ISSN 1347-4804

July 2003
Vol.71 No.3

PC12細胞にKMG-20-AM（Mgプローブ）を投与したときの蛍光顕微鏡像〔総 説〕「マグネシウムイオン蛍光分子プローブ」
鈴木祥夫、岡浩太郎、鈴木孝治 ………2

「ヒドロキシアパタイト固定化ルテニウム触媒による環境調和型酸化反応」
金田清臣 ………8＜脳科学一口メモ＞「脳由来神経栄養因子とシナプス伝達」
津本忠治 ………6＜テクニカルレポート＞「水試料中エストロゲンの分析」 吉田貴三子 ………11「amaxa社「NucleofectorTM」による細胞へのsiRNA導入」
廣世志津子 ………12＜Talking of LAL＞
「第52話 エンドトキシンの種類」 土谷正和 ………14〔化学大家〕「岸本一郎と西川虎之助」

芝

哲夫 ………25〔製品紹介〕
有機合成
ルテニウム(#)-ヒドロキシアパタイト ……10
光学分割剤 ………………………………15
ChemDiv社 ビルディングブロック製品 …15
クロマト
ワコーパック®Navi C18-5 ……………16
環境分析
水銀分析用試薬 …………………………16
日本エンバイロケミカルズ㈱ AE ELISAキット …17
ダイオキシン類分析用プレセップ®多層シリカゲル …………28

細胞生物
KMG-20-AM ………………………………5
骨代謝関連試薬 …………………………18
イノシトールりん脂質代謝関連物質 …19
薬理研究関連試薬 ………………………19
非動物由来組換えトリプシン …………19
スーパーセップ …………………………20
水酸化アルミニウムゲル ………………20㈱シバヤギ 血中IgE測定キット ………20
Apotech社 アポトーシス/ミトコンドリア
関連抗体 ………………………………21

遺伝子
RNAサイズスタンダードマーカー$…21
アルカリホスファターゼ溶液，エビ由来 …22㈱ニッポンジーンテク
CUGA®7 in vitro siRNA合成キット …22㈱ニッポンジーンsiRNAカスタム合成サービス ………22㈱ニッポンジーン
Control siRNA duplexシリーズ………23
amaxa社 NucleofectorTM
マウス神経幹細胞、ラット神経幹細胞用キット…24

1

R

esearchマグネシウムイオン蛍光分子プローブ（財）
神奈川科学技術アカデミー
慶應義塾大学理工学部
慶應義塾大学理工学部、（財）
神奈川科学技術アカデミー

鈴木 祥夫
岡 浩太郎
鈴木 孝治

1 はじめに色素に脂溶性を持たせ細胞膜を通過させるア
セトキシメチル基

細胞内情報伝達は、医学、生物学の幅広い分野で研究されており、生細胞や組OO

織中でのダイナミクスに関する情報を与える種々の試薬が市販されている。細胞O

情報を得る検出手段には、吸光、蛍光、
化学発光および放射線を利用する方法がO挙げられ、中でも蛍光法は感度や操作性等の面から最も取り扱いやすく、しかも

O

N

O

生きた単一細胞内での化学過程の非破壊分析手段として利用されている。例えば、イオンあるいは小分子のダイナミクスをマグネシウムイオン
認識部位

電子移動を起こす
非共有電子対観察するための蛍光プローブとして、カルシウムイオン、亜鉛イオン、塩化物イ
オン、cAMP、NO蛍光プローブ等が報告されている。中でも1980年代に始まっ

図1．KMG-20-AMの構造たカルシウムイオンプローブの開発は、蛍光プローブの代表的な成功例であり、めの３級アミンを有している。さらに、る必要性がある。そこで生理的条件下

単一細胞内のカルシウムイオンのダイナ

脂溶性化合物から水溶性化合物に容易に（[HEPES]＝10.0mM、[KCl]＝130.0mM、ミクスに関して多くの知見が得られてい変換させるためアセトキシメチル基を導[NaCl]＝20.0mM、[EGTA]＝2.0mM、る。一方、マグネシウムイオンはカルシ入している。この化合物を用いて、マグpH7.4）において、マグネシウムイオン

ウムイオンと同様、生体に必要不可欠なネシウムイオンをはじめとした種々の金濃度を変化させたときのKMG-20応答特物質であり、細胞内のエネルギー通貨で属イオンに対する応答特性、熱力学的パ性を、吸収スペクトルおよび蛍光スペク

あるATPあるいは記憶と学習の観点か

ラメータの算出、さらに生きた細胞内のマトルを用いて観察した。図２Aにマグネら注目されているグルタミン酸受容体とグネシウムイオンの動態について検討しシウムイオン添加前後におけるKMG-20結合し、種々の酵素反応を制約したり、たので 、ここにその一端を紹介したい。

の吸収スペクトルを示す。極大吸収波長

４）は428nmから448nmにシフトしたスペクタンパク質の立体構造の安定化、さらに筋肉の収縮、ホルモンの分泌に関与してトル変化が観察された。これは、マグネ2 キャリブレーション測定

シウムイオンとKMG-20が強く複合体をいることが知られている。しかしながら、マグネシウムイオンの細胞内ダイナミク

蛍光強度からマグネシウムイオン濃度

形成することにより、KMG-20の分子内スに関する研究は、カルシウムイオンとを求めるために、遊離のマグネシウムイの電子状態が大きく変化していることを比較して進展していないというのが現状

オン濃度と蛍光強度の関係を予め測定す示している。さらに、430nmに等吸収点である。その大きな理由は、細胞内でマグネシウムイオンを選択的に捕捉し（特0.4

ブがないためである。
今回我々が開発した蛍光分子プローブ
KMG-20-AM（AM：Acetoxymethyl）

Absorbanceめ、この影響を排除する必要がある）、
観察することができる有効な分子プロー

2000
(A)

(B)

[Mg2+]

0.3

0.0 mM

0.2

500 mM

Fluorescence Intensityにカルシウムイオンの妨害が大きいた

0.1

は、蛍光色素としてクマリンを有している。マグネシウムイオン結合部位として、
これまでの我々の研究の知見から、βジケトン類似構造を選択した１）-３）。また、

0
350

400

450

Wavelength / nm

500

1500

1000

[Mg2+]
500 mM

0.0 mM

500

0
450

500
550
600
Wavelength / nm

650

分子内の分極状態を大きくし、錯形成に伴う蛍光スペクトル変化を大きくするた2

図2．マグネシウムイオンを添加前後のKMG-20の吸収スペクトル（A）と蛍光スペクトル（B）

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

表1．マグネシウムイオンおよびカルシウムイオンとの錯形成定数2.5

蛍光プローブKMg（M-1）

KCa（M-1）

KMG-20

100.0

33.3

3.0

mag-fura-2

526.3*

40000*

0.013

mag-indo-1

370.4*

28570*

0.013

mag-fura-5

434.8*

35710*

0.012

Magnesium Green

500.0*

166660*0.003

KMg / KCa

F/F0

2.0
KMG-20Magnesium Green

1.5

1.0
Ca2+

* 参考文献５）を参照

0.5

0

1

2

3

4

5

6

Time (min)を持つ シーソー型 のスペクトル変化

オンの妨害を受けることが予想される。

を示していることから、２波長励起１波

実際に、KMG-20とMagnesium Greenに

長蛍光測光法が可能となるため、より正ついてカルシウムイオンの妨害について

確にマグネシウムイオン濃度を定量する

検討するため、測定溶液（[蛍光プローブ]＝

ことが可能となる。

図3．カルシウムイオンを添加したときのKMG-20とMagnesium Greenの蛍光強度の経時変化

10μM、[MgCl2]＝1.0mM）に、カルシウ

次に、マグネシウムイオンの添加の前

ムイオンを140nMから850nMとなるようとなるようにKMG-20-AMをDMSOに溶後で、KMG-20の蛍光スペクトルを測定に濃度を変化させて添加し、蛍光強度の解し、これをPC12細胞の培養液に最終濃した。結果を図２Bに示す。マグネシウ

経時変化を測定した。その結果、図３に度が10μMになるように加えた。37℃でムイオン濃度の増加に伴い、蛍光強度が示したように、KMG-20はカルシウムイ

30分間インキュベートした後、細胞を洗浄増加し、極大発光波長が、470nmからオンを添加しても、錯形成していたマグ

し、蛍光顕微鏡（Axiovert S 100, Zeiss社）

480nmにシフトした。さらに470nmにマ

ネシウムイオンとカルシウムイオンは置を用いて観察した。励起波長は440nm、グネシウムイオン濃度を変化させても蛍き換わらないために蛍光強度は変化しな

検出波長は500〜530nmとした。

光強度が変化しない点が観察された。

かった。一方、Magnesium Greenの場

PC12細胞にKMG-20-AMを投与した後ナトリウムイオン、カリウムイオンを合、マグネシウムイオンよりもカルシウの微分干渉像および蛍光像を図４に示添加した場合、吸収スペクトルおよび蛍

ムイオンの方が錯形成定数が高く、錯形す。蛍光像においては、赤色から黄色に

光スペクトルともに変化が生じなかっ成していたマグネシウムイオンとカルシなるほど蛍光強度が高いことを示していた。カルシウムイオンについては、数ミ

ウムイオンは置き換わり妨害を受けたた

る。KMG-20は、細胞質および樹状突起

リモル添加した時点から応答しはじめ

め、蛍光強度の増加が観察された。以上部分である成長円錐に均一に分散しておた。しかし生細胞中のカルシウムイオンのことから、KMG-20はマグネシウムイ

り、核を除いた部分を染色していること

濃度は、ナノモルから数マイクロモルでオンに対する選択性が高く、かつカルシが確認された。

あるため、KMG-20に対するカルシウム

ウムイオンの妨害を受けないため、正確次にKMG-20-AMを細胞内に投与したイオンの妨害はない。

に生体内のマグネシウムイオン濃度を定状態で、細胞膜を脱分極させるために、量出来ることが明らかとなった。

120mMのカリウムイオンを添加した。

以上の結果を基に、KMG-20とマグネシ

結果を図５に示す。Aは刺激剤を投与す

ウムイオン及び妨害イオンとなるカルシウムイオンとの錯形成定数をBenesi-Hildebrand
プロットを用いて算出し、表１にまとめた。

3細胞内のマグネシウムイ
オン測定

る前、Bは投与した後の蛍光顕微鏡写真、
Cは細胞の各部位ごとの蛍光強度の経時変化である。カリウムイオンを投与してさらに、現在市販されているマグネシウムイ
オン蛍光指示薬（mag-fura-2、mag-indo-1、KMG-20-AMの細胞内への投与は、以下から数秒後、細胞質および成長円錐部分

mag-fura-5、Magnesium Green）の値もの操作法で行った。まず、濃度が10μmol

が明るくなった。特に成長円錐部分で、併せてまとめた。KMG-20とマグネシウ
ムイオンの結合定数は100.0M-1、カルシAB

ウムイオンとは33.3M-1であり、カルシウ
ムイオンに対するマグネシウムイオンの

細胞質
成長円錐

選択性は3.0倍であった。一方、市販されているマグネシウムイオン指示薬においては、カルシウムイオンとの錯形成定数の方が、マグネシウムイオンよりも約100倍から300倍高いため、カルシウムイ

核

20µm

20µm

図4．PC12細胞にKMG-20-AMを投与したときの微分干渉像（A）と蛍光顕微鏡像（B）

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

3

A

B

20 µm

20 µm

C
成長円錐
細胞質

20 µm

核

Fluorescence Ratio (F/F0)

1.75
成長円錐
細胞質
核

1.50
1.25
1.00
0.75
High K+

0.50
0

1

2

3

4

5

Time (min)図5．カリウムイオン添加前後の蛍光顕微鏡像（A,B）
および細胞の各部位の蛍光強度の経時変化（C）

大きな蛍光強度の増加が確認された。さCa2+らに１分後、蛍光強度が減少しはじめ、４分後には初期状態に戻った。この現象

Mg2+

ミトコンドリアのメカニズムを模式的に図６に示す。刺激（高濃度のカリウムイオン）を与える
ことにより膜電位が変化し、イオンチャ
ネルを介して細胞内にカルシウムイオンが流入する。ミトコンドリア等のオルガ
ネラにシグナル伝達が伝わり、細胞内のカルシウムイオン濃度を低減させるために、マグネシウムイオンが放出される。
その結果、試薬とマグネシウムイオンが小胞体錯体を形成し、明るくなったと考えられ

核

シグナル伝達 ()により、細胞内小器官に蓄えられたMg2+が放出されるる。さらにマグネシウムイオン放出源となるミトコンドリアは細胞質よりも成長円錐部分に局在していることが実験的に

図6．カリウムイオン投与によるマグネシウムイオン濃度増加の模式図証明されたことから、図５Cにおいて、成長円錐部分のマグネシウムイオン濃度は細胞質部分よりも高く、蛍光強度の変4となっている６）。

ムイオンの生理学的知見が増えたのは、化率に違いが生じたものと考えられる。

このように開発した蛍光プローブは、

簡便に利用可能な蛍光プローブが開発さ

PC12細胞以外にもウシ血管内皮細胞に生きた細胞中のマグネシウムイオンを選れたためである。今後、さらに研究が進おいても同様の結果が得られており、さ択的にかつ高感度に同定することに有用

めば今まで明らかにされてこなかったマらに最近ではマグネシウムイオンとナトであることが示された。1980年代後半以

グネシウムイオンを中心とした分子生理

リウムイオンの相関関係について明らか

降、同じ２価金属イオンであるカルシウ

学を展開でき、細胞の専門家や医療関係

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

者の基礎研究に活用されるものと期待しSuzuki, K.: Anal. Chem., 74, 1423（2002）.
５）Haugland, R. P.: "Handbook of Fluorescentている。

Probes and Research Products, 7 th ed. ",Molecular Probes Inc.

