静電気学会誌，42, 1（2018）9-14

J. Inst. Electrostat. Jpn.

論

文

誘電回転法による人工多能性幹細胞の分化評価
桜庭

一樹 ， 脇坂 嘉一 ，中島 崇仁
＊

＊＊

，箱田 優

＊＊＊

＊, 1

（2017年9月11日受付；2017年12月5日受理）

Differentiating Evaluation of Induced Pluripotent Stem Cells Using
Electrorotation Method＊＊＊

Kazuki SAKURABA , Yoshikazu WAKIZAKA ,＊＊＊＊, 1
Takahito NAKAJIMA
and Masaru HAKODA（Received September 11, 2017; Accepted December 5, 2017）
We examined the differentiation of mouse iPS cells by dielectrophoresis（ DEP）
. We induced the differentiation into
osteoblasts and cardiomyocytes and confirmed differentiation by fluorescent staining. The imaginary parts of the ClausiusMossotti function Im［ K（ω ）］of the differentiated cells were measured using electrorotation（ EROT ）which is a type of
DEP. Im［ K（ω ）］of the differentiated cells were different in the stage. Furthermore，Im［ K（ω ）］was analyzed using asingle shell model. It was demonstrated that this EROT method enables the identification of the undifferentiated cells or thedifferentiated cells.

1．はじめに

ザーと蛍光標識を用いて細胞の選択的な分離を可能とす

近年，種々の細胞への分化能を有する ES 細胞や iPSるセルソーターや磁場を利用した MACS が挙げられる ．

細胞等，多能性幹細胞の研究が盛んに行われている

4）．

これらの分析法は高精度な分析が可能である反面，蛍光特に iPS 細胞は患者から摘出した細胞に，Oct 3/4，Sox 2，

色素及び磁気チップを分析対象物に注入しなければなら

KIf 4，c-Myc の 4 遺伝子を導入することで作製されるたず，分析対象物への影響が懸念される．また，非侵襲的なめ，倫理上の問題や移植の際の拒絶反応が抑えられると分析法としてマイクロ流路を使った流体力による分離や，いう点から注目されている ．しかし，iPS 細胞から目

電気泳動や誘電泳動など電場を用いた分析法がある的細胞への分化は多段階のステップを必要とし，細胞分

しかし，流体力のみの分離精度は，細胞径や密度差に起化を安全にかつ確実に制御しなければ目的細胞以外への因し，それらが極端に異なる場合のみに使用が限定され分化や未分化細胞の癌化が生じる．そのため，細胞分化る．また電場を用いる電気泳動は，負の電荷を有するの仕組みの解明や細胞分析の技術開発の重要性が高まっ

DNA やタンパク質の同定に限定されている．一方，誘ている．

電泳動は不均一な交流電場に細胞を置くことで，細胞内

1，2）

3）

従来の細胞や生体高分子などの計測や分離には，レー

．

5-8）

の分極の強さで分析する．そのため分離対象が電気的に中性なものまでをカバーできる．そこで，本研究は電場

キーワード：誘電泳動，誘電回転法，シングルシェルモ
デル＊
群馬大学大学院理工学府環境創生部門（〒376-8515 群馬県桐生市天神町 1-5-1）
Department of Environmental Engineering Science,
Graduate School of Science and Technology, Gunma
University, 1-5-1, Tenjin-cho, Kiryu-shi, Gunma, 3768515, Japan＊＊株式会社 AFI テクノロジー（〒602-0841 京都市上京区梶井町 448-5）
AFI Technology Co. Ltd., 448-5, Kajii-cho Kamigyo-ku,
Kyoto, 602-0841, Japan＊＊＊
群馬大学大学院医学研究科（〒371-8511 群馬県前橋市昭和町 3-39-22）
Graduate School of Medicine, Gunma University, 3-3922, Showa-machi, Maebashi-shi, Gunma 371-8511, Japan1
hakoda@gunma-u.ac.jpを利用した誘電泳動現象の 1 つである誘電回転法を使用
し細胞分析を行った．誘電回転法はこれまでに，金属微粒子やマウス卵細胞，細胞凝集体，魚卵の分化状態の電気特性評価などの研究で用いられている

