6.2 低線量放射線の生体防御機能に与える影響調査
6.2.1 低線量率γ線連続照射マウスの移植腫瘍細胞に対する応答に関わる因子の解析
Response of B6C3F1 Mice Continuously Irradiated with Low-dose-rate Gamma-rays toTransplanted Tumor Cells
高井 大策, 一戸 一晃, 田中 公夫, 小木曽 洋一
生物影響研究部

Daisaku TAKAI, Kazuaki ICHINOHE, Kimio TANAKA, Yoichi OGHISO
Department of Radiobiology
Abstract
Transplantability of a murine ovary granulosa cell tumor cell line was significantly enhanced insyngeneic B6C3F1 mice continuously irradiated with low-dose-rate (20 mGy/22h/day) gamma-rays to atotal accumulated dose of 8000 mGy. Since the enhancement may be due to a chemokine/chemokine
receptor system, we examined RNA expressions of chemokine receptors in blood cells of age-matchedirradiated and non-irradiated control mice. Expression of chemokine receptor Ccr5 gene was reduced in
irradiated mice, and the low expression level of Ccr5 may result in enhanced tumor transplantability. The
reduced expression of Ccl8, known as a ligand of Ccr5, in the tumor cells enhanced the tumortransplantability. The alteration in chemokine axis of chemokine receptor Ccr5 and its ligand Ccl8 may playseveral important roles in the response to low-dose-rate and continuous gamma-ray irradiation.
1．目的抽出し、ケモカインレセプター遺伝子について逆転低線量率（20 mGy/22 時間/日）γ 線長期連続照射

写定量リアルタイム PCR を行い、その発現量を非照マウスで観察された移植腫瘍細胞生着率の違いをも射群と比較した。移植腫瘍細胞株として B6C3F1 マたらす要因が、ケモカイン—ケモカインレセプター系ウスに自然発生した卵巣顆粒膜細胞腫由来の培養細にあると仮定し、照射マウスにおけるケモカインレ胞株（OV3121)を使用した。ケモカイン Ccl8 遺伝子セプター発現の変化が移植腫瘍に対する応答（生着の発現低下を誘導した OV3121 細胞を回収・計数し率）の差に及ぼす影響を明らかにすることを目的とた後、生理食塩水に懸濁し、マウスの背部皮下に接する。

種した。以後毎週 2 回観察を行い、触診により腫瘤形成が確認された場合に腫瘍が生着したと判断した。

2．方法
寿 命 試 験 で 用 い ら れ た マ ウ ス と 同 系 統 の SPF

3．成果の概要
昨年度までに、低線量率（20 mGy/22 時間/日）γB6C3F1 メスマウスを使用した。連続照射室に設置
137

Cs-γ 線源を用い、低線量率（20 mGy/22 時

線を長期連続照射（集積線量 8.0 Gy）したマウスの間/日）γ 線を約 400 日間連続照射（集積線量 8.0 Gy）

免疫細胞ではケモカインレセプターCcr5 の発現がした。照射終了直後のマウスの末梢血から RNA を抑制され（Fig. 1）、さらに免疫細胞のケモカインレされた- 44 -

セプターCcr5 の発現が低いマウスでは移植腫瘍生とが観察され、また同時に Ccr5 遺伝子の発現が低い着率が有意に亢進していることが示された（Fig. 2）。

マウスでの移植腫瘍生着率の有意な亢進が観察されケモカインレセプターCcr5 はケモカインリガンたことから、以前の研究において観察された低線量

ド Ccl3、Ccl4、Ccl5 及び Ccl8 と反応しそのシグナ率（20 mGy/22 時間/日）γ 線連続照射マウスにおけルを免疫細胞の細胞内に伝え、免疫細胞の遊走を刺る移植腫瘍生着率の亢進が、ケモカインレセプター激することが知られている。移植に用いた卵巣顆粒

