Res. Org. Geochem. 26, 139­145 (2010)

技術論文

不飽和脂肪酸の極性カラムを用いた GC/MS 解析 *内藤裕一 ** ****・山口保彦 *** ****・力石嘉人 **** ・大河内直彦 ****
,

,a

,

（2010 年 4 月 23 日受付，2010 年 7 月 30 日受理）と誘導体化（メチルエステル化）の後，GC/MS や
GC/FID による同定・定量や，GC/IRMS による安

1. はじめに飽和脂肪酸は，細胞膜の主要な構成成分であり，またエネルギー源として蓄積および代謝される（松久ら，2002）。不飽和脂肪酸は飽和脂肪酸に比べて融点が低いため，生物が生育環境（温度）に適応した細胞膜を作るうえで重要であり，不飽

定同位体比の測定を行うというものである（例えば，Fang et al., 1993; Meier-Augenstein, 2002; Fang etal., 2006）。しかし，一般的に GC の分離カラムをして用いられている無極性（例えば，Agilent 社製の HP-1）あるいは微極性（例えば，Agilent 社製の和の数（不飽和度）や位置（不飽和位）の生物特異HP-5）の GC カラムでは，クロマトグラム上で個々

性は，生物の化学分類法などにも利用される。従の飽和・不飽和脂肪酸の分離がよくない。これは属栄養生物（動物）においては，自ら生合成でき

無極性カラムでは，主に各化合物の蒸気圧の差をる非必須脂肪酸（例えば，パルミチン酸）と，合利用して分離するので，似たような構造を持つ不成できない必須脂肪酸（例えば，リノール酸，リ飽和脂肪酸では，分離能を稼ぎにくいという本質

ノレン酸）が存在し，栄養状態や病理疾患などと的な欠点があるためである。実際，力石・奈良岡

密接な関係がある（松久ら，2002）。有機地球化学においても，生物試料や土壌，堆積物などといっ（2005）が報告しているように，海藻に含まれる脂肪酸では，とくに炭素数 18 の不飽和脂肪酸についた環境試料中の飽和・不飽和脂肪酸の分布や同位て，不飽和度や不飽和位の異なるものが非常に近体比情報は古くから注目され，有用なバイオマー
カーの 1 つとして多くの研究で用いられてきたグラムから個々の脂肪酸を正確に同定，定量する（例えば，Evershed et al., 2007；新村・沢田 , 2010）。

ことは難しい場合が多く，また，個々の脂肪酸の安飽和・不飽和脂肪酸の一般的な分析法は，試

定同位体比を得ることはほとんど不可能である。

い時間で溶出する。そのため，このようなクロマト

料から脂質成分を有機溶媒で抽出し，シリカゲル

力石・奈良岡（2005）は，海藻に含まれる飽和・クロマトグラフィー等を用いた脂肪酸成分の分画

不飽和脂肪酸を硝酸銀シリカゲルカラムクロマト*GC/MS analysis of polyunsaturated fatty acids: Rapid separation and structural assignment with polar GC column**東京大学大学院新領域創成科学研究科先端生命科学専攻，〒 277-8562 千葉県柏市柏の葉 5-1-5 生命棟 502
Yuichi I. Naito: Department of Integrated Biosciences, Graduate School of Frontier Sciences, University of Tokyo,
Kashiwanoha 5-1-5, Kashiwa, Chiba 277-8562, Japan*** 東京大学大気海洋研究所，〒 277-8564 千葉県柏市柏の葉 5-1-5
		Yasuhiko T. Yamaguchi: Atmosphere and Ocean Research Institute, The University of Tokyo, 5-1-5 Kashiwanoha, Kashiwa,
Chiba 277-8564, Japan****独立行政法人海洋研究開発機構海洋・極限環境生物圏領域，〒 237-0061 神奈川県横須賀市夏島町 2-15
Yoshito Chikaraishi and Naohiko Ohkouchi: Institute of Biogeosciences, Japan Agency for Marine-Earth Science andTechnology, 2-15 Natsushima-cho, Yokosuka, 237-0061, JapanaCorresponding author. Yoshito Chikaraishi
e-mail: ychikaraishi@jamstec.go.jp Tel: +81-46-867-9778; Fax: +81-46-867-9775−139−内藤裕一・山口保彦・力石嘉人・大河内直彦