．また著者

9-14）

らは，誘電回転法を用いて，細胞の同定および活性の評価を行った ．その際に細胞の状態変化から誘電特性が15）変化することを明らかにした．
本研究では iPS 細胞の分化の仕組み解明の一環として
マウス iPS 細胞を，中胚葉を介し骨芽細胞と心筋細胞に分化させ，分化過程での誘電特性の評価を目的とした．
なお，細胞分化の確認は従来の選別法である蛍光染色法で確認し，細胞内電気的特性は Single-shell model による解析から算出した．

静電気学会誌 第42巻 第 1 号（2018）

10

2．理論

ン（047-18863, Wako ）を添加した．心筋細胞への分化

誘電回転法は 4 つの電極間で回転する回転電場を利用培養には 10 µM KY02111（ SML0948, Sigma ）と 10 µM

し，粒子を回転させる．回転電場に置かれた粒子は，粒XAV939（247-00951, Wako ）を添加した．

子表面に回転トルクが生じることで回転を開始する．こ3.2 蛍光染色の回転トルクГ（ω ）は粒子径 r，周囲媒質の誘電率 ε m，

マウス iPS 細胞の分化確認のために細胞染色を行った．

電場強度 E 及び，粒子と周囲媒質の誘電率に関する複未分化確認には GFP（緑色蛍光タンパク質），細胞の生素関数 Clausius-Mossotti 関数の虚部 Im［ K
（ω ）
］で
（1）式

存確認には DAPI（ D9542, Sigma ）による蛍光染色を行のように表される ．

った．骨芽細胞への分化確認は ALP（アルカリホスフ

16）

（1）

ァターゼ）染色キット（武藤化学株式会社）による青色染色の有無で確認した．また，心筋細胞への分化確認は

粒子の回転速度 Ω は，粒子の表面摩擦抵抗 R が回転

4.0％ホルムアルデヒド（163-20145, Wako ）による固定

トルクとつり合うことで定常状態となる．表面摩擦抵抗

処理，0.5％ポリオキシエチレン（10）オクチルフェニ

Rは（3）式のようになる．
（2）式，回転速度 Ω は

ルエーテル（168-11805, Wako ）による浸透処理，3.0％
（2）



（3）



ウシ血清アルブミン（011-07493, Wako ）溶液によるブロ ッ キ ン グ 処 理 後 に Troponin T（ SAB4200717, Sigma ）抗体染色（以降 TnT 染色と呼称）を行い赤色染色した．

なお，η m は周囲媒質の粘度である．
（1）式中の Im［ K

なお，観察には蛍光顕微鏡（ CKX41, OLYMPUS ）と一（ω ）］は細胞の誘電特性を表す因子であるため，
（1）
（3）
-

眼レフカメラ（ EOSKiss X8i, CANON ）を使用し，蛍光式を使い Im［ K（ω ）］について整理したのが（4）式であ強度の算出にはフリーソフト Image J（アメリカ国立衛る生研究所）を使用した．

．

17, 18）（4）

3.3 装置形状と電圧印加
図 1（a）に本実験の装置概略図と四重電極の拡大図を示す．

3．実験方法と手順

本実験はスライドガラスに蒸着した薄膜 Au 電極デバイ

3.1 分化培養ス（ AFI テクノロジー製）を使用した．図 （1 b）は電極の本実験ではマウス iPS 細胞から胚葉体を介し，骨芽細拡大図であり，電極幅は 75 µm，電極間距離は 300 µm で胞，心筋細胞へ分化培養させた．中胚葉誘導期は共通しある．電極の周囲はシリコンカバーで覆い，電極デバイスて 5 日間とした．その後各分化細胞への誘導を開始し，骨芽細胞への分化誘導は中胚葉誘導期と合計して 19 日間，同様に心筋細胞への分化誘導は 17 日間とし 37℃，
5.0％ CO2 下のインキュベータ（ BNA-111, ESPEC ）で培養した．培養培地は DMEM（ D6429, Sigma ）500 ml

19-21）

を基本とし，10％ FBS（ BRL, GIBCO ），硫酸ストレプ
トマイシン（明治製菓）100 mg/ml（力価）とペニシリン
G カリウム（萬有製薬）100 U/ml からなる抗生物質を2.0％，NEAAS（ M7145, Sigma ）5 ml，モノチオグリセ
ロール（195-15791, Wako ）0.5 ml を添加した混合培地を使用した．マウス iPS 細胞の未分化培養には，分化抑制剤として LIF（199-16051, Wako ）0.5 ml を上記混合培地に加えた．次に iPS 細胞から中胚葉への分化培養には上記混合培地に 30 µM CHIR（034-23103, Wako ）と 5 µM
Cyc（038-19311, Wako ）を添加した．中胚葉から骨芽細胞分化培養時には 1 µM SAG（ ALX-270-426-M001, Enzo ）と 50 µg/ml アスコルビン酸（ A4034, Sigma ），10 mM β グリセロリン酸（ G9422, Sigma ），0.1 µM デキサメタゾ

