No.90.qx 08.3.21 17:09 ページ 1

PVDF Blocking Reagent
for Can Get Signal ®
免疫反応促進試薬Can Get Signal ®を用いるウェスタンブロット解析に適した人工合成ブロッキング試薬です。
PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal ®は、免疫反応促進試薬「Can Get Signal ®」（本誌p.2）を用いるウェスタンブロット解析に適した、Ready-to-useのブロッキング試薬です。
ウェスタンブロット解析において多用されるPVDFなどのメンブレンでの使用に適しており、高いブロッキング性能を発揮します。また本試薬は、人工合成ポリマーを主成分とし、タンパク性の成分を含まず、リン酸化タンパク質等の検出に適しています。Can Get

Signal ® Immunoreaction Enhancer Solutionと組み合わせてご使用ください。

特長1 高いブロッキング性能
・本試薬は、PVDF膜を用いるウェスタンブロット解析での使用に至適化されており、高いブロッキング性能を発揮します。免疫反応促進試薬Can Get Signal ®
Immunoreaction Enhancer Solutionを用いるウェスタンブロット解析に適しています。

特長2 プロテインフリー
・本試薬は合成ポリマーであり、タンパク質性の成分を含有しないため、リン酸化タンパク質の検出などに最適です。

特長3 マスキング効果を低減
・本試薬は、スキムミルク・ゼラチン等のブロッキング剤使用時に問題となる、抗原のマスキングによるシグナル低下が少なく、高いS/N比を得ることができます。

実施例1 各種ブロッキング剤との性能比較
ブロッキング剤として、本ブロッキング試薬、5%スキムミルク/TBS-T、5%BSA/TBS-T、およびA社製液状ブロッキ
ング試薬を用いて、HeLa細胞溶解液をサンプルとして、ERK2タンパク質のウェスタンブロット法による検出を試みました。抗原抗体反応にはCan Get Signal ® Immunoreaction Enhancer Solutionを用いました。
その結果、本試薬を用いた場合で、最もバックグラウンドが低く、かつシグナルが高い明瞭な結果を得ることができました。

Skim Milk
PVDF
Blocking Reagent （5%）
123123BSA（5%）
123

A社液状
ブロッキング試薬
1231: HeLa細胞溶解液
2: 1/4希釈
3: 1/16希釈

ERK2〈使用抗体〉
Santa Cruz Biotechnology社の以下の抗体を使用。
1次抗体：
anti-ERK2 (C-14) rabbit polyclonal IgG (CodeNo. SASC154), 2,000倍希釈
2次抗体：
anti-rabbit IgG goat polyclonal IgG (Code No.
SASC2301), 20,000倍希釈

図1．各種ブロッキング剤を用いたウェスタンブロットによるERK2タンパク質検出結果

2008

901

No.90.qx 08.3.21 17:09 ページ 2

実施例2 リン酸化タンパク質の検出
HeLa細胞溶解液（EGF刺激＋/−）をサンプルとして、本製品をブロッキング剤として使用したウェスタンブロットを用いて、リン酸化ERK（p-ERK1、p-ERK2）の検出を行いました。抗体反応には、弊社免疫反応促進試薬Can Get Signal ® Immunoreaction
Enhancer Solutionを使用しました。
その結果、非特異バンドの出現も少なく、p-ERK1（44kDa）、p-ERK2（42kDa）それぞれに由来する2本のバンドが明瞭に確認されました。EGF刺激の有無による差も明確に確認できました。

EGF刺激なし

また、リン酸化タンパク質検出

12

EGF刺激あり3123〈使用抗体〉

時にしばしば問題となる、ブロック

Santa Cruz Biotechnology社の以下の抗体を使用。
1次抗体：
anti-p-ERK (E-4) mouse monoclonal IgG
2a (Code No. SASC7383), 1,000倍希釈
2次抗体：
anti-mouse IgG-HRP goat polyclonal IgG(Code No. SASC2005), 20,000倍希釈

剤中のカゼイン等に起因するバックグラウンドの生成も認められませんでした。
1: HeLa細胞溶解液
2: 1/4希釈
3: 1/16希釈

図2．リン酸化ERKタンパク質の検出

品 名 及 び 内 容
PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal

包®

装

500ml×1本

保存温度

Code No.

価格

4℃

NYPBR01￥13,500※本試薬は使用濃度に調製済みの液状試薬です。通常は希釈せず原液のままご使用ください。
※本試薬は日油株式会社により専用製品として製造されています。

免疫反応促進試薬

Can Get Signal ®
Immunoreaction Enhancer Solution
抗原抗体反応を促進し、同時にバックグラウンドを下げる効果のある試薬です。ウェスタンブロット解析/ ELISA等の感度不足、特異性を改善することができます。使用方法は、従来、抗原抗体反応用の溶液として使用していたTBS-Tなどの代わりに、本試薬を用いるだけです。検出等に関しては、今までお使の条件をそのままお使いいただけます。1次抗体用としてSolution 1、2次抗体用としてSolution 2を用います。抗リン酸化タンパク質抗体などの、良い抗体が得られにくいターゲットの検出等に、優れた威力を発揮します。

実施例1 ウエスタンブロットによるリン酸化タンパク質の検出
培養ウシ副腎髄質クロマフィン細胞の培養液にインスリCan Get Signal ® TBS-Tンを任意の濃度で添加し、5分間刺激を行った細胞のライ

1 2 3 4ゼートをサンプルとして、ウエスタンブロット法によってリ

1 2 3 4ン酸化Akt（p-Akt）の検出を行いました。その結果、従来法（TBS-T使用）に比べ、Can Get Signal ®を用いた場
pAkt合、明らかなシグナルの増強と、バックグラウンドの低下がサンプル：
培養ウシ副腎髄質細胞
1: Control（H2O）
2: Insulin（1nM、5分刺激）
3: Insulin（10nM、5分刺激）
4: Insulin（100nM、5分刺激）見られました（図3）。
※データは宮崎大学医学部 薬理学講座 柳田俊彦先生にご提供いただきました。

図3．抗phospho-Akt抗体による、リン酸化Aktの検出品 名 及 び 内 容®

Can Get Signal
Solution 1 for primary antibody
Solution 2 for secondary antibody

包装

保存温度

各250ml×1本

Code No.

価

格NKB-101¥30,000

NKB-101T¥10,000

4℃
各50ml×1本®

Can Get Signal
Solution 1 for primary antibody

250ml×1本

4℃

NKB-201¥17,000

250ml×1本

4℃

NKB-301¥17,000®

Can Get Signal
Solution 2 for secondary antibody

2200890