食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

研究課題名

食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

フリガナ

アダチ

代表者名

安達タカヒロ貴弘

所属機関（機関名）東京医科歯科大学（役職名）准教授
氏

共同研究者

難治疾患研究所

名（フリガナ）

戸村 道夫（トムラ ミチオ）
中村 公則（ナカムラキミノリ）
高雄 啓三（タカオ ケイゾウ）

未病制御学

所属機関・役職名

役割分担

大阪大谷大学・教授

免疫細胞のプロファイルイン
グ

北海道大学

腸管バリア機能の解析

富山大学

准教授
教授

行動学解析

Immunoglobulin A-specific deficiency induces spontaneous inflammation specifically in the ileum. Gut. 2022 Mar;71(3):487-496. doi: 10.1136/gutjnl-2020本 助 成金 によ る 発
322873.
表論文，学会発表
Adachi, T. IgA-deficiency breaks immunological and neurological homeostasis.
第 50 回日本免疫学会学術集会 2021．12．
研究結果要約
食物アレルギーは腸管バリア機能の低下による食物抗原の侵入が原因と考えられていたが、皮膚からの抗原の侵入が原因となっていることが明らかになってきている。食物アレルギーモデルでは腸管バリア機能に重要な免疫グロブリン A (IgA)がアレルギーの回避に重要であることを示してきた。IgE からIgA にクラススイッチすることで寛容が成立すると考えられ、食物アレルギーを発症しない場合は、継続的な経口投与により腸内細菌に対する IgA と同様に、IgA 抗体価が持続することを見出し、食物抗原に対する免疫寛容の機序となっていると考えられた。また、樹立した IgA 産生細胞可視化マウスを用いて、IgA 産生細胞の腸管および脾臓での動態を可視化した。さらに、樹状細胞可視化マウスを用いて、小腸、大腸、パイエル板、脾臓での動態を明らかにした。一方、昨年度樹立した皮膚感作アレルギーモ
デルでは、皮膚感作により所属リンパ節で感作された IgE 陽性細胞が脾臓、骨髄や他のリンパ節に移動していることを明らかにし、IgE 陽性細胞の動態が明らかとなった。IgA がアレルギーのみならず発達異常に関わっていることが示唆されていたので、その関連についても解析し、IgA 欠損マウスでは脳にも異常がみられることを明らかにした。以上のように、食物抗原への免疫寛容、アレルギー反応に対する機序の一端を明らかにした。

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食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

研究目的創生する画期的なことである。

食物アレルギーは食物抗原に一旦感作されて免疫記憶が成立してしまうと抗原を摂取するた研究計画及び研究手法

びにアレルギー症状が惹起されてしまう。しかし、経口免疫寛容における IgA 抗体産生の解析

その治療方法としては、アレルギーの原因となるマウスに鶏卵オボアルブミン（OVA）を alum

食物を避けるといった対処療法が、いまだ主流でアジュバンドを用いて腹腔に投与して免疫し、2ある。少量の抗原を投与する減感作療法も行われ週間後に追加免疫後、さらに 1 週間後から経口投ているが、根本的な解決には至っていない。通常与すると、IgA 欠損 C57BL/6 マウスでは強いアは、食物抗原により、制御性 T 細胞が誘導されてナフィラキシー反応が起こるが、IgE を過剰に発経口免疫寛容がされるが、腸管や皮膚などのバリ現するノックインマウスでは初回はアナフィラア機能が破綻すると、食物が体内に侵入し、免疫キシーが起こるが、2 回目の経口投与ではアナフ反応が惹起され、アレルギーを発症すると考えらィラキシー反応が見られなくなくなる。また、野れる。これまでの研究から、独自に腸管あるいは生型や腸管バリア機能の低下している IL-22 欠

皮膚のバリア機能を低下せた食物アレルギーモ損マウスに投与してもアナフィラキシー反応はデル系を確立し、IgA が IgE の産生を抑制するこ誘導されない。アナフィラキシー反応が誘導されとを、IgA あるいは IgE を制御する食品成分も見なくなった IgE 過剰産生マウスでは OVA 特異的出している。食物アレルギーにおける免疫記憶、な IgE 産生が OVA 経口投与後は低下し、逆にさらには免疫グロブリンのクラススイッチを標IgA 産生が増えていた。抗原の継続的な投与が的として食物抗原特異的に免疫記憶を制御する

