別紙

飼料中のダイオキシン類の定量法暫定ガイドライン（平成１６年１１月２４日付け１６消安第５２９９号農林水産省消費・安全局衛生管理課長通知）新旧対照表
改

正

後

改

目次
第一章

目次

概論･･････････････････････････････････････････････････････････････････････

1

はじめに･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････

1

1.

分析対象 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

1

2.

用語・略語の定義 ･････････････････････････････････････････････････････････････

1

3.

目標定量下限値 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

2

4.

分析方法 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

3

4.1

概要 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････

3

4.2

分析方法の要件 ･････････････････････････････････････････････････････････････

3

第二章

各論･･････････････････････････････････････････････････････････････････････

5

第1節

試料採取･･････････････････････････････････････････････････････････････････

51.

試料採取（サンプリング） ･････････････････････････････････････････････････････

5

2.

試料の処理 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････

5

3.

分析に使用する試料量 ･････････････････････････････････････････････････････････

5

第2節

分析方法･･････････････････････････････････････････････････････････････････

6

1.

試薬及び標準物質 ･････････････････････････････････････････････････････････････

6

2.

器具及び装置 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

8

前処理用器具 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

8

ガスクロマトグラフ質量分析装置（ GC/MS）･･･････････････････････････････････

9

試料の前処理 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

9

2.1
2.2
3.

抽出及び分解 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

10

3.1.1

ソックスレー抽出････････････････････････････････････････････････････････

10

3.1.2

アルカリ分解／ヘキサン抽出･･････････････････････････････････････････････

11

3.1

正

〔同

左〕

前

改

後

改

高速溶媒抽出････････････････････････････････････････････････････････････

11

精製及び分画 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

12

3.1.3
3.2

正

3.2

正

前

精製及び分画 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

11

3.2.1

硫酸処理 ････････････････････････････････････････････････････････････････

12

3.2.1

硫酸処理････････････････････････････････････････････････････････････････

12

3.2.2

多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー ･･････････････････････････････････

12

3.2.2

多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー ･･････････････････････････････････

12

3.2.3 活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィー････････････････････････････････

13

3.2.3 活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィー ････････････････････････････････

12

3.2.4

シリカゲルカラムクロマトグラフィー ･･････････････････････････････････････

13

3.2.4

シリカゲルカラムクロマトグラフィー ･･････････････････････････････････････

12

3.2.5

硝酸銀シリカゲルカラムクロマトグラフィー････････････････････････････････

13

3.2.5

硝酸銀シリカゲルカラムクロマトグラフィー ････････････････････････････････

13

3.2.6

DMSO 抽出／ヘキサン逆抽出 ･････････････････････････････････････････････

13

3.2.6

DMSO 抽出／ヘキサン逆抽出 ･････････････････････････････････････････････

13

3.2.7

アルミナカラムクロマトグラフィー ････････････････････････････････････････

14

3.2.7

アルミナカラムクロマトグラフィー ････････････････････････････････････････

13

3.2.8

活性炭カラム高速液体クロマトグラフィー（ HPLC） ････････････････････････

14

3.2.8

活性炭カラム高速液体クロマトグラフィー（ HPLC） ････････････････････････

13

3.2.9

活性炭シリカゲルカートリッジカラムクロマトグラフィー････････････････････

14

3.2.9

活性炭シリカゲルカートリッジカラムクロマトグラフィー ････････････････････

14

3.3
4.

試料溶液の調製とシリンジスパイク用内標準物質の添加 ･････････････････････････

15

3.3

同定及び定量 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

15

4.
4.1

GC/MS の分析条件の設定 ････････････････････････････････････････････････････

15

4.1.1

ガスクロマトグラフ（ GC）の操作条件 ･････････････････････････････････････

15

4.1.2

4.1

質量分析計（ MS）の操作条件 ･････････････････････････････････････････････

17

GC/MS の調整 ･･････････････････････････････････････････････････････････････

19

4.2.1

ガスクロマトグラフ（ GC）の調整 ･････････････････････････････････････････

19

4.2.2

質量分析計（ MS）の調整･････････････････････････････････････････････････

19

4.2.3

4.2

試料溶液の調製とシリンジスパイク用内標準物質の添加 ･････････････････････････

14

同定及び定量 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

14

GC/MS の分析条件の設定 ････････････････････････････････････････････････････

14

4.1.1

ガスクロマトグラフ（ GC）の操作条件･････････････････････････････････････

14

4.1.2

質量分析計（ MS）の操作条件 ･････････････････････････････････････････････

16

GC/MS の調整 ･･････････････････････････････････････････････････････････････

18

4.2.1

ガスクロマトグラフ（ GC）の調整 ･････････････････････････････････････････

18

4.2.2

質量分析計（ MS）の調整 ･････････････････････････････････････････････････

18

4.2.3

4.2

GC/MS の感度確認 ･･･････････････････････････････････････････････････････

19

GC/MS の感度確認･･･････････････････････････････････････････････････････

18

4.3

検量線の作成（RRF と RRFSS の算出） ･････････････････････････････････････････

19

4.3

検量線の作成（RRF と RRFSS の算出） ･････････････････････････････････････････

19

4.4

試料の分析 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

21

4.4

試料の分析 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

20

4.4.1

検量線の確認 ････････････････････････････････････････････････････････････

21

4.4.1

検量線の確認 ････････････････････････････････････････････････････････････

20

4.4.2

試料の同定と定量････････････････････････････････････････････････････････

21

4.4.2

試料の同定と定量････････････････････････････････････････････････････････

20

4.4.3

回収率の算出 ････････････････････････････････････････････････････････････

22

4.4.3

回収率の算出 ････････････････････････････････････････････････････････････

21

数値の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････････････････

225.

