信州医誌，63⑸：295〜349，2015

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏
名(所属教室)

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員
主査

副

査

GAUTAM 甲第977号
M ILAN（内科学⑸）

26. 9.30 The Traditional Japanese M edicine (Kampo) 大 森

毛原
啓 甲第992号（外科学⑵）

26. 3.31 Platelet Function during Cardiopulmonary 川眞田樹人 池 田 宇 一
本田孝行
Bypass using M ultiple Electrode Ag-

Boiogito has a Dual Beneﬁt in Cardiorenal
Syndrome:A Pilot Observational Study（和漢医薬（漢方薬）防已黄耆湯は心腎症候群の両面への効果を有する：試験的観察研究）

栄 山田充彦花岡正幸

gregometry:Comparison of Centrifugal andRoller Pumps (M ultiple Electrode Aggregometryを用いた人工心肺中の血小板機能の検討：遠心ポンプとローラーポンプの比 ）劉俊 俊 甲第993号（老化制御学）26. 3.31 Diﬀerential eﬀects of angiotensin II receptor 樋 口 京 一 谷口俊一郎
鈴木龍雄
blockers on Aβ generation（アミロイド β産生におけるアンジオテンシン阻害剤の異なる作用）

劉
余 甲第994号（老化制御学）26. 3.31 Conversion of Aβ43 to Aβ40 by the succes- 樋 口 京 一 鈴 木 龍 雄
谷口俊一郎
sive action of angiotensin‑converting enzyme
2 and angiotensin‑converting enzyme（アンギオテンシン変換酵素 II（ACE2）
およびアンギオテンシン変換酵素（ACE）による Aβ43からAβ40への変換機構解析）

皆川
茜 甲第995号（皮膚科学）

26. 9.30 Dermoscopic features of nonpigmented ec- 森 泉 哲 次 角 谷 眞 澄
菅野祐幸
crine poromas in association with their histopathological features（無色素性エクリン汗孔腫のダーモスコピー像と関連する病理組織像）

岡 本 正 則 甲第996号（運動機能学（整形））

26. 3.31 Noncanonical Wnt5a enhances Wnt/β‑ 本 田 孝 行 栗 田
中山
catenin signaling during osteoblastogenesis（骨芽細胞分化において，
非古典的Wntリガンド
である Wnt5a は Wnt/β‑catenin 経 路 を 促 進する）

木 下 通 亨 甲第997号（内科学⑶）

26. 3.31 Corpus Callosum Atrophy in Patients with 天 野 直 二 角 谷 眞 澄
田渕克彦
Hereditary Diﬀuse Leukoencephalopathy
with Neuroaxonal Spheroids:An MRI‑based
Study（神経軸索スフェロイドを伴う遺伝性び
まん性白質脳症における脳梁萎縮に関する画像的検討）

岡 田 敏 宏 甲第998号（外科学⑵）

26. 9.30 Coexpression of EpCAM, CD44 variant 谷口俊一郎 中 山淳
菅野祐幸
isoforms and claudin‑7 in anaplastic thyroid
carcinoma（甲状腺未分化癌において EpCAM ，
CD44 variant Isoforms と claudin‑7は共発現する）

No. 5, 2015

浩
淳

295

審査学位論文要旨

上條のぞみ 甲第999号（内科学⑵）

平野隆雄（眼科学）

26. 3.31 M utations of Pre‑core and BCP Before and 本 田 孝 行 宮 川 眞 一
竹下敏一
After HBeAg Seroconversion（HBe 抗原セロ
コンバージョン前後におけるプレコア・コアプ
ロモーター変異の臨床的意義）

甲第1000号 26. 3.31 Physiological signiﬁcance of Rag1 in neur- 宇佐美真一 新 藤 隆 行
中山淳
onal death,especially optic neuropathy（神経，特に視神経の細胞死における Rag1の生理的重要性）

岸田
大 甲第1001号 26. 3.31 Genotype‑phenotype correlation in Japanese 福 嶋 義 光 田 中 榮 司（代謝制御学）
樋口京一
patients with familial Mediterranean fever:diﬀerences in genotype and clinical features
between Japanese and Mediterranean populations（本邦の家族性地中海熱患者における遺伝型と表現型の関連―地中海地方との遺伝型や臨床像の違いについて―）高 梨 誠 司 甲第1002号 26. 3.31 Carcinogenicity evaluation for the applica- 谷口俊一郎 小 泉 知 展（運動機能学菅野祐幸
tion of carbon nanotubes as biomaterials in（整形））
rasH2 mice（カーボンナノチューブを生体材料に応用するための rasH2マウスを用いた発がん性評価）
五十嵐恭子 甲第1003号 27. 3.31 Pathophysiological roles of adrenomedullin‑ 菅 野 祐 幸 多 田
剛（循環病態学
田渕克彦
RAMP2 system in acute and chronic cerebral（発生再生ischemia（急性および慢性脳虚血におけるア
医学））
ドレノメデュリン―RAM P2システムの病態生理学的意義）
山 内 啓 弘 甲第1004号 27. 3.31 Functional diﬀerentiation of RAMP2 and 菅 野 祐 幸 多 田
剛（循環病態学
田渕克彦
RAMP3 in their regulation of the vascular（発生再生（脈管系制御におけるRAMP2とRAMP3
system
医学））の機能分化）
望 月 勝 徳 甲第1005号 26. 3.31 Neurological outcomes after extracorporeal 池 田 宇 一 川眞田樹人
（救急集中
本田孝行
cardiopulmonary resuscitation in patients
治療医学）with out‑of‑hospital cardiac arrest :a retrospective observational study in a rural tertiary care center（院外心停止患者における体外式心肺蘇生後の神経予後：地方都市の高次医療機関における後方視的観察研究）
平 林 耕 一 甲第1006号 26. 3.31 Reduced‑toxicity myeloablative conditioning 田 中 榮 司 角 谷 眞 澄（小児医学）
菅野祐幸
consisting of 8‑Gy total body irradiation,
cyclophosphamide and ﬂudarabine forpediatric hematological malignancies（小児血液悪性腫瘍に対する，8‑Gy全身放射線照射，
フルダラビン，シクロフォスファミドから成る
毒性を低減した骨髄破壊的前処置）
岡田綾子
（内科学⑸
（循環器

甲第1007号 26. 9.30 Characterization of cardiac oxidative stress 山 田 充 彦 今 村浩岡田健次
levels in patients with atrial ﬁbrillation（心房細動症例における血中酸化ストレスの検討）

病態学））

296

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

末木
茜 甲第1008号 27. 3.31 Epithelial‑mesenchymal transition of A549 花 岡 正 幸 多 田（病態解析
大森
cells is enhanced by co‑cultured with THP‑1
診断学）
macrophages under hypoxia conditions（低酸素環境下において THP‑1マクロファージとの共培養は A549細胞の EMT を誘導する）

剛
栄原洋 助 甲第1009号 26. 3.31 An Armrest is Eﬀective for Reducing Hand 加 藤 博 之 宇佐美真一
（脳神経
多田
剛
Tremble in Neurosurgeons（アームレストは外科学）
脳神経外科医の手のぶれを軽減する）
黄
玉 哲 甲第1010号 26. 9.30 Serum sulfatide abnormality is associated 山 田 充 彦 樋 口 京 一（代謝制御学多田
剛
with increased oxidative stress in hem（加生））（血液透析患者における血清
odialysis patients
スルファチド異常は酸化ストレスの増加と関連する）
張
玉 根 甲第1011号 26. 3.31 NFκB2 gene as a novel candidate that 本 田 孝 行 竹 下 敏 一（分子腫瘍学
駒津光久
epigenetically responds to interval walking（環境））（インターバル速歩トレーニングに対training
しエピジェネティックに応じる新候補遺伝子，
NFκB2）
岡 村 卓 磨 甲第1012号 27. 3.31 Superﬁcially located enlarged lymphoid folli- 中 山（内科学⑵）
cles characterise nodular gastritis（表在性腫
大リンパ濾胞は鳥肌胃炎の特徴である）

淳 佐々木克典
森泉哲次

小 口 智 彦 甲第1013号 27. 3.31 Eﬀect of herpes simplex virus vector‑mediat- 石 塚（泌尿器科学）
ed interleukin‑4 gene therapy on bladderoveractivity and nociception（単純ヘルペス
ウイルスベクターを用いた IL‑4遺伝子治療における排尿筋過活動と疼痛への効果）

修 菅野祐幸本田孝行

松 木 寛 之 甲第1014号 27. 3.31 Elastic modulus of the femoral trochanteric 佐々木克典 角 谷 眞 澄（運動機能学
樋口京一
region measured byscanning acoustic micros（整形））copy in elderly women（超音波顕微鏡を用いて測定した高齢女性の大腿骨転子部における弾性率）
山 岸 貴 裕 甲第1015号 27. 3.31 Alpha ‑Adrenergic Receptors Mediate Blad- 田 中 榮 司 花 岡 正 幸（泌尿器科学）大森栄
der Overactivity Induced by Cold Stress in
Rats with Bladder Outlet Obstruction（下部尿路閉塞モデルラットの冷えストレス誘発排尿筋過活動における α受容体の機能的役割の考察）
竹 内 大 輔 甲第1016号 27. 3.31 Relationships of obesityand diabetes mellitus 伊 藤 研 一 田 中 榮 司（外科学⑴）
塩沢丹里
to other primarycancers in surgicallytreatedgastric cancer patients（胃癌切除症例における，肥満もしくは糖尿病と，他臓器重複癌との
関連性）
三枝達也
（臓器発生
制御医学

甲第1017号 26. 3.31 Low levels of high‑density lipoprotein choles- 駒 津 光 久 今 村浩岡田健次
terol predict the presence of coronary arterydisease in patients with aortic aneurysms（大（循環器動脈瘤患者において低 HDL コレステロールは病態学））
冠動脈疾患の合併予測因子である）
No. 5, 2015297

審査学位論文要旨

木 村 岳 史 甲第1018号 26. 3.31 Steatogenesis in adult‑onset type II citrul- 小 池 健 一 小 泉 知 展（代謝制御学佐々木克典
linemia is associated with down‑regulation of（加生））
PPARα（成人発症 型シトルリン血症における脂肪肝は PPARαの発現低下に由来する）
趙
麗穎
（神経可
塑性学）

甲第1019号 26. 3.31 Detergent‑dependent separation of post- 田 渕 克 彦 天 野 直 二
樋口京一
synaptic density, membrane rafts and othersubsynaptic structures from the synaptic
plasma membrane of rat forebrain（シナプス
後肥厚部，膜ラフト及び他のシナプス内構造の分離・精製過程の系統的解析）

石 井 宏 明 甲第1020号 26. 3.31 The ratio of plasma aldosterone concentra- 池 田 宇 一 角 谷 眞 澄
（加齢病態
石塚
修
tion to potassium in adrenocorticotropin
制御学
stimulation test is a possible new index for（老医））diagnosis of aldosterone‑producing adenoma
in patients with primaryaldosteronism（原発性アルドステロン症患者において，ACTH 負荷試験による血漿アルドステロン値/血清カリウ
ム値比がアルドステロン産生腺腫の診断に有用な可能性がある）村 杉 謙 次 甲第1021号 27. 3.31 The Development and Trial of a Medication 天 野 直 二 野見山哲生（精神医学）
浅村英樹
Discontinuation Program in the Department
of Forensic Psychiatry（医療観察法病棟における服薬中断プログラムの開発と試用に関する研究）
堀 内 俊 道 甲第1022号 27. 3.31 Gene‑gene interaction between EPAS1 and 浅 村 英 樹 今 村浩（内科学⑴）
小泉知展
EGLN1 in patients with high‑altitude pulmo（高地性肺水腫患者におけるEPAS1
naryedemaと EGLN1の遺伝子相互関係）
鳥 山 佑 一 甲第1023号 27. 3.31 Pathophysiological function of endogenous 菅 野 祐 幸 田 渕 克 彦（循環病態学多田剛
calcitonin gene‑related peptide in ocular vas（発生再生cular diseases（眼内血管関連疾患における内医学））
因性カルシトニン遺伝子関連ペプチドの病態生
理的作用）平
千 明 甲第1024号 26. 3.31 Rapid single nucleotide polymorphism based 菅 野 祐 幸 栗 田（病態解析
多田
method for hematopoietic chimerism analysis
診断学）
and monitoring using high‑speed droplet‑allele‑speciﬁc PCR and allele‑speciﬁc quantitative PCR（液滴型塩基特異的高速 PCR および
塩基特異的定量 PCR を用いた造血幹細胞移植における一塩基多型を使用したキメリズム解
析）

298

浩
剛

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

氏
(所

名
属)

学位授与
番
号

滝沢
章 甲第10号（保険学専攻
医療生命
化学分野
医療生命
科学領域）

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員主査

副査

27. 3.20 Role of the Programmed Death‑1 (PD‑1) 相 良 淳 二 市 川 元 基髙昌星
pathway in regulation of Theilerʼs murine
encephalomyelitis virus‑induced demyelinating disease（タイラーマウス脳脊髄炎ウイル
ス誘導による免疫性脱髄疾患における PD ‑1
pathwayを介した炎症制御機構）

The Traditional Japanese Medicine(Kampo)Boiogito has a Dual Beneﬁt in Cardiorenal Syndrome:A
Pilot Observational Study（和漢医薬（漢方薬）防已黄耆湯は心腎症候群の両面への効果を有す
る：試験的観察研究）
Gautam M ilan
（論文の内容の要旨）

started at the average dose of 4.6±1.5 g/day,which【Introduction】Cardiorenal syndrome (CRS),a con-

was increased to 5.2±1.2 g/dayat 3.5 months and tocomitant status of cardiac and renal insuﬃciency is

5.9 ±1.5 g/day at 9.4 months. Mean eGFR levels

evolving ;however,the consensus to the appropriate

were signiﬁcantly increased from 40.02±10.54 to

management of CRS has not been achieved. This

44.60±10.76 at 3.5 months (P＝0.001),and to 45.93±

prospective observational study explored a new

11.57 at 9.4 months (P＝0.0004). Brain natriuretic

approach utilizing Boiogito (TJ‑20), a traditional

peptide(BNP)levels declined signiﬁcantlyfrom 241.5

Japanese medicine (Kampo), in combination with± 196.6 to 195.5±145.7 pg/mL at 3.5 months (P＝standard treatment for patients with CRS.

0.008),and to 163.3±130.2 pg/mL at 9.4 months (P＝【M ethods】We enrolled patients with chronic heart

0.007). Statistically signiﬁcant improvement in the

failure (CHF): New York Heart Association

NYHA functional class was observed after TJ‑20(NYHA)functional class I‑III, Stage B or Stage C

treatment (P＝0.019). The increase in eGFR had noheart failure, along with renal insuﬃciency (esti-

correlation with the decrease in BNP level,indicat-

mated glomerular ﬁltration rate, eGFR ＜ 65 mL･

ing independent eﬀects on both renal function andmin ･1.73 m ).TJ‑20 treatment was started at theheart failure status.

dose of 2.5 g,5.0 g,or 7.5 g per day on each patientʼs【Discussion】Our study demonstrates that addition

standard medications and the dose of TJ‑20 wasof TJ‑20 on standard treatment improved renal

modiﬁed within the standard dose according to thefunction, decreased BNP levels, and improved

patientʼs acceptance and adherence.To evaluate TJ

NYHA functional class from the baseline. No‑20 eﬀects on renal function and heart failure sta-signiﬁcant adverse events were observed that result-tus,laboratory parameters were averaged from 2‑3

ed in discontinuation of TJ‑20 treatment at the end

outpatient visits for each 3 points as follows: 1)of our study.

before initiation of the treatment (3±1.8 months),

Standard treatment for CRS with diuretics andand followed at mean intervals of 2)3.5±1.8 and 3)

inotropes are frequently associated with drug resis-

9.4±2.3 months after starting the treatment.

tance and limited clinical success. Therefore, alter-【Results】In total, 26 patients (18 men ;mean age,native therapeutic approaches are of major clinical77±8.4 years) were studied. TJ‑20 treatment was

importance. It is widely known that many heart

No. 5, 2015299

審査学位論文要旨

failure medications may also worsen renal function.

dose of Boiogito (2.5 g,5.0 g,or 7.5 g per day),added

As a result, it is diﬃcult to maintain optimal ﬂuid

on standard medications of each patient was deter-balance in CHF patients, while preserving renal

mined according to the patientʼs acceptance andfunction. Importantly, patients with renal dysfunc-

adherence to the treatment.To evaluate Boiogitoʼ
stion are often excluded from clinical heart failure

eﬀects on renal function and heart failure status,

trials;therefore, evidence based therapies for CRS

laboratory parameters were averaged from 2‑3

patients are lacking.

outpatient visits for each 3 points as follows: 1)

Interesting ﬂuid control eﬀect of TJ‑20 has been

before initiation of the treatment (baseline), anddescribed previously. TJ‑20 elicits moderate diur-followed at mean intervals of 2) 3.5 and 3) 9.4

etic eﬀects in patients with excess body water but

months after starting the treatment.

not in euvolemic patients.Therefore,addition ofTJ‑

Results from our study:

20 has the potential to optimize diuresis and prevent

１．Boiogito treatment signiﬁcantly improved

renal dysfunction.In this study,we propose that themean eGFR levels from 40.02±10.54 to 44.60±10.

moderate diuretic eﬀects of TJ‑20 adding on stan-

76 at 3.5 months (P＝0.001),and to 45.93±11.57 atdard treatment for heart failure may beneﬁt CRS

9.4 months (P＝0.0004):and sCr and BUN levels

patients, who require maintaining optimal ﬂuid

decreased signiﬁcantly (P＜0.05).
２．There were no signiﬁcant interval changes

balance.
Furthermore, we measured changes in eGFR andobserved in levels of serum sodium, chloride, or

BNP levels at baseline,3.5 and 9.4 months between

potassium in patients treated with Boiogito (P＞0.

patients with and without receiving angiotensin II05).

receptor blockers, angiotensin‑converting enzyme

３．BNP levels (pg/mL)declined signiﬁcantly with

inhibitors, β‑blockers, or diuretics to determine

Boiogito treatment from 241.5±196.6 to 195.5±

eﬀects of these background treatment agents on

145.7 at 3.5 months (P＝0.008),and to 163.3±130.2

eGFR and BNP levels. No signiﬁcant changes in

at 9.4 months (P＝0.007). Six out of 26 patientseGFR and BNP levels were observed, in the pres-(23%)demonstrated improvement in NYHA func-ence or absence of these background agents.Thesetional class (P＝0.019)from the baseline.

results suggest that addition of TJ‑20 on standard

４．There were no signiﬁcant correlations between

medication beneﬁted both renal function and heart

the changes in eGFR and BNP levels after

failure status in CRS patients.

Boiogito treatment at both 3.5 and 9.4 months

In conclusion, the observations of this study,(P＞0.05), suggesting that the decrease in BNP

utilizing traditional Japanese medicine(TJ‑20),maylevels could be distinct from the increase in eGFR

provide a novel and useful strategy for the diﬃcultlevels.

management of CRS patients.
（論文審査の結果の要旨）

５．No signiﬁcant changes in eGFR and BNP levelsin the presence or absence of background treat-In this study, we have reported the ﬁndings of ament agents (angiotensin II receptor blockers,

preliminary observational study that evaluated theangiotensin‑converting enzyme inhibitors, β‑

eﬀects of Boiogtio in combination with the standard

blockers,or diuretics)were observed at 3.5 and 9.

treatment for chronic heart failure (CHF) in

4 months (P＞0.05).

patients with CRS.We enrolled 26 patients (77±8.5

６．No signiﬁcant adverse events were observed

years, 18 males) with CHF : New York Heart

that resulted in discontinuation of Boiogito treat-

Association (NYHA)functional class I‑III,Stage B

ment at the end of the study.

or Stage C heart failure, along with renal

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値

insuﬃciency (estimated glomerular ﬁltration rate,があるものと認めた。

eGFR ＜ 65 mL･min ･1.73 m ). The conventional
300

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

Platelet Function during CardiopulmonaryBypass using Multiple Electrode Aggregometry:Comparison ofCentrifugaland Roller Pumps（MultipleElectrodeAggregometryを用いた人工心肺中の血小板機能の検討：遠心ポンプとローラーポンプの比 ）毛原啓（論文の内容の要旨）を通じて両群間で有意差を認めなかった。Fib，PF4，【背景】体外循環において遠心ポンプはローラーポン

B‑TG は人工心肺前後で有意差なく，また両群間にプと比べ血球成分の破壊が少ないと言われているが，おいても有意差は認めなかった。Hb は両群で人工心血小板機能について検討した報告は少ない。Multiple

肺終了時から胸骨切開前と比 して有意に低値となっelectrode aggregometry（M EA）は全血での血小板た。

凝集能検査で，人工心肺下での血小板機能の検討に用【考察】血小板アゴニストとして ADP，アラキドン酸，

いられてきている。今回我々はブタを用いて，遠心ポ

TRAP を用いたが，活性化にプロテアーゼを介さなンプとローラーポンプの２群間で体外循環における血い ADP，ア ラ キ ド ン 酸 と プ ロ テ ア ー ゼ を 介 す る

小板機能を M EA により検討した。

TRAP に分けられる。今回，プロテーゼを介さない【方 法】生 後 約 ２ カ 月，体 重 約50kg の White‑Lan-

ADP test，ASPI test で有意差を認めており，この経

drace×Duroc ブタ５匹に遠心ポンプ（CP group），

路が人工心肺中の血小板凝集能低下に関係している可５匹にローラーポンプ（RP group）を送血ポ ン プ

能性がある。

とした人工心肺を装着した。遠心ポンプには Gyro

両群において人工心肺開始後30分で血小板凝集能はpump（M edtronic Japan），ローラーポンプは Heart

最も低値となり，その後は改善傾向であった。これよ，人工肺は Aﬃnity
Assist System（泉工医科工業）

り，人工心肺中の血小板凝集能の低下はポンプ開始直（M edtronic Japan）を使用した。人工心肺は流量２後の血液の希釈や異物面との接触が主要な要因である

l/min で３時間駆動し，人工心肺終了後1時間で実験と考えられる。今回同時に施行した Hb の推移では同終了とした。MEA，ヘモグロビン（Hb），血小板数測定ポイントで有意な低下はなく，また Hb と MEA（PLT）は胸骨切開前，ヘパリン注入後，人工心肺開の結果に関連性は見いだせなかった。以上より，人工始30分後，人工心肺終了時，プロタミン注入後，人工心肺中の血小板凝集能低下には血液希釈よりも異物面

心肺終了１時間後に測定 し た。フ ィ ブ リ ノ ー ゲ ンとの接触が大きく関与していると考えられ，遠心ポン（Fib），血小板 因 子 ４（PF4），beta‑thromboglobin

プと人工心肺チューブの原材料であるポリカーボネイ（beta‑TG）は 胸 骨 切 開 前 と 人 工 心 肺 終 了 １ 時 間ト，ポリビニルクロライドが血液との接触により血小後 に 測 定 し た。血 小 板 機 能 測 定 に は Multiplate

板を活性化することが報告されている。

（Dynabyte，Germany）を用い，血小板凝集の試薬

血小板凝集能に遠心ポンプとローラーポンプで有意にアデノシン二リン酸（ADP test），アラキドン酸差を認めなかった。従来の両ポンプ間の血小板機能の（ASPI test），Thrombin receptor activation protein

検討はその多くが CABG 症例であり，他の要素（血（TRAP test）を使用した。

液リザーバーや吸引回路）の影響を無視することはで【結果】ADP testでは，人工心肺開始30分後でCP groupきない。本症例はブタを用い，送血ポンプ以外の要素

55.4±9.6U（p＝0.019），RP group53.8±17.8U

はできる限り排除した。現在ヨーロッパでは高価な遠（p＝0.007）と両群共に最も低下し，その後人工心肺

心ポンプの使用は10％のみと言われており，我々の結時間の長さと共に低下し続けることは な か っ た。

果もこれを支持する。

ASPI test も 同 様 に 人 工 心 肺 30分 後 で CP group【結語】M EA を用いた血小板機能測定では遠心ポン

53.6±10.8U（p＝0.012），RP group56.8±20.9U

プとローラーポンプ間で有意差を認めなかった。また，（p＝0.016）と最も低値となった。TRAP test も ASP

人工心肺開始30分後で最も低下し，人工心肺時間ととtest，ASPI test と同様な時間経過であったが変化はもに低下し続けることはなかった。人工心肺中の血小有意ではなかった。３種類の試薬の全測定ポイントに板機能低下は送血ポンプの種類に関係なく，人工心肺おいて両群間で有意差を認めなかった。PLT は実験開始直後の異物面との接触の影響が大きいと考えら

No. 5, 2015301

審査学位論文要旨れた。

間後に測定した。フィブリノーゲン（Fib），血小板（論文審査の結果の要旨）

因子４（PF4），beta‑thromboglobin（beta‑TG）は体外循環において遠心ポンプはローラーポンプと比胸骨切開前と人工心肺終了１時間後に測定した。血小べ血球成分の破壊が少ないと言われているが，血小板板 機 能 測 定 に は M ultiplate （ Dynabyte， Ger-

機能について検討した報告は少ない。M ultiple elec-many）を用い，血小板凝集の試薬にアデノシン二リ

trode aggregometry（MEA）は全血での血小板凝集

ン 酸（ADP test），ア ラ キ ド ン 酸（ASPI test），

能検査で，人工心肺下での血小板機能の検討に用いらThrombin receptor activation protein（TRAP test）

れてきている。今回我々はブタを用いて，遠心ポンプを使用した。

とローラーポンプの２群間で体外循環における血小板機能を MEA により検討した。

その結果，毛原は次の結論を得た。
１．遠心ポンプとローラーポンプ間で有意差を認めな

生後約２カ月，体重約50kg の White‑Landrace×，５匹にロー
Duroc ブタ５匹に遠心ポンプ（CP group）

かった。
２．血小板機能は人工心肺開始30分後で最も低下し，ラーポンプ（RP group）を送血ポンプとした人工心肺を装着した。遠心ポンプには Gyro pump（Medtronic

人工心肺時間とともに低下し続けることはなかった。
３．Hb は両群で人工心肺終了時から胸骨切開前と比，ロ ー ラ ー ポ ン プ は Heart Assist System
Japan ）

して有意に低値となった。

（泉 工 医 科 工 業），人 工 肺 は Aﬃnity（M edtronic

これらの結果より，人工心肺中の血小板機能低下はJapan）を使用した。人工心肺は流量２l/min で３時送血ポンプの種類に関係なく，人工心肺開始直後の異間駆動し，人工心肺終了後１時間で実験終了とした。

物面との接触の影響が大きいと考えられた。よって，，血小板数（PLT）は胸
MEA，ヘモグロビン（Hb）

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が骨切開前，ヘパリン注入後，人工心肺開始30分後，人あるものと認めた。

工心肺終了時，プロタミン注入後，人工心肺終了１時

Diﬀerential eﬀects of angiotensin II receptor blockers on Aβgeneration（アミロイド β産生におけるアンジオテンシン阻害剤の異なる作用）劉俊俊（論文の内容の要旨）

ﬁbroblasts separately with telmisartan, losartan,【Backgraound and Purpose】Angiotensin II recep-

valsartan, olmesartan and candesartan for 72 h totor blockers (ARBs) are widely prescribed for thedetermine the eﬀect of ARBs on Aβgeneration.We

medication of systemic hypertension and congestive

measured Aβ40 and Aβ42 levels in the conditioned

heart failure. It has been reported that ARBs canmedia by sandwich enzyme‑linked immunosorbent

reduce the risk for the onset of Alzheimerʼs diseaseassay(ELISA)to determine the Aβlevels.To inves-(AD)and have beneﬁcial eﬀects on dementia. Neu-tigate whether telmisartan increase Aβgeneration

rotoxic amyloid β‑protein (Aβ)is believed to playa

via angiotensin type 1a receptor (AT1a),we isolatedcausative role in the development of AD.However,Agtr1a deﬁcient MEFs from 13.5‑day‑old embryos

whether ARBs regulate Aβ generation remainsof Agtr1a deﬁcient mice and infected the M EFs withlargely unknown. Here, we studied the eﬀect ofhAPP695. We treated Agtr1a deﬁcient hAPP‑ex-

ARBs on Aβgeneration.

pressing MEFs with telmisartan.To explore which【M aterials and Methods】We infected C57BL/6

pathway telmisartan depends on to increase Aβ

mouse embryonic ﬁbroblasts (M EFs) with humangeneration, we pre‑treated APP ﬁbroblasts with

695‑amino acid amyloid precursor protein

pathway inhibitors and then treated with telmisar-(hAPP695)cDNA by a retrovirus‑mediated methodtan.

to generate constant hAPP695 overexpression【Results】We found that telmisartan increased

ﬁbroblasts (APP ﬁbroblasts). And we treated APP

Aβ40 and Aβ42 generation markedly,about 6‑ and302

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

3.2‑fold, respectively, compared to the controls,

We infected C57BL/6 mouse embryonic ﬁbro-

while olmesartan increased Aβ40 generation about

blasts (MEFs)with human 695‑amino acid amyloid

2‑fold at the concentration of 5 μM and Aβ42

precursor protein (hAPP695)cDNA bya retrovirus‑

generation about 3.2‑fold at the concentration of 10

mediated method to generate constant hAPP695

μM. However, losartan, valsartan and candesartan

overexpression ﬁbroblasts (APP ﬁbroblasts). And

did not show any clear increase in the Aβ genera-

we treated APP ﬁbroblasts separately with telmi-

tion. The Aβ42/Aβ40 ratio in serum increased insartan,losartan,valsartan,olmesartan and candesar-familial AD patients and is considered as a causal

tan for 72 h to determine the eﬀect of ARBs on Aβ

factor of AD.Among the ARBs examined,telmisar-

generation. We measured Aβ40 and Aβ42 levels intan signiﬁcantly decreased the Aβ42/Aβ40 ratio

the conditioned media by sandwich enzyme‑linked

and had the lowest Aβ42/Aβ40 ratio, whereas,

immunosorbent assay(ELISA)to determine the Aβ

olmesartan had the highest Aβ42/Aβ40 ratio whichlevels. To investigate whether telmisartan increase

was signiﬁcantly higher than that of telmisartan.

Aβ generation via angiotensin type 1a receptor

Losartan, valsartan and candesartan did not show

(AT1a),we isolated Agtr1a deﬁcient MEFs from 13.5‑

any clear eﬀect on Aβ42/Aβ40 ratio.We also foundday‑old embryos of Agtr1a deﬁcient mice and in-that telmisartan did not increase the Aβ40 andfected the M EFs with hAPP695.We treated Agtr1aAβ42 generation in the AT1a deﬁcient ﬁbroblasts.

deﬁcient hAPP‑expressing MEFs with telmisartan.

Administration of the PI3K pathway inhibitor,

To explore which pathway telmisartan depends on

wortmannin, and γ‑secretase inhibitor, DAPT,

to increase Aβ generation, we pre‑treated APP

markedly blocked the increase Aβ generation byﬁbroblasts with pathway inhibitors and then treatedtelmisartan.

with telmisartan.

