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Gold Standard
ADME/Tox 製品およびサービス

創薬

ent

ADME/Tox 製品およびサービス
サーモフィッシャーサイエンティフィックでは、お客様が研究対象の化合物に関して正しく判断していただけるように、生理学的に関与する結果を生む、業界最高レベルの ADME/Tox 製品

d Like atandardの提供を目指しています。当社は肝細胞研究分野の科学者をサポートする専門家チームであり、当社の製品およびサービス

は IND や NDA の提出をサポートし、酵素誘導、CYP 阻害、ト

ランスポーター、およびその他の代謝関連分野における研究の進歩に関与しています。当社の目標は、お客様のニーズに最適なツールと技術サポートをご提供することです。

and Services

薬物代謝および薬物安全性に関する ADME/Tox 製品
初代培養肝細胞や肝細胞成分分画などの生理学的に関連する

in vitro システムは、異物代謝、薬物相互作用、および細胞毒性に関連するアプリケーションを含めた in vivo アプリケーショ
ンに関するさまざまなリサーチクエスチョンへの取り組みに使用することができます。当社では以下の研究に役立つ製品をご提供しています :• CYP450 阻害および酵素誘導• 代謝プロファイリングおよび代謝的安定性• トランスポーターアプリケーション

幅広く取り揃えた in vitro 肝細胞製品
当社が包括的にご提供する製品には、ヒト、ラット、マウス、イヌ、
ウサギ、非ヒト霊長類、マス、およびご要望に合わせたその他の種から分離された肝細胞および細胞成分分画が含まれます。
当社の製品は特定の研究アプリケーションに対する適格性が事前に確認されており、そのほとんどはプールドドナー品またはシングルドナー品で、多くの場合、複数の実験および施設での実験に好適な大容量ロットでご提供しています。
製品例 :• 凍結保存初代培養肝細胞および Kupffer 細胞• 細胞培養培地定性• トランスポーターアプリケーション

Gibco 品質̶あらゆるステップで肝細胞科学者のチームである当社は、信頼できる高品質のサ
プライチェーンと厳格な特性解析法の重要性を深く理解しています。当社は以下をご提供します :• 堅牢かつ広範な組織調達ネットワーク• 綿密に磨き上げられた単離技術• 厳格な品質管理基準• 現在進行中の研究開発• 技術サポートを提供する肝細胞製品専門担当者

2

3

創薬

ent

アプリケーション一覧
アプリケーション目的

FDA ガイダンス *接着型肝細胞化合物の肝酵素誘導能の有無を決定する

あり

+++

酵素阻害

化合物の肝酵素阻害能の有無を決定する

あり

肝毒性

化合物およびその代謝物の肝毒性の有無を決定する

あり

+++

代謝プロファイリング

化合物の代謝に関与する酵素を決定する

あり

+++

代謝安定性

代謝酵素存在下で化合物の消失を測定するあり++

リアクションフェノタイピング（代謝同定）

代謝酵素暴露時に生じる化合物の代謝物を同定するあり++

トランスポーター取り込み化合物の肝トランスポーター取り込み阻害能または誘導能の有無を決定するなし+++

トランスポーター排出

化合物の肝基底トランスポーター排出阻害能または誘導能の有無を決定するなし+++

創薬研究（ADME、DMPK、毒性学）
酵素誘導

d Like atandardand Services

他の研究アプリケーション（R&D、毒性学、環境安全）
環境生物濃縮薬物または化学薬品のヒトおよび魚での生物濃縮を評価する

なし

+++

肝疾患研究

肝臓疾患について理解を深める

なし

+++

siRNA、基礎研究

疾患に対する遺伝子抑制の効果を明らかにする

なし

+++

* Drug Interaction Studies-Study Design, Data Analysis, and Implications for Dosing and Labeling, Draft Guidance for Industry, USFDA,
September 2006 and Guidance for Industry on Drug Interaction Studies, 2012.
+++ Product highly recommended for this application.
++ Product recommended for this application.
+
Our lowest recommendation, but product may still be useful for some assays.

4浮遊型肝細胞肝ミクロソーム

肝 S9 フラクション

その他

カタログ番号• HMCPIS, Gibco™ Human Cryopreserved Plateable Hepatocytes,
Induction Qualified

Also available:• Fresh plateable human hepatocytes• Cryopreserved and fresh plateable animal hepatocytes

++

+++

• HMMCPL, Gibco™ Human Pooled Microsomes

Also available:• Cryopreserved suspension hepatocytes+++• HMCPMS, Gibco™ Human Cryopreserved Plateable Hepatocytes,
Metabolism Qualified

Also available:• Fresh and cryopreserved human and animal hepatocytes

+++

+++

• HMMCPL, Gibco™ Human Pooled Microsomes

Also available:• Animal microsomes• Human and animal, fresh and cryopreserved hepatocytes• Human and animal S9

+++

+++

• HMMCPL, Gibco™ Human Pooled Microsomes

Also available:• Animal microsomes• Human and animal, fresh and cryopreserved hepatocytes• Human and animal S9

組換え CYP450
酵素類

+++

+++

• HMMCSD, Gibco™ Human Microsomes, Single Donor

Also available:• Baculosome Plus recombinant CYP450s and VIVID™ recombinant
CYP450s• HMCSTS, Gibco™ Human Cryopreserved Suspension
Hepatocytes, Transporter Qualified

Also available:• Human plateable hepatocytes, transporter qualified• Animal hepatocytes

ABC ベシクル• HMCPTS, Gibco™ Human Cryopreserved Plateable Hepatocytes,
Transporter Qualified

Also available:• GenoMembrane™ ABC inside-out vesicles and membranes• Animal plateable hepatocytes

++

+++

• TRS9PL, Gibco™ Fish (Rainbow Trout) S9 Fractions

Also available:• Animal and human, fresh and cryopreserved hepatocytes

+++

++

• HMCS10 HMCS50, Gibco™ Human Cryopreserved Suspension
Hepatocytes, Pooled Donors

Also available:• Animal and human, fresh and cryopreserved, hepatocytes• Animal and human microsomes• HMCPTS, Gibco™ Human Cryopreserved Plateable Hepatocytes
Transporter Qualified

Also available:• Human fresh plateable hepatocytes• Animal cryopreserved plateable hepatocytes

5

創薬

ent

単層完全性の欠如（「不健康な」形態）

理想的な単層完全性（「健康な」形態）• 集密度が低い（70% 未満）*• 集密度が高い（90% 超）。
着に役立つ高い集密度を示します（図 1）• 細胞間接着に乏しい• 細胞間接着が良好• 豊富なロット• 細胞質が粒状• 細胞質が透明• 高い生存率 通常 80％以上• 明らかな細胞伸展• 3 次元組織• 細胞が重度に平坦化• 立方状の細胞構造• 毛細胆管が欠如• 毛細胆管の形成

