ISSN 1347-4804

July 2005
Vol.73 No.3

マウスを用いた心筋梗塞モデル実験における酸化バーストの可視化
冠動脈を1時間閉塞後、再灌流した心臓をO2−・プロー
ブを用いて検出した蛍光写真である。
左図：再灌流5分間。
右図：再灌流8分間。
このモデルでは再灌流7分後に酸化バーストが起こると言われており、それを裏付ける結果となった。
（データ提供：大阪大学大学院 薬学研究科 前田初男 助教授）

〔総 説〕
｢化学的脱保護反応を発蛍光機構とする蛍光プロー
ブの設計開発｣前田初男 ……… 2〈テクニカルレポート〉「新規な方法による高効率cDNAサブトラクション」
林田幸信 ……… 5「カチオン化マトリックスを用いるガングリオシドの質量分析」
田尻道子、和田芳直 ……… 8「食品に残留する農薬などのHPLC分析における前処理
エビ試料中のテトラサイクリン系抗菌剤のHPLC分析」
吉田貴三子 ………10〈Talking of LAL〉
「第60話 エンドトキシン試験法への適応」
土谷正和 ………14〈生薬のはなし〉｢蟾酥（センソ）｣

松田久司 ………12〔化学大家〕「小川正孝」

吉原賢二 ………25〔製品紹介〕
有機合成
光学活性ジルコニウム触媒「(R)-3-I-ZrMS」 20
硫化ナトリウム五水和物
20
環境・分析
プレセップR CM
プレセップR-C RPP（Short）
生薬試験用標準品
水質分析用試薬㈱エルメックス アクアテストⅡ ATS-100
LC/MS用溶媒
日本薬局方適合 生薬有効成分

11
11
13
20
21
22
22

生化学
カチオン化マトリックス
9㈱シバヤギ レビスR レジスチンｰマウス
15
スーパーセップTMPVDFメンブラン
18
電子レンジを用いたQuick-CBB PLUSの応用例
19
アンサマイトシン P-3
19

機

器

出芽酵母形質転換自動化システム

細胞生物
過酸化水素プローブ「BES-H2O2」
βアミロイドELISAキットワコー
サイトカイン 大入り包装

遺伝子
DsDD cDNAサブトラクションキットワコー
7
S.cerevisiae ダイレクトトランスフォーメー
ションキットワコー
24
核酸ケージング試薬「Bhc-ジアゾ」
28

24

4
16
23

〔お知らせ〕
N/400ポリビニル硫酸カリウム（PVSK）溶液の商品変更について……11㈱ニッポンイージーティー siRNA カスタム合成サービスキャンペーン…28
1

R

esearch

化学的脱保護反応を発蛍光機構とする蛍光プローブの設計開発
大阪大学大学院

薬学研究科

前田

初男

たものである。フォスファターゼやガラもH 2 O 2 蛍光プローブとして1（ Scheme

クトシダーゼの酵素アッセイに利用され2）を開発できた6 ）。フルオレセイン（φ＝るプローブがその例である。しかし、0.85 ）
を基準として見積もった1の相対

近 年 注目を集めているC h e m i c a l

化学的な脱保護反応を発蛍光機構と量子収率は0.010である。ほぼ無蛍光

1 はじめにBiology（化学生物学）は化学的発想・して利用するプローブはこれまで存在の1はH 2O 2と反応し、強い蛍光を持つ手法を用いて生物機能解明へアプロー

しなかった。本稿では、著者らの設計

ジフルオロフルオレセインへ 効 果 的にチする学 問 分 野である。 Chemical

戦略に基づき、これまでに開発した過変換される。この脱保護反応はH 2 O 2Biologyの代表的な研究領域の１つで酸化水素（ H 2 O 2 ）、スーパーオキシド

によって特異的に誘起され、O 2−･ 、ヒある「分子イメージング」研究では、生（ O 2−･ ）、チオールならびにセレノール

ドロキシルラジカル（ HO･ ）、 t -ブチル

きた細胞・組織においてダイナミックに

蛍光プローブについて紹介したい。

ヒドロペルオキシド（ t - B u O O H ）、 一

変動する分子を捕捉することにより生酸化窒素（NO･）、ペルオキシナイトラ

物機能を解析する。この「分子イメー

2 H2O2 プローブ

イト（ONOO−）に対して1は殆ど応答を

酢 酸フェニル類との 反 応においてゼに対しても安定である。また、モノ

ジング」研究をソフト面から支援するた示さない。期待したとおり、エステラー

めに、ターゲット分子に特異的かつ高感度な蛍光プローブの開発が重要でH 2 O 2はα効果により水に比べて強力な保護体であるため1は親水性が高く、ある。

求核剤として作用する2 ）。この事実に

そのE t O H 溶 液を緩 衝 液で2 0 0 倍 以

基づき、フェノール性水酸基を持つ蛍上に希釈して用いることができる。汎様々な蛍 光プローブが 既に開 発さ1）れている 。それらのプローブ設計戦

光色素のアシル化体が、脱保護反応

用されているH 2 O 2プローブであるジク

略においては多種多様な発蛍光反応

を発蛍光機構とするH 2 O 2プローブとしロロジヒドロフルオレセイン（ DCFH ）は、が利 用されているが、 著 者らは単 純て利用できると考えられた。そこで、酸化反応を発蛍光機構とする。そのな脱 保 護 反 応に注目し蛍 光プローブ

蛍 光 色 素としてレゾルフィンを用いて、結果、DCFHはH 2 O 2だけでなく他のの設計開発を行なっている。すなわち、様々なアシル化レゾルフィンについて

活性酸素種や酸化酵素に対しても応①蛍光性化合物フルオレセイン類のベ

H 2 O 2プローブとしての実用性を評価し答を示す 7 ）。DCFHに比べて1がH 2 O 2

3−5）

ンゼンスルホニル化体が殆ど無蛍光にた（Scheme 2） 。その結果、それらに対して非 常に高い特 異 性を示したなるという事 実ならびに②これらの保はH 2 O 2の蛍光分析には利用できるが、のは、発蛍光機構として酸化反応で護体が、ある分子に特異的な反応にエステラーゼによっても加水分解を受はなくペルヒドロリシス（ 加過酸化水素

基づき脱保護されるならば、その分子けることから細 胞 系 へ の適 用は不 可分解）を活用したことに由来する。

に対する特異的プローブになるという能であった。そこで、エステル基よりも細胞内H 2 O 2の選択的可視化は、1

仮説に基づき、著者らは新規蛍光プロー

エステラーゼに対して高い抵抗性を有のアセチル化体BESH2O（Scheme
22）

ブの設計を行なってきた（ Scheme 1 ）。

するスルホン酸エステル、つまり、ベを用いて行なうことができる。光照射

脱保護反応を発蛍光機構とするプロー

ンゼンスルホニル化フルオレセイン類に下において刺激剤を使い分けることにブが無いわけではない。フルオレセイ

着目し、更に検討を行なった。幸運により、任意の活性酸素種を恣意的にン等のフェノール性水酸基を有する蛍
光色素について、それらの水酸基を

N

O

N

H2O2

O

+

修飾することにより人工基質に変換し

O

O

O

R

O

O

acyl resorufin

R

OOH

OH

resorufin[ Protection ]
PG–Cl
Z
PG =

S
O2

CO2H
X

CO2H
X
O

O
Y

X

O

OH

O
Y

Y

F

O PG

O

F
O

Y

H2O2

F
O

O
O

O PG
Y

H2O2

F

F

O

O S
O2

F

F
F

BESH2O2
F

protected fluoresceins as probe candidates(almost no fluorescent)

Scheme 1.

Scheme 2.

和光純薬時報

intracellularesterase
1O

Vol.73, No.3（2005）

OH

F

O

X

fluoresceins(highly fluorescent)

2

F
O

F
F

O

Y

F

O

X
PG O

F

O S
O2

1

O

target molecule[ Deprotection ]

CO2H

CO2H
X

F

発 生 す ることが できる淡 水 性 緑 藻

できた。この時観察された応答がO 2−･

見に基づき、新規高感度チオールプロー

Chlamydomonas reinharadtiiをモ由来であることは、スーパーオキシドブとしてBESThio（ Scheme 4 ）の開デル細 胞として用いた 検 討により、ジスムターゼの添加実験により確認した。

発に成功した10）。チオール蛍光プロー
ブの用途は、生体高分子のラベル化剤、

BESH 2 O 2のH 2 O 2プローブとしての有

しかし、2はグルタチオンや還元酵素系

用性が示された。すなわち、暗条件下、に対して無視できないレベルで蛍光応

ＨＰＬＣ分析における誘導体化試薬お室 温 で 3 0 分 間 処 理 す ることにより答を与える。特に、グルタチオンは細よび酵素アッセイにおける指示試薬で

BESH 2 O 2を負荷した緑藻を、H 2 O 2を胞内にmMレベルで存在するため、細ある。既存のチオール蛍光プローブの発 生 する刺 激 剤・銅（ Ⅱ ）イオン添 加

胞内O 2−･の可視化に2は適さないと考

多くは水溶性が低いため、酵素アッセ

培地中、光照射下培養した時のみ、えられた。そこで、2をリード化合物とイに用いる場 合 、 酵 素 反 応と検出反刺激剤濃度に依存した蛍光応答が得して更に分子設計を行なったところ、

応を独立して行なう必要がある。従っられた。このような特異性は、DCFH

グルタチオンにも全く応答を示さないO2−･て、 現 在 市 販されているチオール蛍のジアセチル化体（ DCFH-DA ）を用特異的プローブとしてBESSo（ Scheme

光プローブは専らラベル化剤または誘いた場合には全く観察されなかった。

3 ）の開発に成功した 9 ）。BESSoを用導体化試薬として利用されている。一また、この緑 藻を用いた検 討により1いることによりPMA刺激した好中球が方、BESThioは、モノ保護体である

1

−･
2

が一重項酸素（ O 2 ）にも応答しないこ産生するO をより高感度に検出できた。

ため親水性が高く、そのEtOH溶液とが示された。DCFH-DAに比べてまた 、 2に 比 べ てモノ保 護 体 であるを緩 衝 液で2 0 0 倍 以 上に希 釈した水溶 液として用いることができる。その非 常に 特 異 性 の 高い H 2 O 2プローブ

BESSoは親水性が高く、希釈水溶液

BESH 2 O 2は活性酸素研究における新としても使用し易いという利点もある。

結果、アセチルまたはブチリルチオコ

しいツールとして活用されるものと大いO 2−･の可視化はこれまでヒドロエチジ

リンを基質として用いるコリンエステラーに期待している。

ン（ HE ）
を用いて行なわれてきた。しゼアッセイもBESThioを用いて構築でかし、その発蛍光反応は O 2−･によるきた。このコリンエステラーゼアッセイは、

3 O2−･ プローブ

酸 化に基 づくため、 D C F Hと同 様にアルツハイマー型痴呆症治療薬として

特 異 性に問 題がある。 H Eの問 題 点

近 年 注目されているコリンエステラー

H 2 O 2プローブの開発過程において、を克 服 する高 特 異 的 O 2−･ 蛍 光プロー

ゼ阻害剤の高感度簡便スクリーニング

2（ Scheme 3）がO 2−･プローブとして利ブBESSoは、BESH 2 O 2とともに、活法としても利用できた。他のチオール用できることを見い出した 8 ）。2は活性性酸素研究の発展に大いに貢献する

定 量 に 基 づく蛍 光 酵 素 アッセイもと信じてやまない。

BESThioを活用することにより開発で

酸 素 種の中ではO−･2に対して非 常に高い特異性を示す。その結果、ホルきると考えている。

ボールミリスタートアセタート（ PMA ）

4 チオールプローブ

刺激した好中球が細胞外に産生する
O 2−･を2を用いることにより感度よく検出

5 セレノールプローブ

O 2−･プローブの開 発 過 程に得た知BESThioはpH 6.6ではチオールに

NO2
O2N

O

は殆ど応答を示さないため、セレノー

O

ルに特異的なプローブとして利用でき

F

S O
O2

F
O
F

2

F

O2N

る
（ Scheme 4 ）11 ）。過剰のジチオトレ

NO2

O S
O2

CO2H
F

4 O2– •F

R–SH
at pH 7.4

CO2H
O

O
F

H3C

OH

CO2H
H3C

CH3

CH3

F
O

O S
O2

O
BESThio

NO2

O

O

OH

R–SeH
at pH 6.6

O2N

CO2H
F

F

O2N

Se

SeH
DTT

O

O

F

F
BESSo

O S
O2

OCH3

H2N

CO2H

selenocystine

OCH3

Scheme 3.

2

2x
H2N

CO2H

selenocysteine

Scheme 4.

