博士（医学）越学位論文題名和子

ウイルソン病における銅代謝に関する研究
I． 診 断 お よ び 長 期 治 療 に お け る 銅 代 謝 の 指 標
I
I．尿中測定法の検討とマス・スクリーニングの試み

学位論文内容の要旨

ウィ ルソン病は脳、肝、腎、角 膜などに銅が蓄積してゆく常染色体劣性遺伝性疾患で，その典型例はセ ルロプラスミン（以下Cp)低値，血清銅低値，尿中銅高値，Ka
yser‑Fleischerring陽性を呈する． 1993年にほ原因遺伝子であ るATP7Bがクローニングされ た．このP−type AT
Pase酵素蛋白の障害 により，肝臓から胆汁への 銅排泄障害や活性型Cpの合成 障害が起こるといわれ，その遺伝子変異と関連して多彩な臨床症状を呈すると考えられている．
ウィ ルソン病は典型的な鍋代謝 異常を呈しない場合があり，診断に苦慮する．また，Cp，血清銅の 測定 に は複 数の 測定 法が 並 立し変遷してきたた め銅代謝の評価には注意を 要する．治療は銅キレー ト剤，亜鉛製剤が有効であ る．治療は生涯にわたるため ，体重に応じた投薬量や患者の怠薬にも，キレート剤の副作用にも注意が必要である，このように，ウィルソン病の診断と治療には様々な問題 点があるため，論文Iでは，肝臓銅含量測定，キレート剤負荷試験，バランス・スタディなど銅代謝の指標の有用性を検討した。
ウィ ルソン病は早期診断と治療 により，発症や病期の進行を予防することが可能である，論文H
では，マス・スクリーニング法として、少量の尿による精度の高い尿中銅測定法を設定し，その測定法 で小 学 生223人 の学 校検 尿で 正常 値 を調 べて cut―0ぱ を 設定 した ，次 い で約 3万人の小学生のマス・スクリーニングを行い，患者1人を発見した．今後のスクリーニング時期の参考とするため，乳幼児の尿中銅分布も調べた，［ 論文 Iの 方法 ・ 結果 ］対 象は 9歳から20歳のウィ ルソン病患者10例で，尿中 銅，血清銅，非Cp銅など 銅代謝の指標を，治療前と 治療後，休薬時と投薬時で推 移を調べた．さらに肝臓銅含量，キレー ト剤負荷試験，鋼バランス ・スタディを行った．銅は原子吸光法で，血清CpはSRID法で，非Cp銅はCpが0．3%の銅を含むとして計算により求めた．
診 断時 の 尿中 銅排 泄は 254土120卩 g/day(mean士SD)，キ レート剤が治療量に なった時の尿中銅排泄は 2，249土887皿g/dayとなり ，診断に有用であった．治療後の尿中銅排泄は，キレート剤負荷
時 で4〜8年後 は9.6土 6.1ル g/k g/day，休 薬時 で2〜4年 後は1.6〜2.1〃g/kg/day(mean)になった ．血 清 鋼は 治療 前47.6土 17.5H g/dl(mean土 SD)，治 療後2年以降から20皿 g/dl以下になり10p g/dlに 近づ ぃた ．非 Cp銅 は 治療前29.2土9.2肛 g/dl，治療後は10pg/dl以下 になり，さらに低下した．
非ウ ィルソン病の肝臓で，蛋白 あたり銅含量は乾燥重量あたりの銅含量と相関が高かった．ウィルソン病の肝臓銅含量は，肝組織像別には一定の傾向はなかった．
キレート剤負荷試験，銅バランス・スタディでは，ペニシラミンは負荷後早期の尿中銅が高い特徴
一 162―