Cryopreserved Human and Animal
Hepatocytes
肝臓から分離された初代培養肝細胞は、代謝、薬物相互作用、肝毒性、トランスポーターの in vitro 評価に有効なツールです。 当社の肝細胞分離担当者は、細胞の健康状態を適切に保つための手法に習熟しています。 そのため、Gibco™

d Like atandardCryopreserved Human and Animal Hepatocytes は高い生存率、in vivo に近い酵素発現レベルを示すほか、プレート接着型細胞として出荷されたものは極性化および機能的な細胞間接• 第 I 相および第 II 相の薬物代謝酵素活性を評価
and Services• 複数の大容量ロットをご用意―複数の拠点での長期試験に最適* 注：不健康な単層はコンフルエンスを示すことができますが、細胞の伸展と平坦化によって完全性が損なわれています。

図 2. それぞれ別のドナーの組織から分離したヒト凍結肝細胞を数日間培養した場合の（A）単層の完全性が損なわれている画像（B）および単層の完全性が理想的な画像の代表例

図 1. サンドイッチ培養 5 日後のコンフルエントかつ健康なヒト肝細胞集密度が高く（90% 超）、毛細胆管が観察可能であることは、このロットが代謝実験、誘導実験、トランスポーター取り込み実験に適していることを示しています。

品質管理• 顕微鏡写真によって細胞形態の 10 項目を確認―細胞膜の完図 3. 播種密度の効果
播種密度によって誘導応答が異なります。ここでは最適播種密度に近いほうが RIF に対する応答が優れています。

全性、細胞内小器官サイズ、脂肪滴の存在、核のサイズおよび形態、サイトゾルの透明性、細胞形、細胞片の量、細胞排泄物、細胞間接着（接着型細胞のみ）、毛細胆管網の再形成（接着型細胞のみ）• 代謝活性試験―ECOD、7-HCG、7-HCS；ヒト肝細胞は以下 を 含 み ま す：CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、

CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A、FMO、• アプリケーション適格性試験―接着率、単層集密度（図 2）
典型的な誘導剤による fold induction、トランスポーター取り込みおよび排出、in situ 固有クリアランス• その他の特性データ―遺伝子型同定、最適播種密度（図 3と 4）、生存率の安定性、ドナーに関する統計情報

6

図 4. 播種密度と単層のコンフルエンスとの一般的な関係
ヒト肝細胞の場合、最大コンフルエンスが得られる 24 ウェルプレートの最適播種密度は 0.6 〜 0.9 × 106 細胞 /mL です。

Human Cryopreserved Hepatocytes,
Transporter Qualified• 機能的な膜受容体とトランスポーターを含有• 効率的なトランスポーター取り込みおよび排出評価（付着型肝細胞）実験に好都合• 厳格な出荷規格（米国出荷時）：生存率 80% 以上、集密度80% 以上（付着型肝細胞）図 5. 5-(6)- カルボキシ -2 , 7 - ジクロロフルオレセイン（CDF）の蓄積を示す機能的な毛細胆管網の可視化

浮遊型肝細胞によるトランスポーター取り込みの測定
Gibco ™ Human Cryopreserved Hepatocytes（ Transporter
Qualified）は肝取り込み試験に適しています。通常、この試験のインキュベーショ
では比較的短時間（多くの場合 15 秒〜 3 分）
ン後に細胞内における基質の出現率を測定します。 当社のト
ランスポーター用ロット（浮遊型および接着型）はすべて、タウロコール酸、ジゴキシン、エストラジオール -17 β - グルク
ロニド（E2-17G）を基質として、NTCP、OATP1B3、および

OATP トランスポーター経路の活性について機能試験を行なっているほか、第 I 相および第 II 相代謝の活性についても機能試験を行なっています。 毛細胆管網は化合物 5-(6)- カルボキ
シ -2 , 7 - ジクロロフルオレセインジアセテート（CDFDA）を使って蛍光顕微鏡で可視化しています。 CDFDA は、MRP2 ト
ランスポータータンパク質の基質であり、培養によって細胞が極性化し、毛細胆管が形成される 3 〜 4 日間で毛細胆管に蓄図 6. 凍結前と凍結後の浮遊型ヒト肝細胞の活性の比較
同じロットのヒト肝細胞を使って分離後 2 時間と凍結後にトランスポー
ター取り込みに関する機能試験を行いました。両条件の 2 つの基質（A）タウロコール酸ナトリウムと（B）ジゴキシンの平均蓄積値はほぼ同じでした。

。凍結前と凍結後のトランスポーター取り込
積されます（図 5）
みのデータを比較したところ結果がほぼ同じであったことから、浮遊型肝細胞のトランスポーター遺伝子発現は凍結によって変。
化しないことがわかります（図 6）

7

創薬

ent

Human Hepatocytes, Induction Qualified• CYP1A2、CYP2B6 および CYP3A 誘導について適格性を評価
済み• 生存率 80% 以上、集密度 80% 以上（プレート培養細胞の場合、米国出荷時）

d Like atandard• 最小特異的活性：– CYP1A2 の誘導 10 倍以上– CYP2B6 の誘導 5 倍以上– CYP3A4 の誘導 3 倍以上

in vitro 酵素誘導モニタリング実験におけるロット別酵
and Services
素誘導アッセイ
当社の誘導用肝細胞は、典型的な誘導剤に応答させた場合の特異的活性と mRNA レベルの試験をパスしています。ヒト凍結肝細胞は 24 ウェルのコラーゲン塗布プレートで培養し、トリ

図 7. CYP3A の fold induction について試験した Gibco のヒト凍結
肝細胞
典型的な誘導剤に応答させて Gibco のヒト凍結肝細胞を試験し、アプ
リケーションに対する適否を明らかにします。この例では、CYP3A の誘導倍率 fold induction（バーの上に示されている数値）が計算されており、肝細胞の各ロット固有のばらつきが示されています。

、
オメプラゾール（OMP）、
フェ
プリケートで溶媒（0.1% DMSO）、リファンピシン（RIF）を投与して 72
ノバルビタール（PB）
時間放置します。一度単層を洗浄した後に、基質のフェナセチ
ン、ブプロピオン、テストステロンを加えてインキュベートし、CYP1A2、CYP2B6、CYP3A の活性をそれぞれ決定します（表1、図 7）。誘導された活性と溶媒で処理した場合の活性との比で特異的活性の fold induction を示します。処理後 48 時間にApplied Biosystems™ TaqMan® qRT-PCR 分析によって mRNA
量も測定します。