【Conclusions】Telmisartan signiﬁcantly increased

Results:Aβgeneration,however,did not increase Aβgener-

１．We found that telmisartan increased Aβ40 andation in AT1a deﬁcient ﬁbroblasts. And PI3K path-Aβ42 generation markedly,about 6‑and 3.2‑fold,way inhibitor, wortmannin, markedly blocked

respectively, compared to the controls, while

telmisartan‑induced Aβ generation. These results

olmesartan increased Aβ40 generation about 2‑

suggest that telmisartan increased the Aβ genera-

fold at the concentration of 5 μM and Aβ42

tion through AT1a and the receptor‑related PI3K

generation about 3.2‑fold at the concentration ofpathway. Our ﬁndings revealed the diﬀerent eﬀects

10 μM . However, losartan, valsartan and can-of ARBs on Aβ generation and provide new evi-desartan did not show any clear increase in thedence for the relationship between antihypertensiveAβgeneration.

treatment and AD pathogenesis.
（論文審査の結果の要旨）

２．Among the ARBs examined, telmisartan
signiﬁcantly decreased the Aβ42/Aβ40 ratio

Angiotensin II receptor blockers (ARBs) are

and had the lowest Aβ42/Aβ40 ratio, whereas,

widely prescribed for the medication of systemic

olmesartan had the highest Aβ42/Aβ40 ratio

hypertension and congestive heart failure. It has

which was signiﬁcantly higher than that ofbeen reported that ARBs can reduce the risk for thetelmisartan.Losartan,valsartan and candesartan

onset of Alzheimerʼs disease (AD) and havedid not show anyclear eﬀect on Aβ42/Aβ40 ratio.

beneﬁcial eﬀects on dementia. Neurotoxic amyloid

３．We also found that telmisartan did not increaseβ‑protein (Aβ)is believed to playa causative role in

the Aβ40 and Aβ42 generation in the AT1athe development of AD. However, whether ARBsdeﬁcient ﬁbroblasts.

regulate Aβ generation remains largely unknown.

４．Administration of the PI3K pathway inhibitor,

Here,we studied the eﬀect of ARBs on Aβgenera-

wortmannin, and γ‑secretase inhibitor, DAPT,

tion.

markedly blocked the increase Aβgeneration by

No. 5, 2015303

審査学位論文要旨

telmisartan.

ﬁndings revealed the diﬀerent eﬀects of ARBs on

These results suggest that telmisartan increased

Aβ generation and provide new evidence for thethe Aβgeneration through AT1a and the receptor‑

relationship between antihypertensive treatment

related PI3K pathway. Because telmisartan de-

and AD pathogenesis.

creased the Aβ42/Aβ40 ratio, which is considered
as a causal factor of AD,it is reasonable to deduce

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

the neuroprotective eﬀect of telmisartan. Our

Conversion of Aβ43 to Aβ40 by the successive action of angiotensin‑converting enzyme 2 andangiotensin‑converting enzyme（アンギオテンシン変換酵素 II（ACE2）およびアンギオテンシン変換酵素（ACE）による Aβ43から Aβ40への変換機構解析）
劉余（論文の内容の要旨）

mixture of Aβ43 and mouse brain lysate in a time

【背景と目的】The longer and neurotoxic species ofdependent manner. The generation of converted

amyloid‑βprotein (Aβ),Aβ42 and Aβ43,contribute

Aβ42 was inhibited by EDTA and an ACE2 speciﬁc

to Aβ accumulation in Alzheimerʼs disease (AD)inhibitor, DX600. Furthermore, the combination ofpathogenesis and are considered to be the primary

ACE2 and ACE converts Aβ43 to Aβ40. Notably,cause of the disease. In contrast, the predominant

ACE2 activity showed a tendency to decrease in thesecreted form of Aβ,Aβ40,inhibits amyloid deposi-serum of AD patients compared with normal con-tion and may have neuroprotective eﬀects.We havetrol.

reported that Aβ43 is the earliest‑depositing Aβ【結論】We found that ACE2 converts Aβ43 to

species in the amyloid precursor protein transgenic

Aβ42,and this activity is inhibited by DX600.Com-

mouse brain. Here, we studied whether there arebination of ACE2 and ACE converts Aβ43 to Aβ40,

enzymes converting Aβ43 to Aβ42 and converting

suggesting a successive conversion of Aβ43 toAβ43 to Aβ40.

Aβ40.ACE2 activity showed a tendencyto decrease【材料と方法】C57BL/6J mouse brain and other tis-in the serum of AD patients compared with normalsues were homogenized in an equal volume (w/v)ofcontrol, suggesting an association between lower

lysis buﬀer and centrifuged.The supernatants wereACE2 activity and AD. Therefore, maintaining

then collected to examine angiotensin converting

ACE2 and ACE activities in the brain could act as a

enzyme (ACE) 2 activity, and then to examine theprotective and defensive mechanism in the initialprotein expression of ACE2 by Western blot andstages of AD to limit its pathological development.

immunostaining.ACE2 activitywas measured byan

（論文審査の結果の要旨）

ACE2 activity assay kit,using M c‑Ala/Dnp ﬂuores-

The longer and neurotoxic species of amyloid‑βcence resonance energy transfer peptide.Converted

protein (Aβ), Aβ42 and Aβ43, contribute to AβAβ40 and Aβ42 from Aβ43 were analyzed byaccumulation in Alzheimerʼs disease (AD) patho-

Western bolt. The primary antibodies were anti‑

genesis and are considered to be the primary cause

human amyloid β (35‑40) mouse monoclonal IgG,of the disease.In contrast,the predominant secreted

anti‑human amyloid β(1‑42)rabbit polyclonal IgGform of Aβ, Aβ40, inhibits amyloid deposition andand anti‑human amyloid β(1‑43)rabbit polyclonal

may have neuroprotective eﬀects. Previous study

IgG. Angiotensin II levels in human serum were

has reported that Aβ43 is the earliest‑depositing

measured by enzyme‑linked immunosorbent assay

Aβspecies in the amyloid precursor protein trans-(ELISA).

genic mouse brain.The purpose is to study whether【結果】Aβ40 and Aβ42 were generated from thethere are enzymes converting Aβ43 to Aβ42 and304

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

converting Aβ43 to Aβ40.

The generation of converted Aβ42 was inhibited

C57BL/6J mouse brain and other tissues wereby EDTA and an ACE2 speciﬁc inhibitor,DX600.

homogenized in an equal volume (w/v) of lysis

Aβ43 was converted to Aβ40 by the combination

buﬀer and centrifuged.The supernatants were thenof ACE2 and ACE.

collected to examine ACE2 activity, and then to

ACE2 activity showed a tendency to decrease in

examine the protein expression of ACE2 by West-the serum of AD patients compared with normal

ern blot and immunostaining. ACE2 activity wascontrol.

measured by an ACE2 activity assay kit,using Mc‑

The present data show that ACE2 converts Aβ43

Ala/Dnp ﬂuorescence resonance energy transfer

to Aβ42, and this activity is inhibited by DX600.

peptide.Converted Aβ40 and Aβ42 from Aβ43 were

Combination of ACE2 and ACE converts Aβ43 toanalyzed by Western bolt. The primary antibodies

Aβ40, suggesting a successive conversion of Aβ43

were anti‑human amyloid β (35‑40) mouse mono-to Aβ40. ACE2 activity showed a tendency toclonal IgG, anti‑human amyloid β (1‑42) rabbit

decrease in the serum of AD patients compared withpolyclonal IgG and anti‑human amyloid β (1‑43)

normal control, suggesting an association between

rabbit polyclonal IgG. Angiotensin II levels inlower ACE2 activity and AD. Therefore, maintain-

human serum were measured by enzyme‑linked

ing ACE2 and ACE activities in the brain could act

immunosorbent assay (ELISA).

as a protective and defensive mechanism in theSummarizing the present results, Shuyu Liu
obtained four conclusions as follows:

initial stages of AD to limit its pathological development.

Aβ40 and Aβ42 were generated from the mixtureof Aβ43 and mouse brain lysate in a time depe-

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

ndent manner.

Dermoscopic features of nonpigmented eccrine poromas in association with their histopathologicalfeatures（無色素性エクリン汗孔腫のダーモスコピー像と関連する病理組織像）
皆川茜（論文の内容の要旨）【方法】過去に当科で病理組織学的にエクリン汗孔腫【背景】エクリン汗孔腫は，汗管への分化を示す皮膚と診断された10症例について，既知のダーモスコピー

付属器系良性腫瘍である。掌蹠に好発し，臨床的には所見を調べた。ダーモスコピー及び病理組織像が典型

広基性から有茎性の紅色結節としてみられることが多的であった１症例の検体を用いて水平断切片を作成し，い。そのため，無色素性悪性黒色腫や脂漏性角化症，

ダーモスコピー像と病理組織像との対比を行った。

基底細胞癌など多くの疾患との鑑別を要する。近年，【結果】症例は男８女２，平均年齢は56.3歳であった。

皮膚科領域ではダーモスコピーという，
偏光フィルター

病変部位は足５，下腿３，手１，背部１であった。10やエコージェルなどで角層の乱反射を除き皮膚病変を例中５例で血管所見を認めた。内訳はヘアピン血管と拡大して観察する診断方法が普及している。ダーモス

点状血管の組み合わせ２，ヘアピン血管と点状血管とコープを用いると肉眼では観察しえなかった微細な血線状不規則血管の組み合わせ１，線状不規則血管１，管構造やメラニンの分布様式などを検出することがで

ヘアピン血管１であった。面皰様開大，稗粒腫様嚢腫，

き，その中のいくつかは疾患特異的な所見として診断

脳回転様外観，潰瘍はそれぞれ１例で見られた。また，に役立っている。しかし，エクリン汗孔腫のダーモス

エクリン汗孔腫に特徴的なダーモスコピー所見を10例

コピー所見については十分に解明されておらず，診断中９例で見出した。紅色胞巣が網ひも状の構造で区切確定のためには皮膚生検が欠かせない。

られる所見であることから，「カエルの卵様」外観と【目的】エクリン汗孔腫に特徴的なダーモスコピー所名付けた。このダーモスコピー所見は病変の頂点から見を解析し，さらに病理組織像との関連を検討する。

300‑400μm の深さで作成した水平断の病理組織像に

No. 5, 2015305

審査学位論文要旨

よく相関していた。すなわち，ひも状に配列した腫瘍

無色素性エクリン汗孔腫についてそのダーモスコピー細胞によって囲まれた浮腫状の間質が島状に規則正し所見を調べ，ダーモスコピー所見と病理組織像の関連く配列する病理組織像が認められた。間質内には多くを検討した。

の拡張した毛細血管が含まれていた。

メラノサイト系病変，皮膚線維腫，基底細胞癌，脂【考察】エクリン汗孔腫では血管所見を認める症例が漏性角化症，血管腫，非メラノサイト系病変において少なくない。特に線状不規則血管などの多形血管であ

これまでに報告されてきた疾患特異的なダーモスコ

る場合は，ダーモスコピーの血管所見のみでエクリン

ピー所見が，無色素性エクリン汗孔腫において認めら

汗孔腫と無色素性悪性黒色腫を鑑別することは困難でれるか，10症例を用いて検討を行った。さらに，無色ある。
「カエルの卵様」外観は多くのエクリン汗孔腫

素性エクリン汗孔腫に特徴的であると私が考えたダーで観察されるダーモスコピー所見であり，病理組織学

モスコピー所見に関して，１例の病理組織で水平切片

的にはひも状に配列する腫瘍細胞とそれによって囲まを作成して特殊染色を行い，ダーモスコピー所見と病れた毛細血管を含む真皮の間質である。悪性黒色腫に理組織像との関連を検討した。

特徴的な所見である乳白紅色領域とは，胞巣の境界がその結果，皆川茜は以下の結論を得た。

明瞭で病変内に広く分布する点で区別できる。脂漏性

１．無色素性エクリン汗孔腫のダーモスコピー所見に角化症はヘアピン血管，面皰様開大，稗粒腫様嚢腫がついて，メラノサイト系病変，基底細胞癌，皮膚線

特徴的である。脂漏性角化症におけるヘアピン血管は維腫，血管腫に特異的な所見はなかった。10例中３病変の辺縁に分布する傾向がある一方，エクリン汗孔

例で脂漏性角化症に特異的な所見を認めた。10例中腫では病変の随所に観察される点で異なる。基底細胞

５例に無色素性メラノーマと共通の血管所見があっ癌では樹枝状血管が特徴的であるが，今回検討したエクリン汗孔腫症例では１例も認められず，ダーモスコ

た。
２．無色素性エクリン汗孔腫10例中９例に特徴的なピーによる鑑別は可能であった。

ダーモスコピー所見（乳白色調の粗大網目状構造と【結論】多形血管を含む血管所見と「カエルの卵様」

紅色胞巣状構造）を見出した。

外観は，無色素性エクリン汗孔腫の診断において重要

３．無色素性エクリン汗孔腫のダーモスコピーで見らなダーモスコピー所見である。所見の感度特異度につれる乳白色調の粗大網目状構造は腫瘍に置換された

いては今後の症例蓄積が待たれる。

表皮に相当し，紅色胞巣状構造は拡張した毛細血管（論文審査の結果の要旨）を多数含む浮腫性の間質に相当することが，病理組

皮膚には様々な腫瘍が発生する。色素を持たない紅織の水平切片の検討から明らかとなった。

色結節では，無色素性メラノーマやエクリン汗孔腫を以上の結果より，無色素性エクリン汗孔腫のダーモ

含むさまざまな疾患が鑑別に挙げられるが，確定診断

スコピー所見において血管所見，さらに乳白色調の粗のために生検を行って病理組織学的検査を要する場合

大網目状構造と紅色胞巣状構造は，診断を進める上でがある。近年，皮膚科領域ではダーモスコピーという，重要な所見であると判断しえた。紅色結節を呈する皮皮膚を拡大して観察する検査法が普及している。この

膚腫瘍のダーモスコピー診断において，無色素性エク検査法を用いることで生検を行う前に，より診断を絞

リン汗孔腫を無色素性メラノーマと鑑別する際に，一り込むことが可能となってきた。しかし，無色素性エ

助になると思われる。そこで主査，副査は一致して本クリン汗孔腫のダーモスコピー所見についての報告は論文を学位論文として価値があるものと認めた。

少ない。今回，無色素性メラノーマとの鑑別が難しい

Noncanonical Wnt5a enhances Wnt/β‑catenin signaling during osteoblastogenesis（骨芽細胞分化において，非古典的 Wnt リガンドである Wnt5aは Wnt/β‑catenin 経路を促進する）
岡

本

正

則

（論文の内容の要旨）

期の発生や器官形成，細胞増殖や分化などを制御する。

【研究の背景】Wnt は分子量約４万の分泌性糖蛋白質

Wnt シグナルには，βカテニンを介する古典経路とで，哺乳類では19種類が同定されている。Wnt は初

それを介さない非古典経路とが存在する。Wnt3a な306

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

どの古典的 Wnt が受容体 Frizzled と共受容体 Low‑

マウスの骨組織における，βカテニンレベルも低下し

density lipoprotein receptor‑related protein（Lrp）

た。

5/6の複合体に結合すると，βカテニンが細胞内に蓄次に外因性 Wnt5a の作用を検討した。Wnt5a 存在積する。その後核内に移行した βカテニンは，転写下で Wnt5aKO‑POB を培養すると，低下した Lrp5/6

因子 T cell factor (Tcf)/lymphoid enhancer factorの発現が増加し，Tcf/Lef 転写活性および石灰化能(Lef) とともに，標的遺伝子の発現を促進する。

が回復した。

骨芽細胞分化においては古典経路により Runx2のLrp5の発現効果を検討するため，Wnt5aKO‑POB

発現が促進され，骨芽細胞分化が促進し，脂肪細胞分に Lrp5を過剰発現すると，低下した Tcf/Lef 転写活化を抑制する。一方，非古典経路を活性化するWnt5a

性 お よ び 石 灰 化 能 が 回 復 し た。ま た，Wnt5aKO‑は，脂肪細胞への分化を促進する Pparγの機能を抑POB で は 脂 肪 細 胞 へ の 分 化 が 促 進 す る が，Wnt5

制することで，脂肪細胞分化を抑制し，その結果骨芽aKO‑POB に Lrp5を過剰発現させると，その脂肪細細胞分化を促進する。これらの結果は両経路が協調し，胞分化は抑制された。

骨芽細胞の分化を調節することを示唆する。しかし，

Lrp5/6のプロモーター解析を行い，Lrp5/6に共通

両経路がどのように協調して骨芽細胞分化を調節するする領域として Sp1結合サイトに着目した。Sp1結合かは明らかでない。そこで本研究では，骨芽細胞分化

サイトには，Sp7も結合することが報告されている。

における Wnt5a の古典経路への作用に着目し検討しまた，Wnt5aKO‑POB では Sp7の発現は有意に低下た。

する。このことは Sp7が Lrp5/6の発現を誘導するこ【方法・結果】ST 2細胞を Wnt3aで刺激すると，古とを示唆した。Wnt5a は BM P2と協調して，Sp7の典経路活性を示す Tcf/Lef 転写活性が上昇するが，発 現 を 誘 導 し た。そ し て Sp7を 過 剰 発 現 す る と，

Wnt5a による刺激では変化がみられなかった。しかLrp5の発現が上昇した。Wnt5a のシグナルには共受

し ST2細胞を Wnt5a で前処理した後に Wnt3a で刺容体である Ror2が関与することが多く報告されてい激すると，Wnt3a 単独刺激と比べ，Tcf/Lef 転写活るが，Ror2欠損マウス由来の骨芽細胞では Lrp5/6の性，細胞内 βカテニンの蛋白量はさらに上昇した。

発現に変化を認めなかった。

この結果から，Wnt5a が古典経路を促進する可能性【考 察 ・ 結 論】Wnt5a は Hela 細 胞 や HEK293細 胞が示唆された。

に お い て，Wnt3aと Frizzledの 結 合 に 競 合 し 古 典

野生型マウスの頭蓋冠由来の骨芽細胞様細胞（WT‑

経路を抑制する。また，Wnt5a は Ca 経路を介してPOB）を石灰化培地で培養し，Wnt リガンドと受容

Tcf/Lef 転写活性を抑制することが報告されている。

体の発現を解析した。Wnt5a や Wnt10b の発現上昇

しかし骨芽細胞分化においては，Wnt5a は Sp7の発とともに，Lrp5/6の発現は骨芽細胞分化に伴い経時現を誘導し，Lrp5/6の発現を促進した。そしてその的に増加した。このことは Wnt シグナルそのものが結果，古典経路による骨芽細胞分化を促進することがLrp5/6の発現を制御する可能性を示唆した。しかし，示唆された。

古典経路特異的な阻害分子である Dkk1は Lrp5/6の（論文審査の結果の要旨）

発現を抑制しなかった。また，shRNA を用い Wnt5a

Wnt は初期の発生や形態形成，細胞の増殖・分化を knockdown すると，Lrp5/6の発現が 低 下 し た。

を制御する。Wnt 経路には βカテニンを介する古典

これらの結果は，Wnt5a が Lrp5/6の発現を誘導する的経路と，それを介さない非古典的経路とが存在する。

ことを示唆した。

両経路はそれぞれ骨芽細胞分化を促進するが，骨芽細Wnt5a による Lrp5/6の発現誘導を確認するため，胞分化における両経路の相互作用に関する報告は少な

Wnt5a欠損マウス由来の骨芽細胞様細胞（Wnt5aKO‑

い。今回，岡本らは非古典的 Wnt リガンドの Wnt5a

POB）の 解 析 を 行 っ た。WT ‑POB に 比 べ，Wnt5の古典的経路に対する作用に着目し解析を行った。

aKO‑POB では，Lrp5/6の発現が有意に低く，アルマウスは C57BL/6野生型マウスの他に Wnt5a 欠損

カリフォスファターゼ活性，石灰化能も低下した。ま（Wnt5aKO）マウスと Ror2欠損（Ror2KO）マウス

た，転写因子 Sp7の発現が低く，古典経路の標的遺伝を用いた。両マウスは胎生致死のため胎児頭蓋冠から子である Axin2の発現，Tcf/Lef 転写活性，細胞内

骨芽細胞様細胞を採取し，ex vivo の実験に用いた。

の βカテニンレベルも低下した。そして Wnt5a 欠損
No. 5, 2015

その結果，岡本らは次の結論を得た。
307

審査学位論文要旨

１．野生型マウス由来の骨芽細胞を石灰化培地で培養

６．Wnt5aKO 骨芽細胞に Lrp5を過剰発現させると，していくと，古典的経路の共受容体である Lrp5/6

TCF/LEF 活性および石灰化能が回復した。またの発現は，Wnt5a と Wnt10b とともに，経時的に脂肪細胞分化が抑制された。

上昇した。

７．Lrp5/6のプロモーター解析を行った。Wnt5a は

２．古典的経路特異的な阻害因子は，Lrp5/6の発現

Sp7の発現を誘導し，Sp7は Lrp5/6の Sp1 bindingを抑制しなかった。しかし，Wnt5a のノックダウ

site に結合した。Sp7の過剰発現により，Lrp5の発ンは Lrp5/6の発現を抑制した。

現は促進した。

３．Wnt5aKO 骨芽細胞では Lrp5/6の発現および石８．Ror2KO 骨芽細胞では，Lrp5/6の発現に変化は灰化能が低下した。また Runx2や Sp7の発現も低認めなかった。

下していた。そして古典的経路の活性を示す TCF/

これまでの報告から Wnt5a は古典的経路に対し抑LEF 活性が低下した。

制的に作用することが知られていた。しかし今回の結４．Wnt5aKO マウスの骨組織では，古典的経路の活性を示す βカテニンレベルが低下した。

果より，Wnt5a は骨芽細胞においては Lrp5/6の発現を誘導することで，古典的 Wnt 経路による骨芽細胞

５．Wnt5aKO 骨芽細胞に外因性の Wn5a を添加す

分化を促進する作用も持つことが示唆された。よってると，Lrp5/6の 発 現，TCF/LEF 活 性，お よ び 石

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が灰化能が回復した。

あるものと認めた。

Corpus Callosum Atrophyin Patients with HereditaryDiﬀuseLeukoencephalopathywith Neuroaxonal
Spheroids:An MRI‑based Study（神経軸索スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症における脳梁萎縮に関する画像的検討）
木

下

通

亨

（論文の内容の要旨）せた24例の器質的中枢神経疾患を伴わない患者（男性【背景・目的】神経軸索スフェロイドを伴う遺伝性び

15例，女性９例，年齢29‑73歳，平均49.9歳±13.8歳：

まん性白質脳症（HDLS：hereditary diﬀuse leu-

非中枢神経疾患群）24画像について検討した。

koencephalopathy with neuroaxonal spheroids）は，

HDLS 群は，いずれも CSF1R 遺伝子解析により成人期に発症し，認知機能低下，精神症状，運動障害，

変異が確定された患者を選択した。脳血管性認知症群

痙攣発作を呈する大脳白質疾患である。常染色体優性は，National Institute for Neurological Disorders

遺伝形式をとり，colony stimulating factor‑1受容体

and Stroke‑Association Internationale pour la Re-

遺 伝 子（CSF 1R ）変 異 が 原 因 で あ る。HDLS は，

cherche et lʼEnseignement en Neurosciences

MRI で大脳白質病変・大脳萎縮を呈し，脳血管性認（NINDS‑AIREN）による脳血管性認知症の基準を知症，遺伝性脳小血管病，前頭側頭型認知症，多発性みたす患者のうち，80歳以下，家族歴のないものを選

硬化症などの様々な神経疾患との鑑別が問題となる。

択した。HDLS 群および脳血管性認知症群における

また，HDLS においては脳梁も病変好発部位であり，

M RI 撮影時点での臨床病期を modiﬁed Rankin Scale

神経病理学的にも高度の萎縮を呈することが報告され（mRS）で評価した。

ている。

また，T1強調画像正中矢状断で，picture archiving

本研究では，HDLS 患者の脳 M RI における脳梁萎

and communication system（PACS）workstation

縮に関して，より詳細な定量的評価を行い，HDLSの計測ツールを用いて，画面上で，脳梁吻部，脳梁体の早期診断，鑑別診断における有用性を検討した。

部，脳梁傍大部，脳梁前後径，脳梁高の各径を計測し，【対象と方法】６例の HDLS 患者（男性４例，女性２（脳梁吻部＋脳梁体部＋脳梁傍大部）/脳梁前後径＝脳例，年 齢29‑57歳，平 均47.3±9.3歳：HDLS 群）10

梁萎縮指標（CCI：corpus callosum index）として算

画像，対照として，20例の脳血管性認知症患者（男性出した。
他に，脳梁体部（Ｂ：body）/脳梁高（Ｈ：Height）

11例，女性９例，年齢42‑79歳，平均68.5±7.9歳：脳

＝B/H，
脳梁体部
（Ｂ）/脳梁前後径（Ｌ：Length）＝B/L

血管性認知症群）20画像，HDLS 群と年齢を対応さを指標として算出した。計測に際しては，１名の著者

308

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨と，年齢・性別，診断名，臨床に関する情報を与えら

経病理学的にも高度の萎縮を呈する。本研究では，れていない２名の測定者が，それぞれ１回，独立してHDLS 患者の脳 MRI における脳梁萎縮に関して，定行 っ た。HDLS 群 と 各 対 照 群 の 各 指 標 を，Mann‑

量的評価を行い，HDLS の早期診断，鑑別診断におWhitneyのＵ検定により統計学的に比 した。

ける有用性を検討した。

【結果】HDLS群では全例で前頭葉・側頭葉の白質病変，

６例の HDLS 患者（男性４例，女性２例，年齢29‑

脳梁病変を認めた。HDLS 群の CCI（0.210±0.050）

57歳，平均47.3±9.3歳：HDLS 群）10画像，対照とは，脳血管性認知症群（0.289±0.050，p＜0.01），年齢

して，20例の脳血管性認知症患者（男性11例，女性９を対応させた非中枢性神経疾患群（0.371±0.056，p＜

例，年齢42‑79歳，平均68.5±7.9歳：脳血管性認知症

0.01）と比して有意な低下を認めた。HDLS 群の群）20画像，24例の器質的中枢神経疾患を伴わない患

B/H（0.093±0.024）は，脳血管性認知症群（0.169±

者（男性15例，女性９例，年齢29‑73歳，平均49.9歳±

0.039，p＜0.01），年齢を対応させた非中枢性神経疾

13.8歳：非中枢神経疾患群）24画像について検討した。

患群（0.208±0.039，p＜0.01）と比して有意な低T1強調画像正中矢状断で，picture archiving and下を認めた。また，HDLS 群の B/L（0.040±0.009）

communication system（PACS）workstation の計は，脳 血 管 性 認 知 症 群（0.065±0.011，p＜0.01），

測ツールを用いて，画面上で，脳梁吻部，脳梁体部，

年齢を対応させた非中枢性神経疾患群（0.079±0.014，

脳梁膨大部，脳梁前後径，脳梁高の各径を計測し，p＜0.01）と比して有意な低下を認めた。mRS は（脳梁吻部＋脳梁体部＋脳梁膨大部）/脳梁前後径＝脳脳血管性認知症群（2.75±0.89）と HDLS 群（3.30±

症萎縮指標（CCI：corpus callosum index）として1.10）との間で差はなかった。

算出し，各群の差を統計学的に検定した。

【考察・結論】本研究は，HDLS患者では発症から６‑

結 果，HDLS 群 の CCI（0.210±0.050）は，脳 血 管36カ月の病初期においても MRI 画像にて明らかな脳性 認 知 症 群（0.289±0.050），非 中 枢 性 神 経 疾 患 群

梁萎縮が見られることを示した。HDLS は，大脳白（0.371±0.056）と比質病変を呈する他の疾患，特に脳血管性認知症とは臨た，発症から６‑36カ月の病初期の HDLS 患者におい床的・画像的に鑑別が困難であるが，臨床的に同程度ても明らかな低値を認めた。

して有意に低下していた。まの重症度であっても HDLS では脳梁萎縮が有意に強HDLS の脳梁と半卵円中心の神経病理像は，ほぼいことが示唆された。MR 矢状断画像にて，早期から同等・同質であった。脳梁は両側大脳白質の交連線維出現する脳梁萎縮に留意することは，HDLS を診断を集める部位であり，大脳白質の有髄神経線維の減少する重要な手がかりになると考えられた。

を反映する部位と考えられる。このような二次性変化（論文審査の結果の要旨）に加えて，脳梁自体に出現する病変が加わり，強い脳

神経軸索スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳梁萎縮を呈すると考察された。MRI にて早期から出症（HDLS：hereditarydiﬀuse leukoencephalopathy

現する脳梁萎縮に留意することは，HDLS を診断すwith neuroaxonal spheroids）は，M RI で大脳白質

る重要な手がかりになると考えた。

病変を呈し，脳血管性認知症等との鑑別が問題となる。
HDLS においては，脳梁も病変好発部位であり，神以上の結果より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Coexpression of EpCAM, CD44 variant isoforms and claudin‑7 in anaplastic thyroid carcinoma（甲状腺未分化癌において EpCAM，CD44 variant isoforms と claudin‑7は共発現する）
岡

田

敏

宏

（論文の内容の要旨）えられている EpCAM とその関連因子である CD44

【はじめに】甲状腺未分化癌は極めて悪性度が高い腫variant isoformsおよびclaudin‑7に着目し，ALDH1

瘍であるが，その高い悪性度の要因や，未分化癌が分酵素活性との比 も加え解析した。

化癌から生じてくる未分化転化の機序は，未だ解明さ【方法】甲状腺 乳 頭 癌 細 胞 株 TPC1，濾 胞 癌 細 胞 株

れていない。今回我々は，様々な悪性腫瘍で悪性度と未分化癌細胞株の FRO，
FTC133，
ACT‑1について，細の相関が認められ，癌幹細胞のマーカーの一つとも考胞表面マーカーであるCD44のstandard form
（CD44s）

No. 5, 2015309

審査学位論文要旨

および variant isoform（CD44v3，CD44v6），EpCAM

られ，ALDH1酵素活性が高い細胞での EpCAM の共の発現，および ALDH1酵素活性を，FACS と蛍光免発現が観察された。⑺ 甲状腺癌臨床検体の免疫染色

疫染色で解析した。また，これらの因子と claudin‑7での解析：未分化癌では，EpCAM の核での発現が分の mRNA 発現を定量的 RT ‑PCR 法で解析し，さら化癌より有意に多く認められ，未分化癌で CD44s のに，臨床甲状腺癌組織の免疫組織染色で発現を解析し発現が低く，CD44v6の発現が高い傾向が認められた。

た。

また，未分化癌では CD44s 低発現かつ CD44v6高発【結果】⑴ EpCAM と CD44s，CD44v3，CD44v6の発現を示す症例が認められたが，分化癌では認められな

