培養細胞から RNA 精製が不要で、高品質な cDNA 合成が可能！

リアルタイム PCR 用細胞溶解 &cDNA 合成キット（培養細胞用）

SuperPrep® IICell Lysis & RT Kit for qPCR

SuperPrep® の改良版 !

培養細胞から cDNA 合成が約 30 分で可能
ハイスループット解析のバラツキ低減

Lysis Reagents

ライセート ( 細胞溶解液 ) は氷上で 6 時間安定
DNaseI 処理でバックグラウンド低減
様々な qPCR 試薬と組み合わせ可能

RT Reagents

改良点１ 反応停止液の添加が不要

約30分!

培養細胞

培養細胞

cDNA

Lysis solution

StopStoop sosolution
lsol

逆転写反応

5分

2分

25 分

Stop Solution の添加・反応が不要

改良点２ より幅広い種類の細胞を用いるアッセイに対応
初代培養細胞を含む幅広い哺乳類細胞を用いることが可能

ハイスループット解析のバラツキを低減！

！

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR(Code No: SCQ-401) は、 リアルタイム PCR による遺伝子発現解析のための細胞溶解試薬 (Lysis Reagents) と逆転写反応試薬 (RT Reagents) からなるキットです。 本製品を使用することで、 96 ウェルプレート等で培養した細胞から、 逆転写反応の鋳型として利用可能な RNA を含む細胞ライセートを簡便に調製できます。 さらに、 本キットに含まれる RT Reagents は、 この細胞ライセートからの RT 反応に最適化されています。
前バージョンでは Lysis Solution の後に Stop Solution を添加する必要がありましたが SuperPrep® II では Lysis Solution での処理の後に、 そのまま cDNA 合成ステップに移行することができます。 また、 より幅広い哺乳類細胞から高感度検出が可能になりました。
本キットにより、 簡便、 迅速に培養細胞からリアルタイム PCR 用の鋳型 cDNA の合成が可能です。
培養細胞SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR(Code No. SCQ-401)

従来法 約 2 時間
RNA 抽出DNase I 処理

cDNA 合成【Lysis Reagents】

・Lysis Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor
Total RNAcDNA
【RT Reagents】
・5x RT Master Mix

SuperPrep II®

約 30 分

・5x RT Master Mix no-RT control*

リアルタイム PCR

Lysis solution( DNase I , RNase inhibitor )・Nuclease free Water* 逆転写酵素を含まないマスターミックスです。
コントロールとして使用します。

RT Master Mix
RNA5分

cDNA

・TaqMan® アッセイ
・SYBR® Green アッセイ

25 分

SuperPrep® II Cell Lysis Kit for qPCR (Code No. SCQ-501）
は、細胞溶解試薬 (Lysis Reagents) の別売品です。
THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit (Code No.
QRZ-101)、RNA-direct™ Realtime PCR Master Mix (CodeNo. QRT-101) 等の 1-step リアルタイム PCR 試薬を用いる解析 （簡易測定）にご使用になれます。

特長 1 RNA の精製不要
培養細胞から逆転写反応の鋳型として利用可能な RNA を含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。 Lysis Solution で処理したライセートを鋳型として、 そのまま逆転写反応を行うことができるため、 解析時間を大幅に短縮することが可能です。

特長 2 ライセートから高品質な cDNA を合成
最適化されたバッファー組成により、 RNase 等の細胞成分による RNA の分解を効果的に抑えます （調製したライセート中の RNA は氷上で6 時間安定です）。 また、 gDNA Remover （DNase I） 処理後に cDNA 合成を行うことから、 ゲノム DNA のコンタミの少ない高品質な cDNAを合成することができます。 逆転写試薬は弊社の高効率逆転写酵素 「ReverTra Ace®」 をもとに最適化されたマスターミックスとなっており、簡便 ・ 高効率に cDNA 合成を行うことができます。 合成した cDNA は長期保存可能です。

