Scientific Reports Of the
KOkkaido Salmon Hatchery
N0. 47 1 ‑99, March 1993

北海通さけ・ます

ふイヒ

場

研究報告第
47 L 1‑99 頁@M93 年 3 月

サケ マス増殖事業におけるせつそう 病の疫学的研究 "

野村

哲― "

The Epidemiologicalin Salmon

Study of Furunculosis
Propagation*1

Tetsuichi NOMURA*2

Abstract
This study was

carried out for the purpose

0f establishing control measuresforfurunculosis. The author attempted t0 determine the distribution and prevalence
Of Aeromonas salmonicida ;n mature chum toncorhynchus keta), pink (0.
gorbuscha), and masu salmon (0. mason) fn HOkkaido that showed n0 apparent
clinical signs 0f furunculosis. From September
1979 to NOvember
1992, a total of
20,542 chum, pink and masu
salmonwere collected from 35 rivers. Aeromonas
0f salmonids
fn HOkkaid0,
salmonicida was distributed widely ;n the populations
except tn rivers from the Tsugaru
Strait t0 Uchiura Bay. The changing pattern Of
the annual prevalence 0f 4. salmonicida
fn chum
salmon was closely related tochanges fn fish density fn the holding ponds; the prevalence 0f A. salmonicida
increased ;n proportion to the increase tn the number

Of fish !n the ponds. The

author concluded from the results 0f histological and bacteriological examina‑
tions that fish with A. salmonicida;n the kidney were not diseased but werecarriers 0f A. salmonicida. The agent could not be isolated from the immaturefish
was also isolated from the coelomic fluid of
examined.
Aeromonas
salmonicida
n0 apparent
clinical sign Of furunculosis. A few A. salmonicida werefish showing
found On the surface 0f the eggs 1 hour after fertilization. A survey 0f agglutina‑
tion titers against A. salmonicida fn sera 0f chum, pink and masu salmon showed
great variability within the species. The isolated strains were identified aS A.
salmonicida
subsp. salmonicida
and were pathogenic t0 salmonids. The authorthat the A. salmonicida
carrier state fn fish possess a serious problem
concluded
and its reduction plays a key role tn salmon
in the prevention 0f furunculosis

propagation. BOth maturation 0f fish under conditions Of low density fn ponds,
and disinfection 0f their eggs, areartificial propagation
0f salmon

necessaryt0 prevent fish furunculosis

during

A 第337 号
北悔道さけ・ますふ化場研究業績
"北海道大学審査学位論文(ReSearch DiviSion， HOkkaido

リ 水産庁北海道さけ・ますふイヒ場
2‑ 2 NakanoShima， TOyohlra

・ku ， Sapporo

062 ， Japan)― 1―

Sa@mon

HatChery， FiSherieSAgenCy

OfJapan

，

緒
さけ・ます
ふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

次目

3

第l章 採卵親魚のせっそう病原因菌Ae 「 comonas
第I節 採卵親魚からのA
第2節

10
10

サケ，カラフトマス及びサクラマス採卵親魚の河川別，年別，時期別の

H

．

血保有状況

5almnnici

14

第3節 保菌採卵親魚の腎臓におげるA
第2章 採卯保有状況

salmon;c;da

方分離法の検討

salmomfci

親魚、におけるAe「 comonas

血の存在状態24の感染時期について

27

salmomfci．

safmon;c@da

第 I節 沿岸に回帰した成魚及び末成熟サケ親魚のA ． salmnmcn 血 保有状況
第2節 サケ採卵親魚体腔液中の A ． 5& 仇 M 朽血生菌 数…………………………………………………
．

人為的にA ． MM

37

A ． s fW0%fCf 血の消長 …………………
第5 節 ふ化場現場におげる受精卵，稚魚，幼魚及び野生魚のA ． M.1mnn たん保有状況
第4節

29

血の飼育環境水中での 生存性

Lalmonici。乃 fCf 血で汚染したサケ 卵 におげる

ほ

・

第3節 A

27

43

第6節 サケ，カラフトマス及びサクラマス成熟親魚の血中凝集抗体価
第7節 棲息環境水中におげる
血 ファージの検出
A

salm

第3章 採卯親魚から分離したAeromonas
第I節

。%1

採卵親魚から分離したA ． wMowfCf

第2節 操卵親魚から分離したAの分類学的検討及びその病原性

血の生化学的性状 ……………………………………………

Fぬの 血清学的性状

55
・

55
60

第3節 採卵親魚から分離したA ． swlW 。m.c.i血のサケ及びサクラマスに 対する病原性

64

Ae

．

salmom7「 comonas

salmomic;da

の検出幸

70

第I節 せっそう病防除のための有機ヨード剤による卵消毒法の検討

70

第2節

サケ親魚、

73

第 3節

催熟蓄養親魚と非催熟蓄養親魚からのA ． 5MMOw

第 4節

操卵親魚の蓄養条件とA ． SMWOWfCfにおげる催熟蓄養の実態
ぬ 血検出率の比較 …………………………‥

76

血検出率との 関係の実証的検討 …………………………‥

78

総合考察

81
.........................................................................................................................
84

謝辞@IfflXSt

52。

第4章 採卵親魚の催熟舌韮条件と36*@@R

48． r.i

sa@mon;c;da3990.........................................................................................................................................
9o―2―

野村 せつそう病の
疫学的研究

緒

口―

サケマス増殖事業の 発展
我が国におけるサケマス増殖事業の歴史は古く，江戸時代の河川に湖上するサケ属魚類の親魚を繁殖のため保護した， いわゆる種川制度までその 歴史を遡 ることがでぎる。北海道の近代的な サケマス増殖事業 ぼ1888 年の石狩川支流千歳川におげる官営千歳中央ふ化場の建設に 始まり □、 林 1986;

木村 1988) ，その後

1893 年までの5年間に，28 ヵ所もの民営のふ化場が建設され，その基礎が築かれた。しかし1895 年以後の資源の 減少は， これら民営ふイ し場の経営を圧迫し，再生産用親魚の確保よりも，ふ化場の運営資金を得るために親魚を売却する様な状況を生み出し これによってますます資源の減少を招き経営を悪化させるという悪循環となっていった。

1927 年以後北海道庁は

このような民間ふイ し場の経営状況の悪化と本来の 目的を逸脱した運営方法に対し増殖事業の公益性を重視して， これらふ化場の事業を本来の資源培養を目的とした増殖事業に戻すために民間ふイヒ 場の統― と再編成に着手した(木村 1988) 。 北海道内におけるサケマス増殖事業山国と 北海道庁を中心とする官営の増殖事業に再編され，今日の増殖事業の基本となって現在に至っている。北海道庁の努力に1951 年の水産資源保護法

より整備されたサケマス増殖事業は，第二次大戦による混乱もなく継続されたが，の 制定により事業の主体 ぼ北海道庁から国へと大きく変化した。水産資源保護法第20 条により「農林水産大臣はさく河性魚類のうちさけ及びますの増殖を図るために，その人エふ化放流を実施する」と規定され， これに伴い北海道では国営ふ化場(北海道さけ・ますふ化場)の整備拡充が行われた。 しかし本州ではサケマス増殖事業が小規模であ り民間の自主的な運営に任されていたことから，将来的には国営事業にするとしながらも・水産資源保護法の制定時点においては同法第ト " "。'"'
ア十十ソ 、 人十十十・ 十
31 条の規定により予算の範囲内で費用の‑ 部を補助
20
。イ "。""' 。。

するものの，当面従来通り民間主体の運営が続げら吾過した現在でもナ
八レ。

"。"" 。 。

1/

れることになった。
，本州における
42
年を経，
‑pasQ
その後同法のサケ制定からマス増殖事業は・運営資金の―都国庫補助による民間中心の自主的な運営に委ねられている。
我が国におげる 196 @年以後の サケ (OncorhW 研M及び民営ふ化場の施設の整備拡充により，

●

/

●

戸
t0

三

o

―。

サケ稚魚、

の 放流尾数も大きく増加し 1970 年以前には5億尾前数の著しい増加を
1965

1970

1975

後であ ったものが，施設の拡充強化に伴い 1980 年以

1980

1985

1990

Year

後は 20 億尾前後に増加した。魚種別にみると放流尾

Fig. 1. Number

示したのはサケ稚魚であ り， ヵフ トマス(0 ．

どり rhMC肋 ) はI億尾前後，サクラマ ス(0 ． 肌ぽou)7 ／ I千万尾以下でほとんど増加していな

Of chum

rivers fn HOkkaido

salmon fry released intoandHOnshu

from

1965

to

1990

サケ マスの資源量の 変化と現状の 問題点
サケマス増殖事業の発展に伴い， 我が国におけるサケ属魚類の資源量も大きく変化してぎた。1965 年以後の我が国におけるサケ属魚類の漁業形態別の漁獲量をFig ． 2に示した。総量では12 万トンから 21 万トンへと― 3□

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

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1993

大きく増加しているが，沖合の母船式及び サケマス
流網，

200

刺網漁業では8万トンから?3万 トン前後へと減

少し沿岸域における

大型定置網，小型定置網及び方刺網漁業等では 2万トンから 16 万トンへと急激な 増タ加を示している。これは世界的な沿岸200 海里の経済3水域設定に伴う沖合の漁業規制による漁獲量の減少

喜，サケマス増殖事業による沿岸のサケ属魚類資源

Lの増加による漁獲量の増加が大きく影響していると

g

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COastalfishing―

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50

考えられる。

"。。@00‑ 。中サケ属魚類の漁獲量を魚種別に区分すると，上記のような漁獲方法の変化を反映しvessels

1965

1970 年以後は沿

1970

1975

1980

'0‑0

1985

1990

Year

岸で漁獲される サケ (シロザケ) の 漁獲量が増加している反面，沖合で 漁獲されることの 多いべ二ザケCO ． 雌袖は)，

(O ．

FIg

ギンザケ (0 ．たたMぬchh) 及ぴ マスノスケ

・

2

・

TOtalCatChofSalmonidfiShinJapanby

various Japanesecommercial

fisheries

仁肋川仁。 肋 )は年 々 減少する傾向にあ る。 また

サクラマス及びカラフトマスの合計漁獲量も，カラフトマスの豊漁年と不漁年の変動はあ るものの，徐々に減少の傾向にあ る。 漁獲量の変イヒを地域 @U にみると北海道と岩手県の増加がめざましいが，その他の地域での増加は僅かである。
またサケ マス増殖事業の成果による漁獲量の増加に伴う経済的な影響も大きい。総理府の家計調査によれ
ば，サケ属魚類の鮮魚 と 塩蔵魚での年間消費量は， 1971 年に 1人当たり2 3kg ，漁獲量の増加した1986 年でも・

2． 6 kg と僅かに増加したのみで，消費は低迷し加工原料としての利用の拡大が新たな用途として望まれるようになった。価格も1987 年には I尾当たり3， 000 円程度であったが1991 年には I， 000 円前後にまで低"「し (Kae‑Lyamaand Urawa， 1991) ，沿岸定置網の漁具の大型イヒや人件費の高騰による経営経費の増加により，沿岸定置網の経営は悪化してきている。 さらにサケは性成熟の進行に伴い体色や肉質が大きく変化するため，

食

R口として優れたサケを得るためには河口より沿岸で漁獲することが求められ， また8 月下旬から9月上旬に沿岸に来遊する資源の増加が求められている (阿部 1988)o

サケ マス増殖事業の―般的な 行程と問題点
1990 年現在の我が国のふ化場の数 は官営，民営を合わせて328 ； 所に及ぴ数の上では民営のふ化場が上回っているが，規模の指標となる収容卵数や稚魚の飼育数では官営のふ化場が大きく上回っている。
我が国における サケ マス増殖事業の行程を，北海道さけ・ますふ化場の例を中心に述べる。 サケ，カラフ
トマスでほ天然河川に湖上してきた親魚を捕獲し催熟蓄養を行い，成熟後種卵を確保しこれをふ化飼育した後，適切な時期に河川に放流して資源の造成を図っている。―方サクラマスではサケ，； ラフトマスと同様に催熟蓄養し成熟を待って 種卵を確保する方法に加え，地中で飼育した親魚からの卵確保や，資源保護
河川を選定して天然産卵による再生産を試みたり，稚魚を長期間飼育して降海型幼魚を生産し それを放流すること等による資源の造成を 図り，サケ及びカラフトマスとは異なる手法が用いられている。
ここではサケ，

カラフトマス及びサクラマスの増殖事業について，河川に湖上した親魚から卵を確保し稚魚を河川に放流するまでの行程とそれらの問題点について述べる。我が国におげる増殖対象サケ属魚類は
サケ，カラフトマス，サクラマス及びべ二ザケ( ヒメ マス) の4魚種であ るが，これらは同じサケ属魚類であ ってもその生活史は大きく異なる。すなわちサケ，

カラフトマスのように淡水域での生活期間が短い魚種と，サクラマス，べ二ザケのようにその期間が I年以上と長い魚種に分げられるが，このような生活史の違いが増殖事業の運営に大きく影響している。

― 4―

野村―せつそう
病の疫学的研究増殖事業においては種卵の確保がまず問題となる。増殖対象となるサケ属魚類では，天然河川に湖上した親魚から採卵することを基本としているため，必要量の種卵を十分採卵 でぎるだげの親魚の捕獲が必要である。 しかし近年沿岸定置網の改良と増設により，河川に湖上する親魚に対する漁獲強度が年 4 高まり，来遊
資源量を的確に 予測して，増殖事業に 必要な親魚の 確保を図るための 漁業調整が行われている (小林1988a) 。 最近食品として優れたサケを沿岸で漁獲することを 目的に8月下旬から9月上旬に回帰する前期群の資源の造成が図られ，捕獲後成熟までの期間催熟蓄養する必要性が増加した。増殖事業を中心に考えた場合には催熟蓄養を必要としない親魚から種卵を確保することが埋想であ るが，サケ資源を経済的に利用するため，大規模な施設と多額の人件費を投 L 催熟蓄養しているのが現状であ る。 さらにサケマス増殖事業は河川
環境や社会情勢の変化により，捕獲場は河口部へと移動する傾向にあ り， 催熟蓄養尾数の増加や蓄養期間の長期化と相伴って，生産コストの低減を図ることは当面不可能な状況にあ る。
採卵作業は サケマス増殖事業において，特に多くの労方を必要とする行程であ るが，サクラマスはサケ，；

ラフトマスに比べると採即時期が I ；月あまり早いために作業が重複することはないものの，後者では―時期に採卵が集中し作業量の増大を招いている。
サクラマスは資源量が少なく河川に湖上する親魚の尾数も少ない。 また成熟までの催熟蓄養期間が長いことから，この間の減耗をいかに防止するかが大きな問題で，資源増大のために解決しなげればならない最大の課題である。

捕獲から成熟まで催熟蓄養池で管理された採卵用親魚は，熟度鑑別後採卵に供される。ふ化後の稚魚は浮上後すぐに自然に河川へと放流していたが， m9fio年以降は回帰率の 向上を目ざし 約2 ヵ月に及ぶ配合飼料による給餌飼育を行い大型の稚魚を放流するようになった。 ニジマス用の配合飼料は現在ほば完成の域に達していると考えられているが，サケ稚魚用の飼料は，養殖魚 と異なり健康な放流用稚魚を生産するために体重の 増加のみを目的とすることはでぎず，現在も健康な放流用稚魚、を生産するための飼料の改良研究が続けられている。

サケ マス増殖事業における 疾病の概略
1955 年以前におけるサケマス増殖事業は， その対象魚種が比較的病害に強いサケが中心であったこと，浮上後自然に河川 へ放流する方法であ ったことなどから，稚魚期の病害に関する報告は少なく，受精卵の卵膜が軟化する，いわゆる卵膜軟化症について，

その発生と細菌との関連を検討した高安ら (1934)の報告があるに過ぎない。卵膜軟イ L症については過マリガリ酸ヵり ウムによる卵の消毒が効果的で(大野 1929) ， ―般に治療法として使用されるよ t)になって以来研究の対象とはなっていないが，水病は依然として多くのふ化場で発生している。高安ら (1934)は本病 は細菌性疾病であ るとしているが，本病の原因を単に卵膜の表面に寄生する細菌とすることには疫学的にも疑問があ り， その原因菌 も特定されていないことから，今後さらに種々の観点から検討を要する疾病であ る。
また卵 に寄生する水生菌対策についてもマラカイトグリーンの使用により， その被害は激減したが，自然環境維持の観点からは木剤を使用することなく水生菌を防除する方法の開発が望まれている。稚魚に関する報告としては，西野・尾崎 C1957)によるサケ稚魚の異常死亡と細菌の関連について検討した報告があ るのみである。

195 ，@年以降は配合飼料による池中飼育が導入され，これに伴い種々 の疾病が報告されるようになった。飼育期間の延長に伴って種々の疾病の発生が報告されているが，現状のサケマス増殖事業におげる重要な病害の ― つとして，稚魚期の細菌性鯛病をあ げることがでぎる。本病は鯛表面に多数の長提菌が寄生することにより生ずる疾病で大量の死亡は伴わないものの，呼吸障害などの原因となり放流魚の健康度を低下させることが大きな問題となっている。本病の対策としては従来フラン剤の―種二 フル ピ リノール製剤による薬浴が有効であ り， サケ稚魚にも安全性が高いことから多用されていた(野村・清水 1979) 。 しかし 1983 年に フラ― 5―

さけ・ます
ふ所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

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47,

1993

ン 剤のヒトに対する催奇性や発がん性の問題が提起され，水産増養殖におげる使用も中止され，以後効果的な治療法がなく早急な対策の確立が望まれている。
寄生虫による疾病としては， 粟倉 (1974)が千歳川におけるサケ科魚類の グルギア症にっいて報告しているが， 本病の発生は局地的なものであ り，他の河川からの報告はない。原虫類のIcht 伽此。 小 necator の寄生による疾病については， 粟倉ら (1984), Urawa

Nagasawaeta@(1987)が種人の生理学的検討も含めて報告している。 また，． (1987) は我が国におけるサケ科魚類の寄生虫について総説している。

―方サクラマス，べ 二ザケの降海理幼魚の生産の増加によって，せっそう病や伝染性造血盟壊死症の発生‑も認められ，飼育の長期化に伴い新たな問題が提起されている (木村 1975)o
また親魚の催熟蓄養は1965 年以前はサクラマス及びカラフトマスの―部に限られていたため，体表に寄生する水生菌に関する武田 Q931) の報告があるに過ぎなかった。
しかし 19fi5年以降，サクラマス及ぴカラフトマスの本格的な催熟蓄養の導入に伴いせつそう病の被害が発生し大ぎな 問題となった (西野 1967; 木村 1970) 。 サケマス増殖事業におけるせつそう病の被害については次項で詳細に述べるが，魚類病原ウイルスの分布とその検出率にっいては，

1976 年以降北日本各地の河川

K二 湖上したサケ，カラ ァ トマス及びサクラマス親魚を対象に検討されてぎたが，O れ co ぬ?ynch 硲川如 MUviruS(OMV)がサクラマスに広く分布していること，(IHNV).

chumsalmonvirusCCSV)

さらに検出率 は低いものの伝染性造血盟壊死 症 ウイルス

及び伝染性膵臓壊死症 ウイルス(IPNV)が分離されることを見い出し

1983 年以降発眼期にイリジンによる卵の消毒を実施した。その結果これら病原ウイルスの検出率は年 々 減少

傾向を示し 198f 年以降は卵の 消毒を実施しているふ 化場ではほとんど 分離されなくなっている 拮水ら
19S8) 。

サケ マス増殖事業とせつそう 病
せっそう病は，古くからサケ科魚類の疾病として知られ，McCraw(1952), Herman (1968)及ぴSmieszko(1972)の総説，保利ら (1967)， 江草 (1978)及びAustinandAustin(1987)の優れた成書がみられる。McCraw(1952)によれば本病は広く全世界にみられ，古くからサケ科魚類に被害を与え，研究分野心病原微生物学，病理学，病態生理学，免疫学と多岐にわたり，最も多くの研究がなされている疾病であ る。
本病は， Emmerfch

and Weibel

C890a ， 1890b) によって最初に報告され，その原因菌は当初肋 がぬMm

so7W 。市Cf血と命名されたが ，その後幾多の 変遷を経て現在では AgroW(1984)は本菌をAgmm。H 仏に属するとしているが， Smith(1963)。れ仏属に分類されている。 POpoff

は本菌が他のA ぴ。WOw 俗属の細菌と異なり運動性がないこと， 30C での発育が認められないこと，特有の褐色 々 素を産生することなどに着目し，数値分類を行いNec のW0 ク硲 なる新しい属を提唱している。しかしこれは坂崎 C1974) らにより支持されたものの，―般的には受げ入れられなかった。POpoff(1984)によるとA sa@mWon朽血 にはsubsp. salwionicida, subsp.
・

川佑0MCT 血及び subsp.dcK 叩W 咀g%e.s の 3亜種があ り，色素の産生，VP 反応，糖 の利用性などの差異によって区分される。
本菌の宿主範囲として， 江草 (1978)はTablelに示した種々 の淡水魚及び海産魚をあげているが，近年キン

ギ ，やコイ等のいわゆる"穴 あき 病"の病魚から 4@本菌の井定型株が分離され， ウナギCKitaoetal．， 1984; 大

塚ら 1984; 飯田 ら 1984)，イシガレイ(大滝 1987)からも本菌の井定型株，海中飼育のギンザケ (絵画 ら1984)

から定型株が分離されるなど宿主範囲はかなり広いものと考えられる。 このことはせっそう病が単にサケ科
魚類ぱかりではなく，広範な魚種の増養殖において大ぎな被害を与える重要な疾病であ ることを示すものである。
本病の原因菌であ る A salm 。れ fC伽の病原因子にっいては ，坂井 (1977,1978)，田島ら (t983a,1983b) に・より。蛋白分解酵素のプロテ ア ーゼが重要な働きをしていることが 報告されている。 予防ソクチソの 検討

CHaraeta@

・， 1976) や，耐病種の育種に関する検討もなされているが (WOlf,1954;Snieszkoetal― 6―・， 1959) 末だ野村―せつそう
病の疫学的研究

Table 1. Fish species reported

susceptible to AeromonasaS

Fish species

salmonicida.
Au 山0rS

Susceptible to typical strain 0f the agent
Salmonid fishes
Bro0k trout (S ぱ仏 p.1@几 応力 %tinnl ぬ D
DOLy Varden trout (S ． 川ぱ Zれ77 ゆ叩妨仇応)Lake trout (S. namaycusK)
Rainbow trout (.0ncorhynchus mykiss')
Brown trout (Sfl/W0 trutta)

Atlantic salmon (S. salar)
Cutthroat trout (0. darkii)
Grayling (Thymallm
vulgarise(T. signifer)
MOuntain whitefish (Prosopium willwmsont)
Chub (Sqmlius cephalus}
COho salmon (0. kisutcK)
Chino0k salmon (0. tshawytscha)LOugh neagh pollan (COregonus pollan)
Amago salmon (0. rhodurus')
SOckeye salmon (0. nerka)
Chum salmon (0. kefa')
Lake whitefish (C. clupe.aformis)
Other species
Tench (.Tinea tinea)
・

Carp (Cyゆ nfn7us 切ゆWO ))Channelcatfish ((Silurus s ぬれた )ふPike (Es50x luctus)
Sculpins (COttus ゆp ． )Perch (Perc は ア而 Fの cens)
GOld fish (Ca&rassi硲 au ァ atus)
Yellow bass (MOro0ne miss 氷，SゆDipiensis))
Sablefish (A w ゆrゆO肌乃 @w とん)Chestnutlamprey(IcChthyomyZon e岱血neiis)
Smallmouth bass (Mic 化ゆ terus dolomieuf)
Yellowbass (MO0rone mfss かご 仏ゆ ?ens ば )Fa 血ead minnow(Pi W ゆぬ aw ぬク叩wel@s))
・

Yellow perch (Perca flavescens))
Susceptible t0 atypical strain 0f the agent
Salmonid fishes
Masu salmon (0. masou')Pink salmon (0. gorbuscha)
Brown trout (S. trutta)
Other species
Silver bream (Blicca bjoekna'j
Perch (Perca 刀bv 柘 t l s))
ROach (RM た lus ruはね lus)
COmmonbream (A bram た hra 棚 )McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)(1952)
McCraw
McCraw(1952)
McCraw(1952)
Herman(1968)
Herman(1968)
Herman(1968)
LeTendre et a1. (1972)
Bulkley (1970)
McFadden(1970)
McFadden(1970)

Kimura (1970)
Kimura (1970)
Smith (1963)ム

McCarthy(1975)

McCarthy(1975)

・ォ

McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
McCraw(1952)
Herman(1968)
Herman(1968)
Herman(1968)
Herman(1968)
Herman(1968)
Evelyn (1971)
Ankeli (1971)

McCarthy (1975)
McCarthy (1975)― 7―さけ・ますふ 所報 SC1.

REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47,

1993

実用化の域に達していない。
A・

salmom 而んは最も知見の 集積されている魚類の病原細菌であ るが，本菌を選択的に分離でぎる培地がないことや，培地上では本菌が他の細菌との競合に比較的弱いこともあ って，生態学的には不明な点が多い(McCarthy,(1975a ，

1980) 。 特に木菌がサケ科魚類 K二不顕性感染しているとぎの存在部位については，宮崎・窪田

1975b) の組織学的検討の結果がみられるが， 本菌の分離が行われ てなかったことから，この点は今・後の課題であ る。 本菌の魚類生息環境水中での 挙動については 必ずしも明らかになっていない (McCarthy，1980) 。 また，本菌により引き起こされるせつそう病については，その最も重要な感染源は保菌魚であ るとされているが (HOrneand

Maj ， 1928; MCCraw， 195 刀，前記したように優れた選択培地がないこともあ って，

不顕性感染魚からの水面の検出は必ずしも容易ではない (RabbandMCdermottko ， 1969) 。 Bul@0CkandStuCkeyQ975)， 1962;Bu@l0ckandSnieSZ‑は通常の培養でまったく本菌が検出されない 二ジマスからも，ホルモリ処理や飼育水の温度を変化させることによって，高率に検出されるようになることを報告している。
我が国におけるサケ科魚類の養殖は，比較的せっそう病に強い二ジマスが主体であ ったため，せっそう病の 存在は小林 ら 0]963)，

保科ら (1967)により確認されていたが，大きな問題とはならなかった。 しかしアマ

ゴ，ヤマメを中心とする在来マス類の増養殖の拡大により，せっそう病の被害も増加し(森刀 l 1989)，治療のため抗菌剤の使用頻度の増加によって，薬剤耐性菌の出現を招くこととなった CAOki et a@．， 1983) 。 増殖対
象サケ属魚類のせっそう病にっいては 小林 ら (T963)の実験的に海水中で 飼育したサケ 幼魚からの報告がある 。

催熟蓄養 とせつそう 病
我が国における サケ マス増殖事業は，とこの1(@年問に大ぎな変化をとげてぎた。特に種々の社会状況の変化

サケ属魚類資源の利用形態の変化は， サケマス増殖事業そのものにも大ぎな影響を与え，稚魚の飼育尾数の増加，飼育期間の長期化および採卵親魚の催熟蓄養尾数の増加，蓄養期間の長期化という現象となって現われている。
このような事態に対応するためには，降，諸施設の整備を急がねばならない。親魚の催熟蓄養他は， 1985 年以

その整備が年次計画に沿って始められた。 しかし北海道内でサケ マス増殖事業に使用でぎる湧水は，現在の事業規模でぼぼ限界にあ り，親魚の催熟蓄養 はふ化場内の稚魚飼育池の兼用または河川水を利用して行われる場合が多くなっている。稚魚池を利用しての親魚の催熟蓄養は，施設の効率的使用の面からは利点も認められるが，先にも述べたように成熟親魚が病原ウイルス (吉水ら 1988) を保有していること，さらにはA1．
.w&lmnni.ri 血 も高率に保有していることが明らかになるにつれ(野村・木村 1981; 野村 @983, 野村 ら 1983),
親魚から稚魚への病原体伝播の危険性が危倶 されている。アメリカ，カナダの太平洋岸では，増殖対象魚種の マスノスケ及びギンザケの成熟親魚が細菌性腎臓病□ KD)の原因菌を， べ二ザケ親魚がIHNV

右 していることが明らかにされ，これら魚種の天然資源への影響が懸念されている (Hyer1981; GriShkowSky， 1976) 。 ―方，川水による催熟蓄養は，

and

Amend

and

を高率に保

SanderS ，

局水温による生理的な影響ばかり

ではなく，せっそう病等による死亡を誘発し，卵質にも悪い影響を与えることから，

催熟蓄養技術の再検討が望まれる。
このように，サケ親魚の催熟蓄養 は近年になり始められた事業形態であ るため，高品質の卵の確保と親魚、の使用効率の向上を目的とした催熟蓄養技術の改良試験も開始されたぱかりであ る。 親魚の生理学的特性の解明，疾病防除技術の開発という両面からの技術開発が急務であ る。
我が国における サケ マス増殖事業における親魚期の疾病としては，

まずせつそう病の被害があ げられる。

西野 C19fi?) は十勝川で催熱したサケ親魚のせっそう病について検討し，死亡魚の72 ． ?% に典型的な症状がみられることを，

木村 (1970)は北海道北東部の渚滑川において， 催熟蓄養中のサクラマス及びカラフトマス親角に発生したせっそう病について検討しカラフトマスで 30% ，サクラマスでは40%8―がせっそう病により死

野村―せつそう
病の疫学的研究

亡したことを報告している。また，野村・木村 (1981)，野村C1983)及び野村 ら C1983)は北海道内の主要な河
川 K，棚上したサケ，カラフトマス及びサクラマス親魚のA ． salmoniciぬの保菌率を検討し高い検出率を示す河川卜 存在することから，せっそう病の対策の必要性を指摘し防疫対策上新たな 問題を提起した。催熟
蓄養期間におけるせつそう病の発生状況，親魚の原因菌保有状況を明らかにしその防除対策を確立すること
は，事業の安定した推進のためには極めて重要な課題と考えられる。
本研究では，採卵親魚の催熟蓄養期間におけるせつそう病の防除技術の確立を目的に，まず第I章では北海
道におけるサケ属魚類採卵親魚のA ． salmnnfri血保有状況を検討し 次いで第2章ではこれら外観正常な採卵
親魚から分離したA ． salmomci
血の由来及び親魚から稚魚への伝播の可能性を検討した。第3章では外観正常ぬの代表株について，その分類学的位置と病原性を検討した。 さらにな採卵親魚から分離したA ． M 仇 (imci
第4章では催熟蓄養親魚のA ． salmomci血の検出率と親魚の催熟蓄養条件との関連性を検討しふ化事業におげる採卵親魚のせっそう病防除対策の確立に資する種 々 の知見を得た。ここに4章にわげて報告する。

― 9―

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

芦吉

] 羊章

お哀

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,mF未見 プ良;のせつそ @ う廿肯L頁巨可

首肯

N0.

47,

1993

A e omonas「sa /monl， ci'da十呆モ丁才た ナ五L

せつそう病は魚類の細菌性疾病のなかで ，多方面から 研究されている 疾病であ り， McCraw
Herman(1968)の総説，江草 (1978)及ぴ Austin and Austin (t987) の 成書を始め, McCarthy(1952)及び(1980)の生．

態学的研究，宮崎・窪田 (1975a, 1975b) の病理学的研究，森川ら (1981)， 森川 ・田代(1982)の病態生理学的研究，丹治(1972)及ぴSchubert (1961)の病原体に関する分類学的研究年多くの報告があ る。 しかしながら研究の対象は主として養殖魚及びそれら由来の原因菌A salmomci 血 に関するものであ り，増殖対象のサケ属魚類に関する報告は少ない。 これはサケマスの増殖事業ではふ化した稚魚は給餌することなく放流され，生
活史の大部分を自然条件下で過ごし疾病の 発生やそれに伴う死亡が事業遂行上の問題となることがなかっ・たことによると考えられる。
しかし最近はサケの回帰率を向上させる 目的で・大型稚魚を放流するための給餌飼育が行われ， 池牛飼育
期間が長くなり，疾病の発生による減耗が問題となっている。またサケでは， 8 月下旬から9月上旬に沿岸域に回帰する経済的価値の高い前期群資源の放流が主流で，増殖用の親魚を得るために催熟蓄養が必要となり，この期間における疾病被害が問題となっている。 さらに近年サクラマス及びべ二ザケ ( ヒメ マス)が増殖事業の対象とされ， 降悔型となるまでの約I年半，これらの魚種は池中で飼育され，その間の疾病防除対策を確立することが求められている。
サケマス増殖事業におげる疾病のうち，せっそう病はサケ親魚やサクラマス，べ二ザケに大ぎな被害を与・えることから重要な疾病の―つであ る。 サケマス増殖事業におけるせつそう病の被害としては，西野C1967 )が，北海道十勝川の催熟蓄養中のサケ親魚のせっそう病を，また木村山97(@)は北侮道北東部の渚滑川で催熟蓄養中のカラフトマス及びサクラマス親魚のせっそう病を報告している。
サケ属親魚ば河川湖上時には摂餌 しないため，催熟蓄表時の親魚に 疾病が発生した場合，水産用医薬品の経口投与は難しく，注射ある L' は薬浴等を実施するには魚体が大きく，さらに取り扱う尾数も多いことから ，

せっそう病発生後の治療処置には限界があ る。 その対策として発病以前の防疫処置によって，病原体を排除して発生を未然に防止することが最も効果的な対策と考える。
このせっそう病の発生を未然に防止するためには，まず病原体H ． sa 肋 nn.tc?.
血の地理的分布や 親魚の保有状況を的確に把握し汚染河川から 親魚あ るいは卵の移動を禁止し，汚染の拡大を防止しなげればならない。
本章では以 ト， のような観点から，増殖事業に用いられるサケ，カラフトマス 及ぴサクラマス採卵親魚におけるA ． salmom め血の保有状況を 調査し地理的分布を 明らかにすることを 日的に，まず第 I節ではその検査方法について検討し第 2節では北海道内の採卵親魚のA ． 5nalmnnir.i 血 保有状況を調査した。 さらに第3 節ではA ． salmomc? 血の 魚体 内での挙動について検討した。

第 ]節

操卯 親魚からの A ． salmonicida分離法の検討

魚類の疾病の診断には，病魚から原因となる病原体を分離する方法が―般に行われているが，診断法としては病原体を分離する方法のほか病理学的診断法，血清学的診断法などが広く用いられている。サケ親魚のせっそう病は―般に特右の症状を示すこと，原因菌のA ． salmomfci 血が培地上で 褐色色素を産生すること，現場における診断には各種の制約があ ることなどを総合的に勘案した場合，原因菌の分離培養法が最も適していると考えられる。
増殖事業の現場におげる分離培養法を確立するには， A ． salmomfcf血を分離するための 適切な培地の選択と，供試負から原因菌を効率よく分離でぎる 部位を選定することが重要と考えられる。

本節ではまずA.salmomfci

血の分離 用培地及び分離部位の検討を行づた。

― 10

―

野村―せつそう
病の疫学的研究

材料及び方法
供試菌株
A・

salmom □ぬの標準株としてはA ． salmonicida subsp.salmonici 血 ATCC

14174 を，またサケ親魚由来

株としては1978 年10 月に十勝川に湖上したサケ親魚から分離され， A ． s>a.
肋 omci 血 に分類されたIJ‑1株を供試した。
供試培地
普通寒天培地(以下NA 培地と略す :肉 エキス5e ，pH7・I， 000ml,

0，

栄研)，

ぺプトン10R ，塩化ナトリウム 5 ら寒天 15g ，蒸留水

トリプトリィ寒天培地 (以下TSA 培地と略す : トり プトリ15s ，塩化ナトリウム5g ，寒天15g ，蒸留水I， 000ml,

pH7・

略す : トリブトン 10.0e ，酵母エキス5 OR ，塩化ナト

・り

ソイぺプトリ5g,

3， 栄研)及び Furunculosis 寒天培地(以下FA 培地とウム2 5e ，・L ― チロシ ソ 1.0g ，寒天15.0e ，蒸留水

1,000ml, pH ?.3,,Difco) を使用した。
培地の調製
前記の培地を高圧滅菌後，直径90T[mTnのシャレ 1枚当たり20ml ずつ分注し固イ

L後 クリーンべ ンチ内で2時間乾燥して調製した。

供試菌の調製
普通 ブイョソ(栄研)を用い，20 。C で24 時間振麓培養した供試菌を無菌的に生理食塩水で2回洗浄した後，生‑埋食塩水で適宜希釈し上記の 平板培地に塗抹接種した。
供試魚
1979年9月に石狩川において捕獲，催熟蓄養したサケ採卵親魚のうち，外観上せっそう病の症状が認められ雄それぞれ10 尾を任意に抽出し腹部を有機ヨード剤で消毒，滅菌したメスを用いて無菌的に開腹 しない雌，腎臓，肝臓，心臓，脾臓及び生殖腺を摘出，本実験に供した。
A. salmon;c;daの校出供試臓器を白金耳で 穿刺しNA 培地 (栄研)に塗抹して 20 でで培養した。使用した白金耳での ， A ．

SdJ

川。 乃 icidaりの検出限界は102cfu/g 組織であ った。

培養温度
20 でとした。
培地選択の基準
平板培地上で独立した コ 口二一20 個を任意に選定しシャーレの外側にマークして，

同― コ 0 二―について， 24 時間ごとに直径を ，クF3 ノーターで測定して増殖程度を比較した。 また同時に培地上に肉眼によって褐色色素産生が確認されるまでの時間を求めた。
A ． .s;nlmnn;lr.idaの同走培地上に出現した褐色色素を産生する コ Lt 二―を釣菌し NA 培地 (栄研)を用いて20C で純培養後， PODOff

C1984)に従い生化学的性状を検査し，グラム険性で運動性がなく，褐色色素を産生し，カタラーゼ，オキシ
ダーゼ陽性，グルコースを分解しガスを産生するものをA ． sn.1ni.nnir.i
血と同定した。

結果

A ． salmon;c;dda 分離用培地に関する検討

供試したA ． salmmonictdaV株の3種の供試培地における コ 口二―の大きさと色素産生が確認されるまでに要した時間を Table 2に示した。
標準株として供試したA ． 5n.1m 。nir.z血 ATCC
後に NA

培地で 1.1‑1.9 mm,

TSA培地でI． 0 2． 1 mm
・14174 の各供試培地における コ p 二一 m0 個の直径は96 時間, FA 培地では0． 7 2． 8 mm
・

― 1I ―

であ った。また褐色色素はいさけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDO

Table 2. COmparison
colonies grown

Of diameter0n

SALMONHATCHERY,Of Aeromonas

nutrient agar,

trypt0‑soya

N0.

