DG2020-45
バイオマーカー定量のバリデーション～Context of useを踏まえたバリデーション～

DG2020-45

Validation of Biomarker Quantification in Japan- Context of use for a biomarker assay validation-

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum1

Japan Bioanalysis Forum

Name

Company Harue Igarashi

GlaxoSmithKline K. K.

 Tatsuya Ikehara

SHIONOGI & CO., LTD.

 Kaori Ohka

Sumika Chemical Analysis Service, Ltd.

 Kazufumi Kawano

Toray Research Center, Inc.

 Yuki TayaJapan Tobacco Inc.

 Sachiko Tosa

CMIC Pharma Science Co., Ltd.

 Hisao Nagaya

FBRI (Former: CMIC Pharma Science Co., Ltd.) Yoshitaka Hashimoto

ONO Pharmaceutical Co., Ltd.

 Makoto Yamazaki

Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation※ ご質問、ご意見はメール（yos.hashimoto@ono.co.jp）でお願いいたします。

12th JBF Symposium, DG2020-45

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DG2020-45 Members

（順不同）

2

Japan Bioanalysis Forum

Contents• ”Context of Use"の理解度に関するアンケート• COUの適切な理解と運用• Points to Consider Documentについて• DG2020-45からの提言

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/• DG活動の背景

3

DG活動の背景

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum

12th JBF Symposium, DG2020-45

4Japan Bioanalysis Forum

DG活動の背景
JBFのDGで、2019年度より『バイオマーカー（BM）定量の

DG2019-44の活動の結果、『日本国内におけるBM分析法
Validationの実施状況』及び『BM研究の体制』の状況を把握し、課題として 『COUの適切な理解と運用の必要性とその体制の構築』を挙げた。

http://bioanalysisforum.jp/

バリデーション』に関して討議している。

DG2020-45では、『 COUの適切な理解と運用』をテーマに活動した。
12th JBF Symposium, DG2020-45

5Japan Bioanalysis Forum

背景：2019年度の活動の振り返りするアンケートを実施した結果をもとに議論をした。

http://bioanalysisforum.jp/

2019年度：

12th JBF Symposium, DG2020-45

6

DGメンバーを対象に『日本国内におけるBM分析法
Validationの実施状況』及び『BM研究の体制』に関Japan Bioanalysis Forum

DG2019-44の成果：BM研究の体制について
PK/TK

関わる組織・担当者

両者を兼ねることが多い（特にMS、LBA）
少ない（動態、安全性）

多い（動態、安全性、薬理、TR、開発など）

目的

承認申請

多様（探索項目～申請）

データの評価・解析

明確

多様

バリデーション項目・基準

ガイドラインに規定

多様?（FFP)

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Bioanalysis担当者

BM

PK/TK分析に比べ、多くのメンバーとの活動
PK/TKが画一的な取り組みであるのに対して、BMは多様BM研究の体制に課題があると感じている方が多数であった。
12th JBF Symposium, DG2020-45

7Japan Bioanalysis Forum

DG2019-44の成果：BM研究におけるBAの現状
COU!

COU1?

CPU1?

COU2

BM

理解不足

コミュニケーション不足

PKではこうやっている！、GXP!、BMV Guideline!
Validation!

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COU1

組織横断的活動～製薬企業内～～製薬企業とCRO～

柔軟性に欠け、保守的な対応

12th JBF Symposium, DG2020-45

8Japan Bioanalysis Forum

DG2019-44の成果：DGからの提言＜バイオアナリストとして達成したい状態は＞BM研究に携わるメンバー内でBMの用途や解析・解釈の方針が合意され明確になっている。
•

それをふまえて分析法の要件やバリデーション項目を設定し、BM研究に携わるメンバーに合意されている。

→すなわち、『COUの適切な理解と運用』ができている状態
理想の達成に向けて、必要なことは•

http://bioanalysisforum.jp/•

組織横断的（例えば、臨床と非臨床、データ取得と解析）に協力体制があり、フランクに議論できる体制・雰囲気の醸成。

→コミュニケーション&コミュニケーション

12th JBF Symposium, DG2020-45

9Japan Bioanalysis Forum

DG2019-44の成果：理想的な状況

組織横断的活動～製薬企業内～～製薬企業とCRO～

FFP！

BM

コミュニケーション上手なBA担当者
CoU!,FFP!,
JBF!,DG!,
MoA,PK/PD,TE
Great Idea!

Appropriate
Validationfor each BM!

http://bioanalysisforum.jp/

COU！

COU!

柔軟性のあるBA担当者

12th JBF Symposium, DG2020-45

10Japan Bioanalysis Forum

背景：2020年の活動について• DG2020-45では『 COUの適切な理解と運用』を具– 日本国内におけるCOUの理解度・浸透度を把握するためにアンケートを実施した。
– COUとは何か、COUを分析法開発やバリデーショ
ンにどのように活用するのか議論を行った。

http://bioanalysisforum.jp/

体化するため、– Points to consider文書を整理しまとめた。
12th JBF Symposium, DG2020-45

11

Japan Bioanalysis Forum

Contextという言葉の定義 = the information thatare related to something and that help you tounderstand it–

ロングマン英英辞典から抜粋（https://www.ldoceonline.com/jp/dictionary/context））

では、BA担当者が『Use (of Biomarker)』を理解したいのはなぜでしょうか？
適切な分析法開発やValidationを行いたい。
COUは、そのための情報である。
12th JBF Symposium, DG2020-45

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背景：BAにとってのCOUとは何だろう？

12

Japan Bioanalysis Forum

背景：Example of COU shown by EBF• To develop and validate an immunoassay①分析プラットフォーム②マトリクス①分析プラットフォーム

levels of analyte C in X population to③分析対象物質④評価対象集団

enable a change of Y% from baseline to⑤データ解析方法・判断基準

allow decision Z.

http://bioanalysisforum.jp/

in matrix A on platform B to evaluate the⑥プロジェクトチームがBMデータから判断・決定したいこと
Ref:https://doi.org/10.4155/bio-2020-0243

DG2020-45では、EBFの提示したCOUを参考にCOUをどのように明確化していくのか、それを分析法開発やバリデーションにどうつなげていくのか討議した。
12th JBF Symposium, DG2020-45

13”Context of Use"の理解度に関するアンケート

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum

14

Japan Bioanalysis Forum

アンケート実施の背景• 日本国内の分析担当者を対象にCOUの理解度、浸透度及び業• 期間：2020年12月16日~29日• 有効回答数– 製薬メーカー：25– CRO：9

http://bioanalysisforum.jp/

務への活用状況を把握するためにアンケートを実施した。

• なお、本アンケートにおいて、『バリデーション』とは、事前に実施項目や判断基準を設定しそれを満たすか否かを確認する試験と定義しております。

12th JBF Symposium, DG2020-45

15

Japan Bioanalysis Forum•

COUに対する認識は人それぞれであった。

•

COUを踏まえ、適切な分析法開発やValidationを行うべきという認識はある。

→ただし、製薬企業において、BA担当者のCOUへの取り組みは盛んとは言えず、分析法開発やバリデーション試験に活用できていない。
→故に、製薬メーカーからCROへの情報提供も不足している。

＜目指すべき姿＞

http://bioanalysisforum.jp/

アンケート結果からの考察• COU＝分析法開発やバリデーションを適切に行うために必要な情報• BA担当者は必要な情報を得るために積極的な活動を行う• CROの担当者にもCOUを伝え、達成すべき分析法のイメージを共有する。
12th JBF Symposium, DG2020-45

16アンケート結果
CoUの認知及び理解度について

12th JBF Symposium, DG2020-45

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Japan Bioanalysis Forum

17

Japan Bioanalysis Forum

CoUの認知度

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Q. バイオマーカー又はバイオマーカーアッセイのためのCoUとはどのようなものですか?（複数選択可）• CoUに対する認識が人それぞれ一致していない。
12th JBF Symposium, DG2020-45

