Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

研究課題名

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

フリガナ

マツオ

代表者名

松尾ヒロアキ裕彰

所属機関（機関名）国立大学法人 広島大学 病院薬剤部（役職名）教授
氏
共同研究者

名（フリガナ）

千貫 祐子(チヌキ ユウコ)

所属機関・役職名
島根大学医学部
皮膚科学講座 准教授

役割分担
新規検査法の臨床的検討

高萩 俊輔
広島大学大学院医系科学
新規検査法の臨床的検討(タカハギ シュンスケ) 研究科皮膚科学 講師(発表論文)
Koga Y, Yokooji T, Ogino R, Taogoshi T, Takahagi S, Ishii K, Chinuki Y, Morita E,Hide M, Matsuo H. A novel detection method for cross-linking of IgE-receptors
by autoantibodies in chronic spontaneous urticaria. Allergol Int. 2022;71(1):94本 助 成金 によ る 発102
表論文，学会発表 （学会発表）
古賀祐基, 横大路智治, 荻野龍平, 垰越崇範, 高萩俊輔, 石井香, 千貫祐子, 森田栄伸, 秀道広, 松尾裕彰．高親和性 IgE 受容体の架橋検出による自己免疫性蕁麻疹の新規検査法の有用性．第 23 回ヒスタミン学会．京都．2022 年 1 月
研究結果要約
現在、食物アレルギーの原因検索にはアレルゲン特異 IgE 抗体検査が広く臨床使用されているが、陽性と判定されても実際にはアレルギー症状をきたさない場合が多い。これは、症状惹起に必要な高親和性 IgE 受容体（FcεRI 受容体）を架橋できないアレルゲン特異 IgE 抗体も検出されるためである。したがって、精度の高い食物アレルギーの検査法が求められている。本共同研究では、Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay（ALPHA）法を利用して、FcεRI 受容体の架橋能を有するアレルゲンに対する特異 IgE を検出する高精度食物アレルギー検査法の確立を試みた。
FcεRI 受容体α鎖を標識した ALPHA ドナービーズとアクセプタービーズに小麦アレルギー患者血清を添加した後、抗ヒト IgE 抗体にて FcεRIα鎖に結合した IgE 抗体を架橋すると、各ビーズが近接しALPHA シグナルが得られた。この結果から、ALPHA 法により FcεRI 受容体の架橋が検出できることを明らかにした。さらに、アレルゲンに患者の IgE 抗体を予め結合させたアレルゲン-IgE 複合体を分離した後、FcεRIα鎖標識ビーズを添加する方法により、アレルゲンによる FcεRI 受容体の架橋を検出できることを示した。今後、既存の検査法との検査精度の比較、および本検査法を利用した低アレルゲン化小麦のアレルゲン性評価を実施する。

41

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

研究目的

よび、開発した新規検査法を応用した低アレルゲ

現在、食物アレルギーの検査として、血清中のン化小麦のアレルゲン性を評価することを目的

食物アレルゲン特異 IgE 抗体の測定が広く行わとした。

れている 1）。この方法は、アレルゲンを支持体に固相化し、患者血清と反応後にアレルゲンに結合

目的１）ALPHA 法を利用した新規アレルゲン特した特異 IgE 抗体を酵素標識 2 次抗体を用いて異 IgE 抗体検査法の構築定量する酵素抗体法である。アレルギー症状を惹ALPHA 法は、ドナービーズとアクセプタービ起するためには、肥満細胞や好塩基球表面でアレーズが 200 nm 以内に近接すると、680 nm の励

ルゲン特異 IgE 抗体が結合した 2 分子の高親和起光照射により 615 nm の発光が認められる、分性 IgE 受容体（FcεRI 受容体）が、1 分子のアレ子間の近接を検出する方法である 2)。肥満細胞やルゲンを介して架橋される必要がある。現行のア好塩基球の活性化に必要な FcεRI 受容体のアレレルゲン特異 IgE 抗体検査は、架橋能のないアレルゲンによる架橋を、ALPHA 法を用いて試験管ルゲンに結合する IgE 抗体も検出されるため、偽内で模倣することによる新規アレルゲン特異陽性を生じることがあるなど検査精度は良くなIgE 抗体検査法を確立する（図 1）。本研究で開発い。また、患者末梢血中の好塩基球を利用したヒする新規検査法では、FcεRI 受容体架橋能を持つスタミン遊離試験も臨床使用されているが、採血抗原に対する IgE 抗体のみを検出することが出後の好塩基球の劣化が結果に影響するなどの問来るため、現行法で見られる偽陽性が除外され、題がある。本研究では、Amplified Luminescence

