E.coli O157:H7/- の 培 養 検 査
SIB 寒天培地と LIG 寒天培地による E.coli O157:H7 の簡易検索
はじめに

E.coli O157:H7 は腸管出血性大腸菌（EHEC）の代表的な血清型として知られています。
本菌型の検索には SIB 寒天培地が分離培地として使用されていますが、抗 O157 血清による試し凝集試験の実施に際して胆汁酸塩を含む培地上の菌苔を使用することは好ましくな
く 、 ま た S o r b i t o l 及 び I PA が 陰 性 を 示 す 集 落 の 中 に は 当 然 の こ と な が ら E . co l i 以 外の菌種が含まれています。したがって、従来は E.coli 以外の菌種を除外するために、数種の確認培地による煩雑な鑑別試験を必要としました。
極東 LIG 寒天培地は EHEC O157:H7/- の簡易検索用の確認培地として開発したもので各 種 材 料 を 接 種 ・ 培 養 し た S I B 寒 天 培 地 上 の S o r b i t o l 、 及 び I PA 反 応 が 陰 性 を 示 す
集落を 対象として Lactose、 Indole、β -D-Glucuron idase について 確認する培地です。
なお本培地は胆汁酸塩を含まず、また、Lactose 陽性の場合においても斜面部が酸性化
し ない よう に処 方して ありま すの で Indole、 Oxidas e te st に 影 響 はな く、 さら に斜 面部
菌苔によ る抗 O157 血清での試し 凝集試験も可能です。
(1)本法は以下の性状を前提としています。
表 1.

E.coli O157:H7（EHEC O157:H7）と通常の E.coli の性状 1)、2)

Sorbitol Lactose β-D-Glucuronidase Indole－a)＋－＋＋a)＋＋＋a)：SIB 寒天培地での所見；b)：他菌種との鑑別に有用

E. coli O157:H7
通常の E.coli※

LIG 寒天培地の処方
表 2.
ｶｾﾞｲﾝﾍﾟﾌﾟﾄﾝ 7.5g
肉ﾍﾟﾌﾟﾄﾝ
2.5
乳糖
1.0
L-ﾄﾘﾌﾟﾄﾌｧﾝ
0.1
MUG
0.02
NaCl
5.0
Phenol red0.025
寒天
14.9
精製水 1000ml(pH7.4±)

IPA (Cellobiose)―b)―b)b)――b)

E.coli O157:H7/- 114 株の LIG 寒天培地での結果 3）
由来
ヒト動物
水計

供試菌株数
98
151114

該当性状株数
98（100％）15（100％）1114（100％）(2)LIG 寒天培地の調製①本品 31ｇを精製水 1000ml に溶解し、小試験管に 2.5～3.0ml ずつ分注します。
②121℃、15 分間高圧滅菌後に半高層培地として固めます。
(3)操作手順① 検 査 材 料 を 接 種 培 養 し た S I B 寒 天 培 地 か ら S o r b i t o l 、 I PA と も に 陰 性 の 無 色 、 や や小型の集落（Sorbitol 陽性 E.coli に比し、扁平な傾向を示す）を釣菌し、LIG 寒天培地の高層部、ならびに斜面部に接種し、37℃、18～24 時間培養します。

351002-1

②高層部が明瞭に酸性を示す株の斜面部菌苔により、Oxidase test、Indole spo t test をおこない、Oxidase 陰性、Indo le 陽性を確認します。
③紫外線（365nm）を LIG 寒天培地に照射し、蛍光を示さない株について抗 O157 血清によ り 、 試 し 凝 集 試 験 を 実 施 し ま す 。（ 斜 面 部 菌 苔 を 使 用 ）(4)適用例 3）
甲 斐 ら は E . co l i O 1 5 7 : H 7 に よ る 集 団 事 例 関 連 の 糞 便 1 0 0 例 に つ い て S I B 寒 天 培 地か ら S o r b i t o l 、 I PA 陰 性 の 集 落 2 5 4 株 を 釣 菌 、 L I G 寒 天 培 地 に よ り E. co l i O 1 5 7 : H7の 可 能性 が あ る 56 株 を 選択 し 、こ の なか か ら 抗 O15 7 血 清 に 凝集 す る 30 株 を 得 、そ の全 て が Ve r o 毒 素 を 産 生 す る こ と が 確 認 さ れ ま し た 。
なお抗 O157 血清に交差反応を示すことが知られている Escherichia hermannii や、血清学的に交差反応を示さないにせよ、本培地で E.coli O157:H7 と同一所見を示す可能性がある菌種についても、表 1.に示したごとく、LIG 寒天培地に Cellobiose を 1％に添加することにより、これらの菌種の鑑別・除外が容易になります。4）※；Aleksic らは E.coli O157:H7 のなかに Sorbitol から酸を産生する菌株が存在すると 報 告 し て い ま す が 伊 藤 に よ れ ば ， 本 邦 で は こ の 種 の 株 は 確 認 さ れ て お り ま せ ん 。 4 ）、 5 ）SIB/LIGによる結果

総株数 254 株（SOR、IPA 陰性）
LAC、IND：陽性、MUG：陰性56 株
抗 O157 血清に凝集：30 株(全株とも VT 産生)（図は甲斐らの成績 3）を示す。）

SIB
LIG

使用上の注意：セロビオースを添加する場合。
培地 1000ml当りセロビオース 10.0g を加え加熱溶解後、小試験管に 2.5～3.0ml ずつ分注します。
セロビオース添加LIG寒天培地にする場合は、LIG寒天培地とは異なり115℃、15 分間高圧滅菌を厳守して下さい。滅菌後、TSI寒天培地などと同様に半高層培地として固めます。
References
1 ） J.J.Farmer I, Betty R.Davis, et al.: Identification of New Species and Biogroups ofEnterobacteriaceae isolated from Clinical Specimens. , J.Clin.Microbiol. 21:46-76.1985.
2）Samuel Ratnam, Sandra B.March, et al. :Characterization of Escherichia coli Serotype
O157:H7., J.Clin.Microbiol. , 26:2006-2012.1988.
3）甲斐明美、伊藤 武、工藤泰雄、島田園子、江成 博：腸管出血性大腸菌 O157:H7 の検査の簡略化を目的とした LIG 寒天培地の検討．第 5 回日本臨床微生物学会 1994．
4）江成 博、島田園子、萩原博和、矢野 信禯、神田 隆：腸管出血性大腸菌の検査手順についての試案．第 6 回日本臨床微生物学会 1995．
5）S.Aleksic, H.Kach, and Bockemuhl. A Biotyping Scheme for Shiga-like(Vero) Toxin-producing
Escherichia coli O157 and List of Serological Cross-reactions Between O157 and Other
Gram-negative Bacteria. Zbl. Bact. 276 : 221-230.1992.
6）伊藤 武：ベロ毒素産生性大腸菌と食品衛生．モダンメディア、39：307-322,1993
7）工藤泰雄：細菌のわが国における細菌性食中毒の発生動向．モダンメディア、40：115-125,1994．
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