ISSN 1347-4804

April 2021

Vol.89 No.2

〔総説〕

「エポキシ樹脂包埋生物試料のマルチカラー In-resin CLEM」
谷田 以誠、山口 隼司、角田 宗一郎、内山 安男……… 2〈テクニカルレポート〉「創薬の安全性試験におけるヒト iPS 細胞由来心筋細胞を用いた評価の重要性」
森村 馨……… 6「エクソソーム除去 FBS 中に残存するエクソソーム量の評価－高感度エクソソーム検出技術が可能にした新たな品質保証－」
笹本 宏大……… 8【連

載】〈遺伝子解析 新技術とその応用〉 最終回「第 4 回 トランスクリプトーム・エピゲノムの統合解析」

古賀

友紹、中尾

〈ミクログリア研究の最前線 ―基礎から臨床へ―〉「第 4 回 ミクログリア・マクロファージによる脳梗塞後の炎症と修復の制御メカニズム」大谷

光善……… 10

健人、七田

〈ヒト iPS 細胞由来分化細胞の創薬応用〉 新連載「第 1 回 ヒト iPS 細胞由来心筋細胞を用いた心収縮評価システムの最新動向」

崇……… 12澤田

光平……… 15

根矢

三郎……… 29

〔化学大家〕「フェリックス・ホッペ＝ザイラー」〔製品紹介〕
有機合成

免

水溶性アクリルアミドモノマー……………………………… 18
核酸合成用アクチベーター……………………………… 19

Mature BDNF ELISA キットワコー、高感度品… ……… 24
レビス® Human IL-7 ELISA Kit… ……………………… 24

分

遺

析

ICP 分析用単元素標準液………………………………… 20
水道法対応 JCSS………………………………………… 20
合成ゼオライト……………………………………………… 22
ポジティブリスト関連農薬・動物用医薬品標準品… …… 22
酸性プロテアーゼ測定キット… …………………………… 23
イメージングマルチカラーIn-resin CLEM 関連製品……………………

5

細胞生物

Tau 凝集阻害剤「KT-430」… ………………………… 23
COA-Cl… ………………………………………………… 25
その他

除菌ドライシート… ………………………………………… 19

疫

伝

子

エクソソーム関連製品……………………………………… 9
次世代シーケンス受託サービス… ………………………… 11
MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキット PS Ver.2……………………………………………………………… 26
EV-UPTM MSC EV産生用基礎培地，AF、
EV-UPTM MSC EV産生用サプリメント，AF……………… 27
CD9/63/81-Capture ヒトエクソソーム ELISA キット（ストレプトアビジン HRP）
… ……………………………… 32培

養

医薬品候補化合物の心毒性評価試験サービス… ……… 7
iCell® 心筋細胞…………………………………………… 17
SRVTM iPSC Vector シリーズ… ………………………… 28〔お知らせ〕
水質試験用試薬カタログ 2020年版のご案内 … …………………………………………………………… 21
和光純薬時報 Vol.89 No.1 訂正案内 … …………………………………………………………………… 21

1

R

esearchエポキシ樹脂包埋生物試料のマルチカラー In-resin CLEM
順天堂大学大学院医学研究科

はじめに

エポキシ包埋樹脂生物試料を用いたマ

赤色蛍光として最大励起波長 570nm、

ルチカラー In-resin CLEM について

最大蛍光波長 580nm である。エポキ

概説する。

シ樹脂内では緑色蛍光を示し、赤色蛍

光線−電子相関顕微鏡法（Correlative

エポン樹脂生物試料での解決すべき問題点

光 を 示 さ な い、 と 報 告 さ れ て い る。

よび電子顕微鏡で観察し、蛍光顕微鏡

エポキシ樹脂は生物試料の形態保持を発現させて、電子顕微鏡試料作成にによる蛍光タンパク質により標識され性に関しては、歴史的・汎用的に超微必要な固定条件（通常、2 〜 4% パラ

た標的タンパク質・オルガネラの細胞形態観察に最も適した樹脂の一つであホルムアルデヒド＋0.2 〜 2.5% グルタ

内局在情報（あるいは、標的細胞の組る。In-resin CLEM におけるエポキシ

ルアルデヒド固定液）と四酸化オスミ

織内位置情報）と電子顕微鏡による超樹脂の問題点は、自家蛍光を持つこと

ウム処理での緑色蛍光の変化を観察し微形態情報を相関し解析する方法であであった。しかしながら、100nm 厚たところ、mEosEM は四酸化オスミる。近年、超解像蛍光顕微鏡により蛍の超薄切片を作成して自家蛍光を観察

ウム処理で蛍光が著しく減衰した。少光タンパク質の局在が 1 分子単位で解すると、緑色の自家蛍光はそれほど強なくとも通常 GFP や FITC 観察に用析できるようになり、CLEM におけくなかった。おそらく 100nm といういられている汎用フィルターセットをる微細レベルの一致精度は、より厳密薄さのためだと考えられる。そこで、用いた観察条件では、mEosEM は四になる必要が出てきた。そのため樹脂

エポキシ樹脂包埋試料をブロックのま

酸化オスミウム処理後のエタノールに包埋した生物試料から作成した同一のま観察することは難しくても、エポキ

よる脱水処理、エポキシ樹脂重合反応

超薄切片から蛍光顕微鏡と電子顕微鏡

シ樹脂包埋試料作成まで緑色蛍光タン（60℃、48−72 時間）、エポキシ樹脂で同時観察し、より相関性を高める

パク質の蛍光が保持できれば、超薄切の自家蛍光のバックグラウンドに対抗

In-resin CLEM の必要性が出てきた。

片での緑色蛍光タンパク質の蛍光が観できるほどの蛍光強度が保持できない

In-resin CLEM においては、理論上は察できる可能性があると考えた。このと判断した。

電子線と蛍光波長の差による違い以外

ために、必要な蛍光タンパク質の条件

そこで、2.5％グルタルアルデヒド

は相関性が担保される。しかしながとしては、グルタルアルデヒド耐性、処理後に蛍光強度が mEosEM よりもら、これまでの In-resin CLEM では、

四酸化オスミウム処理耐性、エタノー

強く、四酸化オスミウム処理後の蛍光超微形態の保持性が高いエポキシ樹脂

ルによる脱水耐性、エポキシ樹脂重合

保持率が mEosEM より高い蛍光タンではなく、免疫電子顕微鏡に汎用され反 応（60 ℃、72 時 間 ） 耐 性 で あ る。

パク質をスクリーニングした。このとるメタアクリルレート系の Lowicryl

特に四酸化オスミウム処理耐性とエポ

きに、グルタルアルデヒド固定・四酸

樹脂、アクリル系の LR-white 樹脂やキシ樹脂重合反応は、蛍光タンパク化オスミウム処理の際の洗浄液としヒドロキシエチルメタクリレート系

質にとっては、蛍光を大きく失活さて、HB 溶液を用いた 3）。その結果、四Technovit 樹 脂 な ど を 用 い た 方 法 でせる条件であるため、In-resin CLEM

酸化オスミウム処理後でも、細胞内であった。そのため、超微形態保持性とを行うための大きな問題点となってい

CLEM-Green（CoGFP variant 0）と汎用性に難があり、エポキシ樹脂包埋た。

mWasabi が比較的よく緑色蛍光を保持

Light and Electron Microscopy ;CLEM）は、同一試料を蛍光顕微鏡お

mEosEM が利用できれば、話は簡単であったが、HeLa 細胞内に mEosEM

マルチカラー In-resin
CLEM のために必要な蛍光タンパク質の選定できていた 3, 4）。CLEM-Green は、ウミ

いはmKate2-GGGSGL （CLEM-Red）

これまで、エポキシ樹脂包埋試料のく保持される性質を持つ 4）。mWasabiを使った単色 In-resin CLEM が報告さ

In-resin CLEM に使える緑色蛍光を発はウミトサカから単離された青緑色蛍れた 1, 2）。しかしながら、共局在やオする蛍光タンパク質として、mEosEM

光タンパク質 cFP484 から改変された試料を用いた In-resin CLEM が待たれていた。近年、エポキシ樹脂包埋試料の In-resin CLEM に利用できる蛍光タンパク質として、mEosEM ある2

谷田 以誠、山口 隼司、角田 宗一郎、内山 安男

1）

サボテンから単離された緑色蛍光タ
ンパク質 CoGFP の単量体型に改変された亜種で、酸性条件下でも蛍光が強ルガネラ局在解析など蛍光顕微鏡で汎が報告されていた 。mEosEM はサ

単量体型緑色蛍光タンパク質である 5）。

用されているような細胞生物学的解析

ボテンサンゴ由来の EosFP からの改遠赤色蛍光タンパク質も同様のスクのためには、少なくとも 2 色以上のマ

変タンパク質で光変換可能な蛍光タン

リーニングを行った結果、CLEM-Red

ルチカラー In-resin CLEM が必要で

パク質 mEos4b のエポキシ樹脂耐性に加えて、mCherry2 も四酸化オスミある。今回は、緑色蛍光タンパク質お変異体である。緑色蛍光として最大励

ウム処理後でも明るい蛍光を保持でき

よび遠赤色蛍光タンパク質を用いて、起波長 505nm、最大蛍光波長 516nm、た 6）。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

エポキシ樹脂包埋試料の作成には、四酸化オスミウム処理後にエタノール
脱水、エポキシ樹脂重合反応が必要である。そのために、脱水処理前にできるだけ、蛍光を回復する必要があった。TUK for multicolor 溶液で固定細胞を処理すると、緑色蛍光および赤色
蛍光が部分的に回復できたため、この処理を四酸化オスミウム処理後に行うことにした。これまでに LR-white 樹
脂包埋の植物試料で Na2CO3 や蛍光退色防止剤により GFP の蛍光が回復するとの報告がある 7）。しかしながら、Na2CO3 は蛍光がある程度回復するが、数十分−数時間で蛍光が減衰するためにエポキシ樹脂重合反応（60℃、72時間）に耐えられないと判断した。ま図１．CLEM-Green、mWasabi、mCherry2を用いたエポキシ樹脂包埋細胞の Inresin CLEM

た、蛍光退色防止剤の場合は、蛍光回復以前に、塩の析出と粘性が問題であった。

CLEM-Green（A-D）、mWasabi（E-H）、
mCherry2（I-L）を発現させた HeLa 細胞をエポキシ樹脂に包埋し、100nm 超薄切片を作成し、蛍光顕微鏡および電子顕微鏡で観察した。緑色蛍光フィルターによる観察像（2, B, F）、赤色蛍光フィルターによる観察像（3, J）、青色蛍光フィルターによる観察像（4）、1 は明視野像に蛍光像をマージしたもの。超薄切片中に蛍光を発する細胞が観察できる（B, F, J）。電子顕微鏡観察により、ミトコンドリア、核、小胞体の形態が維持されているのがわかる（D, H, L）。

マルチカラー In-resin
CLEM の実際
CLEM-Green、mWasabi、mCherry2が CLEM-Red 同 様 に In-resin CLEMに応用可能か否かを調べるために、それぞれのタンパク質を HeLa 細胞に発現させて、グルタルアルデヒド固定、
四酸化オスミウム処理後に、エタノー
ル脱水、エポキシ樹脂重合反応まで行い、100nm 厚 の 超 薄 切 片 を 作 成 し、
蛍光顕微鏡によりそれぞれのタンパク質の蛍光が観察されるか否かを調べた。蛍光観察の際には、退色防止剤のンドリア（図２および３）、核（図２

質を用いてエポキシ樹脂包埋生物試料代わりに、TUK for multicolor 溶液を

および４）、小胞体（図３および４）を用いたマルチカラー In-resin CLEM

用いて観察した。その結果、いずれのについて多色蛍光観察が可能であっが可能となったことを示している。

タンパク質でも蛍光が観察され、同時た。また、同一切片を用いて、電子顕に電子顕微鏡を用いて、電子顕微鏡観

微鏡観察を行ったところ、ミトコンド

察が可能であった（図１）。

リア、核、小胞体特有の形態が観察さおわりに更に、オルガネラ局在型蛍光タンパ

れた（図２−４）。培養細胞において、

このように緑色蛍光および赤色蛍光

ク質を作成し、これらのタンパク質を小胞体の超微形態は形態保持が難しい

タンパク質を用いて、エポキシ樹脂包

HeLa 細胞に発現させ、蛍光タンパク質

オルガネラであるが、きちんと形態保埋試料を用いたマルチカラー In-resin

標識したオルガネラの In-resin CLEM

持されていた。これらの蛍光シグナル

CLEM が可能となった。同一切片をが可能か否かを調べた。エポキシ樹脂と電子顕微鏡像を相関させると、良い用いて、蛍光顕微鏡像と電子顕微鏡像

包埋生物試料の 100nm 厚の超薄切片相関性が得られた。このことは、緑色を観察するため、CLEM の相関精度において蛍光顕微鏡を用いて、ミトコ

蛍光タンパク質と遠赤色蛍光タンパク

は、飛躍的に上昇した。理論的には電和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）3

子線と光線の波長の違いによる歪みに限定される。また、蛍光シグナルの Z
軸最大分解能が超薄切片の厚みに限定されるために、3D In-resin CLEM への応用が現実的になってきた。
マルチカラー In-resin CLEM と称したが、まだ２色の蛍光タンパク質が利用できたにすぎない。CLEM-Green、
mWasabi、mCherry2、CLEM-Red に共通の因子が何かわかれば、In-resin
CLEM に利用できる蛍光タンパク質をより効率的にスクリーニングできるのであるが、共通因子は未だ不明であ
図２．核局在 CLEM-Green とミトコンドリア局在 mCherry2 を用いた In-resin CLEM
核局在 CLEM-Green とミトコンドリア局在 mCherry2 を発現させた HeLa 細胞を用いた In-resin
CLEM。電子顕微鏡像（EM）と蛍光顕微鏡像（FM）が良い相関を示している（Merge）。B は Aの拡大図。

る。青色−シアン系蛍光タンパク質もこれまでのところ、エポキシ樹脂包埋試料を用いた In-resin CLEM に利用可能な蛍光タンパク質は見つかっていない。エポキシ樹脂の自家蛍光が少な
いと思われる遠赤外に近い遠赤色（680nm − 720nm）の蛍光を持つ蛍光タンパク質も、多くは四酸化オスミウ

4

図３．小胞体局在 mWasabi とミトコンドリア局在 mCherry2を用いた In-resin CLEM

図４．核局在 CLEM-Green と小胞体局在 mCherry2 を用いた
In-resin CLEM

小胞体局在 mWasabi とミトコンドリア局在 mCherry2 を発現させた HeLa 細胞を用いた In-resin CLEM。電子顕微鏡像（EM）と蛍光顕微鏡像（FM）が良い相関を示している（Merge）（A, B）。
C では小胞体（矢頭）の形態が保持されているのがわかる。

核局在 CLEM-Green と小胞体局在 mCherry2 を発現させた HeLa細胞を用いた In-resin CLEM。電子顕微鏡像（EM）と蛍光顕微鏡像（FM）が良い相関を示している（Merge）。C では赤色蛍光に対応する位置の小胞体（矢頭）の形態が保持されている。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ムに感受性のものばかりであった。今後、エポキシ樹脂包埋試料を用いた
In-resin CLEM に利用可能な新しい青色−シアン系あるいは遠赤外系蛍光タ
ンパク質が発見されることを期待している。
〔参考文献〕
1）Fu, Z. et al . : Nat. Methods , 17（1）,55（2020）.
2）T anida, I. et al . : Sci. Rep ., 10（1）, 11314（2020）.
3）T anida, I. et al . : Sci. Rep ., 10（1）, 21871（2020）.
4）Ogoh, K. et al . : Luminescence , 28（4）, 582（2013）.
5）Ai, H. et al . : BMC Biol ., 6, 13（2008）.
6）Shen, Y. et al . : PLoS One , 12（2）, e0171257（2017）.

CLEM
Correlative Light and Electron
Microscopy の 略 で、光 線−電 子 相 関
顕微鏡法とも呼ぶ。同一試料を光学顕微鏡と電子顕微鏡を用いて観察し、それぞれの像を比較することにより、細胞内における細胞小器官・細胞分子の局在および形態を解析する手法である。通常の CLEM では蛍光観察した
後に電子顕微鏡試料用の固定を行い、四酸化オスミウム処理、エタノール脱水処理、エポキシ樹脂包埋を行うため、電子顕微鏡観察前に化学的・物理的に形態的歪みが生じる。このため、局所観察に限定され、画像もデジタル的補正が必要になる。

7）Toyooka, K. et al . : Microscopy , 68（5）, 417

エポキシ系樹脂
電子顕微鏡で生物試料を観察する場合に最も汎用される樹脂である。細胞内小器官を超微形態観察するのに適している。おもに Epon812 が汎用されている。
Lowicryl 樹脂、LR-white 樹脂、Technovit 樹脂
いずれもエポキシ樹脂とは異なり水溶性樹脂。低温重合も可能であるため、抗原となるタンパク質の変性を抑制する可能性があり、樹脂内での免疫反応が可能となるため、免疫組織染色や免疫電子顕微鏡用の試料作成に汎用される。エポキシ樹脂に比べて、柔らかい傾向がある。

In-resin CLEM
通常の CLEM が蛍光顕微鏡観察と電子顕微鏡観察を樹脂包埋前後に行うのに対し、In-resin CLEM では、同一超薄切片で蛍光顕微鏡観察と電子顕微鏡観察を行うために、化学的・物理的に形態的歪みを避けることができる。

（2019）.

