Journal of National Fisheries University 72（3）75-79（2024）

本論文

スナヤツメ幼生の好酸球における好酸性顆粒の発達
近藤昌和†，安本信哉

Development of the eosinophilic granules in the eosinophils
from larva (ammocoetes) of far eastern brook lamprey
Lethenteron reissneri
Masakazu Kondo† and Shinya Yasumoto
Abstract : Structure and development of eosinophilic granules (EG1) in eosinophils from larva (ammocoetes) of far
eastern brook lamprey Lethenteron reissneri were speculated. EG1 is stratified granules (two-layer) and consists of
inner eosinophilic layer (L0) and chromophobic outer layer (L1). Three subtypes of EG1 are identified based on theoptical artificial image (OAI) of inclusion structure (IS) in L0: EG1a, EG1b, and EG1c. The EG1a had no OAI(probably no IS). The EG1b and EG1c contain IS in L0. The OAI of both EG1b and EG1c were larger than IS. The
former was round or oval chromophobic area (OAI-1), and the latter was expanded and rugged (three-dimensional)
image (OAI-2) surrounded with OAI-1. EG1a was thought to be a prototype of EG1, which would develop into EG1band then EG1c.
Key words : lamprey, Lethenteron reissneri, ammocoetes, eosinophil, granules緒

おいて，エオシン好性のL0内に難染色性の領域または無言色の立体的な構造が認められた (これらは細胞化学染色標1)

著者らは前報 においてヤツメウナギ類 (円口類) の一種

本では観察されない)。両者の中央にはISが存在すると考であるスナヤツメLethenteron reissneri (南方型) の幼生を用えられ，両者の大きさは，ISよりも大型であることから，い，血液中の好酸球の形態学的および細胞化学的特徴を報両 者 は こ の 構 造 体 の 光 学 的 な 人 工 像 (optical artificial2)

告した。好酸球は成熟成魚には観察されず ，幼生に認めimage, OAI) であると解釈した (前者をOAI-1，OAI-1が観られ，好酸球の顆粒 (eosinophil granule, EG) は2種類に大察 さ れ るEG1をEG1b， 後 者 をOAI-2，OAI-2が 見 ら れ る

別された (1型, EG1; 2型, EG2)。EG1はエオシン好性の内層

EG1をEG1cとし，両者が認められないEG1をEG1aとした)。

(L0) と難染色性の外層 (L1) からなり，EG2は難染色性の前報では，EG1aが基本形であり，EG1aのL0内にISが形成

L0と好塩基性 (正調メチレンブルー好性) のL1から構成さされることでEG1bまたはEG1cとなると考えた。また，れていた。

EG1bのOAI-1の大きさと，EG1cのOAI-2の大きさの間に細胞化学染色標本では多くのEG1の中央付近に種々の大きさおよび形状を示す暗い構造体 (封入構造体inclusion

関連は認められなかったことから，EG1bとEG1cのISは異なると考えた。

structure, IS) が認められた (ISは各種細胞化学染色に陰性

哺乳類成体において，好酸球を含む顆粒性白血球は骨髄である)。この構造体はGiemsa染色等の一般染色では観察中で産生されるが，アズール顆粒を有する前骨髄球の段階されなかった。しかし，一般染色標本では，多くのEG1にですでに各種顆粒球への分化が始まっており (電子顕微鏡2023年11月29日受付，2024年2月16日受理
水産大学校生物生産学科（Department of Applied Aquabiology, National Fisheries University）†
責任著者 (corresponding author): kondom@fish-u.ac.jp

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近藤昌和，安本信哉

観察による。光学顕微鏡では区別できない)3)，好酸性顆粒(好酸球の特殊顆粒) は前骨髄球のアズール顆粒に各種成分

本研究では，スナヤツメ好酸球および好酸性顆粒の構造と発達について考察する。

3)が付加されることで形成される 。すなわち，アズール顆
粒が成熟して特殊顆粒になる [好塩基球の特殊顆粒も同様材料および方法であるが，好中球ではアズール顆粒と特殊顆粒は異なる3,4)]。この過程で顆粒の色調は変化し，アズール好性の赤前報1)で作製した染色標本のうち，1/15Mリン酸緩衝液

