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THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

70―4221（ 35 ）＜資料＞カナマイシン発見後の予研抗生物質部の思い出－発見 㻢㻜 周年に寄せて㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌

小河原㻌 宏㻌㻴㻻㻌㻮㼕㼛 研・明治薬科大学㻌（㻞㻜㻝㻣 年 㻣 月 㻝㻠 日受付）㻌
㻌
１．はじめに㻌㻌 本年は、梅澤濱夫先生が日本初の本格的抗生物質であるカナマイシン（㻷㼍㼚㼍㼙㼥㼏㼕㼚、㻷㻹）を 㻝㻥㻡㻣 年に発見１）されてから 㻢㻜 周年になる。このご業績により、先生は 㻝㻥㻢㻞 年日本学士院賞および文化勲章を授与された。筆者は、東京大学（東大）医学部薬学科から化学系大学院博士課程を中退し、㻷㻹 が発見されて間もない 㻝㻥㻢㻜 年に梅澤先生が部長であった国立予防衛生研究所（予研；現国立感染症研究所）抗生物質部に入所し、梅澤先生の指導の下に抗生物質の探索研究などに従事した。これは微生物化学研究所（微化研）開設の 㻞 年前である。㻷㻹 発見 㻢㻜 周年の機会に、当時の予研抗生物質部の状況などについて述べる。㻌
㻌２．㻝㻥㻢㻜 年当時の予研抗生物質部㻌
筆者が入所した当時の予研抗生物質部は、まだ東大伝染病研究所（現医科学研究所）の西門に近い建物の３階と、旧馬小屋を改築し 㻠㻜㻜㻸 の発酵槽を設置した建物を間借りした状況であった。すでに一部移転していた旧海軍大学校跡地（品川区上大崎、㻶㻾 目黒駅近く）に 㻣 月に移転することになっていたが、筆者は発酵槽のある建物の 㻞 階に一時的に在室した。入所早々、梅澤先生は大変忙しい時間を割いて発酵槽のある建物から 㻟 階の抗生物質部実験室を隈無く案内して下さり、大変温かく処遇して頂いた。入所の手続きはその年の 㻞 月中頃に始めたが、事務手続きに手間取ったため採用は 㻡 月になってしまった。梅澤先生は履歴に空白が出来るのは後々具合が良くないと云われ、ご厚意で東大大学院の半年分の授業料を払って下さり、東大に在籍しつつ 㻟 月から予研に通勤し始めた次第であった。当時の抗生物質部は、菌学室（室長：岡見吉郎博士）、化学室（室長：前田謙二博士）、生物室（室長：竹内富雄博士）、中間培養室（室長：大里悌輔博士）のほか、抗生物質の国家検定を担当する検定室（室長：山崎正郎博士）の 㻡 室からなっていた。筆者の所属する化学室の前田室長は米国ボストンの 㻹㻵㼀 のシーハン教授の下に留学中で、滝田智久博士（日本化薬）、村瀬正夫博士（明治製菓）、大井小二三氏（後の前田博士夫人）および近藤廣子氏（近藤信一博士夫人）の 㻠 名が在籍していた。ルーチンワークとして、毎週数株の放線菌株が菌学室から配布され、その生産抗生物質の同定（新規の抗生物質であれば単離してその物理化学的、生物学的性質を明らかにすること）が行われた。男性は他に、それぞれに単独のテーマが与えられて研究に当たっていた。生産菌はもっぱら 㻿㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼙㼥㼏㼑㼟 属放線菌が対象とされ、グラム陽性菌、グラム陰性菌および結核菌に対する抗菌物質の探索、担癌動物と癌の培養細胞を用いる新規制癌抗生物質の探索（後のブレオマイシンの発見に繋がった）、新規農薬の探索（後のカスガマイシン発見に繋がった）の 㻟 つの流れからなっていた。ルーチンワークは化学室および生物室に属するすべての職員が担
