学 位 研 究 紹 介

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学 位 研 究 紹 介
２．C D 1 a ， C D 1 b ， C D 1 c ， C D 1 d ， i n v a r i a n t

歯周炎罹患歯肉組織において CD1d 陽性細胞とナチュラルキラー T 細胞の浸潤は増加している+
Increased infiltration of CD1d andnatural killer T cells in periodontal
disease tissues
新潟大学医歯学総合研究科
摂食環境制御学講座

Vα24JαQ TCR，CD3，CD19，CD83 に対する特異抗体を用いてアルカリフォスファターゼ抗アルカリフォスファターゼ法，ABC- ペルオキシダーゼ法による単染色および二重染色を行った。
３．歯周ポケット上皮または歯肉溝上皮直下の結合組織内炎症細胞浸潤について，CD3/CD19 の二重染色の結果をもとに T 細胞及び B 細胞を含む５−６カ所の 0.04mm2 のエリアを任意に選択し，連続切片

口腔生命科学専攻

上で各種陽性細胞数と単核球細胞数を測定した。

歯周診断・再建学分野

天沼 亮子

４．各 測 定 値 の 統 計 学 的 解 析 に は Mann-Whitney

Division of Periodontology, Department of Oral Biological Science,

U -test，Wilcoxon's signed rank test および相関分析を用い，p ＜ 0.05 を有意水準とした。

Course for Oral Life Science, Niigata University Graduate School ofMedical and Dental Sciences

Ryoko Amanuma【結果】

慢性歯周炎患者 19 名，歯肉炎患者８名より作成した
連続凍結切片より，それぞれ歯肉組織中の炎症性細胞浸【目的】

潤の認められた 112 箇所，46 箇所を選択し解析を行った。
いずれも歯周ポケット上皮または歯肉溝上皮直下の結合

近年，脂質抗原に対する免疫応答が感染防御やトレランス維持に重要であり，これには抗原提示細胞上の組織中に CD3/CD19 の二重染色にてＴ細胞およびＢ細胞が存在することを確認している。

CD1 分子と自己あるいは外来抗原反応性Ｔ細胞が関与CD1 アイソフォームにおいて単染色を行ったところ，していることが知られようになった。中でも CD1d 分子

歯 周 炎， 歯 肉 炎 病 変 部 と も に 発 現 が 認 め ら れ， 特 には免疫調節機能を持つ natural killer（NK）T 細胞に抗CD1d 陽性率は CD1a，
CD1b，CD1c 陽性率に比べ歯周炎，原提示を行い活性化させることが明らかとなっている。

歯肉炎病変部どちらにおいても有意に上昇していた。まヒトの NKT 細胞は TCR Vα24 インバリアント鎖を有た CD83 陽性率と比較したところ，CD1d 陽性率は歯周しており，免疫応答を負に制御する制御性細胞の 1 つと炎病変部において有意に上昇することが認められた（pして近年着目されている。我々はこれまで，歯周炎の組＜ 0.001）。群間比較として，歯周炎と歯肉炎とで各分子織破壊には感染防御免疫のみでなく自己免疫的応答が関の陽性率を比較すると，歯周炎病変部での CD1d 陽性率与すること，さらに Vα24 インバリアント NKT 細胞は歯肉炎病変部でのそれに比べ有意に上昇していた（p（Vα24iNKT）の炎症歯肉組織における比率が末梢血と＝ 0.038）。さらに Vα24iNKT 陽性率についても歯肉炎比較すると有意に高いことを遺伝子発現解析により明らに比較して有意に高いことが認められた（p ＝ 0.018）（以かにしてきた。そこでこの度，歯周組織局所における上図 1）。また，歯周炎病変部における CD1d 陽性細胞

