ISSN 1347-4804

January 2017Vol.85 No.1

NZ-1-PA ペプチド複合体の全体構造と抗原結合部の拡大図〔総説〕「結晶構造から読み解く PA タグシステムの原理とタンパク質ループ構造への挿入」
松永

幸子、有森

貴夫、高木

淳一………   2赤井周司………   6「α-グルコシダーゼ活性阻害測定キットの開発」

松井泰子……… 10

「新規アフィニティーエクソソーム精製法とエクソソーム高感度検出への応用」

今若

直子……… 12「ラセミ体アルコールを光学的に純粋な化合物に収率 100% で変換する新技術」〈テクニカルレポート〉〔化学大家〕
「後藤

格次」

山本

出……… 28〔製品紹介〕
環境・分析

有機合成

9

α-グルコシダーゼ活性阻害測定キット… ………………… 11

アマノリパーゼスクリーニングセット………………………… 15

中圧分取 / フラッシュクロマト用カラム Presep®… ……… 18

動的光学分割試薬 V-MPS4… …………………………
N.E. CHEMCAT 社製

選択的還元触媒……………… 16

ポジティブリスト関連標準品… …………………………… 19

両末端反応型 RAFT 剤… ……………………………… 18

細胞生物

免

プロテインアッセイラピッドキットワコーⅡ…………………… 26

疫

抗アミロイドβ, モノクローナル抗体

COX-2 阻害剤（ニスメリド，ロフェコキシブ）……………… 27（BAN50/BNT77/BA27/BC05）… ………………… 22

HIV プロテアーゼ阻害剤 チプラナビル…………………… 27

抗マウスセロトニントランスポーター , ラットモノクローナル抗体

アルテピリン C… ………………………………………… 27（R5-3-2）… …………………………………………… 23

遺抗マウス Nestin, ラットモノクローナル抗体（7A3）… …… 23

PA tag 検出・精製用試薬… ……………………………

4

培

MagCapture

5

養

伝

子
TM

HP 抗 PA タグ抗体磁気ビーズ… ………

StemSure® on-feeder hPSC 培地……………………… 24

MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキット PS…… 14

CultureSure® IWR-1-endo … …………………………… 24

PS CaptureTM エクソソーム ELISA キット

NSサプリメント（インスリン不含）… ……………………… 25（Anti Mouse IgG POD）……………………………… 14

バッグ充てん液体培地 / プロセス溶液… ………………… 32

Ni-NTA アガロース………………………………………… 20
人工遺伝子合成サービス… ……………………………… 21〔お知らせ〕
有機合成用 酵素反応 パンフレット発行のご案内… ………………………………………………………… 15
5th IIIS Symposium・32nd Wako Workshop Joint Meeting 開催報告… ………………………………… 25

1

R

esearch

結晶構造から読み解く PA タグシステムの原理とタンパク質
ループ構造への挿入
大阪大学

1 はじめに蛋白質研究所

松永

幸子、有森

貴夫、高木

淳一

に PA ペプチドは Met4-Asp10 を中心状態でなければ抗体に認識されにくいに分子全体で NZ-1 抗体と接し、抗原ため、既存のペプチドタグは、タンパ

認識部位の結合ポケットにすっぽりとク質のフレキシブルな領域、すなわちタンパク質の構造解析や機能解析をはまり込んでいた。また、Pro5-Gly6

N 末端あるいは C 末端にしか付加で行うためには高純度の精製タンパク質配列の部分ではβターン構造をとってきない場合が多い。一方、PA タグは、が必要であり、筆者らの研究室ではよいた。Pro-Gly 配列は溶液中でも typeNZ-1 が PA ペプチドの折れ曲がり構

り効率的な試料調製を行うためのカス

Ⅱのβターン構造を形成しやすいこと造を認識することから、PA ペプチド

タムアフィニティータグシステムを開が知られていることから 7）、PA ペプの N 末端と C 末端は抗体に認識され1, 2）。中でも PA タグシス

チドは NZ-1 と結合する前から結合にた状態では同じ方向を向き、距離も近テ ム は、12 残 基 か ら な る PA タ グ

最適な構造を取ることができると予想

くなる（図 1b）。この特徴から、PA（GVAMPGAEDDVV）が、それに対される。抗体側の特徴もそれと類似

タグはタンパク質の末端だけでなく、するモノクローナル抗体 NZ-1 に対しし、ペプチドが結合する前後で立体構

U ターンしているループ部分へ挿入し発してきたて極めて高い親和性で特異的に結合し造および水和状態の変化がほとんど見て も タ グ と し て 機 能 す る、 つ ま り（K D = 4 × 10 −10 M）、しかも PA ペ

られなかった。すなわち、PA タグシ

NZ-1 に認識されることが期待された。

プチドにより容易に競合溶出させるこ

ステムにおいては、ペプチド側も抗体とが可能なため、一段階で目的タンパ

側もともに結合に伴うエントロピーのク質を高純度かつ高収率で精製するこ損失が非常に少ないことが結晶構造かとができる 3, 4）。そもそも PA タグシら示唆された。相互作用の親和性は結ステムの開発は、東北大・加藤幸成教

合前後のエネルギー差で決まるため、

PA タグ配列をループ構造へ挿入す

授らにより、悪性癌細胞に高発現する

このようなエントロピー損失の少なさ

るためのテストサンプルとして、血小膜タンパク質ポドプラニンの部分配列

が、PA タグシステムが高い親和性を板膜タンパク質であるインテグリンを（PA タグ配列）に対する特異的抗体持つ主な要因であると考えられた。

選んだ。インテグリンはα鎖とβ鎖の3

PA タグのループ構造
への挿入

5）

NZ-1 を取得したことに端を発する 。

また、NZ-1 が U 字型に曲がった構

ヘテロダイマーであり、αIIb 鎖とβ3NZ-1 が単独の PA ペプチドに対して造の PA タグを認識することは、非常鎖から構成されるインテグリンαIIbβ3も強く結合することに着目し、筆者らに興味深い知見であった。通常、ペプは立体構造や機能解析の報告例が多のグループによりアフィニティータグ

チドは溶液中で特定の構造をとらず、く、しかも細胞外領域のみでも可溶性システムとして確立するに至った。詳抗体に結合する場合も比較的伸びたコタンパク質として高発現することか

細は和光純薬時報 Vol. 82, No.4（2014）

ンフォメーションをとっていることがら、PA タグ挿入の効果を評価するのおよび文献 4 を参照されたい。最近、多い（図 1b）。つまり、フラフラしたに適した分子である 8）。まず、αIIb

筆者らは PA ペプチドと NZ-1 の複合体の結晶構造を決定し、その特徴的な複合体形成機構より、PA タグシステ
ムの新たな利用法を見出した 6）。本稿では PA タグのループ構造への挿入およびそのタンパク質機能解析ツールとしての応用例を報告する。

2

PA タグペプチド - NZ-1
抗体の複合体構造解析

冒 頭 で も 触 れ た が、PA タ グ は
NZ-1 へ高親和性で結合する。そのメカニズムを知るため、NZ-1 の Fab フ
ラグメント単独および PA ペプチドとの複合体の結晶構造を決定した（PDB
ID: 4YNY, 4YO0）。図 1a に示すよう

2

図１．NZ-1 による PA ペプチド認識機構（a）NZ-1 － PA ペプチド複合体の全体構造と抗原結合部の拡大図。PA ペプチド（黄色のスティッ
クモデル）は U 字型の構造をとり、その N 末端と C 末端の距離は近い。（b）抗ペプチド抗体によるペプチド認識モード。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

か。はじめにターゲット分子としてインテグリンαIIb 鎖を選択したのには前述の理由以外にも大きな理由がある。インテグリンは構造変化に伴い活性が制御される分子であり 9）、非活性状態（お辞儀構造）と活性状態（直立構造）では構造が大きく変化する。そこで、この構造変化の前後で露出度が変 化 す る 部 位 に PA タ グ を 挿 入 し、NZ-1 の結合量の変化により構造変化をモニターできるのではと考えた（図3a）。このために、図 2 で用いた PA
タ グ 挿 入 αIIb 鎖 変 異 体 の う ち 3 種（W2、Thigh_FG、Calf1_EF）を細胞膜上に発現させ、フローサイトメト
リーにより解析した。これらのうち非図２．インテグリンのループ領域への PA タグの挿入（a）インテグリンαIIb（赤）β 3（灰色）の細胞外領域の立体構造（PDB ID: 3FCS）。PA タグを挿入したループ領域をシアンで示す。（b）挿入部位付近のアミノ酸配列。12 残基の PA タグ
は // の位置に挿入した。（c）各 PA タグ挿入変異体の、抗インテグリン抗体（7E3、上段）および抗 PA タグ抗体（NZ-1、下段）による免疫沈降の結果。文献 6 より改変して転載。

活性状態でも分子の外側に PA タグが位置する W2 および Thigh_FG では、インテグリンの活性化状態に関わらず同等の効率で NZ-1 の結合が確認できた（図 3b、W2 および Thigh_FG、青鎖の分子表面に露出したループ構造

まさに機能部位であったり活性部位と色と赤色のヒストグラム）。それに対（特にターン構造）を 8 カ所選び、PA

隣接していたりして、タグ付加を許さして、PA タグがお辞儀構造の内側に

配列 12 残基を挿入した変異体を作製ないタンパク質がいくつか知られてい位置する Calf1_EF においては、未刺し た（ 図 2a, 2b）。 次 に、 こ れ ら PAる。そのようなタンパク質の一例とし

激時（図 3b、Calf1_EF、青色ヒスト

タグ挿入αIIb 鎖変異体をβ3 鎖と共て、神経軸索ガイダンス因子セマフォ

グラム）では他と比較して NZ-1 によに可溶性タンパク質として発現させた

リン 3A が挙げられる。セマフォリン

り認識されにくく、あまり分子表面にところ、NZ-1 抗体および抗β3 鎖抗

3A は両末端が活性に寄与し、また複露出していないことが予想された。と体により免疫沈降されたことから、挿数の受容体との結合部位を持つため、ころがインテグリンを活性化し起き上入 PA タグはアフィニティータグとし「機能に影響のないループ」を選んでがらせると（図 3b、Calf1_EF、赤色ての機能を保持しつつ、かつ、β3 鎖挿入するという目的に適した分子であヒストグラム）、NZ-1 の反応性は上昇とのヘテロダイマー形成に悪影響を与る。実際、筆者らはセマフォリン 3A

した（ヒストグラムのピークが右へシえないことが示された（図 2c）。同様のループに PA タグを挿入することフトした）。このように、たった 12 残の実験を FLAG タグや Myc タグでもで、高活性を持った試料の調製に成功

基の PA ペプチド挿入により構造変化

6）行ったが、これらでは（それぞれ抗している 。この他にも我々はこれま

FLAG タグの M2 抗体および抗 Myc

でに 20 種以上のタンパク質へのルー

タグの 9E10 抗体に対して）まったく

プ挿入を検討し、うまくデザインでき

認識されなかったことから、ループにれば PA タグは比較的自由にループへ挿入できる能力は PA タグに特有のも組み込めることがわかってきた。

のであると言える 6）。
この挿入できる性質がどのような場合に役立つのかを考えてみると、実に4

挿入 PA タグの分子レポーターとしての応用

様々な用途が浮かんでくる。ひとつの追跡が可能となったわけである。

5 おわりに
本稿では、PA タグが単なる精製用タグとしてだけでなく、分子解析ツー
ルとして応用できる一例を示した。他にも、PA タグは使い方次第で様々な解析に有用であると予想する。たとえは、単純に、ターゲット分子の末端にループに挿入した PA タグは、精製

ば結晶構造解析においては、膜タンパ

タグを付加できない事情がある場合で用タグとしてのみならず、分子の機能

ク質などの結晶化が困難な分子の場ある。N 末端あるいは C 末端残基が、解析にも利用できるのではないだろう

合、フレキシブルな領域に結合する特和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）3

異抗体の断片（Fab、単鎖抗体など）と複合体を形成させることにより結晶化を促進させる方法が主流となっていNZ-1がアクセスできない領域にPAタグを挿入する。

るが、通常は、個々の標的タンパク質

構造変化によりPAタグが露出し、NZ-1により認識されるようになる。

に対する抗体を取得する必要があり、多くの時間と労力を費やすことになる。しかし、PA タグシステムでは好きな場所にタグを挿入し、NZ-1 断片と複合体を形成させることで同様の効果が得られる可能性がある。これらの応用は、「高親和性」かつ「ループに挿入可能」という他にはない特異な性質を持つ PA タグシステムだからこそ出来ることである。このような特長を生かし、多くの研究分野で PA タグシ
ステムが応用されることを期待したい。
図３．インテグリンをターゲット分子とした PA タグループ挿入法の活用例〔参考文献〕（a）PA タグシステムを用いてインテグリンの構造変化をモニター。（b）3 種のインテグリンαIIb 鎖 PA タグ挿入変異体の非活性状態（青）と活性状態（赤）のフローサイトメトリーヒスト
グラムを示す。文献 6 より改変して転載。

1）Nogi, T. et al . : Protein Sci ., 17, 2120（2008）.
2）T abata, S. et al . : J. Proteomics , 73, 1777
（2010）.
3）Fujii, Y. et al . : Protein Expr. Purif ., 95, 240（2014）.
4）藤 井勇樹 他 : 蛋白質科学会アーカイブ , 7,e075（2014）.

ループ構造
ポリペプチド鎖の方向を変える折れ曲がり構造。

5）Kato, Y. et al . : Biochem. Biophys. Res. Commun .,349, 1301（2006）.
6）Fujii, Y. et al . : J. Cell Sci ., 129, 1512（2016）.
7）Guruprsad, K. and Rajkumar, S. : J. Biosci .,25, 143（2000）.
8）Zhu, J. et al . : Mol. Cell , 32, 849（2008）.
9）Takagi, J. et al . : Cell , 110, 599（2002）.

ターン構造
3〜4 アミノ酸残基から成る U 字型の二次構造。2 端残基間の距離間隔や主鎖の二面角によって細分類される（α, β, γ, δ, π）。βターンが最も一般的。

PA tag検出・精製用試薬
コード No.

品

名016-25861 Anti PA tag, Rat Monoclonal012-25863 Antibody（NZ-1）

015-25951 Anti PA tag, Rat Monoclonal
Antibody（NZ-1）, Peroxidase
011-25953 conjugated012-25841
018-25843 Anti PA tag Antibody Beads
016-25844

規

格

免疫化学用

免疫化学用

容量

希望納入価格（円）

コード No.