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

3

イトール
（DTT）共存下セレノシスチンかならびに物性の観点から実用性の高ら発生するセレノシステインをBESThio

い蛍光プローブとして利用できると考は高感度に検出できた。また、BESThio

えている。今後、読者の御批判をあを用いることによりセレノプロテインであ

おぎつつ、これらのプローブをより実るチオレドキシンリダクターゼのセレノシ

用的なものへと育てていくとともに、他

ステイン残基数を簡単に決定できた。

の生 体 分 子に対 する蛍 光プローブを

セレンは酸化ストレスに対する生体防同 様な戦 略に基 づき開 発していく所

御機構を担う微量必須元素である。

存である。

活性酸素種（reactive oxygen species; ROS）
分子状酸素から発生するO2−･、H2O2、HO･、
1
O 2などの反応性の高い化学種の総称。正常な生体においても、呼吸により取込まれる
分子状酸素の数％がROSに変換される。
しかし、生体はROSの消去機構やROSとの反応により生成する酸化タンパク質や酸化DNA/RNAの除去・修復機構を備えている。
これらの防御機構が対応しきれないレベル
でROSが発生すると、生体高分子の酸化に起因する細胞障害が起こる。また、ROS
は、単なる細胞障害を引き起こすだけでなく、様々な転写因子や酵素を誘導し、増殖・分化・老化・細胞死といった細胞の一生を左右す
るメッセンジャーとしても作用すると考えられ

生 体 内における含セレン化 学 種は主にセレノシステインである。セレノシス
テインは遺伝子産物であるセレノプロ
テインの構成アミノ酸であり、これまで約35種のセレノプロテインが同定またはその存在が推定されている。セレンを含 有 するセレノプロテインは重 要な生物機能を担っていると考えられているが 、 未だその機 能が 不 明なものも多い。 従って、 生 体セレノール化 合物の簡便な分析法はセレノプロテインの機能・構造解析研究に不可欠である。
しかし、これまでセレノール蛍光プロー
ブ は 全く開 発され て い な か った 。
BESThioはこの領域の研究も支援できる多機能プローブである。

6 おわりに以上、発蛍光機構として化学的脱保護反応に着目することにより著者らがこれまでに開発した蛍光プローブについて解説した。BESH 2O 2、BESSo〔参考資料〕
１）Haugland, R. P.: "Handbook of Fluorescent
Probes and Research Products, 9th ed.",
Molecular Probes, Eugene（ 2002）.
２）Bartoli, G. and Todesco, P. E.: Acc. Chem.
Res., 10, 125-132（ 1977）.
３）Maeda, H., Matsuura, S., Nishida, M., Senba,
T., Yamauchi, Y. and Ohmori, H.: Chem.
Pharm. Bull., 49, 294-298（2001）.
４）Matsuura, S., Yamauchi, Y., Ohmori, H. and
Maeda, H.: BUNSEKI KAGAKU, 50, 475479（ 2001）.
５）Maeda, H., Matsuura, S., Nishida, M., Yamauchi,
Y. and Ohmori, H.: Chem. Pharm. Bull., 50,
169-174（ 2002）.
６）Maeda, H., Fukuyasu, Y., Yoshida, S., Fukuda,M., Saeki, K., Matsuno, H., Yamauchi, Y.,
Yoshida, K., Hirata, K. and Miyamoto, K.:
Angew. Chem. Int. Ed., 43, 2389-2391（2004）.
７）Maeda, H.: ぶんせき, 11, 643-644（ 2002）.
８）Maeda, H., Yamamoto, K., Nomura, Y.,
Kohno, I., Hafsi, L., Ueda, N., Yoshida, S.,
Fukuda, M., Fukuyasu, Y., Yamauchi, Y.
and Itoh, N.: J. Am. Chem. Soc., 127, 68-69（2005）.
９）Maeda, H., Yamamoto, K., Kohno, I., Hafsi,
L. and Itoh, N.: in preparation.
１０）Maeda, H., Matsuo, H., Ushida, M., Katayama,
K., Saeki, K. and Itoh, N.: Angew. Chem. Int.
Ed., 44, 2922-2925（2005）.
１１）Maeda, H., Katayama, K., Matsuno, H. and
Itoh, N.: J. Am. Chem. Soc., in press（ 2005）.

ている。
コリンエステラーゼアッセイ
アセチルチオコリンまたはブチリルチオコリンから酵素反応により発生するチオコリンをエルマ
ン試薬［5,5'-dithio-bis（2-nitrobenzoic acid）］
を用いて検出する吸光光度法が汎用されている。このアッセイでは、チオール／ジス
ルフィド交 換 反 応により発 生 する5-thio-2nitrobenzoic acidを412nmで検出する。
セレノプロテイン
遺伝子にコードされている２１番目のアミノ酸・セレノシステインを含むタンパク質の総称。
代表的なものとして、抗酸化酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼおよびチオレドキ
シンリダクターゼ、酵素活性は持たないが重要な生体機能を担っていると考えられている
セレノプロテインＰやＷなどがある。一般的なセレノプロテインは、セレノシステイン１残基を含むサブユニットから構成されているが、セレノプロテインＰのサブユニットはセレノシス
テイン１０残基を含む。セレンが抗酸化生体機能に深く関わること及び非常にレアなタン
パク質であることから、セレノプロテインは近年注目されている。

ならびにBESThioは、感度、特異性

P roducts
H2O2に特異的な蛍光プローブ

BES-H2O2【3'-O-Acethyl-6'-O-pentafluorobenzenesulfonyl-2',7'-difluorofluorescein】
BES-H2O2は、過酸化水素に高選択的に応答する蛍光プローブです。スーパーOには応答せず、
過酸化水素
オキシド、
ヒドロキシルラジカル及び一重項酸素（ 1O2 ）だけに応答します。

O
O

F
O

F
O

コードNo.

4

品

名BES-H2O2

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

F

O S
O2

F
F

C28H11F7O8S＝640.44

029-15381

F

F

規 格

容 量

希望納入価格（円）細胞生物学用1mg

25,000echnical Report
新規な方法による高効率cDNAサブトラクション
和光純薬工業株式会社 ゲノム研究所

林田

幸信

機能、性質の異なる細胞または組に発現している遺伝子、例えばハウス

Wakoは、cDNA Libraryから調製し織間においては、発現量の異なる遺キーピング遺伝子などの混入が多く、たTester及びDriver cDNAを用いて、伝子が存在しており、それらは細胞・高効率にTester特異的に発現してい双 方の細 胞・組 織に共 通に発 現して組織の機能において重要な役割を果る遺伝子を濃縮することはできません

いる遺伝子同士をハイブリッド形成させ、たしています。このような遺伝子を取でした。また、操作が煩雑で作業工

二 本 鎖 特 異 的 DNA分 解 酵 素である

得することは、細胞・組織の機能や発程が多く、時間と高度なテクニックがDuplex-specific nucleaseによって、そ現機構の解明などに有用です。

要求されていました。

のハイブリッドcDNAを分解した後、cDNA Subtraction法は、細胞・

現在、市販されているcDNA Sub-

ハイブリッド形成せずに残ったTester

組織特異的に発現する遺伝子を同定

tractionキットも、数回の長時間にわ

由 来 一 本 鎖 c D N Aを増 幅し二 本 鎖する極めて効果的な手法の一つで、たるハイブリダイゼーションが必要であり、cDNAとします。その後、主として残これまでに、ハイドロキシアパタイト・ク

その作製に4日を要します。特に、ベク

存 するD r i v e r 由 来 一 本 鎖 c D N Aを

ロマトグラフィー法、アビジン・ビオチン

ター配列の影響によりcDNA Library

ExonucleaseⅠによって分解除去す

結合法、ラテックス・ビーズまたはカラをスタート材料として用いることができる方法です。高い効率で、Tester特ムなどを用いたオリゴ（ dT ）固相法、ないため、毎回、mRNAからTester

異的に発現する遺伝子由来のcDNA

アビジン・ビオチン・磁気ビーズ法などの及びDriver cDNAを準備する必要のみを濃縮することができます。例えば、方法が報告されています。上記方法がありました。

がん細胞・組織の特異的な機能、性はハイブリッド形成した二本鎖cDNA

cDNA Subtraction法以外に細胞・質を解 析したい 場 合には 、 Tester

またはRNA-DNAハイブリッドと分離し、組織特異的に発現する遺伝子を同定

c D N Aをがん 細 胞・組 織 、 D r i v e r

Tester特異的に発現している遺伝子する方法としてDifferential display

cDNAを正常細胞・組織から調製して、を濃縮します。また、これらの方法は法やcDNAをスポットしたDNAチップ（マ

がん細胞・組織特異的に発現している

いずれも物 理 的 結 合または吸 着を利イクロアレイ）があります。Differential

遺伝子由来cDNAを濃縮することがで用しており、Testerに特異的に発現

display法は高発現なmRNAばかりがきます。DsDD cDNA Subtraction Kit

している遺伝子由来の一本鎖RNAま

増幅し、偽陽性バンドが多く現れるとWakoは、cDNA Libraryを材料として用

たはcDNAとハイブリッド形成した二本いう問題点があり、また、時間と労力いることができ、全工程を2日で行うこ鎖cDNAまたはRNA-DNAハイブリッ

を必 要とします 。 一 方 、 D N Aチップとができる画期的な技法です。

ドとを分離します。しかしこれらを厳はチップやハイブリダイゼーション、標

そこで我々はヒト肝 臓 がん由 来 の密に分離することはできず、ハイブリッ

識プローブによる影響が大きく、期待

HepG2細胞及び、ヒト正常肝臓組織ド形成した二本鎖cDNAまたはRNA-していた程の結 果が出ていないのが由 来 の c D N Aライブラリーを用いてDNAハイブリッドが混在してしまうとい

現状です。

DsDD

cDNA

Subtraction

Kit

う問題がありました。その結果、上記

DsDD（ Duplex-specific Direct

Wakoによるサブトラクションを行い、高方法では、Tester及びDriver両方

Digestion）cDNA Subtraction Kit

発現ハウスキーピング遺伝子である

HepG2
GAPDH
AFP

正常肝臓組織
GAPDH
AFP

Subtracted cDNA
GAPDH
AFP

100bp
Step Ladder←1,500bp←1,000bp

931bp→
859bp→←500bpGAPDH : 859bp
AFP : 931bp

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

5

Tester側のライブラリー

Driver側のライブラリー
AAAAA

5
3

DNA増幅（PCRなど）

AAAAA 3
TTTTT 5

5
3

AAAAA 3
TTTTT 55

AAAAA 3

5

AAAAA 3

3

TTTTT

5

3

TTTTT

5

AAAAA

3

Primer 3
DSNで分解

AAAAA
TTTTT

5
3
5
3

AAAAA
TTTTT

5
3

3
ーPー5
3
ーPー5

AAAAA
TTTTT

特異的
遺伝子

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

3
ーPー5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
ーPー5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

Tester ss cDNAの調製

AAAAA
TTTTT

3
ーPー5
3
ーPー5

AAAAA
TTTTT

5
3

5
3

AAAAA 3
TTTTT 55

AAAAA 3

5

AAAAA 3

3

TTTTT

5

3

TTTTT

5

AAAAA
TTTTT

3
5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

特異的
遺伝子

AAAAA
TTTTT

5
3

3
5

5

AAAAA 3

5

AAAAA 3

3

TTTTT

5

3

TTTTT

5

3
5

特異的
遺伝子

Exonuclease I処理

制限酵素処理

5
3

AAAAA
TTTTT

3
ーPー5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
ーPー5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

5

AAAAA

3

5

AAAAA

3

AAAAA

AAAAA 3
TTTTT 5

特異的
遺伝子

ライブラリーから増幅したDriver dsDNA

Lambda Exonuclease処理

5

5
3

5
3

Driver ds cDNAの調製ライブラリーから増幅したTester dsDNA

53

3DNA増幅（PCR）

AAAAA
TTTTT

AAAAA
TTTTT

3
5

3
5

5
3

5
3

TTTTT
AAAAA

5

Primer 4

Primer 2（りん酸化）

特異的
遺伝子

二本鎖特異的DNA分解酵素処理（DSN）
5

cDNA

3

5
3

DNA増幅（PCRなど）

Primer １

3
5

AAAAA

5

特異的
遺伝子

TTTTT

3

5
3

AAAAA 3
TTTTT 5

5
3

AAAAA 3
TTTTT 5

1：200

5

AAAAA 3

5

AAAAA 3

3

TTTTT

5

3

TTTTT

5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

5
3

AAAAA
TTTTT

3
5

Subtracted cDNA

熱変性後、ハイブリダイゼーション（68℃）

DsDD cDNA Subtraction Kit Wakoの原理

glyceraldehyde-3-phosphate

正常肝臓組織cDNA（Driver cDNA）、

きますが、Subtracted cDNAでは確d e h y d r o g e n a s e（ G A P D H ）と及びSubtracted cDNAを、それぞ認できません。一方、HepG2特異的

HepG2細胞で特異的に発現している

れ1ngを鋳型としてDNA増幅し、電発 現 遺 伝 子であるA F Pは、 正 常 肝alpha-fetoprotein（ AFP ）遺伝子を気泳動で確認しました。

臓組織cDNAでは増幅が確認できま

用いて、Subtracted cDNAの評価を行いました。
HepG2 cDNA（Tester cDNA）、

6

高発現ハウスキーピング遺伝子であせんが、Subtracted cDNAにおいるGAPDHは、HepG2 cDNA及び、てはHepG2 cDNAと同程度の増幅

正常肝臓組織cDNAで増幅が確認でが 認 められます 。またリアルタイム

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

PCRによりHepG2 cDNAとSubtractedに発現している遺伝子はサブトラクトされ、cDNAのGAPDH及びAFPの増幅量

HepG2に特異的に発現している遺伝を比較すると、Subtracted cDNA子を効率よく濃縮できていることが確認

Tester： 機能、性質を解析したい組織まの G A P D H は 約 1 / 1 , 0 0 0に 減 少 、できます。DsDD cDNA Subtraction

たは細胞、疾患組織・細胞などの場合がAFPはサブトラクト前後で変化があり

Kit Wakoは疾患関連遺伝子の探索、ませんでした。これらの 結 果から、細胞誘導による遺伝子発現変動、トDriver： Tester特異的機能、性質以外

DsDD cDNA Subtraction Kit Wako

ランスジェニックやノックアウトマウスのはほぼ同様の形態を示すものが理想であり、によって得られたSubtracted cDNA

遺伝子改変による発現変動など、多多く、今回の実験例では肝臓がん細胞を選択している。

今回の実験例では正常肝臓組織を選択しくの研究分野での使用が考えられます。

は、HepG2及び正常肝臓組織に共通ている。

P roducts
和光純薬の新規方法によるサブトラクションキット
DsDD cDNA サブトラクションキット ワコー
Tester cDNAがそのままの形状で取得できます。
特

長

内

容

●cDNA Libraryから作製が可能●Lambda Exonuclease 5μr×1本●Tester及びDriverの優れた選●10×Lambda Exonuclease Buffer
25μr×1本択性●Duplex-specific nucleaseによ●Exonuclease I

5μr×1本

●10×Exonuclease I Buffer●4×Hybridization Buffer

25μr×1本

25μr×1本る2本鎖DNAの除去法を採用● 操 作が 簡 便であり、作 業 工 程が●Duplex-specific nuclease
5μr×1本

少なく2日で終了●2×Duplex-specific nuclease
Buffer
コードNo.