精製 RNA と細胞ライセートでの Ct の相関の検証

実施例 2細胞ライセートの氷上安定性の確認
SuperPrep®
SuperPrep® II

R2 = 0.9826

細胞ライセート (Ct) <SuperPrep® II>
SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401) を用いて、HUVEC （ヒト臍帯静脈内皮細胞） 2.5x10 4 cells から細胞ライセートを調製した後、 cDNA 合成（40μl 反応系） を行いました。 また同時に、 HUVEC から抽出した Total RNA
66.6ng から ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix (Code No. FSQ-201) を用いて cDNA合成 （40μl 反応系） を行いました。 それぞれの cDNA を鋳型に THUNDERBIRD®
SYBR® qPCR Mix (Code No. QPS-201) を用いて 15 種類の House Keeping Gene についてリアルタイム PCR 解析を行い比較しました。
その結果、 今回解析した 15 種類の遺伝子において、 精製 RNA と細胞ライセートを用いた解析に良好な相関が認められました。

Ct 値

精製した Total RNA (Ct)

実施例

A 社試薬

On ice ( 時間 )SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401) を用いて、 HeLa S3細胞 4x10 4 cells から細胞ライセートを調製し、 氷上に移した後、 0 ～ 6 時間後に細胞ライセートをサンプリングし、 すぐに cDNA 合成を行いました。 同様に弊社従来品 （SuperPrep®） 及び A 社試薬を用いて細胞ライセートを調製し、 同様にサンプリングして、 cDNA 合成を行いました。 この cDNA を鋳型に THUNDERBIRD®
Probe qPCR Mix (Code No. QPS-101) を用いて、 GAPDH 遺伝子の発現量をリアル
タイム PCR を行って解析しました。
その結果、 HeLa S3 細胞において氷上に 6 時間放置しても顕著な Ct 値の遅れは認められませんでした。

！

特長 3 幅広い哺乳類細胞を用いることが可能
SuperPrep® II では、 細胞の溶解性を向上させると共に RNase の影響を低減することで、 前バージョンに比べてより幅広い種類の細胞を用いるアッセイに使用可能です。 下表の代表的な細胞について適用できることを確認しています。
表 1. SuperPrep® II の適用確認済み細胞
細胞名12345678910111213141516171819202122232425
26

HPA
HEK
HA
HDF
HFLS
HBEpC
HUVEC
HPAEC
HC
HOb
HSkMC
HAOSMC
HFDPC
HMSC
A431
HeLa S3
HepG2
C2C12
NIH-3T3
MDCK
CHO-K1
Jurkat
K562
THP-1
U937
HMNC

接着／浮遊

種

接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
浮遊
浮遊
浮遊
浮遊
浮遊

H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
M. musculus
M. musculus
C. familiaris
C. griseus
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens

細胞由来

preadipocytes (primary cell)
epidermal keratinocytes (primary cell)
astrocytes (primary cell)dermal fibroblasts (primary cell)
fibroblast-like synoviocytes (primary cell)bronchial epithelial cells (primary cell)umbilical vein endothelial cells (primary cell)
pulmonary artery endothelial cells (primary cell)chondrocytes (primary cell)
osteoblasts (primary cell)skeletal muscle cells (primary cell)aortic smooth muscle cells (primary cell)
hair follicle dermal papilla cells (primary cell)marrow stromal cells (primary cell)
epidermoid carcinoma cell line
cervix carcinoma cell line
hepatocellular carcinoma cell line
myoblast cell line
embryo fibroblast cell line
kidney cell line
ovary cell line
T lymphocyte cell line
myelogenous leukemia cell line
acute monocytic leukemia cell line
leukemic monocyte lymphoma cell linemononuclear cells (primary cell)

前駆脂肪細胞
表皮角化細胞アストロサイト
皮膚線維芽細胞
滑膜細胞
気管支上皮細胞臍帯静脈内皮細胞
肺動脈内皮細胞
軟骨細胞
骨芽細胞
骨格筋細胞
大動脈平滑筋細胞
頭髪毛乳頭細胞
間葉系幹細胞
上皮様細胞がん
子宮頸がん
肝がん
筋芽細胞
胎仔由来線維芽細胞
腎臓
卵巣
白血病T細胞
赤芽球様白血病細胞
単球
単球単核細胞

