January 2001

Vol.69 No.1

Amyloid β-Protein Immunohistostain Kit（Aβ40, Aβ42 specific）
免疫組織染色用
特 長

1. C 末端特異抗体によりアルツハイマー病脳組織に沈（1-40）及びアミロイド
着するアミロイド B- プロテイン
B- プロテイン（1-42）のそれぞれを特異的に染色します。

2. 高感度に染色できます。
内 容1）抗アミロイド B- プロテイン（1-40）, モノクローナル抗7mL × 1体（クローン No. : BA27）2）抗アミロイド B- プロテイン（1-42）, モノクローナル抗7mL × 1体（クローン No. : BC05）
3）ABC 溶液（ストレプトアビジン- ビオチン- ペルオキ
10mL × 1
シダーゼ複合体溶液）
4）抗マウス IgG（H+L）, ヤギ , ビオチン結合 10mL × 1
5）ブロッキング用血清
10mL × 16）ぎ酸（90%）
15mL × 1
7）トリプシン, 結晶
100mg × 1
299-56701

50 回用

90,000 円

キットの性能につきましては、p.8 をご参照下さい。

Wako

目 次
百年前の化学「1901 年の化学を顧みて」 芝
哲夫 ……2
総説━━━━━━━━━━━━━━━━━━「B アミロイド : C 末端特異抗体が明らかにしたこと」
岩坪
威 ………6「ポリ (ADP- リボース ) 代謝の生理的役割」
丸田 英晴 ……12
「キラル化合物の絶対配置決定試薬としての亜鉛ポルフィリン二量体」
Victor Borovkov、井上 佳久 ……31
シリーズ━━━━━━━━━━━━━━━━＜ Talking of LAL ＞「第 42 話 エンドトキシンの糖鎖」
土谷 正和 ……25
<How to 組織イメージング >「第 2 回 骨・軟骨系病変 2」
石川喜美男、三瓶 接子、宮 哲正、
久川 芳三、牛込新一郎 ……………20< 脳科学一口メモ >「GDNF ファミリーとニューロトロフィンファミ
リーの相互作用」
松岡 一郎 ……10テクニカルレポート━━━━━━━━━━━「Fast LC における検出器のレスポンスの影響」
福本 昌巳 ……28
新製品フラッシュ━━━━━━━━━━━━
アミロイド B- プロテイン免疫組織染色キット …1,8
PTP、フルオロスパーク TM PTP アッセイキット …5W-5 塩酸塩、W-7 塩酸塩 …………………11
オステオゲニック成長ペプチド、ペプチドグリカン …15
PIERCE 社 RestoreTM ウエスタンブロットスト
リッピングバッファー 他 ……………………16高効率ハイブリダイゼーション溶液、プロテイ
ン G 他 ………………………………………17（株）シバヤギ レビス® IgE-ELISA キット …18
Genzyme TECHNE 社 ヒト AN' ALYZA 化学
発光イムノアッセイキットシリーズ …………19
脱灰液、脱灰中和液 …………………………22
TM
オステオレジン 包埋キット、カルノア液 ……23
ベンゾジアゼピン系化合物、
バシトラシン亜鉛、
エンドセリン …………………………………24
EGF レセプター溶液、ZAP-70, ヒト , 組換え体 ,溶液、硫酸転移酵素 , ヒト , 組換え体 , サイトゾ
ル抽出液 ……………………………………26
0.347mol/L クロ ム 酸 カリウ ム 溶 液、0.347
mol/L チオ硫酸ナトリウム溶液、テアフラビン………………………………………………27
t- ブチルメチルエーテル 300, 2000、Trikonex
AB 社 クロマトフラッシュチューブ…………29
プレセップ ®けいそう土、顆粒状 …………30
亜鉛ポルフィリン二量体 ……………………33
脱水溶媒 ……………………………………34
PARP ウエスタンブロットキットワコー ………36

1
1

9

1901 年の化学を顧みて大阪大学名誉教授

放射性エネルギーが測定される

芝哲夫

高峰譲吉、上中啓三によりアドレ
ナリンが結晶化される。

Pierre Curie（1859-1906）がラジウ
ムから放射される放射線の熱量を測定

高岡で生まれ、大阪医学校、工部大し、1 グラムあたり、1 時間に 140 カロ

学校で学んでから渡米した高峰譲吉

NCH3リーであることがわかった。これは燃OH（1854-1922）
はニューヨークに高峰研

焼や爆発などの通常の化学変化で放究所を設立した。1900 年 7 月 21 日に出されるエネルギーに比較してはる

助手の上中啓三の手によってウシのかに大きいものであり、原子内部に厖

副腎から血圧上昇作用を持つホルモ

大なエネルギーが内蔵されていること

ンアドレナリンの抽出、結晶化に成功
図 1. トロピン

がはじめて認識された。

し、翌 1901 年に発表して 12,13,14）、第4785 号の特許が得られている。
光の圧力が測定されるロシヤの Petr Nikolaevich Lebedev（1866-1912）がグラスファイバーで吊G. Merling による構造研究が行われていたが、1897 年に至って R. Willstä tter はトロピンの化学構造を確定されていて、その有効成分をそれぞれした 4,5）。

epinephrine, suprarenin と名付けられ

J. Abel や O. von Fü rth によって研究るした金属板にアーク灯の光を照射しWillstä tter は 1901 年から始まる 3ていたが、純粋な結晶を得るに至ってて、そのねじれから光の圧力をはじめ

報

6,7,8）

において、トロピン合成法と呼いなかった。高峰、上中によって得らて測定し、電磁気学の理論と一致する

ばれるその骨格の合成法を発表した。

れたアドレナリン adrenaline は世界最ことを発表した。この現象は後にコン

この Willstä tter のトロピン合成はアト

初のホルモンの結晶化であった。現在、プトン効果の発見によって追認された。

ロピンアルカロイドの重要性にかんが高岡市に「高峰譲吉博士」の胸像、西み、その後、有機化学者の注目を集め、

宮市名塩に「上中啓三翁顕彰碑」がR. Robinson9,10）や C. Schöpf 11）らによ建っている。

新希土類元素ユーロピウムが分離されるる生理的条件下における有機合成の改良合成法の報告が続いた。

この年までに希土類元素としては

11 種が 知られるのみであった。 W.
Crooks1）と P. E. L. de Boisbaudran2）
は鉱石サマルスキー石のスペクトル
分析によって新元素の存在を予告してい た が、この 年に Eugèen Anatole

Demarcay（1852-1903）に よ っ てceria 鉱石の分別結晶により、その新元素に当る原子番号 63 の希土類元素が 分 離 さ れ て、ユ ウ ロ ピ ウ ム

Europium Eu と命名された 3）。

トロピン合成法確立される

1880 年代にアルカロイドのアトロピ
ンやコカインの骨格構造であるトロピ
ン tropin に つ い て A. Ladenburg や2

それまで副腎の血圧上昇作用は J.

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）▲

写真 1. 高峰譲吉
写真 2. 上中啓三

のエチレンに植物ホルモン作用があることをはじめて明らかにした。

エジソン電池発明される
発 明 王 Thomas Alva Edison（18インダンスレン染料発明される

47-1931）が水酸化ニッケル（II）を正極として、鉄粉から成る板を負極としRenè Bohn（1862-1922）がインジて、水酸化カリウムを電解液とするアゴのアントラキノン誘導体の合成研究

ルカリ電池の一種、いわゆるエジソンを行っていた 1901 年に 2- アミノアン電池を発明した。これは鉱山や貨物車

トラキノンのアルカリ溶融によって、イなどの携帯移動用ランプに使われた。

ンジゴよりも安定で明るい色の色素を得 た 15）。これ は anthracen から得 た

indigo の意味で indanthren インダン
スレンと名づけられ、BASF によりこの年、Indanthren-Blau RS として 特 許

この年、ドイツの J. P. Bemberg 社に。さらにそのハロゲン

おいて、セルロースを銅アンモニア法

やスルホン酸誘導体をはじめとするにより、人造絹糸ベンベルグレーヨン

各種の Indanthren-Blau 系の染料のとする工業化に成功した。日本では旭開発に発展した

化成工業株式会社がベンベルグの商が出された
写真 3. 上中啓三のアドレナリン結晶化の実験ノート

人造絹糸ベンベルグレーヨンの工業化が行われる

15）

16,17）。

品名を用いている。

エチレンに植物ホルモン作用発見
される

石灰窒素が合成される
ド イ ツ の Adolf Frank と Nikoden

ノーベル賞制定される

この年オーストリアの Neljubow がCaro がカーバイドを 700 〜 1000℃ でダイナマイトの発明で巨万の冨を得

戸外でまっすぐに伸びるエンドウの芽

窒素ガスと反応させて石灰窒素を得た Alfred Bernhard Nobel（1833-

生えが実験室内では横向きに伸長することに成功した。石灰窒素はカルシ

1896）が、世界の平和と科学の進歩をることに気がついた。これは実験室の照明用ガス燈の中に含まれる物質にウムシアナミド CaCN2 を主成分とする
窒素肥料として、1906 年からイタリアの年ノーベル賞が制定された。第 1 回

よるに違いないと考えて、ガス中の揮で工業生産が開始された。

の 物 理 学 賞 に はド イツ の Wilhelm

発性炭化水素をテストして、0.06ppm

念願して残した遺言にしたがって、こConrad Röntgen（1845-1923）が「X

O

O

HN
NH

O

O

写真 4. R. ボーン

図 2. インダンスレン

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）3

ペッテンコーフェル逝く
ドイツの衛生学者で化学者で副腎障 害 の ア デ ィソ ン 病 を 報 告 し、Zeitschrift für Biologie を 発 刊 し た
Max Joseph von Pettenkofer （18181901）が、この年 2 月 10 日に亡くなった。
（実物大× 1.65）
写真 5. 1901 年のスウェーデンのノーベル賞切手。左よりファントホッフ、
ベーリング、一人おいてレントゲン。

ラウール逝く希薄水溶液の凝固点降下と蒸気圧降下が溶質のモル濃度に比例し、物質の種類によらないというラウールの線の発見」で、化学賞にはオランダの法則を発見し、溶質の分子量決定に道Jacobus Henricus Van' t Hoff（18521911）が「化学熱力学の法則および溶を開いたフラン スの Françcois Marie

液の浸透圧の発見」
により、また医学・日にグルノーブルで死去した。

Raoult （1830-1901）がこの年 4 月 1

生 理 学 賞 に はド イツ の Emil Adolf

von Behring（1854-1917）が「ジフテリアに対する血清療法に関する業績」

ノーベル賞切手を借用させて頂い

3）E.A.Demarcay, Compt. Rend., 132,1484（1901）.
4）R. Willstätter, Ber., 30, 2679（1897）.
5）R. Willstätter, Ber., 31, 1534（1898）.
6）R. Willstä tter, Ann. Chem., 317, 204（1901）.
7）R. Willstä tter, Ann. Chem., 326, 1（1903）.
8）R. Willstä tter, Ann. Chem., 326, 23（1903）.
9）R. Robinson, J.Chem.Soc., 111, 762（1917）.
10）R. Robinson, J.Chem.Soc., 111, 876（1917）.
11）C, Schö pf, G. Lehmann, Ann. Chem.,
518, 1（1935）.
12）J. Takamine, Amer. J. Pharmacy, Nov.,
523（1901）.
13）J. Takamine, J. Soc. Chem. Ind., Jul.
746（1901）.
14）高 峰 譲 吉、東 京 化 学 会 誌、23、416（1902）.
15）D. R. P. 129 845（1901/1902）（BASF）.
16）D.R.P. 129 846（1901）; A.P. 692,762.
17）D.R.P. 129 847（1901）.

た伊藤良一氏に感謝申し上げる。

によりそれぞれ受賞した。

NBS が設立される
米 国 の National Bureau of Stand-ards 規格標準局がこの年創立された。

〔参考文献〕
1）W.Crookes, Compt. Rend., 102, 1464
（1886）.
2）P.E.L.de Boisbaudran, Compt. Rend.,
114, 575（1892）.

ここで検討された長さ、質量等に関する標準方式を NBS 方式と呼ばれる。

ベルツが日本の科学を批判する
明治 9 年（1876）に東京医学校教師とし て 招 か れ て 来 日し たド イツ 人

Ervin von Bä ltz（1849-1913）が明治
34 年（1901）の来朝 25 周年の記念講演で、「外人教師は元来学問の培養者たるべきであり、亦然らんと努力せしに係らず、日本人は教師から最新の収穫を受取ることで満足してしまったのである。この新しい収穫をもたらす根元の精神を学ぶことをせずに」と語って、日本人の西洋学問に対する態度を4

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）▼

痛烈に批判した。

写真 6. ミュンヘン旧南墓地のペッテンコーフェルの墓

シグナル伝達の制御機構の解明に
プロテインチロシンホスファターゼ（PTP）
タンパク質のチロシン残基のりん酸化反応は、細胞増殖・分化、がん化、アポトーシスなど様々な生命現象で重要な働きを担っています。プロテインチロシンホスファターゼ（PTP）はチロシンキナーゼ（PTK）
とともに、チロシンりん酸化を介した情報伝達系で重要な調節的役割を果たしています。

CD45 PTP, Human,
recombinant

LAR PTP, Human,
recombinantT-cell PTP, Human,
recombinant起起

源 ： Human soluble catalytic

起 源 : Human cytoplasmic 38kD

LAR-D1 domain, expressed in E. coli
活 性 ： 約 15,000 units/mg
分子量 ： 37kD

T-cell PTP, expressed in
E. coli
活 性 : 約 5,000 units/mg
分子量 ： 38kD

活

源 ： Human CD45 cytoplasmic domain（residues 5841281）, expressed in yeast
性 ： 約 20,000 units/mg

分子量 ： 95kD

YOP PTP, Y. enterocolitica,
recombinant起

コード No.

