第 67 回 日 本 大 学 歯 学 会 総 会 ・ 学 術 大 会〔 抄 録 〕
期日

平成 27 年 5 月 17 日（日）会場

日本大学歯学部

大講堂《一般講演》《特別講演》
1．LAMP 法を用いた細胞診試料からの検出

再生治療を応用した歯周治療の現状◯野口博康 1,2，松本直行 3,4，福井雄介 5,6，飯沼利光 5,6，
佐藤秀一

祇園白信仁 5,6，岩瀬孝志 3,4，小宮山一雄 3,4，浅野正岳 3,4，

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座

外木守雄 2,4，大木秀郎 2,4

最新の歯科疾患実態調査によると成人のおよそ 8 割が歯周病に日本大学大学院歯学研究科口腔構造機能学分野 1

罹患しているという現状から，歯周治療の重要性を再認識しなけ

日本大学歯学部口腔外科学講座口腔外科学分野 2

ればならないと考える。また，世間では iPS 細胞を開発した山中日本大学歯学部病理学講座 3

教授がノーベル賞を受賞したことで再生医療に対する国民の期待

日本大学歯学部総合歯学研究所生体防御部門 4は非常に高まっている。

日本大学歯学部補綴学第Ⅰ講座 5歯周治療において失われた歯周組織を回復させることを目的と

日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 6

した再生治療は，以前から組織の移植術などで試みられてきた。
しかし，それらの治療法では健常な歯周組織を伴う再生を獲得す

目的

ることは困難であることが過去の研究成果から報告されていた。

擦過細胞診は患者への侵襲性が低く，癌鑑別のスクリーニング

1976 年 Melcher は歯周組織再生治療につながる基礎的概念を発表

検査として近年注目されている。口腔におけるカンジダ属感染のした。その概念を基に 1982 年 Nyman らは遮断膜を使用してヒト有無は高齢者の生体防御能の指標であり，同定に広く用いる培養の歯周組織再生（歯周組織再生誘導法：GTR 法）が可能であること

法は感染有無の判定に日数を要する。我々は細胞診試料から DNAをはじめて症例報告で示した。その後，Heijl や Hammarström ら

を 抽 出 し， 遺 伝 子 増 幅 を 応 用 し た Loop-Mediated Isothermal

によって歯根形成期に重要な役割を担うエナメルマトリックスタ

Amplification（LAMP）法を用いて，ンパク質を応用した新しい歯周組織再生法が紹介された。

の同定について検討した。

ヒトにおける歯周組織再生の症例がはじめて発表されて，すで

（以下

）

対象・方法

に 30 年以上が経過し，歯周組織再生治療に対してのさまざまな結

対象は，1）本院で行った口腔内の擦過細胞診試料から分離した果が報告されている。また，国内でも 2008 年 4 月に GTR 法が保菌 株，2）同 細 胞 診 か ら 得 た 20 例，20 試 料 お よ び 3）Tokyo

険治療に導入されたことで，歯周組織再生治療は日常臨床で行う

Oldest Old Survey on Total Health で採取した唾液 30 例，30 試ことができるルーティンな治療法として認知されるようになった。

料とした。方法は，1）を用いて LAMP 法の検出限界を測定し，3）

このような歯周組織再生治療の普及に伴い，歯周病罹患歯を保存を選択培養しできる環境がより整ってきたと考えられる。

検討した。また，2）について LAMP 法と PAS 染色を行い結果をが同定された 30 試料に対し LAMP 法の精度を一方，予後不良のためやむなく抜歯となった歯の治療法として比較した。この際，DNA の抽出を DNeasy とアルカリ性界面活性Brånemark が発表した骨結合型インプラントの登場によって，歯剤を用いた 2 通りの方法で行い，LAMP 法への影響を検討した。

を喪失した患者に対するインプラント治療が急速に世界中で普及

なお，LAMP 法によるしていった。さらに，インプラント治療に GTR 法の概念を応用しDNA 試料を 65℃で 60 分間加熱し，濁度計（400 nm）で測定，濁度た骨再生治療（骨再生誘導法）を併用することによって，その適応

0.1 以上を陽性と判定した。

範囲が飛躍的に広がっていった。

の判定は，同法のプロトコールに従い結果

本講演では，講演者が臨床で行ってきた GTR 法，エナメルマト

LAMP 法のの検出限界は DNA 濃度で 10 pg/tube であっリックスタンパク質を応用した方法などの歯周組織再生治療や骨た。培養法と LAMP 法で再生治療を応用したインプラント治療を振り返り，その現状を整法と PAS 染色の理してみたい。また，これまで教室で行ってきた骨再生に関する法がより高率に短時間で検出できた。また，DNA 抽出の相違によ

研究の成果も併せて報告する。

る検出率は差を認めなかった。

の検出精度は同等であった。LAMPの検出率は，それぞれ 55%，25％で LAMP

結論
LAMP 法は，の同定において，従来広く用いられてる培養法と同等の精度であるとともに，少量の菌量で迅速な同定が可能な判定法であると考えられた。

181

方 法 は，DFNS プ ロ ト コ ー ル に 準 じ た 検 査 法 で， 冷 覚 認 識 検 査

2．ラット顎下腺再生過程における wnt/β-catenin タ
ンパク質の局在○安光智洋 1,2，清水（CDT）・温覚認識検査（WDT）・温冷変調識別閾値（TSL）・冷痛覚
閾値（CPT）・温痛覚閾値（HPT）・触覚識別閾値（MDT）・機械痛覚

治 2，白土博司 2，米原啓之 2

閾値（MPT）・振動感覚認識閾値（VDT）・圧痛閾値検査（PPT）・ワ

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

インドアップ率（WUR）を測定した。実験部位は対象者の両側オト

日本大学歯学部口腔外科学講座 2

ガイ部で測定を行った。CDT，WD，TSL，CPT，HPT は Medoc目的

TSA Ⅱ Neurosensory analyzer を 用 い 測 定 し，MDT は，vonwnt シグナルは初期発生や臓器形成に重要な役割を果すが，細胞

frey，MPT，WUR は pinprick を使用し，VDT は音叉，PPT は圧レベルでは幹細胞の未分化能の維持と分化に関与することが明らか

痛測定計を使用し計測した。それぞれの検査法において，術前，術になっている。そこで本研究では顎下腺再生過程において，唾液腺

後 一 週， 一 か 月， 三 か 月 の 時 点 で デ ー タ を 計 測 し た。 ま た，

幹細胞のマーカーと考えられている Sca-1 と c-kit を用い，その細Z-score によって感覚障害発生の前後各時点における対象との比較

胞と wnt/β-catenin タンパクとの関連性を検索することを目的とし検討を行った。
考察

た。

右側では，術前と比較し，CDT では術後一週，一か月。TSL で材料及び方法Wistar 系ラット顎下腺主導管を 7 日間結紮後解除し , その後 0，

は術後一週において有意差を認めた。左側では，CDT で，術後一週，3，7，14 日に，再生過程にある顎下腺を摘出し，組織切片を作製

HPT では術後一週で有意差を認めた。両側では，MDT で術後一週，し た。 再 生 過 程 で あ る こ と を HE/PAS 染 色 で 確 認 し た 後，

一か月，三か月で，MPT で術後一週，一か月において有意差を認

canonical な wnt タ ン パ ク の 局 在 に は wnt-1，2，3，8，10 と β

めた。Z-score より，温度認識閾値，機械痛覚閾値の回復の遅延が-catenin を，また唾液腺幹細胞の検出にはマーカータンパクである示唆された。

Sca-1 および c-kit の抗体を使用し免疫組織化学的に検討した。

4．高次痛覚中枢におけるオピオイド受容体のシナプス
伝達修飾作用

成績及び考察顎下腺再生過程における Sca-1 と c-kit の反応は，再生 0 日〜 7
日 ま で の 導 管 様 構 造 物（DLS）お よ び 再 生 3 日 に 出 現 す る newly○横田英子 1,2，小柳裕子 2，小林真之 3，越川憲明 3，

formed acinar cell（NFAC）に認められた。また，canonical な wnt

大井良之 2の陽性反応では wnt-1，8，10 が DLS と NFAC に認められ，wnt-8

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1のみが成熟腺房細胞（MAC）に，また wnt2 は DLS のみ，wnt-3 は日本大学歯学部歯科麻酔学講座 2