IgA 産生を増強、あるいは維持させ、そのために根本的な治療法の開発ができるのではないかとOVA に対する免疫寛容が維持されていると考え考える。そこで本研究では、食物アレルギーにおられる。また、食物アレルギーの治療法に脱感作いて免疫記憶が成立および維持される機序を明療法があるが、その作用機序にもなっているのでらかにすること、それをもとにした抗原特異的なはないかと考えられる。これらの仮説を証明する

免疫記憶およびクラススイッチの機序を明らかために、OVA/alum で免疫後、継続的な OVA のにすること、さらにはその制御法の確立を目的と経口投与で IgA 産生が持続するかを調べることした。またアレルギーと発達障害の関連も指摘さにした。

れており、アレルギー疾患と神経性疾患との因果
IgA 産生細胞の動態解析関係についても多角的に調べ、アレルギーの治療による他の疾患の制御の可能性についても検討IgA 産生細胞を可視化するマウスの作製に成することとした。このことが解明されれば、アレ功していることはすでに一昨年、報告している。

ルギー疾患にとどまらず、新たな医療の枠組みを腸管での IgA 産生細胞の動態を明らかにするこ25

食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発とを目的として、カルシウムバイオセンサー導された濃度も低値に留まった。さらに Enzyme-

yellow cameleon 3.60 (YC3.60) 1)を IgA 産生細Linked ImmunoSpot （ELISPOT）アッセイに胞特異的に発現するマウス 2)を利用し、マウスをよる OVA 特異的 IgE 産生細胞の検出においても４％パラホルムアルデヒドで固定後、小腸、大腸、IgA 欠損 C57BL/6 マウスでは誘導は安定しなか

パイエル板、脾臓についてビブラトームにて、50った。この結果から我々は皮膚感作Ⅰ型アレルギμm の切片を作製した。ライカ社製の蛍光顕微鏡ーモデルでは、野生型に比べ IgA 欠損マウスではにてそれぞれの切片の YC3.60 の黄色蛍光を検出

IgE 産生誘導が低下している可能性を考えた。そした。また、腸管での B 細胞の活性化には樹状細こで今年度は、C57BL/6 系野生型マウスと IgA胞から抗原が提供されているので、樹状細胞の可欠損マウスに皮膚感作Ⅰ型アレルギーモデルを視化マウスを用いて、それぞれの腸管組織で局在適用し、抗原特異的 IgE 産生を検討した。

を検討した。
皮膚感作Ⅰ型アレルギーモデルを用いた IgE 陽

免疫記憶は記憶 B 細胞と長寿命形質細胞によって担われているとされているが、IgA クラスの性細胞の生体内動態解析

抗体は抗原刺激がないと抗体価が下がってしま

本テーマでは、食物アレルギーを含む I 型アレう。特に、骨髄に移行して長寿命形質細胞が免疫ルギー発症要因である抗原特異的 IgE を産生す記憶として持続する抗体産生の実態であると考る抗原特異的 IgE 産生形質細胞およびその前駆えられるが、IgA クラスの抗体では抗原がないと細胞の生体内動態を明らかにし、IgE 産生形質細特異的な抗体価は下がってしまう。それこで、IgA胞の誘導および維持機構を明らかにすることで、抗体産生可視化マウスを用いて、骨髄での IgA 産IgE 産生の制御を目的している。従来、胚中心で生細胞をフローサイトメーターにて検討した。

クラススイッチした IgE 産生形質細胞あるいはその前駆細胞である形質芽細胞は脾臓あるいはIgA 欠損マウスにおける皮膚感作Ⅰ型アレルギ

骨髄に移動し、short-lived、あるいは long-livedーモデルにおける IgE 産生の解析

IgE 産生形質細胞として IgE を持続的に産生し申請者は C57BL/6 系 IgA 欠損マウス 3) の続けると考えられている。しかし、胚中心が存在

OVA/alum 感作モデルでは野生型マウスよりもするリンパ組織から骨髄や脾臓への IgE 産生形

IgE 産生が増強することを見出している。そこで、質細胞あるいはその前駆細胞移動の直接証明は抗原を反復塗布する皮膚感作Ⅰ型アレルギーモ実はなされていない。そこで昨年度までの検討で、デルにおいても同様の結果が得られることを期

