October 2001

Vol.69 No.4

アルツハイマー病等の神経変性疾患の研究に

Phosphorylated Tau Immunohistostain Kit
免疫組織染色用
アルツハイマー病等の痴呆を伴う神経変性疾患では異常にりん酸化されたタウタンパク質の蓄積が見られます。本品は、この異常りん酸化タウタンパク質を特異的に染色する免疫組織染色キットです。

特 長 （1）神経原線維変化を含むタウタンパク質の異常蓄積病
変を高感度で低バックグラウンドに染色できます。
（2）
ヒトタウタンパク質の 422 番目のりん酸化セリンを特異的に認識する抗体を使用しており、正常タウタンパ
ク質は認識しません。

キット内容（1）抗りん酸化タウタンパク質（pSer-422）, ウサギ
10mL × 1 本
10mL × 1 本（2）
ブロッキング用血清（3）抗ウサギ IgG, ヤギ , ビオチン結合

10mL × 1 本（4）ABC 溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキ

10mL × 1 本

シダーゼ複合体溶液）
299-57301

100 回用

52,000 円

詳しくは、p.31 をご参照下さい。

Wako

目 次
化学大家━━━━━━━━━━━━━━━━「ウォレス・ヒューム・カロザーズ」
島尾 永康 ………2
総 説 ━━━━━━━━━━━━━━━━━「水中の大腸菌群・E.coli 検査試薬 AquaTest」
山縣 文夫 ……11
「実験動物における病理組織標本の作製について」
福田 種男 ……16
「カルシウム受容発光蛋白質イクオリン」
井上
敏 ……24「神経変性疾患における異常リン酸化タウの蓄積」
長谷川成人 ……28
シリーズ━━━━━━━━━━━━━━━━＜ Talking of LAL ＞「第 45 話 エンドトキシンに結合する血漿成分」
土谷 正和 ……23
＜ How to 組織イメージング＞「第 5 回 非上皮性腫瘍（2）脂肪組織の腫瘍」
石川喜美男、三瓶 接子、宮 哲正、
久川 芳三、牛込新一郎 …………… 20＜脳科学一口メモ＞「アルツハイマー病の関連タンパク質 APP のリン酸化と代謝制御」
鈴木 利治 ……32
テクニカルレポート━━━━━━━━━━━「大気中のアルデヒド、ケトンの HPCL 分析（その 3）」
吉田貴三子 ………6
新製品フラッシュ━━━━━━━━━━━━
りん酸化タウ免疫組織染色キット ………1,31
ぬれ張力試験用混合液 ………………………5

ワコーパック フルオフィックス………………7
HPLC 用酸、18L キャニスター缶包装脱水溶媒 ………………………………………………8
けいそう土、荷電型、（−）- ヒドロキシくえん酸
カルシウム標準品、アルテピリン C …………9ダイオキシン類分析用試薬、農薬標準品 …10
ELMEX AquaTest…………………………11
横河全窒素全りん測定装置専用試薬、リバースクリプトⅡ …………………………………12,
RNA ポリメラーゼ（RNase 阻害剤（スーパー）添加）、100bp DNA ステップラダー ………13
Invitek社 核酸抽出・精製キット……………14

パソプレップ 546、硫酸アンモニウム飽和
溶液 …………………………………………19
イクオリン ……………………………………26
PIERCE 社 SeizeTM X 免疫沈降キット …27
アミロイド B- プロテイン免疫組織染色キット …31
B- グルカン，水溶性、グアノシン 5' - 二りん酸
ナトリウム塩 …………………………………33
糖尿病研究用 ELISA キット、アルドース還元酵素 … 34
ソルビトール脱水素酵素、ストレプトゾトシン、スタチン系薬剤、ラットレプチン ELISA キットワコー …35
ポリアクリルアミドプレキャストゲル ………36

1
1

389

ウォレス・ヒューム・カロザーズ（1896.4.27 〜 1937.4.29）
科学史家

小さな田舎の大学でウォレス・カロザーズは 1896 年 4 月
27 日、アイオワ州バーリントンで生まれた。父は商業学校の教師であった。高
校生の頃 R．ダンカンの通俗化学書を読んで化学に興味をもち、大学では化学をやりたいと思った。1915 年、長老派教会の熱心な信徒だった父は、カロ
ザ ー ズをその宗 派の建 てた 大 学、ミズーリ州のターキオ・カレッジに入学させた。4 年制の大学だが、学生は男女
合 わ せ て わ ず か 114 名だった。カロ
ザーズはドイツの詩とニーチェとクラ
シック・ドイツ音楽を好んだ。級友から教授 と呼ばれていた。ただ一人の化学 教 授、ア ー サ ー・パ ル デ ィー は、
Ph.D. を取るためにジョンズ・ホプキン
ズ大学へいっており不在だった。二年
生のとき復帰された先生から最新の化学を吸収し、このとき有機化学を勉強し始めた。在学中アメリカが大戦に参戦し、多くの学生が出征したが、カロザーズ
はヨード欠乏地域で成長したため甲状腺腫があり、兵役を免除された。パル
ディーは東部の大学へ転任したので、化学の教員がいなくなり、カロザーズが化学のインストラクターに任命され、卒業が 1 年遅れた。小さな田舎の大学の卒業生には、産業にも大学にも口がなかった。パルディーは Ph.D. の取得を勧め、ジョンズ・ホプキンズでなく、新興のイリノイ大学を薦めた。

図 1. ウォレス・カロザーズ

得（1912）後、ベルリン・ダーレムでエミール・フィッシャーに師事した。酸化白金や酸化パラジウムの触媒作用を発見した（アダムズ触媒）。それまでアメリ
カの化学の Ph.D. の半数はジョンズ・ホ
プキンズから出ていたが、アダムズの指導するイリノイ大学は、ジョンズ・ホ
プキンズをしのぐ勢いとなった。アメリカ化学会会長を務めた（1935）。第一次
大戦中は陸軍で化学兵器に関係し、第二次大戦中は国防科学研究委員となり、日本進駐軍総司令部化学顧問団団長とし て、1947 年に 来 日し ている。カロ（図 2）ザーズより 7 歳年長である。
カロザーズは白金触媒上でのアルデヒドの還元の研究により Ph.D. を取得しイリノイ大学で1920 年、カロザーズはイリノイ大学
大学院に入学した。教授、助教授、インストラクターなどスタッフ 20 人、助手約30 人の大所帯で、4 階建の化学教室の各階はフットボールができるほどの広さが あった。カロザ ー ズ が 師 事したロジャー・アダムズ（1889 − 1971）教授はボストン出身で、第 6 代アメリカ合衆国
大統領、ジョン・クインシー・アダムズの子孫である。ハーバードで Ph.D. を取2

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

図 2. デュポン社でカロザーズと語り合うアダ
ムズ（左）。かれは 38 年間イリノイ大学教授、40 年間デュポン社の顧問をした。

島尾

永康

た（1924）。アゾベンゼン・イミドの構造決定という最初の研究では、ルイスとラングミュアーの原子価理論を有機化学。アダムズら経験にもちこんだ（1923）
主義者ばかりのイリノイ大学化学教室にあって、ただ一人理論的傾向をもつ異色の存在となった。教員と学生の全員の中でかれほどよく化学文献を読んだものはなく、かれほどよくそれを記憶していたものもいなかった。博士号をとる
前から、みんなに 博士 と呼ばれていた。かれの化学的名声は急上昇したが、一方、ときおり襲われたうつ病の時期には完全に無意志症の生活だった。卒業
後インストラクターとなり、サウス・ダコ
タ大学でもインストラクターをした。しかしカロザーズはシャイで、ショーマンの資質がなく、教師には全く不向きであった。

ハーバード大学で1926 年、アダムズの推薦でカロザー
ズはハーバード大学のインストラクターに なった。ハ ー バ ードに は E.P. コー
ラーという 60 歳代の有機化学の教授がいて、洗練された講義と巧みな実験で知られていた。コーラーが実験の巧妙さを得意としたのに対して、カロザーズ
は実験よりも思索を重ね、熟考するタイプだった。カロザーズは インストラク
ターになったばかりであったが、3 歳年
長のジェームズ・コナントはすでに教授であり、数 年 後、40 歳の 若さで ハ ーバードの総長に選出され、大学行政と国家の科学行政に深くかかわっていく。
カロザーズがハーバードに来て第二年目の初めに早くも入社を勧めるデュポン社の役員と接触しているのは、イリノイと異なるハーバードの学風やコナントになじめず、ハーバードでの前途の見通しが必ずしも明らかでなかったからであろう。一方、デュポン社ではこの年、研究部長の C. スタインが、利潤の追求のための研究でない、 純粋の 基礎研
究のために 25 万ドルを留保することを

のアイルランド人移住者を雇い、緊密な生活集団を結成した。安全管理は厳重をきわめた。工場は互いに一定の距離をおき、一つの工場には一度に 2 人しか働かせなかった。
マッチの使用は厳禁し、金属の発火を恐れて、使用人の衣
服のボタンは木製にさせ、靴には釘でなく木くぎを打ち、馬蹄 で さえも 木 製 にし た。ラヴォワジエへの感謝の念をこ図 3. 1925 年の夏休みを楽しむカロザーズ（左）とマーヴェル
めて始めはラヴォワジエ製造（1894 〜 1988）。マーヴェルは 67 歳までイリノイ大学教授、その後、92 歳までアリゾナ大学教授、60 年間デュポン所という社名を考えたが、結社の顧問。合成ゴムに深くかかわった。
局デュポン・ド・ヌムール社と重役会に承認させ、それを指導する教した。19 世紀のアメリカは西部開拓や南北戦争もあって、火薬の需要は無限
授級の化学者を大学から招こうとした。
だった。デュポン社は世界最大の黒色
まずアダムズに対してその申し出がな
火薬の製造者となった。火薬職人の数されたが、アダムズは断り、そのあとC.S. マーヴェル（図 3）、H. ギルマン、家族が代々デュポン家のために働いた。
L. フィーザーらもいずれも応じなかった。 20 世紀になって第一次大戦が起こると、連合国の無煙火薬を一手に引き受けた。
アダムズとコナントはカロザーズを推1914 年 に 5500 人 だ った 従 業 員 は、薦した。パルディーにいたってはカロ
1918 年には 55000 人になっていた。
ザーズこそ百万人に一人の化学者と推第一次大戦以来デュポン社は儲けす奨した。デュポン社はカロザーズの獲ぎて当惑した。戦後もなお爆発物で儲得に躍起となった。1928 年、カロザー
けるデュポン家の人々は 火薬人間 とズは自分の好きなことをしてよいといののしられた。1934 年、社長ラモット・
われ、年俸＄6000 で入社を承諾した。
デュポンは議会上院で厳しく尋問され、ちな みに ハ ー バ ード第 二 年 目のカロ
戦 時 中の 年 間 利 益が 500 万ドル からザーズの給料は＄3200、イリノイ大学
6000 万ドルに跳ね上がったのは軍部へのアダムズ教授は＄8000 であった。カ
の過剰請求による不当利得であると裁
ロザーズはデュポン社で高分子の構造決された。デュポン社のイメージは最とその合成を研究しようと考えた。
悪となった。まさにこのとき基礎研究室でおこなわれた新しい合成繊維の発見
デュポン・ド・ヌムール社に重 役 会が 飛び ついたのは、これに経済学者・政治家ピエール・サミュエ
よってデュポン社のイメージ・チェンジ
ル・デュポン・ド・ヌムール（ド・ヌムールを図れると考えたからである。デュポンと領地名をつけたのは 1789 年、三部会
社はすでに 1919 年以来、火薬専門からの議員に出たときである）
は、近代化学
多種商品製造へと転換しており、基礎の創始者ラヴォワジエの盟友だったの
薬品、レーヨン、プラスチックス、染料、で、そ の 子 エリュテ ー ル・イレ ネ ー
塗料、フィニッシュ、爆発物、セロファン、
は 17 歳でラヴォワジエ（1771 − 1834）
合成ゴム、これに新たにナイロン部門
が監督・理事をしていた王立火薬工場が加わってアメリカ最大の化学コンツェに入り、ラヴォワジエから親しく火薬製ルンになった。そのデュポン社のイメー
4
1799
年、
造の 教えを 受け た（図 ）。
ジを完全に好転させたのは、絹よりも優
デュポン家は蔵書 4000 冊を持ってアメれたナイロンを、女性用ストッキングとリカに亡命した。エリュテールはアメリして大々的に提供したことである。ナイカの火薬の質が悪いのに着目し、1802
ロンの商品化を成功させたのは、ハー年、デラウェア州ウィルミントンに火薬
バー・ボッシュのアンモニア合成に刺激工場を設立した。デュポン家は 140 人
されて導入した高圧化学と化学工学で

図 4. ラヴォワジエの教えを受けるエリュテー
ル・イレネー・デュポン・ド・ヌムール（右）。

ある。ナイロンはデュポン社の新しいテクノロジー時代の象徴となった。1938
年に 1 億ドルの絹を日本から輸入し、その 3 ／ 4 をストッキングに消費していたアメリカにとっては経済的な勝利でもあった。第二次大戦時にもデュポン社
は、原子爆弾用のプルトニウムを生産したが、非難されるどころか、その技術
力はさらに声価を高めた。

デュポン社のカロザーズ
入社早々のカロザーズは言う、「研究費は制限なし。好きなだけ使ってよい。
私が時間をどう使おうと、どういう計画
を立てようと誰も何も聞かない。完全に自由だ」と。さらにポストドクトラルからなる研 究チ ー ムもついた。チ ー ムは1929 年に 6 人だったのが、1932 年には13 人に増員した。発表の自由もあった。
チームの研究結果はすべてカロザーズの名前で発表された。ドイツのヘルマ
ン・シュタウディンガーが、高分子は普通の化学結合で形成される長鎖状の巨大分子であると述べたが、一般に承認。カロザーズはそされなかった（1920）の 理 論 の 実 証を 目 指し、エミー ル・
フィッシャーが樹立した記録、分子量4200 以上のポリマーの合成を目標として出発し、縮重合を徹底的に研究した。
1930 年、チームの一員 A．コリンズがポリクロロプレンのゴム状性質を発見したのが端緒となって、世界最初の合成
ゴムを合成した。デュポン社にちなんでデュプレンと命名した（1936 年にネオプレンと改称）。カロザーズは大学に

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

3

未練があった。コナントがハーバードの総長に就任したと聞いて、ハーバードに教授として戻れないかと考えた（1933）。
しかしシカゴ大学のハッチンス学長からの化学科の部長就任の申し出は断っている（1935）。
最初に長い合成繊維を引いて興奮したのはチームの J. ヒルである（1930）。
しかし実用になる、優秀な繊維を最初に引いたのは、G. バーチェットである（1935）。その原料のヘキサメチレンジ
アミンとアジピン酸は、容易に得られるという点でも有望だった。いずれにも C
が 6 個あるので、ポリアミド 6-6 と呼ばれた。これがデュポン社のナイロンになる。その決定的な実験をしたのは D. コ
フマンである。この 2 種の中間生成物を200 〜 315℃ で加熱するのがナイロン生成の秘訣で、この温度で分子が重合して長い鎖になる。無色透明なナイロ
ンの小片を溶かして液体とし、小さいノズルから噴出させるとクモの糸のような繊維になり、空中で固まる。引き伸ばすと強度が増す。かねてからカロザーズに合成繊維の発見を期待していた化学部長 E. ボルトンは、ただちにその商業的生産の検討に入った。カロザーズはイギリス、ケンブリッジでの世界初のポ、リマー科学国際会議に招かれて（9 月）
シュタウディンガーらと会い、その後ドイツの黒い森を一人で歩きまわった。
化学的な合成繊維の可能性の発見と、その商品化とは全く別の事業である。
かれの留守中、デュポン社では化学者と化学エンジニアを動員して、ポリアミ
ド 6-6 の生産体制を組んだ（図 5）。カロ

ザーズの創造的化学者としての活動は終わった。論文 62 篇、US 特許 69 件。
翌年、アメリカ科学アカデミー会員に選出された（1936 年 4 月）。会員 293 名。
うち化学者 33 名。カロザーズはこの会員に選ばれた最初の企業内の有機化学者だった。ボルトンは言う、「カロザーズほど深く有機化学を読み解いたものは見たことがない」と。
（図 1）
カロザーズは何人かの女性と交際していた。そのうちの一人シ ルヴィア・
ムーア、 並外れた才気と色気と美貌の女性、ただし既婚、にカロザーズは深く心を奪われた。この人が正式の離婚手続きをしたころ、カロザーズは新しい家を買い、故郷から両親を呼び寄せて同居していた。親思いの行為ではあるが、カロザーズは父親に愛情がもてず、母親とはほとんど理解し合えなかったと述べてもいる。これで 2 年余り続いた
シルヴィアとの交際は終わった（1935）。
デュポン社の特許課に勤めていた平凡な、知的でない女性、ヘレン・エヴェ
レット・スウィートマンと結婚した（1936年 2 月）。友人は誰もがシルヴィアならふさわしいが、ヘレンとカロザーズとは不釣合いと見た。そしてヘレンに好意をもたなかった。

うつ病とアルコール依存症
カロザーズは成人したころから何度もうつ病に悩まされた。イリノイ大学以来の師友、アダムズやマーヴェルらは、
ずっとカロザーズの気分を見守り続けた。1934 年、7 月半ばから 8 月末まで、会社には告げず突然姿を消した。これが最初で、その後しばしば失踪した。このときはボルティモアの精神科の医院に入院したのち、同僚の田舎の家に寄。1936 年 6 月には、寓していた（図 6）
妻と会社の人が図ってカロザーズを無理にフィラデルフィアの精神病院に入院させたが、アダムズがヨーロッパにいると聞いて、アダムズとアルプスの旅をしたいと医師に申し出て許可を取り、妻や会社には告げず、ニューヨークを出航した。ミュンヘンでアダムズと合流して、
2 週間ほどチロル・アルプスを歩いたあと、心配している人々のところへふらり。
と帰還した（9 月）
カロザーズの症状は単なるうつ病ではなく、アルコール依存症でもあった。
アルコール依存症とうつ病の合併症は、
かれの一族の病気だった。カロザーズ
はまがいもなくアルコール依存症で、飲めばもうろう状態になるまで飲んだ。禁には密輸酒販売
酒時代（1920 〜 1933）
者から入手していた。AA（アルコール中毒者の自主治療協会）はまだほとん
ど知られておらず、うつ病に対する良い
薬もな か った 時 代に 苦しみ ぬ い た。
1937 年 4 月 29 日、フィラデルフィアのホテルで、ずっと持ち歩いていたシア
ン化物で自殺した。41 歳だった。その7 ヵ月後、女児が生まれた。生涯の一大転機だったデュポン社への入社からわずか 7 年間ほどの間に、頻発するひどいうつ病に阻まれながら、その合間の短い、輝かしい、きわめて生産的な時期に、高分子化学の理論と合成法に大きく貢献し、合成ゴムと完全に合成的な繊維という二大産業を創始した。デュポ「ナイロン」
をン社は、400 件の名称から選んで（現在、この名称はポリアミド系
合成繊維の総称となっている）、1938
年 10 月、ニューヨーク万博で発表し、一大宣伝キャンペーンをくりひろげて、空前の商業的成功を収めた。カロザー
ズはその名称も、その製品も見ることはなかった。

〔主要参考文献〕

図 5. デュポン社は 1940 年末までに、デニールの大きさ、撚り、透明度、フィラメントの数の異なる 1100 種のナイロンを作った。

4

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

図 6. 笑顔のカロザーズの写真は珍しいという（1934 年 8 月、退院直後）。抱いているのは
友人の子供。

Matthew E. Hermes, Enough for One Lifetime,
Wallace Carothers, Inventor of Nylon, American
Chemical Society, 1996.; Susannah Handley,
Nylon. The Story of a Fashion Revolution,
The Johns Hopkins University Press, 1999.; Pap
Ndiaye, Industrial cultures at DuPont, Chemical Heritage, 14-1,（1996）.