特長 4 ハイスループット解析のバラツキ低減
プロトコールから少量の分注工程や希釈工程を減らすことで、 ハイスループット解析におけるバラツキを低減しました。 また、 細胞溶解時のピペッティング操作を無くし、 gDNA Remover 処理を並行して行うことで操作性を向上させました。 反応の停止液や、 RNA を不安定化する加熱工程などは不要です。
SuperPrep™
SuperPrep™ Cell Lysis & RT Kit for qPCR とバラツキを考慮したアッセイ精度の評価

実施例

種々の qPCR 試薬と組み合わせによる性能比較

HeLa S3 細 胞 を 96 ウ ェ ル プ レ ー ト に 2×10 4 cells/well ず つ 播 種 し、 100nM phorbol 12-myristate
13-acetate (PMA) を加えて 24 時間インキュベートしました。 その後、 PMA 処理した 12 ウェル、 未処理の 12 ウェルを PBS(-) で細胞を洗浄し、 SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401) で処理 し て cDNA 合 成 を 行 い ま し た。 こ の cDNA を 鋳 型 に THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix (Code No.
QPS-101) を用いて IL-6、 IL-1β、β-actin 遺伝子について TaqMan® プローブアッセイを行いました (n=12にて実施）。 同様に B 社試薬を用いてリアルタイム PCR 解析を行いました （逆転写とリアルタイム PCR
試薬も B 社キット付属品を使用）。 IL-6、 IL-1β遺伝子の Ct 値をβ-actin 遺伝子で補正し (ΔCt)、 PMA処理の有無の差 (ΔΔCt) を算出しました。 続いて Z’-factor を算出し、 比較を行いました。
＊Z’-factor ： データのバラツキを考慮した、 ハイスループットアッセイ系の質の目安となる数値です。 一般に 0.5 以上で良好と考えられます。 今回は下記の式で算出しました。
Z’-factor = 1-3 x (ΔCt(+) 標準偏差 + ΔCt(-) 標準偏差 ) / |ΔΔCt|
IL - 6PMA

Ct(IL-6)
平均ΔCt(IL-6 - β-actin)
平均
標準偏差SuperPrep® II(+)
(-)

25.35
29.60

3.457.50

B 社試薬

(+)
(-)

25.64
29.76

2.24
6.18

SuperPrep II(+)(-)

Ct(IL-1β）
平均27.83
34.85

B 社試薬

(+)
(-)

28.4235.98

IL - 1βPMA®

ΔΔCt

Z'0.20
0.26

-4.05

0.66

0.190.29-3.940.64

ΔCt(IL-1β - β-actin)
平均標準偏差
0.18
5.93
12.75
0.59
5.01
12.39

0.28
0.74

ΔΔCt

Z'-6.81

0.66-7.380.59< 増幅曲線の比較 >SuperPrep® IIIL-6IL-1ββ-actin

PMAの添加+- + + --B 社試薬IL-6IL-1ββ-actin

PMAの添加+- + + --

その結果、 いずれも Z’-factor としては良好なアッセイ系の目安となる 0.5 をクリアしましたが、 SuperPrep® II/ THUNDERBIRD® Probe qPCR Set (Code No. SCQ401/QPS101) を用いた実験において、 B 社試薬と比較して高い Z’-factor を示し、アッセイ系としてよりバラツキが少なく良好であることが分かりました。

！

特長 5 様々な qPCR 試薬との組み合わせ可能
様々なリアルタイム PCR 試薬 （SYBR® Green I, TaqMan® アッセイ両方に対応可能） と組み合わせて使用可能です。
弊社 THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix (Code No. QPS-101)、KOD SYBR® qPCR Mix (Code No. QKD-201) 等と組み合わせて用いることによって、 培養細胞から簡便かつ高精度の遺伝子発現解析が可能であることを確認しています。 また、 弊社
THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit (Code No. QRZ-101)、RNA-direct™ SYBR® Green Realtime PCR Master Mix(Code No. QRT-201) 等の 1-step リアルタイム PCR 試薬と組み合わせる簡易アッセイも可能です。

実施例

SuperPrep™
SuperPrep™®Cell Lysis & RT Kit for qPCR とSuperPrep
II Cell Lysis & RT Kit for qPCR と種々の qPCR 試薬と組み合わせによる性能比較
種々の qPCR 試薬と組み合わせによる性能比較