NFAC の み に 陽 性 反 応 が 認 め ら れ た。β-catenin は DLS お よ び

日本大学歯学部薬理学講座 3

NFAC そして MAC の細胞質および核に染色性を認めた。
目的

再生過程における DLS と NFAC に Sca-1 と c-kit の陽性が認められたことより，唾液腺幹細胞の可能性が示唆された。また，それオピオイド受容体は，μ，δ，および κ 受容体サブタイプに分ら細胞に canonical な wnt タンパクおよび β-catenin の染色性が認類され，麻薬性鎮痛薬や麻薬拮抗性鎮痛薬の作用部位として知られめられたことより，wnt/β-catenin シグナルが幹細胞の維持や分化ている。代表的な麻薬性鎮痛薬であるモルヒネは，高次痛覚中枢とに関与していると考えられた。

考えられている無顆粒島皮質（AI）において，オピオイド受容体を介して下行性抑制を賦活化し，鎮痛作用を発揮することが報告されている。しかし，オピオイド受容体が AI においてどのようにシナ3．下顎枝矢状分割術後のオトガイ部皮膚感覚に関する研究◯出澤

幸 1,2，野間

プス伝達を修飾することで鎮痛作用を発揮するかについては不明である。そこで本研究は，AI の複数の細胞から同時ホールセル・パ

昇 2，渡邉広輔 1,2，佐藤貴子 3，

ッチクランプ記録を行い，記録細胞を同定したうえで，オピオイド

大木秀郎 3，外木守雄 3，今村佳樹 2受容体サブタイプによるシナプス伝達修飾作用を網羅的に解明する

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔健康科学分野 1

ことを目的とした。

日本大学歯学部口腔診断学講座 2

方法

日本大学歯学部口腔外科学講座 3

18 − 35 日齢の VGAT-Venus ラットから急性脳スライス標本を目的作製し，AI の錐体細胞（Pyr）および抑制性介在ニューロンである

顎骨を外科的に修正する手術（下顎枝矢状分割術）後には，唇から

fast-spiking 細胞（FS）から同時ホールセル記録を行い，単一抑制性

オトガイ部の感覚障害は 80% 以上発生すると報告されている。下シナプス後電流（uIPSC）に対するオピオイド μ，δ，および κ 受

顎枝矢状分割術を施行する患者を対象に，ドイツ神経障害性疼痛研

容体アゴニストの作用を FS → Pyr と FS → FS のシナプスで検討

究ネットワーク（DFNS）に準じた検査方法の，顔面領域の感覚障害した。
結果及び考察に対する有用性を検討することにした。

μ受 容 体 ア ゴ ニ ス ト で あ る DAMGO（1μM）灌 流 投 与 に よ り

顎や口の中での感覚検査を標準化することで神経損傷の重症度，

uIPSC の振幅は，FS → Pyr では有意な変化は見られなかったが，予後の予測，治療法選択，回復度の判定の精度向上を目指す。
材料及び方法FS → FS では減少した。一方，δ受容体アゴニストである DPDPE

対象は日本大学歯学部口腔外科にて，下顎枝矢状分割術が予定さ（1μM）により uIPSC の振幅は，FS → Pyr および FS → FS いずれ

れ，実施された患者群 14 名および健康な対照群 14 名とした。実験においても有意に減少した。κ受容体アゴニストである U50488（1182μM）は，FS → Pyr および FS → FS いずれにおいても uIPSC の振6．血清飢餓と酪酸の同時刺激が歯肉上皮細胞に及ぼす影響

幅を変化させなかった。
これらの結果からオピオイド受容体は，受容体サブタイプおよび◯室伏貴久 1,2，津田啓方 2,3，鈴木直人 2,3

シナプスを形成する細胞の種類により抑制性シナプス伝達修飾作用

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1が異なることが明らかとなった。この違いは，各サブタイプの鎮痛

日本大学歯学部生化学講座 2

効果の度合いの違いに寄与している可能性が示唆された。さらに

日本大学歯学部総合歯学研究所 機能形態部門 3μ受容体は，抑制性シナプス伝達において，Pyr よりも FS に対す
る uIPSC を選択的に抑制する事で脱抑制を抑制し，AI からの出力目的を抑制して下行性抑制を賦活化している可能性が示唆された。

成熟プラーク中では多くの細菌が歯肉溝浸出液中の栄養を消費し，その中の一部の細菌は酪酸を産生する。本研究では成熟プラー

5．ゆらぎ解析による大脳皮質ニューロンのスパイク時
系列の解析◯加藤梨紗子

1,2

3，山中雅則 ，越川憲明

1,2

，小林真之

クが歯肉上皮細胞に及ぼす影響を調べるために，血清飢餓と酪酸を同時に歯肉上皮細胞に作用させた。
材料及び方法1,2

ヒト歯肉上皮 Ca9-22 細胞は 10% FBS 含有 RPMI1640 中で培養

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1
日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 2した。血清飢餓条件は培養液中の FBS 濃度を 1% にすることによ日本大学理工学部物理学教室 3

っ て 作 成 し た。 細 胞 死 測 定 に は SYTOX green 色 素 を 用 い た。
AMPK 活性は AMPK のリン酸化を指標として Western Blot 法で目的確認した。AMPK の阻害剤として Compound C を，活性化剤とし中枢神経系における情報処理は，活動電位の発生頻度とその時間て 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide（AICAR）を用的パターンによってコード化される。ニューロンは局所神経回路をいた。

形成し，例えばあるニューロンが発生させた活動電位は，シナプス

成績及び考察結合した周囲のニューロンにシナプス後電位を発生させて活動を調

酪酸は濃度依存的に Ca9-22 細胞の細胞死を誘導し，血清飢餓は節した後，今度は逆に周囲のニューロンからそのニューロンへシナ

酪酸誘導の細胞死を増強した。また，酪酸及び血清飢餓は AMPK

プス入力し，次の発火タイミングに影響する。このような活動電位を活性化し，AMPK 阻害剤は血清飢餓条件下の酪酸誘導細胞死をの制御は，覚醒下（up-state）で顕著になり，up-state と down-state

有意に抑制した。さらに，10% FBS 存在下で AMPK 活性化剤をを周期的に繰り返す麻酔下では減弱すると予想される。しかし，発作用させると酪酸誘導細胞死が増強された。これらのことから，酪

火頻度や間隔は個体や細胞種に強く依存しており，異なる細胞間の酸及び血清飢餓誘導細胞死は AMPK 依存的であることが示唆され系統的な比較は困難であった。本研究は，物理現象の相互作用の解た。ついで，血清飢餓条件下において酪酸が LC3B タンパク質産生析に用いられているゆらぎの解析法をニューロン発火の時系列へ応を増強していたので，血清飢餓及び酪酸が用し，この困難を回避する方法を提案する。更に，覚醒下と麻酔下す影響を調べた。血清飢餓はにおける単一ニューロン活動に対する麻酔の効果を検討した。

はその発現をさらに増強した。次に，細胞死における LC3B の役割

遺伝子発現に及ぼ遺伝子の発現を上昇させ，酪酸

材料及び方法を調べるために同分子をノックダウンしたところ，酪酸誘導の細胞

全身麻酔下のラットに頭部保定装置を装着し，回復後固定器内で死は有意に減少した。これらのことから，LC3B が血清飢餓時にお飲水するようにトレーニングを行った。トレーニング後，島皮質にける酪酸誘導細胞死に関与していることがわかった。