ぬれ張力試験用混合液
ぬれ性とは、フィルム表面に液体が広がる現象をいい、ぬれの程度を表す指数をぬれ張力といいます。プラスチックフィル
ムに塗装したり、コ−ティングを施したり、またはプラスチックフィルムを接着する場合、プラスチックフィルムがインキ、コ−
ティング剤、接着剤などを保持する事が要求されます。この保持する能力を示す尺度としてぬれ張力があります。
ぬれ張力試験方法は、JIS K6768 で規定されていましたが、ISO 国際規格に整合させるために、ISO8296 を基礎に大幅に改正されました。この改正により、試験用混合液の種類が増え、適用範囲がポリエチレン及びポリプロピレンフィルムから、プラスチックフィルム及びシ−ト全般に拡張されました。
従来よりご利用いただいているぬれ指数標準液につきまして、JIS K6768 の改正により新たにぬれ張力 22.6 〜 30.0 及び56.0 〜 73.0 の 16 品種を追加し、全商品をリニュ−アルしぬれ張力試験用混合液として 36 品種の販売を開始しました。
（注意）色調が多少従来製品と異なりますが、より安定な着色剤を使用しており、ご使用上の問題はありません。
名ぬれ張力 (23℃)

コ−ド No.

品

235-01791

ぬれ張力試験用混合液 No.22.6

22.6

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

238-01801

ぬれ張力試験用混合液 No.25.4

25.4

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

235-01811

ぬれ張力試験用混合液 No.27.3

27.3

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

232-01821

ぬれ張力試験用混合液 No.30.0

30.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

239-01831

ぬれ張力試験用混合液 No.31.0

31.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

236-01841

ぬれ張力試験用混合液 No.32.0

32.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

233-01851

ぬれ張力試験用混合液 No.33.0

33.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

230-01861

ぬれ張力試験用混合液 No.34.0

34.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

237-01871

ぬれ張力試験用混合液 No.35.0

35.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

234-01881

ぬれ張力試験用混合液 No.36.0

36.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

231-01891

ぬれ張力試験用混合液 No.37.0

37.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

234-01901

ぬれ張力試験用混合液 No.38.0

38.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

231-01911

ぬれ張力試験用混合液 No.39.0

39.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

238-01921

ぬれ張力試験用混合液 No.40.0

40.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

235-01931

ぬれ張力試験用混合液 No.41.0

41.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

232-01941

ぬれ張力試験用混合液 No.42.0

42.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

239-01951

ぬれ張力試験用混合液 No.43.0

43.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

236-01961

ぬれ張力試験用混合液 No.44.0

44.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

233-01971

ぬれ張力試験用混合液 No.45.0

45.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

230-01981

ぬれ張力試験用混合液 No.46.0

46.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

237-01991

ぬれ張力試験用混合液 No.48.0

48.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

234-02001

ぬれ張力試験用混合液 No.50.0

50.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

231-02011

ぬれ張力試験用混合液 No.52.0

52.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

238-02021

ぬれ張力試験用混合液 No.54.0

54.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

235-02031

ぬれ張力試験用混合液 No.56.0

56.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

232-02041

ぬれ張力試験用混合液 No.58.0

58.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

239-02051

ぬれ張力試験用混合液 No.59.0

59.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

236-02061

ぬれ張力試験用混合液 No.60.0

60.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

233-02071

ぬれ張力試験用混合液 No.61.0

61.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

230-02081

ぬれ張力試験用混合液 No.62.0

62.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

237-02091

ぬれ張力試験用混合液 No.63.0

63.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

230-02101

ぬれ張力試験用混合液 No.64.0

64.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

237-02111

ぬれ張力試験用混合液 No.65.0

65.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

234-02121

ぬれ張力試験用混合液 No.67.0

67.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

231-02131

ぬれ張力試験用混合液 No.70.0

70.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

238-02141

ぬれ張力試験用混合液 No.73.0

73.0

ぬれ張力試験用

50mL

2,100

mN/m

規

格

容

量

希望納入価格（円）和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）5大気中のアルデヒド、ケトンの HPLC 分析（その 3）
和光純薬工業株式会社

アルデヒドは有害大気汚染物質としクロマトグループ

商品開発担当 吉田貴三子

イソクラティック分析法、② Wakopak

トニトリルで溶出したサンプルのクロて、国内では大気汚染防止法によりホ

WS-DNPH カラムと専用溶離液を用

マトグラムを示しましたが、EPA で規ルムアルデヒド及びアセトアルデヒド

いるグラジエント分析システム、を本制されている 15 成分を 20 分以内に分の 2 成分が優先取組物質に指定され、誌 Vol.66 No.3、No.4 に紹介してきま

離することが可能となり、標準物質、

また悪臭防止法によりアセトアルデヒ

した。グラジエント分析システムは分実試料とも良好に分離し、試料由来のド、プロピオンアルデヒド、n- ブチル

離が難しい DNPH-n- ブチルアルデヒ

妨害物の影響も受けませんでした。

アルデヒド、イソブチルアルデヒド、n-ドと DNPH- イソブチルアルデヒドを

今 回 開 発し た 新 分 析 シ ス テ ム は、

バレルアルデヒド、イソバレルアルデ

含む 16 成分が分離可能という特長を

ヒドの 6 成分が規制の対象になってい

持っていますが、アセトン、アクロレイ

DNPH-n- ブ チ ル ア ル デ ヒ ド と
DNPH- イソブチルアルデヒドの分離ます。また米国では、EPA 等により 15

ン、プロピオンアルデヒドのベースラは達成されないものの、各成分とも成分の測定法が示され、2,4 −ジニト

イン分離が難しい、分析に時間を要す

ベースライン分離が達成されしかも短ロフェニルヒドラゾン（DNPH）誘導体

る、の問題を抱えていました。そこで

時間分析が可能となっています。前回

として GC または HPLC により分析さ今回、分析時間の短縮と分離の改善をまでに紹介した方法と測定目的に応じれています。HPLC 分析法は、GC 法

目的に新分析システムの開発を行いて使い分けていただければ幸いです。

で必要となるさまざまな前処理操作ました。以下分析例として、16 種アル

が不要等の理由から広範に利用され

デヒド-DNPH 混合標準液（和光純薬ています。筆者らのグループでは①製）及び室内空気を DNPH 含浸シリカ

Wakopak WS-II 5C1 8RS を使用した

カートリッジカラムで誘導体化後アセ

3

標 準 液

室内空気サンプル

1
7

2
4
5
3
6
9
10
8

1
11 14
12
13
15

2

5

7

13
14
8

0

5

10

15

20（min.）0

5

10

15

Sample : -2,4-DNPH/
1. Formaldehyde
2. Acetaldehyde
3. Acetone
4. Acrolein
5. Propionaldehyde
6. Crotonaldehyde
7. n-,Iso-Butyraldehyde
8. Benzaldehyde
9. Isovaleraldehyde
10. n-Valeraldehyde
11. o-Tolualdehyde
12. m-Tolualdehyde
13. p-Tolualdehyde
14. Hexaldehyde
15. 2,5-Dimethylbenzaldehyde（0.5[g/ml in CH3CN）

20（min.）Analysis of DNPH-Aldehyde〔HPLC Conditions〕
Column ：Wakopak WS-DNPH II, 4.6x150mm
Gradient ：0-10min. Eluent A 100% → Eluent B 100%,
10-16min. Eluent B 100%6

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

Flow rate：1.0ml/min. at 35℃
Detection：UV360nm 0.032AUFS.
Injection ：10[lHPLC 用ふっ素化シリコン修飾カラム
Wakopak® Fluofix
Wakopak® Fluofix は、含ふっ素化シリコンを高純度球状シリカゲル（純度 99.99%）に修飾した充てん剤 Fluofix を高度な充てん技術によりパックド化された HPLC 用カラムです。
Fluofix は従来から汎用されております炭化水素系修飾充てん剤（C18、
C8 等）と同様の逆相分離モードを基本としていますが、含ふっ素化シリコ

O
CF3
CH3
Si
CF3CF2CF2 C CH2CH2CH2 Si O
O
O
O
CF3
CH3
O Si OHO Si O Si O
Si O
CH3
O
O
O OO
CH3 Si O Si O
Si O SiOCH3O O OHO Si O Si O Si O
CF3
CH3 O
O O O
CF3CF2CF2 C CH2CH2CH2 Si O Si O Si O Si
O
O
Si
CF3
CH3
O
O
O
HO Si OOCH3 O
Si O SiOOO O
CH3 Si O Si
Si O Si OOCH3HO Si O O O
CF3
CH3
O
O Si OSi
CF3CF2CF2 C CH2CH2CH2 Si O
O
O
CF3
CH3

ンの強力なはっ水／はつ油性とその分子構造などから、分析試料によって特異的な分離挙動を示します。
* Fluofix 製品は平成 13 年 7 月 1 日より、当社が製造販売権等すべてを（株）
ネオス
より引き継ぎました。

〔特長〕

ふっ素化シリコン修飾模式図◆ユニークな分離特性
・ふっ素をはじめとするハロゲン原子の認識
・はっ水／はつ油によるシャープなピーク
・剛直なフルオロカーボン鎖による構造認識
・化学的に安定なフルオロカーボンによる高耐久性◆卓越した耐久性
・酸性移動相での長寿命化を実現
高純度球状シリカゲル
110

C2H5

F
F

F

F

F

F

F

F

Variation of retention time (%)

F
F

F
O

F
HN
O

N
H
C2H5

O

90

Fluofix

80

C4
C1

HN
O

100

70

N
H

0

200

400

600

800

1000

Time (h)〔分析条件〕

0

5

10 minFluofix 120E（4.6H × 150mm）

0

10

20

30

移動相：メタノール /0.1%TFA（pH 2.1）=60/40（v/v）
流 速：1ml/min
温 度：40℃
サンプル：ヘキサフルオロベンゼン
インジェクション回数 ： 500 回 /800 時間min

酸性条件下で 800 時間後も安定した性能を維持しております。
C1、C4 カラムと比較すると充分な耐久性を有しております。

ODS（4.6H × 150mm）

移動相：メタノール / 水 = 65/35
（v/v）

充てん剤名

カラムサイズFluofix 120N（ノンエンドキャップタイプ、シリカ細孔径 12nm）

4.6H × 150mm
4.6H × 250mm

Fluofix 120E（エンドキャップタイプ、シリカ細孔径 12nm）

接続ジョイント

容量

希望納入価格（円）

（W）

１本
１本

55,00069,0004.6H × 150mm
4.6H × 250mm

（W）

１本
１本

55,00069,000Fluofix 300N（ノンエンドキャップタイプ、シリカ細孔径 30nm）

4.6H × 150mm
4.6H × 250mm

（W）

１本
１本

59,00073,000Fluofix 300E（エンドキャップタイプ、シリカ細孔径 30nm）

4.6H × 150mm
4.6H × 250mm

（W）

１本
１本

59,00073,000* 上記以外のカラムサイズについては別途お問合せ下さい。
：ウォーターズタイプ*（W）

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

7

酢酸、ぎ酸、りん酸
HPLC 用
本品は低吸光度・蛍光であることを〔規格（りん酸）〕

保証しており、HPLC 分析に最適です。

試験項目
外

規 格 値

観

無色澄明の液体
220nm ： 0.03 以下
240nm ： 0.02 以下
254nm ： 0.02 以下
300 〜 400nm ： 0.01 以下

吸光度（1 → 4）

コード No.

品

蛍光試験

試験適合

水 溶 状

試験適合

含

85.0% 以上

量

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）010-19112

Acetic Acid

高速液体クロマトグラフ用

25mL

3,000

063-04192

Formic Acid

高速液体クロマトグラフ用

25mL

照

162-20492

Phosphoric Acid

高速液体クロマトグラフ用

25mL

3,000

会

18 l キャニスター缶 大入包装品目追加 !!
脱水溶媒
有機合成用
ご好評頂いております、脱水溶媒 18L 大入包装シリーズにアセトニトリル、テトラヒドロフラン（安定剤不含）の二品目を追加しました。
配管に必要な部品も用意しています。当社代理店または当社営業へお問合せ下さい。
〔18l キャニスター缶包装の特色〕

1. 安定した品質 （SUS 密閉容器を使用）
2. 廃棄ビン ゼロ （空容器は回収します）
3. 低価格 （大入包装のため、低価格です）
4. 省スペース （スリム缶を使用、場所を取りません）

コード No.
NEW

NEW

水分含量

容

019-15547

Acetonitrile, Dehydrated

品

名

50ppm 以下

18L

量

希望納入価格（円）照会040-25507

Dichloromethane, Dehydrated

30ppm 以下

18L

照

会

047-25497

Diethyl Ether, Dehydrated

50ppm 以下

18L

照

会

043-25477

N,N-Dimethylformamide, Dehydrated

50ppm 以下

18L

照

会

208-13437

Tetrahydrofuran, Dehydrated（BHT0.03%）

50ppm 以下

18L

照

会

209-13967

Tetrahydrofuran, Dehydrated（no Stabilizer）

50ppm 以下

18L

照

会

205-13447

Toluene, Dehydrated

30ppm 以下

18L

照

会

＊希望納入価格につきましては、当社代理店または当社営業までお問合せ下さい。＊
100ml, 500ml, 3l 包装もございます。ご照会下さい。

8

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

けいそう土、荷電型
試料前処理用本品は、表面にゼータ電位を付加したけいそう土です。けいそう土本来のろ過助剤としての性能に加え、プラスの電荷をもつことにより電気的な吸着力を有することから、エンドトキシン、マイナス電荷の微粒子、微生物などの除去に効果的です。
コード No.
046-28181

品
名Diatomaceous Earth,Charged

規 格
試料前処理用容量

希望納入価格（円）
3,300

100g

〔関連商品〕
粒子径 0.5 〜 1.5mm の顆粒状けいそう土です。
コード No.
042-28281
048-28283

品

名

規

格

容

試料前処理用

Diatomaceous Earth,Granular

量

希望納入価格（円）3,200
15,000100g
1kg

食品分析用試薬（−）- ヒドロキシくえん酸カルシウム標準品
栄養補助食品について、医薬品に（−）- ヒドロキシくえん酸カルシウム HPLC 分析例

H

表示の基準を定めていくように制度整

HO

C

COO

備が進められています。

HO

C

COO

（−）- ヒドロキシくえ ん 酸（別 名：

HCA）は肥満予防としてダイエット食品に汎用されているガルシニアエキ
スの有効成分です。日本健康・栄養食品協会では、ガルシニアエキス食品

H

CH COOHOCH COO

HO

C

COO

H

C

COO

の規格基準を定め、有効成分である（−）- ヒドロキシくえん酸カルシウムを

Ca

Ca

6.491

準じて栄養成分の規格・栄養機能等の

カ ラ ム : Wakobeads T-132-E,
7.8mm × 300mm
カラム温度 : 25℃
溶 離 液 : 水（過塩素酸で pH 2.20 に調整）
流
量 : 0.8ml/min
検 出 器 : UV 210nm
S a m p l e : 本品 0.1g ＋ 10% 過塩素酸 5ml ＋水（→ 100ml）
注 入 量 : 10[lCa

H
(C6H5O8)2Ca3 = 530.43

指標としています。
〔規

格〕

外

観：白色粉末含量（HPLC）：98.0% 以上
コ−ド No.
084-07821

品
名 【別 名】（−）-Hydroxycitric Acid Calcium Salt Standard【HCA Calcium Salt】

規

格

容

量

希望納入価格（円）200mg

高速液体クロマトグラフ用

7,000

Artepillin C, from Propolis
生化学用
アルテピリン C は健康食品プロポリ
ス中に含まれる生理活性物質で、抗酸化作用、抗がん作用等が報告されて
います。
〔規

格〕

含量
（HPLC）：98.0% 以上〔参考文献〕
1）Hayashi, K., Komura, S., Isaji, N.,
Ohishi, N. and Yagi, K.: Chem.
Pharm. Bull., 47,1521（1999）.
2）Aga, H., Shibuya, T., Sugimoto, T.,
Kurimoto, M. and Nakajima, S.:
Biosci. Biotech. Biochem., 58, 945（1994）.

