ImmunoTox Letter

日本免疫毒性学会：The Japanese Society of Immunotoxicology Vol. 9 No. 1（通巻17号）
2004
aa 目
ICH

トピックS8次aa

第11回日本免疫毒性学会学術大会（予告２）………………………………１
塩野義製薬株式会社 中村和市

第11回日本免疫毒性学会学術大会を下記の要領で開催いたしますのでご案内申し上げます。尚、第35回日本職業・環境アレルギー学会と第44回日本産業衛生学会アレルギー免疫毒性研究会との三者協賛大会です。
日 時：平成16年９月10日（金）〜11日（土）会 場：福井県国際交流会館
福井市宝永３丁目１番１号（〒910-0004）
TEL: 0776-28-8800, FAX: 0776-28-8818
共 催：日本衛生学会、日本微量元素学会、
日本薬学会 福井産業保健推進センター
協 賛：日本トキシコロジー学会、日本毒性病理学会
後 援：福井市、福井県、福井県医師会
メインテーマ：アレルギー性化学物質に抗する国際的予防体系を構築するプログラム：
招待講演「呼吸器免疫毒性学の最前線」
ケネス・ドナルドソン
英国エジンバラ大学教授
特別講演「環境と鼻アレルギー」
藤枝重治 福井大学医学部耳鼻咽喉科教授
シンポジウム「アレルギー性化学物質に抗する国際的予防体系を構築する」
ワークショップ「医薬品の免疫毒性評価手順を検討するための共同研究」
シンポジウム「動物感作モデルの分子生物学」
市民公開シンポジウム「地産地消の長寿免疫学」
ランチョン・セミナー（９月10日（金）予定）
一般演題：口頭発表のみ、口頭発表は一演題当たり
発表時間10分、討論時間5分、液晶プロジェクター1台準備します。
演題講演要旨申込締切：６月30日（水）申込先：http://www.tokyukanko.com/conv/3404/ita_2004/
事前登録参加申込締切：8月20日（金）会員5,000円、非会員 8,000円 (当日各2,000円増)
懇親会：9月10日（金） 18:00〜20:00
日本で唯一のハープ産地である、福井県青山
ハープの演奏がアトラクテｲブです。
事前会費 5,000円 （当日 8,000円）
会員に応募要綱を郵送しています。そこに同封している郵便振替用紙を用いて下さい。

第11回日本免疫毒性学会学術大会（予告２）…１
医薬品開発における抗原性試験実施の留意点 …３
ヤンセン ファーマ株式会社 研究開発本部 牧 栄二
一般人集団に適応する免疫指標を用いた環境リス
ク検出の試み ………………………………………５
旭川医科大学健康科学講座 吉田貴彦
「Immunotoxicology」最前線……………………７
Asbestosによるリンパ球細胞死の検討
川崎医科大学衛生学 大槻剛巳、三浦由恵
高田晶子、兵藤文則
マクロファージの接着と異物認識機構 …………９
独立行政法人国立環境研究所環境健康研究領域 平野靖史郎「免疫毒性試験プロトコール」第７回 …………11
LLNA-DA
ダイセル化学工業株式会社 評価・解析センター

山下邦彦、出原賢治

ddddddddddddddddddddd
ICHトピックS8中村

和市（塩野義製薬株式会社）

2003年11月のICH*運営委員会会議において免疫毒性試
験が新規トピックS8として正式に承認され、医薬品の免疫毒性試験に関する日米欧の統一ガイドラインが作成されることになった。
今回、免疫毒性試験が新規トピックS8として承認された理由として、第１回医薬品の免疫毒性試験の国際調和ガイドライン作成のためのICH免疫毒性データ調査（以下、ICH免疫毒性調査）の結果をもとにICHガイドライン作成に目処がついたことがあげられる。第１回ICH免疫毒性調査の結果を解析するための専門家会議は2003年10月に開かれ、寄せられた化合物データについて一般毒第11回日本免疫毒性学会学術大会事務局
福井県吉田郡松岡町下合月23-3（〒910-1193）
福井大学医学部環境保健学内大会会長 日下幸則
Tel: 0776-61-8338, Fax: 0776-61-8107
E-mail: roentgen@fmsrsa.fukui-med.ac.jp（発表申し込みや事前登録申し込みなど、こちらでも扱っています。）― 1 ―ImmunoTox Letter性試験と免疫機能検査の結果を比較し５つのカテゴリー

ラインに盛り込まれると考えられるＴ細胞依存性抗原にに分類した（Table 1）。その際、細胞傷害性の抗がん剤

対する特異抗体産生能の測定法、フローサイトメトリー、とサイトカインを除き、また情報の不足している化合物

NK細胞活性の測定法などについて、時には外部からのはカテゴリーEとした。そして、全45化合物のうち残り専門家も交えながら検討を加えている。またTriggers for

28化合物をカテゴリーＡ〜Ｄに分類した。最も重要と思

Immune Function Testingのサブグループでは、どのよ

われるカテゴリーＣには３化合物が分類された。ただし、

うな場合に免疫機能検査が必要かについて議論を続けてそのうち少なくとも２化合物については免疫機能検査のいる。全ての化合物について免疫機能検査を行う場合に結果には疑問が持たれた。カテゴリーＣに分類された化は問題とならないが、一般毒性試験の結果などをもとに合物の数が少ないという結果をもとに、免疫毒性の懸念

免疫機能検査を行う場合は申請段階で行政当局と免疫毒される開発化合物について免疫機能検査を行うという方性試験実施の必要性に対する見解が異なってくることも向性が示された。なお、現在は第１回ICH免疫毒性調査

考えられる。特に申請前に行政当局との相談を持つ機会の調査票の内容を充実したうえで、さらにデータ数を増の少ない欧州や日本では問題になってくる。このことをやすことを目的とした第２回ICH免疫毒性調査を実施し避 け る た め で き る 限 り 詳 し く Triggers for Immuneており、調査票が2004年2月から3月にかけて各製薬企業

Function Testingを規定しておく必要があるように思わに配布されている。2004年11月までには本調査の最終結れる。これらサブグループでの議論をもとに、ワーキン論を出しICHガイドライン作成の基礎データとしたいと

ググループとしての最終的な結論を出したいと考えている。
本ICHトピックにおいては、2004年11月にStep 2（ガイ

考えている。
免疫毒性試験が新規トピックS8として承認されたのをドライン案作成）、そして2005年11月にはStep 4（最終ガ受け、ICH免疫毒性専門家部会が編成された。現在、同部

イドライン作成）へと進む予定となっている。

会ではStandardization of AssaysとTriggers for Immune*ICH: International Conference on Harmonisation of

