ISSN 1347-4804

October 2002

Vol.70 No.4

Dioxin ELISA Kit wako
ダイオキシン類分析用
抗ダイオキシンモノクローナル抗体による ELISA 法を用いた生体中のダイオキシン類を測定するスクリーニング用キットです。マイクロプレートリーダーを用いて迅速・簡便かつ低価格に、多検体同時分析が可能です。

特 長① 高感度分析が可能（1 〜 100pg/assay）② 標準品として毒性のない 2,7,8-TCDA を使用③ 低価格（2,400 円／検体 n ＝ 2 で実施し、41 検体
測定した場合）④ 多検体同時分析可能（96 穴マイクロプレート使用）⑤ 簡便（2 日間で測定終了）

299-59001

96 回用

98,000 円

詳しくは、p.9 をご参照下さい。

Wako

目 次
化学大家━━━━━━━━━━━━━━━━「マリー・キュリー」
島尾 永康 ………2
総 説 ━━━━━━━━━━━━━━━━━「酵素免疫測定法（ELISA）によるダイオキシンの簡易測定」奥山 光伸 ………6
「P-glycoprotein と multidrug resistance-associated protein 1 の特異的阻害剤 agosterol
A」
秋山 伸一、青木 俊二 ……10
「転写シークエンス技術を利用した解読困難な配列へのアプローチ」 石川 友一 ……14シリーズ━━━━━━━━━━━━━━━━＜ Talking of LAL ＞「第 49 話 透析療法とエンドトキシン」
土谷 正和 ……17
＜脳科学一口メモ＞「小胞体ストレスの神経変性疾患への関与」
金子 雅幸、野村 靖幸 ……18
テクニカルレポート━━━━━━━━━━━「ふ っ素 化 シリコン 修 飾 シリカ ゲ ル カラ ム
Fluofix®のユニークな分離特性」
和田 忠昭 ……16
新製品フラッシュ━━━━━━━━━━━━
ダイオキシン ELISA キットワコー …………1,9
アゴステロール A …………………………13
サイトカイン、ケモカイン …………………20
イデベノン、T-43362、Ras 阻害ペプチド、ゲラ
ニルゲラニルピロりん酸三アンモニウム溶液、
ファネシルピロりん酸三アンモニウム溶液、花粉 ……………………………………………22㈱ホクドー 膵島培養キット…………………23
BFP/GFP ベクター …………………………24
I.F. LAB 社 ビルディングブロック、ライブラリー
有機化合物 ……………………………………25
ワコーパック ® Pre-Clean4.0、固相抽出カラム………………………………………………26㈱エルメックス アクアテストⅡ ATB-50 …27
ダイオキシン類分析用ジエチレングリコール、
環境分析用溶媒 ……………………………28
試作品案内━━━━━━━━━━━━━━━
エンドトキシン吸着剤くっつくりんTM …………9
お知らせ━━━━━━━━━━━━━━━━
第 18 回 Wako ワークショップ開催のご案内………………………………………………19
遺伝子工学用試薬カタログ・マニュアル発行、
日本分子生物学会セミナー開催のご案内………………………………………………25

1
1

392

マリー・キュリー（1867.11.7 − 1934.7.4）
科学史家

ピエール・キュリーとの出会い
ピエールの祖父も父も医師だった。パ
リ・コミューンのとき 15 歳と 12 歳だった
兄ジャックとピエールは、バリケードの上で負傷した人々を手当てする父を手伝った。3 歳半違いの兄弟はかなり性格が異なって おり、ジャックは 活 発で 行 動 的だったがピエールは内省的で、新しい間
題にぶつかると、満足的な説明がつくまで執拗にとりついていた。これでは普通2

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

永康校であるエコール・ノルマル（高等師範学校）を出ていなかったことと、今ひとつは人と競争しようという気持ちが全くない性格だったからである（マリー・キュ
リー著、『ピエール・キュリー伝』）。競争者として勝ち抜いてきたマリーとは正反対の性格だった。研究も急いで発表しなければならない競争の激しい分野は好まず、研究者が少数でゆっくり研究できる分野を好んだ（図 2）。

ロシアの支配下の祖国からパリへ
マリー・キュリー
（結婚前の名前はマリア・スクロドフスカ）
は、1867 年 11 月 7 日、中学校の物理と数学の教師の父と、女学校の校長だった母の 5 番目の末子として、ワルシャワで生まれた。当時ポーランド
はロシア領だったので、ロシア語を強制された。マリーは早い時期からロシア語、
フランス語、ドイツ語、英語を読めるようになった。17 歳から自活し、パリ留学の費用を貯めるため、田舎の裕福な家庭に3 年半住み込みの家庭教師をした。ワルシャワヘ戻ると、祖国の独立を念願して秘密に組織された移動大学の講義で科学に目覚めた。ブンゼンの許で研究した人から化学の手ほどきを受けた。
24 歳のとき久しく夢見ていたパリに出た。当時のフランスでは大学に学ぶ女性は少なく、パリ大学（ソルボンヌともいう）の約 9000 人の学生のうち、女性約 250 人
はほとんどが外国人だった。4 年間の大学生活を屋根裏部屋の貧しい下宿で、ルームメートなしの孤独な生活を選び、食費も切り詰めた。1893 年、マリーは物理学の学士試験に 1 番で合格し、翌年、数学の学士試験に 2 番で合格した。義兄はこれをマリーの生涯の英雄時代と称賛した。
物理学の学士になったマリーはリップ
マン教授の研究室で、鋼の磁性の研究をした。しかし実験室が手狭で装置や試料を置く場 所 が なく困っていたので、ポーランド人の物理学教授に相談したところ、紹介されたのがピエール・キュリー
だった。

島尾

図 1. マリー・キュリー（46 歳）。

の学校では良い成績を上げられないが、学問的な資質はあると見抜いた父は、ピエールを小学校も中学高校も行かせず
家庭で教えた。森や草原や小川につれていって動物や植物の観察をし、実験の面白さを教えた。14 歳から良い数学教師をつけたので、数学とくに幾何学は非常に進んだ。結果として独自の英才教育を施したことになり、16 歳で大学入学資格試験に合格し、18 歳でソルボンヌの理学士になり、理学部の助手に任命された。
21 歳で、ピエールはジャックと共同で
ピエゾ電気 を発見した。この発見から水晶板ピエゾ電気計という、微弱電気量を測定できる装置をつくった。23 歳でピエールは市立物理化学学校の実験主任になり、ソルボンヌの教授になるまで 22
年間、研究生活のほとんどをこの学校で過ごした。結晶の対称性の優れた論文を発表し、キュリー型精密天秤を完成し、キュリーの法則とよばれる常磁性体における温度と磁性の関係の研究で博士号を得た。
若くして優れた業績をあげたが、フランスでは認められず、かれを認めたのはつねに外国の学界だった。実力にふさわしい地位を得られなかったのは、一つは大学教授になるために絶対有利な名門

マリーはピエールの人柄に惹かれ、科学上の業績を尊敬していた。ピエールの方は、愛すべき女性であると同時に、仕事の伴侶にもなりうる女性を見出したことを喜び、最初の出会いからわずか数週間後に結婚を申し込んだ。フランスの学界のアウトサイダーであり、パリ・コミューンの支持者の息子だったピエールと、外国からきたマリーはいずれも、生涯、よそ者の意識をもっていた。1895 年、ピエールが博士号を取得した年、2 人は結婚した。
ピエールは 36 歳、マリーは 28 歳だった。
2 人は区役所での式だけで済まし、白いドレスも、指輪も、宗教的儀式も、宴会もなかった。親戚から贈られた新品の 2 台の自転車で新婚旅行に出かけた（図 3）。

図 2. ピエール・キュリー（1859 − 1906）。微妙な実験装置を組み立てるとき、芸術家のような喜びを味わった。

を出すことが分かった。1898 年 4 月、このような性質を 放射能 と命名した。2 種類のウラン鉱石がウランそのものより強い放射能があることから、それらの鉱石の一つ、
ピッチブレンドにはウランより強い未知の放射性元素があるに違いないと考えた。
そのため分析し、分別結晶を繰り返した。
ピエールはほんの数週間と考えて、自分の結晶の成長の研究を中断して、マリーに協力した。研究を始めて半年後、ピッチブレンドから抽出されたビスマスにウランの 400 倍の強さの新元素が含まれていることを発見し、祖国ポーランドに因んで「ポロニウム」と命名して発表した（7 月）。
さらに半年後、ピッチブレンドから抽出されたバリウムにウランの 900 倍の強さの新図 3. 自転車で新婚旅行へ。当時、女性はまだ自転車に乗らなかった。マリーはこの点でも元素を発見し、これをラジウムと命名した先覚者だった。
（12 月）。
新元素を科学界に承認させるためには、それを分離し、原子量を決定しなけ
ラジウムの発見ればならない。ラジウムの分離のほうがポ1896 年、W．K．レントゲンがⅩ線を発
ロニウムより易しいことが分かり、ラジウムドビエルに集中した。物理化学学校の A．
見して科学界の大きな注目を惹いた。しヌも協力した。仕事の役割分担では、新かしその数ヶ月後、アンリ・ベックレルが光しい放射性物質を探すという面白い仕事を通さない黒い紙に包んだウラン化合物
はドビエルヌが分担し、かれは 1899 年にが一種の放射線を出すこと、またそれはアクチニウムを発見した。ピエールは放まわりの空気を帯電させることを発見した
射能の物理学的測定、マリーは化学的処が、科学者たちはほとんどこれに注目しな理を分担し、結晶作業を数千回おこなっかった。博士論文のテーマを探していたた。オーストリア政府の好意で提供された
マリーはこの現象を選んだ。空気を帯電さ約 7トンのピッチブレンドを処理して数ミリせる点に注目し、まず正確な測定が必要
グラムのラジウムを抽出するのに 4 年かだと考えて、イオン化された空気の中をかった。膨大な量のピッチブレンドからの通る微弱電流を、ピエールの作った高感ラジウム抽出という肉体労働に敢然と挑
度の電気計とピエゾ電気計で測定したんだのはマリーであった（イレーヌ・キュ（図 4）。これは生涯の方法となった。ウラリー、「わが母マリー・キュリーの思い出」）。
ン化合物の他にトリウム化合物も放射線
この化学的処理は、ガラス屋根で雨漏りもする廃屋でおこなわれた。しかし科学アカデ
ミーから 2 万フランの研究費も出たから、全く研究費がなかったわけでもない。1902 年、純粋の塩化ラジウム 0.1 デシグラ
ムを抽出した。濃縮された精製物はひとりでに発光し、とくに夜はこの世のものとは思えぬ
神秘的な光を放った。ラジウムの新しいスペクトルも確認された。原子量を 225 と決定（1907
年に 226.45 と再決定）した。放射能はウランの 500 万倍だっ
図 4. マリー・キュリーと放射能測定装置。

た。こうして放射能科学という新しい分野が開かれた。この間マリーの体重は約9 キロ減り、ラジウムを素手で扱ったために指先に生涯治らぬ火傷を負った。ピ
エールは放射線が皮膚に火傷を生じるという研究をした。マリーはそれを知っていたはずであるが、なぜか防御処置を講じなかった。ピエールはラジウムの放射 線に医 療 効 果があることを指 摘し、キュリー療法（あるいはラジウム療法）の開拓者になった。これはとくにガンに効果を発揮したので、自分たちの発見が人類の幸福に役立つという貴重な確信をもつことができた。このみすぼらしい廃屋で研究に熱中した数年こそ 2 人の生涯の最も幸福な時代だった（マリー・キュリー、「自伝」）。
ラザフォードとソディは、放射性元素はA 線と B 線を放出して、原子は崩壊し、元素は別の元素に変換するという大胆な理論で放射能を説明した（1902）。経験主
義的なキュリーたちは、容易にはこれを容認しようとはしなかったが、最終的には認め、ラジウムはウランからの生成物と考えるようになった。マリーはポロニウムが捕捉しにくいのは、その半減期が 140 日と短いからであることも突き止めた。1900 年、
マリーはセーヴルの女子高等師範学校の講師になった。女高師で初の女性の教師であった。物理実験などやったことのない
女高師の学生に、マリーは初めて実験をさせて学生に喜ばれ、パリの実験室にもつれてきた。教え子のあるものは生涯、マリーと親しい関係を保った。実験科学者であり教師であるマリーは二児の母でもあった。1897 年にイレーヌが、1904 年にエーヴが生まれた。義父ウジェーヌ・キュリー
が幼子の面倒を見た。
1903 年 6 月、マリーは「放射性物質の研究」で理学博士になった。フランスで初の女性の博士だった。12 月、キュリー
夫妻とベックレルに、「放射能に関する共同研究」に対してノーベル物理学賞が与えられた。マリーは衰弱しており、2 人がストックホルムに行ったのは 1905 年 6 月
で、ピエールが受賞講演をした。マリーはノーベル賞を受賞した最初の女性となった。彼女の次に女性のノーベル賞受賞者となったのはマリーの娘のイレーヌ
で、1935 年の化学賞である。ノーベル賞を受賞するとパリ大学もほってはおけず、

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

3

1904 年、ピエールのために理学部に新しい物理学講座を新設した。1905 年、科学アカデミー会員にもなった。ようやくふ
さわしい地位についたかと思うと突然の死が襲った。
ピエールの交通事故死

1906 年 4 月、ピエールは雨の日、パリ
市内で道路を横断するとき滑って、馬車に轢かれ、頭蓋骨は粉砕された。11 年
間つねに一緒に暮らし、ほとんど別れてすごしたことのないピエールの突然の死でマリーは人が変わった。快活さを失い、冷たい、無表情な人間になった。政府は未亡人年金を贈ろうとしたが、マリーは断った。
パリ大学はマリーをピエールの後任とするという画期的な決断を下し、1908 年、正式にパリ大学教授となった。1906 年
11 月 5 日のソルボンヌ初の女性の講義には、大衆が殺到して階段教室は超満員となったが、マリーの弱々しい声の、地味な講義は大衆を失望させた。
マリーは公立学校の教育を嫌い、ピエールの父がピエールにしたように、マリーも娘のイレーヌはピエールに似て、じっくり考える性質と見て取り、イレーヌ
が 10 歳のとき、同僚の大学教授たちを誘い、かれらの子供たち 10 人に独自の英才教育をおこなった。マリーは子供の体育を重視し、授業は 1 日 1 科目に限った。古典教育は必要なしと考え、科学に重点を置き、フランス語と現代外国語は必要だとした。大抵は家庭の居間でおこなったが、ときにはマリーが物理化学学
校の実験室で化学を教え、ジャン・ペラ
ンがソルボンヌの実験室で物理を教えた。ポール・ランジュヴァンが数学、コレージュ・ド・フランスの教授アリス・シヤ
バンヌは 英 語、ドイツ語、地 理、パス
トゥール研究所のアンリ・ムトンは博物学を教えた。なんとも贅沢な学校だった。
これは 2 年間続いた。イレーヌはこの授業のお蔭で楽々と大学入学資格試験に合格した、とマリーはいう。
栄誉とスキャンダルが同時にいたる

