SEC-MALS/RI のデータ解析メモ（Wyatt DAWN HELEOS II (2023.01.27)）
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データファイルの保存（Astra 8.1.2 は起動中、SEC-MALS 測定後に解析を続ける場合）

0-1 データファイルの保存
ワークスペース内、[Experiments]→[サンプル名]を右クリックし、[Save As]を選択する。保存先、ファイル名を指定後、ファイル（ファイルの種類は ASTRA (*.afe8)）を保存する。
保存先は C:¥ASTRA DATA 内に測定日のフォルダを”20230220”のように作成しそこに保存するようにしてください。
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Astra 8.1.2 起動、データファイルを開く

1-1 Astra 8.1.2 起動
デスクトップ上の Astra 8.1.2 のショートカットアイコンをクリックし、Astra 8.1.2 をスタートさせる。

メニューバー
ワークスペース

1-2 Experiment ファイルを開く
メニューバーより[File] →[Open]→[Experiment]を選択し、Open ウィンドウを開き、Experiment ファイル(.afe6 or afe8)を選択、[開く]をクリックする。

2ベースライン指定

2-1 Baselines タブ
ワークスペース内、[Procedures]→[Baselines]をダブルクリックし Baselines タブを表示

させる。

2-2 Baseline 範囲の指定
右側の LS11 のチェックボックスにチェックを入れ、90°の LS 検出器のデータを表示させる。[Autofind Baselines]をクリックし、Baseline 範囲を自動設定させる。その後、Baseline（水色）の左端、右端をそれぞれドラッグして Baseline の開始、終了を設定する。

Baseline 始点

Baseline

Baseline 終点

2-3 Baseline 範囲の確認[Set All]をクリックし、2-2 で設定した LS11 での Baseline 範囲を全データに適応させる。その後、右側のチェックボックスを選択しながら LS1~18,UV,RI の各データでBaseline 範囲が適切であるかを確認し、それぞれのデータについて調整を行う。
全て確認・調整後[OK]をクリック。

※グラフ画面での共通操作[[Ctrl]+左ドラッグで矩形を選択して拡大、[Ctrl]+右クリックで一段階戻る]
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ピーク範囲指定

3-1 ピーク範囲
ワークスペース内、[Procedures]→[Peaks]をダブルクリックし Peaks タブを表示させる。

3-2 ピーク範囲の指定
すでに表示済みのピーク範囲をクリックして選択し、[Dellete]キーで削除し、ドラッグによってピーク範囲の指定を行う。範囲の左端・右端をそれぞれドラッグして指定範囲の調整が行える。ピーク範囲調整後[OK]をクリックする。

Peak 範囲

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Alignment (直列に接続されている LS, UV, dRI のピーク位置のずれを補正)

4-1 Alignment タブ
メニューバー内、[Experiments]→[Configuration] →[Alignment]を選択し Alignment タ
ブを表示させる。

4-2 Alignment の実行
ピークの開始から、ピークの終了の間をドラッグして Alignment 範囲を調節する。[必要に応じて、表示範囲の拡大を実行する。] [Align Signals] をクリックし、各ピーク（LS, UV, dRI）の頂点が一致していることを確認する。確認後[OK]をクリック

Alignment 範囲

Alignment 前

5Alignment 後

Band Broadening(直列に接続されている LS, UV, dRI の試料のピークの広がりを補正)

5-1 Band Broadening タブ
メニューバー内、[Experiments]→[Configuration] →[Band Broadening]を選択し Band
Broadening タブを表示させる。

5-2 Band Broadening を実行
Instrument 表示が dRI 検出器(Optilab)になっていることを確認する。ピークの裾まで含んだ範囲をドラッグで指定し、補正範囲を指定する。[必要に応じて、表示範囲の拡大を実行する。] [Perform Fit] をクリックし、各ピーク（LS, UV, dRI）の幅、ずれが改善していることを確認する。確認後[OK]をクリック
OptilabBroadening 範囲

