Wako
Bio
Window
http://www.wako-chem.co.jp/

2001. AUG.

No.32
C

O

N

T

E

N

T

S
■アポトーシス■遺伝子
Protein Express 社 組み換えタンパク質受託発現サービス p.２
TM

MPI社 Vybrant Apoptosis Assay Kits

p.１４

MPI社 EnzoChek Caspase-3 Assay Kits

p.１６

Origene社のSmartArray チップ

p.３

Invitek社の安価な高性能核酸抽出・精製キット

p.４「Q&A」α-アミラーゼ ウルトラピュア

p.７

ドクターウエスタン

p.８

同仁化学 セルカウンティング キット-WR/HS（for HTS） p.１８

EUROGENTEC社 DNAアレイ

p.９

PIERCE社 CellScreenTMシリーズ

N-G社 GMジャガイモ検知用オリゴヌクレオチド

p.９（株）日本遺伝子研究所 遺伝子組換え食品のDNA受託検査 p.１２

■細胞増殖/細胞毒性
p.１９

■病理
パソプレップ ®５４６

p.１２

■発光
ピッカジーンp.１０

genzyme TECHNE社,
ヒト AN ALYZA BMP-4 イムノアッセイキット■生理活性/蛍光ジヒドロ ローダミン１２３塩酸塩

p.１１

ローダミン１２３

p.１１

ペプチド研

[Gly14]-ヒューマニン

■免疫

p.１３

百日咳毒素

p.１７

マストパラン

p.１７

p.２０

■お知らせ
MPI社 CD-ROM８版＆Bioprobes No.３７発行案内 p.１６
ラボシートTM ５０％OFF特価キャンペーン

p.１７

Protein Express 社のBacillus brevis を用いた組み換えタンパク質受託発現サービス
Bacillus brevisは、効率的な組み換えタンパク質の分泌発現システムです。タンパク質が菌体外に分泌され、正しくフォールディングされるため､活性型タンパク質が効率よく得られます。多量のタンパク質が培地中に蓄積されるため、効率よく精製を行うことができます。プロテイン・エクスプレス社では、発現トライア
ル、小スケール〜大スケール（2L〜700Ｌの発酵タンクまで）での組み換えタンパク質生産の3つの受託サービスを実施しています。

【B. brevis 分泌システムの特長】●培地中にタンパク質を大量に分泌。

Bacillus brevis 菌体●培養が容易。
●培養上清からの精製が容易。
●培養上清中にほとんどプロテアーゼを分泌しないた
め、目的タンパク質の分解が起こりにくい。
●菌株の安全性が高い。

【サービス内容】■発現トライアルサービス
頂いたサンプルを用いた発現トライアルサービ
スです。
（内容）
s発現ベクターの構築（プライマー合成、PCR、クローニング、シーケンス）
sB. brevis HPD31株の形質転換
s小スケール培養試験。培養上清のSDS-PAGE（CBB
染色およびWestern blot）による発現産物の確認
s詳細なレポートと分析用サンプルの送付
s分析用２ml〜５mlの培養上清サンプルの送付■生産量向上研究サービス
発現トライアルサービスで得られた発現量を向上させる場合のサービスです。
（内容）s培養条件の検討：培地成分、培養温度の検討など。
sプラスミドの検討：pNCMO2とは異なった遺伝子発現調節領域、複製起点を持つプラスミドを使用して発現を試みる。
s 宿主菌の検討：B. brevis HPD31-S5とは異なる
B. brevis株による発現。
s融合タンパク質としての発現：分泌性の高いタンパ
ク質との融合タンパク質として発現。

■大量生産サービス発現サービスで成功したサンプルの大量生産を行うサービスです。
（内容）
sプロテイン・エクスプレス社所有の各種の大量培
養装置を用いて、2Ｌ、20L、120L、700Lスケールで培養することができます。培養は、高い生産量を確保するためにその都度十分な検討を加えて行います。

【B. brevisを用いたタンパク質の発現例】
由来
微生物由来
Bacillus stearothermophilus
Bacillus licheniformis
Bacillus macerans
Treponema pallidum

タンパク質

生産性

thermostable-α amylase
thermostable-α amylase
CGTaseantigen(TP47, TP17, TP47-17)

3.0 g/l
3.7 g/l
1.0 g/l
0.0-1 g/l

真核生物由来Aspergillus oryzae
Flounder fish
BovineBovineHuman
Humantaka- amylase A
growth hormon
Interleukin 1-βTumor Necrosis Facto-α
epidermal growth factor
protein disulfide isomerase

22 mg/l
150 mg/l
200 mg/l
50 mg/l
1.5 g/l
1.0 g/lウイルス由来Hepatitis B virus
Hepatitis C virus

core antigen
envelope protein(EGF fusion)

100 mg/l
500 mg/l【備考】価格および納期については、ご相談下さい。
WAKO BIO WINDOW係 E-mail：biowin@wako-chem.co.jp FAX：06-6201-5965

2 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

I.S.

ヒト、マウスの遺伝子発現プロファイリングに

Origene社のSmartArrayTMチップ
SmartArray TMチップは、特定の機能に関与する遺33

P-dCTPでラベルした

伝子群を、ニトロセルロース膜上にスポットし、さらHuman brain mRNAをに、ガラススライド上に貼り付けたDNAアレーです。
限定された遺伝子を包括的にスポットしているので、用いて検出。

一度の実験でキーとなる遺伝子の絞り込みが容易に行
えます。

【特長】
■関連性のある遺伝子を包括的にスポッティング。
■専用チャンバーにより、少容量でのハイブリを実現。
■Cross Hybridizationを最小限に抑えるようにスポッ
トDNAを設計。
■マウスから調製したプローブも使用可能。85%を越える相同性。
■Duplicate spot。

SmartSet 1のQCデータ■高品質（House keeping遺伝子の発現を確認）④【セット内容】① SmartArrayTM Chip
② Hybridization Chamber

2枚
4枚③ Seals（Hybridization Chamber用）④ SlidehybTM Hybridization Buffer

1枚
4本

②

①
③

507-34211 （NSAA-101）

SmartSetTM 1

1セット

89,000円

遺伝子群：Nuclear Hormone Receptors(50)/Co-Regulators(63)/Secondary Co-Regulators(18) スポット数：140×2

504-34221 （HSAB-101）

SmartSetTM 2

1セット

96,000円

遺伝子群：Homeobox/b-ZIP(91)/b-HLH Transcription Factors(56)/Proteins with helix-loop-helix motif(27) スポット数：183×2

501-34231 （TSAC-101）

SmartSetTM 3

1セット

96,000円

遺伝子群：Tissue-specific and Inducible Transcription Factors(172) スポット数：181×2

508-34241 （PSAD-101）

SmartSetTM 4

1セット

114,000円

遺伝子群：Tyrosine Kinases(73)/Phosphotyrosine Phosphotase(43)/SH2/SH3 Domain containing Proteins(129) スポット数：259×2

505-34251 （GSAE-101）

SmartSetTM 5

1セット

131,000円

遺伝子群：G-Proteins(58)/G-Protein Coupled Receptors(181)/Regurators for G-Protein(79) スポット数：327×2

502-34261 （ISAF-101）

SmartSetTM 6

1セット

98,000円

1セット

96,000円

1セット

131,000円

遺伝子群：Ion Channel Proteins(165) スポット数：174×2

509-34271 （XSAG-101）

SmartSetTM 7遺伝子群：Transpoter Proteins(156) スポット数：156×2

506-34281 （MSAH-101）

SmartSetTM 8遺伝子群：Proteinases(284)/Regulators for proteinases(56) スポット数：349×2

503-34291 （CSAI-101）

SmartSetTM 9

1セット

114,000円

遺伝子群：Cytokines(121)/Chemokines(37)/Receptors(107) スポット数：174×2

506-34301 （ASAJ-101）

SmartSetTM 10

1セット

96,000円

遺伝子群：Adhesion Molecules スポット数：178×2
備考 ()内は遺伝子数です。各チップは、9種類のHouse keeping遺伝子を含んでいます。平均500bpのcDNAが、50pg/スポット、約108コピー/スポット含まれています。スポットはデュプリケートですが、隣接していません。
I.S.