謝辞

６）Kubota, T., Tokuno, K., Nakagawa, J.,
Kitamura, Y., Ogawa, H., Suzuki, Y., Suzuki,

本研究を遂行するにあたり、ご協力いK. and Oka, K.: Biochem. Biophys. Res.
.
Commun., 303, 332（2003）

ただきました慶應義塾大学理工学部北村美一郎博士、久保田健氏、小松広和氏に深く感謝致します。
〔参考文献〕
１）Nagashima, H., Tohda, K., Matsunari, Y.,
Tsunakwa, Y., Watanabe, K., Inoue, H. andSuzuki, K.: Anal. Lett., 23, 1993（1990）.
２）Suzuki, K., Watanabe, K., Matsumoto, Y.,
Kobayashi, M., Sato, S., Siswanta, D. and.
Hisamoto, H.: Anal. Chem., 67, 324（1995）

蛍光プローブ
蛍光光度法を用いて生体等の局所環境及

３）Suzuki, Y., Saito, N., Komatsu, H., Citterio,

びその変化を検出する物質

D., Kitamura, Y., Kubota, T., Oka, K. and.
Suzuki, K.: Anal. Sci., 17, i1451（2001）

PC12細胞４）Suzuki, Y., Komatsu, H., Ikeda, T., Saito, N.,

ラット副腎髄質クロム親和性細胞種より

Araki, S., Citterio, D., Hisamoto, H., Kitamura,

単離された神経系クローン細胞

Y., Kubota, T., Nakagawa, J., Oka, K. andffffffffffffffffffffffffffffffff

Mg2+測定用蛍光プローブ
KMG-20-AM
KMG-20-AMはMg2＋を選択的に認識しますので、細胞内のMg2＋の動態を見ることができます。また、本品はCa2+に対すOOる感受性が低いため、より正確にMg2+を定量することができます。

O形 状：褐色粉末

N

含 量（HPLC）：95%以上OOOC19H19NO6＝357.36

コードNo.
110-00711
116-00713

品
KMG-20-AM

名

規 格

容 量

希望納入価格（円）細胞生物学用1mg
5mg

10,00040,000

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

5

R

esearch

脳科学一口メモ⑱

脳由来神経栄養因子とシナプス伝達
大阪大学大学院医学系研究科組織再生医学講座神経統合機能分野

津本 忠治

1950年代に末梢交感神経細胞の生存と突起伸展を促進する物質として神経成長因（a）ニューロトロフィンと受容体

子（Nerve growth factor, NGF）
が発見され、神経細胞の分化、成熟、生存のために

NGF

NT-3

BDNF

TrkA

TrkC

TrkB

NT-4/5は標的細胞から放出される特定の蛋白質を取り込む必要があるという神経栄養因子の概念が形成された１）。その後、分子生物学の発展とともにNGFの遺伝子ファミリーがp75NTR

次々と発見され、多数の蛋白質が神経栄養因子として同定されている２）。それらのうちニューロトロフィンと総称される蛋白質はファミ（b）

リーを形成し、それぞれに特有な受容体を介して作用を発揮することが知られている（図１a） 。このように、神経栄養因子の

TrkB

TrkB

３，
４）

BDNF

伝達物質受容体

カテゴリーに入る蛋白質は非常に多いのであるが、本稿では、最近、特に研究が進

神経伝達物質の放出促進

展した脳由来神経栄養因子（Brain-derived

神経伝
達物質

シナプス後細胞の機能と形態の変化

neurotrophic factor, BDNF）のシナプス伝達に対する作用を主に紹介する。
ニューロトロフィンのシナプス伝達に対する急性作用が最初に見出されたのは、共培養したカエルの筋細胞と神経細胞が作る神経−筋シナプスにおいてであった。この標本
で、BDNFやNeurotrophin-3（NT-3）が投

図1. a, 代表的なニューロトロフィンとその受容体。p75NTRは低親和性ニューロトロフィン受容体を示す。TrkA, TrkB, TrkCは高親和性ニューロトロフィン受容体を示す。
特異的結合性を実線矢印で特異性の弱い結合性を点線矢印で示す（文献4より改変）。b, BDNFの放出部位と作用。左がシナプス前終末、右がシナプス後部を示す（文献3より改変）。

与後数分でシナプス伝達を増強することが見出された５）。この神経−筋シナプスはアセチルに対して培養大脳皮質神経細胞を用いて行コリン作動性であるが、その後グルタミン酸をわれた最近の研究によると、
８−12日間の慢

前述したように、BDNFを代表とするニュー伝達物質とするラット海馬のシナプスにおいて性投与は誘発シナプス反応を増大させるとい

ロトロフィン、さらには神経栄養因子全般は、もBDNFやNeurotrophin4/5（NT-4/5）がう。また、この増大は、イオンチャネル型グルタ

シナプス後細胞からシナプス前終末に移行

同様の作用を示すことが報告された６）。さらミン酸受容体のうちN-methyl-D-aspartate

して作用を発揮すると古くより考えられてきに、ラット大脳視覚野のスライス標本において、（NMDA）
受容体を介する成分の増大が特た。最近、この仮説を検証するため、Green

比較的高濃度（200ng/ml、7.14nMに相当）に大きいことから、シナプス前からの伝達物

Fluorescence Protein
（GFP）
を連結した

のBDNFが短潜時でしかも持続的に興奮性質放出増加だけではなくシナプス後部の受BDNF遺伝子cDNAをプラスミッドに組みシナプス伝達の増強作用を示すことが見出

容体の変化をも伴っていると推測される。そ込んで培養神経細胞の核内に直接注入す（20ng/ml）
された 。一方、比較的低濃度の理由は、もしシナプス前からの伝達物質増る実験が行なわれた ９）。その結果、BDNFのBDNFはシナプス反応を直接増強する作加だけが原因であるとすると、非NMDA型とは軸索内を終末に向かって順向性に移動

用は示さないが、1Hz、15分という低頻度連

NMDA型の両成分は等しく増大するはずだ

し、シナプス後細胞に移行することが見出さ

７）

6的シナプスの増加が起きることを示している。

続入力によって通常惹き起こされるシナプスからである。さらに、BDNF慢性投与が機能れた。さらに、この移行は神経細胞の電気活

長期抑圧を阻止する作用をもつことがその後的なシナプスの数を実際に増加させる効果

動をフグ毒（tetrodotoxin, TTX）
で抑えると発見された８）。この結果は、生理的条件下でがあるのかどうかを確認するために伝達物質

無くなること、逆に抑制阻害薬で活動を上げは内因性のBDNFが低頻度連続入力によを放出したシナプス部位を標識できる蛍光色

ると増えることも見出された。これらの知見

るシナプス抑圧の誘発を防いでいることを示

素FM1-43でシナプス前部を可視化する研究

は、BDNFのシナプス後細胞への移行は神唆している。

も行われた。その結果、BDNF慢性投与群

経細胞の電気活動に関連していることを示上述したように、BDNFを急性投与するとにおいてFM1-43色素で染色される領域が唆している。以上、単純化すれば、BDNF

シナプス伝達を増強したり長期抑圧を阻止

約２倍に増加することが明らかとなった。このの急性作用は主にシナプス前からの伝達物することが判明したのであるが、慢性投与は

結果は、BDNFが脳内神経回路に慢性的質放出を増加させることであるので、シナプ

どのような作用を示すであろうか？この疑問に作用するとシナプス前線維の増殖と活動

ス前から活動依存的に放出されたBDNFは

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

autocrine或いはparacrine的にシナプス前〔参考文献〕に短時間で作用すると考えられる（図１b）。

１） Levi-Montalchini, R.: Science, 237, 1154

一方、慢性的には、シナプス後のTrkB受容体の活性化を介して伝達物質受容体の感受性を変えたり、シナプス後細胞の突起伸展を促進したりすると考えられる。このような神経活動と連携した神経栄養因子のシナプス
後部への移行はシナプス後細胞の機能的・形態的変化に深く関与していると思われる。

５） Lohof, A.M., Ip, N.Y. and Poo, M.-M.:

Nature, 363, 350（1993）.
６） Kang, H. and Schuman, E.M.: Science ,（1987）.
２） Bibel, M. and Barde, Y.-A.: Genes Dev.,

267, 1658（1995）.
７） Akaneya, Y., Tsumoto, T., Kinoshita, S. and14, 2919（2000）.
３） 津本忠治:「脳の発生・分化・可塑性」（御子柴.
Hatanaka, H.: J Neurosci, 17, 6707（1997）
８） Kinoshita, S., Yasuda, H., Taniguchi, N.,

克彦、清水孝雄篇）
p.188（共立出版）（2002）.

Katoh-Semba, R., Hatanaka, H. and Tsumoto,４） Jessell, T.M. and Sanes, J.R.: "Principles of

Neural Science Fourth Edition"（ed. Kandel,.
T.: J Neurosci, 19, 2122（1999）
９） Kohara, K., Kitamura, A., Morishima, M.

E.R. et al.）, p.1041, McGraw-Hill（2000）.

.
and Tsumoto, T.: Science, 291, 2419（2001）

wgggggwgggggwgggggwgggggwgggggwgggggwgggggwgggggw

ttttt
コードNo.
141-07601
143-04861
147-04641
526-36081
016-15731
013-13781
533-85981
533-89901
530-52781
535-86921
562-48513
522-34621
145-06641
148-06631
018-14951
560-46331
567-47321
020-12913
010-16591
523-36351
528-37901
539-89861
032-18851
034-16351
530-85991
530-89911
539-85101
532-86291
132-13681
017-15761
014-15771
011-15781
018-15791
207-15901
190-12441

神経伝達研究用試薬

ttttt[メーカー名] 規格（メーカーコード）品
名
容 量
希望納入価格（円）NGF-β，Human，recombinant
39,000
生化学用
20μg
2.5S NGF
15,700
生化学用
10μg
7S NGF
18,300
生化学用
100μg[Genzyme/TECHNE]
β-NGF, Rat, recombinant, Carrier Free（3556X）
42,000100μg
Anti Human NGF，Monoclonal Antibody
25,000
免疫化学用
200μg
Anti Mouse 2.5S NGF（Rabbit），affinity purified IgG fraction
29,0001ml（1mg/ml）
免疫化学用[Genzyme/TECHNE]
Anti Human β-NGF，Goat（42256）72,000100μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human β-NGF, Monoclonal（43256）59,000500μg[Calbiochem]NGF Receptor（AB-1）Monoclonal Antibody（GR10）
47,800100μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Rat β-NGF, Goat
（42556）72,000100μg[UBI]
Anti p75NTR（neurotrophin receptor）, monoclonal（05-446）
57,000100μg
p75Neurotrophin Receptor（NGF Receptor）/Fc Chimera, Human, recombinant,（2367X）
61,00050μg
Carrier Free
[Genzyme/TECHNE]
Neurotrophin-3, Human, recombinant
38,000
生化学用
5μg
Neurotrophin-4, Human, recombinant
39,900
生化学用
5μg
Anti Human Neurotrophin-3，Monoclonal Antibody
30,000
免疫化学用
200μg
[UBI]
Anti Rat Trk-A（140kDa）, Polyclonal（06-574）
57,000200μg[UBI]
Anti-Trk C（06-675）
41,000250μg
BDNF，Human，recombinant
40,000
生化学用
10μg
Anti Rat BDNF, Rabbit
20,00050μl
免疫化学用[Genzyme/TECHNE]
Anti Human BDNF, Chicken（42248）72,000100μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human BDNF, Monoclonal, Biotinylated（45648）77,00050μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human BDNF, Monoclonal（43248）59,000500μg
CNTF, Human, recombinant
39,000
生化学用
20μg
CNTF, Rat, recombinant
42,000
生化学用
20μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human CNTF, Goat
（42257）72,000100μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human CNTF, Monoclonal（43257）59,000500μg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human CNTF, Goat
（41257）65,0001mg[Genzyme/TECHNE]
Anti Human CNTF R, Goat
（42303）72,000100μg
N-Methyl-D-aspartic Acid
10,000
生化学用
50mg
Anti Rat Synaptotagmin 1, Monoclonal Antibody
30,000
免疫化学用
100μg
Anti Rat SNAP-25, Monoclonal Antibody
30,000
免疫化学用
100μg
Anti Rat Syntaxin, Monoclonal Antibody
30,000
免疫化学用
100μg
Anti Rat Synaptobrevin 2, Rabbit
30,000
免疫化学用
100μg
Tetrodotoxin, from Fugu
21,000
細胞生物学用
1mg
SynaptoGreen C4【FM1-43】
15,000
生化学用
1mg

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

7

R

esearchヒドロキシアパタイト固定化ルテニウム触媒による環境
調和型酸化反応金田 清臣

大阪大学大学院基礎工学研究科

はじめに状錯体では得られない特異な触媒反応場

この酸化反応では、未だにクロム酸や二を提供できる。本稿ではヒドロキシアパ

酸化マンガンなど、有害な重金属廃棄物

21世紀における化学者の使命は、自然

タイトの特性を利用してルテニウムを固を大量に排出する酸化剤を化学量論量用と共生した持続可能な循環型社会を構築定化したRuHAP触媒による、分子状酸いる場合が多い。過酸化物やアミン- N -する新しい化学技術体系を創出すること素を用いたクリーンな環境調和型酸化反オキシドなどの有機酸化剤と遷移金属錯である。そのため、原子利用効率（atom

応について紹介する。

体を組み合わせた均一系触媒反応も報告されているが、グリーンケミストリーの

efficiency）や環境因子（E-factor）を考慮した高効率でクリーンな化学プロセス

ヒドロキシアパタイト固
定化ルテニウム触媒の創成、および分離・回収・再使用を含観点からは、反応後に水のみを副生する
分子状酸素（O2）あるいは空気を酸化剤とし、大量のアルコールを酸化できる触めた資源の有効利用など、革新的な研究開発が望まれている。これらのテーマのCa10（PO4）（
6 OH）
2の一般組成で表され媒酸化法の開発が望ましい。近年、O2を実現には、これまでにない高機能性触媒

るヒドロキシアパタイト（HAP）は、骨酸化剤とする金属錯体触媒による均一系の開発が必要不可欠となる１，２）。

や歯など生体硬組織の主成分として知ら反応の報告が活発になされているが、低我々は、固体表面を利用した固定化金

れ、イオン交換能、吸着能等の特徴をもつ

活性で加圧のO2や添加剤が必要であるこ属錯体触媒の創製を行い、従来の均一系

機能性無機材料である。HAPのイオン交とや、触媒の回収が困難など、実用上の錯体触媒と不均一系金属触媒の特徴を融換体としての特性は、図１に示すように柱問題が残されている。また、不溶性担体