グラフィーにより不飽和度別に分画し，ジメチル
ジスルフィド（dimethyl disulphide：DMDS）誘導体

による超音波抽出で脂質成分を抽出し（15 分× 4回），アルカリ加水分解（0.5 M KOH/MeOH/5wt%

化法とジメチルオキサゾリン（dimethyloxazoline：
DMOX）誘導体化法を用いて，不飽和度・不飽和

H2O で，80℃，2 時間）を行った後，液 - 液抽出

位を決める分析法を報告した。この方法は，従来の研究では同定することが難しかった不飽和度とル化を行った後，シリカゲルクロマトグラフィー
によって A-1 画分（ヘキサン溶出成分：モノカル

不飽和位を正確に決めることができる。また，分ボン酸）と A-2 画分（メタノール溶出成分：ジカ

画後の試料を用いて分子レベルの水素・炭素安定

ルボン酸およびヒドロキシカルボン酸）に分画した。本稿では，この A-1 画分を脂肪酸メチルエス

同位体比分析が行える点で画期的であった（Chikaraishi et al., 2004）。しかし，硝酸銀シリカゲルカ

で酸性画分を分離した。酸性画分はメチルエステ

テル（FAMEs）として扱う。

ラムクロマトグラフィーによる不飽和度ごとの分
画は，熟練した技術（再現性良く，常に高い回収

不飽和位置の同定のための誘導体化（DMOX誘導体化）率でクロマトグラフィーを行う技術）を必要とす

本稿では，不飽和位置の同定のための誘導体化

るうえ，硝酸銀シリカゲルを均一に再現性良く作法として，DMOX 化を用いた。1 ml アンプルに
FAMEs の溶液を入れ，窒素ガス気流化で濃縮・製することが難しいという問題点があった。
この問題の解決策として，硝酸銀シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーによる分画を行う代わり

乾固し，75℃に温めておいた 2-アミノ-2-メチル
プロパノールを適量（約 200-500 μl）添加した。アに，GC の分離カラムに極性カラム（例えば，Agilent 社 製 の DB-23，HP-88，HP-INNOWAX，HP-

ンプル内の空気を窒素ガスに置換したのち封管し，180℃で 24 時間反応させた。75℃まで自然にFFAP など）を用いる方法がある。極性カラムでの分離は，各化合物の蒸気圧に加え，カラム固定

冷却した後，約 75℃の蒸留水を 2 ml 加えた。反応液を 10ml 遠沈管に移し，1-2 ml の n-ヘキサン相への親和性の差を用いて行われる。例えば，同/ ジクロロメタン（2/3, v/v）で 4-5 回抽出した。得

炭素数の脂肪酸は，飽和，1 不飽和，2 不飽和，3られた抽出溶媒に硫酸マグネシウムを加えて脱水

不飽和，4 不飽和と不飽和度が小さいものから溶し，ガラスウールを詰めたパスツールピペットで出し，これらの分離・同定が容易になる。本稿では，無極性カラムと極性カラムによる分析結果を濾過した。窒素ガス気流下で乾固させた後，適量（約 200-500 μl）のジクロロメタンに再度溶かして比較しながら，極性カラムによる迅速かつ簡易な

DMOX 誘導体溶液を得た。

飽和・不飽和脂肪酸の同定法を紹介する。

なお，DMOX 誘導体化の方法やマススペクト
ル は， す で に，Fay and Richli（1991），Luthria andSprecher（1993），Christie（1998）， 力 石・ 奈 良 岡

2.不飽和脂肪酸の表記（2005）などに詳細に記載されているので，それらをリノール酸を例として，脂肪酸の名称と簡略式を Fig. 1 に示す。脂肪酸は慣用名で呼ばれることが多く，また様々な簡略式で表記される。本稿では，一般的な表記に習い，簡略式 a で表記した。

