2021 年 11 月作成（第 1 版）

MonoFas®

研究用試薬キット

Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用

取扱説明書

株式会社アニモス-1-

目次
１．製品説明 .................................................................................................................................. - 3 ２．製品内容 .................................................................................................................................. - 3 ３．製品仕様 .................................................................................................................................. - 3 ４．必要な試薬及び器具................................................................................................................. - 4 ５．MonoFas®スピンカラム使用上の注意事項 ................................................................................. - 4 ６．DNA 抽出プロトコールの簡易フロー .......................................................................................... - 5 ７．保存及びその他の注意 ........................................................................................................... - 12 ８．保証期間 ................................................................................................................................ - 12 -MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-2-

１．製品説明MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用キットは、遺伝子組換え原料を含む食品やその加工食品粉末から DNA を抽出するキットです。
次世代の高分離フィルターである均一な連続孔を持つシリカモノリス採用し、高効率、高純度を実現しながら、短時間で簡便な抽出操作で行なえるのが特長です。本キットは、遺伝子組換え食品検査の PCR 法において、シリカゲル膜タイプキット法に属しながらイオン交換樹脂タイプキット法と同等の高純度 DNA を短時間で抽出が可能です。本キットによって得られた DNA は、PCR 法や LAMP 法等の酵素反応に使用することが可能なため、遺伝子組換え食品の検査以外にも、特定原材料検査、食品微生物検査、原材料検査等への適応も可能です。

２．製品内容本製品を受け取りましたら、梱包内容、スピンカラムの外観、数量、バッファー液等に異常がないか確認してください。
内容違い、数量違い、スピンカラムの外観等に異常がありましたら、すみやかに弊社へご連絡ください。
Cat. No.

A18-0201

A18-0202

A18-0203

回数255010025 本×1 袋

50 本×1 袋

50 本×2 袋

スピンカラムBuffer A18（溶解）

40 mL

80 mL

160 mL

Buffer B18（変性・吸着）

40 mL

80 mL

160 mL

Buffer C18（洗浄）

14 mL

28 mL

55 mL

Buffer D18（溶出）*

6 mL

6 mL

11 mL

Proteinase

K (20 mg/mL)

0.5 mL

1 mL

2 mL＊Buffer D18 は、10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (Free) (pH 8.5)です。

３．製品仕様遺 伝 子 組 換 え 食 品 か ら の DNA 抽 出原理

シリカゲル膜タイプキット法（シリカモノリス法）

操作時間～ 40 分

最 大 DNA 結 合 量～ 50 µg

推奨処理量～ 1.0 g

溶出量50～ 100 µL

DNA の純 度 (A260/A280)

1.7～ 2.1

DNA の純 度 (A260/A230)

1.7～ 2.1

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-3-４．必要な試薬及び器具＜本キット以外に必要な試薬、機器＞○ 99.5%エタノール（特級グレードを推奨）○ マイクロピペット、マイクロピペット用チップ○ 1.5 又は 2.0 mL 遠心チューブ○ 50 mL 遠心管○ フードミル（カッターミル等）○ 遠心機 ※
○ 恒温槽：ドライバス 又は ウォーターバス（70℃で使用可能なもの）○ ボルテックスミキサー（2,500 rpm 程度の攪拌ができるもの）※ 遠心機によっては使用できないケースがありますので、遠心機の仕様をご確認の上、使用してください。
また本書での以下の基本計算式をもとに相対遠心加速度(×g)と回転数(rpm)を算出しております。
ローターの回転半径は、遠心機によって変わりますので、遠心機取扱説明書のローター仕様ページをご確認ください。
基本計算式
RCF＝1.118×R×N2×10-6
RCF：相対遠心加速度（×g） R：回転半径(mm)N：回転数（rpm）

