第 1２回次世代アジュバント研究会
1２th Meeting of the Japanese Vaccine Adjuvant Research Consortium

201９年 1 ⽉ 22 ⽇(⽕)/ January 22, 2019
千⾥ライフサイエンスセンター / Senri Life Science Center, Osaka, Japan主 催：国⽴研究開発法⼈医薬基盤・健康・栄養研究所
次世代アジュバント研究会
AMED 創薬基盤推進研究事業「⾰新的技術に裏打ちされた有効かつ安全な次世代
アジュバント開発」研究班 (研究代表者 国⽴研究開発法⼈医薬基盤･健康･栄養研究所 理事⻑ ⽶⽥ 悦啓)
協 賛：国⽴研究開発法⼈⽇本医療研究開発機構<Organizer>◆National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)◆Japanese Vaccine Adjuvant Research Consortium◆Research Committe"Development of the next-generation adjuvants with innovativeevaluation systems for safety and efficacy" supported by Japan Agency for Medical
Research and Development (AMED) Grant<Supporting organization>◆Japan Agency for Medical Research and Development

Conteents / 目次
m / プロググラム･････････････････････････････････････････････ ･･･････P2
2 ~ProgramP66

al presen
ntation / 講演要旨
旨･･･････････････････ ･････O-01 ~ O-10
Abstractts for ora

oster pressentationn / ポスタター発表要要旨･･････ ･･････P-0
01 ~ P-21
Abstractts for poVennue / 会場会

Li fe Hall

Venue for oral preesentation
Januaryy 22

10:00
0-16:55

Venue ffor poster presentationpnR
Reception/ 受付付

Science Hall

Januaryy 22

9:30-16:30

Notice / 注
注意(1) Smoking is allow
wed only in the designnated roomm on the 6tth floor.
喫煙される方は、6 階の喫煙場所でお願いしします。館内ののそれ以外のの場所での喫喫煙は禁じられれています。
(2) Please
e turned off
ff your cell phone or p
put them ono vibrate duringdthe ppresentatio
ons.
講演中は
は、携帯電話
話は電源を切切るかマナーモ
モードにしてくください。

Program for oral presentation / 講演プログラム■ Registration (9:30)
1. Meeting of the Japanese Vaccine Adjuvant Research Consortium(10:00 ～ 16:55)◆Opening remarks (10:00~10:05)
Koichi Yamanishi / The research foundation for microbial disease of Osaka University◆Part 1 （10:05 ~ 11:05）＜session chair＞

Jun Kunisawa / NIBIOHN
Etsushi Kuroda / NIBIOHN【O-01】 10:05~10:35「Sensing of herpes simplex virus by the host immunity and immune evasion by the virus」
Yasushi Kawaguchi / The University of Tokyo【O-02】 10:35~11:05「The application of glycolipid-mediated NKT cell activation for a pneumococcal vaccine」
YUKI

KINJO / The Jikei University School of Medicine and National Institute of Infectious Diseases◆Part 2 （11:05 ~ 11:55）＜session chair＞

Ken J. Ishii / The University of Tokyo
Norifumi Iijima / NIBIOHN【O-03】 11:05~11:35｢Harnessing the intrinsic adjuvant properties of aldehydic adducts｣
Quentin Sattentau / University of Oxford
11:35~11:55
Ken J. Ishii / The University of Tokyo
Jun Kunisawa / NIBIOHN

2. Lunch Break（11:55 ~ 12:50）
3．Poster session (12:50 ～ 13:50)◆Please feel free to come to Science Hall. Poster presenters will stand by their poster and be
prepared to answer questions from attendees.
◆Part 3 （13:50 ~ 14:50）＜session chair＞

Yasuhiro Yasutomi / NIBIOHN
Satoshi Uematsu / Osaka City University Graduate School of Medicine【O-04】 13:50~14:20｢The novel strategies for developing biologics based on the immunogenicity in human｣
Teruhito YASUI / NIBIOHN

2

【O-05】 14:20~14:50｢Severe mechanisms of virus infection from the aspect of host nuclear system｣
Yumiko Imai / NIBIOHN◆Part 4 （14:50 ~ 15:20）＜session chair＞

Ken J. Ishii / The University of Tokyo
Takato Kusakabe / NIBIOHN【O-06】 14:50~15:00｢Near-Infrared Laser Adjuvant for Influenza Vaccine｣
Yoshifumi Kimizuka / National Defense Medical College【O-07】 15:00~15:10｢Co-administration of Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin in seasonal influenza vaccine showed theantigen-dose sparing effect: A phase 1 clinical study｣
Akane Watanabe / Osaka University【O-08】 15:10~15:20｢Studies on native type BCG-CWS: Immunoreactivity of B-OMS (JBL-107) as a novel adjuvant for
immunotherapy｣
Kazuhiro Matsuo / Japan BCG Laboratory
4．Poster session ＆ Coffee break (15:20 ～ 15:50)◆Please feel free to come to Science Hall. Poster presenters will stand by their poster and be
prepared to answer questions from attendees.
◆Please help yourself to some coffee at the lobby.
◆Part 5 （15:50 ~ 16:50）＜session chair＞

Yumiko Imai / NIBIOHN
Teruhito YASUI / NIBIOHN【O-09】 15:50~16:20｢Amphiregulin-producing pathogenic memory T helper-2 cells drive airway fibrosis via activation ofeosinophils」
Kiyoshi Hirahara / Chiba University【O-10】 16:20~16:50「Development of adjuvant: Approach to improve the efficacy of intranasal influenza Vaccine」
Kiyoshi Takatsu / Toyama Prefectural Institute for Pharmaceutical Research◆ Closing remarks (16:50~16:55)
Jun Kunisawa / National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)

3

Program for poster presentation / ポスター発表プログラム【 January 22, 2019 (9:30 ～ 16:30)】■ Poster session : Poster presenters will stand by their poster and be prepared to answer
questions from attendees from 12:50 to 13:50.
＜Poster Layout ＞Science Hall
ScreenP-09 P-10 P-11 P-12 P-13
P-08
P-07
P-06
P-05

P-14
P-15
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P-17

P-04
P-03
P-02
P-01

P-18
P-19
P-20
P-21

Entrance【P-01】
Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)

1.Preparation of B-OMS

Akihiro Nakaya / Japan BCG Laboratory【P-02】
Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)

2. Formulation of B-OMS

Yasushi Chuma / Japan BCG Laboratory【P-03】
Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)

3. Physicochemical property / structure of

B-OMS
Yukihiro Shibuya / Japan BCG Laboratory【P-04】
Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)

4. Immunoreactivity of B-OMS as a novel

adjuvant for immunotherapy
Kazuhiro Matsuo / Japan BCG Laboratory【P-05】
Protein modification using oligosaccharides functioning as adjuvants
Noriyuki Yuasa / Tokyo chemical industry co. Ltd.
【P-06】
Co-administration of Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin in seasonal influenza vaccine showed theantigen-dose sparing effect: A phase 1 clinical study.
Akane Watanabe / Osaka University4【P-07】
Near-Infrared Laser Adjuvant for Influenza Vaccine
Yoshifumi Kimizuka / National Defense Medical College【P-08】
Chemically synthesized Alcaligenes lipid A augments nasal vaccine effects to prevent pneumococcal
infection
Ken Yoshii /National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)【P-09】
Enhancement of nasal immune responses by mucociliary dysfunction to cholera toxin-based nasal
vaccineHuangwenxian Lan / National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)【P-10】
Potency of polymyxin B as mucosal adjuvant against inactivated influenza virion

Takashi Odagiri / Iwate Medical University【P-11】ZBP1 governs neutrophil-mediated inflammation in influenza virus infection via IL-1α
Masatoshi Momota / National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)【P-12】
Application of D35 adjuvant containing lipid nanoparticles to tumor treatment
Yoshihiko Tanimoto / Osaka University【P-13】
The combination of DAMP-inducing and PAMP adjuvants parallelly induces type-2 and type-1 immune
responses
Tomoya Hayashi / National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)【P-14】
Vaccine-induced IgG1 blocks effector function of IgG2 in influenza vaccine
Meito Shibuya / Osaka University【P-15】
Intrinsic MyD88 signalling in B cells controls IFNγ-mediated early IgG2c class switching in response to aparticulate adjuvant
Michelle Sue Jann Lee / Osaka University【P-16】
Molecular interaction between IL-1 alpha and genomic DNA released under the cell death by Alum
Kou Hioki / National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)【P-17】
Adjuvanticity of combination protamine, a cationic nuclear protein, and nucleic acid adjuvants
Saori Hodokami / National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)

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【P-18】
Priming immunization with whole-virion influenza vaccines is essential for induction of ADCC activities ofvirus-specific antibodies
Kayoko Sato / National Institute of Infectious Diseases【P-19】
Evaluation of effectiveness and safety of CpG-ODN G9.1 as mucosal adjuvant for nasal influenza
vaccines
Koichiro Tateishi / National Institute of infectious Diseases【P-20】
Comprehensive analysis for the immunogenicity in human to explore vaccine targets
Takeharu Minamitani /National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)【P-21】
Characteristics of human Tetanus Neurotoxin antibody
Karin Kiyose/

National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)

6

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ-01】

Sensing of herpes simplex virus by the host immunity and immune evasion by thevirus / 宿主免疫による単純ヘルペスウイルスの認識機構とウイルスによる免疫回避機構
Yasushi Kawaguchi / 川口

寧

Division of Molecular Virology, Department of Microbiology and Immunology, The Instituteof Medical Science, The University of Tokyo /東京大学医科学研究所

感染・免疫部門

ウイルス病態制御分野

Abstract
単純ヘルペスウイルス(HSV: herpes simplex virus)は、ヒトに、脳炎、口唇ヘルペス、眼疾患、皮膚疾患、性器ヘルペス、新生児ヘルペス等、多様な疾患を引き起こす。HSV 感染症に対しては、抗ウイルス剤が開発されているが、脳炎や性器ヘルペスに対してはその効
果は限定的であり、ワクチンも未だ開発されていない。その研究の歴史は古く、1920 年頃
から精力的に研究され、数あるウイルスの中で最も研究が進展しているウイルスの１つである。HSV 感染症の大きな特徴は、潜伏感染と回帰発症を繰り返し、宿主に終生存続することにある。年複数回の回帰発症が長年続くということは、HSV が高度な免疫回避機構を獲得していることが示唆されるが、生体レベルで HSV の免疫回避機構を実証した研究はほ
とんど無い。HSV の免疫回避機構の解析は、HSV にとって真に都合の悪い宿主免疫応答の同定に繋がり、未だ開発されていない HSV ワクチン開発戦略へ有用な情報を提供すると考えられる。本講演では、HSV の宿主免疫回避機構を中心に、宿主免疫による HSV の認識機構を交え、我々の最新の知見を紹介する。

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ-02】

The application of glycolipid-mediated NKT cell activation for a pneumococcal
vaccine / 糖脂質による NKT 細胞活性化の肺炎球菌ワクチンへの応用
YUKI

KINJO / 金城 雄樹

Department of Bacteriology, The Jikei Univer1. Department of Bacteriology, The Jikei
University School of Medicine/ 東京慈恵会医科大学細菌学講座