ω1 ω2 ω3 ω4n-1 n-2 n-3 n-3 ...
18 17 16 15 ...

n or ω terminal

3.試料と分析法
試料として，茨城県沖（北緯 36 度 35.1 分，東経142 度 3.7 分）で捕獲されたキタオットセイ（Cal織を用いた。クロロホルム：メタノール（2:1, v/v）

... 3

2

1

OH

carboxyl terminal

9, 12-Hexadecadienoic acid
Systematic name:
Linoleic acid
Trivial name:
Shorthand designation a: 18:2 (n-6)
b: 18:2 (∆9,12)
c: 18:2 ω6
d: 18:2 (9,12)

試料と脂肪酸の抽出

lorhinus ursinus，2008 年 2 月 7 日捕獲）の筋肉組

O

Fig.1. Systematic name and shorthand designation oflinoleic acid.

−140−
Fig. 1, Naito et al.

不飽和脂肪酸の極性カラムを用いた GC/MS 解析た。オーブンの昇温条件は，HP-5MS については，
40℃で 2 分保持し，120℃まで 30℃ / 分で昇温し，参照して頂きたい。また，不飽和位の同定のための誘導体化には，DMDS 誘導体化（1 不飽和脂肪酸のみに利用可能），ピロリジン（Pyrrolidine）誘導体化，ピコリニルエステル（Picolinyl esters）誘導体化など

120℃から 320℃まで 6℃ / 分で昇温した後，320℃
で 20 分間保持した。また，DB-23 については，
40℃で 2 分保持し，120℃まで 30℃ / 分で昇温し，120℃から 250℃まで 3℃ / 分で昇温した後，250℃もある。詳しくは，Andersson and Holman（1974），
Kawaguchi et al.（1983），Leonhardt and DeVilbiss（1985），Nichols et al.（1986），Christie et al.（1987），
Scribe et al.（1988）などを参照して頂きたい。

で 12 分間保持した。
4. 不飽和度と不飽和位の同定

GC/MS分析
GC/MS 分析は，Agilent 社製，HP 6890N GC/5973A

Fig. 2 にオットセイの脂肪酸の TIC（total ion chro-

MSD を用いた。導入法は PTV 法を用い，50℃でmatogram）を，Table 1にその同定レベルを示す。オッ

0.2 分間保持し，350℃まで 600℃ / 分で昇温した

トセイには，主な飽和脂肪酸として，14:0，16:0，18:0

後，350℃で 10 分間保持した。分析カラムは，従が含まれており，主な不飽和脂肪酸として，16:1（n7），18:1（n-7），18:1（n-9），18:1（n-13），18:2（n-6），20:1

来法で使われている無極性（微極性）カラムの代，20:1（n-11），20:4（n-6），22:1（n-11），22:1（n-13）
表 と し て，HP-5MS（30 m 長 さ，0.25 mm 内 径， （n-9）
0.25 μm 膜厚）を，極性カラムの代表として DB-23などが含まれていた。
脂肪酸の質量数と不飽和度は FAMEs の保持時
（30 m 長さ，0.25 mm 内径，0.25 μm 膜厚）使用しFAMEs (DB-23)

2

6
9

4
1

15

DMOX (DB-23)

7

5

3

11

20

25

2

TIC intensity

9
7

5

3

15

30

6

4

1

12 + 13

10
8

13

10
8

20

11

25

12

30

FAMEs (HP-5MS)
2

5+6
4

9+10
12+13

7

1

3

11

8

15

20

DMOX (HP-5MS)
2

5+6+8
4

9+10

7

1

?

3

12+13

11

15

20

25

Retention time

Fig.2. TIC of FAMEs and DMOX derivatives of northern fur seal (C. ursinus) on HP5MS and DB-23 columns. Numbers correspond to fatty acids listed in Table 1.
Fig. 2, Naito et al.