P roducts
マルチカラーIn-resin CLEM関連製品
コード No.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）

NEW208-21161

TUK Solution for multicolor

電子顕微鏡用10mL

40,000NEW

080-10591

HB Solution

電子顕微鏡用

100mL

40,000NEW

163-28901

pCLEM-Green-nuc

電子顕微鏡用20μg

80,000NEW

160-28891

pCLEM-Green-C

電子顕微鏡用20μg

80,000NEW

163-28881

pCLEM-Green-N

電子顕微鏡用20μg

80,000166-28631

pCLEM-Red-ER

電子顕微鏡用20μg

80,000169-28621

pCLEM-Red-gol

電子顕微鏡用20μg

80,000163-28641

pCLEM-Red-lyso

電子顕微鏡用20μg

80,000165-28461

pCLEM-Red-mito

電子顕微鏡用20μg

80,000160-28651

pCLEM-Red-C

電子顕微鏡用20μg

80,000167-28661

pCLEM-Red-N

電子顕微鏡用20μg

80,000

詳細は当社 HP をご覧下さい。

CLEM

和光

検索

➡
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

5

echnical Report

創薬の安全性試験におけるヒト iPS 細胞由来心筋細胞を用いた評価の重要性
富士フイルム株式会社◆安全性薬理試験のガイドライン

バイオサイエンス＆エンジニアリング研究所

このような開発後期の医薬品開発中止

き安全性試験は、その実施時期とともにを避けるため、hERG 試験とテレメトリー

ICH ※ 1 で定めた国際ガイドラインに規定試験を繋ぐ様々なフォローアップ試験が実されている 。

を検証し、実用化に向けた活動を行ってきた。
特にヒトiPS 細胞由来心筋細胞（以後施されている。その代表例として、IKr

iPS 心筋と記載）を用いた心毒性評価系

安全性試験の中でも、安全性薬理試

チャネル以外の心室筋の活動電位に関わの構築が推し進められてきた。その中で験は生命維持機能に関わる心血管系、る Na チャネルや、Ca チャネルのイオン

も MEA ※ 7 を用いた培養 iPS 心筋の細中枢神経系及び呼吸器の安全性を評

チャネル阻害試験、摘出心臓を用いた胞外電位波形の評価系は高精度でリスク※4

価する極めて重要な試験であり、ヒト臨

APD 試験

やランゲンドルフ灌流心試

予測ができる系として確立されつつある。

床試験の前に行われるべき試験として

験※ 5 などを実施し、統合的なリスク評価

MEA 評 価 系は、iPS 心 筋に存 在 する

2）

ICH S7A/S7B で 規 定 され て い る 。

をしている。非臨床試験間または、臨床

様々なイオンチャネルの電気活動を複合しICH S7A には、安全性薬理試験の一般−非臨床試験間で結果が異なる場合は、た波形で取得するため、QT 間隔の評

原則と推奨事項が記載されており、ICH

ICH のガイドライン上でもフォローアップ試

価だけでなく、動物実験でしか検出でき

S7B は、特に被験物質の心室再分極延験を推奨しており、フォローアップ試験はなかった致死性不整脈（TdP ※ 8）の原因

長を評価するための非臨床試験の進め

統合的リスク評価を構成する重要な要素となる EAD（early afterdepolarization：方について述べられている 3）。

となる。

早期後脱分極）も検出できる。実際、日◆実際の医薬品開発における安全性薬

しかし、複数のイオンチャネルに対する

本国内で行ったバリデーション試験におい理試験の進め方阻害評価は、コストが増加する一方、複て、MEA 評 価 系 の 臨 床 予 測 精 度 は

実際の医薬品開発においては、ICH

数チャネルへの複合作用による臨床での83% となっており、hERG 試 験（72%）

S7A/S7B に従い、探索早期ではスクリー

影響までは評価できていない。また、摘に比べ、精度が向上していることが分

ニング試 験として、培 養 細 胞を用いた出した組織を用いた試験（APD 試験やラ

（右下図；iPS 心筋評価のかっている 5，6）を実施し、臨床試験手前

ンゲンドルフ灌流心試験）は実験手技の臨床予測率）。その一方、使用する iPSの探索後期では化合物の見極めとして、熟練を要し、スループットも低いことが課

心筋の種類によって、イオンチャネルの発

大動物（イヌやサルなど）を用いたテレメ

題となっている。

現が大きく異なることが報告されているこhERG 試験※2を実施している。

以上のことから、早期に臨床予測性がとから 7）、iPS 心筋の種類及びロットの選

hERG 試 験は、心 電 図における QT

高く統合的なリスク評価が可能な細胞

択は MEA を用いた心毒性評価の予測

トリー試験

※3

間隔の延長に関わる IKr チャネルの阻害（in vitro ）試験系が求められている。

精度を向上する上で重要であると考えて作用を評価する試験である。電流の阻◆ヒ ト iPS 細胞由来心筋細胞を用いいる。

害のみを見るため結果が明瞭であり、自た QT 間隔延長評価

動で測定できる機器も普及している。

そのような背景から、2013 年 12 月に、の活動だけではなく、国立医薬品食品衛

しかしながら、心室筋の活動電位には

日本製薬工業協会を母体としたヒトiPS 細生研究所を母体とする JiCSA ※ 9、FDA

IKr チャネル以外にも様々なイオンチャネ

胞応用安全性評価コンソーシアム（以後が母体の CiPA ※ 10 などと協力して国際ルが関与しており、hERG 試験の結果とCSAHi と記載）※ 6 が発足した。発足以的バリデーション試験が実施されてきた。

臨床結果が一致しないケースも報告され

来 CSAHi では、医薬品の安全性で特これらの活動が実を結び、2020 年 10 月ている 4）。その為、hERG 試験の結果だに問題となる心臓、肝臓、神経について、に iPS 心 筋 の 利 用など が 記 載されたけで判断してしまうと、有用な医薬品候補

ヒトiPS 細胞由来分化細胞を用いた各種

ICH E14/S7B のQ&A 案が公開された。

iPS 心筋を用いた心毒性評価は、CSAHi

を開発初期に除外してしまう可能性やヒト

Other
Known riskof TdP categories

での QT 間隔延長リスクを正確に評価できない可能性が示唆されている。
実際に、hERG 試験では陰性だったものの、大動物のテレメトリー試験で心電図 QT 間隔の延長や心臓の収縮・弛緩などへの影響が見られ、医薬品開発が中止となることがある。テレメトリー試験は現在の安全性薬理試験のフロー

今後の安全性薬理試験のフロー

hERG 試験

hERG 試験

ランゲンドルフ

ヒトiPS心筋評価

APD
テレメトリー

テレメトリーhERG 試験に比べて必要な化合物量も多く、この段階での開発中止は時間とコスト

6

馨

安全性評価技術開発とその応用可能性の大幅なロスになり得る。

現在、医薬品開発において実施すべ

1）

森村

安全性薬理試験のフロー

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

Other
Known riskof TdP categories

High risk

TP

FP

High risk

17

2

Low risk

FNTN

Low risk

4

13

81

87

Sensitivity Speciﬁcity Accuracy
(%)
(%)
(%)

hERG IC50/fETPC ≤30

26

10hERG IC50/fETPC >30

6

15

81

60

83

iPS心筋細胞評価の予測率
正確性 = 83%

Other
Known riskof TdP categories

72

ｈERG試験の予測率
正確性 = 72%

TP=True Positive，真陽性
FP=False Positive，偽陽性
TN=True Negative，真陰性FN=False Negative，偽陰性

iPS 心筋評価の臨床予測率 6）

ガイドラインの案文にはフォローアップ試験

Methods , 84, 111（2017）.
7）Kodama, M. et al . : J. Pharmacol. Sci ., 140（4）,325（2019）.
8）Gintant, G. et al . : Regul. Toxicol. Pharmacol .,117, 104756（2020）.

評価」，薬食審査 発 1023 第 4 号，2009 年．
4）Gintant, G. : Pharmacol, Ther ., 129（2）, 109（2011）.
5）Nozaki, Y. et al . : Regul. Toxicol. Pharmacol .,88, 238（2017）.
6）A ndo, H. et al . : J. Pharmacol. Toxicol.

の項目に iPS 心筋を用いた MEA 評価系
も記 載されている 8）。 今 後、ICH E14/
S7B の Q&A が最終化され、iPS 心筋を用いた心毒性評価の実用化が促進されると考えられる。
◆今後の展望※6. CSAHi（Consortium for Safety※1. ICH（International Council for

現在、iPS 心筋を用いた心毒性評価

Requirements for Pharmaceuticalsの研究は更に進んでおり、今まで動物実
験でしか評価ができなかった、収縮・弛緩系の評価系構築も進められている。収縮・弛緩系の評価についても、QT 評価と同様に国内外でバリデーション試験が実施されることが予想され、iPS 心筋を用いた収縮・弛緩系の評価が可能にな
れば、現況のフォローアップ試験で実施されているランゲンドルフ灌流心試験の代替としてさらなる活用が期待できる（前頁左下図；安全性薬理試験のフロー）。
まずはスタート地点に立った iPS 心筋を用いた安全性評価であるが、今後は様々な薬剤の開発に利用され、これまで hERG
試験の偽陽性判定により除外されていた薬剤の救済や、hERG 以外のチャネルによる心毒性リスクを提示できれば、医薬品開発の成功確立の向上に貢献できるであろう。iPS 心筋を用いた評価の実績が積まれていくことで、動物実験の削減や評価効率化に繋がり、より良い医薬品が早く世に送り出されることを期待したい。

Assessment using Human iPS

Harmonisation of TechnicalCells）

for Human Use）: 医薬品規制調和

ヒト iPS 細胞由来分化心筋・肝臓・神経細国際会議

胞を用いた各種安全性評価技術について、

医薬品規制当局と製薬業界の代表者が協働

新規医薬品開発への応用可能性を実験的にして、医薬品規制に関するガイドラインを検証し、将来的展望も含め実用に向け世の科学的・技術的な観点から作成する国際会中に提言することを目的とした組織。2021

議のこと。ここで決まったガイドラインは、

年 1 月 29 日現在、国内外の 47 の企業・機

世界の標準的な指針となる。

関が加盟している。

※2. hERG（human ether-a-go-go-related※7. MEA（Microelectrode array）

gene）試験

微小電極アレイシステム法。アレイ状に配心筋細胞に存在するカリウムチャネルの 1置された電子センサ上に細胞を培養したつである hERG チャネルに対して医薬品

り、組織を置くことで、細胞外電位を測定

候補化合物の阻害作用を確認する試験。

する。

hERG チャネルが化合物に阻害されると※8. TdP（Torsades de Pointes）

QT 間隔が延長し、不整脈が起きる可能性

重症型不整脈の一例であり、突然死の原因が高くなる。

となる特徴的な多型性心室頻脈。心電図上※3. テレメトリー試験

でねじれながら振動するように見えること

イヌやサルなどの大動物に送信機を埋め込から名付けられた。市場から医薬品が回収

み、医薬品候補化合物が心臓へ与える影響

される理由の一つ。

を測定する。近年、ジャケットを被せて測※9. JiCSA（Japan iPS Cardiac Safety

定する非侵襲な方法や、ミニブタを用いる

Assessment）

検討なども進められている。

ヒト iPS 細胞由来心筋細胞を医薬品の安全※4. APD（Action Potential Duration）
試験

性評価に応用することを目的に、産・官・学で構成されたオールジャパン体制の研究

活動電位持続時間の延長を検出する試験。
モルモットなど動物から摘出した乳頭筋グループ。
※10. CiPA（Comprehensive in vitro〔参考文献〕

標本を用いた試験が広く行われている。

1）ICH-M3「医薬品の臨床試験のための非臨床安全性試験の実施時期についてのガイドライン」，医薬審第 1019 号，2000.12.27 改正．
2）ICH-S7A「安全性薬理試験ガイドライン」，医薬審発第 902 号，2001 年．
3）ICH-S7B「ヒト用医薬品の心室再分極遅延（QT
間隔延長）の潜在的可能性に関する非臨床的※5. ランゲンドルフ灌流心試験

米国 FDA（食品医薬品局）を中心に組織

モルモットなどの動物から摘出した心臓をされた国際コンソーシアムで、ヒト iPS 心

用い、QT 間隔延長だけでなく伝搬や収縮・筋細胞などを含めた統合的な催不整脈リス

弛緩など、心臓への様々な影響を総合的にク予測法の確立を目指している。

Proarrhythmia Assay）

評価する実験方法。

医薬品候補化合物の心毒性評価試験サービス
本サービスは、iCell 心筋細胞を用いた、hERG 試験に代わるものと期待されている⾼精度な心毒性評価⽅法による受託サービスです。
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和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

7

echnical Report

エクソソーム除去FBS中に残存するエクソソーム量の評価−高感度エクソソーム検出技術が可能にした新たな品質保証−
富士フイルム和光純薬株式会社◆はじめに

ライフサイエンス研究所

笹本宏大

液などの体液にも存在が確認されており、ホスファチジルセリン（Phosphatidylserine :さらにはがんなどの疾患のバイオマーカー

PS）とカルシウムイオンの存在下で結合す

ソソームは生命現象の理解のための基礎を有しているという報告もあることから、こる Tim4 タンパク質を使用した PS アフィ

研究だけでなく、近年診断や治療といっこ数年で注目度が大きく上昇している 2, 3）。

ニティー法というエクソソーム精製技術及た研究分野でも注目を集めている。培養◆エクソソーム研究におけるFBS

びこれを応 用した PS アフィニティー

種々の細胞から放出される小胞、エク細胞由来のエクソソームの取得及び解析

エクソソーム研究において、培養上清ELISAというエクソソーム定量解析技術を行うにあたっては、細胞培養時にエクから精製した細胞由来エクソソームを解を有している 4）。PS アフィニティー ELISA

ソソーム除去処理したウシ胎児血清（Fetal析に用いることが一般的に行われている。

は、Tim4 タンパク質を固相化したプレー

Bovine Serum : FBS）を添加した培地

通常の細胞培養には FBS を添加した培トに培養上清や血清などのエクソソーム含が多く用いられているが、その残存の有地が幅広く使用されているが、細胞由来

有サンプルを添加し、カルシウムイオン存

無の詳細な検証や、その後の実験へのエクソソームの取得を目的とした培養にお在下でエクソソームを捕捉させ、エクソ影響を議論するようなことはあまり行われ

いては、FBS に多量に含まれるウシ由来

ソーム表面マーカータンパク質に対する抗ていない。そこで、本稿では当社が所有

エクソソームの混入を避けるために無血体反応によりエクソソーム検出を行うもの

する高感度エクソソーム検出技術を用い

清培地かウシ由来エクソソームを除去しであり、ウエスタンブロットのおよそ 1,000て、エクソソーム除去後の FBS におけるた FBS を添加した培地が使用されてい倍以上、エクソソーム表面マーカー抗体

残存エクソソーム量を比較解析した結果る。エクソソームを除去した FBS には、を固相化した既存の ELISA キット（検出を紹介する。

超遠心分離法にてエクソソーム除去を

感 度 は 数 ng ～ 数μg 程 度 ） のおよそ◆エクソソーム

行った自家調製 FBS や、ウシ由来エクソ

100 倍以上の検出感度を有することを確

エクソソームは、細胞から放出される

ソーム除去済みを謳っている市販品が一認している（図 1）。さらに、当社ではエ直 径 30-100nm 程 度 の 膜 小 胞 であり、般的に使われている。そして、これらのクソソーム表面マーカータンパク質である

CD9、CD63、CD81 をマーカータンパク

品質保証としては、残存エクソソームの

CD9、CD63、CD81 に対するモノクロー質として有している 1）。エクソソームはタン

粒子数や miRNA 量の測定、ウエスタン

ナル抗体を樹立・製品化している。そのパク質や核酸（DNA、RNA、miRNA）、

ブロットや ELISA キットなどによるマーカー

うちの抗 CD9, モノクローナル抗体（1K）

さらには脂質といった細胞由来成分を含タンパク質の検出によって残存エクソソー

及 び 抗 CD81, モノクロ ー ナ ル 抗 体有しており、これらを離れた細胞へ受けム量の確認が行われている。

（17B1）は共にウシ抗原への交差性を有渡すことによる細胞間情報伝達を行うと考◆PSアフィニティー ELISAによるFBS

して おり、 上 述 の PS アフィニ ティー

えられている。細胞外に放出されるという中ウシ由来エクソソームの高感度検出

ELISA における検出抗体として用いるこ

特徴から、血液（血清・血漿）、尿、唾

当社はエクソソームの表面に存在するとで、FBS に含まれるウシ由来エクソソー

Biotinylated
Antibody

〔ｋDa〕

B

250
150
100

Ca2+

50

2.00001.0000

20

40

60

80

100

120

精製エクソソーム(ng/mL)

←CD63

37
25
20
15

1.50001.00000.50000.00000

COLO201

2.00003.00000.000075

HRP-conjugatedStreptavidin
Tim4

K562

4.0000Abs.450nm

Exosome（c）

COLO201細胞由来
精製エクソソーム

Abs.450nm

（b）

50
n
75 g
n
10 g
0n
15 g
0
20 ng
0n
g

（a）

K562 細胞由来精製エクソソーム
COLO201 細胞由来精製エクソソーム

0

2

4

6

8

10

12

精製エクソソーム(ng/mL)

検出限界値（pg） 定量限界値（pg）（A0+3.3SD） （A0+10SD）
49.9
134
10.9
33.9

図１．ウエスタンブロットと PS アフィニティー ELISA の検出感度比較（ａ）PS アフィニティー ELISA の原理：固相化した Tim4 タンパク質で捕捉したエクソソームを、表面抗原を認識する抗体で検出することで定量解析を行う当社の独自技術。
（ｂ）ウエスタンブロットによるエクソソーム検出感度：COLO201 細胞由来精製エクソソーム（MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS 使用）をそ
れぞれ 50、75、100、150、200ng 電気泳動し、抗 CD63 抗体でウエスタンブロット検出した。検出限界は 75ng 程度。
（ｃ）PS アフィニティー ELISA による検出限界値：K562 細胞及び COLO201 細胞由来精製エクソソーム（MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS 使用）を段階希釈したサンプル及びバッファーのみのブランク値の活性を測定し、その結果を基に各サンプルの最低検出感度を算出した（各濃度ポイント
は n=6 で、A0 ポイントは n=12 で測定した）。検出限界は K562 細胞由来エクソソームが 49.9pg、COLO201 細胞由来エクソソームが 10.9pg 程度。

8

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

検出：CD9抗体(1K)

3.5

3.5

3
2.5
2
1.5
1
0.5
未処理品

超遠心処理品

原液

市販品A

10倍希釈

市販品B

3
2.5
2
1.5
1
0.5
0

BioSera社
Exosome-Depleted
FBS

TIG3細胞増殖性能
5

生細胞数(×10^5cells)

4

0

（b）

検出：CD81抗体(17B1)