47, 1993

salmonicida ATCC
agar

14174 andand furunculosis

Culture period (h)24Nutrient agar*2

ATCC

14174

U‑1
Trypt0‑soya

agar*3

ATCC

14174

U‑1
Furunculosis agar"

ATCC

14174

U‑1

48

strainAppearance 0f
pigment

StrainMedium

U‑1

agar.

72

96

(h)
48
72

0.1‑0.2"1 0.1‑0.6

0.6‑1.3

1.1‑1.9

0.2‑0.4

0.9‑2.0

1.0‑2.7

1.4‑3.3

0.1‑0.2
0.2‑0.3

0.4‑0.6
0.6‑1.5

0.9‑1.6
1.6‑3.2

1.0‑2.1
1.9‑4.048
72

0.1‑0.2

0.1‑0.6

0.1‑0.2

0.1‑1.2

0.3‑1.8
0.1‑3.2

0.7‑2.8
0.1‑4.148
72*1 Minimum
and maximum
colony diameter(mm)*2 Nutrient agar (Beef extract, 5 g; Peptone, I0 g; SOdium chloride, 5 g; Agar, I5 g; Distilledwater, 1 000 mI; purchased from Eikenkagau, TOky0, Japan)*3 TOrypt0‑soya agar (Peptone, 5 g; SOybean‑peptone, 5 g; SOdium chloride, 5 g; Agar, I5 g;

Distilled water 1,000 mI; purchased from

Eikenkagaku,

TOky0, Japan)@" Furunculosis agar (Bact0‑tryptone, t0 g; Bact0‑yeast extract, 5 g; L‑tyrosine, 1.0 g; SOdium
chloride, 2.5 g; Bact0‑agar, 15.0 g; Distilled water, 1,000 mI; purchased from Difco Lab.

Detroit, USA).

ずれの培地でも48 時間後に肉眼で確認された。
A・

salmwomfciぬ tJ‑l株の場合， 48 時間ではNA 培地で0． 9‑2.0mm,

0.1‑1.2mmとTSA 培地で 0． 6‑l.5mm.

FA 培地でNA 培地での発育が他の培地より 良好であったが，96 時間後にはNA 培地でI 4‑3.3mm,
・

TSA 培

地でI． 9‑4.0mm. FA 培地で 0.l‑4.1
mm と 培地間の発育の差はほとんど認められなくなった。また褐色色素の産生が確認されるまでに要した時間はいずれの培地ともに 7m時間で差は認められなかった。
分離部位に関する検討
生殖腺からのA ． Salmnnici血の検出結果を Tahle.3iに示供試した雌雄各¥0尾の腎臓，肝臓，心臓，脾臓及ぴした。
供試した各 T0 尾のうち雌では9尾 から，雄ではI尾からA ． 5filmnnicf血が検出された。 またすべての臓器から検出されたものが2例，生殖腺 を除く4臓器から検出されたものが2例，肝臓を除く4臓器から検出されたのがI例，心臓と 脾臓及び生殖腺を除く2臓器から検出されたものがI例，肝臓及び生殖腺を除く3臓器から検出されたものがI伊@，肝臓と心臓及び生殖腺を除く2臓器から検出されたものがI例，腎臓からのみ検出されたものが2例であ り，まったく分離されなかった個体も計IO尾あった。A salmoniciぬが分離された10尾について
臓器別にみると，肝臓，心臓及ぴ脾臓から分離されない場合でも腎臓からはA salmonwi而が分離された。
・

・

考

察

採卵親魚からA ． 5dhoW ぬ血を分離する方法を検討した。 まずA ． MMOW ぬ血分離用培地としてNA 培地，
TSA 培地及び FA 培地の3種の培地を用いて A ． s /mow ぬ血代表株の増殖 と 褐色色素を産生するまでの 時間
乙について検討したが，培地間に差は認められなかった。FA 培地はGriffinetal． (1953a) によりA ． 5M 川0%fCfddの分離用培地として，水溶性褐色色素の産生が他の培地より短時間に確認できると報告され，以前は， DifCo
社から市販されていた。しかしFA 培地は NA 培地やTSA 培地に比較して，色素産生までの時間に差が認めら

12

野村―せつそう
病の疫学的研究

Table 3. Isolation Of Aeromonas
nutrient agar
Fishsalmonicida from various organs

Of maturechum

salmonusing

medium.

Sex"

Liver

KidneyHeart

SpleenGOnads

n0.

十 "2

十

3

F

I0

POsitive

6

M
M
M
M
M
M
M
M
M
M

I

I2
t3
I4
I5
16

17
T8
I9

一一一一一一一一土

90POsitive
F, Female; M, Male.
A. salmonicida
was* ‑, A. salmonicida was+,31

isolated from the organ.
isolated from the organ.

not

れなかったこと (Tab た 2), BullockandRoss
コp 二と誤認される結晶が出現すること，(1964)が報告しているように， FA 培地では時として細菌のA ． mClmnnfrf 血の増殖に差がないこと CTable2)

・現在はFA 培地が市販されていないなどの理由から，FA 培地を使用する必然性はないと考えられた。
またAustinandAustin(1987) はせっそう病病魚からの原因菌の分離には，TSA 培地が適していると述べているが，培養中に産生される 酸により(栄研化学 1970) ， A ． sぱ imonmr.@血が死滅することもあ り (吉水私信)，さらに増殖の点でもNA 培地と比較した場合ほとんど差がないことから，経済的で人手が容易なことなどを考慮すると，分離用培地としては市販のNA 培地で十分と考えられた。分離部位については，腎臓，肝臓，
心臓，脾臓及び生殖腺 を対象に，A ． so7W0%fCf 七の検出率を 比較したが，A ． sば ?m 。乃 #Cf ぬ が検出された10 例の供試魚では全て腎臓からA

・

5dZ?wowfCf血が分離され ，腎臓からの検出率が最も高かった。DalyandSteVen‑SOn(1985) はせっそう病症状のみられないブラウンマス286 個体について，腎臓，肝臓，心臓及び
脾臓からの
A．

M 伽 。乃 fCf 血の検出率を 比較し腎臓からのMCDermott

検出率が最も高いことを報告している。 また，Rabb

and(1962) も，カワマスについて種々の臓器からのA ． SM 刑0%fCf ぬの 検出率を検討し 腎臓，肝臓及― 13 ―

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

NO

47, 1993

び心臓からの検出率が，卵巣や脾臓及び精巣に比べて高いことを報告している。 さらに病原体の検査法として広く用いられている， アメリ； 水産学会発行の診断 マ二 ュ アルにおいてもA ． 5n.1mnmzci血の分離部位として腎臓を推奨していること(Amos,1985)などを考慮すると， A ． Siilmomr.i血の分離部位として 腎臓を用いることが本研究を遂行する上で最適と判断した。
また木研究では増殖事業の現場で調査を実施しなげればならず ，事業用の採卵後の親魚を用いて A ．

5M‑

MOwfCf 血の分離を行な 5 必要があ る。 採卵作業によって腎臓以外の臓器や部位は汚染されるが，腎臓は鯉 に被われ直接汚染されることもなく，原因菌の分離を行うには最適の臓器と考えられた。腎臓からの分離培養ではPlate1‑A に示したように，陽性個体ではほぱ純粋にA ． Sぱ JmwowfCf血が出現したが ，険性個体では雑菌数も少なく，採卵作業に伴う汚染はほとんどないものと判断した。
以上のように 増殖事業の現場を 対象に調査を 実施することを 考え合わせると ，腎臓を対象に A.

salmonict ぬの 分離を試みることにより研究目的を遂行できると考える。
A ． salmonici血の検出法としては ，検出感度の点からは蛍光抗体法や ス タフィ ロコッカスを用いる共同凝集反応などの血清学的方法が，分離培養法 より優れているといわれているが(木村，古木1984)，木研究では採卵親魚のA ． salmonia 血 保有状況を明らかにしせつそう

病の防疫対策を確立することを 目的としていることから，生存している原因菌の検出が可能でなけらばならない。血清学的技法ではA ． sa わtmon 朽血が陽性と判定されても，その生死の判定がでぎないという難点があ り，培養法では臓器中の菌量が検出限界であ る
io ， cfu/g 以上なら検出可能であ ること，採卵場において培地への塗抹作業のみで検査がでぎることなどの理由から，木研究には分離培養法が優れていると考えた。 さらに原因菌が分離できれば，その分類学的位置の決定や病原性の比較検討，河川ごとの病原菌の異同などの ヒ較 も可能となる利点があ る。
以上を総合的に判断すると，木研究の 目的を遂行するためには，市販の普通寒天培地に， 採卵親魚の腎臓を白金耳もしくは滅菌綿棒で塗抹した後，実験室に持ち帰り，20 でで培養する方法が最適と判断した。
上

， ]、

括

採卵親魚のせっそう病原因菌A ． swdlmonicf血の保有状況を調査するにあたり，まず採卵親魚からの本菌の分離培地と分離部位を検討し以下の結論を得た。
I．普通寒天培地(栄研)，トリプトリィ寒天培地(栄研)及ぴrurunculosis
寒天培地 CDifco)を用いて比較検討したが，分離用培地としては市販の普通寒大培地で十分であ った。
2 ．分離部位としては検出率が高く，鯉にょって保護され採卵作業による汚染の可能性の少ない腎臓が最適で
あった。

第2 節

サケ，カラフトマス及びサクラマス 採卯 親魚の;小川別 ，年別，時期別のA salmon;c;da保有状況
・

北梅道内でサケマス増殖事業が実施されている主要河川におけるサケ，カラフトマス 及びサクラマス採卵

親魚のA ． salmomc みん保有状況を調査し病原菌の 地理的分布及び検出率の年別，時期別変化を検討した。

材料及び方法詔査対象河川及び期間

1979 年から 1992 年までの 14 年間にわたり調査を行った河川を Fig ． 3!C 示した。

調査対象河川 ぼ，北海道さけ・ますふ化場渡島支場管内が遊楽部川， 茂辺地川， 戸切地川，知内川，利別川， 厚沢部川， 朱大川及び尻m 川の8河川，大塩支場管内が暑寒別州，信砂川，大塩川，頓w 川， 幌別州及び徳志別川の6河川，北見支場管内が幌内川， 堵滑川，湧w 川，常日川，網走川， 斜里川， 藻琴川及び岩屋m 川の 8河川，根室支場管内が薫BI 爪， 伊茶仁川， 標津川，西別州，風蓮川，― 14‑‑

当幌川及び別当賀川の7河川，‑ト勝野村―せつそう
病の疫学的研究支場管内が釧路川及び十勝川の2河川，千歳支場管内が静内刈， 新旭川，敷生川及び石狩川の4河川，合計35河川であ つた。
供試魚、調査対象河川に湖上した後，成熱した採卵親魚を供試した。
供試尾数
I回当たり60 尾を基本として突施したが，増殖事業上重要な尻別州，徳志別州，幌内川，網走川，

斜里川，

岩尾別州，伊奈仁川， 標津川，西別州，釧路川，十勝川及び石狩川についてはI年間に数回実施した場合もある。 調査期間]4 年間の供試尾数を合計すると，サケは12 ， 374 尾，カラフトマスは4， 785 尾，サクラマスは3 ， 3沼

尾であ った。

Sea

ot JapanPacific Ocean

7

Fig. 3. The rivers where mature

examination

chum salmon, pink salmon and masu salmon were collected for
0f the prevalence Of Aeromonas
salmonicida fn the kidney.

1, Hekirichi;

2, MOheji;

3， ShiriuChL

4, TOshibetsu;

5， ASSabu;

6， Shubuto;

9， NObuSh;

10, Shokanbetsu;
14, TOkushibetsu;
18, TOkoro;
22, Iwaobetsu;
26, TOhoro;
30, Kushiro;
34, Shikyuu;

7, Shiribetsu;
11, Teshio;
15, HOronai;
19, Abashiri;
23, Kunbetsu;
27, Nishibetsu;
31, TOkachr,

12, TOnbetsu;
16, Shokotsu;
20, MOkoto;
24, Ichani;
28, Fuuren;
32, Shizunai;

13, HOrobetsu;
17, Yuubetsu;
21, Shari;
25, Shibetsu;
29, Bettouga;
33, Niikappu;

35, Yuurappu― T5 ―

8， IShikaLi;

さけ，ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY.

N0.

47. 1993

A ． sa 而on;c;da の検出

採卵後， 供試魚の腎臓を無菌的に露出させ，中央部を白金耳または滅菌綿俸で穿刺して，普通寒天培地(栄研) に塗抹した後，実験室に持ち帰り20でで7 日間培養した。検出限界は 102cfu/e組織であった。
A. salmon;c;daの同走

前節 と同様に行った。

結果

採卯親魚のA ． salmon;c;da保有状況
サケマス増殖事業におげる採卵親魚のA ． ymmWomc7 血 保有状況を，魚種別にTable4‑6に示した。サケの結果をTable 4に，カラフトマスをTablR 5に，サクラマスをTablef に示した。以下に地域ごと年ごとに整理して地理的分布，年変 及び時期別変化として取りまとめた。
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北侮道さけ・ます ふイヒ 場の担当支場毎にA ． saalmomci血の地理的分布を 取りまとめた。

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サケ: 渡島支場管内の茂辺地川， 戸切地川，知内刈， 厚沢部川，利別州，朱大川，尻別州及び遊楽部川の調んは検出されなかった。
査結果をみると，いずれの河川からもA. 5alm.nnn.Ar.A
大塩支場管内の4河川の調査結果では， 天塩川，頓別州及び徳志31爪の採卵親魚からA salmom;cf血が検出され，署寒gl 川の採卵親魚からは検出されなかった。

北見支場管内の6河川の調査結果では， 幌内川，常日川，網走
川及び藻琴川の採卵親魚からA swilmomci血が検出され，幌内川の採卵親魚では 1980.1981,1982、 1990及ぴ1992年にかなり高率に検出された。斜里川の採卵親魚から 198f年までは検出されなかったが， 1989年以後検出された年もあ る。 渚滑川の採卵親魚から・〃／は検出されなかった。

また根室支場管内の薫別州，伊茶仁川 標津川，当幌川， 西別州及び風蓮川の調査結果では，すべての河川の採卵親魚からA ．

sは ?m0mfCf血が検出され ，十勝支場管内の十勝川及び釧路川では，両河川からH

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さらに千歳支場管内の4河川では，石狩川，静内川及び敷生川の採卵親魚からA salmnnif'i血が検出されたが， 新冠川の採卵親魚からは検出されなかった。
ぬが検出され，その検出率は1.3%
サケ採卵親魚では調査対象30河川の19河川の採卵親魚からA ． sXz.1mnnir.iから33 ． 3% であった。
カラフトマス:大塩支場管内の4河川について調査した結果では， 徳志 m 川の採卵親魚からA・salmonici血が検出されたが， 信砂川，頓別州及び幌別川の採卵親魚からは検出されなかった。
また北見支場管内の8河川におげる調査結果では幌内川，常日川，網走川， 藻琴川及ぴ斜里川の採卵親魚から

A ． salmon □ぬ が検出されたが， 湧別州，渚滑川及び岩屋Sll川の採卵親魚からは検出されなかった。

根室支場管内の5河川では伊茶仁川， 標津川，西別州及び風蓮川で採卵親魚からA.salmonici血が検出された@C

十勝支場管内の十勝川の採卵親魚からはA ． salmomfci血が検出されたが、釧路川でぼ検出されなかった。
カラフトマスの場合では，調査対象 Iw河川のうちn 河川の採卵親魚からA ． salmomfcf血が検出され ，検出率はI． 4% から15.0% であった。
血が検出
サクラマ ス : 渡島支場管内の I河川，尻別川について調査した結果では， 採卵親魚からA salm 。れ &f.t
・された。

大塩支場管内の5河川の調査結果では暑寒別州，信砂川及び大塩川の採卵親魚からd ． sa 研omci血が検出さ川の採卵親魚からは検出されなかった。
れたが，徳志別州及び幌@ll
北見支場管内のI河川について調査した結果では， 斜里川の採卵親魚からA ． saalmnnici血が検出された。

― 16 ―

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根室支場管内の4河川の調査結果では， 漂津川及び西W 川の採卵親魚からA ． salmomJci血が検出されたが ，

風蓮川及ぴ別当賀川の採卵親魚からは検出されなかった。
サクラマスでは調査対象¥W河川のうち，?河川の採卵親魚から A. salmomfci血が検出され ，その検出幸は0 ． 4%

から4.7% であった。

以上サケ，カラフトマス及びサクラマスの採卵親魚におけるA ． salmWomct血の地理的分布を 検討した結果，サクラマスでは調査したすべての地域の採卵親魚からA. salmomci血が分離されたが ，サケでは渡島支場管内の河川に湖上した採卵親魚からは分離されなかった。
2 ．検出幸の年変化

1979 年から 1992 年までの 14 年間の調査期間内において， 8回以上調査を実施した河川を対象にして，A ． SM‑
w0WfCf 血の検出率の 年変化をサケについてはTable? に， カラフトマスについてはTable8 に，サクラマスについてはTable

9 に示した。

サケ : 石狩川では 1979 年から 1992 年まで毎年調査を 実施したが， 1985 年及ぴ 1992 年を除いて毎年 A ．

MZ・momfcf 血が検出された。その検出率はI． ?% から44.5% と変化が認められ，調査の後半の年に低下傾向がみられた。
網走川では1979 年から1992 年までの間に8回調査を実施したが， 1979 年に l1.7% の検出率でA ． salmonicida
ほが分離され，それ以後検出されなかったが， 1990 年及び 1991 年に再びそれぞれI． ?%と10% の 採卵親魚から分離された。斜生川では1979年から 1992年まで 10回の調査で，19Rf 年までは険性であ ったが1989 年以後 199W 年
を除きA ． salmomci 血が分離されている。
また十勝川では1979 年から 1992 年まで9回調査したが， A ． 5almnnir.iんは全ての年で 分離され，その検出車は3． 3% から29.2%であった。

徳志別川では 1979 年から 1992 年まで 8回調査を実施したが ， 1979 年に 30.0% の検出率を示し

1992 年にそれぞれ8． 3%
カラフトマス:と19S9 年及ぴ

I． ?% の検出率をしめしたが，他の年では検出されなかった。

斜里川では 1979 年から1992 年まで ]l 回調査を実施したが1989 年と 1990 年にそれぞれ l.7% と13.3% の採卵親魚から検出されたが，他の調査年にはA ． ssa研 onirf 血 は検出されなかった。徳古川では8回の調査を実施したが， 1979 年に 19 ． 1% の親魚から検出されたが，それ以後は検出されなかった。幌内川では8回調査されているが内 5回から検出されている。
岩屋別川では1984 年から1991 年まで8回調査を実施したが，いずれの年においてもA ． salmomci 血 は検出されなかった。
サクラマス : 尻別川では 1980 年から 1992 年にかげ 12 回の調査を実施したが，そのうち7回の調査でA ． 5d‑

WOwfCf 血が検出され ， その検出率はI． ?九から14 ． 9Z であった。

以上採卵親魚のA ． sd7WowfCf血保有状況の経年変化をみたが，保菌魚の検出される河川忙されない河川が存在し検出された 河川の採卵親魚では長期にわたって保有する傾向が認められた。
3 ．サケ採卯親魚からのA ． safmon;cida検出車の時期別変化

m979 年から 1990 年まで，石狩川において実施した調査をもとに，サケ採卵親魚からのA ． salmomci 血の時
期別検出率をFig. 4に示した。
石狩川におけるサケ採卵親魚からのA ． swalmomfci血の検出 率は，

上

979 年から1983 年の間では，月別に見る

9月に低い値を示したが，催熟蓄養池への収容尾数が増加する 10月上旬以後は高くなり，収容尾数が減少す
る 10月下旬以後に再び低下する傾向がみられ明らかな時期別変化が認められた。検出率は 1981 年10@ 21 日に
最高80.0% を示した。これに対して催熟蓄養池が整備され，湧水と河川水を混合して使用するようになったとョ

1985 年以降は，検出率が低下し
4 ． 雄成熟親魚からのA ． salmomic;da198 ．3年までのように明確な時期別変化はみられなくなった。
の検出

1980年及ぴ1988年に道内4河川の3魚種合計280尾の雄成熟親魚を対象に 調査したA ． 5.1mnniri血の保有 状― 19 ―

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況を，同時に調査した雌親魚の結果と共K二 Table 10 に示した。

1980 年 10 月の石狩川では雄親魚からの検出率が23 ． 3% ，雌では35% であったが，11 月には雄親魚でI ?%,・

雌親魚で3． 3% ，さらに1988 年 10 月では雄親魚が 8.3% ， 雌親魚が5． 8% となり，雌雄によるA ． <@.1mnnici血の検出率に大ぎな差は認められなかった。
幌内川のヵラフトマスでは 雄親魚の 6． ?% からA ．

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ぬ が検出されたが ， 雌親魚からは A・s&7

mfimfciんは検出されなかった。

斜里川及び尻別川のサクラマス親魚からは雌雄ともA. Salm@nic$血 は検出されなかった。
Table 10. Prevalence Of Aeromonas
salmonicida fn the kidney Of maturesalmon ;n HOkkaidothat showed no clinical signs Of furunculosis.
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Chum
Chum

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Ishikari
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47, 1993

察

北海道において増殖事業が開始されて 以来，催熟蓄養が行われるまでは親魚の疾病が事業を実施する上で大きな問題となることはなかった。 しかし早期に 漁獲できる経済価値の高い資源の増殖が強化され，これらのサケが未熟のまま河川を湖上してくるようになるとともに，増殖事業用の親魚とするには1 ヵ月にも及ぶ催熟蓄養が必要となってぎた。 このように催熟蓄養が長期に及ぶ場合には，限られた面積に多数の親魚が収容され，環境の悪化とストレスの増大により種 々 の疾病が発病する機会も増加すると考えられる。
本節では増殖事業に用いられる親魚のせっそう病原因菌 の保有状況を，

1979 年から1992 年までの14 年間にわたり，北海道の主要な サケ マス増殖河川を対象に調査した結果を示した。
調査方法は前節での検討結果に従 い，腎臓を普通寒天培地に塗抹する方法によった。供試個体数は， OSSian

derandWedemeyer

・U973) の報告に従い，無限大の母集団に対応する標本尾数として60 尾を設定した (95%信墳)。 供試したサケ，カラフトマス及びサクラマスの採卵親魚に，外観症状はまったく認められず，特有の膨痛患部が形成された個体もなく全て正常魚、 と判断されるものであった。
北海道内の主要35 河川について，サケ，
カラフトマス及びサクラマスの採卵親魚におげるA ． salmnnir.i血の保有状況を検討したところ，サケでは3(O河川中凹河川から，カラフトマスでは19河川中iI 河川から，サク
ラマスでは1] 河川中?河川の採卵親魚から A ． S.1.mWnnici 血を分離した。

調査対象地域が北海道全域にわたること，調査期間が 14 年に及ぶことなどから，北海道さけ ，ますふ化場の担当支場ごとに区分して，採卵親魚のA ． salmomfci ぬ 保有状況を，地理的分布として取りまとめたところ，
サケでは渡島支場管内の北海道南部を除く広い範囲に分布していることが明らかになり，

カラフトマスでは

天塩支場管内のオホーツク悔沿岸，北見支場管内のオホーツク海沿岸，根室支場管内の太平洋東部の河川の供試魚 から検出された。サクラマスでは渡島支場管内の 日本海南部及び大塩支場管内の 日本海北部，北見支場管内のオホーツク海沿岸及び根室支場管内の太平洋東部の河川に分布していることが明らかになった。 このように，A ． sa.1mnniciんは北海道内の 広い地域に分布していることが 明らかになった。
外観上正常なサケ科魚類親魚からのA

・

salmomc&血の検出例については ，

Daly

and

Stevenson

アメリヵのオンタリオ州のブラウリマスを 対象に，3年問にわたり 286 尾を調査しその 10 ． 87

(I985) が
からA ．

SM‑

肌乃□ぬ を検出したと報告しているが，現在のところこれ以外の報告は見当らない。今回 L 年間の調査結果
による，A ． 5MmoW

ぬ血の 魚種 ごとの平均検出率屯はI． 8Z となり，DalyandSteVenSon

サケでu ． 97 ，カラフトマスでは4． 5九 ，サクラマスで

Q985) の結果に比べると，サケではほぼ等しい検出率であ ったが・

ラフトマス及びサクラマスでは低い検出率を示した。親魚に関する報告として 仏 Smith(1962)
ラソドの12 河川の産卵後の大西洋サケについて，し，検出率が74% にも及ぶことを， Hewetson

ヵ

がスコット

同様の検討を行い ?河川の親魚から A ． salmomfci 血を検出

C1962)が19fin 年から1961 年にかげてスコットランドの 4河川を調査しこのうち I河川の成熟後の大西洋サケの88% から，A ． m.1@nnici血を検出したことを 報告している。
しかしこれらの報告はいずれも供試魚が成熱後の死亡した親魚であ ること，典型的なせつそう病の症状のみられる親魚であったことなどの点で，木研究の調査結果と比較することはでぎない。
北海道内のサケ属魚類からのA ． Ssaialmontci血の検出例としては ，小林ら (1963) の海水飼育中のサケ稚魚，
西野 C1967)の 催熟蓄養中のサケ親魚，木村 C1970)のヵラフトマス及びサクラマス親魚の例などがあ るが， こ
れらはいずれも外観上明確なせつそう病の症状が観察された病魚からの検出例である。
また親魚ではなく，外観上正常な末成熟魚からA ． sd77wowfCfぬ が検出された例もあ り， Bull0CkandSnieSZ‑(1969)は合計166尾の二ジマス，

ko
mott

；ヮマス及びブラウンマスのI． 8Z に当たる3尾から，RabbandMCDer

Q962) は2河川のヵ ヮマスからI． 67(1962)及びHewetsonと 13 ． 0% の割合でA ． SMWOw

・ぬ 血を分離しているが ，前述のSmith(1962)の，外観上せっそう病と判断される親魚の場合と比較すると低い値であ った。

これまでにも述べたよ 5 に，木研究に供したサケ属採卵親魚はいずれも外観上せっそう病の症状が認めら― ?.?

野村 せつそう病の疫学的研究れないにもかかわらず，

その原因菌H ． sarmonici血が高率に検出された。 しかし調査を実施した 14 年間，対象河川の催熟蓄養池において，せっそう病によると考えられる大量死亡は観察されていない。 このことは，
北海道のサケマス増殖事業が実施されている主要河川に湖上するサケ，

カラフトマス及びサクラマス親魚のなかに，A ． salmwomci血の保菌魚が 存在することを示すものと考えられる。

魚類病原体の飼育環境中への侵入経路としては，飼育水や器具さらに人等が考えられるが，せっそう病の場合最も人きな要因は， HOrne and Maj (1928)及び MCCraw (1952)が指摘しているように保菌魚の存在と考えられる。A ．

MZWOw ぬんは魚類病原細菌の 中では数少ない 絶対病原細菌であ るとされ (SnieSZko ，1964) ，また魚病は宿主である魚と病原体との相互関係によって発病するといわれていることから (SnieSzko ，

1958)，以上のように北海道のサケマス増殖事業の採卵親魚にかなり保菌魚C不顕性感染魚) が存在することから考えて，健康度の低下や環境条件の悪化によっては・せつそう病がいつ大発生しても不思議ではない状況と考えられる。

次に， 同 ―河川について採卵親魚からのA ． salmomciぬ検出率の変化を長期に観察したが，石狩川のサケでは1981 年の 44 ． 5% を最高に，それ以後1987 年には2． ?% まで検出率が低下し，網走川でも1979 年の 11.7% を最後に以後低下傾向を示したが，再び1990年及び 1991年には検出された。 これに対しで十勝川では途中調査を実施しなかった年もあ るが，1987年にも 21.6% の検出率を示し 検出率の低下傾向は認められていない。―方
斜里川では，1979 年から T986 年までの6回の調査ではサケ及びカラフトマスからA sa肋 wmfci んは検出されて・いないが，サクラマス からは1987 年にI個体から検出されA ． 5.1@.0nici血の 非汚染河川とはいえなくなった。

Smith C1962)は，イギリスの河川におげる成熟後の大西洋サケからのA salmdniciぬの検出率を 3年間にわ・たって調査し 検出される河川では3年間継続して，陽性となることを報告し本研究のサケ ，カラフトマス
及びサクラマスの場合と同様の結果を示している。
なお石狩川において1979 年から 1990年までの間， A ． salmomci 血の検出率を 時期別に比較検討したところ，

10 月上旬から中旬に検出率が増加し
Rahb

and McDermott

以後は低下する傾向が認められた。

(I962)は河川のカワマスからのA ． salmomfcidaの検出率と水温の影響について検討し，水温 10C 以下で4． 5%, I0@C以上では22.2% と高水温時に検出率が高まることを報告している。木研究の結果でもA ． salmonic?んは水温が高く ， 採卵のピークであ る 10 月に検出率が高かったが，催熟蓄養施設の改善により，検出率が低"「したことから，高密度に蓄養される催熟蓄養が検出率により影響しているものと推察される。
ところでMcCrawQ1952) 及びSmithC1962)は性別によりせつそう病の感染率に差が認められると報告しているが，木研究では性別によるA ． salmomci 血の検出率に 差は認められなかった。
サケ属採卵親魚から検出されたA ． sn rmnnin血の起源については，上流域に生息している罹病魚が原因菌
ょを体外に排出することによって，河川に回帰した親魚が感染したものか，幼稚魚が飼育池で感染を受げキャ
りア のまま放流され，親魚が保菌状態で回帰したことによるものかのいずれかと考えられるが，これらの起源を考察するためには，他の生活期のサケ属魚類におけるA ． 5&JW0wfCM ほの保有状況及びA

・

5M 川0% 桁血の魚体内におげる動態についての検討が必要であ る。
今回A ． 5MWOw□血が検出された 河川は，いずれも北海道における主要なサケマス増殖河川である。 1987

年の北海道さけ・ますふイヒ場 事業成績書によれば，

Tab@e4r 示したA

・.s@&7mci%fri血が検出された河川のサケ親魚からの採卵数は， 545.048干粒 と北海道全体の34.4% に達している。現在サケの採卵数が少ない河川の資源造成を目的に，主要な河川から卵の移殖が活発に行われているが，これに伴ってA salmomfcidaの分布域がさらに拡大する危険性が考えられ，卵から稚魚への垂直伝播の危険性も懸，念され，早急に
A.salmonici血対策の確立の必要性が考えられる。
・23

さけ，ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

/
」

N0.