図 1 装置図（ a ）および四重電極形状（ b ）Fig.1 Schematic diagram of experimental apparatus（ a ）andquadruple electrode shape（ b ）．

誘電回転法による人工多能性幹細胞の分化評価（桜庭 一樹ら）

11

を顕微鏡（ MT5310L，
MEIJI TECHNO Co．
）上に配置した．
配置後に細胞懸濁液を滴下し電圧を印加した．電圧印加
はファンクションジェネレーター（33220A, Agilent ）で出力し，フェーズシフター（ AFI テクノロジー製）を介して四重電極に印加した．フェーズシフターは，ファンクショ
ンジェネレーターから受け取った電気信号の位相を変化させる．位相の変化した電圧が四重電極に伝わるため，
強電場領域が電極間を回転する．これによって回転電場が形成され，電極間に配置した細胞は回転電場の影響を受け回転する．なお細胞の回転挙動は PC（ Compaq 6000
Pro SF，日本 HP ）に動画として保存し測定した．

3.4 回転速度測定とIm［K（ω）］の算出
Im［ K
（ω ）
］を算出するため，細胞の回転速度を測定した．細胞の回転速度は周波数に依存するため，周波数を 1 kHz から 1 MHz まで変化させて検討した．回転速
度は各周波数で 10～30 個のデータを測定し平均値とした．回転の計測は，１回転を 3～20 sec 程度で測定した．
回転速度の速い場合は動画の再生速度を落とすことで測定誤差を抑え，計測した．なお，細胞懸濁には浸透圧とジュール熱の発生を抑える条件で調整した 8.5 wt％スク
ロース +0.3 wt％グルコース溶液を使用した．なお，分化実験は未分化 iPS 細胞（培養 0 day ），中胚葉誘導期（培養 5 days ），骨芽細胞誘導期（9，13，17，19 days ），心筋細胞誘導期（8，12，17 days ）の日数で行った．

4．実験結果及び考察
4.1 細胞染色
iPS 細胞の分化過程における誘電特性を測定するにあたり，目的の細胞への分化の有無を細胞染色にて調べた．
その結果が図 2 である．図 （2 a）は培養 0 day，図 （2 b）は
培養 5 days における GFP 染色画像である．GFP は未分
化の iPS 細胞にみられるタンパク質を緑色蛍光させた．
よって，図 （2 a）では細胞が未分化のため緑色蛍光を確認した．一方，図 （2 b）では分化が進行し GFP が失活したことを確認した．図 （2 c）は培養 0 day，図 （2 d）は培養
5 days，
図（2 e）
は骨芽細胞へ分化誘導時の 19 days，
図（
2 f）
は心筋細胞へ分化誘導時の 17 days の DAPI 染色画像である．GFP は分化が進行すると染色がなくなり，細胞の存在を確認できなくなった．そこで生細胞の核を染色し，分化誘導後も細胞の存在を確認するために DAPI 染色を行った．図 （
2 c）
（
，d）
（
，e）
（
，f）の全てで染色がみられたことから，分化誘導後も細胞が存在していると確認した．
また，図 （2 g）は培養 0 day，図 （2 h）は骨芽細胞へ分化誘導時の 19 days の ALP 染色画像である．ALP は肝臓，小腸，骨などに広く分布している酵素であるが，特に骨形

図 2 分化，未分化細胞の染色画像
Fig.2 Stained image of differentiated cells and undifferentiatedcells.
GFP staining of（ a ）culture 0 day，
（ b ）culture 5 days．
DAPI staining of（ c ）culture 0 day，（ d ）culture 5 days，（ e ）culture 19 days of differentiated osteoblast，（ f ）culture 17 days of differentiated cardiomyocyte．
ALP staining of（ g ）culture 0 day，（ h ）culture 19 days．
TnT staining of（ i ）culture 0 day，（ j ）culture 17 days．