4

Δ450nm-620nm

Δ450nm-620nm

（a）

未処理品

超遠心処理品
原液

100倍希釈

10倍希釈

市販品A

市販品B

BioSera社
Exosome-Depleted
FBS

100倍希釈

未処理品

4

超遠心処理品
3
市販品A
2

市販品B

1

BioSera社
ExosomeDepleted FBS

0
0

2

4

日数

図２．エクソソーム除去 FBS の評価（ａ）PS アフィニティー ELISA による FBS 中のウシ由来エクソソームの検出：抗 CD9 抗体（1K）［コード No. 014-27763］、抗 CD81 抗体（17B1）［コー［コード No. 298-80601］の検出抗体と置き換えて実施。
ド No. 011-27773］をビオチン標識し、PS CaptureTM Exosome ELISA Kit（Streptavidin HRP）
FBS は未処理品、超遠心処理品（120,000 × g, 18h）、市販品エクソソーム除去 FBS2 種、BioSera 社 Exosome-Depleted FBS の原液、10 倍希釈品、100 倍希釈品を使用。シグナル値 4 以上は検出限界以上。
（ｂ）エクソソーム除去 FBS の細胞増殖能評価：D-MEM（低グルコース）［コード No. 041-29775］に各 FBS（未処理品、超遠心処理品、市販品エク
ソソーム除去 FBS2 種、BioSera 社 Exosome-Depleted FBS）を 10% の濃度で添加した培地で TIG3 を 4 日間培養した。播種後 3 日後及び 4 日後に生細胞数をカウントした。

ムの高感度な検出が実現可能となった。

殖能の評価を行ったところ、BioSera 社

な影響を与えることが懸念される。そのた

そこで今回、高感度エクソソーム検出

Exosome-Depleted FBS は市販品と同め、高感度検出が可能な PS アフィニティー

技術を用いて、超遠心処理によりエクソ

等以上の細胞増殖能を持つことも明らか

ELISA を用いて確かな品質が保証されソームを除去した FBS や市販品のエクソとなっている（図 2（b））。

た FBS の使用や、エクソソームが限りな

ソーム除去済み FBS における残存ウシ由◆おわりにく除去されている BioSera 社 ExosomeDepleted FBS を用いることで、正確か

来エクソソーム量の比較解析を行った（図今回我々は高感度な検出が可能な PS2）。すると非常に興味深い事に、一般

アフィニティー ELISA とウシ抗原への交つ明瞭な研究データを再現性良く取得す的に広く論文でエクソソーム除去法として差性を持つエクソソーム表面マーカータン

ることが可能になると我々は考えている。

用いられている超遠心処理にて除去を

パク質抗体を組合せることにより、FBS 中

以上、繰り返しになってしまうが、当社行った FBS や、エクソソーム除去済みをの残存ウシ由来エクソソーム量を高感度が提供する高感度検出が可能な PS アフィ

謳っている 2 つの市販品については、依に検出できる測定系を確立した。そして、ニティー ELISA や、BioSera 社 Exosome-

然として多量のウシ由来エクソソームが残一般的に使用されているエクソソーム除Depleted FBS が有効活用されることで、存していることが明らかにされた（図 2

去後 FBS においては、多量のウシ由来

今後のエクソソーム関連研究の発展に繋（a））。一方、当社で新たに販売予定でエクソソームの残存が明らかとなり、既存

がっていくことを大いに期待している。

ある BioSera 社 Exosome-Depleted FBSのエクソソーム検出技術を用いた品質保には、残存ウシ由来エクソソームがほぼ証ではエクソソーム残存の有無の証明が検 出されないことが 確 認された（ 図 2

非常に困難であることが明らかとなった。

（a））。

当然ながら、細胞培養上清中に混入して加えて、ヒト胎児肺由来正常二倍体線

いるウシ由来エクソソームは、下流の実

維芽細胞（TIG3）の培養による細胞増験や解析におけるバックグラウンドに多大

コード No.

品

名エクソソーム除去 FBS
近日558-39501 Exosome-Depleted FBS
発売
PS アフィニティー法対応 ELISA キット
297-79201 PS Capture ™ Exosome ELISA Kit（Anti Mouse IgG POD）
298-80601 PS Capture ™ Exosome ELISA Kit（Streptavidin HRP）
エクソソームマーカー抗体
014-27763 Anti CD9, Monoclonal Antibody（1K）
011-27773 Anti CD81, Monoclonal Antibody（17B1）

エクソソーム関連製品の詳細情報は当社 HP をご覧下さい。

〔参考文献〕
1）Colombo, M. et al . : Annu. Rev. Cell Dev. Biol .,30, 255（2014）.
2）Tkach, M. et al . : Cell , 164, 1226（2016）.
3）R aimondo, F. et al . : Proteomics , 11, 709（2011）.
4）Nakai, W. et al . : Sci. Rep ., 6, 33935（2016）.

規格 / メーカー

容量

希望納入価格（円）Biosera50mL

30,000

遺伝子研究用遺伝子研究用

96回用
96回用

58,00058,000

免疫化学用
免疫化学用

100μL
100μL

30,00030,000

和光 エクソソーム

検索➡
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）9遺伝子解析 新技術とその応用

第４回

最終回

トランスクリプトーム・エピゲノムの統合解析
熊本大学発生医学研究所

細胞医学分野

古賀

友紹、中尾

光善

エ ピ ゲ ノ ム は、DNA の メ チ ル 化、れており、研究内容に合わせて選択すができる。最大の利点は、集団の平均ヒストンの化学修飾、クロマチンの高る必要がある。RNA-seq では、poly A

値を見る通常のバルク RNA-seq では

次形成、非コード RNA による調節なを利用して mRNA を回収し mRNA-seq

検出が困難な希少細胞における特徴的どで構成されて、転写関連因子と協働を行ったり、rRNA を除去して whole

な発現変化が、scRNA-seq では感度することで、ゲノム上の全遺伝子発現

RNA-seq を行ったり、miRNA の網羅

良く捉えられることである。近年でが制御されると考えられる。エピゲノ

的解析を行ったりと、用途は様々であは、データベースも充実してきておムには安定性と可逆性という両面がある。例えば我々は、ホルモン療法耐り、Tabula-Muris などでは、20 のマ

り、特定の遺伝子座を取り上げてもエ性化モデルの乳がん細胞株 MCF7 をウ ス 臓 器 に お け る scRNA-seq の 全

ピゲノム形成の特異性はほとんど未知

用いて、mRNA-seq と whole RNA-seq

データを公開している（https://tabula-である。近年のシークエンス技術の革の比較解析によって、エストロゲン受

muris.ds.czbiohub.org）。

新により、ゲノムワイドなエピゲノム

容体をコードする ESR1 遺伝子座から解析が急速に発展している。多様なエ

新規の非コード RNA 群（Eleanors とピゲノムを網羅的に検討し、トランス

名付けた）を同定した（図 1 ; Tomita,

ChIP-seq とは、クロマチン免疫沈

クリプトームのデータと合わせること

S. et al . : Nat. Commun ., 6, 6966

降（chromatin immunoprecipitation:

で、表裏一体の遺伝情報を検証するこ（2015）.; Abdalla, M. O. A. et al . : Nat.

ChIP）と高速シーケンサーを組み合とが可能になった。本稿では、高速

Commun ., 10, 3778（2019）.）。MCF7

わせて、メチル化やアセチル化などのシーケンサーを用いた３種類の基本技

細胞がエストロゲン枯渇に適応する修飾型ヒストン、ヒストン修飾因子、術 （RNA-seq、ATAC-seq、ChIP-

過 程 で、ESR1 遺 伝 子 座 の 活 性 化 に

ク ロ マ チ ン リ モ デ ラ ー、 転 写 因 子seq）について、実例を交えながら概

Eleanors が重要な役割を果たすこと（DNA 結合タンパク質）などの、ゲ説したい。

を明らかにした。また近年では、急速ノム上での結合部位を網羅的に解析すな分析技術の高度化により、１個の細る手法である。現在、エピゲノム解析

胞を分離・標識・解析できるようにを行うための基本的な方法になってい

1. RNA-seq

2. ChIP-seq

RNA シ ー ケ ン ス（RNA-seq） は、な っ た（ シ ン グ ル セ ル RNA-seq、る。クロスリンクした DNA を断片化

RNA から cDNA ライブラリを作製し、scRNA-seq）。この手法では、細胞集して ChIP し、脱クロスリンク、DNA

高速シーケンサーを用いて取得した団の転写産物を 1 細胞ごとに網羅的な

抽 出 を 行 い、 ラ イ ブ ラ リ ー 調 製 後、

リード情報をもとにして、遺伝子の発解析をするため、細胞集団の不均一性

シーケンスをゲノムワイドに解読す

現量を解析する手法である。イルミナを解析するのに適しており、細胞集団る。ChIP-seq には特異的な抗体が免社やサーモフィッシャーサイエンティ

を亜集団にクラスタリングしてそれぞ

疫沈降に必要なため、標的とするタンフィック社などから解析機器が提供されの集団の特徴遺伝子を抽出すること

パク質もしくはヒストン修飾などが決まっていること、また、ChIP に適した 抗 体 が あ る こ と が 必 須 に な る。
ChIP-seq では、ゲノムワイドな DNAタンパク質相互作用について詳細な情報が得られるが、十分な量の DNA
ライブラリー調製が必要なため、大量の細胞が必要になる（通常、1×106個程度）。最近では、少量の細胞から
ChIP-seq を可能とする手法も開発されており、ヒストン修飾（H3K4me3、
H3K27me3、H3K4me1） は 5×103 個

図１．エストロゲン受容体遺伝子座における mRNA-seq と whole RNA-seq の比較（Tomita, S.
et al . : Nat. Commun ., 6, 6966（2015）より改変。）
mRNA-seq では exon 部位にそのピークが集積している（青枠）。Whole RNA-seq では intron や
promoter、intergenic 部位にもピークが見られる（赤枠）。ピークの高さから親株の MCF7 よりも LTED で非コード RNA の発現が高いことがわかる。MCF7 : ヒト乳癌細胞株。LTED : MCF7を長期間エストロゲン欠乏培地で培養し、エストロゲン枯渇に適応した細胞株。LTED-RES :LTED にエストロゲン様作用のあるポリフェノールであるレスベラトロールを処理した状態。

10

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）程度の細胞数があれば解析可能になっている。また、転写因子など DNA に直接結合するタンパク質は比較的感度の良いデータが得られやすいが、ヒス
トン修飾酵素など、間接的に DNA に集積する因子はタンパク質間のダブル

遺伝子解析 新技術とその応用

クロスリンクによる固定を用いるな評価できるため、scRNA-seq と組み

ど、 予 め の 条 件 検 討 が 必 要 で あ る合わせたゲノムワイドなシングルセル（Tanaka, H. et al . : Aging Cell , 19,

解析が加速している。

e13173（2020）.; Anan, K. et al . : Nucleic

4. おわりにAcids Res ., 46, 5441（2018）.）。 ま た
ChIP-Atlas は、公開されている既報

エピゲノム解析の広さと深さは拡大の ChIP-seq データを再解析、またはし、生命現象の分子基盤を理解するた

ユーザーデータを照合するウェブツー

めに不可欠な技術に位置づけられる。

ルとして有用性が高い（https://chip-

今 回 紹 介 し た RNA-seq、ChIP-seq、

図２．ATAC-seq の原理
Tn5 transposase がアクセスできるオー
プンクロマチン領域が切断され、オリゴ
DNA が付加される。その後、DNA を抽出し、高速シーケンサーで解析する。

ATAC-seq に加えて、エピゲノムのChromatin（ATAC）-seq は、 高 活 性transposase に 組 み 込 む オ リ ゴ DNA

た HiChIP）なども含めると、様々な

改 変 型 Tn5 transposase を 用 い て、を蛍光色素で標識しクロマチンと反応アプローチが可能である。バイオ情報

DNA の断片化とタグ付けを行い、ゲさせることで、オープンクロマチン領の解析ツールも増えているので、これ

ノムワイドなクロマチン構造を解析

域を蛍光標識し１細胞レベルで可視化

らのデータを照合して、統合的に理解

す る も の で、2013 年 に 開 発 さ れ た

する ATAC-see という方法が開発さすることが重要であると考えられる。

（Buenrostro, J. D. et al . : Nat. Methods ,れている（Chen, X. et al . : Nat. Methods ,10, 1213（2013）.）。アッセイ自体の簡13, 1013（2016）.）。この手法では、蛍便さと幅広いサンプルに適用できるこ

光強度の高い細胞（= オープンクロマとから、オープンクロマチン領域の同チン領域が多い細胞）をフローサイト−シリーズ終了にあたって−定や転写因子の占有率を評価するためメトリーで分取した後、高速シーケンに有効である（図 2）。個別のヒストサーを用いてオープンなクロマチン領

ン修飾の検討など、詳細なエピゲノム

域を同定することができる。ATAC-

解析の前段階にも位置づけられる。同see 法ではフローサイトメトリーで様の目的でこれまでに用いられていた

解 析できるため、異なる蛍光色素でDNase-seq や Formaldehyde-Assisted

標識した抗体と組み合わせることで、Isolation of Regulatory Elements

特定の細胞集団におけるクロマチン状（FAIRE）-seq が 1×106 個以上の細胞態を解析するなど、応用範囲は広い。

2020 年 07 月（Vol. 88 No. 3）から始まりました「遺伝子解析 新技術とその応用」は、本稿をもちまして最終回を迎えました。本誌に寄稿いただきました先生
方にこの場を借りて御礼申し上げます。
おかげさまで本シリーズでは遺伝子解析に関する情報をさまざまな視点でお届けできました。
読者の皆様におかれましては、全 4 回に渡って続いた本連載をご愛読いただき御礼申し上げます。皆様の遺伝子研究の一助になりましたら幸いです。

atlas.org）。

3. ATAC-seq
Assay for Transposase-Accessibleを必要とするのに比べて、必要な細胞

さ ら に、 シ ン グ ル セ ル ATAC-seq

数が 5×102 〜 104 個と大幅に少ないこ（scATAC-seq）を用いると、単一細とも利点である。また近年では、Tn5胞解像度でオープンクロマチン領域を

構造・機能的な相互作用（染色体コン
フ ォ メ ー シ ョ ン キ ャ プ チ ャ 3C/4C/
HiC-seq、HiC と ChIP を 組 み 合 わ せ次世代シーケンス受託サービスのご案内
日本ジーンウィズ（株）は、ゲノミクス研究開発サービスを行っており、埼玉県川口市に所在し、オフィスとラボ、専門スタッフを設置・配備しています。
アメリカ、中国、ヨーロッパの十数か所の解析拠点と協力してGENEWIZ グローバルサービスネットワークを構築し、迅速でかつ利便性に優れた品質の高いサービスをお客様に提供しています。

エピジェネティクス関連受託サービス●全ゲノムバイサルファイト Seq（DNA シト
シンメチル化解析）● ATAC-Seq（活性クロマチン領域の同定）● ChIP-Seq/RIP-Seq（タンパク質と核酸の相互作用解析）

見積依頼・お問合せは、当社営業員までご連絡下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

11

ミクログリア研究の最前線−基礎から臨床へ−第４回

 クログリア・マクロファージによる脳梗塞後の炎症
ミと修復の制御メカニズム東京都医学総合研究所

大谷 健人
脳卒中ルネサンスプロジェクト、日本医療研究開発機構 七田 崇

脳卒中ルネサンスプロジェクト、慶應義塾大学薬学部生化学講座

東京都医学総合研究所

はじめに
脳梗塞は本邦における脳卒中の約 8割を占め、寝たきりや死亡の主な原因である。脳梗塞では、脳血流が低下することによって脳組織への酸素や栄養の補給が不足し、脳組織が虚血壊死（梗塞）に至る。脳虚血では様々な細胞ストレスが惹起されるが、炎症はそのようなストレスのひとつである。脳虚血後の炎症においては、脳組織に常在するマクロファージであるミクログ
リアや、血液脳関門の破綻に伴って脳組織に浸潤したマクロファージが炎症性サイトカインを産生する。ミクログ
リアやマクロファージによる脳梗塞後の炎症は数日間続くが、その後は炎症性サイトカインの産生がみられなくな
り、その代わりに脳組織の修復を促進

図１．脳梗塞後における炎症の惹起
虚血壊死した脳細胞からは HMGB1 や PRX などの DAMPs が放出される。HMGB1 は血液脳関門を破綻させ、血液中のマクロファージが脳組織内へ浸潤する。DAMPs は TLRs などのパター
ン認識受容体を介してミクログリアやマクロファージを活性化することで炎症性サイトカインの産生を誘導し、脳梗塞後の脳浮腫やさらなる神経傷害を引き起こす。

するようにミクログリアやマクロ
ファージの役割が変化する。ミクログ
リアやマクロファージが炎症性細胞や修復性細胞として機能する分子メカニ

ロファージの浸潤を抑制すると脳内炎れている様子が観察されている 4, 5）。

ズムは近年様々に報告がなされてい症が減弱して脳保護効果が観察され

HMGB1 は 脳 組 織 に お け る MMP92）

る。そこで本稿では、脳梗塞後の炎症る 。したがって CCL2-CCR2 の相互（Matrix metalloproteinase 9）の発現とマクロファージによる神経修復の分作用は、炎症性マクロファージの脳内を増加させて血液脳関門の破綻を促進

子メカニズムについて議論するとともへの浸潤に重要であると考えられる。

することにより炎症を増大させる 6）。

に、脳梗塞におけるミクログリア・マ

虚血によって組織が壊死を起こす

さらに HMGB1 は好中球を活性化し、クロファージの機能を標的とした治療と、組織を構成する物質が放出される

NETs （Neutrophil extracellular

薬開発の展望を述べる。

が、これらの物質の中には炎症を引き

traps）と呼ばれる細胞外トラップの

脳梗塞後の炎症におけるミクロ
グリア・マクロファージの役割

起 こ す 分 子 が 含 ま れ て お り DAMPs

放出を誘導する 7）。細胞外トラップは、（Damage-associated molecular patterns）

ゲノム DNA とエラスターゼやミエロと呼ばれている 。DAMPs は、ミク

ペルオキシダーゼなどの殺菌酵素で構

血液中を循環しているマクロファー

ログリアやマクロファージに発現し成される複合体であり、感染や炎症病

ジは、血液脳関門の破綻によって脳組ているパターン認識受容体（Pattern態において病原体の排除や組織におけ織へ浸潤する。マクロファージの脳内recognition receptors : PRRs） を 活 性る炎症を促進する役割があると考えら

