  

   

Pd/C

Reducible functionalities
R-OTBDMS (TES)

R-OBn

Pd/C(en)epoxideBenzyl alcohol

R-CO2Bnaromatic-N-Cbz

ArCOR

Pd/Fibalkyl-N-Cbz

Ar-X
Ar-NO2

olefinacetylene

R-N3

触媒活性の比較〔総説〕
佐治木弘尚 ……… 2「官能基選択的接触還元触媒「パラジウム−フィブロイン」」「プロセス研究者のための Umicore-Solvias C-X- カップリング触媒キット」

Christophe Le Ret、Marc Thommen、青木啓道、岡部和世 ……… 5「Olfactory marker protein (OMP) from PAGE band to structure and function」
Frank L. Margolis and Jae Hyung Koo ……… 9〈生 薬 の は な し〉「黄連と黄柏」水上

元 ……… 16

〈テクニカルレポート〉「産業利用のための耐熱性酵素」

奥崇 ……… 14

〈T a l k i n g o f L A L〉
「第 63 話土谷正和 ……… 13

プラスチック製品とエンドトキシン試験」〔化学大家〕
島尾永康 ……… 28「フリートリッヒ・ヴィルヘルム・オストヴァルト」〔製品紹介〕
有機合成

生化学

パラジウム−フィブロイン …………………………… 4
Umicore社− Solvias社 CX- カップリング触媒キット … 8
シクロペンチルメチルエーテル ……………………… 18
キラル相関移動触媒 …………………………………… 18
パラジウム−活性炭素エチレンジアミン複合体 …… 19

抗 Olfactory Marker Protein、ヤギ ………………… 12
耐熱性酵素「セルラーゼ」 …………………………… 15
L-α-アスパルチル -D- フェニルアラニンメチルエステル … 21
R＆D社 ヒト Proteome ProﬁlerTM ホスホ− MAPK アレイキット … 24
R＆D社 WesternGloTM 化学発光検出基質 …………… 24

環境・分析

遺伝子

エンドトキシン検出用抽出液 ………………………… 13
生薬試験用試薬 ………………………………………… 17
JCSS 認定標準液 ……………………………………… 19酸−アセトニトリル溶液 ……………………………… 20
エンドファイトトキシン試験用試薬 ………………… 20
日本薬局方適合生薬有効成分 ………………………… 21

耐熱性酵素「 DNAリガーゼ」………………………… 15
BAC アレイ解析サービス …………………………… 26
Biotium社 GelRedTM 核酸ゲル染色液 ……………… 27
S. pombe ダイレクトトランスフォーメーションキットワコー … 32

細胞生物

機

器

INFOGRAM 社 eMD2 ………………………………… 25
ACEA 社 リアルタイム細胞計測システム ……… 26

プロスタグランジン J2 誘導体 ……………………… 22
ジアセチルスペルミジン類 …………………………… 22
ラボアッセイTM 過酸化脂質（TBARS）……………… 23
ファロイジン，ローダミン X 結合 ………………… 23

1

R

esearch
官能基選択的接触還元触媒「パラジウム−フィブロイン」
岐阜薬科大学１ はじめに最近、筆者らが開発した Pd/C −エ

佐治木 弘尚保存でき発火性を全く示さない。まき る １）。 一 方、2 . 5％ Pd/Fib は 芳 香

た、はさみで切断して量り取り、反応

族カルボニル基の接触還元に対する触後は濾過するのみで除去できる点に特媒活性を持たないことが明らかとなっ徴がある３，４）。

た（Scheme ２）。

チレンジアミン複合体［Pd/C（en），

な お 最 近 の 研 究 で、 精 練 糸 をPd

そこで 2 . 5％ Pd/Fib を触媒として、

和光純薬より発売．詳細は 19 ページ］

（OAc）
2 のメタノール溶液に浸した後超芳香族カルボニル基共存下での他の還はベンジルエーテルやベンジルアル

音波処理すると、調製時間が大幅に短

元性官能基の選択的接触還元を検討しコール類、脂肪族アミンのN -Cbz 基、縮される（12時間）ことを見いだし、た。その結果、メタノール中芳香族ケ５）エポキシドおよび TBDMS 基に対するより実用的な調製法として確立した 。

トン（Table １, Entries １−６）および水素化分解活性を持たないため、これ

Pd/Fib 触媒が黒色であることから

芳香族アルデヒド（Entries ７and ８）

らの官能基存在下、他の還元性官能基

Pd は調製中に０価に還元されたものを還元することなくオレフィンのみをの選択的接触還元を可能とする触媒でと考えられる。還元剤としてメタノー

選択的に水素化することができた。

ある 。我々は反応の多様性や応用性

ルに注目し、触媒の調製後に得られた

２．芳香族ハロゲン共存下でのオレフィといった観点から、異なる官能基選択

無色透明メタノール溶液中（Fig. １，

ンおよびアジドの選択的接触還元性を持った新規不均一系接触還元触e）のホルムアルデヒドと酢酸を定量

芳香族ハロゲンは Pd/C や Pd/C（en）

媒の開発研究を継続している。今回した。その結果、理論生成量の 72％を用いた接触還元では水素化分解を受Pd/C（en）とは異なる官能基選択性に相当するホルムアルデヒドと 90％

け脱ハロゲンされる１，６，７）。従って、不を示す触媒、すなわち、絹の構成タンの酢酸が定量されたことから、溶媒と均一系 Pd 触媒を用いた接触還元では、パクであるフィブロインに Pd を担持して用いたメタノールが還元剤として芳香族ハロゲン共存下、他の還元性官したパラジウム−フィブロイン複合体

作用していることが明らかとなった能基の選択的接触還元は困難であった。

触媒（Pd/Fib）を開発した。

（Scheme １）。

１）

ところが、2 . 5％ Pd/Fib は芳香族ハロゲンの接触還元に対する触媒活性を

２ Pd/Fib の調製と物性

３

官能基選択的接触還元法
への適用

ほとんど示さず、芳香族ハロゲン共存
下、オレフィンやアジドのみを選択的Pd（OAc）
2 をメタノールに溶解した 赤 褐 色 の 溶 液（Fig. １, b） 中 に、に還元することができた（Table ２）。
１．芳香族カルボニル基共存下でのオ

３．ベンジルエステル共存下でのオレフィ

レフィンの選択的接触還元

無色のフィブロイン繊維（精練糸 , a）

ンおよびアジドの選択的接触還元を浸して放置したところ徐々に黒色

芳香族カルボニル基は Pd/C により

ベンジルエステルは化学的に比較的に着色し（c−e）、溶液（b）は 4 日後容易に還元を受け、ベンジルアルコー

安定であり、Pd/C を触媒とした中性には無色透明に変化した（e）。黒色

ルを経由してさらに水素化分解され接触還元条件下容易に脱保護されるた

フィブロインを濾過した後、メタノー

メチレン化合物へと変換される。まめ、カルボン酸の保護基として幅広く

ルで十分洗浄し減圧下乾燥すること

た、Pd/C（en）触媒ではベンジルア

利用されている。しかし接触還元工程

で 2 . 5 ％ Pd/Fib 触媒を調製した（f）。

ルコールが水素化分解されないため、を含む有機合成ではベンジルエステル

Pd/Fib は、室温下試薬瓶中で安定にベンジルアルコールを選択的に合成での使用は困難であり、保護基のかけ替え等が必要である。そこで、Pd/Fibの適用性を確認すべく、同一分子内にベンジルエステルとオレフィンまたは
FibroinPd(OAc)2(a) Fibroin fiber(c) Fibroin in solution-0 h(e) Pd/Fib in colorless MeOH

rt

MeOH, rtPd(OAc)2/Fib

Pd(O)/Fib + HCHO + 2AcOH
MeOH

Scheme １．Mechanism of Pd/Fib generation
Pd/C
H2

O
No Reaction(b) Pd(OAc)2 in MeOH(d) Fibroin in solution-3 hFigure １．Preparation of Pd/Fib catalyst

2

Ar

R

Vol.74, No.2（2006）

OH

Pd/C(en)Scheme ２．Reduction of aromatic carbonyls

和光純薬時報R

Pd/FibH2(f) 2.5% Pd/Fib

Ar

Ar

R

Table １. Chemoselective hydrogenation of oleﬁn in the presenceof aromatic carbonyl
Entry

Substrate

Time (h)ProductO

Yield (%)

O

1

Ph

Ph

O

Entry

Ph

Substrate

1

Ph

3

37

Me

2

Ph

O

OH O

OH O

O

3

Pr

Ph

Ph

O
Et

4

O

12

2
Ph

Ph

CO2H

6

NH2

24

Cl

10

CO2H

CO2H

Me

Et

6

100

24
Br

CHO

CHO

24

Ph

27

Br
CO2

7

100

O
a

Br
Br

CHO

8

Br

100

Ph

CHO

91

Cl

99

Me

7

OCH2CO2H
Cl

N3

5

O

O

Cl

Cl

quant

CO2H

100

OCH2CO2H

Cl

O

5

Cl

Et

Ph

O

O

99

Ph

O

74
HO

HO

O

21

Ph
Cl

46

98

Ph
Cl

99

Me

Pr

Ph

20

Cl

O

4

O

O

Ph

HO

HO

100
Cl

100
Ph

Ph

Yield (%)

24
Cl

O

3

2

Product

Time (h)Et97(99a, 97b )30
Ph

Table ２. Chemoselective hydrogenation of oleﬁn and azide
functionalities using 2.5% Pd/Fib

Br

CO2Pr

Br

CO2Pr

3
Br

OPr

94

CO2

Br

Br

5 atm of pressure of hydrogen. b The reaction was performed at 50℃.

Table ３. Chemoselective hydrogenation of oleﬁns and azide in thepresence of benzyl esters

アジドを有する基質を用いて、接触還元を行った（Table ３）
。

Entry

そ の 結 果、 オ レ フ ィ ン と 共 役 し た

Substrate

1

ベンジルエステルは比較的水素化分解

CO2Bn

2

されやすく、メタノール中ではオレ3フィンの還元と同時に一部ベンジルエ

4ス テ ル の 脱 保 護 が 進 行 し た（Entries

5

１，
３，
５and ７）。しかし、溶媒を THF

6に変更することでベンジルエステルの7

脱保護を完全に抑制することができ、

8

CO2Bn

CO2Bn

O

9

オレフィンの選択的接触還元のみが効

CO2Bn

Ph

CO2Bn

Solvent

Time (h)CD3OD

6Product

THF-d8

7

91

CD3OD

6

69

THF-d8

7

MeOH

23

MeOH

18

MeOH

24

THF

24

MeOH

8

81
EtCO2Bn

iPrCO 2Bn

93

Et

Ph

PrO

ル中でも脱ベンジル化は全く進行せ

77
33
98

CO2Bn

99
100

CO2Bn

CO2Bn

CO2Bn

11

CO2Bn

12

CO2Bn

８）
。なお、基質によってはメタノー

CO2Bn

CO2Bn

MeOH

10

50

Me

CO2Bn

率よく進行した（Entries ２，４，６andYield (%)

MeOH

6

97
Et

ず、オレフィンやアジド基のみを高選

CO2Bn

CO2Bn

12

択的に還元することができた（Entries

N3

MeOH

17

H2N

100

9 - 12）。 従 っ て、2 . 5％ Pd/Fib 触 媒 とメタノールまたは THF を組み合わせる

保護される Cbz 基はアミノ基の保護

基共存在下でのオレフィンやベンジル

ことでベンジルエステル存在下、オレ基として汎用されているが、Cbz 基をエステルの選択的接触還元法として確フィンやアジドが高選択的に還元され有する基質を接触還元工程で使用する

立している（Scheme ３）１）。なお芳香場合保護基の掛け替えが必要である。

族アミンのN -Cbz基はPd/C（en）触媒

４．N -CBZ 保 護 基 共 存 下 で の オ レ

我々は、Pd/C（en）触媒と THF によを用いた接触還元条件下、容易に水素

フィンおよびアセチレンの選択的る溶媒効果を組合わせることで、脂肪

１）
。しかし、
化分解される（Scheme ４）族N -Cbz 基の脱保護が選択的に抑制

2. 5％ Pd/Fibは芳香族N -Cbz基の水素されることを見いだし、脂肪族N -Cbz

化分解に対する触媒活性を全く示さな

３b，
８）

ることが明らかとなった。

接触還元
Pd/C を用いた接触還元で容易に脱和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）3

Table ４. Chemoselective hydrogenation of oleﬁns in the presence ofaromatic N -Cbz
Entry

Substrate
NHCbz

1

Solvent

Time (h)Product

MeOH

44

THF

5

MeOH

48

N
Cbz

THF

24

CO2

5% Pd/C, H2 (balloon)

100% conversion

NCbz

Yield (%)

NHCbz

NH

MeOH or THF, 24 h, rt
5% Pd/C(en), H2 (balloon)

64

NCbz
THF, 17 h, rt

2
Ph

N
Cbz

4

CO2

Ph

Ph

NHCbz

5
6
7

CO2

4

CbzHN

THF

34

MeOH

25

MeOH

22

Ph

NHCbz

Ph

48
99

CO2

5

N
Cbz

32

Ph

THF, 4 h, rt

96%

50

Pd/C

NHCbz

MeOH

5% Pd/C(en), H2 (balloon)

Scheme ４．

100

CbzHN

NHCbz

8

Scheme ３．

97

ＮＨ

3

92%

92

Reducible functionalities
R-OTBDMS (TES)

R-OBn

92

Pd/C(en)epoxideいため３b，８）、分子内に他の還元性官能オレフィン、アセチレンおよびアジドを基が共存する基質を用いて官能基選択

選択的に還元することができる。従って、的接触還元を検討した。

Pd/Fib、Pd/C（en）およびPd/Cの使い

その結果、メタノール中では一部脱分けにより、Fig. ２に示す種々の還元性保護が進行したが（Entry １）、THF

官能基間での選択的接触還元が可能であの使用により脱保護は完全に抑制される ９，10）。Pd/Fibな ら び にPd/C（en） が（Entry ２）、芳香族N -Cbz 基存在下、広く有機合成の場で活用されることを期

オレフィン（Entries ２，３，５and ７）

待している。

R-CO2Bnaromatic-N-Cbz

ArCOR

Pd/Fibalkyl-N-Cbz

Benzyl alcohol

Ar-X
Ar-NO2

olefinacetylene

R-N3

Figure ２．
T., Sajiki, H. and Hirota, K. : Tetrahedron ,61 , 2217（2005）.
４）赤堀らは 40 年ほど前に Pd を絹に吸着した触媒を高温・高圧・強酸性条件下調製しているが，触媒活性またはアセチレン（Entry ８）のみを本研究にあたりご助言と自由な研究の再現性に乏しく，実用的使用には至らなかった。

選択的に還元することができた。な

環境を与えて頂いた廣田耕作岐阜薬科

Akabori, S., Sakurai, S., Izumi, Y. and Fujii,

お、常圧で不飽和結合の還元が進行し大学名誉教授（愛知学院大学薬学部

にくい場合には、３〜５気圧の水素圧

教授）並びに、研究を精力的に遂行をかけたが Cbz 基の脱保護は全く観していただいた井川貴詞博士（MIT,察されなかった（Entries ５and ８）。

Buchwald 研究室）をはじめとする共同研究者諸氏に感謝致します。

４ おわりにY. : Nature , 178 , 323（1956）.
５）投稿準備中 .
６）（a）Sajiki, H. : Tetrahedron Lett ., 36 , 3465
（1995）. ;（b）佐治木弘尚：薬学雑誌，120，
1091（2000）．
７）（a）Sajiki, H., Kume, A., Hattori, K. andHirota, K. : Tetrahedron Lett ., 43 , 7247
（2002）. ;（b）Sajiki, H., Kume, A., Hattori,〔参考文献〕
以上、Pd/Fib触媒の調製と官能基選

１）（a）佐治木弘尚，廣田耕作：有機合成化学協

択的接触還元法への応用を紹介した。

会 誌，59，109（2001）．；（b） 佐 治 木 弘 尚，

Pd/Fib は Pd/C や Pd/C（en） を触 媒と廣田耕作："Organic Square（WAKO）"，12，

した場合、容易に還元される芳香族カル

８） Sajiki, H., Ikawa, T. and Hirota, K. :Tetrahedron Lett ., 44 , 8437（2003）.

１（2004）．
２）安藤悦郎，今堀和友，鈴木友二：「タンパク

ボニル基、芳香族ハロゲン、ベンジルエ

K., Nagase, H. and Hirota, K. : Tetrahedron

Lett ., 43 , 7251（2002）.