Function Testingのサブグループを設け、ICHガイドラ

Technical

インの作成に向けた議論を行っている。Standardization

Pharmaceuticals for Human Use

Requirements

forRegistrationof Assaysのサブグループでは、何らかの形でICHガイド

Category

Finding

Compound

Total
Number

Std Tox

Imtx

A

＋

＋

E2, E16J4*, J13**, J18, J19, J23-24
U2-1&2, U3, U4, U5-1&2, U8-10

12

B

−

−

E3, E14J3, J5, J8, J7, J11
U1-1&2, U7-9*

9

C

−

＋

E6*, E15*
J14

3

D

＋

−

J1, J2, J12
U6

4

E

Inadequate Imtx data

E1, E4, E5, E7, E8, E9, E12-13
J10, J16, J25-26

10-

Cytokines and Cytotoxic
antineoplastic

E10***, E11***J6, J9*, J15-22, J17, J20-21

7

Std Tox:Standard toxicology endpoints (organ weights, histopathology and hematology)
Imtx:
Immunotoxicology endpoints (T cell-dependent antibody response and immunophenotyping)*Incomplete evidence**Close call, slight changes in flow cytometry and hematology***Cytokines
Table 1 ICH Immunotoxicology Database:Comparison of Standard Toxicity Study and Immunotoxicity Assay Endpoints
― 2 ―

of

Vol. 9 No. 1 (2004)

医薬品開発における抗原性試験実施の留意点
牧栄二（ヤンセン ファーマ株式会社

研究開発本部）の他の毒性」に移され、必要に応じて実施する検討項目に位置付けられた。しかしながら、モルモットの試験も、低分子医薬品を投与した動物の感作リンパ球をin vitroに

医薬品開発における安全性の検討項目の一つである抗て同一薬物と共に培養し、3H-thymidineの取り込みを無原性は、1999年4月8日付医薬発第481号通知「医薬品の処置リンパ球の取り込みと比較することにより、その医承認申請について」において、承認申請書に添付すべき薬品が感作能を有しているか否かを予知することは出来

資料から削除された。しかし、同日付の医薬審第666号

る3) (Fig. 1参照)。

通知「医薬品の承認申請に際し留意すべき事項について」
においては、抗原性は「ニー7

その他の毒性」に含まれることが明記されており、開発医薬品の抗原性の評価は従来通り必要とされている。
新薬承認申請に抗原性のデータが必須であるか否かの詮議はさておき、何故新薬の抗原性を検討しなければならないかを考えることにより、その必要性についての回答が得られると考える。即ち、一般合成医薬品はヒトにとっては異物であり、再投与されることにより薬物アレ
ルギーを惹き起こす可能性を秘めている。一旦獲得された薬物アレルギーは生体に記憶され、生涯消されること

Fig. 1 Memory Lymphocyte Immuno-Stimulation Assay(MELISA) (Stejskal, 1997)はない。従って、全ての医薬品に対して抗原性を検討することが望まれる。因みに、海外において取下げられた
上市品の原因の中で最も頻度の高い副作用は全身性過敏症で、その副作用の占める割合は全体の15％と高い頻度を示している1,2)。現在使用されている抗原性の検出試験
としては、外用剤については予知性の高いモルモットの海外においては、全身的に投与された医薬品によるア
レルギーあるいは自己免疫反応を検出する試験系として
マウス膝下リンパ節試験（PLNA）4-10）が報告されており、開発医薬品の抗原性試験に応用されている11-14) (Table 1)。

Maximization試験ならびにマウス局所リンパ節試験(Local Lymph Node Assay)があるが、全身投与を目的とTable 1 Local lymph node assay (LLNA)とPopliteal lymph
node assay (PLNA)の違い

した医薬品については一般にモルモットのActive
Systemic Anaphylaxis (ASA)およびPassive Cutaneous
Anaphylaxis (PCA)試験が使用されている。しかしながら、全身投与を目的とした後者の試験は高分子医薬品の抗原性の検出には適しているが、低分子医薬品の抗原性の検出には次の理由により適していない。即ち、その低分子医薬品が感作能を有していたとしても、一般に低分子医薬品の場合その分子上に抗原決定基は複数存在しないた
め、感作動物に当該低分子医薬品を再投与しても特異抗体との結合は起きるが、それ以後の補体の活性化を含む一連の反応は発現せず、高分子医薬品で見られる特異的なアナフィラキシー反応は誘発されない。従って、低分

本邦においても、日本製薬工業協会の共同研究により、子医薬品の場合、高分子医薬品と同じ操作を行ってもそ臨床で薬物アレルギーの誘発が知られている医薬品を用の抗原性（感作能および反応惹起能）を検出することはい、PLNA反応との相関性が検討された。その結果、明甚だ難しい。

確にPLNA反応との相関性が証明されたことから、諸外国でも、低分子医薬品に対しては適切な試験法がPLNAは低分子医薬品の抗原性の予知に応用できることないということから、抗原性の検討は原則として要求しが確認され 13-17)、低分子医薬品の抗原性の予知に利用可ていない。本邦においても、このような現況から、上述

能と考えられた (Table 2-4)。しかし、PLNAと云えどものごとく安全性の検討項目から抗原性が削除され、「そ万能な試験系ではなく、幾つかの留意点（皮膚刺激性を― 3 ―ImmunoTox Letter
有する濃度では擬陽性を示すが、刺激反応と免疫反応の区別は２次応答反応の有無で確認可能であること(Fig. 2参照)および代謝物が抗原性の本体である場合、代謝物を使用する必要があること）があるが、十分にその留意点を理解した上で用いれば利用価値のある試験と考えられる。PLNAは、モルモット試験のように症状観察で評価する試験ではないため、どの程度強い薬物アレルギー反応が誘発されるのかは予測できないが、その医薬品の抗Table 2 マウス膝窩リンパ節試験(PLNA)について
Fig. 2

Weight and Cellularity Indexes in the 1st and 2nd
responses of PLN of BALB/c mice

原性（感作能）あるいは自己免疫性の有無の予知は可能である。
抗原性試験に関しては準拠すべきガイドラインがない
ことから、それぞれの企業が自主的に適切な試験方法を選択し、開発医薬品の抗原性を検討することが出来る。
この点については、医薬品研究（2003）の「毒性Ｑ＆Ａ」に同様の記載があり、更に、既に諸外国で十分な臨床経
Table 3 Relationship between PLN response and clinicaladverse event (1)験のある医薬品の場合、その薬物アレルギーに関する情報は有用な抗原性の評価資料になり、PLNAといった新しい試験方法の成績、すべての安全性試験データや臨床試験データ、類薬情報から総合的に判断し、ヒトにおいて重篤な薬物アレルギーを未然に防止することを勧めている18)。
従って、高分子医薬品については、従来通りモルモットを使用した抗原性試験を実施すればよいが、低分子医薬品については、被験医薬品投与モルモットのリンパ球幼若化試験やPLNAを実施し、陽性反応を示す成績が得られた場合は、被験医薬品の他剤との交叉性ならびに薬剤起因性自己免疫疾患の発現の可能性を考慮して臨床試験を実施することが必要であると考える。