浸潤にはケモカインの働きが必須であ化して脳梗塞後の炎症を引き起こすこ

れており、好中球やマクロファージかることが知られており、特に CCL2（C-Cとが知られている（図 1）。 脳梗塞後ら放出される 8）。NETs は脳梗塞組織

motif chemokine 2）とその受容体での主要な DAMPs としては、HMGB1においても観察されており、脳梗塞後ある CCR2（C-C chemokine receptor 2）（High mobility group box1） や PRXの炎症と神経傷害を促進すると考えら

は脳組織内へマクロファージが浸潤す（Peroxiredoxin）が知られている。

れている。また、脳梗塞後の血管内に3）るのに重要な役割を担う1）。CCL2 はHMGB1 は 細 胞 の 核 内 に 存 在 す る

おいても NETs が観察されるが、血虚血に陥った脳組織中の細胞から産生

DNA 結合タンパクとして発見された。

管内で NETs が放出されると血栓のさ れ る。 マ ク ロ フ ァ ー ジ に お い て脳組織では神経細胞が HMGB1 を主形成が促進され、梗塞巣周辺の脳血流

CCR2 を欠損させると脳組織内への浸に産生しており、脳虚血 2 ～ 4 時間後をさらに減少させることにより神経症

潤が減弱し、脳梗塞発症後早期にマクには神経細胞外に HMGB1 が放出さ状の悪化を加速させる可能性がある。

本シリーズの企画・構成に際し、九州大学大学院薬学研究院

12

薬理学分野

津田 誠先生にご協力頂きました。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ミクログリア研究の最前線−基礎から臨床へ−

PRX は細胞内で過酸化水素を水へするように役割を変化させる 13）。こミクログリアやマクロファージは炎症と代謝する抗酸化タンパク質として知のようなマクロファージは、抗炎症性を収束させて修復を促進することによられている。PRX は虚血後の脳細胞

サイトカインである IL-10 や TGF-βり、脳梗塞後の回復に寄与することが内で発現が増加し、酸化ストレスに対（Transforming growth factor β）を知られている 18）。マクロファージでして細胞保護的な機能を持つ 9）。一方産生して神経保護的な作用を持つこと

CCR2 を欠損したマウスでは、脳梗塞で、虚血壊死した細胞からは細胞内でが知られている。脳組織においてアデ

発症数日後における炎症は減弱するも蓄積した PRX が細胞外に放出されて、ノウイルスを用いて IL-10 を過剰発現のの、発症 5 日目以降においては炎症

ミクログリアや脳組織内に浸潤したマさせると、脳梗塞後の神経細胞死と梗がリバウンドして神経症状が悪化し、

14）

クロファージのパターン認識受容体を塞体積の拡大を防ぐ。TGF-βは炎

脳梗塞後の回復が不良になることが報活性化し、炎症性サイトカインの産生症抑制に働く制御性 T 細胞の分化に告されている 13, 19）。脳梗塞発症７日目を誘導する。Myd88 は、主要なパターも重要な因子であり、脳梗塞後の炎症

以 降 に は、 ミ ク ロ グ リ ア や マ ク ロ

ン認識受容体として知られる Toll 様を減弱する 15）。以上のように、脳梗

ファージから IGF-1 や FGF-2 などの受 容 体（Toll-like receptors : TLRs）

塞においてマクロファージは炎症抑制

脳保護的に作用する栄養因子が産生さのシグナルの下流で機能するアダプ性の因子も産生している。

れる 20, 21）。これらの栄養因子は再髄鞘ター分子であり、Myd88 を欠損した

脳梗塞後の炎症収束には、脳組織内化やシナプス形成に関与するため脳梗

マウスではほとんどの TLRs の機能をから DAMPs を排除することが重要

塞後の回復に重要な役割を持つと考え欠損する。Myd88 欠損マウスを用いである。ミクログリアやマクロファー

られている 22）。このように、脳梗塞て脳梗塞モデルを作製すると、脳内にジに発現しているスカベンジャー受組織に浸潤したマクロファージは、炎浸潤した免疫細胞における炎症性サイ

容 体（MSR1 や MARCO） は PRX や症性から炎症収束・修復性へと形質がト カ イ ン 産 生 が 顕 著 に 減 少 す る 10）。

HMGB1 な ど の DAMPs を 認 識 し て変化することにより脳梗塞後の機能回

TLRs は本来、細菌やウイルスなどの脳 梗 塞 組 織 か ら 排 除 す る。MSR1 や復にも寄与しているものと考えられる。

病原体由来の分子を認識して免疫細胞

MARCO を欠損したマウスでは、脳を活性化するが、傷害を受けた組織か

梗塞組織からの DAMPs の排除が遅ら放出される自己由来の分子も認識し延して炎症状態が長引くことで、神経て無菌的な炎症を惹起する役割も持つ症状が野生型のマウスと比べて悪化す

脳 梗 塞 の 急 性 期 治 療 で は、rt-PA

ことが知られている。脳梗塞においてる 16）。ミクログリアやマクロファー（Recombinant tissue plasminogenは、細胞外に放出された PRX は TLRs

ジにおける MSR1 の発現は、脳梗塞

activator）の静脈内投与による血栓溶を活性化し、IL-1β（Interleukin-1β）

発症 1 日目から 3 日目にかけて上昇す

解や、血栓除去術が実施されている 23）。

や IL-23、TNF-α（Tumor necrosis

るが、このような MSR1 の発現上昇

免疫抑制剤であるステロイドやシクロ

factor α）などの炎症性サイトカインには、マクロファージの分化に重要な

スポリン、タクロリムスなどは脳梗塞の産生を誘導する。齧歯類の脳梗塞モ転写因子である Mafb が重要な役割を患者における機能予後の改善効果が証

デルや脳卒中患者では、これらの炎症

持 つ。MSR1 の 発 現 が 高 い マ ク ロ

明されていない。したがって、脳梗塞性サイトカインは虚血後の炎症を促進

ファージでは、TNF-α、IL-1β、IL-23

後の炎症を抑制するだけではなく炎症し、脳浮腫を引き起こし、さらなる神といった炎症性サイトカインよりも、の収束を早めて修復を促進する薬剤の経傷害や予後不良につながると考えら

IGF-1（Insulin-like growth factor1）

開発が期待されている。

れている 11）。

のような神経栄養因子を主に産生して16）ミクログリアやマクロファージを治療標的とした脳梗塞後の炎症制御

IL-10 や TGF-β を 治 療 標 的 と し た

脳梗塞後におけるマクロファー
ジによる炎症収束。脳梗塞を作製したラットに薬剤は、抗炎症性サイトカインのみ発

フタリド誘導体を投与すると、脳組織現誘導させることが困難である上に、に浸潤したマクロファージにおける脳梗塞において発現制御を行うべき適

ミクログリアやマクロファージは脳MSR1 の 発 現 を 増 加 さ せ て DAMPs

した時期が不明であることが問題とないる

梗塞後の炎症に重要な役割を持つが、の排除を促進し、TNF-αの産生を減る。脳梗塞を作製したマウスに DHA

炎症性サイトカインの産生は脳梗塞発弱させることが示された 17）。したがっ（Docosahexaenoic acid）や IL-13、メイ症の数日後にピークを迎え、その後減て、脳梗塞後における DAMPs の排

ソインジゴを投与することで、ミクロ

少していく 12）。脳梗塞発症数日から 1

除は炎症を収束させるための重要なプ

グリアやマクロファージを抗炎症性・週間程度経過するとマクロファージ

ロセスである。

修復性へと形質を変化させる 24-26）。アは、炎症収束を促し、神経修復に寄与

脳梗塞発症後７日程度経過すると、和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ンジオポエチンを投与すると炎症性サ

13

ミクログリア研究の最前線−基礎から臨床へ−

イトカインの産生が減少し、血管新生が促進されて脳保護的な効果がみられる 27）。最近の報告では、PPARγやSTAT6 のような転写因子は脳梗塞後の炎症を収束させる治療標的分子である可能性が示されている 28）。
ミクログリアやマクロファージの炎症収束・修復作用を持続させるための分子メカニズムを解明できれば、脳梗塞を含め様々な臓器傷害における予後を改善させられる治療剤開発が可能となるであろう。さらに、脳梗塞発症後
24 時間以降に投与開始できる治療剤は少ないが、発症数日後に投与しても脳梗塞後の機能予後を改善させる治療薬が開発できる可能性が高い。

結 論
ミクログリアやマクロファージは炎症性、抗炎症性、炎症収束性、修復性など多彩な機能を持ち、脳梗塞後の時期によって病態の進行に重要な役割を果たす（図 2）
。脳梗塞におけるミク
ログリアやマクロファージによる炎症収束・修復の役割を促進させて持続させる次世代の治療剤開発が期待される。
Abbreviations
CCL2: C-C motif chemokine 2; CCR2: C-C
chemokine receptor 2; DAMPs: Damageassociated molecular patterns; PRRs: Patternrecognition receptors; HMGB1: High mobility
group box1; PRX: Peroxiredoxin; MMP9:
Matrix metalloproteinase 9; NETs: Neutrophil
extracellular traps; TLRs: Toll-like receptors;
IL-1β: Interleukin-1β; TNF: Tumor necrosis
factor; TGF-β: Transforming growth factorβ; IGF-1: Insulin-like growth factor1; rt-PA:
Recombinant tissue plasminogen activator;
DHA: Docosahexaenoic acid
Competing interests
The authors declare that they have nocompeting interests.

図２．脳梗塞におけるミクログリアやマクロファージの多彩な機能と役割
脳梗塞発症後、虚血壊死した脳細胞から放出される DAMPs によってミクログリアやマクロファージが活性化され、IL-1βや TNF-αなどの炎症性サイトカインが産生される。一方、MSR1の発現が高いミクログリアやマクロファージは脳梗塞組織から DAMPs を排除し、神経修復の働きを持つ IGF-1 を産生することで脳保護的な効果を示す。

〔参考文献〕（2007）.
2）G liem, M. et al . : Ann. Neurol ., 71, 743（2012）.
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8）K im, S. W. et al . : Acta Neuropathol.

Commun ., 7, 94（2019）.
9）Rashidian, J. et al . : J. Neurosci ., 29, 12497（2009）.
10）Shichita, T. et al . : Nat. Med ., 15, 946（2009）.
11）Shichita, T. et al . : Nat. Med. , 18, 911（2012）.
12）Clausen, B. H. et al . : Neuroscience , 132, 879（2005）.
13）Pedragosa, J. et al . : J. Cereb. Blood Flow

17）Zou, X. et al . : J. Neuroimmune Pharmacol .,（2020）.doi:10.1007/s11481-020-09911-0.
18）Wattananit, S. et al . : J. Neurosci ., 36, 4182
（2016）.
19）Fang, W. et al . : Theranostics , 8, 3530（2018）.

22）Leker, R. R. et al . : Stroke , 38, 153（2007）.
23）Hankey, G. J. : Lancet , 389, 641（2017）.
24）Ye, Y. et al . : Front. Cell. Neurosci ., 13, 553（2019）.
25）Cai, W. et al . : Transl. Stroke Res ., 9, 669（2018）.
26）Kolosowska, N. et al . : Neurotherapeutics ,16, 1304（2019）.
27）Venkat, P. et al . : CNS Neurosci. Ther ., 27,
48（2020）.
28）Zhang, W. et al . : CNS Neurosci . Ther ., 25,1329（2019）.

ミクログリアマーカー抗体

和光

検索

➡

詳しくは、当社 HP をご覧下さい。

16）Shichita, T. et al . : Nat. Med ., 23, 723（2017）.

21）Zhu, W. et al . : Stroke , 39, 1254（2008）.

6）Qiu, J. et al . : Stroke , 41, 2077（2010）.

Metab ., 40, S98（2020）.

（2005）.
15）Cekanaviciute, E. et al . : Glia , 62, 1227（2014）.

20）Ikeda, N. et al . : Stroke , 36, 2725（2005）.

5）Zhang, J. et al . : Stroke , 42, 1420（2011）.

当社では、ミクログリアマーカー抗体を多数取扱っています。

1414）O oboshi, H. et al . : Circulation , 111, 913

1）Mildner, A. et al . : Nat. Neurosci ., 10, 1544

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ヒト iPS 細胞由来分化細胞の創薬応用

第１回

ヒト iPS 細胞由来心筋細胞を用いた心収縮評価システムの最新動向
東京大学大学院

初めに

薬学系研究科

化学物質安全性評価システム構築社会連携講座

澤田光平

胞でも成体心筋と同じように機能している

用いて 2D/3D の心筋モデルを作製するためと考えられる。

ことが進められている。プラスチックプレー

心筋の収縮を正常に保つことは、全身一方、収縮機能に関しては、iPS 細トのように固い素材上に播種された心筋に血液を送り出す心臓のポンプ機能にとっ

胞由来心筋細胞とヒト成体心筋標本で細胞でも、長時間の高頻度電気的ペーて極めて重要である。心筋症などの心疾

生理学的特性や薬理学的特性に関して

シング、配向性の付与あるいは成熟化促

患、薬物誘発の心毒性、COVID-19 なの違いが、種々指摘されている 2）。例え

進物質を与えることによって、FFR やβ-

どのウイルスによる心筋障害、更には環

ば、iPS 細胞由来心筋細胞では収縮力

受容体刺激などに対する薬理的応答が

境汚染物質 PM2. 5 など様々な原因が心は小さく、成体心筋では収縮頻度と収改善されることが示されている。これらの筋の収縮性に障害をもたらす要因となる。

縮力の関係（頻度−収縮関係、force-

方策に加え、柔軟な基材を用いることにこれらの要因は心不全の誘発、悪化につ

frequency relationship、FFR）が正のよって更に成熟化が促進され収縮特性がながる臨床上重要な課題として認識され関係であるのに対し、iPS 細胞由来心筋改善されることが期待される。表には柔ており、高齢者の心不全増加の原因に細胞では負の関係を示す。また、成体

軟な細胞外基質を用いた心筋組織標本

少なからず関与していると考えられる。こ心筋組織ではβ-受容体刺激により収縮力作製法をまとめた。EHT（Engineered

れらの課題を解決するために、ヒト心筋が大きく増加する陽性変力作用（positive

Heart Tissue）は 20 年以上前に心筋細胞を用いた病態の解明、治療法の開inotropy）が認められるが、iPS 細胞由

梗塞で失われた心筋組織に移植する目

発、薬剤の副作用軽減を目指した研究

来心筋細胞では陽性変力作用が明確で的で作製された人工的心筋組織で、ハイが今後とも必要であり、成体心筋により近ないことも多い。これらの特性は iPS 細

ドロゲルマトリックスの中に心筋細胞を封じづいたヒトiPS 細胞由来心筋細胞の重要

胞由来心筋細胞の収縮システムの未成込めたものである。この技術をヒトiPS 細

性はますます増加してくると考えられる。

熟性、特に細胞内 Ca 制御にかかわるタ

胞由来心筋細胞に適用し、ハイドロゲル

ヒトiPS 細胞由来心筋細胞は分化初

ンパク質の低発現、エネルギー供給にかマトリックスとしては生体成分のフィブリン、期から電気的活動のみならず収縮機能をかわるミトコンドリアの未発達、更には筋コラーゲンあるいは人工的高分子を用い、有することから、ヒト心機能に対する薬物

線維のランダムな配向性などが原因であ

心筋以外の線維芽細胞なども加えて、必作用予測に大きく役立つと考えられてきると推察されている。現在、これらの性要な形状に成形して、収縮評価に用いてた。実際、心筋細胞として未成熟な状態

質をより成体心筋に近づけるため成熟化いる。EHT 標本に長期ペーシングを行うであっても薬物による不整脈誘発リスクのの方法が様々検討されている 3）。

ことで、成 体 心 筋 組 織に近い生 理 的、予測においては、臨床における催不整脈
リスクレベルにかなり一致した予測性を示

2D/3D 収縮評価系の新たな展開

1）

すことが明らかとなった 。これは、薬物

薬理的応答が得られることも報告されて4）いる 。心筋シート標本はフィブリンゲル

近年、iPS 細胞由来心筋細胞の収縮や PDMS（Polydimethylsiloxane） なによる催不整脈作用の作用点となる細胞評価において、成体心筋に近い収縮性どで作られた柔軟なシート状基材の上に膜上のイオンチャネルに関しては、未成を示す標本を作製する目的で、成体の細心筋層が張り付いた形状で、心筋細胞

熟性を有している iPS 細胞由来心筋細胞外基質と同様な柔軟性を有する基材をの収縮によってもたらされるシートの変形を表．柔軟な細胞外基質を用いた 2D/3D 心筋組織標本
タイプ

作製法

特徴

３D EHT＊

心筋細胞とコラーゲンやフィ
ブリン、更には線維芽細胞などと混ぜ、型にはめ込ん
で、心筋組織様標本を作製。

型の形を変えることにより、
柱状、
リング状、
また心室チェ
ンバー上の標本を作ることができる。

2D/3Dシート

フィブリンゲルなどの柔軟なシート状基材と細胞シートが結合したもの。基材上に細胞を播種して作製、あるいは心筋シートを張り合わせる。

心筋シートを張り合わせて作製する場合、複数枚の心筋シートを重ね合わすことが可能。また、心筋以外の細胞シートを挟むこともできる。

Sasaki et. al, PLOS ONE 13（5）:e0198026 2018コラーゲンやゼラチン繊維などからなる３次元網目構造
体に心筋細胞を播種して作製。

繊維の太さ、架橋密度、あるいは編み方の違いなどで様々な強度の網目構造を作製可能。 繊維方向によって細胞の配向性も制御。

https://doi.org/10.14869/
toxpt.47.1.0_P-226（JSOT abstract）

Fiber Net

組織標本例

参考文献
Stem Cell Reports j Vol. 7 j 29-42 j
July 12, 2016
NATURE COMMUNICATIONS ¦（2020）11:75

JPTM 105, September 2020, 106892

Adv. Funct. Mater. 2020, 30,
1908612＊ Engineered Heart Tissue

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

15

ヒト iPS細胞由来分化細胞の創薬応用

収縮力あるいは変異として検出するもの

ることができる。心筋は繊維長軸方向により、心筋細胞成熟が加速されることがである。再生医療応用のために開発され沿って配向する特性がある。また網目構予測される。ゼラチンは動物の皮膚などた細胞シート作製技術を用いて作られた造のため厚い 3D 標本中心部でも十分にの結合組織の主成分であるコラーゲンか

