〔生物工学会誌第 91 巻

第 2 号 73–79．2013〕2012 年度 技術賞 受賞

新規液体麹の開発と発酵飲食品への展開
小路博志 1*・杉本利和 2・舛田晋 1・上野貴生 3

Development of a novel submerged culture of koji moldand its application
Hiroshi Shoji1*, Toshikazu Sugimoto2, Susumu Masuda1, and Takao Ueno3 (1Research &Development Laboratories for Brewing, Asahi Breweries, Ltd., 1-21 Midori, 1-chome, Moriya
302-0106; 2Production Process Developement Department, The Nikka Whisky Distilling Co.
Ltd., 2-1 Dairimotomachi, Moji, Kitakyusyu 800-8585; 3Food Specialty Headquarters,
Seasoning Development Department, Asahi Food & Healthcare Co. Ltd., 1-23-1 Azumabashi,Sumida 130-8602) Seibutsu-kogaku 91: 73–79, 2013.

はじめに

新規液体麹

麹菌は日本の伝統的な醸造産業において古くから用い筆者らが携わる事業に直結することから，まずは焼酎られており，安全な微生物として広く認められている．に応用できる液体麹の開発に取組むこととした．焼酎の麹菌の培養方法には，蒸煮処理後の原料表面に麹菌の分醸造工程では，並行複発酵によりアルコールが生成され生子を接種して培養する方法（固体培養法）と，水に原るため，酵母へのグルコース供給に影響を与える糖質分料およびその他栄養分を添加して液体培地を調製し，殺解関連酵素が非常に重要となる．また，清酒と比較して菌のための加熱・冷却後，麹菌の分生子などを接種し培暖かい地域で製造することが多いため，腐造防止を目的養する方法（液体培養法）がある．それぞれの培養物をとして，低い pH 環境下にて醸造する．そこで，筆者ら固体麹または液体麹と呼ぶ．固体麹は一般的に，装置：は焼酎醸造工程にて非常に重要となる，低 pH 環境下で専用，原料：蒸すことが必要，麹菌：分生子が着生しやも活性を有するグルコアミラーゼ（GA）活性と耐酸性すい株，という制限があるが，醸造に必要な多種類の酵D-アミラーゼ（ASAA）活性を指標に培養法を検討した．

素などを大量生産できる大変すぐれた方法である．一方，さらに，焼酎製造技術として現場利用できるようにと，

液体麹は無菌培養ができることに加え，装置：汎用ジャーさまざまな要望（食品原料を用いる・遺伝子組換え麹菌

ファーメンター，原料：固体・液体何でもかまわず，麹は使用しない・固体麹と同等の培養時間内・回分培養法）

菌：菌糸植菌もできるので低分生子形成株でも可能，他に応えることとした．に培養パラメーターの管理をしやすいという面でも優れ

麹菌

焼酎用白麹菌（Aspergillus kawachii NBRC4308）た点が多い．しかしながら，従来の液体麹は，アミラーは，固体培養にて GA と ASAA を高生産できるので，ゼ，セルラーゼなどの酵素生産挙動が固体培養時と大きまずはこの株を用いて，培地検討を進めた．酵素活性測

く異なり，全般的に生産性が低下することが知られてい定法は別報を参照していただきたい 2)．

た 1)．そのため，醸造産業分野では固体麹を用いる方が培地・培養方法

麹菌を液体培地中で培養する際，一般的であり，液体麹を利用することはきわめて稀で原料由来の糖質が可溶化しやすいため，酵素が少量生産あった．筆者らは液体麹でも多種類の酵素を高生産できされた時点でグルコース濃度が高くなる．環境中にグルることが可能となれば，従来はできなかった商品の開発コースが高濃度で存在すると，糖質分解酵素の生産が抑が可能となるであろうと期待し，新規液体麹の製造法に制されてしまう 3)．ただし，グルコースが必要量存在しついて研究を行った．

ないと，麹菌の生育が遅れ，培養時間が長くなってしまう反面もある．一般的な焼酎原料を用い麹菌の液体培養* 著者紹介 アサヒビール株式会社 E-mail: hiroshi.shoji@asahibeer.co.jp
2 ニッカウヰスキー株式会社，3 アサヒフードアンドヘルスケア株式会社

