ISSN 1347-4804

April 2019Vol.87 No.2

〔総説〕

「カーボンナノチューブに内包させて用いる増感色素の開発」

三宅「Phos-tag 技術を用いたタンパク質のリン酸化解析」
【連

木下

秀明、田嶋

智之、高口

豊……… 2

恵美子、木下英司、小池透……… 6載】〈エクソソームと生命現象〉「第 5 回

イミダゾールジペプチドによるエクソソームを介した脳腸相関活性化」

片倉

喜範………

9

〈ペプチド医薬合成基礎講座〉 新連載「第 1 回ペプチド医薬の周辺」

佐藤健太郎……… 12

哲志、宮脇敦史……… 14

根矢

三郎……… 29

〈基礎から応用までよくわかる組織透明化技術〉 新連載「第 1 回透明化技術 Scal e 法を知る、そして使う」

濱

裕、星田

〔化学大家〕「マルグリット・ペレー」〔製品紹介〕
有機合成

免

色素内包カーボンナノチューブ用有機色素、アミロイドβ（Aβ）抗体…………………………………… 21

ビルディングブロック… ……………………………………

5

疫

マウスサイトカイン ELISA キット「レビス ® シリーズ」……… 22

光塩基発生剤「WPBG シリーズ」… …………………… 19培

マグネシウム二次電池用電解液「マグリューション

」…… 19水平型共培養容器「UniWellsTM」… …………………… 23

鉄触媒クロスカップリング用配位子「SciPROP-TB」…… 20

ES/iPS 細胞研究用低分子化合物……………………… 26

TM

養

架橋型人工核酸…………………………………………… 20

CHIR99021, MF………………………………………… 26

フラーレン… ……………………………………………… 21

iCell® ミクログリア… ……………………………………… 27

分

遺

析

伝

子

定量 NMR 用標準液……………………………………… 18

細胞外小胞研究ツール… ………………………………… 24

RoHSⅡ対応用試薬… …………………………………… 18

機

ポジティブリスト関連標準品… …………………………… 18

トキシノメーター ® ET-7000、トキシマスター ® QC8……… 28

器

細胞生物

Phos-tag® 製品……………………………………………

8

SCALEVIEW シリーズ… ………………………………… 17〔お知らせ〕
エクソソーム研究用試薬カタログ Ver. 2 発行のご案内… …………………………………………………… 11
試薬事業 Web サイトリニューアルのお知らせ… ……………………………………………………………… 32

1

R

esearch
カーボンナノチューブに内包させて用いる増感色素の開発

はじめに半導体性を示す単層のカーボンナノ

山口大学大学院
岡山大学大学院

三宅 秀明
智之、高口 豊創成科学研究科

環境生命科学研究科

田嶋は限られてしまう。一方、何らかの方

フェンとベンゾチアジアゾールからな法によってこの限界を打破することがるπ共役系を中心とした色素 1 を目的できれば、実用化への起爆剤となり得分子として設定し、チオフェン誘導体る。

3 を出発原料として、直接アリール化

チューブ（SWCNTs）は、優れた光

このような背景の中、我々は SWCNTs

反応および硫化反応によって合成し吸収特性も併せ持つため光電変換デバに増感色素を内包させることで、上記

た 15）（図 1b）。色素 1 とその前駆体 2イスへの応用が期待されている。ただの限界打破に成功した 10）。すなわち、の違いはチオカルボニル（C=S）とカ

し、単純に SWCNTs に光照射したと

直 径 が 約 1.4 nm の SWCNTs を 用 い

ルボニル（C=O）の違いのみであり、しても、大きな励起子束縛エネルギーて、水からの効率的な光触媒的水素製

分子形状はほぼ同じである。しかし、のため光電変換を実現することは困難造を達成した。これまでに、内包色素

その性質には顕著な違いが見られた。

1-3）。そこで、優れた電子アクの 光 励 起 か ら SWCNTs へ の エ ネ ル

化 合 物 2 の 極 大 吸 収 波 長 は 455 nm

セプターであるフラーレンと複合化しギー移動は報告されていたが 11-14）、光（ε=2.60 × 104）であり橙色を呈する

たシステムが精力的に研究されてい誘起電子移動についてはこれが初めてのに対して、色素 1 は極大吸収波長

る 4-8）。励起電子をフラーレンで抽出の実証例となった。本稿ではその内容

508 nm（ε=2.36 × 104）を中心としすることで効率的な光誘起電子移動がについて紹介する。

て幅広く可視光を吸収し、濃い赤紫色である

実現できるためである。
しかし、近年 Flavel らによる精密な検討によって、SWCNT/C60 システ
ムにおける重大な課題が明らかとなっ

増感色素の設計・合成
および SWCNTへの内包

を 呈 す る（ 図 1c）。C=O 結 合 に 比 べて C=S 結 合 の 方 が HOMO-LUMO
ギャップが小さいため、このような変化がもたらされたと考えられる。化合た 9）。SWCNTs と C60 の ヘ テ ロ 接 合

まず、SWCNTs に内包させる色素物 1 および 2 はいずれもサイクリックを利用した太陽電池の場合、半径の小の 分 子 設 計 を 行 っ た。 色 素 分 子 はボルタンメトリーにおいて可逆な酸化

さい SWCNTs では高い量子効率で発SWCNTs の限られた空間に導入する還元挙動を示すが、その酸化還元電位

電するものの、半径が大きくなるほど必要があるため、出来る限りコンパク（vs Fc/Fc+）にも差異がみられた（1:効率は低下し、0.95 nm 以上ではほぼトなサイズであることが望まれる。まE ox= 0.20 V, E red = − 1.57 V; 2: E ox =0 となってしまったのである。近年、

た、内包色素からの光誘起電子移動を0.10 V, E red = −1.35）。

カーボンナノチューブの合成法は著し実現するためには、光励起によって分SWCNTs 内部空間への色素導入は、く発展しており、大量生産にも成功し子内電荷分離を起こしやすいドナー・

有機溶媒中で加熱還流することによっつつあるが、比較的安価な製品には直アクセプター構造が必要であると考えて行った。具体的には、SWCNTs と径が 1 nm を超えるものが多い。もした。それらの要件を勘案して、電子供

色素 1 の混合物に 1,2- ジメトキシエタ

直径 0.95 nm 以下の SWCNTs に使用

与性の高いフェロセンと電子受容性のン（DME）を加え、３時間加熱還流が限られるとすれば、カーボンナノ

高いチオカルボニル基を有する色素をを行った後、クロロホルムで繰り返し

チューブ系光電変換デバイスの実用性設計した（図１a）。具体的には、チオ

洗浄することで余分な色素 1 を除去

図１．
（a）設計した増感色素分子，（b）色素 1 の合成，（c）色素 1 および化合物 2 の吸収スペクトル（1,1,2,2- テトラクロロエタン溶液）2

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

用いた光触媒について検討した。
まず、SWCNTs とフラロデンドロンの混合物に水を加え、超音波照射を行うことで、複合体 SWCNT/ フラロ
デンドロンの分散液を得た。増感色素した。

光触媒的水素発生実験の結果を内包させた SWCNTs についても同

前述の通り、今回用いる SWCNTs

様の操作を行い、対応する複合体 1@の 直 径（ 約 1.4 nm） は Flavel ら に

図２．
（a）SWCNT 内部空間への色素 1 導入，（b）1@SWCNT の TEM 画像

SWCNT/ フ ラ ロ デ ン ド ロ ン を 得 た

よって示された太陽電池への適用限界（図３）。得られた複合体は、色素内包の値（0.95 nm）を大幅に超過してい

SWCNT を中心とするナノ同軸ケー

るため、SWCNTs の励起による光誘

し、 目 的 の 色 素 内 包 SWCNTs（1@ブル構造を形成して水中に分散してい起電子移動は起こらないことが予想さ

SWCNT） を 得 た（ 図 ２（a））。 得 らると考えられる。

れる。一方、SWCNTs に内包された

れた 1@SWCNT を透過型電子顕微鏡

得られた分散液（SWCNT/ フラロ

色素の励起による光誘起電子移動が起（TEM）で観察したところ、カーボン

デ ン ド ロンと 1@SWCNT/ フ ラ ロ デ

こる可能性がある。そこで、色素 1 内

ナノチューブの内部に色素分子が内包

ンドロン）の吸収スペクトルを測定

包型（1@SWCNT/ フラロデンドロン）

されている様子が確認された（図２

し、900 nm の値で規格化して比較しと非内包型（SWCNT/ フラロデンド（b））。

た（図４）。それらの差スペクトルはロン）の両者について光触媒的水素発色素 1 の吸収スペクトルと類似してお生実験を行い、その活性を比較した。

り、内包された色素 1 による吸収であ実験から得られた水素発生量のアクることが示唆された。色素内包によっ

ションスペクトルを、色素 1 の吸収ス

増感色素内包型 SWCNTs
光触媒の調整て吸収帯が長波長側にブロードニング

ペクトルとあわせて図５に示した。各

我々はこれまでに、フラーレンに親し て い る が、 こ れ は 他 の 色 素 内 包

光触媒システムに波長 450 nm の単色

水性のデンドリマー部位を結合させ

SWCNTs にも見られる現象であり、光を照射した場合、水素の発生量につたフラロデンドロンを独自に開発しその要因は分散力によって色素分子と

いて色素 1 内包型（3.1μmol/h）と非SWCNTs が相互作用するためと考え

内包型（3.4μmol/h）に大きな差は見

ており

16）

、その特性を活かした

SWCNT 光触媒による水からの水素られる

17-21）

11, 12）。

られなかった。これは、この波長領域。これまでに得られた SWCNT 複合体に、電子においては C60 が光吸収体として作用用いた SWCNTs の直径は 1 nm 以下

リレー分子としてメチルビオローゲンしているためと考えられる。しかし、のものであったが、今回開発した増感（MV2+）、犠牲電子ドナーとして 1- ベ

C60 がほとんど光吸収しない波長 500 nm

色素による効果を明らかにするため、

ンジル -1,4- ジヒドロニコチンアミド以上の領域においては、顕著な差が現

直 径 が 約 1.4 nm で あ る SWCNTs を（BNAH）、助触媒としてポリ（N- ビ

れた。すなわち、非内包型の場合にはニル -2- ピロリドン）保護白金ナノ粒

水素の発生量は比較的少なかったが子（PVP-Pt）を加え、光触媒を調製（510 nm: 1.7μmol/h; 550 nm: 0.15μmol/h;製造を達成してきた

図３．1@SWCNT とフラロデンドロンの複合化

図４．可 視 近 赤 外 吸 収 ス ペ ク ト ル（1@SWCNT/ フ ラ ロ デ ン ド ロ ン（ 赤 ） お よ び
SWCNT/ フラロデンドロン（青）の重水分散液，色素 1 の 1,1,2,2- テトラクロ
ロエタン溶液（ピンク破線），1@SWCNT/ フラロデンドロンと SWCNT/ フラロデンドロンの差スペクトル（緑））和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）3

の生成が確認できた。一方、1 を内包
していない場合には MV+· の生成が見られなかったため、色素 1 によって光誘起電子移動が起きていることが明らかとなった。

おわりに今回我々は、SWCNTs に内包させ
図５．色素 1 の吸収スペクトル（1,1,2,2- テトラクロロエタン溶液）と SWCNT 光触媒による水素生成量のアクションスペクトルて用いる増感色素を新たに開発した。
その色素を内包させた SWCNTs を光触媒に活用することで、水素生成にお650 nm: 0.011μmol/h）、色素 1 内包型

る。そして、励起電子は 1 の C60 へ、

け る 増 感 効 果 を 実 証 し た。 こ れ は

ではより多く水素が発生した（510 nm:

ホールは SWCNT の V1 バンドへと移

SWCNTs に内包された分子による光3.2μmol/h; 550 nm: 1.2 μmol/h; 650 nm:

動すると考えられる。この過程によって誘起電子移動を初めて実証した事例で1.3μmol/h）。この光触媒活性の増加

生成する電荷分離状態 1@SWCNT+·/ある。また、光電変換デバイスに応用−·

は色素 1 の吸収スペクトルの傾向と一C60が本システムの鍵となる。図６

する際の限界直径（0.95 nm）を大幅致している。したがって、色素 1 の吸（b）に示した反応機構に沿って上記に 超 え る SWCNTs（ 直 径 約 1.4 nm）

収によって光誘起電子移動が進行し、の過程を説明すると、最初の段階は内を用いて活性向上を実現できたこと水素が生成したと考えられる。

包色素 1 の光吸収による励起であるは、実用上極めて意義深い。今回は水（1 → 1*）。 次 に、 励 起 電 子 が C60 へ、

素生成用光触媒に応用したが、他の光ホールが SWCNTs へ移動することに触媒や太陽電池も基本原理は類似して−·いるため、様々な応用研究への展開が増感色素による光触媒的
水素発生のメカニズム
図６（a）には，本光触媒システム+·

よって電荷分離状態 1@SWCNT /C60

が 生 成 す る。 そ の 後、1@SWCNT+·/
−·
60

C

のホールは BNAH を酸化し、電子期待される。

謝辞に関わる物質のエネルギー準位図を示は MV2+ を経由して白金助触媒へと移した。SWCNTs は複数のヘリシティ

動し、水素を発生させる。以上をもっの混合物を用いているが、代表的なて基底状態 1@SWCNT/C60 が再生し、本研究の一部は、岡山県特別電源所（13,8）SWCNT の伝導体（C1, C2）お触 媒 サ イ ク ル が 完 結 す る。 実 際 に、

在 県 科 学 技 術 振 興 事 業 の 研 究 委 託、

よび価電子帯（V1, V2）を示してある。

BNAH と MV2+ の存在下 1@SWCNT/JSPS 科 研 費 15H03519、16K05895、内包された色素 1 が光を吸収すると、C60 に光照射（波長 650 nm）を行っ

17K14448、文部科学省地域産学官連

電子が励起されて LUMO へと遷移すたところ、MV2+ の還元による MV+·

携科学技術振興事業費補助金地域イノ

図６．（a）色素内包型 SWCNT 光触媒のエネルギー準位図，（b）色素内包型 SWCNT 光触媒による水素生成の反応機構

4

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）ベーション戦略支援プログラム（研究
機能・産学集積高度化地域）、やまぎん地域企業助成基金、中国電力技術研
究財団、宇部興産学術振興財団、大阪
新薬株式会社との共同研究からの助成を受けて実施された。
〔参考文献〕
1）W ang, F., Dukovic, G., Brus, L. E. andHeinz, T. F. : Science , 308, 838（2005）.
2）Dukovic, G., Wang, F., Song, D., Sfeir, M. Y.,
Heinz, T. F. and Brus, L. E. : Nano Lett ., 5,2314（2005）.
3）M aultzsch, J., Pomraenke, R., Reich, S.,
Chang, E., Prezzi, D., Ruini, A., Molinari, E.,
Strano, M. S., Thomsen, C. and Lienau, C. :Phys. Rev. B , 72, 241402（2005）.
4）B indl, D. J., Wu, M.-Y., Prehn, F. C. and
Arnold, M. S. : Nano Lett ., 11, 455（2011）.
5）Jain, R. M., Howden, R., Tvrdy, K., Shimizu, S.,
Hilmer, A. J., McNicholas, T. P., Gleason, K. K.
and Strano, M. S. : Adv. Mater ., 24, 4436
（2012）.
6）Ramuz, M. P., Vosgueritchian, M., Wei, P.,
Wang, C., Gao, Y., Wu, Y., Chen, Y. andBao, Z. : ACS Nano , 6, 10384（2012）.
7）Gong, M., Shastry, T. A., Xie, Y., Bernardi,
M., Jasion, D., Luck, K. A., Marks, T. J.,
Grossman, J. C., Ren, S. and Hersam, M. C. :Nano Lett ., 14, 5308（2014）.
8）Blackburn, J. L. : ACS Energy Lett ., 2, 1598
（2017）.

18）Sasada, Y., Tajima, T., Wada, T., Uchida, T.,
Nishi, M., Ohkubo, T. and Takaguchi, Y. :New J. Chem ., 37, 4214（2013）.
19）M urakami, N., Tango, Y., Miyake, H.,
Tajima, T., Nishina, Y., Kurashige, W.,
Negishi, Y. and Takaguchi, Y. : Sci. Rep ., 7,43445（2017）.
20）K urniawan, K., Tajima, T., Kubo, Y.,
Miyake, H., Kurashige, W., Negishi, Y. andTakaguchi, Y. : RSC. Adv ., 7, 31767（2017）.
21）K urniawan, K., Murakami, N., Tango, Y.,
Izawa, T., Nishikawa, K., Watanabe, K.,
Miyake, H., Tajima, T. and Takaguchi, Y. :Proc. Nat. Res. Soc ., 1, 01004（2017）.