200μℓ

30,000167-25501

1mℓ

品

名

規

格

98,000163-25503

PA tag Peptide

遺伝子研究用

200μℓ

45,000169-27261 PA tag Washing Solution

遺伝子研究用

1mℓ

150,000

容量

希望納入価格（円）5mg

20,00025mg

80,00050mℓ12,0002mℓ（Net 1mℓ） 65,000
免疫化学用 （Net10mℓ5mℓ） 250,000
50mℓ（Net 25mℓ） 照     会当社 HP にて配列情報、Multi Cloning Site（MCS）情報や、PA tag 発現ベクター製品をご紹介しています。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/PA_tag/index.htm…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

4

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

ew Products■ 抗 PA tag 抗体磁気ビーズの再生実験

対するラットモノクローナル抗体（NZ-1）を使用した日本発のアフィニティー精製タグシステムです 1）。NZ-1 は PA

分子量tag に対する高い親和性と特異性を持ち、免疫沈降を用いて PA tag 融合タンパク質をワンステップかつ高純度で精M

WB（抗 PA tag-HRP）

PA peptide

1 2 3 再生回数

100,000

150,000

75,000100,000

メトリー、免疫細胞染色に応用でき、PA tag 洗浄溶液を75,000用いて使用済みの各ビーズを簡単に再生することも可能で

50,000

す 1, 3）。近年、PA tag と NZ-1 複合体の結晶構造が解かれ、

37,000PA tag がβターン構造をとることが明らかになりました 4）。

50,00037,00015,00010,0004）

挿入アプリケーション」も報告されています 。

抗 PA tag 抗体磁気ビーズの再生利用性能を確認した。その結果、3 回再生利用しても性能の低下なくリコンビナント PA tag 融合
EGFP タンパク質を精製することができた。なお、再生には PA
tag Washing Solution［コード No. 169-27261］を使用した。

今回、新たに抗 PA tag 抗体を固定化した磁気ビーズをラインアップしました。免疫沈降法による PA tag 融合タ
ンパク質の精製や検出にご使用下さい。

長■ PA tag ペプチドによる競合溶出回数の検討実験●非特異的結合が少ない

WB（抗 PA tag-HRP）● PA tag ペプチドによる競合溶出、酸による溶出、2 mol/ℓ

250,000
150,000

50,0002mol/ℓ MgCl2

37,00015,00010,000

競合溶出の回数を複数回繰り返すことによって回収量の増加が可能であるか検討を行った。その結果、PA tag ペプチド競合溶
出を複数回繰り返すことによって、リコンビナント PA tag 融合
EGFP タンパク質の回収量を増加できることが明らかとなった。

100,000
75,00050,00050,00037,00037,00025,00025,00020,00020,000⬅PA
tagged 15,000
EGFP 10,000⬅PA tagged
EGFP

25,00020,000150,000

100,000
75,00015,00010,000M

PA peptide
0.1mol/ℓ Glycine-HCl pH 3.0

分子量 M
250,000

2×SDS Sample Buﬀer

75,0005% Input

100,000

溶出（10％溶出物）

2mol/ℓ MgCl2

WB（抗 PA tag-HRP）

0.1mol/ℓ Glycine-HCl pH 3.0

M150,000

銀染色

PA peptide

分子量1% Input
2×SDS Sample Buﬀer■ リコンビナント PA tag 融合 EGFP タンパク質の添加回収実験

M

PA Peptide, 15min, 3 回目

分子量250,000

PA Peptide, 15min, 2 回目

デ ー タ

PA Peptide, 15min, 1 回目●再生利用可能2.5% Input●遠心操作不要PA Peptide, 30min x1

溶出（10％溶出物）

MgCl 2 溶液による溶出が可能

2×SDS Sample Buﬀer

特⬅PA tagged
EGFP

25,000⬅PA tagged
20,000
EGFP

25,00020,00015,00010,000

この特長を応用した「膜タンパク質ループ構造への PA tag

PA peptide

1 2 3 再生回数

150,000

250,000

製可能です 2）。また、ウエスタンブロットやフローサイト

M

分子量250,000

2×SDS Sample Buﬀer

PA tag System は、ペプチドタグ（12 アミノ酸残基）に1% Input
2×SDS Sample Buﬀer

銀染色

MagCaptureTM HP 抗 PA タグ抗体磁気ビーズ

5% Input

PA tag シリーズに磁気ビーズが追加⬅PA tagged
EGFP〔参考文献〕
1）Fujii, Y. et al . : Protein Expr. Purif ., 95 , 240（2014）.
2）藤井勇樹 他 : 蛋白質科学会アーカイブ , 7 , e 075（2014）.
3）Kaneko, M. K. et al . : Biochem. Biophys. Res. Commun ., 432 , 40（2013）.

input : K562 細胞溶解液 +PA tag 融合 EGFP タンパク質

K562 細胞溶解液に添加したリコンビナント PA tag 融合 EGFP
タンパク質の回収性能を確認した。その結果、各種溶出条件において高純度のリコンビナント PA tag 融合 EGFP タンパク質が精製された。

4）Fujii, Y. et al . : J. Cell Sci ., 129 , 1512（2016）.
コード No.
近日
発売

品

名

MagCaptureTM HP Anti PA tag
137-18751
Antibody Magnetic Beads

規格

容量 希望納入価格（円）

免疫化学用

2mℓ

65,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）5

R

esearch

ラセミ体アルコールを光学的に純粋な化合物に収率 100％で変換する新技術

1 はじめに大阪大学大学院薬学研究科

周司とができれば、より実用的な変換法に法を開発した。以前より、オキソバナ

なる。本稿では、著者らが最近開発しジウムエステル O=V（OR）3 はアリル

た『ラセミ体アルコールを光学的に純アルコールと反応して、水酸基の 1,3-

光学的に純粋な有機化合物は、医薬粋な化合物に収率 100％で変換する動

転位を起こすことが知られていたが、品、農薬、香料、液晶などの様々な製的光学分割法』について紹介する。

150℃以上の高温を要した 3）。著者らは、この転位反応を再検討した結果品に用いられている。年々、光学活性

リパーゼ触媒による
2 動 的 光 学 分 割（DKR）
法の背景 2）（図１B）、O=V（OSiPh3）3 5a4） 又は樹のがあるが、常温常圧での高いエナン

リパーゼ触媒による速度論的光学分

媒中、室温〜 50℃でアリルアルコー

チオ並びに官能基選択性、高い触媒回割と並行して、反応せずに残った鏡像

ル（3 及び 4）の 1,3- 転位反応が進行

転率を満足するものは未だ少ない。一異性体を別の触媒によってラセミ体にすることを見出した。しかも、光学活

方、生体触媒（酵素）はこれらを可能戻すこと（ラセミ化）が進行すれば、性アルコールは転位の間にラセミ化すにする。さらに、発酵によって大量生

最終的には、すべてのラセミ体原料をることを新たに発見した。種々の実験

産でき、かつ、生分解されて自然に帰１つの光学活性体に収率 100% で変換

結果から、イオン対中間体 A が生じ、すことができる酵素は、枯渇しない触することができる。この手法は動的光

その後の再結合の際にラセミ化が起媒として資源の乏しいわが国の今後の学 分 割（dynamic kinetic resolution、

こっていることがわかった。このラセ

物質生産・変換を支える鍵になる。

化合物の需要は高まり、環境に負荷をかけない供給法の開発が今日の重要課
題の１つである。最近の金属触媒や低分子有機触媒の発展には目を見張るも脂に結合したホスホン酸のオキソバナ
ジウムエステル 5b5） を用いると、ア
セトン、アセトニトリルなどの極性溶

以下 DKR と略す）と呼ばれる。DKR

ミ化とリパーゼ触媒光学分割を組み合

多様な酵素の中でも、脂質のエステを成功させるためには幾つかの要件がわせることで DKR が達成できた。すル結合を加水分解するリパーゼは、有同時に満たされなければならない（詳なわち、ラセミ体の 3 に、5a 又は 5b

機合成への利用が最も多い。それは、細は総説 2）参照）が、なかでも最も（10 mol%）、市販の固定化リパーゼ、

リパーゼは特に安定で、補酵素が要ら

難題は、酵素とラセミ化触媒が１つの及びアシル化剤として酢酸ビニルを反ず、かつ、非天然の幅広い基質に対しフラスコ内で共存し、本来の機能を発応させると、DKR が進行し光学純度て高い触媒活性とエナンチオ選択性を揮できることである。ラセミ化効率を

90 〜 99% ee の エ ス テ ル（R ）-6 が 収示すからである。さらに、リパーゼを高めるために触媒の活性を上げると、率 64 〜 99％で得られた。これは、オ有機溶媒中で用いると、カルボン酸とリパーゼとの共存性が低下する。そのキソバナジウムが、ラセミ化を伴いな

アルコールからエステルを形成する触理由は、ペプチドであるリパーゼがもがら 4 種の異性体（[ R ）-3,（S ）-3,（R ）-4,媒にもなる。その際、d 体と l 体の２つ官能基によって両触媒は反応して失（S ）-4] 間 の 動 的 平 衡 を 生 じ（ 発 散 ）、

つの鏡像異性体の片方だけを選択的に活したり、リパーゼが触媒活性を維持

リパーゼがその混合物のなかから反応させることができるエナンチオ選するために表面に抱えている多数の水（R ）-3 を高選択的に変換する（収束）択性のために、ラセミ体を分離し光学分子によってラセミ化触媒が失活するという相反する性質の反応が同時進行

活性体を入手する速度論的光学分割にことがあるためである。

することで初めて達成された（図１

汎用されてきた（図１A）。最近では、現在の DKR の主流は、ルテニウムB）。各触媒単独ではこの成果は得ら

何十種類ものリパーゼが市販されてお錯体とリパーゼを併用する手法であれない。また、本法では 3 の位置異性

り、セライトや樹脂などに担持され粉る。ルテニウム錯体はアルコールの酸体 4 が等価な原料として利用できるこ末状になっているものが多い。このよ化－還元反応によってラセミ化を触媒とが合成化学上の大きな利点である

うに、リパーゼは極めて使い勝手がよする。ルテニウム錯体とリパーゼは共（合成化学的応用例は後述）。しかし、

い生体触媒で、工業生産への適用例も存性に概ね優れ、本法の適用範囲は広オキソバナジウム（5a, 5b）のラセミ

多いが 1）、改良の余地も有る。その１

2）い 。

化能は必ずしも充分でなく、基質につは収率である。リパーゼはラセミ体の片方の鏡像異性体だけを反応させる

よってはラセミ化が遅いために生成物

著者らの DKR 法と有機
3
合成化学的応用の収率や光学純度が低いことが問題で利用できれば収率 100% を達成できる

著者らは最近、前述のルテニウム錯

パーゼとも反応して互いを失活させが、それを１つのフラスコ内で行うこ体を用いる方法とは全く異なる DKR

ために、生成物の収率は最大 50% になる。反応しなかった残りの半分を再6

赤井

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

あった。一方で、よりラセミ化能の高いオキソバナジウムを用いると、リた。

図２．MPS の細孔を利用する反応場の分離．

図１．
（A）リパーゼ触媒速度論的光学分割（B）オ キソバナジウムとリパーゼを併用する動
的光学分割

図３．
（A）V-MPS と市販の固定化リパーゼを用いる DKR の概要（B）触媒の回収再利用の具体例

ラセミ化活性とリパーゼとの共存性

mmol/g） を 調 製 し た。 そ の 構 造 はを同時に向上させたラセミ化触媒を開ICP-AMS、元素分析、BET 法などに発すべく、種々検討した結果、メソ

よって図 1B のように推定している。

ポーラスシリカ（MPS）の細孔を利

分子量数百以下の有機化合物は用して両触媒を物理的に隔離する案に

V-MPS の細孔に簡単に出入りするこ至った。MPS は二酸化ケイ素（シリとができるが、分子量数万ダルトン以カ）を材質として、均一で規則的な細上の巨大なリパーゼは細孔に入ってい孔をもつ多孔質無機化合物で、表面積けない（実際には、ポリマーや無機素

2

が 約 1000 m /g も あ る。 ま た、 細 孔材に担持された市販のリパーゼを利用

径が 2 〜 50 nm の異なる種々の MPSするので、細孔内に入る可能性は限りを入手することができるが、本 DKR

なくゼロに近い）。こうして、バナジでは細孔径 3 〜 4 nm の MPS を利用

ウムによる『ラセミ化の反応場』と、した。MPS と 5a を有機溶媒中で 80

リパーゼによる『光学分割の反応場』℃に加熱することで、細孔内表面のシが MPS の細孔によって完全に分離でラノールにバナジウムが共有結合したきる（図 2）。

V-MPS（バナジウム含量 0.20 〜 0.22

新規に調製した V-MPS は、従来使

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

用していたラセミ化触媒（5a, 5b）よりも格段にラセミ化活性が高いことが
わかった

6a）

。さらに、100 nm や 400

nm の大きな細孔径を有するマクロ
ポーラスシリカに結合したオキソバナ
ジウムはラセミ化活性が低いことから、V-MPS のナノサイズの細孔がラセミ化の促進に極めて重要な役割を果たしていることが明らかになった 6a）。
V-MPS と市販の固定化リパーゼは何れも粉末状である。これらを使ってラセミ体 4a の DKR を行った後、溶液部分と沈殿物を分離した。溶液を減圧濃縮すると、高純度の 6a が単離収率 99%、光学純度 99% ee で得られた（図 3A）。また、溶液部分に漏洩した

7

バナジウム量は 0.0003% 未満であっ表１．V-MPS と市販の固定化リパーゼを用いる DKR の実施例

た。 さ ら に、 沈 殿 物（V-MPS と リ
パーゼの混合物）を減圧乾燥後、同じ
条件下、再度 DKR に使用すると全く同じ結果が得られた。この、混合触媒
は 6 回目まで全く失活することなく再6a）。
利用できた（図３B）

さらに、細孔径が各々 3 nm 及び 4
nm の MPS から調製した V-MPS3 とV-MPS4 を用いて、分子サイズの異なる光学活性アルコールのラセミ化速度を比較した結果、分子量 200 程度の小さなアルコールでは、V-MPS3 と VMPS4 のラセミ化活性に差はなかった
が、分子量が 400 を越え、また、分子長が 1 nm を越えるようなアルコールになると、V-MPS4 の方がラセミ化が速いことがわかった 6b）。
基質アルコールに適した市販の固定化リパーゼを選択し、これと V-MPS3
または V-MPS4 を併用する DKR の実施例の一部を表１に示す 6b）。前述のラセミ化速度の違いを反映して、4b〜 4d のように比較的大きなアルコー
ル分子では、V-MPS4 を用いると、より高収率で対応するエステルが得られる（エントリー 1 〜 6）。一方、比較的小さなアルコールでは、V-MPS3 とV-MPS4 に殆ど差はない（エントリー
7 〜 10）。 従 っ て、 一 般 的 に は、VMPS4 を用いることが推奨される。また、本法はベンジルアルコール 3k やプロパルギルアルコール 3l にも適用できる（エントリー 15, 16）。
本 DKR 法の応用例を 2 つ挙げる（図ア リ ル エ ス テ ル（S ）-6n（ 光 学 純 度

告している 8））、エノン、炭素陰イオ4）。（－）- クリナンの不斉合成では、>99%） を 得 た。 こ れ を エ ポ キ シ ドン、アシル化剤の 3 成分をカルボニル

シクロヘキセノンから 1 工程で得られ（S ）-8 に変換後、位置および立体選択

炭素上でエナンチオ選択性に連結してるラセミ体第三級アルコール 4m に本的に Grignard 試薬を付加し、脱保護

全炭素置換光学活性第四級炭素を不斉6a）法を適用し、アリルエステル（R ）-6m

を経て全合成を達成した（図４B） 。

構築する新手法として、今後の展開が（ 光 学 純 度 98%） を 得 た。 続 い て、

これらの事例は、入手容易なラセミ体期待できる。

Ireland-Claisen 転位を行ってカルボン

アルコールが DKR によって、光学的酸（S ）-7 に誘導した後、4 工程の変換に純粋な化合物に高収率で変換できる

7）8を行い、全合成を達成した（図 4A） 。

こ と を 示 し て い る。 さ ら に 前 者 は、

また、（R ）-インペラネンの不斉合成

DKR によって導入されたアシル基を4 まとめ

では、バニリンから誘導したラセミ体

分子骨格構築に有効活用した例でありリパーゼ（生体触媒）とオキソバナ

アリルアルコール 3n に本法を適用し、（著者らは、類似の利用例を他にも報ジウム化合物（金属触媒）という異質

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

悪影響を及ぼすことなく共存し、本来の機能を最大限に発揮するためには、
メソポーラスシリカのナノスケールの細孔を利用することが極めて効果的であることもわかった。著者らは、このナノスケールの反応場の更なる活用研究を進めている。
〔参考文献〕1）
（総説）廣瀬芳彦：有合化誌 , 69, 506（2011）.
2）
（総説）（a）Akai, S. : Chem. Lett ., 43, 746（2014）.（b）Takizawa, S. et al . : Chem. Eur. J .,21, 8992（2015）.（c）Verho, O. and Bäckvall,
J.E. : J. Am. Chem. Soc ., 137, 3996（2015）.（d）Långvik, O. et al . : ChemCatChem , 7, 4004
（2015）.
3）Chabardes, P. et al . : J. Tetrahedron , 33, 1775
（1977）.
4）Akai, S. et al . : Angew. Chem. Int. Ed ., 45,2592（2006）.
5）Akai, S. et al . : Org. Lett ., 12, 4900（2010）.