野生型に比べ高い IgE が産生される IgA 欠損

待 し て 昨 年 度 検 討 し た 。 し か し 、 IgA 欠 損

C57BL/6 マウス 3)に OVA/Alum 感作モデルを適C57BL/6 マウスでは血中抗 OVA IgE 抗体誘導は用し、フローサイトメトリーによる IgE 産生細胞検出される個体も認められたが不確実であり、誘分化過程の詳細解析法と、ELISPOT アッセイに26

食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

よる抗原特異的 IgE 産生形質細胞の検出法を確ウスを用いる必要が有ることを示し、さらに、立した。そしてさらに、IgA 欠損マウスと光変換

KikGR マウス(C57BL/6 バックグラウンド)を蛍光タンパク質 KikGR を発現する KikGR マウ

BALB/c マウスと交配し、ほぼ BALB/c バックグス 4)を掛け合わせて作製した KikGR IgA 欠損ラウンドに置き換わるとされる 6 世代目のC57BL/6 マウスに OVA/Alum 感作して IgE+細KikGR 発現 BALB /c マウスの作成を完了した。

胞を誘導後、腸間膜リンパ節を光照射して細胞をそこで今年度は KikGR 発現 BALB /c マウスに赤色にマークし、抗原特異的 CD19+ IgE+細胞、て皮膚感作Ⅰ型アレルギーを誘導し、皮膚所属リおよび IgE+形質芽細胞(CD19–細胞表面 IgE+)が、ンパ節から、脾臓、骨髄、腸間膜リンパ節におけ腸間膜リンパ節から骨髄および脾臓に移動してる IgE+形質芽細胞の移行と局在を明らかにするいることを国内外で初めて直接検出した。この結ことにした。

果から我々は、頻度は低いが IgE 産生細胞は持続的に所属リンパ節から、脾臓、骨髄に移動してい腸管バリア機能を欠くマウスにおける脳、行動学ると考えている。

解析

一方で、小麦加水分解物を含む石鹸による小麦IgA 欠損マウスの解析から、ヒトの自閉症と相粉アレルギーや英国の乳児へのピーナッツオイ関のある細菌が増えていること、さらにはヒトでル塗布によるピーナッツアレルギーなどが典型

IgA とアレルギー、IgA と自閉症に相関があるこ的な例として挙げられるが、食物アレルギーは皮とが示されている 5, 6)。昨年度報告したが、IgA 欠膚感作により誘導された食物と同一抗原に対す損マウスでは不安行動が増強しており、行動学異る抗 IgE 状態下における食物摂取により惹起さ常がみられることがわかっている。IgA 欠損マウれる。従って、皮膚感作時に誘導される IgE 産生

スでは不安行動が亢進していたので、マウスを固細胞の誘導、維持されるメカニズムと生体内動態定後、脳の凍結切片を作製し、マイクログリア、の解明は、食物アレルギーの感作機序の解明を大炎症性サイトカイン IL-1 の産生の免疫染色を行きく推し進める。OVA/Alum 感作モデルは、誘導った。

された抗原特異的 IgE 産生細胞の解析にはとてIL-22 は腸管からの抗菌ペプチドの分泌に重要も有用なツールであるが、生体内での IgE 産生細なことや、上皮の修復に関わっており、腸管バリ胞誘導過程の解明には、抗原皮膚感作 IgE 誘導モア機能に重要であることが知られている。腸管のデルが必要である。そこで昨年度、抗原を反復塗バリア機能に重要な IgA とともに、IgA/IL-22 の布する皮膚感作Ⅰ型アレルギーモデルを樹立し2 重欠損マウスを作製し、さらなる行動異常がみた。その過程で、上述のように C57BL/6 系 IgAられるかを不安様行動がみられるかを評価する

欠損マウスでは IgE 産生誘導が安定しないため、オープンフィールドテストで検討した。オープン

皮膚感作Ⅰ型アレルギーモデルでは BALB/c マフィールドテストでは約 40 ㎝四方の箱にマウス

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食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

1 匹を置き、10 分間の行動を調べた。箱の中央へ回腸炎を起こすことを IgA 欠損マウスを使ってのアプローチの回数、中央での滞在時間、総移動証明してきた 3)。このことは IgA が腸内細菌によ距離を測定した 7)。

