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サグの 卿 化に関する細胞組織学的研究
順化 腺 ，粘液腺及 卵膜溶解について

I女峨 西田秀夫(北海道大学理学部)

Histological andCytological Studies 0n

the HatchOf Salmon,Oncorhvnchuskeia. 1. On the Hatching Gland,@ Mucous Cel1,and

SOftening of Egg

Membrane.

By
Hideo

NISHIDAInst.

HOkkaido

ZO01.

Uni

[With 5 figures)
1.

Before hatching out tow

types 0f unicellular glands (hatchingpresent in the epidermis Of salmon embry0.

stage (seeing the eye‑spot through the membrane).
cavity andgill at about two

the surface of embiyo
ns,

fs covered with2.

Numerousare

mitochondoria andadays

A

great number

before hatching out

mucousth's granul is wellThe

distinct metachromatical

0f hatching gland fn the oral

is disappered after the ‑hatch,butcells.

mucousfixed withcell inclusion

BOuin'ssolution

andstained

fn blueis almost GOlgi materials and by thecolor [s produced.

Mitochondoria

anduseGOlgi materials of thewithof basic
gland

disussed'cytologically and cytochemicaJly.

cell were3.

cell) aremucousgranules included ;n the hatching gland, its diameter reaches bo 2 micr0‑secretay

Mallory's triple stain.
dyeOr threegland andThe development Of these glands begins‑ in the eyed

TOwardthe endhighly softening.
ed by theuse

Thelife, the egg

membranewhichchange of constitution or the eggof the embryonicmembraneduring

0f Mallory's

consists of three layers, isthe softening

wasstudi‑

triple stain.

I緒

口―

サケの職化に関しては
森脇 C19l0) の生理単的研究があるが，これはわが国のみならずこの分野における最初の業績であつた。また本道における犬飼等 C1939)i の 生理立ぴに細胞和．織ウ勺 報告も注目される。
これらの研究を発展せしむるとともにサケの膀仕事業のための華礎資料を得んとして本研究に漬手した。この報告ほその最初の結果として職化時におげる卿化腺，粘液腺について記するとともに卵膜溶解の帝蹄我 学的観察も併せ託した。聯化腺に閣する細胞学的観察
ほ先トこイ バラトミヨC1953a) ，サケ C1953b)) で述べたから再ぴ繰り返す必要もないか都台上簡単に記載することにした。
研究にあたつて終始御助言賜つた市川純彦教授，山形大学久佐守助教授並びに材料の提供なさ特別の御配恵を戴いた北海道さけ・ます卿化場調査課長佐野誠三氏，，同課疋田豊彦氏に対し厚く感謝の意を表する。なおまたこの研究は北海道科学研究費補助金によつたものである。

63648辮化場 試験報告

L巻 l， 2 号 C1953)‑―

材料八方．法北海道さけ・ます 卿化場 千歳支場で 1952 年 ]1 月， 12 月に採集したも ゐ を北海道大学理学部動物学教室において 人工受精 し，その後同教室で 飼育したも木研究に用いられたものほすべてのであ る。受精 卵は卿化盆 にならべ温度10 。 c 内外の流水の 井水で飼育し 卿イヒ場で行つている

固定ぽ発眼期 頃 のもの ぽ卵膜のように容器を 黒く 塗 つて暗らくするようなことほしなかつた。

o いたまま固定 液 に入れたが 魑化近くのもので 卵膜の除去出来るものほ 卵膜を除いて 固定する亡ともした。 固定後組織が 硬化するから 卵黄と 胚 とは分離しやすくなる。
た後胚 体をメス等で 卵黄からほがし 水洗，脱水等のその後の処理を行いそれで卵膜を 除去し，切片低おもに " ラフイン切片によつた。 固定液並びに染色 ほ次の要領に従つた。
IBOuin・氏液 固定

Mall 。リ氏三重染色a: 第 I液

C0.l ノ酸，性フ クシン水浴 液 ) で 3 分染め ， ― 寸水洗 し第燐壬リプ デン酸水溶液 ) で 3 〜 5 分処理し― 寸水洗 し ， 第 L 液

L 液 Cl%g 十ア = りン肯 0・5g+修酸 2e

蒸溜水 100g( オレンジ G2の混 液を重湯 煎 で約 100 。 C に保ち量が L 減るまで処理し濾過したもの ) で約 2 分染め水でゆすいで QC@O/gg@J/o アルコールで 弁色する。

b

テオニン水溶 液 : 約 10 〜30 分間染色する。 脱水中あ まり脱色するものほ0.2%

空気乾燥 し直接キシ p ‑‑ ル に入れた。

中性赤水溶液 : チオ = ソの 場合と同様にした。

C1%

dDelafield の へマ トキシ りンーエオ シン二重染色 : 普通行われている 方法によつた。

ev v=・ン 水溶液 : ピ p=‑ン はあ らかじめ精製したものえ 水にとかし，適当にうすめて使用した。

HOtchk@ssf2Zenker

・aFeulgenb

ピ p ニン・メチル 線 水溶液
ク345法の多糖類検出

氏液 固定

Da・・ahンは柴谷 C1949)