図４．V-MPS と固定化リパーゼを併用する DKR の応用（A）（–）- クリナンの不斉全合成（B）（R ）- インペラネンの不斉全合成

6）
（a）Egi, M. et al . : Angew. Chem. Int. Ed ., 52,3654（2013）.（b）Sugiyama, K. et al . : Catal.

な触媒を１つのフラスコ内で同時に用間の動的平衡を生じ（発散）、リパーいることにより、入手容易なラセミ体

ゼがその混合物のなかから１つの鏡像

アルコールを光学的に純粋な化合物に異性体を高選択的に変換する（収束）ほぼ定量的に変換する手法を開発しという相反する性質の反応が同時進行た。これは、オキソバナジウムが、ラすることで初めて達成された（図１B）。

セミ化を伴いながら複数の構造異性体

また、高活性な 2 種類の触媒が互いにSci. Technol ., 6, 5023（2016）.
7）Kawanishi, S. et al . : Green Chem ., in press（2017）.
8）
（a）Akai, S. et al . : Angew. Chem. Int. Ed .,43, 1407 （2004）.（b） Nemoto, H. et al . :Tetrahedron , 68, 7295（2012）.

動的光学分割試薬
V-MPS4
コード No.
228-02341
224-02343

品

名

規

格

有機合成⽤

V-MPS4容 量
1g
5g

希望納入価格（円）16,00050,000＊ V-MPS4 は湿気に対して不安定なため、不活性ガス下でご使⽤ください（グローブボックス推奨）＊

関連商品
コード No.

品

名

由632-26061

CHIRAZYME® L-2, C-4

127-06501
125-06502

Lipase PS IM Amano, Immobilized
on Diatomaceous Earth

規格 / メーカー

容量

希望納入価格（円）Immobilized Lipase from
ロシュ・ダイア
Candida antarctica , Type B
グノスティクス
carrier fixed

来

5g

23,400

5g
25g

5,000
12,000Burkholderia cepacia

有機合成⽤☞（p. 15）アマノリパーゼスクリーニングキットの紹介をしています。併せてご覧下さい。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）9echnical Report
α-グルコシダーゼ活性阻害測定キットの開発
和光純薬工業株式会社

概

要

松井

試薬化成品研究所泰子て生じるマルトースなどの二糖類をまれるムタロターゼの作用によりα型

酵 素 活 性 を 保 証 し た α- グ ル コ シ

分解し、グルコースを生じさせ、血液からβ型へ速やかに変換される。β-D-

ダーゼ酵素を含む、「α- グルコシダー

中の血糖値を上昇させる。そのため、グルコースは、グルコースオキシダー

ゼ活性阻害測定キット」（以下、キッα- グルコシダーゼを阻害することは、ゼ（GOD）の作用を受けて酸化され、ト）を開発した。別売りの「ラボアッ生じるグルコース量を減らし、血糖値

同時に過酸化水素を生じる。生成した

セイ TM グルコース」と組合せることの上昇を抑制することができる。現在

過酸化水素は、共存するペルオキシ

で、食品などに含まれる成分のα- グ

さまざまな植物よりα- グルコシダー

ダーゼ（POD）の作用により発色試

ルコシダーゼ阻害作用を測定すること

ゼ阻害物質が抽出され、血糖値の上昇

液中のフェノールと 4- アミノアンチが可能である。キット中のα- グルコを抑える食品への応用が精力的に検討

ピリンとを定量的に酸化縮合させ、赤シダーゼは二糖類（スクロース及びマされている。

色の色素を生成する。この赤色の吸光ルトース）を基質とした分解活性を保これまで、α- グルコシダーゼ阻害証しており、α- グルコシダーゼ阻害物質について IC50 値を算出する手順

ルコース濃度を定量できる。
・基質濃度の検討

度を測定することにより、試料中のグ活性（IC50）値を測定するのに有用でについていくつか報告はあったが、測あると考えられる。以下に、開発経緯

定キットなどの市販品はなかった。ま本 来 GOD は β-D- グ ル コ ー ス に のと特長を報告する。

た、 哺 乳 類 小 腸 由 来 の α- グ ル コ シ

み反応するが、マルトースにも弱い特

ダーゼの市販品が少なく、一部市販さ異性があるため、バックグラウンドをれている商品も活性値を保証していな

上昇させてしまい、適切に阻害作用い製品であった。

を評価できないおそれがある。そこ

１．開発の背景
近年、豊かな食生活の中で、動物性食品の摂取増加のみならず、偏食や過このことから阻害活性を定量的かで、IC50 値を測定する上での最適なマ

剰栄養も手伝って、糖尿病や肥満、脂つ、再現性良く測定することは困難でルトース濃度を検討した。マルトース

質異常症などの生活習慣病、あるいはあった。このような背景の元、定量的と発色試液を 30 分間反応した結果、

メタボリックシンドロームの進展が深にα- グルコシダーゼ活性阻害作用を18.5mmol/ℓ以下の場合、ブランクの1）測定できる分析用試薬の必要性が高ま

吸光度が 0.1 以下となったため、この

特に糖尿病の患者数は増加傾向にあり、この度、キットの開発に至った。

18.5mmol/ℓ以下を候補濃度として採刻さを増している 。
り、平成 24 年の国民健康・栄養調査用することとした（表１）（調液方法
２．開発までの経緯によると糖尿病が強く疑われる人は約は図３参照）。

950 万人、糖尿病の可能性を否定でき「キット」の開発について記述する

次に、マルトース 18.5mmol/ℓ以下ない人（予備軍）は約 1,100 万人と推前に、IC50 値算出のために別途使用すで 酵 素 反 応 性 を 調 べ た 結 果、2 時 間計されている 2）。

る「ラボアッセイ TM グルコース」に

以上酵素活性を持続する基質濃度は糖尿病の臨床現場で用いられている

ついて、その測定原理を示す（図１）。

18.5mmol/ℓであったため、最終的なマ糖尿病薬の一つにα- グルコシダーゼ

ラボアッセイ TM グルコースの測定

ルトース濃度を 18.5mmol/ℓとした（図阻害剤がある。α- グルコシダーゼは原理：試料に発色液を作用させると、デンプンがアミラーゼにより分解され試料中のグルコースは発色試液中に含２）。

表１．マルトース濃度の検討
CH2OH

CH2OH

H

OH
H
OH H
HO
OH
H OH
α-D-グルコース

ムタロターゼ

H

OOH
GOD
H
+ O2 + H2O
OH H
HO
H
H OH
β-D-グルコース

H2O2 + グルコン酸

マルトース濃度（mmol/ℓ）

0

7.4

18.5

37

74

吸光度
（A505）

0.036

0.057

0.099

0.183

0.337

1.40

H 3C

C

C

NH2

2H2O2 + H3C

N

C

O +

N

OH

POD

H3C

C

C

N

H3C

N

C

O

フェノール

4-アミノアンチピリン

O + 4H2O

N

赤色キノン色素

1.20
1.00
0.80
吸光度
0.60
0.40
0.20
0.00

基質18.5mmol/ℓ
基質7.4mmol/ℓ
基質18.5mmol/ℓ
酵素1/2
0

50

100

150
反応時間(min)

図１．ラボアッセイグルコースの測定原理

10

図２．酵素反応曲線

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

200

250

300

・酵素剤によるばらつき低減検討＜サンプル調製＞キットに含まれる酵素剤はラット小試料溶液
基質液50μℓ または精製水25μℓ

腸由来刷子縁膜から採取し、遠心分離

酵素希釈液25μℓ

精製水400μℓにより最適な画分を取得した懸濁液である。粒子径が大きいとすぐに沈殿し

撹拌後
37℃で
30分間加温37℃で3分間加温てしまい、測定者が採取する時に、測

直ちに
沸騰水浴中
3分間加熱

氷冷

定値がばらつく原因になる。そこで、キットに含まれる酵素剤はすぐに沈殿＜ブランク調製＞しないよう粒子径を小さくするための試料溶液
基質液50μℓ または精製水25μℓ

製造方法をとり、測定値がばらつかな

精製水400μℓ

酵素希釈液25μℓ

いようにした。表２に阻害剤としてアカルボースを用いて 3 回試験した結果を示す（調液方法は図３参照）。
表２．アカルボースの IC50 値
IC50 値（μg/mℓ）CV 値（%）

マルトース

0.10

1.8

スクロース

1.28

0.9

基

質

直ちに
沸騰水浴中
3分間加熱

37℃で
3分間加温

氷冷

図３．キットプロトコール
基質液や酵素希釈液などの調製方法詳細は商品添付の取扱説明書でご確認下さい。

応を停止させ、遊離したグルコースをな機能性食品の開発や探索の一助とな「ラボアッセイ TM グルコース」を用いることを期待している。

３．キットプロトコールて定量し、測定試料の IC50 値を算出「キット」中の基質（マルトース、する（図３）。

スクロース）溶液に段階希釈した測定
試料（α- グルコシダーゼ阻害物質）〔参考文献〕
1）森川敏生：科学研究費助成事業 研究成果報
告書，課題番号 24590037，研究期間 2012 〜
2014．“Search for new metabolic syndrome
therapeutic candidates from Thai natural
medicines”
2）厚 生労働省：平成 24 年国民健康・栄養調査
報告（2012）．

４．最後に溶液及び同じく「キット」中のα- グ

本キットの開発によりα- グルコシ

ルコシダーゼ懸濁液を添加し 37℃でダーゼ阻害物質の IC50 値測定が可能反応させた後、沸騰水浴中で加熱し反となった。今後、本キットがさまざま

α-グルコシダーゼ活性阻害測定キット
キット構成〈キット以外に必要な器具・器材〉●酵素剤（α - グルコシダーゼ）………………… 1 mℓ× 2・ラボアッセイ TM グルコース［コード No. 298 - 65701］●緩衝剤（マレイン酸/マレイン酸二ナトリウム）…… 50 mℓ用× 2

・96 ウエルの透明マイクロプレート- マルトース）… ……………… 20 mℓ用× 2●基質 1（D（+）

・プレートリーダー（505 nm 吸光フィルター）●基質 2（スクロース）… ……………………… 20 mℓ用× 2・マイクロピペット●ポジティブコントロール（アカルボース）…… 100 mg × 1

・恒温槽（37℃）■ α-グルコシダーゼ活性阻害測定キット
NEW

コード No.
品
名297-78601 α-Glucosidase Inhibitory Activity Assay Kit

規 格
食品分析用

容 量
96回用

希望納入価格（円）120,000

関連商品■ グルコース定量用キット
コード No.
品
298-65701 LabAssayTM Glucose

名規 格
容 量 希望納入価格（円）
細胞生物学用 1,000回用
26,000α- グルコシダーゼ
活性阻害測定キット…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）11

echnical Report
新規アフィニティーエクソソーム精製法とエクソソーム高感度検出への応用
和光純薬工業株式会社

はじめに

ライフサイエンス研究所

今若

直子

生理機能を解析できないといった問題

domain and mucin domain-containing

エクソソームとは、さまざまな細胞点があげられる。さらに、エクソソー

protein 4（Tim4）タンパク質は、細から放出される直径 30-100nm の膜小ムを検出する方法としては、ウエスタ

胞外領域にある IgV ドメインを介し胞であり、エクソソームが内包する

ンブロットや ELISA が広く一般的にてカルシウムイオン依存的に PS と結mRNA、microRNA な ど の 核 酸 や タ用いられるが、多量のエクソソームを合することがわかっている 4）。以上のンパク質を離れた細胞に受け渡す機能必要とすることや発現量の少ないマー

知見をもとに、我々は Tim4 を固相化を有することが明らかとなっており、カータンパク質の検出が困難であるとした磁気ビーズを用い、カルシウムイ

細胞間情報伝達におけるコミュニケー

いった問題点が生じている。

オン存在下で培養上清や血清などのサションツールとしての役割やがんを含

そこで本稿では、これらエクソソー

ンプル中のエクソソームを捕捉し、キ

むさまざまな疾患におけるバイオマー

ム実験技術におけるさまざまな課題を

レート剤を添加することによってエク

1, 2）

。

解決するために我々が新たに開発したソソームを精製することができる、既

それ故、ここ数年でさまざまな研究分

新規エクソソーム解析ツールについて存の手法とは一線を画す新たなエクソ

野においてエクソソーム研究が広がっ説明する。

ソーム精製法を金沢大学医学系免疫学てきているが、現状のエクソソーム実

ホスファチジルセリンアフィニ
ティーを用いた新規エクソソーム
精製法の華山教授と共同で開発し、キット化
ム 精 製 キ ッ ト で あ る MagCaptureTM

ソーム精製方法において、超遠心分離

エクソソーム膜は分泌細胞由来のタ

Exosome Isolation Kit PS は、従来のやポリマー沈殿法（市販キット）でンパク質や脂質を含んでいるが、そのエクソソーム精製法よりも高純度なエは、多くの夾雑物が混入することによ

中でもホスファチジルセリン（PS）は、

クソソームをインタクトな状態で簡便り、後の実験に多大な支障を生じるこ生細胞ではフリッパーゼという酵素のに精製することを実現しており、これとが明らかとなっている。一方、抗体働きによって細胞膜の内側に配向してまでゴールドスタンダードとされてき

アフィニティーや密度勾配遠心を用いいるのに対して、エクソソームでは膜た超遠心法に置き換わる新たなエクソ

た方法では、高純度なエクソソームのの外側にも露出していることが知ら

ソーム精製法として確立されつつある

精製は可能であるものの、インタクト

れている 3）。また、マクロファージに（図 1）。

な状態のエクソソームを精製することよるアポトーシス細胞の貪食受容体とができず、エクソソームが持つ本来のし て 知 ら れ る T-cell immunoglobulin

カーとして関心が高まっている験技術は発展途上であり、改善すべき課題が多く存在する。例えば、エクソ（a）MagCaptureTM PS

M

ag
超 Ca
遠 ptu
ポ 心分 re T
M
リ
マ 離 P
ー 法 S
沈
M
殿
ag
法
C
超 ap
遠 tu
心 re T
M
ポ 分
リ
離 PS
マ
ー 法
沈
殿
法

（b）

に成功した 5）。なお、このエクソソー

Lamp-1
200nm

Flotillin-2

超遠心分離法

ポリマー沈殿法（左）培養上清 150μℓに由来する
マーカータンパク質量を比較

CD63（右）各回収タンパク質 200ng あたりのマーカータンパク質量を比較

200nm

200nm

図１．MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS と従来の精製法の比較（a）各方法で精製したエクソソームのウエスタンブロット比較
MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS、超遠心分離法、ポリマー沈殿法を用いて K562 細胞培養上清から精製したエクソソームをそれぞれエク
ソソームマーカータンパク質である Lamp-1、Flotillin-2、CD63 抗体で検出した。
（b）各方法で精製したエクソソームの電子顕微鏡写真
MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS、超遠心分離法、ポリマー沈殿法を用いて K562 細胞培養上清から精製したエクソソームを電子顕微鏡で
検出した。