検査精度の飛躍的な向上が期待される。

Proximity Homogeneous Assay（ALPHA）法を利用して、FcεRI 受容体の架橋を形成できるアレ

目的２）低アレルゲン化小麦製品の個々の患者にルゲン特異 IgE 抗体の検査法を開発すること、お対するアレルゲン性の評価

42Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

重篤な症状を引き起こす小麦依存性運動誘発

ALPHA 法により低アレルゲン化小麦製品のアアナフィラキシー（WDEIA）患者の主要抗原は、レルゲン性を評価する。低アレルゲン化小麦製品

ω5-グリアジンや高分子量グルテニンであるが、として、我々の研究グループが開発した低アレル個々の患者でエピトープとなる部位や個数が異ゲン小麦 4)（1BS-18 ホクシンおよび 1BS-18 ミなることが報告されている 3)。また、他の小麦タナミノカオリ）、血清としてω5-グリアジンが原ンパク質を原因とする WDEIA 患者も存在する。

因抗原の小麦アレルギー患者血清を用いてモデしたがって、様々な技術を利用して作製された低ル実験を実施する。抗ω5-グリアジン IgE 抗体をアレルゲン化小麦製品が、患者にとって安全に摂介した受容体の架橋強度を ALPHA ビーズ発光取できるかどうかは個別に検査する必要がある。

シグナルとして検出し、低アレルゲン化小麦のア本研究で開発する ALPHA 法による検査を応用レルゲン性の低下率を評価する。

し、小麦アレルギー患者の血清を用いて、種々のこれら研究計画の内、2021 年度は ALPHA ビ

低アレルゲン化小麦製品のアレルゲン性を評価

ーズを利用してアレルゲンタンパク質によるする方法を確立する。これにより、患者別に安全FcεRI 受容体α鎖の架橋を検出できることを明な低アレルゲン化小麦製品を提案できるようにらかにし、低アレルゲン化小麦製品の評価に関しなる。ては、ω5-グリアジン欠損低アレルゲン小麦粉を取得した。

研究計画及び研究手法
研究計画及び手法の概要

広島大学病院薬剤部

共同研究機関である島根大学医学部皮膚科おALPHA 法を用いて、アレルゲンによる患者血よび広島大学大学院医系科学研究科皮膚科学に

清 IgE 抗体の架橋に伴う FcεRI 受容体の架橋反おいて、アレルゲン特異 IgE 抗体検査、ヒスタミ応を検出できるか否かを評価するために、予備実ン遊離試験、好塩基球活性化試験あるいは食物負験として、アレルゲンの代わりに抗ヒト IgE 抗体

荷試験により確定診断された食物アレルギー患により患者血清 IgE を介して FcεRI 受容体を架者血清を収集する。患者血清を利用して、広島大橋した時に、ALPHA シグナルが検出可能か否か

学病院薬剤部で FcεRIα鎖を標識した ALPHA ドを調べた（図 2A）。リコンビナントヒト FcεRIαナービーズおよびアクセプタービーズを用いた鎖を ALPHA ドナービーズおよびアクセプター

FcεRI 受容体架橋を検出する新しい食物アレルビーズ（PerkinElmer 社）に標識し、両ビーズとギー検査法を構築する。構築した新規検査法の検血清を AlphaPlateTM （PerkinElmer 社）内で査感度や特異度を解析することにより既存の検混合した。その後、抗ヒト IgE 抗体（終濃度 1μ査法に対する有益性を明らかにする。

g/mL, Dako 社）を添加し、6 時間反応後にプレートリーダー（EnspireTM, PerkinElmer 社）

さらに、小麦アレルギー患者血清を利用して

43

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発を用いて 680 nm の励起光を照射し 615 nm の発した患者血清を用いた。AlphaPlateTM ウェル内光を測定した。混合するビーズの比率、血清濃度、で FcεRIα鎖標識 ALPHA ドナービーズ、アクセ