数値の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････････････････

21

濃度の表示 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

22

5.1

濃度の算出･･････････････････････････････････････････････････････････････

22

5.
5.1

5.1.1

濃度の表示 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

21

濃度の算出 ･･････････････････････････････････････････････････････････････

21

5.1.1

改

正

後

改

毒性当量への換算････････････････････････････････････････････････････････

23

表示方法 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

246.

測定データの品質管理 ･････････････････････････････････････････････････････

27

第3節

1.

標準作業手順（ SOP）の作成 ･･･････････････････････････････････････････････････

28

2.

分析法バリデーション ･････････････････････････････････････････････････････････

28

2.1

クリーンアップ操作の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････

28

2.2

回収率の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

28

2.3

ブランク値の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

2.4

標準試料の分析による真度の確認 ･････････････････････････････････････････････

2.5

5.1.2
6.

第3節

前

毒性当量への換算 ･････････････････････････････････････････････････････････

22

表示方法･･････････････････････････････････････････････････････････････････ ･･･

23

5.1.2

測定データの品質管理 ･････････････････････････････････････････････････････

26

1.

標準作業手順（ SOP）の作成 ･･･････････････････････････････････････････････････

27

2.

分析法バリデーション ･････････････････････････････････････････････････････････

27

2.1

クリーンアップ操作の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････

27

2.2

回収率の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

27

28

2.3

ブランク値の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

27

28

2.4

標準試料の分析による真度の確認 ･････････････････････････････････････････････

27

定量下限値の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

28

2.5

定量下限値の評価 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

27

分析時の信頼性の確認 ･････････････････････････････････････････････････････････

28

3.

分析時の信頼性の確認 ･････････････････････････････････････････････････････････

27

装置の信頼性 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

28

3.1

装置の信頼性 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････

27

3.1.1

装置感度の確認 ･･････････････････････････････････････････････････････････

28

3.1.1

装置感度の確認 ･･････････････････････････････････････････････････････････

27

3.1.2

検量線（ RRF）の確認 ････････････････････････････････････････････････････

29

3.1.2

検量線（ RRF）の確認 ･････････････････････････････････････････････････････

28

3.1.3

3.
3.1

注入量の確認 ････････････････････････････････････････････････････････････

29

3.1.3

測定値の信頼性 ･････････････････････････････････････････････････････････････

29

3.2

3.2.1

ブランク値の評価････････････････････････････････････････････････････････

29

3.2.2

回収率の評価 ････････････････････････････････････････････････････････････

29

3.2.3

3.2

4.
4.1

注入量の確認･････････････････････････････････････････････････････････････

28

測定値の信頼性 ･････････････････････････････････････････････････････････････

28

3.2.1

ブランク値の評価 ･････････････････････････････････････････････････････････

28

3.2.2

回収率の評価･････････････････････････････････････････････････････････････

28

3.2.3

定量下限値の評価････････････････････････････････････････････････････････

29

データの管理及び評価 ･････････････････････････････････････････････････････････

29

4.

異常値、欠測値の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････

29

4.1

分析の信頼性に関する記録 ･･･････････････････････････････････････････････････

30

4.2

内部精度管理 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

30

5.

5.1

ブランク値の測定 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

30

5.2

二重測定 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････

30

4.2
5.

5.3
6.

正

定量下限値の評価 ･････････････････････････････････････････････････････････

28

データの管理及び評価 ･････････････････････････････････････････････････････････

28

異常値、欠測値の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････

28

分析の信頼性に関する記録 ･･･････････････････････････････････････････････････

29

内部精度管理 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

29

5.1

ブランク値の測定 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

29

5.2

二重測定 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････

29

品質管理チェック試料の測定 ･････････････････････････････････････････････････

30

5.3

外部精度管理 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

30

6.

品質管理チェック試料の測定 ･････････････････････････････････････････････････

29

外部精度管理 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

29

改

第4節

正

後

改

安全管理･･････････････････････････････････････････････････････････････････

31

第4節

1.

施設 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････

31

2.

実験室等の立入規制 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

31

3.

換気システム ･････････････････････････････････････････････････････････････････

4.

その他の設備 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

5.
6.

正

前

安全管理 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････

30

1.

施設 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････

30

2.

実験室等の立入規制 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

30

31

3.

換気システム ･････････････････････････････････････････････････････････････････

30

31

4.