品

294-62001

DsDD cDNA Subtraction Kit Wako

●Ethachinmate

50μr×1本●Stop Solution

50μr×1本●3mol/r Sodium Acetate, pH 5.2
200μr×1本

25μr×1本

名

規 格

容 量

希望納入価格（円）遺伝子研究用5回用98,000

関連商品
コードNo.
574-98041

290-61501
580-69991
294-61401
043-29291
311-90151
052-07221
546-01651
312-01193
313-90035
314-90261
315-90051
316-90101

品

名［メーカー］TOPOTAQ DNA Polymerase［ Fidelity Systems, Inc.］
Lambda Exonuclease
Duplex-specific nuclease（50 Kunitz-unit）［ Evrogen］
Exonuclease I
dNTP Mixture
Phenol/ Chloroform/ Isoamyl Alcohol（25:24:1） ［（株）ニッポンジーン］
Ethanol（99.5）
100bp DNA Step Ladder（100-1.5kbp）［ Wako Chemicals USA］
Agarose S［（株）ニッポンジーン］
50×TAE［（株）ニッポンジーン］
6×Loading Buffer Triple Dye［（株）ニッポンジーン］
Ethidium Bromide Solution［（株）ニッポンジーン］
Distilled Water, Deionized, Sterile［（株）ニッポンジーン］

規 格（メーカーコード）（T016）

容 量
希望納入価格（円）100units
25,000

遺伝子研究用1,000units（EA001）1set

遺伝子研究用4,000units

分子生物学用

0.2mr

ー

250mr

分子生物学用

100mr

ー

30μg

ー

100g

ー

500mr

ー

1mr×3

ー

10mr

ー

100mr

14,00077,40015,0009,000
15,0001,800
14,00012,000
9,000
2,500
9,000
4,000

正常cDNAライブラリーは当社取扱いのBioChain社にて取扱っております。

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

7

echnical Report
カチオン化マトリックスを用いるガングリオシドの質量分析
科学技術振興機構，CREST
大阪府立母子保健総合医療センター研究所

田尻
和田

道子
芳直

ガングリオシドはシアル酸を含むスフ

ノ、ジ、トリ）を意味し、a、b、cはガ

一方、正イオンモードで測定した場

インゴ糖脂質の総称である。ガングリオ

ングリオシド基本骨格の還元性側ガラ合は試料に含まれるNaやKのために、シドはおもに細胞表面に存在し、細胞クトースに結合するシアル酸残基の数Na付加イオンやK付加イオンが観測され、表 面の陰 性 電 荷に寄 与している。細によって分類される（図１）。

やや複雑なマススペクトルとなることが多い。陰性電荷をもつので負イオンモー

胞識別および細胞基質相互作用の関
シアル酸含有分子の質量分析（MS）
は、与、EGF（上皮増殖因子）、NGF（神ドが使われることも多く、その場 合には主に[ M - H ]−が観 測されシンプルな

経成長因子 ）など各種増殖因子受容マトリックス支援レーザー脱離イオン化

体 機 能の修 飾 、 神 経 細 胞の突 起 進（matrix-assisted laser desorption/

マススペクトルが得られるが、感度は展作用、コレラ毒素、ボツリヌス毒素、

ionization; MALDI）法あるいはエレよくない。

破傷風毒素など細胞毒素の受容体分

クトロスプレーイオン化（ electrospray

子、がん化や老化に関連する分子な

ionization; ESI）法により行われている

今 回はM A L D I 正イオン測 定におど多彩な生理活性が知られる。

が、シアル酸との結合が不安定で、

いて、使用するマトリックスDHB（ 2,5-

イオン化のために与えられるエネルギー

dihydroxybenzoic acid ）をナトリウ

GM2、GMl、GDla、GTlbなどと略によって脱離を起こしやすいため、比ム塩あるいはリチウム塩とすることで得

記される
（L．
Svennerholmの命名法）。

較的難しい。しかし、Naなどのアルカられる効 果を、シアル酸 含 有 糖 脂 質

Gはガングリオシド基本骨格（ Galβ1→

リ金 属によってある程 度はイオン化にであるガングリオシドについて検討した。

3GalNAcβ1→4Galβ1→4GIcβ1→1Cer）、伴う開裂が抑えられることが知られて試料はガングリオシドGM3（ 18,2 ）とM、D、Tは含まれるシアル酸の数（モいる。

個々のガングリオシドはしばしばGM3、ガングリオシドGD1aを用い、それぞれ50%メタノールに溶解し、50pmol/μLにした。マトリックスにはDHB（10mg/mL）

GM1

AcHN

O

OH
O
OH

HO
AcHN

OH
O

O
AcHN

HO
HOO
OH
O
HO

DHBリチウム（ 10mg/mL）の９：１混合

HO

O
OH HOO
HO
O
AcHN
HO

GM3

物を用い、DHB単独、あるいはDHB
O
OH
O

O

OH

O
O
HO

OH
O

Ceramide

HNにNaClを0.02mg/mLになるように加mえたマトリックス溶液の場合と比較した。

O
n

OH

溶媒には30%アセトニトリル0.1%トリフ

OH
m=0, 1, 2
n=1, 2GD1b

ルオロ酢酸を用いた。
マトリックス溶液と試料溶液を１：１に

６００

８００

１０００

１２００

[M-H2O+H]+[M-H2O+Na]+[M-NeuAc+Na]+[M-H2O-NeuAc+H]+

relative abundance[M-H2O+H]+[M-H2O+Na]+[M+Na]+[M-H+2Na]+[M-NeuAc+Na]+[M-H2O-NeuAc+H]+

relative abundance[M+Na]+

図1．ガングリオシドの構造

８００

６００

６００

１２００

[M-H2O+H]+[M-H2O-NeuAc+H]+[M-NeuAc+Li]+

relative abundance[M-H+2Na]+
１０００

６００

８００

１０００

m/z

m/z

図2．ガングリオシドGM3のマススペクトル

8

１２００

[M+Li]+[M-H2O+H]+[M+Na]+[M-H2O+Na]+[M-NeuAc+Na]

８００

１０００

m/z

+

[M-H2O-NeuAc+H]+

relative abundancem/z[M-H+2Na]+

HOOC
OH
O

HO

とDHBナトリウム（ 10mg/mL）
または

GM2
HO

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）[M-H+2Li]+

GD1a

１２００

混合し、Voyager DE Pro飛行時間型て得られた２つのマススペクトルのベーナトリウムの場合は[M-H+2Na]+、[M-

質量分析計を用いてリフレクトロン正イ

スピークの m/z 値を比 較 することで、

2H+3Na]+などシアル酸のカルボキシル

オンモードで測定した。

観測されたイオンがアルカリ金属付加

水素（COOH）がNaに置換（COONa）

イオンであることも容易にわかる。

したイオンが観測されたが、DHBリチ

ガングリオシドGM3の測定結果を図

ウムを用いた場合にはこのような置換２に示す。

ガングリオシドGD1aをカチオン化マト

DHBによる測定では[M-NeuAc+Na]+をベースピークとし、[M+Na]+が弱

イオンはほとんど観測されなかった。

リックスを用いて測定した結果を図３に示す。

再現性のよいMALDI測定を可能に

GM3の場合と同様にDHBナトリウム、く観測された。しかし、 試 料にもともとしたカチオン化マトリックスは、今後、含まれているNaの量に依存してこれら

DHBリチウム共に[M+Na]+、[M+Li]+

実試料の測定に役立つものと期待でのイオン相対強度比が変化し、再現が 強く観 測され 、シアル酸 脱 離イオン

きる。

性はよくなかった。NaClを添加した場[M-NeuAc+Na]+、[M-NeuAc+Li]+は合はシアル酸 脱 離は抑 制されたが、少ない。さらに興味深いことに、DHB

測定間でNa付加イオンの相対強度に[LH+Na]+になった。また、 [M+Na] +に対 する[M-NeuAc+Na]+の相対強度比でわか

１４００

１２００

１６００
m/z

るように、シアル酸脱離も抑制された。

DHBナトリウムと同様に[M+Li]+がベースピークとして観測され、[M+Li]+に対する[M-NeuAc+Li]+の相対強度比は小さく、シアル酸 脱 離の抑 制 効 果がみられた。また、DHBナトリウムによる[LH-NeuAc+Li]+[M-NeuAc+Li]+の 混 合 マトリックスを用 い た 場 合も[M-2NeuAc+Li]+

relative abundanceであった。DHB/DHBリチウム（ 9:1 ）２０００[LH+Li]+

また、マススペクトルの再現性は良好

１８００

１２００

１４００

１６００
m/z

[M+Li]+の強度が改善し、高感度測定が可能[M-H+2Li]+

リックスを用いた場合には、[M+Na]+[LH-NeuAc+Na]+[M-NeuAc+Na]+

DHB/DHBナトリウム（ 9:1 ）の混合マト[M-2NeuAc+Na]+

relative abundance

検出できなくなった。これらに対し、[M-H+2Na]+[M-2H+3Na]+

Naの添加量が多い場合にはイオンが[M+Na]+

ついての再現性はよくなかった。また、

１８００

２０００

図3．ガングリオシドGD1aのマススペクトル測定とDHBリチウムによる測定によっ

M=GD1a(C20:1), LH=GD1a(C18:1)

P roducts
シアル酸含有糖鎖・糖脂質のMALDI-TOFMS分析に
カチオン化マトリックス
本品は、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）法のマトリックスとして汎用されている2,5-Dihydroxybenzoic Acid
（DHB）のナトリウム塩及びリチウム塩です。カチオン化剤としてDHBと9:1の割合で混合すると、シアル酸含有糖鎖・糖脂質サンプ
ルにおいてマススペクトルのイオン強度の改善やシアル酸脱離の抑制などの効果が得られると報告されています。
コードNo.

品

規 格

容 量

希望納入価格（円）041-29471

2,5-Dihydroxybenzoic Acid Sodium Salt【DHB Sodium Salt】

名

プロテオーム研究用

50mg

15,000048-29481

2,5-Dihydroxybenzoic Acid Lithium Salt【DHB Lithium Salt】

プロテオーム研究用

50mg

15,000

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

9

echnical Report
食品に残留する農薬などのHPLC分析における前処理
エビ試料中のテトラサイクリン系抗菌剤のHPLC分析
和光純薬工業株式会社

試薬研究所

吉田

貴三子

近年、食品に残留する農薬、飼料

しかし、スチレンジビニルベンゼン

添加物または動物用医薬品の成分が共重合体ミニカラムで前処理した試料

社会的に問題となっており、厚生労働

液はT C 類の回 収は良 好であるが 、試料の前処理は公定法の 魚介類

省より試験方法が示されている（ 通知

試料によっては不純物を十分除去できの場合 を参考として、固相抽出条件

試験法 ）1 ）。本試験法によれば、
テトラ

ず、TC類の検出に妨害となる場合がを図1のように設定した。分析カラムはサイクリン系抗菌剤（オキシテトラサイある。

WakopakR Navi C18-5、4.6×150mm

として残留TC類の測定を検討したので紹介する。

これらの不純物とTC類の分離には（ODSカラム）を、前処理用スチレンジ

C T C 、テトラサイクリン： T C 、 以 下

弱 酸 性カチオン交 換 充てん剤を充てビニルベンゼン共 重 合 体ミニカラム相T C 類 ）の分 析は、 抽 出 試 料の前 処んしたイオン交換カラムが効果的であ当品はPresepR-C RPP（short）を使理にスチレンジビニルベンゼン共重合り2 ）、今回、新たに開発したポリマー

用した。

クリン：OTC、クロルテトラサイクリン：

R

体ミニカラムを用いた固 相 抽出による系イオン交換カラムPresep CM（弱酸

固相抽出カラムのTC類の回収率は前処理とHPLC-蛍光検出法が採用さ性カチオン交換カラム）を、公定法の混合標準液とエビ試料をホモジナイズれている。

前処理に追加して用い、エビを試料処理した抽出試料に標準品を添加しPresepR-C RPP（short） コンデｨショニング①CH3OH 10mR
②H2O 10mR③飽和EDTA･2Na 5mR*1 抽出試料（１）

洗浄：①H2O 10mR*2

溶出：CH3OH 5mR
PresepR CM

洗浄：CH3OH 5mR（２）

コンデｨショニング
①CH3OH 10mR
②0.1mol/R HCｌ10mR③H2O 20mR④CH3OH 5mR

溶出：CH3OH/0.1mol/R HCｌ=1/1 5mR
N2ガス気流下で２mR以下に濃縮
H2Oで2mRにメスアップ
HPLC 30μR注入（３）*1 抽出試料
エビ5g/30mr EDTA含有くえん酸Buffer ホモジナイズ（ビー
ズショッカー 1min.）。
遠心分離 3,000rpm 10min.、
上清を分離（1）。
残留物に20mr EDTA含有くえん酸Buffer添加、
5分間振
とう混和。
遠心分離 3,000rpm 10min.、
上清を分離（2）、
（ 1）
に合わ
せる。
ｎ-ヘキサン 20mr添加、
5分間振とう混和。
遠心分離 3,000rpm 10min. 水層を分離し抽出試料とする。
*2 公定法はCH3OH 10mrで溶出し濃縮後に1.36%りん酸一カリウム溶液1.0mrで再溶解して試験溶液とする。

（４）

Fig.1. 固相抽出条件
Table 1. 標準液回収率：PresepR-C RPP(Short)
1
2
3
4
X
SD
CV(%)

OTC
99.6
102.1
105.2
100.8
101.9
2.4
2.4

TC
97.2
100.8
102.3
99.0
99.8
2.2
2.2

CTC
96.2
98.5
100.0
97.5
98.0
1.6
1.6

（５）

* 標準液試料：
EDTA含有くえん酸Buffer 50mRに標準品
各1μgを添加（６）

Table 2. 標準液回収率：PresepR CM
1
2
3
4
X
SD
CV(%)

OTC
96.2
95.1
97.9
97.8
96.7
1.4
1.4

TC
89.3
91.3
89.9
91.5
90.5
1.1
1.2

CTC
91.2
94.0
93.3
94.5
93.2
1.4
1.5

* 標準液試料：

CH3OH 5mRに標準品各1μgを添加

Fig.2. (1) Presep -C RPP(short)で処理したエビ試料ブランク 15μR
R(2) PresepR-C RPP(short)で処理したエビ試料標準添加 15μR
(3) PresepR CMで処理したエビ試料ブランク 30μR
(4) PresepR CMで処理したエビ試料標準添加 30μR
(5) 標準液 1μg/mR 15μR
(6) 標準液 0.2μg/mR 15μR

Table 3. エビ抽出液の添加回収率
1
2
3
4
X
SD
CV(%)

10

OTC
96.9
97.1
94.8
95.7
96.1
1.1
1.2

TC
86.8
86.9
89.8
89.9
88.3
1.7
2.0

CTC
86.7
85.7
88.3
90.7
87.9
2.2
2.5

* エビ抽出試料に標準品各1μgを添加〈HPLC conditions〉
Column : WakopakR Navi C18-5,
4.6×150mm
Eluent : CH3OH/Imidazole Buffer=25/75
Flow rate : 1.0mR/min. at 40℃
Detection : FLD Ex.380nm, Em.520nm
Sample : 1. Oxytetracycline
2. Tetracycline
3. Chlortetracycline

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

て測定した。その結果を表1〜3に示において固 相 抽 出カラムの果たす 役

one step増えるものの 分 析 精 度は大したが、いずれの場合も良好な結果

割は大きく、 O D Sと同 様に逆 相 的な幅に改 善されている。

Rであった。その時のクロマトグラムを図

保持挙動を示すPresep -C RPP（short）

2（ 1）〜（6）に示した。

には、高極性不純物の除去効果はあ

エビ抽出試料をPresepR-C RPP（short）

るが、目的薬物と極性が近い不純物

のみで前処理した場合（ 1 ）と、さらには除去できず、蛍光検出法でも多数

PresepR CMで処理をした場合（3）、のの妨 害ピークの溶出が認められた。

R

クロマトグラムの比較から、Presep CM

それに加えてPresepR CMの使用はスで処理した場合は、クリーンナップ効

チレンジビニルベンゼン共重合体ミニカ

果が顕著であった。

ラムで除去できなかった妨害物の除去

以上、エビ試料中のTC類の分析

本分析例が何かの参考になれば幸いである。

〔参考資料〕
１）「食品に残留する農薬、飼料添加物又は動物用医薬品の成分である物質の試験法について」（平成１７年１月２４日付け食安発第0124001号厚生労働省医薬食品局食品安全部長通知）.
２）和光純薬時報, 71（ 1）, 5（ 2003）.

