ISSN 1347-4804

April 2017Vol.85 No.2

37℃
ラジカル発生剤（ AAPH ）ペルオキシラジカル（ ROO・）
分解
COOH

HO

抗酸化物質
蛍光の消失

O

O

フルオレセイン〔総

ORAC 法 測定原理説〕

「妥当性の確認された ORAC（酸素ラジカル吸収能）法による食品の抗酸化能評価」

渡辺

純………   2

「造腫瘍性を有するヒト ES/iPS 細胞の非侵襲的モニタリング技術 －ヒト ES/iPS 細胞モニタリングキットの開発－」
舘野

浩章………   5井原涼子……… 10

〈神経変性疾患研究の最前線〉「第 1 回 アルツハイマー病（1）概論」〈なるほど !!  ELISA －基礎とコツ－〉「第 1 回 ELISA とは ?」株式会社シバヤギ編……… 14「第 5 回 IIIS シンポジウム・第 32 回 Wako ワークショップ合同ミーティング見聞録 Solving the mystery of sleep －睡眠・覚醒の謎に挑む」
藤山

知之……… 26

〔化学大家〕「ヨハン・ガドリン」

桜井

弘……… 29〔製品紹介〕
有機合成

培

アルキルホスフィン、低水分 塩基溶液シリーズ… ……… 16
有機分子触媒 VIP………………………………………… 17
H-ORAC 測定用キット… ………………………………… 4
ポジティブリスト関連標準品… …………………………… 17
電子工業用 溶媒・酸… ………………………………… 18
プレセップ ® 55% 硫酸シリカゲル、
プレセップ ® 10% 硝酸銀シリカゲル… ………………… 18

ヒトES/iPS細胞モニタリングキット………………………… 8
未分化ヒトES/iPS細胞検出試薬 rBC2LCN-FITC、
rBC2LCN-547、
rBC2LCN-635……………………… 9
未分化ヒトES/iPS細胞除去試薬 rBC2LCN-PE23… … 9bFGF溶液, MF…………………………………………… 20
rPSL1a-FITC……………………………………………… 20
ウシ胎児血清（FBS）… …………………………………… 21
ハイブリドーマ用無血清培地… …………………………… 22

免

遺

環境・分析

疫

ELISAトレーニングキット…………………………………… 19
抗ポドプラニン，モノクローナル抗体……………………… 19
細胞生物

マロニル -13C3 コエンザイム Aリチウム…………………… 21
植物透明化試薬 ClearSeeTM… ………………………… 24

養

伝

子

Cas9 タンパク質…………………………………………… 22
KANEKA KanCapTM プレパックカラム…………………… 23
MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキット PS…… 32… ……………… 32
抗 CD63, モノクローナル抗体（3-13）〈ScreenF ectTM 通信〉「ヒト iPS 細胞への遺伝子導入データ」 ……………………………………………………………………………………………… 25〔お知らせ〕
合成・材料、分析分野ホームページリニューアルのお知らせ………………………………………………… 171

妥当性の確認された ORAC（酸素ラジカル吸収能）法による食品の抗酸化能評価
国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構

酸素種を消去し、生体成分の酸化反応を防ぎ、健康の維持・増進に寄与することが期待されている。特に、野菜・果物などの食品中に豊富に含まれるポ
リフェノールやカロテノイドのような抗酸化物質が脚光を浴びている。我が国においても、農産物や加工食品の抗酸化能がアンチエイジングやエイジン
グケア、健康維持の観点から注目されており、食品産業界等から生鮮食品や

純

CO2H

HO

O

フルオレセイン（蛍光）O

マイクロプレートリーダーを用いて96穴プレート中で蛍光強度を測定

蛍光の
消失

分解

抗酸化物質

ペルオキシラジカル (ROO・)
37℃

抗酸化物質あり
抗酸化物質なし

ラジカル発生剤 (AAPH)
この面積をもとにTrolox当量で抗酸化能を表す

測定時間

図１．ORAC 法の測定原理と ORAC 値の計算

ORAC 法の特徴度に対する各時間での蛍光強度の相対値をプロットし、曲線下面積（AUC ;area under the curve） を 計 算 す る。

ORAC 法は、2,2’-azobis（2-amidino-

試 料 存 在 下 の AUC か ら 非 存 在 下 のpropane）
dihydrochloride（AAPH）の

AUC を差し引いた net AUC（図 1 斜

統一的な食品の抗酸化能測定法の必要性

熱分解により生じるペルオキシラジカ

線部）は試料の抗酸化能に比例して増ルが蛍光プローブであるフルオレセイ

大するので、濃度既知の抗酸化物質標ンを分解し、それに伴う蛍光強度の減品 で あ る Trolox の net AUC か ら 検

我が国においては食品の抗酸化機能

弱過程が抗酸化物質の作用により抑量 線 を 作 成 し、 試 料 の 抗 酸 化 能 をに関する長い研究の歴史があり、これ制されることを利用して抗酸化能を測

Trolox 当量（TE）として表す。測定までに多種多様な抗酸化能測定法が用定する方法である（図 1 左）。ORACに必要な機械は汎用性の高い蛍光マイ

いられてきた。食品の抗酸化能は用い法の特徴は、生体成分の過酸化反応にクロプレートリーダーのみであり、用る測定法によって得られる値が異な関与する脂質ペルオキシラジカルを模いる試薬も安価なものである点も特徴る。例えば、代表的な抗酸化物質の抗したラジカル種を用いて生理的 pH 条である。

酸化能を 2 つの異なる測定法（ORAC

件下で測定を行う点であり、このため法と DPPH 法）で測定し、測定値間生体内での酸化反応に近い状態で抗酸の相関を調べると、両者の測定値の相化能が評価できる系であると考えられ関は低かった 1）。すなわち、食品へのている 2）。また、ORAC 法では血清や標準化された抗酸化能測定法を提示

抗酸化能表示を目指すには、まず測定

臓器ホモジネートのような生体試料のするためには、決められた分析手順に法を統一する必要があり、さらに誰が抗酸化能も食品と同様の手法で測定で従って同じ試料を測定すれば、誰がどどこで分析しても測定値が同程度ときることから、抗酸化物質を投与したこで分析しても測定値のばらつきが一なって測定値を比較可能なように測定

ヒトや実験動物から血清を採取し、投定範囲内におさまることを示す必要が方法を標準化する必要がある。また、与した食品の抗酸化能とそれに伴う血ある。食品の抗酸化物質には親水性成

抗酸化能測定法の統一と標準化は、抗清の抗酸化能の変動を同一の測定法で分と親油性成分が存在し、それらの抗酸化物質摂取の健康への寄与を議論す

評価することも可能である 3）。

酸化能を総合的に評価するためには親る上でも必要である。抗酸化能測定法

4）

加工食品への抗酸化能測定値の表示に対する要請が高まりつつある。

2

渡辺

測定試料, フルオレセイン, AAPH

はじめに食品から摂取した抗酸化物質が活性食品研究部門

蛍光強度

R

esearchORAC 法の妥当性確認

では、96 穴マイクロ

水 性 部 の ORAC（H-ORAC） と 親 油の統一・標準化およびその利活用を目

プレートの各ウェルに食品抽出液等の性部の ORAC（L-ORAC）を個別に測指し、抗酸化能評価に関する広範な分

試料溶液およびフルオレセイン溶液を定する（図２）。なお、野菜や果物な

野の第一線の研究者と食品への抗酸化加えて 37℃に加温した後、AAPH 溶

ど多くの食品では、親水性部の抗酸化能 表 示 に 関 心 を も つ 企 業 が 集 結 し、液の添加により反応を開始させ、蛍光へ の 寄 与 が 親 油 性 部 よ り 大 き い が、AOU 研究会が 2007 年に設立された。

強度（励起波長 : 485 nm 近傍、検出ナッツなど親油性部の寄与が大きい食AOU 研究会では、ポリフェノール系

波 長 : 535 nm 近 傍 ） の 経 時 変 化 を品も見られる 5）。

抗酸化物質の抗酸化能指標（AOU-P）

37℃に庫内を保温したマイクロプレー

H-ORAC 測定に関しては、原法にを求めるための測定法として ORAC

トリーダーを用いて 2 分間隔で 90 分

ほぼ準拠した標準作業手順書を作成し測定法を選定している。

間測定する。AAPH 添加前の蛍光強て室間共同試験を行ったが、十分な室ORAC 測定

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

プの代わりにガラスキャピラリーを用

食品

親水性抗酸化物質（ポリフェノールなど）いる分注器、あるいはガラスマイクロ

親油性抗酸化物質（トコフェロールなど）

シリンジを用い、プラスチック器具類

前処理・抽出を使用しないことなどを主な改良点とする改良版 L-ORAC 測定法を開発し抗酸化能測定親水性ORAC (H-ORAC)

親油性ORAC (L-ORAC)

7）
た 。この改良版 L-ORAC 法について室間共同試験を行った結果、用いた

総ORAC：食品の抗酸化能

図２．ORAC 法による食品試料の抗酸化能測定手順

合計 5 種類の抗酸化物質溶液、食品抽間精度が得られなかった（図３上）。

測定中に揮発することが問題と考えら断される国際的な基準の範囲内に測定

H-ORAC 測定の室間精度の低下要因れた。また、H-ORAC 測定ではピペッ

値のばらつきが収まることを確認したとして、①マイクロプレートリーダー

トチップなどのプラスチック器具類を（図 4）8）。

の温度制御特性に起因する測定プレー用いるが、これらを用いて L-ORAC

食品の抗酸化能測定において、試料

ト内のウェル間の温度むら、②各ウェ

測定試料を取り扱うと、溶出された可が液体の場合はそのまま分析に供すこ

ル内の反応液の不均一さ、③一部試料

塑剤が試料中に混入して測定を妨害すとが可能であるが、多くの場合は試料において測定値が試料の希釈倍率に影ることがわかった。これらの知見を踏に含有される抗酸化物質を効率よく抽響を受けることが考えられた。これら

ま え、 ① H-ORAC 測 定 と 同 様 に プ出する必要がある。抽出法として、凍について改良を施した改良 H-ORAC

レートシールを貼付するとともに、測結乾燥した試料から n - ヘキサン - ジ

測定法を開発した。問題点①に対して定プレートへの試料の分注を氷上で行

クロロメタン（1 : 1）で親油性物質をは測定プレート上部にプレートシール

う、②試料の取り扱いはピペットチッ

抽出後、MWA（メタノール : 水 : 酢

剤の AAPH 溶液添加後に混合する操作を加えた。問題点③に対しては、1段階目の測定で試料のおおよその HORAC 値を計算し、その値から求めた最適な希釈倍率で 2 段階目の測定を実施して試料の H-ORAC 値を求める

H-ORAC原法
ORAC(mmol TE/g)を貼付し、②に対してはラジカル発生

出液すべてにおいて分析法が妥当と判

ORAC(mmol TE/g)
ORAC(µmol TE/g乾燥重)値のばらつきが収まることを確認した

90

60

30

50

25

75

Trolox50

平均値: 4.1
RSDint: 8.0%
RSDR: 5.8%
HorRat: 0.5 25

キャベツ

120

80

平均値: 50.0
RSDint: 9.4%
RSDR: 9.2%
HorRat: 0.8 40

45(+)-カテキン

30

30

平均値: 58.9
RSDint: 3.1%
RSDR: 7.7%
HorRat: 0.7 15

タマネギ

平均値: 18.8
RSDint: 5.4%
RSDR: 16.9%
HorRat: 1.5

10

30

コーヒー酸

450

300

平均値: 75.2
RSDint: 1.8%
RSDR: 7.8%
HorRat: 0.7 150

10

フェルラ酸

20

240

30

20

平均値: 30.4
RSDint: 2.3%
RSDR: 4.7%
HorRat: 0.410

ナス

30

20

平均値: 30.5
RSDint: 8.6%
RSDR: 33.2%
HorRat: 3.0

15

45

フェルラ酸

20

平均値: 50.7
RSDint: 5.6 %RSDR: 27.9%
HorRat: 2.6(+)-カテキン

30

コーヒー酸

平均値: 17.5
RSDint: 4.3%
RSDR: 5.5%
HorRat: 0.5 10

ミカン

180

120

160

平均値: 249.6
RSDint: 2.5%
RSDR: 5.6%
HorRat: 0.5 80

平均値: 150.0
RSDint: 2.4%
RSDR: 4.4%
HorRat: 0.4 60

ヘスペレチン
平均値: 20.6
RSDint: 10.4%
RSDR: 26.4%
HorRat: 2.4

ヘスペレチン
平均値: 22.8
RSDint: 3.2%
RSDR: 4.8%
HorRat: 0.4

リンゴ

平均値: 120.3
RSDint: 6.9%
RSDR: 13.8%
HorRat: 1.3※HorRat:分析法が妥当であるかどうかを判断する基準で、ハーモナイズド・プロトコールでは0.5〜2.0の間であれば分析法が妥当であるとされる

6）法による測定と同等の性能をもつ H-

42

実施した結果、室間共同試験に用いた（図 2） 。さらに、この改良 H-ORAC

平均値: 4.0
RSDint: 9.1%
RSDR: 21.5%
HorRat: 2.0

6

H-ORAC 法について室間共同試験を断される国際的な基準の範囲内に測定

4

H-ORAC改良法

が収束するように改めた。この改良版

果物抽出液ともに、分析法が妥当と判

Trolox2

2 段階の測定を行うことで、希釈倍率5 種の抗酸化物質溶液、5 種の野菜・

756

図３．H-ORAC 原法と改良法による室間共同試験結果-トコフェロールで開発した。

6000

平均値 2,942 10000
HorRat 1.78

4500

7500

1500

4500

60000

3000

5000

1000

3000

40000

1500

2500

500

1500

20000

一方、親油性部の ORAC（L-ORAC）
測定に関しても分析法の妥当性確認を行った。L-ORAC 測定では親油性の抗酸化物質を水系に分散させるために、メチル化β- シクロデキストリンを含む含水アセトン溶液で試料を希釈する。このアセトンが試料の取扱中やORAC (µmol TE/L)

ORAC 測定キットを和光純薬と共同-オリザノール
平均値 6,959
HorRat 1.68

玄米

シナモン

ジンジャー

2000

6000

80000

平均値 1,053
HorRat 1.61

平均値 3,267
HorRat 1.63

平均値 44,620
HorRat 1.35

※HorRat:分析法が妥当であるかどうかを判断する基準で、ハーモナイズド・プロトコールでは0.5〜2.0の間であれば分析法が妥当であるとされる

図４．L-ORAC 改良法による室間共同試験結果

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）3

酸 =90 : 9.5 : 0.5）で親水性物質を抽出を行い、データベースの構築を行って民の関心事であり、これに寄与する生する方法を採用した。代表的な野菜・いる 10）。ここで重要なことは、妥当

活習慣の一つとして食生活のあり方に

果物の凍結乾燥粉末を用い、ここに親性の確認された測定法を用いているた

関する情報提供が強く求められるよう

油 性 抗 酸 化 物 質 と し て α- ト コ フ ェめ、改良 H-ORAC, L-ORAC 測定法にになっている。抗酸化能測定法の統一

ロール、親水性抗酸化物質として没食よる測定値が、データベースの抗酸化と標準化を通じた、食品のもつ抗酸化子酸を添加して、それぞれの回収率を能測定値と比較可能なことである。ま能について適切な情報を普及する取り調べた。抽出は上記の様に n - ヘキサ

た、食品の抗酸化能データの集積は、組みが、食品の抗酸化能に関する機能

ン - ジクロロメタン（1 : 1）と MWA

その食品の抗酸化能の代表値を知るこ性研究の進展と深化に繋がるものと確を用いて連続的に行い、残留農薬等のとにもつながる。我々は、抗酸化物質

信している。筆者らの取り組みが、生抽出等に用いられる高速溶媒抽出装置

を単独で摂取しているのではなく、食産者にとっては抗酸化能を指標としたと、抽出装置を用いない抽出方法の比事から複数の抗酸化物質を組み合わせ

農産物・食品のブランド化に、消費者較も行った。その結果、α- トコフェて摂取している。そのため、抗酸化物

にとっては抗酸化能を基準とした食品

ロールは親油性部、没食子酸は親水性質の総量を反映する食品の抗酸化能

選択の基準の確立に繋がることを期待部にのみ見られること、回収率はとり（antioxidant capacity : AOC）に着目したい。

わけ高速溶媒抽出装置を用いた場合にした研究が必要であると考えている。

良好であった 9）。

食品の抗酸化能データベースを充実さ〔参考文献〕

せ、AOC と疾病発症リスクの関連性

妥当性の確認された抗酸化能測定法による食品の抗酸化能データの蓄積に関する高精度の疫学研究を実施しているところである。

今後の展望

ポリフェノール等の二次代謝産物が寄与すると考えられる野菜や果物の抗酸化能は、品種や栽培条件、収穫期な

こ こ で 紹 介 し た 改 良 H-ORAC, L-

どによって変動すると考えられる。すORAC 測定法の標準作業手順書、およ

なわち、抗酸化能の高い品種を選抜

びプレートリーダーのデータから ORAC

し、抗酸化能を高める栽培法を用いる

値を計算するためのテンプレートは、ことによって高付加価値化が図れるこ

食品需給センターのウェブサイト上にとを意味する。このような観点から、掲載され、利用可能である。

代表的な食品の抗酸化能データの蓄積

介護を要しない健康寿命の延伸は国

1）渡辺純 他：化学と生物，47，237-243（2009）.
2）Huang, D. et al . : J. Agric. Food Chem ., 50,
1815-1821（2002）.
3）Cao, G. H. et al . : Free Radic. Biol. Med ., 14,
303-311（1993）.
4）渡 辺 純 他： 日 本 食 品 科 学 工 学 会 誌，57，525-531（2010）.
5）W u, X. et al . : J. Agric. Food Chem ., 52,
4026-4037（2004）.
6）Watanabe, J. et al . : Anal. Sci ., 28, 159-165（2012）.
7）W atanabe, J. et al . : Biosci. Biotechnol.
Biochem ., 77, 857-859（2013）.
8）Watanabe, J. et al . : Anal. Sci ., 32, 171-176（2016）.
9）W atanabe, J. et al . : J. Food Sci ., 79,
C1665-C1671（2014）.
10）Takebayashi, J. et al . : J. Food Comp. Anal .,29, 25-31（2013）.