９）井川貴詞，佐治木弘尚，廣田耕作：有機合成化学協会誌，63，1218（2005）．

質化学４」，（共立出版）（1978）．

ステルおよび芳香族N -Cbz基に対する還３）（a）Sajiki, H., Ikawa, T. and Hirota, K. : Tet-

元活性を示さず、これら官能基共存下、

rahedron Lett ., 44 , 171（2003）. ;（b）Ikawa,

P roducts10）佐治木弘尚：ファルマシア，42，140（2006）．

グリーンケミストリー

官能基選択的接触還元触媒
パラジウム−フィブロイン
コード No.
167-22181
163-22183

4

品

名

Palladium-Fibroin

規

格

有機合成用

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

容 量
１g
５g

希望納入価格（円）4,500
14,000Research
プロセス研究者のための Umicore-Solvias C-X- カップリング触媒キット：
工業レベルにも使用可能な高活性かつ空気中で安定なパラジウム触媒を用いた、塩化アリール、臭化
アリール、アリールスルホン酸塩の C-C/C-N カップリング反応
Umicore AG ＆ Co. KG
Christophe Le Ret
Solvias AG
Marc Thommen（Ph.D.）青木

ユミコアプレシャスメタルズ・ジャパン株式会社

１ はじめに啓道、岡部和世

嵩高い第三級ホスフィンやカルベンを紹介する。詳細は各参考文献を参照

予め配位させたパラジウム触媒を開発されたい。

した。これらの触媒の大きな特徴は、Buchwald-Hartwig アミノ化反応や空気や湿気に対する安定性と、作業・

2 - プロパノール（試薬グレード）を

鈴 木 カ ッ プ リ ン グ 反 応、Heck 反 応、取扱い・保管の容易性にある。従って用いた鈴木−宮浦反応

ケトンのアリール化反応など、パラジ

工業レベルでも問題なく容易に取り扱

電子豊富で低活性な塩化アリールとウム触媒を利用するカップリング反うことが可能である。以下に、両社が立体障害の大きいボロン酸とのカップ

応は産学界問わず非常に重要である１）開発した触媒を反応例と共に紹介すリング反応が本触媒により進行し、室（スキーム１）。シンプルなパラジウムる。

温下において高収率で -二-および
三 - 置換ビアリールが合成される２, ３）。

塩触媒は、高い反応性を持つ基質である臭化アリールや芳香族ジアゾ化合物

一成分系触媒１：

溶媒は試薬グレードの 2 - プロパノーなどに対しては有効であるが、工業的

ユミコア社のカルベン系パラジウ
ム触媒４種 - (IPr)Pd(allyl)Cl、(IMes)Pd(allyl)Cl、［(IPr)Pd(NQ)］2、［(IMes)Pd(NQ)］2

ル、塩基として NaOt -Bu を使用している。鈴木−宮浦反応は、有機ホウ素とにより活性や安定性を増大させる必

ユミコア社は４種類のパラジウム−など様々な利点を背景に、化学工業分要がある。この場合、より良い結果を

含窒素複素環式カルベン系触媒を開野において様々な検討がなされてい得るためには正しいリガンド選択が発し、現在工業レベルで製造している。ユミコア社の触媒は、溶媒として

キーポイントになる。近年そのようなる（スキーム２）。いずれの触媒も空安価でかつ環境負荷の低い 2 - プロパ

電子豊富で嵩高い第三級ホスフィンや気および水中における高い安定性をノールなどを用いることができ、またカルベンリガンドを用いたパラジウム

示し、緩やかな反応条件下において試薬グレードの溶媒でも実施可能であ錯体の開発が進んでいる。

も 迅 速 に 活 性 な パ ラ ジ ウ ム（0）錯 体

る。室温下の反応条件においても高収

２に魅力があるものの反応性に乏しい基質である塩化アリールやトシレートなどに対しては、リガンドを添加するこ化合物が持つ入手の容易性、利便性、
熱安定性、低毒性、高い官能基許容性

しかしその多くは不活性雰囲気下を形成する。また、反応適用範囲が率で目的物を与える（スキーム３、表でのハンドリングが必要であり、取扱広いのもこれらの触媒の特徴である。

１）。

いが困難なことが、工業化へのスケー

以下に鈴木−宮浦カップリング反応、ルアップの障害となっている。ユミコ

アリール化合物のアミノ化反応、お塩化アリールの Buchwald-Hartwig

ア社とソルビアス社はリガンドとしてよび Heck 反応についてその利用例を

アミノ化反応容易にスケールアップ可能な

R

Cl +

COOBu

Buchwald-Hartwig アミノ化反応を確

Na2CO3R

R = Me, OMe

Heck reaction

立するために、本反応におけるユミコ

Suzuki reaction

性について評価した。その結果緩やか

ア社触媒３［（IPr）Pd（NQ）］2 の反応

K3PO4+ (HO) 2B

COOBu

140℃/DMAc

MeO

100℃/dioxane

な反応条件（100℃、＜ 0 . 5 mol％ -Pd）+

NaO Bu

HNR2

Me

NR 2

110℃/toluene

Buchwald -Hartwig
amination

表１．鈴木−宮浦反応への適用例および室温・50℃での反応性

NaO Bu+110℃/toluene

Me

Catalyst, 1mol% [Pd]
KO Bu, 1.1 mmol

α- ketone arylation

Cl + (HO)2B

O

スキーム１．パラジウム系触媒による C-X カップリング反応例と典型的な反応条件(I Pr )Pd(allyl)Cl(I Mes)Pd(allyl)Cl[(IPr )Pd(NQ)]2

O
Pd

Pd

N

N

N

O

N

N

Pd

N

Pd
N

O

2

Yielda[%](RT)

1

93

12

3

88

23

4

86

86

GC yields, average of 2 runs

O
Pd

N

Catalyst, 1mol%
KO Bu

N

Pd
N

O

O

1

Yielda[%](50℃)

a

N

Cl

Cl

Catalyst[(IMes)Pd(NQ)]2ON

IPA, 0.5 - 1hO

Cl + (HO)2B
IPA, 1hO

3

4

スキーム２．ユミコア社のカルベン系パラジウム触媒

和光純薬時報3 : 95%

スキーム３．鈴木−宮浦反応への適用例

Vol.74, No.2（2006）5

表２．ユミコア社触媒錯体３によるアミノ化反応例
Compound

一成分系触媒２：

Yield (%)

CompoundYield (%)

ソルビアス社の嵩高い二級ホス

O
Ｆ3Ｃ

N

O

95

N

O

81

NC

３ フィンが配位したパラダサイ

NO

27 (48)a

N

O

88a

ク ル 触 媒 ２ 種 - SK-CC01-A、
SK-CC02-A

67

触 媒 は、 塩 化 ア リ ー ル の Buchwald-N

ソルビアス社の一成分パラジウム

O
N

95

O

N

Hartwig ア ミ ノ 化 反 応 や Heck 反 応、ON

93 (83)bO

鈴木カップリング反応、ケトンのア
リール化反応に対して高い触媒活性を85

NH持つ。SK-CC01 -A はスキーム４左に示すとおり、C-C カップリング反応おConditions : 1.00mmol arylchloride, 1.50mmol amine, 0.50mol% cat, 3.00mmol KOH, 4mL
dioxane,100℃, 16h, isolated yields
with NaO -Bu as baseb
30.0mmol arylchloride, 40.0mmol amine, 0.05mol% cat, 75.00mmol KOH, 40mL dioxane

よび単純構造を持つアニリンのアミノa化反応に対して非常に有効である。一
方 SK-CC02 -A は、脂肪族および環状の下、塩基として安価な KOH（標準４）脂肪族アミンや立体障害の大きいアニ

Heck 反応グレード）を利用した簡便な合成法

グリーン溶媒としてイオン性液

リンのアミノ化反応に適している（スキーム４右）６）。

を見出すことができた 。表２に示し体を使用した Heck 反応は、沸点の高たように、ユミコア社触媒３［（IPr）

さや低蒸気圧、更にリサイクル可能とソルビアス社の触媒は、ライフサイ

Pd（NQ）］2 は第一級および第二級のいう利点から注目され、中でもテトラエンス分野で一般的な、複雑な構造を芳香族／脂肪族アミンに対して注目にアルキルアンモニウム塩の利用は安価有する化合物の合成において重要な値する反応性を示し、また様々な官能で入手も容易なために注目を集めていファクターである官能基許容性につ基や立体障害の大きいアミンに対してる。そこで、活性及び不活性な塩化ア

いていずれも非常に優れている。SK-

高い反応性を示した。

リールの Heck 反応について、ユミコ

CC01 -A、SK-CC02 -A とも、ベンチス

エノール化可能なケトンや加水分解

ア社触媒４［（IMes）Pd（NQ）］2 の効

ケール、パイロット、および実生産のを起こしやすい基質の場合は、KOH果を確認した。その結果、どちらの塩

全てのレベルで非常に有効な触媒であの代わりに NaOt -Bu のような無水塩

化アリールでも高収率で反応が進行しる。

基の使用が必要となる。触媒使用量をた。更に、活性な塩化アリールでは、

また、アミノ化反応では、塩基と抑えつつ、目的物を高い収率で得るこ

0 . 1 mol％まで触媒濃度を低下させて溶媒とをうまく組み合わせることにとが可能である。

も高収率で目的物を得ることができより、触媒添加量が 0 . 05 mol％以下でた５）。

も高い収率で目的の化合物を得ることが可能である（スキーム５）。一般
的な反応条件としては、塩基として

R

R'

R

Heck

>90%

97%
H
NMe2

Pd Cl
NMe2

Pd
Fe

Cl

P

SK-CC02-A

R
Ketone arylation
95%

N

80%

N
H

86%

H

N

SK-CC01-A
O

88%

NaOt Bu、Cs 2 CO 3、K 3 PO 4、 溶 媒 とR'Suzuki

P

N

N
H

O

条件 60℃−130℃で検討すると良い。
さらに、本触媒の溶媒中での安定性

97%
Cl

87%

+

MeO

94%

N
H, Me
Buchwald-Hartwig

して Toluene、Dioxane、DME、温度

R'
H N
R''

MeO

89%
N
H

up to 96%

CF3

R''

base
R
isolated yields: 80 - 99%

R

N

R

R'
N

SK-CC02-A

tested fun ctional groups R : COOEt, CN, OMe, Me
Amines

H2N

H2N

CF3

HN

HN

HN

O

スキーム４．左：SK-CC01-A の適用例、右：SK-CC02-A の適用例（触媒量 0.5mol％、 スキーム５．アミノ化反応における SK-CC02-A の
2 時間）（詳細は参考文献参照 6））
官能基への許容性6

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

Cl 0.005-1 mol% Pd(OAc)2
0.005-1 mol% L
R

R

NHR
2

+ HNRR'NaO Bu, DME
25-70 ℃ , 2-16 h

L= Fe

H
N

H
N

NHOctylHOHO

HO
0.5%, 100℃
90%

0.5%, 100℃
86%

H
N

H
N

O

O

0.5%, 70℃
92%

H
N

N

N

N
NHoctyl
50 ppm, 90
96%
H
N
Ph

0.01%, 90
83%
H
N

N

N

0.01%, 10079%1.0%, 7067%N
0.05%,.
100
91%, 95%ee

スキーム７．ヘテロ環塩化物のカップリング反応例
N
H

0.05%, 100℃
85%N
50 ppm, 90
93%
H
N
Cy

0.01%,
1%, 100
95%OOH

0.5%, 100℃
67%

N
NHoctyl
10 ppm 100
86%
H
N
Bn

PCy2

NHBn
HO
0.5%, 100℃
84%2%, 100℃
72%

O
NH2

NHoctyl

NHoctyNHoctylP

NHOctyl

アリールトシレートのカップリング反応

0.05%, 100℃
99%

Josiphos SL-J002- 1 またはSL-J009- 1

スキーム６．塩化アリールのカップリング反応例

リガンドと、酢酸パラジウムまたはその他パラジウム系触媒前駆体との組みについて確認したところ、両触媒とも

50 - 100 ppm 触媒量での塩化アリー

合わせにより、第一級アミンとアリー

Dioxane中で3週間以上触媒活性を失わ

ルのカップリング反応

ルトシレートから第二級アリールアミずその性能を保持した。これにより触Josiphos SL-J009- 1リ ガ ン ド と 酢 酸

ンが高選択的に合成された８）。触媒添

媒溶液を予めまとめて調製しておき、パラジウムとの組み合わせにより、第加量は、ハロゲン化アリールに比べる

複数の反応槽へ並列供給することがで一級アミンと塩化アリールから第二級と高めとなる（スキーム９）。

きるため、製造時の大きな利点となる。

アリールアミンが高選択的に合成され最後にた。その際、第三級アミンはほとんど

ソルビアス社のリガンドとユミコア社の前駆体を４ 用いた二成分系触媒ー in situ 混合での効果的
CN- カップリング反応

合成されなかった。反応基質によっては、50−100ppm程度の触媒添加量の今回和光純薬工業株式会社を通しみで高収率に目的物を得ることができて発売される C-X- カップリング触媒

（反応条件
た７）

溶媒：DME、塩基：キットには、以上ご紹介したパラジウ（ス
NaOt -Bu、 反 応 温 度：25−100℃）

ム触媒が盛り込まれており、工業的に

キーム６）。ヘテロ環化合物に対しても重要なほとんどのカップリング反応に本触媒キットには、これまでご紹介同様に高い触媒活性を示した（スキーついて適用が可能である。ターゲット

した一成分系触媒の他に、ソルビアス

ム７）。クロロフェノール類であってもとなる反応に対し最高のパフォーマン

社の空気中で安定なジホスフィンリ

高い選択性で目的とするヒドロキシア

スを発揮させるためには、キット内のガンド SL-J002 - 1、SL-J009 - 1 と、ユミ

ニリン類を得ることが可能である。

触媒を個々にテストされることがキー

コア社のパラジウム塩触媒 Pd（OAc）2

触媒添加量は反応基質に強く依存すポイントであると考えている。我々は及び Pd-dba とが入っている。これら

るため、個々に最適条件を探索する必

最近の検討事例から、本キットは、標はin situ で 混 合 す る こ と が 可 能 で、要がある。その中で、ppm オーダー

的のカップリング反応を高い確率で成取扱いや安定性に優れている。

の低い触媒添加量で高い反応性を発揮功へと導くものと確信している。

以下、米Yale大学のJohn F. Hartwig

させるには、使用するアミン、塩化ア

本キット内の触媒が持つハンドリン

教授によって報告された、本リガンド

リールの品質を高めることが非常に重グや保存の容易性、工業規模へのスとパラジウム塩の組み合わせによる要である。臭化アリールの場合も同様

ケールアップのしやすさという特徴に

C-N- カップリング反応例を紹介する。

である（スキーム８）。

より、本 C-X- カップリング触媒キッ

OMe

H
N

OMe

1% PdCl2(PhCN)2

OTs

H
N

NHoctyl

H
N

P
2

Y

Fe

PCy2

NHR'
Y

+ H2NR' + NaO Bu

0.05%, 24h99%0.05%, 24h
94%

H
N

H
N

50ppm, 36h99%
NHoctyl℃

0.01%, 36h74%HN

N octylH

74%, RT, 1h

F3C

N octyl MeO
H

85%, RT, 2hN
H

0.05%, 48h
95%0.5%, 24h82%

0.05%, 48h98%0.5%, 24h
97%

R=Ph: 87% 80℃, 1h(SL-J002-1)

スキーム８．臭化アリールのカップリング反応例（100℃、DME中）

和光純薬時報N octylH

71%, 80℃, 4h
N Bn
H88%, 80℃, 2h92%, RT, 10h

スキーム９．アリールトシレートのカップリング反応例7,8）

Vol.74, No.2（2006）

7トは、医薬品合成化学からプロセスケ（d）Old, D. W., Wolfe, J. P. and Buchwald,

ミストにいたるまで、幅広い研究者に

S. L. : J. Am. Chem. Soc ., 120 , 9722（1998）. ;Org. Lett ., Vol. 4 , No. 18 , 3031（2002）.

（e）Fox, J. M., Huang, X., Chieffi, A. and６）（a）Indolese, A. F. and Schnyder, A. :Buchwald, S. L. : J. Am. Chem. Soc .,EP- 113 2361（ 2000）（ assigned to Solvias

122 , 1360（ 2000）. ;（ f）Kawatsura, M. andAG）. ;（b）Schnyder, A., Indolese, A. F.,

とって非常に魅力的なツールになると考えている。
〔参考文献〕
１）（a）Tsuji, J. : Palladium Reagents andCatalysts , John Wiley and Sons Ltd.,

Hartwig, J. F. : J. Am. Chem. Soc ., 121 , 1473

Studer, M. and Blaser, H. U. : Angew.

（1999）. ;（g）Roncali, J. ; J. Chem. Rev ., 92 ,Chem. Int. Ed ., 41 , 3668（ 2002）. ;（ c）

711（1992）.

Nettekoven, U., Naud, F., Schnyder, A. and２）Navarro, O., Kelly, R. A. Ⅲ . and Nolan, S. P. :J. Am. Soc ., 125 , 16194（2003）.

Chichester（ 1995）. ;（b）Diederich, F. and５）Selvakumar, K., Zapf, A. and Beller, M. :Blaser, H. U. : Synlett , 14 , 2549（2004）.
７）Shen, Q., Shekar, S., Stambuli, J. P. andStang, P. J. : Metal-Catalyzed Cross-３）Navarro, O., Oonishi, Y., Kelly, R. A.,

Coupling Reactions , Wiley-VCH, Weinheim

Stevens, E. D., Briel, O. and Nolan, S. P. : J.

Hartwig, J. F. : Angew. Int. Ed ., 44 , 1371
（2005）.
８）Roy, A. H. and Hartwig, J. F. : J. Am. Chem .

（1998）. ;（c）Stark, G., Riermeier, T. H. andOrganomet. Chem ., 689 , 3722（2004）.

Beller, M. : Transition Metals for Organic４）Goossen, L. J., Paetzold, J., Briel, O., Rivas-

Synthesis , ed. by Beller, M. and Bolm, C.,

Nass, A., Karch, R. and Kayser, B. : Synlett ,Wiley-VCH, Weinheim, Vol. 1 , p. 208（1998）. ;2 , 275（2005）.

Soc ., 125 , 8704（2003）.

