Def-HEP ヒト肝細胞 [iPS細胞由来, 健常細胞, 疾患モデル]
DeﬁniGENヒト肝細胞は、初代ヒト肝細胞の多くの機能特性を示す、高機能凍結保存細胞製品です。単層で増殖させた場合、細胞は典型的な肝細胞の形状である、タイトな敷石状形態を示し、二核細胞も存在します。初代ヒト肝細胞に匹敵するレベルで、アルブミン産生、グリコーゲン貯蔵、CYP450 mRNA発現および触媒活性を含む重要な肝細胞機能が観察できます。DeﬁniGENの肝細胞はミトコンドリア酸化によるリン酸化を介してATPを生成するため、グリコール分解を介してATPを生成する不死化肝細胞株で観察される不利な現象である「クラブツリー効果」を示さず、かつミトコンドリア毒物学的用途に適している細胞です。解凍による機能回復後、DeﬁniGEN肝細胞は、肝炎のライフサイクル研究のための有効なモデルとなる15〜20日間の効果的なプロセスウインドウを有し、CD81、SR-B1、Claudin-1などの重要な肝炎マーカーが初代ヒト肝細胞と近いレベルまで発現します。

ヒト肝細胞モルフォロジー:複数のCYP450活性の誘導:

Def-HEPは高機能化されたヒト肝細胞です。解凍後にプレート上に播種された細胞は、Def-HEP細胞におけるCYP450誘導活性評価結果は、初代肝細胞（PHH）肝細胞の特徴である、密に詰まった「敷石状」の形状を再現します。と近いことを確認しています（CYP1a2はomeprazole誘導によるERODアッセイ、CYP450はrifampicin誘導によるPGloアッセイ結果）。

図1. Def-HEPの細胞モルフォロジー。肝細胞の特徴して敷石状と双核状であることが確認できます

肝細胞変異マーカー:
Def-HEP細胞からは、初代肝細胞（PHH）に見られる特異的マーカーであるアルブミン分泌、A1AT産生、グリコーゲン貯蔵やLDL吸収等が確認できます。Def-HEPは多くの研究分野において初代肝細胞（PHH）の代替品として利用されています。

図4. 解凍後のDef-HEP肝細胞における複数のCYP活性評価結果。結果より、
図2. Def-HEP WTにおける機能解析。(A) アルブミン分泌、倍率10倍、(B) PAS染色によるグリコーゲン貯蔵、(C) 蛍光染色によるLDLコレステロール吸収

Def-HEP細胞によるCYP活性はPHHと比較可能なレベルであること、誘導に関してはPHHと近いレベルにあることがわかる（CYP1a2はomeprazole誘導によるERODアッセイ、
CYP450はrifampicin誘導によるPGloアッセイ結果）

肝細胞変異マーカー分析:

肝炎マーカー解析:QPCRによる解析から、Def-HEP細胞は初代肝細胞（PHH）と近い主要肝細胞マーカーを

Def-HEP細胞の複数のバッチによる遺伝子解析の結果、CD81、SR-B1、示していることが確認できる。
アルブミン分泌、A1AT産生、グリコーゲン貯蔵、LDL吸収等

Claudin-1およびオクリンを含む重要な肝炎マーカーを再現可能な状態での機能を有することについても確認しています。

発現することを実証しております。 観察されたマーカーのレベルは、PHHと極めて類似しています。

Hepatocyte key marker analysis
2.500
2.000
1.500
1.000
0.500
0.000

Def HEP WTPHHAAT

AFP

ALB

HEP G2HNF4a

図3. 各種肝細胞おける遺伝子発現解析。Def-HEPによる遺伝子発現は初代肝細胞（PHH）に近い。

図5. SR-B1、CD81、Claudin-1およびOccludinを含むDef-HEPにおける主要なC型

またDef-HEPにおけるPHHのレベルは極めて低く、これは細胞の機能が成熟されていることを示しています。

肝炎マーカーの存在を実証するために行われた遺伝子発現分析結果

疾患モデルの作製:
創薬スクリーニング

疾患モデル検証における一般的フロー

従来型の細胞ツールでは、細胞間のバッチ間差や、疾患細胞と健常細胞のフェノタイプが完全に一致していないなどの理由から、薬効が見落とされた化合物が多数存在すると考えられます。