2013年 第2号

73

図 1．大麦原料の精麦度の違いによるグルコース生成量の比較を試みたが，予想通り高い酵素活性を得ることができなかった．筆者らに有利だったのは，基礎データとして，難分解性糖質を液体麹の炭素源として利用すると，その分解のしにくさから，グルコース濃度が低く維持され，酵素生産性が高まることを見いだしていたことである 4)．
そこで何らかの方法により，麹原料からのデンプン溶出

図 2．精麦度の異なる大麦原料を用いた場合の液体麹に含まれる GA 活性（a）と ASAA 活性（b）比較速度をコントロールできないか考えた．着目したのは穀皮である．通常焼酎原料となる大麦などは，利用しやすいように穀皮を搗精工程で除去してある．しかしながら，養での ASAA の生産については，長時間培養で生産さ穀皮にある程度覆われた原料は，穀皮のない原料より分れた報告しかなく 5)，このような簡便な方法を用いるこ解しにくいのでないかと予想した．ラボ搗精機を用いてとにより，短時間で GA と ASAA 両方の同時高生産を達

精麦度の異なる大麦を調製し，無菌液中で糖質分解酵素と成できたのは，初めてである．次に各種原料を用いて培反応させた場合のグルコース生成量を比較した（図 1）．

養した際のグルコース量の変化を調べた 2)．穀皮を有さ

なお，精麦度 100％は玄麦を示す．精麦度が小さくなるない丸麦，粉砕玄麦，デンプンを用いたサンプルでは培（外側がより削られる状態）に従い，グルコース生成量

養初期に急激にグルコース濃度が上昇し，培養 12 時間が高くなった．すなわち分解しやすくなることが判明しで 0.5％以上となった．一方，穀皮を有する玄麦を用いた．一方，これらの原料を粉砕してしまうと，グルコー（図 3）．
たサンプルは，培養中常に 0.1％以下になっていた

ス生成量に差が認められないことから，穀皮の存在が糖これらの液体麹の GA 活性を比較すると，穀皮を有する質溶出を物理的に抑制するものと考えられた．

玄麦を用いたサンプルでのみ高生産されていることが判

これらの精麦を用いて液体麹を製造した．丸麦（精麦明した．一方，粉砕した玄麦・デンプン・丸麦を用いた

度 65％に相当）8 g と水 100 ml を 500 ml バッフル付三．玄麦でのみ高い場合は同等の GA 活性を示した（図 4）角フラスコに張り込み，121qC，15 分間オートクレーブ

酵素活性が得られたことより，低いグルコース濃度を保滅菌を行った．これに白麹菌分生子を 1 白金耳植菌し，持し続けることで，グルコースリプレッションを回避し37qC，24 時間，100 rpm で振とう培養することにより，た可能性が高いと思われる．

前培養液を得た．次に，各精麦 2 g とミネラル水 100 ml

また，Aspergillus oryzae を用いた場合ではあるが，液を 500 ml バッフル付三角フラスコに張り込み，121qC，体麹製造時のメタボローム解析およびマイクロアレイ解

15 分間オートクレーブ滅菌を行った．これに上記の前培養液を 1 ml 添加した．37qC，48 時間，100 rpm で振析を行った 6)．玄麦を用いた液体麹では，培養後半までとう培養することにより，本培養液を得た．グルコース生成も抑制されていた．一方，原料を粉砕した液体麹で生成量が低い精麦（100％精麦，95％精麦）を用いた液は，硝酸イオンが急激に代謝され，培養中期からアンモ体麹に含まれる GA 活性や ASAA 活性は，当時目標とニウムイオンが急上昇した（図 5）．玄麦を用いた液体麹していたスペックを優に越えていた（図 2）．特に液体培

では，酵素生産におけるアンモニアリプレッションも回74

硝酸イオンが緩やかに代謝され，アンモニウムイオンの

生物工学

第91巻

図 3．液体麹培養中のグルコース濃度

図 5．液体麹培養中の硝酸イオン（A），およびアンモニウムイオン（B）の変遷．実線が玄麦，点線が粉砕玄麦．

表 1．液体麹培地の検討

図 4．炭素源を変更した場合の液体麹に含まれる GA 活性比較避している可能性もあるのでないかと推測している．さ玄麦
（％）

廃酵母
（％）

大麦糠
（％）

2.02.02.0̶

̶2.0

酵素活性（units/ml）

GA
74.992.3

ASAA
9.29.5体を添加した場合も，大麦糠を添加した場合も，ミネラ

らに，玄麦を用いた場合，培養中期〜後期において，窒ルを添加しなくても，GA および ASAA は有為に高生産素代謝関連酵素の遺伝子発現が上昇していた．これらよされた．また，液体麹自体の香気も変わり，天然物を用り，培養期間を通じて窒素代謝が維持されることで，酵いると香気に厚みが出るようであった．