Table 4 Relationship between PLN response and clinicaladverse event (2)［文献］
1) deWeck AL: Immunopathological mechanisms andclinical aspects of allergic reactions to drugs, indeWeck AL, Bundgaard H (eds) (1983): Handbook ofExperimental Pharmacology: Allergic Reactions to
Drugs. New York: Springer-Verlag, pp 75-133
2) Guzzie PJ (1995): Immunotoxicology in pharmaceuticaldevelopment. In Gad SC (ed): Safety Assessment for
Pharmaceuticals. New York: Wiley, pp 325-385
3) Stejskal VDM (1997): Human hapten-specificlymphocytes: Biomarkers of allergy in man. Drug
Information Journal, 31: 1379-1382
4) Albers R et al. (1997): Suitability of the popliteal lymph― 4 ―Vol. 9 No. 1 (2004)
allergenic and irritant compounds in mouse popliteal

node assay as a predictive immunotoxicicological test.

lymph node assay. J Toxicol Sci 25(2): 131-136

Drug Information Journal 31: 1337-1340
5) Hurtenbach U et al. (1987): Immunity to D-18) 医薬品医療機器審査センター (2003)：毒性Q&A．医
薬品研究, 34(11): 753-755

penicillamine: genetic, cellular, and chemical
requirements for induction of popliteal lymph nodeenlargement in the mouse. J Immunol 139(2): 411-416
6) Kammuller ME et al. (1989): The popliteal lymph node
assay in mice to screen for the immune disregulating

一般人集団に適応する免疫指標を用いた
環境リスク検出の試み

potential of chemicals--a preliminary study. Int J
Immunopharmacol 11(3): 293-300

吉田7) Patriarca C et al. (1994): Comparison of popliteal lymph
node responses in various strains of rats. Hum Exp

貴彦（旭川医科大学健康科学講座）

１．はじめにToxicol 13(7): 455-460

1960、70年代の高度成長期には、公害対策の法体系の8) Bloksma N et al. (1995): Predictive immunotoxicological

未整備など環境保全対策が不十分であったために全国的test systems: Suitability of the popliteal lymph node

な環境の高濃度汚染が社会問題化していた。しかし、そassay in mice and rats. Crit Rev Toxicol 25(5): 369-396の後の環境保全対策の進展と環境汚染物質排出の抑制技

9) Goebel C et al. (1996): The popliteal lymph node assay in術の発展とによって、我が国の古典的な環境汚染物質は

mice: Screening of drugs and other chemicals for

劇的に低減され、かつての典型的な公害の発生はほぼ見immunotoxic hazard. Inflamm Res 45 (Suppl 2): S85-S9

られなくなった。その一方で、科学技術の進歩にともな

10) Pieters R et al. (2002): Predictive testing forって膨大な数の化学物質が開発･合成され使用されるに

autoimmunity. Toxicol Lett 127(1-3):83-91

至り、それらによる環境汚染が世界的な広がりを見せて

11) Pieters R (2001)：The popliteal lymph node assay: A

いる。その汚染物質の種類は膨大であり、空気や飲食物

tool for predicting drug allergies. Toxicology 158(1-を介して長期間にわたって我々の体内に複合的に負荷・

2):65-69

蓄積された後に生体影響を発現し我々の健康を害してい12) Gutting BW et al. (2002): Investigating the TNP-OVAる。1990年代から微量の環境汚染化学物質による内分泌

and direct popliteal lymph node assays for the撹乱の問題が特に注目され、2000年代には同じく微量のdetection of immunostimulation by drugs associated

室内空気質汚染化学物質によるシックハウス症候群の問with anaphylaxis in humans. J Appl Toxicol 22(3): 177-

題が我が国でも社会問題化している事は、その良い例で183ある。我が国では、従来行政的に環境汚染化学物質の動13) Gutting BW et al. (2002): Diclofenac activates T cells

向調査がなされてきたが、測定対象化学物質の増加に対in the direct popliteal lymph node assay and selectively

応することが困難になった事を受け、代表的かつ影響のinduces IgG1 and IgE against co-injected TNP-OVA.

大きい化学物質の環境測定を継続しつつ、住民の健康影

Toxicol Lett 131(3): 167-180

響をスクリーニング的に調査することによって当該地域

14) Gutting BW et al. (2002)： BALB/c mice orallyの環境リスクを総合的に検出しようとの試みがなされてpretreated with diclofenac have augmented andいる。ヒト集団で起こる健康障害による症状等を疫学的

accelerated PLNA responses to diclofenac. Toxicologyに調査する意義は高いが、健康障害が現れるには長期間

172(3): 217-230を経るために早期の対策立案にはつなげ難いうえに、後15) Aida T et al. (1998): Evaluation of allergenic potential

追い的な感が拭えない。そこで、現時点でヒト集団に生of low-molecular compounds by mouse popliteal lymph

じている症状発現に先立つ生体影響を検出することをも

node assay. J Toxicol Sci 23(5): 425-432って環境リスクを検出することに主眼が置かれる。

16) Shinkai K et al. (1999): Mouse popliteal lymph node
assay for assessment of allergic and autoimmunity-

２．免疫指標の意義

inducing potentials of low-molecular-weight drugs. J
Toxicol Sci 24(2): 95-102

神経−内分泌−免疫系は互いに影響しあいながら生体
恒常性維持において重要な役割を担っている。このうち

17) Suda A et al. (2000): Differentiation of responses to

免疫系は多くの免疫担当細胞群と液性因子類が相互に関― 5 ―ImmunoTox Letter
連する複雑なネットワークを形成している事に加え、神が有意に低く、IFN-γ/IL-4 mRNA発現比はA市とT市が経系および内分泌系の間接的な制御を受ける事により大他市に比べて有意に低くY市が最も高かった。食餌性ア

きな枠組みの中で生体防御の主要な役割を担っている。

レルゲン特異的IgE抗体陽性者の率はA市にて少なく、T

こうした複雑系であるが故に免疫応答システムは環境有

市で多いなどの地域的な差が存在する事がわかった。4

害因子の影響を受けやすく、免疫系の機能である免疫応

年間の調査対象者全て（合計681名）をプールして解析答などの指標は感度の良いバイオマーカーとなりうるとを行ったところ、屋外環境要因の検討では、大規模な工考えられている。ここに免疫系を標的臓器として捉えて場に近接して居住する者にアレルゲン特異的IgE抗体お有害因子による負の生体影響（毒性）を評価する免疫毒