18

Japan Bioanalysis Forum

CoUの認知度

Q.『COUを日本語で表現するとどのようになるでしょうか？』• COU＝『使用目的』というシンプルの回答が大多数。
–

頂いた回答：
バイオマーカーの使用目的、使用目的、使用目的、使用目的、利用状況、使用用途、使用背景、適切な利用、バイオマーカーの特性や使用目的、用途、規定した利用状況、用法設定根拠、
利用の位置づけ・役割・価値、利用の背景と目的：データを活用する上での適用背景に加えて

http://bioanalysisforum.jp/

Q. COUとして必須の要素は何だと思いますか？（複数回答可）

データをどう使うか・どう解釈するか・何を知りたいか等の明確化• COUの認識が人により異なるため、必須と考える要素も異なるようである。
12th JBF Symposium, DG2020-45

19

Japan Bioanalysis Forum

Context = the information that are related tosomething and that help you to understand it–

ロングマン英英辞典から抜粋（https://www.ldoceonline.com/jp/dictionary/context））• そのヒトにとって『BMの用途の理解に役立つ情報』• では、BA担当者は、何故BMの用途を理解したいので

http://bioanalysisforum.jp/

BAにとってのCOUとは何だろう？

しょうか？

12th JBF Symposium, DG2020-45

20Japan Bioanalysis Forum

なぜ、Use of Biomarkerを理解したいのか？

http://bioanalysisforum.jp/

Q. COUを踏まえた分析法開発やバリデーションについて、あなたの考えに近いものを選択してください。（複数回答可）• COUを踏まえて、
適切な分析法開発やValidationを行いたい！
12th JBF Symposium, DG2020-45

21

Japan Bioanalysis Forum

CoU＝適切な分析法開発やValidationを行うための情報とするとhttp://bioanalysisforum.jp/

Q. COUは分析法の開発及びバリデーションパラメータにどのように影響しますか？(複数回答可）• これらすべての項目を適切に設定するための情報＝CoUではないでしょうか？
12th JBF Symposium, DG2020-45

22アンケート結果
BA担当者のCoUへの関与及び運用＆
製薬企業からCROへの情報の共有

12th JBF Symposium, DG2020-45

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Japan Bioanalysis Forum

23

Japan Bioanalysis ForumCoU設定への関与
製薬企業

Q: COUを定めたことがありますか？あるいは
COUを伝えられたことがありますか。

http://bioanalysisforum.jp/

Q: 分析担当者はバイオマーカーアッセイに必要なCOUの決定にどのようにかかわっていますか？最も近いものを選択してください。

CRO• 製薬の分析担当者のCOU設定への寄与が低い（40%弱）。
• CROでは半数以上でCoUが設定されていない
12th JBF Symposium, DG2020-45

24

Japan Bioanalysis Forum

バイオマーカーバリデーションに対する組織の現状
製薬企業

CRO

http://bioanalysisforum.jp/

Q: 分析法開発及びバリデーション実施に関して、あなたの組織の現状に最も近いものを選択してください。

• COUを定義したうえでValidationを実施するケース（製薬：38％、CRO：22％）、分析法開始を実施するケース（製薬：5%、CRO：0%）は少ない。
12th JBF Symposium, DG2020-45

25

Japan Bioanalysis Forum

製薬企業からCROへの情報共有
Q: 委託者からの情報が不足していると思うことはありますか。
http://bioanalysisforum.jp/

Q: バイオマーカーバリデーションを行うために、どのような情報の入手や共有が必要だとおもいますか。（複数回答可）• 製薬企業からCROへの十分な情報共有がされていない
12th JBF Symposium, DG2020-45

26

Japan Bioanalysis Forum

製薬企業からCROへの情報共有における課題
CROの方から寄せられた自由コメント– バリデーションをガイドラインに従った基準で実施するか否か、製薬企業が判断できていなかった。
– 期待される生体反応が開示されなかったため、必要な感度がわからずキットの選定が困難であった。
– COUは伝えられたことがないのでよく分からない。

http://bioanalysisforum.jp/– 測定を重視する物質が打ち合わせの度に変更された。

製薬企業でのCOUの設定・理解が十分でないのではないか。
或いは、COUをCROに伝えていないのではないか。
12th JBF Symposium, DG2020-45

27

COUの適切な理解と運用
メンバーディスカッションの成果

12th JBF Symposium, DG2020-45

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Japan Bioanalysis Forum28

EBFの定義したCOUとその要素

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Japan Bioanalysis Forum

12th JBF Symposium, DG2020-45

29

Japan Bioanalysis Forum• To develop and validate an
immunoassay in matrix A on platform B
to evaluate the levels of free (unbound)analyte C in X population to enable achange of Y% from baseline to allow
decision Z.

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Example of COU shown by EBF

Ref:https://doi.org/10.4155/bio-20200243
12th JBF Symposium, DG2020-45

30

Japan Bioanalysis Forum

•

1層目

•

BMデータから判断・決定したいこと–『治験実施計画書上の分類（規制上の期待）』–データが要求される時期・検体入手からデータアップまでの期間

•

2層目

•

分析技術・プラットフォーム•

評価対象マトリクス•

分析対象物質–標準品–

分析対象物質の既知のリスク•

評価対象集団

•

分析値の評価・解析の仕方

12th JBF Symposium, DG2020-45

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COUの要素は・・・31

Japan Bioanalysis Forum

COUからのつながり
規制当局

BMデータから判断・決定したいこと
治験実施計画書

BM利用ニーズ
レギュラトリニーズ

COUの合意

C-P

分析データ面

分析技術面
分析面の実情実施レベルの提言

分析技術プラットフォーム
評価対象マトリクス

分析担当者(BA)

分析対象物質・標準品

BM評価に関してPT側とBA側のGAPを埋めて合意したCOUを元に策定

項目・クライテリア
選択性・特異性

平行性

真度・精度

安定性

感度

分析計画

治験スケジュール

C-A

データ解析方法
評価対象集団

リアルデータ

V

背景データ
健常者

http://bioanalysisforum.jp/

プロジェクトチーム(PT)患者

分析バリデーション内容
12th JBF Symposium, DG2020-45

32

Japan Bioanalysis Forum

COUからのつながり
ポイント

C-P

プロジェクトチームからの
COU

C-A
C-A

分析担当者から C-A1:分析技術プラットフォームのCOU
C-A2:評価対象マトリクス
C-A3:分析対象物質・標準品
C-A4:データ解析方法
C-A5:評価対象集団

V
V

COUを考慮した V1:選択性・特異性
バリデーション V2:平行性・直線性
項目
V3:感度
V4:真度・精度
V5:安定性V6:背景データ

C-P

C-P1:BMデータから判断・決定したいこと
C-P2:治験実施計画書
C-P3:治験スケジュール

12th JBF Symposium, DG2020-45

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ラベル 項目33

Japan Bioanalysis Forum

BM試験骨子のPTとの合意形成

申請に活用，または

意思決定レベル

治験計画上の分類
規制区分上の分類

その可能性あり

主要

副次的

規制内

探索的

探索・基礎

社内判断

研究

探索的

探索的

規制外

http://bioanalysisforum.jp/

BMデータから判断、決定したいこと

BMの活用方法

BM測定試験の信頼性要求レベルのPT合意
治験実施計画書，治験スケジュールへの反映
12th JBF Symposium, DG2020-45

34

Japan Bioanalysis Forum

合意形成のポイント：分析技術面
PTからの情報

分析技術・•分析対象の種類
プラットフォーム •BMの挙動/予想濃度
分析対象物質・標準品

分析対象
マトリックス

•BM選定の根拠•BMのBiology•測定値のアウトプッ
ト•BM選定の根拠•BMのBiology•添加剤，併用薬

分析の留意点•文献情報/キットの有無•必要感度を満たす技術•実試料中のBM変動を反映できること•検量線の要否•標準品・代替標準品の有無•実試料中のBM変動を測定できるマトリックス•安定性•入手可否、代替マトリックスの利用

12th JBF Symposium, DG2020-45

バリデーション
項目
分析法の決定
濃度範囲
平行性
直線性

平行性
選択性
特異性
安定性

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

35

Japan Bioanalysis Forum

合意形成のポイント：分析データ面
PTからの情報•統計解析手法•分析値の利用方法
データ解析方法•他試験との比較の有
無評価対象集団•疾患や治療・病状の程度•年齢・性別・人種等
背景情報分析の留意点バリデーション
項目

感度•ニーズに応じた感
真度
度・真度・精度・精度
希釈倍率の設定
平行性•文献またはバイオバンク等の試料か
背景データ
らの情報収集（健常者、患者）•健常人との違いを考慮

