写真： HeLa 細胞中での HIVgag-GFP（Cytoplasmic fusion protein）とHIVrev-BFP（Nucleolar fusion
protein）の発現

レポーターアッセイ用GFP（Green Fluorescent Protein）, BFP（Blue Fluorescent Protein)
発現ベクター・ モノクローナル抗体

特長● 生細胞中でのタンパク質の発現や局在を経時的かつ可視的に検出● GFP と BFP の励起／蛍光波長は異なるため、二重染色が可能(GFP ： Ex. 474nm, Em. 509nm
BFP ： Ex. 384nm, Em. 450nm)● 野生型 GFP よりも蛍光強度が強い● 発現タンパク質の蛍光タグとして有用。抗体を用いて発現の確認及び精製が可能

詳しくは、P.25 をご参照下さい。

Wako

目 次
化学大家
「ハーンとマイトナー」
島尾 永康………… 2
総説「マイクロカプセル化触媒〜固定化にマイクロカプセル化法を用いる高分子触媒〜」小林修………… 6
「内分泌撹乱作用が疑われるスチレン２量体
及びスチレン３量体の分析」
川田 邦明、茨木
剛………… 10シリーズ
＜ Talking of LAL ＞「第 35 話 抗生物質のエンドトキシン試験」
土谷 正和………… 16＜ How to アポトーシス＞「第 6 話 アポトーシス制御分子：Bcl-2 ファミリーの機能」
本山
昇………… 18
＜脳科学一口メモ＞「脳の NO：産生と機能」
野村 靖幸………… 22
テクニカルレポート「カラムスイッチング法による生体試料直接分析（カラムライフ改善検討）」上森 仁志………… 14
新製品フラッシュ
GFP，BFP 発現ベクター・モノクローナル抗体………………………………………… 1,25D 化合物、セプタムラバー………………… 5
酸化オスミウム（Ⅷ），マイクロカプセル化… 9
環境分析用試薬、QCB 社 Synthaloidドラッ
グスクリーニングプレート………………… 13
小包装エタノール、高純度過酸化水素、ヒド
ロキシアパタイト………………………… 15
SPECTRUM 社 スペクトラポアマイクロディ
スポダイアライザー他…………………… 17
抗ヒト Bcl-x，モノクローナル抗体、抗 sGC，
モノクローナル抗体……………………… 20
粉末 PBS（−）、ホルマリン液…………… 21（株）ニッポンジーン DAC-30TM、クリアース
テイン Ag………………………………… 24
RNA サイズ標準マーカーⅡ (0.5kb 〜 9kb)、
粉末緩衝液他……………………………… 26
消泡剤……………………………………… 27
mtDNA エキストラクター CT キット…… 28

1

381

ハーン（1879.3.8-1968.7.28）と マイトナー（1878.11.7-1968.10.27）
科学史家

永康

カナダという世界を体験したことにオットー・ハーンは 1879 年 3 月

8 日にフランクフルト・アム・マイン

なる。

で生まれた。その 6 日後にアインドイツとイギリスの教授の違いもシュタインが、そしてさらに 7 ヶ月

分かってきた。ドイツの正教授はゲ

後にラウエが生まれている。リーハイムラート
（枢密顧問官）という高ゼ・マイトナーはハーンより 4 ヶ月

級官僚の称号を持ち、「教授は小さ前の 11 月 7 日にウィーンで生まれな神様であったから、非常に用心ている。ドイツ科学の最盛期の頂点

深く接しなければならず、反発するに立つこれらの人々が、いずれもドことはおろか、批判も差し控えなけ

イツが統一国家となってまもなく、ればならなかった。これに対してイ1879 年に生まれている。

図１. ベルリン大學化学教室の木工作業室のハーンとマイトナー、 ギリスでも教授は尊敬されてはい
30 歳（1909）
るが、われわれとの距離は小さく、

英国留学

2

島尾

仲間の一人という感じだった」といめ、論争にけりを付けた。滞在は一年にう（ハーン、『自伝』1968）。ラムゼーは学

マールブルク大學の有機化学の助手

延びた。この成果を見たラムゼーは、産生ともよく話をし、「親切であれ」をモッだったハーンが、ロンドン大學に留学し業界に入るよりも大學で研究を続けるよ

トーにしていた人物である。いつも大声

放射化学を生涯の研究テーマとするよ

うにと、ベルリン大學のエミール・フィッ

でしゃべり、「わに」というニックネームでうになったのは全くの偶然による。ハーシャーに推薦した。ハーンはさらに放射親しまれていたラザフォードは、気さくで、ンは産業界に進むつもりだった。ところ

能の権威に師事したいと考えて、カナダ

豪放磊落な人柄だった。

がある会社から英語ができて海外に出のマッギル大學のラザフォードの研究室

このようなイギリスの学者に接し、世張できる若い化学者が欲しいという依頼へ行った。ラザフォードはラムゼーの放界を見た体験が、のちにナチス全盛時があり、教授はハーンを推薦した。そこ

射能研究を評価していなかったので、は代のドイツでナチスへの入党を拒否し、で英語習得のため自費で半年ほどロンド

じめはハーンの発見をも認めようとしな

協力しなかったこと、さらには、ナチスのンに行くことにした。教授はハーンをロかったが、ハーンはラザフォードを納得意向にあえて逆らってまで大化学者フンドン大學のラムゼー教授に紹介した。

させた。ここでも放射性アクチニウムを

リッツ・ハーバーの追悼式を主宰したこ

ラムゼーはドイツのテュービンゲン大學

発見した。

と（1935）などと無関係でないであろう。

で有機化学を研究したことがあるが、空

こうしてドイツでは全く知られていな

そして戦時中の政治的潔白さと、カイ

気中からアルゴンその他の希ガスを発かった放射化学という新分野を生涯の専

ザー・ヴィルヘルム研究所の創立以来の見して有名になり、この年ノーベル賞を攻とすることになり、始めはベルリン大古参研究員ということから、戦後のドイツ受賞した。ラムゼーは放射能に興味を持

學の化学教室で、のちにベルリンの郊外

科学を代表する地位、カイザー・ヴィル

ち始めていたので、ハーンがもらったダーレムに新設されたカイザー・ヴィル

ヘルム協会の後継機関であるマックス・

テーマは 100 グラムのバリウム塩から数

ヘルム化学研究所に、小さな、独立の放プランク協会の会長となり、81 歳で自らミリのラジウムを抽出するというものだっ射化学研究室をもった。そればかりではの 意 志 で や めるまで その 職にあった（1948~1960）。

た。自分はラジウムについて無知であるない。ハーンと同世代のドイツの作家、というハーンに、何も知らない白紙の状

トーマス・マンは、「大きなドイツから小さ

態こそ最も良い研究の前提だとラムゼー

なスイスへいくたびに、田舎から世界へ

は励ました。

出る思いがした。ドイツ人は世間知らず

女性科学者

精密な実験家であるハーンは、この試の田舎者である」と辛口のドイツ批判を

科学的には最盛期だったが、女性の料から未知の放射性元素を発見し、ラジしているが（マン「ドイツとドイツ人」

研究者を認めることでは遅れていたドイ

オ・トリウムと命名した。さらに、それま

1945）、この言葉にいくぶんかの真実がツで、マイトナーははなはだしい差別をで論争の種だったアクチニウムとエマあるとすれば、ハーンはドイツという田受けた。プロイセンで女性に教授資格をニウムが同一の物質であることをつきと舎から出て、ロンドン、そしてアメリカ、

認める法令が出て初めて、同年輩の男

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

性よりも十数年も遅れて教授資格を得た

指した化学者と放射線に関心をもつ物

月 19 日、（1920）。ノーベル賞候補にも挙げられる

理 学 者 の 実り多い 共 同 研 究、そし て

28 日）。

ほどの業績がありながら、ナチスのユダ

1968 年に 3 ヶ月違いで二人が亡くなる

マ イト

ヤ人排除の政策により教授資格を剥奪さまで 60 年もつづく友情関係が始まった。

ナ ー は、れた（1933）。そして生涯の最大の業績

ウィーンの良家の子女として育ったマイクリス マとなる研究の途中でドイツ国外への亡命

トナーは、控え目でシャイで、不倫のス

ス休暇でを余儀なくされた（1938）。

キャンダルにまみれたマリー・キュリーとマ イトは異なり、独身で物理学一筋の生涯だっナーに会た（図 2）。

いにきて

オーストリアで公式に女性が大學入学を許可されたのはドイツより早く 1899 年
で、マイトナーはその 2 年後、大學入学
資格試験に合格し、ウィーン大學に登録した。小さい時から数学と物理が好きいた甥の

図２. リーゼ・マイトナー（30 歳
代）

物理学者

核分裂

オットー・フリッシュとこの問題を討論しだったので物理学を志望し、ボルツマン

イタリアのフェルミがウランを中性子た。マイトナーは、抜群の実験家であるの講義をその就任講義から自殺で亡くなで照射して、原子番号 93 の超ウラン元

ハーンの放射化学者としての多年の経るまで（1902~1906）、心を躍らせて聴い素を 創り出したという発 表 は、マ イト

験にもとづく主張は重視しなければならた。1906 年、ウィーン大學で物理学でナーの助手だったマックス・デルブリュッ

ぬと考え、ボーアの提唱した原子核の液

博 士 学 位を 取 得した 二 人 目の 女 性とク（1937 年にアメリカに渡り、後に分子滴模型を使って、ウラン（原子番号 92）

なった。ポストドクトラル研究の希望をベ

生物学の権威となる）に非常な刺激を与の原子核が二つに割れて、その一つがルリン大學のプランクのところへ出した。

え、その追試をせずには夜もゆっくり眠バリウム（原子番号 56）なら他はクリプト

ベルリン大學はまだ女性の入学を認めれないほどの気持ちにさせた。マ イトである筈だと結論した。
ン（原子番号 36）ておらず、プランクから、あなたはすで

ナーは、その実験を成功させるにはハーその際おびただしいエネルギーが放出に理学博士なのに、それ以上何をお望ンのような優れた放射化学者の協力がされることも計算した。これをただちにみですかといわれた。しかし例外的に聴必要と考え、そのハーンを説得するのにハーンに伝えた（1 月 1 日）。ハーンはク講を許可してくれた。ウィーンの講義に数週間かかった。遅い中性子をウランにリプトンが生成していることを確認したうは出てこなかった量子論を初めて聴くこ

照射して、かれらは最初、原子番号 93

えで、確信をもって報告を出した（2 月）。

とができた。プランク、アインシュタイン、から 96 までの超ウラン元素を創り出した

原子力科学というビッグ・サイエンスを

ネ ルン スト、ヘ ルツ、シュレ ー ディンと思ったが、それは間違いだった。途中生み出すことになるハーンの研究が、現ガーらが出席していた水曜コロキューム

から化学者シュトラースマンが参加した。

在、「ハーンの実験机」としてミュンヘンにも欠かさず出た。内気なマイトナーは1938 年にドイツがオーストリアを合併しのドイツ博物館に展示されている、きわ全く発言しなかったが。アインシュタイ

たため、マイトナーは外国人として保護

めてささやかな装置でおこなわれたリト

ンはマイトナーを「ドイツのキュリー」とされなくなり、さりとて出国も許可されな

ル・サイエンスだったのに深い感銘を覚呼んだ。

かったので、ハーンは秘密裏にマイト

える
（図３）。

マイトナーは実験研究をも希望した。

ナーを国外に脱出させた（6 月）。

フリッシュがコペンハーゲンの研究所

このときウィーンでのマイトナーの放射

4 年間の研究の結果、中性子の照射でに帰って、渡米直前のボーアにウランの能の研究を知っていたハーンから、物理

原子番号 92 のウランから原子番号 56 の核分裂の発見を伝えたとき、ボーアは驚学者として共同研究者になって欲しいとバリウムが生成するという、それまでのきのあまり茫然となり汽車に乗り遅れかいう申し込みがあった。しかしハーンは核物理学のいかなる経験にも所属の上司フィッシャーの同意を得なけ

反する結論しか出てこなかっ

ればならなかった。フィッシャーは女性た。しかしハーンは自らの実の受け入れを認めない人であった。交渉験の正確さには自信を持っての結果、半地下の木工作業室なら入っていた。スウェーデンに落ち着もよいが、その上の化学教室には立ち入いていたマイトナーに、ハーらないと言う条件で認められた（図１）。こンがウランが破裂してバリウ

うして 30 年に及ぶ両者の、始めは木工ムが生じるという信じられない作業室で、後にはカイザー・ヴィルヘル

事実を知らせ、意見を求めた

ム化学研究所での、新元素の発見を目のはクリスマス前である（12図３.「ハーンの実験机」（ミュンヘン、ドイツ博物館）

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）3

けた。ワシントンでの国際核物理学会で、

爆の使用とボーアがハーンとシュトラースマンの発

同じ論拠で

見と、マイトナーとフリッシュの解釈を告説得された。

げたとき、学会出席者の中には追試をす

カ イザ ー・

るために学会を抜け出して、それぞれのヴィル ヘ ル

研究所へ飛んで帰ったものが多かった

ム化学研究（1 月 26 日）。マイトナーとフリッシュは、所のほとん

生物学で細胞が分かれることを分裂とどすべての呼んでいることを知り、
「核分裂」
という用

施設が毒ガ

語を創り出し、その題名で最初の論文をス研究で占（フィッシャーとリ発表した（2 月 11 日）。

め ら れ た。

プソン『分子生物学の誕生』1988）。

ただハーン1944 年度のノーベル化学賞が、核分の小さい放射化学の研究室だけがそっの候補にも上がった研究である。

裂の発見に対してハーン単独に与えらとしておかれた。ジェームズ・フランク、

第一次大戦で毒ガスと深くかかわっれた（図４）。マイトナーは含まれなかっ

グスターフ・ヘルツ、ヴィルシュテッター、たハーンは、第二次大戦では原爆を導た。しかもハーンは研究生活についてのヴィーラントといった、後にノーベル賞をき出すウランの核分裂を発見した。戦後