源 : Y. enterocolitica yop51,

expressed in E. coli
活 性 : 約 170 units/mg
分子量 : 33.5kD

037-17941

品 名CD45 PTP, Human,
recombinant

規

格

容

量

希望納入価格（円）

生化学用

20Fg
（100FL）

40,000122-04851

LAR PTP, Human, recombinant

生化学用

100 units

25,000208-15051

T-cell PTP, Human,
recombinant
YOP PTP, Y. enterocolitica,
recombinant

生化学用

100 units

25,000

生化学用

50Fg（100FL）

45,000250-00481

消光蛍光法を用いた PTP 活性アッセイキット
FluorosparkTM PTP Assay Kit
FluorosparkTM PTP アッセイキットは、消光された蛍光性
りん酸化ペプチドを基質として、RI 法に匹敵する感度で簡便にプロテインチロシンホスファターゼ（PTP）活性を測定することができます。

〔測定原理〕
非蛍光性のりん酸化ペプチドを基質として、ホスファターゼで脱りん酸化した後、キモトリプシン消化により生じた蛍光性ペプチドを測定します。

マイクロプレートへの適用が可能ですので、多検体処理に非常に有用です。
〔特長〕

1. RI 法に匹敵する感度（りん酸の絶対量としてサブピコモル）で測定可能。

2. 遊離したりん酸を測定しませんので、りん酸存在下でも測定可能。

299-55601

100 回用

30,000 円

10% dephosphorylation

110FL
1.5mL
220FL
40FL
220FL

sampleSubstrate Solution
Reaction Buffer
Chymotrypsin Solution
Calibrator
Stop Solution（10mmol/L Vanadate）

Fluorescence intensity〔キット内容〕

substrate + chymotrypsin

3. 操作が簡便で、短時間に測定することができます。
4. 細胞抽出物を用いた測定が可能。
5. マイクロプレートを用いた多検体処理が可能。

カイネティック測定

骨芽細胞様細胞株細胞質画分を用いた PTP 活性測定
（データ提供 : 北海道大学歯学部歯科薬理学講座）

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

5

βアミロイド : C 末端特異抗体が明らかにしたこと
東京大学大学院

薬学系研究科

臨床薬学教室岩坪

威にかけての一部分として切り出される

1. はじめに

2. βアミロイドの同定

アルツハイマー病（AD）
は老年期痴

老人斑は大脳皮質などに出現する

呆の原因として最も頻度の高い神経

シミ状の構造物で、細胞外に蓄積したAB の形成には N 末端を切り出す B セ
クレターゼ（1999 年に新規のアスパラ変性疾患であり、病理学的には大脳をアミロイド物質と、変性腫大した神経

ギン酸プロテアーゼとして同定され、ことが明らかになった（図 1）。即ち、中心とする広汎な神経細胞脱落ととも突起、反応性ミクログリアやアストロサに、老人斑（senile plaque）、神経原線

イトなどのグリア細胞から構成される。

BACE と命名された）と、膜内で C 末
端を切り出す C セクレターゼという2 種

維変化（neurofibrillary change）と呼鍍銀染色を主に用いた従来の病理学

類のプロテアーゼの作用が必要であり、ばれる 2 種類の蓄積物が出現すること

では神経突起の意義が強調されることその性状に興味が集まった。

が特徴である。タウ蛋白からなる神経が多く、老人斑は neuritic plaque など

原線維変化は進行期に至って出現すの名称で呼ばれることも多かったが、る病変であり、神経細胞死との高い相1984 年に Glennerと Wongらは、脳に関が指摘されているのに対して、老人おけるもう一種類のアミロイド蓄積性斑は最も初期から出現し、疾患特異性病変である脳血管アミロイドから分子

脳アミロイドから回収される AB の C

上も AD により関係の深い病変とされ量約 4 キロダルトン（アミノ酸数約 40

末端は 第 42 番目の Ala まで伸びた

る。このため老人斑の主要な構成成分個）の新規蛋白を同定し、B アミロイドである B アミロイドの生成過程は AD

蛋 白 と 名 付 け た（現 在 amyloid B

3. A βの形成過程と C末端特異抗体の病因との関連において注目を集め、

peptide を略して AB と標記されること

AB42 が多いのに対して、正常細胞が分泌する AB は第 40 番目の Val で終わる AB40 が 90% を占める。この 2 残B アミロイドは過去十数年にわたり ADが多いため、以下この略語を用いる）。

基の差が何を意味するものかは当初

研究の主要な対象たり続けてきた。本

翌年には Masters, Beyreuther らによ

明らかでなかったが、1993 年、MIT稿では著者らの研究成果をまじえつつり老人斑アミロイドも同じく AB からなの Lansburyらは AB1-40, 1-42 を合成

AD における B アミロイド、特にその Cることが示された。AB の前駆体としてし、後者は前者に比してはるかに凝集末端の意義について考察したい。

クローニングされた BAPP は、695-

し易いこと、AB1-42 から形成された770 アミノ酸からなる一回膜貫通型蛋白であり、AB はその細胞外から膜内

seed をもとにアミロイド蓄積が進行することを in vitro の実験から示唆した。

βAPP

Aβ

β−secretaseα−secretaseγ−secretase

EVKMDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIATVIVITLVMLKKKQ
1

40 42

NL

I, F, G

スウェーデン型（670, 671）

ロンドン型
（717）

図 1. βAPP の構造（アミノ酸番号は 770 アミノ酸型最長アイソフォームに準じる）。各種セクレターゼによる切り出し部位を矢頭、FAD 変異の位置を矢印で示した。London 型変異では第 717 残基の Val → Ile 置換が生じる。

6

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

同じ 頃、武 田 薬 品
工業筑波研究所の鈴 木 伸 宏 博 士 は、
独 自のア イデアでAB40 と AB42 の C
末 端を識 別 するモ
ノクローナル抗体を作出しつつあった 1）。
蛋白質を配列特異的に認 識 する抗 体は通常数アミノ酸からなる抗 原 決 定 部
位（エピトープ）を
認 識 するた め、第40 位と 42 位を区別

図 2. ダウン症脳における Aβ 42, Aβ 40 蓄積の経時変化（31, 44, 57 歳例）。若年ではびまん性老人斑は BC05 陽性（A）だが BA27 陰性（B）である。40 代に入り BC05 陽性斑（C）の一部が BA27 陽性を示し始め（D）、50 代後
半に至って BC05 陽性斑（E）の多くが BA27 陽性を示すようになる（F）。

することは困難であ（もしくは N）末端る。しかしフリーの C

示し始め（図 2C, D）、50 代では多くのて発症する。FAD の責任遺伝子とし構 造を 認 識 する抗 体（end-specificantibody）は、1 アミノ酸の相違でも識別が可能である。鈴木博士らは AB140 を抗原として、AB40 末端に特異的なモノクローナル抗体 BA27、AB3543 を用いて AB42 及び 43 末端に特異的な BC05 を作出した。

斑が BC05 とともに BA27 陽性となる（図 2E, F）。ここに至って AB の C 末端長の差が in vivo の脳内においても ABて AB の前駆体である BAPP そのものが最初に同定された（図 1）が、AB の蓄積性の決定要因となっていることが産生総量を顕著に増加させたのに対示されたのである。

し、最も頻度の高い London 型変異N 末端近傍の Sweden 型変異は AB の

ちなみに ABC 末端の染色には、他（AB C 末端からさらに数残基 C 末端寄の多くの AB 抗体と同様、アミロイド構りの 717 位が Val から Ile に置換されヒト脳における老人斑形成過程にお造を破壊し、抗原性を高めるギ酸前処る）をもつ BAPP 遺伝子を培養細胞にいて、AB40 と AB42 がいかなる時間・理が必要である。ABC 末端は構造上導入しても AB の総分泌量に変化は見

空間的関係をもって出現するのかに興内部に埋まった形をとっているのかもられなかった。BC05, BA27 を検出抗味をもっていた筆者らは鈴木博士と共しれない。また BC05 による染色は、体に用いた ELISA 系を創出して間も同研究を開始し、AD 脳において最初

当初通常レベルの希釈（抗体濃度 数なく、この問題に取り組んでいた米国に蓄積を開始するのは AB42 であり、AB40 の蓄積はこれより遅れて開始す

Fg/mL）
を用いていたところ、背景と特の Younkin 教授の研究グループに合異染色の十分なコントラストが 得難

流した鈴木博士は、London 型変異は、ることを免疫組織化学的に示すことがかったが、AB1-42 ペプチドによる吸正常では 10% 前後に保たれている

できた （図 2）。これに威力を発揮し収を試みたところ、不完全な吸収ではたのは、AD 脳、特にダウン 症 脳をBC05, BA27 で免疫組織化学的に解かえって特異的染色性が向上することから、比較的低めの濃度が適切である

AB42 の産生比率を特異的に増加させることを証明し 1）、ここにおいて AD 発症における B アミロイド、特に AB42 の析することである。ダウン症はヒトの染ことも判明した。さらに今回和光純薬・意義が確立されるに至った。

色体異常症として最も頻度の高い疾患

河野氏らの検討により、ギ酸処理に引であるが、脳においては 20-30 代に老人斑、50 代に至って神経原線維変化が出現し、AD の病変が時間を追ってうことも有効であることも明らかになり、完成されてゆくのを観察することが可

汎用性が向上した。

BAPP 変異は FAD のごく一部を占めるに過ぎず、半数以上が第 14 染色体上の locus と連鎖することが判明していた。この主 要な FAD 遺 伝 子は1995 年、St George-Hyslop 博士のグ

2,3）

き続いてトリプシンによる前処理を行
多様な固定状態のヒト剖検例における能である。30 代初頭のダウン症脳では、AD の最初期病変とされるびまん性老4. AβC 末端と家族性 AD人 斑 は BC05 の み に 陽 性 を 示 し、BA27 には陰性であったが（図 2A, B）、AD のごく一部は常染色体性優性遺40 代で一部の老人斑が BA27 陽性を伝形式をとる家族性 AD （FAD）とし

ル ー プ に よりクロ ー ニ ン グ さ れ、

presenilin（PS）と命名された。PS は 6〜 8 回膜を貫通する膜蛋白であり、すでに 60 種類以上の変異が報告されている。PS 変異が AD を発症する機序

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

7

が次の焦点となったが、1996 年から企業から相次いで公表され、その一部

97 年 に か け て、そ の 病 的 効 果 も
BAPP の London 型 変 異 と 同 じ く、AB42 産生の選択的上昇にあることがは既に臨床試験にも入りつつある。こを草分けとする AB C 末端特異抗体を

筆者らのグループを含む多数の研究利用した測定系が不可欠であり、これ室から報告された 。2000 年に入り、PS が AB C 末端の切り出しに関わる Cらの抗体が AD 研究の進展に果たしたセクレターゼの触媒サブユニットその数年間で、AB の産生・蓄積防止が ADものであるとの見解が急速に広がり、の発症・進行を遅延する効果を有する

PS とその作用により切り分けられる
AB C 末端は、ますます熱い注目を浴される。もしこれらの治療方策によりびるに至っている。

AD の発症が幾分なりとも抑制可能で4）

れらの治療薬開発にも、BC05, BA27

役割は計り知れない。21 世紀初頭のかどうかについても決着がつくと予想

Odaka, A., Otvos, L.Jr., Eckman, C.,
Golde, T.E. and Younkin, S.G. Science
264, 1336-1340,（1994）.
2）Iwatsubo, T., Odaka, A., Suzuki, N.,
Mizusawa, H., Nukina, N. and Ihara,
Y. Neuron 13, 45-53,（1994）.
3）Iwatsubo, T., Mann, D.M.A., Odaka,A., Suzuki, N. and Ihara, Y. Ann.
Neurol. 37, 294-299,（1995）.
4）Tomita, T., Maruyama, K., Saido,
T.C., Kume, H., Shinozaki, K.,
Tokuhiro, S., Capell, A., Walter, J.,
Grünberg, J., Haass, C., Iwatsubo, T.
and Obata, K. Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S.A. 94, 2025-2030,（1997）.

あれば、人類の福祉に大きく貢献することであろう。

5. 終わりに2000 年に入り、AB C 末端を形成す
る C セクレターゼの阻害剤が大手製薬〔参考文献〕
1）Suzuki, N., Cheung, T.T., Cai, X.-D.,C 末端特異抗体により Aβ40 と Aβ42 それぞれを特異的に染色します！
アミロイドβ- プロテイン免疫組織染色キット
免疫組織染色用
アルツハイマー病の病因論については様々な報告がなされていますが、病理学的変化の一つとしてアミロイド B- プロテイ
ン（AB）の脳内沈着が知られています。本品は、脳組織に沈着した AB40 と AB42 のそれぞれを特異的に染色するキットです。

〔操作法〕① 脱パラフィン② 洗浄（蒸留水中で 2 分間× 2 回洗浄します。）③ イムノペン処理④ ぎ酸処理⑤-1 洗浄イムノペンで切片を囲みます。

ぎ酸を約 150FL 滴下し、室温で 5 分間静置します。

水道水で 5 分間洗浄します。

⑤-2 洗浄冷 PBS-Tween20 に
2 分間浸漬します。

⑥ トリプシン処理

0.05% トリプシン溶液を約 150FL 滴下して、37℃ で 15 分間
反応させます。

〔次頁へ続く〕8

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

⑦ 洗浄⑧ ブロッキング

氷浴中、
冷PBS-Tween
20 で 5 分間× 2 回洗浄します。

ブロッキング用血清を 2 滴滴下して、37℃ で 30 分間反応さ
せます。

⑫ 洗浄

⑬ ABC 反応

氷浴中、
冷PBS-Tween
20 で 2 分間× 3 回洗浄します。

ABC 溶 液 を 2 滴 滴
下して、30 分間静置します。

⑨ 一次抗体反応

余分な水分を除いた
後、AB40 抗 体 溶 液
ま た は、AB42 抗 体溶液を 2 滴滴下して、37℃ で 1 時間反応さ
せます。

⑭ 洗浄

氷浴中、
冷PBS-Tween
20 で 2 分間× 3 回洗
浄します。

⑩ 洗浄

⑪ 二次抗体反応

氷浴中、
冷PBS-Tween
20 で 2 分間× 5 回洗
浄します。

⑮ 発色

,
抗マウス IgG（H+L）
ヤギ , ビオチン結合
溶液を 2 滴滴下して、37℃ で 1 時間反応さ
せます。

⑯ 停止

DAB 溶 液 を 約 150
FL 滴下して、室温で2 〜 10 分間反応させ蒸留水で 1 分間洗浄
し、反応を停止します。

ます。

⑰ 対比染色（マイヤーヘマトキシリン溶液）、洗浄、封入、検鏡します。
（注意）組織により反応温度・反応時間等最適条件をご検討下さい。
AB40、AB42 の染め分けは同一切片上では困難です。連続切片をご利用下さい。

〔参考文献〕

アルツハイマー病脳由来連続切片の染色例
左：Anti Aβ42
（クローン No.：BC05）による Aβ42 の染色
右：Anti Aβ40
（クローン No.：BA27）による Aβ40 の染色（写真提供：東京大学大学院薬学系研究科臨床薬学教室 岩坪
コード No.
299-56701

品1）Iwatsubo, T., Odaka, A., Suzuki, N.,
Mizusawa, H., Nukina, N. and Ihara,
Y. : Neuron, 13, 45（1994）.
2) Saido, T.C., Iwatsubo, T., Mann, D.
M., Shimada, H., Ihara, Y. and
Kawashima, S. : Neuron, 14, 457（1995）.
3）Odaka, A., Ishibashi, Y., Kikuchi, T.,
Kitada, C. and Suzuki, N. : Biochemistry, 34, 10272（1995）.
4）Fukumoto, H., Odaka, A., Suzuki, N.,
Shimada, H., Ihara, Y. and Iwatsubo,
T. : Am. J. Pathol, 148, 259（1996）.
5）Fukumoto, H., Odaka, A., Suzuki, N.
and Iwatsubo, T. : Neurodegeneration,
5, 13（1996）.
威 教授）

名

Amyloid β-Protein Immunohistostain Kit

規格

免疫組織染色用

包

装

50 回用

希望納入価格（円）90,000〔関連商品〕
コード No.

