ISSN 1347-4804

October 2004
Vol.72 No.4

X
O

Lewis basic site

O

X

P
O

O H

Brønsted acidic site

X

HO
N

OTMS

ArNH O

15 (30 mol%)

+
OMe

Ph

TolueneLewis basic site

O
O
P
O O H

15a; X=H,
15b; X=Ph
15c; X=4-NO2C6H4Brønsted acidic site

OMe

Ph

X
X

15a; X=H,
15b; X=Ph
15c; X=4-NO2C6H4
HOO

Lewis basic site

O

P
O

O H

Brønsted acidic site

X

OTMS
+

N

OMe

15 (30 mol%)Ph

HO

ToluenePhN

O
15a;ArNH
X=H,
15b; X=Ph
15c; X=4-NO2C6H4
OTMS

OMe

15 (30 mol%)+OMe

TolueneArNH O
Ph

OMe

Ph

〔総 説〕
〈テクニカルレポート〉「新規なキラルブレンステッド酸触媒の開発
ー金属を用いない新たな有機触媒の開発を目指して」 「Evrogen社 Duplex-specific nuclease（DSN）を使用した
秋山隆彦 ……… 2「標準物質」

前田恒昭、宮 晃一 ……… 6

Normalization cDNA の作製」
林田幸信 ……… 9「DNA Extractor SP Kit（血中遊離DNA抽出用試薬）の開発」
平安一成 ………10〈Talking of LAL〉
「第57話 高感度エンドトキシン測定の応用」
土谷正和 ………12〔化学大家〕「ジョーゼフ・プリーストリ」

島尾永康 ………24〔製品紹介〕
有機合成
キラルブレンステッド酸触媒「（R）-NP-NAP」
5
官能基選択的不均一触媒「Pd/C（en）」 13
o-ニトロベンゼンスルホンアミド誘導体 13
硫黄架橋2核ルテニウム錯体「met-DIRUX」 14
環境・分析
産業技術総合研究所計量標準総合センター 認証標準物質
ダイオキシン類分析用サンプリングボトル
PresepR-C DNPHシリーズ
生薬標準品 ゴミシ有効成分

8
14
15
16

生化学
ポリ-γ-グルタミン酸
DAB溶液
ワイドビューTMプレステインタンパク質
サイズマーカー
ワイドビューTMウエスタンサイズマーカー
ポリアクリルアミドゲル「スーパーセップTM」

16
17
17
17
28

遺伝子
Evrogen社 Duplex-specificヌクレアーゼ
DNAエキストラクターSPキット
富士フィルム㈱ QuickGene-800
Evrogen社 J-Redタンパク質発現ベクター

9
11
21
22

機
器
トキシノメーターET-5000

23

細胞生物
蛍光試薬
18
ラットGLP-2 ELISAキット wako
19
日本製粉㈱ ニワトリ型モノクローナル抗体の受託生産サービス 20〔お知らせ〕
第20回 Wakoワークショップ開催のご案内 ……23

1

R

esearch新規なキラルブレンステッド酸触媒の開発ー金属を用いない
新たな有機触媒の開発を目指して
学習院大学理学部

1 はじめに**医薬品、農薬などの生理活性物質を光

X*

R2

N
R1

学純度良く合成する優れた不斉合成反応
要な課題の一つである。その中でもキラル

隆彦

X
X M

の開発は有機合成化学に与えられた最も重

秋山

H

R2

N

R1

Activated by Chiral Lewis Acid

Activated by Chiral Brønsted Acid

Figure 1.

触媒を用いたエナンチオ選択的な不斉合成
反応は、触媒量の不斉源を用いて一方のするプロトンまたは水素結合が重要な働きをアルドール反応以外にもマンニッヒ反応、ア

鏡像異性体のみを光学純度良くかつ高収する有機触媒の最近の研究について紹介

ミノヒドロキシル化反応など様々な反応にお率で合成することが可能であることから、する。

いてL -プロリン（ 1 ）が極めて高い不斉触媒

光学活性化合物の優れた合成手法となることが期待され、活発な研究が行われている。

能を有することが明らかにされ、Jørgensen、林、Cordovaなど多くの研究者がこの分野

2 有機触媒について

アルデヒド、イミンなどの求電子剤に対するに参入し、 L -プロリンを用いた不斉合応反

炭素系求核剤のエナンチオ選択的な求核

近年、低分子量の光学活性な有機化合応の開発研究に取り組んでいる3, 4 ）。この付加反応は、光学活性なアルコール、アミン物がキラル触媒として効率良く働くことが見反応は、カルボニル化合物とL -プロリンから類の優れた合成手法であるが、キラルルイ

いだされ、「有機触媒を用いた不斉合成反生成した光学活性なエナミン中間体5を経ス酸触媒として不斉配位子で修飾された金応」が新たな研究分野として注目を集めててカルボン酸の水素がイミンを活性化するこ

属錯体がこれまで一般的に用いられてきた1）。

いる。カルボニル化合物に対する求核付加とにより反応が進行すると考えられている。

様々な中心金属と不斉配位子を組み合わ反応においても、List、Barbas、Lernerら

しかし、 L -プロリンは有機溶媒に対する溶せることにより高い不斉収率が達成されてによりL-プロリンを用いた不斉アルドール反応

解度が低いため必ずしも良好な結果が得らいる。金属触媒を用いた不斉合成反応は、が2000年に報告されて以来（Scheme 1）2）、れない場合がある。そこで、より活性の高有機金属化学の発展と共に、1980年から

多くの有機合成化学者の注目を集めている。

いL -プロリン誘導体として、GongおよびWu

2000年までの20年間に飛躍的な発展を遂げ、中心原子上に様々な典型元素および遷移O

金属元素を有するキラル触媒が開発され、
様々OH(Scheme 1)

DMSO

O

な場面において用いられている。

O

L-Proline

H+

96% ee

しかし、これら金属ルイス酸触媒にも問題点がある。

O１）安定性：キラルルイス酸触媒は一般に金CO2H直ちに用いられる。一般に単離、精製は困

N
H
HO

N
H

N
H

属錯体と不斉配位子から系中で調製して

1

O

Ph
Ph

Ph
H
N

N
H

N
H

O

Ph
N
H

O

OMe
O

Ph

2

3

難であり、また、酸素、水分等に対して鋭
N N
N
N
H

敏である。
N
H

２）金属が残存する場合がある。特に毒性を有する遷移金属を用いた場合には特に注意を払う必要がある。

R

4

N
O H O
Me
H
5

H
O

Figure 2.

不斉合成反応において、金属触媒を用
6 (20 mol%)いる必要があるのであろうか？我々は、金属触媒を用いないブレンステッド酸触媒を用

+

Ph

O

O

N
Me

N
Me

THF-Et2O

いた炭素−炭素結合生成反応に興味を持

93% eeち研究を続けてきたが、これまで一般的に

Me
N Me

O

用いられてきたキラルルイス酸触媒ではなく、Ph

新規なキラルブレンステッド酸触媒を合成し、NHイミンへの求核付加反応が高いエナンチオ選

6

Me

Ph

N

Ph

択性で進行することを見いだした（Figure 1）。

7

本稿では、その研究の経緯、および関連

2

Me
N Me

O

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

Me(Scheme 2)

らにより2、3が5）、山本、Leyらにより4が開を形成し、キラルなエナミンあるいは、キラ

発され、プロリンでは高い不斉収率が発現

ルなイミニウム塩を経て反応が進行しているが、ナンチオ選択性で進行することを明らかにしない系における適用例や、触媒効率の向

近年、プロトンによる活性化あるいは、水している（Scheme 4）9）。更に、これらの反型 反 応 、ホスホリル化 反 応などが高いエ

上などが報告されている6）。また、MacMillan

素結合によりキラルな環境を形成したエナン

応においては、イミンとチオ尿素が直交し、らは、キラルな環状アミン誘導体6をデザイ

チオ選択的な不斉合成反応が注目を集め

イミンのチッ素原子が尿素の2つの水素と水ンしている7）。アルデヒドから系中でイミニウている。Coreyらは、キラルなグアニジン8素結合を形成した中間体11を経て進行してム塩誘導体7が生成し、カルボニル化合物を触媒として用いている（Scheme 3）8）。グいることを明らかにしている。また、竹本、のLUMOを低下させることにより反応性をアニジンは塩基として作用しシアン化物アニ

長澤らも新規な尿素、チオ尿素誘導体12、高めると同時に不斉環境を提供し、Diels-

オンが生成し、グアジニウムイオンの水素が13を合成し、マイケル付加反応、Aza Henry

Alder反応、Friedel-Craftsアルキル化

水素結合によりイミンを活性化した中間体9反応、Morita Baylis-Hillman反応等にお反応などにおいて高いエナンチオ選択性をを経て進行するとされている。また、Jacob-

いて高い不斉収率を達成している10）。また、発現している（Scheme 2）。
これらのキラル触媒は、基質と共有結合

senらはキラルな尿素誘導体10を用いてイミ

Rawalらは酒石酸より誘導したキラルジオー

ンに対 するH C Nの付 加 反 応 、マンニッヒ

ル14が電子豊富ジエンとアルデヒドとの［4+2］型付加環化反応の優れた不斉触媒となるこ

CHPh2

N

NHCHPh2HPhCN

8 (10 mol%)HCN

Phとを報告している（Scheme 5）11）。

(Scheme 3)

86% ee
N

Ph
N
H

N

Ph

Ph
N

8

Ph2CH

3

Ph

N
H

N
H

N

C
N

我々は、ブレンステッド酸触媒を用いた炭素−炭素結合生成反応について興味を持ちPh研究を行っている。触媒量のHBF 4を酸触9N媒として用いることにより、イミンに対するシリ
ルエノラートの求核付加反応であるマンニッヒ

Boc

OTBS

+

HNBoc O

10 (5 mol%)

Oi-Pr

Ph

Ph

TolueneOi-Pr(Scheme 4)

Ph

t-Bu

O

N
H

得られることを報告した（Scheme 6）12）。また、本反応は、界面活性剤を用いることに

O

O
N
H

N
H

N

N
H
N

HO

H
N

F3C
R'

CO2t-Bu

H
N

N

S
CF3

R
t-Bu

10

型反応が、含水溶媒中において効率良く進
行し、βｰアミノカルボニル化合物が高収率で97% eeHN

ブレンステッド酸触媒を用いたイミンへの求核付加反応11より、有機溶媒を用いることなく、完全な水中でも効率良く進行することも明らかにしている1 3 ）。さらに、イミンとDanishefsky's
dieneの［4+2］付加環化反応も同様に触媒

12量のHBF 4 触媒により含水溶媒中、あるいは水中で効率良く進行し、ジヒドロピリド

F3C

S

S
NH HN
NH

ン誘導体が得られることも見いだしている

CF3（Scheme 7）14）。ブレンステッド酸としては

HN

HFは酸性が弱すぎ、HClでは強過ぎる、

CF3

F3C

HBF 4やp -TsOHなどのp K a 1から−3程度

13の酸性度を有するブレンステッド酸が良好な
TBSO
+

H

R
O

1) 14 (20 mol%)2) AcCl

NMe2

結果を与えた。

R

O(Scheme 5)O

ブレンステッド酸がイミンの活性化剤として有効に働くことがわかったので、新たなキラ

98% eeAr
O

Ar

れた不斉触媒として有用であると考え、新

OH
OH

O
Ar

Ar

14

Ar=1-naphthyl

ルブレンステッド酸触媒を開発すれば、優規なキラルブレンステッド酸の開発を目指して研究を開始した。触媒をデザインするポイ
ントとして、環状構造を有していること、適

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

3

N

+

OMe

1

4ｰニトロフェニル基を3,3'位に導入した15cを

10 mol%
HBF4

OTMS

Ar2

HNAr2 Oaq. MeOH or
SDS-H2O

Ar

用いることにより生成物のβ-アミノエステル(Scheme 6)

Ar1

OMe

の不斉収率が89% eeまで向上することがわかった。3,3'位の芳香環に電子求引性基が置換したリン酸を用いると高い不斉収率かN

10 mol%
HBF4

OTMS

2

Ar

2

Ar

+

Ar1

aq. MeOH or
SDS-H2OOMe

つ良好な化学収率でβ-アミノエステルが得

O

N(Scheme 7)

られたが、電子供与性基の置換したリン酸

Ar1を用いると不斉収率、化学収率共に低下した。

度な酸性度を有していることを考慮すると、ンタノイド金属錯体は稲永らにより付加環化

様々なケテンシリルアセタール、イミンを用必然的にリン酸エステルが考えられる。不反応のキラル触媒として有用であることが報いた結果を示す 17）。様々なケテンシリルアセ

16）

告されている 。しかしながら、リン酸15a

タールを用いても、対応するβ-アミノエステ

なビナフトールより得られるリン酸ジエステル

自体を酸触媒として用いた報告例はない。

ルが良好なシン選択性かつ高いエナンチオ15を用いることとした。15aは光学分割剤とリン酸15はブレンステッド酸であるが、リン酸選択性で得られた。プロピオン酸エステルのホスホリル基の酸素原子はルイス塩基と由来のケテンシリルアセタールを用いると対して働くことも期待できる。

応するβ-アミノエステルが96% eeで得られ斉源として比較的安価で容易に入手可能

15）

して既に用いられている 。また、15aのラX

まず、リン酸15aを用いてイミンとケテンシた。本反応は−78℃で行っているが、わずO

リルアセタールとのマンニッヒ型反応を試み

かに不斉収率が低下するものの0℃で行うこLewis basic site

O

P
O H

O

Brønsted acidic siteX15a; X=H,
15b; X=Ph
15c; X=4-NO2C6H4た（Scheme 8）。対応するβ-アミノエステ

とも可能である。たとえば、前述の96% ee

ルは高収率で得られたが、不斉は全く誘起が0℃では88% eeまで低下した。また、触されなかった。そこで、3,3'位に芳香環を導媒を回収することも可能である。

入した15bを用いたところ不斉収率は27% eeまで向上した。種々置換基を検討した結果

4 反応機構について

Figure 3.
本反応において、触媒量のブレンステッ

HO

OTMS

ArNH O

15 (30 mol%)

+

N

OMe

Tolueneド酸で効率良く行うことが可能である。これは、(Scheme 8)

OMe

Ph

反応後は、系中ではNｰシリル化体となっておPhり、また、チッ素上の置換基が芳香環であるので、アミンの塩基性が低く、酸が触媒

HO

OTMS
+ H

N

OR3
R2

R1

ArNH O

14c (10 mol%)

ArNH O

R1

Toluene

OR3

+

R2

−78℃

的に働くものと考えられる。また、イミンのチッ

R1

OR3

素原子上の置換基を検討した結果、o-ヒド

R2ロキシフェニル基と用いた場合にのみ高い
不斉収率が発現することがわかった。そこで、Table. Results of the Mannich-type Reactions

o位のヒドロキシ基がエナンチオ選択性の発
OH

OH

OH

NH O

NH O

NH O
OEt

Ph

OEt

Ph

Me
quant., syn/anti=87/13, 96% ee

環の遷移状態16を経由して反応が進行しOMePhていると考えている。すなわち、リン酸の酸

OSiPh3

CH2Pha

現に寄与していることがわかる。現在、9員

quant., syn/anti=93/7, 91% ee

a79%, syn/anti=100/0, 91% ee

OH

OH

OH

NH O

NH O

NH O

素原子のo位のヒドロキシ基と水素結合を形a成していると考えている。

Ar
OEt

Ph
Me

Ph

OEt

Ph

CH2Ph

O
OMe

P

OSiPh3

O
Ar

91%, syn/anti=95/5, 90% eea
a4

65%, syn/anti=95/5, 90% eea

86%, syn/anti=100/0, 91% eea

Ee of syn isomer.

16

Figure 4.

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

H O

O
O H

Ar

N

Ar
H

N

N

N

H N

H

OTf
OH
OH
Ar

17

18; Ar=3,5-(CF3)2C6H3

Figure 5.