に大きな効 果があり、 前 処 理 操 作はP roducts
固相抽出カラム
PresepR CMは、シリンジ型カラム（6mr）へ、カルボキシメチル基が修飾されたポリマー系イオン交換樹脂を充てんした固相抽出カラムです。PresepR-C RPP（Short）はカートリッジ型カラムへ、ポリマー系親水性逆相充てん剤を充てんした固相抽出カラムです。
コードNo.

品

名

規 格

容量

希望納入価格（円）298-61801 PresepR CM（弱酸性カチオン） 試料前処理用 10個×5
297-41851 PresepR-C RPP（Short）試料前処理用 10個×5

品

名

カラムサイズカラムタイプ

記号

デュポン

ケGD

ウォーターズ

ケGW

規 格

容量

WakopakR
Navi C18-5

4.6φ×150mm

希望納入価格（円）コードNo.

品

近日発売

294-61901 PresepR S（強酸性カチオン） 試料前処理用 10個×5293-41951 PresepR-C RPP（Long）試料前処理用 10個×3

近日発売

39,000

希望納入価格（円）45,000

関連商品
コードNo.

品

名

規 格

容量

292-61701 PresepR DEA（弱塩基性アニオン） 試料前処理用 10個×5
296-61601 PresepRQA（弱塩基性アニオン） 試料前処理用 10個×5

近日発売

名

希望納入価格（円）
近日発売

29,000Information
N/400ポリビニル硫酸カリウム（PVSK）溶液の商品変更について
このたび当社では下記理由によりPVSK溶液の旧来商品を廃止し、新たな処方に変更の上、商品化することに致しました｡
ご使用願っておりますお客様におかれましては何卒ご事情ご理解の上、新商品を引き続きご利用下さいます様お願い申し上げます｡

記〔新処方製品〕
コードNo.
164-21655

品

名規

ポリビニル硫酸カリウム滴定液（N/400）

格

コロイド滴定用

容 量

希望納入価格（円）

500mr

2,300

〔変更の経緯とその理由〕
従来ファクター値算出に使用する基準原末試薬PVSK中の硫酸塩を｢比濁法｣で測定し純度を算出しておりましたが、「イオンクロマト法」による不純物測定に変更致しました｡
これまで当社従来製品を使用しておられたユーザーにおかれましては、今回のリニューアル製品で同様の試験を実施された場合、その試験結果が約10%程度低くなりますのでご注意下さいますようお願い致します｡
なお今後、最新技術による製品評価に努める所存ですので、宜しくご指導賜りますよう重ねてお願い申し上げます｡
以上

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

11

ー②

蟾酥（センソ）松田

京都薬科大学久司

センソ（ 蟾 酥 ）はシナヒキガ エ ル

頃、外皮末をBufones exsiccatiとし

そ の 他 、インドール 型アルカロイド

Bufo bufo gargarizans CANTOR又はヘリグロヒキガエル B. melanostictusて処方集に収載し、水腫の治療に用（ serotonin、bufotenine、bufoteni-

いられていた。

dineなど）を含む。なお、これら強心

SCHNEIDERの毒腺の分泌物を集めてセンソの詳しい製法は不明であるが、 性ステロイド成分は17位に6員環の不乾燥したものであり、産地は中国（山文献によると6〜8月頃 、ヒキガエルを飽和ラクトンを有し、bufadienolide類に分類される。

東省、河北省、江蘇省、浙江省など）

集め、竹製のすのこに入れて泥土をである。センソには止血や傷口の痛

洗い銅製または牛角製の採取具（ 幅みを止める作用があるとされ、また、の広いピンセット状の器具 ）で背上のセンソの薬理作用として、実験的適当量を服用することにより、強心作

隆起した分泌腺をつかみ、分泌したに強 心 作 用、局 所 麻 酔 作 用及び抗用があり、動悸、息切れに用いられ乳液を集めて篩いでろ過して、夾雑てきた。

物を除き、円形の型に流し込んで風cinobufaginなどのbufadienolide類

乾するとある。

は実験動物の心収縮力を増加させ、ふる炎症作用が報告されている。Bufalin、が ま『神農本草経』の下品に「蝦蟆」がちょうけん収載されており、「邪気を治し、
よう しゅ

堅・

心仕事量を増加させる。実験的虚血

性状は黒褐色で円盤状をした塊状

いん そう

血を破る。 癰 腫・陰 瘡 。これを服 せ物であり、 通 常ブフォケーキともいう。 性心不全に対して強心作用を示す。

ば熱病を患わず」と記されている。『名中国山東省産のセンソは、径約8〜

せん じょBufadienolide類は心筋膜Na +, K +−医別録』では一名を「蟾蜍」とし、『本10cm、厚さ1〜2cmの円盤で、底面

A T P a s e 阻 害 活 性があり、ジギタリ

草拾遺』では蝦蟆と蟾蜍を別物としてがほぼ平坦、上面はやや盛り上がっ

スなどに含まれるcardenolide型 強いる。蝦蟆と蟾蜍が同一物か否かにている（東酥、団蟾酥）。１個の重量

心 配 糖 体と同 様の作 用機 序で強 心

ついては諸説があるが、一類のものとは80〜150gである。また小型で棋子

作 用を示 すものと考えられている。

されており、初めは蝦蟆（蟾蜍）をそのに似たもの（ 杜 酥 、棋 子 酥 ）もある。

Bufadienolide類は吸収がすみやか

まま陰干しして薬用としたらしいが、やにおいはなく、味は初め苦く刺激性で、 で排泄も早く、cardenolide型強心

がてその皮腺の分泌物を蟾酥として用後に持続性の麻痺感を生じるが、安配糖体に比べ蓄積性が少ないといわいるようになったとされる。西欧におい

易に粉末を直接口中に入れると、麻れている。センソには強い局所麻酔痺して呼吸困難になるので厳重注意

作用があり、特にbufalinに顕著な作すべきである。

用が認められている。また、センソのてもその薬効が知られており、18世紀

センソには強心性ステロイド成分（ブ

鎮痛・抗炎症作用に関して、毛細血

フォステロイド）
として、resibufogenin、 管透過性亢進抑制作用や酢酸ライジ
cinobufagin、bufalin、bufotalin、

ング抑制作用などが報告されている他、

cinobufotalinなど及びこれらの3位に解熱作用、赤血球膜安定化作用、アミノ酸（ suberylarginineなど）が睡眠延長作用が知られている。その他、

結 合した形での存 在も知られている。 bufadienolide類にはヒト骨髄性白血OOO

日本の民間薬療法本『広恵済急法』（1790年）より

R2

R2
O

R2
H
OAc
OAc

HO
NH2

serotonin

センソ

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

R1

R1
bufalin : H
bufotalin : H
telocinobufagin : OH
gamabufotalin : H

R2
H
H
H
OH

R3
H
OAc
H
H

–O

HO
N
H

12

OH
HO

R1

R1
resibufogenin : H
cinobufagin : H
cinobufotalin : OH

R3
H

H

HO

O

N
H

bufotenine

N

CH3
CH3

+

N
H

bufotenidine

N(CH3)3

ー②を江戸で広めんと口上を工夫、浅草

病細胞に対して強力なアポトーシス誘

cinobufaginおよびresibufogeninの導作用と分化誘導作用が明らかにさ含量の合計が5.8%以上となっている。 寺の境内はじめ方々で売り始め大当

れており、Na + , K +−ATPase阻害活たりしたと伝えられている。

性との相関性が報告されている。また、 あとがき 『ガマの油』について

その時代の処方については不明で

センソには小 腸 輸 送 能 低 下 、 子 宮

シナヒキガエルやヘリグロヒキガエ

あるが、「・・・・捕えましたるこのガマ

運 動 能 増 強などの 作 用が 知られて

ルほか、世界各地の各種ヒキガエル

を四面鏡張りの箱に入れたるときは、

おり、インドール型アルカロイドbufote-の皮 膚 分 泌 物 、 特に耳 下 腺からのガマはおのが 姿の鏡にうつるをみてnineには幻 覚 作 用があることが明ら

分泌物にも同様または類似の成分を驚き、タラーリ、タラーリと油 汗を流かになっている。

含んでおり、分泌液が目に入るとしみ

す。・
・
・
・
・トローリ、トローリと煮つめ

センソの臨 床 的応用としては強心たり、犬がなめると舌がしびれたりす

ましたるが、この陣中膏ガマの油、利 尿 、 鎮 痛 、 解 毒 、 消 腫の目的でるという。現在、本邦のヒキガエルにこのガマの油の効能は、ひび割れに

内用または外用として用いられる。六は市場性がないが、ヒキガエルというあかぎれ、しもやけの妙薬、まだある、神丸などに1日分量2〜5mg配合され、 と筑波の『ガマの油』が思い浮かべら大の男が七転八倒する虫歯の痛みも動悸や息切れなどに効果がある。本れる。伝説によると筑波山の中腹にピタリと止まる。・・・・・・そればかりか

薬又はその毒成分を含有する製剤はある中禅寺の住職・光誉上人が大坂

刃物の切れ味を止める。・
・
・
・
・
・
・、ガ

劇 薬 であるが 、「 1日分 量 がセンソ

夏の陣に徳川方として従軍、戦傷者

マの油の効能がわかったら遠慮は御5mg以下を含有するもの及び1錠又の手当てに使った陣中薬が良く効い

無用、どんどん買って行きやれ 。」とは1カプセル中、デスアセチルブホタて評判となり、この光誉上人の顔がの有名な口上（ 地方によって少し違う

リンとして、ブホステロイド0.1mg以下

なんとガマに似ていたところから ガマ

らしい ）から察すると、センソが配合を含有するものを除く」ことになってい上人の油薬 としてもてはやされ、後々され、止血や鎮痛などの効果があっる。中国薬典には日本の3倍以上の『ガマの油』として有名になったものとたのではと思うのである。なお、戦前用法が記載されており、中国薬典記

言われている。すなわち、『ガマの油』にはセンソ入り『ガマの油』が販売さ載の用量で使用する場合には注意がの名前の由来は顔がガマに似ていたれていたとのことであるが、現在ではためで薬効成分としてのガマや蟾酥（セセンソ入りの『ガマの油』は販売されンソ）が配合されていたこととは無関ていないとのことである。ちょっと残念

もとづく呈色反応による確認試験や液係なようである。光誉上人の死後70に思う。

体クロマトグラフ法によるブフォステロ〜80年たった頃、新治村永井に生ま必要と思われる。
日本薬局方ではブフォステロイドにイド含量が規定されており、bufalin、 れた兵助（ひょうすけ）が、『ガマの油』

P roducts
生薬試験用標準品
コードNo.