1910 年末、マリーは友人たちに薦められて、科学アカデミー会員に立候補した。
マリーにとって堪えがたかったのは、現会員に儀礼的な戸別訪問をしなければ

4

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

ならないという慣習である。マリーは 2 週のマリーの同情はいつのまにか恋愛感情
間で 58 人を訪問した。マリーの立候補に発展していった。マリー 44 歳、ランは、アカデミーに女性を入れるべきか否
ジュヴァン 39 歳である。1911 年 10 月、かという問題をめぐ って、大きな セン
ヨーロッパとイギリスの一流の物理学者
21 名が招かれて第一回ソルヴェー会議
セーションをまきおこし、女権反対論者
がブリュッセルでおこなわれ、キュリーもや宗教関係者は猛烈な反対運動を展開
ランジュヴァンも参加した。そのころパリした。マリー・キュリーは純粋のフランスの新聞は一斉に、「マダム・キュリーとラ
人でない、ユダヤ系である（事実無根
ンジュヴァン氏の情事」と書きたてた。家だった）、反宗教的である。したがってアには投石され、外国女は国へ帰れと罵らカデミー会員にふさわしくないというのれた。この事件はマスコミ側とそれに反である。ちなみに対立候補はカトリック大駁する側との間に、ランジュヴァン自身
学の物理学教授だった。研究も全部ピを含めて、5 つの決闘を引き起こした。2
エールがやったのであって、マリーはか人の間柄がどのようなものだったか、第
れにくっついてノーベル賞をもらったに
三者には分からない。面白い事に、はるすぎないともいわれた。2 票の差で落選した（1911 年 1 月）。マリーは二度と科学か後になって、マリーの孫娘エレーヌとアカデミーに立候補しなかった。
ランジュヴァンの孫ミシェルが結婚してさらにマリーを深く傷つけることが起いる。
こった。ピエールの教え子、ランジュヴァ
このような折も折、スウェーデンから
ンは永年キュリー家に親しく出入りして「ラジウム元素とポロニウム元素の発見いた。かれはエコール・ノルマルに首席による化学への貢献」に対してノーベルで入学し、ケンブリッジ大学にも留学し、化学賞を授与するという電報がマリーに37 歳でソルボンヌの教授になった（図 5）。 届いた。これは実質的に同じ研究に二度学者としては迅速に出世したが、家庭生目のノーベル賞が単独で与えられたとし
活はもめごとが絶えず、破綻しかけていて、論義を呼んできた。たしかに 1903
た。ランジュヴァンもその妻も職人の子
年以後、根本的に新しい発展はなかった。
であるが、教育の点で両者の間に大きな
マリーはラジウム原器を作製して度量衡差が生じていた。彼女は学者の世界を全基準局に寄託した。計量の単位名「キュく理解せず、子供が 4 人もいるのに産業リー」を提案して採択された。
『放射能概界からの高給の地位を断ったランジュ論』を書いた。しかし際立って重要なものである。そヴァンを責め立てた。ランジュヴァンへは金属ラジウムの単離（1910）
れはその他の放射性物質にない物的証
拠を示す唯一の元素だった。放射能科
学の全体系はラジウム単離の上に構築されているといってよかった。したがってこれに対して与えられたとするのが妥当であろう。
あるノーベル賞委員は、スキャンダルが無実であることが証明されるまで、受賞を断ったらどうかと言ってきた。これに対してマリーは、栄誉は私の科学に対して与えられるのであり、私の個人的行動
とかかわりはない。賞は お受けするときっぱりと応答した。マリーは病身をおして出席し、ノーベル賞講演では、いつもより頻繁と一人称を使った。
「ラジウム単離は私独りでおこなった。」「私は何度も原子量を独りで確定した」などなど。そこにはピエ ー ルの助 手 的 存 在 でしかな
図 5. ポール・ランジュヴァン（1872 − 1946）。
フ ラ ン ス の 指 導 的 物 理 学 者 と な る。マ
かったと見られてきたことへの強い反発
リーの現代物理学の理解はかれとの交遊が表れている。
に負うところが大きい。

女性記者、マリー・メロニーが、
マスコミ嫌いのマリーの心を巧みにとらえた。彼女は、アメリカには 50 グラムのラジウムがあるのにキュリーの研究所には 1 グ
ラムしかなく、それも医療用に使われており、キュリー自身は不自由していることや、1 グラムのラジウムが 10 万ドルすることを知った。そこでアメリカの政財界に顔の広いメロニーは、キュ
図 6. レントゲン車を運転するマリー・キュリー（50 歳）。
リー個人に 1 グラムのラジウム
戦後、マリーは『放射能学と戦争』（1921）を出版した。
を寄贈する運動を企画し、その見返りにキュリー自身のアメリカ訪問と自伝の原稿を求めた。キュリーはランジュ
第一次大戦中の活躍
ヴァン事件を報道しないという条件をつけてこれを承諾した。マスコミによって痛め
外国女 マリーにとって、大戦はフランスへの忠誠を示す絶好の機会となった。 つけられたキュリーは、マスコミによって圧倒的な名声をも勝ち取った。ホワイトハ
当時民間にはレントゲン装置もいくらかウスでアメリカ大統領からラジウム 1 グラ
使われていたが、軍には全くなかった。
ムを受け取ったほか、7000ドルの研究費キュリーも医療器具としてのレントゲンを寄贈された。
装置は使ったことがなかったが、いった
このアメリカ旅行はキュリーの研究所にん軍の医療施設の欠陥を見出すと、これは大きな収穫をもたらし、キュリー自身もこそ自分の使命と思い、非常なエネル
これ以後、大研究機関を管理運営する長
ギーで、赤十字放射線治療班を組織し、老科学者に成長していった。ラジウム研
寄付を募り、車を集めてレントゲン車に究所のキュリー館はどの研究所よりも多く改造し、運転免許をとって自ら運転もしの女性を受け入れた（図 7）。1931 年には、
（図 6）、前線に赴いて負傷者の外科手術
研究者 37 人のうち 12 人が女性だった。
を助けた。17 歳の娘イレーヌを助手としその中の一人、マルグリット・ペレーは、たが、彼女はまもなく独立して活躍した。
87 番元素フランシウムを発見し、マリーが20 台のレントゲン車と 200 箇所に設けた
レントゲン施設で撮られた写真は 2 年間
で 110 万枚に上った。Ⅹ線の発見以来、Ⅹ線がこれほど実用に使われたことはな
かった。イレーヌは戦時中のこの貢献によって政府から表彰されたが、マリーはされなかった。ランジュヴァン事件はまだ忘れられていなかった。
ラジウム研究所の創設
生涯まともな実験室をもてなかったピ
エールの夢を、マリーはその死後になって 初 め て 実 現し た。パリ大 学と パ ス
トゥール研究所の双方と関連する、2 つの別館からなるラジウム研究所を、ピ
エール・キュリー通りに設立したのである。
放射能に関する物理学・化学部門はマリーを所長とし、放射能と医学・生物学に関する部門は医学者ルゴーを所長とし（図 1）。
て、1914 年 7 月末に完成した
1920 年、アメリカの有力な女性雑誌の科学アカデミーに落選して 50 年後に、女性として初の科学アカデミー会員に選ばれた。キュリーの研究所には外国人も多かった。ある年には 14 カ国から 18 人がきていた。キュリーの研究所は放射能と核物理学の分野で、直接間接にフランスのあらゆる研究の中心となっていった。長い間放射線を浴びたので、年齢よりも早く白内障になり、黒板に書いた自分の文字さ
え読めなくなっていた。
キュリー夫妻はラジウム精製に関して何の特許も取らず、その手順を全部公表した。将来のラジウムの経済価値を見通せなかったのかも知れない。もし権利を留保していれば、立派な研究所はわけもな
く建てられたであろう。しかしマリーは強調する。自分たちは研究から物質的な利益を引き出そうとは思わなかった。無私
無欲で一定の目的にむかう指向が強くて、自分の利益などかまっていられない夢想
家も人類には必要なのだ、と（「自伝」）。
1934 年 7 月 4 日、悪性貧血のため亡くなった。67 歳だった。
パンテオン合祀1995 年、2 人の遺体はフランスの偉人を合祀する廟であるパンテオンに祀られた。2 人のよそ者は、ついにフランスの国
民的英雄となった。ピエールは次の言葉をもらしている、「ぼくたちの選んだ人生
は、やはりつらいな。」「贅沢と富を狂気のように追い求めているわれわれの社会では科学の価値なぞ理解されるはずがない」と。そしてノーベル賞講演では次のように述べている。
「犯罪人の手に入れば、ラジウムはきわめて危険な物となりかねない。いったい人間は自然の秘密を知って善用できるほど成熟しているのだろうか。このようなことを知ることは人間に有害なのではあるまいかと、いちおう疑ってみることができます。
」〔主要参考文献〕

図 7. マリー（54 歳）とイレーヌ（24 歳）。
イレーヌ・ジョリオ・キュリー（1897 −
1956）は、1935 年度のノーベル化学賞を受賞。

マリー・キュリー、木村彰一訳、「自伝」；イレーヌ・
キュリー、内山敏訳、「わが母マリー・キュリーの思い出」、『世界ノンフィクション全集 8』、筑摩書房、
1960.：マリー・キュリー、渡辺慧訳、『ピエール・キュ：エーヴ・キュリー、川口篤
リー伝』、白水社、1969．
他訳、『キュリー夫人伝』、白水社、1969.：ウジェ
ニー・コットン、杉捷夫訳、『キュリー家の人々』、岩波：R. リード、木村絹子釈、『キュリー夫人
新書、1962．
：F．ジルー、山口の素顔』、上下、共立出版、1975．
：S. クイ
昌子訳、『マリー・キュリー』、新潮社、1981．
ン、田中京子訳、『マリー・キュリー』、みすず書房、
1999.：N.Pasachoff, Marie Curie, Oxford
University Press, 1996．：L.K. James, ed., Nobel

Laureates in Chemistry, 1901-1992, American
Chemical Society, 1993.

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）5酵素免疫測定法（ELISA）
によるダイオキシンの簡易測定
財団法人

食品薬品安全センター

秦野研究所

奥山

光伸

クリーンアップ操作を必要とするため、びスクリーニング法としての簡易測定

その測定費用は 著しく高価なものと法 1,2）には、ダイオキシンに対する特異"Our Stolen Future" が 米 国 で 出 版
された 1996 年以来、内分泌撹乱化なっている。さらに、わが国では平成抗体を用いるイムノアッセイとダイオ

12 年にダイオキシン類対策特別措置

キシンの結合レセプター（AhR）を用学物質による環境や食物の汚染とそ法が施行されたことにより、測定対象

いる測定系があるが、前者には抗原・れによるヒトの健康影響に対する社会の種類と試料数は益々増加することが抗体反応を妨害する脂溶性物質を除

1．はじめに的関心が急速に高まってきた。特にダ予測されるため、安価で簡便・迅速か去する操作が重要であり、後者にはイオキシン類は、その毒性作用が極微つ高感度なダイオキシン測定法の開AhR にアゴニスト・アンタゴニストとし量で発現することが動物実験で示され発が強く求められている。

て作用するダイオキシン類以外の化たことから、ヒトや生態系に及ぼす毒

ダイオキシン類のモニタリングおよ合物による干渉を避けるための前処理性影響が懸念されている。ダイオキシ
ン類は有機塩素化合物の生産、紙・パルプの脱色や廃棄物の焼却過程など

1.0

で非意図的に生成される化合物であり、その毒性発現機序や感受性の動物種差など不明な点も少なくないが、ヒトの曝露状況や環境・食物など様々な試

0.8

料の汚染実態を正確に把握することはTEF

これらの問題を解決する上で極めて重

交差率

要である。
ダイオキシン類の構造異性体には

0.6

ポ リ塩 化 ジ ベ ン ゾ-p- ジ オ キ シ ン（PCDDs）と 135 種のポリ塩化ジベン
ゾフラン（PCDFs）がある。しかし、各同族体および異性体の毒性は著しく異TEF/交差率

その置換塩素数や位置により 75 種の0.4

なるた め、最も毒 性 の 強い 2,3,7,8-

対象とされている。毒性評価は、これ
らの実測値に TEF を乗じた値の総和、毒性等価量（TEQ）を用いて行われている。
従来、ダイオキシンの測定には高分解能ガスクロマトグラフィー／マスス

0.2

0.0
2
1, ,3,7
1, 2,3 ,82, ,7 T
3 , C
1, ,4, 8-P DD
2, 7, e3 8 C
1, ,6,7 -Hx DD
2,
1, 3, ,8-H CD
2, 7,
x D
1, 3,4 8,9 CD
2, ,6 -H D
3, ,7 x4, ,8 CD
6, -H
7, p D
8 C
2, ,9- DD
3 O
1, ,7, C
2, 8- DD3T
2, ,7,8 CD
3,FP
1, 4,7 eC2,
3, ,8-P DF
1, 4,
2, 7, eC
3 8
D
1, ,6, -H F
2, 7, xC
3 8
2, ,7, -H DF
x
1, 3,4 8,9- CD
2, ,6 H F
3, ,7 xC
1, 4,6 ,8- D
2, ,7 H F
x
3
1, ,4, ,8-H CD
2, 7,
p3, 8, C F
4, 9- D
6,
H F
7, pC
8,
D
9
1, -O F2,C2, 3,4 DF
3, -T
3, 7,8 CD
3',4 -TB D,4',5 rDD-P
eC
B

TCDD に対する相対毒性、毒性等価係数（TEF）が採用され、その中で毒性 の 強 い 7 種 の PCDDs と 10 種 のPCDFs およびダイオキシンと同様の生物作用を示す 12 種の共平面性ポリ
塩化ビフェニール（Co-PCBs）が測定

ダイオキシン類

ペクトロメトリー（HRGC/HRMS）が用いられているが、いずれの試料についても長時間にわたる多段階で煩雑な

6

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

図 1. TEF とモノクローナル抗体 D9-36 の交差反応性
2,3,7,8-TCDD の交差率を１とした

操作が必要である。
ダイオキシン類のイムノアッセイがリーニング法としての ELISA には、そヘキサン層をダ イオキシン吸着剤をの測定値が TEQ と相関することが要充填したガラスカラムに負荷する。ヘ

最 初に報 告され たのは 1979 年であ求されるため、前記の同族体に親和性

キサンでカラムを洗浄後、ベンゼン

り 3）、その後も連綿と研究が継続されの高いモノクローナル抗体（D9-36）を（またはフルオロベンゼン）／ヘキサンてきたが、生体試料に適用可能な測用いて測定系（二次抗体固相・競合（1:3） 混 液 で 溶 出 す る。溶 出 液 に

定 感 度を 有 する酵 素 免 疫 測 定 法法）を構築した。

Triton X-100 を加えて有機溶媒を乾（ELISA）が開発されるまでに約 20 年

原理：一定量の抗ダイオキシン抗体を要した 4）。我々は厚生労働科学研究への結合を、一定量の酵素標識ハプの補助により、母乳など生体試料中ダテン抗原と不定量の抗原（標準品また操作法：抗原（標準品または試料）
溶

イオキシンの ELISA の開発研究を行は試料）とにより競合させた後、ウェル液に抗ダイオキシン抗体を加えて室い、毒性の強いダイオキシン類に親和に固定化した二次抗体で抗ダイオキ

温で 30 分間静置した後にペルオキシ性の高いモノクローナル抗体（図 1）を

シン抗体を吸着させ、抗体に結合した

ダーゼ標識ハプテン抗原を添加し、二新たに作製して ELISA を構築し 5）、さ酵素活性を測定する。競合法であるた次 抗 体 を コ ー テ ィン グ し た 96 穴

らに操作性を簡素化して汎用性の高い

め、酵素活性は抗原量に逆比例する。

ELISA プレートのウェルに反応混液をキットを完成させた。



2．ダイオキシンの ELISA固した後、残渣を緩衝液で溶解して

ELISA 用試料とする（図 2）。

前処理法：試料にエタノールおよび

注入して冷蔵下で一晩反応させる。

水酸化カリウム（最終濃度：1 mol/L）を

ウェルを洗浄し、基質溶液を加えて室加え、室温で 2 時間撹拌して脂質を加温で 30 分間反応後、停止液を添加し水分解する。n- ヘキサンでダイオキて酵素活性を止める。各ウェルの吸光

通常、生体および環境中のダイオキ

シン類を抽出し、濃硫酸でヘキサン層度をマイクロプレートリーダーにより測シン TEQ に占める割合の高い同族体を洗浄する。ヘキサンを蒸留乾固した

定し（図 3）、検量線から試料中のダイは 2,3,7,8-TCDD、1,2,3,7,8-PeCDD

後、さらに濃硫酸で脂質を完全に分解

オキシン（2,3,7,8-TCDD）量を算出す

および 2,3,4,7,8-PeCDF である。ダイする。再びヘキサンで抽出し、 5% 炭る。

オキシン類のモニタリングおよびスク酸水素ナトリウムおよび水で洗浄した

加水分解

脂質を10倍容のエタノールに懸濁（牛乳に等量のエタノールを添加）

検量線：抗ダイオキシン抗体との親標準品または試料：100[L＋最終濃度1mol/LになるようにKOHを添加（室温で2時間以上撹拌）抽出エタノールと同量の水を添加

n-ヘキサンでダイオキシン類を抽出

洗浄

濃硫酸でヘキサン層を洗浄

抗ダイオキシン抗体：100[L＋（室温で30分間放置）
HRP-標準ハプテン抗原：50[L
混合液：100[L/well

ヘキサンを乾固し、濃硫酸を再添加（室温で1時間以上放置）

再抽出

固相抽出

ELISAプレート

5% NaHCO3水溶液および水でヘキサン層を洗浄（冷蔵で一晩放置）
PBSでwellを洗浄

ヘキサン層をダイオキシン吸着カラムに負荷

基質溶液：100[Ln-ヘキサンで再抽出（室温で30分間放置）

n-ヘキサンでカラムを洗浄
n-ヘキサン/ベンゼン（3：1）で溶出反応停止液：100[L

溶出液にTriton X-100を添加し、有機溶媒層を乾固
残渣を緩衝液に溶解

吸光度測定

ELISA

図 2. ELISA 用試料の調整法

図 3. ELISA の操作手順

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

7

30
1.5

r=0.9043
1.0

20
ELISA(pgTCDD)ELISA signal(Abs. 450nm)

y=0.4182x+3.5687

0.5

10

0.0
0.1

1

10

100

1000

2,3,7,8-TCDD(pg/well)

0
図 4.