品

名

規

格

019-18761

Amyloid β-Protein（1-40）（Trifluoroacetate）

生化学用

016-18771

Amyloid β-Protein（1-42）（Trifluoroacetate）

生化学用

542-01011

Tau Protein, Human, recombinant, Solution

生化学用

容

量

1mg
0.5mg
50Fg

希望納入価格（円）36,00038,00025,000

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

9

8
脳科学一口メモ◯GDNF ファミリーとニューロトロフィンファミリーの相互作用
北海道大学大学院

薬学研究科

神経科学分野松岡一郎

前回は、ニューロトロフィンを中心に、神経栄養因子による神経細胞の機Neurturin

GDNF

Artemin
Persephin

能制御に関して述べた。そこで今回は、
もう 1 つの代表的な神経栄養因子ファ
ミリーである GDNF ファミリーについて、その生理的な役割やニューロトロ
GFRA2

フィンファミリーとの関係について紹
介したい。

GFRA3

GFRA1

GFRA4

グリア 細 胞 株 由 来 神 経 栄 養 因 子（Glial cell line-derived neurotro-

phic factor、GDNF）は、1993 年にグリオーマ細胞株の条件培養液より中枢

チロシンキナーゼ

ドメイン

Ret

Ret

の黒質ドパミン作動性神経に特異的にシグナル伝達作 用 する神 経 栄 養 因 子とし て 見 つ

図 1. GDNF ファミリーと受容体

Ret

か っ た 1）。GDNF は、1 次 構 造 上

TGFB スーパーファミリーのリガンドと低いながらも相同性（約 10%）を有しかになった（図 1）6）。GFRA1 は、発現る Trk- ニューロトロフィン受容体のシクローニングにより GDNF 結合活性

グナル伝達のカスケードに類似すると考えられている。

ている。その後、脊髄運動神経や種々を指標に同定された 蛋白質である。

の末梢神経細胞に対する作用が続々

GFRA1 は、C 末端で GPI アンカーをGDNF は、脳内の多くの部位に発現と報告されており、パーキンソン病や介して細胞膜に結合しているが、膜貫しているが、中でも黒質ドパミン作動

筋萎縮性側索硬化症（ALS）などにお通部分や細胞内ドメインを持たずシグ性神経が投射する線条体の神経細胞

ける GDNF の臨床応用の可能性が注

ナル伝達能はない。しかし GFRA1 は、における発現が比較的高く、逆行性神

目 さ れ て い る 2）。1996 年 に な り、

GDNF を細胞膜上に濃縮する役割を

経栄養因子として生理的にも機能して

GDNF と約 44% の 相 同 性を 有 する
ニューチュリン（neurturin）3）が見つかり、GDNF ファミリーと呼ばれるようになった。さらにこの 2 つの因子の相同

持 って い る 可 能 性もある。さらに、いると考えられる。しかし GDNF ノッ
クアウトマウスでは黒質ドパミン作動

GDNF ファミリー第 3と第 4 の因子、アGFRA 受容体もファミリーを形成しており、GDNF を 特 異 的 に 認 識 す る
GFRA1 以外に、neurturin、artemin、
persephin をそれぞれ特異的に認識す
る GFRA2、GFRA3、GFRA4 がこれまでに見つかっている 7-9）。また、図 1 に

4）ルテミン（artemin）とパーセフィン

示すように各リガンドと受容体間の弱部位周辺のグリア細胞から GDNF の5）（persephin）
が現在までに見つかっ

いクロストークも存在するようである。

産生が昂進することが多い 11,12）。また末梢神経系にも GDNF 応答性の神経

当 初、GDNF の 受 容 体 も 他 のTGFB スーパーファミリーの受容体とRet は単独で GDNF ファミリーのリ
ガンドを結合できないが、各 GFRA は単独でリガンドを特異的に結合するこでも、GDNF ノックアウトマウスの解同様に、セリン／スレオニンキナーゼとができる。続いて GFRA- リガンド複析から、大部分の内臓神経系や三叉型の受容体であろうと考えられていた。

合体は、共通なシグナル伝達受容体

神経節、交感神経節、後根知覚神経節

ところが意外なことに、1996 年になっRet と会合してこれを活性化し、チロの一部の神経細胞の生存・発達に必須て、これまでリガンドが不明であった

シンリン酸化を引き起こす。Ret のチな役割が明らかになっている 10）。特に受容体型チロシンキナーゼの Ret と新ロシンリン酸化によって引き起こされ後根知覚神経節では、痛みを伝える

たに見つかった GFRA1 が機能的なるシグナル伝達のカスケードの下流は、小型神経細胞が GDNF 応答性であり、

GDNF 受容体を形成することが明ら

やはりチロシンキナーゼ型受容体であNGF 応答性との関連が注目される。

性をもとにして、縮重プライマーを用いた PCR やデータベースの検索から

ている。

10

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

性神経はほとんど影響受けないので、単一ではなく複数の GDNF ファミリーのリガンドや他の神経栄養因子も作用していると想像される 10）。一方、中枢および末梢の神経傷害時には、傷害細胞が一定の割合で存在している。中また neurturin は、中枢の黒質ドパミ

ノイン酸が協同的に作用して TrkC と〔参考文献〕

ン作動性神経に対する作用に加えて、

GFRA1 の発現を誘導することによるニューロトロフィンファミリーが作用しことを見いだしているないことが知られる毛様体神経や顎下NGF 応答性の神経細胞を含む大脳基神経などの末梢副交感神経細胞に対

底部中隔由来の神経幹細胞株を塩基する逆行性神経栄養因子としての役

性繊維芽細胞増殖因子（bFGF）で処割が注目されている。一方、artemin

理すると、TrkA が誘導されることも見は、交感神経細胞の移動や生後の成いだしている 16）。このように各神経細熟における役割が示唆されている 13）。

胞には、特定の神経栄養因子に対する

1）Lin, L.F., et al. Science 260:1130-1132（1993）
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121（1998）
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9）Enokido, Y., Curr Biol 8, 1019
（1998）
10）Baloh, R. H., et al. Curr. Opin.
Neurobiol. 10, 103（2000）
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（1999）
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13）Nishino, J., et al. Neuron 23, 725（1999）
14）Kobayashi, M., et al. Mol. Brain Res.
53, 206（1998）
15）Thang, S.-H., et al. J. Neurosci. 20,2917（2000）
16）Miyasaka, N., et al. Neurochem. Int.,31, 557（1997）17）Kobayashi, M. & Matsuoka, I. Neuro
Report 11, 2541
（2000）

14,15）。さらに本来こ の よ うに GDNF フ ァミリ ー と応答性を誘導する因子やメカニズム

ニューロトロフィンファミリーは、種々が存在することが明らかになった。まの神経組織において互いに異なるタイた発達初期の交感神経細胞には NT3プの神経細胞に作用したり、あるいはと GDNF の両者が働きうるのである

同じタイプ神経細胞に作用している。

が、著者らはその両者を培養下で作用ではこのような神経細胞ごとの神経栄させると、GDNF による Ret のチロシ

養因子応答性の特異性はどのようにしンリン酸化が NT3 の存在によって著して決定され、そのことにはどのようなく増強されるとともに生存細胞数も著生理的な意味があるのであろうか。例

しく増加することを見いだしている 17）。

えば、神経堤細胞の分化により生じた

これは本来独立であると考えられてい発達初期の交感神経細胞は、TrkC やた、trk 受容体と Ret 受容体の間でチRet を発現し、まず NT3 や GDNF にロシンリン酸化を介した相互作用が存

対する応答性を獲得しているが、その在することを示すものであり、限られた後標的細胞との接続が確立する時期

受容体量、限られた量のリガンドのもになると NGF に対する特異的受容体とでも神経細胞が生存・機能していくである TrkA を発現して、末梢標的細ことを可能にするメカニズムであると胞から供給される NGF に依存して生もいえる。また今後、複数種の因子が存するようになる。著者らは発達期の同時に作用することによってもたらさ

交感神経細胞の有する NT3 と GDNFれる新しい神経機能がみつかるかもしに対する応答性は、骨形成因子とレチれない。

カルモジュリンアンタゴニスト
Ca2+/ カルモジュリン依存性のホス
ホジエステラーゼ（IC50=240FM（W5)、28FM（W-7））とミオシン軽鎖キ
ナーゼ（IC50=230FM（W-5）、51FM（W-7））を阻害するナフタレンスルホ

W-5 HClW-7 HCl

生化学用
外 観 : 白色〜わずかにうすい褐色、

生化学用
外 観 : 白色〜わずかにうすい褐色、結晶性粉末〜粉末

結晶性粉末〜粉末

溶解性 : 水、メタノールに可溶

ンアミド系のカルモジュリンアンタゴ

溶解性 : 水、メタノールに可溶CIニストです。
HCI

HCI
SO2NH(CH2)6NH2
SO2NH(CH2)6NH2
C16H22N2O2S・HCl=342.88

C16H21ClN2O2S・HCl=377.33

233-01731

5mg

2,600 円236-01721

5mg

4,500 円239-01733

50mg

9,500 円232-01723

25mg

16,000 円

237-01734

250mg

34,000 円

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

11

ポリ（ADP- リボース）代謝の生理的役割
東京理科大学

薬学部

生化学教室

丸田

英晴

はじめに
ポリ
（ADP- リボシル）化反応は真核細胞に特有なタンパク質の可逆的修飾反応の一つであり、主に核内において観察される。この反応では、ヒストン

H1、H2B や HMG タンパク質などのクロマチンタンパク質を中心としたア
クセプタータンパク質のグルタミン酸
残基に、酸化還元反応の補酵素として知られる NAD+ の ADP- リボース部分が転移した後、リボース- リボース間のグリコシド結合により重合し、ADPリボースのポリマーが合成される。こ図 1. ポリ（ADP- リボース）代謝回転のポリマーの合成はポリ（ADP- リボース）ポリメラーゼ（PARP）が司る。また、合成されたポリマーはポリ（ADP- リ

ゲノム末端に存在し、細胞の老化に古くから解析されノックアウトマウスもボース）グリコヒドロラーゼ（PARG）に作製されているものが PARP-1 で、一関与していると考えられているテロメ

より分解され、さらに ADP- リボシル

般的にポリ（ADP- リボース） ポリメ

アに結合し、テロメア長維持を負に制プロテ インリアー ゼによりアクセプ

ラーゼ（PARP）と書かれている場合は御するタンパク質として知られている

タータン パク質との切断がなされる

これを示す。詳しくは後述する。

（図 1）。この修飾反応はリン酸化やアPARP-1 のノックアウトマウスにもセチル化などの他の修飾反応とは異ポリ（ADP- リボース）が存在すること、なり、タンパク質に大量に負電荷及びポリ（ADP- リボース）合成活性が存在

分子量の大きな基を導入することになすることが明らかとなり、PARP ファミ

TRF-1 と 相 互 作 用 す る 分 子とし てYeast Two-hybrid System により単離された PARP が Tankylase である 4）。
Tankylase は膜タン パク質や細胞骨格との相互作用に関与する 24 個のタ

るため、タン パク質 自 身のコンフォリーの存在が示唆された。そこでとら

ンデムなアンキリンリピート構造を持メーションばかりでなく、DNA とタン

れ て き たもの が PARP-2 で ある 3）。

ち、PARP-1 の BRCT モチーフ及び、

パク質やタンパク質- タンパク質間の触媒ドメイン（後述）とホモロジーを持

相互作用を大きく変化させ、ヌクレオ

PARP-2 の大きさは約 62 kDa であり、PARP-1 と同様に（後述）DNA 鎖の切つ。Tankylase の大きさは 142 kDa で、ソームのコンフォメーションやさらに高断により活性化する。

TRF-1 を修飾することにより、TRF-1

次な構造の変化を生じさせる可能性
表 1. PARP ファミリーが 考 えられ る 1）, 2）。本 稿 で は、ポリ
（ADP- リボース）ポリメラーゼの解析

名

前

分子量

から得られ た 情 報を主にして、ポリ（ADP- リボース） 代謝機構の生理的役割について紹介する。

ポリ（ADP- リ ボ ー ス）
ポリメ
ラーゼファミリーポリ（ADP- リボース）を合成する酵
素は現在 5 種類知られている（表 1）。

12

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

機能DNA 傷害に依存した細胞内 NAD+ の

PARP-1113 kDa

PARP-262 kDaTankylase

142 kDa

テロメア維持PARP-360 kDa?

vPARP (PH5P)

192 kDa

ヴォールトを構成？

消費、ポリ (ADP- リボ−ス ) の合成
DNA 傷害に依存した細胞内 NAD+ の消費、ポリ (ADP- リボ−ス ) の合成

の DNA 結合能を失わせ、テロメラーる約 113 kDa の比較的大きなタンパ

チーフであり、特に BRCT モチーフは

ゼの活性を制御していると考えられてク質で、非常に構造的に特異な構造を多くの DNA 修復関連因子に共通に見

いる。

2）

持っている
（図 2） 。まず、N 末端の 1-られ、DNA 修 復 過 程に お け るポリ（ADP- リボシル）化の関与を示唆する

さらに、機能の知られていない 2 つ胞内小器官のヴォールトを構成するタ372 部分が主に DNA と結合する部分である。DNA 結合ドメインの N 末端部位に二つの Zn フィンガーモチーフを持つ。この Zn フィンガーにより切断された DNA を認識している。PARP1 の Zn フィンガーは他の DNA 結合タンパク質が持つ Zn フィンガーよりも長く（ループが約 30 アミノ酸、一般的には 12 〜 13 個）
このように長いタイプのZn フィン ガ ーを持つものは DNA リ
ガーゼ III しか知られていない。DNA