5

他のキラルブレンステッド
酸触媒

我々のグループが研究を開始した時点では、キラルブレンステッド酸を用いた不斉合
成反応の研究の報告例はほとんどなかったが、我々の報告に続いて、寺田らもリン酸を用いた 不 斉 触 媒を報 告し 1 8 ）、また 、Johnstonらはキラルなジキノリン誘導体のアンモニウム塩17をキラルブレンステッド酸触媒として用いたA z a - H e n r y 反 応を 1 9 ）、
Schausらは18をキラルブレンステッド酸触媒として用いたMorita-Baylis-Hillman反応を報告している20）。

6 最後に
以上、プロトン、あるいは水素結合の関与した有機触媒に焦点を当てて紹介してきた。
他の有機触媒の最新の成果については新
しい総説をご覧願いたい 21 ）。これまで不斉触媒としては有機金属触媒の独断場であったが、2000年以降急激にキラル触媒としての有機触媒に対する関心が高まっている。
有機触媒はまさに21世紀の触媒であろう。
キラルブレンステッド酸触媒としては発展途〔参考文献〕１）"Comprehensive Asymmetric Catalysis IIII", Jacobsen, E. N., Pfaltz, A., Yamamoto,H., Eds., Springer-Verlag, Berlin, Germany（1999）.
２）List, B., Lerner, R. A., Barbas, C. F., III.: J.
Am. Chem. Soc., 122, 2395-2396（ 2000）.
３）List, B.: Synlett, 1675-1686（ 2001）. Dalko, P. I.,
Moisan, L.: Angew. Chem. Int. Ed., 40, 3726-3748（2001）. Jarvo, E. R., Miller, S. J.: Tetrahedron,58, 2481-2495（ 2002）. Movassaghi, M., Jacobsen,
E. N.: Science, 298, 1904-1905（ 2002）. Cordova,
A.: Acc. Chem. Res., 37, 102-112（ 2004）. List, B.:
Acc. Chem. Res., 37, 548-557（ 2004）. Notz, W.,
Tanaka, F., Carlos, F., Barbas, C. F., III.： Acc.
Chem. Res., 37, 580-591（ 2004）.
４）Cordova, A., Watanabe, S.-i., Tanaka, F., Notz,
W., Barbas, C. F., III.: J. Am. Chem. Soc., 124,
1866-1867（ 2002）. Kumaragurubaran, N., Juhl,
K., Zhuang, W., Bøgevig, A., Jørgensen, K. A.: J.
Am. Chem. Soc., 124, 6244-6245（ 2002）. Hayashi,Y., Yamaguchi, J., Sumiya, T., Shoji, M.: Angew.
Chem. Int. Ed., 43, 1112-1115（ 2004）. Bøgevig,A., Sunden, H., Cordova, A.: Angew. Chem. Int.
Ed., 43, 1109-1112（ 2004）.
５）Tang, Z., Jiang, F., Yu, L.-T., Cui, X., Gong,
L.-Z., Mi, A.-Q., Jiang, Y.-Z., Wu, Y.-D.: J.
Am. Chem. Soc., 125, 5262-5263（ 2003）.
Tang, Z., Yang, Z.-H., Cun, L.-F., Gong, L.-Z.,
Mi, A.-Q., Jiang, Y.-Z.: Org. Lett., 6, 22852287（ 2004）.
６）Torii, H., Nakadai, M., Ishihara, K., Saito, S.,
Yamamoto, H.: Angew. Chem. Int. Ed., 43,
1983-1986（ 2004）. Cobb, A. J. A., Shaw, D.
M., Ley, S. V.: Synlett, 558-560（ 2004）.
７）Ahrendt, K. A., Borths, C. J., MacMillan, D.
W. C.: J. Am. Chem. Soc., 122, 4243-4244（2000）. Paras, N. A., MacMillan, D. W. C.:
J. Am. Chem. Soc., 123, 4370-4371（ 2001）.
Northrup, A. B., MacMillan, D. W. C.: J.
Am. Chem. Soc., 124, 6798-6799（ 2002）.
８）Corey, E. J., Grogan, M. J.: Org. Lett., 1,
157-160（ 1999）.
９）Sigman, M. S., Vachal, P., Jacobsen, E. N.:
Angew. Chem. Int. Ed., 39, 1279-1281（ 2000）.
Wenzel, A. G., Jacobsen, E. N.: J. Am.
Chem. Soc., 124, 12964-12965（ 2002）. Vachal, P., Jacobsen, E. N.: J. Am. Chem. Soc.,
124, 10012-10014（ 2002）.

１０）Okino, T., Nakamura, S., Furukawa, T.,
Takemoto, Y.: Org. Lett., 6, 625-627（ 2004）.
Sohtome, Y., Tanatani, A., Hashimoto, Y.,
Nagasawa, K.: Tetrahedron Lett., 45, 55895592（ 2004）.
１１）Huang, Y., Unni, A. K., Thadani, A. N., Rawal,
V. H.: Nature, 424, 146（ 2003）. Thadani, A. N.,
Stankovic, A. R., Rawal, V. H.: Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A., 101, 5846-5850（ 2004）.
１２）Akiyama, T., Takaya, J., Kagoshima, H.:
Synlett, 1045-1048（ 1999）. Akiyama, T., Takaya, J., Kagoshima, H.: Tetrahedron Lett.,（ 2001）.
42, 4025-4028
１３）Akiyama, T., Takaya, J., Kagoshima, H.:
Synlett, 1426-1428（ 1999）.
１４）Akiyama, T., Takaya, J., Kagoshima, H.:
Tetrahedron Lett., 40, 7831-7834（ 1999）.
１５）Wilen, S. H., Qi, J. Z.: J. Org. Chem., 56, 487489（ 1991）.
１６）Furuno, H., Hanamoto, T., Sugimoto, Y., Inanaga,J.: Org. Lett., 2, 49-52（ 2000）.
１７）Akiyama, T., Itoh, J., Yokota, K., Fuchibe,K.: Angew. Chem. Int. Ed., 43, 1566-1568（2004）.
１８）Uraguchi, D., Terada, M.: J. Am. Chem.
Soc., 126, 5356-5357（ 2004）.
１９）Nugent, B. M., Yoder, R. A., Johnston, J. N.:
J. Am. Chem. Soc., 126, 3418-3419（ 2004）.
２０）McDougal, N. T., Schaus, S. E.: J. Am.
Chem. Soc., 125, 12094-12095（ 2003）.
２１）Lygo, B., Andrews, B. I.: Acc. Chem. Res., 37,
518-525（ 2004）. Miller, S. J.: Acc. Chem. Res.,37, 601-610（ 2004）. Enders, D., Balensiefer, T.:
Acc. Chem. Res., 37, 534-541（2004）. Aggarwal,
V. K., Winn, C. L.: Acc. Chem. Res., 37, 611620（ 2004）. Yang, D.: Acc. Chem. Res., 37,
497-505（ 2004）. Fu, G. C.: Acc. Chem. Res., 37,
542-547（ 2004）. Tian, S.-K., Chen, Y., Hang, J.,
Tang, L., McDaid, P., Deng, L.: Acc. Chem.
Res., 37, 621-631（ 2004）. O'Donnell, M. J.: Acc.
Chem. Res., 37, 506-517（2004）.Ooi, T., Maruoka,
K.: Acc. Chem. Res., 37, 526-533（ 2004）. Shi,
Y.: Acc. Chem. Res., 37, 488-496（ 2004）.

上であり、今後の更なる展開が期待される。

P roducts
キラルブレンステッド酸触媒(R)-NP-NAP【(R)-(ｰ)-3,3'-Bis(4-nitrophenyl)-1,1'-binaphthyl-2,2'-diyl hydrogen phosphate】
コードNo.

145-07861

品名(R)-NP-NAP

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

規 格

容 量

希望納入価格（円）

有機合成用

200mg

15,0005

Research
標準物質
前田

独立行政法人産業技術総合研究所 計量標準総合センター

恒昭、宮

晃一

確ではなく、トレーサビリティを宣言するこ

量衡委員会（ CIPM ）の９番目の諮問委員とは困難である。もちろん、試験法はJIS会として物質量諮問委員会（CCQM）が創に限らず、食品中の残留農薬や添加物の設され、化学計測分野におけるSIへのトレー

標準物質は、試料等を分析し正しい値

分 析 、 環 境中の汚 染 物 質の分 析や医 療

サビリティを通じて国際的な同等性を確立を得るという要 求に答えるための基 準とし検査など様々な分野でも規定されており、することが示された。これを機に国家標準て用いられており、特に計量証明に用いるJISの場合と同様の問題を含んでいる。しを頂点としてきた計量法の体制もSIへのトレー

測定機器の正確な校正を保証するためにかしながら、最近ではこれらの分野においサビリティを確保することが必要となり、国1 背景

は欠かせないものとなっている。計量法はてトレーサビリティが求められるようになって際的な同等性の証明も求められるようになっ1992年の改正により、計量法校正事業者

きている。例えば、東南アジアの国々が米た。また、計量標準の種類では欧米各国認定制度（ JCSS ）によって国家標準へのトをヨーロッパに輸出する際に自国で検査をからみて大きく立ち遅れていることが指摘さ

レーサビリティの確 保と質の保 証を行って行うが、この検査証明書に関して検査方れ、国の施策として2010年までに250種類いる。

法のトレーサビリティを求めるというような状

程 度の標 準 物 質を整 備し供 給 することが況である。

決定された。この計画は知的基盤特別整JCSSでは、（ 独 ）産業技術総合研究所
計量標準総合センター（NMIJ/AIST）（旧

校正・試験機関は、このような要求に対備目標と呼ばれ、毎年計画の見直しを行工業技術院物質工学工業技術研究所 ）が応するため、自らトレーサビリティを宣言す

いながらNMIJ/AISTが中心となり着実に開発した技術を国が指定校正機関としてることが必 須となってきており、 国 際 標 準

開 発が 進められている。当初の5 年 間は指 定した（ 財 ）化 学 物 質 評 価 研 究 機 構化機構（ISO）では試験所及び校正機関のJCSSに関わる標準物質をSIトレーサブルと（ CERI ）（ 旧化学品検査協会（ CITI ））に能力の証明としてISO/IEC17025を定めすることが優先され、2005年にはほぼ全て移 転し、 C E R Iはこの技 術を基に特 定 標ている。

の作業が完了しJCSSで供給される標準物

準物質及び製造装置を維持し、特定二次質は120物質以上となる予定である。

標 準 物 質に値 付けする。さらに認 定 事 業
者が特定二次標準物質を基に実用標準物
質にJCSS標章付き校正証明書を付けて供給する。
現在、JCSSにより、標準ガスでは16物

国際的な同等性証明は、CCQMのもと国際整合性と標準物質の供給

で 国 際 比 較 が 行 わ れ ており、 N M I Jと

1 9 9 3 年に円滑な国 際 貿易、 地 球 環 境

性証明の努力を続けている。計量標準をの保全、人間の健康安全を目的に国際度とりまく国際的な状況としては、世界貿易

3

CERIが協力して国際比較に参加し同等質に関して総数で191レベルの濃度標準がる。 無 機 標 準 液 では 1 0 0 m g / Lと1 0 0 0

Ｂ 国

日本国

用意されており、この数は毎年増加していmg/Lの濃度レベルで、25種類の標準が国家計量標準研究所（ＮＭＩ−Ａ）

供給されている。また、p H標 準 液は6種

NMIJ

1974年に検査制度として国家標準の供給体制が整備されて以来一貫して同等性が物質の供給量は、標準ガスが年間約2万本、国家計量標準研究所（ＮＭＩ−Ｂ）

ＣＩＰＭ／ＡＰＭＰ

認
定
機
関
ｌ
Ａ

類が安定に供給されており、これらの値は維持されている。2003年現在の実用標準

相互比較／相互承認

相互比較
ILAC
APLAC

認
定
機
関
ｌ
Ｂ

認定校正機関

NITE

認定校正機関CERI/認定事業者

標準液が約1万本、pH標準液が約20万

相互比較本程度である。
ユーザー、
試験機関等

日本国
校正証明書

2 トレーサビリティの要求

Ｂ国
校正証明書

ユーザー、
試験機関等

JCSS校正証明書

計 量 証 明 事 業 以 外の分 野では、 市 販の試薬を適宜希釈して校正用標準液として用いることが多く、現時点では実用の問題は無いが、必ずしもトレーサビリティが確立されたものではない。また、我が国の工業標準規格である日本工業規格（ JIS ）に規定されている各種試験法でもこの点は明6

I L A C：試験所・検査機関を認定する機関だけの国際組織、国際試験所認定協力機構
試験所の満たすべき要件（ISO/IEC 17025）や試験所認定機関の満たすべき要件（ISO/IEC
ガイド58）の適用のための指針文書を作成し、認定機関間の相互比較を行っている。
APLAC：APEC域内の試験所認定機関の協力組織、アジア太平洋試験所認定協力機構
APLAC参加機関の技術的な同等性を認め合うものであり、試験所認定機関の相互承認評価を実施し信頼を高めている。

国際協力の一般的な図式

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

機関（WTO）が試験・検査・計測の技術基

JCSSによる供給を補完している。NMIJは、

特定の方法により値付けされた合意値をも盤を統一して自由貿易の障壁を取り除こう

国 の 計 量 標 準 を 所 掌 す る 機 関とし てつ標準物質がある。有機純物質、標準液という政 策で合 意したことが背 景となり、CCQMの活動に参加するとともにアジアパ

や無機標準液は①の方法で値付けされて1999年に国家計量機関（ NMI ）においてシフィック地 域の計 量 組 織であるアジア太いる。 環 境 組 成 標 準 物 質や材 料 標 準 物

計量標準に関する相互承認協定（グロー平洋計量計画（ APMP ）の中で中心的な質などの多くは②の方法で値付けされていバルMRA）が結ばれ、国際比較の結果は役割を果たし、国際的な同等性証明の普る。②の方法では複数の方法を組み合わ

MRAを結んだ国の間で相互に承認される

及と維 持に努めている。 国 内においてはせて用いるので分析方法によらない値付けことが方向付けられた。このような同等性

JCSSにおける中核機関として、またNMIJ

を行っていることになる。CRMの認証書に

証明では、NMIに対して品質システムのCRMの供給機関として、国際的に同等性

は認証値とその不確かさの範囲、認証に用第三者認定を受けること（または自己宣言）の証明された標準供給機関としての役割いた方法とトレーサビリティが記述されており、が 要 求され 、 標 準 物 質 へ の 値 付 け はを担っている。

この値を保証する期間も示されている。また、

I S O / I E C 1 7 0 2 5 、 標 準 物 質の生 産にはISOガイド34が求められている。我が国ではこのNMIの認定は（ 独 ）製品評価技術

認証値ではないが標準物質に付随する情報として参考値も示されている。さらに詳4 標準物質の値づけ

しい情報として認証を行った際に作成した基盤機構の認定制度（ASNITE-NMI）にNMIJが供給するCRMは、計量分野で

技 術 文 書が用意されており、 必 要に応じより実 施されており、 2 0 0 3 年に N M I Jと最 高 位に位 置 すると認められている一 次て参照することができる。認証値の不確か

CERIは認定を取得した。

標準物質である。標準物質には①他の物

さは、均一性試験と保存安定試験の結果

NMIJでは、SIへのトレーサビリティが保質を参照せずに値付けを行う一次測定法の不 確かさを含むので、 多くの場 合 単に

証された標 準 物 質について認 証を行う制（Primary Method:SI単位系に直接繋が分析した場合の分析精度より大きな値となっ度を定め、認証標準物質（NMIJ CRM）

る測定方法 ）で値付けされたSIトレーサブている。各国のNMIがこのような方法で値の 開 発・供 給を開 始している。これらのルな標準物質、②二つ以上の独立した原付 け する技 術を相 互に 評 価 するために

CRMはグローバルMRAの枠組みに対応

理に基づく参照法（Reference Method）

CCQMでは国際比較を実施しており、そしたものとして国際的に通用するものでありで値付けされた標準物質、③合意されたの結果はBIPMのホームページで公開され

計量標準総合センター（NMIJ）

基幹比較＆国際整合性基準物質

SI トレーサビリティ
の確保

ＪＣＳＳ

認証標準物質基幹比較＆国際整合性SI トレーサビリティの確保

NMIJ CRM

供給

供給

JIS Q 17025
および
JIS Q 0034

特定標準物質指定校正機関校正（材料標準物質）（高純度無機標準物質）（有機標準物質）（高分子標準物質）（環境組成標準物質）など

特定二次標準物質

認定事業者

校正

実用標準物質
供給

供給

エンドユーザ
良質な標準の安価且つ安定的な供給を受ける

高度な標準の限定的な供給を受ける

標準物質供給スキーム

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）7

ている。この国際比較はブラインドテストで標準物質が３物質、環境組成標準物質があり、分析方法や測定装置の校正に用い7種類 、高純度無機標準物質が1物質とまる標準物質は参加する国がそれぞれ用意

だ数は少ないが、この他に認 証を行った

して試験に臨んでいる。このようにして信がJCSSの基準物質として直接供給を行っ連して用いられる用語及び定義」に記されてい認証標準物質：ISOガイド30「標準物質に関頼性を確保されたCRMはトレーサビリティていないCRMが10物質、供給準備中のるように、認証書が添付された標準物質。認証
値はトレーサビリティの確立された手順によっての頂点に立つもので、国の技術水準を示

標準ガスが2種類と着実に成果があがって確定され、不確かさが付与されている。
これらは、すものである。

いる。これらの標準物質を開発するにあたっ

分析・計測における真度（正確さ）の測定評価、手法の評価あるいはSIへのトレーサビリティのて市 場の動 向や要 求を積 極 的にとり入れ

5 NMIJ-CRMの紹介
現在NMIJが供給を開始したCRMは材立証には不可欠なものである。

ており、国際的に通用する最高品質の標

一次標準物質：国際単位系（SI）へのトレー

準物質が適宜利用される社会環境になる

サビリティが確立された手順によって確定され、その値に対して不確かさ（又は精度）が付与された標準物質。多くの場合、一次標準物質は
国家計量機関（NMI）
によって開発されている。

ことを期待している。

料標準物質が7種類18物質、高分子材料

P roducts
認証標準物質（NMIJ CRM)
■環境組成標準物質
コードNo.