P roducts
グリーンケミストリー

Umicore社-Solvias社 CX- カップリング触媒キット
パラジウム触媒は医薬品や農薬などの合成に用いられている実用性の高い触媒です。
この度、Umicore 社と Solvias 社の技術提携により新たに CX- カップリング触媒キットを開発し当社にて取扱いを開始しました。
本キットには、反応性が異なり高活性で安定性の高い触媒６品目と Josiphos リガンド２品目、Pd-Acetate、Pddba とカップリング反応に必要な試薬が揃っております。また、反応特異性など詳細を記載した CD-ROM を添付しておりますので迅速なスクリーニングに最適です。

キット内容●高活性触媒各 250 mg
O

N

N

Pd

Pd

Pd
N

N

N

O

O

N

N
N

O

NMe2
O

N

Pd

Pd
N

Pd
N

O

Cl

Cl

N

O

P

H

Pd Cl
NMe2

Pd
Fe

Cl

P

H

O

(I Pr )Pd(allyl)Cl(I Mes)Pd(allyl)Cl● Josiphos リガンド

P[(IP r )Pd(NQ)]2[(IM es)Pd(NQ)]2

SK-CC01-A

SK-CC02-A

各 250 mg

P

P

Fe

P
Fe
H

H

SL-J002-1

SL-J009-1● Palladium（Ⅱ）-acetate

500 mgTris（dibenzylideneacetone）-dipalladium（0） 500 mg● CD-ROM（取扱説明書）
コード No.
559-79951

メーカーコード
UPM55-7995

品
名CX- カップリング触媒キット

容 量
1 Kit

希望納入価格（円）92,000その他、キットに含まれる触媒及びリガンドにつきましては別途単品での販売も取扱っております。また、Solvias社のリガンドを多数取扱っておりますので詳しくはお問合せ下さい。

8

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

R

esearchOlfactory marker protein (OMP) from PAGE band to structureand function : An overview.
Department of Anatomy and Neurobiology, Program in Neuroscience, School of Medicine,
University of Maryland, Baltimore

Abstract

Frank L. Margolis Ph. D. and Jae Hyung Koo Ph. D.

a result of trauma or disease are irrevocably lost.

together all these studies confirm that the central

By contrast, in all vertebrates mature OSNs thatand peripheral portions of the olfactory system are

The peripheral vertebrate olfactory system is com-die or degenerate for whatever reason are replaced

extremely plastic and responsive to manipulations ofprised of the olfactory sensory neurons (OSNs) thatfrom mitotically active progenitors residing in thisthe external odor environment. In addition, olfactory

reside high in the nasal vault within the olfactory

generative neuroepithelium. These newly formed

function is modulated by administration of various

neuroepithelium. The axons of these neurons form

neurons undergo maturation and can correctly reform

systemically administered drugs. These include agents

Cranial Nerve I that innervates the olfactory bulb

synaptic connections with their neuronal targets inused in chemotherapeutic treatments of cancer,of the CNS. These mature chemosensory neurons

the olfactory bulb (OB) of the CNS that were lost

chronic alcohol abuse, and other therapeutic andcan be replaced from progenitor cells throughout

as a result of the degeneration of the dying OSNs.

environmental agents1, 6). Clearly it is critical to identify

the life of the animal and are characterized by theThis progenitor mitotic activity and subsequent

unique molecular reagents that will facilitate the study

expression of the olfactory marker protein (OMP)

neuronal maturation is associated with changesof this system.

that is a unique hallmark of them. The identiﬁcationin gene expression in the OE. The accompanying

and characterization of this protein will be theprocess of degeneration of the synaptic terminals inprimary subject of this essay after we address thethe olfactory bulb is also associated with transynaptic

biology of the olfactory system. Excellent overviews

alterations in gene expression2, 3). Thus, olfactory bulb

Therefore, we began to search for neuronal cell-of the anatomy, neurobiology, function and clinicalneuron phenotype is modulated by degeneration andspeciﬁc examples of gene expression in this pathway.

aspects of the olfactory system are found in Doty, R.

regeneration of the OSNs and their associated synaptic

The thought was that such proteins could serve

L. et al .1).

activity in the OB. In addition to alterations in con-as reagents to study the physiology and function

nectivity, the olfactory bulb neuronal phenotype canof individual classes of neurons in the presence ofbe manipulated by alterations in aﬀerent OSN activity.

their cellular neighbors. This may seem somewhat

Introduction

Discovery of OMP

This has been demonstrated by altering or restricting

naive today but we refer to a time when many of

The vertebrate olfactory neuroepithelium (OE) is aperipheral odor stimulation resulting in modulation

the standard techniques of contemporary biology

generative neuroepithelium that is a site of continuingof gene expression in target neurons in the olfactorywere still undreamed of and in the future. Thus, it isneurogenesis throughout life (Figure 1). This is anbulb４）. Current studies in my lab demonstrate thatimportant to recall that this investigation began before

unusual property of OSNs as the vast majority ofgene expression in deeper cortical areas that receive

the advent of monoclonal antibodies, 2D gel electro-

central nervous system (CNS) neurons are not capable

olfactory input can also be modulated by manipulation

phoresis, recombinant DNA, PCR, transgenic mice, etc.

of being replaced and, if damaged or destroyed asof aﬀerent input to the OB

5, and Kim, H. H. et al ., in prep.）. TakenIndeed we have adopted these various techniques as
they arose and have applied them in order to unravel
the role of this protein in the olfactory system.
We began by using the low resolving power of 1D
non-denaturing gel electrophoresis to search for small
acidic proteins that exhibited CNS regional speciﬁcity.
Extracts of mouse brain regions exhibited quantitativeand qualitative diﬀerences in staining patterns across
CNS regions and in the olfactory system an apparently
unique protein band was observed that was absent
from other regions of the CNS. To study this in detail,and to study the function of this novel protein, it was

Figure 1. Schematic of olfactory neuroepithelium.

necessary to obtain puriﬁed homogeneous protein and

The olfactory neuroepithelium is avascular and rests on a highly vascularized substratum studded
with glands whose ducts project to the surface. Non-neuronal sustentacular (supporting) cells areinterspersed among the mature olfactory sensory neurons (OSNs). Neuronal precursor cells lie atthe base of the olfactory epithelium (OE). The panel illustrates the life cycle of the OSN. Precursor
globose basal cells (GBC) undergo mitosis, migration, maturation and diﬀerentiation to mature OSNs
that express olfactory marker protein (OMP) and odor receptors. Immature neurons express GAP43.
Additional markers permit identiﬁcation of various stages of OSN diﬀerentiation and of the various
cell types in the OE. Axons of OSNs project to the olfactory bulb where they synapse with mitraland tufted cells and juxtaglomerular interneurons. The expression of dopamine (DA), its biosynthetic
enzyme tyrosine hydroxylase, and fos in tufted cells and interneurons, is regulated by OSN activity.
Modiﬁed from G. Ronnett.

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

generate antisera to it. Olfactory tissue was collectedfrom many rats and the protein was puriﬁed to homogeneity using the mobility in PAGE as an assay. This
puriﬁed protein was then used to generate polyclonalantisera7, 8). These antisera to the protein were used tocharacterize its immunoreactivity in several species
and many brain regions. It rapidly became apparent

9the protein was conserved across many vertebrate

were able to identify and characterize the upstream

mature olfactory neurons . As a result, and in the ab-

Cloning and mappingof the OMP genesence of any information about its function, we called

In addition to the interest in understanding theand it became clear that at least one such element was

the protein OMP (Olfactory Marker Protein). Even

function of the OMP another gnawing question waspresent in several genes whose expression patternnow, over 30 years later, its function is only beginningto learn why it is so highly restricted to the mature

was highly selective for regulating genes preferentiallyto be unraveled. The OMP has been demonstrated to

OSNs. The growing availability of recombinant DNA

expressed in the OSNs 20, 21, 22).

be present in all mammals tested including humans, intechnology provided opportunities to learn more

several species of ﬁsh, in marsupials, in amphibia, andabout the mechanisms regulating the highly selective

as best as we can tell is present in mature olfactory

expression of this protein. We determined the amino

neurons of all vertebrate species11). The antisera toacid sequence of OMP from HPLC purified tryptic

OMP transgenic andknock-out mice

OMP gave no evidence of immunologically cross-peptides using semi-automated peptide sequencing.

This set the stage to take advantage of the thenreactive materials in any invertebrate species. The

Knowing the protein sequence facilitated newnovel technology for generating transgenic mice tocritical question that remained unanswered was

directions in the study of this protein and its gene.

perform promoter analyses in vivo in OSNs23, 24). The

that of function. However, even in the absence ofPeptide sequence information permitted prediction

OMP promoter was then used by many laboratories

knowledge of its function, the nearly unique speciﬁcity

of degenerate oligo-nucleotides that could then be

to drive expression of various genes into mature OSNsof the antiserum for mature olfactory neurons has

used to identify OMP cDNA clones from an olfactoryin vivo to analyze the biology of the olfactory system.

proven to be an extremely valuable reagent. It has

neuroepithelium library. With this information it was

One of the most powerful ways to do this was tobeen invaluable for studies of olfactory neurogenesis

possible to generate additional reagents to study theutilize the technique of homologous recombination inin developing animals, and in response to surgical anddistribution of the OMP mRNA conﬁrming its virtual

mice in vivo by which a known gene can be inserted

chemical lesions of the olfactory system. Its broad

restriction to expression in mature OSNs. Further it

into the exact genomic locus normally occupied byphylogenetic cross reactivity has made this antiserum

allowed the mapping of the OMP gene to a defined

OMP25). This allowed the normal genomic regulatory

valuable for immunocytochemical studies of thearea of mouse chromosome 7 and human chromosome

elements that regulated the expression of OMP toolfactory system in species as diverse as mice (Figures

11 that was near the locus for an hereditary auditory

drive the expression of an ectopic gene that could

2a, b) and humans (Figure 3). In addition, the presence

defect called shaker-1 in mouse and Usher syndrome

be used a probe of function. In one such exampleof the OMP throughout the cytoplasm of the OSN has

in humans respectively. The OMP gene was isolated

the OMP was replaced by the fluorescent protein

also made the antiserum a valuable reagent for theand characterized leading to the demonstration that

EGFP leading to the identiﬁcation of a group of OMP

study of the organization of the olfactory bulb during

the entire OMP gene was contained in a single exon

expressing olfactory neurons in an anatomical site that18, 19).

was previously unknown26, 27, 28). This technology also

the olfactory system. Immunocytochemistry with thisThis information and the determination of theoﬀered an opportunity to overcome one glaring deﬁcit,

antiserum has facilitated these studies by both lightnucleotide sequence of this genomic region enabled usthat of the function of OMP. After all of these studies

and electron microscopy15). Curiously, the OMP wasto analyze the genomic elements that were responsible

we still did not have any insight as to the function ofalso identiﬁed in a small subpopulation of neurons infor the highly restricted pattern of OMP expression.

this protein whose expression was developmentallythe hypothalamus16, 17) (Figure 4).

Using in vitro DNA-binding gel-shift assays weregulated and phylogenetically conserved. Indeed

species and was restricted almost exclusively to the9, 10)

12, 13, 14)

development(a)and its response to disturbances ofand that only one copy of it existed in the genome

regulatory elements of the OMP gene. Several of thepromoter elements of the OMP gene were identiﬁed(b)Figure 2.
(a) OMP immunostaining of mouse olfactory neuroepithelium visualized by confocal microscopy.
The OSN cell bodies are apparent with their dendritic processes projecting to the surface of theepithelium where they terminate in dendritic knobs. The OSN axons project centrally and gather into
bundles seen in round cross sections. Koo, J. H. et al . (2005).

(b) OMP immunostaining of mouse olfactory bulb (OB) visualized by confocal microscopy.
The OSN axons are seen penetrating the surface of the olfactory bulb where they gather into globular
neuropil containing structures called glomeruli. No staining is seen deeper in the OB indicative of thespeciﬁcity of the antiserum. Koo, J. H. et al . (2005).

10

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

Figure 3. Immunostaining for OMP in
human olfactory tissue.
Mature olfactory neurons are stained brown inthe middle of the olfactory epithelium with theirdendritic processes projecting to the surfaceof the epithelium where they end in dendritic
knobs. OMP-stained axon bundles are visible
deep in the epithelium. Buiakova, O. I. et al .
(1994).

with the advent of extensive gene cloning and with

their electrophysiological responses exhibited a delayed

identical and demonstrate that OMP exhibits the beta

the sequencing of whole genomes it became clear thatrecovery to baseline compared to controls indicatingclam fold formed from eight beta strands and a pair of

the gene for OMP was present in every vertebratethat they were somehow compromised in their ability

helical domains and two loops. One of the loops is in thespecies analyzed. The predicted amino acid sequences

to recover after odor stimulation29, 31). Other studies

so-called omega loop conﬁguration that is postulated to

are >50% identical across all vertebrate species. The

demonstrated that the OMP-null mice were generally

participate in protein-protein interaction. This loop is

gene for this protein is absent from the genomes ofcompromised in several parameters associated with theirhighly ﬂexible and could adopt a more ordered structure

invertebrate species including Drosophila , C. elegans ,32, 33)ability to respond to odors. Curiously although theon interaction with a protein partner. This is consistent

as well as from unicellular eucaryotes such as yeast.

expression of OMP protein is stringently regulated andwith the postulated role of OMP in transduction and in

Nevertheless it became apparent that comparison ofhighly conserved phylogenetically its eﬀect on olfactory

its interaction with the Bex protein15, 17, 37, 40).

its amino acid sequence with all the sequences in thetransduction processes is quite subtle. We expected

databases did not identify any functional domains that

dramatic eﬀects on various aspects of olfactory-mediatedmight provide information as to its function.

behavior such as those associated with mating, maternal

Conclusioncare, food finding etc. but instead its role is more of a

These brief comments are intended to illustratemodulator. Ongoing studies to identify exactly where in

the potential importance of the OMP in olfactory

the overall sensory transduction process are underway34).

function and the value of the antiserum for studies

Therefore, we utilized the technique of homologous

Where in the process was not clear as the molecularof the degeneration, regeneration and function of therecombination noted above to generate mice in which

steps in the transduction cascade appear to be all wellolfactory system in all vertebrates including humans.

the OMP gene was deleted29). This promised to provide

characterized without requiring the presence of anan entrée to function as any novel phenotype observed

additional component. Furthermore, two olfactory sub-in the absence of any OMP in vivo would provide clues

systems, the main olfactory system and the vomeronasal

as to function of the OMP. We were not disappointed

system both express OMP but they utilize very diﬀerent

in this hope. The OMP mice appeared superficiallytransduction cascades35, 36). Since OMP is abundant innormal but careful electrophysiological and behavioral

both subsystems it is diﬃcult to see how it ﬁts in theseanalyses demonstrated that the OMP-null mice were

pathways. One option is that it plays a role not in thedeﬁcient in their olfactory function. The OMP-null miceprimary response transduction pathway, but that itwere responsive to odors but required 50−100 times

plays a role in regulating the mechanisms associatedhigher concentrations to achieve the same behavioral

with return of intracellular calcium to basal levels34). To

Function of OMP

30)

responses as the wild-type intact mice . In addition,

date, these questions, while still unanswered, are underinvestigation. Nevertheless, all the evidence indicates that
OMP is a participant in the overall olfactory transduction
cascade.

Structure of OMP
Another complementary approach to learn somethingof OMP function was being pursued simultaneously.
Possibly the primary amino-acid sequence of the protein
is not per se a direct determinant of function, but is thebasis of a conserved element of the three dimensional
structure of OMP that is critical to its function in olfacFigure 4. OMP immunostaining in mouse
hypothalamus visualized by confocal
microscopy.
The ventricle is apparent as a vertical dark area
to the left of the figure. A subset of neurons
stained with OMP are evident, as are numerous
axonal processes throughout the ﬁgure. Koo, J.
H. et al . (2005).

tory transduction. Therefore, we undertook to determine
the 3-dimensional structure of OMP in solution 37, 38). To
address this we utilized heteronuclear NMR spectroscopy
to determine the structure of OMP in solution. Anothergroup independently determined the structure by
X-ray crystallography39). Both structures are essentially

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）〔Literature cited〕
１） Handbook of olfaction and gustation, ed. by Doty,
R. L., Marcel Dekker, Inc. New York (2003).
２）Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L. and Joh,T. H. : Transneuronal regulation of tyrosinehydroxylase expression in olfactory bulb of mouseand rat. , J. of Neurosci ., 3, 69-78 (1983).
３）Margolis, F. L., Verhaagen, J., Biffo, S., Huang, F.
L., and Grillo, M. : Regulation of gene expression
in the olfactory neuroepithelium: a neurogenetic
matrix. Prog Brain Res ., 89, 97-122 (1991).
４）Cho, J. Y., Min, N., Franzen, L. and Baker, H. : Rapid
down-regulation of tyrosine hydroxylase expression
in the olfactory bulb of naris-occluded adult rats. ,J. Comp. Neurol ., 369 (2), 264-76 (1996).
５）Kim, H. H., Puche, A. C. and Margolis, F. L. :Odorant deprivation reversibly modulates NR2Bmediated CREB phosphorylation in mouse piriform
cortex. , A. Chem. S ., abstract (2006).
６）Schiﬀman, S. S. and Zervakis, J. : Taste and smell
perception in the elderly : eﬀect of medications anddisease. , Adv. Food Nutr. Res ., 44, 247-346 (2002).
７）Margolis, F. : A brain protein unique to the olfactorybulb. , Proc. Nat. Acad. Sci ., 69, 1221-1224 (1972).
８）Keller, A. and Margolis, F. L. : Immunologicalstudies of the rat olfactory marker protein. , J.
Neurochem ., 24, 1101-1106 (1975).
９）Monti-Graziadei, G. A., Margolis, F. L., Harding, J.
W. and Graziadei, P. P. C. : Immunocytochemistryof the olfactory marker protein. , J. Histochem.
Cytochem ., 25, 1311-1316 (1977).
10）Farbman, A. I. and Margolis, F. L.: Olfactory marker
protein during ontogeny : Immunohistochemical
localization. , Dev. Biol ., 74, 205-215 (1980).
11）Margolis, F. L. : Olfactory marker protein (OMP). ,Scand. J. Immunol. Suppl ., 9, 181-99 (1982).
12）Kim, H. and Greer, C. A. : The emergence ofcompartmental organization in olfactory bulb
glomeruli during postnatal development. , J. Comp.
Neurol ., 422 (2), 297-311 (2000).
13）Kasowski, H. J., Kim, H. and Greer, C. A. : Compartmental organization of the olfactory bulb glomerulus. ,11

J. Comp. Neurol ., 407 (2), 261-74 (1999).
14）Kosaka, K., Toida, K., Margolis, F. L. and Kosaka,
T. : Chemically deﬁned neuron groups and theirsubpopulations in the glomerular layer of the rat
main olfactory bulb-II. Prominent differences in
the intraglomerular dendritic arborization andtheir relationship to olfactory nerve terminals. ,Neuroscience ., 76 (3), 775-86 (1997).
15）Koo, J. H., Gill, S., Pannell, L., Menco, B. andMargolis, F. L. : The interaction of Bex and OMP
reveals a metabolically active covalent dimer of
OMP. , J. Neurochem ., 90, 102-116 (2004).
16）Baker, H., Grillo, M. and Margolis, F. L. : Biochemical and Immunocytochemical Characterizationof Olfactory Marker Protein in Rodent Central
Nervous System. , J. Comp. Neurol ., 285, 246-261(1989).
17）Koo, J. H., Saraswati, M. and Margolis, F. L. :Immunolocalization of Bex protein in the mousebrain and olfactory system. , J. Comp. Neurol. , 487 (1),1-14 (2005).
18）Danciger, E., Mettling, C., Vidal, M., Morris, R. andMargolis, F. L. : The OMP gene : Its structure andolfactory neuron speciﬁc expression in transgenic
mice. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA ., 86, 8565-8569(1989).
19）Buiakova, O., Rama Krishna, N.S., Getchell, T.V. andMargolis, F.L. : Human and Rodent OMP genes :Conservation of structural and regulatory motifs
and cellular localization. , Genomics , 20, 452-486(1994).
20）Wang, M. M., Tsai, R. Y., Schrader, K. A. and Reed,
R. R. : Genes encoding components of the olfactorysignal transduction cascade contain a DNA bindingsite that may direct neuronal expression. , Mol.
Cell Biol. , 13 (9), 5805-13 (1993).
21）Kudrycki, K., Stein-Izsak, C., Behn, C., Grillo, M.,
Akeson, R. and Margolis, F. L. : Olf-1-binding site :characterization of an olfactory neuron-specificpromoter motif. , Mol. Cell Biol ., 13 (5), 3002-14 (1993).