☞P.23
☞P.23
☞P.23

品

名

030-19491

Cinobufagin ＊038-13711

Cinobufagin Standard

187-01921

Resibufogenin ＊184-00951

Resibufogenin Standard

025-15241

Bufalin ＊025-10121

規 格

容 量

希望納入価格（円）

局方生薬試験用（成分含量測定用）

20mg

25,000

生薬試験用

20mg

18,500

局方生薬試験用（成分含量測定用、薄層クロマトグラフ用）

20mg

28,000

生薬試験用

20mg

19,600

局方生薬試験用（成分含量測定用）

20mg

30,000

Bufalin Standard

生薬試験用

20mg

24,000024-10691

Bufotalin Standard

生薬試験用

20mg

36,000035-13721

Cinobufotalin Standard

生薬試験用

20mg

33,300＊：第十四改正日本薬局方の品質規格試験に合格した標品です。

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

13

SERIES

Talking ofLAL
和光純薬工業株式会社

第60話

14

土谷

正和

エンドトキシン試験法への適応

これまでにも何度かエンドトキシン試てみましょう。減らすことができるのは、う。もし、検出しなければならないエ験法のバリデーションについて考えてその試験が不合格の場合に製品の安ンドトキシン濃度がPCの濃度より低い

きました。今回は、実際のエンドトキ

全性に問題が出るリスクの少ないもの

場合に、その濃度が検出できるかどうシン試 験に関して、 実 用的な方 法とです 。 N Cが不 合 格の場 合は使 用しかが心配というのであれば、PCの濃いう観点から考えてみたいと思います。

ている水の汚染かLAL試薬の汚染が、度を検 出したいエンドトキシン濃 度にエンドトキシン試験を行う最も大きなPCが不合格の場合はエンドトキシンの設定する方法もとれると思います。筆

目的は、その製品ロットが「エンドトキ

失活かLAL試薬の失活が、PPCが者のお奨めとしては、毎日1回のNCとシン試験法」に適合するかどうかです。

不合格の場合は試料の阻害が強いかPCの測定、PとPPCはn=2で測定す

しかし、目的をもう少し細かく分けて

LAL試薬の失活が、Pが不合格の場るというものです 。もちろん、 検 量 線

みると、ロットの合否の他に、試験結合は製 品の汚 染か 使 用している水まはそれ以前に確立されているという前果の信頼性、試料の性質のトレンド、

たはLAL試薬の汚染が考えられます。

提です。これは、筆者の局方へのチャ

試験の経済性などの要素が出てきます。

この中で最もリスクの少ないサンプル

レンジではありません。最低限証明し試験結果の信頼性に関しては、そのロッはNC、次にPCだと思います。これら

たいことを考えた場 合 、このような方トが 試 験に影 響を与えていないか 、のサンプルが不 合 格になる場 合は、法もあるのではないかという提案です。

使用した試薬に問題はないか、使用P P C 及び Pも不 合 格になる可 能 性が局方に従うのであれば、検量線の測したエンドトキシンの活性は確かかなど

高く、製品の安全性に影響する可能

定は避けられません。しかし、 検 量の点で問題がないことを確かめる必要性が低いと思われます。従って、どう

線3点以上の測定のタイミングについてがあります 。 試 料の性 質のトレンドは、してもサンプル数を減らさなければならは記 載がありませんので、 朝 一 番に

主にその製品の試験に対する影響のない場合には、NCとPCを減らすのが検 量 線を作 成して、その後のサンプ

動きを観察することにより、試験が無得策といえるでしょう。もちろん、局方

ルはPとPPCのみ測定という方法は受効になるリスクを予測し、事前に対応に対 応した試 験の場 合は、これらをけ入れられるかもしれません。筆者のするためのものです。試験の経済性は、省くことはできません。

提案から、さらにどうしてももう少し節できるだけ無駄な測定を省いてコスト

定量的な光学的方法の場合はどう約したいというのであれば、ゲル化法を低くすることです。この時、試験がでしょう。局方では試料溶液（Pに相当）、の時と同じ理由でNCとPCを省くのがうまくいっていることを説明できるだけ検量線の中点濃度のエンドトキシンをリスクが少ないと思います。

の測 定は残 す 必 要があります 。これ含む試料溶液（ PPCに相当）、3濃度試験法は、調べたい事項とリスクからのことを考慮しながら、どのような試

以 上のエンドトキシン溶 液（ 検 量 線にら必要な測定サンプルが決まってきます。

験方法が実際的なのか考えてみましょ相当 ）、エンドトキシン試験用水（ NC

もちろん、必要なサンプルすべてにつ

う。

に相当）
を測定することになっています。

いて測 定を行えば、 十 分なデータがゲル化法では、陰性対照（ NC ）、筆者が疑問に思うのは、日常の試験得られるでしょう。しかし、何とか楽を

陽性対照（PC）、陽性製品対照（PPC）、で必ず検量線の測定が必要かというして、安く物事を成し遂げたいという製品（P）の4種類が通常測定されます。

ことです。1987年に発行されたFDA

人間の願望は、技術の発展にとって

1）

NCはLAL試薬と使用する水の異常

ガイドライン では、保存検量線を認め必要なものだと思うのです。このあたを発見するため、PCは使用するエンており、日常の試験ではPC及びPPCりも考慮して、リスクが少なく経済的なドトキシンの活性が正常であることを確を測 定 することになっていました。 筆方法を提案していきたいものです。

かめるため、PPCは製品が試験を阻者もこの考え方には賛成で、各ロット

害していないか、Pは製品中のエンドのLALに対して検量線を一度確立しトキシン量が規 格 内であるかどうかをたら、日常試験ではPC及びPPCを測知るために測 定を行います 。ゲル化

定すれば、測定条件の有効性を確保

法の測定はこの4種類の試料の測定できると思うのです。PCの測定値がで十分に目的が達成できると考えられある範囲に入っていることが検量線のます。ここで日常の試験でさらにサン

有効性を示しているという考えは、理

プル数を減らすことができないか考え解しやすいと思うのですがいかがでしょ

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）〔参考文献〕
１）Guideline on Validation of the Limulus
Amebocyte Lysate Test as an End-product
Endotoxin Test for Human and Animal
Parenteral Drugs, Biological Products, andMedical Devices, Food and Drug Adm.
（1987）.

次回は、第61話「SLP試薬の応用（その3）」の予定です。

ew Products
シバヤギ社製 レビスシリーズ新製品

データR

レビス レジスチンｰマウス■ob/ob Mouse Insulin-Resistin測定

本キットは酵素免疫測定法を用いたサンドイッチ手法にMouse ID

Resistin

Insulin

6
84
92
97
98
42
71
77
96
97

12.1
4.99
5.80
5.30
8.12

1.20
4.10
2.05
2.68
1.20

mean
SD
SE

7.26
3.0
1.3

より、マウスレジスチンを高感度に測定するキットです｡微量な試料から短時間でマウスのレジスチンを測定できます。
6週令

特

長

●短時間（ 反応時間 2時間50分 ）●必要な試料はわずか10μr

１４週令●すべての試薬が溶液タイプ●高い精度（ CV値 5%以下 ）

キット構成
１枚

●標準レジスチン溶液（500ng/mr）

200μr

●緩衝液

60mr

●ビオチン結合抗レジスチン抗体

100μr●ペルオキシダーゼ・アビジン結合物

100μr●発色液TMB

12mr●反応停止液，１mol/r H2SO4

12mr●濃縮洗浄液（10×）

100mr

Insulin

6.36
4.27
2.75
4.72
4.13

3.42
3.91
4.11
4.58
2.57

4.44
1.3
0.58

3.72
0.77
0.34
濃度：ng/mR

2.25
1.2
0.54

※InsulinはレビスRインスリン-マウス-Tを用いて測定した。
5.0
Insulin（ng/mR）●抗体固相化プレート 96ウェル

Resistinr = 0.75
p < 0.05

4.0
3.0
2.0
1.0
0.0
0.0

2.0

4.0

6.0

8.0

10.0

12.0

14.0

Resistin（ng/mR）

Resistin-Insulin 相関図■KK-Mouse 測定
Sample：KK-Ay/TaJcl ♂，plasma（ヘパリン），n=2
Mouse ID

6週令

標準曲線例
１４週令

abs.450（⊿620）nm

2.0

1.5

Resistin

6
7
8
9
10
11
12
13
14

4.55
8.78
9.44
9.06
6.68

mean
SD

7.70
2.1

4.76
1.3
濃度：ng/mR

品

名

4.30
6.59
3.46
4.67

1.0
コードNo. メーカーコード
R

632-07141 AKRRS-011 Lbis Resistin-Mouse

0.5

容 量

希望納入価格（円）

96回用

62,000

容 量

希望納入価格（円）

関連商品
0.0

0

10

20
30
40
Resistin（ng/mR）

50

コードNo. メーカーコード

品

名634-01481 AKRIN-011T LbisR Insulin-Mouse-T 96回用

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

48,00015

ew Products
キットの種類●ヒトAβ（1-40）

アルツハイマー病は、神経細胞内に出現する神経原線
維変化と細胞外に出現する老人斑などの病変が特徴です。
Human
Aβ(1-40)

この老人斑の成分は、主にアミノ酸残基数が40または42（ 43）のβアミロイドペプチド（ Aβ）です。Aβ42は、Aβ40と比較

1

して凝集しやすい性質があり、アルツハイマー病の進行過程でAβ42の比率が増加すると報告されています 2）。

40
HRP標識BA27(Fab フラグメント)

BAN50

Absorbance at 450 nm

髄液、血漿などのAβの検出に
βアミロイドELISAキットワコー（ 4種類）

10
1
0.1
0.01
0.1

10

1,000

Std.濃度(pmol/R)

本キットは、武田薬品工業㈱で開発された非常に特異

感度：0.12（ pmol/r）
標準曲線範囲：1.0-100（ pmol/r）性の高い抗体を使用したサンドイッチELISA法により、脳組織はもちろんのこと、脳脊髄液や培養上清中のAβだけでなく、従来では困難であった血漿中のAβも測定できます。

●ヒトAβ（ 1-42 ）するキットと、ヒト、ラット及びマウスなどのAβ40及びAβ42を認識するキットがあります。
Human
Aβ(1-42)42HRP標識BC05（Fab フラグメント）

1

BAN50

Absorbance at 450 nm

キットは4種類あり、ヒトのAβ40及びAβ42を特異的に認識

10
1
0.1
0.01
0.1

10

1,000

Std.濃度(pmol/R)

感度：0.08（ pmol/r）
標準曲線範囲：1.0-100（ pmol/r）

Human/Rat (mouse)
Aβ40
28
11

40

HRP標識BA27(Fab フラグメント)

1

BNT77

特

Absorbance at 450 nm●ヒト/ラットAβ（ 40 ）
10
1
0.1
0.01
0.1

10

1,000

Std.濃度(pmol/R)

感度：0.25（ pmol/r）
標準曲線範囲：1.0-100（ pmol/r）

長●脳脊髄液、血漿、培養上清、組織抽出液などのAβ40●ヒト/ラットAβ（ 42 ）及びAβ42を高感度に定量できるの高いモノクローナル抗体4種類を使用①BAN50 ： AβN末端特異的

42

Human/Rat (mouse)
Aβ42②BNT77 ： Aβ11-28特異的28

11③BA27 ： Aβ40 C末端特異的
1④BC05 ： Aβ42 C末端特異的●ヒトAβ特異的検出キットとヒト及びラット（マウス）Aβ特異BNT77

的検出キットがある

16

HRP標識BC05（Fab フラグメント）

Absorbance at 450 nm●抗体は、武田薬品工業㈱で開発された、非常に特異性

10
1
0.1
0.01
0.1

10

1,000

Std.濃度(pmol/R)

感度：0.19（ pmol/r）
標準曲線範囲：1.0-100（ pmol/r）

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

ew Products
添加回収試験

特異性
抗原■血漿（×4）
添加量
測定値
理論値
キットの種類 （pmol/R）（pmol/R）（pmol/R）
ヒト
Aβ（1-40）
ヒト
Aβ（1-42）
ヒト/ラットAβ（40）
ヒト/ラット
Aβ
（42）

25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25

37.97
24.77
17.88
23.46
11.17
6.13
40.23
26.74
20.08
24.27
12.15
6.77

36.69
24.18
17.94
25.93
13.43
7.18
38.98
26.48
20.23
26.19
13.69
7.44

%
103.5
102.4
99.7
90.5
83.2
85.4
103.2
101.0
99.3
92.7
88.8
91.0

■髄液（×50）
添加量
測定値
理論値
キットの種類 （pmol/R）（pmol/R）（pmol/R）
ヒト
Aβ（1-40）
ヒト
Aβ（1-42）
ヒト/ラットAβ（40）
ヒト/ラット
Aβ
（42）

25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25

44.21
31.54
25.45
26.04
14.91
8.71
53.01
40.10
33.28
31.93
19.18
12.24

43.69
31.19
24.81
28.62
16.12
9.75
51.23
38.73
32.35
31.26
18.76
12.39

ヒト
Aβ
（1-42）
ヒト/ラットAβ（40）
ヒト/ラット
Aβ
（42）

29.43
15.74
9.13
28.25
12.97
6.25
33.01
18.03
10.57
30.18
13.93
6.98

≦0.1

≦0.1

137.0

0.2

100

7.2

≦0.1

132.0

〔参考文献〕
１） Suzuki, N., Cheung, T. T., Cai, X. D., Odaka, A., Otvos, L. Jr., Eckman,
C., Golde, T. E. and Younkin, S. G.: Science, 264, 1336（1994）.
２） Asami-Odaka, A., Ishibashi, Y., Kikuchi, T., Kitada, C. and Suzuki, N.:
Biochemistry, 34, 10272（ 1995）.
３） Fukumoto, H., Tomita, T., Matsunaga, H., Ishibashi, Y., Saido, T.C.
and Iwatsubo, T.: Neuroreport, 10, 2965（ 1999）.
４） Scheuner, D., Eckman, C., Jensen, M., Song, X., Citron, M., Suzuki, N.,
Bird, T. D., Hardy, J., Hutton, M., Kukull, W., Larson, E., Levy-Lahad,
E., Viitanen, M., Peskind, E., Poorkaj, P., Schellenberg, G., Tanzi, R.,
Wasco, W., Lannfelt, L., Selkoe, D. and Younkin, S.: Nature Med., 2,864（ 1996）.
５） Kosaka, T., Imagawa, M., Seki, K., Arai, H., Sasaki, H., Tsuji, S., AsamiOdaka, A., Fukushima, T., Imai, K. and Iwatsubo, T.: Neurology, 48,
741（ 1997）.

101.2
101.2
102.5
91.0
92.5
89.3
103.5
103.6
102.9
102.1
102.2
98.8

コードNo.

品名
内 容
規格 容量 希望納入価格（円）
Human βAmyloid(1-40) ヒトAβ（1-40）を定
免疫化学 96回用 78,000
292-62301
ELISA Kit Wako
量するキット298-62401

Human βAmyloid(1-42) ヒトAβ（1-42）を定
免疫化学 96回用 78,000
ELISA Kit Wako
量するキットヒト、ラット（マウス）のHuman/Rat βAmyloid(40) Aβ（1-40）及びN末端が切断や修飾を受 免疫化学 96回用 78,000
294-62501 ELISA Kit Wako
けたAβ40を定量するキット
ヒト、ラット（マウス）のAβ（1-42）及びN末Human/Rat βAmyloid(42)端が切断や修飾を受 免疫化学 96回用 78,000
290-62601
ELISA Kit Wako
けたAβ42を定量す
るキット

関連商品

添加量
測定値
理論値
キットの種類 （pmol/R）（pmol/R）（pmol/R）
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25
25.00
12.50
6.25

ヒト/ラットAβ（40） 100
ヒト/ラットAβ（42） ≦0.1%

■培地（×4）（DMEM、10%FCS）

ヒト
Aβ（1-40）

ヒトヒト
ヒト ラット（マウス）ラット（マウス）Aβ（1-40）Aβ（1-42）Aβ（1-43） Aβ（1-40） Aβ（1-42）≦0.1 ≦0.1
0.4
0.3
ヒトAβ
（1-40） 100
100
6.6
≦0.1
0.3
ヒトAβ
（1-42） ≦0.1

キットの種類

27.13
14.63
8.38
25.18
12.68
6.43
28.09
15.59
9.34
25.28
12.78
6.53

%
108.5
107.6
109.0
108.2
102.3
97.3
117.5
115.6
113.2
119.4
109.0
106.8

和光純薬時報コードNo.