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

36

COU合意形成の詳細

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum

12th JBF Symposium, DG2020-45

37

Japan Bioanalysis Forum

C-P1『BMデータから判断・決定したいこと』PTからの情報：• 用量設定，薬効・安全性モニタリング，疾患マーカー，患者層別化・除外基準・コンパニオン診断，仮説検証，基礎研究，意思決定なし，等• 意思決定レベル• 当局に提出．または，提出する可能性あり．
• 社内判断• 基礎研究http://bioanalysisforum.jp/• 意思決定の目的• 目的を達成するためのマーカーの選定• マーカー候補としての科学的根拠，変動幅，変動方向，等12th JBF Symposium, DG2020-45

38

Japan Bioanalysis Forum

C-P2『治験実施計画書上の分類（規制上の期待）』PTからの情報：• 主要評価項目：当局から認定されたマーカーや診断マーカーが該当すると考えられる。
• 副次的評価項目：主要評価項目を補足する項目，もしくは，主要評価項目とは異なる観点から有効性を評価する項目• 探索的評価項目：バイオマーカーとして新たな可能性を検証するための項目

http://bioanalysisforum.jp/• 評価項目上の分類• データの活用先：申請資料に使用有無，CSR掲載有無，参考
データ扱い
12th JBF Symposium, DG2020-45

39

Japan Bioanalysis Forum

C-P3『データが要求される時期・検体入手からデータアップまでの期間』• 治験計画（リクルート開始～初回投薬～サンプリング回
数～最終投薬等の検体が発生するスケジュール），計画から逆算したバリデーション完了時期• データ要求時期（採取毎か，コホート毎か，一括か？）• 治験サイトのラボマニュアル（サンプリング～保管条件～検体送付計画，検体送付時の手続き期間）

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

PTからの情報：40

Japan Bioanalysis Forum

C-A1『分析技術・プラットフォーム』
PTからの情報• 分析対象物質（タンパク（Subclassなど），ペプチド，低分子）• 予想濃度BAが考慮すべきこと• 分析対象物質，分析対象数，必要とされる定量下限・定量範囲を満たせる分析技術を選択• 期待するBMの変化が報告されている分析技術・プラットフォームを選択するのが望ましい• LBAの場合：市販キットの場合は，再現性が高い製品を選択する。適切な製品が無ければ自社開発する• MSの場合：文献情報を参考にしつつ，分析対象の化学的特徴を考慮し測定法を設定する

http://bioanalysisforum.jp/• BMの挙動（主にBMの上昇or減少するか）

Validation項目:分析法の決定，濃度範囲
12th JBF Symposium, DG2020-45

41

Japan Bioanalysis Forum

C-A2『分析対象物質・標準品』
PTからの情報• Biology（分析対象物質の体内での状態、正式名称、類似物質やバリアント、など）• 分析対象物質の数• 測定値のアウトプット：定量、相対比較、定性
BAが考慮すべきこと• 実試料中のBM変動を把握できる分析法• 検量線の要否• 標準品、内標準物質の必要性と入手可否

12th JBF Symposium, DG2020-45

Validation項目:
平行性
直線性

http://bioanalysisforum.jp/• BM選定の根拠（論文情報のみか、報告数、作者など）

42

Japan Bioanalysis Forum

C-A2『分析対象物質・標準品』
BAが考慮すべきこと• 内在濃度よりも低濃度域の信頼性担保の検討• 代替マトリックスとの組み合わせ• 内因性を代替する適切な標準品がある• 代替標準品の妥当性評価．
• 内因性の変化を反映しない，または代替性を証明できない．
• 標準品のうち，リコンビナントタンパクでは，内在濃度を反映しないこともあることを注意．

http://bioanalysisforum.jp/• 標準品そのものがある• 代替性を証明できない中で社内判断可能と考えられる分析法の設定．
• 検量線を作成しない内標準との比で算出

12th JBF Symposium, DG2020-45

Validation項目:
平行性43Japan Bioanalysis Forum

C-A3 『分析対象マトリクス』
PTからの情報• BM選定の根拠（論文情報のみか、報告数、作者など）• Biology（分析対象物質の体内での状態、健常人、病態、年齢、性別、食事、薬etc.

BM評価への影響があ• マトリックスの種類（血漿、血清、尿、CSF、組織等）、添加剤、抗凝固剤、併用薬
BAが考慮すべきこと• 実試料中のBM変動を測定可能なマトリックスか• 代替マトリックスを使用するか• 標的分析対象物を除去した生体マトリクスや生物学的対照マトリクスを組成的に模した化学合成混合物までさまざま。評価対象集団と同一または近似のマトリクスを準備するのがベター。
• バリデーションに用いるマトリックスが入手可能か（購入、自社バンキング、Biobank、共同研究、etc）• 入手時期• 入手可能なマトリックスはBM評価の代表的なマトリックスとなりうるか。
• 採取方法、採取量、採取から保存までの時間、保存温度、輸送温度、容器も含め12th JBF Symposium, DG2020-45

Validation項目:
平行性
選択性
特異性
安定性

http://bioanalysisforum.jp/

るか、など）

44

Japan Bioanalysis Forum

C-A4 『データ解析方法』
BAからPTへの確認• 試験内で完結するか、他試験との比較をするか。

• 期待するデータ変動（個体ごとのPre/Postの変動率, Placeboとの比較，など）• 分析値がいつまでに必要か（中間解析の有無など）• 統計解析の手法
BAが考慮すべきこと• 個体差、試料中の妨害物質の有無と程度• BMの変動を評価する場合：期待する変化率を踏まえてそれを検出可能な希釈範囲・真度・精度を設定する。
• 定量値が基準値を超えるか否か、もしくは定量値によって層別したい場合：検出したい差異と基準値

http://bioanalysisforum.jp/• 分析値をどのように利用するか（定量値が必要か、定性的な判断か）あるいは個体間変動をもとに希釈倍率・感度・真度・精度を設定する。

Validation項目:感度，真度，精度，平行性
12th JBF Symposium, DG2020-45

45

Japan Bioanalysis Forum

C-A5 『評価対象集団』
BAからPTへの確認• 評価対象集団の情報（疾患，治療・病状の程度，様々な背景情報：年齢層，人種，性別など）状態や治療による変動）の有無
BAが考慮すべきこと• 既知の定量データ（基準値・個体内/個体間変動など）は目標感度や精度を設定する上で有用だが過信は禁物• 特に分析技術・プラットフォームが異なる場合，評価対象集団の背景情報が不十分な場
合は注意が必要

http://bioanalysisforum.jp/• 評価対象集団における分析対象物質の定量データ（基準値、個体間、個体内変動、疾患の• 評価対象集団の差異を把握するために必要な背景情報が十分揃っているかを確認する。

Validation項目:背景データの取得
12th JBF Symposium, DG2020-45

46

COUからバリデーションへのつながり

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum

47

Japan Bioanalysis Forum

V-1

選択性

【目的】対象マトリックス中に存在が予想される妨害物質又は構造的に関連しない成分の存在下で分析対象物質を正確に測定できるかきな差が無いようであれば健常人で可）し、入手可能な複数個人のマトリックスを使用する。
個々の試料に含まれる分析対象物質を測定し，また、個々の試料から調製した低濃度QC及び高濃度QCを測定し、真度による評価を行う。
【例数】各群10例（少なくとも3例）：内因性濃度から評価可能な個体を選択。
【判定基準・考え方】①計算式：真度=(測定値-理論値)/理論値 × 100

http://bioanalysisforum.jp/【方法】健常人及び対象被験者集団など個体差等を考慮（健常人と被験者集団で大②判定基準は分析対象物質の変動幅を検出できるなど評価目的により定める。
③必要に応じin studyにおける被験者サンプルでも評価する。
12th JBF Symposium, DG2020-45