その他の設備 ･････････････････････････････････････････････････････････････････

30

実験室内での業務 ･････････････････････････････････････････････････････････････

32

5.

実験室内での業務 ･････････････････････････････････････････････････････････････

31

標準物質の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････････････

32

6.

標準物質の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････････････

31

7.

試料の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････････････････

32

7.

試料の取扱い ･････････････････････････････････････････････････････････････････

31

8.

実験中の事故の処置 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

32

8.

実験中の事故の処置 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

31

9.

廃棄物の保管処分等 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

32

9.

廃棄物の保管処分等 ･･･････････････････････････････････････････････････････････

31

10.

作業記録 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

33

10.

作業記録 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

32

11.

健康診断 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

33

11.

健康診断 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････

32

改

第一章

概論

後

改

〔略〕

第二章

各論

第1節

試料採取

第2節
1.～ 2.

3.

正

第一章

概論

各論

第1節

試料採取

分析方法

第2節

分析方法

〔略〕

1.～ 2.

〔略〕

試料の前処理3.

飼料中のダイオキシン類の定量の前処理において、ダイオキシン類の抽出法は試料の種類により 2 通りの方法に大別される（図 2）。

前

〔略〕

第二章
〔略〕

正

〔略〕

試料の前処理
飼料中のダイオキシン類の定量の前処理において、ダイオキシン類の抽出法は試料の種類により 2 通りの方法に大別される（図 2）。

畜産動物用配合飼料、乾牧草、植物質性原料等、脂質含有量が比較的少ない試料については、

畜産動物用配合飼料、乾牧草、植物質性原料等、脂質含有量が比較的少ない試料については、

ソックスレー抽出又は高速溶媒抽出によりダイオキシン類を抽出し、硫酸処理により有機物を分ソックスレー抽出によりダイオキシン類を抽出し、硫酸処理により有機物を分解する（3.1.1

解する（ 3.1.1

ックスレー抽出、3.2.1

ソックスレー抽出、3.1.3

高速溶媒抽出、3.2.1

硫酸処理）。

養殖水産動物用配合飼料、動物質性原料、油脂類等はアルカリ分解により脂質を分解した後、ヘキサンによりダイオキシン類を抽出する（ 3.1.2

アルカリ分解／ヘキサン抽出）。

抽出及び分解処理した試料溶液を、多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（3.2.2）によりソ

硫酸処理）。

養殖水産動物用配合飼料、動物質性原料、油脂類等 はアルカリ分解により脂質を分解した後、ヘキサンによりダイオキシン類を抽出する（ 3.1.2

アルカリ分解／ヘキサン抽出）。

抽出及び分解処理した試料溶液を、多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（3.2.2）により精製し、更に活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ 3.2.3）により精製及び分画した後、精製し、更に活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ 3.2.3）により精製及び分画した後、試料溶液を濃縮（ 3.3）し GC/MS 測定に供する（図 2）。

試料溶液を濃縮（ 3.3）し GC/MS 測定に供する（図 2）。

本ガイドラインに示す前処理では抽出又は精製が不十分である場合には、適宜抽出法を検討す
るか、必要な精製工程を追加することで対応する。

本ガイドラインに示す前処理では抽出又は精製が不十分である場合には、適宜抽出法を検討す
るか、必要な精製工程を追加することで対応する。

畜産動物用配合飼料、養殖水産動物用配合飼料

畜産動物用配合飼料、養殖水産動物用配合飼料

乾牧草、植物質性原料

動物質性原料、油脂類

乾牧草、植物質性原料

動物質性原料、油脂類

試料秤量

試料秤量

試料秤量

CS 添加

試料秤量
CS 添加

改

正

後

ソックスレー抽出又は改
アルカリ分解正

前ソックスレー抽出

アルカリ分解高速溶媒抽出
CS 添加
硫酸処理

CS 添加
ヘキサン抽出硫酸処理

多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー

多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー

活性炭シリカゲル（カートリッジ）クロマトグラフィー［分画］

活性炭シリカゲル（カートリッジ）クロマトグラフィー［分画］

SS 添加

SS 添加
GC/MS による測定

図2

3.1

GC/MS による測定

飼料中のダイオキシン類測定のための前処理方法の概略

図2

抽出及び分解3.1

飼料中のダイオキシン類測定のための前処理方法の概略

抽出及び分解

3.1.1

ソックスレー抽出

〔略〕

3.1.1

ソックスレー抽出

3.1.2

アルカリ分解／ヘキサン抽出

3.1.2

アルカリ分解／ヘキサン抽出3.1.2.1 ～ 3.1.2.2
3.1.2.3〔略〕

3.1.2.1 ～ 3.1.2.2

ヘキサン抽出

3.1.2.3

アルカリ分解液を 1 L の分液漏斗に移す。これにヘキサン洗浄水 100 mL、ヘキサン

〔略〕

〔略〕

ヘキサン抽出

アルカリ分解液を 1 L の分液漏斗に移す。これにヘキサン洗浄水 100 mL、ヘキサン

100 mL を加え振とう抽出する。静置後ヘキサン層を分取し、水層にヘキサン 100 mL を

100 mL を加え振とう抽出する。静置後ヘキサン層を分取し、水層にヘキサン 100 mL を加え同様の操作を更に 2~3 回繰り返す。

加え同様の操作を更に 2~3 回繰り返す。

ヘキサン抽出液を合わせ、2%塩化ナトリウム水溶液 150 mL を加えて回転するように
緩やかに揺り動かし、静置後水層を取り除き、同様の操作を更に 2~3 回繰り返す
ヘキサン層を硫酸ナトリウム（無水）で脱水する。
3.1.3