反応時間等の条件検討を行った。

プタービーズおよび患者血清を混合した後、グル

次に、実際のアレルゲンと患者血清を用いてパール 19S（終濃度 0.001-1μg/mL）を添加しFcεRI の架橋反応が検出可能か否かを評価した

た。室温でインキュベーションした後、発光をプ（図 2C）。本研究の最終目標は、ALPHA 法を用レートリーダーにて測定した。しかし、この方法いた小麦アレルギー患者における低アレルゲンでは架橋の検出が困難であったため、アクセプタ化小麦食品の適応性の評価であること、また、血ービーズを抗ヒト IgE 抗体標識へ変更、さらに、清検体数が多いことから加水分解コムギ（グルパバックグラウンドのシグナルを低下させるためール 19S）含有石鹸の使用により WDEIA を発症にドナービーズに標識されている FcεRIα鎖の44Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

ブ ロ ッ キ ン グ 剤 と し て 抗 ヒ ト FcεRI α 抗 体

れた種苗用の各低アレルゲン小麦を購入し、製粉（CRA2, Bio Academia 社）、アクセプタービー機による挽砕後、篩をかけて全粒粉を調製した。

ズ上の抗ヒト IgE 抗体のブロッキング剤として精製ヒト IgE 抗体を使用した手順についても評

広島大学皮膚科価した（図 2E）。

広島大学病院皮膚科を受診し、臨床症状、アレ

FcεRIα鎖標識ドナービーズや抗ヒト IgE 抗体

ルゲン特異 IgE 抗体検査、食物負荷試験、ヒスタ標識アクセプタービーズを用いた方法で検討をミン遊離試験等により確定診断された食物アレ行ったが、架橋の検出には至らなかった。そのた

ルギー患者血清を収集した。アレルゲンを確定す

めアレルゲン-IgE 抗体複合体を濃縮するステッるためのヒスタミン遊離試験は以下の方法で実プを導入した方法による検出を試みた。アレルゲ施した。食物アレルギー患者より血液を採取し、ン-IgE 抗体複合体溶液に、FcεRIα鎖標識ドナー1%メチルセルロース溶液を加えて静置後、好塩ビーズおよびアクセプタービーズを添加し、イン基球を含む上清を分離した。好塩基球画分にアレキュベーション後にプレートリーダーにて測定

ルゲンを添加し、遊離したヒスタミンを高速液体した。

クロマトグラフィーを利用して定量した。好塩基球を破壊した溶液のヒスタミンを全量として、5%以上ヒスタミンが遊離した場合をアレルゲン

島根大学皮膚科
島根大学医学部附属病院皮膚科を受診し、臨床に対する反応が陽性であると判定した。

症状、アレルゲン特異 IgE 抗体検査、食物負荷試験、好塩基球活性化試験等により確定診断された

結果と考察

食物アレルギー患者血清を収集した。患者の血液

１）患者血清の収集（島根大学皮膚科、広島大学を採取し、現病歴から推測されたアレルゲンを添

皮膚科学）加した後、Allergenicity キット（Beckman Coul島根大学および広島大学皮膚科にて、小麦アレ

ter 社）を用いて、フローサイトメーターで好塩ルギー患者 41 名の血清を収集した。その内訳は、基球をゲーティングし、好塩基球表面に特異的に発現している CD203c マーカーの発現上昇を評

通常の即時型小麦アレルギー1 名、加水分解コム価することにより、原因アレルゲンを確定した。

ギが原因の即時型小麦アレルギー3 名、従来型小

また、我々の研究グルーブがこれまでの研究で麦依存性運動誘発アナフィラキシー（WDEIA）

開発したω5-グリアジンを欠失した低アレルゲ

10 名、加水分解コムギが原因の WDEIA 19 名、ン小麦 1BS-18 ホクシンおよび 1BS-18 ミナミノイネ科花粉症が原因の小麦アレルギー8 名であっカオリのアレルゲン性を患者血清を用いて評価た。
通常の小麦アレルギー患者は、小麦製品摂取後するために、島根県の中山間地域で栽培し収穫さ2 時間以内に蕁麻疹等のアレルギー症状が発症す45