47,

1993

括

八

1979 年から 1992 年までの間に北海道内の主要な サケ マス増殖河川に湖上したサケ，カラフトマス及びサク
ラマス採卵親魚計20,542 尾を対象に，A ． s%i.1mnnt 。?ぬの 保有状況を調査し 以下の結論を得た。
サケ12,374 尾中I， 473 尾山 I 9%) ，；ラフトマス4 ， 785 尾中213 尾・I・サケ 属採卵親魚総数 20,542尾を検討し(4.5%) 及ぴサクラマス3， 383 尾中62 尾 (1.8%) からA ． salmnmci

ぬ が検出された。

2・サケ 採卵親魚では調査した30 河川中19 河川から，カラフトマスでは調査した1Q 河川中n 河川から，サクラ朋 mci 血が検出された。
マスでは調査したH 河川中?河川からの採卵親魚、 からA. salm

・

4 A

・

3．北海道内においては，南部の地域を除く広い地域に分布していると考えられた。

5n.Amm。市c@血の検出率の 時期別の変化を，石狩川を対象に調査した結果，io 月上旬から中旬に上昇し最高は80% にも達した。 これは，採卵親魚の催熟蓄養尾数が増加することに原因すると考えられた。
5 ・以上のA．

5J.1minnirt ぬ が検出された河川は，採卵数が北海道全体の34% にも達するサケマス増殖事業の中心となる河川であ り，資源造成のための卵の移殖に伴い，

A ． salmomfci

血の分布がさらに 拡大されるおそれがあ り， また親魚から卵及び稚魚への伝播の危険性も懸念された。

第3 節

保菌 採卯 親魚の腎臓における A ， salmonicida の存在状態

前節において，せっそう病の原因菌であ る A ． salmomfcfぬが，北海道内の 広い地域の採卵親魚から高率に検出されることを明らかにした。 このような採卵親魚のH ． Sn.1mnnzhC.t血 汚染状況の把握は，水病の感染経路及び防除対策を解明する上で重要と考えられる。
本節ではA ． .w.1m 。血r.i
血 保菌魚の腎臓における同苗生菌数，蛍光抗体法及び組織学的な方法による存在状
熊を検討した。

材料及び方法供試魚
腎臓におけるA ． salmonici血生菌数の測定には 石狩川，大塩川及び標津川の催熟蓄養 サケ採卵親魚をそれぞれ10 ， 10 及び40 尾，

さらに標津川の催熟蓄養 カラフトマス採卵親魚を10 尾供試した。また腎臓におげるA

fsnalmonir.i?
血の存在状態の観察には石狩川，伊茶仁 川攻 び標津川に湖上後催熟蓄養した親魚 各 m0 尾を供試した。なお比較のため倒茶亡事業場で飼育中のギンザケのせっそう病魚5尾も供試した。なお供試した採卵親魚には外観上せっそう病の症状は認められなかった。

腎膜中の生菌数の測定
前節 と同様の方法により， 供試魚の腎臓中央部を無菌的に摘出して， 精件後滅菌乳鉢で充分磨細し 検体の 9倍量の生理食塩水を用いて ホモゲナイズ後，lo 倍段階希釈を行い希釈系列を作成した。普通寒天培地 (栄研)平板2枚を用いて，希釈材料を培地表面に塗抹し 20C で5‑7 日間培養後，出現した褐色 コ 口二―数を計数し A ． sw.1mnmci血生菌数として 求めた。検出限界は50cfu/e 腎臓であ った。
育肢からのA ． salmon@c;daの検出

後述の腎臓におけるA ． salmomct
りA ． sdfw0w

血の存在状態の 検討のための供試魚 については，前節 と同様の力法によぬ血の検出を行った。

組織の固定及ぴ標本の作成
供試魚のうちで腎臓からA ． SM 川0% 石血が検出された 個体については，その腎臓，肝臓及ぴ
心臓を10% 示、
ルマリリ液で48 時間固定し常法によりアルコールで脱水後，パラフィンに包埋 した。包埋後の標本は5pmの切片とした。
染色及ぴ蛍光抗体法によるA ． safmon@cida

存在状態の観棄― 24 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究sampled from
from

the

the Ishikari, Shibetsu and Teshio rivers, and maturepink salmon sampled

Shibetsu River

SpeciesRiver

Viable counts (cfu/g)

Number Of fish
isolated/examined

Other

Ishikari

ChumsalmonTeshioShibetsu<50*1

I 9X10 。
I 2XI0'
・

Iれ0

・

22/40

2 9X10'・・

3 7X]0 ，・・

5 0X10 。
3 4X 上 0'
・

7 4X10 ，
8 7X10'
・

上

・

0X10'

8 2XI0 ，・

5 0x10'I 9X10 ，・・・

5 0X10'
4 IX104
・

5 0X10'・<50

2 IXI0 。
・

2 IX10"
・

<50
<50
<50

6 5X10 ，
・

4 0X10 ，・

2 3X104
・

2 IX105
5 0XTO ，
上
7X10 。

<50

2 IX10 ，

<50

・

・

・

・

Shibetsu

Pink

I 5X10'・

salmon

上

・

0X102

4 上 X103
・*， NOtdptprted．

前記のように作成した切片について先ず，へマ トキシリン・
ュオシン染色(HE 染色)ならびにギムザ染色を行った。蛍光抗体法は北海道大学水産学部微生物学講座から分与され，抗A 5ぬ M0%fCf ん ATCC14174
・家兎

血清及び市販のHTC 標識抗家兎山羊血清(協和メデイクス)を用いた問接法により実施し倍率 I， 000倍で50視野について特異蛍光を発する菌体の存在状態を観察した。

結

果

昔肢における生菌数

U に示した。
石狩川のサケ採卵親魚からは，供試した 10尾中I尾から，大塩川では10 尾中I尾からA ． 5sn.1mmrinir.i
血が検出され，腎臓中の生菌数はそれぞれI． 9x104cfu/e及びI 2x103cfu/eであった。標津川では40尾中22尾から検出
サケ及ぴカラフトマス採卵親魚の腎臓中のA ． .wlmonici血生菌数を Table

・され，生菌数は5． OxIn ，から2.1x105cfu/g であった。A .@ 肋 nnir.i血 以外の生菌数 はいずれも検出限界以下で
・

あ った。

― 25 ―

さけ・ますふ 所報 SC1.

REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47,

1993

また漂津川のヵラフトマスでは， 供試した I(l尾中・ 3i尾 から検出され， 菌数は I Ox]o ，から4.1x103cfu/g であ っ・た。A ． 5alm
れnmfct 血 以外の生菌数は検出限界以下であ った。
背肢におけるA ． safmon;cidaの存在状態

自然発症したギソザケは，HE 染色による観察では膨瘤患部におげる筋肉組織の融解，腎臓におげる壊死が観察され，さらに，腎臓，肝臓に短かん菌の集落が観察された。 またギムザ染色では，さらに 明瞭な短かん菌の集落が観察された。蛍光抗体法では，ギムザ染色及びHE 染色で短かん菌が観察された部位に強い蛍光が観察され，蛍光を発する多数の菌体が確認された (Plate1‑B, Plate1‑C)。 この蛍光は対照の正常家兎血清を用いた染色では認められなかった。
腎臓からのA ． salmomr,@血検出が陽性となったサケ 親魚の観察では， ギリザケの自然発症魚に見られたよ

うな組織変化は認められず，腎臓，肝臓及び心臓にも細菌集落は観察されず，蛍光抗体法によっても菌体 は確認出来なかった。

考察

A ． salmon7fci血の腎臓におげる 生菌数について， 森川ら (1981) はアマゴを用いた感染実験の結果から， 死魚の出現する時点では，10'cfu/eに達することを報告している。本研究のサケ及びカラフトマスの腎臓におげるA ． fsa.1m。乃 ir.z
血の生菌 数は 103cfu/K 程度であり(Table11) ，死亡にいたるほどの菌数には達していない

ことを明らかにした。また，他の細菌はいずれも検出限界以下であ り， A ． snalmnmci血の検出陰性個体でも他の細菌は検出されなかった。

せっそう病の病理組織学的検討では宮崎・窪田(1975a, 1975b)が， 経鯛感染及び経度感染のいずれの場合
も，腎臓には細菌集落の形成が観察されたことを報告している。本研究でも，ギンザケの 自然発症魚では，腎臓に細菌集落が観察され，蛍光抗体法で多数の菌体が観察された。 しかし A ． salmnnici血 保菌サケ採卵

親魚の腎臓には細菌集落と考えられる像は観察されず，蛍光抗体法でも菌体は認められなかった。―般に蛍光抗体法での検出限界は I0'cfu/eg と考えられ，供試魚腎臓中の保菌A ． fsn.1mnnir.f血の生菌数が I0'cfu/K 程度であったことを考えると矛盾はないと考える。
血の腎臓における 存在状態及びその保菌生菌数を考え合わせると， 採卵親魚か以上のようにA ． SiJ.Am.0nw.iri
ら

A. salntnnici血が高率に検出されるにもかかわらず ，せっそう病の発病が認められないのは，腎臓におけるA ． salmonici血の生菌 菌数が死亡に至る菌数に達していないためではないかと考えられる。 これら採卵親

魚の腎臓中のA ． 5ilmomri 血の生菌数が 少ない理由としては，感染してからの期間が短いか，

あ るいぼ分離された菌株が非病原菌株であ り，腎臓内での増殖が起こらないためとも考えられ， これらについて今後検討する必要があ る。

括ノ」 八

サケ及ぴカラフトマス採卵親魚腎臓中のA ． iw.1lmmnnfr.t
血生菌 数及び存在状況について検討し以下の結果を得た。

保菌採卵親魚の腎臓中のA ． 5almnnitcf血の生菌 数は 103cfu/e 程度であ り，組織学的な検討でも，せっそう

柄のギンザケ病魚に見られるような腎臓における細菌集落は観察されず，蛍光抗体法によっても菌体は観察されなかった。
2．保菌採卵親魚にせっそう病による死亡がみられないのは，腎臓中の生菌数が少なく，保菌魚の状態にあ るためと考えられた。

26

野村 せつそう病の
疫学的研究

茸壬

gD ョ規魚、 おける Ae omonas
感染時期について

2 三章

キ采

「

〃こ

salmonfc@daの前章において，サケ属採卵親魚から河川によっては高率に，せっそう病の原因菌であ る A ． salmonici血が緒言でも述べたようにA・検出されることを 朋 らかにした。

salmnmct 血 は主としてサケ科魚類に病原性を右す病原体であ るが，宿主範囲は

淡水魚，海産魚の別なく広い範囲に渡っている。採卵親魚が保菌していたA ． salmnmci 血の感染時期を 明らかにすることは， 採卵親魚からの保有率を低減しまたせっそう病の防除のための具体的な方策の確立に役立つものと考える。
本章では沿岸に回帰したサケ成魚及び末成熟親魚のA ． salmonici血保有状況を検討するとともに，サケ成
熟親魚体腔液中のA ． sa momct ぬの 生菌数， A ． salmwomfcfぬの 水中での生存性，サケ卵からのA ． salmnnici 血ぱの検出率とその生菌数の変化を観察しふ化場内のサケ 受精卵及び稚魚，サクラマス幼魚ならぴに野生魚のA ． @J.1.m.0w□血 保有状況等についても調査した。 さらに採卵親魚の血液中の凝集抗体価を測定し併せて A

mo1mm.UW.Cz.血 フアージの存在状況を調べ，採卵親魚のA ． sw.1momr.tぬ 感染時期について検討した。

第 ]節

沿岸に回帰した 成魚及び未成熟サケ 親魚のA ． salmomfofda 保有状況

前章において，北海道内の主要なサケマス増殖河川のサケ属採卵親魚の腎臓からA ． salmomfci血が高率に検出されることを明らかにした。
わ moniciぬの 感染時期を知ること 戊 せっそう病の防除に不可欠と考えられる。
この採卵親魚におげるA ． sa @本節では北海道沿岸の定置網で漁獲された河川湖上前のサケ成魚，河川湖上後の末成熟サケ親魚及ぴ採卵直前の成熟サケ親魚の腎臓を対象にA ． Salmontict血の検出を試み 比較検討した。

材料及び方法供試魚
沿岸に回帰したサケ成魚の腎臓からのA パ0ZmowM
5に示した北海道の紋別市，常日町，ぬ 検出には，1979 年 10 月から1990 年9 月までの間にFig ．

斜里町及び標津町沿岸のサケ定置網で漁獲されたサケ成魚を合計480 尾供試した。
河川湖上後の未成熟サケ親魚及び採卵直前の成熟親魚 (以下採卵親魚と称す)腎臓からのA ． salmamfci血の検出には， 1989 年9月から10 月にかげ漂津川，西 glM 及び石狩川に湖上役催熟蓄養中の末成熟サケ親魚280 尾
及び採卵親魚540 尾を供試した。

生殖線指数
末成熟の供試魚 については，体重及び生殖服の重量を測定しC生殖腺重量 十 体重)x100 として生殖線指数を求めた。
昔腱からのA ． salmon;cidaの検出

供試魚の腎臓を無菌的に露出させ，中央部を 白金耳または滅菌綿棒で穿刺して，前章同様分離用培地に塗抹した後，実験室に持ち帰り20 でで7 日間培養した。

結
沿岸に回帰したサケ成魚の背膜からのA ． salmon;c;da

果の検出幸― 27 ―

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

沿岸で漁獲されたサケ 成魚の腎臓からの A ．

N0.

47,

1993

Sぱ 7

momfci 血の検出結果を TablR 12 に示した。
1979 年から 1990 年にかげ紋別，常日，斜里及び標津沿岸で漁獲されたサケ 成魚480 尾を対象に検査したが，いずれの供試魚 からもA. Salmomr.tぬは検出されなかった。
河川潮上後の未成熟サケ親魚及び採卯親魚の腎臓からのA ． salmon;c;daの検出幸

標津川，西別州及び石狩川の末成熟サケ親魚及び採卵親魚、 からの A ． MMOw

H

而 血検出率を Tableに示した。
実験 ‑1 の際津川での 生殖線指数が 15 6 から26 2 まFIg ． 5． LOCationSwhere

・・

での末成熟親魚60 尾の検出率は40% であったが採卵

fry andeggs

Of chum

親魚 60 尾 からの検出率は 733i..3
光と，末成熟親魚に 比salmonwere

sampled.

べて有意に高い検出率を示した。

での末成熟親魚60 尾 からはAれなかったが，・・・

突験 ‑2の標津)ll
での生殖線指数が 123 から220 ま
sd7W0 血CfdC は検出さ

採卵親魚 60 尾 からの検出率は 35 ． 0Z

1

Yuurappu

hatchery;

き

員

7，

NakagawahatChery;2

andShubuto
仁三で11, Nijibetsu hatchery;

young

，

masu

hatchery;8，

三三Kitamihatchery;

10 ， KuShiro hatChery;
12, Nakashibetsuhatchery;

15,Nemuro
13,
Shibetsu
hatchery;River; 14,
16,Ichani
Nishibetsu
hatchery;River;

・

実験 3の西別川での生殖線指数が I(@
5 から23U
Iま・

salmon， maturehin
出b.sbettsuRR
ha三だぱ三ery;
む拮 hi p ver;hatchery;

9 ， Shari hatChery;と 20 ． 0% であ った。

adult ， immature

での末成熟親魚 60 尾の検出 率は L7Z であ ったが採17 ， SatSunaihatChery;

18 ， MakubetSuhatChery;

卵親魚60 尾からの検出率は51 ． ? 光と38 ． 37 であ った。

19 ， ShiZunai hatChery;
21 ， TOkoro coaSt;

20 ， MOnbetSu coaSt;
22 ， SharicoaSt;

実験 4 の石狩川では，生殖線指数が 8 ． 9 から22 ． 2 ま

23, Shibetsu coast.

での未成熟サケ 親魚 ion 尾を対象 (CA1. w.tmnw.r.z血の検出を試みたが，すべて陰性であ った。―方成熟

採卵親魚240 尾からの検出幸は4． 2% であった。
いずれの実験においても，未成熟親魚からの検出
率は成熟親魚に比べて低い値を示した。

考Table 12. Prevalence Of Aeromonas
salmonicida in thekidney 0f immature chum salmon sampled from the察

本節においては海洋生活の終了時点であcoastal region off HOkkaido

Numberる ，沿岸に回帰したサケ 成魚を対象に A

MJWOwfCf 血 保有の有無を調査したが，調査

PlaCe

Examined

対象とした常日川及び標津川の成熟採卵親
魚では，A ． MMM

MOnbetSu

sept

18 ， 1990

60

TOkoro0Ct 30 ， 1979
Oct. 16, 1980
Sept. 12, 1980
Sept. 6, 1988
Sept. 30, 1989
Sept. 11, 1990
Sept. 26, 1990

60

り(Table12) ，河川湖上前にはA ． Rd.1mnmfci血を保有していなかった。

Shari
Shibetsu

そこで，河川での末成熟親魚について A

salmnmfcf血の保有状況を 検討した結果，実験‑2 の標津川及び要験‑W の石狩川でほ末成

28・ぬ血が高率に検出されたにもかかわらず，沿岸に回帰した成魚の場合にはいずれも険性であOf fish

Date

・

60

60
60

60
60
60

Isolated野村 せつそう病の疫学的研究
Table 13. COmparison
Of the prevalence 0f Aeromonas
salmonicida
in thematurechum salmon in the Shibetsu, Nishibetsu and Ishikari rivers

xp

Immaturefish

min.‑max.

Examined

Isolated

(%)

40.0

1

Shibetsu

OctI8

15.6‑26.2

60

24

2

Shibetsu

Sept. LI

12.3‑22.0

60

0

3

4

Nishibetsu
Ishikari

Sept. tI

10.5‑23.1

Sept. I6

8.9‑22.2

1.7

60

100

0f immature

MatureName
Of Date GOnad
indexNumber
OffishPrevalence
Date
river

kidneyandfi叶

Number

Of fishPrevalence

Examined

Isolated(%d)
3Oct. I8

60

44

73

Sept. 2I60

21.315 0

Sept. 2I

60

12

2o.0

Sept. 25

60

31

S1.7

Sept. 25

60

23

3@

Sept. 20

240

I0

42

熟親魚からA ． s7ZmowfCf血 は検出されなかったが採卵親魚からの検出率はそれぞれ35 ． 0Z ，

・

・

・

3

・

20 ． 0% 及び4． 2光であった(Table 13) 。
―方末成熟親魚の検出率が40%と高い値を示した実験 ‑1 の標津川では採卵親魚では 73 ． 3光を示し実験 ‑3も採卵親魚は未成熟親魚に比べ有意に高い検出率を示した (Table13)。 以上のように沿岸での成魚がA・の西別川では末成熟親魚がI． ?おであったが採卵親魚では51 ． ?光及び38 ． 3おと高い値を示しいずれの 実験で
sは Z‑

WOM 而血を保有していなかったにもかかわらず ，河川に入るとA ． 5がWOw 而血が検出されたことから ， 採卵
親魚へのA ． 5ii momci ぬ 感染時期は，河川湖上以後と推察される。
ム

末成熟なサケ科魚類からのA ． 5sai.Zm%0mr.z
血の検出率に 関する報告として，
外観正常な二ジマス，

BullockandSnieszko(1969)はヵヮマス，ブラウンマスについて，腎臓からの細菌の検出を試み， ふ化場で飼育した2群の供試魚の12． 5% と 26.l% から種々の細菌が検出され， 供試魚のうち3尾からはA &n.1.m.nntr.i.
血を検出したと報告している。さらに，Rabb
and McDermott(1962)はオンタリナ州の上m種 I， 044尾の魚類にっいてA
5almonici血の保有率を 調査し ヵヮマスでは高いものでは38% もの検出率になるが，これらの供試魚にはせ
つそう病特有の症状は認られないこと，検出率と水温に関連が認められることを報告している。―方，Humphreyetal(1987) はオーストラリアの¥¥の 養魚場で飼育中の外見上正常なサケ科魚類2， 755尾について腎臓，肝臓，脾臓からの細菌の検出を試みたがA ． salmomciぬは分離されなかったことを報告している。
・

・

・

@

括

サケ成魚及び未成熟魚の腎臓からのA ． salmonici血の検出率について検討し以下の結論を得た。
I．沿岸に回帰したサケ成魚の腎臓からA, salmoniciぬは検出されなかった。

2．石狩川及び標津川のサケ末成熟親魚からのA ． salmonici血の検出 率は採卵親魚の検出率R@比べ有意に低い値を示した。

3．成魚，末成熟親魚及び採卵親魚を対象とした検討結果から採卵親魚から分離されるA RaJ.Am.0n
.AC.
血の感染
時期は河川湖上以降と考えられた。
・

第2 節

は

ん

サケ 採卵 親魚体腔液中の A salmomiofda生菌 数・

サケ科魚類は排卵の数日前から，体腔液を腹腔内に分泌するが，魚類病原ウイルスと同様(吉水ら 19叩 )HS加刑 wfCf 血 も採卵親魚体腔液から検出されることが考えられる。

― 29 ―

さけ・ますふ研報 SC1.

REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47,

1993

る

A

・

体腔液に魚類病原細菌が存在すると，採取した卵が汚染されるとともに ，稚魚への感染が危倶 され，さらに採卵作業により体腔液が体外に放出されることから，他の親魚への水平感染も考えられ，体腔液中におけ
salmomfci血の存在状況を 把握することは，せっそう病対策を考える上で重要なことと考える。

本節で山まず 末成熟親魚の腎臓及び卵巣表面ならびに採卵親魚の体腔液中のA ． sviimnnir.iF血の検出 率及び生菌数について調査しさらに 体腔液中でのA ． sa 研 nnict 血の生存性について検討した。

材料及び方法
供試焦、

末成熟親魚におげる腎臓及び卵巣表面のA ． 51mnmr.i 血の生菌 数測定には，m98q 年 IO 月に標津川に湖上後

催熟蓄養中の末成熟サケ親魚30 尾を供試した。
採卵親魚の体腔液からのA ． ,Sff/>nowaCz血の検出には 1989 年Q月に石狩川，伊茶仁川， 西別州，当幌川及び十勝川に湖上後催熟蓄養したサケ採卵親魚計420 尾， 漂津川及び西別川に朔上後催熟蓄養したカラフトマス採卵斜里川及び標津川に湖上後催熟蓄養したサクラマス採卵親魚計 180 尾を供試した。
親魚計120 尾並びに尻別州，また採卵親魚の体腔液中のA ． .Saa/mmo
乃 fCf
血の生菌数については ， 1989 年9月から10 月に採集した大塩川及び標津川に棚 ト後 催熟薔養した採卵親魚を各30 尾供試した。
いずれの供試魚にも外観上せっそう病の症状は観察されなかった。

体腔波の採取体腔波の採集はYOshimizuetal． C1985Jに従い， 採卵直前に滅菌自動 ピ ぺットを用いて無菌的に採取した。

生殖腺指数

末成熟の供試魚については，前節同様供試魚の体重及び生殖腺の重量を測定し 生殖腺指数を求めた。
体腔液からのA ． salmon;c;daの検出

採取した体腔液を普通寒天培地(栄研)平板に塗抹し20C で培養後，培地上に出現した褐色 々 素を産生する
コ 口二―を釣菌し普通寒天培地で純培養後，前章同様POpoff(]984) に従い生化学性状を検査してA ． sal

mnninfda とした。
A. salmon;c;daの生菌数

卵巣表面のA ． salmonmCf血の生菌 数は， 供試魚を無菌的に開腹 し 卵巣全体を滅菌ビ 二―ル袋に収容し生理食塩水を20ml 加えた後，十分混和洗浄しそれを 原液とした。原液を 10 倍の段階希釈し 各希釈液 の 0． 2ml
を普通案大培地(栄研)平板に塗抹後20 でで5 日間培養して，褐色4 素を産生する コ p 二―を測定してA ．

SM‑川。乃 fCf 血の生菌数とした。
採卵親魚の体腔液中のA ． sd7Wow#Cf血の生菌 数は， 供試魚 から採集した―定量の体腔液を生理食塩水で M
倍段階希釈しその 0． 2m@ を普通寒天培地(栄研)平板に塗抹し20 でで5 日問培養後，褐色々 素を産生する コ口
ユーを測定してA ． salmomfcidaの生菌数とした。検出限界 ぼ5 cfu/ml であった。
腎臓のA ． salmom □血の生菌数は，前章第3節 と同様に測定した。
A. salmon;c;daの同走

前章第2節 と同様に行った。

供試菌
サケ親魚から分離したA ． fsnJmcimfr.tdn.20‑1 株を用いた。

供試菌懸河液普通 ブ イヨン培地(栄研)を用い20 でで24 時間供試菌を振撮培養し遠心分離による水での洗浄を2回繰り返し 0 45pm
・培地の除去と生理食塩

孔経のフイルタ ( ，リポア ) で ろ過除菌 した体腔液で希釈して供試菌懸濁液とした。
体腔波の処理法― .3n ―

野村―せつそう
病の疫学的研究1989 年9月に石狩川に湖上後催熟蓄養したサケ親魚2尾から，前項と同様に滅菌自動 ビ ぺットを用いて無菌的に採取し未処理のもの ， 18,000rpm で15 分遠心分離した上澄及び0 45 メ m 孔経のフイルタ ( ，リポア ) でろ・過除菌 した体腔液を作製した。体腔液 の 量 は各処理法とも5 m@ とした。
A ． salmon@c;daの生存性

体腔液中での生存性にっいては，各処理の体腔液h ml に供試菌懸濁液を0． 5 m@ 加えて十分撹押し保存し体腔液と10 でに供試菌懸濁波の混合直後， 24 時間後及び48 時間後にA ． salmcimfcidaの生菌数を上記と同様に測定した。

結果

未成熟親魚の音肢及び卵巣表面のA ． sa 而on;c;da 生菌数
標津川のサケ未成熟親魚におげる腎臓及び卵巣表面のA ． M 肋 omfci 血生菌数を Table 14 に示した。
供試魚の生殖線指数は 13 ． 0 から26 ． 2であ り， 供試した30 尾中12 尾の腎臓からA4. salmWomci血が検出され ，その生菌数は2． 0xlol から2． Oxlo5 cfu/E であ った。しかし卵巣表面からはA ． Sfば /m0 れ而血は検出されなかった。
採卵親魚の体腔液からのA ．

の検出

サケ，カラフトマス及びサクラマス 採卵親魚 720 尾の体腔波及び 腎臓からの A ．

5n.1inontci.血 検出結果をTable 15 に示した。
サケ: 石狩川では供試した120 尾の体腔液及び腎臓からA ． salmonia んは検出されなかったが ， 伊茶仁川でタは60 尾中i尾の体腔液と腎臓の双方からA ． sal@wonici血が検出され ， 10 尾では腎臓のみから検出された。西別川では60 尾中I尾の体腔液と腎臓から検出され，10 尾では腎臓からのみ検出された。 当幌川ではfin尾中，3尾で体腔波のみから， 3尾で体腔液と腎臓の双方から，IH 尾で腎臓のみから検出され，十勝川では ]20 尾中，乃
尾で体腔波のみから， ?尾で体腔液と腎臓の双方から，23 尾では腎臓のみからA ． .Rd/w.1TM.ZL,z'血が検出された。
いずれの河川においても体腔液からのA ． sn.1.mW。 乃 ici 血の検出車は 腎臓にくらべて低い値を示した。

カラフトマス: 標津川のfin尾中I尾の体腔液と4尾の腎臓からA. sa. mmnn&r.i血が検出されたが，体腔液と腎臓ムから同時に検出された個体は存在しなかった。西別川では60 尾中I尾の腎臓から検出されたが，体腔液 からは検出されなかった。
サクラマス : 尻別川の60 尾中T尾では腎臓及び体腔液の双方からA. Sa/.m.。血ci血が検出され ，腎臓のみから検出された供試魚は]尾 あった。また標津川の60 尾では体腔液からは検出されなかったが， 3尾では腎臓のみから検出された。斜里川では，体腔波及び腎臓のいずれからもA ． sd7 川0% 心血は検出されなかった。
採卯親魚の体腔液中のA ． Salmon;c@daの生菌数
標津川及び大塩川のサケ採卵親魚の体腔波及び腎臓におけるA ． SMW0
17,

乃

fCf血の生菌数を Table 16 ， Table

Fig 6, Fie. 7 に示した。
・

標津川では供試した30 尾中 1f 尾に体腔液と 腎臓から A1. sぱi.1mnnici血が検出され ，その生菌数 は体腔液で2． 0x10 。 から5． 6x106

cfu/ml ，腎臓では5． Oxlo ，から
3.1xIo7 ctu/egの 範囲であ った。さらに，3尾では体腔液 か3． 6x10 ， cfu/ml であ った。腎臓からのみ 検出された個体が 5尾存在したらのみ検出され生菌数は 5． Ox10 ，からが． それらの個体の腎臓の生菌数は3． 0x10" からI． 9x106cfu/eであった(Table 16)o

大塩川では，供試した30 尾中4尾で体腔液と腎臓からA ． salmoniciぬ が同時に検出され，生菌数は体腔液で8.3x106 cfu/ml ，腎臓では4． Oxio ，から
9． 9x107 cfu/e の範囲であった。さらに・
3． 2XWO ，から3尾 では体腔液か7． Ixlo 。 cfu/m@ であった。腎臓からのみ検出された個体が 15 尾あったが，らのみ検出され生菌数は3． 4x10 ，から
・

6.8x107cfu/e であった(Table 17,Fig.7)o
それらの生菌数は2 @3x10 ，から体腔液中での生存性
サケ成熱親魚の体腔液中でのA ． .wilmom□血の生菌数の変化を Table. ]R に示した。

― ,31 ―

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMON

Table 14. Viable counts Of Aeromonas
immature

chum

Fish

salmonN0.

47, 1993

salmonicida in the kidneys andKidneyindex*'(cfu/g)<50
2 ． 5XTO 。

<50

I ． 8X104

<50
<50
<50

5
6
2.@ 3

2 3X102

4 7X10 ，
・

・

21
18

・

・

2 ． 0X10 ，

・

<50

・

・

GOnadal surface(cfu/ml)

18 9

・*' GOnadthe gonadal surfaces 0f

20.5
20.7
18 8
20 I

・

3

0n

fn the Shibetsu River
GOnad

no

HATCHERY.

19.2

3 ． 8X102

I0

15.7

II

19.8

<50
<50
<50
<50
<50

T2

20.6

T3

24.5

I4

22.2

<50
<50
<50
<50
<50

I5
I6

18.7

I 8X104

24.5

I 3X104

<50

I7

22.2

I8
T9

19

<50
<50

20

13

<50
<50
<50
<50

21

19

22

18

・

・

・

・

2

<50
<50
<50

0
8
9

<50
<50
<50

3
8
9

21
19

25

18

26

20.3

5 0X10 ，

27

7.7. I

3 8X10 ，

28
29

24

30

18

・

23
24

・

・

<50
・

・

・

index =(GOnad

<50

・

2fi.2
・

<50

50
<50
<50
<50
<50
<50
<50
く

<50

<50

20.8

4 2X10 ，<50

9

6 ． 3X10"

<50

・

・

0

weight / body・weight) x 100

・

未処理，遠心上澄み及びろ過除菌 した体腔液ではともにA fsalmonici
ぬの 生菌数は増加し実験開始時に2 4xWo 。 から3． 6x104cfu/mlであったものが48時間後には未処理の体腔液では7． Oxlo7cfu/ml，遠心処理した体・腔液では2． 5x107cfu/ml，さらにろ過除菌 した体腔液でも3． 4x10 。 CftI/m@まで増加した。この中でも未処理の体腔液中におげる生菌数の増加が他の処理より大きかった。

考察

本節ではまず， 採卵親魚の体腔液からのA ． aalmnmct 血の検出率について 検討した。吉水ら C1988)は， 北― 32 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究

Table 15. Detection Of Aeromonas
pink and masu salmon.

salmonicida in the coelomic fluid (CF)N0.
N0. offish
examinedand kidney (K) Of mature,

Of fish in which A. salmomdda
in CF and/0r K

detectedwasYear/Month

SpeciesRiver

1989/Sept.

Chum

Ishikari

1200(0.0)*'

OC0.0)

0(0.0)

120(100.0)

Ichani60

1(1‑7)

0(0.0)

10(16.7)

49(81.7)

Nishibetsu

60

1(1.7)

0(0.0)

10(16.7)

49(81.7)3(5.0)

3(5.0)

18(30.0)36(60.0)15(12.5)23(19.2)

75(62.5)

salmonCF

TOhoroPinksalmonTOkachi1207(5.8)

Shibetsu

600(0.0)

1(1.7)

4(6.7)

55(91.7)0(0.0)

0(0.0)

1(1.7)

59(98.3)

Nishibetsu

Masu
salmonShiribetsu

600(0.0)

1(1.7)

58(96.7)

Shari

60

0(0.0)

0(0.0)

60(100.0)

600(0.0)

3(5.0)

57(95‑0)3(10.0)3(5.0)

5(16.7)15(50.0)6(20.0)8(26.7)

Shibetsu

1989/Sept.

Chum

*1

16(53.3)
4(13.3)

Shibetsu
Teshiosalmon‑0ct.

+

Percentage

R

九低
o
‑Lナ
山ナ
口E コま

0 ︶ ち一 ココ

m5

エ乍

]0

LOg.

]

2

3

4

5

6

7

viable count (cfu/g or ml)

Fig. 6. Distribution 0f viable counts Of 4. sa1‑
monicida in the coelomic fluid and those in
the kidney Of mature chum salmon fn the
Shibetsu and Teshio rivers.

0

0

<?o
8

0
0

4
@

0

0

0

0
0

0
0

0

oo

コー 0 」
2
LOg.

4

6

8

viable count in kidney (cfu/g)

Fig. ?. Relationship between viable counts of
A. salmonicida fn coelomic fluid and those
fn the kidney Of mature chum salmon fn the
Shibetsu and Teshio rivers.

一ケ巳コ― 33 ―

0‑ 三 0‑ 十 0Q4

No

8 「

O1

十 L トコナ

i TeshiooP
山一口Table 16. Viable counts Of Aeromonas
the Shibetsu River.

SALMONHATCHERY,

N0.

salmonicida tn the coelomic
NumberFishnoCOelomic fluid(cfu/ml)
6.0xIo4
1‑7xIn55*1
9.0x10'く

2.0xIo3II12

1 Oxlo2

く

・

13

<5

14

5.0x

15

<5

16

<5

上

． 2x107

I 2x1032.8x105
I 8x10"5.4x10 。

上0'・

3 1x10'
・

<50
<50
<50
1.9x105
<50
<50

17

<5

1 9x10 。

18<5

3.0x10‑19

1 7x103

2.0xIo ，

20

3.0xlo2
6.6x103

5‑7x103・<5<5
2..3xlo4

24

くKidney(cfu/g)I Ixlo65
5.6x105
3.fixIn2

23

5 and

Of A. salmonicida

3.0x103
2.fixlo4
<50"'

g

22

く

fn chum

3.6x10 ，

5‑5xIn2

21"'

fluid and kidney

2.0x10 。

8I047, 1993

・

HOKKAIDO・

さけ・ます
ふ所報 SC1. REP.

・

5.0xIo ，く50

2.5x10 。
?.7x10 。

25

5.0x10 。

26

I 0xIo2

6.5x1034.4x10327

7.8x104

1 2x10'28
29

54.9x10 。

5 nxIn1

<50

30

<5

<50

50 ，

・

く

・

no 亡 detected― 34 ―

・

salmonin野村―せつそう
病の疫学的研究

Table 17. Number Of viable counts Of Aeromonas
salmon in the Teshio River.

salmonicida

NumberFish

noKidney<5@

6.0x1()650"'
2.6x103

7 ixIn6・

3‑4xIn5

4.7x

<5
<5

50
9.2Xl105<5

7.1xIo 。

<5<5<5

2.3x10 ，<5
4.6x105

<50
<50
<50
5.2x104

II
12

13

16
17
19

22

く

2‑3x

上

05

1 6x105
・

8.3x106
3.2x10 ，

2 Ix10728<5<57.3x105<50<50
4‑nxIn529<5

I 5X105

30

<5

<50

・

27

く

50
6‑SxIo'2.7x104

4 上 x105

26

5 and

・

9.9x1073‑6x10'

23
24
25

く

・

3 Ixlo5

<5
<5

21

04

1 OxIo4

<5
<5
<5
<5

20

ェ

く

<5

18

"'

50
50
6.4x103
く

く

<5
<5
8
9

15

(cfu/g)
く

<5

3

14

0f 4. salmonicida

COelomic fluid(cfu/ml)<5

5

fn the coelomic fluid and kidney

50 ，

・

notdeteCLed

― 35

・

―

fn chumさけ・ますふ研報 SC1. REP.
Table 18. Changes

HOKKAIDO

in the number

SALMONOf 4.

