〔総説〕「再生医療研究のための細胞起源同定システム」

日下部

守昭 ……… 2「フェニルプロピオン酸スキャッホールドを用いた核内受容体 PPAR アゴニストの創製」

宮地

弘幸 ……… 14〈生薬のはなし〉「ガジュツの類」

木村

孟淳 ……… 12〈テクニカルレポート〉「フライ油およびフライ食品用カルボニル価測定法の開発」

遠藤

泰志 ……… 6「抗 Argonaute 抗体を用いた microRNA 研究ツールの紹介」
西部

隆宏、請川

亮、林田

幸信、黒川

勉 ……… 8島尾

永康 ……… 28〔化学大家〕「ルイ・パストゥール」〔製品紹介〕
有機合成

細胞生物・生化学

超脱水溶媒シリーズ …………………………………… 17

抗 CSA，モノクローナル抗体 …………………………… 5

パラジウム - 活性炭素ジフェニルスルフィド複合体 … 18

PPARα/δ/γアゴニスト「TIPP-703」 ……………… 16

シンコニジン修飾パラジウム - 活性炭素 …………… 19

骨吸収阻害剤「アレンドロン酸ナトリウム三水和物」、

環境・分析「リセドロン酸ナトリウム n 水和物」…………………… 21

カルボニル価測定用「1- ブタノール」 …………………

7

抗マウス Sema4A，モノクローナル抗体、生薬試験用試薬 クルクミン類 ………………………… 13

抗マウス Sema4D/CD100，モノクローナル抗体 … 22

TRM（Traceable Reference Material） …………… 19

イオンチャンネル作用物質 ……………………………… 23

プレセップ ® ポリキレート ………………………………… 20

α-マンゴスチン ………………………………………… 23

食品分析用標準品 ……………………………………… 21

MALDI-MS 用キャリブラント …………………………… 24

トランス脂肪酸…………………………………………… 32

高純度マトリックス、ゲル内消化酵素、MS 用染色キット …… 25

遺 伝 子

老人斑選択的蛍光プローブ「BF-168」、

microRNA 研究 関連製品 …………………………… 11

神経原線維変化選択的蛍光プローブ「BF-170」 … 26

5- フルオロオロチン酸 DMSO 溶液 …………………… 27
エチブロデストロイヤー…………………………………… 27〔お知らせ〕
試作品のご案内『尿素入り変性ポリアクリルアミドゲル』… 26

1

R

esearch
再生医療研究のための細胞起源同定システム

1 はじめに

東京大学大学院

系統について紹介したい。

農学生命科学研究科

日下部

守昭

Biﬂorus Agglutinin）反応性分子をマーカーにして小腸のキメリズムを解析

実験用マウスの系統特異的遺伝マーカーによる幹細胞の研究

リプト底部に存在する一つの幹細胞器の機能単位である上皮細胞とその周臓器の生理学的且つ形態学的な恒常る。 そ の 他 の 細 胞 マ ー カ ー と し て、

囲間質細胞の細胞間相互作用は重要な性のためには、組織幹細胞を中心とし

β - ガラクトシダーゼや GFP（green

役割を果たしている。特に、発生過程

た細胞増殖単位による細胞再生系が重ﬂuorescent protein）遺伝子を導入しにおける細胞の増殖・分化、がんの浸要である。幹細胞の非対称細胞分裂にたトランスジェニックマウスなどが開潤・転移や、創傷治癒過程組織におけ

よって、組織には新しい細胞が供給さ発され利用されている。しかしながる遺伝子発現調節は、その細胞を取りれ組織の特異形態と機能が維持されてら、導入された遺伝子の発現が、何ら巻く組織微小環境（ニッチ）によっている。この時、この幹細胞から供給さかの理由で不安定となり、細胞内で蛋調整されていることは周知の事実であれる細胞の全てが同じ遺伝マーカーを白は発現するが GFP の蛍光の消失やる。また、再生医療において ES 細胞、発現すれば幹細胞からの細胞系譜をガラクトシダーゼ酵素活性の消失が起iPS 細胞や骨髄間葉系幹細胞などを分明らかにすることができる。Schmidt

こるケースもある。この問題解決のた化させた細胞を用いて臓器を形成させら 12） および Ponder ら 13） は、遺伝的

め、βガラクトシダーゼや GFP に対生体に移植した場合、移植された細胞に独立した細胞によって構成されるキする抗体を用いた免疫組織化学によっは、生体内で安定した臓器として存在

メラマウスの小腸を、系統によって発てトランスジェニックマウス由来細胞する必要がある。またこの時、移植組

現 の 異 な る DBA レ ク チ ン（Dolichosの同定が行われる場合もある。また、多細胞生物における組織機能の恒常性（ホメオスタシス）のために、各臓織が生着して組織として機能しているのか、残存したホストの組織が移植組
織の組織微小環境を利用して再生したのかなどを明確にする必要がある。その為、幹細胞から分化誘導した細胞が、生体内でどのような状態で存在しているかを、組織学的に詳細に解析することが重要である。

2した。その結果、各クリプトは、クに由来していることを報告してい表１．細胞同定マーカーとしての基準
1. 標的分子は、細胞内に限局しており、分泌されない。
2. 細胞自律的なものであり、隣接する細胞には移行しないし、影響しない。
3. 最初に発現した細胞が増殖した後も全ての細胞に安定して発現している。
4. 発生過程を通して体を構成する全ての細胞に発現している。
5. 組織レベルで容易に検出できる。
6. マウス系統間で遺伝的バリアントが存在する。
7. 発生過程を通して細胞分化や細胞混成に影響しない。

筆者は、以前より発生初期の臓器原基上皮細胞の分化は、それを取り巻く間充織に依存しており、組織微小環境が変わるとその上皮の予定運命が変わ1）ることを示してきた 。その際、分化誘導された細胞の起源を同定する必要があったため、マウス系統特異抗原を遺伝マーカーとして用いることのできる細胞起源同定法を確立して、分化誘導された上皮細胞の起源を同定してきた。更に、この解析系をキメラマウスに応用して、組織幹細胞を中心とした細胞増殖単位の解析 2）やミュータント
マウスと正常マウス間キメラマウスによる遺伝子発現のエピジェネティクス研究を行ってきた 3-11）。本稿では、筆者らが開発した CSA 抗原に対する抗体を用いた細胞起源同定法とこの遺伝マーカーを持つコンジェニックマウス

2

図１．抗 CSA 抗体による細胞の免疫染色像
抗 ComplexⅡ抗体（左下図）と抗 CSA 抗体（左上図）による二重染色によって、CSA 分子は細胞内のミトコンドリアに局在していることが示された。また、キメラマウス尾の線維芽細胞の初代培養では 2 系統の細胞が混在していることが分かる（右図）。

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

図２．抗菌性ペプチド由来の抗 HIV 活性ペプチドとその関連誘導体

雄 マ ウ ス の 特 徴 で あ るY染 色 体 をマーカーにしている報告もなされているが、雌雄の細胞が個体内で共存する
ことで、性ホルモンへの応答の違いが細胞の挙動に影響することは十分に考えられる。
筆者らは、表１に示す基準を満たすものとして抗 CSA 抗体を用いた細胞起源同定法を開発した 1, 2）。CSA（C3H
Speciﬁc Antigen、 現 在 の Hspa9 遺 伝子）は、C3H 系統マウスで発見したマウス系統特異抗原である 14, 15）。この遺伝子は近交系マウスにおいて 2 つの図２．小腸の形態形成過程におけるキメリズムの変化
胎生14日の小腸の上皮（A）は、まだ絨毛が形成されていないが、胎生17日（B）になるとクリプ
トと絨毛が形成される。しかし、
キメリズムをみると、明確な細胞増殖単位の形成は観察できない。
生後20日目（C）では、成獣と同じような形態形成が見られるが、キメリックなクリプトも観察さ
れる
（赤矢印）
。成獣
（D-F）
になると単一幹細胞からの細胞供給で形成されたクリプト（E）とその細胞の流れで形成されている絨毛（D）が観察できる。縦切り切片（F）
ではクリプトから絨毛への細胞の流れが観察できる。

バリアントが存在することが分かっている。抗原蛋白は、ミトコンドリアに存在（図１）するが、遺伝子はゲノム上に存在し、全ての細胞で発現が認められている。今までにこの抗 CSA 抗体を用いて以下の研究を行ってきた。
まず、胎仔顎下腺間充織が下垂体原基上皮の分化予定運命を変えて顎下腺様の組織へと分化誘導した実験で、分化した細胞は間違いなく下垂体由来の細胞であることを証明した 1）。また、キメラマウスを用いた細胞系譜および細胞増殖単位の解析 2）を行い組織幹細胞による増殖パターンを明らかにした。
例えば、図２に示すように、成獣になるとクリプト毎に単一の幹細胞からの図３．リーラーマウス（陽性） BALB/cA（陰性）キメラマウス小脳の免疫染色による細胞構成の解析

細胞供給によって組織形態を維持している様であるが、小腸組織の形態形成

リーラーマウス 正常マウス間キメラ小脳の隣接切片を、抗IP3受容体抗体（左）と抗CSA抗体によって免疫染色したものである。小脳の層構造は正常に形成されているが、リーラー由来のCSA陽性細胞（長矢印）が、正常由来の陰性細胞（短矢印）と共に正常な位置に配列している。
（本写真は、参考文献9より転載）時において幹細胞を中心とした細胞の広がりに一定の法則は見出されない。
また、発育途中（生後 20 日）ではキ
メリックなクリプトが存在すること細胞も少数の正常グリア細胞の支持に

胞などの幹細胞を用いた臨床応用におは、大変興味深い所見である。更に、

よって正常な小脳の層構造を形成する

いて必要なことは、移植した細胞の生各種ミュータントマウスと正常マウス

ことを示した。その他、がんにおける体内における挙動を詳細に把握するこ間のキメラマウスの解析から、遺伝子クローナリティ研究 16-22） や、再生医とであり、また、それらの組織が、一発現には、細胞自律型と微小環境依存療研究として、移植されたマウス新生時的に働くだけでなく、長期に渡って型があることを証明した 3-11）。例えば、仔肝細胞がホスト肝臓に生着すること

生体内に存在し機能し続けることが出

図３に示すように、神経異常マウスのリーラーマウスを示してきた

正常マウスキメラの小脳は正常形態形成を行い、行動も正常化する。そこで抗 CSA 抗体によって小脳のキメリズムを解析したところ、リーラーマウス由来のプルキンエ

323-25）。

今後の再生医療に求められることES 細胞、iPS 細胞や骨髄間葉系幹細和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

来ることを、組織学的に明確に証明することであると考える。

4 本システムの応用分野について
本システムは、表２にまとめたよう

3

化した上皮系および間葉系細胞が陽性

表２．本システムの応用分野
研究分野

用 途

研 究

再生医療

再生医療基礎研究における移植細胞の組織構造と起源同定が観察できます。

◆骨髄未分化間充織細胞の各種細胞への分化研究◆神経幹細胞の移植研究の解析◆未分化胚性幹細胞の分化誘導研究

発生生物学

細胞系譜研究における細胞起源の同定ができます。

◆キメラマウスを用いた遺伝子機能発現評価法◆組織・器官形成時における細胞再生系研究

がん研究

がんの浸潤・転移におけるがん組
織と正常組織間の相互作用の解析に用いることができます。

◆発がんにおける細胞間相互作用の研究◆がん組織のクローン性研究◆がん幹細胞の研究に染色されている。
5 − 3．BALB/cA-CSA コンジェニック
マウスおよび C57BL/6N-CSA
コンジェニックマウス
将 来 的 な 再 生 移 植 医 療 に 向 け て、
更に精力的な個体レベルでの研究が重要である。そのため、遺伝背景をな分野での利用が考えられる。細胞分白（Hspa9）であり、例えば C3H 系統

均一にした近交系マウスを用いた研化に関連する発生生物学やがん研究のと DBA1 系統マウス系統の持つ一つの究が必要である。BALB/cA-CSA（また他、再生医療研究における個体レベル

バリアントが抗 CSA 抗体に認識されるは C57BL/6N-CSA）コンジェニックマウ

での研究に用いることのできるシステ抗原である。また、細胞分化やがん化ス系統は、上記抗体が認識する C3H タ

ムである。

において発現が消失することはない。

イプのバリアント遺伝子を戻し交配に更に、高価な遺伝子組換え実験を行う

よって導入して樹立したコンジェニッ

必要も無く、組織学レベルで安定した

ク系統である。このマウスは、繁殖率

解析結果を得ることができる。

も良く、母系統であるBALB/cA（また5 本システムの構成
本細胞起源同定システムは、認識用

は C57BL/6N）系統との間では、特別

抗体、ES 細胞および各コンジェニッ

5 − 2．陽性バリアントを発現する系な処理を施すことなく相互の組織・細ク系統マウスからなり、自由な組み合

統由来の胚性幹細胞胞の移植が可能である。また、BALB/

わせで多様な研究に用いることができ

抗体陽性バリアントを発現している

cA-CSA コンジェニック系統にヌード遺る。以下に各要素について簡単に説明

近交系マウス系統から樹立した ES 細伝 子 を 導 入 し た BALB/cA-CSA・nu ダ ブする。

胞株（C3H 系統および DBA1 系統由来

ルコンジェニックマウスも樹立済みでES 細胞）である（図４）。本細胞を用あり、ヒト細胞の移植と細胞間相互作

いたキメラマウスからはこの細胞由来用の研究が可能となっている。

5 − 1．マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体（抗 CSA 抗体）の個体が誕生しており、本 ES 細胞は5 − 4．C3H/HeN-BaCSA コンジェニッ

本抗体は、ES 細胞、iPS 細胞や骨髄生殖細胞に分化して個体形成に至るこ

間葉系幹細胞などを用いた再生医療にとは分かっている。また、この細胞株関する基礎的研究に用いることがでは遺伝的に近交系より樹立されている

この系統は、本来抗体陽性系統でき、移植した細胞由来の全ての細胞種

ので、均一な遺伝背景を持っている。

あった C3H 系統に BALB/cA の CSA バ

をホスト組織内で同定できる。本抗体

図４は、この ES 細胞を移植して分化

リアント遺伝子（仮称 BaCSA）を戻の認識する抗原は、全マウス系統の全させたときの各組織を抗 CSA 抗体にし交配によって導入したマウス系統で組織で常時発現している熱ショック蛋

よって免疫染色した組織像である。分

あ る。 こ の マ ウ ス へ は、C3H 由 来 のクマウス

ES 細胞を移植した場合、同系コンジェ
ニックマウスであるので移植片の免疫的拒絶は起こらず、長期に渡って移植細胞が生体内に生存できる。

6 おわりに
本稿では、筆者が長年取り組んできた細胞間相互作用の研究のためのツールとして「細胞起源同定法」を紹介さ

図４．ES 細胞を移植して分化させた組織の抗 CSA 免疫染色像
ES 細胞は、抗 CSA 抗体で陽性に染色されるが、BALB/c 由来のフィーダー細胞は、陰性であっ
た（A）。
抗 CSA 抗体によって ES 細胞由来の細胞が陽性に染色されているのが分かる。上皮細胞も間質
細胞も陽性に染色されている
（B,C）
。

4

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

せていただいた。現在では、GFP 発現細胞や GFP トランスジェニックマウス
を用いた研究が多いが、上述のように、

今後の再生医療では、ES 細胞、iPS 細Flechon, J.-E. and Kusakabe, M. : Int. J. Dev.
Biol ., 39, 645-652（1995）.
8）Kitani, H., Takagi, N., Atsumi, T., Kawakura,K., Imamura, K., Goto, S., Kusakabe, M. and
Fukuta, K. : Zoological Science , 13, 5865-5871（1996）.
9）Yoshiki, A. and Kusakabe, M. : Int. J. Dev.
Biol ., 42, 695-700（1998）.
10）Lipschutz, J. H., Fukami, H., Yamamoto, M.,
Tatematsu, M., Sugimura, Y., Kusakabe, M.
and Cunha, G. : Cells Tissues Organs , 165（2）,57-66（1999）.
11）Noguchi, M., Niwa, K., Kasai, T., Tsunesada,M., Sasaoka, Y. and Kusakabe, M. : J.
Reprod. Develop ., 4, 71-72（2000）.
12）Schmidt, G. H., Wilkinson, M. M. and, 425-429,（1985）.
Ponder, B. A. : Cell , 40（2）13）Ponder, B. A., Schmidt, G. H., Wilkinson, M.
M., Wood, M. J., Monk, M. and Reid, A. :Nature , 313（6004）,689-691（1985）.
14）Michikawa, Y., Baba, T., Arai, Y., Sakakura,T. and Kusakabe, M. : BBRC , 196, 223-232（1993）.
15）Michikawa, Y., Baba, T., Arai, Y., Sakakura,T. and Kusakabe, M. : FEBS letter , 336, 2733（1993）.
16）Lee, G. H., Nomura, K., Kanda, H., Kusakabe,M., Yoshiki, A., Sakakura, T. and Kitagawa,T. : Cancer Res ., 51, 3257-3260（1991）.
17）Tatematsu, M., Fukami, H., Yamamoto, M.,
Kakanishi, H., Masui, T., Kusakabe, M. and
Sakakura, T. : Cancer Letters , 83, 37-42（1994）.
18）立松正衞、稲田健一、中西速夫、増井恒夫、
日下部守昭：消化器癌，6（1）,31-35（1996）.
19）Tatematsu, M., Masui, T., Fukami, H.,
Yamamoto, M., Nakanishi, H., Inada, K.,
Kusakabe, M. and Sakakura, T. : Int. J.

