7.2 低線量放射線の生体防御機能に与える影響調査
7.2.1 低線量率γ線連続照射マウスの脾臓リンパ球サブセットの構成比解析
Analysis of Splenic Lymphocyte Subsets in Mice after Continuous Irradiation with Low-Dose-Rate Gamma-Rays
箭内 敬典, 小木曽 洋一
生物影響研究部

Takanori YANAI, Yoichi OGHISO
Department of Radiobiology
Abstract
Female specific pathogen-free (SPF) mice of three different strains were irradiated with low-dose-rate(20 mGy/22h/day) γ-rays to compare distribution of splenic lymphocyte subsets with those from theage-matched non-irradiated controls.
irradiated for 400 days (8.0 Gy).
with the control mice.
were observed.

A significant increase in body weights was observed in B6C3F1 mice

However, no difference was observed in the other two strains comparedNo remarkable changes of the weight of spleens and the number of spleen cells

The number of CD8+ T cells in the spleen decreased as the dose increased.

cell ratios tended to be higher in irradiated mice, compared with the control mice.
++

CD4/CD8 T

The proportions of+

CD4 CD25 T cells and B220 cells were not significantly different between irradiated and control mice.
1. 目的

2. 方法

低線量放射線生物影響実験調査（寿命試験）では、3 系統（C57BL/6J、C3H/HeN、B6C3F1）の SPF メ低線量率（20 mGy/22h/day）のγ線を約 400 日間連続スマウス（日本クレア）をそれぞれ 6 週齢で導入し、照射（集積線量 8,000 mGy）した雌雄マウスおよび日8 週齢より連続照射を開始した。

線量 1 mGy のγ線を約 400 日間連続照射（集積線量連続照射室に設置された 137Cs-γ 線源を用い、低線400 mGy）したメスマウスに、有意な寿命の短縮、早量率（約 20 mGy/22h/day; 以下、20 mGy/day と記す）期の腫瘍死および非腫瘍死等が観察されている

で、集積線量が 1、 2、 4、8Gy に達するまで連続照（Tanaka S et al. 2003, Tanaka IB 3rd et al. 2007）。この射した。それぞれの照射終了直後（以下、Day50、機構の一つとして、腫瘍細胞の増殖抑制・排除や炎Day100、Day200、 Day400 と記す）に解析を行い、症等を制御する免疫系の変化等が考えられる。そこ非照射対照群（対照群）と比較した。

で、低線量率放射線長期連続照射により免疫系の細脾臓を無菌的に摘出し、重量測定後、単離細胞浮胞がどのような影響を受けるのかを明らかにするた遊液を作製し、trypan blue dye（GIBCO）で未染色のめ、低線量率放射線を長期連続照射したマウスの脾生細胞を計数した。脾細胞浮遊液の細胞濃度を 2 x106

臓中のリンパ球サブセットを蛍光標識特異抗体で染個/ml に調整し、常法（高津聖志他 2004、中内啓光

色し、フローサイトメトリー（FACS）により各サブ2004、中島泉 2006）に従い、抗 CD16/CD32（BDセットの構成比を調べた。

Biosciences） 抗体で FcγR ブロ ック後、抗 CD4（ APC-Cy7-CD4 ; BD Biosciences ）、 抗 CD8（ PE-Cy7-CD8a ； BD Biosciences ）、 抗 CD25

（ R-PE-CD25 ； BD Biosciences ） 及 び 抗 B220

に従い対照群と同じか上回る傾向を示した。CD8a+（FITC-CD45R/B220；BD Biosciences）の蛍光標識抗細胞は、2.0 Gy（Day 100）、4.0 Gy（Day 200）、8.0Gy体を添加して細胞を染色した。脾細胞浮遊液は染色（Day400）と線量が増加するに従い対照群と同じか後、直ちに蛍光励起細胞分取装置（FACS Aria; BD下回る傾向を示したが、いずれの線量でも CD4/CD8Biosciences）にて各サブセット（ヘルパーT リンパ細胞比は増加傾向を示した（Fig. 1）。CD25+細胞、球：CD4+、細胞傷害性 T リンパ球：CD8+、制御性 T