品名内 容

容量 希望納入価格（円）C末端特異抗体により組織中のAβAmyloid β-Protein
40とAβ42のそれぞれを特異的 50回用 90,000
299-56701
Immunohistostain Kitに染色するキット299-57301

Phosphorylated Tau タウ蛋白質の異常蓄積病変を特異100回用 52,000
Immunohistostain Kit 的に染色するキット

Anti Phosphorylated ser129がりん酸化されたα-シヌ
クレインを特異的に認識するモノク 50μr 30,000014-20281 α-Synuclein,
Monoclonal Antibody ロナール抗体pSyn#64
019-18761 Amyloid β-Protein (1-40) ヒトAβ（1-40）ペプチド
014-18951

1mg

36,000Amyloid β-Protein (1-40)
ヒトAβ（1-40）ペプチド塩酸塩 1mg(Hydrochloride)

48,000016-18771 Amyloid β-Protein (1-42) ヒトAβ（1-42）ペプチド

0.5mg 60,000

Amyloid β-Protein (1-42)
011-18961
ヒトAβ（1-42）ペプチド塩酸塩 1mg(Hydrochloride)Vol.73, No.3（2005）

52,00017

ew Products
PVDF膜 新発売！
TM
スーパーセップ PVDFメンブラン
本品は、スーパーセップTM 用のPVDFメンブランです。
タンパク質との結合力が強いため、タンパク質を高感度に検出できます。また、低バックグラウンドのため、高いS/N比が得られます。
メンブランサイズは、スーパーセップTMに合わせてカットしていますので、スーパーセップTMで泳動後のウエスタンブロットに最適です。

特関連商品■スーパーセップTM（プレキャストゲル）シリーズ
スーパーセップTMは保存安定性、再現性が良いうえに、ウエスタンブロットの転写効率に優れています。
分画分子量範囲（核酸のbp） ウェル数
195-13611
10,000〜200,000 12well
SuperSepTM HG, 5-20%（50〜750） 17well
192-13621
199-13631
10,000〜130,000 12well
TM
SuperSep HG, 10-20%（50〜500） 17well
196-13641
192-12901
40,000〜200,000 12well
TM
SuperSep 7.5%
（100〜2,000） 17well
199-12911
196-12921
12well
20,000〜130,000
SuperSepTM 10%（50〜500） 17well
193-12931
190-12941
14,000〜80,000 12well
SuperSepTM 12.5%（30〜300） 17well
197-12951
194-13061
6,000〜60,000 12well
TM
SuperSep 15%（20〜300） 17well
191-13071
194-12961
12well
10,000〜200,000
SuperSepTM 5-20%（50〜750） 17well
191-12971
198-12981
10,000〜130,000 12well
SuperSepTM 10-20%（50〜500） 17well
195-12991
コードNo.

品

名

容量

希望納入価格（円）

10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚

15,00015,00015,00015,00012,00012,00012,00012,00012,00012,00018,00018,00012,00012,00012,00012,000190-13301 SuperSepTM 12.5%

14,000〜80,000（30〜300）

2D

10枚

18,000197-13291 SuperSepTM 5-20%

10,000〜200,000（50〜750）

2D

10枚

18,000長●タンパク質との高い結合力により高感度■簡易泳動槽●低バックグラウンド

コードNo.

品

190-13421 SuperSeparatorTM●プレカットのためカットの手間が不要

容量 希望納入価格（円）差し込むだけでゲルがセッティングできる1セット 38,000
スーパーセップTM専用簡易泳動槽■タンパク質分子量マーカー

データ

コードNo.

1

内 容

名

2
Lane 1 ：WIDE-VIEWTM Western Size Marker［コードNo. 233-02211］
をABC法で検出名

内 容

容量 希望納入価格（円）233-02211

免疫グロブリンと結合能を持つウエスタン用サイズマーカー
WIDE-VIEWTM
250μr 20,000
Western Size Marker （分子量：16,25,35,42,50,60,80,100,120,150k）

134-14501

Molecular Weight Marker, 未着色タンパク質サイズマーカー
1mr用 12,800（分子量：17,30,42,79,116,200k）
High Range

131-14511

Molecular Weight Marker, 未着色タンパク質サイズマーカー
1mr用 12,800（分子量：14,20,30,42,79k）
Middle Range

Lane 2 ：WIDE-VIEWTM Prestained Protein
Size Marker［コードNo. 230-02221］

品

WIDE-VIEWTM Prestained 着色済みタンパク質サイズマーカー
230-02221
500μr 18,000（分子量：15,20,30,40,50,70,100,140k）
Protein Size Marker■SDS-PAGE用バッファー
コードNo.

品名内 容
容量 希望納入価格（円）Sample Buffer Solution メルカプトエタノール含有Laemmli法
196-11022
25mr 3,800
サンプルバッファー（×2）（2ME＋）（×2）

コードNo.

品

名

孔 径

規 格

容量 希望納入価格（円）193-11032

Sample Buffer Solution メルカプトエタノール不含Laemmli法
25mr
サンプルバッファー（×2）（2MEー）（×2）

3,400

191-13272

Sample Buffer Solution メルカプトエタノール含有Laemmli法
25mr
サンプルバッファー（×4）（2ME＋）（×4）

7,600

198-13282

Sample Buffer Solution メルカプトエタノール不含Laemmli法
25mr
サンプルバッファー（×4）（2MEー）（×4）

6,800

184-01291

Running Buffer Solution SDS含有Laemmli法トリスｰグリシン
バッファー
（×10）

5,200

TM

195-13851 SuperSep PVDF
Membrane180.2μm 電気泳動用 20枚

12,000

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

1r

A

pplication Data
電子レンジを用いたQuick-CBB PLUSの応用例

通常のCBB染色では、長時間の染色脱色操作が必要ですが、電子レンジを用いることで、短時間に染色、脱色操作を完了させることができ、約10分で染色結果を観察できます。すぐに結果が見たい時に非常に便利です。

特

操作法

長

●約10分間で結果の確認ができる。

1. 洗浄

1〜2分間

電気泳動後のゲルを100mrの脱イオン水で洗浄する。

●通常のQuick-CBB PLUS染色よりも若干、濃く染まる。

（注意）
この容量は、ミニゲル1枚分です。電子レンジ用のタッパーを使

染色実験用して下さい。

通常法① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨

2. 電子レンジによる染色

電子レンジ法① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨

1分間×2回

クイックCBBプラスにゲルを浸し、軽くサランラップで覆う。次に、電子レンジにセットし、500Wで約1分間加熱処理する。これをもう一度繰り返す。
（備考）加熱の目安は、サランラップに水滴がつくぐらいです。
（注意）完全にサランラップを覆った場合、針で数ヶ所穴を開けて下さい。
また、かなり熱くなりますので、取り出しの際には、手袋を使用し十分注意して下さい。

3. 電子レンジによる脱色

1分間×6回

脱イオン水100mrに染色ゲルを移し、丸めたキムワイ
プを一枚入れ、電子レンジにセットし約1分間加熱処
理する。次に、脱イオン水を換え同様の操作を行う。

サ ン プ ル：BSA
サンプル量：①Totalタンパク質量として5μg②〜⑨は、①の2倍希釈系列
電 気 泳 動：SuperSepTM 15%，
12well［コードNo. 194-13061］
コードNo.

174-00553
178-00551

品

6回繰り返すことで簡単にバックを抜くことができる。
（備考）●加熱の目安は、サランラップに水滴がつくぐらいです。
●

完全にバックを抜く場合は、脱イオン水にゲルを入れ一晩放置して下さい。ほぼ完全にバックを抜くことができます。

名規

Quick-CBB PLUS

格

容 量

希望納入価格（円）

電気泳動用

250mr
1r

4,200
11,000ew Products

有糸分裂阻害剤・細胞周期阻害剤・同調培養試薬アンサマイトシン P-3

安

定性：結晶（冷暗所保存）で安定。
溶液はpH 2-9で安定、pH 10以上では不安
定。

アンサマイ
トシンP-3は、放線菌（Actinosynnema pretiosum）

COCH(CH3)2
Clより産生される抗腫瘍性抗生物質で、真核細胞の有糸分裂を特異的に阻害します。その作用機序は微小管を構成する

CH3O

CH3
N

tubulinに直接結合してその重合を阻止すると共に、微小

O O

O

CH3

H3C
O

管の脱重合を促し、これによって微小管の機能を失わせることにあると言われています。
CH3

規
融

CH3O

N
O H
H

格

O

C32H43CIN2O9=635.15

点：190〜192℃

アセトニトリルー水溶液：限度内

コードNo.
品
名018-14831 Ansamitocin P-3

含量（HPLC）：95.0％以上

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

規 格
生化学用

容 量 希望納入価格（円）5mg
50,00019

ew Products
モレキュラ−シ−ブス固定化
キラルジルコニウム触媒(R)-3-I-ZrMS

改正水道法対応
水質分析用試薬
水道法は、平成4年の改正以来10年が経過し、水道水

光学活性Lewis酸触媒は触媒的不斉合成反応においての水質を取り巻く環境も大きく変化した事、また世界保健

非常に有用な触媒です。しかし、高活性、高選択性を示機構（ WHO ）での飲料水水質ガイドライン全面改訂などをす触媒のほとんどは水や酸素などに不安定であり、取扱い

踏まえ、平成15年5月に水質基準が改定され、平成16年4には十分な注意が必要でした。東京大学小林教授らが開月より施行されました。

発した本触媒は光学活性ジルコニウム触媒をゼオライトの一

この改正に合わせ、｢水質管理目標設定項目｣及び｢要種であるモレキュラーシーブス上に分散させることにより、検討項目｣の測定に使用いただける試薬を、新たに追加発

長期間保存可能であり、かつ水や酸素に安定で取扱いが売しました。

容易になりました。
I
O

I

水質管理目標設定項目

O■塩素酸/亜塩素酸試験用 標準液

Zr
OI

コードNo.

O
I

OSiMe3
H

＋

OPh

OH

(R)-3-I-ZrMS
PrOH

容 量 希望納入価格（円）4,000（ClO2−：1,000mg/R in Water）■ジクロロアセトニトリル試験用 標準液

OOPh

0℃、toluene

規 格

Chlorite Ion Standard Solution イオンクロマト
50mr
グラフ用

034-19411
1）

O

名

4,000

光学活性ジルコニウム触媒

反応例

品

Chlorate Ion Standard Solution イオンクロマト
037-19401
50mr
グラフ用（ClO3−：1,000mg/R in Water）

コードNo.

046-29421

品

名Dichloroacetonitrile Standard Solution（1mg/mR t-Butyl Methyl Ether Solution）

規 格

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 2mr×5A

5,400〔参考文献〕
１）Kobayashi, S., Saito, S., Ueno, M. and Yamashita, Y.: Chem.Commun.,2016（ 2003）.

コードNo.

品

名097-05271（R）-3-I-ZrMS
093-05273

規 格

容 量 希望納入価格（円）15,00055,000

1g
5g

有機合成用

■メチルt-ブチルエーテル試験用 標準液
コードNo.

023-15301

品

名t-Butyl Methyl Ether Standard Solution（1mg/mR Methanol Solution）

規 格

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 2mr×5A

5,700

要検討項目＊）

含硫黄高機能材料の製造原料■アクリルアミド試験用 標準液

硫化ナトリウム五水和物

コードNo.

硫化ナトリウムは医薬・農薬中間体、有機合成中間体、

012-20341

品

名Acrylamide Standard Soloution（1mg/mR Methanol Solution）

規 格

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 2mr×5A

5,300

蛍光体、染料などの含硫黄高機能材料製造の原料として使用されています。本品は結晶形で取扱いが容易であり■酢酸ビニル試験用 標準液

通常の硫化ナトリウム九水和物より不純物が少なく、反応

コードNo.

に及ぼす影響を最小限に抑えることが可能です。

220-01561

規格例外（1mg/mR Acetone Solution）

コードNo.

043-29431

鉄（ Fe ）
： 7ppm以下

品

品

名

N,N-Dimethylaniline Standard Solution（1mg/mR Methanol Solution）

コードNo.
名

197-13752 Sodium Sulfide
191-13755 Pentahydrate

20

規 格

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 2mr×5A

4,700

規 格

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 2mr×5A

4,900■スチレン試験用 標準液

量： 98.0%以上

コードNo.

名■N,N-ジメチルアニリン試験用 標準液

観： 白色〜うすい黄色、結晶または塊

亜硫酸塩及びチオ硫酸塩（ SO 3として）： 1.5%以下
含品

Vinyl Acetate, Monomer Standard Solution

規 格

容 量 希望納入価格（円）

和光特級

25g
500g

1,800
3,000

和光純薬時報197-13791

品

名Styrene, Monomer Standard Solution（1mg/mR Methanol Solution）

規 格

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 2mr×5A＊）測定方法参考文献 上水試験法2001（日本水道協会）.