があり，トリエンは一部で便中への排泄量が高かった，［論文nの方法・結果］
1．フレーム式．Dz−MIBK法とフレームレス式・DDTC―MIBK法の比較
少量 の尿 によ る 簡便 で精 度の 高い 測 定法 として，今回フレーム レス式原子吸光光度計によるDDTC― MIBK法を 3測 定法 4条 件で 設定 し ，従 来の フレ ー ム式 Dz− MIBK法をgold en stand ardとし て11検体 を比 較 検討 し， 硝酸 処理 を 加え たフレームレス式DDTC―MIBK法・検量線法を学校検尿および乳幼児の尿中銅測定法に採用した，
2．マス・スクリーニングのための，未処理尿によるフレームレス式・直接法での，標準添加法と検量線法との比較
オートサン プリング装置を併設した原 子吸光光度計を用い，フレームレス式・直接法で標準添加法 を基 準と して 2測 定法を15検体で比較 検討し，プール尿に銅標準 液を入れた検量線法をマス・スクリーニング法として採用した．
3．フレーム式・Dz一MIBK法と，マス・スクリーニングのための，未処理尿によるフレーム式・直接法の比較
さらに大量 の検体を処理する方法を探 るため，従来の精度の高いDz−MIBK法と未処理尿によるフレーム式・直接法を10検体で比較し，有意な差を認めた，
4．小学生223人の尿中銅測定とcutーoff pointの設定
対象 は小 学校 1年 109人，小学校6年114人の計223人で，銅，クレ アチニンを測定し，cutー0行pointを40肛g/lに設定した．
5．新生児15人，乳幼児37人の尿中銅測定
新 生児 から 生後 2ケ 月ま で はバ ラツ キが 多か ったが，生後3ケ月以 降21歳未満の29人では比較的バラツキが少なく，累積度数分布では40ルg/lで96.6%を示した．
6．小学生の学校検尿によるウィルソン病マス・スクリーニングの試み
小 学 生 の 学 校 検 尿 30， 933人 の 尿 中 銅 を 簡 便 な 2法 で 測 定 し ， 患 者 1名 を 発 見 し た ，［考察］ウィルソン 病では

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er すなわち非Cp銅が増加して各臓器に沈着するとされ，尿中銅は非 Cp銅 の一 部を 反 映し てい ると いわ れ る． 尿中鋼，血清銅，血清 非Cp銅の指標は，総合的に検討すれぱ，診 断や長期治療中の指標とし て怠薬を発見するなど有用で あった，非Cp銅は，計算値であること， Cpを免疫学的方法で測定す る場合はアポ体の量だけ少なく計算されること等に留意する必要がある が，実際の診療の場では有 用であった．ウィルソン病の肝臓銅含量は，蛋白あたり銅含量の測定法 の検討も含め，今後もデー タの蓄積が必要である，キレート剤負荷試験および銅パランス．スタディでは，トリエンはキレート剤として有用と考えられた．
尿中銅によるマス・スクリーニングはフレームレス式直接法とフレーム式直接法の2種類で施行し，小 学生 30， 933人か らウィルソン病患者 1例を発見した，一試料の測 定時間は前者で4分，後者で15〜30秒であ り，費用と測定時間の著し い経済性から85%は後者で測 定した．今後，ウィルソン病乳幼児での銅代謝が解明されれば，スクリーニング時期の設定に重要な手がかりになると思われる．
近年の測定機器の進展は顕著で，尿中銅によるマス・スクリーニングは，今後も有望と考える，― 163―、

学位論文審査の要旨
主 査 教 授 小 林 邦 彦
副 査 教 授 藤 堂
省
副 査 教 授 岸玲 子

学 位 論 文 題 名ウイルソン病における銅代謝に関する研究
I． 診 断 お よ び 長 期 治 療 に お け る 銅 代 謝 の 指 標
n.尿中 測定 法の検討と マス・スク リーニング の試み