9）Pfohl, M., Glaser, K., Graf, A., Mertens, A.,
Tune, D. D., Puerckhauer, T., Alam, A.,
Wei, L., Chen, Y., Zaumseil, J., Colsmann, A.,
Krupke, R. and Flavel, B. S. : Adv. Energy
Mater ., 6, 1600890（2016）.
10）M urakami, N., Miyake, H., Tajima, T.,
Nishikawa, K., Hirayama, R. and Takaguchi,
Y. : J. Am. Chem. Soc ., 140, 3821（2018）.
11）Y anagi, K., Iakoubovskii, K., Kazaoui, S.,
Minami, N., Maniwa, Y., Miyata, Y. andKataura, H. : Phys. Rev. B , 74, 155420（2006）.
12）Y anagi, K., Iakoubovskii, K., Matsui, H.,
Matsuzaki, H., Okamoto, H., Miyata, Y.,
Maniwa, Y., Kazaoui, S., Minami, N. andKataura, H. : J. Am. Chem. Soc ., 129, 4992
（2007）.
13）Loi, M. A., Gao, J., Cordella, F., Blondeau, P.,
Menna, E., Bartova, B., Hebert, C., Lazar, S.,
Botton, G. A., Milko, M. and Ambrosch-Draxl, C. :Adv. Mater ., 22, 1635（2010）.
14）Okazaki, T., Iizumi, Y., Okubo, S., Kataura, H.,
Liu, Z., Suenaga, K., Tahara, Y., Yudasaka, M.,
Okada, S. and Iijima, S. : Angew. Chem., Int.
Ed ., 50, 4853（2011）.
15）Miyake, H., Tajima, T. and Takaguchi, Y. :Chem. Lett ., 46, 48（2017）.
16）T akaguchi, Y., Sako, Y., Yanagimoto, Y.,
Tsuboi, S., Motoyoshiya, J., Aoyama, H.,
Wakahara, T. and Akasaka, T. : Tetrahedron
Lett ., 44, 5777（2003）.
17）Tajima, T., Sakata, W., Wada, T., Tsutsui, A.,
Nishimoto, S., Miyake, M. and Takaguchi, Y. :Adv. Mater ., 23, 5750（2011）.

光誘起電子移動物質が光エネルギーを吸収し、励起されたことにより起こる電子移動。
結果的に励起電子とホールが離れる
ことで電荷分離状態が生成する。太陽電池や光触媒の根幹を成す現象である。
増感色素
光化学反応や太陽電池などにおいて、上記の光誘起電子移動を促進させる
ために添加する色素。光に対する感度を向上させる効果がある。

P roducts
高効率水素発生 色素内包カーボンナノチューブ用
有機色素
ビルディングブロック
有機色素Fe

ビルディングブロック
S

S
S

S
N

S

N

C36H24Fe2N2S5＝756.60
1

Fe

Fe

O

O
S

Fe

S
N

S

Fe

N

S

C15H12FeOS＝296.17
CAS RN® 12087-88-6
3

C36H24Fe2N2O2S3＝724.47
2

No. コード No.
品
名
有機色素
NEW
1
022-19271 4,7-Bis（5-ferrocenylthiocarbonyl-2-thienyl）-2,1,3-benzothiadiazoleNEW2
025-19261 4,7-Bis（5-ferrocenylcarbonyl-2-thienyl）-2,1,3-benzothiadiazole
ビルディングブロック
NEW
202-20841 （2-Thiophenecarbonyl）ferrocene
3

O

規

格

容量

希望納入価格（円）

機能性有機材料用
機能性有機材料用

100mg
100mg

25,00020,000

機能性有機材料用

500mg

15,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）5

R

esearchPhos-tag 技術を用いたタンパク質のリン酸化解析
広島大学大学院医歯薬保健学研究科 医薬分子機能科学研究室

木下 恵美子、木下 英司、小池 透

はじめに細胞内で生命活動を担う多くのタン
パク質は、キナーゼによるリン酸化とフォスファターゼによる脱リン酸化を繰り返し、活性の ON と OFF を切り替えている。しかし、キナーゼやフォ
スファターゼの異常によりこの活性制
御のバランスが崩れると、様々な病気が引き起こされることが知られている。特にがんでは種々のキナーゼの異常が報告されている。それゆえに、タ

図１．Phos-tag SDS-PAGE の概略

ンパク質のリン酸化研究は、様々な疾したバンドとして検出される（図１）。

るプレキャストゲルを好んで継続的に患の原因究明やキナーゼ阻害剤（分子本電気泳動法では、あるタンパク質

利用している研究者も多い。筆者らの標的薬）の開発につながる非常に重要のリン酸化されているアミノ酸残基数

グループでも SuperSep Phos-tag を用な研究分野となっている。

が同じであっても、その部位が異なる

い た 例 を 報 告 し て お り 4）、Phos-tag

場合には、移動度の異なるバンドとし

SDS-PAGE データ集（www.phostag.

）を捕捉する機能性分子て検出される。すなわち、リン酸化状

hiroshima-u.ac.jp）に画像を公開して

Phos-tag（フォスタグ）を用いた、タ態の違いを分離検出できる。セリン、いるので、ご覧いただきたい。

ンパク質のリン酸化解析技術の開発を

スレオニン、チロシンのリン酸化はも最近の筆者らのグループによる行っている。本稿では、これまでに開ちろん、酸性では加水分解を受けやすPhos-tag SDS-PAGE を用いた解析例発した Phos-tag を基盤とした技術のいヒスチジンやアスパラギン酸のリンとして、がんにおける MEK1 の変異うち、多くの生命科学研究者に利用さ酸 化 タ ン パ ク 質 も 解 析 で き る の で、と MEK1 のリン酸化亢進の関連を解れるようになった３つについて紹介しPhos-tag SDS-PAGE はこれらのリン析した研究を紹介する 5）。肺がんや卵たい。

酸基を介するバクテリアの情報伝達機

巣がんでは、細胞内情報伝達に関わる

3）
構の研究の進展に寄与している 。

MEK1 キナーゼの遺伝子に特徴的な筆者らの研究グループは、リン酸基
2−

（–PO3

Phos-tag SDS-PAGEによるリン酸化タンパ
ク質の解析法

また、Phos-tag SDS-PAGE プレキャ

変異が生じることが報告されている。

ストゲル、SuperSep Phos-tag シリー

MEK1 遺伝子をクローニングし、報ズも発売されているので、気軽に本法告された変異、あるいは抗がん剤耐性を研究に取り入れることができる。再細胞株において報告された変異を導入

１ つ 目 は、SDS-PAGE を 用 い て リ

現性が高くシャープなバンドが得られしたものを細胞に発現させ、そのリン

ン酸化タンパク質と非リン酸化タンパ
ク質を分離するリン酸基アフィニティ
電 気 泳 動 法、Phos-tag SDS-PAGE である 1, 2）。リン酸基捕捉分子であるア
クリルアミド化 Phos-tag を分離ゲル作成の際に添加してアクリルアミドと共重合させたゲルを用いる。タンパク
質試料の調製法や電気泳動の操作・試
薬は、すでに確立された SDS-PAGE法と全く同じである。リン酸化タンパ
ク質は、ゲルに固定された Phos-tagと可逆的な結合を繰り返しながら泳動するため、相当する非リン酸化タンパ
ク質よりも移動が遅れ、シフトアップ

6

図２．がんにおける MEK1 変異と MEK1 のリン酸化種の増加（文献 5 より転載）
肺がん、卵巣がん、および抗がん剤耐性細胞株で報告されている変異型 MEK1 の細胞内でのリン酸化状態を Phos-tag SDS-PAGE で解析した。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）酸化状態を Phos-tag SDS-PAGE を用
いて解析すると、通常の MEK1 では見られない、リン酸化種が存在することが わ か る（ 図 ２）。in vitro キ ナ ー

図４．LPS/PMA で刺激によってリン酸化する Raw264.7 細胞内 タンパク質の検出（文献 6 より転載）
抗 体 ア レ イ（Proteome Profiler
Human Phospho-MAPK Array, R&D
Systems） と ビ オ チ ン 化 Phos-tag
を 用 い て LPS/PMA で 刺 激 し た
Raw264.7 細胞抽出液中のリン酸化
タンパク質を検出した。スポット 1−6 が陽性であり、刺激による有意なリン酸化が認められた。

ゼアッセイで、これらの変異 MEK1のキナーゼ活性が亢進していることも確認している。これらのことから、
MEK1 の変異が活性亢進の原因となり、がん化に繋がっていることが示唆された。

ビオチン化 Phos-tag
によるリン酸化タンパ
ク質の解析法

チド基質のキナーゼアッセイ後のリンされうるが、それらは、ダイナミック

酸化検出、抗体アレイと反応したタンに変化するキナーゼ／フォスファター

２つ目は、PVDF 膜上のリン酸化

パク質のリン酸化解析など、アレイにゼ反応によって刻一刻とリン酸化と脱タンパク質を特異的に検出できるビオよる網羅的な検出にも利用できる。図リン酸化を繰り返しており、実際にリチン化 Phos-tag である。ビオチン化

４に、Raw264.7 細胞を LPS/PMA でン酸化状態にあるのは極微量である可Phos-tag を、予め市販品の HRP（西刺激した際に Akt2、HSP27、MKK6、能性が高い。そのようなリン酸化タン

洋わさびペルオキシダーゼ）結合ストMSK2、p38β、RSK2 な ど の リ ン 酸

パク質を研究する上で、リン酸化タン

レプトアビジンと 4：1 の複合体を形成化が亢進することを、抗体アレイとビ

パク質を分離、濃縮することは非常にさせておき、ブロット膜をプロービン

オチン化 Phos-tag を用いて検出した有用である 7）。

グする。ビオチン化 Phos-tag と特異的に結合した膜上のリン酸化タンパク質は、市販の化学発光基質と HRP の反応（ECL）によって検出される（図1）３） 。これは、一般的なウェスタン
解析法に準じたものであり、使用する

6）

例を示す 。

Phos-tag アガロースによるリン酸化タンパク質やリン酸化ペプチドの分離・濃縮

図５では、細胞抽出液を Phos-tag
アガローススピンカラムで前処理することによって、抗リン酸化抗体によるウェスタン解析の特異的シグナルを増強させることができた例を紹介する 8）。
EGF 刺激による A431 細胞内の SHC

バッファー、試薬などは特別なもので３つ目は、リン酸基親和性クロマトのリン酸化を抗リン酸化 SHC 抗体にはなく、抗体をビオチン化 Phos-tag

グラフィ担体、Phos-tag アガロース

よってウェスタン解析する際に、リンに替えただけの簡便な方法である。

である。生体内に存在する全てのタン

酸化レベルが低い、あるいは抗体の特パク質のうち、60% 以上がリン酸化異性が高くないなどの原因で特異的シ

また、本法ではアレイ化されたペプ

グナルが検出できなかったが、Phostag アガロースカラムによる前処理を行い、特異的シグナルが鮮明に検出できるようになった。
ま た、Phos-tag ア ガ ロ ー ス は 質 量分析を用いたリン酸化プロテオミクス
解析における、リン酸化ペプチドの分離・濃縮にも有用である 9）。

おわりにPhos-tag を利用したことが記載されている研究論文件数は、2018 年の
図３．ビオチン化 Phos-tag を用いた PVDF 膜上のリン酸化タンパク質検出の概略

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

１年間だけでも 500 件近くにのぼり

7図５．Phos-tag アガローススピンカラムを用いたウェスタン解析サンプルの前処理によるリン酸化タンパク質の濃縮（文献 8 より転載）
A431 細 胞 を EGF 刺 激 し、SHC のリン酸化を抗リン酸化 SHC 抗体によるウェスタン解析した。Phos-tag
アガロースカラムで前処理することによって、目的バンド（66, 52, 46kDa）が鮮明に検出されるようになった。

（Google Scholar による）、リン酸化解

筆するべきことである。また、抗体が析のスタンダードとして広く浸透して市販されていないタンパク質や、デーきている。生命科学のトレンドの最先

タベースを参照してもリン酸化の報告

端分野でも利用されているのはもちろ

例がないマイナーなタンパク質の解析

んだが、バクテリアや植物などの研究にも本法は適用できる。Phos-tag 技報告の比較的少ないタンパク質の解術を広い分野の多くの研究者に利用し析に本法が利用されていることは特ていただき、Phos-tag 製品がタンパ

ク質のリン酸化解析に貢献できれば幸いである。
〔参考文献〕
1）Kinoshita, E. et al . : Mol. Cell. Proteomics , 5,749（2006）.
2）K inoshita, E. and Kinoshita-Kikuta, E. :Proteomics , 11, 319（2011）.
3）Kinoshita-Kikuta, E. et al . : PLoS One , 10,e0132598（2015）.
4）Kinoshita-Kikuta, E. et al . : Int. J. Chem ., 4,
e1（2012）.
5）Kinoshita-Kikuta, E. et al . : Biochim. Biophys.
Acta Proteins Proteom ., 1867, 62（2019）.
6）Kinoshita, E. et al . : Anal. Biochem ., 438, 104（2013）.
7）Kinoshita-Kikuta, E. et al . : Proteomics , 6,5088（2006）.
8）Kinoshita-Kikuta, E. et al . : Anal. Biochem .,389, 83（2009）.
9）Yuan, E. T. et al . : Electrophoresis , 38, 2447
（2017）.

Phos-tag®製品一覧
分離

精製

SDS-PAGE による分離に！

ゲルクロマトでの精製に！

実験操作は生理的条件下 (pH 7.5 )Phos-tag® アガロース

SDS-PAGE ゲルに混ぜるだけ
Phos-tag® アクリルアミド
プレキャスト Phos-tag® 入りゲル
スーパーセップ TM Phos-tag®

充てん

Ready-to-use のりん酸化ペプチド精製チップ
Phos-tag® Tip

サンプル

りん酸化 β-casein

フロースルー画分

フィルター
Phos-tag®
アガロース

非りん酸化 β-casein

MS

MALDI-TOF/MS での検出に！

りん酸化分子のみを高感度に検出
Phos-tag® 質量分析用キット

検出

溶出画分

化学発光検出に！

PVDF 膜上の全りん酸化タンパク質を検出
Phos-tag® ビオチン

25,000OH

Counts

20,000OO-N

10,000

64

5,000
0
400

りん酸化 α-casein

O

15,000NP

Zn2+ O-

N

O

O
N
Zn2+
N

非りん酸化 α-casein

1015.3 ( / )O64[64Zn2L3+-LPA2-]+

りん酸化 β-casein

N

PVDF膜
600

800

1,000
Mass(m/z)

1,200

非りん酸化 β-casein

1,400

詳細は当社 HP からご覧下さい。

富士フイルム和光純薬 Phos-tag

検索

➡

8

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）エクソソームと生命現象

第５回

イミダゾールジペプチドによるエクソソームを介した脳腸相関活性化
九州大学大学院 農学研究院

片倉喜範

イミダゾール基を含むヒスチジンが結合したジペプチドの総称であるイミ
ダゾールジペプチドには、カルノシン
やアンセリンなどが知られており（図１）、筋肉や脳に多く存在し、特に食肉中に豊富に含まれている。イミダ
ゾールジペプチドはこれまでに、抗酸化作用、抗糖化作用、疲労回復作用な
ど、様々な生理機能を有していること

図１．

が知られている 1, 2）。最近になり、アという概念が注目されている。これ胞として知られる。エクソソームは、

ルツハイマー病モデルマウスを用いたは、脳と腸が自律神経系や液性因子

正常細胞からがん細胞に至るまで、生解析 3）、及び中高齢者ボランティアに（ホルモンやサイトカイン）を介して物を構成するあらゆる細胞から分泌さ対するヒト介入試験の結果から、記憶密接に関わり合い、相互作用をするこれることが知られている。このエクソ機能を改善する効果があることが明らとであり、「脳腸軸（Brain-gut axis）」

ソームの機能性に関する研究は、エク4, 5）。このように、イとも言われている。この脳腸相関のソソームが miRNA を内包しているとミダゾールジペプチドの脳機能改善効

代 表 的 な 例 と し て、 過 敏 性 大 腸 炎いう報告を機に、一気に注目を集める

果は明らかとなってはいるが、その詳（irritable bowel syndrome : IBS） が6）こととなった 。miRNA は、21-25 塩

細な作用機序に関しては未だ明らかとある。これは、脳がストレスを感知す

基長の短い 1 本鎖 RNA 分子であり、はなっていない。その原因として、ヒることで、視床下部においては副腎皮

真核生物において遺伝子の転写後発現

トが経口摂取したカルノシンは、腸管質ホルモン放出因子の、そして腸粘膜調節に関与している。miRNA はその上皮細胞内において、あるいは腸管をにおいてはセロトニンの分泌を促し、

