Code No. BE-3110, BE-3111, BE-3112, BE-3113
抗原抗体反応促進試薬（ELISA・ウェスタンブロット用）

2014 年 8 月 28 日改訂

XL- Enhancer

使用説明書

【特徴】

XL-Enhancer はウェスタンブロッティングや ELISA などの抗原・抗体反応を用いた解析において、感度不足や高いバックグラウンド等の問題点を改善するための反応促進試薬です。さまざまな免疫アッセイ系に用いることができます。

【使用方法】○ 本試薬は、一次抗体希釈用の Solution 1st と二次抗体希釈用の Solution2nd で構成されています。各 Solution は、それぞれの反応に最適化された組成となっていますので、それぞれの抗体反応において、抗体を本試薬により目的の濃度に希釈し、そのままアッセイに用いてください。アッセイ方法は従来のままで行って下さい。詳細は後述の使用例をご参照ください。

１） 従来法に比べ高いシグナル・低いバックグラウンド

XL-Enhancer は、抗原抗体反応を促進する効果があり、界面活性剤含○ 抗体を一種類しか用いないアッセイ系(一次抗体に標識が付加されてい有バッファーを用いる従来法に比べ、数倍から数十倍の高いシグナルる場合など)の場合は、Solution 2nd の使用をお勧めします。但し、抗体のていますので、高いＳ/Ｎ比を得ることができます。

すので、お試しください。

が期待できます。また、バックグラウンドが低くなるように設計され種類やアッセイ系によっては、Solution 1st を用いた方が良い場合もありま○ XL-Enhancer を使用して効果が見られた実験実績として、ウェスタンブ

２） 既存品に比べ高いシグナルを得ることが可能

XL-Enhancer は、既存品に比べ、多くの場合高いシグナルを得ること

ロティング、抗体サンドイッチ ELISA（一次抗体標識型、二次抗体標識型）、が出来ます。抗体濃度や反応時間を従来通りの条件で行った場合にバ抗原サイドイッチ ELISA（抗原標識型）などがあります。

反応時間等を調節し、最適の条件でご使用ください。

１） ウェスタンブロッティングにおける使用方法例

ックグラウンドが高くなる場合もあります。使用時には、抗体濃度や①３） 抗体使用量の節約や反応時間の短縮に効果

抗体使用量を減らしたい場合、少量の抗原を検出したい場合、検出時間を短くしたい場合などに有効です。

４） 高い汎用性

SDS-PAGE ： 通常の方法にて実施してください。

②

PVDF 膜へのタンパク質転写 ： 通常の方法にて実施してください。

③

ブロッキングならびに洗浄 ： 通常の方法にて実施してください。

④

一次抗体反応 ： 一次抗体を Solution 1st にて希釈し、使用してくだ
さい。

XL-Enhancer は、ウェスタンブロッティングや ELISA など抗原抗体反一次抗体の最適な希釈倍率は、抗体種、抗原の量、検出系の感度等に応大きく依存します。本試薬を用いた場合、抗体を通常より低い濃度にを用いたさまざまなアッセイ系に広く用いることが可能です。

する、あるいは反応時間を短くしても十分な反応が得られる場合が多

また、HRP(ペルオキシダーゼ)や AP(アルカリフォスファターゼ)などの標識酵素の活性に影響を与えませんので、これらの標識抗体を用いたいですが、予備検討により最適濃度を決定ください。
⑤

二次抗体反応 ： 二次抗体を Solution 2nd にて希釈し、使用してください。

アッセイ系にも使用することができます。また、発色検出、発光検出のいずれにも使用可能です。

二次抗体の最適な希釈倍率は、抗体種、抗原の量、検出系の感度等に大きく依存しますので、抗体の供給元の推奨条件等を参考にしてくだ

５） 簡単な使用方法

XL-Enhancer は、希釈せずにそのまま使用できるように調製されています。使用方法は、通常使用している抗体希釈液を本試薬へ替えるださい。
⑥

検出 ： 通常の方法にて実施してください。
発色・発光の度合いを見ながら反応・露光を⽌めてください。⻑時間

けです。の反応はバックグラウンドの上昇やエキストラバンドの出現を起こします。

【製品内容】
本製品には以下の種類があります。本マニュアルは以下の製品総てに適用されます。
品名

内容

保存方法

XL-Enhancer Sセット

Solution 1st 100mL
Solution 2nd 100mL

4℃

XL-Enhancer Lセット

Solution 1st 250mL
Solution 2nd 250mL

4℃

Code No.
BE-3110BE-3111BE-3112

XL-Enhancer Solution 1st

Solution 1st 250mL

BE-3113

XL-Enhancer Solution 2nd Solution 2nd250mL

4℃※ 酵素標識した一次抗体を用いる場合、標識二次抗体は用いませんが、その場合には、標識一次抗体は Solution 2nd で希釈してください。なお、場合によっては Solution 1st の方が良い結果を得られる場合がありますのでお試しください。