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 3

プラスミドDNA・アガロースゲルからのDNA回収・PCR産物・RNAの精製に…

Invitek社の安価な高性能核酸抽出・精製キット
Invitek社が提供するInvisorbTM
A C N A E（ A n t i - C h a o t r o p i c
Nucleic Acid Extraction）技術
は、カオトロピック塩を使用しない新しい核酸抽出法です。血液、組織あるいは糞便のような、複雑な生物サンプルからでも抽出可能で、最適化された条【抽出・精製の基本操作】
以下に示される溶解，結合，洗浄，溶出の確立されたマルチステップ精製によって、必要なDNAやRNAが得られます。

スピンカラムフォーマット

96ウェルプレートフォーマット

(プラスミドDNA精製の場合)(プラスミドDNA精製の場合)サンプルを溶解

サンプルを溶解件下で、シリカなどの修飾担体
へ核酸を結合させます。また、専用の修飾担体を使い分けることにより、異なる種類の核酸の選択的分離が実現可能になりま

スピンフィルター付カラム
にアプライ

した。

前ろ過
（吸引）

結合条件の調整
DNAをフィル
ター膜へ結合遠心DNAをフィル
ター膜へ結合（吸引）

結合DNAを洗浄
Invisorb ® 96 Vacuum Manifold

結合DNAを洗浄（吸引）
遠心

DNAを溶出DNAを溶出（吸引）【使用例】プラスミドHindⅢによるDNAの消化

消化a
未消化a

InvisorbTM Spin Plasmid Mini Kitを用いて精製したプラス
をHindⅢ
ミドDNA（vector pGEM, in E. coli strain DH5α）
で消化した。制限酵素処理はそれぞれ1μgのプラスミド
DNAを用いて行った。消化および未消化のDNAを、
1%TAEアガロースゲル電気泳動により分析した。
レーン1：
1kbpラダーマーカー
レーン2,4,6,8,10：未消化プラスミドDNA
レーン3,5,7,9,11：消化プラスミドDNA

4 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

製品内容の詳細については、Invitek社カタログをご覧下さい。
〔カタログ請求先〕WAKO BIO WINDOW係
E-mail: biowin@wako-chem.co.jp FAX: 06-6201-5965

【特

長】

◆スピンカラム法、吸引法、バッチ法、96ウェルプレート法による抽出・精製法。
◆カオトロピック塩非存在下で、核酸を修飾された担体に結合。
◆最適化されたバッファーにより核酸結合の選択性が高い。
コードNo.

メーカー
コード

品

名

◆核酸を含むすべてのサンプルから抽出・精製可能。
◆短時間で簡単な操作。
◆再現性よく高回収率で抽出・精製。
◆コンタミ物質を完全に除去。
◆毒物・有機溶媒非使用の安全な手法。
◆DNase消化なしでRNAを精製。
包

装

希望納入
価格（円）

適用サンプル■シングルチューブ（スピンカラム法 ／ 吸引法 ／ バッチ法）●プラスミドDNAの抽出・精製
プラスミドキット504-32423 10101103
InvisorbTM Spin Plasmid Mini Kit
502-32424 10101104
501-32433
509-32434

10101202 InvisorbTM Plasmid Midi Kit
10101203 （Vacuum Format）

508-32443

10101302

InvisorbTM Plasmid Maxi Kit（Vacuum Format）

50 回分
9,000
バクテリア培養液0.5-2.0ml
250 回分 33,500
24 回分 28,000 バクテリア培養液(高コピー) 10-25ml
バクテリア培養液(低コピー) 100ml
48 回分 49,500 別売のInvisorbTM 96 Vacuum Manifoldが必要
バクテリア培養液(高コピー) 100ml
12 回分 18,000 バクテリア培養液(低コピー) 250ml
別売のInvisorbTM 96 Vacuum Manifoldが必要●DNA断片の抽出・精製
PCR産物精製キット
505-32453
503-32454

10202003
InvisorbTM Spin PCRapid Kit
10202004

50 回分
250 回分

10,000
PCR産物，
酵素反応液100μl
36,00050 回分
250 回分
100 回分
250 回分

10,000
TAE/TBEアガロースゲル400mg
36,00013,500
TAE/TBEアガロースゲル400mg
23,500

ゲルDNA抽出キット
502-32463
500-32464
509-32473
507-32474

10201102
InvisorbTM Spin DNA Extraction Kit
10201103
10201002 InvisorbTM DNA Extraction Kit
10201003 （Batch Format）●ゲノムDNAの抽出・精製
全血キット
506-32483
504-32484
503-32493
501-32494
506-32503
504-32504
503-32513
501-32514

10311002
InvisorbTM Spin Blood Mini Kit
10311003
10311103
InvisorbTM Spin Blood Midi Kit
10311104
10311202
InvisorbTM Spin Blood Maxi Kit
10311203
10311302 InvisorbTM Blood Giga Kit
10311303 （Batch Format）

50 回分 17,000
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，
バフィーコート1-200μl
250 回分 60,000
50 回分 35,000
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，
バフィーコート200μl-2ml
250 回分 157,000
25 回分 35,000
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，
バフィーコート1-10ml
50 回分 63,000
50 回分 54,000
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，
バフィーコート5-20ml
100 回分 97,000

動物組織キット
500-32523
508-32524
507-32533
505-32534

10321002
InvisorbTM Spin Tissue Mini Kit
10321003
10321102
InvisorbTM Spin Tissue Midi Kit
10321103

50 回分
250 回分
25 回分
50 回分

15,000
新鮮・凍結動物組織，
マウスの尾，
パラフィン包埋組織1-40mg
67,00025,000
新鮮・凍結動物組織，
マウスの尾，
パラフィン包埋組織30-100mg
45,00010331003
InvisorbTM Spin Cell Mini Kit
10331004

50 回分
250 回分

15,000 培養細胞，
新鮮・凍結酵母，
バクテリア2×106個
67,000 血漿，
血清100μl

50 回分
250 回分
25 回分
50 回分

16,000 新鮮・凍結植物組織100mg (湿重量)73,500 乾燥植物組織60mg
25,000 新鮮・凍結植物組織500mg (湿重量)45,000 乾燥植物組織300mg

50 回分
250 回分
50 回分
250 回分

17,000
動物性の新鮮・加工・保存食品40mg
67,00022,000植物性の新鮮・加工・保存食品40mg
73,500細胞キット
504-32543
502-32544

植物組織キット
501-32553
509-32554
508-32563
506-32564

10371002
InvisorbTM Spin Plant Mini Kit
10371003
10371102
InvisorbTM Spin Plant Midi Kit
10371103

食物キット（動物性 & 植物性）
505-32573
503-32574
502-32583
500-32584

10361002
InvisorbTM Spin Food KitⅠ
10361003
10361102
InvisorbTM Spin Food KitⅡ
10361103

糞便DNAキット509-32593
507-32594

10381002
InvisorbTM Spin Stool DNA Kit
10381003

50 回分 25,000
新鮮・凍結糞便200-300mg
250 回分 110,000

スワブキット502-32603
500-32604

10351002
InvisorbTM Spin Swab Kit
10351003

50 回分
250 回分

17,500 スワブ(口内，鼻内，咽頭，目) 2×105個細胞67,000 唾液100μl

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 5

メーカー
コード
ゲノムDNAキット（組織 & 細胞）コードNo.
509-32613
507-32614
506-32623
504-32624
500-32626

品

名10321202 InvisorbTM Genomic DNA KitⅡ
10321203 （Batch Format）
10331102
InvisorbTM Genomic DNA KitⅢ
10331103（Batch Format）
10331104

包

装

希望納入
価格（円）

適用サンプル

25 回分
100 回分
25 回分
100 回分
250 回分

9,000
新鮮・凍結動物組織，
マウスの尾，
パラフィン包埋組織0.5-40mg
25,0009,000
培養細胞，
新鮮・凍結酵母，
バクテリア2×106個
25,000
血漿，
血清100μl
50,000

50 回分
100 回分

22,000
法医学的サンプル(血痕，歯，骨，毛根，精子，
チューインガム，切手など)
39,500

法医学キット503-32633 10341002 InvisorbTM Forensic Kit
501-32634 10341003 （Batch Format）●ゲノムDNA／Total RNAの並行抽出・精製
細胞DNA/RNA並行分離キット
500-32643 10704002
InvisorbTM TwinSpin Cell Mini Kit
508-32644 10704003
507-32653 10703002 InvisorbTM Twinprep DNA/RNA Kit
505-32654 10703003 （Batch Format）