食品などの抗酸化能の測定に
H-ORAC測定用キット
キット構成●フルオレセイン

1 mℓ用× 1●トロロックス

1 mℓ用× 2● AAPH

15 mℓ用× 2●フェルラ酸100 mg × 1● Assay Buffer

500 mℓ用× 1● 96 穴マイクロプレート

2枚●プレートシール

4枚

関連商品〈キット以外に必要な試薬・器具・機材〉
・プレートリーダー
・メタノール
・恒温槽
・酢酸
・精製水
・マイクロピペット
NEW

コード No.
品
名295-79501 H-ORAC Activity Assay Kit

規 格
食品分析用

容 量 希望納入価格（円）
1キット
照
会

プレートリーダー

品
名Spark®
Infinite®200PRO

メーカー
TECAN
TECAN

希望納入価格（円）照会
照会※製品の仕様詳細は下記当社 HP からご確認いただけます。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/kiki/multi/index.htm…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

4

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

R

esearch

造腫瘍性を有するヒト ES/iPS 細胞の非侵襲的モニタリング技術- ヒト ES/iPS 細胞モニタリングキットの開発 -はじめに

国立研究開発法人 産業技術総合研究所 創薬基盤研究部門

舘野

浩章

0907 第３号 2012 年 9 月 7 日）におい（rBC2LCN-PE23：2015 年 7 月）を開ても、「ヒト iPS（様）細胞加工医薬

発し、培養液に添加するだけで未分化品等においては目的細胞以外の未分化細胞を選択的に殺傷除去することがで

ヒト ES 細胞や iPS 細胞は再生医療

細胞の混入を否定するための方策が最きる試薬を開発した 4）。

のための細胞源として期待されていも重要な要件である。可能な限り中間

る一方、造腫瘍性という大きな課題

製品の段階で目的細胞以外の未分化細を抱えている。我々はこれまでヒト胞の混入を否定することが望ましい」

ES/iPS 細 胞 に 選 択 的 に 結 合 す ると記載されており、ヒト iPS（様）細rBC2LCN レ ク チ ン の ヒ ト ES/iPS

rBC2LCN レ ク チ ン を 見 出 し、 ヒ ト

胞加工医薬品を医療に用いる際には、細胞への結合機構を解析したところ、

ES/iPS 細胞を染色して、除去する技

残存する未分化細胞の造腫瘍性が大き

rBC2LCN はポドカリキシンという１術を開発してきた。今回、我々は培養な関心事になっていることが分かる。

型膜タンパク質上の O 型糖鎖の一種

液を用いてヒト ES/iPS 細胞の数を非それ故、ヒト ES/iPS 細胞から作製しで あ る H タ イ プ ３（Fucα1-2Galβ1-

破壊的にモニタリングする技術を世界た移植用細胞にどのくらい未分化な細3GalNAc）と呼ばれる糖鎖エピトープ

で初めて開発し、実用化することに成胞が残存しているかを評価する技術がに結合することが分かった 5）。面白い

功した。ヒト ES/iPS 細胞を用いた再必要となる。

ことに、この rBC2LCN が反応性を示

ヒト ES/iPS 細胞モニ
タリングキットの開発

ヒト ES/iPS 細胞特異的レ
クチン rBC2LCN の発見

すポドカリキシン（以後、rBC2LCN

我々はこれまで細胞表面を高密度にに分泌されていることを見出した 6）。

ヒト ES/iPS 細胞を用いた再生医療の大きな課題

覆う糖鎖を迅速、高感度に解析する技

一方、ポドカリキシンは腎臓など他の術としてレクチンマイクロアレイを開

組織にも存在するが、ヒト ES/iPS 細発してきた。ヒト ES/iPS 細胞表面も胞に特徴的な rBC2LCN 陽性ポドカリ

生医療の安全性向上への貢献が期待される。本総説ではヒト ES/iPS 細胞モ
ニタリングキットの開発経緯についてご紹介したい。

陽性ポドカリキシン）が、さまざまな種類のヒト ES/iPS 細胞から培養液中

ヒト ES 細胞やヒト iPS 細胞は、無他の細胞同様に糖鎖で覆われている

キシンは調べた限り通常の体細胞から限 に 増 殖 で き る 能 力（ 自 己 複 製 能 ）が、これら多能性幹細胞がどのようなは分泌されていない。すなわち、培養や、心筋細胞や神経細胞など、あらゆ

糖鎖構造を発現しているのかについて

液中の rBC2LCN 陽性ポドカリキシン

る細胞に分化する能力（多能性）を持の詳細は明らかにされていなかった。

を調べることで、細胞自体を使わずにつことから、再生医療のための細胞源

こうした中、我々はレクチンアレイを

培 養 液 を 用 い て ヒ ト ES/iPS 細 胞 をとして世界的に大きな期待が寄せられ用いて計 100 種以上のヒト ES/iPS 細検 出 で き る こ と に な る。 そ こ で ま1）ている。特にヒト iPS 細胞は遺伝子を胞を解析した 。更に、質量分析計とず、rBC2LCN を ELISA プ レ ー ト に導入するだけで様々な体細胞から作製

液体クロマトグラフィーを用いて定量固相化することにより培養液中の2）することができることから、再生医療

的な糖鎖構造解析を実施した 。そのrBC2LCN 陽性ポドカリキシンを捕捉

のみならず、病態モデルや創薬開発な結果、ヒト ES/iPS 細胞に発現する糖して、それを検出するためのプローブ

どへの応用が期待されている。2015

鎖構造を明らかにするとともに、レクを探索した 6）。各種抗体やレクチンを

年の 9 月には加齢黄斑変性の治療を目チン（糖結合タンパク質の総称）の一

スクリーニングした結果、O 型糖鎖的として、自己のヒト iPS 細胞由来の種である rBC2LCN がヒト ES/iPS 細に反 応 性 を 示 す rABA レ ク チ ン を

網膜色素上皮細胞を移植する臨床研究

胞に特異的に結合することを見出し

検 出 プ ロ ー ブ と し て 用 い る こ と で、1）が世界で初めて実施された。このようた 。その後、和光純薬工業との共同

rBC2LCN 陽 性 ポ ド カ リ キ シ ン を 高にヒト ES/iPS 細胞の臨床応用が進む研究を実施し、rBC2LCN を用いてヒ感 度 に 検 出 で き る こ と が 分 か っ た。

一方で、安全性に関する大きな課題がト ES/iPS 細胞を生きたまま染色でき

rBC2LCN レクチンと rABA レクチン

立ち塞がる。ヒト ES/iPS 細胞から作る試薬を開発した（非標識 rBC2LCNの２種類のレクチンを用いたサンド

製した移植用の細胞には、分化誘導後

レ ク チ ン：2013 年 6 月、rBC2LCN-

イッチアッセイ系を GlycoStem 法とも尚、未分化な状態の細胞が残存し、

FITC：2014 年 6 月、rBC2LCN-635：

命名した。しかしポドカリキシンのタ腫瘍化する可能性があることが最大の2014 年 12 月、rBC2LCN-547：2015 年

ンパク質骨格に対して作製された各種懸念事項となっている。ヒト（自己）6 月）3）。更に rBC2LCN レクチンの C抗体では、うまく検出することができ

iPS（様）細胞加工医薬品等の品質及末端部分に緑膿菌由来外毒素（PE23）なかった。それはポドカリキシンが多び安全性の確保に関する指針（薬食発を融合させた組換えタンパク質量 の O 型 糖 鎖 で 覆 わ れ て い る た め、

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）5ヒトiPS/ES細胞から分泌された
rBC2LCN陽性ポドカリキシン

rBC2LCN陽性ポドカリキシンの検出

ヒトES/iPS細胞数の測定

１に GlycoStem-HP 法の概要を示す。

細胞培養液

分泌

ア ッ セ イ 系 を 高 性 能 GlycoStem 法（GlycoStem-HP 法 ） と 名 付 け た。 図
GlycoStem-HP では mTeSR1、TeSR-E8、
StemSure ® hPSC medium、mouseembryonic fibroblast-conditioned

発色強度

rBC2LCN陽性ポドカリキシン

media（MEF-CM） な ど 各 種 培 養 液で培養したヒト ES/iPS 細胞の検出に細胞数

ヒトiPS/ES細胞表面: rBC2LCN陽性
ポドカリキシン

0.0006-0.03% であった（図２）。

ヒト iPS 細胞由来心筋細胞、及び神経幹細胞への応用: 酵素: H type3 (Fucα1-2Galβ1-3GalNAc): rBC2LCNレクチン

適用可能であり、その検出下限値は: ケラタン硫酸: Core1 (Galβ1-3GalNAc)

GlycoStem-HP 法が実際のヒト iPS: R-10G抗体

細胞由来の移植用細胞に適用できるかどうかについて検証した。そこで重症図１．GlycoStem-HP法（ヒトES/iPS細胞モニタリングキット）の概要

心不全の治療を目的として、ヒト iPS
細胞由来心筋細胞を用いた再生医療を

抗体がタンパク質骨格にうまくアクセ

結果、ヒト ES/iPS 細胞に発現するポ目指して研究を進めている大阪大学心スできないためであると考えられた。

ドカリキシンに提示された低硫酸化ケ

臓血管外科との共同研究により、ヒト

その後更に本 GlycoStem 法を検証しラタン硫酸に反応する R-10G 抗体を

iPS 細胞から心筋細胞を分化誘導すた結果、培養液中に含まれるウシ胎児

使用すると、ウシ胎児血清の影響をる過程における未分化細胞数の測定

血清に対して高いバックグラウンドを受けずに、培養液中の rBC2LCN 陽性を行った（図３）。フローサイトメー示すことがわかった 7）。そこで更に、

ポドカリキシンを特異的に検出できる

ターで解析したところ、全細胞数は分

ウシ胎児血清にバックグラウンドを示ことが分かった。rBC2LCN レクチン化誘導後５日目に増加し、その後は細さない検出抗体の探索を行った。そのと R-10G 抗体を用いたサンドイッチ

胞 数 に 大 き な 変 動 は な か っ た。 一

mTeSR1

4.00

0.60

2.00

0.30

0

OD450-650

StemSureⓇ hPSC

5,000

10,000

2.00

0.40

1.00

0.20

0.00

0.00

2.00

0

5,000

10,00015,000

0.30

1.00

200

0

400

1,000

10,000

0.40

0.10

0.20

0.05

0.00

0.00
0

5,000

10,00015,000200

y=0.0001x+0.0637

後に増加したものの、その後は徐々に

R2=0.9895

減少し、フローサイトメーターで算出

2,000

3,000

400

600

800

3,000

Cell number (cells/mL)

図２．GlycoStem-HP 法（ヒト ES/iPS 細胞モニタリングキット）を用いた標準曲線の作成
各種培養液で培養したヒト iPS 細胞（201B7 株）培養上清を用いた解析。

6

和光純薬時報し研究を進めている慶應義塾大学医学
ヒト神経幹細胞中に混在するヒト iPS

R2=0.9981
2,000

iPS 細胞由来神経幹細胞の移植を目指
部及び大阪医療センターとの共同で、

y=2E-05x+0.031

1,000

された細胞数と類似していた。
更に脊椎損傷治療を目的としてヒト

LLOD = 384 cells/mL(0.03%)

0

けの細胞数（arbitrary unit, AU）も、
全細胞数の増加とともに分化誘導３日

R2=0.9978
0

15,000た。GlycoStem-HP 法で得られた見か
800

y=0.0002x+0.1031

0.00
5,000

600

LLOD = 105 cells/mL(0.006%)0.10
0

ところ、分化誘導過程で徐々に減少し

LLOD = 65 cells/mL(0.02%)

0.20

0.00

MEF-CM0

15,00060/rBC2LCN 陽性細胞数を測定した

y=0.0006x+0.095
R2=0.9996

0.00

0.00

TeSR-E8

方、 フローサイトメーターで Tra-1LLOD = 27 cells/mL(0.0006%)

Vol.85, No.2（2017）

細 胞 の 測 定 に 挑 戦 し た。 そ の 結 果、GlycoStem-HP 法を用いると 0.05% のヒト iPS 細胞の混入を検出できることが分かった。2016 年 3 月、GlycoStemHP 法は「ヒト ES/iPS 細胞モニタリ
ングキット」として和光純薬工業から

中胚様誘導心筋前駆細胞誘導心筋細胞の拡大維持

レクチン
糖鎖に結合するタンパク質の総称で、ヒトからウイルスまで全ての生物に存在する。1888 年にロシアのスティ
ルマークにより、ヒマ種子の抽出液がいろいろな動物の血球を凝集することを発見されたのが最初。特定の糖鎖に結合することから、古くから糖鎖解析のための試薬として応用されるほか、細胞間の相互作用を媒介することによりさまざまな生命現象に深く関与する機能を持つ。

4.E+060.6

y=5E-05x+0.0178

3.E+06

2.E+060.2

2.E+06

LLOD = 10 cells/mL0

1.E+06

3.E+06R2=0.9994

0.4

5000
10000
15000
Cell number（cells/mL）0

1.E+06

0.E+00Cell number by ﬂow cytometer（cells/mL）（△, □）

4.E+06OD450-620

GlycoStem-HP で算出した見かけの細胞数（AU）
（●）

EB形成

0.E+00
0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

Diﬀerentiation day● GlycoStem-HP▲ Flow cytometer（Tra-1-60/rBC2LCN-positive cells）■ Flow cytometer（Total cells）

rBC2LCN
グラム陰性菌由来のレクチン BC2L-C の N 末端ドメインの組み換えタンパク質のこと。
レクチンアレイを用いた解析の結果、各種ヒト ES/iPS 細胞と反応性を示す
レクチンとして同定された。培養液に添加するだけで生きたままヒト
ES/iPS 細胞を染色できることから、
ヒト ES/iPS 細胞染色用試薬として、未標識体や各種蛍光標識体が和光純
薬工業より実用化されている。

図３．GlycoStem-HP 法（ヒトES/iPS細胞モニタリングキット）を用いた心筋分化過程の未分化細胞数のモニタリング

実用化に至った。

おわりに

分化細胞数を測定する新しい技術であることから様々な検証が必要であることは言うまでもない。
rBC2LCN レ ク チ ン を 用 い て ヒ ト

造腫瘍性試験法としては、免疫不全

ES/iPS 細胞を染色、検出、除去する動物を用いた in vivo 造腫瘍性試験法

技術を開発し、実用化した（図４）。

に加え、未分化細胞に特異的な抗体をヒト ES/iPS 細胞を用いた再生医療の用 い た フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー 法、実現化に貢献できるよう、これら技術

Lin28 遺伝子発現を指標とした PCRの改良と検証を進めるとともに、ヒト〔参考文献〕

法、Essential-8/LN521 培 養 増 幅 法 なES/iPS 細胞に発現する糖鎖の機能にどがある。これらの試験法はいずれもついても明らかにしていきたい。

1）Tateno, H., Toyota, M., Saito, S., Onuma, Y.,
Ito, Y., Hiemori, K., Fukumura, M.,
Matsushima, A., Nakanishi, M., Ohnuma, K.,

移植に用いる細胞の一部を検査に使用
す る 必 要 が あ っ た。 今 回 開 発 し た
GlycoStem-HP 法の最大の利点は、貴rBC2LCN lectin
由来(
BC2L-C レクチンのN末端ドメイン)

重な移植用細胞を用いることなく、僅か 50 µL の培養液を用いて非破壊的に未分化細胞数を測定することが出来る点である。培養液で測定できるため、自動化検査装置の開発への展開も期待できる。培養液を用いて未分化細胞数を測定する技術は世界的にも他にヒトES/iPS細胞を生きたまま染色する試薬

培養液でヒトES/iPS細胞 ヒトES/iPS細胞を殺傷除去の数を測定するキット
する試薬は存在しない。再生医療・細胞治療用の細胞加工品中に残存する未分化細胞の非破壊試験法としての活用が期待される。一方注意点としては、ヒト ES/

rBC2LCN-PE23

iPS 細胞の数を rBC2LCN 陽性ポドカ
リキシンの量で測定しているため間接的であること、また細胞や培養液の種

Tateno et al. J Biol Chem 2011
Onuma, Tateno et al. BBRC 2012

Tateno et al. Sci Rep 2014
Tateno et al. Regenerative
Therapy 2017
Tateno et al. Stem Cell Rep 2015

類によって分泌量が変化することなどがあげられる。GlycoStem-HP 法は未

図４．rBC2LCN レクチンを用いたヒト ES/iPS 細胞の染色、検出、除去技術の開発

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

7

Akutsu, H., Umezawa, A., Horimoto, K.,
Hirabayashi, J. and Asashima, M. : J. Biol.
Chem., 286, 20345-20353（2011）.
2）Hasehira, K., Tateno, H., Onuma, Y., Ito, Y.,
Asashima, M. and Hirabayashi, J. : Mol. Cell.
Proteomics , 11, 1913-1923（2012）.
3）Onuma, Y., Tateno, H., Hirabayashi, J., Ito, Y.
and Asashima, M. : Biochem. Biophys. Res.
Commun ., 431, 524-529（2013）.
4）Tateno, H., Onuma, Y., Ito, Y., Minoshima, F.,
Saito, S., Shimizu, M., Aiki, Y., Asashima, M.

and Hirabayashi, J. : Stem cell reports , 4, 811820（2015）.
5）T ateno, H., Matsushima, A., Hiemori, K.,
Onuma, Y., Ito, Y., Hasehira, K., Nishimura, K.,
Ohtaka, M., Takayasu, S., Nakanishi, M.,
Ikehara, Y., Ohnuma, K., Chan, T., Toyoda, M.,
Akutsu, H., Umezawa, A., Asashima, M. andHirabayashi, J. : Stem Cells Transl. Med ., 2,
265-273（2013）.
6）Tateno, H., Onuma, Y., Ito, Y., Hiemori, K.,
Aiki, Y., Shimizu, M., Higuchi, K., Fukuda, M.,

Warashina, M., Honda, S., Asashima, M. andHirabayashi, J. : Sci. Rep ., 4, 4069（2014）.
7）T ateno, H., Hiemori, K., Hirayasu, K.,
Sougawa, N., Fukuda, M., Warashina, M.,
Amano, M., Funakoshi, T., Sadamura, Y.,
Miyagawa, S., Saito, A., Sawa, Y., Shofuda, T.,
Sumida, M., Kanemura, Y., Nakamura, M.,
Okano, H., Onuma, Y., Ito, Y., Asashima, M.
and Hirabayashi, J. : Regenerative therapy ,（2016）,in press.