SuperPrep
CellLysis
RT KitforNo.
（CodeSuperPrep
SuperPrep™
™ CellIILysis& RTKit for&qPCR（CodeqPCR
CodeNo.qPCRSCQ-101)
を用いて、434 ヒト間3SCQ-401)
を用い 10て、系10
幹4、細1×10
胞101×10、、HeLa
s3 細 胞7.5×107.5104、葉1×101021×1010、 5×10、 1×10、 1×102
1cells1×101×10から細胞
ライセートを調製し、続い、cells から細胞ライセートを調製し、 続いて cDNA 合成 （40（40 μl 反応系） てを®
cDNA 合成それぞれの（40 μl 反応系）を行いました。
それぞれのcDNAを行いました。
cDNA を鋳型にTHUNDERBIRD
ProbeqPCR®
ProbeqPCR
Mix(CodeNo.
QPS-101、THUNDERBIRD
鋳型にMix (Code No. QPSQPS-１ 01)
01)、 A 社及び B 社製リアルタイム PCR
試薬を用
C 社及び
D 遺伝子について
GAPDH 遺伝社製リアルタイム
PCR® 試薬を用いて、
b-actin-actin
TaqManいて、アッセイを行いました。
®
TaqMan子についてアッセイを行いました。
その結果、 いずれのリアルタイム PCR 試薬においても良好な増幅を認め®
その結果、PCR 試薬においても良好な増る
こ と が で きいずれのリアルタイム
ま し た。 特 に、 THUNDERBIRD
Probe qPCR Mix (Code®
THUNDERBIRD
Probe
幅を認めることができました。
特に、No. QPS-１01)
QPS- 01) との組み合わせにおいて、最も良好な Ct を示しました。
®

THUNDERBIRD®
C 社 qPCR 試薬
D 社 qPCR 試薬

qPCR Mix (Code No. QPS-101) との組み合わせにおいて、 最も良好な Ct 値を示しました。

セット購入がお得です
品名および内容SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR

評価用サンプル
ございます<Lysis Reagents><RT Reagents>

・Lysis Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor

・5 x RT Master Mix
・5 x RT Master Mix no-RT Control
・Nuclease-free Water

包装

保存温度

Code No.

価格

100 回用 *1-20℃

SCQ-401￥76,000

100 回用 X5-20℃

SCQ-401X5￥325,000

１セット-20℃

SCQ401/QPS101￥99,500

１セット-20℃

SCQ401/QKD201￥99,500

100 回用-20℃

SCQ-501￥39,000

SuperPrep® II / THUNDERBIRD® Probe qPCR Set *3
SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR(SCQ-401) とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix (QPS-101）*2 とのセット

評価用サンプル
ございますSuperPrep® II / KOD SYBR® qPCR Set *4
SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR(SCQ-401）とKOD SYBR® qPCR Mix (QKD-201)*2 とのセット

評価用サンプル
ございますSuperPrep® II Cell Lysis Kit for qPCR *5<Lysis Reagents>
・Lysis Solution・gDNA Remover

・RNase Inhibitor*1 40 μl で逆転写反応をした場合に 100 回用としてご使用になれます。
*2 50 μl 反応で 200 回用、 20 μl 反応で 500 回用としてご使用になれます。
®
®
*3 SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (100 回用 ) [\76,000 → \72,300] と THUNDERBIRD Probe qPCR Mix (Code No. QPS-101: 200 回用 ) [\29,000 → \27,200] とのセット販売品です。
®
®
*4 SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (100 回用 ) [\76,000 → \72,300] と KOD SYBR qPCR Mix (Code No. QKD-201: 200 回用 ) [\32,000 →\27,200] とのセット販売品です。
®
*5 SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR に含まれる Lysis Reagents の別売り品です。 1-step リアルタイム RT-PCR による簡易アッセイのための細胞ライセート調製にご使用になれます。

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Code No.

価格

100 回用-20℃

QRZ-101￥33,000

100 回用-20℃

QRT-201￥33,000®

RNA-direct™ SYBR® Green Realtime PCR Master Mix* 50 μl 反応で 100 回用、 20 μl 反応で 250 回用としてご使用になれます。
®
®
※ SYBR は Molecular Probe Inc. の登録商標です。 TaqMan は Roche Molecular Systems Inc. の登録商標です。

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