合した新たな触媒分野を開拓し、グリーン状に並んだCa2＋イオン（Columnar Ca）がへスペーサーを介して、その末端に配位

サステイナブルケミストリー（GSC）を

種々の金属イオンと容易に交換できるこ子を結合し金属錯体を固定化した研究も指向した ものづくり をめざしている。

とに起因する。HAPをRuCl3水溶液で処なされているが、金属−配位子間の結合

均一系錯体触媒を用いた有機合成反応の理すると、表面のCa とRu が交換する。

が弱いため金属種の溶出が起こりやすく、発展に伴い、ポリスチレンなどの有機高

この時、EXAFS（広域X線吸収微細構造）

有機担体では担体自体が酸化されるなど分子や、シリカ、アルミナ、最近ではメソなどを用いたキャラクタリゼーションか問題は多い。一方、無機担体は酸化雰囲

ポーラスシリカなどの無機担体を利用しら、固体表面を配位子としたルテニウム

気下でも化学的に安定であり、酸化反応

た固定化錯体触媒の開発が行われている

リン酸錯体（RuHAP）が得られることに適している。

が、これらは既存の均一系錯体触媒の固を明らかにした（図２）。上記リン酸錯

表１に示すように、RuHAP触媒は、定化という枠を越えるものではなかった。

体は均一系では合成されておらず、１気圧のO2のみを酸化剤とし、各種ベン

2＋3＋

金属酸化物などの無機結晶性化合物

HAP表面を利用することで特異的に生

ジル型、アリル型、脂肪族一級、二級ア

は、構成金属成分の組成やイオン半径に成している。また、HAPを用いた本触

ルコール類を高選択的に対応するアルデ

応じて独特の結晶構造を形成している。

媒調製法は極めて簡便であり、さらに、

ヒド、ケトンへと酸化できる３）。酸素のか

我々は、天然の無機結晶性化合物である

原子レベルで構造の明確な活性金属種をわりに空気を用いても、反応速度、選択

その表面に創製することができる。

性の低下はほとんど見られない（entry２）。

ヒドロキシアパタイト、ハイドロタ３−６）

ルサイト７−14）、モンモリロナイト15−17）のまた、ピリジンメタノール、チオフェン

固体表面を触媒活性種の配位子として捉アルコール類の酸化反応

え、金属活性種の電子状態と、原子レベ

メタノールのようなヘテロ原子を有する
アルコールでも、対応するアルデヒドがルでの配位環境を精密に制御している。

アルコールの酸化によるカルボニル化合

高収率で得られる（entries 14 and 15）。

反応に関与する金属イオン種が規則正し物の合成は、有機合成化学分野において、一級アルコールと二級アルコールの分子く配列した結晶表面では、均一系の分子最も重要な官能基変換反応の一つである。

内競争反応では、一級アルコールが優先

Columnar Ca
Cl
6.88Å

Screw axis Ca

2.32Å

P

b
a

9.43Å

O
H

図1．ヒドロキシアパタイトの結晶構造

8

P

O
O

1.97Å
Ru

図2．RuHAPの表面構造

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

O
O

P

表1．RuHAP触媒による分子状酸素を用いたアルコール酸化反応ａ
entry

substrate

product

1
2b

OH

CHO

Cl

convn
（％）

yield
（％）

3
3

100
100

>99
95

3

100

>99

3

100

92

CHO

OH

3

て、本RuHAPは添加剤を必要としない優

time
（h）

Cl

H3CO

H3CO

OH

反応や、シラン類の選択的酸化反応においても優れた触媒となる。脂肪族一級ア

O

5

2
OH

分子状酸素存在下でのアミン・シラン類の酸化反応
RuHAPは、アミン類の酸化的脱水素

CHO

OH

4

れた触媒である。

100

98

ミンやベンジルアミン類からは、高選択
４）。また、的にニトリルが得られる
（式２）

O

6

2

100

>99

1

100

99

4

99

99

3

90

85

アミンとアルコールとの分子内競争反応
では、アミノ基の脱水素が優先し、４-（ア

7

OH

CHO

8

OH

CHO

ミノメチル）ベンジルアルコールからは４-シアノベンジルアルコールが高選択

9

CHO

OH
OH

的に生成する（式３）。さらに、本反応系に水を添加すると、ニトリルの水和反応も進行し、高収率でアミドが得られる。

O

10

5

93

91

6

83

80

16

95

94

例えば、３-ピコリンアミンからワンポッ
トでニコチンアミドが得られる（式４）
。

11

OH

12c

O
OH

CHO

13

少量の水存在下でシラン類を相当するシ。
ラノールへと収率良く酸化できる（式５）５）OOH

RuHAP触媒を用いると、分子状酸素と

6

96

96

10

100

>99

2

100

94

RuHAP以外のRu触媒では生成物の逐次的な縮合反応が進行し、シラノール選択

14

N

OH

N

CHO

S

CHO

性が低い。また、本触媒では、炭素―炭素二重結合や三重結合など他の官能基を

15

S

OH

有するシランの反応においても高収率で対応するシラノールが得られる。RuHAP

Alcohol (2 mmol), RuHAP (0.2 g), toluene (5 mL), 80℃, O2 atmosphere.
Under 1 atm of air instead of pure O2.
c
The reaction temperature was 60℃.
ab触媒による本シラン酸化は、酸化剤として水と分子状酸素を用いる点に特徴がある。H 218Oを用いた同位体標識実験において、生成したシラノールに 18Oが選択

OH

OH

RuHAP
OH

CHO

O2, CH2Cl2, 70℃(1)

的に導入されたことから、生成物の酸素
原子は水分子に由来している（式６）。

81 %本触媒は固体触媒であるため濾過により容易に反応液からの分離が可能であ的に酸化される（式１）。この選択性は脱離によりカルボニル化合物とRu-H種る。さらに、上記酸化反応において溶液

RuO2のようなバルクのRu触媒ではみらが生成する。Ru-H種は酸素分子と反応へのRu種の溶出はなく、高い活性を維れない。RuHAPではRu種がHAP表面にし、Ru-OOHを与え、さらにアルコール持したまま再使用が可能である。

単核で存在しているためこのような選択との配位子交換によりRu-alcoholate種を性が発現すると考えられる。RuHAP 触媒

生成し触媒サイクルが形成される。均一によるアルコール類の酸化反応は、RuHAP

23）
3では、酸素を系単核錯体、RuCl（PPh表面のClとの配位子交換により生成する

酸化剤として触媒サイクルを形成させる

Ru-alcoholate種を経由すると思われる。

ためには、ハイドロキノンやTEMPOなど

このRu-alcoholate種からのβ-ヒドリドのメディエーターが必要であるのに対し

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

9

H
R

４）Mori, K., Yamaguchi, K., Mizugaki, T., Ebitani,

NH2

RuHAP
O2, toluene, 110℃

H

（2001）.
K. and Kaneda, K.: Chem. Commun., 461

(2)

R C N

５）Mori, K., Tano, M., Mizugaki, T., Ebitani, K.

R=alkyl, aryl

99-81 %and Kaneda, K.: New J. Chem., 26, 1536（2002）.
６）Mori, K., Yamaguchi, K., Hara, T., Mizugaki,

CN

RuHAP

NH2
HO

T., Ebitani, K. and Kaneda, K.: J. Am. Chem.

(3)

HO

O2, CHCl3, 90℃（2002）.
Soc., 124, 11572
７）Kaneda, K., Yamashita, T., Matsushita, T.

99 %（1998）.
and Ebitani, K.: J. Org. Chem., 63, 1750

NH2
N

CN

RuHAP
O2, 120℃

O
RuHAP
H2O, 150℃

N８）Yamaguchi, K., Ebitani, K., Yoshida, T.,NH2

Yoshida, H. and Kaneda, K.: J. Am. Chem.

(4)（1999）.
Soc., 121, 4526

N９）Matsushita, T., Ebitani, K. and Kaneda, K.:

91 %Chem. Commun., 265（1999）
.

R1

R1
R2

Si

H

RuHAP

R2

O2, H2O, ethylacetate, 80℃

R3Si10）Yamaguchi, K., Ebitani, K. and Kaneda,

(5)

OH

（1999）.
K.: J. Org. Chem., 64, 2966

R311）Yamaguchi, K., Mizugaki, T., Ebitani, K. and（1999）.
Kaneda, K.: New J. Chem., 23, 799

R=alkyl,alkenyl,
alkynyl, aryl

99-89 %

12）Yamaguchi, K., Mori, K., Mizugaki, T., Ebitani,Me13）Honma, T., Nakajyo, M., Mizugaki, T.,

K. and Kaneda, K.: J. Org. Chem., 65, 6897（2000）.

Me
Ph Si
Me

H

RuHAP

Ph Si

O2, H218O, ethylacetate, 80℃

18

OH

(6)

Ebitani, K. and Kaneda, K.: Tetrahedron（2002）.
Lett., 43, 6229

Me14）Ji, H.-B., Mizugaki, T., Ebitani, K. and Kaneda,

99 %（2002）.
K.: Tetrahedron Lett., 43, 7179
15）Ebitani, K., Nagashima, K., Kawabata, T.,
Mizugaki, T. and Kaneda, K.: Green Chem., 2,

フェノール合成などさらに高難度な酸化おわりに反応に挑戦していく予定である。

157（2000）.
16）Kawabata, T., Mizugaki, T., Ebitani, K. and

本稿では、ヒドロキシアパタイト表面（2001）.
Kaneda, K.: Tetrahedron Lett., 42, 8329

を配位子とした新たな触媒活性種の創成〔参考文献〕と、酸化反応への応用を紹介した。著者

１）Anastas, P. T. and Warner J. C.: "Green

らが開発した固定化ルテニウム触媒を用

Chemistry; Theory and Practice", Oxford

17）Ebitani, K., Ide, M., Mitsudome, T., Mizugaki, T.
and Kaneda, K.: Chem. Commun., 690（2002）.

Press（1998）.

いる酸化反応システムは、１）容易な触

２）御園生誠、村橋俊一編：「グリーンケミス

媒調製、２）高い触媒活性、３）シンプ

トリー

ルなwork-upかつ触媒の再使用が可能、Atom efficiency―持続的社会のための化学」（講,

全生成物の分子量の合計に対する目的とする化合物の分子量の割合

談社）（2001）.

４）有害な試剤を使用しない、という点

３）Yamaguchi, K., Mori, K., Mizugaki, T.,

で環境調和型である。今後、自然共生型

E-factor

Ebitani, K. and Kaneda, K.: J. Am. Chem.

の有機合成反応を視野に、分子状酸素を目的生成物に対する副生物の重量の比（2000）.
Soc., 122, 7144

用いたエポキシ化反応、ベンゼンからのttttttttttttttttttttttttttttttttttt

分子状酸素を用いたクリーンな環境調和型酸化反応に！
コードNo.

品

名182-01851
Ruthenium（Ⅲ）-Hydroxyapatite
188-0185310

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

規 格

容 量

希望納入価格（円）

有機合成用

1g
5g

7,000
26,000T

echnical Report
水試料中エストロゲンの分析
和光純薬工業株式会社

試薬研究所

吉田 貴三子

エストロゲンは外因性内分泌撹乱作用が比較して実試料中の夾雑物の影響が少な

Presep®-C RPP（short）
はODSと同様に示唆されている物質（環境ホルモン）としてく、高い検出感度が得られた。さらに高逆相的な挙動を示すスチレンジビニルベン

河川水および下水における実態調査の測感度分析が必要な場合には、溶出液をN2

ゼン-ポリメタクリレート系の親水性ポリマー

定対象となっている。環境省の「外因性内分

ガス気流下にて乾固後、50%アセトニトリを充填したカートリッジカラムで、ODS充填

泌撹乱化学物質調査暫定マニュアル」等にルで再溶解したものをHPLC分析する方剤に比較して①極性化合物の保持が大き定める方法には、LC/MS法、ELISA法、な法が有効であった。この場合、各標準品

い、②塩基性化合物の吸着が少ない、③どがあるが、ぬで島等は、HPLC/ECD法

0.5ng以下の検出も可能であった。

使用可能なpH範囲が広い、などの利点がによる水試料中のエストロゲン一斉分析法（short）
を前処理に以上、Presep®-C RPPある。本誌Vol.70No.１、Vol.71No.１に使を報告している 。今回この方法を参考に固使用し、分析カラムにWakopak Navi C18-5、用例を紹介しているが、多方面に応用可（short）、分
相抽出カラムにPresep®-C RPP

4.6φx150mmを用いたHPLC/ECD法による能な固相抽出カラムである。

析カラムにWakopak Navi C18-5を用い、水試料中エストロゲンの分析例を紹介した。

河川水中のエストロゲン（エストリオール、17

今回検討したHPLC/ECD法では河川水

β-エストラジオール、エストロン、エチニルエ

中の夾雑物の影響でエストリオールの検出

１）ぬで島智恵子、吉岡秀俊、備藤敏次、東野ストラジオール）
を一斉分析する方法についはできなかったが、精製水への標準添加回

和雄、植田忠彦：固相抽出-電気化学検出て検討したので紹介する。

収は良好で、溶出液として、アセトニトリル

器付きHPLC法によるビスフェノール-A、

精製水および河川水1000mlに標準１μg、以外に酢酸エチル/メタノール
（５：１）
も使用

エストロゲン一斉分析法, 日本水環境学会

0.3μg、0.1μgを添加し、Presep®-C RPP

でき、他の特異性に優れたエストロゲン分（short）を使用して前処理後、アセトニト

析法（例えばELISA法）の前処理へ適応可

リル３mlで溶出し、直接HPLCで分析し能と考える。本分析例が水中エストロゲンた。その時の回収率を表１に、固相抽出分析の参考になれば幸いである。

１）

®

®

〔参考文献〕

MS技術研究委員会シンポジウム「環境ホルモン物質の測定技術と水環境の現状」,
1999年９月13日

条件を図１に示した。
①標準液１ng、②河川水1000mlの濃縮、③河川水1000mlに標準0.3μgを添加した場合の分析例とHPLC条件を図２にTable1.

