死細胞、全細胞数及び細胞生存率を測定する
蛍光試薬を用いた高感度細胞毒性測定試薬セット
Cytotoxic Fluoro-test wako
細胞毒性測定用
本試薬は、Fluorometric Assay based on Cell Lysis & Staining method（FACLS 法）を用いた、死細胞、全細胞数及び細胞生存率を高感度に測定するキットです。
・ 操作時間が、約 5 分で測定可能です。
・ 薬剤や pH、温度、培地成分の影響を受けません。
・ 浮遊細胞、接着細胞どちらも測定可能です。
（測定の応用例）
細胞毒性測定試験
細胞増殖能測定試験
細胞の生死の割合の測定
動物実験代替試験

293-55001

1,000 回用

31,000 円

キットの性能につきましては、P.13 をご参照下さい。

Wako

目 次
百年前の化学「1899 年の化学を顧みて」
芝
哲夫………… 2
総説「改正変異原性試験について（その 2：染色体異常試験） OECD ガイドラインとのハーモ
ナイゼーション 」 清水 英佑………… 6「核酸蛍光染色剤を用いた新しい細胞増殖及び、細胞生存率測定法（FACLS 法）」
加藤 文法………… 9「糖脂質の糖鎖構造の変化と癌（後編）」
瀧孝雄………… 14シリーズ＜ Talking of LAL ＞「第 34 話 B- グルカンとリムルス試薬の反応性」
土谷 正和………… 20＜ How to アポトーシス＞「第 5 話 アポトーシス誘導分子：Fas-Fas リ
ガンド（FasL）の機能と変異」松沢 昭雄………… 22＜免疫一口メモ＞「免疫とケモカイン」
義江
修………… 28
テクニカルレポート「合成オリゴヌクレオチド精製用「Wakosil
DNA カラム」
について」
上森 仁志………… 18
新製品フラッシュ
細胞毒性フルオロテストワコー…………… 1,13
住友精密工業（株） フタル酸エステル類測定
用水、（株）
クマモト抗体研究所 コイビテロジェ
ニン ELISA キット…………………………… 5
日本製薬（株）日局充てん試験対応 ソイビー
ン・カゼイン・ダイジェスト培地「ダイゴ」… 8
バリドキシルアミン A……………………… 16
トレハロース二水和物、ストレプトアビジン，
タイプⅡ、L-012 ナトリウム……………… 17
ワコーパック Wakosil- Ⅱ 5C22、WS DNPH、ワコーシル DNPH 溶離液 A・B………… 19（株）サンギ GPDH 活性測定キット他…… 21
アンチマイシン A、アンチセンスコントロール
テンプレート……………………………… 24（株）ニッポンジーン ドロップ PCR キット、ス
マートラダー……………………………… 25
トリス、マイヤーヘマトキシリン溶液（× 2）… 26
レプチン、Tocris 社 コンパウンドライブラ
リー………………………………………… 27
ケモカイン、サイトカイン………………… 29
抗ヒトレチノイド X レセプター B，モノクロー
ナル抗体他………………………………… 30
イムノスター試薬、グルタミン酸トランスポー
ター抗体…………………………………… 31
ベロトキシンテストワコー…………………… 32

1

71899 年の化学を顧みて大阪大学名誉教授哲夫

えて生じた希土類混合物の中から、第放射線が二成分に分かれる

三の新放射性元素アクチニウム acti-

1896 年に A. H. Becquerel が X 線

nium を発見分離した 5, 6）。この元素名の研究から偶然に発見した放射線は

アクチニウムはギリシア語の光線を意

3 年後の 1899 年になって、少なくとも二成分に分かれることがわかった。E.
Rutherford の実験によって、ウラニウ

味する aktinos に由来する。Debierne
は 1910 年に Curie 夫人に協力して、ムからの放射線は薄いアルミニウム箔

る。

純粋なラジウムの単離にも成功していに吸収されるものと、それを通過する

アクチニウムが発見された 3 年後のものとに分かれた。Rutherford は前者

1902 年に F. Giesel はやはりウラン鉱を A 線、後者を B 線と呼んだ 1）。両成分

石ピッチブレンドから放射線を発するは 磁気的にも分離されることが、E.

元素を分離してエマニウム emanium

2）

Giesel に より ポ ロ ニ ウ ム で、H.
Becquerel3） によりラジウムで、それぞれこの年に確認された。A 線の本体と名づけたが 7）、後に Giesel 自身エマが ヘリウ ム で あ ること は、や はり証明した 9）。

ニウムはアクチニウムと同一物質であることに気づき 8）、O. Hahn がそれを写真１． J. Thiele

Rutherford により 1908 年に、また B
線が電子であることは、1901 年に W.
Kaufmann により明らかにされた。さらアクチニウムはランタンに性質が似説を提唱してその反応性を説明しよう

る 89 番元素であったが、最初はランとした 10, 11, 12）。二重結合に関与する炭タンに続くいわゆるランタノイドのよう素原子には反応に利用できる第二原にウラニウムの放射線には電磁波でな同類元素はアクチニウムにはない

子価を部分的に持つとするものである。

ある C 線も含まれていることが 1900 年と考えられていたが、1940 年代になっ

たとえば、ブタジエンの場合、中央のに P.Villard によって報告された 。
4）

ウラン鉱石から第三の放射性元素
アクチニウム発見て、ネプツニウム neptunium、プルト

2、3 位の炭素原子の部分原子価は互

ニウム plutonium などの新元素が人いに中和されているが、1、4 位の末端工的に作られるようになって、15 元素の部分原子価は中和されないので、1、より成るアクチノイド actinoid 系列が4 付加が起こると説明された。この説成立することになった。

はベンゼンに対する共鳴構造説の前Curie 夫妻が 1898 年にウラン鉱石
から放射性元素としてはじめてポロニ
ウムとラジウムを発見したことはよく段階の説ともみなされる（図 1）。

二重結合の部分原子価説

Wagner-Meerwein 転位反応見つかる

知られている。その翌年の 1899 年に二重結合、特に共役二重結合を持Curie 夫 妻と 親 交 が あ った André Louis Debierne が同じウラン鉱石ピッ

つ化合物が反応性に富むことから、J.

Thiele は C ＝C 二重結合の部分原子価

1899 年、G.Wagner と W. Bricknerが二環性テルペンである A- ピネンがチブレンドの溶出液にアンモニアを加または残余原子価とよばれる原子価

エーテル中塩化水素によって、炭素骨図１． Thiele の報告 13）に部分原子価で画かれたベンゼン（Fig.

2

芝

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999））, ナフタリン (Fig.

)，アントラセン (Fig.

)13)

図２． Wagner の見い出した A- ピネン転位反応の原報 14）の図格が変わった塩化ボルニルを生成するという転位反応をはじめて見つけ）2）。
た 14（図そ の 後 1913 年に な って H. Meer-

wein が二環性テルペンに限らず、シク
ロヘキサン系、さらには鎖状炭化水素に対しても、塩化水素添加のみならず

図３． Baeyer-Villiger 反応の最初の報告 16）の構造式

逆に脱塩化水素、脱水反応に際しても、同様な転位反応が広く起こることを明らかにした 15）。今日では中間にできた炭素陽イオンに向かって隣接する基が 転 位 する反 応をまとめ て 一 般に

Wagner-Meerwein 転位と称されている。そのきっかけとなったのが 1899
年の Wagner らの発見であった。

写真３． P. SabatierBaeyer -Villiger 酸化反応見つかる

副腎血圧上昇物質のエピネフリンの存在報告さる

ケトンをぺルオキシ酢酸などの過酸

副腎エキスには強心作用、止血作で酸化すると、酸化と同時に転位反応用があるので、1800 年代中頃から治が起こって、カルボン酸エステルを生成することを A. Baeyer と V. Villiger

写真２． A. Baeyer

療薬としての期待が高まり、多くの研究者によってその研究が行われ、有効16）がこの年に発見した 。したがってこの反応は Baeyer-Villiger 反応または成分の分離が試みられた。1899 年に還元ニッケル触媒を用いた硬化油の製造

至って、米国のジョーンズ- ホプキン

かさ高いアルキル基やアリール基の方

炭素炭素二重結合を持つ有機化合

血 圧 刺 激 物 質とし て エ ピ ネフリンが起こりやすいので、メチルケトンから物はニッケル粉末触媒存在下に気相

epinephrin と 称 す る 物 質 を 分 離しは酢酸エステルが生成する。また環で 250-300℃ で容易に還元飽和された 20）。その時に報告された分子式は状ケトンからはこの反応でラクトンがることがフランスの P. Sabatier と J. B.

C17H15NO4 で、純粋な物質といえるも得られる。Baeyer と Villiger は最初この反応の酸化剤に Caro 酸すなわちぺルオキソ一硫酸 H2SO5 を用い、メントンから D- ラクトン、カンファーからカン）3）。
フォリドを得た 16, 17（図Senderens によって見いだされ、こののではなかった。

Baeyer-Villiger 転位と呼ばれる。
酸素原子への転位はメチル基より方法で不飽和脂肪の油から硬化油がス大学の J. J. Abel がはじめて副腎の1901 年になって高峰譲吉によって。Sabatier結晶として単離された同じ作用物質

はこの仕事によって、1912 年にノーベはアドレナリンと命名されて、その分ル賞を受賞した。

子式は C9H13NO3 であった 21）。

製造されることになった

18, 19）

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）3

解熱剤アスピリン発売さる

化学の巨匠相次いで逝く

18 世 紀 の はじめに イギリス人 E.
Stone はマラリアの高熱で苦しむ人々に柳の樹皮を煎じて飲ませてその苦しFriedel-Crafts 反応を見つけたフランスの化学者 Charles Friedel が 1899
年 4 月 20 日にフランスのモントバンでみを救った。この柳の解熱作用は成分亡くなった。

のサリチル酸によることがわかった。

ジエチル亜鉛を発見し、有機金属

因みにサリチル酸 salicylic acid の名

化学の道を開き、また太陽スペクトルは柳のラテン名 salix に由来する。し中にヘリウムを見つけたイギリスの化

かしサリチル酸自身には副作用があっ学者Sir Edward Frankland も 8 月 9 日てそのまま薬剤にはならなかった。

にノルウェーのゴラアで死去した。

1897 年に F. Hoffmann がサリチル

ド イツの 化 学 者 で 分 光 分 析 学を酸と無水酢酸からアセチルサリチル酸

完成させ、セシウムやルビジウムのを合成した。その翌々年の 1899 年になって、この化合物の薬剤作用を H.
Dresser22）と J. Wohlgemuth23）が臨床

新元素を発見するとともにブンゼン

Wilhelm Bunsen がこの年 8 月 16 日

的に調べて、副作用の少ない、すぐれにハイデルベルグで逝去した。墓はハ

た鎮痛、解熱作用があることを明らか

イデルベルグ南墓地にある（写真 4）。

バ ー ナ ーの 発 明 で 知られる Robertにした。同年にさらに K. Witthauer はザールのハレの看護婦病院でその臨床結果を確認した 24）。それによってア

わが国で初めての薬学博士 4 名誕生

セ チ ル サ リチ ル 酸 は ア ス ピ リン

わが国薬学の先覚者で、麻黄の成aspirin の名で Baeyer 社から市販され分エフェドリンの発見で有名な長井長ることになった 25）。

義、フグ毒テトロドトキシンの研究で知サリチル酸の古名は、それがとれられる田原良純、東京大学医学部薬学る セ イヨ ウ ナ ツ ユ キ ソ ウ Spiraea
ulmaria の名からスピラエ酸 spiraeic
acid と呼ばれていた。ここに得たアセた下山順一郎、丹波敬三の 4 名が明チルサリチル酸は天然物ではない純によって、わが国最初の薬学博士と化学的に作ったものであるという意味なった。長井はそれより前、明治 14 年

で spirae に否定詞 a をつけて aspirin（1881）に留学先のベルリン大学よりドと名づけられた。このアスピリンは錠

クトル・デル・フィロゾフィーの学位を剤として市場に売り出された最初の薬

既に得ていた。

剤であった。

科教授で、日本薬学会設立にも貢献し
治 32 年（1899）に東京大学総長推薦

なおこの同じ年、タカジアスターゼ、
アドレナリンの研究で有名な滞米中の水素がはじめて固化される
前年の 1898 年に水素の液化に成功したイギリスの J. Dewar は翌 1899 年に固体水素を作り出し、低温到達記録

高峰譲吉もわが国の工学博士の学位を受けている。

P. Sabatier の切手を提供頂いた伊藤良一氏に感謝申し上げる。

を 14K まで下げて、絶対零度に向っての一歩を進めた。このことによりそれまで知られていたすべての物質はヘリウムを除いてすべて固体となることがわかった。

4

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）〔参考文献〕
1) Rutherford, E. : Phil. Mag., 47, 109(1899).
2) Giesel, F. : Ann. Physik., 69, 834(1899).
3) Becquerel, H. : Compt. Rend., 129,

写真４． R. W. Bunsen

996 (1899).
4) Villard, P. : Compt. Rend., 130, 1010,
1178 (1900).
5) Debierne, A. : Compt. Rend., 129, 593(1899).
6) Debierne, A. : Compt. Rend., 130, 906(1900).
7) Giesel, F. : Ber., 35, 3608 (1902).
8) Giesel, F. : Ber., 37, 1696, 3963
(1904).
9) Hahn, O. : Physik. Z., 7, 557 (1906).
10) Tiele, J. : Ann. Chem., 306, 87 (1899).
11) Tiele, J. : Ann. Chem., 319, 129 (1901).
12) Tiele, J. : Ann. Chem., 311, 241(1900).
13) Tiele, J. : Ann. Chem., 306, 129 (1899).
14) Wagner, G., Brickner, W. : Ber., 32,2302 (1899).
15) Meerwein, H. : Ann. Chem., 396, 200(1913).
16) Baeyer, A.,Villiger, V. : Ber., 32, 3625
(1899).
17) Baeyer, A., Villiger, V. : Ber., 33, 858(1900).
18) Sabatier, P., Senderens, J. B. : Compt.
Rend., 128, 1173 (1899).
19) Sabatier, P., Senderens, J. B. : Compt.
Rend., 132, 1254 (1901).
20) Abel, J. J. : Z. Physiol. Chem., 28, 318(1899).
21) Takamine, J. : J. Soc. Chem. Ind., 20,
746 (1901).
22) Dresser, H.: Arch. Ges. Physiol.(Pflüger),76, 306 (1899).
23) Wohlgemuth, J. : Therap. Monatsch.,13, 276 (1899).
24) Witthauer, K. : Heilkunde, 3, 396(1899).
25) Hoffmann, F. : US-P. 644 077 (1898/
1900).

環境ホルモン測定用試薬
フタル酸エステル類測定用水
近年、外因性内分泌撹乱化学物質（環境ホルモン）の問題が世界的に注目されています。環境ホルモンは、人間のホルモンシステムに作用し、生殖障害・悪性腫瘍等を引き起こす影響があり、人間に世代を超えた深刻な影響を与える可能性が有ります。今回、フタル酸エステル類の測定用にフタル酸エステル類を極限まで低減した水を発売しました。
また、農薬類測定用水、Pops 類（ダイオキシン類等）測定用水も製品化を予定しておりますのでお問合わせ下さい。
〔規格値〕
分析項目

規格値（ng/W）

分析項目

規格値（ng/W）

4- オクチルフェノール

100

フタル酸ジシクロヘキシル

50

ノニルフェノール

50

フタル酸ジエチル

50

フタル酸ジ-2- エチルヘキシル

100

オクタクロロスチレン

50

フタル酸ブチルベンゼン

50

フタル酸ジペンテル

50

フタル酸ジ-n- ブチル

100

フタル酸ジヘキシル50

アジピン酸ジ-2- エチルヘキシル

100

フタル酸ジプロピル

50

ビスフェノール A

50

スチレンの 2 or 3 量体

50

〔用 途〕
★試料からのフタル酸エステル類の抽出溶媒として★固相抽出カラムの洗浄★器具の洗浄★空試験用の水■キャンペーン期間：平成 11 年 1 月 7 日〜 4 月 6 日■フタル酸エステル類測定用水を通常の半額で提供します。この機会に是非お試し下さい。
コード No.