Broadening 前

6Broadening 後Normalize (LS 検出器の角度による強度差の補正)
あらかじめ標準試料で行う。溶媒の屈折率に依存するので溶媒ごとに再校正が必要

6-1 ピーク範囲の再設定
ワークスペース内、[Procedures]→[Peaks]をダブルクリックし Peaks タブを表示させる。ピーク範囲をピーク高さの 1/2~1/3 に狭め、ピークの頂点のそばだけにし、[Apply]をクリックする。

peak 範囲(1/2~1/3 に狭める)

6-2 Normalize タブ
メニューバー内、[Experiments]→[Configuration] →[Normalize]を選択し Normalize タブを表示させる。

6-3 Normalize
Peak Name で校正対象のピークを確認し、Radius に試料の大まかな半径を入力する[BSA: 3.5 nm, OA: 3.0nm 程度?]
[Normalize]をクリックし、新たな係数を計算させ、[OK]をクリックする。
Peak タブを開き、変更されているピーク指定範囲を元に戻し、[OK]をクリック7LS 検出器の選択

7-1 Molar Mass & Radius from LS タブ

ワークスペース内、[Procedures]→[Molar Mass & Radius from LS]をダブルクリックしMolar Mass & Radius from LS タブを表示させる。

7-2 Control graph ピークの頂点の選択
Control graph 内の青い棒状のマークを左クリックとカーソルキーで移動させ、ピークの頂点に移動させる。(必要に応じて表示を拡大する)

Peak の拡大前

Peak の拡大後

7-3 LS 検出器の選択
画面下欄の[Enabled Detectors]の[+]をクリックし LS 検出器の選択欄を開く。
Results graph の各点が各 LS 検出器の測定に対応しているため、Results graph を確認しながら、近似直線から外れた LS を除外し、Molar Mass や Results graph の下部にある相関係数を確認する。LS を追加・除外したりなど試行錯誤する必要がある。
[OK]をクリックする。

検出器の選別前8検出器の選別後結果の出力 (Astra のない環境で利用できる計算結果のファイルを出力)

8-1 Report ファイルの表示
ワークスペース内、[Results]→[Report (summary)]をダブルクリックし Report(summary)タブを表示させる。

8-2 Report ファイルの保存
メニューバー内、[File]→[Print]を選択し Print ウィンドウを表示させる。プリンターの選択で Microsoft Print to PDF を選び印刷をクリックして Report ファイルを PDF で出力する。
8-3 csv ファイルの保存
ワークスペース内、[EASI Graph]を選択し EASI Graph タブを表示させる。

8-4 設定の確認
EASI Graph タブの上部において Display: Molar mass, Distribution: vs. time or volume,
Abscissa: mL になっていることを確認する。なっていなければ、設定を行う。

8-5 Edit 画面の表示
EASI Graph タブ内で右クリックし、Edit を選択し、EASI Graph Options ウィンドウを開く。EASI Graph Options ウィンドウ内の[Chromatograms]部分において 1st, 2nd, 3rdにチェックを入れ、Rayleigh ratio, Differential refractive index, UV absorbance を選択した後に[Export]をクリックする。

8-6 csv 形式で保存ファイルの種類を csv に指定（エクセルにすると正しく出力されない）し、保存フォルダ、ファイル名を入力し[保存]をクリックする。

名前変更後の csv ファイル

csv ファイル内はA 列:

volume (ml) [LS の volume]

B 列:

xxx (サンプル名) [LS の信号強度]

C 列:

volume (ml) [dRI の volume]

D 列:xxx (サンプル名) [dRI の信号強度]

E 列:

volume (ml) [UV の volume]

F 列:

xxx (サンプル名) [UV の信号強度]

G 列:volume (ml) [分子量の volume]

H 列:xxx (サンプル名) [分子量]と 2 列ごとにデータが並んでいる。
（LS, dRI, UV はスケーリングされている）[1 行目の各データの名前を変更しておくと、エクセルなどでの再利用の際にわかりやすくなる。]