表 1. Gibco™ 接着型ヒト凍結肝細胞（誘導用）の CYP450 活性を評価するためのプローブ基質

8

酵素

誘導剤

誘導剤濃度

基質

基質濃度

インキュベーショ
ン時間

マーカー代謝物CYP1A2

omeprazole

50 µM

phenacetin

100 µM

15 minacetaminophen

CYP2B6

phenobarbital

1000 µM

bupropion

500 µM

20 minhydroxybupropion

CYP3A

rifampicin

10 µM

testosterone

200 µM

14 min6 β-hydroxytestosterone

Human Cryopreserved Hepatocytes,
Plated, Metabolism Qualified• 代謝回転の低い化合物の固有クリアランス（CLint）の評価に
有用

Human Cryopreserved
HEP10 Pooled and Single Donor
Hepatocytes, Metabolism Qualified• CYP1A2 、 CYP2B6 、 CYP2C8 、 CYP2C9 、 CYP2C19 、• ミダゾラム、トルブタミド、デキストロメトルファンの CLint に基づいて適格性を評価済み

CYP2D6、CYP3A、ECOD、7-HCG お よ び 7-HCS 活 性 を評価（表 3）• バッチサイズが 500 バイアルを超える高品質のプールされた• 80％以上の生存率と 75％以上の接着効率ロット

代謝評価用付着型ヒト肝細胞の代謝アッセイ条件
Gibco ™ Human Cryopreserved Hepatocytes, Plated,
Metabolism Qualified は、CYP450 の典型的な基質であるミダ
ゾラム、トルブタミド、デキストロメトルファンを用いてそれぞれ CYP3A4、CYP2C9 、CYP2D6 の酵素機能をテストしてい。コラーゲンコートプレートに肝細胞を接着させたます（図 8）
後に、血清不含 Williams Medium E を用いてデュプリケートでインキュベートし、氷冷したアセトニトリルを使って表 2 に示し

Gibco™ Human Cryopreserved HEP10™ Pooled and Single
Donor Hepatocytes は、代謝プロファイリング、代謝安定性といった代謝試験に最適です。肝組織調達および肝細胞分離をリードするメーカーとして、当社はシングルドナーロットおよび。当社のプー
プールドロットの最大級の品揃えを誇ります（図 9）
ルドロットは平均的な CYP450 活性をもつ正常なドナーから調製しているため、複数のドナーを用いる必要がある実験に好都合です。

た時点で反応を停止させます。ウェルの中身を -70 °C で保存した後に分析します。親化合物の消失を LC-MS/MS でモニターし、直線回帰によって固有クリアランス値を決定します。

表 2. プレート培養したヒト凍結肝細胞の CLint のインキュベーション条件
基質濃度

インキュベーション
時間

Midazolam

0.50 µM

0, 1, 2, 4, 6, 8 hr

Tolbutamide

1.00 µM

0, 4, 6, 8, 18, 24 hr

Dextromethorphan

1.00 µM

0, 1, 2, 4, 6, 8 hr

図 9. 浮遊代謝アプリケーションについて適格性を評価済みのヒト肝細胞図 8. プレート培養代謝（固有クリアランス）について適格性を評価済みのヒト凍結肝細胞
CLint（µL/1 × 106 細胞 / 分）の結果は、ミダゾラムが 14.6、トルブ
タミドが 1.34、デキストロメトルファンが 7.20 でした。

9

創薬

ent

表 3. Gibco™ 浮遊型ヒト凍結肝細胞の代謝能を測定するためのテスト条件

酵素

基質

濃度

インキュベーション時間

マーカー代謝物CYP1A2

phenacetin

100 µM

15 minacetaminophen

CYP2B6

bupropion

500 µM

20 minhydroxybupropion

CYP2C8paclitaxel

20 µM

45 min6 α-hydroxypaclitaxel

CYP2C9diclofenac

25 µM

15 min4'-hydroxydiclofenac

CYP2C19(S)-mephenytoin

250 µM

30 min4'-hydroxymephenytoin

CYP2D6detromethorphan

15 µM

15 mindextrorphan

CYP3A4

testosterone

200 µM

14 min6 β-hydroxytestosterone

Phase I and II

7-ethoxycoumarin

100 µM

30 min7-HCG, 7-HCS, 7-HC *d Like atandard* 7-hydroxycoumarin glucuronide, 7-hydroxycoumarin sulfate and 7-hydroxycoumarinand Services
4.
表接着型ヒト凍結肝細胞トラブルシューティングガイド

問題
解凍後の細胞生存率が低い考えられる原因

アドバイス• 解凍手法が不適切• 解凍、播種および計数について、詳細なプロトコルを見直す• 解凍培地が最適ではない• 細胞を 37°C、2 分未満で解凍する• 計数時の肝細胞の取り扱いが荒い• 解凍に CHRM™ Medium を使って凍結保護剤を除去する• 計数または播種前の細胞の放置時間が長すぎる• ワイドボアピペットチップを使用し、穏やかに混合する• 計数前に細胞混合物が均一であることを確認する• 4 本の格子線のうち 2 本の格子線上の細胞を計数する• ロードする前に細胞をトリパンブルー混合液中に 1 分間以上放置しない• 計数後速やかに細胞を播種する細胞収量が想定していたより低い• 解凍手法が不適切• 解凍、播種および計数について、詳細なプロトコルを見直す• 解凍培地が最適ではない• 細胞を 37°C、2 分未満で解凍する• 遠心速度が不適切• 解凍に CHRM™ Medium を使って凍結保護剤を除去する• 計数時の肝細胞の取り扱いが荒い• 室温、100 × g で 10 分間遠心する• 計数手法が不適切• ワイドボアピペットチップを使用し、穏やかに混合する• 計数前に細胞混合物が均一であることを確認する• 4 本の格子線のうち 2 本の格子線上の細胞を計数する• ロードする前に細胞をトリパンブルー混合液中に 1 分間以上放置しない

接着率が低い• 細胞の接着時間が不十分• 細胞下層の品質が悪い• 肝細胞のロットが接着型ではない• サーモフィッシャーサイエンティフィックが提供するロット別特性評
価仕様書の写真と培養細胞とを比較する• Geltrex™ を重層する前に、時間をおいて接着率が増加するかどうかを確認する• Gibco™Collagen I Coated Plate を使用する• 解凍、播種および計数について、詳細なプロトコルを見直す• ロットの規格を調べて接着用であることを確認する

10

表 4. 接着型ヒト凍結肝細胞トラブルシューティングガイド（続き）問題
単層の集密度が不十分考えられる原因• 播種密度が低すぎる• 播種時の肝細胞の分散が不十分• ウェルフォーマットに対応する
播種液量が不適切• 接着率が低い（上記参照）

アドバイス• サーモフィッシャーサイエンティフィックが提供するロット別特性評
価仕様書で適切な播種密度を確認する• インキュベーション前に顕微鏡で細胞を観察し、播種が適切かを調べる• インキュベーター内でプレートを 8 の字または前後にゆっくり動かして細胞を均一に分散させる• 播種量についてサーモフィッシャーサイエンティフィックの文献または技術サポートを参照する