試料水への標準添加回収率

試料水
標準添加量

示した。河川水では、夾雑物の影響でエストリオールの検出はできなかったが、エストリオール以外の17β-エストラジオー
ル、エストロン、エチニルエストラジオー
ルは、いずれも良好な分離と回収率を示

精製水1000ml
河川水1000ml
1μg
0.3μg
0.1μg
1μg
0.3μg
0.1μg
n=4
n=2
n=2
n=2
n=2
n=2
回収率
（%） 回収率（%） 回収率（%） 回収率（%） 回収率（%） 回収率（%）

Estriol（E3）17β-estradiol（E2）Ethynylestradiol（EE2）
Estron（E1）

98.3
96.6
97.9
101.6

89.9
97.5
94.7
91.7

76.2
90.6
86.0
80.6

97.9
99.9
105.2

94.5
95.8
103.4

91.2
88.8
91.5

* Estriolは不純物が重なるため測定不能。

した。また、ECD（アンペロメトリック電気
標準液 1ng

化学検出器）による検出は、UV検出法に

河川水 1000ml
Blank

河川水 1000ml
標準添加 0.3μg

Presep®-C RPP（short）
コンディショニング：①CH3CN 5ml②CH3OH 5ml③H2O 10ml

水試料1000ml：*1
洗浄：①5％ CH3OH 3ml
乾燥：5分間空気を吸引
溶出：CH3CN 3ml
HPLC 10μl*1

Fig.1.

水試料
1mol/l HCl でpH3.5に調整する。
河川水はろ過して濁りなどを除く。

固相抽出条件

HPLC conditions
Column : Wakopak® Navi C18-5, 4.6x150mm=34/66（v/v）
Eluent : CH3CN/50mmol/l NaClO4（pH2.6←H3PO4））
Flow rate : 1.0ml/min. at 35℃
Detection : ECD 900mV, RANGE=1, ATTEN=5
Injection vol. : 10ul

Fig.2.

Sample :1）
Estriol（E3）2）
17β-estradiol（E2）3）
Ethynylestradiol（EE2）
4）
Estron（E1）

エストロゲンの分析

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

11

T

echnical Report
amaxa社「NucleofectorTM」による細胞へのsiRNA導入
株式会社ニッポンジーン

二本鎖RNAの細胞内への導入により、遺伝子の発現が抑制される現象はRNAi（RNA interference；RNA干渉）と呼ばれ、Method1×106〜1×107cells+

1998年に線虫において初めてその発現抑DNA or siRNA+

制効果が確認された。その後、植物やショ

Cell specific NucleofectorTM
solution

ウジョウバエなどにおいても同様の現象が発見されたが、哺乳類細胞では30bp以

廣世 志津子NucleofectorTM装置
cuvette

上のRNAが導入されると、抗ウィルス反応によるインターフェロン応答が働き細胞内の遺伝子発現を抑制してしまうことから、特定の遺伝子に対するRNAiは

Nucleofection by cell specificprogram

Culture難しいと考えられてきた。
しかし、近年、Tuschlらにより、21〜

Analysis
NucleofectorTMキット

23bpの短い二本鎖RNA（siRNA）を細胞へ導入することでこのインターフェロン応

Fig.1

amaxa社NucleofectorTMによるsiRNAの導入法の概要

答が回避でき、哺乳類細胞においても遺伝子発現の抑制が可能であることが確認

般的な導入方法は、Fig.1に示すように、

Planck研究所のTuschlらのホームページ

された。これをきっかけにして、最近では培養していた細胞を回収しPBSでwashし（http://www.mpibpc.gwdg.de/abteilung細胞だけでなく個体レベルでもこのsiRNAた後、1×106〜1×107個の細胞、および

en/100/105/sirna.html）に設定の目安がを用いたRNAi実験が広く行われるように

100pmolesのsiRNAを専用の試薬で100μl

記載されているので参考にしてもよい。

なってきており、今後、遺伝子機能解析やになるように混合しキュベットに移す。

RNAi実験では、現在、多くの研究者

医療への応用が期待されている。

にセットし、
キュベットを「Nucleofector 」

は有機化学的に合成されたsiRNAを使用

amaxa社より提供されたその細胞に最もしている。これら化学合成siRNAは弊社

導入効率の良いプログラムを実行後、細を含めいくつかのメーカーから手に入れ

TMsiRNAの導入胞を培地に移し培養する。実験の目的にることができる。また、in vitroで酵素

哺乳類細胞へのsiRNAの導入にはカチ

もよるがsiRNAを導入する場合、抑制効

的にsiRNAを合成するキットも発売されオニックリポソームを用いたリポフェク

果の確認はターゲットとする遺伝子からており、この方法では比較的安価にション法が多く用いられている。しかし、作られるタンパク質のターンオーバーを

siRNAの作製が可能である。さらに、ある種の細胞ではリポフェクション法で考慮して、通常、24時間から48時間後以RNAポリメラーゼのプロモーターの下の核酸導入効率が低いため、siRNAによ降に行うことが多い。しかし、外部から流にsiRNAの鋳型となる配列をつないだる遺伝子の発現抑制効果が得られない場導入されたsiRNAの効果は一過的であsiRNA発現ベクターにより、細胞内で合がある。そこで今回、エレクトロポレーション

り、その効果は日が経つにつれ弱くなっsiRNAを合成する方法も昨年発表され、を法を応用したamaxa社「Nucleofector 」ていくため導入後数日のうちに解析を行

現在、多くの研究者によって検討が行わ

用いて核酸導入の困難な細胞へのsiRNA

うのが一般的である。

れている。

TM

の導入を検討した。
「NucleofectorTM」はamaxa社から細胞siRNAの合成

siRNAによる発現抑制ごとに専用の導入試薬とプログラムが準備されており、細胞、試薬、そして導入

RNAi実験では、通常、21〜23bpの３

弊社では昨年からカスタムsiRNA合成

する核酸を混合し指定のプログラムを実行

末端が２塩基突出した短い二本鎖RNAがとともに、siRNA関連製品として「Control

することで効率よく核酸が導入できる。

siRNAとして用いられる。siRNAはター

siRNA duplex」を発売している。このsiRNAに関して専用のプログラムはゲットとなるmRNAの配列から任意に設「Control siRNA duplex」はアニーリング

amaxa社から特に示されていないが、定するが、発現抑制効果はその配列によ済みの化学合成siRNAで、文献上で実際我々でいくつか条件を検討したところでって大きく影響される。しかし、配列の選に効果が確認されている配列を採用しては、今のところベクター等を導入する際

択には今のところはっきりとしたルールはいる。現在のところ10種類のsiRNAが発に推奨されている条件がsiRNAでも最もなく、任意の３〜５カ所からsiRNAを合成売されているが、今回はこれらの中から効率よく導入できるようである。

し、その効果を実際に使用して確認する

GFP、cdk1 siRNAを導入した結果を簡「Nucleofector 」を用いたsiRNAの一という方法がとられることが多い。Max

単に紹介する。

TM

12

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

+siRNA

Control

Fig.2は２種類の細胞にGFPに対する
siRNAを導入した結果である。HeLa細胞はNucleofectorTM Solution R

一般的なリポフェクション法でも十分導入効率の高い細胞であるが、「NucleofectorTM」

Program : A-28
HeLa

Control siRNA duplex,
jellyfish GFP : 100pmol

を用いて導入した場合でも90％以上の細胞でsiRNAが取り込まれ細胞内のGFP発現が抑制されていることがわかる。ここControl+siRNA

で使用したNucleofectorTM Solution R、プ

NucleofectorTM Solution V

ログラムA-28は、amaxa社が提示しているHeLa細胞における推奨の試薬、プログ

Program : T-10
GFP plasmid : 2µg

U937

ラムである。

Control siRNA duplex,
jellyfish GFP : 100pmol

一方、U937細胞はリンパ腫由来の細胞で、通常のリポフェクション法では遺伝子の導入効率が非常に低い。このような細胞ではsiRNAにおいても導入効率が低い

Fig.2 GFPを構成的に発現しているHeLa細胞、およびU937細胞におけるGFP siRNA
の効果

14
U-

13
U-

09

T-

A-

U-

28

T-

10

を用いて行った結果では、50％以上の細01とが多い。しかし、今回「NucleofectorTM」

Ca
Lip tionic
os
om
e
T10

ためRNAi実験を行うことは困難であるこ

cdk1 siRNA

+

+

+

+

+

+

+

-

Luciferase GL3 siRNA

-

-

-

-

-

-

-

+

胞にGFP Plasmidが導入され導入された
ほぼ全ての細胞のGFP発現を抑制していCDK1

ることが確認できた。ここで用いた試薬
NucleofectorTM Solution V、プログラムT-10

GAPDH

もamaxa社が推奨するU937細胞用の方法である。
次に細胞内在性の遺伝子であるcdk1についてもGFPの時と同様にU937細胞へsiRNAを導入し、発現抑制効果を調べた（Fig.3）。まずsiRNAを導入して、24時

Fig.3 NucleofectorTM各プログラムを用いたU937細胞へのcdk1 siRNAの導入（赤字はamaxa社によるU937細胞用推奨プログラム）

間後に細胞を回収、細胞を溶解しタンパク質を抽出後、ウェスタンブロッティング

以上のように「NucleofectorTM」を用にてcdk1タンパク質を検出した。U937

いたsiRNAの導入法は、通常の細胞株は細胞への核酸導入に関してamaxa社はT-

もとより一般的に核酸の導入効率が低い

10以外にもいくつかの推奨プログラムを提とされている細胞株（特にprimary cell

供しているが、実験の結果からそのいずには専用の試薬とプログラムが準備されれのプログラムにおいてもリポフェクションている）において有効な道具となるもの

法より効果的にcdk1の発現を抑制していと思われる。

ることがわかった。

（ここに載せたデータを含めたsiRNA

ただし、ここに示したいくつかのU937

関連実験データはニッポンジーンのホー細胞用プログラムでは、導入効率が高い

ムページ（http://www.nippongene.jp）

一方で50％前後の細胞が死んでしまうとに掲載していく予定です。
）

いう問題がある。実験の目的によっては
この死細胞率が問題となることもあるか

６）Miyagishi, M. and Taira, K.: Nat. Biotechnol.,
20 497（2002）.
７）Lee, N. S. et al. : Nat. Biotechnol., 20, 500（2002）.
８）Paul, C. P. et al. : Nat. Biotechnol., 20, 505（2002）.
９）Paddison, P. J. et al. : Genes Dev., 16, 948（2002）.
10）Sui, G. et al. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA,99, 5515（2002）.
11）Yu, J. Y. et al. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA,99, 6047（2002）.
12）Brummelkamp, T. R. et al. : Science, 296,
550
（2002）.

〔参考文献〕もしれない。今後は、導入効率が高く、な

１）Fire, A. et al.: Nature, 391, 806（1998）.

おかつ死細胞率の低い条件をさらに検討（2000）.
２）Zamore, P. D. et al. : Cell, 101, 25

していく必要があると考えている。

（2001）.
３）Elbashir, S. M. et al. : Genes Dev., 15, 188４）Bernstein, E. et al. : Nature, 409, 363（2001）.
.
５）Elbashir, S. M. et al. : Nature, 411, 494（2001）

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）※ 関連商品はP.22〜P.24をご参照下さい。※

13

Talking of LAL
和光純薬工業株式会社

第52話

土谷 正和

エンドトキシンの種類

今回は、エンドトキシンの種類について、ち、グラム陰性菌の中に２つのグループ

シンの分散を良くしますが、モノマー単位

リムルス試験の観点から考えてみましょう。

があって、その一つは非常に低い活性をまで分散させたエンドトキシンの生物活示します。

性は非常に低いことが知られています。

エンドトキシンの研究は、臨床的に重要な細菌について進められてきました。

グラム陰性菌であるにもかかわらず菌体がまた、エンドトキシンの水懸濁液を超音

実際、現在使用されているエンドトキシ

リムルス試薬に反応しにくい原因として、いく波処理すると活性が変化することが知ら

ン標準品は大腸菌やサルモネラ菌由来のつかの原因が考えられます。

れています。実際、筆者らも超音波処理ものです。例えば、日本薬局方では

一つは、細胞壁成分がLPS以外の成分で構でエンドトキシン溶液の活性が10倍以上

Escherichia coli UKT-B株由来の、米国成されている場合です。Sphingobacterium

薬局方ではEscherichia coli O113株由来

やSphingomonasは、その細胞壁にスフィン

さて、リムルス試験で測定するエンドトの、欧州薬局方ではSalmonella abortus-

ゴリピドを多く含んでいることがわかっていキシンの活性とはどのようなものでしょう。

equi由来のLPSをエンドトキシン標準品

ます。Cytophaga 、Flavobacterium 、

この話題は以前にも取り上げましたが３、４）、に使用しています。しかし、医薬品や医

Sphingomonasは遺伝子的に近い菌種な

リムルス試験で検出できるエンドトキシン

療用具に混入するエンドトキシン汚染源

ので、細胞壁の成分が他のグラム陰性菌

活性は、測定時の存在状態における活性としての細菌は、必ずしも臨床上重要なと大きく違うことがこれらのエンドトキ

であって、決してエンドトキシンの絶対菌とは限らず、水棲細菌や土壌細菌が大

シン活性の低さの原因かもしれません。

量を測定しているわけではありません。

きな比率を占めていると思われます。この二つ目の原因として、菌体の構造、特にこれは、未知の試料の場合、リムルス試

観点から、医薬品等の安全性試験に使用

莢膜の有無です。莢膜がある菌体は、その験の結果からエンドトキシン量や菌体量する標準エンドトキシンはPseudomonasの際防壁が外界と接触しにくいため、リムルスを推測することが困難であることを示唆ような水中によく見られる菌から取るべ

試薬とも反応しにくい場合が考えられます。

しています。この観点からすると、リムきではないかとの意見があるようです。

三つ目は、エンドトキシン自体の活性がルス試験はある標準品に対比して試料中以前にもご紹介したように、種々の乾菌によって違う場合です。LPSの活性中心のエンドトキシン活性がどの程度である

燥菌体は、様々なリムルス反応性を示しと考えられるリピドAの構造は菌種によっかを知るための試薬と考えることができます１）。図１は、筆者らが測定したグラて異りますから、そのエンドトキシン活性ます。筆者は、医薬品等の安全性試験の

ム陰性菌乾燥菌体のリムルス試薬に対すが異る場合があることは理解できます。

場合、ウサギ発熱試験とリムルス試験の上昇した例を経験しています。

る反応性の一例です。Cytophaga、

精製したエンドトキシンの場合、そのFlavobacterium 、 Sphingobacterium 、存在状態によって大きく活性が変化しまることから、確立された標準品があればSphingomonasで非常に低い活性が認めす２）。以前から溶液中のエンドトキシン（由来菌にかかわらず）特に問題はない

られます。その他の菌は、乾燥菌体１μgの分散性を高める目的で、アルブミン、と思います。もちろん、試料中に混入すあたりのエンドトキシン活性が10からトリエチルアミン、糖アルコールなどが使るエンドトキシンの種類や状態、菌の種

1000EUの範囲に入っています。すなわ

われてきました。界面活性剤はエンドトキ

類などの情報があれば、絶対量の推定も比較データを基に基準作りが行われてい可能と思われます。その場合は、試料中に混入してくるエンドトキシンの種類や状

Acinetobacter calcoaceticus
Citrobacter freundii
Cytophaga johnsonae
Enterobacter cloacae
Escherichia coli
Flavobacterium meningosepticum
Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas cepacia
Pseudomonas diminuta
Salmonella typhimurium
Serratia marcescens
Sphingobacterium heparinum
Sphingomonas paucimobilis
Stenotrophomonas maltophilaVibrio parahaemolyticus

態を常に意識し、状況に適した標準や測定条件を考える必要があると思います。
〔参考文献〕
1） 土谷正和：和光純薬時報，66（1），16（1998）.
2） 丹羽允：「内毒素-その構造と活性-」（本間遜監修），p.124，（医歯薬出版）（1983）.
3） 土谷正和：和光純薬時報，64（1），16（1996）.
4） 土谷正和：和光純薬時報，64（2），16（1996）.