素生産フェーズが長く続き，結果として酵素が高生産と液体麹を用いた焼酎製造なることが考察された．
培地追加検討先の試験では，本培養の培地成分と発酵試験筆者らが開発した麦液体麹と，対照としして，ミネラルを添加した．それらの代わりに，より安て，一般的な麦固体麹を用いた焼酎小仕込み試験を実施

価な天然物由来の素材を用いることができないか検討し．両試験区とも良好に発酵した．
した（表 2 および表 3）

た．発酵終了後の廃酵母または大麦糠を本培養培地に添

また，当時の配合では，両方のもろみに含まれる主要酵加した際の酵素生産性への効果を確認した．なお，使用

素力価バランスがよく似ていたこともあり，発酵もろみした大麦糠は，玄麦の搗精工程から得られる副産物であ．また，の重量減少積算量は近似したものとなった（図 6）り，大麦穀皮および糠を含むものである．表 1 に示すよ

発酵終了もろみのアルコール度数，主要な高級アルコー

うに，水に各原料を添加し，121qC，15 分間オートクレー

ルおよびエステル類の含有量に大差はなかった．

ブ滅菌後，白麹菌の液体培養を行った 7)．得られた液体
麹の GA 活性と ASAA 活性を同様に測定した．酵母菌

2013年 第2号

官能評価および機器分析

官能評価で差が生じない

か，もう少し大きなスケール（発酵もろみ 40 l）にて各75表 2．液体麹を用いた場合の配合表

1次
掛麦（g）
汲水（ml）
液体麹（ml）

301
3215002次

表 4．液体麹焼酎と固体麹焼酎の比較

3次

508
766

508273

̶

̶

1319
1360
500

3次

合計

31310161860

表 3．固体麹を用いた場合の配合表

1次
麹麦（g）
掛麦（g）
汲水（ml）

2次313

̶

̶̶508
766

508
594

500

平均点

合計
硫黄臭
油臭
酸臭
こげ臭
エステル
原料臭
すっきり感

液体麹

固体麹

有意差

0.38
0.81
0.56
0.19
1.44
1.19
2.19

0.44
0.88
0.44
0.31
1.63
1.50
2.06

無無無無無無無表 5．玄麦使用量を変更した液体麹に含まれる酵素活性比較
玄麦使用量（％）

GA

2.0
1.9
1.8
1.7
1.6
1.51.4212224225213205195187

酵素活性（units/ml）
ASAA
セルロース分解活性

12.3
11.4
10.6
10.2
9.5
8.5
7.4

0.07
0.08
0.15
0.20
0.17
0.160.14に寄与しないか検討した．玄麦量を 2.0 〜 1.4％の範囲
図 6．固体麹および液体麹を用いた焼酎もろみの重量減少量比較で調製し，42 時間培養した（表 5）．玄麦使用量を制限して も，GA 活 性 の 大 幅 な 低 下 は 認 め ら れ な か っ た．

ASAA 活性は大麦添加量の多い方が高かったが，極端に低下しなかった．セルロース分解活性は，中間となる臭，こげ臭，エステル，原料香，スッキリ感とした．9

1.7％玄麦使用量の場合が一番高かった．
玄 麦 使 用 量 2.0％，1.7％，1.4％ の 液 体 麹 を 用 い て，ラボスケールで発酵試験を試みた．1.7％の液体麹を用いた場合，発酵速度が一番速かった（図 7）．また，もろ焼酎を製造し，当社酒類専門パネルを用いて，定量的記述分析法による調査を行った．サンプルは減圧蒸留を行い，冷却ろ過した原酒とした．用語は硫黄臭，油臭，酸段階評価を行ったが，有意差が得られた項目はなかった

みアルコール度数は一番高く，もろみ粘度は一番低いと．すなわち，質の面で差は認められない似通った（表 4）．これら 3 つのメリットの中いうことも判明した（表 6）タイプであることが判明した．また，液体麹麦焼酎と固で，もろみアルコール度数はコスト削減に，粘度低下は体麹麦焼酎に含まれる揮発成分量を SPME-GC/MS 解析