50 回分 29,500
新鮮培養細胞1×106個
250 回分 118,000
25 回分 14,500 新鮮培養細胞5×106個
50 回分 26,000 新鮮動物組織50mg●Total RNAの抽出・精製
細胞RNAキット504-32663 10605002
InvisorbTM Spin Cell RNA Mini Kit
502-32664 10605003
501-32673 10605102
InvisorbTM Spin Cell RNA Midi Kit
509-32674 10605103

50 回分
250 回分
25 回分
50 回分

22,000 新鮮培養細胞1×107個
94,000 新鮮酵母1×109個，バクテリア5×107個
35,000 新鮮培養細胞2.5×107-1×108個
63,000 新鮮酵母，
バクテリア

25 回分
50 回分

14,500 新鮮植物組織100mg
26,500 新鮮植物細胞，
糸状菌1×107個

50 回分
100 回分
50 回分
100 回分

酵母，
バクテリア103-104個
13,000 真核細胞102-103個，23,000 血漿，
血清100μl，
組織0.5-1mg
酵母，
バクテリア105-108個
18,000 真核細胞106-108個，32,000 血漿，
血清500μl，組織5mg-1g

50 回分
100 回分

25,000糞便100mg
45,000植物RNAキット508-32683 10608002
InvisorbTM Spin Plant RNA Mini Kit
506-32684 10608003

RNAキット505-32693 10601003 InvisorbTM RNA KitⅠ
503-32694 10601004 （Batch Format）
508-32703 10602003 InvisorbTM RNA KitⅡ
506-32704 10602004 （Batch Format）

エンテロウイルスRNAキット
505-32713 10604002 InvisorbTM Enterovirus RNA Kit
503-32714 10604003 （Batch Format）■96ウェルプレート
プラスミドキット ／吸引法
504-32761
501-32771
507-32773
505-32774
501-32776

70101102
2×96 回分 98,000
バクテリア培養液0.5-2.0 ml/wellInvisorbTM Plasmid HTS 96 Kit/V-Starting Kit
70103101
1×96 回分 35,000
70103102
2×96 回分 60,000
バクテリア培養液0.5-2.0 ml/well
70103103 InvisorbTM Plasmid HTS 96 Kit/V
4×96 回分 108,000
別売のInvisorbTM 96 Vacuum Manifoldが必要
70103104
24×96 回分 540,000

PCR産物精製キット ／吸引法
506-32841
503-32851
509-32853
507-32854
503-32856

70211102
2×96 回分 87,000
PCR産物，
酵素反応液200μl
InvisorbTM PCR HTS 96 Kit/V-Starting Kit
70213101
1×96 回分 24,000
70213102
2×96 回分 42,000
PCR産物，
酵素反応液200μl
70213103 InvisorbTM PCR HTS 96 Kit/V
4×96 回分 75,000
別売のInvisorbTM 96 Vacuum Manifoldが必要
70213104
24×96 回分 375,000

細胞RNAキット ／吸引法
508-32921
505-32931
501-32933
509-32934
505-32936

70611102
2×96 回分 98,000
新鮮培養細胞50-5×105個
InvisorbTM RNA HTS 96 Kit/V-Starting Kit
70613101
1×96 回分 45,000
70613102
2×96 回分 80,000
新鮮培養細胞50-5×105個
70613103 InvisorbTM RNA HTS 96 Kit/V
4×96 回分 145,000
別売のInvisorbTM 96 Vacuum Manifoldが必要
70613104
24×96 回分 790,000

吸引マニホールド
Plasmid Midi Kit，Plasmid Maxi Kit，
56,000 Plasmid HTS 96 Kit，
PCR HTS 96 Kit，
RNA
HTS 96 Kitに対応
ロボット対応(Beckman Coulter，Canberra Packard，Qiagen用)および遠心法96ウェルプレートキットにつきましては、
当社代理店あるいは
当社営業員にお問い合わせ下さい。
504-33001

50102100 InvisorbTM 96 Vacuum Manifold

1個

I.T.

6 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

多糖類の夾雑でお困りの方に…

α-アミラーゼ ウルトラピュア
α-アミラーゼはα-1,4-グルコシド結合を加水分解する酵素です。本酵素の最適pHは5〜9と広く、かつ耐熱【使用法】
コーンを原料としたスナックからのDNA抽出例

性を有することから様々な反応条件でお使いいただけます。また、本品はDNaseやDNAをほとんど含まない←1×α-Amylase Ultrapure Buffer
8ml
40μl←2M CaCl2
200units←α-Amylase Ultrapure撹拌
90〜100℃ 30分間（10分毎によく撹拌）
10,000×g 10分間

高純度のα-アミラーゼ溶液です。発現菌体由来のDNaseによる試料中のDNAの分解やゲノムDNAのコ
ンタミが少なく安心してお使いいただけます。本品は試料中のデンプンを効率的に液化することから、従来抽出が困難であった多く含む試料からのDNA抽出に非常に有用です。
抽出バッファーを別途ご用意しておりますので、必要に応じてお求め下さい。

【形状】
10mM Tris-HCl（pH8.0）,10mM CaCl2, 50％ Glycerol

液体窒素により粉砕したスナック0.8g

上清
オープンカラム精製

DNA【酵素反応条件】
30mM Tris-HCl（pH8.0）, 500mM NaCl, 10mM
CaCl2, 5M Urea, 5% Tween 20, 0.5% Triton X-100【保存】・α-Amylase Ultrapure：−20℃（凍結不可）【保存】・1×α-Amylase Ultrapure Buffer：室温【活性】4〜10units/μl
コードNo.

品

名

容量

希望納入価格（円）316-04751

α-Amylase Ultrapure

4,000units

23,000312-04753

α-Amylase Ultrapure

20,000units

80,000313-04761

1×α-Amylase Ultrapure Buffer（2M CaCl2 2.5ml添付）

500ml

12,000【使用例】α-アミラーゼ ウルトラピュアを添加して抽出したDNAを用いたPCR〈コーン（コーンスナック）〉Zein遺伝子の検出
1

2

3

4

5

6

7

8

9

lane 1lane 2lane 3lane 4lane 5lane 6lane 7lane 8lane 9製品A（×1）
B（×1）
C（×1）
D（×1）
E（×1）
F（×1）
Marker 11(pUC19/MspⅠdigest)
鋳型DNAなし（ネガティブコントロール）
コーンミール（×1/10）（ポジティブコントロール）

Q & A
Q 酵素の由来菌株は何ですか？
A Bacillus subtilis です。
Q 菌体由来のゲノムDNAやDNaseの混入のチェック方法は？
A 品質管理試験における純度試験を実施しています。
・DNase試験：酵素 30unitsと1μgのλ/ HindⅢを37℃で16時間反応させた後、アガロースゲル電気泳動を行った結果、泳動パターンに変化は認められない。
・DNAコンタミ試験：PCRを用いたDNAコンタミ量の検定試験を行い、菌体由来のDNAが1ng 以下であることを保証しております。

Q 酵素の活性定義は何ですか？
A よう素呈色法を用い、緩衝液のみの反応をコントロールとして、酵素液の青紫色の呈色が1％低下する酵素量を1ユニットと定義しています。

Q なぜ、酵素に反応バッファーが添付されていないのですか？
が存在することで安定化します
A 反応バッファー中に、Caので、特に専用の反応Bufferの必要ないためです。しかし、
2＋

ニッポンジーン社で、酵素活性を促進する物質を添加した
1×α-Amylase Ultrapure Bufferは別売しております。
PCRにて目的遺伝子が増幅しないのですがどうすればよいで

Q しょうか？

サンプル量を増量するなど、PCR条件を検討して下さい
A （Template量、サイクル数など）。

Q 加工食品より抽出したDNAをアガロースゲル電気泳動でバンドを検出できなかったのですが…
DNA量は非常に微量であるため、サン
A 加工食品に含まれる
プルによってはバンドを検出できないことがあります。

Q 米粒や果肉などのサンプルに応用できますか？
A 検討しておりません。
I.S.