CD1 アイソフォーム，Vα24iNKT の発現と局在を免疫と Vα24iNKT の浸潤に正の相関が認められた（r2 ＝組織学的手法により解析することとした。

0.242，P ＝ 0.033）（図 2）。
次 に，CD1d 陽 性 細 胞 の 細 胞 種 の 同 定 を 行 う た め，【方法】

CD1d と CD19，および成熟樹状細胞マーカーである
CD83 との二重染色を行ったところ，CD1d 陽性細胞と１．インフォームドコンセントの得られた慢性歯周炎患

Ｂ細胞の分布に一致が認められたが，成熟樹状細胞とほ者 19 名，歯肉炎患者８名より歯肉組織を採取し連とんど一致は認められなかった。さらに Vα24iNKT と続凍結切片を作成し，各試料について H-E 染色にの二重染色では，CD1d 陽性細胞と Vα24iNKT との近より歯肉組織中の炎症性細胞浸潤の程度を確認し接している像が認められた。

た。
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新潟歯学会誌 37（2）：2007
図1
歯周炎（Ｐ）と歯肉炎（Ｇ）における CD1 ア イ ソ フ ォ ー ム，CD83，
invariant NKT の単核細胞数に対する陽性率を箱ひげ図にて示したものである。
* 歯周炎で CD1d と invariant NKTの単核細胞数に対する陽性率は歯肉炎に比べ有意に高いことが認められた（p ＜ 0.001）。
** 歯 周 炎 で CD1d 陽 性 率 が CD1a，-b，-c，CD83 に 比 べ 有 意 に 高 く（P＝ 0.038），*** 歯肉炎で CD1d 陽性率が CD1a，-b，-c に比べ有意に高い（P＝ 0.018）ことが認められた。

図2
歯周炎における CD1d と invariant NKT の単核細胞数に対する陽性率の分布を示す。Invariant NKT 陽性率はCD1d 陽性率と正の相関があることが認められた。

おいて浸潤 B 細胞上の CD1d が Vα24iNKT に抗原を提【考察】示し，NKT 細胞活性化を誘導することが考えられる。

【結歯周病原細菌感染による慢性炎症病変であるヒト歯周語】

炎歯肉組織において，CD1d，Vα24iNKT 陽性率ともに歯肉炎に比べ有意に上昇していた。また，CD83 陽性

歯周炎罹患歯肉組織における Vα24iNKT の局在と率と比較しても CD1d 陽性率は歯周炎歯肉組織中におい

CD1d との関与が明らかとなり，歯周病原細菌の感染のて有意に上昇することが認められたことから，歯周炎病過程で生じた自己免疫応答の制御に関与する可能性が示

変部では成熟樹状細胞のみならず CD1d 陽性細胞も抗原唆された。

提示細胞として重要であることが示唆された。CD1d は【文成熟樹状細胞にも発現することが知られているが，歯周献】

炎病変部の二重染色においてはほとんど認められなかった。さらに CD1d 発現とＢ細胞の分布が一致していたこ

Amanuma R, Nakajima T, Yoshie H, Yamazaki K:とから，歯肉炎に比較して有意に高いＢ細胞病変である

Increased inﬁltration of

歯周炎組織において，Ｂ細胞が脂質抗原提示細胞としてcells in periodontal disease tissues. J Periodontal Res,働いている可能性が示唆された。

41: 73-79, 2006.

CD1d+ and natural killer T

また，NKT 細胞は細菌感染や自己免疫において重要

Ito H, Honda T, Domon H, Oda T, Okui T, Amanum a R,

であることが知られているが，最近の報告では，NKT

Nakajima T, Yamazaki K: Gene expression analysis of

細胞は外来抗原のみならず，LPS 刺激により産生誘導

the CD4+ T-cell clones derived from gingival tissues ofされた自己抗原を認識することが分かってきている。今periodontitis patients. Oral Microbiol Immunol, 20: 382

研究において，歯周炎歯肉組織中の浸潤細胞に占める-386, 2005.

Vα24iNKT の割合が上昇していること，また CD1d 発
現とＢ細胞の分布が一致し，Vα24iNKT と CD1d 陽性細胞との近接像が認められたことから，歯周炎病変部に− 46 −