22）Behrens, M., Venkatraman, G., Gronostajski, R.
M., Reed, R. R. and Margolis, F. L. : NFI in thedevelopment of the olfactory neuroepithelium andthe regulation of olfactory marker protein gene
expression. , Eur. J. Neurosci ., 12 (4), 1372-84 (2000).
23）Walters, E., Grillo, M., Oestreicher, A. B. andMargolis, F. L. : LacZ and OMP are co-expressed
during ontogeny and regeneration in olfactory
receptor neurons of OMP promoter-lacZ transgenic
mice. , Int. J. Dev. Neurosci ., 14 (7-8), 813-22 (1996).
24）Margolis, F. L. : Regulation of olfactory neuron
gene expression. , Cytotechnology , 11, 17-22 (1993).
25）Mombaerts, P., Wang, F., Dulac, C., Chao, S. K.,
Nemes, A., Mendelsohn, M., Edmondson, J. andAxel, R. : Visualizing an olfactory sensory map. ,Cell , 87 (4), 675-86 (1996).
26）Storan, M. J. and Key, B. : Septal organ of
Gruneberg is part of the olfactory system. , J,
Comp. Neurol ., 494 (5), 834-44 (2006).
27）Fuss, S. H., Omura, M. and Mombaerts, P. : The
Grueneberg ganglion of the mouse projects
axons to glomeruli in the olfactory bulb. , Eur. J.
Neurosci ., 22 (10), 2649-54 (2005).
28）Koos, D. S. and Fraser, S. E. : The Grueneberg ganglion projects to the olfactory bulb. , Neuroreport ., 16(17), 1929-32 (2005).
29）Buiakova, O. I., Baker, H., Scott, J. W., Farbman,
A., Kream, R., Grillo, M., Franzen, L., Richman,M., Davis, L. M., Abbondanzo, S., Stewart, C. L.
and Margolis, F. L. : Olfactory Marker Protein(OMP) Gene Deletion Alters Physiological Activity
Of Olfactory Neurons. , Proc. Nat. Acad. Sci ., 93,9858-9863 (1996).
30）Youngentob, S. and Margolis, F. L. : OMP genecauses an elevation in behavioral thresholdsensitivity. , Neuroreport , 10, 15-19 (1999).
31）Ivic, L., Pyrski, M., Margolis, J. W., Richards, L.
J., Firestein, S. and Margolis, F. L. : Adenoviral
vector mediated rescue of the OMP-null mouse. .
Nature Neuroscience , 3, 1113-1120 (2000).

32）Youngentob, S. L., Kent, P. F. and Margolis, F. L. :OMP gene deletion results in an alteration inodorant-induced mucosal activity patterns. , J.
Neurophysiol ., 90 (6), 3864-73 (2003). Epub 2003 Aug
13.
33）Youngentob, S. L., Margolis, F. L. and Youngentob,
L. M. : OMP gene deletion results in an alterationin odorant quality perception. , Behav. Neurosci .,115 (3), 626-31 (2001).
34）Kwon, H. J., Leinders-Zufall, T., Koo, J. H. andMargolis, F. L. : The absence of OMP causes
compromised NCX activity in the mouse olfactory
receptor neurons. , Soc. for Neurosci ., Abstract(2005).
35）Lucas, P., Ukhanov, K., Leinders-Zufall, T. andZufall, F. : A diacylglycerol-gated cation channel
in vomeronasal neuron dendrites is impaired in
TRPC2 mutant mice : mechanism of pheromone
transduction. , Neuron ., 40 (3), 551-61 (2003).
36）Berghard, A., Buck, L. B., and Liman, E. R. :Evidence for distinct signaling mechanisms in two
mammalian olfactory sense organs. . Proc. Natl.
Acad. Sci. USA ., 93 (6), 2365-9 (1996).
37）Baldisseri, D. M., Margolis, J. W., Weber, D. J.,
Koo, J. H. and Margolis, F. L. : Olfactory marker
protein (OMP) exhibits a beta-clam fold in solution: implications for target peptide interaction andolfactory signal transduction. , J. Mol. Biol ., 319 (3),823-37 (2002).
38）Wright, N.T., Margolis, J. W., Margolis, F.L.and
Weber, D. J. : Reﬁnement of the solution structureof rat Olfactory Marker Protein (OMP). , J. Biomol.
NMR ., 33 (1), 63-8 (2005).
39）Smith, P. C., Firestein. S. and Hunt, J. F. : The
crystal structure of the olfactory marker protein at
2.3 A resolution. , J. Mol. Biol . 319 (3), 807-21 (2002).
40）Behrens, M., Margolis, J. W. and Margolis, F. L.
: Identification of members of the Bex genefamily as olfactory marker protein (OMP) binding
partners. , J. Neurochem , 86, 1289-1296 (2003).

嗅覚神経タンパク質特異的抗体
抗 Olfactory Marker Protein、ヤギ
Olfactory Marker Protein（OMP）は成熟した嗅覚神経に発現している可溶性酸性タンパク質です。本品は嗅覚神経とその軸索へ特異的に反応するヤ
ギポリクローナル抗体です。希釈倍数を変えることにより、ほぼすべての脊椎動物に交差性を示すことが特長です。
用

途

形

状

保存条件

ウェスタンブロット

実用希釈倍数〜 1：50,000

免疫組織染色

実用希釈倍数

１：200 〜 1：50,000

アジ化ナトリウム（0 . 05 %）を含むグリセロール溶液− 20℃保存〔参考文献〕
Figure. Immunoﬂuorescence staining of adult mouseolfactory epithelium with goat anti-OMP (Wako
Chemicals USA, Code#544-10001).
Green : OMP staining was visualized with Cy2(Jackson ImmunoResearch).
Data was provided by Dr.Frank L. Margolis and
Dr. Jae Hyung Koo, Department of Anatomy and
Neurobiology, School of Medicine, University of
Maryland.

１）Baker, H. et al. : J. Comp. Neurol ., 285, 246（1989）.
２）Buiakova, O. I. et al . : Genomics , 20, 452（1994）.
３）Cummings, D. M. et al . : J. Comp. Neurol ., 421, 362（2000）.
４）Keller, A. and Margolis, F. L. : J. Neurochem ., 24, 1101（1975）.
５）Koo, J. H. et al . : J. Neurochem ., 90, 102（2004）.
６）Koo, J. H. et al . : J. Comp. Neurol ., 487, 1（2005）.
７）Rama Krishna, N. S. et al . : Brain Res ., 593, 295（1992）.
８）Verhaagen, J. et al . : J. Neurosci. Res ., 26, 31（1990）.

コード No.
544-10001

12

品
名Anti Olfactory Marker Protein, Goat

和光純薬時報規 格
免疫化学用Vol.74, No.2（2006）

容 量
100μℓ

希望納入価格（円）43,000SERIES

Talking ofLAL
和光純薬工業株式会社

第 63 話土谷正和

プラスチック製品とエンドトキシン試験

使い捨てのプラスチック製品は便利ではないかと、その友人に尋ねました

液の効果に関しては、筆者らの論文 1）です。エンドトキシン試験でもプラス

が、リムルス試薬をその容器に入れるをご参照下さい。最後に、エンドトキ

チック製品を使用することがまれではと感度が下がったとのことなので、やシン溶液を容器に入れ、その活性の変ありません。このシリーズでも何度かはり阻害物質が出ていたのかもしれま

化を調べます。抽出液に反応干渉因子

プラスチック用具について考えてきせん。

が含まれず、エンドトキシンの汚染もました（Talking of LAL 第 15 話、第

筆者は、第 15 話で、リムルス試験

検出されず、入れたエンドトキシン溶

16 話、第 55 話参照）
。今回は、もうに使用する用具に要求される条件とし液の活性が変化しなければ、その容器

一度プラスチック製品の使用についてて、「エンドトキシン（LAL 活性化物は使用してもよいと判断できると思う

考えてみたいと思います。

質）の汚染がないこと」、「エンドトキのですが、いかがでしょうか。

アメリカ人の友人がこんなことをシンや試料を吸着しないこと」、「エンエンドトキシン試験で用いる器具

言っていました。「1990 年代の後半にドトキシンの活性に影響を与えないこは、高い温度で乾熱できるガラス用具

プラスチック製品の添加剤に関係したと」を挙げています。もし、プラスが主に用いられます。いわば、エンド規制が変わり、ポリプロピレン製の用チックから阻害物質が出るとすると、

トキシン試験における器具のゴールド

具からそれまでと異なる物質が溶出「リムルス試薬の活性化に影響を与えスタンダードはガラス器具です。しかし、これがリムルス試薬の反応を阻害る物質が溶出しないこと」も付け加えし、ガラス器具にも問題がないわけでした。そのため、リムルス試薬に関連る必要があるでしょう。日本薬局方にはありません。ガラスの種類によってしたラボから、ポリプロピレン製の用は「マルチウェルプレート及びマイク

は、微量金属の溶出によりエンドトキ

具が消えた。」と。

ロピペット用チップなどのプラスチッシン活性が低下することもあります

その友人は、リムルス試薬には造詣

ク製品を用いる場合は、エンドトキシ（Talking of LAL 第 10 話参照）
。もし、が深く、知識と経験が豊富なので、そンが検出されないこと及びエンドトキ

ガラス器具が、単に乾熱によってエンの言葉に間違いがあるとは思えませ

シン試験に対する干渉作用のないこと

ドトキシンを不活性化できるという理ん。しかし、筆者らのラボでは、水をが確認されたものを用いる。」と記載

由だけで選ばれてきたとすると、もうポリプロピレン製の遠心管に入れたされています。「エンドトキシン試験

少し慎重に考える必要があるかもしれ

り、ポリプロピレン製のピペットチッに対する干渉作用がない」とは、筆者ません。

プを使用したりしていますが、特に阻が考えた条件のいくつかを包括した表

筆者はなにも、ガラス用具よりプラ害を経験したことがありません。ある

現で、言い得て妙と言えるでしょう。

スチック用具の方を推奨しようとしてい種のポリプロピレン製用具がエンドト

さて、上記のようなことも考慮してるのではありません。エンドトキシン試

キシンを吸着することは、以前報告しプラスチック製品の「エンドトキシン

験に使用する用具の満たすべき条件を考試験に対する干渉作用」を調べる方法

え、これらを確認していく必要があるのを考えてみましょう。筆者としては、ではないかと考えているのです。

1）

た通りです 。エンドトキシンの吸着

プラスチックの中の私

まずリムルス試験に干渉を与える因子

それにしても、プラスチックの微量が溶出していないこと、次にエンドト添加物質が使用者に予告なしに変更さ

キシンの汚染がないこと、最後にエンれ、溶出する主成分以外の物質が変化す

ドトキシンの吸着がないことを調べるるというのであれば、定期的に使用する作戦を考えています。すなわち、まず

プラスチック製品の性能を確認すること

容器の水抽出液に対してエンドトキシも考える必要があるのでしょうか。

ンの添加回収試験を行い、抽出液中にリムルス試験に対する反応干渉因子が含まれないことを確認します。次に、〔参考文献〕
1）土谷正和他：防菌防黴誌，24, 357（1996）.

エンドトキシン検出用抽出液（和光純薬）を用いてエンドトキシンの汚染を調べます。エンドトキシン検出用抽出

コード No.
293-51601

品

名規

Endotoxin Extracting Solution

格エンドトキシン検出用

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

次回は、第 64 話「LAL は無菌製剤か」の予定です。

容量10mℓ×４

希望納入価格（円）
15,00013

echnical Report
産業利用のための耐熱性酵素
株式会社

はじめに

耐熱性酵素研究所

奥崇

なったり一回の反応に使用する酵素量

るエンド型のセルラーゼです。結晶性が多くなったり色々と大変な面があり

セルロースに作用させますと見た目なました。そこで少ない酵素量で、雑菌どに変化は見られにくいですが、その「酵素」とはいったいなんでしょの繁殖の心配もなく、長時間の反応に後にエキソ型を含むようなセルラーゼう？

人によって酵素に対するイメー

耐えうる酵素が必要とされてきましで分解を行うと、耐熱性セルラーゼでジは違うと思います。一口に「酵素」た。超耐熱性酵素はこれらすべての問処理をしたものは分解効率が上がることいいましても様々なものがあるから題を解決できる可能性を秘めて開発さとが示されています（図１）。

だと思います。また、最近では健康れました。

ブームに乗って酵素入り食品、酵素入

産業技術総合研究所および耐熱性酵

りドリンク、酵素風呂などなどいかに

素研究所では産業用に広く使用できるも身体にとっていいものとして扱われ

超耐熱性酵素の開発に取り組んでまい

超耐熱性古細菌Pyrococcus furiosusています。それらの効能はさておきそりました。もう一度まとめますと超耐より見出された超耐熱性のキチン分解の「酵素」の実体から簡単にご説明さ

熱性酵素のメリットといたしまして酵素です。実はこの酵素はゲノム上でせていただきます。酵素とは簡単に言は、１）様々な雑菌の繁殖を抑えるこは一塩基の挿入によって分断されていうと生体中で行われる化学反応を触媒とができる、２）反応温度を高くするました。その塩基を修復することで全する蛋白質です。つまり働きを持った（85℃以上）ことで反応速度を上げる

長の遺伝子が明らかとなり、さらにそ

蛋白質すべてが酵素といえます。ここことが出来る、３）物理的に高温にさの中に含まれる活性部位のうち、最もを読んでいらっしゃる方には釈迦に説らされる状態においても比較的安定に強力な部分を取り出すことに成功しま

法とは存じますが酵素が蛋白質である活性を維持することが出来る、４）有した。このキチナーゼはこれまで酵素的というところがこれからお話しするひ

機溶媒中においても酵素活性を維持すに分解することが困難であったα- 型

とつのポイントとなりますのであえてることが出来る、等があげられます。

の結晶性キチンを分解することが出述べさせていただきました。

これら以外にも今後いろいろな利用法来ます。分解産物は主にN −アセチルが現れてくると考えられます。

グルコサミンの２量体（キトビオース）

蛋白質というと食卓に並ぶ魚、肉な超耐熱性キチナーゼ

どを想像していただければわかると思

さて、以下に現時点で提供できる酵になり、単量体もある程度生成しま

いますがダイニングテーブルの上に生素について簡単に説明させていただきす。３〜４量体の生成はみられませのまま放置すると様々な細菌やカビがます。

ん。これまでキトオリゴ糖を作成する

繁殖します。これがいわゆる「腐敗」という現象です。酵素も蛋白質である
以上同じように腐敗をします。これま際には強酸で分解していましたが、そ超耐熱性セルラーゼ

うすることによって①脱アセチル化が起こること、②生成物であるオリゴ糖で産業的に酵素の利用という面に関し

超耐熱性古細菌Pyrococcus horikoshiiの重合度が一定しないこと、の２つのまして必ずついて回るのが腐敗、つまのゲノム中より見出された超耐熱性の問題点が存在します。酵素で分解を行り雑菌の繁殖をいかに抑えるかという

セルロース分解酵素です。セルロース

うことの大きなメリットはアセチル基点であります。雑菌を繁殖させないたに切り込みを入れる作用をもついわゆを保護できるということ、分解産物がめには短時間の反応、または厳重な滅菌管理を行わなければいけませんでした。そのため酵素は使い捨てが多く

図２．実際のキチン基質分解の様子
図１．超耐熱性セルラーゼの活性温度依存性

14左よりコロイド状キチン、イカキチン、カニキチンを分解した様子を撮影した。
それぞれ左側は酵素を添加していないもの、右は酵素添加後 85℃で３時間加温したものである。

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

一定であることです。特殊な工程をマO

イルドな条件で行うことの出来る酵素
ならではの特性だと思います（図２）。

H2
C

O
HO

P

O

CH

OH

NH2

OH

超耐熱性システイン合成酵素

システイン
合成酵素

C

原料（X）

生成物（Y）

リン酸

ホスホセリン
図３.