HIROSHI OGAWARA: Memories on Department of Antibiotics of NIHJ after kanamycin discovery－a remark for the 60th anniversary of kanamycin－ e-mail: hogawara@sc5.so-net.ne.jp222（ 36 ）THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

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当し、培養液を濃縮後、溶媒系の入った 㻝㻚㻡㼏㼙㻌 ×㻌 㻞㻜㼏㼙 の試験管とゴム栓に挟んだ 㻝㼏㼙 幅の濾紙を用いペーパークロマトグラフィーで展開し、濾紙を溶媒除去し乾燥した後、寒天平板培地で培養した試験菌に対する阻止円を観察する方法で行った。展開溶媒としては水飽和ブタノール、水飽和酢酸エチル、ブタノール：メタノール：水混液、水飽和ブタノール：パラトルエンスルホン酸、㻡㻜㻑アセトン水、塩化アンモニウム溶液、メタノール：ベンゼン：クロロホルム：水などの溶媒系を用いることにより、おおよその抗生物質の化学的性質を知ることから始まった。この方法は 㼟㼡㼙㼙㼍㼞㼕㼦㼑㼐㻌 㼜㼍㼜㼑㼞㻌 㼏㼔㼞㼛㼙㼍㼠㼛㼓㼞㼍㼜㼔㼥 略してサンマと呼んでいた。試験菌としてはグラム陽性の枯草菌、グラム陰性の大腸菌、結核菌の代替抗酸菌

㻹㼥㼏㼛㼎㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼡㼙㻌㼟㼙㼑㼓㼙㼍㼠㼕㼟㻌㻢㻜㻣㻌㻔㻹㻢㻜㻣 と略称㻕あるいは 㻹㻚㻌㼜㼔㼘㼑㼕 が用いられた。両菌は結核菌に比較して培養時間が 㻞 日間と短く（とは云っても枯草菌や大腸菌は 㻝 日培養）、抗結核薬探索に非常な利点をもたらした。同時にマウスに対する急性毒性が検討され、低毒性で抗菌力ないしは制癌力の強い物質が標的とされた。しかし微化研が設立後、ルーチンワークは継続されたものの主力は予研から微化研に移っていった。㻌
㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌㻌
図１．㻝㻥㻢㻡 年頃の予研抗生物質部の陣容㻌
（梅澤先生は出張のためお見えにならない）㻌

㻌３．水溶性塩基性抗生物質の毒性研究㻌㻌 㻝㻥㻡㻝 年 㻞 月に初のアメリカ視察旅行より帰国された梅澤先生が持ち帰った 㻹㻢㻜㻣 および 㻹㻚㻌 㼜㼔㼘㼑㼕 を試
験菌として本格的に抗結核薬の研究が始められた。最初に、水難溶性のピリドマイシン㻔㼜㼥㼞㼕㼐㼛㼙㼥㼏㼕㼚、㻼㼅㻕が発見された２）が、動物実験で有効性がなかった。因みに、㻼㼅 の化学構造の解明５）と生合成経路の解析６）は、筆者の博士論文のテーマとなった。次いで、有機溶媒に溶け、結核菌やその他の抗酸菌を低濃度で阻止し、マウス腹腔注射で低毒性のアイラマイシン（㻵㼘㼍㼙㼥㼏㼕㼚）が発見された３）。