培養液でヒトES/iPS細胞数を推測可能！
未分化細胞維持培養と分化工程の品質管理にご使用下さい
ヒトES/iPS細胞モニタリングキット
本キットは、細胞を消費せずに培養上清を用いて、未分化細胞が培養液中に放出する rBC2LCN 陽性ポドカリキシンを定量的に測定することで培養液中に含まれるヒト ES/iPS 細胞数を推測できます。

特長●培養上清を分析することで、未分化細胞数の増減をモニタリング可能●測定対象が培養上清であるため、細胞を検査に消費することなく、細胞はそのまま培養を継続可能●少量の培養上清（50μL）で分析可能● ELISA 法を用いるため、簡便に多検体を処理可能
コード No.

品

299-78301

Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

名

規

格

再生医療研究用

容

量

96回用

希望納入価格（円）96,000

詳細は、当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/es_ips_monitoring/index.htm）をご覧下さい。

関連商品
rBC2LCN関連製品
ヒト ES/iPS 細胞の未分化維持培養〜分化誘導〜精製 / 純化の各工程において、rBC2LCN 関連製品を使用頂けます。
ヒト ES/iPS 細胞

質の悪いヒト ES/iPS 細胞

未分化維持培養・品質管理
rBC2LCN-FITC, -547, -635
ヒトES/iPS 細胞モニタリングキット

目的の細胞への分化誘導
ヒト ES/iPS 細胞モニタリングキット

残存未分化細胞

目的細胞の精製 / 純化、未分化細胞除去
純化、未分化細胞除去
rBC2LCN-PE23
ヒト ES/iPS 細胞モニタリングキット

目的細胞…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

8

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）［次頁に続く］未分化維持培養・品質管理
培地に添加するだけでヒトES/iPS細胞を染色可能！

rBC2LCN-FITC、rBC2LCN-547、rBC2LCN-635
本品は、蛍光色素でラベル化した rBC2LCN です。ヒト ES/iPS 細胞の培養液に添加することで、未分化細胞を生きたまま解析することができます。細胞染色、フローサイトメトリーのいずれにもご使用頂けます。

特長●培地に添加するのみで染色可能●細胞固定せず細胞を生きたまま明瞭に染色可能●細胞毒性が低く、染色した状態で培養可能●Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA3, SSEA4 と同様に細胞表面上の糖鎖を認識●細胞染色、フローサイトメトリーに使用可能
コード No.
180-02991
186-02993
186-03211
182-03213
185-03161
181-03163（ヒト iPS 細胞 201B7 株）

品名rBC2LCN-FITC【AiLecS1-FITC】

規

格

細胞染色用

Excitation 495nm, Emission 520nm

rBC2LCN-547【AiLecS1-547】

細胞染色用

Excitation 551nm, Emission 565nm

rBC2LCN-635【AiLecS1-635】

細胞染色用

Excitation 634nm, Emission 654nm

容 量
100μL
100μL×5
100μL
100μL×5
100μL
100μL×5

希望納入価格（円）20,00080,00030,000120,000
30,000120,000

詳細は、当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/rBC2LCN-FITC/index.htm）をご覧下さい。

目的細胞の精製/純化、未分化細胞除去
培地に添加するだけでヒトES/iPS細胞を除去可能！

rBC2LCN-PE23
本品は、緑膿菌由来外毒素の触媒ドメイン（PE23）を rBC2LCN の C 末端に融合させた組換えタンパク質です。
rBC2LCN-PE23 は細胞内に取り込まれた後、タンパク質合成を阻害して細胞死を引き起こすことでヒト ES/iPS 細胞を殺傷します。殺傷された細胞は培養容器より浮遊するため、培地交換を行うことで、除去することが可能です。

デ ー タ■ 間葉系幹細胞分化でのヒト iPS 細胞の除去
添加前

添加 24 時間後添加 48 時間後

ヒト iPS 細胞+
間葉系幹細胞疾患患者由来ヒト iPS 細胞を間葉系幹細胞に分化させ、ヒト iPS 細胞と間葉系幹細胞が混在している培養液に、終濃度 10μg/mL となるように rBC2LCN-PE23 を添加した。添加 24 時間後にはヒト iPS 細胞のコロニーが崩れ始め、添加 48 時間後にはヒト iPS 細胞
はほとんど除去されている。
一方、間葉系幹細胞は、rBC2LCN-PE23 添加 48 時間後でもその影響を受けることなく、細胞が生存している。
（データご提供：東京慈恵会医科大学 再生医学研究部 岡野ジェイムス洋尚先生）
コード No.
180-03231
186-03233

品名規

rBC2LCN-PE23

格

細胞培養用

容 量
100μL
100μL×5

希望納入価格（円）30,000120,000

詳細は、当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/rBC2LCN-PE23/index.htm）をご覧下さい。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）9神経変性疾患研究の最前線

第１回

アルツハイマー病（1）概論

東京大学大学院医学系研究科

神経病理学、東京大学医学部附属病院

早期・探索開発推進室

井原涼子「神経変性疾患研究の最前線」シリーズ開始にあたって
東京大学大学院医学系研究科

神経病理学

岩坪

威

このたび和光純薬時報に、疾患研究の最前線を紹介する本格的なレビューシリーズがあらたに企画され、その第一弾として神経変性疾患を取り上げて頂ける僥倖に与った。かつて神経変性疾患は、治療はおろか診断すらも困難な稀少難病ばかり、との固定観念を逃れられぬ時代もあった。しかし医学研究の発展と高齢化社会の本格化に伴い、アルツハイマー病，
パーキンソン病などは common disease と認識され、その診断・治療法開発も格段の進歩を遂げ、さらには希代の難病と目された ALS にも病態解明のメスが入ろうとしている。本シリーズでは、研究の発展の著しい幾つかの代表的な神経変性疾患を対象に、本邦の気鋭の研究者に、その現状と展望を存分に開陳頂くことにした。ご期待ください。

はじめに
ア ル ツ ハ イ マ ー 病（Alzheimer’s
Disease, AD）は、病理学的には老人斑と神経原線維変化を伴う海馬・側頭葉を中心とした神経細胞脱落を特徴とする神経変性疾患であり、臨床的には老年期に発症し、いわゆる物忘れを主体とする緩徐進行性の認知症を呈する。AD 以外にも物忘れを主とした認知症の原因となる病理があり、しばしばそれらは複数合併すること、また純粋なアルツハイマー病理であっても時に非典型的な臨床症状を来すことからわかるように、病理学的な AD と臨

図１．家族性 AD 症例（50 代、PSEN1 V717I 変異）の脳病理
A・C は海馬、B・D は側頭葉皮質、Bielschowsky 染色。A：多数の老人斑（矢頭）と神経原線
維変化（矢印）を認める。B：全層にわたって老人斑を認める。C：海馬には dystrophic neuriteを伴う老人斑（neuritic plaque）を認める。D：このように中心にコアを伴う老人斑を coredplaque と呼ぶ。スケールバー：A・B は 100μm、C・D は 50μm。

床像は必ずしも一対一に対応しない。
本稿では AD を病理学的疾患と位置た。老人斑と神経原線維変化は、それ胞内にできる神経原線維変化の主成分

づけ、分子病態を説明した後、それにぞれ独立してある程度均一な病理の進が異常にリン酸化されたタウタンパク

基づく新しい臨床診断区分や最新の臨展形式をとることがわかり、老人斑は質であることが相次いで報告され、こ床研究について解説したい。

大脳新皮質→側頭葉内側構造物や基底れらの発見は AD 病態研究のブレイ

1）核→脳幹→小脳 、神経原線維変化はクスルーとなった。しかし、同じよう

嗅内野→辺縁系→新皮質と進展する 2）。

に AD を特徴づける分子のうち、ど2012 年に発表された米国国立加齢研

ちらが病態の中心的役割を担うのか長究所とアルツハイマー協会（NIA-AA）

く議論の対象となった。1990 年代に1906 年にアロイス・アルツハイマーによる神経病理学的診断ガイドライン

AD の約 1% を占める家族性 AD の病

は、記憶障害と妄想を主徴とする初老では、両者の広がりや密度に対応した因遺伝子として APP 、PSEN1 、PSEN2

期認知症患者の脳の顕微鏡的観察におスコアが設定され、認知症の原因病理が相次いで同定された 4-6）。APP の産

いて、Bielschowsky 染色にて明瞭にとして説明しうるか否かが 4 段階で判

物アミロイド前駆タンパク質は 1 回

AD の病態生理
・AD の神経病理所見観察される老人斑と神経原線維変化を断される 。

膜貫通型タンパク質であり、管腔側で認めたと報告した。老人斑は細胞外・βアミロイドとタウ、アミロイドカ

βセクレターゼの BACE1（beta-site

3）に、神経原線維変化は細胞内に生じる

スケード仮説

APP cleaving enzyme）、次いで細胞構造物である（図 1）。この 2 つの病1980 年に入り生化学的手法が進歩

膜内でγセクレターゼによって切断理学的特徴を有する疾患を、他の認知し、細胞外にできる老人斑の主成分がされ、そうして産生された Aβは細症と区別して AD と呼ぶようになっ

βアミロイド（Aβ）であること、細胞 外 に 分 泌 さ れ る。PSEN1 、PSEN2

本シリーズの企画・構成に際し、東京大学大学院医学系研究科岩坪威先生にご助言頂きました。

10

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

神経変性疾患研究の最前線の 産 物 プ レ セ ニ リ ン 1 お よ び 2 は、りタウのリン酸化が起こり神経原線維

仮説内では深く触れられていない

nicastrin、Aph-1、Pen-2 と と も に γ変化ができる→ 5）広範な神経細胞機が、Aβオリゴマーがどのようにタウ

セクレターゼを構成する分子で、酵素能不全と神経細胞死を生じ、臨床的にを介した異常につながるのかは、いま活性中心を形成することが判明した。

7）。孤発性認 知 症 を 発 症 す る（ 図 2）

だに最大のブラックボックスであり、このように、3 つの病因遺伝子のいず

AD の場合は、Aβ産生過多ではなく、また AD の主たるリスク遺伝子である

れも Aβ産生に関わり、一方、タウタ

細胞外に分泌された Aβの分解遅延

APOE が主にどのステップに関わるのンパク質をコードする MAPT の変異が想定されること、臨床的な認知機能か、未解明である。

ではアルツハイマー病ではなく前頭側障害は Aβ病理ではなくタウ病理の・AD のバイオマーカー

頭葉変性症になること、正常高齢者の進行度と強く関連することなど、解釈

バイオマーカーとは疾患の病態生理

病理学的な解析から老人斑を多く認めに注意が必要な点はあるものの、ADを反映する定量的な指標で、診断や重るが神経原線維変化を認めない症例がのモデルとなる APP トランスジェニッ

症 度・ 進 行 度 の 評 価 に 用 い ら れ る。

少なからず見られることなどから、Aβ

クマウスにおいてタウをノックアウト

AD の治療薬治験では評価項目として

8）が病態の上流に位置すると考えられる

すると認知機能障害にならない 、β認知機能や日常生活機能を図る尺度がようになった。これをまとめたアミロ

セクレターゼによる切断に抵抗性の用いられてきたが、内的および外的要イド仮説（アミロイドカスケード仮説

APP 変異は AD になりにくいなど

因によるぶれが大きいとの理由で、そともいう）は次のような病態の流れ

仮 説 を 支 持 す る デ ー タ が 複 数 あ り、れに代わる定量性の高いバイオマー

9）を 仮 定 し て い る。1）APP 、PSEN1 、「仮説」ではあるものの広く信じられカーの探索がなされてきた。AD のバ

PSEN2 の変異により A β産生が増えている。現在この仮説を理論的根拠とイオマーカーとして、変化が出現する

る→ 2）Aβが凝集し老人斑を形成す

して疾患修飾薬の開発が行われてお順に、脳内の Aβ沈着を反映する脳る 過 程 で、 オ リ ゴ マ ー が 作 ら れ る

り、後述するバイオマーカーを用いた脊髄液 Aβ（特に Aβ1-42）やアミロ→ 3）オリゴマーがシナプス毒性を示

臨床診断区分もこの仮説に基づいた病

イド PET、神経細胞機能不全を反映

し、シナプスおよび神経細胞の傷害を態の経過を想定して設定されたものです る FDG-PET や 機 能 的 MRI、 タ ウ

起こす→ 4）キナーゼ活性の変化によある。

による神経変性を反映する脳脊髄液リン 酸 化 タ ウ お よ び タ ウ、 タ ウ PET、神経細胞死を反映する構造的 MRI が挙げられる 10）。近年アミロイド PET、タウ PET といった生体分子イメージ
ングの進歩が目覚ましく、選択基準への組み込みや、副次評価項目としての使用など、臨床研究で果たす役割も大きくなっている。侵襲度とコストの観点から血漿・血清バイオマーカーの開発が望まれているが、現在のところ信頼性の高いものは見つかっていない。

NIA-AA による AD の臨床診断区分
AD が根底にあることが疑われる、記憶障害を主とする認知症は、病理学的疾患としての AD と区別してアルツハイマー型認知症と呼ばれてきた。
しかし、1995 年頃から認知症の前段

図２．アミロイド仮説と現在開発中の疾患修飾薬
アミロイド仮説は、Aβが産生され、オリゴマー化するとシナプス毒性を発揮し、何らかの機序でタウを介した神経毒性につながり、神経細胞死に至るというものである。この図からもわかる
ように、老人斑や神経原線維変化は、不溶性の凝集体を作ることで Aβやタウの毒性発揮からむ
しろ保護的に働く可能性が考えられている。抗 Aβ抗体は、それぞれ凝集程度の異なる Aβに作用することが想定されている。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

階 と し て 軽 度 認 知 障 害（mild cognitive impairment, MCI）という言葉が用いられるようになったことや、バイオマーカーにより臨床症状が出るより11神経変性疾患研究の最前線もかなり前から病理変化が始まること

え、Aβマーカーのみが陽性の stage1、あるいは中断されている。それに代わがわかってきたことから、よりふさわ

Aβマーカーに加えてタウまたは神経る Aβ産生抑制薬として、BACE1 阻

しい表現が望まれるようになった。実変性を示唆するマーカーが陽性である

害薬に期待が集まっている。最初に臨際、家族性 AD の遺伝子変異の未発stage2、その 2 者のバイオマーカー陽

床開発に進んだ 2 剤はいずれも非臨床症保因者を縦断的に追跡した多施設共性に加えて軽微な認知機能低下を認め試験での毒性のため開発中止となった

同研究 Dominantly Inherited Alzheimer

る stage3 に分けられる。NIA-AA のが、現在も複数の薬物が臨床開発進行

Network（DIAN）では、臨床的に症診断基準は、バイオマーカーを取り入中である。ただ、BACE1 は、基質が状が出る 20 年前からアミロイド PETれると生前に高い精度で病理診断がで多いことが懸念材料となっていたγセによりアミロイド蓄積が見られることきるという複数のグループの研究をコクレターゼに代わる安全な標的と考えを明らかにした 11）。このような流れ

ンセンサスとしてまとめたに過ぎないられてきたが、BACE1 のノックアウを踏まえ、2011 年に NIA-AA は、最が、研究利用を目的として明確な診断

トマウスに網膜病変を認めることがわ

新のバイオマーカーの知見を取り入れ区分が設けられたことは、観察研究やかってきており 16）、以前よりも安全

た新しい診断基準を発表した 12-14）。実

治験における被験者の選択の一助と性の確保に慎重な姿勢となっている。

に 25 年ぶりの改訂であった。新診断なったと言えよう。一方、積極的なバ

Aβのクリアランスを促進させる薬基準では、アルツハイマー病の臨床病

イオマーカーの測定を推奨しているもとしては、受動免疫の抗 Aβ抗体、能期は、AD dementia、MCI due to AD、のではなく、preclinical AD の診断や動免疫の Aβワクチンが臨床開発されpreclinical AD の 3 つに分類される。