0.0001 0.001

0.01

0.1

1

10

100

1000

Endotoxin Activity (EU/ µg-dry cells)
次回は、第53話「SLP試薬の応用」の
図1．

14

予定です。

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

N

ew Products

新しい光学分割剤株式会社 ワコーケミカル

側鎖ビルディングブロックの製品例
メーカーコード：R052-2490

光学分割剤

H3C

ジアステレオマ−塩法による光学分割剤として、高い光学純メーカーコード：R052-2498
H3C

N

N

度の両鏡像体を揃えました。大量処理が可能でさらに回収再使

N

NH2

N

NH2

用も可能です。

反応例

F
C10H10FN3 = 191.21

C10H11N3 = 173.22
+

1/2

N
COOH
H
rac-Pipecolinic Acid
(PPA)

S -PPA・S -APP
(crystallized)

O

COOH

メーカーコード：R052-2642

CH3(S )-2-Phenoxypropionic Acid
(S-APP)

H3C

N
N+ (S )-2-Phenoxypropionic Acid
(recycled)
COOH

N
H
(S )-Pipecolinic Acid

NH2

N

CH3

NH2

N
H

C11H17N3 = 191.28

C5H9N3 = 111.15

メーカーコード：R052-2784

N
COOH
H
R-rich Pipecolinic Acid

メーカーコード：R052-2768

メーカーコード：R052-2788

NH2

CH3

N
N

コ−ドNo.
含量（HPLC） 光学純度（HPLC） 容 量 希望納入価格（円）
品 名325-41021 （R）（
5,000
5g- ＋）-1-Benzylamino-397.0％以上 98.0％ee以上
323-41022 phenoxy-2-propanol
14,00025g
322-41031 （S）（
- −）-1-Benzylamino-397.0％以上 98.0％ee以上
320-41032 phenoxy-2-propanol

5g
25g

5,000
14,000329-41041 （2R,3R）（- ＋）-Tartranilic
327-41042 Acid

5g
25g

4,000
10,00097.0％以上 98.0％ee以上

326-41051 （2S,3S）（- −）-Tartranilic
324-41052 Acid

97.0％以上 98.0％ee以上

5g
25g

4,000
10,000323-41061 （R）（
- ＋）-2321-41062 Phenoxypropionic Acid

97.0％以上 98.0％ee以上

5g
25g

3,500
9,000

320-41071 （S）（
- −）-2328-41072 Phenoxypropionic Acid

97.0％以上 98.0％ee以上

5g
25g

3,500
9,000

N
H2N
C9H9N3 = 159.19
メーカーコード：R052-2820

ビルディングブロック製品

C10H13N3 = 175.23
メーカーコード：R052-2831

NH2
H3C
S

N

N
N

NH2

S

H3C
CH3
C9H20N2 = 156.27＊別容量のご注文もお受けできますので、お問合せ下さい。

ChemDiv（Chemical Diversity Laboratories）社

N

メーカーコード：R052-2842

C4H7N3S2 = 161.25
メーカーコード：R052-2848

H2N
CH3
O

O
N

NH2

N
H

CH3

ChemDiv社は、カリフォルニア州のビルディングブロックとライブラリの供給メーカーです。この度、新しいビルディン

C8H13NO = 139.20

C7H9N3O = 151.17

グブロックを開発しました。

特メーカーコード：R052-2851

長

1. 低分子
分子量200〜250以下を中心に品揃えを増強しています。
2. 品揃えをアミノ基、カルボニル基中心に展開し、アミノ酸系も包含
3. 迅速納期
弊社またはChemDiv社に在庫10g以上確保
4. Webサイト＜www.chemdiv.com＞から製品情報をダウンロード
できます。
5. ビルディングブロックは和光の独占販売です。

メーカーコード：R052-2865

O
CH3
S

NH2

C6H9NS = 127.21

+

H2N
N

N

O

-

O

N

C2H2N4O3 = 130.06※ISISフォーマットまたはsdファイルで電子データを送付しま
すので、ご連絡下さい。

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）15

N

ew Products

HPLC用パックドカラム
Wakopak® Naviシリーズ

水銀分析用試薬5w/v％ 過マンガン酸カリウム溶液

Wakopak® Navi C18-5

水銀は、現状ではきびしい規制により排水から検出されるこ

さらにグレードアップしたODS充てん剤
従来よりも高純度化した粒子径5μmのシリカゲルを採用してとはほとんどありません。しかし、肝臓、毛髪などの生体内でしばしば検出されることから、今後も監視が必要です。

います。オクタデシル基修飾法を改良し、徹底的にエンドキャッ
ピングを行った充てん剤です。応用範囲が広くファーストチョイ

分析のフローシート

スカラムとして最適です。

還元気化原子吸光法（JIS K 0101 工業用水試験法、JIS K 0102 工場排水試験
法による）

分析例
〔直鎖カルボン酸の分析〕

300ml 三角フラスコ

分析条件
Column size：4.6×250mm
Eluent：20mmol/l NaH2PO4（pH 2.5）
Flow rate ：1.0ml/min.
Temp.
：35℃
Detection ：UV 210nm 0.04Aufs
Sample：1）Oxalic Acid
2）Tartaric Acid
3）Formic Acid
4）Lactic Acid
5）Acetic Acid
6）Citric Acid
7）Fumaric Acid
8）Succinic Acid
9）Acrylic Acid
10）Propionic Acid
11）Levulinic Acid

硫酸（1＋1） 20ml、硝酸 5ml
50g/l 過マンガン酸カリウム溶液（5w/v％溶液）20ml
溶液の色が15min以上
持続するまで95℃の水浴で2時間加熱

還元容器に移送

分析条件

水銀蒸気を発生させ吸収セルに導入

Column size：4.6×250mm
Eluent：CH3CN/0.1％H3PO4,5mmol/l SHS＝10/90（v/v）
Flow rate ：1.0ml/min.
Temp.
：40℃
Detection ：UV 210nm 0.16Aufs-Ascorbic acid（V.C）
Sample：1）L（＋）
2）Nicotinic Acid
3）Nicotinamide
4）Pyridoxine･HCI（V.B6）
5）Caffeine6）Thiamine･HCI（V.B1）
7）d-Biotin（V.H）
8）Riboflavin（V.B2）

水で液量を250mlにする。
10w/v％ 塩化すず(Ⅱ)二水和物溶液 10ml〔参考〕50g/l 過マンガン酸カリウム溶液は、上水試験でもご使用になれます。
上水試験 2001 P-383

コードNo.

品 名

5w/v％ Potassium163-21005
Permanganate Solution

カラムサイズ カラムタイプ 希望納入価格（円）4.6×150mm
Wakopak Navi C18-5
4.6×250mm

45,00048,000

4.6×150mm デュポン（D）
Wakopak® Navi C22-5
4.6×250mm ウォーターズ（W）

49,00052,000規 格

コードNo.

品 名

規 格Navi C22-5…ドコシル基修飾充てん剤を使用。

135-13671

52,00055,000水比率の高い移動相でC18よりさらに高分離、高保持能が得られます。
Navi C30-5…ポリメリックタイプのトリアコンチル基修飾充てん剤を使用。
優れた構造認識能をもち同族体分析に威力を発揮
します。

3,800

関連商品

セミミクロカラムから分取用カラムまで各種サイズを取揃えております。

4.6×150mm
4.6×250mm

容 量 希望納入価格（円）

排水試験用 500ml

089-01472
081-01471 Hydroxyammonium Chloride 試薬特級
083-01475
Mercury Standard
138-13661
JCSS
Solution（Hg:1000mg/l）

Wakopak® Navi C30-5

16

50g/l ペルオキソ二硫酸カリウム溶液 10ml

253.7nmの指示値を測定※SHS：Sodium 1-Hexane sulfonate®

50g/l 過マンガン酸カリウム溶液

80g/l 塩化ヒドロキシルアンモニウム溶液 10ml

〔水溶性ビタミンの分析〕

品 名

試料水 （Hgとして0.1〜2μgを含む）
水を加えて150mlとする。

容 量 希望納入価格（円）
25g
100g
500g

1,300
2,200
3,300

100ml

2,400

100ml

2,700

140-04016 Nitric Acid
有害金属測定用 500ml
161-08921 Potassium Permanganate 有害金属測定用 250g
169-11891 Potassium Peroxodisulfate 窒素・りん測定用 100g
192-04696
500ml
Sulfuric Acid
試薬特級
198-04693
6kg
198-11565 64％ Sulfuric Acid（1＋1）
500ml−
206-06681 Tin Chloride Dehydrate 有害金属測定用 100g

2,200
3,000
2,700
770
3,100
1,200
2,200

Mercury Standard
Solution（Hg:100mg/l）

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

JCSS

N

ew Products

環境汚染診断薬エコロジーナシリーズ
非イオン界面活性剤 AE ELISAキット（チューブタイプ）

試料の前処理法（簡易固相抽出）
簡易固相抽出による濃縮によりpptオーダーの試料でも測定できます。

チューブタイプ追加！

試料を-CNカートリッジに通水後、メタノールで溶出し、濃近年、非イオン界面活性剤の生産量は陰イオン界面活性剤と縮します。この過程でAEの測定を妨害する物質も同時に除去

同程度にまで増加しています。アルキルエトキシレート（AE,することができます。測定用試料は、最終的に10％メタノール

POER）は代表的な非イオン界面活性剤のひとつであり、家庭に調製し、測定試料とします。

用合成洗剤に配合されるなど特に生産量が増加しています。
試料水

AEの生分解性は比較的良好ですが、起泡性が強く、水道水質（ろ過後、pH5に調整）の管理上、監視の必要性が指摘されています。
構造式

特

吸着
（-CN固相カートリッジ）

CH3（CH2）n-O（C2H4O）
mH

洗浄（蒸留水）長●モノクローナル抗体を使用しているため、製造ロット間で抗溶出（メタノール）

体性能にばらつきがありません。
蒸発乾固、10%メタノール溶液●定量範囲は2〜100μg/l（プレートタイプは20〜1,000μg/l）と高感度で、環境水中のAEを特異的に検出・測定できます。
●測定値のCV（変動係数）は10％以下で、ばらつきが少なく、

ELISA測定※固相抽出の方法は測定対象により異なることがあります。

高精度です。
●有機溶媒の使用量を削減できます。

抗AE抗体の交差反応性●試料の調製から定量まで2.5時間で測定が完了します。

抗AE抗体はアルキル鎖長10〜12のAEに特異性が高く、APE●APEキットとの併用により、POE型非イオン界面活性剤の総量を測定できます。

など他の非イオン界面活性剤にはほとんど反応しません。
また、石けん類やアルキル硫酸エステル塩などの陰イオン界面活性剤と若干交差反応します。

〔参考〕非イオン界面活性剤の測定法
環境中の非イオン界面活性剤測定法として、上水試験法にはテトラチ
オシアノコバルト酸法（CTAS法）が収載されています。CTAS法では
AEとアルキルフェノールエトキシレート（APE, POEP）の総量を測定できますが、煩雑なクリーンアップ、有機溶媒による抽出が必要なほか、EO基の付加モル数による感度のばらつきなどの問題があります。
改良法として4-（2-ピリジルアゾ）-レゾルシノール法（PAR法）やLCMS法なども検討されています。

140

交 120
差 100
反
80
応
60
性
（%） 40注）図中空欄部分については、標準品の入手が困難なため、データを取得していません。
8

20
0 1 2

3 4 5 67 8 1020 23 25101214
アルキル鎖長16

酸化エチレン鎖長

AE測定用標準曲線
化 合 物

定量範囲は2〜100μg/l（プレートタイプは20〜1,000μg/l）で、定量範囲内濃度の試料はろ過だけで測定することができます注）。
測定範囲外濃度の試料

100

はろ過後、希釈あるいは
濃縮操作（固相抽出）がB/BO %

は10％以下で、測定のば︵

測定値のCV（変動係数）︶

必要になります。

らつきが少なく、高精度

交差反応性
（％）

非イオン界面活性剤
AE（C12EO7）
Nonylphenol Ethoxylate（NP10EO）
Polyethylene Glycol（PEG）
Tween-20
陰イオン界面活性剤
Linear Alkylbenzene Sulfonates（LAS）
Sodium Laurate
Sodium Dodecyl Sulfate（SDS）
Alkylether Sulfate（AES）
陽イオン界面活性剤
Hexadecyltrimethyl Ammonium Chloride

100
＜1
＜1
3
＜1
10
16
31
＜1

です。
注） 測定試料により固相抽出などによる濃縮、クリーンアップが必要な場合があります。

10
0.001

コードNo. メーカーコード
0.01
C12EO7 (mg/l)（チューブタイプ）

0.1

NEW 300-14241

91769
300-08251 91767

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

品 名

容 量

希望納入価格（円）AE ELISAキット（チューブタイプ）1キット（20回用） 50,000
AE ELISAキット（プレートタイプ）1キット（96回用） 70,00017N

ew Products『骨代謝』関連試薬

Shh, ヒト, 組換え体
（Shh：ソニックヘッジホッグ）

骨吸収抑制作用物質

Shhはヘッジホッグファミリーの一つであり、体軸の左右や肢エチドロン酸ニナトリウム芽の前後軸の決定などの形態形成に関与するサイトカインです。

破骨細胞による骨吸収を抑制し、異所性骨化の進展を阻止す

起 源：Human sonic hedgehog cDNA expressed in E.coli

る作用をもつビスフォスフォネート系化合物です。

形 状：凍結乾燥品（キャリアフリー）

含量
（滴定法）
：95.65％（Lot No. PKM2966の実測値）

エンドトキシン：0.1ng/μg（1EU/μg）以下

pH（10g/l , 25℃）
：4.2〜5.2

M-CSF, マウス, 組換え体
OH

（M-CSF：マクロファージコロニー刺激因子）

ONa

NaO

M-CSFは単球、線維芽細胞および内皮細胞により産生され
O

P

P

HO

O

マクロファージコロニーを刺激し、単球およびマクロファージ

OHによる抗体依存性細胞障害を促進して破骨細胞の骨吸収を阻害

CH3

します。

C2H6Na2O7P2 = 249.99

起 源：Mouse macrophage colony stimulating factor cDNA
コードNo.
品 名
規 格
容 量 希望納入価格（円）058-07181
4,000
200mg
054-07183 Disodium Etidronate 薬理研究用
9,500
1g052-07184
30,0005g

expressed in E.coli
形 状：凍結乾燥品（キャリアフリー）
エンドトキシン：0.1ng/μg（1EU/μg）以下
コードNo.