超耐熱性古細菌Aeropyrum pernix-DNAリガーゼより見出された超耐熱性のシステイン
合成酵素です。従来のシステイン合成

他社耐熱性リガーゼ

ライゲーション産物

酵素は不安定なO - アセチルセリンを0出発物質としていましたがこの酵素はO - ホスホセリンを原料とします。O ホスホセリンはアセチルセリンと比較して、非常に熱安定性が高いのが特徴

1030

フィドを付加する反応を行いますが、

0

10

30

60 120 180

95℃でのインキュベーション時間（分）

図４．Ape- DNA リガーゼの熱安定性より見出されたグルタミン酸脱炭酸酵

ることが出来ます。

素です。グルタミン酸を脱炭酸して、で耐熱性酵素を用いた物質生産に最適です。この酵素はホスホセリンにスル60 120 180

超耐熱性 DNA リガーゼ

γ - アミノ酪酸（GABA）を生成します。これまで知られているグルタミン

スルフィドの供与体に様々な物質を選

超耐熱性古細菌Aeropyrum pernix

酸脱炭酸酵素と比較して高い pH で反ぶことによって種々のシステイン誘導より見出された超耐熱性の DNA 連結

応するため、高濃度のグルタミン酸溶体の合成ができる可能性があります

酵素です。ATP 存在下で DNA 二本鎖液を反応に用いることが可能となり、（図３）。

上に存在するニックを連結することが効率的なγ - アミノ酪酸の生産が可能出来ます。実際に近縁種などの超耐熱です。このγ - アミノ酪酸には、精神性 DNA リガーゼが市販されています

安定作用、血圧降下作用、皮膚老化防がそれらを凌駕する熱安定性を持って止作用等の生理作用があることが知ら

超耐熱性イノシトール
１リン酸合成酵素います。現行の酵素の活性の半減期はれており、生理活性を有する食品素

超耐熱性古細菌Aeropyrum pernix

95℃で１時間といわれていますが本酵

材・家畜飼料または香粧品への応用がより見出された超耐熱性のイノシトー

素の活性の半減期は 105℃で１時間で期待されています。また、γ - アミノル１リン酸合成酵素です。グルコースあり、95℃においては３時間以上にわ酪酸は、生分解性の高いナイロン４を６リン酸からイノシトール１リン酸をたって活性に変化は見られません。今構成するモノマーとしても知られてお生成します。生体内でのシグナル伝達

後、遺伝子診断など様々な分野への応り、カーボンニュートラルの見地かやリン脂質合成に関係するイノシトー用が期待されています（図４）。

ら、その有用性は広がっていくものとルの生合成を行う酵素群のひとつで、イノシトールに関係する生体機能を研考えられます。
以上、いくつかの酵素を上げさせていただきましたが、今後色々な場面です。従来の酵素と比較して、安定かつ超耐熱性グルタミン酸
脱炭酸酵素

高速にイノシトール１リン酸を合成す

超耐熱性古細菌Pyrococcus horikoshiiてゆくことを期待しております。

究するための試薬の調製に使われま酵素を用いた数々の産業展開が行われ

P roducts
コード No.
294-64201
030-19871

品
名DNA Ligase, thermostable, recombinant, solution
Cellulase, thermostable, recombinant, solution規格
遺伝子研究用
生化学用

容 量
25 μℓ

希望納入価格（円）30,000１mℓ30,000

近日発売予定
コード No.
034-19891
037-19881
071-05191
090-05381

品
名Chitinase, thermostable, recombinant, solution
Cystein synthetase, thermostable, recombinant, solution
Glutamic acid decarboxylase, thermostable, recombinant, solution
Inositol 1-monophosphate synthetase, thermostable, recombinant, solution

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

規
格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容 量
１mℓ
１mℓ
１mℓ
１mℓ

15

−⑤

黄 連 と 黄 柏
名古屋市立大学大学院

水上元

動脈硬化とは、動脈が硬く、もろく

ゆる健康食品で動脈硬化の進行が防げ

つ黄連の主アルカロイド berberine のなる状態をさしている。中・大動脈にないだろうかとは、高齢化というリス

増殖抑制効果は coptisine よりも弱く、おこる動脈硬化は特に粥状動脈硬化まクファクターを抱える筆者のみならず

またメチレンジオキシ基を持たない

たはアテローム動脈硬化といい、進行

誰もが考えるところであろう。

palmatine には活性はなかった（図３）。

すると心筋梗塞や脳梗塞をひきおこす

漢方医学では生体の恒常性は気黄連（図４）は、日本薬局方ではキンことになる。この２つの病気による死（き）・血（けつ）・水（すい）の３つ

ポウゲ科の植物であるオウレンCoptis

亡は日本人の死亡原因の約 30％をしの要素で維持されているとしている。

japonica 、C. chinensis 、C. deltoidea のめ、ガンによる死亡を上回って、我がこのうちの血とは、全身をめぐる赤い根茎であると規定されている。このう

国での死亡原因のトップを占めている。

液体であり、その不足を『血虚（けっちオウレンは日本に分布する植物で、粥状動脈硬化は動脈の血管内皮細胞のきょ）』、その循環の異常を『血（お葉の分裂の程度に応じてキクバオウレ

損傷が引き金となって起こる炎症性疾けつ）』という名前の病態としてとらンC. japonica var. japonica 、セリバオ

患で、最終的に血管平滑筋細胞の脱分えている。漢方医学的には、動脈硬化

ウレンC. japonica var. dissecta 、コセ

血』によるものであリバオウレンC. japonica var. major の化と増殖が誘導されて、脂質に富んだ症はまさに『

泡沫細胞、平滑筋細胞などからなる沈

る。
『

血』と

３つの変種がある。日本産の黄連とし着物（アテローム）が形成されるこという薬能を持った多数の漢方薬が準備て使用されているのは現在ではほとんになる（図１）。

されている。

どがセリバオウレンで、杉林などの下我々は駆血』の治療には『駆血作用を持つとされる 16

生えとして野生しているほか、林業農

種類の漢方薬を対象にして平滑筋細胞

家の副業として栽培もされている。兵の形成を抑える作用を示す薬物はまだ増殖抑制作用を検討した結果、『温清飲

庫県産のものに対して丹波黄連、島根

なく、高血圧、高脂血症などのリスク（うんせいいん）』という漢方薬だけが県産のものに因州黄連という名前も付

ファクターをターゲットとするものが細胞増殖を抑制することを示した。そけられている。しかし日本で流通してほとんどである。また、これらの薬物

こで、『温清飲』を構成する８種の生いる黄連のほとんどは中国産のもの

が心筋梗塞や脳梗塞の発症を防ぎ、死薬抽出物について個別に増殖抑制効果である。中国で普通に黄連といえば亡率を減少させるというエンドポインを検討したところ、黄連抽出物が平滑

C. chinensis を基原とするもの（味連と動脈硬化の治療薬としては、血管平滑筋細胞の増殖を抑制してアテローム

トで評価した場合に本当に有効である

筋細胞の増殖抑制効果を示し、『温清も呼ばれる）で、その他 C. deltoides はかどうかについても議論がわかれてい飲』の作用は黄連によるものであるこ

雅連、C. teeta は雲黄という名前で流通る。このように真の有効性が不明確で、とが明らかになった。黄連抽出物の効している。

かつ高価な新薬ではなく、比較的副作

果は平滑筋細胞に特異的であり、他の黄連の含有化学成分としては何と用が少なく、かつ安価な漢方薬やいわ

細胞の増殖は抑制しない。また平滑筋

いってもベンジルイソキノリン骨格を細胞に対して細胞毒性を示すことなく、持つアルカロイドが有名である。その細胞周期を G 0 /G 1 期および G 2 /M 期

主成分である berberine は強い苦味をで停止させることによって細胞増殖を示し、抗菌作用、抗炎症作用をはじ抑制している。さらに、黄連中の平滑筋細胞増殖抑制成分の探索を行ったところ、この作用はベンジルイソキノリ
ンアルカロイドの１種 coptisine によるも の で あ っ た（ 図 ２）
。coptisine と 同
図１．Apo E ノックアウトマウスに自然発症した粥状動脈硬化
MeO

じベンジルイソキノリンアルカロイドのうち、メチレンジオキシ基を１つ持

O
N

MeO

O
N

O
OMe

OMe

O
O

OMe

OMe
palmatineNOberberine

coptisine

図２．黄連に含有されるベンジルイソキノリンアルカロイド

16

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

図３． coptisine、berberine、palmatine の平滑筋細胞増殖抑制作用

−⑤

図４．黄連（左）と黄柏（右）左上は国内産、左下は中国産の黄連

め種々の薬理作用を示し、berberine
chloride として家庭用整腸薬等にも配合されている。berberine そのものは黄連だけでなく、キンポウゲ科やメギ科に属する各種植物にも含まれており、日本では berberine chloride の製造原料

図５．黄連と黄柏アルカロイドの HPLC 分析

としてはミカン科の木本植物であるキとして berberine によるものだけであ用」を上げている成書もある（佐竹元

ハ ダ（Phellodendron amurense ） の 樹

るなら黄柏で充分に代用可能なはずだ

吉他

皮、すなわち黄柏（図４）を用いていが、漢方の臨床上の経験からは黄連とじほう、2001 年）。

る。黄柏は整腸薬や苦味健胃薬に配合

黄柏とは全く異なる生薬である。我々

日本薬局方では黄連と黄柏の品質されており（吉野の陀羅尼輔丸や、御が平滑筋細胞の増殖抑制作用を持つこ

評 価 に HPLC に よ る berberine の 定 量

岳山の百草丸は黄柏を主薬として配合とを示した coptisine は、黄柏には含有を 採 用 し、 黄 連 で は 乾 燥 物 に 対 し、している）
、先ほどの温清飲をはじめ黄されていない（図５）。このことは、温berberine chloride として 4 . 2％以上の

連解毒湯などの漢方薬に黄連とともに清飲構成生薬である黄柏が増殖抑制効

含量を、黄柏では同じく 1 . 5％以上の配合されることも多い。

果を示さなかった結果とよく一致して含量を求めている。berberine 含量はも監修「漢方 210 処方生薬解説」

黄連と黄柏の薬能の差についてはこいる。coptisine は黄連と黄柏の薬能のちろん品質の指標として重要であるが、れまでいろいろと論じられてはきたが、差をもたらしている含有成分の一つで黄連の品質指標としては coptisine 含量

その実体については不明な部分が大きあろう。事実、黄連に特徴的な作用とについても注目していく必要があるかい。いずれにしても、黄連の薬効が主して「血性の各種炎症性疾患への作もしれない。

P roducts
生薬試験用コードNo.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）

022-07681

Berberine Chloride Standard

生薬試験用

20mg

7,000

036-11311

Coptisine Chloride

生薬試験用

20mg

19,600166-17641

Palmatine Chloride Standard

生薬試験用

20mg

23,000

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）17

ew Products
グリーンケミストリー

Wako

新規溶媒

シクロペンチルメチルエーテル【CPME】
シクロペンチルメチルエーテル（CPME）は、さまざまな有機合成反応や抽出操作において THF やジエチルエー

Wako

キラル相関移動触媒（Maruoka catalyst）（S , S ）-3,4,5-トリフルオロフェニル -NAS= ブロミド
（R , R ）-3,4,5-トリフルオロフェニル -NAS= ブロミド
（R , R ）-3,5- ビストリフルオロメチルフェニル -NAS= ブロミド

テルの代替として使用できる新規溶媒です。水への溶解性

分子デザインの容易なビナフチル環を二つ有するスピロ型

が小さく、過酸化物の生成が少ないことから、他のエーテ

光学活性アンモニウム塩であるキラル相関移動触媒が京都大ル系溶媒と比較して、取扱いが容易です。

学の丸岡教授によって考案されました。この触媒は、α,α−ジアルキル−α−アミノ酸の合成にきわめて有効です。さ
まざまな側鎖を有するα−アミノ酸を不斉合成することがで

OCH3

き、製薬、材料、食品の分野で多様な用途があります。
F

F

F

C6H12O=100.16

F

–

N+

特

F

F

Br

–

N+

Br

長
F

●水への溶解性が小さい

F●乾燥が容易F●過酸化物の生成が少ない

C56H34BrF6N ＝ 914.77

F

F

F

C56H34BrF6N ＝ 914.77（S , S ）- 3, 4, 5-Triﬂuorophenyl-NAS Bromide （R , R ）- 3, 4, 5-Triﬂuorophenyl-NAS Bromide

規

格

反 応 例

外

観：無色〜ほとんど無色、澄明の液体

密度：0.856 〜 0.864g/mℓ

水■α−アミノ酸誘導体の不斉アルキル化反応 1)
OPh

分：0.01％以下

N

Ph

Br
OBut ＋

R₁( , )-3,4,5-TriﬂuorophenylNAS Bromide (1mol%)OBntoluene-50% KOH aq.
0℃ 1-2hO

過酸化物（H2O2 として）：0.005％以下

HN₂
1M citric acid

OBut

H

R₁

THF r.t. 10h

反 応 例

OBn

MgBr ＋

O

R 1 =OBn : Y. 81 %, 98 %ee
R 1 =H: Y. 83 %, 98 %ee■β−ヒドロキシ−α−アミノ酸誘導体への直接不斉アルドール反応 2)

0℃, 1HOH ＋

CPME or THF
1

O

Ph
PhCH₂CH₂CHO ＋ Ph

2

N

OH

( , )-3,5-Bistriﬂuoromethylphenyl-NAS Bromide (2mol%)OBut

toluene-1% NaOH aq.
0℃ 2h

O

OH

O

1N HClYield of Products（%） Sel. of Products（%）

Solvent

1

2

1

2

THF

OBut ＋ PhH₂CH₂C

PhH₂CH₂C
NH₂erythro isomer 90%ee

THF

44.8

33.1

57.5

42.5

THF＋CPME（1:1 vol.）

66.8

14.7

82.0

18.0

CPME

81.9

1.6

98.0

2.0

Y.80%（73 : 27）

OBut
NH₂
threo isomer〔参考文献〕
1）Ooi, T., Kameda, M., Tannai, H. and Maruoka, K.：Tetrahedron Lett ., 41, 8339（2000）.
2）Ooi, T., Taniguchi, M., Kameda, M. and Maruoka, K.：Angew. Chem. Int. Ed ., 41, 4542（2002）.

コード No.
031-19845
039-19841
037-19847

品名

規格

Cyclopentyl Methyl
Ether, with Stabilizer

和光特級

（安定剤

18

容量

希望納入価格（円）

500mℓ

3,500

3ℓ

11,00016kg

照会

BHT：約 0.005％）

和光純薬時報コード No.
品名
規格
容 量 希望納入価格（円）201-16401
100mg
30,000（S,S）-3,4,5NEW
有機合成用
207-16403 Triﬂuorophenyl-NAS Bromide
500mg 照 会
201-15921 （R , R ）-3,4,5100mg 30,000
有機合成用
207-15923 Triﬂuorophenyl-NAS Bromide
500mg 照 会
029-14921 （R , R ）-3,5100mg 30,000
Bistriﬂuoromethylphenyl-NAS 有機合成用
025-14923 Bromide
500mg 照 会

Vol.74, No.2（2006）

ew Products■イオン標準液

Wako

品目追加

コード No.

JCSS 認定標準液 (Japan Calibration Service System)
本品は計量法トレーサビリティ制度に適合した標準液です。当社は金属標準液・pH 標準液・イオン標準液の校正事業者として、商品１本ごとに、国家計量標準にトレーサブルであることを証明する「校正証明書」を添付しております。
この度、金属標準液８種と臭化物イオン標準液を追加しましたので、ご活用下さい。

■金属標準液
コード No.
016-18271
016-15471
013-18281
010-15491
013-15501
013-15481
NEW

Aluminium Standard Solution
Antimony Standard Solution
Arsenic Standard Solution

027-15321 Barium Standard Solution
023-14201
021-12661
030-16211
036-16171
036-17891
039-16161
037-16221
030-16191
039-17901
033-16181
034-16231
033-16201
091-03851
094-03841
127-04301
124-04291

NEW

品名Bismuth Standard Solution
Cadmium Standard Solution
Calcium Standard Solution
Chromium Standard Solution
Cobalt Standard Solution
Copper Standard Solution
Iron Standard Solution
Lead Standard Solution

129-05221 Lithium Standard Solution
136-13601 Magnesium Standard
136-12121 Solution
139-12111 Manganese Standard
133-12131 Solution
135-13671
138-13661

NEW

130-14961
144-06471
147-06461
162-19941

Mercury Standard Solution
Molybdenum Standard
Solution
Nickel Standard Solution
Potassium Standard Solution

濃度（mg/ℓ）
100
1,000
100
1,000

成

分

Al(NO3)3 in 0.5mol/ℓ HNO3
SbCl3 in 3mol/ℓ HCl

100 As2O3 and NaOH in ｗater
1,000 pH 5.0 with HCl
1,000 BaCO3 in 0.1mol/ℓ HNO3
100
1,000
100
1,000
100
1,000
100
1,000
100
1,000
100
1,000

Bi(NO3)3 in 0.5mol/ℓ HNO3
Cd(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3
CaCO3 in 0.1mol/ℓ HNO3
K2Cr2O7 in 0.1mol/ℓ HNO3
Co(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3
Cu(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3

100 Fe（NO3）3 in 0.1mol/ℓ
1,000 HNO3
100
1,000

Pb(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3

1,000 Li2CO3 in 0.2mol/ℓ HNO3
100
1,000
100
1,000
100
1,000
1,000
100
1,000
100

Mg(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3
Mn(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3
HgCl2 in 0.1mol/ℓ HNO3
Mo in 0.4mol/ℓ HCl・
0.2mol/ℓ HNO3
Ni(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3
KCl in Water

容量 希望納入価格（円）NEW

濃度（mg/ℓ）

品名

成分

容量 希望納入価格（円）NH4NO3 in 0.02mol/ℓ
Ammonium Ion Standard
019-15461
NH4+：1,000
HNO3
Solution
Bromide Ion Standard
024-15331
Br − ：1,000 KBr in Water
Solution
Chloride Ion Standard
032-16151
Cl − ：1,000 NaCl in Water
Solution
Fluoride Ion Standard
066-03401
F − ：1,000 NaF in Water
Solution
Nitrate Ion Standard
143-06441
NO3−：1,000 NaNO3 in Water
Solution
Nitrite Ion Standard
140-06451
NO2−：1,000 NaNO2 in Water
Solution
Phosphate Ion Standard
PO43 −：1,000 NaH2PO4 in Water
Solution
Sulfate Ion Standard
192-10821
SO42 −：1,000 Na2SO4 in Water
Solution
168-17461

50mℓ

3,900

50mℓ

4,500

50mℓ

3,900

50mℓ

3,800

50mℓ

3,900

50mℓ

4,000

50mℓ

4,000

50mℓ

4,000

■ pH 標準液
コード No.