COOH
HO

メタノール溶状：全溶〔保存条件〕
不活性ガス封入・2 〜 10℃・遮光保存

016-19131

10mg

26,000 円

C19H24O3=300.39

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）9ダイオキシン類分析用「多層シリカゲルカラム」作製に ! 2 品目追加
ワコーゲル DX
硫酸ナトリウム
ダイオキシン類分析の各種マニュアル、ガイドライン、JIS（K0311、K0312）等に、多層シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによる試料のクリーンアップ法が記載されています。当社では従来より多層カラム用化学修飾シリカゲルを発売しておりましたが、この度、多層カラムに最適なワコーゲル DX（シリカゲル）と硫酸ナトリウムを新発売しました。
本品は、ダイオキシン類分析適合性試験を実施し、ダイオキシン類が低濃度である事を保証した商品です。化学修飾シリカゲルと一緒に「多層シリカゲルカラ〔ダイオキシン類分析適合性試験〕
ム」の作製にお使い下さい。

項

ワコーゲル DX は粒度が 75 〜 150Fm のため、カラム目詰まりせずにサンプルを精製する事ができます。ダイオキシン類を保証した
シリカゲルですが、ご使用の際には各種分析マニュアルにそってご使用下さい。
コード No.

品

目

ワコーゲル DX

硫酸ナトリウム

ダイオキシン（4 〜 7 塩素化物）

5pg/10g 以下

1pg/10g 以下

ダイオキシン（8 塩素化物）

10pg/10g 以下

5pg/10g 以下

ジベンゾフラン（4 〜 7 塩素化物）

5pg/10g 以下

1pg/10g 以下

ジベンゾフラン（8 塩素化物）
コプラナー PCB ノンオルト（4 〜 6 塩素化物）、
モノオルト（5 〜 7 塩素化物）

10pg/10g 以下

5pg/10g 以下

10pg/10g 以下

5pg/10g 以下

名

規

格

238-01781

Wakogel DX（Silica Gel）

ダイオキシン類分析用

194-12221

Sodium Sulfate

ダイオキシン類分析用

容量

希望納入価格（円）

100g
250g

6,500
3,400

〔関連商品〕
コード No.

規格

容量

希望納入価格（円）167-19251

2% Potassium Hydroxide-impregnated Silica Gel

品名ダイオキシン類分析用

17,000197-11611

10% Silver Nitrate-impregnated Silica Gel

ダイオキシン類分析用

191-11631

44% Sulfuric Acid-impregnated Silica Gel

ダイオキシン類分析用

194-11621

22% Sulfuric Acid-impregnated Silica Gel

ダイオキシン類分析用

100g
100g
100g
100g

17,00017,00017,000ダイオキシン類分析用溶媒
Nonaneダイオキシン類を保証したノナンです。分析試料調製に安心してお使い頂けます。
148-07351

2mL × 59,500 円142-07354

100mL

照

農薬標準品

会

〔品質保証値〕
ダイオキシン類
ジベンゾフラン

4 〜 7 塩素化物

5fg/[l 以下（5ppt 以下）

8 塩素化物

10fg/[l 以下（10ppt 以下）

4 〜 7 塩素化物

5fg/[l 以下（5ppt 以下）

8 塩素化物

10fg/[l 以下（10ppt 以下）

コプラナー PCB

5fg/[l 以下（5ppt 以下）

追加３品目！

Azoxystrobin Standard

Ethoxysulfuron Standard

Terbacil Standard

残留農薬試験用

残留農薬試験用

残留農薬試験用外

外外

観：白色粉末観：白色粉末

溶解性（20℃）：水 0.006g/L、ヘキサン

溶解性（20℃）：水10.5mg/L、アセトン

溶解性（25℃）：水 710ppm、ジメチ ル

0.057g/L、オ ク タ ン-1- オ ー ル
1.4g/L、メタノール 20g/L、アセト
ン 86g/L、アセトニトリル 340g/L、
ジクロロメタン 400g/L

36g/L、酢酸エチル 14.1g/L、メタ
ノー ル 7.7g/L、ジ クロロメタン
107g/L、n- ヘ キ サ ン 0.006g/L、ジメチルスルホキシド＞ 500g/L、トルエン 2.5g/L
CAS No.：126801-58-9

ホルムアミド 33.7g/100g、シクロ

CAS No.：131860-33-8
N
O
CN

N

ソブチル ケトン 13.8g/100g、ブチルアセテート 9.7g/100g、キシレン 6.5g/100g

CAS No.：5902-51-2

OCH3

H3 C

N

O

O S O N C N
H
H
O
O

OCH3

H3CO

200mg

C15H18N4O7S ＝ 398.39

15,000 円

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

054-06821

50mg

14,000 円

O

N
N

Cl

N

C(CH3)3O

OCH3

C22H17N3O5 ＝ 403.39

019-19001

ヘキサン 22.0g/100g、メチルイH

O CH2CH3

O

10

観：白色結晶性粉末

C9H13ClN2O2 ＝ 216.66

209-15341

200mg

12,000 円

水中の大腸菌群・E.coli 検査試薬

AquaTest

財団法人 東京顕微鏡院 立川研究所 山縣することはできませんし、市販品は他の方法に比べてかなり高価です。このため、1993 年に上水試験法にこの方法が収載された後も、その迅速性や簡便性にも関わらず、従来の LB-BGLB
が検査の主流であり続けました。
一方で食品検査などでは大腸菌群の検出に B- ガラクトシダーゼの基質として、X-GAL（5- ブロモ-4- クロロ-3インドリル-B-D- ガラクトピラノシド）を添加した培地が汎用されています。この X-GAL と大腸菌検出用の MUG で構成された上水試験用の培地の一つが XM-10 です。今年改訂された上水試験法では、XM-10 をはじめ 4 社の
X-GAL・MUG 法にもとづく特定酵素
基質培地が新たに収載されました。
今回、XM-10 は組成をさらに改良して損傷を受けている菌の発育支持能力を高めた、AquaTest 10 となりました。
図 1、2 に大腸菌群を構成する代表
cloacae と K．pneumoniae
的な菌、E．
の標準菌株から調製した菌液での試
験結果を示します。菌の濃度はおよそ102 個 /mL ですが、菌に損傷を与える
ために約 0.15mg/L の塩素で 0 〜 300
秒処理してあります。塩素処理時間の延長にしたがって陽性管数はいずれの培地でも減少しますが、AquaTest
10 は MMO-MUG とほぼ同じ挙動を示しました。
また、水道の原水となる河川水 5 種を用いての検討結果を表 1 に示します。
180 秒の塩素処理の前後で各試料 2回ずつ測定し、5 本法で求めた MPNで表しました。試料により各方法での数値が上下しますが、MMO-MUG と比べて 2 回の測定がともに 1 桁以上数
値が乖離するケースはなく、この 2 法で得られる結果に有意差はないと考えられます。
X-GAL を基質に用いる培地では、呈色が青色であるため MMO-MUGと異なり試料が持つ背景色の影響を受け難い特徴があります。また、Aqua
Test 10 では大腸菌による蛍光を検出する能力に優れていることが示唆されています。詳しくは次号をご覧下さい。

30

30
AquaTest 10
MMO-MUG
LB

AquaTest 10
MMO-MUG
LB

20

陽性管数

陽性管数

上水（飲料水）が飲用に適当であるか否かの判断基準の一つに大腸菌群の有無があります。水道法には水質基準項目として 46 項目が定められていますが、最も重視される 10 項目（省略不可項目）には微生物学的な指標が 2つ含まれています。一つは生菌数、もう一つが大腸菌群です。水質基準では大腸菌群は検出されてはならないとされています。一般に大腸菌群とは「グラム陰性、無芽胞の桿菌で、乳糖を分解して酸とガスを産生する好気性
または通性嫌気性の菌」と定義されています。これを検査する方法として
LB-BGLB 法が長年使われてきています。この方法では最終的に結果が確定するまでに 4 〜 7 日を要する場合もあり、直ぐにでも結果が必要な場合には大きな問題となります。このため、1992 年に特定酵素基質培地法が追加採用されましたが、ここでいう方法とは
MMO-MUG 法に限定されています。
大腸菌群を構成する細菌は B- ガラ
クトシダーゼを共通して産生するため、培地を構成する ONPG（o- ニトロフェニル-B-D- ガラクトピラノシド）を分解して黄色の o- ニトロフェノールを産生します。さらに大腸菌には B- グルクロニダーゼが存在するため MUG（4- メ
チルウンベリフェリル-B-D- グルクロニド）を分解して、青紫色の蛍光を発す
る 4- メチルウンベリフェロンを産生します。MMO-MUG 法では培地を構成する「ソラニウム」を入手することができないため、我々が培地を自ら作製

文夫

20

10

10

0

0
0

15

30

60

120

0

300

15

30

60

120

300

塩素処理時間（秒）
図2. K.pneumoniaeを用いた比較

塩素処理時間（秒）
図1. E.cloacaeを用いた比較

図 1、2 E．cloacae と K．pneumoniae の約 102 個 /ml の菌液を AquaTest 10、MMO-MUG、LB の各培地 30 本に10ml ずつ投入し、37℃ 24 時間後（LB は 48 時間後）に陽性となった培地数を表す。横軸は菌を約 0.15mg/l の濃度の塩素で処理した時間を表す。

表 1. 5 種の河川水を用い、塩素処理 180 秒の前後について 5 本法による MPN を求めた。判定は 37℃ 24 時間後（LB は 48 時間後）に行なった。測定は各試料につき 2 回ずつ行
ない、残留遊離塩素濃度はおよそ 0．2mg/l に調製した。

試料番号
塩素処理前後培地種
AquaTest 10
MMO-MUG
LB

試料 1
試料 2
試料 3
試料 4
試料 5
塩素処理前 塩素処理後 塩素処理前 塩素処理後 塩素処理前 塩素処理後 塩素処理前 塩素処理後 塩素処理前 塩素処理後
1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目 1 回目 2 回目
11
22
2

22
14
1.8

1.8
1.8
1.8

1.8 24000 14000
1.8 3300 4900
1.8
49 240

46
46
23

13
130
13

170
920
33

350
540
79

22
540
33

64
540
23

120
540
13

24
350
1.8

3.6
13
1.8

4
23
1.8

540
79
7.8

7000
170
20

2
2
1.8

24
6.8
1.8

水中の大腸菌群・E. coli 検査用培地（XGal-MUG 培地（ピルビン酸ナトリウム添加））
コード No.
305-09421
302-09431

メーカーコード
AT-10
AT-50

品
AquaTest 10
AquaTest 50

名

容 量（10mL 用× 10 本）
× 20（50mL 用× 10 本）
× 10

希望納入価格（円）28,00040,000※サンプルご希望の方は、資料請求カードにてお申込み下さい。
和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）11横河全窒素全りん測定装置専用試薬
従来、閉鎖性の高い海域や、水の循環の悪い湖沼では、富栄養化の防止を目的として、排水中の化学的酸素要求量（COD）
について総量規制が行われてきました。しかし、現在でも赤潮や青潮が発生するなどなお一層の水質改善が求められております。このため、平成 13 年度より実施が予定されている第５次総量規制では、COD に加えて全窒素及び全りんの総量が規制される見通しです。
横河 NP1000 及び NP500 全窒素全りん測定装置用試薬は横河電機（株）製 NP1000 全窒素全りん自動測定装置及び NP500
全窒素全りん自動測定装置に最適な専用試薬です。横河 NP1000 専用試薬は簡単な調液をしていただいた後、装置にそのままセットしてご使用いただけます。また、横河 NP500 専用試薬はすべて調液済みの試薬ですので、そのまま装置の試薬専用タンクに移してご使用いただけます。
＊試薬の種類及び使用方法等詳細につきましてはお問合せ下さい。

横河 NP1000 全窒素全りん測定装置用
コ−ド No.

品

名横河 NP500 全窒素全りん測定装置用
容033-18587

キャリア液187-01747

反応液 1184-01757

反応液２181-01767

反応液３188-01777

反応液４162-20637

0.04mol/l ペルオキソ二硫酸カリウム溶液

019-19165

0.6mol/l L（+）- アスコルビン酸溶液

量 希望納入価格（円）

20L
10L
10L
20L
19.5L
10L
500mL

コ−ド No.

品

9,000

143-07421

NP500 A 液

8,000

140-07431

NP500 B 液

8,000

147-07441

NP500 C 液

16,000144-07451

NP500 D 液

6,000

141-07461

NP500 E 液

15,000148-07471

NP500 F 液

名容

量 希望納入価格（円）

6L
1L
3L
1L
1L
1L

13,000
3,500
4,000
4,000
5,000
2,500

5,000

〔関連商品〕
コ−ド No.
147-07321
160-19241

窒素標準液
りん標準液

品 名
N：1,000mg/l
P：1,000mg/l

内 容
処方：KNO3 in water
処方：KH2PO4 in water

規 格
排水試験用
水質試験用

容

量

50mL
50mL

希望納入価格（円）
3,500
3,700

完全長 cDNA の回収率を向上

ReverScript II【MMLV Reverse Transcriptase, RNaseH-】
遺伝子研究用本酵素は Moloney murine leukemia virus の RNA 依存性 DNA ポリメラーゼで、遺伝子工学的修飾によりポリメラーゼの最適な機能を保持したまま RNaseH 活性を不活化し、E.coli で発現したものです。37-55℃の範囲で反応が可能であり、完全
長 cDNA の回収率を増加させます。
〔応用例 2：長鎖サンプルの検出〕〔応用例 1：反応温度の影響〕
マウス腎臓 totalRNA をテンプレートとして、GAPDH（1,041bp）を各反応温度で転写後、PCR を行った。

M4

（42℃）

（50℃）

（55℃）

本品 A 社

本品 A 社

本品 A 社マ ウ ス 腎 臓 totalRNA を テ ン プ テ ー トとして、Insulin receptor（3,875 bp）、Insulin like growth factor Ⅱ receptor（8,210 bp）及びdynein（13,603 bp）断片の RT-PCR を行った（リバースクリプトⅡの反応温度 42℃）。
IR IGF II R M3

dynein M1 M3

0.8% アガロース

1% アガロースGAPDH：Glyceraldehyde-3-phoshate Dehydrogenase
M4：Marker4（HX174/HaeIII digest：コード No. 315-00664）

形

活

12

IR：Insulin receptor
IGF II R：Insulin like growth factor II receptor
M1：Marker1（E /Hind III digest：コード No. 316-00454）
M3：Marker3（E /Hind III ＋ E /EcoR I digest mixture：コード No. 316-00574）,
状： 50mmol/L Tris-HCl（pH 7.5）単位の定義：テンプレートプライマーと200mmol/L NaCl, 0.1mmol/L EDTA, 1mmol/L DTT,
0.1% TritonX-100, 50%
Glycerol

して poly（A）
・oligo（dT）

性：ラベルに記載

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

を 用 い、37℃ 10 分 間 に

1nmol の dTTP を 酸 不 溶
性画分に取込ませる酵素
量を 1unit とする。

※本品には 10 × Reaction Buffer（500FL）と100mmol/L DTT Solution（500 FL）が添付されています。
（備考）＊ 10 × Reaction Buffer の組成
500mmol/L Tris-HCl（pH 8.3）,
400mmol/L KCl, 70mmol/L MgCl2

187-01781

10,000 units

25,000 円

強力な RNase 阻害剤 [RNase Inhibitor,（Super）] を含んだ RNA ポリメラーゼ
SP6 RNA Polymerase with RNase Inhibitor,（Super）
T3 RNA Polymerase with RNase Inhibitor,（Super）
T7 RNA Polymerase with RNase Inhibitor,（Super）
遺伝子研究用多種の RNase を阻害する RNase 阻

性 ：約 20units/FL（ロット毎に

活

状 ：20mmol/L りん酸カリウム

形

害剤（スーパー）を含む SP6, T3, T7

実測値表示）, 100 m
緩 衝 液（pH 7.7）

RNA ポリメラーゼです（阻害効果は
下表参照）。RNase 阻害剤（スーパー）を含んでいるため、RNase のコンタミ単位の定義 ：37℃、60 分で不溶性物質

mol/L NaCl, 1mmol/L
EDTA, 1.0% CHAPS,
10 mmol/L DTT, 50 % グ
リセロール（v/v），RNase
阻 害 剤（ス ー パ ー）0.5
unit/FL

中にヌクレオチド三りん酸

1nmol を取込むのに必要な酵素量を 1unit とする。

等影響を受けずにノーザンハイブリダ
イゼーション用 RNA プローブ他の作製が可能です。
コード No.