細胞機能評価iPS由来細胞を、初代細胞もしくは既存の細胞ツールと評価比較

ゲノム編集*を採用した疾患モデルにおいては、疾患の有無のみが異なる細胞をペアで提供することが出来るため、より正確なスクリーニングを行うことが可能になりました。
（*CRISPR/CAS法を採用）【対象】健常モデルiPS由来細胞

希少疾患モデル

疾患機能評価

希少疾患に対する創薬開発は、疾患細胞が容易に入手できない点と動物モデルを用いた際のコストおよび倫理性が導入の障害になっています。

既存の疾患モデル細胞を利用し、フェノタイプ解析等を実施

DeﬁniGENは世界各国の疾患細胞バンクへアクセスし、患者由来の細胞を入手後、iPS細胞への初期化を行った後、目的の細胞への分化誘導を行います。

【対象】疾患モデルiPS由来細胞

小規模スクリーニング

細胞は凍結バイアルにてクライアントに納入されます。

代表的な化合物を採用し、小規模のスクリーニング試験を実施【対象】
カスタム疾患モデルiPS由来細胞

健常モデル分化誘導細胞

線維芽細胞(健常細胞)

疾患モデル分化誘導細胞

ゲノム編集

大規模スクリーニング*

化合物ライブラリーを用いたハイスループットスクリーニングを実施

疾患モデル分化誘導細胞
線維芽細胞(疾患細胞)

健常モデル分化誘導細胞

ゲノム編集

【対象】
カスタム疾患モデルiPS由来細胞*(* 同系-isogenic ペアとしての提供が可能)

DefiniGENにおけるゲノム編集を併用した疾患モデル作製スキーム。疾患線維芽細胞
は、各国の疾患細胞バンクから供給され、希少疾患にも同じスキームが採用できます●● 対応可能な疾患モデル（一例）
Genetic cholestasis (PFIC and Alagille syndrome), Wilson's disease
Hereditary hemochromatosis, Tyrosinemia type 1, Alpha-1 antitrypsin
deﬁciency, Argininosuccinic aciduria (ASL), Glycogen storage disease (GSD)
Crigler-Najjar syndrome, Primary hyperoxaluria type 1, Maple syrup urine
disease (MSUD), GSD type Ia (in metabolic control), Familial hypercholesterolemia, Organic acidurias (except MSUD), Gaucher disease, , etc.

製品情報

凍結バイアル細胞
品名

製品コード単位(Typical cell content: 6 x 10⁶ per vial, Cryopreserved, viability >70% post thawing)

Def-HEP WT

1 vial

DeﬁniGEN human hepatocyte cell Alpha 1 Antitrypsin Deﬁciency mutation

Def-HEP A1ATD

1 vial

DeﬁniGEN human hepatocyte cell Glycogen Storage Disease 1a mutation

Def-HEP GSD1a1 vial

DeﬁniGEN human hepatocyte cell FH LDL receptor mutation

Def-HEP FH

1 vial

DeﬁniGEN human hepatocyte cell wild type(Typical cell content: 6 x 10⁶ per vial, Cryopreserved, viability >70% post thawing)(Typical cell content: 6 x 10⁶ per vial, Cryopreserved, viability >70% post thawing)(Typical cell content: 6 x 10⁶ per vial, Cryopreserved, viability >70% post thawing)※専用ドライシッパーにて輸送されます。輸送費が別途加算されます。

解凍・メンテナンス専用培地
品名

製品コード単位

DRM100 Pack

1 set

製品コード単位

CUSTOM

1 unitHepatocyte Maintenance and Thaw media additive pack
カスタムプロジェクト
品名

カスタム疾患モデル作成、ゲノム編集、iPSリプログラミング等(DeﬁniGENは、研究開発型の企業として、ユーザー様からのリクエストに応じたカスタム品作製・カスタムプロジェクト受入等に柔軟に対応しております。詳細は問合せ。）© DeﬁniGEN Ltd.

本カタログ中に掲載されている図表の無断転用を禁止致します。2017年8月作成

日本国内代理店

DeﬁniGEN Ltd.

www.deﬁnigen.com

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Tel: +44 1223 497 106

キシダ化学株式会社

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