減圧蒸留時の突沸抑制に貢献する．培地・培養条件を工した．主要香気成分に有意差は認められなかったが，閾夫することにより，さらなる酵素バランスの向上が図れ値に達しない微量 5 成分に違いが見いだされた．66 試料

るものと期待している．

について 5 成分の分析を行い，定量値を用いた主成分分

筆者らは，新規な液体麹焼酎の製造法と伝統的な固体析により，液体麹・固体麹麦焼酎をグループ化できるこ麹焼酎の製造法およびブレンド技術を組み合わせることとが判明した 8)．

により，新しいタイプの焼酎「本格麦焼酎醸造特性向上

洗浄殺菌・培地調製時間を考慮すると，現場で 2 日に 1 回の出麹を達成するためには，培養時間は 42 時間程度に制限される．GA や ASAA は，培養 12 時間くらいから活性が検出される．一方，セルラーかのか」を上市した．ほどよくふくらみのある飲み口と雑味のないすっきりとした後味が特長となっている．
麹原料多様性について

ゼ系の酵素の中には，培養終期（36 時間程度）から酵先に述べたように，穀皮が存在する玄麦を用いると，素活性が検出されるものがある．玄麦の使用量を減らす

液体麹の酵素の生産性が高まることが判明した．
そこで，ことにより，デンプンが早く消費され，培養後期に生産それ以外の原料でも穀皮を保持した状態の穀類を麹原料される酵素群の生産時間が増大し，結果として安定生産に用いたならば，酵素の生産性が高まる可能性があるの76

生物工学第91巻

表 7．液体麹の麹原料と酵素活性
本培養原料

98％精麦

図 7．玄麦使用量を変更した液体麹を用いた焼酎もろみの重量減少量比較

玄そば
アワ
ヒエ
キビ
コウリャン
トウモロコシ
籾殻付米
玄米
大豆
小豆
さつまいも
アマランサス
キヌア

濃度％（w/v）

GA 活性（units/ml）

ASAA 活性（units/ml）

28888884882
2
22

101.4
112.4
101.3
113.0
90.3
111.2
114.2
140.4
112.7
110.8
138.2
108.6
125.7
126.8

8.0
10.4
11.0
10.2
8.5
10.5
4.2
11.5
15.6
11.3
12.9
5.5
11.0
10.6

表 6．玄麦使用量を変更した液体麹を用いた焼酎もろみ比較

玄麦 2.0％液体麹
玄麦 1.7％液体麹
玄麦 1.4％液体麹

アルコール度数（％）

粘度（CP）

18.0
19.2
18.6

1946569

でないかと予想した．各種穀類にて実験を行ってみたと
ころ 9)，多くの未加工の穀類を用いた液体培養により，GA および ASAA を高生産することができた（表 7）．驚いたことに，大麦より両酵素活性を高くする穀類もかなり存在した．
穀類により好適な原料濃度が異なったのは，デンプンなどの含有量や原料の壊れにくさが関与しているものと思われる．これら液体培養物は用いる穀類により，液体麹自体の香気が異なることも判明した．また，通常の固体麹と同様に焼酎もろみの発酵に用いることが可能であった．また，できあがった焼酎の品質は，麹原料由来の風味が表れることが判明した．また，2 つの酵
素活性以外の酵素バランスが異なる可能性もあり，目的に応じて原料を選択すれば，従来とは一線を画した商品ができる可能性があると予想された．
黒麹菌を用いた液体麹について

図 8．精麦度の異なる大麦および粉砕玄麦を用いた場合の黒麹
菌液体麹に含まれる GA 活性（a）と ASAA 活性（b）比較

黒麹菌は，古くから泡盛の製造に使用されている．また，明治以降，九州の焼酎製造にも使われ始めた 10)．白麹菌で成功したことから，黒麹菌（Aspergillus awamori

白麹菌と同様に，精麦度の高い状態の大麦を用いた液体NBRC4388）でもうまく行くのでないかと考え，同様麹が GA および ASAA 共に高生産された．菌株が異なの手法により液体麹の製造を検討した．液体培地としてるせいもあるが，今回作製した黒麹菌の液体麹は，白麹

炭素源 2％，各種ミネラルを添加した．なお炭素源とし菌のものとは香気に差が認められた．また，酵素バランては，各種精麦，および粉砕玄麦を用いた．48 時間培スも異なると予想されることから，目的により使い分け．
養終了後の GA 活性および ASAA 活性を測定した（図 8）ることが可能となろう．

