2021 年 11 月作成（第 1 版）

MonoFas®

研究用試薬キット

DNA Buccal Swabs Kit

取扱説明書

株式会社アニモス-1-目次１．製品説明 .................................................................................................................................. - 3 ２．製品内容 .................................................................................................................................. - 3 ３．製品仕様 .................................................................................................................................. - 4 ４．必要な試薬及び器具................................................................................................................. - 4 ５．MonoFas®スピンカラム使用上の注意事項 ................................................................................. - 4 ６．DNA 抽出プロトコールの簡易フロー .......................................................................................... - 5 ７．保存及びその他の注意 ........................................................................................................... - 12 ８．保証期間 ................................................................................................................................ - 12 -MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-2-

１．製品説明MonoFas® DNA Buccal Swabs Kit は、口腔内の様々なサンプル（スワブ、唾液、喀痰など）から DNA を抽出するキットです。
次世代の高分離フィルターである均一な連続孔を持つシリカモノリス採用し、高効率、高純度を実現しながら、短時間で簡便な抽出操作で行なえるのが特長です。本キットは、様々なサンプルの採集方法に合わせた専用プロトコールを適用して頂くことで高純度 DNA を短時間で抽出が可能です。本キットによって得られた DNA で、不純物の除去率が高く、抽出した DNA 溶液中に無機塩類が非常に少ないため、高効率の PCR 増幅が可能です。

２．製品内容本製品を受け取りましたら、梱包内容、スピンカラムの外観、数量、バッファー液等に異常がないか確認してください。
内容違い、数量違い、スピンカラムの外観等に異常がありましたら、すみやかに弊社へご連絡ください。
Cat. No.

A20-0001

A20-0002

A20-0003

A20-0004

回数2550100

250

25 本×1 袋

50 本×1 袋

50 本×2 袋

50 本×5 袋

スピンカラムBuffer A20（溶解）

9 mL

17 mL

33 mL

83 mL

Buffer B20（変性・吸着）

9 mL

17 mL33 mL

83 mL

Buffer C20（洗浄）

14 mL

28 mL

55 mL

138 mL

Buffer D20（溶出）*

6 mL

6 mL

11 mL

28 mL

Cat. No.

A20-0201

A20-0202

A20-0203

A20-0204

回数

2550100250

25 本×1 袋

50 本×1 袋

50 本×2 袋

50 本×5 袋酵素(Proteinase K)セット

スピンカラムBuffer A20（溶解）

9 mL

17 mL

33 mL

83 mL

Buffer B20（変性・吸着）

9 mL

17 mL

33 mL

83 mL

Buffer C20（洗浄）

14 mL

28 mL

55 mL

138 mL

Buffer D20（溶出）*

6 mL

6 mL

11 mL

28 mL

Proteinase K (20mg/mL)

0.5 mL

1.0 mL

2.0 mL

5.0 mL＊冬季になると Buffer A20 に白い結晶が析出する場合がありますが、品質、性能に問題はありません。
容器ごと 40～50℃で加温し、結晶を完全に溶解させてからご使用ください。
＊Buffer D20 は、10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (Free) (pH 8.5)です。

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３．製品仕様

Buccal Swab か ら の DNA 抽 出原理

シリカモノリス法

操作時間～ 30 分

推奨処理量

サンプル採集方法による溶出量10～ 100 µL

DNA の純 度 (A260/A280)

1.7～ 2.3

DNA の純 度 (A260/A230)

1.7～ 2.3

４．必要な試薬及び器具＜本キット以外に必要な試薬、機器＞○ 99.5%エタノール 又は イソプロパノール（特級グレードを推奨）○ マイクロピペット、マイクロピペット用チップ○ 1.5 又は 2.0 mL 遠心チューブ○ 遠心機 ※
○ 恒温槽：ドライバス 又は ウォーターバス（70℃で使用可能なもの）○ ボルテックスミキサー（2,500 rpm 程度の攪拌ができるもの）※ 遠心機によっては使用できないケースがありますので、遠心機の仕様をご確認の上、使用してください。
また本書での以下の基本計算式をもとに相対遠心加速度(×g)と回転数(rpm)を算出しております。
ローターの回転半径は、遠心機によって変わりますので、遠心機取扱説明書のローター仕様ページをご確認ください。
基本計算式
RCF＝1.118×R×N2×10-6
RCF：相対遠心加速度（×g） R：回転半径(mm)N：回転数（rpm）