よび吸入性アレルゲン特異的IgE抗体の陽性の者の割合

性学の意義があると言えよう。免疫系に対して環境有害が低い傾向があった。屋内環境要因の検討では、コンク

因子が作用した場合に、その生体影響として免疫応答のリート造の家屋に居住する者が木造に居住する者に比し抑制による易感染性や腫瘍発生の増加、逆に亢進によるて総IgE抗体価が高く、かつアレルゲン特異的IgE陽性者

自己免疫疾患やアレルギー関連疾患の増加などがヒト集の割合も多かった。逆に同居する喫煙者が居る方が総団に生ずる可能性があり、公衆衛生上大きな問題となる。

IgE抗体価が低値であった。抗風疹IgG抗体価は喫煙者数

そのため、ヒト集団における健康障害の発生が顕在化すが多いほど高値となる傾向があった。以上のように免疫る前に、免疫指標をバイオマーカーとして集団の健康度

指標と環境要因の相関について従来の常識的説明と符合を測定し環境リスクを検出することは、環境保全対策のする項目もあれば、必ずしも合わない項目もあった。理策定につなげられ国民の健康の保持増進を図る上で有用論的な説明が付けられ難い原因として次のような事が考である。

えられた。アレルギー症状を有する者が、改善を願う家族の努力によって原因アレルゲンや免疫応答変容物質への曝露を回避した（寝室･居間でのカーペット使用の中

３．小児集団での検討
筆者らは1998年に厚生省委託研究を受けて、環境リス

止、布団からベッドへの変更、ペット飼育の中止、タバクを検出する事が可能なバイオマーカーとして用いるこコ煙曝露の回避など）例が幾つか見出され、こうした行との出来る免疫学的検索法の確立に取り組んだ。動物実

動変容が結果を撹乱した可能性が考えられた。そこで、

験を中心に行った委託研究の検討の結果から選択した免

健診受診時点での生活状況の調査に加えて過去の生活状

疫指標をさらに絞り込み、健常なヒトから比較的容易に

況の調査も行ったが、状況毎の例数が少なくなり明確な得られる検体で実施可能、かつ全国展開のために簡易で解析は出来なかった。また、純系の実験動物を用いて単検体の運搬･保存が可能な検索法を選んだ。この過程で、独の因子の曝露影響を観察する動物実験や、典型的症状

環境リスク検出感度が良いながら培養を要する検索法はを呈する臨床患者に対する検査結果などは、教科書的な除外した。その結果、選択した免疫指標は、末梢血から理論で説明のつけられる場合が多いものの、フィールド

分離･抽出される血清およびｍRNAを検体として測定可調査での一般ヒト集団は様々な素因や生活習慣を背景に能な項目である。また、均一集団が得られ、かつスクリ持つ個体から構成されるために、環境リスクの影響を受

ーニング調査を容易ならしめるために集団健康診断が実けて変動する免疫指標を集団として把握する場に教科書施される３歳児健康診断を受診した小児を対象に設定し的に説明出来ることはむしろ稀であるかも知れない。逆た。すなわち、総IgE抗体、３歳児健診までにほぼ全員に教科書的な変化が集団中に観察された場合には、相当が予防接種を受けて抗体産生応答が誘導されて生産され程度の環境要因の作用が存在していると考えるべきであた抗麻疹IgG抗体、抗風疹IgG抗体、さらにはアレルゲン

ろう。次いで、地域毎に免疫指標に大きな差異が認めら

特異的IgE抗体、免疫バランス制御にかかわるサイトカれた理由について考察すると、気候（温湿度など）の影インであるIL-4およびIFN-γのｍRNA発現量を免疫指標

響、自然植生に起因する環境アレルゲン（花粉など）のとして採用した。また、主観的な指標として、アレルギ

影響、地域特性に起因する家屋要因（建築様式、建築部

ー関連症状の有無、アレルギー関連疾患の診断既往の有材、気密性、暖房・換気方式などと、室内アレルゲンの無を補足的に用いた。以下に、4年間にわたって行った

発生母地など）が影響する部分が大きいと推測された。

調査研究の成果を示しながら、今後の展開について考察

特定の環境要因（新築家屋居住、幹線道路近接居住、大する。

規模工場近接居住、同居喫煙者、ペット飼育など）と関対象者の居住地などの大きな地域別の検討では、北海連すると考えられる免疫指標の変動について、地域毎の道A市で関東圏のH市、Y市、T市に比して総IgE抗体価

対象者のみに限定して解析すると関連性ありとして検出― 6 ―Vol. 9 No. 1 (2004)
される場合がある一方で、全調査ないし複数地域をプー

crystalline silica でありスレート剤等で広く使用されていルして解析すると関連性が検出され難くなる事実は、上る。また，医療的に汎用されている silicone は合成ポリ

記の地域に関連する要因などの交絡要因の影響の大きさマーであり [-SiR2-O-]n の化学式で表される。加えて，元が反映していることを示すものであろう。従って、免疫素としての珪素は，土中等に広く分布しており，その曝指標を用いて環境リスクを検出する試みは大まかな地域

露としての塵肺症の形成が，産業衛生・環境医学的にも毎に行うべきであって、その中で例数を蓄積して地域標問題となっているが，これらは，Na, Mg, Al, K, Ca, Fe

準データを作成し、それからの偏移をもって環境リスクなどと結合した Silicate: 珪酸塩として存在している。

を検索するべきであろう。我々が取り組んできた一連の繊維状物質ということで前記した asbestos も silicate

調査研究は、現時点では地域毎に解析するには例数がまである。asbestosの中には，chrysotile, crocidolite,

だ不十分であり環境リスクの検出力に限界があるが、今

amosite な ど が 種 類 と し て 挙 げ ら れ る が ， そ れ ぞ れ

後に調査が継続され例数が蓄積されるならば、十分に環

3MgO-2SiO 2-H 2O, NaFe(SiO 2) 2-Fe 2 SiO 2-H 2O, 1.5MgO-

境リスクの検出が可能であろうと思われる。

5.5FeO-2SiO2-H2O という結合塩となっている8）。

４．あとがき

免疫影響を検討してきているわけであるが，それは塵肺

我々の教室では，前植木教授の頃より珪酸化合物のヒト集団において環境リスクによって免疫系に影響が症，中でも珪肺症に合併する自己免疫疾患の報告が古く見出される事は国民の健康の維持･増進にとって大きなよりなされており9-12），成書にも記載されていることによ脅威であることから、様々のバイオマーカーが検討される。ちなみに現在の本邦での衛生・公衆衛生関連の教科ている中にあって免疫指標はその重要性が高いものと考書にもその記載のあるものもあるし，症例報告としては，えられる。今後、各地においてモニター的に免疫指標を