る過剰な免疫応答を制御していることを示しており、腸内細菌のみならず、日常的に摂取する食結果と考察物に対して同様に働いていることが強く示唆さ

経口免疫寛容における IgA 抗体産生の解析れる。これまで経口免疫寛容は制御性 T 細胞で説野生型 C57BL/6 マウスにリン酸緩衝液（PBS）明されてきたが、制御性 T 細胞による過剰な免疫で OVA/alum (OVA 50 ㎍)を懸濁した 300 ㎕を腹反応の抑制のみならず、抗原特異的な IgA も過剰腔投与し、3 週間後に、同様の方法で追加免疫をな免疫応答の抑制に働き免疫寛容に寄与していした。さらに 3 週間後から、1％OVA/PBS、300ることが示された。

㎕を１週間ごとに経口投与を行った。経口投与時に採血を行い、その血清について ELISA で OVA

IgA 産生細胞の動態解析

特異的な IgA を測定した。その結果、コントロー

IgA 可視化 (IgA-Cre/YC3.60) マウス 2)につルとして PBS のみを投与したマウスでは追加免いて４％PFA により固定後、それぞれの組織を摘

疫の 3 週間後では OVA 特異的な IgA の抗体価は出し、作製した切片標本について蛍光観察をした。

低くなっているが、OVA を経口投与した群では、パイエル板では B 細胞濾胞内の 2 次濾胞に集積顕著に高い OVA 特異的抗体が検出された（図 1）。

していることが明らかとなった（図 2）。またバイ

腸管には非常に多くの共生細菌が存在しているエル版の基底側近傍にも多く存在していた。腸管が、その多くは IgA 抗体と結合していることが知基底側で M 細胞を介して取り込まれた抗原は近られている 8)。IgA がないと、特に小腸で腸内細接するドーム下領域（sub-epithelial dome: SED）

菌叢のバランスが崩れ、免疫系を過剰に刺激してに分布する樹状細胞によって B 細胞が抗原刺激を受け、IgA にクラススイッチするとされている。

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食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発観察された IgA 産生細胞はクラススイッチした直後のものであると考えられる。パイエル板近傍の粘膜固有層では柔毛内でも数多くの IgA 産生細胞が検出されている。大腸では IgA 産生細胞は多数見られるが、これまでの報告のとおり、小腸の方が多くみられている。一方、樹状細胞を可視IgA 欠損マウスにおける皮膚感作Ⅰ型アレルギ

化 す る た め に 、 CD11c の 発 現 を 可 視 化 し たーモデルにおける IgE 産生の解析

CD11c-Cre/YC3.60 マウス 9)のパイエル板ではC57BL/6 系野生型マウスと IgA 欠損マウスに、SED 近傍に多く見られた（図 3）。小腸の粘膜固腹部皮膚をテープストリッピング後、OVA を週有層に多数存在していることが確認された。に 1 回塗布感作を、1 回/週 × 3 回実施して 3 日

IgA-Cre/YC3.60 マウスの骨髄細胞を調べる

後、および 1 回/週 × 4 回実施して 3 日後に、血と、CD138 陽性の IgA 産生細胞が存在している

中 IgE を測定した。その結果、IgA 欠損マウス血（図 4）。また、この細胞は CD93 陽性で、長寿中の抗原特異的 IgE 濃度は野生型マウスよりも命形質細胞であることを強く示唆している。この低かった。また、生体内の IgE が、細胞表面に発ことは、IgA クラスの抗体でも、長寿命細胞によ現する高親和性 IgE 受容体 FcεR1 に結合して、る恒常的な産生が可能であると考えられ、長寿命IgE+細胞として検出される好塩基球 (CD45dull

形質細胞が誘導できれば、長期間の免疫寛容の誘で同定)の IgE シグナルおよび OVA シグナルは、導も可能ではないかと推測される。

IgA 欠損マウスの方が低かった (図 5)。

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食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