５．MonoFas®カラム使用上の注意事項○ スピンカラムは落としたり、ぶつけたりしないでください。強い衝撃を与えるとシリカモノリスが割れることがあります。
○ すべての工程は遠心操作で行ってください。
○ スピンカラムはオートクレーブ処理が可能です。処理後は、真空乾燥機を利用して十分乾燥させてから使用してください。
オートクレーブ条件：110℃以下、20 分以内
乾燥条件：真空化 100℃以下 5 時間以上
○ スピンカラムは汎用のシリカメンブレンカラムより通液抵抗が小さくなっておりますので、液の流出を止める場合にはスピンカラムの蓋を閉めるようにしてください。
○ 遠心機を用いる場合はチューブ類が装置の蓋などに接触しない事を確認の上ご使用ください。
○ 精製 DNA を分子生物学的操作に用いる場合には、十分に滅菌された容器や滅菌水などを用いてください。
○ 本製品は消耗品ですので再使用はできません。
○ ご所属の機関の倫理委員会の規定に従い作業してください。また、スピンカラムの廃棄の際には、遺伝情

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-4-

報が残らないことと、感染症への配慮を考慮してください。

６．DNA 抽出プロトコールの簡易フロー＜口腔内サンプルについて＞
口腔内から採取されるサンプル（スワブ、唾液、喀痰など）に合わせた専用プロトコールを選択頂くことで、高純度DNAを回収することが可能です。
本キットでは、プロトコール①には、粘性の低いサンプルを対象にした簡易抽出法、プロトコール② には、様々なサンプルに対応した標準抽出法、プロトコール③には、高粘度サンプルを対象にした高純度・高収量抽出法を示す。
プロトコールの選定基準
プロトコール①

簡易抽出法：保存上清液、唾液（粘性の低いサンプル）

プロトコール②

標準抽出法：保存上清液、喀痰、唾液、Swabサンプル

プロトコール③

高純度抽出法：粘度が高い、夾雑物が多いサンプル

プロトコール②で高純度のDNAが得られない場合は、プロトコール③でDNA抽出をお試しください。
尚、本キットを利用して、口腔スワブと同様に鼻腔スワブは鼻咽頭スワブからもDNA抽出が可能です。

＜遠心加速度と回転数について＞
当社のスピンカラムは通液性に優れているシリカモノリスフィルターを採用しており、汎用の卓上遠心機を用いて、遠心加速度 10,000×g 未満の設定で使用可能です。しかしながら、10,000×g 未満の場合、核酸の量や溶液の粘度によって、目詰まりが発生するケースがあります。目詰まりが発生した場合は、必要に応じて遠心加速度を上げる、遠心時間を延長する等の追加遠心を行い、アプライした液体がスピンカラムに残らないように通液させてください。

＜添加するアルコール類について＞
本プロトコールでは、溶液の溶解度を変えるためにアルコール類を添加する方法を採用しております。
この添加するアルコール類は、エタノールまたはイソプロパノールが選択可能です。
イソプロパノールはエタノールより疎水性が高いため、核酸の溶解度が低く、より少ない量で効果を発揮します。
選択の基準
回収される DNA 量が多い場合：イソプロパノール選択回収される DNA 量が少ない場合：エタノールを選択

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-5-

≪プロトコール①簡易 DNA 抽出方法≫
保存上清液、唾液（粘性の低いサンプル）

遠心チューブにサンプルを 100～200 µL を採集①

Buffer A20

200 µL

ボルテックス混和②Buffer B20200 µL

ボルテックス混和③

イソプロパノール 400 µL 添加、10 回程度強く転倒混和注）イソプロパノールを添加後は遠心を行わないこと④

溶解混合液全量をスピンカラムにアプライ≧10,000×g(11,000 rpm) 1分間遠心濾液を捨てスピンカラムに再装着⑤ Buffer C20≧10,000×g