マルチ電極を刺入し，覚醒時と麻酔下で同一ニューロンの活動を細胞外記録法にて記録した。

7．日本大学歯学部における芸術学部学生 SP 参加型演習と OSCE の現状結果および考察
ゆらぎ解析によって得られる減衰パターンと減衰速度は，スパイ○上原

ク発火の相関性を反映する。すなわち，周辺ニューロンとのシナプ

任，三澤麻衣子，山崎晴美，尾崎哲則，中島一郎

日本大学歯学部医療人間科学分野

ス入力の大きさを予想できる。解析の結果，約半数の細胞が麻酔下と比較して覚醒下で強い相関があることが明らかとなった。これは日本大学歯学部では，平成 24 年度より日本大学医学部と芸術学

覚醒下において発火がランダムではなく，局所神経回路を介して一部演劇学科の協力を得て，共用試験歯学 OSCE に芸術学部学生の定の規則性を持って発火することを示唆している。一方麻酔下で標準模擬患者（SP）を導入している。

は，発火が偶発的に生じることが多いと推察できる。

教育課程においては，第 4 学年前期に教科「医療面接」を配置して以上，ゆらぎ解析による所見から，覚醒下における大脳皮質においる。本教科の目的は，診療参加型臨床実習に向けての基本的臨床

いて，ニューロン発火は局所回路によって制御され，麻酔下ではそ能力である医療コミュニケーションの在り方を，演習形式で理解すの制御機能が弱まるという仮説を支持することが明らかとなった。

ることにある。従前は，学生同士のロールプレイを通じて，様々なコミュニケーション技法を修得する演習を行ってきたが，疾患の症状の正確な表現や感情変化の表出が困難なため，十分な教育効果を上げることができなかった。そこで，平成 25 年度から，学生同士でのロールプレイを経験した後に芸術学部学生 SP が参加する演習を実施している。
医療面接の演習の成績から，学生 SP 導入前よりも導入後におい183

て，歯学部学生の演習内容の理解が深まったことが示唆された。
「医9．義歯刻印を発端とした身元不明死体の歯からの個人識別療面接」演習後に行った歯学部学生へのアンケートによると，医療コミュニケーションの重要性への気づきに関する内容が多かったこ○伊澤とから，学修の必要性を理解することでその後の学習意欲が向上し

光 1，丸山小室歳信

たのではないかと推察された。また，芸術学部学生へのアンケート澄 1，堤博文 1，瀧川智義 2，1

日本大学歯学部法医学講座 1からは，歯学部学生に対してどのように患者心理を伝え，歯学部学

日本大学付属歯科病院歯科医療情報管理部医療情報科 2生から医療人としてのレスポンスを引き出すかに苦心して取り組んだ心情がうかがえた。これらのことから，自己を振り返りながら問

都内を流れる河川で発見された身元不明死体の義歯刻印を発端と題をみつけ解決するという芸術および医療分野に共通した専門性にした歯からの身元確認事例を紹介する。

資する教育効果があったと思われる。

事件の概要

両分野を結ぶ重要な鍵となるのは「シナリオ」であるが，歯学部・午前 6 時 30 分頃，川の土手で通行人が川に浮かび流される人を

芸術学部双方にとって理解しやすいシナリオの形式については前例発見。死体には他為的損傷はないが，新法解剖を施行。鑑識課員ががなく，今後もコミュニケーション教育の質の向上を目指して改善

義歯に「日大」を発見。義歯を含めた歯科所見からの身元確認が要請に取り組む予定である。

された。
検査所見

8．薬理学の統合的理解に対する少人数教育の効果

死体の歯科所見

上顎歯では DbD 健全，FGAF（GB に RF），

 FMC，IGFEdHI 欠損であった。GF には  コンビネーショ◯藤田智史，小林真之，山本清文，加藤梨紗子，富山勝則，
越川憲明

ン鉤，2 腕鉤，F 双歯鉤と鋳造パラタルバーによる一体型の局

日本大学歯学部薬理学講座

部床義歯が装着されていた。 の滑択面には朱色で「日大」の刻印

日本大学総合歯学研究所顎口腔機能研究部門

を 認 め た。 下 顎 歯 で は TcTU 健 全，8'X AF（&W B に RF），
V5 HJC，9 欠損であった。生前の歯科所見

上顎歯では DC 健

目的

全， FMC， RF，FG In，IdHI 欠 損，C 情 報 な し，GF

日本大学歯学部では，基礎医学科目である薬理学を 3 年次後期かに は 死 後 所 見 と 同 様 の 義 歯 が 装 着 さ れ て い た。 下 顎 歯 で はら 4 年次前期で履修させる。4 年次後期では，CBT 共用試験に対V5HJC，&WRF，9 欠損，XWTcUXY 情報なしであった。

応した演習を 3 時間程度行うものの，5 年次では臨床実習を主体に異同識別行うため，薬理学の講義はない。したがって，6 年次を迎える時点

該当者のカルテが見つかり，死後と生前の歯科所見を比較した結で少なくとも 1 年間の空白期間を経て薬理学の学習を再開すること

果，所見の一致が 12 歯，所見は不一致だが歯科治療学的に矛盾しになる。例年の国家試験では，薬理学に関する問題について本学学

ないは 19 歯であった。 の死後は健全で，生前は RF であり，所生の平均点が全国平均点を下回ることが多く，抜本的な対策が求め

見は不一致かつ矛盾していた。しかし，歯冠色系の充填を見誤るこられていた。そこで，平成 26 年度従来のカリキュラムに沿った 6とはよくあり，同一人を積極的に否定するものではない。一方，死年次の講義に加えて，新しい形式で補習を行うことで薬理学の学力

後と生前のエックス線写真を比較した結果，V5 にはスクリューポ

改善を図ったので報告する。

ストとレジン築造が装着され，6 の歯根尖には小豆大の骨硬化像，方法

7 の近心根には歯周炎に起因する歯根吸収と歯根尖には歯冠大の補 習 の 参 加 希 望 者 を 4 月 の は じ め に 募 っ た と こ ろ， 希 望 者 は根尖病巣が認められ，身元を特定し得ると判断した。

63/110 名だった。そこで，3-4 名で構成される小規模群（計 8 班）と考察

17 名で構成される中規模群（計 2 班）にグループ分けした。薬理学

本歯科病院で義歯刻印法が始まって 11 年。本件は警視庁管内に全範囲を網羅するように学習項目を 10 に分類し，各項目についておける身元確認に奏功した最初の事例となった。歯科病院を挙げて要点を解説する講義（約 2 時間）を 1 週目に受講させた。翌週には，義歯刻印を行っているのは本学部歯科病院のみである。さらなる推理解度確認のための口頭試問と解説（約 2 時間）を行った。すなわ進を期待したい。

ち，1 項目を 2 週間で終える速度で学習させた。なお中規模群に対しては，参加者の意向を尊重して 2 週目の口頭試問と解説は行わな

10．矯正力負荷下の歯根膜刺激に対する大脳皮質神経
活動の解析

かった。
結果および考察○堀貫恵利 1,2，小林真之 3,5，越川憲明 3,5，清水典佳 2,4

中規模群においては，成績下位層における薬理学の成績向上はほ

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 1

とんど認められなかったが，同じ講義を受けた中規模群の成績上位

日本大学歯学部歯科矯正学講座 2

層では薬理学の成績が向上する傾向が認められた。一方，小規模群

日本大学歯学部薬理学講座 3

ではほぼ一様に薬理学の得点率の上昇が認められた。小規模群と中日本大学歯学部総合歯学研究所臨床研究部門 4規模群から得られたアンケート結果に特に差は認められなかったこ