48

Japan Bioanalysis Forum

V-1

特異性

【目的】LBAにおいて，分析対象物質と構造的に類似した物【方法】生体マトリックス，もしくは代替マトリックスに類縁物質を添加し、測定対象物質への影響度を評価する。
【例数】少なくとも3例：類縁物質の添加濃度は、生体内の存在量を考慮して設定する。
【判定基準・考え方】

http://bioanalysisforum.jp/

質と識別して検出できるか①判定基準は分析対象物質と類縁物質の存在比に応じて適宜設定する。
12th JBF Symposium, DG2020-45

49

Japan Bioanalysis Forum

V-2 平行性【目的】実試料を正しく測定できるように，適切な希釈範囲を設定する【方法】高濃度の分析対象物質を含む検体を段階希釈し分析する【希釈範囲の選択方法】①BMの定量値が判断基準となる場合：定量可能（真度・精度共に許容範囲）な希釈範囲②BMの変化率が判断基準となる場合：求められる変化率を検出可能な希釈範囲（シグナルが低すぎない程度に設定）③BMによる判断基準が不明確な場合：分析測定範囲全体及び/又は試料の予想濃度範囲全体を網羅し，少なくとも4回の段階希釈を実施（可能であれば6~10回の希釈）【補足】・高濃度の検体を入手できない場合は実試験の中で平行性を確認するケースもある。

http://bioanalysisforum.jp/【例数】6例以上が望ましい（個体間差が大きい場合は例数を追加）

また，COUによってはリコンビナント添加等で高濃度試料を調製して平行性を実施しなくても良い場合もある。
・選択性の評価の中で，個体別マトリクスの取捨選択のために10例以上測定，段階希釈できそうな試料を6例選択し，平行性を実施
12th JBF Symposium, DG2020-45

50

Japan Bioanalysis Forum

V-2

直線性

【目的】分析対象物質の定量範囲を決定する。
しくは代替マトリックスを選択する。複数濃度の標準物質を添加して添加濃度とレスポンスの直線性を確認する。代替マ
トリックスを使用する場合は平行性の確認は必須とする。
【例数】１例以上。
【判定基準・考え方】

http://bioanalysisforum.jp/【方法】実試料を安定して定量できる生体マトリックス，も①各濃度における逆回帰値の真度を求め、評価目的に応じて判定基準を設定する。
12th JBF Symposium, DG2020-45

51

Japan Bioanalysis Forum

V-3 感度【目的】分析対象物質の濃度や変動を適切に検出できるような測定法を設定する【方法】①健常人及び患者由来試料を入手し濃度を確認する【例数】6例以上が望ましい【判定基準・考え方】①健常人及び患者試料中濃度の分布と最低濃度を把握する②治験薬投与により濃度が低下する場合は，想定される濃度領域を良好な精度で検出できる感度を担保する
・BMの数値が必要な場合：低濃度領域に関して，評価目的に適した真度/精度

http://bioanalysisforum.jp/②治験薬による濃度変動を考慮し，十分な感度を担保するの基準を設定する・BMの変化の傾向や変化率を把握する場合：低濃度領域の測定において，真度/
精度の基準は必ずしも厳しい数値でなくても構わない。また，NDでも可の場合は，想定濃度を全てカバーする定量範囲とする必要が無い時もある。
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52

Japan Bioanalysis ForumV-4 真度・精度【目的】BMの有意な変動を捉えられる測定法を設定する【方法】真度(%)=(測定値-理論値)/理論値×100【例数】LBA：複数濃度を6回繰り返し測定
LC-MS：複数濃度で日内n=5, 日間3バッチ測定
ただし，濃度範囲や目的に応じて設定濃度・n数・回数は減らしても良い【判定基準・考え方】
分析技術を考慮し，評価目的集団におけるBMの変動を検出しうる基準を設定する。
各cohortのn数と検出したいBMの変動幅，分析技術自身のばらつきから，真度・精度を設定するのが理想である。

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http://bioanalysisforum.jp/

精度(%)=測定値誤差/測定値平均×100

53

Japan Bioanalysis Forum

V-5 安定性【目的】実試料の取り扱い条件を設定する。
【方法】評価項目：凍結融解、ベンチトップ、長期保管安定性
安定性試料：実検体を使用，高濃度試料は分析対象物質の標品を添加して調製。標品が無い場合は代替物質（リコンビ【判定基準・考え方】N=3以上（分析方法のバラつきを考慮して設定する）の平均値を用いて評価する。


添加試料を用いる場合、添加濃度からの変動率が分析方法の仕様の範囲内であること。



実検体を用いる場合、初期測定値からの変動率がBMの評価目的を達成可能な範囲内であること。

【注意点】
•

実検体を用いて全条件を検討できない場合でも、安定性の傾向をつかむために凍結融解、ベンチトップなどは実施するのが望ましい。

••

以下のリスクについてデータ使用者と合意すべきである–

実検体のすべての取り扱い条件を保証可能な安定性情報が得られない場合の対応–

リコンビナントを用いた安定性の評価結果は、実検体の安定性を反映しない可能性がある。

http://bioanalysisforum.jp/

ナントなど）を添加。1~3濃度を設定（評価するBMの濃度範囲をできるだけ広く網羅できるように設定）

安定性情報が事前に得られない場合は、–凍結融解を避けるよう分注本数を増やし、できるだけ低温で保管する。

–

リスクの許容度によって、分析時期を設定する。
例）採取後速やかに分析を行う。/検体採取から分析までの期間を一定にする（ただし、バッチ間差が小さい場合に限る。）/全検体を集積後まとめて分析をする。

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54

Japan Bioanalysis Forum

V-6

背景データ

【目的】健常者，患者における濃度差の確認(求められる測定レンジの設定，治療効果による変動幅の推定)（検体購入に際して想定患者層の臨床スコアの指定が必要）【例数】健常者，患者共に10以上(入手しやすい疾患・検体種に依存，入手できないケースあり）【判定基準・考え方】①想定変動(疾患で増減・治療で増減）情報を既報から把握してまずは条件設定②選択性項目にて各症例濃度を確認し，幅が大きい場合は低高濃度でのQC(内在濃度QC)を設定

http://bioanalysisforum.jp/【方法】バリデーション時に市販検体を用いて確認③高濃度を把握してパラレリズム条件を設定④検体入手が難しい場合は添加試料調製も考慮（LBAの場合はリコンビナント-内在の反応性違いがあることあり）
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55

テストケース

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum

12th JBF Symposium, DG2020-45

56

Japan Bioanalysis Forum

テストケース

ケース

目的

規制区分

測定対象

1
2
3
4

社内判断
探索研究
申請用
社内判断

探索-規制外低分子
探索-規制外低分子
副次項目-規制内 タンパク質探索-規制外
タンパク質

測定方法

実施場所

LC-MS/MS
LC-MS/MS
LBA
LBA

自社
自社
委託
委託

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

COUの3段階の考え方に従って、プロジェクトチームからの要望を測定法
バリデーションに落とし込んでみた。

57

Japan Bioanalysis Forum

Case. 1

プロジェクトチームからのリクエスト＜プロジェクトチームからのリクエスト&情報＞
る脂質 Bを測ってほしい。
• 投与前濃度と薬効との相関、投与による減少の有無を確認し、患者層別化の可能性を確認したい。
• マーカーの有用性についての社内判断に用いる。
• 社内研究により見いだされた分子であり、論文情報に乏しい

http://bioanalysisforum.jp/• 第二相試験にて疾患Aの患者血漿で上昇することが期待され。
12th JBF Symposium, DG2020-45

58

Japan Bioanalysis Forum

Case. 1

BM試験骨子のPTとの合意形成

申請に活用，または

意思決定レベル

治験計画上の分類
規制区分上の分類

その可能性あり

主要

副次的

規制内

探索的

社内判断

探索・基礎
研究

探索的

探索的

規制外

http://bioanalysisforum.jp/

新規マーカーの患者層別化の可能性判断

BMの活用方法

分析信頼性要求レベル：結果の判断に影響が無い程度の分析信頼性があればよい。

スケジュール：検体がある程度まとまった段階で測定。それまでに必要な分析法を確保しておく。評価は長期に及ぶ可能性。
12th JBF Symposium, DG2020-45

59

Japan Bioanalysis Forum

Case. 1

合意形成のポイント：分析技術面
PTからの情報

分析の留意点•LC/MS法一択
分析技術・
•脂質B
•必要感度を満たす測定
プラットフォーム •BMの挙動は不明
条件•非臨床データによる •実試料中のBM変動をBM選定の妥当性反映できること
分析対象物質・•ヒトでの挙動は不明 •検量線が必要
標準品•測定値は定量的な指 •標品は確保可能だが、標が必要
安定同位体は入手不可•患者血漿•非臨床モデルでの変•ヒト血漿中安定性
分析対象
動はあまり大きくない•血漿は入手可能。代替
マトリックス•ヒトでの挙動は不明
マトリックスを利用す•添加剤，併用薬なし
る。