バイオマーカーの測定は、あくまで研てきた。抗 Aβ抗体は、最初に臨床治

他の認知症疾患と同様に、dementia

究目的に限るよう勧告している。

験に入った 2 剤に共通して amyloid-と MCI を分類するのは認知機能障害に加えて日常生活の自立の障害がある

AD の治療薬開発という血管原性浮腫の副作用が認められ、開発が足踏みすることとなった。

か 否 か、MCI と preclinical を 分 類 す

12related imaging abnormalities（ARIA）

るのは日常的に一貫した認知機能障害

1996 年にアリセプトが AD の治療

いずれも用量を減らすなどの工夫をしがあるか否かであるが、それぞれの診薬として米国 FDA の認可を受けて以て第Ⅲ相試験に進んだものの、認知機

断区分の確からしさを増す手段として来、現在までに上市されてきたのは、能障害の進行抑制効果を示すことがバイオマーカーの情報が加えられた。

症状改善薬のみである。日常診療におで き な か っ た 17, 18）。solanezumab はAD dementia は、緩徐進行性で客観的いてこれらの薬は活躍しているが、ア

その後も MCI 〜早期の AD dementiaに示される認知機能悪化があり、健忘

ミロイド仮説に基づき病態そのものをを 対 象 と し た 治 験 を 続 け て い た が、あるいは言語障害、視空間認知障害、止めるあるいは遅らせることを目的と2016 年 11 月にエンドポイントを達成

遂行機能障害を特徴とするという臨床した疾患修飾薬も待ち望まれている。

せ ず と の 結 果 と な っ た。 後 述 す る

情報だけでも probable AD dementia

疾患修飾薬は、この 20 年近く、開発

preclinical AD を対象とした治験にもの診断は可能だが、それに AD のバが進んできたものの、残念ながら第Ⅲ採用されており、まだ検証過程にあイオマーカー陽性が加わると診断の確相試験のハードルを超えることができる。現在、標的とする Aβ種やエピからしさが一段上がる。同様に MCIていない。

トープが異なる複数の抗体薬が臨床開も、例えば臨床情報に加えて AβバAβの産生を抑制する薬として最初発に進み、期待も大きいが、ARIA を

イオマーカーと神経変性バイオマーにγセクレターゼ阻害薬の開発が進ん避けながらの用量設定となるため、有カーの両方が陽性であるものを区別しだが、最初の semagacestat は第Ⅲ相

効な用量設定を行えるかどうかが大きて、MCI due to AD – high likelihood

試験にて皮膚癌の発生のリスクの上昇な鍵となる。Aβワクチンの開発の歴などとする。preclinical AD は臨床的を認めたため、開発中止となった 15）。

史は抗体より古く、2001 年に Aβ全に正常、あるいは MCI の診断を満た

この副作用はγセクレターゼの基質の長を用いたワクチン AN1792 が治験さない程度の軽微な認知機能障害を認

一 つ、Notch を 介 し た も の と 考 え らに進んだが、髄膜脳炎の副作用のため

めるのみだが、AD のバイオマーカー

れ、Notch 切断を抑制しないγセクレ

開発中止となった 19）。現在では免疫陽性のものを指す。preclinical AD はターゼ阻害薬や、γセクレターゼ活性

原性の低い Aβの N 末を用いたワク

進行度に応じて 3 病期に分けられ、前を変えずに毒性の強い Aβ42 の産生チンの第Ⅱ相試験が行われている。

述のようにアミロイド仮説を仮定するのみ減らすγセクレターゼ調整薬も開タウを標的とする治療薬も開発されと、AD のバイオマーカーは Aβ→タ

発されたが、Notch を介した副作用をてきたが、現在のところ第Ⅲ相試験でウや神経変性の順に生じることを踏ま完全に防げないという理由で開発中止

有効性を示したものはない。細胞外に和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

神経変性疾患研究の最前線放出された病的なタウが正常な神経対象とした A4 study（Anti-Amyloidとも言える、新しい臨床研究が積みあ

細胞内に取り込まれ、正常なタウをtreatment in Asymptomatic Alzheimer’s

げられつつある。AD の研究の歴史は、

病的なものへと変質させる prion-likestudy）など preclinical AD を対象と間違いなく他の神経変性疾患の治療薬

propagation によってタウの病理の進し た 治 験 が 相 次 い で 開 始 さ れ た。

開発のモデルとなるだろう。

展が起こるという説が提唱されておDIAN-TU や API で は 被 験 者 数 が 限

り 20）、その抑制を目的とした抗タウられること、現在は主要評価項目とし〔参考文献〕

抗体が臨床開発に進み、関心を集めてて臨床的指標しか許容されていないいる。

が、preclinical 期には臨床症状の変化

新たな取り組み〜 preclinical
AD を対象とした治験が少ないことから、従来の治験より長い 3 年〜 5 年という追跡期間が設定されている。多額の費用がかかる、若い
被験者を対象にするため負担軽減の策

アミロイド仮説に基づいて開発されを練る必要がある、軽微な認知機能障た疾患修飾薬の臨床開発がうまくいっ

害を検出する尺度もまだ改良の余地がていない理由として、アミロイド仮説

ある、など先駆けであるがゆえの悩み

が正しくないためとする声はごく少数

は多いが、この革新的な治験に研究である。もちろん薬物側の改良点はあ者・一般の人とも大きな期待を寄せてるが、これまでの治験では適切な対象いる。その他、AD の臨床研究におけに投与できていないことが失敗の主因

る最新のキーワードとして、このようと考える研究者が多い。第一に、真にな 治 験 を 行 う た め の public private

対象とする病態を有する被験者を選択

partnership という新たな枠組み、多できているのかという問題があり、臨施設共同研究のデータを有効利用する

床的に重症度の軽い被験者を対象とすためのデータシェアリング、そのデーる治験では、バイオマーカーを用いたタを解析し効率的な治験の設計の助け

被験者の選択が行われるようになってと な る disease progression modeling

きた。第二に、対象とする病期が病態などが挙げられる。

を抑制するには遅きに失しているのではないかということである。疾患修飾

おわりに薬の治験の対象は、中等度 AD から
早期 AD、早期 AD から MCI へと徐々AD の研究の歴史をたどりながら、に早期化してきたが、臨床症状が出始

最新の研究を解説した。この 40 年間、

める MCI においても、Aβの蓄積は多数の研究者により活発に AD 研究

ほぼ天井に達しており、それなりの脳が行われ、特徴的な病理変化の主要構萎縮、すなわち神経細胞死が見られる

成成分の同定と遺伝性家系の病因遺伝状態であることを考えると、もっと病子の同定は、病態の解明につながり、態の軽いうちに介入するのが良いのでそれが疾患修飾薬の開発だけでなく、はと考えられるに至った。2013 年よバイオマーカーや診断基準といった臨り、家族性 AD の遺伝子変異の未発床的に有用なツールにもつながった。

症 保 因 者 を 対 象 と し た DIAN-trial

一方、同じだけ長い年月にわたって健unit（DIAN-TU）、API（Alzheimer’s

常者を含むコホートの縦断的臨床デー

Prevention Initiative）、アミロイドタと剖検の蓄積があり、そういった土PET 陽性の孤発性 preclinical AD を台の上に、基礎研究と臨床研究の融合

1）Thal, D. R. et al . : Neurology , 58, 1791-800（2002）.
2）Braak, H. et al . : Acta Neuropathol ., 112, 389404（2006）.
3）Montine, T. J. et al . ; National Institute ons Association : Acta
Aging ; Alzheimer’
Neuropathol ., 123, 1-11（2002）.
4）Goate, A. et al . : Nature , 349, 704-6（1991）.
5）Sherrington, R. et al . : Nature , 375, 754-60（1995）.
6）Levy-Lahad, E. et al . : Science , 269, 970-3（1995）.
7）Hardy, J. et al . : Science , 297, 353-6（2002）.
8）Roberson, E. D. et al . : Science , 316, 750-4（2007）.
9）Jonsson, T. et al . : Nature , 488, 96-9（2012）.
10）Jack, C. R. Jr. et al . : Lancet Neurol ., 9, 11928（2010）.
11）Bateman, R. J. et al . : Dominantly Inherited
Alzheimer Network : N. Engl. J. Med ., 367,
795-804（2012）.
12）McKhann, G. M. et al . : Alzheimers Dement .,7, 263-9（2011）.
13）Albert, M. S. et al . : Alzheimers Dement ., 7,
270-9（2011）.
14）Sperling, R. A. et al . : Alzheimers Dement .,7, 280-92（2011）.
15）D oody, R. S. et al . ; Alzheimer's Disease
Cooperative Study Steering Committee,
Siemers, E. et al . ; Semagacestat Study
Group : N. Engl. J. Med ., 369, 341-50（2013）.
16）Cai, J. et al . : EMBO Mol. Med ., 4, 980-91（2012）.
17）Salloway, S. et al . ; Bapineuzumab 301 and
302 Clinical Trial Investigators : N. Engl. J.
Med ., 370, 322-33（2014）.
18）D oody, R. S. et al . ; Alzheimer's Disease
Cooperative Study Steering Committee;
Solanezumab Study Group : N. Engl. J.
Med ., 370, 311-21（2014）.
19）Orgogozo, J. M. et al . : Neurology , 61, 46-54（2003）.
20）H olmes, B. B. et al . : J. Biol. Chem ., 289,
19855-61（2014）.

次回は、「アルツハイマー病（2）タウタ
ンパク質」の予定です。

当社では、アルツハイマー病研究関連試薬を取り扱っています。
詳細は当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/Alzheimer/index.htm）をご覧下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）13なるほど !!

ELISA

−基礎とコツ−

全４回
株式会社シバヤギ編

第１回 ELISA とは？
ELISAは免疫学的測定法のひとつ

次に、酵素反応によって発色する物質（色原性基質）の

ELISA は抗体を使った免疫学的測定法（イムノアッ
セ イ、Immunoassay） の ひ と つ で す。Enzyme-linked

溶液を加え、酵素反応を行わせると色原性基質は酵素の作用を受けて色素に変わります。

immuno-sorbent assay の頭文字をとっています。「酵素結

そこで反応停止液を加え酵素反応を止めてから色の濃合免疫吸着測定法」、「酵素免疫測定法」と訳されていま淡を 96 ウェルマイクロプレート用の比色計で測定します。読み方はエライザ／エライサ／イライザ／イライサとす。こうして固相化抗体に結合した抗原の量が色素とし様々ですが、エライザが多いようです。

て測定できることになります。比色定量の結果は吸光度

抗体は生体にとって異物で（absorbance）として表現されるので、標準品の測定結果

ある抗原が体内に入ることにから横軸に抗原濃度、縦軸に吸光度をとり検量線を描きま

よって免疫反応を起こした結す。この検量線を用い測定試料の吸光度から試料中の抗原

果 作 ら れ る タ ン パ ク 質 で す。

量を計算します。

イムノグロブリン（Ig）に属します。イムノグロブリンにはG（IgG）、M（IgM）、A（IgA）、
D（IgD）、E（IgE）のクラスがあります。イムノアッセイで使われる抗体は主として IgGです。
ELISA は、目的とする物質とだけ結合する「優れた特異的結合能」と「ごく微量の物質でも結合できる強い親和性」を持つ抗体を結合試薬として利用した測定法です。
図１．

ELISAでは抗体をどう利用するのか？
ここでは利用頻度が最も高いサンドイッチ ELISA につ

図１に示したサンドイッチ ELISA の実施方法はもっといて説明します。通常 96 ウェルマイクロプレートを使いも基本的な方法です。酵素の分子量はかなり大きいので抗ます。

体の結合に立体障害が生じる可能性があります。また 1 分

先ず、ウェルの表面に抗体を吸着させておきます（コーティング、coating とか固相化と言う）。この抗体は固相化抗体（キャプチャー抗体）と言われ、測定対象物質である子の抗体に多くの酵素を結合させることは困難です。
そこで別なタンパクに酵素を結合させて立体障害を少なくする方法が考えられました。

抗原を捉えるために使われます。図１では都合上、抗体が下の図２のように、第二抗体はビオチンで標識します。

1 個しか付いていないように描かれていますが、実際は数

ビオチンは分子量が非常に小さい物質です。ビオチンとは多くの抗体が吸着されています。抗体が固相化されたウェ

もともと生体に存在する生理活性物質ですが、これと非常

ルに抗原を含む溶液（標準品、または測定試料）を加え、に強い親和力で結合するタンパク質が卵白の中に含まれて抗体に抗原が結合するまでの時間放置します（一次反応）。

いるアビジンです。このアビジンに酵素を結合させ、抗原反応が終わったら余分な液を捨て、ウェルを洗います。こうすると固相化抗体に結合した抗原だけがウェルに残ります。
次に、固相化抗体が抗原を認識する場所（エピトープ）とは異なるエピトープを認識する抗体（第二抗体とか二次抗体、検出抗体と言う）を加えて、しばらく放置します。
この第二抗体にはあらかじめ化学的に酵素を結合（標識）してあります。
加えられた酵素標識第二抗体は固相化抗体に結合した抗原を認識し、それに結合します。その後、余分な酵素標識
第二抗体を洗い流します。

14

図２．

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

なるほど !!

ELISA

−基礎とコツ−と結合したビオチン標識第二抗体と反応させれば、立体障が分解され、生じた活性酸素が TMB を酸化します。この害を克服できます。またアビジンに結合させる酵素を増や結果できた青紫の色素は反応を停止するために加えられるすことにより増幅効果も期待できます。ELISA ではこの硫酸酸性下では黄色になり、450nm に吸収を持つようにような改善方法も用いられています。

なります。

本法は、抗体－抗原－抗体の形になるので、サンドイッ

吸光度の測定チ法と呼ばれています。つまり抗体がパンで抗原をハムと吸光度を測るには、TMB 由来色素の吸収波長の 450nm

考えるわけです。

での吸収を測定します。ウェルの均一性や、ウェルの酵素と色原性基質

キズなどの影響をキャンセルするために、副波長として

ELISA で良く用いられている酵素はペルオキシダーゼ

620nm（600 〜 650nm）の吸光度も求め、450nm の吸光と言う過酸化水素等を基質として酸化反応を触媒する酵素度との差を真の吸光度として扱います。

です。ペルオキシダーゼにはいくつかあります。今回は吸光度とは、比色定量の基盤となる光の透過と溶液中

HRP と呼ばれる西洋わさび（Horseradish）由来のペルオの物質濃度との関係を示すランベルト−ベールの法則

キシダーゼの主な性質を表１に要約しました。

（Lambert-Beer’s low）によって決められる数値のことです。

ここでひとつご注意願いたいのは、検体に存在する可能

吸光度 ＝ log10（Io/I）=εlc

性のある阻害剤です。ペルオキシダーゼの阻害剤は、表１にあるように CN-、S2-、F-、N - などです。特に血液試料

Io：入射光、 I：透過光、

3

ε：モル吸光係数、l：吸収層（cm）、を採取するときに採血管がフッ素や NaN3 でコーティング

c：濃度（M）

されているものを使用することがあります。ELISA では
検体を抗体と反応させた後に洗浄するので、阻害剤が決定

入射光に対する透過光の割合、即ち透過率の逆数の対数的な酵素活性抑制を起こすほどではありませんが、洗浄後が吸光度（absorbance）になります。

わずかに残存しているものが酵素をいくらかでも抑制すれ

例えば、光が 10% しか透過しないときには、吸光度はば、発色の低下となって現れる可能性があります。これら

100/10 = 10、log10 = 1 となります。50% の透過率では、の採血管は使用しないことが望ましいです。

100/50 = 2、log2 = 0.301 となります。吸光度 3.0 は透過

HRP の色原性基質として使用されているのは、TMB

率 0.1% ということになります。プレートリーダーの性能と言われる、3,3’,5,5’- テトラメチルベンジジン（3,3’,5,5’-にも寄りますが信頼できる限界付近を事前に決めておくこ

Tetramethyl benzidine）です。HRP によって過酸化水素とをお薦めします。

表１．

表２．

ペルオキシダーゼ（Hydrogen peroxidase，Horseradish peroxidase，HRP）
色原性基質＋ H2O2 ⇔ 酸化型色素＋ 2H2O
反 応
起 源
西洋わさび（Horseradish）
分子量、至適 pH 40,000，pH 6.5
基質特異性
色原性基質（水素供与体）については特異性なし。
過酸化物としては H2O2，CH3OOH，C2H5OOH のみ阻害剤と活性化剤 阻害剤：CN-、S2-、F-、N3-（抗凝固剤として用いられるフッ素イオンと保存料として用いられる NaN3 に注意！）
安定性
乾燥、冷蔵状態で数年間、水溶液で冷蔵 1 年間
安定

透過率（%） 90
吸光度
0.046

80
0.097

次 回 は、「 第 ２ 回

50
0.301

10
1.000

1
2.000

0.1
3.000

ELISA の 操 作 法 と そ の ポ イ ン ト（前編）」の予定です。
本記事は、若林克己著「ELISA A to Z」（株式会社シバヤギ発行）
をもとに、株式会社シバヤギで編集したものです。

〜『イムノアッセイ』の測定技術習得をサポートします〜
教材／研修用／技術評価用

ELISAトレーニングキット
ELISA トレーニングキットは、ELISA 測定を始められる方、ELISA 測定の技量を確認したい方、測定施設内 / 間で技術検定を実施したい方向けの製品です。
コード No.
639-31581

メーカーコード
AKRBS-TR2

品
ELISA training Kit

名

容 量
1kit

希望納入価格（円）40,000

詳しくは、p.19 をご覧下さい。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）15

ew Products
空気中で不安定な化合物が使いやすくなりました !!