2013年 第2号

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養上清中の GA 活性と AA 活性を測定した（図 9）．GAは 98％精麦試験区のみで顕著に生産され，一方，これを粉砕した原料や穀皮を有さない原料を用いた試験区で）．AA は生産は酵素生産性が著しく抑制された（図 9（a）
挙動が GA とは若干異なるものの，やはり 98％精麦試
験区で多量の酵素を生産した（図 9（b））．このように黄麹菌であっても，98％精麦のような表面が穀皮で覆われた穀類を用いることで，GA や AA といった発酵飲食品の製造に必要な酵素群を同時高生産できることが判明した．
紅麹菌を用いた液体麹について
紅麹菌を用いた固体麹（紅麹）は，古くから中国，台湾などにおいて，紅酒，老酒などの酒類の製造に用いられている．ただし紅麹の生産はきわめて煩雑なため，日本ではあまり普及していない10)．紅麹を用いた液体麹が，各種酵素を生産し，かつ簡便に製造できるのならば，新しい切り口の提案になろうと考え，検討を進めた．白米

8 g と水 100 ml を 500 ml バッフル付三角フラスコに張り込み，121qC，15 分間オートクレーブ滅菌を行って，前培養培地とした．この前培養培地に紅麹菌（Monascus
purpureus NBRC4484）菌糸を 1 白金耳植菌し，37qC，24 時間，100 rpm で振とう培養することにより，前培養液を得た．この培養時間で菌体は十分に増殖していた．本
図 9．各種炭素源を用いた場合の黄麹菌液体麹に含まれる GA活性（a）と AA 活性（b）比較培養の培地は，玄米 4.0％，各種ミネラルとした．液体培
地 3000 ml を調製し，容量 5000 ml のジャーファーメンターに張り込み，121qC，15 分間オートクレーブ滅菌した．この本培養培地へ上記の前培養液を 30 ml 添加した．
その後，温度 37qC，攪拌速度 300 rpm，通気量 0.5 vvm

黄麹菌を用いた液体麹について
黄麹菌を用いた固体麹は，清酒・みりん・甘酒・味噌・醤油・食酢などの製造に用いられる．代表的な黄麹株である A. oryzae においてもまた，その液体培養物におけるにて 48 時間培養を行い，液体麹を得た．GA 活性は 71.7units/ml，AA 活性は 32.0 units/ml であった．これらを用いて焼酎の製造が可能であることも判明している 13)．
液体麹を用いた無蒸煮発酵

GA 活性が著しく低いことが報告されている 11)．筆者ら

原料を蒸煮せずに糖化させると，糖化工程中の粘度上は先に述べた方法により，白麹菌又は黒麹菌を用いた液昇を回避できるため，高濃度仕込みが可能となる．焼酎体培養法による酵素高生産を実現した．そこで，黄麹菌用麹菌を用いて製造した固体麹の GA と ASAA には生でもこの方法を応用し，清酒などの発酵飲食品製造の鍵

デンプン吸着部位が存在するため，生デンプンを糊化せ酵素となる GA および D-アミラーゼ（AA）の活性が高ずに直接分解できることが知られている．今回筆者らがい液体麹を製造できるか検討した．まずは液体麹製造に製造した液体麹を用いても，生デンプンを直接分解できおける酵素生産性に対する炭素源の影響を調べるため，ることが判明した 14)．この特性をさらに強化した液体麹

以下のような方法で液体麹を製造し，酵素活性を測定しを開発し，効率的無蒸煮発酵を検討した．キャッサバはた 12)．液体培地として炭素源 2％，各種ミネラルを添加

デンプン粒子が大きく，かつ複雑な構造を持つため，分した．なお炭素源としては，可溶性デンプン，デキスト解しにくく，無蒸煮発酵の原料として大きなスケールでリン，65％精麦，98％精麦，98％精麦をミルで粉砕処理成功した例はなかった．パイロットプラントを用いて，したものを用いた．このように調製した培地に，黄麹菌

1.6 kl 発酵スケールのキャッサバ無蒸煮発酵を試みた 14)．
雑菌数は 10 の 5 乗オーダー以下をキープし，アルコー
ル度数は 10.3％にまで到達した．発酵歩合は 92.7％と（A. oryzae RIB40）の分生子を植菌し，30qC，72 時間，100 rpm で振とう培養した．培養終了後，それぞれの培78

