栃木農研報

No39：43〜52（1992）

デルフィニウム（Delphiniumelatum）の組織培養による大量増殖
天谷正行・岡部陽一・米内貞夫
月にも及ぶ場合があり，計画的な生産に支障をⅠ緒 言きたしている．またパイプハウス等を利用してデルフィニウムはきんぽうげ科に属する植物

3〜5月に開花させる現在の作型では，夏越しで，ピレネーから西アジアにかけての乾燥したの育苗を行わなくてはならず，元来冷涼な気候冷涼地帯が原産地とされており，現在までに約を好むデルフィニウムには不都合なものとなっ200種が北半球において確認されている9）．わがている．

国への導入は明治の初期といわれているが，そこれらの問題に対処し解決を図るためには，の後積極的な育種が日本において行われた経緯

優良な開花品質を持つ個体を栄養増殖させる方は無く，現在栽培されている品種のほとんどは法が有効であるが，圃場での株分けでは恐らく欧米諸国で育成されたものである．栽培種には年間20倍程度の増殖しか見込めないため，実用

宿根性のヒエンソウ（Delphinium的な新品種を作出することは不可能である．そelatum）と一ajachis）がある

こで，生物工学的手法を用いた組織培養によるが，一般的にデルフィニウムといえば前者を指増殖法を検討することにした．これまでにもデし，生産量も商品価値も圧倒的に高い．主に青ルフィニウムの培養が試みられた例はあるが，系の花色を持つデルフィニウムは，切花長も長い

培養部位，培養条件，培地組成等に問題がありものでは2m以上にもなり，近年の華やかな催開花株からの大量増殖に成功した例は無い．今し物会場の飾り付け等には欠かせない花である．

回筆者らは開花株の塊根部から採取した腋芽のしかし，デルフィニウムの栽培生産にはいく生長点を用いた組織培養法及び増殖法を確立し年草のチドリソウ（Delphinium

つかの問題があり，その普及に歯止めをかけてたので報告する1）．

いる．中でも最も大きな問題は，日本で実生にⅡより栽培されている品種の全てが遺伝的に未固開花株組織からの組織培養法の検討定なものであることである．花弁及び繭に茶色または黒色の色素を持った個体は，蜂が止まっ1．目ているように見えることからbeeと呼ばれてい開花形質の優れた個体を培養の材料とするたるが，このような個体の商品価値は著しく低い

め，開花株の組織を用いた培養方法について検ものである．この形質は元々8鰯遡種が持っ討する．

的ていたものであるので，実生増殖で集団を維持

2．試験方法していく際に，他殖の組み合わせによって出現1）供試材料してしまうものと考えられるが，生産歩留まりデルフィニウム（D6励翻襯召弼撚）の品種を低下させる大きな要因となっている．開花期

ブルーバードの2番開花を終えた株を1989年の間についても未固定であるため非常に幅があり，5月上旬に農試温室から選抜し，その塊根部か同一品種であるにも関わらず長いものでは3ケら生えている小さな腋芽を材料とした（写真1）．

一43一

栃木県農業試験研究報告第39号

腋芽は1cm以下の地下部のものを含めて1株かH章で用いた品種ブルーバードの選抜系統（以ら14本を採取できた．

下BB〉及び，1990年5月上旬に農試圃場で開花

2〉材料の調製

検定後に選抜した品種ブルースプリングスの系

水道水で洗浄しながら余分な葉身部分を切除

統（以下BS1，BS2の2系統）の無菌培養植物．

し，70％エタノールで10秒間の表面殺菌を行い，有効塩素0．5％の次亜塩素酸ナトリウムで撹はんしながら20分間の殺菌を行った．次に滅菌水

初期の培養方法についてはH−1を参照．
2）増殖培養条件の検討

系統BBの生長点から再分化した植物体を再分を数回換え，塩素の臭いが無くなるまで洗浄し，化培地（第6表）に移植して40日間培養すると，無菌操作に供した．

植物組織の基部には塊根組織に相当するものが発達してくる．そこでこれを第2表の5種類の3）初代培養条件の検討
殺菌した試料から生長点及び数枚の葉原基を含む近傍組織を実体顕微鏡下で摘出し，MS培地7》培地に移植し，20日毎に1個の腋芽を付けた外を基本とした第1表の6種類の培地に置床し反腋芽及び茎葉数の調査を行った．基本培地の無応を観察した．初代培地の無機塩類組成はMS培