日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 5とから，講義に対して抱く学生の感想と成績との間には必ずしも相関がないと考えられた。

目的

以上の結果より，成績下位の学生の成績向上には，マン・ツー・

矯正治療による歯の移動に伴う痛みは，矯正治療中にしばしば遭マンに近い形で学生と密に関わり理解度を把握しながら教える必要遇する愁訴であり，患者にとって大きな負担となっている。痛みの性が示唆された。

メカニズムに関しては，歯根膜周囲の炎症性反応であることが知ら184れているが，歯根膜への侵害刺激が大脳皮質においてどのような神下流遺伝子発現について明らかするために，10 nM, 25 nM および経活動を引き起こすかについては不明な点が多い。本研究では，ラ50 nM の TGF-β 受容体の Inhibitor（LY2157299）を含む培養液に，ットの上下顎切歯・臼歯歯根膜に電気刺激を行い，大脳皮質への投0.25 ng/ml の rhTGF-β2 を添加刺激した系についても検討した。

射部位に局在性があるかについて検討した。さらに，上顎臼歯（M1/

成績M2 間）に実験的矯正力を加えたラットを用い，歯根膜刺激に対す

1.0 g/cm2 CF を 3 時間与えた場合，コントロールおよび 2.0 g/cm2

る神経活動がどのように修飾されるかを明らかにした。

CF の同時間刺激に比較し TGF-β2 の遺伝子およびタンパク発現

試料および方法が 有 意 に 増 加 し た。 受 容 体 に つ い て は，CF の 影 響 は な か っ た。

実験には SD ラット（6 〜 7 週齢）を用いた。ウレタン麻酔下にて，

TGF-β2 添加 3 時間刺激後の，Smad2 および p38 のリン酸化発現

右側上下顎切歯・臼歯歯根膜にそれぞれ双極電極を挿入し固定しは有意に増加し，TGF-β 受容体の inhibitor 添加により有意に抑制た。その後，ラット左側頭部を開頭し，体性感覚野および島皮質領された。転写因子である Osterix の遺伝子およびタンパク発現も域を露出させ，膜電位感受性色素 RH1691 を負荷して皮質表面を染TGF-β2 添加 3 時間刺激により有意に増加し，inhibitor 添加によ色した。歯根膜の電気刺激に対する大脳皮質神経活動は，実体顕微り有意に抑制された。

鏡に CCD カメラを搭載した光学計測システムを用いて記録した。

考察さらに，上顎 M1/M2 間にゴム片を挿入したモデル動物を作製し，MC3 T3-E1 細胞に 1.0 g/cm2 CF を付加した際 TGF-β2 発現が矯正力負荷 1 日後の歯根膜刺激時の大脳皮質神経活動の変化を計測

増加し，下流遺伝子の経路を介し骨形成関連転写因子が増加したこした。

とから，矯正治療時での骨リモデリングに TGF-β2 が関与してい結果および考察ることが示唆された。今後は，CF と TGF-β2 のシグナル伝達に

上下顎切歯・臼歯歯根膜の電気刺激に対する初期応答は，中大脳ついて詳細に解明する予定である。

動脈の尾側領域に位置していた。それぞれの初期応答には局在性が12．ヒト歯根膜線維芽細胞に対する LIPUS の効果認められ，上顎歯根膜応答領域に対して下顎歯根膜応答領域はより尾側に位置していた。矯正力負荷 1 日後のモデル動物では，対照群○齋木あかり 1,2，本吉と比較して上顎臼歯刺激に対する応答の最大振幅と最大応答領域が満 2,4，浅野正岳 3,5，清水典佳 2,4

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 口腔構造機能学分野 ¹

有意に増大した。これらの結果から，①上下顎切歯・臼歯歯根膜の日本大学歯学部歯科矯正学講座 ²，病理学講座 ³

侵害刺激情報は大脳皮質島領野に局在性をもって投射しているこ

日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門⁴，生体防御部門 5と，そして②歯根膜への持続的な機械刺激は大脳皮質での神経活動目的に可塑的変化を起こすことが示唆された。

本研究は Low-Intensity Pulsed Ultrasound（LIPUS）の組織再生に対する効果について明らかにすることを目的とした。そこで，組11．骨芽細胞に compressive force を与えた際の TGFβ2 シグナル伝達の解明○佐野麗美 1,2，中嶋

織再生に重要な分子である Connective Tissue Growth Factor（CTGF）および Heat Shock Protein 70（HSP70）に着目し，ヒト歯根膜由来線維芽細胞や上皮系培養細胞に対する LIPUS 刺激がこれ

昭 2,4，川戸貴行 3,5，前野正夫 3,5，らの遺伝子発現にどのような影響を及ぼすかについて検討を行っ清水典佳 2,4

た。

日本大学大学院歯学研究科専攻 口腔機能構造学分野 1

材料および方法日本大学歯学部 歯科矯正学講座 2，衛生学講座 3

実験には矯正治療において便宜抜去した歯より得たヒト歯根膜由日本大学歯学部総合歯学研究所 臨床研究部門 4，機能形態部門 5

来線維芽細胞（HPLF）と口腔扁平上皮癌由来培養細胞株（KB）を用目的いた。35 mm culture dish にそれぞれの細胞を 1.0×105 cells/dish

TGF-β は，顎顔面成長因子として細胞の分化や形質転換等の機となるよう播種後，周波数 3.0 MHz，パルスサイクル 20％，出力30 mW/cm2，15 分間 LIPUS 照射を行った。

能を有することが知られている。しかし，矯正力を想定して骨芽細胞に compressive force（CF）を与えた際の TGF-β2 シグナル伝達

遺伝子発現の変化については，CTGF および HSP70 に対する特経路については明らかではない。そこで，本研究では，CF を骨芽異的プライマーを用いた RT-PCR 法にて，タンパク発現について

細胞様細胞（MC3 T3-E1 細胞）に負荷した後，TGF-β2 およびそのは Western blot 法にて定量解析を行った。また，Angiotensin Ⅱ

受容体発現ついて検討した。さらに，受容体の inhibitor を用い，受容体の関与についても RT-PCR 法により発現を検討した。

recombinant human（rh）TGF-β2 添加刺激が下流遺伝子である

成績

Smad2 および p38 のリン酸化へ与える影響ついて，また骨形成関LIPUS 照射の結果，HPLF においてはコントロールと比較して連転写因子（Osterix）の発現への影響についても検討した。

有意に CTGF および HSP70 遺伝子発現の増強を認めた。CTGF，材料および方法

HSP70 共に，発現は LIPUS 照射 45 分後にピークを認め，その後

マ ウ ス 頭 蓋 冠 由 来 株 化 骨 芽 細 胞 で あ る MC3 T3-E1 細 胞 を 100は低下した。一方，KB 細胞においては両遺伝子共に発現の変化はmm plate に播種後，1.0 g/cm2 または 2.0 g/cm2 CF を，1，3，6

確認できなかった。HPLF における HSP70 タンパク発現について

および 9 時間与えた。コントロールについては CF を負荷しなかっは照射 12 時間後に明らかな発現増強を確認することができた。また。TGF-β2，TGF-β Ⅰ型およびⅡ型受容体，および Osterix のた，非照射下において HPLF における Angiotensin Ⅱ受容体の発遺伝子発現は Real-time RT-PCR 法で調べた。上記因子， p-Smad2

現を確認した。

および p-p38 のタンパク発現は，Western blot 法で調べた。また，

185

考察

14．新たな根管清掃・消毒法に関する基礎的研究―超音波と LED の照射が低濃度過酸化水素水の活性酸素種発生に及ぼす影響―

CTGF および HSP70 は共に組織再生に重要な分子であり，本結果は，LIPUS が HPLF を介して組織再生を促進する可能性を示唆するものであった。一方，KB 細胞においては増強効果が認められ○井比陽奈 1,2，林