現の比 ：EpCAM は未分化癌細胞株で高発現を認め，かった。

分化癌細胞株では発現が認められないか，極めて低い【考察】EpCAM ，CD44 variant isoforms，claudin‑7発現が認められた。CD44s は分化癌細胞株で高発現が複合体を形成して腫瘍の悪性度や増殖を促進してを認めたが，未分化癌細胞株ではその発現は低かった。

いる可能性が他癌で報告されているが，今回の我々

一方，CD44の variant isoform では，未分化癌細胞の解析でも，甲状腺未分化癌細胞株で，EpCAM と株で variant３および６の発現を認めたが，分化癌細claudin‑7の 高 発 現，CD44s の 発 現 低 下 と variant

胞株では発現を認めなかった。⑵ EpCAM と CD44s

forms の発現増加や高い ALDH1酵素活性が認められ，の発現の比：FACS 解析では，未分化癌細胞株で臨床検体でも EpCAM や CD44v6では同様の傾向が認は EpCAM の高発現と CD44s の低発現を認め，両者められ，甲状腺未分化癌では EpCAM とその関連因の発現には逆相関が認められた。蛍光二重染色の観察

子や高い ALDH1酵素活性が，この癌の高い悪性度にでは，CD44s の発現は分化癌細胞株で高く，未分化

関与している可能性が推測され，これらの因子が新規癌細胞株では低発現を示し，一方 EpCAM の発現は，治療戦略開発に繫がる可能性が考えられる。

分化癌細胞株では認めら れ ず，未 分 化 癌 細 胞 株 のCD44s が低発現の細胞でのみその発現が認められた。

（論文審査の結果の要旨）
甲状腺未分化癌は極めて悪性度が高い腫瘍であるが，⑶ EpCAM ，claudin‑7の mRNA および蛋白 の 発 現

その高い悪性度の要因や，未分化癌が分化癌から生じの比：EpCAM およびこれと直接結合することによてくる未分化転化の機序は，未だ解明されていない。

り Wnt シグナル伝達に関与する claudin‑7の発現を，

今回岡田は，様々な悪性腫瘍で悪性度との相関が認め

RT‑PCR 法およびウェスタンブロット法で解析した。

られ，癌幹細胞のマーカーの一つとも考えられている

未分化癌細胞株では，EpCAM ，claudin‑7のいずれ

EpCAM とその関連因子であるCD44 variant isoforms

も，分化癌細胞株に比し有意な発現の増加を認めた。

および claudin‑7に着目し，ALDH1酵素活性との比⑷ ALDH1酵素活性と mRNA 発現解析の比：分化癌細胞株では ALDH1酵素活性を有する細胞は認めも加え解析した。
甲状腺乳頭癌細胞株 TPC1，濾胞癌細胞株 FTC133，

られず，未分化癌細胞株では，高い ALDH 1酵素活

未分化癌細胞株の FRO，ACT‑1について，細胞表面性を有する細胞を多く認めた。また，未分化癌細胞株

マーカーである CD44の standard form（CD44s）おでは，ALDH1 mRNA の有意な発現増加を認めた。

よび variant isoform（CD44v3，CD44v6），EpCAM⑸ ALDH1酵素活性と CD44s の発現の 比：FACSの発現，および ALDH1酵素活性を，FACS と蛍光免解析では，ALDH1酵素活性と CD44s の発現には逆疫染色で解析した。また，これらの因子と claudin‑7相関を認め，蛍光二重染色での観察では，CD44s 高の mRNA 発現を定量的 RT ‑PCR 法で解析し，さら発現の細胞は ALDH1酵素活性が低く，逆に ALDH1に，臨床甲状腺癌組織の免疫組織染色で発現を解析し酵素活性が高い細胞では CD44s の発現が低いことた。

が観察された。未分化癌細胞株ではALDH1酵素活性は 高 く，CD44s は 低 発 現 を 示 し た。⑹ ALDH1酵
素活性と EpCAM の発現の比

その結果，岡田は以下の結論を得た。
１．EpCAM は未分化癌細胞株で高発現を認め，分化：未分化癌細胞株で癌細胞株では発現が認められないか，極めて低い発は，ALDH1酵 素 活 性，EpCAM 発 現 と も に 高 く，

現が認められた。CD44s は分化癌細胞株で高発現

ALDH1酵素活性と EpCAM には強い正の相関が認めを認めたが，未分化癌細胞株ではその発現は低かっられた。蛍光二重染色では，未分化癌細胞株にのみた。一方，CD44の variant isoform では，未分化癌

ALDH1酵素活性，EpCAM 発現共に高い細胞が認め細胞株でvariant３および６の発現を認めたが，分化310

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

癌細胞株では発現を認めなかった。

６．未分化癌細胞株では，ALDH1酵素活性，EpCAM

２．FACS 解析では，未分化癌細胞株では EpCAM

発現ともに高く，ALDH1酵素活性と EpCAM にはの高発現と CD44s の低発現を認め，両者の発現に強い正の相関が認められた。蛍光二重染色では，未は逆相関が認められた。蛍光二重染色の観察では，

分化癌細胞株にのみ ALDH1酵素活性，EpCAM 発

CD44s の発現は分化癌細胞株で高く，未分化癌細現共に高い細胞が認められ，ALDH1酵素活性が高胞株では低発現を示し，一方 EpCAM の発現は，い細胞での EpCAM の共発現が観察された。

分化癌細胞株では認められず，未分化癌細胞株の７．未分化癌では，EpCAM の核での発現が分化癌よCD44s が低発現の細胞でのみその発現が認められり有意に多く認められ，未分化癌で CD44s の発現た。

が低く，CD44v6の発現が高い傾向が認められた。

３．未分化癌細胞株では，EpCAM ，claudin‑7のいまた，未分化癌では CD44s 低発現かつ CD44v6高

ずれも，分化癌細胞株に比し有意な発現の増加を認発現を示す症例が認められたが，分化癌では認めらめた。

れなかった。

４．分化癌細胞株では ALDH1酵素活性を有する細胞

これらの結果により，本研究では，甲状腺未分化癌は認められず，未分化癌細胞株では，高い ALDH1細胞株で，EpCAM と claudin‑7の高発現，CD44s の酵素活性を有する細胞を多く認めた。また，未分化発現低下と variant forms の発現増加や高い ALDH1

癌細胞株では，ALDH1 mRNA の有意な発現増加

酵素活性が認められ，臨床検体でもEpCAM やCD44v6を認めた。

では同様の傾向が認めら れ，甲 状 腺 未 分 化 癌 で は

５．FACS 解 析 で は，ALDH1酵 素 活 性 と CD44s のEpCAM とその関連因子や高い ALDH1酵素活性が，発現には逆相関を認め，蛍光二重染色での観察では，この癌の高い悪性度に関与している可能性が推測され，

CD44s 高発現の細胞は ALDH1酵素活性が低く，これらの因子が新規治療戦略開発に繫がる可能性が考逆に ALDH1酵素活性が高い細胞では CD44s の発えられた。よって，主査，副査は一致して本論文を学

現が低いことが観察された。未分化癌細胞株では位論文として価値があるものと認めた。

ALDH1酵素活性は高く，CD44s は低発現を示した。

Mutations of Pre‑core and BCP Before and After HBeAg Seroconversion（HBe抗原セロコンバー
ジョン前後におけるプレコア・コアプロモーター変異の臨床的意義）
上

條

のぞみ

（論文の内容の要旨）

持続陰性群43例（観察期間中央値９年）を対象とした。

【目的】HBV 持続感染者の自然経過における，HBe

自 然 経 過 中 の HBeAg， anti ‑HBe， HBs 抗 原

抗 原（ HBeAg ）か ら HBe 抗 体（ anti‑HBe）の（HBsAg），コ ア 関 連 抗 原（HBcrAg），HBV DNAHBeAg セロコンバージョン（SC）は通常，HBV のの変動について調査し，HBV genotype 分類は溝上

複製や肝臓の炎症の減少などを伴う良い兆候であると

ら の 報 告 に 従 っ た。pre‑C・BCP 変 異 に つ い て は受け止められている。だが SC 後でもなお高ウイルス

enzyme‑linked mini‑sequence assay kit・HBV core

量や強い炎症性を示す症例がある。HBV の変異のいpromoter detection kit を用いて検出し，SC 群の詳

くつかは SC と関連があると報告されており，近年特細な検討にはダイレクトシークエンス法にて HBV ゲにプレコア（pre‑C）・コアプロモーター（BCP）変ノムフルシークエンス解析を行った。

異の関連性が示唆されているが，SC 前後の pre‑C・【結果】観察開始時と終了時において pre‑C・BCP 変

BCP 変異の正確な役割は未だ不明である。本研究で異の割合を比は，HBV 持続感染者の自然経過における特徴を遺伝

HBeAg 持続陰性群では，共に pre‑C・BCP 変異の子変異と検査値から長期間に渡り捉えることを目的と割合に変化はなかった。SC 群では BCP 変異の割合

し，さらに SC と pre‑C・BCP 変異との関連性につに変化がなかったが，pre‑C 変異の割合が有意に上昇

いて遺伝子学的に検討を行った。

し た（24％ to65％，P＝0.022）。さ ら に，SC 群 で【方法】HBeAg 持続陽性群18例，SC 群25例，HBeAg

pre‑C 変異を伴わない SC を引き起こした６例についNo. 5, 2015

したところ，HBeAg 持続陽性群と311

審査学位論文要旨て，SC 後の HBV のフルシークエンス解析を行った

期自然経過を観察可能であった HBV キャリア86例

ところ，岡本らの 報 告（1994年）に あ る SC と 関 連〔観察期間中央値９年〕を対象とした。HBe 抗原のする可能性のある変異は１例のみで他は認められな

status で３群に分け，pre‑C・BCP 変異や HB ウイ

か っ た。HBVDNA，HBsAg，HBcrAg は，HBeAg

ルスマーカーの検討を行い，pre‑C・BCP 変異の観陽性で pre‑C・BCP 変異が無い場 合 に 有 意 に 高 く

察前後での割合を明らかにし，さらに SC とこれら変（ HBV DNA： P＝0.003； HBsAg ： P＜0.001；

異との関連，Ｂ型肝炎の病態との関連を検討した。まHBcrAg：P＝0.001），反対に anti‑HBe 陽性では，た一部の SC 症例については HBV ゲノム全塩基配列

BCP 変異の有無にかかわらず pre‑C 変異がある場の比 検討を行った。

合において有意に高い（HBV DNA： P＝ 0.012；

その結果，上條は以下の結論を得た。

HBsAg：P＝0.041）という二相性の結果を示した。

１．BCP変異はSCのかなり前から高率に陽性であっ【考察】これまで pre‑C・BCP 変異の両方が HBeAg

たのに対し，pre‑C 変異は SC 前後で陽性率が急速産生を抑制することによって SC と関連づけられてきに上昇した。この結果より，pre‑C 変異は SC とよ

たが，それらの結果とは異なる報告もあり，本研究でり直接的に関連すること，BCP 変異は SC と関連は SC 群のみならず HBeAg 持続陽性群や HBeAg 持するとしてもより間接的であることが示唆された。

続陰性群をも含めた長期間追跡調査を行うことにより

２．SC 群において，Pre‑C 変異を伴わずに SC した

自然経過中の pre‑C・BCP 変異を捉えることができ６症例があったことから，これらの症例について全た。上記の結果より，少なくとも BCP 変異は SC 前

塩基配列を決定したが，この６例中５例では SC とから存在しており SC との関連性が認められないが，関連することが報告されている変異が確認されず，

pre‑C 変異の出現は明らかに SC 後であり SC と直接

遺伝子変異と直接的に関与しない SC の存在が示唆

関係している可能性が示唆された。中でも特筆すべきされた。

は，pre‑C 変異を伴わない SC が存在したことで，必３．Pre‑C 変異の有無と HBV 活動性との関連性のずしも pre‑C 変異が HBeAg 産生を抑制する変異で検討において，HBe 抗原陽性例と HBe 抗体陽性はないということを示している。フルシークエンス解

例で，逆のパターンになることは大変興味ある結果

析の結果から，岡本らの SC に関する変異は１例のみであり，この結果より HBe 抗原の SC 後にしばしであり，その他の変異や欠損/挿入の可能性を追求す

ば み ら れ る HBe 抗 原 陰 性 慢 性 肝 炎 は，HBV のるため今後さらに SC 前後での遺伝子学的解析を加え

HBe 抗原非産生変異株により惹起されている可能ていく必要があると考える。また本研究では，HBV性が示唆された。

複製活性を評価するマーカーとして血清中の HBVPre‑C と BCP 変異は HBe 抗原の非産生変異であDNA，HBsAg，HBcrAg 値 を 用 い た。こ れ ら の 値

り，これまで SC との直接的な関連性が示唆されていが HBeAg 陽性時と anti‑HBe 陽性時で は pre‑C・た。しかし，SC 前後での両変異の出現パターンに差BCP 変異の有無に対応して相反する結果を示したこがあることや，遺伝子変異を伴わない SC の存在も報とで，宿主免疫からのプレッシャーによるものだとい告されており，これまで十分に解明されていないのがうことが確認できた。これらの結果より anti‑HBe 陽

現状である。本研究では，SC 例のみならず，HBe 抗性時における pre‑C 変異の存在は臨床的に肝炎へと原持続陽性例や HBe 抗体持続陽性例も対象として解進行することが示唆された。

析し，自然経過を長期間観察することにより，pre‑C【結語】HBV 感染者の SC 前後において，pre‑C 変異および BCP 変異の SC における意義をより鮮明にしはウイルス量との相反する関連性が示唆された。

た。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文（論文審査の結果の要旨）として価値があるものと認めた。

HBV 持続感染者の自然経過における，HBe 抗原（HBeAg）か ら HBe 抗 体（ anti‑HBe）の HBeAg
セロコンバージョン（SC）は通常，HBV の複製や肝臓の炎症の減少などを伴う良い兆候であると受け止められている。本研究ではウイルスの遺伝子変異とHBe 抗原の SC との関連をより明確にするため，長312

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

Physiological signiﬁcance of Rag1in neuronal death,especiallyoptic neuropathy（神経，特に視神経の細胞死における Rag1の生理的重要性）
平

野

隆

雄

（論文の内容の要旨）

より RGCs にのみ Rag1が発現することが明らかと【背景と目的】核内転写因子 nuclear factor kappa Bなった。６カ月齢のNF‑κBp50欠損マウスでは網膜切（NF‑κB）が細胞死 あ る い は 細 胞 生 存 に 関 与 し て片，フルオレセイン逆行性染色により測定した RGCs

いることはよく知られている。しかしながら，中枢神数が野生型マウスと比 し有意な減少が認められた。

経系での細胞死における NF‑κB の詳細な役割につしかしながら，NF‑κBp50・Rag1ダブル欠損マウス

い て は 明 ら か と さ れ て い な い。以 前，我々は NF‑

では，野生型マウスと RGCs 数において有意差が認

κBのサブタイプの１つである p50欠損マウス（NF‑

められなかった。フローサイトメトリーの結果，６カκBp50欠損マウス）における経時的な網膜神経節細胞

月齢の NF‑κBp50欠損マウスの RGCs 細胞死数が野（RGCs）の障害について報告した。本研究では NF‑

生型マウスと比 し有意に増加していた。一方，NF‑

κBp50欠損マウスで認められる RGCs 障害を制御しκBp50・Rag1ダ ブ ル 欠 損 マ ウ ス の RGCs 細 胞 死 数ている因子の発現と活性化について検討を行った。

は野生型マウスと同等であった。M urine neuronal【材料及び方法】組換え活性化遺伝子（Rag : Recom-stem‑like cells を用いた NMDA 誘導性細胞死の実験

bination activating gene）は Rag1 および Rag2 によ系において，コントロール群に比し Rag1の発現を抑り構成されている。この２つの遺伝子が V
（Ｄ）
J 組換

制した群では Live cells の割合が有意に多かった。まえ酵素の Rag1および Rag2 を作り，多種多様な抗体

た，Rag1を過剰発現させた HEK293細胞において，細産生を可能にし，適応免疫には欠かせない。Rag1は胞死関連因子 Bax，cleaved caspase‑3，‑8，‑9の発現

中枢神経系，その中でもとくに海馬などの細胞密度がはコントロール群より有意に強いことが認められた。

高い領域での発現が確認されているが，同領域での組織学的解析により，ヒト網膜でも Rag1が RGCs 特

Rag1の役割については明らかされていない。本研究

異的に発現していることが確認された。

では，Rag1が RGCs 障害に関係しているという仮説【結論】マウスの視路において Rag1が RGCs特異的にをたて，まず Rag1の視路での発現を４カ月齢の野生発現していることが明らかとなった。また，In vivo型マウスを用い免疫染色法，ウエスタンブロット法，

および in vitro の結果より Rag1が神経細胞死に関与

PCR 法により検討した。次いで，Rag1の RGCs 細胞することが示された。さらに，ヒト網膜でも RAG1が死への関与を明らかにするため，６カ月齢の野生型マ

RGCs に発現していることが確認されたことから今後，ウス，NF‑κBp50欠損マウス，NF‑κBp50・Rag1ダ

緑内障を代表とする RGCs 障害に対して RAG1が新

ブル欠損マウス，Rag1欠損マウスの４群において網たな治療法のターゲット候補となる可能性が示唆され

膜切片・フルオレセイン逆行性染色により RGCs 数

た。

を評価した。RGCs の細胞表面マーカー CD90.2陽性（論文審査の結果の要旨）細胞において Annexin V を用いたフローサイトメト

核内転写因子 nuclear factor kappa B（NF‑κB）

リーにより RGCs 細胞死数を検討した。In vitro でが細胞死あるいは細胞生存に関与していることは知らはneuronal stem‑likecells（mouse）を用いたNMDA

れているが，中枢神経系での細胞死における NF‑κB

誘導性細胞死の実験系により，Rag1の発現有無との正確な役割については明らかとされていない。本研

神経細胞死との関連性を検討した。また，人為的に究では NF‑κBp50欠損マウスで認められる網膜神経

Rag1を 過 剰 発 現 さ せ た HEK293細 胞 で の Bax，

節細胞（RGCs）障害を制御している因子の発現と活

cleaved caspase‑3，‑8，‑9などの細胞死制御因子の性化について検討を行った。

発現をウエスタンブロット法により評価した。さらに，

Rag1の視路での発現を４カ月齢の野生型マウスを

ヒト網膜における Rag1の発現を組織学的に検討した。

用い免疫染色法，ウエスタンブロット法，PCR 法に【結果】４カ月齢の野生型マウスの網膜・視神経におより検討した。次いで，Rga1 の RGCs 細胞死への関

いて免疫染色法，ウエスタンブロット法，PCR 法に与を明らかにするため，６カ月齢の野生型マウス，

No. 5, 2015313

審査学位論文要旨

NF‑κBp50欠損マウス，NF‑κBp50・Rag1ダブル欠

３．Murine neuronal stem‑like cellsを用いたNMDA

損マウス，Rag1欠損マウスの４群において網膜切片，

誘導性細胞死の In vitro 実験系において，Rag1のフルオレセイン逆行性染色，フローサイトメトリー発現を抑制することにより Live cells の割合がコンなどの手法により各マウスの RGCs 数を評価した。

トロール群に比し有意に多かった。また，培養細胞

Murine neuronal stem‑like cells を用いた NM DA 誘を用いた In vitro 実験系において，Rag1を過剰発

導性細胞死の In vitro 実験系を用いて，Rag1の発現現させることにより細胞死関連因子の発現がコント有無の神経細胞死への影響を検討した。また，人為的ロール群に比し有意に上昇していた。

に Rag1を過剰発現させた HEK293細胞での細胞死制

４．ヒト網膜でも RAG1が RGCs 特異的に発現して御因子の発現をウエスタンブロット法により評価した。

いた。

さらに，ヒト網膜における Rag1の発現を組織学的にこれらの結果より，マウスの視路において Rag1が検討した。

RGCs 特異的に発現していて神経細胞死に関与するこ

その結果，平野は次の結論を得た。

とが示された。さらに，ヒト網膜でも RAG1が RGCs

１．マウスの網膜・視神経組織では，RGCs にのみにRag1が発現していた。

に発現していることが確認されたことから，今後，緑内障を代表とする RGCs 障害に対して RAG1が新た

２．６カ月齢の NF‑κBp50・Rag1ダブル欠損マウス

な治療法のターゲット候補となる可能性が示唆された。

では，NF‑κBp50欠損マウスで特異的に認められよって，主査，副査は一致して本論文を学位論文としる RGCs 細胞死が減少していた。

て価値があるものと認めた。

Genotype‑phenotype correlation in Japanese patients with familial Mediterranean fever:diﬀerences ingenotype and clinical features between Japanese and Mediterranean populations（本邦の家族性地中海熱患者における遺伝型と表現型の関連―地中海地方との遺伝型や臨床像の違いについて―）岸田大（論文の内容の要旨）

除外し，何らかの遺伝子変異を有していた116例の患【背景】家族性地中海 熱（Familial M editerranean者を対象とし，遺伝型と表現型との関連について検討

fever；FMF）は遺伝性の自己炎症性疾患であり，周した。

期性発熱に加え胸膜炎や腹膜炎などの漿膜炎を特徴と【結果】116例中，複合へテロ接合体が67例と最も多く，する。原因遺伝子である MEFV 遺伝子の変異により単独ヘテロ接合体が47例，ホモ接合体が２例だった。

発症し，基本的には常染色体劣性遺伝性であるものの，男女比は51：65と女性にやや多く，発症年齢は平均

単独ヘテロ接合体でも発症することがある。典型例で23.7歳，年間の発作頻度は平均11.7回，１回の発作のは12時間から３日間程度続く発熱や漿膜炎発作を繰り

持続期間は平均4.7日であった。臨床症状としては，返し，コルヒチンの投与が発作の予防に有効である。

38℃以上の発熱が83.6％の患者で認められた。その従来地中海地方の民族に多い疾患と考えられてきたが，他の症状は腹膜炎：62.1％，胸膜炎：45.7％，関節近年本邦でも疾患の認知度が高まり，遺伝学的検査が炎：41.4％，頭痛：19.8％，筋痛：11.2％，紅斑：可能となったことから，症例の報告が増加している。

6.8％であった。反応性 AA アミロイドーシスの頻度

今回我々は，本邦の FM F 患者の臨床的特徴を明らか

は1.7％と地中海地方（9.5‑24％）より少なかった。

にするために，遺伝型と表現型の関連について詳細な

コルヒチンは60.3％の患者で投与され，そのうち90検討を行った。

％以上の患者で発作の軽減あるいは消失を認めた。コ

【方法】2003年９月から2012年12月までに，臨床的にルヒチンの平均投与量は１日あたり0.8mg であった。

FMF が疑われ遺伝学的検査の同意が得られた216例

最も多く検出された変異は E148Q（全体の40.2％）の患者（自験例76例，他施設からの依頼140例）に対で，以 下 M 694I（21.0％），L110P（18.8％），P369S

し， MEFV 遺伝子の解析を行った。症状については（5.4％），R408Q（5.4％）の順であった。一方で，地中臨床診断の指標として確立している Tel‑Hashomer

海地方で頻度の高い変異（M 694V，V726A，M 680I）

criteria を用いた。後に他疾患の診断がついた症例をは検出されず，変異の種類に人種間の差があることが314

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

明らかになった。本邦の FMF 患者において，M 694Iを有する患者は発症年齢が低く，発作の頻度が高いこ

作の持続期間は平均4.7日であった。
３．臨床症状としては，38℃以上の発熱が83.6％のとに加え，胸膜炎や腹膜炎の出現頻度も高く，他の変患者で認められた。その他の症状は腹膜炎：62.1％，

異をもつ患者と比べ重症であった。また，M 694I を胸膜炎：45.7％，関節炎：41.4％，頭痛：19.8％，有する患者はコルヒチン治療に対して非常に良好な反筋痛：11.2％，紅斑：6.8％であった。反応性 AA

応を示した。一方 E148Q を有する患者は，発症年齢

ア ミ ロ イ ド ー シ ス の 頻 度 は1.7％ と 地 中 海 地 方はやや高く，発作頻度はやや低く，軽症の患者が多（9.5‑24％）より少なかった。

かった。P369S/R408Qを有する患者は，非常に多彩

４．コルヒチンは60.3％の患者で投与され，そのうな表現型をとると同時に，コルヒチンの効果は限定的

ち90％以上の患者で発作の軽減あるいは消失を認であり，診断にあたっては注意が必要と考えられた。

めた。コルヒチンの平均投与量は１日あたり0.8【考察】本邦の FMF 患者では，臨床的な特徴や遺伝mg であった。

子変異の種類が地中海地方とは異なっていた。また，

５．最も多く検出された変異は E148Q（全体の40.2

本邦 FM F の患者の中でも，遺伝型によって表現型は％）で，以下 M 694I（21.0％），L110P（18.8％），

大きく異なっていた。FM F の診断に際しては，臨床，R408Q（5.4％）の順であった。
P369S（5.4％）

症状と遺伝学的検査の両者を組み合わせて検討するこ

一方で，地中海地方で頻度の高い変異（M 694V，とが必要と考えられた。

V726A，M 680I）は検出されず，変異の種類に人種（論文審査の結果の要旨）
家族性地中海熱（Familial M editerranean fever；

間の差があることが明らかになった。
６．本邦の FM F 患者において，M 694I を有する患FMF）は遺伝性の自己炎症性疾患であり，周期性発者は発症年齢が低く，発作の頻度が高いことに加え，熱に加え胸膜炎や腹膜炎などの漿膜炎を特徴とする。

胸膜炎や腹膜炎の出現頻度も高く，他の変異をもつ原因遺伝子である MEFV 遺伝子の変異により発症し，患者と比べ重症であった。同時にコルヒチン治療に

基本的には常染色体劣性遺伝性であるものの，単独ヘ対して非常に良好な反応を示した。一方 E148Q を

テロ接合体でも発症することがある。典型例では12時有する患者は，発症年齢はやや高く，発作頻度はや間から３日間程度続く発熱や漿膜炎発作を繰り返し，や低く，軽症の患者が多かった。P369S/R408Q を

コルヒチンの投与が発作の予防に有効である。従来地有する患者は，非常に多彩な表現型をとると同時に，中海地方の民族に多い疾患と考えられてきたが，近年

コルヒチンの効果は限定的であり，診断にあたって

本邦でも疾患の認知度が高まり，遺伝学的検査が可能

は注意が必要と考えられた。

となったことから，症例の報告が増加している。今回，これらの結果より，本邦の FMF 患者では臨床的な本邦の FMF 患者の臨床的特徴を明らかにするために，

特徴や遺伝子変異の種類が地中海地方とは異なること

遺伝型と表現型の関連について詳細な検討を行った。

が明らかとなった。また，本邦 FM F の患者の中でも，2003年９月から2012年12月までに，臨床的に FMF

遺伝型によって表現型は大きく異なっていた。FMFが疑われ遺伝学的検査の同意が得られた216例の患者の診断に際しては，臨床症状と遺伝学的検査の両者を（自験例76例，他施設からの依頼140例）を対象とし，組み合わせて検討することが必要と考えられた。

MEFV 遺伝子の解析を行った。症状については臨
床診断 の 指 標 と し て 確 立 し て い る Tel‑Hashomer

以上の結果より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

criteria を用いた。後に他疾患の診断がついた症例を除外し，何らかの遺伝子変異を有していた116例の患者を対象とし，遺伝型と表現型との関連について検討した。
その結果，岸田は次の結論を得た。
１．116例中，複合へテロ接合体が67例と最も多く，
単独ヘテロ接合体が47例，ホモ接合体が２例だった。
２．男女比は51：65と女性にやや多く，発症年齢は平均23.7歳，年間の発作頻度は平均11.7回，１回の発No. 5, 2015315

審査学位論文要旨

Carcinogenicity evaluation for the application of carbon nanotubes as biomaterials in rasH2 mice（カーボンナノチューブを生体材料に応用するための rasH2マウスを用いた発がん性評価）
高

梨

誠

司

（論文の内容の要旨）

vol ％の濃度で混合した生理食塩水に，MWCNTs を【はじめに】Carbon nanotubes（CNTs）は，直径が３mg/ml の濃度で加え，超音波分散器を用いて30分

ナノスケール，長さがマイクロスケールの繊維状粒子

間 sonication を行い，CNT 浮遊液を作成した。同様

であり，その特徴的な物理的・化学的性質から，様々の方法により，カーボンブラックの３mg/ml の浮遊な分野で研究開発が進められている。医療の分野でも，

液を作成した。Tween80を0.1vol ％の濃度で混合しCNTs を生体材料に応用する研究が，近年活発に行ただけの生理食塩水を溶媒液とした。組織毒性を有す

われるようになり，抗癌剤の drug delivery system

ることが既知である M NU を３mg/ml で Tween80入や癌細胞のイメージングに利用したり，電磁波の吸収り生理食塩水に混合し，陽性対照液とした。

体として癌の温熱療法に用いるなど，癌治療に応用す

ヒト由来のプロト型癌遺伝子である c‑Ha‑ras を導る研究が急速に進められている。また，CNTs は骨入した rasH2マウスを用いて，CNTs の皮下埋め込

再生や神経再生の足場材料 scaﬀold materials としてみ試験を行った。rasH2マウスは生後34週齢まで腫瘍優れていることが報告されており，その他，強化材との自然発生は僅少であることから，生後６週齢に被験して既存の implant と複合することにより，機械的物質を投与し，26週間で腫瘍の発生を評価することで，強度や耐久性を高める研究なども進んでいる。

発癌リスクを予測した。背部皮下に各被験物質を550

このように様々な分野で応用が期待される CNTs
は，その生体安全性についても世界的に研究が進めら

ul/匹（約75mg/kg）注入した。各群10匹で，合計40匹の rasH2マウスを使用した。

れているが，多くが吸入に関するものである。しかし，26週後に安楽死させて解剖を行った。26週以内に死CNTs を生体材料として用いる場合の安全性は，吸亡もしくは極度の衰弱を認めた場合にはその時点で安入に対する安全性とは全く異なる評価が必要である。

楽死させ，解剖を行った。解剖の際には，まず肉眼でCNTs の生体材料としての安全性試験を行わなけれの腫瘍形成の有無を確認し，各臓器に分けて固定，包ばならない。特に，埋植した際の発癌性評価は最も重埋，薄切した。その後 hematoxylin and eosin 染色を要な課題の一つである。われわれが調べた範囲では，

行い，プレパラートを作成して，光学顕微鏡で観察しこれまでに CNTs を，遺伝子導入により発癌性を高た。

めた実験動物の体内に埋め込んで評価した報告はない。

【結果】CNT 群は，術後26週の時点で全て生存して今回我々は遺伝子導入発癌性モデルである rasH2いた。カーボンブラック群では，経過中１匹が死亡し，マウスを用いて CNTs の発癌性試験を世界で初めて26週で９匹が生存していた。溶媒群は，26週全てのマ行った。その際，安全性の基準物質として，黒色の刺ウスが生存していた。M NU 群では，経過中に４匹が青に使用されているカーボンブラックを用いた。