機塩類組成はMS培地のKNO3，NH4NO3，KH2PO4の地のKNO3，NHINO3，KH2PO・の濃度を1／3に減量濃度を1／2に減量したものを用い，ショ糖3％，したものを用い，ショ糖3％，ゲルライトα3％

ゲルライト0．3％を加えpH5．6に調製した．培地を加えpH5．6に調製した．培地は試験管（φ25×は試験管（φ25×100mm）に10m召を分注し，外植100mm）に10m4を分注し，外植片を1個ずつ置片を1本ずつ置床した．培養条件は20℃，220床した．

CLuxの12時問照明下で行った．更に増殖法検

また，培養条件は20℃，2200Luxの12植片となるよう株分割し移植を行い，増殖した

時間照明下で行った．

討試験で養成した培養菌を全てB4培地に移植し3．結果及び考察，株分割法による増殖を3回行った．培養条件

デルフィニウムの生長点は葉原基が周囲を囲は同一であったが，培地は200m召容のマヨネーむようにして露出しており，やや平たいドームズ瓶に40m召ずつ分注し，1瓶あたり4本の外植状であった（写真2）．また摘出した外植片の大片を置床して行った．

きさは約0．4mmであった．これを第1表に示し

3）分割条件と増殖率との関係についてた6種類の培地に置床して培養を行ったところ，系統BS1，BS2の無菌培養植物をB4培地に移植

ベンジルアデニン（以下BA）の濃度が0．2ppm以し，20日毎に株分割法による増殖を行った。そ上の培地では組織のカルス化が観察され，更にの際，初回の分割のみ腋芽1本ずつになるよう30日後にはA4培地から正常な植物体が再分化しに行い，その後の増殖の様子を観察した．分割た（写真3〉．

そこでA4培地組成を初代培養培

3回以降は腋芽が2〜3本ずつになるよう分割を行った．試験開始時の植物体数はBS1が52本，地とすることにした（第6表）．

BS2が16本であった．培養条件は20℃，2200Lux

皿
1．目

組織培養による増殖条件の検討

容のマヨネーズ瓶に40m召ずつ分注し，1瓶あた的生長点由来の再分化植物体を増殖させるための条件を検討する．の12時間照明下で行った．また，培地は200m召り4本の外植片を置床して行った．