ピ a=の方法により 精製しメチル 綴 にほp TT フォルムを接触させた。
FanoReeaud

・反応

氏液 固定， 後銀 染色。
氏液 固定， 後

He@denhainの鉄へマ トキシ L ジ 染色を行つた。

Cha エranpy 氏液 固定
He@denhainの鉄ヘ マト 千シりン 染色。
Kull の染色，酸性フ クシン ぽア = リンーフ クシンとした。

卵膜溶解観察のためにほ 発眼期の卵と 卿化直前の卵との BOuin 固定したものを 卵膜をつけたまま セ p イヂ イン切片とし ，Mallory

H比三重染色 左行つた。

卿叱腺

サケ ほ水温 IO'C 内外でほ受精 後 50 日頃 より職化し始めるが， 卿化腺ほ発眼期

C受精徒約、30 日 ) 頃 より現われる 単細胞 皮腺 であ る。嫡化前 2 ， 3 日からもつとも 発達 び数も非常に多く口腔内の上皮及び 鯛の上皮であ るが頭部表皮及び 鯛蓋の表皮にも見られる。また卵黄 姦 膜にも散見される。 (第 I 図) 卿化腺ほ 内部に MaIl 。廿 比三重染色で アなる。 分布するところはおもに臼︶

万三

l‑︱
巷

土口報

田秀夫

西︱

= y ン 青によく染まる 大きな 穎粒をもつことによつて他の細胞から 容易に区別される。 卿化腺について細胞学的にその 消長を記述すると 次のようであ る。 (第 2 図 )口腔上皮に ぽ分裂中の細胞がしぼしぼ 見られ
また DaFano 固定銀染色によつて 核の周辺によく発達したで ルジ物質をもつ細胞があ るが(第 2 図の a) この細胞が将来 卿化腺にをる ものである。 亡ので ルジ物質ほその後 (発眼期頃 )者しく仲長し 悌 2 図の b) 更にまた 短棒状に切断され (第 2 図の 3) 切断が進 か 小さい親 粒になる 頃 に細胞内に液胞が 現われ始める (第 2図の c)

OcellmucousFig. 1.

Asalmon0r

cross

embryothree daysb : brain,

sectional diagram
fn the part0f

0f head

消失し Regaud

固定， Hejdenhain

中プりン でよく染まる ミ

い 頼 粒状で現われ 始め 核 丘中心に進行し 前述のtwo

液胞の問をも 埋める (第 2 図の d)o
り前述の液胞と 交代する(第 2 図の e)

Gbc

卜十。ぷ「2十edF@g.

Cytogenesis Of the hatching gland during the development
G:

この ミト

コンド りアの頼粒は 更に増大し大をな 頼粒 とな

h : heart.

aの鉄へマトトコトンド D アが小さ

thebefore hatching out.,g : gi'1,固定で保存されすに染色される。 これが更に進むと ゴルジ物質 ほhatching@laind@

この液胞 ぽ ROu@n

従つて酸性色素でも 塩基性色素でむ 染色され 低い。 Champy‑Kullの固定染色によれ ぼ淡 緑色

GOlgi materiales, M : mitochondna.
65

N: nuileus,

Of t@ e embry0.
V: vacuoles

この三fi(S 聯化場 試験報告
トコンド y アの 頼紡が8Mallory

巻 l， 2 号 C@953

二染色で ア 二リン育によく 染まる瀬 粒で，エオシンにも染まり

チオ = ンで青く，中性ホで桃色に染まる。 また Champy‑Kull

固定染色で赤紫に 染色され，Zenker

反応 ほ陰性であ るが HO ねhk@SS

固定 ピ p = ン ・メチル緑染色で赤紫に 染たる。 Fedgen法の多糖類検出では 陽性であ る。 ミ トコンドリアの 頼粒ほ嫡化 2 ， 3 日前がもつともよく 発達し各瀬 粒の大きさ ほ 約 2 がにまでも達する。 頭部上皮に見られる 咽化腺でほ 隅化時にもまだよく発達せヤ 液胞が細胞内にかなり 残存するものもあ る。卿化後ほミ トコンド りアの頼粒ほ 著し
く萎縮し小さい 親 粒と なりこの小さい 期粒が連続して 珠数状になり C第 2 図の f) 遂 には消失する。 ―方核ほ願 粒の発達につれて 細脚の隅に押しやられ 小さくなり職 化侍 にほ核 も消失 する 。 このように レて隅化腺ほ 卿 化後の 胚にぽ まつたく見られ 低くなる。