死亡した。

【対 象 と 方 法】使 用 し た CNTs は，Multi ‑walled

組織学的検査では，CNT群では１匹の脾臓にinﬂam-

CNTs（MWCNTs）で，平均直径100nm，平均長さ10matory psudotumor が発生した。カーボンブラック

μm，炭素含有率が99.9％以上であった。MWCNTs

群で死亡した１匹には新生物が認められず，死因は明を 溶 液 に 分 散 さ せ る た め の 界 面 活 性 剤 と し て，

らかではなかった。生存した９匹中１匹で，脾臓に血Tween80を使用した。黒色の刺青を乾燥して析出し管腫を認めた。また，別の１匹は肺に腺腫が生じた。

た固体成分を，評価のための基準物質とした。走査型

溶媒群では，いずれの臓器にも新生物形成を認めな

電子顕微鏡で形状を観察したところ，直径約30〜50

かった。M NU 群では，死亡した４匹と生存した６匹

nm のほぼ均一なカーボンブラック粒子であった。エ

全てに多くの新生物を認めた。

ネルギー分散型Ｘ線分光法を用いて元素組成分析を【考察と結論】これまで CNTs の生体材料としての安行ったところ，Ｃが99.57wt ％，Na が0.43wt ％で，全性試験がいくつか報告されているが，その評価は難その他の元素は検出されなかった。Tween80を0.1

しく，同じ試験でも異なる結果が報告されている。そ316

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨の最大の理由は，生体安全性が確認されているナノ粒はない。
今回高梨は世界で初めて多層CNT（MWCNT）

子の基準物質がなかったことである。我々は CNTs

を遺伝子導入発癌性マウスである rasH2マウスの背と同じ炭素からなり，長年にわたりヒトに埋め込まれ，

部皮下組織に埋め込み，その発癌性試験を行った。こ

歴史的にその安全性が認められている黒色の刺青がナの試験において，人体への安全性が実証されている黒ノサイズのカーボンブラックの粒子であることに着目

い刺青の主成分であるカーボンブラックを，安全性のし，2011年にこれが CNTs の安全性評価のための最基準物質として用いた。その他，陽性基準物質として適な基準物質になることを報告した。本研究では，こ，陰性基準物質
N ‑Methyl‑N ‑nitrosourea（MNU）のカーボンブラックを基準物質として，CNTs の発として生理食塩水を用い，各群10匹にて比癌性動物への皮下埋め込み試験を世界で初めて行った。

行った。

その結果，CNTs は発癌性が認められず，カーボン
ブラックより低い発癌性であった。

評価をその結果，高梨は次の結論を得た。
１．経過中 M WCNT 群ではすべてのマウスが生存し，今後も本研究で用いたカーボンブラックのような生カーボンブラック群では１匹が死亡した。

体安全性が実証されている基準物質と比 した，数多

２ ． M W C N T 群 に お い て ， in ﬂa m m a t o r y

くの発癌性試験の蓄積が必要である。これにより，pseudotumor を１例認めたが，それ以外の新生物

CNTs を生体材料に応用する研究が大きく進展すれの発生は全く認められなかった。

ば，癌治療，再生医療，drug delivery system など医

３．カーボンブラック群において，肺腺腫１例，脾臓

学の様々な重要分野が発展することが期待できる。
（論文審査の結果の要旨）

血管腫１例を認めた。
４．以上より MWCNT はカーボンブラックと同等ま

現在，カーボンナノチューブ（CNT）の様々な生たはより低い発癌性であった。

体材料への応用が注目されている。例えば，CNT を

今回の結果から，CNT が人体への安全性が実証さ

癌治療の drug delivery system に用いる研究，生体れている黒い刺青の主成分であるカーボンブラックとイメージングとして診断に用いる研究，再生医療にお同等もしくはより低い発癌性であることが示唆された。

いて足場材として用いる研究，複合強化剤として用い今後も適切な基準物質を用いて多くの発癌性評価を実る研究などがある。このような CNT を用いた生体材施し，その結果を蓄積して，CNT の生体材料として料を臨床で実用化する際に最も重要なことは，その生の安全性を確認していく必要がある。これにより，体安全性である。このためには生体材料としての様々

CNT を用いた生体材料が臨床応用されれば，医学がな毒性評価を行わなければならない。特に発癌性評価

大きく発展することが期待できる。

は最優先で行う必要があるが，これまでに遺伝子導入発
癌性マウスを用いた CNT における発癌性試験の報告

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Pathophysiological roles of adrenomedullin‑RAMP2 system in acute and chronic cerebral ischemia（急性および慢性脳虚血におけるアドレノメデュリン―RAMP2システムの病態生理学的意義）
五十嵐

恭

子

（論文の内容の要旨）

的意義の詳細は不明である。これまで我々は，AM お【背景と目的】脳虚血は，急性期の運動感覚障害のみ

よび AM 受容体の活性調節タンパクである RAM P2

ならず，慢性期には血管性認知症の原因にもなる。アのホモノックアウトマウスが，共に胎生中期に血管のドレノメデュリン（AM ）は，血管拡張作用を有する発達不全により致死となることから，RAM P2が AM

ペプチドホルモンとして発見されたが，その後の研究の血管における機能を制御する因子であることを発見

から，抗炎症作用，抗酸化ストレス作用，血管新生作し，新たな治療標的として有望と考えた。本研究では，用など多彩な作用を有することが明らかとなり，そのRAMP2の遺伝子発現が，野生型マウスの半分に低下し臨床応用も期待されている。一方で AM は血中半減たRAMP2ヘテロノックアウトマウス（RAMP2＋/−）期が短く，慢性疾患への応用には制限もある。さらにを用い，急性および慢性脳虚 血 に お け る 内 因 性 のAM は脳内でも高発現を認めるが，その病態生理学

AM ‑RAMP2系の病態生理学的意義を検討した。

No. 5, 2015317

審査学位論文要旨【方法】急性脳虚血を誘発させるため，マウスの総頸

RAMP2の遺伝子発現が野生型マウスの半分に低下した動脈からシリコンコートした塞栓糸を挿入して中大脳RAM P2ヘテロノックアウトマウス（RAM P2＋/−）

動脈内を閉塞し，２時間後に塞栓糸を抜去し，急性脳を用い，急性および慢性脳虚血における内因性 AM ‑梗塞モデルとした（中大脳動脈閉塞術（MCAO モデ

RAM P2系の病態生理学的意義を検討した。

ル））。また慢性脳虚血を誘発させるため，総頸動脈に

急性脳虚血を誘発させるため，マウスの総頸動脈か

直径0.18mm のコイルを装着し狭窄することで，慢性ら塞栓糸を挿入して一時的に中大脳動脈内を閉塞する

脳虚血状態を作製した（両側総頸動脈狭窄術（BCAS

ことで急性脳梗塞モデルとした（中大脳動脈閉塞術

モデル）
）
。

（M CAO モデル））。また慢性脳虚血を誘発させるため，【結果】MCAO処置したマウスにおいて，脳血流量の回総頸動脈にマイクロコイルを装着し狭窄することで，

復 は，野 生 型（WT）マ ウ ス と 比

慢性脳虚血状態を作製し た（両 側 総 頸 動 脈 狭 窄 術

し て，RAM P2＋/−マウスでは遅延していた。AM の遺伝子発現は，
RAM P2＋/−マウスおよびWTマウスの双方において，梗塞後に亢進したが，その発現の亢進はRAMP2＋/−マ（BCAS モデル））。
その結果，本研究では次の結論を得た。
１．MCAO 処置したマウスにおいて，脳血流量の回ウスでより顕著であった。さらにIL‑1βなどの炎症性

復は，野生型（WT）と比サイトカインの発現亢進は，RAMP2＋/−マウスでは遅延していた。

して RAM P2＋/−でより顕著であり，病理解析では，RAM P2＋/−マウ

２．遺伝子発現解析において，AM の発現は両群で梗

スでは，神経細胞の脱落および脱髄の亢進，神経細胞

塞 後 に 亢 進 し た が，そ の 発 現 の 亢 進 は RAM P2のアポトーシスの亢進，酸化ストレスレベルの亢進を＋/−でより顕著だった。また，炎症性サイトカイ認めた。

ンの発現亢進は，RAMP2＋/−でより顕著だった。

一方，BCAS 処置したマウスにおいては，脳血流３．病理解析では，RAM P2＋/−で神経細胞の変性

量の回復は，特に術後１日目までの急性期において，や脱髄，アポトーシスの亢進，酸化ストレスレベル

RAM P2＋/−マウスでは，WT マウスと比の亢進を認めた。

して有意に低下していた。病理解析では，術後早期（５日４．BCAS 処置したマウスにおいては，脳血流量の目）において，RAMP2＋/−マウスでは神経細胞の回復は，特に術後１日目までの急性期において，空胞変性を認め，術後慢性期（42日目）において，神RAMP2＋/−で有意に低下していた。

経細胞の変性や減少，酸化ストレスの亢進，血管新生

５．病理解析では，術後早期（５日目）において，の低下を認めた。８方向放射状迷路を用いた行動試験

RAMP2＋/−では神経細胞の空胞変性を認め，術では，RAM P2＋/−マウスでは，WT マウスと比後慢性期（42日目）において，神経細胞の変性や減少，して，参照記憶エラーの増加，所要時間の延長を認め，

酸化ストレスの亢進，血管新生能の低下を認めた。

記憶力が有意に低下していた。

６．行動解析試験では，RAMP2＋/−では，参照記【結論】内因性の AM ‑RAM P2系は，急性脳虚血にお憶エラーの増加，所要時間の延長を認め，記憶力がいては，脳血流の維持，炎症や酸化ストレスの抑制に有意に低下していた。

より，慢性脳虚血においては，血管新生作用により，以上の結果より，内因性 AM ‑RAM P2系は，急性急性および慢性脳虚血の双方において，神経細胞に対

脳虚血においては，脳血流の維持，抗炎症作用，抗ア

し保護的に働いていることが明らかとなった。AM ‑ポトーシス作用により神経細胞保護的に働き，慢性脳RAM P2系は，脳虚血に対する新たな治療標的として虚血においては，それらに加え，抗酸化ストレス作用，期待される。

血管新生作用により認知機能の改善に関与しているこ（論文審査の結果の要旨）
アドレノメデュリン（AM ）は多彩な作用を有する
ペプチドホルモンで，その臨床応用も期待されている。

とが明らかとなった。
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

一方で AM は血中半減期が短く，慢性疾患への応用には制限もある。さらに AM は脳内でも高発現を認めるが，その病態生理学的意義の詳細は不明である。
本研究では，AM 受容体の活性調節タンパクである
318

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

Functional diﬀerentiation of RAMP2 and RAMP3 in their regulation ofthe vascular system（脈管系制御における RAMP2と RAMP3の機能分化）
山

内

啓

弘

（論文の内容の要旨）

ところ，レーザードップラーによる血流回復，病理切【背景と目的】アドレノメデュリン（AM ）は，血管片における血管密度，各種血管新生因子の発現のいず拡張作用をはじめ，血管新生作用，抗酸化ストレス作

れも両群の間に差は認められなかった。

用，抗炎症作用など多彩な生理活性を有する心脈管作

次に，リンパ管について解析を進めた。術後リン動物質である。我々は AM の機能の多様性を制御す

パ浮腫モデルでは，血管，リンパ管特異的 RAM P2るメカニズムを解明するため，AM の受容体システ−/−共に，浮腫の程度に変化を認めなかったが，ムに着目した。AM およびそのファミリーペプチド

RAM P3−/−のみで浮腫の増悪を認めた。RAM P3の受容体である７回膜貫通型Ｇタンパク共役型受容体−/−では，新生リンパ管数，血管数に変化はないもCLR には，RAM P と呼ばれる受容体補助蛋白が結合のの，リンパ管の異常拡張，間質浮腫の増悪，炎症細する。RAM P は３つの αヘリックス構造からなる長胞浸潤の亢進が認められた。AM の持続投与によるい細胞外ドメインを有し，CLR と RAM P の細胞外浮腫の治療実験を行ったところ，野生型では浮腫の軽ドメイン同士が結合することにより，リガンドに対す減が認められるのに対し，RAMP3−/−では浮腫のるバインディングポケットが形成されると考えられて軽減は認められなかった。さらに，インドシアニング

いる。RAM P には１〜３までのサブアイソフォーム

リーンを用 い た 耳 介，尾 部 の リ ン パ 管 造 影 で は，が存在し，いずれも体内に広く分布しているが，各RAM P3−/−においてリンパ管ドレナージの不良がRAM P の相同性は約30%程度である。RAMP サブ

認められた。腸管リンパ管の乳糜輸送の検討では，

アイソフォームのうち RAM P2または RAMP3のいず

RAM P3−/−において脂質の吸収遅延が認められた。

れか１つが CLR に結合することにより，AM と親和

腸間膜リンパ管のライブイメージングを行ったところ，性 の 高 い 受 容 体 と し て 機 能 す る。し か し，こ れ ま

RAM P3−/−では小腸リンパ管のリンパ流速が著明で RAM P2と RAM P3の脈管系における機能的な差に低下していた。また，RAM P3−/−では，AM 投

異は不明なままであった。本研究では，RAMP2と与によって血管の拡張反応は見られるが，リンパ管に

RAM P3について，胎生期から全身で遺伝子欠損させ反応が見られなかった。電子顕微鏡によるリンパ管内たマウス，あるいは成体において各組織特異的に遺伝皮の観察では，RAM P3−/−において，リンパ管内

子欠損を誘導できるマウスを樹立し，胎生期における皮の形成不全，ミトコンドリアの空胞変性，繫留フィ

脈管系の発生と，成体において遺伝子欠損誘導後の脈ラメントの形成不全が特徴的に観察された。胎児リン管系の変化を観察し，両者の機能分化を検討した。

パ管内皮細胞の初代培養を行ったところ，RAM P3【結果】RAM P2ノックアウトマウス（−/−）は，胎−/−では，リンパ管関連因子の発現低下が認められ，生期に全身の浮腫や出血により致死となったが，成体

Scratch assayにおいて，RAM P3−/−リンパ管内皮での遺伝子欠損誘導後には血管炎や臓器障害が自然発

細胞は野生型と比べ遊走能が低下していた。RAM P3症することから，AM ‑RAMP2系は血管の発生と恒−/−リンパ管内皮細胞の遊走能の低下は，AM 添加

常性維持双 方 に 必 須 で あ る 事 が 示 さ れ た。一 方，によっても改善は認められず，AM ‑RAMP3系の破RAM P3−/−は胎生期の血管発生の異常は認められ綻による結果であると考えられた。さらに RAM P3ず，正常に出生し，成体が得られた。RAMP3−/−−/−リンパ管内皮細胞では，細胞生存シグナルであ成体における腫瘍移植モデルでの腫瘍血管新生の検討

る Akt の活性化低下が認められた。

では，腫瘍内血流，血管密度共に，野生型マウスと差【結論】以上の結果から，AM ‑RAM P2系が発生段階

違を認めなかった。腹部大動脈切片を用いた Aorticの血管新生，成体での血管恒常性を制御しているのにRing モデルによる ex vivo での検討でも，RAM P3

対し，AM ‑RAM P3系は成体でのリンパ管機能を制−/−は野生型と同程度の血管新生能を示した。さら御していることがはじめて明らかとなった。AM ‑に下肢虚血モデルを用いて虚血性血管新生を評価した

RAM P 系は，RAM P2，3の機能分化により脈管系全No. 5, 2015319

審査学位論文要旨

体の恒常性を制御する生体内システムであり，将来，３．術後リンパ浮腫モデルでは，血管，リンパ管特異新たな治療標的として期待される。

的 RAMP2−/−共に浮腫に変化を認めなかったが，（論文審査の結果の要旨）

RAMP3−/−のみで浮腫の増悪を認めた。RAM P3

アドレノメデュリン（AM ）は，多彩な生理活性を−/−では，新生リンパ管数，血管数に変化はない

有する心脈管作動物質である。AM およびそのファ

ものの，リンパ管の異常拡張，間質浮腫の増悪，炎

ミリーペプチドの受容体である７回膜貫通型Ｇタンパ症細胞浸潤の亢進が認められた。

ク共役型受容体 CLR には，受容体補助蛋白 RAMP

４．RAMP3−/−では，耳介，尾部のリンパ管造影が 結 合 す る。RAM P サ ブ ア イ ソ フ ォ ー ム の う ちにおいてリンパ管ドレナージの不良が認められ，腸RAM P2または RAM P3のいずれか１つが CLR に結管リンパ管による乳糜輸送において脂質の吸収遅延

合することにより，AM と親和性の高い受容体としが認められた。

て機能する。しかし，これまで RAMP2と RAMP3の５．RAMP3−/−では，リンパ管内皮の形成不全，

機能的な差異は不明なままであった。本研究では，

ミトコンドリアの空胞変性，繫留フィラメントの形

RAM P2と RAM P3について，各々の遺伝子改変マウ

成不全が特徴的に観察された。

スを用い，両者の機能分化を検討した。

６．RAMP3−/−の初代培養リンパ管内皮細胞では，その結果，山内啓弘は次の結論を得た。

リンパ管関連因子発現が低下しており，この細胞を１．RAM P2ノックアウトマウス（−/−）は，胎生用いた Scratch assayでは遊走能が低下していた。

期に全身の浮腫や出血により致死となったが，成体

この遊走能の低下は，AM 添加によって回復しなでの遺伝子欠損誘導後には血管炎や臓器障害が自然かった。

発症することから，AM ‑RAM P2系は血管の発生

７．RAMP3−/−リンパ管内皮細胞では，細胞増殖と恒常性維持双方に必須である事が示された。

に関わる Erk の活性化に変化が認められなかった

２．RAM P3−/−は胎生期の血管発生の異常は認めのに対し，細胞生存に関わる Akt の活性化の低下

られず，正常に出生した。成体での腫瘍移植モデルが認められた。

による腫瘍血管新生の評価，腹部大動脈を用いた

以上の結果から，山内啓弘は，AM ‑RAMP2系がAortic Ring assayモデルによる新生血管の評価，発生段階の血管新生，成体での血管恒常性を制御して下肢虚血血管新生モデルを用いた虚血性血管新生のいるのに対し，AM ‑RAMP3系は成体でのリンパ管評価等を行ったところ RAMP3−/−では異常を認機能を制御していることをはじめて明らかとした。よめないことから，AM ‑RAMP3系は，血管の発生，って，主査，副査は一致して本論文を学位論文として成体における血管新生には重要でないことが示され価値があるものと認めた。

た。

Neurological outcomes after extracorporeal cardiopulmonary resuscitation in patients with out‑of‑hospital cardiac arrest:a retrospective observational study in a rural tertiary care center（院外心停
止患者における体外式心肺蘇生後の神経予後：地方都市の高次医療機関における後方視的観察
研究）
望

月

勝

徳

（論文の内容の要旨）

工肺による酸素化と遠心ポンプによる強力な循環補助【背景】院外心停止の社会復帰率はわずか２％と報告で，脳の低酸素状態を是正し，社会復帰率向上に寄与されている。経皮的心肺補助による体外循環を心肺蘇すると考えられている。院外心停止例はこれまで，二生に利用する体外式心肺蘇生（extracorporeal car-

次救命処置のために直近病院へ搬送されるのが一般的

diopulmonary resuscitation，ECPR）は，大都 市 でであった。近年，救急救命士による気管挿管や薬剤投は院外心停止の社会復帰率を12〜15％に向上させる

与などにより，二次救命処置の多くは病院前で行うこことが報告されている。心肺停止時の脳の低酸素状態とが可能となった。我々は医療資源の限られた地方都は経時的に脳障害を進行させるが，ECPR は膜型人

市では，ECPR 導入までの時間を最短時間とするた320

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

めに，院外心停止例を ECPR が常時施行可能な高次の比では，社会復帰群において動脈血 pH（7.10±

医療機関に直接搬送することが社会復帰率向上に寄与

0.08 VS 6.87±0.25，P＜0.001），base excess（−すると考えた。そこで，地元消防機関と協力し，心肺停14.7±3.8 VS −19.3±7.7，P＝0.014）が有意に高止例を近隣の病院への搬送を回避して，常時 ECPR

値， PaCO （52±21mmHg VS 85±37 mmHg，を施行可能な高次医療機関へ直接搬送することを心停

P＝0.010）が有意に低値であったが，ロジスティック止バイパスシステムとして推進してきた。この研究の回帰分析では独立した予後因子は明らかとならなかっ

目的は，心停止バイパスシステムを導入した地域の高た。

次医療機関における，ECPR 施行例の予後を明らか【考察と結論】これまで，地方都市における院外心停とすることである。

止の生存率は大都市に比 して低いことが報告されて【方法】2004年４月から2013年３月までの信州大学医きた。我々の研究は，地方都市で行われたため平均

学部附属病院高度救命救急センターのデータベース

CPR 時間が長い。しかしながら，本研究の社会復帰を後方視的に解析し，通常の心肺蘇生術（cardiopul-

率は，大都市で行われた研究と比し遜色のないものでmonary resuscitation，CPR）で蘇生できなかった院あった。本研究では，心停止バイパスシステムを推進

外心停止に対して ECPR を施行した10歳以上の症例している地方都市における院外心停止に対するを抽出した。ECPR は，

ECPR は，大都市と同様に有用であることが示され・偶発性低体温症による心停止

た。

・来院時に心室細動╱無脈性心室頻拍を呈し，目撃がありバイスタンダー CPR が行われた70歳未満の患者で，脳蘇生の可能性が残されているもの（論文審査の結果の要旨）
院外心停止の社会復帰率はわずか２％と報告されている。経皮的心肺補助による体外循環を心肺蘇生に利・若年者の心停止

用する体外式心肺蘇生（extracorporeal cardiopul-を積極的導入基準とした。重症外傷，制御不能な出血，

monary resuscitation，ECPR）は，大都市では院外

悪性疾患の末期，不可逆性の脳障害，元々寝たきり，

心停止の社会復帰率を12〜15％に向上させることがDNAR（do not attempt resuscitation）オーダーの報告されている。心肺停止時の脳の低酸素状態は経時あるものは適応除外とした。しかしながら，救急搬送

的に脳障害を進行させるが，ECPR は膜型人工肺に過程で前述の要素を正確に判定することは困難なため，よる酸素化と遠心ポンプによる強力な循環補助で，脳ECPR 導入の最終決定は担当医の判断で行った。主の低酸素状態を是正し，社会復帰率向上に寄与すると要評価項目は１カ月後の社会復帰（Glasgow‑Pitts-

考えられている。院外心停止例はこれまで，二次救命

burgh cerebral performance categories score１もし処置のために直近病院へ搬送されるのが一般的であっくは２）とし，社会復帰群と非社会復帰群の背景，病た。近年，救急救命士による気管挿管や薬剤投与など

院前・初診時所見を比 検討した。

により，二次救命処置の多くは病院前で行うことが可【結果】対象期間に当センターへ救急搬送された院外能となった。望月らは，医療資源の限られた地方都市

心停止1,018例のうち，ECPR は50例に施行され，平では，ECPR 導入までの時間を最短時間とするため

均年齢は51歳（10〜83歳），男性が33例であった。内に，院外心停止例を ECPR が常時施行可能な高次医

25例は積極的導入基準に合致していた。目撃ありは36

療機関に直接搬送することが社会復帰率向上に寄与す

例，バイスタンダー CPR ありは32例，卒倒から胸骨ると考えた。そこで，地元消防機関と協力し，心肺停圧迫開始までの平均時間は7.4±10.4分，平均 CPR

止例を近隣の病院への搬送を回避して，常時 ECPR

時間は84±48分であった。現場での初期心電図波形は，を施行可能な高次医療機関へ直接搬送することを心停

心室細動╱無脈性心室頻拍37例，その他13例，来院時止バイパスシステムとして推進してきた。今回，心停心電図波形は，心室細動╱無脈性心室頻拍27例，その止バイパスシステムを導入した地域の高次医療機関に他23例であった。心停止の原因は，心原性が32例，偶おける，ECPR 施行例の予後を検討した。

発性低体温が７例，その他が11例であった。１カ月生

本研究では，2004年４月から2013年３月までの信州

存率は26％，社会復帰率は20％であった。原因別の社

大学医学部附属病院高度救命救急センターのデータ

会復帰率は，
心原性で16％，
偶発性低体温で71％であっベースを後方視的に解析し，通常の心肺蘇生術（car-た。社会復帰群（n＝10）と非社会復帰群（n＝40）で蘇生できなかっdiopulmonary resuscitation，CPR）

No. 5, 2015321

審査学位論文要旨

た院外心停止に対して ECPR を施行した10歳以上の0.08 VS 6.87±0.25，P＜0.001），base excess

症例を抽出し，１カ月後の社会復帰率と社会復帰群と（−14.7±3.8 VS −19.3±7.7， P＝0.014）が非社会復帰群の背景，病院前・初診時所見を比 検討

有意に高値，
2 52±21mmHg VS 85±37mmHg，
PaCO（

した。

P＝0.010）が有意に低値であった。

その結果，望月らは以下の結果を得た。

４．ロジスティック回帰分析では ECPR の独立した

１．ECPR による１カ月生存率は26％，社会復帰率

予後因子は明らかとならなかった。

は20％であった。

これらの結果より，心停止バイパスシステムを推進

２．原因別の社会復帰率は，心原性で16％，偶発性
低体温で71％であった。

ECPR は，大都市と同様に有用であることが示され

３．社会復帰群（n＝10）と非社会復帰群（n＝40）の比している地方都市における院外心停止に対するでは，社会復帰群において動脈血 pH（7.10±た。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Reduced‑toxicity myeloablative conditioning consisting of 8‑Gy total body irradiation, cyclophosphamide and ﬂudarabine for pediatric hematological malignancies（小児血液悪性腫瘍に対する8‑Gy
全身放射線照射，フルダラビン，シクロフォスファミドから成る毒性を低減した骨髄破壊的前
処置）
平

林

耕

一

（論文の内容の要旨）【結果】対象期間中に31名が8‑Gy TBI/FLU/CY から【背景】同種造血幹細胞移植（allo‑HSCT）は，小児成る RTMAC 後に初回 allo‑HSCT を受けた。移植の高リスク急性骨髄性白血病（AML）や超高リス

時年齢の中央値は8.0歳，疾患は ALL 11名，AML 13

ク急性リンパ性白血病（ALL），骨髄異形成症候群

名，MDS４名，若年性骨髄単球性白血病１名，分類（M DS）に対する標準治療法である。従来の骨髄破壊

不能型急性白血病２名だった。移植ドナーはヒト白血的前処置（M AC）では，しばしは重度の治療関連毒球抗原（HLA）完全一致血縁骨髄６例，HLA 不一致性（RRT）が起きることから，骨髄非破壊的前処置

血縁骨髄９例，HLA 完全一致非血縁骨髄４例，HLA（NMAC）が開始されるようになった。近年では，フ不一致非血縁骨髄２例，臍帯血10例であった。早期再

ルダラビン（FLU）の併用によりブスルファンを減発した３名以外の28名は移植後100日以内に完全ド量した骨髄破壊的前処置（RTM AC）も報告されてナーキメリズムを達成した。RRT は，grade１，２，いる。一方，小児においては現在も従来型 MAC が前

３がそれぞれ，21名，６名，10名にみられた。また，処置としては主流である。しかし，従来型 MAC 後に移植後寛解が維持されている患者では，観察期間中にallo‑HSCT を受けた長期生存患者が増えるに従い，重度の臓器障害は認めなかった。急性移植片対宿主病

生活の質の低下（特に性腺内分泌系）で苦しむ患者が（GVHD）の grade

増加している。このため，我々は8‑Gy全身放射線照いなかった。中等症から重症の慢性 GVHD は４名に射（TBI），FLU，シクロフォスファミド（CY）にみられた。５年全生存率は80％，５年非再発率は71

よる RTMAC を開発し，移植後早期の低毒性を報告％であった。観察期間中９名が再発し，そのうち６名した。平均観察期間が７年を超えたため，予後や安全に再移植が行われ，２名が観察期間中寛解を維持して性に関して検討した。

いた。

【方法】対象は2004年３月から2012年12月までに信州【結論】今回の解析結果で特に注目すべき点は，⑴ 非大学医学部附属病院小児科で8‑Gy TBI/FLU/CY か

再発死亡を認めなかった，⑵ 生着不全が少なかったら成る RTM AC 後に allo‑HSCT を受けた20歳以下（特に臍帯血移植で10％），⑶ 再発後に再移植可能なの患者とした。2014年８月までの患者情報を収集した。

例が多かった（９例中６例），⑷ 予後が比生殖細胞系列に染色体異常を有する例，allo‑HSCT

ったことである。⑴と⑶に関しては，TBI を12‑Gyの既往を持つ例，放射線照射の治療歴がある例は除外

から8‑Gyに減弱したために臓器障害が軽減されたた

した。統計解析は EZR を使用した。

めと思われる。⑵に関しては，生着不全のリスクが高322を12名に認めたが，grade

は

的良好だ

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

い臍帯血移植であっても90％で生着が得られており，

血病13名，骨髄異形成症候群４名，若年性骨髄単球性8‑Gy TBI/FLU/CY レジメンは生着に対し十分な前白血病１名，分類不能型急性白血病２名だった。移植

処置強度を持つと考えられた。⑷に関しては，患者背ドナーはヒト白血球抗原（HLA）完全一致血縁骨髄景や移植ソースが多様で明確な結論を出せないが，過６例，HLA 不一致血縁骨髄９例，HLA 完全一致非去の非 TBI‑RTM AC レジメンの成績と同程度かそれ

血縁骨髄４例，HLA 不一致非血縁骨髄２例，臍帯血以上であった。以上より，8‑GyTBI/FLU/CY RTMAC

10例であった。さらに，31名の５年全生存率，５年非レジメンは小児の血液悪性腫瘍患者に対して有用な移再発率，生着率，治療関連毒性，予後因子を解析した。

植前処置であると考えられた。

その結果，平林耕一は次の結論を得た。

（論文審査の結果の要旨）

１．非再発死亡を認めなかった。

従来の骨髄破壊的前処置（MAC）後に同種造血幹２．生着不全が少なかった（特に臍帯血移植で10％）。

細胞移植（allo‑HSCT）を行うとしばしは重度の治

３．移植後再発に対して再移植が可能な患者が多かっ

療関連毒性（RRT）が起きる。また，小児期に allo‑
HSCT を受けた長期生存者が増えるに従い，生活のた（９例中６例）。
４．予後が比的良好であった（５年全生存率80％，