単層が完全性に欠ける（単層上に細胞塊または細胞片の集合）• 播種密度が高すぎる• 播種時の細胞の分散が不十分• ウェルフォーマットに不適な播種量• サーモフィッシャーサイエンティフィックが提供するロット別特性評
価仕様書で適切な播種密度を確認する• インキュベーション前に顕微鏡で細胞を観察し、播種が適切かを調べる• インキュベーター内でプレートを 8 の字または前後にゆっくり動かして細胞を均一に分散させる• Geltrex™ を重層する前にプレートを揺り動かし、細胞単層を洗う• 播種量についてサーモフィッシャーサイエンティフィックの文献または技術サポートを参照する

膜の完全性または立方状の細胞形態が失われている• 肝細胞のロットが接着型ではない• ロットの規格を調べて接着用であることを確認する• 培地が最適ではない• Gibco™ Plating and Incubation Supplement Packs を 添 加 し た
Gibco™ Williams Medium E を使用する• 細胞の培養期間が長すぎる• 播種プロトコルを参照する• 通常、接着型ヒト凍結肝細胞は 5 日以上培養しないでください

毛細胆管の形成が不十分• 肝細胞のロットがトランスポーター用ではない• 培地が最適ではない• 毛細胆管の形成時間が不十分• ロットの規格を調べてトランスポーター用であることを確認する• Gibco™ Plating and Incubation Supplement Packs を 添 加 し た
Gibco™ Williams Medium E を使用する• サーモフィッシャーサイエンティフィックの播種プロトコルを参照する• 通常、毛細胆管網の形成には 4 〜 5 日以上の培養期間が必要

予期しない誘導結果• 単層集密度が不十分（上記参照）• 単層が完全性に欠ける（上記参照）• ポジティブコントロールが不適切

細胞の集合、細胞片、細胞の壊死を示す単層の穴がみられる• サーモフィッシャーサイエンティフィックが提供するロット別特性評
価仕様書の結果と得られた結果とを比較する• 酵素誘導プロトコルを参照する• ポジティブコントロールの濃度が不適切• ポジティブコントロールが適切であることを確認する• 被験化合物の毒性• 処理した細胞と未処理の細胞の形態を比較する• 培地が最適ではない• 播種プロトコルを参照する• 肝細胞のロットが接着型ではない• ロットの規格を調べて接着用であることを確認する• 細胞の培養期間が長すぎる• 通常、接着型ヒト凍結肝細胞は 5 日以上培養しない

11

創薬

ent

Animal Cryopreserved Plateable and Suspension Hepatocytes• 毒性学に利用される主要な動物種の接着型ロットまたは浮遊型ロットをご用意• 生存率が通常 80％以上• 第 I 相および第 II 相酵素の活性を評価
当社の動物凍結肝細胞はヒト凍結肝細胞と同じ丁寧な分離・凍結保存手法で調製されています。当社ではマウス、ラット、イヌ、ウサギ、

d Like atandard

非ヒト霊長類から定期的に肝細胞を分離しているほか、ご依頼に応じて他の動物種の肝細胞も分離いたします。第 I 相および第 II 相、生
酵素活性の評価法の対象は ECOD、7-HCG、7-HCS です。当社では経時的な細胞形態、接着率、単層集密度（接着型細胞）存率安定性も厳密にモニターしています。

表 5. 凍結肝細胞の解凍および播種に関する一般的なガイドライン

Human

Rat

Mouse

Dog

Monkey遠心条件

100 × g
10 min86 × g
6 min

86 × g
6 min

86 × g
6 min

86 × g6 min

肝細胞のサイズ

20 µm

播種密度

0.7 − 0.9 × 10
total cells/µm

and Services

30 µm
6

0.7 − 0.9 × 10
total cells/µm

50 µm
6

0.3 − 0.5 × 10
total cells/µm

20 µm
6

0.7 − 0.9 × 10
total cells/µm

8 − 10 µm
60.9 − 1.1 × 106
total cells/µm

培養後 72 時間

追記：上記遠心条件は Hepatocyte Thaw Medium（CM7500）を使用される場合の条件です。

凍結クッパー細胞、生理学的により良いモデルを提供
正常および病理学的な条件下で、多くの肝細胞の機能はその近傍にある非実質性細胞（NPC）から放出される物質によって制御されることが多くの証拠によって示されています。これら細胞の中で、特にクッパー細胞は肝臓の異化代謝調節に重要な役割を果たしています。クッパー細胞は炎症応答の主たる媒介物質を分泌し、肝臓の炎症をコントロールしています。こうしたサイトカイン媒介物質
は第 I 相と第 II 相酵素群と直接的な相互作用を通して、肝細胞の代謝率コントロールに関与しています。炎症誘発サイトカインまた
はリポ多糖類（LPS）で処理をすると 72 時間後には、共培養中のクッパー細胞と肝細胞は自己組織化することができます。そして効果的に P450 発現を調節することで機能し、生理学的に対応する結果をもたらします。肝細胞と NPCs を共培養することで、肝臓の正常な生理状態と病的状態の両方をより明瞭に示すことが研究で分かっています。凍結保存された精製ヒトクッパー細胞とラットクッ
パー細胞は、肝細胞とクッパー細胞の共培養系でさまざまな肝機能を研究する便利なツールを提供します。

12

凍結クッパー細胞の品質• 高い生存率、通常 90％以上• 高い精製率、通常 90％以上• リポ多糖類（LPS）による活性化反応• バイアル当たり生存細胞が最小限でも 100 万個• 肝細胞との共培養プロトコルが提供可能

Kupffercellscells
Kupffer
Kupffer cells
Kupffercells
Kupffercells

Hepatocytes
Hepatocytes
Hepatocytes
Hepatocytes
Hepatocytes

Co-culture
Normalliverliverstatestate
Co-culture- NormalCo-culture-- Normal
liver
state
Co-culture
liver
state
Co-culture-- Normal
Normal liverstate

Co-culture
Inflamed
liverliverstatestate
Co-culture-- Inflamed
Co-culture-- Inflamed
liver
state
Co-culture
Inflamed
liver
state
Co-culture- Inflamed
liver state

図 10. 正常および炎症状態の肝臓モデル
これらのモデルによって、研究者は炎症時の肝細胞とクッパー細胞間の相互作用を研究することが可能。

Co-cultures

600

IL-6 (pg/mL)

500
400
300
200
100
0

Vehicle LPS

24 hr

IL-2

Vehicle LPS

48 hr

IL-2

Vehicle LPS

IL-2

72 hr

図 11. クッパー細胞と肝細胞の共培養中での IL6 産生（LPS およびIL2 刺激後 24、 48、および 72 時間経過後）
24、48、72 時間後の全ての時点で IL6 が顕著に上方調節されていることに注意。クッパー細胞と肝細胞間の相乗的な細胞自己組織化によって、炎症時の反応中にこれら細胞が共に機能できることを示唆してい
る。