標的 mRNA に対して不完全な相同性通過した後の血中において、カルノシ

それぞれの特異的レセプターを介しをもって結合し、一般に標的遺伝子のナーゼというカルノシン分解酵素によて、消化管の運動に異常をきたすこと

3’
UTR を認識して、標的 mRNA を不り、β-Ala と L-His に分解され、カルが原因とされており、生体にとっては安定化するとともに翻訳抑制を行うこノシンそのものが脳に送達し、その機ネガティブな意味での脳腸相関を示すとでタンパク質生産を抑制する。発能を発揮しているわけではないことが疾患と言える。

生、細胞増殖、細胞分化、アポトーシ

かとなっている挙げられる。つまり、カルノシン摂取

そこで我々は、脳機能改善効果のあスまたは代謝といった様々な生体内プによる脳機能改善効果は、カルノシン

る食品による脳腸相関活性化の可能性

ロセスにおいて miRNA が関わっていの直接的な送達ではなく、腸管から脳を検証するとともに、その分子基盤のることが明らかとなっている 7）。このへの何らかのシグナルの伝達、すなわ

一つとして、細胞分泌小胞として知ら

エクソソームが miRNA を内包すると

ち「脳腸相関」の活性化によるものとれる“エクソソーム”を想定し、研究いう報告により、細胞間コミュニケー

考えられている（図２）。

を行った。エクソソームは直径 40 〜

ションの重要なメディエーターとして

100 nm という非常に小さい細胞外小のエクソソームの関与が推定されるよ近年「脳腸相関（Brain-gut interaction）」

うになってきている。実際に、オリゴ
デンドロサイトが分泌するエクソソー
ムが髄鞘形成を制御すること 8）、プリオン病の原因となる異常プリオン構造
タンパク質がエクソソーム内に含まれ、中枢神経内への異常構造プリオン
タンパク質が伝搬するなど 9）、神経細胞間コミュニケーションにおけるエク
ソソームの関与に関する報告が相次いでいる。
以上のことを踏まえ、我々はカルノ
シンによる脳腸相関活性化の分子基盤
図２．カルノシンによる脳腸相関活性化とその分子基盤

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

として、腸管由来のエクソソームを想9エクソソームと生命現象定し、そのエクソソームの単離、同定、内包される miRNA と神経細胞におけるその miRNA の標的遺伝子の同定を試み、研究を行った。
まずヒト培養腸管細胞のモデルとしてヒト結腸ガン由来細胞 Caco-2 を用いた。カルノシン処理した Caco-2細胞の培養上清から、MagCaptureTM
Exosome Isolaton Kit PS を用いてエクソソームを単離・精製した 10）。得られたエクソソームを、ヒト神経芽細胞
腫 SH-SY5Y 細胞に添加し培養することで、SH-SY5Y において神経突起の伸長（図３）と、神経突起マーカー遺伝子（Neurofilament Medium（NEFM）,
Nestin, 図４）の発現増強が観察され

図３．カ ルノシン処理した Caco-2 細胞培養上清由来エクソソームを添加した SH-SY5Y細胞における神経突起伸長
左から、無処理 SH-SY5Y 細胞、レチノイン酸処理した SH-SY5Y 細胞、カルノシン処理した
Caco-2 細胞培養上清由来エクソソーム処理した SH-SY5Y 細胞
SH-SY5Y 細胞における神経突起は、Neuro-Chrom Pan Neuronal Maker（Millipore）により蛍光染色し、共焦点レーザー走査型顕微鏡（FLUOVIEW FV1000, Olympus）を用いて観察した。
（Sugihara Y. et al ., PLoS One（in press）より引用）た。以上の結果から、カルノシン処理をした Caco-2 細胞から、SH-SY5Y 細胞の神経突起伸長を促すエクソソームが分泌されていることが明らかとなった。
次に、カルノシン処理により Caco-2細胞から分泌され、SH-SY5Y 細胞の神経突起伸長を促すエクソソームに含まれる miRNA とその標的遺伝子の同定を試みた。そのためにまず、カルノ
シン処理した Caco-2 細胞から分泌されるエクソソームを単離・精製し、マイクロアレイ解析により、その中に含まれる miRNA の発現解析を行った。
コントロール処理と比較して、有意に
発 現 変 動 を 示 す miRNA を 抽 出 し、Target Scan Human（http://www.
targetscan.org/）を用いて、発現変動

図４．カ ルノシン処理した Caco-2 細胞培養上清由来エクソソームを添加した SH-SY5Y細胞における遺伝子発現変化
終濃度 1 mM あるいは 10 mM のカルノシンを添加した Caco-2 細胞培養上清からエクソソームを調製し、SH-SY5Y 細胞に添加し培養後、定量 RT-PCR 法により遺伝子発現変化を検証した。
Exo-ctrl：無処理 Caco-2 細胞培養上清由来エクソソームを添加した SH-SY5Y 細胞
Exo-Car1/Exo-Car10：1 mM/10 mM のカルノシンを添加した Caco-2 細胞培養上清由来エクソソー
ムで処理した SH-SY5Y
無処理：無処理 SH-SY5Y
レチノイン酸：レチノイン酸処理 SH-SY5Y

miRNA の標的遺伝子を予測した（図さらに神経細胞活性化に関わる遺伝

SY5Y 細胞での機能性解析を行うこと

さ ら に、 上 記 カ ル ノ シ ン 処 理

子 の 抽 出 及 び Ingenuity Pathway

で、カルノシン処理 Caco-2 細胞由来

Caco-2 細胞由来エクソソームを、ター

Analysis による遺伝子相関図をもと

エクソソームに含まれ、しかも神経細ゲット細胞である SH-SY5Y 細胞に添に、カルノシン処理 Caco-2 細胞由来

胞活性化に関わる miRNA とその標的

加 し、 マ イ ク ロ ア レ イ 解 析 に よ り、

エクソソームに含まれ、しかも神経細遺伝子の同定に成功した（投稿中）。

SH-SY5Y 細胞内における遺伝子発現

胞活性化に関わる miRNA の同定（4以上のように、エクソソーム中の解析を行い、発現変動した遺伝子の抽種）と SH-SY5Y 細胞におけるその標

miRNA の マ イ ク ロ ア レ イ と エ ク ソ

出を行った（図５：遺伝子セット 2）。

的 遺 伝 子 の 同 定（14 種 ） を 行 っ た。

ソームの標的細胞における mRNA の遺伝子セット１と遺伝子セット 2 の間

その後、それら miRNA の機能性は、

マイクロアレイの統合解析を行うことで共通する遺伝子を抽出し（約 200 遺その miRNA mimic を導入あるいはそで、エクソソームにより伝達される情伝子、マイクロアレイの統合解析）、の標的遺伝子をノックダウンした SH-

報の分子基盤（内包する miRNA とそ

５：遺伝子セット１）。

10

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）エクソソームと生命現象〔参考文献〕
1）B oldyrev, A. A. et al . : Physiol. Rev ., 93,
1803-1845（2013）.
2）Budzeń , S. and Rymaszewska, J. : Adv. Clin.

Exp. Med ., 22, 739-744（2013）.
3）Herculano, B. et al . : J. Alzheimers Dis ., 33,
983-997（2013）.
4）Hisatsune, T. et al . : J. Alzheimers Dis ., 50,
149-159（2016）.
5）K atakura, Y. et al . : Nutrients , 9, 1199（2017）.
6）Valadi, H. et al . : Nat. Cell Biol ., 9, 654-659（2007）.
7）Ma, C. et al . : Sci. China. Ser. C , 52, 323-330（2009）.
8）Bakhti, M. et al . : J. Biol. Chem ., 286, 787-796（2011）.
9）Bellingham, S. A. et al . : Front. Physiol ., 3,
124（2012）.
10）Nakai, W. et al . : Sci. Rep ., 6, 33935（2016）.

図５．miRNA- ターゲット遺伝子同定のためのマイクロアレイ統合解析の標的遺伝子）の同定が可能となっかにする上で、非常に有用な方法になた。ある種の表現型誘導に関わるエク

り得るものと考えられた。

ソソームの同定とその分子基盤を明ら

エクソソーム研究用試薬カタログ Ver. 2

発行予定

4 月下旬

!

エクソソーム研究に使用する製品をまとめたカタログです。新製品情報及び各製品のアプリケーションデータを多数追加掲載しています。
1 . 総説 〜エクソソームとは？〜

ExosomeResearch Products Ver. 2

2 . PS アフィニティー法について●アプリケーションデータ
		 a. TEM 解析
		 b. NTA 解析
		 c. microRNA および mRNA 解析
		 d. プロテオミクス解析
		 e. BCA アッセイプロトコル
		 f.	エクソソーム標識方法および取り込み実験

		 c. 希釈直線性
		 d. エクソソーム量の経時変化測定
		 e. 感度比較

4 . 新製品情報
		 a.	Exosome ELISA Kit …
(Streptavidin HRP)
		 b. Exosome Flow Cytometry Kit
		 c.	EV-Save ™ 細胞外小胞ブロッ
キング試薬

5 . Q ＆ A・トラブルシューティング

3 .	PS アフィニティー法の ELISA への応用

6 . エクソソーム解析受託サービス●アプリケーションデータ
		 a. 定性解析
		 b. 定量解析

8 . 価格表

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

7 . 関連製品

11

SH

ペプチド医薬合成基礎講座

SH
H

第１回

ys
Sec C

Glu

Lys

Cys

Ala

Ala

OH
H

Sec

S

Cys
Lys

ペプチド医薬の周辺
サイエンスライター

佐藤健太郎

1970 年代以降、合成低分子医薬は一世を風靡し、多くの優れた医薬品が世に送り出された。しかし一方でこの分野は行
き詰まりも指摘されており、医薬品開発の中心は抗体医薬をはじめとしたバイオ医薬にシフトしている。
こうした状況の中、医薬品開発の次代を担うジャンルとして、ペプチド医薬が注目を集めつつある。その長所と短所、新たなデザインと合成のアプローチなどについて、本連載で述べてゆきたい。
人類は有効な医薬を求め、様々な対象を探索してきた。
最初に探索の対象になったのは植物や鉱物の成分であり、これは天然物創薬として現代にまで受け継がれている。20世紀以降は有機合成化学の進歩により、低分子の人工合成による創薬が盛んになった。
特に、医薬分子とタンパク質との相互作用の様子が解明され、理論的なバックボーンも固まった 1980 年代以降、合成創薬は全盛期を迎え、多くの画期的医薬品がこの分野から登場した。製薬企業が大型商品を連発し、巨大な利益を稼ぎ出したのはこの時代である。

図１．インスリンの構造。51 のアミノ酸から成る

これら生理作用を示すペプチド類には、そのまま医薬としかし、21 世紀に入ってからは低分子医薬開発の勢いして用いられるものもある。糖尿病にはインスリンが、低に翳りが見え始め、製薬業界は 2010 年問題ともいわれた身長症には各種成長ホルモンが、それぞれ不可欠な治療薬危機の時代を迎えた。この時期に登場したのが、バイオテとなっている。

クノロジーによって製造したタンパク質を用いるタイプの

また、これらのペプチドのアミノ酸配列を改変し、医薬医薬であった。特に、体内で免疫作用を担う抗体を改変しとしての性質を改良したものも用いられる。たとえば、イて作り出される抗体医薬は広く用いられ、がんやリウマ

ンスリンのアミノ酸配列を一部改変し、即効性を高めたイ

チなど難病の治療に大きな進歩をもたらした。中でも抗ンスリンアナログ類はよく知られている。また前立腺がん

PD- 1 抗体ニボルマブ（商品名オプジーボ）は、肺がんななどの治療薬であるリュープロレリンは、性腺刺激ホルモ

どの画期的な治療薬として注目を集め、2018 年ノーベル

ン放出ホルモン（GnRH）の構造を改変し、より強力なア

生理学・医学賞の対象となったことは記憶に新しい。

ゴニストとしたものである（図２）。

ただし、これら抗体医薬は、その分子サイズの大きさ（分子量約 15 万）ゆえに、基本的に細胞の中には入って行けない。また、通常のタンパク質同様に胃腸で消化されてしまうため、経口投与も不可能である。このため、治療可
能な疾患はかなり限定され、低分子医薬に完全に取って代わるものにはなりえない。
こうした状況から、現在ポスト抗体医薬となる新ジャンルの探索に力が注がれている。以前に本誌連載で取り上げた、核酸医薬などもその一つだ。そして近年、ペプチドを医薬として用いる分野に、改めて注目が集まっている。本
連載では、こうしたペプチド医薬が注目される理由、合成手法、新たな展開などについて述べてゆきたい。

ペプチドミメティック
ペプチドそのものを医薬とするのではなく、ペプチドに似せた化合物をデザインして医薬とする手法も広く行われ医薬としてのペプチドている。たとえば、プロテアーゼの標的となるペプチド配ペプチドは、いくつかのアミノ酸がアミド結合で連結した化合物である。明確な区分はないが、アミノ酸の数が数12

図２．GnRH（上）とリュープロレリン（下）。丸囲みは構造の相違部分

列を変換した化合物を投与し、プロテアーゼの働きを阻害するような手法である。

十以下のものをペプチド、100 以上のものをタンパク質とHIV プロテアーゼ阻害剤であるインジナビルやアタザ呼ぶことが多い。ペプチドには、ホルモンや伝達物質など

ナビル（AIDS 治療薬）はその代表的な例だ（図３）。ペとして生体内で重要な生理作用を担うものが数多くある。

プチドに類似しているものの、アミド結合を C-C 結合に変血糖値の調整を行うインスリン（図１）、鎮痛作用などを換するなどしてあり、切断を受けない構造になっている。

示すエンドルフィン類はその代表的なものである。

その他、レニン阻害剤（高血圧治療薬）など、多くのジャ

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

Glu

OH

SH
SH
H

ys
Sec C

Lys

Glu

Cys

Ala

OH
H

Sec

S

Ala

S

ペプチド医薬合成基礎講座

Cys

Cys
Lys

OH

Glu
His

ンルでペプチドミメティック型の医薬が開発され、臨床の現場で用いられている。

図３．インジナビル（左）とアタザナビル（右）図４．シクロスポリン

ペプチド医薬の問題点

質との相互作用に有利に働く。また、形がしっかり決まった

ペプチドは強い生理作用を持つものが多く、合成も比較

分子は、膜を透過しやすいという利点も大きい。天然のマク的容易であるにもかかわらず、医薬として成功しているもロライド類に、医薬として成功を収めているものが多いことのは決して多くはない。その要因として、ペプチドは胃腸

は、こうした大環状分子の有利さの証といえる。

の消化酵素によって素早く分解されるため、経口投与が不にもかかわらず、これまで大環状骨格を持った合成医薬可能である点が挙げられる。このため上記に挙げたインスの例は極めて少ない。これは、大環状骨格の構築の難しさ

リンやリュープロレリンなどは、皮下注射による投与が行が大きな要因だ。長い鎖状分子上の遠く離れた反応点同士われる。この点、経口投与が可能な一般的低分子医薬に比を連結させるのはエントロピー的に極めて不利であるた

べて不利である。

め、高度希釈法などの面倒な合成手法と、長い反応時間がペプチドミメティック型の医薬は経口投与も可能だが、必要となる。多種多様な化合物を作り、構造の最適化を行

分子量が大きくなりがちであること、分子が細長い構造にわねばならない創薬研究においては、これはあまりにも不なること、また水溶性官能基が多いせいで膜透過性が低利である。

く、体内動態に優れないケースが多い。このためペプチド

しかし最近、この壁を乗り越え、多数の大環状ペプチド

ミメティックは研究例の多さの割に、医薬としての成功例

を一挙に作り出し、スクリーニングを行う技術が開発されは少ないともいわれる。

た。東京大学の菅裕明教授が開発した一連の技術がそれ逆に言えば、易分解性と体内動態の悪さという難点を解だ。この方法では、一挙に 1 兆種類もの環状ペプチドを合決できれば、ペプチド関連化合物は医薬として極めて有望成し、標的タンパク質に対して最適な構造を持つものを選であり、引き出されていないポテンシャルがあるというこ

び出すことができる。
その鍵となったのは、フレキシザイムと呼ばれる技術とになる。

だ。菅らはこの方法によってタンパク質の生合成系を改変

特殊ペプチド創薬

し、天然のタンパク質を構成する 20 種以外の自由なアミ体内動態に優れたペプチド型化合物も存在している。たノ酸を連結させることに成功した。さらに工夫を加えるこ

とえばシクロスポリンは、11 のアミノ酸から成るペプチとで、これを大環状アミノ酸とし、高速にスクリーニング

ドでありながら、経口投与でも十分な薬効を示し、免疫抑を行うことを実現している。一連の技術は、世界の製薬業制剤として活用されてきた。

界においても大いに注目され、次世代医薬品開発の根幹とこの鍵は、その大環状骨格にある。環状であること、またして期待を受けている。

D- アミノ酸を含んでいるため、シクロスポリンは消化酵素

またこれ以外にも、ペプチド及びタンパク質の化学合成にペプチドとして認識されず、分解を受けにくいと考えられの技術は大いに進展しており、以前なら不可能であったサる（図４）。また、大環状骨格であるということは、分子全イズのタンパク質なども、フラスコ内で合成が可能になっ体がフラフラと動かず、柔軟でありながらある程度固定されている。本連載ではこうした合成手法にスポットを当て、た配座を取りやすいということでもある。これは、タンパク