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発る。従来型 WDEIA 患者は、ω5-グリアジンや高ためには、100 例程度必要であるため、血清の収分子量グルテニンが主要原因抗原であり、小麦製集は引き続き実施する。

品接種後に運動負荷や非ステロイド性抗炎症薬（NSAIDs）の服用によりアレルギー症状が誘発

２）ALPHA 法を利用した新規アレルゲン特異される 3)。加水分解コムギが原因の WDEIA は、IgE 検査法の構築加水分解コムギ（グルパール 19S）含有石鹸の使用により経皮感作され発症した WDEIA であり、

① 抗ヒト IgE 抗体による FcεRI 受容体架橋状態

グルパール 19S 特異 IgE 抗体が主にγ-グリアジの検出（広島大学病院薬剤部）

ンに含まれる QPQQPFPQ エピトープに交差反はじめに、FcεRIα鎖を標識した ALPHA ビー応することにより症状が誘発されると考えられ

ズに血清 IgE 抗体を反応させ、アレルゲンの代わている 5)。イネ科花粉症が原因の小麦アレルギーりに抗ヒト IgE 抗体により IgE を架橋した時に、は、花粉-食物アレルギー症候群（PFAS）と呼ばALPHA シグナルが検出可能であることを確認れ、イネ科花粉タンパク質により感作され、小麦した （図 2A）。リコンビナントヒト FcεRIα鎖製品を摂取することによりアレルギー症状が誘タンパク質を ALPHA 測定用ドナービーズとア発される。その原因抗原として、ペルオキシダー

クセプタービーズに標識した。両ビーズと血清をゼ-1 やβ-グルコシダーゼが同定されている 6)。

ウェル内で混合した後、抗ヒト IgE 抗体を添加す

この様に、小麦アレルギーの病型により原因アることにより FcεRIα鎖を架橋し、ALPHA シグレルゲンが異なっていることから、本研究で構築ナル値を測定した。抗ヒト IgE 抗体を添加した場する新規診断法の検討に利用する患者血清につ合の ALPHA シグナル値は健常者および患者のいて、原因アレルゲンおよび FcεRI 受容体を架いずれの場合においても、未添加の ALPHA シグ橋できるアレルゲンに対する特異 IgE 抗体を保ナル値より増加した（図２B）。この結果から、抗有するか否かを明らかにしておく必要がある。そヒト IgE 抗体により受容体が架橋され、ドナーおこで、これらの小麦アレルギー患者の好塩基球上よびアクセプタービーズが近接していることがの FcεRI 受容体に結合した IgE 抗体が、ω5-グ

分かり、ALPHA 法により架橋状態が検出可能でリアジン、グルパール 19S、あるいは花粉タンパあることが示された。

ク質により架橋され好塩基球が活性化されるこ

抗ヒト IgE 抗体による架橋検出の至適条件をとを、好塩基球活性化試験および好塩基球ヒスタ調べた結果、混合液のインキュベーション時間はミン遊離試験によって確認した。

6 時間、ドナービーズおよびアクセプタービーズ

本年度に 41 名の好塩基球活性化能を有するアの混合比は 1:4、添加血清の終濃度は 5%である

レルゲン特異 IgE 抗体を有する患者血清を収集ことを明らかにした。さらに、発光強度（ALPHAできた。既存の特異 IgE 抗体検査との比較を行うシグナル値）は、添加した抗ヒト IgE 抗体の濃度依存的に増加したことから、定量的に架橋が検出

46

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発できると示唆された。この研究結果の一部は論文

ヒト IgE 抗体を市販のヒト IgE 抗体でブロッキ報告した 7)。

ング、ドナービーズ上の FcεRIα鎖を抗 FcεRIα鎖抗体（CRA2）でブロッキングした後に、グル② アレルゲンによる FcεRI 受容体架橋状態の検パール 19S を添加する方法を検討した（図 2E）。