５．MonoFas®スピンカラム使用上の注意事項○ スピンカラムは落としたり、ぶつけたりしないでください。強い衝撃を与えるとシリカモノリスが割れることがあります。
○ すべての工程は遠心操作で行ってください。
○ スピンカラムはオートクレーブ処理が可能です。処理後は、真空乾燥機を利用して十分乾燥させてから使用してください。
オートクレーブ条件：110℃以下、20 分以内
乾燥条件：真空化 100℃以下 5 時間以上
○ スピンカラムは汎用のシリカメンブレンカラムより通液抵抗が小さくなっておりますので、液の流出を止める場合にはスピンカラムの蓋を閉めるようにしてください。
○ 遠心機を用いる場合はチューブ類が装置の蓋などに接触しない事を確認の上ご使用ください。
○ 精製 DNA を分子生物学的操作に用いる場合には、十分に滅菌された容器や滅菌水などを用いてください。
○ 本製品は消耗品ですので再使用はできません。
○ ご所属の機関の倫理委員会の規定に従い作業してください。また、スピンカラムの廃棄の際には、遺伝情報が残らないことと、感染症への配慮を考慮してください。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-4-

６．DNA 抽出プロトコールの簡易フロー＜食品の前処理方法について＞
食品検査では、サンプリングの誤差を小さくするため、食品が均一になるように十分ホモジナイズする（均質化処理）必要があります。均質化処理の方法として、JAS 分析試験ハンドブック「遺伝子組換え食品検査・分析マニュアル」＜改訂第 3 版＞では、試料重量と同じ重量の滅菌水を加えて粉砕する方法、又は、試料をフリーズドライ等により乾燥させて粉砕する方法が記載されている。
均質化処理が困難試料については、均質化処理過程において、試料と同重量の水を加え、充分に均質化操作を行った後に、凍結乾燥処理を行い、再度粉砕操作を行ったものを調製試料とする方法や試料が液体の場合には、ミキサ－ミル等を用いた均質化を行った後、凍結乾燥処理に供し、処理後、再びミキサ－ミル等を用いた粉砕処理を経たものを調製試料とする方法があります。
本キットでは、プロトコール①には、乾燥粉末試料を対象とした抽出方法、プロトコール② には、液体の食品や試料に滅菌水を加えてホモジナイズした試料を対象とした抽出方法、プロトコール③には、少量試料を対象とした抽出方法を示す。また、遺伝子組換え食品の原料は、加工品比べDNA量が十分確保できるため、少量試料を対象としたプロトコール③を推奨します。

＜遠心加速度と回転数について＞
当社のスピンカラムは通液性に優れているシリカモノリスフィルターを採用しており、汎用の卓上遠心機を用いて、遠心加速度 10,000×g 未満の設定で使用可能です。しかしながら、10,000×g 未満の場合、核酸の量や溶液の粘度によって、目詰まりが発生するケースがあります。目詰まりが発生した場合は、必要に応じて遠心加速度を上げる、遠心時間を延長する等の追加遠心を行い、アプライした液体がスピンカラムに残らないように通液させてください。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-5-≪プロトコール①乾燥粉末試料からの DNA 抽出方法≫

45mL

調製試料(均質化処理済)～1.0 g を遠心管に秤量する

4035302520①

Buffer A181.5 mL + Proteinase K

20 µL

ボルテックス混和②60℃ 10 分間加温③

Buffer B18

1.5 mL④≧4,000×g(7,000 rpm)⑤

上清約 900 µL を新しい遠心チューブに移す⑥

エタノール 900 µL 添加、10 回程度強く転倒混和(約 2 分毎に 10 秒間ボルテックス混和）
ボルテックス混和151010 分間遠心5注）エタノールを添加後は遠心を行わないこと⑦

溶解混合液全量を 2 回に分けてスピンカラムにアプライ≧10,000×g (11,000 rpm)

1分間遠心濾液を捨てスピンカラムに再装着⑧

Buffer C18500 µL≧10,000×g 11,000 rpm） 1分間遠心
スピンカラムを新しいサンプリング用遠心チューブに装着⑨

Buffer D1850～100 µL≧10,000×g （11,000 rpm） 1分間遠心溶出DNAを回収※抽出・精製 DNA は－20℃で保存してください。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-6-