O

O

EtO

アルキルホスフィン

OEt

+

O

EtO

H

+

EtOH

OEt
p a : 29.8**

p a : 16.4**

低水分 塩基溶液シリーズ

各種溶媒における pK a 値

有機合成化学で使用する反応剤は、空気中の水分や酸素と反応し活性に大きな影響を与えることが知られていま

pK a の値が高い方が、強力な塩基として作用します。

す。このような反応剤は、秤量中の短い時間で失活・潮解p a

するため、不活性ガス雰囲気下（グローブボックス内な基質ど）で秤量を行う必要があります。この度、このような不便さを解消する溶液タイプを発売しました。各容量ともシH-butane

リンジ針で抜き取ることができるため、空気中の水分や酸素と触れることなく使用することができます。

特

O

EtO

CH4

H
H

長

●空気中の水分や酸素と触れずに、使用することができる

H
H

H

PhH

●取扱易い溶液タイプ

試薬抜き取り方法

NH3

H

図のように N2 または Ar ガスを吹き

N
H

H

p a
基

H2O

DMSO

53**

ー

-BuOH

48**

56**

DBN

43**

ー

DBU

38**

41**

DABCO

〜36**

41*

DMAP

質

O

H

H2O

DMSO

17.0**

32.2*

ー

ー

17.0**

12**

2.97,
8.82**

2.97,
8.93**

9.2**

ー

N
N
H
N
N
H

込みながら、シリンジにて試薬を抜き

N
N
H

H

NMe2

取って下さい。

H2

H

H

N
H

＊p a table（Bordwells' group）: http://www.chem.wisc.edu/areas/reich/pkatable/（2016/12/27 現在）＊＊p a table（Evans' group）: http://evans.rc.fas.harvard.edu/pdf/evans̲
pKa̲table.pdf（2016/12/27 現在）

規 格 例 1.0mol/L t-BuOK, THF 溶液■ アルキルホスフィン

アルキルホスフィン配位子は、さまざまな金属と錯体を

試験項目

規格値

試験項目

規格値

外観

試験適合

濃度

0.8〜1.1mol/L

IR（ATR法）

試験適合

カリウム

試験適合

密度
（20℃） 0.903〜0.907g/mL形成し、カップリング反応に利用されます。本シリーズで水分0.1％以下は、特に空気と容易に反応するホスフィンをラインアップ
しました。

コード No.

品

名

規格

容量

コード No.

品

名CAS No.

規格

容量 希望納入価格（円）NEW

206-20481

3mol/L Trimethylphosphine
Tetrahydrofuran Solution 危

59409-2

有機
50mL
合成用

30,000NEW

205-20451

1mol/L Tri-n -butylphosphine危
Toluene Solution

99840-3

有機
50mL
合成用

17,000NEW

208-20441

1mol/L Tri-t -butylphosphine 13716- 有機
50mL
危Hexane Solution
12-6 合成用

49,000■ 低水分塩基溶液

有機塩基化合物は有機合成において重要な反応剤の一つ

で、基質の pKa を基に適切な反応剤を使用します。この度、潮解しやすい塩基化合物を低水分、高活性な状態でラインアップしました。

7,000
23,000
6,000
12,000
6,000
12,000043-34201 0.5mol/L 4-Dimethylaminopyridine
有機 100mL
NEW 045-34205
Tetrahydrofuran Solution【DMAP】 危 合成用 500mL

9,500
35,000NEW…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

16

和光純薬時報希望納入価格（円）128-06651 1.0mol/L Lithium t -Butoxide,
有機 50mL
NEW 124-06653
Tetrahydrofuran Solution【t -BuOLi】 危 合成用 250mL
NEW 192-18241
1.0mol/L Sodium t -Butoxide
有機 100mL
NEW 194-18245
Tetrahydrofuran Solution【t -BuONa】 危 合成用 500mL
NEW 169-27901
1.0mol/L Potassium t -Butoxide
有機 100mL
NEW 161-27905
Tetrahydrofuran Solution【t -BuOK】 危 合成用 500mLNEW
047-34221 1.0mol/L 1,5-Diazabicyclo[4.3.0]有機 100mL
5-nonene Tetrahydrofuran Solution
合成用
NEW
500mL
049-34225 【DBN】
危
1.0mol/L
1,8-Diazabicyclo[5.4.0]NEW
042-34151
有機 100mL
undec-7-ene Tetrahydrofuran Solution
合成用
NEW 044-34155
500mL
危
【DBU】
1.0mol/L 1,4-Diazabicyclo [2.2.2]
NEW 040-34211
有機 100mL
octane Tetrahydrofuran Solution
合成用
NEW 042-34215
500mL
危【DABCO】
NEW

Vol.85, No.2（2017）

11,00040,0009,000
33,0009,500
35,000ew Products
高収率・高立体選択性を実現 !!
有機分子触媒

この春、合成・材料及び分析分野のホームページをリニューアルします

VIP

本触媒は、不斉アルドール反応、不斉マイケル付加反

各製品情報が見やすく探しやすくなります。

応、不斉ヒドロホスホニル化反応などの不斉反応に使用す「合成・材料」ページではサイエンスライターのコラム

ることができます。アミノ酸のバリンを原料とするためを閲覧、「分析」ページでは HPLC アプリケーションデー

VIP（= Valine-derived IminoPhosphorane）とし、窒素上タを検索いただけます。是非ご活用下さい。

に置換基を持たないジアミンからは M 体、メチル基をも［合成・材料］

つものからは P 体の塩が生成します。
Ph

Ph

H
N

H

特

P

N
H

H

H
N

H

Me

Me

N

N

H

P

N
H

Ph

Ph

Ph

Ph

Cl
-VIP・HCl

N
H

N
H

Ph

Ph

Cl
-VIP・HCl【合成・材料】http://labchem.wako-chem.co.jp/synthesis/

長【分析】http://labchem.wako-chem.co.jp/analysis/●収率、立体選択性、共に優れた不斉合成用触媒

反 応 例

追加品目のお知らせ
H

O
EtO2C

P
（OMe）
2

1
HO Bn
+
RCHO
（5 eq.）
2

Me
N
N
H

Ph
Ph

Me
P

N
N

ポジティブリスト関連標準品

H

当社では、ポジティブリスト制度の対象となる農薬標準PhPh（10 mol%）

EtO2C

下記品目を新たに発売しました。

R
HO Bn 3

農薬標準品

収率 [%][b]syn/anti[c]エナンチ
オマー比[d]

C6H5

3a

71

> 30:195:5

22-naphthyl

3b68> 30:1

94.5:5.5

3

2-FC6H43c56> 30:1

94:6

4

2-ClC6H4

3d64> 30:1

95:5

5

3-NCC6H43e89> 30:1

94:6

6

3-BrC6H4

3f

87> 30:1

95:5

7

4-ClC6H43g

82> 30:195:5

8

4-BrC6H4

3h

91> 30:1

95.5:4.5

9

4-MeO2CC6H4

3i

89> 30:1

97:3

1[a] 本 反 応 は 基 質 0.10mmol に 対 し て 5.0 等 量 の ア ル デ ヒ ド を 用 い、
2-MeTHF 中、ー 50℃、20 時間の反応条件で実施した。[b] 単離生成物の収率。[c] 未精製反応物に対して 1H NMR 測定を行い、割合を決定した。
[d] CHIRALPAK AD3 カラムを使用し、割合を決定した。

〔参考文献〕
１）Corbett, M. T., Uraguchi, D., Ooi, T. and Johnson, J. S. : Angew.

Chem. Int. Ed ., 51 , 4685（2012）.
コード No.

品

名■フルベンダゾール代謝産物 R35475 標準品■メタアルデヒド標準品

[a]

生成物

R

品、動物用医薬品標準品を品揃えしています。

OPO3Me22-MeTHF, -50℃, 20 h

表．高立体選択的アルドール反応
No.

［分析］

規

格

容量

希望納入価格（円）226-02381 P -VIP・HCl

有機合成用

50mg

18,000NEW

229-02371 M -VIP・HCl

有機合成用

50mg

16,000■ゲンタマイシン C1 標準品■イプロニダゾール標準品■ロメフロキサシン塩酸塩標準品
コード No.

品

名規

Flubendazole Metabolite
NEW 069-06671
R35475 StandardNEW
130-18741 Metaldehyde Standard
NEW079-06591 Gentamicin C1 Standard

NEW

098-07261 Ipronidazole StandardNEW

122-06671

Lomefloxacin Hydrochloride
Standard

格

容量 希望納入価格（円）

高速液体クロマト
100mg 30,000
グラフ用
残留農薬試験用 100mg 5,000
高速液体クロマト
50mg 23,000
グラフ用
高速液体クロマト
100mg 30,000
グラフ用
高速液体クロマト
100mg 8,000
グラフ用

随時、当社 HP のリストに発売品目を追加・更新しています。詳細は、当社 HP の「ポジティブリスト関連品目」
リストをご覧下さい。
当社試薬 HP →カテゴリーから選ぶ→分析・環境→食品分析→
01. 残留農薬・動物用医薬品（ポジティブリスト制度）→ 1. ポジ
ティブリスト制度対応 取扱い品目一覧（16.07）
和光 ポジティブリスト

検索

➡

NEW

動物用医薬品標準品…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）17

ew Products
酸

金属含量・パーティクルを保証

類

コード No.

電子工業用 溶媒・酸

品

名

規

087-10361 Hydrochloric Acid
143-09741 Nitric Acid
（1.42）
194-18321 Sulfuric Acid

パーティクルや金属含量を抑えた高純度の溶媒、酸類です。電子工業分野での試験研究にご使用いただけます。1
本からの購入が可能で、使用期限は製造から 12 か月（硝格

容量 希望納入価格（円）

電子工業用
電子工業用
電子工業用

1kg
1kg
1kg

2,200
2,400
2,000

ダイオキシン類測定用

酸は 24 か月）です。

プレセップ ®55% 硫酸シリカゲル

規 格 例
試験項目
外観
（APHA）

プレセップ ®10% 硝酸銀シリカゲル

1- メチル -2- ピロリドン

塩酸

無色〜わずかに微黄色、澄明の液体（50以下）

無色澄明の液体

近年、臭素化ダイオキシン類の人1.032〜1.037
100ppm以下
1.468〜1.471−−−
5ppm以下1ppm以下−10ppm以下−−−−−
99.0%以上−−
10ppb以下−−
5ppb以下−−1ppb以下2ppb以下10ppb以下
20ppb以下−−−
50ppb以下
1ppb以下1ppb以下−10ppb以下−
100個/mL以下
300個/mL以下−−−
0.2ppm以下
10ppm以下2ppm以下
−
−
試験適合
−
試験適合
1ppm以下10ppm以下
1ppm以下1ppm以下−35.0〜37.0%
1ppb以下200ppb以下
5ppb以下100ppb以下
300ppb以下
1ppb以下1ppb以下2ppb以下10ppb以下100ppb以下
50ppb以下
5ppb以下200ppb以下
5ppb以下500ppb以下
10ppb以下
20ppb以下
20ppb以下
50ppb以下
5ppb以下試験適合−への健康影響などに関する調査や施

比重（20/4℃）
水分
屈折率n D20
硫酸塩
（SO4）
蒸発残分
強熱残分
灰分
塩化物
（Cl）
遊離塩素
遊離アミン
（CH3NH2として）よう素還元性物質
亜硫酸塩
（SO3）
臭素
（Br）
よう化物
（I）
アンモニウム
（NH4）
含量
（GC）
濃度
銀
（Ag）
アルミニウム
（Al）
ひ素
（As）
バリウム
（Ba）
カルシウム
（Ca）
カドミウム
（Cd）
コバルト
（Co）
クロム
（Cr）
銅
（Cu）
鉄
（Fe）
カリウム
（K）
リチウム
（Li）
マグネシウム
（Mg）
マンガン
（Mn）
ナトリウム
（Na）
ニッケル
（Ni）
鉛
（Pb）
ストロンチウム
（Sr）
亜鉛
（Zn）
水銀
（Ag）
パーティクル（0.5μm以上）
パーティクル（0.3μm以上）設などからの排出実態調査が進められています。
この度、ダイオキシン類を含む
サンプルのクリーンアップにお使いいただけるプレセップ ®55% 硫酸シリカゲル、塩素化ダイオキシ
ン、臭素化ダイオキシンの分離が可能なプレセップ ®10% 硝酸銀シ
リカゲルの販売を開始しました。

特右：55％硫酸シリカゲル
左：10％硝酸シリカゲル

長●外装に防湿性アルミ袋を採用●保管中の品質劣化が少なく、品質が安定

製品情報●カラム材質：ガラス●ガラス管サイズ：直径 10 . 6 mm ×長さ 150 mm〈カラム組成〉

ガラス管
55%硫酸シリカゲル
or
10%硝酸銀シリカゲル

円柱状脱脂綿
円柱状脱脂綿
テフロン製シール

溶媒類
コード No.
NEW
NEW
NEW
NEW
NEW

012-26821
056-09201
133-18731
139-18691
169-28121

品

名危Acetone危Ethanol危Methanol
1-Methyl-2-pyrrolidone 危危
2-Propanol

規

格

電子工業用
電子工業用
電子工業用
電子工業用
電子工業用

容量 希望納入価格（円）

1L
1L
1L
1L
1L

2,000
4,310
1,700
8,000
3,000

コード No.

品

名

規

格

容量 希望納入価格（円）Presep® 55% Sulfuric AcidNEW
293-35581
impregnated Silica Gel

ダイオキシン類
10本
測定用

照

会

Presep® 10% Silver Nitrateimpregnated Silica Gel

ダイオキシン類
10本
測定用

照

会

NEW

296-35571…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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18

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

ew Products『イムノアッセイ』の測定技術習得をサポート
教材／研修用／技術評価用

コード No.

メーカーコード

名639-31581 AKRBS-TR2 ELISA training Kit

ELISAトレーニングキット

容量

希望納入価格（円）

1kit

40,000ELISA を行うすべての人に読んでほしい

ELISA -A to Z-

ELISA トレーニングキットは、ELISA 測定を始められる方、ELISA 測定の技量を確認したい方、測定施設内 / 間
で技術検定を実施したい方向けの製品です。測定対象はウ
シアルブミン（BSA）です。標準品、ポジティブコント
ロール（PC）を測定し、得られた標準曲線から PC 濃度を求めます。各標準品や PC の真度、C.V. 値を比較することにより測定技量の確認ができます。初心者は測定範囲を
1.56 〜 50ng/mL の間で設定し、上級者は 0.78 〜 50ng/mLの間で設定し、定量限界を比較することもできます。

特品

増補改訂第 5 版のご紹介
シバヤギ技術顧問をされていた、群馬大学名誉教授の若林 克己先生がELISA の原理、実技、測定技術向上のコツを詳しく解説。
これから ELISA を始める人はもちろん、経験を積んだ方にもぜひ読んでほしい一冊。

長

実習や教育の解説にも役立ちます。

●短時間で測定可能（総反応時間：2.5 時間）

本キット購入者でご希望の方は、当社営業員もしく●すべての試薬が溶液タイプで即座に使用可能

は代理店までご請求下さい。

●環境に優しい防腐剤を使用

リンパ管・腫瘍細胞マーカー抗体● 1 つのキットを 3 人（3 組）で使用可能●高い再現性

精抗ポドプラニン，モノクローナル抗体度

膜一回貫通型糖タンパク質であるポドプラニン（PDPN）
は、リンパ管内皮や肺胞上皮のマーカーとして知られる●アッセイ内変動試験（5 重測定、4 検体）

他、脳腫瘍、悪性中皮腫、精巣腫瘍や種々の扁平上皮がん

C.V. 値は 10％未満などで過剰発現し、悪性度と相関性があることが知られて●アッセイ間変動試験（2 重測定、3 検体、3 日間）

います。ポドプラニンは細胞外領域（N 末端）に PLAG

C.V. 値は 10％未満

ドメイン（PLAG1-3）を持ち、PLAG3 を介して血小板上のレセプターである CLEC-2 と結合し、血小板凝集を引き起こす機構が見出されています。近年、PLAG4 ドメイン
※ BSA のコンタミネーションに注意しながら測定を行って下さい。

方が関与することが示唆されています。
当社では複数のエピトープに対する抗ヒトポドプラニン
抗体を取り揃えています。アプリケーションによって使い分けて、または組合せてご使用下さい。

キット内容●抗体固相化 96 ウェルプレートが報告され、CLEC-2 との結合には PLAG3、PLAG4 の両

96 ウェル（8 × 12）× 1 枚●アルブミン標準溶液（500 ng/mL）

200 μL × 1 本●緩衝液

60 mL × 1 本●ペルオキシダーゼ結合抗アルブミン抗体 200 μL × 1 本●発色液（TMB）

12 mL × 1 本●反応停止液（1 mol/L H 2 SO 4）

12 mL × 1 本●濃縮洗浄液（10 ×）

100 mL × 1 本●プレートフレーム●プレートシール●希釈ウシ血清（T）

また、イヌ、マウス、ウサギ、ラットに動物種特異性が高いモノクローナル抗体を取り揃えています。

ヒトポドプラニンに対する抗体認識部位

2個
3枚
1 mL × 1 本※ウシ血清は BSE 発生国以外の材料を使用

詳しくは当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/
product/life/PDPN/index.htm）をご覧下さい。

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）19

ew Products
使いやすい滅菌済みの溶液品

コード No.