メーカーコード

品

名

容

量

希望納入価格（円）632-05321 NMIJ CRM 7301-a

海底質（ブチルスズ分析用）

60g

42,460639-05331 NMIJ CRM 7302-a

海底質（有害金属分析用）

60g

36,340636-05341 NMIJ CRM 7303-a

湖底質（有害金属分析用）

60g

36,340633-05351 NMIJ CRM 7304-a

海底質（ポリクロロビフェニル・塩素系農薬類分析用−高濃度）60g

48,570630-05741 NMIJ CRM 7401-a

サメ肝油

1g

18,290※7304-aは第1種特定化学物質の確約書が必要です■材料標準物質
コードNo.

メーカーコード

品

名

形

態

容

量

希望納入価格（円）630-05361 NMIJ CRM 1001-a

鉄−クロム合金（Cr 5％）EPMA用

1個

33,830637-05371 NMIJ CRM 1002-a

鉄−クロム合金（Cr 15％）EPMA用

1個

33,830634-05381 NMIJ CRM 1003-a

鉄−クロム合金（Cr 20％）EPMA用

1個

33,830631-05391 NMIJ CRM 1004-a

鉄−クロム合金（Cr 30％）EPMA用

1個

33,830634-05401 NMIJ CRM 1005-a

鉄−クロム合金（Cr 40％）EPMA用

1個

33,830631-05411 NMIJ CRM 1006-a

鉄−ニッケル合金（Ni 5％）EPMA用

1個

33,830638-05421 NMIJ CRM 1007-a

鉄−ニッケル合金（Ni 10％）EPMA用

1個

33,830635-05431 NMIJ CRM 1008-a

鉄−ニッケル合金（Ni 20％）EPMA用

1個

33,830632-05441 NMIJ CRM 1009-a

鉄−ニッケル合金（Ni 40％）EPMA用

1個

33,830639-05451 NMIJ CRM 1010-a

鉄−ニッケル合金（Ni 60％）EPMA用

1個

33,830636-05461 NMIJ CRM 1011-a

鉄−炭素合金（C 0.1％）EPMA用

1個

33,830633-05471 NMIJ CRM 1012-a

鉄−炭素合金（C 0.2％）EPMA用

1個

33,830630-05481 NMIJ CRM 1013-a

鉄−炭素合金（C 0.3％）EPMA用

1個

33,830637-05491 NMIJ CRM 1014-a

鉄−炭素合金（C 0.5％）EPMA用

1個

33,830630-05501 NMIJ CRM 1015-a

鉄−炭素合金（C 0.7％）EPMA用

637-05511 NMIJ CRM 1016-a

鉄−クロム合金（Cr 40％）蛍光X線用

直径30mm、厚さ6mmの円盤状

637-05751 NMIJ CRM 5202-a

SiO2 / Si多層膜標準物質

634-05761 NMIJ CRM 8001-a

ファインセラミックス用炭化けい素（α型）微粉末標準物質

631-05771 NMIJ CRM 8002-a

ファインセラミックス用炭化けい素（β型）微粉末標準物質

約4×10×15mmの直方体

約3×10×15mm
または4×10×15mmの直方体

約3×10×15mm
の直方体

1個

33,8301個

154,400

約13×13mmの正方形の薄片

1個

36,670−50g

16,910−50g

16,910■高分子標準物質
コードNo.

メーカーコード

品

名

容

量

希望納入価格（円）634-05521 NMIJ CRM 5001-a

ポリスチレンオリゴマー標準物質（PS2400）

0.2g

631-05531 NMIJ CRM 5002-a

ポリスチレンオリゴマー標準物質（PS500）

0.4g

9,490

638-05781 NMIJ CRM 5003-a

ポリカーボネート46000

0.2g

57,140

フタル酸水素カリウム

50g

16,5708,230■高純度無機標準物質638-05541 NMIJ CRM 3001-a8

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

echnical Report
Evrogen社 Duplex-specific nuclease（DSN）を使用したNormalization cDNAの作製
和光純薬工業株式会社 ゲノム研究所

林田

幸信

カムチャッカカニの肝臓由来の新規Duplex-

genase（ GAPDH）、中発現遺伝子である本法のNormalization効率が非常に優れて

specific nuclease（DSN）
は2本鎖DNA及び

ribosomal protein L13a（ RPL13A）、低発いることを示している。今回我々が作製した

DNA-RNAハイブリッド中のDNAを優先的

現遺伝子であるinsulin-like growth factor

Normalization cDNAは作業日程が2日と短に切断するDNA分解酵素である。至適温（I IGF-1）を用いた。ヒト正 常 肝 臓 cDNA

かく、またpUC系のプラスミドに挿入された度は55〜65℃と高く、また75℃でも安定に

Libraryの挿入断片（Control cDNA）と

cDNA Libraryで作製ができるため、市販

作 用 する特 長 が ある。 我々はこの 新 規

Normalization cDNAを各遺伝子のPCR

品のcDNA Libraryまたは自作のcDNA Li-

DSNを使用した新たな方法によるNormali-

増 幅 量により比 較 検 討した。その結果、braryを使用すれば、すべての工程をDNA

zation cDNAを作製し、良好な結果が得Control cDNAと比較してNormalization

で行うことができる。これらの点においても一cDNAではRPL13Aはほぼ同等の増幅量で般ユーザーにとっては容易に作製でき、かつあったがGAPDHは約1/100以下に増幅量

再現性のある結果が得られるものと予想される。

られたので紹介する。
Normalization cDNAの作製方法としては一般的にハイドロキシアパタイト・カラムやが減少した。Control cDNAではGAPDH

このDSNを用いて作製されたNormaliza-

マグネティック・ビーズを使用した方法が知らとRPL13Aでは約20倍以上の増幅量の差

tion cDNAは発現量の低い遺伝子の探索にれているが、作業工程が多く、操作も煩雑があると見られるが、Normalization後の非常に有効である。またDNAマイクロアレイ

であり、安定した結果を得るには熟練を要

cDNAの増幅量は同程度であることから、

やDNAチップのプローブとして使用することにする。各メーカー独自の方法による受託生

非常に効率よくNormalizationされているより、再現性のあるデータ、バックグランドの産という手段もあるが、納期が約3ヶ月程かと考えられる。また低 発 現 遺 伝 子である低減が可能であり、数社より販売の製品によかり、また非常に高価であることからなかな

IGF-1の比較では20サイクルのPCR増幅にるデータの互換性が30パーセント程と言われか手が出ないのが現状である。そこで我々

おいて双方ともにバンドは確認できなかったている現状を改善できると考えている。これら

はDSNを使用した簡便で高効率なNormali-

が25サイクルのPCR増幅でNormalization

以外にも有効な使用方法があると考えられるが、zation cDNAの作製方法を考案した。今cDNAの方がControl cDNAと比較して増Normalization cDNAの作製が「難しい」、

回標的としてヒト正常肝臓cDNA Library

幅量が上回った。ハイドロキシアパタイト法「大変」、「面倒」と思っている研究者にとっ（ BioChain社：pUC系プラスミドベクター）のような従来法で作製したNormalizationて本稿が参考になればと思っている。

を使用し、Normalization前後で比較した。

cDNAでは一般に効率よくNormalizationさ

評 価 遺 伝 子として 高 発 現 遺 伝 子 である

れないため中発現量以下の遺伝子においglyceraldehyde-3-phosphate dehydro-ては元のcDNAの増幅量に留まっており、作製方法

Control cDNAとNormalization cDNAとの比較

cDNA LibraryをpUC/M13 Forward及びReverse Primer
で挿入断片のPCR増幅−①

Control cDNA
20
20
20
GAPDH RPL13A IGF-1

25
IGF-1

Normalization cDNA
20
20 20
25
GAPDH RPL13A IGF-1 IGF-1(PCR cycles)
100 bp SL①の挿入断片両端のマルチクローニングサイトの制限
酵素切断−②①：②＝1：100で68℃、4時間ハイブリダイゼーション

DSN切断、68℃、30分

Normalization cDNAのPCR増幅

鋳型cDNAは5ng使用

1.5%Agarose S
GAPDH : 859bp
RPL13A : 835bp
IGF-1 : 272bp

GAPDH、RPL13A、IGF-1のPCR増幅によりNormalization
効率を評価

カムチャッカカニの肝臓由来の新規のDNAヌクレアーゼ
コードNo.

メーカーコード

580-69991

EA001

品

名

Duplex-specific nuclease, lyophilized(50Kuniz-units)

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

容 量

希望納入価格（円）1Set

86,0009

echnical Report
DNA Extractor SP Kit（血中遊離DNA抽出用試薬）の開発
和光純薬工業株式会社

よう化ナトリウム法

血中遊離DNA

平安

一成

今回開発した試薬は、ヒト血清（血漿）中に1991年（平成3年）、筆者らは、当時DNA大腸癌における多段階遺伝子変異に代表浮遊しているDNAの抽出のために反応条件

抽出試薬の主流であった劇物のフェノールやされる癌抑制遺伝子の不活化及び癌遺伝子や試薬組成を整え、且つ血液中に含まれる多クロロホルムを使わずに一本のマイクロ遠心チューの活性化などの多重変異が、癌化を誘発して量の脂質成分の除去にも対応できるように調ブ内で一連の抽出操作を行うDNA抽出法「よいることは広く知られている。ras や p53 、整したアルコール液もセット化して製品を組みう化ナトリウム法」を開発した。
よう化ナトリウム

BRCA-1などに代表される癌関連遺伝子と呼立てた（商品名DNA Extractor SP Kit：コー

は、強いタンパク質可溶化剤として知られるカ

ばれる遺伝子群は、発癌に関わる働きやメカ

ドNo. 296-60501）。ここでは、
本新製品の内オトロピック塩であり、我々はその性質を利用

ニズムが研究されるだけではなく、これらを利容を紹介すると共に、それを使って血中遊離することによって非常に簡便で高い回収率を用した癌診断法開発の研究対象となっている。

DNAを抽出し、増幅検出した実施例を提示（下図：参考持つDNA抽出法を完成させた1）

遺伝子診断法は、
その潜在的なパワーが見する。

データ）。同法は、よう化ナトリウムとタンパク質込まれ、近年は癌の早期診断法開発の中心

分解酵素や界面活性剤などを使ってタンパク的な役割を担ってきた。他の従来型腫瘍マー

DNA Extractor SP Kit：構成試薬

質を可溶化した後にアルコールを添加するだ

カーと同様に血液を使った簡便かつ非浸襲（試料100μrを対象として50回処理用）

けでDNAを優先的に沈殿／濃縮する簡便的な診断法が期待されている。

（1）酵素反応液

10mr×1本

1, 2）。

1970年代当初から、癌に限らず全身性エリ（2）タンパク質分解酵素液

250μr×1本

よう化ナトリウム法に基づく既製のキット試

テマトーデス（SLE）などの様々な疾患者で細（3）よう化ナトリウム溶液

15mr×1本

な方法になっている薬には、生物製剤（DNA Extractor Kit：コー

胞の死滅や組織の傷害等によって遊離して（4）
アルコール液30mr×1本ドNo. 295-50201）、
全血液・組織（DNA Ex-

きたDNAが、血清（血漿）中に搬出されてい（5）洗浄液（A）

50mr×1本

tractor WB Kit：コードNo. 291-50502）、
毛るという報告がなされている6, 7）。その中では（6）洗浄液（B）

50mr×1本

髪・爪（DNA Extractor FM Kit：コードNo.

癌関連遺伝子の検出等が数多く報告され、

295-58501）、全血液・組織中のミトコンドリア

この血中遊離DNA（plasma DNA）
が、
特にDNA Extractor SP Kit：プロトコール

DNA（mtDNA Extractor WB Kit：コー

癌の遺伝子診断法へ応用されることを期待さ（1）血清（血漿）を100μr、
1.5mr容マイクロ遠ドNo. 293-54401、mtDNA Extractor CT

れていた8, 9）。

心チューブに添加する。

Kit：コードNo. 291-55301）など様々な対象に

例えば、血中遊離DNA濃度は癌の進行度適用した製品があり、その高い回収率を背景

p53やK-ras遺伝子の変や大きさと相関し10）、に微小な試料から極微量のDNAを抽出する

異が検出される患者では、腫瘍の摘出手術

ルテックスミキサーで混合する。

試薬として好評を頂いている。また、よう化ナ

後にも血中遊離DNA中に変異遺伝子が検（4）56℃で10分間、インキュベートする。

トリウム法がDNAに人為的酸化ダメージを出され続けていると高い確率で再発や転移（5）よう化ナトリウム溶液を300μr添加して、軽与えにくい抽出方法であることから、DNA

CEA等の従来マーカーよりが認められ10, 11）、

損傷マーカーである8-hydroxy-2'-deoxy-

も高率にそれらを検出できるといった報告がguanosine（ 8-OH-dG）等を検出する際の前なされている10, 11）。

3−5）

。

また、血中遊離DNAを使った特定のマイクロサテライトの解析は、早期診断だけではな

微量なDNAを高収率に取得できる優れた特く、癌を発症する可能性が高いハイリスク患性を生かして、新たなDNA抽出試薬の対象者の同定にも寄与する可能性が示唆されてを開拓し、その可能性を広げた。

非小細胞肺癌（non-small
いる12−14）。さらに、〔参考データ：文献1より〕

は、血中遊離DNAを使ってp16癌抑制遺伝

cell lung cancer）
を始めとする肺癌などで子のhypermethylationを検出することが癌再発診断の有力な手法になるとも考えられて
15）

いる 。

（3）
タンパク質分解酵素液を5μr添加して、ボく混合する。
（6）
アルコール液を600μr添加して、ボルテッ（7）室温で10分間、放置する。
（8）12,000〜20,000×gで10分間、
室温で遠心
分離する。
（9）上清を捨て、
ペーパータオルの上で上清残液をできるだけ除く。
（10）沈殿に、洗浄液（A）
を1mr添加して、ボルテックスミキサーで混合する。
（11）12,000〜20,000×gで5分間、
室温で遠心
分離する。
（12）ステップ9と同様の操作を行い上清残液

血中を浮遊しているDNAの検出／解析には、
このような可能性が秘められており、今後も注目される研究材料である。そこで、筆者らは、「よう化ナトリウム法」によるDNA抽出法を血中遊離DNA分析の前処理試薬として至適化した新規抽出試薬の開発を行った。

和光純薬時報（2）酵素反応液を200μr添加する。

クスミキサーで混合する。

今回、筆者らは、
よう化ナトリウム法が持つ処理試薬としても広く利用されつつある

10

試薬研究所

Vol.72, No.4（2004）

をできるだけ除く。
（13）沈殿に、洗浄液（B）
を1mr添加して、ボルテックスミキサーで混合する。
（14）12,000〜20,000×gで5分間、
室温で遠心
分離する。
（15）ステップ9と同様の操作を行い上清残液