＜詳細プロトコール＞
DNA抽出工程①

乾燥粉末試料 ～1.0 gを15 又は 50 mL遠心管に秤量する。
●

乾燥粉末試料が多すぎた場合、スピンカラムの目詰まり、回収量減少、精度低下の可能性があります。目詰まりした場合は、量を減らして検討してください。

②

Buffer A18 1.5 mLを添加し、Proteinase K（20 mg/mL）を20 µL入れ、攪拌混合（ボルテックス）を行う。

③

60℃で10分間インキュベートを行う。2分間毎に10秒間ボルテックスを行う。

④

Buffer B18 1.5 mL添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑤≧4,000×g●(7,000 rpm) 10分間遠心する。

上清と沈殿物がうまく分離しない場合は、遠心加速度を上げるか、遠心時間を延ばしてください。

⑥

上清約900 µLを新しい2.0 mL遠心チューブに移す。

⑦99.5%エタノールを900 µL添加し、10回程度強く転倒混和する。
●

混和が不充分なときは、タッピング、ピペッティングあるいは転倒混和などでよく混ぜてください。
ライセート完成後は、速やかに抽出操作を行ってください。

●

凝集物が出来た場合、再度遠心することなく、凝集物を含めて、すべてスピンカラムにアプライしてください。

⑧

混合液をスピンカラムに最大1.0 mLアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑨

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑩

残りの混合液をスピンカラムにアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。
●

遠心後、液がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。遠心操作で液が完全に通過しない場合は、スピンカラムの蓋を開けて遠心して下さい。

⑪

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑫

スピンカラムの蓋を開け、Buffer C18を500 µL添加し、≧10,000×g（11,000 rpm）１分間遠心する。
●

遠心後 Buffer C18がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。

●

Buffer C18が残余すると回収率が悪くなる場合がありますので注意してください。また、溶出液に混入すると遺伝子増幅反応を阻害するのでご注意ください。

⑬

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。廃液の入ったコレクションチューブを廃棄する。

⑭

スピンカラムを新しい1.5 mLサンプリング用遠心チューブに装着後、スピンカラムの蓋を開け、Buffer D18を50～100 µL、モノリス表面の中央に添加する。その後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑮

遠心機からスピンカラムとサンプリング用遠心チューブを注意深く取り出し、スピンカラムを廃棄する。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-7-

≪プロトコール②液体試料からの DNA 抽出方法≫

45mL

調製試料(均質化処理済)～1.0 g を遠心管に秤量する

4035302520①Buffer A18

800 µL + Proteinase K20 µL

ボルテックス混和②60℃ 10 分間加温③

Buffer B18800 µL④≧4,000×g(7,000 rpm)⑤

上清約 900 µL を新しい遠心チューブに移す⑥

エタノール 900 µL 添加、10 回程度強く転倒混和(約 2 分毎に 10 秒間ボルテックス混和）
ボルテックス混和

151010 分間遠心5注）エタノールを添加後は遠心を行わないこと⑦

溶解混合液全量を 2 回に分けてスピンカラムにアプライ≧10,000×g (11,000 rpm)

1分間遠心濾液を捨てスピンカラムに再装着⑧

Buffer C18500 µL≧10,000×g 11,000 rpm） 1分間遠心
スピンカラムを新しいサンプリング用遠心チューブに装着⑨

Buffer D1850～100 µL≧10,000×g （11,000 rpm） 1分間遠心溶出DNAを回収※抽出・精製 DNA は－20℃で保存してください。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-8-

＜詳細プロトコール＞
DNA抽出工程①

乾燥粉末試料 ～1.0 gを15又は50 mL遠心管に秤量する。
●

液体試料が多すぎた場合、スピンカラムの目詰まり、回収量減少、精度低下の可能性があります。目詰まりした場合は、量を減らして検討してください。

②

Buffer A18 800 µLを添加し、Proteinase K（20 mg/mL）を20 µL入れ、攪拌混合（ボルテックス）を行う。

③

60℃で10分間インキュベートを行う。2分間毎に10秒間ボルテックスを行う。

④

Buffer B18 800 µL添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑤≧4,000×g●(7,000 rpm) 10分間遠心する。