12th JBF Symposium, DG2020-45

バリデーション
項目
分析法の決定
濃度範囲
平行性
直線性
平行性
選択性
特異性
安定性

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

60

Japan Bioanalysis Forum

Case. 1

合意形成のポイント：分析データ面
PTからの情報•薬効との相関解析、群間の有意差検定やデータ解析方法 ROC解析を実施。
•他試験と比較する可能性あり
評価対象集団•疾患や治療・病状の程度•年齢・性別・人種等
背景情報分析の留意点バリデーション
項目•変動幅が不明であ感度るため、精密な定真度
量は求めないが、精度
再現性は重視した
日内/日間再現性い。
•患者検体を入手し、濃度幅を検討
背景データ•健常人値と日内変（健常者、患者）動や食事の影響を考慮

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

61

Japan Bioanalysis Forum

Case. 1

COUからバリデーションへのつながり

平行性

実施しない

感度

健常人、患者血漿を用い、必要な濃度範囲の確認。
代替マトリックスの妥当性検証。
健常人プール血漿に1濃度添加し、真度精度を確認。簡易的な日間再現性も取得。判定基準は20%とする。

真度・精度

安定性

健常人血漿を用いたベンチトップの安定性を確認。長期安定性用サンプルを仕込んでおき、必要に応じて適宜確認。

背景データ

健常人検体を用いて日内、日間変動、食事の影響を確認する。

12th JBF Symposium, DG2020-45

設定の背景
健常人と患者で大きく選択性は変わらないことが想定されるため、健常人プール血漿で代用。
ーhttp://bioanalysisforum.jp/

選択性バリデーション
3ロットの健常人プール血漿を使用し、添加濃度は1濃度。必要に応じて、MS条件（MRM or HRMS）、LC条件を最適化。

変動幅を考慮した濃度範囲設
定想定される濃度範囲がそれほど広くないため、1濃度で十分とした。複数回の評価に渡るため、日間再現性は確認する。
非臨床データでも安定性に問題がなく、ベンチトップの安定性の結果でリスク判定できると判断

脂質は変動要因のリスクがあるため、背景情報を得ておく。
62

Japan Bioanalysis Forum

Case. 2

プロジェクトチームからのリクエスト＜プロジェクトチームからのリクエスト&情報＞
化合物Aを測定したい。
• 治験薬投与により，Aの濃度は上昇すると考えられる。
• 目的は基礎研究で，別のプロジェクトでもデータを取得し，毒性マーカーとしての有用性を検証する。
• 論文情報によるとAはLC-ESI-MS/MSで測定されている。

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/• 第一相試験にて，ある毒性リスクをモニターするため低分子

63

Japan Bioanalysis Forum

Case. 2

BM試験骨子のPTとの合意形成
毒性所見のモニターが可能かを検証
申請に活用，または

意思決定レベル

治験計画上の分類
規制区分上の分類

その可能性あり

主要

副次的

探索的

規制内

社内判断

探索・基礎
研究

探索的

探索的

規制外

分析信頼性要求レベル：基礎研究だが，プロジェクト横断的にデータを取得する必要があり，将来的に毒性リスク判断の基準を設ける可能性があるため，再現性の高い分析法が必要

http://bioanalysisforum.jp/

BMの活用方法

治験実施計画書：探索的に内因性代謝物を測定する可能性があることを記載
スケジュール：第一相試験終了後に測定12th JBF Symposium, DG2020-45

64

Japan Bioanalysis Forum

Case. 2

合意形成のポイント：分析技術面
PTからの情報•低分子化合物A
分析技術・•治験薬投与により濃プラットフォーム
度は上昇
分析対象物質・標準品

分析対象
マトリックス

分析の留意点バリデーション
項目•文献情報を参考に
LC/MS測定法を設定
分析法の決定•内因性濃度が低いため 濃度範囲
高感度分析が必要•毒性所見と化合物A•検量線は作成するの関連を報告する文献•文献に記載されているが多数メーカーから標準品を•治験薬投与前後で経購入
時的に濃度を取得•安定性が悪いという報•PhIで血漿中濃度を告あり
測定•社内ボランティア血漿•抗凝固剤はEDTA
を使用

12th JBF Symposium, DG2020-45

平行性
直線性
平行性
選択性
特異性
安定性

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

65

Japan Bioanalysis Forum

Case. 2

合意形成のポイント：分析データ面
PJからの情報

分析の留意点•治験薬投与前と投与 •他試験と比較する
後におけるAの濃度推 ため，ある程度の移を比較
真度・精度は必要
データ解析方法•複数の臨床試験で取 •濃度が低いため試得したデータを比較し 料の希釈は不要，
考察予定
感度は必要
•文献で濃度範囲を•健常人
確認
評価対象集団 •一般的なPhIのリク •PhIのみで測定す
ルート条件
るため健常人のマトリックスを使用

12th JBF Symposium, DG2020-45

バリデーション
項目
感度
真度
精度
平行性

背景データ
（健常者、患者）

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

66

Japan Bioanalysis Forum

Case. 2

COUからバリデーションへのつながり

平行性
感度
真度・精度

安定性
背景データ

実施しない
健常人の個体別血漿を用い、必要な濃度範囲を確認。

ー
変動幅を考慮して濃度範囲を設定。
LLOQは最も濃度が低い試料濃度の約1/4に設定。
代替マトリックスは4濃度，健常人プー LLQCは代替マトリックスのみで調製。実測は複数バッチに渡るため、
ル血漿は3濃度のQC試料を調製し、真血漿試料は日間再現性を確認。想定度・精度を確認。血漿試料は日間再現されるBMの変動率と分析の難易度性も取得。判定基準は20%（LLOQは25％）とした。
を考慮し基準を設定。
健常人血漿及び代替マトリックスを用
文献情報で安定性に懸念があったた
いた短期及び長期保存安定性を実施。
め，実測前にしっかり安定性データを取得した
社内ボランティアによる健常人血漿で文献情報をある程度信用し，事前の個体間差を確認。日内、日間変動、人確認は個体間差のみとした。ただ，実測定の際はプラセボ試料も測定し種差は文献情報で確認。食事の影響はて自社でデータを取得した。
不明。
12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

選択性バリデーション
設定の背景
6ロットの健常人個体別血漿を使用。異 測定はPhIのみのため健常人の試料性体と分離できるLC条件を設定。
を使用。

67

Japan Bioanalysis Forum

Case. 3

プロジェクトチームからのリクエスト＜プロジェクトチームからのリクエスト&情報＞
る変動を知りたい。
• 治験薬投与により，Aの濃度は低下すると考えられる。
• 目的は探索だが，PKPDとしての用量設定に使用する可能性がある。
• 非臨床試験では評価実績があるが，ヒトにおいては論文含め

http://bioanalysisforum.jp/• 第一相試験にて，標的組織における標的分子の薬剤投与によて情報がほとんどない。
12th JBF Symposium, DG2020-45

68

Japan Bioanalysis Forum

Case. 3

BM試験骨子のPTとの合意形成

申請に活用，または

意思決定レベル

治験計画上の分類
規制区分上の分類

その可能性あり

主要

副次的

規制内

探索的

探索・基礎

社内判断

研究

探索的

探索的

規制外

http://bioanalysisforum.jp/

標的組織における標的分子を知りPKPD利用可能性

BMの活用方法

分析信頼性要求レベル：次治験における用量設定根拠データになる可能性があるた
め，当局説明が可能なレベルの信頼性が必要
治験実施計画書：Secondaryとして評価項目に記載
スケジュール：CSR記載に間に合うように試験完了
12th JBF Symposium, DG2020-45

69

Japan Bioanalysis Forum

Case. 3

合意形成のポイント：分析技術面
PTからの情報•標的タンパク質A
分析技術・•治験薬投与により濃プラットフォーム
度は低下
分析対象物質・標準品
分析対象
マトリックス•非臨床では薬剤投与による低下を確認•非臨床での濃度レベ
ルはデータあり•生検を計画分析の留意点•ELISAキットは市販されている•ELISAキットのスペッ
ク情報あり