HATCHERY,

salmonicida

N0.

47, 1993(cfu/ml)in chum

salmoncoelomic

fluid.

The

suspended A. salmonicida 20‑1 strain was transferred into non‑sterile, centrifuged at 18,000 rpm
for 10 minutes, sterile filtered using a 0.45 /@m pore size HA filter (Millipore Lt), and incubatedat ]Q'C.

ta

什
P
eO
︵
h

m

T 血

Viable counts (cfu/ml)
NOn‑sterile

Centrifuged

Sterile filtered

2 4X10 。

3 6X104

3 ． 5X10 。

24

7 ． 5X105

3 9X 上 05

7 ． 5X104

48

7 0X1072 5X10'3 ． 4X10 。

・

・

・

・

・

海道内のサケ及ぴサクラマス採卵親魚の体腔液からIHNV,

0MV.

している。魚類病原細菌の検出に関しては， Barkeretal.(1989)

CSV22 ． びIPNV が検出されたことを報告
がブラウンマス，ニジマスの体腔液 について細菌学的検討を行い，Ap 汀棚仰 5， s ゆゆ lococcus， 山 rvn%ebactenum
検出しているが，

及びF@@ ほ.ひ 。bac ぬ nuMm に属する細菌をA ． fsn.m0nW.&r.z 血 は検出されていない。
ム

木研究でも同様の検討を行ったが，サケについて調査した5河川のうち4河川の採卵親魚の体腔液から， カ
ラフトマスでは 調査した 2 河川中 l河川，サクラマスでは 3 河川中 I河川の 採卵 親魚の体腔 液 から A ．
WOw

而血を検出した (Table 15) 。

木研究でてまず 前節において採卵親魚からのA ． SMW
熟親魚の腎臓及び卵巣表面のA ．
WOW

RdJ‑

。HfCf 血の検出率が 高かった標津川を対象に，末成

wZWoW ぬぬ 保有の観察を行ったが，未成熟親魚の場合腎臓からのA ．

ぬ血の検出 率は40% の値を示したものの，卵巣表面からはA ．

wZWow

5M‑

ぬ んは検出されなかった (Table14) 。 腎臓のA ． 5C/W0 乃而血の生菌 数は 10 ，― 10 ， cfu/g であったが，この程度ではA ． SがWOM

ぬんはまだ卵巣まで広がっていないためと考えられた。 しかし採卵親魚の場合，漂津川及び大塩川では70 おの供試魚の腎臓にIn ，― io7cfu/g のA ． salmonici血が存在し，体腔液中にも 70% 及び 20% の供試魚 からlo ，から
lo6cfu/mlにも改ぶA ． .sfZmow. ぬ 血が検出された (Table 16, 17)o
未成熟親魚の卵巣からのA ． sailm 。mfci 血の検出例については ， McCraw
巣からもA. salmonici血が検出されることを ，さない河川の；ヮマスについて，を， さらにMcDermottandまたRabbC1952)がせっそう病の病魚ではワト

and McDermott(1962) はせっそう病の症状を示

A ． md かmnnnfr.i血が分離された 37 尾中の2尾で，卵巣からのみ検出されたこと

Berst (1968) も河川のせっそう病の症状のない ヵヮマスにおいて，卵巣からのみ検出される個体も存在する事を報告している。
サケ科魚類の体腔液にっいては，生殖機構との関連において検討がなされ，高野・松原 (1983)はサケ，；

ラフトマス及びサクラマスの体腔波の組成について，電解質では血清に比較してカリウムイオンの濃度が高く，蛋白質濃度は約1/5と低い値を示すことを報告し由来については 主要な部分は血清から由来しそれに体腔壁 あ るいは卵巣腔壁上皮由来の成分が加わって構成されたものとしている。
前記したようにサケ属魚類の体腔液 は電解質及び適量の蛋白質を含むことから細菌の増殖には適した環境と考えられ，分離菌株を用いた試験管内での体腔液中でのA ． .wd仇 omfcidaCの生菌数の変化の観察結果，10C
で48 時間I， O00 倍に生菌数が増加していた (Table18)。

このようなことから，

A ． salm 。れ桁血が，いったん 体腔液中に侵入後は，短時間に生菌数が増加するものと考えられる。
A ． salmomci 血のサケ 属魚類におげる感染経路を考える上で，体腔液 からの本菌の検出は大きな意味を持つ。催熟蓄養池においても，サケは成熟にともない体腔液を体外に排出しているものと考えられる。 このため，体腔液中に増殖している細菌も排出され， 蓄養地内の他の親魚に感染する可能性が考えられる。成熟度― 36 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究の 鑑別時には漁具により腹部が圧迫され，また腹部を圧迫して熟度の鑑別を行うために，体腔液は蓄養池内に排泄される。さらに採即時の開腹作業に伴い，ほぼその全量が採卵場排水へ流出する。
現状の北海道内におけるサケ属魚類の採卵場では，使用した用水は未処理のまま河川 へ排水され，A ． 5d‑

WOmfCf 血が親魚の湖上する 河川及び蓄養池に大量に放出されることになる。 これらのことから，体腔液中に存在するA ． @w.1moma 血は，感染源として重要な意味を持つと考えられる。
体腔液中のA ． fsa7mmnmci血の由来については ，腎臓の生菌数が体腔液 より高いことから，腎臓で増殖したものが血流を介して体腔に達し，体腔液中で増殖したと考えられるが，現在のところ詳細については不明で
ある。

@

括

本節では採卵親魚からの検出率の 高かった標津川及び天塩川を対象として 末成熟親魚の 腎臓及び卵巣表面， 採卵親魚の体腔液中のA ． salmonic7ぬの 生菌数について検討し以下の結論を得た。
I． 標津川の末成熟親魚では40% の 供試魚腎臓から2.5x10，から2.0x105 cfu/e の A ． .sM/mMoMfCf 血が検出されたが，卵巣表面からはA ． salmomci 血 は検出されなかった。
2． 採卵親魚の体腔液からも腎臓よりは低率ではあ ったが，A ． salmontci血が検出され ，水平感染の成立及び卵を介しての汚染の拡大が危倶 された。
3．大塩川及ぴ標津川の60‑70%
腔波の場合は10‑70%の 採卵親魚の腎臓から 10 ，― 107 cfu/e の A ． .w.1
nnmc? 血が検出されたが ，体クの供試魚から10 ，― 1016cfu/m@ の A ． salmonici血が検出され 腎臓に比べて 10' 程度低い値を示した。
4．体腔液中で@uo でで急速な増殖が認められた。
5．現状ではA ． SMmomcT

七 を含む体腔液等 は無処理のまま採卵場から排出され，下流の他の親魚への重要な感染源となり得ることが明らかになった。

第3 節

A ． salmon;c;daの飼育環境水中での 生存 牲

前節において，採卵親魚の体腔液からもA ． swalmomci血が検出され，現状の北海道内のふ化事業においては， 採卵時の体腔液を含む採卵場排水は未処理のまま河川 C 排出されていることから，湖上してくる他の親
サ

魚への水平感染と， 卵を介しての汚染地域の拡大が危倶 された。
採卵親魚から排泄されたA ． 5almomci 血の他のサケ 属魚類への感染経路を考える上で，A・5a.1mnnicf血の飼育環境水中での生存性を検討しておくことは重要と考える。
本節ではA ． 5Mmomc?

血の飼育環境水中での 生存性について検討した。

材料及び方法供試水
湧水としては北海道さけ・ますふ
化場千歳支場のふ化用水を供試し 未処理のもの， 0 45 ノ m のフイルタ( ，・リポ ア ) でろ過除菌 したもの及び121C で15 分間高圧滅菌したものを用いた。 また海水としては石狩湾で採取した塩分濃度33%0 の海水を供試し上記と同様に処理した。
供試菌1979 年に石狩川のサケ親魚の腎臓から分離し A ． sa mom ぬ血と同定された A ． salmfimぬぬ 20‑1 株を用
み

いた。

供試苗液
供試菌をトリプトリィ液体培地(栄研)に接種 し 20C で2A 時間振縁培養後，遠心分離(18， 000rpm
により培地を除去し生理食塩水で3回遠心洗浄を繰り返し，最後に610nm

37―で10分間)

における吸光度がI 0 となるよう・さけ，ますふ 既報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993に生理食塩水に懸濁 し供試菌液を得た。
A. salmon;c;daの生存性

Freshwater「

A ． sal刑nnici ぬの供試 水中での生存性の 検討には，

供試水 150 ml に供試菌懸濁液をI m@ カ n えた後

IOC に保ち所定時間毎に生菌数を測定した。生菌数・の 測定は，供試水を m0 倍段階希釈し 各希釈波の0 2

ml を普通寒天培地 (栄研)平板に塗抹 し 20でで5日間培養後，出現した褐色 コ p 二―数を測定して生菌

‑
告
3

2

数を求めた。検出限界は5 cfu/ml であった。
・

結

果

供試水の処理による生存性の相違，の 4(Mo 01

供試水を未処理，ろ過除菌及び高圧滅菌としたときの生菌数の変イヒを Fig ． 8に示した。
湧水中では，未処理では8 日後に検出限界以下となったが，ろ過除菌で50 日後に4.3x10， cfu/ml ，高田滅」菌でも?.2x102cfu/ml の生菌数を示した。

七

」・」

。

10

海水中では，未処理で8 日後に検出限界以下となったが，ろ過除菌では20 日後まで検出され， 30 日後に検出限界以下となった。 これに対して高圧滅菌では

20

30

40

50

切

Days
Fig ． 8． Changes in viable counts Of Aeromon

20 日後でも4． 8x101 cfu/ml の生菌数を示し 20 日後岱

salnwnicida 20‑1 strain in non sterile(o‑o),sterile filteredC*‑@) and autoclaved(0‑‑‑0)
fresh and salt water at I0@C.

まで検出された。

考

八。―

察

A ． sn.1mnmci 血の環境水中での 生存については，
多くの報告がみられるが (AustinandAustin,1987)，優れた選択性を示す培地がないことと，他の細菌との競合に弱いことから，

McCarthy

ごくわずかの菌数を水中の細菌群の中から検出することは容易でほない。

(1980)は水中での挙動を検討するため， A swAmrintr.@ 血のストレプトマイシン 耐性菌株を用い・て検討し淡水中では 20 日間あまり生存することを報告している。
POpoff (1984)はA.5almonict 血が魚類を離れては ，水中には単独で存在しないとしているが，このことぼ
A ． s%i.Zw.nnidf血が，水中から検出された報告がないためと考えられる。 しかしAustinandAustin

ぴMcCarthy(1987)及(1980)の報告にあるように，水中での生存はかなり長期に及ぶと考えられる。

本研究でも供試水の処理法の違いにより，生存期間に 差が認められ (Fie ．

8) ，無処理の飼育水中での A・@Ma.1mom 而 血の生存 性は，高圧滅菌あるいはろ過除菌に鮫べ著しく悪かった。しかし親魚の河川湖上時の平均的水温と考えられるinでの未処理の湧水中で4 日間を経過しても生存し (FiK.8)，上流部の採卵場から放出された刀 ． 5almnnntCt血が再ぴ河川を 湖上してくる他のサケ親魚に感染する可能性は十分考えられた。

小指

本節ではA ． salm 。乃 ici血の棲息環境水中での 生存性について検討し以下の結論を得た。
I．棲息環境水中でのA ． salmomci 血の生存 性は供試水の処理法により異なり，未処理の湧水中では8 日間で検出限界以下となったが，滅菌水中では50 日間も生存した。
2．海水中で低未処理海水の 場合は8 日後に検出限界以下となったが，ろ過除菌及び高圧滅菌海水中では20 日― 38 ―

野村 せつそう病の疫学的研究

後まで検出された。
3 棲忌環境水中で，4 日以上生存したことから， 採卵親魚の体腔液 から排泄されたA ． sa.1mom □血が，湖上し・てくる他の親魚への水平感染と卵を介しての垂直感染に関与する可能性が示唆された。

第4 節

人為的に A salmoni@cidaで汚染したサケ 卯 における
A. sa@mon@c@(da の消長・

軌節において。採卵親魚の腎臓と同様に，成熟親魚の体腔液 からもA ． salmon □ 血が検出され ，その生菌数は体腔液1 ml あたり 106cfn にも及ぶことが明らかになった。
体腔液中 pこ A・salmonici血が存在することは ， 採卵 した卵の表面もA ． salmon

而血 に汚染されることが考えられ，親魚‑卵 稚魚への感染の 成立が考えられる。 このような感染が成立すると，その 集団は長期 @I@@A.

sa?lmnmM ぬ を保有することになり，水平感染とは異なる見地からの防除対策を講ずる必要性が考えられる。
従って卵表面及び卵内におげるA・salmmonici血の挙動を明らかにすること 防この親魚から 稚魚への感染を考える上で重要であ る。 本節では実験的に汚染した卵を用い，卵表面及び卵内のA ． sizlmonir.u
血の消長から， 経卵感染の可能性について検討した。

材料及び方法供試卯
1989 年10H に石狩川に湖上したサケ雌親魚5尾 から採取した卵及び雄親魚5尾から採取した精子ならびに 同年}i 月に当幌川に湖上したサケ雌親魚 25 尾から採取した卵を供試した。

供試菌株
前節同様i@A ． saZmomfci血 20‑1 株を用いた。
卯汚染
供試菌株を トリブトソイ液体培地 (栄研)250ml で24 時間振潟培養後，遠心分離(18,000rpm で10 分間) して培地を除去し 菌体を生理食塩水で3回洗浄後，ろ過除菌体腔液 10ml に懸濁させた。この供試菌懸濁液10m@と石狩川のサケ由来卵4尾分各I， 200 粒をそれぞれ混合し 卵表面汚染卵とした。さらに石狩川のサケI尾由来の2， 500 粒に菌懸濁液20

m@ を加え，十分に混合して卵内からのH

MM0%

た Md の検出の有無を検討するため―方当幌川由来の各 100 粒 について，YOshimizuetal

・の汚染卵とした。

(1989) と同様に，先端の外径が100umの自家製毛細 ガラス針を用いて， 供試菌液を人為的に卵内に接種した卵内接種区と，生理食塩水を接種した対照区とを設定した。また精液2m@ と供試菌株懸濁液 Iml を混合し 未受精卵IOo 粒を受精させたものを精子汚染区とした。 さらに上記石狩川のサケ卵と同様に処理した卵汚染区と未処理の精子を用いた対照区を作製した。
卵表面及ぴ卯内の生菌数の測定
汚染卵 は受精後10.4 での地下水で注水量0． 51/ 分で飼育し，受精直後，I時間後，24 時間後及び48 時間後に卵表面の生菌数を測定した。
卵表面の生菌数の測定は供試卵20 個を200ml 容の三角フラスコに取り，生理食塩水を18ml 加えて振楊機により 10cm の振幅で毎分120 回10 分間振糧 して表面を洗浄した。この洗浄液を，生理食塩水で10 倍段階希釈しその0． 2 ml

を普通寒天培地に塗抹して20 でで培養し，出現した褐色色素産生 コ

口二―数；@@A. salmonicidaの生菌数を求めた。検出限界は4.5cfu/個であった。
・血の検出は，汚染卵を受精I 日後， 10 日後， 20 日後及び.330日後にそれぞれ60 粒を取り，卵 内のA .Sf肋 。nir.i

有効ヨウ素 100mpm の有機ヨード剤( イソジン)で15 分間表面を消毒し 滅菌地下水で3回無菌的に洗浄した。
洗浄後の卵を，組織培養用の24 穴のプレートの各人に I粒ずつ収容 し トリプトリィ液体培地を各人当たり
I． 5 ml 加えた。2n でで5 日間培養し，培地の混濁がないこと及びこの培養液を普通寒天培地 (栄研)平板に塗抹― 39 ―

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY.

N0.

さらにIn 口問培養した。In 日後に各穴の液体して菌集落が出現しないことを確認後，無菌的に卵をつぶし培地を普通寒天培地(栄研)平板に塗抹して，47, 1993

出現する コ 口二―を観察した。

卵 内及び死卵 内の生菌数の測定は供試卵を無菌的に ホモジナイズ して，生理食塩水でW0 倍段階希釈し A

salmonici血の生菌数を 測定した。
卵ホモジナ イズ液中でのA ． salmon;c;daの生存性
当幌川のサケ卵2nn 粒を用い，卵表面を有効ヨウ素50ppm
無菌的に卵膜を除去しのイリジン液で消毒し滅菌蒸留水で3回洗浄 し

ワーリソ グブレソ ダーにより卵のホモジナイズ液を作製した。 このホモジナイズ液

10 ml に供試菌懸濁液をI ml 接種後， 10 でに保存し突験開始直後， I， 2， 3， 4 日後に生菌数を測定した。
対照、 としてトリプトリィ液体培地を卵ホモジナ イズ波の代わりに用いた。

結汚染卯表面におけるA ． salmon;c;da

果の消長

A ． ysaalmwomfci血で汚染した 卵の，受精後の卵表面のA ． sn.1.mmWnnir.t
血生菌数の 変イ乙を Table 19 に示した。
汚染直後I． Ixlo 。 ― 4． 3x106cfu/

個であ ったA ． Salmomct んば，受精後上時間では6． 4‑ 68cfu/個まで減少し受精後24 時間及び48 時間後では4試料とも検出限界以下となった。
人為的に卯表面を汚染したサケ卵内からのA ． salmon@c;daの検出

実験的に卵表面を汚染したサケ卵 内からのA ． salmWomfc 血の検出結果を Table20
タ

に示した。

卵―粒当たりI． 4x105cfu/ 個のA ． snalmnnici血で表面を汚染したサケ 卵の卵内からは受精後I 日後， 10 日後，Table 19. Changes fn the viable number 0f Aeromonas salmonicida (cfu/egg) 0n thesurface 0f chum salmon eggs that had their surface artificially contaminated
with

the

agent
Experimental

After

No

fertilization (hour)3
4.3x10668" NOt

4 ． 5"'

24

く

48

<4.5

5.8x105
11.3
<4.5
<4.5

1.6x105
6 4
4 5
<4.5
・

く

．

1.1xlo4
I5
<4.5
<4.5

detected

Table 20. Isolation Of Aeromonas
salmonicida in eggs that had theirsurfaces artificially contaminated with the agent.
Days after
fertilization

NumberExamined
60

I0
20
30

60
60
60

― 40 ―

Of eggs

Isolated野村 せつそう病の疫学的研究

Table 21. Changes in viable counts Of Aeromonas
salmonicida
cultured in homogenized chum salmon eggs and trypt0‑soyaDays

at T0@CViable counts (cfu/ml) in

after

HOmogenizedcultivation

salmonInitialTSB

eggs

9 7X10z

9 7X10 ，

2X104

3 0X10z

3 2XTO6

3 ． 2X 上 0@

4 土 X107

3 8X10 ，

5 4X10'

8 4X10 。

・

上

・

・

broth (TSB)

・

・

3

・

・

Table 22. Changes tn the viable counts 0f Aeromonas
their surfaces artificially contaminated・・

salmonicida tn chum salmon eggs that hadby the agent

Viable counts (cfu/egg) Of 4. salmonicida
On

Methodcontaminated

A
Egg

・

was

sdZmo

土

with

・

rn eggs
a ter

IX103

1.4x1031.1xlo"5.4x108?.7x108

ND"l

ND

5.4X10"1.6x10"

ND

ND

乃 fCfd 巳

surface was contaminatedwith A. salmonicida*' NOtsurfaceust

A. salmonicida
was inoculated
into the egg
Sperm

egg

detected.

0f chum salmon
eggs artificially contaminatedwith
4esalmonicida by various methods and the prevalence 0f the agent

Table 23. MOrtalityromonasfromthe dead

eggs.

MOrtality (%)
MethodInfected
Inoculation 0f egg
COntamination Of sperm
COntamination Of egg

COntrol

100

42

I1

37.5

22.5

上上

― 4I

Prevalence 0f A. salmon

icida in dead eggs (%)
Infected

COntrolさけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

20 日後， 30 日後いずれも供試した60 粒からA4． salmonici止 は検出されなかった。
即ホモジナイズ液中でのA ． safmon;c;daの消長

sぽ /W0 れた血の消長を Table21

に示した。

・

卵ホモジナ イズ液中のA ．

10 での卵ホモジナ イズ液中でのA ． salmzonici血の消長は，接種時には 9 ． 7xlo2cfu/m@
日後には5． 4X108Cfu/ml

であった生菌数が， 4に増加した。―方，同条件下のトリプトリィ液体培地では8 ． 4x10 。 cfu/ml で， トリプ

トリィ液体培地よりも卵ホモジナ イズ波の方が良好な増殖を示した。
卯内に人為的に接種したA. salmon;c;daの消長

卵 内に人為的に接種した卵，精子汚染卵及び卵汚染卵 におげるA ． $almnniiczぬの 消長，卵の累積弊死率及び死卵からの A ． sdfW 。市F 血の検出率を Table

22 と Table

23 に示した。

人為的に卵 内に接種した卵では，接種時にはI． 4X10'Cfu/ 個であった A ． 5ぱ ZmwowfCf血が 7 日後にはlHX10 ，

Cfu/ 個 まで増加し A ． 5が川。
血お血を接種した卵はすべて死亡した。
対照区の累積死卵率は 42 光であったが，卵円接種区では100% であった。弊死卵からのA ． SMWOW

ぬ血の検出率は対照区，精子汚染区及び卵汚染区では検出されなかったが卵内接種区の卵からの検出 @／ 100% であ っ木‑@0考
サケ科魚類卵の表面の生菌数にっいて，察Be1l etal ． (1971) ， TruSt(1972) ， McFadden(1969) ， Barker

et al ． Q989) は卵表面ではふ化用水とは異なる細菌相を示すことを報告している。卵表面とふ化用水中の細菌相に相違がみられることは，必ずしも全ての水中の細菌が卵表面に付着するのではなく，特定の細菌が卵表面で増殖するものと考えられる。
A ． salmonidf血の病原 性株山

自発凝集性を右 し 細胞等の表面に付着する性質を右していることが報告されており(UdeyandFryer,1978)，体腔液 に存在するA ． @ailmon桁血も 卵の表面に付着する可能性は十分考えられる。
人為的@cA1. salmmomct血で汚染した 卵では，卵の吸水のためI時間静置された卵表面のA ． sw.1mnniici ぬの生け

菌数は減少を示し(Table19)，受精24 時間後には検出限界以下となった。現在H ． salmomci 血 に対する選択培地がないことから (AustinandAustin,1987)，他の細菌が存在する状況で， 卵表面のごく小数の 同苗生菌数を検出することは容易ではなく，受精後他の細菌が卵表面に付着することにより，相対的にA ． salmonici血の検出が困難になつたものと考えられる。
吸水後即はふイヒ 場に収容されるが， 卵表面に付着したA ． salmonici血 は吸水後I時間を経過しても卵表面に存在した (Table19) ことから，採卵場からの輸送前に卵表面の消毒を実施しなけれ戊 受精卵表面に付着したA ． salmonici血 はふ化室へ持ち込まれる可能性が高い。サケマス増殖施設で屯 用水の効率的利用と作業の効率上から最上流部にふ化槽を設置することが―般的であ り，受精後吸水を完了した卵を輸送し，消毒せずにふイヒ 場に収容すると， 卵に付着していたA ． sa励 nnici 血がふ化した 稚魚に感染を引き起こす危険性が考えられる。卵から稚魚への感染経路の成立は，せっそう病防除の観点からは重要な問題であ り，

従づ て採卵場からふ化室への受精卵の輸送時には，消毒を実施し 感染経路を遮断することが必要と考えられる。
また，A ． .wdlmomfci血が 卵 内に侵入する可能性があれば，せつそう病の対策上さらに大きな問題となる。

卵表面は有機ヨード剤などにより消毒可能であるが，卵内の細菌を消毒することは困難であることから，卵内への病原細菌の侵入は経卵感染の成立に直接に結びつくものと考えられる。
Belletal. C1969)はサケの卵膜は40um から80um の厚さがあ り，その外側は種々の蛋白分解酵素によっても分解されない強固な膜であること，またKudo

and Inoue (1986)及び Kudo

and Inoue (1989) 低

コイ， アユ及びニジマスの受精卵の卵膜には，抗菌性物質が存在することを報告しており，正常な卵 には外部からの細菌の侵入を防ぐ種々の防御機構が存在することを指摘している。

― 42 ―

野村 せつそう病の
疫学的研究

・

しかし 未受精卵では直径0 5から1.5um の小人や未受精の段階では卵門が 開口していて，細菌が侵入することも可能と考えられる。精子をA・salmomfcidaで汚染した実験でもサケ卵 内へのA ． salmonici

血の侵入は観察されず，精子に付着して卵に侵入することもないと考えられる。
しかし木研究で人為的に卵表面をA出されず，非運動性細菌であ る A・salmomci 血で汚染した 場合でも卵の 内部からはA ． salmomc?

・

5almnm 而 血の 卵 内への能動的な侵入はないものと 推察された。
が卵内にはA ． sal@朋 mfci 血 は存在しないであ ろうとした推定を支持

これらの結果はGeeandSarles(1942)
し， 卵内へのA・んは検

5a.1mnnici血の侵入はふ 化事業の現場においては起き得ないものと考えられる。

しかし，卵のホモジナイズ液中ではA・

salm@onici血 はよく増殖 し卵 内に人為的に接種した場合に UIOの 水温下でも，7 日後には生菌数が I， O00 倍に増加することが 明らかになり，これによって卵は100%

で

死亡する

ことを認めた(Table 22, Table 23)o以上の結果から受精，吸水終了時に卵表面を消毒し重要であ ろう。
ノ 」

病原微生物の以後の卵 内に侵入防止をはかることは括

八

採卵親魚体腔液に存在するA ． salmWomc$ぬの卵 表面での挙動を検討するために，人為的にA ． salmomci

血で汚染したサケ卵を用いて，受精後の卵表面の生菌数の変化，卵内からのA ． sal 刑om 而血の検出を試み ，以下の結論を得た。
I・人為的にA. salmomfci血で汚染後受精させた卵の表面に存在した A ． salmonidf 血は ，受精後 I時間で激減したが完全にはなくならず，体腔液由来のA ． .@.1mnmfrfぬが 卵とともにふ化室に持ち込まれる危険性が示唆された。
2・人為的に卵表面を汚染した卵でも内部からはA ． salmonicidaが検出されず，

A ． salmomfci

んば能動的には卵内に侵入しないと考えられた。
3・

卵内に人為的t@ 接種したA ． @n.1.mmnmfr.i 血は 7 日間で生菌数がI， O00 倍 K 増加し殖が確認されたことから，

卵ホモジナ イズ液中でも増もし何らかの原因で卵内に侵入すると卵や発生した稚魚に大ぎな被害を与える可能性が考えられた。
4・以上の結果から，卵を介してのA,snmMnmfr.i血の伝播防止のためにょ・ふ化場に卵を収容する前に， 卵表面

消毒実施の必要性が示唆された。

第5 節

ふ化場現場における 受精卵，稚魚，幼魚及び野生魚のA ． salmonicida 保有状況

人為的にA.

salmomci

んで汚染した 卵 についての前節におげる検討結果から，

卵表面に付着した A ．

sa/・川。mfrf 血 は受精卵と共にふイ乙 場内にそのまま持ち込まれる可能性のあ ることが明らかになった。しかし実際のふ化事業における卵の取扱は．前節の実験規模とは大きく異なるため，

ふイヒ

場内の卵を対象とした疫学的な検討が必要と考えられた。
本節では，ふ化場内に実際に収容されている卵及び飼育中の稚魚，幼魚及びふ化場外のサケ属 以外の野生
魚、 からのA ． @wilmomfcf血の検出を試みた。

材料及び方法供試卯
ふ化槽に収容されている卵表面からのA ． salmomc 施の検出は 1989 年10 月に北海道さけ・ますふイヒ場 中川
事業場，

中標律事業場， 虹別事業場及び札内事業場のふ L槽から採取したサケ卵各60 粒を供試した。
ィ

またふイヒ槽 内に収容されている卵内からのA ． smmm%rinir.7f
ぬの検出には北海道さけ・ますふ化湯中標律事業― 43 ―

さけ ますふ所報 SC1. REP.
・HOKKAIDOSALMONHATCHERY.

N0.

47. 1993

場， 札内事業場及び十勝事業場でふ化中のサケ卵各 fin粒を供試した。

供試魚
サケ稚魚は1988 年3月から5月までに北海道さけ・ますふ化場用別事業場，北見事業場， 斜里事業場，根室事業場， 幕別事業場及び千歳事業場さらに民間ふ化場の朱大収容場， 錦多布収容場及び遊楽部収容場で採集した体重0 6f から0.9R の稚魚，計finn 尾を供試した。
・またサクラマス幼魚は1987 年3月から19S8 年 12 月までに北海道さけ・ますふ化場尻別事業場，中川事業場，斜里事業場，の 各fin尾，中標律事業場， 伊茶亡事業場，根室事業場，釧路事業場，

静円事業場及び千歳事業場で飼育中

計I， 410 尾を供試した。

野生魚の腎臓から刀 ． salmomfci血を検出するための供試魚 として1979 年4月から10 月までに石狩川，遠別州
放び大塩川で採集した，

ドジ ，ウ(@VeW2 杣ぬ応to 市)48 尾，(PZffぬfC@Zf
如.s .@加 llatus)6尾，チカ (Hvゆ 。mg.szuu.s w ゆゆ onensis)6尾，ウグイ(.Tribolodon

W ． )180 尾， ヌマガレイ

フ カサギ(iHypomesM 力 retiosus/a 力 。乃 ir硲乃

泡心/Ms われ耶dm が m)H 尾の計2fif 尾を用いた。
尾及びギンブナ (.CadA ． salrnon;c;da の検出及びその生菌数の測定

卵表面からのA ． sn.1mnmfr.if血の検出は， 供試卵60 粒に，滅菌生理食塩水を 10ml カ日え， 5分間強振して卵表面に付着している細菌を生理食塩水中に洗い出し

この卵洗浄液をio 倍段階希釈し普通寒天 (栄研)平板を用いて，前節の卵表面のA ． salmonici血生菌 数測定と同様にして求めた。検出限界は0 ． 8cfu/ 個であつた。さらにこの洗浄液を3， 500rpm
法によりA ． MMOwfCf

で20 分間遠心分離し 沈澱物をスライドグラスに塗抹して，火炎固定後蛍光抗体

血 抗原の検出を試みた。

すなわち火炎固定後の標本に，北海道大学水産学部微生物学講座から分与された抗A ． 5MW0w

ぬぬ ATCc

14174 家兎血清を30 分間反応させ，過剰の抗体を PBS で洗浄後， FITC 標識抗家兎 山羊血清(協和メディク ス
製) で30 分間染色し，PBS で過剰のFITC 標識抗家兎 山羊血清を除去しグリセリン PBS 緩衝液 (pH9 ． 0) で封入後，蛍光顕微鏡により400 倍で 100 視野を観察した。
ふ化槽に収容されている卵内からのA ． 5MWOwfCf 血の検出は， 供試卵各60 粒の表面を有効ヨウ素ェ 00 ppmの有機ヨード剤で15 分間消毒し滅菌 湧水で3 回洗浄し洗浄後の 卵を，前節同様に組織培養用の24 穴の滅菌
ブレートの各人にI粒ずっ収容 し トリプトリィ液体培地を各人当たりI． 5ml；口えた。20C で5 日間培養し卵の外部が無菌状態であ ることを確認した。その後無菌的に卵をつぶし， さらに10 日間培養した。In 日後に各穴の培養液を普通寒天培地 (栄研)平板に塗抹して，出現する コ 口二―を観察し 褐色 々素産生の コ p 二―数でA ． .Sa?/mm?.on2Z(@:?.
血生菌数とした。
腎腱からのA ． salmon;c;daの検出

供試 魚の腎臓を無菌的に露出させ，中央部を 白金耳または滅菌綿捧で穿刺して，分離用培地に塗抹後，実験室に持ち帰り 20C で7 日間培養した。検出限界は 102cfu/e 組織であ った。

結果

ふ化仁に収容されている卵表面からのA ． salmon@ic;daの検出

ふ化槽に収容した卵表面からの，A ． fsnfm.rimfr.t血の検出を培養法及び蛍光抗体法により試み，その結果をTab@e 24 に示した。
供試した4 ふ化場のL5 検体のサケ卵からは，培養法及び蛍光抗体法のいずれによってもA ． aa.1mnniri血 は検出されなかった。
ふ化栖 に収容されている卯内からのA ． safmonicidaの検出

中標律事業場， 札 内事業場及び十勝事業場のふイヒ槽 内から採集したサケ卵の内部からのA ． salmomci 山の検出を試み，その結果をTable 25 に示した。
いずれのふ化場のサケ卵の内部からもA ． .soiwow朽ぬは検出されなかった。

― 44 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究
Table 24. Isolation Of Aeromonas
HOkkaido
SalmonHatcherysalm.0nicida fromsurface 0f

eggs

in incubation

boxes

in

systemfertilization
sampling
Dateof fertilization
Days
after
Isolation
salmonicida
OfA
Date Of

HatcheryRiver

Culture"Nakashibetsu

Nishibetsu*' A. salmonicida

wascultured

0Ct ． 30

Oct. 90ct ． 30

Oct. 21
Sept, I8
Sept. I8
Sept. 28
Sept. 30

0Ct ． 30

OCt ． 6

0Ct ． 6

Oct. 6
Sept. I2
Sept. I6

0Ct ． 60n

0Ct ． 17

0Ct ． 30

0Ct ． 4
0ct ．
0Ct ．

4
4

0Ct ． 40Ct ．

6

0Ct ． 6

nutrient agar

凹

TOkachi

Oct. 2

Oct ． 17

万TOkachiTOkachiTOkachiSatsunaiOct ．

H9HU7700

Nijibetsu

H

Sept. I3
Sept. I2
Oct. t5
Sept. T5

2 北叩

TeshioTeshioTeshioShibetsu
Shibetsu
Shibetsu
Shibetsu
Shibetsu
Shibetsu
Nishibetsu

叩凹Nakagawa

FAT"plates at 20@C

*2 Fluorescent antibody techniques.
"NOt

isolated

Table 25. Isolationboxes

0f Aeromonasat Nakashibetsu,

Hatcherysalmonicida from

Satsunai andDays after
fertilization

Nakashibetsu
SatsunaiTOkachiII
24

TOkachieggs

fn incubation

hatcheries.

NumberOf eggs

Examined

Isolated

60
60
60

0

サケ唐魚類稚魚，幼魚におけるA ． salmon;c;da保有状況
サケ属魚類稚魚，幼魚におげるA ． salmom 心血保有状況の 検討結果を Table26.