上清と沈殿物がうまく分離しない場合は、遠心加速度を上げるか、遠心時間を延ばしてください。

⑥

上清約900 µLを新しい2.0 mL遠心チューブに移す。

⑦

99.5%エタノールを900 µL添加し、10回程度強く転倒混和する。
●

混和が不充分なときは、タッピング、ピペッティングあるいは転倒混和などでよく混ぜてください。
ライセート完成後は、速やかに抽出操作を行ってください。

●

凝集物が出来た場合、再度遠心することなく、凝集物を含めて、すべてスピンカラムにアプライしてください。

⑧

混合液をスピンカラムに最大1.0 mLアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑨

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑩

残りの混合液をスピンカラムにアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。
●

遠心後、液がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。遠心操作で液が完全に通過しない場合は、スピンカラムの蓋を開けて遠心して下さい。

⑪

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑫

スピンカラムの蓋を開け、Buffer C18を500 µL添加し、≧10,000×g（11,000 rpm）１分間遠心する。
●

遠心後 Buffer C18がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。

●

Buffer C18が残余すると回収率が悪くなる場合がありますので注意してください。また、溶出液に混入すると遺伝子増幅反応を阻害するのでご注意ください。

⑬

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。廃液の入ったコレクションチューブを廃棄する。

⑭

スピンカラムを新しい1.5mLサンプリング用遠心チューブに装着後、スピンカラムの蓋を開け、Buffer D18
を50～100 µL、モノリス表面の中央に添加する。その後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑮

遠心機からスピンカラムとサンプリング用遠心チューブを注意深く取り出し、スピンカラムを廃棄する。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用-9-≪プロトコール②少量試料からの DNA 抽出方法≫

沈殿物～200 mg を遠心チューブに秤量する①

Buffer A18

300 µL + Proteinase K

20 µL

ボルテックス混和②60℃ 10 分間加温③

Buffer B18④≧10,000×g (11,000 rpm) 5 分間遠心⑤

上清約 450 µL を新しい遠心チューブに移す⑥

エタノール 450 µL 添加、10 回程度強く転倒混和(約 2 分毎に 10 秒間ボルテックス混和）

300 µL

ボルテックス混和注）エタノールを添加後は遠心を行わないこと⑦

溶解混合液全量をスピンカラムにアプライ≧10,000×g (11,000 rpm)

1分間遠心濾液を捨てスピンカラムに再装着⑧

Buffer C18500 µL≧10,000×g 11,000 rpm） 1分間遠心スピンカラムを新しいサンプリング用遠心チューブに装着⑨

Buffer D18

50～100 µL≧10,000×g （11,000 rpm） 1分間遠心溶出DNAを回収※抽出・精製 DNA は－20℃で保存してください。

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用- 10 -

＜詳細プロトコール＞
DNA抽出工程①試料 ～200 mgを1.5 又は 2.0 mL遠心チューブに秤量する。
●

試料が多すぎた場合、スピンカラムの目詰まり、回収量減少、精度低下の可能性があります。目詰まりした場合は、量を減らして検討してください。

②

Buffer A18 300 µLを添加し、Proteinase K（20 mg/mL）を20 µL入れ、攪拌混合（ボルテックス）を行う。

③

60℃で10分間インキュベートを行う。2分間毎に10秒間攪拌混合（ボルテックス）を行う。

④

Buffer B18 300 µL添加し、よく攪拌混合（ボルテックス）を行う。

⑤≧10,000×g (11,000 rpm) 10分間遠心する。
●

上清と沈殿物がうまく分離しない場合は、遠心加速度を上げるか、遠心時間を延ばしてください。

⑥

上清約450 µLを新しい1.5 又は 2.0 mL遠心チューブに移す。

⑦

99.5%エタノールを450 µL添加し、10回程度強く転倒混和する。
●

混和が不充分なときは、タッピング、ピペッティングあるいは転倒混和などでよく混ぜてください。
ライセート完成後は、速やかに抽出操作を行ってください。

●

凝集物が出来た場合、再度遠心することなく、凝集物を含めて、すべてスピンカラムにアプライしてください。

⑧

混合液全量をスピンカラムにアプライ後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。
●

遠心後、液がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。遠心操作で液が完全に通過しない場合は、スピンカラムの蓋を開けて遠心してください。