ウィ ルソン病は 脳、肝、腎 、角膜など に銅が蓄積 してゆく常染色体劣性遺伝性疾患 で，その典 型例はセル ロプラスミ ン（Cp）低値 ，血清銅低値，尿中銅高値，
Kayser―Fleischerring
陽性を 呈する．原因遺伝子はATP7Bである。このP−type
ATPase酵素 蛋白の障害 により，肝 臓から胆汁 への銅排泄 障害や活性型Cpの合成障害が 起こるとい われ，その 遺伝子変異 と関連して 多彩な臨床 症状を呈すると考えられ ている，ウ ィルソン病 は典型的な 銅代謝異常 を呈しない 場合があり，診断に苦慮 する，また ，Cp，血清銅 の測定には 複数の測定 法が並立し変遷してきたため
銅代 謝の評価に は注意を要 する．治療 は銅キレー ト剤，亜鉛 製剤が有効である．
治療 は生涯にわ たるため， 体重に応じ た投薬量や 患者の怠薬 ，キレート剤の副作用な どの注意が 必要である ．このよう に，ウィル ソン病の診 断と治療には様々な問 題 点が あ るた め，論文Iでは，肝 臓銅含量測 定，キレー ト剤負荷試 験，バランスス タディなど 銅代謝の指 標の確立を 検討した。 一方、ウィ ルソン病は早期診断と 治 療に よ り， 発症や病期 の進行を予 防すること が可能であ る．論文uでは，マス・スクリーニング法として、少量の尿による精度の高い尿中銅測定法を設定し，その 測定法で 小学生223人の学校 検尿で正常 値を調ぺて cutーoffを設定し、約3万人 の小学生の マス・スク リーニング を試みた． 今後のスク リーニング時期の参考と するため， 乳幼児の尿 中銅分布も 調べた．
［ 論 文Iの 方法 ・ 結果 ・ 考察 ］ 対 象は 9歳か ら20歳 のウィルソ ン病患者10例 で，尿中 銅，血清鋼 ，非Cp銅など 銅代謝の指 標を，治療 前と治療後，休薬時と投薬時で推 移を調べた ．さらに肝 臓銅含量， キレート剤 負荷試験， 銅バランススタディを 行 った ． 銅は 原 子吸 光 法で ， 血清 CpはSRI
D法 で ，非 Cp
銅はCpが 0．3%の銅 を含む として計算 により求め た．
銅代 謝異常の指 標として、 尿中銅、血 清銅、Cp、非 Cp結合銅測定は診断に有用で あった。肝 臓銅含量は 治療にもか かわらず増 加している ものもあり、評価には組 織像との関 連を考慮す る必要が明 らかとなっ た。負荷試 験やバランススタデ― 164ー

イ か ら ト リ エ ン は ペ ニシ ラ ミン と同 様 治療 薬と し て有 用で あ った 。
［論 文1
Iの方法・結 果・考察］ 少量の尿に よる簡便で 精度の高い測定法として，
フ レー ム レ ス式 原 子吸 光 光度 計 によ る DDTCーM
IBK法を3測定法4条件で設定 し，従 来の フ レ ーム式Dz
一MI
BK
法 をgoldenst
andardとして 1
1検体を用い て比較検討した 。試料に硝 酸処理を加 えたフレー ムレス式DDTCーMI
BK法 ´検量線法の安定性を検討し、学校検尿およぴ乳幼児の尿中銅測定法に採用した．対象は小学校1年109人 ，小 学 校 6年 114人 の計 223
人 で ，銅 ， クレ ア チニ ン を測 定 し， ヒ ス トグ ラムから マス・スク リーニング のcut
−offpointを40Hg/lに設定した．新生児15人，乳 幼児 37人の 尿 中鋼 測 定も 行 った 。 新生 児 から生後 20月まではバ ラツキが多 かった が，生後3ケ月以降 2歳未満 の29人では比 較的バラツ キが少なく，゛累積度数
分布 では40皿g/lで96.
6％を示した．小学生の学校検尿によるウィルソン病マス・ス クリ ー ニ ングを簡 便な2法 で試み、30，933人中， 患者1名を発見し た．フレームレ ス式原子吸 光光度計の 精度の進展 から、尿試 料を輸送す る媒体を選べば、今後 尿中 銅 測 定を マ ス・ ス クリ ー ニン グ のシ ステム に載せる事 が可能と考 えた。
公開発表に際し、副査の藤堂教授よルウィルソン病のマス・スクリーニングの現況、 偽陽性の扱 いについて 、キレート 剤の効果と 移植後の治 療についてなど、副査の 岸教授から データと予 後との関連 、スクリー ニング開始 時期について、尿を試料 とする場合 の注意点や 媒体につい てなど、主 査の小林教 授から尿を用いる本
スク リーニング 法を一般化 するための 今後の問題 点について などの質問があったが 、申 請者 は自 ら の知 見と 文献 から ほぼ 妥当 な回 答を した 。
本研究 は、ウィル ソン病の銅 代謝把握法 の確立なら びに新しいマス・スクリー
ニン グ法の開発 を行った点 が評価され 、今後の同 疾患の診断 と治療に貢献することが 期待される 。
審 査 員 一 同 は 、 こ れ ら の 成 果 を高 く 評価 し 、申 請 者が 博 士（ 医 学 ）の 学 位を受 けるのに充 分な資格を 有するもの と判定した 。

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