①

②

③

④

⑤

⑥

⑦

⑧

⑨

⑩

NC ①

⑪

MW A W A W A W A W A W A W A W A W A W A W A

②

③

④

⑤

⑥

⑦

⑧

⑨

⑩

⑪

NC

MW A W A W A W A W A W A W A W A W A W A W A W A

NC：negative control

⑪

439bp

NC：negative control①〜⑪：検体番号（検体番号⑤のみ血漿、残は全て血清検体）
M ：分子量マーカーDNA Step Ladder Mix（80bp〜10kb）
W：DNA Extractor SP Kit
A ：A社DNA精製キット③、②、⑪：検体番号

M ：分子量マーカーDNA Step
Ladder Mix（80bp〜10kb）
W：DNA Extractor SP Kit
A ：A社DNA精製キット

図2. p53-Exon7領域（439bp）のPCRの結果

図1. p53-Exon5領域（308bp）のPCRの結果

②

439bp

308bp

①〜⑪：検体番号（検体番号⑤のみ血漿、残は全て血清検体）
M ：分子量マーカーDNA Step Ladder Mix（80bp〜10kb）
W：DNA Extractor SP Kit
A ：A社DNA精製キット③

MW A W A W A W A

図3. p53-Exon7領域（439bp）のPCR再試験をできるだけ除く。

は下記参照）。各々反応に使用するプライマー（16）ブロックヒーター（約65℃）などで、約5分間、沈殿を乾燥させる。

まとめは、ニッポンジーン社のp53 Primers（ Exon5：

今回の結果よりDNA Extractor SP Kit

コードNo. 312-03511, Exon7：コードNo. 316-の特長として｢高いDNA回収率｣を示すこと（17）乾燥した沈殿に、適当量のTE（pH 8.0）03531）を用いた。
また、比較対照としては、
多ができた。血中遊離DNAを高収率で取得すなどを添加して、
ボルテックスミキサーでくの血中遊離DNA解析に関する文献で使用ることは、上述したような疾患関連遺伝子の混合する。

されているシリカ担体（遠心ろ過）法を原理と検出の感度や分析の精度を向上させること（18）ブロックヒーター（約65℃）
などで、
3〜5分

したA社DNA精製キットを使って抽出したにつながり、診断法開発研究の進歩に寄与

間ほど加温しつつ、
ボルテックスミキサー

DNAを用い、
1回のPCRに25μr血清又は血できるものと思われる。本キットに興味を抱いで撹 拌して 沈 澱を完 全に 溶 解させ 、漿に相当するDNA溶液を試料として添加した。

ていただき、皆様方の研究の一助となれば幸DNA試料とする。

（結果）

いである。

本キットで 抽 出した 検 体に ついては 、
実施例

Exon5のPCRで全ての検体から増幅断片が

（方法）

認められた
（図１）。Exon7のPCRでは、
1検体

DNA Extractor SP Kitを用いて、健常人（検体番号③）のみ増幅断片が認められなかっの血 清（ 1 0 検 体 ）及び血 漿（１検 体 ）からたが、残りは全て増幅断片を検出することがDNAを抽出し、20μrのTE（pH 8.0）に溶解できた（図２）。
しかも、PCR増幅断片のDNA

したDNA試料の内５μr（25μr血清又は血漿

量は、全ての検体において、本キットで抽出し

相当量）
に対して、
p53-Exon5領域及びp53-

たDNAに対する増幅の方が、A社のキットでExon7領域のPCR増幅を行った（PCR条件抽出したDNAに対する増幅結果より明らかに多く（太いバンドとして得られ）、本キットのDNA抽出効率の高さを示す結果となった。

〔PCRの反応条件〕
［反応液］
DNA試料
forward primer
reverse primer
dNTP
10×Gene Taq Universal Buffer
Gene Taq NT
D.W.

Exon7の検出できなかった検体については、
5μR（6.25μR：対照の場合）4pmol
4pmol
200μmol/R
1μR
0.5units３）。再試験を実施して増幅断片が得られた

10μRにfill up

ことで、
100μrという少量の検体から抽出した［PCR cycles］
96℃ 30sec
94℃ 30sec
Ｘ℃
30sec ×40cycles
72℃ 1min
72℃ 5min
アニーリング温度（Ｘ℃）＝65℃（Exon5）、67.5℃（Exon7）、66℃（Exon7再試験）〕

次の実験で、PCR条件を多少変えて再試験を行った結果、増幅断片を得ることができた
（図

場合でも、
検討した全ての検体からp53遺伝
子のPCR増幅が可能であることを示すことができた（PCRに供した検体量は25μr相当量）。

〔参考文献〕
１）Ishizawa, M. et al.: Nucleic Acids Res., 19, 5792
（1991）.
２）Wang, L. et al.: Nucleic Acids Res., 22, 1774-1775（1994）.
３）Helbock, H. J. et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA,95, 288-293（ 1998）.
４）Hamilton, M. L. et al.: Nucleic Acids Res., 29,
2117-2126（ 2001）.
５）Oikawa, S. et al.: Biochemistry, 40, 4763-4768（2001）.
６）Leon, S. A. et al.:Cancer Res., 37, 646-650（ 1977）.
７）Koffler, D. et al.: J. Clin. Invest., 52, 198-204（ 1973）.
８）Stroun, M. et al.: Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 23,707-712（ 1987）.
９）Stroun, M. et al.: Oncology., 46, 318-322（ 1989）.
１０）Shao, Z. M. et al.: Clin. Cancer Res., 7, 2222-2227（2001）.
１１）Yamada, T. et al.: Clin. Cancer Res., 4, 1527-1532（1998）.
１２）Silva, J. M. et al.: Cancer Res., 59, 3251-3256（ 1999）.
１３）Sozzi, G. et al.: Clin. Cancer Res., 5, 2689-2692（1999）.
１４）Khan, S. et al.: Int. J. Cancer, 110, 891-895（ 2004）.
１５）Esteller, M. et al.: Cancer Res., 59, 67-70（ 1999）.

血中遊離DNA抽出用試薬
コードNo.

296-60501

品

名

DNA Extractor SP Kit

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

規 格

容 量

希望納入価格（円）遺伝子研究用50回用25,00011

SERIES

Talking ofLAL
和光純薬工業株式会社

第57話

土谷

正和

高感度エンドトキシン測定の応用法というものはないのですが、筆者らは、簡比濁時間分析法や比色法を用いると、か症例でもエンドトキシン値が低いことがありまなり低濃度のエンドトキシンが測定できるよう便な操作で処理が行え、ある程度良い回収

すし、健常人血漿からエンドトキシンが検出になっています。本シリーズでも、水中のエ率の得られる希釈加熱法を採用しています。

されることはほとんどありません。それでは、

ンドトキシンの測定の話題を取り上げ、試料操作が簡便であることは、エンドトキシン汚どれくらい低い濃度を測定すると健常人におの添加量を調整することでトキシノメーター法

染を防ぐという面からも非常に重要です。筆ける血中エンドトキシン濃度が見えてくるのでによる1EU/rのエンドトキシンの検出が90分

者らが開発した界面活性剤を用いた希釈加

しょう。筆者らは、トキシノメーターの測定時程度で行えること、また、試料中のエンドトキ

熱法で血漿を前処理し、エンドトキシンに特間を延長すれば低濃度まで検出できるというシンを濃縮できるパイロセップ法では0.1EU/r

異的なリムルス試薬とトキシノメーターを用い特徴を利用して、健常人血漿中のエンドト

以下のエンドトキシンの検出が可能であることてエンドトキシンを測定する方法では、通常キシン測定を試みました2）。すなわち、前処をご紹介しました（第21話 ）。トキシノメーター

用いられている5pg/mrをカットオフ値とすると、理した健常人血漿を999分間測定してみた

1）の場合、試薬自体が自然に活性化を起こさ

グラム陰性菌感染症を発見できる確率（診断のです。74人の健常人の血漿を測定したとない試薬、いわゆるブランクの安定な試薬を感度）が56%、陰性の時にグラム陰性菌感

ころ、平均のゲル化時間は690.3分、最大用いると、測定時間を延長すればするほど染症でない確率（診断特異度）が99%との結999分以上、最小79.2分、標準偏差191.6

低濃度までエンドトキシンの測定が可能となり果を得ており、グラム陰性菌感染症を発見分でした。690分のゲル化時間から検量線ます。今回は、この性質を利用した血中エするより、否定することに優れている方法との外挿によってエンドトキシン濃度を求めると、

ンドトキシン測定の応用例をご紹介しましょう。

思われます 2）。同じデータを用いて、カットオ

0.06pg/mr（0.72EU/r）となりました。

血中エンドトキシンの測定は、グラム陰性

フ値を1pg/mrまで下げると、診断感度は実際にこの方法を臨床研究に応用した例

菌感染症診断に有用であることが期待され、72%に上昇します2）。そのかわり、診断特異が報告されています3）。八重樫らは、健常人検討されてきました。1980年代から1990年

度は81%まで下がります。

66名、感染症群31名、非感染症SIRS群代前半にかけて、主に合成基質法を用いた

血漿の前処理時の希釈倍率は10倍です。

40名について、測定時間を延長したエンドト測定が検討され、迅速診断に期待が持たれ使用しているエンドトキシン1pgは約0.007EU

キシン測定を行い、感染症群が他の群と比ましたが、β-グルカンにも反応するリムルス試ですから、血漿中の1pg/mrのエンドトキシ

較して有意に高かったと報告しています。カッ

薬を使用していたため、その結果に疑問がンを測定するためには、その10分の1である

トオフ値を1.1pg/mrに設定すると、診断感持たれるようになりました。その後、エンドト

0.0007EU/mrを検出する必要があります。

度81.3%、診断特異度86.1%となっており、キシン特異的試薬を用いた測定が主流にな

最近では、使用する器具も吟味され、測定有用な検査になる可能性が示唆されています。

ると血中エンドトキシンの陽性率が低下しまし

技術も向上してきましたから、器具や操作か問題は時間がかかることですが、この点もた。血中エンドトキシン測定には、血液中にらの汚染は少なくなりました。それに伴って、実際に測定するべき濃度が明らかになって存在する測定妨害物質を不活性化する必要

血中エンドトキシンの測定も正確に行えるよう

くると、解決されていくことと思われます。

があります。妨害物質の不活性化は、血液（血になってきたのですが、エンドトキシンの検出

血液中にエンドトキシンが存在することは漿）の前処理によって行われ、種々の方法が率も下がったように思えます。血中エンドトキ

異常事態ですから、生体はこれに反応して開発されています。なかなか完全な前処理

シンの上昇が予想されるグラム陰性菌感染

エンドトキシンを抑えにかかると思われます。
このような状態は定常的でなく、常に変化していると思われますから、その測定も困難が予想されます。今後、エンドトキシン測定技
術がさらに向上し、エンドトキシンの血中動

16

N = 74
Mean: 690.3 min(= 0.06 pg/mr)
SD: 191.6 min
Max: > 999 min
Min: 79.2 min

14

Frequency

12
10
8
6

態が明らかにされることを期待しています。
〔参考文献〕
１）土谷正和：和光純薬時報，63（ 4）, 16（ 1995）.
２）土谷正和：「エンドトキシン研究5−研究と治療の進歩−」，p.17,（医学図書出版）（ 2002）.
３）八重樫泰法 他：エンドトキシン血症救命治療研究会誌，7，25（ 2003）.

4
2
0
0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

1100

次回は、第58話「リムルス試験のバリデー

Gelation Time (min)12

和光純薬時報ション」の予定です。

Vol.72, No.4（2004）

ew Products
官能基選択的不均一触媒
パラジウム−活性炭素エチレンジアミン【Pd/C（en）】
複合体（Pd 3.5~6.5%）

アミン合成試薬o -ニトロベンゼンスルホンアミド誘導体
ニトロベンゼンスルホンアミド誘導体は、相当するアルキルハライド

Pd/C（en）はパラジウム活性炭素（Pd/C）のパラジウムとエチレ

やアルコールに簡便に窒素原子を導入することができるため、
１級

ンジアミンが約1：1の割合で複合化した不均一触媒です。中性条や２級アミンの合成に有用な求核試薬です１）。これら結晶性の高い

件下、様々な官能基を選択的に接触還元することが可能です。反アンモニア等価体のスルホンアミド誘導体は、生理活性天然物の全応後はろ過するだけで簡単に除去することができます。また、通常合成や医薬品開発研究に多用されています 2, 3）。

のPd/Cに見られるような発火性を示さず、保存安定性を有する優

この度、アミン合成試薬として重窒素化したo -ニトロベンゼンスル
ホンアミド及びその誘導体の販売を開始しました。15 N標識アミン合れた還元触媒であり、工業的レベルでの展開が期待されます。
Pd/C（ en ）を用いた接触還元では、保護基であるベンジルエー

成試薬を用いて15 N標識化合物を容易に合成することが可能となり

テル2）、脂肪族アミンのZ（benzyloxycarbonyl）基 2, 3）、O -TBDMSました。15 N標識化合物は、薬物代謝研究など幅広い研究用途へ（ t-butyldimethylsilyl）基 4 ）、エポキシド5 ）及びベンジルアルコール6 ）の応用が期待されています。

の還元を抑制しながら、
オレフィン、
アジド、
ニトロ、ベンジルエステル、

反応例

芳香族ハロゲンなどの官能基を容易に還元することが可能です 1）。

反応例

Me

HSCH2CO2H
K2CO3■ベンジルエーテル基存在下での選択的還元反応

2)

Me
Ns
EtO2C

EtO2C
DEAD, PPh3

R

Pd/C(en)
CH2CO2Bn

BnO

Ns

Br

H
N

Boc

R

K2CO3

CH2CO2H

H2(1atm), MeOH, 2h

R

Ns-NH2R

OH
DEAD, PPh3

Boc

Boc
Me
TFA

Boc
N
Ns

EtO2C

N
H

Ns

SO2
Ns =

yield 94%■Ｚ基存在下での選択的還元反応

N
Ns

N
H

DMF

OBn

H2(1atm), MeOH, 24h
yield 91%

BnO

EtO2C

Me
Boc

OH

Pd/C(en)
OBn

H
N

NO2

NHNs

2, 3)

Pd/C(en)
N Z

N Z
H2(1atm), THF, 17h
yield 92%
Pd/C(en)( ) 7 NHZ

〔参考文献〕( ) 7 NHZ

H2(5atm), THF, 22h

１）Fukuyama, T., Cheung, M. and Kan, T.: Synlett, 1301（ 1999）.
福山透：有機合成化学協会誌, 59, 779（ 2001）.
２）菅敏幸、
３）Kan, T. and Fukuyama, T.: Chem. Commun., 353（ 2004）.

yield 99%

■エポキシド化合物の選択的還元反応6)O

Pd/C(en)OO
H2(1atm), THF, 3h

O
O

O2N

O
H2(1atm), THF, 18h

品

名

規 格

O

H2N
yield 100%

149-07881
o-Nitrobenzene(15N)sulfonamide 有機合成用
145-07883

1g
5g

15,00055,000029-15141 N-BOC-o-nitrobenzene(15N)sulfonamide 有機合成用

1g

20,00015〔参考文献〕
廣田耕作 : 有機合成化学協会誌, 59, 109（ 2001）.
１）佐冶木弘尚、
２）Sajiki, H., Hattori, K. and Hirota, K.: J. Org. Chem., 63, 7990（ 1998）.
３）Hattori, K., Sajiki, H. and Hirota, K.: Tetrahedron, 56, 8433（ 2000）.
４）Hattori, K., Sajiki, H. and Hirota, K.: Tetrahedron Lett., 41, 5711（ 2000）.
５）Sajiki, H., Hattori, K. and Hirota, K.: Chem. Eur. J., 6, 2200（ 2000）.
６）Sajiki, H., Hattori, K. and Hirota, K.: J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1,4043（ 1998）.

コードNo.

品

名

規 格

163-21441 Palladium-Activated Carbon Ethylenediamine 有機合成用
169-21443 Complex (Pd 3.5~6.5%)

容量 希望納入価格（円）
1g
5g

容量 希望納入価格（円）■15N標識アミン合成試薬

O

Pd/C(en)O

コードNo.