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 7

小包装
追加

ウエスタンブロット用MWマーカー

ドクターウエスタン
IgGと特異的に結合。メンブレンやX線フィルム上で分子量マーカーを確認できます！
Dr.Westernは、IgGと特異的に結合する性質をもった新規のウエスタンブロット用に開発されたタンパク
質分子量マーカーです。最終的にメンブレンやX線フ
ィルム上にバンドを検出することができるため、分子量の算出やウエスタンブロットの正否のチェックが容易に行えます。本品には15k〜82kまでの6種類のサイズ
マーカーが入っています。

写真１

【実験例】
写真１

写真2
1

Dr.Western（2μl/レーン,300ng）]
一次抗体：抗オボアルブミン抗血清[ウサギ（1/2,500希釈）
二次抗体：ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギⅠgG（1/3,000希釈）

写真3
2

1 2 3 4

写真２ １：Dr.Western（2μl/レーン,300ng ）
82k
68k
55k

２：組み換えヒトアラニンアミノトランスフェラーゼ（r-hALT）
部分精製品0.1μg/レーン
一次抗体：抗r-hALTモノクローナル抗体（10μg/ml）
二次抗体：ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスⅠgG（1/3,000希釈 ）

42k
28k

写真3
15k

PVDF膜

PVDF膜

X線フィルム（100回分）【キット内容】
Dr. Western

Lane 1：Dr.Western（75ng）
Lane 2：625ng
Lane 3：125ng
Lane 4：25ng
サンプル：rGFP（組み換えGFP）
1次抗体：Anti-GFP,mAb(11E5)(×2,000)
2次抗体：HRP anti-mouse ⅠgG,Rabbit(×2,000)
PVDF膜（Immobilon-P）
検 出：ImmunoStarTM Kit for Rabbitにより行った。
1分間露光【使用量】免疫染色： 2μl/lane：10μl/lane

CBB染色200μl（40μl×5tube）【分子量】81,807、68,406、55,004、41,603、28,201、 【取扱上の注意】
14,800（Da）【濃度】0.05μg / 2μl（各タンパク質あたり）
0.3μg / 2μl（総タンパク質）【形状】62.5mM Tris/HCl（pH6.8）/2% SDS/5%

1）室温で完全に融解してから使用して下さい。
2）免疫ブロッティングの場合、低分子のバンドの染色性は他のバンドと比べて低くなります。
3）アプライ前にボイルする必要はありません。

【保存】−20℃glycerol / 0.005% Bromophenol Blue
コードNo.
304-51663
308-51661

品

名Dr.Western（ドクターウエスタン）量

希望納入価格（円）40μl（20回分）

容

5,000

40μl×5（ 100回分）

20,000〔参考文献〕※「化学発光におけるDr.Westernの最適濃度の検討」は、（1992） WAKO BIO WINDOW No.16の4頁
1）Kihira, Y. et al.: J. Chromatogr., 597, 277-283（1999）
をご参照下さい。
2）Laemmli, U. K.: Nature, 227, 680-685（1970）※「Dr.WesternのQ&A」は、WAKO BIO WINDOW3）Kihira, Y. et al.: Urol. Oncol., 2, 20-26（1996）
No13の14,15頁（1998）をご参照下さい。
I.S.

8 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

遺伝子発現パターンの機能解析に…

製造元
輸入元

DNAアレイEUROGENTEC社
ニッポンジーン

ニッポンジーンでは、EUROGENTEC（ユーロジェンテック）社のDNAアレイを取り扱って
おります。
生物種

ORFs

Bacillus subtilis

4,096

Helicobacter pylori

1,600

Neisseria meningitidis

2,080

Neisseria meningitidis

2,191

Z2491＋MC58

Candida albicans

2,000

Saccaromyces cerevisiae
Drosophila melanogaster

6,168
22,000

製品形態

共同研究先

スライドガラス
ナイロンメンブレン（2枚）
スライドガラス
ナイロンメンブレン
スライドガラス
ナイロンメンブレン
スライドガラス
ナイロンメンブレン
スライドガラス
ナイロンメンブレン
スライドガラス

備考

1,2
3
4
4
3
新プライマー使用
秋頃発売予定1〔共同研究先〕
1）
ドイツ癌センター：DKFZ、Heidelberg,
2）
フランス農務水産省 国立農学研究院：INRA, Jouy enJosas3）パスツール研究所：Pasteur Institute, Paris
4）フランス雇用労組省 保健医療研究局：INSERM. Paris■ナイロンメンブレン：12×8cmのナイロンメンブレ
ンにダブルスポットされています。
■スライドガラス：アミノシランコートされたスライドガラスにダブルスポットされています。

■各製品共にPCRプライマーセット及び標識用プライ
マーセットをご用意しています。
PCRプライマーセット：各2nmol, 96穴プレート
標識用プライマーセット：各5pmol, 1チューブ〔問い合わせ先〕
WAKO BIO WINDOW係
E-mail：biowin@wako-chem.co.jp
FAX：06-6201-5965

GMO検知用試薬
GMジャガイモ検知用オリゴヌクレオチドを新発売しました！
コードNo.

製

内容

濃度

容量

312-05191

GMジャガイモ系統別DNA
New leaf Plusオリゴヌクレオチド

p-FMV02-5'
PLRV01-3'

50μM
50μM

30μl
1set
30μl （各1,500pmol）

12,000318-05193

GMジャガイモ系統別DNA
New leaf Plusオリゴヌクレオチド

p-FMV02-5'
PLRV01-3'

50μM
50μM

90μl
1set
90μl （各4,500pmol）

24,000315-05201

GMジャガイモ系統別DNA
PLRV-rep1-5'
New leaf Plus確認用オリゴヌクレオチド PLRV-rep1-3'

50μM
50μM

30μl
1set
30μl （各1,500pmol）

12,000311-05203

GMジャガイモ系統別DNA
PLRV-rep1-5'
New leaf Plus確認用オリゴヌクレオチド PLRV-rep1-3'

50μM
50μM

90μl
1set
90μl （各4,500pmol）

24,000312-05211

GMジャガイモ系統別DNA
New leaf Yオリゴヌクレオチド

p-FWV05-5'
PVY02-3'

50μM
50μM

30μl
1set
30μl （各1,500pmol）

12,000318-05213

GMジャガイモ系統別DNA
New leaf Yオリゴヌクレオチド

p-FWV05-5'
PVY02-3'

50μM
50μM

90μl
1set
90μl （各4,500pmol）

24,000319-05221

GMジャガイモ系統別DNA
New leaf Y確認用オリゴヌクレオチド

PVY01-5'
PVY01-3'

50μM
50μM

30μl
1set
30μl （各1,500pmol）

12,000315-05223

GMジャガイモ系統別DNA
New leaf Y確認用オリゴヌクレオチド

PVY01-5'
PVY01-3'

50μM
50μM

90μl
1set
90μl （各4,500pmol）

24,000316-05231

ジャガイモ内在性DNA
Pssオリゴヌクレオチド

Pss 01n-5'
Pss 01n-3'

50μM
50μM

30μl
1set
30μl （各1,500pmol）

12,000312-05233

ジャガイモ内在性DNA
Pssオリゴヌクレオチド

Pss 01n-5'
Pss 01n-3'

50μM
50μM

90μl
1set
90μl （各4,500pmol）

24,000品

名

包装単位

希望納入価格（円）※GMトウモロコシCBH351系統検知用プラスミド及びGMジャガイモ検知用プラスミドは近日発売予定です。
※GMトウモロコシ、GMダイズ検知用オリゴヌクレオチドとプラスミドの製品リストにつきましては、
WAKO BIO WINDOW No.31の2頁（2001）をご覧下さい。
http://www.kongo.co.jp/npgene/gmdetect.html参照。

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 9

ルシフェラーゼアッセイのスタンダード試薬

ピッカジーン（PicaGene® ）
国内生産、
国内生産
だから安心
安心
ラジオアイソトープを用いた

500,000

CATアッセイに代わるレポータ

450,000

ー遺伝子アッセイに向け、 高感
度 、 迅速 、 簡便 、 安全 、

400,000

低コスト を武器に日本で初めての本格的なルシフェラーゼア

250,000

ッセイ試薬として1991年投入し150,000

350,000
300,000
200,000
100,000。
た「ピッカジーン(PicaGene® )」プロモーターなどによる転写

50,0000活性の測定をベースに着実に用途が拡がり、販売から10年が経った現在、ポスト・ヒトゲノム
プロジェクトの一翼としての遺伝子機能の解析を始め、製薬メ
ーカーによるゲノム創薬、細胞膜受容体やシグナルトランスダ

