北里コーポレーション
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PROTOCOL プ ロ ト コ ー ル
微少精子の融解 実施例

01※このプロトコールの内容は、公式YouTubeにて動画でご覧いただけます。

右記のようにOligospermia Thawing Kitを用いて精子融解・ICSI用ディッシュの準備をし、5％CO2インキュベータで2時間以上平衡させます。

運動確認ドロップ
OT-2 (2µL）
生存確認ドロップ
OT-3 (50µL）

融解ドロップOT-1 (2µL）
ICSIドロップ
OT-1 (50µL）

02

ピペット洗浄用ドロップ
OT-4 (50µL）

液体窒素からCryotopⓇ-wideを取り出し、2秒間空気中で静止させ融解します。

PRODUCT CATALOGUE

Oligospermia
Cryopreservation

ディッシュ内の融解（OT-1）ドロップにCryotopⓇ-wideの先端を浸漬し精子を回収します。
精子の運動が確認出来たら、即時にICSIを実施します。
〇精子が不動だった場合
運動確認（OT-2）
ドロップ内で運動性を確認。確認後、ICSIを実施します。
〇運動確認ドロップでも不動の場合生存確認（OT-3）
ドロップ内で生存性を確認（生存精子は精子尾部が膨化します）。確認後、ICSIを実施します。

融解ドロップOT-1 (2µL）

運動確認ドロップ
OT-2 (2µL）

生存確認ドロップ
OT-3 (50µL）

ICSI

OT-1 (50µL）

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84030

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REF

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Cryotop-wide(W)

10本/袋

81019

Cryotop-wide(B)

10本/袋

81020

Cryotop-wide(Y)10本/袋改良のため予告なく仕様を変更することがありますのでご了承ください。

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Happiness,for the Next Generations

〇 微少精子の凍結融解に用いる試薬とデバイスCryotop®-wideのキットです。
〇 凍結液にGlycerolを使用せずSucroseのみを用いています。
〇 Cryotop®-wideは10本/袋で購入いただけます。（REF. 81016、81017、81018、81019、81020）
共同開発 : セントマザー産婦人科医院 院長 田中 温 先生

REF

内容量

Oligospermia Cryo Kit

Cryotop®-wide(white)

2本

OC-1 (Collagenase)

0.5 mL×1OC-2 (Sperm Medium)0.5 mL×1

OC-3 (Sperm Freeze(SF4)) 0.5 mL×192232

Oligospermia Thawing Kit

成分

Calcium Chloride / Collagenase / Gentamicin / Glucose /HEPES / Human serum albumin / Magnesium sulfate /Pentoxifylline / Polyvinylpyrrolidone / Potassium chloride /Potassium phosphate / Sodium bicarbonate / Sodium chloride /Sodium lactate / Sodium pyruvate / Sucrose

OT-1 (Sperm Medium)0.5 mL×1

OT-2 (Pentoxifylline)

0.5 mL×1

OT-3 (HOST Solution)

0.5 mL×1

OT-4 (PVP3％)

0.5 mL×1

OC-1 / OC-2 / OC-3 /OT-1 / OT-2 / OT-3 / OT-4
pH 7.2-7.6 / 浸透圧 / エンドトキシン <0.25EU/mL / 無菌試験 /Sperm Survival(24h) ≥80% / Sperm Penetration Assay ≥3
冷蔵保存 2～8℃
有効期限 製造日より6ヶ月

RESULT 臨 床 デ ー タ
受精率 (%)

平均移植胚数(最小‒最大)

平均凍結胚数(最小‒最大)

87.1a[444/510]

52.7a[224/425]

1.52(1-2)

0.72(0-1)

92.7[152/164]

60.5b[92/152]37.2b[29/78]1.73(1-2)

0.53(0-1)

新鮮精子のためデータなし

新鮮精子のためデータなし

52.2[302/579]

1.41(1-2)

1.83(0-4)

患者数

移植
周期数

融解後の回収率 (%)

融解後の生存率 (%)

凍結射出精子2860

97.8[510/521]

凍結精巣内精子

20

18107

31

a - b : p < 0.05 (カイ二乗検定)

REFERENCE 参 考 文 献

02※このプロトコールの内容は、公式YouTubeにて動画でご覧いただけます。

※射出精子の場合は 02 から始めます。
Oligospermia Cryo Kit のOC-1（Collagenase）を用いてガラスボトムディッシュに精細管細切用ドロップを作ります。
その中に採取した精細管を入れ、27G注射針を用いて細切します。

精細管細切用ドロップOC-1（30-50µL）

Oligospermia Cryo Kit のOC-2（Sperm Medium）を用いてディッシュに精子回収用ドロップ（30-50µL）と精子収集用ドロップ（1µL）をマイクロピペットで作り、オイルを重層します。 01 で細切した精細管を精子回収用（OC-2）
ドロップに移し精子を探します。
※マイクロツールで精子を回収しやすい容量およびドロップ形状で行ってください。

03TESE Pick Up ピペット

精子回収用ドロップの精子をTESE Pick Up ピペット（REF. 71410）で吸引し精子収集用（OC-2）
ドロップ（1µL）に集めます。

提供：セントマザー産婦人科医院

田中 温先生〇 Endo et al. Clinical and neonatal outcomes of individually vitriﬁed human sperm with Cryotop and Cell Sleeper. Cryobiology. 2022 Oct:108:78-81.

精子収集用ドロップ
OC-2（1µL）

精子回収用ドロップ
OC-2（30-50µL）

品質管理

Cryotop®-wide(white)
無菌試験 / エンドトキシン ≤0.5EU/device / Mouse Embryo Assay ≥80% /外観及び清浄度 / シート部引張試験 ≥5N / 滅菌済み
有効期限 製造日より3年

新鮮射出精子微少精子の回収および凍結 実施例

01

コード92231

北里コーポレーション
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PROTOCOL プロトコール〇 融解後に精子の運動性および生存性の速やかな判定が可能です。

04

CryotopⓇ-wideを倒立顕微鏡ステージに置き、マイクロピペットで 2µLのOC-3（Sperm Freeze）ドロップを作成します。
Cryotop®-wideOC-3 (2µL）

05

Blue Box 精子用 小（REF. 84012）に液体窒素を入れ、精子凍結用浮き台（REF. 84021）を浮かべます。

06

精子収集用ドロップに集めた精子を尾部からTESE Pick Up ピペットで吸引し、手順 04 のOC-3ドロップに精子を素早く移します。

TESE Pick Up ピペット

OC-3 (2µL）
Cryotop®-wide

07

CryotopⓇ-wideを直ちに精子凍結用浮き台にのせ、液体窒素の蒸気（液面から2㎝）に2分間暴露させ凍結します。

精子収集用ドロップ
OC-2（1µL）

浮き台を固定Cryotop®-wide

08 ２分後、CryotopⓇ-wideを液体窒素に投入し キャップをつけ、 Blue Box 精子用 小液体窒素タンクで保存します。

浮き台液体窒素
2分間

2cm