どのインタービューでもマイトナーに言受賞した著名な科学者たちも動員され世界の人々が注目したのは原爆とのか及しなかった（ケルナー『核分裂を発見た。戦争に反対していたヴィルシュテッ

かわりである。しかしハーンは原子兵器

1986）。しかし 1946 年、アメリカした人』

ター教授も、ヘクサメチレンテトラミンをの仕事をしたこともないし、ハイゼンベの女性ジャーナリストたちはマイトナー

用いてガスマスクを開発した。新しく製ルクらのように原子炉研究にも関係しなを「今年の女性」に選び、1959 年、ベルリ造されたガスマスクが濃密度の、きわめかったと述べている。かれは化学者としンの原子核研究所は「ハーン・マイトて毒性の強いフォスゲンの中で、どれだてひたすらウランの分裂生成物だけをナー研究所」と命名され（図５）、1966 年、

け長くもちこたえられるかを、自ら志願し研究していたという。たしかに戦争末期

アメリカ原子力委員会は、ハーン、マイて実験用モルモットとなったのはハーン

では 100 ほどの同位元素の形で約 25 種

トナー、シュトラースマンの三人にエンリとフランクだけだった。

類の元素を発見していた。ウランの中性

コ・フェルミ賞を贈った。マイトナーも十ハーンはガス部隊の指揮官として東子照射で余分の中性子が放出されるこ分世界的に認められた。それでもなお部戦線で、塩素とフォスゲンとの混合ガとも知らなかったし、連鎖反応もまだ発「この発見に最初の解釈を与えたのはフスを用い、その効果を最前線で調査した。

見されていなかった。ハーンは放出されリッシュと私である」と晩年に述べている

苦しんで死んでいくロシア兵と目が合っるエネルギーには関心がなかった。しか（マイトナー「私の回想記」1964）。

戦争と科学者

4

図４. オットー・ハーン（46 歳） 図５. ベルリンのハーン・マイトナー原子核研究所におけるハーンとマイトナー、80 歳

たとき、こういうことをしている「自らを深し敗戦後のイギリスでの抑留中、広島の

く恥じ、心の中は動揺した」（『自伝』）。し

原爆投下のニュースに接したとき、「名かしハーンはベルリンの研究所とレバー状しがたいほどのショックを受け、打ちクーゼンの工場では「ガスの専門家」とのめされた。一晩中つづいた長い討論と第一次大戦中、ハーンはカイザー・

して有名になっていった。ジフォスゲン

自己嫌悪の後、私はすっかり興奮してしヴィルヘルム物理化学研究所所長ハーとフォスゲンの混合物の製造の指導もしまい、ラウエその他の人々は私の自殺をバーの率いる毒ガス研究に全面的に参た。毒ガスの実戦と研究では味方の被真剣に心配したほどだった」（『自伝』）。

加し、毒ガス戦の攻撃と防御、製造と研害も免れなかった。ヘルツは東部戦線

人類の歴史は核時代に突入した。そ究に従事した（1915~1918）。マイトナー

で重い被害を受け、フロイントリッヒは研の後の核兵器の発展は全人類を絶滅さは志願してオーストリア軍の野戦病院の究所で生命も危ぶまれるほどの被害をせて余りあるものになっている。ハーン

レントゲン技師になった。初めてハー受けた。ハーンも研究中フォスゲンの中は純粋科学にかかわった科学者といえバーに呼び出されたとき、ハーンは毒ガ

毒で卒倒した。驚くべきは、このようなども、その帰結に対する責任は免れない

スはハーグ条約に違反するのではない

毒ガス戦の軍務の合間を縫って研究室と考えるようになり、1957 年 4 月 12 日、かと反論したが、フランス軍のほうが先に戻り、マイトナーとともに、アクチニウ

18 人の科学者の連盟で、猛反対する国に使っていること、またこの新兵器が、ム系列の母体をピッチブレンドの不溶性防相を抑えて、ドイツ連邦共和国はいか多くの犠牲者を出さず、戦争を早く終結の残差から発見し、プロトアクチニウム

なる種類の核兵器も断念するというゲッさせるであろうという、第二次大戦の原と命名したことである。ノーベル化学賞

ティンゲン宣言をおこなった。

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

Ｄ化合物追加のご案内
当社の重水素化合物がさらに充実しました。
今回はさらに品目を追加するとともに、汎用の溶媒類についても[１] 0.05％ＴＭＳ（内標）含有品の充実[２] 1mW × 5（アンプル品）包装の追加に重点を置いています。
コード No.
019-17161
015-17163
011-17361
018-17371
011-17001
017-17003
016-17311
012-17313
024-13511
021-13521
034-17211
032-17131
038-17133
043-26413
040-26423
046-26361
044-26362
049-26471
046-26481
041-26291
135-12951
136-13101
133-13091
160-19023
190-11601
196-11603
200-14271
208-14272
204-14213

品

名

容

量

10g
50g
1mW × 51mW × 51mW
1mW × 510g
50g
1mW × 51mW × 5100g
1mW
1mW × 5
50g
50g
10g
25g
1mW × 51mW × 51mW
10g
1mW × 51mW × 51mW × 5
10mW
50mW
10g
25g
1mW × 5Acetone-d6, 99.9%, with 0.05% TMS
Acetone-d6, 99.8%
Acetone-d6, 99.8%, with 0.05% TMS
Acetonitrile-d3, 100%(min. 99.95%)
Acetonitrile-d3, 99.8%
Benzene-d6, 99.8%
Benzene-d6, 99.8%, with 0.05% TMS
Chloroform-d, 99.7%, with 0.05% TMS
Cyclohexane-d12, 99.5%
20% Deuterium Chloride Soln. in D2O, 99.5%
35% Deuterium Chloride Soln. in D2O, 99.5%
Dimethylsulfoxide-d6, 99.9%, with 0.05% TMS
Dimethylsulfoxide-d6, 99.8%
Dimethylsulfoxide-d6, 99.8%, with 0.05% TMS
1,4-Dioxane-d8, 99.5%
Methanol-d4, 99.8%, with 0.05% TMS
Methanol-d4, 99.8%
Pyridine-d5, 99.5%, with 0.05% TMS
40% Sodium Deuteroxide Soln. in D2O, 99.5%
Toluene-d8, 99.6%
Trifluoroacetic Acid-d, 99.3%

希望納入価格（円）6 ,500
24 ,000
8 ,5008 ,5004 ,500
17 ,000
11 ,000
34 ,000
12 ,000
12 ,000
7 ,1004 ,500
17 ,000
照 会
照 会
7 ,200
14 ,400
7 ,5007 ,5009 ,000
15 ,000
11 ,500
11 ,500
12 ,000
照 会
照 会
14 ,500
26 ,000
6 ,000セプタムラバー
A

試験管などの密栓用として下記のセプタムラバーを在庫しました。

B

材質は天然ゴムとシリコンの 2 種類
で適用試験管の大きさはつぎの通りでC
Dす。

コード No.
190-11721
197-11731
194-11741
191-11751
192-11781
198-11761
199-11791
195-11771
192-11801

品

名セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー（白色）
セプタムラバー
（白色）

材

質

適用試験管

包

装

天然ゴム
天然ゴム
天然ゴム
天然ゴム
シリコンゴム
天然ゴム
シリコンゴム
天然ゴム
シリコンゴム5mm 径用7mm 径用8mm 径用10mm 径用10mm 径用15mm 径用15mm 径用18mm 径用18mm 径用

100 個
100 個
100 個
100 個
100 個
100 個
100 個
100 個
100 個

希望納入価格（円）
7,500
7,500
7,500
8,000
13,00012,00020,00015,00026,000

Ａ
7.6
9.0
11.8
13.0
13.0
17.0
17.0
21.0
21.0

[ サイズ (mm)]
Ｂ
Ｃ
11.5
4.5
18.0
5.4
20.0
6.5
19.5
9.0
19.5
9.0
28.0
12.5
28.0
12.5
35.0
14.0
35.0
14.0

Ｄ
4.5
6.8
7.7
10.7
10.7
14.0
14.0
16.5
16.5

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）5マイクロカプセル化触媒〜固定化にマイクロカプセル化法を用いる高分子触媒〜
東京大学大学院

薬学系研究科小林修

１．はじめに高分子固定化触媒（高分子触媒）を用いるプロセスは、生成物と触媒をろ過だけで分離でき、反応の後処理が簡便で触媒の再使用も容易であるな
どの利点を有し、経済性にも優れるた
め、工業レベルでの化成品、医薬品合成への展開も広く期待される。触媒化
学の中で重要な位置を占める高分子
触媒のアイデア自体は比較的古くから

Fig.1. Scanning electron microscopy (SEM) micrograph (left) and scandium energy
dispersive X-ray (EDX) map of MC Sc(OTf)3

知られていたが、その成功例は意外と少ない。例えば、現代有機合成の中である。この方法によれば、固定化後も無に近い。通常触媒を高分子上へ固マイクロカプセル化は、食品や医薬る「高分子効果」による反応の加速効定化する際、共有結合を用いるが、し品を保護するのにしばしば使われてい果も望める。実際の高分子触媒の合成

ばしば繁雑な操作を必要とする上、共る技術である。筆者らはこの技術をまは、以下に示す標準的なマイクロカプ

有結合で高分子に結ばれた触媒は立ず、ルイス酸であるスカンジウムトリフ

セル化法に従って行った。すなわち、体障害などにより高分子に固定化する

2

ラート (Sc(OTf)3) の固定化に用いよ

ポリスチレン（分子量 28,000）
１g を 40前の触媒より活性が低下してしまう場

うと考えた。ルイス酸を用いる有機合℃ でシクロヘキサン 20mW に溶解し、も中心的役割を果たしているルイス酸を高分子上へ固定化した成功例は皆触媒の高活性が期待され、またいわゆ合が多い。筆者らは、比較的長い歴史

成は上述したように繁用されているが、0.200g をこの溶液に Sc(OTf)（粉末）
3を有する高分子触媒が期待される程筆者らは特に水中で安定でしかも高加える。同温度で１時間撹拌した後、実用化されていないのは、この点に問活性を有し様々な合成反応へ展開さゆっくりと 0℃ へ冷却する。この段階で題があると考え、共有結合を用いないれている Sc(OTf)3 に注目し、このマイコアセルベート化が起り、Sc(OTf)3 を新たな高分子触媒の調製法を模索しクロカプセル化を検討した。筆者らの芯物質とするマイクロカプセルが生成た。その結果、これまで全く例のない

基本的な固定化の考え方は、すでにする。ヘキサン（30mW）を加えてカプ

新しい高分子触媒として「マイクロカ

述べたように従来法のような共有結合

セルを固めた後、ろ過してアセトニトリ

プセル化触媒」を開発することができによらず、ポリマー鎖の物理的な相互

ルで洗浄後、50℃ で乾燥する。こうした。なお筆者らはこの新触媒を「マイ作用による取り込みと、高分子担体とて得られたマイクロカプセル化スカン

クロカプセル化触媒」と呼び、従ってして用いるポリスチレンのベンゼン環

ジウムトリフラート (MCSc(OTf)3) は本稿のタイトルにも用いたが、実際ののπ電子と Sc(OTf)3 の空軌道の電子

0.120g の Sc(OTf)3 を含み、外見は塊

触媒は固定化される触媒の大きさによって必ずしも形の整った「マイクロカ
プセル」を生成しない場合も多い。形の崩れたものも学術上は「マイクロカプセル」で正しいのだが、読者の誤解を避けるため副題をつけた。

6的相互作用を利用しようというもので

２. マイクロカプセル化スカンジウ
ムトリフラート (MCSc(OTf)3)１

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

状だが適当な大きさに砕いて用いることもできる。
図１に MCSc(OTf)3 の Scanningelectron microscopy（SEM）写真とス
カンジウムの Energy dispersive X 線（EDX）
マップを示した。SEM 写真から、生成した MCSc(OTf)3 は芯物質である Sc(OTf)3 が小さいため互いに凝集して形がかなり崩れている様子が伺える。一方、スカンジウム EDX マップ
からは、形が崩れることによりカプセ
ル内の Sc(OTf)3 が表面に出てきて、ほぼ触媒の表面に均一に分散している様子がわかる。筆者らはこの２枚の写真を見て、合成した MCSc(OTf)3の高活性を確信した。実際、MCSc(OTf)3 はいくつかの基本的かつ重要な炭素ー炭素結合生成反応に有効であることがわかった。まずイミン類を有効に活性化し、イミンアルドール反応（式１）、アザ Diels-Alder 反応（式２）、シアノ化反応（式３）、アリル化反応（式４）などが円滑に進行し、目的とする付加体が高収率で得られた。反応は通常の反応容器を用いるバッチシス
テム、あるいは循環式カラムを用いる
フローシステムどちらでも行うことができる。バッチシステムの場合は通常のろ過によって触媒を定量的に回収でき、２回、３回と使用しても活性は低下しない。一方、フローシステムでは、次々に原料を加えることにより連続使用が可能で、生成物は単にカラムの下からぬき取 れ ばよい。さらに MCSc