品名pH 値（25℃） 容量 希望納入価格（円）

100mℓ

3,100

100mℓ

2,900

151-01845 Oxalate pH Standard Solution

1.68

500mℓ

2,500

100mℓ

4,500

168-12145 Phthalate pH Standard Solution

4.01

500mℓ

2,400

100mℓ

3,100

165-12155 Phosphate pH Standard Equimolal Solution

6.86

500mℓ

2,400

100mℓ

3,100

166-17445 Phosphate pH Standard Solution

7.41

500mℓ

3,300

100mℓ

2,900

205-08775 Tetraborate pH Standard Solution

9.18

500mℓ

2,400

100mℓ

2,500

037-16145 Carbonate pH Standard Solution

10.01

500mℓ

2,600

100mℓ

4,500

100mℓ

3,100

100mℓ

3,100

100mℓ

2,800

100mℓ

3,100

100mℓ

2,900

100mℓ

3,100

100mℓ

2,900

Wako

官能基選択的接触還元触媒

パラジウム−活性炭素エチレンジアミン複合体
Pd/C（en）はパラジウム活性炭素（Pd/C）のパラジウ

100mℓ

4,500

ムとエチレンジアミンが約１：１の割合で複合化した不均

100mℓ

3,000

一触媒です１）。中性条件下、さまざまな官能基を選択的に

100mℓ

3,100

100mℓ

2,700

接触還元することが可能です。反応後はろ過するだけで簡

100mℓ

3,000

単に除去することができます。また、通常の Pd/C に見ら

100mℓ

2,700

100mℓ

2,900

れるような発火性を示さず、保存安定性を有する優れた還

100mℓ

2,700

100mℓ

2,400

Pd/C（en）を用いた接触還元では、保護基であるベン

100mℓ

3,100

100mℓ

2,700

ジルエーテル２）、脂肪族アミンの Z（benzyloxycarbonyl）

100mℓ

3,100

基２, ３）、O -TBDMS（t -butyldimethylsilyl）基４）、エポキシ

100mℓ

2,700

ド ５） 及びベンジルアルコール ６） の還元を抑制しながら、

100mℓ

3,100

100mℓ

2,900

オレフィン、アジド、ニトロ、ベンジルエステル、芳香族

100mℓ

2,400

ハロゲンなどの官能基を容易に還元することが可能です１）。

100mℓ

3,100

100mℓ

2,700

100mℓ

3,100

元触媒であり、工業的レベルでの展開が期待されます。

〔参考文献〕
１）佐冶木弘尚，廣田耕作：有機合成化学協会誌，59，109（2001）.

100mℓ

2,700

２）Sajiki, H., Hattori, K. and Hirota, K. : J. Org. Chem ., 63 , 7990（1998）.

NEW

188-01951 Rubidium Standard Solution

1,000 RbCl in Water

100mℓ

4,900

３）Hattori, K., Sajiki, H. and Hirota, K. : Tetrahedron , 56 , 8433（2000）.

NEW

192-13861 Selenium Standard Solution

1,000 Se in 0.1mol/ℓ HNO3

100mℓ

2,500

.
４）Hattori, K., Sajiki, H. and Hirota, K. : Tetrahedron Lett ., 41 , 5711（2000）

100mℓ

3,100

100mℓ

2,700

165-17471

191-12111
199-10831

Sodium Standard Solution

1,000

100
1,000

NaCl in Water

NEW

199-13871 Strontium Standard Solution

1,000 SrCO3 in 0.1mol/ℓ HNO3

100mℓ

2,500

NEW

205-16301 Thallium Standard Solution

1,000 TlNO3 in 1mol/ℓ HNO3

100mℓ

2,900

NEW

202-16311 Tin Standard Solution
261-01431
264-01421

Zinc Standard Solution

1,000 Sn in 3mol/ℓ HCl
100
1,000

Zn(NO3)2 in 0.1mol/ℓ HNO3

５）Sajiki, H., Hattori, K. and Hirota, K. : Chem. Eur. J ., 6 , 2200（2000）.
６）Sajiki, H., Hattori, K. and Hirota, K. : J. Chem. Soc ., Perkin Trans . 1 ,4043（1998）.

100mℓ

2,400

コード No.

100mℓ

3,100

100mℓ

2,700

163-21441 Palladium-Activated Carbon Ethylenediamine
169-21443 Complex（Pd 3.5 〜 6.5％）

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

品

名

規

格

有機合成用

容量 希望納入価格（円）
１g

4,000

５g

13,50019

ew Products
Wako

調液の手間不要
酸−アセトニトリル溶液

0.1vol％酢酸−アセトニトリル
0.1vol％ぎ酸−アセトニトリル
0.1vol％トリフルオロ酢酸−アセトニトリル
HPLC 分析における溶媒として、酸を添加したアセトニ
トリルが頻繁に用いられます。特に、LC/MSの普及によWako

エンドファイトトキシン試験用
酒石酸エルゴバリン
ロリトレム B

エンドファイトトキシンとは主にイネ科牧草などの植物に寄生ないし共生する真菌（エンドファイト）が産生する神経毒素です。

り、酢酸・ぎ酸を使用するケースが増えました。本品は、牛、馬がエンドファイトトキシンに汚染された輸入牧草

LC/MS 用アセトニトリルに高純度の酸を混合調製した製品を摂取すると、BSE症状に似た中毒を起こし、筋肉の攣縮、です。調液後、UVや蛍光物質を保証しており、HPLC分析

起立障害、痙攣などの症状を引き起こすことが知られてい用溶媒として安心してご使用いただけます。

ます。これは細胞内外の電位差の保持の役割をするイオンチャンネルが阻害されるためと考えられています。また、

特長

エンドファイトトキシンは血液脳関門を通過する可能性が高いと考えられています。

●調液の手間がかからない

エルゴバリンとロリトレムBは、公定法として「飼料分●充実した品質保証● UV、蛍光物質を保証

析法」に測定法と規制値が決められています。現在、エン● 酢 酸− ア セ ト ニ ト リ ル、 ぎ 酸− ア セ ト ニ ト リ ル はドファイトトキシンとして知られているのはこの2品目で、規制値は下記の通りです。

LC/MS 適合性試験も実施
コード No.

品名

規格011-20551
NEW
017-20553

0.1vol％ Acetic AcidAcetonitrileNEW062-04721
068-04723

0.1vol％ Formic AcidAcetonitrile

NEW

206-16451
202-16453

容 量 希望納入価格（円）

LC/MS用

1ℓ
3ℓ

5,700
13,800

LC/MS用

1ℓ
3ℓ

5,700
13,800高速液体
0.1vol％ Triﬂuoroacetic
Acid-Acetonitrile
クロマトグラフ用

1ℓ
3ℓ

6,400
16,000

規 制 値
エルゴバリン：500 ppb 以下
ロリトレム B：1 , 800 ppb 以下

測 定 法

HPLC ／蛍光検出

エルゴバリン：励起波長 315nm 蛍光波長 415nm
ロリトレム B：励起波長 268nm 蛍光波長 440nm

関連商品
コード No.

エルゴバリン
品名

内容
（mℓ）

O

希望納入価格
容量
（円）

規格

H

CH₃

010-19911 Acetonitrile Solution（1+9） CH3CN:H2O＝1:9 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

4,000

017-19921 Acetonitrile Solution（2+8） CH3CN:H2O＝2:8 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

4,500

N

014-19931 Acetonitrile Solution（3+7） CH3CN:H2O＝3:7 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

4,500

H

011-19941 Acetonitrile Solution（4+6） CH3CN:H2O＝4:6 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

5,000

018-19951 Acetonitrile Solution（5+5） CH3CN:H2O＝5:5 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

5,000

015-19961 Acetonitrile Solution（6+4） CH3CN:H2O＝6:4 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

5,500

012-19971 Acetonitrile Solution（7+3） CH3CN:H2O＝7:3 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

5,500

019-19981 Acetonitrile Solution（8+2） CH3CN:H2O＝8:2 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

6,000

016-19991 Acetonitrile Solution（9+1） CH3CN:H2O＝9:1 高速液体クロマトグラフ用 1ℓ

6,000

20

品名

規格

容量

希望納入価格（円）

H
N

O

H
H₃C

CH₃

HN

N
O
CH
CH₃

C29H35N5O5=533.62（057-07391酒石酸エルゴバリンは酒石酸を介したエルゴバリンの２量体）

ロリトレムBO
H
H

H

コード No.

OH
O

N
H

C

O

214-01301
210-01303

Ultrapure Water

LC/MS用

1ℓ
3ℓ

1,600
3,000

016-19854
012-19851
018-19853

Acetonitrile

LC/MS用

100mℓ
1ℓ
3ℓ

1,900
5,600
13,000132-14524
138-14521
134-14523

Methanol

LC/MS用

100mℓ
1ℓ
3ℓ

1,050
1,600
3,450

コード No.

30,00040,000

H
N
H

OH

O
H

C42H55NO7=685.89

品名

規格

容 量 希望納入価格（円）018-20061

Acetic Acid

LC/MS用

50mℓ

5,500

057-07391 Ergovaline Tartrate エンドファイトトキシン試験用 1mg

067-04531

Formic Acid

LC/MS用

50mℓ

9,000

122-05071 Lolitrem B

和光純薬時報

H
O

O
H

O

Vol.74, No.2（2006）

エンドファイトトキシン試験用 1.3μg

ew Products
Wako

日本薬局方適合生薬有効成分（標品）

塩酸ベンゾイルメサコニン［６］−ショーガオールブシ（ハナトリカブトやオクトリカブトなど）に含有さカンキョウ（ショウガ）に含有される有効成分です。
源：Zingiber oﬃcinale Roscoe（Zingiberaceae ）起れる有効成分です。
源：Aconitum carmichaeli Debeaux起

Aconitum japonicum Thunberg（Ranunculaceae ）CAS No.：555 - 66 - 8

CAS No.：126266 - 38 - 4

コード No.

品名

199-14111 ［6］-Shogaol規格

容 量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用5mg（薄層クロマトグラフ用）

17,000ブシジエステルアルカロイド混合標準物質

コード No.

品名

ブシ末〔Powdered Processed Aconite Root〕（ハナトリ
カブトやオクトリカブトなど）に含有される有効成分です。

022-15491

規格

容 量 希望納入価格（円）Benzoylmesaconine 局方生薬試験用
5mg（薄層クロマトグラフ用）
Hydrochloride

16,000

源：Aconitum carmichaeli Debeaux起

Aconitum japonicum Thunberg（Ranunculaceae ）アスパルテームの分析にお使い下さい

Wako

L-α-アスパルチル-D-フェニルアラニンメチルエステル
食品添加物に収載されている「アスパルテーム」の試験項目にある、『他の光学異性体』を試験する際の対象物質としてお使いいただけます。

規格含量（HPLC）：95 . 0 % 以上
本品はアコニチン 0 . 05 mg、ジェサコニチン 0 . 05 mg、

水

溶

状 ：試験適合

メサコニチン 0 . 1 mg、ヒパコニチン 0 . 15 mg を含む混合標品です。
第十四改正日本薬局方 第二追補 解説書 一般試験法 試
薬・試液のブシジエステルアルカロイド混合標準溶液、純度試験用の混合標準溶液の調製に使用されます。使用時、りん酸緩衝液・アセトニトリル混液（１：１）5 mℓに正確に溶解してご使用下さい。
コード No.

品名

規格012-20581

Aconitum Diester
Alkaloids Standard

局方生薬試験用（純度試験用）容 量 希望納入価格（円）

コード No.

0.35mg010-20401 L-α-Aspartyl-D-phenylalanine
016-20403 Methyl Ester

15,000

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

品名

規格
生化学用

容 量 希望納入価格（円）
200mg
1g

15,00050,00021

ew Products
Wako

プロスタグランジン J2 誘導体■ 0 . 01 mol/ℓ Δ 12 - プロスタグランジン J 2、アセチレンア
ナログ・エタノール溶液

プロスタグランジン（PG）は、アラキドン酸のような
エイコサポリエン酸からシクロオキシゲナーゼ（COX）

CO2Hの作用により動物組織で合成される一群の生理活性物質です。細胞内情報伝達機構や生理調整機能に関与するメディ
エーターとして注目されています。

OOH

なかでもプロスタグランジン J 2（PGJ 2）類は、①抗炎症

C20H28O4=332.43

作用や抗腫瘍作用などを有すること、② PPARγなどの核内レセプターのリガンドとして作用すること、③そして、タンパク質中のシステイン残基と共有結合して標的タンパ

保存条件 不活性ガス封入・− 20℃・遮光保存

ク質の機能を制御することなどが報告されています。
■ 0 . 01 mol/ℓ 15 - デオキシ - Δ 12 , 14 - プロスタグランジン

コード No.

品名

規格

容 量 希望納入価格（円）047-29691

0.01mol/ℓ 15-Deoxy-Δ12, 14-prostaglandin J2 ･Ethanol Solution

細胞生
物学用

1mg 近日発売

040-29701

0.01mol/ℓ 15-Deoxy-Δ12, 14-prostaglandin
J2, Acetylene Analog･Ethanol Solution

細胞生
物学用

500μg 近日発売

047-29711

0.01mol/ℓ 15-Deoxy-Δ12prostaglandin J2･Ethanol Solution

細胞生
物学用

500μg 近日発売

167-22201

0.01mol/ℓΔ12-Prostaglandin
J2･Ethanol Solution

細胞生
物学用

500μg 近日発売

162-22251

0.01mol/ℓΔ12-Prostaglandin J2,Acetylene Analog ･Ethanol Solution

細胞生
物学用

500μg 近日発売

J 2 ･エタノール溶液

CO2H

O

C20H28O3=316.43■ 0 . 01 mol/ℓ 15 - デオキシ - Δ 12 , 14 - プロスタグランジン
J 2、アセチレンアナログ・エタノール溶液

CO2H

ポリアミンのアセチル体及びジアセチル体

Wako-ジアセチルスペルミジン
O-ジアセチルスペルミン

C20H26O3=314.42

生体内には 20 種類以上のポリアミンが存在し、その生体
12■ 0 . 01 mol/ℓ 15 - デオキシ - Δ - プロスタグランジン J 2・

内分布は、がん組織などの活発に増殖する部位に多いことが知られています。そのような部位ではポリアミン代謝もエタノール溶液

活発で、がん患者において尿中ポリアミン排泄量が増加す

CO2Hることが報告されています。特に代表的なポリアミンのスペルミジンとスペルミンのジアセチル体であるN 1 , N 8 - ジ
アセチルスペルミジン及びN 1 , N 12 - ジアセチルスペルミンO

C20H30O3=318.45は、尿中排泄量の増加が顕著であると報告されています。
コード No.

品名

規格

容 量 希望納入価格（円）12■ 0 . 01 mol/ℓ Δ - プロスタグランジン J 2・エタノール溶
液

CO2H

O

和光純薬時報N 1 -Acetylspermidine
n -Hydrochloride

017-20411 N 1,N 8 -Diacetylspermidine

細胞生物学用40mg

34,000

細胞生物学用40mg

36,000014-20421

N 1 -Acetylsperminen -Hydrochloride

細胞生物学用40mg

38,000045-29511

N 1,N 12 -Diacetylsperminn -Hydrochloride

細胞生物学用40mg

42,000OH
C20H30O4=334.45

22010-20381

Vol.74, No.2（2006）

ew Products
Wako

血中過酸化脂質の定量に最適です
ラボアッセイ TM 過酸化脂質（TBARS）

測定範囲
過酸化脂質濃度0 〜 40 nmol/mℓ

生体内に存在する脂質は、活性酸素などの作用を受けてキット内容酸化され、過酸化脂質を生じることが知られており、動脈●生理食塩液55 mℓ×１本硬化、脳血管障害、高脂血症、肝臓疾患、糖尿病などの疾● N/ 12 硫酸溶液

330 mℓ×１本

患や老化との関連が注目されています。本キットは、血液● 10％ りんタングステン酸水溶液

45 mℓ×１本中の過酸化脂質とチオバルビツール酸（TBA）の反応に● TBA 試薬60 mℓ×１本より生成した色素を蛍光測定することにより、過酸化脂質● n- ブタノール

300 mℓ×１本を定量することができます。

●標準液（1, 1, 3, 3-テトラエトキシプロパン５nmol/mℓ） 10 mℓ×１本

測定手順
試料

コード No.

品名

298-62901

TM

Lab Assay

規格
TBARS

細胞生物学用容 量 希望納入価格（円）
50回用

45,000←りんタングステン酸（硫酸酸性下で添加）
本キットは研究用試薬ですので、診断用に供することはできません。

遠心タンパク質と共に過酸化脂質を沈殿

沈殿←りんタングステン酸（硫酸酸性下で添加）

F - アクチン染色用プローブ

遠心ファロイジン，ローダミン X 結合

沈殿の洗浄：類似呈色物質除去

Wako

二環式ペプチドであるファロイジンは、細胞骨格を構成

沈殿する F- アクチンに特異的に結合することが知られています。

酸性条件下において、脂質過酸化物
よりアルデヒド類が遊離される。アルデヒド類は TBA と反応して赤色の蛍光物質を生成する←TBA 溶液
加熱

本品はファロイジンと赤色蛍光試薬ローダミン誘導体とを結合させたアクチン染色用プローブです。従来のローダ
ミン−ファロイジンに比べて鮮明に染色できます。

蛍光物質を n-ブタノールで抽出
蛍光測定

励起波長：515 nm

特蛍光波長：553 nm

長●強い蛍光強度
同時に操作した標準液の蛍光強度を比較することにより、試料●低いバックグラウンド中の過酸化脂質濃度をマロンジアルデヒド濃度として求める

デ ー タ
HS
２

N

OH

O

O
C

N

H

CH2

H H2O

感

N

HO

O

Malondialdehyde

■当社製品

SH

N

■他社製品（ローダミン−ファロイジン）

２H2O
N

CH

CH

CH

OH

OH

TBA

HS

C

N
OH

TBA pigment

度●精製水を試料として操作した場合の蛍光強度は 0 〜 23

同一条件でマクロファージの染色を行った。当社製品の方がマク
ロファージが明瞭に染まった●標準液を試料として操作した場合の蛍光強度は、60 〜100（マロンジアルデヒド 21 nmol/mℓに相当）

測定波長
励起波長：556 nm

再 現 性

コード No.