0

2,3,7,8-TCDD の標準曲線
4- パラメーター回帰式
Y = (A-D)/(1+(X/C)^B)+D
A=1.376, B=1.072, C=9.833, D=0.136
r = 0.999

40

60

図 5. GC/MS および ELISA による脂質中ダイオキシン測定値の相関性

和性が 2,3,7,8-TCDD と同等で、毒性完全に除去した後に固相抽出で精製処理法が開発されなかったためと考えのほとんど ない 代 理 標 準 品を 使 用する必要がある。さらに、ガラス器具・られる。

しているため、本 ELISA による測定値

ピペットチップなど使用する用具や実

ダ イオキシン吸着剤を用いる精製は 2,3,7,8-TCDD 等 量 と な る。本験室・実験台など試験環境に由来する法と組み合わせた本 ELISA は、安価

ELISA の測定範囲は 2,3,7,8-TCDD 1〜 100 pg/assay で あり、4- パラメー
ター回帰式に精度よく適合する（図 4）。
GC/MS との相関性：牛乳またはバ
ターに PCDD/Fs を添加して、前記のダ イオキシン類あるいは非特異的なで簡便・迅速なダイオキシン類のモニ

ELISA の妨害物質を避けるために、

タリングおよびスクリーニング法とな器具や作業環境の洗浄・清掃には細心ることが期待される。

の注意を要する。使用する器具類はア
セトンやヘキサンで洗浄し、操作は汚処 理 法 に 従 って 精 製し た 試 料 を染のない実験室や簡易ドラフト内で行

ELISA および HRGC/HRMS により測定した。母乳中 TEQ の大部分を占める 3 種 の PCDD/Fs（2,3,7,8-TCDD、
1,2,3,7,8-PeCDD および 2,3,4,7,8-Pe
CDF）の本精製法による回収率はほぼ満足できるものであり、また、ELISA
測定値は HRGC/HRMS による TEQ）
5）。
と良好な相関性を示した 6（図うことが要求される。

留意点：抗原・抗体反応を応用する

820

HRGC/HRMS(pgTEQ)

3．おわりにダイオキシン類の分析には、その同族体・異性体の多さと試料中含量の少 な さから、抽 出・精 製 の 煩 雑 な

GC/MS による測定法が用いられてきた。イムノアッセイはこれを補完する

ELISA は親水性の反応系であるため、簡易測定法として期待され、20 年以ダイオキシン類のような水に難溶性で上にわたって研究が継続されてきた試験器具に吸着しやすく、かつ超微量が、これまで市販されたものは高濃度（ppt レベル）の化合物を測定するには、試料に適用が限られていた。ダイオキ

界面活性剤や吸着防止剤の使用が必

シンのイムノアッセイが困難な理由は、須で、その種類や濃度を適切に設定

その試料中含量の低さとダイオキシン

することが重要となる。また、前処理に類本来の物理化学的特性に起因する

おいてはアルカリや濃硫酸で脂質類をところが大きく、簡便で収率の良い前

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）〔参考文献〕
1）奥山光伸、松木容彦、中澤裕之：食品
衛生学雑誌 第 42 巻（4） J233~238,
20012）Behnisch P.A., et al.：Environment
International 27, 413-439, 2001
3）Albro P.W., et al.：Toxicol. Appl.
Pharmacol. 50, 137~146, 1979
4）Sugawara Y., et al.：Anal. Chem. 70,
1092~1099, 1998
5）Okuyama M., et al.：Organohalogen
Compounds, 54, 77~80, 2001
6）Okuyama M., et al.：Organohalogen
Compounds, 58, 365 〜 368, 2002

ダイオキシン ELISA キットワコー
ダイオキシン類を分析する手法とし〔キット内容〕〔原理図〕て、高分解能 GC/MS 法が採用されて二次抗体固定化プレート 96 回用× 1 枚

います。その一方で、より簡便に多検陽性コントロール体を測定したいというニーズがあり、緩衝液 B

簡易分析法の開発検討が進められて

希釈緩衝液

います。

一次抗体

本キットは、抗ダイオキシンモノク
ローナル抗体による ELISA 法を用い

緩衝液 A

2mL 用× 1 本
10mL × 1 本
20mL × 1 本
200FL 用× 1 本
24mL × 1 本

た生体中のダイオキシン類を測定す

ペルオキシダーゼ複合体（凍結乾燥品）
4mL 用× 2 本

るスクリーニング用キットです。マイク

試料溶解液

ロプレートリーダーを用いて、迅速・簡

濃縮洗浄液（× 6）

便かつ低価格に、多検体同時分析が

基質

可能です。

くえん酸緩衝液
停止液
プレートシール
現品説明書

コード No.
299-59001

品
名
Dioxin ELISA Kit wako

ペルオキシダーゼ（POD）とダイオキシンの複合体

クリーンアップ済み検体 またはダイオキシン標準品

一次抗体

未反応の抗体とPOD複合体の反応
結合反応

5mL × 1 本
50mL × 1 本
0.5mL × 1 本
15mL × 1 本
13mL × 1 本
2枚
1部

二次抗体固定化プレートへ添加

反応物をプレートへ固定する
基質

発色

PODに対する基質と反応させ、発色させる。
その後マイクロプレートリーダーにて呈色濃度を測定する。

規 格
ダイオキシン類分析用

容量

希望納入価格（円）98,000

96 回用

エンドトキシン吸着剤
くっつくりんTM
くっつくりんTM は、カブトガニ血球● リガンドの結合は極めて安定してい由来のエンドトキシン結合ペプチドをリますから、リークは無視できます。

ガンドとした、エンドトキシン除去吸着体です。カラム法またはバッチ法により、タンパク質溶液等の試料からエンド
トキシンを除去できます。
〔特長〕● リガンドは、エンドトキシンと特異的に結合しますから、試料の非特異的吸着は、低いレベルに抑えることができます。
● 広い pH 範囲、高塩濃度でも優れた吸着能力を発揮します。
● エンドトキシンの種類を問わず、高い吸着率が得られます。
● 再生が簡単なので、繰返し使用できます。

〔使用方法〕
カラム法 ： くっつくりんTM をカラムに詰め、適当な緩衝液で平衡化したのちに試料を添加し、1 時間あたりにカラム体積量の 1 〜
10 倍量を流して処理します。
バッチ法 ： 試 料 溶 液 に 5 〜 10%（v/v）の くっつくりんTMを加え、1 〜数時間攪拌したのち、処理液を回収します。

〔再生方法〕
カラム法の場合にはカラム体積の約10 倍量、バッチ法の場合には 10 〜 20
倍量のアルカリ溶液（0.1N NaOH 等）
で処理します。
〔エンドトキシン添加・回収除去例〕
試料

エンドトキシン吸着率
（%）

H2O

99.9

0.5mol/l NaCl

99.3

2mol/l NaCl

99.6

0.1% HSA※熱変性させた HSA

79.5

ご希望の方には、有償にて提供できますので、ご照会下さい。
※

くっつくりんTM はマルハ株式会社の登録商標です。

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）9

P-glycoprotein と multidrug resistance-associated protein 1 の特異的阻害剤 agosterol A
秋山
大阪大学大学院・薬学研究科 青木鹿児島大学医学部・腫瘍研

伸一
俊二

められているが、CFTR, TAPs, P-gp,

れるエネルギーを利用して基質を能MRPs, ALDP, SUR など 真 核 生 物 で動的に膜輸送する。アミノ酸、糖、無機

海洋生物由来の化合物は、その特の報告も近年増加しており、それらのイオン、ペプチド、タンパク質、疎水性

はじめに



異な化学構造と生理作用により注目さ担う生理的機能についての研究も精力

有機化合物、グルタチオンおよびグ

れ て い る。海 綿 由 来 の ス テ ロ イド

的に進められている。また、嚢胞性繊

ルクロン酸抱合体を輸送する ABCト

agosterol A は、がんの多剤耐性に関与する P-glycoprotein（P-gp）と multidrug resistance-associated protein 1（MRP1）の 2 種の ABCトランスポー

維症（CFTR）、副腎脳白質ジ ストロ

ランスポーター が、これまでに見出さ

フィー（ALDP）、Dubin-Johnson 症候

れており、基質は多岐にわたる。ABC

群（MRP2）、が ん 多 剤 耐 性（P-gp,
MRP1）など ABCトランスポーターのトランスポーターは、外から基質を取り

ターを特異的に阻害する。ここでは、関係する疾病も数多く報告されており、質を細胞外へ排出するものとがあるが、agosterol A のこれらトランスポーター

臨床的な問題と関係していることから両方向に基質を輸送するものはこれまも注目されている。

でに見つかっていない。ABCトランスに対する阻害作用の詳細について述

ポーターが 1 分子の基質を運ぶのに 1べる。

〜 2 分子の ATP が加水分解されるこ2．ABC トランスポーターの1．ABC トランスポーターとは

込み細胞内に基質を蓄積するものと基とが必要であり、ATP が加水分解され構造と機能ると、ATP 結 合 領 域のコンフォメー

すべての細胞は、外部環境から脂質

ABCトランスポーターは、基本的にションが変化し、
ドメイン間の相互作用

膜によって隔てられているので、栄養によりその変化が膜貫通ドメインのコ

する特定の膜蛋白質を介して行われ4 つの領域からなっている。すなわち、2 つの膜貫通ドメイン（MSD）と 2 つのATP 結合領域（NBD）であり、多くの真核生物の ABCトランスポーターは、
4 つの領域が結合して、1 つのポリペの摂取や老廃物の排泄など、調節された分子の膜透過が細胞の生存に不可欠である。膜輸送は、その基質に対応

ンフォメーションを変化させることで基質が輸送されると考えられているが、その詳細は不明である（Fig. 1）。

ており、数種のファミリーに分類するこ

プチドとして発現している。例外的に、と が 出 来 る。ABC（ATP Binding

後述する MRP1 の様に 3 つの膜貫通ド

Cassette）トランスポータースーパー

メインを有するものや、Taps や BCRP

ファミリーは、これらのファミリーの中での様に 1 つの膜貫通ドメインと 1 つの作用機序も化学構造も異なる数種も最大で、大腸菌からヒトまで広範な

3．ABC トランスポーターとがん多剤耐性ATP 結合領域をもつ蛋白質 2 個が複の抗がん剤に同時に薬剤耐性を獲得

種に存在し、これまでに 100 種類以上合体となって働くハーフタイプトランスした細胞は「多剤耐性がん細胞」と呼の ABCトランスポーターが確認されポーターも存在する。ABCトランス

ばれ、がん化学療法の大きな障害とている。それらの多くは原核生物に認ポーターは、ATP を加水分解して得らなっている。がん細胞が多剤耐性を獲

multidrug resistance-associated protein (MRP1)
P-glycoprotein (P-gp)
1

outsidesugar chainssugar chainssugar chainsoutside

H 2N
1531

COOH

inside
MSD0

NBD1

COOH
1280

NBD2

Fig. 1. Topology of P-glycoprotein and MRP1

10

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

inside

1

MSD2

MSD1
L0

H2N

得するメカニズムはいくつか知られているが、その一つとして、がん細胞が4．がん多剤耐性克服物質

5．Agosterol A の多剤耐性克服作用 7）

抗がん剤を細胞外に排出する一種のCa 拮抗薬 verapamil が P-gp の関与

Agosterol A は、三重県英虞湾で採ポンプ機構を有する膜蛋白質を過剰する耐性を克服出来ることが報告され集した Spongia 属の海綿から単離構造

発現し、細胞内の抗がん剤濃度を低くて以来 3）、数多くの P-gp に対する耐性決定された、分子内に 3 個のアセチル保つことによって耐性を獲得するとい克服物質（P-gp の基質輸送に対する基と 2 個の水酸基を有する高度に酸化う機構が注目されている。このポンプ阻害剤）が報告されている。それらのされたステロイド化合物である 8）（Fig.

機構を担う膜蛋白質として ABCトラン

多くは、P-gp の基質結合部位に競合

2）。

スポータースーパーファミリーに属す的に結合してその輸送を阻害するもの

まず、P-gp を過剰発現する多剤耐2）

る P-gp や MRP1 といった膜蛋白質と考えられているが、構造的にはまっ性ヒト咽頭上皮がん細胞 KB-C2 株おが見出されている。これらの膜蛋白質

たく関連性がなく、基質特異性の低い

よ び MRP1 を 過 剰 発 現 す る KB-

は正常組織でも発現しており、生理的CV60 株の 2 種類の多剤耐性がん細胞を用い 9）、agosterol A の多剤耐性克服
作用について詳細に検討した。Fig. 3Aの発現が上昇する例も、急性白血病、

P-gp の性質を反映しているとも言える。
一方、MRP1 に対する耐性克服物質
は、P-gp に比較するとかなり少なく、
P-gp に対する耐性克服物質のほとん
どは、MRP1 の関与する耐性を克服出来ない。ピリジン誘導体 PAK-104P 4）や leukotriene D4（LTD4）受容体拮抗薬 とし て 開 発 さ れ た MK571 5） が、
MRP1 の 関 与 する耐 性を 克 服 出 来

乳がん、神経芽細胞腫、リンパ腫などる 代 表 的 薬 物 と い え る。ま た、

1）にはホルモンなどの分泌や有毒物質の排泄に関わっていると考えられている。一方、これら膜蛋白質を発現する組織由来の腫瘍は、多剤耐性になることが多く、悪性化の過程でもその発現が保たれていることを示している。また、化学療法後に薬剤排出膜蛋白質で認められる。このように、多くの腫瘍が多剤耐性化し、化学療法において大きな問題になっている。

glutathione（GSH）生合成阻害剤である buthionine sulfoximine（BSO）も細胞内 GSH 濃度を低下させることにより、耐性克服作用を示す 6）。

100

A

80
60

40
20
0

H

HO

H

H

AcO
AcO

H

OAc

C33H52O8=576.76
Fig. 2. Chemical structure of agosterol A.

growth inhibition (%)

growth inhibition (%)

100

OH

B

80
60

40
20
0

0.001

0.01

0.1

colchicine (Fg/mL)

1

10

0.001

0.01

0.1

1

10

vincristine (Fg/mL)

Fig. 3. Reversal of MDR to colchicine in KB-C2 cells（A）and to vincristine in KB-CV60 cells（B）by agosterol A. Sensitivity ofeach cells was measured in the absence or presence of various concentrations of agosterol A and verapamil. （□）: KB3-1,（○）: KB-C2（A）or KB-CV60（B）,（■）: KB-C2（A）or KB-CV60（B）+ agosterol A（10 [M）,（●）: KB-C2（A）or
KB-CV60（B）+ agosterol A（3 [M）,（▲）: KB-C2（A）or KB-CV60（B）+ agosterol A（1 [M）,（△）: KB-C2（A）or KBCV60（B）+ verapamil（10[M）. Points represent means（±SE）of triplicate determinations.