3,500,000

クションの解析、環境ホルモンの活性測定など、ルシフェラー

3,000,000

ゼアッセイの拡がりに呼応しな

2,500,000

がら「ピッカジーン」はその発光性能や使い勝手に磨きをかけ

2,000,000て進化して参りました。
1997年より国内の東洋インキ専用工場での生産に切り換え、

1,500,000
1,000,000

従来にない特長を製品に賦与させています。

【特長】◆発光量のアップ◆使用頻度に併せたオーダーメイド生産

凍結乾燥品、凍結品、共に発光量を従来に比べアッカタログに記載されていない容量やサイズのご指定

プさせ、世界最高の発光強度を実現しました。またにもお応えします。
「ピッカジーン」は試薬ロスのな

これに伴い、日本ならではの厳格な品質管理を施し、生産ロット毎の発光量の相違を最小限に抑えてあり

い効率的なルシフェラーゼアッセイのお手伝いを致します。

ますので、いつでも再現性のあるデータを得ること。
ができます（図1）◆ハイスループットタイプの「ピッカジーンLT」登場◆試薬の安定性の向上

従来タイプのピッカジーンに独自に改良を加え、長時間発光し続けるロングタイプを開発。半減期が1

独自の処方を導入し、いったん使用した試薬も冷蔵

時間から7.5時間まで幅広く製品をラインナップし、（0℃または4℃）により安定に保存できるようになりました（図2）。また、輸送時に使用されるドライア

研究目的に合った製品を選択することができます。
細胞溶解剤を含む1液タイプで、ロボットアッセイ

イスが凍結品(PGL5500、PGL2000)を劣化させるクレームに対応し、それを防ぐ工夫もこれらの製品にに対応させています。

適用させてあります。

◆使い勝手および安全性への配慮

加速度的に拡がるルシフェラーゼアッセイの用途。
それにお応えできる「ピッカジーン（PicaGene）」を目

凍結乾燥品(PGL100、PGL1500)が入った容器は輸入指し、東洋インキ製造㈱はさらなるR&D強化を図って販売時にはアルミシールで密封されていましたが、おります。
ライフサイエンス分野をさらに明るく照らすホタル

これで手を切る危険性やゴミ分別の問題などユーザー側の視点に立ち、全面的に簡単なスクリューキャップに改めました。

10 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001の「光」を、是非とも皆様の研究にご活用ください。

コードNo. メーカーコード
302-04311 PGL100

品

名

構成内容

ピッカジーン発光キット

容・発光基質（凍結乾燥品）7mg
・PGL100 1本

309-04321 PGL1500 ピッカジーン発光キット

・PGL1500 5本・緩衝液 10ml

306-04331 PGL5500 ピッカジーン発光キット

・発光基質（溶解液）50ml
・PGL5500 1本

303-04341 PGL2000 ピッカジーン発光キット

・PGL2000

希望納入価格（円）

100回用

10,000100回用×5

45,000500回用

45,000500回用×4

165,000

300-04351 PGC50

ピッカジーン 培養細胞溶解剤 Luc（ルシフェラーゼアッセイ専用）

30ml

6,000

307-04361 PGC51

ピッカジーン 培養細胞溶解剤 LCβ（Luc,CAT,β-galactosidaseアッセイに使用）

30ml

6,000

上記以外にも製品をとりそろえておりますので、パン
フレットをご請求下さい。

5本量〔パンフレット請求先〕WAKO BIO WINDOW係
E-mail：biowin@wako-chem.co.jp
FAX：06-6201-5965

I.S.

ROS検出用 水溶性ジヒドロローダミン123

ジヒドロローダミン123塩酸塩
非蛍光性のジヒドロローダミン123は、細胞に容易に

H2N

O

NH2

入り、酸化物質や細胞内の酸化還元系により酸化され、蛍光性のローダミン123になりミトコンドリア膜内に蓄積します。スーパーオキシドやペルオキシニトライト

Hを含む活性酸素種の検出に用いられます。本品は、水溶性の塩酸塩になっています。

【規

COOCH3格】

含量（HPLC）：90.0%以上

C21H18N2O3 = 346.38(net)

メタノール溶状：試験適合コードNo.
047-28231

品

名規Dihydrorhodamine 123 Hydrochloride

格

生化学用

容

量 希望納入価格（円）10mg

27,000K.T.

〔参考文献〕
1) Kooy, N. W. et al.: Free Radic. Biol. Med., 16, 149（1994）

2) Vowells, S. J. et al.: J. Immunol. Meth., 178, 89（1995）

ローダミン123
生細胞中のミトコンドリアに取込まれ、ミトコンド
リア内の電位変化をモニターする蛍光試薬です。フロ

H2N

O

NH2 Cl＋−ーサイトメトリー実験に汎用されます。またアポトー
シスに伴うミトコンドリアの変化を検出できることからも用途は広がっています。

【規

COOCH3格】

含量（HPLC）：95.0%以上
C21H17ClN2O3 = 380.82

メタノール溶状：試験適合コードNo.
181-01701

品
Rhodamine 123

名

規

格

生化学用

容

量 希望納入価格（円）

50mg

K.N.

〔参考文献〕
1) Bernal, S. D., et al.: Science, 218, 1117
（1982）

17,0002) Millot, J. M., et al.: Cytometry, 17, 50（1994）

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 11

遺伝子組換え食品のDNA受託検査㈱日本遺伝子研究所では、PCR法を用いた遺伝子組換え大豆・とうもろこしの受託検査を行っています。
独自の内部精度管理用GMOプライマーを数種類組み合わせて検出を行っており、また、独自に開発した
plant DNA抽 出 法 に よ り 高 純 度 の ゲ ノ ム DNA【検出例】
サンプル中に組換え遺伝子（CP4遺伝子）が存在す
れば、570bpの増幅産物（バンド）が検出されます。
またコントロールとしての大豆アクチン遺伝子は225bpのバンドが検出されます。

（260/280比：2.0OD）を得ることができるため、精度のたいへん良いものとなっています。

PCR反応後の電気泳動写真【GMO検出のフローチャート】

M

1. DNAの抽出

1

M

2

↓
2. PCRによるDNAの増幅[ 570bp 組換え
遺伝子↓
3. PCR反応生成物の電気泳動による分析↓[225bp 大豆アクチン
遺伝子

4. DNA分析報告書を発行（お客様へ発送）

M：分子量マーカー（pUC18 /Sau3A）【検出可能な材料】

1：陰性サンプルs大豆

2：陽性サンプル

sとうもろこし（加工品）
s豆乳【検査項目】

s油揚げ
s豆腐
s味噌

sPCR法によるGMOの検出
sGMOの定量sその他ご相談下さい

sDNAの抽出検査

コードNo.
638-03081

品
GMOの検出（受託検査、
PCR法）

名

検 体
1回

希望納入価格（円）20,000635-03091

GMOの検出（受託検査、
PCR法）、加工品

1回

25,000638-03101

GMOの定量（受託検査）

1回

50,000〔問い合わせ先〕WAKO BIO WINDOW係

E-mail：biowin@wako-chem.co.jp

FAX：06-6201-5965

G.IT.

病理組織包埋用パラフィンに低融点タイプ新登場！

パソプレップ ® 546
優れた薄切性・伸展性・浸透性、そのうえ低融点のパラフィンです。免疫染色に優れている上、包埋が難しいと言われるマウス、ラット等の実験小動物の組織包埋に適しています。

コードNo.
167-20501

品

名Pathoprep® 546

融

点

規

格

容

量

希望納入価格（円）54〜56℃

病理組織包埋用

2kg×312,000【関連製品】
162-18961

Pathoprep® 568

56〜58℃

病理組織包埋用

500g×1213,000165-19551

Pathoprep® 580

58〜60℃

病理組織包埋用

2kg×313,000〔パンフレット請求先〕WAKO BIO WINDOW係

12 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

E-mail：biowin@wako-chem.co.jp

FAX：06-6201-5965

K.N.