メーカーコード

301-06841

EH001

品

名

容

フタル酸エステル類測定用水量

希望納入価格（円）

キャンペーン価格（円）12,0006,000

300mW × 6

コイ ビテロジェニン ELISA キット
ビテロジェニン（Vg）
は産卵期のメスの血中で増加する卵黄前駆体で、本来オスには有りません。しかしオスにエストロジェン処理を行うと、Vg の産生が認められます。このことから、近年、河川などの環境水中にある内分泌撹乱物質のバイオマー
カーとして注目されています。
本キットは、コイ Vg に特異的な 2 つの抗体を用いたサンドイッチ ELISA 法に基づいており、血清中のコイ Vg を定量することができます。

Absorbance at 490 nm〔キット内容〕〔測定原理〕
1枚
キットのマイクロプレートには抗コイ Vg 抗体がコートされており、（1）抗体固定化マイクロプレート
2本
コイ Vg 標準品
検体及び標準液中のコイ Vg を捕獲します。さらに HRP 標識抗コイ （2）30mW
Vg 抗体を反応させると、ウエル上に固定化抗体‐抗原‐抗体のサン （3）検体希釈液
4
HRP
Vg
100
0.15mW
（
）
標識抗コイ
抗体
（×
）
ドイッチ型複合体が形成されます。抗体により捕獲されたコイ Vg は、
16mW（5）基質液HRP により触媒される発色反応により定量されます。
6
OPD
2錠
（
）
（オル
トフェニレンジアミン）
錠〔標準曲線〕〔測定範囲〕
20mW（7）濃縮洗浄液（× 20）
7. 8 〜 500ng/mW
Standard curve
4.0
8
6mW
（
）
反応停止液
〔保存条件〕

2 〜 8℃
3.0

コード No. メーカーコード
303-06161

2.0

KH003

品

名

容

コイ ビテロジェニン ELISA キット

量 希望納入価格（円）

96 回用

90,000〔関連商品〕
1.0

0.0
1
10
100
Concentration of carp vitellogenin (ng/mℓ)

コード No. メーカーコード
300-06811

KH004

304-06831

KH005

307-06821

KH007

−

KH006

品

名

容

コイ ビテロジェニン モノクローナル抗体（IG2）

量 希望納入価格（円）100Fg
マミチョグ ビテロジェニン モノクローナル抗体（3E11） 100Fg
マダイ ビテロジェニン モノクローナル抗体（5A4） 100Fg
100Fg
メダカ ビテロジェニン モノクローナル抗体

40,00040,00040,00040,000

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

5改正変異原性試験について（その 2 ：染色体異常試験）− OECD ガイドラインとのハーモナイゼーション −東京慈恵会医科大学

はじめに
サルモネラ菌を用いた変異原性試
験とともに、化学物質のがん原性を効れている。
我が国では、昭和 40 年代に生じた

英佑

ここでは、in vitro 染色体異常試験について改正点や注意点を述べること

本試験を実施するに当たり、用量範にする。

ほ 乳類培養細胞を用いる染色体異常試験

囲を 設 定 するた めの 試 験 で、直 径60mm のプレート（培養液は 5mW）に
約 4 × 103 個 /mW の細胞を播種する。
プレート数は各用量につき 1 枚以上を用いる。

世界に先駆けて化学物質の安全性確1. 染色体異常試験の種類について
In vitro 染色体異常試験は、短時間明の場合には最高用量を 5mg/mW ま保を目的として「化学物質の審査及び処理法、連続処理法および細胞増殖

たは 10mM のいずれか低い用量とし、製造の規制に関する法律」（化審法）が抑制試験がある。このうち、細胞増殖

原則として公比 2 で 6 段階以上の用量制定された（1973 年 10 月）。しかし、抑制試験は、前 2 者の試験を実施するを選定する。

諸外国の情勢に対応するため 1986 年
12 月に化審法を改正し、スクリーニン

にあたり、試験に用いる被験物質の用

細胞増殖抑制試験で得られた 50%

量範囲を設定するための試験である。

以上の細胞増殖抑制用量を最高用量

グ毒性試験項目として「ほ乳類を用い細胞の増殖抑制およびその他の細胞として、原則として公比 1.5 〜 2 で、3る 28 日間の反復投与毒性試験並びに毒性を指標とする。

段階以上の用量を選定する。細胞毒

PCB による環境汚染問題を契機に、被験物質の細胞に対する毒性が不細菌を用いる復帰突然変異試験及びこれ以外に、試験結果が疑陽性に出性が認められない場合には、5mg/mW

ほ乳類培養細胞を用いる染色体異常た場合に確認試験を行う必要がある。

または 10mM のいずれか低い用量を試験による変異原性試験」が定められ、

また、陽性結果が被験物質の pH 等に最高用量とし、以下の短時間処理試験

その試験方法が公表された。これによより影響を受けたことが危惧される場

および連続処理試験を実施する。

り、国内の製造および輸入の総量が 1

合には、適切な処理をした上で行う追トン以上の物質で、難分解、低蓄積性加試験がある。

の物質について指定化学物質に該当

今回の改訂での大きな特徴は、短するか否かを判定するためにスクリー

時間処理法で試験結果が明らかに陰2）短時間処理試験
直径 60mm のプレート（培養液は5mW）に約 4 × 103 個 /mW の細胞を播ニング試験が実施されることになった。

性の場合には連続処理試験を実施し種するが、培養開始から被験物質の処

一方、1983 年に OECD（経済協力

なければならないが、陽性の場合には、理までの時間を変更するときはそれに開発機構）のテストガイドラインが公表

連続処理試験を省略することができる

併せて播種細胞数を調整する。原則とされて以来、欧米ではこのガイドライことである。

してプレート数は各用量ごとに 2 枚以

ン に より試 験 が 行 わ れ て 来 た が、

1997 年 6 月に国 際 的な ハー モ ナ イ

上を用いる。

2. 使用細胞株についてゼーションの観点から大きな改訂がな

チャイニーズ・ハムスター肺由来のされた。我が国でもこの動きを尊重し線維芽細胞（CHL/IU 細胞）、ヒト末梢た上で、労働省、厚生省、通商産業省、

血リンパ球またはその他のほ乳類培

環境庁、農林水産省等が報告書の様

養細胞の初代、継代若しくは株細胞を式の統一化に向けて調整がなされて

用いる。

きた。
その結果、労働省では 1997 年 9 月
29 日に告示され（基発 652 号）、1998
年 4 月 1 日より実施された。また、化審法では、1997 年 10 月 31 日に局長通達が出され、1998 年 4 月 1 日より実施

6清水

3. 被験物質の用量・用量段階について
1）細胞増殖抑制試験

された。

率よく検出するため、ほ乳類培養細胞を用いた染色体異常試験が広く用いら

環境保健医学講座

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

但し、我が国では、これまでの実績

代謝活性化を用いる場合と用いな
い場合について行うことはこれまで通りである。

3）連続処理試験
OECD のテストガイドラインでは 24
時間でよく、必要に応じて 48 時間処と扱い易さから、CHL/IU 細胞を用い理を行うとある。また、倍数体の観察ることが望ましい。ガイドラインもこのについても参考程度で我が国と若干細胞株を用いた場合について記述さ異なる。しかし、我が国ではこれまでれている。

の実績から、倍数体を観察することが必要であり、48 時間処理も行うことが望ましい。また、24 時間処理と 48 時
表１． 構造異常の分類

間処理とで D20 値が変わってくることも考えられる。これは被験物質の染色体異常のリスクを低く評価する危険性につながる。

4. 被験物質溶解溶媒の選択について
被験物質の性状により次のような選択をする。
（1）水溶性で、水に安定ならば滅菌生
理食塩水とする。
（2）水に難溶、DMSO に可溶で安定

染色分体型切断（chromatid break : ctb）
染色分体型交換（chromatid exchange : cte）
染色体型切断（chromosome break : csb）
染色体型交換（chromosome exchange : cse）
その他の異常（断片化など）（others）
注：染色分体幅以下の非染色性部位をギャップとし、別途記録するが、構造異常には含めない。

な物質の場合には DMSO に溶解させる。
（3）水や DMSO に難溶の場合には、

1% カルボキシメチルセルロー

表２． 染色体の構造異常および数的異常の判定基準

異常細胞の出現率（%）

判定基準

培養液そのものを溶媒とするこ

5% 未満

陰

ともできる。

5% 以上 10% 未満

疑陽性

10% 以上陽

ス・ナトリウム溶液の懸濁とする。

5. 対照物質について
試験技術の正確さや用いた細胞の安定性を保証する意味で毎試験ごと

性

性

注：CHL/IU 細胞を用いた試験で、これまでの蓄積データを基にした場合の基準である。

に陰性対照と陽性対照を置く必要がある。
陰性対照は原則として溶媒対照とするが、特殊な溶媒を用いたときは、溶媒をいれないものを置くこともある。
陽性対照は代謝活性化を加えない

7. 結果の評価について試験が適切に実施されて得られた結果が評価の対象となる。

示すことがある。この場合には適切な方法で中和した後に追加試験を実施する必要がある。

被験物質処理群の値が陰性対照値

定量的評価のためには、陽性結果質を用いる。染色体異常出現率が 20と比較して明らかに上昇し、かつ、用が得られた場合に、用量依存性から、〜 40% になる濃度がよい。

量依存性が認められれば陽性と判定

構造異常を持つ細胞または数的異常する。総数にはギャップのみを持つ細を持つ細胞が 20% 出現する推定被験胞の出現率を除く。CHL/IU 細胞を用を求め、mg/mW とし物質濃度（D20 値）いた試験での判定基準は表 2 に示す。

て記述する。

場合と加えた場合とで指定された物

6. 染色体異常の観察について
各用量当たり、よく拡がった分裂中期細胞 200 個（各プレート当たり 100

統計学的解析は必要としない。

8. 報告書の様式個）以上を、顕微鏡下 600 〜 1000 倍

単一用量で陽性となった場合でも、で観察する。ノーカバーレンズを用いその再現性が確認されれば（確認試

試験結果報告書に関しては、今回

験）総合的に陽性と判断する。特に疑OECD とのハーモナイゼーションによ構造異常は表 1 に示す分類に従い、陽性や用量依存性が認められなかっる見直しで、これまでと様式がだいぶ

いずれかの異常を 1 個以上持つ細胞

た場合には確認試験を実施する。しか変わっているが、省庁間による相違はを異常細胞 1 個として記録するとともし、短時間処理や連続処理試験で明らない。Ames 試験による試験結果報告に、異常の種類を記録する。また、染かに陰性または陽性の結果が得られ書と整合性を取った部分もある。

色体数が倍加している細胞（倍数体やれば確認試験の必要性はない。

ると便利である。

核内倍加）が出現した場合にはその出現率を記録する。

また、被験物質によりpH が著しく影響を受け、陽性結果（false positive）を

9. 物性を考慮した試験の実施
被験物質は固体・液体・気体に大別

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）7

される。Ames 試験の場合と同様に、式曝露方法が最適である。

GLP 適合機関が行った試験結果の相個体に関してはこれまで溶媒に溶解し、また、培養液と接触すると析出する

互受け 入れはすでに行われている。

あるいは懸濁して試験が実施されて被験物質がある。培養細胞には貪食

昨年は GLP 査察も国際間で相互に行きた。気体はガス状物質として特殊の能（phagocytosis）があることから、析

うことが承認され、すでに実施され始方法で試験が行われている。一方、液出した濃度に関しても試験範囲とする

めた。GLP を遵守し正しい試験を行い、体の場合は物質により、沸点の低い物ことが望ましい。

定性的・定量的に正しい結果を出す努

質、気化しやすい物質等蒸気圧の異力をすることが大切である。

なる物質があり、37℃ の試験条件下

尚、この原稿は、日本バイオアッセ

おわりにで被験物質が細胞と十分な時間接触

イ研究センター松島泰次郎所長を委しているかどうかが重要であり、物性

Ames 試験に比較すると染色体異常員長とする委員会で検討したことを基を考慮した試験方法を選択することが試験は時間がかかるだけでなく、高度に作成したことを記して謝辞とする。

必要である。特に培養細胞の場合には、の技術と熟練が要求される。

気層と液層が交互に入れ替わる回転

国際的協調時代に入り、各国とも

日局充てん試験対応

ソイビーン・カゼイン・ダイジェスト培地「ダイゴ」

メンブランフィルターろ過性能 Up・γ線照射済み
医薬品・食品の充てんラインチェックを定期的に実施する方、粉末培地の滅菌にお困りの方、また培地のメンブラン
フィルターろ過でお困りの方に、「メンブランフィルターろ過性能を Up」し、「C 線を照射」した「日局充てん試験対応、ソイビーン・カゼイン・ダイジェスト培地」をご用意しました。
特長・メンブランフィルターろ過性能は、メンブランフィルター

1cm2 当たり 100mW までろ過したときの平均流速が、（本培地を調製した）水に対して 70% 以上の流速を保証しています。
・C 線は 20kGy を照射しています。照射による培地性能の低下はありません。
※ 従来の SCD 培地に較べて、照射による特異な臭いがあります。
※ γ（ガンマ）
線照射線量の単位は、kGy（キログレイ）といradい、従来の rad（ラド）との関係は、10kGy=1M（メガ）となります。
※ 放射線滅菌の場合の指標菌 B.pumilus ATCC27142の D 値はドライタイプで 1.8 〜 2.0kGy です。

25.0
平 20.0均流
速 15.0︵mℓ 10.0
/
min

︶

5.0

0.0
LOT. No

メ
ー
カ
ー
名

a
蒸
留
水

b
本
品

a

b

a

従
来
自
社

b

a

b

a

b

Ａ

Ｂ

Ｃ

社

社

社

・
「培地性能試験記録」を添付しています。
・従来のソイビーン・カゼイン・ダイジェスト培地「ダイゴ」

従来のソイビーン・カゼイン・ダイジェスト培地とのろ過性能比較と組成・性能は同じです。

コード No.
397-20061

8

品

名

日局充てん試験対応 ソイビーン・カゼイン・ダイジェスト培地「ダイゴ」

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

容

量

600g

希望納入価格（円）9,500核酸蛍光染色剤を用いた新しい細胞増殖及び、細胞生存率測定法（FACLS 法）
石原産業株式会社

中央研究所

医薬研究開発グループ

加藤文法

I ．はじめに
医薬品、農薬、化粧品、食品などの製品開発分野、医学、薬学、生物学上

1st Step

2nd Stepの研究分野、及び臨床的な検査・診断分野などの幅広い分野に渡って、細胞

核酸染色剤

膜損傷液

毒性を簡便かつ迅速にしかも正確に
Cells

測 定 する方 法は、利 用 価 値が 高く、

MTT 法

1）

Cells

Fd

Ft

をはじめ種々の方法が考案され実用化されてきている。しかしな

生細胞

がら、既に実用化されたこれらの方法

膜損傷細胞
（死細胞）

においても改善されるべき点はいくつ
Fd : 膜損傷細胞（≒死細胞）に由来した蛍光強度
Ft : 全細胞に由来した蛍光強度
Ft - Fd : 生細胞に由来した蛍光強度
細胞生存率（％）＝（Ft - Fd）／ Ft × 1 0 0