出（広島大学病院薬剤部）

しかしながら、バックグラウンドのシグナル値の次に、実際のアレルゲンと患者血清を用いて低下は認められず、また、グルパール 19S 添加にIgE 受容体の架橋状態の検出を試みた（図 2C）。

よる ALPHA シグナルの上昇も認められなかっ

本実験では、患者数が多いグルパール 19S 含有た。ALPHA シグナルが検出できない原因として、石鹸の使用により WDEIA を発症した患者血清

血中の抗原特異 IgE 抗体量が少ないこと、血中にを 用 い た 。 ウ ェ ル 内 に ヒ ト FcεRI α 鎖 標 識

多量に存在するアルブミンやグロブリンなどのALPHA ドナービーズおよびアクセプタービータンパク質がシグナル値の上昇を阻害すること、ズ、グルパール 19S で好塩基球ヒスタミン遊離抗 FcεRI やヒト IgE 抗体によるブロッキングが活性が認められた患者血清を混合し、グルパール不十分で、ビーズ同士の直接的な結合が起きてい19S を終濃度 0.001-1μg/mL になるように添加ることなどが推察された。

し、インキュベーションした後に ALPHA シグナ

そこでアレルゲンと IgE 抗体の複合体を分離

ルを測定した。その結果、患者および健常者のいし、血清の夾雑物質が少ない状態で架橋を形成さずれの場合においても、アレルゲンであるグルパせる方法でのシグナルの検出を試みた。この方法

ール 19S 濃度の増加に伴う ALPHA シグナル値により、健常者とグルパール 19S 感作小麦アレの上昇は認められなかった（図 2D）。

ルギー患者の血清を用いて予備的に解析した結

次に、アクセプタービーズを抗ヒト IgE 抗体で果、患者血清を添加してグルパール 19S-IgE 抗標識したものに変更し、同様の操作によりグルパ体複合体と両ビーズが結合した場合にのみ、ール 19S による IgE 受容体の架橋の検出を試みALPHA カウントの上昇が認められた。この結果た。その結果、グルパール 19S 非添加時のバックから、アレルゲン-IgE 抗体複合体を分離する操グラウンドのシグナル値が高く、また、グルパー作を加えることで ALPHA 法による架橋能を有ル 19S 添加による ALPHA シグナル値の上昇はするアレルゲン特異 IgE を測定できることが示認められなかった。バックグラウンドのシグナル唆された。

値が高い原因として、患者血清中 IgE 抗体と結合今回の研究期間内に、計画していた既存のアレしていない抗ヒト IgE 抗体標識アクセプタービ

ルゲン特異 IgE 抗体検査との検査精度の比較研ーズが、ドナービーズ上の FcεRIα鎖に結合して究は実施できなかった。今後の課題として、至適いる患者血清 IgE に直接反応している可能性が測定条件の決定、グルパール 19S 以外のアレル考えられた。そこで、アクセプタービーズ上の抗ゲンの測定系の構築、既存のアレルゲン特異 IgE

47

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

異 IgE の検出による精度の高い検査法の確立を検査との精度の比較が挙げられる。

目指して本助成研究を実施した。その結果、
３）低アレルゲン小麦製品のアレルゲン性評価

ALPHA 法を利用して食物アレルギー患者血清（広島大学病院薬剤部、島根大学皮膚科）

中の IgE 受容体架橋能を有するアレルゲン特異低アレルゲン化小麦製品は様々な方法で作成IgE 抗体を検出できることを明らかにした。このされるため、低下するアレルゲンの種類や低下率

新しい方法は、I 型アレルギーの原因となる IgEは製品によって異なる。また、小麦アレルギー患受容体の架橋をヒトの好塩基球を使用せずに測者は個々に感作されているアレルゲンが異なる定できること、侵襲性が少なく血清があれば検査ため、低アレルゲン化小麦を患者が安全に摂取で可能であり患者にとって負担が少ないことが特きるか否かは個別に評価する必要がある。本研究徴である。今後、既存のアレルゲン特異 IgE 検査

では ALPHA 法による特異 IgE 検出系を利用しとの診断的有用性を比較し、臨床診断薬として開て、FcεRI 受容体の架橋能の違いによるアレルゲ発したい。
ALPHA 法による検査は血清と食物抽出タンン性の評価を試みる。
評価する低アレルゲン小麦として、我々の研究パク質があれば、タンパク質が患者の IgE 受容体