Jikei Center for Biofilm Science and Technology, The Jikei University School of Medicine /東京慈恵会医科大学バイオフィルム研究センター
Department of Chemotherapy and Mycoses, National Institute of Infectious Diseases /国立感染症研究所真菌部
Abstract
肺炎は主な死因の一つであり、その原因菌として最も多いのが肺炎球菌である。肺炎球菌は成人及び小児にて肺炎のみならず、髄膜炎や菌血症などの侵襲性肺炎球菌感染症（IPD）
を引き起こす。肺炎球菌の莢膜多糖に対する抗体が感染防御に重要であることから、現在、成人では 23 価多糖体ワクチン、小児では 13 価多糖体の結合型ワクチン（PCV）を定期接種に用いている。小児にて PCV 導入後、ワクチン血清型による IPD の劇的な減少を認めた。
しかし、肺炎球菌は約 100 種類の血清型が存在し、近年 PCV に含まれない非ワクチン血清型による IPD が増加していることから、新規ワクチンの開発が求められている。
私達は血清型を超えた肺炎球菌感染防御効果をもたらす新規ワクチンの開発をめざし、全ての血清型の肺炎球菌に存在する表層蛋白をワクチン抗原として用いた。また、アジュ
バント効果を期待して、リンパ球の natural killer T（NKT）細胞を活性化する糖脂質を用いた。肺炎球菌蛋白・糖脂質経鼻ワクチン接種マウスでは、蛋白抗原特異的 IgG 抗体の産生が誘導され、肺炎球菌感染に対する防御効果をもたらした。また、非ワクチン血清型の肺炎球菌感染及びインフルエンザ続発性肺炎球菌感染に対しても防御効果を認めると共に、本ワクチンによる肺炎球菌感染防御効果が長期間持続することを明らかにした。本発
表では、新規肺炎球菌ワクチンとして有望な蛋白ワクチンに対する糖脂質のアジュバント
作用について紹介したい。

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ-03】

Harnessing the intrinsic adjuvant properties of aldehydic adducts
Quentin Sattentau
University of Oxford
Abstract
Proteins undergo a multitude of post-translational modifications, amongst which oxidative
modification by reactive and non-reactive adducts is common. Many of these adducts areassociated with immune-mediated disease, including inflammatory, degenerative andallergic conditions resulting from their immune modulating activity. However, specificadducts may also be harnessed to enhance protein immunogenicity, potentially serving asadjuvants for vaccine use. We have studied a specific group of aldehydic adducts, andhave demonstrated that they impart intrinsic adjuvanticity to otherwise weakly or
non-immunogenic proteins. Of particular interest are adducts produced by treatment withglycolaldehyde and malondialdehyde, that trigger robust T and B cell responses to the
adducted antigens in the absence of extrinsic adjuvants. Mass spectrometry reveals thataldehydic groups are adducted to specific amino acid side chains, particularly those oflysine. Immunzation of mice with aldehyde-adducted proteins drives an enhanced helper T
helper type-2 (Th2) response associated with altered T cell epitope immunodominance.
Analysis of the effects of aldehyde-modified proteins on dendritic cell uptake reveals
minimal enhancement, and no evidence for canonical pro-inflammatory dendritic cellmaturation. Moreover, direct presentation of aldehyde-adducted peptides to T cells resultsin enhanced T cell activation. We therefore propose that the mechanism of enhancement ofadaptive immunity by aldehydic adducts is likely to result from enhanced antigen
presentation, potentially via stabilization of the peptide-MHC-TCR interaction. Taken
together these results suggest that targeted aldehydic adducts on protein or peptide
vaccine antigens may serve as intrinsic adjuvants, bypassing the requirement forexogenous adjuvants and their associated inflammatory risks

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ-04】The novel strategies for developing biologics based on the immunogenicity inhuman / ヒト免疫原性を基盤としたバイオロジクス開発戦略
Teruhito YASUI, PhD / 安居輝人

Laboratory of Infectious Diseases and Immunity
Laboratory of Immunobiologics Evaluation
Center for Vaccine & Adjuvant Research (CVAR)
The National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN) /国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 感染症制御プロジェクト/ワクチン・アジ
ュバント研究センター免疫バイオロジクスプロジェクト
Abstract
ワクチンや抗体に代表される生物製剤（バイオロジクス）において、その医薬品効果の「方向性」と「強度」はアジュバントに制御され、「特異性」はヒト免疫原性に支配されていることが知られている。本来抗体医薬品は、ヒトにおける免疫原性を有さない（免疫学的不活化）を前提とし、一方、ワクチン製剤は、アジュバントによる免疫応答の強度増強、ワ
クチンコンポーネントによる免疫原性の特異性発揮（免疫学的活性化）をもって、製剤として成立する。しかしながら、バイオロジクスの最適化において、免疫原性の適切な制御が開発諸問題の一つとして挙げられる。その両製剤開発段階において、実験動物による試験評価が必須であるが、ヒトー実験動物間における免疫原性多様性の差異は、バイオロジ
クス開発の障害になり得る。そこで、ヒト免疫原性を考慮したバイオロジクス開発戦略は、
それら開発の迅速化、適正化に重要な鍵となると考えられる。今回は、両製剤シーズ探索において「感染症」に焦点を当て、１）ワクチンコンポーネント探索、２）治療抗体シー
ズ探索を可能にする２つのコア技術を紹介する。本探索技術は、探索リソースにヒト検体を用い、免疫原性試験といった免疫学的手法と、網羅的探索を行うための分子生物学的手法を融合した結果、ヒト免疫応答に即した創薬シーズのレパートリー集積と選択を可能にした。さらにヒト免疫応答成立機構について、抗原特異的反応性の多様性形成過程を網羅的に解析できることより、将来的なヒト免疫原性予測の可能性についても言及したい。

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ-05】

Severe mechanisms of virus infection from the aspect of host nuclear system /宿主核内システムから見たウイルス感染症の重症化機構
Yumiko Imai / 今井 由美子
Laboratory of the Regulation for Intractable Infectious Diseases,National Institutes ofBiomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)
国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 感染病態制御ワクチンプロジェクト
Abstract
ウイルスは宿主因子を利用・略奪して増殖します。インフルエンザウイルスは RNA ウイ
ルスですが、宿主の核内でウイルスゲノムの転写・複製を行うので、宿主の核内システム
はインフルエンザウイルスの増殖やウイルス感染症の病態形成に重要な役割を担っていると考えられます。私たちは、核内の RNA 輸送やエピゲノム応答に焦点を当てた研究を行っています。今回私共の最近の研究をご紹介し、これらを基にした創薬の可能性について言及させていただきたいと思います。

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ-06】

Near-Infrared Laser Adjuvant for Influenza Vaccine /インフルエンザワクチンにおける近赤外光レーザーアジュバント
Yoshifumi Kimizuka1, Satoshi Kashiwagi2
君塚善文 1、柏木哲 2
1) National Defense Medical College, Division of Infectious Diseases and Respiratory
Medicine
2) Massachusetts General Hospital, Gordon Center for Medical Imaging
1)防衛医科大学校 内科学講座(感染症・呼吸器)
2)ハーバード医科大学マサチューセッツ総合病院、ゴードン医用画像センター
要旨（Abstract）【背景】発表者らは、光という物理的エネルギーをアジュバントとして利用することに着目し、これまでワクチン接種部位の短時間で安全な近赤外光照射がワクチン増強効果を持つことを明らかにしてきた。今回、この作用機序の解明のため, インフルエンザマウスモ
デルを用いて検討した。
【方法・結果】光源として連続波 1064nm ダイオード励起固体レーザー(Nd:YO4)を用いた。
C57BL/6 を背景とする複数種の遺伝子改変マウスを用い、皮膚所属リンパ節への樹状細胞
遊走、インフルエンザ全粒子ワクチン接種後の抗インフルエンザ抗体価およびインフルエ
ンザ感染後生存率を比較したところ、近赤外光照射によるアジュバント効果には皮内樹状細胞サブセットの中で Lang-CD11b- migDC, Lang+ migDC, monocyte-derived CCR2+ DC が関与することを明らかにした。また、近赤外光照射によりマウス皮内に CCL20 や CCL2など特定のケモカイン発現が起き、樹状細胞の活性化に関与することが示唆された。更に、骨髄誘導マスト細胞への近赤外光照射で活性酸素種が産生されること、野生型マウスへの抗酸化物質の投与やマスト細胞欠損マウス(KitW-sh/ KitW-sh)で近赤外光のアジュバント効果が減弱すること、KitW-sh/ KitW-sh の皮内にマスト細胞を移植し再構成することでアジュバン
ト効果が復活することから、皮内マスト細胞が活性酸素種の産生を介して下流のアジュバ
ント効果に寄与していることを明らかにした。
【結論】近赤外光を用いたインフルエンザワクチン増強効果には、マスト細胞内の活性酸素種の産生を介して皮内ケモカインの発現を活性化し、特定の遊走性樹状細胞集団の所属
リンパ節への遊走を促進する機序が示唆された。

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ－07】

Co-administration of Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin in seasonal influenza vaccine
showed the antigen-dose sparing effect: A phase 1 clinical study.
Akane Watanabe1, Sumiyuki Nishida1, Takato Kusakabe2, Masatoshi Momota2, Etsushi Kuroda2,
Ken Ishii2, Atsushi Kumanogoh1
1) Department of Respiratory Medicine and Clinical Immunology, Graduate School of Medicine, Osaka
University. 2) Laboratory of Adjuvant Innovation, Center for Vaccine and Adjuvant Research, National
Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition.

Background: Hydroxypropyl--cyclodextrin (HP-CyD) functions as an immune adjuvant. When
HP-CyD is co-administered with the seasonal influenza vaccine, it is expected to enhance thevaccine-induced immune response without an allergic reaction and to reduce an antigen in a single dose.
To investigate the feasibility of a seasonal influenza vaccine formulated with HP-CyD (FluCyD-vac) and
its advantage in immunogenicity compared to a standard seasonal influenza vaccine (Flu-vac), we
conducted a phase 1 clinical study. Methods: We designed a single-blinded, randomized study. Healthy
volunteers aged 20 to 64 years were assigned at a ratio of 2:1 to FluCyD-vac or Flu-vac. The primary
end points included safety and immune responses including hemagglutinin inhibition (HAI) titer. All
subjects received a vaccine subcutaneously one time. Flu-vac was the tetravalent inactivated flu vaccine
composed of 15 g of HA. FluCyD-vac, which was also the tetravalent inactivated flu vaccine, contained
9 g of HA and 20% W/V of HP-βCyD. Results: In total, 36 healthy volunteers were enrolled from
October to November during the 2017-2018 season (FluCyD-vac, n = 24; Flu-vac, n = 12). The mostcommonly reported vaccine-related adverse events (AEs) was a mild local skin reaction at a vaccine site
(FluCyD-vac, 22/24, 91.7%; Flu-vac, 12/12, 100%, p =0.543). Although some systemic vaccine-related
AEs such as headache and fatigue, all of which were limited to G1 and G2, occurred in both treatmentgroups, no subjects experienced serious AEs. The proportion of each systemic AE was not statisticallysignificant (all systemic AEs: FluCyD-vac, 58.3%; Flu-vac, 66.7%, p = 0.727). The immunogenicity of
FluCyD-vac was assessed by the geometric mean titer ratio (GMTR) of post-HAI titer to pre-HAI titer. In
the FluCyD-vac group, the GMTR of A/H1N1, A/H3N2, B/Victoria, and B/Yamagata were 4.12, 4.24, 2.59,
and 2.83, respectively. In the Flu-vac group, these were 4.24, 4.24, 2.38, and 2.12, respectively.
Conclusion: FluCyD-vac was well tolerated in healthy adults without any serious AEs. FluCyD-vac,
despite reducing HA antigens to 60%, showed comparable immunogenicity to that of the standard
Flu-vac in all of 4 strains. The use of HP-CyD as an immune adjuvant in the seasonal influenza vaccine
is advantageous for the antigen-dose sparing. Clinical trial information: UMIN000028530