バリデーション
項目
分析法の決定濃度範囲•検量線は作成する
平行性•標的組織中濃度は検討
直線性確認する必要あり•標的組織入手方法•健常者での発現有無•研究倫理対応

12th JBF Symposium, DG2020-45

平行性
選択性
特異性
安定性

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

70

Japan Bioanalysis Forum

Case. 3

合意形成のポイント：分析データ面
PJからの情報•治験薬投与前後の濃データ解析方法 度推移を比較•治験薬用量依存性

評価対象集団•健常人

分析の留意点•真度・精度はLBA
ガイドラインを前提に内在濃度レベルを考慮して決定•薬理作用による低下時に濃度検出できるかどうか•バリデーション試
験前に濃度確認検体試験を実施•P2以降も考慮して患者試料データ
も取得確認

12th JBF Symposium, DG2020-45

バリデーション
項目
感度
真度
精度
日内/日間再現性

背景データ（健常者、患者）

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

71

Case. 3

Japan Bioanalysis Forum

COUからバリデーションへのつながり

平行性

感度
真度・精度
安定性
背景データ

http://bioanalysisforum.jp/

選択性バリデーション
設定の背景
事前に健常者，患者試料にて内在組織濃度 事前に健常者，患者を事前にを確認し，使用試料を決定．
各10症例内在濃度を確認．
6試料（両性各n=3)を使用し、添加濃度は内在濃度を考慮して2濃度設定。
高値の内在濃度が確認された6試料（両性
内在濃度が高値であれば，そ
各n=3)を利用して5段階希釈を設定（内在 のまま利用することが望まし濃度が低い場合はリコンビナント標品を添 い．
加）
ELISAキットスペックに準ずる，平行性確 ELISAキットスペック通りか
認時に検出できることが前提．
どうか．
代替マトリクスでLLOQと3濃度及び内在濃 薬剤投与により低下するため，度が確認された6試料（両性各n=3)を利用．代替マトリクスでは実濃度よりも低い範囲を担保．
内在濃度が確認できた試料（両性n=1）で 実際は凍結組織試料保管だが，実施．
ホモジネートを使用．
健常者と患者を事前確認し，可能であれば P2以降も同バリデーションを両者を用いる．
利用することを想定し，患者データも取得．
12th JBF Symposium, DG2020-45

72

Japan Bioanalysis Forum

Case. 3

バリデーション実施に向けて＜分析担当者からＣＲＯ委託に際して伝えること＞• ヒト組織試料利用実績がないことを伝える。
• 検討試験を準備し，複数キットのフィージビリティとヒト組
織中濃度検出確認を行い，バリデーション試験実施可否を含めた計画を立てる。
• バリデーション試験項目の実施基準を伝える。

http://bioanalysisforum.jp/• 市販ELISAキット情報を提供，CROでも調査を依頼。

• 検討試験-バリデーション試験のスケジューリングをし，治験実施計画に間に合うように調整する。
12th JBF Symposium, DG2020-45

73

Japan Bioanalysis Forum

Case. 4

プロジェクトチームからのリクエスト＜プロジェクトチームからのリクエスト&情報＞
第一相試験にて，開発品候補の薬剤投与による標的分子タンパクAの変動メ
カニズムを血中で確認したい．
•

標的分子は組織中に特異的に発現する分子であり，血中には極微量にしか存在しないと想定．タンパクAもしくは，一部成熟体となったタンパクBとして血中に存在する•

生検は倫理的に難しい．

•

目的は作用機序確認を血中でできるかどうかの社内可否判断．

•

非臨床試験ではマウス用の良い抗体が存在しなかったため，血中での検出

http://bioanalysisforum.jp/•

はできなかった．
•

超高感度なLBAを強みにしているC社がCRO候補として挙がっている．
12th JBF Symposium, DG2020-45

74

Japan Bioanalysis Forum

Case. 4

BM試験骨子のPTとの合意形成

申請に活用，または

意思決定レベル

治験計画上の分類
規制区分上の分類

その可能性あり

主要

副次的

規制内

探索的

社内判断

探索・基礎
研究

探索的

探索的

規制外

http://bioanalysisforum.jp/

作用メカニズムの血中での確認可否判断

BMの活用方法

分析信頼性要求レベル：非常に高感度な測定法が要求され，検出の難易度が高いため，相応の定量性があれば十分．
治験実施計画書：探索的な項目として記載．CSRには記載しない．
スケジュール：治験とは別試験として，全検体収集後に測定．
12th JBF Symposium, DG2020-45

75

Japan Bioanalysis Forum

Case. 4

合意形成のポイント：分析技術面

分析技術・
プラット
フォーム

分析対象物
質・
標準品

PTからの情報•タンパクA（前駆体），
B（成熟体）はごく微量である•測定法は感度を重視•高感度測定技術に定評のあるC社が委託先として有望•分子メカニズムとして薬剤投与により上昇することを想定•非臨床での濃度レベル
データなし

分析の留意点バリデーション
項目•C社がタンパクA, Bの高感度測定法をバリデーショ
分析法の決定ン済みかどうか．
濃度範囲
・C社がタンパクA, Bの特
特異性
異的アッセイ法（抗体）を保有しているかどうか•検量線はA, B共に作成す
る

平行性
直線性

•健常人血漿を評価する． •健常者でのタンパクA, B
分析対象•EDTA血漿の想定濃度域の推定．
マトリックス•安定性情報の確認

平行性
選択性
特異性
安定性

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

考慮する
ポイント

76

Japan Bioanalysis Forum

Case. 4

考慮する
ポイント

分析の留意点バリデーション
項目•治験薬投与前後の濃データ解析方法 度推移を比較•治験薬用量依存性•真度・精度はLBA
ガイドラインを前提に内在濃度レベルを考慮して決定

感度
真度
精度
日内/日間再現性

評価対象集団•バリデーション試
験前に濃度確認検体試験を実施
背景データ•P2以降も考慮し（健常者、患者）て患者試料データ
も取得確認

PJからの情報•健常人

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

合意形成のポイント：分析データ面

77

Case. 4

Japan Bioanalysis Forum

COUからバリデーションへのつながり

特異性
平行性
感度
真度・精度
安定性
背景データ

http://bioanalysisforum.jp/

選択性バリデーション
設定の背景
事前に健常者の血中濃度を確認し，使用試 事前に健常者10症例以上を確料を決定
認．
6試料を使用し、添加濃度は内在濃度を考慮して1濃度設定。
高濃度のタンパクA(B)を添加し，タンパク タンパクAとBがお互いの定B(A)の検量線で定量した時の交叉性を確認．量に与える影響を精査．
高値の内在濃度試料があれば，そちらを利 内在濃度が高値であれば，そ用して5段階を設定（内在濃度が低い場合のまま利用することが望ましはリコンビナント標品を添加）
い．
C社のスペックに準ずる，平行性確認時に スペック通りかどうか．
検出できることが前提．
血漿で1濃度設定
マトリクスは低濃度試料を使用
内在濃度が確認できた試料（可能であれば 必要最低限の安定性項目とす
両性n=1）で実施，低濃度の場合は選択性 る．
で設定した添加試料を利用．
健常者と患者を事前確認し，可能であれば P2以降も同バリデーションを両者を用いる．th
利用することを想定し，患者78
12 JBF Symposium, DG2020-45
データも取得．

Japan Bioanalysis Forum

Case. 4

バリデーション実施に向けて＜分析担当者からＣＲＯ委託に際して伝えること＞• 既にC社にてバリデーション実施済みであれば，そのデータを最大限活用し，COUの実現のために追加で必要なバリデー
ション項目について協議する．
• 追加の分析法設定が必要であれば，検討試験-バリデーション
試験のスケジューリングをし，治験実施計画に間に合うよう

http://bioanalysisforum.jp/• 条件検討，バリデーションのために必要なCOUを伝達する。

に調整する。

12th JBF Symposium, DG2020-45

79

DG2020-45
Points to Consider Document
生体マトリクス中バイオマーカーの適格性承認のための定量分析法バリデーションに関する科学的及び規制上の留意事項

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum80

Foreword（序文）

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum・序文
・適格性評価において考慮すべき4領域
・主要な７つのバリデーションパラメーター
12th JBF Symposium, DG2020-45