13

創薬

ent

細胞培養試薬Hepatocyte Maintenance Supplement Pack

解凍用培地

サメタゾン、ペニシリン‐ストレプトマイシンのカクテル溶液、Gibco™ Hepatocyte Maintenance Supplement Pack は、デキ

Gibco™ Hepatocyte Thaw Medium（HTM） お よ び Gibco™
Cryopreserved Hepatocyte Recovery Medium（CHRM™）は、細胞凍結保存後に凍結保護剤を除去しながら生存肝細胞の収率を高めるために設計された独自の処方です。適切に使用した

d Like atandard

場合、一貫して生存率が高く、より健康な肝細胞が得られるこ。 いずれの培地も簡単に使用とが証明されています（図 12）

ITS ＋（インスリン、トランスフェリン、セレン錯体、BSA、リノー
ル酸）、GlutaMAX™、HEPES が含まれており、浮遊培養またはプレート培養で肝細胞をインキュベートするため、最大 500

mL のフェノールレッド不含 Williams Medium E または別の適
切な 基礎培地に添加します。

できます。解凍した肝細胞 1 バイアル分をコニカルチューブに移し、軽く遠心分離して培地を除去し、細胞ペレットをやさしく再懸濁するだけです。

Gibco™ Geltrex™ Matrix は、Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）

100%

腫瘍細胞間の境界を形成する特殊な細胞外基質の連続シート

and Services
細胞生存率

Geltrex Reduced Growth Factor Basement
Membrane Matrix

から精製されており、可溶性の増殖因子低減（RGF）基底膜

75%

抽出物（BME）です。 Geltrex Matrix の主成分は、ラニン、IV

50%であり、３次元（3D）培養試験の基盤を提供します。

型コラーゲン、エンタクチン、ヘパリン硫酸プロテオグリカン

25%

Collagen I, Rat Tail for Cell Culture0%

HTM または CHRM 培地

DMEM

図 12. 凍結保存後の肝細胞生存率を向上させる能力における HTM
または CHRM の典型的結果と DMEM の典型的結果との比較

Williams Medium E
LC-MS/MS 分析を行なう肝細胞研究にはフェノールレッド不含
Gibco™ Williams Medium E のご使用をお勧めします。

Hepatocyte Plating Supplement Pack
Gibco™ Hepatocyte Plating Supplement Pack は、適格性評
価済みのウシ胎児血清、デキサメタゾン、ペニシリン‐ストレ
プトマイシンのカクテル溶液、ウシインスリン、GlutaMAX™、

HEPES が含まれており、新鮮肝細胞または凍結肝細胞を播種するため、 最 大 500 mL のフェノー ルレッド不 含 Williams

Medium E または別の適切な 基本培地に添加します。

14

コラーゲンは、細胞培養に最もよく使用されている細胞外基質（ECM）タンパク質で、細胞の接着や分化を促します。 5 mg/

mL Collagen I 溶液のほか、Collagen I をコートした 6 ウェルプ
レート、24 ウェルプレート、96 ウェルプレートも肝細胞実験向けにご用意しています。

Gibco HepExtend Supplement（50X）
Gibco™ HepExtend™ Supplement（50X）は、凍結初代肝細付着肝細胞を培養する際に最良の細胞形態および生存率を提胞の細胞生存率、機能および培養可能日数を改善するために供できるよう設計されています。

開発された培地です。これにより、標準的な培養条件では達成• 細胞の生存期間を延長することで、正常細胞形態および微小できない代謝や毒性評価結果を得ることができます（図 13 お胆管を維持しながら培養期間を 10 日以上に延長することが。
よび 14）できます。

HepExtend Supplement をスタンダード培地である Williams E• cGMP 準拠施設において最高品質の材料を使用し、安定したHepatocyte Maintenance Medium に加えて、現在の肝細胞の品質で提供しています。

培養方法および装置と一緒に使用してください。本サプリメン
トには、初代肝細胞機能を妨げることが知られている低分子や

100

100

50

50

0
0 1 2 0 1 25105
培養日数培養日数

10 14

CYP2D6活性CYP2D6
活性

60 60

4

4

2

2

0

80

0
0 1 2 0 1 25105
培養日数培養日数

10 14

14

60
40
20
0

CYP3A4活性CYP3A4
活性

1,000
1,000

40 40

500 500

20 20
0

6

1,500
1,500

デキストロファン(pmol/mg protein/min)
デキストロファン(pmol/mg protein/min)

80 80

14 14

14

6

6b-ヒドロキシテストステロン(pmol/mg protein/min)
6b-ヒドロキシテストステロン(pmol/mg protein/min)

0

CYP2B6
活性 活性
CYP2B68

デキストロファン(pmol/mg protein/min)

150

8デキストロファン(pmol/mg protein/min)

150

CYP1A2活性 活性
CYP1A2ヒドロキシブプロピオン(pmol/mg protein/min)200

ヒドロキシブプロピオン(pmol/mg protein/min)

200
APAP
(pmol/mg protein/min)

APAP(pmol/mg protein/min)

ウシ胎児血清は含まれておりません。

00 10 21 2

5

10 10
5
培養日数
培養日数

14 14

0

0
0 10 21 2

5

10 10
5
培養日数
培養日数

14 14

図 13. 14 日間の培養期間におけるチトクローム P450 特異的活性

HepExtend Supplement を使用した培養では、ウィリアム E 培地と比較してチトクローム P450 の活性が高くなっています。

CYP1A250
4
2
コントロール

オメプラゾール

40

20

0

コントロール

フェノバルビタール リファンピシンCYP3A420
コントロール標準培地に対する倍率

100

コントロール標準培地に対する倍率

コントロール標準培地に対する倍率

150

0

CYP2B6

60

200

15
10
5
0

コントロール

フェノバルビタール

リファンピシン

図 14. HepExtend Supplement 中で培養したヒト肝細胞は Ah 受容体（PXR および CAR）に対する誘導剤に対して反応

15

創薬

ent

ヒトおよび動物凍結肝細胞の解凍・播種プロトコル
準備するもの：重層を行なう場合は、ロットの濃度と技術的な

8. 肝細胞をマルチウェルプレートに移し、分散させます。ただし、回旋はさせないでください。

参考事項について Gibco Geltrex Reduced Growth Factor

24 ウェルプレートの場合：Basement Membrane Matrix（製品番号 12760-021）の仕様• ヒト肝細胞、500 µL、Certificates of Analysis（COA）に™