ペプチド医薬の新たな可能性について紹介してゆきたい。

当社では、ペプチド合成用試薬をラインアップしています。詳しくは、当社 HP をご覧下さい。
試薬事業トップ＞製品情報＞合成・材料＞ペプチド合成

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）13

基礎から応用までよくわかる組織透明化技術

第１回

透明化技術 Scal e 法を知る、そして使う
国立研究開発法人理化学研究所

脳神経科学研究センター

濱

はじめに

細胞機能探索技術研究チーム

裕、星田

哲志、宮脇

敦史

に 用 い る Scal e 試 薬 に SCALEVIEWとで目的の神経細胞の軸索がどこまでが付いた試薬の名称を用いる。前出の伸びているかを顕微鏡観察により追跡

固定組織の透明化技術（以下、単にScal eA2 法および Scal eS 法はそれぞれ、することができる。透明化を用いた神透明化技術と表記する）は、従来二次

SCALEVIEW-A2、そして SCALEVIEW-

経回路の解析に関して Economo ら 3）

元を主体として行われてきた組織学をS シリーズの試薬を用いる方法であや Ye ら 4）は興味深い方向性を示して三次元に大幅に拡張し組織学におけるる。これらの試薬を用いた透明化の手いる。

新たな視野を得るための方法の一つで順と三次元免疫染色の手順が富士フイ

過去約 10 年の間、世界中の研究者ある。そして近年、透明化技術は動物

ルム和光純薬のホームページに紹介さによって多様な透明化技術の開発が行だけでなく植物の研究領域にも利用されているのでご覧いただけたらと思う。

われ報告されてきた。発表された透明れるようになり、基礎生物学の分野を

本稿では透明化技術の現状とその基化技術はどれも開発者の特徴ある工夫

はじめ製薬などの応用分野で技術導入

礎について Scal e 法を中心に概説すが盛り込まれている。それらの特徴にが少しずつ広がりを見せている。

る。また、実験解説書としての役割を

5）や日置
ついては Tainaka ら（2016）

Scal eA2 法 1） と Scal eS 法 2）（ こ れ

持たせ透明化した組織を顕微鏡観察す

6）の総説に体系的にしかもら（2017）らを総称して Scal e 法と呼ぶ）は筆者

る際に気をつけるべき点などについて

わかりやすくまとめられているので参らが開発した透明化技術である。ま述べる。

照していただきたい。

た、筆者らは AbScal e 法という透明化技術にマッチした三次元免疫染色法

透明化技術の現状

また、最近注目されている透明化技術の応用として挙げられるのは生物発を開発した。これら二つの技術を組み透明化技術は主に神経科学の分野で光イメージング（BLI）技術との組合

合わせることで、マウス全脳や脳半使われてきた。特に蛍光タンパク質遺せである。すなわち、まずウイルスベ

球、あるいは厚みのある脳スライス内伝子を導入した神経細胞を観察する際クターを使ってルシフェラーゼ遺伝子部の詳細な構造をとらえることができに力を発揮する技術である。蛍光タンと蛍光タンパク質遺伝子とを同一の神る。図１にそれらの画像を示す。

パク質遺伝子を組み込んだウイルス

経細胞に同時に発現させ、その活動をScal e 法に用いる試薬溶液はすでに（例えばアデノ随伴ウイルス，AAV）

生物発光シグナルとしてライブで非侵

富士フイルム和光純薬から一連のを脳の特定の領域に感染させることで襲的に検出する。その後に脳を固定、SCALEVIEW 試薬として市販されて神経細胞を限定的に標識することがで透明化し蛍光タンパク質のシグナルをいる。以後本稿では透明化のプロセスきる。その組織を固定・透明化するこ確認する。これによりその神経活動が

図１．Scal eS 法による透明化と AbScal e 法による染色例
a. 未処理のマウス全脳（左）および透明化を行ったマウス全脳（右）。いずれも固定した C57BL6/J オスマウス（13 週齢）由来。b. 透明化を行った
YFP-H マウス（14 週齢、オス）全脳（左上）のうち大脳を表面から視床まで 2 光子レーザー励起（正立型）顕微鏡で観察（左下）を行い三次元に再構築した画像（VR）（右）。c.Tomato lectin-texas red で血管染色を行った新生仔マウス（C57BL6/J、生後 10.5 日）大脳の冠状断スライス（厚さ 1.2mm）（左上）を透明化し、正立共焦点レーザー走査型顕微鏡（CLSM）で観察（左下）した VR 画像（右）。d. Tomato lectin-texas red で血管染色（図中、青）を行ったアルツハイマー病モデルマウス（App NL-F/NL-F 、17 か月齢、オス）大脳の冠状断スライス（厚さ約 2 mm）を AbScal e 法で免疫染色を行い透明化後に観察した画像。赤色蛍光色素 635 結合 Iba1 ポリクローナル抗体（富士フイルム和光純薬 013-26471、図中、緑）および Alexa Fluor 488
結合 amyloid- βモノクローナル抗体（図中、赤）を染色に用いた。皮質部を正立型 CLSM で観察した。左は薄黄色の長方形の領域 10 枚分の X-Y 面（Zステップ =7μm、右の薄黄色の長方形の領域に相当）を重ねた画像（max intensity projection）。右は高さ 2 mm の角柱状の観察領域の X-Z 面を示す。
スケールバーはそれぞれ、5 mm（a、b、および c）ならびに 100μm（d）

14

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）基礎から応用までよくわかる組織透明化技術

どの細胞に由来するものであったかを低減化すると筆者らは考えている。つ子励起蛍光顕微鏡を使って透明化した

確認することが可能である。特に筆者

まり、尿素が結合組織を構成する繊維

厚みのある組織の深部をしっかりと観らの研究室で開発された AkaBLI シを柔軟化させながら水を滲み込ませ、察するために特に気をつけなければな

ステムは極めて感度が高く、体内に標同時に細胞の形質膜の脂質分子間にもらないことがある。それは対物レンズ

識した細胞がたった一つしか存在しな

水を運びこむということが Scal e 法にと組織の間、加えて組織とマウント液い場合でもそのシグナルを追跡するこ

よる透明化の主たるメカニズムであるとの間の屈折率のマッチングである。対とが可能である 7）。BLI 技術と透明化と推測している。

物レンズと組織の間、そして組織とマ

また、筆者らが Scal eA2 法の後にウント液との間に屈折率の差がある（ミ経科学の分野だけでなく、がん、免開 発 し た Scal eS 法（SCALEVIEW-S

スマッチ）と組織内部で焦点がタイト

疫、幹細胞の研究分野に応用可能であシリーズの試薬を用いる方法）では試でなくなり、組織の深さ方向（Z 方向）ると考えられる。

技術とのコンビネーションの応用は神薬溶液に尿素とともに糖アルコールのに伸びて滲んだ不鮮明な観察像になっ

以上の in vivo を中心とした研究に一つであるソルビトールが含まれていたり内部の観察像が暗くなったりする。

加え、もう一つ透明化技術の応用範囲る。ソルビトールも尿素と同様に高い

SCALEVIEW-S 試 薬 を 含 め、 近 年として注目すべき分野がある。スフェ

保水能力を持つ物質である。これが組次々と開発されている透明化技術は概

ロイドやオルガノイドなどの組織を模

織中に水を配位する上で尿素と相乗的して高屈折率（1.43 〜 1.56）のマウン

した三次元細胞培養を用いた in vitroに作用し組織の光散乱をより低減化す

ト液を用いる傾向にある。Scal eS 法のでの研究である。近年、それらの細胞るように働くと考えられる。

場合、透明化した組織はマウント液で塊は基礎生物学的な研究から薬剤のス

Scal eS 法に用いる溶液には低濃度

あ る SCALEVIEW-S4（ 屈 折 率 1.47）、

クリーニングなどの実用的な研究に多の TritonX-100 [0.1–0.2%（w/v）濃度 ]あるいはより高い透明性を得ることが用されている。このような細胞塊を詳が含まれている。この濃度範囲ではできるマウント液の SCALEVIEW-SMt

細に観察するために透明化技術が有効

TritonX-100 による脂質の抽出効果は（屈折率 1.49）で十分に平衡化されてであると考えられる。本稿の終盤にかなりマイルドである。そのため、細いると考えてよい。つまり、注意すべScal e 法の応用としてニューロスフェ

胞膜のダメージが比較的軽微である。

きポイントはマウント液と対物レンズ

ロイド（Nsp）の例を挙げ解説を行う。

このことは、Scal eS 法で一度透明化との間の屈折率である。これらの液のScal e 法による透明化の基本原理したマウス脳組織を PBS（–）で脱透屈折率に対応する対物レンズを使って明化し、同組織から作成した超薄切片

観察することが望ましい。もし、高屈ご存知の通り、多くの生体組織は透を透過型電子顕微鏡で観察することに折率のマウント液に対応したレンズが明ではなく濁って見える。組織を構成より検証された。その結果は神経細胞ない場合、SCALEVIEW-S4 までの試する成分によって光が散乱し直進しにの形質膜や興奮性シナプス周辺部の膜薬で透明化した後にマウント液をくいからである。このことは顕微鏡観構造の超微細構造が良好な状態で保持

SCALEVIEW-A2（屈折率 1.38）に置察にとって大きな障害になる。散乱のされていることを示しており、Scal eS

換 し て 数 時 間 37ºC で 平 衡 化 し、 水原因となる物質は主として細胞膜を構法がマイルドに作用することが確認さ

浸 用の対物レンズで 1 〜 2 mm の深成する脂質、そして細胞外基質とそれらが集合した結合組織（例えばコラー
ゲン繊維など）である。透明化技術の多くはこうした生物組織に由来する光

2）

れた 。

Scal e 法で透明化したサンプルの観察で気をつけるべき点

さまで観察を行うことも可能である。 た だ し、SCALEVIEW-S4 か ら
SCALEVIEW-A2 に置換した場合、組織がやや膨潤することに留意していた

散乱をできる限り低減化するために、透明化組織の観察時のトラブルとし高濃度の界面活性剤や有機溶媒を用いて「透明化を行ったが像がぼやけてて積極的に組織中の脂質成分を除くとはっきり見えない」あるいは「像が暗観察時のトラブルを防ぐための対策

いう工夫をしている。

い」など、観察がうまくいかないといとして、使用するマウント液の特性やだきたいと思う。この詳細は Protocol
Exchange で公開している 8）。

これとは異なったアプローチが筆者う話を聞くことが多い。個別に詳しい

屈折率に関する情報を集め自分の対物らの尿素を主成分とした試薬溶液を用話を聞くと、サンプルを浸けた浸漬液

レンズで対応可能かどうか、またレンいる Scal e 法である。尿素はタンパク（マウント液）の屈折率や対物レンズ

ズの作動距離についての情報もあわせ質変性剤であると同時に水を抱えこむに関する情報や理解が十分でないことて知っておく必要がある。これらの情性質がある。この性質により組織を親が大半の原因である。

報を観察の前に必ず確認していただき

水化（hydration）することで散乱を共焦点レーザー走査型顕微鏡や 2 光

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

たいと思う。不明な場合は試薬メー

15基礎から応用までよくわかる組織透明化技術

カーと対物レンズのメーカー各社に問らんだ組織を元のサイズに戻すという

SCALEVIEW-S4 は 密 度 が 高 く Nsp

合わせ、目的とするサンプルの観察に二つの意味で重要な過程である。

が液中で浮遊しやすいからである

適した方法について相談していただく

deScal e の 後 に ブ ロ ッ キ ン グ を 行（SCALEVIEW-A2 液中にある透明化の が ベ ス ト で あ る。 以 上 の 内 容 はい、蛍光標識した 1 次抗体を用いる直Nsp は遠心分離で簡単に沈降させることができる）。

Scal e 法の場合だけでなく他の透明化

接法あるいは 1 次抗体の後に蛍光標識技術を用いた場合にも共通して言える

化 2 次抗体を用いた間接法で染色を行

AbScal e 法 に よ る 染 色、 こ れ に 次ことである。

う。間接法を行う場合は、2 次抗体のぐ透明化、そして観察という一連の操

反応時間および反応温度、そして洗浄作の中で特に工夫を要するのは顕微鏡法の条件は 1 次抗体の場合と同じであ観察のためのマウントのしかたである。続く染色後の再固定は反応させたる。筆者らが通常行っているアガロー

ニューロスフェロイドへのScal e 法の応用固定したスフェロイド内部を顕微鏡抗体が離脱するのを防ぐ。スフェロイ

スを用いたマウントのフローを図 2 に観察することは簡単ではない。スフェ

ドはサイズが小さいため AbScal e 法まとめた。このマウントの方法は主とロイドは細胞外基質が発達しており、の前処理により抗体が内部によく浸透

して倒立顕微鏡による観察用である細胞同士がタイトにパックされているする。ただし、抗体の中には浸透しにが、正立顕微鏡を用いた観察にも転用

ため特に中心部分の濁りが強いからでくいものがあるので、可能であれば同することができる。

ある。これまで細胞塊の内部を観察す

一の抗原に対して複数の抗体を使ってAbScal e 法で免疫染色および透明るために物理的に切断した厚さ数十μmテストをしていただけたらと思う。

化した Nsp を上述のマウント法で不の切片を作製する必要があったが、小ここで紹介する変法では、Nsp の透動化した。その観察像を図 3 に示す。

さな細胞塊から切片を作るという煩雑

明 化 を SCALEVIEW-A2 試 薬 に よ っ

また、この実験例の場合、サンプルのさと困難とを回避するためには透明化て行う。SCALEVIEW-S4 による透明マ ウ ン ト 液 に SCALEVIEW-A2 を 用技術が有効である。アダルト海馬由来

化 を こ の 変 法 で 行 わ な い 理 由 は、い、空浸の 10 倍対物レンズを備えたの 神 経 幹 細 胞 か ら 調 製 し た Nsp を

図２．三次元免疫染色後のニューロスフェロ
イドを観察するためのマウントの一例

AbScal e 法によって染色し透明化するための操作手順が富士フイルム和光純

図の手順の詳細を以下に述べる。① 37〜 40 ºC に温度を下げた 1.5%（w/v）アガロース /SCALEVIEW-S4 溶液を 75μl加える。②ニューロスフェロイド（以下、Nsp と記する）とアガロースの懸濁液をカバーガラス上に移す。次いでピペットの先端でゲルを薄く広げる。③風乾（10分、室温）することで Nsp の表面にアガロースの薄膜を作る。④風乾後にカバーグラスを貼り付けてある穴をおおう量（110μl） の 1.5%（w/v） ア ガ ロ ー ス /SCALEVIEW-S4 液（37 〜 40 ºC に 温
度を下げておく）を加えて再び風乾（10分、 室 温 ）。 次 い で 冷 蔵 庫（4 〜 8 ºC）
内でアガロースを固める。⑤アガロース
ゲルがはがれないように（ゲルとディッ
シュ底面をまたぐように）少量の瞬間
接着剤をドット状に留める。接着剤を十 分 に 固 化 さ せ る。 ⑥ デ ィ ッ シ ュ にSCALEVIEW-S4 または SCALEVIEW-A2
を 2 ml 加えた後、振とうして平衡化す
る（1 〜 2 時間、常温）。⑦カバーガラ
スに近接した Nsp を観察する。（補足）i） シ リ コ ン コ ー ト し た チ ッ プ お よ び
チューブを使用することが望ましい（内壁 に Nsp が付着することによるロスを
防 ぐ ）。ii）1.5%（w/v） ア ガ ロ ー ス /SCALEVIEW-S4 液を溶融させる場合は、電子レンジで熱した（500 W、4 〜 5 分間）後、気泡が入らないように均一に混ぜる。37 〜 40 ºC になるように流水でボトルを冷却する。iii）風乾を行っても30 〜 40 分以内であれば Nsp が乾燥することはない。

薬のホームページに紹介されている。
本稿ではその手順をベースとしてやや改変を行った方法について解説する。
Nsp を 4% PFA/PBS（–） で 固 定 した 後、SCALEVIEW 試 薬 を 用 い て
A2

↗

↗

S0

8 M urea solution（ 自 作↗

する必要がある）A2 の順に前処理を行う。この処理を含め、以後のすべての液交換は Nsp が浮遊している溶液をマイルドに遠心分離（500 × g、
15 分間、常温）した後に、上清をできる限りピペットアウトしてから次のステップの溶液を加えて行う。前処理の過程は、Nsp を一旦膨らませること
で細胞間に存在する細胞外基質の柔軟性を上げる効果がある。この過程はNsp 内への抗体の浸透を助長するため、そして染色後の Nsp の透明化を促進するために重要である。
次 の deScal e の 過 程 で Nsp は 再 度
不透明になる。この過程は後に続く免疫染色のための抗原性の再賦活化と膨16