質の低下（特に性腺内分泌系）で苦しむ患者が増加し５年非再発率71％）。

ている。今回，小児血液悪性疾患に対する全身放射線

これらの結果より，TBI を12‑Gyから8‑Gyに減量照射（TBI）を12‑Gyから8‑Gyに減量し，フルダラ

することで移植後の臓器障害が軽減でき，再移植も比ビン（FLU）とシクロフォスファミド（CY）を組み合的安全に行える可能性が示唆された。また，いかな

わせた毒性を低減した骨髄破壊的前処置（RTMAC）

るドナーソースであっても8‑Gy TBI/FLU/CY レジの予後や安全性を検討した。

メンは生着に対して十分な前処置強度を持つと考えら

対象は2004年３月から2012年12月までに信州大学医れた。予後に関しても過去の非 TBI‑RTMAC レジメ

学部附属病院小児科で8‑Gy TBI/FLU/CY から成る

ンの成績と同程度かそれ以上であった。以上より，8‑

RTM AC 後に allo‑HSCT を受けた20歳以下の患者

Gy TBI/FLU/CY RTMAC レジメンは小児の血液悪31名とした。生殖細胞系列に染色体異常を有する例，

性腫瘍患者に対して有用な移植前処置であると考えら

allo‑HSCT の既往を持つ例，放射線照射の治療歴がれた。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論ある例は除外した。対象症例の移植時年齢の中央値は文として価値があるものと認めた。

８歳，疾患は急性リンパ性白血病11名，急性骨髄性白Characterization of cardiac oxidative stress levels in patients with atrial ﬁbrillation（心房細動症例における血中酸化ストレスの検討）
岡

田

綾

子

（論文の内容の要旨）

シ ョ ン 治 療 を 施 行 し た85人（PAF＝50人，PsAF＝【目的】高齢化に伴い心房細動（AF：Atrial ﬁbrilla-

35人，平均年齢63歳）。アブレーション時に右心房，tion）の罹患率は年々増加している。AF 症例において

左心房，冠状静脈より血液を採取し dROM を測定し血中酸化ストレス（dROM：Diacron‑reactive oxygen

た。またアブレーション前と３カ月後に末梢血より血

metabolitie）と脳性ナトリウム利尿ペプチド（BNP：

液 を 採 取 し，dROM と BNP を 測 定 し た。PAF，Brain natriuretic peptide）は強い相関関係を示すが，PsAF 両群間および各部位間の dROM を比その原因は解明されていない。本研究は発作性心房細持続時間と酸化ストレスとの関連性と酸化ストレス産動（PAF：Paroxysmal AF）と 持 続 性 心 房 細 動

生箇所を検討した。さらに dROM と BNP の関連性

（PsAF：Persistent AF）症例両群間における，心腔を検証した。またアブレーション前後の血中 BNP と内 の dROM と 血 中 dROM ，BNP を 測 定 し，AF 持dROM 値の変化量をアブレーション治療有効群と非続と酸化ストレスおよび心負荷の関係を解明すること

有効群で比 し，AF 改善の有無と酸化ストレスの変を目的とした。

化および心負荷との関連性を検討した。

【方法】対象は当院でAFに対するカテーテルアブレー【結果】PAF と PsAF 両群間に左心房径と血中 BNP

No. 5, 2015

し，AF

323

審査学位論文要旨

値以外は患者背景には相違は認めなかった（左房径：外は患者背 景 に は 相 違 は 認 め な か っ た（左 房 径：

PAF＝41.6±6.8mm，PsAF＝48.5±6.4mm，P＜

PAF＝41.6±6.8mm，PsAF＝48.5±6.4mm，P＜

0.01， BNP PAF 52.7［24.5‑89.6］ PsAF 123.8

0.01， BNP PAF 52.7［24.5‑89.6］ PsAF 123.8［64.3‑186.7］。
pg/dl）
PsAF 群 の dROM は 末 梢 血，心［64.3‑186.7］pg/dl）。PsAF 群 の dROM は 末 梢 血，

腔内の各部位で PAF 群と比心腔内の各部位で PAF 群と比し有意に高値であり，し有意に高値であり，

特 に 冠 状 静 脈 で そ の 差 は 顕 著 で あ っ た（PsAF＝

特 に 冠 状 静 脈 で そ の 差 は 顕 著 で あ っ た（PsAF＝429.0 Carratelli units vs PAF＝374.0 Carettelli429.0 Carratelli units vs PAF＝374.0 Carettelliunits，P＜0.05）。また PsAF 群においては冠状静脈。また PsAF 群においては冠状静脈
units，P＜0.05）の dROM が他部位に比の dROM が他部位に比し高値であり，他部位よりし高値であり，他部位より心筋の酸化ストレスの増加を反映していると考えられ心筋の酸化ストレスの増加を反映していると考えられたため，冠状静脈内の dROM と末梢血 BNP の関連たため，冠状静脈内の dROM と末梢血 BNP の関連性を 検 証 し た と こ ろ 相 関 関 係 が 認 め ら れ た。
（r＝性を 検 証 し た と こ ろ 相 関 関 係 が 認 め ら れ た。
（r＝0.436，P＜0.001）さらに，アブレーション治療有効0.436，P＜0.001）さらに，アブレーション治療有効群では３カ月後の末梢血 dROM と BNP は改善して群では３カ月後の末梢血 dROM と BNP は改善しており，両者の変化量に相関を認めた（r＝0.473，P＜

おり，両者の変化量に相関を認めた（r＝0.473，P＜

0.001）。

0.001）。

【考察】本論文は AF 症例における心腔内各部位での酸化ストレスを検討した最初の研究である。PAF と比

その結果岡田綾子は次の結論を得た。
１．本論文は AF 症例における心腔内各部位での酸化

し PsAF において，特に冠状静脈洞内で他部位ストレスを検討した最初の研究である。PAF と比よりも dROM が有意に高値であった。冠状静脈血はし PsAF において，特に冠状静脈洞内で他部位

左室心筋からの静脈還流が主体であることから，AF

よりも dROM が有意に高値であった。冠状静脈血が持続することで左室が酸化ストレスに暴露されているは左室心筋からの静脈還流が主体であることから，ことが推察された。また冠状静脈の dROM が BNP

AF が持続することで左室が酸化ストレスに暴露さと強い相関を認めたことから，持続する AF が酸化ス

れていることが推察された。

トレスを増大させ，その影響で左室機能障害を生じて

２．冠状静脈の dROM が BNP と強い相関を認めたいると推定された。さらに，これらの結果から AF 患ことから，持続する AF が酸化ストレスを増大させ，者における dROM の測定は AF による左室機能障害

その影響で左室機能障害を生じていると推定された。

の程度や罹患期間，アブレーション効果の評価に有用であると考えられた。

３．これらの結果から AF 患者における dROM の測定は AF による左室機能障害の程度や罹患期間，ア（論文審査の結果の要旨）

ブレーション効果の評価に有用であると考えられた。

対象は当院で AF に対するカテーテルアブレーショ

これらの結果より，心房細動持続に伴う左室の収縮ン治療を施行した85人（PAF＝50人，PsAF＝35人，障害拡張障害は酸化ストレスの上昇と相関していると

平均年齢63歳）。アブレーション時に右心房，左心房，考えられた。

冠状静脈より血液を採取し dROM を測定した。また

今後心房細動に対するアブレーション治療の有効性

アブレーション前と３カ月後に末梢血より血液を採取

評価，再発予測因子として有益であると考えられる。

し，dROM と BNP を 測 定 し た。PAF，PsAF 両 群

本論文は心房細動の病態における酸化ストレスの関間および各部位間の dROM を比し，AF 持続時間

与について検証した臨床上有意義な研究であり，主査，と酸化ストレスとの関連性と酸化ストレス産生箇所を副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも検討した。さらに dROM と BNP の関連性を検証しのと認めた。

た。またアブレーション前後の血中 BNP と dROM
値の変化量をアブレーション治療有効群と非有効群で比 し，AF 改善の有無と酸化ストレスの変化および心負荷との関連性を検討した。
PAF と PsAF 両群間に左心房径と血中 BNP 値以
324

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

Epithelial‑mesenchymal transition ofA549 cells is enhanced byco‑cultured with THP‑1 macrophages
under hypoxia conditions（低酸素環境下における THP‑1マクロファージとの共培養は A549細
胞の EMT を誘導する）
末木

茜（論文の内容の要旨）

低酸素環境下で THP‑1マクロファージと共培養す【背 景 と 目 的】特 発 性 肺 線 維 症（idiopathic pulmo-

る と，A549細 胞 に お い て E‑cadherin 低 下 お よ びnary ﬁbrosis；IPF）は，肺胞領域に炎症が生じ，持vimentin と ﬁbronectin 増加が蛋白発現レベルで確認

続的に線維化が進行する原因不明の難治性疾患である。

された。これらの変化は，TGF‑β1 type I receptor

最近，肺胞上皮細胞の transforming growth factor

kinase inhibitor（SB‑431542）にて阻害され，A549(TGF)‑β1 を介した上皮間葉転換（epithelial mesen-

細胞の EMT に TGF‑β1の関与が示唆された。低酸

chymal transition；EM T）が，肺線維化誘導の原因

素環境下で A549細胞と THP‑1マクロファージを共のひとつと考えられている。肺線維症は線維芽細胞増培養すると，両細胞で TGF‑β1 mRNA 発現が有意

殖，炎症細胞浸潤および肺胞隔壁肥厚が特徴的な所見に増加し，THP‑1マクロファージでは TGF‑β1の上で，肺胞領域のまだらな局所的低酸素環境を容易に推流調節因子である IL‑1βmRNA の発現も有意に増加測できる。また，低酸素環境下で肺胞マクロファージした。さらに，IL‑1βを中和抗体で阻害すると，低は活性化され，サイトカイン分泌が亢進する。本研究

酸素環境下における共培養の培養上清中にて TGF‑

では， 型肺胞上皮細胞の EM T に注目し，低酸素環

β1分泌量が有意に低下した。

境におけるマクロファージの活性化が肺の線維化を誘【考察】低酸素環境下において THP‑1マクロファー

導するか検討した。

ジが活性化されることで，A549細胞の EMT を強く【方 法】THP‑1細 胞 は500ng/ml phorbol 12‑myris-

誘導した。低酸素環境下のみでは A549細胞の EMT

tate 13‑acetate（PM A）で４日間培養を行いマクロは誘導されず，室内気酸素濃度にて THP‑1マクロフ

ファージに分化させた（以下，THP‑1マクロファー

ァージと共培養しても EM T は誘導されなかった。しジ）。細胞を通さないポアサイズ1.0μm のメンブレ

たがって，A549細胞の EM T には，低酸素環境およンを用い，下部のウェル内で A549細胞（型肺胞上びマクロファージ活性化の２つの条件が必要であり，

皮細胞），上部のインサート内で THP‑1マクロファー

生体でも肺の線維化が生じる場合，この２つの条件がジを培養し，物質の透過量が確保された環境にて共培

同時に満たされる必要性を示唆した。低酸素下にて共養を行った。A549細胞あるいは THP‑1マクロファー培養を行うことにより，両細胞の TGF‑β1産生が有ジの単培養もしくは両者の共培養を，室内気酸素濃度

意に増加しており，A549細胞の EM T 化に TGF‑β1（21％ O ）あるいは低酸素濃度（２％ O ）環境下での関与が示唆された。
さらに，
低酸素環境は THP‑1マ行った。EM T 確認のための分子マーカーとして，E‑

クロファージの IL‑1βの発現を増加させ，その IL‑1β，vimentin と ﬁbrocadherin（上皮系蛋白マーカー）

がA549細胞とTHP‑1マクロファージ自身のTGF‑β1（間葉系蛋白マーカー）の発現をウェスタンブロッ
nectinの発現を増加させた。

ト法と蛍光 免 疫 染 色 法 を 用 い て 解 析 し た。ま た，【結語】

A549細胞の EMT 誘導における TGF‑β1と IL‑1βのび IL‑1βが関与しており，低酸素環境下における関与を検討するため，TGF‑β1type I receptor kinase型肺胞上皮細胞とマクロファージの相互作用が必要で

inhibitor（SB ‑431542）または IL‑1β中和抗体を用あった。この結果は，肺線維症のメカニズム解明に大いて EM T 誘導の阻害実験を行った。TGF‑β1と IL‑

きな役割を果たすと考えられた。

1βの mRNA の発現は，real‑time PCR 法にて解析した。

型肺胞上皮細胞の EMT には TGF‑β1およ（論文審査の結果の要旨）
Idiopathic pulmonary ﬁbrosis（IPF）の肺線維化【結果】THP‑1マクロファージとの共培養により，の原因として， 型肺胞上皮細胞の epithelial mesen-

A549細胞は EM T に特徴的な形態を示し，低酸素環

chymal transition（EM T）が考えられている。IPF

境下ではより EM T の形態変化が鮮明となった。また，患者の肺胞洗浄液ではマクロファージが増加し，肺胞No. 5, 2015325

審査学位論文要旨

領域では局所的に低酸素状態が生じていると考えられ

EMT 変化は低酸素環境下で強く誘導された。

る。本研究では，低酸素環境下において 型肺胞上皮

２．低酸素環境下でA549細胞とTHP‑1マクロファー細胞とマクロファージがどのように関連して線維化を誘導するか， 型肺胞上皮細胞の EMT に注目して検ジの TGF‑β1 mRNA の発現が増加した。
３．低酸素環境によって増強した A549細胞の EMT討した。

変化は TGF‑β1依存性であった。

THP ‑1細 胞 は phorbol 12‑myristate 13‑acetate

４．低酸素環境下で THP‑1マクロファージの IL‑1β（PM A）でマクロファージに分化させた（THP‑1マ
クロファージ）。下部のウェル内に A549細胞（

mRNA の発現が増加した。

型

５．IL‑1β中和抗体によって，THP‑1マクロファー

肺胞上皮細胞），上部のインサート内に THP‑1マクジと A549細胞の共培養上清中の TGF‑β1分泌が減ロファージを入れて，室内気酸素（21％ O ）あるい

少した。

は低酸素（２％ O ）環境下で単培養もしくは両細胞

これらの結果より，A549細胞の EM T には，低酸の共培養を行った。EM T 分子マーカー発現をウェス

素環境およびマクロファージ活性化の２つの条件が必

タンブロット法と蛍光免疫染色法で解析した。また，要であり，生体でも線維化が生じる場合，この２つのtransforming growth factor (TGF)‑β1 阻害剤または条件を同時に満たす必要性を示唆した。また，A549

IL‑1β中和抗体を用いて A549細胞の EM T 誘導を阻

細胞の EMT には，低酸素環境下で分泌が増加する害した。TGF‑β1と IL‑1βの mRNA発現は real‑time

TGF‑β1および IL‑1βが関与しており，IPF 発症の

PCR 法で解析した。

メカニズム解明に繫がると考えられた。よって，主査，

その結果，末木茜は次の結論を得た。

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるも１．THP‑1マクロファージと共培養した A549細胞ののと認めた。

Serum sulfatide abnormalityis associated with increased oxidative stress in hemodialysis patients（血液透析患者における血清スルファチド異常は酸化ストレスの増加と関連する）
黄（論文の内容の要旨）【背景と目的】スルファチドは，ガラクトシルセラミ

玉哲

ファチド値異常の機序解明を第二の目的とし，様々な臨床的データとともに統計的に解析した。

ドのＣ３位に硫酸基が結合した代表的なスフィンゴ糖

過去の動物実験や腎移植患者を対象とした研究で，脂質である。様々な臓器に広く分布するが，血清中に我々は代表的な酸化ストレスマーカーである malon-

もリポ蛋白に含有され存在している。過去の基礎的研

dialdehyde（M DA）と血清スルファチド値異常との究によると，血清中のスルファチドは動脈硬化の進展，関連性を報告しているので，本研究でも M DA を含

血液凝固，血小板凝集に関連し作用することが示唆さめて解析することとした。

れている。過去の横断的研究において，心血管病が多【対象及び方法】本研究に同意した信州大学腎臓内科

発する血液透析患者で血清スルファチドを測定してみ関連病院の外来維持血液透析患者201名の内，除外基たところ，透析患者では著しく血清スルファチド値が準（担癌，感染症，同意の撤回）に抵触しない156名

低下すること，また，心血管病既往のある患者では血を３年間経過観察した。経過観察中に死亡した患者34

清スルファチド値異常が顕著になることが判明した。

名と臨床検査値やサンプルに欠損のある患者27名を除

これらの結果は，血清スルファチド値異常が心血管病

外し，最終的に95名を解析した。血清サンプルは，症発症に関連する可能性を示唆している。透析患者の血例登録時，18カ月後，36カ月後の時点で，週初めの透清スルファチド異常の出現機序は不明であるが，我々

析施行直前に採取した。本研究の遂行に当たっては，は透析年数とともに血清スルファチド値が低下する興ヘルシンキ宣言を遵守した。
また，本研究のプロトコー

味深い現象を見出した。しかし，横断研究では，個々

ルは信州大学医学部倫理委員会にて審議され了承されの症例の時間依存的変化を検出することは困難であるている（承認番号 750）。血清スルファチド測定法とため，本研究ではこの現象を３年間の追跡研究によりしては，血清サンプルより脂質抽出を行った後に，ス確定させることを第一の目的とした。また，血清スル

ルファチドを可溶性のリゾスルファチドに変換し，マ326

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

トリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量

ルファチドの低下現象を確定させることと，血清スル分析器（M ALDI‑TOF MS）にて含有量を測定した。

ファチド値の低下機序の解明を目的とした。

スフィンゴイド種により７種類のスルファチドが検出

信州大学腎臓内科関連病院の外来維持血液透析患者されるため，その総和を血清スルファチド値と定義しで除外基準に抵触しない95名を解析した。血清サンプ

た。M DA 測定法については，比色定量法により測定

ルは，症例登録時，18カ月後，36カ月後の時点で採取を行った。

した。血清スルファチド測定法としては，血清サンプ

統計解析方法について血清スルファチド値や M DA

ルより脂質抽出を行った後に，スルファチドを可溶性の時間依存的変化については，Wilcoxon matched‑のリゾスルファチドに変換し，マトリックス支援レー

pairs signed‑rank test を用いた。スルファチドと各

ザー脱離イオン化飛行時間型質量分析器（MALDI‑

種臨床検査値との関連性については，相関解析および

TOF MS）にて含有量を測定した。スフィンゴイド

多変量線形解析を用いた。

種により７種類のスルファチドが検出されるため，そ【結果】透析患者の血清スルファチド値の平均値は健の総和を血清スルファチド値と定義し計算した。血清

常者の50％未満に低下しており，心血管病の既往がスルファチド値と相関する因子の解析のため，様々なある患者では既往の無い患者に比 し有意に血清スル

臨床データとともに統計解析を行って検討した。

ファチド値が低くなることが再確認された。３年間のその結果，黄は以下の結論を得た。

追跡調査により，血清スルファチドは時間依存性に有１．透析患者の血清スルファチド値の平均値は健常者意に低下し，M DA は時間依存性に有意に上昇するこの50％未満であり，心血管病の既往がある患者でとが確認された。多変量線形解析では，時間依存的なは既往の無い患者に比 し有意に血清スルファチド

血清スルファチド値の推移と有意に関連するのは，
MDA の推移のみであることが判明した。

値が低くなることが再確認された。
２．３年間の追跡調査により，血清スルファチドは時【結論】本研究は，透析患者の血清スルファチド値異間依存性に有意に低下し，酸化ストレスマーカーで常が時間依存的に悪化すること，また，その時間依存ある M DA は時間依存性に有意に上昇することが性の血清スルファチド異常が酸化ストレスの上昇に関明らかとなった。

連することを初めて明らかにした。この結果から，酸

３．多変量線形解析では，時間依存的な血清スルファ

化ストレスの上昇は血清スルファチド異常の増悪因子

チド値の推移と有意に関連するのは，MDA の推移になりうる可能性が示唆された。血清スルファチド値のみであることが判明した。

異常や酸化ストレスは血液透析患者の心血管病発症にこれらの結果により，酸化ストレスの上昇は透析患関連する可能性があるため，それらに対する新たな治者における血清スルファチド異常の増悪因子になりう療法の開発が必要であると思われた。

る可能性が示唆された。血清スルファチド値異常や酸（論文審査の結果の要旨）

化ストレスは血液透析患者の心血管病発症に関連する

スルファチドは血清リポ蛋白質を構成するスフィン

可能性があるため，それらに対する有用な治療法の開ゴ糖脂質の主要成分であり，血清スルファチドは動脈発が必要である。本研究は，透析患者における血清ス

硬化の進展，血液凝固，血小板凝集に影響することがルファチド異常に対する新たな治療法の開発のための示唆されている。血液透析患者では透析年数に従い血有益な情報を提示していると考えられる。

清スルファチド値の低下が顕著になり，心血管病と関連する可能性が報告されている。本研究では３年間のよって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

追跡研究により透析患者における時間依存性の血清ス

NFκB2 gene as a novel candidate that epigeneticallyresponds to interval walking training（インターバル速歩トレーニングに対しエピジェネティックに応じる新候補遺伝子，NFκB2）
張（論文の内容の要旨）
Physical ﬁtness has been reported to decrease theNo. 5, 2015

玉根

risk of lifestyle‑related diseases.The present study
evaluated genome‑wide methylation under the327

審査学位論文要旨

hypothesis that interval walking training (IWT)あるパイロシークエンス法を用い，マイクロアレイ実

imparted beneﬁcial eﬀects on health,particularlyby

験からの結果を詳細に検証した。

epigenetically ameliorating

susceptibility to

その結果，張玉根は次の結果を得た。

inﬂammation. We screened DNA from peripheral

１．マイクロアレイ実験では，133個の遺伝子のメチ

blood samples via genome‑wide microarray for

ル化がインターバル速歩によって変化することが分

genes whose methylation was aﬀected by IWT,

かった。この133個遺伝子についてオントロジー解

paying special attention to promoter regions, and析を行い，メチル化が変動した遺伝子を分類した。

identiﬁed over 40 hyper‑ or hypo‑methylated genes

２．メチル化変動がプロモーター領域で生じている遺

following IWT that were not witnessed in controls.

伝子を約80個抽出し，メチル化の増減がエネルギー

We next selected genes in which the degree of

消費量に相関するか否かについて解析した。エネル

methylation change in the promoter region was

ギー消費量と相関してメチル化が増強した遺伝子はcorrelated with energyconsumption following IWT.

HELT ，BAT2，と NFκB2 で あ り，メ チ ル 化 がIn this way, we found the NFκB2 gene to have

減少した遺伝子は SLIT2，NKX2 ‑5 ，TBX18 とincreased methylation in multiple regions of its

EGR2 であった。

promoter sequence following participation in an

３．NFκB2 のプロモーター領域に17個のプローブを

exercise regimen. Next, IWT‑induced NFκB2

作成し，メチル化変動を調べたところ，その内９個

hyper‑methylation was conﬁrmed by a quantitativeの領域でメチル化がインターバル速歩により増強し

PyroSequencing assessment of methylation in sam-た。さらに，その中で３つのプローブに対応する領

ples obtained from independent subjects who also

域のメチル化の増強がエネルギー消費量と統計的にunderwent IWT. The increase in NFκB2 gene pro-

有意に相関することが分かった。

moter methylation by IWT indicates that this regi-

４．パイロシークンス実験で詳細に解析したところ，

men may suppress pro‑inﬂammatory cytokines.

NFκB2 のプロモーター領域のメチル化が増強する

Thus, these results provide an additional line of

ことを確認できた。

evidence that IWT is advantageous in promoting

以上の結果より，インターバル速歩トレーニングに

health from an epigenetic perspective by ameliorat-

よって NFκB2 遺伝子メチル化が増強することが分か

ing susceptibility to inﬂammation.

った。NFκB2 遺伝子は炎症のマスター遺伝子である（論文審査の結果の要旨）

ことと，またエピジェネティックス解析結果を鑑み，

インターバル速歩は，体力向上，生活習慣病指標のインターバル速歩は抗炎症的効果をもたらし，健康を改善，うつ改善に効果があることが明らかにされてい促進すると考えられた。この成果は，運動処方の効果る。インターバル速歩トレーニングによって生じるゲをエピジェネティックスの側面から明らかにしたのみ

ノムの修飾に関する現象については，これまで明らか

ならず，疾患予防のための効果判定に対する簡便かつになっていない。張玉根はインターバル速歩トレーニ

高感度な方法を示唆するものであり，今後，予防医学

ングによりメチル化変化を示す遺伝子の同定を試みた。

に貢献すると期待される。よって，主査，副査は一致

熟年大学参加者13名を被験者として，インターバル

して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

速歩トレーニングを実施した。６カ月間インターバル
速歩トレーニング後，合計運動日数40日を基準として，40日未満の被験者を非運動群，40日以上を運動群とした。インターバル速歩トレーニング前後の２回採血を行い，採取した血液サンプルからゲノム DNA の抽出を行った。トレーニング前の DNA を Cy3，トレーニ
ング後の DNA を Cy5でラベルし，ゲノムワイドのマイクロアレイ実験でメチル化変動する遺伝子をスクリーニングした。さらに別のインターバル速歩トレーニン
グ被験者グループについて，異なるメチル化測定法で328

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

Superﬁcially located enlarged lymphoid follicles characterise nodular gastritis（表在性腫大リンパ濾胞は鳥肌胃炎の特徴である）
岡

村

卓

磨

（論文の内容の要旨）かった。正常コントロールではリンパ濾胞はほとんど【背景と目的】鳥肌胃炎は Helicobacter pylori 感染と認めなかった。さらに，鳥肌胃炎におけるリンパ濾胞

関連し，上部消化管内視鏡検査で前庭部に均一な小顆は萎縮性胃炎に比 し，粘膜固有層における占拠率が粒状隆起が密集して鳥肌状の概観を呈するものである。

高く，また有意に粘膜表層部に位置していた。α4β7

組織学的にはリンパ濾胞の過形成によるとされている

integrin と結合する機能的な M AdCAM ‑1陽性 HEVが，これを証明する定量的解析は報告されていない。

様血管は鳥肌胃炎，萎縮性胃炎で認められたが，その一方，生体内における組織へのリンパ球の誘導は，高出現頻度は両者で差はなかった。一方，M ECA‑79陽

内皮細静脈（high endothelial venule：HEV）を介し性 HEV 様血管は鳥肌胃炎で有意に増加していた。

たリンパ球ホーミングにより引き起こされる。その接【結論】表在性腫大リンパ濾胞は鳥肌胃炎の組織学的着機構として，リンパ球の表面に発現する L‑selectin

特徴であり，MECA‑79陽性 HEV 様血管は鳥肌胃炎

は，HEV の血管内皮上に発現する糖鎖である6‑sulfoの病態形成の一部に関与していると考えられる。

sialyl Lewis X と結合し，リンパ球ホーミングの最初（論文審査の結果の要旨）の段階に至る。6‑sulfo sialyl Lewis X の糖鎖構造は

鳥肌胃炎は，上部消化管内視鏡検査で前庭部に小顆

mouse endothelial cell antigen 79 （M ECA‑79）抗体

粒状隆起が密集し，鳥肌状の概観を呈するものである。

により認識される。また，α4β7 integrin をリガンド

組織学的にはリンパ濾胞の過形成によるとされているとする粘膜細胞接着分子である mucosal addressin

が，これを証明する定量的解析は報告されていない。

cell adhesion molecule 1（M AdCAM ‑1）も同様に腸一方，生体内における組織へのリンパ球の誘導は，高管関連リンパ組織の HEV 内皮上に特異的に発現して内皮細静脈（high endothelial venule：HEV）を介しいる。L‑selectin リガンド糖鎖や MAdCAM ‑1は関たリンパ球ホーミングにより引き起こされる。そのた節リウマチ，慢性甲状腺炎，炎症性腸疾患，自己免疫め，本研究ではリンパ濾胞過形成が鳥肌胃炎の病態形性膵炎などの慢性炎症において組織中に発現すること成に関与しているかどうか，更にリンパ球動員に関与が報告されている。今回，リンパ濾胞過形成が鳥肌する高内皮細静脈様血管の発現に関して検討した。

胃炎の病態形成に関与しているかどうかを明らかにす

リンパ球ホーミングに関しては，組織中に存在するることを目的とし，鳥肌胃炎の組織検体におけるリ

HEV の血管内皮上にリンパ球が接着する機序が最初

ンパ濾胞の定量的評価，さらにリンパ球動員に関与の段階で認められ，その相互作用として，リンパ球のする MECA‑79陽性 HEV 様血管，MAdCAM ‑1陽性

表面に発現する L‑selectin と HEV の血管内皮上に

HEV 様血管の発現を定量的に解析した。

発現する糖鎖である6‑sulfo sialyl Lewis X が結合す【対象と方法】鳥肌胃炎患者99例，萎縮性胃炎患者65る。6‑sulfo sialyl Lewis X の糖鎖構造は mouse en-

例，H. pylori 陰性正常コントロール31例より採取しdothelial cell antigen 79 （MECA‑79）抗体により認た組織検体を用いて，リンパ濾胞の個数，大きさ，存識される。また，α4β7 integrin をリガンドとする粘在部位を検討した。
また，
M ECA‑79抗体，
M AdCAM ‑膜細胞接着分子である mucosal addressin cell adhe-

1抗体，血管内皮細胞を認識する CD34抗体を用いた

sion molecule 1（MAdCAM ‑1）も同様に HEV 内皮免疫染色を行った。さらに，鳥肌胃炎の組織検体（凍上に特異的に発現している。

結切片）に対して α4β7 integrin･IgG ヘテロ二量体

鳥肌胃炎99例，萎縮性胃炎65例，H. pylori 陰性正キメラ蛋白を用いた接着実験を行い，HEV 様血管上常コントロール31例より採取した組織検体を用いて，の MAdCAM ‑1が実際に接着分子としての機能を有リンパ濾胞の個数，大きさ，存在部位を検討した。まするかどうかを検討した。

た，MECA ‑79抗 体，MAdCAM ‑1抗 体，CD34抗 体【結果】リンパ濾胞数は鳥肌胃炎，萎縮性胃炎で差は（血管内皮細胞マーカー）を用いた免疫染色を行い，認められなかったが，濾胞径は鳥肌胃炎で有意に大きHEV 様血管の発現，並びに同部における MECA‑79

No. 5, 2015329

審査学位論文要旨

陽性血管と MAdCAM ‑1陽性血管の出現パターンをなかった。一方，MECA‑79陽性 HEV 様血管は鳥検討した。さらに，鳥肌胃炎の組織検体（凍結切片）に肌胃炎で有意に増加していた。

対してα4β7 integrin･IgGヘテロ二量体キメラ蛋白を

４．鳥肌胃炎の組織検体（凍結切片）に対する α4β7用いた接着実験を行い，HEV 様血管上の MAdCAM ‑integrin･IgG ヘテロ二量体キメラ蛋白を用いた接1が実際に接着分子としての機能を有するかどうかを着実験において Ca 依存性に特異的に結合したこと検討した。