紫色 (アズール色素による異調染色性) から青紫や青色に(pH7.0) を希釈液として使用したMay-Grünwald・Giemsa

3)なり，最終的にエオシン好性の橙色となる 。したがって，

染色 (文献2のtable 1におけるPN=74の染色) を施した標本

成熟した好酸球にはアズール好性の色調を示す顆粒は存在を観察に供した。なお，採血に使用したスナヤツメ幼生はしない。スナヤツメの好酸性顆粒 (EG1) の成熟過程を推2021年3月および4月に木屋川の支流（山口県）で採集され測するために，前報で作製した標本を再度詳細に観察したた個体である。

ところ，前報の記述とは一部異なる点が明らかになった。

Fig. 1. Eosinophils from ammocoetes of Lethenteron reissneri. A-D, development of eosinophils (A→D). A, eosinophil withsome EG1a, many EG1b, and a few EG1c; B, eosinophil with a few EG1a, many EG1b, some EG1c; C, eosinophilwith a few EG1a, some EG1b, and many EG1c; D, eosinophil with a few EG1a, a few EG1b, and numerous EG1c.
A’-D’, same cells in A-D with different focus (inner part of inclusion structure (See Fig. 2) show black). Small
arrowheads, EG1a; large arrowheads, EG1b; arrows, EG1c. E & E’, lysed eosinophil [E’ is same cell in E withdifferent focus. Three types of fusing granules are observed: 〇, EG1b +EG1b; △, EG1b + EG1c; □, EG1c +EG1c. See Fig. 3). May-Grünwald·Giemsa (PN=74; See table 1 in Kondo & Yasumoto2)). Bar (5 µm) in E’ is adapted
to other figures in Fig. 1.

スナヤツメ幼生の好酸球

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結果および考察したものであり，EG1cのOAI-2が黒く見える。Figure 1A

EG1bとEG1cのOAIは，L0がエオシンで染色された場合のEG1cが認められる。また，Fig. 1Bでは少数のEG1aと多の好酸球にはいくつかのEG1aとともに多くのEG1bと少数1)にのみ認められる 。EG1bのOAI-1は光学顕微鏡下で，L0くのEG1bおよびいくつかのEG1cが観察される。Figure内のISから放射される光がエオシンの色調を無色とするこ

1Cの好酸球は少数のEG1a，いくつかのEG1bおよび多数のとで難染色性の領域として観察され，EG1cのOAI-2はL0

EG1cを含み，Fig. DではEG1aとEG1bはともに少数であり，1)のISが拡大されて立体的に見えたものと考えられている 。

EG1の多くはEG1cとして認められた。これらの好酸球でまた，EG1cのOAI-2は，顕微鏡の焦点をOAI-2の上方 (対は細胞質に顆粒が充満しており，個々の顆粒の詳細を調べ物レンズ側) に移動させることで，黒色の粒子として観察ることは困難である。しかし，崩壊した好酸球 (Fig. 1E)される。の観察によってEG1cのOAI-2の周囲にはEG1bに見られる本研究においてもスナヤツメ幼生の好酸球のEG1は様々OAI-1が形成されていることが明らかとなった。前報1)でな形態を示し (Fig. 1)，EG1a，EG1bおよびEG1cの1細胞中はEG1bとEG1cのISは異なるとしたが，この観察結果から，における存在比率も様々であった (Fig. 1の好酸球は1枚のEG1cのISは二重構造をしており，内側の構造がOAI-2を，染色標本上に観察された細胞である)。Figures 1A-1Dは壊外側の構造がOAI-1を形成すると考えられる。

れていない (intact) 好酸球，Fig. 1Eは崩壊して (lysed) 細

崩壊した好酸球には顆粒同士の融合像も観察された。

胞内顆粒が核周辺に広がった好酸球である。また，Figs.

Figure 1Eの“〇”はEG1b同 士 の 融 合 を，“△”はEG1bと1A’-1E’はそれぞれFigs. 1A-1Eの好酸球を別の焦点で撮影

EG1cの融合を，“□”はEG1c同士の融合を示す融合途中のBasic typesL0L0L1L1EG1EG2

Subtypes of EG1AB
EG1aEG1bFig. 2. 近藤・安本：スナヤツメ幼生の・・・（100%）.