Table27 及びTable28

に

示した。

1987 年から 1988 年にかげ北侮道内のサケマスふイ場で飼育中のサケ稚魚及びサクラマス幼魚について調査
乙m刑
omfct んは検出されなかった。
したが，供試した計2， om0 尾 からA. s&.A
甘生魚の昔れからのA ． safmonicidaの検出
サケ属魚類以外の野生魚266 尾の腎臓からのA ． snl@mnmr.i血検査結果を Table 29 に示した。
供試した石狩川，遠別州及び大塩川の野生魚266 尾の腎臓からA ． salmomc 励ほ 検出されなかった。

― 4h ―さげ，ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

Table 26. Prevalence Of Aeromonasin 1988.

Place

Date ofsampling

N0.

Number0f fishExamined

M

60

Mar.

18

60

Shari

May 9
Apr. 8May 1060

fryPrevalence

Age

Apr.

ShubutoNishitappu
Yuurappu

1993

salmonicida in the kidney 0f chum salmon

Shiribetsu
Kitami
NemuroMakubetsu
Chitose47,

Isolated

(%)

60
60
60

0

Apr. 1
Apr. 5
Apr. T9
Apr. 5
Apr. 20

60
60

60
60

TOtal

600

0f Aeromonas

salmonicida fn the kidney Of masu

Date

Ag

Table 27. Prevalencesalmon fry in

1987.

(%)

60
60
60

60
60

60
60

TOtal

780

46

0

nc

ed

vale

re
P

f@・ O

er

60

0000

May 6
May 7
Ju1. T0
Aug. 20
Oct. I4
NOv. I0

bd

Shizunai
Chitose

I4

60

工工工

Mar.

60

0

May I3
NOv. 3060

工Kushiro

I9
24

60
60

00

Ichani

NOv.
Dec.

E

I3

工

24

samp

Dec.

May

0

l ・l

Shari

Nakashibetsu

amine

fn

O

Place

野村 せつそう病の疫学的研究

Table 28. Prevalence

Of Aeromonas

salmonicida

fn the kidney Of masu

salmonfry fn1988

Date 0f
sampling

Place

NumberExamined

June I3
Jul. 6
Mar. I7
May 9
Jul. 6

Shiribetsu

Nakagawa
Shari

Nakashibetsu
Ichani
NemuroKushiroChitose

60
60

I

60

Mar.
Mar.
June
Mar.
Apr.

T5

Isolated

0

60

I4

21

Prevalence

60

30
60
60
60
60
60

Dec.

0f fish

Age

I6
21

TOtal

0
0

630

Table 29. Prevalence

Of Aeromonas

salmonicida ;n the kidney 0f wild fish
Number

Of fishSpeciesPrevalence

Examined

Isolated(光)Ng.inn.。 ん dluぬ廿。市

48

0

0

TnFhnlodon

180

卑ゆ

Platichthys stellatus
Hypomesus nipponensis
Hypomesus pretiosus
japonicus
CarasSsぬuis loone@s5do
り公 @

6

0
0

T8

考

o

察

前節 までの結果から， 採卵親魚の体腔液からA ． salmonicも血が検出されることは卵がA染されることを示すものであ り，卵を介してA ．

Sn.Am.nmfr.i
ぬの 汚染が拡大しさらには

A

・

・

salmonici血で汚salmomfci血 に感染した卵の死亡も右り得ると考えられた。そこで実際のふ化事業における卵及び稚魚幼魚のA salmomfci血・保有状況を明らかにする必要性を認めた。

成熟親魚の腎臓及び体腔液からのA ． salmonぬぬの 検出率が高かった天塩川，標津川，西glW 及び十勝川で採取した卵を収容，ふ化している中川事業場， 中標律事業場， 虹別事業場及ぴ札内事業場を対象にふイじ槽
内の卵表面からのA ． salmmomfct
血の検出を試みたが ，いずれも険性であ ったCTable24)。 供試卵はいずれも採卵後24時間以上を経過した卵で，先の人為的に汚染した卵表面におげるA ． salmomfci血の消長と合わせ考えると妥当な結果と考えられる。
― 47

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDO

EvelynandMcDermott

SALMONHATCHERY,

N0.

47.

1993

(1961)はオンタリオW @，生息している
10 種の魚類350 尾について，内臓からの細廿菌の検出について検討しp@cu 血 W 。乃の ， Ae 仰min 佑， M?c 汀cocc 硲， Lac 幻 bacill硲 をはじめ多種の細菌を分離しているが，A ． Sa.1monicida

は分離していない。

本研究におけるサケ，サクラマス幼稚魚，サケ属以外の野生魚の調査結果でも従来のA ． salmonici 血の検出に関する報告と同様であ り， 供試 サケ，サクラマスの稚魚，幼魚及び野生魚の外観上正常な個体及び沿岸で漁獲された末成熟の サケからはA・salmnniciぬは検出されなかった (Table12,
/t
」

ふイヒ

Table2629)n

括場内に収容されている卵，サケ稚魚，サクラマス
幼魚及びサケ属以外の魚類からのA ． salmon□ぬの検出を試み以下の結論を得た。
t ふ化槽内に収容されている卵の表面及び卵内部からはA ． salm 。乃 icif血 は検出されなかった。
・2・サケ稚魚，サクラマス幼魚及びサケ属 以外の野生魚からのA ． salmonici血の検出の試みはすべて 陰性であ
った。

第6 節

サケ，カラフトマス及びサクラマス 成熟親魚の血中凝集抗体価

前章において北海道各地の河川に湖上した外観正常なサケ属採卵親魚からA ． salmomciとを明らかにしたが，での期間が異なるサケ，血が検出されるこ

これらの親魚の刀 ． snrmnmr.i 血 感染時期の推定を 日的に，河川に湖上して以降採卵 ま；

ラフトマス及びサクラマスの3魚種を対象V@A. salmomci ぬ に対する血中凝集抗体価を測定し比較検討した。

材料及び方法供試魚、

A ． SdMow

ぬ血 に対する血中凝集抗体価を比較するため，

1988 年に北海道内の， 伊茶仁W15 尾，十勝川叩

尾及ぴ静内M30 尾の計75 尾のサケ親魚，渚滑川，岩屋別州及び西別川のヵラフトマス親魚各30 尾ずっ計90 尾
並びに尻別川39 尾， 斜里 MIa 尾及び西別州27 尾の計84 尾のサクラマス親魚を供試した。
同―河川における魚種別のA ． sn.1.m
れnmfr.i血 に対する血中凝集抗体価の保有状況の比較には1988 年に標津川のサケ22 尾，カラフトマスfin尾及びサクラマス If 尾を用いた。

また採卵親魚からのA ． 5.1moniciぬの検出状況とA ． s.Zw.0w.TK.A止に対する血中凝集抗体価の 関連性の検討には198i 年の iom14 日から11 月 15 日までに，石狩川で捕獲されたサケ親魚計161 尾を用いた。
血清の採取
供試魚の尾柄部血管から真空採血管(テルモ製)を用いて採血し ，現場において速やかに3． F>nn 回転で20 分間の遠心分離により血清を得た。採取した血清はドライアイスで凍結後実験室に持ち帰り，分析まで‑an でに保
存した。

供試抗原
自然凝集性の認められないA ． .@ 肋 nmr.t 血 subsp. salmomci

血 ATCC14174

株を用いて，普通 ブイヨソ培

地(栄研) で2A 時間培養後，遠心分離し 0． 85% の生理食塩水で2 回洗浄して，0 ． 5% となるようにホルマリソを加え，20 でで24 時間処理し菌体懸濁液とした。この菌体懸濁液 は使用するまでOC に保存し使用時に 0． 85% の
生理食塩水で2回洗浄した後，630nmにおげる吸光度がI． Oflとなるように， 0 ． 85% 生理食塩水で希釈して抗原液とした。
血中凝集抗体仙の測定
サケ親魚から採取した血清は非動化することなく， 0． 85% の生理食塩水で2倍の段階希釈を行い，等量の抗原液を加えて， ?37C にI時間静置しその後冷蔵 庫中にI夜静置して判定した。凝集反応の判定は常松 C1981)― 48 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究に従い， 上清がほとんど透明になり，試験管底に抗原とした菌体が沈澱 し 軽く振った場合に沈澱が懸濁した場合を凝集が認められる下限とした。対照には血清の代わりに生理食塩水を使用し，同様に操作した。
平均値の差の検定
血中凝集抗体価についてF‑ 検定により行った。
A. safmonic@daの検出

前章第I節 と同様に行った。
A. safmon;c;daの同走

前章第I節 と同様に行った。

結果

サケ，カラフトマス
及ぴサクラマス成熟親魚のA ． salmon;c;daに対する血中凝集抗体価の湖上河川ごとの比較

19S8 年におげる河川にとの血中凝集抗体価の分布を，魚種別にTahle 30 に示した。
サケでは調査した3河川共に，大部分の個体はl: 4 の ， 抗A ． salmonici止血中凝集抗体価を示し1:fi4以上をく示す個体はみられなかった。
カラフトマス血中凝集抗体価には MIf にモードが認められ， 1:64 以上の血中凝集抗体価を示す個体はみられなかった。
サクラマスでは，

サケ及び ； ラフトマスと異って，血中凝集抗体価は比較的高く，として広い範囲に分布を示し

l:8 もしく@1:16 を中心

尻別川では 1:64 の血中凝集抗体価を示す個体が2個体，I:128 の個体が2個体みられ，斜里川では1:fi4の個体が2個体みられた。 しかしA ． sKa.1montct方に対する血中凝集抗体価 屯同 ―魚種
では河川による分布の " ターンに大きな差は認められなかった。
同 ―河川における魚種別のA ． 5almon;c;daに対する血中凝集抗体価の保有状況の比較

同 ―河川におけるサケ，カラフトマス
及びサクラマスにおげる血中凝集抗体価の比較をTabIe31
標津川のサケ， カラフトマス及びサクラマス採卵親魚について，

同 ―年，

に示した。

同―河川での魚種によるA ． soJ

WOw/Cf 方に対する血中凝集抗体価を 比較した。
すなわちサケではL 4 に血中凝集抗体価のモードがみられ， ヵくラフトマスでは1 16 と 1:32 にモードがみられた。 これに対してサクラマスではl:く 4 から1:I6 までほぼ均等に分・布しており， 同 ―河川におげるA ． salmom □血 に対する血中凝集抗体価の分布にぼ，魚種ごとに差が認められた。
サケ成熟親魚からのA ． salmon;c;daの検出とA ． salmon;c@daに対する血中凝集抗体価

A ． sn.1@74rimfrci血が検出された 個体と，検出されなかった個体の血中凝集抗体価の 分布をTable

332 に示した@O
A ． sa/mwoWfcf血が検出された 個体の血中凝集抗体価は 81.0% が l: 4であ り，最高は
l:16 であったが，検出さくれなかった個体では， 90 ． 3% の個体が1: 4 を示し最高は 1:64 であった。血中凝集抗体価がl: 4 の 個体を除外
く

くして，平均値の差をF‑ 検定により行ったが，危険率5% でもA.salm。 血ci血 に対する血中凝集抗体価の平均値に右意の差はみられなかった。

考察

血液中に抗体が存在することは生体の防御反応として重要な意義を持ち，凝集抗体の存在は補体との共同作用により，強い防御方を魚類に与える。
免疫していない魚類のA ． swlmWomfr.t 血 に対する血中凝集抗体価について， Duff C1942)は二ジマスで1:20 以下，

SpenceKrantzet al ． (t965) は生理食塩水及びアジ ， ，‥ ソドのみを接種した 二ジマスでは l:10 以下，さらにet a@. (1963)は2養魚場のヵ ワ マスではl:40 以下であったことを報告している。

Krantzand

Heist (1970) はヵワマスとブラウンにおげる自然凝集抗体価の保有状況を調査し 発病を経― 49

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

Table 30. Prevalence and ranges
Of agglutinin liters against Aeromonas
salmonicida
serum
Of mature chum, pink and masu salmon ascending the rivers in HOkkaid0.

Speciees

River

Churn

NumberIchaniTOkachiShizunaisalmonAgglutinin titers (1: )Of fishexamined

Negative (%)

MOdes

Range

80.0

32

16‑ 32

6

8
16

8‑32

15

30

76

30

66.6

Shokotsu
Iwaobetsu
Nishibetsu

30
30

1f

30

6
6 7
G 7

Masu

Shiribetsu

39

15

salmonShari

18

Nishibetsu

27

Pink
salmon・chum,SpeciesChumpink and

16

4‑32

16

4‑.312

・

16

4‑33i2

・

・

4

29.6

salmonmasu

Numbersalmong

4‑ 128I6

4‑ 128g

4‑32

salmonicida ;n the serum0

ascendingofthe Shibetsu River fn 1988

Agglutinin liters (1: )of fishexamined

22
60
I6

Pink salmon
Masu salmon

8‑32

・

Table 31. Prevalence 0f agglutinin titers against Aeromonas
maturein the

<4

4

8

t6

32

64

128

I7
1

1
4

0
8

0
I7

3
I7

1
]3

0

4

5

4

3

0

0

0

Table 32. Prevalence of agglutinin titer against Aeromonas
salmonicida ;n the serum
Of chum salmon with the agent fn the kidney and without the agent.
Number

Of fish1solation of
Agglutinin titers (1A ． 50 %OMfCfdd
ゎ

EXamined<4
1solated37

NOt isolated

124

30

(81.0)"

(5.4)

I12

3
(8.1)

I6

32

64

(5.4)

(0)

(0)

工

(90.3)" (4.0) (3.2) (0.8) (0.8) (0.8)"'1 (Percentage)50―

野村―せつそう
病の疫学的研究生したA・

験した魚群では，高い凝集抗体価を有していることを 明らかにしている。木村(1970)は北海道の渚滑川で発
salmomci ぬ subsp 肌@SOUCf 血 によるせつそう病に関する研究において，疾病の発生時のサクラマ
・

病魚の中には，1:4,096と高い血中凝集抗体価を保有する個体も存在したが，発病がないと考えられる魚群

ス

では，サクラマス及びカラフトマスともL8 もしくはそれ以下であ ったと報告している。いずれの報告においても，せっそう病の流行のない時のA ． 5almomfcf血 に対する血中の凝集抗体価は低い値を示している。本節の供試魚も病原体を保有しているものの発病していない親魚であ り，血中凝集抗体価が―般に低い値を示した。
同 ― 魚種では，河川による凝集抗体価の分布の差はみられず (Table30)の 検出との関連もみられなかった (Table32)，石狩川のサケではA ． sxa.mm.nniri血ク。 しかし魚種による凝集抗体価の比較を，標津川で検討した結果では， 魚種により凝集抗体価に 差が認められた(Table31] 。 このように河川により， またA ． sdJ
mnntr ． i血の検出の有無により ， A ． mlm@nniri 血 に対Chumsalmonn=379

する血中凝集抗体価には差が認められなかったことから(Table30 及び 32),1982年以後の種々の河川の成熟親魚について，

50

A ． .w./.mnm.fcf. 血 に対する血中凝集抗体価の測定結果と， Table30

からTable32の結果を合わせて， 魚種 ごとにまとめFig ． 9 に示した。すなわち，サケ親魚のA ． sn.1川。m.r.i血 に対する血中凝集抗体価は，調査した 379 尾の 77.3% に当たる293 尾

1:<4，カラフトマスでは I:16にモードがあ り， サがPink salmon支

クラマスでは，サケ親魚及びカラフトマス親魚とは

）

していた。

Q.

魚種により血中凝集抗体価の保有状況に差が認められた理由についてはサクラマスの場合・湖上後6 ；月間河川に生活していることから (真山 1988) ，salmomci

A

血 に遭遇してから採卵 までの期間が長く十分な免疫応答期間があ ったものと考えられる。―

50

方 サケ及びカラフトマスでは，河川湖上後に刀 ． 5M川。乃 tctda に遭遇したものの，抗体産生に十分な免疫応答期間がなかったことに起因するのではないかと考えられた。
今後，サケマス増殖事業において，淡水生活期間qが長く， しかもせっそう病に罹 り易いサクラマス親
魚に対しては，せっそう病の防疫のために，

4 8
6 32 叫て28
Agglutinln liter (1:)
千ワクチン 接種による対策も考えられるが，サケ及ぴカラフ

FIg

魚種では，湖上後のワクチン接種は実用的ではない

9 PrevalenCe
Of agg@utinin titerS againSt
Of
Aeromonas
salmonicida;n the serum
maturechum, pink and masu
salmonascending the rivers fn HOkkaid0,
n =numberOfと考えられる。

fish examined

トマスのように，河川湖上後採卵 までの期間が短い― h1 ―・・さけ・ます
ふ所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

小N0.

47, 1993

指サケ， カラフトマス及びサクラマス採卵親魚のA ． milmomct 血 に対する血中凝集抗体価を測定し以下の結論を得た。

I A @uilmomci血 に対する血中凝集抗体価は， 魚種により異なる分布を示し河川湖上・・

後河川での生活期間が長いサクラマスでは，比較的高い値を示したが，サケでは1: く 4 に， ； ラフトマスではI:If に分布のモードが認められた。
2． 同―魚種では河川による差は見られなかった。
3 ．サケ成熟親魚の， A ． salmomfci

血検出場性個体と 険性個体の問に有意の血中凝集抗体価の差はみられなかった。
4 ． 魚種による血中凝集抗体価の差は，湖上後の淡水生活期間の差によるものと考えられ，A ． sd. mmnnnniri 血 にク

は河川湖上後に遭遇感染したものと推察された。

第7 節

棲息環境水中における A ． salmonicida フアージの検出

サケ 属採卵親魚飼育環境水中に A ．

%h0wM

血が存在するか 否かは，採卵親魚から分離された A ．

s&J

mnnir ． i血の由来と感染時期を 考察する上で重要と考える。
しかしながら，魚類の棲息環境水中からのA ． Salmomci 血の検出に関する 研究は種々報告され検討されているが，人工実験感染の試験水槽など特殊な場台を除いて，A ． salmomfci血が検出されたという報告はみられない (McCarthy, 1980)o
口高 (1975. 1976) は， 我が国の河川及び湖沼からA ． salmれomfcida フアージを検出しそれらのフアージを用いてA ． MMOW

ぬ血のファージ 型別を試み， ファージを利用してのA ． 5MWOwfCf

査の可能性を報告している。水中にA ．

血の分布や疫学的な 調

soJmow ぬ血 フアージが存在することは，同時に宿主であ る A ．

ぬ 血の存在を示すものであ ると考えられ，本節ではサケ採卵親魚飼育環境水中に A ． M7mow

WOw

5M‑

桁血 ファージが存在するか否かを検討した。

材料及ぴ方法供試水
1987 年 lo 月から12 月にかげ親魚の湖上期に尻別州，署寒別州及び大塩川の3河川の河川水・北海道さけ ・ますふ化場用別事業場，千歳事業場及び斜里事業場の3事業場の注水，尻別事業場，千歳事業場， 斜理事業場，幕別事業場， 札内事業場及び十勝事業場の排水を，1987 年3月の稚魚の放流期には釧路川の河川水，斜里事業場，

中漂律事業揚， 計根別事業場， 虹別事業場及び釧路事業場の注水，千歳事業場，業場，

中標律事業場及び虹別事業場の排水を滅菌フラスコを用いて採取し斜里事業場，伊奈亡事

水冷して実験室に持ち帰り実験

に供した。

供試苗
鹿児島大学水産学部微生物学講座から分与されたA ． 5MW0%M

血 SubSp ． SMM0w/C/

ぬ Ar‑71 ，

H‑70 ， Ar 32
・及びAr 43 の 4株を宿主菌 として供試した。
・

試料からのフアージの検出
普通 ブイヨソ(@栄研) で20C24 時間振露培養した宿主菌培養液500 ml に0 45 um
・

過した試水を， innml
ルムを Imli

口ずつ接種しの，リポアフィルターで濾

さらに48 時間培養してフアージを増殖させ， これらの培養液にク口 r3 ホ

えて遠心分離後，微生物研究法懇談会 u977) の方法に従って，寒天重層法によりプラック形成の 有無を観察しプラックが出現した試料をファ ―ジ陽性と判定した。なお，対照として試水を接種しない

宿主菌液についても同様の操作を行った。

― 52

野村 せつそう病の疫学的研究

Table 33. Isolation 0f Aeromonas

salmonicida phage fromrivers water, hatchery waterandsewageOf

hatcheryType
Season

Of
water

Fall

River water

water

HOst

strainOf

place

Ar‑7I H‑70

collection

Shiribetsu R.

Dec.

Shokanbetsu

Oct. 31, 1987
Oct. 30, 1987

TeshioHatchery

Date

Sampling

R

R.

Shiribetsu H.
Chitose H.

20, 1987

Dec.

20, 1987

Oct.

14, 1987

‑
+
+
‑
‑

十

Ar‑32 Ar‑43

十

十

+

+

‑

十

十

‑

+

+

十

―

―

十

Dec. 1. 1987
Shari H.

Sewage ofhatcheryH

Shiribetsu

Chitose H.

Oct. 14, 1987

‑
‑
‑

I，

―

Dec.

25, 1987

Dec.

14, 1987

DeC
Shari

NOv.

Makubetsu
H.
Satsunai H.

SpringTOkachiH.

River water

KushiroR.

Hatchery

Shari H.

water

Sewage ofhatcheryNakashibetsu．

H

Kenebetsu H.
Nijibetsu H.
Kushiro H.
Chitose H‑

20,

17, 1987

Mar.

15,

Mar.

17.

Mar.

21,

Shari H.

Mar.

15,

Mar.
Mar.

16,

Mar.

15.

H

Nijibetsu H.

1987

Mar.

1chani H.
Nakashibetsu

1987‑
Dec. 20. 1987‑
Dec. 17. 1987‑
NOv. 17, 1987‑
NOv. 17, 1987 +Mar. 17, 1987‑
Mar. 15, 1987‑
Mar. 16. 1987
‑

H

結

16,

+

‑
1987 +
1987
‑
1987
‑
1987 +
1987 +
1987
‑
1987

十
十

+

干

十

果

1987 年に道内 n 事業場の注水及び排水並びに河川水から採取した26 検体の試料について， A ． .w.1mnmfri血
ファージの検出を試みた結果を Table 33 に示した。

供試した26 換体のうち，親魚湖上期の河川水では，暑寒別州及び大塩川から，事業場では十勝事業場の排水からA. salm%0mfci血 ファージが検出された。稚魚の放流期には， 計根別事業場及ぴ釧路事業場の注水並びに伊茶亡事業場及び中模律事業場の排水から検出され，親魚の湖上期ぱかりではなく稚魚の放流期にも検出された。
宿主菌 ごとのファージの検出状況では， Ar‑7m 株が感受性を示すファージが暑寒 B@ 川，大塩川，十勝事業場
排水及び計根別事業場注水から，H ， 70 株が感受性を示すファージが大塩川及び釧路事業場注水から，Ar‑3i2株

が感受性を示すファージが暑寒別州．十勝事業場排水，釧路事業場注水及び伊茶亡事業場排水から， さらに― 53 ―

さけ・ますふ 既報 SC1.

REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47,

1993

Ar‑43 株が感受性を示すファージが暑寒別州，天塩川，十勝事業場排水。釧路事業場注水，伊茶亡事業場排水及び中標律事業場排水からそれぞれ検出された。

考
McCraw

察(1952), POpoff (1971a, 1971b) 及びROdgerseta@

養魚場の用水，泥及び魚の内臓から検出されることを，A．

． (1981) はA ． salmWonicidaフアージが河川水，また日高(1975, 1976) は我が国の河川及び湖沼から

salmonici 血 フアージを検出しそれらのファージを 用いてA ．

A．

sn ム mmnmfr.if 止のファージ 型別を試み，

Siilmonir.t 血の分布や疫学的な 調査にフアージの 検出及び 型別が応用可能であ ることを報告している。
POpoff(1971a) はA ．

saAmmomr.@血のファージは ，宿主菌 の種特異性が強いことを 報告し水中 @VLA.

@WaI

womc みんファージが存在することは， 同時にA. sal@mnmfri血の存在を示すものと 考えられている。
魚類棲息環境水中におけるA ． salmcintci血の検出が培養法や 免疫学的な方法によっても 困難な現状では，

A ． 5almWontrt血 ファージの検出は間接的ながら，環境水中にA ． salmonica

血が存在することを 示しているものと考えられる。
木研究においても，調査した河川及び飼育用水から，

A ． @@umcimcf

血 ファージが分離された(Tab@e33)o

今回の調査 ぼ試料数も少なく サケマス増殖河川全般について論議することはでぎなかったが，の試料のー部からA ． sMd/?mm.0%z'Cfぬ ファージが検出されたことは，

これら河川水それらの河川水中にA ． SfJ.1wi.nnir.i血が生存することを示すものと考えられる。

小棲息環境水中でのA ． salmomc?

括血の生存を推定するため ，棲息環境水中からA ． saiM 。乃 ir.i
血 ファージの検出を試み，以下の結論を得た。
I．

A．

sd mowfCfょ

ぬ ファージが親魚の湖上期及ぴ稚魚の河川放流時期に棲息環境水中から検出され，A ．

SM

W0%fCf 血がこれら棲息環境中に 生存することを推定した。
2．以上の結果から， 採卵親魚におげるA ．

5MWOwfCf 血の感染時期は 河川に湖上して以後と考えられ， 採卵親

魚における検出率の低減がせっそう病防疫対策上重要と考えられた。

―5イ野村―せつそう
病の疫学的研究3 三寺

茸斗

採 gP 栽士焦、 から分 推した Ae 「nomonas

salmonlcidaの十萬

分類学的検討及びその 病原 性
前章では，北海道内の主要な サケマス増殖河川の外観正常なサケ属採卵親魚から，せっそう病の病原菌であ る A ． sor@%0wfCf血が高率に検出されることを 明らかにし水温などの 外部環境の変化によって，容易に発病に結び付く危険性があ り，抜本的な防除対策の必要性のあることを指摘した。
A ． SMmow

ぬぬは ， SnieSzkoC964)が報告しているように，絶対病原性を有する細菌と考えられている。

現在まで世界各地で分離された株間に，生化学的性状による差は少ないことが知られているが (AuStin

andAuatin ， 1987) ， A salnionaici 血 には3亜種の存在が報告されており (POpoff, 1984) ， 第 I章で分離した多数の・A ． salmomci 血の分類学的位置を 明確にしさらにその病原性の有無を確認しておくことは，せっそう病の防除対策を確立する上で重要であ り，不可欠の要素と考える。
本章では，サケ属採卵親魚から分離したA. salmonici血 について，第I節では分離株の分類学的位置について ，第2節では分離株の血清学的性状について，第3節では分離株のサケ属魚類に対する病原性にっいて検討した。

第]節
A ． 50MOw

操卯 親魚から分離した A. salmonicidaの生化学的性状

ぬ血 は魚類病原細菌の中では研究の歴史が長いこともあ って，生化学的，血清学的性状などが比較的よく研究されている (AuStin

and

AuStin ， 1987) 。 しかし我が国ではアマゴから 分離されたA ． sdZ・□ぬ について丹治 Q972) が，サクラマス及びカラフトマス親魚から分離されたH S4ZW 。乃 fCfdd についてWOw

M 肋 Wn. わ励 ， subsp

・ぽ池 及びsubsp杣ぉ。

・salmrim 七 施には subsp

・

A

・

木村 (1969a, 1969b ， 1970) が報告しているのみであ る。

? 杣勿川昭@nesの3亜種が報告されている(POpoff, 1984)0
本節では北海道各地の河川のサケ属採卵親魚から分離したA ． salmonici血 について，その生化学的性状を検討し分類学的位置の決定を試みた。

材料及び方法供試菌株
第I章においてサダ属採卵親魚から分離したA ． M 肋 0%F

ぬ の中から，1979 年に石狩川の サケ から分離した

4株 (NO ． 1‑NO ． 4) ，十勝川のサケから分離された2株 (NO ． 5‑NO ． 6) 及び標津川のサケから分離した3株 (NO ．

?‑NO ． 9) ， 1980 年に石狩川のサケから分離した5株 CNO ． 10‑NO． 14) ，

幌内川のサケから分離した4株 (NO ． 15‑

NO ． 8) 及び十勝川の サケから分離したI株 (NO ． 19) ， 1987 年に石狩川の サケから分離したI株 (20‑D の計20 株
ェを供試した。
・

刀 e/fl miTm

松 salmnmct

Salmonici血 NCMBI102の 4 株，

血の標準株としては ， A ． 幻伽 omcidasubsp.salmon

株, subsp. masouc

励 NCMBAe めm り刀 仏 属の標準株としてA ． 伽? 叩ゆ hilna NCMB

如ぴ坤。ぬれ 5 ATCcI1715

た idaATCC

14174

2020 株及び subsp.achromoeenesNCMB
86 株， A・

力 unr. 血加

NCMB

株，

suba p・

I110 株
74 株及びA

株の3株計7株を供試した。

供試菌株の前培養

供試菌株の前培養には，市販の普通寒天培地(栄研) もしくは普通ブイヨソ培地(栄研)を使用し，20 でで24時間培養後，

生イヒ

学的性状試験に供した。

生化学的性状55―

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

主として坂崎 C]974)を参照して，以"ドの方法で実施した。
培地は栄研イヒ 学またはDifco 社製の市販品を用いたが，―部の特殊培地は実験室で調整した。培養温度は特記した以外は20 でとした。

1) グラム染色:Hucker の方法によった。

2) 運動性:半流動寒天培地に供試菌株を接種 し 穿刺線の混濁の拡散から判定した。
3) 37 でにおげる発育:供試菌株を普通 ブ イヨン培地に接種して，37C で培養し発育の有無を観察した。

4) 水溶性色素の産生:普通寒天培地に供試菌株を接種 し 褐色 々 素の産生の有無を観察した。
5) 7． 5% 食塩含有培地での発育 :普通 ブ イヨン培地に?.5% となるように食塩を添加し pH を7． 2に調整した培地に供試菌株を接種 し

7 日間発育の有無を観察した。

6) グルコ スの酸化，醗酵試験 COF 試験) クルコースをi% の 割合に添加した Hugh・

Leifsonの OF 培地各2本に供試菌株を穿刺し ―方は滅菌 セリンと流動" ラフィンの混合物(2:1混合)を重層し 他方はそのまま
ワ

7 日間培養して， 酸及びガス産生の有無を観察した。

?) イ リド ルの産生:普通 ブ イヨン培地に供試菌株を接種 し薩 酸紙が桃色に変色した場合を陽性とした。

8) 硫化水素の産生:TSI寒天培地に接種 し 24時間ごとに培地の色調を観察し 黒色に変色した場合を陽性とした。

9)KCN 培地での発育:KCN 培地に普通 ブイヨソ(栄研)で前培養した供試菌株を接種し 発育の有無を観察した。

10) チ トクロ―ム オキシダーゼ試験 ;チ トクロ―ム オキシダーゼ判定ディス ク c栄研)に供試菌株を白金耳で塗抹しディスクが 紫色に変色した場合に陽性と判定した。
11) カタラーゼの産生 :普通寒天培地で4S時間培養後3% 過酸化水素液を滴下しその直後改 閃 分後のガスの産生の有無を観察した。
12) ウレアーツ:Christensenの尿素培地に供試菌株を接種 し 7 日後に培地が赤変した場合を陽性とした。
13)硝酸塩の還元:硝酸塩 ブ イヨン培地に供試菌株を培養後，亜硝酸塩試薬を滴下して赤色に変化した場合を陽性とした。赤変しない場合はさらに亜鉛末を加えて放置し培地が 赤変するか否かを観察した。
14) リジリ脱炭酸酵素 : ジンを1% 含む MOller の培地に供試菌株を接種 し 滅菌流動。 ラフィソを重層して4リ日間培養しその 間脱炭酸による培地のアルカリ化を観察した。
15) ゼラチソの液化:ゼラチン培地で培養後液化状態を判定した。
16)MR

反応:MR 判定用培地に供試菌株を接種して培養後，0． 2%

メ

チールレ " ド 溶液を滴下して赤色に変色した場合を陽性とした。

17)G‑ C 含量の測定:MarmurandDotyC1962)の方法により，NO・

12 株及び20‑ 1株から抽出したDNAについで，常法により測定した。

結果

供試2m菌株の形態，生化学的性状などをTable34に，標準株?菌株の性状等をTabls35に示した。
供試株20菌株は同様な性状を示しいずれもグラム 険性，褐色 々 素を産生し，運動性がなく， 37で及ぴ
7 ． 5% 食塩を含む培地での発育は認められなかった。供試菌株はゼラチソを 液イ乙 したが，グルコースを発酵的に分解し，ガスを産生した。
供試菌株はシュクロ― ス からの酸 の産生を除けば，

A．

salmonicidao subsp. salmonicidaに ‑ 致したが，subsp.masouci 血 ， subsp‑achro 川昭enes とは褐色々 素の産生，イソドールの産生，グルコースからのガスの産生の点で異なる性状を示した。G‑C 含量はNO.12 株では 56.7%.

SubSp 5Mm
・

。Wfrf 止 NCMB

20‑i 株では58.0% であ り， A ． salmoniri血HO2 株の値とよく―致したo

A げ。川0% の属の他種の標準株についてみると， A ． 竹小ゆM 妨 NCMB86
A ． JWM 如 FmS

ATCC

株， A 似加勿 NCMB74
・

株及び

I1715 株には運動性が認められ，褐色4 素を産生せず， 37 でで発育する点でA― hf ―

・50J‑

野村―せつそう
病の疫学的研究

O

一
二

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十l十 l十山十 l l l 十l 十 l十

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さけ・ますふ研報 SC1. REP.

I

HOKKAIDO

I Cri l te l b‑, 1 + 1 1 ++SALMONHATCHERY,

1+ 1 I I

1 + 1 +++++

N0.

47.

1993

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野村―せつそう
病の疫学的研究

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さけ・ますふ 既報 SCIREP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

14174 株及びA

monicida subsp.salmWonicidaATCC

・

N0.

47, 1993

salmom7cidasubsp.salmomcid

は

NCMB

IIQz 株と明らかに異なっていた。

考察

POpoff (1984)によると，Aeromonas 属の性状として 屯短桿 菌で通常運動性を右 し 糖を発酵的に分解し酸と ガスを産生し

ダルコ

スから2，

3 ブタンジオルを産生する細菌とされている。

本節で供試した，サケ採卵親魚から分離したA ． sUa.1mnnntri血 20 菌株の性状にはほとんど差は認められなかったが(Table34)
及びA・，分類上の位置を決定するために， 供試菌株と既往のA Kalmnniri血の性状 (POpoff,1984)
・

50MOw 而血の標準株の 性状 (Table35)

性の点で異なる他は，の比較を試みた (Table36)

G‑ C 含量も含めほとんどの性状で，A ． MMMM
A ． Mrmow

株の性状と完全に ―致し。 供試菌株はシュク p ―スの分解

血 SubSp ． SがWOw

試菌株は褐色 々 素の産生が陽性，イソドールの産生陰性及びりジン脱炭酸険性の点でA
WM.xnur

ぬ血 ATCC14174

ぬ血 に分類することに問題がないと考えられた。亜種との比較では供・5がWOW 桁血 SubSp ．

． iぬと異なり，褐色々 素の産生陽性，インドールの産生険性，ゼラチンの液化陽性及ぴダルコースからガスを産生する点で，Asaalmnnici血 subsp ． 0肋叩川昭(e.%c.fsと異なる性状を示した。 以上のようにサケ属採・卵親魚からの分離株は シュク @@t―スの分解性を除く性状でA ． ssnlmnmr.i血 subsp. salmonici 血と ―致することから，分類学的にはA ． salmomcZ

血 subsp.

salmomc?