12

静電気学会誌 第42巻 第 1 号（2018）

成のマーカーとして用いられている．ALP を持つ細胞

下を示し，DAPI は一定の値をとった．また，TnT 染色

は青色染色されるため，図 （2 h）で青色染色を確認したは中胚葉から心筋細胞への分化誘導 8 days 以降に発現しことから iPS 細胞が骨芽細胞に分化したことを確認した．これは中胚葉から心筋細胞へ正しく分化が進行した

た．加えて，図 （2 i）
は培養 0 day，図 （2 j）
は心筋細胞へことを表している．

分化誘導時の 17 days の TnT 染色画像である．TnT は筋

4.3 分化による誘電特性の変化

肉を構成する蛋白質の一つで心筋特異性が高く，心筋マ

分化培養日数毎に細胞の誘電特性を求めた結果を図 4ーカーの代表例である．図 （2 i ）の未分化細胞では赤色に示す．なお，図中の n は測定した細胞数を示している．

が確認できず，図 （2 j ）では赤色染色を確認したことか

未分化 iPS 細胞（0 day ）は 100 kHz で Im［ K
（ω ）
］の最

ら iPS 細胞が心筋細胞に分化したことを確認した．

大値を示し，中胚葉誘導期（5 days ）は 20～50 kHz で

4.2 蛍光強度

最 大 値 を 示 し た． 図 （4 a）の 骨 芽 細 胞 誘 導 期（9～19

図 2 の染色結果を，ImageJ によって数値化した結果をdays ）はピーク周波数が 50 kHz のまま，Im［ K（ω ）］の図 3 に示す．図 （3 a）は骨芽細胞へ誘導時の GFP，DAPI

値が低下していった．一方，図 （4 b）の心筋誘導期（8～染色の結果である．GFP は培養 5 days で急激に低下し，

17 days ）はピーク周波数が 20～100 kHz の広範囲に広が

DAPI はバラつきがあるものの一定の値をとった．これり，分化が進行しても Im［ K（ω ）］の値は変化しなかっは GFP の低下が分化の進行を表している．一方の DAPI

た．この結果より，未分化細胞と骨芽，心筋細胞で Im［ Kは，分化誘導後も細胞が存在していることを表している．

（ω ）］の値に違いが生じ，未分化細胞と分化細胞の同定

図（3 b）は心筋細胞へ誘導時の GFP，DAPI，TnT 染色のが可能であると示唆された．

結果である．図 （3 a）同様 GFP は培養 5 days で急激な低

図 3 分化による蛍光強度への影響（ a ）骨芽細胞誘導 （ b ）心筋細胞誘導
Fig.3 Effect of fluorescence intensity by differentiation.
（ a ）Differentiated osteoblast（ b ）Differentiated cardiomyocyte

図 4 分化による Im［ K（ω）］の変化
Fig.4 Change of Im［ K（ω）］by differentiation.
（ a ）Differentiated osteoblast（ b ）Differentiated cardiomyocyte

誘電回転法による人工多能性幹細胞の分化評価（桜庭 一樹ら）

13

4.4 Single-Shell modelによる解析
分化による Im［ K（ω ）］の違いが何に起因するものかを調べるため Single-Shell model を使い，計算した結果を表 1 に示す．Single-Shell model とは細胞の細胞質を均質
な電解質溶液とし，その電解質溶液を絶縁性の薄い膜で囲んだ単純なモデルである．解析モデルは，植物プロト
プラストや動物細胞において測定結果と良く合致することが報告されている．解析結果から導出された細胞22, 23）

質比誘電率，細胞質電気伝導度，細胞膜キャパシタンス
を図 5 に示し，細胞質比誘電率，細胞質電気伝導度，細胞膜キャパシタンスの文献値については表 2 に示す．

24-29）

表 1 と図 5 より骨芽細胞は心筋細胞に比べ低い値を記録した．これは分化の進行とともに細胞内の物性が変化したためだと考察した．生体組織の中で，骨は木材と同程度のヤング率を有し，変形しにくい物質である ．これにより電30）気抵抗率が高くなり表 1 の電気的物性も分化とともに低下したと考察した．一方の心筋細胞は，筋組織に分類され，組織の中でも特異的な興奮性組織にあたる．興奮性組織は
細胞自身の能動的な収縮と電気信号の受動的な伝達という性質を併せ持っている．この特徴から心筋細胞の電気的物性は高い値を示したと考察した．また，今回の解析結果は
文献値と 10～15％ 程度の誤差を有したが，これは実験による偏差も含めれば無視できる範囲であると考察した．
表 1 Single-Shell model 解析（ a ）骨芽分化（ b ）心筋分化
Table1 Single-Shell model analysis.
（ a ）Differentiated osteoblast（ b ）Differentiated cardiomyocyte（a）Differentiationdays［ day ］