−141−

内藤裕一・山口保彦・力石嘉人・大河内直彦

Table1. Identification level of saturated and unsaturated fatty acids extracted from northern fur seal (C. ursinus).
Peak
No.* Systematic nameTrivial name

Shorthanddesignation

Retention time (min)FAMEs(DB-23)

Identification level**

DMOX
FAMEs
DMOX
(DB-23) (HP-5MS) (HP-5MS)

This
study

Reference paper

1

Tetradecanoic acid

Myristic acid

14:0

12.07

15.17

11.02

13.94

4

Chikaraishi and Naraoka (2005)

2

Hexadecanoic acid

Palmitic acid

16:0

16.32

19.59

14.09

16.94

4

Chikaraishi and Naraoka (2005)

3

9-Hexadecenoic acid

Palmitoleic acid

16:1 (n-7)

16.86

20.08

13.71

16.57

2

Chikaraishi and Naraoka (2005)4

Octadecanoic acid

Stearic acid

18:0

20.81

23.98

17.05

19.75

4

Chikaraishi and Naraoka (2005)

55-Octadecenoic acid18:1 (n-13)

21.11

24.10

-

-

1

6

9-Octadecenoic acid18:1 (n-9)

21.26

24.32

16.65

19.35

4

Chikaraishi and Naraoka (2005)

7

11-Octadecenoic acid18:1 (n-7)

21.42

24.53

16.72

19.44

4

Chikaraishi and Naraoka (2005)

8

9,12-Octadecadienoic acid18:2 (n-6)

22.27

25.29

16.52

-

4

Chikaraishi and Naraoka (2005)

99-Eicosenoic acid

20:1 (n-11)

25.56

28.38

19.42

21.94

1

10

11-Eicosenoic acid

Gondoic acid

20:1 (n-9)

25.67

28.53

19.54

22.00

2

Fay and Richli (1991)

11

5,8,11,14-Eicosatetraenoic acidArachidonic acid

20:4 (n-6)

27.59

30.20

18.81

21.36

2

Fay and Richli (1991)

12

9-Docosenoic acid

22:1 (n-13)

-

32.24

22.10

-

1

13

11-Docosenoic acid

22:1 (n-11)

-

32.35

22.04

24.42

1

Oleic acid
Linoleic acid

* Peak numbers refer to chromatograms in Fig. 2 and Fig. 3.
** 1. Interpretation of mass spectral data.

		
		
		

2. Coincedence in mass spectral data in a reference.
3. Coincedence in mass spectral and retention time data in a reference.
4. Coincedence in mass spectrum and GC retention time with that of authentic standard.

間とマススペクトルの親イオンから容易に求められるが，それらの情報（FAMEs の保持時間とマ
ススペクトル）から不飽和位の情報を得ることは困難である（Figs. 3a, 3c, 3e）。一方，DMOX 誘導
体のマススペクトルは，不飽和位に対応した特徴
的なイオンフラグメントを示すことから，不飽和位の決定が容易である（Figs. 3b, 3d, 3f）。一般的に，DMOX 誘導体のマススペクトルは，親イオン（M）に対してまず 15 ダルトン小さいイオンフラグメント（M-15）が得られ，その後，不飽和位まで14 ダルトン間隔でイオンフラグメントが得られる。

の後は，m/z 224 → 210（n-8 位），210 → 196（n-9位）と再び 14 ダルトンの間隔を示す。
また，20:4（n-6）の場合（Fig. 3f），親イオンが m/z
357 であり，14 ダルトンの間隔で，m/z 342 → 328（n-1 位），328 → 314（n-2 位），314 → 300（n-3 位），
300 → 286（n-4 位），286 → 272（n-5 位）のイオン
フラグメントを持つ。そして n-6 位（Δ14 位）で m/z
272 → 260 と 12 ダルトンの間隔を示し，1 つ目の不飽和位が n-6 位である。そして，m/z 260 → 246（n-7位），246 → 232（n-8 位）と 14 ダルトンの間隔のあ不飽和位では，12 ダルトンの間隔でイオンフラグと，再び n-9 位（Δ11 位）で m/z 232 → 220 と 12 ダルトンの間隔を示し，2 つ目の不飽和位が n-9 位でメントが得られる。ただし不飽和位がカルボキシ
ル基末端に近くなると，13 ダルトンの間隔が 1 つある。さらに，m/z 220 → 206（n-10 位），206 → 192（n-11 位）と 14 ダルトンの間隔のあと，n-12 位（Δ8先の炭素位での 2 重結合の位置を示す場合もある