胞や骨髄間葉系幹細胞などの幹細胞を用いた臨床応用において必要なこととして、移植した細胞の生体内における挙動を詳細に把握することであり、また、それらの組織が、一時的に働くだ
けでなく、長期に渡って生体内に存在し機能し続けることが出来ることを組織学的に証明することと考える。その意味で本同定法が、コンジェニックマ
ウスを含めて広く利用されることを期待したい。
〔参考文献〕
1）Kusakabe, M., Sakakura, T., Sano, M. andNishizuka, Y. : Devel. Biol ., 110, 382-391（1985）.
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M. : Development , 113, 1293-1304（1991）.
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6）Dvorak, P., Dvorakova, D., Yoshiki, A.,
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7）Dvorak, P., Yoshiki, A., Dvorakova, D.,

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20）Tatematsu, M., Masui, T., Fukami, H.,
Yamamoto, M., Nakanishi, H., Inada, K.,
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21）Tsukamoto, T., Inada, K., Fukami, H.,
Yamamoto, M., Tanaka, H., Kusakabe, M.,
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Kusakabe, M. and Tatematsu, M. : Cancer
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23）Taniguchi, H., Kondo, R., Suzuki, A., Zheng,Y., Ito, S., Takada, Y., Fukunaga, K., Seino,K., Yuzawa, K., Otsuka, M., Fukao, K.,
Yoshiki, A., Kusakabe, M. and Nakauchi, H. :Transplant Proc ., 31（1-2）,454（1999）.
24）Suzuki, A., Zheng, Y. W., Kondo, R.,
Kusakabe, M., Takada, Y., Fukao, K.,
Nakauchi, H. and Taniguchi, H. : Hepatology ,32（6）,1230-1239（2000）.
25）Suzuki, A., Taniguchi, H., Zheng, Y. W.,
Takada, Y., Fukunaga, K., Seino, K.,
Yanawa, K., Otsuka, M., Yoshiki, A.,
Kusakabe, M., Fukao, K. and Nakauchi, H. :Transplant Proc ., 32（7）,2370-2371（2000）.

P roducts
再生医療分野の研究に抗 CSA, モノクローナル抗体
特異性：Hspa9 の C3H バリアントを認識する。

抗 原：C3H/HeN 筋肉粗抽出液の GPI 活性分画
精 製：腹水を Protein G アフィニティークロマトグラ

C3H/He 及び C3H を遺伝背景とするコンジェニッ
クマウス、DBA1 及び SM/J が陽性系統である。

フィーによって精製
クローンNo.：17-6C3

また、BALB/cA、C57BL/6 の CSA コンジェニッ

サブクラス：IgGγ1･κ
形 状：PBS（-）（pH 7.2）and 0.1% Sodium Azide

クも陽性系統である。
濃 度：1mg/mℓ
使用濃度：免疫組織染色 ･･･1 〜 5μg/mℓ

コード No.
015-21791

品

名

規

格

免疫化学用

Anti CSA, Monoclonal Antibody

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

容

量

100μg

希望納入価格（円）54,0005

echnical Report
フライ油およびフライ食品用カルボニル価測定法の開発
東京工科大学応用生物学部

1 はじめに泰志

13 - 2003 4）に採用されているが、そのル価を測定するには、まずエーテルや原理は、従来法と変わりはない（図クロロホルム / メタノール混合液で油

１）。油脂中に含まれるカルボニル化

脂を抽出し、溶剤を濃縮させて得た油

フライ調理は、180℃付近の高温で合物を酸性下で 2 , 4 - ジニトロフェニ

脂についてカルボニル価を測定する。

加熱するため短時間で調理ができるこ

ルヒドラジンと反応させた後、生じた

そのため、油脂の抽出・濃縮操作に時と、並びに油脂が熱媒体として作用す

2 , 4 - ジニトロフェニルヒドラゾンを、間がかかり、多検体の測定が困難でるため局所的な過熱がない等の利点を塩基性下でキノイドイオンの形態にしあった。そこで筆者らは、抽出溶剤に有することから、優れた調理法として、て、可視部（420 nm）の吸収を測定

測定溶剤と同じ溶剤を用いた抽出・測ファーストフードやそうざいをはじめするものである。従来法は、ベンゼン

定一体型測定法の開発を試みた。

加工食品の製造に良く利用されてい中でこの反応を行うのに対し、新法でフライ食品に 1 - ブタノール / ヘキサる。しかし、フライ調理では、油脂中は、毒性の弱い 1 - ブタノール中で上ン混合液（1 : 1）を加えて油脂を抽出で熱酸化や加水分解、重合といった複記の反応をすべて行う。また、従来法し、その抽出液を試料溶液としてカル数の劣化反応が同時に起こる。中でも、では、標準物質が無かったが、新法でボニル価（ブタノール法）を測定した

空気中の酸素による酸化劣化は、油脂

は、フライ油のカルボニル化合物の主（図２）。フライ食品としては、市販の中の不飽和脂肪酸からヒドロペルオキ

な成分である 2 - デセナールを標準物

揚げせんべい、即席めん、かりんとシドの生成を経て様々な二次酸化生成

質に用いて、カルボニル化合物の総量

う、ドーナッツなどを用いた。その結物を生じる。とくに、カルボニル化合を 2 - デ セ ナ ー ル 相 当 量 と し て 表 す。

果、抽出溶剤に 1 - ブタノール / ヘキサ物の生成は、不快な臭いを呈するだけ

なお、新法では、試験管１本ですべてン（1 : 1）混合液を用いても油脂の抽でなく、味の劣化や毒性を示す。そのの反応を行うため、使用する溶剤が従

出効率はエーテルの場合と同等であっため、フライ食品の安全性を確保する

来法よりも半分以下で済む他、多検体た。市販のフライ食品のカルボニル価

ため、フライ油の品質をチェックするの測定が可能になるなど大幅に改善さは、数 10 〜数 100 μ mol/ 100 g と種類ことになっている。厚生労働省の弁当れた。

に よ っ て 異 な る 値 を 示 し た も の の、およびそうざいの衛生規範において、フライ油の化学特数である酸価が 2 . 5、あるいはカルボニル価が 50 を超えた

フライ食品用カルボニル価
３（抽出・測定一体型測定法）

フライ油については、新しい油と交換

エーテルで油脂を抽出してから、油脂のカルボニル価を測定した場合と、1 ブタノール / ヘキサン（1 : 1）混合液で抽出した溶液を測定したカルボニル

することが望ましいとされている。しフライ食品の安全性を図るため、フ価は同じ値を示し、その有効性が確認

かし、現在のカルボニル価測定法では、

ライ油のカルボニル価の測定が推奨さされた（表１）。さらに、この抽出・発癌性を有するベンゼンを溶剤に使用れているが、実際に食すのはフライ食するため、実際の食品製造現場では利品であり、フライ食品のカルボニル価

用されていないのが実状である。

を測定する必要がある。これまで、揚そこで筆者らは、ベンゼン以外の溶げかまぼこや揚げ菓子など多くのフラ剤として、2 - プロパノール 1 , 2）や 1 - ブ

イ食品のカルボニル価が測定されていタノール 3）を用いたフライ油用のカル

る 5 , 6）。一般にフライ食品のカルボニ

ボニル価測定法の開発を行い、従来法と同等の精度と感度を得ることができた。本稿では、この測定法についてフを紹介する。

CHO

タノール法）は、現在、（社）日本油化学会の基準油脂分析試験法の暫定法

+

H2N

アルデヒド

R

C
H

N

NO2

N
H

酸性

フライ油用カルボニル価２（ブタノール法）
筆者らが開発したカルボニル価（ブ〈試料溶液〉
フライ油：1-ブタノール10 mL中に油脂50〜500 mg
フライ食品：1-ブタノール/ヘキサン（1 : 1）100 mLで
試料 5 gまたは10 gを 粉砕、ろ過後のろ液〈測定方法〉
試料溶液 （または 2-デセナール標準溶液）

1 mL

2,4-ジニトロフェニルヒドラジン溶液 1 mL
加熱（45℃, 20分）

R

ライ食品にも応用したので、その結果

6

遠藤

2,4-ジニトロフェニル
ヒドラジン

NO 2

N
H

塩基性

2,4-ジニトロフェニル
ヒドラゾン

C
H

N

検量線を作成し、試料溶液の吸光度から
2-デセナール量を算出する。
カルボニル価 (μmol／g) = A／S

OR

8%水酸化カリウム溶液 8 mL
遠心（3,000 rpm, 5 min）

吸光度（420 nm） 測定

NO 2
NO 2

常温まで冷却N
H

N
O

キノイドイオン（420 nm）

NO 2

図１．カルボニル価の測定原理

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

A : 試料溶液の吸光度から求めた
2-デセナール量 (μM)
S : 試料溶液1mL中の油脂量 (mg)

図２．フライ油およびフライ食品用カルボ
ニル価測定法

測定一体型カルボニル価測定法を、室表１．フライ食品のカルボニル価

内に放置した際の揚げせんべいに応用フライ食品したところ、揚げせんべいの自動酸化による劣化の程度を評価することがで

脂質含量 (g/100g)
抽出・測定一体型

エーテル抽出

抽出・測定一体型

揚げせんべい

34.0

34.4

455

454

即席めん

14.2

14.4

60

58

かりんとう

17.4

17.6

300

297

ドーナッツ

22.3

22.4

285

290

きた（表２）。

４ おわりに

表２．揚げせんべいの自動酸化（室温放置）〔参考文献〕

近年、ファーストフードやそうざ

1）Endo, Y., Li, C.-M., Tagiri-Endo, M. andFujimoto, K. : A modified method for theestimation of total carbonyl compounds inheated and frying oils using 2 -propanol as asolvent. , J. Am. Oil Chem. Soc ., 78 , 1021 1024（2001）.
2）Endo, Y., Li, C.-M., Fujimoto, K., Tagiri-Endo,M., Tooyama, K. and Usuki, R. : Estimationof the deterioration of frying oil used forﬁshery products by the carbonyl value using
2 -propanol as a solvent. , Nippon Suisan
Gakkaishi , 69 , 80 - 81（2003）.
3）Endo, Y., Tominaga, M., Tagiri-Endo, M.,
Kumozaki, K., Kouzui, H., Shiramasa, H. andMiyakoshi, K. : A modified method toestimate total carbonyl compounds in frying
oils using 1 -butanol as a solvent. J. Oleo
Sci ., 52 , 353 - 358（2003）.
4）基準油脂分析試験法 暫定法 13 - 2003：カルボ
ニ ル 価（ ブ タ ノ ー ル 法 ）, 日 本 油 化 学 会 編（2003）.

い、冷凍食品の消費が増加するにつれ、フライ食品の消費も伸びている。
フライ食品の安全性を図る上で、フライ油の品質を評価することになっているが、フライ食品自体の品質評価には至っていない。筆者らが開発したフラ
イ油用カルボニル価は既に公定法に採用されたが、今回、フライ食品用カル
ボニル価の測定法の開発を行った。この抽出・測定一体型カルボニル価測定
法は、操作が単純であり、かつ操作時間も短いので、多検体のフライ食品の品質を測定するのに適していると考える。本法が実際のフライ食品の製造現場で導入されることを期待する。

カルボニル価（μmol/100g）

エーテル抽出自動酸化

カルボニル価（μmol/100g）
エーテル抽出

抽出・測定一体型

０日目

478

473

７日目

508

505

14 日目

545

537

21 日目

581

587

5）遠藤美砂子、薄木理一郎、江口万里江、佐藤由紀、千葉美子、清野陽子、佐々木多栄子、
遠藤泰志： ブタノール法による魚油および食品抽出油脂のカルボニル価の測定 , 日食科
工誌 , 54 , 54 - 58（2007）.
6）Usuki, R., Shibata, Y., Tagiri-Endo, M. andEndo, Y. : Estimation of total carbonylcompounds in roasted and dried foods by
the tentative method using 1 -butanol as asolvent. , J. Oleo Sci ., 58 , 23 - 25（2009）.
7）特許第 4059310 号：油脂のカルボニル価の測定方法及び該方法において使用する溶剤並びに測定キット．

カルボニル価測定用
1 - ブタノール
規

格
試験項目

外観

規格値

試験項目

無色澄明の液体密度（20℃）
屈折率 n D20
吸光度

230nm
240nm
254nm
270 〜 400nm

0.808 〜 0.812 g/mℓ
1.398 〜 1.400
0.20 以下
0.07 以下
0.03 以下
0.01 以下

コード No.
022-16591

品

規格値

水分

0.1% 以下

蛍光試験

試験適合

含量（cGC）

99.7% 以上

カルボニル価測定適合性※

試験適合※基準油脂試験法「暫定法 13 - 2003 カルボニル価（ブタノール法）」に準拠したブランク試験を行っています。

名規

1-Butanol

格容カルボニル価測定用量1ℓ

希望納入価格（円）
9,800

関連商品
コード No.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）049-03612

2,4-Dinitrophenylhydrazine

試薬特級

25g

NEW

040-31271

trans -2-Decenal Standard

カルボニル価測定用

１g

9,500

NEW

041-31201

Diethyl Ether-Petroleum Ether（1：1）

食品分析用

1ℓ

3,500

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

4,250

7

echnical Report
抗 Argonaute 抗体を用いた microRNA 研究ツールの紹介
和光純薬工業株式会社

ゲノム研究所

西部

隆宏、請川

亮、林田

幸信、黒川

勉

はじめに
microRNA は 約 22 塩 基 か ら な る 一群の機能性低分子 RNA で、遺伝子発現を転写後レベルで制御するガイド分
子として機能し、さまざまな生体機能を担っていることが報告されています 1）。ヒトやマウスでは 1 , 000 種類以
上 の microRNA の 存 在 が 示 唆 さ れ て
おり、機能未知な新規 microRNA の同定、疾患に関連する microRNA の機能解明などが世界中で盛んに進められています。また最近では、細胞内だけでなく血液などの体液中にも microRNAが存在することが報告され、がんなど疾患の臨床マーカーの候補分子としても注目を集めています 2）。

図１．microRNA の生合成と作用機構

microRNA は細胞中で複数のステッ
なりつつあります 14 - 20）。

プを通して成熟化して RNA-induced

タンパク質の中で発現量が最も多いの

silencing complex（RISC） と 呼 ば れは Ago2 で、 唯 一 標 的 RNA を 切 断 す

このような状況のもと当社では抗るタンパク質複合体に取込まれ、そのる Slicer 活性を有していることから、

Ago 抗体を用いた microRNA 研究ツー

主要コンポーネントである Argonaute

microRNA パスウェイにおいて中心的

ル を 中 心 に microRNA の 機 能 解 析 に（Ago）サブファミリータンパク質とな役割を担っていると考えられていま向けたいくつかの解析ツールを提供し

7 - 13）結合した後に標的 mRNA と結合してす。この Ago タンパク質に対するています（図２）。これらを組合せてmRNA 鎖を分解する、あるいは翻訳

抗 体 に よ り、RISC が 免 疫 沈 降 さ れ、用いることにより細胞、組織などに存を抑制すると考えられています （図そ こ か ら microRNA が 回 収 で き る こ

在 す る RISC に 含 ま れ て い る micro１）。この Ago サブファミリーはヒトと、さらには microRNA の標的になっRNA と mRNA を総合的に解析するこで ４ 種 類（hAgo1 -hAgo 4） 存 在 し、ている mRNA も共沈されることが分と が で き、 ｍicroRNA の 解 析 の み な

それぞれがユビキタスに発現していま

か り、Ago 免 疫 沈 降 法 は microRNA

らず標的 mRNA 解析にも応用するこす 6）。また一群の Ago サブファミリーの多彩な機能の解明に必須の方法論ととができます。以下にそれぞれのツー

3- 5）ルとその使用法、解析例の概略を提示します。

microRNA Isolation
Kit シリーズ
当社では免疫沈降法に利用可能な抗Ago 抗体を作製し、免疫沈降法による
microRNA 精 製 が 簡 便 に 行 え る micro
RNA Isolation Kit シリーズを販売しております。現在、ヒト / マウス Ago1、
ヒトAgo2、マウスAgo2及びヒトAgo3に対応するキットを揃えており、ヒト
Ago4 に 対 応 す る キ ッ ト は 開 発 中 です。これらのキットを用いることによ

図２．Ago 免疫沈降法をベースにした microRNA 解析ツール8

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

ロアレイ、定量 PCR、クローニングなどの方法により解析を行いますが、新規の分子が同定できるという点でクnt

ローニング法は利点を有しています。
そこで当社では microRNA を効率良くクローニングすることができる microRNAnt

Cloning Kit Wako を販売しています。
microRNA Isolation Kit シリーズで得られた RNA 画分を本キットにより解析することで、rRNA や tRNA などの分解産物や人工的な配列のコンタミが 少 な く 高 効 率 な microRNA ク ロ ー
ニングが可能になります（図４）。これによりより正確なプロファイリング
を 行 う こ と で き、 新 規 な microRNA

図３．ヒト培養細胞株からの microRNA 精製
microRNA Isolation Kit, Human Ago2 を用いて、ヒト培養細胞株 3 種類
（HeLa、HepG2、HEK293）、及びマウス培養細胞株（P388D1）から精製した RNA 画分を Urea-PAGE の後、銀染色によって検出した。その結果、ヒト培養細胞特異的に microRNA が精製できた。使
用細胞数は 5×106 細胞。