しかし、IgA 欠損マウスでも皮膚感作回数を増や皮膚感作Ⅰ型アレルギーモデルを用いた IgE 陽

すと FcεR1 発現細胞の IgE および OVA シグナ性細胞の生体内動態解析

ルは増加することから、IgA 欠損マウスも抗原のKikGR 発現 BALB /c マウス 4)の腹部皮膚をテ感作回数や強さに依存して抗原特異的 IgE 産生ープストリッピング後、OVA を週に 1 回塗布感も増加すると考えられた。IgA 欠損マウスへの作を 1 回/週 × 4 回実施して 6 日後に、所属リ

OVA/alum 感作では野生型に比べ IgE 産生が増ンパ節である鼠径リンパ節を光照射して細胞を強したのに対し、皮膚感作では IgE 産生が低下し赤色(KikGR-Red)にマークした。そして、24 時間ていた理由として、OVA/alum のような強い感作後に皮膚所属リンパ節、脾臓、骨髄、そして、腸条件では IgE 産生細胞が容易に誘導された後、間膜リンパ節の細胞を分離してフローサイトメ

IgA 欠損によって IgE から IgA へのクラススイトリーで解析した(図 6A)。当検討では、B220 のッチが出来ないことにより IgE 産生増強が認め代わりに CD19 を使用した。

られた。それに対して、より生理的な皮膚感作に最初に、所属リンパ節から他の臓器への免疫細よる IgE 誘導条件下では、IgA 欠損によって腸内胞の移行について確認した。コントロールとして環境のディスバイオーシスにより、抗原特異的なIgE–B220+B 細胞を例にみてみると、光照射したIgE 産生誘導自体が抑制された可能性を考えて所属リンパ節では、38%の細胞が KikGR-Red でいる。

あり、62%の細胞が KikGR-Green 細胞であった(図 6C)。光照射時には所属リンパ節の 100%の細30

食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

胞を KikGR-Red にマークしているので、この結ることがわかった。 IgE+ 細胞をゲートして、果は 38％の細胞は光照射時から所属リンパ節にCD45high と CD45dull に分離した。このうち留まっており、62%の細胞は光照射後 24 時間で

CD45dull 細胞は前述の好塩基球であり、ネガテ入れ替わったことを示している。そして、所属リィブコントロールとして以下でも比較対照としンパ節から移出した細胞は他の臓器に移行し、各て用いた。CD45high 細胞を、CD19+と CD19–に臓器の IgE–B220+B 細胞画分で KikGR-Red が、分けた。これらの細胞を FSC と SSC で展開して皮下リンパ節では 9.9%、腸間膜リンパ節、およみると、ほぼ全ての細胞が FSChigh でナイーブ

びパイエル板では 4%、脾臓では 4.4％、骨髄ではB 細胞等に比べて大きな細胞であり(図 3 中)、こ5.3％検出された(図 6D)。これらの結果は光照射

れらの細胞は胚中心で増殖したためサイズが大した所属リンパ節から他の検出した臓器への細きくなっていると考えている。これらの結果をも胞移動をきちんと検出出来ていることを示してとに、IgE+CD45highCD19+細胞を IgE+産生細胞いる。にコミット直後の「IgE+形質芽細胞前駆細胞」、IgE+CD45highCD19–細胞を「IgE+形質芽細胞」

次に骨髄細胞の結果を用い、IgE+細胞についてフローサイトメトリーの解析ゲートを設定したとして、それぞれ検出した。

(図 7)。死細胞・T 細胞除去画分を、IgE と CD19

所属リンパ節では IgE+細胞がわずかに検出さで展開すると、IgE+ 細胞が分画され CD19–とれ(図 6B)、CD19+ および CD19–細胞が約半分ずCD19+細胞が認められた(図 7 左)。また同じ細胞つ含まれたが、いずれも FSClow の小さな細胞がを IgE と OVA で展開するとほとんどの IgE+細ほとんどで、一部で FSChigh のサイズの大きい胞が OVA+であることから、感作抗原特異的であ細胞が認められた(結果は示さず)。この結果から、

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食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