産業医学領域のみならず，現在でも学会等での報告が多バイオマーカーとして用いた環境リスク検出の事業が展く見られる。

開され、環境改善･保全の対策策定に用いられん事を願

実際にその発症機転を検討するにあたって，我々はasbestos fiberの国際標準品を南アフリカ連邦共和国国立っている。

産業衛生研究所より配布を受けて主に chrysotile-A, 同-Bを用いて， 検討を進めている。またいわゆるsilicaにつ

参考文献
厚生労働科学研究費補助金

化学物質リスク研究事業

いては，産業医科大学呼吸病態学

森本泰夫教授より「生活環境汚染物質による小児での毒性評価のための免

Min-U-Silicaの標準品を分与されて使用させていただい

疫指標の開発に関する研究」平成13−平成15年度総合研

ている。

究報告書

主任研究者

これらの検討について予め述べておくべき事項として

吉田貴彦

は，教科書的，臨床的には，合併症としての免疫異常が生じるのはいわゆる珪肺症，遊離珪酸によって肺病変の起こる病態であり，一方，石綿（アスベスト）吸入によ「Immunotoxicology」最前線って惹起される病態は，石綿肺となり合併症としては，
前述のごとく，肺癌であり悪性中皮腫であるという現実である。但し，我々は鉱物学的にもasbestosがそのコア

Asbestosによるリンパ球細胞死の検討
大槻剛巳，三浦由恵，高田晶子，兵藤文則（川崎医科大学衛生学）の部分に SiO 2 を含む珪酸塩であることより，特にinvitroの実験系においてはasbestos fiber による免疫担当細胞の変化を検討することにより，珪酸による免疫異常惹

繊維状物質の中の，天然鉱物繊維にはアスベスト，セ起13-15）のモデルとして考察しようという立脚点においてピオライト，ウォラストナイトなどがある１）。石綿肺に検討を進めてきた。最近では，同じfiberであっても合併する肺癌や悪性中皮腫の例を挙げるまでもなく，発chrysotile-Aと同-Bの影響の差異や，これらとMin-U-

がん性が問題となるが，それには物理学的性状（長さやSilica との違いの検討にも研究を進展させつつあるとこ

表面など）と化学的性状や，OHラジカルの産生などがろであるが，まだまだその端緒についたという状況である。

問題になるようである

2-7）

これらの検討のうち，臍帯血由来でHTLV-1ウィルス。

一方，鉱物学的にはsliconはSi: 珪素元素であり，silica

によって不死化した多クローン性T細胞株であるMT-2細とはSiO2: 珪酸である。生体影響として問題になるのは，

胞16-17）へ，chrysotike-Aをin vitro曝露した際のapoptosis― 7 ―ImmunoTox Letter
側優位に導き，例えばBaxなどはミトコンドリアから細の出現について紹介する。
MT-2細胞を，0, 10 ならびに25 μg/mlの Chrysotile-A

胞質へのtranslocationが認められる。ミトコンドリアは，と供培養し，３日目に細胞を集め，whole cell lysate，も膜電位の低下により，膜表面のドアが開くことによってしくは細胞質とミトコンドリア画分から蛋白を抽出し，cytochrome cの細胞質への放出，Apaf-1のリクルートをWestern blotting法にて，apoptosisに関連する蛋白の変介したCaspase 9の活性化を起こし，Caspase 3 の活性化化を検討してみた。

を惹起する。また，AIF分子により核へapoptosisのシグ

図は，一般的なapotosisの細胞内シグナル伝達機構を

ナルを伝える。

示し，Death factor（Fas ligand, Trail, TNFαなど）から今回の検討で用いたMT-2に見られる変化としては，のシグナルは，Death receptor（Fas, DR4, DR5, TNFR1

パネル（白抜き）Aでは，JNKの活性化，BではBAXの増など）を介して，Caspase 8の活性化の後，Caspase 3の

加，CでのBAXのtranslocation，Dでのchytochrome cの活性化を経て，DNA分断化を直接司るCADをICADから細胞質への放出（C, Dのパネルでは，Cy: cytoplasma な放つことにより，apoptosisを完成させる経路に繋がる。

らびにMi: mitochondria分画でのバンドの濃さを対照さ

この経路からはBidのtruncation を介して，もう一方のれたい），E，Fのパネルで見られるCaspase 9及び3の活ミトコンドリア経路に繋がる副経路も存在している。ま

性化が確認できた。なお，apoptosisの出現は同条件の細た，ストレスや毒性物質による細胞障害では，MAPキナ

胞のTUNEL法による検出で確認した。

ーゼ経路の中のJNKやp38のリン酸化による活性化がミこのようなapoptosisの経路が，実際の症例では長期慢

トコンドリアへ伝わり，Bcl2/BAXで代表されるBcl2フ性反復性曝露の結果，なんらかの破綻を来して，ァミリーのpro-とanti-apoptotic な分子のバランスをpro-

apoptosisが生じないようになってくると考えると，その図の説明 アポトーシス・シグナルの伝達の略図とMT-2細胞をChrysotile-Aと供培養した際に認められた変化の供覧。

― 8 ―Vol. 9 No. 1 (2004)
silica dust. A case report and critical literature review.

Tリンパ球の中に，自己認識クローンが含まれていれば，Clin Rheumatol 21: 76-81. 2002

将来的な自己免疫異常の惹起が見られる可能性がある。
但し，実際の症例ではFas経路の異常も生じており，

10. Stratta P, Canavese C, Messuerotti A, Fenoglio I,

一概にある分子の異常というだけでなく，複合的な破綻

Fubini B. Silica and renal diseases: no longer a problem

によって塵肺症での免疫異常が誘発されていると思わin the 21st century? J Nephrol 14: 228-47. 2001

れ，今後も精力的に解析を加えていかなければならない

11. Shanklin DR, Smalley DL. The immunopathology ofと考えているとともに，環境免疫学に携わる教室の一つ

siliconosis. History, clinical presentation, and relation

として，広範な視点にたった上で，今後も種々の検討を

to silicosis and the chemistry of silicon and silicone.