12

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

ることが明らかとなった（図 3b）。また、既存の Exosome ELISA 製品の感度が、数 ng 〜数μ g 程度（各製品マニュアルなど参照）であることから

Exosome
表面抗原抗体（一次抗体）
Exosome

も、Tim4 タンパク質と PS を介した
アフィニティー結合を利用した本キッ

HRP 標識抗マウス二次抗体

トは、従来のエクソソーム表面マー
カー抗体を固相化する ELISA 法と比較して 100 倍以上高感度であることが示された。

Tim4-Fc 固相化

最後に、本キットの使用例として各種細胞由来エクソソームの表面マー

図２．Exosome ELISA キット原理図

カータンパク質の発現プロファイリングを行った。13 種類の細胞培養上清

PS Capture Exosome ELISAKit の特長と使用例

腸腺がん細胞である COLO201 細胞由からエクソソームを精製し、各精製エ

来精製エクソソームをサンプルに用いクソソーム 1ng を用いて、エクソソーTM

今 回 我 々 は、Tim4 タ ン パ ク 質 がて抗 CD63 モノクローナル抗体によるム マ ー カ ー タ ン パ ク 質 で あ る CD9、

PS を介してエクソソームとアフィニウエスタンブロットを行ったところ、

CD63、CD81 抗体による ELISA 検出

テ ィ ー 結 合 す る 仕 組 み を ELISA にタンパク質量で 75ng のエクソソームを行った（図 4）。その結果、各エク

応用し、PS CaptureTM Exosome ELISA

まで検出できた。次に、本キットを用

ソソームにおけるマーカータンパク質

Kit を開発した。本キットは、エクソ

いて白血病由来細胞株である K562 細の存在比は由来細胞ごとに異なっていソーム表面マーカー抗体を固相化する

胞及び COLO201 細胞由来精製エクソることが明らかとなった。ある種の細従来の ELISA 法より高感度にエクソ

ソームの ELISA 検出限界を調べたと胞株では特定のマーカータンパク質がソームを検出することができる。方法

ころ、K562 細胞由来精製エクソソー

存在しないエクソソームを分泌しておとしては、Tim4 タンパク質を固相化

ムの検出限界が 49.9pg、COLO201 細り、エクソソームの heterogeneity のしたドライプレートに培養上清や血清

胞由来精製エクソソームの検出限界が高さを鮮明とするデータが、本キットなどのエクソソーム含有サンプルを添

10.9pg であり、ウエスタンブロットを用いた ELISA により明らかにされ加し、カルシウムイオン存在下でエクの実に 1,000 倍以上の検出感度を有すた。

ソソームを捕捉させ、エクソソーム表（a）にはマウス抗 CD63 モノクローナル抗体を一次抗体として添付しているが、それ以外のエクソソーム表面マーカーを測定するのであれば、マウス由来の一次抗体を用意することでエクソソー
ムの検出が可能である。

製品よりも高感度なエクソソーム検出を実現していることである。まず始めに、本キットとウエスタンブロットの検出感度を比較するために、ウエスタ
ンブロットにおけるエクソソーム検出
限界を調べた（図 3a）。結果、ヒト結

COLO201

4.00002.0000250,000

3.00001.5000150,000
100,000
75,00050,00037,00025,00020,00015,0002.00001.00000.0000←CD63

020 40 60 80 100 120
精製エクソソーム (ng/mℓ)

1.00000.50000.0000

0

2
4
6
8
10
精製エクソソーム (ng/mℓ)

12

精製 K562 エクソソーム
精製 COLO201 エクソソーム

本キットの最大の特長は、ウエスタ
ンブロットや既存の Exosome ELISA

K562

分子量

Abs.450nm

ム検出を行う（図 2）。なお、キット

（b）

50
n
75 g
n
10 g
0
15 ng
0
20 ng
0n
g

体反応及び二次抗体によりエクソソー

COLO201 細胞由来
精製エクソソーム

Abs.450nm

面マーカータンパク質に対する一次抗図３．ウエスタンブロットと ELISA の検出感度比較（a）エクソソームのウエスタンブロット検出感度検討
COLO201 細胞由来精製エクソソーム（MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS 使用）をそれぞれ 50、75、100、150、200ng 電気泳動し、抗 CD63 抗体でウエスタンブロット検
出した。
（b）Exosome ELISA 検出限界値検討
本キットを用いて K562 細胞及び COLO201 細胞由来精製エクソソーム（MagCaptureTM
Exosome Isolation Kit PS 使用）を段階希釈したサンプル及びバッファーのみのブランク値の活性を測定し、その結果を基に各サンプルの最低検出感度を算出した（各濃度ポイントは
n=6 で、A0 ポイントは n=12 で測定した）。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

13

おわりに
以上のように、Tim4 タンパク質の精製エクソソーム (1ng/well)

PS ア フ ィ ニ テ ィ ー 性 能 を 利 用 し た
MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS
は、従来法より高純度かつ簡便にエク
ソソーム精製を実現し、PS CaptureTM
Exosome ELISA Kit は、高感度なエクソソーム検出を可能とする画期的な製品である。そのため、本キットを用いることにより、従来法では不純物の混入により見逃されていたエクソソー
ム中のマーカータンパク質の同定や、これまでウエスタンブロットや既存のExosome ELISA 製品では検出が困難であった微量な表面マーカーを検出できる可能性が期待される。今後も当社
では Tim4 タンパク質の PS アフィニ
ティー性能を利用したエクソソーム研
究関連試薬を開発する予定であり、それら製品がエクソソーム研究の発展に貢献できることを切に願う。

図４．各種細胞のエクソソームマーカータンパク質発現解析
各種細胞の培養上清由来精製エクソソーム（MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS 使用）を
1ng ずつ用い、エクソソームマーカータンパク質 CD9、CD63、CD81 に対する抗体を用いて
ELISA 検出した。

〔参考文献〕（2008）.

1）Tkach, M. et al . : Cell , 164, 1226（2016）.
2）R aimondo, F. et al . : Proteomics, 11, 709

4）Miyanishi, M. et al . : Nature , 450, 435（2007）.
5）Nakai, W. et al . : Sci. Rep ., 6, 33935（2016）.

（2011）.
3）Trajkovic, K. et al . : Science, 319（5867）, 1244

新規アフィニティー法によるエクソソーム単離キット ＆ ELISAキット
MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキット PS
PS CaptureTM エクソソーム ELISA キット（Anti Mouse IgG POD）
■ ELISA キット■アイソレーションキット

キット構成

キット構成

● Streptavidin Magnetic Beads… ………… 600μℓ× 1● Exosome Capture 96 Well Plate………………… 1 枚● Biotin-labeled Exosome Capture………… 100μℓ× 1● Plate Seal…………………………………………… 4 枚● Exosome Capture Immobilizing Buffer……35mℓ× 1● Reaction/Washing Buffer（10 ×）……… 50mℓ× 2 本● Exosome Binding Enhancer（× 500）…… 500μℓ× 1● Exosome Binding Enhancer（100 ×）… 10mℓ× 1 本● Washing Buffer… ……………………………75mℓ× 2● Control Primary Antibody Anti CD63（100 ×）● Exosome Elution Buffer……………………… 5mℓ× 1● Reaction Tubes… …………………………………22 本……………………………………… 120μℓ× 1 本● Secondary Antibody HRP-conjugatedAnti Mouse IgG（100 ×）… …………… 120μℓ× 1 本● TMB Solution…………………………… 12mℓ× 1 本● Stop Solution… ………………………… 12mℓ× 1 本

コード No.
品
名293-77601 MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS
近日
PS CaptureTM Exosome ELISA Kit（Anti Mouse IgG POD）
発売 297-79201

規 格
遺伝子研究用遺伝子研究用容 量 希望納入価格（円）
10回用
80,00096回用
58,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

14

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

ew Products
お得なセットリパーゼの基本反応や、アマノリパーゼの反応例を当社

発売開始

HP に掲載していますのでご覧下さい。

アマノリパーゼスクリーニングセット

http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/chemical/

生体触媒の利用は、『不要なものを出さない・作らない』というグリーンケミストリーの観点から注目されており、

和光 アマノリパーゼ

検索す。生体触媒のリパーゼは、エステル結合に作用する酵素➡

光学活性な化合物を容易に得るための便利な手法の一つでamano/index.htm

であり、優れた不斉認識能を示すことから不斉合成に利用されます。
本品は、酵素メーカーである天野エンザイム社製の『アマノリパーゼ』です。この度、リパーゼ 6 種のスクリーニ

有機合成用 酵素反応パンフレット発行

ングセットを発売しました。酵素触媒を使った反応条件の酵素反応の実験方法や酵素の選択方法について掲載

検討にご利用下さい。

していますのでご活用下さい。
ご希望の方は、当社営業員または、代理店にお問合

セット構成● Lipase AK Amano… ……………………………… 10 g × 1

せ下さい。

● Lipase AS Amano… ……………………………… 10 g × 1● Lipase AYS Amano… …………………………… 10 g × 1● Lipase G Amano 50………………………………… 10 g × 1● Lipase PS Amano SD……………………………… 10 g × 1● Lipase PS IM Amano, Immobilized on
Diatomaceous Earth… …………………………… 5 g × 1
コード No.
NEW019-26831

品

名Amano Lipase Screening
Set（Contains 6 Lipase）

規格

希望納入価格（円）容量

有機合成用 1セット

28,000

関連商品
コード No.

品

名125-06541 Lipase AK
121-06543 Amano

129-06561 Lipase AS
125-06563 Amano

122-06551 Lipase AYS
128-06553 Amano

121-06521 Lipase G

127-06523 Amano 50
128-06531 Lipase PS

124-06533 Amano SD

由来

規格 容量 希望納入価格（円）

Pseudomonas ≧ 20,000 有機 10g
fluorescens FIP units/g 合成用 50g
Aspergillus
niger≧ 12,000 有機 10g
units/g 合成用 50g

Candidacylindracea≧ 30,000 有機 10g
units/g 合成用 50g

Penicillium
camemberti≧ 50,000 有機 10g
units/g 合成用 50g

Burkholderia ≧ 23,000 有機 10g
cepacia FIP units/g 合成用 50g

Lipase PS
IM Amano,
Burkholderia
Immobilized on
cepacia
Diatomaceous
125-06502
Earth
127-06501

活性

≧ 500
units/g

有機
合成用

5g

6,500

［掲載内容］

18,500◆ 酵素反応の概要

6,000
13,0004,500
10,500◆ 酵素触媒反応例
・リパーゼ
・プロテアーゼ・エステラーゼ・D-アミノアシラーゼ

・ヘム結合タンパク質大阪大学

赤井 周司教授が開発された酵素共触媒

7,500「V-MPS4」を掲載しています。目的のエナンチオマー

16,000を収率 100% で合成する新手法です。アマノリパーゼ

5,500と併用してご利用頂けます。

14,0005,000

パンフレットは、当社 HP でもご覧頂けます。
URL：http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/
chemical/kouso/index.htm

25g

12,000☞ V-MPS 4 に関する総説（p. 6 〜）も併せてご覧下さい。

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）15

ew Products
反 応 例

N.E. CHEMCAT 社製
選択的還元触媒
世界的な Pd/C の供給メーカーである N.E. CHEMCAT社の選択的還元触媒を 3 品目、カップリング触媒を 1 品目
ラインアップしました。

■ 還元触媒■ Pd/BN, NEb-0.3DR（Pd 0.3%）
本品は、リンドラー触媒の代替品です。

特長●アルキンをアルケンに選択的に変換●鉛フリーのため毒性が低い●リンドラー触媒と比較し、反応速度が 15 倍速い● Pd 使用量を 1/6 に低減■ Pd/C, NEs-5DR（Pd 5%）
（含水）

特

デ ー タ

長

●オレフィンや、ベンジル位水酸基を還元■ リンドラー触媒との性能比較●共存するベンジル基、芳香族ケトンなどを特異的に制御●含水品のため、発火のリスクが低い〈モデル反応〉

反 応 例

水素吸収速度の比較

水
素
吸
収
量
（mℓ）

Pd/BN, NEb-0.3DR
選択率95.8％

リンドラー触媒
選択率95.7％

Pd/BN, NEb-0.3DR触媒（Pd=0.287mg）
リンドラー触媒（Pd=1.92mg）

反応時間
（min）

■ Pt/C, STAF-1M（Pt 1%）（含水）

水素吸収速度から算出した反応速度
Entry

特

Pd 量 反応時間 水素吸収 溶媒量
反応速度（mg） （min） （mℓ） （mℓ）［mmol/(ℓ・h・mg-Pd)］

触媒1

Pd/BN, NEb-0.3DR
0.287
触媒

97

120

50

231

2

リンドラー触媒

223

118

50

15

1.916

長

●芳香族ニトロ基を選択的に還元●脱ハロゲン化反応を特異的に制御●含水品のため発火のリスクが低い…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

16

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）［次頁に続く］ew Products
反 応 例

コード No.

品

名

規

格

容量 希望納入価格（円）168-27971 Pd/BN, NEb-0.3DR
5g
有機合成用
NEW
166-27972 （Pd 0.3%）25g
NEW
163-27921 Pd/C, NEs-5DR（Pd 5%）
5g
有機合成用
NEW
161-27922 （wetted with water）
25g

6,500
18,0008,000
26,00010,00035,00010,00035,000NEW

166-28011 Pt/C, STAF-1M（Pt 1%）5ｇ
有機合成用
164-28012 （wetted with water）
25g
NEW
5g
160-27931
Pd/SiO2, PL Catalyst
有機合成用
NEW
168-27932
25g
NEW
NEW

関連商品
Pd/c, NXタイプ（含水）
接触還元に広く用いられる N.E. CHEMCAT 社のパラジ
ウム - カーボン（Pd/C）を多数取り揃えています。いずれの触媒も発火のリスクの低い含水タイプでありながら、反応活性の高い触媒です。

デ ー タ■ オレフィンの還元反応■ カップリング触媒

5%Pd/C(wet)(5wt%)■ Pd/SiO2, PL 触媒

特EtOH, H2, rt, time長

● Pd（PPh3）4 と同等以上の触媒活性

5％ Pd/C(wet)● Pd 使用量を最大 1 / 8 まで軽減可能

N.E. 社 (NX type)
A社
B社●錯体触媒と比較して、Pd 溶出が少ない〈モデル反応〉

ratioa (SM : product)
30 min.
1h
1 : 99ー
58 : 420 : 100
39 : 61
0 : 100a) Ratio was determined by 1H-NMR■ ニトロ基（芳香族）の還元反応
NO2

NH2

5%Pd/C(wet)(5wt%)
EtOH, H2, rt, time

Conversion(%)

b)

100
90
80
70
60

N.E.社(NX type)
A社
B社

50
40
30
20
10

デ ー タ

0

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

Time(h)b) Conversion was determined by HPLC

■ Pd（PPh3）4 との性能比較

格容量

希望納入価格（円）165-27001
Pd/C, type NX（Pd 5%） 有機
163-27002（wetted with water）
合成用
161-27003
162-27011
Pd/C, type NX（Pd 10%） 有機
160-27012（wetted with water）
合成用
168-27013
169-27021
Pd/C, type NX（Pd 20%） 有機
167-27022（wetted with water）
合成用
165-27023

コード No.

品

名

規

   5g
25g
100g
   5g
25g
100g
   5g
25g
100g

   5,000
15,00047,000   6,500
19,00062,000   9,000
29,000100,000

その他、多数取り揃えています。当社 HP にて、ご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/chemical/ne_
chemcat/index.htm…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）17

ew Products
精密重合試薬No. コード No.

両末端反応型 RAFT 剤
本品は、制御リビングラジカル重合手法の一つである
RAFT 重合に用いられる連鎖移動剤（RAFT 剤）です。

名規

格 容量 希望納入価格（円）

5g
25g
1g
有機合成用
5g
有機合成用

に有効な重合法です。この度、両末端に反応性基を有する
二官能性 RAFT 剤を追加しました。ブロック共重合体やindex.htm

末端反応性ポリマーの合成にご利用下さい。

タイプ S 新登場

長

中圧分取 / フラッシュクロマト用カラム Presep®

●分子量の分布範囲が狭いポリマーを合成可能

プレセップ ® 分取用カラムシリーズはポリプロピレン●適 した RAFT 剤を用いることで、広範囲のラジカル重製のシリンジカラムに高品質のクロマト用担体を充てんし

合性モノマーの重合制御が可能●両末端反応型の RAFT 剤を用いて得られるポリマーは、たパックドカラムです。充てん量が異なる５種類のサイズ

鎖延長反応や架橋反応、ブロックコポリマー合成に利用（M・L・2L・3L・4L）に S サイズを追加しました。S サ

可能

イズは、分取条件の検討や少量サンプルの分取に最適です。

反 応 例
O

HO

N

O

①

HO

OH

N

S S

O

O

HO

O

C23H22O4S3＝458.61
CAS No. 1637222-91-3

O

N

O

O

N
O

O
HO

O

C29H36N2O6S3＝604.80
CAS No. 948877-08-5
⑤
HO

S

OH

O

O

O

N

OH

O

S

N
O

O

OH

C25H32N2O4S3＝520.73
CAS No. 948877-09-6

O
O

OH

〔参考文献〕
１）Sudo, A., Hamaguchi, T., Aoyagi, N. and Endo, T. : Polym. Chemi ., 51 ,
318（2013）.
品

名規

格 容量 希望納入価格（円）024-18991 Bis[4-(allyloxycarbonyl)benzyl]
有機合成用
020-18993 Trithiocarbonate023-18961 Bis[4-(2,3-dihydroxypropoxycarbonyl)②
有機合成用
029-18963 benzyl] Trithiocarbonate①③

Type SType MType LType 2L
Type 3L
Type 4L

15 × 65
20 × 60
27 × 100
27 × 140
46 × 110
46 × 220

7
15
40
60
145
290

5 ～ 1010 ～ 40
20 ～ 40
20 ～ 4040 ～ 80
40 ～ 80

No.