EG1cFig. 2. Structure of eosinophil granules (EG) from ammocoetes of Lethenteron reissneri. EG1,type 1; EG2, type 2; L0, layer 0 (inner layer); L1, layer 1 (outer layer); , chromophobic; ,eosinophilic; , basophilic (orthomethylenophilic). Inclusion structure (IS) in L0 of EG1
is not recognized in normal staining preparation, such as May-Grünwald, Giemsa, andMay-Grünwald・Giemsa (probably due to the affection of eosin-stained L0), but foundin cytochemical staining preparation. The IS is probably not in EG1a. Single ( ) anddouble structure ( , inner; , outer) of IS are expected in EG1b and EG1c,respectively. The IS occur optical artificial image (OAI) in L0 of EG1b and EG1c:
EG1b, chromophobic area (OAI-1; ) in L0; EG1c, OAI-1 and expanded and rugged(three-dimensional) image (OAI-2; ). OAI-2 is surrounded with OAI-1. Both OAI arelarger than IS. A, expected structure; B, observation image.

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近藤昌和，安本信哉

顆粒と考えられる。“〇”の顆粒は顆粒内にOAI-1が2つ認め粒が2種類存在し，好酸性領域を有する顆粒はEG1である。

られる。“△”の顆粒ではOAI-1が2個あるが，そのうち1つ一方，EG2は難染色性の内層と好塩基性の外層を有し，内にはOAI-2が検出される。また，“□”では2個のOAI-1内に層 (L0) にはアルカリ性フォスファターゼ，酸性フォスファそれぞれ1個のOAI-2が観察される。本研究ではEG1aと他ターゼ，ꞵ-グルクロニダーゼ，α-ナフチルアセテートエスのEG1 (EG1b，EG1c) の 融 合 像 は 認 め ら れ な か っ た。

テラーゼおよびナフトールAS-Dクロロアセテートエステ

EG1aにISの成分が付加されてEG1bやEG1cになると考えラーゼが検出されることから1)，EG2はリソゾームである

られるが1)，EG1bとEG1cも融合することから，好酸球のと考えられる。一方，EG1にはリソゾーム酵素は認められEG1は十分に発達すると全てEG1cになると推察される。

ず，種々の糖類染色や脂質染色にも陽性反応を示さないこ

このことは，好酸球内のEG1の種類の比率と好酸球の発達とから1)，顆粒内の成分については不明である。EG1は観が関連していることを示唆している。すなわち，EG1cが察 時 の 形 態 に よ っ て3種 類 に 細 分 さ れ る。Figure 2の多いほど発達した好酸球であると考えられる。したがって，“Subtypes of EG1”における“A”は各EG1の予想される構造

Figs. 1A-1DはA→Dに向かって発達が進んだ好酸球であるであり，“B”では観察時の形態を模式的に描いた。EG1aはと言える。

内層内にEG1bやEG1cに存在するISがなく，OAIは形成さ以上の観察結果から推定される成熟した好酸球の顆粒構れない。EG1bのISはOAI-1を形成することで，エオシン好造の模式図を Fig. 2に，EG1の発達段階の推定図をFig. 3性の内層に難染色性の領域が観察されることとなる。に示す。スナヤツメの好酸球には2層構造を有する成層顆EG1cには二重構造を有するISの存在が予想され，外側のFig. 3. Development of eosinophil granules type 1 (EG1) from ammocoetes of Lethenteron reissneri. In the basicprocess, vesicles from Golgi body will be fused and firstly formed EG1a. Secondly, vesicles containing thefactor of IS, which occur OAI-1, are added to EG1a, and the EG1a change to EG1b. Thirdly, vesicles
containing the factor of IS, which occur OAI-2, are added to EG1b, and the EG1c is formed. Otherdevelopment process is fusion of granules. At least, three types of fusion (A-C) are identified. A, NG1b +NG1b; B, NG1b + NG1c; C, NG1c + NG1c. 〇, △, and □ correspond to same diagrams in Figs. 1E & 1E’.

スナヤツメ幼生の好酸球

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ISか ら はEG1bのISと 同 様 にOAI-1が， 内 側 のISか ら は種類観察されている2,5)。ヤツメウナギ類のアズール好性顆OAI-2が生じ，観察時にはOAI-1内にOAI-2が認められる粒を哺乳類のアズール顆粒と相同な顆粒であると仮定する(Fig. 2)。と，そのアズール好性は好中球および顆粒の発達段階で変EG1aはゴルジ装置からの分泌小胞が融合して形成され化 (消失) しないこととなる。ヤツメウナギ類の好中球のると考えられる。将来EG1bのISを構成することとなる因アズール好性顆粒は，哺乳類好中球のアズール顆粒の原始子を含む小胞がEG1aに融合することでEG1bとなる。次い型かもしれない。この仮定が正しければ，ヤツメウナギ類