深めて行きたいと思う。

Immunol Res 18: 125-73. 1998
12. Uber CL, McReynolds RA. Immunotoxicology of silica.
Crit Rev Toxicol 10: 303-19. 1982

謝辞
平成15年度まで我々の教室の研究補助員であった坂口
治子氏（現13. Bartsch P, Salmon J, Mahieu P. Asbestosis andsystemic lupus erythematosus. Int Arch Allergy Appl

本学組織培養免疫センター）のご協力に深Immunol 61: 28-31. 1980

甚なる謝意を表します。また現在の研究補助員である幡14. Toivanen A. Pulmonary asbestosis and autoimmunity.

山圭代氏，畑田聡美氏に厚く御礼申し上げます。

Br Med J. 1: 691-2. 1976
15. Greenberger PA. Immunologic aspects of lung文献

diseases and cystic fibrosis. JAMA 278: 1924-30. 1997

1. 神山宣彦．繊維状物質．労働衛生39: 695-697，1998
2. Ohyama M, Otake T, Morinaga K. Effect of size of man-

16. Miyoshi I, Kubonishi I, Yoshimoto S, Akagi T, Ohtsuki

made and natural mineral fibers on chemiluminescentY, Shiraishi Y, Nagata K, Hinuma Y. Type C virus

response in human monocyte-derived macrophages.

particles in a cord T-cell line derived by co-cultivating

Environ Health Perspect 109: 1033-8. 2001

normal human cord leukocytes and human leukaemic T
cells. Nature 294: 770-1. 1981

3. Schneider T, Burdett G, Martinon L, Brochard P,
Guillemin M, Teichert U,Draeger U. Ubiquitous fiber

17. Miyoshi I, Kubonishi I, Yoshimoto S, Shiraishi Y. A T-

exposure in selected sampling sites in Europe. Scand J

cell line derived from normal human cord leukocytes byWork Environ Health 22: 274-84. 1996

co-culturing with human leukemic T-cells. Gann 72:
978-81. 1981

4. Everitt JI. Mechanisms of fiber-induced diseases:
implications for the safety evaluation of synthetic
vitreous fibers. Regul Toxicol Pharmacol 20: S68-75.
1994

マクロファージの接着と異物認識機構

5. Maples KR, Johnson NF. Fiber-induced hydroxyl

平野

radical formation: correlation with mesothelioma（独立行政法人国立環境研究所

induction in rats and humans. Carcinogenesis 13: 20359. 1992

靖史郎

環境健康研究領域）

マクロファージは単球由来の免疫細胞であり、分化す

6. Rom WN, Travis WD, Brody AR. Cellular andる臓器の微少環境によりその機能と名称が異なる。脳でmolecular basis of the asbestos-related diseases. Am

はグリア細胞、腎臓ではメサンギューム細胞、肝臓ではRev Respir Dis 143: 408-22. 1991

クッパー細胞、骨では破骨細胞、皮膚ではランゲルハン

7. Talcott JA, Antman KH. Asbestos-related malignancy.
Curr Probl Cancer 12: 135-78. 1988

ス細胞といった具合である。国立環境研究所においては、
粒子状物質を中心とする大気汚染の影響に関する研究が8. 植木絢子．珪酸化合物のスーパー抗原活性．臨床免疫29: 252-8. 1997

精力的に行われてきているが、肺に沈着した粒子状物質のクリアランスに重要な役割を果たしている肺胞マクロ9. Iannello S, Camuto M, Cantarella S, Cavaleri A,

ファージが研究の対象として取り上げられてきた。

Ferriero P, Leanza A, Milazzo P, Belfiore F.

では、肺胞マクロファージはどのようにして、肺胞領

Rheumatoid syndrome associated with lung interstitial

域に沈着した粒子状物質を認識するのであろうか。この

disorder in a dental technician exposed to ceramic

問いに正しく答えるのは意外と難しい。なぜならば、オ― 9 ―ImmunoTox Letter
プソニン化した粒子状物質、例えば抗体で処理した羊赤Macrophage Receptor with Collageneous Structure

血球や補体で処理した粒子は、それぞれマクロファージ(MARCO)であることが証明された３）。

の細胞膜表面に存在するFcレセプターやC3biレセプター

非特異的接着、あるいは環境粒子と接した後のマクロにリガンドとして作用するため、貧食の最初の過程は蛋ファージには、その後どの様なシグナルが伝達されるの白間の相互作用（Receptor-Ligand）による接着として理であろうか。本研究室では、これまでの研究で次のよう解される。一方、肺胞表面でマクロファージに貧食されなことを明らかにしてきた。接着に伴い、Sykキナーゼ

るディーゼル排気粒子、タバコの粒子、シリカ／アスベ

やPaxillinなどがリン酸化される。

ストなどの無機物質、あるいは多環芳香族有機化合物でーゼは更に接着を増強する。その後、核転写因子である

表面をコートされた炭素粒子などについては、マクロフ

korx20/egr-2の発現が特異的に上昇する４−７）（図１）。

活性化したSykキナ

ところでマクロファージに貧食（Phagocytosis）されァージの細胞表面にこれらの粒子状物質のレセプターとる粒子とは、一般に粒径が１ミクロン以上のもので、マなりうる分子があるとは考えにくい。
マクロファージが環境由来の粒子を認識する最初のス

クロファージと接触後、細胞膜の隆起により取り囲まれテップは、粒子表面を異物として認識することである。

るものを指す。これより小さい粒子の細胞内への取込み

肺胞マクロファージをディッシュに播種すると、非常に作用は、エンドサイトーシス（Endocytosis）と呼ばれて短時間の内にプラスティック表面に接着し、伸展するこ

いるが、取込まれる物質が液体である場合は特にピノサとが観察される。この現象を、肺胞マクロファージが膨

イトーシズ(Pinocytosis)と呼んでいる。エンドサイトー

大な表面を持つプラスティックを細胞内に取り込もうとシスには、クラスリン（Clathrin）やカベオリン

している過程と捉えることも可能である。Oxford大学の（Caveolin）が関与するものや、それ以外の機構によるも

Siamon Gordon 教授らのグループは、マクロファージののなど様々である。これまでの大気中粒子状物質の生体

非特異的接着を阻害する抗マクロファージ抗体をスクリ

影響に関しては、浮遊粒子状物質（粒径が10ミクロンよーニングして、プラスティック表面を認識する２つのマ

り小さいもの）やPM2.5（粒径が2.5ミクロンより小さい

クロファージのレセプターを同定した。一つはC3biレセ

もの）について研究が進められてきた。最近、直径が数

１）プター(CR3)であり 、他方はスキャベンジャーリセプタ

十ナノメーター以下の極小粒子が、細胞層を速やかに通ー(Sc.R)である 。その後、Harvard大学のLester Kobzik

過し多臓器にわたり影響を及ぼす可能性が指摘されてい教授らによるノックアウトマウスを用いた研究により、

る８）。粒子状物質の細胞内への取込みに関する新たな研環境粒子などに対する非特異的な接着に関与するのは、究領域が開拓されようとしている。

２）

Sc.R そ の も の で は な く 、 そ の ホ モ ロ グ で あ る

図１、マクロファージの非特異的接着と細胞内シグナル伝達― 10 ―

Vol. 9 No. 1 (2004)

文献
1. Rosen H, Ordon GS. Monoclonal antibody to the「免疫毒性試験プロトコール」第７回

murine type 3 complement receptor inhibits adhesionof myelomonocytic cells in vitro and inflammatory cell

LLNA-DA

recruitment in vivo. J. Exp. Med. 166: 1685-1701, 1987.