り細胞、組織サンプルから各内在性
Ago タンパク質に結合した microRNA
を簡便に精製取得することができます。

ることが可能になると考えられます。

microRNA クローニング（図３）。Ago サブファミリータンパク
質はユビキタスに発現していますが、の探索にも有用です。

標的 mRNA クローニング

Ago 免 疫 沈 降 RNA 中 に 含 ま れ る
mRNA はマイクロアレイや定量 PCRなどによって解析することが可能です
が、より詳細な解析をするために当社取 得 し た microRNA は 通 常 マ イ ク

では Ago 2 免疫沈降物中に存在する微その発現量には大きな差異があり、通常 Ago2 が 最 も 多 く 発 現 し て い ま すが、各タンパク質の発現量は細胞種により異なります。本キットシリーズを駆使することで現在まだ明確でない各
Ago タンパク質と microRNA の対応の特異性についても検討することが可能となります。
また、本キットシリーズを用いることで各 Ago タンパク質と複合体を形
成 し て い る mRNA を microRNA と 共沈して取得することができます。micro
RNA と mRNA の 結 合 領 域（seed 配

microRNA

rRNA

tRNA

OthersUnknowns

列）は６塩基と短く、対応する配列をもつ mRNA が数多く存在することからコンピューター解析だけでは標的mRNA の同定が困難でした。しかし、
本キットシリーズにより得られる免疫沈 降 物 中 の microRNA と mRNA の 相互の変動を調べ、コンピューター解析と組合せることで、microRNA の標的となっている mRNA を効率よく同定す

図４．microRNA Cloning Kit Wako による Ago2 免疫沈降 small RNA のクローニング
HeLa 細 胞 か ら microRNA Isolation Kit, Human Ago2 に よ り 精 製 し た small RNA 画 分 を
microRNA Cloning Kit Wako を用いて cDNA クローニングした。得られたクローンのうちランダムに選抜した 95 クローンをデータベース（Sanger miRBase）に照合し、その構成を調査した。
その結果、95 クローン中 89 クローン
（全体の 93.7%）と microRNA が高効率にクローニングされた。

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）9量 な mRNA を ク ロ ー ニ ン グ で き る
,

（FU）
160

Target mRNA Cloning Kit Wako を販

Anti-Ago2

売しています。本キットでは相補鎖のmouse IgG

140

cDNA 合成にランダムプライマーを用120いることにより cDNA の鎖長を均一

100化させ、鎖長差により引き起こされる

80

PCR 時の増幅効率のバイアスを抑制
して mRNA のポピュレーションをで60きるだけ反映できるような工夫がされ40ています。この方法で合成増幅した

20

Ago 免 疫 沈 降 物 中 の mRNA 由 来 のcDNA はキャピラリー電気泳動によっ0てその存在を確認することができます

-20
15

100

200

300

400

700

1,500

［bp］

（図５）。また本キットにより増幅され

図５．Target mRNA Cloning Kit Wako による Ago2 免疫沈降
mRNA のクローニング

た cDNA の中にはマイクロアレイでは 同 定 で き な い よ う な RISC 内 の

HeLa 細胞から抗ヒト Ago2，モノクローナル抗体（免疫動物：
マウス）及びマウス IgG を用いて免疫沈降精製した RNA 画分を
Target mRNA Cloning Kit Wako を用いて cDNA 合成し、PCR増幅したフラグメントをキャピラリー電気泳動により検出した。
その結果、抗 Ago2 抗体を用いた免疫沈降画分から特異的にmRNA に由来する cDNA フラグメントが検出された。

mRNA 以外の RNA 分子も含まれており、我々はある程度の量の Alu 関連配列が RISC 内に存在することを見出しています 21）。
当社では本キットを用いて特定のmicroRNA の 標 的 mRNA 探 索 を 試 み
ま し た 21）。 肝 臓 特 異 的 な microRNAである miR-122 は細胞のがん化に伴いその発現が低下することが知られており、肝細胞のがん化と関連することが報告されています 22）。我々は miR-122
をほとんど発現していないヒト肝がん
細 胞 株 HepG 2 に miR-122 を 導 入 し、
Ago2 免疫沈降物中の mRNA を cDNA
クローニングしてそのプロファイルをルシフェラーゼ siRNA 導入コントロー
ル細胞と比較しました。その結果、得られたクローンを TargetScan により
解 析 す る こ と で miR-122 導 入 細 胞 に
miR-122 のターゲットとして確率の高いクローンが多く存在していることが示されました。これらクローンについ図６．miR-122 の標的 mRNA 探索
肝臓特異的な microRNA である miR-122 の標的 mRNA 探索として、miR-122 をほとんど発現していないヒト肝がん細胞株 HepG2 に miR-122 を導入し、Ago2 免疫沈降物中の mRNA を
Target mRNA Cloning Kit Wako を用いて cDNA クローニングし、そのプロファイルをルシフェ
ラーゼ siRNA 導入コントロール細胞と比較した。その結果、miR-122 導入細胞から得られたクローンに TargetScan により miR-122 のターゲットとして確率の高いことが予測された mRNAが多く含まれていた。そこでそれらの mRNA について miR-122 導入細胞とコントロール細胞における量比を定量 PCR により測定し、Ago2 免疫沈降画分での濃縮度合いを検出した。図はその結果で、miR-122 導入細胞で Ago2 免疫沈降 RNA（Ago2 IP RNA）中に特異的に濃縮されるクローンが高い割合で存在し、逆に Total RNA 量は RISC による分解を受けることでコント
ロール細胞よりも減少するクローンが存在した。これらの中には miR-122 の標的としていまだ報告されていない新規の標的候補（SLC1A5、PIGS、SLC7A5）が含まれていた。

10

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）て定量 PCR 解析を行うと、多くのもの は miR-122 の 導 入 に よ っ て mRNAが Ago2 免疫沈降物中に濃縮され、総量としては RISC を介した分解により減少していることが確認されました（図６）。その中には標的としていまだ報告のないクローンも存在し、これらは 新 規 の miR-122 標 的 mRNA 候 補 で

あ る と 考 え ら れ、 本 キ ッ ト が 標 的ングや細胞染色などの用途にも用いる

mRNA 探索に有効であることが示さことができます。ぜひ皆様のご研究にれました。

お役立て頂ければと考えます。

。

おわりに

12）Hutvagner, G. and Zamore, P. D. : Science ,297 , 2056（2002）.
13）Yekta, S., Shih, I. H. and Bartel, D. P. : Science , 304 , 594（2004）.
14）Beitzinger, M., Peters, L., Zhu, J. Y., Kremmer,
E. and Meister, G. : RNA Biol ., 4 , 76（2007）.
15）Karginov, F. V., Conaco, C., Xuan, Z.,
Schmidt, B. H., Parker, J. S., Mandel, G. and
Hannon, G. J. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA ,104 , 19291（2007）.
16）Easow, G., Teleman, A. A. and Cohen, S. M. :RNA , 13 , 1198（2007）.
17）Hendrickson, D. G., Hogan, D. J., Herschlag,
D., Ferrell, J. E. and Brown, P. O. : PloS
ONE , 3 , e2126（2008）.
18）Landthaler, M., Gaidatzis, D., Rothballer, A.,
Chen, P. Y., Soll, S. J., Dinic, L., Ojo, T., Hafner,M., Zavolan, M. and Tuschl, T. : RNA , 14 ,2580（2008）.
19）Chi, S. W., Zang, J. B., Mele, A. and Darnell,.
R. B. : Nature , 460 , 479（2009）20）Wang, W. X., Wilfred, B. R., Hu, Y., Stromberg,
A. J. and Nelson, P. T. : RNA , 16, 394（2009）.
21）Hayashida, Y., Nishibu, T., Inoue, K. andKurokawa, T. : BMC Res. Notes , 2 , 169（2009）.
22）Gramantieri, L., Ferracin, M., Fornari, F.,
Veronese, A., Sabbioni, S., Liu, C. G., Calin,
G. A., Giovannini, C., Ferrazzi, E., Grazi, G.
L., Croce, C. M., Bolondi, L. and Negrini, M. :Cancer Res ., 67 , 6092（2007）.

〔参考文献〕

以 上 の よ う に microRNA Isolation
Kit シリーズ、microRNA Cloning Kit

Wako 、Target mRNA Cloning Kit
Wako を用いることにより RISC に含
ま れ る microRNA と mRNA を 総 合 的に解析することが可能になります。これ ら の ツ ー ル は、 新 規 microRNA の同定、microRNA の発現プロファイル、
標 的 mRNA の 探 索 な ど microRNA の機能解析に活用できるばかりでなく、医薬への活用が期待されている
siRNA のオフ - ターゲットの探索などにも活用できるものと期待されます。
また、microRNA Isolation Kit シリー
ズに用いている抗 Ago ファミリー抗体は単品での販売も行っており、免疫沈降だけでなくウェスタンブロッティ

１）Bartel, D. P. : Cell , 116 , 281（2004）.
２）Cortez, M. A. and Calin, G. A. : Expert Opin.
Biol. Ther ., 9 , 703（2009）.
３）Hammond, S. M., Bernstein, E., Beach, D.
.
and Hannon, G. J. : Nature , 404 , 293（2000）
４）Hammond, S. M., Boettcher, S., Caudy, A. A.,
Kobayashi, R. and Hannon, G. J. : Science ,293 , 1146（2001）.
５）Gregory, R. I., Chendrimada, T. P., Cooch, N.
.
and Shiekhattar, R. : Cell , 123 , 631（2005）６）Sasaki, T., Shiohama, A., Minoshima, S. andShimizu, N. : Genomics , 82 , 323（2003）.
７）Pillai, R. S., Artus, C. G. and Filipowicz, W. :RNA , 10 , 1518（2004）.
８）Meister, G., Landthaler, M., Patkaniowska,
A., Dorsett, Y., Teng, G. and Tuschl, T. :Mol. Cell , 15 , 185（2004）.
９）Liu, J., Carmell, M. A., Rivas, F. V., Marsden,
C. G., Thomson, J. M., Song, J. J., Hammond,
S. M., Joshua-Tor, L. and Hannon, G. J. : Science , 305 , 1437（2004）.
10）Song, J. J., Smith, S. K., Hannon, G. J. and
Joshua-Tor, L. : Science , 305 , 1434（2004）.
11）Meister, G. and Tuschl, T. : Nature , 431 , 343（2004）.

P roducts
microRNA研究関連製品
内在性 Ago タンパク質の検出・精製と、標的mRNA を共沈できる microRNA Isolation Kit シリーズ他を是非お試し下さい。
コード No.
キット類
290-66501
298-65103
292-65101
298-67901
298-68001
291-70201
292-66701
292-67301
297-70301
抗 体
011-22033
015-22031
014-22023
018-22021
018-22401
015-22411

品

名

規

格

microRNA Cloning Kit Wako

遺伝子研究用Single Strand DNA Ligase, thermostable, recombinant, Solution

遺伝子研究用PCR Purification Kit Wako
Target mRNA Cloning Kit Wako
microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1
microRNA Isolation Kit, Human Ago2
microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2
microRNA Isolation Kit, Human Ago3

遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用Anti Human Ago2, Monoclonal Antibody

免疫化学用Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody

免疫化学用Anti Ago1, Monoclonal Antibody (1F2) (WB)
Anti Ago1, Monoclonal Antibody (2A7) (IP)

免疫化学用
免疫化学用

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

容量

希望納入価格（円）8 回用
200units
500units
30 回用
10 回用
10 回用
10 回用
10 回用
10 回用

63,00043,00087,00015,00060,00060,00045,00045,00060,000

50μℓ
100μℓ
50μℓ
100μℓ
50μℓ
50μℓ

30,00050,00030,00050,00030,00030,00011

−⑰
ガジュツの類日本薬科大学

漢方薬学科

木村

孟淳

地球上の大陸東岸に当たる地域は湿出産品であり、台湾や中国にも厳密にる。青紫色のものがCurcuma zedoaria 、

潤温暖な気候に恵まれ、植物の種類も同じと言えるものがなく、屋久島固有青緑色のものがCurcuma aeruginosa

量も豊富で、薬用、食用、香辛料、観のものと考える方が順当である。

と単純に理解していたが、ことはそれ

賞用とその応用も極めて多種多様であ

屋久島から遠く離れた土地で、たまほど簡単ではないらしいのである。植る。その中で、アジア大陸の東岸からたま川に流れた根茎が、海をさまよっ

物学の原報にはC. zedoaria の切り口

インド亜大陸、アフリカ北部にかけて屋久島に漂着し、そこに根をおろしは白、C. aeruginosa の切り口は緑青て、熱帯降雨林や亜熱帯モンスーン地て何万年あるいは何百万年と生き続けのような緑色と記載されている。中国

帯を中心として、多種類のショウガ科る間に、屋久島の気候風土に合った性ではガジュツの原植物が 6 種類もの数植物が分布しており、その大部分が薬質に変わってしまったと考えてはいけに分けられている。

用その他の有用植物として利用されてないだろうか。

ガジュツによく似たハルウコンC.

いる。その中でウコン、ガジュツなど

1970 年頃、筆者は海外技術事業団

aromatica は切り口が薄い黄色、ウコが含まれるクルクマ属の植物は植物学（現在の JICA）派遣でタイ国の薬用植ンC. longa はあざやかなオレンジ色に的に大変扱いにくい厄介なグループで物研究所に勤務した。そのころのタイなる。日本では、ハルウコンとガジュある。

の植物学の本にはクルクマ属植物は

ツは葉が成長する前の６月ごろ花茎がクルクマ属の植物は長い進化の歴史

たった６種類しか掲載されていなかっ先に出て開花する。これに反してウコの間に種子を作らず、根茎の株分かれた。バンコックの旧王宮前広場で毎週ンは８月から９月ごろ、２方向に出たによってのみ増殖するという性質を獲末に市場が開かれているが、ここで葉の間、つまり根茎の茎頂から花茎を得してしまった。ということはメンデショウガの類の根茎を専門にして売っ

のばして花の穂をつける。

ルの法則が全く通用しない遺伝を続けているおじさんがいた。この人は常にガジュツの特徴としては、葉の中央ているということになる。極端な話、150 種 ほ ど の 根 茎 を 並 べ て 売 っ て い

付近の葉脈に沿って赤紫色の斑点がは一個体しかない親から永遠に増え続けて、その半数以上がひと目でクルクマ

いり、これはタイも中国も屋久島も変ているクローン植物であり、他の植物の類と分かるものを置いていた。このわらない。根茎から直接出て茎のようでいうタクソン（分類群）という考え

人は根茎をポキンと折って、切り口のに見える葉柄の下部が暗赤色になる

方は通用しない、永久に一個体であ色と味で区別できるようで、客にも切が、屋久島のものは根元まで草色のまる。インドが原産地と考えられているり口を見せながら説明をしていた。もまである。

ガジュツの分布の北限は日本の屋久島

ちろんラテン名などは分からない。

屋久島のガジュツは根茎の切り口である。屋久島のガジュツは平安時代

タイのガジュツには切り口が青紫色

は紫色で、最近ではムラサキウコン

から江戸時代にかけて薩摩の重要な輸のものと青緑色のものの２種類があという名前まで使われている。また、一つの穂につく花の数がやや少ないという特徴があり、初島氏によってCurcuma liukiuensis という名がつけられたことがあるが、一般化せず、疑問視されながらもCurcuma zedoaria
Roscoe という学名を使っている。
中国産のガジュツは温郁金 Curcuma

wenyujin という学名が現在使われている。
ガジュツの成分 1）については東北大学のヒキノら、静岡県立大の福島ら、
大阪大学の北川、渋谷らなどのほか、
中国、インドなどから多数の研究報告があり、発見された成分は curcumin
な ど の ク ル クミノイド類が 12 種、モノテルペン、セスキテルペンが合わせ
図１．タイ国産ガジュツ
Curcuma aeruginosa12

図２．屋久島産ガジュツ
Curcuma zedoaria

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）て 100 種以上にもなっている。ウコンの 根 茎 は curcumin が 圧 倒 的 に 多 く、

−⑰

OH

O
CH3O

OCH 3

HO

OH

curcuminOOOO
dehydrocurdione
H

O

O
O

図３．根茎の切り口
左：タイ国産ガジュツ
中：屋久島産ガジュツ
右：ウコン

Ofuranogermenone

germacrone

OH

H

H O
curzerenone

curcumenolOfuranodienone

カレーライス、たくあん漬けの黄色色

ないが、これらの成分をすべて多量にス に 対 す る 駆 虫 効 果、 ヘ リ コ バ ク

素としてよく知られている。curcumin

含んでいて、しかもそれらの総量であ

ター・ピロリの除菌効果なども明らか

は水にも油にもよく溶け、紫外線にる精油含量も 1 . 13 % で、中国、台湾にされている。2、3 のセスキテルペ

よって黄色の蛍光を発し、人体に有害の二倍以上という数値を示している。

ンに制がん作用が見出されているが、な作用はなく、胆汁分泌を促進する薬

屋久島産のガジュツの精油は量も多作用が弱く、さらに解明が待たれると効もあり、食品用の黄色色素として優く、比重が水より重くて沈むため、局ころである。

れた性質を持っている。タイなどで仏方の精油定量は生薬量を減らすなどの動物実験では総エキスで著しい胆汁

僧が着る黄色の衣を染める聖なる染料

工夫が必要なほどである。屋久島産の分泌促進作用が認められ、小腸内輸送としても尊ばれている。タイの田舎町

ガジュツの精油は鮮やかな紫色を呈し

能は減少、胃液分泌は抑制、胃潰瘍形

でインドネシア料理のドライカレーをているが、その色の本体はアズレン類成の抑制、エールリッヒ腹水がん抑制などが認められている。

食べたところ、翌日、「ドクター・キ

で、 紫 色 の linderazurene と 青 色 のムラは仏教徒のくせに回教徒の料理を

chamazurene で あ る と 筆 者 ら 3） が 報食べた」といって研究所の女性たちに告している。

成 分 で は furanogermenone に 実 験的肝障害改善の効果が認められる。

ガジュツを主役とするほとんど唯一睨まれた。タイ・カレーにはウコンがの家庭薬として「恵命我神散」が胃腸〔参考文献〕

ガジュツには curcumin の類はごくわ

良薬というふれこみで販売されてい１）Ravindran, P. N., Nirmal Babu, K., Sivaraman, K.