位）で m/z 192 → 180 と 12 ダルトンの間隔を示し，
3 つ目の不飽和位が n-12 位である。最後に，m/z（力石・奈良岡，2005）。
例えば，18:1（n-7）の場合（Fig. 3b），親イオン

180 → 166（n-13 位）と 14 ダルトンの間隔のあと，が m/z 335 であり，14 ダルトンの間隔で，m/z 320→ 306（n-1 位），306 → 292（n-2 位），292 → 278

n-14 位で m/z 166 → 153 と 13 ダルトンの間隔が示（n-3 位），278 → 264（n-4 位），264 → 250（n-5 位），
250 → 236（n-6 位）のイオンフラグメントを持つ。
そして n-7 位（Δ11 位）で m/z 236 → 224 と 12 ダル
トンの間隔を示し，不飽和位が n-7 位である。そされ，4 つ目の不飽和位が n-15（Δ5 位）位である。
Fig. 2 に示すように，FAMEs と DMOX 誘導体は，保持時間は異なるが，基本的にほとんど同じ順序で溶出するため，両者のクロマトグラムを比較することで，FAMEs の個々の脂肪酸の同定も可能になる。

−142−

不飽和脂肪酸の極性カラムを用いた GC/MS 解析a) No.7, 18:1(n-7)-FAME
O

55

O
69

41

83

97
264
110
123

40

60

80

100

138

120

222

180
152

166

140

193

160

180

235

207
200

220

b) No.7, 18:1(n-7)-DMOX

296

246

240

260

280

236

N

113

O

126

224

12

55
41

Intensity

69

40

98

83

60

80

140

100

120

210

168
182

154

140

160

196

180

320

220

335
292

250

224

200

278

264

＊ ＊
236
240

260

280

306
300

320

c) No.6, 18:1(n-9)-FAME
O

55

O
69
41

83

97

264

110

222

123

180

137

152

166

40

60

80

100

120

140

160

180

200

296

235

207

193

220

246

240

d) No.6, 18:1(n-9)-DMOX

260

280

208

126

N

113

O

196
182

12

55
41
69

40

60

83
80

140

98

168
154

100

120

140

160

236

222

200

220

180

250
278

＊
＊
196
208

320

292

335
306

264
240

260

280

300

m/z

320

Fig. 3 (1/2), Naito et al.

e) No.11, 20:4(n-6)-FAME
79

O
91

O

67

41

105
55

119

Intensity

133

40

60

80

100

120

150

140

161

180

160

180

203

217

200

f) No.11, 20:4(n-6)-DMOX

272

118

233

220

313

264

247
240

260

232

280

192

300

166

N
O

260

220

180

13
98

41

67

55

＊

126

＊
166

79
136

40

60

80

100

120

140

12

12

153

160

＊ ＊
180

180

192

206

＊
220

＊

12
246

200

220

＊ ＊
260

232

240

260

272

300
314

286
280

300

320

328

342

357

340

m/z

Fig.3. Mass spectra of a) 18:1(n-7)-FAME, b) 18:1(n-7)-DMOX, c) 18:1(n-9)-FAME,d) 18:1(n-9)-DMOX, e) 20:4(n-6)-FAME, and f) 20:4(n-6)-DMOX derivatives.