2） ELISA における使用方法例
ここでは、「抗体サンドイッチ ELISA」における使用方法を記載します。
①②

抗体の固相化、ブロッキング： 通常の方法にて実施してください。
サンプル溶液・一次抗体の希釈、反応 ：抗原を含むサンプル溶液と一次抗体を Solution 1st にて希釈し、使用してください。一次抗体の最適希釈倍率は、抗体種、抗原の濃度、検4℃

出系の感度等に大きく依存しますので、抗体の供給元の推奨条件等を参考にしてください。

【使用期限】
上記保存方法にて１年※ 抗原のみを反応させた後、プレートを洗浄してから一次抗体をSolution 1st で希釈して反応させる方法もあります。
③④

洗浄 ：通常の方法にて実施してください。
二次抗体反応 ：標識された二次抗体を Solution 2nd にて希釈し、使用してください。
二次抗体の最適希釈倍率は、抗体種、抗原の濃度、検出系の感度等に

本試薬は Solution 2nd の方が Solution 1st より僅かに⻩色が強くなっています。
変色ではありませんので、ご安心ください。

大きく依存しますので、抗体の供給元の推奨条件等を参考にして下さい。
⑤

洗浄 ： 通常の方法にて実施してください。

⑥

検出 ： 通常の方法にて実施してください。

※ 酵素標識した一次抗体を用いる場合、標識二次抗体は用いませんが、その場合には、標識一次抗体は Solution 2nd で希釈してください。なお、場合によっては Solution 1st の方が良い結果を得られる場合がありますのでお試しください。

【トラブルシューティング】
ウェスタンブロット
トラブル

原因と対策

シグナルが抗原タンパク質濃度が低い。できる限り濃い試料をご使用ください。

弱い

抗体濃度が低い。最適な抗体濃度を検討してください。
膜への転写が不十分。電流量を上げるか、転写時間を延⻑してください。
ブロッキングが強すぎる。オーバーナイトなどでブロッキングを強くしすぎるとシグナルが弱くなる場合があります。
膜への転写時間・電流量が過剰。特にニトロセルロース膜使用時には、過剰な転写操作により、タンパク質が透過する場合があります。電流量や時間を調節してください。膜の種類を PVDF 膜に代えるのも有効です。

バンドの一部

抗原量が多すぎる、あるいは抗体濃度が高すぎる。過剰なシグナルにが抜けるより逆に発光が抑えられてしまうことがあります。最適な抗原量・抗体濃度を検討してください。

エキストラ

抗体濃度が高すぎる。過剰な抗体により、非特異的なシグナルが増大

バンドが多いすることがあります。最適な抗体濃度を検討してください。
タンパク質量が多すぎる。電気泳動するタンパク質量を減らしてください。
ブロッキングが不十分。抗原や抗体によっては、ブロッキング剤に大きく依存します。ブロッキング剤の種類、濃度やブロッキング時間の検討を行ってください。
洗浄が不十分。洗浄回数や洗浄時間を増やしてください。

バックグラウ

抗体濃度が高い、或いはインキュベーション時間が⻑い。シグナルがンドが高い

見えるがバックグラウンドも高い場合、抗体濃度を低くするか、抗体との反応時間を短くしてください。

ELISA
シグナルが抗原または抗体の濃度が低すぎる。抗原・抗体濃度の検討を行ってく

弱い

ださい。

シグナルが抗原または抗体の濃度が高すぎる。抗原・抗体濃度の条件検討(タイト強すぎるレーション)を行ってください。
インキュベーション時間が⻑すぎる。時間を短くしてください。

バックグラウ抗原または抗体の濃度が高い。抗原・抗体濃度の検討を行ってくださンドが高いい。
ブロッキングが不十分。抗原・抗体種によっては、ブロッキング剤の種類や濃度に大きく依存します。ブロッキング剤の種類、濃度、ブロッキング時間を検討してください。
洗浄が不十分か、過剰洗浄によるブロッキング効果の低下が考えられます。洗浄回数を調節してください。