4）培養温度と増殖率との関係について

2．試験方法系統BS1の無菌培養植物をB4培地に移植し，1）供試材料

異なる温度条件下（10，15，20，25℃）で培養を行

一44一

デルフィニウムの組織培養による大量増殖

第1表

生長点培養における植調物質濃度の影響

Appm

NAA

1／3MS

0．020〃

〃〃0．2

基本培地

B

10乙34︻∂6AA＾八A＾A晶A

〃〃〃

2．0〃

〃

カルス形地

植物再分化＋＋＋十＋培地名

十ppm

0．0200．0200．02

注。基本培地はKNO3，NH4NO3，KH2PO4の量のみを1／3に減量し，sucroce3％，gellangumO．3％を共通に加え，PH5。6に調製した．

B A suc genangum pH
ppm％％

1／2MS

O

3．03．05．6

〃

0．5〃

〃〃

〃
〃

1．02．O

〃
〃

〃
〃

〃
〃

〃

5．0

〃

〃〃

5

基本培地

腋芽と葉数の増殖倍率

培地名
nDBDりBnD

増殖培養の検討に使用した培地組成

10乙34︻J（倍）第2表

注基本培地はKNO3，NH4NO3，KH2PO4の量のみを1／2に減量した．

O
い，20毎に腋芽が1株あたり2〜3本となるよう株分割し増殖率を調査した．また，光条件はBl

B2

B3

B4

B5

培地名
第1図 BA濃度が腋芽と葉の増殖に及ぼす影響

2200Luxの12時間照明とし，培地は200m召容のマ●一●腋芽の増殖率■卜一■

ヨネーズ瓶に40m4ずつ分注し，！瓶あたり4本葉身の増殖率になるように敷いた．また，PVP（MW40，0000はの外植片を置床して行った．

5）ポリビニルピロリドン及びクリプトモスsigma社製）の濃度は500ppmであった．

添加が培地の黒褐色変化と増殖率に及ぼ3．結果及び考察

す影響について

1）増殖培地及び増殖率について

株分割法により増殖培養する際に発生する，デルフィニウムは代謝産物を盛んに分泌する培地への黒褐色の代謝物質を抑制するため，従ため，塊根部組織の周辺の色は！0日後には黒褐来増殖に用いてきたB4培地にクリプトモスある色に変化し，培養20日後には培地全体が黒色にいはポリビニルピロリドンを添加し，移植40日変化した．この現象はBに植物体の様子や培地の色の変化及び増殖率にらず，全ての培地で観察された。20日毎に腋芽ついて調査を行った（第4表）．培養条件は20及び茎葉数を調査した結果，これらは添加した℃，2200Luxの12時間照明とし，培地は200m6容BAの濃度が高くなるにつれて増加する傾向を示のマヨネーズ瓶に40m2ずつ分注し，1瓶あたりしたが，BAを2．Oppm含むB4培地においてその増4本の外植片を置床して行った．添加したクリ加は頭打ちとなった（第！図）．

プトモスは予め5×5mmの飾を通した粉末状のが最も高いB5培地の区では塊根部の異常肥大化ものをオートクレーブ滅菌（121℃，20min）し及び一部カルス化が起きており，葉身には水浸ておき，培地1瓶あたり約0．5gを表面に均一症状が認められたことから，BA5．Oppmという濃一45一Aの添加の有無に関わまた，BA濃度

栃木県農業試験研究報告第39号
度はデルフィニウムの増殖には不適であると考のは20℃であり，次いで15℃であった．10℃でえられた．これらの結果から，増殖培地にはB4はほとんど増殖せず，また25℃では葉色が淡く培地を用い（第6表），増殖は20日毎に株を分割なるなど生理的な障害も観察されやはり不適で移植して行うこととした．更に培養苗を全てB4あった．

培地に移植し，株分割法による増殖を3回行っ4）培地の黒褐色変化と増殖率に対するクリプトモス及びPた試験結果を第3表に示した．但し，この時のVP添加の影響について分割は1株あたりの腋芽数を2本として行った。

クリプトモスの施用は発根を促進し，培地のこれは分割の際に，塊根組織をあまり小片化し褐変化を抑制した．しかしBS1の結果では増殖てしまうと株の活性が落ちる事が経験的にわか率は施用しない試験区に比べてやや低い数値でってきたからである．この結果，前培養がB3培あった．この結果はクリプトモスが培地と塊根地であったものだけはやや増殖率が低かったが，組織の間に存在することで物理的に成分や植調他の培地区のものには有意差は認められず，従物質の吸収を抑制したためか，あるいはクリプって前培養の影響は無いものと考えられた。増トモス中に含まれる何らかの成分の働きによる殖率は初回は3．2倍であったが，以降は20日毎ものと考えられるが明らかではない．また，ポに2．3倍を示した（写真4，5）．