ヘキサン抽出高速溶媒抽出

3.1.3.1

注21

高速溶媒抽出注20。

ヘキサン抽出液を合わせ、 2%塩化ナトリウム溶液 150 mL を加えて回転するように緩やかに揺り動かし、静置後水層を取り除き、同様の操作を更に 2~3 回繰り返す注20。
ヘキサン層を硫酸ナトリウム（無水）で脱水する。

改

正

後

改

正

前

試料 注14 50 g を抽出容器注22 に入れ、高速溶媒抽出装置注23 に装着し、抽出を行う。試料容量が大きくなる場合には、抽出容器 注24 数本に試料を分割して抽出を行う。
抽出条件

例

抽出溶媒：ヘキサン－アセトン（1+1）
温度： 100 ℃
加熱時間：5 分
圧力：10.3 MPa 注25
保持時間：5 分
保持回数 注26： 3
溶媒置換総量 注27：抽出容器の 60%
窒素ガスパージ時間： 120~150 秒
3.1.3.2

クリーンアップスパイク用内標準物質の添加

3.1.1.2 と同様にクリーンアップスパイク用内標準物質を抽出液に添加する注28。この抽出液を 1 L の分液漏斗に移す。試料を分割していた場合は複数の抽出液を先の分液漏斗に合わせる。捕集ビンを少量のヘキサンで数回洗浄し、洗液を先の分液漏斗に合わせる。分液
漏斗のヘキサン量が 200 mL 程度となるようにヘキサンを加え、更にアセトン量が 150 mL程度となるようにアセトンを加える 注29。 2%塩化ナトリウム水溶液 150 mL を加えて振り混ぜ注29、静置後水層を取り除く。更に、 2%塩化ナトリウム水溶液 150 mL を加えて回転する
ように緩やかに揺り動かし 注30、静置後水層を取り除く。
3.2

精製及び分画注31
〔略〕

3.2.1

硫酸処理

3.2

精製及び分画注21
〔略〕

3.2.1

硫酸処理

試料溶液の入っている分液漏斗に濃硫酸を適量加え、穏やかに振とうし、静置後、硫酸層試料溶液の入っている分液漏斗に濃硫酸を適量加え、穏やかに振とうし、静置後、硫酸層を除去する。この操作を硫酸層がほとんど着色しなくなるまで繰り返す注32。ヘキサン層をヘを除去する。この操作を硫酸層がほとんど着色しなくなるまで繰り返す注32。ヘキサン層をヘ

キサン洗浄水 50~100 mL で 3~5 回洗浄し、硫酸ナトリウム（無水）で脱水する。
3.2.2

多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー

キサン洗浄水 50~100 mL で 3~5 回洗浄し、硫酸ナトリウム（無水）で脱水する。
3.2.2

多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー

内径 15 mm、長さ 300 mm のカラム管に、シリカゲル 0.9 g、 2%水酸化カリウムシリカ

内径 15 mm、長さ 300 mm のカラム管に、シリカゲル 0.9 g、 2%水酸化カリウムシリカ

ゲル 3.0 g、シリカゲル 0.9 g、44%硫酸シリカゲル 4.5 g、 22%硫酸シリカゲル 6.0 g、シリ

ゲル 3.0 g、シリカゲル 0.9 g、 44%硫酸シリカゲル 4.5 g、 22%硫酸シリカゲル 6.0 g、シリ

改

正

後

改

カゲル 0.9 g、10%硝酸銀シリカゲル 3.0 g、シリカゲル 2.0 g 注33 及び硫酸ナトリウム（ 無水）
6.0 g を順次乾式充てんする

注34

正

前

カゲル 0.9 g、10%硝酸銀シリカゲル 3.0 g、シリカゲル 2.0 g 注23 及び硫酸ナトリウム（ 無水）
6.0 g を順次乾式充てんする 注24。

。

へキサンでカラムを十分洗浄し、液面がカラムの上面に達するまで流下させた後、5 mL

へキサンでカラムを十分洗浄し、液面がカラムの上面に達するまで流下させた後、5 mL程度に減圧濃縮した試料溶液を入れる。少量のヘキサンで数回洗い込み、ヘキサン 150~200程度に減圧濃縮した試料溶液を入れる。少量のヘキサンで数回洗い込み、ヘキサン 150~200