か残されている。既存法の共通の問題点として、大量の検体の細胞毒性をマ
イクロプレートを使用して試験する際、プレート毎に良い細胞培養条件下で測定されたかどうかを客観的数値によ

図１．測定原理

りバリデートすることが困難な点が挙げられる。できたとしても面倒な操作を別に付加しなければならない。現状
ではこれをカバーするため、試験者は顕微鏡下で細胞状態を観察し、良否をⅡ．本測定法の原理と特徴
1. 測定原理（図 1 参照、基本的に 2 スとによって測定系に存在する全細胞数を蛍光測定計で定量する。

3）生細胞数の定量

経験的（主観的）に判断するのが一般テップで操作が完了）的であろうと予想される。更に今日でここで使用する核酸染色剤は、核酸

細胞数に相当する蛍光強度の差からは、コンビナトリアルケミストリーを応と結合していない状態では蛍光強度

生細胞数に相当する蛍光強度を算出

用して大量に化合物が合成される時は 0 付近で、核酸と結合することによする。

代となり、これに充分対応しうる測定

り蛍光強度が 100 〜 1000 倍増強する。

4）細胞生存率系の開発が要求されるようになってき

又、蛍光強度が長時間安定で、プロピ生細胞数に相当する蛍光強度を全ている。

ジウムなどより励起定数が一桁上であ細胞数に相当する蛍光強度で割ることにより算出する。

今回、核酸蛍光染色剤と細胞膜損る。本剤は、生細胞に対しては膜透過傷剤とを組み合わせて用いることによ性を示さず、細胞膜に障害のある死細り、このバリデーションの問題を解決し、胞の核酸と結合して蛍光を発する。

さらに簡便かつ迅速に、多検体の試料中の細胞増殖並びに、細胞生存率を

1）死細胞数の定量

全細胞数に相当する蛍光強度と死2. 特徴
1）室温にて簡便で迅速な測定が可能（5 分程度）。

測定できる新たな試験方法（FACLS

生細胞及び死細胞が共存する測定

インキュベーション、セルハーベ

法，Fluorometric Assay based on系に、死細胞のみを通過する性質を持スト、遠心操作、色素洗浄、色素溶

Cell Lysis & Staining method）の 確

つ核酸蛍光染色剤を作用させ、その解など面倒な操作が不要。基本的

立を試みた

蛍光強度を蛍光測定計で測定し、まずに 2 ステップで操作が完了。
2）マイクロプレート上の多検体の生

。

2,3)

死細胞数を定量する。

2）全細胞数の定量
引き続き同一の系に細胞膜損傷剤を作用させ、生細胞の膜を傷害するこ

細胞数、及び細胞生存率を同時に測定できる。
各プレート毎に培養条件を客観的

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）9図２．細胞数と蛍光強度との関係（非付着性細胞）にバリデート（数値化）することができる。

3）浮遊細胞、接着細胞どちらも測定

図３．細胞数と吸光度との関係（MOLT-4 細胞）

図４．細胞数と蛍光強度との関係（付着性細胞）の間で直線関係が認められた（図 2）。

い条件下（培地交換しない）で培養し一方、付着性細胞 HT-1080 では 3た細胞（MOLT-4）を用いて、それぞ× 10 〜 1 × 10 個／ウェルの範囲のれの細胞生存率を測定した。その結果、

35

細胞数において直線性が見られた（図どちらの培養条件下においても、既存の細 胞 生 存 率 測 定 法 である Trypan

ション温度、反応時間、血清中酵4）。これら非付着性細胞ではウェルあたり2 × 105 個程度で、又、付着性細胞
では、1 × 105 個以下でコンフルエント

blue 法とほぼ同様の結果が得られた（表 1）。従って、本法は細胞培養条件

素等の影響を受けにくい。

可能。

4）酵素反応を利用しないため、薬剤による pH の変動、インキュベー

な状態となる。従って、本法は、付着が良好であるか否かを既存法とほぼ

5）有機溶媒、放射性元素を使用しな性、非付着性どちらのタイプの細胞に同様の感度でチェックできることが確いので取扱い操作がより安全で廃対しても、一般的な培養試験系におい認された。一般的に Trypan blue 法で棄が容易。

ては充分測定に耐えうる定量性の範は、試験系からその一部をスライドグ

囲を有しているものと思われる。

ラスに移し、これを顕微鏡下でさらに

6）測定原理、操作が簡単であり完全限定された視野の中の細胞について

自動化への対応が容易。

Ⅲ．応用例

2. 細胞生存率測定について− Trypan blue 法 6）との比較−
良好な条件下（適宜培地交換）と悪試験者が肉眼で生死（細胞内色素取込み）を経験的に判断（カウント）する
ことによって測定される。一方、本法

1. 付着性、非付着性細胞における細胞数測定の定量性について

表１．細胞生存率測定（Trypan blue 法との比較）

非付着性の MOLT-4 細胞について

96 ウェルマイクロプレートを用いその定量性を検討した結果、3 × 103 〜 4 ×
105 個／ウェルの範囲の細胞数において蛍光強度との間で直線性が見られ

培養条件

本法

Trypan blue 法

適宜培地交換

99.1%

98.3%

培地交換なし

88.5%

84.8%

た（図 2）。これを既存の細胞数測定法
である MTT 法 4）や WST 法 5）と比較す

表 2 ．超音波処理後の細胞生存率

ると（図 3）、本法は定量性の範囲がよ
処理時間（秒）細胞生存率（%）

099.1

である U937、HL60 においても、それ

15

86.7

ぞれ細胞種毎に蛍光強度は異なるが、

60

57.6

り広くなっており、これまでの方法よりも細胞数等の条件設定が容易であると考えられる。その他の非付着性細胞

MOLT-4 同様に細胞数と蛍光強度と10

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

においては、試験系全体を反映した客表 3 ．薬剤による細胞傷害性の検討（MTT 法との比較）

観的数値として測定結果を示すことができる。又、大量のサンプルをまとめ方法（MOLT-4 細胞に対するマイトマイシン C の作用の例）て迅速に処理できる点でも優れてい

96 穴マイクロプレート

る。さらに本法のもう一つの利点として← 薬剤希釈液添加（400Fg/mW より公比 1:10 で段階希釈） 50FW/well

は機械的（物理的）損傷にも対応が可← 細胞懸濁液添加 3 × 104cells/150FW/well

37℃、2 日間培養能なことである。その例として、超音▼波処理を時間を変えて細胞に施した細胞傷害性測定後、それぞれの生存率を本法にて測本定すると、処理時間に依存して細胞傷

法

MTT 法

①核酸蛍光染色剤添加 10FW/well

1分①遠心分離、2000rpm

5分

害を受け ていること（細胞生存率低②プレートミキサー攪拌

30 秒

②上清除去

2分

下）
が確認された（表 2）。Trypan blue

③蛍光測定（Fd)

30 秒③ MTT 試薬 (0.04%）
100FW/well 添加 1 分法では、死細胞が細胞としての形を留④細胞膜損傷剤 10FW/well

1分④ 37℃、5%CO2 培養

3 時間⑤プレートミキサー攪拌

30 秒⑤ PBS 100FW/well 添加

1分⑥蛍光測定（Ft)

30 秒⑥遠心分離、2000rpm

5分

⑦上清除去

2分

⑧ DMSO(100%) 100FW/well 添加

1分

めないこの種の傷害に対して原理的にも測定することは不可能である。

3. 薬剤の細胞傷害性についての評価− MTT 法との比較−
代表的な抗癌剤の一つであるマイト

合計所要時間マイシン C（MMC）は MOLT-4 細胞

約5分⑨プレートミキサー攪拌

5分⑩吸光度測定30 秒

合計所要時間約 3 時間 20 分

（蛍光リーダーの機種により異なる）

に対して細胞傷害性を示す。本剤の活性評価を本法と既存の細胞数測定法
である MTT 法との間で比較検討した。

1）迅速性、簡便性
表 3 に示すように、本法では飛躍的な測定時間の短縮が可能となった（1プレートあたり約 5 分）。MTT 法（トータル約 3 時間 20 分）と比べると、その最初のステップである遠心操作の間に、法で検討した結果、IC50 値が MTT 法

本法では全ての測定操作が完了する。

では 5.5Fg/mW、本法では 2.2Fg/mW

操作性の面でも遠心分離や洗浄操作、と数値的にほぼ同じオーダーとなった

インキュベーション等が不要であり簡（表 4）。ここで両者には 2 倍程度の差

便性が大幅に増している。

があるが、これは恐らく測定原理の違

2）細胞傷害性（薬効・毒性）評価
MMC の抗腫瘍活性を MTT 法と本いに起因するものと考えられる。即ち、MTT 法は細胞のミトコンドリア内の脱表 4 ．マイトマイシン C の抗腫瘍活性の評価− MTT 法との比較
マイトマイシン C 処理濃度（Fg/mW）
方法

本法

MTT 法

評価項目

0

0.01

0.1

1

10

100

死細胞数 (Fd)

1.3

− 2.0

− 2.3

− 5.3

5.7

18.7

全細胞数 (Ft)

327.3

247.7

246.3

201.3

87.7

32.3

生細胞数 (Ft − Fd)

326.0

249.7

248.6

206.6

82.0

13.6

細胞生存率 (%)*

99.6

100.8

100.9

102.6

93.5

42.1

％コントロール **

100.0

76.6

76.3

63.4

25.2

4.2

生細胞数 ( 吸光度 )

1.228

1.221

1.468

1.165

0.420

0.032

％コントロール **

100.0

99.4

119.5

94.9

34.2

2.6

IC50
(Fg/mW)

2.4

5.5

表中の細胞数は、蛍光強度或いは、吸光度における相対値として表示*： 細胞生存率 (%) ＝ (Ft − Fd) ／ Ft × 100**：％コントロールは、下線値をそれぞれ 100 として計算

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

11

理群を設置するのが普通であるので、装置がうまくマッチしていれば、細細胞膜がある程度壊れていても、酵素同様にすれば特別な操作を付加する

胞数が千個以下のオーダーまで活性が残存していれば生細胞としてことなく、各プレート毎にバリデーショ

定量性があることが確認されてい評価される系である。一方、本法は細ンを行うことが可能となる。

る。

水素酵素活性を利用した方法であり、胞膜破壊を指標としており、細胞死に至る過程で、ある程度の損傷が細胞膜

4. 完全自動化への対応について
放射性同位元素を使用しない方法系である。この測定原理の違いが、両として、これまで MTT 法、WST 法、今回、核酸蛍光染色剤と細胞膜損者の IC50 値の差を反映していると予想

7）

遊離 LDH 測定法 、クリスタルバイオ

傷剤とを組み合わせて用いることによされる。どんな測定系を採用するにせ

レット染色法 、ニュートラルレッド取り、多検体試料中の生細胞数と細胞生よ、それぞれの測定原理を十分認識し込み法 9）、Calcein AM 法 10）など種々存率とを同時に簡便かつ迅速に測定た上で結果を解釈し、薬剤の作用性をの測定法が考案、改良されてきた。しできる新たな試験方法（FACLS 法）
を評価する必要があると思われる。

かしながら、これら既存の方法におい紹介した。小規模な試験への利便性

3）細胞生存率の評価及び、培養条件ても 37℃ インキュベーション、遠心操はもちろんであるが、この方法を採用のバリデーション

作、洗浄、色素抽出など、いずれかのすることにより、既存の方法では困難

本法では生細胞数と生存率の測定

操作を加える必要がある。そのため完であった試験系のバリデーションを含が、遠心操作や培養上清のプレート間全自動化ができないか或いは、できめた完全自動化測定への対応が容易

8）

移し替えなどの面倒な操作をすることたとしても特別な装置を必要とし、測になると思われる。本法が医薬品、化なくほぼ同時にできる。従って、1 回の定システム全体が複雑となり、高価な

粧品、農薬をはじめ、多分野にわたる

実験から得られる情報が増え、薬剤のものとなってしまう。

動物実験代替法試験に応用され、又、一方、本法においては、これらの操効果を多面的に評価できる。表 4 での
MMC の測定結果を例にすると、本剤
で は 1Fg/mW の 低 濃 度 で は 細 胞 増

いので取扱いが非常に簡便であり、蛍殖抑制作用のみである（生細胞数は

光測定装置の小規模な改良により完

63.4% に減少しているが、生存率はほぼ 100% である）が、高濃度になるに全自動化への対応が可能であると思作を必要とせず、有機溶媒も使用しなわれる。

従い細胞傷害作用が強くなっている（100Fg/mW の濃度では、生細胞数は4.2% に、生存率は 42.3% まで 減少

IV．本法の問題点についてしている）ことが判定できる。一方、本法の測定原理に由来して、次のよ

MTT 法では単独では生細胞数に対応うな問題点がある、或いは考えられる。

したデータのみで生存率に関しては情報が得られない。MTT 法が改良さ

1. 原理的には核酸を定量する方法でれた XTT 法や WST 法では操作面であり、測定系に核酸が混在すると簡便性が増しているが、測定原理はほ干渉を受ける。

ぼ同じであり、生存率が評価できない

含量によっては、バックグラウンド

ことは同様である。

12

V．おわりにに加われば、死細胞として検出される補正で測定可能。

本法のこのような利点は、薬効（毒2. 本法の蛍光測定で使用する励起性）評価系が細胞状態の良好な条件

波長、測定波長付近に吸収を持つ下で行われていたか否かを客観的数

薬剤により干渉を受ける。

値（生存率）として確認するバリデー

吸収性の程度によっては、バックションにも応用できる。表 4 の例では、
薬剤無処理群の生存率が 99.6% であ

3. 蛍光測定装置側の測定方式、光学り、本試験系は良好な培養条件下で評系の特徴等により、バックグラウン

価されたものと判断される。一般的にドが高くなり測定が困難となる場

は、プレート毎にこのような薬剤無処合がある。一方、本法と蛍光測定

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

グラウンド補正で測定可能。

それらの研究・開発の発展の一助となることを期待したい。
〔参考文献〕
1) Mossman T. J.: Immunol. Methods 65,
55-63. (1983)
2) 加藤文法ら：第 10 回日本動物実験代
替法学会 P-17
3) Kato F. et al : Toxicol. in Vitro, inpress4) Carmichael J et al: Cancer Reserch 47,
936-942 (1987)
5) Ishiyama M. et al: Chem. Pharm. Bull.
41, 1118-1122 (1993)
6) 今井勝行ら：細胞免疫実験操作法（理工学社）15-16
7) Sasaki T et al: Toxicol. in Vitro 6, 451457 (1992)
8) Saotome K et al: Toxicol. in Vitro 3,
317-321 (1989)
9) Borenfreund E et al: Toxicol. Lett. 24,
119-124 (1985)
10) Morris S.J. et al: Bio Techniques 8,296 (1990)

死細胞、全細胞数及び細胞生存率を測定する
蛍光試薬を用いた高感度細胞毒性測定試薬セット
Cytotoxic Fluoro-test wako（FACLS method）
本試薬は、Fluorometric Assay based on Cell Lysis & Staining method（FACLS 法）を用いた、死細胞、全細胞数及び細胞生存率を測定するキットです。測定には核酸蛍光染色剤と細胞溶解剤とを組合せて使用します。この核酸蛍光染色剤は、細胞膜に障害を受けた死細胞の膜を通過して核酸と反応することにより蛍光を発し、生細胞に対しては膜透過性を示さない特長があります。この性質を利用した蛍光測定により、高感度測定が可能となります。また付着、浮遊細胞ともに使用可能です。
従って、下記の様な項目の測定に有効です。
・ 細胞毒性測定試験
・ 細胞の生死の割合の測定
・ 細胞増殖能測定試験
・ 動物実験代替試験
特長