W液

粘腺

粘液腺も発 眼期頃より現われる 細胞学的に職 化腺と非常に対称的な 単細胞皮腺であ る。 最初
おもに頭部の 表皮に分布するが 卿化後ほ体表全面を覆うようになる (第 3 図) 。 粘液腺ほ BOuin
固定 DeIafJeIdMaIIoayの ヘ マト 千シりン・エオ シン染色で エオシン より ヘマ トキシ りンに淡く染まり染色でほ ア = りン肯にうすく染まる。 表皮組織中のあ る細胞 ほ始め ミ トコンド U アよう物質が核の 周 P に現われ (第 4 図の b3 続いて細胞内にで ルジ 物質の網状構造が 現われてくる 。 この ゴルジ物質の網状構造 ほ遂にぽ 細胞全休を rj@めるようになるが C第 4 図の C) 続いて細胞遊離端の ―部が破れで ルヴ 物質が外部に 出される (第 4 図の d ，e)

この ゴルジ 物質 ほHOtchkiss の多 結類検出でよく赤色に 染ぬられる。 細胞外にで ルジ物質が出される 頃 に拝 細胞内にはで ルジ物質 ぽ認、められなくなる。 しかし多糖類を 含む細胞質 ほ依然認められる。 分泌が終 る頃 には咳 周辺 P ミ トコンド D ア よう物質ば萎縮しその 後核とともに 消失する。 粘液腺のでルジ 物質主主とする 細胞質は

BOu@n

固定チオニン ，巾 ， 住赤 ，

ピ p 二ン による染色で 明らかに

メタク @3 マ ヂ T を示す。 またで ルジ 物質が細胞外に 出る前までの 粘液腺の細胞質は定ピ 口二 ン ・メチル練 染色淡 く赤紫で網 桝毒 造にそめられる。

@ mucous
Fig. 3.

Apartcrosssectional diagram

Of the bodycell

Of t1‑e embryo

at t1‑e hatching out.

66

in the middleZenker

固碑．報告，
8 巻 l， 2 号 C@953)

西田秀夫

67

鰯%
Ge@Fig.

4.

Cytogenesis
G:0f thev
サケの卵膜はBOulncell during the devlopment

mucousGOlgi materiales, Mf
Of the embry0.

mitochondria, N : nucleus.

:卵膜

溶

固定で約 fio 仕の厚さがあ 刀 ，解Mallory 染色を行え ぽ オレンジ G 及び酸性 フ クシンに染ま b 黄燈 色に見える。 卵膜 ほ ，明確でほないが 内・ 申 外 C約 l: 3: IJ・層に区別される。 そして内部に 卵表面に対し垂直に 綿条構造が認められるの三C第 5 図) ，卵膜ほ晒化 近くになるに 従つて 鵬 化酵素により 侵食を受けた 部分はア二リン 肯 に染まるようになる 。
互のためはじめ 黄燈 色であ つたものが褐色となりほる 。

， 遂 にほ アヒりン 青のみに 肯 く染まるように

この卿 化酵素により 崩壊した卵膜の 部分ほしぼ らくコ p イド状に膨 棚 した状態で卵膜に附着しているが 最後にほほげ 落ちてしまう。 そのため卵膜の 厚さは約 13u ，まで薄くなる。こ卿
abcdFig. 5.

Thediagrams

Of hatching,show

t1‑e porcess of t1‑e softeningi : innerlayer, m: middle

67

layer,

egg

irembraneo : outerlayer.

att1‑e course

68

8 巻 I， 2 号 CI953D――卿化 場試験報告の 崩壊の程度ほ 胚休 の 位 造する 附近の部分に低なほだしく; 遠ざかるにつれて 緩い傾向がある。 しかもこの崩壊の 進み方 ほ 前に記しだ 卵華 面に垂直な 腺条 構造の部分において 先行するかのように見える。 卵膜がェ3 が 程度に薄くねつた 頃胚ほ 自身の機械的破壊によつて 卵膜を破り卿 出する。 第 5 図 ほその週里を 示す 。

V
サケの 職化腺 について ぽ先に著者することをさけるが考祭，、，

CJ953b)