から，HEV 様血管上の MAdCAM ‑1が実際に接着

その結果，岡村は次の結論を得た。

分子としての機能を有していることが判明した。

１．リンパ濾胞数は鳥肌胃炎，萎縮性胃炎で差は認めなかったが，濾胞径は鳥肌胃炎で有意に大きかった。
２．鳥肌胃炎におけるリンパ濾胞は萎縮性胃炎に比これらの結果より，表在性腫大リンパ濾胞は鳥肌胃炎の組織学的特徴であり，MECA‑79陽性 HEV 様血管は鳥肌胃炎の病態形成の一部に関与していると考えし，粘膜固有層における占拠率が高く，また有意にられた。

粘膜表層部に位置していた。

よって主査，副査は一致して本論文を学位論文とし３．M AdCAM ‑1陽性 HEV 様血管は鳥肌胃炎，萎縮て価値があるものと認めた。

性胃炎で認められたが，その出現頻度は両者で差はEﬀect of herpes simplex virus vector‑mediated interleukin‑4 gene therapyon bladder overactivityand
nociception（単純ヘルペスウイルスベクターを用いた IL‑4遺伝子治療における排尿筋過活動と疼痛への効果）小口（論文の内容の要旨）

智彦

果について研究を行った。

【背景と目的】頻尿や膀胱痛を主訴とする間質性膀胱【材料および方法】雌の SD ラットを用いた。マウス炎や骨盤痛症候群といった疾患は難治性で，その成因由来の IL‑4を発現する単純ヘルペスウイルスと，コは未知の部分が多い。しかし，これまでの研究で炎症

ントロールとして，βガラクトシダーゼのみ発現する性サイトカインの関与が知られるようになり，炎症を単純ヘルペスウイルスをラットの膀胱壁に注入した。

抑えることが，この病態の治療につながる可能性があ

免疫染色および ELISA 法にてマウス由来の IL‑4がることがわかってきた。一方，Interleukin(IL)‑4はラットの膀胱と後根神経節で発現しているか確認した。

抗炎症サイトカインであることが知られているが，そ膀胱の刺激には，膀胱痛覚に関与する無髄Ｃ線維を刺の半減期が短いため，治療として使用するには持続投激するレジニフェラトキシンを用いた。各ウイルスを与が必要となり，また，全身投与では様々な副作用が感染させた１週間後に，ウレタン麻酔下に膀胱内圧測生じることから，臨床上，痛みの治療には用いられて定検査を行い，10nM のレジニフェラトキシンで膀いないのが現状である。

胱過活動を誘発し比 を行った。また，感染の２週間

我々は，単純ヘルペスウイルスを用いてサイトカイ

後に覚醒下の痛み行動観察研究を行った。３μM のレンや薬物を局所で発現させて投与する方法の有効性を

ジニフェラトキシンを膀胱に１分間注入すると，ラッ

報告してきた。その方法とは，増殖能を奪った単純ヘ

トは下を向いてすくむが，以前の研究では，この行動

ルペスウイルスを膀胱壁に注射すると，求心性線維をは膀胱の求心性線維を含む骨盤神経を介していること

上行し後根神経節に感染するが，このウイルスに特定が判明している。そのため，すくみ行動を観察比の物質を組み込むと，注射部位と後根神経節で最大４た。また，レジニフェラトキシンで刺激後の膀胱での週にわたって，その物質を発現し続ける性質を利用し炎症性サイトカインの発現，膀胱組織像，M yeloper-

た方法である。つまり，半減期が短い薬剤や全身投与

oxidase（MPO）活性による好中球の活性も比 した。

による副作用が危惧される物質を局所に投与すること【結果】免疫染色では，膀胱と後根神経節の神経細胞が可能となる。

にウイルスが感染していることが確認された。また，し

今回は，この方法を用いて，単純ヘルペスウイルス

ELISA 法にてマウス由来の IL‑4は膀胱と膀胱の求心に IL‑4を組み込み，膀胱過活動や膀胱痛に及ぼす効性線維である後根神経節で有意に増加していた。IL‑330

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

4を発現する単純ヘルペスウイルスを感染させたラッ純ヘルペスウイルスに IL‑4を組み込み，膀胱過活動

トではレジニフェラトキシンを潅流しても排尿間隔はや膀胱痛に及ぼす効果について研究を行った。

短縮せず，膀胱過活動は抑制され，有意にすくみ行動

雌の SD ラットを用いた。マウス由来の IL‑4を発が減少した。また，炎症性サイトカインであるIL‑1β

現する単純ヘルペスウイルスと，コントロールとして，と IL‑2は増加しなかった。しかしながら，陰部神経

βガラクトシダーゼのみ発現する単純ヘルペスウイル

を介するとされる舐め行動は両群で差がなかった。レスをラットの膀胱壁に注 入 し た。免 疫 染 色 お よ び

ジニフェラトキシンで膀胱を刺激すると，膀胱粘膜下

ELISA 法にてマウス由来の IL‑4がラットの膀胱と後の浮腫像が増悪し MPO 活性も上昇することが知られ根神経節で発現しているか確認した。膀胱の刺激には，ているが，IL‑4を発現する単純ヘルペスウイルスを膀胱痛覚に関与する無髄Ｃ線維を刺激するレジニフェ感染させたラットでは膀胱浮腫があまり見られず，ラトキシンを用いた。各ウイルスを感染させた１週間

MPO 活性も低くなっていた。

後に，ウレタン麻酔下に膀胱内圧測定検査を行い，10以上の結果から IL‑4を発現する単純ヘルペスウイ

nM のレジニフェラトキシンで膀胱過活動を誘発し比ルスを感染させたラットでは，レジニフェラトキシンを行った。また，感染の２週間後に覚醒下の痛み行による膀胱刺激後も炎症が抑制されることが確認され動観察研究を行った。３μM のレジニフェラトキシンた。

を膀胱に１分間注入すると，ラットは下を向いてすく【結論】IL‑4を発現する単純ヘルペスウイルスを膀胱

むが，以前の研究では，この行動は膀胱の求心性線維壁に注入すると，IL‑4が膀胱と膀胱の求心性線維でを含む骨盤神経を介していることが判明している。そある後根神経節で発現し，炎症性の反応を低下させ，のため，すくみ行動を観察比 した。また，レジニフ

膀胱炎ラットモデルにおける膀胱過活動と膀胱痛を抑ェラトキシンで刺激後の膀胱での炎症性サイトカイン

制したと考えられた。

の発現，膀胱組織像，Myeloperoxidase（MPO）活

このことは，IL‑4による遺伝子治療が，頻尿や膀胱痛の新しい治療法となる可能性が示唆するものである。

性による好中球の活性も比 した。
その結果，小口は次の結論を得た。
１．免疫染色にて膀胱と後根神経節に投与したウイル（論文審査の結果の要旨）

スの存在が確認された。

頻尿や膀胱痛を主訴とする間質性膀胱炎や骨盤痛症

２．IL‑４を発現する単純ヘルペスウイルスに感染し候群といった疾患は難治性で，その成因は未知の部分たラットの膀胱と後根神経節で，マウス由来の IL‑が多い。しかし，これまでの研究で炎症性サイトカイ4が確認された。

ンの関与が知られるようになり，炎症を抑えることが，３．同ラットは，レジニフェラトキシンによる膀胱刺この病態の治療につながる可能性があることがわかっ

激後も排尿間隔は短縮せず頻尿にならなかった。

てきた。一方，Interleukin (IL)‑4は抗炎症サイトカ

４．同ラットは，骨盤神経由来のすくみ行動が有意にインであることが知られているが，その半減期が短い

減少した。

ため，治療として使用するには持続投与が必要となり，

５．同ラットでは，レジニフェラトキシンで膀胱を刺また，全身投与では様々な副作用が生じることから，激した後も，炎症性サイトカインである IL‑1βと臨床上，痛みの治療には用いられていないのが現状でIL‑2は抑制された。

ある。小口らは，単純ヘルペスウイルスを用いてサイ

６．同ラットでは，レジニフェラトキシンで刺激後もトカインや薬物を局所で発現させて投与する方法の有膀胱浮腫が軽減し，MPO 活性が有意に抑制された。

効性を報告してきた。その方法とは，増殖能を奪った

これらの結果により，単純ヘルペス由来の IL‑4が単純ヘルペスウイルスを膀胱壁に注射すると，求心性

膀胱の求心性線維と膀胱で発現し，炎症性の反応を減線維を上行し後根神経節に感染するが，このウイルス

少させ，膀胱炎ラットモデルにおける膀胱過活動と膀

に特定の物質を組み込むと，注射部位と後根神経節で胱痛を抑制したと考えられた。

最大４週にわたって，その物質を発現し続ける性質を利用した方法である。つまり，半減期が短い薬剤や全身投与による副作用が危惧される物質を局所に投与することが可能となる。今回は，この方法を用いて，単No. 5, 2015

IL‑4による遺伝子治療が，頻尿や膀胱痛の新しい治療法となる可能性を示唆した。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。
331

審査学位論文要旨

Elastic modulus of the femoral trochanteric region measured by scanning acoustic microscopy inelderly women（超音波顕微鏡を用いて測定した高齢女性の大腿骨転子部における弾性率）
松

木

寛

之

（論文の内容の要旨）

遠位部と比 して有意に低下していた（p＜0.05）。

【背景と目的】骨粗鬆症に起因する大腿骨転子部骨折【結論】本研究の結果から，70歳以上の標本においては，高齢者の QOL を著しく低下させる。また同骨折

は外側皮質骨部の弾性率は海綿骨部と同程度にまで低の発生数は近年著しく増加しており，同骨折の予防は下しているため，外側皮質骨部における弾性率の低下

社会的，医療経済的に重要である。同骨折の発生割合には皮質骨の海綿骨化が関与している可能性が示唆さは，高齢女性において年齢とともに著しく増加するこれた。また，80歳以上の３標本において，外側近位海とが知られているが，その理由は不明である。今回

綿骨部の弾性率が低下していたが，それらには Wolf

我々は超音波顕微鏡を用いた新たな測定手法により，の法則による骨吸収の増加が関与している可能性が示

高齢女性の大腿骨転子部の弾性率分布に局所的な特異唆された。今回の研究で弾性率値が低下していた大腿性がないかを調べた。

骨転子部の外側皮質骨部と外側近位海綿骨部は大腿骨【材料及び方法】解剖用死体より摘出した大腿骨転子

転子部骨折の骨折部位と一致しており，これらの骨組部７標本（女性７標本，67〜88歳）を対象とした。大織部の弾性率の低下は高齢女性における大腿骨転子部

腿骨転子部を精密切断機を用いて切り出し，冠状面骨骨折の発生割合の増加に関与している可能性が示唆さ

幅中央で切断して低温硬化樹脂で含侵包埋した。このれた。

表面を自動研磨機を用いて研磨紙とダイアモンド粒子（論文審査の結果の要旨）で鏡面化し標本を作製した。大腿骨転子部外側では４骨粗鬆症に起因する大腿骨転子部骨折は，高齢者のmm の測定ラインで等間隔に16ライン，転子部内側でQOL を著しく低下させる。また同骨折の発生数は近は４mm の測定ラインで等間隔に10ラインを計測高

年著しく増加しており，同骨折の予防は社会的，医療位として，超音波顕微鏡（日立建機社製 H ‑SAM ）経済的に重要である。同骨折の発生割合は，高齢女性を用いて，200MHz の周波数で弾性率，密度を算出

において年齢とともに著しく増加することが知られてする際に必要となる骨組織における漏洩表面波の音速，

いるが，その理由は不明である。本研究で松木は，そ

反射率などを計測した。得られた計測値から皮質骨部，の理由を解明することを目的として超音波顕微鏡を用

海綿骨部の縦弾性率，横弾性率，密度の値を算出した。

いた新たな測定手法により，高齢女性の大腿骨転子部【結 果】皮 質 骨 の 縦 弾 性 率 は 大 腿 骨 転 子 部 外 側 での弾性率分布に局所的な特異性がないかを調べた。本

14.26〜22.53GPa，内側で23.4〜35.28GPa，横弾性研究では解剖用死体より摘出した大腿骨転子部７標本

率 は 大 腿 骨 転 子 部 外 側 で5.07〜8.23GPa，内 側 で（女性７標本，67〜88歳）を対象とした。大腿骨転子8.52〜13.38GPa であった。海綿骨の縦弾性率は大腿部を精密切断機を用いて切り出し，冠状面骨幅中央で

骨 転 子 部 外 側 で14.84〜22.55GPa，内 側 で18.27〜

切断し低温硬化樹脂で含侵包埋したのち，この表面を28.17GPa，横弾性率は大腿骨転子部外側で5.24〜

自動研磨機を用いて研磨紙とダイアモンド粒子で鏡面8.18GPa，内側で6.67〜10.5GPa であった。皮質骨の化し標本を作製した。大腿骨転子部外側では４mm

密度は大腿骨転子部外側で0.35〜0.59g/cm ，内側での測定ラインで等間隔に16ライン，転子部内側では４0.55〜0.81g/cm であった。海綿骨の密度は大腿骨mm の測定ラインで等間隔に10ラインを計測高位と転 子 部 外 側 で0.38〜0.55g/cm ，内 側 で0.45〜0.67

して，超音波顕微鏡（日立建機社製 H ‑SAM ）を用

g/cm であった。外側皮質骨部と内側皮質骨部で弾性

いて，200MHz の周波数で弾性率，密度を算出する

率値を比 した結果，70歳以上の標本において，外側際に必要となる骨組織における漏洩表面波の音速，反皮質骨部の縦弾性率，横弾性率が内側部と比 して有射率などを計測した。得られた計測値からを皮質骨部，意に低下していた（p＜0.05）。外側海綿骨部におい海綿骨部の縦弾性率，横弾性率，密度の値を算出した。

て近位部と遠位部で弾性率値を比 した結果，80歳以上の３標本において，近位部の縦弾性率，横弾性率が332

その結果，松木は次の結論を得た。
１．皮質骨の縦弾性率は大腿骨転子部外側で14.26〜
信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

22.53GPa，内側で23.4〜35.28GPa，横弾性率は大折の骨折部位と一致しており，こられの骨組織部の弾腿骨転子部外側で5.07〜8.23GPa，内側で8.52〜性率の低下は高齢女性における大腿骨転子部骨折の発13.38GPa であった。

生割合の増加に関与している可能性が示唆された。今２．海綿骨の縦弾性率は大腿骨転子部外側で14.84〜

回の研究結果は解剖用死体より摘出した骨標本におけ22.55GPa，内側で18.27〜28.17GPa，横弾性率はる結果であり，生体における評価ではない。本研究の大腿骨転子部外側で5.24〜8.18GPa，内側で6.67〜

臨床的意義は，今回の知見を加齢による脆弱性骨折の10.5GPa であった。

予防に応用することにより骨折の発生率を減少させ，３．70歳以上の６標本において，大腿骨転子部の外側

また治療効果の新しい判定法の開発に応用できるとい

皮質骨部の縦弾性率，横弾性率は内側部と比 してうことなどである。以上により，これまで研究が行わ有意に低下していた。

れていなかった高齢女性の大腿骨転子部の皮質骨と海４．80歳以上の３標本において，大腿骨転子部の外側

綿骨の弾性率値や弾性率分布の評価がなされており，

近位部の海綿骨部の縦弾性率，横弾性率が遠位部と臨床医学的に意義があるものと考えられるため，主査，

比

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるもして有意に低下していた。

今回の研究で弾性率値が低下していた大腿骨転子部のと認めた。

の外側皮質骨部と外側近位海綿骨部は大腿骨転子部骨Alpha ‑Adrenergic Receptors Mediate Bladder Overactivity Induced by Cold Stress in Rats withBladder Outlet Obstruction（下部尿路閉塞モデルラットの冷えストレス誘発排尿筋過活動における α受容体の機能的役割の考察）
山

岸

貴

裕

（論文の内容の要旨）

その後，４週間通常飼育し，下部尿路閉塞（BOO）【背景と目的】前立腺肥大症などの下部尿路閉塞によモデルとした。また，尿道を結紮しなかった動物を偽る蓄尿障害，排出障害，排尿後症状などの下部尿路症

手術ラットとした。４週間の通常飼育後，BOO モデ状の治療には，未だに多くの課題がある。下部尿路症

ルでは閉塞を解除し，膀胱内圧測定のための膀胱留置状発症機序としては，下部尿路閉塞による膀胱の過伸

カテーテルを挿入した。このとき，膀胱容量が２‑５展が膀胱血流の低下を引き起こし膀胱内の排尿筋，神ml を示すラットを BOO 完成モデルとして膀胱内圧経などを障害するとともに，正常の排尿ではあまり排測定に用いた。膀胱内圧測定用カテーテルを挿入して尿に関連しない無髄Ｃ線維が活性化されることで症状

２日後，薬物投与用に頸静脈にカテーテルを留置し，が誘発されると考えられている。その一方，低温環境（RT，27±２℃）
BOO ラットの膀胱内圧測定を室温下への変化，つまり寒冷刺激を受けると尿意切迫，頻尿，で20分間行い，基準の膀胱内圧曲線とした。続いて，夜間頻尿などの下部尿路症状を経験することがある。

0.3mg/kg ナフトピジル（n＝６），あるいは，対照

しかし，寒冷刺激によって引き起こされる下部尿路症薬（n＝５）を頸静脈より投与した。投与５分後，ラ状の機序については，不明な点が多く，下部尿路閉塞

ットを速やかに低温下（LT，４±２℃）に移行し，では，寒冷刺激による反応が，どのように変化するの

膀胱内圧測定を40分間行った。膀胱内圧測定を行ったかもわかっていないのが現状である。本研究は，前立BOO ラットと正常組織としての偽手術ラット（n＝腺肥大症に伴う下部尿路症状の寒冷刺激に対する機序

８）の膀胱を摘出した。摘出した膀胱をトリミングし，を解明するために，前立腺肥大症による下部尿路閉塞

約1/3の膀胱組織から α と α 受容体 mRNA の発現を模倣したラットモデル及び α

交感神経受容体遮レベルを解析し，残りの組織に対して，α あるいは断薬のナフトピジルを用いて，α交感神経受容体のα 受容体抗体と，カルシトニン遺伝子関連ペプチド

機能的役割について検討した。

（CGRP）抗体を用いた二重免疫組織染色を行った。

【材料及び方法】10週齢雌 SD ラットをペントバルビ【結果】下部尿路閉塞の４週間後，BOO ラット（n＝タール麻酔下にて下腹部を開腹し，尿道をチューブと11）を無作為に，ナフトピジル群（n＝６），対照群

ともに結紮した後，チューブのみを抜去し閉腹した。

（n＝５）分けて検討を行った。対照群，ナフトピジ

No. 5, 2015333

審査学位論文要旨

ル投与群ともに室温から低温に移行すると，膀胱基底（論文審査の結果の要旨）

圧の有意な増加，１回排尿間隔の有意な低下，及び，

泌尿器科領域において，前立腺肥大症などによる下膀胱容量の有意な低下が認められた（それぞれ P＜

部尿路閉塞により生じた下部尿路症状の治療には，未0.01）。しかし，ナフトピジル投与群の低温への移行

だに多くの課題がある。その一つとして，寒冷刺激にに伴うこれらの増減は，対照群と比 すると有意に抑よって引き起こされる下部尿路症状が挙げられる。本

制されていた（P＜0.05）。下部尿路閉塞ラット膀胱

研究は，前立腺肥大症による下部尿路閉塞を模倣した

における α 受容体 mRNA の発現は，偽手術ラット

ラットモデルを用いて寒冷刺激に対する膀胱機能につと差がなかった。しかし，下部尿路閉塞ラット膀胱にいて検討した。さらに，αおける α 受容体 mRNA は，偽手術ラットと比ジルを用いて下部尿路閉塞膀胱に発現する α受容体

して，有意な高発現を示した。下部尿路閉塞ラット膀胱

受容体遮断薬ナフトピの機能的役割について検討した。

での CGRP 陽性求心性神経上の α 受容体の発現は，10週齢雌 SD ラットの尿道を結紮し，下部尿路閉塞

偽手術ラット膀胱との差が認められなかった。しかし，（BOO）ラットを作成した。膀胱容量が２‑５ml を示

下部尿路閉塞ラット膀胱での CGRP 陽性神経細胞上す BOO ラットを膀胱内圧測定に用いた。BOO ラッの α 受容体発現は，偽手術ラット膀胱よりも高発現

トの膀胱内圧測定を室温下で20分間行った。続いてしている傾向を示した。

0.3mg/kg ナフトピジルあるいは対照薬を頸静脈よ【考察】これまでの研究から，冷えストレス誘発性排り投与した。投与５分後速やかに低温下に移行し膀胱

尿筋過活動には，求心性無髄Ｃ線維（レジニフェラト

内 圧 測 定 を40分 間 行 っ た。膀 胱 内 圧 測 定 を 行 っ た

キシン感受性神経）の関与が報告されている。また，

BOO ラットと正常組織としての偽手術ラットの膀胱

α交感神経受容体は，組織部位によって発現レベルを摘出した。摘出した膀胱組織から α と α 受容体には差があるものの下部尿路組織全体に発現している

mRNA の発現レベルを解析し，残りの組織に対してことも報告されている。特に，膀胱に発現する α交

α あるいは α 受容体抗体とカルシトニン遺伝子関

感神経受容体は，求心性神経経路に発現していること

連ペプチド（CGRP）抗体を用いた二重免疫組織染色が報告されているため，本研究では膀胱内の α交感を行った。

神経受容体に注目した。下部尿路閉塞では，α 交感

その結果，山岸は次の結論を得た。

神経受容体 mRNA 発現量が増加し，CGRP 陽性求心１．対照群，ナフトピジル投与群ともに室温から低温性神経細胞上の α 交感神経受容体の発現が増加するに移行すると膀胱基底圧の有意な増加，１回排尿間傾向が認められた。ナフトピジルは α

交感神経受隔の有意な低下，及び膀胱容量の有意な低下が認め

容体遮断薬のひとつであり，特に α 交感神経受容体られた。しかし，ナフトピジル投与群の低温への移に対する親和性が高い。したがって，α

行に伴うこれらの増減は対照群と比交感神経受容体を介する冷えストレス誘発性排尿筋過活動がナ
フトピジルで抑制されたと考えられた。

すると有意に抑制された。
２．BOO ラット膀胱における α 受容体 mRNA の発

これらの研究結果は，下部尿路閉塞に伴う冷えスト

現は偽手術ラットと差がなかった。しかし，BOO

レスによって生じる下部尿路症状の悪化の機序のひとラット膀胱における α 受容体 mRNA は，偽手術つとして，α交感神経受容体を介した経路が存在す

ラットと比 して有意な高発現を示した。

ることを示唆している。

３．BOO ラット膀胱での CGRP 陽性求心性神経上の【結論】α交感神経遮断薬は，下部尿路閉塞モデルラッα 受容体の発現は偽手術ラット膀胱との差が認め

トにおける冷えストレス排尿筋過活動の一部を抑制しられなかった。
しかし，BOO ラット膀胱での CGRP

た。また，下部尿路閉塞モデルラットでは α 交感神

陽性神経細胞上の α 受容体発現は，偽手術ラット

経受容体 mRNA 発現量の増加，CGRP 陽性求心性神膀胱よりも高発現している傾向を示した。

経細胞上での α 交感神経受容体発現の増加傾向が認

これらの結果より，下部尿路閉塞に伴う寒冷刺激にめられた。これらのことより，α交感神経受容体

よって生じる下部尿路症状の悪化の機序のひとつとしは下部尿路閉塞における冷えストレス誘発性排尿筋過て，α受容体を介した経路があることが示唆された。

活動の制御に関与することが示唆された。

以上より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

334

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

Relationships of obesity and diabetes mellitus to other primary cancers in surgically treated gastriccancer patients（胃癌切除症例における，肥満もしくは糖尿病と，他臓器重複癌との関連性）
竹

内

大

輔

（論文の内容の要旨）

区間 1.0291‑6.9780；p＝0.044）。術後成績に関して【背景】胃癌患者にはさまざまな他臓器重複癌が合併

は，同時性重複癌を有する群は，そうでない群と比することが知られている。また肥満と糖尿病はさまざ

し て 全 生 存 期 間 に お い て 予 後 不 良 で あ っ た（p＝

まな癌の発育に関連があるといわれている。胃癌患者

0.04）
。

における，肥満と糖尿病の他臓器重複癌への影響を検【結論】胃癌患者に糖尿病もしくは肥満を伴う場合は，討した。

他臓器重複癌の存在に注意しなければならない。特に【対象と方法】2002年から2010年までの期間で，当科糖尿病や肥満を有する胃癌患者の手術の術前，術後ににて胃癌手術を施行された435例を対象とした。他臓は他臓器重複癌も視野に入れたスクリーニングが必要

器重複癌の検索としては，術前には下部消化管内視鏡である。

検査，胸腹部 CT 検査が施行された。術後には，６カ（論文審査の結果の要旨）

月後の胸腹部 CT 検査，１年後の CT 検査と上部消化胃癌患者にはさまざまな他臓器重複癌が合併するこ管内視鏡検査，下部消化管内視鏡検査が施行された。

とが知られている。また肥満と糖尿病はさまざまな癌

その後は１年毎の CT 検査，内視鏡検査が施行され，の発育に関連があるといわれている。胃癌患者におけ異常所見が認められれば検査の間隔が短縮された。平る，肥満と糖尿病の他臓器重複癌への影響を検討した。

均フォローアップ期間は39カ月であった。肥満に関し

2002年から2010年までの期間で，当科にて胃癌手術ては，Body mass index が25kg/m 以上の患者を肥を施行された435例を対象とした。他臓器重複癌の検満群とした。空腹時血糖と HbA1c は手術前に検査さ索としては，術前には下部消化管内視鏡検査，胸腹部れ，糖尿病のスクリーニングが行われた。

CT 検査が施行された。肥満に関しては，Body mass

【結果】他臓器重複癌は109例（25.1％）に認められindex が25kg/m 以上の患者を肥満群とした。空腹時

た。同時性重複癌を胃癌手術前後１年以内の発見と定

血糖とHbA1cは手術前に検査され，糖尿病のスクリー

義すると，同時性重複癌は40例（9.2％），異時性重ニングが行われた。

複癌が76例（18.2％）であった。他臓器重複癌の内その結果，竹内大輔は次の結論を得た。

訳は，消化器系が38例（34.9％）と最も多く，次いで１．他臓器重複癌は109例（25.1％）に認められた。

泌尿器系が25例（22.9％）と多く認められた。単変量

同時性重複癌が40例（9.2％），異時性重複癌が76

解析にて，他臓器重複癌は高齢者（p＝0.001），胃癌の例（18.2％）であった。他臓器重複癌の内訳は，遠隔転移陽性（p＝0.02），糖尿病患者（p＝0.0022）

消化器系が38例（34.9％）と最も多く，
次いで泌尿器に多く認められ，これら３因子を用いた多変量解析で系が25例（22.9％）と多く認められた。

は糖尿病は他臓器重複癌発生の独立した危険因子で２．単変量解析にて，他臓器重複癌は高齢者（p＝

あ っ た（オ ッ ズ 比 2.215；95％ 信 頼 区 間 1.2007‑

0.001），胃癌の遠隔転移陽性（p＝0.02），糖尿病

4.0850；p＝0.011）。単変量解析にて，同時性重複癌患者（p＝0.0022）に多く認められ，これら３因子

は男性（p＝0.0067），肥満群に多く認められた（p＝を用いた多変量解析では，糖尿病は他臓器重複癌発

0.025）。これら２因子の多変量解析では，肥満は同時

生の独立した危険因子であった（オッズ比 2.215；

性重複癌発生の独立した危険因子であった（オッズ比95％信頼区間 1.2007‑4.0850；p＝0.011）。単変量

2.354；95％ 信 頼 区 間 1.1246‑4.9279；p＝0.023）。

解析にて，同時性重複癌は男性（p＝0.0067），肥

単変量解析にて異時性重複癌は高齢（p＝0.038），飲満群に多く認められた（p＝0.025）。これら２因子

酒習慣（p＝0.04），糖尿 病 患 者（p＝0.0071），HbA1cの多変量解析にて，肥満は同時性重複癌発生の独立高値（p＝0.0496）に多く認められた。これら４因子

した危険因子であった（オッズ比 2.354；95％信の多変量解析では，糖尿病は異時性重複癌発生の独立

頼区間 1.1246‑4.9279；p＝0.023）。単変量解析にした危険因子であった（オッズ比 2.680；95％信頼て異時性重複癌は高齢（p＝0.038），飲酒習慣（p＝No. 5, 2015335

審査学位論文要旨

0.04），糖尿病患者（p＝0.0071），HbA1c 高値（p＝満を伴う場合は，他臓器重複癌の存在に注意しなけれ

0.0496）に多く認められた。これら４因子の多変量ばならないと思われた。特に糖尿病や肥満を有する胃解析にて，糖尿病は異時性重複癌発生の独立した危

癌患者の手術の術前，術後には他臓器重複癌も視野に険因子であった（オッズ比 2.680；95％信頼区間

入れたスクリーニングが必要であると考えられた。今1.0291‑6.9780；p＝0.044）。

回の研究は胃癌患者における他臓器重複癌のリスク因

３．術後成績に関しては，同時性重複癌を有する群は，子を明らかにしたものであり，臨床上の意義が高いとそうでない群と比 して全生存期間において予後不考えられ，主査，副査は一致して本論文を学位論文と良であった（p＝0.04）。

して価値があるものと認めた。

これらの結果により，胃癌患者に糖尿病もしくは肥Low levels of high‑density lipoprotein cholesterol predict the presence of coronary artery disease inpatients with aortic aneurysms（大動脈瘤患者において低 HDL コレステロールは冠動脈疾患の合併予測因子である）
三

枝

達

也

（論文の内容の要旨）

術前に得られる各種因子と冠動脈疾患との関連につ【目的】大動脈瘤は全身の動脈硬化や心血管病の一般

いて，大動脈瘤症例全体，胸部大動脈瘤，腹部大動脈的な危険因子とされている。実際に大動脈瘤を有する瘤，胸腹部大動脈瘤の群別に統計学的に解析した。

患者の30‑70％に冠動脈疾患が合併するとの報告があ【結果】外科的治療適応があり術前冠動脈造影を施行る。また腹部大動脈に対する外科的手術を施行されたされた大動脈瘤191例のうち，胸部大動脈瘤は34例，患者では，冠動脈疾患を有することが遠隔期の死亡率

腹部大動脈瘤は137例，胸腹部大動脈瘤は20例であっに関連があると報告されている。

た。74例（38.7％）で冠動脈疾患の合併を認め，特したがって，大動脈瘤の手術前に冠動脈疾患の評価に腹部大動脈瘤137例（40.9％），胸腹部大動脈瘤20をすることは意義あることと考えられるが，この集団例（55.0％）で多く認めた。単枝病変42例（56.8％），