山下

2. Fraser I, Hughes D, Gordon S. Divalent Cation-

邦彦、出原（ダイセル化学工業(株)賢治

評価・解析センター）

Independent Macrophage Adhesion Inhibited by
Monoclonal-Antibody to Murine Scavenger Receptor.

A. 解説

Nature 364: 343-345, 1993.
3. Palecanda A, Paulauskis J, Al-Mutairi E, Imrich A, Qin

Local Lymph Node Assay（以下LLNA)は、マウスを用

GZ, Suzuki H, Kodama T, Tryggvason K, Koziel H,

いた皮膚感作性試験法として、Kimberら1,2)によって発表

Kobzik L. Role of the scavenger receptor MARCO in

され、2001年には欧州医薬品審査庁のガイダンス 3) に、

alveolar macrophage binding of unopsonized

また2002年にはOECDテストガイドライン4)に、独立した

environmental particles. J. Exp.Med. 189: 1497-1506,

試験法として正式に採択された。LLNAは、従来のモル

1999.

モットを使用した皮膚感作性試験と比較し、試験期間が4. Hirano S. Nitric oxide-mediated cytotoxic effects of

短い、定量的なデータが得られる、動物に対する負荷がalveolar macrophages on transformed lung epithelial

少ないなどのメリットを有するが、感作性の検出に 3H-

cells are independent of theβ 2 integrin-mediatedthymidineを用いることから、日本においては実施出来intercellular adhesion. Immunology, 93: 102-108, 1998.

る施設に制限があるのが実情であると思われる。一方ラ

5. Hirano S. Kanno S. Syk and paxillin are differentially

ジオアイソトープ(RI)を使用しない非RI-LLNAを開発す

phosphorylated following adhesion to the plastic

ることを目的に、国内でも優れた成果が報告された 5,6)。

substrate in rat alveolar macrophages. Immunology,

しかしながら、これらはいずれも、一般的な化学品会社

97: 414-419, 1999.

において、日常的に行うには技術的に高度であった。そ6. Hirano S, Anuradha CD, Kanno S. Transcription of

こで我々は、より簡便な非RI-LLNA法の開発を試み、皮

krox-20/egr-2 is upregulated following exposure to膚感作性物質の検出法として実用上十分な感度と、従来

fibrous particles and adhesion in rat alveolarにない簡便性を有する手法(LLNA-DA: modified LLNA ofmacrophages. Amer. J. Respir. Cell Mol. Biol. 23: 313-

Daicel based on ATP content)を開発したので紹介する。

319, 2000.

我々はこの手法を用い、論文などでLLNAを用いた評価

7. Hirano S, Anuradha CD, Kanno S. Krox-20/egr-2 is up-

結果が公開されている既知化合物約20種類と、自社開発

regulated following non-specific and homophilic

等に関連した100種類以上の新規化合物を評価した。既adhesion in rat alveolar macrophages. Immunology,

知化合物に関してはLLNA法と同等の感度で検出できる

107: 86-92, 2002.

こと、及び新規化合物に関しては、それらの構造から予8. Hirano S, Nitta H, Moriguchi Y, Kobayashi S, Kondo Y,

測される感作性とLLNA-DAの結果が良く一致すること

Tanabe K, Kobayashi T, Wakamatsu S, Morita M,など、試験法としての有効性に関してはある程度の信頼

Yamazaki S.

性と実績はあると考えた。

Nanoparticles in Emissions andAtmospheric Environment - Now and Future -. J.
Nanoparticle Res. 3: 311-321,2003.

B. 実験材料
１．動物
CBA/JNマウス（雌, 8〜12週齢）を使用する。他の系統のマウス、あるいは雄マウスについては、十分な使用実績がない。動物は個体識別が出来る様に飼育し、試験開始時及び終了時に体重を測定する。
２． 試薬及び器具（１）溶媒：アセトン/オリーブオイル4:1(v/v)、― 11 ―

ImmunoTox Letter
ジメチルスルフォキシド、N,N-ジメチルホ用する。試験濃度は、労働安全の為の感作性スク

ルムアミド等

リーニングとしては、Basketterらの報告を参考に、（２）ATP測定試薬：ViaLightTM HS(三光純薬)

35％、15％、0.1％の3濃度でスクリーニング試験（３）その他：リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、を 実 施 し て い る 7)。 E C 3 値 を 求 め る 場 合 に は 、OECDのガイドラインに従った濃度設定を行う4，7)。

１％ SDS溶液（４）ATP測定装置：ルミテスター C-100（キッコーマン(株))

被験物質の調製については、使用時に調製することが望ましいと考えられる。また同時に複数の検体を異なった溶媒に溶解して塗布する場合には、
溶媒対照群は使用した溶媒ごとに設ける。試験感C. 実験操作手順度を表す陽性対照には、10％ Eugenol(AOO溶媒)、

１．投与及びATP測定
第1, 2, 3及び7日：被験物質溶液を調製する。被15% HCA(DMF溶媒)を用いている。これらを用い験物質投与1時間前に、１％ SDS溶液をマた場合、通常リンパ節重量で約2倍、ATP値で3倍

ウス両耳介に、習字用細筆を用いて塗布す以上の反応が得られる。

る。SDS塗布後1時間目に、被験物質溶液

被験物質適用1時間前に行う1％ SDS処理は、習字

25 μlをピペットマンを用いて塗布する。

用細筆を用いて、軽く1回濡れる程度に行えば十第8日：リンパ節を摘出し､重量､及びATPの測分であり、この処置により感度が上昇する。SDS
溶液は、サンプルの相互混入を防ぐために、15 ml定を行う。
4回目の投与は、第6日に実施した場合でも統計