[Gly14]-ヒューマニン
アルツハイマー病における神経細胞死を強力に抑制するペプチド見つかる！
アルツハイマー病の重要な研究課題の１つに神経細胞死を進行させる因子の解明があり、報告も多くあり

西本らは化学合成したHumaninを用い、神経細胞の保護作用が用量依存的であることを証明しました。同ます。しかし、慶応大学の西本らは、病気の原因が細胞死の抑制因子に起因し、その作用低下にあると考え時に、構造活性相関の検討から、14位のSer残基をGly残基に置換した誘導体 [Gly14]-Humaninが強い作用を持ました。彼らは death-trap法を用いV642I-APPを発現

つことを見いだしました。実際、このペプチドは種々させたF11神経株の中から、生存できた細胞をスクリーニングしました。その結果1567塩基からなるcDNAの因子によって引き起こされる細胞毒性を10 nMという低用量で強力に抑制しました。

を見いだしました。さらにその遺伝子内のどの部分が細胞死を抑制するかを確定し、アミノ酸24残基からな新しい考え方と手法を用いて見いだされた [Gly 14]-

るHumaninを同定しました [Proc. Natl. Acad. Sci.

Humaninはアルツハイマー病の研究の発展に大きく寄U.S.A., 98, 6336-6341 (2001)]。

与するだけでなく、アルツハイマー病治療薬開発に新たな可能性を与えるものと期待されています。

神経細胞でHumaninを発現させると確かに細胞毒性が抑制されました。また、この神経細胞の培養上清には

M
L L
C
L
A
S
D L P V K R R A
L
P
F
I
T
R G
G E

細胞保護作用が認められました。培養上清のHumanin
免疫活性は分子量3-4kDaのバンドにありました。これ
らの事実から、Humaninは単なる遺伝子情報ではなく、細胞から分泌されて神経細胞の保護作用を示すことが判明しました。

コードNo.

メーカーコード品
14[Gly14]-Humanin

名

容

量

希望納入価格（円）334-43851

4385-v[Gly ]-Humanin

0.5 mg/vial

10,000337-43841

4384-v

Humanin

0.5 mg/vial

25,000336-43791

4379-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 40) [HCl Form]

0.5 mg/vial

20,000330-43071

4307-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 40)

0.5 mg/vial

18,000338-43491

4349-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 42)

0.5 mg/vial

30,000333-43701

4370-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 43)

0.5 mg/vial

35,000336-43671

4367-v[Pyr3]-Amyloid β- Protein (Human, 3- 42)

0.5 mg/vial

30,000【関連製品】

334-43091

4309-v

Amyloid β- Protein (Human, 25- 35)

0.5 mg/vial

4,000

334-43591

4359-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 16)

0.5 mg/vial

10,000337-43581

4358-vβ-Sheet Breaker Peptide iAβ55 mg/vial

16,000330-00111

14307-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 40) Antiserum

0.05 ml/vial

25,000336-00211

14356-v

Amyloid β- Protein (Human, 34- 40) Antiserum

0.05 ml/vial

25,000333-00221

14357-v

Amyloid β- Protein (Human, 37- 42) Antiserum

0.05 ml/vial

25,000330-00231

14359-v

Amyloid β- Protein (Human, 1- 16) Antiserum

0.05 ml/vial

25,000

学会・展示会名

期間

学会場＊日本生物工学会

9/26〜28

山梨大学

日本神経化学会

9/26〜28

京都国際会議場＊食品開発展2001

9/26〜28

東京ビッグサイト＊日本癌学会

9/26〜28

パシフィコ横浜

当社は、＊印の学会・展示会に展示を行っておりますので、是非お越し下さい。

G.I.

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 13

蛍光法によるアポトーシス検出キット®

■細胞表面のホスファチジルセリン測定によるアポトーシス検出
Vybrant Apoptosis Assay Kits
正常細胞では細胞膜の細胞質表面にあるホスファチ
ジルセリンが、アポトーシスの初期段階では細胞膜のチジルセリンと特異的に結合するannexin V（ホスファ
チジルセリン結合タンパク質）を用いて正常細胞、アポ外部表面へ移動することが知られています。MPI社の4
種類のVybrant Apoptosis Assay キットは、ホスファ

トーシス細胞、ネクローシス細胞を区別します。

Single-Color Assay
Vybrant Apoptosis Assay Kit #1

緑色蛍光プローブを組み合わせた一色測定キットです。Alexa Fluor 488 annexin Vがアポトーシス初期の細胞表面のホスファチジルセリンに結合し、膜非透過性のSYTO Green dyeが、形質膜が不完全になったネ
クローシス細胞を染めます。染色後ネクローシス細胞
は正常細胞やアポトーシス細胞よりも強く緑色の蛍光を示します。また、このキットはフローサイトメータのFL１チャンネルのみを使用しますので、残りのチャンネルを他のパラメータの研究に利用することができます。

【キット内容】
sAlexa Fluor 488 annexin V
sSYTO Green dye

250μl
100μl

s5×Annexin-Binding Buffer

15ml

50回用

68,400円
Mito Tracker Red CMXRos fluorescence（V-13240）

Mito Tracker Red CMXRos fluorescence503-33691

細胞膜外部表面のホスファチジルセリンとミトコンドリ
アの変化の同時検出（左図）Camprothecin処理 （右図）Camprothecin未処理
Vybrant Apoptosis Assay Kit ♯1とMito Tracker Red
CMXRosのマルチパラメータ検出例
V：正常細胞 N：ネクローシス細胞 A：アポトーシス細胞

Two-Color Assay
506-33701（V-13241）

Vybrant Apoptosis Assay Kit #2

50回用

59,500円

緑色蛍光プローブと赤色蛍光プローブを組み合わせた二色測定キットです。上記のKit #1と同様に、Alexa
Fluor 488 annexin Vがアポトーシス細胞表面のホスファ
チジルセリンと結合し、赤色蛍光のPropidium iodide
がネクローシス細胞の核酸と結合します。Propidium
iodideは正常細胞や初期のアポトーシス細胞では膜非透過性です。

【キット内容】
sAlexa Fluor 488 annexin V

250μl

sPropidium iodide

100μl

s5×Annexin-Binding Buffer

15ml

10μM Camptothecin処理されたJurkat細胞でのアポトーシス細胞検出例
初期アポトーシス細胞表面のホスファチジルセリンは、Alexa
Fluor488で緑色に、後期アポトーシス細胞とネクローシス細胞は、Propidium iodideで赤色に染色される。

Two-Color Assay
503-33711（V-13242）

Vybrant Apoptosis Assay Kit #3

上記Kit #2のAlexa Fluor488 annexin Vの代わりに

50回用

46,200円【キット内容】

FITC annexin Vを用いたキットです。
Kit #2、Kit #3はフローサイトメータや蛍光顕微鏡に

sFITC annexin V
sPropidium iodide

250μl
100μl

使用できます。

s5×Annexin-Binding Buffer

15ml

14 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

500-33721（V-23200）

Vybrant Apoptosis Assay Kit #６

アポトーシス細胞表面のホスファチジルセリンをBiotin X

50回用

59,500円【キット内容】

annexin Vで染色した後、Alexa Fluor350 streptavidin

sBiotin-X annexin V

250μl

でannexin Vを明るい青色に蛍光染色します。一方、赤色蛍光のPropidium iodideがネクローシス細胞の核酸と結sAlexa Fluor 350 streptavidinsPropidium iodide

200μg
100μl

合します。青色蛍光と赤色蛍光の標識のため、可視ス
ペクトル部分がマルチパラメータ研究に利用できます。

s5×Annexin-Binding Buffer

28ml■細胞膜透過性変化によるアポトーシス検出507-33731 （V-13243）

Vybrant Apoptosis Assay Kit #4

200回用

38,500円

アポトーシスが進行するにつれ、細胞膜の透過性は段階的に増加します。ネクローシス細胞の膜を透過する赤色蛍光のPropidium iodideとアポトーシス細胞の形
質膜を透過し、緑色蛍光に染めるYO-PRO-1を組み合わせた２色測定キットです。この二種類の蛍光色素で染色すると、アポトーシス細胞は緑色蛍光を、死細胞は赤色蛍光を、正常細胞はかすかに蛍光を示します。また、この二種類の色素はアルゴンイオンレーザーの488nmの波長で効率よく励起され、フローサイトメー
タや蛍光顕微鏡に適しています。

【キット内容】
sYO-PRO-1 dye

200μl

sPropidium iodide

200μl

（左図）
10μM Camptothecin処理したJurkat細胞 （右図）
未処理
Campothecin処理された細胞ではアポトーシス細胞の比率（A部分）が高くなっている。
V：正常細胞 N：ネクローシス細胞 A：アポトーシス細胞■クロマチン構造の変化によるアポトーシス検出504-33741 （V-13244）