ずかにしか含まれず、セスキテルペンて、日本海軍の薬として使われていた

入らない。

2）

類が主成分になる。渋谷ら によると、

ものが、戦後一般に販売されてきたも中国産のガジュツにはdehydrocurdione,のである。漢方で使われることはほと

germacrone, furanogermenone が多く、んどない。この製剤の薬効は腹痛をは

台 湾 産 の ガ ジ ュ ツ に は curcumenol,

じめ、便秘、下痢のいずれにも効果がcurzerenone, furanodienone、 屋 久 島

あり、酒毒、肝臓病、胃がんに効いた産のガジュツは curcumenol がやや少という報告もあり、最近ではアニサキ

and Kimura, T. et al . : Turmeric, The genus
Curcuma , CRC Press, Boca Raton, London,
Newyork（2007）.
２）渋谷博孝ら：薬学雑誌，106，212（1986）.
３）木村孟淳ら：日本生薬学会 41 年会（札幌）
要旨集、187（1994）.

P roducts
コードNo.

品

名020-16411

Bisdemethoxycurcumin038-21021

Curcumin049-31001

Demethoxycurcumin

規

格

容

量

希望納入価格（円）

局方一般試験法用

10mg

34,000

局方生薬試験用（成分含量測定用）

10mg

32,000

局方一般試験法用

10mg

34,000

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）13

R

esearchフェニルプロピオン酸スキャッホールドを用いた核内受容体 PPAR アゴニストの創製
岡山大学大学院医歯薬学総合研究科創生医薬化学分野

はじめに

弘幸

5）
、PPARα/δデュアルアゴニ（KCL）

プ選択的アゴニスト KCL 誘導体を創

6）、PPARδ選択的ア
スト（TIPP-401）

製（代表的化合物は、欧州にて臨床第7）ペルオキシソーム増殖剤応答性受容ゴニスト（TIPP-201） 等一連の光学IIA 相試験が終了）し、さらにその適体（PPAR）は、核内受容体スーパー

活性α- 置換フェニルプロピオン酸誘切な構造展開により PPARα/δデュファミリーに属する、脂溶性低分子化導体を創製してきた。さらに、光学活

アルアゴニスト（TIPP-401）、PPARδ

合物をリガンドとする転写因子である。

性α - 置 換 フ ェ ニ ル プ ロ ピ オ ン 酸 のサブタイプ選択的アゴニスト（TIPP-

PPAR はリガンド結合後、他の多くのPPAR リガンドとしての機能拡張の観201）等一連の光学活性α - 置換フェニ

核内受容体と同様、レチノイド X 受容点から新規 PPAR パンアゴニスト創ルプロピオン酸誘導体を創製し、置換8）体（RXR）とヘテロダイマーを形成し製を計画し TIPP-703 の創製にも成フェニルプロピオン酸構造の PPAR

標的 DNA の特定塩基配列（PPRE）に功した。今般、和光純薬工業株式会社

リガンド創製におけるスキャッホール

結合することで標的遺伝子群の転写をより、この TIPP-703 の試薬として市ドとしての有用性を示してきた。先に制御している。PPAR にはα、δ、γの販させていただくことになり、その開記載したように、PPAR 各サブタイプ

３サブタイプが同定されている。初期

発の経緯等を紹介したい。

はそれぞれ脂質、リポ蛋白質、糖質のの研究により PPARαは肝臓や腎臓等

恒常性維持に重要な機能を有する遺伝

脂肪酸異化能の高い組織に分布していリガンドスーパーファミリー概念て脂肪酸の代謝や輸送、コレステロー

核内受容体はヒトにおいては 48 種類

PPAR サ ブ タ イ プ を 活 性 化 で き る

ルや中性脂肪の代謝に関連する遺伝子の存在が知られている。これらは一つ

PPAR パンアゴニストには、例えば糖の発現制御をしていることが判明した 1）。

の始原遺伝子から分子進化派生した蛋

尿病治療薬として臨床使用されている

PPARγは白色脂肪組織や褐色脂肪組織

白質であり、スーパーファミリーを形

ピオグリタゾンやロシグリタゾン等選に顕在していて、脂肪細胞の分化誘導成している。そうであるならば、その択的 PPARγアゴニストのインスリン2）に対し中心的役割を果たしている 。

リガンドにもスーパーファミリーが存

抵抗性改善作用という有効性を保持しPPARδは骨格筋を含め各組織に普遍的在し得るはずであると著者は考える。

つつ、一方で、浮腫や体重増加といっに発現していて、飢餓時のエネルギー

すなわち核内受容体の三次元構造は高た副作用が軽減したより安全性の高い産生に関する中心的転写因子としての度に保存されており、リガンド結合部

糖尿病治療薬としてのポテンシャルが役割等が報告されている 。PPAR 各サ位の構造も基本的には相互に似ている

期待された。これまでに PPAR パンア

ブタイプは、それぞれ、糖・脂質・コはずである（実際極めて良く似ている

ゴニスト創製の報告は極わずかであっレステロールの恒常性制御因子としてのである）。著者は核内受容体のリガン

た

その発見当初から代謝性疾患治療薬のド結合部位の三次元構造は、始原蛋白

リガンドスーパーファミリー概念を分子標的として注目されてきた。しか質のリガンド結合部位構造を共通基本

踏まえてこれまでに合成した置換フェし近年、PPAR の機能は糖・脂質恒常構造として有し、さらに個々の核内受ニルプロピオン酸誘導体の構造を改め性調節のみならず、がんや免疫、記憶、

容体リガンドに特徴的相補構造が先のて眺めてみると、本系統の化合物は基

睡眠、創傷修復等との連関も報告され共通基本構造に付加された形で分子進

本的に PPARαおよび PPARδに対しるに至りその多能性が着目されている。

化したと考えている。このリガンド

高活性を示す構造であり、PPARγリ

従来、PPAR 各サブタイプ選択的リガスーパーファミリー概念 9）という作業

ガンド創製のスキャッホールドとしてンド創製を目指した研究が精力的に行仮説のもとに著者はこれまでに PPAR

は不向きな傾向が読み取れた（図１）。

われてきた。しかし、PPAR 各サブタ

リ ガ ン ド を 中 心 に、 肝 臓 X 受 容 体

事実、これまでに合成した化合物で、

3）

10）

子発現を制御していることから全ての14-17）

ためその創製を計画した。

イプはそれぞれに特徴的な遺伝子発現（LXR）リガンド 、ファルネソイド X

PPARγ転写活性化作用に関してナノ制御機能を有すること、ならびにサブ受容体（FXR）リガンド 11）、プロゲス

モーラーオーダーの EC50 値を示す化

12）

タイプ選択的リガンドによる副作用軽テロン受容体（PR）リガンド 、アン

合物は存在しなかったのである。しか減の可能性から、近年 PPAR デュアル

ドロゲン受容体（AR）リガンド 13） のし、活性は弱いながらも、疎水性末端

アゴニスト、さらには PPAR パンアゴ

創製研究を合理的かつ効率よく展開し部分置換基の立体的因子が PPARγにニストの創製が期待されている 4）。

その概念適応の有用性を示してきた。

対する転写活性化作用に相関していそ

我々はこれまでに 1,3,4- 三置換ベン
PPAR アゴニスト創製を研究しておフェニルプロピオン酸
スキャッホールドの構造展開

り、すでに PPARα選択的アゴニスト

著者はこれまでに PPARαサブタイ

ゼンをスキャッホールドに用いた

14

宮地

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

うな傾向が読み取れた（化合物１）。
そこで疎水性末端部分に三次元的により嵩高いアダマンチル基を導入した化合物を合成した（化合物２）
。この化

O

L

X

F
F

Z

Y
F

F
F

COOH

F

F

O
N
H

O

R

O
N
H
Meo

COOH

N
H

COOH

O
COOH

N
H
O
COOH

O

O

F

COOH

N
H
O

O
COOH

N
H

H
O

図２．代表的 PPARγアゴニストによる 3T3-L1 脂肪細胞分化誘導
図１．フェニルプロピオン酸スキャッホールドを用いた PPAR
リガンドの創製展開と、これまでに得られたフェニルプロピオン酸
型 PPAR リガンドの構造活性相関、ならびに PPAR パンアゴニスト
TIPP-703 創製の展開概念図

活性効力の比較結果（MCC-555 ; PPARγパーシャルアゴニスト、
rosiglitazone ; PPARγフルアゴニスト）ならびに 3T3-L1 細胞をTIPP-703 で処理した場合の oil-red-o 染色像

合物は期待通り、さらに PPARγ転写

高活性であるというこれまでの知見を

オポエチン様ペプチド 4（ANGPTL4）、活性化作用が向上し、PPARγフルア

踏まえ（S ）-エチル体を合成し、各サ

3- ヒドロキシ -3- メチルグルタリルコ

ゴニストで糖尿病治療薬として臨床使

ブタイプの転写活性化作用がさらに向エンザイム A 合成酵素 2（HMGCS2）、用されているピオグリタゾン（アクロ

上した化合物 TIPP-703 を創製するに

PPARγアゴニストならびに PPARαス ）と同等に強いサブマイクロモー

至 っ た の で あ る（EC50 値；PPARα /アゴニストで強い発現亢進が認められラーオーダーの PPARγ転写活性を有δ/γ＝ 61/120/43nM）（図１）。

た細胞内脂肪滴構成蛋白質（ADRP）、®

する PPARα/γデュアルアゴニスト

前駆脂肪細胞は PPARγの作用によPPARαアゴニストならびに PPARδ

活 性 を 示 し た の で あ る（EC50 値；

り分化し脂肪細胞となる。生成した脂アゴニストで強い発現亢進が認められ

PPARα/δ/γ＝ 95/1100/120nM）。

肪細胞はインスリン感受性で、遊離脂たカルニチンパルミトイルトランス

化合物２を次なるリード化合物と肪酸をトリグリセライドの形で細胞内フェラーゼ 1（CPT1）のいずれの遺し、PPAR パンアゴニスト創製を目指に取り込むようになることが知られて伝子発現も亢進させた。これらの実験

す場合の次なる課題は PPARδ活性を

いて、PPARγ活性の指標としてよく結果は、細胞レベルにおいても TIPP-

如何に増強するかという点である。し用いられる。TIPP-703 はマウス線維703 が PPAR パンアゴニストとして活かし、これまでの構造活性相関に関す芽細胞 3T3-L1 を用量依存的に脂肪細性を示すことを強く示唆する（図３）。

る知見ならびに活性発現に関する相加胞へと分化させることがトリグリセラ的傾向を踏まえれば、PPARδ活性のイド含量の直接測定より確認された。

向上を図ることは容易と思われた。即またその活性の強さは既存の PPARγ

何故アダマンチル基でPPARγ活性が向上したのか

ち、化合物２の中央ベンゼン環４位ア

フルアゴニストで糖尿病治療薬として

TIPP-703 は疎水性末端部に三次元的ルコキシ基の伸長により PPARδ活性臨床使用されているロシグリタゾンに嵩高いアダマンチル基を導入するこの向上が見込まれた。そこで４位メト（アバンディア ®）と同等であることとで、PPARγアゴニスト活性が、こキシ基を増炭した n- プロポキシ基にが確認できた（図２）。

れまで合成してきたフェニルプロピオ

変換した化合物（化合物３）を合成しま た、ヒト肝癌細胞株 HuH-7 を用ン酸誘導体に比べ格段に向上した。したところ、予想通り他のサブタイプにい た 遺 伝 子 発 現 実 験 に お い て は、

かしそれは何故なのか？ この理由を解

対する影響を与えずに PPARδ活性のTIPP-703 は PPAR 各 サ ブ タ イ プ で 発析するために、TIPP-703 と PPARγリ

み向上させることができた（EC50 値；現制御されている代表的遺伝子群の発ガンド結合領域（LBD）との複合体 X

PPARα/δ/γ＝ 140/220/70nM）。

現を亢進させることも確認できた。す線結晶構造解析を行った。約１年程のカルボキシル基のα位エチル基に関

なわち、TIPP-703 は PPARγアゴニス

時間を要したが、幸いにも約2.4Å の解する立体化学は、（S ）配置の方がよりトで強い発現亢進が認められたアンジ

像度での複合体結晶構造解析に成功し

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

15

O

4

30
24

H
O

3

18

COOH

N
H

2

12
1

6
0

DMSO

7647

1516

tro

TIPP

0

4

12

3

9

2

6

1

3

0

DMSO

7647

1516

tro

TIPP

0

DMSO

7647

1516

tro

TIPP

図４．TIPP-703 と PPARγリガンド結合領域との複合体 X 線結晶構造

DMSO

7647

1516

tro

左
図：複合体の全体構造
右上構造：TIPP-703 の化学構造
右 下 図：TIPP-703 のアダマンチル基近傍で相互作用するアミノ酸の拡大図

TIPP

横軸： 7647 : GW7647（αアゴニスト）、1516 : GW501516（δアゴニスト）、
tro : Troglitazone（γアゴニスト）、TIPP : TIPP-703〔参考文献〕

図３．ヒト肝癌細胞株 HuH-7 を用いた遺伝子発現実験
TIPP-703 は PPARγアゴニストで強い発現亢進が認められた ANGPTL4、HMGCS2、
PPARγアゴニストと PPARαアゴニストで強い発現亢進が認められた ADRP、PPARαアゴニストと PPARδアゴニストで強い発現亢進が認められた CPT1A のいずれの遺伝
子発現も亢進させた。

た 18）。その結果を図４に示した。アダ基でそれが効果的に実現できたものとマンチル基は PPARγ LBD 中 H2 ヘリッ

推測できる。

クス、H3 ヘリックス、β3ターンで構おわりに成される大きな疎水性空間中に収納され、そこで疎水性相互作用を形成して今回、本稿で紹介させていただいた

いることが見て取れた。PPARγ LBD

TIPP-703 を和光純薬株式会社より市の疎水性末端への入り口に位置するア

販していただける運びとなった。このミノ酸はグリシンとイソロイシンであPPAR パンアゴニストや著者がこれまり側鎖の小さなアミノ酸で構成されてでに創製してきた選択的リガンドを用いた。これに対し、対応するPPARδといることによって、複雑多岐に渡り始

PPARαの疎水性末端への入り口に位置

めた PPAR 機能の全容解明が進むこするアミノ酸はそれぞれアルギニンととを期待している。TIPP-703 の開発

トリプトファン、システインとロイシ

は引用文献にある多くの先生方との共ンであり、はるかに嵩高い側鎖を有す

同研究の賜物だが、特に現特許庁（もるアミノ酸で構成されていた。PPARγと東京大学大学院薬学系研究科博士過LBD の疎水性末端への広い間口と良好程）･ 春日淳一博士に謝意を表したい。

な疎水性相互作用をすることが重要であり、三次元的に嵩高いアダマンチル

1）Aoyama, T. et al. : J. Biol. Chem ., 273, 56785684（1998）.
2）Staels, B. and Auwerx, J. : Curr. Pharmaceut.
Des ., 3, 1-14（1997）.
3）Lim, H. et al. : Genes Dev ., 13, 1561-1574（1999）.
4）Fruchart, J. C. et al. : Curr. Atheroscler.
Rep ., 3, 83-92（2001）.
5）Nomura, M. et al. : J. Med. Chem ., 46, 35813599（2003）.
6）Kasuga, J. et al. : Bioorg. Med. Chem ., 14,8405-8414（2006）.
7）Kasuga, J. et al. : Bioorg. Med. Chem ., 15,5177-5190（2007）.
8）Kasuga, J. et al. : Bioorg. Med. Chem. Lett .,18, 1110-1115（2008）.
9）Hashimoto, Y. and Miyachi, H. : Bioorg. Med.
Chem ., 13, 5080-5093（2005）.
10）Aoyama, A. et al. : HETEROCYCLES ., 76,
137-142（2008）.
11）Kainuma, M. et al. : Bioorg. Med. Chem ., 15,2587-2600（2007）.
12）Nakagawa, A. et al. : Bioorg. Med. Chem ., 16,7046-7054（2008）.
13）Wakabayashi, KI. et al . : Bioorg. Med.
Chem ., 16, 6799-6812（2008）.
14）Sznaidman, M. L. et al. : Bioorg. Med. Chem.
Lett ., 13, 1517-1521（2003）.
15）Mogensen, J. P. et al. : Bioorg. Med. Chem.
Lett ., 13, 257-260（2003）.
16）Mahindroo, N. et al . : J. Med. Chem ., 48,
8194-8208（2005）.
17）Rudolph, J. et al. : J. Med. Chem ., 50, 9841000（2007）.
18）Oyama, T. et al. : Acta Crystallogr. D, Biol.
Crystallogr ., 65. 786-795（2009）.