また、㻝㻥㻡㻢 年に水溶性塩基性で、抗酸菌に有効であるが酸に不安定なフレオマイシン（㻼㼔㼘㼑㼛㼙㼥㼏㼕㼚）が発見された４）。こうした中、動物体内でも結核菌に有効なストレプトマイシン（ 㻿㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼙㼥㼏㼕㼚、㻿㻹） ７ ） やストレプトスリシン 㻮（㻿㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻌 㻮㻘㻌 ＝ネオマイシン 㻺㼑㼛㼙㼥㼏㼕㼚）８）が水溶性で塩基性であることから、放線菌がつくる抗生物質のうち水溶性塩基性の物質が集中的に探索された結果、㻷㻹１）が発見されたのであった。水溶性塩基性抗生物質の多くは腎毒性および聴覚障害を示す 㻥㻘㻝㻜㻕㻌 が、㻷㻹 は腎毒性が少ない物質であった。特に、ストレプトスリシン（㻿㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻘㻌 㻿㼀）㻝㻝㻘㻝㻞㻕㻌 はマウスに注射して 㻟～㻣 日後に死亡する毒性である遅延性毒性を示す 㻝㻟㻕が、筆者に与えられた最初のテーマはこの 㻿㼀 の遅延性毒性を低減する物質の探索であった。これは、梅澤先生がかつて 㻿㻚㻌 㼞㼛㼟㼑㼛㼏㼔㼞㼛㼙㼛㼓㼑㼚㼡㼟 のつくる水溶性塩基性抗生物質を研究中、粗Aug. 2017

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70―4223（ 37 ）粉末では遅延性毒性を示さず、精製するとともに遅延性毒性が高まることを経験しておられたことから、この放線菌生産物中に遅延性毒性を低下させる物質が存在するとのアイディアに基づくものであった。この遅延性毒性は腎毒性の結果起こるものと考えられ、この遅延性毒性抑制物質は、水溶性塩基性抗生物質で一般的に見られる腎毒性９）を低減する可能性がある。そこで、培養液をイオン交換樹脂などで分画し、抗菌活性画分とそれ以外の画分を色々組み合わせて、マウスの尾静脈に注射し、遅延性毒性低下を解析した。マウス尾静脈への注射は生物室の竹内富雄博士の指導の下で行ったが、注射の際、培養液などが尾静脈から少量でも漏れると尾が壊死を起こして切れてしまうことを経験し、細心の注意を要した。
結果的に、培養濾液からはこのような遅延性毒性抑制物質は単離出来なかった。そこで、戦略を変更した。一般に薬物は、グルクロン酸抱合、硫酸抱合、グリシン抱合などの誘導体を経て解毒、代謝される。
グルクロン酸抱合の場合、グルクロン酸は 㼁㻰㻼㻙グルクロン酸からグルクロン酸転移酵素により薬物に転移されることから、各種ピリミジン誘導体の遅延性毒性低減作用を検討した。その結果、ウラシル、オロチン酸、㻞㻙アミノ㻙㻠㻘㻢㻙ジクロロピリミジンなどが遅延性毒性低減作用を示すことを発見した 㻝㻠㻕。㻌
㻌４．お調べと「抗生物質の話」㻌