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ－08】

Studies on native type BCG-CWS: Immunoreactivity of B-OMS (JBL-107) as a novel
adjuvant for immunotherapy / 天然型 BCG-CWS－B-OMS (JBL-107) の研究: 免疫療法を標的とした B-OMS の新規アジュバントとしての免疫活性
Kazuhiro Matsuo1, Akihiro Nakaya1, Yukihiro Shibuya1, Yasushi Chuma1, Hideyasu Kiyohara1,
Shuichi Kishimoto2, Shoji Fukushima2 and Makoto Sunagawa1
松尾和浩 1、中谷彰洋 1、渋谷幸広 1、中馬康志 1、清原秀泰 1、岸本修一 2、福島昭二 2、砂川

洵1

1

Japan BCG Laboratory and 2Kobe Gakuin University

1

日本ビーシージー製造㈱、2 神戸学院大学
BCG-CWS (Bacillus Calmette Guerin-cell wall skeleton) cancer immunotherapy has been studied since1970’s, and several clinical efficacies were reported. It has been known that CWS has three layers membranecomposed of mycolic Acid (MA), arabinogalactan (AG), peptidoglycan (PG), and is not dissolved in water nor
any organic solvent. Until now, structure and physicochemical property of CWS particle have hardly beenreported. SMP-105 type (105-type) CWS, which had high purity, prepared by the reported method showed
low water-dispersibility. To improve the dispersibility, we modified its preparation process and obtained a new
product named BCG outer membrane skeleton (B-OMS) which has a different surface structure of particle
from the conventional CWS. Physicochemical analyses of B-OMS revealed that AG moieties are exposed on
the particle surface in aqueous condition despite containing the same chemical component as previously
reported CWS. Depending on this character, B-OMS is novel material which shows different property from the
105-type CWS.
In this report, we investigated immunoreactivity of the B-OMS in in vitro and in vivo studies. Oil in water(o/w) emulsion of B-OMS and corresponding vehicle emulsion were rapidly incorporated into RAW cells in
one hour whereas B-OMS API did not show uptake in the same period. Therefore, we tested In vitro
bioactivity of the B-OMS emulsion and observed enhanced cytokine production both in RAW cells and insome dendritic cell lines. Such difference of in vitro activity may be due to the AG exposed on the surface ofoil emulsion particle of B-OMS. Toll-like receptor (TLR) reporter assay showed that all of raw material BCG
cells, refined BCG cells, B-OMS, its intermediate product and washings did not show any TLR-4-agonist
activity and B-OMS and relating compounds reacted with TLR-2. As for in vivo activity, B-OMS and 105-type
CWS showed similar profile in both interferon-γ production in intraperitoneally inoculated mice and onset ofadjuvant arthritis in rat. In a preliminary study, the implantation rate of Meth-A sarcoma in mice was reduced
when the cells were inoculated with B-OMS emulsion. In addition, the lyophilized formulation of B-OMS withan ovalbumin (OVA) cytotoxic T cell epitope peptide successfully induced OVA-specific CD8+ T cells in
intradermally inoculated mice. These data suggest that the B-OMS formulation would be expected as a novel
candidate adjuvant for immunotherapy.

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ－09】

Amphiregulin-producing pathogenic memory T helper-2 cells drive airway fibrosis
via activation of eosinophils / 好酸球性気道炎症において線維化誘導-病原性ヘルパーT細胞が誘導する組織線維化の形成機構について
Kiyoshi Hirahara / 平原潔

Department of Immunology, Graduate School of Medicine, Chiba University /千葉大学大学院医学研究院

免疫発生学

Abstract
常に外界と接している臓器のひとつである気道は、細菌やウイルスといった外来抗原の暴露をうける危険に恒常的に曝されていることから、気道粘膜における適切な免疫反応は生体防御において重要である。一方で、気道での異常な免疫応答は、気管支喘息など慢性アレルギー性疾患の原因となる。
気管支喘息は、好酸球をはじめとする様々な炎症細胞が気道周囲へ浸潤し、気道壁の肥厚、気管支腺の肥大増生、組織線維化という気道のリモデリングがおこった結果、非可逆的な気道の閉塞や気道過敏性の亢進が誘導される、下気道を中心とした慢性炎症疾患である。しかし、慢性アレルギー性疾患における気道の組織線維化の機序について、その詳細は不明であった。
我々は、組織線維化を起こす「線維化誘導-病原性記憶T細胞」を新たに発見した。「線維化誘導-病原性記
憶T細胞」が分泌する生理活性タンパク質のAmphiregulinが、好酸球からのOsteopontin分泌を誘導し、組織の線維化を引き起こす。「線維化誘導-病原性記憶T細胞」から分泌されるAmphiregulinを介した好酸球からのOsteopontin産生は、新たな組織線維化の誘導メカニズムで、難治性アレルギー疾患の有効な治療の標的になることが期待される。
気管支喘息における組織線維化は、患者のQOLの著しい低下の原因となるが、根治的治療法は一切なく革新的な治療の開発が急務である。我々の研究が、この難治性の病態に対する新規治療法開発の一助になれ
ば幸いである。
参考文献； Morimoto, Y., Hirahara, K., Kiuchi, M., Wada, T., Ichikawa, T., Kanno, T., Okano, M., Kokubo,
K., Onodera, A., Sakurai, D., Okamoto, Y., Nakayama, T.: Amphiregulin-producing pathogenic memory T
helper-2 cells instruct eosinophils to secrete Osteopontin and facilitate airway fibrosis. Immunity (2018)

Abstract of oral presentation / 講演要旨

【Ｏ－10】Development of adjuvant: Approach to improve the efficacy of intranasal influenza
Vaccine / 経鼻インフルエンザワクチンのためのアジュバント開発
宮本（山口）朋美 1，柳橋努 1，本田裕恵 1，渡邉康春 2，長井良憲 2.3，髙津聖志 1,21
富山県薬事総合研究開発センター; 2 富山大学大学院医学薬学研究部（医学） 免疫バイオ・創薬探索研究講座, 3 富山県立大学工学部医薬品工学科
皮下注射型インフルエンザワクチンの投与はインフルエンザ発症や重篤化を予防できるが，感染そのものを防御できないと云われている。経鼻粘膜投与型インフルエンザワクチン（以下，「経鼻ワクチン」）は，粘膜免疫と分泌型 IgA 交叉抗体の産生を惹起し感染局所でウイルス感染を防御できると考えられ，次世代ワクチンとして期待されている。しかし、経鼻ワクチンのみの投与では効
果が十分でなく，有効なワクチン効果を惹起するにはアジュバントないし粘秱剤が必要不可欠である。我々は安全で有効なアジュバントの開発を目的として，ワクチンメーカー及び富山大学と共同で過去 7 年余り研究を推進している。本講演では我々のアプローチと一部の結果を紹介したい。
（１）LPS 刺激マウスＢ細胞による IgA 産生を増強する活性を指標に、約 600 種類の化合物を（２）21 種用いて in vitro で一次スクリーニングした。21 種類の化合物が IgA 産生を増強した。
類の化合物が in vivo でアジュバント活性を示すか評価した。BALB/c マウスにインフルエンザウ
イルス HA 抗原と候補化合物を 2 週間間隔で 2 回経鼻投与し、最終投与 2 週間後の鼻腔洗浄液中のIgA 抗体価を測定した。ワクチン特異的な IgA 抗体の産生を強く誘導する 5 種類の化合物を見出した。
（３）5 種類の化合物に関しインフルエンザウイルス感染に対する防御の増強効果を検討した。BALB/c マウスに B 型 HA 抗原と候補化合物を 3 週間隔で 2 回経鼻投与した。最終投与の 2 週間後にワクチン株と同じインフルエンザウイルスを外鼻腔より攻撃接種し、感染 3 日後の鼻腔洗浄液中のウイルス価（TCID50）を比較した。3 種類の化合物に感染防御の増強効果を認めた。
（４）
マウスの感染実験において高い防御効果を示した化合物について，カニクイザルを用いた感染実
験によりアジュバント効果を検証した。化合物をワクチンと併用した経鼻投与群で，3 頭全てにおいてウイルス価が検出値以下であった。いずれの化合物も実験期間中に有害事象は観察されなかった。
試験管内で B 細胞による IgA 産産生増強効果を指標に化合物をスクリーニングし、最終的にワクチンとの経鼻投与によりアジュバント活性を示す化合物を選択した。アジュバント候補化合物はワ
クチンとの経鼻投与により、インフルエンザウイルスを感染局所で防御できることを示した。
本研究会で報告する内容は（一般財団法人） 阪大微生物病研究会及びデンカ生研株式会社との共同研究の成果である。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-01】

Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)
1. Preparation of B-OMS
天然型 BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)の研究
1. B-OMS の調製

Akihiro Nakaya, Yukihiro Shibuya, Yasushi Chuma, Kazuhiro Matuso and Makoto Sunagawa
中谷彰洋、渋谷幸広、中馬康志、松尾和浩、砂川洵

R & D department, Japan BCG Laboratory
日本ビーシージー製造㈱ 研究開発部
BCG-CWS (Bacillus Calmette Guerin-Cell Wall Skeleton) cancer immunotherapy has been studied since1970’s, and several clinical efficacies were reported. It has been known that CWS is three layer membranecomposed of Mycolic Acid (MA), Arabinogalactan (AG), Peptidoglycan (PG), and is not dissolved in water nor
any organic solvent. Until now, structure and physicochemical property of CWS particle have hardly beenreported. SMP-105 type (105-type) CWS, which was high purity, prepared by the reported method1) showed
low water-dispersibility. To make progress in development of pharmaceutical product, the improvement ofdispersibility is important.
In the native state of CWS in water, hydrophilic AG is exposed on its surface but the surface structure iseasily changed depending on the condition because of the unstable very thick membrane. It was consideredthat the low hydrophilicity of 105-type CWS was due to decrease of AG exposure on the surface of CWS
particle and the change of surface structure gradually occurred during the multi-steps in 105-type CWS
preparation process. We aimed to obtain native type BCG-CWS exposing AG on its surface, that is B-OMS(BCG-Outer Membrane Skeleton, JBL-107), using Mycobacterium bovis BCG Tokyo 172 as a raw material
just like SMP-105.
As a result, the preparation process of B-OMS was established by disruption of the purified BCG cell bodyobtained by wash to remove the extracellular attached components. The disrupted particle was easily
processed to pure native type CWS (B-OMS) by short-steps. As expected, B-OMS showed high water
dispersibility and stronger in vitro activity than 105-type CWS in both RAW and BC-1 cells.
These results suggest that AG exposure on the surface of particle not only enhance the hydrophilicity, butalso the in vitro activities of B-OMS.