Vol.73, No.3（2005）

4,500

ew Products
濃縮液体タイプを新発売
大腸菌・大腸菌群検査用培地 AquaTestⅡシリーズ
アクアテストⅡ ATS-100

使用法①試験容器（試験管）を用意する。
②製品（培地）をアルミパックから取り出す。

従来のアクアテストⅡシリーズは、粉末培地をバックまた③親指で培地容器の蓋を開け、試験容器に全量を移す。

はチューブに分包したタイプで、検水を入れて粉末を溶解④検水100mrを加え、キャップをして24時間、36±1℃で培させて使用する製品でした。このタイプはサンプル管を用意する手間がかからない利点はありましたが、粉末の溶解に養する。
⑤コンパレータと発色、または蛍光を比較し陽性・陰性の判

少し時間がかかる問題もありました。今回、培地と検水の定をする。

混合を容易にする目的で、既に培地を水に溶解させたタイ※判定：青の発色が専用コンパレータと同等か濃ければプを開発しました。サンプル管を用意頂き、培地と検水を大腸菌群が陽性。蛍光がコンパレータと同等か強ければ大腸菌が陽性。

入れて、混ぜるだけで十分濃度が均一になります。

※コンパレータ：ATB-100CまたはATⅡ-100Cを購入い特

ただき、ご使用のサンプル管に移し替え

長

て使用。

●検水100mr中の大腸菌と大腸菌群を24時間で検出●培地と検水の混和が容易
培地は既に溶解済みで、所定の濃度の10倍濃度に調製されている。培地を試験管に分注し、検水100mrを加えるだけでコードNo. メーカーコード

品

名

容 量

304-16601 ATS-100 AquaTest Ⅱ ATS-100 （100mr用×5本）×20

希望納入価格（円）30,000培養を開始できる。

●試験管への試薬の分注が容易
溶解済みの培地は、片手で開封可能なチューブに封入されており、試験管への分注は容易に完了するので、流れ作業に向いている。

関連商品■アクアテストⅡチューブタイプ（培地入り樹脂試験管）
コードNo. メーカーコード●長期間の保管時の劣化防止5本ずつのアルミ個別包装を採用しており、光による劣化を防

品

名

容 量

307-14251 ATⅡ-10 AquaTest Ⅱ ATⅡ-10 （10mr用×10本）×20
309-14691 ATⅡ-100 AquaTest Ⅱ ATⅡ-100 100mr用×100本

希望納入価格（円）28,00043,000

別売り

止する。

コードNo. メーカーコード

品

名309-14571 ATⅡ-10C AquaTest Ⅱ AT-10用 コンパレータ
302-14701 ATⅡ-100C AquaTest Ⅱ AT-100用 コンパレータ
305-15531 PXR-03 収納ラックATⅡ-10用（50本立て）
306-15321 PXR-02 収納ラック（ATⅡ-100用）

容 量

希望納入価格（円）

1本
1本
1本
1本

1,500
3,500
8,000
8,000

■アクアテストⅡバックタイプ（培地入りバック容器）
コードNo. メーカーコード

品

名

容 量

308-13201 ATB-50 AquaTest Ⅱ ATB-50 （50mr用×5バッグ）×20
304-14401 ATB-100 AquaTest Ⅱ ATB-100 （100mr用×5バッグ）×20

希望納入価格（円）25,00030,000

別売り
コードNo. メーカーコード

組

成

ペプトン
5.0ｇ
塩化ナトリウム
5.0ｇ
硝酸カリウム１.0ｇ
ピルビン酸ナトリウム1.0ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム 0.10ｇ

りん酸水素二カリウム
りん酸二水素カリウム
X-Gal
MUG
IPTG

4.0ｇ
1.0ｇ
0.10ｇ
0.10ｇ
0.10ｇ

当組成は、2001年改訂上水試験法の糞便性指標である大腸菌群及び大腸菌の試験方法として収載された特定酵素基質培地法に基づくものです。

和光純薬時報品

名307-13411 ATB-50C AquaTest ⅡATB-50用 コンパレータ
306-14581 ATB-100C AquaTest ⅡATB-100用 コンパレータ
304-13421 PXR-01 収納ラック（バック用）

容 量

希望納入価格（円）

1本
１本
１ラック

2,000
3,000
5,000

■試験管タイプ・バックタイプ共用付属機器
コードNo. メーカーコード

品

名309-09441 BL-02
ミニブラックライト蛍光ランプ
300-09471 BL4BLB ミニブラックライト交換用ランプ

Vol.73, No.3（2005）

容 量

希望納入価格（円）

１台
１本

5,600
1,700

21

ew Products
LC/MS用溶媒 超純水追加！
LC/MS（液体クロマトグラフ/質量分析計）は生体・食品・

酢酸
ぎ酸

環境分析などさまざまな分野で広く普及しています。特に近年では、装置のインターフェイス部の開発・改良が飛躍的に進んだ結果、環境汚染物質や薬物代謝物の極微量分析などにも適用されています。

特長●LC/MS分析適合性試験の実施
バックグラウンドノイズの低減を実現

当社では、ご好評いただいておりますLC/MS用溶媒に規格例

加え、今回新たに超純水を追加しました。全有機炭素（TOC）
4 p p b 以 下を保 証しており、 極 微 量 の 成 分を分 析 する
LC/MSに最適な試薬です。

TOC4ppb以下を保証
超純水

ぎ酸

外観

無色澄明の液体

無色澄明の液体含量(HPLC)

99.5％以上

99.5％以上

蛍光試験

試験適合

試験適合

LC/MS分析適合性試験

試験適合

試験適合

コードNo.

特

酢酸

品

名

規 格

214-01301
Ultrapure Water
LC/MS用210-01303
016-19854
012-19851 Acetonitrile
LC/MS用
018-19853
132-14524
138-14521 Methanol
LC/MS用134-14523
018-20061 Acetic Acid
LC/MS用
067-04531 Formic Acid（abt. 99%） LC/MS用

長●全有機炭素の低減を実現●従来通りの保証（吸光度・蛍光試験）
も実現●特殊処理ガラス容器・アルミキャップを
採用

規格例
外観

無色澄明の液体

吸光度(210〜400nm)

0.01以下容 量 希望納入価格（円）
１r
1,600
３r
2,800
100mr 1,900
１r
5,600
３r
13,000100mr 1,050
１r
1,600
３r
3,450
50mr
5,500
50mr
9,000

蛍光試験

試験適合

日本薬局方適合生薬有効成分（標品）

全有機炭素（TOC）

4ppb以下第十四改正日本薬局方に収載される生薬有効成分の試験に使用されます。本品は、日本薬局方一般試験法 試薬・試液の規格「成分含量測定用」
・「薄層クロマトグラフ用」

アセトニトリル
メタノール
特に適合しています。

長

ゲニポシド

●LC/MS分析適合性試験を実施

ゲニポシドはサンシシ（クチナシ果実 ）に含有される有効m/z50〜2,000でのノイズレベルを保証成分です。ラット消化管内ではゲニピンとなって胆汁分泌促●アルミキャップを採用

進作用があります。

プラスチックキャップからの微量汚染物質の混入する可能性を

起低減

CAS No. : 24512-63-8

源 : Gardenia jasminoides Ellis（ Rubiaceae ）規格例

含量（毛管カラムGC）
密度（20℃）

アセトニトリル

メタノール

99.8％以上

99.7％以上

H

O

0.780〜0.783g/mR 0.789〜0.792g/mR

蛍光試験

試験適合

試験適合

LC/MS分析適合性

試験適合

試験適合

COOCH3HOH

OGlc
C17H24O10=388.37［次頁に続く］22

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

ew Products
コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用20mg（成分含量測定用
薄層クロマトグラフ用）

071-05071 Geniposide

13,000ブファリン
ブファリンはシナヒキガエル毒腺分泌物に含有される有効成分です。モルモットやウサギ角膜における局所麻酔作用があり、ブファリンはシノブファギンやレジブフォゲニンより強い

シノブファギン作用があります。

シノブファギンはシナヒキガエル毒腺分泌物に含有される有効成分です。強心作用があり、イヌ心肺標本を用いた

起 源：Bufo bufo gargarizans Cantor

CAS No. : 465-21-4

実験でペントバルビタールによる心不全に対して心収縮性を回復させる作用があります。
起

O
H3C

源 : Bufo bufo gargarizans Cantor

CAS No. : 470-37-1

H

H3C
H
O
H 3C
H

H 3C

コードNo.

O ・nH2O

O

H
HO

HO

O
O

・nH2O

OH

H

C24H34O4・nH2O（C24H34O4=386.52）

名規 格

容 量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用20mg（成分含量測定用）

025-15241 Bufalin

30,000H
C26H34O6・nH2O（C26H34O6=442.54）

コードNo.

品

O品

名容 量 希望納入価格（円）

規 格

局方生薬試験用
030-19491 Cinobufagin
20mg（成分含量測定用）

25,000サイトカイン
大入り包装取扱い開始
サイトカイン類のバルク包装（1mg）の在庫販売を開始しました。通常包装に比べ単位量当り安価となっておりますので、是非ご使用下さい。他のサイトカイン、ケモカイン、成長因子についても特注包装の取扱い可能ですのでご照会下さい。

レジブフォゲニン
レジブフォゲニンはシナヒキガエル毒腺分泌物に含有されコードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）

る有効成分です。局所麻酔作用、抗炎症作用及び強心

098-04623 Interleukin-3, Human, recombinant

生化学用

1mg

650,000

作用があります。

090-03963 Interleukin-4, Human, recombinant

生化学用

1mg

700,000

起 源：Bufo bufo gargarizans Cantor

096-04283 Interleukin-11, Human, recombinant 生化学用

1mg

950,000

CAS No. : 465-39-4

097-05173 Interleukin-13, Human, recombinant 細胞生物学用 1mg

900,000

067-04053 Flt-3 Ligand, Human, recombinant 生化学用
Vascular Endothelial Cell Growth229-01313
生化学用
Factor, Human, recombinant

1mg

950,000

1mg

950,000

H3C

RANK Ligand soluble, Human,
生化学用 1mg 照
recombinant
199-12813 Stem Cell Factor, Human, recombinant 細胞生物学用 1mg 照O

H3C

188-01473

O

H
H

O

・nH2O

HO
H
C24H32O4・nH2O（C24H32O4=384.51）

コードNo.

品

名187-01921 Resibufogenin

規 格

容 量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用20mg（成分含量測定用）

28,000

和光純薬時報会
会

Tumor Necrosis Factor-α, Human,
201-15264
生化学用
recombinant

1mg

300,000

090-04683 Interleukin-1β, Mouse, recombinant 生化学用

1mg

950,000

096-03943 Interleukin-4, Murine, recombinant

生化学用

1mg

700,000

094-05183 Interleukin-13, Mouse, recombinant 細胞生物学用
Granulocyte-Macrophage Colony
079-04673
生化学用
Stimulating Factor, Mouse, recombinant
Macrophage Colony Stimulating131-14393
細胞生物学用Factor, Mouse, recombinant
Tumor Necrosis Factor-α, Murine,
207-13463
生化学用
recombinant

1mg

900,000

1mg

900,000

1mg

950,000

1mg

550,000

Vol.73, No.3（2005）23

ew Products
HTに対応！！

形質転換効率ワンステップ出芽酵母形質転換試薬
S. cerevisiae ダイレクトトランスフォーメーションキットワコー
出芽酵母（ Saccharomyces cerevisiae ）を形質転換させるための試薬キットです。酵母培養液に直接、目的のプ
ラスミドと専用試薬を加えるだけで形質変換させることができ

BY4737株にpRS316を導入した場合の形質転換効率
形質転換効率（cfu/μg）
チューブ法≧5,00096ウェルプレート法

≧ 500

キット内容

ます。独自の技術により、コンピテント細胞の調製が不要と（20回用）（100回用）（500回用）なり一晩培養した菌体に直接導入が可能であり、従来法で●Sc Transformation Reagent 500μr

2.5mr

12.5mrは困難であった多種変異株への同時導入が簡単に行えます。

●Carrier DNA（5μg/μr）

250μr

1.25mr

50μr

本品は、少数検体向けのチューブ法と、HT（ハイスループット）向けの96ウェルプレート法の2通りのマニュアルを用意しています。

特保存条件−20℃保存長

コードNo.

●目的プラスミドと専用試薬を加えるだけのワンステップタイプ●コンピテント細胞の調製が不要

品

名

規 格

296-62701 S. cerevisiae Direct292-62703 Transformation Kit
290-62704 Wako

容 量 希望納入価格（円）

20回用
遺伝子研究用 100回用
500回用

4,800
10,00040,000●96ウェルプレートを用いることで、多検体処理が可能●HT向けの低粘性試薬

遺伝子機能の網羅的解析に最適！

操作方法

出芽酵母形質転換自動化システム■チューブ法
酵母の培養

形質転換

YPD培地 2mR
←コロニーを植菌

1.5mR容マイクロチューブ

OD600：0.01に調製
1mR＊←プラスミド・試薬混合液 25μR
混合（ボルテックス）←培養酵母（A） 25μR
インキュベート，42℃，2時間←滅菌水 150μR

振とう培養，28-30℃，
OD600：3.5-5.0まで プレーティング
インキュベート，28-30℃，2-3日
培養酵母…（A）
形質転換酵母■ 96ウェルプレ ート法「S. cerevisiae ダイレクトトランスフォーメーションキットワコー」を使用し、既知遺伝子が破壊された出芽酵母遺伝子破壊
株ライブラリー（約4,800株）の形質転換を全自動で行います。
マイクロプレート対応で、試薬やプラスミドの分注から、
スポッティング、インキュベーションまでのすべての工程を高速、全自動で実施し、遺伝子機能、遺伝子ネットワー
クの網羅的解析を強力にサポートします。

特96ウェルプレート←YPD培地 25μR
コロニーを植菌
静置培養，28-30℃，18-24時間
菌体懸濁（プレートミキサー）＊←プラスミド・試薬混合液 25μR
混合（プレートミキサー）
インキュベート，37℃，2時間

長

アプリケーション●酵母形質転換を自動化●遺伝子機能の解析●マイクロプレート対応●遺伝子ネットワークの解析●高速、全自動処理●各種生体反応経路の解析●インキュベータ搭載

スポッティング 5-10μR
インキュベート，28-30℃，2-3日
形質転換酵母
プラスミド・試薬混合液
組成（1チューブ、1ウェルあたり）＊

Sc Transformation Reagent
プラスミドDNA

Carrier DNA

20μR
1μg
2μR

ご興味のある方はお問合せ下さい。

滅菌水で25μRに調製

24

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）

化学大家
小

川

正

400

孝（1865〜1930）
東北大学名誉教授

吉原賢二

断ちがたく、数年後ふたたび帝国大「 味の素 」の池 田 菊 苗は今も有 名
人だが 、 彼の帝 国 大 学 時 代の同 級学に戻ってダイバースのもとで無給の生であった小川正孝（ 元東北帝国大副手として研究をおこなった。午前と学総長 ）はあまり知られていない。し夜間、中学校の教師をして生計を立かし小川は当時科学のレベルの低かってた。午後と週末は大学で実験にはた日本から英国に行って、元素の発見