ンパク質であった 7）。vPARP の機能は結合ドメインの中央には双極型の核移

ヴォールトを構成するタンパク質であ行シグナルが存在する。この核移行シ（major protein component ofる MVP

グナルの双極性を分断する箇所でア

vaults）を修飾する以外何も分かってポトーシスの実行プロテアーゼである

いない。興味深いことにヴォールトをカスパーゼ-3 により切断される。核移構成するタンパク質としてテロメラー

行シグナルの後半部分に重なるように

ゼ 複 合 体の 構 成 タン パク質 である

してヘリックス- ターン- ヘリックス構

PARP-1 は DNA 鎖の切断により活性化される。このため DNA 鎖切断が起きる様々な現象にポリ（ADP- リボシ

TEP-1 が報告されている 1）。
また、最近 PARP-1 と同じ遺伝子からなるが長さが短いタイプの PARP（sPARP）
も報告されている 8）。

造があり DNA との相互作用に関与すル）化が関与していることが推察される。

ている。特に、最近のノックアウトマウ

PARP-1 の中央部に位置するのが自己修飾ドメイン（374-525）でグルタ

ス解析から、DNA 損傷の回復の遅れ、
γ線感受性の増大、ゲノム不安定性のミン酸のクラスターが存在し、そのグ増大が観察され、PARP-1 が DNA 修

ルタミン酸クラスターで自己修飾を受復の効率、速度を増大させるために働ける。この自己修飾ドメインには二ついていると考えられている 1）。

の PARP を紹介する。ゲノム解析から

PARP とホモロジーを持つものとして見い出された PARP-35）、大きさは約60 kDa で機能は全く分かっていない。
inter-A-trypsin inhibitor の ホ モ ロ
ジー解析でとられた PH5P6）、大きさは192 kDa で あ る。この PH5P と 同じ
分 子 で あ る が、全く別 に 得られ た

vPARP は、機能の分かっていない細ポリ（ADP- リ ボ ー ス）
ポリメ
ラーゼ-1 の構造と機能前述した PARP ファミリーでもっとも多く解析されているのが PARP-1 である。PARP-1 は 1014 アミノ酸からなものである。

PARP-1 の C 末 端 側 に は ポ リ（ADP- リボース）合成活性を持つ触媒ドメイン（526-1014）がある。この触媒ドメインが PARP ファミリー間で極めて類似している。触媒ドメイン中の656-1014 が 活 性に 必 要 な 領 域 で、859-908 が系統学的に保存されている。活性中心は 893K であり、NAD+ 結合モチーフの GKG 中に存在する。

ポリ（ADP- リボシル）
化と DNA
修復のモチーフが存在する。一つはロイシ

また、ポリ（ADP- リボー ス）ポリ

ンジッパー構造でもう一つは BRCT

マーに様々な DNA 修復因子が非共モチーフである。両モチーフともタン

有的に結合することが報告されており、

パク質- タンパク質相互作用を示すモ

DNA 損傷部位に DNA 修復因子を向図 2. ポリ（ADP- リボース）ポリメラーゼ-1 の構造

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

13

かわせるリクルーターとしての働きをポリ（ADP- リボース）ポリマーが担っている可能性が考えられている 9）。
さらに、ポリ（ADP- リボース）が代謝される過程で生じる ATP が修復過程に使用されている可能性が報告されている（図 3）10）, 11）。DNA 損傷部位
で合成されたポリ（ADP- リボース）がポリ（ADP- リボース）グリコヒドロラー
ゼによって速やかに分解され ADP- リ
ボースとなる。生成した ADP- リボー
スはピロリン酸存在化で ADP- リボー
スピロホスホリラーゼにより ATP とリ
ボース-5- リン酸へと変換される。この反応により、DNA 損傷部位局所的に

図 3. ポリ（ADP- リボース）の分解による ATP の生成
ポリ（ADP- リボース）がポリ（ADP- リボース）グリコヒドロラーゼにより ADP- リボー
スに分解する。ADP- リボースはピロリン酸存在下で ADP- リボースピロホスホリラー
ゼにより ATP とリボース-5- リン酸へと代謝される。ATP は DNA 修復機構等の ATP 依
存性過程に使用され、リボース-5- リン酸は核酸合成の前駆体となる。

ATP の濃度が上昇し、DNA リガーゼ
等の反応に効率良く利用されると推測解により PARP-1 は DNA 損傷に依存されている。

した活性を失う。この PARP-1 の限定
分解はアポトーシスの過程で過剰のローシスではなくアポトーシスに向かわ

ポリ（ADP- リボシル）化反応は基質

さらに、PARP-1 ノックアウトマウス

として NAD を使用する。NAD は生が MPTP（1-methyl-4-phenyl-1, 2,

体エネルギー代謝に不可欠な因子で

3, 6-tetrahydropyridine）誘導モデル

あ る。生 体 内 で の NAD+ レ ベ ル はNAD+ の 合 成と分 解 で 調 節される。
NAD+ の合 成は NAD+ ピロホ スホリ

パーキンソン病やストレプトゾトシン

ラーゼによって司られ、分解は様々な

これらのことは神経細胞や膵β細胞の酵素が関与するが、PARP の活性化
が NAD+ の大量消費を促していることが報告されている 12）。NAD+ の大量消費に引き続いて細胞内 ATP が減少す

細胞死に PARP-1 が重要な役割を果++る。これらの現象が細胞死を引き起こせるために起こると考えられている 15）。

誘導モデル糖尿病、脳虚血に対して抵抗性を持つことが報告されている 1）。

たしていることを示唆している。

おわりにしていることが示唆されている。また、ポリ（ADP- リボシル）化反応は多岐

過 剰 の PARP 活 性 化 に より大 量 のにわたる機能を持つため、特定の現象

NAD 、ATP が消費され細胞内レベに研究対象を絞るのが非常に困難でルを維持できなくなると細胞はネクある。しかし、今までの報告を考えあローシスを起こす。

わせると、ポリ（ADP- リボース）代謝+

また、アポトーシスの過程においては、ゲノム維持機構に重要な役割を果

PARP-1 が カ ス パ ー ゼ-3 に よ って113 kDa のタンパク質が 89 kDa と 24
kDa に限定分解を受ける 13）, 14）。この限定分解は PARP-1 の双極性核移行シたすことにより、生体が外界の環境因

グナルの双極性を分断するように起きる（図 2）。カスパーゼ-3 による限定分

14

NAD+ の消 費を抑 制し、細 胞をネク

ポリ（ADP- リボシル）化と細胞死

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

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346-347（1994）
14）Tewari, M. et al. Cell 81,801-809（1995）
15）Smulson, M. E. et al. Adv. Enz.
Regul. 40, 183-215（2000）子に対する抵抗性を獲得するために

PARP Western Blot Kit wako

進化してきた機構だと考えられる。

アポトーシス研究用〔参考文献〕

295-56801

1）Shall, S. and de Murcia, G. Mutat.

24 レーン用

35,000 円

p.36 の商品説明をご参照下さい。

骨形成増殖因子ペプチド試薬
Osteogenic Growth Peptide
生化学用
オステオゲニック成長ペプチドはBab et al., Gazit et al., らによって骨形成の作用を持つ因子として骨髄中から単離されたアミノ酸 14 個からなるペプチドであり、そのシークエンスは
ヒストン H4 の C 末端部分と共通の構造を有していることが分かりました。
in vitro では骨芽細胞（MC3T3 E1）の増 殖を促 進させたり、アルカリホ ス
ファターゼ活性を上昇させる生理活性作用があります。ラットに投与した invivo の系では骨密度の増加が確認されています。骨芽細胞の増殖や分化における新しい因子として注目を浴びています。なお本品は固相法によって合成されたペプチドです。さらに当社
では関連商品として破骨細胞吸収試
薬を新たに取揃えました。

〔ペプチド配列〕

H-A-L-K-R-Q-G-R-T-L-Y-G-F-G-G-OH
C68H110N22O18 =1523.74〔規格〕3）Greenberg, Z. et al. : J. Cell Biochem.,
65, 359（1997）.
4）Greenberg, Z. et al. : Biochem.
Biophys. Acta, 1178, 273（1993）.

含量（HPLC）：97.0% 以上
水溶状 : 試験適合〔参考文献〕
1）Bab, I. et al. : Endocrinology, 123, 345（1988）.
2）Gazit, D. et al. : Connect Tissue Res.,23, 153（1989）.

152-02311

1mg

24,000 円〔関連商品〕 破骨細胞吸収試薬
コード No.
159-02321
155-02323
032-17751
038-17753

品

名

規

格

Osteostatin

生化学用Calcitonin Acetate（Salmon）

生化学用

容

量

5mg
25mg
200Fg
1mg

希望納入価格（円）8,500
30,0007,000
25,000Peptidoglycan
生化学用
ペプチドグリカンは、N- アセチルまたは N- グルコリルムラミン酸と D- ア
ミノ酸を含むことを特長とする糖ペプ
チドのポリマーで、細菌の細胞壁成分
として菌の形状の保持に重要な役割を担っています。また、ペプチドグリカ
ンは、B リンパ球、T リンパ球等の免疫応答細胞に対する種々の作用、血小板の破壊、繊維芽細胞の増殖促進等、様々な生物活性を示すことが知られています 1）,2）,3）,4）。
本 品 は そ れ ぞ れ Enterococcus
コード No.
167-20241
164-20251
161-20261

faecalis, Lactobacillus acidophilus,
Staphylococcus aureus より調製したペプチドグリカンです。発熱作用やSLP 試薬に対する反応など、様々な生物活性の研究に有効です。
形
状 : 凍結乾燥品
製法 5）: 一晩培養を行った各細菌を集菌し、10%トリクロロ
酢酸に懸濁して 20 分間
煮沸後、37℃、2 時間トリ
プシン処理を行い調製。
貯法 : −20℃ 保存

品
名Peptidoglycan Type Ⅰ（起源 Enterococcus faecalis）
Peptidoglycan Type Ⅱ（起源 Lactobacillus acidophilus）
Peptidoglycan Type Ⅲ（起源 Staphylococcus aureus ）〔参考文献〕
1）土谷正和 : 「透析エンドトキシンがよくわかる本」, p.135（東京医学社）.
2）竹 内 理、審 良 静 男 : 実 験 医 学 , 18,343（2000）.
3）小 谷 尚 三、高 田 春 比 古 : 薬 学 雑 誌 ,103, （1 1983）.
4）Kotani, S., Tsujimoto, M., Koga, T.,
Nagao, S., Tanaka, A. and Kawata, S. :Fed. Proc., 45, 2534
（1986）.
5）Schleifer, K. H. and Kandler, O. :Bacteriol. Rev., 36, 407（1972）.

規 格
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

1mg
1mg
1mg

希望納入価格（円）20,00020,00020,000〔関連商品〕

微
微生
生物汚染等の検出可
可能能ペプチドグリカン、β- グルカン検出用試薬
コード No.
297-51501
295-53001

品

名SLP Reagent Set
SLP Single Reagent Set

規 格
微生物検出用
微生物検出用

3mL 用
25 回用

容

量

規 格
生化学用

2mL（2Fg）

希望納入価格（円）19,00049,000SLP 試薬セットの標準に使用
コード No.
162-18101

品
名Peptidoglycan（起源 Micrococcus luteus）

容量

希望納入価格（円）2,700

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）15

ウエスタンブロッティング用抗体除去バッファー
RestoreTM Western Blot Stripping Buffer
ウエスタンブロッティングによる検出において、満足な結果が得られず、再プローブするときのための抗体除去バッファーです。一次抗体や抗体濃度の再検討のために電気泳動を再度行う手間が省けます。所要時間は 5 〜 15 分です（但し、一次抗体のアフィニティーに影響されます）。
〔特 長〕● 時間の節約 : 再泳動は必要ありません。
● 貴重なサンプルを節約 : 一度検出に使用した同じメンブレンを再プローブします。
● 十分な除去効果 : ピアス社独自処方で十分な効果が期待できます。
● 緩和な組成 : 標的タンパク質にダメージを与えません。
● 悪臭なし : メルカプタンを使用していない還元剤
なので、刺激臭がありません。

※ 8 × 10cm ブロット 1 回に対して約 20mL 使用

コード No.
527-79775
525-79771〔使用例〕アッセイ条件の最適化
A

B

C

ピアス社のスーパーシグナル West Pico（メーカーコード : 34080 ）を使用した例。本品による 1 回の抗体除去とその後の再プローブによって二次抗体がどのように最適化されたかを示します。
（A） 最初のブロット：抗マウス IL-2, ラット抗体の 1,000 倍希釈された一次抗体と二次抗体として 5,000 倍希釈 HRP 標識抗ラット, ヤギ
を使用（B）（A）を 5 分間（室温）Restore TM Western Blot Stripping Buffer でインキュベート（C）（B）を再プローブ：5,000 倍希釈した一次抗体と 20,000 倍希釈した二次抗体を使用メーカーコード
品
名21059
RestoreTM Western Blot Stripping Buffer
21062

容

量

500mL
30mL

希望納入価格（円）17,0007,000〔関連商品〕 HRP 標識を用いてウェスタンブロット、ドットブロットを高感度に検出するための化学発光基質セットです。
コード No.
536-44191
532-44193
531-50251
537-50253
534-84551
530-84553

メーカーコード
34080
34079
34075
37071
34095
34094

品
名
SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate
SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate
SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate
SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate Trial Kit

容

量

500mL
50mL
100mL
20mL
100mL
20mL

希望納入価格（円）36,3007,300
61,60013,30062,50015,500レンジで簡単染色 !!
InstaStainTM Blue Gel Stain Paper
Coomassie® Blue-G250 をコートした電気泳動ゲル染色用シートです。
〔特長〕

1）染色液の調製が不要
2）短時間で染色完了
─染色 10 秒、脱色 1 時間─
3）固相なので扱いが容易〔使用手順〕
1.前洗浄

電気泳動後、ゲルカセット/ガラスプレートの片側を取除き、緩やかに振とうしながら、脱イオン水で3×5分間洗浄する。

2.固定

脱イオン水を捨てて、十分な量の脱色液を加え、振とうせずに室温で10分間固定する。

3.染色

4.脱色

脱色液からゲルとプレートを取出し InstaStainTM Blue Gel Stain Paper
をゲルサイズにカットし、青色の面を下にしてゲルの上にのせる。
その上にゲルサイズにカットした 3 枚のフィルター紙を脱色液で湿らせて、置く。ゲルカセットのもう片方をフィルター紙の上に置き
それを、電子レンジ（500-1000W ）で 10 秒加熱する。
一番上のゲルカセットとすべての紙を取除き、脱色液の中に移し、振とうしながら約 1 時間室温で脱色する。タンパク質のバンドはこの時点で現れる。
（注意 : 振とう速度の変化は脱色時間に影響を与えます。
）

コード No.
メーカーコード
品
名523-94633
24825
InstaStainTM Blue Gel Stain Paper
527-94631
24802
InstaStainTM Blue Gel Stain Paper Trial Pack
※ Coomassie® は ICI Americas の登録商標です。

16

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

容量25 sheets
2 sheets

希望納入価格（円）18,5001,000
1 sheet：10cm × 10cm

High Efficiency Hybridization Solution
High Efficiency Hybridization Solution with 50% Formamide
遺伝子研究用
本品は、ノーザン、サザン及びドットます。バックグラウンドを抑え、高いハ

ブロッティングのために用いる調製済

イブリダイゼーション効率を得る事がみ ハイブリダイゼーション溶液です。

できます。調製したトータル RNA 中に

通常のハイブリダイゼーション溶液に存在する低含量の mRNA を、poly A+

含まれる NaCl と SDS の他に、ハイブ

フラクションの分離を行うことなく検出

リダイゼーションシグナルを上げるた

する事ができます。また RI または非めデキストラン硫酸及びハイブリダイ

RI 検出の両方で使用可能です。

〔参考文献〕
1）Chomczynski, P. and Mackey, K. :Anal. Biochem., 221, 303（1994）.
2）Chomczynski, P. : Anal. Biochem.,
201, 134（1992）.
3）Cornish, E. C., Beckham, S. A. and
Maddox, J. F. : Biotechniques, 25, 948（1998）.