CD4+CD25+細胞及び B220+細胞は 50 日間照射（1.0リンパ球：CD4+CD25+および B リンパ球：B220+）のGy）では対照群と比べ減少傾向が観察されたが、100構成比（%）を測定し、全脾細胞中の各細胞数及び日間照射（2.0 Gy）、200 日間照射（4.0 Gy）では対CD4/CD8 細胞比を算出した。

照群と比べ同じか、やや高くなる傾向を示し、400日間照射（8.0 Gy）では、増加傾向を示した。

3. 成果の概要

腫瘍免疫における重要な担当細胞のひとつである

B6C3F1 マウスでは 400 日間照射（8.0 Gy）した体CD8a+細胞数が、低線量率放射線連続照射によって重の有意な増加が観察されたが、他の 2 系統では対減少傾向を示した今回の結果は、寿命試験で認めら照群と比べ差は観察されなかった。

れた早期の腫瘍死による寿命の短縮に、免疫細胞の++C57BL/6 マウスの CD4 及び CD8a 細胞は、50 日変化が関わっている可能性を示唆するものである。

間照射（1.0 Gy）では増加する傾向を示した。線量

引用文献が 2.0 Gy（Day 100）、4.0 Gy（Day 200）と増加するに従い減少傾向を示し、8.0 Gy（Day400）では再び

Tanaka S et al. (2003) Radiat Res., 160, 376-379.

増加傾向を示した。CD4/CD8 比は、100 日間照射（2.0Tanaka IB 3rd et al. (2007) Radiat Res., 167, 417-437.

Gy）までは対照群と比べ変らなかったが、200 日間高津聖志他（2004）実験医学別冊

照射（4.0 Gy）、400 日間照射（8.0 Gy）では、増加のための抗体実験マニュアル+傾向を示した。B220 細胞は 200 日間照射（4.0 Gy）
で、増加傾向を示し、400 日間照射（8.0 Gy）では、++++CD25 細胞、CD4 CD25 細胞及び B220 細胞が増加傾向を示した

中内啓光（2004）細胞工学別冊

タンパク質研究フローサイトメト

リー自由自在―マルチカラー解析からクローンソーティングまで
中島泉（2006）免疫学実験法ハンドブック+C3H/HeN マウスの CD4 細胞は対照群と比べ、50日間照射（1.0 Gy）では変化が観察されなかったが、線量が 2.0 Gy（Day 100）、4.0 Gy（Day 200）と増加するに従い減少し、8.0 Gy（Day400）では差がみられなかった。CD8a+細胞は線量が増加するに従い減
少し、4.0 Gy（Day200）では有意に減少していたが、8.0 Gy（Day400）では差がみられなかった。CD4/CD8
細胞比は 4.0 Gy（Day 200）までは増加したが、8.0 Gy（Day400）では差がみられなかった。CD25+細胞、CD4+CD25+細胞及び B220+細胞に関しては、200 日間照射（4.0 Gy）までは変化は観察されなかったが、400 日間照射（8.0 Gy）では、減少傾向を示した。
B6C3F1 マウスでは、CD4+ 細胞、CD25+ 細胞、CD4+CD25+細胞及び B220+細胞は、50 日間照射（1.0Gy）ではいずれも減少傾向を示し、線量が増加する

大学出版会

名古屋

CD4: Control

6CD4: Irradiated20

4102CD4 / CD8 cell ratio

Number of CD4+ & CD8+cells（ 106 / spleen）

30

CD8: Control
CD8: IrradiatedCD4/CD8: Control
CD4/CD8: Irradiated
00Day 0Day 50Day 100

Day 200

Day 400

Mean ± SD（n=5）

Fig.1 Number of CD4 + and CD8+T cells in spleen cells from B6C3F1 mice after lowdose-rate gamma-ray irradiation .