500 µL(11,000 rpm) 1分間遠心

スピンカラムを新しいサンプリング用遠心チューブに装着⑥ Buffer D20≧10,000×g

10～100 µL(11,000 rpm) 1分間遠心溶出DNAを回収※抽出・精製 DNA は－20℃で保存してください。

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-6-

＜詳細プロトコール＞
DNA抽出工程1.5 又は 2.0 mL遠心チューブにサンプルを100～200µLを採集する。
●

試料が多すぎた場合、スピンカラムの目詰まり、回収量減少、精度低下の可能性があります。目詰まりした場合は、量を減らして検討してください。

①

Buffer A20 200 µLを添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

②

Buffer B20 200 µLを添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

③

イソプロパノールを400 µL添加し、10回程度強く転倒混和する。
●混和が不充分なときは、タッピング、ピペッティングあるいは転倒混和などでよく混ぜてください。ライセート完成後は、速やかに抽出操作を行ってください。

●

凝集物が出来た場合、再度遠心することなく、凝集物を含めて、すべてスピンカラムにアプライしてください。

④

混合液全量をスピンカラムにアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。
●

遠心後、液がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。遠心操作で液が完全に通過しない場合は、スピンカラムの蓋を開けて遠心してください。

⑤

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑥

スピンカラムの蓋を開け、Buffer C20を500 µL添加し、≧10,000×g（11,000 rpm）１分間遠心する。
●

遠心後 Buffer C20がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。

●

Buffer C20が残余すると回収率が悪くなる場合がありますので注意してください。また、溶出液に混入すると遺伝子増幅反応を阻害するのでご注意ください。

⑦

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。廃液の入ったコレクションチューブを廃棄する。

⑧

スピンカラムを新しい1.5 mLサンプリング用遠心チューブに装着後、スピンカラムの蓋を開け、Buffer D20を10～100 µL、モノリス表面の中央に添加する。その後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑨

遠心機からスピンカラムとサンプリング用遠心チューブを注意深く取り出し、スピンカラムを廃棄する。

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-7-≪プロトコール②標準 DNA 抽出方法≫
保存上清液、喀痰、唾液、Swab サンプル

① 遠心チューブに滅菌又は精製水 1.0ｍL を秤量
② 試料 ～500 µL を採集③ ≧10,000×g(11,000 rpm) 2 分間遠心後上清を除去④ Buffer A20

180 µL + Proteinase K

20 µL

ボルテックス混和⑤ 70℃ 10 分間加温(約 2 分毎に 10 秒間ボルテックス混和）⑥ Buffer B20

ボルテックス混和200 µL⑦ イソプロパノール 400 µL 添加、10 回程度強く転倒混和注）イソプロパノールを添加後は遠心を行わないこと⑧ 溶解混合液全量をスピンカラムにアプライ≧10,000×g(11,000 rpm) 1分間遠心濾液を捨てカラムに再装着⑨Buffer C20≧10,000×g

500 µL(11,000 rpm) 1分間遠心

スピンカラムを新しいサンプリング用遠心チューブに装着⑩Buffer D20≧10,000×g

10～100 µL(11,000 rpm) 1分間遠心溶出DNAを回収※抽出・精製 DNA は－20℃で保存してください。

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-8-＜詳細プロトコール＞
DNA抽出工程①

1.5 又は 2.0 mL遠心チューブに滅菌又は精製水1.0②秤量した滅菌又は精製水にサンプルｍLに秤量する。

～500 µL を採集する。

●

スワブは、遠心チューブ側面に強く擦り付けるようにしてサンプルを採取してください。

●

試料が多すぎた場合、スピンカラムの目詰まり、回収量減少、精度低下の可能性があります。目詰まりした場合は、量を減らして検討してください。

③≧10,000×g (11,000 rpm) 2分間遠心後上清を除去する。

④

Buffer A20 180 µLを添加し、Proteinase K（20 mg/mL）を20 µL入れ、攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑤

