Time-series Analysis Software～生物時計、薬剤応答の経時変化、細胞毒性試験など時系列解析に～直感で分かる簡単操作で過去のデータも今日のデータも自由自在に比較解析 は、生物時計、薬剤応答の経時変化、細胞毒性試験など、様々な時系列データやサーカディアンリズムの解析に適した解析ソフトウェアです。サーカディアンリズムは 2017 年にノーベル医学生理学賞を受賞したことでも記憶に新しいですが、 生物の睡眠やホルモンの分泌などの生理学的なリズムは、ある特定の遺伝子（時計遺伝子）の周期的な発現により制御されています。
アトーの Kronos シリーズ（Kronos HT、Kronos Dio）は、この時計遺伝子などの発現をレポーター遺伝子（ルシフェラーゼ）の発光によって経時的にモニタリングするシステムです。KronoAnalyzer は、Kronos シリーズにより取得した時系列データ※ 1 を利用して、ピーク / ト
ラフの時間や値の抽出、周期 (Period)、頂点位相 (Acrophase)、振幅 (Amplitude) ※ 2、および平均値・標準偏差・変動係数など基本統計デー
タの計算などを実行するソフトウェアです。1 つのファイルデータのサンプル間の比較だけでなく、個別に取得した最大 3 つのファイルからデータを抽出し、グラフの重ね合わせや、比較解析にも適しています。
※ 1. 時系列データ : 同一試料の測定値を連続して取得したデータ。
※ 2. 周期、 頂点位相、 振幅は、 デトレンド処理後に、 算出します。

Analysis Flow
データファイル

データ処理設定

グループ設定解析結果

Kronos HTExcel●

Kronos シ リ ー ズ 測 定データ（kht, dtl 形式）●

KronoAnalyzer 解データ（ krd 形式）●

Excel データ（テンプレートあり）

析

●

ノイズ処理

●

レイアウト

●

ピーク / トラフ値●

デトレンド※設定

●

サンプル名

●

周期 (Period)●

ピーク／トラフ設定●

検体数（n 数）●

振幅 (Amplitude)●

周期計算（コサイナー法）

●

グループ●

頂点位相 (Acrophase)●

バックグラウンド減算●サブグループ●

基本統計データ●

データ処理範囲●

ブランクウェル

※ リズムに由来しない変動の影響を排除してリズムを抽出する処理（ 平 均 値・ 標 準 偏 差・ 変 動係数（CV 値）など）

解析ソフトウェア KronoAnalyzer
直感的なかんたん操作でデータ解析
全体表示

見たいグラフをクリックして拡大＆重ねて表示

データ処理項目

データ処理項目のボックスにチェックを入れると「ノイズ処理」「デトレンド」「マルチカラー計算」が全グラフに反映されます。「全体表示」にチェックを入れると96ウェルプレート全体の一覧表示に、また個別のウェルをダブルクリックで拡大表示（1つのファイルにつき最大5ウェル）。複数のウェルを選択後に「グラフ」ボタンをクリックすると、選択したウェルの重ね合わせ表示ができます。

ドラッグして一気に選択⇒「グラフ」ボタンで重ねて表示

重ね合わせ表示ダブルクリックすると別ウィンドウに拡大表示され、並べた比較も容易です

ウェルの選択はマウスポインタをドラッグすれば広範囲に、またコントロー
ル／シフトキー&クリックでウェルの追加・削除も自由自在です。

個別ウェル表示セルをクリックしてソート表示
周期 (Period)

グラフウィンドゥ内の「数値表示」ボタンをク

頂点位相 (Acrophase)リックすると、表示されたグラフに応じた解析振幅 (Amplitude)データが表示されます。表示される解析データ

データ処理項目をチェックしてグラフに反映には「周期 (Period)／頂点位相 (Acrophase)／振データ処理項目幅 (Amplitude)」「ピーク／トラフ値」「グループ平均値／標準偏差／CV値」があります。各項目のセル内をクリックすると昇順／降順でソーセルをクリックしてソート
ピーク／トラフ値

ト表示できます。また解析デー
タはまたExcel／CSV形式で出力検量線の作成できます。

データ処理項目には「ノイズ処理」「ピーク/トラフ」「デトレンド」「周期」

グループ平均値／標準偏差／CV値「マルチカラー計算」の5つがあります。ボックスにチェックを入れるとグラフとテキストデータに反映されます。またグラフ上で特定のポイントをクリックすると、その時間と数値が表示されます。グラフを見ながら解析結果の確認が簡単にできます。

条件設定で思いのままのデータ解析KronoAnalyzer は対象となる生物や現象、実験系に合わせてデータ処理設定値を変更し、最適な条件で解析できます。データ処理条件設定
項目には「ノイズ処理」「デトレンド」「ピーク／トラフ検出」「データ処理設定範囲」「周期解析」「バックグラウンド減算」があります。