品

062-06661

bFGF 溶液，MF

068-06663

bFGF（Fibroblast Growth Factor（basic））は、ヒト ES/名規

bFGF Solution, MF

格

容量

細胞培養用

希望納入価格（円）50μL

80,00050μL×4260,000※原薬等登録原簿（MF）への登録は、厚生労働省（独立行政法
人医薬品医療機器総合機構）による、品質及び安全性に関する確認または評価が行われたことを意味するものではありません。

iPS 細胞培養時に未分化性を維持させながら、細胞を増殖させるために必須の因子とされており、ヒト ES/iPS 細胞
をはじめ各種幹細胞の維持培養に使用されています。本品
は溶液品のためそのまま培地に添加して使用できます。無菌保証した製品のためコンタミリスクを抑えられます。

間葉系幹細胞の分化能マーカー

当社は科研製薬株式会社が販売する褥瘡・皮膚潰瘍治療剤「フィブラスト®

スプレー」の有効成分である組換え型

rPSL1a-FITC

ヒト bFGF の提供を同社より受け、再生医療研究用試薬

rPSL1a は、アミヒラタケ（Polyporus squamosus ）由として販売しています。2016 年 5 月に原薬等登録原簿（マ来レクチンの組換え体で、α2-6 シアル酸を認識します。

スターファイル：MF）にその他（培地添加物）区分とし

ヒト脂肪由来間葉系幹細胞やヒト骨髄由来間葉系幹細て登録されました。

高い継代初期の間葉系幹細胞に反応性を持ちますが、分化長能が低い継代後期の間葉系幹細胞やヒト皮膚線維芽細胞に● Ready-to-Use の溶液品

は反応性を持ちません。そのため、rPSL1a はヒト間葉系●製造プロセスでの無菌保証

幹細胞の分化能を評価するマーカーとして使用できます。

● MF 登録済み※●生物由来原料基準クリア

デ ー タ

製品概要

100

●タンパク質濃度：0 . 9 〜 1 . 1 mg/mL（初回実績値 1 . 0 mg/mL）

8.00×10 580% of Max●エンドトキシン：10 EU/mg 以下●比活性：50 万国際標準単位 /mg 以上（BHK- 21 細胞を用いたバイオアッセイ法による）

6.00×10 5

60

MFI

特

胞、軟骨組織由来軟骨細胞において、rPSL1a は分化能が404.00×10 5

2.00×10 5
20

0

0
10

3

10

4

10

5

10

6

10

継代初期（P7）：分化能高い＜培地組成＞StemSure® hPSC培地Δ+
35ng/mLbFGF溶液, MF

StemSure® hPSC 培地Δ［コード No.197-17571］に終濃度が35ng/mL となるように本品を添加し、ヒト iPS 細胞 201B7 株
を 5 継代培養した。分化したような形態の細胞は観察されず、安定して培養できた。また、4 継代目（P4）もしくは 5 継代目（P5）の 細 胞 を 用 い て、 各 種 未 分 化 マ ー カ ー（OCT3/4, rBC2LCN,
NANOG, SSEA4）の発現を確認した。

〔参考文献〕
１）Hasehira, K., Hirabayashi, J. and Tateno, H. : Glycoconj. J .,（2016）,inpress.
２）Tateno, H., Saito, S., Hiemori, K., Kiyoi, K., Hasehira, K., Toyoda, M.,
Onuma, Y., Ito, Y., Akutsu, H. and Hirabayashi, J. : Glycobiology , 26 ,1328（2016）.
コード No.
近日発売

和光純薬時報Control

継代後期（P15）：分化能低い品

名180-03351 rPSL1a-FITC

規格

フローサイトメトリー用容量

希望納入価格（円）100μL

70,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

20

BSA
-FITC

ヒト多指症由来間葉系幹細胞 Yub622 について、分化能が高い培養初期（P7）の細胞と分化能が低い培養後期（P15）の細胞を
rPSL1a-FITC と反応させ、フローサイトメトリーを用いて反応性を解析した。継代後期の細胞に比べ、継代初期の細胞が強く蛍光染色されていることが分かった。
（データご提供：国立研究開発法人 産業技術総合研究所 創薬基盤研究部門 舘野 浩章 先生）〔参考文献〕
１）Akutsu, H. et al : Regenerative Therapy , 1 , 18（2015）.

rPSL1a-FITC

7

Vol.85, No.2（2017）

ew Products
尿素

オーストラリア産 高品質 FBS

Lactate Dehydrogenase（LDH）

Aspartate Transaminase（SGOT）

SELBORNE 社 ウシ胎児血清（FBS）

Alanine Transaminase（SGPT）●化学試験項目（実測値）

SELBORNE 社は、BSE 非発生国であるオセアニア産のグルコース カルシウム りん ナトリウム カリウム

牛胎児血清（FBS）をはじめとした牛由来製品を取り扱う製造会社です。
屠畜場と徹底した個体管理を行うことで、最終製品で

コード No.

メーカーコード

品

名あるウシ胎児血清（FBS）に関して、どの農場から採取を554-04855

FBS-04

FBS オーストラリア産

容量

希望納入価格（円）

500mL

照 会

行ったかをトレースすることが可能です。

糖尿病、脂肪酸合成の研究に
マロニル-13C3 コエンザイムAリチウム

製造施設
オーストラリア タスマニア島

本品は、マロニルコエンザイム A（CoA）リチウムの安定同位体です。

ローンセストン近郊

特

マロニル CoA は脂肪酸生合成系において、アセチル

長

CoA からカルボキシラーゼによって変換されます。この● EDQM、FDA 認可の cGMP 製造施設で製造変換を阻害することによる、インスリン感受性亢進作用を● 0.1 μm のフィルターを用いて 3 回のろ過滅菌を実施利用した糖尿病治療剤が開発されています。また、心臓の● 9CFR 品質規格に則した品質試験を実施

エネルギー代謝への関与が示唆されおり 1）、心疾患研究の● BVDV 陰性であることを確認

標的として注目されています。
生体内での代謝、産生物解析の指標にご利用下さい。

提出書類●牛出荷申告書（National Vendar Declaration）

アセチルCoA※農場が牛を屠畜場へ出荷する際に記入するシート●屠畜シート（Kill Sheet）

マロニルCoA

脂肪酸合成

アセチル CoA カルボキシラーゼ※牛の健康チェックをするためのシート（生前検査）●血液出荷表・納品書●製造記録（血液遠沈〜凍結）
NH2●製造記録（フィルターろ過〜ボトリング）●試験成績書●出荷伝票・健康証明書

O

HO※日本への出荷伝票・ウシ由来製品の健康証明書●輸入検査申請書

O

P

O

O

O

H
N

C 13 C
S
C
OH
13

13

O

OH

製品概要

無菌試験（ph Eur 2.6.1 ）●外観：白色〜わずかにうすい褐色、結晶〜粉末

エンドトキシン試験：≦ 10EU/mL●水溶状：試験適合

マイコプラズマ試験（ph Eur 2.6.7 ）●含量（HPLC）：実績値報告（91.5% ロット No.TWR5994）●ウイルス試験（9CFR 113.53 ）pH：6.8-8.1 浸透圧：260-330mOsm/kg●生化学試験

CH3
H
N

C2113C3H38N7O19P3S・nLi（C2113C3H38N7O19P3S＝856.56）

試験検査項目

●物性試験

P OH
O
O
O OH
O OH
P

nLi

●動物検疫検査合格通知書●輸入許可通知書●微生物試験

OH O

O
N

N

※ 9CFR 品質規格に則した品質試験

CH3

N

N

〔参考文献〕

ヘモグロビン：≦ 25mg/dL

１）Fillmore, N. et al . : IUBMB Life , 66, 139（2014）.

トータルプロテイン：30-45g/dL●生化学試験（実測値）

コード No.

アルブミン αグロブリン βグロブリン γグロブリン
トータルビルビリン

コレステロール

クレアチニン

NEW

136-18721

品

名

規

格

容量

Malonyl- C3 Coenzyme A
薬理研究用 10mg
Lithium Salt
13

希望納入価格（円）75,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）21

ew Products■ 細胞形態

血清含有培地と同等の抗体産生能

ハイブリドーマ用
無血清培地

ハイブリドーマ用無血清培地
本品は、ハイブリドーマ培養用の無血清培地です。抗体産生にご使用いただけます。

特長●血清成分含有培地と同等の細胞増殖能

デ ー タ

培養
8日目
100

本品で培養したハイブリドーマは、血清入り培地と同様の細胞形態を示した。

80
生存率
（％）

生細胞密度
（×104 cells/mL）■ 生細胞密度、生存率60

コード No.

40

4
培養日数

6

0

8

▲ ハイブリドーマ用無血清培地◆ RPMI-1640 + 10% FBS

■

品

名

Hybridoma Serum-Free
NEW 081-10381
Medium

20
2

培養
2日目

培養
6日目

●血清成分含有培地と同等の抗体産生能

0

RPMI-1640 +10% FBS

培養
4日目●無血清培地

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

他社品
（血清成分含有品）

0

2

4
培養日数

6

規

格

容量 希望納入価格（円）

細胞培養用

1L

12,0008

他社品（血清由来成分含有）

実験条件
播種細胞数：1.0×105 cells/mL
培養スケール：25mL
培養条件：37℃、5%CO2

CRISPR/Cas9 システムによるゲノム編集ツール
Cas9 タンパク質
ニッポンジーンでは S. pyogenes 由来の Cas9 タンパク質と、Cas9 タンパク質に対するマウスモノクローナル抗

本品は血清成分含有培地と同等の生細胞密度、生存率を示した。

体をご用意しています。Cas9 タンパク質は核移行シグナル（NLS）を有しており、合成したガイド RNA（gRNA）と組合せることでゲノム編集に利用することができます。

■ 抗体産生量

高純度・高品質（野生型Cas9）■ Cas9 Nuclease protein NLS

16
14gRNA と相補的に結合した任意の DNA 配列を二本鎖切IgG（μg/mL）

12

断し、DNA 損傷修復機構を利用して遺伝子変異を引き起10こすことができます。

8
6

特

4

● DNA を二本鎖切断

2
0

長

2

4

培養日数

■ハイブリドーマ用無血清培地■RPMI-1640 + 10% FBS

68●低エンドトキシン（1 EU/µg 未満）● NLS 付加でin vivo 実験でも高効率■他社品（血清由来成分含有）

実験条件
播種細胞数：1.0×105 cells/mL
培養スケール：25mL/ フラスコ
培養条件：37℃、5%CO2、8 日間培養

培養上清を各培養日数ごとに回収し、ELISA 法により抗体産生量を測定した。

Cas9

gRNA

本品は血清成分含有培地と同等の抗体産生能を示した。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

22

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）［次頁に続く］ew Products
高精度なゲノム編集に（改変型Cas9）■ Cas9 Nickase protein NLS

抗体や Fc 融合キメラタンパク質の精製に最適す。Nickase 型 Cas9 は DNA の一本鎖のみを切断しニッ

KANEKA KanCapATM プレパックカラムは、抗体及びクを入れるため、欠損や挿入が起こらずオフターゲット効

Fc 融合キメラタンパク質の精製に使用可能なプレパック

果を抑制します。

カラムです。イムノグロブリンの Fc 領域に特異的に結KANEKA KanCapATM プレパックカラム

ゲノム編集の際は同時に 2 種類の gRNA を必要としま

特合する新規アルカリ耐性プロテイン A を固定化したセル

長

ロース担体が充てんされています。

● DNA の一本鎖のみを切断

スクリーニング、初期開発プロセス、小スケール精製な● 2 種類の gRNA を用いることでオフターゲット効果を抑制

どにご使用下さい。

● NLS 付加でin vivo 実験でも高効率

特長●アルカリ耐性及び長寿命

標的配列●溶出 pH を最適化
●高吸着容量●高 流速操作への対応及び製造スケールへ簡単なスケールアップが可能●再生利用可能● Ready to Use

転写抑制研究に（不活性型Cas9）■ dCas9 protein NLS■本品に使用しているプロテイン A（改変型プロテイン A）概要

dCas9 は、gRNA を介して標的配列へ結合することがサブ結合できます。転写開始部位の下流に結合すると転写伸長を阻

野生型プロテインA
リガンド

害するなど、転写抑制などの研究への応用が期待されます。

Fab
メイン結合

Fc

変異導入

特

長

● DNA の切断活性をもたない

多量体化● gRNA により標的配列を認識し結合

KANEKAプロテインAリガンド● NLS 付加でin vivo 実験でも高効率

メイン結合

Fc

1）Cドメイン 5 量体タンパク質
2）アルカリ耐性の向上
3）Fab 領域への非特異結合の減少
RNA
Polymerase

最適pH条件下でシャープに抗体を溶出
コード No.

コード No.

品

名濃度

容量 希望納入価格（円）313-08421 Cas9 Nuclease protein NLS

1µg/µL 50μg

60,000

Cas9 Nuclease protein NLS
317-08441（high conc.）

3µg/µL 75μg

75,000319-08521 Cas9 Nickase protein NLS
316-08531 dCas9 protein NLS

3µg/µL 75μg
3µg/µL 75μg

75,00075,000品

名規111-01081
KANEKA KanCapATM
NEW
117-01083
Prepacked Column
NEW 115-01084
NEW

格

容量

希望納入価格（円）1mL
22,00060,000
遺伝子研究用 5mL
5×5mL 240,000

カラム性能を維持し微生物増殖を防ぐため、未使用の本品の保管については説明書に従って下さい。またシステムから取り外した
本品の両端を Inlet stopper と Outlet stopper で堅く締めて保管して下さい。その際、空気が入らないようご注意下さい。

関連商品

関連商品

安価でバルク対応可能なビーズタイプもご用意しています。

Cas9モノクローナル抗体
コード No.

品

名310-08431

Anti-Cas9 Monoclonal
Antibody

濃度

容量 希望納入価格（円）1µg/µL 50μg

55,000

コード No.

品

名114-01071 KANEKA
110-01073 KanCapATM
118-01074

規

格

容

量

希望納入価格（円）2mL（net 1mL） 10,000
遺伝子研究用 10mL（net 5mL） 40,000
50mL（net 25mL） 150,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）23

ew Products
植物科学新ツール 植物透明化試薬
ClearSeeTM
ClearSeeTM は、1）固定、2）洗浄、3）透明化の 3 ステッ
プで簡単に植物組織を透明にすることが可能な試薬です。
植物科学の新しいツールとして、蛍光タンパク質や蛍光色

サンプルのまわりに除かれたクロロフィルが見える様子（1 〜 2 日後）

素を用いた既存のイメージング技術と合わせることで、細胞レベルの現象と固体全体をつなぐシステムの解明などが期待されます。

透明になったシロイヌナズナの葉・幼植物（3 〜 5 日後）■ 他植物透明化例
左：処理なし右：ClearSeeTM 処理後処理なし ClearSeeTM

処理なし

トレニア

処理なし ClearSeeTM

イネ

トマト

（本ページ掲載データご提供：名古屋大学大学院理学研究科 栗原大輔先生・水多陽子先生）

ClearSeeTM

ペチュニア

使 用 例

キュウリ

タバコ

■ シロイヌナズナの葉の透明化
詳細な方法は、製品に添付されている製品説明書をご確認下さい。

■ 観察例

１．固定
４% パラホルムアルデヒド溶液を用いて、サンプルを

核局在蛍光
タンパク質

明視野

自家蛍光
+
核局在蛍光
タンパク質

固定する。
透明化処理前

透明化処理後固定液に浸けたシロイヌナズナの葉・幼植物

２．洗浄
固定液を除き、1 × PBS を 1 mL 加えて 1 分間静置する。
1 × PBS を除き、新しい 1 × PBS を 1 mL 加えて 1 分間静置する。この作業を 2 回繰り返す。

透明化したシロイヌナズナの葉は、明視野では透明に見え、クロロフィ
ルの赤い自家蛍光がなくなる。丸ごと葉が観察できるので、内部にある維管束の蛍光タンパク質も観察できる。スケールバーは200μm。
コード No.

３．透明化処理品

名031-25151 ClearSeeTM
TM

1 × PBS を除き、ClearSee

規格

植物透明化用容量

希望納入価格（円）50mL

20,000容量

希望納入価格（円）

100g

2,150

500g

4,400

1mL×10A

9,000

を 1.3 mL 加える。必要に応じて、新しい ClearSeeTM で置換する。

関連商品
コード No.