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）基礎から応用までよくわかる組織透明化技術

倒立顕微鏡で観察を行った。その結果、 直 径 約 500μm の Nsp 全 体 を その内部も含めて問題なく観察することができた。特に、Nsp のほぼ中間に位置する最大直径の部分で良好な免疫
染 色 像 お よ び propidium iodide に よる核染色像が得られたことから、Nsp
全体に抗体と蛍光色素が十分に浸透していたことがわかる。
以上のような使い方をすることでScal e 法と AbScal e 法がスフェロイドの観察および解析に貢献し得る技術に
図３．三次元免疫染色後のニューロスフェロイドの観察像なると考えている。

a. アダルトラット海馬由来の神経幹細胞ストックからニューロスフェロイド（Nsp）を調製。培養後 5 日目で分化誘導剤を加えてから 2 日後に AbScal e 法で染色ならびに透明化を行い、図 2に示した方法によるマウント後に倒立顕微鏡で観察した。免疫染色には nestin（図中、緑）および doublecortin（図中、赤）に対する抗体を用いた。また、この実験では透明化および観察時の浸液に SCALEVIEW-A2 を用いた。a.-c. は PBS（–）を添加したコントロール Nsp の画像、また d.-f. は分化誘導剤を添加した Nsp の画像である。a. および d. は免疫染色の三次元再構築像（VR）。b. および e. は Nsp の最大直径部の X-Y 面の免疫染色画像を示す。また、これらの Nsp
を propidium iodide で核染色した（図中、青）（蛍光色素による染色を筆者らは ChemScal e と呼んでいる）。c. および f. は Nsp の最大直径部の X-Y 面の propidium iodide の画像である。スケー
ルバーは 100μm（b、c、e、および f）。

おわりに透明化技術は現在、研究を効率的に進めるための観察を含めた一連の実用的な系を構築する段階に入っているといえる。こうした観点から Boutin ら 9）の Scal e 法によるスフェロイドのハイ
スループット解析に関する報告は Scal e法の興味深い応用例を提案している。
Scal e 法と AbScal e 法はともにマウスだけでなく、ヒトの正常組織や病理組織に応用可能な技術である。組織を扱う多くの研究者の方々にぜひトライしていただきたいと筆者らは考えている。そのために本稿が何らかの助けになれば幸いである。また、Scal e 法による組織透明化のより詳しい内容については筆者らの総説 10, 11） を参考にしていただけたら幸いである。
〔参考文献〕
１）Hama, H. et al . : Nat. Neurosci ., 14, 1481-1488（2011）.

２）Hama, H. et al . : Nat. Neurosci ., 18, 1518-1529（2015）.
３）E conomo, M. N. et al . : eLife , 5, e10566（2016）.
４）Ye, L. et al . : Cell , 165, 1776-1788（2016）.
５）Tainaka, K. et al . : Annu. Rev. Cell Dev.
Biol ., 32, 713-741（2016）.
６）日置寛之ら：「透明化技術の現状と今後の発展 –Scal eS 法 に 焦 点 を 当 て て 」， 日 薬 理 誌

透明化技術149, 173-179（2017）.
７）Iwano, S. et al . : Science , 359, 935-939（2018）.
８）H ama, H. et al . : Protocol Exchange , doi:
10.1038/protex.2016.019（2016）.
.
９）Boutin, M. E. et al . : Sci. Rep ., 8, 11135（2018）10）濱 裕ら :「組織の透明化技術」，生体の科学，
68, 85-93（2017）.
11）濱 裕，宮脇 敦史 :「顕微鏡観察における組織透明化技術」，生体の科学，64, 595-601（2013）.

シリーズ開始にあたって

この度、多くの先生方のご協力により「透明化技術」に関する最新情報の連載を開始しました。ご協力いただきました先生方には、この場を借りて感謝申し上げます。
生体組織を透明化する歴史を遡ると 100 年以上も前になりますが、日本ではさまざま
な透明化技術が近年報告されています。蛍光タンパク質観察及び抗体観察の普及と共に顕微鏡技術革新と同時に透明化技術開発も進み、目的に合わせた透明化技術を選択することが可能となってきました。今後、透明化技術を応用した生命科学研究へのアプローチが期待されています。
本シリーズは、透明化技術開発及び透明化技術の応用研究分野でご活躍されている先生方に最新の研究内容をご紹介いただきます。ぜひ、ご期待下さい。

SCALEVIEWシリーズ
コード No.

品

名

SCALEVIEW-A2
SCALEVIEW-S0
SCALEVIEW-S1
SCALEVIEW-S2SCALEVIEW-S3
SCALEVIEW-S4
SCALEVIEW-SMt
deScal e Solution
SCALEVIEW-S Trial Kit

規格

組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用
組織透明化用

容

量

500mL
250mL
250mL
250mL
250mL
250mL
250mL
500mL
1キット

希望納入価格（円）10,00012,00012,00012,00012,00012,00015,00012,00045,000透明化プロトコール例は、当社 HP をご覧下さい。
富士フイルム和光純薬

SCALEVIEW-A2

富士フイルム和光純薬

SCALEVIEW-S
検索➡

193-18455
196-18521
193-18531
190-18541
197-18551
194-18561
191-18571
041-34425
299-79901…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）17

ew Products
精密な秤量が不要

フタル酸エステル類 4 種を追加保証

定量 NMR 用標準液

RoHSⅡ 対応用試薬

定量 NMR 法は、標準物質を基準として測定対象物質

2019 年 7 月より RoHS 指令が改正されます。改正 RoHS

（サンプル）の純度または濃度を評価する方法です。これ

指令（RoHS Ⅱ）では従来の禁止物質 6 物質（カドミウム、までの定量 NMR 用標準物質及び標準液に加えて、新たに

クロム、水銀、鉛、PBB（ポリブロモビフェニル）、PBDE

1,4-BTMSB-d4 標準液（500mg/L DMSO-d6 溶液）を発売（ポリブロモジフェニルエーテル））にフタル酸エステル類

しました。

4 種（DEHP、DBP、BBP、DIBP）が追加されます。

特RoHS Ⅱ対応用試薬は改正 RoHS 指令に対応した、禁止長

物質 10 物質の含量を保証した試薬です。

●定量 NMR 法によって決定した特性値（濃度）を付与

コード No.

●信頼性の証である不確かさを付与●標準物質の精密な秤量が不要

溶液法概略1）
標準液添加前後の質量を測定することでより精確になります。

標準液

規

格

容量 希望納入価格（円）

RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500mL
RoHSⅡ対応用 500g
RoHSⅡ対応用 500g
RoHSⅡ対応用 500g

当社ではポジティブリスト制度の対象となる農薬標準品、動物用医薬品標準品を品揃えしています。下記品目を

１）山﨑太一 他 : 分析化学 , 63 , 323（2014）.

コード No.

品

名規1,4-BTMSB-d4 Standard Solution
020-19211（500mg/L DMSO-d6 Solution） 危
DSS-d6 Standard Solution（500mg/L
041-33641
Deuterium Oxide Solution）

格

定量NMR
用
定量NMR
用

1mL
×5A
1mL
×5A

22,00018,000

値付けした純度（不確かさを含む）が付与された認証標準
物質です。
品

名

規

格

容量

希望納入価格（円）024-17031 1,4-BTMSB-d4 Reference Material
50mg
TraceSure®
020-17033
50mg×4044-31671
50mg
DSS-d6 Reference Material
TraceSure®
040-31673
50mg×4048-33271 Dimethyl Sulfone Reference Material TraceSure® 100mg

30,00075,00030,00075,000135-17951 Maleic Acid Reference Material
4 Internal Standard Set for
093-06731
Quantitative NMR

TraceSure® 100mg

15,000

定量NMR用 1セット

55,00015,000NMIJ CRM
コード No. メーカーコード

品

名メーカー 容量 希望納入価格（円）NMIJ CRM 3,5-Bis（trifluoromethyl）benzoic Acid
産業技術634-29181
200mg
4601-b for Quantitative NMR（1H, 19F）
総合研究所
1,4-Bis（trimethylsilyl）-2,3,5,6NMIJ CRM
産業技術
639-44151
tetrafluorobenzene for Quantitative NMR
100mg
4602-a 1 19
総合研究所
（ H, F）

コード No.

品

名

規

格

容量 希望納入価格（円）010-16493 Acetamiprid Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW018-18253 Azimsulfuron Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW021-07673 Bensulide Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW021-16223 Benzofenap Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 026-11533 Bethrodine Standard
危 残留農薬試験用 100mg
NEW 021-12703 Bifenthrin Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 032-16793 Cymoxanil Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 037-17723 Cyprodinil Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 043-25173 Dimepiperate Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 068-03503 Fenpropathrin Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 063-03553 Flufenoxuron Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 068-03363 Flusulfamide Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW095-03893 Imazosulfuron Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW099-02394 Iprodione Metabolite Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW
危 残留農薬試験用 100mg
130-05534 MEP StandardNEW
131-07904 Mepronil Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 134-18881 Metosulam Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 130-06634 MPP Standard
危 残留農薬試験用 100mg
NEW 144-05893 Napropamide Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 168-17863 Piperonyl Butoxide Standard
危 残留農薬試験用 100mg
NEW 169-10914 Pyridaphenthion Standard
残留農薬試験用 100mg
NEW 207-15783 Trifloxystrobin Standard
残留農薬試験用 100mgNEW

標準物質国際単位系（SI）にトレーサブルな測定方法で

コード No.

新たに発売しました。

容量 希望納入価格（円）

関連商品

18,75016,87012,00014,00011,00026,00010,00018,00020,00020,00020,00010,00013,00015,00012,00015,0008,000
10,00030,0009,000
11,00010,0008,400
22,000

随時、当社 HP のリストに発売品目を追加・更新しています。詳細は、当社 HP をご覧下さい。
試薬事業トップ＞分析＞食の安全・安心＞残留農薬分析（標準品）＞ポジティブリスト制度 関連試薬 取り扱い標準品一覧…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

18

照会
照会
照会
照会
1,900
照会
照会
照会
照会
照会

ポジティブリスト関連標準品

秤量〔参考文献〕

NEW名

追加品目のお知らせ

qNMR
サンプル

品

危
014-27805 Acetone
危023-19365 2-Butanone
危051-09295 Ethanol（99.5）
危
204-20965 TolueneNEW
危240-00985 Xylene
近日
発売 141-09845 Nitric Acid
近日
発売 086-10515 Hydrochloric Acid
近日（Ⅱ）Sulfate Heptahydrate
発売 092-07345 Iron
近日（Ⅱ）Chloride Hexahydrate
発売 144-09835 Nickel
近日（Ⅱ）Sulfate Hexahydrate
発売 148-09855 Nickel
近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）ew Products
コード No.

光塩基発生剤品

名

容量 希望納入価格（円）（Z ）｛-［Bis（dimethylamino）methylidene］amino｝-N NEW 352-44731 cyclohexyl（cyclohexylamino）methaniminium
Tetrakis（3-fluorophenyl）borate【WPBG-345】

WPBG シリーズ

356-33641 9-Anthrylmethyl N ,N -Diethylcarbamate
352-33643 【WPBG-018】
351-33711 （E ）-1-Piperidino-3-（2-hydroxyphenyl）-2-propen357-33713 1-one【WPBG-027】

光塩基発生剤（Photo Base Generator ; PBG）とは、UVの照射によってアミンなどの有機塩基を発生する化合物です。発生した有機塩基によって、エポキシ樹脂の硬化、ゾル - ゲル法などでゲル化を進行させます。高分子の合成に357-33671 1-（Anthraquinon-2-yl）ethyl Imidazole-1-carboxylate353-33673 【WPBG-140】

おいて反応開始剤として用いられ、コーティング材料、電5g

38,000

1g
5g
1g
5g
1g
5g

11,00038,00011,00038,00011,00038,000

子機器の封止剤などの分野で活用されています。

特長

新規マグネシウム二次電池用電解液●金属の腐食、樹脂の変性がない

マグリューション TM●エポキシ、ポリアミック酸などの樹脂の硬化が可能

マグネシウム電池はリチウム電池の代替として期待され●酸素が反応の邪魔をしないています。当社は、マグネシウム電池の研究用途に最適な
安全性、酸化耐性に優れた電解液を開発しました。本品は、独自に開発したほう素系マグネシウム塩を使用した、高性能・安全な電解液です。
〈マグネシウム二次電池の可能性〉
マグネシウム二次電池は高電圧・高容量、かつ安全、ク
リーンな未来型電池です。マグネシウムはリチウムと比較して資源量も豊富なため、産業的にも注目されています。

■ WPBG- 345■ WPBG- 018

F
CH3
H3C
F
N HN
H3C
N
N
NH

B
F

O
O

NEt2

CH3
F

C42H52BF4N5＝713.70

C20H21NO2＝307.39●イオン型の光塩基発生剤●光照射によりジエチルア●組成物中で高い保存安定性

特■ MaglutionTM B01

ミンを発生●各種増感剤を併用するこ ●長波長領域に吸収帯とで長波長領域に感光性

長●揮発性の低いトリグライムを溶媒とした扱いやすい電解液●優れた溶解性●マグネシウムが繰り返し溶解析出する、マグネシウム二次電池用電解液■ WPBG- 027■ MaglutionTM B02■ WPBG- 140

O

O
N

OH

C14H17NO2＝231.29
CAS RN® 1203424-93-4●シャープなマグネシウムの溶解・析出を実現した電解液

CH3 O
O

OMgCl

N

ClMgO

N
O

C20H14N2O4＝346.33
CAS RN® 1418139-51-1

ルを発生●アウトガス無し

コード No.
NEW●長波長領域に吸収帯

OMgCl

AlCl3

OMgCl
Triglyme

ClMgO

B

AlCl3

OMgCl
Triglyme, THF

自然発火性の高い有機マグネシウム塩を含まず、安全にご使用頂けます。

●光照射によりピペリジン ●光照射によりイミダゾー
を発生

B

品

名

規格/メーカー

容量 希望納入価格（円）357-44982 MaglutionTM B01 危 富士フイルムワコーケミカル 25mL
289-95162 MaglutionTM B02 危
電池研究用
25mL

35,00035,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）19

ew Products
関連商品

鉄触媒クロスカップリング用配位子

コード No.

SciPROP-TB
パラジウムを中心とした貴金属を用いるクロスカップリ
ングは医薬品や機能性材料の合成に広く利用されています。しかし、環境調和性や低毒性化の観点から鉄などの典型金属を利用したカップリング反応が注目されています。
SciPROP は、従来の SciOPP 配位子よりも触媒活性が高

名

いため、一般的に反応性が低い塩化アルキルを基質とする鈴

特殊アミダイト木−宮浦型クロスカップリング反応でも反応が進行します。

架橋型人工核酸

特

長

規

格

容量 希望納入価格（円）

25ｇ
2,100
500ｇ
3,600
250mｇ 10,000
有機合成用    1g 30,000   5g 照  会
試薬特級

本品は、リボース環の 2’と 4’が架橋した構造を持つ、架橋型人工核酸（Locked Nucleic Acid）です。この架橋●塩化アルキルを基質とする鈴木 - 宮浦クロスカップリング

型人工核酸を含むオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ（核反応が可能

酸分解酵素）耐性を示すため核酸医薬品への応用が期待さ●よう化メチルとアリールほう素化合物のクロスカップリン
グ反応が可能れます。

鉄触媒の調製方法を発売しました。核酸医薬の合成検討にご使用下さい。

Bu

Bu
Bu

P

Bu
Bu

この度、水分値 200ppm 以下を保証した架橋型人工核酸

Bu
Bu

P

Bu

SciPROP-TB

Bu

Bu

P

P
Fe
Cl Cl

Bu

EtOH
reﬂux, 11 h

Bu

Bu

Bu

FeCl2・4H2O（1.1 equiv.）

Bu
Bu

Bu
Bu
FeCl（SciPROP-TB）
2

反 応 例■ 第一級塩化アルキルを基質とする鉄 SciPROP-TB 触媒を用いたクロスカップリング反応

EtO

N

O
O

80%
（61%）

98%
（89%）

91%
（82%）
OMe

78%
（62%）

Cl

77%
（73%）

＊ Yields were determined by 1H NMR analysis using 1,1,2,2- tetrachloroethane
as the internal standard.
The isolated yields were shown in the parenthesis.

〔参考文献〕

No.