ゼーションプローブの非特異的な結合をブロックするための特殊な試薬（及び 50% ホルムアミド）を含んでい
コード No.
544-01331
541-01341〔貯 法〕 室温品
名High Efficiency Hybridization Solution
High Efficiency Hybridization Solution with 50% Formamide

容量

希望納入価格（円）13,00014,000

100mL
100mL

Protein G
免疫化学用
プロテイン G は免疫グロブリン G（IgG）の Fc フラグメン
トグラフィーのリガンドとして IgG の精製に利用されます。本品は従来品よりも IgG との結合能が優れているのが特長です。

2
吸光度(492nm)

トに強く結合することが知られており、アフィニティークロマ

1.5
従来品
新商品

1
0.5
0
0

Sou rc e : Streptococcus sp.
保存条件 : 2 〜 10℃ 保存

コード No.
168-20271

5

10

15

IgG1濃度(@g/ml)

マウス IgG1 との結合能（ELISA 法により測定、プロテイン G 5[g/ml × 50[l）
品

名

規 格
免疫化学用

Protein G

容量

希望納入価格（円）28,0001mg

電気泳動用の分子量マーカー
BlueRangerTM Prestained Protein Molecular Weight Marker Mix〔特長〕

Myosin, 215kD◆ 一回使用分ずつにマイクロチュー
ブに小分けされているので、毎回フレッシュなものが使用できます。
◆ 凍結乾燥品なので室温で安定です。
◆ 青色に着色されており、電気泳動の進行状況の確認に便利です。

Phosphorylase B, 120kD
BSA, 84kD
Ovalbumin, 60kD
Carbonic Anhydrase, 39.2kD
Trypsin Inhibitor, 28kD
Lysozyme, 18.3kD

コード No.
524-79741
520-79743

1 チューブに 10 [lの水を加えて溶解
後、4-20 ％トリスグ リ シ ン SDSPAGE プレキャス
トゲルで泳動。

メーカーコード
品
名BlueRangerTM Prestained Protein Molecular Weight
26681
26685
Marker Mix

容量

1 プレート（48 チューブ）5 プレート（5 × 48 チューブ）

希望納入価格（円）17,70066,700

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

17

レビス ® IgE-ELISA キット（マウス）レビス ® IgE -ELISA キット（マウス）
は、マウスの血中 IgE 濃度を ELISA 法により簡便に測定できます。キットはすべて溶液タイプになっており、わずらわしい試
薬の調製の必要がありません。測定時間は約 5.5 時間で、短時間に IgE 濃度を測定する事ができます。また、測定に必要な検体量はわずか 5FL で検体を多量に調製する必要がありません。アレルギーの治療薬の開発、研究に最適なキットです。

〔特長〕
1. 約 5.5 時間で測定可能
2. 微量検体（5FL）から測定可能
3. すべての試薬が溶液タイプ
4. 幅広い測定範囲（1 〜 100ng/mL）
5. 溶血（ヘモグロビン 40mg/dL 以下）の影響がない
6. 高い特異性（IgG、IgA、IgM との交差反応 0.01% 以下）〔キット構成〕〔操作手順〕〔IgE 標準曲線〕

A : 抗体固相化プレート
B : IgE 標準液 100ng/mL
C : 緩衝液D : ビオチン結合抗 IgE 抗体
E : ペルオキシダーゼアビジン結合物
F : 発色剤（TMB）
H : 反応停止液
I : 濃縮洗浄液（10 ×）

96 ウェル 1 枚
600FL × 1
60mL × 1
10FL × 1
20FL × 1
10mL × 1
10mL × 1
50mL × 1

抗体固相化プレート
洗浄

1.4
1.2

IgE標準液、or 緩衝液（45FL）＋検体（5FL） 50FL
攪拌、室温（20〜25℃）2時間反応
吸光度(450nm)

1.0

洗浄
ビオチン結合抗体IgE抗体 50FL
攪拌、室温（20〜25℃）2時間反応

0.8
0.6
0.4

洗浄

0.2
0.0

ペルオキシダーゼ-アビジン結合物 50FL
攪拌、室温（20〜25℃）1時間反応

0

20

40

60

80

100

IgE濃度(ng/ml)

洗浄
発色剤 50FL
攪拌、室温（20〜25℃）20分反応〔同時再現性試験（N=5）〕

洗浄
反応停止液

50FL

Mean
SD
CV
（%）

吸光度測定（450nm）

18

コード No.

メーカーコード

639-02891

AKRIE-010

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

品
レビス

®

名

IgE-ELISA キット（マウス）

Sample 1
76.98
0.47
0.61

容

Sample 2
21.02
0.57
2.71

量

96 回用

Sample 3
9.58
0.29
3.03

希望納入価格（円）58,000Human AN'ALYZA Chemiluminescent
Immunoassay Kit Series
Human AN' ALYZA Chemiluminescent Immunoassay Kit Series は、ヒトサイトカインを化学発光により測定する ELISA
キットです。HRP 標識検出抗体、ルミノール、H2O2 によりサイトカイン濃度を測定します。化学発光を用いているため、従来の発色法による ELISA キットより測定範囲が広くまた、高い感度が得られます。測定時間も約 5 時間で、短時間に測定できます。
未知濃度のサイトカインの定量に有効なキットです。
〔特 長〕
● 高感度
● 測定範囲が広い● 再現性は良好● 短時間で測定可能● 血清、血漿、培養上清のどれでも測定可能〔キット構成〕

1. サイトカイン抗体固相化プレート
2. サイトカイン標準品
3. HRP 標識サイトカイン抗体
4. 測定緩衝液
5. 標準品希釈液＊＊
6. 10 倍濃縮洗浄液
7. 発色基質 A
8. 発色基質 B
9. プレートカバー

１枚
＊

21mL
6mL
21mL
100mL
12.5mL12.5mL
4枚＊ サイトカイン標準品の容量はキットにより異なります。
＊＊ IL-2、IL-4、IL-12、TNF-A のキットには標準品希釈液が 2 種類
（血清サンプル用、培養上清サンプル用）含まれています。

〔各キットの性能一覧〕
測定範囲（pg/ml）

測定時間

同時再現性 日差再現性
CV 値（%） CV 値（%）

Endothelin-1

0.16

0.32-1000

5 時間

2.1

7.1

GM-CSF

0.5

0.7 -7000

4.5 時間

3.8

6.7

Interleukin-1β

0.4

0.5 -5000

5.5 時間

2.3

6.5

Interleukin-2

0.8

1.6 -5000

5.5 時間

3.2

7.4

Interleukin-4

1.0

1.6 -5000

5.5 時間

5.4

8.8

Interleukin-6

0.2

0.3 -3000

5.5 時間2.8

9.4

Interleukin-8

0.8

1.6 -5000

5.5 時間

5.1

8.2

Interleukin-12

0.6

0.7 -7000

5.5 時間1.8

8.5

TNF- α0.5

0.7 -7000

6.5 時間

3.1

6.7

VEGF

0.4

6.4 -20000

5.25 時間

5.0

7.9

10000010化学発光キット
発色キット

10000

1000
1
100

10

0.1
0.1

1

10

100

1000

Relative Light Units(RLU)

感度（pg/ml）

吸光度(OD)

測定物質〔測定範囲の比較（IL-6）〕

1
10000

IL-6濃度(pg/ml)

コード No.

メーカーコード

品

名

容

量

希望納入価格（円）538-76381

84004

Endothelin-1

96 回用

90,000521-45561

84009

GM-CSF

96 回用

90,000533-75091

84005

Interleukin-1β

96 回用

90,000524-45551

84008

Interleukin-2

96 回用

90,000532-75181

84001

Interleukin-4

96 回用

90,000530-75241

84002

Interleukin-6

96 回用

90,000535-75291

84003

Interleukin-8

96 回用

90,000530-75361

84000

Interleukin-12

96 回用

90,000531-75771

84006

TNF-α

96 回用

90,000527-45541

84007

VEGF

96 回用

90,000

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

19

KIA 株式会社 ケーアイエー細胞病理研究所 石川喜美男、三瓶宮
哲正、久川株式会社 保健科学研究所
牛込新一郎
京浜予防医学研究所 診断病理センター

第 2 回 骨・軟骨系病変 2

接子
芳三

軟骨肉腫 : 軟骨形成性の骨悪性腫成る。核は濃染し、粗大なクロマチン

では、軟骨基質は青色に染色され独瘍。腫瘍細胞による類骨形成がないのをもつ核をみる。通常型の軟骨肉腫の特な染色像を示す。また、鍍銀染色でが骨肉腫と異なる。骨肉腫より発生頻他に、間葉性軟骨肉腫、脱分化型軟骨は、腫瘍細胞の細胞突起は羽毛状に度は低く、30 〜 60 才の骨盤骨、大腿肉腫などがある。軟骨肉腫の病理学的黒く鍍銀され特徴的な像を示す。免疫骨、肋骨などに発生しやすい。悪性度

検査法には、特殊染色法として PAS

学的検査法では S-100 蛋白およびは一般的に低く、発育は緩徐、遠隔転染色とアルシアン青の重染色が用いら型コラーゲンの抗体が用いられる。

移をするものは少ない。腫大した類円れる。PAS 染色では、腫瘍細胞の細形の腫瘍細胞と豊富な軟骨基質から胞質が赤紫色に染まり、アルシアン青

図 1. 脱分化型軟骨肉腫（大腿骨）
大腿骨の骨幹部上半部に分葉状部分と境界明瞭な透過像（脱分化部分）から成っている病変である。

図 2. 脱分化型軟骨肉腫の肉眼像
骨髄腔を置換する半透明状の軟骨肉腫の部分に、出血、破壊を伴う
未分化肉腫像の部分が割合境界明瞭にみられるが特徴像である。
( 図 1 と同一症例 )図 3. 大腿骨に発生した間葉性軟骨肉腫
骨外に半球状に突出し、骨本質と骨髄内に発育する
腫瘍、出血と破壊巣を伴い悪性を示唆している。

20

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

図 4. 大腿骨の軟骨肉腫
分葉状の骨透過像を特徴とす
る大きい腫瘍である。

図 5. 大腿骨の軟骨肉腫
転子間に骨破壊を伴う軟骨性腫瘍（半透明状）で一部骨外に浸潤している。

図 6. 軟骨肉腫 H・E 染色 × 10.
核異型のある腫瘍細胞が分葉状に増殖した構造内に見られる。基質はヘマトキシリンに強く（紫色）染色され、その中に核異型の強い腫瘍細胞が多くみられる。また、骨組織は桃赤色に染色され、ヘマトキシリンで青紫色を帯びている。

図 7. 軟骨肉腫 マッソントリクローム染色 × 10.
軟骨基質は淡青色に染色され、腫瘍細胞が鉄ヘマトキシリンで黒褐色に基質内に埋もれているのがわかる。骨組織は赤色を呈している。

図 8. 軟骨肉腫 アルシアン青と PAS の重染色 × 10.
軟骨基質はアルシアン青で強陽性（青緑色）に染色され、この腫瘍の特徴を示している。また、骨組織は PAS で弱陽性（淡紫色）を呈している。

図 9. 軟骨肉腫 酵素抗体法（S-100 蛋白抗体） × 10.
軟骨基質内の腫瘍細胞は、S-100 蛋白抗体で強陽性を示している。

図 10. 軟骨肉腫 H・E 染色 × 40.
ヘマトキシリンで青色に染色された基質を背景に大小不同のある核異型の強い腫瘍細胞が多数認められる。

図 11. 軟骨肉腫 アルシアン青と PAS の重染色 × 40.
軟骨基質はアルシアン青で緑青色に、軟骨肉腫細胞の細胞質は PAS
で赤紫色を呈している。

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）21

図 12. 軟骨肉腫 鍍銀染色 × 40.
腫瘍細胞の細胞突起の細線維は羽毛状に黒く鍍銀され、この腫瘍細胞の特徴を示している。

図 13. 軟骨肉腫 酵素抗体法（S-100 蛋白抗体） × 40.
大小不同のある腫瘍細胞が S-100 蛋白抗体で褐色強陽性を示している。

〔参考文献〕

図 14. 軟骨肉腫 TEM 像 × 3000.
絨毛状の胞体突起をもつのが特徴で、細胞質内には糸粒体や粗面小胞体をみる。また、明るく抜けている部分は糖原を示す。細胞周囲には微細な線維が目立つ。

1）牛込新一郎, 町並陸生他 : 骨・軟部腫瘍の病理−診断へのアプ
ローチⅡ : 骨腫瘍ならびに腫瘍様病変. 病理と臨床. 文光堂.
2）水口國雄, 石川喜美男, 三瓶接子, 宮哲正, 牛込新一郎 他 : 組織
アトラス−正常と病変− . Medical technology. 医歯薬出版
3）田所衛, 石川喜美男, 宮哲正, 牛込新一郎 他 : 実践病理組織細胞学カラー図鑑 [ 肉眼像・組織像・細胞像 ]. HBJ 出版局

硬組織の病理標本作製に !
骨や歯といった硬組織の薄切切片作製にはパラフィン包埋の場合、脱灰処理が必要です。一方で、近年硬組織分野の研究において、その無機塩の存在や分布・石灰化度の違いを知るために非脱灰での標本作製の重要性も高まっています。
硬組織の病理標本作製に必要な試薬類を各種取揃えておりますので目的に合わせてお選び下さい。