形状

細孔径
(nm)

細孔容量
(mℓ/g)

比表面積(m2/g)

pH

①
②
③
④
⑤

球状
破砕状
球状
破砕状
破砕状

3
7
4.5
6
6.7

0.6
0.8
1.0
0.85
0.72

780
450
900
550
432

6.5-7.5
5.5-7.5
8.5-11.5
6.5-7.5
10

No. コード No.

S

C21H22O6S3＝466.59
CAS No. 1637222-83-3

No. コード No.

推奨流速(mℓ/min)■ 充てん剤の物性

S
SO

カラムボリューム
CV(mℓ)

NEW

S
S

サイズ
(mm × mm)

OH

S

S

O

④
S

N

シリンジサイズn

C23H26O8S3＝526.64
CAS No. 1637222-92-4

S
S

S S
n
S

HO

S

O

③

N

②

S
S

O

O

VA-086
110℃, 24h
Chlorobenzene
RAFT重合S020-18971 Bis{4-[ethyl-(2-acetyloxyethyl)026-18973 carbamoyl]benzyl} Trithiocarbonate

有機合成用

1g
5g
1g
5g
1g
5g

9,000
30,0009,000
30,00014,00038,000

近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売

品

名

297-35481 Presep (Luer Lock)
293-35483 Silica Gel (HC-N) Type S
293-35461 Presep® (Luer Lock)②
299-35463 Silica Gel Type S

8g/
15mℓ

③

7g/
15mℓ

®

①

294-35491 Presep® (Luer Lock) NH2
293-35483 (HC) Type SNEW
290-35471 Presep® (Luer Lock) Silica④
NEW
296-35473 Gel(for Loading) Type S
NEW
NEW

カラム容量
参考値

⑤

294-35511 Presep® (Luer Lock) NH2
290-35513 (for Loading) Type S

7g/
15mℓ

7g/
15mℓ
8g/
15mℓ

容量

希望納入価格（円）10本×2袋10本×10袋
10本×2袋10本×10袋
10本×2袋10本×10袋
10本×2袋10本×10袋
10本×2袋10本×10袋

照
会
照
会
照
会
照
会
照
会
照
会
9,000
照
会
14,000照会

分取カラムの接続には別途アダプターが必要です。お問合せ下さい。分取用カラム Presep®
（Luer Lock）シリーズの詳細は当社
HP をご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/chromato/article/
presep_cat.htm…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

18

7,000
16,0009,000
30,000上記以外に RAFT 剤を取り揃えております。当社 HP をご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/chemical/RAFT/

RAFT 重合は、分子量の分布範囲が狭いポリマーの合成

特品029-17961 Bis{4-[ethyl-(2-hydroxyethyl)④
027-17962 carbamoyl]benzyl} Trithiocarbonate
027-18981 Bis[4-(2-hydroxyethoxycarbonyl)⑤
023-18983 benzyl] Trithiocarbonate

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

ew Products■ 動物用医薬品標準品

品目追加■ジメトリダゾール代謝産物 A 標準品

ポジティブリスト関連標準品

化学名：	2-Hydroxymethyl-1-methyl-5-…
nitroimidazole
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：	白色～黄褐色、結晶～結晶性粉末

ポジティブリスト関連の残留農薬試験用標準品及びHPLC 用動物用医薬品標準品の追加品目をご紹介します。

N
O2N

CH2OH

N

品目は順次追加しています。

CH3

C5H7N3O3＝157.13
CAS No. 936-05-0■ 農薬標準品■イソシンコメロン酸二プロピル標準品■ アメトクトラジン標準品
化学名：	5-Ethyl-6-octyl[1,2,4]triazolo[1,5a ]pyrimidin-7-amine
含量（HPLC）：98.0% 以上
外 観：	白 色～わずかにうすい黄褐色、結晶性粉末～粉末備 考：	殺菌剤

化学名：	Dipropyl 2,5-pyridinedicarboxylate
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：	白色～わずかにうすい黄色、塊、又は融解時、うすい黄色～黄色、澄明の
液体

NH2
N
N

N

CH3

CH3

N

O

O

N
O

C15H25N5＝275.39
CAS No. 865318-97-4
H3C

C13H17NO4＝251.28
CAS No. 136-45-8■N - イソプロピルアニリン標準品
化学名：	N -(1-Methylethyl)phenylamine
含量（cGC）：99.0% 以上
外 観：	うすい黄色～褐色、澄明の液体■ マホプラジン標準品

CH3

化学名：	N -{4-{3-[4-(2-Fluorophenyl)-1piperazinyl]propoxy}-3-…
methoxyphenyl}acetamide
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：	ごくうすい黄色～うすい黄褐色、結晶性粉末～粉末

NH

H3C

CH3

O

C9H13N＝135.21
CAS No. 768-52-5

N

F

CH3

O

N
O

NH
O

H3C

C22H28FN3O3＝401.47
CAS No. 80428-29-1■メシリナム標準品■イソキサジフェンエチル標準品
化学名：	Ethyl 4,5-Dihydro-5,5-…
diphenyl-1,2-oxazole-3-…
carboxylate
含量（qNMR）：99.0% 以上
外 観：	白色の粉末
備 考：	薬害軽減剤

化学名：	6-{[(Hexahydro-1H -azepin-1-yl)
methylene]amino}penicillanic Acid
含量
（HPLC）：97.0% 以上
外 観：	白 色～わずかにうすい黄色、結晶性
粉末～粉末

CO2CH2CH3

O

N

H

O

COOH

N
N

N

CH3
CH3

S
H

H

C15H23N3O3S＝325.43
CAS No. 32887-01-7■ミロキサシン標準品

C18H17NO3＝295.33
CAS No. 163520-33-0

化学名：	5,8-Dihydro-5-methoxy-8-oxo-1,3dioxolo[4,5-g ]quinoline-7-…
carboxylic Acid
含量
（qNMR）：98.0% 以上
外 観：	ほとんど白色～わずかにうすい黄褐色、結晶性粉末■トリフルミゾール代謝産物 FA-1-1 標準品
化学名：	4-Chloro-α,α,α-trifluoro-o -…
toluidine
含量（HPLC）：98.0% 以上
外 観：	うすい黄色～黄色、澄明の液体

018-26541

NEW

094-07241

NEW

097-07231

NEW

200-20521

品

名

規

格

O

N
OCH3

NH2

C12H9NO6＝263.20
CAS No. 37065-29-5

C7H5ClF3N＝195.57
CAS No. 445-03-4

コード No.

O

CF3

Cl

NEW

O
HOOC

容量 希望納入価格（円）Ametoctradin Standard
残留農薬試験用 100mg
N -Isopropylaniline Standard
残留農薬試験用 100mg
危35,000Isoxadifen-ethyl Standard
残留農薬試験用 100mg
Triflumizole Metabolite FA残留農薬試験用 100mg
危
1-1 Standard

25,0006,000

15,000

コード No.
NEW045-34141

NEW046-33951

NEW
NEW
NEW

130-18481
133-18471
136-18461

品

名

規

格

容量 希望納入価格（円）Dimetridazole Metabolite
高速液体クロマトグラフ用 50mg
A Standard
Dipropyl Isocinchomeronate
高速液体クロマトグラフ用 100mg
危Standard
Mafoprazine Standard
高速液体クロマトグラフ用 100mg
Mecillinam Standard
高速液体クロマトグラフ用 100mg
Miloxacin Standard
高速液体クロマトグラフ用 50mg

20,0007,000
20,00030,00045,000

その他のポジティブリスト関連品目は当社 HP にてご覧下さい。
和光純薬試薬 HP →カテゴリから選ぶ→分析・環境→食品分析→
01. 残留農薬・動物用医薬品（ポジティブリスト制度）→ 2. ポジティ
ブリスト制度対応 取扱い品目一覧（16 . 07）…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）19

ew Products
タンパク質精製のコストダウンに〈実験条件〉

Ni-NTA アガロース① 超音波破砕法により、6 ×ヒスチジン融合 GFP を大腸菌か

本品は、ヒスチジンが 6 残基続く 6 ×ヒスチジンタグを② Ni-NTA カートリッジを液体クロマトグラフィーシステム

ら回収し、精製前サンプルとする。

N 末端または C 末端側に融合した組換えタンパク質のアへ接続する。

フィニティー精製に使用されます。可溶性タンパク質、不③ Running Buffer＊1 150mℓでカラムを平衡化する。

溶性タンパク質、膜タンパク質など幅広いタンパク質の精④ 精製前サンプルを供す。
⑤ Running Buffer 100mℓで洗浄する。

製に利用されています。溶出にペプチドを使用せず、低コ⑥ Elution Buffer＊2 150mℓで溶出する。

ストかつ簡便な方法で目的のタンパク質を精製できます。

特⑦ Running Buffer 100mℓで洗浄する。

長⑧ SDS-PAGE、CBB 染色を行う。

●安価なためコスト削減可能＊1 Running Buffer：20mmol/ℓ Sodium Phosphate（pH 7.4）,

●再生利用可能製品仕様

10mmol/ℓ Imidazole                           500mmol/ℓ Sodium Chloride,

6% 架橋アガロース
ニトリロ三酢酸（NTA）
50-150μm＞ 50mg/mℓ ゲル＊タンパク質結合容量は目的タンパク質により異なります。

実験条件は、目的のタンパク質ごとにご検討下さい。
コード No.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）147-09761   2mℓ（Net 1mℓ）
4,500
Ni-NTA AgaroseNEW
143-09763
遺伝子研究用 10mℓ（Net 5mℓ） 10,500
NEW
141-09764
100mℓ（Net 50mℓ） 62,000

溶出画分
M 1 2

                           10 〜 500mmol/ℓ Imidazole

NEW

デ ー タ

75,00063,00048,000500mmol/ℓ Sodium Chloride,  ＊2 Elution Buffer：20mmol/ℓ Sodium Phosphate（pH 7.4）,

ゲルマトリックス
リガンド
ビーズサイズタンパク質結合容量＊

分子量

  

関連商品

イミダゾール濃度

本品

プレパックタイプ

35,00025,000

A社

75,00063,00048,00035,00025,000

本品がプレパックされているカートリッジタイプの製品

75,00063,000B社です。液体クロマトグラフィーシステムに Ready-to-use でご使用頂けます。

48,000

コード No.

35,000品

名146-09731 Ni-NTA
142-09733 Cartridge

25,000: 6×ヒスチジン融合 GFP を示す

M：ワイドビューTM

プレステインタンパク質サイズマーカーⅢ［コード No. 236-02463］
Lane1：精製前サンプル

規格

遺伝子研究用容量

1本（5mℓ）1本（5mℓ）×5

13,00055,000

高性能タイプタンパク質結合容量が高い高性能タイプの Ni-NTA アガ
ロースです。

Lane2：カラム素通り画分※本データは、Ni-NTA アガロースがプレパックされている Ni-NTA
カートリッジ［コード No. 146-09731］を使用したデータです。

他社品と同等量のタンパク質を回収可能です。

コード No.

品

名

規

格

容

量

和光純薬時報希望納入価格（円）149-09684   2mℓ（Net 1mℓ）    8,500
Ni-NTA Agarose
145-09681
遺伝子研究用 10mℓ（Net 5mℓ） 13,000HP
141-09683
100mℓ（Net 50mℓ） 100,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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20

希望納入価格（円）Vol.85, No.1（2017）

ew Products■ バリュー遺伝子サービス

クローニングが面倒だと考えている方に標準合成サービスと比較して、標準生産期間は長くなり

人工遺伝子合成サービス

ますが、価格を下げたサービスです。研究プロジェクトの

GENEWIZ 社では、クローニング作業の手間を省き、コストを大幅に削減します。

お客様の希望に合わせた人工遺伝子を合成します。
商品のお届けは、標準生産期間から２〜３営業日後の到着となります。

製品概要●最低価格・・・36 円 /bp●ミニマムチャージ・・・15 , 600 円［納品物］各サービス共通（Fragment Gene 除く）●合 成した目的遺伝子が挿入済みの凍結乾燥プラスミド（約 2 〜 5 μg）

遺伝子鎖長（bp）

希望納入価格453 以下15,600 円 / 件

454 〜 1,500
1,501 〜 3,000●制限酵素による解析を含む成績書（COA）●アライメントした目的遺伝子配列のトレースデータ●合成遺伝子とベクターの配列情報

3,001 〜 5,000

9,001 〜 10,000

製品概要

希望納入価格453 以下19,500 円 / 件
45 円 /bp3,001 〜 5,000

55 円 /bp5,001 〜 6,000

25 〜 29 営業日

65 円 /bp7,001 〜 8,000

35 〜 39 営業日
60 円 /bp40 〜 45 営業日

れないお客様に向けたサービスです。カスタムベクターで標準生産期間6 〜 9 営業日
10 〜 12 営業日
15 〜 20 営業日
20 〜 25 営業日

6,001 〜 7,000

30 〜 34 営業日

作製した人工遺伝子をベクターに挿入することを希望さ●ミニマムチャージ・・・19 , 500 円

1,501 〜 3,000

52 円 /bp■ Fragment Gene

●最低価格・・・45 円 /bp

遺伝子鎖長（bp）

15 〜 19 営業日
20 〜 24 営業日

7,001 〜 8,000
8,001 〜 9,000

10 〜 14 営業日

44 円 /bp5,001 〜 6,000
6,001 〜 7,000■ 標準合成サービス

454 〜 1,500

36 円 /bp

標準生産期間25 〜 30 営業日

使用したいという方におすすめです。

製品概要●納品物・・・二本鎖 PCR フラグメント（500 〜 1,000 ng）●電気泳動によるターゲット遺伝子のサイズ検証実施● DNA シークエンス解析による検証実施●正確率：100 % 正しい配列のフラグメントを 80％以上含む

30 〜 35 営業日

遺伝子鎖（bp） 希望納入価格

8,001 〜 10,000

75 円 /bp35 〜 40 営業日

100 〜 250

7,000 円 / 件

10,001 ≧見積り

見積り

251 〜 500

12,000 円 / 件

501 〜 750

16,000 円 / 件

751 〜 1,000 20,000 円 / 件■ TurboGENE （緊急対応サービス）
TM

標準合成サービスよりも早く納品する緊急対応サービスです。

標準生産期間2 〜 4 営業日

収量（ng）
500

3 〜 5 営業日

1,001 〜 1,250 31,000 円 / 件
1,251 〜 1,500 38,000 円 / 件
1,501 〜 1,750 45,000 円 / 件

5 〜 8 営業日

1,000

1,751 〜 2,000 52,000 円 / 件

製品概要●最短標準生産期間・・・5 日

見積もりのご依頼は専用メールアドレスもしくは、オンライ
ン見積依頼フォームをご利用下さい。

●ミニマムチャージ・・・32 , 688 円
遺伝子鎖長（bp）

希望納入価格453 以下32,688 円 / 件

454 〜 1,500
1,501 〜 2,000

72 円 /bp2,001 〜 3,000
3,001 〜 5,000

標準生産期間
5 営業日
7 営業日
11 営業日80 円 /bp

15 営業日■専用メールアドレス
下記を記載の上、メール送信下さい。
jutaku@wako-chem.co.jp①プロジェクト名，②ご依頼配列，③クローニングベクター，④遺伝子最適化有無，⑤販売代理店名■オンライン見積依頼フォーム
https://www02.wako-chem.co.jp/cgi-bin/jutaku/gene/form.cgi…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
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和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）21

ew Products
特異性
抗 原

サブクラス
交差性

適
応
参考文献

Aβ 42(43) の C
末端部分を特異的に認識します。

マウス
IgG1・κ

WB 1：1,000
IHC 1：500-5,000
ELISA 1：100-1,000

ヒト Aβ35-43 a.a.