品

C41H49N4O9P＝772.82
CAS RN® 206055-75-6
4

名

規

格

35,000品

名

規 格 容量 希望納入価格（円）

NEW

核酸
合成用

1g

30,000NEW

Locked Nucleic Acid-G（DMF）
2 125-06781 Cyanoethyl Phosphoramidite（mixture of isomers）

核酸
合成用

1g

30,000NEW

Locked Nucleic Acid-mC（Bz）
3 122-06791 Cyanoethyl Phosphoramidite（mixture of isomers）

核酸
合成用

1g

30,000NEW

Locked Nucleic Acid-T
4 125-06801 Cyanoethyl Phosphoramidite（mixture of isomers）

核酸
合成用

1g

30,000

容量 希望納入価格（円）

2-t -Butyl-1,3-bis[bis（3',5'-di029-19301 t -butylphenyl）phosphino]
有機合成用 500mg
propane【SciPROP-TB】

コード No.

Locked Nucleic Acid-A（Bz）
1 128-06771 Cyanoethyl Phosphoramidite（mixture of isomers）

1）Nakajima, S., Takaya, H. and Nakamura, M. : Chem. Lett ., 46, 711（2017）.

コード No.

C48H54N5O9P＝875.94
CAS RN® 206055-82-5
3

O
EtO

OMe
NC

C44H53N8O8P＝852.91
CAS RN® 709641-79-2
2

+

O

Cl

O

C48H52N7O8P＝885.94
CAS RN® 206055-79-0
1

FeCl（SciPROP-TB）（5 mol%）2
SciPROP-TB（5 mol%）
MgBr（20
mol%）
2
Li
1°
Alkyl-Ar
THF, 40-80℃, 4-18 h

O

Bu
1°
Alkyl-Cl + ArNEW

品

095-00912 Iron（Ⅱ）Chloride
099-00915 Tetrahydrate
029-17081 1,2-Bis[bis[3,5-di（t -butyl）
025-17083 phenyl] phosphino]benzene
023-17084 【SciOPP】…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

20

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）ew Products
特高純度炭素材料

長●優れた特異性

フラーレン●論文使用実績が豊富

フラーレンは、C60 を中心とする球状炭素分子の総称で、炭素の単体であるダイヤモンド、グラファイトと同様の炭素同素体です。フラーレンはその興味深い構造、物性からさまざまな分野の研究に利用されています。代表的な例としては、C60 の内部空間に金属を取り込んだ「金属内包フラーレン」の合成、有機トランジスタや太陽電池の n 型半導体への応用が挙げられます。最近では、医薬品や化粧品材料としても注目されています。当社では、高純度保証のフラーレン及びその誘導体を販売しています。

C60＝720.64
C70＝840.75
C60＝720.64
CAS RN® 99685-96-8 CAS RN® 99685-96-8 CAS RN® 115383-22-7
1
2
3
O

O

O

クローン アイソ
No.
タイプ

Mouse WB/IP/IHC/
IgG1・κ ICC/ELISAIHC/IP/
BNT77 Mouse
IgA・κ
ELISA
Mouse
WB/IHC/BA27 IgG2a・κ
ELISA
Mouse
WB/IHC/
BC05 IgG1・κ
ELISA
Mouse WB/IHC ※
2C8
IgG2b

BAN50

O

No. コード No.

1061-06751

C82H14O2＝1030.99
5

品

名

規

Aβ 反応性ヒト
マウス/ラットAβ40 Aβ42 Aβ43 Aβ40 Aβ42 Aβ43
○

○

○

×

×

×

○

○

○

○

○

○

○

×

×

○

×

×

×

○

○

×

○

○

○

○

○

○

○

○

WB：ウエスタンブロット IHC：免疫組織染色 ICC：免疫細胞染色
IP：免疫沈降 ELISA：ELISA※2C8は一般的な免疫組織染色だけでなく透明化試薬 SCALEVIEW-S（コード No. 299-79901 SCALEVIEW-S Trial Kit）で透明化した組織でも使用可能です。

S■ アルツハイマー病モデルマウス脳の免疫組織染色
BAN50

C72H14O2＝910.88
4

適応実験

使 用 例

O

O

●認識 Aβが異なる５種をラインアップ

BNT77

BA27

C77H18O2S＝1007.03
6

格

容量 希望納入価格（円）250mg

14,0001g

35,000Fullerene C60, 99.95%

機能性有機材料用

2 064-06741 Fullerene C60, 99.5%

機能性有機材料用

1g

19,0003 062-06781 Fullerene C70, 99.0%

機能性有機材料用 250mg

33,0004 134-18761

Methyl Phenyl-C61-Butyrate,
機能性有機材料用 500mg
99.5%

48,0005 167-28281

Methyl Phenyl-C71-butyrate,
機能性有機材料用 250mg
99.0%（mixture of isomers）

40,000

マウス脳内に蓄積した Aβが染色された。

6 164-28291

3-Ethylthiophene PhenylC61-butyrate, 99%

36,000017-26871 Anti Human Amyloid β, Monoclonal013-26873 Antibody（BAN50）014-26881 Anti Amyloid β, Monoclonal Antibody
010-26883 （BNT77）018-26921 Anti Amyloid β40, Monoclonal Antibody
014-26923 （BA27）014-26901 Anti Amyloid β42（43）,Monoclonal
010-26903 Antibody（BC05）
Anti Amyloid β, Monoclonal Antibody
NEW012-27781（2C8）067-06753

BC05

機能性有機材料用 250mg

アルツハイマー病研究に
アミロイドβ（Aβ）抗体アミロイドβ（Aβ）は約 40 アミノ酸から成るペプチドです。A βはアルツハイマー病患者の脳内の病変として形成される老人斑の主成分であり、アルツハイマー病の原因と考えられています。A βはアミノ酸の長さの違いか
らいくつか種類があり、主なものに Aβ40（40 アミノ酸）、
Aβ42（42 アミノ酸）、Aβ43（43 アミノ酸）があります。
当社では A βに対する抗体をラインアップしています。

サンプル：15 か月齢 APP/PS1 系統アルツハイマー病モデルマウス
脳梨状皮質パラフィン切片
B6.Cg-Tg（APPswe.PSEN1dE9）85Dbo/Mmjax
抗原賦活化法：BAN50…くえん酸 Buﬀer（pH 6.0）中でのマイクロウェーブ処理＋proteinase K 処理
BNT77/BA27/BC05…ぎ酸処理
抗体濃度：BAN50/BNT77/BA27…1/1,000 BC05…1/100,000
二次抗体：ビオチン標識抗体
検出法：ABC 法＋DAB 染色

コード No.

品

名

規

格

容量 希望納入価格（円）

10μL
免疫化学用
50μL
10μL
免疫化学用
50μL
10μL
免疫化学用
50μL
10μL
免疫化学用
50μL

10,00035,00010,00035,00010,00035,00010,00035,000

免疫化学用 50μL

35,000

関連商品
コード No.

品

名High Molecular Amyloid β Oligomer
298-80101
ELISA Kit Wako
299-79901 SCALEVIEW-S Trial Kit

規

格

免疫化学用

容量 希望納入価格（円）

96回用

98,000

組織透明化用 1キット

45,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）21

ew Products
製品概要

マウス血清（血漿）中のサイトカインを短時間・微量検体・高感度で測定可能●検量線範囲：2 . 06 〜 800 pg/mL●測定時間：3 時間 50 分
●測定波長：主波長 450 nm ／副波長 620 nm

レビス シリーズ®

●必要検体量：25μL

本品は、マウス血清（血漿）中の IFN-γを特異的かつ高感度に測定可能なキットです。

●検体：マウス血清／血漿〈標準曲線〉

IFN-γは IFN-α/βなどのⅠ型インターフェロンとは構造が異なるⅡ型インターフェロンで、146 アミノ酸からなるサイトカインです。主に T 細胞、NK 細胞により分泌され、ホモ二量体として機能し、抗ウイルス効果をはじ

Abs.（450-620nm）Blank■ レビス® Mouse IFN-γ ELISA Kit

10.00
1.00
0.10
0.01

め、細胞増殖抑制効果、抗腫瘍効果、マクロファージ活性化、NK 細胞の活性増強、免疫応答調節作用、分化誘導の調節作用などの生物活性を有することが知られており、さまざまな研究分野で注目されています。

測 定 例
マウス正常血清検体中 IL-17A を本キット及び他社製品

検●検量線範囲：2 . 05 〜 500 pg/mL●測定波長：主波長 450 nm ／副波長 620 nm●必要検体量：25μL●検体：マウス血清／血漿Abs.
（450-620nm）Blank

10.00

本品は、マウス血清（血漿）中の TNF-αを特異的かつ高感度に測定可能なキットです。

0.10

TNF-αはマウスに移植した腫瘍に対して出血性壊死を誘導する因子として同定された 156 アミノ酸（マウス）の

10
100 1,000
Mouse IFN-γ（pg/mL）

炎症性サイトカインです。さまざまな疾患との関連性が報

マウス正常血清検体中 IFN-γを本キット及び他社製品で測定した。

血清 -1
血清 -2
血清 -3
血清 -4
血清 -5

告されており、関節リウマチ、炎症の他、糖尿病、高脂血症、腎症、敗血症、骨粗鬆症などの分野で注目されています。

測定値（pg/mL）
他社
LBIS（レビス®）
30.1
N.D.
31.3
N.D.
5.73
N.D.
56.0
N.D.
19.3
N.D.

■ レビス® Mouse IL-17A ELISA Kit

本品は、マウス血清（血漿）中の IL-17A を特異的かつ高感度に測定可能なキットです。

製品概要●検量線範囲：3 . 58 〜 700 pg/mL●測定時間：3 時間 50 分
●測定波長：主波長 450 nm ／副波長 620 nm●必要検体量：25μL●検体：マウス血清 / 血漿〈標準曲線〉

IL-17A は 2 つの 133 アミノ酸サブユニットからなるホモ二量体の炎症誘発性サイトカインです。関節リウマチ（RA）をはじめとするさまざまな自己免疫疾患、炎症性疾
患やアレルギー反応、細菌感染防御などに重要な役割を果たしていることが知られており、注目を集めています。

Abs.（450-620nm）Blank体

測定値（pg/mL）
他社
LBIS（レビス®）   5.75
N.D.
46.6
N.D.
45.2
5.14
1.90（参考値）
N.D.
53.2
N.D.

■ レビス® Mouse TNF-α ELISA Kit

1.00

測 定 例

検

体

血清 -1
血清 -2
血清 -3
血清 -4
血清 -5

●測定時間：3 時間 50 分

0.01
1

10
100 1,000
Mouse IL-17A（pg/mL）

で測定した。

製品概要〈標準曲線〉

1

10.00
1.00
0.10
0.01
1
10
100 1,000
Mouse TNF-α（pg/mL）…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

22

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）［次頁に続く］ew Products
測 定 例

使 用 例
■ エクソソームの取り込み

マウス正常血清検体中 TNF-αを本キット及び他社製品で測定した。
検

測定値（pg/mL）
他社
LBIS（レビス®）
5.10
N.D.
3.72
N.D.
4.49
N.D.
3.84
N.D.
4.20
N.D.

体

血清 -1
血清 -2
血清 -3
血清 -4
血清 -5
コード No. メーカーコード

品

名630-44701 AKMIFNG-011 LBIS Mouse IFN-γ ELISA Kit
NEW 637-44711
AKMIL17-011 LBIS Mouse IL-17A ELISA Kit
NEW
634-44721 AKMTNFA-011 LBIS Mouse TNF-α ELISA Kit
NEW

容量 希望納入価格（円）

96回用
96回用
96回用

58,00058,00058,000細胞 A
核を赤色にラベル⇩

共培養が変わる

細胞 B
CD63-GFP 融合タンパク質を発現細胞が通り抜けないサイズのフィルター（0.6μm）

水平型共培養容器 UniWellsTM
本品は、細胞間相互作用研究用の新しい培養容器です。
いままでは培養液を共有する代表的な培養容器として、セルカルチャーインサートと呼ばれる上下に重ねるタイプの容器が用いられていました。不都合な点として、細胞の底面の素材が異なるため細胞の挙動も異なることや、相互の細胞が混ざることなく、細胞 B 由来のエクソソームが細胞 A に取り込まれた。

細胞を同時に顕微鏡で観察できないことがありました。ま細胞から放出されるエクソソームが拡散し、フィルターを透過して別の細胞に取り込まれるかを確認するため、UniWellsTM Horizontal Co-Culture
Plate を使用して上記実験を行った。

た、フィルターの上に細胞が位置するため、細胞数が増えると共培養効果が低下するという欠点もありました。さらには、容器同士の容量が大きく異なるため、培養液中に分泌された物質の希釈効果も加わり、共培養効率は高くはあ

培地容量についてりませんでした。それらの欠点を解消するために、横に接400μL 未満の培地量の場合、ウェ
ル間で培地は共有されません。

続する方式の細胞培養容器を新たに作りました。これまで困難だった相互作用の同時観察のみならず、効果的な共培養を行うことができるようになりました。一般的なプレパ
ラートサイズですので、これまでの各種研究機器が利用可能です。フィルターも、直径が 13mm であれば、自由に選ぶことができます。多種多様の共培養実験が可能になりました。

特片側の最大培地容量は1.8mLです。

長●２細胞の顕微鏡観察が容易●同時観察が可能●ウェル間のフィルターが目詰まりしにくい●それぞれの細胞を独立して培養可能●減菌済みコード No. メーカーコード

名

用 途

容量

希望納入価格（円）10セット
58,000（20個入り）

388-14441

2525- UniWellsTM
06FW Filter 0.6μm

専用フィルター（孔径0.6μm）

50枚

23,000NEW

381-14431

専用フィルター2525- UniWells
003FW Filter 0.03μm （孔径0.03μm）

50枚

35,000NEW

385-14451

2596- UniWellsTM
01FW Adapter 96

１個

30,000NEW

UniWellsTM Horizontal
Co-Culture Plate 1 個品

UniWellsTM
培養容器本体2501NEW 384-14421
Horizontal Co（材質 : ポリスチレン）
02FW
Culture PlateTM

96ウェルプレートサイズのホルダー
UniWellsTM 本体を8個セット可能…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）23

ew Products
細胞外小胞の吸着をブロック■ EV-SaveTM 細胞外小胞ブロッキング試薬

精製から解析までトータルサポート
細胞外小胞研究ツール
エクソソームに代表される細胞外小胞は、表面または内部にタンパク質、mRNA、microRNA、DNA などを含み、細胞から分泌された後、血液、尿、唾液、髄液、母乳などの体液中で安定的に存在していることから、細胞間コミュ

特長●細胞外小胞の実験器具への吸着を抑制

デ ー タ■ チューブ移し替え時の吸着ロス測定
CD63シグナル(移し替え前後の相対比較)

ニケーションのメッセンジャーとして注目を集めています。近年、エクソソームを用いたバイオマーカー探索や再生治療に関する研究報告が増えてきており、高感度検出系
や正確な定量系に関する技術・製品への需要が急激に高
まってきました。
当社は、上記のご要望に対応するためにオリジナル技術

100である PS アフィニティー法の開発に成功し、高純度な細胞外小胞の精製キットや高感度定性及び定量解析用キットなどを提供しています。

高純度細胞外小胞の精製ツール■ MagCaptureTMエクソソームアイソレーションキットPS
特

移し替え前

60

移し替え1回目

40

移し替え2回目

20
0

EV-SaveTMなし EV-SaveTMあり

チューブはどちらもタンパク質低吸着チューブを使用

細胞外小胞の高感度解析ツール■ PS CaptureTMエクソソームELISAキット（ストレプトアビジンHRP）
特

長

80

長

●培養上清・血液検体に対応●高純度精製●超高感度（検体の節約）●インタクトなエクソソームを精製●検体から直接検出可能（単離不要）●培養上清・血清・血漿・尿に対応

測定原理●高い再現性●超遠心分離不要

原

ビオチン標識抗体

理

細胞外小胞
B

ホスファチジルセリン（PS）結合分子を用いて細胞外小胞を金属イオン
依存的に捕捉した後、キレート剤により溶出します。

Ca2+

HRP標識ストレプト
アビジン
Tim4

本キットでは、ビオチン標識抗体を一次検出、HRP 標識ストレプトア
ビジンを二次検出に用いています。
そのため、抗体種に依存せずに細胞外小胞を解析できます。また、二次検出に HRP 標識ストレプトア
ビジンを採用しているため、血液成分への非特異結合が低く、血液サンプル中の細胞外小胞を高感度に検出できます。

Tim4 固相化プレート

デ ー タ■ 電子顕微鏡解析（TEM）及び粒子径解析（NTA）
TEM
超遠心分離法

50〜100nm
11.74

Mean: 106 +/- 4.1 nm
Mode: 85 +/- 2.0 nm
SD: 45 +/- 4.0 nm
Total Concentration: 82.87 +/- 3.46 particles/frame
9.32 +/- 0.34 E8 particles/mL

Concentration（E6 particles/mL）

Size Distribution:

平均粒子径106 ± 4.1 nm
0100 200 300 400 500 600 700 800 900 1,000Size(nm)

細胞外小胞(50〜100nm)の粒径に相当する粒子の濃縮が確認できた。

サンプル：K562細胞培養上清(無血清培地)■ 正常血液検体の各種エクソソームマーカー測定

NTA
PSアフィニティー法

ng/mL

TEM
PSアフィニティー法

デ ー タ
60.0

CD9

50.0

CD63

40.0

EpCAM

30.0
20.0
10.0
0.0

粒度分布計：NanoSight LM10

Serum(n=10)

Plasma EDTA Plasma Heparin
(n=9)
(n=9)

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

24

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）［次頁に続く］ew Products
細胞外小胞のフローサイトメトリー用解析ツール■ PS CaptureTM エクソソームフローサイトメトリーキット
特■ 抗 CD63, モノクローナル抗体（3-13）, 赤色蛍光色素（635）結合
特長長●高感度ヒト CD63 抗体標識品●複数抗原の同時検出●安価●検体から直接検出（精製不要）

デ ー タ●単離から染色まで 3 時間

■ COLO201 細胞由来エクソソームのフローサイトメ

デ ー タ

トリー解析

■ 抗体固相化磁気ビーズ（他社品）との感度比較
80
検出：Isotype Control
検出：抗 CD63 抗体
検出：抗 CD9 抗体
検出：抗 CD81 抗体

カウント数

150

60

100

250
200

Count

101

100

102

PS CaptureTM Exosome
Flow Cytometry Kit
S/B (Isotyope = 1.00)

12.0

103

0

100

101

102

103

抗 CD81 抗体固相化磁気ビーズ

0

20

50

50
100

101

102

103

抗 CD9 抗体固相化磁気ビーズ

0

100

101

102

103

抗 CD63 抗体固相化磁気ビーズ

0

本品と他社品の S/B 比の比較

100

検出抗体

10.0

Isotype

8.0

αCD63

6.0

αCD9

4.0

αCD81

2.0
0.0

100

100

50

0

150

150

100

40

200

200

150

50

①

③

②

①PS Capture

TM

102

103

Exosome Flow Cytometry Kit②他社品：抗 CD81 抗体固相化磁気ビーズ③他社品：抗 CD9 抗体固相化磁気ビーズ④他社品：抗 CD63 抗体固相化磁気ビーズ

サンプル：COLO201 細胞培養上清より PS CaptureTM エクソソームフロー
サイトメ
トリーを用いて単離したエクソソーム④

コード No.