グルーブが開発したω5-グリアジン欠失小麦でを架橋するか否かを簡単に測定することができある 1BS-18 ホクシンおよび 1BS-18 ミナミノカる。すなわち、本検査結果は食物アレルギーの負オリを選択した。今回、島根県の中山間地域で種荷試験結果の予測や、食物アレルギー患者にとっ苗用に栽培し収穫された小麦を購入し、製粉機にて安全に摂取可能か否かの判断が難しい低アレよる挽砕後、篩をかけて全粒粉を調製した。ω5-ルゲン化製品の評価に利用できる可能性が高い。

グリアジンが原因抗原である従来型 WDEIA 患特に小麦のように多種のアレルゲンを含む食品者血清を利用して、得られた小麦粉から抽出したの個々の患者に対するアレルゲン性の評価は重タンパク質を抗原として、個々の患者の IgE 受容要であるため、アレルゲン性の評価研究は今後も体架橋能を ALPHA 法にて測定する予定であっ継続して実施する。本研究で得られた、食物アレたが、ALPHA 法の構築に時間を要したため、評ルギー検査や低アレルゲン製品の評価方法に関価には至らなかった。今後、ALPHA 法による架する成果は、学会・論文発表を行うとともに、臨橋検出方法を確立次第、ω5-グリアジン欠失小麦床診断薬や食品関連企業との連携により実用化のアレルゲン性の評価を実施する。

を図る。

今後の研究活動について

参考文献

現行のアレルゲン特異 IgE 検査には偽陽性が1) Ebisawa M, Ito K, Fujisawa T; Committe

多いという課題を解決するため、ALPHA 法を利e for Japanese Pediatric Guideline for F

用して FcεRI 受容体を架橋できるアレルゲン特ood Allergy, The Japanese Society of Ped48

Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay (ALPHA)法を用いた食物アレルギーの新規検査法の開発

iatric Allergy and Clinical Immunology;5) Yokooji T, Kurihara S, Murakami T, Chi

Japanese Society of Allergology. Japanes

nuki Y, Takahashi H, Morita E, Haradae guidelines for food allergy 2020. Allerg

S, Ishii K, Hiragun M, Hide M, Matsuo

ol Int. 2020 Jul;69(3):370-386.

H. Characterization of causative allergen2) Bielefeld-Sevigny M. AlphaLISA immunoa

s for wheat-dependent exercise-induced assay platform- the "no-wash" high-throug

naphylaxis sensitized with hydrolyzed w

hput alternative to ELISA. Assay Drugheat proteins in facial soap. Allergol Int.

Dev Technol. 2009 Feb;7(1):90-2.

2013 Dec;62(4):435-45.

3) Morita E, Matsuo H, Chinuki Y, Takaha6) Ogino R, Chinuki Y, Yokooji T, Takizawa

shi H, Dahlström J, Tanaka A. Food-dep

D, Matsuo H, Morita E. Identification oendent exercise-induced anaphylaxis -imp

f peroxidase-1 and beta-glucosidase as cr

ortance of omega-5 gliadin and HMW-glu

oss-reactive wheat allergens in grass polltenin as causative antigens for wheat-deen-related wheat allergy. Allergol Int. 20

pendent exercise-induced anaphylaxis-. Al

21 Apr;70(2):215-222.

lergol Int. 2009 Dec;58(4):493-8.

7) Koga Y, Yokooji T, Ogino R, Taogoshi T,4) Yamada Y, Yokooji T, Ninomiya N, Taogo

Takahagi S, Ishii K, Chinuki Y, Morita

shi T, Morita E, Matsuo H. Evaluation oE, Hide M, Matsuo H. A novel detection

f the allergenicity of ω5-gliadin-deficientmethod for cross-linking of IgE-receptors

Hokushin wheat (1BS-18) in a wheat allby autoantibodies in chronic spontaneous

ergy rat model. Biochem Biophys Rep. 2urticaria. Allergol Int. 2022 Jan;71(1):94019 Nov 1;20:100702.

-102.

49