品 名
SP6 RNA Polymerase with RNase
548-01591
Inhibitor,（Super）
T3 RNA Polymerase with RNase Inhibitor,
541-01601（Super）
T7 RNA Polymerase with RNase Inhibitor,
548-01611（Super）※各商品には 10 × Reaction Buffer 添付

規

格

容

量

希望納入価格（円）遺伝子研究用1,000 units

16,000

遺伝子研究用1,000 units

9,000

遺伝子研究用5,000 units

15,000〔関連商品〕

RNase Inhibitor,（Super）
コード No.
543-01301
549-01303

品

名規

RNase Inhibitor,（Super）

格

容

遺伝子研究用量2,500units
10,000units

希望納入価格（円）14,00036,000〔RNase Inhibitor,（Super）他の阻害比較〕
コード No.
阻害剤名
本品
189-00761
RNase Inhibitor, Human Placenta
547-00601, 543-00603
RNase Inhibitor, Human Placenta, recombinant
542-00911
RNase Inhibitor（Antibody）○：阻害効果有り

RNase A

RNase B

RNase C

RNase Ⅰ

RNase T1

RNase T2

RNase H

RNase S

○

○

○

○

○

未確認

×

未確認

○

未確認

未確認

×

×

未確認

未確認

未確認

○

未確認

未確認

×

×

未確認

未確認

未確認

○

○

○

×

×

×

×

未確認

×：阻害効果無し（備考）上記 RNase 以外に RNase Ⅲ，RNase CL，RNase D，RNase P，RNase U2 が知られているが、阻害効果は未確認。

100bp DNA Step Ladder（100-1.5kbp）
遺伝子研究用本 品 は、100, 200, 286, 400, 500,
600, 717, 800, 900, 1.0k, 1.5k 塩基の

11 本のラダーです。2.0% アガロースに添加し、EtBr 等で染色する事によりクリアーなバンドを観察する事ができます。特に 500bp のバンドを倍の濃さ

1.5kbp性状 ：10mmol/L Tris-HCl（pH8.0），1mmol/L EDTA，
100 mmol/L NaCl
＊ 本品には、6 × Loading Dye（30 % Glycerol, 30mmol/L EDTA，0.03% Bromophenol Blue，0.03% Xylene Cyanol）が添付されています。

500bpになるよう調製しています。
546-01651

30Fg

14,000 円

2%アガロースゲル

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）13

プラスミド DNA・PCR 産物・RNA の精製 , アガロースゲル DNA の回収に
Gesellschaft für Biotechnik & Biodesign mbH

Invitek 社の安価な高性能核酸抽出・精製キット

Invitek 社が提供する InvisorbTM ACNAE（AntiChaotropic Nucleic Acid Extraction）技術は、カオ
トロピック塩を使用しない新しい核酸抽出法です。
血液、組織あるいは糞便のような、複雑な生物サンプルからでも抽出可能で、最適化された条件下で、シリカなどの修飾担体へ核酸を結合させます。また、専用の修飾担体を使い分けることにより、異なる種類の核酸の選択的結合が実現可能になりました。
〔特〔抽出・精製の基本操作〕
以下に示される溶解、結合、洗浄、溶出の確立された
マルチステップ精製によって、必要な DNA や RNA が得られます。
スピンカラムフォーマット
( プラスミド DNA 精製の場合 )96 ウェルプレートフォーマット
( プラスミド DNA 精製の場合 )サンプルを溶解

サンプルを溶解長〕◆ スピンカラム法、吸引法、バッチ法、96 ウェル
プレート法による抽出・精製法◆ カオトロピック塩非存在下で、修飾された担体に核酸を結合◆ 最適化されたバッファーにより核酸結合の選択性が高い◆ 核酸を含むすべてのサンプルから抽出・精製可能◆ 短時間で簡単な操作◆ 再現性よく高回収率で抽出・精製◆ コンタミ物質を完全に除去◆ 毒物・有機溶媒非使用の安全な手法◆ DNase 消化なしで RNA を精製

前ろ過( 吸引あるいは遠心 )スピンフィルター付
カラムにアプライwaste

結合条件の調整DNA をフィルター膜へ結合
DNA をフィルター膜へ結合( 吸引あるいは遠心 )遠心結合 DNA を洗浄
結合 DNA を洗浄( 吸引あるいは遠心 )遠心DNA を溶出( 吸引あるいは遠心 )DNA を溶出※製品内容の詳細については、Invitek 社カタログをご覧下さい。

〔InvisorbTM Spin Plasmid Mini Kit を用いたプラスミド DNA の精製〕
InvisorbTM Spin Plasmid Mini Kit を用いてプラスミド DNA （vector pGEM、 in E. coli strain
DH5 α）を精製した後、Hind III で消化した。
レーン 1 ：
1kbp ラダーマーカー
レーン 2, 4, 6, 8, 10 : 消化していないプラスミド DNA
レーン 3, 5, 7, 9, 11 : Hind III で消化したプラスミド DNA
制限酵素処理はそれぞれ 1[g のプラスミド DNA を用いて行った。
消化及び未消化の DNA を、1% TAE アガロースゲル電気泳動により分析した。
コード No. メーカーコード品
名
包 装
希望納入価格（円）適用サンプル■シングルチューブ（スピンカラム法／吸引法／バッチ法）■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■●プラスミド DNA の抽出・精製
プラスミドキット
50 回分
504-32423
10101103
9,000
バクテリア培養液 0.5-2.0ml
InvisorbTM Spin Plasmid Mini Kit
250 回分
502-32424
10101104
33,500501-32433

10101202

InvisorbTM Plasmid Midi Kit（Vacuum Format）

24 回分

28,000508-32443

10101302

InvisorbTM Plasmid Maxi Kit（Vacuum Format）

12 回分

18,000InvisorbTM Spin PCRapid Kit

50 回分
250 回分

10,00036,000InvisorbTM Spin DNA Extraction Kit

50 回分
250 回分
100 回分
250 回分

10,00036,00013,50023,500バクテリア培養液（高コピー）10-25ml
バクテリア培養液（低コピー）100ml
別売の InvisorbTM 96 Vacuum Manifold が必要
バクテリア培養液（高コピー）100ml
バクテリア培養液（低コピー）250ml
別売の InvisorbTM 96 Vacuum Manifold が必要● DNA 断片の抽出・精製
PCR 産物精製キット
505-32453
503-32454

10202003
10202004

PCR 産物，酵素反応液 100[lゲル DNA 抽出キット
502-32463
500-32464
509-32473
507-32474

10201102
10201103
10201002
10201003

InvisorbTM DNA Extraction Kit（Batch Format）

TAE/TBE アガロースゲル 400mg
TAE/TBE アガロースゲル 400mg〔次頁へ続く〕14

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

コード No. メーカーコード●ゲノム DNA の抽出・精製
全血キット
506-32483
504-32484
503-32493
501-32494
506-32503
504-32504
503-32513
501-32514

10311002
10311003
10311103
10311104
10311202
10311203
10311302
10311303

品

名InvisorbTM Spin Blood Mini Kit
Invisorb

TM

Spin Blood Midi Kit

Invisorb

TM

Spin Blood Maxi Kit

InvisorbTM Blood Giga Kit（Batch Format）

包装

希望納入価格（円）適用サンプル

50 回分
250 回分
50 回分
250 回分
25 回分
50 回分
50 回分
100 回分

17,00060,00035,000157,000
35,00063,00054,00097,00050 回分
250 回分
25 回分
50 回分

15,00067,00025,00045,000

新鮮・凍結動物組織，マウスの尾，パラフィン包埋組織
1-40mg

新鮮・凍結・乾燥全血，血清，バフィーコート 1-200[l
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，バフィーコート 200[l-2ml
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，バフィーコート 1-10ml
新鮮・凍結・乾燥全血，血清，バフィーコート 5-20ml

動物組織キット
500-32523
508-32524
507-32533
505-32534

10321002
10321003
10321102
10321103

InvisorbTM Spin Tissue Mini Kit

10331003
10331004

InvisorbTM Spin Cell Mini Kit

50 回分
250 回分

15,00067,000培養細胞，新鮮・凍結酵母，バクテリア 2×106 個
血漿，血清 100[lInvisorbTM Spin Plant Mini Kit

50 回分
250 回分
25 回分
50 回分

16,00073,50025,00045,000

新鮮・凍結植物組織 100mg（湿重量）
乾燥植物組織 60mg
新鮮・凍結植物組織 500mg（湿重量）
乾燥植物組織 300mg

50 回分
250 回分
50 回分
250 回分

17,00067,00022,00073,500InvisorbTM Spin Tissue Midi Kit

新鮮・凍結動物組織，マウスの尾，パラフィン包埋組織
30-100mg

細胞キット
504-32543
502-32544

植物組織キット
501-32553
509-32554
508-32563
506-32564

10371002
10371003
10371102
10371103

InvisorbTM Spin Plant Midi Kit

食物キット（動物性 & 植物性）
505-32573
503-32574
502-32583
500-32584

10361002
10361003
10361102
10361103

InvisorbTM Spin Food Kit I
Invisorb

TM

Spin Food Kit II

動物性の新鮮・加工・保存食品 40mg
植物性の新鮮・加工・保存食品 40mg

糞便 DNA キット
509-32593
507-32594

10381002
10381003

InvisorbTM Spin Stool DNA Kit

50 回分
250 回分

25,000110,000

新鮮・凍結糞便 200-300mg

10351002
10351003

InvisorbTM Spin Swab Kit

50 回分
250 回分

17,50067,000スワブ（口内，鼻内，咽頭，目）2×105 個細胞
唾液 100[l25 回分
100 回分
25 回分
100 回分
250 回分

9,000
25,0009,000
25,00050,000

新鮮・凍結動物組織，マウスの尾，パラフィン包埋組織
0.5-40mg

50 回分
100 回分

22,00039,500

法医学的サンプル（血痕，歯，骨，毛根，精子，チューインガ
ム，切手など）

50 回分
250 回分
25 回分
50 回分

29,500118,000
14,50026,000

新鮮培養細胞 1×106 個

新鮮培養細胞 1×107 個
新鮮酵母 1×109 個，バクテリア 5×107 個
新鮮培養細胞 2.5 × 107-1×108 個
新鮮酵母，バクテリア

スワブキット502-32603
500-32604

ゲノム DNA キット（組織 & 細胞）
509-32613
507-32614
506-32623
504-32624
500-32626

10321202
10321203
10331102
10331103
10331104

InvisorbTM Genomic DNA Kit II（Batch Format）

10341002
10341003

InvisorbTM Forensic Kit（Batch Format）

InvisorbTM Genomic DNA Kit III（Batch Format）

培養細胞，新鮮・凍結酵母，バクテリア 2×106 個
血漿，血清 100[l

法医学キット503-32633
501-32634●ゲノム DNA ／ Total RNA の並行抽出・精製
細胞 DNA/RNA 並行分離キット
500-32643
508-32644
507-32653
505-32654

10704002
10704003
10703002
10703003

InvisorbTM TwinSpin Cell Mini Kit
InvisorbTM TwinPrep DNA/RNA Kit（Batch Format）

新鮮培養細胞 5×106 個
新鮮動物組織 50mg

● Total RNA の抽出・精製
細胞 RNA キット
504-32663
502-32664

10605002
10605003

InvisorbTM Spin Cell RNA Mini Kit

50 回分
250 回分

22,00094,000501-32673

10605102

InvisorbTM Spin Cell RNA Midi Kit

25 回分

35,00010608002
10608003

InvisorbTM Spin Plant RNA Mini Kit

25 回分
50 回分

14,50026,500

新鮮植物組織 100mg
新鮮植物細胞，糸状菌 1×107 個

10601003
10601004
10602003
10602004

InvisorbTM RNA Kit I（Batch Format）
InvisorbTM RNA Kit II（Batch Format）

50 回分
100 回分
50 回分
100 回分

13,00023,00018,00032,000真核細胞 102-103 個，酵母，バクテリア 103-104 個
血漿，血清 100[l，組織 0.5-1mg
真核細胞 106-108 個，酵母，バクテリア 105-108 個
血漿，血清 500[l，組織 5mg-1g

植物 RNA キット
508-32683
506-32684

RNA キット
505-32693
503-32694
508-32703
506-32704

エンテロウイルス RNA キット

50 回分
25,000
糞便 100mg
100 回分
45,000■ 96 ウェルプレート ■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■
プラスミドキット／吸引法
バクテリア培養液 0.5-2.0ml/well
2 × 96 回分
504-32761
70101102
InvisorbTM Plasmid HTS 96 Kit/V - Starting Kit
98,000
1 × 96 回分
501-32771
70103101
35,000バクテリア培養液 0.5-2.0ml/well
2 × 96 回分
507-32773
70103102
60,000InvisorbTM Plasmid HTS 96 Kit/V
4 × 96 回分 108,000
505-32774
70103103
別売の InvisorbTM 96 Vacuum Manifold が必要
24 × 96 回分 540,000
501-32776
70103104
PCR 産物精製キット／吸引法
PCR 産物，酵素反応液 200[l2 × 96 回分
506-32841
70211102
InvisorbTM PCR HTS 96 Kit/V - Starting Kit
87,000
1 × 96 回分
503-32851
70213101
24,000PCR 産物，酵素反応液 200[l2 × 96 回分
509-32853
70213102
42,000InvisorbTM PCR HTS 96 Kit/V
4 × 96 回分
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70213103
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2 × 96 回分
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1 × 96 回分
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70613101
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2 × 96 回分
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80,000InvisorbTM RNA HTS 96 Kit/V
4 × 96 回分 145,000
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24 × 96 回分 790,000
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和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）15

実験動物における病理組織標本の作製について
エーザイ株式会社 薬理安全性研究所 開発安全性研究部 福田種男

臨床面での病理検査は主に、手術時から予後判断など患者と密接に関係しており、患者個人の診断に供される目的が主である。一方、動物実験に

臓器
（摘出）

おける研究は、患者様を初めとする
人々の健康・福祉などの為の薬（医薬、（生の材料）
固定

薬粧、農薬関連）の開発での貢献が主であり、開発された薬が直接的、間接的に人体に影響を及ぼす以上、動物実験での開発品の安全性を主とする
評価は、その信頼性が非常に重要となる。この安全性試験などの評価では、

ホルマリン（一般）
ブアン, FSA＊1）（精巣など）
GF ＊2）（眼球）切り出し
PLP ＊3）（組織化学）（固定後の材料）
包埋（一般にはパラフィン）

凍結

実験中の動物の症状観察、血液や尿などのいわゆる臨床検査および解剖して摘出した多くの臓器による病理検査が総合的に行われ、中でも動物実

薄切
染色・封入

験の最後の段階である病理検査では、病理観察者による評価が重要となる。
実験病理に携わる病理観察者に対しては、日本毒性病理学会による専門家の認定制度があり、人材育成が図られている。一方、実験動物材料での組織標本作製手順は、基本的にはヒト材料での手順と同じであるが、動物実験

図 1．実験動物における病理組織標本の作製手順
実験動物では組織の自己融解が比較的早いので、摘出後は速やかな固定が望まれる。一般には 10% 中性緩衝ホルマリンが使われるが、精巣および眼球の固定や組織化学（免疫抗体法、
in situ hybridization など）を目的とする場合は、より良好な組織標本とするため、特殊な固定液が使われる。凍結手順は、目的により未固定材料からと固定材料からの場合がある。
＊1） FSA：Formalin,Sucrose,Acetic acid＊2） GF：Glutaraldehyde Formaldehyde＊3） PLP：Periodate-Lysine-Paraformaldehyde

では、一般に対照群と実験群の比較に16よる評価から、一度に多量の組織標本

べ、実験動物のそれは小形にも係わらリン液を使用するなど努力がされていを、しかも均一な状態で作製する必要ず、往々にして固定不良に成りがちでる。マイクロウェーブを使用した固定がある。正しい病理学的評価を得るたある。これは、組織・細胞および結合促進の報告もされている。

めには、 質の高い 組織標本の恒常的織など間質成分を含めた構成の粗、【脱水・脱脂】パラフィン浸透のためな提供が望まれることから、その標本

密（一般に実験動物組織は密）さなどの臓器・組織の脱水〜脱脂剤として、作製に従事する者（病理技術者）の不から、固定液の浸透性が影響している

一般には純エタノールの使用が主流

断の努力が必要である。病理技術者のかも知れないが、特に実験動物の場であるが、最近、エタノール濃度を下のこうした精進の手助けとして、実験

合、その浸透促進策を追求しながら現げ、他のアルコールを混合させた病理

病理組織技術研究会があり、日頃の研在に至っている。病理組織標本の良し

組織処理専用の脱水剤が数社から市究成果を発表したり、病理技術の切実

悪しの要因としては、組織標本作製の販されており、我々は動物材料においな疑問や問題を提起して解決に向か

全行程の一つ一つが 重要であるが、て純エタノールとの比較を行ったが、う場として運営されている。さらに、実中でも初期固定が 最も重要である。

いずれも結果として遜色はなかった。

験動物の組織標本作製に携わる病理

従って、臓器に『割』を入れたり、振盪

【包埋】包埋するパラフィンは、随分技術者の人材育成として、日本毒性病

したりして固定液浸透の早期促進に努

昔は粗雑なものが多く、そのままでは

理学会の後援を得た『実験病理組織技める必要がある。そのため、固定液の組織への浸透力不足を生じたり、薄切術士』の認定制度がある。

頻繁な交換や、ホルマリン液の濃度を時、パラフィンの粘り不足で本来の切【固定】
ヒトの臓器・組織の固定に比高めたり、アルコール類を含むホルマ

片形成に苦慮し、技師が自分で適当

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

（経験に裏打ちされた量）に蜜を添の場合と大きく異なる操作はなく、臨製出来るようになった最近では、組加するなど改善のため非常に苦労し床材料での染色方法が多いに参考に

織・細胞の形態を保ちながら mRNAて調製していた。しかし、最近は組織なっている。

レ ベ ル の 局 在 を 検 索 す る in situ

浸透性に優れたパラフィンが発売され動物実験では、特に新鮮材料の採

hybridization も、動物実験におけるて、手軽に使用できるようになった。

取が容易であることから、特殊な染色

毒性発現の機序解明上、しばしば用い【薄切】薄切では、1 本刀で数個のパの他、酵素組織化学や免疫組織化学

られるようになってきている。

ラフィンブロックを薄切しては数時間などの研究が導入されることが多い。

最後に、最近の環境問題から、ホル研磨するなどの苦労から、替え刃の開何れの研究も繊細な組織構造の追求

マリンやキシレンが注目されているが、発でこれは一変した。1 本刀時代に比と共に、細胞内の目的とする物質の局

病理組織標本作製上、主要な処理液

べ、比較的硬い組織ブロックなどから在を把握（酵素反応や免疫抗体反応

であるだけに代替え品も難しく、常用も、均一な厚さの切片が作製出来るよなど）するもので、これらの目的物はする上で取り扱い者への影響や、使用うに成ったこと、また、ミクロトーム刀

往々にして構築が崩れやすかったり、後の処理方法や処理装置の開発などとして替え刃の普及により薄切経験の微量で溶出しやすいため、局所での今後の動向が注目される。

浅い技師でも容易に短時間で切片作

完全な保持、即ち固定条件が最も重以上、何れにしても実験動物におけ製が可能となり、効率的に安定した染要である。また、酵素組織化学的染色る病理組織標本の作製は、基本的な色標本が出来るようになった。

では、殆どが新鮮材料での凍結切片

手技はヒト材料での標本の作製と殆ど【染色】染色液は色素から調製するであり、基質を用いた反応原理である

同じである。しかし、固定、脱水・脱脂、時代から、調製済み品の普及に代わっため、動物材料でも特に問題にはなら

パラフィン包埋および染色の各処理時てきた。ただ、自分達で調製することない。しかし、免疫組織化学的染色間については、動物種や処理数などにで自ずと、染色液の各成分の熟知と、（免疫抗体法）において、以前はヒト抗相応しての工夫が必要であり、そのノ各成分が染色目的に果たす役割を把原に対する抗体の市販が殆どで、実験