心筋シートを張り合わせる場合には、複酸素や栄養成分を受け取ることができるなら抽出されたアミノ酸ポリマーで、親水性、数の心筋シートや他の細胞シートを重ね合

ど非常に魅力的な技術である。心筋の細胞接着性などに優れているため、細胞わせた多層の心筋組織を作製することも収縮評価においては、まだ始まったばかり

培養の基材として古くから用いられてい可能である。コラーゲンやゼラチンなど柔であるが、今後の発展が期待できる。次た。心筋細胞が長軸方向に配向できるよ

軟な繊維をネット状に成形して作られたに 3D 網目構造足場材を用い現在行ってうな直径を有したゼラチン繊維を 3D 網目

3D の足場材を用いて心筋細胞の培養をいる研究について紹介する。

構造に加工することにより、大きな収縮変行う取り組みも活発になっている。この技化を得るだけでなく、成熟を促すことので

ゼラチン繊維不織布を用いた収縮評価系の取り組み

きる足場材となることが期待される。日本

でき、組み合わせの自由度も大きいことか

これまでの研究から、成熟を促すとさ

ル繊維不織布（Genocel®）は繊維同士

ら、様々な細胞や目的に応じた足場を作れている種々の方法を同時に与えることにが結合したネットワーク構造を有し、長期術では繊維の素材、太さ、方向性、密度などそれぞれの特性を変更することが毛織（株）が開発したゼラチンハイドロゲ

図．ゼラチンハイドロゲル繊維不織布（GHFN）上で培養したヒト iPS 細胞由来心筋細胞標本を用いた薬理評価
実験には iCell® Cardiomyocytes2 を GHFN 足場に対し、6,000 cells/mm2 の濃度で播種し、2 週間培養した標本を用いた。画像記録および解析にはそれぞれ共焦点イメー
ジング装置（CQ1, 横河電機）および CellPathfinder（横河電機）を用いた。（A）組織染色（培養 15 日目）：細胞核（Hoechst）、アクチンフィラメント（phalloidin）、ア
クチン結合タンパク質（α-actinin）を蛍光染色。アクチンフィラメント画像より広範なネットワーク構造、α-actinin 画像よりゼラチン繊維長軸方向に整列したサルコメア構造が確認できる。（B）収縮および Ca 蛍光強度測定：明視野（上段）および Ca 蛍光（下段、蛍光色素 EarlyTox）タイムラプス画像を同一視野から記録した（20 frame/ 秒）。
収縮波形の数値化には MUSCLEMOTION Software5）を、Ca 蛍光強度変化は CellPathfinder を用いた。細胞内 Ca の上昇に伴い細胞収縮が開始し、ゼラチン繊維の変形がみられる。
（C）
陽性変力作用：上段からβ-受容体作動薬（Isoproterenol）、強心配糖体（Digoxin、Na-Kポンプ阻害薬）
およびホスホジエステラーゼ 3 阻害剤（Milrinone）。
Isoproterenol および Milrinone は収縮力および拍動数を濃度依存的に増加させた。Digoxin は収縮力を濃度依存的に増加させた。（D）Digoxin 1μM による細胞内 Ca
振動：0.1μM では細胞内 Ca は急速に増加した後、ゆっくりと減少し静止時には低値を維持した（上段）。一方、１μM では細胞内 Ca は急速に増加後、速やかに減少したが、その後小さな増減を繰り返した（下段）。（E）抗がん剤 Nilotinib 72 時間暴露の影響：収縮力は 72 時時間後 25％程度低下し、拍動数も低下した（ a）下段）。
。
MitoTracker® によるミトコンドリアの形態観察において Nilotinib 暴露標本ではミトコンドリアの断片化の像が見られた（ b）下段）

16

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ヒト iPS 細胞由来分化細胞の創薬応用培養にも安定で、収縮変形能と変形回および Digoxin（Na-K ポンプ抑 制 薬 ）できる総合的 in vitro 細胞実験システム

復能に優れていることも示されており、心の陽性変力作用が確認できた（図 C）。

の開発が重要であろう。また、抗がん剤®

2

筋収縮を評価する目的に適している素材

iCell Cardiomyocytes を用いたこれまなどの薬物による心筋収縮力抑制を検討であると考えられる。ただし、今回実験にでの報告では、長期ペーシングなどで成する時には長期の薬物暴露が必要であは心筋細胞が長軸方向に配向しやすいよ熟化促進を行わない標本においては、こり、成熟化などを進めた心筋細胞でもそ

うに市販の Genocel® より繊維径の細いゼ

れらの陽性変力作用はとらえにくいことがの状態を長期に維持できるかなどの課題

ラチン繊維から構成されたゼラチン繊維

報告されている。今回の結果はゼラチンを解決することも重要である。

不織布（GHFN）を用いた。ヒトiPS 細胞

繊維３D 足場材上で培養しただけでペー由来心筋細胞（iCell® Cardiomyocytes2）

シングと同様の効果があることを示唆すを GHFN に播種すると、3 日目からゼラチる。また、ゼラチンは無色透明で、薬物

ン繊維長軸方向に縦長の心筋細胞が整によるサルコメア、ミトコンドリアまた核など

列し、サルコメアの縞模様も観察できた。

細胞内小器官への影響を調べる場合にまた、アクチン繊維はゼラチン繊維に沿っも適していると考えられる。Digoxin 高濃て伸展し、ゼラチン繊維の交点を介して度による細胞内局所での Ca 振動（図〔参考文献〕
1）Blinova, K. et al . : Cell Rep ., 24, 3582（2018）.
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5）Sala, L. et al . : Circ. Res ., 122, e5（2018）.

連結し、ネットワーク構造を形成した。培D、下段）は催不整脈性の副作用メカニ

養７日目以降では GHFN 全体が同期拍

ズムと関連している可能性がある。また、動を示した。15 日間培養することで、心抗がん剤 Nilotinib 長期暴露によるミ
トコン

筋の拍動がより大きくなり、ゼラチン繊維

ドリアの断片化の像（図 E、b）下段）

長軸に沿って配向したサルコメア構造もは心毒性との関連性を示唆する。ゼラチ

さらに明確になり、サルコメア長はおよそ

ン繊維 3D 足場材を用いた検討はまだ進ことから、種差の壁を越え臨床予測性向上

2μm で成体心筋細胞と同様な構造的特行中であるが、今後さらに広い応用性がの期待のもと、創薬応用が展開されています。

性を示した（図 A）。タイムラプス動画か示されると考えられる。

らカルシウムトランジェントと動きを同時に測定することで、１つの像からカルシウム−シリーズ開始にあたって−2007 年にヒトiPS 細胞技術が確立されて以来、現在まで種々のヒトiPS 細胞由来分化細胞が報告されています。ヒト細胞である

本号からの「ヒトiPS 細胞由来分化細胞の創薬応用」は、全 4 回の連載で創薬に最後に対するヒトiPS 細胞由来心筋、神経細胞、レベルと心筋の動きを評価することが可能

心毒性をもたらすメカニズムは多様で、であった（図 B）。2 週間培養の標本に複雑に絡み合っている。臨床での心機能

おいて、Isoproterenol（β- 受容体作リスクを正しく予測するためには、収縮機動薬）、Milrinone（PDE3 阻 害 薬 ）能のみならず組織学的変化も併せて検討

オルガノイド、肝細胞の応用例を、トップラン
ナーの研究者からご紹介頂きます。
本連載が読者の皆様のご研究の一助になりましたら幸いです。

iCell® 心筋細胞
コード No.
メーカーコードiCell® 心筋細胞 01434 株
551-33491
C1056
552-33301
C1006
iCell® 心筋細胞 11713 株
552-33541
C1105
559-33551
C1106
iCell® 心筋細胞 2.0 01434 株
NEW554-39721
C1058
553-33331
C1016
iCell® 心筋細胞 2.0 11713 株
NEW553-40301
C1233

品

名

iCell® Cardiomyocytes 01434
iCell® Cardiomyocytes 01434
iCell® Cardiomyocytes 11713
iCell® Cardiomyocytes 11713
iCell® Cardiomyocytes2 01434※
iCell® Cardiomyocytes2 01434
iCell® Cardiomyocytes2 11713

容量

希望納入価格（円）>1.0×106cells/vial>4.0×106cells/vial

131,000
258,000>1.0×106cells/vial>4.0×106cells/vial

131,000
258,000

150>1.25×106cells/vial>5.0×106cells/vial

74,000258,000

150>5.0×106cells/vial

258,000

150
150

150
150

150

※本品のご購入は２バイアル単位となります。

関連製品

専用培地

コード No. メーカーコード
品
名
M1001
iCell® Cardiomyocytes Plating Medium
550-33581
M1003
iCell® Cardiomyocytes Maintenance Medium
557-33591

iCell® 心筋細胞のアプリケーション情報及び他の iCell® 製品情報は当社 HP をご覧下さい。

容量
30mL
100mL

希望納入価格（円）52,00020,000iCell Products

検索➡
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

17

ew Products
デ ー タ

機能性ポリマー材料合成に■ FOM-03006 の安全性評価

水溶性アクリルアミドモノマー

試験項目

アクリルアミドモノマーから得られるポリマーは、UV

結果
PⅡ＝ 0
無刺激
陰性
陰性

皮膚刺激性・腐食性

塗料、接着剤、レンズコート材料などさまざまな用途に利

皮膚感作性
変異原性（Ames）

用されています。特に、近年、アクリルアミドポリマーは生体適合性が高いことから、バイオマテリアルとしての応用が期待されています。当社では、アクリルアミド基を複■ マウス線維芽細胞の付着抑制確認試験数有した架橋剤、及び高い親水性を発現するベタイン構造とメタクリルアミド基を有するモノマーを新たにライン
アップしました。新規のポリマー材料の開発にご利用下さ
い。

特

長

●水溶性が高く、安全性に優れている●高い安定性（耐加水分解性）●ポリマーの用途として塗料、接着剤、レンズコート材料などに加え、生体適合性が高いことからバイオマテリア
ルとしても注目 1, 2）

Glass●バルク対応も可能

Coated左：処理なし、右：FOM-03010 とメタクリル酸ブチルとの共重合体をガラスに塗布

H
N
O

O

O
O

N
H

H
N

O

O

O

O
N
H

O

N
H

N

O

H
N

N
H

O

O

O

O

C25H40N4O7＝508.61

C13H19N3O3＝265.31

C16H28N2O5＝328.40

CAS RN® 1393329-90-2

CAS RN® 34330-10-4

CAS RN® 160432-07-5

1

2

3

O

O
N
H

N

N
H

O

O

〔参考文献〕
1）Matsuda, T., Kawakami, R., Namba, R., Nakajima, T. and Gong, J. P. :Science , 363 , 504（2019）.

O

H
N

N

細胞の付着抑制作用を示すため、生体内で異物反応が起きる可能性が低く、生体適合性が高いと考えられる。

H
N

O

+
N

2）中島祐 : 高分子，69，146（2020）.

SO3

C18H26N4O4＝362.42

C13H26N2O4S＝306.42

No.

CAS RN® 158749-66-7

CAS RN® 83623-32-9

4

5

NEW

N -[Tris（3-acrylamidopropoxymethyl）
1 356-45851 methyl]acrylamide【FOM-03006】

5g

13,000NEW

2 353-45861

N ,N -Bis（2-acrylamidoethyl）acrylamide【FOM-03007】

5g

7,000

NEW

N ,N ’-[Oxybis（2,1-ethanediyloxy-3,13 350-45871 propanediyl）]bisacrylamide【FOM-03008】

5g

11,000NEW

N ,N ’-1,2-Ethanediylbis{N -[24 357-45881 （acryloylamino）ethyl]acrylamide}【FOM-03009】

5g

20,000NEW

4-[（3-Methacrylamidopropyl）
5 354-45891 dimethylammonio]butane-1-sulfonate【FOM-03010】

5g

7,000

溶 解 性
溶解度（wt%）（FOM-03010 は液温 25℃、それ以外は 30℃）
アクリルアミド FOM-03006 FOM-03007 FOM-03008 FOM-03009 FOM-03010
モノマー
1
2
3
4
5
溶媒

n - ヘキサン

0.1 未満0.1 未満0.1 未満0.1 未満―トルエン

0.1 未満0.1 未満1～5

0.1 未満―コード No.

品

名

容量 希望納入価格（円）

酢酸エチル

0.1 未満0.1 ～ 0.5

0.1 ～ 0.5

0.1 ～ 0.5

0.1 未満メチルエチルケトン

0.1 ～ 0.5

0.1 ～ 0.5

0.5 ～ 1

1～5

―

アセトン

0.5 ～ 1

0.1 ～ 0.5

1～5

1～5

0.1 未満イソプロピルアルコール40 ～ 50

0.5 ～ 110 ～ 201～5

0.5 ～ 1

アセトニトリル

0.5 ～ 1

0.1 未満

0.5 ～ 1

1～5

―

エタノール

50 以上

50 以上

50 以上

30 ～ 40

10 ～ 20

試薬事業トップ→合成・材料→高分子合成

メタノール

50 以上

50 以上

50 以上

50 以上

30 ～ 40https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/

水

50 以上

50 以上

50 以上

40 ～ 50

50 以上

synthesis/polymerization/index.html

その他のモノマー、重合開始剤などは当社の HP をご覧下さい。

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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18

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ew Products
まとめ買いにも対応

すこしの水で除菌ができるペーパータオル

核酸合成⽤アクチベーター

除菌ドライシート

本品は、核酸合成手法のホスホロアミダイト法における本品は、すこしの水※で濡らすと、除菌効果を発揮する

カップリング工程で使⽤するアクチベーター（活性化剤）

ドライタイプのペーパータオルです。ドライタイプのたです。定番の BTT、ETT 他、4 種類のアクチベーターをめ、⻑期保管に向いており、開封後も保管条件を気にする

水分値を保証して販売しています。商⽤スケールでご使⽤ことなく、⼿軽にご使⽤いただけます。また、除菌成分でのお客様には 3L 包装のまとめ買いにも対応します。

ある CPC（塩化セチルピリジニウム）は、衛生関連製品

特を中心に多数の使⽤実績があり、汎⽤的に使⽤されている

長

成分です。

●粉末と溶液品の 2 タイプをラインアップ※最適な水分量：⼩さじ約 1/2 程度（2g）●カップリング反応を阻害する水分を低減
水分値保証

除菌成分

CPC

粉末：300ppm 以下、溶液：30ppm 以下

160
枚入●豊 富なスケールアップ実績：3L 包装のまとめ買いに対
応可能
DMTrO

DMTrO

B

B

O
HO

P

B

O

O

CN

N

O

O

蓄⽤などさまざまなシーンでご使⽤いただけます。

B

手洗い後の
ペーパータオルにO

Activator

担体

Cl‑

家庭や学校、⾼齢者施設や病院での⽇常生活から、防災備

O

O

N

すこしの水で効果を発揮するため使⽤場所を選ばず、ご

CN

O

P

H3C
+

使 用 例

O

O

使いやすい

ノンアルコール

濡れたテーブル拭きに

身の回りの
お掃除に

いざという時の防災備品として

担体

粉末
CAS RN®

規格1122-28-75g
核酸
合成用 25g

10,000019-27551 Activator-45g
核酸（5-Ethylthio-1H -tetrazole） 89797-68-2 合成用
017-27552
25g
危12,000

コード No.

品

名016-27561 Activator-1（4,5-Dicyanoimidazole）
014-27562

容量 希望納入価格（円）

⼀般財団法⼈⽇本衛生材料⼯業連合会の「ウェットワイ

22,000パー類の除菌性能試験方法」に準拠し性能試験を実施しました。

30,000［対象となる菌］

溶液
コード No.

除菌性能品

CAS RN®

名013-19685 Activator Solution-1（0.25mol/L
011-19681 4,5-Dicyanoimidazole,
Acetonitrile Solution）
017-19683

規格核酸
1122-28-7
合成⽤
危Activator Solution-2（0.45mol/L 1H -Tetrazole,011-19701
Acetonitrile Solution）

核酸
288-94-8
合成⽤

容量 希望納入価格（円）

500mL

8,500

3L

22,0003L×485,000⼤腸菌・⻩⾊ブドウ球菌［試験方法］
主成分 CPC を配合した除菌ドライシート全体に JIS 硬水を⼀定量含浸させ、除菌性能試験を⾏い除菌効果を調べた。
［結果］
除菌ドライシート（JIS 硬水 2g 含浸）

3L

25,000500mL015-20015 Activator Solution-3（0.25mol/L 5-Benzylthio核酸
013-20011
21871-47-6
3L
1H -tetrazole, Acetonitrile
合成⽤
NEW 019-20013
危
Solution）
3L×4

8,900

…⼤腸菌 99.9% 以上除菌／⻩⾊ブドウ球菌 99% 以上除菌※※すべての菌を除菌できるわけではありません。

危3L018-19691 Activator Solution-4（0.25mol/L 5-Ethylthio核酸
89797-68-2
1H -tetrazole, Acetonitrile
合成⽤
3L×4012-19694 Solution）
危

27,800照会
36,100照会

コード No.
NEW

品

名296-36311 Dry Antibacterial Sheet

規格

容量

希望納入価格（円）

除菌用 1箱（36パック＊） 10,000＊１パック 160 枚入り

詳細は当社 HP をご覧下さい。
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/02046.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

19

ew Products
コード No.