品 名
規 格
容 量 希望納入価格（円）Bone Morphogenetic
023-14941 Protein 14, Human,
39,000
細胞生物学用 10μg
recombinant【rhBMP-14】

骨代謝関連サイトカイン類
BMP-14, ヒト, 組換え体
（BMP-14：骨形成因子 14）
BMP-14/CDMP-1はヒト胚発生中、長骨において発現する軟骨Parathyroid Hormone
165-21141 Related Protein, Human, 細胞生物学用
recombinant【rhPTHrP】

50μg

39,000

Sonic Hedgehog, Human,
細胞生物学用
recombinant【rhShh】

25μg

39,000Macrophage Colony
135-14391 Stimulating Factor, Mouse, 細胞生物学用
recombinant【rmM-CSF】

10μg

39,000199-12891

形成の基本的なイニシエーターとして知られています。四肢の軟骨原基に発現しますが体幹の骨には発現しない特長があります。
TGF-βスーパーファミリーの一つGDF-5（Growth/differentiation
factor-5）のヒト相同遺伝子産物です。

関連商品

起 源：Human bone morphogenetic protein 14 cDNA expressedin E.coli
形 状：凍結乾燥品（キャリアフリー）
エンドトキシン：0.1ng/μg（1EU/μg）以下

PTHrP, ヒト, 組換え体
（PTHrP：副甲状腺ホルモン関連タンパク質）
PTHrP（Parathyroid Hormone Related Protein）はPTH（副甲状腺ホルモン）と相同なN末端アミノ酸配列を有し、その部分でPTH類似の作用があります。軟骨性骨形成などにおいては局所性のサイトカインとして作用し、また乳がんの骨転移の際にも重要な働きを示します。
起 源：Human parathyroid hormone related protein cDNA
expressed in E.coli
形 状：凍結乾燥品（キャリアフリー）
エンドトキシン：0.1ng/μg（1EU/μg）以下

18

コードNo.

品 名 [メーカー名] 規格（メーカーコード） 容 量 希望納入価格（円）rhBMP 2026-14811 【Bone Morphogenetic Protein 2, 生化学用
35,0005μg
Human, recombinant】
rhBMP 4023-14821 【Bone Morphogenetic Protein 4, 生化学用
35,0005μg
Human, recombinant】
rhBMP 6509-34531 【Bone Morphogenetic Protein 6,（2507） 20μg
92,000
Human recombinant】[Genzyme/TECHNE]
rhBMP 7506-34541 【Bone Morphogenetic Protein 7,（2354） 10μg
81,000
Human recombinant】[Genzyme/TECHNE]
rhM-CSF
133-13611
39,00010μg【Macrophage Colony Stimulating
生化学用
139-13613
148,000
50μg
Factor, Human, recombinant】
RANK (Receptor) soluble,
184-01671
37,000
生化学用 100μg
Human, recombinant
182-01471 RANK Ligand soluble,
37,00010μg
生化学用186-01474 Human, recombinant
50μg 148,000
RANK Ligand soluble,
184-01791
39,000
生化学用 10μg
Mouse, recombinant

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

N

ew Products

イノシトールりん脂質代謝関連物質
PIPs（diC8）シリーズ

Wako

脂質は細胞内情報伝達系に重要な役割を担っています。さら薬理研究関連試薬
ノニル酸ワニリルアミド
抗炎症作用を持つ合成カプサイシンのひとつです。局方収載にイノシトールりん脂質をはじめ、様々な脂質そのものが脂質の確認試験にも使用されます。

結合ドメインを介してタンパク質活性を制御していることが知外 観：白色結晶性粉末

られています。この度、イノシトールりん脂質代謝関連物質のエタノール溶状：澄明

品揃えが充実しました。脂質研究に是非ご利用下さい。
OCH3

規

格

各製品共通

O

凍結乾燥品、合成品

CH2NHC(CH2)7CH3

HO

含量
（NMR）
：98%以上C17H27NO3 = 293.40

側鎖による特長

コードNo.
品 名
規 格 容 量 希望納入価格（円）142-07631 Nonylic Vanillylamide
4,000
1g
薬理研究用
148-07633【N-Vanillylnonamide】
10,00010g

diC8（di-octanoyl）：水系溶媒に可溶

構造式例
Pl（ 4,5）P（
2 diC8）

O

O

OH
O

HO

P

O

C7H15

O

C7H15

O

細胞表皮に吸収され易い油溶性ビタミンCです。メラニンのO

OH生成を抑え、美白作用があります。
外 観：無色〜うすい黄色、液体OH(HO)2(O)PO

テトラ2-ヘキサデカン酸アスコルビル【アスコルビン酸，油溶性】

エタノール溶状：澄明

OP(O)(OH)2
C25H49O19P3 = 746.57

H31C16OCO

Pl（ 3）P（diC8）

O

O
OH
O

(HO)2(O)PO

P

O

O

C7H15

O

C7H15

O

O

CHCH2OCOC16H31

OCOC16H31
C70H128O10 = 1129.76

OOH

コードNo.
品 名
規 格 容 量 希望納入価格（円）012-19591 Ascorbyl Tetra-2-hexydecanoate
4,000
10g
生化学用
018-19593 【Ascorbic Acid，oil soluble】
12,00050g

OH

HO

OCOC15H31OH
C25H48O16P2 = 666.59

コードNo.
549-02361
549-02361
546-02371
543-02381
545-02341
542-02351
540-02391
541-02321
541-02321

品 名L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 3-

規 格 容 量 希望納入価格（円）
生化学用 200μg

27,000L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 4生化学用 200μg
Monophosphate(diC8)【PI(4)P(diC8)】

27,000

Monophosphate(diC8)【PI(3)P(diC8)】

L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 5-

Monophosphate(diC8)【PI(5)P(diC8)】
L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 3,4-

Diphosphate(diC8)【PI(3,4)P2(diC8)】
L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 3,5-

Diphosphate(diC8)【PI(3,5)P2(diC8)】
L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 4,5-

Diphosphate(diC8)【PI(4,5)P2(diC8)】
L-α-Phosphatidyl-D-myo-Inositol 3,4,5-

Triphosphate(diC8)【PI(3,4,5)P3(diC8)】

非動物由来組換えトリプシン
トリプシン, ウシ, とうもろこし発現組換え体
とうもろこしで発現させた組換えウシトリプシンです。とう生化学用 200μg

27,000

生化学用 200μg

39,500

生化学用 200μg

39,500

生化学用 500μg

31,000

生化学用 200μg

42,000

もろこしで発現させているため、BSEのような動物病原体を含みません。
形 状：凍結乾燥品
活 性：172TAME units/mg以上（3,300USP units/mg以上）
コードNo.
品 名
規 格 容 量 希望納入価格（円）208-15931 Trypsin, Bovine, recombinant
8,000
5mg
細胞生物学用
204-15933 expressed in Corn
48,00050mg

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

19

N

ew Products

シャープで再現性の良い、
低コストプレキャストゲル

アレルギー（IgE産生）惹起物質
水酸化アルミニウムゲルSuperSep

TM

水酸化アルミニウムゲルは、ALUMとも呼ばれ、IgE産生惹

タンパク質、核酸の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャ

起物質として使用されます。本品はロット毎にIgE産生能試験

ストゲルです。ゲル中には、SDSは含まれておりませんので、を行っておりますので、安心してご使用頂けます。

SDS-PAGEとNative-PAGEの両方に使用できます。

濃 度：20mg/ml

仕IgE産生能試験

様プレートサイズ：
100
（H）
×100
（W）
×（
3 T）
mm

1）方法
本品および50mg/ml DNP-BSAを等量、BALB/cマウスに

ゲルサイズ：85（H）
× 90（W）
×（
1 T）mm
ウェル数：12well、17well
ウェル容積：
35μl（12well）、25μl（17well）

特２回腹腔投与し、血中IgEを測定する。
2）使用例（BALB/cマウス、８週令、雄）

6,000

長
マウスIgE (ng/ml)

１．低コスト！（1,200円/１枚）
２．使用期限は６ヶ月！
３．濃縮ゲルにより、バンドがシャープ！
４．再現性が良い！
５．８連ピペット対応！（17wellのみ）

4,000
投与時
投与4週後

2,000

６．タンパク質、核酸に対応
７．SDS-PAGE、Native-PAGEに対応

0

コントロール

８．ゲルが取り出しやすい包装形態

本品投与

泳動例
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
ゲル：SuperSepTM 5-20%, 12well

コードNo.
品 名
規 格 容 量 希望納入価格（円）019-19501 Aluminium Hydroxide Gel 免疫化学用 100mg 20,000〔コードNo.194-12961〕

サンプルバッファー：Sample Buffer Soln.
（×2、2-Me＋）〔コードNo.196-11022〕

泳動バッファー：Running Buffer Soln.（×10）
〔コードNo.184-01291〕

染色：Quick CBB 〔コードNo.299-50101〕
サンプル：Lane1,2,7,8 ラダーマーカー
Lane3,4,9,10 低分子量マーカー
Lane5,6,11,12 高分子量マーカー

保存条件

特

２〜10℃保存（凍結不可）
・遮光保存

20

レビス® IgE ELISAキット
微量検体でマウス・ラットの血中IgE濃度を迅速測定

CBB染色

コードNo.
品
名
濃縮ゲル％ 規 格
192-12901 SuperSepTM,7.5％,12well5％
電気泳動用
199-12911 SuperSepTM,7.5％,17well
5％
電気泳動用
196-12921 SuperSepTM,10％,12well5％
電気泳動用
193-12931 SuperSepTM,10％,17well
5％
電気泳動用
190-12941 SuperSepTM,12.5％,12well5％
電気泳動用
197-12951 SuperSepTM,12.5％,17well
5％
電気泳動用
194-12961 SuperSepTM,5-20％,12well−
電気泳動用
191-12971 SuperSepTM,5-20％,17well−
電気泳動用
198-12981 SuperSepTM,10-20％,12well−
電気泳動用
195-12991 SuperSepTM,10-20％,17well−
電気泳動用

血中IgE測定キット

長●約5.5時間（ラットは約3.5時間）で測定可能
容量 希望納入価格（円）12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,000
10枚
12,00010枚●微量検体（血清、血漿5μlから）で測定可能●優れた再現性（CV値５％以下）●高い特異性（IgA、IgG、IgMとの交差性反応0.01％以下）●幅広い測定範囲（1〜100ng/ml）
コ−ドNo. メーカーコード
発 色 剤 容 量 希望納入価格（円）
品 名639-02891 AKRIE-010
96回用 58,000®
レビス IgE ELISAキット（マウス） TMB
635-02893 AKRIE-210
192回用 100,000
632-04341 AKRIE-011
96回用 58,000
レビス®IgE ELISAキット（ラット） TMB
638-04343 AKRIE-211
192回用 100,000

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

N

ew Products

Apotech社

RNAマーカー品目追加

アポトーシス/ミトコンドリア関連抗体

RNAサイズスタンダードマーカー$（0.28-6.58kb）

当社では、約1,000品目のアポトーシス関連抗体、測定キッ

281、623、955、1,383、1,908、2,604、3,638、4,981、6,583bのトおよび関連試薬をラインナップしているApotech社製品の取９種類のin vitro 転写RNA産物です。グリオキサルまたはホル扱いを開始しました。

ムアルデヒドアガロースゲル電気泳動でRNAサイズスタンダードとして使用することができます。エチジウムブロマイドで染色することによりバンドを確認できます。

主な製品分野●Apoptosis/Detection, Death Receptors, Caspases, Bcl-2
Family, Mitochondria, DNA Fragmentation, PARP-1

形 状：10mmol/l Tris-HCl（pH 8.0）, 1mmol/l EDTA
添加量：3μl/レーン●Inflamation/TNF&TNF-R Superfamily, IL-1R &TLR, NFκB&JNK〔貯法〕−80℃

Signaling●Cancer Research/MDR●Obesity&Diabetes Researchbases− 6,583− 4,981− 3,638-UV+UV− 2,604− 1,908

cytochrome c− 1,383

Smac/DIABLO

−

955

−

623

−

281

1％ formaldehyde-agarose
コ−ドNo.