㻌 筆者が予研に入所して数ヶ月経過した頃であった。梅澤先生が朝一番に化学室に来られ、仕事の話を聞かせてほしいとのことであった。その頃はまだ「お調べ」と称して、年に数回そのようなことが行われていた。筆者にとっては初めての経験で、約 㻭㻠 判の旧タイプライター用紙サイズの予研名入り実験ノートを直接お見せしたところ、朝 㻥 時過ぎからここはどうかあそこはどうかと実験方法と結果を詳細に検討して下さった。実験ノートのあっちを開いたりこっちを開いたりし徹底的に調べられ叱られた。午後 㻝 時頃になって先生は「それでは僕はちょっと食事をしてくるからね」と云って出かけて行かれた。しかし筆者の方は食事など喉を通るわけがなく、「ボッー」と先生のお帰りを待っている状態であった。㻟㻜 分程で先生が戻ってこられ、また「お調べ」が再開され、結局 㻠 時過ぎまで続けられ、筆者は完全にグロッキーになってしまったのであるが、初めて先生の仕事に対する厳しさ、情熱などを見せられ、感激するとともに大学を出て数年の若輩者に対してもこれだけ長時間直接ご指導を頂ける幸せを感じたものである。その後抗生物質部に入所してきた正規の職員に聞いても、この「お調べ」のことを知らないので、筆者が最後になり、この方式は微化研の方に移行していったのではないかと想像された。㻌
㻌 梅澤先生との出会いで今でも特に印象深く記憶に残っていることは、先生がお書きになった岩波新書の「抗生物質の話」㻝㻜㻢 ページに載っている記事の原稿に関することである。㻝㻥㻢㻞 年 㻝㻞 月が初版であるから、㻝㻥㻢㻞 年の中頃であったか、化学室にお見えになった梅澤先生は、筆者に向かって「君、メッセンジャー㻾㻺㻭 上でアミノ酸㻙ｓ㻙㻾㻺㻭 が配列して蛋白質が合成されるので間違いがないね？」とお聞きになったと記憶している。当時は 㼠㻙㻾㻺㻭 のことを 㼟㻙㻾㻺㻭 と称しており、蛋白質合成系が明らかにされて数年しか経っておらず、特に興味を持って勉強していなければ知らない新しい知見であった。たまたま筆者は、出席させてもらっていた予研化学部の水野伝一先生のセミナーでこのような話を聞いていたのでお答えすることができた。とはいえ、㻞㻜 歳以上も年下の筆者にこのようなことを聞かれるとは、知識の吸収には年齢は関

図２．㻝㻥㻢㻜 年頃梅澤先生の直々のご指導を仰ぐ筆者㻌㻔㻝㻥㻤㻣 年 㻝 月 㻝㻞 日朝日夕刊㻕

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係のないという至極当然のことを当たり前にされるとともに、数週間後には筆者より数倍、数十倍の知識を取得されている梅澤先生の偉大さに改めて尊敬の念を抱いたものである。㻌
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５．おわりに㻌㻌 筆者は 㻷㻹 発見直後に梅澤濱夫先生が部長の予研抗生物質部に入所するという幸運に恵まれた。しかし、当時の予研では 㻷㻹 に関連した雰囲気というものはほとんど感じられず、既に次の態勢に移行していたと記憶している。本稿では 㻷㻹 発見の場となった予研抗生物質部の当時の状況、３つの大きな研究の流れのうち結核菌 㻹㼥㼏㼛㼎㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼡㼙㻌㼠㼡㼎㼑㼞㼏㼡㼘㼛㼟㼕㼟 に代わる抗酸菌 㻹㻢㻜㻣 あるいは 㻹㻚㻌㼜㼔㼘㼑㼕 を取得しての、低毒性で結核菌に有効な水溶性塩基性抗生物質である 㻷㻹 の発見に至る梅澤濱夫先生の独創性と先見性、これに関連して筆者が関与した水溶性塩基性抗生物質であるストレプトスリシンの低毒性化の研究、先生の研究に対する情熱を示すエピソードの一端を述べた。㻌