血 に同定して差し支えないと考えられた。

なお分離株がすべてシュク p ―スの分解性が陽性を示しこれに対して標準株が険性であ った。 この点については，諸外国での分離株は全てシュク p ―ス分解性険性であ り (江草 1978;AustinandAustin,1987),
我が国での分離株はすべて陽性であ ることが明らかにされていることから(丹治 1972; 木村 1970) ， 第 I章の分離抹は，我が国を起源とするA・<M/ 刑omfr.if
血 subsp. salm%0nici血と考えられる。

小括

サケ属採卵親魚から分離したA ． 5aAmrimfr.i 血 代表株についてその生化学的性状を検査し分類学的位置について以下の結論を得た。
I． 供試したA ． SMWOwM
すべてA ．

SがWOw

血 代去株20菌株とA ． s&?mow

ぬ血 SubSp ． wMoW

ぬ 血の標準株との 生イヒ 学的性状の比較から供試菌株はぬ血 に同定された。

2 供試菌株はシュク p ―スの分解性が陽性であ ったことから，・

戎国を起源とするA ． sd/W0%

而血 SubSp パM‑

WOwfCfda と考えられた。

第2 節

採卯 親魚から分離した A ． Salmonjcldaの血清学的性状

前節において，サケ属採卵親魚から分離した A ． MM0%Mんば，生化学的性状から A ． SMm。ぬCf 血SubSp

salm%0mf 、i血 に同定し得たが，分離菌株の血清学的性状を明らかにしておくことは，血清学的な診断や免疫学的な予防方法の導入に際して不可欠と考えられ，本節では分離菌株の血清学的性状について検討した。

材料及び方法
供試菌株
前節で生化学性状を調査したA ． salmnniciぬ NO ． I から20‑1 株の計2(@菌株，また広範な地域で分離した株の自発凝集性を調べるため，1979 年に石狩川で分離した50 株， 徳志別川の.Hf株，網走川の21 株， 標津川の21 株，
釧路川の3株及び十勝川の9株の いずれもサケ採卵親魚から分離したA ． $n.1momfr.if血 合計I4m 株を用いた。標

NCMB

5M 川0%fCf 血 SubSp

HO2 株放び SubSp ．川のOMCfdo NCMB

・

・

・

準株としては前節の標準株中のA

MM0%

而血

ATcC

2020 株の3株を供試した。

自発凝集試験
― 60 ―

14174 株， SubSp ．

M 肋 0%fCfdd

野村―せつそう
病の疫学的研究
供試菌株を普通 ブイヨソ培地(栄研) で， 20 でで24 時間振藩培養しボルテ " ク，キサーで?． n 秒撹伴し
後静置して 1.@分後ま でに菌体の沈降が認められた菌株を自発凝集件強 (++)
・められた株を 自発凝集性弱 C+) と判定，それ以外は日発凝集性を示さない
抗A ． salmon;c;da

A

・

・

(

血清感作staphylococci

木村・吉水 (1984)の方法に従 い ，
リイブイヨン培地(栄研) で， 37C18

株のホルマリン 死菌をウサギに接種して作成した。

波の調整

S 幻ク如 lococcusau化usATCC12598(CowanI・

うに再懸濁して，安定化staphylococci 液を作成した。
この安定化staphylococci 液 I 0ml に， 抗A ． salmonici

で6 回洗浄後，

salmomfcf 血 血清感作staphylococci

PBS

で5回洗浄後 ，で10%(V/V)

PBS

0． 5

となるよ

血 ウサギ血清を0 ． 1 ml 加え，よく混合した後 25 でで3時間反応させた。次に，遠心分離により上澄みを除去し PBS で0 ． 5%(V/V)
・型)株を用いて， トリプト時間から24 時間培養後，遠心分離により集菌し九 ホルマリリPRS 液 に懸濁して，25 でで3時間静置し，さらにPBS

A)株と判定した。

ウサギ血清

salm%0nicidasubsp.sa 仇 onicidaATCC14174

抗A salmon;c;da

以と判定，
I時間後までに沈降が認となるように再懸濁して，抗液を得た。

供試菌株抗原供試菌株を普通 ブイ ヨソで24 時間培養後，遠心分離により得た培養液を培養液抗原としこれを 100C30分

加熱したものの遠心上清みを加熱抽出抗原とした。
共同凝集試験
・

木村・吉水 (1984) の方法に従い，前述の方法で調整した抗A 5MW0%fCf 血 血清感作Staphyl0coCCi 液0 ． 05mlと供試菌株抗原0． 05ml を載せガラス上で混合し湿潤箱に収めて室温で反応させ，30 分後と60 分後の共同凝集の程度を肉眼で観察し凝集が 観察されたものを凝集反応陽性とした。

結果

自発凝集試験
A ． salmonici 血 NO ． Iから20‑ 1株の20 菌株と標準株の 自発凝集試験の結果をTablP.37 に示した。
A ． 5MWOWfCf 血 NO ． Iから20‑1 株の 20 菌株中では A ． 5MW0 れ fCf ぬ 20‑1 株を含む 12 株は強い自発凝集 性

WOw/Cf 血 NCMB

5がWOwfCf

ぬ SubSp・

自発凝集性を示さない株は見られなかった。

5がW 。乃 fCfd7 ATCC

14174 株及びA・

また標準株のうちA・(十十)を， 8抹 は弱い自発凝集性(十 ) を示し

SM 川0%fCf 血 SubSp ． 5M‑

石ぬ SubSp ． 仰W 50M ぬ血 NCMB

HO2 株は自発凝集性を示さなかったが， A ． 5MW0%2020 株は弱い自発凝集性を示した。

A SがW0%fCf 血 20‑1 株，A 5が川0%fCf 血 SubSp・・

MZWOWfCf 血 NCMB

・

5が川OwfCf 血 ATCC

14174 株及びA

・

soJW0

乃 fCfdoSubSp ．

HO2 株の自発凝集性の状態をPlate 2‑A に示した。

刀バalm nmrt 血 20‑ 1株では振濁直後には菌体が均―に分布していたが， 15 分後には上清が透明になり， 自・発疑集した菌体が沈澱していたのに対しmonn.@ぬぬ subsp.

sa 肋 om,c.i血 NCMB

A ． salmomra

血 subsp.

salmomfcida

ATCC

14174 株及びA ． Sfd/

1102 株では，15 分後でも培養液は清澄とならなかった。

1979 年にサケ採卵親魚から分離したIw0 株の自発凝集試験の結果をTable38

1979 年にサケ採卵親魚から分離した140 株のうち 10f 株が強(++)に示した。

自発凝集性を示し

34 株は弱 W十 ) と判定された。

共同凝集試験
A ． salmonicida

NO ． Iから20‑ m株の20 菌株と標準株の共同凝集試験の結果をTablR

39 に示した。

A ． silmontcida NO ． Iから20‑ 1株の20 菌株は，培養液抗原及び加熱抽出抗原を用いた試験ともに凝集反応陽性を示した。また，標準株 もいずれも凝集反応陽性を示した。
1979 年にサケ採卵親魚から分離した 140 株の共同凝集試験の結果をTable40― fi1 ―に示した。

きけ・ます ふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

Table 37. Autoagglutinnin
ability 0f Aemmonas
salmonicida
isolated from mature chum salmon, and standard strains Of thebacterial agent

StrainStrains isolated
from

chum

Agglutinin ability*'
A. salmonicida 1

salmon

A.
A.
A.
A.

salmonicida
salmonicida
salmonicida
salmonicida

2
3
4
5
A. salmonicida 6
A ． Sは 乃w0wzCZ? ぱ 7

A ． Sは JwowzCz?

ぱ 8

A. salmonicida

9

++

++

+ +
++
++

A ． 5 0%7C77 ぱ I0
A ． Ralmom7cida II
A ． 54ZMOWfCf7C I2
A ． 50 %OwfCf? ほ I3
はわれ

++
++

わ

A. salmonicida I4
A. salmonicida I5
A ． 5ぱ ZM0m た i70 I6

A ． SMw0 乃 fCM0 I7
A ． SdJw0%fCf77 I8
A ． Sば ?moWfCfd ほ I9++

A. salmonicida 20‑1
A. salmonicida
subsp. salmonicida
NCMB
14174

Standard strains

・

A

++

5&ZWOwfC770

subsp. salmonicida
NCMB
1102

A

・

5aJmomfcid"" 。"P ．

*1 ++,

Strain has

NCMB
2020
strong agglutinin ability;+,

Strain has weak‑,

Strain dose not have

Table 38. Autoagglutinnation
isolated
River

from

kidneyagglutinin ability;
agglutinin ability.

ability of Aeromonas

Of chum

salmonicida

salmonin HOkkaido

Number0f strain
Autoagglutinin*1

Examined

Ishikari
TOkushibetsu
AbaShiri
Shibetsuは凧"""'血

++
49

50
36
21
21

+
29

0
O

106
34
140
Strain has strong agglutinin ability;+, Strain has weak agglutinin ability;

0

20
21

KushiroTOkachiTOtal*" + +,‑,

Strain does not haveagglutinnation― 62 ―

ability野村 せつそう病の疫学的研究

Table 39. Serological identification 0f Aeromonas
salmonicida
strains
isolated from the kidney 0f mature chum salmon and standard strains
Of genus Aeromonas
by coagglutination test using Staphylococci
sensitized with A. salmonicida ATCC
14174 serum.

Antigen
Strainin culture
mediumStrains isolated
from chum salmon

extracted byheatedA. salmonicida 1
A. salmonicida 2
A ． SMmo 乃 fCU7 3
A. salmonicida 4
A ． S? 止刑 OnazC@ぱ0 5
A ． sUZW0 れた fd0 6
A. salmonicida 7
A . salmomfcida
8
A ． salmomcida
9A . salmom7cida
10
A . salmom7cida4 11
A ． sa w0w Cff0aほ 12
A ． salmom7r.?fd.d 13
d ． salmomci 血 14
A ． salm0wicid ほ 15
A . salmwomFcidao 16
A ． salmom た ida 17
A ． salmomfcida
18
A. salmomfcida
19
ムタ

A ． SaJmnmFr.77d

Standard

strainsは

20‑1
A. salmonicida

subsp. salmomfcida
ATCC
14174

A

・

ssn.1mm.0w.C.iiin.

subsp. salmonicida
NCMB
1102

A ． salninm め ,tdaa
W俗 oucfda

subsp.

NCMB

2020

Table 40. Serological identification Of Aeromonas
salmonicida strains
isolated from the kidney Of mature chum salmon fn HOkkaido bycoagglutination test using Staphylococci sensitized with A. sa1‑
nwnicida

ATCC

14174

serum.

NumberExamined

River

Ishikari
TOkuahibe

Abashiri
Shibetsu

0f strain
POsitive
Antigen
Antigen in
cultureextracted
by heatmedium

帖u

50

50

50

36

34

35

21
21

21
21

21
21

140

9
138

139

KushiroTOkachiTOtal― 63 ―

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

1979 年にサケ採卵親魚から分離した株は，培養液抗原を用いた試験では138 株が，加熱抽出抗原を用いた試
験で@／ 139 株が凝集反応陽性を示した。

考UdeyandFryer (1978)@／ A ． MMOwfCf

察

血の分離当初には 自発凝集性を示すことが多いこと，また自発凝集性と コ p 二―のS型とR 理及び菌体表面に存在するAlayerとの関連について検討し，自発凝集性はA@ayerの存在する株にのみ認められ，これらの株 は病原性を有することを報告し，IShiguroetal

・(1981)及びKayet al ． (1981) も同様の報告をしている。

供試菌株はすべて 自発凝集性を示したことから CTable37)，病原性を右するものと推定された。標準株として供試したA

NCMRnIn2・

salmomfcf血 subsp. salmomci 血 ATCC

14174 株及びd・

salmomct 血 subsp. salmomfciぬ株は自発凝集性を示さなかったが， Duff (1937)が述べているように，これらの株 は分離後長期に人エ培地で継代培養を重ねたためAlayer 形成能が脱落したことによるものと考えられる。
Karlsson(1964)はスウ，―デソ，アイルランド及び スコ ，トランドで分離された12 株のA ． salmonic? 血の血清学的性状に差はないことを報告し POpoff (1969)も供試した 39 株には血清学的な 差異がなかったことを報告している。また木村(1970)は北海道の渚滑川のカラフトマス及びサクラマス親魚から分離したA ． sa/
川。
n?.z.1cf
血 subsp. masoucidaI@ 文 .A4.salmomfcid@adsubsp.
salmom而血と共通抗原を 有することを報告している。

従来A ． salmomci 血 に対する凝集試験では，前記のように分離当初の多くの菌株に自発凝集性が認められるため，ラテックスや血球を用いた 間接凝集試験 (McCarthyandRawle,1975;McCarthy,1975)
アンインク法 (McCarthyandWhitehead,1977)

や インデイ，共同凝集試験(木村・吉水 1984) などの応用が検討されている。本研究で1979 年のサケ採卵親魚からの分離株 も自発凝集性の強弱には差があ るものの，すべての株が自発凝集性を示したことから，通常の載せガラス法による抗A ． MMOw

た fdC ウサギ血清を用いる凝集試験を実施することは 困難であ った。そのため本研究では，木村・吉水 (1984) の 抗A ．

5M 川0% 心血血清感作 Sta‑phyl0CoCCi による共同凝集試験を用いて，分離株の血清学的性状を検討した。
供試菌株は共同凝集試験陽性を示し標準株として14174 株， subsp ． salmomci 血 NCMRImo2

供試したA ． sぽ ZWOw 而血 SubSp ． Sa7P%0WfC/血 ATCC

株及びsubsp.@asouci

血 NCMB2020

株の3株も反応陽性を示した

ことから，分離株は血清学的性状においても均―であ り，標準株と共通抗原を右することが明らかになった。

@

括

サケ属採卵親魚からの分離菌株について 自発凝集性及び血清学的検討を行い以下の結論を得た。
I．自発凝集の結果では分離株はすべて自発凝集性を示した。

2．共同凝集試験を用いた血清学的な検討結果から，分離菌株はいずれも凝集反応陽性を示し， A. salmomfci血の標準株と共通の抗原を右 し第3 節

血清学的には均―な性状を有していることが明らかになった。

採卯 親魚から分離した A ． salmomfc;Kda のサケ及びサクラマスに 対する病原 牲
前節 までに採卵親魚から分離した A ．

。ぬCf血 は生化学的性状や 血清学的性状の 検討から

A．

S刃

suibsp salmonici血 に同定され，自発疑集性を右していたことから病原性を有する可能性が示陵・加ワ mfcf 血SMWされたので，本節では分離株のサケ及ぴサクラマスに対する病原性について検討した。

材料及び方法
供試菌株
1987 年に石狩川のサケ採卵親魚から分離しA ． salmomci 血 に同定された20‑1 株を用いた。
― fi4 ―

野村 せつそう病の
疫学的研究

供試魚

いた。

サクラマス幼魚に対する病原性の検討にはサクラマス幼魚 (平均体重20 ． 5 g) を実験区で45 尾，対照区で M屋用いた。
サケ親魚に対する病原性の検討にはサケ親魚(平均体重2， 040g) を8屋用いた。

接種苗液
供試菌株を普通 ブ イヨン培地(栄研) で， 20 でで7A4時間振撮培養後，遠心分離により集菌し菌 体を生理食塩水で適宜希釈して接種苗液を調整した。

接種苗量
サケ稚魚、
では供試魚 I尾当たりI． 7x10'cfu

接種 し サクラマス幼魚では I尾 当たりI ． 8xIo ， cfu としサケ親

魚、には供試魚 I尾当たり6． OxIo5 cfu 接種した。
接種法
接種苗液を，サケ稚魚放びサクラマス幼魚の背鰭基部にて イ @7 V シリンジを用いてそれぞれ0． 01

ml と 0． I

ml ずつ接種した。対照区には滅菌生理食塩水をそれぞれ0． 01 m¥l と 0 ． 1 ml 同様に接種した。
サケ親魚では接種苗液を滅菌注射器を用いて背鰭基部に0.1 ml 接種した。

袋死の観察
サケ稚魚及びサクラマス幼魚を26l 容の塩化ビ二― ル製水槽に収容し 水温10‑4 での湧水を毎分0 ． 5l 注水しながら，5 日間弊死の出現状況を観察した。日間弊死率は，後述の生菌数測定用の供試魚を取り上げた後の生残尾数と，その後24 時間の姥死尾数から求めた。実験期間中給餌はしなかった。
サケ親魚で 屯1(U． 4 での湧水を毎分 m 注水した61l 容の塩化ビ二ル製水槽に I尾ずつ収容 し ，症状の発現と行動を観察した。
接種後のサケ親魚に対する病原性の判定は， 供試魚の皮膚の膨瘤 などの典型的なせつそう病の症状はみられるが，行動が止常な場合を (+) ，前記の症状に加えて瀕死の状態になった場合を (++)

として表示した。

腱能中の接種苗生菌数の測定
サケ稚魚に対する病原性の検討では接種後，実験区で48 時間後に3尾， 72 時間後に10 尾及び96 時間後にIO 尾を取り上げ，供試魚の肝臓及び腎臓を無菌的に摘出し 精秤後接種苗生菌数の測定に用いた。すなわち各臓器に供試材料の9 倍量の滅菌生理食塩水を加え，滅菌乳鉢で十分磨細し lo 倍希釈して希釈系列を作成した。
普通寒天培地平板に各希釈波の0． 2ml ずつを接種 し コンフジ捧で塗抹，20 でで5‑7 日間培養後，出現した褐色コ@@r二―数を計数 し供試 臓器中の生菌数を求めた。検出限界は 50 cfu/g 組織であ った。
サクラマスの幼魚に対する病原性の検討では接種して4S 時間後に5尾，96 時間後に5尾， 120 時間後に3 尾，

144 時間後に9尾及び lfi8時間後に?尾を取り上げて同様供試した。
サケ親魚に対する病原性の検討の場合 K W72 時間後に5尾，二

96 時間後に3尾を取り上げ，肝臓，腎臓及び脾臓について，接種苗生菌数を測定した。
血球数
サケ稚魚に対する病原性の検討では所定時間ごとに 5‑7 尾の供試魚を取り上げ，尾柄部を切断し流出した血液をへ。 リリ処理毛細管で採取した。採取した血液をコールターエレクトリック社製のイソトーソで希釈後，自動血球計算機( コールター；ウリターZF 型)で測定した。

対照区からのA ． salmon@c;daの検出

サケ稚魚に対する病原性の検討では対照区の供試魚についても，実験終了時に，普通寒天培地C栄研) を用いて．
30 尾の腎臓からA ． sal@wontci血の検出を行った。
サクラマス幼魚の対照区では168 時間後に10 尾を供試した。

fihさけ・ます
ふ所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

結

N0.

47,

1993

果

サケ及ぴサクラマスに対する病原牲

サケ稚魚に対する病原性の検討に供試したサケ 稚魚の日間 弊死率，腎臓及び 肝臓の生菌数の 経時変化を
Tab@e 41 に示した。
サケ稚魚は対照区では弊死 はみられなかったが，実験区では7m 時間から96 時間までの日間 弊死率は50 ． 6%であった。実験区の腎臓及び肝臓におげる接種苗生菌数は， 48 時間目までは肝臓で検出限界以下であ ったのに対し，腎臓ではlo ， cfu/R またはそれ以下であった。50.6% の 供試魚が弊死した9f 時間目では，肝臓でIO ， から

I0'cfu/g ，腎臓では10 。 から108Cfu/g 程度に増加した。―般に肝臓の生菌数は腎臓に比べると， 10 ， cfu/g

程度低い値を示し臓器による 菌数の差が認められた。対照区では外見上せっそう病の症状や弊死も認められず，腎臓からまったく細菌が検出されなかった。
供試魚の血球数の変化を TabIe42
個 /mm3に示した。血球数の変化を平均値でみると，実験区では開始時121 ． IX10 。

であったものが，72 時間後には96 ． 9xlo 。個/rnm ，， 96 時間後には61.4xlCn。 個/mm せ 急激な減少傾向が示した。
認められたのに対し対照区では 96 時間後では143.7x10。個/mm ，とむしろ増加傾向を

実験区では平均値の標準偏差も時間の経過とともに大きくなったことから，血球数の減少傾向は個体によって差があるものと推察された。

サクラマス幼魚に対する病原性の検討に供試したサクラマスの 日間弊死率，腎臓及ぴ肝臓の生菌数の経時変化をTabIe43に示し，症状をPlate 2‑B に示した。

対照区では弊死 はみられなかったが，実験区では120 時間から144 時間目では21.9% ， 144 時間から1fi8 時間日では43 ． 8光の日間弊死率であ った。実験終了時の対照区の供試魚の腎臓からはA ． salm 。乃 icfんは検出されなかった。

供試菌株を接種したサクラマス幼魚においても，サケ稚魚と同様，Plate2‑B に示したように，接種部位に典型的なせつそう病の症状が再現された。
腎臓及び肝臓の接種苗生菌数は， 48 時間目までは検出限界以下であ ったが，弊死が出現した144 時間以後には，肝臓でI0' から106 cfu/g ，腎臓においては In 。 からio7 cfu/e ．の生菌数を示し

日間弊死率が43.8% に達し

107cfu/g であった。やはり肝臓の生菌数は腎臓のた168 時間後に屯 肝臓で103 から105cfu/g ，腎臓で10 ，から生菌数より，10' から103cfu/g 少ない値であ った。
サケ親魚に供試菌株を接種した場合の，供試魚の肝臓及び腎臓の接種苗生菌数の経時変化をTable44に，

72 時間後の症状をPlate 2‑C に示した。
72 時間後には供試した5尾はいずれも，接種部位の膨瘤や皮膚の白色化が観察され，瀕死の個体 (++)) も出
現し 96 時間後には供試した3尾はすべて瀕死(++)の状態になった。この場合の膨瘤患部の皮膚を除去すると，赤色の血液と筋肉の融解物の貯留が観察された。

供試魚の72 時間及ぴ96 時間後の各臓器の接種苗生菌数は，症状が (+) のものでは，肝臓では10' Cfu/g から10'Cfu/g ，腎臓で10 。 Cfu/g から10' cfu/g 及び脾臓ではI0'Cfu/gから 10。 Cfu/gであった。病状が(十十) の瀕死の個体では，肝臓でI0'から10。 Cfu/g，腎臓で107から109 cfu/g 脾臓では 104 から106Cfu/g に達していた。

考察

サケ稚魚，サクラマス幼魚及ぴサケ親魚を対象に ，サケ採卵親魚から分離されA

WOwL

・

Mh0wfC

タぬ SubSp ． s&?‑血と同定した 20‑1 株の病原性を検討したが，供試魚は菌接種後，いずれも典型的なせつそう病の症状を呈しサケ稚魚，サクラマス 幼魚では約半数が死亡し瀕死魚の腎臓及び脾臓の接種苗生菌数は，奈川ら(1981)の報告と同様に108cfu/g に達し 供試したA ． salmonic ぁ血 20‑1 株は病原性を有することが明らかになった。

― fif ―

野村―せつそう
病の疫学的研究

Table 41. Changes in the viable counts in the kidney and liver Of chumsalmon fry inoculated with 1.7x102 colony forming unit 0f Aer‑salmonicida

omonasHOurs after
inoculation

20‑1

MOrtality

48

72

0

strainInoculatedViable count (cfu/ml)
Liver
Kidney<50*1<50
2 ． 5X10 ，
<50
<50
<50
2 IX10 ，<50
・

8 ． 5X10 。

5 5X103I ． 2X105
土
IX105
・

上

5(L 6
・

・

<50
<50
3.6x10"5.5x10"<50
9.1x105
96・

4.1x106
4.8x10"2 7XTO6・

6.7x106

8X106

上

<50
2.6x107
G.0xlo5
4.4X103
1.Gxlo"9.5X104

0X107

6.1x107?.5X10"4.5x10"1.1xlo8
5.1x107

IX10 ，

7 6X10 ，

2.1x108?.8x107?.8x107

5 8X105

1 IX10 。

・

・

・

・

NOt

・

I ． 3X10'

3.3x10"8.3x105
3.9x105土*' <50,COntrol
MOrtality

detected

Table 42. Changes tn b100d cell counts (X I0") tn chum salmon fry
inoculated with 1.7x102 colony forming units 0f Aeromonas
sa1‑
monicida

20‑1Time (h) after
inoculation
24
48
96
Mean

実験感染魚、 は， A ． MMOw+

Inoculated
Number ofFish
B100d cells
5121.1@10.1"
h
5
5
5

72
"

strain.

COntrol
Number of
Fish
h
5
5
5
5

118.4+
7.8
107 4 土 10 4
96 ． 9 十 23 ． 0
61.4 上 29.I
・

・

B100d

cells

121.1+10‑I
118 4十 12 8・・

T30.9 土 8.7
122.5 十 12.2
143.7+13.9

SD而血 20‑1 株接種数日後に急激な貧血症状を呈し

森川ら (1981)がアマゴにA

salW 。mfci 血を接種した 場合，接種4 日後から血球数の急激な減少を観察し接種時には I10X10 。 個/mm ，であったものが，4 日後には70x104 個 /mm3 以下に低下したとの報告とよく―致していた。

，

10' Cfu/g の A ． Mr
A ． salmomfci血 20‑ m株を接種した サケ 親魚では，48 時間から72 時間後に典型的なせつそう病の症状を示し

腎臓の生菌数は I0' に@達し瀕死の 個

せつそう病症状の全く観察されないサケ及びカラフトマスの採卵親魚の腎臓からは，womci

血の生菌が検出されることを 先に述べたが (第 I章， Table11)体が出現した。すなわち第I章のA ． RnJmmonir.i 血が検出された親魚の場合に，生理変化，環境条件等の変化に― 67 ―

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,NO

47. 1993

Table 43. Changes fn the viable counts in the kidney and liver Of masu salmon
fry inoculated with 1.8x103 colony forming unit Of Aenmonas
sa1‑
monicida

strain.

20‑1Infected

HOurs
inoculation,after.. MOrtality,, . ,.,
48

96

COntrol
MOrtality

Viable count (cfu/rnl)

Liver
<50'"
<50
<50
<50

Kidney
<50
<50
<50
<50

I 4X10 ，
4 8X 上 0'

I 9X10'5 0XT0 ，

・

・

・

・

<50

<50

8 0X10'2 IX 上 04
I 4X10 ，
・

・

・

<50

<50

2 3XI06
2 6X1072 5X105
2 9x105
9 3X10'
3 9X106
上8X105

2 6XI0 ，
5 6X106
3 8XI06
5 0X]06
2 8XI06
5 6X107
9 5X106
3 2XI05
2 3x106
5 5X 土 04

120

・

・

・

21

・

9

・

・

・

144

・

・

・

・

・

・

・

・

<50

・

6 0X10 。
・

・

<50

・

I 9X10 ，
I 9X10 ，
土
3X10 ，
2 9X10 。
・

43.8

168

I 9X10 。
I 5X10 ，
I 3X105
5 0X106
3 8X107
9 9X106
I 4X106

・

・

・

・

・

・

8 3X10・。

・

4 2X10'
2 7X10 。
5 0X104

・

・

・

・

・

・

@' NOtdetected

Table 44. Changes in viable counts tn the kidney and liver 0f mature chum salmon
inoculated with 6.0x105 cfu per fish cell 0f Aeromonas
salmonicida 20‑1
strain72

NumberLiver
2.9x107

Of viable counts
KidneySpleen1.4x105
5.0x104
2 ． 0X10 。
2 ． Oxlo4
5 ． 4X107
6 0X108
9 IX109

3 ． 5X10 ，
4 ． IX10 。
3 ． 2X10 ，
6 IX106++

96

I 9X 06
8.8x103
6 4X10 ，
3 3X10 。
5 0X10 。

7.1x1052.4x10"2.8x105++

3 ． 2X10 ，observed;+ +HOurs after
inoculation

・

上

・

・

・

+,
+ +,

3.5x103・・・

4 8X10 ，
3 ． 6X107
Small furunculosis lesion was
MOribund
fish
・

*1

Symptoms*'― 68 ―++

MOrtality野村―せつそう
病の疫学的研究
よって，保菌されていたA ． Ralmomci ぬ が短時間に，その親魚を死に至らしめるに十分な菌数にまで増殖す― 般に催熟蓄養池の水温は河川水る可能性のあることが示陵された。
本節の実験の水温は10.4 でであ ったが，を使用している場合には 15C 以上となる場合が多く，体 内でのA ． $almnnici血の増殖がさらに 充分促進され得ると考えられる。従って第I章に示したような高率にA ． salmon □血を保有している 採卵親魚集団では， せつそう病の大発生に結びつく可能性が極めて大きいことが示唆された。 さらに，A ． SQMOw

ぬ血 20‑ 1株は，サケ稚魚及びサクラマス幼魚に対しても高い病原性を示したことから，保菌採卵親魚は本病の水平伝播の源となる可能性のあることも明らかになった。
A ． sdfm 。 乃而血 20‑ 1 株を接種したサケ親魚でも，行動が正常な個体の腎臓の生菌数は，組織であ った(Tab@e44)

10 。 から10"Cfu/g。 このことはサケ及びカラフトマスの採卵後の腎臓で観察されたA ． salmoniff血の103cfu/g組織程度の生菌数 (Table 11)では典型的な症状や，死亡はみられないと考えられ，第 I章のサケ属
採卵親魚から高率に A. salmonir.i血が分離されたが ，河川でせっそう病の病魚や死亡魚がみられないのは，体内の生菌数が死亡時の10scfu/eとなる以前に採卵されているためと考えられる。
ノ 」

八

括

採卵親魚分離のA ． .wd.1mnmrt血 代表株として20‑1 株を用いて，サケ稚魚及びサクラマス幼魚に対する病原性を検討して以下の結論を得た。

]．サケ稚魚への供試菌株接種突験の結果，典型的なせつそ 5 病の症状が再現され，死亡することが明らかになり，死亡時の腎臓の生菌数@／ 108cfu/g に及んだ。

幼魚に対しての接種実験でも，サケ稚魚、と同様の典型的なせつそう病の症状が再現され，死亡
2．サクラマスすることが明らかになった。

接種実験は接種部位に典型的なせつそう病の症状が再現され，瀕死の供試魚の腎臓におげる
3 ．サケ親魚への生菌数は 10 。 cfu/e におよんだ。
4．以上の結果から，北海道の主要増殖河川のサケ属採卵親魚から高率にA ． salmomfci血が検出されるにも 拘らず，せっそう病症状を呈したり弊死する親魚が観察されないのは， 体内の生菌数が108cfu/g組織にまで増殖 していないためと考えられた。

― 69

さけ・ます
ふ所報 SC1. REP.

芦吉

4茸
三

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

井 mP 来見点えの 作竺妄
ね書享室妻圭条イ 牛と Aeomonas哀「

salmonicidaの 木夫 tfc
享立

前章までに，サケ属採卵親魚からA ． salmnnifciぬ が高率に検出され，その感染時期は親魚が河川に湖上してからであ ることを明らかにした。
さらにそれらから分離した菌株が明らかに病原性を右していたことから，採卵親魚のせっそう病の防除対策が，サケマス増殖事業の安定的な推進のためには不可欠であ ることを指摘した。
―部の採卵親魚では腎臓のみならず体腔液中にも多数の，A ．

51momciぬ が存在したことから本菌の防除には採卵親魚からの検出率の低減と卵を介しての稚魚への感染の防止を図ることも重要であ る。 卵表面に付着した病原微生物の消毒には有機ヨード剤による薬裕が効果的であ るとされ(Amendand Pietsch,1972),
反町ら (1987) も有機ヨード剤がA ． sfJ.1mnmci血 に対して有効であると報告している。

Smith1(1962))及ぴ Hewetson(19fi2)は，大西洋サケにおげる河川でのせっそう病による死亡例を報告し木村 C1970) 及び西野 C1967) も催熟蓄養中の親魚に発生したせっそう病を報告している。 しかし今回調査
血の検出率が 高かった河川でも，サケ属採卵親魚にした北海道におけるサケ属採卵親魚では，A ． salwinnici

現状の サケマス増殖事業においては ，親魚の 催熟蓄養は種 卵の確保のために 不可欠の過程で ， A・

せっそう病の発生は認められず，死亡も観察されていない。
DalyandStevenson(1985)
も外見上正常なブラウリマス親魚を， 催熟蓄養した場合A.salmfinid血の検出率が高くなることを報告し限られた 面積に収容される催熟蓄養は，河川の自然条件下と比べ魚にとってかなり異なった環境条件にあ ると考えられる。
sal

m@nmffc&daaの 検出車と催熱蓄養の関連を明らかにすること 低 催熟蓄養施設及ぴ蓄養方法の改善などによる，
H ． salmo 乃ぬ血の検出率の 低減につながり， 本病の防疫対策の策定に寄与するものと考えられる。

本章では，有機ヨード剤による卵の消毒効果を検討すると共に，サケマス増殖事業における親魚の催熟蓄養条件とA ． salmom心血検出率との 関係を明らかにしせつそう 病防除のための具体的方策について検討し
た。

第 ]節

せつそう 病 防除のための 有機ヨード剤による gp 消毒法の検討

前章までに， ― 部の成熟親魚の 体腔液中には A ．

5が川。
血わ血が存在しそのため卵が汚染され A・

so7

momci 血が受精後の卵 に付着してふ化室内に持ち込まれる可能性のあ ることを示した。
卵表面に存在する病原微生物の消毒に戊 有機ヨード剤が魚類病原ウイルスならぴに魚類病原細菌に有効であることが報告されている (Amendand

Pie 低 Ch ， 1972; 反町ら 1987) 。

本節では，有機ヨード剤による卵表面のA ． fsn研 。 icf
血 に対する消毒効果及ぴ有機ヨード剤の受精直後の乃

サケ卵に対する毒性について検討した。

材料及ぴ方法
供試菌株
供試菌株としては前章と同様にA ． wIW 。乃 ict血 subsp. salmonici血 20‑ m株を用いた。

供試卯
石狩川に湖上したサケから採卵 した卵を，受精後ふイヒ槽 内でI時間吸水させた後用いた。
有捜 ヨード剤
明治製菓製水産用イリジン液 C有効ヨー素I． 0%) を用いた。

供試菌賎ね波の作製
トり プトリィ液体培地(栄研)で24時間振撮培養した供試菌株を 18， 000rpm で10分間遠心分離し滅菌生理― 70 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究

食塩水で洗浄しさらに遠心，洗浄を2 回繰り返した。菌体を滅菌生理食塩水に懸濁して供試菌懸濁液とした。
消毒効果の判定
所定の希釈濃度の有機ヨード剤溶液5． 0 ml に供試菌懸濁液を5． n ml 加え，所定時間後にI m をトリプトリ
液体培地に加えて， 20C で培養し細菌のイ

増殖の認められない場合を消毒効果を有する C+)と判定した。

卯 に対する毒性の判定
供試卵を200 倍希釈した有機ヨード剤溶液に 15 分， 3(@分， 60 分浸潰し以後 10.4 での湧水で積算温度480 でまで菅埋し供試卵 に対する発眼卵数から発眼率を求め，供試卵数から未受精卵数を除いた卵数に対する死卵数から，死卵率を求めた。

結A ． safmon;c;da

果に対する有機ヨード剤の殺菌効果

A ． fs41mWnmfri 血 に対する有機ヨード剤の殺菌効果をTable 45 に示した。
通常の卵表面のウイルスの殺菌に使用される，液(有効ヨウ素25ppm)

イノジン2no 倍希釈 (有効ヨウ素 50 ppm) 及び 40n 倍希釈溶

では5分間処理で殺菌効果が認められた。これに対して800 倍希釈溶液では60 分で殺菌効果が認められたが， I， 600 及び3， 2w0 倍希釈溶液では60 分後でも殺菌効果は認められなかった。
受精後 l時間のサケ卯 に対する有機ヨード剤の200 培希釈容波の毒性
受精後I時間のサケ卵を有機ヨード剤200 倍希釈溶液に浸潰したとぎの発眼率及び死卵率をTable46

に示し

木，
@o

200 倍の希釈溶液で受精後I時間のサケ卵を処理した時の発眼率は，対照区では95.1 兆，処理時間 15 分で95.5% 及び処理時間30 分では95.2% と差は認められなかったが，処理時間60 分では86.6% に低下した。死卵率は対照区では4． 2% ，処理時間15 分で3． 4% 及び処理時間30 分では3． 9% と差は認められなかったが，処理時間60
分では 12.5%K@ 増加した。

考察

サケ科魚類の発眼卵の病原微生物の消毒について， GeeandSarlesの 消毒にアクリノールが効果的であ ることを報告しC1942) は卵に付着したA ． salmomci 血

さらに MCFadden

Q969) はマス卵のぬ

叩mom

ぉぱ

・

叩 がは cif ns の消毒にもアクリノールが効果的であ ることを報告している。
しかしその後AmendandPietsch(1972)が有機ヨード剤製剤であ るウェスコヂソ及びべタジンがウイ

ルスを含む広範囲の魚類病原微生物に殺菌効果を右していることを報告して以来，卵に対する毒性も低いこTable 45. Sanitary effect 0f Isodine solution
Ae 印nin 乃必 sssaiWり刀 ?c Z血Onる

Diluted (1: )

Time

(mm)

@

@

+"

+

g@

I0
I5
60
@1 Effective.
*2 NOteffective― 71 ―@pg@0Q

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOとから，有機ヨード剤が卵の消毒

SALMONHATCHERY.