抗エクソソームマーカー抗体シリーズ■ 抗CD63, モノクローナル抗体（3-13）, フルオレセイン結合
特

101

長

●高感度ヒト CD63 抗体標識品
●安価

デ ー タ
■ COLO201 細胞のフローサイトメトリー解析

100

50

0
100

101

102

103

名

規格

容量

希望納入価格（円）20,00080,000遺伝子    2回用研究用 10回用

遺伝子
1mL
研究用
遺伝子
96回用
研究用
遺伝子
300回用
研究用
免疫 25回用
化学用 100回用
011-27751 Anti CD63, Monoclonal Antibody（3-13）, 免疫 25回用
化学用 100回用
017-27753 Red Fluorochrome（635）Conjugated

9,800
58,00030,00013,00045,00013,00045,000

その他細胞外小胞研究ツール
コード No.

150

品

299-77603 MagCaptureTM Exosome Isolation
293-77601 Kit PS
EV-SaveTM Extracellular Vesicle
058-09261
Blocking Reagent
PS CaptureTM Exosome ELISA Kit
298-80601（Streptavidin HRP）
PS CaptureTM Exosome Flow
297-79701
Cytometry Kit
018-27641 Anti CD63, Monoclonal Antibody
014-27643 （3-13）, Fluorescein Conjugated

品

名

規格

容量

希望納入価格（円）PS Capture™ Exosome ELISA Kit
297-79201（Anti Mouse IgG POD）

遺伝子
96回用
研究用

58,000018-27761 Anti CD9, Monoclonal Antibody
014-27763 （1K）016-27061 Anti CD63, Monoclonal Antibody
012-27063 （3-13）20μL
免疫
化学用 100μL
20μL
免疫
化学用 100μL
20μL
免疫
化学用 100μL
20μL
免疫
化学用 100μL

9,000
30,0009,000
30,00012,00040,0009,000
30,000013-27711 Anti CD63, Monoclonal Antibody
019-27713 （3-13）, Biotin Conjugated015-27771 Anti CD81, Monoclonal Antibody
011-27773 （17B1）

上記以外のデータ、使用例なども多数当社 HP に掲載していますので、ご覧下さい。
サンプル：COLO201 細胞懸濁液

富士フイルム和光純薬

Exosome検索➡
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）25

ew Products
コード No.

ES/iPS 細胞の研究に
ES/iPS 細胞研究用低分子化合物
ES/iPS 細胞の未分化能維持や分化誘導に関わる低分子化合物を多数取り揃えています。今回新たに 3 製品を発売しました。

容量 希望納入価格（円）CHIR99021, MF

H3C

本品は、原薬等登録原簿（マスターファイル：MF）のO（初回実績値）その他（培地添加物）区分に登録されています。製造工程●溶解性：DMSO（5mg/mL） H N

や分析法のバリデーション、変更管理を実施し、恒常的に

2

N

N

●エンドトキシン：0.01EU/mg

安定した品質の製品を得られる体制で製造しています。

N未満（初回実績値）〔参考文献〕N

C26H29N5O2＝443.54
CAS RN® 234772-64-6

1）Shimizu, T. et al . : Stem Cells , 30,1394（2012）.

CHIR99021 は、選択性の高い GSK-3β（glycogen synthaseOH

kinase 3β）阻害剤です。CDKs（Cyclin-Dependent kinases）
に対して交差性を示しません。
CHIR99021、PD0325901 を含む培地で ES 細胞を培養す

2）Yagi, M. et al . : Nature , 548, 224（2017）.

ると、高効率で分化を抑制できることが報告されています。

■ JNK阻害剤Ⅷ

また、SB431542、CHIR99021、ドルソモルフィンの 3 つ

本品は、ATP 競合的に作用する阻害剤です。JNK 阻害の低分子化合物を用いて誘導された細胞は、目的細胞への剤Ⅷ及び LIF、CHIR99021、PD0325901、SB203580、分化効率及び速度が大きく上昇するとも報告されています。

A419259、XAV939 を含む培地でマウスの 8 細胞期から特単離した割球を培養すると、胎盤になることができる細胞を●含量（HPLC）：98.0% 以上●溶解性：DMSO（5mg/mL）●エンドトキシン：0.01EU/mg●動物由来原料不使用の化学合成品

O

H3C
NC

N

O

●合成〜包装までをすべて日本国内で実施

CH3●複数ロット連続合格が示す高い品質安定性N

H2N

未満（初回実績値）※原 薬等登録原簿（MF）への登録は、厚生労働省（独立行政法
人医薬品医療機器総合機構）による、品質及び安全性に関するO
O〔参考文献〕

CH3

確認または評価が行われたことを意味するものではありません。

C18H20N4O4＝356.38
CAS RN® 894804-07-0

3）Yang, J. et al . : Nature , 550, 393（2017）.

長● MF 登録済み※

作製、維持培養することができると報告されています 3）。

製品概要●含量（HPLC）：98.0% 以上■ SB590885●外観：白 色〜うすい褐色、

本品は、B-Raf キナーゼの強力かつ選択的な ATP 競合

結晶性粉末〜粉末的阻害剤です。SB590885 及び PD0325901、IM-12、Y-27632、●溶解性：DMSO に可溶

WH-4-023、hLIF、Activin A を含む培地でフィーダー細〔参考文献〕

N
CH3

3

O

N
H

N

N

N

NH

Cl

Cl

CH3

C22H18Cl2N8＝465.34
CAS RN® 252917-06-9

1）Ying, Q. L. et al . : Nature , 453, 519（2008）.
2）Fujimori, K. et al . : Stem Cell Reports ., 9, 1675（2017）.

N OH

C27H27N5O2＝453.54
CAS RN® 405554-55-44）Theunissen, T. W. et al . : Cell Stem Cell , 15, 471（2014）.

NH●マイコプラズマ否定試験済み

N●溶解性：DMSO（5mg/mL） H C N

HN●生菌数試験済み

ることができると報告されています 4）。
（初回実績値）N未満

状態と類似したナイーブ型ヒト ES 細胞へ誘導し、維持す●含量（HPLC）：96.5%

CN●エンドトキシン：0 .05EU/mg

胞上でヒト ES 細胞を培養すると、マウス ES 細胞の基底

コード No.

品

名032-25441
CHIR99021, MF
近日
発売 038-25443
近日
発売

規

格

容量 希望納入価格（円）

細胞培養用

5mg 50,000
25mg 200,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

26

45,00045,00035,000

MF 登録済み

培養できると報告されています 1, 2）。

未満（初回実績値）

格html）。

とともに培地に添加することで、高品質に ES/iPS 細胞を〔参考文献〕

規

細胞培養用 5mg
細胞培養用 5mg
細胞培養用 5mg

（https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/00924.

本品は、強力な Src キナーゼ阻害剤です。CHIR99021●エンドトキシン：0.01EU/mg

名

掲 載 品 目 以 外 の 化 合 物 は 当 社 HP を ご 参 照 下 さ い■ CGP77675●含量（HPLC）：97.9%

品

034-25521 CGP77675
NEW 108-00191
JNK Inhibitor Ⅷ
NEW
194-18681 SB590885
NEW

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）［次頁に続く］ew Products■ iCell® Microglia における刺激応答性サイトカインの遊離関連商品
010-26741
018-26742
259-00613
257-00614
044-33751
040-33753
162-25291
168-25293

品

名規

A-83-01, MF

格

細胞培養用

Y-27632, MF

細胞培養用

Dorsomorphin

細胞生物学用PD0325901

細胞生物学用100,000

容量 希望納入価格（円）5mgConcentration（pg/mL）

コード No.

40,00025mg 135,000
5mg

50,00025mg 200,000
1mg

8,000

5mg

22,0005mg

17,00025mg

68,00010,000
1,000
100
10Control
LPS
IFN-γ
LPS+IFN-γ

1
0.1
0.01
0.001
0.0001

8

CL

CX

8/

IL-

10 L-12 L-13 L-15 17A L-25 1F2 1F3 IL-2 IL-3 L-33 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 1F1IIII
IL- E/I /IL- /IL/IL1α
17 1β 1ra
ILIL- IL- IL-IL-

Analyte播種後 3 日目に Lipopolysaccharide（100ng/mL）
及び IFN-γ（50ng/mL）で刺激した。 刺激処置後 24 時間の培養上清を Luminex Multiplex
Assay で測定した。

ヒト iPS 細胞由来分化細胞※解凍・播種・維持培養方法については、製品に添付されiCell® ミクログリアている User's Guide をご参照下さい。当社 HP でもご覧頂けます。

本 品 は、FUJIFILM Celluar Dynamics, Inc. 製 の ヒ ト
iPS 細胞由来ミクログリアです。ミクログリアは、アルツ
ハイマー型認知症やパーキンソン病などに関与する免疫細〔参考文献〕
1）Abud, E. M. et al . : Neuron , 94（2）,278（2017）.

胞で、神経細胞や脳内に集積したアミロイドβタンパク質の貪食などの免疫機能を有しています。
本品は Blurton-Jones 研究室により開発された技術を用
い た 製 品 で、FUJIFILM Celluar Dynamics, Inc. は カ リ
フォルニア大学アーバイン校（UCI）から本技術を独占的

コード No. メーカーコード
NEW559-33671

C1110

品

名

容量 希望納入価格（円）

iCellⓇ Microglia 01279 1M Cells

1EA

150

300,000

その他の iCell® シリーズは、当社 HP をご覧下さい。
試薬事業トップ＞培養＞細胞＞ iCell® Products

関連商品に使用するライセンスを取得しています。

ミクログリア免疫染色用Iba1抗体

ドナー情報

Iba1 は、神経系のミクログリア特異的に発現する分子
iCell® Microglia 01279株

量約 17,000 のタンパク質で、ミクログリアマーカーとし性別

男性て 頻 用 さ れ て い ま す。 当 社 の Iba1 抗 体 を 用 い て iCell®
Microglia が染色されることを確認しました。

年齢層

55-59 歳民族性

Caucasian

組織起源

PBMC

リプログラミング方法

エピソーマルベクター

アプリケーション■ iCell® Microglia の細胞形態及び Iba1 抗体による免疫染色●抗原：合成ペプチド（Iba1 の C 末端配列）●サブクラス：ウサギ IgG●濃度：0.5 mg/mL●交差性：マウス、ラット、ヒト●適応：免疫組織染色（凍結切片）1 : 500-1,000
免疫細胞染色 1 : 500-1,000（緑）■ iCell® Microglia におけるミクログリア抗体 Iba1
及び TREM2（赤）による二重陽性細胞
細胞：iCell® Microglia
細胞数：14,500 cells/well（384 well plate）
抗体濃度：1 : 500（データ提供：FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc.）（A）PEI/Laminin によりコーティングしたプレートにおける播種後 1 日
目の明視野画像。（B）播種後 1 日目のミクログリア抗体 Iba1（緑）及び核染色試薬 DAPI（青）による二重陽性細胞。

コード No.

品

名Anti Iba1, Rabbit（for019-19741
Immunocytochemistry）

規格

容量 希望納入価格（円）

免疫化学用 50μg

40,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）27

ew Products
タイムコースグラフと検量関係

トキシノメーター ® ET-7000（測定装置）

110

トキシマスター QC8（ソフトウェア）

90

トキシノメーター

透過光量比
（%）

®

®

256

100

は、各種微生物細胞壁成分であるエンドトキシン、（1,3）-β-D- グルカン、ペプチドグリカンを80
NC（ネガティブコントロール）
0.0002 EU/mL
0.0005 EU/mL
0.005 EU/mL
0.05 EU/mL
0.5 EU/mL

70
60
50
40
0

専用試薬を用いて光学的方法により高感度に測定できま

20

40

60

80

100 120 140 160 180 200

反応時間（min.）

エンドトキシン試験に0.0002 EU/mL
0.0005 EU/mL
0.005 EU/mL
0.05 EU/mL
0.5 EU/mL

16

エンドトキシン濃度と反応時間とは
この図の様な検量関係を示します。
40.0001

0.001

0.01

0.1

1

エンドトキシン濃度（EU/mL）

時間（min.）

す。また、反応インキュベーションから結果判定まで、短時間で個人差なく測定でき、日本薬局方のエンドトキシン■ トキシマスター® QC8（ソフトウェア）

試験に最適なシステムです。

専用ソフトウェア「トキシマスター ® QC8 ER/ES」は、従来の「QC7 ER/ES」に比べ、ER/ES 指針・FDA21 CFR
Part11 やデータインテグリティ※への対応がより強化されました。データの完全性をもとに、安全で確実な品質管理をサポートします。
※データが完全で、一貫性があり、正確であること。

特長●権限を細分化し、さまざまな運用方法に対応●試験結果に関するすべてのデータが保護され、自動バッ
クアップが可能●監査証跡のレビューの強化●セキュリティの向上

測定中も、
タイムコースグラフ、
測定の経過、
サンプル配置設定が確認可能

配置方向や、希釈倍率を入力することで一括配置が可能■ トキシノメーター® ET-7000（測定装置）
特長●日本／米国／欧州の薬局方に沿った試験をサポート＊ Windows は、Microsoft Corporation の商標または登録商標です。

●比濁法／比色法／ゲル化法の３試験法に対応● Windows パソコンより専用ソフトウェア「トキシマス

コード No.