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）11

に示 すように、agosterol A

Accumulative ratio ( % )の colchicine に対する生育阻害曲線が親株で非耐性株である KB-3-1 株に近づき、

agosterol A は KB-C2 株 のcolchicine に対 する耐 性を3 FM の濃度で完全に克服できることが明らかになった。

**: P<0.01

**
**

100
80
60
40

100

**: P<0.01

80
70
60
50
40

が で き た（Fig. 3B）。ま た
Fig. 4A.

**

20
) M)
)
60 )
)
CV M F M F M 0 F M 0 F
B
1K
B- 10 F (31(
( il (1K(A.
lAl A ero erol eriv pam
o
t
r
t
a
d
te gosos
c- ver
os
a
ag
eA
ag
d
itr

Effect of agosterol A on accumulationof vincristine in KB-CV60 cells.

20

0

1

-3

で 完 全 に 克 服 す ること

**

30

0

CV60 株 の vincristine 耐 性についても 3 FM の低 濃 度

AG-A = agosterol A

90

20

さらに agosterol A は、KB-

agosterol A は、10 FM の濃度でも今回用いた 3 種の細

**

120

Vincristine content (%)の用 量 依 存 的に KB-C2 株

40

60

80

100 120

Time (min)○KB-CV60▲

KB-CV60 + AG-A (1 F M)□

KB-3-1■KB-CV60 + AG-A (10 F M)△

KB-CV60 + verapamil (10 F M)

Fig. 4B.

Efflux of the accumulated vincristinefrom KB-3-1 cells and KB-CV60 cells.

胞株に対して全く細胞毒性
次に、agosterol A 存在下
tri-での細胞内抗がん剤濃度を測定した。親株で非耐性株

kDaである KB-3-1 株への [3H]-

drug agosterol A deacetyl
verapamil
deriv.
free
FM

21 6

1

10 100 10 100 10 100

vincristine 細胞内蓄積濃度 P-gp
13 2
を 100 % とし、耐性株の細胞内抗がん剤濃度を百分率で 示した。KB-CV60 株 での細胞内 [3H] vincristine 蓄
積濃度は 親株の約 40 % ま

78

45.7

[3H]DNP-SG uptake in KB-CV60 vesicles (%)

を示さなかった。

で 低 下 し て い た が、

agosterol A を作用させるとFig. 5. Inhibition of [3H]azidopine photolabeling to
P-gp by agosterol A. Membrane vesicles
prepared from KB-C2 were incubated withが明らかになった（Fig. 4A）。
[3H]azidopine in the presence of agosterolA.
また、細胞外への抗がん剤

用量依存的に上昇すること

120
100
80
60

**

**

40
**
20
0

)
)
)
)
)
)
l
ro M M M M M M
nt 0 µ 0 µ 0 µ 10 µ 0 µ 0 µoc(1 (3 (10 . ( (10 (1v
PA A
ol rol ol A deri SO 104r
B
te ste ter Acs
K
o
o
s
PA
ag ag ago ri-detFig. 6. Effect of agosterol A on ATP-dependent
DNP-SG uptake in inside-out membrane
vesicles prepared from KB-CV60 cells.

排出に対する agosterol A の

12

作 用 を 検 討 し た。細 胞 内 の [3H]-

制 さ れ た。こ れ ら の 結 果 か ら、ており、光照射により容易に P-gp を標

vincristine 残留量は各サンプルにおけ る排 出 時 間 0 分 の 時 の 蓄 積 量を100 % とし、ここから各時間経過後の細胞内 [3H]vincristine 濃度を百分率で 表した（Fig. 4B）。耐 性 株 の KBCV60 株では親株の KB-3-1 株に比べて 速 や かに vincristine が 排 出され、120 分経過後の細胞内 vincristine 残
留 量 は 約 20 % で あ っ た。一 方、
agosterol A（10 FM）存在下では親株と同程度まで vincristine の排出が抑agosterol A は多剤耐性がん細胞に過識 す ること が で き る 10）。そ こ で、剰発現する薬剤排出膜タンパク質に

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

さらに、agosterol A の薬剤排出膜タ

azidopine と P-gp の 結 合 に 対 す る
agosterol A の作用を KB-C2 株から調製した膜小胞を用いて検討した。Fig.
5 に示すように、[3H]azidopine によって標識される 170 kDa の P-gp のバンドが agosterol A の存在下では用量依存的に減少し、agosterol A は P-gp のンパク質との直接相互作用について検

基質結合部位に直接結合していること討した。P-gp の基質として知られるが示唆された。また、KB-CV60 株かazidopine は分子内にアジド基を有しら調 製し た 反 転 膜 小 胞 を 用 い て、

作用し、その薬剤排出を阻害して細胞内抗がん剤濃度を高めることが示唆された。
（Fig. 4 には KB-CV60 株での結果を示しているが、KB-C2 株でも同様の結果を得ている。
）

MRP1 を 介し た 薬 物 輸 送 に 対 す る
agosterol A の作用を調べた。ATP 存
在下で MRP1 の基質 [3H]DNP-SG を添加し、反転膜小胞内に輸送された
3[ H]DNP-SG 量に対 する agosterol Aの 作 用 を 検 討 し た 11）。そ の 結 果、

agosterol A は用量依存的に DNP-SG
輸送量を減少させた（Fig. 6）。これらの結果から、agosterol A は薬剤排出膜
タンパク質に直接作用し、そのポンプ機構を阻害することにより耐性克服作
用を示すことが強く示唆された。



6．終わりに

さらに最 近、agoste rol A を用いて

photoaffinity probe を合 成し、MRP1の GSH 依存的な標識に成功しており、
MRP1 における薬物結合部位や GSHの相互作用部位についての興味深い
知 見を得 ている 12）。Agoste rol A は、

P-gp と MRP1 を低濃度で特異的に阻害する化合物であり、これまでに P-gp
や MRP1 の阻害剤として知られている化合物とはまったく異なる構造を有している。天然物から活性化合物をスク
リーニングすることで、既存の化合物の構造にとらわれない特異な構造を有する活性物質が得られることは非常に興味深く、これからもバイオプローブとして有用な天然活性物質の発見が望まれる。
〔参考文献〕
1）Gerlach, J. H.; Endicott, J. A.;
Juranka, P. F.; Henderson, G.; Sarangi,F.; Deuchars, K. L.; and Ling, V.
Nature 1986, 324, 485-489.
2）Cole, S. P. C.; Bhardwaj, G.; Gerlach,J. H.; Mackie, J. E.; Grant, C. E.;
Almquist, K. C.; Stewart, A. J.; Kurz,
E. U.; Duncan, A. M. V.; and Deeley,
R. G. Science 1992, 258, 1650-1654.
3）Tsuruo, T.; Ishida, H.; Tsukagoshi, S.;
and Sakurai, Y. Cancer Res., 1981,
41, 1967-1972.
4）Sumizawa, T.; Chen, Z-S.; Chuman,Y.; Seto, K.; Furukawa, T.; Haraguchi,
M.; Tani, A.; Shudo, N.; and Akiyama,
S. Mol. Pharmacol., 1997, 51, 399405.
5）Gekeler, V.; Ise, W.; Sanders, K. H.;
Ulrich, W-R.; and Beck, J. Biochem.
Biophys. Res. Commun., 1995, 208,345-352.
6）Manzano, R. G.; Wright, K. A.;
Twentyman, P. R. Clin. Cancer Res.
1996, 2, 1321-1326.
7）a）Aoki, S.; Chen, Z-S.; Higashiyama,K.; Setiawan, A.; Akiyama S.; andKobayashi, M. Jpn. J. Cancer Res.,
2001, 92, 886-895.
b）Chen, Z-S.; Aoki, S.; Komatsu, M.;
Ueda, K.; Sumizawa, T.; Furukawa,
T.; Okumura, H.; Ren, X-Q.; Belinsky,
M. G.; Lee, K.; Kruh, G. D.;
Kobayashi, M.; and Akiyama, S. Int.
J. Cancer, 2001, 93, 107-113.
8）a）Aoki, S.; Yoshioka, Y.; Miyamoto,Y.; Higuchi, K.; Setiawan, A.;
Murakami, N.; Chen, Z-S.; Sumizawa,
T.; Akiyama, S.; and Kobayashi, M.
Tetrahedron Lett., 1998, 39, 63036306.
b）Aoki, S.; Setiawan, A.; Yoshioka,
Y.; Higuchi, K.; Fudetani, R.; Chen, ZS.; Sumizawa, T.; Akiyama, S.; andKobayashi, M. Tetrahedron, 1999, 55,
13965-13972.
9）a）Akiyama, S.; Fojo, A.; Hanover, J.
A.; Pastan, I.; and Gottesman, M. M.
Somat. Cell. Mol. Genet., 1985, 11,
117-126.
b）Nagayama, S.; Chen, Z-S.; Kitazono, M.; Takebayashi, Y.; Niwa, K.;
Yamada, K.; Tani, A.; Haraguchi, M.;
Sumizawa, T.; Furukawa, T.; Aikou,
T.; and Akiyama, S. Cancer Lett.
1998, 130, 175-182.
10）Safa, A. R.; Glover, C. J.; Sewell, J.
L.; Meyers, M. B.; Biedler, J. L.; andFelsted, R. L. J. Biol. Chem. 1987,
262, 7884-7891.
11）Chu, X-Y.; Kato, Y.; and Sugiyama, Y.
Cancer Res. 1997, 57, 1934-1938.
12）Ren, X-Q.; Furukawa, T.; Aoki, S.;
Nakajima, T.; Sumizawa, T.; Haraguchi, M.; Kobayashi, M.; andAkiyama, S. J. Biol. Chem., 2001,
276, 23197-23206.

ATP Binding Cassette（ABC）トランスポーターの特異的阻害剤
Agosterol A
生化学用
三重県英虞湾に生息する Spongia

多剤耐性がん細胞上の薬物排出膜タ

起源：海綿（Spongia sp.）属の海綿由来のステロイド化合物で、ンパク質に作用して薬剤排出を阻害

形

状：白色粉末

2 種 の ABCトラン ス ポ ー タ ー（Pglycoprotein、multidrug resistanceassociated protein1）を特異的に阻害することから、がんの多剤耐性克服物

することが解明されました。その結果、質として注目されています。
016-19511

100Fg

30,000 円

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）13

転写シークエンス技術を利用した解読困難な配列へのアプローチ
和光純薬工業株式会社

ゲノム研究所石川友一

広範なゲノム領域や cDNA の塩基
リボヌクレオチドおよびその誘導体を造を通過する事ができずに、シークエ
配列解析が進む中、2001 年 2 月には基質材料として伸長鎖反応が進行す
ンス解析におけるシグナルの著しい低ヒト・ゲノムの概要配列が決定されたとる際に、蛍光標識が行われる事で塩基下が起こります。このような配列を我々いう報告（Nature、Science 誌）がなさ
配列決定が可能となります。図 1 では
は難解読配列と称しています。
れました。このようにヒトゲノムの解読
転写シークエンスの方法論のモデル
本報告は、筆者等のグループおよがほぼ完了したとされたのを機に、あを従来技術と比較しました。ここで用び理化学研究所との共同研究により開らゆる生物種でのゲノム解析プロジェ
いるリボヌクレオチド誘導体には蛍光発した RNA 転写反応による新規シー
クエンス技術「転写シークエンス技術」
クトが加速している状況にあります。そ色素を結合させており、また RNA ポリ
メラーゼによる伸長鎖への取り込みにを弊社で独自に改良し、従来技術が苦の DNA 塩基配列を決定する手段としては、サンガー法とよばれるシークエ
有利な立体構造を形成しています。
手とする問題を解決すべく研究を進めRNA ポリメラーゼには、遺伝子工学
ンシング技術が一般的に使用され、分てきた成果です。従来技術とは視点的な改変が加えられ、シークエンス反子生物学研究における重要な基礎技が異なり、DNA の複製反応ではなくRNA 鎖伸長反応（すなわち RNA 転写
応において、より適応した性質を有し術の 1 つとなっています。ヒト・ゲノム
解析プロジェクトにおいても、塩基配反応）を利用する事で、安定した構造ています。反応系構築の段階では、そ列の構成因子となっているアデニンである二本鎖 DNA をそのままの状態の精度と読取り鎖長の向上を目指すた
で鋳型サンプルとして利用する事が（A）、グアニン（G）、シトシン（C）、チめの種々詳細な検討を行いました。開ミン（T）を各々個別の蛍光色素（4 色）可 能となりま す。RNA 鎖 合 成 酵 素
発の経過を振り返りますと、A、G、C、T を均一にシグナル検出するバランス
で標識、検出する事により、解析デー（RNA ポリメラーゼ）の特性から 37℃
で の 恒 温 条 件 下 で 反 応 が 進 行し、を整える過程で、非常に多くの時間がタの産出を高度に能率化した手法がDNA を一本鎖化する必要がありませ費やされています。その結果、現状の主に利用されています。その実績からん。このため、難解読配列により生じる
スペックでは 700 塩基程度まで 99%
も、従来技術としてほぼ統一された感以上の正確度を提示することが実現で複雑な二次構造の悪影響を回避するのある方法論です。しかしながら、今事が可能になったのです。本反応系は、 きました。
後の各ゲノムプロジェクトにおける精難解読配列に出会った場合、従来転写反応が RNA ポリメラーゼの認識
密な配列決定を行う段階では、この従する特定のプロモーター配列から特異技術ではどのような障害（現象）が観
来 技 術 で 解 読 で き な か った 配 列的にスタートし、鋳型配列をコピーし察されるのか？ また、本技術でのアプ（ギャップ領域）が大きな問題として残ローチによる優位性はあるのか？ 双ながら伸長していく過程を利用します。
るものと考えられます。その要因として、グアニン・シトシン（GC）含量が高い領域、繰り返し配列が存在する領域
ターゲット材料などでは、PCR の反応効率が悪い場
鋳型DNA
合や DNA シークエンス反応での解読
恒温反応
熱変性が困難な事例が起こり易いためです。
（37℃）
従来のシークエンス技術では、通常
従来シークエンス技術
転写シークエンス技術
は二本鎖として存在する DNA を熱変写性させて、一本鎖化するための工程を
DNA
RNA
A転
ポリメラーゼポリメラーゼRN伴います。その状態から、酵素による
DNA複製
DNA の複製反応が始まり、配列決定
一本鎖DNAとして処理
二本鎖DNAとして処理のための蛍光標識が行われるのです。
難解配列では…
難解配列でも…
安定した二本鎖構造を維持する DNA
酵素反応と比べ、一本鎖化された DNA は、構
二次構造の形成（etc..）
酵素反応
造上の問題から上記の高 GC 含量領
構造的に安定な二本鎖域あるいは繰り返し配列領域において、複雑な（例えばヘアピン状の）二次構伸長反応が停止…
伸長反応は進行！！
造を形成し易いと考えられます。DNA
図１．従来技術と転写シークエンス技術との比較の複製反応を司る酵素は、この二次構
5'
3'

3'
5'

3'd U=T
3'd C
3'd A

dd T

dd C
dd A
dd G

3'd G

プライマー伸長反応

プロモーター配列

3'

5'

14

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

5'
3'

3'
5'