mL を滴下速度約 2.5 mL/min（毎秒 1 滴程度）で流し、ダイオキシン類を溶出させる注35。

mL を滴下速度約 2.5 mL/min（毎秒 1 滴程度）で流し、ダイオキシン類を溶出させる注25。

3.2.3

活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィー

3.2.3

活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィー

〔略〕

〔略〕

0.5 mL 程度に減圧濃縮した試料溶液を入れる。容器をヘキサン 0.5 mL 程度注36で洗浄し、0.5 mL 程度に減圧濃縮した試料溶液を入れる。容器をヘキサン 0.5 mL 程度注26で洗浄し、洗液を活性炭シリカゲルカラムに加える。この操作を更に 1 回繰り返す。15 分間放置した洗液を活性炭シリカゲルカラムに加える。この操作を更に 1 回繰り返す。15 分間放置した

後、ヘキサン 50 mL を滴下速度約 2.5 mL/min（毎秒 1 滴程度）で流し、液面がカラムの上後、ヘキサン 50 mL を滴下速度約 2.5 mL/min（毎秒 1 滴程度）で流し、液面がカラムの上面に達するまで流下し、カラムを洗浄する。

面に達するまで流下し、カラムを洗浄する。

〔略〕
3.2.4

〔略〕

シリカゲルカラムクロマトグラフィー注37

3.2.4

〔略〕
3.2.5

〔略〕

硝酸銀シリカゲルカラムクロマトグラフィー注38

3.2.5

〔略〕
3.2.6

3.2.6

〔略〕

DMSO 抽出／ヘキサン逆抽出注29

3.2.6.1 ～ 3.2.6.2

アルミナカラムクロマトグラフィー注40

3.2.7

〔略〕
3.2.8

硝酸銀シリカゲルカラムクロマトグラフィー注28〔略〕

DMSO 抽出／ヘキサン逆抽出注39

3.2.6.1 ～ 3.2.6.2
3.2.7

シリカゲルカラムクロマトグラフィー注27〔略〕

アルミナカラムクロマトグラフィー注30〔略〕

活性炭カラム高速液体クロマトグラフィー（ HPLC）

3.2.8

活性炭カラム高速液体クロマトグラフィー（ HPLC）を装着し、あらかじめトルエ

HPLC に活性炭カラム（例、内径 4.6 mm、長さ 100 mm）注31 を装着し、あらかじめトルエ

ンでカラムを十分に洗浄した後、十分量のへキサンで置換する。調製した試料溶液を HPLC

ンでカラムを十分に洗浄した後、十分量のへキサンで置換する。調製した試料溶液を HPLC

カラムに注入し、移動相としてヘキサン 8 mL を流す。

カラムに注入し、移動相としてヘキサン 8 mL を流す。

HPLC に活性炭カラム（例、内径 4.6 mm、長さ 100 mm）

注41

〔略〕
3.2.9

〔略〕

活性炭シリカゲルカートリッジカラムクロマトグラフィー
0.5 mL 程度に減圧濃縮した試料溶液を活性炭シリカゲルカートリッジ

をヘキサン 0.5 mL 程度

注36

3.2.9
注6

に入れる。容器で洗浄し、洗液を活性炭シリカゲルカートリッジに加える。この

活性炭シリカゲルカートリッジカラムクロマトグラフィー
0.5 mL 程度に減圧濃縮した試料溶液を活性炭シリカゲルカートリッジ注6 に入れる。容器をヘキサン 0.5 mL 程度注26 で洗浄し、洗液を活性炭シリカゲルカートリッジに加える。この

改

正

後

改

前

操作を更に 1 回繰り返す。 15 分間放置した後、ヘキサン 60 mL を同カートリッジに加え、操作を更に 1 回繰り返す。15 分間放置した後、ヘキサン 60 mL を同カートリッジに加え、液面がカラムの上面に達するまで流下し、カラムを洗浄する。

液面がカラムの上面に達するまで流下し、カラムを洗浄する。

〔略〕
3.3

正

〔略〕

試料溶液の調製とシリンジスパイク用内標準物質の添加

3.3

試料溶液の調製とシリンジスパイク用内標準物質の添加

ダイオキシン類の精製及び分画後に、ダイオキシン類が溶出する各画分を約 1 mL に減圧濃ダイオキシン類の精製及び分画後に、ダイオキシン類が溶出する各画分を約 1 mL に減圧濃縮する。濃縮液をクデルナ・ダニッシュ（ KD）濃縮器に移し、容器をヘキサン 1~2 mL で数縮する。濃縮液をクデルナ・ダニッシュ（KD）濃縮器に移し、容器をヘキサン 1~2 mL で数回洗浄し、洗液を KD 濃縮器に合わせた後、窒素気流下で約 0.1 mL 以下まで濃縮する注42。

回洗浄し、洗液を KD 濃縮器に合わせた後、窒素気流下で約 0.1 mL 以下まで濃縮する注32。

次いで、シリンジスパイク用内標準物質をクリーンアップスパイク用内標準物質と同程度の次いで、シリンジスパイク用内標準物質をクリーンアップスパイク用内標準物質と同程度の濃度になるように加え、少量のヘキサンで KD 濃縮器の壁を洗い、更に窒素気流下で極少量の濃度になるように加え、少量のヘキサンで KD 濃縮器の壁を洗い、更に窒素気流下で極少量の溶媒が残る程度まで濃縮する。次いで、ノナン 0.05~0.1 mL を加え、更に窒素気流下で最終液溶媒が残る程度まで濃縮する。次いで、ノナン 0.05~0.1 mL を加え、更に窒素気流下で最終液量まで濃縮注42,43し、 GC/MS 試料溶液とする注44。

量まで濃縮注32,33し、GC/MS 試料溶液とする注34。

同定及び定量4.