PPARα/δ/γアゴニスト[EC50] PPARα：61nmol/ℓ, PPARδ：120nmol/ℓ, PPARγ：43nmol/ℓ
コード No.
205-17881

16

品
TIPP-703

名

和光純薬時報規格
細胞生物学用Vol.78, No.2（2010）

容 量
10mg

希望納入価格（円）20,000ew Products
水分含量をさらに抑えた
有機合成用脱水溶媒
超脱水溶媒シリーズ キャニスター缶入り
有機合成用 超脱水溶媒は水分含量を 10 ppm 以下まで抑えたハイグレードの脱水溶媒です。水分を嫌う各種有機合
成反応の溶媒としてご利用下さい。
なお、超脱水溶媒は使用後に廃棄物が出ない、キャニス
ター缶リンク容器に充てんして販売します。ご使用の際は別途接続配管が必要になりますので、当社もしくは当社代理店までお問合せ下さい。ご使用後はキャニスター缶をす
みやかに当社代理店までご返却下さい。

規 格 例
テトラヒドロフラン（超脱水）（安定剤不含）
試験項目
外観
密度
（20℃）
屈折率n D20
水分含量（キャピラリーカラムGC）

規格値
無色透明の液体
0.884 〜 0.889 g/mℓ
1.406 〜 1.409
0.001% 以下
99.5% 以上

コード No.
品
名（安定剤）
NEW 016-22907 Acetonitrile, Super Dehydrated
Dichloromethane, Super Dehydrated
NEW 040-31237

水分含量
10ppm以下

容 量 希望納入価格(円)
18ℓ 照 会

10ppm以下

18ℓ 照 会084-09107 Hexane, Super Dehydrated
164-24391 Pentane, Super Dehydrated
Tetrahydrofuran, Super Dehydrated,
NEW 203-17907
with Stabilizer (BHT 0.03%)
205-17761 Tetrahydrofuran, Super Dehydrated,203-17767 Stabilizer Free

10ppm以下10ppm以下

18ℓ 照 会
9ℓ 照 会

10ppm以下

18ℓ 照 会(2-Methyl-2-butene 0.0005-0.005%)

NEW
NEW

NEW

200-17917 Toluene, Super Dehydrated

10ppm以下10ppm以下

9ℓ 照 会
18ℓ 照 会
18ℓ 照 会

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コード No.
品
名（安定剤）
010-15533
016-15535
Acetone, Dehydrated
014-15531
012-15537
017-15543
013-15545 Acetonitrile, Dehydrated
011-15541
022-12853
028-12855 Benzene, Dehydrated
026-12851
020-13035
1-Butanol, Dehydrated
028-13031
027-13045
2-Butanone, Dehydrated
025-13041
027-13263
Butyl Acetate, Dehydrated
023-13265

水分含量
50ppm以下

50ppm以下30ppm以下
50ppm以下
50ppm以下
50ppm以下

容 量 希望納入価格 ( 円 )100mℓ 1,800500mℓ 3,300
3ℓ
13,70018ℓ
照 会
100mℓ 2,400500mℓ 4,800
3ℓ
16,000100mℓ 1,800500mℓ 3,800
3ℓ
14,000500mℓ 3,600
3ℓ
14,000500mℓ 4,100
3ℓ
14,000100mℓ 2,200500mℓ 4,400

和光純薬時報コード No.
品
名（安定剤）
024-15951
026-15955 t -Butyl Methyl Ether, Dehydrated
020-15953
035-16283
031-16285 Chloroform, Dehydrated(Ethanol 0.3-1.0%)039-16281
032-16813
038-16815 Chloroform, Dehydrated, Amylene added(Amylene 150ppm)

036-16811
032-20701
Cyclopentyl Methyl Ether, Dehydrated,034-20705
with Stabilizer (BHT 0.005%)
038-20703
048-25503
044-25505 Dichloromethane, Dehydrated(2-Methyl-2-butene 0.0005-0.005%)
042-25501
045-25493
041-25495
Diethyl Ether, Dehydrated (BHT0.0003%)
049-25491
047-25497
042-30371
044-30375 Diisopropyl Ether, Dehydrated
048-30373
042-25285
N,N -Dimethylacetamide, Dehydrated
040-25281
041-25473
047-25475
N,N -Dimethylformamide, Dehydrated
045-25471
043-25477
046-26023
Dimethyl Sulfoxide, Dehydrated
042-26025
048-25483
044-25485 1,4-Dioxane, Dehydrated (BHT0.0005%)
042-25481
055-06133
051-06135 Ethanol, Dehydrated (99.5)
059-06131
050-06183
056-06185 Ethyl Acetate, Dehydrated
054-06181
053-06313
Ethylene Glycol, Dehydrated
059-06315
089-07273
Heptane, Dehydrated
085-07275
089-07033
085-07035 Hexane, Dehydrated
083-07031
136-12383
132-12385
Methanol, Dehydrated
130-12381
138-12387
131-12713
4-Methyl-2-pentanone, Dehydrated
137-12715
138-12723
1-Methyl-2-pyrrolidone, Dehydrated
134-12725
161-22025 Pentane, Dehydrated
166-18305
1-Propanol, Dehydrated
164-18301
165-17993
161-17995 2-Propanol, Dehydrated
169-17991
161-18453
167-18455 Pyridine, Dehydrated
165-18451
207-13963
Tetrahydrofuran, Dehydrated, Stabilizer
203-13965
Free
201-13961
206-13433
Tetrahydrofuran, Dehydrated, with
202-13435
Stabilizer (BHT 0.03%)
200-13431
203-13443
209-13445 Toluene, Dehydrated
207-13441
242-00685
Xylene, Dehydrated
240-00681

Vol.78, No.2（2010）

水分含量
50ppm以下30ppm以下30ppm以下30ppm以下30ppm以下

50ppm以下

50ppm以下
50ppm以下

50ppm以下

50ppm以下
50ppm以下

50ppm以下

50ppm以下
50ppm以下30ppm以下30ppm以下

50ppm以下

50ppm以下
50ppm以下30ppm以下
50ppm以下
50ppm以下

50ppm以下

50ppm以下

50ppm以下30ppm以下30ppm以下

容 量 希望納入価格 ( 円 )100mℓ 2,300
500mℓ 5,000
3ℓ
20,000100mℓ 1,900500mℓ 4,000
3ℓ
16,500100mℓ 2,000
500mℓ 4,200
3ℓ
17,500100mℓ 2,500500mℓ 6,000
3ℓ
20,000100mℓ 2,100500mℓ 3,600
3ℓ
13,000100mℓ 2,600
500mℓ 6,100
9ℓ
照 会
18ℓ
照 会
100mℓ 2,300
500mℓ 4,300
3ℓ
16,000500mℓ 5,200
3ℓ
21,500100mℓ 1,950500mℓ 4,500
3ℓ
16,00018ℓ
照 会
100mℓ 2,500500mℓ 7,000
100mℓ 1,900500mℓ 4,000
3ℓ
15,800100mℓ 2,150500mℓ 4,600
3ℓ
18,000100mℓ 1,700
500mℓ 3,300
3ℓ
13,500100mℓ 2,500500mℓ 7,000
100mℓ 2,500500mℓ 5,500
100mℓ 1,700
500mℓ 3,400
3ℓ
12,800100mℓ 1,800500mℓ 3,550
3ℓ
12,70018ℓ
照 会
100mℓ 2,700
500mℓ 5,000
100mℓ 2,500500mℓ 5,700
500mℓ 5,600
500mℓ 4,200
3ℓ
15,500100mℓ 1,900500mℓ 3,600
3ℓ
13,000100mℓ 2,600
500mℓ 8,000
3ℓ
22,800100mℓ 2,000
500mℓ 4,000
3ℓ
15,000100mℓ 2,050
500mℓ 4,100
3ℓ
15,200100mℓ 1,850
500mℓ 3,500
3ℓ
13,500500mℓ 3,850
3ℓ
16,20017

ew Products
選択的還元触媒

新製品

選択的還元触媒

パラジウム - 活性炭素ジフェニルスルフィド複合体（Pd8.5-11.5％）【Pd/C［Ph2S］】
本品は、パラジウム - 活性炭素に触媒毒としてジフェニ
ルスルフィドを固定化した接触還元触媒です。芳香族ケト
ン、芳香族ハロゲン、ベンジルエステル及びN -Cbz 保護基共存下での、オレフィン、アセチレン、ニトロ基及びアジドの選択的還元反応に有用です。

特当社では、本品以外にも還元触媒として、パラジウム - 活
性炭素にエチレンジアミン［Pd/C（en）］を固定化した触媒や、パラジウムにフィブロイン［Pd/Fib］、ポリエチレンイミン［Pd/PEI］を担持した触媒、オスミウム - 活性炭素［Os/c］などの触媒を販売しています。官能基選択性に優れており、使い分けいただくことで種々の還元性官能基変換が可能です。
■ Os/C
O2 N

Os/C, NH 2 NH2 . H 2 O (excess)

長

H2 N

MeOH, 60 ℃, 4h●官能基選択的還元触媒●発火性が少ない

yield 94 %■ 5 % Pd/C（en）●反応後はろ過するだけで簡単に除去可能

5% Pd/C(en)
OBn

OBn

H 2 (1 atm), MeOH, 24h
yield 91%

■ 10 % Pd/C（en）
O

OH

10% Pd/C(en)H 2 (1 atm), MeOH, 3hyield 91%

■ Pd/Fib
O

反 応 例

Ph

■ ベンジルエステル基存在下での選択的還元反応
CO2 BnO2 N

CO2 Bn

10% Pd/C[Ph 2 S]
H2 (balloon), MeOH, rt, 24h

Cl

H2 N

■ 芳香族系アミンの Cbz 基保護下での選択的還元反応
NHCbz

NHCbz

10% Pd/C[Ph2 S]
H2 (balloon), MeOH, rt, 24h

yield 98%

H2 (balloon), MeOH, rt, 24hClyield 100%

コード No.
NEW

18

品

名

規

格

160-24131 Palladium-Activated Carbon Diphenyl
Sulﬁde Complex（Pd8.5-11.5%）（wetted 有機合成用
166-24133 with ca. 50% water）【Pd/C[Ph2S]】

Pd/PEI
H 2 (1 atm), 24h
MeOH + dioxane (1 : 1)

Ph

容 量 希望納入価格(円)
1g

5,500

5g

15,500

和光純薬時報

Cl

Ph +
97

コード No.
品
名151-02881 Osmium-Activated Carbon【Os/C】
157-02883 （Os 3.5-6.5%）
163-21441 Palladium-Activated Carbon
169-21443 Ethylenediamine Complex【5％ Pd/C（en）】
161-21442 （Pd 3.5-6.5%）

167-22181
Palladium-Fibroin【Pd /Fib】
163-22183
161-22221 Palladium-Polyethyleneimine
167-22223 【Pd/PEI】

10% Pd/C[Ph2 S]

ClPh

167-23301 Palladium-Activated Carbon
Ethylenediamine Complex
163-23303 （Pd 8.5-11.5%）【10%Pd/C(en)】■ 芳香族ハロゲン化合物存在下での選択的還元反応

Ph

H2 (1 atm), MeOH, 20h

yield 98 %■ Pd/PEI
Ph

yield 96%O

Pd/Fib

Ph
Ph

:

規

+ Ph

Ph

1

:

格

容 量 希望納入価格 ( 円 )1g
5,000
5g 16,000
1g
4,000
5g 13,500
25g 48,000

有機合成用
有機合成用

有機合成用
有機合成用
有機合成用

2

1g
5g

5,000
16,000

1g
5g
1g
5g

4,800
14,5008,600
27,500選択的還元触媒のセット品
上記の５種の触媒［Os/C, 5％ Pd/C
（en）
, 10% Pd/C
（en）,
Pd/Fib, Pd/PEI 各 1 g］をお求めやすいセット品にしました。
コード No.
品
名032-21041 Chemoselective Reduction Catalysts Set

Vol.78, No.2（2010）

規 格
容 量 希望納入価格 ( 円 )有機合成用 1セット 23,000

ew Products
不斉水素化触媒

コード No.

シンコニジン修飾パラジウム - 活性炭素
【CD-modified Pd/C】
本品はパラジウム - 活性炭素にシンコニジンを修飾した触媒です。β 置換不飽和カルボン酸、α- ピロン誘導体のTraceable Reference Material 100mg 17,000
Traceable Reference Material 100mg

6,000

018-22261 Atrazine Reference Material
Bensulfuron-methyl Reference028-16331
Material
NEW 020-16391
Bensulide Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

8,500

020-16271 Benthiocarb Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

025-16341 Bethrodine Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 10,000

022-16351 Bifenox Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 10,000

027-16281 BPMC Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

Traceable Reference Material 100mg 18,000NEW030-21081 Cumyluron Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 25,000049-30881 DCMU Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

049-30641 DEP Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 12,000045-30861 Dimepiperate Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 20,000042-30871 Dithiopyr Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 15,000052-07841 Echlomezol Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 12,000058-07821 EPN Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 13,000059-07851 Esprocarb Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 16,000

054-07801 Etofenprox Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

NEW068-05421 Flufenoxuron Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 13,000NEW065-05311 Flutolanil Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

6,000

NEW

070-05541 Glyphosate Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

8,000

091-05671 Iprodione Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

8,000

094-05661 Isoprothiolane Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

6,000

097-05651 Isoxathion Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

6,000

134-15961 Malathon Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 11,000

131-16191 MCP Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 12,000

136-16021 MCPP Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 15,000

133-16031 Mefenacet Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 12,000

137-15951 MEP Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

135-15991 Mepronil Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 10,000

81%ee
COOH

CD-modiﬁed Pd/C
H3CO

H2 , dioxane/H2O,
benzylamine

H3CO
OCH3

OCH3
4,4'-Dimethoxyphenylcinnamic Acid

92%ee
NEW

〔参考文献〕
１）Sugimura, T. et al . : J. Catal ., 262 , 57（2009）.

NEW２）杉村高志：Wako Organic Square , 31 , 2（2010）.
コード No.

品

名031-21371 Cinchonidine-modified Palladium-037-21373 Activated Carbon【CD-modified Pd/C】

規

格

有機合成用

容 量 希望納入価格(円)
200mg

7,000

1g

24,000

SI トレーサブルな標準物質
TRM (Traceable Reference Material)

7,000

033-21071 Chlorfluazuron Reference Material Traceable Reference Material 100mg 10,000
Traceable Reference Material 100mg 15,000

CD-modiﬁed Pd/C

COOH

6,000

031-21251 Coumaphos Reference MaterialNEW

Phenylcinnamic Acid

Traceable Reference Material 100mg 11,000

037-20871 Chloroneb Reference Material

COOH
H2 , dioxane/H2O,
benzylamine

Traceable Reference Material 100mg 25,000

NEW

反 応 例
COOH

希望納入
容 量 価格 ( 円 )019-22311 Asulam Reference Material●不斉水素化に有用●安全に使用可能格013-22331 Anilofos Reference Material

NEW●回収が容易規NEW

全に使用できるほか、回収も容易に行えます。

長

名

NEW

不斉水素化に有用です。シンコニジンを修飾したことで安

特

品

7,000

5,000

8,000

132-16001 Metalaxyl Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

NEW

139-16011 Molinate Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 15,000NEW

139-16131 Myclobutanil Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 16,000

164-23791 2,4-PA Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

162-24071 PCP Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 10,000

NEW

9,000

6,000

164-23811 Pendimethalin Reference Material Traceable Reference Material 100mg 13,000

純度保証において、NMIJ で SI トレーサブルな方法で測NEW定した特性値［純度（質量分率）］に、当社小分け時の均NEW

160-23911 cis -Permethrin Reference Material Traceable Reference Material 100mg 10,000
trans -Permethrin Reference
165-24061
Traceable Reference Material 100mg 25,000
Material
161-23821 Probenazole Reference Material
Traceable Reference Material 100mg 20,000NEW

162-24191 Prochloraz Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 15,000

165-23461 Procymidone Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 13,000

162-23611 Propyzamide Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 12,000

質性及び、商品の保存安定性による不確かさを付加した
TRM シリーズを残留農薬試験用の農薬を中心に順次追加
しております。

特※SI：（国際単位系）The International System of Units の略称

長167-23801 Pyributicarb Reference Material
Pyridaphenthion Reference
168-23831
Material
NEW 198-15541
Silafluofen Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

9,500

Traceable Reference Material 100mg

6,000

198-15281 Simetryn Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

201-17501 Thiophanate Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 20,000

204-17471 Thiuram Reference Material

Traceable Reference Material 100mg

225-01751 Vinclozolin Reference Material

Traceable Reference Material 100mg 14,000

NEW●特性値として純度（質量分率）を記載した証明書を商品に添付●純度 ( 質量分率 ) は NMIJ トレーサブル●特性値の不確かさの要因として、小分け時の均質性及び保存安定性による不確かさを付加

NEW

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

Traceable Reference Material 100mg 14,000
7,000
5,000

19

ew Products
多くの金属元素に対応

操 作 例

プレセップ ® ポリキレート

カラムコンディショニング

プレセップ ® ポリキレートは、官能基としてカルボキシ
メチル化ポリエチレンイミンを導入したキレート樹脂を用いた固相抽出カラムです。一般的な IDA（Iminodiaceticacid）型キレート樹脂に比べ、広い pH 範囲で多くの金属元素を高度に捕捉できます。また、酸性〜中性条件下では、
アルカリ金属・アルカリ土類金属の影響を受けず金属オキソ酸（Mo、V、W）を高度に捕捉することが可能です。

① CH3OH② 3 mol/ℓ HNO 3③ H2 O
④ 0 . 1 mol/ℓ CH 3 COONH 4

5 mℓ
10 mℓ
20 mℓ
10 mℓ

固相抽出操作サンプルの pH 調整① 0 . 1 mol/ℓ CH 3 COONH 4 5 mℓ/ サンプル 100 mℓ② HNO3 または NH 3 溶液を用いて pH 調整
サンプル負荷：〜 500 mℓ
流速：3 〜 10 mℓ/min
洗浄
H 2 O：20 mℓ
溶出
1 〜 3 mol/ℓ HNO 3：3 〜 5 mℓ
機器分析（ICP-AES、ICP-MS、AAS など）
コード No.