品 名
Anti Mouse Smac/DIABLO,
575-72451
Monoclonal Antibody

容 量 希望納入価格（円）
100μg

69,600100μg

69,600Anti Human Apaf-1, Monoclonal579-72471
Antibody

100μg

76,800576-72481

Anti Mouse Apaf-1, Monoclonal
Antibody（13F11）100μg76,800573-72491

Anti Mouse Apaf-1, Monoclonal
Antibody（18H2）

100μg76,800Anti Rat Native Cytochrome c,
576-72501
Monoclonal Antibody

100μg

63,800573-72511

Anti Horse Denatured Cytochrome
100μg
c, Monoclonal Antibody

56,500570-72521

Anti Human Active Caspase-3,
Rabbit100μg

107,000

Anti Human Active Caspase-9,
577-72531
Rabbit100μg

108,000

RNA Size
545-01621 Standard Marker
Ⅲ（100b-1kb）

574-72541 Anti Mouse Survivine, Rabbit

100μl

63,800548-01731

100μg

75,400545-01741

572-72461

571-72551

Anti Human Smac/DIABLO,
Monoclonal Antibody

Anti Human HtrA2/Omi,
Monoclonal Antibody

コードNo.

品 名
規 格 容 量 希望納入価格（円）RNA Size Standard
188-01831
21,000
遺伝子研究用 50μl
Marker Ⅳ（0.28-6.58kb）

関連商品
コードNo.

RNAサイズ 規 格 容 量 希望納入価格（円）
品 名100, 200, 300, 遺伝子
RNA Size
541-00741
14,50025μg
Standard Marker 400, 500b
研究用
0.5k, 1k, 1.5k,
RNA Size
遺伝子
2k, 2.5k, 3k,
542-00651 Standard
24,00050μg
研究用
Marker Ⅱ
4k, 5k, 6k, 9kb
100, 200, 300,
遺伝子400, 500, 750,
50μg
研究用
1,000b

16,000Ribosomal RNA
1,776, 3,566b
Marker（16S＋23S）

遺伝子
2.5mg
研究用

14,000Ribosomal RNA
2,000, 5,300b
Marker（18S＋28S）

遺伝子
250μg
研究用

35,000

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）21

N

ew Products
Wako

65℃で完全不活化する

アルカリホスファターゼ溶液, エビ由来
アルカリホスファターゼはDNAの5'末端を脱りん酸化しセルフ
ライゲーションを防ぐために使用されますが、ウシ由来の酵素でニッポンジーン
siRNAカスタム合成サービス㈱ニッポンジーンでは最高品質のsiRNAをお届けするために、PAGE精製品をスタンダードとしています。

は脱りん酸後の後処理が煩雑でした。本品は65℃で15分間、加熱するだけで素早く簡単に活性を失活させることができます。

■Set 1：１本鎖siRNAセット
センス鎖、アンチセンス鎖のセットです。

特長

合成スケール
0.2μmol
1μmol●65℃で不活化します●不活化後の手間な操作が必要ありません
コードNo.

品 名
Alkaline Phosphatase544-02291
Solution, from Shrimp

規 格

容 量 希望納入価格（円）9,700

遺伝子研究用 500U

精製
PAGE
PAGE

仕 様：19RNA＋dTdT, 凍結乾燥品, ５×annealing buffer＋
DEPC treated Water添付
納 期：２〜３週間■Set 2：２本鎖siRNA

RNA i 関連試薬
CUGA®7 in vitro siRNA Synthesis Kit
本キットでは、CUGA®7 RNAポリメラーゼを使用して、in vitro
siRNA合成を行います。in vitro siRNA合成にはCUGA®7 RNA

アニーリング処理、濃度調整済み２本鎖siRNAです。
合成スケール
0.2μmol
1μmol

保証量
30nmol50nmol

精製
PAGE
PAGE

仕 様：19RNA＋dTdT, 凍結乾燥品, 10nmol/tube

ポリメラーゼの特長が最大限に機能します。

特保証量
各30nmol
各50nmol

納 期：３〜４週間（Set 1＋１週間）

長●CUGA®7 RNAポリメラーゼ によって、天然型RNAポリメラー

オプション

ゼよりも正確かつ大量の3'末端２塩基突出２本鎖siRNA合成が多種の修飾が可能です！

可能です。

●5'標識 HEX/TET, 6-FAM, Cy3TM, Cy5TM, Phosphate●化学合成よりも安価にsiRNAを作製することができます。

●3'標識 Fluorescein, 6-FAM, TAMRA, Cy3TM, Cy5TM●操作は簡便で、１チューブ内で両鎖の転写反応を行います 。

●その他 Fluorescein dT internal●siRNAは１日で合成することができます。

注文方法

siRNA合成手順
鋳型合成DNA（sense, antisense）と、T7 プロモーター
DNA オリゴのアニーリング↓
CUGA®7 RNA ポリメラーゼによるRNA合成↓
ヌクレアーゼによる鋳型DNAおよび不要なRNAの分解↓
精製↓
3'末端２塩基突出２本鎖siRNA

専用依頼書に必要事項をご記入の上、当社または当社代理店の営業担当者にお渡し下さい。
※専用依頼書は㈱ニッポンジーンホームページからダウンロー
ドできます。
→ http://www.nippongene.jp/

見積り方法
修飾など、Set 1、Set 2以外の仕様やオプションにつきましては、別途お見積りさせていただきますので、専用依頼書にて

キット構成●ユーザーズマニュアル ●CUGA®7 Enzyme Solution●５×Transcription Reaction Buffer ●NTP mixture

ご依頼下さい。
※本サービスは、siRNA合成〜精製をEUROGENTEC社で行い、アニーリング
処理などを㈱ニッポンジーンで行うものとなります。

●２×Annealing Buffer ●T7 Promoter DNA Oligonucleotide●DNase Enzyme Solution ●RNase Enzyme Solution●Digestion Reaction Buffer ●Enzyme Dilution Buffer（RNase-Free）●Control GL3 siRNA Template ●H2O
コードNo.
品 名
容 量 希望納入価格（円）301-14411
42,0005反応用
CUGA®7 in vitro siRNA Synthesis Kit
307-14413
20反応用 95,000

22

品

名

Set 1（1本鎖siRNAセット）
Set 2（2本鎖siRNA アニーリング・10nmol/tube分注済み）
Screening Set 2（Set 2×3）
Set 2 オプション（アニーリング後の脱塩処理）

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

合成スケール 希望納入価格（円）98,0000.2μmol
118,0001μmol
0.2μmol1μmol
0.2μmol−

128,000
148,000
282,000
5,000

N

RNA i 関連試薬
Control siRNA duplex シリーズ
特長●Control siRNA duplex シリーズは、文献１）２）３） にてRNAi（RNA interference）効果が報告された配列を採用した２本鎖siRNAで、RNAi実験を行う際の陽性コントロールsiRNA

ホタルルシフェラーゼ/ウミシイタケルシフェラーゼ

ew Products
1:negative control（H2O）
2:Firefly Luciferase GL3 sense
鎖（final 25nmol/l）3:Firefly Luciferase GL3 antisense
鎖（final 25nmol/l）
4:Control siRNA duplex, Firefly
Luciferase GL3（final 25nmol/l）
5:Control siRNA duplex, Jellyfish
GFP（final 25nmol/l）HeLa（Human）
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0

1

2

3

4

5

として使用することができます。
●5nmolのsiRNAが凍結乾燥されています。
約80回分に相当します。

実験例1
EGFPを発現している1×105個のHeLa細胞に対して、Control
siRNA duplex, Jellyfish GFP（final 100nmol/l）のリポフェクション法による導入実験を行った。
導入48時間後に蛍光顕微鏡で観察し、RNAi効果を確認した。

ホタルルシフェラーゼ/ウミシイタケルシフェラーゼ●24ウェル培養細胞に対して60pmol導入実験３）を行った場合、
NIH3T3（Mouse）

1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0

1

2

3

4

5

6

7

1:negative control（H2O）
2:Firefly Luciferase GL3 senses
鎖（final 25nmol/l）3:Firefly Luciferase GL3 antisense
鎖（final 25nmol/l）
4:Firefly Luciferase GL3 antisense
鎖（final 2.5nmol/l）
5:Control siRNA duplex, Firefly
Luciferase GL3（final 25nmol/l）
6:Control siRNA duplex, Firefly
Luciferase GL3（final 2.5nmol/l）
7:Control siRNA duplex, Firefly
Luciferase GL3（final 0.25nmol/l）〔結 果〕
siRNAは同配列のsense, antisenseの1/100濃度でも効果的に
Luciferaseの発現を抑制していることから、siRNAは遺伝子発現抑制の効果的なツールであることが確認された。
また、Control siRNA duplex, Jellyfish GFPでは全く発現を抑制していないことから、RNAiには遺伝子特異的なsiRNAが必要であることも確認された。

Control（H2O）

siRNA（100nmol/l）〔参考文献〕〔結 果〕
上記写真の様に、Control siRNA duplex, Jellyfish GFPの導入によって、EGFPの発現が抑制されていることが確認された。

（2001）.
１）Harborth, J. et al.: J. Cell Sci., 114, 4557
２）Caplen, N.J. et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98, 9742（2001）.
３）Elbashir, S.M. et al.: Nature（London）, 411, 494（2001）.

実験例2
１×105個のHeLa細胞に対して、pGL3-control（1μg）、pRLTK（0.1μg）と同時にControl siRNA duplex, Firefly Lusiferase
GL3（final 25nmol/l）、または同sense鎖（final 25nmol/l）、または同antisense鎖（final 25nmol/l）、またはControl siRNA
duplex, Jellyfish GFP（final 25nmol/l）をリポフェクション法で同時導入し、24時間後にLuciferase活性を測定してRNAi効果を確認した。
また、１×105個のNIH3T3細胞に対しても同様の実験を行い、Control siRNA duplex, Firefly Lusiferase GL3についてはfinal
25nmol/l, 2.5nmol/l, 0.25nmol/lでの導入を行った。

＊本品はEUROGENTEC社で合成したsiRNAを原料に、ニッポンジーンで製品化をしています。

コードNo.

品

名319-05841 Control siRNA duplex, Human β-actin
316-05851 Control siRNA duplex, Human NuMA
313-05861 Control siRNA duplex, Human cdk1
310-05871 Control siRNA duplex, Human Eg-5
317-05881 Control siRNA duplex, Human Lamin A/C
314-05891 Control siRNA duplex, Human Lamin B1
317-05901 Control siRNA duplex, Human Vimentin
314-05911 Control siRNA duplex, Jellyfish GFP
311-05921 Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL2
318-05931 Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL3

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

容 量 希望納入価格(円)
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol

20,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00023

N

ew Products〔ラット神経幹細胞用キットでの導入例〕

遺伝子導入装置「NucleofectorTM」専用キットシリーズ
マウス神経幹細胞、ラット神経幹細胞用キット
遺伝子導入システムNucleofectorTMは導入装置と細胞ごとに特化した専用試薬により高導入効率が得られ大好評をいただいています。今回、マウス用とラット用の２種類の神経幹細胞用キット

ラット胚から神経幹細胞を単離しプログラムA-31を使用しpEGFPを導入した。
図左）導入後２日経過時の蛍光顕微鏡像
図右）導入後７日経過時の蛍光顕微鏡像が発売されました。本キットでの導入効率はマウス、ラットともに40％以上の効率が得られウイルス法を用いない簡便な導入法として神経幹細胞研究をバックアップします。
5μgのpEGFPをA-33（高導入効率もしくは長期間発現させるためのプログラム）とA-31（分化能に最適なプログラム）により導入を行い48時間経過時の導入効率を測定

NucleofectorTM Device

特NucleofectorTM Kit

長◆今回ご紹介したキットは神経幹細胞用キットになっています。海馬状神経細胞、皮質細胞、後根神経節に導入をお考えの方は下記
Neuron NucleofectorTM Kitをご使用下さい。◆●高い導入効率（40〜60％）●低い死細胞率

コ−ドNo. メーカーコード

品 名

容 量 希望納入価格（円）60,00060,000TM570-35521 VPG-1001 Mouse Neuron Nucleofector Kit 25回用
60,000577-35531 VPG-1002 Chicken Neuron NucleofectorTM Kit 25回用
60,000570-38681 VPG-1003 Rat Neuron NucleofectorTM Kit 25回用
60,000507-98931 VPA-1001 Human B Cell NucleofectorTM Kit 25回用
60,000504-98941 VPA-1002 Human T Cell NucleofectorTM Kit 25回用
60,000
Human CD34 Hematopoietic
501-98951 VPA-1003 Progenitor Cell NucleofectorTM Kit 25回用
60,000NEW 572-72341 VPG-1004 Mouse Neural Stem Cell NucleofectorTM Kit 25回用NEW 579-72351 VPG-1005 Rat Neural Stem Cell NucleofectorTM Kit 25回用●操作が簡単で再現性が高い

キット構成
NucleofectorTM Solution ……………………………………2.25ml
Supplement ……………………………………………………0.5ml
キュベット ……………………………………………………25個ピペット ………………………………………………………25本マニュアル ……………………………………………………１冊

導入例〔マウス神経幹細胞用キットでの導入例〕

マウス胚から神経幹細胞を単離しプログラムA-33を使用しpEGFPを導入した。
図左）導入後48時間経過時の顕微鏡像
図右）導入後48時間経過時の蛍光顕微鏡像5μgのpEGFPを導入後24時間、48時間経過時の導入効率
細胞生存率は85-90％程度である

579-32671 VPA-1004 Human Dendritic Cell NucleofectorTM Kit 25回用Human Coronary Artery508-98961 VPB-1001 Endthelial Cell NucleofectorTM Kit 25回用Human Umbilical Vein Endthelial
505-98971 VPB-1002 Cell NucleofectorTM Kit
25回用
Human Microvascular Endothelial573-35491 VPB-1003 Cell-Lung NucleofectorTM Kit
25回用
Human Aortic Smooth Muscle
502-98981 VPC-1001 Cell NucleofectorTM Kit
25回用Normal Human Dermal
509-98991 VPD-1001 Fibroblast NucleofectorTM Kit 25回用
Normal Human Epidermal Keratinocyte506-99001 VPD-1002 Neonatal NucleofectorTM Kit
25回用Normal Human Epidermal Melanocyte503-99011 VPD-1003 Neonatal NucleofectorTM Kit
25回用
Human Mesenchymal Stem
576-35481 VPE-1001 Cell NucleofectorTM Kit
25回用