−143−内藤裕一・山口保彦・力石嘉人・大河内直彦

5.GC カラムの比較（少なくとも GC/MS で同定ができるレベルで）分離
することができる。実際に，HP-5 では，炭素数 18 の従来の研究で用いられてきた無極性や微極性のGC カラムでは，個々の飽和・不飽和脂肪酸をきれ

不飽和脂肪酸のうち，18:1（n-9）と 18:3（n-3），18:1（n-9）と 18:1（n-13）はほとんど同じ時間で溶出し，いに（ベースラインで）分離することが難しい。そのため，無極性や微極性の GC カラムを用いて飽

両者のピークは完全に重なってしまうが（Figs. 4c,
4d），DB-23 では，これらの不飽和脂肪酸のピークを和・不飽和脂肪酸の正確な同定を行うためには，力石・奈良岡（2005）で報告されているように，GC/MS

全て完全に分離することができる（Figs. 4a, 4b）。このように，極性カラムを用いることで，従来の硝酸での測定前に硝酸銀シリカゲルカラムクロマトグラ

銀シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いた分フィーを用いて，飽和・不飽和脂肪酸をあらかじめ析法に比べて，非常に迅速かつ簡単に飽和・不飽和

不飽和度別に分画するなどの必要がある。
一方，DB-23 などの極性カラムを用いると，飽和・脂肪酸を同定することが可能である。

不飽和脂肪酸の混合溶液をそのまま測定しても，ク

6. 今後の課題

ロマトグラム上で個々の脂肪酸をある程度きれいに

一般的に，極性カラムの使用温度限界は無極性
または微極性カラムに比べて著しく低い（例えば，
本稿で用いた DB-23 は 250℃であり，HP-5MS はa) DB-23 standard
18:0

325℃である）。これは，極性カラムでは高分子の脂肪酸（炭素数 26 以上）の分析ができないことを

18:2(n-6)
18:3(n-6)

18:1(n-9)

18:3(n-3)意味する。すなわち，炭素数 26 以上の脂肪酸をほとんど含まない植物プランクトンやバクテリア，
一般的な捕食動物を試料とする場合には問題になb) DB-23 sample

らないが，炭素数 26 以上の脂肪酸が含まれている

18:1

陸上植物や土壌，堆積物などの環境試料を分析す

n-9

18:0
n-13

n-7

18:2(n-6)る場合には注意が必要である（例えば，GC の導入
口の温度条件を使用する GC カラムの限界温度と同じにして，高分子化合物が GC カラム内に導入されないようにする。あるいは，高温でも使用すTIC intensityc) HP-5MS standard
18:2(n-6)

18:1(n-9)+
18:3(n-3)

18:0

ることのできる中・極性カラムを検討する，など）。
また，このような極性カラムを使って GC/IRMS で
安定同位体比を測定する場合には，その再現性や18:3(n-6)安定性を確かめる必要がある。特に，DOMX 誘導体で同位体比を測定する場合には，誘導体化時のd) HP-5MS sample

同位体分別の有無も調べる必要がある。
18:1

n-9 + n-13

18:2(n-6)

18:0

謝

n-7

Retention time辞キタオットセイ現生標本は，清田雅史博士・
米崎史郎博士（水産総合研究センター）からご提供頂きました。越智大介氏（水産総合研究セン

Fig.4. TIC of C18 fatty acids: a) standards on DB-23,Fig. 4, Naitoet al.・香山薫氏（伊豆・三津シーパラダイス）にター）b) northern fur seal (C. ursinus) on DB 23, c)
は，標本の採取において大変お世話になりましstandards on HP-5MS, and d) northern fur seal (C.
ursinus) on HP-5MS columns.
た。海洋研究開発機構の大河内グループ，米田穣

−144−

不飽和脂肪酸の極性カラムを用いた GC/MS 解析

准教授・横山祐典准教授（東京大学）には，脂肪酸

C. (2006) Fractionation of carbon isotopes in biosyn-の分析に関して助言・アドバイスをいただきましthesis of fatty acids by a piezophilic bacterium Mori-

た。奈良岡浩教授（九州大学）
・沢田健講師（北海tella japonica strain DSK1. Geochim. Cosmochim.