(OTf)3 はいわゆる化合物ライブラリー
構 築に 威 力を 発 揮 す る３成 分 縮 合反応である Mannich 型反応（式５）、

Strecker 反応（式６）、キノリン生成反応（式７）の触媒としても有効であることがわかった３。これらの反応によれば、りでなくカルボニル化合物の活性化に進行することも明らかとなった。

興味深い生物活性の期待される含窒も有効であることがわ かった。アル

素化合物のライブラリーを、多種類かドール反応（式８）、Michael 反応（式MCSc(OTf)3 の触媒活性は、ほとん
どの反応で担持前の Sc(OTf)3 の活性

つ１つ１つ純粋な形で、それぞれの化

９）、シアノ化反応（式１０）、アリル化反に匹敵する。中には、イミノアルドール

合物の量も数百ミリグラムを超える量

応（式１１）、Diels-Alder 反応（式１２）、

反応のように、Sc(OTf)3 よりもマイクで合成することができる。

Friedel-Crafts アシル化反応（式１３）などが、MCSc(OTf)3 存在下円滑に

ロ カ プ セ ル 化 し た 触 媒 (MCSc

さらに MCSc(OTf)3 は、イミンばか(OTf)3) の方が高活性を示す場合も見

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

7

い出されており、共有結合を用いずに高分子上に担持している点、およびい4
わゆる「高分子効果」
によってイミンを活性化する遷移状態が安定化されている点、が高活性に結びついているものと考えられる。

３. マイクロカプセル化四酸化オス
ミウム (MCOsO 4)5
次に、四酸化オスミウム（OsO4）を同様の「マイクロカプセル化法」によって高分子上へ担持することを検討した。

OsO4 は、オレフィンをジオールへ変換する最も優れた試薬の一つであり様々な需要があるものの、実際の工業プロセスとしての成功例はほとんど知られていない。これは１つには、OsO4
が毒性が高く、高価で揮発性のため、回収、再使用が難しいためであると考えられる。これらの問題を解決するた
めに、高分子上に OsO4 を固定化しようとする試みはこれまでにも２、３あったが、触媒の回収、再使用の観点から必ずしも満足できる結果を与えていな
いのが現状であった。
筆者らは、先に Sc(OTf)3 を高分子上に固定化した「マイクロカプセル化」
法を、OsO4 の固定化にも適用しようと考えた。但し、OsO4 は Sc(OTf)3 に比べてルイス酸性が低いため、ポリスチ
レンのベンゼン環上のπ電子と空軌
道の相互作用は弱くなるものと予想され、研究の開始当初は OsO4 の導入率
および反応後の回収率が低いのではないかと危惧された。しかしながら幸いなことに、MCSc (OTf)3 の調製法とほぼ同様の方法で MCOsO4 を合成することができ、導入率もほぼ同程度、また反応後の回収率は定量的で再使酸化剤としては N- メチルモルホリン-

了後、MCOsO4 はろ過によって定量用しても触媒の活性も低下しないこと

N- オキシド（NMO）が好結果を与え的に回収され、回収した触媒を数回用がわかった。

8

た。他の共酸化剤としてトリメチルアミ

いてもいずれも活性は全く低下しない

まずモデル化合物としてシクロヘキ

ン-N- オキシド、過酸化水素、t- ブチ

ことがわかった（表１）。さらに生成物へ

センのジヒドロキシル化について検討

ルヒドロパーオキシド、フェロシアン化の OsO4 の混入を定性分析によって調した。溶媒としては水−アセトン−ア

カリウムなどを検討したが、収率は低

べたところ、検出誤差範囲内で OsO4

セトニトリル（1：1：1）が最適で、また共下することがわかった。また、反応終は検出されず、生成物への混入はな

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

いこともわかった。
種々のオレフィンの MCOsO4 を用いるジヒドロキシル化反応の結果を表２に示す。環状オレフィン、末端オレフィン、トランスオレフィン、さらに三置換オレフィンのいずれを用いた場合も反応は円滑に進行し、目的とするジオールを高収率をもって得ることができた。これらの反応ではいずれの場合も反応終了後ろ過によって触媒と生成物を分離することができ、触媒は定量的に回収、再使用できる。

４．おわりに「マイクロカプセル化」法という全く新しい触媒の高分子上への固定化法について、Sc(OTf)3 および OsO4 を例
にとってその固定化法およびそれぞれのマイクロカプ セル化触媒の特性について概説した。これらの触媒は従来から用いられてきた共有結合を用いず配位結合によって触媒を固定化しているため、これまで知られている高分子触媒に比べて高活性な上、回収、再使用も可能な点が特徴である。今後、
本「マイクロカプセル化」法は、種々の触媒や反応試剤の高分子上への固定化に広く応用されるものと期待される。
〔参考文献〕
1. S. Kobayashi, S. Nagayama, J. Am.
Chem. Soc., 120, 2985-2986 (1998).
2. S. Kobayashi, Eur. J. Org. Chem., 1999,
15-27.
3. S. Kobayashi, Chem. Soc. Rev., 28, 16 (1999).
4. S. Kobayashi, S. Nagayama, Synlett,1997, 653-654.
5. S. Nagayama, M. Endo, S. Kobayashi,
J. Org. Chem., 63, 6094-6095 (1998).

揮発性を抑えたリサイクル可能な酸化オスミウム（Ⅷ）
Osmium（Ⅷ）Oxide,
Microencapsulated
有機合成用
153-02081

1g

15,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）9内分泌撹乱作用が疑われるスチレン２量体及びスチレン３量体の分析
新潟県保健環境科学研究所

邦明、 茨木剛

チレン 3 量体を検出し、このうち、4 種

体及びスチレン 3 量体は、DDT やフ

17 地点、湖沼 5 地点、地下水 8 地点）
では 4）、スチレン 2 量体は全地点で検出下限未満 （P0.05Fg/W）であった。
一方、スチレン 3 量体は、河川の 6 地点（0.07 〜 0.30Fg/W）及び海域の 1 地
点（0.07Fg/W）で検出されたが、その他の地点では検出下限未満（P0.05
Fg/W）であった。
Bayona らは 5）, 6）、底質中の有機化
合 物をジ クロロメタン - メタノー ル（2:1）で超音波抽出後、中性アルミナ

タル酸ジエチルヘキシル、アルキル

及びシリカゲルを用いたカラムクロマ

1,030Fg/g、また、スチレン 3 量体 7 種を 650 〜 20,770Fg/g 検出している。
そして、その大部分をスチレン 3 量体
がしめ、また、スチレン 3 量体の 2/3 が1-phenyl-4-(1' -phenylethyl)tetralin

フェノール類などとともに、内分泌撹

トグラフィーで得られたフラクションをであったと報告している 8）。なお、オク

1. はじめにスチレン 2 量体及びスチレン 3 量体
は、ポリスチレン樹脂の製造工程において、熱重合の副反応生成物として生成することが知られている。1991 年 6月に内分泌撹乱化学物質問題に関する専門家会議がウイング スプレッド（米国）で開催された。この際に発表された合意声明において、スチレン 2 量のスチレン 2 量体と 6 種のスチレン 3量体の構造を確定または推定している 7）。さらに、河村らは、ポリスチレン
製品 25 種中のスチレン 2 量体及びス
チレン 3 量体の含有量を GC-FID により定量し、スチレン 2 量体 4 種を 90 〜

乱化学物質として示された 1）, 2）。また、

GC 及び GC/MS 分析する方法を用い

タデシル基（ODS）を化学結合したシ環境庁が作成した報告書（1997 年）でることにより、Sesos 川（バルセロナ ,リカゲルを固定相とし、アセトニトリ

も、内分泌撹乱作用が疑われている化

スペイン）の河口付近及びその沖合い

ル - 水系を移動相とする HPLC による合物のひとつとしてリストされている 。

などで採取した底質から、スチレン 2分離も試みられている 7）。

しかし、その毒性などに関しては不明

量体の一種を 1.5 及び 0.1Fg/g、また、な点が多い。

スチレン 3 量体の一種を 1.5Fg/g 検出

2）3．環境試料の分析方法したと報告している 5）。しかし、スチレ

2. 環境中などにおける存在
建設省が 1998 年 7 〜 8 月に、全国5 ヶ所で実施した河川水調査では、対象としたスチレン 2 量体（2,4-diphenyl-1-butene 及び 1,3-diphenylpropane）及び スチレン 3 量 体 （2,4,6triphenyl-1-hexene）はいずれも検出
下限未満 (P0.01Fg/W) であった 3）。環境庁が 1998 年 8 〜 9 月に実施した全
国の環境水調査（河川 100 地点、海域

水質試料

ン 2 量体及びスチレン 3 量体の構造の査法暫定マニュアルをいち早く示して方法については、添加回収試験等によいる 9）, 10）。それによれば、水試料につる評価は記述されていない。

いては、ベンゾフェノン、4- ニトロトル

スチレン 2 量体及びスチレン 3 量体

エン及びベンゾ [a] ピレンとの同時分は、ポリスチレン製品に残存している

析法として、ヘキサンで溶媒抽出し、ことが河村らにより報告されている 7）。

必要に応じてシリカゲルカラムクロマ

河村らは、ポリスチレンを細片化してトグラフィーによりクリーンアップ後、

シ クロ ヘ キ サ ン - 2- プ ロ パノー ル

GC/MS で定量する方法が示されている（図 1）。また、溶媒抽出に代わる方法として、ODS を化学結合したシリカ（1:1）に浸せきし、得られた抽出液中から、4 種のスチレン 2 量体と 8 種のス

液液抽出

脱

1W（サロゲ

ヘキサン

Na2SO4

ート添加）100mW × 2 回

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

環境庁では、内分泌撹乱物質の調推定などは行っておらず、用いた分析

水

濃

縮

1mW

カラムクロマト
グラフィー
シリカゲル

図１. 水試料の分析方法の概要

10

川田

濃

縮

内標準添加

GC/MS

ゲルやポリマーゲル等を充填または成型した固相カラ
ムや固相ディスク等を使用

底質試料

アルカリ分解溶媒抽出

脱した固液抽出も示されてい20g（サロゲ

Na2SO4ート添加）

1M KOH EtOH
溶液 100mW

ヘキサンる。底質試料及び生物試料

100mW × 2 回

については、ベンゾ [a] ピレ

カラムクロマトグラフィー

ンとの同時分析法として、

シリカゲル

試料をアルカリ分解後、ヘ

濃

水

濃

縮

濃

縮

GC/MS

縮

内標準添加

キサンで溶媒抽出し、シリカゲルカラムクロマトグラ

図２. 底質試料の分析方法の概要

フィーによるクリーンアップ
後、GC/MS で定量する方法が示されている（図 2 及
生物試料

アルカリ分解溶媒抽出

脱なお、水及び底質試料中20g（サロゲ

Na2SO4ート添加）

1M KOH EtOH
溶液 100mW

ヘキサンのスチレン 2 量体及びスチ

100mW × 2 回

び図 3）。

レン 3 量体の分析法として、
著者らは、精油定量器を用いた連続蒸留 11） により溶媒

カラムクロマトグラフィー
シリカゲル

濃

縮

水

GC/MS

内標準添加

抽出後、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーによりク

図３. 生物試料の分析方法の概要

リーンアップし、GC/MS で定量する方法を検討しており、概ね良好な結果を得ている 12）。こいている 7）。Bayona らは 5）, 6）、微極性体の標準は市販標準品を用いて作成の方法は、操作が極めて簡便であるこの 5 % フェニルメチルポリシロキサン

した。このうち、表 1 の条件（1）で作成と、クリーンアップが容易であることなを液相とするキャピラリーカラムを用したスチレン 2 量体及びスチレン 3 量

どがその特徴としてあげられる。

いているが、分離状況については不明

体の検量線を図 4 に例示する。

である。環境庁の暫定マニュアルでは、

4．GC 分離カラムの選定
スチレン 2 量体及びスチレン 3 量体

50 % フェニルメチルポリシロキサンを液相とするキャピラリーカラムが例示
されている

9）, 10）。

は、相互に極めて類似したマススペク

著者らは、スチレン 2 量体及びスチトルを有するため、これらの個別定量

レン 3 量体を、内分泌撹乱作用が疑わにおいてはカラムによる分離が不可欠れるベンゾフェノンや 4- ニトロトルエ

である。従って、スチレン 2 量体及びン等と同時に GC/MS 分析するために、

スチレン 3 量体の GC 及び GC/MS 分

種々の条件を検討した。その結果、微析においては、カラムの選定は極めて極性の 5 % フェニルメチルポリシロキ重要となる。河村らは、スチレン 2サン （HP-5 等）又は中極性の 50 %量体及び 3 量体を分離するために無フェニルメチルポリシロキサン （DB-

極性のジメチルポリシロキサンを液相

17 等）を液相とするキャピラリーカラとするキャピラリーカラムを用いていムを用いることにより良好な分離結果

る。し か し、4 種 の 1-phenyl-4-(1' phenylethyl)tetralin 類の分離が不十が得られることがわかった 12）, 13）。GC/7）, 8）

分であるため、これらの化合物の分離には強極性のポリエチレングリコールを液相とするキャピラリーカラムを用MS 条件を表 1 に、各化合物の定量イ
オン及び検討した 2 種のカラムにおける保持時間を表 2 に例示する 9）, 10）。な
お、スチレン 2 量体及びスチレン 3 量〔参考文献〕
1) T. Colborn, D. Dumanoski, J. P. Myers:"Our Stolen Future: Are We Threatening Our Fertility, Intelligence, andSurvival? - A Scientific Detective
Story"（邦訳：長尾 力 訳：" 奪われし未来 "，翔泳社，東京，1997）.
2) 環境庁リスク対策検討会：" 環境ホル
モン "，環境新聞社（1997）.
3) 建設省河川局：河川における内分泌撹
乱化学物質に関する実態調査結果（前期調査）（1997）.
4) 環境庁水質保全局水質管理課：水環
境中の内分泌撹乱化学物質（いわゆる環境ホルモン）実態概況調査（夏季）結果速報（1998）.
5) M. Grifoll, A. M. Solanas, J. M. Bayona: Arch. Environ. Contam. Toxicol.,19, 175（1990）.
6) P. Fern｀
andez, M. Grifoll, A. M.
Solanas, J. M. Bayona, J. Albalg｀e s:Environ. Sci. Technol., 26, 817（1992）.