ウハウは各施設、技術者各位の経験

握出来、染色不良の原因追究と対策

動物に対する抗体の入手は難しく、動で行われているのが現状である。

が講じれる事が多い。市販品で手軽に物実験での免疫抗体法では、ヒト抗体〔参考文献〕

染色が出来る様に成った反面、その染を使用する場合、実験動物との交差性

色液の成分と性状の把握が不十分だを確認しながら行ったり、多くの場合

1）水平敏知：マイクロウェーブ固定法，生体の科学 42 1991
2）榎本眞，林裕造，田中寿子：実験動物の病理組織，㈱ソフトサイエンス社 ,19813）田所衛，石川喜美男 他：実践病理組
織細胞学カラー図鑑［肉眼像・組織像・
細胞像］. HBJ 出版局, 1990
4）水口國雄，石川喜美男，三瓶接子 他：
組 織 アト ラ ス 〜 正 常 と 病 変 〜 .
Medical technology. 医歯薬出版㈱5）前川昭彦，林裕造：毒性試験講座 5 毒性病理学，㈱地人書館 1991
6）伊東信行，林裕造：カラーアトラス実
験腫瘍病理組織学，㈱ソフトサイエン
ス社 1987
7）佐野豊：組織学研究法（第 5 版），南山堂，19798）日本病理学会編：病理技術マニュアル
3，医歯薬出版㈱，1981
9）野村慎太郎 他：in situ ハイブリダ イ
ゼーション，脱アイソトープ実験プロト
コール① DIC ハイブリダイゼーション，
秀潤社 1994
10）阿部寛，古川文夫，尾崎善孝，葛西
久 芳：実 験 動 物 の 組 織 標 本 作 製，
Medical Tech. 28（12）, 2000
11）阿部寛，古川文夫，尾崎善孝，葛西久芳：実験動物の組織標本作製（1,2,3），
Medical Tech. 29（2,4,5）, 2001と、染色不良となった際の解析に苦慮

は染色を断念するしかなかった。しかする事がある。最近は多くの市販品がし最近では、実験動物に対する抗体も開発・販売されており、随分便利に多く開発・市販されだし、反応手技もなったが、安易な使用は慎み、保存剤

ABC 法を基盤とした高精度な改良法

や成分である色素の濃度などを調査や簡易法の開発で、効率的な技術改して性状を十分に把握し、注意深い使善がなされ、その結果の判定精度も数用から本来の美しい染色標本に仕上段に向上してきた。ただ注意点として、げることが必要である。実験動物のホ

免疫抗体法での判定には、可能な限り

ルマリン固定材料では、線維系やホル陽性対照を準備すべきである。また、

モン分泌細胞などの特殊な染色を行

正確な反応結果を得るためには、例えう場合、ピクリン酸系固定液（例えばばホルマリン系固定の場合、マイクロブアン液）で染色前に媒染処理を行う

ウェーブやオートクレーブでの反応前事がある。ピクリン酸は、組織内タン処理が有効である場合が多い。更に、パクの凝固作用が強く、特に糖タンパ

パラフィン包埋ブロックの作製においクやヒアルロン酸の多い疎性結合組織ても、熱による抗原の失活を最小限になどの固定に有効である。また、過マ

くい止める努力が必要で、組織への浸ンガン酸カリウム液（酸化）とシュウ酸

透・包埋に使用するパラフィンの融点（還元）などを使い染色の前処理をすの低いものの使用が推奨されるが、こる等の工夫をして綺麗な染色結果をの場合、薄切時に包埋ブロックを冷却経験している。一般には、染色においする必要が生じるだろう。

て動物材料だからといってヒト材料でまた、非放射性プローブが容易に作

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

17図 2. ラット 膵臓
10% リン酸緩衝ホルマリン固定 パラフィン切片

18

H.E 染色図 3. ラット 脳10% リン酸緩衝ホルマリン固定 パラフィン切片

図 4. ラット 膵臓（ラ氏島）
10% リン酸緩衝ホルマリン固定 パラフィン切片
免疫抗体二重染色（インスリン・グルカゴン）

図 5. ラット 肝臓
10% リン酸緩衝ホルマリン固定 凍結

図 6. ラット 膵臓（ラ氏島）
10% リン酸緩衝ホルマリン固定 パラフィン切片
in situ hybridization DIG 標識インスリン図 7. ラット 肝臓（生凍結）
Adenoshine Triphosphatase: Wachstein-Meisel 法

図 8. ラット 胃
4%EDCD1＊4）及び 4%PFA＊5）二重固定 パラフィン切片 ヒスタミン＊4）
EDCD1：1-ethyl-3（3-dimethyl-aminopropyl）carbodiimide＊5）
PFA：Paraformaldehyde

図 9. ウサギ 腎臓（糸球体）生凍結 FITC 標識 蛍光抗体法（IgG）

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

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（25℃）
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和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

19

第 5 回 非上皮性腫瘍（2）脂肪組織の腫瘍
良性腫瘍のものは、脂肪腫といわれ、成熟した脂肪細胞よりなる。一般的に腫瘍細胞の集団は幅の狭い結合組織
によって囲まれる。一方悪性のものとして脂肪肉腫があるが、異型性脂肪腫、多形性脂肪腫および悪性線維性組織球腫と鑑別を要するものもある。
脂肪腫：中高年齢層の肥満女性に多く、若い年齢層には少ない。頸部、背部、肩、大腿、臀部などの成熟した脂肪組織から発生する黄色の結節を作る境界鮮明な良性腫瘍で、全身の皮下脂肪組織に好発する。組織学的には成熟した脂肪細胞から成る腫瘍で異型はない。一般的に結合組織によって分隔されるが、幅の広い結合組織に囲まれる線維性脂肪腫や血管に豊富

20

KIA 株式会社 ケーアイエー細胞病理研究所 石川喜美男、三瓶宮
哲正、久川株式会社 保健科学研究所
牛込新一郎
京浜予防医学研究所 診断病理センター

接子
芳三する脂肪肉腫があるので、この場合脂な血管脂肪腫などがある。また、稀で肪をズダンⅢやズダン黒などで証明はあるが、幼若な脂肪細胞からなる褐
する必要がある。また、脂肪顆粒の少色脂肪腫もある。
脂肪肉腫：軟部腫瘍の悪性の中では、 ない場合、電子顕微鏡学的に確認を要する場合もある。電顕的特徴として発生頻度の高い腫瘍で、分化の低い
基底膜様構造をもった腫瘍細胞は毛
脂肪組織の未熟異型細胞の悪性腫瘍
細血管に接近して認められることが多である。大腿部や後腹膜に好発し、40歳以降の男性にやや多く発生する。大く、細胞質内には脂肪滴が見られる。
部分が比較的分化した脂肪組織とと〔参考文献〕
1）石川栄世 , 遠城寺宗知 , 牛込新一郎他 : 軟部
もに、未熟な大型濃染性の異型脂肪腫瘍アトラス . 東京文光堂 . 第一版第一刷 .
を芽細胞（くもの巣状 spider web cell）
1989.
認めることが多い。異型脂肪芽細胞の
2）三瓶接子 , 石川喜美男 他 : 血管系の腫瘍 .
第 20 回日臨技病理研修会テキスト . 1994.
細胞質は泡沫状に見え、間質は網目
3）石川喜美男 , 三瓶接子 他 : 軟部腫瘍の免状の毛細血管に富み、腫瘍細胞は血疫組織化学と電顕像−低分化な軟部腫瘍への応用−. 第 20 回日臨技病理研修会テキス
管密着し、鍍銀染色ではその構造がト . 1994.
よくわかる。しかし、なかには分化し
4）田所衛 , 石川喜美男 , 三瓶接子 他 : 実践病
た脂肪組織がなく、腫瘍細胞を主体と理組織細胞学カラー図鑑 . HBJ. 1997.

図 1. 脂肪腫 肉眼像 × 1
左は消化器、右は、皮下に発生したもので肉眼的に黄色を呈し、薄い被膜で覆われる球状の軟らかい腫瘍である。また、割面は分葉状で光沢があるのも特徴である。

図 2. 筋肉内脂肪腫 肉眼像 × 1
分葉状、多結節上の軟らかい腫瘤で菲薄な被膜を有するのが特徴である。

図 3. 脂肪腫 H・E 染色 左：× 4、 右：× 10
比較的大きさの揃った成熟した脂肪細胞からなる腫瘍である。右はその拡大像で異型はない。

図 4. 線維性脂肪腫
左：H・E 染色、右：マッソン・トリクローム染色 × 4
頬粘膜に発生した腫瘍で、通常の脂肪腫と同様で成熟した脂肪組織からなる。分葉状に発育した脂肪細胞は幅の広い結合組織で分隔されている。

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

図 5. 血管脂肪腫
左：H・E 染色、右：マッソン・トリクローム染色 × 4
背部に発生した腫瘍で異型のない成熟脂肪組織の増生と共に、種々の大きさの血管の介在を認める。血管の内皮細胞には異型はない。

図 6. 骨脂肪腫
左：H・E 染色、右：マッソン・トリクローム染色 × 10
耳に発生した腫瘍で、成熟型脂肪細胞からなる線維組織内の骨化が見られ、その一部は成熟した骨染に類似した像を示している。

図 7. 褐色脂肪腫
左：H・E 染色、右：ズダンⅢ染色 × 10
肩甲部に発生した腫瘍で分葉状に発育した褐色細胞を認められた。
左では、細胞質が泡沫顆粒状を呈し、類円形である。右では、脂肪滴が橙赤色に染まり、野イチゴ状に見える。

図 8. 脂肪芽細胞腫 左：肉眼像 × 1、右：H・E 染色 × 1
幼小児に発生する良性脂肪性腫瘍で、結節状、帯黄白色を呈するのが特徴である。
右では、脂肪細胞の集団は種々の幅を持った線維性の結合組織に
よって分葉状に分隔されている。線維性脂肪腫と類似するが結合織に厚みがある。

図 9. 高分化型脂肪肉腫 肉眼像 × 1
黄色を帯びた腫瘍細胞は、結節状、分葉状で、弾性軟で、出血性のある結節が癒着するように発育しているのが分かる。

図 10. 高分化型脂肪肉腫 左：H・E 染色、右：鍍銀染色 × 10
大型濃染性の未熟な異型脂肪芽細胞（くもの巣 spider
web cell）が比較的分化した脂肪組織の中に認められる。細胞質は泡沫状に見える。右の鍍銀像では脂肪芽細胞から黒色の線維が周囲の血管に伸びているのがわかる。

図 12. 粘液型脂肪肉腫 肉眼像 × 1
一つの腫瘍内に分葉状、多結節状かつ、粘液様変化を特徴とする肉腫である。

図 11. 高分化型脂肪肉腫 ズダンⅢ
染色（凍結切片） × 40
大型の濃染核をもった脂肪芽細胞の細胞質には微細な脂肪顆粒が認められる。

図 13. 粘液型脂肪肉腫
左：H・E 染色、右：鍍銀染色 × 20
腫瘍細胞の密な部分では、核の濃縮した腫瘍細胞が血管周囲に集まって見える。右では、血管周囲の腫瘍細胞が繊細な細網線維によって囲まれているのがわかる。

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

21

C
Lu

Li

図 14. 粘液型脂肪肉腫 左：ズダンⅢ染色、右：オイル赤 O 染色 × 40
腫瘍細胞の胞体内に橙赤色〜赤色に染まった脂肪滴が確認出来る。

図 15. 粘液型脂肪肉腫 TEM 像 × 5000
脂肪顆粒（Li）をもった腫瘍細胞は基底膜様構造を示し、毛細血管（Lu）に近接している。C：粘液様の基質

図 16. 多形細胞型脂肪肉腫 肉眼像 × 1
下肢に発生した脂肪肉腫の CT 像で、低信号の腫瘍内に壊死を示唆する所見が見られる。

図 17. 多形細胞型脂肪肉腫 肉眼像 × 1
図 16 と同一症例で、腫瘍細胞の割面は、帯黄灰白色で、分葉状、結節状に発育し、一部に出血性である。右上には、壊死に陥った部分が見られる。

図 18. 多形細胞型脂肪肉腫 H・E 染色 × 40
多核の巨細胞と核の偏在した小円形細胞の増殖をみる。個々の細胞の胞体には、多数の空胞を認める。

図 19. 多形細胞型脂肪肉腫
左：H・E 染色、右：マッソン・トリクローム染色 × 20
細い結合組織に囲まれて、クロマチンに富む核の濃染した多核細胞と類円形の細胞を認める。右では、血管周囲に腫瘍細胞が細線維に取り囲まれているのが分かる。

Lu

Co
Li
Co
M

M
図 20. 多形細胞型脂肪肉腫
左：鍍銀染色、右：PAS-Alcian blue 重染色 × 40
左では、個々の腫瘍細胞は黒色に染まる嗜銀線維によって取り囲
まれ、腫瘍細胞から毛細血管に線維が伸び、この腫瘍の特徴を示している。右では、腫瘍細胞の胞体内が PAS 陽性（赤紫色）に染まり、基質には酸性粘液多糖類を認める。

22

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

N
図 21. 多形細胞型脂肪肉腫 TEM 像 × 2000
発達した膠原線維（Co）と粘液様の基質（M）の間に脂肪顆粒（Li）をもった腫瘍細胞が毛細血管（Lu）に接している。また、糸巻き状の核小体（N）をもった幼若な腫瘍細胞も認める。

和光純薬工業株式会社 土谷

第 45 話正和

エンドトキシンに結合する血漿成分

エンドトキシンの生物活性について

typhimurium Re595 由来の LPS を用の物質の影響もさらに研究が必要ではこれまでもいろいろな面から取り上

いて、健常人全血中における LPS のしょう。エンドトキシンが最もよく結合げてきました。エンドトキシンの生物

蛋白への結合状態を報告しています 2）。

するリポ蛋白はどれ かという話一つ

活性を考える時、血液中の成分によるその結果、10 人のボランティアの全血

とっても、Levels らと Vreugdenhil ら

修飾を考える必要があります。この修において、LPS は、60%（± 8%）がで 意 見が 異なるようで すし、ここに飾の一つにエンドトキシンに結合する

HDL に、25%（± 7%）が LDL に、
12%（± 5%）が VLDL に結合していました。分析には HPLC を用いています。
一方、Vreugdenhil らは、ビオチンでラベルした LPS 及び LBP を用いて、LBP が関わってくるとなるとますます血漿成分があり、これらの成分はリム
ルス試験を行う上でも重要になる場合があります。今回は、エンドトキシンに結合する血漿成分について考えてみ話が複雑になってきます。
エンドトキシンに結 合 する物 質といっても、エンドトキシンの活性に影響を与える物質と与えない物質、特異3）

その血液中での分布を調べています 。

的に結合する物質と非特異的に結合

エンドトキシンに結合する血漿成分

その結果、血液中の LPS 及び LBP はする物質があります。また、エンドトキ

としては、血清アルブミン、補体成分

LDL 及 び VLDL に 結 合 し て おり、
HDL にはほとんど結合していません
でした。また、apoB は LPS と LBP 両

トカインの産生は促進するかもしれま方に結合する部位を持っており、これ報告があり、活性の種類によって影響ましょう。

（C1 や C3）、血液凝固系の第 XII 因子（ハーゲマン因子）、リゾチーム、HDL、シンに特異的に結合する LBP はサイ
せんが、リムルス活性は阻害するとの

LDL などの正常血漿蛋白、LPS 結合蛋白（LBP）、マンノース結合蛋白、免が LDL や VLDL と LPS/LBP との結が異なる場合も考えられます。非特異

疫グロブリンなど刺激によって産生さ合に関係していると考察しています。

的結合だからといって、活性の修飾をれる蛋白が挙げられます 1）。

LBP 濃度が上がっている敗血症患者の血清でも、LBP/LPS は LDL/VLDL

考える上で重要でないとはいえません。この怪人百面相のような多様性がに主に結合していました。分析には、

エンドトキシンの魅力でもあるわけで

主にアガロース電気泳動とウエスタン

すが、エンドトキシンの生物活性を理

ブロット法を用いています。

解するためには、この複雑な構図を一Levels ら は、4,4-dufluoro-4-bora3n,4n-diaza-S-indacene （BODIPYR6G, Molecular Probes Inc., Oreg.
USA）で 蛍 光 ラ ベ ル し た E. coli
O111:B4 由 来 LPS や 7-nitrobenz-2oxa-1,3 diazole fluoride （NBD-F,
Molecular Probes）で蛍光ラベルした
E. coli J5（Rc）及び Salmonella servar

これら 2 つの論文の結論は乖離しているように思われます。この結果の違つ一つ明らかにしていかなければなりません。

いはどこから来ているのでしょう。LPS

このエンドトキシン複雑系を解明しのラベル方法が違うからでしょうか。

ていくために現在もいろいろな試みがLPS の種類が違うからでしょうか。分

なされており、今後の進展が期待され離方法や検出方法が違うからでしょうます。また、そのテーマは意外と身近か。筆者がその答えを持っているわけなところにあるかもしれません。あな

では、もちろんありません。

たは、Levelsらの HDL 派ですか、それ

LPS が血流中に入ると LBP に結合
し、CD14 との親和性が上昇し、白血球上の Toll Like Receptor 4 に受け渡とも、Vreugdenhil らの LDL 派ですか。
〔参考文献〕かし、このメインストリームを修飾する

1）遠藤重厚、稲田捷也：「エンドトキシンと病体」、p. 60（へるす出版）（1995）.
2）Levels, J. H. M. et al.: Infect. Immun.,69, 2821（2001）.
3）Vreugdenhil, A. C. E. et al.: J. Clin.
Invest., 107, 225（2001）.