160-16061
162-16065

品

名Paraformaldehyde

167-25981 16w/v% Paraformaldehyde
163-25983 Solution, Methanol free

ClearSee 中のシロイヌナズナの葉・幼植物
TM

規

格

組織固定用
電子顕微鏡用10mL×10A 11,500…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）安価で高性能な遺伝子導入試薬

ScreenFectTM 通信
vol. 1

ヒトiPS細胞への遺伝子導入データ

・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
Screen ectTMAを用いたヒト iPS 細胞への遺伝子導入実績及びプロトコールを紹介します。iPS 細胞の足場として使用される Matrigel のプレートコーティング方法、Y-27632 を含む細胞懸濁液の調製プロトコール、また最適化された試薬比率を記載しますので、ご参考下さい。
■ヒ ト iPS 細胞（201B7 株）へのトランスフェクション
プロトコール例■実験データhiPS 細胞（201 B 7 株）へリバーストランスフェクショ

こ こ で は、StemSure® hPSC 培 地 Δ（ コ ー ド No. 19717571）を使用したプロトコール例を一部紹介します。本プ
ロトコール完全版や mTeSR1 培地を使用したプロトコー
ルは、当社データベースをご参照下さい。

ン（1 -STEP）で GFP 融合遺伝子の導入を行い、蛍光顕微鏡にて導入遺伝子の導入効率を比較しました。
〈StemSure® hPSC 培地Δ使用〉

導入効率：52％

http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol〈トランスフェクション試薬の調製〉
2.0μL の ScreenF ectTMA plus reagent、4.0μg のプラスミド DNA
が 160μL の Opti-MEM に含まれるように DNA-lipid complex を作製する。
〈Matrigel によるプレートコーティング〉
１．Matrigel hESC-Qualified Matrix を 4℃で溶解する。室温で溶解すると凝固するため避ける。
２．Matrigel 300μL を冷却した D-MEM/Ham’s F-12 25mL で希釈する。
３．希釈した Matrigel 溶液を 12 ウェルプレートに 1mL/well 加える。
４．室温で１時間以上インキュベートする。
〈細胞懸濁液の調製〉
１．StemSure® hPSC 培地Δを 2 〜 8℃で数時間から一晩かけてゆっくり融解する。37℃では解凍しない。一週間以内に使用する。
２．融 解後の StemSure® hPSC 培地Δに bFGF（コード No. 06405381, 068-05384）を終濃度 35 〜 100ng/mL で添加し、完全培地を調製する（以下、sshPSC 培地という）。
３．sshPSC 培地は使用前に室温に戻す。温浴は使用しない。
４．Y-27632 を sshPSC 培地へ終濃度 10μmol/L となるように添加する（以下、ROCKi+ 培地という）。
５．hiPS 細胞を培養中のプレートより、培地を除去し、細胞をPBS（-）で一度洗浄する。
＊細 胞は 80% 程度のコンフルエントとなった対数増殖期の状態でトランスフェクションして下さい。
６．PBS（-）を除去し、StemPro Accutase を添加する。
７．37℃、5% CO2 インキュベーターで 5 分間静置する。
８．ROCKi+ 培地を添加し、P1000 マイクロピペットを用いて、コロニーを剥がし、シングルセルへ分散する。
９．15mL チューブに移す。
10．1,000rpm（約 170 × g）で 3 分間、室温で遠心する。
11．上清を除去する。 ROCKi+ 培地で再懸濁する。
12．生細胞数を計測する。
13．ROCKi+ 培地で 5 × 105cells/mL に細胞濃度を調製する。
〈トランスフェクション〉
用意しておいた DNA-lipid complex に調製した細胞懸濁液を 1mL
添加し、ピペッティングでよく混合して、全量を 12 ウェルプレー
トに播種する。
※ポイント
播種から 24 時間経過時に培地交換を行って下さい。このときの培地は Y-27632 を含む必要はありません。

細胞数：5 × 105 cells/well
プラスミド DNA 量：4μg/assay
トランスフェクション試薬混合比率：
DNA 量（μg）：ScreenFectTMA plus reagent（μL）＝ 1：0.5
フォーマット：12 ウェルプレート
備考：ScreenFectTMA plus reagent 及び DNA は Opti-MEM で希釈した。

〈mTeSR1 培地使用〉

導入効率：38％

細胞数：5 × 105 cells/well
プラスミド DNA 量：1μg/assay
トランスフェクション試薬混合比率：
DNA 量（μg）：ScreenFectTMA plus reagent（μL）＝ 1：2
フォーマット：12 ウェルプレート
備考：ScreenFectTMA plus reagent 及び DNA は Opti-MEM で希釈した。

■使用上の注意・ヒト iPS 細胞への遺伝子導入は、シングルセルの状態で行うことをおすすめします。
・遺伝子導入時の細胞数は約 5 × 105 cells/well をおすすめします。
・プ ラスミド DNA 量が多いとき、導入遺伝子の発現量が高いことにより細胞死が引き起こされることがあります。
コード No.

品

名293-77101
299-77103 ScreenFectTM A plus
297-77104

規

格

容量

希望納入価格（円）0.2mL
遺伝⼦研究⽤   1mL
1mL×5

9,000
35,000140,000

上記以外の ScreenF ectTM シリーズの詳細情報は専用
HP（http://screenfect.jp/ja/）をご覧下さい。
Matrigel は、Corning Incorporated の商標または登録商標です。/mTeSR
は、WARF の商標または登録商標です。/Opti-MEM、StemPro は、Life
Technologies Corporation の商標または登録商標です。

今後、順次各細胞に対するトランスフェクションプロトコール例をご紹介予定です。
掲載をご希望される細胞がございましたら、こちらのメールアドレスまでご連絡下さい。→ jiho@wako-chem.co.jp…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

25

見聞録

第 5 回 IIIS シンポジウム・
第 32 回 Wako ワークショップ 合同ミーティング

Solving the mystery of sleep − 睡眠・覚醒の謎に挑む
筑波大学

国際統合睡眠医科学研究機構（WPI-IIIS） 柳沢／船戸研究室

特別研究員

藤山

知之

第 5 回 IIIS シンポジウム・第 32 回

スルーとなる技術革新が進んだことに存されていることが確認されました。

Wako ワークショップ合同ミーティン

より、睡眠・覚醒研究の手法にさらな哺乳類と魚類を研究対象として扱うこグ「Solving the mystery of sleep −る多様性がもたらされたことが、このとで、神経回路メカニズムのみならず睡眠・覚醒の謎に挑む」が 2016 年 12

分野の目覚ましい発展に寄与してい脳の進化にも迫った、神経科学と生物

月 12 日、 東 京 カ ン フ ァ レ ン ス セ ン

ると考えられます。本会では、世界学両方の面白さを味わうことのでき

ター品川ビル内にて開催されました。

に先駆け光遺伝学を睡眠・覚醒研究にる、たいへん意義のある研究だと感じ

本会は、筑波大学国際統合睡眠医科学取り入れたベルン大学（スイス）のました。睡眠の研究でも、同様のアプ研究機構（International Institute for

Antoine Adamantidis 博士をはじめ、ローチが睡眠・覚醒行動を司る神経回

Integrative Sleep Medicine : IIIS）の国内外より著名な、または新進気鋭の路の進化的保存性を語る上で有効とな

柳沢正史機構長が世話人となり、毎年研究者ら 11 名がそれぞれの研究の最ると考えられます。

開催されている Wako ワークショッ

新の知見についてご講演されました。

続 い て、IIIS の 柳 沢 正 史 機 構 長 がプと IIIS シンポジウムを兼ねた国際

この稿では、特に筆者の印象に残った「Forward genetic analysis of sleep in

会議でした。

5 講演について述べます。

randomly mutagenized mice」という

私達は人生のおよそ 1/3 を寝て過ご

最初の演者は、理化学研究所脳科学

タイトルでご講演されました。柳沢先していますが、睡眠という生理現象に総合研究センター（理研 BSI）の岡本生はかつてオレキシンを発見し、現代ついて知られていることはごくわずか

仁先生で、「Evolutionarily conservedの睡眠医科学研究分野の開拓者でもあです。そのため睡眠は神経科学分野最role of the habenula in resolution of

ります。最近、これまでの研究で得ら大のブラックボックスと称されて、こsocial conflict」という演題でご講演された知見をもとにオレキシン 2 型受容れまで数多くの研究者たちの興味を惹れました。岡本先生はゼブラフィッ体作動薬（商品名：YNT-185, Wako）

きつけてきました。ヒトにおける最初

シュとマウスをモデル動物として、感が開発され、ナルコレプシーモデルマの脳波記録は 1929 年、ドイツの精神

情や意思決定を引き起こす神経回路にウスの症状を改善することが報告され科医ベルガー博士によって報告され、ついてご研究されています。発表スラました。睡眠・覚醒に関わる神経回路

睡眠が「覚醒以外の状態」として脳波

イドは非常に印象的で、中でも荘厳な（作動系）が明らかになりつつある一で定義できるようになりました。これクラシック音楽をバックにザリガニの方で、睡眠の恒常性制御についてはまに伴い、睡眠と覚醒を巡るメカニズム

攻撃行動が流れる冒頭約 5 分間のシー

だよくわかっていません。睡眠負債

は本格的な研究対象として発展してきンは、特に記憶に残りました。岡本先（すなわち眠気）そのものの分子実体ました。近年、ゲノム編集技術、光遺生のグループは、ゼブラフィッシュにや神経細胞レベルにおけるメカニズム

伝学・薬理遺伝学・ウィルスベクター

おいて手綱核と呼ばれる脳部位から脚がこれまでまったく不明だったのでによる神経回路機能操作技術、脳・神間核へ投射するふたつの並行した神経す。柳沢先生のグループは、睡眠の恒経細胞活動イメージング法などの脳機回路が、勝者および敗者に特有の行動

常性を制御する遺伝子の存在を仮定

能を知るための手段においてブレイクを惹起するのにそれぞれ重要な役割をし、睡眠・覚醒様式に変化のあるマウ

果たすということを発見されました。

ス個体をフォワードジェネティクスのマウスでも手綱核−脚間核を結ぶ回路

手法により探索したところ、覚醒時間において同様の機能があるかを調べたが顕著に減少する Sleepy 家系、およ

総合企画の柳沢正史先生

26

日本学術振興会

ところ、ゼブラフィッシュでみられたびレム睡眠量が顕著に減少する現象と非常によく似た結果が再現さDreamless 家系という２つの変異系統

れ、この回路が種を超えて進化的に保を樹立することに成功しました。ここ

合同ミーティングの会場風景

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

ポスターセッション風景

H. Okamoto 先生

P. Nolan 先生

C. Anaclet 先生

Y. Oishi 先生

A. Adamantidis 先生

C. Li 先生

Z. Wang 先生

A. Yamanaka 先生

J.-H. Han 先生

M. Murayama 先生に至るまでにおよそ 8,000 匹以上ものする方法が確立されておらず、これま

マウスの脳波が測定されており、筆者で直接の因果関係を示すのは非常に困が存在するメラニン凝集ホルモンも当事者ながら改めてその研究スケー難でした。同氏らの研究グループは、（MCH）産生ニューロンは、海馬を含ルの大きさを実感しました。その後、終脳の内側中隔に位置する GABA 作

め脳のほとんどの領域に投射している原因遺伝子も次世代シークエンスによ

動性神経細胞の活動を、アーキロドプ

ことが知られていますが、これまでにり そ れ ぞ れ 同 定 さ れ、Sik3 お よ び

シンを用いて光遺伝学的に抑制するこ同氏の研究グループは Tet-off システ

Nalcn という遺伝子の中のたった一つとで、睡眠そのものを阻害することなムと光遺伝学を組み合わせ、睡眠中にの塩基変異が睡眠異常を引き起こすこく、レム睡眠中の記憶形成を強化する

MCH ニューロンを特異的に活性化すとを見出し、ゲノム編集でもこれを再

脳波成分（シータ波）を正確に遮断することで、ノンレム睡眠がレム睡眠へ現しました。Sik3 はセリン／スレオ

る手法を編み出しました。その結果、移行することを報告しました。さらニンリン酸化酵素、Nalcn は電位非依

新奇物体認識や恐怖関連記憶の形成がに、MCH 神経細胞の時期特異的な脱存性イオンチャネルをコードする遺伝阻害されることを見出し、さらにはレ落マウスを作成したところ、新奇物体子です。面白いことに、線虫やショウ

ム睡眠以外での抑制は記憶形成に影響

認識テストにおける顕著な成績上昇がジョウバエで Sik3 のホモログを遺伝を及ぼさないことが示されました。こ

みられ、MCH 神経の記憶形成におけ学的に操作した結果、睡眠様行動に顕れにより、記憶の固定化におけるレム

る生理的役割が明らかになりました。

著な異常がみられました。今後、この睡眠の生理的意義について、その因果

一方、光遺伝学および薬理遺伝学を用発見を契機に、睡眠負債の分子実体、関係とメカニズムが明確になりました

いた MCH ニューロンの活性化では、

ノンレム睡眠・レム睡眠・覚醒の神経（Boyce et al. , Science 2016）。前述の恐怖記憶を減弱もしくは消去できる可細胞メカニズムの解明、さらには新規ように、同氏は睡眠・覚醒研究におけ能性が示されました。すなわち、睡創薬の進展が期待されます。誰も発見る光遺伝学的手法を最初に導入した研眠・ 覚 醒 調 節 に 重 要 な 視 床 下 部 のしていないメカニズムの解明に挑み続究者のひとりです。先見性があり、優MCH 神経細胞が、記憶の制御にも関け、世界でも類稀なるリーダーシップ

雅かつ卓越した研究を続けられている

わっていることが新たに明らかになっを発揮されている柳沢先生の研究姿勢

お姿に、理想的な研究者像を見ましたのです。神経回路機能操作技術を自には（内輪ながら）感激しました。

た。

在に駆使し、新規の生理的意義が明ら的な方です。視床下部に少数の細胞体

昼食休憩をはさみ、ベルン大学（ス

活発な意見交換がなされたポスター

イス）の Antoine Adamantidis 博士が発表ののち、名古屋大学環境医学研「Causal evidence for the role of REM

究所の山中章弘先生が「Hypothalamic

最後に、理研 BSI 行動神経生理学

sleep theta rhythm in contextual

neurons regulate sleep/wakefulness

研究チームリーダーの村山正宜先生

memory consolidation」というタイトand memory」というタイトルでご講が「Cortical top-down input for

ルでご講演されました。レム睡眠は記演されました。山中先生は視床下部に

perceptual memory consolidation」と憶固定化との関連性が指摘されてきま

おける光遺伝学研究の第一人者であいうタイトルでご講演されました。筆したが、レム睡眠のみを効果的に阻害

り、ユーモア溢れる人柄がとても魅力

者は、この発表で紹介された研究の筆

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）

かになっていく様は痛快で、この分野の醍醐味を感じました。

27

頭著者の方と面識があり、互いの研究ました。さらに、ノンレム睡眠時に M2についてお話する機会があったのですと S1 において同期性の高い 0.5-4 Hz

すべての講演が終了した後も活発なが、村山先生の発表を拝聴するのはこの徐波活動がみられることを見出し、議論が交わされるなど、例年以上に終れが初めてで、非常に楽しみにしてい同期的な刺激が記憶を向上させるか

始熱気を帯びた会だったように感じまました。ノンレム睡眠は触覚などの知

ど う か を 光 遺 伝 学 で 検 証 し た 結 果、した。

覚記憶の固定化に重要であることが知

これが質感の記憶の固定化に十分であ抜かれました。

られていましたが、高次脳領域から低ることも示されました（Miyamoto et

次脳領域への入力経路（トップダウン

al. , Science 2016）。将来、大脳新皮質

筆者は神経発生生物学が専門で、睡経路）とその反対の経路（ボトムアッを刺激もしくは抑制することによっ

眠 研 究 者 と は ま だ 到 底 い え ま せ ん。

プ経路）のうち、どちらが記憶の固定て、各種の記憶をコントロールできる

IIIS の柳沢先生、船戸先生のもとで睡化に重要であるかは解明されていませ可能性を感じさせる内容でした。ま

眠に関する研究を始めて 3 年程度の駆んでした。これを検証するため、同氏

た、村山先生は神経細胞レベルでのイ

け出しで、なんとかついて行けるようらは触覚に関与するマウス大脳新皮質

メージング法の開発にも注力されてお日々精進しています。今回、睡眠研究の第二運動野（M2）から第一体性感

り、顕微鏡メーカーとの共同開発にに携わる者の一員として、最先端の睡覚野（S1）を結ぶ神経回路をモデル

よって、大多数の皮質神経細胞の活動

眠研究について議論する会の見聞録を系として採用し、光遺伝学を駆使したを同時に可視化することにも成功され寄稿する機会をいただきました。この詳細な実験により、学習直後のノンレました。満天の星空の輝きを思わせる場をお借りして、勉強の機会を与えてム睡眠におけるトップダウン入力によその動画の美しさに感動を覚えるととくださった発表者の先生方と、執筆をり、感覚野の再活性化と知覚記憶の固もに、脳を知るための技術開発に邁進ご依頼いただいた和光純薬の皆様へ厚定化が生じていることを明らかにされする同氏の熱意と実行力には、度肝をく御礼を申し上げます。

おわりに5th IIIS Symposium・32nd Wako Workshop Joint Meeting

睡眠・覚醒の謎に挑む Solving the mystery of sleep

総合企画：柳沢正史

先生（筑波大学 国際統合睡眠医科学研究機構（WPI-IIIS）機構長）

主催：筑波大学 国際統合睡眠医科学研究機構（WPI-IIIS）
・和光純薬工業株式会社 合同ミーティング実行委員会

後

援：文部科学省

日時：2016 年 12 月 12 日（月） 9：00 〜 18：00

会

場：東京コンファレンスセンター・品川〈プログラム〉
Opening Remarks
WelcomeOpening Address 1
Opening Address 2

Masashi Yanagisawa
Toshio Kuroki
Masami Watanabe

Session 1
Keynote lecture:
Evolutionarily conserved role of the habenula in resolution of social conflict
IIIS updates:
Forward genetic analysis of sleep in randomly mutagenized mice
Session 2
Circadian rhythm and sleep disturbances in discrete Zfhx 3 mouse mutants
Brainstem circuitry regulating slow-wave-sleep
IIIS updates:
Sleep-regulatory mechanism of the nucleus accumbens
Session 3
Contextual memory consolidation during REM sleep
Dynamical neural circuitry underlying working memory
IIIS updates:
Synaptic phosphoproteome as a molecular correlate of sleep need
Poster Session & Tea BreakSession 4
Hypothalamic neurons regulate sleep/wakefulness and memory
Top-down mechanism for consolidation of associative memory
Cortical top-down inputs for perceptual memory consolidation
Closing
Closing

Hitoshi Okamoto

Director, IIIS, University of Tsukuba
WPI Program Director
Research Promotion Bureau, Ministry of
Education, Culture, Sports, Science andTechnology（MEXT）
Chair : Hiromasa Funato
RIKEN BSI

Masashi Yanagisawa

WPI-IIIS, University of Tsukuba

Patrick Nolan
Christelle Anaclet
Yo Oishi

Chair : Michael Lazarus
MRC Harwell
University of Massachusetts Medical School
WPI-IIIS, University of Tsukuba

Antoine Adamantidis
Chengyu Li
Zhiqiang Wang

Chair : Qinghua Liu
University of Bern
Shanghai Institutes for Biological Sciences
WPI-IIIS, University of Tsukuba