ノイズフィルタを組み合わせると、メディアン-フィルタ
ーでスパイクノイズを除去し、移動平均フィルターで細かいノイズを除去できます。

シンプルな解析データ
頂点位相（Acrophase）

ピーク

振幅（Amplitude）

データ処理設定

トラフ
実験系に合わせて指定した時間幅のトレンドを除去します。
ピーク／トラフ検出も同様に時間幅を指定します。

測定装置固有のバックグラウ
ンドノイズ値を減算できます。

フィッティングカーブ

計測開始直後の不安定なデータの除去や、薬剤投与などで測定を一時停止した時間を境に解析範囲を区切る（2区分まで）設定ができます。

周期（Period）

KronoAnalyzerは様々な時系列データを最適な状態で処理し、複数のファイルの多数のデータを同時に比較解析できます。周期 (Period)、頂点位相 (Acrophase)、振幅 (Amplitude)、ピーク／トラフ値からなるシンプルな解析結果だからこそ容易に比較できます。

解析ソフトウェア

KronoAnalyzer

さまざまなデータをグループ設定で簡単に比較・解析
KronoAnalyzer は過去に測定したデータも、別の装置で測定したデータも、同時に 3 ファイルまで開いて比較解析できます。サンプルを測定条件ごとにまとめてグループ化して平均化することで、ピーク／トラフ値や位相（Acrophase）、周期（Period）の差が明瞭になり、再現性のよい、精度の高い解析が可能になります。また各グループの平均値グラフを重ねて表示できますので、視覚的にもデータの傾向を容易にとらえやすくなります。
多様なデータファイルに対応

１ウェル＝１グループからグループ化の設定可能

Kronos HTの96 well data

Kronos HTの24 well data

各ウェルを実験条件ごとに、検体数 (ｎ数)＜ サブグループ＜ グループに任意の名称を付けて分類できます。プレートレ
イアウトもウェルをクリックするだけで半自動的に設定されます。検体数 (ｎ数)＜サブグループ＜グループともに1~192（96ウェルプレート2枚分）のサンプルまで選択できます。
またグループ化すれば、Kronosシリーズのファイルはもちろんのこと、Excelファイル（テンプレートあり）も同一ファイル内でグラフを重ね合わせたり比較解析できます。

たくさんのウィンドウを開いても目的のファイルをクリックすれば前面に表示されます。

Kronos Dioの8 dish data

グラフの重ね合わせ表示
チェックボックスでデータ解析処理を適用できます。

解析結果
ファイルごとにグループ・サブグループ表示されます。

チェックボックスでデータの追加削除も簡単です。

サーカディアンリズムへの CK1 δの影響

周期 (Period)、頂点位相 (Acrophase)、振幅 (Amplitude)、ピーク／トラフ値に加えて、各グループの平均値・標準偏差・CV値が自動計算されます。混在した多数のデータもワンクリックでソート可能です。また解析結果はExcel／CSV形式で出力できます。

Application Data

カゼインキナーゼ（CK) は、視床下部の視交叉上核（SCN) の体内時計に関わるタンパク質（PER/CRY など）をリン酸化することにより、サーカディアンリズムを制御するといわれています。CK の影響を調べるために、CK1 δ阻害剤を投与した Bmal1 プロモーター -Luciferase (Bmal1-Luc)
発現 MEF 細胞を用いて、レポーター遺伝子の発現（ルシフェラーゼの発光）を Kronos Dio でモニタリングしました。BMAL1 は PER/CRY などの発現制御に関わる転写因子であり、CK により間接的に影響を受けることが知られています。Kronos Dio の測定データを KronoAnalyzer で解析したところ、CK1 δ阻害剤の濃度に比例して周期（Period）が長くなり、頂点位相（Acrophase）が遅れ、振幅（Amplitude）が小さくなることが示されました。CK1 δの阻害により PER のリン酸化が抑制されユビキチンにより分解されなくなって安定化します。その結果 PER の周期が長くなり、連動して生じる、さまざまな時計遺伝子の転写ー翻訳のフィードバックの結果、Bmal1 の周期も伸びたと考えられます。
【実験方法】
Bmal1-Luc 発現 MEF 細胞を 35mm ディッシュに播種し、デキサメタゾン処理で同期後、0.3％ DMSO もしくは CK1 δ阻害剤（0.1 ～ 1.0 µM）含有培地で 2 時間刺激しました。その後、100uM Luciferin 添加培地に交換し、測定間隔 20 分、測定時間 1 分の設定で Kronos Dio を用いてルシフェラーゼの発光を 5 に置換測定しました。測定後のデータは KronoAnalyzer で解析しました。