リビニルピロリドンを添加した培地では褐変化

2）分割条件と増殖率との関係についてはむしろ促進された．しかし無添加区の褐変化分割条件と増殖率との関係について第2図にが茶色〜黒色であったのに対し，紫色〜濃茶色示した．初回の分割は一株当たりの腋芽を1本と明らかに質的な差が認められた．また，無添にしたため，一時的に株数は増加したが，2回加区の褐変化は塊根部の周辺で局部的に起きて目の時点ではほとんど増殖せず，分割は行えないたのに対し，添加区ではこの褐変物質が速やかった．これは塊根組織をあまり小片化してしかに培地全体に拡散した（写真6）．一般的にポまうと株の活性が低下し，新しい芽が分化してリビニルピロリドンはポリフェノール類を高分くるまでに時問がかかるためと考えられた．先子構造の中に組み込むことで酸化を防止する働の系統BBを用いた増殖試験で経験的にわかってきがあるといわれているが，今回の場合にもそいたことを改めて裏付ける結果となった．またのようなことが起きていると考えられた．これ

3回以降の分割は腋芽を2〜3本付けた状態でらの培地の変化は系統BS1，BS2に同様であった．

行ったが，コンスタントに2．4倍程度の増殖を植物体への影響は，BS1ではポリビニルピロ示した．これも先の系統BBでの数字に極めて近リドンを単独で基本増殖培地に添加した区ではいもので，品種間での反応が同様である事を意

発根せず，葉の腿色程度も軽微であった．また味している．分割苗の数がBS1とBS2の間で大き増殖率については無添加区に比べ顕著な差は認く異なっているが，これは試験開始時の植物体められなかったが，植物体の活性を考えればポ数の違いが影響しているためで，系統間差異にリビニルピロリドンの添加は長期間の培養にはよるものではないと思われる．試験終了時の分適していると考えられた．この条件では従来の割苗数はBS1が3814株でBS2が574株であり，そ分割サイクルが20日毎であったものを，増殖率れぞれ開始時からは73倍と36倍であった．

を低下させることなく40日に延ばすことが可能

3）培養温度が増殖率に及ぼす影響についてであると考えられた（第4表）．

培養温度と増殖率との関係について第3図に示した．この結果，安定して増殖培養が行えた

一46一デルフィニウムの組織培養による大量増殖︶％00︵3（株）

4000％30︶03
腋芽1個／株←1→腋芽2〜3個／株
「」

3000
200株

増増
殖率

数2000

殖200率

100

lOO

1000

012

3452

106（回）

3

分割回数

第2図

第3図 培養温度と増殖率との関係○一〇10℃，ロー｛］15℃，

株分割条件と増殖率との関係

闘ll舞殖率の推移
幽■第3表■卜■20℃，●一●25℃

BS1BS2株数の推移

株分割方式による腋芽の増殖率
増殖率

第2回

増殖率

第3回

増殖率

倍

分割数倍

分割数倍

2．51512．32．457

1．72．1158
120

2．4

2．22．3486

2．330﹁D460636﹃﹂〃total

第1回
分割数

6423

0乙34︻JB
BnDB

4B

初期置床
株体数

6乙−qDO乙前培養培地

8貧U97

培地名

3．3
2．3
3．6

3．3

95

215

3．2

第4表

クリプトモスとPVPが分割増殖中の植物体に及ぼす影響について

品種名

PVP

クリプトモス

十変色程度

210乙070

十O乙22り乙十十BS2培地のの発根株数
1十麦禾多ネ直40日

605つ0十供試株数00八︾0 OOOO
4444十十BS154分割回数

葉色の変色程度

2．4

生長点の増殖倍率

十十十十3．2十十十十十

4．4十十〜十十十十十十十十十十十十十3．7
4．1十十十十十十

注1． PVP：ポリビニルピロリドン（MW．40，000はsigma社製）
注2． 培地の褐変程度は，無色（一）〜黒色（＋＋＋）の4段階評価として肉眼により観察した。
注3． 葉色の変化程度は，濃緑色（＋＋＋）〜黄白色（一）の4段階評価を肉眼により観察した。
注4． BS2の生長点の増殖倍率は未調査