◆ 脱灰標本作製用◆
. 脱灰液
脱灰法
無機酸（鉱酸）
有機酸

脱灰液
塩酸
硝酸
ぎ酸
トリクロロ酢酸

迅速脱灰法（混合酸）

脱灰液 A（プランク・リュクロ処方）

中性脱灰法

脱灰液 B
（EDTA 処方）成分

10% 塩酸
8% 硝酸
5% ぎ酸
5% トリクロロ酢酸
塩化アルミニウム（結晶）
7.0g
塩酸
8.5ml
ぎ酸
5.0ml
蒸留水で全量 100ml にする
0.5mol/l EDTA 溶液が主成分（pH7.0 〜 7.5）

特性

脱灰能力は良いが染色性低下の影響あり無機酸より組織への障害は少ない
脱灰時間：ぎ酸、硝酸の約3倍
抗原性の保持は良くない
中性で脱灰でき染色性に優れるが処理時間は長い
免疫染色に最適. 脱灰中和液：5% 硫酸ナトリウム溶液〔次頁へ続く〕22

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

コード No.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）089-07675

10% 塩酸

病理研究用

500mL

2,300

146-07075

8% 硝酸

病理研究用

500mL

2,100

062-04025

5% ぎ酸

病理研究用

500mL

2,100

205-14905

5% トリクロロ酢酸溶液

病理研究用

500mL

2,400

047-21911

脱灰液 A（プランク・リュクロ処方）

病理研究用

1L

3,600

041-22031

脱灰液 B（EDTA 処方）

病理研究用

1L

5,200

196-11985

5% 硫酸ナトリウム溶液

病理研究用

500mL

3,000

◆ 非脱灰標本作製用◆
オステオレジン TM 包埋キット
非脱灰硬組織用の樹脂包埋キットであり、特長として樹脂重合開始剤に当社開発の V-601 を使用しています。この V-601 は非ニトリル系アゾ化合物であり、従来から使用されている過酸化ベンゾイルと比較して一般に衝撃に対し安定で、爆発などの危険性も少ない等の特性をもっています。樹脂は疎水系の MMA（メタク
リル酸メチル , モノマー）を基剤としています。本キットから得られた非脱灰硬組織
切片は脱樹脂後、一般染色をはじめ、ビラヌエバ骨染色、免疫染色などが可能です。

歯牙・顎骨部（イヌ）アリザリンレッド：石灰化骨（赤茶色）アルシアンブルー：軟骨（青色）ヘマトキシリン：核（濃青紫色）（× 200）（）

〔キット内容〕
樹脂基剤（MMA：メタクリル酸メチル , モノマー）

500mL
1g × 5重合開始剤（V-601）
脱樹脂剤（AME：1- アセトキシ-2- メトキシエタン） 500mL
100mL
コロジオン（10%）＊ キットの詳しい使用方法につきましてはパンフレットを用意しておりますのでご照会下さい。

コード No.
297-56001

品

名

オステオレジン TM 包埋キット

規格

病理組織包埋用容量

希望納入価格（円）

1 キット

20,000

病理組織固定液
カルノア液
組織固定用
代表的なアルコール系固定液であり、大腸などの粘液質組織の固定に使すので目的に合わせて各種固定液＊をお選び下さい。

用されグリコーゲンや酸性ムコ多糖類などの水溶性物質の保存に適します。
特長として浸透力が強く、早く固定でき、通常 2 〜 3 時間固定後、純エタ
ノールに移します。
カルノア液は、氷酢酸による溶血やエタノールによる細胞収縮を起こしま〔組 成〕
純エタノール
クロロホルム
氷酢酸

600mL
300mL
100mL

＊： 希釈ホルマリン液、中性緩衝ホルマリ
ン液の他、ホルマリンの刺激臭を抑えた " マイルドホルム " もあります。ご照会下さい。

034-17711

1L

3,600 円和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

23

ベンゾジアゼピン系化合物
ベンゾジアゼピン系化合物〜新製品追加しました ! 〜
ベンゾジアゼピン骨格を基本構造とする化合物群は中枢抑制作用として抗不安作用、筋弛緩作用、催眠作用、

NEW

抗痙攣作用、馴化作用を有しています。
ベンゾジアゼピンに特異的な受容体は神経終末に局在しており、この受容体 に 結 合 す ると GABA（C-amino-

NEW
NEW

butyric acid）の GABA 受容体との結合能が増し、結果的に神経細胞膜の興奮性が抑制されると考えられています。これらは主に動物を使った神経系

NEWの薬理実験に使用されます。
NEW

＊
＊
＊
＊
＊
＊
＊
−
＊
＊
＊
＊
＊
＊
＊
＊
−
＊

コード No.
016-17171
020-13471
023-14321
031-17221
038-17231
045-18901
051-06831
057-06811
067-03791
060-03801
122-04591
139-12971
135-13791
142-04831
158-02031
162-19181
203-15121
205-14221

品 名Alprazolam
Bromazepam
Brotizolam
Chlordiazepoxide
Chlonazepam
Diazepam
Estazolam
EtizolamFlunitrazepam
Flurazepam
Lorazepam
Medazepam
Midazolam
Nitrazepam
Oxazepam
Prazepam
Tofisopam
Triazolam

規 格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg

希望納入価格（円）30,00025,00030,00015,00025,0003,780
30,00025,00025,00020,00025,00020,00030,0003,600
25,00030,00025,00030,000＊ 印品は向精神薬該当品目ですのでご購入の際には「向精神薬試験研究施設設置者登録証」が必要です。また、ここに記載されている試薬は試験・研究用にのみ使用されるものであり、医療には用いられません。

Bacitracin Zinc Salt
生化学用
バシトラシンは Bacillus subtilis から〔規格〕得られるペプチド系抗生物質です。グ

力価（乾燥物計算）：min. 70,000units/g

ラム陽性菌に有効で、細菌の細胞壁ペ

希塩酸溶状：試験適合

プチドグリカン合成系に作用します。

乾燥減量（60℃、減圧）：max. 5.0%

本品は力価が 高く、70,000units/g以上を保証しています。

Source：Bacillus subtilis

高血圧の研究に高血圧の研究にエンドセリン

エンドセリン-1

L S S C S C

清から単離・同定された物質で、強力

029-14281

20g

20,000 円

N末端
S-S結合

I W C末端

エンドセリン-2

W S S C S C
Lにコードされる 3 つのアイソフォーム
があり、いずれも 21 残基のアミノ酸か6,000 円D K E C V Y F C H L D I

生理活性ペプチドです。異なる遺伝子

ら成ります。

5g

M

エンドセリンは、内皮細胞の培養上な血管収縮作用・細胞増殖作用を持つ

025-14283

D K E C V Y F C H L D I

I W

エンドセリン-3

Y T F C T C
K
D K E C V Y Y C H L D I
コード No.
052-06861
059-06871
056-06881

24

品 名Endothelin-1（human, porcine, dog, rat）
Endothelin-2（human）
Endothelin-3（human, rat）

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

規 格
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

0.5mg
0.5mg
0.5mg

I W

希望納入価格（円）43,00043,00043,000和光純薬工業株式会社

第 42 話土谷正和

エンドトキシンの糖鎖

エンドトキシン、すなわちリポ多糖

高くなり精製方法や物理化学的な性質

Campyrobacter jejuni のコア糖鎖が（LPS）は、リピド A と呼ばれる脂質部

が S 型菌の LPS と異なることが知られ深く関わっている病気です 4）。この菌分と、コア糖鎖・O 抗原多糖からなるています 1）。

の中には、動物神経細胞のガングリオ

糖鎖部分で構成されています。リムル

コア糖鎖の部分は、比較的菌種間

シドと同じ構造を持つものがあります。

ス試験に関わる方々は、リムルス試薬

で共通の構造が認められる部分です。

「そのような菌が感染することによっの活性化をはじめとしたエンドトキシ

特に腸内細菌では共通部分がよく保て、宿主の生体防御系が抗ガングリオ

ンの生物活性の多くを担うリピド A に存されており、サルモネラではすべて

シド抗体を作ってしまい、感染菌のみ

興味を持たれることが多いと思います。

の血清型のコア糖鎖は同一だそうでならず宿主自身の神経細胞にも傷害

エンドトキシンの糖鎖の部分についてす 。しかし、種々の細菌のコア糖鎖をを与えてしまう」というシナリオは、単は、いかがでしょう。著者自身もどちら比較すると多くのバリエーションが認

純ながらなかなか恐ろしいと思うのでかというとリピド A の方に興味を持っめられます。例えば、コア糖鎖に特徴

すがいかがでしょう。

てきました。実際 Talking of LAL での一つと考えられる Kdo（3-deoxy-D-

エンドトキシンの活性を考えるとき、も、第 26 話で O 抗原多糖を取り上げ

manno-2-octulosonic acid）が Vibrio

発熱性やサイトカインの誘導といったた以外は、エンドトキシンの糖鎖にあ属 で は り ん 酸 化 さ れ て い た り、

華々しい生物活性を担うリピド A と共まり触れていません。今回は、エンドトに、抗原性などで動物に大きな影響を大腸菌の中にも、丸くなめらかなコ

Acinetobacter calcoaceticus で Kdoの代わりに KO（D-glycero-D-talo-2octulosonic acid）が見つかったりしています。このような違いは、LPS の分

リピド A のように種々の菌で（強さに違

ロニーを形成する菌株と周辺がギザ解性などに影響を及ぼすことがわかっいはあるものの）同様の生物活性をギザのコロニーを形成する菌株が認ています 。

持っているのではなく、個々の菌で作

キシンの糖鎖部分について、少し考えてみたいと思います。

められます。これらは S 型菌、R 型菌と2）

3）細菌の糖鎖の中には、病原性に強く与えている糖鎖部分の作用も重要と考えられます。糖鎖部分の難しさは，用が異なる点ではないでしょうか。分

呼ばれており、O 抗原多糖を持った菌

関わっているものがあります。

析技術の進歩によって、菌株ごとの株は S 型、O 抗原多糖を欠いた菌株はNeisseria gonorrhoeae（淋菌）やN. meningitis（髄膜炎菌）は O 抗原を持たない R 型菌です。これらの菌のコ

LPS の構造がどんどん明らかになってR 型を示すと言われています。R 型菌の LPS は糖鎖が短いため、疎水性がア糖鎖は、ヒト赤血球上のくるものと思われます。今後、私たちは「エンドトキシン」の個性にも目を向ける必要があるのかもしれません。

糖脂質と同一の構造を持っており、菌が宿主から異物としての認識を受けないよ
うにする働きがあります 2）。
同 様 の 糖 鎖 が Haemo-

philus influenzae（インフルエンザ菌）でも認められています。これらの菌は、宿主の抗原と同じ抗原を持つという戦略で、細胞内寄生を〔参考文献〕
1）Galanos, C. and Luderitz, O. : Handbook of Endotoxin, vol.1 : Chemistryof Endotoxin ed. by Rietchel, E.T.,
Elsevier, Amsterdam, p.46（1984）.
2）川原一芳，一色恭徳：日細菌誌，50，451（1995）.
3）中野昌康，小玉正智編：「エンドトキシン」，p.15，（講談社サイエンティフィ
ク）（1995）.
4）結城伸泰：日細菌誌，50，991（1995）.

可能にしていると考えられます。
神経や筋肉の麻痺を引き起こすギラン・バレー症候

次回は「第 43 話

群やフィッシャー症候群も、もう一度」の予定です。

LAL の特異性を

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

25

EGF Receptor Solution, from Human Carcinoma A431 Cell
生化学用
EGF レセプター（上皮増殖因子受容体）は、分子量約 130 k のタンパク質に糖鎖が付加した糖タンパク質で、EGF、TGF αとの結合部位である細胞外ドメイン（糖鎖が付加したドメイン）、膜貫通ドメイン、細胞質内に位置するチロシンキナーゼドメイン（がん遺伝子 v-erbB の産物と相同性をもつことが知られている）及びその C 末端の自己りん酸化部位からなっています。
EGF が細胞膜の EGF レセプターに結合すると、染色体 DNA の複製が開始
され細胞分裂が起こり、その過程で、細胞膜では EGF レセプターのりん酸
化、インターナリゼーション（陥入）が起こり、細胞内ではイオンや pH の急
速な変動、さまざまな生化学反応を司る酵素の活性化や c-fos、c-myc 等のプロトオンコジーン発現の誘導等が起こります。
本品は、アフィニティークロマトグラ
フィーを用いて A431 細胞から精製した EGF レセプターです。抗がん剤等の開発研究に有効です。
形 状 : 20 mmol/L HEPES（pH 7.4）,130mmol/L NaCl, 10% Glycerol, 0.05 % Triton X-100.
純 度 : 90% 以上（SDS-PAGE）
活 性 : ロット毎に表示（活性の定義）30℃、1 分間で Angiotensin Ⅱに 1 pmol のりん酸を転移するのに必要な EGF レセプター量を 1unit とする。

法〕 − 80℃（注意 : 凍結融解を繰り返さないで下さい。
）〔参考文献〕〔貯1）Hunter, T. : Nature, 311, 414（1984）.
2）Gamou, S., Shimagaki, M., Minoshima, S., Kobayashi, M. and Shimizu, N.: Exp. Cell Res., 183, 197（1989）.
3）Miller, J.A.: Chem. Biol. Interact., 92,
329（1994）.
4）McCall, J. et al.: J. Med. Chem., 26,
1791（1983）.
5）Weinshilboum, R.M. et al.: FASEB J.,
11, （3 1997）.
6）Raftogianis, R.B. et al.: Biochem.
Biophys. Res. Commun., 239, 298（1997）.
7）Campbell, N.R. et al.: Biochem.
Pharmacol., 36, 1435
（1987）.

546-01391

10units

照会

ZAP-70, Human, recombinant, Solution
生化学用
ZAP-70 は、サイトゾルタンパクチ
ロシンキナーゼの一種で、T 細胞とナ
チュラルキラー細胞にのみ発現します。

T 細胞受容体刺激により活性化され、抗原刺激を伝達するうえで重要な因子です。またヒト免疫不全症の一つである重症複合免疫不全症は ZAP-70
遺伝子の変異が発症の原因になっている事が知られています。
本品はヒト ZAP-70 の全長をクローニングし、バキュロウイルスにより発現させたヒスチジン- タッグを有する
組換えタンパク質です。免疫機能等の研究に有効です。
起 源 : バキュロウイルスより昆虫細胞に感染させ発現したヒス
チジン- タッグを有するヒト
ZAP-70。
,
形 状 : 25 mmol/L HEPES（pH 7.4）

0.5 mmol/L DTT, 150mmol/L
NaCl, 50 % Glycerol.
純 度 : 90 % 以上（SDS-PAGE）

活

性 : ≧ 150nmol/min/mg using
E4Y（polyglutamic acid: tyrosine） as the sub-strate.
〔貯 法〕 − 20℃〔参考文献〕
1）Isakov, N. et al. : J. Biol. Chem., 271,
15753（1996）.
2）Chan, A. et al.: Cell , 71, 649（1992）.