品

名

規

格

容量

希望納入価格 ( 円 )296-33491 Presep PolyChelate（250mg/3mℓ）試料前処理用 10 本×５ 75,000
®

デ ー タ

関連商品

■処理排水及び表層海水中の金属元素の測定例
Elements

Treated wastewatera（n=3）
Found/μg/ℓ

Recovery /%cSurface seawaterb（n=3）
Found/μg/ℓ

Recovery /%c

コード No.

品

名

規

格

013-08455 25% Ammonia Solution

有害金属測定用容量

希望納入価格 ( 円 )

500mℓ

2,400

Cd

0.2±0.02

93±2.9（0.03±0.004）

96±1.7014-20845 Ammonium Acetate

RoHS対応用

500g

1,950

Co

< 0.03392±3.7（0.02±0.012）

96±1.5136-09475 Methanol

精密分析用

500mℓ

1,500

Cu

1.1±0.13104±3.5

0.77±0.017

112±3.2

Fe

33±3.3114±13.8

1.3±0.05

94±3.2140-04016 Nitric Acid（1.38）

有害金属測定用

500mℓ

2,200

Mn

871±7564±9.0Not measure

Not measure

超微量分析用酸類

Mo

458±9.3

98±1.77.4±0.07

100±4.5

コード No.

容量

希望納入価格 ( 円 )Ni

11±0.2101±4.90.46±0.017

100±1.8

Pb< 0.2294±2.70.09±0.052

104±2.0V< 0.2292±3.1

1.3±0.05

96±2.5Zn

11±3.183±2.12.5±0.24102±2.2

a. Sample volume：200mℓ, pH 5.5.
b. Sample volume：300mℓ, pH 4.0.
c. 5μg of each element was added to the solution.

品

名

規

格

089-07555 Hydrochloric Acid

超微量分析用

500mℓ 20,500

081-07755 Hydroﬂuoric Acid

超微量分析用

500mℓ 22,000

148-06935 Nitric Acid（1.42）

超微量分析用

500mℓ 21,000

198-11825 Sulfuric Acid

超微量分析用

500mℓ 20,000

217-01031 Ultrapure Water

超微量分析用

1ℓ

5,000■プレセップ ® ポリキレートの金属捕捉特性
Cartridge: PolyChelate, 3 mℓ of syringe type packed
with 0 . 25 g of the resin
Conditioning: 5 mℓ of CH 3 OH, 10 mℓ of 3 mol/ℓ HNO 3 ,20 mℓ of H2 O and 10mℓ of 0. 1mol/ℓ
CH 3 COONH 4
Sample volume : 100 mℓ
Each element : 10μg
Flow rate: 3 mℓ/min
Elution: 3 mℓ of 3 mol/ℓ HNO 3 and then 3 mℓ of
H2 O
Measurement: PerkinElmer Optima 3000 DV ICP-AES,
cross-ﬂow nebulizer and a Scott-type spraychamber※ 本データは、本品の使用例を示すもので、製品規格及び品質保証のデータではありません。
（データご提供 : 富山大学工学部20

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

加賀谷重浩先生）

ew Products
食品成分の分析に

骨吸収阻害剤：骨代謝の研究に！

食品分析用標準品

アレンドロン酸ナトリウム三水和物

食品分析用の標準品を新たに追加しました。

リセドロン酸ナトリウムn 水和物
骨組織は、絶えず骨吸収と骨形成が行われており、リモ■シクロアリイン塩酸塩一水和物標準品
化学名：（1S , 3R , 5S ）-5 - Methyl- 3 -thiomorpholinecarboxylic
Acid 1-Oxide Hydrochloride Monohydrate
CAS No.：13438 - 71 - 6

H
N

H 3C

含量（HPLC）：98 . 0 % 以上
備

考：たまねぎに含まれ本品は、ビスフォスフォネート化合物であり、破骨細胞

・HCl ・H2Oが付着する骨石灰化面に選択的に分布します。そして破骨=観：白色の結晶性粉末

O

細胞の作り出す酸性環境下で遊離されて破骨細胞に取込ま

C6H11NO3S・HCl・H2O＝231.70

る成分

よって引き起こる骨粗鬆症は、高齢化社会への移行に伴い患者数が増加しています。

COOH

S

外

デリングされています。骨代謝のバランスが崩れることにれ、骨吸収活性を抑制します。破骨細胞のアポトーシス誘
導作用、破骨細胞の骨吸収能の直接的抑制作用により骨吸収を抑制すると考えられています。

■（Z ）- 8 - ヘプタデセン標準品（CH2）6

含量（cGC）：95 . 0 % 以上

H3C

C

H

C

（CH2）
7
CH3

H

C17H34＝238.45

外観：無色澄明の液体

備

考：放射線照射食品検知■アレンドロン酸ナトリウム三水和物
含量（HPLC）：97 . 0 % 以上
水溶状：試験適合

炭化水素法用試薬

CAS No.：121268 - 17 - 5■ 1 , 7 - ヘキサデカジエン標準品（異性体混合物）
HO

CAS No.：125110 - 62 - 5

HO含量（cGC）：98 . 0 % 以上（異性体混合）
外観：無色澄明の液体

備

考：放射線照射食品検知
H2C

CH

O

O

P

P

ONa

OH

H2 N

OH 3H2O・

CAS No.：16369 - 12 - 3炭化水素法用試薬
（CH2）
4

H
C

C4H12NNaO7P2・3H2O＝325.12

H
C

（CH2）
7

CH3

C16H30＝222.41■リセドロン酸ナトリウムn 水和物
含量（HPLC）：97 . 0 % 以上

■ 酢酸（±）-α- トコフェロール標準品

水溶状：試験適合

名：Vitamin E Acetate

CAS No.：115436 - 72 - 1

CAS No.：7695 - 91 - 2
含量（HPLC）：98 . 0 % 以上
外

観：無色〜黄色、澄明の液体HO

備

考：ビタミン E 誘導体

HO

CH3
H3C

O

N

CH3

O

P

P
OH

ONa
OH
H2O

CH3
CH3

H3CCOO

CH3

CH3

C7H10NNaO7P2＝305.09

CH3

コード No.

O・別C31H52O3＝472.74

品

名

規

格

容 量 希望納入価格(円)

コード No.

Cycloalliin Hydrochloride Monohydrate
035-21151
食品分析用 50mg 40,000
Standard

012-22661

082-08841 (Z )-8-Heptadecene Standard

食品分析用 50mg 35,000018-22663

1,7-Hexadecadiene Standard
089-08851（mixture of isomers）

食品分析用 50mg 45,000

189-02461

食品分析用 100mg 10,000

185-02463

208-17751 (±)-α-Tocopherol Acetate Standard

和光純薬時報品

名規格Alendronate Sodium Salt Trihydrate

薬理研究用

Risedronate Sodium Salt n -Hydrate

薬理研究用Vol.78, No.2（2010）

容 量 希望納入価格 ( 円 )100mg 12,000
500mg 48,000
100mg 14,000
500mg 48,000

21

ew Products
使 用 例

免疫研究に

分子群です。現在その機能は、神経系にとどまらず器官形
成、免疫系、血管新生、がんの伸展への関与など、多岐に60わたることが明らかになっています。最近では、免疫系に50

り、免疫系において機能するセマフォリン分子は『免疫セマフォリン』の名称でも呼ばれています。
当社では免疫系に関わるセマフォリン 4 A（Sema 4 A）、
セマフォリン 4 D/CD100（Sema 4 D/CD100）に対するマ
ウスモノクローナル抗体をラインアップしました。

誘導されます。また、免疫学的解析より Th 1 /Th 2 制御への関与が明らかとなっています。
形状：PBS 溶液
抗原：組換えマウス Sema 4A-Fc 融合タンパク質
特異性：マウス及びヒト Sema 4A
クローン No.：1H 9
推奨実用希釈倍率：
Immunocytochemistry
Immunohistochemistry
Immunoprecipitation

1：20 〜 50
1：10 〜 20
1：500 〜 1 , 000■ 抗マウス Sema4D/CD100, モノクローナル抗体
Sema 4 D/CD 100 は、T 細胞に多く発現しています。一方、休止期の B 細胞や樹状細胞での発現は少ないですが、これらの細胞も活性化されると Sema 4 D/CD 100 の発現上昇が認められます。また、免疫応答及び免疫系のホメオ

60
40
20

102

101

104

1：20 〜 50

Immunoprecipitation

1：100 〜 500

0

101

102

103

104

105

Fluorescence Intensityof Allophycocyanin

1）Kumanogoh, A. et al . : Immunity , 22 , 305（2005）.
2）Okuno, T. et al . : J. Immunol ., 184 , 1499（2010）.
コード No.

品

名Anti Mouse Sema4A,
019-22811
Monoclonal Antibody

018-22381
014-22383

規

格

容量

希望納入価格（円）

免疫化学用 100μℓ 30,000

Anti Mouse Sema4D/CD100,
免疫化学用 100μℓ 30,000
Monoclonal Antibody

品名Anti DYKDDDDK tag,
Monoclonal Antibody

292-69903 ImmunoStar LD®

290-69904

和光純薬時報20105296-69901

Immunocytochemistry40〔参考文献〕

012-22384

推奨実用希釈倍率：

60

COS7 細胞で Sema4A, Sema4D/CD100 を発現させ、抗マウス Sema4A,
モノクローナル抗体及び、抗マウス Sema4D/CD100, モノクローナル抗体
で染色（1：30）、抗マウス IgG で 2 次抗体染色（1：50）し、Allophycocyanin
で検出した。
緑線：コントロール、赤線：Sema4A または Sema4D/CD100 を発現させた COS7 細胞（データご提供：大阪大学 微生物病研究所 感染病態分野 熊ノ郷淳先生）

コード No.

クローン No.：5H 7

103

Sema4 D/CD100

80

Fluorescence Intensityof Allophycocyanin

関連商品

特異性：マウス及びヒト Sema 4 D/CD100

100

80

す。

抗原：組換えマウス Sema 4D/CD100 -Fc 融合タンパク質22

Sema4 A100

016-22821

濃度：0 . 9 mg/mℓ（初回ロット実績値）

tro
l
Se
m
C a4D
D /
10
0FL

■ FACS

スタシスの維持に重要であることが明らかとなっていま
形状：PBS 溶液

Sema4D/
CD100
約150k

60

0

濃度：0 . 7 mg/mℓ（初回ロット実績値）

110
80% o f MAX
(number of cells)

れませんが、Th 1 型細胞に分化すると Sema 4 A の発現が

co
n

160
Sema4A
約110k

COS7 細胞で Sema4A-FLAG（DYKDDDDK）（ 約 110k），Sema4D/CD100FLAG（約 150k）を強制発現させ、NP-40 で細胞を溶解させた。抗マウス Sema4A, モノクローナル抗体及び、抗マウス Sema4D/CD100, モノ
クローナル抗体それぞれで免疫沈降後（5μg/mℓlysate）、SDS-PAGE を行い、抗 DYKDDDDK 抗体でウェスタンブロットを行った。2 次抗体は抗マウス IgG-POD を使用し、イムノスター ® LD で検出した。
（データご提供：大阪大学 微生物病研究所 感染病態分野 熊ノ郷淳先生）% o f MAX
(number of cells)ています。休止期の T 細胞には Sema 4A の発現は認めら

a4

tro
l

260

■ 抗マウス Sema4A, モノクローナル抗体
Sema4A は、免疫系では主として樹状細胞に多く発現し

（k）

160
110
80

おけるセマフォリンの重要性が広く認識されるところとな

Se
m

（k）

co
n

セマフォリンファミリーは、発生過程における神経軸索の方向性を決定する神経ガイダンス因子として同定されたAFL

抗マウス Sema4D/CD100, モノクローナル抗体

AGAG■ 免疫沈降抗マウス Sema4A, モノクローナル抗体

Vol.78, No.2（2010）

規

格

免疫化学用

容量

希望納入価格（円）200 ㎍

24,0001mg

48,0005mg

77,000200cm28,000

2

ブロッティング用 1,000cm

30,0002,000cm2

48,000ew Products■ ZD7288

神経、筋肉などの電気生理の研究に！

心臓の洞房結節に作用し、過分極誘発性陽イオン電流

イオンチャンネル作用物質（If または Ih）の発生を阻害します。

イオンチャンネルは、細胞内外における各種イオン

含量（HPLC）：98 . 0 % 以上+

（K 、Ca 、Na 、Cl ）の濃度や膜電位の調節、神経や筋

水溶状：試験適合

肉などの活動電位の発生に関与しています。

CAS No.：133059 - 99 - 1

2+

+

−

H3C
H
N

N
N

■ E-4031

不整脈作用があります。

コード No.

含量（HPLC）：98 . 0 % 以上

054-07921

水溶状：試験適合
N

N

O

NEW

電位依存性 Ca 2 + チャンネル α2δ サブユニットに作用
含量（HPLC）：99 . 75 %（初回ロット実績値）
C9 H17 NO 2 =171.24■ KB-R7943
NCX（Na+/Ca 2 + exchanger）の阻害剤です。心筋虚血、再灌流障害を抑制すると言われています。

細胞生物学用

269-01971
265-01973

SKF96365

細胞生物学用ZD7288

細胞生物学用

O2N

・

O

NH
NH2

O
N

O

・

34,0005mg

15,00025mg

60,00010mg

32,00050mg 128,000

含量（HPLC）：97 . 7％（初回ロット実績値）
エタノール溶状：試験適合

O

CH3

CH3

O

和光純薬時報

OH

CH3
CH3

O

HO

OH

C24H26O 6 ＝410.46〔参考文献〕
1）Itoh, T. et al . : Bioorg. Med. Chem ., 16 , 4005（2008）.
2）Akao, Y. et al . : Int. J. Mol. Sci ., 9 , 355（2008）.
コード No.

C22H26N2O 3･HCl=402.91

CH3

H3C O

ルブロッカーです。受容体介在性や電位依存性の Ca 2 + 流

CAS No.：130495 - 35 - 1

30,000トーシス誘導経路に作用すること、また、がん細胞選択的

TRP（Transient receptor potential）カチオンチャンネ

HCl

1g
10mg

α- マンゴスチンは、マンゴスチン果皮に含まれている■ SKF96365

水溶状：試験適合

9,000

キサントン誘導体です。ミトコンドリアが関与するアポC16H17N3 O3 S・CH3 SO3 H=427.50以上

50mg 120,000200mg

α- マンゴスチン

H3C

N

30,000

外観：うすい黄色〜黄色、結晶性粉末〜粉末

CH3 SO3H

S

含量（HPLC）：98 . 0 %希望納入価格（円）にアポトーシスを誘導することが報告されています。

含量（HPLC）：98 . 0 % 以上

入を阻害します。

細胞生物学用

容量10mg

マンゴスチン抽出物

CAS No.：60142 - 96 - 3

CAS No.：182004 - 65 - 5

E-4031

格

CO2 H

H2N

水溶状：試験適合

水溶状：試験適合規114-00851 KB-R7943
199-15593■ ガバペンチン

名

細胞生物学用193-15591

C21H27N3O3 S･2HCl=474.44

品

Gabapentin

072-05643

2HCl

O

し、GABA 神経系を亢進させます。

076-05641

CH3

・

O

050-07923

H
N

S

CH3

C15H21ClN 4 = 292.81

go-go related gene）K+ チャンネルのブロッカーです。抗

H3C

CH3

+

CH3

・Cl

心筋活動電位の再分極を担う HERG（Human ether-a-

CAS No.：113559 - 13 - 0

N

品

132-16241 α-Mangostin

Vol.78, No.2（2010）

名

規

格

細胞生物学用容量

希望納入価格（円）5mg

12,00023

ew Products
MALDI-MS のキャリブレーションに…

100

MALDI-MS 用キャリブラント

90

本品はタンパク質などの生体高分子の分析に汎用されて70% Intensity

80

いる matrix assisted laser desorption ionization（MALDI）
mass spectrometry 用のペプチドスタンダードです。高純

60
50
40

度に精製され、MALDI-TOF-MS 試験をクリアしています。

30
20

長

10

●高純度

0
499.0

●分子量が約 500 刻みでサンプルに応じた最適なキャリブ
ラントの選択が可能

899.4

1299.81700.2Mass ()

2100.62501.0■ Insulin（⑦）●経済的で使いやすい容量

5804.6455

特1046.5423■ Angiotensin Ⅱ（①）

プロテオーム関連試薬

品質保証● MALDI-TOF-MS：試験適合

100
90

使用例

80

19μℓH2O1μℓ

0.5μℓ% Intensity

20μℓ

70

0.5μℓ

60
50
40

H2O or
0.1% TFA

30
20
10

Stock
Solution

Working
Solution

MALDI
targetMatrixSolution

02499.03499.44499.85500.2Mass (

6500.67501.0)

データ：MS チャート% Intensity

80
70
60
50

775.4107（※）

40
30
20
10
0

500

1200

1900

26 00
Mass (

サンプル：MSキャリブラント混合物
マトリックス：CHCA（Code No. 037-19261）（※）
M.W. 755.4107のペプチドは商品化検討中

242932.5905（⑤）

3574.8711（⑥）

902477.3630（④）

100

2026.8955（③）

1046.5422（①）

1497.8483（②）■ キャリブラント混合物

和光純薬時報33 00

4 0 00)（データご提供：大阪府立母子医療センター

Vol.78, No.2（2010）

和田芳直先生）ew Products
コード No.