ラインアップ追加！
ICP 分析用単元素標準液
当社では不純物の少ない⾼純度な標準液を品揃えしてお名

規格

物元素情報を製品毎に添付しています。

長●不純物元素の測定を ICP-MS で実施（目標値は 0.05mg/L●現品説明書に不純物元素情報をロット毎に記載

ICP分析用 100mL

9,000

083-10601 Hafnium Standard Solution（Hf 1000）

ICP分析用 100mL

28,000NEW

093-07331 Iridium Standard Solution（Ir 1000）

ICP分析用 100mL

23,000NEW

147-09881

Niobium Standard Solution（Nb 1000）

ICP分析用 100mL

8,500

NEW

180-03471 Rhodium Standard Solution（Rh 1000）

ICP分析用 100mL

30,000NEW

196-18901 Scandium Standard Solution（Sc 1000） ICP分析用 100mL

9,500

NEW

201-21151

Tantalum Standard Solution（Ta 1000） ICP分析用 100mL

16,000NEW

207-21011

Tungsten Standard Solution（W 1000）

ICP分析用 100mL

12,000NEW

265-02291 Zirconium Standard Solution（Zr 1000） ICP分析用 100mL

8,800

以下 ）
● JCSS 実用標準液または NIST SRM にトレーサブル

容量 希望納入価格（円）NEW

り、新たに 9 品目追加しました。ICP-MS で測定した不純特品

Chromium（Ⅲ）Standard Solution
NEW039-25831（Cr 1000）

その他の元素標準液は、当社 HP をご覧下さい。

《現品説明書（単元素標準液）》

試薬事業トップ→分析→元素標準液（金属標準液）→単元素

・製品に現品説明書を添付

標準液→ ICP 分析用元素標準液

・ト レーサビリティのソース、

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/00442.html

濃度測定の⼿法を記載（①）
・不純物元素情報を記載（②）

新製品ラインアップ追加①

水道法対応 JCSS②

水質基準に関する省令の⼀部改正により、試薬における標準原液の規定として、計量法に基づく証明書が添付され、かつ各号の別表に定める標準原液と同⼀濃度のものを用いることができるようになっています。今回、水道法に対応した「非イオン界面活性剤（ヘプタオキシエチレンド
デシルエーテル）」を JCSS として追加しました。水質試
験の信頼性向上にお役⽴て下さい。

ラインアップクロム（Ⅲ）、ハフニウム、イリジウム、ニオブ、ロジ

製品概要

ウム、スカンジウム、タンタル、タングステン、ジルコニ

ヘプタオキシエチレンドデシルエーテル標準液（メタノール溶液）

ウム標準液を新たに追加し、67 元素をラインアップしま組した。今後オスミウム標準液を追加予定です。

成

水質基準に係る検査方法※

ヘプタオキシエチレンドデシルエーテル
水質基準（別表）28、28（2）100mg/LICP 分析用
67 元素ラインアップ※ 2021 年 3 月 1 日時点
コード No.
NEW

品

名

規格

容量 希望納入価格（円）

ヘプタオキシエチレンドデシルエーテ
2mL×086-10571
JCSS
12,000危
ル標準液（メタノール溶液）
5A…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

20

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）［次頁に続く］ew Products
関連製品
組

成

⽔質試験⽤試薬カタログ 2020 年版配布中 !!

水質基準に係る検査方法※

フェノール類 6 種混合標準液（アセトン溶液）
フェノール
2- クロロフェノール
4- クロロフェノール
2,4- ジクロロフェノール
2,6- ジクロロフェノール
2,4,6-トリクロロフェノール
各 1,000mg/L

水質基準（別表）29、29（2）

亜塩素酸イオン標準液（ClO2−  1000）
亜塩素酸ナトリウム : 1,000mg/L

水質管理目標 10、12陰イオン 5 種混合標準液
硝酸態窒素（Nとして）：100mg/L
亜硝酸態窒素（Nとして）：10mg/L
ふっ化物イオン：100mg/L
水質基準（別表）13
塩化物イオン：200mg/L
塩素酸イオン：100mg/L
ハロ酢酸 4 種混合標準液（t - ブチルメチルエーテル溶液）
クロロ酢酸
ジクロロ酢酸
トリクロロ酢酸
ブロモ酢酸
各 1,000mg/L

混合標準液について分析例をご紹介

水質基準（別表）17、17（2）※ 2021 年 3 月 1 日時点
コード No.

品

名規格

容量 希望納入価格（円）2mL×
フェノール類6種混合標準液（アセト
JCSS
163-28521
19,000危
5Aン溶液）
亜塩素酸イオン標準液（ClO2
036-25581
JCSS 100mL 7,800
1000）
012-28021

陰イオン5種混合標準液

JCSS

084-10491

ハロ酢酸4種混合標準液（t -ブチル
2mL×
JCSS
14,000危
メチルエーテル溶液）
5A

50mL

●水 質基準項目、水質管理目標設定項目、要検討項目

9,800など項目別に対応する試薬を収載（2020 年度水道法
対応）●混合標準液については分析例、分析条件の情報を追加

その他にも多数の JCSS 対応品を取扱っています。詳細は当社ホームページをご確認下さい。

カタログをご希望の場合は、当社または当社代理店営

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/analysis/

業員までお問合せ下さい。

referencematerial/jcss/index.html

和光純薬時報 Vol.89 No.1 訂正案内
和光純薬時報 Vol.89 No.1 の記事中に誤りがございました。下記の通り訂正をご案内させていただくとともに、深くお詫び申し上げます。
記〈訂正内容〉
掲載箇所：p.5
訂正内容：表の項目名が以下の通り（左から 4 つ目が、「D」）
訂正箇所：表 1
［誤］
A
B
C
C
E
OA

1.080

1.106

1.063

1.051

1.067

A
1.080

B
1.106

C
1.063

D
1.051

E
1.067

↓
［正］

OA

尚、ホームページ掲載 PDF ファイルは訂正しています。

以上…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

21

ew Products〈従来製品〉

リニューアル！

コード No.

合成ゼオライト
合成ゼオライトは、アルカリ⾦属またはアルカリ⼟類⾦属の結晶性含水アルミノけい酸塩の結晶水を加熱により脱離させたものです。結晶水が脱離してできた空洞は強い吸着能を有します。またこれに通じる直径数オングストロー
ムの均⼀な細孔は分子ふるい効果を持ちます。
本品は、粒子径 150μm 以下の粉末タイプの製品です。

規格

容量 希望納入価格（円）269-00555

Zeolite, Synthetic, A-3, Powder,through 75μm（200mesh）

品

名

−

500g

5,350

267-00595

Zeolite, Synthetic, A-4, Powder,through 75μm（200mesh）

−

500g

4,900

261-00635

Zeolite, Synthetic, F-9, Powder,through 75μm（200mesh）

−

500g

販売終了

※ F-9は、販売を終了しました。A-3、A-4 は在庫が無くなり次第、販売を終了します。
※ 2021 年 3 月 29 日時点

吸着特性
合成ゼオライト

A-3

A-4

F-9

（0.4K＋
Na2O・Al2O3・ Na2O・Al2O3・
0.6Na）2O・
2SiO2
2.5SiO2
Al2O3・2SiO2

化学組成
細孔径（Å）
水分吸着量（wt%）
水
アンモニア
CO2
CO
硫化水素
亜硫酸ガス
C1、C2 パラフィン

3
20
〇
〇
〇
〇
〇
〇

C3〜C22n -パラフィン類
イソパラフィン類
C2、C3 オレフィン
C4以上
吸 n -オレフィン類
着イソオレフィン類物
質 シクロプロパン
C4以上 ナフテン類
ベンゼン及び大部分の低級芳香族炭化水素類

4
20
〇
〇
〇
〇
〇
〇
〇

9
26
〇
〇
〇
〇
〇
〇
〇
〇
〇
〇

〇

〇
〇
〇
〇
〇

C1～C3
n -アルコール

〇

〇

C4以上
n -アルコール類〇

C3以上
iso -、sec -、tert -アル
コール類〇

ジ-n -プロピルアミン
ジ-n -ブチルアミン
結晶型

〇
〇
X型

当社では、ポジティブリスト制度の対象となる農薬・
動物用医薬品の標準品を取扱っています。
下記品目を新たに発売しました。
農薬標準品■ ベンズピリモキサン代謝物 M5 標準品■ フェンピロキシメート代謝産物 M-3 標準品■ イプフルフェノキン標準品■ イソフェタミド代謝産物 C 標準品■ MIPC 標準品■ オキサチアピプロリン標準品■ テトラニリプロール標準品■ XMC 標準品

動物用医薬品標準品■ チルジピロシン標準品（異性体混合物）
コード No.

品

名

A型

A型

名

規格

容量 希望納入価格（円）Benzpyrimoxan MetaboliteNEW023-19441
M5 Standard

残留農薬試験用 20mg

45,000Fenpyroximate Metabolite
M-3 Standard

残留農薬試験用 50mg

45,000NEW

066-06941

NEW

095-07411 Ipflufenoquin Standard

残留農薬試験用 100mg

29,000Isofetamid Metabolite C
NEW 098-07381
Standard

残留農薬試験用 100mg

30,000130-06813 MIPC Standard
153-03561 Oxathiapiprolin StandardNEW
204-21141 Tetraniliprole Standard
NEW
244-00503 XMC Standard

残留農薬試験用 100mg
残留農薬試験用 50mg
残留農薬試験用 50mg
残留農薬試験用 100mg

12,00030,00030,0008,000

高速液体クロマト
50mg
グラフ用

10,000NEW

NEW

205-21171

Tildipirosin Standard（mixture of isomers）

規格

容量 希望納入価格（円）260-02305

Zeolite, Synthetic, A-3, Powder,through 0.15mm（100mesh）

−

500g

6,000

NEW

267-02315

Zeolite, Synthetic, A-4, Powder,through 0.15mm（100mesh）

−

500g

4,900

試薬事業トップ→分析→残留農薬・動物用医薬品分析→NEW

264-02325

Zeolite, Synthetic, F-9, Powder,through 0.15mm（100mesh）

−

500g

5,450

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/01942.html

NEW品

ポジティブリスト関連農薬・動物用医薬品標準品

NEW（〇：吸着）
コード No.

追加品目のお知らせ

随時、当社 HP のリストに発売品目を追加・更新しています。詳細は当社 HP をご覧下さい。
標準品→残留農薬・動物用医薬品分析用標準品“製品一覧”…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

22

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ew Products
操作方法麴菌 Aspergillus oryzae 由来の酸性プロテアーゼ簡易測定キット

測定は、酵素反応・失活反応・発色反応の 3 ステップで完了します。

酸性プロテアーゼ測定キット

基質溶液 測定サンプル
0.5ｍL
0.5ｍL

清酒醸造において重要な米麴の酸性プロテアーゼを、簡

pH調整液
0.15ｍL

pH調整液
1.85ｍL易 に 測 定 で き る キ ッ ト で す。 本 キ ッ ト は、Aspergillus

oryzae 由来の酸性プロテアーゼに特異性が高い基質溶液

STEP1 : 酵素反応
40℃/20minと pH 調整液（炭酸ナトリウム水溶液）の 2 本で構成してSTEP2 : 失活反応
煮沸/5min

STEP3 : 発色反応
即時

吸光度測定
（400nm）

います。国税庁所定分析法（以下、標準法）と比較して簡便かつ迅速に、米麴の酸性プロテアーゼ活性値を測定できます。

標準法との相関性

特種々の米麴（n=82）を用いて、標準法と本法の測定結長果を比較し、良好な相関性があることを確認しています。
標準法で求めた酸性プロテアーゼ活性値（U/mL）●簡便混合と加熱だけで測定できます。測定は 3 ステップで終
了します。
●迅速
酵素反応は 20 分、失活反応は 5 分、発色反応は短時間で終了します。
●相関性
標準法と高い相関が認められています。

測定原理

NEW

基質溶液に含まれる合成基質 HAP-01 が、酸性プロテ

250.0
200.0
R2 = 0.8989

150.0
100.0
50.0
0.0

0

50

100

コード No.

メーカーコード

335-00921

L3780

200

品

名

250

容量 希望納入価格（円）Acid Protease Assay Kit   

アーゼによって分解されます（酵素反応）。pH 調整液を

Tau 凝集阻害剤

加えて煮沸すると酸性プロテアーゼが失活し（失活反応）、

KT-430

同時に、酵素反応で生じた HAP-01 断片ペプチドから 4-150

本キットで求めた酸性プロテアーゼ活性値（U/mL）

50回

27,000KT-430 は、イソプロテレノール由来の低分子化合物で、ニトロフェノールが遊離します。未反応の HAP-01 から 4-

Tau タンパク質の凝集を阻害する作用があります。これ

ニトロフェノールは、ほぼ遊離しません。さらに pH 調整

までに Tau タンパク質凝集阻害作用が報告されていたメ液を加えたアルカリ条件下で 4- ニトロフェノールを発色

チレンブルーの約 20 倍の阻害作用を有します。

させた後（発色反応）、波長 400nm の吸光度を測定し、換算式により酸性プロテアーゼの活性値を求めます。

特長●Tau タンパク質の凝集を阻害●高い凝集阻害活性
O2N

NH

H2 N

O

HN
O
N
H

H 3C

CH3
H O
N

O

H
N

N
H

O

HN

N

N
H

O

CH3

N

O

O

O2N

NH

O
N
H

NH2

酸性プロテアーゼ

HN

HN

O
O

O

H2N

NH

NH2

●血液脳関門透過性

NH2

N

CH3
N

O

NH2

●in vitro 及び in vivo （マウス）で Tau タンパク質の凝

NH

O
N
H

集阻害作用を確認

NH2
O

HAP-01断片ペプチド

NH2

OH

HAP-01
O2N

HN

O
O
H2N

N

CH3
N

O

N

NH2
NH

自発的化学反応

O
N
H

NH2
O

HAP-01断片ペプチド

･3HCI

N
N

O2N
OH

4‑ニトロフェノール

コード No.
NEW

品

119-01141 KT-430

名C21H27N3O・3HCI = 446.84
CAS RN® 2133395‑39‑6
規格

細胞生物学用容量

希望納入価格（円）10mg

26,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

23

ew Products
神経疾患研究に
Mature BDNF ELISA キットワコー、高感度品
BDNF（Brain-derived Neurotrophic Factor）は神経栄
養因子の一つで、神経発生・神経保護作用・シナプス形成

レビス® シリーズにHuman IL-7が追加になりました！
ヒト血清（血漿）中の IL-7 を短時間・微量検体・⾼感度で測定可能
レビス® Human IL-7 ELISA Kitなどに関与し、脳内で重要な役割を担うことが知られてい富士フイルムワコーシバヤギ（株）のレビス® サイトカ

ま す。BDNF に は 前 駆 体 で あ る proBDNF が 存 在 し、

イン ELISA キットシリーズに新たに Human IL-7 が追加さ

BDNF とは異なる作用を有することが報告されています。

れました。既存品では感度が得られず測定できなかった正proBDNF は プ ロ セ シ ン グ を 受 け る こ と で mBDNF

常検体、低濃度検体を⾼感度に再現性良く測定可能です。

（mature BDNF）となります。

IL-7 は主に骨髄、胸腺、リンパ器官・組織のストロマ細

本品は、検体中の mBDNF 濃度を特異的に測定可能な胞などの非造血細胞によって産生され、幹細胞の免疫系細

ELISA キットです。発光検出系を用いることで既存品胞への分化を誘導するサイトカインです。成熟体は 152 ア（ コ ー ド No. 296-83201 Mature BDNF ELISA キ ッ ト ワ

ミノ酸で構成されています。CD4+、CD8+ 両細胞の増殖やコー）の約 20 倍の感度を実現し、従来検出が難しかった発生、抗ウイルス活性を促進し、関節リウマチや慢性大腸

マウス血中の微量な BDNF を測定可能です。

炎発生、好酸球活性を介した喘息にも関係づけられていま特す。また、抗がん剤と免疫チェックポイント関連薬剤の併長用治療におけるブースター因子として、NK 細胞、B 細胞、●マウス血漿、血清中の微量な BDNF を測定可能

T 細胞の増強作用物質の探索や研究に⾼感度 IL-7 測定の●mature BDNF を特異的に検出

性

特

長

Mature BDNF ELISA
キットワコー、高感度品

Mature BDNF ELISA
キットワコー

コード No.

298-83901

296-83201

測定対象

mature BDNF

mature BDNF

検体

マウス血清・血漿ラット血清・血漿ヒト血清・血漿

検量線範囲0.205 ～ 50pg/mL

4.1 ～ 1,000pg/mL

ヒト proBDNFとの反応性＜ 0.5%

約 10%

必要検体量

13μL（4 倍希釈時）

ヒト血清：10μL（10 倍希釈時）
ヒト血漿：5μL（20 倍希釈時）

測定時間

約 4 時間約 4 時間検体

ヒト血清 / 血漿（ヘパリン /EDTA）

発色系

検量線範囲

1.50 〜 236pg/mL

品名

NEW

有用性が期待されています。

能

検出法

発光系

コード No.

品

298-83901

名

Mature BDNF ELISA Kit Wako ,High Sensitive

規格●微量な検体で測定可能●短時間で測定可能（全反応時間：2 時間 50 分）●環境に優しい防腐剤を使用

容量 希望納入価格（円）

免疫
96回用
化学用

83,000●⾼い精度と再現性

性

能

アッセイ内変動（5 重測定、2 検体） 平均 C.V. 値：15%未満
アッセイ間変動（3 重測定、3 検体、
平均 C.V. 値：15%未満
4 日間）

デ ー タ

関連製品

■ ヒト検体測定（例）■ ELISA キット
コード No.

品

名296-83201 Mature BDNF ELISA Kit Wako

規格

容量 希望納入価格（円）

免疫
96回用
化学用

69,000■ BDNF 抗体
コード No.

●カルタヘナ法非該当（バキュロウイルス不含）

品

名

規格

容量 希望納入価格（円）Anti BDNF, Monoclonal Antibody 免疫017-28071  
100μL
（2D7）
化学用

50,000Anti BDNF, Monoclonal Antibody 免疫014-28081  
100μL
（3C8）
化学用

50,000Sample No.

測定値

Sample No.

測定値

1

3.90

7

3.78

2

2.44

8

11.0

3

7.59

9

40.0

4

6.21

10

10.0

5

9.36

11

3.50

6

5.35

ヒト正常血清、2 重測定、単位：pg/mL…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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24

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）［次頁に続く］ew Products
キット内容

デ ー タ

●抗体固相化 96 ウェルプレート 96 wells（8 × 12）/ １枚●ヒト IL- 7 標準品

１本

●緩衝液

１本

●ペルオキシダーゼ・アビジン結合物

NEW

血管新生促進作用

60 mL ×１本

●ビオチン結合抗 IL- 7 抗体

150μL ×１本

●発色液（TMB）

12 mL ×１本

●反応停止液（1 mol/L H2SO4）

12 mL ×１本

●濃縮洗浄液（10 ×）

100 mL ×１本

コード No.

■ 血管内皮細胞と線維芽細胞の共培養系での使用例：

メーカーコード品

名

容量 希望納入価格（円）637-50441 AKH-IL7 LBIS Human IL-7 ELISA Kit

96回用

Solvent
Tube area 1.0

VEGF(10ng/mL)
1.9

COA-CI 1μmol/L
1.3

10μmol/L
2.3

70,000

関連製品
コード No.