ヒト
マウス
ラット

1, 3, 5−9）

アルツハイマー研究に
抗アミロイドβ，モノクローナル抗体（BAN50/BNT77/BA27/BC05）

クローン No. BC05

アミロイドβ（Aβ）は、約 40 アミノ酸から成るペプチ
ドで、アルツハイマー病患者の脳内に蓄積して、老人斑を形成します。そのため Aβはアルツハイマー病の原因因子として考えられています。Aβには複数の種類があり、主なものとして Aβ 40（40 アミノ酸）、Aβ 42（42 アミノ酸）、Aβ 43（43 アミノ酸）があります。
この度、エピトープが異なる 4 種のクローン（BAN50/〔参考文献〕
1）Asami-Odaka, A. et al . : Biochemistry , 34 , 10272（1995）.
2）Sambamurti, K. et al . : J. Biol. Chem ., 274 , 26810（1999）.
3）Fukumoto, H. et al . : J. Neurosci ., 30 , 11157（2010）.
4）Takahara, Y. et al . : J. Neurosci ., 25 , 436（2005）.
5）Iwata, H. et al . : J. Biol. Chem ., 276 , 21678（2001）.
6）Tomita, T. et al . : J. Neurosci ., 19 , 10627（1999）.
7）Sudoh, S. et al . : J. Neurochem ., 71 , 1535（1998）.
8）Iwatsubo, T. et al . : Am. J. Pathol ., 149 , 1823（1996）.
9）Nunomura, A. et al . : J. Neuropathol. Exp. Neurol ., 59 , 1011（2000）.

BNT77/BA27/BC05）をラインアップしました。

特長●文献での使用実績豊富●小容量包装あり

製品概要■各抗体の認識 Aβ種

コード No.

ヒ ト

近日
発売

マウス / ラット

クローン No.

Aβ40

Aβ42

Aβ43

Aβ40

Aβ42

Aβ43

BAN50

○

○

○

×

×

×

BNT77

○

○

○

○

○

○

BA27

○

×

×

○

×

×

BC05

×

○

○

×

○

○

○反応する ×反応しない
特異性
抗 原

ヒト Aβ
1-16 a.a.

近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売
近日
発売

サブクラス
交差性

適
応
参考文献

マウス
IgG1・
κ

WB 1：2,000
ICC 1：2,000
IHC 1：1,000-2,000
IP 1：1,000
ELISA 1：100-500

クローン No. BAN50
ヒト Aβの N 末 端
配列を認識します。

近日
発売

ヒト

Aβの中 央 部 分を認識します。

マウス
IgA・
κ

IP 1：500
ELISA 1：250-1,000

ヒト Aβ11-28 a.a.

ヒト
マウス
ラット

1, 6, 7）Aβ 40 の C 末 端部分を特異的に認識します。

マウス
IgG2a・κ

WB 1：100
IHC 1：500-5,000
ELISA 1：100-1,000

ヒト Aβ1-40 a.a.

ヒト
マウス
ラット

1, 3, 5−9）クローン No. BA27

名

規

格

免疫化学用
免疫化学用
免疫化学用
免疫化学用

容量

希望納入価格（円）10μℓ

10,00050μℓ

35,00010μℓ

10,00050μℓ

35,00010μℓ

10,00050μℓ

35,00010μℓ

10,00050μℓ

35,000容量

希望納入価格（円）関連商品
ELISAキット
コード No.

品

名

規

格

ヒト
292-62301

Human β Amyloid（1-40）
免疫化学用 96回用
ELISA Kit Wako

78,000298-64601

Human β Amyloid（1-40）
免疫化学用 96回用
ELISA Kit Wako Ⅱ

78,000298-62401

Human β Amyloid（1-42）
免疫化学用 96回用
ELISA Kit Wako

78,000

Human β Amyloid（1-42）
296-64401 ELISA Kit Wako , High
免疫化学用 96回用
Sensitive

90,0001−5）クローン No. BNT77

品

017-26871 Anti Human Amyloidβ, Monoclonal013-26873 Antibody（BAN50）014-26881 Anti Amyloid β,
Monoclonal Antibody
010-26883 （BNT77）018-26921 Anti Amyloid β40,
Monoclonal Antibody
014-26923 （BA27）014-26901 Anti Amyloid β42（43）, Monoclonal
010-26903 Antibody（BC05）

ヒト/ラット294-62501

Human/Rat β Amyloid（40）ELISA Kit Wako

免疫化学用 96回用

78,000294-64701

Human/Rat β Amyloid（40）ELISA Kit Wako Ⅱ

免疫化学用 96回用

78,000290-62601

Human/Rat β Amyloid（42）ELISA Kit Wako

免疫化学用 96回用

78,000

Human/Rat β Amyloid292-64501 （42）ELISA Kit Wako ,High Sensitive

免疫化学用 96回用

90,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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22

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

ew Products
Native form のセロトニントランスポーターを認識

神経幹細胞マーカー

抗マウスセロトニントランスポーター , ラットモノクローナル抗体（R5-3-2）抗マウス Nestin, ラットモノクローナル抗体（7A3）

本品は、DNA 免疫法により樹立した Native form のセ

本品は、中間径フィラメントタンパク質である Nestin

ロトニントランスポーターを特異的に認識するラットモノを認識するラットモノクローナル抗体です。Nestin は、

クローナル抗体です。セロトニントランスポーターは 12

中間径フィラメントのクラスⅥに属し、神経幹細胞、神経

回膜貫通型の膜タンパク質で、記憶、摂食、睡眠などの制前駆細胞に発現していることから、これらのマーカーとし御に関与するセロトニンの量を調節しており、精神疾患とて知られています。

の関連が報告されています。脳内では縫線核、大脳皮質、製品概要

海馬などに広く局在し、末梢では血小板での発現も確認さ●クローン No.：7A3

れています。

特●サブクラス：ラット IgG2b・κ
●交差性：マウス

長●適応：免疫組織染色（1：100 〜 500）

●免疫組織染色で使用可能● Native form のセロトニントランスポーターを認識

使 用 例

製品概要
●クローン No.：R 5 - 3 - 2●サブクラス：ラット IgG 2 a・κ●交差性：マウス（他の動物種は未検証）●適応：フローサイトメトリー（1：100 〜 10 , 000）
免疫組織染色（1：100）

核

Nestinサンプル：胎生 12.5 日目マウス
大脳皮質
切
片：凍結切片抗体濃度：10μg/mℓ
二次抗体：抗ラット IgG-Alexa
Fluor 488
緑：Nestin
青：核（Hoechst33342）

使 用 例■ 免疫組織染色
サンプル：10 週齢 ICR 系雄マウス
大脳皮質前頭前野
切片：凍結切片
賦活化条件：くえん酸緩衝液（pH 6）中でマイクロウェーブ処理
10 分
抗体濃度：10 μg/mℓ
二次抗体：抗ラット 1gG-Alexa Fluor488

Merge

Nestin を発現している神経幹細胞が染色された。
コード No.

品

名016-26841 Anti Mouse Nestin, Rat
NEW 012-26843 Monoclonal Antibody
（7A3）
NEW

セロトニントランスポーター mRNA の発現が報告されている前
頭前野で陽性シグナルが見られた。
（データご提供：大阪大学大学院歯学研究科
先生）
コード No.

品

名011-26911 Anti Mouse Serotonin Transporter,
NEW 017-26913 Rat Monoclonal Antibody（R5-3-2）
NEW規

田熊先生、長谷部格

容量 希望納入価格（円）

10μℓ
免疫化学用
50μℓ

10,00030,000

関連商品
コード No.

品

名Anti Mouse 5-HT1A Receptor,
016-25981
Rat Monoclonal Antibody（4A6）
Anti Mouse 5-HT2C Receptor,
013-25991
Rat Monoclonal Antibody（6D2）

規

格

容量 希望納入価格（円）

免疫化学用 50μℓ

30,000

免疫化学用 50μℓ

30,000規

格

容量 希望納入価格（円）10,00030,000

免疫化学用

10μℓ
50μℓ

規

容量 希望納入価格（円）

関連商品
Iba1抗体コード No.

品

名Anti Iba1, Rabbit
016-20001 （forWestern Blotting）

格

免疫化学用 50μg

30,000016-26461 Anti Iba1, Rabbit, Biotin-conjugated
免疫化学用 100μℓ
Anti
Iba1,
Rabbti,Red
Fluorochrome013-26471 （635）-conjugated
免疫化学用 100μℓ
012-26723 Anti Iba1, Monoclonal Antibody
10μℓ
免疫化学用
016-26721 （NCNP24）50μℓ

45,00045,00010,00035,000

神経細胞培養用試薬
コード No.

品

名148-09671 Neuron Culture Medium
291-78001 Neuron Dissociation Solutions
297-78101 Neuron Dissociation Solutions S

規

格

容量 希望納入価格（円）

細胞培養用 100mℓ 50,000
細胞培養用 4セット 31,100
細胞培養用 10セット 50,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）23

ew Products
ヒト ES/iPS 細胞培養用液体培地

コード No.

StemSure® on-feeder hPSC 培地
本品は、フィーダー細胞上でヒト ES/iPS 細胞を培養す

名

規 格

コード No.

基礎培地、血清代替品、アミノ酸溶液、還元剤などをプ
レミックスしていますので、培地調製の手間を省くことができます。なお、bFGF は含んでいませんので、ご使用前に bFGF を添加して下さい。

長●未分化維持性に優れる

細胞培養用 500mℓ 28,000

品

名

規 格

064-04541 Fibroblast Growth Factor（basic）, Human, recombinant
060-04543 【bFGF/FGFb/FGF2】

細胞生物学用

064-05381 Fibroblast Growth Factor（basic）, Human, recombinant,Animal-derived-free
068-05384 【bFGF/FGFb/FGF2】

細胞生物学用

容量 希望納入価格（円）

50μg

39,500100μg

67,00050μg

39,500100μg

67,0001mg

12,3005mg

37,000257-00511●プレミックスされているため

253-00513 Y-27632

bFGF の添加のみで使用可能

試験項目
●無菌試験

細胞生物学用251-00514

25mg 145,000

030-24021

1mg

15,0005mg

40,000®
036-24023 CultureSure Y-27632● pH

034-24024●浸透圧●エンドトキシン

エンドトキシン、
マイコプラズマ試験済み

細胞培養用

25mg 150,000

253-00591 5mmol/ℓ Y-27632 Solution

細胞培養用 300μℓ

20,000CultureSure 10mmol/ℓ039-24591 Y-27632 Solution,
Animal-derived-free

細胞培養用 300μℓ

30,000®

●マイコプラズマ試験

デ ー タ■ 細胞形態
本品

容量 希望納入価格（円）

関連商品

るための培地です。

特品

StemSure® on-feeder hPSC
NEW
285-93925
MediumWnt シグナル阻害剤

他社 同等品CultureSure® IWR-1-endo
CultureSure® シリーズに、IWR-1-endo が新たに追加となりました。IWR-1-endo は Wnt シグナルの阻害剤です。
βカテニンを分解する複合体（Axin2, Apc, Ck1, Gsk3βから成る）を安定化させ、βカテニンの分解を促進させます。マイコプラズマ試験、エンドトキシン試験などを行っているため、細胞培養に安心してご使用頂けます。

■ アルカリホスファターゼ染色
本品

他社 同等品こ の 他 の CultureSure® 低 分 子 化 合 物 は、 当 社 HP
（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/
culturesure_ya/index.htm）をご覧下さい。

製品概要●外観：白 色〜うすい黄色、結晶性粉末〜粉末●含量（HPLC）：98 . 0 % 以上
分化コロニー 29 個

（10mg/mℓ）、●溶解性：DMSO

分化コロニー 170 個

エタノール（0. 2mg/

フィーダー細胞：STO 細胞，培地組成：StemSure on-feeder
hPSC 培地 + 5 ng/mℓ bFGF，播種比率：1：8®

本品と他社同等品を用いてヒト iPS 細胞 201B7 株を培養し、3継代した後のアルカリホスファターゼ染色の結果を示した。本品
は、1dish あたりの分化コロニーの数が少なく、未分化性維持に優れていることが分かった。

H

O
O

N
H

N
H

O

C25H19N3O3＝409.44
CAS No. 1127442-82-3mℓ）●エンドトキシン、マイコプラズマ試験済み
コード No.
NEW037-25131

NEW

033-25133

品

名CultureSure® IWR-1-endo

規 格

容量 希望納入価格（円）

細胞培養用…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

24

和光純薬時報N

Vol.85, No.1（2017）

5mg

照

会

25mg

照

会

ew Products
神経細胞培養用無血清サプリメント
NS サプリメント（インスリン不含）
本品は、神経細胞培養用の血清不含サプリメントです。
インスリン分泌及びインスリン受容体の研究にご利用下さ
い。

デ ー タ

ラット胎児（E17）の大脳皮質より単離した神経細胞を NS 基
礎培地と本品あるいは NS サプリメント（インスリン含有品）（NSS） を 混 合 し た 培 地 で 培 養 し、 培 養 6 日 目 の 相 対 細 胞 数（NSS を含む培地で培養したときの細胞数を 1 とした）を確認した。比較対象として本品に通常の NSS に含まれるインスリン濃度の 0.25 倍、1.0 倍のインスリンを添加した条件に関しても同様に確認した。その結果、インスリンには神経細胞の生存促進作用があるため、本品は通常の NSS に比べて生細胞数が低下しているが、インスリンを加えた場合、通常の NSS と同様の細胞数を示すことが確認できた。

■ ラット大脳皮質由来初代神経細胞の培養

コード No.
NEW

NSサプリメント（インスリン不含）

NSS

NEW

品

名

149-09721 NS Supplement without Insulin
145-09723 （×50）

規

格

細胞培養用

容量 希望納入価格（円）

10mℓ

22,00050mℓ88,000インスリン添加なし

関連商品+0.25×インスリン

コード No.
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

品

名

148-09615 NS Basal Medium
146-09351 NS Supplement（×50）+1.0×インスリン
1.2

規

格

容量 希望納入価格（円）

細胞培養用 500mℓ 8,000
細胞培養用 10mℓ 22,000

相対細胞数（NSS=1）

142-09691

培地組成：NS 基礎培地 ＋ 2% 本品 or NSS ＋ 0.5mmol/ℓ L- グルタミン（+×0.25 or ×1.0 インスリン）（30,000-70,000）
コート
細胞播種数：4.0×104 cells/well（ポリ -L- リジン
された 96 ウェルプレートを使用）

NS Supplement without Vitamin
細胞培養用 10mℓ 22,000
A（×50）

141-09041

N2 Supplement with Transferrin
細胞培養用    5mℓ 20,000（Apo）（×100）

141-08941

N2 Supplement with Transferrin
細胞培養用    5mℓ 18,000（Holo）（×100）

5th IIIS Symposium・32nd Wako Workshop Joint Meeting

睡眠・覚醒の謎に挑む Solving the mystery of sleep

平成 28 年 12 月 12 日に、Wako ワークショップを開催しました。
32 回目となる今回は、IIIS（国際統合睡眠医科学研究機構）との合同シンポジウムとして、柳沢 正史先生に総合企画頂き、開催しました。この様子は、2017 年 4 月発行の和光純薬時報でお伝えする予定です。
総合企画：柳沢 正史