なかったことから，LIPUS の効果には細胞特異性があることが明吉田彩佳 ，平野頼是 2，小林慶美 2，李らかとなった。歯の骨性癒着は，歯の移動を困難にするため回避し

落合邦康

た い が， 未 だ 十 分 に 検 討 さ れ て い な い。 近 年，LIPUS 照 射 が，小木曾文内昌一 7，

2,4

日本大学歯学部 歯科保存学第Ⅱ講座 ²，細菌学講座 ³

LIPUS による歯根膜細胞の再生促進効果と骨性癒着抑制の関連性

日本大学歯学部 総合歯学研究所 高度先端医療研究部門 4，

およびその効果発現における Angiotensin Ⅱ受容体の関与について

生体防御部門 5

今後の研究課題にしたいと考えている。

神奈川歯科大学大学院 口腔科学講座 光歯科医学分野 6
横須賀湘南地域災害医療歯科学研究センター 7

13．多目的プライマーが金合金の接着耐久性に及ぼす
影響

目的
従来より根管の清掃・消毒には多種の薬剤が応用されているが，○平場晴斗 1,2，小泉寛恭 2,3，中山大介 2,3，野川博史 2，

根尖周囲組織の為害作用，発癌性および突然変異誘発性などの問題

修 2，松村英雄 2,3が指摘されている。これまで演者らは，安全性をも考慮した新たな日本大学大学院歯学研究科歯学専攻応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座

3,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 ¹に お い て 骨 性 癒 着 を 軽 減 す る と い う 報 告 が あ る こ と か ら，

佐伯

誠 2,4，吉野文彦 6，田村宗明 3,5，6

根管清掃・消毒法として過酸化水素に超音波を照射することにより2生成されるヒドロキシラジカル（HO・）の殺菌作用について研究を日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3行ってきた。近年，過酸化水素への紫外線照射により HO・ が発生
目的することが報告されている。そこで本研究は過酸化水素への超音波

近年，複数の機能性モノマーを含むことにより歯科用合金のみな

照 射 に 加 え て， 生 体 へ の 安 全 性 を 考 慮 し た 光 源 で あ る LED

らずセラミックスに対しても利用可能なプライマーが開発されてい（405 nm）を用いた殺菌効果について検討した。

る。また，硫黄化合物の金合金の接着に対する有効性が明らかとな

材料及び方法っている。しかし，他の機能性モノマーと併用されることによる硫

1）超音波と LED 照射によって生成された HO・の測定

黄化合物の有効性は不明な点が多い。本研究の目的は，複数の機能

超 音 波 発 振 装 置 と し て Handy Sonic UR-20 P（Tomy 精 工 ），性モノマーを含んだ多目的プライマーによる表面処理が，金合金のLED 光源として Pencure 2000（ 波長 405 nm，モリタ製作所）を使

接着耐久性に及ぼす影響を検討することである。

用した。試験管内の 0.5 および 1.0 M 過酸化水素水に超音波（10 お

材料および方法

よび 20 W）と LED 照射を 1，2 および 3 分間行ったものを HO ・ 測金合金（キャスティングゴールド M.C. タイプⅣ，ジーシー）より定用試料とし，電子スピン共鳴（ESR）法を用いてスピンアダクトか作製した円板状試料を，耐水研磨紙 #1500 にて注水研磨し，内径ら信号強度を測定した。

5 mm のマスキングテープにて接着面積を規定した。被着面の処理

2）生成された HO・が条件は，ユニバーサルプライマー（UV，トクヤマデンタル），メタ

難治性根尖性歯周炎の代表的な原因菌に及ぼす影響（JCM5803）を供

ル リ ン ク（ML， 松 風 ）， モ ノ ボ ン ド プ ラ ス（MB，Ivoclar

試し，菌懸濁液作成後，1）と同様に超音波および LED の照射を行

Vivadent），アロイプライマー（AP，クラレノリタケデンタル），

い colony forming unit（CFU）を測定した。

メタルタイト（MT，トクヤマデンタル），V- プライマー（サンメデ

成績及び考察ィカル），エステニア C&B オペークプライマー（クラレノリタケデ

超音波と LED の照射を併用することにより HO・が検出され，超ンタル），アクリルボンド即時重合用（松風），メタルプライマーⅡ

音波照射のみおよび LED 照射のみと比べて有意に高い信号強度が（ジーシー），スーパーボンドモノマー液（サンメディカル）の 10 種検出された。

類を製造者指示に従って使用し，表面処理なしをコントロール群とが，超音波照射と LED 照射を併用した群において，それぞれ単独

し計 11 条件とした。

で使用した群に比べ有意に高い殺菌効果を示した。

の CFU は各実験条件で経時的に減少した

表面処理後，ステンレス鋼製リングを固定し，アクリル系レジン

以上の成績から，過酸化水素に超音波と LED の照射を併用する（MMA-TBB）を筆積み法にて充填した。試験体は 37℃精製水中にことにより，それぞれ単独で使用する場合よりも HO・ の生成が増て 24 時間保管し，水中熱サイクルを 0 回もしくは 20,000 回負荷後，加し，高い殺菌効果が認められ，新たな根管清掃・消毒として利用

せん断接着強さを測定し，破断面を観察した。

できる可能性が示唆された。

成績及び考察水 中 熱 サ イ ク ル 0 回 で は ML，MT，MB，UV，AP が，20,000
回では ML，MT，MB，UV が他と比較し有意に高い接着耐久性を示した。また，それらの間に有意差は認められなかった。このことから，MMA-TBB による金合金の接着において，他の機能性モノマーの併用が硫黄化合物の接着耐久性の低下に影響はないことが示
唆された。

186

15．フッ化物含有 CPP-ACP ペーストが歯質の石灰化促進と脱灰抑制に及ぼす影響
◯鈴木崇之

1,2

黒川弘康

2,3

2

，村山良介 ，川本

，陸田明智

2,3

諒

2,3

，宮崎真至

，高見澤俊樹2,3

16．Ni イオンにおける癌抑制効果の検討◯太田裕崇 1,2，塩野目尚 4，勝呂
菅野直之

，

2,3

2,7

，浅野正岳

3,6

尚 5，新井嘉則 8，，佐藤秀一 2,7

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

日本大学歯学部 歯科保存学第Ⅲ講座 2，病理学講座 3

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅰ講座 2

歯科補綴学第Ⅱ講座 4，歯科保存学第Ⅱ講座 5

日本大学歯学部総合歯学研究所生体工学研究部門

3

日本大学歯学部総合歯学研究 生体防御部門 6，
高度先端医療研究部門 7

緒言

日本大学歯学部 8

齲蝕の予防における，フッ化物の効果に関しては，これまで多くの報告がある。また，カゼインホスホペプチド‐非結晶性リン酸カ

目的

ルシウム（CPP-ACP）の脱灰抑制効果についても報告されている。

Ni は歯科治療で一般的に使用される合金に含まれており，金属

しかし，CPP-ACP とフッ化物を併用することで，脱灰抑制ととも

アレルギーの原因物質や，発癌性を有する物質として報告されていに石灰化促進効果があるかについての詳細は不明である。そこで，る。一方で，癌細胞の増殖抑制やアポトーシス誘導促進などの癌治

フッ化物含有 CPP-ACP ペースト（MI ペーストプラス）を用いた際療薬としての可能性を示唆する報告もありそのメカニズムや生物学に生じる歯質の変化を，超音波パルス法を用いて検討した。また，的効果については充分に解明されていない。これまでの研究から