周期が伸びるコントロールCK1 δ阻害剤

周期が伸びる製品の仕様型式・名称・コード

Speciﬁcations
KronoAnalyzer・クロノアナライザー ・ 3510155

解析対応ファイル

・Kronos HT ／ Kronos Dio ／ Kronos ファイル（kht 形式／ dtl 形式 )・KronoAnalyzer ファイル（krd 形式 )・Excel ファイル（テンプレートあり）※同時に 3 つのファイル まで表示・比較・解析可能

データ表示形式【グラフ表示】
・全ウェルの一覧表示（最大 3 つのファイル）・各ウェルの単独／並行表示（プレート 1 枚につき 5 ウェルまで、最大 3 ファイル× 2 プレート× 5 ウェル選択・並行表示）
・重ね合わせ表示（最大 192 グループ（ウェル）× 3 ファイル）【テキストデータ表示】
・時系列データ、ピーク／トラフ、周期

データ処理設定･ ノイズ処理設定 （移動平均／中央値／多項式フィッティング）･ デトレンド処理設定 （指定移動平均の減算)･ バックグラウンド値設定 （装置由来のバックグラウンド減算)･ ブランク設定 （ブランクウェルの減算)･ マルチカラー解析設定 （多色発光サンプル対応）･ ピーク／トラフ／周期算出設定･ グラフ XY 軸の設定 （X 軸 : 0 ～ 2x109､ Y 軸 : 0 ～ 999 時間､ フル／オートスケール、範囲指定）･ データ処理範囲の設定 （2 区間まで設定可能）

グループ設定形式

・検体（測定）数の設定（n=1 ～ n=192）
・サブグループ設定（最小サブグループ︓1 ウェル＝ 1 サブグループ～最大サブグループ︓192 ウェル＝ 1 サブグループ
・グループ設定（最小グループ︓1 ウェル＝ 1 グループ～最大グループ︓192 ウェル＝ 1 グループ）・ブランクグループの設定（1 グループ）

グループデータ解析

・各グループの基本統計解析︓平均値、標準偏差、変動係数の算出
・各グループのデータ解析︓時系列データ、ピーク／トラフ、周期・選択グループ、サブグループのグラフ重ね合わせ表示

解析データ【ピーク／トラフ】･ ピーク／トラフの値と時間･ ピーク／トラフのシンボル表示･ データソート （昇順／降順）【周期算出 (コサイナー法）】
・周期（Period）／振幅（Amplitude）／頂点位相（Acrophase）の算出 ( コサイナー法による )･ データソート （昇順／降順）

データの保存・解析データの保存（krd)
・グラフ画像の保存（TIFF ／ JPEG ／ BMP ／ PNG）
・データ処理・解析結果の保存（Excel ／ CSV）

言語

日本語／英語 （ソフトウェア上で言語切替対応）

システム

Windows10 ／ 11 (64bit)、メモリ 8GB 以上 推奨表示解像度 1,920 × 1,080

価格\300,000

関連製品

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多検体生細胞リアルタイム発光測定システム

CO2 インキュベータ機能付 35mm Dish 用ルミノメーター

Kronos HTKronos Dio

WSL-1565

名称・コードWSL-1565 Kronos HT クロノス HT・3510134

検出器

PMT（光電子増倍管）（10℃冷却）× 2 ユニット

計測容器

クリアボトム 24 ウェルプレート（標準）クリアボトム 96 ウェルプレート、35mm ディッシュ（オプション）

測定プレート枚数 2 枚（2 つの検出器で 2 枚を測定）
培養槽制御

室温 +5℃～ 45℃（0.1℃ステップ）、CO2 ガス混合ユニットによる CO2 濃度制御（設定可能範囲︓1.0 ～ 20%)

色分離計測

2 色を分離計測 （3 色分離対応モデルもあり）

寸法・質量650(W) x 520(D) x 340(H)mm, 40kg

価格

\7,780,000

AB-2550

名称・コードAB-2550 Kronos Dio クロノス Dio
3510119検出器

PMT（光電子増倍管） 波長域

検体数

8 サンプル（35mm 培養ディッシュ）培養条件

庫内温度 室温 -5℃～ 45℃ (1℃ステップ）
CO2 濃度制御 5%（固定） 加湿 加湿用スポンジ

色分離計測

最大 3 色まで分離計測が可能

寸法・質量280(W) × 400(D) × 330(H)mm

価格\3,780,000

350 ～ 670nm

・16.0kg

URL https://atto.co.jp/ お問い合わせ WEB 会員登録の上お問い合わせフォームよりBulletein 230310 2023 年 3 月