1) Uenishi et al., Chem. Pharm. Bull., 55(6), 843-852 (2007).

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-02】

Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)
2. Formulation of B-OMS
天然型 BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)の研究
2. B-OMS の製剤
Yasushi Chuma, Yukihiro Shibuya, Akihiro Nakaya, Kazuhiro Matsuo and Makoto
Sunagawa
中馬康志、渋谷幸広、中谷彰洋、松尾和浩、砂川 洵
R & D Department, Japan BCG Laboratory
日本ビーシージー製造㈱ 研究開発部
As for the BCG-CWS formulation, oil-in-water (o/w) emulsion was reported1). Although
B-OMS, which was excellent in dispersibility in water, was possible to prepare various typesof formulations such as aqueous suspension, we selected o/w emulsion formulation and its
lyophilized formulation in consideration of the reported clinical efficacy.
First, by the same preparation method as reported SMP-105 formulation2), B-OMS
emulsion was obtained easily and had higher stability. To obtain safer and more stable
formulation of B-OMS, a lot of prescription were examined. As the results, squalene,
polysorbate 80, citrate buffer, dibutylhydroxytoluene (BHT) and mannitol were selected asadditives. It was also found that in the case of B-OMS emulsion, the amount of oil, whichmight be related to the efficacy and safety, was able to be reduced.
The obtained o/w emulsion composed of those additives was extremely stable. Amazingly,
it was able to be stored at room temperature for several days. This phenomenon, which
was similar to the fact that B-OMS aqueous suspension was stabilized by the AG exposureon the surface of B-OMS particle itself, suggested the exposure of AG on the surface of oil
particle in the o/w emulsion.
In vitro bioactivity of BCG-CWS o/w emulsion has not been reported until now. The
bioactivity of the B-OMS emulsion was examined in vitro using RAW cells and TNF-α
induction activity was found. In the simple bilayer system of water and oil such as in vitro
examination of oil paste containing B-OMS and oil, surfactant in using RAW cells, TNF-α
induction activity was also found. These results strongly suggest the exposure of AG on thesurface of oil particle in B-OMS emulsion.
1) Yoo YC et al., Arch. Pharm. Res., 25(4), 522-527(2002).
2) Murata, Cancer Sci., 99(7), 1435-1440(2008)

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-03】

Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)
3. Physicochemical property / structure of B-OMS
天然型 BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)の研究
3. B-OMS の物理化学的特性／構造

Yukihiro Shibuya, Yasushi Chuma, Akihiro Nakaya, Kazuhiro Matsuo and Makoto Sunagawa
渋谷幸広、中馬康志、中谷彰洋、松尾和浩、砂川洵

R & D Department, Japan BCG Laboratory
日本ビーシージー製造㈱ 研究開発部
Studies on Active Pharmaceutical Ingredients (API) and formulation (o/w emulsion) of B-OMS suggested
that AG was exposed on the particle surface. However, both are qualitative evaluations, and establishment of
quantitative evaluation methods are desired. In addition, the different structure of B-OMS and105-type CWS
is needed to be clarified.
The AG exposed structure of B-OMS API and o/w emulsion were confirmed by high binding affinities withlectin (Concanavalin A) and anti-BCG antibody. The exposing degree of AG was evaluated by measuring ofzeta potential related to surface charge of particle. When B-OMS was treated in water with heating and/or
addition of surfactant, it was changed to low water dispersible CWS, that was 105-type CWS, and it was also
found that the change was irreversible. It was known that two MA moieties in BCG-CWS were associated inwater to form laminate structure1), but its strength has not been reported. It was confirmed that there existedof two types of association, reversible weak association and irreversible strong association (aggregation), by
using Auramine O staining. B-OMS was decolorized but 105-type CWS was not done. As for the oil particle
structure in o/w emulsion, AG was exposed on the surface of oil particle due to the surfactant-like activity ofhydrophobic MA and hydrophilic AG moieties.
In summary, B-OMS is a native type BCG-CWS possessing the structure in which AG is exposed on theparticle surface of both API and o/w emulsion.
1) Uenishi et al., J. Microbiol. Methods, 77(2), 139-144 (2009).

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-04】

Studies on native type BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)
4. Immunoreactivity of B-OMS as a novel adjuvant for immunotherapy
天然型 BCG-CWS: B-OMS (JBL-107)の研究
4. 免疫療法を標的とした、B-OMS の新規アジュバントとしての免疫活性

Kazuhiro Matsuo1, Akihiro Nakaya1, Yukihiro Shibuya1, Yasushi Chuma1, Hideyasu Kiyohara1,
Shuichi Kishimoto2, Shoji Fukushima2 and Makoto Sunagawa1
松尾和浩 1、中谷彰洋 1、渋谷幸広 1、中馬康志 1、清原秀泰 1、岸本修一 2、福島昭二 2、砂川

洵1

1

R&D Department, Japan BCG Laboratory and 2Kobe Gakuin University

1

日本ビーシージー製造㈱ 研究開発部、2 神戸学院大学
B-OMS/JBL-107 has a different surface structure of particle from conventionally called CWS, on which AG

are exposed on the particle surface in aqueous condition despite containing the same chemical component aspreviously reported CWS. Depending on this character, B-OMS is novel material which shows completely
different physicochemical property from the 105-type CWS.
In this report, we investigated immunoreactivity of the B-OMS in in vitro and in vivo studies. O/W emulsionof B-OMS and corresponding vehicle emulsion were rapidly incorporated into RAW cells in one hour whereas
B-OMS API did not show uptake in the same period. In vitro bioactivity of BCG-CWS o/w emulsion has notbeen reported until now. The bioactivity of the B-OMS emulsion was examined in vitro using RAW cells.
TNF-α induction activity was found. Similar enhancement of interleukin-12 production was observed in somedendritic cell lines. Such difference of in vitro activity may be due to the AG exposed on the surface of oil
emulsion particle of B-OMS. Toll-like receptor (TLR) reporter assay showed that all of raw material BCG cells,
refined BCG cells, B-OMS, its intermediate product and washings did not show any TLR-4-agonist activity
and B-OMS and relating compounds reacted with TLR-2. As for in vivo activity, B-OMS and 105-type CWS
showed similar profile in both interferon-γ production in intraperitoneally inoculated mice and onset ofadjuvant arthritis in rat. In a preliminary study, the implantation rate of Meth-A sarcoma in mice was reduced
when the cells were inoculated with B-OMS emulsion. In addition, the lyophilized formulation of B-OMS withan ovalbumin (OVA) peptide recognized with cytotoxic T cell successfully induced OVA-specific CD8+ T cells
in intradermally inoculated C57BL/6 mouse. These data suggest that the B-OMS formulation would be
expected as a novel candidate adjuvant for immunotherapy.

Abstrract of posterr preseentationn / 発表
表要旨

【P-0
05】

Protein m
modificatioon using oligosacchoharides fu
unctioning
g as adjuvaants
アジュバン
ント作用を
を持つ糖鎖をを用いたタ
タンパク質分分子の修飾
飾Noriyuki Yuasa, Ke
ento Kawa
amura, Yujji Matsuzaaki
湯浅徳行，川村健人
人，松﨑祐二二emical indu
ustry co. Lttd., Departtment of Glycotechno
ologyTokyo che
東京化成工
工業株式会
会社

糖鎖技
技術部

要旨
東京化成工
工業は、有機
機合成試薬を中心とし
して、近
しば、
年は糖鎖合
合成試薬にもも注力していいる。しばしその不均一
一性や異種抗抗原（αGal や Neu5Gcc）の付加が問題ととなる抗体医医薬品に対しして、弊社合合成糖
鎖試薬と糖糖転移酵素をを用いた試みみとして、不不均一な糖鎖構造造を持つ抗体
体医薬分子にに単一構造のの糖鎖を転移するることに成功功している（図 1）。こ のような、細胞培
培養技術によよる生産では
は達成するこことが難しい単一一構造の糖鎖鎖を持った抗抗体分子は、、糖鎖が重要な役役割を果たすす ADCC 活性
性や CDC 活
活性の
詳細な解析
析に活用が期期待されていいる。
今回我々々は、自然抗抗体を持つた
ため、Uri Ga
alili らによりりワクチンアアジュバン トとしての応用が検討
討されている
る αGal（Gaalα1-3Gal, 図 2）エピト
トープと自己己抗体上に付付加される と抗炎症効果を示すこと知られてている α2,6 シアル酸（Neu5Acα2--6Gal）構造
造を、ヒト血血清アルブミミン（HSA））をモデル
タンパク質質として有機
機化学的およよび酵素化学
学的手法を用用いた作成を試みたのので報告する
る。本法は結結合数の制御
御や自然界にに存在しないい糖鎖ミミッックの結合も可能であり、合成糖鎖鎖を組み合わせることで様々な均
均一糖鎖・タタンパク質複複合体を作成成可能となる
ると期待される。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-06】

Co-administration of Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin in seasonal influenza vaccine
showed the antigen-dose sparing effect: A phase 1 clinical study.
Akane Watanabe1, Sumiyuki Nishida1, Takato Kusakabe2, Masatoshi Momota2, Etsushi Kuroda2,
Ken Ishii2, Atsushi Kumanogoh1
1) Department of Respiratory Medicine and Clinical Immunology, Graduate School of Medicine, Osaka
University. 2) Laboratory of Adjuvant Innovation, Center for Vaccine and Adjuvant Research, National
Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition.
Background: Hydroxypropyl--cyclodextrin (HP-CyD) functions as an immune adjuvant. When
HP-CyD is co-administered with the seasonal influenza vaccine, it is expected to enhance thevaccine-induced immune response without an allergic reaction and to reduce an antigen in a single dose.
To investigate the feasibility of a seasonal influenza vaccine formulated with HP-CyD (FluCyD-vac) and
its advantage in immunogenicity compared to a standard seasonal influenza vaccine (Flu-vac), we
conducted a phase 1 clinical study. Methods: We designed a single-blinded, randomized study. Healthy
volunteers aged 20 to 64 years were assigned at a ratio of 2:1 to FluCyD-vac or Flu-vac. The primary
end points included safety and immune responses including hemagglutinin inhibition (HAI) titer. All
subjects received a vaccine subcutaneously one time. Flu-vac was the tetravalent inactivated flu vaccine
composed of 15 g of HA. FluCyD-vac, which was also the tetravalent inactivated flu vaccine, contained
9 g of HA and 20% W/V of HP-βCyD. Results: In total, 36 healthy volunteers were enrolled from
October to November during the 2017-2018 season (FluCyD-vac, n = 24; Flu-vac, n = 12). The mostcommonly reported vaccine-related adverse events (AEs) was a mild local skin reaction at a vaccine site
(FluCyD-vac, 22/24, 91.7%; Flu-vac, 12/12, 100%, p =0.543). Although some systemic vaccine-related
AEs such as headache and fatigue, all of which were limited to G1 and G2, occurred in both treatmentgroups, no subjects experienced serious AEs. The proportion of each systemic AE was not statisticallysignificant (all systemic AEs: FluCyD-vac, 58.3%; Flu-vac, 66.7%, p = 0.727). The immunogenicity of
FluCyD-vac was assessed by the geometric mean titer ratio (GMTR) of post-HAI titer to pre-HAI titer. In
the FluCyD-vac group, the GMTR of A/H1N1, A/H3N2, B/Victoria, and B/Yamagata were 4.12, 4.24, 2.59,
and 2.83, respectively. In the Flu-vac group, these were 4.24, 4.24, 2.38, and 2.12, respectively.
Conclusion: FluCyD-vac was well tolerated in healthy adults without any serious AEs. FluCyD-vac,
despite reducing HA antigens to 60%, showed comparable immunogenicity to that of the standard
Flu-vac in all of 4 strains. The use of HP-CyD as an immune adjuvant in the seasonal influenza vaccine
is advantageous for the antigen-dose sparing. Clinical trial information: UMIN000028530