における冠動脈疾患を合併する予測因子については，

左前下行枝病変57例（44.9％）が多く，大動脈瘤術

これまで検討が十分になされていない。

前に40例（54.1％）に冠動脈の血行再建が必要であっ本研究では大動脈瘤に対する外科的手術を施行するた。

患者において，冠動脈造影による有意狭窄病変の検索

大動脈瘤症例全体の検討では，冠動脈疾患との関連を行い，冠動脈疾患と関連する背景因子について検討

で，単変量解析で HDL‑コレステロール（HDL‑C）を行った。

と逆相関（p＝0.009），腹部大動脈瘤と正相関（p＝【方法】2006年１月から2009年12月までに胸部大動脈0038）を認めた。多重ロジスティック回帰分析では，瘤，腹部大動脈瘤，あるいは両者を合併し，開腹によ高血圧，LDL‑コレステロール（LDL‑C），HbA1c，る人工血管置換術またはステントグラフト置換術の予

喫煙，スタチン服用による調整下で HDL‑C（Odds

定となっている連続191例で検討した。手術適応基準

ratio 0.630，p＝0.010）と腹部大動脈瘤（Odds ratio

は，短径で胸部大動脈瘤６cm 以上，腹部大動脈瘤５3.331，p＝0.036）が冠動脈疾患の独立した予測因子

cm 以上もしくは急速増大，嚢状瘤であることとした。

であることが示された。

以前に冠動脈造影で有意狭窄を指摘されている，冠血胸部大動脈瘤の検討では，単変量解析で喫煙と冠動

行再建の既往がある，狭心症症状がある症例は除外し脈疾患の関連を認めたが，多変量解析では独立した予た。術前に患者情報収集および血液検査施行し冠動脈

測因子にはなり得なかった。

造影を行った。冠動脈の内腔が75％以上の狭窄，左腹部大動脈瘤症例の検討では，単変量解析でHDL‑

主幹部は50％以上の狭窄を有意狭窄とした。冠血行C が冠動脈疾患と逆相関（p＝0.041）を認め，多変量再建は日本循環器学会の安定冠動脈疾患における待機解析で唯一独立した予測因子であった（Odds ratio

的冠動脈インターベンション（PCI）のガイドライン

0.646，p＝0.041）。一般的な冠危険因子である高血に基づいて施行した。

圧，LDL‑C，HbA1c，喫煙歴は関連を示さなかった。

336

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

受信者動作特性曲線（ROC 曲線）を用いた冠動脈疾

冠動脈病変は，大動脈瘤症例全体の検討では，単変患を予測し得るHDL‑Cのカットオフ値は47.5mg/dL

量解析で HDL‑C と逆相関（p＝0.009），腹部大動脈で，感度54.8％，特異度62.7％であった（p＝0.018）。

瘤と正相関（p＝0038）を認めた。多重ロジスティッ【考察】本研究では外科的手術適応のある大動脈瘤症

ク回帰分析では，高血圧，LDL‑C，HbA1c，喫煙，例における冠動脈疾患の予測因子を検討し，HDL‑C

ス タ チ ン 服 用 に よ る 調 整 下 で HDL‑C（Odd ratioの低値が予測因子と考えられた。

0.630，p＝0.010）と腹部大動脈瘤（Odd ratio 3.331，

一般的に虚血性心疾患の有病率は1,000人あたり8.13‑
11.8人と報告されているが，今回の研究ではそれを大

p＝0.036）が虚血性心疾患の独立した予測因子であることが示された。

きく上回り，従来の報告を踏襲するものであった。細胸部大動脈瘤の検討では，単変量解析で喫煙と虚血胞外基質のリモデリング過程の一形態とする胸部大動性心疾患の関連を認めたが，多変量解析では独立した

脈瘤とは異なり，腹部大動脈瘤は特に高い合併率を認予測因子にはなり得なかった。腹部大動脈瘤症例の検めた。

討では，単変量解析で HDL‑C が虚血性心疾患と逆従来から HDL‑C と虚血性心疾患，動脈硬化所見

相関（p＝0.041）を認め，多変量解析で唯一独立しの関連は複数報告されているが，大動脈瘤患者におけた予測因子であった（Odd ratio 0.646，p＝0.041）。

る検討は本研究がはじめてである。近年は HDL‑C

一般的な冠危険因子である高血圧，LDL‑C，HbA1c，の量的影響だけではなく，末梢血管から肝臓にコレス

喫煙歴は関連を示さなかった。

テロールを転送する HDL‑C の質的影響が動脈硬化

ROC曲線を用いた虚血性心疾患を予測し得るHDL‑予防に重要であるとの報告があるが，本研究では検討

C のカットオフ値は47.5mg/dL で，感度54.8％，特しておらず，今後の検討課題である。

異度62.7％であった（p＝0.018）。

フラミンガム心臓研究では HDL‑C の上昇が虚血

その結果 三枝達也は次の結論を得た。

性心疾患の減少と関連を認めたが，HDL‑C 上昇薬剤

１．本研究は外科的手術適応のある大動脈瘤症例にお等による介入で心血管イベントを減少させるか不明でける虚血性心疾患の予測因子を検討した最初の研究ある。すでに大規模介入研究で検討が開始されているであり，HDL‑C の低値が虚血性心疾患の唯一の予が，今後我々としては個々の動脈硬化病変に視点をお

測因子であった。

き血管内超音波などのイメージングを用いて HDL‑C

２．末梢血管から肝臓にコレステロールを転送する改善による動脈硬化進展予防効果を検討し，本研究でHDL‑C 作用が動脈硬化疾患予防の重要役割を担っ得られた HDL‑C の重要性を検証していく必要があているとの報告があり，今回の HDL‑C と虚血性る。

心疾患の関連を示唆するものである。
（論文審査の結果の要旨）

３．これらの結果から，大動脈瘤術前患者において外科的治療適応があり術前冠動脈造影を施行された

HDL‑C の測定は虚血性心疾患を予測する上で有用

大動脈瘤191例のうち，胸部大動脈瘤は34例，腹部大であり，術前リスクを層別化する一つの判断項目に動脈瘤は137例，胸腹部大動脈瘤は20例であった。74なる可能性があると考えられた。

例（38.7％）で虚血性心疾患を認め，特に腹部大動

本論文は大動脈瘤術前患者における虚血性心疾患の脈瘤137例（40.9％），胸腹部大動脈瘤20例（55.0％）

予測因子について検証した臨床上有意義な研究であり，で多く合併を認めた。単枝病変42例（56.8％），左前下主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が行枝病変57例（44.9％）が多く，術前に40例（54.1％）

あるものと認めた。

に冠動脈の血行再建を施行した。

Steatogenesis in adult‑onset type II citrullinemia is associated with down‑regulation of PPARα（成人発症 型シトルリン血症における脂肪肝は PPARαの発現低下に由来する）
木

村（論文の内容の要旨）【目的】成人発症No. 5, 2015

型シトルリン血症（以下 CTLN2）

岳史は我が国で比 的多く見られる尿素回路異常症で，原因として SLC25A13 遺伝子変異が同定されている。
337

審査学位論文要旨

この疾患では肥満や飲酒に関連しない脂肪肝が合併すして SLC25A13 遺伝子の変異が同定されている。こることが報告されているが，その発症機構は不明であの疾患では肥満や飲酒に関連しない脂肪肝が合併するる。本研究の目的は，通常の脂肪肝とは臨床像の異なことが報告されているが，その発症機構は不明である。

る CTLN2随伴性脂肪肝の発症メカニズムを明らかに

本研究は，通常の非アルコール性脂肪肝疾患とは臨床することである。

像の異なる CTLN2随伴性脂肪肝の発症メカニズムを【方法】1998年から2012年の14年間で当院にて肝組織明らかにすることを目的とした。1998年から2012年にが得られた CTLN2 16例を対象とした。また生体肝

当院にて肝組織が得られた CTLN2 16例を対象とし，移植ドナー７例の肝組織を対照として用いた。凍結肝

凍結肝組織から RNA・蛋白を抽出し，脂質代謝関連組織から RNA・蛋白を抽出し，脂質代謝関連遺伝子

遺伝子の発現量を定量 PCR 法やイムノブロットなどの発現量を定量 PCR 法やイムノブロットなどを用いを用いて解析した。また生体肝移植ドナー７例の肝組て解析した。

織を対照として用いた。

【結果】CTLN2では全例で肝臓に脂肪沈着を認めた
ものの，痩せ型であった。脂肪酸輸送・活性化に関連する CD36，FABP1（fatty acid‑binding protein 1），

その結果，木村岳史は以下の結論を得た。
１．CTLN2患者の肝臓では，全例で組織学的に脂肪沈着を認めた。

ACSL1（long‑chain acyl‑CoA synthase 1），脂肪酸

２．脂肪酸輸送・活性化に関連する CD36・FABP1

β酸化に関連する CPT1A（carnitine palmitoy1‑CoA（fatty acid‑binding protein 1）
・ ACSL1（long‑，ACADM（medium‑chain acyl‑CoAtransferase 1α）

chain acyl‑CoA synthase 1)，脂肪酸 β酸化に関連，（acyl‑CoA oxidase 1），
リポ
dehydrogenase）
ACOX1

するCPT1A (carnitine palmitoyl‑CoA transferase

蛋白分泌に関連するM TTP（microsomal triglyceride1α)・ACADM (medium‑chain acyl‑CoA dehy-transfer protein）の mRNA 発 現 は CTLN2で 有 意・ ACOX1（acyl‑CoA oxidase 1），リdrogenase）に低下し，脂肪沈着量と負の相関を示した。脂肪酸 β

ポ蛋白分泌に関連する M TTP (microsomal trig-

酸化能を反映する血中ケトン体は CTLN2で有意に低lyceride transfer protein) の mRNA 発 現 が値であった。遺伝子発現の結果とあわせて，CTLN2

CTLN2患者の肝臓で有意に低下し，脂肪沈着量とでは肝臓での脂肪酸 β酸化が顕著に抑制されている負の相関を示した。

ことが示唆された。一方，脂質新規合成酵素である

３．脂 肪 酸 β酸 化 能 を 反 映 す る 血 中 ケ ト ン 体 は

FASN（fatty acid synthase），ACLY（ATP citrate

CTLN2患者で有意に低値であった。遺伝子発現の，DGAT（diacylglycerol O‑acyltransferase）
lyase）

結果とあわせて，CTLN2患者では肝臓での脂肪酸1/2などの発現には差がなかった。脂肪酸 β酸化は核β酸化が顕著に抑制されていることが示唆された。

内受容体 α型ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体

４．脂質新規合成酵素である FASN（fatty acid sy-（peroxisome proliferator‑activated receptor
PPARα（ATP citratelyase），（diacylnthase），
ACLY
DGAT

α）に強力に制御されているので，PPARαに関して

glycerol O‑acyltransferase）1/2などの発現には差も検討したところ，PPARαの発現量・機能ともにがなかった。

CTLN2で著明に低下しており，脂肪沈着量と逆相関

５．脂 肪 酸 β酸 化 の 強 力 な 調 節 因 子 で あ る 核 内 受を呈した。さらに CTLN2患者の肝臓では JNK（c‑容体 α型ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体

Jun N‑terminal kinase）のリン酸化が亢進しており，

PPARα（peroxisome proliferator ‑activated

PPARαの発現を低下させる一因と推測された。

receptor α）に関して検討したところ，PPARαの【結論】PPARαの低下とその結果として生じる脂肪発現量・活性はともに CTLN2患者の肝臓で著明に酸代謝異常が，CTLN2における脂肪肝形成の主たる低下しており，脂肪沈着量と逆相関を呈した。

分子機構であった。これらの結果は，尿素回路異常症

６．CTLN2患者の肝臓ではJNK（c‑Jun N‑terminalと脂質代謝・PPARαとの関連を示す新知見を提示しkinase）のリン酸化が亢進しており，PPARαを低ていると考えられた。

下させる一因と推測された。

（論文審査の結果の要旨）

今回の研究は，CTLN2患者の肝臓において脂質代

成人発症 型シトルリン血症（以下 CTLN2）は我謝 遺 伝 子 の 発 現 解 析 を 行 っ た 初 の 研 究 で あ る。

が国で比 的多く見られる尿素回路異常症で，原因とPPARαの低下とその結果として生じる脂肪酸 β酸338

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨化の低下が，CTLN2における脂肪肝形成の主たる分えられた。従って主査，副査は一致して本論文を学位

子機構であった。これらの結果は，尿素回路異常症と論文として価値があるものと認めた。

脂質代謝・PPARαとの関連を示す新知見であると考Detergent‑dependent separation of postsynaptic density, membrane rafts and other subsynaptic
structures from the synaptic plasma membrane of rat forebrain（シナプス後肥厚部，膜ラフト及び他のシナプス内構造の分離・精製過程の系統的解析）
趙（論文の内容の要旨）

麗穎得られたシナプス内構造を SDG にて分離して，その【背景と目的】 シ ナ プ ス 後 肥 厚 部（postsynaptic

分離のプロセスを系統的に解析した。

density，PSD）の精製法は1970年代後半に確立され，【実験方法】PSD とシナプス後部膜ラフトの精製：６

この方法により主として Type I（興奮性）PSD が精週齢ラットの前脳から調製したシナプス膜を様々な濃製されると言われてきた。以来，この精製 PSD は生度のマイルドな界面活性剤（Triton X‑100，OG，

化学的に克明に解析が進められてきた。1997年になる

CHAPSO）で処理した後，SDG にかけて，12画分をと，脂質ラフト（後に膜ラフト）の概念が提案された。

分離・回収した。各画分のタンパク質の分布は電気泳

PSD と膜ラフトはともに４℃で界面活性剤不溶性で動/銀染色で検出した。SDG 上の Type I 及び Typeあるが，信州大学神経可塑性学研究室は，シナプスに

II シナプスタンパク質の分布，シナプス膜ラフトマー

おける Triton X‑100不溶性の PSD と膜ラフトは密度

カーの分布をウエスタンブロッティングにてそれぞれの差によりショ糖密度勾配（SDG）超遠心法によってのマーカー分子を検出することにより調べた。また，分離されること，またシナプス膜（synaptic plasma

主要な画分の構造を電子顕微鏡で観察し，各画分に含を比 的低濃度の Triton X‑100で処理しmembrane）

まれる構造とその構成分子の対応を調べた。

た後，界面活性剤不溶性膜画分（detergent‑insoluble【実験の結論と考察】Type I と Type II タンパク質

membrane，DRM ，いわゆる膜ラフト画分）中に PSD‑

は相互に排他的な分布をしていた。Triton X‑100処

膜ラフト複合体が存在することを報告した。また，シ

理後に Type I PSD は主に沈渣（第12画分）と不溶性

ナ プ ス 膜 の オ ク チ ル グ ル コ シ ド（n‑octyl β‑D ‑画分８に分布していた。従来 の 方 法 で 精 製 さ れ る

glucoside，OG）処理は PSD と DRM を完全に分離

PSD は，これら２つの PSD プールの混合物であるこすることも報告した。これらの結果は，シナプス膜内とが示唆されたが，Type II の PSD は混在していなのサブコンポーネントの可溶化は，界面活性剤処理のかった。Type I PSD と膜ラフトの結合は Triton X‑

条件，例えば，界面活性剤の種類，界面活性剤の濃度100処理時には観察されたが，OG や CHAPSO でのまたは界面活性剤：タンパク質比率によってかなり異処理時には検出されなかった。一方，Type II PSD

なることを示唆していた。また，精製された脳シナプと膜ラフトの相互作用は Triton X‑100では観察さス画分は不均一で，前脳から調製したシナプトソーム

れ ず，OG や CHAPSO の 処 理 時 に は 観 察 さ れ た。

やシナプス膜は Type I と Type II（抑制性）シナプ

Type II シナプスのマーカーである gephyrin（scaf-

ス を 含 む。し か し，こ の 様 に ヘ テ ロ な シ ナ プ ス やfolding protein）と GABA 受容体は，
gephyrin が容易

PSD を体系的に分離・同定する研究はまだ行われてに可溶化されるため，解離していた。
また，
Type I PSD

いなかった。これらのシナプスのサブ構造間の解剖学

タンパク質は高濃度の OG により可溶化されることが的関係および相互作用や，シナプスの分子構築は詳細分かった。さらに，CHAPSO 処理により新規のシナには明らかにされてはいない。例えば，Type II PSD

プスサブ構造を含む画分が複数同定された。これらはの分離法は確立されていない。PSD とシナプス後部

今後の研究対象になると考えられた。GluA は PSD

膜ラフトの間の，より詳細な相互作用を解明するために結合したサイトの他に，PSD から解離したサイトに，私 た ち は，３ 種 類 の マ イ ル ド な 界 面 活 性 剤（非 PSD プール）にも存在することが OG と CHAP-

Triton X‑100，OG または CHAPSO を濃度を変えてSO 処理により明らかになった。以上の結果は，分子用いてラット前脳から調製したシナプス膜を可溶化し，レベルでのシナプス構造の理解を深めるために有益でNo. 5, 2015339

審査学位論文要旨あると考えられた。

し，Type I 及び Type II シナプスタンパク質の分布，（論文審査の結果の要旨）

シナプス膜ラフトマーカーの分布をウエスタンブロッ

シナプス後肥厚部（postsynaptic density，PSD）

ティングにて検出した。また，主要な画分に含まれるの精製法は1970年代後半に確立され，この方法によりシナプス膜由来の構造を電子顕微鏡で観察し，各画分

主として Type I（興奮性）PSD が精製されると考えに含まれる構造とその構成分子の対応を調べた。

られてきた。この研究を行う以前の研究において，信その結果，以下のような結果を得た。

州大神経可塑性学教室の研究によって，以下のことが

１．Type I と Type II PSD タンパク質はショ糖密度

明らかになっていた。つまり，シナプス膜（synaptic

勾配遠心の後，相互に排他的な分布をしていた。

plasma membrane，SPM ）から Triton X‑100を用い

２．Triton X‑100処理後に Type I PSD は主に沈渣

て PSD を精製する過程で，PSD の他に，軽い Triton（第12画分）と不溶性画分８に分布していた。

X‑100不溶性画分が同時に得られること。この軽い画

３．従来の確立された方法で精製される PSD は，こ分は，コレステロールとスフィンゴ脂質に富んでおり

れら２つの PSD のプールの混合物であることが示

膜ラフトであること。シナプス膜をオクチルグルコシ

唆されたが，Type II の PSD は含有していなかっド（n‑octyl β‑D‑glucoside，OG）処理で可溶化する

た。

と，PSD と膜ラフトが完全に分離し，かつ PSD‑free

４．Type I PSDと膜ラフトの複合体はTriton X‑100の膜ラフトが得られること。さらに，シナプス膜内の処理時には観察されたが，OG や CHAPSO での処

サブコンポーネントの可溶化は，界面活性剤処理の条

理時には検出されなかった。一方，Type II PSD

件，例えば，界面活性剤の種類，界面活性剤の濃度まと膜ラフトの相互作用は Triton X‑100では観察さたは界面活性剤：タンパク質比率によってかなり異なれず，OG や CHAPSO 処理時には観察された。

ること。また，精製された脳シナプス画分は不均一で，

５．Type II シ ナ プ ス の マ ー カ ー で あ る gephyrin

前脳から調製したシナプトソームやシナプス膜は（scaﬀolding protein）と GABA 受容体は，gephy-

Type I と Type II（抑制性）シナプスの両者を含有すrin が容易に可溶化されるため，解離していた。

ると考えられていたが，それらを界面活性剤処理して

６．Type I PSD タンパク質は高濃度の OG により可得られる PSD の heterogeneity，例えば Type I PSD
Type II PSD のどちらを含むのか，あるいは両方を溶化されることが分かった。
７．CHAPSO 処理により新規のシナプスサブ構造を含むのか，という点についてさえ，明らかになってい含む画分が複数同定された。

なかった。そこで，申請者はシナプスのサブ構造間の８．GluA は PSD に結合したサイトの他に，PSD か

解剖学的関係およびそれらの相互作用や，シナプスのら解離したサイト（非 PSD プール）にも存在する

分子構築を詳細に知るために，ヘテロジナスなシナプ

ことが OG と CHAPSO 処理により明らかになった。

スや PSD の分離生成過程を体系的に調べた。６週齢以上の結果は，分子レベルでのシナプス構造の理解

ラットの前脳から調製 し た シ ナ プ ス 膜（SPM ）をを深めるために有益であり，今後のシナプス可塑性の様々な濃度のマイルドな界面活性剤（Triton X‑100，

分子レベルでの研究を正しく進めていく上で不可欠な，CHAPSO）で処理した
Octylβ‑D‑glucoside［OG］

基礎情報を提供するものであると考えられた。よって

後，ショ糖密度勾配遠心にかけて，12画分を分離した。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が各画分のタンパク質の分布を電気泳動/銀染色で検出あるものと認めた。

The ratio of plasma aldosterone concentration to potassium in adrenocorticotropin stimulation test isa possible new index for diagnosis of aldosterone‑producing adenoma in patients with primaryaldosteronism（原発性アルドステロン症患者において，ACTH 負荷試験による血漿アルドステ
ロン値/血清カリウム値比がアルドステロン産生腺腫の診断に有用な可能性がある）
石

井

宏

明

（論文の内容の要旨）

告では全高血圧患者の約５‑10％を占めると言われて【目的】原発性アルドステロン症（PA）は，最近の報

おり，二次性高血圧の中で最も頻度の高い疾患の１つ

340

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨である。疾患頻度の増加の背景として，画像診断の普3.4mEq/l（59症例中30例に低Ｋ血症を認めた），平

及に伴い腹部超音波検査や CT 検査を受ける機会が増

均尿中アルドステロン濃度13.4μg/dayであった。

え，偶然副腎腫瘍がみつかるといういわゆるインシデ

CT 画像による腫瘍局在は右側22例，左側23例，両側ンタローマの発見頻度が増えたことや ARR（血漿ア７例，副腎腫大なし７例であった。全81症例に対して

ルドステロン濃度/血漿レニン活性比）と呼ばれる採AVS 施 行 例 は59例（73％）で，手 術 施 行 例 は26例

血による PA のスクリーニング検査が普及したことな（AVS 例における46％，PA 例における32％）であっ

どが影響していると考えられる。日本における PA のた。AVS に よ る 局 在 診 断 で は，32症 例 を probable

確定診断について，まずは上記スクリーニング陽性例

APA，17症例を probable IHA と診断した。手術をに対してカプトプリル負荷試験，立位フロセミド負荷施行した probable APA 26症例において，25症例は試験などの機能検査を行い暫定的な診断をつけた上で，病理学的に APA と診断され，１例のみ過形成と診断

局在診断目的に副腎静脈サンプリング検査（AVS）された。

を行うことがゴールドスタンダードとなっている。こAVS 症例のうち迅速 ACTH 負荷試験の施行例はの局在診断こそが PA の診断において非常に重要で，28症例で，probable APA 群17例，その他の群11例でその結果により外科治療が可能となるためである。

あった。群間で各種パラメーターを比PAは通常２つのカテゴリーに分類され，アルドステロ

血清Ｋ値と ACTH 負荷試験前後の PAC で有意差をン産生腺腫（APA：aldosterone‑producing adenoma）

認め，APA 群で明らかな血清Ｋ値の低下，PAC の上と過形 成 に よ る 特 発 性 ア ル ド ス テ ロ ン 症（IHA：

昇を認めた。このことから PAC/血清Ｋ値（APR）

idiopathic hyperaldosteronism）である。AVS の結の有効性を検討したところ，ACTH 負荷試験後にお果，APA の可能性が高い（片側性アルドステロン過いて顕著な有意差を認めた。また probable APA の剰分泌）と診断されれば外科治療により根治が見込め

診断を予測する ACTH 負荷試験において，複数のパる可能性がある。現在，その局在診断において AVS

ラメーターを ROC 解析にて評価した。ACTH 負荷

がゴールドスタンダードとなっているものの，その検試験30分後の APR において cut oﬀを102.6とするこ査自体は侵襲性もあり，どこの施設でも手軽に行えるとで感度94.1％，特異度90.9％を得た。

検査ではない。今回当科における４年間で AVS を施【結語】PA 患者において，迅速 ACTH 負荷試験によ行した PA 患者のデータを解析し，片側性アルドステ

る血漿アルドステロン値/血清カリウム値比がアルド

ロン過剰分泌の存在をあらかじめ迅速 ACTH 負荷試

ステロン産生腺腫の診断に有用な可能性が示唆された。

験で予測するための因子を探索した。

したところ，（論文審査の結果の要旨）【方法】2009年４月から2013年３月までの４年間に当本研究では，当科で経験した原発性アルドステロン

科で PA と診断した81症例のうち AVS を施行した59症（PA）症例のデータを解析し，アルドステロン産症例とさらにその中で迅速 ACTH 負荷試験を施行し生腺腫（APA）を非侵襲的に予知すること，つまりた28症例について，AVS による局在診断の結果（片副腎静脈サンプリング（AVS）検査を積極的に進め側アルドステロン過剰分泌を probable APA，両側アるべき症例を予知する因子を探索した。

ルドステロン過剰分泌例を probable IHA とそれぞれ2009年４月から2013年３月までの４年間に糖尿病・定義）をもとに ROC 曲線を用いて迅速 ACTH 負荷

内分泌代謝内科で PA と診断した81症例のうち AVS

試験の有効性について検討した。PA の確定診断におを施行した59症例とその中で迅速 ACTH 負荷試験をける機能検査，AVS の局在診断における評価は日本

施行した28症例について，AVS による局在診断の結内分泌学会の診療治療ガイドラインに準じて行った。

果（片側アルドステロン過剰分泌を probable APA，

【結果】PA 診断症例のうち AVS 施行症例は59例で男

両側アルドステロン過剰分泌例をprobable IHAとそれ女比27：32，年齢は平均53歳で治療前の平均血圧144/

ぞれ定義）をもとに ROC 解析を用いて迅速 ACTH

88mmHg であった。治療一か月後の平均血圧は131/

負荷試験の有効性について検討した。

82mmHg と有意な低下を認め，手術例では全例降圧

その結果，石井は以下の結果を得た。

剤の減量もしくは中止に至った。検査データでは平均

PA 診断症例のうち AVS 施行症例は59例で男女比

血漿アルドステロン濃度（PAC）378pg/ml，平均血27：32，年齢は平均53歳，治療前の平均血圧144/88

漿レニン活性（PRA）0.14ng/ml/hr，平均血清Ｋ値

mmHg で治療１カ月後の平均血圧は131/82mmHg

No. 5, 2015341

審査学位論文要旨と有意な低下を認めた。検査データでは平均血漿アル認め，probable APA 群で明らかな血清Ｋ値の低下，ドステロン濃度（PAC）378pg/ml，平均血漿レニン

PAC の上昇を認めた。このことから PAC/血清Ｋ値

活性（PRA）0.14ng/ml/hr，平均血清Ｋ値3.4mEq/l（APR）の有効性を検討した結果，ACTH 負荷試験であった。
32症例を probaAVS による局在診断では，後において顕著な有意差を認めており，ACTH 負荷

ble APA，17症例を probable IHA と診断した。手術試験における複数のパラメーターを ROC 解析にて評を施行した probable APA 26症例において，25症例

価した。ACTH 負荷試験30分後の APR において cut

は病理学的に APA と診断され，１例のみ過形成と診

oﬀを102.6とすることで感度94.1％，特異度90.9％

断された。

を得た。

AVS 症例のうち迅速 ACTH 負荷試験の施行例はこれらの結果より，PA 患者において，ACTH 負荷

28症例で，probable APA 群17例，その他の群11例で試験による APR が APA の診断に有用な可能性が示あった。群間で各種パラメーターを比唆された。よって，主査，副査は一致して本論文を学したところ，

血清Ｋ値と ACTH 負荷試験前後の PAC で有意差を位論文として価値があるものと認めた。

The Development and Trial of a Medication Discontinuation Program in the Department of Forensic
Psychiatry（医療観察法病棟における服薬中断プログラムの開発と試用に関する研究）
村

杉

謙

次

（論文の内容の要旨）

調症患者に対し M DP を実施し，実施前後の薬に対す【背景と目的】病状の長期的安定や再他害行為防止とる構えの調査票（Drug Attitude Inventory‑30：DAI‑

いった触法精神障害者治療の目的を達成するためには，

30）の 評 点 を 比

服薬アドヒアランスの向上が必要不可欠である。日本も確認するため，MDP実施後６〜14カ月後にもDAI‑

初の触法精神障害者の医療と社会復帰に関する法律と30評定を実施した。さらに，DAI‑30の全30個の質問なる医療観察法の対象患者の疾病の多くは統合失調症

項目を，① 服薬の必要性の認識，② 薬効の自覚，③であるが，これは各種疾病の中でもとりわけ服薬アド薬に対する印象の３つの下位項目に分けて検討するこ

ヒアランスの向上が得にくいと言われている。医療観とで，服薬アドヒアランスの向上にどのような因子が察法対象患者の入院治療を行うにあたり，服薬アドヒ

影響するのかについても調査した。また，MDP 実施

アランスの向上を促すために，新規抗精神病薬の単剤中に実施されている他の治療プログラムが，患者の服治療や疾病教育をはじめとした多角的なアプローチが薬に対する態度に影響を及ぼしている可能性を確認す

標準的に実施されているが，これらのアプローチによるため，介入群と基本属性を一致させた17例の統合失っても，服薬アドヒアランスが向上せず，頑なに薬物調症患者を非介入群として，介入群と同時期に DAI‑療法を含めた治療を拒否し続ける患者も存在する。そ30評定を実施し，前後の DAI‑30評点を比 した。

のような患者に対し，個々の特性に合わせて構造化し【結果】介入群において，MDP 実施前後で，DAI‑30た方法で抗精神病薬を中断し，精神症状の変化を主観

合計点が有意に上昇しており（−2.3±13.2→18.3±

的かつ客観的にモニタリングすることで薬効の自覚を9.2，P＝0.002），６〜14カ 月 後 の DAI ‑30合 計 点 も促し，ひいては服薬アドヒアランスの向上を目指す，

19.9±8.5との結果が得られ，評点の下降はみられな

服薬中断プログラム（Medication Discontinuation

かった。DAI‑30の３つの下位項目においても，MDP

Program：M DP）を開発した。我々は，精神科の治実施前後で評点は有意に上昇していた（① P＝0.015，

療プログラムに M DP を導入する価値があると考え，② P＝0.002，③ P＝0.014）。また，非介入群におい

MDP に何らかの有用性があるかどうかについて調査ては，DAI‑30評点の上昇は認められなかった。

した。

【結論】本研究によって，MDP が服薬アドヒアラン【方法】小諸高原病院医療観察法病棟において，新規スを向上させる可能性を持っていることが示唆され，抗精神病薬の単剤治療や疾患・向精神薬に対する心理

M DP の効果は長期間持続することも示唆された。ま教育といった標準的な入院治療を行ったものの，服薬た，MDP が多角的に服薬アドヒアランスの向上に寄アドヒアランスの向上が得られなかった７例の統合失

与することも示唆された。本研究は，試験的研究であ342

し た。MDP の 長 期 的 有 用 性

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

り，いくつかの検討課題も存在しているが，M DP が，

tory‑30：DAI‑30）の評点を比服薬アドヒアランスを向上させることが大きな課題と的有用性も確認するため，MDP 実施後６〜14カ月後なる統合失調症治療において，有用な治療プログラムにも DAI‑30評定を実施した。さらに，DAI‑30の全になりうると考えられた。また，今後，MDP を司法