Masanori Murayama

Chair : Kaspar Vogt
Nagoya University
Korea Advanced Institute of Science andTechnology
RIKEN BSI

Masahiro Miura

Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Akihiro Yamanaka
Jin-Hee Han

非ペプチド性オレキシン２受容体アゴニスト YNT- 185・2 HCl
詳細は、当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/YNT185 _ 2 HCl/index.htm）をご覧下さい。

28

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）化学大家 438
ヨハン・ガドリン（1760. 6. 5〜1852. 8. 15）
京都薬科大学名誉教授

桜井弘

18 世 紀 に 入 っ た ヨ ー ロ ッ パ で は、

ラ ン ド で 最 も 古 い ト ゥ ル ク 教 区 は、卑金属を黄金に変える「賢者の石」のローマのバチカン文書館にも記載され幻想がなおも支配していました。しかていて、宗教改革の時代にはプロテス

し、18 世紀後半に入ると“定量的実タント（ルター派信徒）となっていま

験”の必要性が高まり、錬金術にもとす。ガドリンという姓はヘブライ語

づく物質観は少しずつ変化しはじめま“godol” に 由 来 し、 ラ テ ン 語 で はした。1760 年イギリスのキャヴェン“magnus”、 英 語 で は“great” を 意

ディッシュによる水素の発見、1772

味しています。ヨハンの母方の祖父ヨ年スウェーデンのシェーレと 1774 年

ハン・ブロバリウスはスウェーデンの

イギリスのプルーストリーによる酸素

植物学者カール・フォン・リンネの教の発見、1772 年イギリスのラザフォーえを受けたスウェーデン王国で最も有ドによる窒素の発見、1800 年イタリ

名な自然科学者のひとりでした。スアのボルタの発明によるボルタ電池を

ウェーデン王立アカデミーの会長をいち早く用いたイギリスのデービーによる 1807 － 8 年のカリウム、ナトリ

図１．ヨハン・ガドリン（1760 － 1852）

ウム、マグネシウム、カルシウム、スし、トゥルク大学では植物学と神学の教授、トゥルク主教をつとめた人物でした。

トロンチウムそしてバリウムの 6 元素います。15 歳でトゥルク大学に入学

ヨハン・ガドリンは、ベリマン教授の発見の大潮流は自然界における元素

し、ユークリッドやアルキメデスの知が亡くなったあと、1784 年に後任教の存在と科学を確立したものとして識を学びました。父は数学を学ぶよう授の候補者の一人となりましたが、実

華々しく語られています。しかし、ま薦めましたが、ヨハンは化学に興味を現しませんでした。しかし翌年、トゥ

さしく時を同じくして、現代の日常生示しました。ペーター・ガッド教授の

ルク大学の特任教授に迎えられまし活に今や欠くことのできなくなった希影響を受けて、講義だけでなく演示実た。1786 年から 2 年間、ガドリンは土類元素（rare earth elements、レア

験にも出席し、父の図書やガッドが貸

北ヨーロッパ諸国を旅し、多くの大学

アース）がスカンディナビア半島で静してくれた化学の書籍を片っ端から読や鉱山を訪問しました。ドイツではかに研究されはじめ、新元素が次々とみました。19 歳になった 1779 年に、

Chemische Annalen の編者ローレン

発見されていった歴史は、専門家を除

ヨハンは、スウェーデンのウプサラ大ツ・クレル、アイルランドではアデ

いて、熱く語られることは多くはない

学に移りました。化学の教授としてトア・クロフォードやリチャード・キル

ようです。18 世末からおよそ 110 年

ルビョルン・ベリマンがヨハンの指導

バンらと研究をしました。ガドリンにおよぶレアアース探求の苦闘の歴史教授となりました。ヨハンはベリマン

は、フィンランド語以外にラテン語、の第 1 頁を拓いたヨハン・ガドリンと一緒に研究したのち、1783 年にトゥ

ドイツ語、フランス語、ロシア語やス（図１）の生涯とレアアースの発見のルク大学にもどりました。1881 年にウェーデン語で論文を書き、指導的科

歴史を概略的に紹介しましょう。

は鉄の分析に関して博士論文を書き、学者としてのキャリヤーを積み、スカ翌年に博士となりました。

ンディナビアでは最初の燃焼に関する

ガドリンの生涯 1-4）

ここで、ヨハンの父母の家系を少し

ラボアジェ支持者となりました。28

ガ ド リ ン は、1760 年 6 月 5 日、 当

紹介しましょう。ガドリンの父ヤコ歳になった 1789 年には、トゥルク大時スウェーデンの統治下にあったフィ

ブ・ガドリンは、トゥルク大学で天文学の教授に推薦され、1797 年に正教

ンランドの南西部のバルト海に面した学と物理学の教授をつとめ、ヨハンが授 と な り ま し た。1790 年 に は、 ス

500 年以上の古い歴史を持つ町トゥル

生まれて 2 年後には神学の教授にもな

ウェーデン王立科学アカデミーの会員

ク（スウェーデン語でオーボ）で生まりました。ヤコブは、スウェーデンのに選ばれています。

れました。ヨハンは、幼少のころからグスタフ 3 世に対抗する勢力のリー

1794 年、34 歳になったガドリンは、教育環境に恵まれて成長しました。5

ダーとなり、一時は投獄もされました

17 歳の女性ヘドリク・ティレマンと歳のころ家庭教師から教育を受け、1が 免 赦 さ れ、 ヨ ハ ン が 28 歳 の と き

結婚し、9 人の子どもをもうけ、その日に 10 時間も勉強したと伝えられて

トゥルク司教になっています。フィン

うち 7 人が成人しました。ヘドリクが亡くなった 59 歳のとき、24 歳年下の女性エバ・パランドールと再婚しました。ガドリンは家庭的な夫ではなかっ

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）29

たようで、家族とは食事のときのみ顔

レッド・ノーベル（Nb）などが挙げを合わす程度で、書斎で多数の書籍にられますが、これらの重元素はすべて

囲まれて日々を過ごしました。運動も放射性元素です。サマリウムは自然界

せず、食べ、飲み、タバコを吸い、近に安定同位体と放射性同位体で存在し視でしたがめがねをかけませんでしますが、ガドリニウムは自然界でほとた。彼はしばしばめまいに襲われましんどが非放射性元素として存在します。

たが、医師に診てもらうこともなく、薬も飲みませんでした。

30

ガドリンの業績 1-5）

図２．ガドリン石（（Ce,La,Nd,Y）2FeBe2Si2O10）1798 年には、スカンディナビアでガドリンは、1791 年に初期型カウ

最初の化学の本を出版しています。こンターカレント（向流式）蒸留装置をの本は 50 年以上もの長い間使われた発明しています。アルコールの蒸留にそうです。学生のためには、当時とし革命をもたらしたと評価され、工業化ては初めての化学実験書も書きました。

学的には重要な装置でしたが、後に、究した鉱物は、彼のこの分野での功1822 年に 62 歳で定年退職したあと、リービッヒコンデンサーとよばれるよ績 を 讃 え て、1800 年 に ガ ド リ ン 石

ミュナマキに移り、30 年間過ごしま

うになりました。また、化学変化にお（Gadolinite）（図２）と名付けられました。1827 年トゥルクの町の大火で、ける熱に関心を持ち、特に比熱や潜熱した。

教会近くにあったガドリンの実験室やの研究をし、それぞれ 1874 年と 1791

イットリアは研究初期には地球上に鉱 物 コ レ ク シ ョ ン は 失 わ れ ま し た。

年 に 論 文 を 発 表 し て い ま す。 ま た、

まれにしか存在しない元素と考えら

1852 年 8 月 15 日に 92 歳で亡くなり1810 － 1824 年には、中国の合金白銅

れ、希土類元素（レアアース）とよばました。

（pak tong）や洋銀（alpacca）の研究れていましたが、実際の地殻中の存在（京都大学総合博物館所蔵の第三高等学
校標本、撮影 豊 遥秋博士、協力 京都大学総合博物館）

ガドリンは、数学、物理学、鉱物

もしています。しかし、ガドリンの最量はそれほど少なくないことがわかり学、冶金学や工業化学などを含めて、大の歴史的業績は、最初のレアアース

ました。しかし、この名称は、現在で多くの分野で研究をした、まさしく真研究があげられます。

もそのまま使われています。たとえばの ル ネ サ ン ス 人 と 言 わ れ て い ま す。

1792 年ガドリンは、スウェーデン

レアアースのうち地殻中の元素存在度

フィンランド商務省を設立し、ビジネのベルセーリウスの下で研究をしていが最大のものはセリウムですが、これスマンとしても活躍しました。トゥル

たカール・アクセル・アレニウスがはスズ、鉛、亜鉛などよりも多く、最ク音楽協会の設立メンバーとなり、ま1787 年に発見した、ストックホルム

小のツリウムでもビスマスと同じ程度

たヨーロッパ各都市の化学会の名誉会

近郊のイッテルビー村の石英採石場でで、銀よりは多いことがわかりました。

員となりました。彼は膨大な量の書籍見つけられた“黒くて重い鉱物”標本と図書館を持っていて、トゥルク大学を受け取りました。注意深く実験しなには遺産として 18 世紀後半の出版物

が ら、 ガ ド リ ン は 標 本 の 約 38 ％ は、が多く残されています。彼の使っていこれまで知られていない元素

であ

ジウム、イットリイウムとランタノイ

た二つの実験棟は、現在も残されていることを見つけ、1794 年に研究成果

ドの合計 17 元素）は全元素（118 元て、ひとつは病院、もうひとつは子どを発表しました。鉱物名はイッテルビ

素）の 1/7 を占め、これらは現代の日

もたちのディケアセンターとして使わアとよばれていましたが、1797 年ア

常生活には欠かせないものです 7, 8）。

れています。

ンデルス・エーケベリがイットリアと

しかし、それらの発見の経緯は混乱を6）

レアアース元素の発見の歴史
元素周期表ではレアアース（スカンガドリンの名誉を讃えて元素ガドリ

名付けました。ガドリンや多くの化学きわめました。分離しても分離して

ニ ウ ム（Gd） が 命 名 さ れ て い ま す。

者は、イットリアは新元素であると信も、瓜二つのような純粋な新元素はな

元素名に人名が採用された 2 番目の例

じ て い ま し た が、1805 年 に ハ ン フ

かなか見つかりませんでした。1794でした。最初は、ロシアの地理学者ワリー・デービーがそれは純粋な元素で年のイットリウムの発見から 1907 年

シーリー・サマルスキーを讃えて名付はなく、酸化物であることを明らかにのルテチウムの発見まで、じつに 113けられたサマリウム（Sm）でした。

しました。これが初めて発見された希

年にもおよぶ戦いがあったのです 7）。

その後も、マリー・キュリー（Cm）、

土類元素の酸化物でした。イットリア

17 種類の元素は、互いに著しい化学アルバート・アインシュタイン（Es）、から、金属イットリウムを得たのはド的類似性を持っていたからです。

エンリコ・フェルミ（Fm）、ドミト

イツのフリードリヒ・ヴェーラーでガドリンが研究したガドリン石から

リー・メンデレーエフ（Md）、アルフした（1828 年）。ガドリンが最初に研

未知の元素が分離されイットリアと名

和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）イットリウム（イットリア）(1794)

イットリウム(1843)
エルビウム(1843)
テルビウム(1843)

イッテルビウム(1878)
エルビウム

ガドリン石

ルテチウム
(1907)
イッテルビウム

エルビウム

ホルミウム

ホルミウム
(1879)
ツリウム(1879)

ジスプロシウム(1886)

サマリウム(1879)
ガドリニウム(1880)
ネオジム(1885)
プラセオジム(1885)

セリウム
セリウム(1803)

スカンジウム(1879)

ジジミウム(1839)（セル石：セリウムを含む石） （サマルスキー石）

ランタン(1839)

サマリウム
ユウロピウム(1896, 1901)

元素の名前の由来
スウェーデンのイッテルビー
スウェーデンのイッテルビー
スウェーデンのイッテルビー
スウェーデンのイッテルビー
スウェーデンのラテン語名
ストックホルムの古名
スカンジナビア半島の旧地名ツーレ
ギリシャ語の“近づきにくい”
パリの古名ルテチア

表２．元素の発見者と名前の由来（7種類）
原子番号 発見年

57
62
64
60
59

ユウロピウム63

発見者
ベルセリウスとヒシンシェル
1803 （スウェーデン）クラップロート（ドイツ）
1839 モサンダー（スウェーデン）1879 ボアボードラン（フランス）
1880 マリニャック（スイス）1885 ウェルスバッハ（オーストリア）
1885 ウェルスバッハ（オーストリア）
1896,
ドマルセ（フランス）
1901

元素の名前の由来
1801年に発見された小惑星ケレス
ギリシャ語の“かくれる”
鉱物の発見者サマルスキーを讃えてガドリンの功績をたたえて
ギリシャ語の“新しい双子”
ギリシャ語の“緑の双子”
ヨーロッパ大陸＊サマリウムとガドリニウムは、元素の名前に人の名前がつけられた最初の例

付けられましたが、この中には 9 種類

先頭とする９元素およびセリウムを先頭とする 7 元素の発見者と元素名の由来（表１と２）から、北欧とヨーロッパの多数の人々がレアアース研究に携

力と忍耐があったからこそ、強力な永久磁石に欠かせないネオジムやジスプ
ロシウム、強い固体レーザー、カラー
テレビの蛍光体あるいは高温超伝導体

元素名
原子番号 発見年
発見者
イットリウム39 1794 ガドリン（フィンランド）
エルビウム
68 1843 モサンダー（スウェーデン）テルビウム
65 1843 モサンダー（スウェーデン）イッテルビウム
70 1878 マリニャク（スイス）
スカンジウム21 1879 二ルソン（スウェーデン）ホルミウム
67 1879 クレーベ（スウェーデン）ツリウム
69 1879 クレーベ（スウェーデン）ジスプロシウム
66 1886 ボアボードラン（フランス）
ルテチウム
71 1907 ユルバン（フランス）

ランタン
サマリウム
ガドリニウムネオジム
プラセオジム

航跡を残しています。イットリウムをるようです。無数の人々のたゆまぬ努

表１．元素の発見者と名前の由来（9種類）

58が拓いたレアアースの発見の歴史は、わった信念と情熱を感ずることが出来太字で示した元素名と年号は、その元素が発見された年号として認定されていることを示している。 ジジミウムという元素名は、現在は無い。ユウロピウムは、1896 年に発見され、1901 年に単離された。

セリウム

幅広い見識と技術を持ったガドリン
長い困難な研究を克服した素晴らしい図３．希土類元素（レアアース）の発見の歴史

元素名

見出されました。

にも 7 種類の元素が隠れていたのです。

もの元素が含まれていました（図３）。

レアアースの中では、プロメチウム

このうち、イットリウム、エルビウ

のみが唯一人工元素です。この元素

ム、テルビウム、イッテルビウムの 4は、天然のウランの核分裂生成物中に元素の名称は、イッテルビー村の名前

みられるはずですが、半減期が短いたに由来して名付けられました。一方、め（145Pm：17.7 年）自然界にはほと同じ鉱石から、1803 年にベルセーリ

んど存在しません。1913 年に、モー

ウス、ヒシンイェルやクラップロートはズリーにより存在が理論的に予測さ新酸化物を見出し、2 年前に発見されれ、1947 年にアメリカのマリンスキー

た小惑星ケレスに因んでセリウムと名らにより陽イオンクロマトグラフィー

付けました。ところがこの酸化物の中を用いて、ウランの核分裂生成物から和光純薬時報Vol.85, No.2（2017）に使用されるイットリウムなどを含む
レアアースが現代の私たちの生活を支えているのです

8-10）。

〔参考文献とノート〕
1）W eeks, M. E. : “The Discovery of the
Elements, XVI. The Rare Earth Elements”,
J. Chem. Educ ., 9, 1751（1932）.
2）D ean, P. D. and Dean, K. : “Sir Johan
Gadolin of Turku : The Grandfather ofGadolinium”, Academic Radiology , 3 Suppl.
2, S165（1996）.
3）Pyykko, P. and Orama, O. :“What did Johan
Gadolin actually do?”,“Episodes from theHistory of the Rare Earth Elements”ed. by
Evans, C. H., Kluwer Academic Publishers,
p.1-12（1996）.
4）Johan Gadolin : https://en.wikipedia.org/
wiki/Johan_Gadolin5）ウ ィークス / レスター・著、大沼正則・監訳：「元素発見の歴史 3」、16：希土類元素、
p.728-765（朝倉書店）（1990）．
6）古 代哲学では、万物の根源をなす要素と考え ら れ て い た 土（earth）、 空 気（air）、 火（fire）、水（water）を４大元素とよんでいた。ガドリンはこれにしたがって土（earth）の成分を構成するものとして“未知の土”とした。この言葉が、後に希土類元素（rareearth elements）とよばれるようになった。
7）1947 年に発見されたプロメチウムまでを含めると、1794 年のイットリウムの発見から
1947 年まで実に 153 年の歳月が費やされた。
8）桜 井 弘編著：「元素 111 の新知識 第 2 版増補版」（講談社）（2013）．
9）文 部科学省：『一家に 1 枚周期表』第 10 版
（化学同人）（2017）．
10）レ アアース全般については、足立吟也編著「希土類元素の科学」（化学同人）（1999）および足立吟也監修・編集代表「レアメタル便覧」（丸善）（2011）を参考にされたい。

31

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和光純薬時報 Vol. 85 No. 2
2017 年 4 月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
発 行 所

印

32

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所

上田 衡
大西礼子
和光純薬工業株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.06-6203-3741（代表）URL http://www.wako-chem.co.jp
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