道大学）には，本稿の査読を通して貴重なご助言を頂きました。記して厚く感謝申し上げます。本Acta 70, 1753-1760.
Fay L. and Richli U. (1991) Location of double bonds

稿の内容は，日本学術振興会特別研究員研究奨励

in polyunsaturated fatty acids by gas chromatogra-

費（内藤・山口）により実施した研究成果の一部を

phy-mass spectrometry after 4,4-dimethyloxazoline

取り纏めたものである。

derivatization. J. Chromatogr. 541, 89-98.
Kawaguchi A., Kobayashi Y. Ogawa Y. and Okuda S.
(1983) Determination of double bond positions in

引用文献

polyunsaturated fatty acids by mass spectrometry.
Chem. Pharm. Bull. 31, 3228-3232.

Andersson B. A. and Holman R. T. (1974) Pyrrolidides
for the mass spectrometric determination of the po-

Leonhardt B. A. and DeVilbiss E. D. (1985) Separa-sition of the double bond in monounsaturated fattytion and double-bond determination on nanogram

acids. Lipids 9, 185-190.

quantities of aliphatic monounsaturated alcohols,
aldehydes and carboxylic acid methyl esters. J.

Chikaraishi Y., Suzuki Y. and Naraoka H. (2004) Hy-

Chromatogr. 322, 484-490.

drogen isotopic fractionations during desaturationand elongation associated with polyunsaturated fatty

Luthria D. L. and Sprecher H. (1993) 2-Alkenyl-4,4-acid biosynthesis in marine macroalge. Phytochem-

dimethyloxazolines as derivatives for the structural

istry 65, 2293-2300.

elucidation of isomeric unsaturated fatty acids. Lip-

力石嘉人・奈良岡 浩（2005）海藻中の不飽和脂肪
酸の GC/MS による解析：不飽和度別分画と不飽和位置の同定． Res. Org. Geochem. 20, 23-30.
Christie W. W., Brechany E. Y. and Holman R. T. (1987)

ids 28, 561-564.
松久俊博・小池一男・木島孝夫・羽野芳生・掘田清・増田和夫・宮澤三雄・安川憲（2002）脂Mass spectra of the picolinyl esters of isomeric質．資源天然物化学，共立出版，69-84.
Meier-Augenstein W. (2002) Stable isotope analysis ofmono- and dienoic fatty acids. Lipids 22, 224-228.

fatty acids by gas chromatography-isotope ratio mass
spectrometry. Anal. Chim. Acta 465, 63-79.

Christie W. W. (1998) Gas chromatography-mass
spectrometry methods for structural analysis of fatty

Nichols P. D., Guckert J. B. and White D. C. (1986)

acids. Lipids 33, 343-353.

Determination of monounsaturated fatty acid

Evershed R. P., Bull I. D., Corr L. T., Crossman Z. M.,

double-bond position and geometry for microbial

van Dongen B. E., Evans C. J., Jim S., Mottram H.

monocultures and complex consortia by capillaryR., Mukherjee A. J. and Pancost R. D. (2007) Com-

GC-MS of their dimethyl disulphide adducts. J. Mi-

pound-specific stable isotope analysis in ecology andcrobiol. Meth. 5, 49-55.

paleoecology, In: Michener R. and Lajtha K. (Eds.),

Scribe P., Guezennec J., Dagaut J., Pepe C. andStable Isotopes in Ecology and Environmental Sci-

Saliot A. (1988) Identification of the position

ence, Blackwell Publishing, pp. 480-540.

and the stereochemistry of the double bond inFang J., Abrajano T. A., Comet P. A., Brooks J. M.,

monounsaturated fatty acid methyl esters by gas

Sassem R. and MacDonald I. R. (1993) Gulf ofchromatography/mass spectrometry of dimethyl
disulfide derivatives. Anal. Chem. 60, 928-931.

Mexico hydrocarbon seep communities XI. Carbon
isotopic fractionation during fatty acid biosynthesis

新村龍也・沢田健（2010）海生哺乳類の骨化石のof seep organisms and its implication for chemosyn-

脂肪酸・ステロイドの組成分布と炭素同位体比

thetic processes. Chem. Geol. 109, 271-279.

〜古食性・続成変化の評価への応用．地球化学
44, 17-29.

Fang J., Uhle M., Billmark K., Bartlett D. H. and Kato
−145−