種々の物質が血液中にはあり、エンド

次回は「第 46 話

トキシンの生物活性の解明にはこれらニ事情」の予定です。

され、細胞内へのシグナル伝達が行われることによりサイトカインなどが発現するという構図は、最近明らかにされつつある重要な成果の一つです。し最近のカブトガ

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

23

カルシウム受容発光蛋白質イクオリン（Calcium-activated photoprotein Aequorin）
チッソ株式会社 横浜研究所 井上

1. はじめに発光を示し、セレンテラジンの酸化物

白質部分であるアポイクオリンが他ので あ る セレ ン テ ラミド（coelenter-

ルシフェラーゼと同様に O2 を添加す

イクオリン（Aequorin）※ 1 は、微量のamide）、二酸化炭素を生成する。アポる反応を触媒（効率の良い反応の場のカルシウムイオンと特異的に結合し、イクオリンの一次構造は、筆者らにより提供）している。見方をかえると、再生

青色発光する蛋白質（発光蛋白質 =したイクオリン分子は酵素反応過程にオンに対する感受性の高さから微量カ

1984 年 cDNA クロー ニン グの 結 果（GenBank: L29571）、189 アミノ酸よりなる単純蛋白（分子量 21,400）であ

ルシウムイオンの検出／定量や細胞り、カルモジュリンと相同性をもち、カ態で、しかも常温で安定に存在するユ内カルシウムの動的変化のイメージ

ルシウムと特異的に結合するヘリック

ニークな蛋白質である。筆者らによりプローブとして用いられて来た。イクス- ループ- ヘリックス構造である EF-

決定された組換えイクオリンの X 線結

オリンはワシントン州シアトル近郊のハンド構造が 3 ケ所あることが示唆さ

晶構造解析の結果をもとに、イクオリ

フライデーハーバー島近海に棲息す

れた 3）。イクオリンの最大のユニークさ

ン発光及び再生過程を模式的にまとる発光オワンクラゲ Aequorea aequo-は、一般に EF-hand 構造型カルシウ

めたものが図 1 である（反応直後のカ

photoprotein）である。カルシウムイ

生成する酵素- 基質複合体（アポイクオリン- セレンテラジン-O2 複合体）状

rea の 傘 の 周 辺に 存 在 する発 光 器

ム結合蛋白質が制御蛋白の役割や生ルシウム結合アポイクオリン、セレン（photocyte）から単離された 1）。この発体内でのカルシウムイオンの緩衝的テラミドの複合体は青色蛍光能をもつ

光器には、現在レポーター蛋白としてな機能を持つ構造蛋白質でなく、蛋白ので Blue Fluorescent Protein（BFP）

広く用いられている緑色蛍光蛋白質、質自身が酵素的（触媒的）な役割をとも呼ばれる）。

Green Fluorescent Protein （GFP）、担った低分子型 EF- ハンド型蛋白質も共存している。クラゲの発光は、外である。
3．イクオリン発光と測定部刺激にたいしてイクオリンと GFP の一方、カルシウムと結合し発光した

間 で Bioluminescence Resonance

後のアポイクオリンは、発光能を持つ

イクオリンの発光は、図 2 に示すよ

Energy Transfer（生物発光共鳴エネ

イクオリンへ再生可能である。その再うに、過剰の Ca2+ 溶液を加えると瞬間

ルギー移動）の結果、緑色の発光（極生は、EDTA 等のキレート剤によりカのスパイク状の発光をしめし、数秒で大波長 = 509nm）が観察される。1990

ルシウムイオンを除き、還元剤、セレ発光を終了する。これは、他の発光酵

年以降、発光クラゲの減少に伴い、細ンテラジン、酸素（O2）とともに低温で素（ルシフェラーゼ）のように連続的な胞内カルシウム測定用の高純度天然

インキュベーションすることにより達発光反応と決定的に異なる点である。

イクオリンの供給が十分でない状況で成される。この再生過程において、蛋発光原理は Ca2+ が イクオリンの EF-あったが、現在、遺伝子組換え法による高純度イクオリンの供給が可能とな
り、またそれを用いた X- 線結晶構造解析によりその全体像が明らかとなっ

OH
O

O
O

2）

た 。

4N

2
N

N

NH

OH
N

6 N 8
HO



2. イクオリンとはHO

イクオリンは、蛋白質部分であるア
ポ イ ク オ リン（ア ポ 蛋 白 = Apo-

aequorin）と発光基質に相当するセレンテラジン（coelenterazine）と分子状酸素（O2）が複合体を形成した状態で

O
4N

2
N

OH

6 N 8
H
HO

存在している。イクオリン分子にカルシウムイオンが結合すると青色の瞬間

24

敏

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

図 1. イクオリンの発光／再生過程の模式図OH

図 2. 組換えイクオリンの過剰のカルシウムイオン添加による発光パターン
矢印で過剰の CaCl2 を注入する。

図 3. 組換えイクオリンの発光スペクトル

ハンドのループ部分に結合することにクオリン遺伝子）
は、真核、原核細胞内より高次構造が変化し、分子内で安定で発現可能である。筆者らは大量に精化されていたセレンテラジンのペルオ製するために、大腸菌を宿主として、
5）

5. イクオリンの結晶解析からの情報



結晶解析に使用した組換えイクオリ

分泌系の発現系を構築した 。もともンは，アミノ末端の配列が天然イクオいる。発光強度（Imax）
は、Ca 濃度ととイクオリンは細胞質の蛋白と考えら

リン VKLTS- の代わりに ANSKLTS-

相関関係があり、既知の Ca2+ 濃度に対れるが、アポイクオリンは分泌系で動で はじまる 191 アミノ酸 残 基よりな

キシドが開裂し発光すると解釈されて
2+

6）

する発光曲線を作成することにより物培養細胞系では細胞外へ 、大腸菌

る 3,5）。X 線結晶解析は 2.3 Åの解像度（10 −7-10 −4M）、目的サンプル溶液のの場合はペリプラズムに蓄積させるこで行い、組換えイクオリンの N- 末端

2+

4）

5）

Ca 濃度を決定することができる 。
一方過剰の Ca2+ を添加するのみで、とができる 。大腸菌での分泌発現での 4 残基を除く天然イクオリン配列のは、培養条件によっては培養液中にもスパイク状の発光反応であることや数産生させることも可能であり、その全秒以内で反応が終了することより、ス

発現量は約 2g/L である 7）。イクオリン

ピーデーな S/N 比の良い解析結果をの精製は、アポイクオリンを精製した得ることができる。このことはイクオリ

後イクオリンへと再生する方法 5,7）とア

ン分子をハイスループット検出系でのポイクオリンをイクオリンへ再生した

Leu-3 から Pro-189 の 構 造を 決 定し）
PDB：1EJ3）。結晶化イクオリン
た 2（
は 2 量体を形成しており、2 量体の構造は、カルシウム結合 4 番目のループ
部分の 153-157 残基のずれを除けばほぼ同じであった。図 4 に示すように、

高感度発光分子マーカーとして利用

のち精製する方法 8） が確立していが、イクオリン分子は球状蛋白であり、発できる可能性をしめしている。イクオ

イクオリンの使用目的によってその精

光基質に相当するセレンテラジン-O2リンの検出限界は測定装置の感度にも製法を考慮している。精製イクオリン

コンプレックス分子（セレンテラジンぺ

よるが、1 ピコグラム以下である。

の安定性は結晶化の操作過程を考慮

ルロキシド）
は中央に位置している。一発光スペクトルは、図 3 に示すようすると、精 製しに極大波長は 460-470 nm である。こた イクオリン はの青色波長領域は、市販のルミノメー

一般的な酵素類

ターで使用されているバイアルカリ型と同等な取り扱

光電子増倍管 photomultiplier の高吸

いで十分である。

収特性を示す領域であり、市販ルミノ

最大の不安定要メーターとの相性が良い。一方、イク

因（失活）は、操オリンの発光の立ち上がりが早いため作中での Ca2+ のに（ミリ秒）、市販ルミノメーターの中にコン タミネ ーは、イクオリン測定に不都合なものもションに起因す

ある。

る。



4．高純度組換えイクオリンの精製
イクオリン遺伝子（正確にはアポイ

図 4. 組換えイクオリンの結晶構造イメージ図
データは PDB：1EJ3 のモノマー A を使用した。

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

25

方、カルシウム結合のためヘリックス-にある 184 番目のチロシンでありフェループ- ヘリックスの EF-hand 構造は、実際には蛋白質構造中に 4 ケ所見い出だされたが、当初から第 2 番目のEF-hand 構 造 に 相 当 す る 部 分 は、

ノール性酸素原子との水素結合により安定化が示唆されている。また、セレンテラジンの C2 位のペルオキシド基の絶対配置は（S）配置であった。これ

ループ部分に置換があり機能していな

はウミシイタケ由来ルシフェラーゼのいと推定されている 3）。イクオリンへの発光反応過程で生成される発光基質

カルシウムの結合個数はカルシウム

中間体と推定される C2 位ぺルオキシ

イオンの滴定により 3 個であることがドの絶対配置は（R）配置であり 10）、立示され、発光に必要なカルシウムの個体特異性の異なる点が興味深い。一数は最低 2 個であることが示唆されて般に、不斉中心を持たない発光基質

9）セレンテラジンへの C2 位への酸素添

いる 。
有機化学的立場から最も興味深い
点は、セレンテラジンペルオキシドの加反応は、蛋白質によって正確に制御されていると考えられる。

安定化機構である 2）。イクオリン分子内でのセレンテラジンと酸素のコンプ
レックスの構造については、すでにセレンテラジンの C2 位の部分にペルオ
13

6．おわりにイクオリン発見以来、約 40 年にわ

キシド構造が存在する可能性が、 C-たって研究が継続してきたのは、そのNMR により示唆されていた。結晶解

発光に魅せられた研究者に負うところ

析の 結 果 は 球 状アポ 蛋 白の 中 央のが大きい。筆者が遺伝子単離、精製、

600Å3 の 空 間に、C2 位に 電 子 密 度
55-60% であるが、ペルオキシド構造（-O-O）存在を確認した。セレンテラ

できた幸運は、多くの良き共同研究者に恵まれたからである。高純度組換え

ジンぺルオキシド分子の間隙は半径

イクオリンの製造体制が確立したこと

1.4Å球状で占められており分子表面から溶媒の影響を受けず、21 個の疎水性残基、3 個のチロシン、2 個のヒス
チジン、2 個のスレオニン と 1 個のリジンで覆われている。C2 位のヒドロペ構造解析に関する一連の研究に参画

さらにその高次構造が明らかとなったことで、次の研究の展開の準備ができている。特にイクオリンの産業領域での応用が加速される状況が出てきたことは事実である。

ルオキシド基の安定化に関与している
アミノ酸残基は、カルボキシ末端近傍※ 1「Aequorin」の 和名表記について。
「エ
クオリン」
、
「エコーリン」、「イコーリン」
等が使用されて来たが、和名「イクオ
リン」を最初に使用したのは、発見者である下村脩博士が「生物発光の謎」の中であり、（1964:「自然」2 巻 47-51）
それを尊重するのが妥当であると筆者は考える。

〔参考文献〕
1）Shimomura, O., Johnson, F.H. &Saiga, Y. : J. Cell. Comp. Physiol., 59,
223（1962）.
2）Head, J.F., Inouye, S., Teranishi, K.
and Shimomura, O. : Nature, 405, 372（2000）.
3）Inouye, S., Noguchi, M., Sakaki, Y.,
Takagi, Y., Miyata, T., Iwanaga, S.,
Miyata, T. and Tsuji, F.I. : Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 82, 3154（1985）.
4）Blinks, J.R., Wier, W.G., Hess, P. &Prendergast, F.G. : Prog. Biophys.
Mol. Biol., 40, 1（1982）.
5）Inouye, S., Aoyama, S., Miyata, T.,
Tsuji, F.I. & Sakaki, Y. : J. Biochem.
（Tokyo）, 105, 473（1989）.
6）Inouye, S. & Tsuji, F.I. : Anal.
Biochem. 201, 114（1992）.
7）Inouye, S., Zenno, S., Sakaki, Y. &Tsuji, F.I. : Protein Expr. and Purif.,
2, 122（1991）.
8）Shimomura, O. & Inouye, S. : Protein
Expr. and Purif., 16, 91（1999）.
9）Shimomura, O. & Inouye, S. :Biochem. Biophys. Res. Commun.,
221, 77（1996）.
10）H. Nakamura, C. Wu, S. Inouye ＆ A,
Murai : J. Am. Chem. Soc., 123, 1523
（2001）.

カルシウム受容発光タンパク質
Aequorin, recombinant, Solution
生化学用
発光オワンクラゲから単離されたイ
2+

クオリンは、Ca と特異的に結合し、青色の発光を示すタンパク質です。微2+

量 Ca の検出・定量や細胞内カルシウ
ムのイメージングに用いられます。
製 法 ： 発光オワンクラゲ（Aequorea
aequorea）由来の発光タンパ
ク質アポイクオリンを大腸菌で発現させ、イクオリン

26

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

へ再生後、精製。
形 状 ：凍結品（10mmol/L Tris-HCl、

pH 7.5、2mmol/L EDTA、
1.2mol/L （NH4）2SO4）
純 度 ：95% 以上（SDS-PAGE）

473（1989）.
3）Inouye, S. et al. : Protein Expr. Purif.,
2, 122（1991）.
4）Shimomura, O. and Inouye, S. :Protein Expr. Purif., 16, 91（1999）.
5）Head, J. F. et al. : Nature, 405, 372（2000）.

〔参考文献〕
1）Inouye, S. et al. : Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 82, 3154
（1985）.
2）Inouye, S. et al. : J. Biochem., 105,011-19181

50Fg

30,000 円

ピアス独自の新技術で、目的タンパク質だけを単離！
SeizeTM X 免疫沈降キット
架橋技術と抗体アフィニティークロマトグラフィー技術を組合せた新しい免疫沈降法により、目的タンパク質を効率的に沈降、単離するキットです。従来の免疫沈降法と異なり、目的タンパク質のみを単離できるので、ウェスタンブロッティングによるバンドの確認が必要なくなりました。
〔特 長〕● タンパク質回収率がアップ！

● 抗体のコンタミンなし！

従来法に比べて目的タンパク質の回収率が高くなりました。

● 経済的！
プロテイン G（もしくは A）に架橋させた抗体ビーズは繰り返
し約 10 回使用できます。

抗体が架橋されているため単離されたタンパク質に、抗体のH 鎖 / L 鎖が混入しません。そのため SDS-PAGE で単一バンドとして検出されます。
1

2

3

kDa

〔操作手順〕（要約）
215

Step 1： プロテイン G（もしくは A）- ビーズ

Step 4： 結合タンパク質を溶出する。

に抗体を架橋させる（抗体はキットには含まれておりません）。

120
84
60
39
28

Step 2： 溶解した細胞サンプルを抗体- プロ
テイン G（もしくは A）- ビーズに添

18.3

Step 5： SDS-PAGE によりタンパク質を分析する。
このとき、単一バンドとして検出される。（データ 1）

加する。

データ 1：
E. coli で発現させた GFP 融合タンパク質を BPER® により細胞から抽出後、ヤギ抗 GFP 抗体を使用して免疫沈降により単離、SDS-PAGE 分析を行った。
レーン 1： SeizeTM X を使用して GFP 融合タ
ンパク質を免疫沈降により単離。単一バンドが検出。
レーン 2： 従来法を使用して GFP 融合タンパ
ク質を免疫沈降により単離。抗体のH 鎖、L 鎖が含まれている。
レーン 3： 分子量マーカー（BlueRangerTM Prestained

Step 3： 未結合タンパク質を洗浄・除去する。

Protein Molecular Weight
Markers）
コード No. メーカーコード
品
501-28481 45215
SeizeTM X Protein A Immunoprecipitation Kit（内容） ImmunoPure® Plus Immobilized Protein A
Binding/ Wash Buffer 1
Quenching/Wash Buffer 2
Elution Buffer504-28471

45210

45230
45225
45220

容

SeizeTM X Yeast Immunoprecipitation Kit
SeizeTM X Mammalian Immunoprecipitation Kit
SeizeTM X Bacterial Immunoprecipitation Kit

量 希望納入価格（円）43,900

1kit
1ml
500ml
500ml
50ml

Sample Loading Buffer
DSS Cross-linker
Spin X Cups and Tubes
Collection Tubes

5ml
4 × 13.2mg
12 本
72 本

SeizeTM X Protein G Immunoprecipitation Kit（内容） ImmunoPure® Plus Immobilized Protein G
Binding/ Wash Buffer 1
Quenching/Wash Buffer 2
Elution Buffer508-28511
501-28501
508-28491

名

1ml
Sample Loading Buffer
5ml
500ml
DSS Cross-linker
4 × 13.2mg
500ml
Spin X Cups and Tubes
12 本
50ml
Collection Tubes
72 本（#45210）＋（Y-PER® Yeast Protein Extraction Reagent 25ml）（#45210）＋（M-PER® Mammalian Protein Extraction Reagent 25ml）（#45210）＋（B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagent 25ml）

1kit

49,400

1kit
1kit
1kit

57,00057,00057,000〔関連商品〕
メーカー
コード
化学発光基質

コード No.

536-44191 34080
532-44193 34079
531-50251 34075
537-50253 37071
534-84551 34095
530-84553 34094

品

名

容量

希望納入
価格（円）

コード No.