先生

筑波大学 国際統合睡眠医科学研究機構（WPI-IIIS）機構長
主催：筑波大学 国際統合睡眠医科学研究機構（WPI-IIIS）
・
和光純薬工業株式会社 合同シンポジウム実行委員会

後

援：文部科学省

日時：2016 年 12 月 12 日（月）AM 9：00 〜会

場：東京コンファレンスセンター ･ 品川合同シンポジウムの会場風景

ポスターセッション風景

総合企画の柳沢正史先生…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）25

ew Products
簡便・迅速な総タンパク質定量キット
プロテインアッセイラピッドキットワコーⅡ

50μℓ
試料

発色試液
3.0mℓ

本品は、試料中の総タンパク質を測定するキットです。

よく混合し37℃で現在、さまざまなタンパク質定量法が利用されています

30分間放置

吸光度を測定（600nm）

が、多くの方法では試験管やガラス器具などへの汚染などの問題がありました。
本キットはピロガロールレッド（PR）を色素に用い比〈検量線の例（セル法）〉
0.500

色法を基本原理として開発された測定キットです。発色試

0.400

Abs

液は、通常の使用では器具類を汚染することはほとんどな
く、操作も簡便です。

特

0.300
0.200
0.100

長

0.000
0

●定量はワンステップ

500

1,000

1,500

2,000

2,500

BSA濃度
（μg/mℓ）●発色試液は希釈不要

BSA 標準液（2mg/mℓ）を蒸留水にて段階希釈して測定しています。

●反応時間は 30 分間

共存物質の影響●発色試液の器具への汚染が少ない

BSA（濃度 500μg/mℓ）を標品にした時、下記共存物
質の影響は、無添加時の吸光度の± 10% 以内であること

測定原理
ピロガロールレッド（PR）がモリブデン酸と結合し、470nm に極大吸収をもつ赤色錯体を形成します。この錯体は酸性下でタンパク質と結合すると波長がシフトし、青紫色を呈します。600nm 付近の吸光度を測定することにより、試料中の総タンパク質濃度を定量します。
OH
HO

OH
O

O

SO3H

Mo
（VI）+ Protein

ピロガロールレッド（PR）λ max : 470nm

PR-Mo-Protein

PR-Mo-錯体
λ max : 604nm

測定範囲
セル法：62.5 〜 2,000 μg/mℓ
マイクロプレート法：125 〜 2,000 μg/mℓ

キット内容
●発色試液

310 mℓ× 1 本● BSA 標準液（2 mg/mℓ）

5 mℓ× 1 本

操作概要（セル法）

を確認しています。
化合物
硫酸アンモニウム
ジチオトレイトール
EDTA・2Na
EGTA
フルクトースグルコース
グルタチオングリセロールグリシン
グアニジン塩酸塩
HEPES
塩酸
塩化カリウム塩化マグネシウム六水和物
2-メルカプトエタノール

コード No.

品

２．37℃で 30 分間加温する。

コード No.

297-73101＊マイクロプレート法では試料 10μℓと発色試液 250μℓを混合

名

規

格

量 希望納入価格（円）容Protein Assay Rapid Kit wako Ⅱ タンパク質 100回用
NEW 295-78401
定量用

関連商品

４．検量線よりタンパク質濃度を算出する。

化合物
共存許容濃度
MES
0.7mol/ℓ
MOPS
0.2mol/ℓ
塩化ナトリウム
4mol/ℓ
水酸化ナトリウム
0.02mol/ℓ
りん酸二水素ナトリウム
1mol/ℓ二水和物
PIPES
0.5mol/ℓ
SDS＊
0.01w/v%
アジ化ナトリウム
0.2w/v%
スクロース
40w/v%
Triton®X-100
0.07w/v%
Tris
2mol/ℓTween®20（10w/v%溶液） 0.1w/v%
尿素
6mol/ℓ＊本 キットは SDS の影響を受けやすい傾向があります。SDS
0.01% において BSA 濃度 250 ～ 2,000μg/mℓでのみ検量線を作成できることを確認していますが、SDS 添加下でのご使用は避けて下さい。
Triton は Dow Chemical Company の登録商標です。
Tween は ICI Americas, Inc. の登録商標です。

１．試料 50μℓと発色試液 3.0mℓをよく混合する＊）。
３．600nm の吸光度を測定する。

共存許容濃度
0.8mol/ℓ
0.5mol/ℓ
0.4mol/ℓ
0.04mol/ℓ
0.1mg/mℓ
0.1mg/mℓ
0.5mg/mℓ50v/v%
0.1mol/ℓ
0.1mol/ℓ
0.1mol/ℓ
1mol/ℓ1mol/ℓ1mol/ℓ0.5mol/ℓ

168-25911

品

名Protein Assay BCA Kit

規格

量 希望納入価格（円）

容

タンパク質
250回用
ビシンコニン酸（BCA）
を用いたタンパ
定量用
ク質定量試薬Protein Assay Bradford Reagent

クーマシーブリリアントブルー（CBB）
G-250を用いたタンパク質定量試薬

タンパク質
定量用

1ℓ

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

26

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）12,50015,00013,000ew Products
抗炎症・鎮痛作用物質

HIV プロテアーゼ阻害剤

COX-2阻害剤

チプラナビル

シクロオキシゲナーゼ（COX）は、アラキドン酸カス

本品は、HIV プロテアーゼ阻害剤です。HIV のポリタ

ケードという代謝経路において、アラキドン酸をプロス

ンパク質を特異的に切断する HIV プロテアーゼを阻害し、タグランジンに変換する酵素です。COX 阻害剤は、発熱、感染性を有する成熟型ウイルスの形成を妨げます。

痛みに関与するプロスタグランジンの生成を阻害すること●外観：白 色〜うすい褐色、により、抗炎症、鎮痛作用を示します。COX には 2 つの結晶〜粉末

アイソザイムが存在しており、COX-1 は全身に発現して●アセトニトリル-メタノール溶状：

いますが、COX-2 は炎症部位に発現するため、COX-2 を試験適合

選択的に阻害することで、他の部位へ影響を与えず、抗炎●含量（HPLC）：95 . 0 % 以上症作用を示すと考えられています。
■ ニメスリド

コード No.

本品は、COX-2 選択的な非ステロイド系阻害剤です。
肝毒性が強いと報告されています。

NEW200-20381

NEW

206-20383●外観：う すい黄色〜褐色、結晶性粉末〜粉末

H
N●含量（HPLC）：98 . 0 % 以上
● IC50：70 μmol/ℓ（ リ コ ン
ビナントヒト COX1 ）、 1 . 2 7 μm o l /ℓ

S
O

O2N

品

名

O

S

O

OH

O

CH3

C31H33F3N2O5S＝602.66
CAS No. 174484-41-4
規Tipranavir

H
N

F F
F

N

格

容量 希望納入価格（円）

1mg

薬理研究用

30,0005mg 120,000

関連商品

O

●アセトン溶状：試験適合

CH3

O

CH3

コード No.

O

185-03041
181-03043

C13H12N2O5S＝308.31
CAS No. 51803-78-2

010-25261
016-25263

1）（リコンビナントヒト COX-2）

品

名

規

Ritonavir

格容量 希望納入価格（円）

薬理研究用

Amprenavir

薬理研究用

10mg

7,200

50mg

18,0005mg

12,00025mg

33,000〔参考文献〕
1）Barnett, J. et al. : Biochim. Biophys. Acta , 1209 , 130（1994）.

プロポリス由来生理活性物質■ ロフェコキシブ

アルテピリンC

本品は、COX-2 選択的な阻害剤です。長期使用による本品は、健康食品のプロポリスに含まれる桂皮酸誘導体

心血管リスクの増加が確認されています。

の一つです。抗がん作用、抗炎症作用、抗酸化作用など、●外観：白色〜黄色、結晶性

さまざまな生理活性が報告されています。

粉末〜粉末●ジメチルスルホキシド溶状：

O
H3C

O
S

製品概要

試験適合

●外観：白色〜ほとんど白色、結晶〜粉末O●メタノール溶状：試験適合●含量（HPLC）：98 . 0 % 以上

●含量（HPLC）：98 . 0 % 以上

O

C17H14O4S＝314.36
CAS No. 162011-90-7
コード No.

品

140-09751
NimesulideNEW
148-09752
NEW
186-03331 Rofecoxib
NEW

名

規 格

O

容量 希望納入価格（円）

5g
8,000
薬理研究用
25g 32,000
細胞生物学用 100mg 12,000

その他、多数の COX 阻害剤を取り扱っています。当社
HP をご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/Nimesulide/index.htm

CH3

OH

CH3
OH

H3C

コード No.
NEW

C19H24O3＝300.39
CAS No. 72944-19-5

CH3

品

019-26711 Artepillin C

名規 格

容量 希望納入価格（円）

生化学用 5mg

45,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）27

化学大家 437
後 藤 格 次（1889. 3. 4〜1969. 11. 29）
東京農業大学名誉教授

山本

出

室は政府の仕事で忙しく、化学の研究

生い立ちはあまりできなかったという。この後藤格次は明治 22 年 3 月 4 日、福間、急にアルプスとアルカロイドに対岡県吉井町（現在うきは市の一部）のする熱が燃えスイスのアルカロイドの東光寺（明治期の神仏分離政策で廃大家ピクテー教授の下に赴いた。その寺）に生まれた。幕末の高名な学者広とき教授は二糖類の合成に没頭してお瀬淡窓の生母、また後藤格次もこの寺

り、あまり仕事はできなかったが、研の出自であるところから東光寺跡には究者の心構えだけは教授より学ぶこと

両者を顕彰する石碑が建っている（表大であった、という。

１）。

サルバルサン

北里研究所入所の経緯

第一次大戦時（1914 〜 18）また戦

後藤は東京帝国大学農学部農芸化学

後、ドイツからの薬品輸入が途絶、鈴科に学び、鈴木梅太郎先生の薫陶を受

木梅太郎は、日本酒保蔵に必須だった

けた。北里柴三郎門下の宮島幹之助と東大農学部の石川千代松の両氏が動物

写真１．後藤格次先生

し、その一つサルバルサン（性病薬）

学同士で親しかったので、当時農学部によるという。化学部門ができたのはについては、後藤は留学から帰国後、学生で北里柴三郎を敬愛していた後藤

北里が化学の必要を認めたことに起因

一時鈴木の下でその合成の手伝いをしはこの両先生を介して大学卒業と同時する。

た。その 4 ケ月間は鈴木に親炙したのに北里が主管し、伝染病研究のメッカといわれる内務省伝染病研究所に就職で、今日でも輝かしき時だったと回顧

留学している。製品の生理試験は北研の秦した。大正 3 年（1914）研究所が文部

後藤は北研最初の在外研究員として佐八郎が担当した。間もなく鈴木法の省の所管に変わり、政府の方針に納得

大正 4 年（1915）から 6 年（1917）ロサルバルサンは三共で製造、北研の秦

せざる北里は研究所を去り、私立の北ンドンのユニバーサルカレッジのコ

室で検定の上発売された。後藤にいわ里研究所を樹立した。このとき門下生

リー教授の下で有機化学を学ぶ一方、

せれば、これが彼の唯一の北研への金一同と共に後藤は北里研究所に参加しマンチェスター大学のロビンソン教授

銭的貢献であった。

た。

の知遇をえた。大正 6 年から 1 年間ゼ

北里が北里伝染病研究所といわず北ネバ大学でピクテー教授の下で勉強、

里研究所（以下北研）と称したのは伝

大正７年（1918）帰国した。英国に到染病を超えて最先端の研究に挑む意図

着したときは欧州戦争第 2 年目で実験

シノメニン研究の始まり
後藤によれば、「アルカロイドと私とは学生時代から因縁があったように思われ、今から思うと植物が好きだっ表１．学歴・職歴 / 栄誉
学歴・職歴
熊本高等学校
東京帝国大学農学部農芸化学科明治 45 年（1912）卒；（国立）伝染病研究所に入所
大正 3 年 （1914）（私立）北里研究所創立と共に入所、助手；化学部創設に貢献
大正 4 年 （1915）から大正７年（1918） 欧州留学
大正 11 年 （1922）から東大農学部講師を兼任
大正 13 年 （1924）日本農芸化学会創成期の創立委員；日本農芸化学会誌の編集幹事
大正 14 年 （1925）農学博士
昭和 12 年 （1937）北里研究所理事（〜 1943）
昭和 18 年 （1943）東大農学部農芸化学科生物化学講座教授（〜 1949）
昭和 22 年 （1947）日本農芸化学会会長（〜 1949）、編集顧問、評議員
昭和 24 年 （1949）北里研究所に復職；昭和 29 年まで監事・理事歴任
昭和 29 年 （1954）北里研究所定年、名誉部長としてとどまる
昭和 37 年 （1962）北里大学設立に参画、北里大学教授；昭和 44 年（1969）まで評議員、顧問を歴任
昭和 44 年 （1969）11 月 29 日逝去（80 歳）
栄誉
昭和 8 年 （1933）日本化学会桜井賞
昭和 24 年 （1949）日本学士院恩賜賞
昭和 25 年 （1950）日本学士院会員
昭和 40 年 （1965）勲二等瑞宝章
昭和 44 年 （1969）正四位追叙

28

サリチル酸、その他の国内生産を企図

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

たからかもしれないが、一つはアルカ
ロイドという言葉が妙に魅惑的に感じられていたらしい。学生時代の東大農学部の有機化学は、さほど発達しておらず、学生の時代にはアルカロイドはおろか有機化学のこともあまり勉強せず、土壌細菌学でも研究しようかと思っていた。
欧州から帰朝して、アルカロイドの研究題目を探していた時、田口勝太（京都帝大医学部）はオオツヅラフジの根からアルカロイドを抽出、その薬理を研究していた。田口は私にこのアルカロイドの化学研究をしないか、とのことであった。このアルカロイドは

有害作用を中和するかも知れないと化く限りこの研究を続けていきたいので学者らしい夢を語ったことがあるがこあるか、果たしてその目的を達し得るの点は未検討である。

や否やは自信があるわけではない。おそらくこれ等の問題は我々よりももっ研究業績と若い新進の研究者たちに残された60 篇を超す報文の概要は「Sinomenine-

輝かしいテーマであるかもしれな

an optical antipode of morphine alka-

い。・・・」とあるが、これが達成さ

loids」（1964 北里研究所）に記載されれたのは 1954，1957 年である。

ている。シノメニンから天然系モル

図２．北里柴三郎先生

クコリンと呼ばれた。

この点を少し詳しく記すと、後藤・

フィン類の光学対掌体 6 種をえ、武部山本

虎一はこれらの薬理作用を研究した

後少しという目鼻がついたとき、米国

が、これらはモルフィン類に見られるの Marshall Gates が 天 然（-）- モ ル

出が（+）-モルフィンを目指し、麻痺作用、性欲興奮作用などを有せず

フィンの全合成を速報で発表し主として痙攣作用を示した。これによ（1952）、その合成経路の最後の数段階

りモルフィン類の作用はその立体構造

は後藤が試みているのとまったく同様が関係することが知られた。

であった。その内の鍵となるステップ

薮田貞次郎の「故後藤格次会員追悼の 収 率 に 関 し Gates は scanty（ か つの辞」（日本学士院）の一部を借りるかつ）と記している。このステップは

ところが私と関係なく、東大薬学科と「後藤は本邦特有の防己科植物「オわれわれも苦労していたが、良い収率においてもこの研究が始められ、近藤

オツヅラフジ」中に含まれるシノメニ

をあげ、1954 年シノメニンから（+）-

平三郎、落合英二は大正 12 年春シノン、その二量体のジシノメニン、またモルフィンの誘導を発表し、Gates のメニンの名でこのアルカロイドの研究

シナクチン、ツヅラニンの 4 種のアル

本報告では後藤・山本の反応条件に

第 1 報を発表、私も当時までの研究をカロイドの化学構造を決定し、特にシ従った旨記載されている。

まとめ同年秋、日本化学会に発表、そノメニンの呈する種々の特異な反応を後藤・山本は 8 年間ほとんど二人きの後数年上記両氏と私との研究は雁行

天然モルフィン族アルカロイドの反応りであり、当時研究費は月 7000 円、

したが昭和のはじめシノメニンの構造に関連して研究し、40 年にわたる研

構造決定にはまず結晶化、古典的元素決定は一段落を告げ、近藤は防已科植

究の結果は 60 篇以上の報文となり幾分析、誘導体にして更なる元素分析、物全部のアルカロイド、落合はマトリ多の新事実を発見し多数の誘導体をとくにシノメニン化学では対応するモンの研究に転じたが、私はシノメニン