メーカーコード品

LBIS Human IL-6
ELISA Kit
LBIS Human IL-8
AKH-IL8（CXCL8）ELISA Kit
AKH- LBIS Human TNF-αTNFA ELISA Kit
AKH- LBIS Human VEGF
VEGF ELISA Kit
AKH- LBIS Human IFN-γ
IFNG ELISA Kit

635-42311 AKH-IL6
632-42321
639-42331
631-40831
631-47891

名

標準曲線範囲容量 希望納入価格（円）（pg/mL）

1.16〜
500
0.686〜
500
2.05〜
500
1.10〜
800
0.768～
75.0

96回用

70,00096回用

70,00096回用

70,00096回用

58,00096回用

70,000

容量・価格リニューアル
VEGF/NGF like な活性を示す低分子化合物
COA-Cl【2-Cl-C.OXT-A】

100μmol/L
3.8

10 日間培養後に形成される管腔面積が増加した。
（データご提供：香川大学医学部 塚本郁子先生）■ ラットグリオーマ細胞（C6）の培養例：細胞保護作用
3日目の（A）（B）

12日目の（A） 死滅剥離

（B）

増殖

（C）

14日目に(B)に替え
不変（C）ると増殖を始めた

COA-Cl（コアクロル）は、血管新生促進作用を示す低分子化合物です。神経保護・栄養作用も示します。水溶性の低分子化合物であり、VEGF や NGF に代わり再生医療における血管や神経の構築に用いることができる可能性があります。また、Xeno-free 培地の添加剤として有用である可能性があります。
NH2
N

N

N
N
CH2OH

Cl

CH2OH

C11H14ClN5O2=283.71
CAS RN® 1253579-96-2

製品概要●外観：白色～わずかにうすい褐色、結晶性粉末～粉末又は塊（A）D-MEM （B）D-MEM＋血清（ウマ15%＋ウシ2.5%）（C）D-MEM＋COA-Cｌ（100μmol/L）

ラットグリオーマ細胞（C6）を 24 ウェルプレートに播種し、翌
日、
（A）、
（B）、
（C）に置換し、16 日間培養した（培地交換なし）。
（A）、（B）では、12 日目に細胞が死滅したが、（C）では 12 日
目も変化なく、さらに 14 日目に培地を（B）に交換すると、増殖を始めた。
（データご提供：香川大学医学部 塚本郁子先生）

コード No.

品

名

規格038-21543 COA-Cl
NEW
036-21544 【2-Cl-C.OXT-A】

容量 希望納入価格（円）

細胞生物学用5mg

15,00025mg

60,000

上記以外のデータは、当社 HP をご覧下さい。
COA-Cl和光

検索➡

●水溶状：試験適合…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

25

ew Products■精 製エクソソームの細胞毒性比較

回収率と精製純度を向上させた
エクソソーム単離・精製キット

従来品

MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキット PS Ver.2

Ver.2

溶出バッファー
（50μL/well）

本キットは、従来品（MagCaptureTM エクソソームアイ
ソレーションキット PS：コード No. 293-77601）よりもエ
クソソームの回収率と精製純度が向上し、実験操作時間の短縮を実現したエクソソーム単離・精製キットです。本

精製EV（0.7 × 1010個/
well）

キットで精製したエクソソームは、そのまま細胞添加実験にも使用できます。

特

長

無処理

●エクソソームの回収率と精製純度が向上●アフィニティー反応時間を短縮（3 時間→ 1 時間）●精製エクソソームの細胞毒性を低減

デ ー タ

従来品及び本キット（以下、Ver.2）を用いて、COLO201 細胞
培養上清よりエクソソームを含む細胞外小胞（EV）の単離・精製を行った。その後溶出バッファーのみ、もしくは精製エクソソー
ムを、あらかじめ播種しているヒト正常線維芽細胞へ添加し、48時間経過時点での細胞形態変化を観察した。
従来品では添加後 48 時間経過時点で細胞死が起こるが、Ver.2
では顕著な細胞毒性は観察されなかった。

■ エクソソーム回収率の比較〈ELISA EV マーカーの比較〉

6

2.5

5

2.0

4

Abs (⊿)

3
2

収率の⽐較

1.0
0.5

1
0

■ア
 フィニティー反応時間におけるエクソソーム精製回

1.5

従来品

0.0

Ver.2

2
従来品
Ver.2
検出 : CD9：Input

従来品
Ver.2
検出 : CD63：Flow through（取りこぼし）

1.5

：精製EV

Abs (⊿)

×1010 個/mL

〈ナノサイト粒子数測定〉

10.5〈ウエスタンブロッティング EV マーカーの比較〉(kDa)

M 従来品 Ver.2

(kDa)

M

従来品 Ver.2

50

50

(kDa)

M

0

従来品 Ver.2

30min 10min

IB : Flotillin2

3h1h30min 10min

検出 : CD63

反応時間

25
20

IB : CD631h

検出 : CD9：Input37373h

IB : CD9

間葉系幹細胞（MSC）の培養上清において、従来品及び本キット（以下、Ver.2）を用いて、エクソソームを含む細胞外小胞（EV）の単離・精製を行った。その後、得られたサンプルについて、ナノサイトによる粒子数測定、及び PS CaptureTM エクソソーム ELISA
キット（ストレプトアビジン HRP）［コード No. 298-80601］とウエスタンブロットによる EV マーカーの比較を行った。
Ver.2 では従来品と比較して回収率が向上した。

：Flow through（取りこぼし）：精製 EVCOLO201 細胞培養上清において、本キット（以下、Ver.2）のアフィ
ニティー反応時間を 4 条件設定し、エクソソームを含む細胞外小胞（EV）の単離・精製を⾏った。その後、得られたサンプルについて、
PS CaptureTM エクソソーム ELISA キット（ストレプトアビジン
HRP）［コード No.298-80601］による EV マーカーの⽐較を⾏った。
Ver.2 は、1 時間のアフィニティー反応で十分 EV を回収可能であることが確認できた。
コード No.
NEW

NEW

品

294-84101 MagCaptureTM

名

Exosome290-84103 Isolation Kit PS Ver.2

規格

遺伝子研究用

容量 希望納入価格（円）

2回用

20,00010回用

80,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

26

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

ew Products■ EV 粒⼦数

エクソソーム研究に！

10

EV-Up

TM

粒子数 (× 1010 個/mL)

EV-UpTM MSC EV産生用基礎培地，AFMSC EV産生用サプリメント，AF

本品は、間葉系幹細胞（MSC）専用のエクソソーム（EV）
産生用基礎培地とサプリメントです。EV-UpTM MSC EV
産生用基礎培地，AF に EV-UpTM MSC EV産生用サプリ

8
6
4
2
0

D-MEM + 10% FBS (EV-dep.)

当社
EV産生用培地

メント，AF を添加することで EV産生用培地としてご使用いただけます。本品は、血清及びその他の動物由来成分

各培地で培養した MSC 細胞培養上清から PS affinity 法を用いて精製した EV の粒⼦数を、ナノサイトによる Nano Tracking
Analysis 技 術 で 測 定 し た。 そ の 結 果、 当 社 EV 産 生 用 培 地 で
培 養 し た MSC が 放 出 す る EV の 粒 ⼦ 数 は、D-MEM +10% EV
depleted FBS に比べて約 2.6 倍であった。

を含みません。また、増殖培地の種類を問わずご使用いただけます。エクソソーム研究にお役⽴て下さい。

特長●血清培地より多くのエクソソームを分泌■抗線維化活性mRNA発現量（EV‑/TGFβ+との相対値）●高活性のエクソソームを産生可能●MSC の生存率を高く維持

適用細胞例●骨髄由来 MSC
●脂肪由来 MSC

EV産生用培地

Day 0

Day 3-5①②③※EV-UpTM MSC EV産生用基礎培地, AFにEV-UpTM MSC EV産生用サプリメント, AFを添加する

0.2
0

‑

+

+

+

‑

‑

D-MEM + 10% FBS(EV-dep.)

当社
EV産生用培地

サンプルを配布しています。詳しくは当社 HP をご覧下回収したエクソソームの精製は PS affinity法＊ を利用した MagCapture

0.4

各培地で培養した MSC 細胞培養上清から PS affinity 法で EV を精製した。TGFβで刺激したヒト胎児肺由来線維芽細胞（TIG3細胞）に精製 EV 5×107 個 /mL を添加し、抗線維化活性を比較した。その結果、当社 EV 産生用培地で産生させた EV は TGFβによる線維症関連遺伝子であるαSMA の上昇を強力に抑制した。

培養上清
回収

Day -4

TM

0.6

EV

使用方法
EV産生用培地※に増殖培地
培地交換（血清培地・無血清培地）

1
0.8

TGFβ

●臍帯マトリクス由来 MSC

MSC
播種

1.2

さい。

Exosome Isolation Kit PS（コード No.

エクソソーム 和光

検索➡

293-77601）がおすすめです。
＊ホスファチジルセリン（PS）結合分⼦を用いて細胞外⼩胞を⾦属
イオン依存的に捕捉した後、キレート剤により溶出する方法。

デ ー タ■細胞生存率

細胞生存率（％）

100

品

名

EV-UpTM EV Production Basal
053-09451
Medium for MSC, AF

NEW

EV-Up MSC EV Production
Supplement, AF

298-84001

TM

規格

容量

希望納入価格（円）

細胞
培養用

95ｍL

12,000細胞
100ｍL用
培養用

18,000規格

容量

希望納入価格（円）

遺伝子
研究用

1mL

9,800

遺伝子 2回用
研究用 10回用
遺伝子 2回用
研究用 10回用

20,00080,00020,00080,000

関連製品

80

エクソソーム抽出・精製試薬60

コード No.

40

品

名EV-SaveTM Extracellular058-09261
Vesicle Blocking Reagent

200

コード No.
NEW

D-MEM + 10% FBS (EV-dep.)299-77603 MagCapture Exosome
293-77601 Isolation Kit PSNEW
294-84101 MagCaptureTM Exosome
NEW 290-84103
Isolation Kit PS Ver.2
TM

当社
EV産生用培地

血清含有培地で拡大培養したヒト骨髄由来 MSC を、各培地を用いて 5 日間培養し EV を産生させた後に生存率を測定した。その結果、当社 EV 産生用培地は D-MEM +10% EV depleted FBS と同様に高い生存率を示した。

MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS Ver.2 の詳細は、
26 ページをご覧下さい。

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

27

ew Products■ SRVTM control Vector

ヒト iPS 細胞樹立試薬

本品は、蛍光タンパク質 EGFP が搭載されたベクターで

SRVTM iPSC Vector シリーズ

す。種々の細胞に対する遺伝子導入活性を確認することができます。

■ SRV iPSC-1 Vector■ SRVTM iPSC-2 Vector
TM

PuroR
3

hNP

hP

hC

hL

5

EGFP

TM

ステルス型 RNA ベクター（SRV ）は直径 240nm のウイルス様の粒子の中に、インターフェロン誘導を回避す

SRVTM control Vector 模式図るためヒト細胞に最適化した人工核酸で構成された必要最

iPS 細胞作製フロー

低限の遺伝子を用いた RNA 転写系が封入されています。

■ SRVTM iPSC- 2 Vector を使って血球細胞（単球）か

SRV は、安全な細胞リプログラミングに必要とされる 3ら iPS 細胞を誘導した実施例

つの条件、（1）複数遺伝子を同時にかつ効率よく導入して

血球用
血球用培地
iPS細胞用培地培地
iPS細胞用培地
P1 でコロニーピックアップをする場合
ベクター導入iPS細胞用培地でコロニーピックアップ［P1］継代［P2］
継代［P3］
プレートへ播種
培地交換

最適なレベルで発現でき、（2）これらの遺伝子を 1 〜 3
週間程度安定に発現でき、（3）リプログラミングが完了し

iPS細胞用培地を添加たら速やかに導入した遺伝子を消去できることのすべてを0 1満たす世界で唯一の遺伝子導入・発現系であり、再生・細

3

5

7

9

17

24

15
継代
［P1］

22
継代
［P2］

31

コロニー出現継代［P3］

胞治療の実用化にも極めて優れた技術です。

0 1

3

5

7

9

SRVTM iPSC-1 Vector は、線維芽細胞から iPS 細胞を作製するように遺伝子発現レベルを最適化した製品で、SRV

単球 : 1 × 105 cells/well (48 well plate)を siRNA の導入により除去するベクターです。

29

36
継代［P14］

単球 : コロニーピックアップ前

単球 : well 全体を継代培養

2日目

4日目

16日目

28日目

2日目 EGFP

4日目 EGFP

16日目 EGFP

28日目 EGFPSRVTM iPSC-2 Vector は、末梢血単球 / 単核球、CD34
陽性細胞から iPS 細胞を作製するように遺伝子発現レベルを最適化した製品で、SRV は miR-302 の発現に応答して自動的に消去されるベクターです。
２種類のベクター共に、ヒト由来の初期化因子（OCT3/4、×100

KLF4、SOX2、c-MYC）、EGFP、Puro 耐性遺伝子を搭載しています。

hOCT3/4
3

hNP

hP

5

hL
EGFP

hKLF4

h-c-MYC PuroR

コード No. メーカーコード

SRVTM iPSC-1 及び iPSC-2 Vector 模式図

特
●SRV

は染色体への挿入がなく細胞質で安定に発現●iPS 細胞へのリプログラミング後、SRVTM を短期間で消去することが可能●ヒト、マウスなど幅広い宿主域の分裂細胞・非分裂細胞に関わらず遺伝子を導入●単一 RNA 上にすべての転写因子が搭載され、高効率でのリプログラミングを実現●EGFP 搭載で遺伝子導入の効率や消去の様子がすぐに判
断可能

品

名

対象

容量 希望納入価格（円）388-19061 S1011624A SRVTM iPSC-1 Vector 非営利機関 0.1mL
NEW 385-19071 S1011624P
営利機関 0.1mL
NEW 382-19081 S1011694A
SRVTM iPSC-2 Vector 非営利機関 0.1mLNEW
389-19091 S1011694P
営利機関 0.1mLNEW
384-19041 S0011590A SRVTM control Vector 非営利機関 0.1mLNEW
381-19051 S0011590P
営利機関 0.1mL
SRVTM iPSC-1 Vector
NEW383-19131 S1011624T （Trial package）−
0.01mLNEW

SRVTM iPSC-2 Vector
380-19141 S1011694T （Trial package）●遺伝子導入以降の過程は BSL1 で取扱うことが可能−

0.01mL

385-07361

892011381-07363

892012

品

名20,00020,000iMatrix-511 solution（0.5mg/mL）

メーカー 容量 希望納入価格（円）175μg（株）マトリ ×2
クソーム 175μg
×6…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2021 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

28

90,000135,000
90,000135,000
30,00045,000

関連製品
コード No. メーカーコード●フィーダー細胞不要※遺伝子導入は BSL2 で取扱う必要がある。

×40
EGFP 陽性細胞は継代を続けるうちになくなります。

NEW

長
TM

×40
EGFP 陰性のコロニーとEGFP 陽性細胞が残って観察されています。

※基 質（iMatrix511）と培地（StemFit® AK02N）を用いた、ときわバイオ（株）のデータです。他の基質や培地を用いる際は、プロトコルの最適化を検討いただく必要があります。

hSOX2

hC

×100

SRVTM で遺伝子導入 2 日後と 4 日後の観察
ベクター導入された EGFP 陽性を示し、徐々に細胞がプレートに接着するようになります。

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

28,00072,000化学大家 453
フェリックス・ホッペ＝ザイラー（1825 . 12 . 26 ～ 1895 . 8 . 10）
千葉大学名誉教授

根矢三郎

ナジウム（中高一貫校）へ通った。33
１．はじめに歳の時、フランジスカ・ボルシュタイ

生命とは何だろう？この問いかけンと結婚し、後にキール医科大学の教に、人びとは太古から興味を抱いてき授となる一人息子ゲオルクが生まれた。すでに紀元前 3 世紀に古代ギリた。 な お、 フ ェ リ ッ ク ス は 39 歳 でシャの哲学者であるアリストテレス

ホッペ姓をホッペ＝ザイラーの複合姓

は、今でいう「生気論」に近い論調をに変えたが、それは孤児の頃から援助唱えている。生気論とは、生体は神秘してくれたザイラー夫婦への謝意を込的な生命力をもつとする考えである。

めてのことだった。

しかし、彼の生命観はあくまでも思索

彼は 19 歳で医師を目指してライプの産物であり、物質的根拠とはかけ離

チッヒ大学に進んで病理学や有機化学

れた哲学的思想であった。自然科学にを学んだが、26 歳のとき医学博士号

基づく生命観が芽吹いたのは、それかをベルリン大学で得た。彼の博士論文

ら 2 千年以上もの時を経た後である。

題目は「軟骨の構造と軟骨質につい19 世紀になると、オパーリン（ロシア）、ダーウィン（イギリス）、メンデ

図１．ホッペ＝ザイラー（参考文献１より）

ル（オーストリア）などの生命科学分野の碩学たちが現れ、生理学領域でもて」で、ルドルフ・ウィルヒョウ教授（白血病の発見者）が注目することとなった。やがて、ウィルヒョウが創立

２．生い立ちした病理学研究所で彼の助手となり、幕 が 開 き 始 め た。 生 理 学 は 英 語 でフェリックス・ホッペ＝ザイラーは解剖医と化学研究室主任として軟骨にPhysiology と書くが、語源は自然や1825 年 12 月にドイツのチューリンゲ

関する研究を開始した。しかし、そこ存在を表すギリシャ語 Phúsis に由来

ン州のフライブルク市（図 2）で、父では学生達の指導に追われ、研究はな

す る と さ れ、 こ の 言 葉 は 物 理 学

エルンスト・ダンケゴット・ホッペ

かなか進まない状態が続いた。ところ

Physics、体格 Physique（自然が与え（ 教 員 ） と 母 フ レ デ リ ケ・ ニ ッ ツ・が、35 歳になると定員外教授（助教

た 身 体 ）、 内 科 医 Physician（ 身 体 をホッペの 10 番目の子供として生まれ授相当）に指名され、やがて欧州有数治す人）などの派生英語となり今も活た。彼が 6 歳のとき母が亡くなり、父の生理学研究室を主宰する道へとつなきている。医学でいう生理学は生体をは 9 歳のときに他界した。その後 10がった。36 歳でチュービンゲン大学