方の技術での結果を照らし合わせ、実データを元にご報告させて頂きます。
図 2- 図 4 に 示し た 対 象 は、か ず さ
DNA 研究所 植物遺伝子第一研究室（田畑室長）
より実際に依頼を受けた難解読サンプル および、マウスゲノム
DNA 上に存在した難解読配列を抽出したものです。図 2[A] に示した解析結果からは、このサンプル配列中に逆向が存在し、き反復配列（inverted repeat）
二次構造の形成が予想されます。さらにその二次構造内部に部分的に重複した直列反復配列（direct repeat）が認められます。図 2[B] の従来技術の適用では、このような複合的な要因を抱えている問題箇所において伸長反応の停止、すなわち以降のシグナル消失が確認できます。データの比較からも、弊社の転写シークエンス技術の有用性を顕著に提示する事ができます。図3[A] の転写シークエンス技術による
波 形 で は、単 純 反 復 配 列（Simple
Sequence Repeat）
として CT の二塩基リピートが認められますが、シグナルの減衰なく均一なピークを示しています。一方、従来技術の方は単純反復配
列の読取りを苦手としており、図 3[B]の後半部分に差し掛かるとシグナルの大幅な減衰が生じています。従来技術が苦手とする配列の具体例としては、
あ
図 4 に示すような G の連続（G-run）
るいは C の連続（C-run）も挙げられます。10 塩基以上続くような G-run および C-run に直面する場合、図 4[B] に認められるような伸長反応の停止が高い確立で生じます。その対処法としてここで提示する転写シークエンス技術
では、問題となる領域のリー（図 4[A]）
ドスルーと信頼度の高い波形データを表します。
現 在までに 様 々な 難 解 読 配 列 のシークエンスに成功しております。この経験と実績を基に DNA 受託シークエンスサービスを始める事に致しました。
終盤に差し掛かったゲノムプロジェ
クトにおいてこそ、これまでの技術レベルで対応できなかった配列、すなわちギャップとなっている領域がターゲッ（A）Wako 受託シークエンス（転写反応によるシークエンス技術）（B）従来型シークエンス・キットの適用（A 社サイクルシークエンス技術）

図 2. 二次構造（ヘアピン）形成サンプル
鋳型は、ラン藻由来（Gloeobacter violaceus PCC 7421）、かずさ DNA 植物遺伝子第一研究室（田畑室長）より依頼されたサンプル。ABI PRISM 377 DNA Sequencer にて解析。

（A）Wako 受託シークエンス（転写反応によるシークエンス技術）（B）従来型シークエンス・キットの適用（A 社サイクルシークエンス技術）

図 3. 単純反復配列（SSR）サンプル
鋳型は、ミヤコグサ由来（Lotus japonicus）、かずさ DNA 植物遺伝子第一研究室（田畑室長）
より依頼されたサンプル。ABI PRISM 377 DNA Sequencer にて解析。

（A）Wako 受託シークエンス（転写反応によるシークエンス技術）（B）従来型シークエンス・キットの適用

図 4. G-run（18base）サンプル
鋳型は、mouse genomic DNA より調製。ABI PRISM 377 DNA Sequencer にて解析。

トとして濃縮されてきているものと考えられます。今後 SNPs の多型を指標とした医薬や診断への展開を考慮する
際、これら未解析部分の存在には留意する必要があります。これらの課題を解決するための転写シークエンシング

技術、それと従来技術の併用で異なる手法を組み合わせる事により、他に例を見ない有効な受託サービスを提供できるものと考えます。

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）15ふっ素化シリコン修飾シリカゲルカラム Fluofix® のユニークな分離特性
和光純薬工業株式会社

試薬営業本部

学術部

和田

忠昭

ロードなピークを生じる恐れがある場合も今日の HPLC 分析の普及は、全多孔
第二は構造認識性です。フルオフィッ
シャープなピーク形状が見込めます。
性球状シリカゲルを基材とした化学修飾
クスは分子の平面認識性が ODS などの以上の様にフルオフィックスはすぐれた型充てん剤の開発によるものと言っても炭化水素鎖型充てん剤と異なっています。
ハロゲン原子の認識性とユニークな構造
過言ではありません。その代表的な充て
一般的なモノメリック ODS の場合、図 3
認識性により、ふっ素化合物をはじめ天ん剤として C18 充てん剤（ODS、オクタのように嵩高い o-terphenyl よりも平面性
然物や生体サンプルなど従来の ODS でデシルシリカゲル）が挙げられます。ODSの高い triphenylene の方が強く保持されは多岐にわたる分析に用いられておりま
ますが、フルオフィックスは逆に triphenyは分離が困難な場合に、より有効な充て
lene の方が早く溶出します。この特性をすが、その理由としては 1）分析対象物のん剤であると考えられます。
使用できる溶媒種が適応範囲が広い 2）
利用し o,m,p 位など立体構造のわずかに
16
1. 2-chlorophenol
15 17
多く分離至適条件へ導きやすい 3）
他の異なる化合物を分離することが可能です。
2. 4-chlorophenol
3.
3-chlorophenol
化学修飾型充てん剤に比べ耐久性が高
図 4 にキシレノールの分析例を示します。
10
4. 2,6-dichlorophenol
9 14
5. 2,3-dichlorophenol
キシレノールはフェノール樹脂原料や有い、等の利便性が考えられます。当社も
13
6. 2,5-dichlorophenol
7.
2,4-dichlorophenol
機合成中間体、消毒・防腐剤として用い
多様なニーズに応えるべく各種 ODS を
122
8. 3,4-dichlorophenol
7 11
9. 3,5-dichlorophenol8
上 市しています。しかしながら ODS もられる化合物で、6 種類の構造異性体が610. 2,3,6-trichlorophenol
11. 2,4,6-trichlorophenol
オールマイティーとは言えず、それを補存在します。従来の炭化水素鎖型充てん
12. 2,4,5-trichlorophenol
3
完する形で C8 や C22、C30 などの炭化剤では異性体分離が困難でしたが、フル
13. 2,3,4-trichlorophenol
5
14. 2,3,5-trichlorophenol
41
水素鎖長の異なる充てん剤や、イオン交
オフィックスはメタノール／水の簡単な移
15. 2,3,4,6-tetrachlorophenol
16. 2,3,5,6-tetrachlorophenol
換基や極性基など異なる分離機構の修動相で分離が可能です。また図 5 はサポ
17. pentachlorophenol
飾基を導入した充てん剤、あるいはこれら
ニゲンのエピマー分離例です。天然物か異なる機能を併せ持つ複合型充てん剤
らの抽出物成分の異性体分離は、各成分
0102030min.
等、様々な充てん剤が開発、使用されての有用性を見出すために必要であり、フColumn: Fluofix 120N(4.6 × 150mm)
Flow Rate : 1ml / min.
Eluent: (A)CH CN
Temperature : 40℃(B)0.1% Phosphoric acid
Detector: UV(230nm)います。
ルオフィックスはこの様な場合にも威力を(A)25 to 80v/v% for 50min.
図 1.
その中で当社は、分岐状ポリフルオロ発揮します。
1
ODS
2
アルキルシランを多孔性球状シリカゲル
第三には、
2に化学修飾したふっ素化シリコン修飾シリ
撥水性のみ
ODS
カ ゲ ル 充 て ん 剤、フ ル オ フィックス
ならず 撥 油1. triphenylene（Fluofix®）を上市し分析の多様性に対応
性も有して
3
1
2
しております。
いる事です。
1
1. fluorobenzene
2. trifluorobenzene
ODS では疎
フルオフィックスは基本的には逆相分
2. o-terphenyl
3. hexafluorobenzen
配作用を示し、C1、C4 の炭化水素鎖型
水性相互作
0
3
6
9
12
15min. 0
3
6
91215min.
05
10
15
20min.
充てん剤とほぼ同等の保持力を有します。
用が強すぎ Column : Fluofix 120N(4.6 × 150mm) Column : Fluofix 120N(4.6 × 150mm)
Column: ODS(4.6 × 150mm)
Eluent: CH OH / H O=60 / 40 (v/v)
Eluent: CH OH / H O=90 / 10 (v/v)
Eluent: CH OH/H O=60 / 40 (v/v)
Flow Rate : 1.0ml / min.
Flow Rate : 1.0ml / min.
Rate : 1.0ml / min.
さらに、化学的に安定なフルオロカーボンるためにブ Flow
Temperature : 40℃
Temperature : 40℃
Temperature : 40℃
Detector: UV(254nm)
Detector: UV(254nm)
Detector: UV(254nm)を有することで従来の炭化水素鎖
図 2.
図 3.
型充てん剤とは異なったユニーク
1,2
1.
な分離特性を示します。
1
6
O
2.
2 4
第一はハロゲン原子の認識性
HO H
3
H
2
Fluofix
ODSです。フルオフィックスはハロゲン
3.
4,5
1
6
H
H
3
原子を有する化合物、特にふっ素
H
HO
5
4.
1. 3β-panaxadiol
化合物を強く保持します。また類
O
HO H
5.
H
似の構造を持つ化合物では分子内のふっ素の数に依存して保持時
H
HO
6.
H
H
間が 長くなります。図 1 にクロロ
2. 3α-panaxadiol
フェノール異性体、図 2 にフルオロ
ベンゼンのクロマトグラムを示しま 0 10 20 30 40 50 60 70 80min. 0 10 20 30 40 50 60 70 80min. 0
102030min.
す。両分析ともハロゲン原子の数
Column: Fluofix 120N (4.6 × 250mm)
Column: ODS (4.6 × 250mm)
Column:Fluofix
120N(4.6×250mm)
Eluent: CH OH / H O=10 / 90 (v/v)
Eluent: CH OH / H O=25 / 75 (v/v)
Eluent: CH OH / H O=70 / 30 (v/v)
Flow Rate: 1ml / min.
Flow Rate: 1ml / min.
Flow Rate: 1ml / min.
が多くなるほど保持は大きくなり、
Temperature: 40℃
Temperature: 40℃
Temperature: 60℃
Detector: UV(254nm)
Detector: UV(254nm)
Detector: RI
Injection Volume : 5[lInjection Volume : 5[lヘキサフルオロベンゼンの場合、
図 4.
図 5.
ODS と同程度の保持を示します。
®

3

1

2

0

5

3

10

15

20min.

®

®

3

3

2

2

3

OH

H3C

CH3

OH

CH3

OH

CH3

CH3

CH3
OH

0.01 AUFS

CH3

H3C

OH

CH3

CH3
OH

H3C

CH3

®

3

16

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

®

2

3

2

3

2

2

和光純薬工業株式会社

第 49 話土谷正和

透析療法とエンドトキシン

今回のテーマは、透析療法におけるれた透析液による発熱反応が報告さ

シンとペプチドグリカンの影響に関すれるようになりました 。また、長期透

る土田らの興味深い報告があります 3）。

透析医学会のデータによると、1999

析における副作用の一つである透析ア

すなわち、エンドトキシンやペプチド

年における日本国内の慢性透析患者

ミロイド症の原因物質、B2 ミクログロブ

グリカンの最小構成単位であるムラミ

数は 197,213 人、透析施設数は 3,220

リンが、透析液のエンドトキシンフリー

ルジペプチド（MDP）は、ヒト末梢血単

エンドトキシン測定の重要性です。

1）

2）

核球（PBMC）のサイトカイン産生を誘施設、ペーシェントステーション数は化で低下することも報告され 、透析

75,448 台となっています。この約 20

液の清浄化への感心が高まっていま

導し、PBMC による IL-1B や IL-1Ra

万人の透析患者さんたちは、腎臓移植

す。汚染透析液を使用した場合の血中の産生における相乗効果を示したといを受ける以外、一生透析療法を受ける

エンドトキシンは証明されていないもうものです。この相乗効果は、汚染さ必要があります。透析療法の進歩によのの、透析液の清浄化、特にエンドトれた透析液で長期間透析を受けていり、生存率も向上し、25 年以上透析療

キシン濃度の低減の必要性は、現在た患者群では有意に低下していました。

法を受けている患者数も 2,000 人を超広く認められてきたと考えられます。

この結果は汚染された透析液からの何えています。透析療法は長期にわたる

新しく検討されている透析療法の一

らかの刺激を示唆しており、やはり透ため、その副作用も長期間の観察によ

つに血液透析ろ過療法（HDF 療法）が析液の清浄化が必要ということなのでる考察が必要です。

あります。HDF 療法では、透析液を血しょう。さらに、単独では活性の弱いペ注射用医薬品中のエンドトキシン濃液に入れ、増加分をろ過で取り除くもプチドグリカンもエンドトキシン活性を

度は 5 EU/kg 以下と定められています

ので、従来の透析療法が膜を介した拡増強することから、ペプチドグリカンの管理も必要かもしれません。

が、これは一時的に投与される医薬品

散を利用していたのに対し、積極的にの急性毒性を抑えるための規格と考えろ過を行うことで、血液中の不要物をエンドトキシンは、多量投与では急ることができます。大量の透析液が透効率良く除去しようというものです。

性毒性を示しますし、少量の継続的刺析膜を介して血液と接触するにもかか

さらに、ペプチドグリカンが相乗的に働ことから、エンドトキシンの規格値は注

HDF 用の透析液（補液）中のエンドト
キシン濃度は 1 EU/L 未満という規格
が、HDF 研究会から提唱されていまくとなると、これらを産生する細菌の管射用水程度とされてきました。ところす。筆者らのグループがパイロセップ

理が重要であることはいうまでもありまが、透析療法の効率を上げるために、

法で検討したところ、市販の補液は非せん。もちろん、ペプチドグリカン以外

わらず、透析液を血液に直接入れない

激でも様々な影響を与えるようです。

より大きい口径を持つ高性能膜が開発

常にきれいで、検量線の外挿値から、にも生物活性を持った微生物成分があされると、エンドトキシンの逆ろ過の危少なくとも 0.005 EU/L 以下と考えられることでしょう。人は、良きにつけ悪し険性が指摘されるようになり、汚染さました。さすが、医薬品会社の無エン

きにつけ、微生物と無関係には生きてドトキシン製品製造能力はた

いけません。この分野に関して、和光

いしたものです。しかし、オンの LAL/SLP システムがお役に立てば

ライン HDF 療法などでは、通よいのですが。よい利用方法がござい常の透析液をろ過などによりましたら、是非お知らせください。

清浄化して補液として使用するため、補液の清浄化を維持することが必要となり、原料と次回は、第 50 話「エンドトキシン試
験のアメリカ事情」の予定です。

なる RO 水をはじめ、工程の管理が重要になってきます。やはり、一旦通常の環境で調液を行うと、微生物の汚染は少々の努力では避けられないようです。
さて、透析液中のエンドトキ〔参考文献〕
1）Steven, M. et al. : J. Am. Soc. Nephrol., 2, 1436（1992）.
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和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

17

15
脳科学一口メモ◯

小胞体ストレスの神経変性疾患への関与
北海道大学・大学院薬学研究科

金子

雅幸，野村

靖幸

小胞体はカルシウムの貯蔵に関す

ム 系 に よ る 分 解，ER-associated

よって誘導されることを見いだしているだけでなく、膜蛋白質や分泌蛋白質

degradation: ERAD）である。そして、る（投稿中）。したがって、プレセニリンの成熟にも関わっている。これらの蛋不良蛋白質が過剰に小胞体に貯まっの変異は ERAD 機能の低下を引き起白質はリボソームで合成されると、小た状態を小胞体ストレスといい、このこす可能性も予想される。

胞体膜にあるチャネルを通って小胞体状態が続くと細胞はアポトーシスを起内腔に入り、正常に成熟したものだけ

こして死に至る。

また、家族性パーキンソン病の一つ
常染色体劣性遺伝性若年性パーキン

が、各細胞内小器官に送られる。すな

興味深いことに最近、この小胞体ス

ソン病（AR-JP）でも小胞体ストレスにわち、小胞体は、工場として製品（膜トレスと神経変性疾患との関係が取りよる神経細胞死が起きている例が報

蛋白質や分泌蛋白質）の加工（折りたざたされてきている。その一つの例と告されている 2）。AR-JP の原因因子とたみやジスルフィド結合の形成、糖鎖

して、プレセニリンの変異による小胞して知られている Parkin は、ユビキチ

1）修飾）と品質管理を行い、不良品はそ

体シャペロンの誘導抑制がある 。家

ンリガーゼとして基質蛋白質の認識との先のライン（ゴルジ装置など）に送ら

族性アルツハイマー病（FAD）にはプ

ユビキチン化に働き、ERAD に関与ないように制御している。その工場がレセニリンの変異が多くみられ、凝集することが報告されている。そして、そ何らかの障害（この場合、小胞体内の性の高いβアミロイドの分泌が亢進しの基質として Pael 受容体が発見され、カルシウムの枯渇や糖鎖修飾の阻害、ていることは有名である。一方、そのParkin の変異によって Pael 受容体が還元剤によるジスルフィド結合の切断、