ほかなり詳しい 報告 七 しているのでこてに 重複， 晒化 時にお ぽる 粘液腺上卵膜溶解を 卿化腺 と関連させつつ―つの 考察を試みることにする。
るが ( 四日 ]953a)

イ バラトミヨで ぽ卿化腺 はおもに頭部表皮にあ限られている。 この点で低石田，サケでほおもに 口腔にC1944) によつて観察された メダ力 (Oryz@as latips)の分布

状態 と 類似している。 卿化腺の細胞でもつとも 持徴のあ ることは 魍化時に近く細胞内に 現われる ミ トコンド 5 アの 頼粒 であ る。 この穎粒 について石田は 親 粒 にほン

Delafield の ヘマ トキシりに染まる粒があ ると報じているがサケで ぽ瀬粒 にをのような 粒の存在ほ認められなかつた。

また イ バラトミョの 卿化 脇の 頼粒は Mallory

染色で 淡燈 色に染まるがサケで ほア 二リン育に育く染まるの ほサケの 陥化期粒ほ イドラ 十 ミヨのそれよりも 構造的に 姐であ ることを示すと 考えられる。 メダカや イ バラトミヨの 卿化腺 に見られなかつた 脂肪様の液胞がサケにほ持に注目される。 このような 卿化腺 の性質，分布の相違ほ極 類によるものであ的関連があ るかどうか、応の興味が持てるとE、う(石田， 1947) 。

2 種の単細胞 皮腺 の特徴，戸の2 種の細胞の機能と 関係させて考えるとい。 鵬化腺 は卵膜の 浴解に役立ち，粘液腺ほおもにろうが分類学

隅化腺にミ トコンドリアが発達しているのに 対し粘液腺にほ ゴルジ 物質が富んでいることほこのといわぼけれほならないもので見られるの非常に興味深

順化後の 休表の保護に役立つものであ ろう。粘液腺に多量に 含まれる多糖類 低 おもに m 夜分泌による 体表の保護に 効果があ るものでなるかもしれ ほい 。 鵬

BOud@n ，石田・かろつか，また卿化腺 の多糖類 低 ―種のエネルギー 源になつているのであ化酵素による 卵膜溶解の生理学的研究は 古く 森脇 に始まりその 後 Wmnterbert,等があ るが卵膜溶解の 現象 丘組織学的に観察した 結 某 次のことがいえると P 、 う。即ち 卵膜 ほ卿化酵素によつて 構造の間隙部から 崩壊していくが 全休 L して崩壊は内部より 外部に ―様に進むをの秤 度の 差ほ 酵素の働安方によつて 生する。 その結果卵膜を 構成していた 物質 ほ構造的に 粗になり，容積七増し 膨潤 し遂にほ 無 構造のものとなりぼげ 落ちると考えられる。 そして 胚ほ 卵膜のもっとも 薄 V@.部分 丘 破って隅出する。 したがって 鵬 化のときに頭部から 出るとか尾部から出るといつたような―定の 隅出の現象ほないように

W
I，摘

思う

要

サケの 胚 について特に 卿化 時の全体的組織並びに 細胞学的観察を 行い，顕著な2 極の 細胞即ち隅化腺 と粘液腺について 研究するとともに 卵膜溶解 Q 現芽" を組織学的に 観察した。
2・隅化腺 及び粘液腺において ミ． トコンリア とゴルジ 物質が明らかた 対称的に関係していることが解つた。 また卵膜の溶解が 組織学的にあ る程度追求観察することが 出来卵膜構造の 変化
左染色反応から 考察した。

伊聯 ・報告・ 8 巻 l， 2 号 C1953)

西田秀夫

引犬飼 ・国弘・ 柏岡 :939

文鮭 の 牌 出の機構動物学雑誌

石田寿老:

l947

動物の卿化

Ishida, J :l9 中Hatching

enzymeHarde:

195@

・用69

献
第引巻第 27号@n the fresh □ wwaterfish, 0ryzias laptipes.

Annot.

ZO0l.

Japon

VO@. 22. N0. 3
L.

and森脇幾茂 :MOnne.

l9l0S.

西田秀夫 ‑

l953a

西田秀夫 :l953h

柴谷篤弘 :@949

On

thecortica@ granules

Oftheめa urchin

egg.

aedl.

第 3 回y協通水産試験場事業報告
魚胚の 卿化腺とミトコンドリア 科学 第 23 巻 第 2 号
サケ胚 の 踊化腺におけるゴルジ体と ミ トコンドリア 科学第 23 巻
低分子核酸染色のためのピ D ニン情製法科学第 l969

巻第 H 号

第6 号

Hafte6