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-07】

Near-Infrared Laser Adjuvant for Influenza Vaccine
インフルエンザワクチンにおける近赤外光レーザーアジュバント
Yoshifumi Kimizuka1, Satoshi Kashiwagi2
君塚善文 1、柏木哲 2
1) National Defense Medical College, Division of Infectious Diseases and Respiratory
Meidicine
2) Massachusetts General Hospital, Gordon Center for Medical Imaging
1)防衛医科大学校 内科学講座(感染症・呼吸器)
2)ハーバード医科大学マサチューセッツ総合病院、ゴードン医用画像センター
要旨【背景】発表者らは、光という物理的エネルギーをアジュバントとして利用することに着目し、これまでワクチン接種部位の短時間で安全な近赤外光照射がワクチン増強効果を持つことを明らかにしてきた。今回、この作用機序の解明のため, インフルエンザマウスモ
デルを用いて検討した。
【方法・結果】光源として連続波 1064nm ダイオード励起固体レーザー(Nd:YO4)を用いた。
C57BL/6 を背景とする複数種の遺伝子改変マウスを用い、皮膚所属リンパ節への樹状細胞
遊走、インフルエンザ全粒子ワクチン接種後の抗インフルエンザ抗体価およびインフルエ
ンザ感染後生存率を比較したところ、近赤外光照射によるアジュバント効果には皮内樹状細胞サブセットの中で Lang-CD11b- migDC, Lang+ migDC, monocyte-derived CCR2+ DC が関与することを明らかにした。また、近赤外光照射によりマウス皮内に CCL20 や CCL2など特定のケモカイン発現が起き、樹状細胞の活性化に関与することが示唆された。更に、骨髄誘導マスト細胞への近赤外光照射で活性酸素種が産生されること、野生型マウスへの抗酸化物質の投与やマスト細胞欠損マウス(KitW-sh/ KitW-sh)で近赤外光のアジュバント効果が減弱すること、KitW-sh/ KitW-sh の皮内にマスト細胞を移植し再構成することでアジュバン
ト効果が復活することから、皮内マスト細胞が活性酸素種の産生を介して下流のアジュバ
ント効果に寄与していることを明らかにした。
【結論】近赤外光を用いたインフルエンザワクチン増強効果には、マスト細胞内の活性酸素種の産生を介して皮内ケモカインの発現を活性化し、特定の遊走性樹状細胞集団の所属
リンパ節への遊走を促進する機序が示唆された。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-08】

Chemically synthesized Alcaligenes lipid A augments nasal vaccine effects to prevent pneumococcal
infection / 化学合成されたアルカリゲネスリピド A は経鼻ワクチン効果を増強し肺炎球菌感染症を防止する
Ken Yoshii1,2, Koji Hosomi1, Atsushi Shimoyama3, Hidehiko Suzuki1, Takahiro Nagatake1, Koichi
Fukase3, Hiroshi Kiyono4, Jun Kunisawa1,2,4,5,6 /吉井 健 1,2，細見
長竹

晃司 1, 下山 敦史 3, 鈴木 英彦１，

貴広１，深瀬 浩一 3，清野 宏 4, 國澤 純 1,2,4,5,6

1

Laboratory of Vaccine Materials, Center for Vaccine and Adjuvant Research, and Laboratory of Gut

Environmental System, National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN)/国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 ワクチン・アジュバント研究センターワクチンマテリアルプロジェ
クト・腸内環境システムプロジェクト 2Graduate School of Medicine, Osaka University/大阪大学大学院医学系研究科

3

Graduate School of Science, Osaka University/ 大 阪 大 学 大 学 院 理 学 研 究 科

4International

Research and Development Center for Mucosal Vaccines, The Institute of Medical Science, The University ofTokyo/東京大学医科学研究所国際粘膜ワクチン開発研究センター 5Graduate School of Pharmaceutical
Sciences, Graduate School of Dentistry, Osaka University/大阪大学大学院薬学・歯学研究科 6Kobe University
Graduate School of Medicine/神戸大学大学院医学研究科
We previously identified Alcaligenes as predominant bacteria inside Peyer’s patches (PPs) but not in thelumen or lamina propria. Our subsequently studies showed that Alcaligenes-derived lipopolysaccharide (LPS)
stimulated dendritic cells (DCs) to enhance the production of IgA-enhancing cytokines, including IL-6, andtherefore promoted antigen-specific immune responses including IgA antibody and Th17 responses without
excessive inflammation. In this study, we chemically synthesized Alcaligenes lipid A, an active part of LPS,
and examined its efficacies as an adjuvant in nasal vaccine against Streptococcus pneumoniae infection.
Mice were intranasally immunized with pneumococcal surface protein A (PspA, as vaccine antigen for S.
pneumoniae) together with chemically synthesized Alcaligenes lipid A. Mice immunized with PspA together
with Alcaligenes lipid A showed higher levels of PspA-specific IgA antibody in nasal wash and BALF
compared with mice immunized with PspA alone. Consistent with this result, germinal center formation was
detected in the nasopharynx-associated lymphoid tissue (NALT) of mice immunized with PspA together with
Alcaligenes lipid A. Additionally, PspA-specific IgG antibody was also induced in serum of mice immunizedwith PspA together with Alcaligenes lipid A. We finally examined whether PspA-specific immune responses
induced by Alcaligenes lipid A could be sufficient to protect against S.pneumoniae infection. Challenge of S.
pneumoniae into the respiratory tract led to loss of body weight and survival rate in mice immunized with PspA
alone. In contrast, all mice immunized with PspA together with Alcaligenes lipid A survived with little bodyweight loss. These findings suggest that Alcaligenes lipid A can be applicated to mucosal adjuvant to enhance
nasal vaccine efficacy against respiratory bacterial infection including S. pneumoniae.

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-09】

Enhancement of nasal immune responses by mucociliary dysfunction to cholera
toxin-based nasal vaccine
Huangwenxian Lan1,2, Hidehiko Suzuki1, Takahiro Nagatake1, Koji Hosomi1, Koji
Ikegami3, Mitsutoshi Setou4, and Jun Kunisawa1,2,5,6,7
1

Laboratory of Vaccine Materials and Laboratory of Gut Environmental System, National
Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition (NIBIOHN), 2Graduate School of
Pharmaceutical Sciences, Osaka University, 3Graduate School of Biomedical & Health
Sciences, Hiroshima University, 4Department of Cellular & Molecular Anatomy, Hamamatsu
University School of Medicine, 5Division of Mucosal Immunology, Department ofMicrobiology and Immunology and International Research and Development Center for
Mucosal Vaccines, The Institute of Medical Science, The University of Tokyo, 6Kobe
University Graduate School of Medicine, 7Graduate School of Medicine and Graduate
School of Dentistry, Osaka University.
Mucosal tissues equip physical barriers such as mucus layer and ciliary function of epithelium.
Tubulin tyrosine ligase-like family member 1 (Ttll1) is essential for normal respiratory ciliary
function, and its deficiency (Ttll1-KO) leads to mucus accumulation in nasal cavity. In this study,
we found an enhanced antigen-specific respiratory immune response in Ttll1-KO mice due tolonger antigen retention on the respiratory epithelium when we used cholera toxin (CT) as amucosal adjuvant. When we intranasally immunized mice with pneumococcal surface protein A(PspA, as vaccine antigen) together with CT, higher level of PspA-specific IgA antibody was
found in nasal wash and plasma cells in nasal passage in Ttll1-KO mice compared withTtll1-hetero (He) mice. In order to address whether the higher immune responses in Ttll1-KO
mice is caused by the accumulation of mucus in the nasal cavity, we treated Ttll1-KO mice withmucus removal before immunization, showing that the mucus removal did not affect theenhanced immune induction against vaccine antigen and thus suggesting that the mucociliary
dysfunction is a key factor for the higher immune responses in Ttll1-KO mice. Indeed, we
observed PspA retention time on the respiratory epithelium of Ttll1-KO mice was longer than
Ttll1-He mice. Consistently, Ttll1-KO mice showed higher PspA uptake to dendritic cells in
nasopharynx-associated lymphoid tissue. Taken together, these results suggest that, themucociliary dysfunction of Ttll1-KO mice enhances the antigen-specific IgA immune responseof CT-based nasal vaccine, since the antigen retention time was extended.

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-10】

Potency of polymyxin B as mucosal adjuvant against inactivated influenza virion
不活化インフルエンザウイルス粒子に対するポリミキシン B の粘膜アジュバント効果
Takashi Odagiri, Naoto Yoshino, Yutaka Sasaki, Yasushi Muraki
小田切

崇、吉野

直人、佐々木裕、村木靖

Division of Infectious Diseases and Immunology, Department of Microbiology, School of Medicine,
Iwate Medical University
岩手医科大学

医学部

微生物学講座感染症学・免疫学分野【背景・目的】粘膜に効果的な防御免疫を誘導するためにはワクチン抗原と共に粘膜アジュバントを接種する必要がある。我々は、卵白アルブミン（OVA）などのタンパク分子を用いた実験で、Bacillus 属の細菌が産生するポリミキシン B（PMB）、コリスチン、サーファクチンの 3 種の環状リポペプチド（環状ポリペプチドに脂肪鎖が結合した化合物）が粘膜アジュバント効果をもつことを見出した。さらにこれらの化合物がアジュバント効果を発揮するためには、1)環状リポペプチドとタンパク分子の複合体形成による抗原デリバリー効率の向上、2)環状リポペプチド単体が肥満細胞に作用することによるヒスタミンの放出と獲得免疫増強に関与するサイトカインの産生、が重要であると報告した。環状リポペプチドのアジュバント効果はタンパク分子でしか確認されていない。
そこで本研究ではインフルエンザウイルス粒子に対する PMB のアジュバント効果を検討した。
【方法】不活化全粒子インフルエンザウイルスを単独（単独群）または PMB と併用（併用群）でマウスに 0 週および 4 週の 2 回経鼻免疫した。また、同じスケジュールで不活化ウイルスを皮下接種（皮下群）した。最終免疫から 2 週後に粘膜分泌液（鼻腔洗浄液および気管洗浄液）中および血漿中のウイルス特異的 IgA、IgG を ELISA で測定した。さらに、最終免疫から 2 週後に致死量のマウス馴
化インフルエンザウイルスを経鼻接種した。
【結果】粘膜分泌液中のウイルス特異的 IgA 抗体価は単独群より併用群で有意に高かった。皮下群では特異的 IgA は検出されなかった。一方、3 群間で血漿中の IgG 抗体価に有意差はなかった。ウイルス接種後、皮下群＞単独群の順で体重の減少率は大きかったが、併用群では体重の減少は観察されず、単独群に比べ有意に体重減少を抑制した。以上より、PMB の粘膜アジュバント効果が不活化ウイルス粒子でも確認された。
【考察】PMB とタンパ
ク分子との複合体は PMB の脂肪鎖とタンパク分子が非共有結合することで形成されると考えられる。
本研究においては PMB とウイルス粒子との複合体形成を確認している。したがって、抗原デリバリ
ー効率は検討していないものの、鼻粘膜でのウイルス粒子の取り込みの向上に PMB が寄与していると思われる。PMB は OVA などのタンパク抗原と不活化ウイルス粒子のいずれの形状のワクチン抗原にもアジュバント効果を発揮すると予想され、汎用性の高いアジュバントになり得ると考えられた。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-11】ZBP1 governs neutrophil-mediated inflammation in influenza virus infection via IL-1α
Masatoshi Momota1, 3, Patrick Lelliott4, Takato Kusakabe1, 3, Atsuko Kubo1, Koji
Kobiyama5,

Etsushi Kuroda1, 3, Yumiko Imai2, Cevayir Coban4, and Ken. J. Ishii1, 3.