新しい仮説とは、プレセニリンの変異

小胞体へ蓄積し、小胞体ストレスを誘低酸素など）を受けると、不良品の蛋が小胞体シャペロンの誘導に必要な小発しているという説が提唱されている。

白質が多く作られる。これに対し小胞胞 体 膜 上の小 胞 体 ストレ ストラン ス

さらに、小胞体外で蓄積した変性蛋

体は三つの対策を講じる。第 1 は、生デューサー（IRE1, ATF6）の抑制を引

白質が最終的に小胞体ストレスを引き産ラインの停止（リボソームでの蛋白き起こすというものである。そのために起こすという、例が報告されている 3）。

翻訳の停止）、第 2 は、不良品の修理

小胞体は不良蛋白質の修復が十分にそれは、ハンチントン病に代表される（小胞体シャペロンによる修復）、そし

できずに小胞体ストレスに対して脆弱

ポリグルタミン蛋白質の蓄積である。

て最後は、修理不可能な不良品の廃になり、神経細胞死が惹起されるとい

ポリグルタミン病は、原因遺伝子内に棄（小胞体から細胞質への変性蛋白質

う機構である。私たちはさらに、ERAD

おける CAG の繰り返し塩基の伸長にの排出と、ユビキチン−プロテアソー

関 連 遺 伝 子も IRE1 および ATF6 によってポリグルタミンを多く含む不溶小胞体
Parkin

ATF6

Ub Ub Ub

ERAD

小胞体シャペロン
変性蛋白質

p97/VCP

Presenilin（変異体）

Q
QQ
QQ

IRE1

Ub

ポリグルタミン蛋白質

小胞体シャペロンおよびERAD関連遺伝子の誘導
図18

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

小胞体に蓄積した変性蛋白質に対する応答機構と疾患の発症機構

26Sプロテアソーム
による蛋白質分解

性の蛋白質が生じ、細胞内に蓄積する説明できず、上記の小胞体ストレスが考えられるが、小胞体における分解機

ことによって起こる。この蛋白質は主に関与するメカニズムも視野に入れる必構すなわち ERAD がその鍵を握ると核に蓄積するが、結果として小胞体に要がある。神経変性疾患に対する治療予想される。

起因する IRE1 を介した細胞死を引き法は、アルツハイマー病におけるコリ

起こすことが報告されている。その原

ンエステラーゼ阻害薬やパーキンソン

因として ERAD において小胞体から病における L-dopa など対症療法に終細胞質に蛋白質を引きずり出すポンプ

わっている。そのため、その根本的治である p97/VCP をポリグルタミン蛋白療法として、老人斑や Lewy 小体など質が塞ぎ、小胞体に蛋白質が蓄積しの「目に見える」蛋白質の蓄積を防ぐて小胞体ストレスが起きるためと推論方法が注目されている。しかし、これらされている。

の疾患が小胞体ストレスを原因とする

一方、神経変性疾患において、変性

ものなら、「目に見えない」小胞体ストレ

蛋白質の凝集体が細胞内または細胞

スから細胞を守ことが重要になると考外に蓄積しているのがしばしば観察さえられる。しかしながら、小胞体ストレれるが、AR-JP などでは他のパーキン

ス応答機構、特に ERAD に関与する

ソン病で見受けられる Lewy 小体が見分子はヒトにおいては不明な点が多い。

られない。ということは、蛋白質凝集体

今後、さらに小胞体ストレスと神経変の毒性だけでは神経細胞死の機序は性疾患の関係が明らかになってくると〔参考文献〕
1）Katayama, T., Imaizumi, K., Sato, N.,
Miyoshi, K., Kudo, T., Hitomi, J.,
Morihara, T., Yoneda, T., Gomi, F.,
Mori, Y., Nakano, Y., Takeda, J.,
Tsuda, T., Itoyama, Y., Murayama, O.,
Takashima, A., St.George-Hyslop, P.,
Takeda, M., and Tohyama, M. （1999）
Nat. Cell Biol. 8, 479-485.
2）Imai, Y., Soda, M., Inoue, H., Hattori,N., Mizuno, Y. and Takahashi, R.
（2001）Cell 105, 891-902.
3）Nishitoh, H., Matsuzawa, A., Tobiume, K., Saegusa, K., Takeda, K.,
Inoue, K., Hori, S., Kakizuka, A. andIchijo, H. （2002） Genes Dev. 16,
1345-1355.

第 18 回 Wako ワークショップ「糖尿病におけるトランスレーショナルリサーチの展望」
日時：平成 14 年 11 月 19 日（火）10：00 〜 17：00
場
所：千里ライフサイエンスセンター 5 階ライフホール（大阪府豊中市新千里東町 1 丁目 4 番 2 号）
総合企画：神戸大学大学院 医学系研究科 糖尿病代謝・消化器・腎臓内科 春日 雅人 教授
講演プログラム：
10：00 〜 開会挨拶
和 光 純 薬10：05 〜 はじめに
神戸大院・医 春日 雅人
10：10 〜 インスリン分泌の分子機構
千葉大院・医 清野 進
10：50 〜 インスリン分泌と糖尿病の発症
京都大院・医 清野 裕
11：30 〜 小胞体ストレスと糖尿病の発症
熊 本 大・医 荒木 栄一
12：10 〜── 昼
食 ──

13：10 〜 インスリン作用機構と糖尿病の発症
13：50 〜 遺伝素因と糖尿病の発症
14：30 〜 肥満と糖尿病の発症
15：10 〜── コーヒーブレイク ──

神戸大院・医東京大院・医大阪大院・医

春日 雅人
門脇 孝
松澤 佑次

15：30 〜
16：10 〜
16：50 〜
17：00 〜

金沢大院・医筑 波 大・医神戸大院・医和 光 純 薬

山本 博
山田 信博
春日 雅人

糖尿病細小血管症の分子機構
糖尿病大血管障害の分子機構
おわりに
閉会挨拶

一般講演は、講演時間 30 分、質疑応答 10 分を予定しております。

申込・連絡先：和光純薬工業株式会社

試薬営業本部

学術部

ワークショップ係

TEL : 06-6203-1788 FAX : 06-6201-5964 E-mail : seminar@wako-chem.co.jp
定員：420 名（先着順）
参 加 費：無料

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）19

和光の組換えサイトカイン、ケモカイン製品
当社では新たに 33 品目のサイトカ
イン及びケモカインを商品化し、さらに品揃えが充実しました。新規に発見された特色ある品目にも着目しています。この機会に是非ご利用下さい。
1 インターロイキン-1α，

ラット，組換え体
起源： Rat interleukin-1A cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 0.005ng/mL （比 活 性 ＞ 2 ×
109 units/mg に相当）
（マウス D10S 細胞の用量依存的増殖）
2 インターロイキン-2，ラット，組換え体
起源： Rat interleukin-2 cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 0.4ng/mL （比 活 性 ＞ 2.5 ×
106 units/mg に相当）
（マウス CTLL-2細胞の用量依存的増殖）
3 インターロイキン-3β，ラット，組換え体
起源： Rat interleukin-3B cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 10ng/mL（比活性＞ 1.0 × 105
units/mg に相当）
（マウス MC-9 細胞の用量依存的増殖）
4 インターロイキン-10，ラット，組換え体
起源： Rat interleukin-10 cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 10ng/mL（抗原特異的 T 細胞
増殖の用量依存的阻害）
5 カルジオトロフィン-1，ヒト，組換え体
起源： Human cardiotrophin-1 cDNA ex-pressed in E. coli
活性： ED50 ＜ 1.0ng/mL（比活性＞ 1 × 106
units/mg に相当）
（TF-1 細胞の用量依
存的増殖）
6 EMAP-Ⅱ，ヒト，組換え体
起源： Human EMAP-Ⅱ cDNA expressedin E. coli
活性： 20 〜 40ng/mL でヒトMCF-7 細胞においてアポトーシスが認められる。
7 顆粒球コロニー刺激因子，

ヒト，組換え体
起源： Human G-CSF cDNA expressed in

E. coli
活性： ED50 ＜ 0.1ng/mL（比活性＞ 1 × 107
units/mg に相当）
（マウス M-NFS-60
細胞の用量依存的増殖）
8 ケラチノサイト成長因子，
ヒト，組換え体
起源： Human KGF cDNA expressed in E.

coli
活性： ED50 ＜ 10ng/mL 以下（KGF 反応性
BaF3 細胞のチミジンの取込み）
9 可溶性 RANK リガント，ヒト，組換え体
起源： Human sRANK ligand cDNA ex-pressed in E. coli
活性： ヒト PBMC 細胞株による IL-8 生産の用量依存的増殖テストにおいて ED50
が 10ng/mL 以下。
10 幹細胞成長因子-α，ヒト，組換え体
起源： Human SCGF-A cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 0.1ng/mL 以下（GM-CSF を含む培地中で生育した TF1 細胞の増殖
阻害効果）

20

11 幹細胞成長因子-β，ヒト，組換え体
起源： Human SCGF-B cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 7ng/mL 以下（GM-CSF を含む培地中で生育した TF1 細胞の増殖阻害効果）
12 腫瘍細胞増殖因子-β2，ヒト，組換え体
起源： Human TGF-B2 cDNA expressed in

E. coli
活性： ED50 ＝ 0.05 〜 0.1ng/mL（比活性 1 〜
2 × 107units/ mg に相 当）（ミンク肺
MvILu（CCL-64）の用量依存的増殖）
備考： renatured
13 可溶性腫瘍壊死因子レセプターⅠ，ヒト，組換え体
起源： Human sTNF receptorⅠ cDNA

expressed in E. coli

活性： 50 〜 100ng/mL でヒト末梢血好酸球
走化性が認められる。
22 エオタキシン-3，ヒト，組換え体
起源： Human eotaxin-3 cDNA expressedin E. coli
活性： 2Fg/mL でヒト CCR3/HEK293 細 胞
走化性の最大活性が認められる。
23 ストローマ細胞由来因子-1α，

ヒト，組換え体
起源： Human SDF-1A cDNA expressed in

E. coli
活性： 20 〜 80ng/mL の濃度で、PHA と IL2 で活性化されたヒト末梢 T 細胞の走化性により決定される。
24 ストローマ細胞由来因子-1β，ヒト，組換え体
起源： Human SDF-1B cDNA expressed in

E. coli

活性： ED50 ＝ 0.05Fg/mL（0.25ng/mL の
rhTNF-A の存在下、マウス L-929 細胞において TNF-A による細胞毒性の阻害効果により決定）
14 可溶性腫瘍壊死因子レセプターⅡ，ヒト，組換え体
起源： Human sTNF receptorⅡ cDNA

活性： 20 〜 80ng/mL の濃度で、PHA と IL2 で活性化されたヒト末梢 T 細胞の走化性により決定される。
25 エオタキシン-2，マウス，組換え体
起源： Mouse eotaxin-2 cDNA expressed

expressed in E. coli
活性： ED50 ＝ 0.125Fg/mL（0.25ng/mL の
rhTNF-A 存在下、マウス L-929 細胞において TNF-A による細胞毒性の阻

活性： 10 〜 100ng/mL でマウスリンパ球走化性が認められる。
26 ストローマ細胞由来因子-1α，マウス，組換え体
起源： Mouse SDF-1A cDNA expressed in

害効果により決定）15 可溶性 TRAIL レセプター-1，ヒト，組換え体
起源： Human sTRAIL receptor-1 cDNA

expressed in E. coli
活性： ヒト PBMC 中、100ng/mL ヒト sTRAIL/Apo2L 存 在 下、本 品 100ng/mL でIL-8 産生を 95% 阻害する。
16 可溶性 TRAIL レセプター-2，ヒト，組換え体
起源： Human sTRAIL receptor-2 cDNA

expressed in E. coli
活性： ヒト PBMC 中、100ng/mL ヒト sTRAIL/Apo2L 存在下、本品 1,000ng/mL でIL-8 産生を 50% 阻害する。
17 TWEAK，ヒト，組換え体
起源： Human TWEAK cDNA expressedin E. coli
活性： ED50 ＜ 10ng/mL（ヒト PBMC の用量
依存的 IL-8 産生により決定）
18 カルジオトロフィン-1，マウス，組換え体
起源： Mouse cardiotrophin-1 cDNA ex-pressed in E. coli
活性： ED50 ＜ 1.0ng/mL（比活性＞ 1 × 106
units/mg に相当）
（TF-1 細胞の用量依存的増殖）
19 顆粒球コロニー刺激因子，マウス，組換え体
起源： Mouse G-CSF cDNA expressed in

E. coli
活性： ED50 ＜ 0.05ng/mL（比活性＞ 2 × 107
units/mg に相当）
（マウス M-NFS-60
細胞の用量依存的増殖）
20 可溶性 RANK リガンド，マウス，組換え体
起源： Mouse sRANK ligand cDNA ex-pressed in E. coli
活性： 5 〜 10ng/mL でマウス RAW264.7 細胞において破骨細胞の形成を誘導する。
21 エオタキシン-2，ヒト，組換え体
起源： Human eotaxin-2 cDNA expressedin E. coliin E. coli

E. coli
活性： 50 〜 100ng/mL でヒト PBMC の走化性により決定される。
27 ストローマ細胞由来因子-1β，マウス，組換え体
起源： Mouse SDF-1B cDNA expressed in

E. coli
活性： 50 〜 100ng/mL でヒト単球の走化性により決定される。
28 アルテミン，ヒト，組換え体
起源： Human artemin cDNA expressed in

E. coli
29 毛様体神経栄養因子，ヒト，組換え体
起源： Human CNTF cDNA expressed in

E. coli
活性： ED50 ＜ 2.0ng/mL（比活性＞ 2 × 105
units/mg に相当）
30 ミッドカイン，ヒト，組換え体
起源： Human midkine cDNA expressed in

E. coli
活性： 0.1 〜 10.0ng/mL でヒト好中球の走化性が認められる。
31 神経成長因子-β，ヒト，組換え体
起源： Human NGF-B cDNA expressed in

E. coli
活性： ED50 ＝ 2.0 〜 5.0ng/mL（コリンアセチ
ルトランスフェラーゼ活性の誘導）
32 パーセフィン，ヒト，組換え体
起源： Human persephin cDNA expressedin E. coli
活性： 0.1 〜 1.0ng/mL の濃度で RETりん酸化を誘導する。
33 プレイオトロフィン、ヒト、組換え体

起源： Human pleiotrophin cDNA ex-pressed in E. coli
1 〜
33 共通：※
形状：凍結乾燥品（キャリアフリー）
エンドトキシン：0.1ng/Fg（1EU/Fg）以下〔次頁に続く〕和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）■インターロイキン

New
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コード No.
品
名
Human094-04561 IL-1 α
095-04611 IL-1 β
097-03951 IL-2
092-04621 IL-3
094-03961 IL-4
093-03811 IL-5
099-04631 IL-6
096-04641 IL-7
091-04331 IL-8
（内皮細胞）
098-04341 IL-8
（単球）
093-04651 IL-10
090-04281 IL-11
093-04391 IL-12
090-04661 IL-15
Mouse
097-04671 IL-1 α
094-04681 IL-1 β
090-04421 IL-2
091-03971 IL-3
090-03941 IL-4
097-04431 IL-6
094-04441 IL-7
091-04691 IL-10
096-04401 IL-12
Rat1

094-04941 IL-1 α
096-04261 IL-1 β
2
091-04951 IL-2
3

098-04961 IL-3 β
098-04461 IL-4
093-04271 IL-6
4

092-04981 IL-10

規

格

容

量

希望納入価格（円）
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生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
10Fg
50Fg
10Fg
10Fg
3Fg
20Fg
10Fg
25Fg
25Fg
10Fg
10Fg
5Fg
10Fg

39,00039,00039,90039,00050,00052,50039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,000

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
10Fg
20Fg
10Fg
10Fg
5Fg
5Fg
10Fg
5Fg

39,00039,00039,00039,90050,00020,00039,00039,00042,000

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
5Fg
20Fg
10Fg
10Fg
10Fg
10Fg