Cytoplasm
relative
permittivity［-］

Cytoplasm
Electric
conductivity［ S/m ］

Cell
Membrane
capacitance2［ F/m ］

0 day

94.8

5.59 × 10-2

6.52 × 10

5 days97.0

1.11 × 10-12.30 × 10

9 days

76.6

1.98 × 10

6.88 × 10

13 days

70.0

1.35 × 10

6.04 × 10

17 days

67.6

1.40 × 10

3.10 × 10

19 days

52.6

1.37 × 10

3.95 × 10

Cytoplasm
relative
permittivity［-］

Cytoplasm
electric
conductivity［ S/m ］

Cell
membrane
capacitance2［ F/m ］

94.8

-2

5.59 × 10

6.52 × 10

97.0

-1

1.11 × 10

2.30 × 10

300.1

1.15 × 10

1.66 × 10

311.2

1.03 × 10

321.1

8.18 × 10

-3
-3
-3
-3

-4
-3
-4
-4
-4
-4

（b）
Differentiationdays［ day ］
0 day
5 days8 days12 days
17 days

-2
-2
-3

-4

図 5 分化による各パラメータの変化（ a ）細胞質比誘電率 （ b ）細胞質電気伝導度（ c ）細胞膜キャパシタンス
Fig.5 Change of each parameter by differentiation.
（ a ）Cytoplasm relative permittivity（ b ）Cytoplasm electric conductivity（ c ）Cell membrane capacitance

表 2 各パラメータの文献値
Table2 Literature value of each parameter.

1.53 × 10

Cytoplasm
relative
permittivity［-］

Cytoplasm
electric
conductivity［ S/m ］

Cell
membrane
capacitance2［ F/m ］

1.34 × 10

44.9～270

2.3 × 10 ～4.7

3.8 × 10 ～1.2 × 10

-3
-3
-3
-3

-3

-4

-2

静電気学会誌 第42巻 第 1 号（2018）

14

5．結言
誘電泳動現象の 1 つである誘電回転法を用いた分化過
程での Im［ K（ω ）］を測定した結果，以下の結論を得た．
（1）分化過程に伴って分化細胞の Im［ K
（ω ）
］の変化を
明らかにした．
（2）Im［ K（ω ）］の違いから未分化細胞と骨芽細胞，心筋細胞の同定が可能であることが示唆された．
（3）Single-shell model 解析から分化過程における細胞の細胞質比誘電率，細胞質電気伝導度，細胞膜キャパ
シタンスを明らかにした．
参考文献
1） M. J. Evans and M. H. Kaufman :Establishment in culture ofpluripotential cells from mouse embryos. Nature, 202（1981）
1542） G. R. Martin: Isolation of a pluripotent cell line fromearlymouse embryos cultured in medium conditioned byteretocarcinoma stem cell, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 78（1981）7634
3） K. Takahashi : Induction of pluripotent stem cells from adulthuman fibroblast by defined factors. Cell, 131（2007）861
4） 静電気学会：静電気ハンドブック, p.841, オーム社（1988）
5） R. G. Daniel and M.W. Westbrook, J. M. Albert: Label-freecell separation and sorting in microfluidic systems. Anal
Bioanal Chem, 397（2010）3249
6） M. L. Caroline and M. Yunan, G. L. Robert: Partial Purificationof a Megadalton DNA Replication Complex by Free Flow
Electrophoresis. PLOS ONE, 11（2016）1
7） L. Nuttawut and Y. Chun: Continuous separation of multiple
particles by negative and positive dielectrophoresis in a
modified H-filter. Electrophoresis, 35（2014）714
8） D. Yagmur and K. Aziz, E. Murat: Label-free detection ofmultidrug resistance in K562 cells through isolated 3Delectrode dielectrophoresis. Electrophoresis, 36（2015）1149
9） S. García and R. Yukun, J. Juan, M. Hywel, R. Antonio:
Alternating current electrokinetic properties of gold-coatedmicrospheres. American Chemical Society, 28（2012）13861
10）N. Tsukada, K. Kudoh, M. Budiman: Development Auto
Nuclear Transplantation System. Mammalian ova research, 18（2001）106
11） 白樫 了，ウラジミール スコルコフ：Electrorotation による魚卵の電気特性の測定．生産研究，65（2013）343
12）C. Trainito and E. Bayart, F. Subra, O. Franc: The
Electrorotation as a Tool to Monitor the Dielectric Propertiesof Spheroid During the Permeabilization. J Membrane Biol,
249（2016）593
13）R. Yukun and W. Hongchi, F. Guojing, H. Likai, J. Hongyuan:
Effects of Chip Geometries on Dielectrophoresis andElectrorotation Investigation. Chinese jornal of mechanicalengineering, 27（2014）103
14）L. Huang and L. Tu, X. Zeng, L. Mi, X. Li, W. Wang: Study ofa Microfluidic Chip Integrating Single Cell Trap and 3D Stable