O

yield 98%

4,000
13,500

和光純薬時報265-01831 N-Z-o-nitrobenzene( N)sulfonamide 有機合成用

1g

20,000012-20221 N-ALLOC-o-nitrobenzene(15N)sulfonamide 有機合成用

1g

近日発売

142-07871
5g
o-Nitrobenzenesulfonamide 有機合成用
140-07872
25g

6,000
18,000022-15131
5g
N-BOC-o-nitrobenzenesulfonamide 有機合成用
020-15132
25g

12,00045,000268-01821
5g
N-Z-o-nitrobenzenesulfonamide 有機合成用
266-01822
25g

12,00045,000015-20211
5g
N-ALLOC-o-nitrobenzenesulfonamide 有機合成用
013-20212
25g

近日発売

■14Nアミン合成試薬

Vol.72, No.4（2004）

近日発売

13

ew Products
硫黄架橋2核ルテニウム錯体
met-DIRUX

ダイオキシン類分析用
サンプリングボトル(洗浄済み）

met-DIRUXはRuCl 3にpentamethylcyclopentadiene及び

環境水を採取する際に使用する、ダイオキシン類ブランクを保証

methanethiolが配位したキラルな硫黄架橋2核ルテニウム触媒です。

した3rのサンプリングボトルです。アセトンとジクロロメタンでプロパルギルアルコールなどとルテニウム−アレニリデン錯体を形成

2回洗浄しております。

し様々な基質と触媒的に反応することができます。たとえば、同一
1）分子内の両末端アルキンによる環化反応 やプロパルギルアルコー
ル化合物のプロパルギル位置換反応

最終洗浄液（ジクロロメタン）を採取し、高感度GC/MSにてダイ
オキシン類を測定、低濃度である事を保証しています。

2, 3）、フェノール化合物との環化付加反応 4 ）、芳香族化合物のプロパルギル化反応 5 ）、アルケン

洗浄後、1本ずつアルミ袋で包装し外部からの汚染を防いでいますので、開封しそのまま使用できます。

とのアレニリデン−エン反応 6）が可能です。

1箱 4本入また、不斉合成への応用も可能であり、空気中でも安定な触媒です。

個別アルミ袋
＊

Ru
Cl

S
H3C

met-DIRUX :[Cp RuCl(μ2-SMe)2RuCp Cl]（Methanethiolate-Bridged Diruthenium Complex）

S

Ru
Cl

1箱ごと試験成績証明書添付

＊

CH3

反応例

■プロパルギル位置換2, 3)
ROH (R= Me, Et, Ph)

Ph

60℃, 15min
R'SH (R'= alkyl, Ph)

Ph

60℃, 4hPhOH

Ph

60℃, 4h

NH4BF4(10mol%)yield: 46-86%
SR'

ArNH2

+ met-DIRUX(5mol%)

yield: 63-91%
OR

NHAr

HP(O)Ph2

yield: 56%
P(O)Ph2acetonePh●1箱ごとに試験成績証明書添付■フェノール化合物との環化付加反応4)OH+ met-DIRUX(5mol%)●小包装（4本単位）から、大包装まで対応可能●事前洗浄なしでそのまま使用可能

O

OH●ダイオキシン類のブランク値を高分解能GC/MSで保証●1本ごとにアルミ包装し、コンタミを防止yield: 85%

reflux, 3hPh長●2種類の溶媒（アセトン、
ジクロロメタン）で洗浄

Ph

60℃, 1h特yield: 64-93%

PhO
yield: 80%

品質保証値

NH4BF4 (10mol%)
60℃, 1h

国土環境㈱ 環境創造研究所にて測定

PCDDs〔参考文献〕
１）Nishibayashi, Y., Yamanashi, M., Wakiji, I. and Hidai, M.: Angew. Chem. Int. Ed., 39, 2909
（2000）.
２）Nishibayashi, Y., Wakiji, I. and Hidai, M.: J. Am. Chem. Soc., 122, 11019（ 2000）.
３）Nishibayashi, Y., Wakiji, I., Ishii, Y., Uemura, S. and Hidai, M.: J. Am. Chem. Soc., 123, 3393
（2001）.
４）Nishibayashi, Y., Inada, Y., Hidai, M. and Uemura, S.: J. Am. Chem. Soc., 124, 7900（ 2002）.
５）Nishibayashi, Y., Yoshikawa, M., Inada, Y., Hidai, M. and Uemura, S.: J. Am. Chem. Soc.,
124, 11846（ 2002）.
６）Nishibayashi, Y., Inada, Y., Hidai, M. and Uemura, S.: J. Am. Chem. Soc., 125, 6060（ 2003）.

PCDF

品

130-14581 met-DIRUX

14

名

規 格

13,000

和光純薬時報4〜8塩素化物

0.0031pg-TEQ/本 以下
0.00046pg-TEQ/本 以下

Co-PCB 1＊

1 non-ortho Co-PCB（4〜6塩化物）4種、mono-ortho Co-PCB（5〜7
塩素化物）8種

容量 希望納入価格（円）

有機合成用 200mg

0.0053pg-TEQ/本 以下＊

コードNo.
コードNo.

4〜8塩素化物

297-44651

品

名ダイオキシン類分析用サン
プリングボトル（洗浄済み）

Vol.72, No.4（2004）

規 格−

容 量 希望納入価格（円）
3r×412,000ew Products
捕集管の選択アルデヒド分析用前処理カラム
PresepR-C DNPH（Short）
PresepR-C DNPH

Presep R-C DNPH（Short）
室内空気や高通気速度での捕集に好適。サンプリングポンプの吸引能力に応じて、本品を複数連結して使用することが可能。

Presep R-C DNPH
アルデヒド類は有害大気汚染物質として、国内では悪臭防止法、
大気汚染防止法、及びシックハウス（ 室内空気汚染 ）に係るガイド
ラインにより、規制・測定の対象となっています。

汎用タイプ。大気捕集などに好適 ※ 。
※：大気捕集の際、測定値がオゾンの影響を受ける場合は、Presep R -C
オゾンスクラバーを大気吸引側に取り付けて下さい。

本品はカルボニル化合物の捕集ならびに2,4ｰジニトロフェニルヒ
ドラゾン（ DNPH ）による誘導体化を行う専用捕集管です。外装はルアーフィッティングタイプの高純度ポリエチレン製カートリッジを採用、
大気捕集や溶媒抽出時の接続、取り扱いが容易です。この度商品化しましたPresep R -C DNPH（ Short ）は、充てん剤量を従来の約半分に変更し、さらに基材・フィルターの改良により、高流速

分析例①カートリッジブランク②分析例（アセトニトリル5mRにて抽出） （実験室中の空気30R採取）

でのサンプリングが可能です。用途に応じて、shortタイプと通常タイプをご選択下さい。

1. Formaldehyde-2,4-DNPH
2. Acetaldehyde-2,4-DNPH
3. Acetone-2,4-DNPH

PresepR-C DNPH（Short）

PresepR-C DNPH

特長

Presep R-C DNPH（Short）●通気時の抵抗が低く、高流速でのサンプリングが可能●室内空気捕集に好適（厚生労働省法に準拠）

Presep R-C DNPHシリーズとして●低ブランクの実現（ホルムアルデヒド、
アセトアルデヒド及びアセトンによる汚染を極力抑えました）

カラム：Wakosil-Ⅱ 5C18RS、4.6φ×250mm
溶離液：CH3CN/H2O＝60/40（v/v）
流 速：1.0mR/min.at 40℃
検 出：UV360nm,0.005AUFS（①）、0.04AUFS（②）
注入量：10μR●使いやすい個別包装

仕様

コードNo.
PresepR-C DNPH(Short)
破砕状シリカゲル基材

充 て ん 剤 量

希望納入価格（円）20個

24,000規 格

容 量

希望納入価格（円）

試料前処理用20個

29,000

カートリッジ

293-40351 Presep -C Ozone Scrubber 試料前処理用

20個

13,500約1.8mg/カートリッジ

017-17743
Acetonitrile
011-17741

アルデヒド 100mr
200mr
分析用

2,200
4,000

破砕状シリカゲル

粒子径：150-425μm

粒子径：75-150μm
細孔径：7.0nm

関連商品

比表面積：450cm2/g

比表面積：450cm2/g

コードNo.

約0.4g(シリカゲル)/
カートリッジ

全長3.8cm、
カ ラ ム サ イ ズ 最大幅1.9cmφ

約0.8g(シリカゲル)/

全長5.0cm、最大幅1.9cmφ

充てん部1.0φ×0.8cm

充てん部1.0φ×1.6cm

約75μg

約150μg品

名規 格

291-43951 PresepR-C DNPH（Short）試料前処理用

細孔径：7.0nm

D N P H 量 約0.9mg/カートリッジ

試 料 負 荷 量

容 量

PresepR-C DNPH

品

名

R

290-34251 Presep -C DNPH
R

品 名カラムサイズR

Wakopak Wakosil-Ⅱ
5C18RS

4.6φ×250mm

カラムタイプ

記号

デュポン

トID

ウォーターズ トIW

希望納入価格（円）48,000(ホルムアルデヒドとして) （ホルムアルデヒドとして）

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）15

ew Products
生薬標準品

機能性高分子ゴミシ（五味子）有効成分

ポリ-γ-グルタミン酸

ゴミシン、シザンドリンはチョウセンゴミシSchisandra chinesis

ポリ-γ-グルタミン酸はγ位のカルボキシル基とα位のアミノ基がペBaillon（ Schisandraceae ）の果実に含まれる生薬有効成分です。

プチド結合で連なったポリマー（ 下図 ）で、主として納豆菌などのゴミシ有効成分は、中枢抑制、鎮咳、抗炎症、抗アレルギー及びBacillus 属菌によって産生されます。
本品は韓国の伝統大豆発酵食品であるチョングッチャンから単利尿などの薬理作用が報告されています。

離されたBacillus subtilis chungkookjangにより産生されたもの

本品は局方収載ゴミシンの確認試験に使用されます。

で、通常の納豆菌から産生されるポリ-γ-グルタミン酸よりも非常にゴミシンA標準品

高分子量（20万〜600万）であるため、吸水剤・保湿剤・増粘剤・ミ起源：Schisandra chinesis

Baillon（ Schisandraceae ）ネラル吸収促進剤・徐放性薬物伝達体（ DDS ）・生分解性凝集浄OO化剤など、機能性高分子化合物として化粧品・医薬品・工業用品

CAS No.：58546-54-6

CH3
H3CO
CH3

アセトニトリル溶状：澄明

H3CO
OH

の幅広い分野で用途開発が期待される物質です。
今回新製品として、平均分子量3タイプ、さらに各々Na有無による2タイプの合計6タイプと多彩に品揃えしました。

薄層クロマトグラフィー試験：試験適合含量（HPLC）：98.0%以上

H3CO

O

OCH3

H
N

C23H28O7=416.46
コードNo.

品

名077-04951 Gomisin A Standard

規 格

容 量

希望納入価格（円）

生薬試験用

10mg

26,000

ゴミシンN標準品
Baillon（ Schisandraceae ）薄層クロマトグラフィー試験：試験適合

H3CO

CH3
H

＊Naフリー
放射線処理による架橋反応に適する。放射線照射によってさらに複雑な高H3CO次構造を形成する結果、優れた吸水剤となることが知られている。水に難OCH3溶（アルカリ側で可溶）。

C23H28O6=400.46
名074-04961 Gomisin N Standard

規 格

容 量

生薬試験用

＊Na塩

希望納入価格（円）10mg

26,000

シザンドリン標準品
OCH3

起源：Schisandra chinesis

Baillon（ Schisandraceae ）H3CO

CAS No.：7432-28-2

CH3
H3CO
CH3
H3CO

メタノール溶状：澄明OH

薄層クロマトグラフィー試験：試験適合含量（HPLC）：99.0%以上

H3CO
OCH3

C24H32O7=432.51
コードNo.

品

名192-10441 Schizandrin Standard

16

的安定である。
●ロットごとに各平均分子量を確認済み。

含量（HPLC）：98.0%以上

品

長●安定な粘度：本品溶液の粘度値はpH、温度変化に対して比較
CH3

H3CO

n

●DL混合物である。
（D：L＝7：3）

OO

アセトニトリル溶状：澄明

コードNo.

COOH

特起源：Schisandra chinesis

C

規 格

容 量

希望納入価格（円）

生薬試験用

20mg

15,700

和光純薬時報非常に水溶性が高く、生体内でのミネラル（Caイオンなど）吸収促進作用がある。

コードNo.
品
名■Naフリータイプ
161-21361 Poly-γ-glutamic Acid,
167-21363 Average M.W.
165-21364 200,000〜500,000
168-21371 Poly-γ-glutamic Acid,
164-21373 Average M.W.
162-21374 1,500,000〜2,500,000
165-21381 Poly-γ-glutamic Acid,
161-21383 Average M.W.
169-21384 4,000,000〜6,000,000■Na塩タイプ
162-21391 Poly-γ-glutamic Acid
168-21393 Sodium Salt, Average M.W.
166-21394 200,000〜500,000
165-21401 Poly-γ-glutamic Acid
161-21403 Sodium Salt, Average M.W.
169-21404 1,500,000〜2,500,000
162-21411 Poly-γ-glutamic Acid
168-21413 Sodium Salt, Average M.W.
166-21414 4,000,000〜6,000,000

Vol.72, No.4（2004）

規 格

生化学用
生化学用
生化学用

生化学用
生化学用
生化学用

容 量

希望納入価格（円）

1g
10g
50g
1g
10g
50g
1g
10g
50g

3,500
17,50052,5003,800
19,00057,000
4,100
20,50061,500

1g
10g
50g
1g
10g
50g
1g
10g
50g

3,000
15,00045,0003,300
16,50049,5003,600
18,00054,000ew Products
イムノブロッティングや免疫組織染色に
DAB溶液

青色とピンク色の着色済みマーカー
TM

ワイドビュー プレステイン タンパク質サイズマーカー

DAB（ 3,3'-diaminobenzidine ）は、POD（ Peroxidase ）の発

着色済みのタンパク質サイズマーカーです。含まれる8つのリコンビ

色基質です。PODと活性酸素の存在下で茶色に発色し、沈着しナントタンパク質には、青色とピンク色の発色団が共有結合しており、ます。そのため、イムノブロッティングや免疫組織染色において、50kのバンドはピンク色、その他のバンドは青色を呈します。また、溶解後はボイルなしでそのまま使用できる簡単設計です。

POD標識抗体の検出に使用されます。
本品は、このDABの濃縮液と反応液がセットになった商品です。
反応液には過酸化水素が含まれていますので、使用前に濃縮液と反応液を混合するだけで、イムノブロッティングや免疫組織化学などに使用できます。

特

長●2色のバンドで分子量の確認が容易です。
●溶解後、そのままご使用いただけます。

推奨アプライ量
分子量範囲

内

容

●DAB溶液3mr×1本●反応液

100mr×1本

保存条件

5−10μr／lane

15−150（ k）−20℃保存コードNo.

品名

規 格 容 量 希望納入価格（円）TM

230-02221 WIDE-VIEW Prestained Protein Size Marker 電気泳動用 500μr 18,000
TM

ワイドビュー ウエスタンサイズマーカー
ウエスタン用のタンパク質サイズマーカーです。免疫グロブリンと結合能を持つリコンビナントタンパク質（プロテインG）
により、ウエスタンブロットの一次抗体、二次抗体の両方に反応します。さらに、リコンビナントタン
パク質は高純度に精製されていますので、シャープではっきりしたバンドが得られます。また、分子量は正確で再現性のある結果が得られます。

特長●ウエスタンブロットで、直接マーカーがバンドと保存条件して確認できます。
2〜10℃保存●マーカーの分子量が広範囲です。
（16−150k）●プロテインGと結合する様々な動物種の抗体とコードNo.

品名

標識酵素

用途

規格 容量 希望納入価格（円）

Immunohistochemistry 生化学用
545-02461 DAB Solution Peroxidase Immunoblotting
100mr用

18,800

反応します。
●使用方法が簡便です。
●正確な分子量が求められます。

関連商品
コードNo.

推奨アプライ量

品名
TMB Solution
546-01911 (Microwell)

標識酵素

用途

Peroxidase ELISA

生化学用 100mr

12,000543-01921 TMB Solution(Membrane)

Immunohisto生化学用 100mr
Peroxidase chemistry
Immunoblotting

12,5002,2'-Azino-bis(3-ethyl549-01901 benzothiazoline-6- Peroxidase ELISA
sulfonic Acid) Solution

規格 容量 希望納入価格（円）

保存条件
コードNo.