30個の質問項目を，① 服薬の必要性の認識，② 薬効精神医療においてのみではなく，一般精神医療においの自覚，③ 薬に対する印象の３つの下位項目に分けても実施し，MDP の有用性や限界をより明確にしてて検討することで，服薬アドヒアランスの向上にどのいくことを検討したい。

ような因子が影響するのかについても調査した。また，（論文審査の結果の要旨）した。MDP の長期

M DP 実施期間中に実施されている他の治療プログラ

日本初の触法精神障害者の医療と社会復帰に関する

ムが，患者の服薬に対する態度に影響を及ぼしている

法律となる医療観察法の主要な目的は再他害行為の防可能性を確認するため，介入群と基本属性を一致させ止であり，その目的を達成するためには，医療観察法

た17例の統合失調症患者を非介入群として，介入群と対象患者の服薬アドヒアランスの向上が必要不可欠で同時期に DAI‑30評定を実施し，前後の DAI‑30評点ある。しかし，医療観察法対象患者の疾病の多くを占を比 した。

める統合失調症は，各種疾病の中でもとりわけ服薬アドヒアランスの向上が得にくい疾病と言われており，

その結果，村杉謙次は次の結論を得た。
１．介入群において，MDP 実施前後で，DAI‑30合

医療観察法対象患者の入院治療においては，服薬アドヒアランスの向上を促すために，新規抗精神病薬によ計点が有意に上昇していた。
２．介入群における，M DP終了６〜14カ月後のDAI‑

る単剤治療や疾病教育，服薬教育をはじめとした多角

30合計点は下降していなかった。

的なアプローチが標準的に実施されている。しかし，

３．介入群において，DAI‑30の３つの下位項目の評

これらのアプローチによっても，服薬アドヒアランス

点全てが，MDP 実施前後で有意に上昇していた。

が向上せず，頑なに薬物療法を含めた治療を拒否し続

４．非介入群においては，合計点，３つの下位項目共ける患者も存在する。そのような患者に対し，構造に，DAI‑30評点の上昇は認められなかった。

化した方法で抗精神病薬を中断し，精神症状の変化

これらの結果より，MDP が服薬アドヒアランスをを主観的かつ客観的にモニタリングすることで服薬向上させる可能性を持っていることが 示 唆 さ れ，

アドヒアランスの向上を目指す，服薬中断プログラム

M DP の効果は長期間持続することも示唆された。ま

（M edication Discontinuation Program：MDP）をた，MDP が多角的に服薬アドヒアランスの向上に寄開発し，その有用性について調査した。

与することも示唆された。本研究は，試験的研究であM DP の有用性を検討するために，小諸高原病院医り，いくつかの検討課題も存在しているが，MDP が，療観察法病棟において，標準的な入院治療を行ったも服薬アドヒアランスの向上が大きな治療課題となる統のの，服薬アドヒアランスの向上が得られなかった７

合失調症治療において，有用な治療プログラムとなる

例の統合失調症患者に対し M DPを実施し，実施前可能性も示唆されている。よって，主査，副査は一致

後の薬に対する構えの調査票（Drug Attitude Inven-

して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Gene‑gene interaction between EPAS1 and EGLN1 in patients with high‑altitude pulmonary edema（高地性肺水腫患者における EPAS1 と EGLN1 の遺伝子相互関係）
堀

内

俊

道

（論文の内容の要旨）HIF）がさまざまな遺伝子の誘導を制御し適応を図る【背景と目的】高地肺水腫（high altitude pulmonary

ことが知られている。これまでにチベット族やシェル

edema：HAPE）は，心肺疾患のない健常者が急速にパ族など高地居住民族の低酸素環境への適応に，HIF

2,500m 以上に高度上昇した際の順応不全であり，低の活性化経路に存在するさまざまな遺伝子が関与する

酸素下で肺動脈が収縮することによって非心原性の肺可能性が示されている。例えば，HIF2αとして知られ水腫が惹起される。低酸素環境へ適合する病態生理にる endothelial PER‑ARNT‑SIM domain protein 1

おいては，
低酸素誘導因子（hypoxia induciblefactor：（EPAS1）や，prolyl hydroxylase domain protein 2

No. 5, 2015343

審査学位論文要旨（PHD2）として知られるegl nine homolog 1（EGLN1）

組み合わせでは，ともにホモ接合型ではない，
EGLN1：が挙げられる。EPAS1 に存在する単塩基多型（SNPs）

rs2153364（A/G）x EPAS1：rs13419896（G/A）がはチベット族やシェルパ族で低酸素への耐性と関連し検討に最適であった。この中で，日本人の HAPE 発ており，EGLN1 に存在する SNPs はインド・イラン症に関して，各アレルが EGLN1：rs2153364 AA x語族の高地適応と関連している。しかし，元来の高地

EPAS1：rs13419896 GA の組み合わせがもっともハ

居住民族の高地適応は何世代にもわたり低酸素環境にイリスクであった（9 subjects of HAPE‑s vs. 3 sub-

暴露され続けて自然選択の結果獲得された形質であり，

jects of HAPE‑r，RR＝3.41with 95％ CI from 0.97

低地居住者が急速に高地に移動することによって急性。一方，EGLN1：rs2153364 AG x EPAS1：
to 11.99）

発症する HAPE の病態に，高地民族の HIF の遺伝rs13419896 AA の組み合わせがもっともローリスク

生物学的な事象があてはまるかは不明である。

であった（1 subjects of HAPE‑s vs. 5 subjects of

我々は，日本人の HAPE 発症に，HIF 経路の分子

HAPE‑r，RR＝0.23 with 95％ CI from 0.03 to

遺伝学的な変異が関与しているかどうかを検討するた

1.89）
。

め，EPAS1 と EGLN1 に存在する SNPs を用いて，【結論】EPAS1 と EGLN1 それぞれ単独では日本人

HAPE既往者と健常登山者の２群間で比 検討を行っの HAPE 発症への関連を認めなかったが，これら２た。

遺伝子の相互作用が発症に関与する可能性が示唆され【方法】1971年から2013年の間に日本アルプス登山中た。

に HAPE を発症し，信州大学医学部附属病院あるい（論文審査の結果の要旨）

は関連病院に入院した59人のHAPE既往者群（HAPE‑s）

高地肺水腫（high altitude pulmonary edema：（男性52人，女性８人，平均年齢34.2歳）と，対照とHAPE）は，低地に住む健常者が急速に2,500m 以上

して67人の健常登山者群（HAPE‑r）（男性58人，女の高度に移動した際の順応不全により発症する。低酸性９人，平均年齢37.0歳）を対象とした。全ての被検素環境で恒常性を維持する病態生理においては，低酸

者は低地に居住する日本人であり，既往に心肺疾患の素誘導因子（HIF）が，低酸素環境下でさまざまな遺伝ないことを確認した。

子を制御し適応を図ることが知られている。EPAS1

EPAS1 の SNPs から３つ（rs13419896，rs4953354，

は HIF のサブユニットである HIF2A をコードし，そrs4953388）と EGLN1 の SNPs から３つ（rs1435166，の単塩基多型（SNPs）は高地居住民族であるチベッrs7542797，rs2153364）を，国 際 HapM ap 計 画2005

ト族やシェルパ族において低酸素への耐性と関連するの日本人の遺伝子型データから選択した。HAPE‑s

ことが報告されている。また，EGLN1 は HIF の活性と HAPE‑r からそれぞれ 静 脈 血 を 採 取 し，−70℃

を 制 御 す る PHD2を コ ー ド し，そ の SNPs は イ ン

で凍結保存した。ゲノム DNAを白血球から抽出し，

ド・イラン語族の高地適応と関連することが報告され

選 出 し た ６ つ の SNPs に つ い て，TaqMan SNPている。しかし，高地居住民族の高地適応は何世代にGenotyping Assayを行い，遺伝子型と遺伝子頻度をもわたり低酸素環境に暴露され自然選択の結果獲得さ決定した。

れた形質であり，低地居住者が急速に高地に移動する

２群間の比 にはカイ二乗検定を用いたが，検体数ことによって発症する HAPE で，高地民族におけるが５以下であった場合は Fisher の直接確率計算法を

HIF に関する遺伝生物学的な事象があてはまるかは行った。両側検定のＰ値は＜0.05で有意とした。次い解明されていない。HIF 経路による HAPE 発症ので，EPAS1 と EGLN1 の２遺伝子の関連をみるため，

機序を明らかにするため，EPAS1で３個，EGLN1

遺伝子間で任意の SNPs のアレルの組み合わせを多で ３ 個 の SNPs の 解 析 を 行 っ た。HAPE 既 往 者 群

元解析（multi‑dimensional reduction：MDR）で評（HAPE‑s）59例 と 健 常 登 山 者 群（HAPE‑r）67例

価した。

を対象とし，６つの SNPsを用いて TaqMan SNP【結果】両群ともに６つの SNPs の遺伝子型の分布はGenotyping Assayで遺伝子の発現頻度を解析した。

Hardy‑Weinberg 平衡に合致した。アレルの発現頻さらに，遺伝子‑遺伝子の相互関係が HAPE の発症度に有意差はなく，EPAS1 と EGLN1 の各遺伝子単に関与するか否かを多元解析（M DR）法にて検討し

独では HAPE の発症に関連しないことが示唆された。

た。

２遺伝子の関連を調べるための各SNPsのアレルの344

この結果，堀内は以下の結論を得た。
信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

１．ア レ ル の 発 現 頻 度，お よ び 遺 伝 子 型 の 分 布 はを持つ場合，両群間に有意差を認めた。

HAPE‑s 群と HAPE‑r 群の２群間で有意差はなく，これらの結果から，EPAS1，EGLN1 遺伝子それ

EPAS1 と EGLN1 の各遺伝子 単 独 で は HAPE のぞれ単独では有意 差 を 認 め な か っ た が，EPAS1，

発症には関与しないことが示唆された。

EGLN1 の相互作用が，日本人の HAPE 発症に関与２．２つの遺伝子の相互作用が HAPE 発症に関与すしている可能性が示唆された。

る可能性を M DR 法にて解析したところ，EPAS1の rs13419896と EGLN1 の rs2153364の組み合わせ

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Pathophysiological function of endogenous calcitonin gene‑related peptide in ocular vascular diseases（眼内血管関連疾患における内因性カルシトニン遺伝子関連ペプチドの病態生理的作用）
鳥

山

佑

一

（論文の内容の要旨）である，レーザー誘導 CNV モデルにおける脈絡膜血【背景と目的】カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）

管新生の解析を行った。CNV モデルにおいて，レーは，カルシトニン遺伝子のalternative splicingによっザー瘢痕の面積は両者に差を認めなかったが，レーザーて作られる37個のアミノ酸残基からなるペプチドであり，処置後14日における脈絡膜新生血管の面積は，WT

神経系，消化器，血管などに発現がみられ，強力なマウスに比べ，CGRP−/−マウスの方が有意に大き血管拡張作用をはじめ多彩な生理活性を有する因子でかった。フルオレセイン蛍光眼底造影においても，ある。我々はこれまで，CGRP のファミリー因子でCGRP−/−マウスでは WT マウスに比べ，脈絡膜新あるアドレノメデュリンが，眼内病的血管新生に係わ生血管からの漏出をより強く認めた。またレーザー後ることを報告してきた。
近年，CGRPについても血管新７日において CGRP−/−マウスではレーザー照射

生や免疫系への関与や，眼内での分布が報告されてい部により多数のマクロファージ浸潤を認めた。Realるが，眼内 CGRP の病態生理学的意義の詳細は解明

time PCR では野生型マウス，CGRP−/−マウスとされていない。

もにレーザー後に色素上皮・脈絡膜において TNF‑α

我々は，カルシトニン‑CGRP 遺伝子配列のうち，の発現上昇を認めたが，CGRP−/−マウスでより発CGRP に特異的なエクソン５のみを欠損させること現が強かった。CGRP による CNV 抑制の機構を明で，カルシトニンは正常に保たれ，CGRP のみ欠損

らかにするため，WT マウスからチオグリコレート

するノックアウトマウス（CGRP−/−マウス）を樹誘導マクロファージを採取し，リポ多糖（LPS）刺立した。本研究では，CGRP−/−マウスを用いて，激による TNF‑αの産生を ELISA にて定量したとこ

眼内の生理的および病的血管新生における CGRP のろ，CGRP の前投与により，マクロファージからの役割を検討した。

TNF‑αの産生が有意に抑制された。さらにヒト網膜【材料および方法】野生型（WT）
マウスと CGRP−/−

色素上皮細胞に TNF‑αを投与し，ZO‑1免疫染色にマウスにおいて，生理的網膜血管新生，および，酸素て細胞間 tight junction（TJ）を評価したところ，濃誘導網膜症（OIR）モデルとレーザー誘導脈絡膜新生

度依存性に TNF‑αによる TJ の破綻が認められた。

血管（CNV）モデルにおける病的血管新生について

CGRP の 治 療 応 用 へ の 検 討 の た め，WT マ ウ ス の解析を行った。

CNV モデルに対して CGRP または CGRP アンタゴ

【結果】出生後の生理的網膜血管新生と OIR モデルにニストの持続皮下投与を行ったところ，CGRP 投与

おける病的網膜血管新生において，CGRP−/−マウによる有意な CNV の抑制とアンタゴニスト投与によスと WT マウスに明らかな差はみられなかった。眼る CNV の増大を認めた。さらに，CGRP−/−マウ内における CGRP とその受容体の遺伝子発現を real

スの CNV 増大と TNF‑αの関連を明らかにするた

time PCR で解析すると，受容体遺伝子は網膜よりもめ，TNF‑α産生抑制作用を有する lenalidomide を，色素上皮・脈絡膜でより強い発現を認めた。眼内のWT マウスと CGRP−/−マウス各々に投与したとこ

CGRP は網膜より脈絡膜において病態生理学的意義

ろ，CGRP−/−マウスでは，WT マウスと同程度まを有すると考え，次に滲出型加齢黄斑変性症のモデル

で，CNV およびマクロファージ浸潤が抑制された。

No. 5, 2015345

審査学位論文要旨【結論】内因性 CGRP は TNF‑α産生を抑制し，網膜色素上皮を保護することで脈絡膜新生血管の進展を−/−マウスに差はみられなかった。
２．定量的 RT ‑PCR にて CGRP 受容体の遺伝子は抑制していると考えられた。CGRP は滲出型加齢黄斑変性症における脈絡膜新生血管に対する新たな治療

網膜よりも脈絡膜で強く発現していた。
３．CNV モデルにおいて，CGRP−/−では野生 型薬となる可能性が示唆された。

に比べ，CNV の拡大と血管漏出の増加，マクロフ（論文審査の結果の要旨）

ァージ浸潤の増加を認めた。

カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）は，多４．CGRP 前投与により，LPS 刺激によるマクロフ

彩な生理活性を有するペプチドであり，血管新生や免疫系への関与，さらに眼内での発現が報告されている

ァージの TNF‑α産生が抑制された。
５．ヒト網膜色素上皮細胞において，TNF‑αは濃度が，眼内 CGRP の病態生理的作用の詳細は解明され依存性に，細胞間 TJ の形成を障害した。

ていない。そこで鳥山佑一は，CGRP ノックアウト

６．WT マウスの CNV モデルにおいて，CGRP のマウス（CGRP−/−マウス）を用いて，網膜の生理

持続皮下投与による CNV およびマクロファージ浸的血管新生および酸素誘導網膜症（OIR）モデルにお潤 の 抑 制 と，CGRP ア ン タ ゴ ニ ス ト 投 与 に よ る

ける病的血管新生の解析，眼内における CGRP 受容体

CNV 増大を認めた。

の発現解析，レーザー誘導脈絡膜新生血管（CNV）

７．WT マウスおよび CGRP−/−マウスの CNV モ

モデルにおける病的血管新生やマクロファージ浸潤のデルにおいて，TNF‑α産生抑制薬の投与により，解析，チオグリコレート誘導マクロファージを用いた，

CGRP−/−マウスでは WT マウスと同程度まで，

CGRP による TNF‑α産生抑制作用の解析，ヒト網

CNV およびマクロファージ浸潤が抑制された。

膜色素上皮細胞を用いた細胞間タイトジャンクション

以上の結果から，鳥山佑一は眼内における内因性（TJ）へ の TNF ‑αの 影 響 の 解 析，CGRP お よ び

CGRP が TNF‑α産生を抑制し，網膜色素上皮を保CGRP アンタゴニストの持続皮下投与による CNV

護することで脈絡膜新生血管の進展を抑制しているこ

モデルへの影響の解析，TNF‑α産生抑制薬投与によと，CGRP が加齢黄斑変性症における脈絡膜新生血

る CNV モデルへの影響の解析を行った。

管に対する新たな治療薬となる可能性を示した。

その結果，鳥山佑一は次の結論を得た。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文と１．生理的網膜血管新生および OIR モデルにおけるして価値があるものと認めた。

病的血管新生では，野生型（WT）マウスと CGRP

Rapid single nucleotide polymorphism based method for hematopoietic chimerism analysis andmonitoring using high‑speed droplet‑allele‑speciﬁcPCR and allele‑speciﬁcquantitativePCR（液滴型
塩基特異的高速 PCR および塩基特異的定量 PCR を用いた造血幹細胞移植における一塩基多型を使用したキメリズム解析）
平千明（論文の内容の要旨）

SNP）を利用した方法が多く報告されており，塩基【背景と目的】キメリズム解析は同種造血幹細胞移植

特異的 PCR（allele‑speciﬁc PCR，AS‑PCR）が有においてドナー/レシピエント比率を数値定量化する用である。本研究では，SNP を用いたキメリズム解方法であり，移植後の生着確認や再発予測に重要であ析として，ドナー/レシピエント識別領域の移植前迅る。解析には，ゲノム DNA 上の多型領域（特に数塩

速スクリーニングのための液滴型高速PCRによる塩基基の繰り返し配列である short tandem repeat，STR

特異的 droplet‑AS‑PCR 法と，レシピエント DNA領域）を用いた STR‑PCR 法が汎用されているが，の移植後定量解析のためのリアルタイムPCRによる塩PCR 増幅の非特異産物であるスタッターピークや，

基特異的定量PCR（AS‑quantitative PCR，
AS‑qPCR）

STR 領域の長さに依存した増幅効率の影響を受けるの開発を行った。

ことが知られている。近年，より正確な定量解析法と【方法】同種造血幹細胞移植を施行した20組のドナー/

して一塩基多型（single nucleotide polymorphisms，

レシピエントからなる40人を対象とした。SNP は多346

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

型頻度の高い５領域を対 象 と し た。プ ラ イ マ ー の検出行程が煩雑で時間を要する。本研究において，一３ʼ末端を修飾することで塩基特異的プライマーを作成

塩基多型（single nucleotide polymorphisms，SNP）

し，droplet‑AS‑PCR・AS‑qPCR ともに同一プライを用いて，移植前スクリーニング法と移植後定量解析

マー・プローブを使用した。
ドナー/レシピエント識別について新たなキメリズム解析手法を構築した。

率は droplet‑AS‑PCRによる SNPジェノタイピング

プライマーの３ʼ末端を修飾したプライマーの感により評価した。移植後経時変化の追跡が可能であった

度・特異性を評価し，各 SNP における塩基特異的プ６名について，AS‑qPCRを用いた定量解析によりレシライマーを作成した。また，20組のドナー/レシピエ

ピエント比率を算出し，STR‑PCRの結果と比ントを用いて，液滴型高速 PCR 装置による droplet‑

した。

【結果】Droplet‑AS‑PCR を用いることで，５領域全

allele speciﬁc‑PCR（droplet‑AS‑PCR）法で，移植ての SNP で８分以内にジェノタイピングが可能であ前スクリーニングとして SNPジェノタイピングをった。20組のドナー/レシピエント識別率は，５領域行った。SNP 領域は事前検討により多型頻度の高い

単独で５‑50％，５領域全ての SNP を用いると95％５種を用いた。さらに，移植後の定量解析として，６（19/20）であった。20組中10組では，２領域以上の識症例において塩基特異的定量 PCR（AS‑quantitative

別領域が得られた。AS‑qPCR による６名の定量解析

PCR，AS‑qPCR）と汎用法である STR ‑PCR の経の結果，２名が STR‑PCR の結果と乖離し，患者１時的変化を比 した。

は ２ 領 域 の SNP で レ シ ピ エ ン ト 由 来 細 胞 が2.04‑
2.91％検出されたのに対し，STR‑PCR では検出感度以下であった。患者２は３領域の SNP では６カ月後を除いた全ての検出点でレシピエント由来細胞が1.25‑2.16％検出された。
【考察】移植前のドナー/レシピエント識別領域選択方法として，droplet‑AS‑PCR を用いることで迅速でその結果，平千明は次の結論を得た。
１．Droplet‑AS‑PCR により，８分以内で SNP ジェ
ノタイピングが可能であった。
２．５種の SNP の各識別率は５‑50％で，５領域全てを用いることで95％（19/20）の識別率を得た。
３．経時的変化の追跡が可能であった６例中２例で，STR‑PCR との乖離点が見られた。

簡便にスクリーニング可能であった。識別率を100％

４．AS‑qPCR は STR‑PCR でみられる非特異反応にするために，人種を考慮した領域選択や組み合わせや増幅効率による影響が少なく，より正確な定量結が必要である。移植後の定量解析で乖離した２例は，果が得られた。

いずれも STR‑PCR のスタッターピークや増幅効率による偽陰性または偽陽性が考えられた。AS‑qPCRを用いることで，より正確にレシピエント DNA を検５．経時的変化の追跡が可能であった６例中４例で，２種以上の識別領域が得られた。
６．本法の総解析時間が，STR‑PCR を用いた汎用出することが可能であった。本研究で構築した dro-法より半分以下に短縮された。

plet‑AS‑PCR と AS‑qPCR を組み合わせたキメリズ

これらの結果より，移植前のドナー/レシピエント

ム解析は STR‑PCR の欠点を補う方法であり，容易

識別領域選択方法として，droplet‑AS‑PCR を用いに臨床応用可能である。

ることで迅速で簡便にスクリーニング可能であった。

【結論】同種造血幹細胞移植において，一塩基多型

識別率を100％にするためには，人種を考慮した領域（SNP）を指標とした移植前迅速スクリーニング法

選択や組み合わせが必要である。移植後の定量解析で（droplet‑AS‑PCR）と移植後定量法（AS ‑qPCR）

は，AS‑qPCR と STR‑PCR で結果が乖離した例がを組み合わせることで，迅速性かつより正確な定量性見られたが，STR‑PCR によるスタッターピークやを併せ持つキメリズム解析法が構築できた。解析工程

増幅 STR 領域の長さに依存した PCR 増幅効率によも簡便であり，臨床的有用性が期待される。

る影響が考えられ，AS‑qPCR を用いることで，より（論文審査の結果の要旨）

正確にレシピエント DNAを検出することが可能で

キメリズム解析で汎用されている short tandem

あった。本研究で構築した droplet‑AS‑PCR と AS‑

repeat（STR）領域を使用した STR‑PCR は，識別qPCR を組み合わせたキメリズム解析は STR‑PCR

率が高く定量性もあるが，PCR 増幅の非特異産物での欠点を補う方法であり，高い臨床的有用性が示唆さあるスタッターピークや，STR 領域の長さに依存しれた。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論た増幅効率の影響を受けることが知られている。また，文として価値があるものと認めた。

No. 5, 2015347

審査学位論文要旨

Role of the Programmed Death‑1 (PD‑1)pathwayin regulation ofTheilerʼs murine encephalomyelitis
virus‑induced demyelinating disease（タイラーマウス脳脊髄炎ウイルス誘導による免疫性脱髄疾
患における PD‑1 pathwayを介した炎症制御機構）
滝

沢章（論文の内容の要旨）① 抑制性共刺激によって，Ｔ細胞の反応を抑制し，【背景および目的】多発性硬化症（M ultiple Sclerosis：

末梢性寛容において重要な役割を果たす，② ２次リMS）は中枢神経系の脱髄疾患である。MS は自己免ンパ組織においてだけでなく，末梢臓器における自己疫疾患の一つであることが明らかとなっているが，自免疫寛容の維持にも深く関わっている，③ 慢性ウイ

己免疫反応が生じる原因は未だ不明であり，根治療法

ルス感染時における免疫系の疲弊状態にも関与していも確立されていない。MS の患者は欧米に多く，欧米

る，といった点が報告されている。

における有病率は人口10万人当たり約50人である。欧以上の背景から，本研究は TM EV‑IDD における米では一般的によく知られた疾患であり，社会的な関PD‑1 pathwayの役割を解析することにより，PD‑1

心も非常に高い。一方，日本における有病率は人口10

pathwayの治療応用への可能性を検討した。

万人あたり８‑９人と欧米に比べ少ないが，患者数は【方法および結果】初めに TMEV 感染による PD‑1，

近年増加傾向にあり，今後さらに増加すると考えられ

PD ‑L1の 発 現 量 の 変 化 を in vitro レ ベ ル に て 検 討ているため，治療法の研究，開発は急務である。

するため，ナイーブマウスの大腿骨から骨髄細胞を本研究は，M S のウイルス誘導性動物実験モデルで採取し，GM ‑CSFによって樹状細胞を誘導した。こある「タイラー脳脊髄炎ウイルス（Theilerʼs murineの樹状細胞に TM EV を感染させ，PD‑1，PD‑L1のにより誘導される脱encephalomyelitis virus：TM EV）

mRNA 発現量をリアルタイム RT ‑PCR 法にて測定

髄疾患（TM EV‑induced demyelinating disease：

した。その結果，TM EV を感染させた樹状細胞にお」を用い，MS の発症機序の解明及び，TMEV‑IDD）

いて PD‑1発現量が約３倍，PD‑L1発現量が約12倍

治療法確立のための解析を行った。TM EV‑IDD は，増加した。次に，TM EV感染による PD‑1，PD‑L1

中枢神経系に慢性感染した TMEV に対する免疫反応の発現量変化を inを起因とし，中枢神経系の脱髄が生じる。さらに，中TMEV‑IDD マウスを作製し，TMEV‑IDD の進行に

枢神経系の髄鞘抗原に対する自己免疫反応による障害

伴 う PD ‑1，PD ‑L1の 発 現 量 を リ ア ル タ イ ム RT ‑が生じていることも報告されている。このように，PCR 法にて検討した。その結果，脊髄中の PD‑1，

TMEV‑IDD の脱髄は，ウイルス感染に対する免疫反PD‑L1の発現量は，麻痺症状の進行に伴い，約15倍

応と，自己組織に対する免疫反応の２つの背景を有しまで増加した。

vivo においても追跡するため，ており，脱髄の結果，下肢の麻痺症状が発現する。従っさらに，TM EV‑IDD における PD ‑1 pathwayのて，TM EV‑IDD は中枢神経系に炎症性の脱髄が生じ役割を詳細に解析するため，TMEV‑IDD マウスに抗る機序を理解する上で非常に重要な動物実験モデルでPD‑1抗体を投与することにより，PD‑1 pathwayをある。

阻害し，免疫反応及び麻痺症状発現への影響を検討し本研究では，TMEV‑IDD における炎症反応を詳細た。抗 PD‑1抗体の投与期間は，TMEV‑IDD の麻痺に解析する上で，Ｔ細胞上に発現する抑制性の共刺激症状が発症し始める，TM EV 接種後20日目で区切り，

受 容 体 と し て 近 年 注 目 さ れ て い る Programmed

麻痺症状発症前の期間（Induction phase）と発症後Death 1（PD‑1）に着目した。PD‑1は活性化したＴの期間（Eﬀector phase）に分けて行った。その結果，細胞，Ｂ細胞，抗原提示細胞上に発現し，中でもＴ細Induction phase に抗 PD‑1抗体を投与した群では，胞上に発現する PD‑1は，Ｔ細胞の活性化を抑制する

麻痺症状の発症が有意に遅延した。一方，抗 PD‑1抗役割を持つ。この PD‑1のリガンドとして，PD‑L1お

体を Eﬀector phase に投与した群では，麻痺症状がよび PD‑L2の２種類が同定されている。これらのリ有意に増悪した。さらに，対照群及び抗 PD‑1抗体投

ガンドは共に炎症時や感染時に発現が増加することが与群を TMEV 接種から34日後に屠殺し，病理組織学

知られている。PD‑1 pathwayの主な機能として，的な解析を行うと共に，脾細胞，脊髄浸潤細胞におけ348

信州医誌 Vol. 63

審査学位論文要旨

る細胞内炎症性サイトカインをフローサイトメトリー

当該研究はＴ細胞上に発現する抑制性の共刺激受容にて解析した。その結果，Eﬀector phase に抗 PD‑1

体として注目されているProgrammed Death 1（PD‑抗体を投与した群は，脊髄における炎症及び脱髄がよ1）とそのリガンドである PD‑L1の関与について研究

り高度に進行していた。加えて，脾細胞，脊髄浸潤細した。タイラーウイルス感染による多発性硬化症の発胞における IFN‑γ，TNF‑αの産生が亢進している症過程で PD‑1および PD‑L1の発現が増加すること，ことが明らかとなった。

阻害型の PD‑1抗体投与によって多発性硬化症の進行【結論】以上の結果から，TMEV‑IDD において PD‑が促進することを示した。さらに，組織化学的観察に

1pathwayが中枢神経系の炎症反応に対して抑制的により PD‑1抗体投与群では炎症性細胞の浸潤が亢進す

働くことが明らかとなった。MS 治療法の確立に向け，ることを示した。また，炎症性サイトカインの産生もPD‑1pathwayを制御することが重要であることが示亢進されることを示した。これらの結果は多発性硬化唆された。

症の発症過程で免疫抑制性の PD‑1/PD‑L1系が抑制（論文審査の結果の要旨）的に作用することを示している。

多発性硬化症は（multiple sclerosis）は中枢神経

従来の多発硬化症の発症機序の研究は免疫促進的に系の脱髄疾患で難病指定されている。様々な原因でお働く免疫システムの研究が中心であったが，この研究こるとされているが感染や原因不明の要因を引き金すは免疫抑制的なシステムに注目しておこなわれた。結る自己反応性の免疫の成立が原因ではないかとされて論として免疫抑制的に機能する PD‑1/PD‑L1システ

いる。現在，根治治療法はなく原因解明による治療法

ムが抑制的に働くことを示した。この結果は発症のメ開発が望まれている。タイラーウイルスをネズミ脳内

カニズムとして免疫抑制系の破たんが多発性硬化症のに接種すると多発硬化症が発症することを利用して，増悪因子である可能性を示すとともに，新たな治療法

当人が所属する研究室では多発硬化症における免疫と開発のシードとなることが期待される。

発症の関係および免疫抑制による治療法開発に鋭意取り組んでいる。

No. 5, 2015

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として認めた。

349