81

Japan Bioanalysis Forum

Foreword(序文)-1• 規制当局へDDT(Drug Development Tool)の適格性承認*に必要な測定• バリデーションでの科学的及び規制上の考慮事項を定義• 当初の目的と適用範囲が拡大

現在• 医薬品開発におけるバイオマーカー分析の包括的ユーザーガイドになっている• 科学技術の発展に伴い、定期的に更新

未来

http://bioanalysisforum.jp/

経緯法バリデーションで期待される事項についてのコンセンサスの確立• バイオマーカー分析において、バリデーションを支援するための有益な情報源となること* 適格性申請/承認： DDTとしてのバイオマーカーの FDAによる承認

12th JBF Symposium, DG2020-45

82

Japan Bioanalysis Forum

Foreword(序文)-2【Points to Consider Documentを読み解くに当たって注意すべきこと】• COUに従って、適切なバリデーションを実施すべきである。
パラメータを選別することが、分析の目的を明確にすることもある。また実施するパラメータ、しないパラメータについて説明できることが重要である

FFP（Fit-for-Purpose）とは、必要とするバリデーションレベルがCOUに対して十分なものであるかどうか

http://bioanalysisforum.jp/

書いてあるパラメーター全て実施せよ、とは言っていない• COUを明確にしたうえで必要なバリデーションレベルを決める。
それが「目的に合致した方法で（FFP）」実施したバイオマーカー分析である。
12th JBF Symposium, DG2020-45

83

Japan Bioanalysis Forum

Foreword(序文)-3

1

事前に分析条件を決める

2

分析に求められる性能の設定

3

分析法の評価及び記録

4

Drfining pre-analytical conditions

Setting analytical performance requirements for assay

Characterizing and documenting assay performance

http://bioanalysisforum.jp/

バイオマーカーを分析する際には、使用するプラットフォームの種類に関わらず、
以下４つの領域について常に考慮すべき

クライテリアの設定

Establishing assay validation acceptance criteria

12th JBF Symposium, DG2020-45

84

Japan Bioanalysis Forum

Foreword(序文)-4
バイオマーカーの分析法バリデーションで考慮すべきパラメーター７つ
1
2
3
4

真度（相対）
Accuracy (Relative)

5

選択性

6

特異性

Selectivity

分析濃度範囲Analytical Measurement Range

平行性
Parallelism

7Specificity

http://bioanalysisforum.jp/→ 全て実施することを推奨しているわけではなく、COUによって適切に評価すべき

試料中安定性Stability (sample)

精度

Precision

12th JBF Symposium, DG2020-45

85

Introduction（序論）・Analytical Validation vs Clinical Validation
・Biomarker Assay Validation and the Fit-forPurpose Paradigm

12th JBF Symposium, DG2020-45

http://bioanalysisforum.jp/

Japan Bioanalysis Forum86

Japan Bioanalysis Forum

Points to Consider Document の対象

Ligand Binding Assays
Single plex

Chromatographic Assays
LC, GC-MS, LC-MS

http://bioanalysisforum.jp/

以下を用いた可溶性バイオマーカー*の分析* 血漿、尿、唾液等に存在するタンパク、ペプチド、脂質、 可溶性化学物質など
12th JBF Symposium, DG2020-45

87

Japan Bioanalysis Forum

対象外

フローサイトメトリー

免疫染色

LBA_Multi plex

（基本的にはSingle plexに従うが、追加でバリデートすべきことがあるがこの文書ではその件について記載しない）

ゲノミクス

臨床検査

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イメージングhttp://bioanalysisforum.jp/

以下はPoints to Consider Document の対象範囲外である。
（qPCRについて記載はなかった）

コンパニオン
診断薬
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Introduction(序論)-1
最終的に適格性申請に用いられるバイオマーカーはフルバリデーションが実施されたバイオマーカー測定法＊を利用しなければならない。
＊この測定法の性能特性はFDAが定義するDDTとして標的バイオマーカーに対する測定法の適格性をよく理解したものでなければならない。

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http://bioanalysisforum.jp/【医薬品開発におけるバイオマーカー測定法の位置づけ】

89Japan Bioanalysis Forum

Introduction(序論)-2
分析法及びその測定結果が,分析法の目的に適していることが重要である。 *・バイオマーカーのデータの信頼性と再現性を保証する
分析バリデーション
バイオマーカーアッセイの性能特性（例えば、精度、精度、選択性、感度、安定性、および再現性）が適合していることを保証
試験中に測定法に変更があった場合、分析的バリデーションを再度行う

http://bioanalysisforum.jp/【医薬品開発におけるバイオマーカー測定法の位置づけ】

臨床バリデーション
設定したCOUに対して、バリデートされたバイオマーカー測定が適切な結果をえることができているかの検証。ただし臨床的有用性と混同してはならない

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Japan Bioanalysis Forum

Introduction(序論)-3
 バイオマーカー分析法の特性

 バイオマーカーサンプルについての課題
サンプルは手に入りやすい？
流体ベースのような扱いやすい形状？
対象バイオマーカーは？

以上の要因を考慮すると

http://bioanalysisforum.jp/

 様々な要因による個体差のために変動する分子の内因性レベルの増加
又は減少を測定すること

バイオマーカーの適格性承認に使用される分析法の判定基準と期待値は以下の点を考慮しなければならない
 測定される分子のタイプ
 バイオマーカーが医薬品開発や規制上の意思決定に適用されているかどうか。
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91

Japan Bioanalysis Forum

Introduction(序論)-4【バイオマーカー測定法とほかの測定法との関係】≠ バイオマーカー測定法の分析法バリデーション

バイオマーカーの適格性承認のための分析バリデーションは、
医薬品の開発状況に合わせて改良しなければならない。

 薬物動態（PK）測定法の分析法バリデーションは医薬品開発ツールとしてバイオマー
カー測定法に普遍的に適用できるものではない。これは、バイオマーカーの適格性確認に用いる分析法に期待されるものが異なるためである。

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薬物動態（PK）測定法の分析法バリデーション

 薬物動態（PK）測定法のバリデーションの基準は、バイオマーカ ーのバリデーションの基準に一部利用することはできるが、バイオマーカ ー測定に利用されている技術は多岐にわたっており、それぞれが異なる技術的要件を有しているため、基準 をすべて受け入れることはできない。
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Japan Bioanalysis Forum

Introduction(序論)-5
DDTの承認に使用される可溶性バイオマーカー*の分析法妥当性を確認するためには、科学的及び規制上の考慮事項を定義すること* 血漿、尿、唾液などに溶解しているタンパク質、 ペプチド、脂質、その他の化学物質【本留意事項で議論されるトピック】
 分析法の設計及び技術選択
 試料採取から分析までの作業 (輸送、保管、前処理など)の最適化
 主要な分析法の期待される性能
 最低限許容できる分析法の性能基準の設定
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http://bioanalysisforum.jp/【本留意事項の目的】

93

分析法バリデーションに関するガイドライン・2001: Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation・2013: Guidance for Industry, Bioanalytical Method
Validation(draft)・2015: Evidentiary Considerations for Integration of
Biomarkers in Drug Development・2018: Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation
12th JBF Symposium, DG2020-45

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Japan Bioanalysis Forum94

Japan Bioanalysis Forum発表年 2001（ガイダンス）
題名
Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation
概要〇メソッドバリデーション
・臨床試験PK評価における薬効、バイオアベイラビリティ、生物学的同等性ついて・対象：フルバリデーション、パーシャルバリデーション、クロスバ
リデーション・推奨キーパラメーター：選択性、真度、精度、回収率、検量線、安定性（スパイクサンプル）
発表年 2013（ガイダンス（ドラフト））
Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation(draft)
題名〇2001年のガイダンスの改定案
概要・生物分析法の妥当性確認に関連する最近の科学技術の進歩に対応。
・基本的なパラメーターの確認：真度、分析測定範囲、平行性、精度、選択性、特異性、安定性（サンプル）
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バリデーションのガイドライン-1

95

Japan Bioanalysis Forum発表年 2015（シンポジウム）
題名
Evidentiary Considerations for Integration of Biomarkers in Drug
Development
概要〇シンポジウムの目的・バイオマーカーの認定に対する科学的および規制上の期待を定義し、最終的に体系化すること。
発表年 2018（ガイダンス）
題名
Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation
概要〇業界向けガイダンス「生物学的分析法バリデーション」の最終版
・バイオマーカー測定法のための分析法バリデーションは、薬物測定法の分析法バリデーションと同じようにするべきである。