16−150（ k）−20℃保存品

名規 格

容 量 希望納入価格（円）233-02211 WIDE-VIEWTM Western Size Marker 電気泳動用 250μr 20,000
生化学用 100mr

11,000

関連商品

ImmunohistoAlkaline
生化学用 100mr
547-01941 BCIP/NBT Soluiton phosphatase chemistry
Immunoblotting

12,500ImmunohistoAlkalinechemistry
phosphatase Immunoblotting 生化学用 100mr

11,000540-01931 pNPP Solution

分子量範囲

1−5μr／lane

和光純薬時報コードNo.

品名

規 格 容 量 希望納入価格（円）134-14501 Molecular Weight Marker, High Range 電気泳動用 1mr用 12,800（分子量：17,30,42,79,116,200（k））
Molecular Weight Marker, Middle Range
131-14511 （分子量
電気泳動用 1mr用 12,800：14,20,30,42,79（k））

Vol.72, No.4（2004）17

ew Products
測定波長：λex=517nm、λem=721nm

蛍光試薬

溶解性：DMSO、
EtOHに可溶。

蛍光試薬はRIの代替用途としての生体内物質標識の他に特長的な性質を持つものもあり、幅広い分野で様々な用途に使用する(CH3)3NCH2CH2+N

CH CH

ことができます。この機会に是非ご利用下さい。

N(CH2CH3)2

2Br−

C26H35Br2N3=549.38

5-Carboxyfluorescein【5-FAM】
ペプチド、タンパク質、核酸の標識に用いられる緑色蛍光試薬です。本品の蛍光強度はpHに依存するため、標識試薬としての
他に細胞内pH変化を調べるためにも使用できます。
測定波長：λex=492nm、
λem=518nm

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）

細胞生物学用5mg

近日発売

N-（3-Triethylammoniumpropyl）-4-{4-[4-（diethylamino）
phenyl]butadienyl}pyridinium dibromide【RH 414】
Dialkylaminophenylpolyenylpyridinium色素の類似体である膜OHO

溶解性：DMSO、DMF

O

に可溶。

電位感受性色素です。電荷の変化に反応して蛍光スペクトルが変化します。本品はニューロン、心筋及び組織標本などにおける一過的なCAS No.：76823-03-5

電荷の変化を調べるのに用いることができます。

〔参考文献〕
１）Hahn, M. et al. :Electrophoresis,

品

名

C OH

測定波長：λex=532nm、λem=716nm

O

溶解性：DMSO、EtOHに可溶。

CAS No.：161433-30-3

22, 2691（ 2001）.
２）Avrahami, D. et al. :Biochemistry,
40, 12591（ 2001）.
３）Hung, S. C. et al. :Anal.
Biochem., 243, 15（ 1996）.

コードNo.

コードNo.

046-29161 Di-2-ANEPEQ

C

OH

O

(CH3CH2)3N(CH2)3+N

CH CH CH CH

C21H12O7=376.32

規 格10,000Tetramethylrhodamine-5-maleimide
チオール標識蛍光試薬です。光安定性であり、蛍光強度はpH
O(CH3)2N

C28H43Br2N3=581.47

容 量 希望納入価格（円）039-19341 5-Carboxyfluorescein【5-FAM】細胞生物学用 100mgの影響を受けません。

N(CH2CH3)2

2Brｰ

N(CH3)2

測定波長：λex=541nm、
λem=569nm

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）N（- 3-Triethylammoniumpropyl）-4-{4141-07841 [4-（diethylamino）phenyl]butadienyl} 細胞生物学用
pyridinium dibromide【RH 414】

5mg

近日発売

6-Carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein
Diacetate, Diacetoxymethyl Ester
細胞内エステラーゼの蛍光基質です。細胞膜透過性であり、細胞溶解性：DMSOに可溶。

−

C O

CAS No.：174568-67-3の中に入ると細胞内非特異的エステラーゼによって加水分解を受け、蛍光を呈します。また、酸化を受けることによっても蛍光を呈するため、O

アポトーシスの指標である活性酸素の検出にも用いられます。反応後の本品の蛍光スペクトル（λem）
は529nmです。
O

N

O

測定波長：λex=291nm、λem=none
溶解性：DMSOに可溶。

C28H23N3O5=481.50

O
H3C C O

コードNo.

品

名

規 格

O
O C CH3

O

容 量 希望納入価格（円）204-16131 Tetramethylrhodamine-5-maleimide 細胞生物学用 5mg

近日発売

CI

CI

H

COCH2OCCH3O

Di-2-ANEPEQ

CH3COCH2OCO

ANEP（Amino Naphthyl Ethenyl Pyridinium）色素の類似体で

O

C31H24Cl2O13=675.42ある膜電位感受性色素です。電荷の変化に反応して蛍光スペクトル18Oが変化します。本品はニューロン、心筋及び組織標本などにおけるコードNo.

一過的な電荷の変化を調べるのに用いることができます。

6-Carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein032-19331
細胞生物学用 5mg
Diacetate, Diacetoxymethy Ester

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）
近日発売ew Products
Fluorescein Diphosphate Tetraammonium Salt【FDP】

測定手順
抗体固相化プレート

ホスファターゼの蛍 光 基 質です 。りん酸 基が 加 水 分 解されて75μR、強い蛍光を示します。チロシンホスファターゼの検出やELISA法

ビオチン化ラットGLP-2の蛍 光 基 質として用いられます 。 反 応 後の本 品の蛍 光スペクト

標準液または検体

ル（λem ）は514nmです。

抗ラットGLP-2, ウサギ 50μR

測定波長：λex=272nm、λem=none

4℃、一晩静置

CAS No.：217305-49-2

洗浄

25μR、

HRP結合ストレプトアビジン 100μRO
O P O−
O−

O
−

O

O P O
O−

室温（20〜30℃）、1時間振とう
洗浄
発色液

O

100μR

室温(20〜30℃)、30分間反応

O
4NH4＋

100μR

反応停止液
吸光度測定(492nm)
C20H26N4O11P2=560.39

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）Fluorescein Diphosphate060-04521
細胞生物学用 5mg
Tetraammonium Salt【FDP】

近日発売

標準曲線
1.4
1.2
Absorbance〔参考文献〕（Tokyo）, 129, 243（ 2001）.
１）Yu, J. S. et al. :J. Biochem.
（ 2002）.
２）Nolkrantz, K. et al. :Anal. Chem., 74, 4300
（ 2001）.
３）Murakami, Y. et al. :Biosens. Bioelectron., 16, 1009
（ 1994）.
４）Ahumada, A. and Izquierdo, L. :Biol. Res., 27, 241（ 1992）.
５）Huang, Z. et al. :J. Immunol. Methods, 149. 261

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0

0.1

1
10
Rat GLP-2 (ng/mR)

100

簡便、定量性に優れたGLP-2測定キット
Rat GLP-2 ELISA Kit wako

測定範囲0.137〜100ng/mr

プログルカゴンは、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（GLP）-1、

測定時間

一晩+1.5時間

GLP-2などから構成されており、膵臓ではグルカゴン、腸管では

検体量

25μr

添加回収

109〜123％（ラット血清）、108〜109％（ラット血漿）

特異性

ラットGLP-2に特異的。300pmol/mrの範囲内でラット

GLP-1、GLP-2にプロセシングされます。最近、GLP-2を脳内に投与することによりラットの摂食行動が抑制されることが報告されました1）。
本キットは、簡便でかつ特異性、定量性に優れた競合型ELISA

グルカゴン及びラットGLP-1とは交差反応しない。
〔参考文献〕（ 2000）.
１）Tang-Christensen, M. et al.: Nature Med., 6, 802

キットです。血清、血漿サンプルの測定が可能です。

キット内容●抗体固定化96穴マイクロプレート
（分割可）

1枚

●ラットGLP-2標準品

50ng●ビオチン化ラットGLP-2

1本●抗ラットGLP-2, ウサギ

6mr●HRP結合ストレプトアビジン

12mr●発色剤（OPD錠）

コードNo.

26mr

●緩衝液

25mr

●洗浄原液（20×）

50mr●反応停止液12mr●プレートシール

3枚

和光純薬時報名規 格

容 量 希望納入価格（円）75,000

関連商品
コードNo.

2錠●基質溶解液品

292-60601 Rat GLP-2 ELISA Kit wako 糖尿病研究用 96回用

291-59201

品

名GLP-1(Human, Mouse, Rat)規 格

容 量 希望納入価格（円）

糖尿病研究用 96回用

75,000

糖尿病研究用 96回用

75,000295-57401 Rat C-Peptide ELISA Kit wako 糖尿病研究用 96回用

75,000297-57601 Rat Leptin ELISA Kit wako

60,000ELISA Kit wako
297-57101

Glucagon (Human, Mouse, Rat)
ELISA Kit wako

Vol.72, No.4（2004）

肥満研究用 96回用

19

ew Products
免疫時の抗体価の比較 （ニワトリ、マウス、ウサギ）

抗体ができずにお困りの方へ
ニワトリ型モノクローナル抗体の受託生産サービス（免疫期間：約１.5ヶ月）■ニワトリの免疫時抗体価
OD
4.0

日本製粉㈱は、抗原を免疫したニワトリから遺伝子操作により抗3.5体遺伝子を単離し、大腸菌で大量にモノクローナル抗体を生産す

3.0

る技術を確立しました。この技術を利用して、ニワトリ型モノクロー

2.5

ナル抗体受託サービスを行っております。

A-No.92.0

A-No.10

特長

G-No.71.5

G-No.8●哺乳類由来の抗原でも抗体が作製できる可能性が高い

1.0●納期は約3ヶ月

0.5●ニワトリ抗体の可変領域にマウスの定常領域を結合させたキメラ

0.0

H5-No.3
H5-No.4
H5-No.5
H5-No.6

102

103

抗体

104

105

106

Serum Dil.

●卵IgY（ポリクローナル抗体）も提供可能（オプション）

ニワトリ型モノクローナル抗体作製
お預かりした抗原をニワトリに免疫した後、膵臓から抗体遺伝子を単離し、大腸菌で抗体を産生させます。

膵臓から調製した
抗体遺伝子

免疫ニワトリ■マウスの免疫時抗体価
OD
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0

■ウサギの免疫時抗体価

H-No.1
H-No.2
H-No.3
H-No.4
H-No.5

102

103

104
105
Serum Dil.

106

OD
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0

Y-No.1
Y-No.2
Y-No.3

102

103

104
Serum Dil.

105

106

大腸菌に導入必要な抗原量は？
VH

５mg（濃度：
１mg/ｍR以上）です。

VL

抗体は一本鎖モノクローナル抗体ですが、ウエスタンブロッティン

CL

菌株保存期間：5年間

FC

グやELISA、免疫沈降などの実験で、通常の二本鎖のモノクロー
ELISAによる特異性抗体の検出
クローンの選択ナル抗体と同様に使用できますか？
通常の二本鎖のモノクローナル抗体と同様に使用できます。

遺伝子組換え方法を用いて大量生産
3種のモノクロナール抗体を提供

抗体を生産する大腸菌は提供できますか？
申し訳ありませんが、大腸菌は提供できません。大腸菌が生産した抗体を精製してお届けします。

抗体の構造

抗体産生菌株はどれくらい保存してあるのですか？

可変領域（VH、
VL）
はニワトリ型、５年間保存しますので、その期間内であれば、同一クローンの追加

定常領域（ C ）はマウス型である一本 鎖モノクローナル抗 体です 。ウ

抗体作製、精製が可能（オプション）です。

VH

抗体作製に失敗した場合は費用がかかるのですか？

VL

エスタンブロット法やELISA法の二次抗体として抗マウス抗体が使用

基本作業料金として、１０万円請求させて頂きます。ただ、哺乳類

CL

由来の抗原の場合、種が異なる、ニワトリを免疫動物として作製しFCますので、抗体ができる可能性は高くなります。

できます。

抗体遺伝子配列の開示は可能でしょうか？
基本的には開示しませんが、契約に同意いただければ、開示します。

基本作業内容コードNo.

ニワトリ免疫

クローニング（ELISA）

納期

容量

003-10500 ニワトリ型モノクローナル抗体

3ヶ月

3クローン 1,200,000■オプション・他
品 名

納期

容量

希望納入価格（円）−130,000

クローニング（イムノブロッティング）0.5ヶ月

抗体精製（最大3抗体提供）

20

品名

和光純薬時報希望納入価格（円）追加抗体精製0.5ヶ月 1クローン

80,000卵IgY精製

2.5ヶ月

5個分

130,000

ポリクローナル抗体

3ヶ月−

220,000

Vol.72, No.4（2004）

ew Products
特自動核酸抽出システム
QuickGene-800

長

●小型軽量
加圧操作のみ、遠心分離器を使わないコンパクトな卓上自動システム。

従来の約 1／10の厚さ！ 革新的なメンブレンフィルター●簡単便利

あらゆる遺伝子研究へ、DNAそしてRNAの自動抽出を

サンプルをセット、モード選択。あとはスタートスイッチを押すだけ。

●迅速処理
21世紀に入り、ライフサイエンスの世界では、研究から臨床診断の幅広い領域で遺伝子に関わる様々な研究と技術開発がなされています。核酸（DNA， RNA）の抽出は、遺伝子研究を行うために抽出時間は8サンプル同時でわずか6分 ※、小型ながら大量処理も可能。
※DNA全血キット●専用キット避けて通ることのできないプロセスであり、迅速性や簡便性の向上、全血DNA、培養細胞RNAそして組織DNA。必要な試薬がすべて揃う専用

自動化、低コスト化とともに、核酸の純度や収率に改良が求められて抽出キット。

いました。
「QuickGene-800」は、これらの要望にお応えする、富士フイル
ム独自の先進的な高分子製膜技術を駆使した「多孔質メンブレン」
を用いて核酸の抽出を行うシステムです（Fig.1）。
「多孔質メンブレン」
は、核酸以外の成分との相互作用は少なく、選択的に核酸を吸着する表面改質がなされており、80μmと非常に薄いメンブレンにもかかわらず高い収量の核酸を捕捉することができます（Fig.2）。
従来からあった核酸抽出システムでは1,000μm（1mm）という厚みのグラスフィルターを使用することからフィルター中の残留物による純度に課題があり、また遠心分離機が必要でした。しかし、「多孔質メンブレン」を用いることで遠心分離機を不要とし、低圧濾過方式

使用例■抽出 DNA の PCR 例

で容易な抽出が可能となり、高純度、高収率、小型、簡便、迅速

M

1

2

3

全血 200μRから抽出したゲノム DNA

な自動システムが実現できます。
QuickGeneシステムは基礎研究にとどまらず遺伝子診断などの各を用い、p53 exon6領域をターゲットにPCRを行った。

種診断市場向けに発展するとともに、SNPs（ 一塩基多型）解析やマイクロアレイなど、各種診断へ繋げるトータルシステムとしての可能性を持っています。

M： 100bp ladder
1 : ゲノムDNA
10ng/μR
2 : ゲノムDNA
1ng/μR3 : ゲノムDNA
0.1ng/μR

275bp■抽出 RNA の RT-PCR 例
M

1

2

HL60 細胞 1×10 6から抽出したtotal
RNA を用い、β-actin をターゲットに
RT-PCRを行った。
M： 100bp ladder
1 : total RNA
100pg/μR
2 : total RNA
10pg/μR

645bp

Fig.1
コードNo. メーカーコード〈カートリッジ〉

品

名

容量 希望納入価格（円）

QuickGene-800

１台 1,040,000■自動核酸抽出システム
80μm

1
12.5

636-05601
1,000μm

電子顕微鏡による膜の断面写真
50μm
核酸抽出メンブレン ■多孔質メンブレン

50μm■一般的なグラス繊維ー■専用抽出キット633-05611

DB-S

QuickGene DNA whole blood kit S 96回用

33,400630-05621

RC-S

QuickGene RNA cultured cell kit S 96回用

51,400637-05631

DT-S

QuickGene DNA tissue kit S

37,400

96回用

Fig.2 画期的な核酸抽出メンブレン

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）21

ew Products
赤色蛍光タンパク質発現ベクター
J-Red Protein Expression Vector■pJRed-N vecterのマップ

pUC oriMCS

PCMV IE

J-Redは、遺伝子改変操作によりAnthomedusaeクラゲの色素タ
ンパク質を赤色に変えた新規の赤色蛍光タンパク質です。J-Redは、

HSV TK
poly A

他の赤色蛍光タンパク質に見られるような細胞内での凝集などがな
いため、融合タンパク質として有用です。

特

J-Red

pJRed-N
vecter, 4.7kb

Kanr/Neor

SV40
poly A

PSV40e長P

f1 oriSV40ori●真の赤色蛍光である（610nm）●細胞内で凝集しないので融合タグに適している
マルチクローニングサイト
NheⅠ
BglⅡ
SalⅠ
SacⅠ
HindⅢ
EcoRⅠ
GCTA. GCG. CTA. CCG. GAC. TCA. GAT. CTC. GAG. CTC. AAG. CTT. CGA. ATT. CTG. CAG.
XhoⅠ
PstⅠ
Eco47Ⅲ