1

Laboratory of Adjuvant Innovation, and 2Regulation of Intractable Infectious Diseases,
National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition, Osaka 567-0085, Japan;
3
Laboratory of Vaccine Science, and 4Malaria immunology, World Premier International
Immunology Frontier Research Center, Osaka 565-0871, Japan;
6
La Jolla Institute for Allergy and Immunology, La Jolla, CA 92037.
Keywords: influenza, necroptoic cell death, NLRP3 inflammasome, IL-1α/β, neutrophils,
In influenza A virus (IAV) infection, IL-1 plays an important role in both protective andpathological immunity, however, the precise immunological mechanism by which the
production of IL-1α and IL-1β is regulated during lethal and/or non-lethal IAV is unknown.
Recent evidence suggest that Z-DNA binding protein-1 (ZBP1) is involved in IAV-induced
cell death and IL-1β induction, however, the involvement of the NACHT, LRR and PYD
domains-containing protein 3 (NLRP3) inflammasome is unclear, and ultimately it remains
controversial if ZBP1 contributes toward protective, or pathological immunity.
Here, we show that during influenza infection, IL-1α is a critical upstream factor for the
induction of further IL-1β. IL-1α/β were released after IAV induced cell death, which wascontrolled by ZBP1 but not NLRP3 inflammasome activation. Indeed, mice lacking NLRP3,
ASC or Caspase-1/11 had no phenotype, while those lacking either IL-1 receptor (IL-1R) or
ZBP1 displayed higher viral load and mortality than wild type mice due to reduced IL-1α/βsecretion in lung. Conversely, when mice were infected intratracheally, to mimic highly
pathogenic infection, ZBP1 deficiency protected mice from acute pulmonary inflammation.
These pathological and detrimental roles of ZBP1 mirrors its essential role in recruitment
and infiltration of neutrophils to the lung, and in resultant inflammation and neutrophil
extracellular trap (NET) formation.
Collectively, these results indicate that ZBP1 is essential not only for IAV-induced cell
death, but also IL-1α production in vitro and in vivo in the absence of NLRP3 inflammasome
machinery. As a result, ZBP1 controls IL-1-dependent, neutrophil-mediated pulmonary
inflammation, leading to reciprocal outcomes, protective immunity or immunopathology,
depending on the type, kinetics, and target host tissue of IAV infection.

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-12】

Application of D35 adjuvant containing lipid nanoparticles to tumor treatment
D35 アジュバント含有脂質ナノ粒子の腫瘍治療への応用
Yoshihiko Tanimoto1, Lisa Munakata2, Akio Osa3, Jie Meng1, Yasunari Haseda1, Shohei
Koyama3, Ryo Suzuki2, Taiki Aoshi1.
谷本佳彦 1, 宗像理紗 2, 長彰翁 3, 孟潔 1, 長谷田泰成 1, 小山正平 3, 鈴木亮 2, 青枝大貴 1.
1

Vaccine Dynamics Project, BIKEN Innovative Vaccine Research Alliance Laboratories,

Research Institute for Microbial Diseases, Osaka University
2

Faculty of Pharma-Science, Teikyo University

3

Graduate School of Medicine, Osaka University1

大阪大学 微生物病研究所

2

帝京大学 薬学部

3

大阪大学大学院

BIKEN 次世代ワクチン協働研究所

ワクチン動態プロジェクト

医学系研究科D35 は A タイプの免疫賦活 CpG オリゴデオキシヌクレオチド（ODN）であり、形質細胞様樹状細胞（pDC）から IFN-α を多く誘導する。また、B、C、P タイプなど他の CpG ODN と違い、D35
は天然型ホスホジエステルのバックボーンを持つことから高い安全性と優れた効果を持つと考えられる。これらの特徴から D35 は腫瘍に対しても安全性の高い免疫賦活化剤として機能し抗腫瘍効果を発揮することが期待される。本研究では、D35 と脂質を複合体化した Lipid Nano Particle（D35LNP）を作製し、抗腫瘍効果を評価した。D35LNP はオリジナルの D35 に比べて pDC から
TLR9 依存的に IFN-α をより強く誘導した。また、D35LNP 投与によって MC38 皮内腫瘍の顕著な増殖抑制がみられた。この増殖抑制効果は、オリジナルの D35 では見られず、抗 CD8 抗体で処理することで消失した。腫瘍組織の mRNA を評価すると、D35LNP 治療によって Th1 関連遺伝子や特定の TCR レパトア遺伝子の増幅が認められた。腫瘍組織切片を解析すると D35LNP 投与により腫瘍内への CD8T 細胞の浸潤が多く認められた。さらに、抗 PD-1 抗体との併用治療効果もみられた。これらのことから D35LNP は腫瘍に対する免疫賦活化剤として作用し CD8T 細胞を活性化す
る抗腫瘍薬となり得ることが示唆された。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-13】

The combination of DAMP-inducing and PAMP adjuvants parallelly induces type-2
and type-1 immune responses
DAMP 誘導アジュバントと PAMP アジュバントの併用は 2 型および 1 型免疫応答を誘導する
Tomoya Hayashi
林 智哉
National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition
医薬基盤・健康・栄養研究所
Abstract
Recently, it was reported that 2-hydroxypropyl--cyclodextrin (HP--CyD), a common
pharmaceutical additive, can act as a vaccine adjuvant to enhance protective type-2
immunogenicity to co-administered seasonal influenza split vaccine by inducing host-derived
damage-associated molecular patterns (DAMPs). However, like most other DAMP-inducing
adjuvants such as aluminum hydroxide (Alum), HP--CyD may not be sufficient for the induction ofprotective type-1 (cellular) immune responses, thereby leaving room for improvement. Here, we
combined HP--CyD with a humanized TLR9 agonist (K3 CpG-ODN), a potent type-1 inducing PAMP
adjuvant. These combination parallelly induced both type-2 and type-1 immune responses. Moreover,the induction of IgE by HP--CyD was suppressed by the addition of K3 CpG-ODN. HP--CyD andK3 CpG-ODN-adjuvanted influenza HA split vaccination protected the mice against lethal challengewith high dose of influenza virus, which could not be rescued by the singular-adjuvanted vaccine.
Further experiments using gene deficient mice revealed that type-2 and type-1 immune responses
enhanced by the combined adjuvants were dependent on TBK and TLR9, respectively, indicating
their parallel signaling pathways. Taken together, these results may offer the potential clinicalapplication of the combination of DAMP-inducing and PAMP adjuvants to improve the vaccine
immunogenicity and efficacy by enhancing both type-2 and type-1 immune responses in a parallelmanner.
Reference:(1) M. Onishi et al., J. Immunol., 194, 2673-2682 (2015).
(2) T. Kusakabe et al., Vaccine, 34, 191-198 (2016)

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-14】

Vaccine-induced IgG1 blocks effector function of IgG2 in influenza vaccine
インフルエンザワクチンにおける IgG サブクラスの競合と感染防御への影響評価
Meito Shibuya1, 2, Taiki Aoshi2, 3, Yasuo Yoshioka1, 2, 3
澁谷銘人 1,2、青枝大貴 2,3、吉岡靖雄 1,2,3
1

Grad. Sch. of Pharm. Sci., Osaka Univ., 2RIMD, Osaka Univ., 3The Research Foundation for Microbial

Diseases, Osaka Univ.
1

大阪大学薬学研究科

創薬ナノデザイン学、2 大阪大学微生物病研究所 BIKEN 次世代ワクチン協働研究所、3 一財）阪大微生物病研究会

BIKEN 次世代ワクチン開発研究センター

要旨
現行のインフルエンザワクチンでは、ワクチン株と流行株が異なると十分なワクチン効果を期待できない。そのため、同一亜型内の別株（ヘテロローガスな株）に対して交差反応性を示すワクチンの開発が期待されている。ヘテロローガスな感染防御においては、非中和型の抗体と FcR を介した抗体依存性細胞傷害（ADCC）が重要であり、IgG サブクラスの中でも特に、IgG2 の重要性が報告されている。しかしワクチンにおいては、IgG1 も産生されるため、抗原への結合を IgG2 と競合することで、ヘテロロ
ーガスな感染防御を阻害する可能性も考えられる。そこで我々は、アジュバントの違いがワクチンの交差反応性に及ぼす影響を検討すると共に、抗体のサブクラスが混在することで感染防御に与える影響を検討した。本検討では H1N1 の同一亜型株として Cal 株および PR8 株を用い、アジュバントとして水酸
化アルミニウム Alum および TLR9 リガンドである CpG 核酸を用いた。まず Cal 株由来スプリットワクチ
ンとアジュバントをマウスに免疫し、ヘテロローガスな PR8 株に対する特異的抗体価を測定した。その結果、Alum 群、CpG 群ともに同程度の抗原特異的 IgG が検出され、Alum 群で IgG1 が、CpG 群で IgG2cの上昇が認められた。また、MDCK 細胞を用いて PR8 特異的中和抗体価を測定したところ、Alum 群、CpG
群ともに中和抗体価は検出されなかった。さらにワクチン後、PR8 を致死量で感染させたところ、中和
抗体価が検出されないにも関わらず、CpG 群で体重減少の抑制、生存率の上昇が認められるなどの交差反応性を示した。一方で、CpG 群と同程度の Total IgG が検出されているにも関わらず、Alum 群では感染防御が観察されなかった。次に、抗体のサブクラスが混在することで感染防御に与える影響を評価する目的で、CpG 群由来の血清（CpG 血清）と Alum 群由来の血清（Alum 血清）を混合し、混合血清中のPR8 特異的 IgG2c 抗体価を測定した。その結果、Alum 血清が高濃度になるにつれ、CpG 血清由来 IgG2cの PR8 に対する結合が阻害され、検出可能な抗体価の減少が認められた。次に、in vivo でも同様の阻害を評価するため、CpG 血清と Alum 血清を混合し、PR8 と共に経鼻投与した。その結果、Alum 血清を高濃度で混合している群では、Alum 血清非混合群に比べ、体重減少および生存率の低下が認められた。以上の結果より、CpG アジュバントにより、非中和型 IgG2c の産生が上昇し、ADCC によって、ヘテロロー
ガスな感染に交差反応性を示すことが明らかとなった。また、IgG1 が混在することで、IgG2c による感染防御が阻害されたことから、IgG2 のみを産生上昇させるアジュバントがヘテロローガスな感染には有用であると考えられた。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-15】