同定及び定量

4.

〔略〕
4.1

〔略〕

GC/MS の分析条件の設定

4.1.1
4.1.2

〔略〕

4.1

GC/MS の分析条件の設定

4.1.1

質量分析計（ MS）の操作条件

4.1.2

質量校正用標準物質（ PFK）を用いたロックマス方式による選択イオンモニタリング（ SIM）

質量校正用標準物質（ PFK）を用いたロックマス方式による選択イオンモニタリング（ SIM）

による分析を行うために、分解能、電子エネルギー、イオン化電流、イオン源温度、モニタによる分析を行うために、分解能、電子エネルギー、イオン化電流、イオン源温度、モニターイオン（分析対象物質は各塩素数につき 2 以上のモニターイオン、内標準物質は 1 以上

ーイオン（分析対象物質は各塩素数につき 2 以上のモニターイオン、内標準物質は 1 以上のモニターイオン及び PFK のモニターイオン）及び SIM の周期注45を設定する。

のモニターイオン及び PFK のモニターイオン）及び SIM の周期注35を設定する。

〔略〕
4.2

〔略〕
質量分析計（ MS）の操作条件〔略〕

GC/MS の調整〔略〕

4.2.1 ～ 4.2.2
4.2.3

4.2

GC/MS の調整
〔略〕

〔略〕

GC/MS の感度確認

4.2.1 ～ 4.2.2
4.2.3

〔略〕

GC/MS の感度確認

各分析対象物質を注入し SN 比（S/N=10）から GC/MS の定量下限量を求める注46。GC/MS

各分析対象物質を注入し SN 比（ S/N=10）から GC/MS の定量下限量を求める注36。 GC/MSの定量下限量から計算した試料における定量下限値が、目標定量下限値を越えないことを確の定量下限量から計算した試料における定量下限値が、目標定量下限値を越えないことを確

改

4.3

正

後

改

正

前

認する（第 3 節 3.2.3 参照）。同様に SN 比（ S/N=3）から GC/MS の検出下限量及び試料に認する（第 3 節 3.2.3 参照）。同様に SN 比（S/N=3）から GC/MS の検出下限量及び試料における検出下限値を求める。

おける検出下限値を求める。

検量線の作成（RRF と RRFSS の算出）

4.3

〔略〕

検量線の作成（RRF と RRFSS の算出）〔略〕

各分析対象物質に対して、 0.1 ng/mL~500 ng/mL の濃度範囲で 5 段階程度の標準溶液を調製

各分析対象物質に対して、 0.1 ng/mL~500 ng/mL の濃度範囲で 5 段階程度の標準溶液を調製する注47。この標準溶液には、定容前に、あらかじめクリーンアップスパイク及びシリンジスパ

する注37。この標準溶液には、定容前に、あらかじめクリーンアップスパイク及びシリンジスパ

イクに用いたものと同じ内標準物質を、ダイオキシン類が 1~20 ng/mL なるように添加しておイクに用いたものと同じ内標準物質を、ダイオキシン類が 1~20 ng/mL なるように添加しておく。標準溶液の 1 $L を GC/MS に注入し、各分析対象物質のクロマトグラムを記録する。各く。標準溶液の 1 $L を GC/MS に注入し、各分析対象物質のクロマトグラムを記録する。各

分析対象物質の 2 つのモニターイオンのピーク面積の強度比を求め、天然存在比（表 2-6）

分析対象物質の 2 つのモニターイオンのピーク面積の強度比を求め、天然存在比（表 2-6）とほぼ一致することを確認する注48。各分析対象物質の対応するクリーンアップスパイク用内標とほぼ一致することを確認する注38。各分析対象物質の対応するクリーンアップスパイク用内標

準物質に対するピーク面積の比と、注入した標準溶液中の各分析対象物質とクリーンアップス

準物質に対するピーク面積の比と、注入した標準溶液中の各分析対象物質とクリーンアップス

パイク用内標準物質の濃度の比を用いて、検量線を作成し、相対感度係数（ RRF）を算出する。

パイク用内標準物質の濃度の比を用いて、検量線を作成し、相対感度係数（ RRF）を算出する。

〔略〕

〔略〕

検量線の作成では、 1 つの濃度に対して、最低 3 回の分析を繰り返して行い、全濃度領域で検量線の作成では、1 つの濃度に対して、最低 3 回の分析を繰り返して行い、全濃度領域では、合計で 15 点以上のデータを得る。その平均値を RRF とする。この時のデータの変動係は、合計で 15 点以上のデータを得る。その平均値を RRF とする。この時のデータの変動係