™

書をご参照ください。 Geltrex Matrix は、使用前に氷上で 3 〜

4 時間解凍するか、または 4 °C で一晩解凍した後に、氷冷しておきます。 初代培養肝細胞を取り扱う際には、一般的な安d Like atandard

全対策を講じ、適切な安全キャビネットをご使用ください。

解凍、遠心、再懸濁
1. HTM Medium と Plating Medium（Gibco™ Hepatocyte
Plating Supplement Pack（Serum-Containing）を 添 加した Williams Medium E）を 15 分間温めて 37°C にします。

and Services
2. 凍結肝細胞を 37°C のウォーターバスに約 2 分間浸して解凍します。

3. フード内で 70% アルコールによりバイアルを消毒し、注
ぐか、またはワイドボアのピペットチップを使って肝細胞をHTM Medium に移します。
4. 室温で遠心します：• ヒト肝細胞、100 × g で 10 分間• 動物肝細胞、86 × g で 10 分間

応じた密度• イヌおよびラット肝細胞、500 µL、ウェルあたり 3.5 〜 4.5
× 105 細胞• マウス肝細胞、500 µL、ウェルあたり 1.5 〜 2.5 × 105細胞• 非ヒト霊長類肝細胞、500 µL、ウェルあたり 4.5 〜 5.5
× 105 細胞9. 37°C で 4 〜 6 時間インキュベートします。
10. プレートの培地を撹拌して吸引します。
11. 重 層 を 行 なう場 合 は、Gibco™ Hepatocyte MaintenanceSupplement Pack（Serum-Free） を 含 有 す る Williams
Medium E で氷冷した Geltrex Matrix を 0.35 mg/mL の最終濃度に希釈して、4°C の Geltrex™ Matrix 混合物を調製します。

12. 4 °C の Geltrex を重層するか、または 37 °C の Incubation
Medium を添加してプレートを一晩インキュベートした後に使用します。

5. 注意深く吸引を行ない、適量の Plating Medium（通常は 1× 106 細胞あたり 1 mL）を添加します。

計数、播種およびインキュベート
6. 細胞生存率と収量を決定します（詳細は肝細胞計数手順をご参照ください）。細胞を浮遊させて使用する場合は以下。
には進みません（図 15）7. Plating Medium で播種密度に希釈します：• ヒト肝細胞、Certificates of Analysis（COA）参照（通常
0.7 〜 0.9 × 106 全細胞 /mL）
• イヌおよびラット肝細胞、0.7 〜 0.9 × 106 全細胞 /mL• マウス肝細胞、0.3 〜 0.5 × 106 全細胞 /mL• 非ヒト霊長類肝細胞、0.9 〜 1.1 × 106 全細胞 /mL16

図 15. 浮遊肝細胞とプレート肝細胞のセットアップ

トリパンブルー色素排除試験法による初代培養肝細胞の計数プロトコル
注：初代培養肝細胞を取り扱う際には、一般的な安全対策を行肝細胞の計数7. 血球計算盤の 4 区画の生細胞（透明または黄色）と死細胞（青色）を速やかに計数します。その際は、各区画の 2 本

い、適切な安全キャビネットをご使用ください。凍結肝細胞を。トリパの区画線上の細胞数を含めて計数します（図 16）

解凍し、凍結保護剤を除去する手順は播種プロトコルに記載さンブルーへの曝露が長くなると細胞が壊死するおそれがあれています。

るため、計数は速やかに行ってください。

細胞計数用バイアルの準備

計算

1. 1.5 mL のマイクロ遠心チューブに 200 µL のバッファー

8. 全肝細胞数のほか、肝細胞の生存率を求めます。肝細胞（PBS またはこれに類する溶液）と 50 µL の 0.4% トリパ

混合物を目的の最終細胞濃度に希釈する場合は、添加済み

ンブルー染色液を加えて混合します。細胞の計数に用いるの新たな Plating Medium またはこれと同等の培地を使用し1.5 mL のバイアル（細胞計数用バイアル）にこのトリパンます。

ブルー希釈液を 50 µL 加えます。

2. 肝細胞浮遊液を計数用バイアルに加える前に、肝細胞浮遊液が入ったチューブを穏やかに数回転倒混和して溶液を均一にします。細胞を正確に計数するにはこのステップがきわめて重要です。

3. ワイドボアチップで 50 µL の肝細胞浮遊液を一度だけ吸い上げて測り取り、細胞計数用バイアルに押し出して注入しま

9. 生細胞率＝（生細胞数／全細胞数）× 100
10. 生細胞の収量＝ 1 区画あたりの生細胞の平均数（全生細胞数÷ 4）× 10,000 × 2 ×最終細胞浮遊液の全量（mL）

11. 全細胞密度（細胞数 /mL）＝ 1 区画当たりの生細胞＋死細10,000 は 1 区画の体積
胞の平均数× 10,000 × 2。ここで、（0.1 µL）の換算係数であり、2 は細胞希釈倍率です。

す。この際にチップを洗浄しないでください。細胞浮遊液が 2 倍に希釈されてしまいます。

4. 計数用バイアルを弾く、または穏やかにたたいて混ぜます。
細胞が壊死して正確な生存率が決定できなくなるため、激しい振盪や撹拌は避けてください。

血球計算盤の準備
5. 計数用バイアルを 1 分静置し、これを穏やかに弾く、またはたたいて再度混合した後に、ピペットで 10 µL の混合液を血球計算盤の片側の V 字型の溝にゆっくり移します。毛管作用によって細胞浮遊液が血球計算盤に吸い込まれます。

6. 計数前に、顕微鏡下で 4 区画を素早く調べて細胞が均等に分布していることを確かめます。血球計算盤に細胞が均等に分布していない場合や泡が入っている場合はやり直しま図 16. 血球計算盤の細胞の計数
細胞とトリパンブルーとの混合液を血球計算盤の片側にロードし、全 4区画（B の円）の細胞数を計数します。区画線上の細胞を計数する際には、2 本の区画線上の細胞数を計数し、残りの 2 本の区画線上の細胞数は計数しません。たとえば図 C の場合、上と左の区画線上にある細胞（緑の点）は計数しますが、下と右の区画線上にある細胞（赤の点）
は計数しません。

す。

17

創薬

ent

Ordering information
製品名

サイズ

製品番号

Human Cryopreserved Plateable Hepatocytes, Kupffer and Hepatic Stellate Cells (Each lot's Certificate Of Analysis has an exact cell count.)
Human Plateable Hepatocytes, Spheroid Qualified> 5 million viable cells