Intrinsic MyD88 signalling in B cells controls IFNγ-mediated early IgG2c class switching in
response to a particulate adjuvant
Michelle Sue Jann Lee1, Yayoi Natsume-Kitatani2, Burcu Temizoz3, Etsushi Kuroda3,4, Wataru
Ise5, Takeshi Inoue5, Tomohiro Kurosaki5, Kenji Mizuguchi2, Shizuo Akira6, Ken J Ishii3,4, andCevayir Coban1
1 Laboratory of Malaria Immunology, Immunology Frontier Research Center (IFReC), Osaka

University, Osaka, Japan
2 Laboratory of Bioinformatics, National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition,

Osaka, Japan
3 Laboratory of Vaccine Science, IFReC, Osaka University, Osaka, Japan
4 Laboratory of Adjuvant Innovation, Center for Vaccine and Adjuvant Research, National Institutesof Biomedical Innovation, Health and Nutrition, Osaka, Japan
5 Laboratory of Lymphocyte Differentiation, IFReC, Osaka University, Osaka, Japan
6 Laboratory of Host Defense, IFReC, Osaka University, Osaka, Japan

Adjuvants improve the potency of vaccines, but the modes of action (MOAs) of most adjuvants
are largely unknown. Toll-like receptor (TLR)-dependent and -independent innate immune
signaling through the adaptor molecule MyD88 has been shown to be pivotal to the effects ofmost adjuvants; however, MyD88’s involvement in the TLR-independent MOAs of adjuvants ispoorly understood. Here, using the T-dependent antigen NIPOVA and a unique particulate
adjuvant called synthetic hemozoin (sHZ) we show that MyD88 is required for early germinal
center formation and enhanced antibody class-switch recombination (CSR). Usingcell-type-specific MyD88 knockout mice, we found that IgG2c class switching, but not IgG1class switching, was controlled by intrinsic MyD88 signaling in B cells. Notably, interferon
gamma (IFNγ) produced by various cells including T cells, NK cells and dendritic cells was theprimary cytokine for IgG2c CSR and B-cell intrinsic MyD88 is required for IFNγ production.
Moreover, IFNγ receptor (IFNγR) deficiency abolished sHZ-induced IgG2c production.
Recombinant IFNγ administration rescued IgG2c CSR impairment in mice lacking B-cell
intrinsic MyD88 upon immunization with sHZ adjuvant. Together, our results show that intrinsic
MyD88 signaling in B cells is involved in the MOA of certain particulate adjuvants and enhance
our specific understanding of adjuvants and vaccines.

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-16】

Molecular interaction between IL-1 alpha and genomic DNA released under the cell death by Alum

Kou Hioki1,2, Burcu Temizoz1,2, Etsushi Kuroda1,2, Ken J. Ishii1,2

1

Laboratory of Vaccine Science, WPI Immunology Frontier Research Center (IFReC), Osaka

University, Japan
2

Center for Vaccine and Adjuvant Research (CVAR), National Institutes of Biomedical Innovation,

Health and Nutrition (NIBIOHN)

Abstract
Recently, the number of patients who are suffering from allergic inflammation, including
allergic asthma or rhinitis has been increased. Although the reason is unclear, it issuggested that environmental factors are the cause of allergic inflammations. Particulatematter 2.5 (PM2.5) and Asian yellow sand dust are well-known inflammatory particle, andthese fine particles are known to induce pulmonary inflammation when they are deeply
inhaled in the lung. It is important to note that these fine particle work as an adjuvant andinduce allergic immune responses.
Adjuvants are the reagents that enhance the immune response to coadministeredantigen(s), and aluminium salts (referred to as Alum) is one of well-known vaccine
adjuvants. Alum is categorized into particle adjuvant, but the mode of action of particle
adjuvants are still unclear.
Once particle adjuvants are inhaled, they are deposited in the lung, and then induce
allergic lung inflammation. In allergic inflammation, serum immunoglobulin E (IgE) against
allergen, which is known to be as a mediator of allergic responses, is increased. Therefore,
IgE is an important marker for allergic diseases. Some particle adjuvants such as alum andsilica are known to preferentially increase the IgE level. However, it is also unclear that
underlying mechanisms by which particle adjuvants induce allergic responses.
Damage-associated molecular patterns (DAMPs), including DNA, are reported as factors
for the adjuvanticity of Alum, and released DAMPs under the cell death are thought toactivate the innate immune cells and subsequently adaptive immune cells.
Recently, we revealed that Interleukin-1alpha (IL-1α), which is released under the cell
death after alum stimulation, works as a DAMP as same as DNA. We also found that IL-1as
released in the lung after administration of alum into the lungs, and released IL-1αinvolvedin IgE production in vivo.
In this study, we investigated the interaction of IL-1α which are released as DAMPs afteralum stimulation, and we hypothesized that IL-1α binds to DNA and DNA- IL-1α complex
work as effective adjuvant for the activation of immune cells.

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-17】

Adjuvanticity of combination protamine, a cationic nuclear protein, andnucleic acid adjuvants
カチオン性核タンパク質 プロタミンと核酸アジュバントの併用による効果
Saori Hodokami1,2, Takato Kusakabe1,2, Masatoshi Momota1,2, Etsushi Kuroda1,2 and Ken J Ishii1,2
程上紗央里 1,2、日下部峻斗 1,2、百田匡寿 1,2、黒田悦史 1,2、石井健 1,2
1

Adjuvant Innovation, National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition

2

Laboratory of Vaccine Science, Immunology Frontier Research Center (IFReC), Osaka University

国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所
大阪大学免疫学フロンティア研究センター

アジュバント開発プロジェクト

ワクチン学分野

アジュバントは、ワクチンの効果を増強させるために添加される物質であり、アルミニウム塩や核酸、
オイルアジュバントなどが用いられている。中でも核酸アジュバントは高い免疫賦活能を有する一方、生体内で分散しやすく、酵素による分解を受けやすいため、免疫細胞により効率的に取り込ませるシス
テムの開発が望まれている。一方、プロタミンはアルギニンを主成分としたカチオン性タンパク質であり、核酸と静電的に相互作用し複合体を形成する。さらに、食品の保存料や医薬品としての使用実績があり、生体適合性に優れるタンパク質である。そこで、本研究では核酸アジュバントにプロタミンを添加することにより、核酸アジュバントの免疫賦活化効果が増強されるか否かを検討した。
まず、プロタミン (硫酸塩・塩酸塩) と STING リガンド、または K3 CpG-ODN を種々の混合比で調製し、マクロファージ様細胞である RAW264.7 細胞および腹腔滲出マクロファージに添加後のサイトカイン産生量を測定した。その結果、TNF- および IL-12p40 の産生量はプロタミン添加の影響を受けなかったことから、in vitro においてはプロタミンの併用により核酸アジュバントの効果は変化しない
ことが示唆された。そこで、モデル抗原に OVA を用い、核酸アジュバントおよびプロタミンと混合してマウス投与し、血清中の抗原特異的 IgG1 および IgG2c 量と脾細胞を OVA で刺激後のサイトカイン
産生を調べた。その結果、今回の検討においてはプロタミンの併用による核酸アジュバントの免疫賦活化効果の増強はみられなかった。今後はプロタミンと核酸アジュバントの相性も考慮し、両者の混合比、混合方法の再検討等を行っていく。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-18】

Priming immunization with whole-virion influenza vaccines is essential for inductionof ADCC activities of virus-specific antibodies
インフルエンザワクチン特異的 ADCC 抗体の産生誘導には全粒子ワクチン初回免疫が必要
である
Kayoko Sato, Hideki Asanuma
佐藤佳代子、浅沼秀樹
Influenza Virus Research Center, National Institute of Infectious Diseases
国立感染症研究所

インフルエンザウイルス研究センター

要旨
インフルエンザワクチンにはウイルス粒子をホルムアルデヒドで固定した全粒子ワクチンとウイルス粒子をさらにエーテルで処理し脂質膜を除去し部分的に HA 成分を精製したス
プリットワクチン（以下 HA ワクチン）がある。これまでに我々は、追加免疫を行った場合
全粒子ワクチンはスプリットワクチンと比べて、avidity の高いワクチン特異的抗体及び抗体依存性細胞傷害（ADCC）活性を持つ抗体を産生誘導することを報告してきた。これらの抗体誘導のメカニズムを詳細に解明するために、初回免疫に焦点を当てた検討を行った。
全粒子ワクチンは、初回免疫または追加免疫のいずれかにより、HA ワクチンよりも avidityの高い IgG 抗体を産生誘導した。一方、ADCC 活性を持つ抗体の産生誘導は、全粒子ワクチンを用いて初回免疫を行った場合にのみ誘導され、初回免疫を HA ワクチンで行うと全粒子ワクチンで追加免疫を行っても誘導されないことがわかった。ADCC 活性を持つ抗体は
BALB/c マウスでは IgG2a であることから、インフルエンザワクチンによる抗体産生誘導時の igG サブクラスの決定は初回免疫時の応答が必須であると考えられる。一方 affinity
maturation は初回免疫、追加免疫のどちらの過程でも誘導されると考えられることから、
インフルエンザワクチンは初回免疫と追加免疫で異なる機構により抗体産生を誘導している可能性が示された。このように、投与時期による抗体産生誘導機構の違いを評価することは今後のアジュバント開発に際し有益な知見を得ることが期待される。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-19】

Evaluation of effectiveness and safety of CpG-ODN G9.1 as mucosal adjuvant fornasal influenza vaccines
CpG-ODN G9.1 の経鼻インフルエンザワクチンにおける有効と安全性の評価
Koichiro Tateishi1, 2, Kayoko Sato1, Eita Sasaki1, Takuo Mizukami1, Junichi
Maeyama1,Sumiko Iho3, Saburo Yamamoto4, Norio Yamamoto5, Kohtaro Fujihashi6,7,
Hideki Asanuma1
立石 恒一朗 1, 2、佐藤 佳代子 1、佐々木 永太 1、水上 拓郎 1、前山 順一 1、伊保 澄子 3
山本 三郎 4、山本 典生 5、藤橋 浩太郎 6,7、浅沼 秀樹 1
1

National Institute of infectious Diseases, 2Japan Agency for Medical Research andDevelopment, 3University of Fukui, 4JAPAN BCG Laboratory, 5Juntendo University,