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バリデーションのガイドライン-2

・バイオマーカーアッセイのバリデーションの出発点として薬物アッセイに用いるアプローチを用いるべきであるが、FDAはすべて適用できるわけではないことを認識している。
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分析法をデザインし、構築し、そしてバリデーションを行う
・Key assumption
・Assay Design and Technology Selection
・Assay Validation Acceptance Criteria

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Japan Bioanalysis Forum97

Key assumption-1

Japan Bioanalysis Forum~C-Path文章における適格性承認のための分析に関する重要な仮定

分析法デザイン≠http://bioanalysisforum.jp/

・分析法構築における要求や考慮すべき事項は『COU（また最終的には医薬品開発への適応内容）』に基づく

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Validation parameters
PK・TK測定法の分析法バリデーション

バイオマーカー測定法の分析法バリデーション

Key assumption-2

Japan Bioanalysis Forum~C-Path文章における適格性承認のための分析に関する重要な仮定『バイオマーカーの適格性を評価できる』ことが重要・『バイオマーカーの適格性承認があればCDRH（Center for Devices andRadiological Health）が承認しているまたは認可している』わけではない
・『FDAの承認または認可された分析法』はCOUに適さない（適応外）可能性がある

http://bioanalysisforum.jp/

バイオマーカーの適格性承認＊『CDRHの認可なしに規制対象の臨床診療に使用』できるものではない

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Japan Bioanalysis Forum

Assay Design and Technology Selection-1【考慮すべき事項】•

COUを充分に検討し、分析法をデザインするために、実際的な留意事項を考える(例）リスクを考慮し、標準的な方法で試料を採取すると、分析法のデザインの見直しが必要にな。
る)•

COUによっては、測定法を繰り返し見直す必要がある（例；試験規模、単一施設か複数施設か、医薬品開発が進むにつれて異なる/改良される分析性能）。

【注意事項】

http://bioanalysisforum.jp/

COU ＝

分析法の選択とデザインのために、最も重要な前提条件• バイオマーカー分析法を選択する際に影響を与える事柄• 測定対象バイオマーカーの種類（タンパク質、脂質等）• 必要となる感度及び選択性• 分析法の使いやすいさ• 現在の自動化された技術は、判断基準を満たす精度を示すことがほとんどである。よって入手しやすい試薬を用いて、分析パラメータを比較し、分析法を選択することが重要になる。
• 高度な専門性が必要となる分析法やデータ処理ではグローバルに展開しにくいため、バイオマー
カー分析は汎用性があることが重要。
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Assay Design and Technology Selection-3【考慮すべき項目】
Biomarker

小項目
Stability of biomarker if known in disease conditions Biology, structure and isoforms

Context of Use

Application requirements, Test population (e.g., human (healthy, disease), animal),Patient population comorbidities, Sample acquisition

Use Environment

Lab vs. field, Ruggedness / Robustness , User training, Maintenance, Sample
collection (timing, methods, transport and storage), Immediate vs stored analyses,
Sample preservation, Single/multiple sites, Single/multiple use (aliquot size; storage
stability and freeze/thaw) , Contamination effects (e.g., blood in CSF)

Assay features

Analyte(s) selection (measurands), Qualitative/ Semi-Quantitative/Quantitative ,Calibrators/ reference material, Controls (external, internal) , Reportable range,
Reference interval, Specimen volume/quantity requirements, Desired analyticalprecision and aTAE, desired detection sensitivity – upper and lower limits andputative detection range, Selectivity and specificity considerations including probableinterference factors in endogenous matrix, Results turn-around time, Batch mode vsrandom access performance in automated clinical analyzers, Automation, Process
software, Analyte or reagent carry-over, Analytical software, user interface,
Waste/hazard containment, Cost, Technical support requirements

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大項目

Iteration(versioning,
Platform/technology
migration,
convergence)

Interim data evaluation, Assay refinement

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Assay Validation Acceptance Criteria-1【理由】

低分子、高分子のPK試験で確立しているクライテリアとは異なり、バイオマーカーの分析では、 生
理学的挙動によってクライテリアを変える必要がある。また、バリデーションに用いることができる。
サンプルの特性によっては、クライテリアの設定にさらなる影響を及ぼす。

【注意事項】• バイオマーカー分析法がFit for purposeであるかどうかは、バイオマーカーの変動を統計的有意差としてとらえることができるか、が重要になる＜有意差がない場合、以下が考えられる＞• その分析法は適切な分析特性を欠いている• バイオマーカーがCOUに適していない• 試験の規模/被験者の選択が不適切• バリデーションが妥当である、と判断するため必要なこと• 分析法の適切に評価する（主要な7つのバリデーションパラメータと相対真度）• 健常人で存在する濃度範囲をとらわれずにバイオマーカーの変化を明確に区別できること

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バイオマーカー分析においてクライテリアを設定することは最も難しい

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Assay Validation Acceptance Criteria-3
概要

選択性

理論値に対する測定値の程度（%）
バイオマーカーで標準物質の入手が難しいことが多く、『相対真度』が利用されることが多い
LLOQ ～ ULOQ
・希釈が必要な場合は、希釈倍数を乗じる
・内部標準を用いない分析法の場合、n=2でデータを取得する
・r値による相関関係の解釈はLBAとクロマトグラフ法で異なる・TAE（total analytical error) を計算する
・主にLBAで必須。希釈直線性とは異なる。
・代替と生体マトリクスが、測定範囲内で同じ挙動を示すかの検証
バッチ内/間での測定値の同一性。バリデーション実施前に確認しておくことが望ましい
マトリックス由来成分と分析対象物質を区別し、測定する能力

特異性

類似物質と分析対象物質を区別し、測定する能力

(試料中)
安定性

可能な限り臨床検体（生体マトリックス、内因性物質）を用いる。化学的根拠があれば代替でもよい。初期値を取るのが難しい場合、経時変化を追う

真度（相対）

測定範囲

平行性
精度

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項目

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まとめ〇バイオマーカーとは、低分子、高分子を問わず生体の内因性化合物である。
健常人と患者ではその値が大きく異なることがあるので、注意を要する。

http://bioanalysisforum.jp/〇バイオマーカーの適格性承認において、分析法バリデーションは不可欠であり、分析法はCＯUに適合した基準で定義されることが必要である。これには、4つの考慮すべき領域及び主要な7つのパラメーターなどが含まれている。
以下の場合は、その分析性能は許容可能であると考えられる。
1) 適切な分析法の特性評価方法が適用されている（分析法の精度、精度、定量下限値/上限値、特異性、直線性、平行性、堅牢性）
2）バイオマーカーの変化を正確に区別可能な分析法である（通常の分析変動の範囲外にある場合や、変化が微小の場合）。

〇分析法バリデーションのためのガイダンスがでているが、完全に合致させる必要はない。
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DG2020-45からの提言

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まとめ：COUの理解と運用①•

BA担当者にとってのCOUは、『分析法開発やバリデーションを適切に行うために必要な情報』である。
対象集団、⑤データ解析方法・判断基準、⑥プロジェクトチーム（PT）がBMデー
タから判断・決定したいことである。

•

COUの理解と運用のため、BA担当者はPTメンバーと積極的にコミュ
ニケーションすべきである。PTからの情報取得だけでなく、BAに関するCOUやリスクの情報提供を行い相互理解を深める。
– COUが明確でない場合、それで生じるリスクをチームに共有し分析法開発をどのよ

http://bioanalysisforum.jp/– 主たる要素は、①分析プラットフォーム、②マトリクス、③分析対象物質、④評価

うに進めるのか合意をすべきである。特に、感度や精度の基準設定に必要な情報が欠落している場合、過剰・過少対応とならないようにする。
– COUは文書化する。データや情報の追加・更新に合わせ改訂しチーム合意する。
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まとめ：COUの理解と運用②•

BA担当者は、PTと合意したCOUをもとに分析法開発の戦略・計画を•

BA担当者は、 CRO担当者にもCOU及び分析法開発の戦略・計画を共有する。また、CRO担当者からの助言も参考に戦略・計画を改善
する。

COU

適切な分析法

臨床開発を促進させる
BMデータ

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立てる。

革新的な医薬品をいち早く
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