励起波長（nm）： 584
蛍光波長（nm）： 610
−1

BamHⅠ
AgeⅠ
J-Red
SalⅠ
KpnⅠ
ApaⅠ
TCG. ACG. GTA. CCG. CGG. GCC. CGG. GAT. CCA. CCG. GTC. GCC. ACC. ATG. XXX. XXX
SmaⅠ/XmaⅠ
SacⅡ

−1

ε
（cm ・M ）： 44,000
蛍 光 収 量（φ）： 0.20
コドA

ン ：ヒト型

宿主 ： 哺乳動物

プロモーター/選択マーカー： CMV IE/Kan/Neo
構

造 ：モノマー（ゲル電気泳動で確認）

B
励起スペクトル

Fluorescence200

蛍光スペクトル

150

C

100

EGFP-fibrillarin及びJ-Red-fibrillarin融合タンパク質を発現するHeLa細胞の蛍光
顕微鏡写真
（A）
：EGFP の緑色蛍光シグナル（B）：JRedの赤色蛍光シグナル（C）
（A）
:
と（B）
を重ねた像

50
0
400 450 500 550 600 650 700 750 800

Wavelength, nm■pJRed-C vecterのマップ
HeLa細胞へのJ-Red-actin融合タン
pUC ori

パク質をコードするプラスミドの導入例（一過性発現）PCMV IE

HSV TK
poly A

J-Red

Notice to Purchaser:（ライセンスについて）
Evrogen Fluorescent Protein Products (the Products) are available to:
Not-For-Profit-Entities for non-commercial research use. With purchase of the Products, non-profit entities are granted a worldwide, non-exclusive, royalty-free, limited license to use the Products for non-commercial life science research only. Such license specifically excludes the right to sell or otherwise transfer the Products, its
components or derivatives to third parties. For any other use of the Products pleasecontact Evrogen at license@evrogen.com
For-Profit-Entities for non-commercial or commercial applications under license. For license information please contact Evrogen at license@evrogen.com

pJRed-C
vecter, 4.7kb
SV40
poly A

Kanr/Neor
PSV40eP

MCS

f1 oriSV40
ori

マルチクローニングサイト
J-Red
BglⅡ
SacⅠ
EcoRⅠ
SalⅠ
KpnⅠ
TCC. GGA. CTC. AGA. TCT. CGA. GCT. CAA. GCT. TCG. AAT. TCT. GCA. GTC. GAC. GGT. ACC.
SacⅡ
XhoⅠ
HindⅢ
PstⅠ

ApaⅠ
BamHⅠ
Stops
GCG. GGC. CCG. GGA. TCC. ACC. GGA. TCT. AGA. TAA. CTG. ATC. A
SacⅡ
SmaⅠ/XmaⅠ
XbaⅠ#
BclⅠ#

22

和光純薬時報品

名581-82861 FP701 pJRed-C

コードNo. メーカーコード

Vector20μg

93,000588-82871 FP702 pJRed-N

Vector20μg

93,000Vol.72, No.4（2004）

容 量 希望納入価格（円）ew Products
エンドトキシン測定装置
トキシノメーターET-5000●Windows版ソフトウェア「トキシマスターQC」（日本薬局方１４局、トキシノメーターシリーズは、1985年にエンドトキシンとライセート●WindowsXP採用により、将来的な機能拡張をサポート

FDAガイドライン、
生物学的製剤基準エンドトキシン試験法に対応）を内蔵、高いデータ処理機能を提供
USBコネクタ、LANコネクタを装備し、USB機器接続や将来のネットワーク接続

試薬のゲル化による半定量の方法からエンドトキシン定量化を図る

機能などの拡張機能をサポート

測定装置としてET-201が上市されました。

バーコードリーダー、Part11対応、LANネットワークリモート制御可能

さらにE T - 2 0 8 、 E T - 3 0 1 、 E T - 2 0 0 0 及び全自動 測 定 装 置の●パソコン不要のスタンドアロンシステム

ET-auto3000を日本薬局方エンドトキシン試験法の比濁法測定装●TFTカラー液晶ディスプレー（タッチパネル）の採用による洗練さ置として、また1996年光源に超高輝度青色LEDを採用し、黄色れた操作性を実現

合成基質法試薬にも対応できるようになり比色法の測定装置として●反応試験管セットによる測定の自動スタート

もご愛顧頂いて参りました。

●設定温度を30/37℃切り替え可能

この度、ET-301の後継機としてET-5000を開発しました。

●12mm試験管を利用することにより、マルチテスト、
シングルテストの両方のテストが可能

コードNo.

品

名

容 量 希望納入価格（円）293-43651 トキシノメーターET-5000コントロールモジュール

1台

2,000,000

299-43751 トキシノメーターET-5000 BL2アナリシス-Ｓモジュール

1台

1,800,000

関連商品
コードNo.

※プリンターはオプションです。

品

名容 量 希望納入価格（円）293-41059 トキシノメーターET-2000/Ｊ

特

長●超高輝度青色LEDの採用により比濁法試薬及び黄色発色合成

1台

2,100,000

297-40859 トキシノメーターET-301 BL2アナリシス-Ｓモジュール/Ｊ

1台

1,800,000

293-42051 LS-トキシマスターQC5

1セット

480,000

290-31451 バイオクリーンチップワコー200

100本

2,800

294-31351 バイオクリーンチップワコー1000

100本

2,800

298-32851 バイオクリーンチップワコーエクステンドS

100本

6,000

■エンドトキシンフリーチップ

基質法試薬にも対応●各種微生物細胞壁成分の測定が可能
エンドトキシン、（ 1,3）-β-Ｄ-グルカン、ペプチドグリカン●最大128検体同時測定可能（アナリシスモジュールを４台接続時）

第２０回

講演プログラム「がんの分子病態：新たな制御法の開発に向けて」

開始時間

演

題

所 属

講演者

10：00〜 開催挨拶

和光純薬
阪 大 院 医 金倉

日時：平成16年11月24日（水） 10：00〜17：00

10：05〜 はじめに場

所：千里ライフサイエンスセンター ライフホール（5階）

10：10〜 チロシンキナーゼからのシグナルと細胞がん化 東大医科研 山本

雅

10：50〜 造血シグナルと分子標的治療

阪 大 院 医 金倉譲

11：30〜 細胞周期制御とがん

九大生医研 中山 敬一

大阪府豊中市新千里東町1丁目4番2号 TEL 06ｰ6873ｰ2010

総合企画：大阪大学大学院 医学系研究科
分子病態内科学（血液・腫瘍内科学）教授 金倉 譲 先生
参 加 費：無料
定

員：420名（先着順）

参加申込先：和光純薬工業株式会社 試薬営業本部

12：10〜 （休譲憩）

13：10〜 細胞の接着・運動・増殖の制御機構

阪 大 院 医 高井 義美

13：50〜 膜結合型増殖因子と細胞増殖制御

愛 大 医 東山 繁樹

14：30〜 がんのゲノム異常

東医歯大難研 稲澤 譲治

15：10〜 （コーヒーブレイク）

学術部 ワークショップ係

15：30〜 白血病における転写とクロマチンの制御

国立がんセ研 北林 一生〒540ｰ8605 大阪市中央区道修町三丁目1番2号

16：10〜 がん抑制遺伝子の機能

東大分生研 秋山徹

FAX：06ｰ6201ｰ5964

16：50〜 おわりに

阪 大 院 医 金倉譲

17：00〜 閉会挨拶

和光純薬

TEL：06ｰ6203ｰ1788

E-mail：seminar@wako-chem.co.jp

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

23

398

化 学大家

ジョーゼフ・プリーストリ（1733.3.13〜1804.2.6）
科学史家

島尾

永康

過ごした6年間（1761〜67）で、プリーストリ
は大きく発展した（図3）。語学、近代史、

非国教の牧師・教師

法律、弁論と批評、さらに解剖学までほと

今日ジョーゼフ・プリーストリは酸素を発んど何でも教えた。吃音矯正にも努めた。

見した化学者として知られるが、本来は牧正式に牧師に任命され、教え子の姉メリー・師・教師であり、ルネッサンス人のような広ウイルキンソンと結婚した。妻の実家は18

範な興味をもって、神学、歴史、教育、

世紀イギリス有数の製鉄業者だった。プリー

形而上学、言語、美学、政治、科学に

ストリは教育的業績によってエディンバラ大ついての本、パンフレット、論文など、著学からLL.D（法学博士）を授与され（1764）、作は200篇の多数に上る（うち101篇は科王立協会会員にもなった（ 1766 ）。かれが学論文）。著書の大部分は神学論争である。

考 案した『伝 記 図 表』は、 歴 史 的 人 物の

生前、科学者として大きな名声を博したが、生存期間を１本の横線で表示し、約2000

宗教家としても、政治活動でも有名だった（図

人を幅60センチ、長さ90センチの1枚の紙1 ）。毛織物業者が集中していたヨークシア州リーズの近くで、 祖 父の代からの毛 織物の仕上げ職人の６人の子供の長子としにグラフ化した。これは好評で版を重ねた。
図1. ジョーゼフ・プリーストリ、61歳。
ウィリアム・アートード画、1794。

この時期の最大の業績は、大冊、『電気学の歴史と現状』、2巻、約800ページて生まれた。幼いときは母方の祖母に引きための地 方自治 体 法（ 1 6 6 1 年 制 定 ）と、（ 1767 ）である。原論文にもとづいて書か取られ、６歳で母が亡くなったあとまもなく、非国教徒を中央公職から排除するためのれているので、今なお価値を失わない。地

子供のない父方の伯母の許に送られ、伯審査法（1673年制定）とを制定していたから、方の非国教の牧師・教師が科学について

母が亡くなるまで22年間一緒に暮らした。

非国教徒が宗教的には英国教会に対立し、書いた最初の書物が一挙に名著になった

かれが生涯を通じて権威に服従しなかった

政治的には急進的になるのは当然だった。

のは、次のような事情による。プリーストリのは、実の家族からずっと引き離されてい在学中から三位一体論への懐疑をつのらはよくロンドンへでかけ、そこで当時、電気たことによるとみる人もいる。現に18歳ころ

せ、「いかなる問題であれ、その異端的研究者として最も有名だったベンジャミン・には一家の厳格なカルヴィニズムに反発すな面を見てとることができた」（『回想』、1787）

フランクリンにうまく接触し、さらに電気学者

るようになっていた。伯母の家によく出入り

プリーストリは、生涯を通じてつねに政治的、

ジョン・カントン、ウィリアム・ワトソン、リチャード・していた非国教の牧師たちの神学論議や神学的問題では異端的立場をとり続けた。

プライスと知り合った。かれらはす べて王急進的な政治的見解に親しんだ。イギリス

しかし当の本人は結構魅力的な人柄で、立協会会員で、プライス以外は王立協会

では支配層・上流階級は英国教会に属し、誠実で、真理探究に熱心で、好印象を与えの最高の賞であるコプレイ賞受賞者でもあっ

その他の人々は非国教の諸宗派に属した。

る人物であった。

た。無名の青年プリーストリがこれら一流

18世紀初め、非国教の教会が1000箇所

最初はサフォーク州、ニーダム・マーケットも設立された。伯母はプリーストリに牧師の長老派教会の牧師補として赴任したが、になることを勧め、語学の才能があるかれ

若年の未熟さ、ひどい吃音、そして異端はそのつもりでラテン語、ギリシア語、ヘブ的神学でさんざんな不評を蒙った。ここにライ語を学び、さらにカルデア語、シリア語、

３年過ごした後、ナントウィッチの教会に移っ

アラビア語に及んだ。一時、病気になり志たが、ここではかれの神学はさほど問題に望を変更した時期には、フランス語、イタはならず、ささやかな学校を開いて教師とリア語、高地オランダ語（ドイツ語 ）などのして成功した（1758〜61）。

の人々をどのようにして引きつけたのであろ現代語を独学した。
19歳で非国教のダヴェントリ・アカデミーに入学した。当時の英国の唯二つの大学、
オックスフォードとケンブリジは非国教徒に

電気学史

は門戸を閉ざしていたので、非国教徒は別

これが機縁となって、非国教の学校中にアカデミー（ 大学とは名乗れなかった）をの名門校ウォリントン・アカデミーに招かれて設立し、それらは沈滞していた大学より充実した高等教育をおこない、国教徒の通学も認めていた。ちなみに支 配 層は、 非国教徒を地方自治体の公職から追放する

24

図2. プリーストリの署名。

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

図3. ウォリントン・アカデミーの教師
時代のプリーストリ、30歳ころ。
作者不詳。親友フランクリンの肖像と並んで王立協会に掲げられている。

うか。科学のオリジナル研究を始めたばかりで早くも、この4人の人々の推薦で王立協 会 会員になった。さらに電 気 学 史の執筆の構想をもちかけて、かれらから全面的な後援と助言を獲得したのはプリーストリの伯爵（ホイッグ党の有力政治家ウィリアム・ペッ

統治の原理：多数者の利益と幸福『 電 気 学 史 』の出 版を待たず 、 生まれ

ティ、1782年に首相となる）にプリーストリのパトロンになるよう推 挙した。 伯 爵は承諾しプリーストリも躊躇したのち、住み込みの「学問上のお相手役」となることを受諾し手腕であろう。原稿の一部分が出来上が故郷に近いリーズの牧師となった（ 1767〜

た（ 1773〜80 ）。リーズでの収入の2.5倍るたびに、かれらに批評してもらい、参考73 ）。教師から本職の牧師に復帰したのに当たる年収250ポンド、居宅付。辞職後書や原論文や実験のヒントをもらった。巻である。ここでユニテリアニズムの立場をは年金150ポンドを支給するという好条件だっ

末に参考文献としてギルバートの『磁石論』

明確に打ち出し、宗教と政治の論客となった。金銭と余暇に恵まれこの7年間が化学（1600）から1766年の本まで65冊を年代順ていく。『英文法』、『電気学入門』、『透者プリーストリの最も実り多い時期である。

に列挙し、出版年不明の8冊を別に挙げ

視 画 法』など3 0 冊の著 述があるが、 最も家計が楽になったばかりでなく、科学者としている。そのうち著者が見たものには＊印

注目すべきは、パンフレット、『統治の第一て創造性の頂点に達したときパトロンを得をつけているが、41冊ある。当時としては

原理、および政治的、市民的、宗教的自たのであるから、これほど時宜にかなった

異 例であった。 1 8 世 紀イギリスの電 気 研

由の本性』（ 1768 ）であろう。「いかなる国パトロンとの出会いはなかった。

究についての最も権威ある記述となり、50

家であれその構成員の多数者の利益と幸プリーストリが空 気 化 学（ 気 体 化 学 ）の

年以上にわたって有益なテキストとなった。

福が、国家にかかわるすべての事柄をき研究を始めたのは37歳という遅い時期であ

英語版５版、オランダ語版、フランス語版、める際の基 準となる」というプリーストリのる。しかしその最初の10年間の研究で気

ドイツ語版各１版を出した。各種物質の電言葉は、ジェレミー・ベンサムに影響して、体化学の第一人者となり、その興味は生気伝導性などプリーストリのオリジナル研究「最大多数の最大幸福」という有名なスロー

涯の最後まで続いた。最初の論文、『諸は第2版以後に収録された（図4）。生涯をガンになり（『政治論断片』、
1776）、またトー

種の空気についての観察』（ 1773 ）は古典通じてプリーストリは歴史的手法で知的問

マス・ジェファソンの「アメリカ独立宣言」（1776）

的論文となっている。パリ王立科学アカデミー

題に取り組んだ。電気学史執筆と同じころ、にも影響した。電気学史の成功に気をよくの8人の外国会員の一人にも選出された（図ウォリントン・アカデミーに歴史、政治学、経済学