㻌利益相反自己申告：㻌 申告すべきものなし㻌㻌文献㻌1) 㼁㼙㼑㼦㼍㼣㼍㻌㻴㻘㻌㼁㼑㼐㼍㻌㻹㻘㻌㻹㼍㼑㼐㼍㻌㻷㻘㻌 㼑㼠㻌㼍㼘㻚㻦㻌㻼㼞㼛㼐㼡㼏㼠㼕㼛㼚㻌㼍㼚㼐㻌㼕㼟㼛㼘㼍㼠㼕㼛㼚㻌㼛㼒㻌㼍㻌㼚㼑㼣㻌㼍㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㼕㼏㻘㻌㼗㼍㼚㼍㼙㼥㼏㼕㼚㻚㻌㻶㻌㻭㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㻚㻌㻝㻥㻡㻣㻧㻌㻝㻜㻭㻦㻌㻝㻤㻝㻙㻤㻚㻌2) 㻹㼍㼑㼐㼍㻌㻷㻘㻌㻷㼛㼟㼍㼗㼍㻌㻴㻘㻌㻻㼗㼍㼙㼕㻌㼅㻘㻌㼑㼠㻌㼍㼘㻚㻦㻌㻭㻌㼚㼑㼣㻌㼍㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㼕㼏㻘㻌㼜㼥㼞㼕㼐㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻚㻌㻶㻌㻭㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㻚㻌㻝㻥㻡㻟㻧㻌㻢㻭㻦㻌㻝㻠㻜㻚㻌3) 㼀㼍㼗㼕㼠㼍㻌㼀㻘㻌㻻㼔㼕㻌㻷㻘㻌㻻㼗㼍㼙㼕㻌㼅㻘㻌㼑㼠㻌㼍㼘㻚㻦㻌㻺㼑㼣㻌㼍㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㼕㼏㼟㻘㻌㼕㼘㼍㼙㼥㼏㼕㼚㼟㻚㻌㻶㻌㻭㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㻚㻌㻝㻥㻢㻞㻧㻌㻝㻡㻭㻦㻌㻠㻢㻙㻤㻚㻌4) 㻹㼍㼑㼐㼍㻌㻷㻘㻌㻷㼛㼟㼍㼗㼍㻌㻴㻘㻌㼅㼍㼓㼕㼟㼔㼕㼠㼍㻌㻷㻘㻌㼑㼠㻌㼍㼘㻚㻦㻌㻭㻌㼚㼑㼣㻌㼍㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㼕㼏㻘㻌㼜㼔㼘㼑㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻚㻌㻶㻌㻭㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㻚㻝㻥㻡㻢㻧㻌㻥㻭㻦㻌㻤㻞㻙㻡㻚㻌5) 㻻㼓㼍㼣㼍㼞㼍㻌㻴㻘㻌㻹㼍㼑㼐㼍㻌㻷㻘㻌㻷㼛㼥㼍㼙㼍㻌㻳㻘㻌㼑㼠㻌㼍㼘㻚㻦㻌㼀㼔㼑㻌㼏㼔㼑㼙㼕㼟㼠㼞㼥㻌㼛㼒㻌㼜㼥㼞㼕㼐㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻚㻌㻯㼔㼑㼙㻌㻼㼔㼍㼞㼙㻌㻮㼡㼘㼘㻚㻌㻝㻥㻢㻤㻧㻌㻝㻢㻦㻌㻢㻣㻥㻙㻤㻣㻚㻌6) 㻻㼓㼍㼣㼍㼞㼍㻌㻴㻘㻌㻹㼍㼑㼐㼍㻌㻷㻘㻌㼁㼙㼑㼦㼍㼣㼍㻌㻴㻦㻌㼀㼔㼑㻌㼎㼕㼛㼟㼥㼚㼠㼔㼑㼟㼕㼟㻌㼛㼒㻌㼜㼥㼞㼕㼐㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻚㻌㻮㼕㼛㼏㼔㼑㼙㻚㻌㻝㻥㻢㻤㻧㻌㻣㻦㻌㻟㻞㻥㻢㻙㻟㻜㻞㻚㻌7) 㻿㼏㼔㼍㼠㼦㻌 㻭㻘㻌 㻮㼡㼓㼕㼑㻌 㻱㻘㻌 㼃㼍㼗㼟㼙㼍㼚㻌 㻿㻭㻦㻌 㻿㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻘㻌 㼍㻌 㼟㼡㼎㼟㼠㼍㼚㼏㼑㻌 㼑㼤㼔㼕㼎㼕㼠㼕㼚㼓㻌 㼍㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㼕㼏㻌 㼍㼏㼠㼕㼢㼕㼠㼥㻌 㼍㼓㼍㼕㼚㼟㼠㻌㻳㼞㼍㼙㻙㼜㼛㼟㼕㼠㼕㼢㼑㻌㼍㼚㼐㻌㻳㼞㼍㼙㻙㼚㼑㼓㼍㼠㼕㼢㼑㻌㼎㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼍㻚㻌㻼㼞㼛㼏㻌㻿㼛㼏㻌㻱㼤㼜㻌㻮㼕㼛㼘㻌㻹㼑㼐㻚㻌㻝㻥㻠㻠㻧㻌㻡㻡㻦㻌㻢㻢㻙㻥㻚㻌8) 