549-01381

20[g

照

会

薬物代謝の研究等に有効
Sulfotransferase, Human, recombinant, Cytosolic Extract Solution
硫酸転移酵素は、水酸化合物やアミン化合物等の様々な生体外異物や内因的な基質に対し、硫酸化を触媒します。また、薬剤等の生体外異物を硫酸抱合し、尿と共に排出させるため硫酸抱合酵素とも呼ばれ、薬物代謝の研究に用いられます。
本品は、ヒトの硫酸転移酵素 1E 及び 2A1 をコードする cDNA をバキュロ
ウイルスにより発現させたサイトゾル
抽出液です。
コード No.
540-01311
547-0132126

比活性 : 1E ≧ 150 pmol/min/mg to-ward the substrateestrone.
2A1 ≧ 300 pmol/min/mg toward the substrate dehydroepiandrosterone（DHEA）.

〔貯法〕 − 80℃

品 名
Sulfotransferase 1E, Human, recombinant, Cytosolic Extract Solution
Sulfotransferase 2A1, Human, recombinant, Cytosolic Extract Solution

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）〔参考文献〕
1）Miller, J.A. : Chem. Biol. Interact.,
92, 329（1994）.
2）McCall, J. et al. : J. Med. Chem., 26,
1791（1983）.
3）Weinshilboum, R.M. et al. : FASEB J.,
11, 3（1997）.
4）Raftogianis, R.B. et al. : Biochem.
Biophys. Res. Commun., 239, 298（1997）.
5）Campbell, N.R. et al. : Biochem.
Pharmacol., 36, 1435（1987）.
規 格
生化学用
生化学用

容

量

250[g
250[g

希望納入価格（円）39,00039,000果実飲料のエタノール分測定に !
0.347mol/l クロム酸カリウム溶液
0.347mol/l チオ硫酸ナトリウム溶液
果実飲料試験用JAS 規格（日本農林規格）の「果実飲料の日本農林規格に定める基準の測定方法」に記載されている試験項目、エタノール分測定の際に使用される試薬です。
既に調液済みですので、そのままお使い頂けます。
コード No.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）161-20205

0.347mol/l Potassium Chromate Solution

果実飲料試験用

500mL

3,000

192-12185

0.347mol/l Sodium Thiosulfate Solution

果実飲料試験用

500mL

3,000

ポリフェノール
ポリフェノール
テアフラビン
紅茶の色素であるテアフラビンは、〔参考文献〕
1）Lin, J.K., Chen, P.C. et al. : J.Agric.
Food Chem., 48, 2736（2000）.
2）Hibasami, H., Komiya, T., Achiwa, Y.
et al. : Int. J. Mol. Med., 1, 725（1998）.

緑茶等に含まれるカテキン類が酸化的に縮重合した構造を有するポリフェノー
ルです。抗酸化作用、胃がん抑制作用
等の生理活性が報告されています。
コード No.

品

名

含

量

規

格

容

量

希望納入価格（円）201-15161

Theaflavin

≧ 90%

生化学用

1mg

12,000202-15191

Theaflavin-3-gallate

≧ 90%

生化学用

1mg

15,000204-15271

Theaflavin-3'-gallate

≧ 90%

生化学用

1mg

15,000208-15171

Theaflavin-3,3'-digallate

≧ 90%

生化学用

1mg

15,000含規〔関連商品〕
コード No.
059-06751
055-06753
052-06741
058-06743
056-06761
052-06763
059-05411

品

生化学用（-）-Epicatechin Gallate, from Green Tea

≧ 98%

生化学用

（-）-Epigallocatechin, from Green Tea

≧ 98%

生化学用

（-）-Epigallocatechin Gallate

≧ 90%

生化学用

Daidzin, from Soybean

≧ 98%

生化学用

Daidzein, from Soybean

≧ 98%

生化学用

Glycitin, from Soybean

≧ 98%

生化学用

077-04691
073-04693
070-04701
076-04703

Glycitein, from Soybean

≧ 98%

生化学用

Genistin, from Soybean

≧ 98%

生化学用

Genistein

≧ 98%

生化学用

070-04681
076-04683
546-00171

格

≧ 98%

043-28071
049-28073

量（-）-Epicatechin, from Green Tea

040-27741
046-27743

名容量

希望納入価格（円）

10mg

8,000

50mg

24,00010mg

12,00050mg

38,00010mg

12,00050mg

38,000100mg

13,00010mg

13,500100mg

98,000

10mg

5,000

100mg

29,80010mg

13,500100mg

98,00010mg

13,500100mg

98,00010mg

13,500100mg

98,000

20mg

5,000

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

27

Fast LC における検出器のレスポンスの影響
和光純薬工業株式会社
近年、環境問題への関心の高まりかなった背景には、HPLC 装置の高性能

大阪研究所

福本

昌巳

Fast LC ではピーク幅、ピーク間隔がら HPLC 分析に使用される有機溶媒化（配管系での拡散が少なく、検出器

狭いのでレスポンスの設定がクロマト量の削減やその努力が行われ、また、のレスポンスをより細かく調節できる

グラムに大きく影響することがわかる。

ドラッグディスカバリー分野に代表さようになった）と充てん剤の製造技術

以上、Fast LC でカラムが本来持つれる分析検体数の増加に伴う分析時及び充てん技術の進歩によるところが高い分離性能を得るためにはポンプ間の短縮が強く求められている。有機

大きい。しかし、ショートカラムの性能の流量精度、インジェクターの注入機

溶媒量の削減にはカラム内径を細くすを十分に引き出すためには取り扱い上

能、分析セルの適正、カラムと配管のる方法とカラムの長さを短くする方法

いくつかの注意が必要である。ポンプ

接続などのほかに検出器のレスポンとがあり、分析時間を短縮するためにの流量精度、インジェクターの注入機

スの速さも重要であることがわかる。

は流速を上げる方法とカラムの長さを能、分析セルの適正、カラムと配管の短くする方法とがある。特に、これら方接続などに注意を払うことは一般の分法の中でカラムサイズのショート化は

析と同じであるが、Fast LC では検出

環境、コスト及び処理時間の面から大器のレスポンス設定も重要になる。下〔参考資料〕
Wakopak Combi ODS fast の分離性能
和光時報 p14 , Vol.68 , No.4（2000）

きなメリットがあるものと考えられる。

図に検出器のレスポンスを変化させた

カラムサイズのショート化が可能にときのクロマトグラムの変化を示した。
測定条件
カ ラ ム：Combi ODS fast 4.6mmφ× 30mm
移 動 相：A）CH 3CN/H2O=5/95（V/V）, 0.05% TFA ;B ）CH3CN/H2O=95/5（V/V）, 0.05% TFA
グラジェント：0-2.5min（Bconc. 0-80%）, 2.5-3.0min（80%）
流速：3.0ml/min
温度：room temperature
検出：uv 280nm sens. 2.048aufs
装
置：Simadzu LC-10A system
検 出 器：Simadzu SPD-10A UV detector
試料：1）p -hydroxybenzoic acid , 2）methyl p-hydroxybenzoate , 3）salicylic acid ,4）ethyl p-hydroxybenzoate , 5）propyl p-hydroxybenzoate , 6）methyl salicylate ,7）butyl p-hydroxybenzoate , 8）ethyl salicylate , 9）propyl salicylate ,10）butyl salicylate each 1mg/ml in methanol 6[l injection

2
1
4
5
2
7

1

4
5
7

2
1

4
5
7

2

3

4

1

5

7

3

6 8

3

9 10
6 8 9

3

10
6 8

response1（fast）

28

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

3

9 10

4（standard）

6

5

8

9 10

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300 倍及び 2000 倍濃縮液中に観：無色澄明の液体① GC-ECD において、不純物が有機塩素系農薬γ-BHC（20pg）のピーク高密度（ 20 ℃）：0.739 〜 0.742g/mL
水の 1/2 以下であること

分：0.1％以下② GC-FPD において、不純物が有機りん系農薬 MPP（0.5ng）のピーク高の

不 揮 発 物：2ppm 以下

1/25 以下であること

残留農薬・PCB 試験適合性 ：試験適合
コード No.
024-14351
021-14361

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t -ブチルメチルエーテル 2000

規 格
残留農薬・PCB 試験用
残留農薬・PCB 試験用

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品

名規

蒸留水（ヘキサン洗浄品）

格

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４. 溶離溶媒を加え展開するチューブ

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担６. バンドを専用カッターで切断する

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コード No.
522-77341
529-77351
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体
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80,000キラル化合物の絶対配置決定試薬としての
亜鉛ポルフィリン二量体
ERATO 井上光不斉プロジェクト・大阪大学 Victor Borovkov、井上

はじめに

佳久

い。このようなキラル化合物について能である。さらに、この波長に重ならな

は、円二色（CD）スペクトルを用いる

い限り、芳香族などのかなり大きな発

パストゥールが酒石酸ナトリウムア

経験則が有効であるばかりでなく、分色団をもつ試料に対しても全く問題な

ンモニウムの結晶を顕微鏡で観察し、光学的絶対配置決定法は必要とする

く適用できることもこの試薬の重要性

互いに鏡像関係にある 2 種類の結晶を試料量もきわめて少量ですむ利点もと汎用性を高めている。

見つけて顕微鏡下で選り分け、それぞある。中でも Djerassi らが提唱したオれの結晶を溶かした水溶液が逆の旋

クタント則は有名であり、ステロイドや光性（直線あるいは円偏光に対する振テルペノイドなどのシクロヘキサノン

舞いが違う）を示したことから、分子に誘導体に幅広く適用される。多環ラクキラリティー（掌 性 : ギリシ ャ語 のトンについては、Klyne らのラクトンセ

cheir（掌）に由来）があることを発見してからすでに 150 年以上がすぎた。しクター則が知られている。

高感度キラリティーセンサーとしての亜鉛ポルフィリン二量体
図1（上）に示すように、キラリティー
センサーとなる亜鉛ポルフィリン二量

これらはいずれもカルボニルの n-

体は 2 つのオクタエチルポルフィリン＊の亜鉛錯体を短いジメチレン鎖でつかし、分子キラリティーの研究はむし

π 吸収帯に現れるコットン効果の符

ろ近年になって大きな進展を見せ、現号の正負で絶対配置を決定する経験ないだものである。この二量体の特徴

在、化学、生物学のみならず医学、薬則であるが、1,2- ジオールの絶対配は、低極性溶媒中では強い分子内π-学、生理学、農学など多岐にわたる分置の決定に対して提唱された中西・原

π相互作用により 2 つの亜鉛ポルフィ

野の中心的課題の一つとして、基礎・

田のジベンゾエート・キラリティー則でリンが重なったかなり安定な syn 構造

応用両面において活発に研究されては、ジオール部位に導入された 2 つのを取るが、アミンやアルコールなどのいる。

発色団（安息香酸エステル）間の励起

配位性化合物を系に添加すると亜鉛

分子キラリティーには中心性・軸性・子相互作用によって現れる CD スペクに配位して超分子錯体を形成し、2 つ面性のキラリティーが存在するが、いトルにおける同強度・逆符号の分裂型の亜鉛ポルフィリンがすぐさま anti 構

ずれの場合も分子中の原子あるいはコットン効果を利用している。

造に切り替ることである。この syn 体と原子群の絶対配置（空間的な配列の位

これから紹介する亜鉛ポルフィリン

anti 体の間には、可視紫外吸収スペク

置 関 係）が そ の 分 子 が 持 つ キラリ

二量体を用いた光学活性アミンおよ

トルのソーレ吸収帯において明確な違ティーを一義的に決め、結果として互びアルコールの絶対配置決定法も同いが認められる。つまり、syn 体では

いに鏡像関係にある一対の異性体がじ励起子相互作用に基づいている。しソーレ帯は 400 nm 付近に単一ピーク

逆の旋光性を持つことになる。逆のキ

かし本法は、亜鉛ポルフィリン二量体として現れるが、anti 体では長波長シラリティーを持つ鏡像異性体はほとんのキラルな超分子錯体形成反応を利フトし 430-450 nm に 2 つに分裂した

どの化学的・物理的性質が同じである

用しているため、近傍に位置する高い

幅広いピークとして現れる。

が、キラルな光、分子、環境（場）に対分子吸光係数をもつ 2 つのポルフィリ

この亜鉛ポルフィリン二量体の亜鉛

して異なった挙動をする。特に、生物

ン発色団間のきわめて大きな励起子

原 子に 光 学 活 性 な ア ル キ ル アミン

において分子キラリティーは決定的な相互作用が期待できる。実際、本法で（RR' R"CNH2; 置換基サイズ :R > R'役割を演じている。その意味で、これは被検出物質の誘導体化が不要なたまでの分子キラリティーの長い研究のめ、ただ単に絶対配置未知の試料溶歴史の中で絶対配置を決定するため液にこの試薬を溶かして CD スペクト

> R"）ま た は ア ル コ ー ル（RR' R"
COH）が配位すると、anti 体が生じる。
そのコンフォメーションは、図 1（中）にのさまざまな理論、実験的手法ならび

ルを取り、ポルフィリンの 430 nm 付近示すように、オクタエチルポルフィリンに経験則が提唱されてきたのは当然のソーレ吸収帯に現れる分裂型コットのエチル基とキラルアミンの A- 炭素のことといえる。

ン効果の符号を見るだけで即座に絶に結合した最大の置換基 R との立体

先験的に絶対配置を決めることがで対配置が決定できるという大きな特徴

反発により、2 つのポルフィリンはキラ

きる唯一の方法は、異常分散効果を利を持っている。また、操作は簡便・効率

ルなねじれ構造を取ることになる。そ用した X 線結晶解析であるが、非結的で、極微量の検出試薬で、超高感度のねじれの方向はアミン配位子の絶対晶性の化合物については適用できなに、かつ一義的に絶対配置を決定可

配置のみによって一義的に決り、（R）

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）31

体のアミンが配位した時は左回り（図位した右ねじれ構造の anti- ポルフィ

れ角の大きさを決める A- 炭素に結合

1b）、（S）- 体が配位した時には右回り（図 1a）となって、それに基づく超分子した置換基 R の大きさのみならず、実性化合物の絶対配置が決定できる本リン二量体（図 1a）では、2 つの B|| 遷移が時計回りに結合し、B 遷移は反時
計回りに結合する（図 1c）。それらの励起子相互作用の結果、CD スペクトルの長波長側に出る第 1 コットン 効果
ピークは負の値となり、第 2 ピークはキラリティーセンサー法の基本原理で正となると予測される。一方、左ねじ