細胞毒性試験の原理（1）同一のウエル内で死細胞数、全細胞数及び細胞生存率が短時間で測定可能です。
（2）測定試料に対して培地交換、細胞洗浄、細胞遠心分離、

Fluorescence Reagent は、核酸と結合していない状態では蛍光強度は 0 付近ですが、核酸と結合すると蛍光強度が100 〜 1,000 倍に増強します。また、この試薬は生細胞に対しては膜透過性を示さず、細胞膜に障害のある死細胞の核

色素溶解などの煩雑な操作が不要です。
（3）2 ステップで操作が完了、迅速な測定が可能である（5分程度）ため、蛍光プレートリーダーを用いて多検体酸と結合して蛍光を発します。この原理を利用し死細胞、全細胞数、細胞生存率を算出します。

処理が可能です。
（4）酵素反応を利用しないため、薬剤による pH の変動、測定温度、反応時間、血清添加の培養液に含まれる酵素
活性などの影響をほとんど受けません。

検量線の作成例

平均蛍光強度値と細胞数の相関を検量線を作成して判定（5）ラジオアイソトープ、有機溶媒等を使用しないので取扱測定例 ：蛍光／吸光マルチプレートリーダースペクトラフ

い操作及び試験後の廃棄が容易です。

ルオで HL-60 細胞を用いて検量線サンプルを作（6）浮遊細胞、接着細胞のどちらでも測定可能です。

成し、測定した結果。

（7）本蛍光法は、死細胞を選択的に検出でき、従来の吸光8000

測定法に比べ高感度測定が可能です（非付着性 MOLT

7000

Fluorescence Intensity-4 細胞 3 × 103 〜 4 × 105 個 / ウェル（200FW）、付着性
HT-1080 細胞 3 × 103 〜 1 × 105 個 / ウェル（200FW））。
操作概要

6000
5000
4000

y = 0.0716x + 31.772
R2 = 0.9987

3000
2000

HL-60

1000

HL-60 Standard
curve

0
0

所用時間

1分
30 秒
30 秒
1分
30 秒 *
30 秒←―――――――――――――――――

細胞培養系（被験物質添加）［例：96 穴マイクロプレート

10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000 80000 90000 100000

200FW/well］

Cell number (Cell / well)【インキュベーション（各試験系において検討された時間）】←――――［Fluorescence Reagent 添加←――――［攪10FW/well］

拌］←――――［蛍光測定］（Ex: 420nm, Em: 460nm）（FD）←――――［Lysis Solution 添加←――――［攪10FW/well］

拌］ ＊測定細胞種、細胞数により至適時間が異なる場合があります。

←――――［蛍光測定］（Ex: 420nm, Em: 460nm）（FT）

細胞生存率 （％）＝

FT − FD――――――――FT×

FT : 全細胞数に相当する蛍光強度
FD : 死細胞数に相当する蛍光強度

100

内

容

Fluorescence Reagent
Lysis Solution

500FW
10mW
293-55001 1,000 回用

1本
1本
31,000 円〔関連商品〕
コード No. メーカーコード

品

名

内容

特

長

534-52061 F129.003

スペクトラフルオ

1 台 蛍光 / 吸光マルチ
プレートリーダー

536-67031 F129.005

スペクトラフルオプラス

蛍光 / 発光 / 吸光マルチ
1 台 プレートリーダー

コード No.
メーカーコード
532-53961 TCN-ex B126300
539-53971 TCN-emB126400

品
名
励起吸光用フィルタースライド
蛍光用フィルタースライド

内容
1個
1個

パンフレットを用意しております。ご請求下さい。

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）13糖脂質の糖鎖構造の変化と癌（後編）大塚製薬株式会社

細胞工学研究所瀧孝雄［前編は、Vol.66 No.1 に掲載されており、本稿はその後編です。］

癌組織特異的糖脂質表１． 癌における Lex および Lea 関連糖脂質の発現

ヒト癌の糖脂質研究から癌組織や癌細胞特異的な糖脂質が明らかにされLex (SEEA-1)

Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer
3
LacCer
Fucα1
Lex

膵臓癌
大腸癌
大腸癌肝転移巣

Dimeric Lex
Trimeric Lex

Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer
3
3
LacCerFucα1
1 or 2
Fucα1
x
x
Le
Le

大腸癌

てきた。

1．Fucosyl-GM1（Fuc-GM1）−肺小細胞癌の糖脂質−

Nilsson によって Fuc-GM1 が肺癌に特徴的な糖脂質であることが報告さ

Sialyl Lex (sLex)

Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer
3
3
LacCerFucα1
NeuAcα2
x
SLe

大腸癌
肝転移巣

Sialyl dimeric Lex

Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer
3
3
3
LacCerNeuAcα2
Fucα1
Fucα1
x
SLex
Le

大腸癌

SialylLea

Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer
4
3
LacCerFucα1
NeuAcα2

大腸癌
膵臓癌
胆のう癌

れて以来、これを支持する多くの論文が提出されている。特に肺小細胞癌に検出されるこの脂質は、有効な診断や治 療 の マ ー カ ーと な ると 考 えられる 15）〜17）。

2．sLe −膵臓癌、胆のう癌−
Koplowski らのグ ループによって作成された N19-9 モノクローナル抗体は sLea 構造を認識する 18）, 19）。膵臓
a

SLea
NeuAcα2
DisialylLea

癌や胆のう癌患者の血清中に高い頻6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ1-1Cer
4
3
LacCerFucα1
NeuAcα2

大腸癌

SLea度で検出されるこの抗原は、糖脂質よりむしろ糖タンパクに発現している。

3．GM3、GD3、GM2 そして GD2法から、肝癌患者血清中にも PG が高析器による微量分析法が用いられるよ−メラノーマ−

い頻度で検出されることが 明らかにうになってヒト癌組織の複合糖質にこれらのガングリオシドはメラノーマ

なった 26）。PG のシアル酸誘導体 S2‐の特徴的糖脂質である。メラノーマ細6PG が肝癌の特徴的糖脂質であるこNeuGc が 検 出 さ れ る よ うに な った 27）〜30）。その含量は NeuAc の 1％を胞を免疫することによって、これらのとは前節でしめした。

越えないが免疫学的意義や臨床応用

糖脂質に対する抗体が作成されてき5．Lea、sLea 関連糖鎖 −大腸癌−に興味が持たれている 28）。

ていると共に、メラノーマ患者由来の大腸癌組織を抗原として作成した

モノクローナル抗体も作成され、治療抗体から Lea や sLea 構造を認識するもへの応用が試みられている20）〜24）。どののが得られる。Lea、sLea 関連糖鎖につ

患者にはどの種のガングリオシドが蓄いては表 1 を参照されたい。

積しているかを治療前に調べる必要

6．N- グリコリルシアル酸（NeuGc）をが あ る が、メラノー マ は immuno-

thrapy が最も進んでいる腫瘍である。
4．パラグロボシド（PG ）、シリアリル
2-6 パラグロボシド（S2-6PG ）癌化によって糖脂質の糖鎖が変化

含有する糖脂質することは糖脂質合成に関与する糖転

シアル酸には表 2 に示すように、N-

移酵素が変化することを示唆している。

アセチル型（NeuAc）と N- グリコリル

筆者らは癌患者腹水の糖脂質分析で型（NeuGc）がある。この分子種は動PG が癌関連糖脂質であることを見い出したが、PG 合成酵素（ガラクトース

一肝癌の糖脂質一物や種による持徴的な分布を示す。マ

筆者らは癌患者腹水の糖脂質分析

ウス、ラット、ウシ、ブタ、イヌ、ウマ等

転移酵素）も癌患者腹水や血清中に高か ら PG（Gal B 1-4GlcNAc B 1-3Galは NeuGc を含む糖脂質がみられるが、い頻度で検出されることを見い出し

B 1-4 Glc B 1-1Cer）が肝癌の患者にヒトやニワトリには NeuGc は存在しな

た 31）, 32）。

高い頻度で検出されることを見い出し

いと思 われ ていた。ところが モノク

た 。PG に対する抗体を用いた測定

ローナル抗体やガスクロマト−質量分

GlcNAcB1-3GalB1-4GlcB1-1Cer＋ UDP-Gal →

25）

14

糖転移酵素の癌性変化 一ガラ
クトース転移酵素の場合一

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

は肝への高い転移性をもつマウスリン

表２． N- グリコリルノイラミン酸（NeuGc）と癌

NeuGc を含む複合糖質

パ腫細胞には GD1A が高濃度に検出

NeuGc が検出される癌組織

MUC-1 糖タンパク（O- 結合糖鎖）

乳癌

糖タンパク

ヒト胃癌細胞株 NUGC 4

4-OAc-GM3

大腸癌

GM2, SPG, GM3, OAc-GM3

ヒト癌組織

GD3

ヒトメラノーマ

されることを見い出し、GD1A の標的
組織への接着性の関与を調べてきた。
その結果、GD1A は転移性癌細胞と肝の類洞内皮細胞（HSE）との接着を強く阻害すること、HSE は GD1A を固相化したプレートに特異的に接着する

GM3, NeuGcA2-3GalB1-4GlcB1-1Cer
GD3, NeuGcA2-8NeuGcA2-3GalB1-4GlcB1-1Cer
GM2, GalNAcB1-3 (NeuGcA2-3) GalB1-4GlcB1-1Cer
SPG (sialylparagloboside), NeuGcA2-3GalB1-3GlcNAcB1-3GalB1-4GlcB1-1Cer

ことを見い出した。我々は、糖鎖構造

N- アセチルノイラミン酸（NeuAc）

ことに成功した。このペプチドはマウ

N- グリコリルノイラミン酸（NeuGc）

O
CHOH
CH2OH

COO-

H2C – C – NH

CHOH

OH O

CHOH

–
=

CHOH

O

=

CH3 – C – NH

O

OH

スリンパ腫の転移を有意に阻止した。

GD1A はヒトにもその存在が明らかに

CH2OH

OH

OH
(– C – NH3)

（

=

OH

COO-

をもつペプ チドをファージ ディスプ
レイライブラリー法を用いて作成するされており、今後この分子の機能解明に大きな興味が持たれる。
）内は４−OAc の場合

O

おわりに
Gly-Asp）と共に固相化した分子の濃モノクローナル抗体を用いた研究が度勾配をゲル中に作成しておき、この癌の糖脂質研究に導入され、さらに物
理化学構造分折が進展するに連れて、糖転移酵素は通常ゴルジ膜に局在ゲルに B16F10 メラノーマ細胞をまくと、細胞は GlcNAc の濃度に依存した分しているが、PG 合成酵素が血清中に布を示すこと、転移性のメラノーマはとがわかり、一般化することの困難さ検出されることは、癌化によって酵素

非転移性のメラノーマに比較して、ガを示すこととなった。しかし、一方ではがなんらかの修飾を受けていることをラクトース転移酵素活性が 5 倍も増加

これまでの研究成果を基に、糖脂質に示している。培養癌細胞の上清から精していることが明らかにされた 33）。

よるワクチンの開発や免疫療法の試

GalB1-4GlcNAcBl-3GalB1-4GlcB1-1Cer＋ UDP

製した酵素の性質を調べてみると、次糖鎖の癌性変化はさらに複雑であるこ

最近、筆者らは PG 合成酵素の簡便

みも進められている。癌の糖鎖研究はで特異的な活性測定法を開発したが、早期発見と治療への応用が実現して（1）PG 合成酵素はラクトース合成

本測定法を用いた分析から、血中のはじめて大きな意味を持つようになる。

酵素と同じアミノ酸配列を持っている

PG 合成酵素活性測定は癌の検出に今後の研究にはこれまでのような基礎こと。
（2）細胞密度が高くなり、細胞ど有効であること、転移がみられる患者的分析をさらに蓄積する一方で、分析

うしが接触するようになると酵素は細血清中には本酵素活性が極めて高い技術の開発を進めると共に、糖鎖を認胞膜に分布するようになり、やがて細こと、予後観察に極めて高い有効性を識するタンパク分子の人工合成とこれ胞外に放出される。
（3）酵素は限定分示すこと等が明らかになった 32）。

を応用した臨床応用が期待される。

のようなことがあきらかになった。

解を受けて可溶性タンパクとなって分泌される。
細胞外に分泌された酵素は、細胞〔参考文献〕

転移に関連する糖脂質

表面の複合糖質の GlcNAc 残基に結筆者らは大腸癌の肝転移巣に Lea お

合して細胞間相互作用に影響を与え

よび sLea が多量に検出されることを報ると想像される。実際、癌細胞には告したが 34）、同じような知見がいくつ

GlcNAc を認識するレクチンがよく結か の グ ル ー プ からも報 告され てい合すること、レクチン結合部位と同じ

る 35）, 36）。神奈木らのグループは転移癌部分に PG 合成酵素が検出されることと血管内皮細胞との接着には sLea やが明らかになった。

sLea とセレクチンを介する反応が関与

また GlcNAc を接着ペプチド（Arg-

していることを報告している 37）。筆者ら

15）Nilsson, O., Brezicka, F. T., Holmgren, J., et al.：（1986）Detection of aganglioside antigen associated withsmall cell lung carcinomas using
monoclonal antibodies directed against
fucosyl-GM1. Cancer Res., 46 ： 14031407.
16）Brezicka, F. T., Olling, O., Nilsson, O.,et al.：（1989） Immunological detection of fucosyl-GM1 ganglioside in
human lung cancer and normal tissues
with monoclonal antibodies. Cancer
Res., 49 ： 1300-1305.
17）Vangsted, A. J., Clausen, H., Kjeldsen,