⑨

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。コレクションチューブ内の廃液を捨て、スピンカラムに再装着する。

⑩

スピンカラムの蓋を開け、Buffer C18を500 µL添加し、≧10,000×g（11,000 rpm）１分間遠心する。
●

遠心後 Buffer C18がスピンカラム内に残っている場合、最高速度で再度遠心操作を行ってください。

●

Buffer C18が残余すると回収率が悪くなる場合がありますので注意してください。また、溶出液に混入すると遺伝子増幅反応を阻害するのでご注意ください。

⑪

遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを注意深く取り出す。廃液の入ったコレクションチューブを廃棄する。

⑫

スピンカラムを新しい1.5 mLサンプリング用遠心チューブに装着後、スピンカラムの蓋を開け、Buffer D18を50～100 µL、モノリス表面の中央に添加する。その後、≧10,000×g（11,000 rpm）1分間遠心する。

⑬

遠心機からスピンカラムとサンプリング用遠心チューブを注意深く取り出し、スピンカラムを廃棄する。

以上で遺伝子組換え(GMO)食品中DNAの抽出は完了です。
注) スピンカラムに添加した溶出Buffer D18は、ほぼ全量が回収されます。
注) 回収したDNAをすぐに使用しない場合は、サンプリング用遠心チューブのキャップをしっかりと閉めた後、−20℃で保存することをお勧めします。
注) 本製品に同封されているBuffer D18は、RNase・DNaseフリー滅菌水に置き換えることが可能です。その場

MonoFas® Food Kit 遺伝子組換え(GMO)検査用- 11 -

合、pHにより回収率が変動するためアンモニア水などでpH 8.5～9.0に調整してご使用ください.

＜使用に関する注意事項＞① 試薬の容量は抽出プロトコールに記載された量を厳守してください。
② コンタミネーションを防ぐために毎回ピペットチップを交換してください。
③ 遠心後、遠心機からスピンカラムとコレクションチューブを取り外す際は、廃液がスピンカラム先端に付着しないよう注意深く取り外してください。付着した場合は軽くスピンダウンを行ってください。
④ 遠心機内の温度が上昇するのを防ぐため、遠心機の連続運転は避けてください。
⑤ 抽出の途中では時間をおかず、操作は速やかに行ってください。
⑥ 感染性のおそれのあるサンプルを使用した場合、廃棄物は感染性産業廃棄物に該当しますので、適切な処理を行ってください。

７．保存及びその他の注意○

室温（15℃ ～ 25℃）で保存してください。

○

酵素 ( Proteinase K ) は室温保管が可能ですが、開封後は冷蔵保管( 2～8℃ )を推奨します。

○

洗浄液には、揮発性の高いエタノールが含まれています。ご使用後は、蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めてください。

○MonoFas® 抽出・精製キットは厳しい品質管理のもとで製造、検査、包装、出荷しておりますが、万一不具合がありましたら弊社までご連絡ください。

○

本製品は口腔内サンプルからの DNA 抽出・精製の目的で製造しております。それ以外の目的での使用および本取扱説明書に基づかない方法では使用しないでください。

○

本試薬キットを使用前に、安全データシート（SDS）の記載内容をご一読ください 。
○

安全データシート（SDS）の（URL http://www.animos.co.jp）よりダウンロードして入手願います。

余った Buffer の廃棄方法は、安全データシート（SDS）に記載された通り廃棄ください。

８．保証期間
〇各種 Buffer の保証期間は未開封、室温保存で購入後 1 年間です。
各種 Buffer が追加で必要な際には、最寄りの支店または営業所までご連絡ください。

ゾルーゲル法によるシリカモノリスは、国立大学法人京都大学 曽我直弘先生、中西和樹先生により開発されました。この技術と、ジーエルサイエンス株式会社が所有する製品商標及び特許のライセンスを受けて、MonoFas® シリーズ製品を株式会社アニモスが開発・製造しています。

お問い合わせ先 ： 株式会社アニモス〒333-0844 埼玉県川口市上青木 3-12-18
TEL：048-606-2892

FAX：048-611-7192

E-mail：monofas@animos.co.jp

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