メーカー
コード

名

容量

500mL

36,300527-32915 24590 GelCode® Blue Stain Reagent

500mL

品

希望納入
価格（円）

染色試薬／分子量マーカー
SuperSignal® West Pico Chemiluminescent
Substrate
SuperSignal® West Pico Chemiluminescent
Substrate Trial kit
SuperSignal® West Dura Extended Duration
Substrate
SuperSignal® West Dura Extended Duration
Substrate Trial kit
SuperSignal® West Femto Maximum
Sensitivity Substrate
SuperSignal® West Femto Maximum
Sensitivity Substrate Trial kit

524-79741 26681

BlueRangerTM Prestained Molecular Weight
Markers

50mL

7,300

100mL

61,600528-32761 78501 M-PER® Mammalian Extraction Reagent

20mL

13,300533-81905 78248 B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagent

100mL

62,50020mL15,500

10,200
1 plate 17,700（48 well）

タンパク質抽出試薬

527-32775 78990 Y-PER® Yeast Protein Extraction Reagent

250mL
500mL
500mL

43,90050,50050,500

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

27

神経変性疾患における異常リン酸化タウの蓄積
東京都精神医学総合研究所 分子神経生物学研究部門 長谷川成人



はじめに

を伴う多くの神経変性疾患にみられる。

る熱に安定な因子として、1975 年にそのため、タウの蓄積は疾患特異的

アルツハイマー病は初老期から老な病理変化というより二次的変化、神年期にかけて発症する進行性の痴呆

経細胞の変性した後の結果としてとら症状を主徴とする神経変性疾患であえられる傾向にあった。しかしながら、

Weingarten らによって同定された蛋白質である。1988 年にマウス、ヒトのタウの cDNA がクローニングされた。
ヒトタウ遺伝子は第 17 番染色体にひる。その病理学的特徴は B アミロイド

1998 年に第 17 番染色体に連鎖する

とつ存在するが、選択的スプライシン

蛋白からなる老人斑と異常リン酸化タ

パーキンソニズムを伴う家族性前頭グによって多種類の分子種を発現す

ウを主要構成成分とする神経原線維

側頭型痴呆（frontotemporal demen-

る。胎児期から幼若期には最も短い分変化（neurofibrillary tangle: NFT）の子種が一種類、大人になるとスプライ出現である。老人斑は正常の老化でもtia and parkinsonism linked tochromosome 17: FTDP-17）の家系に

シングによる挿入が加わって 6 種類の

かなりの頻度で出現するのに対し、神タウ遺伝子の変異が発見され、タウのアイソフォームが発現する。C 末端側経原線維変化は痴呆の程度とよく相異常が神経変性の原因である可能性に繰り返し配列があり、この領域を介し関し、その本体である異常リン酸化タが考えられるようになって最近注目をてチューブリンに結合し、微小管重合

ウの蓄積は細胞の変性と密接な関係集めている。本稿ではアルツハイマー促進、安定化に働く（図 1）。主に軸索があることが示されている。異常リン病や他の神経変性疾患における異常に局在するが、ある割合で細胞内や樹酸 化タウの 蓄 積 病 変 は ア ル ツ ハ イ

リン酸化タウの蓄積について、著者ら状突起にもリン酸化されて存在する。

マー病だけでなく、ピック病（Pick' sの仕事を中心に概説し、タウの異常リ

disease）、皮質基底核変性症（corticobasal degeneration: CBD）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear
palsy: PSP）、グアムパーキンソン痴

ン酸化とその意味について考察したい。

1980 年代中頃、タウがアルツハイ
マー病に出現する NFT の構成成分で呆複合症、前頭側頭型痴呆など、痴呆

タウ蛋白は微小管の形成を促進すあると考えられるようになり病理生化

タウ蛋白と神経原線維変化（NFT）

学的側面からの研究が盛んに行われた。NFT は神経細胞内に蝋燭の炎のような形をした炎型（flame-shaped）、

1

リン酸化タウ
の割合

S 413

S 404
S 409

S 396
S 400

T 217
T 231
S 235
S 262

S 198
S 199
S 202

正常タウ

441
〜5 - 20％

S 396
S 400
T 403
S 404
S 409
S 412
S 413
S 422

S 198
S 199
S 202
S 208
S 210
T 212
S 214
T 217
T 231
S 235
S 262

PHFタウ

1

441
〜100％

1

2

3

4

5

7

9

10

スプライシング挿入配列

11

12

13

繰り返し配列図 1. タウ蛋白の模式図と PHF タウ、正常タウに同定されたリン酸化部位。
ヒトタウの脳に発現する最も長いアイソフォームの模式図。緑、ピンク、黄色で示した部分は選択的スプライシングによって挿入される
adult-type の挿入配列。黒で示した部分は微小管との結合に関与する繰り返し配列。下段に示した数字はタウのエクソンを示す。PHF タ
ウと正常タウ（胎児型も成熟型も含む）のリン酸化部位と、およそのリン酸化されている割合（％）を示した。

28

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

を作製すると、リン酸化タウに対する抗体が得られることを示した。著者らは Sarkosyl を使って PHF に富む画分を調製し、それを抗原に特異的なモノ
クローナル抗体を調製した。得られた二つのモノクローナル抗体の認識部位を決定したところ、ヒトタウの 231 番のトレオニン残基と 396 番のセリン残基のリン酸化を認識することがわかり、これらの部位が PHF 内のタウにおいて高度にリン酸化されていることが示された 1）。その後、Sarkosyl を使ってAB
図 2. アルツハイマー病脳組織の抗リン酸化タウ抗体 AP422 による免疫染色。
大脳皮質の 2-3 層、及び 5 層の大形の錐体細胞に炎状や糸玉状の NFT が出現している像が観察される。同時に NFT に加え、背景をうめるように無数の糸屑様の NT の染色が観察される。老人斑周囲の変性突起の染色も観察される。 A）× 40 倍、B）× 200 倍。

PHF を部分精製し、タウの抗体でイム
ノブロットすると正常のタウよりも電気泳動度の遅いタウが検出されること、その移動度はアルカリホスファターゼ

糸巻き状にとぐろをまいたような球型

PHF を構成する異常リン酸化タウの脱リン酸化処理によって変化するこ（globose type）の構造物が出現する変化をさす（図 2）。NFT は正常でも海

では PHF を形成しているタウはどにリン酸化されていることが生化学的

馬、及び海馬傍回に出現することがあのようなタウか。エピトープが異なるにも明らかとなった。この異常リン酸化

るが、アルツハイマー病では大脳皮質

様々なタウの抗体が細胞内の NFT を

タウは、PHF を構成するタウという意

全域にわたって出現し、細胞脱落が見

染めることなど から、全 長のタウが味で PHF タウと呼ばれている。著者らられる連合野の第 3、5 層の大形の錐

PHF として蓄積していることが示されは、PHF タウを HPLC で高度に精製

体細胞に多く見られる。細胞が死滅している。一方、細胞が死滅した後もし、質量分析とアミノ酸配列分析を行た後も分解されず残存した細胞外のも残っている ghost tangle は N 末端側のなって正常タウと比較しながら詳細にのは ghost tangle とよばれる。

抗体では染まらず、分解をうけて C 末

解析し、PHF タウにおいて 19 箇所のタウの抗体でアルツハイマー病脳端側の半分近くのみが残っていると考部位が高度にリン酸化されていることの切片を染色すると細胞内の NFT にえられる。In vitro の実験などからも）1）。
を明らかにした 2, 3（図加え、背景をうめるように細かい糸屑

PHF を形成したタウは C 末端側の繰様の病変（neuropil threads: NT）や、り返し配列部分がプロテアーゼに対しおり、特に胎児から幼若期の発達過程

老人斑の周囲をとりまくように変性して抵抗性をもつことが示されている。

でその割合が高いが、PHF タウのリンた神経突起が染色される（図 2）。これ

また、微小管結合領域のタウの抗体は

酸化は質的にも量的にも胎児型タウのらの変化は、検出感度の高い免疫染色

何も処理をしない PHF や NFT を染め

リン酸化と異なる高度なリン酸化であとが示され、蓄積しているタウは異常

タウは正常でも一部リン酸化されてではじめて明らかとなってきた病変でにくく、ギ酸やプロテアーゼ等で処理る。リン酸化の程度は部位によってまあり、そのほとんどは神経細胞の樹状をすると染色されるようになることから、

ちまちであるが、胎児の場合でも全体

突起内や軸索内にタウが蓄積していこの部分は線維の中心部に埋もれてとしておよそ 20％程度のリン酸化でるものである。NFT も NT も電子顕微いると考えられている。

あるのに対し、PHF タウのリン酸化は、

鏡 に よ る 観 察 で、paired helicalfilament （PHF）とよばれる特異な形飾をうけ ているのかどうかが 焦点と態の線維からできていることがわかっなった。Grundke-Iqbal らは Tau1 とている。NFT は細胞体に、NT は樹状いう抗体が組織切片をアルカリホス

突起に形成される PHF の束で、そのファタ ー ゼ 処 理し た 場 合に 限 って100% に近いといってよい（図 1）。また、質的な違いとしては、Ser422 やモノク
ロ ー ナ ル 抗 体 AT100 の 認 識 部 位（Thr212, Ser214）のように胎児型タウにほとんど検出されず、PHF タウにお大きさや太さが異なるものの、構成線

NFT を染めるようになることを見出し、いて強くリン酸化されている部位がい維の超微形態は同じであり、生化学的抗体の認識部位が異常にリン酸化されくつかあるということである 3, 4）。ただ、ていることを示した。また、井原らは正常で全くないということではく、程度

NFT を精製し、これを抗原に特異抗体の差が非常に大きいと考える方が自にもタウ蛋白からできている。

次に蓄積しているタウが何らかの修

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

29

然である。



タウのリン酸化酵素とリン酸化の意味

タウ遺伝子の変異とリン酸化タウの異常は以前から神経細胞死との関係が指摘されていたが、1998

おわりに



タウのリン酸化に関わる酵素として

年に 家 族 性を示 す 前 頭 側 頭 型 痴 呆

最近、変異タウを過剰発現するトラは、これまでの主に in vitro の検討か
ら、MAP kinase（mitogen-activatedprotein kinase）、GSK3 （glycogensynthase kinase 3）、CDK5 （cyclindependent kinase 5）、SAPK（stressactivated protein kinase）等が候補の（FTDP-17）の患者にタウ遺伝子の変

ンスジェニックマウスやショウジョウ

異が発見され、遺伝学的にもタウの異バエが作製され、線維化したタウの蓄常と神経変性の連鎖が証明された。こ積や神経細胞の脱落が確認されていれまでに、50 をこえる家系から 20 種る 6）。これらのモデルはタウの異常リン類以上の変異が報告されている。それ

酸化、線維化機構の解明に重要である

らはアミノ酸配列レベルでの変化をおだけでなく、今後、タウの蓄積、神経キナーゼとして考えられている。最近、

こすミスセンス変異、欠損変異と、ア変性をターゲットとした治療薬のスク

CDK5 の活性化因子 p25 が AD 脳で

ミノ酸配列には影響しないサイレント

リーニングや評価に役に立つものと期待される。

増加しているという論文が発表され、変異、さらにエクソン 10 に続くイントロ

AD におけるタウの異常リン酸化機構

ン内の変異に大別される。これまでのが明らかになったかと期待されたが、著者らの検討から、ミスセンス変異の谷口、著者らが、死後経過の短い剖検

多くは微小管の重合促進能を低下さ脳を用いて注意深く解析したところ、せることが確認されている。また、微AD 脳と対照脳の間で p25 と p35 の比率に違いは認められず、p25 は、死後比較的早い時間に p35 が分解されて小管の重合促進能が低下しないミスン内の変異は mRNA の選択的スプラ

生成する死後分解の産物であることがイシングに影響し、結果として adult-

5）センス変異やサイレント変異、イントロ

明らかとなった 。したがって AD におtype のアイソフォームの発現の割合をいて p35 の分解を介して CDK5 が活増加させることが明らかになっている。

性化し、タウが異常リン酸化されるとまた、FTDP-17 患者すべてにおいていうのは否定的である。

タウの蓄積病変が観察されており、蓄タウの機能は微小管（チューブリン）

積しているタウは AD の PHF タウと同に結合してその重合を促進すること、様に異常にリン酸化されている。このまた形成した微小管を安定化すること

ことは、タウ蛋白の機能異常、発現異であるが、タウがリン酸化されるとそ

常がその異常リン酸化、蓄積を導くこの機能は低下する。PHF タウはそのとを示唆している。FTDP-17 の臨床、異常リン酸化のために、重合促進活性病理は多様でタウの蓄積病変が見らを持たないばかりか、微小管への結合れる部位や細胞の種類が異なる。アル

能も失っていることが示されている。

ツ ハ イマ ー 病 で は す べ てのア イソ

タウのリン酸化は病変の初期から見出

フォームがリン酸化されて蓄積するのされること、PHF を構成するタウはそに対し、FTDP-17 は変異によって影のほとんどが高度にリン酸化されてい響を受ける分子種が主にリン酸化されることを考えると、タウがリン酸化されて蓄積している。また、PSP や CBD、てから線維化、蓄積がおこると考える

ピック病においても、ある種のアイソのが自然である。また最近、タウがリ

フォームが選択的に蓄積しているとこ

ン酸化されると、線維化が促進されるとが示されている。これらの疾患ではという論 文も報 告され ている。した蓄積するタウの分子種が異なるものの、がって AD 脳内では何らかの原因でタタウがリン酸化されて蓄積しているとウのリン酸化が亢進するような状況がいう点ではアルツハイマー病と同じであると推察される。

あり、なんらかの共通の分子メカニズ
ムが働いてタウが線維化、蓄積してい30るものと考えられる。

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）〔参考文献〕
1）Hasegawa M, Watanabe A, Takio K, et
al: Characterization of two distinct
monoclonal antibodies to paired
helical filaments: further evidence forfetal-type phophorylation of the tau inpaired helical filaments. J Neurochem
60: 2068-2077, 1993.
2）Hasegawa M, Morishima-Kawashima
M, Takio K, et al: Protein sequenceand mass spectrometric analyses of
tau in the Alzheimer' s disease brain. J
Biol Chem 267: 17047-17054, 1992.
3）Morishima-Kawashima M, Hasegawa
M, Takio K, et al: Proline-directed andnon-proline-directed phosphorylationof PHF-tau. J Biol Chem 270: 823829, 1995.
4）Hasegawa M, Jakes R, Crowther RA,
Lee VMY, Ihara Y and Goedert M,:
Characterization of mAb AP422, anovel phosphorylation-dependent monoclonal antibody against tau protein.
FEBS Lett 384: 25-30, 1996.
5）Taniguchi S, Fujita Y, Hayashi S, et al:
Calpain-mediated degradation of p35
to p25 in postmortem human and rat
brains. FEBS Lett 489: 46-50, 2001.
6）Lewis J, McGowan E, Rockwood J, et
al: Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant（P301L） tau protein. Nat Genet 25:
402-405, 2000.

アルツハイマー病の研究に
りん酸化タウ免疫組織染色キット
アルツハイマー病脳ではアミロイド斑とならんで神経原線維変化（neurofibrillary changes）が生じることが知られています。この神経原線維変化は、神経細胞内で neurofibrillary tangles（NFT, 火炎状あるいは糸玉状の線維の塊）や
neuropil threads（NT, 糸屑状の構造物）として観察され、細胞死と密接に関係していることが知られています。これらの異常構造物は paired helical filaments（PHF）と呼ばれる線維の束からなり、主成分は異常にりん酸化されたタウタンパ〔染色方法〕① 脱パラフィン②洗

浄③ 3% 過酸化水素処理④ ブロッキング

ク質で、アルツハイマー病だけでなくピック病や皮質基底核変性症、前頭側頭型⑤ 一次抗体反応

痴呆（FTDP-17）など痴呆を伴う多くの神経変性疾患にみられます。本品はこのり⑥ 二次抗体反応

ん酸化タウタンパク質を特異的に染色する免疫組織染色キットです。

⑦ ABC 反 応

〔表紙写真の説明〕⑧発

アルツハイマー病脳組織の抗りん酸化タウ抗体

AP422 による免疫染色。大脳皮質の 2 − 3 層、及び5 層の大形の錐体細胞に炎状や糸玉状の NFT が出現している像が観察されます。同時に NFT に加え、背景をうめるように無数の糸屑様の NT の染色が観

色

⑨対比染色
（マイヤーヘマトキシリン）⑩ 封入、 鏡検察されます。老人斑周囲の変性突起の染色も観察されます。
（写真提供：東京都精神医学総合研究所 分子神経生物学研究部門 長谷川成人先生）
コード No.
299-57301

品 名Phosphorylated Tau Immunohistostain Kit

規 格
免疫組織染色用容量

希望納入価格（円）52,000

100 回用アミロイドβ- プロテイン免疫組織染色キット
アルツハイマー病の代表的な病変である老人

アルツハイマー病脳由来連続切片の染色例斑を構成するアミロイド B- プロテイン（AB）
はアミ

左：Anti Aβ42（ク ロ ー ン No.：
BC05）による Aβ42 の染色
右：Anti Aβ40（ク ロ ー ン No.：
BA27）による Aβ40 の染色

ノ酸数 40 個の AB（1 − 40）と 42 個の AB（1 − 42）が主要であると報告されています。本品はこれらの C 末端に特異的なモノクローナル抗体 BA27 と（写真提供：東京大学大学院薬学系研
究科臨床薬学教室 岩坪 威 教授）

BC05 を組込んだ免疫組織染色キットです。
コード No.
299-56701

品 名Amyloid β-Protein Immunohistostain Kit

規 格
免疫組織染色用容量

希望納入価格（円）90,00050 回用〔関連商品〕
コード No.
542-01011
019-18761
016-18771
014-18951
011-18961
193-12311
192-12141
198-12143
190-12321
182-01591
188-01593

品
名Tau Protein, Human, recombinant, Solution
Amyloid β-Protein（1-40）（Trifluoroacetate）
Amyloid β-Protein（1-42）（Trifluoroacetate）
Amyloid β-Protein（1-40）（Hydrochloride）
Amyloid β-Protein（1-42）（Hydrochloride）
β-Secretase Inhibitor（H-Lys-Thr-Glu-Glu-Ile-Ser-Glu-Val-Asn-Sta-Val-Ala-Glu-Phe-OH）

γ-Secretase Inhibitor, Type Ⅰ（Z-Leu-Leu-Nle-CHO）

γ-Secretase Inhibitor, Type Ⅱ（Substrate-based Difluoroketone）

Roscovitine（CDK5 Inhibitor）

規 格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

50Fg
1mg
0.5mg
1mg
1mg

量

希望納入価格（円）25,00036,00038,00048,00052,000

生化学用

1mg30,000

生化学用

1mg
5mg

照
照

生化学用

1mg

30,000

生化学用

1mg
10mg

6,500
34,000会会

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

31

11
脳科学一口メモ◯アルツハイマー病の関連タンパク質 APP のリン酸化と代謝制御
北海道大学大学院 薬学研究科 神経科学分野 鈴木利治

アミロイド前駆体タンパク質（APP）
は、アルツハイマー病（AD）患者に特P徴的に見い出される老人斑のタンパク

T

E性主成分 B- アミロイド（AB）の前駆体て同定されている 1）。AB の生成・分
わると理解されている（アミロイド仮R

YENPT YN-terminal
helix capping
box structure

Fe65

V

YTSI

であり、家族性 AD の原因遺伝子とし
泌・凝集・蓄積は AD 発症機構にかか

X11L

E

(1)
細
胞
膜

説）
が、その詳細な分子機構は未解明

(3)

X11L

Pi

な点が多い。APP は生体内で多くの組織に発現しているが、APP の神経

YTSI

V

T

P E

N

Y

E R

E

細胞特異的な機能・代謝機構を解析することは AD 発症機構を理解する上

COOH

T
P

Y

COOH

Fe
6

5

(2)

で重要であると考えられている。
神経細胞における APP 代謝機構の解明を目指す手がかりが、 APP 細
胞質ドメインの神経特異的なリン酸化と、神経特異的なタンパク質と APP