㼁㼙㼑㼦㼍㼣㼍㻌㻴㻘㻌㼀㼍㼗㼑㼡㼏㼔㼕㻌㼀㻘㻌㻷㼡㼞㼛㼟㼡㻌㻱㻦㻌㻿㼠㼡㼐㼕㼑㼟㻌㼛㼚㻌㼟㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻙㼓㼞㼛㼡㼜㻌㼟㼡㼎㼟㼠㼍㼚㼏㼑㼟㻚㻌㻻㼚㻌㼟㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻌㻭㻌㼍㼚㼐㻌㼟㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻌㻮㻚㻌㻶㼍㼜㻌㻹㼑㼐㻌㻶㻚㻌㻝㻥㻠㻥㻧㻌㻞㻦㻌㻥㻙㻝㻡㻚㻌9) 㻸㼛㼜㼑㼦㻙㻺㼛㼢㼛㼍㻌㻶㻹㻘㻌㻽㼡㼕㼞㼛㼟㻌㼅㻘㻌㼂㼕㼏㼑㼚㼠㼑㻌㻸㻘㻌 㼑㼠㻌㼍㼘㻚㻦㻌㻺㼑㼣㻌㼕㼚㼟㼕㼓㼔㼠㼟㻌㼕㼚㼠㼛㻌㼠㼔㼑㻌㼙㼑㼏㼔㼍㼚㼕㼟㼙㻌㼛㼒㻌㼍㼙㼕㼚㼛㼓㼘㼥㼏㼛㼟㼕㼐㼑㻌㼚㼑㼜㼔㼞㼛㼠㼛㼤㼕㼏㼕㼠㼥㻦㻌㼍㼚㻌㼕㼚㼠㼑㼓㼞㼍㼠㼕㼚㼓㻌㼜㼛㼕㼚㼠㻌㼛㼒㻌㼢㼕㼑㼣㻚㻌㻷㼕㼐㼚㼑㼥㻌㻵㼚㼠㼑㼞㼚㻚㻌㻞㻜㻝㻝㻧㻌㻣㻥㻦㻌㻟㻟㻙㻠㻡㻚㻌10) 㻷㼍㼣㼍㼟㼍㼗㼕㻌㼀㻘㻌㻿㼠㼑㼥㼓㼑㼞㻌㻼㻿㻦㻌㻵㼚㼠㼞㼍㼏㼑㼘㼘㼡㼘㼍㼞㻌㼙㼑㼏㼔㼍㼚㼕㼟㼙㼟㻌㼛㼒㻌㼍㼙㼕㼚㼛㼓㼘㼥㼏㼛㼟㼕㼐㼑㻙㼕㼚㼐㼡㼏㼑㼐㻌㼏㼥㼠㼛㼠㼛㼤㼕㼏㼕㼠㼥㻚㻌㻵㼚㼠㼑㼓㼞㻌㻮㼕㼛㼘㻚㻌㻞㻜㻝㻝㻧㻌㻟㻦㻌㻤㻣㻥㻙㻤㻢㻚㻌11) 㼃㼍㼗㼟㼙㼍㼚㻌 㻿㻭㻘㻌 㼃㼛㼛㼐㼞㼡㼒㼒㻌 㻴㻮㻦㻌 㻿㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻘㻌 㼍㻌 㼚㼑㼣㻌 㼟㼑㼘㼑㼏㼠㼕㼢㼑㻌 㼎㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼛㼟㼠㼍㼠㼕㼏㻌 㼍㼚㼐㻌 㼎㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼏㼕㼐㼍㼘㻌 㼍㼓㼑㼚㼠㻘㻌㼜㼍㼞㼠㼕㼏㼡㼘㼍㼞㼘㼥㻌㼍㼏㼠㼕㼢㼑㻌㼍㼓㼍㼕㼚㼟㼠㻌㻳㼞㼍㼙㻙㼚㼑㼓㼍㼠㼕㼢㼑㻌㼎㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼍㻚㻌㻼㼞㼛㼏㻌㻿㼛㼏㻌㻱㼤㼜㻌㻮㼕㼛㼘㻌㻹㼑㼐㻚㻌㻝㻥㻠㻞㻧㻌㻠㻥㻦㻌㻞㻜㻣㻙㻝㻜㻚㻌 㻌12) 㻴㼑㼕㼘㼙㼍㼚㻌㻰㻴㻦㻌㻯㼥㼠㼛㼠㼛㼤㼕㼏㼕㼠㼥㻌㼛㼒㻌㼟㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻌㼍㼚㼐㻌㼟㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻚㻌㻼㼞㼛㼏㻌㻿㼛㼏㻌㻱㼤㼜㻌㻮㼕㼛㼘㻌㻹㼑㼐㻚㻌㻝㻥㻠㻡㻧㻌㻝㻜㻦㻌㻟㻢㻡㻙㻣㻚㻌13) 㼀㼍㼚㼕㼥㼍㼙㼍㻌㻴㻘㻌㻿㼍㼣㼍㼐㼍㻌㼅㻘㻌㻷㼕㼠㼍㼓㼍㼣㼍㻌㼀㻦㻌㻯㼔㼍㼞㼍㼏㼠㼑㼞㼕㼦㼍㼠㼕㼛㼚㻌㼛㼒㻌㼞㼍㼏㼑㼙㼛㼙㼥㼏㼕㼚㻚㻌㻯㼔㼑㼙㻌㻼㼔㼍㼞㼙㻌㻮㼡㼘㼘㻚㻌㻝㻥㻣㻝㻧㻌㻝㻥㻦㻌㻝㻢㻞㻣㻙㻟㻠㻚㻌14) 㻻㼓㼍㼣㼍㼞㼍㻌㻴㻘㻌㼀㼍㼗㼑㼡㼏㼔㼕㻌㼀㻘㻌㼁㼙㼑㼦㼍㼣㼍㻌㻴㻦㻌㻼㼥㼞㼕㼙㼕㼐㼕㼚㼑㻌㼏㼛㼙㼜㼛㼡㼚㼐㼟㻌㼞㼑㼐㼡㼏㼕㼚㼓㻌㼠㼛㼤㼕㼏㼕㼠㼥㻌㼛㼒㻌㼍㻌㼟㼠㼞㼑㼜㼠㼛㼠㼔㼞㼕㼏㼕㼚㻚㻌㻶㻌㻭㼚㼠㼕㼎㼕㼛㼠㻚㻌㻝㻥㻢㻞㻧㻌㻝㻡㻦㻌㻝㻟㻣㻙㻠㻜㻚㻌