Vybrant Apoptosis Assay Kit #5

アポトーシスが進行した細胞ではクロマチン凝集が認められ、核はHoechst33342で明るく蛍光染色されます。このキットは、青色蛍光のHoechst33342と赤色蛍

200回用

29,700円

ローシス細胞の核酸を赤色蛍光染色します。簡便迅速なフローサイトメトリー用キットです。

光のPropidium iodideの二種類の蛍光色素を用いています。Hoechst33342でアポトーシス細胞の凝集したクロ【キット内容】

マチンは青色蛍光染色され、正常細胞のクロマチンはsHoechst 33342

200μl

かすかに染色されます。一方、Propidium iodideはネク

sPropidium iodide

200μl■TUNEL法によるアポトーシス検出
501-33751 （A-23210）

APO-BrdU TUNEL Assay Kit

60回用

68,400円

アポトーシスにより断片化したDNAの3'-OH末端に5- 【キット内容】
sPositive control cells (1×106cell/ml)
Terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)を用いて sNegative control cells (1×106cell/ml)
標識した後、Alexa Fluor488標識した抗BrdUTP抗体 sTerminal deoxynucleotidyl transferase
Bromo-2'-deoxyuridine 5'-triphoshate(BrdUTP)をを反応させ、アポトーシス細胞をフローサイトメータ
で検出します。

5ml
5ml
40.5μls5-Bromo-2'-deoxyuridine 5'-triphoshate
480μl
sAnti-BrdU mouse monoclonal antibody PRB-1, Alexa Fluor 488 conjugate 350μl
sPropidium iodide/ RNase A Staining Buffer

30mlsReaction BuffersWash Buffer

0.6ml
120ml

sRinse Buffer

120ml

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 15

■Caspase-3活性測定によるアポトーシス検出
EnzoChek Caspase-3 Assay Kits
Caspase-3の基質になるAsp-Glu-Val-Asp(DEVD)を用®

定し、アポトーシスを検出するキットです。

いてCaspase-3やDEVD特異プロテアーゼ活性増加を測

508-33761 （E-13183）

EnzoChek Caspase-3 Assay Kit #1

500回用

59,500円

基質としてZ-DEVD-AMCを用いています。この基質 【キット内容】
は紫外部で弱い蛍光（Ex/Em max:〜330/390nm）があり
sZ-DEVD-AMS substrate
ますが、Caspase-3で強い青色蛍光物質（Ex/Em max:sDimethylsulfoxide(DMSO)〜342/441nm）に変換されます。
s20×Cell Lysis Buffer

4mg
1.3ml
1.5ml

s5×Reaction Buffer

20ml

sDithiothreitol(DTT)sAc-DEVD-CHO inhibitor

100mg
0.2mg

s7-Amino-4-methylcoumarin(AMC) reference standard 0.5mg
505-33771 （E-13184）

EnzoChek Caspase-3 Assay Kit #2

500回用

68,400円

基質としてZ-DEVD-R110を用いています。この基質

非蛍光のBisamide基自体は非蛍光物質ですが、Caspase-3で非常に強い蛍光物質(Ex/Em max:〜496/520nm)に変換されるのが特徴

質がPeptidaseでまずです。

て非常に強い蛍光物質

Monoamide体に、続い体のRhodamine110【キット内容】
sZ-DEVD-R110 substratesDimethylsulfoxide(DMSO)

2mg
1.3ml

s20×Cell Lysis Buffer

1.5ml

s5×Reaction BuffersDithiothreitol(DTT)

20ml
100mg

sAc-DEVD-CHO inhibitorsRhodamine 110(R110) reference standard

0.2mg
0.5mg

（R-110）に変換される。

U.MI.

★Handbook of Fluorescent Probes and Research Products on
CD-ROM 8版 配布中！
★Bioprobesの最新号のNo.37配布中！

®

〔CD-ROM＆冊子請求先〕
WAKO BIO WINDOW係
E-mail : biowin@wako-chem.co.jp
FAX : 06-6201-5965

CD-ROM 8版

Bioprobes

U.MI.

16 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

百日咳毒素百日咳毒素は、5種6個のサブユニットからなり、S-1
サブユニットがAプロトマー、残りの5量体（S-4が2

起 源：Bordetella pertussis
分子量：28,000(S-1)、23,000(S-2)、22,000(S-3)、

個、S-2、S-3、S-5）がBオリゴマーと呼ばれています。
Aプロトマーは、細胞内に侵入し、Gタンパク質をADPリボシル化します。Bオリゴマーは、標的細胞に結合し、Aプロトマーを細胞内に侵入させます。

純

11,700(S-4)、9,300(S-5)
度：5バンド（百日咳毒素）、1バンド（Aプロトマー）、4バンド（Bオリゴマー）（12%ポリアクリルアミドSDS-ureaゲルで電気泳動）

活 性：百日咳毒素についてはCHO Cell Assay1)とアデニル酸シクラーゼ活性2)、BオリゴマーについてはHA Assay3)をロット毎に測定します。
コードNo.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）547-01701

Pertussis Toxin

生化学用

50μg

30,000544-01711

Pertussis Toxin A Protomer

生化学用

10μg

29,000541-01721

Pertussis Toxin B Oligomer

生化学用

40μg

40,000〔参考文献〕
1）Hewlett, M. et al.: Infect. Immun., 40, 1198
（1983）
2）Wolff, J. et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 3841
（1980）

3）Sato, Y. et al.: Infect. Immun., 41, 313（1983）
K.T.

Gタンパク質活性化剤

マストパラン
マストパランはスズメバチの毒成分で、14残基からなる細胞透過性の合成ペプチドです。Gタンパク質共役型レ

外 観：白色粉末
含 量：98.0%以上(HPLC)

セプターと類似したメカニズムで百日咳毒素感受性のGタンパク質(Gi、Go)を直接活性化させます。本品はトリフル

水溶状：試験適合
H-Ile-Asn-Leu-Lys-Ala-Leu-Ala-Ala-Leu-Ala-Lys-Lys-

オロ酢酸塩です。

H2N-Leu-Ile
コードNo.
138-13921

品

名規

Mastoparan

格

生化学用

容

量 希望納入価格（円）1mg

11,800K.T.

〔参考文献〕Nishida, M. et al.: Nature, 408, 492（2000）

高吸水性シート

ラボシートTM

特価キャンペーン
キャンペーン期間：〜平成13年9月末まで
この機会にぜひお試し下さい！
ラボシートとは
高吸水性ポリマーを吸着させた特殊シートをさらに不織布(表側)、ポリエチレンフィルム(裏側)で挟み、周囲をヒートシール加工しています。
◆用途はさまざま…解剖、薬理実験、実験器具下敷など◆サイズ：30cm×40cm◆吸水量：1枚あたり、約800ml※但し、対象が血液や体液の場合は吸収能力は多少低下します。
コードNo.
121-04701
127-04703

品
Labsheet TM

名

包装形態

通常価格

キャンペーン価格

10枚

1,900円

950円

10枚×1015,000円

7,500円G.T.

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 17

セルカウンティング キット-WR（for HTS）
セルカウンティング キット-HS（for HTS）

【特

【Cell Counting Kit の測定原理】
脱水素酵素
基質

NAD+

1-methoxy PMS
(還元体)

WST-8

酸化体

NADH

1-methoxy PMS

WST-8 ホルマザン【Cell Counting Kit（for HTS）を用いた細胞増殖試験】
1.5

Cell Counting Kit-HS（for HTS）

Absorbance at 450 nm

Cell Counting Kitは、高感度水溶性ホルマザンを生成するテトラゾリウム塩、WST-8を発色基質として採用しており、ホルマザンを溶解する操作を必要することなく、簡便に生細胞数の高感度測定が可能です。
最近では短時間に多くのサンプルを測定する技術、High-Throughput Screening（HTS）を導入した生化学
あるいは分子生物学的研究が盛んに行なわれていますが、その一つとして細胞増殖試験、細胞毒性感受性試
験などにおいてもHTSの手法を用いた研究が進められております。
HTS用細胞増殖試験、細胞毒性感受性試験用のCellCounting Kitとして、Cell Counting Kit-WR（for HTS）、
およびCell Counting Kit-HS（for HTS）を用意いたしま
した。Cell Counting Kit-WR（for HTS）はWide Range
用として、0から25,000cells/wellの細胞数測定に、またCell Counting Kit-HS（for HTS）は高感度用として、
0から5,000cells/wellの細胞数測定に適しております。