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）15

T. B., et al.：（1991） Immunologicaldetection of a small lung cancerassociated ganglioside（Fuc-GM1）antigen in serum. Cancer Res., 51 ： 28792887.
18）Koprowski, H., Steplewski, Z., Mitchell,K., et al：（1979）Colorectal carcinoma
antigen detected by hybridoma antibodies. Somat. Cell Genet., 5： 957972.
19）Magnani, J. L., Nilsson, B., Brockhouse, M., et al.：（1982）A monoclonal
antibody-defined antigen is a ganglioside containing sialylated lacto-N-fucopentaose. . J. Biol. Chem., 257 ：
14365-14369.
20）Portoukalian, J., Zwingelstein, G. andDore, J. F. ：（1979）Lipid compositionof human malignant melanoma tumors
at various levels of malignant growth.
Eur. J. Biochem., 94 ： 19-23.
21）Tai, T., Cahan, L. D., Paulson, J. C., etal.：（1984）Human monoclonal antibody against ganglioside GD2： Use indevelopment of enzyme-linked immunosorbent assay for monitoring of antiGD2 in cancer patients. J. Natl. Inst.,
73 ： 627-633.
22）Irie, R. F. and Morton, D. L. ：（1986）
Regression of cutaneous metastaticmelanoma by intralesional injection
with human monoclonal antibody toganglioside GD2. Proc. Natl. Acad.
Sci. U.S.A., 83 ： 8694-8698.
23）Shirata, K., Kuwana, Y., Nakamura,K., et al. ：（1993）A mouse/humanchimeric anti（ganglioside GD3）antibody with enhanced antitumor activities. Cancer Immunol. Immunother.,
36 ： 373-380.
24）Helling, F., Shang, A., Calves, M., etal.：（1994）GD3 vaccins for mela-noma ： Superior immunogenicity of
keyhole limpet hemocyanin conjugate
vaccins. Cancer Res., 54 ： 197-203.
25）Taki, T., Kojima, S., Seto, H., et al. ：（1984）Glycolipid composition of
ascitic fluids from patients with cancer.
J. Biochem.
（Tokyo）, 96： 1257-1265.
26）Myoga, A., Taki, T., Arai, K., et al. ：（1988）Detection of patients withcancer by monoclonal antibody directed to latoneotetraosylceramid（paragloboside）. Cancer Res., 48 ： 15121516.
27）Higashi, H., Hirabayashi, Y., Fukui,Y., et al. ：（1985）Characterization of
N-glycolylneuraminic acid-containing
gangliosides as tumor-associated Hanganutziu‐Deicher antigen in humancolon cancer. Cancer Res., 45 ： 37963802.
28）Kawai, T., Kato, A., Higashi, H., etal. ：（1991）Quantitative determinationof N-glycolylneuraminic acid expression in human cancerous tissues andavian lymphoma cell lines - a tumor
associated sialic acid by gas chromatography-mass spectrometry. Cancer Res.,
51 ： 1242-1246.
29）Hirabayashi, Y., Higashi, H., Kato, S.,et al.：（1987）Occurrence of tumorassociated gang1ioside antigens with
Hanganutziu-Deicher antigenic activity on human melanomas. Jpn. J.
Cancer., 78 ： 614-620.
30）Miyoshi, I., Higashi, H., Hirabayashi,Y., et al.：（1986）Detection of 4-Oacetyl - N - glycolylneuraminyllactosylceramide as one of tumor-associatedantigens in human colon cancer tissue
by specific antibody. Mol. Immunol.,
23 ： 631-638.
31）Taki, T., Nishiwaki, S., Ishii, K., et al.：（1990）A simple and specific assay of
glycosyltransferase and glycosidase
activities by an enzyme-linked immunosorbent assay method,and its application to assay of galactosyltransferase
activity in sera from patients withcancer. J. Biochem., 107 ： 493-498.
32）Nishiwaki, S., Taki, T., Handa, N., etal. ：（1992）Elevation of 4B-galactosyltransferase activity for paraglobosidesynthesis in sera of patients withcancer. Cancer Res., 52 ： 1875-1880.
33）Brandley, B. K., Shaper, J. H. and
Schnaar, R. L.：（1990）GlcNAc gradient distribution of B16F10 melanoma.
Dev. Biol. 140 ： 161-171.
34）Taki, T., Takamatsu, M., Myoga, A., etal.：（1988） Glycolipids of metastatic
tissue in liver from colon cancer：
Appearance of sialylated Lex and Lex
lipids. J. Biochem.
（Tokyo）, 103 ： 9981003.
35）Hoff, S. D., Matsushita, Y., Ota, D., etal.： Increased expression of sialyldimeric Lex antigen in liver metastasisof human colorectal carcinoma. Cancer Res., 49 ： 6883-6888.
36）Matsusako, T., Muramatsu, M., Shirahama, T., et al.：（1991）Expression ofa carbohydrate signal, sialyl dimeric
Lex antigen is associated with metastatic potential of transitional cell
carcinoma of the human urinary bladder. Biochem. Biophys. Res. Commun., 181 ： 1218-1222.
37）Takada, A., Ohmori, K., Takahashi,N., et al. ：（1991）Adhesion of humancancer cells to cascular endotherium
mediated by a carbohydrate antigen,sialyl Lewis A. Biochem. Biophys.
Res. Commun., 179 ： 713-719.

Validoxylamine A【VAA】
生化学用
〔規 格〕
バリダマイシンの一種であるバリ
含 量（cGC）: 95.0% 以上
ドキシルアミン A は多くの動物・菌種において、トレハラーゼの特異的
メタノール溶状 : 限度内な阻害剤として知られています。ト〔参考文献〕
1）Kameda, Y., Asano, N., Yamaguchi, T.
レハラーゼはトレハロースを 2 分子
and Matsui, K. : J. Antibiot. XL, 563のグルコースに加水分解する酵素で、

VAA により阻害を受けるとエネル
ギー代謝が乱され、致死的な効果をもたらします。またゴキブリ等の昆虫種においても同様な阻害剤として報告されており 2） 代謝のメカニズム解明に有用な試薬です。

16

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）(1986).
2) Kono, Y., Takahashi, M., Matsushita,K., Nishina, M., Kameda, Y. and Hori,
E. : J. Insect Physiol., 40, 455 (1994).
3) Kyosseva, S.V. et al. : Arch. Biochem.
Biophys. 316, 821 (1995).

２２０-０１３２１

20mg

15,000 円

CH2OH

OH

OH

OH

N
H

H O

CH2OH
OH

OH

C14H25NO8=335.35〔関連商品〕

Trehalase Solution (E.C. 3.2.1.28)
生化学用205-14461 2.5units 12,000 円

安価なトレハロース、ストレプトアビジン新発売
トレハロース、ストレプトアビジンの廉価製品の発売を開始しました。バルク供給も可能ですので、別途お問合せ下さい。

Trehalose Dihydrate
和光一級
トレハロースは、グルコース２分子

〔規

格〕

含
量 ：97.0% 以上 (HPLC)
水 溶 状 ：試験適合
乾 燥 減 量 ：8 〜 11%(105℃、減圧 )が 1,1 結合した非還元性二糖の一種
で、タンパク質の変性防止や澱粉の老化防止など多くの特長を持つことが知られています。本品は酵素反応により

205-14162

製造されており、安価にご使用頂けま

207-14161

す。

209-14165

1,800 円

25g
100g
500g

6,000 円
18,000 円

Streptavidin, Type Ⅱ
生化学用
ストレプトアビジンは、Streptomyces

形

状 ：凍結乾燥品

起源 ：Streptomyces avidinii
ビオチン結合能 ：10 〜 20units/mg

avidinii より産生されるタンパク質で、卵白アビジンに比べ非特異吸着が低く抑えられています。ビオチンとの特異198-11641

的結合性を利用して、特定のタンパク

194-11643

質の高感度検出に用いられます。

192-11644

3,000 円

1mg
5mg
25mg

12,000 円
45,000 円

新規な高感度発光基質
L-012 ナトリウム
生化学用

L-012 [8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido [3,4-d] pyridazine-1,4-(2H, 3H)
dione] は新規なピリドピリダジン構造〔特長〕

1）ルミノールと比較し発光量が極めNH2て大きく、ペルオキシダーゼ様活性を高感度に測定することができを有する合成発光基質です。ルミノー

NH
N

ます。

ルに比べて発光量が極めて大きく、ペルオキシダーゼ様活性を高感度に測

2）中性域で発光する性質があり、生定することができます。また、中性域

理条件下組織細胞中のスーパーオで発光する性質があるため、生理条件

キシドアニオン、ヒドロキシラジカ

下組織細胞中のスーパーオキシドア

ル、ハイポクロライドなどの活性酸

ニオン、ヒドロキシラジカル、ハイポク

素の測定に有効です。

〔参考文献〕
1）Ii, M., Yosida, H. et al. : Biochem.
Biophys. Res. Commun.,193, 540(1993).
2）Nisinaka, Y., Aramaki, Y. et al. :Biochem. Biophys. Res. Commun., 193,
554(1993).
3）今田伊助、佐藤英介、宮本雅史、市森有三、
井上正康 : 生化学 ,69,728(1997).

水
溶
状 ：澄明
含量（ HPLC ）：98.0% 以上品

129-04621

L-012 Sodium Salt

名ONa

C13H9ClN4NaO2=311.68〔品質規格〕

コード No.

NH
Cl

ロライドなどの活性酸素の測定に有効
です。

O

容

量

10mg

希望納入価格（円）10,000

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）17合成オリゴヌクレオチド精製用「Wakosil DNA カラム」について
和光純薬工業株式会社

合成オリゴヌクレオチドは、プロー

度まで一塩基づつの認識が可能であ

大阪研究所

上森

仁志

ブとして遺伝子のクローニングや特定る。図 1. に oligo dA mixture の分離例

DNA カラムは、合成オリゴヌクレオチ
ドの純度検定から分離精製までを 1 本

遺伝子の検出に、プライマーとして、を示した。また 実施例として、合成の分析用カラムで短時間に達成でき、

シークエンスや PCR に広く利用されしかも 20 〜 40 O.D / 回の精製が可能ている。オリゴヌクレオチドの分離精

FITC- 蛍光標識プライマー（22 mer :100 O.D260 unit/mW）の分離精製と純製法としては、ゲル電気泳動法、イオ

度確認に応用した場合のクロマトグラ

考えている。

ン交換クロマト法、ゲルろ過法、逆相ムを図 2. に示した。以 上、Wakosilなどの利点があり有用性が高いものとクロマト法が利用されているが、クロ: Wakosil DNA(4.6 × 150mm): A : 0.1M TEAA B : CH3CN/0.1M TEAA = 50/50(v/v)
Gradient : 12-20%B in 60min
Flow rate : 1.0mW/min at R.T.
Detector : UV 260nm, 0.16 AUFS
Sample : Oligo dA mixture (12-30mer)

ColumnEluentマト法は操作性に優れ、特に脱塩操作が不要な逆相クロマト法は利用度が高いと考えられる。このクロマト法も、目的とする精製純度により、カートリッジ カラ ムを 利 用し た 簡 易 精 製 法とHPLC による高純度精製法に大別される。筆者らのグループでも、合成オ
リゴヌクレオチドの純度検定や分離精製に 活 用 で きる専 用 カラ ムとし てWakosil DNA カラムを開発した。本カラムは、100 mer 程度までの合成オ
リゴヌクレオチドの精製に利用でき、同一塩基のオリゴマーなら 50mer 程

図１． Oligo dA の分析: Wakosil DNA (4.6 × 250mm): A ; 0.1M TEAA, B ; CH3CN/0.1M TEAA = 50/50(v/v)
0 → 20min : 10% → 44 %B
Flow rate : 1.0mW/min. at 40℃
Detection : UV 260nm
ColumnEluent

合成プライマー（2FW inject）

精製時（200FW inject）
図２． 蛍光標識プライマーの精製と純度検定

18

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

純度検定

HPLC 用カラム
ワコーパック Wakosil-Ⅱ 5C22
粒子径 5Fm 高純度シリカゲルにドコシル（C22）基を導入《分析例》

後、完全エンドキャッピングした高性能充てん剤です。C22

充 て ん 剤 ： Wakosil- 5C22
カラムサイズ ： 4.6 H × 250mm
溶
離液 ： CH3OH/H2O=50/50(v/v)
流
速 ： 1.0mW/min. at 40℃
検
出 ： UV 254nm, 0.128AUFS
試料 ：１）Uracil２）Caffeine３）Phenol
４）2-Ethylpyridine５）Methyl Benzoate６）Benzene７）N,N-Dimethylaniline
８）Toluene1

充てん剤はアルキル基が長く、ODS（C18）充てん剤に比べ2て保持能・分離挙動が異なる場合があります。従来の ODS
充てん剤では分離が困難な試料の分析にぜひ一度お試し下
さい。
7○ 独自の分離挙動
4○ 高純度シリカゲル使用○ 高分離能、高理論段数○ 内径 1.0 H 〜 20 H の各カラムサイズに対応
カラムサイズ
4.0 H × 150mm
4.0 H × 250mm
4.6 H × 150mm
4.6 H × 250mm

53

カラムタイプ6

希望納入価格（円）45,00048,00045,00048,000デュポン
ウォーターズDNPH アルデヒド分析システム

10

20

30

DNPH アルデヒド 16 成分の一斉分析が可能 !!

ワコーパック WS DNPH
ワコーシル DNPH 溶離液 A・B
アルデヒド類は有害大気汚染物質と

08《DNPH アルデヒド 16 成分の分析例》

して環境中に広く存在します。ワコー

充 て ん 剤 ： Wakosil DNPH
カラムサイズ ： 4.6 H × 250mm
溶
離液 ： A ; Wakosil DNPH 溶離液 A
B ; Wakosil DNPH 溶離液 B

0-16min. B ; 10%
16-35min. B ; 10-90%
35-45min. B ; 90%
速 ： 0.6mW/min. at 37℃
出 ： UV 360nm, 0.016AUFS
料 ： １）Formaldehyde-2,4-DNPH２）Acetaldehyde-2,4-DNPH３）Propionaldehyde-2,4-DNPH４）Acrolein-2,4-DNPH５）Acetone-2,4-DNPH
６）Isobutyraldehyde-2,4-DNPH
７）n-Butyraldehyde-2,4-DNPH
８）Crotonaldehyde-2,4-DNPH
９）Isovaleraldehyde-2,4-DNPH
１０）n-Valeraldehyde-2,4-DNPH
１１）Benzaldehyde-2,4-DNPH
１２）Hexaldehyde-2,4-DNPH
１３）o-Tolualdehyde-2,4-DNPH
１４）m-Tolualdehyde-2,4-DNPH
１５）p-Tolualdehyde-2,4-DNPH
１６）2,5-Dimethylbenzaldehyde-2,4-DNPH
each 0.625Fg/mW (as aldehyde, ketone)

パック WS DNPH は、アルデヒド類の流
検試

2,4- ジ ニトロ フ ェ ニ ル ヒドラ ジ ン（DNPH）誘導体を分析する HPLC 用
カラムです。
従来の HPLC カラムでは分離できなかった DNPH-n- ブチルアルデヒドと DNPH- イソブチルアルデヒドの完
全分離を実現しました。専用溶離液と組合せることで、グラジエント溶出による多成分の一斉分析が可能です。
品名

ワコーパック WS DNPH
コード No.
233-01611
230-01621

カラムサイズカラムタイプデュポン
ウォーターズ

4.6 H × 250mm
品
ワコーシル DNPH 溶離液 A
ワコーシル DNPH 溶離液 B

名

記 号
オID
オ IW
容

量

1W
1W

希望納入価格（円）65,000
希望納入価格（円）
5,000
1,200

〔関連商品〕
コード No.
062-03481
012-17391

012-15451

品
名ホルムアルデヒド-2,4- ジニトロフェニルヒドラゾン標準液（40Fg HCHO/mW in acetonitrile）
2 種アルデヒド DNPH 混合標準液（ホルムアルデヒド-DNPH, アセトアルデヒド-DNPH,
各アルデヒドとして 0.1Fg/FW in acetonitrile）
6 種アルデヒド化合物混合標準液（アセトアルデヒド-DNPH, プロピオンアルデヒドDNPH, ホルムアルデヒド-DNPH, イソブチルアルデヒド-DNPH, n- 吉草酸アルデヒドDNPH, イソ吉草酸アルデヒド-DNPH, 各アルデヒドとして 0.1Fg/FW in acetonitrile）

規 格
容 量
排ガス分析
2mW × 5
（HPLC）用
大気汚染物質2mW × 5測定（HPLC）用
悪臭物質試験
（HPLC）用

2mW × 5

希望納入価格（円）10,50012,00015,700

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

19

和光純薬工業株式会社

リムルス試薬がエンドトキシンだけ

あたり0.7 個以上の CM 基が導入でなく B- グルカンにも反応することは、されると反応性の低下が認められすでにお話ししたとおりです。一口にました。1 個以上が導入されるとB- グルカンといっても、重合度や B1,6 結合の割合などの違いにより、いろ