Ccr5 遺伝子の発現が低下することによって引き起膜細胞腫由来の培養細胞 OV3212 細胞は、Ccl5 とこされている可能性が示唆された。

Ccl8 を発現し、これらを細胞培養液中に分泌していまた、今回、OV3121 細胞におけるケモカインリることから、OV3121 細胞におけるこれらのケモカ

ガンド Ccl8 の発現を抑制することにより、移植生着インリガンドの発現を抑制することにより、移植生率の有意な亢進が観察されたことから、ケモカイン着率にどのような影響が生じるかを観察した結果、リガンド（Ccl8）—ケモカインレセプター（Ccr5）ケモカインリガンド Ccl5 の発現を抑制した OV3121の組み合わせが低線量率（20 mGy/22 時間/日）γ 線細胞では移植生着率が正常な OV3121 の移植と比較連続照射マウスにおける移植腫瘍生着率の亢進の鍵し抑制されることが示された。そこで、今年度はケである可能性が示唆された。
ケモカインシステムは生体内において免疫細胞モカインリガンド Ccl8 の発現を抑制し、移植生着率等の腫瘍部位への遊走や浸潤等に関わっている。まへの影響を観察した。
Fig. 3 に示したように、Ccl8 遺伝子の発現を抑制た、腫瘍細胞や腫瘍周辺の細胞により産生されるケするようデザインした shRNA Plasmid を導入した

モカインは、免疫細胞表面に発現しているケモカイ

OV3121 細胞で最も Ccl8 遺伝子の発現抑制が見られンレセプターと結合し、機能することが知られていたクローンである Ccl8-2-4 細胞を B6C3F1 メスマウ

る。今回の結果から低線量率放射線の長期連続照射

スの背部皮下に移植し腫瘤の形成を観察したところ、 が腫瘍に対する生体の応答に及ぼす影響にケモカイ
ケモカインリガンド遺伝子の発現が抑制されていなンシステムの関与が示唆されたことから、今後、低い細胞（Ccl8 が正常な OV3121）を移植した場合と線量率放射線が生体に及ぼす影響を媒介する因子と比べて、有意な生着率の亢進が観察された。

してケモカインシステムに注目した解析をすすめる

これまでの結果から、低線量率（20 mGy/22 時間/計画である。

日）γ 線連続照射マウスの免疫細胞ではケモカイン

Relative expressions compared with control

レセプターCcr5 遺伝子の発現が顕著に低下するこ

Fig. 121.510.5**

**
**

**

0

Relative expressions of chemokine receptors in irradiated mice compared with non-irradiatedcontrol mice. RNAs were purified from peripheral blood cells of mice. Expressions were
measured using real time quantitative RT-PCR. Error bars indicate mean ± S.D. **P<0.01.

- 45 -60

40

200010203040

5060

70Days after inoculation

Fig. 2Comparison of tumor

100

300
250
200
150
100
500A
Fig. 3

No. of palpable tumor-bearing mice (%)

80350

Ccl8-2-4
Ccl8-NCOV3121

Ccl8 concentrations in culture supernatant (pg/ml)

No. of palpable tumor-bearing mice (%)

1008060402000B20406080Days after inoculation

Down-regulation of Ccl8 in OV3121 cells.

transplantability. 5.0 x 105

A, SureSilencing shRNA Plasmid for Mouse CCL8 was

OV3121 cells were inoculated into

introduced into OV3121 cells. Concentrations of Ccl8 inmice with high expression of Ccr5

culture supernatant were measured using ELISA. B, 1.0(〇) and mice with low expression

x 105 of Ccl8-2-4 cells (▲) and Ccl8-NC cells (〇) wereof Ccr5 (▲). The number ofinoculated into mice. The number of tumor-bearing mice,tumor-bearing mice, wherein awherein a palpable tumor was detected was counted topalpable tumor was detected, wasassess transplanted tumor formation.

counted to assess transplanted
tumor formation.

- 46 -