LSM および SEM 観察を併せて行うことで考察資料とした。

我々は，Ni イオンが口腔扁平上皮癌における増殖および遊走能を材料および方法

抑制し，癌の転移浸潤に関連する MMP 発現を抑制することを見出

1. ウシ下顎前歯エナメル質を用い，これをブロック体に切り出してきた。この結果は Ni イオンが癌の治療薬として応用できる可したものを測定用試片とした。脱灰条件としては，乳酸緩衝液に能性を示唆するものであり極めて興味深い。本研究では Ni イオン

20 分間浸漬した後水洗し，人工唾液中に保管することとし，これの癌増殖抑制効果を判定することを目的として，ヌードマウスにおを 1 日 2 回，28 日間行った。この脱灰サイクルに先立って，MI ペ

ける舌癌転移モデルの確立と，動物実験用 micro-CT 撮影による癌

ーストプラス，CPP-ACP ペースト（MI ペースト）およびフッ化物

領域の可視化を試みた。

含有歯磨剤（ルシェロ）の，それぞれ 3 倍，6 倍および 9 倍に希釈し材料および方法た水溶液に 1 日 2 回 20 分間浸漬した。また，脱灰サイクルのみ行

6 週齢 BALB/c-nu/nu マウスの舌辺縁にヒト口腔扁平上皮癌由来細胞株（HSC-3-M3）を 5×105 cell/30μl 接種した。1 週間後，舌にったものを脱灰群とした。
2. 超音波伝搬時間の測定装置としては，パルサーレシーバー，おける腫瘤の形成を確認した後，1 mM Ni-Cl2 水溶液または通常の縦波トランスデューサーおよびオシロスコープから構成されるシス

水道水を自由飲水させて 2 週間飼育した。飼育後，尾静脈より造影テムを用いた。測定に際して，試片をサンプルステージに静置して剤を注入し動物実験用 micro-CT にて原発巣の撮影と体重測定を行

トランスデューサーを垂直に接触させ，試片の厚みから各試片におった。観察後の舌体部を摘出し HE 染色により原発巣の確認を行っ

ける音速を求めた。

た。また nested PCR にてヒト由来の β-globin 遺伝子を検出しリ成績および考察

ンパ節転移および原発巣への Ni の影響について検討した。

供試した試片の音速は，脱灰群では浸漬 7 日後から音速が低下す

成績および考察る傾向が認められた。一方，その他の群では，浸漬 7 日後から音速

腫瘍細胞接種後 1 週間ですべてのマウスで腫瘤の形成が確認されが上昇する傾向が認められた。この音速の上昇傾向は，MI ペース

た。対照群では経日的に明らかな体重減少は認められたが，Ni 飲

トプラス群で最も顕著に認められた。この結果は，MI ペーストプ

水群ではやや軽減される傾向にあった。CT 像では両群でいわゆるラスでは CPP-ACP に加えてフッ化物が併用されており，歯質の脱Ball in hand 像が確認されたが，Ni 飲水群では中心部に大きな陰灰抑制作用と石灰化促進作用を示したためと考えられた。

影が観察され，組織像では腫瘍中心部に壊死像が形成されており，

結論

これは Ni が血管新生を抑制したことに基づいた変化であると想定

フッ化物含有 CPP-ACP ペーストは歯質の脱灰抑制作用と，石灰された。nested-PCR では Ni 飲水群のリンパ節で β-globin 遺伝子化促進作用を有していることが示唆された。

の増幅量が少なかった。以上の結果は，Ni イオンが癌の増殖と転移を抑制する傾向があることを示すものであった。

17．炎症性バイオマーカーを用いた簡便な歯周病検査法の開発○大津麻里子 ¹，菅野直之 ²,³，望月小枝加 ²，高野麻由子 ²，
佐藤秀一 ²,³
日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 ¹
日本大学歯学部 歯科保存学第Ⅲ講座 ²
日本大学歯学部総合歯学研究所 高度先端医療研究部門 ³

目的
歯周組織検査には多くの時間と手間を要し，より簡便な検査法の187

開発が望まれてきた。本研究では，短時間に採取可能な gingival

イトカイン産生に及ぼす継続的な LIPUS 刺激の影響について，細retention fluid（GRF: 歯肉辺縁貯留液）を対象とし，炎症性バイオ

胞生物学的に検討した。

マーカーの検出を行い，臨床パラメータと比較することで歯周病の材料および方法

診断マーカーとして有用であるか検討した。

マウス頭蓋冠由来株化骨芽細胞（MC3 T3-E1 細胞）
を 6 well プレー

材料および方法

トに播種し，3，7，14 日間 LIPUS 刺激（超音波出力 30 mW/cm²，発被験者は，日本大学歯学部付属歯科病院歯周病科および予防歯科

振周波数 3.0 MHz，刺激時間（30 min/day）を与えた。歯周病を想に初診で来院した歯周病患者とした。臨床パラメータは，probing

定し，

pocket depth（PPD），bleeding on probing（BOP）とし，全身疾患，

ル回収後，種々の炎症性サイトカイン（IL-1 α ，IL-6，RANKL）と

年齢，性別，喫煙の有無についても調査をした。GRF の採取は滅LPS の 受 容 体 で あ る TLR2，TLR4 の 遺 伝 子 発 現 に つ い て real-

菌した小筆を用い，上顎前歯部歯肉辺縁部を 3，4 回往復し採取しtime PCR 法を用いて調べた。さらに，タンパク発現量を ELISAた。

法を用いて測定した。

GRF 中から検出する炎症性バイオマーカーは，室温でも安定性

株由来（10μg/ml）の LPS を使用した。サンプ

結果の高いラクトフェリン（以下 LF）および α 1- アンチトリプシン（以MC3T3-E1 細 胞 の IL-1 α ，IL-6，RANKL，TLR2，TLR4 の 遺下 α 1-AT）を選択し ELISA 法で測定した。歯周基本治療後も同様

伝子発現は，培養 14 日目において LPS 添加によりコントロールにの測定を行った。

比べて顕著に増加した一方，LPS ＋ LIPUS 群では，コントロール
レベルまで有意に抑制された。また IL-1 α ，IL-6，RANKL のタン

両 バ イ オ マ ー カ ー 検 査 の 性 能 評 価 に は，receiver operating
characteristic（以下 ROC）分析を用い，area under the curve（以パク発現量は，遺伝子発現量と同様の結果であった。

下 AUC）を算出した。また ROC より得られたカットオフ値から感結論

度と特異度を検討した。なお，本研究は日本大学歯学部倫理委員会

LIPUS 刺激は，LPS 存在下における骨芽細胞の炎症性サイトカ
イン（IL-1 α ，IL-6，RANKL）産生と TLR2，TLR4 を抑制すること承認を得た。
（承認番号 2013-14）
成績および考察が示唆された。

初診時における，GRF 中の両バイオマーカーと臨床パラメータ

19．マウス歯周炎モデルにおける歯周組織の機械痛覚に対する CXCR4 の関与（PPD，BOP）との間に有意な正の相関が認められた。また，両バ
イオマーカーは歯周基本治療後に有意に減少した。検査の評価はAUC0.78，感度 0.85，特異度 0.73 であった。以上の結果から，LF○長嶋秀和 1，篠田雅路 2，鈴木達郎 1，渡辺雅弘 1，と α 1-AT は歯周病の診断マーカーとして有用である可能性が示唆

吉沼直人 3,4，菅野直之 3,4，岩田幸一 2，佐藤秀一 3,4された。

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻応用口腔科学分野 1
日本大学歯学部生理学講座 2

18．低出力超音波（LIPUS）刺激は LPS 存在下における骨芽細胞の炎症性サイトカイン産生を抑制する

日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 4○長尾麻由 1，田邉奈津子 2,3，内藤昌子 3,4，髙山忠裕 5,6，
目的