調べる学問をさし、私たちが生きる仕

歳で、子どもがなかった長姉クララ・

化学科に異動し、まもなく正教授に昇組みを究明する分野である。つまり、ザイラーと義兄ゲオルグ・ザイラー

進した。異動した研究室は丘の上にあ生命現象の構成要素として身体を構成（牧師）の養子となった。やがてハレる古い城の元台所で狭く、大きな煙突する器官、組織、細胞、生体物質など

市の養護施設で生活し、そこからギム

側面が壁面を通り、焼き肉台を改造しを対象とし、それらがどのように機能た化学実験台が備えつけられていたするかを解き明かす学問である。現代が、ここから彼の研究歴が始まった。

では医学に限らず、薬学、生物学、化彼の周りにはフリードリッヒ・ミー

学、物理学の知識を統合するより広範

シェルやアルブレヒト・コッセルら多な領域となっている。多くの人々が生

数 の 優 秀 な 学 生 た ち が 参 集 し た。

理学に魅了される理由には、科学的知

チュービンゲンで 10 年を過ごした後、識や技術が発展して、生命の謎に向け47 歳でシュトラスブルク大学（現フて多彩な分野からの参入が可能となっランス領内）に新設された世界初の生た背景がある。

理化学研究室に教授として赴任した。

ホッペ＝ザイラー（図 1）は 19 世

70 歳で急性心不全により生涯を閉じ

紀後半に現れ、生理学の基礎を築いた

るまでこの職位に留まった。

生命科学の傑人である。彼の研究は３．人物像と研究業績

20 世紀以降の分子生物学や近代医学

ホッペ＝ザイラーは若々しい容貌のの発展に大きく貢献した。そこで、人物像、研究歴および業績に焦点を当て
1）て彼を紹介しよう 。

図２．ホッペ＝ザイラーに関連したドイツの地名

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

持ち主で個性豊かで愛想がよく、態度も優しいため、とりわけ学生達には人29

気があった。しかし元来は、自分に厳ミンは単に鉄（Ⅲ）型ヘムの塩素結合

しくドイツ人らしく厳密さを求めて妥物質であり（図 3）、ヘモグロビンはホッペ＝ザイラーのヘモグロビン研

協を許さない性格だったと言われてい酸化鉄（Ⅲ）ヘムではなく還元鉄（Ⅱ）

究は、細胞の組成研究へと発展した。

る。当初、彼は骨や軟骨に興味があっ型ヘムを分子内に取り込んで酸素運搬

その結果、組織中には、レシチン、コ

たが、歯のエナメル質に興味を広げ、機能をもつと強調した。一酸化炭素をレステロール、アルブミン、リン酸カ

これが化石や動物の歯のアパタイト

血液に通すと鉄原子に結合して鮮紅色

リウム、グリコーゲンが多く含まれる（リン灰石）と同一物質であると解きに変わるが、一酸化炭素が血液の酸素ことを見つけた。彼の教え子であった明かした。ベルリン大学で研究してい運搬能を失わせる現象も見つけた。37

フリードリッヒ・ミーシェル（スイスた頃には、炎症部位などから染み出す

歳の時にはヘモグロビンの結晶化に成人）に細胞核中に存在するリン酸化合体液である浸出液や漏出液の成分を調功した。ヘモグロビンの結晶化は 13

物の検証を担当させヌクレインとよばべ、体の部位による違い、ならびに毛

年前に、カール・ライヒェルトがモルれる物質を検出し、核酸研究の糸口を細血管や血圧による浸出液成分差を検モットで成功していたが、ライヒェル

つくった（図 4）。ホッペ＝ザイラー

証した。また、尿やリンパ液においてトはそこに不純物混入があるとしていはこの時、卵黄中にビテリンというリ

インジカンやキトサンとよばれる糖やた。しかし、ホッペ＝ザイラーは自分

ンタンパク質も見つけている。

多糖類の存在を指摘した。しかし、彼の結晶が純粋なヘモグロビンから成る

ホッペ＝ザイラーはヘモグロビンにの注目すべき成果は、血液中の血色素と証明し、ヒトのヘモグロビン結晶の酸素分子が結合することに注意を払っ

ヘモグロビンの発見であろう。血液中初めての調製者となった。一連の成果

たが、酸素分子そのものは活性が低には鉄原子を含む特定の化学物質があは、基本的な呼吸の仕組みを解明した

く、体内で活性化される必要があり、り、体内で酸素を運搬している事実を重要事実であり、30 報以上の学術論

膿は体の成分が活性化酸素で酸化をう見つけた。彼はこの物質にヘモグロビ

文として発表した。ホッペ＝ザイラー

けてできると考えていた。また、クロンの名称をつけた。さらに分光学を応は、潜水作業などで高圧を受けて働く

ロフィルとヘムの構造類似性を認め、用して、ヘモグロビンには 2 種類、つ人々が浮上して通常大気圧に戻ると突クロロフィルの結晶であるクロロフィ

まりオキシ型（酸素化ヘモグロビン）

然死する問題にも挑戦した。深海で作ランを結晶化した。彼はクロロフィラとデオキシ型（非酸素化ヘモグロビ

業をすると、高圧で血液や組織によりンがヘムに類似した組成をもつもの

ン）がある事実を究明した（構造式、多くの空気が溶ける。しかし 1 気圧のの、鉄に代わりマグネシウムを含むと

図 3）。オキシ型とデオキシ型のどち

海面に急浮上すると、溶け込んだ窒素いう結果も報告している。葉緑素であらも還元鉄（Ⅱ）原子が酸化されるとが血管内で気泡となり、気泡で血管がるクロロフィルは原子状酸素ではなく酸化鉄（Ⅲ）型ヘモグロビン（メトヘ

詰まり脳梗塞に似た疲労感や血液滞留

酸素分子を発生させる現象を次のよう

モグロビン）になり、酸素結合能力をが発生するとつき止めた。彼の発表以に例証した。つまり、ヘモグロビンと失う現象も証明している。そのうえ、

降は、その抑制策としてゆっくりと海

緑色植物を密閉空間に共存させて日光

ヘモグロビンに結合するのは、酸素原面へ浮上する手順がとられるようにを当てると、ヘモグロビンは植物から子でなく酸素分子（O2）であると解なった。現在では、ヘリウムを混ぜた

出る酸素分子によってオキシヘモグロ

明し、大きな衝撃を与えた。また、ヘ血液に溶解しにくい潜水用ガスを使う

ビンに変化したのである。化学につい方法も利用されている。

ての正確な知識、比色計や分光光度A計、偏光計による正確な分析、および

B
近位

NH

ヒスチジン
N

N

N

N

Fe

Fe
N

第６配位子 L
HO2C

CO2H

プロトポルフィリン・鉄錯体について顕著な業績を残した。
４．生理学研究に与えた影響

遠位
ヒスチジン

N

ホッペ＝ザイラーの研究内容は、生体内の酸化還元、呼吸、脂質・尿素の代謝と多岐にわたり、次世代の生化NH

図３．ヘモグロビンの分子構造。（A）ヘム補欠分子、（B）酸素結合部位の構造
太線はヘムを横から見たもの。いずれも、ホッペ＝ザイラー没後に判明した。

30

深い洞察力により、彼はヘモグロビン

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

学、化学、医学、生物学に大きな影響を及ぼした。彼の考えの根底には、生体内にある化学物質の同定とその変換過程の知識が生命現象を解明するとの洞察力があり、生理学を通じて人びと能力を発揮しただけでなく、研究を通を疾病から救済したいとの熱意があっ

じて人材育成にも尽力し、生化学や分ドイツの生理学者であるアルブレヒ

た。ところが、彼の研究手法は同時代

子生物学の創始者として、亡くなった

ト・コッセルも学生時代に核酸と分解のドイツ人生理学者エデュアート・フ

後からも、多くの研究者に影響を与え産物についての研究でホッペ＝ザイ

リューガーたちからは批判された。伝た。その一人にフリードリッヒ・ミー

ラーの指導を受けている。彼は細胞統的ではない化学的手法を使ってい

シェルがいる（図 4）。彼はスイスの核の化学組成を追求した細胞化学者

る、ドイツの生理学界を分断しようとバーゼルで生まれ、バーゼル大学医学になった。タンパク質と核酸の研究している、と責められて正当な評価を部を卒業後、ゲッチンゲン大学で有機で 1910 年にノーベル生理学・医学賞受けなかった。それでも、ホッペ＝ザ

化学を学び、チュービンゲン大学のを 受 賞 し、1895 年 か ら 1927 年 にイラーの生理学は、スウェーデン、ノホッペ＝ザイラーの研究室で研究を開

Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem. 誌のルウェイ、スイス、オーストリア、ロ

始した。研究テーマはリンパ球であっ編集長としても活躍した。

シア、アメリカ、イギリス等へ国域をたが、試料の大量入手が難しく、傷口

ホッペ＝ザイラーによるヘモグロビ

越えて広く認知されていった。当時、を覆う膿のついた大量の包帯を病院かンの結晶化は分子生物学の発展を促し

ドイツとフランスは国境戦争で険悪なら集めた。大量の膿つき包帯とはいさた重要功績である。イギリスのマック関係にあったにも拘わらず、フランス

さか奇妙だが、当時はペニシリンなど

ス・ペルーツはヘモグロビンやミオグ

科学アカデミーはホッペ＝ザイラーをの抗生物質はなく傷口が化膿しやすい

ロビンの結晶に X 線を照射し、タン連絡会員（準会員相当）に選出してい状況だった。膿には死んだ白血球の核パク質には一定の立体構造があると証る。

がたくさん含まれ、そこからヌクレイ

明して革新的成果をあげた。ペルーツ

ンとよばれる物質を 1869 年に単離しは ジ ョ ン・ ケ ン ド リ ュ ー と と も にた。ホッペ＝ザイラーは 2 年間かけて

1962 年 の ノ ー ベ ル 化 学 賞 に 輝 い た。

５．生 理 学 雑 誌、Zeitschrift für
Physiologish Chemie

医学賞）につながった。

その結果を確かめ、1871 年に「膿のペ ル ー ツ は 1995 年 に Biol. Chem.

ホッペ＝ザイラーは生理学の発展を

細胞の化学的な構成成分について」とHoppe-Seyler 誌の中で、ホッペ＝ザ

目指して、生理学雑誌 Zeitschrift für

いう標題でミーシェルに博士論文の発イラーによるヘモグロビン結晶化の偉

Physiologish Chemie（Z. Physilol.

表を許可した。ミーシェルが見つけた

3）
功を讃えている 。

Chem.）を 52 歳で創刊した。創刊号

ヌクレインの正体は核酸つまり遺伝物

20 世紀前半から分子生物学や生化の挨拶文で、彼は「biochemistry」の質 DNA であり、後年の DNA 発見と学は飛躍的に発展し続けている。その用語を初めて用いている。この雑誌は分子生物学発展の根幹となるワトソン

源流を創り出したのが、生命現象を物

その後、名称を 4 回変えて 140 年間以とクリックによる DNA 二重らせん構質の言葉で理解しようとしたホッペ＝上経た現在も発刊中で、名称の変遷は造の発見（1962 年ノーベル生理学・

ザイラーの熱意と努力である。彼の生

次のとおりである。1）1877-1895 年、

涯は私たちが銘記すべき生命科学の歴

第1-21 巻、Z. Physiol. Chem.、2）

史そのものである。

1895-1984 年、 第 21-365 巻、Hoppe謝Seyler’s Z. Physiol. Chem.、3）1985-

辞1995 年、 第 366-376 巻、Biol. Chem.

本稿執筆を勧めていただいた桜井

Hoppe-Seyler、4）1996-2021年（現弘先生（京都薬科大学名誉教授）に心在 ）、 第 376-402 巻、Biol. Chem.。 第より御礼申し上げます。

1 期 は 1895 年 の 彼 の 逝 去 で 終 了 し、
第 2、3 期の誌名には彼の名前があっ〔参考文献〕た。第 3 期以降、雑誌名称は英語化さ

1）A ） https://en.wikipedia.org/wiki/Felix_

れ、ドイツ語使用は 1995 年に終了し、Hoppe-Seyler.（2021 年 1 月 10 日 閲 覧 ）. B）

第 4 期以降は英語使用のみとなった。

Gamgee, A. :“The Late Professor HoppeSeyler.”,Nature , 52, 575（1895）.

現在はドイツ生化学分子生物学会の学

2）h ttps://en.wikipedia.org/wiki/Friedrich_

会誌へと躍進している。
６．影響を与えた人々
ホッペ＝ザイラーは抜きんでた研究

Miescher.（2021 年 1 月 10 日閲覧）.

図４．フリードリッヒ・ミーシェル（18441895）。 ヌ ク レ イ ン（DNA） の 発
見者。（参考文献２より）

和光純薬時報 Vol.89, No.2（2021）

3）P erutz, M. :“Hoppe-Seyler, Stokes and
Hemoglobin.”, Biol. Chem. Hoppe-Seyler , 376,
449（1995）．

31ヒト由来細胞外小胞の定性・定量解析に
CD9/63/81-Capture ヒトエクソソーム ELISA キット（ストレプトアビジン HRP）
本キットは、細胞培養上清や体液検体中の細胞外小胞の定性・定量解析に利用できる酵素免疫測定試薬です。細胞面マーカータンパク質に対するビオチン標識抗体を一次検出に用いることで、ヒト CD 9 / 63 / 81 及び任意のマーカー
タンパク質を表面に有する細胞外小胞を高感度に検出することが可能です。

特長●ヒト由来細胞外小胞を特異的に検出可能●細胞培養上清及び体液（血清、血漿）検体中の細胞外小胞を直接定性及び定量可能

測定原理
PS CaptureTM Exosome ELISA Kit シリーズ（図右）は動物種に依存することなくホスファチジルセリンを有する細胞外小胞を捕捉するのに対して、本キット（図左）はヒト CD 9 / 63 / 81 を有する細胞外小胞を特異的に捕捉できるため、マウスやラットなどの実験動物や FBS などウシに由来する細胞外小胞が含まれるサンプルを用いた場合においても、ヒト由来 CD 9 / 63 / 81 陽性細胞外小胞を特異的に捕捉・検出可能。

デ ー タ■ マウス EDTA 血漿中へのヒト由来エクソソーム添加実験■ ヒト由来エクソソーム検出における特異性比較
測定検体：各 濃度の精製 COLO201 エクソソームを添加した 10 % FBS 添加 D-MEM 培地※超遠心処理した FBS を使用
検出キット：
・PS CaptureTM エクソソーム ELISA キット（ストレプトアビジン HRP）
［コード No. 298 - 80601］
・CD9 -Capture ヒトエクソソームELISA キット（ストレプトアビジン HRP）
［コード No. 296 - 83701］
検出抗体：抗CD9, モノクローナル抗体（1K）［コードNo. 014- 27763］※ヒ ト・ウシ CD 9 と交差する抗体。ビオ
チン標識して使用。

検体：各 濃度の COLO201 細胞由来精製エ
クソソーム／マウス EDTA 血漿検出：CD9 /CD63 /CD81 -Capture ヒトエ
クソソーム ELISA キット

各濃度のエクソソーム，COLO201 細胞由来，精製品［コード No. 052 09301］を添加した 50% マウス EDTA 血漿検体を本キットで測定し、希釈直線性を評価した。
マウス EDTA 血漿サンプルに添加したヒト由来エクソソームを良好な希釈直線性で検出できることが示された。

NEW
NEW
NEW

各 濃 度 の エ ク ソ ソ ー ム，COLO201 細 胞 由 来， 精 製 品［ コ ー ド No. 052 09301］ を 添 加 し た 10 %FBS 含 有 D-MEM 検 体（2 倍 希 釈 ） を 2 種 類 のELISA キット付属のプレートに反応させ、ヒトとウシ CD9 に交差反応する抗CD9 抗体（Clone : 1 K）［コード No. 014 - 27763］を検出抗体に用いてヒト
由来エクソソーム量を測定した。
PS CaptureTM ELISA ではヒト由来エクソソームだけでなく FBS 由来エクソ
ソームも捕捉した。一方で、CD 9 -Capture ELISA では、ヒト特異的な固相化抗体により、ヒト由来エクソソームを特異的・濃度依存的に検出できた。

コード No.

品

296-83701
290-83601
292-83801

CD9-Capture Human Exosome ELISA Kit
（Streptavidin HRP）
CD63-Capture Human Exosome ELISA Kit
（Streptavidin HRP）
CD81-Capture Human Exosome ELISA Kit
（Streptavidin HRP）

名

その他のエクソソーム研究試薬は当社 HP をご覧下さい。

規格

容量

希望納入価格（円）遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用

96 回用
96 回用
96 回用

90,00090,00090,000

和光 エクソソーム

検索➡
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。
…特定毒物
  
…毒物
…劇物
…毒薬
…劇薬 危 …危険物
…向精神薬
…特定麻薬向精神薬原料特定    
…化審法 第一種特定化学物質…化審法 第二種特定化学物質…化学兵器禁止法 第一種指定物質…化学兵器禁止法 第二種指定物質
毒素等 …国民保護法
覚 …覚せい剤取締法
掲載内容は、2021 年４月時点での情報です。上記以外の法律及び最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

…カルタヘナ法収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 89 No. 2
2021 年４月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
発 行 所

印

32

刷

所

岡本訓明
大西礼子
富士フイルム和光純薬株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.06-6203-3741（代表）URL http://fujifilm.com/ffwk
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E-mail ffwk-jiho@fujifilm.com●製品に対するお問合せはこちらまでお寄せ下さい。

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■富士フイルム和光純薬株式会社（Japan）
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フリーダイヤル（日本のみ）0120-052-099
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E-mail ffwk-labchem-tec@fujifilm.com■Wako Overseas Offices :・FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A. Corporation http://www.wakousa.com
Toll-Free（U.S. only）+1 877 714 1920

Tel +1 804 714 1920 / Fax +1 804 271 7791

・FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH http://www.wako-chemicals.de
European Office（Neuss, Germany）：Tel +49 2131 311 0 / Fax +49 2131 311 100

Vol.89 No.2

外小胞表面マーカータンパク質として知られるヒト CD 9 / 63 / 81 特異的抗体を固相化しており、任意の細胞外小胞表