70℃で10分間インキュベートを行う。2分間毎に10秒間攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑥

Buffer B20 200 µLを添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑦

イソプロパノールを400 µL添加し、10回程度強く転倒混和する。
●

混和が不充分なときは、タッピング、ピペッティングあるいは転倒混和などでよく混ぜてください。ライセート完成後は、速やかに抽出操作を行ってください。

●⑧

凝集物が出来た場合、追加遠心することなく、凝集物を含めすべてカラムに添加してください。

混合液全量をスピンカラムにアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。
●

遠心後、液がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。遠心操作で液が完全に通過しない場合は、スピンカラムの蓋を開けて遠心してください。

⑨

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑩

スピンカラムの蓋を開け、Buffer C20を500 µL添加し、≧10,000×g（11,000 rpm）１分間遠心する。
●

遠心後 Buffer C20がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。

●

Buffer C20が残余すると回収率が悪くなる場合がありますので注意してください。また、溶出液に混入すると遺伝子増幅反応を阻害するのでご注意ください。

⑪

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。廃液の入ったコレクションチューブを廃棄する⑫

スピンカラムを新しい1.5 mLサンプリング用遠心チューブに装着後、スピンカラムの蓋を開け、Buffer D20を10～100 µL、モノリス表面の中央に添加する。その後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑬

遠心機からスピンカラムとサンプリング用遠心チューブを注意深く取り出し、スピンカラムを廃棄する。

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02-9-≪プロトコール③高純度抽出法 DNA 抽出方法≫
粘度が高い、夾雑物が多いサンプル① 遠心チューブにサンプル～500 µL を秤量② Buffer A20

280 µL + Proteinase K

20 µL

ボルテックス混和③ 70℃ 20 分間加温(約 5 分毎に 30 秒間ボルテックス混和）④ Buffer B20

300 µL

ボルテックス混和⑤ ≧10,000×g(11,000 rpm) 2 分間遠心

⑥ 上清約 500 µL を新しい遠心チューブに移す⑦ イソプロパノール 500 µL 添加、10 回程度強く転倒混和注）イソプロパノールを添加後は遠心を行わないこと⑧ 溶解混合液全量をスピンカラムにアプライ≧10,000×g(11,000 rpm) 1分間遠心濾液を捨てスピンカラムに再装着⑨Buffer C20≧10,000×g

500 µL(11,000 rpm) 1分間遠心

スピンカラムを新しいサンプリング用遠心チューブに装着⑩Buffer D20≧10,000×g

10～100 µL(11,000 rpm) 1分間遠心溶出DNAを回収※抽出・精製 DNA は－20℃で保存してください。

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02- 10 -

＜詳細プロトコール＞
DNA抽出工程①

1.5 又は 2.0 mL遠心チューブにサンプル●～500 µLを秤量する。

粘性が高い喀痰については、喀痰に対して容量で1〜3倍量のPBS(-)を加えボルテックスミキサーおよび激しい転倒混和により懸濁し、その懸濁を使用してください。

●

試料が多すぎた場合、カラムの目詰まり、回収量減少、精度低下の可能性があります。目詰まりした場合は、量を減らして検討してください。

②

Buffer A20 280 µLを添加し、Proteinase K（20 mg/mL）を20 µL入れ、攪拌混合（ボルテックス）を行う。

③70℃で20分間インキュベートを行う。5分間毎に30秒間攪拌混合（ボルテックス）を行う。

④

Buffer B20 300 µLを添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑤≧10,000×g (11,000 rpm) 2 分間遠心する。

⑥

上清約 500 µL を新しい 1.5 又は 2.0 mL 遠心チューブに移す。

⑦

イソプロパノールを500 µL添加し、10回程度強く転倒混和する。
●

混和が不充分なときは、タッピング、ピペッティングあるいは転倒混和などでよく混ぜてください。ライセート完成後は、速やかに抽出操作を行ってください。

●

試料の水分含量が少ない場合、500 µL の上清を回収できない場合があります。添加するアルコールの液量比（1：1）を維持してスケールダウンしてください。なお、以降の工程では添加量を変更する必要はありません。