N0.

TabIe 46 ． TOXiCityof100
izedに広く使用されるようになってきchumsalmon47, 1993

ppm iodineSolutiontoJuStfertH
green

eggs.

ている。

Time

(min)

0

I5

30

60

547

596

546

599

Eggs

我が国でも卵表面に付着している ウイルスの消毒のためには， 200

倍希釈 (有効ヨウ素濃度 50 ppm)

NumberofeggSeXamined

で15 分問の消毒が効果的であ るこ

Number4756とが報告され硅国 河川湖沼養殖研究会養鱒部会 1976)，応用されている。しかしこれら ぼ発眼卵

NumberofeggSeyed% ofeyedeees
NumberofeggSdied

520

569

520

519

95.1

95.5

95.2

86.6

23

20

2I

74

に対するものであ り，有機ヨード

MOrtality (%)"

4 2

3 4

3． 9

12 ． 5剤は有機物が共存すると効果が減*1 (N0. 0f eggs died/

少することが知られていることか・

Of eggs unfertilized

・(n0. 0f eggs examined‑n0,

0f eggs

imfertilized))X100(反町ら 1987) ，受精役I時間のら卵 に対する消毒効果については，殺菌効果及ぴ毒性についてさらに検討が必要であ った。
また卵の消毒は， 単に本研究で対象としたA ． Salmonict血だげではなく ，吉水ら (A198Viの報告にもあ るよ

うに，サケ属魚類親魚からは病原ウイルスの検出も明らかにされていることから，その消毒に常用されている 200倍希釈液で1.@分間の処理時間を参照して，木研究ではこの処理法を基礎として検討した。
A ． fmmomci

血 に対しては400 倍希釈液で5分間の消毒で完全な殺菌効果が認められた。 このことから，200 倍希釈液で 15 分問のイリジン 消毒は，A ．

イルスの消毒のためには 通常ふ化場で 実施されている，

ウ

5M

monici 血 に対しても有効であることが明らかになった。

@

毒性について ぼ， 200 倍希釈液 による，1． 分間及び30 分問の処理時間で対照 E に比べて死卵率に増加はみられず，悪影響はないと考えられる。しかし 60 分間の処理時間では死卵率が対照区で4． 2% であったのに対して，12.5% と増加を示し 長時間の処理では死卵率が増加することが明らかになつた。

A ． fsn.1mm.nmfr.i
血 に対する殺菌効果は， 4n0 倍希釈5分間で有効であ ったことから，通常の200 倍希釈波の消毒で十分に効果が期待され，かつ200倍1．W分間の処理でも受精卵に対して全く毒性を示さなかったために，受精直後即に対しても安全な濃度と考えられる。
北海道内における サケマス増殖事業では，サクラマス卵に対しては，ウイルス性疾病の防除を 目的に発眼卵に対し有機ヨード剤による消毒が実施されているが，費用と作業量の問題から，サケ卵及びカラフトマス
卵には消毒は実施されていない現状にあ る。 またサクラマス卵でもふイヒ 場収容時には卵の有機ヨード剤による消毒は実施されておらず，第2章で明らかになった卵表面に存在するA ． salmontci血は，卵とともにふ化窒
内に持ち込まれているものと推察される。
特に近年はサクラマス及びべ二ザケの際梅型幼魚の飼育が拡大し，周年ふ化場内にせっそう病に感受性の高い魚類が存在する情況になっている。 このような情況を考慮すると，卵のふ化場への収容時における消毒L／ mp からふ化稚魚へのA ． wImomfcf 血の感染防止に 加えて，サクラマス及びべ二ザケ幼魚に対する水平感染の 防止のため K，も，必ず実施しなければならないと考える。

小括

卵を介してのA ． salmomc? 血の伝播防止の 具体的な方策について検討し以下の結論を得た。

I．有機ヨード剤の200倍希釈液(有効ヨウ素50ppm) で1.@分間の消毒はA salmomct方に対しても十分な効果・を有することが明らかになった。

2．有機ヨード剤の卵に対する毒性の検討結果から， 発眼卵 に対すると同様に受精後I時間の卵に対しても有機
―

lz

―

野村 せつそう病の疫学的研究

ヨード剤の200 倍希釈で ¥@ 分問の消毒処理は安全であ ることが明らかになった。

第2 節

サケ親魚における 催 熟蓄 養の実態

現在のサケマス増殖事業は，経済的価値の高い，8月下旬から9月上旬に来遊する前期群サケ資源の増大を目ざし そのため河川に湖上した親魚からは直ちに採卵することはできず，捕獲後催熟蓄養が必要になってきている。しかしサケ及びカラフトマス 親魚の催熟蓄養は，北海道における サケマス増殖事業推 拡充計イ乙画が開始された1971 年以降に取り入れられた比較的新しい技術で，現在に至るも確立された段階にはなく，その実態も明確にされていない(木村 1988) 。 この催熟蓄養は自然環境と異なり湖上親魚は特殊な状況下におの感染，伝播に 4@>関係しているものと考えられる。従かれ，前章までに明らかにしたようにA ． sfilmnnicidaって北海道内におけるサケ親魚の催熟蓄養の実態を明らかにすることは， 催熟蓄養条件とA ． salmon 心血の検出率の関係を検討する上でも，極めて重要と考える。

材料及び方法
調査対象河川対象河川としてぼ近年資源量の増加が目ざましく， 催熟蓄養尾数も多い石狩川を選定し検討した。
北海道さけ・ますふイヒ場 事業成績害を参照して，m97W年から 1988年の間に捕獲された親魚のうち，催熟蓄
養尾数と非催熟蓄養尾数及び催熟蓄養期間中の姥死尾数について調査した。
さらに，北海道さけ・ますふイ乙場 捕獲採卵旬報，北悔道さけ・ますふ化場さげます増殖施設現況調書，捕獲採卵場気象観測表等の資料を参照して，石狩川におけるサケ親魚の催熟蓄養尾数， 催熟蓄養池の条件，蓄養密度 (尾/m") 等をも調査した。
催熟蓄養池の溶存酸素量
YellowSpringsInstrument
A. salmonic;da社製溶存酸素計MOdel ， 50 型により測定した。

の検出幸

第I章第2節の研究結果を引用した。

結果及び考察
石狩川におけるサケ親魚の非催熟， 蓄養親魚，催熟蓄養親魚の尾数． 催熟蓄養率及び催熱蓄養中の弊死率をTable 47 に示した。
石狩川におけるサケ親魚の催熟蓄養率は， 1979 年には73 ． 3%, 1980 年には60.4% であったが，1981 年以降は，次第に上昇しいずれの 年も90% 以上の高率を示した。
蓄養中の 弊死率は石狩川では 1979 年には 7． 8% でChitoseあ ったが，1980 年以降では 1982 年の 34.5% が最も高
く

，

River

19Sf 年以降は再び10 光以下に低下した。

石狩川 R@おげる1979 年から 198S 年までの催熟蓄養

HOlding pond

池の配置及びその面積をFig.10 に， 催熟蓄養池の密Q

度の年次変化をTable 48 に示した。

HOlding pond

HOlding pond

石狩川におけるサケ親魚の催熟蓄養池ぼ， 979 午に本格的にサケ親魚の催熟蓄養が開始されて以来，
ェ

HOldin9pond

数次にわたる拡張エ事により， 1988 年には面積で 3，

040m2

と

1979 年の3． 8倍にまで増強された。これに伴ぃ1984 年までは河川水が 主として使用されていた

Fig. 10. LOcation Of holding ponds for chumsalmon maturation fn the Chitose River fromが， I985 年以後は催熟蓄養時の水温の調整を図る目
‑7Q

1979

―

to 1985.

さけ・ますふ研報 SCI REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

Table 47. Number
and mortality 0f adult chum salmon held in ponds formaturation tn the Chitose River from 1979 to 1988
hd

a1
亡

MM

er

e

n
u
mh・
f lS

b

To

Ye

1979

44,657

32,774

73!.3

1980

44,914

27,135

60.4

II

1981

93,51685,092

91

0

19

・

7.8
・

・

9
土

1982

77,91569,543@9.3.3{4 5

1983

109,838

103,655

94.4

18

1984

76,17973,899

97.0

12

1985

71,24770,439

98.9

24.3

1986

52,43850,153

95.G

7.7

1987

67,01966,084

98.6

3 5

1988

59,94059,03298.5

5 4*1 NO ． 0ffiash heldin ponds/total

n0.

・

・

4

・

・

9

・

0ffish.

的で，湧水と河川水とを混合して使用するようになった。
河川水のみを使用していた場合の水温の変化を

句別の平均水温でみると， 9 月上旬に15で前後と高水温であったものが，催熟蓄養の進行に伴って低下し事業終了時点の H 月上旬には9 でとなってい

モ 8
重
‑
亘

だ。 これに対し湧水との混合水を使用するように車なって以降，10 月 ‑h 句までの水温は 12 でと以前に言比べ低くなり，

4

催熟蓄養に適する水温となった。

催熟蓄養密度を蓄養地 Im ，当たりの
尾数で示す
と

6

き

一

，最大で9． 3尾であったが，平均値でみると198I

年に最高の 5． 3尾を示し以後は 減少の傾向にあり， 1984 年にはI． 3尾 と最小になった。以後若干増加の傾向を示してはいるものの， 1988 年で3． 3尾と1981 年の約 62% にまで減少した。 これは蓄養池の1‑tA.‑

September

FIg

新設またぼ改修により，面積が増加したことによ・

Octoberu ChangeSinChumSalmondenSityinho@d
ing pond tn the Chitose River @n 1980(o) and・ー

1988(o)．

るものであった。また，最大蓄養密度は1979 年の9． 3尾 で以後減少傾向を示しているが，河川湖上尾数の多い年には7 3尾まで上昇することもあ った。
・

蓄養用水の溶存酸素量は調査した 19S(m
年と 1988年では，注水部で n‑13
・では1980 年の4 0‑5 9ppm
・に対し1988 年には7 2‑ 10.2 ppm
・ppmと差はなかったが，排水部と改善されていた。

北海道内における サケマス増殖事業では， 採卵尾数に占める催熟蓄養親魚の比率が年 々 高くなり，現状では90% 以上に達し 催熟蓄養 は増殖事業に不可欠な過程となっている (Table 47) 。

これは，8月下旬から9 月上旬に回帰する前期群サケ資源の造成を図ったことによるもので，サケマス増殖事業を推進するためには，阿部(1988)が述べているように，沿岸におげる適切な漁業調整によって，計画的― 74 ―

野村 せつそう病の疫学的研究

and water

supply in holding ponds at the Chitose Hatcheryfromto 1988

1979

Area

POnd"

1979

807

1980

A
A

807

9.

上

3.2

R

1981

BC

2,152

9.2

5.3

R Or W

1982

BC

2.152

?.2

3.0

ROrW

1983

BCD

4,552

?.4

3.4

R 0r W

1984

BCD

4.552

3.9

1.3

R 0r W

1985

BD

3,040

6.0

1.9

R+W

1986

BD

3.040

2.9

1.7

R+W

1987

BD

3,040

?.3

2.4

R+W

1988

BD

3.040

4.6

3.3

R+W

"

See

9.3

3.3

Fig.T0well

waterに湖上させた親魚を催熟蓄養して，種卵を確保す

羊ることを基本としなげればならない状況にあ る。

O l9 引n

屯卜

4o

サクラマスでは，

催熱蓄養は種卵確保のためには必須の技術であるが，サケでは工971 年以後取り

o耳
山
Q
qq
ち

Water"(m2) Max.
(m2)
Mean

*2 R, river water; W,

岩Fish density

Year入れられた比較的新しい技術で，催熟蓄養中の鉾
20
0

Q才

)W
0 19060Q19BO

死率を低下させるためにも解決しなげればならな

00@@1
ぽ

い研究課題が多い。

石狩川 K，おけるサケ親魚の 催熟蓄養 施設 山

1982

1979 年には807m‑

19B5 Q 1987 198e
2

4

Fish stock density

6(fish/m2)

Fig. 12.There@ationshipbetweenaveragedensityof fish in holding ponds and prevalence Of
Aeromonas salmonicida in fish taken from the
Chitose River. Numbers fn the figure indicate
the

year

と小規模であったが，以後改修によって催熟蓄養施設が増強され，1988 年には台計面積で3 ， 040 m" に拡張された。
石狩川におけるサケ親魚の催熟蓄養施設が改善される以前の，平均蓄養密度が3． 2尾であった1980
年と，改善後3． 3尾 となった1988 年を抽出して， 毎日の蓄養密度を比較してFig.Uに示した。
平均蓄養密度は同じであ っても，1980 年には 10
月上旬に蓄養密度は9尾にまで達し 以後徐々に減

0f examination

少しているのに対して，1988 年には採卵の最盛期の 9月下旬に5尾 となり，以後IO 月下旬まではほば

同 程度の密度を維持し1980 年のように密度が―時的に増加することはなかった。 このように採卵尾数が増加し平均 蓄養密度が同じであっても，施設の拡張によって採卵盛期の密度の上昇を抑制することによって，舞死率はu ． 9% から，5． 4Zに減少したと考えられる (Table47) 。

石狩川におげる 1979 年から 1988 年までのサケ 親魚の平均 蓄養 密度と，前章第 I章第2節に述べた A ．

― 75 ―

5M‑

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

・

momci 血の検出率との 関係をFie 12 に示したが，催熟蓄養施設が完備していなかった1979 年から 1986 年までは，平均菩養密度と検出率の間には強い止の相関が認められた。 しかし催熟蓄養施設の整備にともない，

19a7 年・ と 19S8 年には平均蓄養密度は2‑ 4尾と，以前に上として密度の上では大ぎな差は認められないものの，
溶存酸素量の増加が図られ，それと比例するようにA1． snZmm.umicC 血の検出率も 大幅に低下していることが明タらかになった。
以上の調査結果から催熟蓄養池の排水部の溶存酸素量が7 ppm 以上になるように， 蓄養密度を調整することにより，催熟蓄養中の弊死率は低下し

同時K@4 ． salmomfci血の検出率も 低減する傾向にあ ったことが明らかになり，催熟蓄養密度の低下など菩養環境条件の整備の必要性が示唆された。
/ ¥v
」

括

石狩川を中心にサケ親魚からのせっそう病原因菌H ． salmmmimici 血の検出率と 催熟蓄養 との関連について検討し以下の結論を得た。

I．石狩川におげる親魚の催熟蓄養尾数は近年急激に増加を示し

I975 年以前の 10 倍以上に達していた。

2． 催熟蓄養尾数が増加しているのにもかかわらず施設の改修，増設が実施されたことにより，排水部の溶存酸素が増加するなど蓄養環境は改善され，親魚の姥死率には明らかな減少傾向が認められた。
3． 採卵親魚の催熟蓄養密度とA ． salmonict血の検出率との 間にも相関が認められ，蓄養条件の改善により検出 率が低下した。

第3 節

催熟蓄 養親魚，と非催熟蓄 養親魚からのA ． sa@monicida 検出率の比較

前節において，北海道におけるサケ親魚の催熟蓄養の実態を，石狩川をその代表河川として調査し蕎 養
条件とA ． 5al刑nntr.i血の検出率との 間に相関が見られることを明らかにした。
と催熟菩養親魚におげるA ． salmnmci 血検出率
本節では1980 年と 19S8 年の両年にっいて，非催熟蓄養親魚、の比較を試みた。

材料及び方法供試魚
非催熟蓄養親魚として，

1980 年 10 月 12 日以降に千歳捕獲場で捕獲され，その時点ですでに成熟していた親魚合計・ R85 尾を用いた。また1988 年には千歳捕獲場で捕獲した未成熟のサケ親魚 15,000尾をウライの上流に放流し千歳事業場の 排水部 (千歳捕獲場から約7 km 上流部)で捕獲された.@2f尾を用いた。
催熟蓄養親魚、はすでに第上章第2節で供試した 1980 年の 3fi0尾， 1988 年の541 尾についてのA ． ysa.
研 。nn'i ぬの検出結果をそのまま引用した。
A. salmon;cidaの検出

採卵後の供試魚の腎臓を無菌的に露出し中央部を 白金耳または滅菌綿棒で穿刺して，分離用培地に塗抹後，実験室に持ち帰り?.nc で7 日間培養した。検出限界は102cfu/e 組織であ った。
A ． salmon;c;daの同走

前章までと同様に 培地上に出現した 褐色 々 素を産生する コ 口二― を釣菌し，普通寒天培地で 純培養後

POpoff (1984)に従い生化学性状を検査し A ． xa#mmnniri血の同定を行った。

結果1980 年改び 1988 年の催熟蓄養親魚及び非催熟蓄養親魚からのA ． Rn @M.nnir.@?
血検出率を Table 49C 示した。
ム1980 年の催熟蓄養親魚からの検出率は6． ?% から41.7% ，平均25.8% であ り井催熟蓄養親魚、からの0からは． 0― 76 ―

野村―せつそう
病の疫学的研究
平均3． 9%より高い値を示した。

19m8 年の催熟蓄養親魚で @／ I回は険性であ ったが，他はI． ?% から8． Q% ，平均4.i% の 検出率を示したのに対して，非催熟蓄養親魚からの検出率は， 4回の調査のうちで2回が検出険性であ ったほか，T． ?%と6． .3% ，平均

I． 5% であ った。

以上のように，

i98f@年と 1988 年について催熟蓄養親魚、と非催熟蓄養親魚からのA. salmomcZ 血の検出率を比較すると，いずれの年においても催熟蓄養親魚は，非催熟蓄養親魚に比較して高い値を示した。

考察

我が国のサケマス増殖事業では，最近サケ親魚を天然河川で成熟させる例は少なく，ほとんどの河川で催熟蓄養が実施されている (小林 1988b) 。 石狩川においても 1984 年までは nT 月上旬以降に捕獲される親魚は，催熟蓄養することなく採卵されていたが，1985 年以後は沿岸において経済的価値の高い資源を増殖の対象としたため，催熟蓄養しなければ採卵でぎない未熟の親魚が年 々 増加している状況にあ る。
催熟蓄養親魚、と非催熟蓄養親魚、との， A ． 5a わwnmfci 血の検出率を 1980 年と 1988 年の両年について比較した
ところ，いずれの年においても催熟菩養親魚からの検出率の高いことが明らかになった(Table49)。

本節の催熟蓄養親魚、と非催熟蓄養親魚との相違点は，捕獲時にすでに成熟していて直ちに採卵されたか，
Table 49. COmparison Of the prevalence 0f Aeromonas
salmonicida from the kidneys 0f mature chumsalmon kept in the holding pond and fish not kept in the pond.

sept ． 9・N0.

円叶 in holding

pond

Fish not in holding pond

Of fishPrevalence

N0. Of fish

Isolated/examined
6.7

1980

Sept. 29
Ort ． 6

Prevalence

Isolated/examined
II

21/60

・

Date Ofexamination

7

35

Oct, t2
Oct. 2141.7
3@ ． 323

Oct. 27

21.7

Ij ． 0・

6 7
3 3

NOv. 6
NOv. T1．

．

Dec. 2t2

TOtal

93/36025.8

Sept. 10, 1988
Sept. I3
Sept. I9

Oct. 7
Oct. 8Oct. I1
Oct. I9
Oct. 25
TOtal

0れ20

0/38
25
．

3/48

7
63

33
I7
4 I

5/326

I 5

2れ20

1/40
0/60
7/120
8/100
1/41
4/120
1/60
22/541

土．

・

Sept 24
Oct. 5

15/385

・

Dec.

・

・

― 77 ―．

さけ・ますふ所報SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

あるいは末成熟のために―定期間蓄養池に収容されていたかの違いであ り，湖上から捕獲されるまでの状況には差はなかった。前第2章第7節で明らかになったように，石狩川の河川水中に @／ A ． salmomc/ているものと考えられ，河口から76 km の地点の捕獲場まで棚上する間に感染する機会は，血が常在し非催熟蓄養親魚と催熟蓄養親魚とでは同じであると考えられる。
しかしながら催熟蓄養親魚からのA・

saimomct 血の検出率が 非催熟蓄養親魚に比較して常に高いこと， 催

熟蓄養施設が改善された19R8 年の検出率の，8． Q% が1980 年の 41.7% に比べ明らかに低下していることからみても，A ． salmnmci 血の検出車は ，サケ親魚の蓄養密度をはじめ， 溶存酸素量などの蓄養環境条件の影響を受げることが明らかになった。

Daly and Stevenson(1985)は河川に湖上したブラウンマスの親魚について， 催熟蓄養をしなかった年のA ． salmomci 血の検出 率は2.l% と低かったが催熟蓄養を行った年には，それぞれ21.1%. H.8%と高率であったことを，また同時に調査した非催熱菩養の二ジマスからはいずれの年もA. salmontci血 は検出されなかったことを報告している。 このように魚種の違いはあ るものの，催熱蓄養がA ． fsa.1mnntri血の検出率をより L昇 させていることは明らかと考えられる。

石狩川 K，おけるサケ
親魚の催熟蓄養魚、 と非催熟蓄養魚におげるA ． sn./@川。
れ而血の検出率を 比較し以下の結論を得た。
I． 催熟蓄養親魚からのA ． salmomci 血の検出率が 非催熟蓄養親魚に上ヒ鮫 して高いこと，そして特に蓄養環境の良否がA ． sa.1.mnntr.t血の検出率に 大きく影響した。

第4 節

採 mF 親魚の 蓄養 条件と A ． salmomlclda検出率との関係の実証的検討前節までにサケ親魚を催熟蓄養すると，A ． salmmoniciぬの検出率が増加することが 明らかになったが，

催

熟蓄養環境を良好に保つことによって，検出率を低減させることも可能と考えられたことから，石狩川に湖上したサケ親魚を対象に実験的に 異なるいくつかの 蓄養条件を設定し催熟蓄養 密度及び溶存酸素量のA ．

salmom □ 血検出率に及ぼす 影響について検討を行った。

材料及び方法
催熟蓄養密度を変えた時の検出率の変化
1988 年に石狩川に湖上したサケ親魚を供試しコ

リクリート製催熟蓄養池の―部を区画した 10 ． 2m2 の試験池に収容した。
催熟蓄養密度は 1E50 尾 (4 ． 9尾An2). 2E150 尾 (14 ． ?尾/nro である。 水質f 標とし実験期間は25 日間とした。
ての溶存酸素量はYe@lowSpringsInstrument

社製溶存酸素計MOde@50

型により測定した。水温は I?.でであつた。
催熟蓄養密度を―定とし，溶存酸素旦が異なる場合の検出幸の変化

1988 年に石狩川に湖上したサケ親魚を供試し 前項と同様の試験池を用い，実験期間は9 日間とした。供試
1] ． 8尾 /m2 となった。2区は蓄養池の下流に設
尾数は iiz, 2E ともそれぞれ120 尾 とし，蓄養密度はI 区2E ，とも置して酸素量の低減を計った。
催熟蓄養池の溶存酸素量は前項と同様に測定した。水温は10.8C であった。
A ． sa@mon;cidaの検出

採卵後の供試魚の腎臓を無菌的に露出させ，中央部を 白金耳または滅菌綿捧で穿刺して，分離用培地に塗抹した後，実験室に持ち帰り 20C で7 日間培養した。検出限界は102cfu/g組織であ った。
78―

野村 せつそう病の疫学的研究

Table 50. Relationship between prevalence Of Aeromonas
ponds.
LOt

Number
Of fishexaminedFishdensity
per m2

Number
Of fishdiedsalmonicida and fish density at the holding
PrevalenceOf
A. salmonicida

Survival
Days

rate

(%)

4g
・

100

Dissolved
Inlet

I8

ュ

n.0‑

(ppm)

oxygen10.3

Outlet

9

・ 3‑

9 7
・

20
TOtal
150

14.7

T2

92

7 6‑7.9

6． (3/4g)
土・

6 3!‑f6.6
・27.7(13/47)
28.6C12/42)
20.3(28/138)

23
25
TOta1
*1 Percentage (n0. 0f fish isolated / examined)

A ． safmoni'cida の同走

前章までと同様に 培地 卜 に出現した褐色 々 素を産生する コ a 二―を釣 菌し普通寒天培地で 純培養後

POpoff (1984)に従い生化学性状を検査し A sal グ仰 mfc 施の同定を行った。
・

結
蓄養密度とA ． salmon;c;da

果

の検出幸

サケ親魚を密度を変えて蓄養した時のA ． salmonic?血の検出率を Tab@e50に示した。

各試験区の生残率は，高密度で催熟蓄養した2区では，12 尾が死亡したため92% となったが，I区では死亡は認められなかった。また蓄養期間中の溶存酸素量を排水部についてみると，したが，2 区では6． 3‑6.6

pDm

各試験区におげるA ． MMOw

I区では9． 3‑ 9.7 ppm

の値を示

であった。
ぬ血の検出 率は， 低密度のIE では供試した50 尾のうちI尾 から検出され， 2%の検出率であ ったのに対し 高密度の2E では採卵 日ごとの検出率は6． I， 277 及ぴ28 6Z となり，平均20 3光
・

と上

・

E に比較すると高い値を示した。なおいずれの区の採卵親魚及び死亡魚にも外観上せっそう病の症状はみられなかった。
溶存酸素旦が異なる場合のA ． salmon;c;da検出幸
実験期間中の蓄養成績，A ． 51@mnnic$血の検出 率等をまとめてTable51に示した。

催熟蓄養時の飼育水の溶存酸素量は， IE で注水部では10.@‑ 10.3 ppm ，排水部で 9 6‑10.0 ppm
・が， 2『ではそれぞれ8． 3‑8.6ppm,

6.1‑6.3ppm

2 区では実験開始4 日後に12 尾，と5 日後に19尾，

であ った

IE に比べて低い値を示した。

6 日後に14尾と，合計45尾が死亡し実験期間中の 弊死率は37 ． 5% となり，死亡魚45 尾のうち6． ?% に当たる3尾からA. salmonzci血が検出された。

採卵は突験開始後lE では6 日、7 日及び9 日後に，2E では6 日， 8 日及び9 日後に行い，採卵尾数は lE で合計120 尾， 2E では合計75 尾であった。採卵後の親魚からのA mlmm.nnir.i 血の検出率は， lE では調査した120 尾・からはまったく検出されなか 0 たが，2区の採即日毎の検出率は 13 ． 0%. 14.3% 及び 12 5光となり，平均すると・75 尾中 13 ． 3% に相当するIO 尾からA ． fialmnnmCf血が検出された。各区とも採卵魚及び死亡魚に屯 外観上せっそう病の症状は認められなかった。

考察

北海道における サケマス増殖事業においては，末成熟のサケ親魚は捕獲してから成熟するまでの期間蓄養― 79 ―

さけ・ます
ふ所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMON

Table 51. Relationship between prevalence
holding pond.
NumberOf
fish
testedOf Aeromonas

N0.

47, 1993

salmonicida and dissolved

Fishdensity
per

m2

IL

8

・

LOt

HATCHERY,

rate

Inlet
10.

上

10.3

Days

@

8 ． 3‑ 8.6

6.1‑

f6.3

62

・

・

fn thePrevalence
0f

9.6 ― In.0

TOtal
II

oxygen

5

・

.3
5(1
1/
0/
12 13

TOtal
*' Percentage (n0. 0f fish isolated / examined)

0(0/18)
OCO/120)13.0(6/46)

しなげればならないが， 前節までに，催熟蓄養された親魚は捕獲後直ちに採卵された親魚(フ F催熟蓄養親魚)に比べ，A ． Sa.1mnniri血の検出率が 高く，催熟蓄表時の収容密度がA ． .@.1momri 血の検出率に 関係していることが考えられた。
サケマス増殖事業では種卵の確保のために，現状では親魚の催熟蓄養は不可欠であ り，捕獲場を親魚の湖上する河川のと流部に移動させても，経済的価値の高い資源の増殖を図っている状況から催熟蓄養ぼ避げられない。 このような現状では，親魚のA ． sXa.fm.nmri 血の保有率を 低くするためには， 催熟蓄養の条件を改善することが重要と考えられる。本節では石狩川のサケ親魚の，催熟蓄養密度とA ． salmom ぬ血の検出率の 関係について突験的に検討した。
まず実験的に蓄養密度を変えてA ． salmomct ぬの検出率を比較したところ，事業規模の場合と同様に密度が高くなるほど弊死率も高くなり，

A ． @almnnidf血の検出率も 高くなった。

しかし 溶存酸素量 と A ． salmonici血の検出率を 検討した実験では同―密度で催熟蓄養しても溶存酸素量の 差によりA ．

sn.1monir.t 血の検出率に 差が認められ， 溶存酸素量の低い区では検出率が高くなった。 これはWedemeyer(1972)による二ジマスでの観察と同様の傾向であ った。

Kingsbury(]961)

はせっそう病の発病と飼育水中の溶存酸素量との影響について，せっそう病が継続的に発生している養魚場では，飼育用水の爆気を十分行うことによって，せっそう病による被害が減少したと報古していることから考えると，病原細菌の検出率は催熟蓄養池の環境条件によって支配され，特に溶存酸素量の影響を強く受げているものと考える。
以上の溶存酸素量 と A ． salmonici血の検出率の 関係から考えて，高密度蓄養でも溶存酸素量の高い蓄養地を使用すればA ． salmnniri血の検出 率すなわち保菌魚放は増加しないとも考えられるが，大多数の蓄養池の用水は現状では量的に限界に達し

このような条件設定を事業規模で実現することは期待でぎない。

しかし排水部の 溶存酸素量が少なくと t>7 ppm 以上に保たれるように， 蓄養密度を調整することによっA ． sn.1mnmr.t血の検出率を 低減させることがでぎると考える。

て，

/n@
」

括

実験的に蓄養条件を変えてA ． sa1.mWnniri 血の検出率を 比較検討し以下の結論を得た。
I 催熟蓄養密度と検出率との間には相関関係が認められ，収容密度の上昇にともない検出率が増加した。
・

2． 溶存酸素量の低下にともないA ． 5almomfr.i血の検出率が 高くなった。

3 A
・

7ppm

・

salmomfcf血 保菌親魚の低減には， 催熟蓄養条件の改善が有効 で， 催熟蓄養池の排水部の溶存酸素量を以上に維持するように， 催熟蓄養親魚の収容尾数を調整することが必要と考えられた。

― so野村―せつそう
病の疫学的研究総合考察
木研究はサケ属魚類の催熟蓄養時に問題となるせつそう病原因菌，

A ． salmwonfci血 について，サケマス増

殖事業の現場における防除対策を確立するために，まずサケ属魚類採卵親魚のA ． salmomc?
査しついで採 卵親魚のA・

血 保有状況を調

salmon □血 感染時期，分離株の分類学的位置と病原性，さらにせっそう病被害防除のための具体的な方策について検討した。
第I章では，まずサケ属採卵親魚からのA ． salmomci ぬ 分離法について検討した。すなわち分離培地として，
普通寒天培地， トリ ブトソイ寒天培地及びburunculosis 寒天培地を用い，それぞれについて A ． salmonici 血の 増殖及び褐色 々 素が産生されるまでの時間を指標として比較検討した。その結果供試培地間で増殖の程度
及び褐色 々 素が肉眼で確認されるまでの時間に差がなかったことから，特にA ． 54J@%0wfCf血の分離培養用として開発されたFuruncul0SiS 寒天培地 (Griffin et al．， 1953a) を使用しなければならない 必然性は認められ5W‑

ず，経済的で 入手が容易な ，普通寒天培地が 研究目的に適していると 考えられた。 また保菌魚の A ．

W#}nt(:i血の検査部位を ，腎臓，肝臓，心臓，脾臓及び生殖腺 について検討したところ，他の組織から分離されない場合でも腎臓からは分離されること，腎臓は採卵後も鯉 によって被われ他の細菌による汚染が少ない
こと， 採卵後の親魚から現場で培養操作をしなげればならないこと等から，腎臓からの検出が最適と考えられ，以後普通寒天培地を用い，腎臓からのA ． salmonict血の分離を試みることにした。
次いで，北海道内の35 河川において，外観上せっそう病の症状がみられない止常なサケ， カラフトマス及びサクラマス採卵親魚合計20.542 尾を供試して， A ． Sf0<WoWCZ 血 保有状況を調査したところ，サケでは調査した.310
河川中19 河川から，； ラフトマスでは調査した19 河川中 n 河川から， サクラマスでは調査した11 河川中?河川の採卵親魚からA ． Xは.1mnnir.i 血が検出された。地理的分布で山津軽海峡から 内浦湾を除く，北海道の広い範囲の河川のサケ属採卵親魚にA ． salmom 心血が分布汚染していることが 明らかになった。
A ． sdlmnmn