容積のファルコンチューブなどに動物群数用意し上有意差のない結果が得られる。この場合リンて行う。習字用細筆に関しては、動物群ごとに軽パ節の摘出は第7日となる。

く水洗、ペーパータオルなどで水切りして使用する。

第1日〜第3日の投与は、できれば同一時間帯が４．浮遊液の調製望ましい。

切除したリンパ節は、そのまま25 mm径程度の細第7日目の投与は午前中に行い、摘出まで24時

胞培養用ディッシュに移し、精密化学天秤で重量間以上の時間を空ける。我々の標準プロトコーを測定する。重量測定後、リンパ節を2枚のスラ

ルでは、水曜日から金曜日に最初の3回の塗布

イドグラスにはさんで軽く潰し（リンパ節が潰れを実施し、翌週の水曜日にリンパ節の摘出を実て広がればよい）、500 μlのPBS溶液を用いて、ス施している。

ライドグラスに付着した細胞を、ディッシュ内に２．使用する動物数

洗い流すように回収する。このとき、細胞剥離用使用する動物数は、統計処理が可能となるよう各
群3匹以上を使用する。我々は、通常1群3匹、1化合物3濃度（計9匹）、陽性対照及び陰性対照各3匹のセルスクレイパー(Costar Corporation: Catalog
No. 3010)を用いると効率良く細胞が回収できる。
５．ATPの測定の15匹を最小セットとして試験を実施している。

調製した細胞浮遊液の一部をPBSを用いて100倍に複数の人数（3人）で処理すれば、3時間程で50匹希釈しATP測定用のサンプルを作成する。通常は、程度の動物の処置とATP測定がすべて終了するの

15 ml容量のファルコンチューブなどに、予め1.98

で、1回の実験で4ないし5化合物の評価が可能でmlのPBSを分注しておき、そこに20 μlの細胞浮ある。また、感作性強度の相対比較などを実施す

遊液を添加する。次に、ViaLightTM HSのマニュる場合には、同一濃度（例えばEugenol、HCA等

アルに従い、90 μlのATP抽出試薬に、90 μlのサで十分な反応が見られる15％）で試験を実施すれンプル（希釈した細胞浮遊液）を添加し、5分間ば14ないし15化合物の比較が同時に比較できる。

放置後に20 μlの発光試薬を添加して、直ちにル

なお、実験最終日の処置は、処置数を増やす目的

ミテスターC-100等を用いて、抽出されたATP量があれば、できれば複数の人数で行うことが望まを反映するルシフェリンの発光量を測定する。

しいが、第1日目から第7日目までの塗布に関しては、50匹程度であっても一人で作業は可能である。

６．データ処理及び判定基準
マウス個体毎に測定したリンパ節重量とルシフェ
リン発光量データの統計処理を行い、有意差検定

３．被験物質の調製と塗布
被験物質の溶解性によって適切な溶媒を選択し使― 12 ―

を行う。感作性の判定基準は、投与したいずれか

Vol. 9 No. 1 (2004)の被験物質濃度において、ルシフェリン発光量が、(1995) A modification of the local lymph node assay for

溶媒対照の3倍以上であれば明らかな陽性とする

contact allergenicity screening: mesurement ofが、被験物質の濃度依存性やリンパ節重量の増加

interleukin-2 as an alternative to radioisotopic-なども考慮に入れる。

dependent proliferation assay. Toxicol. Pharmacol. 34,
274-286.
6. Suda, A., Yamashita, M., Tabei. M., Taguchi, K, Vohr

D. 留意事項

H-W, Tsutsui, N., Suzuki, R., Kikuchi, K., Sakaguchi, K.,

１．動物を安楽死させてからATP量測定までは個体毎

Mochizuki, K., and Nakamura, K. (2002) Local lymphに20分以内で行うようにする。
２．ATP測定試薬に関しては、ViaLightTM HSを使用

node assay with non-radioisotope alternative

している。他のキット試薬などに関しても、基本

endopoints. The Journal of Toxicological Sciences,

的には使用可能であると考えているが、現在検討

27(3)205-218.

中である。なお三光純薬よりViaLightTM HS plus

7. Basketter, D.A., Blaiker, L., Dearman, R.J,. Kimber, I.,と言う別製品が発売されているが現時点では使用

Ryan, C.A., Gerberick, G.F., Harvey, P., Evans, P.,の可否は不明である。

White, I.R., and Rycroft, R.J.G. (2000) Use of the local

３．判定に関しては、スクリーニング試験でわずかに陽性が疑われる場合（統計的な有意差のみが認められ、刺激指数が3を超えていないような場合）には、試験濃度を設定しなおして確認試験を実施
し、再現性と濃度依存性を確認する。また物性情
報、構造情報なども考慮にいれて慎重に判定を行う。我々の社内安全性の判定基準としては、より厳しく判定する目的でリンパ節重量、ルシフェリ
ン発光量のいずれかで統計的有意差が出た場合には陽性と判定することにしている。
４．溶媒との関係から皮膚への透過性の悪いことが考えられる物質についてはMaximization法を考慮する。

E. 参考文献
1. Kimber, I., Mitchell, J.A., and Griffin, A.C. (1986)
Development of a murine local lymph node assay forthe determination of sensitizing potential. Food andChemical Toxicology. 24, 585-586.
2. Kimber, I., Hilton, J.A., and Weisenberger, C. (1989) The
murine local lymph node assay for identification ofcontact allergens: a preliminary evaluation of in situ
measurement of lymphocyte proliferation. Contact
Dermatitis. 21, 215-220.
3. The European Agency for the Evaluation of Medicinal
Products (2001) Note for Guidance on Non-Clinical
Local Tolerance Testing of Medicinal Products.
4. OECD (2002) Guideline for Testing of Chemicals 429,
Skin Sensitisation: Local Lymph Node Assay.
5. Hatao, M., Hariya, T., Katsumura, Y., and Kato, S.
― 13 ―

lymph node assay for the estimation of relative contact
allergenic potency. Contact Dermatitis. 42, 344-348.

ImmunoTox Letter
編集後記
ラットゲノム解読のニュースの中で、解毒に関わる遺伝子はヒトより多く存在するので、毒性試験の解釈にはより考慮が必要との記事があった。種差はもとより、遺編集・発行：日本免疫毒性学会
発行日：平成16年６月

伝子が均一な近交系マウスを用いた毒性実験でも指標によっては大きな個体差がみられることがある。実験に用いられるまで育てられた環境がその要因とも考えられているが、明らかでない。母胎内から出生後の免疫系が確立されるまでの幼児期における環境因子との関わりについては大きな不思議が隠れているのかもしれない。
（HF記）― 14 ―

編集発行責任者：大沢 基保
編集委員会：香山不二雄、中村 和市、
牧
栄二、藤巻 秀和
原稿送付先：fujimaki@nies.go.jp