一47一6（回）栃木県農業試験研究報告第39号

3．結果及び考察】〉
1．目

増殖苗の発根条件の検討

発根はほとんどが塊根部と茎葉の境界付近から観察された．また1株当たりの発根数はかな

的

株分割法によって増殖した植物体の発根条件

りばらついており，多いものでは9本もの根が観察された株もあった．NAAの濃度が0〜0．2ppmを検討する．

2．供試材料及び試験方法の間にある培地区では約半数の47％の株が発根株分割法によって増殖培養した系統BBの培しており，NAA無添加区と0．02及び0．2ppm添加養苗を腋芽1本ずつに塊根組織ごとに分割し，区との間には有意差は認められなかった．これ

第5表の4種類の培地に置床して40日後に発根に対して，NAA2．Oppmの培地区では著しい発根の有無について調査した．調査は肉眼により，率の低下が起きた．これらのことから発根培地1mm程度の発根であっても確認されるものは発にはC1培地を用いることにした（第6表）．

根株とした．基本培地の無機塩類組成はMS培地

第5表

NAAの濃度が発根に及ぼす影響

培地名

基本培地のKNO3，NH4NO3，KII2PO4の濃度を1／2に減量したものを用い，ショ糖3％，ゲルライト0．3％

129Q4CハしCCを加えpH5．6に調製した．培地は200m召容のマヨネーズ瓶に40m4ずつ分注し，1瓶あたり5本の外植片を置床した．培養条件は20℃，2200Luxの12時間照明下で行った．

NAA

置床数

発根数

ppm

1／2MS

発根率％

OlO5

〃

0．02

〃

495046．747．6

〃

0．2

〃

4946．7

〃

2．0

〃

98．6

注 基本培地はKNO3，NH4NO3，KH2PO4の量のみを1／2に減量し，共通にsuc3％，ゲルライト0．25％を加えpH5．6に調製した．

デルフィニウムの培養培地

培名地基本培地

BA

ppm
再分化培地
増殖培地（B4）発根培地（C1）

1／3MS
1／2MS
1／2MS
1／2MS

O．2

suc％％

30．02

一一〃2．0一〃一一〃

gellangum3pH翫

初代培地（A4）

NAAppmα第6表

6

注1． 基本培地はKNO3，NH隻NO3，KH2PO4のみを減量
注2． 再分化培地は発根培地と同一
注3． 増殖培地にはポリビニルピロリドン（MW40，000）を500ppm添加する場合もある

時点では不明である 栃木県の生産現地でもプ

V

総合考察

リンセスカロラインというピンク系の品種が導デルフィニウムの組織培養に関する報告は村入されているところもあり，その特徴的な花色

崎ら6）が行った無菌播種由来の植物体を材料とが人気を博している．しかし輸入ものであるこしたものがあるが，本報告は開花株を用いた組とと，希少な極良質品種であることから苗の価織培養法及び増殖法を確立したという点でユニ格もかなり高価で，国内産の優良な栄養系品種ークである。一方，国外での実状はどうかといの作出に期待がかけられているところである。

うと，既に栄養系品種が存在しており，苗の形一般的に外の材料を用いて組織培養を行う場で輸入されているものがあることから何らかの合，花茎腋芽や蕾内の組織，葉身などを用いる増殖法が確立されているものと思われるが，現ことが多いが，これらは大抵は地上部の組織で一48一デルフィニウムの組織培養による大量増殖ある．これは，地下組織を用いることがすなわか検討の余地が残っている．

ち，雑菌汚染の危険性が高いという考えに結び

株分割法による増殖では，20日間で2．4倍のつくからであるが，既に病原菌やあるいは共生効率で株を増殖することができるが，まだ満足菌などが組織内に侵入してしまっていない限り，のいくものではなく，更に効率のよい胚様体の材料の表面殺菌と生長点の摘出が完全に行われ利用などによる増殖方法を確立する必要がある