その反応性は大幅に低下しました。このことから、B-1,6- グルコ

いろな構造が考えられます。では、リシド結合が増えると B- グルカン

ムルス試薬に反応しやすい B- グルカのリムルス試薬に対する反応性

ンの構造とはどのようなものでしょう

が低下する可能性が考えられまか。今回は、B- グルカンの重合度と修す。

正和

0.0001 0.001

このような 視 点 からもう一 度

ス試薬の反応性について考えてみま

Fig. 1 のデ ータを見直してみましょう。

しょう。直鎖の curdlan の反応性

リムルス試薬と各種グルカンとの反が最も強く、B-1,6- グルコシド結

応性は Fig. 1 の通りです。各バーは、
curdlan の活性を 1 としたときのそれの活性は低くなっています。また、ぞれの活性を表しており、バーが長い

グルコースの重合度が 20 から 30ほどリムルス試薬との反応性が強いと程 度 の laminaran は、重 合 度いうことになります。Paramylon から

5000 以上の lentinan に比べると、

curdlan まではすべて B-1,3- グルコシ

反応性が低いという結果です。こド結合を持っており、これらの反応性

curdlan 分 解のあたりの結果は、が 高いことから、リムル ス試 薬は B-

物 や CM 化 curdlan の反応性と1,3- グルコシド結合を持っているグル傾向が一致していると思います。

カンによく反応すると考えられます。

これらの結果をまとめますと次

それでは，いくつくらいのグルコー

PustulanCM-cellulose
Cellulose
DextranPullulan
Glycogen
Amylopectin
Amylose
NigeranPramylon
Zymosan
Lentinan
Laminaran
LicheninCM-curdlan
CurdlanFig.1

化するのでしょう。Fig. 2 に、ギ酸分解

コシド結合をもつグルカン

したカードランの分画物を用いた筆者に反応する。

14

26

49

82

131

Fig.2 リムルス試薬の反応性に及ぼす B- グルカンの重合度の影響10(Degree of polymerization) が 6 のものはほとんど反応しませんが、14 では
少し反応が認められ、49 以上でほぼに 対 す る 反 応 性 は、グ ル

一定となりました。

が 50 を越えるとほぼ一定に

curdlan は B-1,3- グルコシド結合のみからなる直鎖の B- グルカンといわれていますが、天然の B- グルカンでは、curdlan のようなグルカンは少な
く、B-1,3- グ ルコシド結 合 以 外に B1,6- グルコシド結合を持っているものが多いようです。筆者らは、curdlan をカルボキシメチル化 (CM 化 ) し、リムなる。

いた結果です。日本産カブトガニ由来

ルス試薬との反応性への影響を調べの試薬を用いた報告 1) もありますのでました。その結果、一つのグルコース

ご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

0.1

Degree of polymerization(2) B- グルカンのリムルス試薬るに従って増大し、重合度

各種グルカンのリムルス試薬との反応性

6

ら の デ ー タ を 示 し ま す。重 合 度

コースの重合度が大きくな

11のようになります。

(1) リムルス試薬は B-1,3- グル

0.1

10

合 を 持 つ lentinan や laminaran

スがつながれば、リムルス試薬が活性0.01

Relative activity (g-curdlan/g)

Relative activity (g-curdlan/g)

飾度の観点から、B- グルカンとリムル

20

土谷

β- グルカンとリムルス試薬の反応性

Relative activity (g-curdlan / g)

第 34 話

大阪研究所(3) B- グルカンのリムルス試薬に対する反応性は、β-1,3グルコシド結合以外の結合

1

0.1

0.01

0.001
0.06 0.17 0.38 0.52 0.71 0.95 1.14
Degree of substitution (CM-group / glucose)

Fig.3 リムルス試薬の反応性に及ぼす B- グルカンのCM 基置換度の影響が増えるに従って反応性が低下する。
今回のデータは、筆者らの試薬を用

次回は「第 35 話 抗生物質のエン
ドトキシン試験」の予定です。
〔参考文献〕
1) Tanaka, S. et al. : Carbohydor. Res.,
218, 167 (1991).

肥満、糖尿病研究関連キット
GPDH 活性測定キット（脂肪合成活性測定用）
グリセロール 3 りん酸脱水素酵素（GPDH）の活性がより簡便に測定できます。
★ 簡単な操作
凍結乾燥粉末に蒸留水を加えるだけで測定が可能★ 多検体の測定が可能
96 ウエルプレートリーダーを使用すれば最大 500 検体まで測定可能〔キットの構成〕
成

分

包装形態

反 応 基 質

トリシン緩衝液，pH 7.4
EDTA・2Na
DTT
DHAP
NADH
安定化剤

25 検体分／ボトル× 4 本（凍結乾燥状態）

酵素抽出試薬

トリシン緩衝液，pH 7.4
EDTA・2Na

200mW 分× 1 袋（粉末状態）

脂肪細胞

グルコース
GPDH

株化脂肪細胞 3T3L1 に骨由来の脂肪蓄積抑制物質を添加
A : 無添加 B : 0.5Fg/mW 添加 C : 1Fg/mW 添加

TG
核

培養脂肪細胞の GPDH 活性測定

褐色脂肪細胞培養キット
褐色脂肪組織は過剰に摂取したエネルギーを脂肪として蓄えると同時に脂肪のエネルギーを直接熱として体外に放出する特殊な働きを持ち、交感神経から出るノルアドレナリ
ンのベーター作用の支配のもとに、エネルギー消費の自動調節に寄与しています。
本 キットは、褐 色 脂 肪 細 胞の 機 能を 損 なうことなく、Primary Cultutre の状態で褐色脂肪細胞をお届けします。
▲ ▲ ▲

〔用 途〕
抗肥満、抗糖尿病薬のスクリーニング
褐色脂肪細胞の機能解析
褐色脂肪細胞の熱エネルギー放出〔キットの構成〕 各 1 本● 褐色脂肪細胞
25mW フラスコ● 増殖用メディウム
125mW● 分化誘導メディウム
100mW● 脂肪細胞維持メディウム
125mW
コード No.

メーカーコード

309-06141

AK0001306-06151

AK0002

ノルアドレナリン添加

培養褐色脂肪細胞
品

名

脂肪滴が縮小する
規格明細

希望納入価格（円）GPDH 活性測定キット

100 検体用

50,000褐色脂肪細胞培養キット

一式

100,000

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

21

東京大学

医科学研究所松沢昭雄

第５話 アポトーシス誘導分子：Fas-Fas リガンド
（FasL）の機能と変異本シリーズでくり返し述べられてい路 が 明ら か に な って い る 3）。

るように、アポトーシスが生体の発生

FasL は Fas と結合することにやホメオスタシスで重要な役割をは

よりシグナルを細胞内へ送りこたしていることが広く認識されて世界

み、このシグナル は 細 胞内の中で盛んに研究されている。アポトー

シス研究の隆盛の火つけ役となった

death domain（DD）を通 してFADD に 伝 えられる。FADD
は death effector domain（DED）を通して caspase8 を活性化し、活性化された caspase8

ことで注目される。

は 一 連 のシ ス テ イン プ ロテ

１．Fas と FasL

ア ー ゼ より成 る caspase カ ス

Fas は細胞を殺す活性をもつモノク
ローナル抗体（mAb）に対する抗原として発見された 1）。APO-１、CD95 とも呼ばれている。cDNA クローニングにより、Fas は TNF/NGF リ セ プ タ ー

ケードを活性化することにより、に DAXX や RIP を介する経路

スーパーファミリーに属するⅠ型膜タも報告されている。

ン パク質であることが 明らかにされ

２．Fas と FasL の異常と病気

シスの主要な経路の一つである Fas-

FasL に関する研究は、わが国の研究者が世界をリードし、現在のアポトー

分解、核の凝縮を特徴とするアFasL

Deat h Domain
FADD
DAXX

caspase 8

JNK/ c-JUN
Act ivat ion
Cascade of Caspase
Act ivat ion

ポトーシスを惹き起こす。ほか

Fas-FasL シグナル伝達経路た細胞が抗 Fas mAb によりアポトーシに異変が起きたら、どうなるのスを起こすことから、Fas がアポトーシ

だろうか。マウスで表面マーカーとしアポトーシス

図 1．Fas シグナル伝達経路（本文参照）に流出した自己反応性 T 細胞や役目

スシグナル（death signal）を細胞内へて Thy1 をもつが CD4 と CD8 をもたを終えたリンパ球をアポトーシスによ送りこむリセプターであることが確か

ずに B 細胞マーカーである B220 をもり除去していて、この装置が故障するめられた。Fas は胸腺、肝臓、肺、腎臓

つ異常な T 細胞（CD4 − CD8 −であると本来必要としない異常な細胞がリンで高く発現し、ほかの臓器・組織でもことから double negative（DN） T 細

パ節に蓄積すると考えられる 7）。実際低いながら広く発現している。

胞と呼ばれている）が末梢で増加、蓄に、抗 DNA 抗体、リウマチ因子、免疫

生体内では抗 Fas mAb にかわって、
FasL が Fas と結合してシグナルを送積して著明な全身性リンパ節腫脹を複合体などの自己抗体が証明されて起こすミュータントが見つかっている 4）。

いる。

りこむ役目をはたしている。細胞傷害

この DN T 細胞の出現は一つの劣性遺性Ｔリンパ球（CTL）からの cDNA ク

伝子 lpr（lymphoproliferation）によっ

Fas と FasL は一体となって働いているので、FasL に変異が起こっても同

ローニングにより、FasL は TNF ファミて支配されている。染色体マッピング

じ異常が起こるはずである。やはりマリーに属すⅡ型膜タンパク質でＣ末端により、Fas 遺伝子が第 19 染色体上のウスで lpr と全く同じ DN T 細胞蓄積を細胞外に出していることが明らかに

lpr と同じ場所にあることが判明して解によるリンパ節腫脹を起こす劣性遺伝

された２）。Fas に比べて FasL の発現は析が進み、lpr は Fas の第 2 イントロン

子 gld（generalized lymphoprolifera-

限定され、主に NK 細胞や T 細胞で活

内へのトランスポゾン（ETn）の挿入に性化時に発現するが、精巣や眼球でもよる突然変異で Fas を発現していない

tive disease）がすでに第 1 染色体上に見つかっていた。この gld こそ FasL の発現している。またプロテアーゼによことが明らかになった 5）。このことから、突然変異遺伝子で細胞外領域に点変り細 胞 表 面 から切 断 され、可 溶 性

Fas は T 細胞の分化や機能の調節とい異を起こしフェニルアラニンがロイシ

FasL として生体内に存在することもあう重要な役割をもつことが分かった。

ン に 代 わり、産 生 され る 変 異 FasL

る。

lpr マウスの胸腺では T 細胞の選択が正 常に 進 行していることから、FasFasL 装置は胸腺で排除されずに 末梢（mFasL）
が Fas と結合できないことがFas を介するアポトーシスについて
は、図１に示す death シグナル伝達経

22

FAS

DNA の断片化、タンパク質のた 。Fas-cDNA をトランスフェクトし
2）

FasL

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

分かった 2）。すなわち、lpr マウスでは

Fas の発現がないために、gld マウス

では mFasL が Fas と結合できないたが肝細胞表面に発現している Fas と結めに、末梢に DN T 細胞が蓄積し識別合して death シグナルを送りこみ肝細）2C）。
もみられている 10（図以上のように、Fas と FasL は微妙なできないほどよく似た病状が現われる。

胞のアポトーシスを起こしたためと考バランスの上で免疫系を中心として生著 者らは lpr と gld を 橋 渡し す る ユ

えられる。また、動物の肝炎モデルで体のホメオスタシスを保っている。今ニ ー ク な Fas の 突 然 変 異 遺 伝 子

可溶性 Fas や抗 FasL mAb の投与が後の研究でさらに新しい機能が明らか

lpr （lpr complementing gld）を見つ

肝炎を予防することから、肝炎に Fas-になることが期待される。

け ている 6）。lprcg は Fas の 細 胞 内の〔参考文献〕

DD 部分の点変異でイソロイシンがア
スパラギンに代わったために death シ

FasL 経路が関係している可能性がある。HIV 感 染 患 者の CD4 T 細 胞 でFas の発現が上昇して Fas を介するア

グナルを伝えられない。そのためにポトーシスに感受性になっていること

cg

Fas-FasL 経路が中断してアポトーシ
スが起こらなくなり、DN T 細胞蓄積によるリン パ節 腫 脹が 起こる。lprcg はdeath シ グ ナ ル を 伝 えら れ な い がFasL と結合できる変異 Fas（mFas）を細胞表面に発現するために、lprcg とgld は異なる染色体上にある劣性遺伝子であるにもかかわらず、lprcg と gld
マウスを交配して作 っ た F1 マ ウ スで軽度ながら DN T 細胞によるリンパ節
腫脹 が 起 こ る。こ の不可解な現象は、
こ の F1 マ ウ ス がlprcg gld・
Fas FasL

から、AIDS 患者で見られる CD4 T 細胞の減少に Fas-FasL 経路が関与しているという報告もある。
３．Fas、FasL と癌
アポトーシスの観点から眺めると、癌はアポトーシスに抵抗性になり無限に増えつづける細胞集団と考えられる。
肝細胞は Fas を高発現し、抗 Fas mAb
によりアポトーシスを起こすことは既に述べた。肝癌細胞も同様に Fas を発現していれば、FasL や抗体により死滅させることが可能であるが、多くの肝癌は Fas の発現を停止したり低下さの遺伝子型であるこ とからFas、mFas、

せて CTL からの攻撃を免れている 8）

FasL、mFasL が同じ分子数ずつ作られ、mFas が FasL と結合するためにFas に death シグナルを送りこむ FasL

（図 2A）。この ような 癌 細 胞 へ Fasが不足してアポトーシスの効率が低下の癌遺伝子治療への応用が考し て 起こると考 えられ ている。lpr、えられる。

cDNA をトランスフェクトすると再びア
ポトーシスを誘導できることから、Fas

lprcg、gld のいずれも MRL マウスで自肝癌のなかには Fas を発現

己抗体産生に加えて重症な糸球体腎しないだけでなく FasL を発現炎、血 管 炎 や関 節 炎を起こすので、して逆に CTL をアポトーシス

Fas と FasL の変異が自己免疫病の原因となる可能性がある。ヒトでも lpr マ

させて免疫機構による排除から

1）Yonehara, S., Ishii, A. and Yonehara,
M. (1989) J. Exp. Med. 169, 17471756
2）Nagata, S. (1997) Cell 88, 355-365
3）Depraetere, V. (1998) Current Biol. 8,
R7044）Cohen, P. L. and Eisenberg, R. A.
(1991) Annu. Rev. Immunol. 9, 243269
5）Watanabe-Fukunaga, R., Brannan, C.
I., Copeland, N. G. et al. (1992)
Nature 356, 314-317
6）Matsuzawa, A., Moriyama, T.,
Kaneko, T. et al. (1990) J. Exp. Med.
171, 519-531
7）Rieux-Laucat, F., Le Deist, F., Hivroz,
C. et al. (1995) Science 268, 13471349
8）Strand, S., Hofmann, W., Hug, H. etal. (1996) Nature Med. 2, 1361-1366
9）Green, D. R. and Ware, C. F. (1997)
Proc. Nat. Acad. Sci. 94, 5986-5990
10）Seino, K., Kayagaki, N., Okumura, K.
et al. (1997) Nature Med. 3, 165-170
A

肝細胞
Fas

FasL ( ant i-Fas)