60,00060,00060,00060,00060,00060,00060,00060,000573-35511 VPF-1001 Human Chondrocyte NucleofectorTM Kit 25回用
60,000574-70721 VPH-1001 Mouse ES Cell NucleofectorTM Kit
60,00025回用
NucleofectorTM Kit R for Cell
500-99021 VCA-1001 Line (e.g. for HeLa, NIH 3T3） 25回用
60,000
NucleofectorTM Kit T for Cell
507-99031 VCA-1002 Line (e.g. for CHO, UT7/Epo) 25回用
60,000
NucleofectorTM Kit V for Cell Line
504-99041 VCA-1003 (e.g. for 293, COS-7, K562,PC12, 25回用
60,000Jurkat, HepG2,HL60,HaCaT）
TM
573-26341 VCO-1001 Cell Line Optimization Nucleofector Kit 50回用 140,000

導入装置
コ−ドNo. メーカーコード
品 名500-98921 AAD-1001 NucleofectorTM Device

24

60,000

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

容 量 希望納入価格（円）
1台 2,500,000

394

化学大家

岸本一郎（1849〜1878）と西川虎之助（1854〜1929）
大阪大学名誉教授

芝 哲夫

明治の世となり、近代国家の仲間入りを早急に果たさねばならなかった維新直後の日本では化学の分野でも多くの課題の解決が急がれた。その一つに貨幣制度の確立に伴う貨幣の製造があった。硬貨の鋳造は閉鎖された香港造幣局の技術者と設備、機械をそのまま移して、明治３年（1870）に創設された大阪の造幣寮において開始され軌道に乗った。
それに対して初期の紙幣の製造には印刷インキ、印肉などの化学製品の調製が必要とされた。この分野で貢献した明治初期の二人の日本人化学者、岸本一郎と写真1．岸本一郎

写真3．西川虎之助

西川虎之助について紹介する。
岸本一郎は嘉永２年（1849）
６月10日にイツに製造を依頼してそれに偽造防止の現在の兵庫県西宮市名塩で生れた。叔母ために印を押して国内で通用することにが緒方洪庵夫人八重であったので、幼少なっていた。その押印に必要な印肉の製の頃から大阪の緒方家に引き取られ、適造のために、明治５年（1872）に紙幣寮塾生となって育った。慶応２年（1866）、にアメリカ人アンチセルT.Antisellを雇

17歳の時に、幕府派遣の英国留学生の選い入れて、その任に当らせた。明治７年

抜試験に合格して、同年10月に渡英し、（1874）にこの紙幣寮内に舎密局すなわ

ロンドンにおいて化学を専攻し勉学しち化学局が新設された時、岸本一郎が呼た。同じ年に松本 太郎がオランダのユト

ばれて、同局長、さらには試験部総長にレヒトに留学しているが（本誌 Vol.64,

任ぜられて、アンチセルの技術の継承がNo.3, pp.2〜4（1996）
参照）、この岸本とはかられた。当時日本国中に外国へ留学

松本の渡欧がわが国の化学留学生の最初して化学専攻の勉学をした化学技術者はである。

他にいなかったのである。

２年間のロンドン留学中に、わが国でこの紙幣寮舎密局において、アンチセ

は維新の変が起った。慶応４年（1868）、岸ルと岸本のコンビによって、「安全秘訣

本は留学を途中で打ち切り帰国した。帰薬」と称する特殊な印肉製法の案出に成国後、尼崎藩洋学教師を経て、明治２年功した。また岸本はこの紙幣寮の学場す（1869）大阪に開かれた舎密局（せいみなわち教習所において化学技術者の育成きょく）に勤務した。舎密局では外国人化指導も開始した。

学専門教師としては最初に来日したオランダ

岸本一郎にその技術を伝授し終わった人ハラタマK.W.Gratamaが教頭となって、アンチセルは明治９年（1876）に任を終

当時最新の西欧理化学の教授が行われてえて帰国した。その後を受けて岸本はそいた。松本もオランダから帰国して、舎密の頃、大蔵省印刷局となっていた印肉製局に入り、助教を勤めていた。岸本は一造部門の責任者となり、わが国の化学技等助手としてそのハラタマを助けて、化術の先覚者としての道を歩み始めた。と学の講義や実験を担当した。明治４年ころが遺憾なことに、明治11年（1878）（1871）にハラタマが任期が切れて帰国しに岸本は肺結核に罹り、同年３月７日にた後の後任にはドイツ人リッテルH.Rittter

満28歳の短い生涯を閉じた。岸本一郎はが赴任したが、岸本は引き続き文部少助

緒方洪庵の眠る東京駒込の高林寺に葬ら

教として教鞭を取った。

れ、そこには大蔵省印刷局による墓碑が大蔵省では明治４年（1871）に紙幣寮建てられた（写真２）。

を設けて、紙幣の製造を試みたが、当初大蔵省印刷局の当事者は貴重な専門技は国産の紙幣は作り得なかったので、ド術者を失って、事業の遂行に当惑したこ

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

写真2．岸本一郎墓

東京駒込高林寺

25

とと思う。明治初年のその頃、日本中をで、その経済的庇護を受けて西川はおそ長兼工務支配人として赴任し（写真５）、

探してもそれに代わる化学者はいない。

らく応用化学者として英国に骨を埋める

その工場設計から、硫酸、ソーダの製造

東京大学に理学部が創設されて、その前積りであったかと思われる。それは後の実施に自らたずさわった。また英国式塊の開成学校に入っていた化学科の最初のことになるが、唯一人の息子を少年時に鉱炉やマレトラ式粉鉱炉もわが国ではじ

卒業生３名が出たのが明治10年（1877）

日本から英国へ帰らせて帰化させたことめて建設している。明治34年（1901）に、のことであるから、当時の日本の化学者からもうかがえる。ところが明治12年

博士会の推薦によって工学博士の学位をの総数は十指にも満たないという状況で（1879）に岸本一郎の後継者として大蔵得た。その後、大阪アルカリにも勤め、あった。

省から印刷局製肉部技師に呼び戻され、

明治43年（1910）には日産化学の前身で西川は夫人を伴って帰国した。

ある大日本人造肥料の取締役に就任してその時、ロンドンに留学していた日本人
化学者がまだ英国にいるとの情報が印刷

西川は印刷局において帰国翌年の明治いる。このように西川虎之助は日本の近局に入ってきたことと思われる。岸本一郎

13年（1880）に早くもルブラン法による

代化学工業出発に際しての基幹であったの後任として、急遽英国から呼び寄せら

ソーダ類および晒粉の製造法を開発し、酸、アルカリ工業および肥料工業の基礎れたのが西川虎之助（にしがわとらのすけ）

ついで芒硝、塩酸、黒灰、ソーダ灰、次確立に貢献した開拓者としてその名はわであった。

亜硫酸ソーダの製造を行っている。そのが国の化学工業界で忘れられるべきでは

西川虎之助は嘉永７年（1854）
２月22日

他壁紙などの用紙を漆加工する新事業をないと思う。

に浅野藩士西川理三郎の長男として広島展開している。明治19年（1886）になっ西川虎之助の人柄はきわめて謙譲で、に生まれて、明治２年（1869）、15歳のて、王子村に新設された印刷局抄紙部に

自己宣伝を嫌い、またあまり社交を好ま時に広島藩外国留学生に選ばれて英国において、西川は日本最初のグラウバー塔、ない学者風の風格があったという。夫人

渡り、応用化学を専攻した。明治５年

ゲーリュサック塔による鉛室硫酸製造法との間に１男４女をもうけて、家庭ではす（1872）に明治政府は新文教政策を実施すを完成させ、印刷局における最大課題でべて英国風で家族との会話も英語であっるために海外に留学していた日本人全員にあった原料硫酸製造の最新技術導入を成た（写真６）。昭和４年（1929）１月22日

一旦帰国を命じた時にも、西川は英国に留功に導いた。

に東京で亡くなり、青山墓地に葬られた。

まって、明 治７年（ 1 8 7 4 ）にウィンター嬢
K.W.Winterと結婚した（写真４）。

享年74歳であった。

間移譲の方針に基づいて印刷局を去り、

平成10年（1998）に、京都大学超高層

これはあるいは日本人留学生の国際結明治22年（1889）に東京青山で製氷所を電波研究センターの客員研究員として来婚第１号であったかもしれない。新婦は創設してわが国最初の製氷事業を立ち上

日中のベルリン自由大学教授ラビツケ

虎之助より４歳年上の姉さん女房であっげた。明治25年（1892）には大阪西成郡

K.Labitzke 女史が人を介して、筆者にた。夫人の実家のウィンター家は伯爵家

川北村字西野の大阪硫曹株式会社の技師会見を求められ、ラビツケ女史の曽祖父

写真4．英国での新婚当時の西川虎之助とケイテイ夫人26

その後西川は明治政府の殖産事業の民写真5．明治38年頃の大阪硫曹正門前の写真
前列左から4人目が西川虎之助

和光純薬時報 Vol.71, No.3（2003）

写真6．西川虎之助とその家族
前列右より虎之助、長男正心、三女愛喜代、四女憲、ケイテイ夫人
後列右より二女朝子、長女清子

Toranosuke Nisigawaのことを知りたいとの〔参考文献〕

申し入れを受けた。虎之助の三女愛喜代（アキヨ）がドイツ人べール E.Behr氏と結岸本一郎：婚し、その長男アルフレッド・マサヨシ・「岸本一郎氏の事蹟」大蔵省印刷局, 昭和39年.

ベール氏がドイツ人と結婚して生まれた

名塩会編：『名塩史』西宮市, 平成２年.

のがラビツケ女史とわかった。その縁でさらに豊中市在住の虎之助の弟の孫、佐貫美洋子様を探し出し得て、虎之助の家族の情報、写真を見出すことができた。

緒方 次郎：「舎密局に就いてのかずかず」関
西医事, 第11巻, 昭和14年.
芝 哲夫：「舎密局について」生産と技術, 1964年.

西川虎之助：
中沢岩太：「我邦ニ於ケル硫酸及曹逹製造ニ就テ」東京化学会誌, 13, 24（1892）.
松井元太郎：『化学工業全書』第二十刷, p.5,
124（1925）.
日産化学工業株式会社：『八十年史』pp.47〜
51, 昭和44年.
鎌谷親善：『日本近代化学工業の成立』pp.136,
148, 197〜199, 206, 209（1989）.
芝 哲夫：「明治の化学者の国際結婚―西川虎之助―」近畿化学工業界, 50（8）, １（1998）.

和光純薬時報 Vol.71 , No.3（2003）27

ダイオキシン類分析用プレセップ® 多層シリカゲル
わずらわしい充てんが不要にわずらわしい充てんが不要に！
！！
！

特

長

Vol.71
ol.71 No.3

排ガス、土壌中のダイオキシン類を分析する際、試料のクリーンアップに多層シリカゲルカラムクロマト
グラフィーが用いられます。本品は、JIS K 0311（排ガス中のダイオキシン類及びコプラナーPCBの測定方法）およびJIS K 0312（工業用水・工場排水中のダイオキシン類及びコプラナーPCBの測定方法）に記載されている「多層シリカゲルカラム」に準拠した製品です。

使用例＜プレセップ® 多層シリカゲルを用いた土壌試料のクリーンアップ＞●JIS K 0311、JIS K 0312に準じた設計
充てんの手間を簡略化●個別アルミパック包装を採用
必要な個数だけ使用可能

〔処理前〕

〔処理後〕

２ ３

５

４

６

１

カラムの組成カラムクロマトグラフ管：ガラス製 内径 15mm

７0

シリカゲル 0.9g×3

10％硝酸銀シリカゲル 3g
22％硫酸シリカゲル 6g
44％硫酸シリカゲル 4.5g
2％水酸化カリウムシリゲカル 3g
ガラス繊維フィルター

10

20

30

40

0

10

20

30

40

1. 2,4,6-Trichlorophenol 2. Propyzamide 3. Anthracene 4. N,N-Bis(1methylethyl)benzamide 5. Lenacil 6. Bis(2-ethylhexyl)phthalate 7. Terpenes

ガラス繊維フィルター
硫酸ナトリウム6g〔操作方法〕
１．100mlのダイオキシン類分析用ヘキサンを本品に通液し、コンディショニングを行う。
２．アントラセン20μｇ、トリクロロフェノール10μｇを添加した土壌抽出試料1mlをカラム層上部にチャージする。
３．ダイオキシン類分析用ヘキサン200mlを通液し、クリーンアップを行う。
４．処理液を濃縮し、FID-GC法で測定する。
※ご使用の際は、本品をダイオキシン類分析用ヘキサンなどの溶媒で十分洗浄を行って下さい。※

カラム接続部品コードNo.
295-41651
299-42151
295-42251

プレセップ® コックアダプター

プレセップ® カラムアダプター

カラムクロマトグラフ管下部にとりつけます。
試料溶出液の流速を調整します。

カラムクロマトグラフ管上部にとりつけます。
共通すり合わせ（TS15/25）つき分析
ろうとが取り付け可能です。

品
名Presep® Multilayer Silica Gel
Presep® Cock Adapter
Presep® Column Adapter

規 格
ダイオキシン類分析用
―
―

容 量
5本
1個
1個

希望納入価格（円）
18,00015,0004,000

関連商品

プレセップ® 活性炭埋蔵シリカゲル、プレセップ® 活性炭混合シリカゲル
ご好評いただいております活性炭埋蔵シリカゲルと活性炭混合シリカゲルを、使いやすいガラス製カラムに充てんしました。本品は、高分解能GC-MS法で適合性試験を行い、ブランクを保証しておりますので安心してダイオキシン類のクリーンアップにご使用になれます。
コードNo.
299-41551
293-41451
291-41751
297-41753

品
名Presep® Active Carbon-blended Silica Gel
Presep® Active Carbon-impregnated Silica Gel
Presep® Cylinder Adapter（PTFE製）―

635-04191

テフロン製 ルアーストップコック―

規 格
ダイオキシン類分析用
ダイオキシン類分析用

容 量
10個
10個
5個
20個

希望納入価格（円）
22,00028,00013,00045,00010個

19,200

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
記載価格は希望納入価格であり消費税などは含まれておりません。

和光純薬時報 Vol.71 No.328

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2003年７月15日発行
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発 行 所 和光純薬工業株式会社
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フリーファックス 0120−052−806
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和光純薬時報 Vol.71, No.1（2003）