HMCPSQ

Human Plateable Hepatocytes, Transporter Qualified> 4 million viable cells

HMCPTS

Human Plateable Hepatocytes,Transporter Certified> 4 million viable cells

HMCPQC

Human Plateable Hepatocytes, Induction Qualified> 4 million viable cells

HMCPIS

Human Plateable Hepatocytes, Metabolism Qualified> 4 million viable cells

HMCPMS

Human Plateable Hepatocytes, Uptake Qualified> 4 million viable cells

HMCPUS

Human Plateable Hepatocytes, 5-Donor> 6 million viable cells

HMCPP5

Human Kupffer Cells> 1 million viable cells

HUKCCS

Activated Human Myofibroblastic Hepatic Stellate Cells> 1 million viable cells

HMFHSC

Human Suspension Hepatocytes, Transporter Qualified> 4 million viable cells

HMCSTS

Human Suspension Hepatocytes, Metabolism Qualified, Male

> 4 million viable cells

HMCS1S

Human Suspension Hepatocytes, Metabolism Qualified, Female> 4 million viable cells

HMCS2SHEP10, Pooled Human Hepatocytes,10-Donor> 4 million viable cells

HMCS10

Human Pooled Suspension Hepatocytes, 50-Donor> 4 million viable cells

HMCS50Dog (Beagle) Hepatocytes, Male> 4–8 million viable cells

DGCS10Dog (Beagle) Hepatocytes, plateable Male> 4–8 million viable cells

DGCP10

Monkey (cynomolgus) Hepatocytes, Male> 4–8 million viable cells

MKCS10

Monkey (cynomolgus) Hepatocytes, Plateable Male> 4–8 million viable cells

MKCP10

Mouse (CD-1) Hepatocytes, Male> 4–8 million viable cells

MSCS10

Mouse (CD-1) Hepatocytes, Female> 4–8 million viable cells

MSCS20

Mouse (CD-1) Hepatocytes, Plateable Male> 4–8 million viable cells

MSCP10

Mouse (CD-1) Cryopreserved Hepatocytes, Plateable Female> 4–8 million viable cells

MSCP20Rat (Sprague-Dawley) Hepatocytes, Male> 4–8 million viable cells

RTCS10Rat (Sprague-Dawley) Hepatocytes, Female> 4–8 million viable cells

RTCS20Rat (Sprague-Dawley) Hepatocytes, Plateable Male> 4–8 million viable cells

RTCP10Rat (Sprague-Dawley) Hepatocytes, Plateable Female> 4–8 million viable cells

RTCP20Rat Kupffer Cells> 1 million viable cells

RTKCCSd Like atandard

Human Cryopreserved Suspension Hepatocytes

and Services

Animal Suspension and Plateable Cryopreserved Hepatocytes and Kupffer Cells(Please inquire for minipig, guinea, and other custom species.)* 注：Gibco Human Cryopreserved Hepatocytes, Transporter Qualified（ヒト凍結肝細胞，
トランスポーター用）は B-CLEAR 試薬に対する適応性が評価されておらず、本製品の購入によって B-CLEAR™ 技術を実用化する権利が譲渡されることはありません。
™

18

™

Ordering information, continued
製品名

サイズ

製品番号

45 mL

CM7500Cryopreserved Hepatocytes Recovery Medium (CHRM )50 mL

CM7000Williams E Medium, no phenol red

500 mLA1217601

Primary Hepatocyte Thawing and Plating Supplements

1 kit for 500 mL medium

CM3000Primary Hepatocyte Maintenance Supplements

1 kit for 500 mL medium

CM4000Cryopreserved Hepatocytes Plating Medium (CHPM)

50 mL

CM9000

HepExtend Supplement (50X)

10 mL

A2737501

Collagen-coated plate, 6-well

1 plates

CM1006Media and Reagents for Hepatocyte Culture
Hepatocyte Thaw Medium™

Collagen-coated plate, 24-well

1 plates

CM1024

Collagen-coated plate, 96-well

1 plates

CM1096

Geltrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix

5 mL

A1413202

19

創薬

ent

肝ミクロソーム

ヒトおよび動物肝ミクロソームの解凍・インキュベーション
プロトコル• 再現性のある長期試験向けの大容量のプールドロット

1. 被験物質を溶媒に溶かして 100 倍のストック溶液を調製します。

• S9、サイトゾルをはじめとする他の細胞画分もご用意
肝小胞体由来の細胞画分には、医薬品候補の in vitro 代謝の評
、次の価に用いられる種々の代謝酵素が含まれており（表 6）

d Like atandard

2. ミクロソームを氷上でゆっくりと解凍します。
3. 以下を混合して全量 198 µL とします。

種々の実験に適しています。

• 183 µL の 100 mM バッファー• チトクロム P450 阻害試験

• 10 µL の 20 mM NADPH（最終濃度 1 mM）• 代謝安定性• 5 µL のミクロソーム（最終タンパク質濃度 0.5 mg/mL）
4. 3. の混合物を 5 分間ウォーターバスに浸してプレインキュ• チトクロム P450 フェノタイピング

ベートします。

• 代謝物の特性決定
当社では、ヒトをはじめとする毒性学に用いられるさまざまなand Services
種の肝細胞画分をご提供しています。各製品にはドナーの平均的な典型的プールが含まれています。ヒトミクロソームのプー

ルは、GLP 基準に従い、FDA の推奨する基質を使用して主要なチトクロム P450 活性と一部の第 II 相酵素の特性（Km およ。
び Vmax）が完全に決定されています（表 7 および 8）

5. 100 倍の被験物質ストック溶液を 2 µL 添加して反応を開始します。

6. 穏やかに撹拌しながら 37°C で最大 60 分間インキュベート
します。

7. 有機溶媒（酢酸エチル等）を 200 µL 添加して反応を停止させます。

8. 有機層にさらに 25 µL の内部標準を添加します。
表 6. 肝細胞画分に存在する代謝酵素

Metabolic enzymes

Livermicrosomes

Aldehyde oxidase

9. サンプルをボルテックスした後に約 3000 rpm で 5 分間遠
Liver S9
fractionsLivercytosolxx

Cytochromes P450 (CYP)xx

Flavin monooxygenases
(FMO)

x

x

Glutathione transferase
(GST)