げんだ。この頃が一 番 苦しかった時という最先端の困難な仕事に取り組み、期であった。当時大学（ 明治30年にほとんど成 功に近いところまで行って

東京帝国大学に改称 ）にいた眞島利いた。彼が発見したニッポニウムは周行（のち東北帝国大学教授、大阪帝期表の位置がひとつ上にずれていた

国 大 学 総 長 ）は小川の勤 勉ぶりに感ために、現在の周期表に名を残すこ嘆している。

とはなかった。 彼の実 験の大 部 分は

明治32年（ 1899 ）、小川は第一高

正しく、ニッポニウムは現在のレニウム

等学校の教授のポストを得た。ダイバー（第７族、原子番号75）であった。

スが英国に帰国する時期で、本格的にひとり立ちすることになったのである。

最 近（ 2 0 0 4 年９月）、 理 化 学 研 究所では113番元素の生成を確認、発表したが、日本人の発見した最初の写真１. 東北帝国大学理科大学長時代の小川正孝

彼はスルファミドを大 量に製 造 する方法を見出した（明治35年）。

元素となるだろうと新聞は報じた。そスに乗ることができた。松山出身者の明治37年（1904）２月、小川は文部の100年前に小川のニッポニウム研究寮があって、小川はそこに入っていた省在外研究員として外国留学することが始った。欧米との科学格差の大きかっが、その頃の寮生の集合写真の中にになった。行先は桜井錠二東京帝国た当時の先 人はどんなに苦 労したか、

正岡子規とともにうつっているものがあ

大学教授の紹介によるものと思われるが、ふり返ってみることの意義は決して小る（写真２）。

桜井のかっての留学先のロンドン大学、

明治22年（ 1889 ）、小川は帝国大ウィリアムソンA.W. Williamson教授

小川正孝は元治２年（ 1865、のち学（現在の東京大学）の第１回卒業生の後任のラムゼイW. Ramsay（1904

慶応元年と改まる）
１月26日、当時のとなり、 卒 業 後 英 人 教 師ダイバース

年ノーベル化学賞）の研究室であった。

江 戸 、 芝の三田、 松 平 藩 邸中屋 敷

E. Diversについて無機化学の研究をこれにはダイバースも相談にあずかっで生まれた。父正弘は伊予（愛媛県）

おこなった。

たようだ。ラムゼイは希ガス、アルゴン

さくはない。

松山の松平藩の下級武士であった。

小川はその後、静岡中学校の化学

ArやネオンNe、クリプトンKr、キセノ

やがて世は明治維新（ 1868 ）となり、の教 師として赴 任した。 校 長が月給

ンXeを発見し、ヘリウムHeの地球上

廃 藩 置 県の近 代 化がスタートし、 一60円の時代、彼は80円の月給をもらっの存在を確認して、周期表に18族元

家は郷里松山に帰ることとなった。父たという。しかし彼は化学研究の志を素のグループを加えた大化学者であっが早く亡くなったので、正孝少年は大へん苦 労して勉 学したらしい。 松 山
中 学 校に入 学 、 通 学の途 中 、 近 道の陸軍練兵場を横切って歩哨にとがめられ 、口 論したこともある。 向うっ
気の強い少 年だったという。当時の
とき よし

松山中学校には草間時福という名校長がいて、人材も多く出た。
小川は松山中学校を首席で卒業。
さらに学問を続けることを志したが、学資がないため藩主の奨学金に応募した。一度は不採用になったが、小川が必死の思いで書いた嘆願書がみとめられ、彼は幸運にも上京して大学予備門から帝国大学までのエリート・コー

写真２. 帝国大学時代の小川正孝−−後列右端が小川、２人おいて正岡

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）25

た。当時はキュリー夫妻が放射性元

表の位 置を決めなければならない。

素ポロニウムP oとラジウムR aを発 見

周期表の空席にあてはまる原子量が（ 1898 ）したあとで、新元素発見の熱得られれば、 新 元 素をそこに入れる。

（フィーバー）がさめやらず、ラムゼイ

小川はラムゼイの指導のもとに原子量はなおいくつかの新元素に取り組む姿

を100と定め、モリブデンとルテニウム勢であった。

の間 、マンガンの下の位 置（ 原 子 番

小川は明 治 3 7 年（ 1 9 0 4 ）、日ロ戦

号43番に当たる）の空席においた。（た争の開戦直前に出発し、ロンドンに渡っだし、小川自身はこの原子量に多少た。ラムゼイは当時の新鉱物トリアナの不安を持っていたらしく、価数によっ

イト中の新元素の探索を小川の研究テーてはもっと大きいものになる可能性を述マとして与えた。この鉱石はセイロン

べている。）小 川は帰 国 後 第 一 高 等

島（ 現在スリランカ）から発見され、サ学校から東京高等師範学校に移った。

イコロ状の珍しいもので、ラムゼイは新このニッポニウムの研究は明治41年

元素がいくつか含まれると考えたので（1908）、英国の化学雑誌Chemicalある。小川はほとんど寝食も忘れるばNewsに発表された。主としてトリアナ

かりに研究に打ちこんだ。その年の末

イトからのニッポニウム分離と、モリブ

新 設の東 北 帝 国 大 学 理 科 大 学の教頃には、苦心の結果、新元素らしい

デナイトからのニッポニウム分離の２編授となり、その理科大学長となった。

特性を示す物質の検出ができた。新の Preliminary Note としてであっ

当初 東 京 帝 国 大 学の長 岡 半 太 郎がしいスペクトル線も観測された。ラムゼ

た。ラムゼイの支持のもとに発表され理科大学長になる予定だったが、長イは大いに喜んだ。日英同盟下、極たために大きな反響があり、ニッポニ

岡を東大側で離さないために、若手

東の小国日本を後押しした英国にあっウムは元素記号Npとして翌年のローリ教授の間で最年長の小川にその職がて、ラムゼイも日本 人を高く評 価した。

ングF.H. Loringの周期表に採用された。

廻って来た。小川は研究熱心のため、

小川はニッポニウムの業績によって、東 北 帝 国 大 学 総 長の澤 柳 政 太 郎が小川の仕事の完成を、日ロ戦争の激
戦地の「旅順の陥落が早いか、新元

明治43年（1910）、第１回桜井褒賞（の理科大学長の用事をカバーしていたと素発見が早いか」などと言って、激励

ちの日本化学会賞 ）を受賞し、また理いう話もある。 東 北 帝 大は創 立当時した。うまくいったら新元素の名をニッ

学博士となった。その頃の写真が残っ

活気にあふれ、研究第一主義で教授

ポニウムと命名することを早くからすすている（写真３）。

たちは夜ふけまで研 究にはげみ、そめたのはラムゼイであった。祖国日本

小川はその後、明治44年（ 1911 ）、の名を元素に命名することは小川にとってのこの上ない光栄であり、喜びであると小川は思ったに違いない。しかしそれだけに慎重に研究を進めなければならない。小川は２年の滞在予定をさらに延長して研究をおこなった。対象が微量であるために大へんな労力を必要としたのである。
明治39年（ 1906 ）８月に帰国した小川はさらに新 元 素の研 究を継 続した。
幸運にも日本産輝水鉛鉱（モリブデナ
イト）からもニッポニウムのスペクトルを示すものが発見された。新元素の同定に光学スペクトルを使うのはラムゼイの研究室の得意とするテクニックであった。小川は新元素の分離に成功したとの自信を深めた。
新元素の発見を確定するには周期

26

写真３. 東京高等師範学校時代の小川正孝

写真４. 東北帝大の実験室での小川正孝

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）のことは新聞にも書き立てられるほど

写真５. 総長時代の小川正孝

写真６. 小川記念園であった。中でも小川の研究ぶりは研の達人であったが、いつかその限界

7 5 番 元 素が現れていた。ニッポニウ

究第一主義のシンボルのように言われを感じ、当時最先端の物理的手法をムは1908年当時未発見の75番元素とたこともある。実験室の小川を写真４採用しようとした。とはいっても自分自分かった。木村健二郎東京帝大助教に示す。

身はすでに老齢なので、弟子の青山授（当時）のもとでも同じ方法で同じ結小 川は若 手の青 山 新 一 助 手 、 小新一にその方面を担当させる意図をもっ果を得た。 1 9 3 0 年のことであった。

林松助助教授、小野平八郎大学院たのである。その方法とは1913年にイ

結果は公表されることはなかった。75

生らにトリアナイトを与えてニッポニウム

ギリスのモーズリーH.G.J. Moseleyが番 元 素 は 1 9 2 5 年にドイツのノダックの探索をやってもらったが微量すぎて

発 展させたもので、 物 質から出る特W. Noddackらによって発見され、小仕事は難航し、結果が出なかった。

性Ｘ線によって原子番号を決める画期川が訂正するには遅すぎた。

弟子たちがやってもできなければ本人的な方法であった。勉強家の小川が小 川 は 実 験 室 で 倒 れ 、８日後 の自身がやるしかないと小川は思ったよ

これに目を付けたのは卓見であった（1919

1930年７月11日に急性胆嚢炎のためうである。ニッポニウム含量の多いモ

年 ）。しかし当時すぐ化学者が使える死去した。サムライの壮烈な討死を思

リブデナイトについてコツコツ独りで実ようなＸ線の分光器は日本にはなく、わせる。65歳であった。その死後、験を行い、しばしば夜更けに及び、

小川はむなしく10年以上を待たなくて

東北大片平キャンパスの一隅に小川

大学内に泊ることもあった。

はならなかった。小川は一時自分のも記念園が作られ、今も小川の功績−−

たん のう えん

小川は大正８年（1919）に東北帝国とを離れていた青 山 新 一を呼び 戻し、とくに研究第一主義の模範を示したこ

大学総長に公選された。その前は澤柳、講師、助教授に取り立て、学位論文とがしのばれる。小川がレニウムの実

北条、福原と三代にわたり文部官僚

をまとめさせ 、さらに海 外 留 学にまで

質 的な発 見 者として再 評 価される気が天下って来たが、このとき公選によ送り出した。行先は72番元素ハフニウ

運にあることも付言する。

る総長が誕生し、小川は公選最初のムを発見したヘベシーG. de Hevesyの総長として昭和３年（ 1928 ）まで、３期もとであった。ここにはよいＸ線 分 光

９年つとめたのであった。この間に金器があった。

属 材 料 研 究 所の設 置や法 文 学 部の青山は大正14年（1925）３月ヨーロッ増設など、東北帝国大学の発展に尽パへ出発、昭和３年（ 1928 ）帰国した

くした功 績は大きい。 小 川は総 長のが、その間１年前後コペンハーゲンで職務をつとめるかたわら、寸暇を惜し

Ｘ線分光法を習得した。彼は帰国後、んで研究に従事した。夜更けまで実小川の後押しによると思われるが、金験室にこもる小川は実験室の鬼−−ある属材料研究所に移籍し、Ｘ線分光器

いは研究室の聖者のようにも見えた。

を購入した。小川から依頼され、ニッ

小川について最近わかって来たこと

ポニウム試料を測定した写真乾板が残っがある。小川は古典的な分離分析法ていた。そこには43番元素は存在せず、

和光純薬時報Vol.73, No.3（2005）〔参考文献〕
１）吉原賢二 : 化学史研究, 24, 295（1997）;29, 209（2002）;30, 69（2003）.
２）吉原賢二 : 現代化学, 1997年６月号, p.14 ; 2004年５月号, p.36.
３）Yoshihara, H. K.: Radiochim. Acta, 77, ９（1997）; Spectrochim., B59, 1305（ 2004）;
Historia Scientiarum, 9, 257（2000）.
−ニッ４）吉原賢二著 :「科学に魅せられた日本人−
ポニウムからゲノム、光通信まで」岩波ジュニア
新書372（初版2001, ２版2004）.
５）水関秀雄 : 「小川正孝の事蹟と生涯」松山大
学80周年記念論文集. p.485（ 2004）.
（2003）.
６）Kaji, M.: Historia Scientiarum, 12, 238
７）菊池好行 : 化学史研究, 31, 239（ 2004）.

27

核酸ケージング試薬
6-ブロモ-4-ジアゾメチル-7-ヒドロキシクマリン【Bhc-ジアゾ】
ケージド化合物は、セカンドメッセンジャーや神経伝達物質などをケージングすることで、細胞内あるいは組織上の局部的な活性化を光によりコントロールできる物

N
N:

H
Br

従来のケージド化合物（2-ニトロベンジル基化合物）は光反応効率が悪く、高線量の紫外線をエネルギーとして与える必要がありました。今回、製品化したBhcく脱ケージングすることができるため、細胞に有害な紫外線によるダメージを従来よ

O

O

HO

ジアゾは従来の化合物に比べ10分の1の紫外線量（365nm, 0.5〜1秒）で効率良C10H5BrN2O3=281.06

りも低く抑えることができます。
Bhc-ジアゾは、りん酸基と結合するため、cAMP、cGMPといったセカンドメッセンジャー以外にmRNA、プラスミドDNAのような高分子化合物もケージングでき、遺伝子発現の部位と時期をも自由にコントロールすることができます。

特〔参考文献〕

長１）Furuta, T., Wang, S. S., Dantzker, J. L., Dore, T. M., Bybee, W. J., Callaway, E. M., Denk, W. andTsien, R. Y.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96（ 4）, 1193（ 1999）.
２）Furuta, T., Takeuchi, H., Isozaki, M., Takahashi, Y., Sugimoto, M., Kanehara, M., Watanabe, T.,
Noguchi, K., Dore, T. M., Kurahashi, T., Iwamura, M. and Tsien, R. Y.: Chembiochem, 5（ 8）, 1119
（2004）.
3） 安藤秀樹、古田寿昭、岡本 仁：細胞工学, 21（ 2）, 217（ 2002）.

●脱ケージングの効率が高い●暗所での安定性が高い●細胞傷害性が低い
コードNo.

020-15291
026-15293

品

名6-Bromo-4-diazomethyl-7-hydroxycoumarin

規 格

容 量

希望納入価格（円）遺伝子研究用20mg
1g

30,000照会

Information
siRNAカスタム合成サービス㈱ニッポンイージーティーは遺 伝 子
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無償設計サービスも行っています。お問合せ下さい。

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol.73 No.3

28

２００５年7月１５日 発行
発行責任者 松田知憲
編集責任者 大西礼子
発 行 所 和光純薬工業株式会社
〒５
４
０-８
６
０
５ 大阪市中央区道修町三丁目１番２号
TEL.０
６-６
２
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３-３
７
４
１（代表）
URL http://www.wako-chem.co.jp
印 刷 所 株式会社 林欧文堂

●和光純薬時報に対するご意見・ご感想はこちらまでお寄せ下さい。
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Vol.73 No.3

質です。