血 に汚染された河川では，比較的長年にわたって採卵親魚から検出されるが，検出率は年によって変化した。さらに時期別の変化も石狩川におげる調査で明らかとなり， 催熟蓄養尾数の増加する時期に検出率も上昇を示した。
・

供試魚腎臓のA salmomci 血生菌数を調査した 結果，サケ及ぴカラフトマス採卵親魚では，WO ， cfu/g に達していること，他の細菌は検出限界以下であ ることが明らかになった。しかし組織学的な 検討の結果では，
せっそう病罹病魚の患部に見られるような細菌集落は腎臓組織中に観察されなかった。以上の結果から， A ．

@wdim.nntr.idn.の 検出されたサケ属魚類採卵親魚は，保菌c木顕性感染)状態であることが明らかになった。
このよ 5 に北海道内のサケ属魚類の採卵親魚にぼ，A ． 5MWOw

ぬぬ 保菌魚が広い地域に存在することが 明らかになったが，せっそう病の発生要因として保菌魚の存在が重要視されるている (HOrneandMaj

MCCraw，

ェ928;， 1952) ことから，サケマス増殖事業におけるせつそう病の防疫対策を確立するにあたり，採卵親魚のA ． 5MW0%

而血 保菌状態を低減させることが重要と考えられた。

第2章においては， 採卵親魚のA sぱ Zm770WfCf血 感染時期について検討した。沿岸に回帰したサケ属成魚からはA ． S7MOw

ぬんは全く検出されなかった。 しかし淡水で催熟蓄養した親魚ではA ． 5ぱ /川0% 而血 は体腔液 からも高率に検出され，その生菌数は I0"

cfu/ml にも及ぶことが明らかになり，

さらに環境水中でのA ．

5M‑

m 。wM 血の挙動についての検討結果から，体腔液から水中に放出された後も，環境水中で生存し他の親魚への伝播の危険性が 明らかになった。
従って現状のふ化事業では採卵場及び催熟蓄養池の排水は無処理で河川 lに排泄されていることから， 採卵
親魚体腔液中にA ． salmomfcfぬ が大量に存在することは，河川を湖上してくる親魚への感染源として重要な意味を持つものと考えられる。
―方 これらの採卵親魚血清中のA ．

salmomfctda
ぱ K@ 対する凝集抗体価を測定した結果， サケ採卵親魚では― K1 ―

さけ 立すふ研報 SC1. REP.
・HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993]:<4 の個体が多く，またカラフトマス親魚では 1:16 にモードがみられ，サクラマス親魚では T:4 から1:128 ま
でと比較的高い値に凝集抗体価の分布がみられた。サクラマスのように淡水生活の期間がサケ，

カラフトマ

スに比べて長い魚種では，河川水中に存在する刀 ． salmwonici血と遭遇後，免疫応答を 引き起こすに十分な期間生活するために，比較的高い値を示すがサケ，；

ラフトマスでは河川湖 L 後にA ． .w.1mnnic$ぬ に遭遇しても， 末だ充分な免疫応答の期間がないまま採卵されたためと考えられる。
予防免疫によるサケ属親魚のせっそう病の防除については，
では有効と考えられるが(木村 1970) ，サクラマスのように催熟蓄養期間が長い魚種

サケ及ぴカラフトマスのように， 催熟蓄養期間が I ； 月末満と短い

魚種では，実用化し得ないと考えられた。
通常の細菌学的手法では環境水中に存在する微量のA ． salmomci 血を直接検出することは 技術的に困難と考えられたので，次いでA ． salmonici

血 に特異的に感染する，， クテリオファージを検出することによって，間接的にA. salmomci 血の存在を推定することを 試みた。従来の報告でもA ． .wlmoninf血のファージは 多くの材料から分離されており (McCraw, 1952;POpoff, 1971a, 1971b;日高 1975, 1976)，木研究においても調査した環境水中から，親魚の河川湖上期ばかりではなく，稚魚の河川放流期にも ， ， クテリオファージが比較的高率に検出された。 このことは環境水中にA ． swalmomci血が常時わずかながらも 存在していることを示唆するものと考えられた。
以上の結果及び沿岸に回帰したばかりのサケ成魚からまったくA ． sa 肋 onict 血が検出されなかったことを合わせ考えると，

採卵親魚のA ． swalmnm□ぬの 感染時期は河川に湖上して以降であ ると考えられた。

第3章においては， 第I章のサケ属採卵親魚から分離したA ． salmomfci血の代表株20 株について分類学的検討を行い，既往の報告 (POpoff,1984)
及び同苗種標準株との生化学的性状の比較を行ったが，分離菌株はいずれもA.@w.1mnnir? 血 subsp.salmomci
sVJ．1mnniri血 ATCC

ぬ に同定され，血清学的にも共同凝集試験で A s@.1mnntci血 subsp.
・14174 株と共通抗原を有することが明らかになった。

次いでサケ採卵親魚から分離したA ． salmomci血 20‑1株を代表株として，サケ及びサクラマスに対する病原性を検討したところ，典型的なせつそう病の症状を呈し， 弊死魚が出現することから明らかに病原性を有することが明らかになった。しかも弊死する時点での腎臓の生菌数は108cfu/eに達し従来の報告と ―致していた。またA ． s@umWomci血 20‑1 株のみならず大多数の分離菌株は強い自発凝集性を右することから病原因子

Alayer の存在も推定され， 供試株全てが病原性を右する菌株であ ることが確認された。なお第I章において明らかになったように，サケ属親魚から高率にd ． sa/ 川0%c? 止が検出されるにもかかわらず ，せっそう病の発症や大量弊死が出現しない理由は， これら採卵親魚では腎臓組織中のA パば rW0% 朽ぬの生菌数が I0'cfu/g程度であ り， 弊死を引き起こす菌数に達する以前に採卵されてしまうためと考えられた。
次いで第4章においては，まず卵表面のウイルス消毒に常用されている，有機ヨード剤の A ． w 川0% 而血
ク

に対する殺菌効果について検討した。市販の有機ヨード剤 イリジソの200 倍希釈溶液 で 15 分間薬浴すること
により，A ． salmomci 血が完全に殺菌され ，この濃度では受精直後の卵 に対しても毒性が認められなかった。

従って受精卵をふ化場に収容する前に有機ヨード剤による消毒を実施すれば汚染卵に由来する以後の伝播を防止することがでぎると考えられる。
次に催熟蓄養した親魚のA ． salW 。nicもん保菌率の低減を計るために，まず石狩川にっいてサケ親魚の催熟
蓄養の実態を検討するとともに， 催熟蓄養条件を人為的に変えた場台のA ． fsai.1@.nmr.t
血の検出率を 実験的に検証した。石狩川におけるサケ親魚の催熟蓄養率は， 1979 年には 73.3% であったが 198 年以降は90% にも及んでいる。催熟蓄養密度とA ． Sf&/m0れ $Ca血の検出率との 間には，強い正の相関が認められ， 催熟薔養親魚と非催熟蓄養親魚におげるA ． ss00zWoM而血の検出率を 比較すると，明らかに前老の方が高く催熱善養条件が刀．
salmomci 血の検出率に 大きく影響していることが明らかになった。

人為的に蓄養密度をIm2 当たり4． 9尾 とした場合には，検出率は2． 0%,

14 ． ?尾 とした場合には20.3% と IO 倍・に増加した。蓄養密度を1I ． 8尾 として，溶存酸素量を変えた実験で屯 排水部の溶存酸素量が9 6‑10.0ppm― s2 ―の野村 せつそう病の疫学的研究

場合にはまったく検出されなかったが， 6． 1‑6.3ppmに親魚を蓄養した場合には弊死率も高くなり，の場合には検出幸は 13.3% となった。このように高密度

しかもA. salmonici血の検出率も 上昇することが 明らかになった，そして親魚の収容尾数を調整して， 蓄養池の排水部の溶存酸素量が7 wpm

以上を保つようにすることく，莫大な建設費を要することから，現状ではサケ稚魚の飼育池を 兼用しているが ， 採卵親魚からH ．

MJ・によって，良好な蓄養環境が維持されると考えられた。
以上，サケマス増殖事業におけるせつそう病の防除対策を確立するため―連の疫学的研究の知見を基にして，せっそう病の防疫という観点から指摘される サケマス増殖事業におげる改善事項は次の通りであ る。
第Iに催熟蓄養は近年になって導入された技術でC木村 1988)，サケに関しては技術的に完全に確立されたとは言い難い。まず検討しなげればならない問題は催熟蓄養施設の改善であ る。 催熟蓄養他は使用期間が短
WOw ぬ血が高率に検出されることが 明らかになったので， 採卵親魚が保有している病原細菌の伝播を防止する意味で，催熟蓄養のための専用池を建設すべきであ る。 また防疫上の観点から，催熟蓄養地は蓄養に使用
後は，稚魚などの飼育に使用すべきではないと考えられるが，消毒などによってA ． MfWow

ぬ方を完全に殺菌し伝播を防止する 対策を講じることが出来れば，稚魚池への転用も可能になると考えられる。現在の北海道内では使用し得る濁水の量に限界があ るため，催熟蓄養に使用する用水は，河川水を使用しなげればならない状況にある。 A ． 5almmnmfci血の増殖速度は ，温度によって左右されるので，

上ヒ

較的水温の低い湧水を使用して催熟蓄養するのが理想的と考えられる。河川水を使用する場合にも，水温の低下を図るため， 湧水との混合使用が必要であろう。また，河川水のみを使用する催熟蓄養池においては，せっそう病の発生を防除するため，初期の高水温時の催熟蓄養を行うことは避げて，水温が12C 以下に低下してから催熟蓄養を開始すべきと考えられる。
第2 C ， 採卵親魚のA ． salmomfci血 保有状況が，親魚の催熟蓄養条件，特に催熟蓄養密度と溶存酸素量に影サ響 されることが明らかになったことから，排水部の溶存酸素量が7 ppmJ@ し h に保たれるように， 催熟蓄養池の収容尾数を調節すべぎと考える。 このためには沿岸におげる的確な漁業調整により，河川湖上の親魚屋数を再生産に必要な尾数となるように調整することも必要であろう。
第3に，北海道におけるサケマス増殖事業の主要河川の採卵親魚が，すでにA ． salmomc? 七 に汚染されている現状では，ふイヒ 場への収容時には有機ヨード剤などによる卵の消毒を必ず実施して，A ． sa.1.mnnin血の汚染の拡大防止を図る必要があると考える。
第4に，サケ及び； ラフトマスの増殖事業で 屯 春季に稚魚を放流してから，秋季に親魚が湖上してくるまでの間，―般にサケ属魚類はふ化場内に存在しない。 このため，大日乾燥などによって施設の殺菌が可能と考えられるが，サクラマスやべ 二ザケのように， 降侮型幼魚の生産を行うようになるとこれらの魚種は淡水生活期が長いため，周年サケ属魚類が施設内で飼育されることになり，施設の消毒が困難となり病原体の，水平伝播の可能性が増大する。 また病原体が採即時の体腔液とともに放出されることが明らかとなりそれに起因する水平伝播を防止するために， A ． Kalniomfci血 に汚染されている可能性の高い親魚の催熟蓄養池 とふ，可能な限り異なる水系を使用し位置的にもでぎるだげ 分離をはかることが必要であろう。
以上のよ 5 な ，サケマス増殖事業におげる防疫体制の確立によって，同時に魚類病原ウイルスの侵入に対する防疫も可能になり，またサケ属採卵親魚の催熟蓄表時の生残率が向上し さらには清浄な環境下で稚魚を飼育し得ることにもなり，サケマス増殖事業のより健全な発展が期待される。
イヒ場は― 83 ―

さけ・ますふ研報 SCIREP

HOKKAIDOSALMONHATCHERY

Summary
Furunculosis

0f salmonid

fishes, caused

by Aeromonas

salmonicida, was firstreported tn 1890

and Weibel(1890a, 1890b). Since these first reports, furunculosis has been reported inby Emmerichvirtually all parts 0f the world wherewild

cultured salmonids occur

or(Herman

1968; Smith

1960;

Snieszk0, 1972; Austin and Austin, 1987).
Furunculosis ;s not a serious problem;n rainbow

trout (Oncorhynchus

myhiss') culture fn Japanbecause this species tS resistant to the causative agent Of the disease. HOwever, serious mortality has
been

documented

dance withtn juvenile amago

salmon(0. rhodurus) and masu

salmon(.0. masou)

fn accor‑increased production Of these fish. In HOkkaid0, outbreaks Of furunculosis havereported to occur

in chum

salmon (.0. keta) by Nishino (1967), andsalmon(.0. gorbuscha) by Kimura

NOmura(1983), NOmura

salmonicida fromand;n masu

been

salmon andpink(1970) during the maturation 0f these species ;n holding ponds.

Kimurathe kidneys Uf mature(1981), andNOmurae[ a1. (1983) reported

chum,

and

salmon that showed

pink

masu

isolatingnoA.

apparent

clinical signs Of furunculosis.
Recently,systematic epidemiological studies have been done t0 establish control measuresn0

furunculosis ;n salmonids from whichforquarantine and disease control polices could be based.

In this paper, the author report the recent epidemiological study 0f 4. salmonicida which
carried out for the purpose

Of establishing control measures

wasfor the disease.

Distribution 0f 4. salmonicida ;n salmonids ;n HOkkaido:
The author attempted to determine the distribution and prevalence 0f A. salmonicida tn mature
pink, and

chum,

masu

furunculosis (NOmura
From September
collected fromrandomly

were

salmonpopulations fn HOkkaidothat showedn0

apparent

clinical signs Of

and kimura, 1981).
1979 to NOvember

1992,

a total

0f 20,542 chum,pink, and masu

salmon were

35 rivers (Fig. 3) tn HOkkaid0. At each sampling, a total 0f 60 fish 0f eachselected from the rivers' salmonid populations fn accordance with Amos

species(1985). The

fish were separated by species and river and held tn individual ponds at each river for about 1 month
until maturity. After spawning, they were

processed for examination. Kidney

ked onto nutrient agar plate (Eiken C0. TOkyo
pigment

and showedstrea‑

Japan) and cultured at 20@C for ? days. N0 clinicalsigns 0f furunculosis were observed fn the examinedbrownmaterials were

fish. Bacterial colonies that produced a soluble

the following characteristics were classified aS 4. salmonicida: Gram

negative staining, lack 0f motility, failure [o grow at 37@C, tested positive for cytochrome oxidase, andhad the ability to ferment On oxidative fermentative basal medium.
Theauthor isolated A. salmonicida from chumsalmon tn 19 Of the 30 rivers examined; thepercent occurrence

0f the bacterium tn this species 0f fish ranged frompink salmon, fromI9 rivers were

tested and A. salmonicida was isolated frompercent occurrence

ranging from

1.2 [o 15.0%. In masu

0f II rivers examined
wasand the percent occurrence

1.3 t0 33.3%. POpulationsofII 0f these rivers withsalmon, the bacterium was isolated from 7

ranged from 0.'4 t0 6.1%. Hence, A. salmonicida

determined t0 be distributed widely ;n the salmonid populations Of HOkkaid0, except those ofrivers located between Tsugaru

Strait and Uchiura bay.

In the Ishikari, Shari, Iwaobetsu, Shibetsu, and TOkachi rivers, the prevalence 0f 4. salmonicida― S4 ―

野村 せつそう病の疫学的研究

was found to vary yearly. rn the Ishikari River, the prevalence Of 4. salmonicida ;n chum salmon

high fromwas1979 to 1984, but has gradually been decreasing since 1985 (Fig. 4). In the chum salmon

0f the TOkachi River and tn all three species tn the Shibetsu River, the prevalence 0f the bacterium
has remained high, throughout the examination
salmonicida wasfish examinedFrom

not isolated fromperiod. In the Shari River from1979 t0 1988,

A

0f the fish examined, however, tt was isolated from 4 Of 60

any

fn 1989.

1979 t0 1984, changes tn the monthly

prevalence

0f the agent could be observed tn fishes

in the Ishikari River. The incidence Of A. salmonicida increased until the middle 0f October and thendecreased thereafter. The pattern Of change was closely related with changes ;n fish density fn theholding pond; the prevalence 0f the bacterium appeared to increase proportionately as density Of fishin the pond

increased (Fig. 4).

The number

Of 4. salmonicida bacteria found ;n kidney tissues ranged from 103 t0 10s colony

forming units per
The

gram

(cfu/g) (Table 11) .

kidney 0f chumsalmon fn which

A. salmonicida wassolution for histopathological examination. The kidney organs
Paraplast, and sections 0f the samples wereisolated were fixed with
wereBOuin'sdehydrated and embedded

made and stained with HE and Gimsa

instain (Plate 1 B

and C).
Histopathological examination

0f the infected fish, however, did not reveal colonies of 4.

salmonicida typically observed fn fishes with furunculosis. Als0, n0 outbreaks 0f furunculosis wererecorded tn the examined

populations during the research period.

There are few reports examining the prevalence
normal mature fish. In fact, aS far aS I know,
They

0f 4. salmonicida ;n the organs

reported that A. salmonicida was detected tn 31 Of 286 brownfrom spawningshowedruns

tn the Ganaraska

Of apparently

there tS only one report by Daly and Stevenson C1985) .
trout (.Salmo trutta) sampled

River, Ontari0, Canada, over a period Of two years. Our resultsthat the incidence Of this agent tn apparently normalthat 0f Daly and Stevenson's (1985) estimated for brown

chum salmon

was higher comparedtotrout, and that A. salmonidda is distributed

widely tn the river populations 0f salmonids tn HOkkaid0.
et a1.(1981)

MOrikawa
salmonamago

reported that the number

108 to 109 cfu/g. The reason

wasthe author examined, even

0f A. salmonidda ;n the kidneys of moribund

why diseased fish were

not found tn the population

though they had A. salmonicida ;n their kidneys, was that the degree of

infection was not high enough. From the results 0f histological and bacteriological examinations, ft
tS concluded that fish with A. salmonicida fn the kidney are not diseased fish but carriers of A.
salmonicida.
A. salmonicida fn immaturefish:

The author attempted [o isolate A.' salmonicida from immature
Of 480 fish
salmonwere

chumcollected ;n 4 coastal set nets off HOkkaid0, andand chum salmon

fry wereand masu

salmon. A total

a total Of 2,600 juvenile masu

collected from II hatcheries 0f the HOkkaido

SalmonHatcherysystem.

The bacterium
Aeromonas

was

not isolated from any 0f the examinedfish.

salmonicida @n coelomic fluid:

In 1989 fn HOkkaid0, the author attempted t0 isolate A. salmonicida from the coelomic fluids ofmaturechum,

pink, andmasu

salmon.
― 85 ―

さけ，ますふ研報 SCIREP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,NO

COelomic fluids were collected according tu the method

47, 1993

0f YOshimizu et a1. (1985). The coelomic

fluids were streaked onto nutrient agar plate (Eiken C0. TOky0, Japan) and the plates were cultured
at 2U@C for ? days. Number
measured

0f viable counts

fn accordance with the method

Of 4. salmonicida ;n coelomic fluid and

Uf NOmuraand Kimura

kidney were

(1981).

A. salmonicida was isolated from the coelomic fluid 0f fish showingn0clinical signs ofapparent

furunculosis. FOr example, A. salmonicida wasisolated from the coelomic fluid Of 22 Of 120 fish

examined

0f A. salmonicida bacteria tn coelomic fluids ranged

from the TOkachiRiver. The number

from 101 t0 107 cfu/mt fn the populations from the Shibetsu and Teshio rivers.
COelomic fluid containing A. salmonicida flows out 0f the fish at the time

eggs

are

strippedorduring the process of maturation fn the pond. COnsequently, infected waterand infected coelomic

fluid

areas

expelled into the river because the sewage

arefrom the egg strippingandthe holding

ponds ts not disinfected ;n HOkkaid0. The author suspect from these results that the agent
fromthe fish may

be a source

0f infection for other anadromous

salmondrainedthat ascend the river for

spawning.
and Maj(1928)and

HOme

McCraw

C1952)stated that the most important source 0f A. salmonicida

in the spread of furunculosis fS the existence 0f fish carryinga serious problem

pose

in salmont0 the prevention

this agent. Fish carrying the bacterium

0f furunculosis, and their reduction fn fish plays a key role

propagation.

A. salmonicida

0nsurfaces:egg

The existence 0f the bacterium ;n the coelomic fluid suggests that the surface 0f eggs taken fromthe fish will also bc contaminated.

COntaminatedeggs mayspread the agent to areas where the eggs

will be transplanted. The author studied the existence Of 4. salmonicida 0n the surface of eggs byartificially contaminating
which

was

chum salmon

eggswith A. salmonicida. The

A. salmonicida 20‑1 strain,

isolated from the kidney 0f chum salmon ;n the TOkachi River, was

used

as

inoculum. The

strain was cultured and harvested, then was suspended tn phosphate buffer saline (PBS). The chumsalmoneggs

werebathed ;n PBS

containing the agent for an hour. The

at 8@C tn the laboratory. At one hour

water

and the author then measured
present On

were

the viable number

shaken strongly for 5 minutes

0f @. salmonicida tn the water. Egg surfaces were

1.1x10" to 4.3x108 cfu/egg Of A. salmonicida. The number

the egg surfaces decreased from

salmonicida could not be isolated fromincubated ;n welland at 24 hours after fertilization, the author to0k 20 eggs

from the incubator and put them into sterilized water. The flask was
initially bathed witheggs

68 to 4.6 cfu/egg an hour

the eggs cultured

On

Of A. salmonicida

after fertilization andA.

plates 24 hours after the initial bathtreatment.

The author also attempted to isolate A. salmonicida from the eggs ;n the incubation boxes at theandTOkachi hatcheries. These eggs were taken from bro0d fish fn

Satsunai, Nakagawa,

Nemurowhich

0f 4. salmonicida was highthe prevalenceCTable 4).

FOrtunately, A. salmonicida was not isolated fromIn HOkkaid0, the fertilized
hour

are

eggs

any

0f the I5 hatcheries' eggs (Table 25).

transported to hatcheries form the egg collection location 1

after fertilization. The results 0f this experiment suggest that A. salmonicida tS able t0 exist on

the surface 0f an
hatchery withegg.

fertilized

This
egg.

makes

uS

concerned that wemay

be transporting the bacteria t0 the

The author believe that ;t fS necessary

salmonicida via eggs fn order t0 control 0f furunculosis.
― 86 ―

t0 preventthe transfer 0f A.

野村 せつそう病の疫学的研究

Survival 0f 4. salmonicida fn water:
By definition, A. salmonicida ;s considered t0 bean

CPOpoff 1984) and fS neverobligate pathogen

found tn surface water. Its ability t0 survive and remain infectious ;n the external environment
be

a

major

determinant

tn the spread 0f furunculosis. The

author studied the viability

salmonicida tn nonsterile, sterile filtered, and autoclaved fresh water
A. salmonicida strain 20‑1 isolated from chumexperiment. The strain

salmonandof A.

;n salt water.

;n the TOkchi

River

used

was

cultured at 20@C and harvested, then suspended fn fresh water

was

may

tn thisfn salt

Or

water. The suspended cells were

inoculated into 200 mI 0f nonsterile, sterile filtered, and autoclaved

fresh water

were

and salt waterandincubated at T0@C.

In sterilized fresh water, A. salmonicida survived for 60 days
days. The

survival Of 4. salmonicida tn sterile salt waterandtn nonsterile water, only 4

8 days, this waswasashorter survival

period than that tn sterile fresh water (Fig. 8).
It ;s believed that A. salmonicida ;s not able t0 exist for long time ;n water
McCarthy(1980) studied the survival 0f the agent fn watersalmonicida and found the agent

could survive for 8 days

using an antibiotic‑resistant strain of A.
tn water.

(1980) and this study indicated that A. salmonicida

The results 0f McCarthy

without fish, but

survives long enoughto infect other fish ;n the water.

Variation Of agglutination titer against A. salmonicida ;n the serum:
Of adult salmon

A serological survey
kaid0, fromchum,

maturepink and

was

masu

artery with T0 mI 0f Vacteinor (Terumo

b100d‑cell clot by centrifugation andmade from b100d samples collected ;n 1988 fn HOk‑

salmon. B100d was aseptically extracted from the dorsal

C0. TOky0, Japan). The resulting serum
wasstored at ‑90@C until assayed. The

agglutinating antibody titers individually by test tube methods
Agglutinin titers against A. salmonicida tn the serumin HOkkaido

fn 1988 are shown

0f a total 0f 75 serum
Of titers was
was
range

tested forwith A. salmonicida ATCC

14174.

0f maturechum,pink andmasu

salmonchum salmon, 73.3%

16.6%

10%

did not have the agglutinin,and the range

0f the sample did not have the agglutinin,and the range

0f the examinedserum

did not havethe agglutinin, and the

4 to 128.

was

The

0f maturesalmon,wastn Table 30.

8 to 32. rn pink salmon,

4 t0 32. In masu

was separated fromserum

diversity ;n the incidence of agglutination titer within each

0f the three species indicates acontinuous, widespread interaction between individuals 0f the host populations and A. salmonicida.
Of agglutination titer ts proportionate to the period 0f 4. salmonicida

The difference fn the amountinfection.
In genera1, the percentage
residency increased. Weber
Atlantic salmon

0f serologically reactive salmon increased
and Zwicker(.Salmo salar) ;n the Miramichi

salmonicida agglutinin, but 0f 27 Restigouche
20, and

one

had

a

titer 0f 640. They

salmonicida ;n the RestigoucheaS theirandMargareen

from
had

A.

River salmon, four had a titer Of 10, five had a titer ofhave

previously contacted A.

River.
were

low. It wassuggested that the fish were

infected with A. salmonicida shortly before their eggs were stripped. Kimura
methodsampledrivers fn Canada, none

confirmed that Atlantic salmon

In this study, agglutinate titers fn the serums
the immunologicallength Of fresh water(1979) reported that 0f a total 0f 43 serum

Of preventing furunculosis was― fi7 ―

useful fn adult masu

(1970)reported that
salmonduring theさけ・ますふ研報 SCIKEF

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,stay

fn fresh water

holding period because these salmon

N0.

47,

1993

for a long enoughperiod to allow

produce antibodies after antigen inoculation. In chum salmon, however, the fresh water
period is short,

this method

S0

0f prevention

would

not

1solation 0f the bacteriophage 0f A. salmonicida from
There !s n0 sensitive medium
A. salmonicida tn water

the culture medium

On

Other natural bacteria populations. The

residency

water:
thatmeans

is low, the isolation Uf A. salmonicida from the water
grow

to

be practica1.

for selecting A. salmonicida. Thisis because A. salmonicida cannot

themauthor attemptedwhen

the numberofwill be difficult. This

under competitive conditions witht0 isolate thebacteriophage

Of 4.

sa1‑

monicida t0 ascertain the existence 0f A. salmonicida tn the water.
Water

samples,

TOky0, Japan)

fromTT hatcheries andemployedwas

examined. Nutrient

broth (Eiken C0.

for the routine culture, dilution and enumeration

0f A. salmonicida

and its phage strain. One hundred
32, Ar‑43, Ar‑7I and

H‑70

McCraw

mt 0f sample was

were

added

t0 500 mI 0f cultured A. salmonicida Ar‑

strains ;n the logarithmic phase. Detection andachieved using the medium

were

4 rivers

enumeration

0f phageand double agar layer technique (Paterson et a1., 1969).

(1952) stated that when

the bacteriophage 0f A. salnwnkida exists, its presencemay

indicate the existence Of the bacterium. The bacteriophage was isolated from the 2 samples 0f riverand 5 samples fromwater

salmonicida

can

its existencemaysurvive forbehatchery watera(Table 33). From this result, fL was suspected that A.

long time tn the river water
Of infection to salmonida source

tn HOkkaido
fish. The

after leaving the fish andresults suggest that

such

that

bacteriu‑

phage could be very useful for studying the existence 0f the agent tn water.
Pathogenicity 0f the isolated A. salmonicida:
The isolated strains

wereidentified as A. salmonicida subspecies salmonicida, by their biologica1,

biochemica1, and immunologicalcharacteristics. All Of the isolated A. salmonicida strains showed

aut0‑agglutination and produced protease fn the medium,
In order t0 examinesowealso expected them t0 be pathogenic.

the pathogenicity 0f the isolated strain,weinjected ;t into chum andmasu

salmon fry and adult chum salmon.
Aeromonas
in PBSandsalmon andsalmonicida 20‑1 wascultured for 48 hour at 20@C. The cells weresuspended tn PBS.

The strain

were

chum

salmonwashedthree time

injected into chum salmon fry, yearlingwas

bro0d fish at concentrations Of 1.7x102, 1.8x103 andmasu

6.0x105 cfu/fish

respectively.
All Of the examinedfish showed

typical signs 0f furunculosis 3 to 4 days

number

Of 4. salmonicida ;n the kidneys Of moribund

numberreported by MOrikawa

after injection.

Thefish was around 108 cfu/g kidney, the same

et a1. (1981) fn the kidneys Of moribund

amago

salmon.

On the basis

Of these results, I suspect the isolates t0 be a pathogenic strains.
COntrol Of 4. salmonicida On the surface 0f egg:TO

establishamethod0f controllingA.

salmonicida

popidon‑iodine (Isocline), and the toxicity Of this agent

On

the

eggs,

to the chumthesalmonbactericidal effect Of
egg

were

studiedThe bactericidal effects Of popidon‑iodine t0 4. salmonicida were determined fn accordance withthe method

0f Amendand Fryer (1972)

Aeromonas. salmonicida wasand this solution wascompletely killed by treatment

not toxic t0 the chumsalmonthe author confirmed that isodine solution has

a

eggs

with 25 ppm

for treatments

sanitizing effects― 88 ―

oniodine for five minutes

lasting up to one hour. Thus,
the agent, and that tt does not野村 せつそう病の
疫学的研究

have

adverse

MethodFromeffectsOn

chum

salmoneggs.

for decreasing the prevalence Of 4. salmonicida fn churn salmon:
the results 0f this epidemiological study, the author suspected that the incidence 0f A.

salmonicida was affected by the density 0f fish during their maturation period tn the holding ponds;
aS

the average

examineddensity 0f bro0d fish stocked fn ponds

fish also decreased (Fig. 11). Therefore,

stocking density Of fish fn the pond
Chum
held

and

high

randomly

AS the author expected, I found that 20.3%
at a lowdensity, but 2%

density (Table 50). The

dissolved oxygen(Table 51). Thesea marked

0f A. salmonicida ;n the fish.
assigned to experimental holding ponds andconditions

until maturation. The

cultured 0n nutrient agar.

Of the fish examined

harbored A. salmonicida whenbacterium ;n fish that werethat 0f fish held under highresults clearly indicate that highhave

the relationship between the

0f the fish contained the agent when they were stocked

incidence 0f theconditions was higher thanlevels tn holding ponds

examineddensity (14.7 fish/m2)

kidney tissues Of all the fish used tn experiment were
they were stocked at a highweand the prevalencesalmon tn the Ishikari River were

under low (4.9 fish/m2)

decreased, the incidence 0f 4. salmonicida instocking densities andeffect On the prevalence

heldunder low

dissolved oxygen
lowlevelsdissolved oxygen

0f the agent ;n the fish. It was

concluded that fish maturation fn the pond under low density conditions and disinfection 0f the eggs,
arenecessaryt0 prevent fish furunculosis tn the artificial propagation89―

0f salmon.

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

謝

N0.

47,

1993

辞

稿を終えるにあたり，終始懇切なるご指導を賜り，また厳密なる御校閲を頂いた北海道大学名誉教授木村喬久博士，同大学水産学部水産食品学科食品製造学講座教授信儂晴雄博士，同大学水産学部水産食品学科微生物学講座教授絵画良男博士に深甚なる敬意と謝意を表する。
また種々 適切なご助言と御教示を頂いた，

同大学水産学部水産食品学科微生物学講座助教授田島研―博士

ならびに同大学水産学部水産食品学科微生物学講座助手古木 守博士に衷心よりお礼申し上げます。
本稿の取りまとめの機会を与えて下さり，種々有益なご助言とご指導および御校閲を頂いた水産庁西海区
水産研究所長原武史博士に心から感謝いたします。 また岐阜県水産試験場故奈川

遊博士には右益なご助言を頂き，文献の収集にもご協力頂きました。 ここに厚くお礼申し上げます。
さらに，魚病研究の手ほどぎをしていただいた恩師東京水産大学名誉教授保科利―博士，木研究の端緒を与えられ，サケ属魚類の生態学的知見について右益なご助言を頂いた前水産庁北海道さけ・ますふ化場長小林哲夫博士に心から深謝いたします。
木研究の標本の採集は， サケマス増殖事業の最も忙しい時期であ ったのにもかかわらず，北海道さけ ・ますふイヒ 場者事業場及ぴ財団法人北海道さけます増殖事業協会各位の絶大なるご協力を得ることがでぎた。特に北海道さけ ，ますふイヒ場 千歳支場関係各位には長期にわたり標本採取，実験魚の飼育に多人の労をわずらわせた。 これらの，暖かいご協カ と励ましがなくては，本橋の取りまとめも不可能であ った。ここに衷心より感謝の意を表する。
最後に本研究推進にご理解を賜り，数々のご支援を頂いた前北海道さけ・ますふイ乙場 川越―徳場長，前調査課長阿部進―氏，

広井修調査課長ならびに調査課職員の皆様に深謝いたします。

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― 95 ―

さけ・ますふ 所報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMON

Plate 1.
A. Appearance 0f bacterial colonies Un
salmonwas

cultured at 20@Ca

HATCHERY,

N0.

nutrient agar plate

which A. salmonicida was isolated.

Right: The

which

A. salmonicida

B. COlonies Of 4. salmonicida (arrow) thatfurunculosis shown

with

was

were

stain.
C. COlonies 0f 4. salmonicida (arrow) that were

furunculosis by the FAT

Uu

1993

which kidney material frommaturefor 5 days.

Left: The plate fromplate from

47,

not

observedisolated.
in the kidney

Of diseased coho salmon

with

Of diseased coho

with

Giemzaobserved in the kidney

method.

― 96 □

salmon甘村 ―せつそう府の 艮学的研究

Plate

1

A

B

c

― S7 ―

さけ・ますふ研報 SC1. REP.

HOKKAIDOSALMONHATCHERY,

N0.

47, 1993

Plate 2.
A. Autoagglutinating

ability Of Aemmonas

salmonicida

Left: non‑autoagglutinating strain, ATCC
14174.
Center: non‑autoagglutinating strain, NCMB
1102.
Right: strong autoagglutinating strain, 20‑1.
B. Clinical lesion 0f juvenile masu salmon inoculated with 1.8x103 cells 0f 4. salmonicida 20‑1 strain
C. Clinical lesion 0f mature chum salmon inoculated with 6.0x105 cells 0f A. salmonkida 20‑1 strain.

98―

野村―せつそう 病の疫学的研究
Plate

2

c
― 99 ―