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）11

7) 河村葉子，杉本直樹，武田由比子，山田 隆：食 品 衛 生 学 雑 誌，39, 110（1998）.
8) 河村葉子，河村麻衣子，武田由比子，
山田 隆：食品衛生学雑誌，39, 199（1998）.
9) 環境庁水質保全局水質管理課：" 外因性内分泌撹乱化学物質調査暫定マ
ニュアル（水質，底質，水生生物）"，
p.VI-1（1998）.
10) 川田邦明：第 26 回日本環境化学会講演会予稿集，p.89（1996）.
11) 川田邦明，尾崎邦雄，横山ひろみ：衛生化学，32, 128（1986）.
12) 茨木 剛，川田邦明，雅楽川憲子，坂井正昭，貴船育英，森田昌敏：分析化
学（投稿中）.
13) 川田邦明ほか（未発表）.
14) 和光純薬工業株式会社（私信）.

表-１. GC/MS 測定条件
Apparatus: Shimadzu GCMS QP5050A
Injection temperature: 280℃
Interface temperature: 280℃
Ionization current: 350FA
Ionization energy: 70 eV
GC conditions:(1) Column: HP-5 trace analysis (0.25Fm film thickness, 30 m long, 0.25 mm i.d.)
Column temperature: Programmed from 60℃ (held for 1 min) to 280℃ at a
rate of 10℃/min (held for 2 min).
Carrier gas pressure: programmed from 6 kPa to 70 kPa (held for 0.5 min) at
a rate of 200 kPa/min, then back to 6 kPa at the same rate and to 50 kPa at a
rate of 2 kPa/min (held for 2 min).
(2) Column: DB-17 (0.25Fm film thickness, 30 m long, 0.25 mm i.d.).
Column temperature: Programmed from 60℃ (held for 1 min) to 220℃ at a
rate of 15℃/min (held for 2 min), then to 300℃ at a rate of 10℃/min (heldfor 7 min).
Carrier gas pressure: programmed from 6 kPa to 70 kPa (held for 0.5 min) at
a rate of 200 kPa/min, then back to 6 kPa at the same rate and to 39 kPa at a
rate of 3 kPa/min (held for 0 min), then to 54 kPa at a rate of 2 kPa/min (heldfor 7 min).

表-２．スチレン 2 量体及びスチレン 3 量体の GC/MS 測定イオンと保持時間 9）, 10）
化合物名

略号

保持時間 (min)

m/z
Q

I

D

2,4-Diphenyl-1-butene

DPB

91

115

HP-5

DB-17

16.15

14.10

D

cis-1,2-Diphenylcyclopropane

cis-DPCP

104

208

15.89

14.27

D

trans-1,2-Diphenylcyclopropane

trans-DPCP

104

208

D

1,3-Diphenylpropane

DPP

92

91

196

16.49

14.63

15.40

T

1e,3e,5a-Triphenylcyclohexane

14）

13.43

eea-TPCH

91

104

T

1e,3e,5e-Triphenylcyclohexane14）

eee-TPCH

91

104

312

25.79

24.55

312

26.33

25.01

T

1a-Phenyl-4a-(1'-phenylethyl)tetralinaa-PPET

91

129

207

T

1a-Phenyl-4e-(1'-phenylethyl)tetralinae-PPET

91

129

207

208

24.09

23.05

208

24.02

22.70

T

1e-Phenyl-4a-(1'-phenylethyl)tetralinea-PPET

91

129

T

1e-Phenyl-4e-(1'-phenylethyl)tetralinee-PPET

91

129

207

208

24.18

22.93

207

208

23.89

22.78

T

2,4,6-Triphenyl-1-hexene

TPH

91

117

Sur

1,2-Diphenylethane-d14

DPE-d14

196

207

208

23.06

20.95

13.72

12.23

IS

Chrysene-d12

Chr-d12

240

23.39

22.98

130

Q : 定量イオン、I : 確認イオン、D : スチレン 2 量体、T : スチレン 3 量体、Sur : サロゲート、IS : 内標準

図４．スチレン２量体及びスチレン３量体の検量線の例

12

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

208

197

環境分析用試薬

NEW
NEW
NEW
NEW
NEW

新製品一覧

No. コード No.
品
名＜スチレンダイマー＞
1 048-26561 1,3-Diphenylpropane Std.
2 044-26541 2,4-Diphenyl-1-butene Std.
3 040-26521 cis-1,2-Diphenylcyclobutane Std.
4 047-26531 trans-1,2-Diphenylcyclobutane Std.
＜スチレントリマー＞
1 168-19281 1a-Phenyl-4a-(1'-Phenylethyl)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene Std.
2 161-19271 1a-Phenyl-4e-(1'-Phenylethyl)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene Std.
3 165-19291 1e-Phenyl-4a-(1'-Phenylethyl)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene Std.
4 168-19301 1e-Phenyl-4e-(1'-Phenylethyl)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene Std.
5 203-14381 1,3,5-Triphenylcyclohexane Std.
6 206-14371 2,4,6-Triphenyl-1-hexene Std.
＜スチレンダイマー・
トリマー重水素化合物＞
1 048-26821 cis-1,2-Diphenylcyclobutane-d5 Std.
2 045-26831 trans-1,2-Diphenylcyclobutane-d5 Std.
3 041-26811 2,4-Diphenyl-1-butene-d5 Std.
4 202-14591 2,4,6-Triphenyl-1-hexene-d5 Std.
5 205-14581 1,3,5-Triphenylcyclohexane-d5 Std.
＜フタル酸エステル類＞
1 046-26621 Dicyclohexyl Phthalate Std.
2 048-26701 Di-n-hexyl Phthalate Std.
3 047-26651 Di-n-pentyl Phthalate Std.
4 045-26571 Di-n-propyl Phthalate Std.
＜アルキルフェノール類＞
1 028-13531 p-t-Butylphenol Std.
2 164-19381 p-n-Pentylphenol Std.
3 089-07511 p-n-Hexylphenol Std.
4 082-07501 p-n-Heptylphenol Std.
5 146-06791 p-n-Nonylphenol Std.
6 159-02061 p-n-Octylphenol Std.
7 208-14451 p-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl）phenol（p-t-Octylphenol) Std.
＜その他＞
1 026-13571 Benzophenone Std.
2 025-13541 Bisphenol Ａ Std.
3 029-13561 n-Bthylbenzene Std.
4 049-26611 2,4-Dichlorophenol Std.
5 152-02051 Octachlorostyrene Std.
6 146-06811 p-Nitrotoluene Std.

規

格

容

量

希望納入価格（円）

環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用

500mg
10mg
10mg
10mg

8,000
40,00040,00040,000

環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用

10mg
10mg
10mg
10mg
10mg
10mg

35,00035,00035,00035,00035,00035,000

環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用

5mg
5mg
5mg
5mg
5mg

近日発売
近日発売
近日発売
近日発売
近日発売

フタル酸エステル試験用
フタル酸エステル試験用
フタル酸エステル試験用
フタル酸エステル試験用

1g
1g
1g
1g

3,000
10,000
5,000
8,000

環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用

500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg

4,500
5,000
5,000
5,000
10,000
8,000
5,000

環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用

500mg
500mg
500mg
500mg
25mg
500mg

5,000
4,500
5,000
5,000
12,0002,000＊上記以外の標準品試薬類につきましては、別途パンフレットをご請求下さい。

アルツハイマー病の研究に！
Synthaloid Drug Screening Plate
アルツハイマー病では、まず B アミ
ロイドの沈着が引き金となり、神経原
繊維変化と神経細胞死がもたらされるものと考えられています。
本品は、核となる B アミロイド凝集
原繊維をポリマーマトリックスに固定したものが、96 穴プレートにコートされています。
Figure 1. Pharmaceutical Targets During AB
Nucleation and Deposition.
The formation of amyloid templates as Target
1 is a nucleation-dependent process which
involves the self-assembly of AB.Once formed,
this aggregate can serve as a template forfurther addition of AB monomers in a nucleation-independent mechanism(Target 2).

B アミロイド沈着の阻害剤の力価測定やスクリーニングに有用です。
〔参考文献〕
William, P. E. et al. :Nature Biotechnology,
15, 258（1997）.

532-67011

1 プレート40,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）13

カラムスイッチング法による生体試料直接分析（カラムライフ改善検討）
和光純薬工業株式会社

大阪研究所

仁志

近年開発された生体試料直接分析

1）カラムスイッチングの際、前処理た。以上の検討結果から、200FW 程度

用充填剤は、従来 ODS 充填剤を用いカラムから分析カラムへ目的物を導入の大量の血清試料を安定的に注入分た場合に必要となった除タンパクや抽する方法において、①分析用移動相を析するためには、1）前処理カラムから出、濃縮などの前処理操作が不要で用いて逆方向に導入する方法、②順

分析カラムへの目的物の導入方法は、あり、分析時間の短縮や測定精度、お方向に導入する方法、③前処理用移

前処理用移動相で導入すること、2）前よび再現性の面からも優位であること

動相を用いて順方向に導入する方法

処理カラムに使用する有機溶媒濃度が報告されている。しかし、除タンパの 3 法を比較した結果、①、②のシス

は 10% までとすること、の 2 点が必須

クと生体成分の分離を同一担体上でテムでは前処理用カラムのみならず項目と考えられた。本方法によりカラ行うという充填剤の設計上の理由から、

分析カラムへの影響も大きかったが、ムライフは飛躍的に改善されたが、保分離性能的には ODS 充填剤に比べ劣③の方法は前処理用移動相条件を適持の差の大きい成分を同時分析する

るところがあり、本充填剤を前処理カ

正に設定することにより分析カラムへ場合には、分析時間が方法①、②に比ラムとして使用するカラムスイッチンの影響を回避しカラムライフの改善がべ長くなるとの問題もあり、分析時間

グ法が主流となっている。筆者らは、可能であった。そこで本方法を採用し、の短縮検討と高感度検出系の確立に先に本目的に使用できる充填剤として Wakosil GP-N6 を開発しその有用

2）前処理用移動相にアセトニトリル/0.1M リン酸緩衝液（pH6.0）を用いてWAKO HPLC INFORMATION（No.7）性を報告してきた。しかし、一度に有機溶媒比率の影響について検討し「生体試料直接分析用充填剤の開発と200FW 程度の血清試料を注入分析すた結果、有機溶媒濃度 10% までは安応用」にて紹介しているが、方法③を向 け 継 続 検 討 中 で あ る。詳 細 はる場合には、前処理カラムの圧力上昇、定に使用可能であった。3）最大注入

使用した場合の耐久性試験結果を図

分析カラムの性能低下などカラムライ

量 200FW までの検討において、連続

1. に示した。

フに問題が残っていた。そこで、カラ200 回以上の分析後も分析カラムの劣化は認められず、注入量 100FW では
連続 400 回以上の使用が可能であっ〔参考文献〕

ムライフの改善を目的に、1）カラム
スイッチング方法、2）有機溶媒比率、

3）注入量とカラム

1) 分析化学会第 44 年会講演要旨集 p7879(1995)
2) 和光純薬時報 p14,Vol. 64, No2 (1996)

ライフの関係について検討した。高圧六方バルブ付カ
ラムスイッチング
シ ステ ムを 持 つHPLC 装置を使用し、前処理用カラムに Wakosil GP-

N6, 4.6mm I. D.
× 50mm を、分析
カラムに WakosilII 5C18 RS, 4.6
mm I. D. × 150
mm を 使 用し、ア
セトニトリルとリン酸緩衝液を用いた移動相条件下に牛血清を直接注入して検討した。

14

上森

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

図１．方法③を使用した場合の耐久性試験結果
HPLC Conditions
Column: ① Pre treatment column Wakosil GP-N6（4.6 × 50mm）② Analysis column Wakosil-II5C18RS（4.6 × 150mm）
Eluent: ① CH3CN/100mM Phosphate buffer（pH 6.0）= 2/98（v/v）② CH3CN/100mM Phosphate buffer（pH 6.0）= 35/65（v/v）
Flow rate : 1.0mN/min. at 40℃
Sample: Calf serum 200[NPre treatment time : 5min.