間中総一郎 5，尾崎愛美 1，鈴木直人 2,3，佐藤秀一 5,6

一般に炎症性疾患では痛みが持続することが多いにもかかわら日本大学大学院歯学研究科歯学専攻応用口腔科学分野 1ず，なぜ歯周炎は痛みがなく進行するのか不明である。歯周炎の病

日本大学歯学部生化学講座 2

原菌である

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 3（）の 病 原 因 子 と し て 繊 毛 蛋 白（Fimbriae）が知られており，免疫細胞に発現するケモカイン受容

日本大学歯学部解剖学第Ⅰ講座 4体の一つである CXCR4 に Fimbriae が結合することにより炎症性日本大学歯学部歯科保存学第Ⅲ講座 5

サイトカインの放出を抑制することが報告されている。また，炎症日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 6

性サイトカインは末梢の侵害受容器の興奮性を増強し，その結果と目的して疼痛をもたらすことが知られている。このため，CXCR4 を介歯周病発症と進行に関わるグラム陰性細菌のリポ多糖体（LPS）がしたメカニズムによって歯周炎で痛みが起きないという仮説を立て

骨芽細胞に作用すると，炎症性サイトカインが産生され骨吸収を促た。本研究では，臼歯への絹糸の結紮および

進することが知られている。また，骨芽細胞は様々なメカニカルス

周炎モデルマウスを作成し，歯周炎による歯周組織の痛みに対するトレスに応答することが示されている。メカニカルストレスの 1 つCXCR4 の役割を検討した。

である低出力超音波（LIPUS）は超音波出力が 100 mW/cm2 未満で，の播種による歯材料と方法
C57 BL/6 マウス（7 w，♂）の上顎第二臼歯周囲を 5-0 絹糸にて医科および歯科領域で広く臨床応用されている。LIPUS は音波エ
ネルギーの熱への返還はなく，cavitation 効果も発生しないため，

結紮し非侵襲的に骨形成を促進すると考えられている。中尾らは，LIPUS

Complete Freundʼs adjuvant（CFA）を注射した（CFA 群）。浅麻酔

は LPS の刺激により増加した骨芽細胞の炎症性ケモカインを抑制

下にて上顎第二臼歯頰側歯肉に機械刺激を与え，逃避反射閾値を経すると報告した（Nakao et al.,

日的に測定した。さらに，

2014）。しかしながら，LIPUS

を 播 種（群 ）， ま た は 上 顎 第 二 臼 歯 頰 側 歯 肉 に群に対し上顎第二臼歯頰側歯肉に刺激が LPS によって誘発された炎症性サイトカインに及ぼす影響

CXCR4 抗体を連続投与し（100μg/day），機械刺激に対する逃避反については検討されておらず，その詳細なメカニズムについても明射閾値の変化を解析した。

らかにされていない。そこで，LPS 存在下で骨芽細胞の炎症性サ188

成績及び考察21．TNBS 誘発舌熱痛覚過敏発症に対する三叉神経節
内 p38 リン酸化の役割

群において上顎第二臼歯頰側歯肉への機械刺激に対する逃避反射閾値に変化は見られなかったが，CFA 群において逃避反射
閾値が有意に低下した。

○丸野

群において上顎第二臼歯頰側歯肉へ

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1の CXCR4 抗体の連続投与により，処置後 2，4 日後に逃避反射閾

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2

値が有意に低下した。以上の結果から，歯周炎モデルマウスにおい日本大学歯学部生理学講座 3て，歯周病原菌の感染による CXCR4 を介したシグナルが機械痛覚

日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門 4の変調に関与していることが示唆された。

日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能研究部門 5

20．顎関節炎に随伴する咬筋痛に対する三叉神経節内
satellite cell の関与
1○伊藤玲央 ，篠田雅路

3,4

，岩田幸一

充 1，篠田雅路 3,4，岩田幸一 3,4，祇園白信仁 2,5

3,4，祇園白信仁目的
舌痛症は難治性口腔内異常疼痛の中で最も発症率が高いことが知られているが，その発症機構に関しては未だ十分に研究がなされて

2,5

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

いない。本研究では，2,4,6-trinitorobennzenne sulfonic acid（TNBS）

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅰ講座 2

誘発舌熱痛覚過敏発症モデルマウスを作製し , 舌熱痛覚過敏発症に対する三叉神経節内において，Mitogen-activated Protein Kinase

日本大学歯学部生理学講座 3
日本大学歯学部総合歯学研究所機能形態部門の一つである p38 のリン酸化の役割について検討した。

4日本大学歯学部総合歯学研究所顎口腔機能部門

材料及び方法5

C57/BL6 雄性マウス（7 週齢）の舌背に TNBS（10 mg/ml）または目的

vehicle を 1 時間塗布し，舌熱痛覚過敏発症モデルマウスを作製し臨床の場において , 顎関節に疼痛を訴える患者の多くは , 咬筋痛た。TNBS 処置後 3 日目より，浅麻酔下にて熱刺激プローブを用いも訴える場合がある。顎関節痛と咬筋痛との間には何らかの関与がて 舌 背 に 熱 刺 激 を 加 え， 逃 避 反 射 閾 値（Head-withdrawal

あると考えられるが , 詳細は不明である。近年，三叉神経節内のthreshold：HWT）を経日的に測定した。さらに，あらかじめ舌にsatellite cell が顎顔面部の異常疼痛発症に関与することが報告され逆行性トレーサーである FG を投与し，TNBS 処置 5 日後に全身麻た。 そ こ で， 顎 関 節 炎 に 随 伴 す る 咬 筋 痛 に 対 す る 三 叉 神 経 節 内

酔下にて 4% paraformaldehyde を用いて灌流固定後，三叉神経節

satellite cell の役割を検討した。

を摘出し，15μm の凍結切片を作製した。p38 陽性およびリン酸化

材料および方法

p38 陽性舌投射三叉神経節ニューロン数の変化を免疫組織化学的に

深 麻 酔 下 に て SD 系 雄 性 ラ ッ ト（7 W）の 顎 関 節 相 当 部 に解析した。

Complete Freundʼs adjuvant（CFA）を投与したのち，受動的開閉

成績及び考察口運動（once/day, 30 min, 1 Hz）を行い，顎関節炎モデルラットをTNBS 処置後 5 日目より 15 日目まで vehicle 群と比較し，舌へ作成した。CFA 投与後，顎関節および咬筋相当部への圧刺激に対の 熱 刺 激 に 対 す る HWT は 有 意 に 低 下 し た。TNBS 処 置 5 日 後，する頭部逃避反射閾値を経日的に測定した。また，CFA 投与後 3

p38 陽性舌投射三叉神経節ニューロン数に変化は認められなかった

日目にサーモグラフィーを用い，顎関節および咬筋相当部の顔面皮が，リン酸化 p38 陽性舌投射三叉神経節ニューロン数が有意に増

膚表面温度を計測した。あらかじめ神経逆行性トレーサーを咬筋に加した。TNBS 誘発舌熱痛覚過敏発症には，舌投射三叉神経節ニュ注射し，咬筋投射 TG ニューロン周囲の satellite cell 活性を glial

ーロンにおける p38 のリン酸化が関与している可能性が示された。

fibrillary acidic protein（GFAP）発現を指標とし，免疫組織化学的手法にて解析した。

22．ジルコニアに対する物理的および化学的表面処理
が接着耐久性に及ぼす影響

成績および考察
顎関節 CFA 投与後 , 顎関節および咬筋相当部への圧刺激に対す○赤澤伸隆 1,2，小泉寛恭 2,3，中山大介 2,3，野川博史 2，

る頭部逃避閾値は有意に低下した。CFA 投与後 3 日目，顎関節相平場晴斗 1,2，松村英雄 2,3

当部の顔面皮膚表面温度が上昇し，咬筋投射 TG ニューロン周囲の日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

satellite cell の活性化が認められた。以上の結果から，顎関節炎に日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2