同一検体を５回以上同時に測定するとき、蛍光強度のCV 値は 10％以下

和光純薬時報

蛍光波長：574 nm

品名Phalloidin, Rhodamine
165-21641
X conjugatedVol.74, No.2（2006）

規格
細胞生物学用容 量 希望納入価格（円）
300回用

50,00023

ew Products
解 析 例

りん酸化 MAPKs の測定に
ヒト Proteome ProﬁlerTM ホスホ -MAPK アレイキット

A

MAP キナーゼ（MAPK）カスケードは細胞外からのさ
まざまな刺激情報を、カスケードを構成するシグナル伝達
因子のりん酸化を行うことで核へと伝達するシグナル伝達

B経路です。本品は、これらりん酸化 MAP キナーゼ群を検出するアレイキットです。メンブレン上に各抗体が固定化されており、試料中の各りん酸化 MAP キナーゼ群が特異C的に結合し、HRP 標識ストレプトアビジンによって検出できます（下記抗体マップ参照）。まとめて検出できるので個々のシグナル伝達因子ごとに免疫沈降 / ウェスタンブ
ロット法を行う必要がなく、非常に簡便です。

特長●抗体特異性が高い●５時間で定量できる●少量サンプルで解析できる（250 μg 以下）

rhIL- 1 βで 30 分処理した Hep G 2 細胞のライセート 200 μg をサンプルとして用い、その結果（A：未処理 B：rhIL- 1βで30分間処理）を画像ソフトで解析してグラフ化した（C）●免疫沈降 / ウェスタンブロット法の感度に匹敵

コード No. メーカーコード

キット内容● Phospho MAPK Array

４枚● Array Buﬀer（３種類）

各 21 mℓ×３本● Lysis Buﬀer

21 mℓ×１本● Wash Buﬀer（25 倍濃縮液）

21 mℓ×２本

品名

容 量 希望納入価格（円）Proteome ProﬁlerTM
1 Kit 104,000
Human Phospho-MAPK Array Kit

554-81471 ARY002

化学発光基質WesternGloTM 化学発光検出基質● Anti-Phospho-MAPK Detection Antibody Cocktail

１本● Streptavidin-HRP

１本

本品は HRP 標識を利用したアッセイ系において使用す●４-Well Rectangular multi-dish１枚

ることを目的とした化学発光検出用試薬です。A 液と B 液● Transparency Overlay Template

１枚を等量ずつ混合してご使用下さい。本品１セットでメンブ＊ WesternGloTM 化学発光検出基質（557 - 72171）との併レン（8 . 5 cm × 6 . 5 cm）50 枚以上（面積にして 2700 cm 2以上）に使用できます。ウェスタンブロット関連製品と併用をおすすめします。

せてご使用下さい。

捕獲抗体マップ

検出限界

持続限界

pg オーダー

最大２時間

使用方法
A 液と B 液を必要量だけ等量ずつ混合して使用する＊混合後は室温で１時間は安定であるが、なるべく 20 分

24

位

置

ターゲット

位

置

ターゲット

位

置

A1

A2

Control (+)

B19

B20

Akt2

D7

D8

ターゲット
MSK2

A21

A22

Control (+)

C3

C4

ERK2

D15

D16

HSP27

B3

B4

ERK1

C5

C6

JNK2

D17

D18 p70 S6 Kinase

B5

B6

JNK1

C9

C10

p38α

E3

E4

B7

B8

JNK pan

C11

C12

p38β

E5

E6

Control (−)

B9

B10

p38γ

C13

C14

RSK2

E7

E8

Control (−)

B11

B12

p38δ

C15

C16

GSK-3βE9E10Control (−)

B13

B14

RSK1

C17

C18

Akt3

E11

E12

Control (−)

B15

B16

GSK-3α/βC19C20

Akt pan

E13

E14

Control (−)

B17

B18

Akt1

D5

D6

JNK3

F1

F2

Control (+)

Control (−)

和光純薬時報以内に使用する内容● WesternGloTM A 液
TM● WesternGlo

B液

コード No. メーカーコード
557-72171

AR004

Vol.74, No.2（2006）

100 mℓ×１本
100 mℓ×１本
品名

容 量 希望納入価格（円）WesternGloTM Chemiluminescent
1 PK
Detection Standard

21,000ew Products
ターゲットタンパク質薬剤分子のドッキングシミュレーショ

ダイナミック分子モデリングシステム
eMD2 ー Empowered Molecular Design/Dynamics ーンでは、互いの分子間相互作用が考慮されなければなりません。現実の世界では、ターゲットタンパク質や薬剤分子の構

eMD 2（エムディースクエア）は、分子動力学シミュ

造はダイナミックに変化しています。これらがドッキングすレーション（MD）計算と分子操作をリアルタイムに連携ることで互いの立体構造も変化するでしょう。これらすべてさせた新しいタイプの分子モデリングソフトです。ユーの動きを考慮した分子モデリングによって、初めてリアリス

ザーフレンドリーなインターフェイスを通じ、通常のデス

ティックな状態を直感的に把握できます。

クトップコンピューター上で「分子間相互作用を実感しな「動いている分子を触って動かす」

がら、 動く分子を使った分子モデリング 」が可能とな

これが、これからの新しい分子モデリングです。

りました。

「よりリアルに、よりパワフルに、そしてより直感的に。」
これが我々の目指す、分子モデリングソフトの新しいカ
タチです。

力を感じる
eMD 2 ではユーザーによる分子操作中でも常に MD 計算
がリアルタイムに実行されています。このシミュレーショ

超高速 MD 計算 ( オプション )ンでは、各々の原子間に働く「力」が計算されています。

独立行政法人理化学研究所で開発された MDGRAPE- 3

ただ動いている分子を操作するだけでなく、この原子・分は、２原子間のクーロン相互作用やレナードジョーンズポ

子にかかる力を実感することで、よりリアルな分子間相互テンシャルなどを高速に計算する PC 拡張ボードです。こ作用の検証が可能です。eMD 2 では、ユーザー設定によっ

れを PC に搭載することで、通常の PC でも強力な分子動て、原子・分子が感じている力を、リアルタイムに表示し力学計算パワーが得られます。

ます。原子・分子にかかる力の向きと大きさを直感的に認eMD 2 はこのボードとも連携可能であり、大規模な MD識することで、これまでの分子モデリングソフトでは得ら計算も高速に実行できます。eMD 2 と MDGRAPE- 3 を連れなかった新しい視点・インスピレーションが生まれるで携させた場合、MDGRAPE- 3 を使用しなかった場合と比しょう。

べて、原子数 12 , 967 個の場合で 154 倍にもなります。
これは５ヶ月かかった計算が１日で終わることを意味し「分子の鼓動があなたの想像を刺激する」

ます。

eMD 2 は、リアルな分子モデリングを提供します。

水を溶媒としたCytochrome-CのMD計算を
1,000 step行うために要する時間

コード No.

動く分子をマニピュレーション
現実に存在する分子は、分子振動・拡散など常に動いてメーカーコード

品名容 量 希望納入価格（円）303-17151 MD-AC1Std eMD2 スタンダード アカデミック版

１セット

300-17161 MD-CP1Std eMD2 スタンダード コーポレート版

１セット 1,500,000

634-08061−

MDGRAPE-3 PCI-X アカデミック版−−

MDGRAPE-3 PCI-X コーポレート版

１枚
１枚

500,000
1,200,000
照 会

います。これらの分子ダイナミックスを考慮しなければ、現このソフトウェアは独立行政法人理化学研究所と株式会社

実に即した分子モデリングはできません。創薬開発におけるインフォグラムが共同開発したものです。

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）25

ew Products
Wako

染色体異常 CGH 解析

納期（サンプルが多数の場合はご照会下さい）

BAC アレイ解析サービス
BAC アレイとは、ヒトゲノム DNA 断片をクローニング化
した BAC（バクテリア人工染色体）クローンをスライドガラ
ス上にスポットしたアレイで、染色体の異常を検出できます。

サンプル受取り後、10 営業日

価

格

照会

お問合せ先：BAC アレイ解析サービステクニカル窓口
E-mail

当社では、2006年４月より、BACアレイを用いたComparative

bacarray@wako-chem.co.jp

genomic hybridization（CGH）解析受託サービスを開始しました。がん細胞などで生じる染色体コピー数の増加・欠失といった染色体異常のゲノムワイドなプロファイリングを行うサービスです。

特

非標識で細胞数・細胞形態変化を
リアルタイム 自動測定
リアルタイム細胞計測システム【RT-CESTM】

長● Macrogen 社 MAC ArrayTM* を使用●約２週間で結果をご提供●独自の蛍光色素と独自の技術で、再現性の高いデータを提供●トレーニングを受けた専任の研究者が対応●オリゴ DNA を用いた CGH 解析に比べ、微細な変化をとらえることが可能＊MAC ArrayTM は、韓国ヒトゲノムプロジェクトで作成された BAC クローン（DNA 断片）をスライドガラス上にスポットしたアレイで、スポットされている BAC クローンは FISH 法によって遺伝子座が確定されています。

細胞アッセイは標的細胞に対する薬剤やリガンドの有効性、選択性、透過性、溶解性、安定性、作用機序などを理解する上で非常に重要です。多くの細胞アッセイはエン

応用用途

ドポイント測定で行われており、一部の情報しか得られ●がん関連遺伝子の探索

ず、細胞標識や細胞破壊を伴います。実際の細胞は生き●がんの診断の基礎研究ており、生物学的細胞プロセスはダイナミックであるた●がんの進展の研究

め、このような一面的な測定には限界があります。細胞プ●悪性化に関与する染色体異常領域の探索

ロセスを十分に理解し、測定するためには、薬剤処理や成●診断マーカーの探索

長因子による刺激に対するダイナミックな細胞反応のカイ

解析の流れ

ネティックデータを提供できる非侵襲測定システムも必要です。それが RT-CES システムです。既に全米の多くのサンプル入手
ハイブリダイゼーション
ゲノムDNAの蛍光標識
スキャニング
蛍光標識DNAの精製
データ解析

大手製薬メーカーや公的機関において実績があり、多様な細胞アッセイに有効に使われています。現在 16 ウェル
プレートタイプと 96 ウェルプレートタイプがありますが、さらに 96 ウェルプレートを同時に６枚測定できるマルチ
プレートタイプ及び細胞浸潤を測定できる CIM 16 ウェル

解析結果

タイプが加わりました。

以下のデータをご報告します。
●画像データ（TIFF）●WY-547-WY-647 マージデータ（BMP）●解析 raw データ（Excel、Text）●Log2 スキャタープロット（BMP）
Female-WY-647/Male-WY-547

96 ウェルマルチプレートタイプ

データは CD-R で納品します。

26

CIM16 ウェルタイプ

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

ew Products
応 用 例

励起・蛍光スペクトル●細胞増殖・細胞毒性の測定●細胞接着・細胞伸展の測定●細胞でのレセプターリガンド相互作用の測定
GPCR、受容体型チロシンキナーゼ、IgE レセプター、
EGF レセプター など●内皮細胞バリアー機能の測定● NK 細胞の細胞傷害活性の測定※価格はお問合せ下さい

DNA 存在下、１× PBS 中にて測定。

核酸電気泳動ゲル染色剤

励起波長：300 nm 付近

GelRedTM 核酸ゲル染色液（×10,000，DMF 溶液）
本品は核酸電気泳動において、ゲル内の核酸を染色することを目的としています。他ブランド品に比べ、安定な蛍

EtBrとの比較
1 2 3 41 2 3 4

GelRedTM 及び EtBr で染色し、チジウムブロミド（EtBr）と同じ方法で使えるため、大検出感度を比較した。特に低変扱いやすい製品です。

分子領域において検出感度の差が顕著に現れている。

長●高感度で光安定性に優れる

lane 1 : 200 ng●毒性が低いlane 2 : 100 ng●汎用性が高いlane 3 : 50 ng●専用フィルターなどは不要
GelRedTM

lane 4 : 25 ng
EtBr

M 社製品

検出物質

dsDNA/ssDNA/RNA

ゲルの種類

アガロースゲル / ポリアクリルアミドゲル

染色方法

異 な る 量 の DNA を １ ％ ア
ガロースゲルで電気泳動後、光が高感度で得られます。また、一般的に使われているエ

特最大蛍光波長：595 nm 付近＊

プレステイン法 / ポストステイン法両方とも可能

GelRedTM

EtBr

ポストステイン法のみ

プロトコル例

退色速度

遅い

速い

速い

■プレステイン法

毒

低い

高い

低い

１．融解した 50 mℓのアガロース溶液に本品 5μℓを加え、性＊ポリアクリルアミドゲルではプレステイン法はお奨めでよく攪拌させゲルを作成する（融解前に添加してもよ
い）。

きません。

２．電気泳動後、標準的なトランスイルミネーターを使用

蛍光強度の経時変化

して写真撮影する。
■ポストステイン法
１．本品 15μℓを 50 mℓの蒸留水もしくは泳動バッファーに加える。
２．電気泳動後のゲルを、この溶液内で 30 分程振とうする。
３．標準的なトランスイルミネーターを使用して写真撮影する。

1 × PBS 中にて測定。GelRedTM、M 社製品それぞれについて蛍光強度の経時変化を測定し、プロットした。

和光純薬時報コード No.

メーカーコード

品名

41000

GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain
10,000x in DMF

559-78731

Vol.74, No.2（2006）

容 量 希望納入価格（円）
0.5mℓ

22,00027

化学大家 402
フリートリッヒ・ヴィルヘルム・オストヴァルト（1853 . 9 . 2 〜 1932 . 4 . 4）
科学史家

島尾

永康

である。オストヴァルトは物理化学よりも一般化学という名称を好んだ。

生立ち・修業時代（1853 〜 1881）

オストヴァルトには物理化学の先オストヴァルトは当時ロシア領だっ駆的研究者をいちはやく見抜く眼力がたラトヴィアの首都リガで、３人兄弟あった。グルドベルクとヴァーゲの質の次男として生まれた。父は桶屋の親量作用の法則、アレニウスの溶液の電方、母はパン屋の親方の娘で、両親は離理論、ファント・ホフの著書、『化

いずれもドイツ系入植者の子孫であ学動力学』と溶液理論、ネルンストのる。ギムナジウムのころ、すでにオス

ヴォルタ電池の起電力の研究などがそ

トヴァルトの興味の幅は広く、物理とれである。無名のギッブスとその相律

化学のみならず、文学、音楽、絵画の価値を誰よりも先に認めたのもかれに及んだ。手作りで物を作るのが好である。オストヴァルトは外国の、孤きで、家に工作室と実験室を作った。

立した物理化学の研究者にわざわざ会

父はリガ高等工業学校に入れたいといに出かけた。アレニウスとは生涯の友となった。会ってみるとグルドベル

思ったが、オストヴァルトはドルパト（現、タルテュ）大学化学科に入学した（1872）。

図１．オストヴァルト。1904 年、アントン・クラムロート画、パステル画。
87 × 44 cm。

ドルパト大学はドイツの大学ほど有リガ時代の二大著作業績の今ひとつ は『 物 理 化 学 誌 』 の 創 刊 で あ る

機化学一辺倒ではなかったので、平衡科医の娘、ヘレーネ・フォン・フライ（1887）。知名度も十分でなく、弱冠論や反応速度に興味をもつよう指導されヘアーと結婚し、５人の子供をもうけ34 歳で新分野の学術雑誌を創刊するた。卒論研究は、「塩化ビスマスの加水た。その一人、ヴォルフガングはコロのであるから、ル・シャトリエら 22

分解における水の質量作用」であり、こイド化学者となった。

人の国際的に著名な化学者の支持を取れが最初の出版論文となった。この研究り付けた。このときファント・ホフ

中、グルドベルクとヴァーゲの質量作用は、実際に編集はしないが、共同編集の研究（1866）を見つけた。かれは質量作用の法則の意味を理解し、それを利用

リガ時代（1881 〜 1887）

者にしてもらいたいという条件をつけた（オストヴァルト、『自伝』）。『一般し、広めた最初の化学者の一人である。

高等工業学校の化学教授となった。

化学教科書』と同様、この雑誌も初め

物理的性質の測定から反応を研究でき

教育熱心だった。化学科の学生が急増から成功した。オストヴァルトは有機るという考えに思い至り、溶液の反応したので、実験室の新築計画を任され、酸の電気伝導度を測定していたが、何に伴う密度の変化を精密に測定し、「親その参考とするため初めてドイツに旅

千という有機酸は商品としては入手で和力についての容量化学的研究」で修し、16 ケ所の大学の実験室を歴訪し、きず、このためドイツへ有機酸の托鉢士号を取得した。さらに反応に伴う屈多くの著名な化学者たちと会見した。

の旅に出た。その途上でライプツィヒ

折率の変化の測定を加えた、「容量化150 人用の実験室を造ったが（1885）、

大学教授への招聘の確定を知った。

学 的 お よ び 光 学 化 学 的 研 究 」（1878）

実習生は 193 人になり、翌年は 210 人

が博士論文となった。ガラス細工、木になった。この時期かれが考案した恒工、金工の器用さを身につけ、仕事振温槽は、世界中の実験室に普及した。

りは素早かった。生涯、高価な装置を

化学熱力学の研究と電気化学の研究に嫌い、大抵の測定装置を手作りしたの打ち込んだ。リガ時代の二大著作業績

ライプツィヒ大学の物理化学の教授はこのころからの習慣である。在外研のひとつは、過去 50 年間の物理と化学となったのは、オストヴァルトの生涯

究奨学金に応募したが、不合格だった。

の雑誌の文献を体系的に調べた結果にの最も重要な出来事であった（1887）。

合格していればドイツへ行ったであろもとづいた、野心的な、1764 頁の『一それは６年前に設置された、世界で唯う。ドイツへ行けばおそらく全盛時代

般化学教科書』、 ２ 巻（1885、1887）

一の物理化学の教授職で、初代は物理ライプツィヒ時代（1887 〜 1906）の有機化学に魅せられ、有機化学者に学者ヴィーデマンである。ランドル

なったであろう。ラトヴィアに留まっ

ト、ヴィンクラー、ファント・ホフが断ったあとにオストヴァルトが任命さたおかげで物理化学者になったと、後年、『自伝』で語っている。リガの外28

クは数学者、ヴァーゲは化学者だった。

図２．オストヴァルトの署名。

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

れたのである。ラトヴィア出身で、ドイツの大学を出ていないのがハンディ休業した（1896）。驚異的な記憶力もだったが、ヴィスリチェヌスと実験心衰えを見せ始めた。上級の学生と研究理学の創始者ヴントが支持した。就任について語ることが喜びよりも重荷

