Graduate School Research Meeting Presentation-大学院歯学独立研究科第 1 1 3 回 中 間 発 表 会 プ ロ グ ラ ム
第 97 回 大 学 院 研 究 科 発 表 会 プ ロ グ ラ ム
大学院学生等が、これまでの研究成果を発表します。
どなたでも聴講できますので、多数の参加をお待ちしております（聴講申込不要）

場 所：実習館 2 階 総合歯科医学研究所セミナー室
日 時：2021 年 3 月 24 日（水）17 時 25 分 開会
－2021 年 3 月 24 日（水）－No.

演題名・発表者

発表区分・予定時間

17：25

審査委員

開会挨拶 平岡研究科長「Cryopreserved spontaneous spheroids from compact bone-derived1［大学院］
17：30～18：00

mesenchymal stromal cells for bone tissue engineering」

司会：各務 教授の凍結保存）董 宏偉

主査：平賀教授（骨再生治療を目的とした皮質骨由来間葉系間質細胞によるスフェロイド 副査：大須賀教授：中道講師

硬組織疾患制御再建学講座 硬組織発生・再生工学専攻

2

［中 間］
18：00～18:30
司会：増田 教授

「口唇トレーニング前後における口腔周囲筋の筋疲労の評価」「カスタマイズしたセンサーを用いて外耳道のひずみで咀嚼回数をカウン 主査：金銅教授

3

［中 間］
18：30～19：00
司会：増田 教授山田 紗織

顎口腔機能制御学講座 咀嚼機能解析学専攻

トする新しい方法」
吉野 旭宏

顎口腔機能制御学講座

咀嚼機能解析学専攻

主査：大須賀教授
副査：蓜島教授：倉澤教授

副査：山本教授：正村准教授「Contribution of transglutaminases and their substrate proteins to
the formation of cornified cell envelope in oral mucosal epithelium」
4［大学院］
19：00～19：30
長谷川 教授（口腔粘膜上皮における角質化細胞エンベロープの形成へのトランスグル 主査：各務教授

副査：中村教授：小出准教授タミナーゼと基質タンパク質の寄与）
RITA RANI ROY
硬組織疾患制御再建学講座 硬組織疾患病態解析学専攻

5

［大学院］
19：30～20：00
芳澤 教授「皮質骨由来細胞によるティッシュエンジニアリングの併用は移植歯周囲 主査：平賀教授
への骨形成を促進する」
松村奈穂美

硬組織疾患制御再建学講座 硬組織発生・再生工学専攻

副査：小林教授：吉成教授※1 はオンラインにて行う。

問合わせ先：本館 2 階

学事室（大学院）内線 2215

発表内容の要旨（課程博士）
Abstract of Presented Research (For the Doctoral Course)
学

籍番号Student ID No.
（ ふ り が な ）

氏
攻分

入 学 年

1712

2017

Entrance Year

とうこうい

名

董宏偉

野

硬組織発生・再生工学

Name in Full

専ID♯GMajor Field

主 指 導 教 員
Chief Academic Advisor

発 表 会 区 分Type of Meeting

年

Year各務 秀明
中間発表会･大学院研究科発表会･松本歯科大学学会

Midterm Meeting / Graduate school research meeting presentation /The Matsumoto Dental University Society

演題名 / Title of Presentation
Cryopreserved spontaneous spheroids from compact bone-derived mesenchymal stromal cells for bone
tissue engineering（骨再生治療を目的とした皮質骨由来間葉系間質細胞によるスフェロイドの凍結保存）
発表要旨 / Abstract