エタノール小包装追加

高純度 過酸化水素（過酸化水素水）
精密分析用

ご好評いただいております、インフィニティピュアシリーズ・有機合成用脱水溶媒
シリーズにエタノール 100mW 包装を追加しました。既存品と併せてご利用下さい。

〔規

シリーズ

格〕

濃度：30.0 〜 35.5％

高純度溶媒でいつもフレッシュな状態でご利用いただけるパーソナルユース試薬で蒸発残分：10ppm 以下す。また、１本毎に試験成績書を添付していますので、安心してご使用いただけます。

塩化物（Cl）：1ppm 以下

試験項目

規格値

実測値例
（ロット ACG8970）
外観
無色澄明の液体 無色澄明の液体
含量（cGC による） 99.8% 以上
100.0%
水溶状
澄明
澄明
密度（20℃）
0.789 〜 0.791g/mW
0.790g/mW
屈折率 N 20
1.360 〜 1.363
1.362
D
吸光度 255nm
0.02 以下
0.011
水分0.3% 以下
0.066%
不揮発分
2ppm 以下
1.0ppm酸（CH3COOH として） 0.002% 以下
0.0002%

コード No.
053-06531

品
名Ethanol (99.5)

塩基（NH3 として）0.5ppm 以下
銅 (Cu）
5ppb 以下
鉛 (Pb)
5ppb 以下
鉄 (Fe)
10ppb 以下
アセトン及びアルデヒド
5ppm 以下（CH3COCH3 として）
メタノ−ル（CH3OH として） 0.02% 以下
過酸化物（H2O2 として） 5ppm 以下
硫酸着色物質試験適合
過マンガン酸還元性物質 (O として） 3ppm 以下
蛍光試験
試験適合

規
格
インフィニティピュア

容

量

100mW

りん酸塩（PO4）：1ppm 以下

0.1ppm 以下
1ppb 以下
1ppb 以下
1ppb 以下

硫酸塩（SO4）：1ppm 以下
ナトリウム（Na）：0.3ppm 以下
カリウム（K）：0.3ppm 以下5ppm 以下

銅（Cu）：0.003ppm 以下

0.01% 以下
1ppm 以下
試験適合1ppm 以下試験適合カルシウム（Ca）：0.05ppm 以下
亜鉛（Zn）：0.01ppm 以下
カドミウム（Cd）：0.001ppm 以下
水銀（Hg）：0.003ppm 以下

希望納入価格（円）1,800

鉛（Pb）：0.05ppm 以下
ひ素（As）：0.005ppm 以下

有機合成用脱水溶媒

クロム（Cr）：0.01ppm 以下

水分を最小限まで抑えた溶媒です。

マンガン（Mn）：0.05ppm 以下

100mW 包装は 500mW 包装同様、シリンジで溶媒を抜き取れるような特殊な鉄（Fe）：0.05ppm 以下
コバルト（Co）：0.003ppm 以下

キャップを使用しています。
コ−ド No.
055-06133
051-06135
059-06131

品

名Ethanol, Dehydrated (99.5)

水分含量

規

格

ニッケル（Ni）：0.003ppm 以下

容

量 希望納入価格（円）
100mW
2,100
50ppm 以下 有機合成用 500mW
4,200
3W
15,700

安定剤：不含086-07445

500mW

1,600 円カラムクロマトグラフ用ヒドロキシアパタイト
ヒドロキシアパタイトは他のクロマトグラフィー担体にはない特異的な分離挙動を示すため、高度なタンパク質分離精製に用いられています。しかし従来のヒドロキシアパタイトは、板状晶のために耐圧性が悪い、目づまりしやすい、もろい等の欠点があり、大量精製用の充てん剤として用いられていません。本品はこれらの欠点を改善したクロマトグラフィー用充てん剤です。

HAP-C-BEADS（分取用球状アパタイト）〔分析例〕

大量精製用大型カラムに適しています。
長〕◆ 平均粒子径を 40Fm にそろえた球状アパタイトです。

Cytochrome - CAlbumin

0.3

ABS◆ 球状なので取扱いが簡単です。

0.1

0.2

◆ 高流速が得られます。

0.1◆ 耐久性に優れています。
〔諸物性〕分子式：Ca10(PO4)6(OH)2
分子量：1004.64

00.0

使用可能線流速：1,000cm/hour
ジンなど

HAP-A-BRIKS（分析用アパタイト）
〔特

長〕

〔仕

に粒子化したアパタイトです。分析用◆ HPLC に匹敵する分離能です。

カラムに適しています。

◆ 高流速が得られます。

コード No.
305-06861
308-06851
304-06853

メーカーコード
HCB11
HAB01
HAB02

品
HAP-C-BEADS
HAP-A-BRIKS

名

0
min.

30.0

カ ラ ム ：内 径 3cm 長さ 10cm
流
速 ：10mW/min.
溶 出 液 ：りん酸カリウム緩衝液 pH 6.80
溶出方法 ：開始後 5 分から 36 分間で 10mM から 0.5Mまでリニアグラジエント
検出波長 ：230nm
試料 ：アルブミン，リゾチーム，チトクロム-C

使用可能変性剤：尿素、塩酸グアニ

使用可能 pH：5.5 〜 14

針状アパタイトを 5Fm のブロック状

0.4
Phosphate(M)〔特Lysozyme
0.2様〕

使用可能 pH：5.5 〜 14
使用可能線流速：400cm/hour
容

量

100g
20g
100g

希望納入価格（円）
60,00010,00040,000
和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

15和光純薬工業株式会社

第 35 話

大阪研究所

土谷

正和

抗生物質のエンドトキシン試験

1998 年、日本抗生物質医薬品基準

されるフィルター やに一般試験法として「エンドトキシン試

原料からの混入が疑

験法」が収載されました。今回は、抗われます。このように、生物質のエンドトキシン試験について

B- グルカンが混入し考えてみましょう。

た抗生物質製剤がか

今回の改正で、収載薬剤中 118 製

なりあると思 わ れま

剤のエンドトキシン規格値が定められすから、抗生物質のました。試験法としては、「日本薬局方エンドトキシン試験に

一般試験法エンドトキシン試験法を準は、エンドトキシン特用する」
ことになっています 1）。日本薬

異的リムルス試薬を

局方のエンドトキシン試験法には、ゲ用いる必要があるでル化法と光学的方法が記載されておしょう。また、希釈やり、「その結果に疑いのある場合は、別pH 調整によって測定に規定するもののほか、ゲル化法にしやすい条件にする

よって最終の判定を行う」
ことになってことも同様です。反応干渉因子試験をトキシンでも起こっているかどうかはいます 。日本における実状としては、行う場合の注意点として、抗生物質の不明であり、反応干渉因子試験への影定量性に優れた光学的方法が好まれエンドトキシンに対する影響が挙げら

響だけでなく、抗生物質中のエンドており、抗生物質の工程検査にもこれれます。すなわち、抗生物質の中には、

トキシンの存在状態と活性測定の意

らの方法が多く使われているようです。

鉄イオンやアルミニウムイオンのよう義にも関わっていると思います。

抗生物質のエンドトキシン試験におに、エンドトキシン活性を低下させるも抗生物質のエンドトキシン試験は、ける注意点について考えてみましょう。

のがあります。当研究所でも、硫酸ゲ

基本的に他の医薬品を試験する場合

抗生物質の場合も、これまで考えてきンタマイシンでこの現象を経験していと変わりありません。従って、ふだんたリムルス試験における注意点と基本ます。すなわち、硫酸ゲンタマイシン

気をつけている点に注意すれば、問的に同じです。筆者らは、エンドトキシ溶液（10 mg/mW）をエンドトキシン溶

題なくエンドトキシン試験が行える

ンと B- グルカンの両方に反応する従液と混合後、活性を測定すると、そのでしょう。これまで通り、エンドトキ

来のリムルス試薬による抗生物質の測

エンドトキシン活性は 40% まで減少しシンの活性変化には注意が必要です

定で、 B- グルカンと思われる反応をました。しかし、リムルス試薬に硫酸が……。

経験しております。この B- グルカンのゲンタマイシン溶液、エンドトキシン

由来は不明ですが、製造工程で使用溶液の順で添加すると、そのエンドト

2）

図１ 硫酸ゲンタマイシン溶液（10mg/mW）に添加したエンド
トキシン回収率の変化

キシン活性はほとんど変化しませんでした。このあたりの実験
方法については、これまでにもご 紹 介し てき ています
（Talking of LAL 第 10 話 3）、第33 話 4））。また、硫酸ゲンタマイ
シン溶液とエンドトキシン溶液〔参考文献〕
1）日本抗生物質医薬品基準解説 1998,
p.490,（薬事時報社）（1998）.
2）第十三改正日本薬局方解説書 , p. B53,
（廣川書店）（1996）.
3）和 光 純 薬 時 報 Vol.61 No.1, p. 12,（和光純薬工業株式会社）（1993）.
4）和 光 純 薬 時 報 Vol.66 No.4, p. 18,（和
光純薬工業株式会社）（1998）.

をあらかじめ混合した溶液では、エンドトキシン活性は経時的に低下し、24 時間後には 10% となりました（図 1）。このような現象は、自然界に存在するエンド

16

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

次回は「第 36 話 エンドトキシンと電子線」の予定です。

10[N 〜 100[N の少量サンプルの透析に便利！
！
Spectra/Por Micro DispoDialyzer
や、低分子の不純物の除去などに大変便利です。
〔特 色〕
膜 の 種 類 ：バイオテック再生セル
ロース
p H 範 囲 ：2 〜 12
温 度 限 界 ：60℃
保 存 剤 ：0.1% アジ化ナトリウム
キャップ材質：ポリプロピレン

新しくデザインされたスペクトラポ
アマイクロディスポダイアライザーは
少量サンプル 用の透析ツールです。
マイクロピペットで、サンプルの添加回収が行えるようにデザインされていますので、取扱いが簡単です。10FW、50FW、100FW の 3 種類の容量がそろっており、また、分画分子量は 3.5kD 〜
60kD の間で 5 種類ありますので脱塩
コード No.
535-70291
538-70301
535-70311
532-70321
539-70331
536-70341
533-70351
530-70361
537-70371
534-70381
531-70391
534-70401
531-70411
538-70421
535-70431

メーカーコード
1356001135601113560211356002135601213560221356003135601313560231356004
13560141356024
135600513560151356025

品

名Spectra/Por Micro DispoDialyzer MWCO3.5kD

Spectra/Por Micro DispoDialyzer MWCO8kD

Spectra/Por Micro DispoDialyzer MWCO15kD

Spectra/Por Micro DispoDialyzer MWCO25kD

Spectra/Por Micro DispoDialyzer MWCO60kD

容 量
10FW × 12 コ
50FW × 12 コ
100FW × 12 コ
10FW × 12 コ
50FW × 12 コ
100FW × 12 コ
10FW × 12 コ
50FW × 12 コ
100FW × 12 コ
10FW × 12 コ
50FW × 12 コ
100FW × 12 コ
10FW × 12 コ
50FW × 12 コ
100FW × 12 コ

希望納入価格（円）18,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,00018,000

洗浄剤
Heavy Metal Cleaning Solution
スペクトラポア膜を使用する前に、膜に付着している重金属の洗浄に用います。
通常の実験では脱塩水での洗浄で十分ですが、精密な実験を行う場合に使用されます。
〔組 成〕
EDTA 溶液

鉛 0.004%
鉄 0.01%

Nitrilotriacetic Acid 0.1%
539-70451 8 oz（約 230mW） 12,600 円

Sulfide Removal Kit
スペクトラポア 1 〜 6 は 0.1% の硫黄が製造工程で含まれます。その硫黄や硫化物を除去するための洗浄剤です。
通常の実験では脱塩水での洗浄で十分ですが、精密な実験を行う場合に使用されます。

〔キット内容〕
溶液 A：８ oz（約 230mW）1% 亜硫酸ナトリウム水溶液
溶液 B：８ oz（約 230mW）0.4% 硫酸溶液
532-70441

1Kit

12,600 円

Angiostatin
Endostatin
アンジオスタチンとエンドスタチン
腫瘍血管を標的とした制がん剤の研〔参考文献〕
Claesson W. L. et al. : Proc. Natl. Acad.
は血管新生を抑制する物質として単離 究に役立つツールです。
Sci. USA, 95, 5579
（1998）.
されました。マウスを用いた実験では、
コード No.
品
名容 量 希望納入価格（円）
腫瘍血管の形成が抑制され、がん細胞
500Fg
538-84571
Angiostatin,
Human
106,300
はアポトーシス像が多く、増殖が著しく
250Fg
531-84561 Endostatin, Mouse, Recombinant
72,100
阻害されたことが報告されています。
535-84581 Endostatin, Human, Recombinanat 250Fg
72,100近日発売
和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）17国立長寿医療研究センター

老年病研究部

本山昇

第６話 アポトーシス制御分子：Bcl-2 ファミリーの機能
アポトーシスは、胚発生・神経およ

しないことが特徴的である。これら二シナリーのアポトーシス実行因子とし

び免疫系の分化・ウイルス感染細胞のつのサブファミリーの分子には、Ｃ末て Caspase ファミリーが知られている2）。

除去・組織の恒常性の維持など生物学

端に疎水性領域をもっておりこの領域

Bcl-2 ファミリー は、Caspase ファミ

的に重要な現象であり、多細胞生物にを介して、核外膜、小胞体膜およびミリーの活性化を抑制することによってとっては不可欠な機構である。過剰なトコンドリア膜に結合している。BH3