IgE+産生細胞にコミット直後の「IgE+形質芽細胞

臓 で 検 出 さ れ た IgE+CD45highCD19– 分 画 の前駆細胞」あるいは「IgE+形質芽細胞」は所属リ

KikGR-Red 細胞は、所属リンパ節から移行したンパ節で生成後直ぐに所属リンパ節を移出する「IgE+形質芽細胞」であると考えている。と考えられた。また、他の皮下リンパ節、腸間膜脾臓あるいは骨髄で、IgE+産生細胞にコミットリンパ節、パイエル版では IgE 産生細胞はわずか直後の「IgE+形質芽細胞前駆細胞」あるいは「IgE+に検出されたのみで、赤色にマークされた IgE+形質芽細胞」の両方で KikGR-Red 細胞が検出さ細胞も検出されなかったため、これらの臓器はれた。この結果から、両細胞が所属リンパ節からIgE 産生細胞の維持への関与は少ないと考えら移動している可能性、あるいは、CD19+ IgE+細胞れた(結果は示さず)。そこで次に、骨髄の IgE+細が脾臓あるいは骨髄に移行後、CD19–IgE+プラズ胞をみてみると、前述の様に IgE+産生細胞にコマブラスト細胞に分化した可能性が考えられる

ミット直後の「IgE+形質芽細胞前駆細胞」あるいが 、 我 々 は 、 所 属 リ ン パ 節 で CD19 – IgE+ とは「IgE+形質芽細胞」が検出され、それぞれ、3.6%CD19+IgE+細胞の両方(いずれも FSChigh)が数と 0.7%の KikGR-Red 細胞が検出された(図 7 右)。

は少ないながらも検出されることから、前者と後一方、脾臓では IgE+プラズマ前駆細胞にコミッ者の両方の経路が存在する可能性を考えている。

ト直後の細胞では 6.2%、IgE+プラズマ細胞では骨髄および脾臓での「IgE+形質芽細胞前駆細胞」8.3%、KikGR-Red 細胞が検出された(図 8)。脾臓の KikGR-Red 細胞の割合は、3.6% vs. 6.2%と大の IgE+CD45highCD19–分画には、IgE 陽性のマきく変わらないのに対し、「IgE+形質芽細胞」画スト細胞(細胞表面に FcεR1 を発現し好塩基球分のそれは、0.7% vs. 8.3%と大きく異なる。一般

同様 IgE+細胞として検出される。c-kithigh 細胞的にある細胞画分の細胞数が大きく変化しないとして同定)が 10%程度含まれるが、所属リンパ場合、移入してきた KikGR-Red 細胞の割合は入節において IgE 陽性のマスト細胞は検出出来なれ替わり速度に比例する。従って、脾臓の「IgE+かった(別の実験で確認)ことから、骨髄および脾

形質芽細胞」の入れ替わり速度は、骨髄のそれよ32

食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

りも 10 倍程度早いことが想定される。この結果

腸管バリア機能を欠くマウスにおける脳およびは、胚中心でクラススイッチした IgE 産生細胞は行動学解析

脾臓および骨髄に移行し、脾臓では short-lived

IgA 欠損マウスでは不安行動が亢進していた形質細胞として、骨髄では long-lived 形質細胞

ので、マウスの脳の調べたところ、マイクログリとして維持されるという知見と一致する。

アが増加しており、炎症性サイトカイン IL-1 の前年度の検討で、細胞内 IgE 陽性細胞のうちの産生の亢進が見られた。このことは脳でも、炎症99%が細胞外陽性であり、細胞外 IgE 陰性細胞はが亢進していることが明らかとなった。IgA がな

細胞内 IgE 陽性細胞の 1%程度しか検出されなか

いことにより、生体内での各所に炎症があり、そったことを考えると、今回の結果は、ほぼ IgE 産れがアレルギーのみならず、他の疾患にも影響し生細胞の生体内動態を検出出来ている可能性がていると考えられる。さらに、IgA/IL-22 の 2 重高いと考えている。

欠損マウスについてオープンフィールドテスト

以上の様に、我々は、所属リンパ節から脾臓、を行った。正常マウスに比べ IgA 欠損マウスでは骨髄への IgE+細胞移動の詳細を明らかにした。

不安様行動が増加しており、腸管バリア機能に重これらの知見は、食物アレルギーを含む I 型アレ

要な IL-22 を欠くことでさらに症状が悪化する

ルギー発症要因である抗原特異的 IgE が持続的と予測したが、16 週令の IgA/IL-22 の 2 重欠損に産生されるメカニズムの解明に繋がる。

マウスでは IgA 欠損マウスとの差異は見られなかった（図 9 を参照）。IL-22 欠損は腸炎のリス

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食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