Rotation Manipulation. Micromachines, 7（2016）1
15）桜庭一樹，古澤尚也，脇坂嘉一，箱田 優：誘電回転法
による動物細胞の識別と活性評価．静電気学会誌，41［1］（2017）57
16）T. B Jones: Electromechanics of particles, p.42, Cambridge
University Press（1995）
17）D. Christopher: AC electrokinetic characterisation andseparation of cells with high and low embryogenic potential insuspension cultures of carrot（ Daucus carota ）Plant Cell.
Tissue and Organ Culture 75（2003）261
18）Ying Huang: Membrane dielectric responses of human
T-lymphocytes following mitogenic stimulation. Biochimi
Biophysica Acta, 1417（1999）51
19）K. Takasiro and M. Inamura, K. Kawabata, F. Sakurai, K.
Yamanishi, T. Hayakawa, H. Mizuguchi: Efficient adipocyte
and osteoblast differentiation from mouse induced pluripotent
stem cells by adenoviral transduction. Stem Cells, 27（2009）
180220）K. Kanke and H. Masaki, T. Saito, Y. Komiyama, H. Hojo, H.
Nakauchi, C. L. Alexander, T. Takato, U. Chung, S. Ohba:
Stepwise differentiation of pluripotent stem cells into
osteoblasts using four small molecules under serum-free andfeeder-free conditions. Stem Cell Reports, 2（2014）751
21）I. Minami and K.Yamada, T. Otsuji, T. Yamamoto, Y. Shen, S.
Otsuya, S. Kadota, N. Morone, M. Barve, Y. Asai, T. T.
Heuser, J.E. Heuser, M. Uesugi, K. Aiba, N. Nakatsuji: A small
molecule that promotes cardiac differentiation of humanpluripotent stem cells under defined, cytokine- and xeno-free
conditions. Cell Reports, 2（2012）1448
22）A. Docosilis and N. Kalogerakis, L.A. Behie, K.V. Kaler: A
Novel Dielectrophoresis-Based Device for Selective Retentionof Viable cells in Cell Cuiture Media. Biotechnol Bioeng, 54（1997）239
23）K.V. Kaler and T.B. Jones: Dielectrophoretic spectra of single
cells determined by feedback-controlled levitation. Biophys. J. ,57（1990）173
24）J. Yang and Y. Huang, X. Wang, X. Wang, F. Becker, P.
Gascoyne: Dielectric Properties of Human Leukocyte
Subpopulations Determined by Electrorotation as a Cell
Separation Criterion. Biophysical Journal, 76（1999）3307
25）C. I. Trainito and E. Bayart, F. Subra, O. Francais, B. Le
Pioufle: The Electrorotation as a Tool to Monitor the Dielectric
Properties of Spheroid During the Permeabilization. Membrane
Biol, 249（2016）593
26）A. Docoslis and N. Kalogerakis, L. A. Behie, S. Kaler:A Novel
Dielectrophoresis-Based Device for the Selective Retention of
Viable Cells in Cell Culture Media. Biotechnology andbioengineering, 54（1997）239
27）T. Zhou and Y. Ming, S. F. Perry: Estimation of the physicalproperties of neurons and glial cells using dielectrophoresis
crossover frequency. Biological Physics, 42（2016）571
28）廣田祐輔：誘電泳動現象を用いた細胞活性評価法および細胞分離法の開発，p.33, 群馬大学博士論文（2010）29）嶋津秀昭：医用工学概論，p.111，医歯薬出版株式会社（2005）