数は 20%以内でなければならない 注49。

数は 20%以内でなければならない 注39。

〔略〕
4.4

試料の分析

4.4.1
4.4.2

〔略〕
試料の同定と定量

〔略〕
4.4

試料の分析

4.4.1
4.4.2

操作ブランク及び試料溶液の 1~2 $L を GC/MS に注入して分析を行う。4.1.2 で設定した〔略〕
試料の同定と定量操作ブランク及び試料溶液の 1~2 $L を GC/MS に注入して分析を行う。 4.1.2 で設定した各分析対象物質のクロマトグラムを記録する。測定終了後、個々の試料ごとに、2 つのモニ

各分析対象物質のクロマトグラムを記録する。測定終了後、個々の試料ごとに、2 つのモニ

ターイオンのピーク面積の比を計算する注50。個々の試料ごとにロックマスのモニターチャン

ターイオンのピーク面積の比を計算する注40。個々の試料ごとにロックマスのモニターチャン

ネルの確認を行う 注51。各分析対象物質とそれに対応するクリーンアップスパイク用内標準物

ネルの確認を行う注41。各分析対象物質とそれに対応するクリーンアップスパイク用内標準物

質のピーク面積の比を計算し、あらかじめ 4.3 で求めた対応する相対感度係数（ RRF）を用

質のピーク面積の比を計算し、あらかじめ 4.3 で求めた対応する相対感度係数（RRF）を用

いて、次式により試料抽出中の各分析対象物質の量を算出する注48,52。

いて、次式により試料抽出中の各分析対象物質の量を算出する注38,42。

〔略〕
4.4.3

回収率の算出

〔略〕
4.4.3

回収率の算出

改

正

後

改

クリーンアップスパイク用内標準物質のピーク面積とシリンジスパイク用内標準物質のピ

クリーンアップスパイク用内標準物質のピーク面積とシリンジスパイク用内標準物質のピーク面積の比、及び対応する相対感度係数（RRFSS、4.3 参照）を用いて、次式により、回収率を計算し、抽出及びクリーンアップの回収率（ Rc）を確認する注53。

率を計算し、抽出及びクリーンアップの回収率（ Rc）を確認する注43。
〔略〕

数値の取扱い

5.1.1

濃度の表示

5.1

濃度の算出

5.1.1

4.4.2 で得られた結果から、次式を用いて飼料中のダイオキシン類の濃度を算出する
Ck ＝数値の取扱い

5.

濃度の表示

5.1

前

ーク面積の比、及び対応する相対感度係数（ RRFSS、4.3 参照）を用いて、次式により、回収

〔略〕

5.

正

注54

濃度の算出
4.4.2 で得られた結果から、次式を用いて飼料中のダイオキシン類の濃度を算出する注44。

。

Qs,k － QB,k

Ck ＝

W

Qs,k － QB,kW

濃度は原則として 3 けた目を四捨五入し、有効数字 2 けたで表す。ただし、4.2.3 で求めた濃度は原則として 3 けた目を四捨五入し、有効数字 2 けたで表す。

試料における検出下限値の表示けたまでとし、それより下のけたは表示しない。

〔略〕

〔略〕
5.1.2

毒性当量への換算5.1.2

ダイオキシン類の濃度を毒性当量に換算する場合は、 5.1.1 で算出した各分析対象物質のダイオキシン類の濃度を毒性当量に換算する場合は、 5.1.1 で算出した各分析対象物質の濃度（pg/g）に表 2-7 及び表 2-8 に示す毒性等価係数（TEF）を乗じ、その合計を毒性当量濃度（pg/g）に表 2-7 及び表 2-8 に示す毒性等価係数（TEF）を乗じ、その合計を毒性当量（ TEQ： pg-TEQ/g）とする｡個々の異性体の毒性当量については、丸めの操作は行わず、合（TEQ：pg-TEQ/g）とする｡個々の異性体の毒性当量については、丸めの操作は行わず、合計値の 3 けた目を四捨五入し、有効数字 2 けたで表す。なお、実測濃度が定量下限値未満

計値の 3 けた目を四捨五入し、有効数字 2 けたで表す。なお、実測濃度が定量下限値未満

又は検出下限値未満の場合には表 2-9 に示すいずれかの算定法により換算し、いずれの算又は検出下限値未満の場合には表 2-9 に示すいずれかの算定法により換算し、いずれの算定法を使用したのかを明記する注55｡

定法を使用したのかを明記する 注45｡

〔略〕

6.

〔略〕

第3節

測定データの品質管理

〔略〕

6.

〔略〕

〔略〕

第3節

〔略〕
1.

毒性当量への換算

測定データの品質管理

〔略〕
1.

〔略〕

改

正

後

分析法バリデーション

2.