長】●384プレート対応のHTS用●1液タイプ●高水溶性●Wide Range用とHig Sensitivity用の2タイプをライ
ンアップ

1.0

0.5

0

0

1

2

3

4

5

7

6

Number of Cells（×1,000 cells/well）

2.5【操作方法】■細胞増殖試験
Absorbance at 450 nm1）対数増殖期にある細胞懸濁溶液を384wellマイクロ
プレートに35μlずつ播種する。
2）プレートをCO2インキュベーター内で2〜3時間イン
キュベーションする。
3）凍結しているキット溶液を融解させる（37℃以下の温水を使用してもよい）。
4）キット溶液35μlを各wellに添加する。
5）プレートをCO2インキュベーター内で1〜4時間イン
キュベーションする。
6）マイクロプレートリーダーで450nmの吸光度を測定する。

Cell Counting Kit-WR（for HTS）

2.0

1.5

1.0

0.5

Hela
HL60

0

0

5

10

15

20

25

Number of Cells（×1,000 cells/well）■細胞毒性試験
1）細胞懸濁溶液（1,000〜2,000cells/well）を384wellマ
イクロプレートに35μlずつ播種する。
2）プレートをCO2インキュベーター内で24〜48時間イ
ンキュベーションする。
3）試料の薬剤溶液5μlを各wellに添加し、CO2インキュベーター内で24〜48時間インキュベーションする。
4）キット溶液35μlを各wellに添加する。
5）プレートをCO2インキュベーター内で1〜4時間イン
キュベーションする。
6）マイクロプレートリーダーで450nmの吸光度を測定する。
品

Staining: 37℃, 5% CO2, 1h（Hela）
37℃, 5% CO2, 4h（HL60）
Detection: 450nm【キット内容】●WST-8, 1-methoxy PMS混合水溶液

コードNo.

メーカーコード

340-90261

CK07

Cell Counting Kit-WR（for HTS）

10,000回用

46,000343-90251

CK08

Cell Counting Kit-HS（for HTS）

10,000回用

46,00018 WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001

名

容

量

400ml×1本

希望納入価格（円）細胞接着因子コーティング済みプレート

CellScreenTMシリーズ
Pierce社からCollagen I 、Poly-D-Lysine、Poly-L-

増殖試験、アポトーシスアッセイなどに幅広くお使い

Lysineなどの細胞接着因子をコートした、96穴および384穴のマイクロプレートが供給されています。細胞

頂けます。
またハイスループットスクリーニング（HTS）へのの接着性と増殖能に優れ、レポーターアッセイ、レセ
プターバインディングアッセイ、細胞毒性試験、細胞使用にも対応していますので、医薬品等の研究開発にもご活用頂けます。

【製品概要】
96well384well

プレート材質ポリスチレン

ポリスチレン

well形状平底

平底

well容量

300μl

100μl

コーティング面積0.33cm ／well

1.6mm2／well

ふたあり（圧縮リング付き）

あり

プレート色

2

透明

透明

白

白

白（透明底）白（透明底）黒（透明底）黒（透明底）■CellScreenTM Collagen I Coated Platesシリーズ
コードNo. メーカーコード

品

名

容量

希望納入価格（円）501-33251

15610

Collagen I Coated Clear 96-well Plates

5枚

12,200508-33261

15611

Collagen I Coated White 96-well Plates

5枚

13,900505-33271

15612

Collagen I Coated White with Clear Bottom 96-well Plates

5枚

22,000502-33281

15613

Collagen I Coated Black with Clear Bottom 96-well Plates

5枚

22,000509-33291

15615

Collagen I Coated Clear 384-well Plates

5枚

15,500502-33301

15616

Collagen I Coated White 384-well Plates

5枚

17,200509-33311

15617

Collagen I Coated White with Clear Bottom 384-well Plates

5枚

27,500506-33321

15618

Collagen I Coated Black with Clear Bottom 384-well Plates

5枚

27,500

5枚

12,200■CellScreenTM Poly-D-Lysine Coated Platesシリーズ
509-33171

15600

Poly-D-Lysine Coated Clear 96-well Plates

506-33181

15601

Poly-D-Lysine Coated White 96-well Plates

5枚

13,900503-33191

15602

Poly-D-Lysine Coated White with Clear Bottom 96-well Plates

5枚

22,000506-33201

15603

Poly-D-Lysine Coated Black with Clear Bottom 96-well Plates

5枚

22,000503-33211

15605

Poly-D-Lysine Coated Clear 384-well Plates

5枚

15,300500-33221

15606

Poly-D-Lysine Coated White 384-well Plates

5枚

17,200507-33231

15607

Poly-D-Lysine Coated White with Clear Bottom 384-well Plates

5枚

27,500504-33241

15608

Poly-D-Lysine Coated Black with Clear Bottom 384-well Plates

5枚

27,500

5枚

12,200■CellScreenTM Poly-L-Lysine Coated Plates
502-31341

15620

Poly-L-Lysine Coated Clear 96-well Plates※プレートはすべて放射線滅菌処理済みです。

G.J.

訂正のお詫びと変更のご案内●WAKO BIO WINDOW No.30の17頁に紹介しました日本ハム（株）家畜臓器の輸送条件に誤りがありました。正しくは、
ドライアイスでの冷凍輸送を行なうことはできません。
●WAKO BIO WINDOW No.22の12頁に紹介致しました（株）ヤガ
イの「ミニスラブ電気泳動槽」の名前を「ミニ電気泳動槽」に変更させて頂きます。

●WAKO BIO WINDOW No.31の4頁に紹介しました「RNAサイ
ズスタンダードマーカーⅢ」の電気泳動写真の泳動パターンにに誤りがありました。
誤）「RNAサイズスタンダードマーカーⅡ」→正）「RNAサイズスタンダードマーカーⅢ」
誤）「本品」→正）「RNAサイズスタンダードマーカー（541-00741）」

WAKO BIO WINDOW No.32 AUG.2001 19

,

ヒト AN ALYZA BMP-4 イムノアッセイキット【キット構成】
s抗BMP-4抗体固相化プレート

1枚の濃度をELISA法により測定するキットです。キットには測定に必要な試薬がすべて入っており、約4.5時間

sHRP標識抗BMP-4抗体

21ml

sBMP-4標準品
s測定用緩衝液20ng
11mls標準品希釈液
s25倍濃縮洗浄液

21ml
21ml

s発色液A
s発色液B

12.5ml12.5mlでBMP-4濃度を測定することができます。

【特長】●2種類のモノクローナル抗体を使用。
●短時間（4.5時間）で測定が可能。

s反応停止液6ml●培養上清、組織から測定可能。

sプレートカバー4枚【操作方法】【検量線】

抗BMP-4抗体固相化プレート

室温、２時間
洗浄
t標識抗体

200μl

室温、２時間（遮光）
洗浄
t発色基質

測定

1

0.1

200μl
0.01

室温、30分（遮光）t反応停止液Optical Density（OD）

t測定用緩衝液
100μl
tサンプル or 標準品 50μl

10

10

50μl

100
1000
BMP-4 濃度（pg/ml）

10000

450nm

コードNo.

メーカーコード

507-34571

8086

品 名
,
Human AN ALYZA BMP-4 Immunoassay Kit

容量

希望納入価格（円）

96回用

76,000■本文に収載しております試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるもので、「医療品」、「食品」、「家庭用品」などとして使用できません。
希望納入価格には消費税等が含まれておりません。

本社 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目1番2号 （06）6203−3741（代表）支店 103-0023 東京都中央区日本橋本町四丁目5番13号 （03）3270−8571（代表）
九 州 営 業 所 （092）622−1005㈹中 国 営 業 所 （082）285−6381㈹
東 海 営 業 所 （052）772−0788㈹横 浜 営 業 所 （045）476−2061㈹
北関東営業所 （048）641−1271㈹
筑 波 営 業 所 （0298）58−2278㈹
東 北 営 業 所 （022）222−3072㈹北海道営業所 （011）271−0285㈹フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 ■機器の連絡先 06-6203-2759／03-3270-8124

01.820.6学 01 F

http://www.wako-chem.co.jp/

2001. AUG.

本キットは2種類のモノクローナル抗体を用い、組織や培養上清中のヒトBMP-4（Bone morphogenic protein-4）

Wako Bio Window No.32

TECHNE

骨形成の研究に…