ター ® QC」で制御・解析可能

品

名

内容

●海外認証規格 C-UL（CSA）
・CE 適合［セット内容］●厚生労働省 ER/ES 指針・FDA 21 CFR Part 11 準拠

NEW（ER/ES セットのみ）

ーター ET-7000/J（1 台）、トキシマス 1 セット 3,000,000
295-35781 トキシメ®
®

ター QC8 ER/ES、パソコン（1 台）、トキシ
マスター ® QC8 ER/ES 検証資料（CD-ROM）、
IQ/OQ サービス（納入時 1 回）

Toxinometer® ET-7000/J Standard Set

主な仕様

NEW

●光源：超高輝度青色 LED（中心波長 430 nm）●温度設定：30 ／ 37℃切り替え

298-35771 ［セット内容］ ®

トキシノメーター ET-7000/J（1 台）、トキシマ
スター ® QC7、パソコン（1 台）

1セット 1,800,000

Wako LAL システムでは、エンドトキシンの役立ち情報●測定時間：最大 200 分●別売の増設用モジュール［コード No. 291 - 35761］を最
大 7 台まで増設可能

や、関連製品を多数掲載しています。
是非ご活用下さい。
Wako

LAL システム…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）

検索➡

（※基本モジュールを含めて最大 8 台まで USB で接続可能）28

希望納入価格（円）Toxinometer® ET-7000/J ER/ES Set

化学大家 446
マルグリット・ペレー（1909 . 10 . 19 ～ 1975 . 5 . 13）
千葉大学名誉教授

根矢三郎

した。最後に、助手を雇う研究費は夏１．はじめにが来たら下りると言われたとき、これ元素の特徴が周期的に表れることをは面談を切り上げる口実かと推測しま解明した周期表は、物質観に秩序をもした。そしてここに来ることは二度と１）たらした自然科学の金字塔である 。

ないと思いました」

ロシアの科学者ドミトリ・メンデレー

しかし、数日して 7 月 9 日にキュ

エフ（1834-1907）は 63 種類の元素をリー教授の秘書から、10 月 1 日より使い、その原型を 1869 年に発表した。

採用との手紙が届いた。

2019 年は周期表誕生 150 周年を讃え
３．ラジウム研究所での活動

る国際周期表年である。当時、メンデレーエフの分類表にはいくつもの空欄

キュリー教授の個人助手としてがあった。まだ見ぬ多くの元素を求め1929 年より働きだした 19 歳のペレーてあまたの元素ハンターたちが活発なは、実験操作と研究試薬について通常探索活動をくり広げた。1898 年からの化学知識しかなかった。放射性物質の 20 年間には、新元素（ポロニウム・ラドン・ラジウム・アクチニウムおよびプロトアクチニウム）が 5 つも見つ図 1．マルグリット・ペレー（51 歳）
参考文献２よりがもつ特殊な化学反応や性質に関しては何も知らず、まずは放射化学の素養を身につける必要があった。当時のかった。フランシウムは原子番号 87であった。4 歳のとき父が亡くなり、キュリー教授には実験法を教える時間のアルカリ金属で、セシウムのすぐ下

母はピアノ教師などで生活を支えた。

的余裕がまだあった。朝から深夜までにくる元素エカセシウムとして予言さペレーは医者になりたいという希望を熱心に働くペレーの態度にうたれ、二れていた。ところが発見されたのは捨てて、地元の女性化学技術者の養成

人の良好な関係が始まった。キュリー

1939 年と比較的遅く、自然界の元素学校に進んだ。そこで奨学金をもらい教授は原料のピッチブレンド（ウランとしては最後であった。

ながら学生たちへ教育指導も行い、化鉱）から実験材料となる放射性物質を学の初歩を習得した。

取りだす技術を数年かけてペレーに教フランシウムを探し当てたのはフラ最初の転機が訪れたのは 1929 年でえ込んだ。混在する数多くの放射性元（図 1）。彼女は並外れあった。ソルボンヌ大学ラジウム研究

素の分離に、ペレーは当初から優れたた存在だったが、人物像などを書き表所のマリー・キュリー教授（ノーベル腕前を発揮した。そのため、1931 年

した記事は意外に少ない。そこで、フ

化学賞・物理学賞受賞。日本ではキュに発表されたキュリー教授とローゼン

ランシウムの性質を交えてペレーの生

４）
リー夫人として有名 。1867 ～ 1934

ブルム教授の共同論文にはペレーへの涯や人柄を紹介しよう。

年）は、ペレーが在籍していた技術者

謝辞がある。

ンス人女性科学者マルグリット・ペ
レーである

２，３）

養成学校の校長に優秀な個人助手の求

キュリー教授は 1898 年当時、ピッ人を依頼した。19 歳のペレーは 7 月

チブレンドの中にウランよりも強い放ペレーは正式名をマルグリット・カ

初めにキュリー教授を訪ね、暗くて狭射能を出す物質があることを知っていトリーヌ・ペレーといい、1909 年 10

い待合室に通されて面接を受けた。そた。それは、夫ピエール・キュリーと月にパリ中心部から東へ 13 km、電の様子を次のように述壊している。

ともに見つけたポロニウム（1898 年 7車でおよそ 15 分の街ヴィルモンブル「わずかの待ち時間でしたが、緊張

月発見）とラジウム（1898 年 12 月発で生まれた。父親エミール・ルイス・のあまり 1 時間ほどに感じました。や見）であった。彼女はさらにアクチニ

ペレーと母親アン・ジャンヌ・ペレー

がて全身を黒い服で包み、髪を後ろにウムにも興味をもった。アクチニウムに 5 人兄弟（姉 1 人と兄 3 人）の末っ束ねて分厚いメガネをかけた方が影のの存在は数十年前から知られていた子として育てられた。父はアルザス地

ようにスッと入って来ました。青白いが、研究するには少なすぎたので多量方の名門出身で、母はスイスのヴォー

顔色でひ弱そうな雰囲気があり、最初の実験材料をペレーに準備するように

州にある旧家に生まれた。母方の親戚

は秘書さんかと勘違いしたのですが、依頼した。ペレーは期待に応え、1934には赤十字社をつくったアンリ・ジュ

それがキュリー先生でした。有名な先年に分析試料をアムステルダム大学のナ ン（1901 年 ノ ー ベ ル 平 和 賞 受 賞 ）生の前にいると思うと心が震えるよう

ピーター・ゼーマン教授（1902 年ノーがいた。父は 5 つの製粉機をもつ自営でした。ところが、面談しているうち

ベル物理学賞受賞）に送った。同年 7

業者で、厳格で敬虔なプロテスタントに、どうやら断られたらしいと感じま

月にキュリー教授が亡くなり、この共

２．生い立ち和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）29同研究は中座した。しかし、すでに力量を認められていたペレーは、キュリー教授から共同研究者に加わるよう誘われていた。
４．フランシウムの発見
1934 年 7 月にキュリー教授がこの
世 を 去 る と ペ レ ー は 24 歳 で 上 司 を失った。この頃、彼女は新進の放射化学者として認められつつあった。ラジウム研究所の次期所長となったアンドレ・ドビエルヌ（アクチニウムの発見者）と、ラジウム研究所にいたイレー
ヌ・ジョリオ＝キュリー（キュリー教

図３．周期表の一部とフランシウムの性質

授の娘、1935 年ノーベル化学賞受賞）

が、1% ほどがα崩壊するとわかった。

も提唱した元素記号 Cm はキュリウ

はペレーの研究継続を支援した。やがわずかにできるα崩壊生成物に着目しムですでに使われていた。そこでペて第二の転機が訪れた。1939 年にペて、それが新元素であると確信した。

レーは母国フランスでの発見を記念し

レーはアクチニウムから新元素フラン

フランシウムと出会った瞬間だった。

て“フランシウム”の名前を提唱しシウムを発見する幸運に恵まれたので

やっと手にしたフランシウムであった。すると、元素の命名法に詳しいアある。図 2 で示すように、フランシウ

たが、当初は正体不明で、ペレーはアメリカ人物理学者のウィリアム・F・

ムはアクチニウムがα崩壊する過程でクチニウム K という仮の名前をつけメガースは、不安定なフランシウムは生まれる。また、アクチニウムがβマて、実験内容を 1939 年に科学アカデ

フランス国家の永続性にそぐわないと

イナス崩壊するとトリウムになる。α

ミ ー の 学 術 雑 誌 Comptes Rendus に言いだした。また、他の例を引き合い

崩壊では、原子核からヘリウム原子が発表した。みんな彼女の結果にびっくに、元素記号には母音 a がついた Fa

α粒子として飛び出して陽子数と中性り仰天。当初は否定的なコメントが出がよかろうとも述べた。最終的に、ペ子数が変わり、別種の原子核になる。

たが、アクチニウム K は周期表 87 番

レーはフランスの水爆の父ベルトラ

一方、βマイナス崩壊では、電子が放目の穴にぴたりと納まった。次の課題

ン・ゴールドシュミットの提案に従出されて原子番号がひとつ増える。

は元素名だ。ペレーは 1949 年に博士

い、フランスを連想しやすい元素記号

ペレーはフランシウムを射止めた

論文を書いたとき、名称を元のアクチ

Fr を決めた。やがて名称フランシウ

が、それまでは前駆物質アクチニウム

ニ ウ ム K か ら カ チ ウ ム（ 元 素 記 号

ムと元素記号 Fr は、国際純正・応用の精製を担当していた。アクチニウム

Cm）に改めた。理由は、フランシウ

化学連合から正式に認められた。

は天然には微量しかないため、数トン

ムが周期表の左隅一番下にあるので分のピッチブレンドから分離しなけれ（図 3）、アルカリ金属では一番カチオばなかった。高濃度にしたアクチニウ

ン（陽イオン）になりやすいと予想し大学を卒業していなかったペレー

ム分画を調べてみると、ほとんどがβたからである。科学的根拠があるもの

は、1942 年から 1945 年にソルボンヌ

マイナス崩壊してトリウムになったの、不人気なネーミングだった。しか大学で授業を受けて卒業資格を得た。

５．栄光への道

1946 年に物理学博士の学位をとり終えると、ラジウム研究所だけでなく政府機関であるフランス国立科学セン
ター CNRS にも研究室を得た。CNRS
では教育や会議で多忙を極めて研究現場を離れざるをえなかった。
1949 年、ストラスブール大学は核化学研究所にペレーを所長として招い
図２．アクチニウムのα崩壊とβマイナス崩壊
元素記号の上下につく数値はそれぞれ原子量と原子番号を示す。

30

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）て、研究に専念できる環境を提供した。ペレーは放射能のような超自然的エネルギーは体にいいはずだと素朴に手と頭に覚えたが、しばらくしても痛信じていたので、フランシウムの医療

みから完全には解放されなかった。病への適用を研究テーマとした。フラン院で診察を受けても原因不明で、担当

シウムには、半減期が 22 分と短く、医からは心的要因ではないかと言わがん組織に入りやすい利点があった。

れ、ニースの街で保養するよう勧めら

問題は稀少性と不安定さだった。そのれた。1956 年後半にニースへ転居しため医者たちにほとんど試料を提供でたペレーは、まだ研究機構の施設拡充

きず、医療への応用は立ち消えになっに意欲的で、すぐにもストラスブール

た。現在でもフランシウムの実用的なへ戻るつもりでいた。一方では、放射使途はない。とはいえ、新聞や雑誌は線への甘い対応を反省して、もっと注

フランシウムで初期のがんが見つかる意すべきだったと知人たちに漏らしてと楽観的に報じた。さらに、新しいマ
リー・キュリーの誕生という論点もつ
け足され、ペレーは表舞台に躍り出図４．ストラスブール大学・核研究センター
講堂にあるペレーのブロンズ記念画
参考文献３よりた。これには女性科学者の活躍がまだいる。やがて視力はだんだん弱まり、
1973 年ころには失明して身の回りのことができなくなった。1974 年にはルーヴシエンヌの病院に移り、ベッド

珍しく、新ヒロインの登場を歓迎する

ミーはご老体たちが運営する男社会の中で最後の栄誉となる国家功労勲章

時代のうねりが味方した。ペレーはで、女性は連絡会員でさえ認められを手にした。そして 1975 年 5 月 13 日

キュリー教授に例えられる風潮を素直ず、マリー・キュリーも入会できなに 65 歳で人生の幕を閉じた。原因はには喜ばなかった。キュリー教授は尊かった。ペレーは威光を放つ科学アカ

ウラン、ポロニウム、アクチニウムな敬すべき最愛の先生で、ポロニウムとデミーに入会を許された最初の女性研

どの放射性元素に加えて、自ら発見しラジウムを理詰めで発見したのに対究者となった。この出来事も大々的にたフランシウムからの放射線による血し、フランシウム発見はセレンディピ

報じられペレーの名声はいよいよ高液・骨髄の損傷とその合併症であっティー（おもわぬ幸運に恵まれた発まったのである。1964 年になるとさた。5 月 16 日にベルサイユのプロテ見）だと自覚していたからである。そらに、科学アカデミーのラボアジェ賞

スタント教会で近親者やアルフレッ

れでも、フェミニストやプロテスタン

をうけ、フランス化学会の銀メダルをド・カストレル（1966 年ノーベル物

トの団体は、女性への偏見を打破した獲得した。1974 年には国家功労勲章理学賞）などの友人らが参列して葬儀として、彼女を熱狂的に支持した。

に輝いた。

がとり行われた。放射化学の初期の道

1955 年になると、ストラスブール
大学と CNRS は各地に分散していたのりを献身的に歩み、そこに新たな歴
６．病気に見舞われて史をつけ加えた人生だった。ちなみ

核科学の関連施設をストラスブールに

放射能は医療に効くどころか、有害集約して、物理学・化学・生物学への性と持続性を兼ね備えていた。揺らん

応用を目指す新規の核研究センターを期の放射化学者としてペレーは危険性つくった。ペレーはその化学部門主任を十分認識しないまま研究に取り組ん

本稿の執筆を勧めていただいた桜井になった（図 4）。ここではラジウムだ。ラジウム研究所に勤務して 4 年目

弘先生（京都薬科大学名誉教授）に心研究所とストラスブール大学の勤務時頃から手や指にやけどができることにより御礼申しあげます。

代から続けていた午後のお茶の時間を気づいた。まわりから指摘されると、大切にし、にぎやかな雰囲気をつくる

酸などの化学薬品のせいだろうと答え〔参考文献〕

よう努めた。ペレーは部下たちの相談ていた。フランシウムを発見してから事に気軽に応じ、兄弟親戚たちともよは学位論文づくりで実験時間が減った

く連絡をとる気さくな人物だった。

が、やけどの跡は残ったままだった。

１）桜 井 弘：「元素 118 の新知識」（講談社、ブルーバックス B2028）（2017）．
２）https://en.wikipedia.org/wiki/Marguerite_
Perey.
３）Adloff, J.-P. and Kauffman, G. B. :“Marguerite
Perey（1909-1975）: A Personal Retrospective
Tribute on the 30th Anniversary of Her
Death”, Chem. Educator , 10, 378-386（2005）．
４）
（a）https://en.wikipedia.org/wiki/Marie_Curie ;（b）島尾永康：「マリー・キュリー」
，和光純薬
時報，70
（4）
，2-5（2002）.

1962 年にはフランス学士院の科学

やがて、軽い体調不良を訴えるように

アカデミー部門の「連絡会員」に選ばなった。1955 年以降はストラスブーれた。科学アカデミーはフランス学士

ル大学での欧州原子核研究機構の開設

院を構成する 5 つのアカデミーのひと

業務に忙殺されてストレスが増えた。

つである。連絡会員は永年会員ではな

47 歳になった 1956 年初めには、加えく準会員である。当時の科学アカデて急性神経痛症状に似た激しい痛みを

和光純薬時報 Vol.87, No.2（2019）に、ペレーは生涯独身であった。
謝

辞

31

試薬事業Webサイトリニューアルのお知らせ
試薬事業 Web サイトにつきまして、さらなるサービス向上のため、検索システム「Siyaku.Com」と統合し、全面目的のページに素早く辿り着くことができるよう、製品検索機能の強化及び、サイト構造の改善・情報の整理を行い、より快適にご覧頂けるようになりました。
スマートフォンでご覧になった場合も、より見やすいように最適化を図っています。
ぜひ、ご利用下さい。

※画面はイメージです。

https://labchem-wako.fujifilm.com※「お気に入り」、「ブックマーク」などに登録されている場合は、再設定をお願いします。

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。
…特定毒物
  
…毒物
…劇物
…毒薬
…劇薬 危 …危険物
…向精神薬
…特定麻薬向精神薬原料特定    
…化審法 第一種特定化学物質…化審法 第二種特定化学物質…化学兵器禁止法 第一種指定物質…化学兵器禁止法 第二種指定物質
毒素等 …国民保護法
覚 …覚せい剤取締法
掲載内容は、2019 年 4 月時点での情報です。上記以外の法律及び最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

…カルタヘナ法収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 87 No. 2
2019 年 4 月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
発 行 所

印

32

刷

所

糸 博之
大西礼子
富士フイルム和光純薬株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.06-6203-3741（代表）URL http://ffwk.fujifilm.co.jp
共進社印刷株式会社●和光純薬時報に対するご意見・ご感想はこちらまでお寄せ下さい。
E-mail ffwk-jiho@fujifilm.com●製品に対するお問合せはこちらまでお寄せ下さい。

Please contact us to get detailed information on products in this journal.

■富士フイルム和光純薬株式会社（Japan）
試薬 URL https://labchem-wako.fujifilm.com
フリーダイヤル（日本のみ）0120-052-099
フリーファックス（日本のみ）0120-052-806
E-mail ffwk-labchem-tec@fujifilm.com■Wako Overseas Offices :・FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A. Corporation http://www.wakousa.com
Toll-Free（U.S. only）+1 877 714 1920

Tel +1 804 714 1920 / Fax +1 804 271 7791

・FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH http://www.wako-chemicals.de
European Office（Neuss, Germany）：Tel +49 2131 311 0 / Fax +49 2131 311 100

Vol.87 No.2

リニューアルしました。