で，EG1cのOAI-2を形成する因子を含む小胞がEG1bに融の好酸球と好中球の発達過程は哺乳類とは大きく異なると合することで，ISは二重構造となり，EG1bはEG1cとなる言える。

(Fig. 3)。以上がEG1の基本的な発達過程であるが，その他にEG1同士の融合も起こる。EG1b同士が融合する過程には，顆粒内にOAI-1を形成するISが2つ存在する時期があ文献り，この場合，顆粒内にOAI-1が2つ観察される。同様に

1) 近藤昌和，安本信哉: スナヤツメ幼生の好酸球の形態学

EG1bとEG1cの融合やEG1c同士の融合においてもそれぞ的および細胞化学的特徴. 水産大学校研究報告, 70, 149-

れのISが顆粒内に別々に存在する時期があると考えられ，

163 (2022) [Kondo M, Yasumoto S: Morphological and

前 者 で は2個 のOAI-1と1個 のOAI-2が (OAI-2の 周 囲 に は

cytochemical characteristics of eosinophils from larva

OAI-1が形成される)，後者では2個のOAI-1それぞれの中に(ammocoetes) of far eastern brook lamprey LathenteronOAI-2が観察される。その後，顆粒内のISは融合し，EG1b

reissneri. Journal of National Fisheries University, 70, 149-

およびEG1cに特有おISを形成する (Fig. 3)。

163 (2022) (in Japanese with English abstract)]

本稿の緒言にも記したように，哺乳類の好酸球ではメチ2) 近藤昌和，安本信哉: スナヤツメ成魚の好中球の形態学

レンアズールによって赤紫色を呈するアズール顆粒に各種的および細胞化学的特徴. 水産大学校研究報告, 71, 109-

成分が付加されることで好酸性顆粒 (好酸球の特殊顆粒)122 (2023)* [Kondo M, Yasumoto S: Morphological and3)が形成され ，この成熟過程で顆粒の色調は赤紫色から青
3)cytochemical characteristics of neutrophils from adult

紫や青色になり，最終的に橙色となる 。しかし，ヤツメof far eastern brook lamprey Lathenteron reissneri.

ウナギ類の造血組織中の好酸球において，好酸性顆粒の色

Journal of National Fisheries University, 71, 109-122 (2023)*

1)1)

調を紫色や青色とした報告はない 。また，前報 において(in Japanese with English abstract)]

血液中に観察された未熟な好酸球 (fig. 1A) においても赤3) 三輪史朗, 渡辺陽之輔 (共著): 血液細胞アトラス (第5版),

紫色や青紫色の顆粒は認められていない (EG2のL1は淡青

文 光 堂, 東 京, 466pp (2004) [Miwa S, Watanabe Y (co-色を示すが，EG1とは細胞化学的特徴が異なることから，

author): Atlas of Blood Cells (5th edition), Bunkodo,両者は異なる顆粒である)。これらの知見から，スナヤツ

Tokyo, 466pp (2004) (in Japanese)]

メを含むヤツメウナギ類の好酸球の発達過程にはアズール顆粒を産生する時期はないと言える。
哺乳類では好中球にもアズール顆粒が形成されるが，ア4) Parmley RT: Mammals. In: Rowley AF, Ratcliffe NA (ed)Vertebrate Blood Cells, Cambridge University Press,Cambridge etc., 337-424 (1988)

ズール顆粒 (一次顆粒) が最初に産生され，次いで好中性5) 近藤昌和，安本信哉: スナヤツメ幼生の好中球の形態学

骨髄球において特殊顆粒 (二次顆粒) が産生される。両顆的および細胞化学的特徴. 水産大学校研究報告, 70, 125-

粒は異なる顆粒であるが，アズール顆粒は顆粒の発達 (成148 (2022) [Kondo M, Yasumoto S: Morphological and4)熟) にともなってアズール好性を失う 。ヤツメウナギ類のcytochemical characteristics of neutrophils from larva

造血組織および血液中の好中球にもアズール好性の顆粒が(ammocoetes) of far eastern brook lamprey Lathenteron5)

報告されている 。スナヤツメにおいても幼生と成熟成魚

reissneri. Journal of National Fisheries University, 70, 125-のどちらにもアズール好性の領域を有する2層性の顆粒が2148 (2022) (in Japanese with English abstract)]*この論文は2022年に発行されたことになっているが [表紙 (p109) に記載]，これは誤りであり，正しくは2023年である。