アポトーシスを制御していることが示

アポトーシスにより形成不全が生じ奇サブファミリーには、Bik、Blk、Hrk、

されている
（図２）。

形、神経変性疾患および免疫不全な

Bid、Bim、Bad および BNIP3 などがアポトーシスが誘導されるとミトコ

どが誘導される。一方アポトーシスの含まれ、アポトーシスを促進する。こンドリアの膜電位が低下し、ミトコンド

減少により過形成などが生じ、また、の分子は、BH3ドメインのみに Bcl-2

リア内の Caspase 活性化因子 AIF やがん化が誘導される。

遺伝子ファミリーと相同性を持っておシトクロム c などが細胞質内へ流出すり、その他の領域は、サブファミリー間る。Bcl-2 サブファミリーは、それらをでも相同性はない。

抑制する。一方、Bax サブファミリーは、などのミトコンドリアからの流出を誘導ム研究の中心となった。

２． Bcl-2 ファミリーによるアポトーシ
ス制御メカニズム
いったん細胞がアポトーシスを起こ

１．Bcl-2 サブファミリーと構造

すというアポトーシスシグナルを受け

Vauxらによって、Bcl-2 の過剰発現
がリンパ球系の細胞に誘導されるアポ

膜電位低下および AIF やシトクロム c

トーシスを抑制することが示されて以来、Bcl-2 はアポトーシスのメカニズに多数のファミリー遺伝子が単離されム単位への断片化、クロマチンの凝縮、BH3 サブファミリーの Bid の局在が細胞質からミトコンドリアに移行し、Bcl2 サブファミリーとヘテロ二量体を形成し、Bcl-2 サブファミリーの機能を阻害することによって、Bax サブファミている 。構造と機能から３種類のサ

断片化、細胞質の凝縮、細胞表面の湾リーによるミトコンドリアの変化を誘導

ブファミリーに分類される（図１）。Bcl-

曲などが起こり、最終的に細胞が断片することが示されている 1）。また、Bcl-

2 サブファミリーには Bcl-2、Bcl-xL、
Bcl-w、A1、Mcl-1 など化し死滅していく。このようなメインマ

2 サブファミリーは、Apaf-1 を介して構造の類似性と Bcl-2 蛋白質に結ると最終的にはメインマシナリーに集合する因子の同定を通して、現在まで約され、染色体 DNA のヌクレオソー

１）が含まれ、アポトーシス
抑制活性を有している。
構造上の特徴としては、

Bcl-2 ファミリー間で高く保 存され て い る BH1（Bcl-2 homology region 1）, BH2, BH3,
BH4ドメインとよばれている領域を有している。

Bax サブファミリーには、
Bax、Bak、Bok が含まれ、アポトーシスを促進する機能を有している。
このファミリーの分子は、BH1, BH2 と BH3ド メ
インが 保 存され ているが、BH4ドメインは存在

18する3）。Fas を介したアポトーシスでは、

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

図１.

Caspase-9 とも複合体を形成することう。末梢のリンパ球は顕著に減少し、しており精子の形成異常により不妊でができ、アポトーシスを制御している

最終的にはほぼ消滅してしまう。メラある7, 8）。Bax ノックアウトマウスも正常可能性が考えられるが、この詳細なメノサイトの死滅により、毛の生え変わりに発育し健常であるが、精巣が萎縮しカニズムは、今後の解析に期待され時に毛が白色化してしまう。多嚢胞性ており精子の形成異常により不妊である 。

腎症様の異常が腎臓に生じ、これが原る。また、卵巣において顆粒細胞の増因で早期に死亡してしまうと考えられ加を呈しているが、生殖能を有してい

３．Bcl-2 ファミリーの生理学的機能ている。Bcl-x ノックアウトマウス 6）は、る 9）。Bcl-x ノックアウトマウスにみら

Bcl-2、Bcl-x、Bcl-w、Bax、ノック

胎仔肝における造血細胞のアポトーシ

れたような未成熟神経細胞の過剰なアウトマウスが作製されて生理機能がスの増加による赤血球形成不全によっアポトーシスは、Bcl-x/Bax ノックアウて胎生期１３日ころに死亡してしまう。

トマウスでは生じない。

1）

解析されている。

Bcl-2 ノックアウトマウス4, 5）は、胚発

また、中枢および末梢神経系で未成生は正常に進み一見正常なマウスが

熟神経細胞のアポトーシスが増加して生まれるが、成長は極端に遅延し、大いた。Bcl-w ノックアウトマウスは、正部分が５〜６週齢までに死亡してしま常に発育し健常であるが、精巣が萎縮

４．終わりに

bcl-2 遺伝子は、濾胞性リンパ腫において染色体転座による過剰発現により発ガンに関与している。また、bax
遺伝子欠損や変異によるアポトーシスの低下は発ガンに関与している。また、過剰のアポトーシス誘導は、神経変性
疾患や免疫不全などを導くことが明らかになってきている。すなわち、アポトーシス制御メカニズムがわかれば、
アポトーシス異常により引き起こされうる発ガンや変性疾患の病因の解明に役立つだけでなく、これらの疾患の治療にも新しい道が開けることが期待される。
〔参考文献〕

図２.

1. Adams, J. M. and Cory, S.（1998）
Science 281, 1322-1326
2. Thornberry, N. A. and Lazebnik, Y.
（1998）Science, 281, 1312-1316
3. Green, D. R. and Reed, J. C.（1998）
Science 281, 1309-1312
4. Veis, D. J., Sorenson, C. M., Shutter,
J. R. et al.
（1993）Cell, 75, 229-240
5. Nakayama, K., Nakayama, K.-i.,
Negishi, I. et al.（1994）Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 91, 3700-3704
6. Motoyama, N., Wang, F., Roth, K. A.
et al.
（1995）Science, 267, 1506-1510.
7. Print, C. G., Loveland, K. L., Gibson,
L. et al.（1998）Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 95, 12323-12431
8. Ross, A. J., Waymire, K. G., Moss, J.
E. et al.
（1998）Nat. Genet. 18, 251-256
9. Knudson, C. M., Tung, K., Tourtellotte, W. G. et al.（1995）Science 270,96-99

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）19

パラフィン切片染色用 Bcl-x 抗体
Anti Human Bcl-x, Monoclonal Antibody
免疫組織染色用
bcl-x 遺伝子は、選択的スプライシ
ングにより少なくとも 4 種類の遺伝子産物が知られています。233 アミノ酸からなる Bcl-xL は Bcl-2 よりも強力に
ア ポトーシ スを 抑 制 するのに 対し、

170 アミノ酸からなる Bcl-xS はアポトーシスを促進することが知られています。本抗体は、（His）6 - ヒト Bcl-xL
融合タンパク質に対するモノクローナ
ル抗体で、特にホルマリン固定パラ（His）6 - ヒト Bcl-xL 融合
免 疫 原：
タンパク質
形
状：PBS 凍結品（0.5mg/mW）
精 製 法：Protein G アフィニティ精製

クローン No.：HBx-B5
サブクラス：IgG1
特 異 性：ヒト、ラットの Bcl-xL、
Bcl-xS、Bcl-B と反応する
実用希釈倍数：
免疫組織染色（パラフィン切片）
フローサイトメトリー

フィン包埋切片の免疫組織染色に優れており、細胞レベルでの Bcl-x の発
現、局在の研究にご利用頂けます。

ラット大脳

1:50

1:50 〜 1:500〔参考文献〕
Boise, L. H. et al. : Cell, 74, 597（1994）.

014-17591

100Fg

35,000 円
ヒト小脳〔関連商品〕
コード No.
010-16851
013-16101
017-16481

品 名
抗ヒト Bcl-xL，モノクローナル抗体（HBx-2F3）
ウエスタンブロット、免疫沈降でヒト、ラット、マウス Bcl-x と反応

抗ヒト Bcl-2，モノクローナル抗体（Bcl-2/100）
ウエスタンブロット、免疫沈降、免疫組織染色でヒト Bcl-2 と反応抗ラット Bcl-2，モノクローナル抗体（B248）
ウエスタンブロットでラット、マウス Bcl-2 と反応

容量

希望納入価格（円）100Fg

35,000100Fg

32,000100Fg

30,000

NO による立体構造変化を認識できる sGC 抗体
Anti-soluble Guanylate Cyclase (sGC), Monoclonal Antibody
免疫化学用
血管内皮由来弛緩因子（EDRF）の本

本抗体は、NO により活性化された体である事が見出された NO（nitricsGC を強く認識するものであり、NOoxide）の生理作用は多様多岐に渡る

研究伸展の手段としてご利用下さい。

事が知られています。その作用標的分子として知られている sGC（可溶性グ
アニル酸シクラーゼ）は、NO が sGCのヘムに結合すると立体構造が変わり、酵素活性が 100 倍以上に増強され、

cGMP の合成を促進します。その結果生じた cGMP が、血管系では血管弛緩をもたらし、神経系では逆行性の神経情報を伝達し、また脳虚血時の神経細胞死を引き起こすことが示唆されています。このように、NO により活性化され、cGMP の産生を促進する sGCの局在及び作用機序を知ることは生
理機能や疾患の病因の解明に必須であると考えられます。

20

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

免 疫 原：ウシ肺由来の精製 sGC
形

状：0.1mol/W Glycine-Tris（pH 7.4）

濃度：500Fg/mW

精 製 法：硫安分画及びプロテイン G
アフィニティクロマトグラ
フィにて精製クローン No.：mAb 3221
サブクラス：IgG1
特 異 性：sGC と特異的に反応するだけでなく、NO による sGCの立体構造変化により抗原抗体反応が増強する。sGCの A と B サブユニットの両方を認識する。膜結合型のGC とは反応しない。

ラット小脳初代培養細胞の免疫蛍光染色

種交叉反応性：ラット、ウシ、ヒトと反応する
実用希釈倍数：
1 : 5,000
ウエスタンブロット（ALP による検出）
1 : 250
蛍光抗体法

019-17801

20Fg

近日発売

免疫組織染色の洗浄用 PBS（−）
Phosphate Buffered Saline Powder 0.01mol/N pH 7.2 〜 7.4
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溶かすだけですぐにご使用頂けます。 Na2HPO4
NaCl
8g＊ pH 7.2 〜 7.4（25℃）
162-19321 1W 用× 20 包4,000 円

各種緩衝剤
● PBS 関連
コード No.

品

名

組

成

規

格

容

1W 中：NaH2PO4・2H2O……… 0.45g

164-18541
162-18547

0.01mol/W PBS（−）

041-20211

Dulbecco's PBS（−）

Na2HPO4・12H2O……… 3.2g
NaCl……………………… 8g
1包中：NaCl…………………… 4.0g
Na2HPO4……………… 0.6g
KCl……………………… 0.1g
KH2PO4 ………………… 0.1g

量

希望納入価格（円）

組織洗浄用

1W
20W

3,300
13,000

生化学用

500mW 用× 20 包

4,200

● PB 関連
コード No.
166-14461
163-14471
161-12191
160-14481
167-14491

組 成（1 包中）Na2HPO4( 無水 ) KH2PO4
Phosphate Buffer Powder 1/15mol/W,pH 6.4
2.5g
6.7g
Phosphate Buffer Powder 1/15mol/W,pH 6.8
4.7g
4.5g
Phosphate Buffer Powder 1/15mol/W,pH 7.0
5.7g
3.6g
Phosphate Buffer Powder 1/15mol/W,pH 7.2
6.6g
2.7g
Phosphate Buffer Powder 1/15mol/W,pH 7.4
7.6g
1.8g
品

名

規

格

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

1W 用× 20 包
1W 用× 20 包
1W 用× 20 包
1W 用× 20 包
1W 用× 20 包

希望納入価格（円）
3,700
3,700
3,700
3,700
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汎用固定液の 10，15，20% ホルマリン液を商品化 !
10、15、20％ホルマリン液
組織固定用
病理組織の固定液にはホルマリン系、アルコール系、ピクリン酸系など多種類ありますが、その中でもホルマリンは使用法も簡便で、浸透性に優れていることから最も良く用いられています。
長所・一般染色に使用、鍍銀法に最適である
・凍結切片による脂肪、神経組織染色に良い
コード No.
060-03845
068-03841
066-03847
067-03855
065-03851
063-03857
064-03865
062-03861
060-03867

品

名

短所・ホルマリン色素の出現
・グリコーゲン、酵素類の固定には不適である
ホルムアルデヒド含量

規

格

10% Formalin Solution

4%

組織固定用

15% Formalin Solution

6%

組織固定用

20% Formalin Solution

8%

組織固定用

容

量

500mW
1W
20W
500mW
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20W
500mW
1W
20W

希望納入価格（円）
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各種固定液
コード No.
133-10311
131-10317
132-10521
136-10041
134-10047
139-10531
137-10537
062-01661
060-01667
069-02391
067-02397
060-01721
068-01727

品
Mildform 10N

名※ホルムアルデヒド含量 : 4%

規

格

病理研究用

Mildform 10NM ※ NM は浸透・固定力をパワーアップしたタイプ

病理研究用

Mildform 20N

病理研究用※ホルムアルデヒド含量 : 8%

Mildform 20NM ※ NM は浸透・固定力をパワーアップしたタイプ

病理研究用

10% Formalin Neutral Buffer Solution

組織固定用

15% Formalin Neutral Buffer Solution

組織固定用

20% Formalin Neutral Buffer Solution

組織固定用

容

量

1W
20W
1W
1W
20W
1W
20W
1W
20W
1W
20W
1W
20W

希望納入価格（円）2,300
11,5002,500
2,300
11,5002,800
13,400
2,100
10,000
2,100
10,0002,000
10,000※ Mildform：リリー処方に従って調製された 10%,20% 中性緩衝ホルマリン液にホルマリン臭のマイルド剤 ( ワインエキス ) を微量添加した固定液