39,00039,00039,00039,00039,00039,00039,000■サイトカイン／成長因子
New
New

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コード No.
品
名
Human
5

034-18811 Cardiotrophin-1
057-05211 EGF
6

057-07031 EMAP-Ⅱ
067-04031 bFGF
061-04051 Flt-3L7
074-04841 G-CSF
071-04111 GM-CSF
080-07781 HGF
094-03721 IFN- γ
099-04511 IGF-Ⅰ
096-04521 IGF-Ⅱ8
 119-00661 KGF
133-13611 M-CSF
157-02121 OPG
153-02101 OSM
163-19731 PDGF-AA
160-19741 PDGF-BB
182-01471
9186-01474 sRANKL
188-01473
184-01671 sRANK Receptor
190-12201 SCF
10 194-12721 SCGF-α
11 191-12731 SCGF-β
204-14291 TGF- β1
12 201-15661 TGF- β2
203-15263
TNF-α
207-15261
13 205-15681 sTNF Receptor Ⅰ
14 202-15691 sTNF Receptor Ⅱ205-14841 TRAIL/Apo2L
15 205-15701 sTRAIL Receptor-1

16 202-15711 sTRAIL Receptor-2

17 209-15721 TWEAK

223-01311 VEGF
Mouse
18 031-18821 Cardiotrophin-1
057-04111 EGF
19 071-04851 G-CSF


規

容

量

10Fg
生化学用
100Fg
生化学用
20Fg
生化学用
25Fg
生化学用
10Fg
生化学用
10Fg
生化学用
10Fg
生化学用
1Fg
生化学用
生化学用 2,000,000JRU
100Fg
生化学用
75Fg
生化学用
10Fg
生化学用
10Fg
生化学用
25Fg
生化学用
10Fg
生化学用
10Fg
生化学用
10Fg
生化学用

希望納入価格（円）

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
50Fg
1mg
100Fg
10Fg
10Fg
10Fg
2Fg
2Fg
10Fg
50Fg
20Fg
20Fg
50Fg
50Fg
50Fg
10Fg
10Fg

39,00015,00039,00019,50039,00039,00039,90043,00068,00037,00037,00034,00039,00059,00037,00039,00039,00037,000
照 会
照 会
37,00039,00039,00039,00049,00030,00015,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00035,000

生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
100Fg
10Fg

39,00016,00039,000

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

名

規 格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

10Fg
100Fg
10Fg
10Fg
20Fg
5Fg

量

希望納入価格（円）39,00039,00039,00039,00039,90020,000

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
1Fg
100Fg
20Fg

19,50043,00039,00039,000

生化学用
生化学用

10Fg
10Fg

15,70034,000規容■ケモカイン

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格

コード No.
品
073-04671 GM-CSF
094-04701 IFN-γ
20 184-01791 sRANKL
198-11521 SCF
201-13461 TNF-α
224-01341 VEGF
Rat
069-04091 bFGF
087-07791 HGF
099-04251 IFN-γ
203-14261 TNF-αBovine061-02851 aFGF
067-02831 bFGF

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コード No.
品
名
Human058-06461 ENA-78
055-06471 Eotaxin
21 054-07041 Eotaxin-2

22 058-07061 Eotaxin-3
058-06581 Exodus-2/SLC
077-04451 GRO-α
095-04351 IP-10
137-13011 MCP-1
138-13161 MCP-3
133-13231 MDC
138-13041 MIP-1α
136-13081 MIP-1β
130-13241 MIP-3α /LARC
137-13251 MIP-3β /ELC
134-13261 MIP-4/PARC
167-19751 PF-4
181-01441 RANTES
23 199-12651 SDF-1α
24 193-12671 SDF-1β
202-14611 TARC
Mouse
052-06481 Eotaxin
25 051-07051 Eotaxin-2
055-06591 Exodus-2/SLC
135-13171 MCP-3
185-01461 RANTES
26 196-12661 SDF-1α27 190-12681 SDF-1β
Rat
072-04521 GRO
074-04461 GRO-β131-13031 MCP-1
135-13051 MIP-1α
188-01451 RANTES

格

量

希望納入価格（円）

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

20Fg
10Fg
20Fg
20Fg
20Fg
25Fg
25Fg
20Fg
10Fg
20Fg
20Fg
10Fg
20Fg
20Fg
10Fg
20Fg
20Fg
10Fg
10Fg
20Fg

39,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,000

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
20Fg
20Fg
10Fg
20Fg
10Fg
10Fg

39,00039,00039,00039,00039,00039,00039,000

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

25Fg
25Fg
10Fg
20Fg
20Fg

39,00039,00039,00039,00039,000規容■神経栄養因子
New
New
New
New

New
New

コード No.
品
名Human
28 012-19471 Artemin020-12913 BDNF
29 032-18851 CNTF
079-04151 GDNF
30 135-14271 Midkine142-06891 Neurturin
31 141-07601 NGF-β145-06641 NT-3
148-06631 NT-4
32 164-20871 Persephin
33 161-20881 PleiotrophinMouse
143-04861 2.5S NGF
147-04641 7S NGF
Rat
034-16351 CNTF

格

量

希望納入価格（円）

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

10Fg
10Fg
20Fg
5Fg
20Fg
10Fg
20Fg
5Fg
5Fg
20Fg
20Fg

39,00040,00039,00025,00039,00037,00039,00038,00039,90039,00039,000

生化学用
生化学用

10Fg
100Fg

15,70018,300

生化学用

20Fg

42,000

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）21脳代謝の研究に
イデベノン、T-43362
イデベノンは、中枢神経に作用して、脳卒中、脳虚血等に伴う情動障害、四O肢麻痺、受動的回避反応障害を改善

H3CO

CH3

CH3
N

することが知られています。

N

・2HCl

H

T-43362 は、脳内アミン作動性を併

CH3

（CH2）
10OH

H3CO

有した中枢性抗酸化作用があります。

O

N18-RE-105 細胞のグルタミン酸誘発

C17H28N2・2HCl=333.34
T-43362

C19H30O5=338.44
Idebenone細胞に対し強い保護作用を示します。
また、過酸化脂質生成抑制も示します。
〔参考文献〕
大阪府薬剤師会編：「医薬品要覧 第 5 版」, p282
コード No.
096-05001
203-15741

品

名

Idebenone
T-43362

規格
生化学用
生化学用

容量

100mg
50mg

希望納入価格（円）15,00012,000Ras Inhibitory Peptide
生化学用
本品は、guanine nucleotide-releasing factor の活性部位（1149-1158）とントロールしており、Ras の生理活性をです。がん遺伝子産物 Ras の機能をコ

同一のアミノ酸配列を持ったペプチド阻害します。

182-01731

1mg

14,000 円

Geranylgeranylpyrophosphate Triammonium Salt Solution
生化学用
翻訳後修飾の過程で、タンパク質の言います。このゲラニルゲラニル化に

C 末端部分のシステイン残基に、本品より生じるプレニル化タンパク質は、がゲラニルゲラニル転移酵素により修シグナル伝達において重要な役割を飾されることをゲラニルゲラニル化と果しており、本品を基質とした阻害剤の開発に応用できます。

076-04781

200Fg

12,000 円

200Fg

12,000 円

Farnesylpyrophosphate Triammonium Salt Solution
生化学用
ます。

翻訳後修飾の過程で、タンパク質のこのファルネシル化により生じるプレC 末端部分のシステイン残基に、本品ニル化タンパク質は、シグナル伝達にがファルネシル転移酵素により修飾さおいて重要な役割を果しており、本品れることをファルネシル化と言います。

を基質とした阻害剤の開発に応用でき

065-04211

スギ及びヒノキ由来の花粉の凍結として使用される他、アレルゲンタン

形

乾燥品です。本品は、アレルギー物質

パク質の抽出・精製に用いられます。

花粉アレルギー研究用
スギ花粉
ヒノキ花粉

コード No.
168-20911
165-20921

22

品
Pollen, from Sugi
Pollen, from Hinoki

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

名

規 格
生化学用
生化学用

状：凍結乾燥品

容

量

1g
1g

希望納入価格（円）5,000
12,000糖尿病研究に膵島培養キット
糖尿病には、膵臓から分泌されるイ
ンスリンが深く関与しています。本キッ
トはラット膵臓から膵島のみを分離、培養し、専用メディウムと共にお客様へお送りします。キットの膵島はグルコー
ス依存的にインスリンを分泌します。
糖尿病研究、糖尿病治療薬開発にお役立て下さい。
〔キット構成〕
膵島（ランゲルハンス氏島）
ラット 1 匹分（数百個）
15mL コニカルチューブ× 1 本
ベーサルメディウム
0.5mg/mL グルコース , 10% FBS 含有
RPMI1640
100mL × 1 本グルコース刺激メディウム
3mg/mL グルコース, 10% FBS 含有
RPMI1640
100mL × 1 本〔操作方法〕
1）必要量をプレートもしくは遠心チュー〔抗−インスリン抗体染色〕

ブに分注し、ベーサルメディウムを用いて 1 日間、培養して下さい。

2）グルコース刺激メディウム中に検体を加え、この培養液を用いてメディウム
交換し、30 分から 60 分インキュベート
して下さい。

3）培養上清中の、インスリン濃度を測定して下さい。ベーサルメディウムでの培養に対して、通常 5 倍から 10 倍のイ
ンスリン濃度になります。
また、培養上清中のグルカゴンを測定することもできます。

膵島を 48well プレートに 3 日間培養し、ホルマリン固定後、抗- インスリン抗体、
HRP 標識二次抗体を用いて染色した。
上写真：48well プレート内の膵島
下写真：拡大図※膵島はベーサルメディウム（グルコー
ス濃度 0.5mg/mL）中に分散された状態で供給します。

〔ラット膵島に対する糖付加試験〕

インスリン濃度（ng/ml）

30

24 Well プレートの 2 Well に、1 Well
当たり単離ラット膵島 50 個を加え 1 日間培養した。
その後、一旦 0.6mg/ml glucose 濃度の培養液で 60 分間培養後、一方の Well
を 1mg/ml glucose 入り培養液に交換し、液に交換し 90 分間、37℃ でインキュベー
トし培養上清を回収し培養液中のインスリ
ン濃度をレビスインスリン・ラット
（シバヤ
ギ社製）
を用いて測定した。

25
20
15
10
5
0

コード No.
303-13491

glucose 1mg/ml

glucose 3mg/ml

メーカーコード
CUPI01品
名Pancreatic islets Culture Kit（1 tube）

容

量

1 キット

希望納入価格（円）130,000〔関連製品〕
コード No.
297-57101

コード No.
632-01281
637-01471
639-03131

品
名Rat Glucagon ELISA Kit wako

メーカーコードAKRIN-010
AKRIN-010T
AKRIN-030

品
名Lbis® Insulin-Rat
Lbis® Insulin-Rat-T
Lbis® Insulin-Rat U-Type規 格
糖尿病研究用

96 回用

容

量

希望納入価格（円）75,000容

希望納入価格（円）量96 回用
45,00096 回用
45,00096 回用
62,000
T は発色基質が TMB、U タイプは高感度タイプになります。
和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

23

BFP/GFP ベクター 品目追加！
哺乳動物細胞中で、核小体由来のりんタンパ
ク質である B23 と BFP/GFP の融合体を高効率に発現することができます。融合タンパク質は核小体に局在します。また、SV40 プロモーターの下流に neo 遺伝子を含んでおり、形質転換された薬剤耐性株を効率よく選択できます。

p

CM
Vp
ro

（フ ィル タ ー：Excitation filter 360/
40nm Emission filter 460/40nm）

GFP Ex. 474nm Em. 509nm（フ ィル タ ー：Excitation filter 485/20nm Emission filter 530/30nm）

形
純

nef moiety

B23
moietypQBI-B23BFP/GFP

BFP/GFP
moietySV40
poly Ao

SV40
promoter BGH poly A

状 ：10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA（pH 8.0）

哺乳動物細胞中で、HIV 由来の rev タンパク質と BFP の融合体を高効率に発現することができます。rev タンパク質は、核小体から細胞質へのタンパク質の往復を支配していますが、融合タ
ンパク質はほとんど核小体に局在します。また、
SV40 プロモーターの下流に neo 遺伝子を含んでおり、形質転換された薬剤耐性株を効率よく選択できます。
Bgl Ⅱ(13)度 ：OD260/OD280 ＝ 1.7 〜 1.9

BGH poly A
SV40 promoter

SmaⅠ(3,504)

Vpro

LTR プロモーターの制御により、哺乳動物細胞中で HIV-1 由来の gag タンパク質と GFP の融合
体を高効率に発現することができます。発現は機能的な rev タンパク質に依存しています。融合体
は、gag と GFP が 18 アミノ酸のスペーサー分、離れているため両方の機能を保持したまま細胞質に局在します。HIV 感染に対する強力な感受性コン
トロールとして用いられます。また、pQBI-revGFPと co-transfection することで、細胞質を緑色、核小体を青色に染めることができます。
StuⅠ(8,077)
HIV-1

Sac Ⅱ(966)
rev moiety
rev BFP1）Stauber, R. H. et al : BioTechniques,24, 462（1998）.
2）WO 97/42320.

BFP Vector pQBI 50-fPA、
GFP Vector pQBI 25-fPA
NheⅠサイトを用いて、PCR 産物のコード配列と BFP/GFP の融合タンパク質を簡単に作るための ベクター で す。また、プロモ ー ター 領 域、
BFP/GFP コード配列、poly A シグナル配列の切り出しのための機能的なカセットベクターとしても使用できます。
(*cuts more than once)V

pro

Bam HⅠ(2,947)
XbaⅠ(2,959)
HIV-1 3' LTR
Eco NⅠ(3,875)rNotⅠ(4,785)

GFP Vector pQBI-tatGFPGFP Vector pQBI-T7

哺乳動物細胞中で、HIV 由来の tat タンパク質と GFP の融合体を高効率に発現することができます。融合タンパク質は核小体及び核に局在します。また、SV40 プロモーターの下流に neo 遺伝子を含んでおり、形質転換された薬剤耐性株を効率よく選択できます。

T7 RNA ポリメラーゼを発現している大腸菌
内で高効率に GFP を発現します。また、本品はリプレッサータンパク質である lacIq 遺伝子を含んでいますので、lac オペロンの発現を最小限度に抑えることができます。pET システムに有用で
す。

CM

r
mp

ClaⅠ(25)roSac Ⅱ(966)
NheⅠ(983)
tat moiety

pQBI-tatGFPGFP moiety

Vp

A

ori

ClaⅠ(1,698)
SV40
poly A

neo

BGH poly A
SV40 promoter

SmaⅠ(3,146)

品
名Blue Fluorescent Protein Vector pQBI 50-fPA
Green Fluorescent Protein Vector pQBI 25-fPABlue Fluorescent Protein Vector pQBI-B23BFP
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-B23GFPBlue Fluorescent Protein Vector pQBI-revBFP
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-tatGFP
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-nefGFP
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-LTRgagGFP
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-T7

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

Hin d Ⅲ(30)
T7 terminatorCel Ⅱ(268)Bam HⅠ(320)Aat Ⅱ(5,043)

r

PstⅠ(4,366)

Bam HⅠ(1,961)
Eco RⅠ(1,992)
Eco RV(2,004)
NotⅠ(2,019)
XbaⅠ(2,037)
Bsp 120Ⅰ(2,043)
ApaⅠ(2,047)

p

Am

FP

24

PmeⅠ(2,582)
Eco RⅠ(2,593)
RRE

SmaⅠ(3,248)

6,506 bp

Dra Ⅲ(2,276)
SV40 promoter

GFP

8,358 bp

Sac Ⅱ(4,797)

NheⅠ(1,244)

Bsa BⅠ(2,869)

コード No.
545-02101
541-02061
544-02171
548-02191
541-02181
541-02201
548-02211
545-02221
542-02231

BGH poly A
SV40
promoterpQBI-LTRgagGFP

G

neo

neo

NheⅠ(983)

Stop, Stop, Stop
MluⅠ(1,714)
BGH poly A

Eco 47Ⅲ(1,829)
Cel Ⅱ(1,835)

NheⅠ(1,037)
XbaⅠ(1,082)
T7 promoter
BgI Ⅱ(1,148)

pQBI T7-GFP
5,115 bpori

BsmⅠ(3,930)*Bst BⅠ(3,692)