x

Monamine oxidase (MAO)x

Sulfurotransferases (SULT)x

Uridine glucuronide
transferase (UGT)xx

以下の種の細胞画分ご用意しています。
• ヒト（シングルドナー、プールドナー）• ラット（Sprague-Dawley）

心します。

10. 有機層を清潔なプレートに移して蒸発乾固させます。
11. 移動相を溶媒としてサンプルを調製し、生じた代謝物をLCMS/MS で分析します。

表 7. Gibco™ ヒト肝ミクロソーム（50 ドナープール）の任意ロットのキネティックパラメーター

x

Km
（µM）

Vmax
（nmol/
min/mg）

Acetaminophen

78

0.73

CYP2A6

7-Hydroxycoumarin

1.1

0.53

CYP2B6

Hydroxybupropion

64

0.29

CYP2C86 α -Hydroxypaclitaxel

5.5

0.15

Isoform

Metabolite

CYP1A2• マウス（CD-1）

CYP2C9Hydroxytolbutamide

220

0.19

CYP2C194'-Hydroxymephenytoin

34

0.031

• イヌ（ビーグル）

CYP2D6

Dextrophan

3.2

0.13

• 非ヒト霊長類（カニクイザル）

CYP2E16-Hydroxychlorzoxazone

70

1.4

CYP3A46 β -Hydroxytestosterone

19

4.0

CYP3A41'-Hydroxymidazolam

1.6

1.1

20

表 8. Gibco™ ヒト肝ミクロソームを使って試験したチトクロム P450 および第 II 相酵素
モニターした酵素

マーカー

基質インキュベーション（分）

タンパク質濃度（mg/mL）

CYP1A1/2

Phenacetin

30

0.1

代謝物

Acetaminophen

CYP2A6

Coumarin

525

7-Hydroxycoumarin

CYP2B6

Bupropion

20

0.25

Hydroxybupropion

CYP2C8

Paclitaxel

10

0.075

6 α -Hydroxypaclitaxel

CYP2C9Tolbutamide

20

0.1

Hydroxytolbutamide

CYP2C19(S)-Mephenytoin

30

0.1

4'-Hydroxymephenytoin

CYP2D6

Dextromethorphan

15

0.2

Dextrorphan

CYP2E1Chlorzoxazone

20

0.1

6-Hydroxychlorzoxazone

CYP3A4/5

Midazolam

4

0.025

1'-Hydroxymidazolam

CYP3A4/5

Testosterone

7

0.05

6 β -Hydroxytestosterone

CYP4A11

Lauric acid

15

0.2

12-Hydroxydecanoic acid

FMO

Methyl p-tolylsulfide

15

0.05

Methyl p-tolylsulfoxide

UGT

7-Hydroxycoumarin

30

0.2

7-Hydroxycoumarin glucuronide

21

創薬

ent

Ordering information
製品名

サイズ

製品番号

Human Microsomes, 50 Donors

0.5 mLHMMCPL

Human Microsomes, 20 Donors, Male Donors

0.5 mLHMMCPM

Dog (Beagle) Microsomes

0.5 mLDGMCPL

Monkey (Cynomolgus) Microsomes

0.5 mLMKMCPL

Monkey (Rhesus) Microsomes

0.5 mLRHMCPL

Mouse (Balb-c) Microsomes

0.5 mLBCMCPL

Mouse (CD-1) Microsomes

0.5 mLMSMCPLRat (Sprague Dawley) Microsomes

0.5 mLRTMCPL

Human S9 Fractions

1.0 mLHMS9PL

Monkey (Cynomolgus) S9 Fractions

1.0 mLMKS9PL

Monkey (rhesus) S9 Fractions

1.0 mLRHS9PL

Mouse (Balb-c) S9 Fractions

1.0 mLBCS9PL

Mouse (CD-1) S9 Fractions

1.0 mLMSS9PLRat (Sprague Dawley) S9 Fractions

1.0 mLRTS9PL

Human Cytosol

1.0 mL

HMCYPL

Mouse (CD-1) Cytosol

1.0 mLMSCYPLRat (Sprague Dawley) Cytosol

1.0 mL

RTCYPL

Human and animal liver microsomes, 20 mg/mL

d Like atandard

Human and animal S9 fractions, 20 mg/mL

and Services

Human and animal cytosol, 20 mg/mL

22

CYP450 Baculosomes Plus Reagent とVivid Screening Kit
Gibco™ Cytochrome P450 Baculosomes™ Plus Reagent は
ヒト CYP450 アイソザイムおよびヒトチトクローム P450 レ
ダクターゼを含み、組み換えバキュロウイルスを感染させた昆 虫 細 胞から調 整したミクロソームです。 Gibco™ Vivid™

最適な結果を得るための柔軟なアッセイフォーマット
Gibco™ Vivid™ CYP450 アッセイ感度は弱い阻害剤を検出可能です。一反応あたり 2 µL まで系を微細化できます。アッセ
イはキネティックモードまたはエンドポイントモードで設定可能
で、マルチプレートによるスクリーニングを簡易化できます。
アッセイは室温または 37℃で実施することができます。

CYP450Screening Kits は酵素 - 薬物相互作用および CYP450阻害の検出ができるハイスループット用蛍光アッセイです。

• 詳細な薬物代謝研究用の単一ヒト P450 アイソザイム• 簡易な 3 ステップ操作

CYP450 酵素と Vivid™ スクリーニングキットの全リストは以下のウェブサイトを参照ください。

www.thermofisher.com/admetox• 高シグナル／バックグラウンドノイズ比と幅広いダイナミック
レンジ• 96 ウェルから 1536 ウェルまで複数のフォーマットに対応

単一の過剰発現ヒト CYP450 アイソザイム
Cytochrome P450 Baculosomes Plus Reagent はただ一種類の CYP450 アイソザイムを発現し、その他の CYP450 やその他クラスの薬物代謝酵素による代謝を避けることでヒト肝ミク
ロソーム（HLMs）について際立った利点を提供しています。

明るい蛍光シグナルとバックグラウンドの低い Vivid 試薬
Vivid 蛍光発光性基質は、切断または水酸化を受けるまで蛍光発光が最小限に抑制されたブロック化色素です。 2 か所の酸化可能部位のどちらかが酸化されると強度発光の蛍光発光産物
を放出します。この産物は従来の蛍光発光プローブと比較して優れた蛍光性、溶解性およびキネティクス特性を示します。その結果、高度な感受性、より大きなシグナル／ノイズ比、および優れたアッセイ再現性を示します。 Vivid™XX 基質は本キットに含まれています。青色、緑色、赤色またはシアン色から蛍光
産物基質を選択できます。

23

創薬

ent

ADME/Tox 試薬サポート
ADME/Tox 試薬プロトコル• トリパンブルー排出解析を用いた初代培養肝細胞の細胞数計測• 浮遊型肝細胞を使った代謝安定性評価• プレート培養肝細胞を使った代謝安定性評価

d Like atandard• プレート培養肝細胞での誘導試験• クッパー細胞と肝細胞の共培養

製品選びに関するサポート
製品に関するご注文・お問い合わせは販売代理店までお願いいたします。

and Services

ウェブサイト：thermofisher.com/admetox

テクニカルサポート
Email: jptech@thermofisher.com
Phone: 0120-477-392

24

25

研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用はできません。
記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。
For Research Use only. Not for use in diagnostic procedures. © 2019 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified.
TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc., used under permission and license.
価格、製品の仕様、外観、記載内容は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめご了承ください。
標準販売条件はこちらをご覧ください。thermofisher.com/jp-tc

販売店

GIB051-C1907OB

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オーダーサポート
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