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

21１
脳科学一口メモ◯脳の NO： 産生と機能北海道大学大学院

薬学研究科

野村

靖幸

生命科学の近年の進歩は著しいものがある。とくに最近１０〜２０年間は、遺伝子、分子、細胞レベルの研究が大きく進展した。このダイナミックに展開した生命諸科学の中で最後に残された最大のフロンティアの一つが脳科学であろう。
「２１世紀は脳科学の世紀」といわれる所似である。欧米と米国に続いて日本でも、各省庁により脳の解明をめざした大型プロジェクトが計画・
実行されつつあることは喜ばしいことである。２１世紀を控えこれから本格的に脳機能の解明に向けた学際的、総合的研究が、医学、薬学、生物学などの分野のみでなく、工学、農学、さらには心理学などの人文科学系も含め活発に展開されると考えられる。脳神経系を本質的に理解するのに、個体レベ
ル（個体の生命活動を統御する脳―末梢相関など）で脳機能を巨視的、総合的に認識する研究方向と、細胞レベル（神経細胞（ニューロン）やグリア細胞における細胞間、細胞内コミュニケーション）および分子・遺伝子レベル（神経細胞内の遺伝子・分子の実体とその機能）で微視的、解析的に認識する研究方向とが相互に影響し合いつつ、研究が展開しよう。
この「脳科学一口メモ」
では、脳科学図１. 脳組織における３種 NO 合成酵素（NOS）の活性化／誘導と生成 NO の機能
NMDAR : NMDA 受容体 , R：受容体 , CaM : カルモジュリン , L-Arg : L- アルギニン ,PK : プロテインキナーゼ , TF： 転写因子 .

における主要な事項の最近の進歩について、行動科学、心理学的アプロー

すなわち Robert F. Furchgott（Newならない。この研究グループは脳 NO

チを含め、生理学、生化学、分子生物

York 州 立 大 学 ）、 Louis Ignarro（ California 大 学） お よ び Ferid
Murad（Texas 大学）の３教授に与えられた。これら３教授は、それぞれ NOの神経生理学的機能と細胞毒性学的学、薬理学から、さらに臨床医学（神経内科、精神医学など）の分野で活発に研究する研究者の執筆によるわかりやすい解説を連載することにしたい。第
１回の今回は、脳における各種の主要な機能分子のうち一酸化窒素（NO）をとりあげ、その脳組織における生成とその機能の基本的な点を記す。
さて、昨年（１９９８年）のノーベル生理学賞は米国の NO 研究者の３博士、22

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

機能についてブレークスルーとなる業績を挙げたからである。

NO は、２種の NO 合成酵素（NOsynthase, NOS）によって L-arginineの発見、同定、作用機序の解明などに関する卓越した業績を挙げ、それが高より生成される。NOS には、細胞内にく評価されたものである。一方、生体
常 に 存 在 す る（constitutive） NOS
内 NO の研究範囲を脳にまで拡大し、 （cNOS）と、ある刺激に伴って発現す
脳 NO の役割に関し先導的研究をしたる（inducible）NOS（iNOS）がある。図
S. H. Snyder 教授（Johns Hopkins 大
１に 示 す ように、脳 組 織に お い て、
cNOS としてはニューロンに存在する学）らの果たした大きな貢献も忘れて

nNOS と 血 管 内 皮 細 胞に 存 在 す る
eNOS が、一方、グリア細胞で誘導される iNOS が知られている。nNOS やeNOS は、各種の刺激に伴って上昇する 細 胞 内 Ca2+ が カ ル モ ジ ュリン（CaM）を活性化、Ca2+ ／ CaM によって活性化され、その結果 NO を生成しニューロン死惹起など神経病態生理

NO に関する今後に残された課題に対学的、細胞毒性学的機能をも併せ有しし、さらなる研究の進展が期待されてている点は注意すべきである。NO のいる。本シリーズの第１回では、脳にこの二面的作用は神経系におけるのおける主要な機能分子 NO について、

みでなく、他の組織、細胞においても生成と機能を紹介したが、次回は、脳一般にあてはまる。この点、脳ばかりNO のニューロン死惹起に関わるグリ

か生体の一般組織においても、NO 作

ア細胞の機能について解説を試みるこ

種々の生理機能を発現する。たとえば用の制御が医療においてもきわめてとにしたい。

nNOS によって生成された NO（適量）

重要といえる。このために NO とそのは、逆行性シナプス伝達物質として神（活性）代謝物質（たとえば ONOO な

経可塑性（長期増強や長期抑圧）に関ど）の細胞機能、NO の生成と代謝のわる。一方、各種ストレスにより過度に機 構の 基 礎 的 解 明も重 要 な 課 題と活性化された nNOS、ならびに細菌感なっている。これらに関する基礎的新染に伴う LPS や脳内グリア細胞で生

知見は、脳科学をはじめて生命科学の成されたサイトカインなどにより、グリ進展への寄与とともに、新規治療薬のア細胞内に誘導された iNOS によって開発などを通して医療に大きく貢献す

過剰に生成された NO は、ニューロン

るはずである。

死など細胞障害を引き起こす。このよ
うに脳 NO は、一方で神経生理学的に

NO 研究者にノーベル賞が授与され、生体内 NOとその研究の重要性が強く、重要な機能を有するのに対し、他方、且つ広く認識され たが、これらの脳〔参考文献〕
1. 野 村 靖 幸：Clinical Neuroscience, 16,762（1998）.
2. 野村靖幸：心血管病態と NO, p.33-42（金芳堂）（1998）.
3. 上原 孝 , 野村靖幸：神経研究の進歩，
印刷中 .

NO 試薬
阻害剤
コード No.
096-04021

品

名L-N6-(1-Iminoethyl)lysine・HCl【L-NIL・HCl】

規

格

容

量

希望納入価格（円）

生化学用

10mg

3,600

090-03681
096-03683

NG-(1-Iminoethyl)-L-ornirhine・HCl【L-NIO・HCl】

生化学用

5mg
50mg

5,200
31,500138-11221

NG-Monomethyl-L-arginine Monoacetate【L-NMMA】

生化学用

100mg

12,600144-06091

NG-Nitro-L-arginine【L-NNA】

生化学用

100mg

2,100

147-06101
143-06103
145-06102

NG-Nitro-L-arginine Methyl Ester・HCl【L-NAME】

生化学用

100mg
10g
25g

1,600
13,80031,500規

容抗体
コード No.

品

名

格

量

希望納入価格（円）50,000

免疫化学用

100FW
100FW
100FW

免疫化学用

1 セット

86,000013-15981

Anti Rat bNOS, Rabbit

免疫化学用010-15991

Anti Bovine eNOS, Rabbit

免疫化学用017-16001

Anti Mouse iNOS, Rabbit

015-17141

Anti Human bNOS Antibody Set
Anti Human bNOS, Rabbit 100FWbNOS Control Peptide
25Fg

48,00050,000

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

23

トランスフェクション用試薬
DAC-30TM

製造元 EUROGENTEC Bel s.a.
輸入元 株式会社ニッポンジーン

DAC-30TM は、正に荷電したリポソームで、細胞毒性が低く、高い効率で再現性良くトランスフェクション
できる製品です。
DNA 溶液を DAC-30TM（凍結乾燥品）に加えると、DNA との多重薄層複合体が形成され、この複合体のかなりの割合が細胞に取込まれます。
トランスフェクションに用いる量では毒性はないので、トランスフェク
ション後の細胞を洗浄する必要はありません。したがって、初代培養細胞のトランスフェクションや常時血清が必要な場合にも応用できます。

表１．DAC-30 TM を用いてトランスフェクションに成功した細胞の例

DAC-30TM は、 in vivo での脳腫瘍の遺伝子治療用としても研究されています。極めて低い毒性と高いトラ
ンスフェクション効率のため、グリオーマ細胞や神経芽腫細胞への自殺遺伝子やアンチセンスオリゴヌクレ

293

293 HEK

745-A

A-431

Atrial myocytes

BxPC3

C5N

Caco-2

Capan-1

CC531

CFPAC

CHO

CHO K1

COS-1

COS-7

CV-1

EAHY

EAHY 926

F98

GH3

GP&envAM12 H-295 R

H-4-

HACAT A131

HEK

HEL

HeLa

Hep G2High FiveHT29

HUV-EC R24

HUV-EC-C

IEC 17

IEC 18Jurkat

K 562

KARPAS-299

L 929

LIN 175

MAt-LYLU

MCF-7

MRC-5

MT4

N64

NCTC 2544

NDCK

Neuro 2A

NIH 3T3

NT2/D1

P19

primary neuronal cells

品317-80001

HACAT

primary dendritic cells

primary human myoblasts

primary keratinocytes

SF9

SK-UT-1

ST

SW 979U-937

Y-1

SW 480オチドのトランスフェクション試薬として使われています。

コード No.

-E

名

DAC-30TM

容

U-2 OS

Hs 766T

MNEL

U-373

化 学 名：3B[N(N,N' -dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol
量2 × 0.5mg

希望納入価格（円）45,000核酸銀染色キット
CLEAR STAIN Ag
CLEAR STAIN Ag は、ポリアクリルアミドゲル中の核酸を低バックグラウンドで高感度に検出できる銀染色キットです。
◆ 低バックグラウンドSYBR Green 染色の約 20 倍高感度で、20 〜 50pg/band の DNA が検出可能◆ 高感度：臭化エチジウム染色の約 100 倍、◆ 安全：TCA（トリクロロ酢酸）を使用しない〔キット内容〕
200mW
１．固定液（× 20）
２．アンモニア溶液（× 20） 200mW
200mW
３．染色液 A（× 20）200mW
４．染色液 B（× 20）
５．現像液 A（× 10） 200mW × 2
200mW
６．現像液 B（× 20）200mW
７．保存液（× 20）〔使用例〕
サンプル：Marker9（φ X174/Hinf
Ⅰ digest） ニッポンジーン社製
サンプル量：Lane 左より 500、
250、125、63、32、16、8、4、
2、1、0.5、0.25ng/lane
140 × 140 × 1mm 6％ポリアク
リルアミドゲル〔参考文献〕

TBE バッファー

Tegalstrom, H. : Electrophoresis, 7, 226（1986）.
コード No.
311-03961

24

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

品

名

CLEAR STAIN Ag

容

量

1kit（20 枚分）

希望納入価格（円）35,000Green Fluorescent Protein（GFP）, Blue Fluorescent Protein（BFP）
発現ベクター・ モノクローナル抗体
GFP, BFP 発現ベクター
本品は、オワンクラゲ（Aequorea victoria）由来の蛍光タンパク質である GFP の遺伝子を改変して作った蛍光強度の強い
GFP です。細胞内における、タンパク質の発現や局在を経時的、かつ可視的に検出 できるレポーターとして有用です。
BFP : Ex. 384 nm Em. 405 nm）（GFP : Ex. 474 nm Em. 509 nm
GFP pQBI 25

BFP pQBI 50

GFP pQBI-pgk

CMV-IE プロモーター / エンハンサーにより、
Nhe サイトを用いて GFP とのフュージョンタ
ンパクができます。動物細胞中での GFP 高発

CMV-IE プロモーター / エンハンサーにより、
Nhe サイトを用いて BFP とのフュージョンタ
ンパクができます。動物細胞中での BFP 高発

現に用いられます。

現に用いられます。

pgk プロモーターにより、 ES 細胞や初代培
養細胞を含む幅広い種の細胞で安定に発現できます。また、Neomycin 耐性遺伝子を組み込んでいるため、蛍光及び薬剤による二重選択が可能です。

GFP pQBI-pol

GFP pQBI 63

BFP pQBI 67

プロモーターにより、ES 細胞や初代培養細胞を含む幅広い種の細胞で安定に発現できます。また、Neomycin 耐性遺伝子を組み込んでいるため、蛍光及び薬剤による二重選択が可能です。

強力な T7 バクテリオファージのプロモーターを持ち、大腸菌において高感度の GFP を発現します。

強力な T7 バクテリオファージのプロモーターを持ち、大腸菌において高感度の BFP を発現します。

pol-

GFP モノクローナル抗体
本抗体は、微量の発現タンパク質の検出に有効です。固定化することによりタンパク質の精製にも用いることができます。
クローン ：3E6
サブクラス ：IgG2a
特 異 性 ：天然型 GFP、GFP 変異体、GFP 結合タンパク質を認識
1:100 〜 1:500
実用希釈倍数： 免疫沈降
1:100 〜 1:500
イムノサイトメトリー
ELISA
1:1,000 〜 1:2,000
ベクター

抗コード No.