Eco RⅠ(2,094)
NotⅠ(2,121)
XbaⅠ(2,139)
Bsp 120Ⅰ(2,145)
ApaⅠ(2,149)

SV40
poly A

Sac Ⅱ(966)pQBI25/50-fPA(GFP/ BFP)
6,176 bpgag

Bgl Ⅱ(13)

P/GFP
BF

ori

A

SV40 poly A

6,601 bp

BgI Ⅱ(13)

CM

r
mp

pQBI-revBFP

NarⅠ(639)
Bss HⅡ(712)
SalⅠ(718)
ClaⅠ(771)
5' LTR

BFP moiety
Amp

ori

〔参考文献〕Bam HⅠ(2,319)
Eco RⅠ(2,350)
NotⅠ(2,377)
XbaⅠ(2,395)
Bsp 120Ⅰ(2,401)
ApaⅠ(2,405)

GFP Vector pQBI-LTRgagGFP

CM

pr
Am

GFP moiety

SV40
poly Aneo

Bam HⅠ(2,594)
Eco RⅠ(2,625)
Eco RVⅠ(2,637)
NotⅠ(2,652)
XbaⅠ(2,670)
Bsp 120Ⅰ(2,676)
ApaⅠ(2,680)

neNheⅠ(1,602)

pQBI-nefGFP
6,857 bp

B23BFP/GFP

7,132 bp

SmaⅠ(3,779)

Sac Ⅱ(966)

Sac Ⅱ(966)

ori

p
Am

CM
Vp
ro

r

Am

BFP Vector pQBI-revBFP

BFP Ex. 384nm Em. 450nm

SspⅠ(6,739)

SspⅠ(7,014)r

Dra Ⅲ(3,232)

測定波長：

きます。融合タンパク質は核周囲に局在します。
また、SV40 プロモーターの下流に neo 遺伝子を含んでおり、形質転換された薬剤耐性株を効率よく選択できます。

ori

来の緑色蛍光タンパク質です。蛍光を発するのに酸素以外特別な因子を必要とせず、in vivo において生理的機能を損なうことがないため、生細胞中でタンパク質の発現や局在を直接観察できます。BFP（Blue Fluorescent Protein）は、GFP を変異させた
青色蛍光タンパク質です。
本品は、野生型 BFP/GFP を変異させ、より哺乳動物細胞での発現効率を高めた BFP/GFP ベクターです。

BFP Vector pQBI-B23BFP、 GFP Vector pQBI-nefGFP
哺乳動物細胞中で、HIV 由来の nef タンパクGFP Vector pQBI-B23GFP
質と GFP の融合体を高効率に発現することがで

ori

GFP（Green Fluorescent Protein）は、
オワンクラゲ（Aequorea victoria）由Lacl qEagⅠ(2,938)

規 格
遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用

容

量

20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg

希望納入価格（円）33,00033,00050,00050,00050,00050,00050,00055,00035,000Novel Organic Compounds

30

28

24

22

26

20

16
18

8

12
14

6

2

4

0

10

log P

stock log P＜5=66038
viable log P＜5=88913

MW values
30000

stock MW＜500

5000
0

11
50

ど様々な形態での納入も可能

10000

95
0

問合せ下さい。

viable

15000

10
50

精度を保証し、バイアルやプレートな

stock
20000

75
0

しますので、資料請求カードにておviable MW＜500

25000

50

※ 製品のデータを CD-ROM で提供

Quantity Standards andFormatting
秤量は 1 〜 500mg で 0.1mg 単位の

85
0

●

0

65
0

の納期は 4 週間〜 2 ヵ月）

5000

55
0

ブロック

10000

45
0

即時納入が可能です。
（再合成の場合

15000

25
0

在庫管理体制も万全で、在庫からのviable350

MS にて実施しております。

20000

-4

評価試験は 400MHz NMR 及び LC/

viable log P＜5
stock

-2

商品は安価で高純度（90% 以上）、

stock log P＜5

25000

15
0

提供しているメーカーです。

30000

Count ID業）にスクリーニング用有機化合物を

log P values-6（製薬企業、農薬企業、バイオテク企

Smart Library of Small Molecules
厳選された 600 種類のテンプレート
を基本骨格とする、18 万件以上の化
合 物 ラ イブ ラリ （Stock : 94,000 ;Viable : 90,000）● Collection of Building Blocks
多様な新規構造を持つ、I.F. LAB
社独自の 2,000 件以上のビルディング●

Count ID

I.F. LAB Ltd. は、世界中の 200 社

mw

stock MW＜500=80018
viable MW＜500=104935

遺伝子工学用カタログ・マニュアル

第 13 版

2003 年度版 発行！

〔目 次〕● 定量 PCR 用試薬、GM 検

知用試薬、学生実験用キッを新たに掲載ト「Dr. ジーン」● プロテオーム解析用試薬を
約 70 ページ掲載● 各機種対応の定量 PCR 用
試薬もラインナップ● RNA抽出試薬「ISOGEN/-● 製品に関するデータをできLS」に mRNA 精製キットがセットになった「ISOGEN/＋LS Poly（A）
Isolation
Pack」
を掲載

BufferPCR
Cloning and Modification
Restriction Endonuclease
Modifying Enzyme
DNA Substrate and Vector
Other
Gene Transfer
DNA Sequencing
PrimerElectrophoresis
MarkerAgarosePolyacrylamide and Dye
Apparatus
DNA Array
Hybridization
DNA and RNA Extraction
Invitek GmbH

るだけ多く掲載し、マニュア
ルもさらに充実

Library
Cap Site Technology
RNA and DNA
BioChain, Inc.
DNA and RNA Synthesis
Proteome Analysis
Protein Extraction
Protein Purification
Protein Refolding Reagent
Protein Analysis
Two-hybrid System
Structural Analysis
Apoptosis
Custom Service
Biotechnology Educational Kit
GMO Detection
OthersManuals
Appendix
Index and Price List

第 25 回 日本分子生物学会年会

バイオテクノロジーセミナーのご案内
当社では、12 月 11 日よりパシフィコ横浜で開催されます第 25 回日本分子生物学会年会のバイオテクノロジー
セミナーで、amaxa 社 NucleofectorTM システムを中心とした遺伝子導入に関するセミナーを行う予定です。是非
ふるってご参加下さい。
（当日は軽食を用意しております。）
開 催 日：平成 14 年 12 月 12 日（木）12:00 〜 13:30
会

場：B 会場

演題番号：BT-2B※詳しくは資料請求カードにてお問合せ下さい。

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）25

生体試料前処理用 HPLC カラム
ワコーパック® Pre-Clean4.0
本品は、粒子径 30Fm の親水性逆相型ポリマー系充てん剤を使用した、
カートリッジタイプの HPLC 用カラムです。生体試料、血清中の成分・薬物分析における前処理カラムとして使用
できます。
〔特

長〕

1. 親水性化合物の保持が大きく、タン
パク成分との分離に優れる

2. カラムの劣化が少なく、耐久性に優れる〔血清中テオフィリン、カフェインの分析〕
Pretreatment conditions
Column ： Wakopak® Pre-Clean 4.0, 4.0mmφ×10mm
Eluent： 20mmol/l CH3COONH4
Flow rate ： 0.7ml/min. at R.T.
Analytical conditions
Column ： Wakopak® Navi C18-5, 4.6mmφ×150mm
Eluent： A）CH3CN/20mmol/l CH3COONH4 =10/90（v/v）
B）CH3CN/H2O=70/30（v/v）
0-15min. A 100%, 15-17min. B 100%, 17-23min. A 100%
Flow rate ： 1.0ml/min. at 40℃
Detection ： UV 270nm
Column switching time ： 5-7min. Reverse
Sample ： ①Theophylline②Caffein0.1[g/ml in FBS
Inj.vol.
： 100[l11223. 安価なカートリッジタイプ

標準液 0.1[g/ml

コード No.
295-40551
291-40651

品
名
Wakopak® Pre-Clean4.0（4.0mmφ× 10mm）
Wakopak® Pre-Clean Cartridge Holder

20

15

10

5

0

20

15

5

0

和光純薬時報 Vol.70, No.3, p.14（2002）.

10〔参考資料〕
標準添加 FBS

規 格
HPLC 用HPLC 用容量

希望納入価格（円）36,00018,0002本
1本

分析試料前処理用
分析試料前処理用
固相抽出カラム
EU において輸入食品や医薬品・医薬品原料などから抗菌性物質が検出〔固相抽出カラム使用例〕

されたことにより、国内でも輸入品の試

一部についてモニタリング検査の対応が求められています。
これらの分析法にはすでに畜水産中

料
緩衝液・有機溶媒
遠心操作
Precep-C

C18固相抽出カラムの残留抗生物質の分析と同様な方法が用いられます。今回、その分析法に

COOH固相抽出カラム用いられる前処理用固相カラムなどをご紹介します。
抗菌活性試験、HPLC試験など
Bakerbondspe カラムプロセッサー■固相抽出カラム
コード No.
292-32251

コード No.
568-20011
566-20012
564-20013
562-20014
560-20015

品
名Presep-C C18（ODS）

メーカーコード
7020-17020-27020-37020-67020-7規 格
試料前処理用品

名Bakerbond オクタデシル（C18）容量0.9g/ 個× 50 個入り

容量

1mL（100mg） × 100 本入り
3mL（200mg） × 50 本入り
3mL（500mg） × 50 本入り
6mL（500mg） × 30 本入り
6mL（1,000mg）× 30 本入り

希望納入価格（円）25,000

希望納入価格（円）26,00018,30020,20013,80019,200〔次頁に続く〕26

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

コード No.
569-20161
567-20162

メーカーコード
7211-17211-3

品

名容Bakerbond カルボン酸（COOH）

量

1mL（100mg） × 100 本入り
3mL（500mg） × 50 本入り

希望納入価格（円）34,60029,900＊その他、各種官能基を結合した固相抽出カラムを取揃えています。お問合せ下さい。

■固相抽出カラム減圧システム
コード No.
569-20281
566-20291

メーカーコード
7018-00
7208-00

品
名
spe-12G カラムプロセッサー（12 本カラム処理用）
spe-24G カラムプロセッサー（24 本カラム処理用）

容

量

1台
1台

希望納入価格（円）125,000
180,000

アクアテストⅡ ATB-50★上水試験方法収載のピルビン酸添加 X-Gal・MUG 培地★水中の大腸菌群・E.coli 及び損傷大腸菌群を 24 時間で検出★試験管の要らない 50ml 分包タイプ（1 検体）★安価：250 円 /50ml〔特〔AquaTest Ⅱ 組成表〕

長〕

● 水中の大腸菌群と E. coli を同時に検査
発色及び発光酵素基質を使用して
います。

ペプトン
塩化ナトリウム
硝酸カリウムピルビン酸ナトリウム
ラウリル硫酸ナトリウム● 損傷菌の判定も、24 時間
上水試験方法収載の、ピルビン酸
添加 X- Gal・MUG 培地です。

当組成は、2001 年改訂上水試験方法の糞便性指標である大腸菌群及び大腸菌の試験方法として収載された特定酵素基質培地法に基づくものです。

5.0 g
5.0 g
1.0 g
1.0 g
0.10g

りん酸水素二カリウム
りん酸二水素カリウム
X- Gal
MUG
IPTG

4.0 g
1.0 g
0.10g
0.10g
0.10g

〔使用方法〕● 試験管は要りません
樹脂製バッグに、調製済粉末培地が密封されています。
バッグを開封して、検水を入れるだけで検査が開始できます。
面倒な前準備や後作業が無いため、省力効果は抜群です。

① ノッチ部から、袋を開封します。

② 袋上部のバンド両端を指で持ち、内側に押すようにして袋を開口し、検水 50ml を注入します。袋の上から培地を揉みほぐして溶解します。

④ バンド両端をロックして密封します。

⑤ 孵卵器で培養（36 ± 1℃ 24
時間）します。淡黄色の培地が青く変色すれば大腸菌群
陽 性 で す。紫 外 線（λ =366nm）を照射して蛍光を発すれば E.coli 陽性です。

● 目視判定が容易
樹脂製ボトルや試験管に比べて、発色と発光が明瞭に観察できます。
● 使う人の身になった設計
培養後はバッグごとオートクレーブ
滅菌し、そのまま廃棄ができます。
保管場所も、驚くほど省スペースで済みます。

コード No.
308-13201

メーカーコード
ATB-50

AquaTest Ⅱ

品
名ATB-50

メーカーコード
ATB-50C
BL-02
BL4BLB
PXR-01

品
名
AquaTest Ⅱ ATB-50 用 コンパレータ
ミニブラックライト蛍光ランプ
ミニブラックライト用交換用ランプ
収納ラック③ バンド両端を両手で外側に引くように持ち、袋を回転させて巻きつけます。

容量（50mL 用× 5 バッグ）
× 20

希望納入価格（円）25,000〔関連商品〕
コード No.
307-13411
309-09441
300-09471
304-13421

容

量

1本
1台
1本
1 ラック

希望納入価格（円）
2,000
5,600
1,700
5,000

和光純薬時報 Vol.70, No.4（2002）

27

和
光
純
薬
時
報
第
七
十
巻

ジエチレングリコール
ダイオキシン類分析用
ダイオキシン類は、主に産業廃棄物れます。本品は、ダイオキシン類分析及び焼却場等の排ガスから排出され適合性試験を行い、ダイオキシン類がています。下記に示す装置で排ガス中低濃度であることを保証しておりますのダイオキシン類をサンプリングするので、安心してご使用いただけます。

第四号

際に、ジエチレングリコールは使用さ〔排ガス等のダイオキシン類をサンプリングする装置の 1 例〕

4 〜 6 塩素化物

5pg/l 以下

7, 8 塩素化物

25pg/l 以下

4 〜 6 塩素化物

5pg/l 以下

7, 8 塩素化物

25pg/l 以下

2, 3', 4, 4', 5-PCB

100pg/l 以下

その他 Co-PCB

50pg/l 以下

ダイオキシン類

吸着樹脂カラム
煙道より●ダイオキシン類分析適合性試験

真空ポンプ
流量計へ

ジベンゾフランコプラナー PCB
蒸留水（ヘキサン洗浄品） 空 ジエチレングリコール 空

コード No.
040-28645

品 名Diethylene Glycol

規 格
ダイオキシン類分析用品 名
DIOXIN TRAP BEADS

規 格
ダイオキシン類分析用

容量

希望納入価格（円）
3,000

500mL

〔関連商品〕
コード No.
040-27481
040-28081
046-28083

Distilled Water, Hexane Washed

環境分析用溶媒容量

希望納入価格（円）25,000
2,250
5,000

200g
1L
3L

残留農薬試験用品目追加！

Methyl Acetate
環境分析用
ご 好評いただいている環境分析用

キルフェノール類等）の濃度を測定し、〔規溶媒に今回新たに、酢酸メチルを追加

実用上問題ないとされている低濃度を含量（cGC）：98.0％以上しました。

保証しております。内分泌撹乱物質類

密度（20℃）：0.928 〜 0.935g/mLの分析に安心してお使いいただけます。

内分泌撹乱物質分析適合性：試験適合

環境分析用溶媒類は、内分泌撹乱格〕

134-14285

化学物質（フタル酸エステル類、アル500mL4,000 円〔関連商品〕
コード No.
018-17815
015-17825
041-28055
043-28375
048-28065
055-06895
084-07985
085-07655
135-13855

品
AcetoneAcetonitrile
Dichloromethane
Dichloromethane
Diethyl Ether
Ethanoln-Heptane
n-Hexane
Methanol

名

規 格
環境分析用
環境分析用
環境分析用
エストラジオール分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用

容

量

500mL
500mL
500mL
500mL
500mL
500mL
500mL
500mL
500mL

希望納入価格（円）
1,900
2,600
2,600
2,700
4,200
4,000
4,000
1,800
1,800

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

記載価格は希望納入価格であり消費税等は含まれておりません。

発行所

28

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL. 06-6203-3741（代表）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

2002 年 10 月15日
金 澤 廣 継大 西 礼 子
共進社印刷株式会社