アポトーシス
癌化

B

逃れているものもある（図 2B）。

ウスと酷似したリンパ節腫脹などの症

正常組織でも FasL を発現して状をしめす自己免疫性リンパ球増多症

いる精巣のセルトリ細胞や眼球の小児患者で Fas の突然変異が見つの角膜は、MHC が異なるレシ

CTL
癌細胞

かっている 7）。自己抗体による溶血性ピエントに移植しても FasL に

FasL導入貧血、血小板減少症や好中球減少症

よりCTL をアポトーシスさせて、Cが起こっている患者もいる。

長く生存できる 9）。この現象はFas-FasL 経路のシグナル伝達障害

immune privilege と呼ばれ、が異常リンパ球蓄積や自己免疫病を臓器移植への応用が考えられ起こすように、機能過剰も生体にとっている。しかし、遺伝子導入にて 有 害に は たらく。マウ スに 抗 Fas

より FasL を過剰発現させた正mAb を注射すると急性肝障害で数時間以内に死亡する 2）。lprcg マウスでは全く異常が見られないことから、mAb

常細胞や癌細胞を移植すると大量の好中球の浸潤が起こり、炎症反応により拒絶される現象

アポトーシス

好
中
球

炎

症

排

除

図 2 ．癌細胞に対する Fas と FasL の作用−肝細胞を例として（本文参照）

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）23

電子伝達系及びアポトーシスの研究にAntimycin A, from Streptomyces sp.
生化学用
抗カビ作用をもつ抗生物質の 1 つ
〔規 格〕
8
A
A
で、 位アルキル基の異なる 1 〜 9
含 量（ T L C ）: 99% 以上
化合物の混合物です。ミトコンドリ
エタノール溶状 : 限度内
アの呼吸鎖の電子伝達をチトクロム〔参考文献〕b とチトクロム c1 の間で阻害します。 Wolvetang, E. J. et al. : FEBS Lett., 339,
40（1994）.
また、bcl-2 によって阻害されないア
ポトーシスを誘導するとの報告もあります。

015-17021
011-17023

25mg
100mg

O

OH CH3
NHCHO

CH3

O

CONH

OCCH2CH
R

O

O

CH3
CH3

O

A1: R = n - C6H13

Antimycin A1
C28H40N2O9=548.63

4,000 円
11,500 円

Antisense Control Template
遺伝子研究用
下記遺伝子を含むアンチセンスコ
ン ト ロ ー ル テ ン プ レ ー ト で、リ ニ
アーになっているため in vitro 転写反応のテンプレートとして直ちに使用できます。T7 RNA Polymerase や他の Polymerase を用いてこのテンプレートで転写を行う事により、アンチセンス RNA を生じ、これらの転写
物は、リボヌクレアーゼや S1 ヌクレ
アーゼプロテクションアッセイ、RTPCR アッセイ、ノーザン及びドットブロットのプローブとして使用できます。
濃形

度 ：0.5mg/mW
状 ：10mM Tris-HCl (pH貯7.5), 1mM EDTA
法 ：− 20℃

Bax-2 Mouse Antisense Control Template

p53- Mouse Antisense Control Template

コード No.
546-00671
547-00721
540-00711
543-00701
540-00691
543-00681
549-00661

24

品
名Bax-2 Mouse Antisense Control Template
p53-Mouse Antisense Control Template
p53-Human Antisense Control Templatec-myc Human Antisense Control Template
Bcl-X Mouse Antisense Control TemplateBcl-2 Mouse Antisense Control TemplateBax-1 Mouse Antisense Control Template

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

容

量

10Fg
10Fg
10Fg
10Fg
10Fg
10Fg
10Fg

希望納入価格（円）22,00022,00022,00022,00022,00022,00022,000血液をそのまま PCR、DNA 精製不要
Drop PCR Kit for Human Blood
Drop PCR Kit for Human Blood は、血液を直接 PCR 反応液に添加（滴下：Drop）するだけで、目的の遺伝子を検出できるように開発された製品です。

抗凝固剤による影響はありません
3 種類の抗凝固剤（sodium citrate, EDTA, heparin）処理血を、室
温・冷蔵（4℃）・冷凍（− 20℃、− 80℃）条件下で約 2 カ月半保存し、添付の Control Primer*1)（p53Primer Exon 6：275bp）を用いて PCR を行った。

血液試料 0.5μℓ〔特 長〕
血液試料 0.5FW を直接 PCR 反応液に添加するだけ
で PCR が行えます。
各種抗凝固剤処理血、凝固血及び血痕試料を使用できます。
1kbp 以下の DNA の増幅に適しています。
DNA 精製を行う必要がないため、・ 短時間で解析できます。
・ 操作が簡便であり、一度に多数のサンプルを処理することができます。
・ 精製過程におけるクロスコンタミネーションの可能性が少なくなります。

sodiumcitrateEDTA
heparinM 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 M
Lane 1
Lane 2
Lane 3
Lane 4室温保存
４℃保存−20℃保存−80℃保存

M：Marker５（φ×174 / Hin c digest）
PCR産物の 1 / 5 量（10μℓ）
３％ Agarose 21*1) ヒト p53 遺伝子 Exon 6 を含む領域（275bp）を増幅させるためのプ・ ウイルス感染血等を扱う際の危険性が少なくなります。
詳細なマニュアルが添付されています。

ライマーです。
ニッポンジーン製品 p53 Primer Exon 6（コード No. 319-03521）
forward と reverse の混合液です。

318-03851

60 回分

55,000 円

本品は、株式会社島津製作所との技術提携により製品化しました。

DNA のサイズと量が比較できる
Smart Ladder（0.2-10kbp）
Smart Ladder（0.2-10kbp）は、直鎖状二本鎖 DNA のサイズや DNA 量の目安となる Size ＆ Mass マーカーです。
フラグメント
サイズ（bp）

10000
8000
6000
5000
4000
3000
2500
2000
1500
1000
800
600
400
200

DNA量
（ng /バンド）

−
−
−
−
−
−
−
−
−
−
−
−
−
−

１％ Agarose S、EtBr染色
１レーン当たり５μℓ電気泳動した場合

100
80
60
50
40
30
25
20
15
100
80
60
40
20

色素マーカー添付

1kbp と 10kbp のバンドを強調〔使用方法〕
通常 1 レーンに 5FW 使用して下さい（写真参照）。
〔形

マーカーのフラグメントサイズ
から DNA 量が概算できる
5FW ア プ ラ イ し た 場 合、1,600 〜
10,000bp の範囲ではフラグメントサ
イズの 1/100 量（15 〜 100ng / バンド）になり、200 〜 1,000bp ではフラグメ
ントサイズの 1/10 量（20 〜 100/ バンド）になります。

状〕

10mM Tris-HCl（pH 8.0）、1mM
EDTA、0.025% bromophenol blue、
0.025% xylene cyanol FF、2.5%
Ficoll 400、0.1% NaN3

317-03941 500FW（100 回分） 22,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）25高品質 ･ 高純度のトリス試薬 !!
生化学用
生化学用トリスシリーズすべてに含量、吸光度分析など厳密な製品規格を設定しております。あらゆる場面で汎用される本製品群は自信を持ってユーザーの皆様にお届けできます。
〔Tris 999 の規格例〕
含量（滴定分析） 99.9% 以上
吸光度 A290=0.05 以下（40% w/v in water）

pH

硫酸塩 SO4
塩化物 Cl

0.002％以下
5 ppm 以下
A260=0.05 以下（40% w/v in water） カルシウム Ca 4 ppm 以下
10.0 〜 10.8（0.1M 溶液）
乾燥減量（１０５℃） 0.1% 以下

コード No.

品

Tris HCl
500g

名

容

013-16385
011-16381
017-16383
015-16921
011-16923

2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol 999【Tris 999】
2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol Acetate【Tris Acetate】

010-17451
012-17455
016-17453

2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol Hydrochloride【Tris HCl】

量Tris 999
1kg

Tris Acetate
250g

希望納入価格（円）

500g

8,000

1kg

13,7005kg

50,000

100g

5,000

250g

10,000

100g

4,200

500g

15,0001kg

25,000Mayer's Hematoxylin Soln.（× 2）
病理研究用
細胞核染色用試薬。通常処方のマ
イヤーヘマトキシリン溶液に比べ 2倍法のものはヘマトキシリン含量が多いため、より短時間で核内構造の細部まで鮮明に染色され、超薄切片にも使用できます。

〔組 成〕
ヘマトキシリン（C.I. 75290）
よう素酸ナトリウム
カリウムミョウバン
抱水クロラール
くえん酸
134-13065

2g
0.4g
50g
50g
1g

5,000 円

500mW

胃バイオプシー HE 染色（× 200）

〔関連商品〕 各種処方ヘマトキシリン液

26

コード No.

品

131-09665

Mayer's Hematoxylin Soln.

病理研究用

500mW

4,200

032-14635

Carrazzi's Hematoxylin Soln.

病理研究用

500mW

4,200

073-03711

Gill's Hematoxylin Soln. No.1

病理研究用

1W

6,800

070-03721

Gill's Hematoxylin Soln. No.2

病理研究用

1W

7,800

077-03731

Gill's Hematoxylin Soln. No.3

病理研究用

1W

8,400

121-03905

Lillie-Mayer's Hematoxylin Soln.

病理研究用

500mW

4,700

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）レプチン
従来脂肪組織は、エネルギーを貯蔵するだけの臓器と考えられていました。ところが、近年脂肪組織が様々な液性因子を分泌することが明らかになりつつあり、またそれらが摂食行動、エネルギー消費、糖脂質代謝、インスリン作用などに影響することから、肥満糖尿病、動脈硬化症、虚血性心疾患におけるその臨床的意義も注目されています。その脂肪細胞由来の液性因子の 1 つであるレプチンは、ob 遺伝子より産生され飽食因子であると考えられています。摂食の抑制、エネルギー消費の増
加、LH, FSH, TSH の上昇、ACTH, NPY 産生の低下などが知られています。

Leptin, Human, recombinant
生化学用
産生： ヒトレプチンの cDNA を組み形

生物学的活性： 1 〜 10mg/kg/day で ob/込んだ発現プラスミドを持つ

ob C57 BL /6J マウスのE.coli により生産

体重及び 食餌の摂取量

状： フィルター滅菌後 PBS からに、用量依存的減少が認

凍結乾燥（安定剤不含）

められます

分子量： 16kDa

121-04561

1mg

48,000 円

128-04571

1mg

40,000 円

Leptin, Mouse, recombinant
生化学用産

生： マウスレプチンの cDNA を組み込んだ発現プラスミド

生物学的活性： 1 〜 10mg/kg/day で ob/

ob C57 BL /6J マウスのを持つ E.coli により生産
形

体重及び食餌の摂取量に、用量依存的減少が認められます

状： 10mM クエン酸 Na, pH 4.0から凍結乾燥（安定剤不含）

分子量： 16kDa〔参考文献〕
1) Halaas, J. L. et al. : Science, 269, 543 (1995).
2) Campfleid, L. A. et al. : Science, 269, 546 (1995).

High Throughput Screening や化合物ライブラリーの包括に大変便利！
Compound Library
TOCRIS 社は、カタログ製品約 800品目から、ご希望に応じた品目を、ご希望に応じた容量にて、96 穴マイクロチューブプレートにて、化合物提供を行っております。また、カタログには掲載されておらず、薬理作用がまだ、不明である中間体も、品質管理試験がされていませんが、同様に 96 穴マイク
ロチューブプレートで提供させて頂いております。これらの品目の Structure

Database フロッピー（SD file）は、無料で提供しておりますので資料請求トールされている IBM PC もしくはそ〔関連商品〕

カードにてご請求下さい。

の互換機が必要になります。

ISIS/Desktop

ご覧頂くには、Windows 3.1 以上のOS を搭載した ISIS/BASE が インス

ご 注文は、当社営業担当者までご相談下さい。

（Windows，Machintosh ハイブリット版）
533-90251

一式

198,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）27

20 ／最終回
免疫一口メモ◯免 疫 と ケ モ カ イン
近畿大学

この稿では最近見い出されたリンパ

医学部

細菌学講座

義江

組織へホーミングする効率はナイー

球や樹状細胞に特異的に作用するケ

T 細胞は再び循環を開始するが、その循環経路はナイーブ T 細胞とは異なり、

ブ T 細胞と比べると低いが、そのかわ

モカインについて紹介する。詳しくはおもに炎症組織や皮膚、腸管粘膜固りに２次リンパ組織以外の末梢組織へ

文献１、２の総説を参照されたい。

有層などといった標的抗原の存在する

選択的に移動する。

リンパ球は生理的な状態でも血液と可能性の高い組織へと遊走し、そこか

このような細胞接着分子による特異組織の間で絶えず再循環とホーミン

ら移入リンパ管を経てリンパ節へ還流的結合に加えて、さらにリンパ球をこグを繰り返している。すなわち１次リンする。このようにして個々には数に限りれらの組織の微小環境へと誘導する

パ組織である骨髄や胸腺で分化成熟のある抗原特異的な多数のクローンが一群のケモカインが存在する（表１）。

したナイーブな B 細胞や T 細胞は末

常時再循環することによって生体はき

例えば、SDF-1 はリンパ球や CD34 陽梢血に放出され、血液と脾臓、リンパわめて巧妙な仕方で免疫学的に監視性前駆細胞に対する強力な遊走活性

節、パイエル板、虫垂などの２次リンされている。

を示し、そのレセプター CXCR4 は B

パ組織との間で再循環を繰り返す。一リンパ球の組織特異的な再循環に細胞、T 細胞、CD34 陽性前駆細胞な方、末梢組織で抗原を取り込んだ樹状はまずそれぞれのクラスやサブセット

どで発現している。また CXCR5 は２細胞は所属のリンパ組織に移行して抗が発現するホーミングレセプターと標次リンパ組織での B 細胞領域（濾胞や原ペプチドと MHC クラス II 抗原の複的組織の血管内皮細胞が発現するそ胚中心）の形成に必須であり、そのリガ合体を提示する。そして抗原特異的な

れらのリガンド（アドレッシン）との特異

ンド BCA-1/BLC は B 細胞に対するナイーブ T 細胞がこの複合体を認識的結合が重要である。例えば、リンパ特異的な遊走因子である。TARC はするとさらに CD28 と CD80 や CD86

節に選択的ホーミングするナイーブ T

おもに胸腺の髄質に存在する樹状細との結合による共シグナルも加わって細胞は L セレクチンを高レベルで発胞で恒常的に産生されており、そのレ

T 細胞は増殖を開始し、最終的にエフェクター／メモリー T 細胞に分化する。エフェクター／メモリー T 細胞は現し、一方リンパ節に存在する高内皮セプター CCR4 は胸腺の皮質に存在

小静脈にはセレクチンと結合する糖鎖

する CD4 単独陽性 T 細胞に発現してリガンドが GlyCAM-1 や CD34 上にいる。このことから TARC は胸腺内で活性化されたときに産生するサイトカ

発現されている。またパイエル板へポジティブセレクションを受けた CD4

インの種類からさらに Th1 型（IL-2、

ホーミングするナイーブ T 細胞の場合

単独陽性胸腺細胞の皮質から髄質へ

IFN-C などを産生）と Th2 型（IL-4、IL-5 などを産生）に大別される。Th1

は L セレクチンとともに A4B7 インテの移動に関与していると考えられる。

グリンも発現しており、一方パイエル

さらに CCR4 は 末 梢 血 で は おもに

はおもに細胞性免疫や自己免疫疾患

板の高内皮小静脈は MAdCAM-1 やに関与し、また Th2 は液性免疫やアレ
ルギー反応を促進する。そして血液中

VCAM-1 を発現している。大半のメ
モリー／エフェクター T 細胞は L セレ

CD4 陽 性 メ モ リ ー T 細 胞 の 一 部（~20%）に発現しており、しかもこれらの細胞は Th2 タイプのサイトカインをに放出されたエフェクター／メモリー