ク因子であるが、16 週令の IgA 欠損マウスではある。しかし、前述の様に IgE 産生を誘導する日顕著な病態を示すほどの影響がないことが示唆

常的な抗原感作は皮膚を介しているが、当研究でされた。老齢マウスや IgA 欠損マウスより病態のも確立した皮膚感作マウスモデルでは IgE+細胞悪いマウスモデルを用いれば、IL-22 の欠損の影は誘導されるもその数が少なく、さらに BALB/c響がみられるのではないかと考えられる。

マウスでの解析が望ましいという状況のため研究が進んでいない。さらに、皮膚感作後のどのタイミング(感作後の日数など)で IgE 産生細胞が所今後の研究活動について
YC3.60 マウスを使うと細胞の動態のみなら属リンパ節で誘導され脾臓、骨髄に移動していくず活性化もモニターできる 1)。IgA 産生細胞を可のかの詳細も不明である。しかし、これらの情報視化し、小腸パイエル板での細胞の動態が明らかは、長期に抗原特異的 IgE が産生されるメカニズになってきたので、この細胞の動態や活性化を骨ムの解明に繋がり重要である。当研究で確立した髄での長寿命形質細胞も同定できるようになっKikGR 発現 BALB /c マウスを用いた皮膚感作Ⅰたので、食物アレルギーや、経口免疫寛容が起こ型アレルギーモデルを用いる事で、抗原の皮膚感っている状態で、生体イメージングにより IgA の作によって誘導される IgE 産生細胞の時空間的動態および活性化を可視化することで、その機序な生体内動態を明らかにしていけると考えていの詳細の解明が可能であると考えられる。また、る。

IgA クラスの長寿命形質細胞が十分検出できる

また、IgM+B 細胞からのクラススイッチでは、ので、OVA などの抗原特異的な細胞について、動

low affinity IgE 産生形質細胞が誘導されるのに態を明らかにし、食物アレルギーを回避するメカ

対し、IgG1+B 細胞からの sequential クラススイニズムについて調べる予定である。

ッチでは、high affinity IgE 産生形質細胞が誘導

IgE+細胞の生体内動態解析については、今後、されると考えられている。当研究で検出した IgE+

IgE 産生細胞を確実に検出出来る細胞内 IgE 染細胞は、high affinity IgE 産生形質細胞であると色を当研究で確立した KikGR 発現 BALB /c マ考えている。そこで現在、当研究で確立したウスを用いた皮膚感作Ⅰ型アレルギーモデルにKikGR 発現 BALB /c マウスを用いた皮膚感作Ⅰよる細胞動態解析に組み合わせることで、「IgE+型アレルギーモデルの所属リンパ節について、形質細胞」(B220– 細胞内 IgE+ 細胞外 IgE–)も含

high affinity IgE 産生細胞の供給源となる抗原特め、局在と生体内移行についてさらに詳細に明ら異的 IgG1+B 細胞について memory B と胚中心かにできると考えている。また、従来の IgE+形質B 細胞も区別して検出した解析を進めている。こ芽細胞あるいは形質細胞の研究は、強い抗原感作

れら所属リンパ節における抗原特異的 IgG1+B 細や寄生虫感染などで大量に誘導された IgE 産生胞の生成と維持と、抗原特異的 IgE+細胞の脾臓、細胞を脾臓や骨髄で検出する解析がほとんどで骨髄への移動を組み合わせて明らかにすること

34

食物アレルギーにおける免疫記憶の解明およびその制御法の開発

71: 487-96

で、特に皮膚感作における IgE 産生誘導過程を明4) Tomura M. New Tools for Imaging of Im-

らかにできると考えている。

mune Systems: Visualization of Cell Cy-

食物アレルギーと他の疾患の関連についても、行動学解析を中心に、病態連関の全容が明らかに

cle, Cell Death, and Cell Movement byできるような総合的な解析方法を見出し、効率的Using the Mice Lines Expressing Fucci,
SCAT3.1, and Kaede and KikGR. Meth-な疾病の発見、早期治療法の確立に貢献できるよods Mol Biol 2018. 1763: 165-74

うな研究を目指す予定である。

5) Hand TW, Reboldi A. Production andFunction of Immunoglobulin A. Annu Rev

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