目的：マウス皮質骨由来間葉系間質細胞(compact bone-derived mesenchymal stromal cells：CBDCs)から形成された自発的スフェロイドは，優れた幹細胞性や，高い骨分化能を有する．この細胞を再生医療に応用するためには凍結保存方法の確立が望まれるが，これまで自発的スフェロ
イドの凍結保存方法については十分な検討が行われていなかった．本研究では，この CBDCs から形成された自発的スフェロイドを用いて，凍結保存と解凍が幹細胞性や骨分化能，および invivo における骨形成能に与える影響について検討した．
材料と方法：３週令雄 C57BL/6J マウスを麻酔薬の過量投与によって安楽死させた後，大腿骨および脛骨を取り出し，細切してコラゲナーゼにて処理を行った．得られた細胞を基礎培地（α-MEM＋10％牛胎児血清＋bFGF）にて平面培養を行い，CBDCs を得た．2 継代目の細胞をスフェロイド形成用の低接着性シャーレに播種することで，自発的スフェロイドを得た．24 時間後にスフェロイドを回収し，5，10，15，20％のジメチルスルホキシド (DMSO)とともに緩徐凍結法にて-80℃まで冷却し，その後液体窒素中で保管した．解凍後，CCK-8 および CK−17（いずれも同仁化学研究所）を用いて，生存細胞数と細胞障害の程度を測定した．次に凍結保護剤による凍結前のスフェロイド（非凍結群）と凍結解凍後のスフェロイド（凍結群）の体性幹細胞マーカー，多能性幹細胞マーカー，および骨分化マーカーの発現を比較した．また，７日間骨分化誘導培地にて分化誘導後，骨分化マーカーの発現を調べた．次に非凍結群および凍結群のスフェロイドと，これらを骨分化誘導後の細胞とをそれぞれβ-TCP ブロック（オスフェリオン，オリンパステルモバイオマテリアル）へ播種し，SCID マウスの背部皮下へ埋入した。4
週後に摘出・固定し，μCT にて撮影後，脱灰，包埋，薄切して Hematoxylin-eosin にて染色し，組織学的検討を行った．
結果：解凍後の細胞生存率は 5%DMSO の群で最も高く，細胞障害の程度もこの群が最も低かった．この条件で凍結したスフェロイドについて，体性幹細胞マーカーである CD29，CD44，CD105，
Sca1，多能性幹細胞マーカーである SSEA1，Sox2，Oct4，Nanog，KLF4 および骨分化能のマーカーである OCN，OPN，Col1A1，BSA，Osterix の発現を比較したところ，非凍結群と凍結群で有意差は認められなかった ．骨分化誘導後，非凍結群と凍結群の ALP 活性はそれぞれ1.28±0.19 と 1.46±0.39 で，有意差は認められなかった．また，骨分化マーカーである BSP，Osterix，DMP1 の発現も，非凍結群と凍結群の間で有意差は認められなかった． SCID マウスへ移植後４週のサンプルを解析したところ，凍結群では非凍結群と同程度の骨組織の再生が認められ，さらに，骨分化誘導を行わない場合でも，分化誘導を行った自発的スフェロイドと同程度の骨形成がみられた．
結論：CBDCs による自発的スフェロイドを調製し，凍結保護剤である DMSO の濃度の最適化を試みたところ，５％で最も高い生存率が得られた．この条件で凍結保存を行った自発的スフェ
ロイドでは幹細胞性，骨分化能，および骨形成能が維持されており，凍結保存を行っていない自発的スフェロイドと同程度であった．適切な凍結保存方法を選択することで，CBDCs による自発的スフェロイドは利便性の高い骨再生用の細胞源となることが示唆された．
大学院歯学独立研究科 2005/01/12

発表内容の要旨（課程博士）
Abstract of Presented Research (For the Doctoral Course)
学

籍番号Student ID No.

氏
攻分

1810

名山田 紗織野咀嚼機能解析学Name in Full専

ID♯GMajor Field

主 指 導 教 員
Chief Academic Advisor

発 表 会 区 分Type of Meeting

入 学 年

2018

Entrance Year

年

Year

3年

増田 裕次
中間発表会

･

大学院研究科発表会･松本歯科大学学会

Midterm Meeting / Graduate school research meeting presentation /The Matsumoto Dental University Society

演題名 / Title of Presentation

口唇トレーニング前後における口腔周囲筋の筋疲労の評価

発表要旨 / Abstract【目的】
口唇機能は哺乳、捕食、咀嚼、嚥下、発音、表情による感情の表出などの口腔機能を営む上で重要である。口腔機能を維持・向上させるためのトレーニングの必要性があると考えられるが、効率よく行うトレーニングがないのが現状である。口唇が発揮する力を方向別に可視化できるようにした装置を作製し、ビジュアルフィードバックを用いて口唇閉鎖運動を行うシステムを開発した。このシステムによる口唇トレーニングが、口唇機能や顎下部形態に影響を及ぼすためには、口腔周囲の筋疲労を起こして、筋の活性化を引き起こすことが必要であると考えられる。本研究では、期待されるトレーニング効果を知るために、トレーニング時間が筋疲労に及ぼす影響を調べることを目的とした。
【方法】
被験者は健常成人（男性 12 人、女性 6 人）とした。右側の上唇部、下唇部および顎下部に電極間距離 10 ㎜で脳波用皿電極をテープで貼付し、上唇部、下唇部の口輪筋および舌骨上筋群の表面筋電図を記録した。ビジュアルフィードバックを用いた口唇トレーニングには多方位口唇閉鎖力測定装置とモニターを用いた。モニター上にランダムな方向に現れる的に、その方向の口唇閉鎖力を維持するように口唇に力を入れ、0.2 秒維持されると到達音とともに的は消え、新たな的が表示される。
この口唇トレーニングを 120 秒間行った場合と 60 秒間行った場合で直後の疲労を調べた。筋疲労を確認するために、口唇トレーニング前後で、20 秒間の最大口唇閉鎖運動中に右側上下唇部口輪筋および右側舌骨上筋群から表面筋電図を記録し、そのうち、活動開始から 2 秒間を高速フーリエ変換により周波数分析を行い、中間周波数を算出した。
【結果】
30 分間のインターバルで疲労の蓄積があるかどうかを調べたところ、トレーニング前の中間周波数に有意な相違は認められなかった。1 回目の 2 分間の口唇トレーニング前後の比較では、上唇部、下唇部口輪筋および舌骨上筋群筋電図の中間周波数に有意な低下が認められ、疲労していることが明らかとなった。2 回目に 2 分間、3 回目に 2 分間、2 回目に 1 分間、3 回目に 1 分間の口唇トレーニング前後でも、上唇部および下唇部口輪筋筋電図の中間周波数に有意な低下が認められたが、舌骨上筋群では、1 分間のトレーニングでは有意な変化は認められなかった。
2 回目、3 回目に関わらず、2 分間の口唇トレーニングの結果を合わせて、舌骨上筋群の筋電図を解析するとトレーニング前後で中間周波数に有意な低下が認められた。一方、2 回目、3 回目に関わらず、1 分間の口唇トレーニングの結果を合わせても、舌骨上筋群筋電図の中間周波数に口唇トレーニング前後で有意な変化は認められなかった。
【考察】
口唇トレーニングによって口唇機能の向上には、1 分間のトレーニングでも有効である可能性を示すが、顎下部の引き締め効果を期待するには、2 分間の口唇トレーニングが必要であることが示唆された。