品（M+H）+（monoisotopic）

名

規格

容量

希望納入
価格（円）

①

019-22931 Angiotensin II（Human）
015-22933 MALDI-MS Calibrant②

017-22971 [D-Arg1,D-Pro2,D-Trp7, 9, Leu11]プロテオーム 2nmol×1 本 8,000
1497.8483
研究用 2nmol×5 本 28,000
013-22973 Substance P MALDI-MS Calibrant③

016-22941
012-22943

1046.5423

Apamin MALDI-MS Calibrant

プロテオーム 2nmol×1 本 8,000
研究用 2nmol×5 本 28,000

2026.8944

プロテオーム 2nmol×1 本 8,000
研究用 2nmol×5 本 28,000

2477.3642

プロテオーム 2nmol×1 本 8,000
研究用 2nmol×5 本 28,000④

160-24251 PAMP（Rat）MALDI-MS
166-24253 Calibrant⑤

014-22981 ACTH（Human, 1-24）MALDIプロテオーム 2nmol×1 本 8,000
2932.5885
研究用 2nmol×5 本 28,000
010-22983 MS Calibrant⑥

013-22951 Adrenomedullin（Human, 22019-22953 52）MALDI-MS Calibrant

090-05881 Insulin（Human）MALDI-MS⑦
096-05883 Calibrant

3574.8770

プロテオーム 2nmol×1 本 8,000
研究用 2nmol×5 本 28,000

プロテオーム 2nmol×1 本 8,000
5804.6455
研究用 2nmol×5 本 28,000

ゲル内消化酵素
リシルエンドペプチダーゼ ®，質量分析グレード
トリプシン，ブタ膵臓由来，質量分析グレード
本品はゲル内消化に汎用されるトリプシン（Tp）とリ
シルエンドペプチダーゼ（LEP）です。
トリプシンは還元メチル化により自己消化を低く抑えています。
リシルエンドペプチダーゼは、タンパク質の切断部位を特異的かつ効率的に分解でき、ペプチド質量によるデータ
ベース検索が容易になると言われています。
また、トリプシンとリシルエンドペプチダーゼを併用することにより、リシン残基における切断の確実性が増し、得られるペプチド数が増加すると報告されています。

高純度マトリックス
α- シアノ -4- ヒドロキシけい皮酸【CHCA】

使 用 例

2,5- ジヒドロキシ安息香酸【DHB】
シナピン酸【SA】
本品は再結晶処理により高純度に精製されたマトリック
スです。ノイズが少なく、高い S/N 比のマススペクトルが得られます。またシナピン酸は、飽和溶液が作りやすいよ
うに、溶解性が高められています。

使 用 例
非再結晶化CHCA（データご提供：大阪府立母子医療センター 和田芳直先生）
コード No.

品

名

Lysyl Endopeptidase®, Mass
125-05061
Spectrometry Grade202-15951⇩

再結晶化CHCA

Trypsin, from Porcine Pancreas,
Mass Spectrometry Grade

規

格

容量

希望納入価格（円）プロテオーム研究用 20μg×5 本

17,500

プロテオーム研究用 20μg×5 本

15,000

MS 用染色キット
銀染色 MS キット
ネガティブゲル染色 MS キット
銀染色 MS キットは、従来の銀染色キットに含まれるグ
ルタルアルデヒドを除くことにより、ゲル内消化効率を高（データご提供：大阪府立母子医療センター
コード No.
037-19261

和田芳直先生）品
名規 格
希望納入価格（円）容量
α-Cyano-4-hydroxycinnamic Acid
プロテオーム研究用 50mg×5 本 20,000【CHCA】めているため、質量分析に最適です。ネガティブ染色 MS
キットはタンパク質が色素による修飾を受けないため質量分析に有効です。
コード No.

品

名

規

格

容量

希望納入価格（円）044-29101 2,5-Dihydroxybenzoic Acid【DHB】プロテオーム研究用 50mg×5 本

20,000299-58901 Silver Stain MS Kit

電気泳動用

20 回用

19,000192-13361 Sinapic Acid【SA】

20,000293-57701 Negative Gel Stain MS Kit

電気泳動用

20 回用

17,000

プロテオーム研究用 50mg×5 本

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）25

ew Products
アルツハイマー病の研究に！

関連商品

老人斑選択的蛍光プローブ【BF-168】

コード No.

神経原線維変化選択的蛍光プローブ【BF-170】

組織染色キット
Amyloid β-Protein
299-56701
免疫組織染色用 50 回用 110,000
Immunohistostain Kit
合成アミロイド β- プロテインペプチド
Amyloid β-Protein（ペプチド研究所，
330-43071
0.5mg 18,000（Human,1-40）
4307-V）
Amyloid β-Protein（ペプチド研究所，
338-43491
0.5mg 30,000（Human,1-42）
4349-V）
Amyloid β-Protein（1-40）
014-18951
生化学用 1mg 48,000（Hydrochloride）
Amyloid β-Protein（1-42）
011-18961
生化学用 1mg 54,000（Hydrochloride）
組換えタウ タンパク質
Tau-352 Protein, Human,
201-17621
細胞生物学用 50μg 38,000
recombinant, Solution
Tau-381 Protein, Human,
208-17631
細胞生物学用 50μg 38,000
recombinant, Solution
Tau-383 Protein, Human,
205-17641
細胞生物学用 50μg 38,000
recombinant, Solution
Tau-410 Protein, Human,
202-17651
細胞生物学用 50μg 38,000
recombinant, Solution
Tau-412 Protein, Human,
209-17661
細胞生物学用 50μg 38,000
recombinant, Solution
Tau-441 Protein, Human,203-17681
細胞生物学用 50μg 38,000
recombinant, Solution
タウ凝集阻害剤

アルツハイマー病脳では、β アミロイドが凝集した老人斑とりん酸化タウが凝集した神経原線維変化が観察されます。このうち、老人斑を比較的選択的に染色する蛍光プ
ローブが BF- 168、神経原線維変化を比較的選択的に認識する蛍光プローブが BF- 170 です。

特長● 簡単な操作で短時間に染色できる（免疫組織染色のおよそ 1/3 の染色時間）

測定波長

励起波長（nm） 蛍光波長（nm）
BF-168380-420450 以上BF-170450-490520 以上デ ー タ■ BF-168

品

規 格（メーカーコード）

名133-06962 Methylene Blueアルツハイマー病患者切片の染色。免疫染色と同様に老人斑選
択的に染色できた。

リン酸化 α シヌクレイン抗体
Anti Phosphorylated
014-20281 α-Synuclein, Monoclonal
Antibody（pSyn#64）

容量

希望納入価格（円）

試薬特級

25g

3,800

免疫化学用

50μℓ

30,000（データご提供：東北大学未来医工学治療開発センター 工藤幸司先生）

RNA 研究に…

■ BF-170「尿素入り変性ポリアクリルアミドゲル」
試作品のご案内アルツハイマー病患者切片の染色。免疫染色と同様に神経原線
維変化選択的に染色できた。

Ready-to-use の尿素入り変性ゲルです。RNA などを変性状態で電気泳動する際にご利用いただけます。
手作りされた製造直後のゲルと比較すると若干バックグラ
ウンドが高い傾向があります。しかし、Ready-to-use のプ
レキャストゲルタイプですので、尿素の溶解など面倒で時間のかかる作業が必要ありません。
試作品をご用意しておりますので是非お試し下さい。
申込先：jiho@wako-chem.co.jp（データご提供：東北大学未来医工学治療開発センター 工藤幸司先生）
(bp)

(bp)
100

〔参考文献〕
1）Kitamoto, T. et al .: Lab. Invest ., 57 , 230（1987）.
2）Okamura, N. et al .: J. Neurosci ., 24 , 2535（2004）.

50
40
30

3）Okamura, N. et al .: J. Neurosci ., 25 , 10857（2005）.
コード No.

品

名

格

容量

希望納入価格（円）細胞生物学用1mg

15,000026-16371 BF-170（神経原線維変化選択的） 細胞生物学用

1mg

15,000029-16361 BF-168（老人斑選択的）26

規

和光純薬時報

20

50
40
30
サンプル：RNA Prestain Marker
泳動バッファー：TBE Buﬀer
電流：10mA 低電流

20

サンプル：RNA Marker
泳動バッファー：0.5×TBE Buﬀer
電流：10mA 低電流
染色：銀染色現像時間：5 分（ゲルサイズ 10×10×1（mm）. 泳動装置はイージーセパレーター TM（Code No. 058-07681）他を使用できます）

Vol.78, No.2（2010）

ew Products
特便利な溶液タイプ●エチジウムブロマイドの構造を変換

5-フルオロオロチン酸 DMSO 溶液
5-フルオロオロチン酸（5-FOA）は、Orotidine- 5 -P（OMP）
Decarboxylase を合成する酵母細胞に対してのみ致死作用を有します。したがって、OMP Decarboxylase 遺伝子を持つ酵母菌株の選択が行えます。

●エチジウムブロマイド分解物は AMES 試験で変異原性が無いことを確認済み● SYBR Green、SYBR Gold、SYPRO ORANGE にも適用可能

エチジウムブロマイド分解のメカニズム

本品は、溶解しにくい 5 -FOA を DMSO に溶解した製品

エチブロデストロイヤー
処理により窒素−炭素間の二重構造を破壊です。目的の終濃度に合わせて培地に添加するだけで使用できます。溶解の手間がかかりません。

特長

構造変化によりDNAへのインターカレートができない

長Br−●使いやすい溶液タイプ●酵母の選択マーカーとして有用

H2N●フィルター滅菌済（0.22μm フィルター）F

HN●濃度：100 mg/mℓ●溶媒：DMSO

O●使用期限：２年

NH2

OH

N
H

使 用 例

BrN

O

H2N

エチジウムブロマイド

O

製品概要

⇨

N+

NH2
エチジウムブロマイド分解物

エチジウムブロマイドを含むゲルの処理

O

C5H3FN2O4 ＝174.09
コード No.

品

名100mg/mℓ 5-Ｆ
ｌ
ｕｏ
ｒ
ｏｏ
ｒ
ｏ
ｔ
ｉ
ｃＡｃ
ｉ
ｄ
NEW 060-05481
DMSO Solution

規格

容量 希望納入価格（円）

遺伝子研究用

5mℓ

12,000規

容量 希望納入価格（円）

関連商品
安価な粉末タイプ
コード No.

品

名

格060-03661
066-03663 5-Fluoroorotic Acid Monohydrate

遺伝子研究用

064-03664

1g

12,0005g

44,00010g

74,000ゲル A、B：蒸留水に浸漬
ゲル C、D：蒸留水＋ EtBr Destroyer Bag に浸漬
どちらも 24 時間後に撮影⇒ C、D は UV 照射によって蛍光消滅を確認

DNase 活性、RNase 活性チェック済み（粉末タイプ）
コード No.
064-04921
060-04923

品

名5-Fluoroorotic Acid Monohydrate

規格

分子生物学用

容量 希望納入価格（円）1g13,00020g

140,000

コード No. メーカーコード

品

名

容

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20 個

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和光純薬時報品

名315-90051 EtBr Solution
051-07811
057-07813

Ethidium Bromide

メーカーコード［メーカー名］／規格 容量 希望納入価格（円）［（株）ニッポンジーン］ 10mℓ
遺伝子研究用

9,000

1g

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28,000TM

TM

Vol.78, No.2（2010）

TM27

化学大家 414
ルイ・パストゥール（1822 . 12 . 27 〜 1895 . 9 . 28）
化学史家

島尾

永康

ン・ハーシェルである。かれは石英のエコール・ノルマル

旋光能がその結晶構造を表しているこ

ルイ・パストゥールは小さな革なめとを証明した。

し業者の５人の子供の第３子として発酵したブドウ果汁の中から酒石ドールで生まれた。５歳のとき、ジュ（酒石酸カリウム）が得られることは

ラ山脈の麓の、人口 8 , 000 のアルボワ

ギリシア時代から知られていた。1769に移りそこで成人したので、そこが故年に酒石酸を遊離したのはシェーレで郷となった。つましい職人の家庭にある。第二の酒石酸が北フランスのタ育ったので、家族思い、真面目さ、勤ンで粗製の酒石酸から得られた。1828

勉、経済的な安定への関心が身に着いた。中学時代、成績は普通だったが、

図１．パストゥール、30 歳、ストラスブー
ル大学教授。

絵の才能は抜群で、かれが描いた両親酸（ブドウの房の意）と命名し、酒石酸と同成分であるとした。1830 年、の優れた肖像画が保存されている。15

ンヌ大学教授にもなった。簡素な装置

ベルセリウスは酒石酸とラセミ酸は歳のとき学業に意欲が出て、あらゆると手作りの試薬で実験の技をふるうの異性体であるとし、後者をパラ酒石賞を総なめにしたので、校長はパリのを好んだ。鉱物学教授ドラフォスは結酸と命名した。ビオは 1832 年、酒石

エコール・ノルマル・シュペリウール

晶学の創始者アユイの弟子である。有酸が光学活性で、右旋性であること（高等師範学校）の受験を勧めた。ナ

機化学が科学として成熟しかけたこを示し、1838 年、パラ酒石酸は光学

ポレオンのイベリア半島の戦いに従軍の時期の重要な化学者で、のちにコ

不活性であることを見出した。1841

したことを誇りにしていた父親は無学

レージュ・ド・フランス教授の地位を年、精密な研究者として知られていたで、ルイが地方のリセ（高等中学）のバラールと争うことになるローランド・ラ・プロヴォステーユは酒石酸と教師になってくれればよいがと思って（1807 − 1853）が、このころバラール

パラ酒石酸、およびそれらの塩の各種いたが、ルイは大きな野心をもつようの研究室にいた。パストゥールはこのの結晶の研究を発表した。パストゥーになった。ブザンソンの学校で文学の３人から大きな影響を受ける。1846

ルはこの論文を研究し、自らも酒石酸

バカロレア（大学入学資格）学位を取年に卒業してバラールの助手に任命さとその塩の結晶を研究したところ、すり、さらに 1842 年、科学のバカロレ

れ、1847 年、物理学と化学の２篇のべての酒石酸にはまがうことなく半面アを取った。エコール・ノルマルに論文によって理学博士となった。

像が認められたが、ド・ラ・プロヴォ

入学許可となったが、志願者 22 名中の 15 位という席次が気に入らず、入28年、ゲー・リュサックはこれをラセミ

ラセミ酸の分割・分子不斉ステーユはそれを見落としているという興味ある事実に気がついた。パス

学を辞退した。同じ年の秋、土木技師

1812 年にコレージュ・ド・フラン

トゥールは実験を繰り返し、酒石酸にになることを考えて、エコール・ポリ

ス の 物 理 学 教 授 ビ オ（1774 − 1862）

は半面像があるが、パラ酒石酸にはな

テクニク（理工科学校）を受験したがが、石英が偏光面を面の厚さに比例しいことを確認した。

合格しなかった。そこで１年かけてエて回転させることを発見した。1815

その矢先パストゥールの注目を引い

コール・ノルマルへの入学準備のため

年にビオはまた、砂糖、ショウノウ、たのが、ビオによって科学アカデミー

パリのサン・ルイ校で学んだ。ソルボ

酒石酸、テレピン油、タンパク質などに伝えられたベルリン大学教授ミッンヌの大講堂で 800 人の受講者の一人の天然有機物の溶液でも光学活性が現チ ェ ル リ ッ ヒ（1794 − 1863） の 短 信として、デュマ教授の講義を聴いて、れることを発見した。石英の光学活性（1844）である。それは、酒石酸ナトリ

化学に興味をかきたてられたのもこのは結晶の性質であるが、有機化合物のウム・アンモニウムとパラ酒石酸ナトときである。学年の終わりにサン・ル溶液の光学活性は分子の性質と考え

リウム・アンモニウムとは、化学組成、

イ校で物理学で首席となり、エコー

た。結晶の対称性から現れる面のうち結晶形、比重、複屈折、水溶液の屈折

ル・ノルマル理科志願者名簿の４位と半分だけが結晶形に現れるものを半面率がいずれも同じであるが、ただ水溶なって入学した（1843）。

像という。アユイとその弟子ドラフォ

液では酒石酸塩は光学活性で、パラ酒

エコール・ノルマルには優れた学者

スは石英に半面像があり、右に傾くも石酸塩は不活性である。これでも 1823がいた。化学教授バラール（1802 −のと、左に傾くものがあることを観察

年のシュヴルールの化学種の定義（化1876）は、モンペリエの薬剤師だっした。アユイとドラフォスの結晶学的合物の原子の数、比率、配置が同じでた 23 歳のとき、臭素元素を発見して観察と、ビオの物理学的観察とを結びあれば、同一の種に属する。）によれ大きな注目を浴び、パリに出てソルボつけたのは、イギリスの天文学者ジョば、同一の化合物ということになるの