クチンの発現が低いため、２次リンパ選択的に産生する。そのため末梢組

表１. 免疫系ケモカイン
ケモカイン

CXC ケモカイン
IP-10
MIG
SDF-1
BCA-1
CC ケモカイン
TARC
MDC
LARC
PARC
ELC
SLC

28

修

別

名

主要発現組織産生細胞

主要標的細胞

レセプター

リンパ節、脾臓、肝臓、胸腺

IFN-C 処理細胞
IFN-C 処理細胞

活性化 T

脾臓、肝臓

PBSF
BLC

脾臓、膵臓、卵巣、小腸

ストローマ細胞ナイーブ T、B、CD34+

肝臓、脾臓、リンパ節樹状細胞（？）

B

CXCR3
CXCR3
CXCR4
CXCR5

胸腺、肺、腸管

樹状細胞

STCP-1
MIP-3A/Exodus
DC-CK1/AMAC-1
MIP-3B
6Ckine/Exodus-2

胸腺、リンパ節、虫垂

マクロファージ

CD4+ T（Th2)
CD4+ T（Th2）
T、B、樹状細胞
ナイーブ T
T、B、樹状細胞
T、B、樹状細胞

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

腸管

腸管上皮細胞

肺、リンパ節、胸腺

樹状細胞、マクロファージ

２次リンパ組織高内皮静脈（？）

２次リンパ組織

高内皮静脈

活性化 T

CCR4
CCR4
CCR6
CCR7
CCR7、CXCR3

織では TARC やレセプターを共有す

ター CCR7 は T 細胞、B 細胞および成織を中心に構成的に産生されており、る MDC は樹状細胞やマクロファージから産生され、Th2 タイプの T 細胞を

熟樹状細胞に広く発現している。さらリンパ球のクラスやさまざまな機能的に T 細胞を活性化すると CCR7 の発

サブセットの体内での移動とホーミン

これらの抗原提示細胞へと呼び集める

現は強く増強することから、これらのケ

グを生理的に制御し、それによって免と考えられる。また PARC はリンパ節

モカインは２次リンパ組織へのリンパ疫組織の形成や機能維持に必須の役の胚中心や T 細胞領域の樹状細胞で球の生理的ホーミングとともに免疫応割を担うと考えられる。さらにこれらの産生されており、リンパ節でのナイー

答での T 細胞の遊走にも重要な役割

ケモカインの産生はさまざまな刺激や

ブ T 細胞のホーミングと活性化に関与を担っていると考えられる。

サイトカインによっても強く誘導される

することが示唆されている。LARC は

好中球や単球をおもな標的細胞とことから、免疫応答でも重要な役割を

おもに腸管上皮細胞で産生されており、する「炎症性ケモカイン」でもその多く担うと考えられる。これらのケモカイン

一方レセプター CCR6 は T 細胞や Bがメモリー T 細胞に対する遊走活性をの生理的および病的な役割の解明が細胞で発現しており、さらに肺組織か示す。この事実は好中球や単球が主要望される。

ら分離した樹状細胞や臍帯血 CD34

体の炎症反応でもやがてリンパ球の陽性細胞から分化させた樹状細胞で浸潤が起こることをよく説明し、炎症も発現している。LARC は腸管粘膜で反応と免疫応答の密接な関係を裏付の免疫組織の形成に関与すると考えらけるものである。さらに本稿でふれたれる。SLC や ELC は２次リンパ組織

リンパ球や樹状細胞に特異的に作用の傍濾胞皮質領域（T 細胞ゾーン）でする言わば「免疫系ケモカイン」はそ強く発現しており、これらの共有レセプ

れぞれに特有のパターンでリンパ系組ケモカイン

コード No.
Human058-06461
055-06471
077-04451
091-04331
098-04341
095-04351
137-13011
138-13161
138-13041
136-13081
181-01441

品

名〔参考文献〕
１）義江 修：「免疫 98-99」、p.176、（中
山書店）（1998）
２）Yoshie O. et al. : J. Leukoc. Biol .,62, 634（1997）

容 量

希望納入価格（円）ENA-78, recombinant
Eotaxin, recombinant
GRO-A, recombinantInterleukin-8(endothelial cell-derived), recombinantInterleukin-8(monocyte-derived), recombinant
IP-10, recombinant
MCP-1, recombinant
MCP-3, recombinant
MIP-1A, recombinant
MIP-1B, recombinant
RANTES, recombinant

20Fg
10Fg
25Fg
25Fg
25Fg
25Fg
20Fg
10Fg
20Fg
10Fg
20Fg

39,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,00039,000

Eotaxin, recombinant
MCP-3, recombinant
RANTES, recombinant

10Fg
10Fg
20Fg

39,00039,00039,000

GRO, recombinant
GRO-B, recombinant
MCP-1, recombinant
MIP-1A, recombinant
RANTES, recombinant

25Fg
25Fg
10Fg
20Fg
20Fg

39,00039,00039,00039,00039,000

容 量

希望納入価格（円）Interleukin-2, recombinantInterleukin-4, recombinantInterleukin-5, recombinantInterleukin-11, recombinant
GM-CSF, recombinant
TNF-A, recombinant

50Fg
10Fg
3Fg
10Fg
10Fg
10Fg

39,90050,00052,50039,00039,90043,000Interleukin-3, recombinantInterleukin-4, recombinant
TNF-A, recombinant

10Fg
10Fg
20Fg

39,90050,00039,900Interferon-C, recombinantInterleukin-1B, recombinantInterleukin-6, recombinant
TNF-A, recombinant

100Fg
5Fg
10Fg
20Fg

39,00039,00039,00039,000Mouse
052-06481
135-13171
185-01461

Rat
072-04521
074-04461
131-13031
135-13051
188-01451

サイトカイン

コード No.
Human097-03951
094-03961
093-03811
090-04281
071-04111
203-11101

品

名

Mouse
091-03971
090-03941
201-13461

Rat
099-04251
096-04261
093-04271
203-14261

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

29

レチノイド研究用試薬
レチノイン酸は細胞の分化や増殖、アポトーシス、または脊椎動物の形態形成など多くの生物機能を制御する、いわば生命の中枢的役割を持つ生理活性物質です。生物学的同効物質であるレチノイドを含め、これらは核内に存在する特異的レセプターを介し、ビタミンＤ同様、ホルモンとしての作用機構が解明される一方で、数種のレチノイドレセプターの発見とともに他の核内レセプターをも含んだ複雑なネットワークが明らかにされました。レチノイン X レセプター（RXR）
は、レチノイン酸レセプター（RAR）のホモログとして発見されそのリガンドは長らく不明でしたが、今日では、9-cisレチノイン酸がリガンドとして確立されています。また RAR、甲状腺ホルモンレセプター及びビタミンＤレセプター（VDR）とヘテロダイマーを形成することにより各々の応答遺伝子発現の調整に起因し、広く核内レセプターの情報伝達に関与していることがわかっています。

Anti Human Retinoid X Receptor β, Monoclonal Antibody
免疫化学用
免 疫 原 ：ヒト RXRB 組換え体

特 異 性 ：ヒト、マウスの RXRB（〜形
状 ：PBS 溶液（2mg/mW）
クローン No.：MOK13-17

50kDa）と反応しますが、RXRA 及び C とは反応しサブクラス：IgG1

ません

実用希釈倍数：ウエスタンブロット
012-17031

100Fg

1:400
65,000 円

Retinoid X Receptor β, Human, recombinant, Soln.
生化学用
製

法 ：ヒト RXRB（rH-2R BP）の cDNA を組み込んだバキュロウイルス発現ベク
ターを感染させた Sf9 細胞抽出物より生産〔参考文献〕〔関連商品〕

形

状 ：本 品 2mg / mW に 対 し、

20mM HEPES pH 7.9,
0.1M KCl, 0.2mM ED
TA, 0.5mM DTT, 20% グ

分 子 量 ：51kDa
用
途 ：ゲルシフトアッセイ 1）、ウ
エスタンブロッティングのコントロール

リセロール、プロテアー
ゼ阻害剤を含む溶液

187-01421

33,000 円

1）Marks, M. S. et al. : Mol. Endocrinol., 6, 219（1992）.
2）Berrodin, T. J. et al. : Mol. Endocrinol., 6, 1468（1992）.
3）MacDonald, P. N. et al. : Mol. Cell. Biol., 13, 5907（1992）.
4）Minucci, S. et al. : Mol. Cell. Biol., 14, 360（1994）.

コード No.
180-01271
204-14171
017-16621
014-16631
180-01391
039-16781
123-04521

品

名9-cis-Retinoic Acid
TTNPB（RAR 選択的アゴニスト）
Am80（RARA,B 選択的アゴニスト）
Am580（RAR 選択的アゴニスト）
Re80（RAR アゴニスト）
Ch55（RAR アゴニスト）
LE540（RAR アンタゴニスト）

規格182-01111
188-01113

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

all-trans-Retinoic Acid

容量

希望納入価格（円）

生化学用

5mg

18,900生化学用

5mg

13,500生化学用

5mg

35,000生化学用

5mg

35,000生化学用

5mg

35,000

生化学用

5mg

40,000

生化学用

5mg

48,000

50mg
250mg
1g

2,100

生化学用

186-01114

30

50Fg

4,200
12,000イムノスター 発光試薬のみで発売開始

発売記念キャンペーン実施中！

ImmunoStar Reagents

キャンペーン期間〜 1999 年 3 月 31 日

ブロッティング用
ご好評頂いております超高感度イムノブロッティング検出システム『ImmunoStar Kit』に含まれる発光用試薬のみで構成した『ImmunoStar Reagents』の発売を開始しました。従来の ABC 法に限らず、様々な手法に対応できるようシンプルな構成となっております。発売を記念しまして『ImmunoStar』
60 分間露出
５分間露出
全製品を特別価格にて提供させて頂きます。
１ ２ ３ ４１ ２ ３ ４〔特 長〕
Lane1 : Dr. Western(2.34 ng)1．発光の持続時間が数時間に延長されています。
68K
Lane 2 : 75 ng
2．発光試薬の自己発光が低く抑えられていますの
Lane 3 : 25 ng
85K
Lane 4 : 5 ng
で、S / N 比が非常に高くなっています。
55K
3．発光試薬のみの構成となっていますので、様々
42K
な実験系に対応できます。
サンプル : CNTF,

Rat,
recombinant
１次抗体 : Anti Rat CNTF,
Rabbit10/20 polyacrylamide gel
PVDF 膜〔キット構成〕
内

容1,000cm2 用

5,000cm2 用発光溶液 A

70mW

330mW

発光溶液 B

70mW

330mW

発光溶液 C

30mW

120mW

コード No.

品

28K

名

包

295-55201
291-55203

ルミノイメージアナライ
ザー LAS1000（富士写真フイルム）

15K

ImmunoStar Reagents

希望納入価格（円）

キャンペーン価格（円）1,000cm2 用

装13,0008,000

2用30,00020,0005,000cm〔関連商品〕 ImmunoStar Kit は、発光試薬のほか、ブロッキング溶液、ビオチン標識二次抗体（マウスまたはウサギ）、ABC 溶液、希釈用緩衝液、洗浄液から構成される超高感度イムノブロッティングキットです。
コード No.
291-54603
297-54703

希望納入価格（円）

キャンペーン価格（円）

ImmunoStar Kit for Mouse

品

名1,000cm2 用

包装25,00017,000ImmunoStar Kit for Rabbit

2用

25,00017,0001,000cm

神経伝達研究用
神経伝達研究用グルタミン酸トランスポーター抗体
神経伝達は、神経伝達物質がシナプス間隙に放出されることにより開始し、受容体に結合後、ニューロンなどに取込まれることにより終了します。グルタミン酸を特異的に取込む
グルタミン酸トランスポーターは３種類報告されており、アストログリ
アには GLT-1、特定のニューロンとプルキンエ細胞には EAAC1、ニュー

コード No.

が局在することが分かっています。

ロンとアストログリアには GLAST
GLT-1

EAAC1

GLAST

免疫原

C 末端ペプチド

C 末端ペプチド

C 末端ペプチド

精製法

プロテイン A アフィニティ

抗原アフィニティ

抗原アフィニティ

交叉反応

ラット、ウシ

未試験

未試験 2)

ウエスタンブロット

1:300 − 1:500

1:100 − 1:1,000

1:100 − 1:1,000

免疫組織染色1:300

1:100 − 1:500

1:100 − 1:500

1)1) 抗原部位のホモロジーはラット、マウス、ウサギ、ヒトの間では 100%。
2) 抗原部位のホモロジーはラット、マウス、ヒト、ウシの間では 100%。
品

名

規

格

包

装

希望納入価格（円）015-16421

Anti Rat Glutamate Transporter (GLT-1), Rabbit

免疫化学用

200Fg

30,000019-17281

Anti Rat Glutamate Transporter (EAAC1), Rabbit

免疫化学用

100Fg

62,000016-17291

Anti Rat Glutamate Transporter (GLAST), Rabbit

免疫化学用

100Fg

62,000

和光純薬時報 Vol.67, No.1（1999）

31

和
光
純
薬
時
報
第
六
十
七
巻

イムノクロマトによりベロトキシン（VT1,VT2）を簡易に検出可能
Verotoxin test wako
ベロトキシン 1 型 , 2 型検出用
病原性大腸菌には、感染により出血性の大腸炎を起こす一群の存在が知られており、腸管出血性大腸菌と呼ばれています。腸管出血性大腸菌による感染症は、指定伝染病に指定されており、食肉をはじめ、食品の汚染が主要な感染源と考えられています。この腸管出血性大腸菌は O-157:H7 等ベロトキシンと呼ばれる毒素を生産する事を特長としており、ベロトキシン生産性大腸菌（VTEC）と称されています。ベロトキシンには、抗原性の違いにより１型（VT1）と２型 (VT2)の２種類があり、特に VT1 は志賀毒素と同じである事が知られています。VTEC は、VT1 単独生産株、VT2 単独生産
株及び VT1-VT2 両生産株があり、更に VTEC の血清型でもベロトキシン非生産株が存在することから、VTEC の判定にはベロトキシンの生産の有無を確認することが極めて重要です。
本品は、金コロイド標識抗ベロトキシンモノクローナル抗体を使用し、イムノクロマト法により大腸菌が産生するベロ
トキシンを検出します。本品は体外診断用医薬品ではありません。
特長

1：試薬の調製を必要とせず、ワンステップで簡便かつ短時間に検出できます。
2：VT1 及び VT2 をそれぞれ検出できます。
3：抗原抗体反応により、ベロトキシンを高感度かつ特異的に検出できます。

内容

VT1 検出用テストプレート
VT2 検出用テストプレート

ベ ベ
ロ ロ
ト ト
キ キ
シ シ
ン ン
１ １
型 型
陰 陽
性 性

ベ ベ
ロ ロ
ト ト
キ キ
シ シ
ン ン
２ ２
型 型
陰 陽
性 性

コード No.
299-55101

ベ
ロ
ト
キ
シ
ン
１
型
陰
性

ベ
ロ
ト
キ
シ
ン
１
型
陽
性

品

名

ベ
ロ
ト
キ
シ
ン
２
型
陰
性

Verotoxin test wako

25 枚
25 枚

ベ
ロ
ト
キ
シ
ン
２
型
陽
性

テストプレートの原理

規

格

容

ベロトキシン 1 型 , 2 型検出用量

希望納入価格（円）25 回用

50,000

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

希望納入価格には消費税等が含まれておりません。

発行所

32

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.
和光純薬時報 Vol.67, 06-6203-3741
No.1（1999）（代）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

1999 年 1 月 15 日
岸 井 松 司大 西 礼 子
共進社印刷（株）

第一号