品

クローン ：11E5
サブクラス ：IgG1
特 異 性 ：変性 GFP、GFP 変異体、GFP 結合タンパク質を認識
1:1,000
実用希釈倍数： ウエスタンブロット

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）546-00811
546-00791
540-00831
547-00841
543-00821
549-00801

Green Fluorescent Protein Vector pQBI 25 【GFP pQBI 25】
Blue Fluorescent Protein Vector pQBI 50 【BFP pQBI 50】
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-pgk 【GFP pQBI-pgk】
Green Fluorescent Protein Vector pQBI-pol 【GFP pQBI-pol 】
Green Fluorescent Protein Vector pQBI 63 【GFP pQBI 63】
Blue Fluorescent Protein Vector pQBI 67 【BFP pQBI 67】

遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用遺伝子研究用

20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg
20Fg

33,00033,00033,00033,00033,00033,000542-00771
549-00781

Anti-Auto Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody（Clone : 3E6）
Anti-Auto Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody（Clone :11E5）

免疫化学用
免疫化学用

150Fg
150Fg

26,00026,000体

近日発売

組換え体 GFP, BFP（オワンクラゲの蛍光タンパク質に由来した GFP の発色団遺伝子を改変し大腸菌を用いて発現させた組換えタンパク質です。）
コード No.
545-00901
542-00891

品

名Green Fluorescent Protein, Aequorea victoria, recombinant, Soln.
Blue Fluorescent Protein, Aequorea victoria, recombinant, Soln.

規

格

生化学用
生化学用

容

量

25Fg
25Fg

希望納入価格（円）照照会会

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

25

RNA Size Standard Marker Ⅱ（0.5kb 〜 9kb）
遺伝子研究用
本品は、ノーザンブロットにおける RNA サイズスタンダードとして用いるためにデザインされた、0.5,
1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6 と 9kb の 10 種類の RNA 転写産物です。エチジウム
ブロミド染色により検出できます。

性

9 kb

状：0.1mmol/W EDTA, 二炭酸ジ
エチル処理済み水溶液

6 kb
5 kb
4 kb
3 kb
2.5 kb2 kb
1.5 kb
1 kb
0.5 kb542-00651

24,000 円

50Fg

使いやすいジェネティシン溶液®

Geneticin Disulfate Solution
生化学用
neo 遺伝子を持つベクターでトラ
ンスフェクションした細胞について、目的の遺伝子が発現した細胞を選択するために培地中に添加して用いられます。溶液状態のため直ちに使用する事ができます（滅菌済み）。

緩衝液

〔濃

度〕50mg/mW

078-04501

20 mW
100 mW

074-04503

26,000 円※ Geneticin® は、Life Technologies Inc. のGIBCO Division の登録商標です。

90,000 円

粉末タイプ 4 品目新発売しました

10 × TBE, 20 × SSC, 20 × TBS, 25 × TAE
緩衝液は生命科学分野での実験を行うに際し、必須の試薬群です。DNA の電気泳動用、in situ ハイブリダイゼーションでの洗浄用、ウエスタン、サザンブロッティングなどの手法にこれらの緩衝液は欠かすことができません。この様に頻繁に使う、しかも重要な緩衝液の調整に時間を取られがちですが、本試薬は１W の水に溶かせば即使用可能な粉末タイプの緩衝液です。
〔特 長〕粉末タイプ４品目すべてに以下の特長が挙げられます。
①１W の水に溶かすだけで指定濃度の Stock Solution ができます。
② 粉末タイプですので、容器からの不純物の溶出はほとんどなく常にフレッシュな状態でご使用できます。
③ 面倒な試薬秤量の必要がありません。
④ 面倒な pH 調整の必要がありません。

コード No.

品

名

規

格

組

成

10 × TBE 粉末

0.9 M トリス- ほう酸、15.6 mM EDTA・2Na

20 × SSC 粉末

3 M 塩化ナトリウム、0.3 M くえん酸ナトリウ
ム

20 × TBS 粉末

75mM トリス、0.425M トリス塩酸塩、2.8M 塩
化ナトリウム、60mM 塩化カリウム

25 × TAE 粉末

0.5M ト リ ス、0.5M ト リ ス 酢 酸 塩、25mM
EDTA・2Na

容

量

pH ※

希望納入価格（円）203-13781

10 × TBE Powder

遺伝子研究用

4 × 1W 用

8.0~8.5

13,500199-11291

20 × SSC Powder

遺伝子研究用

4 × 1W 用

7.5~8.2

10,000200-13791

20 × TBS Powder

生化学用

4 × 1W 用

7.2~7.7

14,000206-13771

25 × TAE Powder

遺伝子研究用

4 × 1W 用

7.9~8.3

16,000※ pH はそれぞれ １× TBE, SSC, TBS, TAE 時の値です。

近日発売

26

コード No.

品

名

規

格

容

量

191-11871

20 × SSPE Powder

遺伝子研究用

4 × 1W 用

138-13281

10 × MESA Powder

遺伝子研究用

4 × 1W 用

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

培養系に有効な消泡剤
消泡剤

新発売

消泡剤 PE-H、PE-M、PE-L

SI

本品は、シリコーン（Sil i c o n e）系消本品は、ポリエーテル系消泡剤です。ワックス類や硫黄等を全く含んでおりませ

泡剤で、破泡性、抑泡性共に非常に優んので、濁りや析出物が発生することがありません。粘度の違いにより、PE-H

れた消泡剤です。そのため、低濃度で（Poly-Ether-High）, PE-M（Poly-Ether-Medium）, PE-L（Poly-Ether-Low）の３

消泡効果が得られます。また、培地に種類があります。一般に粘度が低いほど分散性が良くなります。
20℃ における粘度（cP）：PE-H 約 980 PE-M 約 325 PE-L 約 160添加したときの濁りが少ないのが特長
です。
〔添加量〕

細胞培養における本品の添加量は、2000-4000 倍希釈（1W の培地に 0.25mW-0.5mW） が適量ですが、各々の系で確認の上ご使用下さい。
〔データ〕
2. 細胞毒性試験
1. 消泡効果と濁りの測定

消
泡
剤

希釈倍率
時間

添加後 10 秒

５分
1５分
濁り

SI

添加後 10 秒
S
社
品

5分
15 分
濁り

消泡剤添加後の泡の高さ

1 × 103

2 × 103

4 × 103

8 × 103

1 × 104

1 × 105

control

0
0
0
有
0
0
0
有

0
0
0
無
2
0
0
有

3
0
0
無
8
0
0
有

5
0
0
無
11
1
0
有

8
0
0
無
13
8
8
有

14
0
0
無
17
9
9
無

19
3
2
無
18
13
13
無

24
20
13
無
22
16
13
無

2）MEM（細胞培養用培地）+10%FCS（ウシ胎児血清）
希釈倍率
時間

添加後 10 秒

５分
1５分
濁り

SI

添加後 10 秒
S
社
品

5分
15 分
濁り

希釈倍率
時間

添加後 10 秒

５分
1５分
濁り

PE-M

添加後 10 秒
S
社
品

5分
15 分
濁り

１０００
５００

単位（mm）

1 × 1021 × 103

2 × 103

4 × 103

8 × 103

1 × 104

1 × 105

control

0
0
0
有
0
0
0
有

0
0
0
無
1
0
0
有

0
0
0
無
2
0
0
有

2
0
0
無
4
0
0
有

5
0
0
無
6
2
1
有

10
0
0
無
11
3
2
有

31
0
0
無
19
19
17
無

40
34
33
無
40
31
24
無

消泡剤添加後の泡の高さ
消泡剤

方法：Alamar Blue を添加し、LD50 を測定する。下記のデータは LD50 値を示す時の希釈倍率と添加後の日数の関係のグラフです。

０

消泡剤添加後の泡の高さ

消泡剤

単位（mm）

1 × 102

viability の判定：Alamar Blue1)

1 × 103

2 × 103

4 × 103

8 × 103

1 × 104

1 × 105

control

1
0
0
有
0
0
0
有

1.5
0
0
少有
1
0
0
有

3
1
0
無
2
0
0
有

3
1
0
無
4
0
0
有

3
2
1
無
6
2
1
有

9
3
1
無
11
3
2
有

25
20
2.5
無
19
19
17
無

47
41
41
無
40
31
24
無

２

３

４

５

消泡剤SI

６

S 社品

１０００

単位（mm）

1 × 102

１

日 数

希釈倍率

１）BHIB（細菌培養用培地）＋ 0.04%Tween20

細胞：Vero 細胞の subclone (O78 株 )希釈倍率

方法：小試験管に培地を 5mW 分注し、激しく振とう後、さまざまな希釈倍率の消泡剤を添加する。添加後、10 秒、5 分、15 分と泡の高さを測定する。また、そのときの濁りも測定
する。

８００
６００
４００
２００
０

１

２

３

４

日 数

PE-M

S 社品

注意：細胞毒性は非常に低く、細胞培養に用いても問題ないと思われますが、各々の系で確認の上ご使用下さい。

〔参考文献〕
Pagé B., Paggé M. and Noel, C. : Int. J. Oncol., 3, 473（1993）.
コード No.
016-17431
018-17435
010-17191
012-17195
010-17211
012-17215
013-17201
015-17205

品

名

規

格

SI

生化学用

PE-H

生化学用

PE-M

生化学用

PE-L

生化学用

容

量

100mW
500mW
100mW
500mW
100mW
500mW
100mW
500mW

希望納入価格（円）
3,000
9,000
2,700
6,000
2,700
6,000
2,700
6,000

和光純薬時報 Vol.67, No.2（1999）

27

和
光
純
薬
時
報
第
六
十
七
巻

細胞 (Cell)・組織 (Tissue) ミトコンドリア DNA 抽出専用キット
mtDNA Extractor CT kit
近年、糖尿病やアルツハイマー病とミトコンドリア DNA（mtDNA）変異との関連を示唆する報告がなされ始め、mtDNA の解析が盛んに行われるようになってきました 1）, 2）, 3）, 4）。特に神経や筋組織に症状をあらわす多くの疾患にも深く関わっている事が知られるようになり、血液中の白血球からでなく、疾患に関わる様々な組織からも mtDNA を抽出する必要性が指摘されています 5）。しかし、高純度の mtDNA を調製するには、煩雑な操作と多くの時間が必要であり、多検体処理を目的とした研究には適していません。現在の mtDNA 分析は、細胞から total DNA を抽出する際に含まれる微量の mtDNA を用いて、多量のゲノム DNA の混在下で行われています。
mtDNA エキストラクター CT キットは、細胞や組織から短時間かつ容易に高純度の mtDNA を抽出することができます。
特

長

キット内容

・簡単な操作で短時間に組織や細胞中の mtDNA を抽出できます。また回収され た mtDNA は ゲ ノ ム の 混 入 が 少 な い た め、組 織 片 約 50mg（骨 格 筋 は250mg）からの抽出でアガロース電気泳動により mtDNA の確認ができます。
・調製された mtDNA は高純度であり、制限酵素処理等に使用できます。
・少量の組織（5mg）からでも PCR 反応に適用できる mtDNA が回収できます。
・新鮮な組織だけでなく、凍結組織からも mtDNA の回収が可能です。
・フェノールやクロロホルムなどの有害な劇物溶剤を使用しません。
実用例

Buffer for Homogenate
25.0 mW
DNA Extraction SolutionⅠ 1.3 mW
DNA Extraction Solution Ⅱ (A)
1.3 mWDNA Extraction Solution Ⅱ (B)
1.3 mWDNA Extraction Solution Ⅲ 1.9 mW
Sodium Iodide Solution
7.5 mW
Washing Solution
50.0 mW

mtDNA エキストラクター CT キットにより各組織から抽出した mtDNA の電気泳動結果（1）マウスの各組織 50mg
（骨格筋 250mg）から抽出した mtDNA 半分
量を Pst Ⅰで約 1 時間消化し、アガロース電気泳動で mtDNA 回
収の有無を調べた。
全ての組織から抽出 mtDNA の２本の Pst Ⅰ消化断片が観察できた。

E / Hind（2）
マウスの凍結（− 20℃ で 1 日保存）した各組織 50mg（骨格筋250mg）から抽出した mtDNA の半分量を Pst Ⅰで約 1 時間消化し、アガロース電気泳動で mtDNA 回収の有無を調べた。
全ての組織から mtDNA が回収できた。

E / Hind

マーカー

脳
心臓
肝臓
腎臓
骨格筋

マーカー

脳
心臓
肝臓
腎臓
骨格筋

〔参考文献〕
1）安田和基：医学のあゆみ , 174, 420（1995）.
2）Davis, R. E. et al.：Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 4526
（1997）.
3）Poulton, J. et al. ： Prenatal Diagnosis, 16, 1247
（1996）.

関連商品

コード No.
291-55301

品
名
mtDNA Extractor CT Kit

コード No.
293-54401
291-50502
295-50201
295-52401

品
名
mtDNA Extractor WB Kit
DNA Extractor WB Kit
DNA Extractor Kit
DNA Isolator PS Kit

4）Jazin, E. E. et al. ： Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 12382（1996）.
5）田中雅嗣、小澤高将：日本臨床 , 47, 307（1989）.
規 格
組織・細胞 mtDNA 抽出用
容

量

25 回用
50 回用
50 回用
100 回用

容

量

25 回用

希望納入価格（円）23,000

希望納入価格（円）用途
23,000
全血中のミトコンドリア DNA 抽出
26,000
全血中のヒトゲノム抽出16,000
生物製剤中の DNA 抽出
20,000パラフィン切片中の DNA 分離

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

希望納入価格には消費税等が含まれておりません。

発行所

28

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.
和光純薬時報 Vol.67, 06-6203-3741
No.2（1999）（代）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

1999 年 4 月 15 日
岸 井 松 司大 西 礼 子
共進社印刷（株）

第ニ号