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

るからである。パストゥールが酒石酸結晶の研究に戻ることはなかったが、とパラ酒石酸以外の物質から研究を始

晩年にそれを深く後悔した。

めていたら、光学異性の発見はなかっ

第２講では、分子不斉と生命の関係ただろう。勿論、実験の巧みさ、粘りが論じられる。1857 年に一種のカビ強さもある。近視だったことも有利にが光学不活性のパラ酒石酸塩を次第に働いた。周囲の正常視覚者に見えない

左旋性にし、最終的には左旋性の結晶

ものも、かれには見えたといわれる。

を生じたことを発見し、物質の非対称

図２．酒石酸ナトリウム・アンモニウムの半面像結晶。右旋性と左旋性。

この年パリは二月革命で騒然となっ

性と生命現象とのかかわりについてのた。５月末、闘争の都パリにいる息子

信念を一層深くした。しかし光学活性をいつも気遣っていた母親が死んだ。

の有機物質は実験室で合成することはではないか、とそれはシュヴルールの傷心のパストゥールは文部省からディできないことを認識した。それでもな

定義への挑戦であった。パストゥール

ジョンのリセの物理学教師に任命されお 1850 年代前半、パストゥールはあ

はこれを読んで、半面像への言及がなた（９月）。ビオとバラールの働きか

えてそのような合成実験を試みた。スいことから、ミッチェルリッヒもそれけがあったのであろうか、進行中の研トラスブール大学では、結晶の生成にを見落としたのではないかと考えた。

究に配慮して、赴任は 11 月まで猶予

非対称の力を及ぼそうと強力な磁石をそこでただちに酒石酸ナトリウム・ア

された。そのディジョンに赴任してわ作った。リール大学では、時計仕掛け

ンモニウムとパラ酒石酸ナトリウム・ずか数週間後に、ストラスブール大学のヘリオスタットと反射板による太陽

アンモニウムの結晶を作り、組織的に理学部の化学の助教授が空席になった光線の逆回しの装置を作って、発芽時観察し始めた。すぐに酒石酸ナトリウ

ので、応募して指名を獲得した。ストの植物の生成過程に非対称な要素を与ム・アンモニウムの結晶に半面像があラスブール大学に着任（1849 年１月）

えようとした。ビオの忠告もあって、ること、また予想に反してパラ酒石酸

して１カ月もたたないうちに、学長の結局この種の実験は中止したが、生命塩にも半面像があることを見出した

次女にプロポーズして半年後に結婚し現象に及ぼす非対称の力は見果てぬ夢（図２）。ルーペで調べると、酒石酸塩

た。ストラスブールに６年間いたのとなって長く残った。

の半面像は右向きだけだが、パラ酒石

ち、フランス最大の工業都市リールに

酸塩には右向きと左向きの両方があっ新設されたリール大学理学部の化学教た。それらは右手と左手のような関係、授兼学部長に転任し、３年後、母校のパストゥールはリール大学の教授

実物と鏡面像の関係であった。そこでエコール・ノルマルに理科科長兼行政だったとき、ビート糖の糖蜜を原料

右向きと左向きのそれぞれの結晶を手監督官として就任した（図１）。

とする酒精工業の発酵の不具合につ発 酵で選別し、それぞれを水に溶かし、偏1860 年、かれはパリ化学会で「分いて相談を受けた（1856）。これがか光計で調べた。右向きの結晶の溶液は子不斉」と題する、２講からなる講演

れの発酵研究のきっかけとされてい

右旋性、左向きの結晶の溶液は左旋性をおこなって研究を回顧し、第１講る。しかしすでに 1849 年にビオからであり、二つの溶液を等量に混合するで、「有機化合物の原子配列が不斉で発酵産物アミル・アルコールの光学活と、混合液は不活性な物質（ラセミ体）

あると、その結晶は重ね合わすことの性を知らされて以来、発酵には関心をとなることが分かった。パストゥールできない半面像をもった分子不斉を示もっていた。発酵現象の近代化学的解のこの最初の研究（1848 年５月 15 日発す。分子不斉が存在することは光学

釈は 18 世紀末のラヴォワジエに始ま表）が出世作となった。ときに 26 歳。

活性によって明らかになる、」と述べる。19 世紀初めにゲー・リュサック

パストゥールの研究には二つの幸運た。これは立体化学という新しい科学

が、ブドウ糖からアルコールと炭酸ガがはたらいた。一つは酒石酸塩のうちを予想するものであり、1874 年、22スが生じるアルコール発酵の方程式をナトリウム・アンモニウム塩だけが、歳のファント・ホフと 27 歳のル・ベ提起した。しかし化学者は何が発酵

不活性のパラ複塩を二つの成分に分割

ルによって、それぞれ独立に不斉炭素をおこすかは論じなかった。1835 年、することができたことである。他の塩原子の概念が発見されたことで、パスカニャール・ド・ラトゥールが、アルの結晶は完面像になり、半面像はでき

トゥールの生前にその基礎が築かれコール発酵をおこなうのは生きた酵母ないのである。いま一つの幸運は、こた。結晶と化学の独創的な研究は、パである。それは楕円形または球形の植の実験が気温の低いパリでおこなわれストゥールの業績のうちではあまり物であり、増殖するとした。細胞学者

たことである。26℃以上では酒石酸ナ

有名でないものである。その後パスシュワンもキュッツィングもそれぞれトリウム・アンモニウムは完面像にな

トゥールは実際問題に専念して、再び独立にこれを確認した。しかし、ベル

和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）29

セリウス、リービッヒなど化学界の権威たちは、この発酵の生物説を認めなかった。パストゥールは化学者としての教育を受けたにもかかわらず、つねに自分の研究の中の生物学的な含蓄を見逃さなかった。「乳酸発酵についての報告」（1857）という短い論文が、パストゥールの 20 年間にわたる発酵研究の最初の論文である。アルコール
発酵ほど産業的に重要視されていな
かった乳酸発酵（酸乳、たとえばヨー
グルト、を生じる発酵）をあえて選んだのは、高名で論争好きなリービッヒの発酵の化学説を打破するための戦略だったと考えられる。アルコール発酵にはすでに多くの研究が出ており、化学者もそれに関与する酵母が生物であ図３．白鳥の頸型フラスコ（パストゥール、『自然発生説の検討』）。

判したのはスパランツァーニ（1729 −
1799）である。かれは、フラスコをコることは認めていた。しかし乳酸発酵は、そのような酵母なしでおこるので酸素があると死滅する微生物が存在す

ルク栓でなく完全に密封し、浸出液をはないかと考えられていた。したがっるという重大な発見をし、「好気性」、

十分に加熱し、フラスコ中の空気が完て乳酸発酵こそが勝負どころだったの「嫌気性」の用語を創った。発酵と腐全に滅菌されているときは、微生物はである。かれは乳酸発酵をおこすのは敗を識別し、それらの作用を意のまま生じないことを証明した（1765）。

アルコール発酵の酵母とは異なる、乳に制御できることを示した。微生物を19 世 紀 に は、 ル ー ア ン の 科 学 博

酸酵母という微生物（1878 年、セディ

飼いならせるようになったのである。

物館館長プーシェが、自然発生説を

自然発生説論争（1858）。沸騰した水を満たしたフラス

強く支持する実験的研究を発表した

ヨによって提案された用語）であることを明らかにした。

30

図４．晩年のパストゥール。

「乳酸発酵についての報告」が発酵

自然発生（spontaneous generation）

コを水銀槽中にさかさに立て、100℃の生物説の宣言だったとすれば、それとは同種の生物によって先行されないに加熱された枯れ草と、強熱された酸を実験的に証明してみせたのが、長文

生物体の生成のことである。さまざま

素をこのフラスコに導入した。生きての古典的な論文、「アルコール発酵にな動物が自然に、つまり親なしに発生いる芽胞を完全に排除したと考えられ関する報告」（1860）である。

するという考えは古代では自明のことたにもかかわらず、数日後にフラスコ

これはリービッヒやベルセリウスのだった。アリストテレスも自然発生説

中に微生物が発生した。クロード・ベ

発酵の化学説に痛打を与えた論文とを認めていた（『動物学』）。近代科学

ルナールによって代表される実証的精なった。パストゥールは、アルコールが始まった 17 世紀になると、顕微鏡を神が支配的だったフランス科学アカデ

発酵はラヴォワジエの化学式より複雑作ったレーエンフックは微生物の世界

ミーは、プーシェの結論には否定的で、炭酸ガスとエチル・アルコールとを発見し、自然発生説に反対した。18だった。しかしプーシェの実験を否定

いう古典的公式の要請する生成物のみ

世紀にはジョン・ターバーヴィル・ニー

することもできなかった。プーシェ

ならず、それまで人が注意しなかったダム（1713 − 1781）が、自然発生説をは、パストゥールの乳酸発酵の論文

グリセリン、コハク酸、さらに微量の支持する実験を発表した（1849）。動物に、自然発生説に批判的な文言がある

セルロース、脂肪物質など多くの生成や植物の浸出液を、加熱したガラス瓶と反駁文を送ってきた。これがプー物が生じることを明らかにした。リー

に入れて、コルク栓で遮断しておいて

シェ・パストゥール論争の導火線とビッヒは酵母にはタンパク質を含む物

も、微生物が発生することを報告したなった。人々が古来手を焼いた自然発質が必要だとしたが、パストゥールはのである。浩瀚な『博物誌』で知られ生論争に、パストゥールがまきこまれ

純粋に無機的な媒質のなかで発酵を起るビュッフォンがかれを後援したので、ることをビオもデュマも思いとどまらこすことに成功した。酪酸発酵の研究

この発表は自然発生説を活気づけた。

せようとした。しかしパストゥールはでは、酸素がないところでは増殖し、ニーダムの滅菌法は不十分であると批1860 年から１年のあいだに６篇の自和光純薬時報Vol.78, No.2（2010）

度を異にする地点の空気の比較研究がおこなわれた。『自然発生説の検討』はわずか百頁の小著にすぎないが、古代から 19 世紀まで続いた自然発生説にとどめを刺し、微生物学の出発点となった。ときにパストゥール 39 歳。
自然発生説論争はパストゥールの生
涯のハイライトの一つとなった。自然
発生論争は宗教的、思想的にさまざまな反響をまきおこした。その波紋が広が る な か で、1864 年 ４ 月 ７ 日、 パ ス
トゥールはソルボンヌの「科学の夕べ」
図５．ソルボンヌ大学の中庭のパストゥー
ル像。パストゥールはバラールの後任としてソルボンヌ大学有機化学教授に就任した（1867）。

講演会で啓蒙的な講演、「自然発生に

図６．パストゥール研究所（1887 年設立）のパストゥール像。

ついて」をおこなった。大講堂は立錐の余地もなかったが、自然発生、生命に微生物学を究め、自然発生論争の立の起源、生物の進化に関する混乱した

役者にもなった。19 世紀中葉のフラ論争は、この講演後も沈静化しなかっンスの競争熾烈な学問の世界で、きわ然発生に関する論文を次々に発表し、た。パストゥールは自然の産物のみがめて野心的で、機を見るに敏だった。

全面的に自然発生の研究にかかわっ非対称性を示すことを認識したにもか類まれな実験の巧みさと、目的達成また。科学アカデミーは、自然発生の問かわらず、あえて自然を模倣して、上での粘り強さは言うまでもないが、論

題の解明を賞金 2 , 500 フランの懸賞題

述のように化学現象に非対称性を導入

争と自己宣伝の術に長けていたことも

目として提起していた。パストゥール

しようとする実験を 1850 年前半におこたしかである。一生を通じて騒々しさ

は６篇の論文をまとめて、「大気中になった。成果を挙げられずに終わったがつきまとった。論争では闘争的で痛存在する有機体性微粒子に関する報が、非対称を、すなわち生命を創りだ烈だった。闘争はもって生まれた性格

告。自然発生説の検討」（1861）といす夢は生涯残った。表向きでは自然発だった。45 歳で脳卒中で倒れ、生涯

う生物学史上モニュメンタルな意義を生をきっぱり否定しながら、そのようの後半の 30 年間は半身不随での研究もつことになる論文を発表した。1862

な思弁をうちに秘めていたのである。

だった（図４, ５, ６）。

科学のフリーランス〔参考文献〕

年 12 月、科学アカデミーの選考委員
会は全員一致でパストゥールに授賞を決定した。さらにパストゥールを科学アカデミー会員にも選出した。

結晶学と化学と微生物学で基礎的な問題に貢献したにもかかわらず、すぐ

パストゥールが独創的な実験と完璧に実際問題へと関心がずれた。それをな論理的構成で証明したのは、煮沸さ実地に移すことに並はずれた熱意と戦れた有機性の液が空気に接触するとき術をもっていた。実際問題への関心は発生するすべての生物は、空中の芽胞発酵の研究から発展した。発酵の微生に起源をもつという命題である。有名

物説は産業と医学に大きい意味があっな白鳥の頸型フラスコは、自然発生た。ブドウ酒の「病気」の対策をめ

論争でパストゥールを応援した師のぐって開発された食品の低温滅菌、いバラールが示唆したものであるといわゆるパストゥーリゼーションの工夫

う（図３）。この実験は、煮沸されたは、実際問題における最大の貢献の一

液を大気とは接触させるが、大気中のつである。結晶学から発酵を経て病気

塵埃とは接触できない条件を作りだすの研究へという進展について、「自分と、液に生物は発生しないという命題の研究はほとんど動かし難い論理にを証明した。空気中の塵埃と微生物のよって繋がれている、」と述べている。

発生の原因結果の量的対応関係につい次々に異なる専門分野に移るという離ても、標高を異にする地点や、雑踏のれ業を演じ、生物学の正規の訓練なし

和光純薬時報 Vol.78, No.2（2010）

Pasteur, L. : Researches on Molecular Asymmetry ,Alembic Club Reprint, No. 14（1964）. ; Dubos, R. J. :Louis Pasteur. Free Lance of Science , Little,
Brown and Company（1950）. ; Geison, G. L. : Louis
Pasteur , Dictionary of Scientiﬁc Biography , Vol. X,
pp. 350 - 416（1974）. ; Geison, G. L. : The Private
Science of Louis Pasteur , Princeton University
Press（1995）. ; Conant, J. B. ed. : Pasteur s Studyof Fermentation , Harvard University Press（1952）, ; Conant, J. B. ed. : Pastuer s and Tyndall s
Study of Spontaneous Generation , Harvard University Press（1953）. ; Kauﬀman, G. B. and Myers,
R. D. : The Resolution of Racemic Acid , Jour.
. ; ヴァレリー・ラ
Chem. Edu ., 52 , 777 - 781（1975）
ド著、桶谷繁雄訳：『ルイ・パストゥール』，（冨山房）（1941）．
；パストゥール著、山口清三郎訳：『自然発生説の検討』，（岩波文庫）（1970）．
；科学；の名著 10『パストゥール』（，朝日出版社）（1981）．
川 喜 田 愛 郎：
『パストゥール』，（岩波新書）（1967）．
；川喜田愛郎：『近代医学の史的基盤』，
下巻（1977）．
；ルネ・デュボス著、竹田美文訳：『ルイ・パストゥール』３巻，（講談社学術文庫）（1979）．

31

食品分析用
トランス脂肪酸
トランス脂肪酸は、マーガリンや分 析 例

ショートニングなどの硬化油の製造■ リノール酸メチルトランス化物

過程で水素添加などにより生成することが知られています。トランス脂

1O
H 3C (CH 2) 4 CH CH CH 2 CH CH (CH 2) 7 C OCH3肪酸の作用として、悪玉コレステロー

3ルといわれている LDL コレステロー

2

1. 92. 93. 94. 9-, 12, 12, 12, 12-

1. 92. 93. 94. 95. 96. 97. 98. 9-, 12, 15, 12, 15, 12- , 15, 12, 15, 12- , 15, 12, 15, 12- , 15, 12- , 15-4ルを増加させることや、多量に摂取を続けた場合には、動脈硬化などによる虚血性心疾患のリスクを高めるなどの報告があります。これらの背■ α- リノレン酸メチルトランス化物

景から、日本でも食品中のトランス脂肪酸含有量の表示に関するガイド

1

O

ラインの作成が進められています。

C 2H 5 CH CH CH 2 CH CH CH 2 CH CH (CH 2) 7 C OCH 3「基準油脂分析試験法」において、トランス脂肪酸含量の測定では、

324

キャピラリーガスクロマトグラフ法

5 67

が暫定法 ※ として採用されています。

8

トランス脂肪酸の検出位置の確認に有用な、リノール酸メチルと αリノレン酸メチルのトランス体を発売しました。
〔参考文献〕※基準油脂分析試験法：暫 17 - 2007 トランス脂肪
酸含量（キャピラリーガスクロマトグラフ法）［GC 分析条件］
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検出器槽：280℃
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スプリット比 ：1/20
注入量：10mg/mℓヘキサン溶液、1μℓ＊分析条件は、当社の製品試験時の条件です。

C18 トランス脂肪酸メチルエステル
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Methyl 9,12-Octadecadienoate Standard (mixture of cis - and trans -)（リノール酸メチルトランス化物）

食品分析用

200mg

28,000130-16281

Methyl 9,12,15-Octadecatrienoate Standard (mixture of cis - and trans -)（α- リノレン酸メチルトランス化物）

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100

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1ℓ

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Heptadecanoic Acid Standard

メチルエステル化剤
029-06172
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Boron Triﬂuoride Methanol Complex Methanol Solution（About 14 〜
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041-31201

Diethyl Ether-Petroleum Ether（1：1）

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記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 78 No. 2
2010 年 4 月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
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32

刷

所

糸 博之
鰐部梢子
和光純薬工業株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
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