生物工学第91巻

表 8．液体麹を用いた米および大麦糠無蒸煮発酵試験結果
原料

米粉
大麦糠

発酵条件

デンプン含量（％）

使用量（kg）

もろみ量（l）

固形分（％）

74.4
39.0

8000
8000

30,02519,80026.640.4

結果
アルコール 発酵歩合
（％）
（％）

13.3
12.1

93.5
95.1

による酵素高生産を実現した．
酵素バランスや香りなど，目的に応じて麹菌や培地を選択できるというメリットも得られた．白麹菌および黄麹菌液体麹を用いると，清酒・みりん・甘酒・醤油・みそなどを問題なく製造できることも判明している．今回開発した新規液体培養法は，麹菌の物質生産能力を最大限に引き出すのに適した培養技術であると考えており，麹菌の更なる高度利用に貢献できるのでないかと期待している．
本技術に関する研究開発は，アサヒビール株式会社の皆様をはじめ，関係会社の多くの方々にご支援いただき，実用化にこぎつけることができました．心より御礼申し上げます．

文
図 10．液体麹を用いたキャッサバ無蒸煮発酵経過．A：酵母数（○）および雑菌数（△），B：もろみアルコール度数（●）．
および pH（□）

なり，キャッサバ無蒸煮発酵としては，非常に高い数値を得ることができた（図 10）．さらに実証設備を用いて，30 kl 発酵スケールの米粉，20 kl 発酵スケール大麦糠の無蒸煮発酵を試みた（表 8）．米粉の場合，雑菌数は 10の 2 乗 オ ー ダ ー 付 近 を キ ー プ し， ア ル コ ー ル 度 数 は13.3％にまで到達した．発酵歩合は 93.5％と高かった．
大麦糠の場合，デンプン含量が少ないため，もろみ中のアルコール濃度を高めるために，固形分 40％以上の高濃度仕込みとした．この高濃度仕込みでももろみ粘度が大きく上がらず，雑菌数は 10 の 4 乗オーダー以下をキープし，アルコール度数は 12.1％にまで到達した．発酵
歩合は 95.1％と，低デンプン含量原料を用いたにも関わらず，かなり高いものとなった．いずれの場合でも，段仕込みで酵母の優位性を保つ製造法を採用しており，それが功を奏したものと考えている．
おわりに穀皮で覆われた原料を用いるというコンセプトにより，白麹菌・黒麹菌・黄麹菌・紅麹菌を用いた液体培養

2013年 第2号

献1) Iwashita, K., Todoroki, K., Kimura, H., Shimoi H., and
Ito K.: Biosci. Biotechnol. Biochem., 62, 1938–1946(1998).
2) Shoji, H., Sugimoto, T., Hosoi, K., Shibata, K., TanabeM., and Kawatsura K.: J. Biosci. Bioeng., 103, 203–205(2007).
3) Ruiter, G. J., and Visser, J.: FEMS Microbiol. Lett., 151,103–114 (1997).
4) Sugimoto, T., Horaguchi, K., and Shoji, H.: J. Ind.
Microbiol. Biotechnol., 38, 1985–1991 (2011).
5) 赤尾 健，須藤茂俊，佐藤和夫，大場俊輝：醸協 , 89,913–914 (1994).
6) Masuda, S., Kikuchi, K., Mstsumoto, Y., Sugimoto, T.,
Shoji, H., and Tanabe, M.: Biosci. Biotechnol. Biochem.,
73, 2190–2195 (2009).
7) 杉本利和，小路博志：特許第 4083194 号．
8) Masuda, S., Ozaki, K., Kuriyama, H., Sugimoto, T.,Shoji, H., Tanabe, M., Kitagawa, Y., and Yamashita, H.:
J. Inst. Brew., 116, 170–176 (2010).
9) 小路博志，田邉正行：バイオサイエンスとインダスト
リー , 64, 633–634 (2006).
10) 村上英也：麹学，日本醸造協会 (1987).
11) Ishida, H., Hata, Y., Ichikawa, E., Kawato, A., Suginami,K., and Imayasu, S.: J. Ferment. Bioeng., 86, 301–307(1998).
12) 杉本利和，小路博志：特許第 4068649 号．
13) 杉本利和，小路博志：特許第 4908815 号．
14) Sugimoto, T., Makita, T., Watanabe, K., and Shoji, H.: J.
Ind. Microbiol. Biotechnol., 39, 605–612 (2012).

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