随伴する咬筋痛には咬筋投射 TG ニューロン周囲の活性化 satellite

日本大学歯学部総合歯学研究科 高度先端医療研究部門 3

cell が関与することが示唆された。
目的

近年，酸化ジルコニウム（ジルコニア）は高い機械的強度と優れた
生体親和性を有することから，補綴装置のフレーム材料として広く臨床応用されている。ジルコニアをセメントにて接着する際にサンドブラストやプライマーによる接着前処理が用いられているが，それらの最適な組み合わせを示した報告は少ない。本研究の目的は，ジルコニアに対する物理的ならびに化学的表面処理が接着耐久性におよぼす影響を検討することである。
材料及び方法ジルコニア円形平板試料（カタナ，クラレノリタケデンタル）を耐189

水 研 磨 紙 #800 に て 注 水 研 磨 後， ア ル ミ ナ サ ン ド ブ ラ ス ト 処 理製水中に 24 時間浸漬後，万能試験機を用いてクロスヘッドスピー（HAL，ハイアルミナ，松風）もしくはトライボケミカル処理（ROC，

ド毎分 0.5 mm の条件下でせん断接着試験を行った。試験後，試料

ロカテックシステム，3 M ESPE）を行った。処理後，内径 5 mm

は実体顕微鏡にて破壊様式の観察を行い，さらに走査型電子顕微鏡のマスキングテープで接着面積を規定し，クリアフィルセラミック（SEM）による観察を行った。
成績及び考察プライマー（CP，クラレノリタケデンタル），アロイプライマー（AP，クラレノリタケデンタル）もしくはエスペジル（ES，3 M ESPE）を

PAR は EOP，CPB，CPB＋Act が，EST および CER は ALP，製造者指示に従い塗布した。プライマー処理は，未処理（UP）を含

EOP，CPB，CPB＋Act が他のプライマーに比較し有意に高い接め計 4 条件とした。接着面にステンレス鋼製リングを設置し，アク着強さを示した。これより，酸性機能性モノマーである MDP を含

リル系レジン（MMA-TBB）を筆積み法により充填した。接着試験

むプライマーを用いることが各種歯肉色前装材料とジルコニアの初体は 37℃の精製水中に 24 時間保管し，水中熱サイクル（5℃および期接着強さにおいて有効であることが示唆された。また，EOP，

55℃，各 60 秒間）0 回もしくは 10,000 回を負荷後，せん断接着強CPB，CPB＋Act において PAR が他の歯肉色前装材料に比較し有さを測定した。

意に高い接着強さを示したことから，アクリルレジンはジルコニア

成績及び考察に対して強固な初期接着強さを獲得できることが明らかとなった。

HAL-CP および ROC-CP が他の群と比較し有意に高い接着耐久

24．ジルコニアを応用したスクリュー固定式インプラ
ント上部構造の破壊強度性を示した。これより，ジルコニアに対してアルミナサンドブラス
ト処理またはトライボケミカル処理後にリン酸エステル系モノマー（MDP）とシランカップリング剤（γ‐MPTS）を含有するプライマー○本田順一 1,2，神尾伸吾 2，伏木亮祐 2,3，小峰

太 2,3，を塗布する表面処理方法が最も優れていることが示唆された。ま松村英雄

た，HAL-AP と ROC-AP では HAL-AP が，HAL-ES と ROC-ES

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻 応用口腔科学分野 1

2,3

では ROC-ES が有意に高い接着耐久性を示した。すなわち，トラ日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2

イボケミカル処理によりジルコニア表面に γ‐MPTS に有効かつ

日本大学歯学部総合歯学研究所 高度先端医療研究部門 3

MDP の効果を阻害するシリカ層が形成されていることが示唆され目的た。

ジルコニアを応用したスクリュー固定式インプラント上部構造の23．ジルコニアに対する表面処理が義歯床用レジンおよび間接修復用コンポジットとの接着強さに及ぼす影響○窪地

慶 1,2，伏木亮祐 2,3，神尾伸吾 2，小峰

松村英雄

破壊強度を明らかにすること。
材料及び方法下顎第一大臼歯の一歯欠損に対するインプラント治療を想定し，インプラント体をポリエステル樹脂に植立した。試験に供したイン

太 2,3，

プ ラ ン ト 上 部 構 造 は， モ ノ リ テ ィ ッ ク ジ ル コ ニ ア ク ラ ウ ン

2,3

日本大学大学院歯学研究科歯学専攻（MONO），陶材焼付冠（PFM），ジルコニアフレームに陶材を前装

応用口腔科学分野 1

したもの（ZAC），ジルコニアフレームに間接修復用コンポジット

日本大学歯学部歯科補綴学第Ⅲ講座 2を前装したもの（ZIC）の計 4 条件とした。

日本大学歯学部総合歯学研究所高度先端医療研究部門 3

ジルコニアフレームは外周 0.5 mm，咬合面部 1.0 mm に統一し，目的

歯科用 CAD/CAM により製作した。PFM はフレームとアバット

ジルコニアに対する表面処理が義歯床用レジンおよび間接修復用

メントを一体化させた形態にし，ロストワックス法により製作しコンポジットとの接着強さに及ぼす影響を明らかにすることを目的た。PFM，ZAC，ZIC は前装部製作用シリコーンガイドと金型をとした。

用いて，高径 8.0 mm，頬舌径 10.0 mm，近遠心径 11.0 mm に統一

材料及び方法した形態になるよう，陶材または間接修復用コンポジットを前装し歯肉色前装材料として，アクリルレジンであるパラプレスバリオ

た。MONO は，スキャニング用ワックスアップを行い，歯科用（PAR），間接修復用コンポジットであるエステニア C&B（EST），

CAD/CAM により製作した。ZAC，ZIC，MONO の上部構造内面

セラマージュ（CER）を使用した。

に対してアルミナブラストを処理行い，レジン系装着材料を用いてアバットメントに接着した。

被着体としてジルコニアの円形平板を用い，#600 の耐水研磨紙
にて注水研削後，アルミナブラスト処理を行った。PAR，EST，全ての試料はチタンスクリューとトルクコントローラーを用い

CER は接着面積を規定後，アロイプライマー（ALP），エステニアて，インプラント体に装着し，アクセスホールは仮封用レジンを用

オペークプライマー（EOP），クリアフィルフォトボンドボンディ

いて封鎖した。製作した試料は 37℃精製水中に 24 時間保管後，万ングエージェント（CPB），CPB とクリアフィルポーセレンボンド

能試験機を用いて破壊強度試験を行った。破壊強度試験後，試料のアクチベーター（Act）の等量混和液（CPB＋Act），メタルリンク

破壊形式を光学顕微鏡で観察し，さらに走査電子顕微鏡（SEM）に（MLP），さらにプライマー未塗布を加えた計 6 条件にてプライマて破壊面の観察を行った。
成績及び考察ー処理を行った。プライマー処理後，PAR はポリマーとモノマーを混和し，ステンレス鋼リングで囲んだ後，填入，重合を行った。

MONO の破壊強度は，他の上部構造に比較して有意に高い破壊

EST はオペークを塗布し，重合後，ボディを充填し，光重合と加強度を示し，また，PFM，ZAC および ZIC の破壊強度に有意差は熱重合を行った。CER はプレオペークおよびオペークを塗布し重認められなかった。
スクリュー固定式インプラント上部構造としてモノリティックジ

合後，ボディを充填し，光重合を行った。製作した試料は，37℃精190

ルコニアクラウンが高い破壊強度を有することが示唆された。また，PFM，ZAC および ZIC の破壊強度に有意差が認められないことから，ZAC，ZIC は PFM と同程度の破壊強度を有することが示唆された。

191