講演に対しても教授たちの間には、リとなってきたので、自費で助手 2 名をガからきたロシア人、古典重視のドイ

雇って委ねた。

ツのギムナジウム出身でなく、ドイツ

新築早々３人の日本人が留学した。

の大学出身でない人間に、まともな話

まず織田顕次郎が短期滞在し（1898）、
図３．大幸勇吉（オストヴァルト研究室への留学時、1900 年）。

その翌年、池田菊苗と大幸勇吉が同時題で、原子論の代替的立場としてエネ

米人がドイツ人より多いときもあっトヴァルトのおそらく最後の実験研究

ルゲティクを提唱した（図１、２）。

ができるかという偏見があった。かれは「エネルギーとその変化」という演に留学した（10 月 24 日）。大幸はオスた。1903 年までにオストヴァルトにに立ち会った（図３）。金属クロムを大学ではもともと農業化学のために師 事 し た ア メ リ カ 人 は 30 人 に 上 る。

塩酸で溶解するとき発生する水素の圧建てられた、旧式の、設備の悪い農学

オストヴァルト研究室は多くの院生を力の周期的変化の研究であったが、金教室を、農学・畜産学の教授と共同使ひきつけ、国際的な物理化学センター

属クロムが継続入手できなくなって研用しなければならなかった。最初の助となり、門下から世界中の 60 〜 70 人

究は挫折した。「オストヴァルトの興手に任命したのがネルンストである。

の大学教授が出た。

味は物理化学から離れかけていた。こ

それまでコールラウシュやボルツマン

アレニウスとの交流の影響で電気化の研究の結果はどう処理されたか全くについて物理学の研究をしていたネル

学的研究をおこなうようになり、電極知らない」と大幸は述べている。大幸

ンストにとっては物理化学者になる重における物質の酸化と還元、溶液の電は、オストヴァルト研究室の若い研究

大な転回点となった。オストヴァルト

気伝導度などを研究した。電気化学会者たち、ブレディヒ、ルター、ボーデの研究指導を受ける学生は、初年度はを設立して、その会長となり、『電気ンシュタインから次々に指導を受け、２人、二年目は１人という状態だっ化学誌』を創刊したが（1894）、電気

さ ら に 1900 年 ９ 月 ６ 日 か ら １ 年 間、た。しかしまもなく 30 人に増え、英

化学以外の論文も掲載できるように、

ゲッティンゲンのネルンストに師事した。

電気化学会を、かなりの反対を押し切って、「応用物理化学・ドイツ・ブンゼン協会」というオストヴァルト好みの大げさな名称に変えた（1898）。
「ブンゼン協会」と略称された。
1898 年１月３日、約 35 万マルクを費やした新研究室がリンネ通りに完成した。それまでの名称「第二化学教室」
を「 物 理 化 学 教 室 」（Physikalischchemisches Institut）と改称し、オストヴァルトがディレクター（教室長）となった。触媒の研究を始めたのは新しい研究室になってからである。高温
高圧で窒素ガスと水素ガスから鉄線を触媒としてアンモニアを合成した。さらにアンモニアを触媒で酸化して硝酸を作る方法を開発した。この硝酸製造の商業的成功（1906）がノーベル賞指名の要因となっている。
図４．オストヴァルト著、池田菊苗訳註、『近世無機化学』、明治 37 年（1904）、
東 京 開 成 館、 大 阪 府 立 図 書 館 蔵。
縦書き、１冊本で本文 1592 頁、序、目次、索引が 83 頁の大著。

新物理化学教室は順調に滑り出したが、教室長オストヴァルトの体調は順調とはいえなかった。過労のため講義中に倒れ（1893）、夏期ゼメスターを

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

図５．大幸勇吉著、『物理化学講義』、上
中 下、 ３ 巻、 縦 書 き、 明 治 40 年
（1907）、冨山房、奈良女子大学図書館蔵。物理化学と題した日本最初の書物である。上巻は函数から微分方程式までの数学、中下巻が物理化学。計 852 頁。図は中巻のタイトル・ページ。

29

池田は東京帝大の物理化学教授となり（1901 〜 1923）、オストヴァルトの無機 化 学 書（1900） を『 近 世 無 機 化

めの数学的なフィクションにすぎず、おびただしい化学教科書の執筆成されており、化学過程はエネルギー学』（1904）として訳出した（図４）。

オストヴァルトほど生涯を通じての転換であると確信するようになっ織田は京都帝大の物理化学教授となったえず、驚くべき速さで次々に化学教た。リューベックでのドイツ科学者・たが（1899 〜 1903）、４年後、病気の科書を書いた人はいない。「大オスト

医師協会大会（1895）では、「科学的ため退官したので、応用電気化学教授

ヴァルト」と呼ばれた上述の 1764 頁の物質論の克服」という講演をおこなに就任（1903）していた大幸が物理大著、『一般化学教科書』、にしりごみ

い、全現象を物質と運動に還元する機

化学教授に転じた（1904 〜 1927）。かする人々も多かったが、623 頁の『一械論を攻撃し、物質でなくエネルギーれは日本最初の物理化学と題した書

般化学概説』（1889）「小オストヴァル

こそ宇宙の基本であると強調して原子物、『物理化学講義』、３巻、明治 40ト」は、きわめて手ごろで多くの版を論を否定した。しかし科学者たちの納（1907）、を出した。852 頁の大著であ重ねた。物理化学実験の教育を重視し得は得られなかった。マックス・プラ

る（図５）。

たオストヴァルトは、『物理化学測定

ンクはエネルゲティクは形而上学にす

しかしオストヴァルトの興味は化学法』（1893）を書いた。これは 20 世紀

ぎないと批判し、反原子論者マッハでから哲学へと移っていた。エネルギー

を通じて物理化学実験と実験室に大きさえエネルゲティクに異議を唱えた。

の諸原理をさまざまな分野に適用した

かつて助手だったネルンストもオスト

諸科学を統合して、それを「自然哲な影響を与えた。質量作用則にもとづいて酸̶塩基指示薬を記述した『分析学」として構想した。この演題での講

化学の科学的基礎』（1894）は、ハン要性を強調した。それでも闘争的なオ

演を物理化学教室、植物学教室、法ガリー語、ポーランド語、フランス語、

ストヴァルトは一向にへこたれず、な

学講義室と次第に大きい講義室でおイタリア語、英語、日本語の各国語に

おもロンドンで、原子論に頼ることなヴァルトに同調せず、原子、分子の重こなったが、いずれも超満員だった

翻訳されて、分析化学の教育に革命をく化学結合を説明できると述べた。さ（1900）。そこで『自然哲学年報』を創もたらした。さらに『無機化学概要』

らに『エネルギー』（1908）を出版し刊した。アメリカのセント・ルイスの（1900）と『化学の学校』（1903）を出た。しかし 1909 年、ペランのブラウ

芸術と科学の国際会議の重要なスピーし た。『 電 気 化 学、 そ の 歴 史 と 教 説 』

ン運動の研究に接してはじめて、オスカーとして招かれたが、部門は化学で（1894 〜 96）も大著である。科学史をトヴァルトは原子論に対する公的立場なく哲学だった（1904）。翌年の夏学重視して『精密科学の古典論文集』（オを変え、原子論を受け入れた。それ以期の化学講義を免除して欲しいと大学

ストヴァルト・クラシカー）を創刊し後かれの著作の中でのエネルゲティクに申し出たが、認められなかったのは社会的、政治的な信条へと変わってで、辞表を出した（1905）。その数週（1889）、232 巻を出した。きわめて個性的な書物、『化学の根本原理 ̶̶ す

間後、第一回独米交換教授に指名されべての化学教科書への入門書』（1907）

令」を意識して、『エネルギー的命令』

たので、1906 年まで大学教授としてでは、合理的科学体系の形はとるが、を書いた（1912）。「エネルギーを浪費

留まり、ハーバード大学その他で講義

個々の物質の性質にはかかわらない、するな。エネルギーをより有益な形にした。オストヴァルト研究室の重要な「物質なき化学」（Chemie ohne Stoﬀe）

転じるように努めよ」というのが、そ研究は講義と関連していたので、講義を説いた。そして『平易な化学史７講』の基本則である。

がなくなるのを残念がる人が多く、友（1908）を出した。ケンブリッジ大学

人たちは慰留したが、本人は大学が講での表彰では（1904）、オストヴァル

義を免除してくれたら留まるという。

トの著作はドイツ的深遠さとフランス

化学と哲学のいずれを取るかは本人次的明晰さを併せ持つと評された。

第というのが大学の態度で、本人は哲ツの大学のディレクターには定年はな
く、フィッシャーは 67 歳（1919）で、いく。たとえばカントの「倫理的命「ヴィラ・エネルギー」時代（1906 〜 1932）
ライプツィヒ近郊のグロースボーテ

学を取って引退した。このころのドイ

30

宇宙はさまざまな形のエネルギーで形

エネルゲティク

ン村に、豪壮な邸宅、「ヴィラ・エネ
ルギー」を建てて移り住み（1906）、フ

バイヤーは 82 歳（1917）でいずれもオストヴァルトは学生のころから熱リーの科学者としてエネルゲティクを死ぬまで在職した。オストヴァルトの力学に興味をもち、とくにギッブスの促進した。引退の３年後、触媒、化学

53 歳の引退は異例の早さであり、こ論文から強い影響を受けた。原子や分平衡、反応速度論の研究に対してノーれについては種々の論議がある。

子は、エネルギーの作用を説明するた

ベル化学賞を受賞した（1909）。化学者

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）

オストヴァルトは、よき教師、独創的な実験家、多作の著述家だったのみな
らず、精力的な編集者、巧みな組織者として物理化学の誕生と発展の中心人物だった。賞金の半分を使って、各国、各文化の間の懸け橋を意味する、「ブリュッケ」という国際的な知的活動組
織を設立し（1911）、全世界の科学者、作家を会員とし、思想と発見を交換して、世界平和に寄与しようとした。しかしこれは早くも第一次大戦で崩壊し

図６．オストヴァルト色立体。外周の純色には記号がついている。赤の２つの色相を除去して断面を示したものである。

た。物理化学教室に留学生が多かった
ことと、国際会議への出席の経験から、き、画材にも大きな関心をもっていた

エスペラントよりも簡単な、国際共通

オストヴァルトは、61 歳で宿願の色語、イド、を考案してその普及に努め

彩の科学的研究に着手したが、戦争中たが（1907）、これも戦争がおこると科で国外の研究者との交信のないまま独学者たちに顧みられなくなった。

自の色の体系をつくり上げた。すべて「私が手がけた多くの若者の中からの色は白色、黒色、純色の３成分の混優秀な学者が輩出したので、将来、傑合とした。この３成分を頂点とする正出する人物をどのようにして早期に認三角形は等色相三角形である。その白知できるかという問い合わせが、日黒辺を軸として垂直に立て、回転して本政府から留学生を通じて寄せられできる複円錐体がオストヴァルト色立

図 ７．オ ス ト ヴ ァ ル ト の 24 色 の 色 相 環（上）。色立体の白黒軸の、音楽のオクターブのアナロジーで８段階になっているグレースケール（下）。
（W. Ostwald,, 1923）。
大阪府立図書館蔵。この書物の図版の色票はすべて印刷したものではなく、染色した色紙を一片ずつ貼ってあるので、色票の部分が盛り上がっている。

た」、という書き出しで始まるのが、体である（図６）。純色としては、黄『大科学者たち：天才の生物学的研究』と藍、赤と青緑の２組の補色対の４色（1909）である。従来の伝記研究でなを色相環の基礎として等間隔に配置

おざりにされた生物学的条件に重きをし、その間に橙、紫、青、黄緑を置い

日、オストヴァルトの名前が最もよくおいたので、このような副題をつけたて８色相とし、それらをさらに３色ず言及されるのは、物理化学でもエネルという。創造的研究者はどのようにしつに分けて 24 色の色相環（図７）をゲティクでもなく、色彩科学の分野にて生成されるか、創造活動のテンポ、完成した（1920）。中心に対して相対

おいてである。『自伝』（1926）は３

そして創造活動の限界には、一定の法する色相はいずれも補色関係にある。

巻、1194 頁の大著である。病床につ則性があるという認識に立って、大科色を表示する色票を文字と数字で記号

くこと５日で死去。79 歳だった。

学者の「心理的伝記」（オストヴァル化した。色立体の上の頂点には白、下トの造語）の研究をおこなったものでの頂点には黒、外周には純色が配置ある。デーヴィ、マイヤー、ファラ

され、中心軸（グレースケール、図Ostwald, W. : Grosse Männer : Studien zur

デー、リービッヒ、ジェラール、ヘル７）を通る菱形の垂直断面は、互いにBiologie des Genies . Leipzig（1909）. ; Ostwald,

ムホルツの６人を個別の章で論じたの補色をなす２つの等色相三角形からな. ; Ostwald, W. :W. : Farbkunde , Leipzig（1923）

ち、さまざまな観点から大科学者を論り、白、黒、純色の混色した色が配置

じた６つの章が面白いが、なかでも創される。色立体によって色彩調和を論

造活動のテンポの速い科学者をロマンじた。かれの百年前にゲーテが画期的主義者、遅いものを古典主義者と分類

な、感覚心理学的『色彩論』を著し

Lecture , J. Chem. Soc ., 316 〜 332（ 1933）. ;て、それを自己の最高の業績と言いHolt, N. R. : A Note on Wilhelm Ostwald s

したことは有名である。

きったが、かれもその色彩研究を自己の最高の業績と確信した。たしかにオ

色彩科学
生涯を通じて趣味として風景画を描

ストヴァルト表色系はアメリカのマン〔参考文献〕

Lebenslinien, eine Selbstbiographie . 3 Bände,Berlin（1926）. ; Walden, P. Wilhelm Ostwald ,Berichte der Deutsch. Chem. Gesell ., A 65 , 101 〜
141（1932）. ; Donnan, F. G. : Ostwald Memorial

Energism , Isis , 61 , 386 〜 389（1970）. ; 大幸勇吉
「化学者としての予の思出」、『化学の領域』、第３巻、第 12 号（1949）．；都築洋次郎訳、『オストワルド自伝』、自伝第１巻の訳、東京図書（1979）．

セル表色系と並んで、最も普及したカ；日本色彩学会編、『新編・色彩科学ハンドブッ

ラー・オーダー・システムである。今ク』東京大学出版会（1998）．

和光純薬時報Vol.74, No.2（2006）31酵母形質転換試薬 第２弾 分裂酵母用 新発売

S. pombe ダイレクトトランスフォーメーションキットワコー

遠心操作不要！！
ワンステップ！！

ご好評をいただいております出芽酵母形質転換キットに加え、分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe ）専用の試薬キットを発売しました。目的プラスミドと専用試薬の混合液を酵母培養液に直接加えるだけの簡単な操作で形質転換を行うことがでドスクリーニングが可能です。
本品は、多検体向けの 96 ウェルプレート法と、少数検体向けのチューブ法の 2 通りのプロトコールを用意しています。

特長

形質転換効率●目的プラスミドと専用試薬を加えるだけのワンステップタイプ≧ 250 cfu/μg●コンピテント細胞の調製が不要● 96 ウェルマイクロプレートを用いることで、多検体処理が可能●ハイスループット向けに分注しやすい低粘性試薬を採用

操作方法■ 96 ウェルプレート法■チューブ法
酵母の培養

96 ウェルプレート

形質転換

YES 培地 2mℓ←YES 培地 25μℓ
コロニーを植菌

1.5mℓ容マイクロチューブ←プラスミド・試薬混合液※ 100μℓ←コロニーを植菌

静置培養，28ｰ30℃，21ｰ24 時間←培養酵母（A）25μℓ

OD600：0.2 に調製インキュベート，37℃，2 時間

菌体懸濁（プレートミキサー）
1mℓを14mℓ容ツーポジションチューブに移す←プラスミド・試薬混合液※ 100μℓ

プレーティング

振とう培養，28ｰ30℃，OD600：6.0ｰ7.0 まで

混合（プレートミキサー）

培養酵母・・・・A＊

インキュベート，46℃，2 時間

インキュベート，28ｰ30℃，5ｰ7 日
形質転換酵母

スポッティング 10μℓ
※プラスミド・試薬混合液（1 ウェル・1 チューブ当たり）

インキュベート，28ｰ30℃，5ｰ7 日

Transformation Reagent
プラスミド DNA
Carrier DNA

形質転換酵母＊42℃, 4 時間、または、37℃, 6 時間で行うこともできます。

キット内容

滅菌水で 100μℓに調製（20回用）（100回用）（500回用）●Sp Transformation Reagent

2.25mℓ×1

11.5mℓ×1

57mℓ×1●Carrier DNA（5 mg/mℓ）

0.1mℓ×1

0.5mℓ×1

1.25mℓ×2

コード No.
290-64301
296-64303
294-64304

品

名S. pombe Direct Transformation Kit Wako

90μℓ
1μg
4μℓ

規

格

遺伝子研究用保存条件−20℃保存容 量
20 回用
100 回用500 回用

希望納入価格（円）4,800
11,00040,000容 量
20 回用
100 回用500 回用

希望納入価格（円）4,800
10,00040,000

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コード No.
296-62701
292-62703
290-62704

品

名S. cerevisiae Direct Transformation Kit Wako

規格

遺伝子研究用収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 74 No. 2
2006 年 4 月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
発 行 所

32

印

刷

所

松田知憲
鰐部梢子
和光純薬工業株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
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 きます。従来法では困難であった多種菌株への同時処理が簡単に行えるため、お手持ちの遺伝子破壊株を用いたゲノムワイ