大学院歯学独立研究科 2005/01/12

発表内容の要旨（課程博士）
Abstract of Presented Research (For the Doctoral Course)
学

籍番号Student ID No.

氏
攻分G1809

入 学 年

吉野 旭宏

野

顎口腔機能制御学 咀嚼機能解析学

Major Field

主 指 導 教 員
Chief Academic Advisor

発 表 会 区 分Type of Meeting

2018

Entrance Year

名Name in Full専ID♯

年

Year

3年

増田 裕次
中間発表会

･

大学院研究科発表会･松本歯科大学学会

Midterm Meeting / Graduate school research meeting presentation /The Matsumoto Dental University Society

演題名 / Title of Presentation
カスタマイズしたセンサーを用いて外耳道のひずみで咀嚼回数をカウントする新しい方法

発表要旨 / Abstract【目的】
外耳道のひずみで咀嚼回数をカウントする方法を開発した。しかし、既成の耳栓を利用したセンサーでは、測定できない被験者もいた。そこで、本研究では、外耳道の型を取り、カスタマイズしたイヤホン型のセンサーを作製し、咀嚼回数の測定の可能性を検討した。
【方法】
被験者は健常成人（男性 7 人、女性 7 人）とした。外耳道のひずみ変化を感知するために、パテタイプのシリコン印象材で外耳道の印象を取り、この印象材を３D スキャン後、CAD でイヤホン型を構築した。そのデータをもとに３D プリンタでラバーライクの素材を用いて作製し、気圧計を内蔵したイヤホン型のカスタマイズされたセンサーを作製した。イヤホン型のサイズとして実寸の 100％、110％、120％の３種類を作製した。リンゴ（一片：5ｇ）およびグミキャンディー（1 個：3.4ｇ）を左右それぞれ偏側で咀嚼させた。記録した圧変化の波形から咀嚼回数識別計数表示装置を用いて計数した。咀嚼側咬筋から記録した筋電図から咬筋バーストの数をカウントした。外耳道の圧変化からカウントした回数が、筋電図を用いてカウントした回数の 50％未満の場合測定不能と知た。測定可能な場合には、それぞれの咀嚼回数の一致度をBland-Altman 分析にて解析した。
【結果】
被験者ごとに、食品を嚥下するまでの咀嚼回数は異なった。食品ではリンゴ咀嚼よりもグミキャンディー咀嚼の方が、咀嚼回数が多かった。測定不能となった記録は男性では認めれなかったが、女性においては認められた。外耳道波形を測定した側と同側で咀嚼した場合に多く見られ、100％、110％、120％および既製品では反対側咀嚼で、7 人中それぞれ 2 人、0 人、2 人 1人、同側咀嚼で 3 人、1 人、2 人、3 人であった。110％を用いたときが測定不能となった記録は最も少なかった。Bland-Altman プロットでの 95％一致限界は男性の方が女性よりも小さい値を示し、リンゴ咀嚼の方が、グミキャンディー咀嚼よりも小さい値を示した。いずれの食品においても記録外耳道とは反対側での咀嚼の時が小さく、110％を用いた時が最も小さかった。
【考察】
イヤホン型のカスタマイズされたセンサーを作製する際には、110％のサイズのものが有効である可能性が見出された。

大学院歯学独立研究科 2005/01/12