れば十分に使用が可能であることを今回の塊根と考えている．ちなみに1年間の培養でどの程部の腋芽を使用した試験は示している．

度の苗が得られるかを試算してみると，初代培

デルフィニウムの生長点はやがて花芽へと分養と発根誘導をそれぞれ1ケ月，増殖期間には化していくが，この様子を勝野4）が図示してい10ケ月を当てるとして，10株の培養苗で増殖をる，これによれば，筆者らが培養に供したのは開始すると20日毎に2．4倍として10×2．415＝栄養生長期の段階のものでああった．また，別4207144本という数字になる．更に発根率を50な試験から得られた結果では，既に花芽分化が％としても年間約210万本もの苗生産が可能で始まっているような生長点は，たとえ培養を行あるが，実際には発根していない株も馴化が可ってもすぐに茎立ちし，培養瓶の中で開花して能であるという結果も得られているので（未発しまい増殖培養を行う事はできなかった．勝野表），成苗率はこれを上回るものと考えている．

は生長点肥大の時期が栄養生長から生殖生長へ

培養苗を利用することで育苗期問の大幅な削減の転換期ではないかと述べているが，実際どのが見込まれ，さらには作型の変更も可能となり，段階の生長点までが培養可能なのかはまだ明ら

本県のデルフィニウム生産に大きなメリットをかでない．ただ言える事は，まだ地上に出ていもたらす事ができるものと期待する．

ないような腋芽を材料に用いるなら，生長点のデルフィニウムが代謝する黒褐色物質は，カステージについては何等問題はないということトレア2である．

るような致命的な培養植物への障害は引き起こ

3）やファレノプシス5）で報告されてい培養条件については，冷涼な気候を好むといさないようであるが，長期間の培養を困難にしうことを考慮して培養温度は20℃で統一して基ていることは確かである．同じきんぽうげ科の礎試験を行ったが，増殖培養と温度条件との関トリカブトの組織培養でも同様の現象が報告さ係を調べた試験結果からも，20℃という条件はれている．Robert8）らはこれらは非常に酸化さデルフィニウムにとっては適当なものであった．

れやすいフェノール性物質であると述べており，このようにたとえ人工栄養培地を用いた閉鎖的PVPを培地に添加することでその酸化を抑制しな環境にあっても，植物側の要求してくる生理ている．筆者らの試験でも，PVPの添加で明ら的な条件は自然な場合と何等変わるものではな

かにこの物質が質的に変化を受ける事が観察さく，やはり目的の植物の栽培法を良く理解した

れ，しかも植物体の活性を保ちながら培養でき上で組織培養を行う事が望ましいと反省させらる期間を延ばす効果が確認された。また，小林

れた．培地については基本培地にMSを用い，特ら5）はファレノブシスの組織培養においてクリに窒素成分について標準組成よりも低い改変をプトモスを培地に施用することで黒変化を抑え行った．しかし筆者らのMS培地調製用の貯蔵液ており，クリプトモスが植物組織と培地の間に組成ではKNO3，NH4NO3，KH2PO4が一緒になって存在することで，代謝物の培地への移行が抑止おり，不必要にリン酸成分についても減量をしされるためであると述べている．筆者らの試験てしまったため，必ずしも適当な改変であるのでも明らかなように，クリプトモスの施用区で一49一

栃木県農業試験研究報告第39号
は培地の色の変化は軽微であり，BA2．Oppmを含20日から40日へと延ばせる可能性が示唆された．

む培地であったにも関わらず発根が促進されて一方，クリプトモスの添加は，この黒褐色物質おり，ホルモンの作用を弱めるようなフィルタの分泌を抑制したが，同時に培地中のホルモンー効果が働いたものと考えられた．このことは，の作用も抑制した．

3．増殖した植物はホルモンを除いた培地に発根がホルモンフリーの培地に移植するだけで比較的容易に起こるという試験結果からも明ら移植することで，40日後には47％が発根した．