して、光学史、『視覚、光、色彩の発見5 ）。1772〜75年に8種類の新気体（かれの講義を導入したが、これはオックスフォード

史と現状』（ 1772 ）を出版したが、英独各はgasを用いず、一貫してairを使った）を大 学に経 済 学 教 授 職 が 設けられる6 0 年

１版しか出ず、資料収集の費用さえ回収発見した。現在の表記でいえば、NO 2 、も前だった。27歳年長の、アメリカ植民地

できなかったので個別科学史を書くことを

N２O、HCl、CO、NH３、O２、SO２、SiF４

政庁代表のフランクリンとは終生の友となり、断念した。しかしマッハの光学史が20世である。デーヴィもいうように、「独りでこれ

アメリカ植民地の支持者となった。

紀になって英訳されるまで150年間、英語ほど多くの新しい、珍しい物質を発見したでは唯一の光学史であった。風景画家ター

ものはいない。」

ナーはこの書物から影響を受けたという。

酸化水銀から酸素を遊離した有名な実験は、1774年8月1日、シェルバーン伯の化学の研究
リーズ時代に化学の研究に手を染めたが、そのきっかけは住居の隣がたまたま醸造所だったので、 発 酵で生じるその豊 富な炭
酸ガスを加圧して、「ソーダ水」の製法を発明したことである。その冊子はフランス語に翻訳され、王立協会からはコプレイ賞を授与された。このころクック船長の南海への第 二 回 航 海に同 行してはという話があり、本人と家族への手当てが非常に良かったのでその気になったが、かれの宗教的立場のゆえに不成立となった。子供も3人
図4. 『電気学の歴史と現状。オリジナル実験付き。』、第3版（1775）の扉、第1巻、503頁、第2巻、 375頁。

になり、家計が楽でないのを見た友人プライスが、プリーストリを尊敬していたシェルバーン

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

図5. 化学者として最高の名声を博した
ころのプリーストリ、50歳。
ヘンリ・フューゼリ画、1783。

25

ストリが自分を唯物論者と見なしたとして激

唯物論的形而上学

怒して抗議の手紙を寄せた。その実ボスコ
ヴィッチは英 語が 読めず 、プリーストリの『物質と精神についての論考』、（1777）

著書を読んでいなかった。ともあれ『物質は、プリーストリの哲学の主著である（図7）。

と精神についての論考』は広く物議をかもし、人間は肉体と精神からなり、物質である肉プリーストリは唯物論者、無神論者とごう

体は滅びても非物質である精神または霊魂

ごうたる非難を浴びた。シェルバーンとのは不滅であるという古来の多くの哲学を否関係もこのころ冷却したので辞職した。プリー

定して、プリーストリは思考や感覚にかか

ストリには上流社会への違和感もあった。

わる精神は脳の機能であり、人間はすべ
図6.

プリーストリの実験室。暖炉で加熱した固形物に銃身を挿入し、抽出した気体を、水銀を満たした盆に倒置した円筒に導く。
左側のＵ字管で気体中の放電火花の実験をした。

て物質であり、肉体の死によって人間は全的に死滅するという、徹底した唯物論を展開した。その際、物質を構成するのは、従来の堅い粒子の原子論ではなく、引力

生涯の最良の歳月
義兄の勧めでバーミンガムに転居した。

と斥力の中心である、非物質的な、新し

そこで過ごした最初の10年（ 1781〜91 ）はいボスコヴィッチ原子論を援用した。唯物プリーストリの生涯で最も静穏な日々だった。

トリの実験室でおこなわれた（ 図6 ）。しか論なら無神論につながるのが普通だが、いわば嵐の前の静けさだった。その教会

しプリーストリはそれを以 前に発 見した笑

プリーストリはそれと両立しそうもないキリス

はイギリスでも最も神学的にリベラルな教会と見たから、この段 階ではまだ気（ N２O ）ト教とを結合している。霊魂不滅説はもともの一つだったから居心地が良かった。まも酸素の発見とはいえない。10月にパリでラヴォと異教の思想体系の一部分だったのがキなく入 会したルナー協 会はわずか 1 4 名の夏の住居であるカーンの邸宅内のプリース

ワジエに会ったとき、研究を秘密にしない

リスト教に持ち込まれ、それによってキリス会 員からなるが 、マシュー・ボールトン、

主義のプリーストリは、自分の実験を洗い

ト教の改悪が生じたとプリーストリは見る。

イラズマス・ダーウィン、ジェームズ・ワット、

ざらい話したので、ラヴォワジエは11月に唯物論の立場にたてば、真正のキリスト教、

ジョサイア・ウェッジウッドなど、いずれも錚々た

それを追試したが、発生したのは普通のすなわちユニテリアニズムになるというのでる地方の知識人、科学者、産業家である。

空気であると見た。翌年3月、プリーストリ

ある。精神は肉体とともに滅びるとした一プリーストリはかれらから尊敬され、知的には再び同じ実験をおこない、今度は著しく方で、最後の審判の日における万人の復も経済的にも大きい支援を受けた。バーミ

呼吸と燃焼を助ける新気体であると認め、活というキリスト教の教義を信奉していたか

ンガム時代のかれの科学機器の収集は当ラヴォワジエの所見を批判した。この段階

ら、 唯 物 論と信 仰を両 立させた奇 妙な著

時の世界の最良のものとなっていた。ラヴォ

で酸素を発見したといえるが、理論好みで作になっている。しかしクロアチア人でイエ

ワジエは財産家である上に莫大な収入のないプリーストリはその発見の意義を理解

ズス会士、科学者ボスコヴィッチは、プリー

ある総括徴税請負人だったから、いくらでせず、それをフロギストン説で解釈した。

も思いのままに高価な実験装置を揃えるこ

新気体を「酸素」と命名し、燃焼と酸生成とができたが、プリーストリのような中流下の理論の中心に位置づけて、化学の新た層階級出身の牧師にとって、篤志家の寄な体系を創り出したのはラヴォワジエである。

付なしには研究は不可能だった。義兄の理論的関心の欠如がプリーストリに自分の製鉄業者から1万ポンドの寄贈を受けたほか、

発 見を理 解させなかったとすれば、 理 論

シェルバーン伯の許にいたときは年額40ポ

的明晰さがラヴォワジエに発見をさせなかっンドの研究費が与えられたが、それ以後も、た。かれに新事実を教えたのはプリースト

毎年、一定額の援助をしてくれる人々がおリである。近代化学の誕生にはこの二人り、『回想』では二十数名の名前を挙げてのいずれも欠かせない。プリーストリはまたいる。ウェッジウッドはそれ以外にも陶製の植物が光合成によって酸素を発生させるこ

レトルトや管を提供したし、直径16インチのと、動物の呼吸に酸素が不可欠であること

大レンズを寄付した人もいる。プリーストリをも証明した。

は寄付集めに熱心だったと批判されてもいる。
この時期、化学研究は進まず、ラヴォワジエとフランス化 学 者に対 抗してフロギストン
図7. 『物質と精神についての論考』、（1777）の扉。

26

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）

説を擁護する立場になっていた。一方、神学論争のほうは一層活発になった。

ユニテリアニズムの唱道
イタリアのレリオ・ソッチーニとファウスト・
ソッチーニが16世紀に創始した教派は、キリスト教正統派教義の中心である三位一体論に反対して、キリストは神ではなく人間であるとし、聖書は教会の権威によらず理性によって解釈すべきであり、また教会と国家の結びつきを認めず、国家の起こす
ストリはリーズの牧師時代にこの立場に立プリーストリ家を破壊するバーミンガ
ムの暴徒。現場に居合わせた画家が描いたもの。

つことを明確に表明した。当時はまだソッチーニ

1791年７月14日、フランス革命２周年を祝う

戦争には絶対反対の立場を貫いた。プリー

図8.

図9. ジョーゼフ・プリーストリ。オザイアス・
ハンフリ画、制作年不詳。18世紀の風習によりプリーストリは大抵かつらをつけていた。アメリカに移ってかつらを外した。

派と呼ばれていたが、のちにユニテリアニ

支 持 者のパーティを襲い、プリーストリのズムと呼ばれる教派になった。プリーストリ

教会、実験室、居宅を襲撃して放火し、はバーミンガム時 代には、 得 意の歴 史 的論文、書籍、実験器具のほとんどを破壊の目で見られ、外国人法を適用して国外手法を用いて、『キリスト教改悪史』、2巻、した（ 図8 ）。７月14日の夜から17日の夜ま退去させられる恐れさえあった。永年の友（1782）
を書き、三位一体論、処女懐胎、で続いたこの暴 動は、「 国 教 会と国 王の人で、しばしば文通もしていたジェファソン

原罪などキリスト教の基本的教義のほとん暴動」と呼ばれた。一家は着のみ着のままが大統領に就任したとき（ 1801 ）、生涯でどは改悪であるとする見解を述べた。これ

ロンドンに移ったが、ロンドンでも王立協会

初めて政府が自分に友好的な国に住むこは1785年に焚書処分になった。しかしさら会員のほとんどが、宗教的、政治的理由とになると述懐した。ノーサンバーランド在に『イエス・キリストについての初期の見解

でプリーストリを避けた。息子たちは就職

住10年間に神学書12冊、化学論文40報、の歴史』、4巻、（1786）を書いた。プリー

できなくなったので、アメリカへ移住した。

パンフ3冊を出し、アメリカ最初のユニテリ

ストリに宗教的、政治的、知的理想を体

プリーストリは自宅と実験室の損害賠償とし

アン教 会の一つを設 立した。 妻と末 子に現した人物を見ていた詩人コールリッジにて約4085ポンドを申し立て、その約半額を先立たれ、かれ自身も食道に障害を生じて、よれば、イギリスのユニテリアニズムを創始取り戻した。

固形物を嚥下できなくなり、苦しい病床でしたのはプリーストリであった。

最後まで知的活動を続けた（図9）。

アメリカ移住国教会と国王の暴動

プリーストリは大科学者のアメリカ移住の

フランス革命がおこった1789年から英国第一号となった（ 1794 ）。親友フランクリン

国会の内外で審査法と地方自治体法問題

は4年前に亡くなっていたが、アメリカの学がやかましく論じられ、プリーストリはこれ

界はかれを歓迎し、ペンシルヴァニア大学

らの法律の撤回を求める非国教徒の指導

化 学 教 授の地 位の提 供と、アメリカ哲 学者となった。このため全 国の国 教 会の牧会会長への就任を要請した。プリーストリ

師から攻撃され、国会はプリーストリを危はいずれも断り、サスケハナ河を５日間上険人物とした。かつての友人エドマンド・バーク

流にさかのぼったノーサンバーランドに落ちが非国教徒攻撃の指導者となった。プリー

着いた。かれの息子が契約で取得していストリはフランス革命を擁護するパンフレットた70万エーカーの土地に、プリーストリを（ 1791 ）を書き、フランス革命はすべての首長とするイギリス人非国教徒の入植地を地 上の政 体の崩 壊の始まりであり、 神のつくることになっていた。コールリッジらはそ国の到来を予告するものとした。フランス

こに万民平等社会（ パンティソクラシー）の革命に対してイギリスには政治的反動がお実現を夢見ていた。しかしアメリカ人は想こっていたから、かれは一層の敵意を受け像したほどリベラルでもなければ、開明的た。

でもなかった。アダムズ大統領時代には、

市 の 権 力 者たちが 扇 動した暴 徒 が 、〔参考文献〕
J. Linsay ed., Autobiography of Joseph Priestley,
Adams & Dart,（1970）. ; R.E.Schofield ed., A
Scientific Autobiography of Joseph Priestley,
The MIT Press,（1966）. ; J.Priestley, The History and Present State of Electricity, 2 vols.,
1767, Johnson Reprint,（1966）. ; J.Priestley, Experiments and Observations on Different Kinds
of Air, Vol.II,（1775）. ; J.Priestley, Disquisitions
relating Matter and Spirit, London, 1777, Arno
Press,（1975）. ; B.Willey, The 18th Century Background, Chatto & Windus,（1940）.

プリーストリは宗教的、政治的理由で疑惑

和光純薬時報Vol.72, No.4（2004）27

ポリアクリルアミドプレキャストゲル
SuperSepTM System
SuperSepTM Systemは、ポリアクリルアミドゲル「スーパーセップTM」と専用泳動槽「スーパーセパレーターTM」を中心とした電気泳動システムです。

長スーパーセップTM

スーパーセパレーターTM●保存安定性、再現性に優れている。

●差し込むだけで2枚のゲルを泳動できる。

●ウェル容積が大きい。

●付属の白色アクリル板を反対側にセットすること●ウエスタンブロッティングにおいて、タンパク質

Vol.72 No.4

特により、泳動状況が鮮明に確認できる。

バンドのPVD膜への転写効率が優れている。

仕様

プレートサイズ：100（ H）
×100（ W）
×3（ T）mm

ゲルサイズ：85（ H）
×90（ W）
×1（ T）mm

ウェル容積：35μr（12well）, 25μr
（17well）

泳動例■タンパク質のSDS-PAGE（CBB染色）■核酸の電気泳動（臭化エチジウム染色）

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
分子量

（bp）
311
200
151

200k
116k

（bp）
100
80
60
50
40

100
66k
42k
30k

30
17k
10k

20

ゲル：SuperSepTM 5-20%，
12well［コードNo.194-12961］
サンプルバッファー：Sample Buffer Soln（×. 2、2-ME＋）［コードNo.196-11022］
泳動バッファー：Running Buffer Soln.（×10）［コードNo.184-01291］
染色：Quick CBB［コードNo.299-50101］
サンプル：タンパク質分子量マーカー

コードNo.

192-12901
199-12911
196-12921
193-12931
190-12941
197-12951
194-13061
191-13071
194-12961
191-12971
198-12981
195-12991
190-13301
197-13291
190-13421

品

名SuperSepTM7.5%,12well
SuperSepTM7.5%,17well
SuperSepTM10%,12well
SuperSepTM10%,17well
SuperSepTM12.5%,12well
SuperSepTM12.5%,17well
SuperSepTM15%,12well
SuperSepTM15%,17well
SuperSepTM5-20%,12well
SuperSepTM5-20%,17well
SuperSepTM10-20%,12well
SuperSepTM10-20%,17well
SuperSepTM12.5%, 2D
SuperSepTM5-20%, 2D
SuperSeparatorTM（簡易泳動槽）

濃縮ゲル

5%
5%
5%
5%
−
−
−
−
−

ゲル：SuperSepTM15%，
12well［コードNo.194-13061］
サンプルバッファー：5mmol/RTris（pH 7.9）, 1mmol/REDTA,

30% Sucrose, 0.004% BPB
泳動バッファー：0.025mol/RTris, 1.92mol/RGlycine
染色：臭化エチジウム
サンプル：DNAマーカー

分画分子量範囲（核酸のbp）

規 格

電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
20,000〜130,000（50〜500）
電気泳動用
電気泳動用
14,000〜80,000（30〜300）
電気泳動用
電気泳動用
6,000〜60,000（20〜300）
電気泳動用
電気泳動用
10,000〜200,000（50〜750）
電気泳動用
電気泳動用
10,000〜130,000（50〜500）
電気泳動用
14,000〜 80,000（30〜300） 電気泳動用
10,000〜200,000（50〜750） 電気泳動用
電気泳動用−

40,000〜200,000（100〜2,000）

容 量

希望納入価格（円）

10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
10枚
1セット

12,00012,00012,00012,00012,00012,00018,00018,00012,00012,00012,00012,00018,00018,00038,000

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol.72 No.4

28

２００４年10月１５日 発行
発行責任者 松田知憲
編集責任者 大西礼子
発 行 所 和光純薬工業株式会社
〒５
４
０-８
６
０
５ 大阪市中央区道修町三丁目１番２号
TEL.０
６-６
２
０
３-３
７
４
１（代表）
URL http://www.wako-chem.co.jp
印 刷 所 株式会社 林欧文堂

●和光純薬時報に対するご意見・ご感想はこちらまでお寄せ下さい。
E-mail oonishi.reiko@wako-chem.co.jp●製品に対するお問合せはこちらまでお寄せ下さい。
フリーダイヤル ０１
２
０ｰ０
５
２ｰ０
９
９
フリーファックス ０１
２
０ｰ０
５
２ｰ８
０
６
E-mail labchem-tec@wako-chem.co.jp