コールよりもアミンが、高温より低温のあると考えられる。

れ構造の（R）- アミンが配位したもの

方が、高極性より低極性の溶媒の方が、キラリティーが発現することになる。これが、アキラルな検出試薬（亜鉛ポル
フィリン二量体）を用いながらも、配位

このように 2 つのポルフィリン発色（図 1b）
では、2 つの B|| 遷移が反時計
団がキラルなねじれ配置を取る結果、回りに結合し、B 遷移は時計回りに結ポルフィリンの主要な 2 つの遷移モー合する（図 1d）。その結果、逆の符号をメント B|| と B はそれぞれ互いに励起持つ分裂型のコットン効果ピークを与える（図 1d）。
子相互作用を起し、光学活性な吸収帯となって、CD スペクトルにより検出
このような機構に基づいて得られる可能となる。例えば、（S）- アミンが配コットン効果ピークの大きさは、ねじ際に配位子が結合している亜鉛ポル
フィリン二量体の濃度に比例するので、用いる配位子との結合定数にも依存すると考えられる。その意味で、より大きな置換基を有する配位子が、アル検出感度が高くなると予測される。また、多座配座が可能なキラル化合物
についてはより複雑な配位様式が考えられるので、ここで述べたような単純な励起子相互作用の解析はそのま
ま適用できない。

亜鉛ポルフィリン二量体をキラリティーセンサーとする絶対配置決定法
実際に 10-6M 程度の濃度の亜鉛ポ
ルフィリン二量体のジクロロメタン溶
液に光学活性なアミン（室温で測定）
またはアルコール（配位能が低いため、低温で測定）を添加すると、CD スペク
トルは図 2 のような顕著な分裂型のコットン効果を示した。これまでさまざまな置換基を有するキラルなモノアミ
ンやモノオールについて検討したが、いずれの場合も例外なく、R の絶対配置を有するものはポルフィリンのソーレ帯が負の分裂型コットン効果（長波長側が負、短波長側が正）を、S の絶対配置のものは逆に正のコットン効果を示した（図 2）。この実験結果は、上の各遷移モーメント間の励起子相互作
用から予測されるコットン効果の符号
とも完全に一致する。
（代表例を表 1 に示す）。
分子内にいくつかの不斉中心を持
つキラル化合物の場合（例えば、ボルニルアミン、イソピノカンフェニルアミ
ン、ミルタニルアミン）には、ある程度予測されることであるが、もっとも配位原子（ここでは窒素または酸素）に近
図 1. 亜鉛オクタエチルポルフィリン二量体のキラル配位子との超分子錯体形成に伴う syn-anti コンフォ
メーション変化と各遷移モーメント間の励起相互作用とそれによってもたらされる円二色スペクト
ルにおける分裂型コットン効果（CE）の第 1（長波長側）および第 2 ピークの符号32

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

い不斉中心の絶対配置が、観測される
コットン効果を決定していることが明らTable 1. Correlation between the absolute configuration of chiral compounds and the sign of CD
couplet induced upon complexation with bis（Zn porphyrin）

ligand2-butanol
1-phenylethanol
2-butylamine
1-phenylethylamine
1（1-naphthyl）ethylamine
1-cyclohexylethylamine
N-methyl-1-phenylethylamine
N-benzyl-1-phenylethylamine

図 2. 亜鉛ポルフィリン二量体のジクロロメタン溶液に光学活性アミンを添加したときに現れる典型的な誘起 CD
スペクトル（（R）- 体を添加したときは、図 1d に示すように左回りのねじれが誘起されて負の分裂型コットン効果（点線）が、（S）- 体では逆のねじれが生じて正のコットン効果（実線）が誘起される）かになった。この結果は、さまざまな位置に多数の不斉中心を有するキラル化合物へも不安なく適用できること

2-methyl-1-butylamine
cis-myrtanylamine
bornylamine
isopinocampheylamine
2（methoxymethyl）pyrrolidine
1（2-pyrrolidinylmethyl）pyrrolidine
1-amino-2-（methoxymethyl）pyrrolidine

まとめabsolute
configuration
（R）
（−）
（S）
（＋）
（R）
（＋）
（S）
（−）
（R）
（−）
（S）
（＋）
（＋）
（R）
（S）
（−）
（R）
（＋）
（S）
（−）
（R）
（−）
（S）
（＋）
（R）
（＋）
（S）
（−）
（R）
（＋）
（S）
（−）
（S）
（−）
（S）
（−）
（1R,2S）（＋）（1R,2R,3R,5S）（−）（1S,2S,3S,5R）
（＋）
（S）
（＋）
（＋）
（S）
（R）
（＋）
（S）
（−）
-

sign of Cotton effect
1st peak
2nd peak
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
＋
−
−
＋
−
＋
−
＋
−
＋
＋
−
−
＋
−
＋
−
＋
＋
−
−
＋

現在、さらに検出感度を高め、対象化合物を広げ、用途を拡大するための亜鉛ポルフィリン二量体のキラル超研究を展開しているが、上記のような分子錯体形成に伴う励起子相互作用特長を持つこの新しい絶対配置決定

不斉中心まわりの置換基の立体障に基づく CD コットン効果を利用する試薬が、今後さまざまな分野において害の差がもっとも小さいメチル基とエキラリティーセンサー法を新たに開発

幅広く活用されることを期待している。

チル基の場合（例えば、2- ブタノール、した。この方法は、きわめて少量の検を示している。

2- ブチルアミン、2- メチル-1- ブチル

出試薬ならびに試料量で、キラルアミアミン）も、同様に高感度で区別してンやアルコールの絶対配置を、前処理

正しい絶対配置を CD スペクトルで決なしで、超高感度に、再現性よく、例

定できることも明らかになった。

外もなく一義的に、確実・簡便・高効率

さらに、この亜鉛ポルフィリン二量体に決定することができる。A- あるいはは、不斉中心がより遠い配位原子の B-

B- 位に不斉中心を持つさまざまなキ

位にあるキラル化合物の場合（例えば、ラルアミンやアルコールに適用可能で

2- メチル-1- ブチルアミン、ミルタニル
アミン、1- アミノ-2（メトキシメチル）
ピロリジン）でも正しい絶対配置を CD ス

あり、複数の不斉中心のある化合物でペクトルで分光学的に決定できた。

配置が決定できる。

ここで特筆すべきことは、これらのは亜鉛に配位するアミノ基や水酸基に最も近い位置にある不斉中心の絶対〔参考文献〕
1）Borovkov, V. V.; Lintuluoto, J. M.;
Fujiki, M.; Inoue, Y. J. Am. Chem.
Soc. 2000, 122, 4403-4407.
2）Borovkov, V. V.; Lintuluoto, J. M.;
Inoue, Y. Org. Lett. 2000, 2, 15651568.
3）Borovkov, V. V.; Lintuluoto, J. M.;
Inoue, Y. J. Phys. Chem. A 2000, 104,
9213-9219.
4）Borovkov, V. V.; Yamamoto, N.;
Lintuluoto, J. M.; Tanaka, T.; Inoue,
Y. Chirality, in press.

測定にはわずか 2-3 mg のサンプルしキラル化合物の絶対配置決定試薬

か必要とせず、低温で測定すれば結Zinc Porphyrin Dimer

合定数が増大するのでさらに少量です

CD 用

むことである。しかもこの高感度に加亜鉛ポルフィリン二量体は CD 分光計を用いて簡単にキラルなアミン類やアルコール類などの絶対配置を決定することができます。従来の X 線結晶解析法などに比べて、サンプル試料も少なくてすみ、前処理なしで、高感度に、再現性よく検出することができます。

えて、誘導体化など何の前処理も必要なく、従って、貴重なサンプルの場合にはこの検出試薬とともにサンプルを完全に回収することも可能である。

＊本品を用いて、すべてのキラル化合物についての検証は行っておりません。

267-01651

20mg

20,000 円

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

33

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13,0001,800
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13,000〔次頁へ続く〕34

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

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055-06133
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059-06131
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056-06185
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059-06315
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085-07275
089-07033
085-07035
083-07031
136-12383
132-12385
130-12381
131-12713
137-12715
138-12723
134-12725
166-18305
164-18301
165-17993
161-17995
169-17991
161-18453
167-18455
165-18451
206-13433
202-13435
200-13431
207-13963
203-13965
201-13961
203-13443
209-13445
207-13441
242-00685
240-00681

品

名

水分含量

Cyclohexane, Dehydrated

30ppm 以下

Dichloromethane, Dehydrated（2-Methyl-2-butene 0.0005~0.005%）

30ppm 以下Diethyl Ether, Dehydrated（BHT 0.0003%）

50ppm 以下

N,N-Dimethylacetamide, Dehydrated

50ppm 以下

N,N-Dimethylformamide, Dehydrated

50ppm 以下

Dimethyl Sulfoxide, Dehydrated

50ppm 以下

1,4-Dioxane, Dehydrated（BHT 0.0005%）

50ppm 以下

Ethanol, Dehydrated

50ppm 以下

Ethyl Acetate, Dehydrated

50ppm 以下

Ethylene Glycol, Dehydrated

50ppm 以下

Heptane, Dehydrated

30ppm 以下

Hexane, Dehydrated

30ppm 以下

Methanol,Dehydrated

50ppm 以下

4-Methyl-2-pentanone, Dehydrated

50ppm 以下

1-Methyl-2-pyrrolidone, Dehydrated

50ppm 以下

1-Propanol, Dehydrated

50ppm 以下

2-Propanol, Dehydrated（Iso- 〃）50ppm 以下

Pyridine, Dehydrated

50ppm 以下

Tetrahydrofuran, Dehydrated（BHT 0.03%）

50ppm 以下

Tetrahydrofuran, Dehydrate（no Stabilizer）

50ppm 以下

Toluene, Dehydrated

30ppm 以下

Xylene, Dehydrated

30ppm 以下

容

500mL
3L
100mL
500mL
3L

量

希望納入価格（円）3,600
13,0002,000
3,500
13,000

500mL

5,700

500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
100mL
500mL
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
100mL
500mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
100mL
500mL
3L
500mL
3L

5,200
20,0001,800
4,200
15,000
2,500
7,000
3,600
13,0002,100
4,200
15,7001,700
3,100
12,000
2,500
7,000
2,500
5,000
1,700
3,100
11,0001,700
3,550
12,700
2,500
5,000
2,500
5,000
4,200
14,0001,800
3,100
12,0002,500
7,500
20,0001,700
3,700
13,1001,700
3,500
13,0001,700
3,000
10,5003,500
13,000

和光純薬時報 Vol.69, No.1（2001）

35

和
光
純
薬
時
報
第
六
十
九
巻

アポトーシスの初期判定にPARP Western Blot Kit wako
アポトーシスの実行過程において、様々なタンパク質がカスパーゼによって分解されます。ポリ（ADP- リボース）ポリメ
もその一つで、アポトーシスの初期にカスパーゼ 3 によって分解されることが知られています。本キットはこの
ラーゼ（PARP）PARP の分解産物を生化学的解析手法の 1 つであるウエスタンブロット法を用いて検出するシステムです。アポトーシスの生化学的な検出法には従来よりアネキシンⅤ染色法、TUNEL 法などが知られていますがそれらと本キットを組合せて使用する
ことでより正確なアポトーシスの判定が可能になります。
〔特 長〕１）各ステップの主な反応試薬をセット化
２）PARP 分解産物を特異的に検出〔プロトコール例〕
マイクロプレートに誘導・非誘導HL60細胞を蒔く〔キット内容〕
I 一次抗体II ALP 標識二次抗体
III 洗浄液
IV ブロッキング溶液
V 基質発色液（BCIP）
VI 基質発色液（NBT）
VII 発色用緩衝液

遠40FL ×１本
40FL ×１本
70mL ×１本
90mL ×１本
70FL ×１本
150FL ×１本
25mL ×１本※ メンブレンはキットに付属しておりません。別にご用意下さい。
PVDF 膜ではバックグラウンドが高く、検出感度が低いため本キットには適していません。ニトロセルロース膜（ミリポア社イモビロン-NC Standard）
を推奨します。
※ お使いになる細胞によって実験プロトコールが変わりますので最適な系を実験毎にご確認の上ご使用下さい。
※ サンプルバッファー中に 6M Urea を添加、また超音波破砕を行っているのは PARP/DNA 結合体から効率よくPARP を分離するためです。

沈心（2,400rpm, 5分）
殿
サンプルバッファー（62.5mM Tris-HCl ; pH 6.8, 6M Urea,
10% Glycerol, 2% SDS, 0.00125% bromophenol blue,
5% β-mercaptoethanol）を添加

超音波破砕15秒
インキュベート15分、65℃

遠心（20,000rpm, 10分）

上清20[l/laneをSDS-PAGEにアプライ
NC膜に転写ブロッキング溶液でNC膜をブロッキング。4℃で一夜放置
ブロッキング溶液で希釈した一次抗体を室温で１時間
インキュベート

NC膜洗浄

洗浄液で3分ずつ3回

ブロッキング溶液で希釈したALP標識二次抗体を室温で１時間インキュベート

NC膜洗浄

洗浄液で3分ずつ3回

基質発色液（BCIP/NBT）で発色
水洗、乾燥

コード No.
295-56801

品
PARP Western Blot Kit wako

名規 格
アポトーシス研究用

包装

24 レーン用

希望納入価格（円）35,000〔関連商品〕
種 別
Screeningin situ
Ladder
FACS
PARP 阻害剤
PARP 阻害剤
酵 素

コード No.
291-55801
295-53501
297-53201
291-53204
297-55901
018-18611
166-20211
168-18821

品
名
Apoptosis Screening Kit wako
Apoptosis in situ Detection Kit wako

規 格
アポトーシス研究用
アポトーシス研究用

Apoptosis Ladder Detection Kit wako

アポトーシス研究用

Annexin V Fluorescein Staining Kit
4-Amino-1,8-naphtalimide
6（5H）-Phenanthridinone
Poly（ADP-ribose）polymerase, from Bovine Thymus

アポトーシス研究用
生化学用
生化学用
生化学用

包

装

96 回用
40 回用
96 レーン用
24 レーン用
50 回用
20mg
500mg
100Fg

希望納入価格（円）46,00060,00058,00033,00040,00011,00024,00052,000

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

記載価格は希望納入価格であり消費税等は含まれておりません。

発行所

36

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL. 06-6203-3741（代表）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

2001 年 1 月 15 日
岸 井 松 司大 西 礼 子
共進社印刷株式会社

第一号