改

〔略〕

2.1 ～ 2.2〔略〕

2.1 ～ 2.2

ブランク値の評価注56

2.3

〔略〕

〔略〕

〔略〕

2.4

定量下限値の評価

2.5〔略〕

ブランク値の評価注46

2.3

〔略〕
2.4

定量下限値の評価

2.5

2.3 でブランク値が認められる化合物においては、ブランク値の標準偏差の 10 倍に相当す

2.3 でブランク値が認められる化合物においては、ブランク値の標準偏差の 10 倍に相当する量を求める。また、クロマトグラム上のノイズと標準溶液から求めたピーク高さから、S/N=10る量を求める。また、クロマトグラム上のノイズと標準溶液から求めたピーク高さから、S/N=10に相当する量を求める注46。この 2 つの値の大きい方を定量下限値とする。

に相当する量を求める注36。この 2 つの値の大きい方を定量下限値とする。

〔略〕

3.

〔略〕

4.1

データの管理及び評価

4.

〔略〕

4.1

分析の信頼性に関する記録

4.2

〔略〕

3.

データの管理及び評価

4.

分析の信頼性に関する記録

4.2

以下のデータを記録し、整理・保管しておき、測定データの信頼性管理に関する報告の要請

以下のデータを記録し、整理・保管しておき、測定データの信頼性管理に関する報告の要請があった場合に提出する。

があった場合に提出する。

（ 1）～（ 5）（ 1）～（5）〔略〕（ 6）検量線の RRF、感度、操作ブランク値、回収率、定量下限値。

〔略〕

5.～ 6.

〔略〕

第4節

安全管理

第4節

安全管理

施設

1.

施設

〔略〕

〔略〕

1）実験室

1）実験室

①

①

〔略〕

〔略〕

（ 6）検量線の RRF、感度、操作ブランク値、回収率、検出下限値。

5.～ 6.

1.

前分析法バリデーション

2.

〔略〕

正

〔略〕

改

正

後

改

②実験室は、可能であれば 2~3 のエリアに仕切った方がよい。その場合の各エリアの役割は、

イ）③

下記のとおりである。
注57

〔略〕

〜注〜

2

イ）
③

〔略〕

1

ア）試料の分解、抽出、精製及び濃縮を行うエリア注47。

。

〔略〕

2.～ 11.

粉砕して 0.5 ～ 1 mm の網ふるいを通してよく混合する。この際、外部から及び試料間の

22

〔略〕

粉砕し 0.5 ～ 1 mm のふるいを通過していれば通常必要ない。

19～ 2021〔略〕

高圧液体抽出、高圧流体抽出又は加圧流体抽出とも呼ばれている。
試料採取後、抽出容器に空間がある場合は、ケイソウ土、ガラスビーズを加えてもよい。
ケイソウ土としては、ケムチューブ－ハイドロマトリックス（ VARIAN 製）及び ASE Prep D.E.
（ DIONEX 製）がある。

23

高速溶媒抽出装置としては、 ASE-100、ASE-200、ASE-300（ DIONEX 製）がある。

24

33 mL の抽出容器にはおおよそ 10 g の乾牧草又はおおよそ 20 g の穀物を入れることができる。また、 99 mL の抽出容器にはおおよそ 30 g の乾牧草又はおおよそ 60 g の穀物を入れることができる。

25

1,500 psi

26

サイクル数

27

〔略〕

〜注〜
〔略〕

3～ 17

〔略〕

〔略〕

2.～ 11.

12ダイオキシン類の混入がないようにすること。

18

前②実験室は、可能であれば 2~3 のエリアに仕切った方がよい。その場合の各エリアの役割は、下記のとおりである。
ア）試料の分解、抽出、精製及び濃縮を行うエリア

正保持回数によって、分割して注入される。例えば、「保持回数： 3」及び「溶媒置換総量：抽出容器の 60%」の場合、高速溶媒抽出装置の動作は、次のとおりである。

〔略〕
粉砕して 1 mm の網ふるいを通してよく混合する。この際、外部から及び試料間のダイ
オキシン類の混入がないようにすること。

3～ 17
18

〔略〕

粉砕し 1 mm のふるいを通過していれば通常必要ない。

19～ 20

〔略〕

改

正

後

改

最初に、抽出容器内の圧力が 10.3MPa になるまで抽出溶媒を注入し、抽出容器内を昇温するために 5 分間加熱する。次に、5 分間保持し、抽出容器の 20%の容量の抽出溶媒を同容器に注入し、流出した抽出液を捕集ビンに捕集し、更に、5 分間保持及び 20%容量の溶媒注入の動作を 2 回繰り返す。 3 回目の抽出溶媒注入後直ちに窒素ガスをパージし、流出した抽出液を捕集ビンに捕集する。
28

試料を分割していた場合はいずれか 1 つの抽出液にクリーンアップスパイク用内標準物質を添加してもよい。

29

溶媒容量割合が大幅に異なるとエマルジョンが発生しやすくなる。

30

振り混ぜるとエマルジョンが発生する。

31～ 57〔略〕

21～ 47〔略〕

正前