APP 細胞質ドメインは 3 つの機能モチーフ（1）-（3）を含む。Pi はリン酸基、X11L, Fe65
は APP 結合タンパク質である。

細 胞 質ドメイン の 相 互 作 用 である。

ると理解されている。多くの研究者がAPP は一回膜貫通型の膜タンパク質
であり、ER で生合成後ゴルジ体を経

APP 細胞質ドメインの機能に注目して

helix capping box 構造を作る 4）。このモチーフ内の Thr668 が APP のリン

いる点はここにある。すなわち、細胞

酸化サイトである。分裂している細胞
では、ERに存在するN-型糖鎖修飾を由して細胞膜上に分布するようになる。

内で小胞輸送を受ける APP はその細この分泌過程および細胞膜上からの胞質ドメインが、他のタンパク質と相受けたAPP（immature APP [imAPP]）

エンドサイトーシスにより取り込まれた互作用できる唯一の領域であり、APP

が cdc2 キナーゼにより細胞分裂期に後のエンドソーム内でプロテアーゼ

細胞質ドメインと細胞質タンパク質と一時的にリン酸化される 5）。その生理（セクレターゼ）によるプロセッシングの相互作用が APP の細胞内輸送・代機能は明らかではない。神経細胞におを受け、一部の APP から AB が生成さ

謝・機能を制御していれ細胞外に分泌される（アミロイド生成

る。APP 細胞質ドメイン的代謝）。APP の大部分は AB の中央

は、3 つの機能モチーフ

部でプロセッシングされるため AB はを持つ（図 1）。
（1）653-

生成されない（アミロイド非生成的代YTSI-656 モチーフ（ア謝）。アミロイド生成的代謝を受ける

ミノ酸 番 号は APP695

APP は少ないが、その割合の増加がア イソフォ ー ム）は、神経細胞の変性と関連していると考え

APP の細胞内への取りられている。家族性アルツハイマー病

込み 2）、または、基底膜（FAD）の原因遺伝子である APP やプへのソーティングシグ

レセニリン（PS）の変異は、AB の生成

ナ ルとして 報 告され、

1）

量を増加させる 。しかしながら原因
遺伝子に変異がない場合（弧発性アルツハイマー病、SAD）では、細胞内

APP 分泌経路の選択・異常等がアミロイド生成的代謝の割合を増加させてい32

図 1. APP 細胞質ドメインの機能モチーフと結合蛋白質

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

微小管と相互作用可能

A

B

C

D

図 2. ラット海馬培養神経細胞におけるリン酸化 APP と APP の分布 6）な PAT1 タンパク質がA, 抗リン酸化 APP 抗体で染色したもの。細胞膜、神経突起、神経末端にリン酸化 APP の局在が観察できる。C、相互作用を行う 3）。（2）
抗 APP 抗体による染色。細胞体に APP が多く存在して667-VTPEER-672 モ
いる。B、D は同じ細胞の抗- チューブリン抗体染色。細胞の形態が確認できる。
チ ーフは、N-terminalいては、N- 型糖鎖修飾に加えてゴル

下する（図 1）9）。Cdk5 は、タウ蛋白質

ジ体で O- 型糖鎖が付加された APP（mature APP [mAPP] ）が、神経特異のリン酸化を行い AD 患者で観察される神経原繊維変化を引き起こす酵素

的に活性化されるプロティンキナーゼとしても知られており 13，14）、Cdk5 の活

Cdk5 によってリン酸化され、細胞膜性制御異常が APP とタウのリン酸化

および神経突起に存在するようになる

異常を介在して神経変性を引き起こし（図 2）6）。神経突起における mAPP のている可能性が考えられている。

リン酸化レベルは神経突起の伸張と共に増加し、リン酸化サイトに変異を導7）

入すると突起の伸張が抑制される 。

Thr668 のリン酸化は、このモチーフの高次構造を変化させるだけでなく、細胞質ドメイン全体の構造変換を引き起
こす 8，9）。Arg672 も APP のアミロイド
非生成的代謝に必要であり、このサイトの変異はアミロイド生成的代謝を増加させる 10）。（3）682-YENPTY-687
モチーフは、Fe65 や X11L 等、複数の細胞質タンパク質と相互作用を行う 11，12）。APP 細胞質ドメインと相互作
用し APP の代謝・AB の生成を制御している因子のうち、Fe65 は、APP 細
胞質ドメインのリン酸化による構造変換の結果、APP への結合能が著しく低〔参考文献〕
1）Price, D., Sisodia, S. S. and Borchelt,
D. R.（1998）Science 282, 1079-1083.
2）Lai, A., Sisodia, S. S. and Trowbridge,
I. S.（1995）J. Biol. Chem. 270, 35653573.
3）Zheng, P., Eastman, J., Pol, S. V. andPimplikar, S.（1998）Proc, Natl. Acad.
Sci. USA 95, 14745-14750.
4）Ramelot, T. A., Gentile, L. N. andNicholson, L. K.（2000）Biochemistry39, 2714-2725.
5）Suzuki, T., Oishi, M., Marshak, D. R.,
Czernik, A. J., Nairn, A. C. andGreengard, P. （1994） EMBO J. 13,1114-1122.
6）Iijima, K., Ando, K., Takeda, S.,
Satoh, Y., Itohara, S., Greengard, P.,
Kirino, Y., Nairn, A. C. and Suzuki, T.
（2000）J. Neurochem. 75, 1085-1091.

7）Ando, K., Oishi, M., Takeda, S.,
Iijima, K., Isohara, T., Nairn, A. C.,
Kirino, Y., Greengard, P. and Suzuki,
T.（1999）J. Neurosci. 19, 4421-4427.
8）Ramelot, T. A. and Nicholson, L. K.
（2001）J. Mol. Biol. 307, 871-884.
9）Ando, K., Iijima, K., Elliott, J. I.,
Kirino, Y. and Suzuki, T. （2001） J.
Biol. Chem. in press[August 21].
10）Tomita, S., Kirino, Y. and Suzuki, T.
（1998） J. Biol. Chem. 273, 1930419310.
11）Fiore, F., Zambrano, N., Minopoli, G.,
Donini, V., Duilio, A. and Russo, T.
（1995） J. Biol. Chem. 270, 3085330856.
12）Tomita, S., Ozaki, T., Taru, H.,
Oguchi, S., Takeda, S., Yagi, Y.,
Sakiyama, S., Kirino, Y. and Suzuki,
T. （1999） J. Biol. Chem. 274, 22432254.
13）Kusakawa, G., Saito, T., Onuki, R.,
Ishiguro, K., Kishimoto, T. andHisanaga, S. （2000） J. Biol. Chem.
275 17166-17172.
14）Patrick, G. N., Zukerberg, L., Nikolic,M., de la Monte, S., Dikkes, P. andTsai, L-H. （1999） Nature 402, 615622.

※アルツハイマー病研究用試薬につきましては p.31 をご参照下さい。

β-Glucan, Water Soluble
生化学用

B‐グルカンは、酵母・カビの細胞壁として存在しています。本品は、シイの骨格構造物として、また多くの担子タケ子実体から精製された水溶性の菌子実体（キノコ）の主要な多糖成分

B- グルカンです。

Source：Lentinula edodes
073-04811

10mg

7,000 円078-04741

50mg

6,000 円

074-04743

100mg

10,000 円

Guanosine 5'-Diphosphate Sodium Salt
生化学用
グアノシン 5' - 二りん酸は動物組織

取って GTP になります。

中に含まれ、生体内では ATP と GMP
量：95.0% 以上（HPLC）

からグアニル酸キナーゼにより合成さ含れます。また、ヌクレオシド二りん酸キ

水溶状：澄明ナーゼにより ATP からりん酸を受け

貯〈改法：2 〜 10℃ 保存

訂〉

NH2 O
NH

和光純薬時報 Vol.69 No.3 p.31
総説「L-012 化学発光による好中球活性酸素代謝特性の解析」図 2 のルミノールの構造式は正しくは右図の通りです。

NH
O

Luminol

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）33

糖尿病研究用 ELISA キット
Rat Glucagon ELISA Kit wako

Rat Glucagon Standard Curve
1.4

糖尿病研究用1.2
1Absorbanceグルカゴンには膵由来と腸管由来が存在します。膵グルカゴンは主に膵 A
細胞から分泌されるポリペプチドで、血糖上昇ホルモンとしてインスリンと共に糖代謝調節機構において重要な役割を果たしています。本キットはラット膵グ
ルカゴンを特異的に定量することができます。

0.8
0.6
0.4
0.2
0

〔キット内容〕
1）抗体固定化マイクロプレート

10

100

1000

10000

Rat Glucagon (pg /mL)

1枚
10ng
12mL 用
12mL
2錠
26mL
50mL
10mL
15mL
12mL
4枚

（抗ラット グルカゴン，ウサギ抗体）2）ラット膵グルカゴン標準品
3）ビオチン化ラット膵グルカゴン
4）ストレプトアビジン− HRP 溶液
5）基質剤（OPD 錠）
6）基質溶解液
7）洗浄原液8）緩衝液（A）
9）緩衝液（B）
10）反応停止液
11）プレートシール〔性 能〕
標準曲線範囲：50 〜 10,000pg/mL
測定時間 ：約 25.5 時間
検 体 量 ：50FL
特 異 性 ：ラット膵グルカゴンを特異的に測定できます。
腸管グルカゴン、GLP-1（グルカゴン様ペプチド）、GLP-2 とは反応しません。
297-57101

96 回用

75,000 円

Rat C-Peptide ELISA Kit wako
糖尿病研究用〔キット内容〕
1）抗体固定化マイクロプレート（抗ウサギ IgG，ヤギ抗体）
2）ラット C- ペプチド標準品
3）ビオチン化ラット C- ペプチド4）抗ラット C- ペプチド，ウサギ
5）ストレプトアビジン− HRP 溶液
6）基質剤（OPD 錠）
7）基質溶解液
8）洗浄原液9）緩衝液10）反応停止液
11）プレートシール

Rat C-Peptide Standard Curve
1.2
1
AbsorbanceC- ペプチドは、インスリンの前駆体であるプロインスリンのプロセシングにより、インスリンとほぼ等モル比で血中に放出されます。血中 C- ペプチド濃度は血中インスリン濃度を反映しており、C- ペプチド濃度の測定はインスリン投
与時の膵 B 細胞機能のモニタリングに有用です。

0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.1

1枚
50ng
8mL 用
12mL
12mL
2錠
24mL
50mL
35mL
12mL
3枚

1
10
Rat C-Peptide (ng /mL)

100

〔性 能〕
標準曲線範囲：1.56 〜 50 ng/mL
測定時間 ：約 5.5 時間
検 体 量 ：50FL
特 異 性 ：ラット C- ペプチドを特異的に測定できます。
ヒトをはじめ他の C- ペプチドとは反応しません。
295-57401

96 回用

75,000 円

糖尿病性合併症研究にAldose Reductase, Human, recombinant
生化学用
アルドースレダクターゼはグルコー
スをソルビトールに変換する酵素で、ソルビトールをフルクトースに変換するソルビトールデヒドロゲナーゼとともにグルコース代謝の副路であるポリオール経路を形成しています。アル
ドースレダクターゼは糖尿病性合併症

34

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）の発症への関与が示唆されており、その阻害剤の開発が盛んに行われています。

分子量 ：約 36,000
純 度 ：95% 以上（SDS-PAGE）
比活性 ：1.5 ± 0.2units/mg protein〔参考文献〕

形

状 ：5mmol/L DTT、50% グリセ
リン、50mmol/Lりん酸ナトリ
ウム緩衝液（pH 7.0）

Nishimura, C. et al. : Biochim.
Biophys. Acta, 1078, 171（1991）.

547-00581

0.4unit48,000 円

糖尿病性合併症の研究に正確なソルビトールの定量に
Sorbitol Dehydrogenase（EC 1.1.1.14）
生化学用
本品はポリオール代謝酵素に係わる重要な酵素であり、D- ソルビトールを基質とし、フルクトースへ分解する
微生物由来の基質特異性が高い酵素です。糖尿病の合併症はソルビトールの沈着から起きるといわれています。
従来から市販されている酵素ではソルビトール以外の糖類とも反応しましたが、本酵素を用いればソルビトールの正確な定量が可能になります。
代表的な糖類であるグルコース、マンニトール、ガラクトース（共に濃度は0.5mol/L）を基質とし単独もしくは混合溶液で反応させた結果、吸光度は変化せず基質特異性が高いことが証明されています。
合併症の進行するメカニズム研究
はもちろんのこと、食品中におけるソルビトールの定量にもお使いいただけます。
199-12391

50units/vial

20,000 円

549-00281

100mg

3,500 円545-00283

500mg

8,500 円543-00284

1g

15,000 円

549-00286

5g

45,000 円

量

希望納入価格（円）13,00039,00013,00039,00017,00019,000

糖尿病モデル作製用
Streptozotocin
生化学用
ストレプトゾトシンは、Streptomyces
achromogenes から得られる抗生物質
で、膵 B 細胞に対し特異的な細胞毒性をもっており、糖尿病モデル動物の作
製に広く用いられています。

外
観 ：わずかに薄い黄色粉末
溶 解 性 ：水、エタノール、アセトンに可溶
毒性 ： LD50 264 mg/kg（マウス経口）

スタチン系薬剤／ HMG-CoA レダクターゼ阻害剤
HMG-CoA レダクターゼ阻害剤は、体内でのコレステロール合成に必要な酵素を特異的に抑制し、血液中のコレステロールを低下させます。また、ファネシルピロリン酸の産生を抑えることにより、抗がん作用を示すと考えられています。さらに、最近では骨形成の促進も報告されており、その多様な作用に注

目が集まっています。
コード No.
193-12051
199-12053
162-19821
168-19823
125-04581
033-17301

品

名

規

格

容

Simvastatin

生化学用Pravastatin Sodium Salt

生化学用

Lovastatin
Compactin

生化学用
生化学用

25mg
100mg
25mg
100mg
25mg
25mg

Rat Leptin ELISA Kit wako
肥満研究用

Rat Leptin Standard Curve

Absorbance

脂肪細胞から分泌されるレプチンは、摂食抑制やエネルギー代謝の増大を
10.8
介して体脂肪量の調節などを司るホルモンです。レプチンは摂食抑制という生
0.6
理作用を持ちますが、一般肥満者や肥満モデル動物では脂肪組織でのレプチ
0.4
ン遺伝子の発現及び血中レプチン濃度は、逆に亢進していると最近報告され
0.2
ています。
0
〔キット内容〕
10
100
1000
10000
100000
Rat Leptin (pg /mL)1）抗体固定化マイクロプレート〔性 能〕
1枚（抗ラットレプチン，モノクローナル抗体）（培養上清）
標準曲線範囲： 78.1 〜 5,000 pg/mL2）ラットレプチン標準品
20ng3）HRP 標識抗体
312.5 〜 20,000 pg/mL（血漿、血清）
6mL（HRP 標識抗ラットレプチン，ウサギ）
測定時間 ：約 5.5 時間
4）基質剤（OPD 錠）
2錠
検 体 量 ：10FL または 50FL
5）基質溶解液24mL
特 異 性 ：ラットレプチンを特異的に測定できます。
6）洗浄原液50mL
ヒトレプチンとはほとんど反応しません。
7）緩衝液
20mL
8）反応停止液
9）プレートシール

12mL
2枚

297-57601

96 回用

61,000 円

和光純薬時報 Vol.69, No.4（2001）

35

和
光
純
薬
時
報
第
六
十
九
巻

タンパク質の電気泳動にポリアクリルアミド- プレキャストゲル（7.5%、10%、2-15%、4-20%）
電気泳動用

第
四
号

本品は、ポリアクリルアミドのプレキャストゲルです。ゲル中に SDS（Sodium Dodecylsulfate）が含まれていませんので、Laemmli 法による SDS-PAGE と Native-PAGE の両方に使用できます。
〔特 長〕★ 分解能が良く、シャープなバンドが得られます。
★ 保存安定性が良く、使用期限は製造日から 12 ヶ月です。
〔仕 様〕★ プレートサイズ………100（H）× 100（W）× 3.2（T）mm★ ゲルサイズ……………90（H）× 83（W）× 1（T）mm★ ウェル数………………12 ウェル

商品のコームは白色です。

〔泳動条件（SDS-PAGE）〕
サンプルバッファー：Laemmli 法サンプルバッファー
泳動バッファー：トリス / グリシン /SDS
電荷：200V 定電圧または 50mA 定電流（200V 定電圧を推奨します）
泳動時間：表 2 参照
染色：CBB 染色、銀染色〔ゲルの選択〕

SDS-PAGE では表 1 に基づき、サンプルのタンパク質の分子量に応じてゲルを選択下さい。
〔泳動時間〕

Laemmli 法による SDS-PAGE での泳動時間を表 2 に示します。
表1

表2
ゲル濃度
7.5%
10%
2-15%
4-20%

分子量（SDS-PAGE）
5 万〜 20 万
3.5 万〜 15 万
3 万〜 50 万
1 万〜 20 万注）Native-PAGE ではサンプルの荷電状態により移動度が変わりますので各々のサンプルでご確認下さい。
〔貯

電荷
ゲル濃度
7.5%
10%
2-15%
4-20%

定電圧
200V
150V
50 分
60 分
50 分
70 分
50 分
70 分
50 分
80 分

定電流
50mA
40mA
40 分
60 分
60 分
70 分
60 分
70 分
60 分
80 分

注）泳動時間は目安であり、室温・泳動条件により異なります。

法〕 2 〜 10℃（凍結厳禁）・遮光保存
コード No.
163-20721
166-20711
169-20701
166-20691

品
名
7.5% Polyacrylamide-precast Gel
10% Polyacrylamide-precast Gel
2-15% Polyacrylamide-precast Gel
4-20% Polyacrylamide-precast Gel

容

量

10 枚
10 枚
10 枚
10 枚

希望納入価格（円）15,00015,00015,00015,000

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

コード No. が 54＊−＊＊＊＊＊の商品は、Wako Chemicals USA, Inc. で製造されたものです。
記載価格は希望納入価格であり消費税等は含まれておりません。

発行所

36

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.
06-6203-3741
和光純薬時報 Vol.69, No.4
（2001）（代表）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

2001 年10月15日
岸 井 松 司大 西 礼 子
共進社印刷株式会社