かであり，やはり物理的な成分吸収の抑制効果が働いている可能性が高い．従って，増殖培養

本研究を行うにあたり，農業試験場花き部並中にはクリプトモスの施用は望ましくなく，むびに生物工学部の方々に有益な御助言を賜った．

しろ発根誘導時には有効ではないかと考えられここに記して厚く感謝の意を表する次第である．

た．

引用文献

今後は様々な優良開花株について本法の適用を行い，栄養増殖系品種の作出を行っていく予

1

天谷正行・岡部陽一・米内貞夫（1991）：

定である．また，今回使用した系統については

園学雑60別1：454−455．

現在開花検定中であり，培養苗の有用性あるい2は変異の問題などについて今後明らかにしてい（3）：325−330．

きたいと考えている．

市橋正一・加古舜治（1977）：園学雑3

石井實（1980）：園学雑4

勝谷範敏（1987）二農と園V【摘要48（2）：199−204．

42（9）：149−

150．

デルフィニウム（1）ε1加伽伽規6鰯襯）の開花

5株の塊根部腋芽を材料とした組織培養法及び増7

2．無菌植物体はBA2．Oppmを含む増殖培地で，株分割法により増殖が可能であり，20日毎に約の培地への添加が有効であり，分割継代期問を

一一50一

Murashige，

T．

and

Skoo9，F．

1962．

PhysiolPlant．，15：473−497．

8Robert，C．1987．HortSci。22：304−2．4倍に増殖した．培養温度は20℃が適してい培養中に代謝される黒褐色物質には，PVP

村崎公明・上田善弘・安藤敏夫（1985）：
園学要旨昭60春：368−369．

1．塊根部の生長点を培養し，無菌植物体を再分化させることができた．

小林光子・米内貞夫（1990）栃木農試研
報37：57−70．

6殖法を検討した．

た．

46305．

9

塚本洋太郎（監修）．花卉園芸大事典（1884）：養賢堂：731−732．

'T')

7 4 :

Ja), + i‑*"

1i J; ;

jC E**‑'=̲

̲̲

In vitro mass propagation of Delphiniumby tissue culture of flowering plants,
Masayuki AMAGAI, Youichi OKABE, Sadao YONAI

Summary
Almost of Delphinium cultivars cultured in Japan were not pure‑bred, and consequentry it
made difficult to uniform the flowering quality. So we try to establish the protocols of in vitro
tissue culture and shoot prolifiration by using flowering plants of Delphinium elatum cv. Bluebirdand Bluesprings.

The apical meristem tissue was cut out from axillay buds of tuberous roots, and cultured on

modifled MS medium (KN0=, , NH* NO* and KH* P04 were decreased to l/3 of orlginal concen‑tration) supplemented with 0.2ppm BA, 0.02ppm NAA, O.3% gellangum adjusted to pH5.6 Materials
for experiment were incubated at 20 ) under fluorescent light (approx. 2200lux) with a 12‑hr photo‑
period. The aceptic differentiation of plants occured 30 days after the start of experiment.

These aseptic plants were transplanted to modified MS medium (KN03 , NH4 N03 and KH 2
P0+ were decreased to 1/2 of original concentration) supplemented with BA 2.0ppm and cultured

under the same condition as those mentined above. Shoots proliferated with progression of thegrowth of tuberous tissues. For the purpose of mass propagation, explants were dissected to smallpieces with 2‑3 shoots in every 20 days and subcultured on the fresh medium. When explants
were transplanted to hormon free medium, rooting occurred in 470/0 of materials examined.
Field tests of the propagated plants are in progress.

Bull. Tochigi Agr. Exp.
Stn. No.39 : 43‑52 (1992) lJ‑ 51 ‑

栃木県農業試験研究報告第39号

写真1

塊根部の腋芽の様子

写真3

生長点から再分化した植物体の様子

写真5

増殖培地で培養20日目の株の様子

写真2

生長点近傍組織の様子

写真4

株分割法により増殖中の様子

写真6
一52一

PVPの添加が黒褐色物質を拡散した様子（左はコントロール）