●⑧

凝集物が出来た場合、追加遠心することなく、凝集物を含めすべてカラムに添加してください。

混合液全量をスピンカラムにアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。
●

遠心後、液がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。遠心操作で液が完全に通過しない場合は、スピンカラムの蓋を開けて遠心してください。

⑨

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑩

スピンカラムの蓋を開け、Buffer C20を500 µL添加し、≧10,000×g（11,000 rpm）１分間遠心する。
●

遠心後 Buffer C20がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。

●

Buffer C20が残余すると回収率が悪くなる場合がありますので注意してください。また、溶出液に混入すると遺伝子増幅反応を阻害するのでご注意ください。

⑪

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。廃液の入ったコレクションチューブを廃棄する⑫

スピンカラムを新しい1.5 mLサンプリング用遠心チューブに装着後、スピンカラムの蓋を開け、Buffer D20
を10～100 µL、モノリス表面の中央に添加する。その後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑬

遠心機からスピンカラムとサンプリング用遠心チューブを注意深く取り出し、スピンカラムを廃棄する。

以上で口腔内サンプルからのDNA抽出は完了です。
注) スピンカラムに添加した溶出Buffer D20は、ほぼ全量が回収されます。
注) 回収したDNAをすぐに使用しない場合は、サンプリング用遠心チューブのキャップをしっかりと閉めた

MonoFas® DNA Stool Kit Ver.02- 11 -

後、−20℃で保存することをお勧めします。
注) 本製品に同封されているBuffer D20は、RNase・DNaseフリー滅菌水に置き換えることが可能です。その場合、pHにより回収率が変動するためアンモニア水などでpH 8.5～9.0に調整してご使用ください。

＜使用に関する注意事項＞① 試薬の容量は抽出プロトコールに記載された量を厳守してください。
② コンタミネーションを防ぐために毎回ピペットチップを交換してください。
③ 遠心後、遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを取り外す際は、廃液がスピンカラム先端に付着しないよう注意深く取り外してください。付着した場合は軽くスピンダウンを行ってください。
④ 遠心機内の温度が上昇するのを防ぐため、遠心機の連続運転は避けてください。
⑤ 抽出の途中では時間をおかず、操作は速やかに行ってください。
⑥ 感染性のおそれのあるサンプルを使用した場合、廃棄物は感染性産業廃棄物に該当しますので、適切な処理を行ってください。

７．保存及びその他の注意○

室温（15℃ ～ 25℃）で保存してください。

○

酵素 ( Proteinase K ) は室温保管が可能ですが、開封後は冷蔵保管( 2～8℃ )を推奨します。

○

洗浄液には、揮発性の高いエタノールが含まれています。ご使用後は、蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めてください。

○MonoFas® 抽出・精製キットは厳しい品質管理のもとで製造、検査、包装、出荷しておりますが、万一不具合がありましたら弊社までご連絡ください。

○

本製品は口腔内サンプルからの DNA 抽出・精製の目的で製造しております。それ以外の目的での使用および本取扱説明書に基づかない方法では使用しないでください。

○

本試薬キットを使用前に、安全データシート（SDS）の記載内容をご一読ください 。
○

安全データシート（SDS）の（URL http://www.animos.co.jp）よりダウンロードして入手願います。

余った Buffer の廃棄方法は、安全データシート（SDS）に記載された通り廃棄ください。

８．保証期間
〇各種 Buffer の保証期間は未開封、室温保存で購入後 1 年間です。
各種 Buffer が追加で必要な際には、最寄りの支店または営業所までご連絡ください。

ゾルーゲル法によるシリカモノリスは、国立大学法人京都大学

曽我直弘先生、中西和樹先生により開発されました。この技術と、ジーエルサイエンス株式会社が所有する製品商標及び特許のライセンスを受けて、MonoFas® シ
リーズ製品を株式会社アニモスが開発・製造しています。

お問い合わせ先 ： 株式会社アニモス〒333-0844 埼玉県川口市上青木 3-12-18
TEL：048-606-2892

FAX：048-611-7192

E-mail：monofas@animos.co.jp

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