6

The University of Tokyo, 7 The University of Alabama at Birmingham1

国立感染症研究所、 2 国立研究開発法人日本医療研究開発機構、3 福井大学、
4
日本 BCG 製造株式会社、5 順天堂大学、6 東京大学、7 アラバマ大学バーミングハム校
我々はこれまで、福井大学と共に開発した新規アジュバントである CpG ODN G9.1
（G9.1）の経鼻インフルエンザワクチンへの応用に向けた研究を行ってきた。G9.1 はホスホジエス
テル結合のみで構成された A(D)タイプの CpG ODN であるが、他の A(D)タイプの CpG ODN よ
りも高い免疫増強効果を有することが明らかとなっている。これまでの研究で、G9.1 をス
プリット型のインフルエンザワクチンとともに経鼻投与すると、G9.1 を添加しない場合と比較して高い防御効果が認められ、鼻腔中にはそれと相関した特異的分泌型 IgA 応答が認められた。このことから G9.1 はインフルエンザワクチンとともに経鼻投与することで、高い粘膜免疫増強効果があることが明らかとなった。また、この増強効果を他の粘膜アジュ
バントと比較した結果、Poly(I:C)や K(B)タイプの CpG ODN と同等の免疫誘導能を有することも明らかとなった。一方、安全性を評価することを目的とし、G9.1 を経鼻投与後の肺における Type I IFN 関連遺伝子群の発現と IFN-α産生能を検討した。その結果、有意なType I IFN 関連遺伝子群の発現は認められるものの、Poly(I:C)や K(B)タイプの CpG ODN
よりも、発現が有意に低いことが明らかとなった。また投与 24 時間後の肺では IFN-αの産生が認められなかった。以上の結果は G9.1 には高い特異抗体誘導能を有している一方で、炎症反応は弱いことを示唆しており、G9.1 が高い有効性だけでなく、高い安全性を有する
粘膜アジュバントである事が示唆された。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-20】

Comprehensive analysis for the immunogenicity in human to explore vaccine targets
ワクチンターゲット探索へ向けた網羅的ヒト免疫原性解析
Takeharu Minamitani1,2, Rika Furuta3, Ken-Ichi Imadome4 and Teruhito Yasui1,2
南谷武春 1,2、古田里佳 3、今留謙一 4、安居輝人 1,2
1 Laboratory of Infectious Diseases and Immunity, NIBOHN, 2 Laboratory of
Immunobiologics Evaluation, CVAR, NIBIOHN, 3 Japanese Red Cross Kinki Block Blood
Center, 4 Department of Advanced Medicine for Infections, NCCHD
1 医薬基盤・健康・栄養研究所 感染症制御プロジェクト、2 ワクチン・アジュバント研究センター 免疫バイオロジクスプロジェクト、3 日本赤十字社近畿ブロック血液センター、4 国立成育医療研究センター 高度感染症診断部
要旨
感染症予防に用いられるワクチンは、ヒト免疫系を効率的に活性化し、免疫記憶を誘導する一方で、副反応は最小限に抑えることが重要である。このことから、近年では、いくつかの抗原を組み合わせたコンポーネントワクチンの開発が進んでいる。コンポーネントワクチンに用いる抗原には、ヒトにおいて免疫原性を持つタンパク質が用いられる。しかしながら、多くの病原体では、ヒト体内において免疫原となる因子について広く明らかにされていない。そこで我々は、ヒト血中抗体の抗原への反応性を指標として、免疫原性を網羅的に検出する PathogScan 法を新規に開発した。
本発表では、サイトメガロウイルス(CMV)のヒト免疫原性解析を試みたので報告する。UniProt に登録された CMV 全系統の全 ORF を分割し、各ペプチドに対応する遺伝子配列から、ペプチド断片を提示する M13 バクテリオファージライブラリを作製した。このファージライブラリを、ヒト血清抗体
によって免疫沈降し、各 CMV タンパク質の検出頻度を次世代シークエンサーによって解析した。こ
の検出頻度をヒト免疫原性の指標として、遺伝情報統計学的解析を行った。ヒト血清は、CMV 陰性
を 93 検体、CMV 陽性を 25 検体（健常人 9, 先天性 CMV 感染症 15, CMV 血球貪食症候群 1）を用いた。
その結果、CMV 陽性健常人において検出されたタンパク質を分類した結果、約 4 割がウイルス構成成分であった。また、これまで高抗体価抗原として知られている pp65 (UL83)も検出され、PathogScan 法の有用性が強く示唆された。先天性 CMV 感染症、および CMV 血球貪食症候群由来血清は抗 CMV 抗体価が高値であり、特異的な CMV タンパク質が高頻度で検出された。さらに、CMV 陽性
健常人検体と CMV 関連疾患検体では、検出されるタンパク質の傾向が異なることが明らかとなった。
これらの結果から、CMV をターゲットとする液性免疫反応の免疫原性が明らかとなった。今後、検出されたタンパク質の細胞性免疫誘導能を検討することで、CMV コンポーネントワクチンの候補となり得るか検討する予定である。

Abstract of poster presentation / 発表要旨

【P-21】

Characteristics of human Tetanus Neurotoxin antibody
ヒト抗破傷風毒素抗体の単離と多様性解析
Karin Kiyose, Takeharu Minamitani and Teruhito Yasui
清瀬かりん、南谷武春、安居輝人
Laboratory of Infectious Diseases and Immunity, Laboratory of Immunobiologics Evaluation,
CVAR, NIBIOHN
医薬基盤・健康・栄養研究所 感染症制御プロジェクト、ワクチン・アジュバント研究セ
ンター 免疫バイオロジクスプロジェクト
要旨
近年、ワクチンアジュバント開発の進展により、ワクチン接種有効率の著しい向上が認められる一方、発症後対処療法の必要性が示唆されている。特に、感染症においては、免疫グロブリン製剤の適用に加えて、抗体医薬品での特異的、かつ効果的な治療が不可逆的損傷の阻止に有効と考えられている。しかしながら、治療法開発におけるシーズ探索は、未だ十分に行われていない。さらに、抗体医薬品開発の基盤となるヒト
免疫原性、特にヒト抗体多様性成立メカニズムの解明には至っていない。本研究会では、ヒト免疫原性成立機構の解明、および抗体医薬品シーズ探索法の開発を目的として、ヒト末梢血より破傷風毒素（TeNT）に対するヒト抗体クローンを単離し、その性状を解析したので報告する。
健常人ボランティアより提供いただいた末梢血から末梢血単核球（PBMC）を分離した。Epstein-Barr ウイルス（EBV）により PBMC 中 B 細胞を不死化した後、14 日後、培養上清を ELISA に供した。ELISA では、大腸菌で産生、精製した TeNT サブユニットドメインタンパク質、Hc、Hn、Lc に対する反応性を検出した。ELISA
陽性クローンは、次世代シークエンサーにて抗体遺伝子配列を決定した。さらに、組換え抗体を作製した後、機能性試験に供した。PBMC 中の TeNT 抗体クローンの頻度は、抗ヒト CD40 抗体で活性化した後、培養上清を
ELISA することによって検討した。
ヒト PBMC より抗 TeNT 抗体クローンを 15 種類単離した。各ドメインへの反応性を検討した結果、Hc, 11
種類、Lc, 3 種類、Lc-Hn mix, 1 種類であった。培養上清を用いた機能性試験では、Hc 依存性 GT-1b 結合阻害、Lc 依存性 Vamp2 切断阻害活性を有するクローンが、それぞれ 2 種類、1 種類認められた。さらに GT-1b結合阻害は、組換え抗体においても活性保持が確認された。PBMC 中 TeNT 抗体クローンの頻度は、EBV 感染に
よって 106 PBMC に 1 細胞程度の検出であったのに対し、CD40 刺激における検出感度は 5 倍程度で認められた。
今回我々が構築した抗体シーズ探索法を用いて、TeNT に対する機能的抗体 3 種類が同定された。さらに本法では、末梢血中 TeNT 抗体クローンの約 20％が探索できることが明らかとなった。本開発技術は、ワクチン接種後評価における抗体濃度、中和活性のみならず、抗体クローン出現頻度、及び抗体の質的変化といった新たな評価基準を付加する可能性を強く示唆している。

ポスター発表＜Poster

Layout＞【掲⽰時間】平成 31 年 1 ⽉ 22 ⽇（⽕）9:30〜16:30※うち、ポスターセッション 12:50〜13:50【掲⽰場所】サイエンスホール
ScreenP-09 P-10 P-11 P-12 P-13
P-08
P-07
P-06
P-05
P-04
P-03
P-02
P-01

P-14
P-15
P-16
P-17
P-18
P-19
P-20
P-21
Entrance

P-1

Akihiro Nakaya （Japan BCG Laboratory）

P-2

Yasushi Chuma （Japan BCG Laboratory）

P-3

Yukihiro Shibuya（Japan BCG Laboratory）

P-4

Kazuhiro Matsuo （Japan BCG Laboratory）

P-5

Noriyuki Yuasa（Tokyo chemical industry co. Ltd.）

P-6

Akane Watanabe（Osaka University）

P-7

Yoshifumi Kimizuka（National Defense Medical College）

P-8

Ken Yoshii (NIBIOHN)

P-9

Huangwenxian Lan(NIBIOHN)

P-10 Takashi Odagiri（Iwate Medical University）
P-11

Masatoshi Momota (NIBIOHN)

P-12 Yoshihiko Tanimoto（Osaka University）
P-13 Tomoya Hayashi（NIBIOHN)
P-14 Meito Shibuya（Osaka University）
P-15 Michelle Sue Jann Lee（Osaka University）
P-16

Kou Hioki (NIBIOHN)

P-17 Saori Hodokami (NIBIOHN)
P-18 Kayoko Sato（National Institute of Infectious Diseases）
P-19 Koichiro Tateishi（National Institute of infectious Diseases）
P-20 Takeharu Minamitani(NIBIOHN)
P-21 Karin Kiyose (NIBIOHN)

Today's Programth○12

Meeting of the Japanese Vaccine Adjuvant Research Consortium (10:00-16:55)

10:00-10:05
10:05-10:35(30min)10:35-11:05(30min)
11:05-11:35(30min)11:35-11:55(20min)Opening remarks : Koichi Yamanishi / The Research Foundation for Microbial
Disease of Osaka University
Yasushi Kawaguchi / The University of TokyoYUKIKINJO / The Jikei University School of Medicine

Quentin Sattentau / University of Oxford
Ken Ishii / The University of Tokyo
Jun Kunisawa / The National Institute of Biomedical Innovation, Health andNutrition（NIBIOHN）

11:55-12:50

Lunch

12:50-13:50
13:50-14:20(30min)
14:20-14:50(30min)
14:50-15:00(10min)
15:00-15:10(10min)
15:10-15:20(10min)
15:20-15:50(30min)
15:50-16:20(30min)
16:20-16:50(30min)
16:50-16:55

Poster Session
Teruhito YASUI / The National Institutes of Biomedical Innovation, Health andNutrition (NIBIOHN)
Yumiko Imai / The National Institutes of Biomedical Innovation, Health andNutrition (NIBIOHN)
Yoshifumi Kimizuka / National Defense Medical College
Akane Watanabe / Osaka University
Kazuhiro Matsuo / Japan BCG Laboratory
Coffee break & poster session
Kiyoshi Hirahara / Chiba University
Kiyoshi takatsu / Toyama Prefectural Institute for Pharmaceutical Research
Closing remarks : Jun Kunisawa / The National Institutes of Biomedical
Innovation, Health and Nutrition（NIBIOHN）

第 12 世代アジュバント研究会

プログラム・講演要旨集

Program and Abstracts (January 22, 2019, Senri Life Science Center, Osaka,Japan)

Copyright Ⓒ 2019 All rights reserved(不許複製・禁無断転載)

出版：2019 年 1 月 22 日

発行：国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所ワクチン・アジュバント研究センター事務局