作って天然モルフィン族アルカロイド

ルフィン誘導体とラセミ化合物を作を中心にモルフィン族アルカロイドのにて未だ経験されなかった新事実を解り、旋光度がゼロになるかの確認が必研究に終始した。」と言う。

明する等、モルフィン族アルカロイド

要であり、それなりの物質量を作らね

シノメニンは神経痛治療薬として塩の化学に多大の貢献をされ…」、「シノばならなかった。また結晶化には多大

野義から発売された（大正 10，1921

メニン研究の一目標としておられたモの修練が必要とされた。これが機器分頃）。後藤帰国後、暫時サルバルサン

ルフィンへの誘導は、それがモルフィ析を駆使した Gates に先行された一因

合成に従事したが、その後は 40 年間

ン の 対 掌 体 で あ る（+）-モ ル フ ィ ンである。

にわたりシノメニンの化学と取り組み

で・・・・・博士はその成功を非常に喜上 記 の（+）- モ ル フ ィ ン 合 成 は多数の研究業績を挙げた。シノメニン

ばれ満足げに私共にも話されたのが深く

Gates とまったく独立に行ったもので誘導体の薬理は、はじめ北研の武部虎

私の印象に残っております。」とある。

あるが、もっとも重要な最後の数段階一によって研究された（1933）。後藤

後 藤 の「 シ ノ メ ニ ン の 研 究 綜 説 」

は Gates の速報に遅れたので、何とかの最後の研究対象はシノメニンから天（1948 年）には「・・・以上述べた所

まったく別の方法はないかと模索し 3

然モルフィンの光学対掌体の合成であ

で諸君は我々の研究の大目的、即ちシ

年後、シノメニンから（+）-モルフィ

り、その生理作用は岡山大学の協力をノメニンを（+）-モルフィンに変ぜん

ンを容易につくる別法を見出した

得て明らかにされた（1957）。鎮痛作とする努力はいまだ達せられていない（1957）。収率は前の方法を凌駕し、容用はなかったが鎮咳作用を示した。後のを知るであろう。・・・・かく考え

易に（+）-モルフィンが得られるに至藤はモルフィンとその光学対掌体は体てくると我々の前途はなお遼遠なもの

り、生理活性の検討試料を提供でき

内でラセミ体をつくり、モルフィンのといわざるを得ない。我々は根気の続た。後藤積年のシノメニン研究の上に

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）29

立つ独自の合成ルートであった。

東大農芸化学科で学生の訓育にあたったが、この間 2000 人に及ぶ学生が教後藤の述懐えを受けた。後藤の研究に対する真摯

「シノメニン研究 40 年」（1958）にな態度と、立派な業績とが農芸化学領

よれば、「シノメニン研究はたった人

域における有機化学の発展にもたらし生に一度しか生きられないこの人間にた功績は極めて顕著である。

とって一生を打ちこむほど研究する必報文の他、後藤は合成有機化学、構要があったかとの思いもあるが、シノ

造有機化学、反応有機化学なる 3 部作

メニン一つで終わってしまったのは、を出版（岩波書店）、当時の有機化学

北里研究所という細菌学の研究所でアの先端を示し学生、研究者に多大に裨

ルカロイドの研究をやっていたのも一益した。いずれも大部であり、学生教

因で、孤立した実験室ではすべての知育用には有機化学要説（朝倉書店）を識を自分の手で集めねばならない。教出版している。またシノメニン並びに員・学生を使って自分の研究をさせる関連研究の進歩について「シノメニン

便宜も無く、大学教授の想像できないの研究」（1944 までの総説）、「最近のハンデイキャップがあった。熊本の五シノメニン研究」（1949）、「Grewe の高時代植物学をやりたかったが、先生

テトラヒドロデソキシコデインの完全に君のような貧乏人のすることではな

合成」（1950）、「最近のモルフィンのい、と叱られて、農芸化学に入った化学」（1955、山本との共著）がある

が、化学をやっていると応用方面よりが、研究の集大成は「Sinomenine- an

金に縁が少ない純理的なことが面白く

optical antipode of morphine alkaloids

なった。人が学問をするか、金を儲け（1964）」で最終報文まで尽くしてい

業分野は多くあり理学か応用かは当人の資質、興味、環境によっており、いずれが上というわけではない。
心構えの第三：有機化学は実験の学問であるから「多く実験して、少なく主張する」習慣をつけよ。こう思うという場合、その思う所を実験して示すべきである。
第四は研究者の待遇：一国の富力に関する問題であるが、研究者に後顧の憂いを与えず専
心研究に従事しうるだけの待遇をするのが望ましい。
＊金、研究費のために研究するな、学者は外食を節するのが一番の倹約。
＊言葉を慎め。
＊後藤の口癖は「dignity を保て」。
＊書籍・文献は家で読め。実験中は立ち詰め、反応を注視しすべての事象を観察、思いをめぐらせ。
＊文学は古きを読め、科学は新しきを読め。
＊天行健にして息まず（天行健なり、君子もって自彊して息まず）。後藤はこの句か好きで、Der Gang der Sterne ist stetig ohne Ruhe と訳されたのが耳朶に残っている。
＊後藤下の 8 年間山本は学会参加を許されなかった。農大に行ってから初めての農芸化学会での発表に際し「学会の重鎮が前列に並んでいるが、事ニコチン殺虫剤に関しては君が一番、自信をもって発表せよ」と。
＊山本が後藤の下を去り東京農大に行くに際しての言：長年なじんだシノメニン研究を続ければ報文は出るだろうが、それではいつまでも後藤の研究になってしまう。君独自のテーマに取り組み、あれは山本の仕事だと世間が認める成果を挙げてこそ一人前だ。

るかは、その人の天分嗜向、家庭の事る。随筆として「学問の理想」（1950）、情による。・・・・化学者としての生「老婆心」（1952）、「シノメニン研究

最初の（+）-モルフィンの合成の際、涯が成功であったか失敗であったか、四十年」（1958）、「化学物質名の仮名

人間がまだなっておらん、学位はまだ欲をいわなければまあまあ、欲をいえがきの統一についての所感」（1951）、だといわれたことと併せ後藤流の激励

ばもっと沢山仕事をすべきであった。」「新制大学と化学教育」（1951）、「北里と思い、農薬の分野でニコチンの研究と。

研究所を去る」（1960）、「鈴木梅太郎などで業績を挙げた。くしくも後藤が筆者の理解では、シノメニン研究一先生」（1961）などが手元にあるが全アルカロイドをはじめて学んだピク筋はあたかも実験用マウスを徹底的に部を尽くしているとはいいがたい。

テーは 1904 年ニコチンを合成している。山本は多くの関連化合物を合成、解剖し、生理機能を明らかにすることにより人体についても多くを知るがごときである。

後藤の警句

ニコチノイドと称し、今日のネオニコ

報文以外にシノメニン関係の総説、チノイド殺虫剤の基礎を作った。

随筆あるいは口頭で教育的言辞を多々

教育業績

後藤の人生観発している。

原文のまま紹介するには長文、長時

北研ではほとんどの期間、部下なるも の は い な か っ た が、 大 正 11 年
（1922）から東大農学部講師を兼ねて有機化学の講義を担当、昭和に入り毎
年 2 名ほどが後藤の親しい薫陶を受けようと北研で卒業論文あるいは博士論文研究に携わり、その数は 20 名以上に達し、これらに多くの影響を与えた。昭和 19 年東大農学部の生化学研究室の教授を兼担、昭和 24 年（1949）
東大退官まで 28 年の久しきにわたり

30＊いかにしてこの激甚な有機及び生物両化学界の進歩に追随し、これを追い越し、世界一流の化学国に伍していくべきか考えよ。
＊学者の心構えの第一：オリジナリティを尊重すべし。殻を破るの努力である。鈴木梅太郎
先生の偉業を追慕するのは、恩師への情誼だ
けでなく、当時の栄養学の定説を大胆に破ったからである。スポーツでいえば、誰がテープを切るかである。だが反則はいかん。
心構えの第二：有機化学に従事せんとするものは莫大な知識を身につけねばならない。化学でも一を聞いて十を知るかどうかが、化学にほんとの趣味を有するかを決すべき判断の拠点である。もっとも化学が必要とされる職

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）

間を要するので片言隻句に形で供する
点、許されたい。後藤の言うがごとく
人生観は人それぞれのものであり、他者のそれは参考である。後藤の学生時
代の青春の夢は一生の間にあらゆる科学を体験しこれを系統立てることであった。この夢は挫折したとはいえ、一日として忘れたことはない。多くの進化論の本を貪り読み境遇から得た体験と併せ徐々に人生観を作っていった。進化論への関心から動物学の石川なる。死は人生と不離の関係にあり、後藤先生が亡くなわれて半世紀を閲

千代松の知遇をえ、これが北里門下に宗教の領域でもあるとはいえ、科学はし門下生のほとんどが死去、今日先生入ることにつながった。欧州に留学し宗教の迷信的部分を除き、宗教への迫の業績を顧みる者、名前を知る者すらたが時あたかも第一次大戦の真っただ

害、宗教による迫害を減じてきたのはまれである。忘れ去られる営みをなん

中、専門の化学もさることながら、世ヒューマニズムの進歩といえよう。

でするか。その時代の個人の個々の微界の情勢、人間とはなにかに関心を持
ち、これをまとめた原稿は出版の機会

分的業績の総体がその時代の科学技術

人となり

ないし文化のレベルを現わしており、を逸したが、その結論は、進化の直接研究者に対しては厳しかったが、学の動因は「生物が個性を区別する（原部学生には優しく、パーティーなどの文のまま）」ことであり、ここから進集まりでは後藤の周囲に蝟集したもの化が生じ、その頂点が人間である。人である。語学の才に恵まれ、知る限り

間は本能、感情によると共に理性にマージャンに遊び、一方歌人佐々木清よって支配される。学問の目的の一つ綱に師事、その歌集「洗瓶」がある。

はこの理性を深化させ理性にかなった

これにあたるフランス語には尿瓶の意

社会を建設して、人生の目的を達成さ味もある、と後藤は笑っていた。そのせるにある。それには「絶対的自由主

一句は墓碑銘に記されている。後藤の義」が肝要、だが自分の自由を重んじ

晩年、先生に親しい連中が夫婦同伴でるが故に、他者の自由を重んじること先生を囲み会食、歓談する会がもたから自由の範囲は自ずと制限され、これ、明石武和、山本

こに社会規範、道徳の必要が生まれで幹事役を務め、先生亡き後もあき夫る。人はこの道徳を理性によって理想人を囲み会は継続した。参集者には二化せんとし、デモクラシーにいたった

國二郎，角田俊直、松井正直、中村道が、制度の根本には精神的部分でこの徳、江本「絶対的自由主義」がなければならな

丸尾文治、大村京生、福場博保，道喜い。こういった意味での生物的進化に

美代、舟橋三郎、杉崎善次郎、三井進

続く精神的進化は徐々にしかも確固た午、西田寿美、芦田

る基礎の上に行われている。自由主義

諸氏がおり、もって後藤がいかに敬愛は各人が ｢ 独立自尊 ｣ でなければならされたかが偲ばれる。

出は最年少の故栄、小林恒夫、松井宗俊、

惇、斉藤日向のないので、その根底には自己の修養があるが、これには莫大な思考と学問がれてきたが科学の裏付けのある人生観院、通称目赤不動にあり、葬儀はここ

は近代科学が発達して可能となった。

で営まれた。墓所にはあき夫人らが建人間が宇宙に出現して初めて宇宙は自てた黒大理石の墓碑銘がある。これを己 を 理 解 し、 我 々 の 眼 は 宇 宙 の 眼、記す。

もこれを理解し賛美するものとてない。人間は宇宙の発達における目的それ自身ともいえよう。ここに人間の尊厳があり、個人を尊重すべき所以がある。生存権、法律の前に万民は平等というヒューマニズムは進化の論理的、理性的産物であり人間のさらなる進歩を促す動因である。こう考えると社会に対する個人の責任はますます重大と〔参考文献〕
1）北 里研究所編：「北里研究所二十五年誌」，
p175（北里研究所）（1939）．
2）北里研究所編：「北里研究所五十年誌」，p309（北里研究所）（1966）．
3）薮 田貞次郎：「故後藤格次会員追悼の辞」，
日本学士院紀 28（1），21（1970）．
4）後 藤格次：「シノメニンの研究」，化学実験学，第２部，第 13 巻，研究賓例篇１，p380（1944）．
5）後 藤格次：「最近のシノメニンの研究」，日
本薬学会特別講演録，p1（1948）．
6）後 藤格次：「シノメニンの研究総説」，化学の研究，２, p48（1948）．
7）後藤格次：「学問の理想」，昭和 25 年 3 月 25日東北大学学士試験合格証書授与式記念講演（1950）．
8）後 藤格次：「新制大学と化学教育」，化学の領域，5（12），673（1951）．
9）佐橋佳一編：「山本出、後藤格次：最近のモルフィン化学」，生物化学最近の進歩 第 1集，p108（技報堂）（1955）．
10）後 藤格次：「シノメニン研究四十年」，日本
11）後 藤格次：「北里研究所を去る」，化学，15,

先生の墓は世田谷三軒茶屋の教学間が不在ならば宇宙は存在したとして思う。

大学薬学研究報告 2，1（1958）．

葬儀・墓地

いる。人生観なるものは大昔から語ら

我々の頭脳は宇宙の頭脳といえる。人先生もその一端を輝かしく担った、と44（1960）．
12）後藤格次先生夫妻を囲む会記録
13）山 本出 :「研究余滴－若き日の思い出」，

ハートの会会報 No.84，20（2016）．

かぎいなきうれひ抱きて人は生き
人は死すべく生まれ来しかな
正四位勲二等
日本学士院会員
農学博士東大教授 後藤格次
北里研究所顧問
法名 潤徳院秀格清次居士
昭和四十四年十一月二十九日死去享年八十才
法名 貞徳院格室妙秋大姉
格次室あき
平成十六年五月十六日死去
享年百二才
昭和四十五年秋彼岸建之
後藤あき
秋山咲子
平野絹子
福本昭子

和光純薬時報Vol.85, No.1（2017）31抗体医薬・再生医療分野のシングルユースバッグ対応にバッグ充てん液体培地／プロセス溶液
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写真提供：ザルトリウス・ジャパン㈱、積水成型工業㈱特※バッグは打ち合わせの上、決定します。

長●国内製造のため短納期で対応可能●培地製造で培ったノウハウを生かした無菌充てん●受託製造品にも対応可能

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項 目
容

量

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試験項目
（一例）

原料の変更管理製造環境

内

容

1ℓ、10ℓ、200ℓ（左記以外の容量は別途相談）
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掲載内容は、2017 年 1 月時点での情報です。上記以外の法律及び最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

…カルタヘナ法収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 85 No. 1
2017 年 1 月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
発 行 所

印

32

刷

所

上田 衡
鎌田裕子
和光純薬工業株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.06-6203-3741（代表）URL http://www.wako-chem.co.jp
共進社印刷株式会社●和光純薬時報に対するご意見・ご感想はこちらまでお寄せ下さい。
E-mail jiho@wako-chem.co.jp●製品に対するお問合せはこちらまでお寄せ下さい。

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E-mail labchem-tec@wako-chem.co.jp■Wako Overseas Offices :・Wako Chemicals USA, Inc. http://www.wakousa.com
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Tel 1-804-714-1920 / Fax 1-804-271-7791

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Vol.85 No.1

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