2003. NOV.

特集号
No.54

h t t p : / / w w w . w a k o - c h e m . c o . j p

遺伝子関連製品
アポトーシス関連製品
Apoptosis Ladder Detection Kit wako

P.2〜P.8

遺伝子導入製品
amaxa社 Nucleofector

TM

P.9〜P.16
SystemApoptosis Ladder Detection Kit wako Q&A

免疫細胞への導入

Apoptosis in situ Detection Kit wako

心臓血管系細胞への導入

Apoptosis in situ Detection Kit wako Q&A

マウス胚線維芽細胞（MEF）への導入

Apoptosis Screening Kit wako

神経細胞系への導入

アネキシン V-フルオレセイン染色キット

株化細胞への導入

PARP Western Blot Kit wako

Cell Line Optimization NucleofectorTM Kit

Apotech社 アポトーシス/ミトコンドリア関連抗体

siRNA導入アプリケーション

お 知らせ
NucleofectorTM Deviceのプログラムバージョンアップ（V2.1）のお知らせ ‥ p.13

蛍光法による高感度アポトーシスDNA検出キット

Apoptosis Ladder Detection Kit wako
アポトーシスは発生・分化・成熟・老化過程において細胞（組織）の統御されたシステムの中で、機能的に不要になった細胞の除去や、異常を来し有害となった細胞の積極的な排除が、遺伝子により制御されている細胞の死として理解されています。細胞のアポトーシスの測定は、細胞機能の基礎的研究のみならず、薬剤の開発研究などに盛んに行われています。
本キットは、高感度蛍光試薬によりアポトーシス細胞中のDNAラダーを検出するよう設計されています。分析に使用する主要な試薬がすべて揃っており、簡便、迅速に再現性よく、培養細胞および組織細胞のアポトーシスによるラダーを検出することができます。

高感度検出

103個のアポトーシス細胞が検出できます。

迅速な分析

細胞の溶解、DNAの抽出、電気泳動、SYBR® GreenⅠによる染色、DNAラダーの検出までの一連の操作時間は約2時間30分です。

簡便な操作

最適化された試薬をプロトコールに従って使用するだけでアポトー
シスが検出できます。

高い再現性

細胞中のタンパク質や脂質の影響を受けない独自のDNA抽出法を採用しているため、電気泳動できれいなラダー像が得られます。

安全な操作

フェノールやクロロホルムのような有害な有機溶媒を使用しません。

【キット内容】
sEnzyme Reaction Solution ……………… 18ml×1本
sRNase ……………………………………… 1ml用×1本
sEnzyme Activator ……………………… 2ml用×1本
sProtein Digestion Enzyme ……………… 1ml用×1本◆アポトーシス誘導されたHL-60細胞の検出
HL-60細胞をアクチノマイシンDでアポトーシス誘導
し、アポトーシス誘導細胞と非誘導細胞を各比率でtotal 105個細胞に調製して、DNAラダーを本キットでsDNA Extraction Solution ………………… 30ml×1本
sTE Buffer ………………………………… 1.5ml×1本
sAgarise Gel ………… 12レーン用×2枚（24レーン用）

検出しました。100％（10 個アポトーシス細胞）のサン………… 12レーン用×8枚（96レーン用）
sLoading Buffer（10×）…………………… 200μl×1本

プルにおいて、ヌクレオソーム単位で断片化したDNAが検出されました。

sLadder Marker（123bp）………………… 200μl×1本
sSYBR® GreenⅠ＊1 ………………………… 100μl×1本

5＊1：本品はMolecular Probes, Inc.製です。
コードNo.
291-53204
297-53201

2

品

名Apoptosis Ladder Detection Kit wako

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

規格

アポトーシス研究用

容量

希望納入価格（円）24レーン用

36,00096レーン用

58,000Q
Q && AAQ SYBR GreenⅠの保存方法は？
A キット開封後は、ボルテックスミキサーで十分に撹拌し、アガロースゲル1枚当りの使用量（約12μl）
ずつポリプロピ®

◆キットの性能

Q 分析可能な細胞数は？
〜10 個です。10 個未満は検出限界以下、10 個以上でA 10は回収DNAの粘度が高すぎてアガロースゲルにアプライ
3

6

3

7

しにくくなります。

レン容器に分注、−20℃で遮光保存して、使用直前に室温まで速やかに解凍して下さい。ガラス製やその他の容器では、色素が吸着するために保存安定性が低下します。

Q SYBR GreenⅠを希釈するには？
Q 組織細胞のアポトーシスを検出するには？
未固定の新鮮組織により作製した凍結切片からは、専用
Bufferを用いて、1：10,000まで行って下さい。さA プロトコールに従って操作することにより検出可能です。 A TAB
らに希釈すると検出感度が低下します。また、蒸留水で®

Q キット以外に用意するものは？
A 試薬類はイソプロパノール、70％エタノール、TAE
Buffer、滅菌蒸留水が必要です。器具類は1.5mlマイクロ
チューブ、遠心機、サブマリン型電気泳動装置、染色ト
レイ、シェーカー、UVトランスイルミネーター、ポラロ
イドカメラ、Yellow Gelatin Filter（SYBR® Green Gel
Photographic Filter）
が必要です。

希釈しても感度が低下します。

Q 希釈したSYBR GreenⅠ溶液の保存安定性は？
A 室温あるいは4℃にて遮光保存した場合で24時間です。
Q SYBR GreenⅠによる染色時間は？
A 少なくとも30分間以上行って下さい。30分間以下では検出感度が低下します。また、120分間までは延長しても感®

®

度は変わりません。

◆電気泳動

Q SYBR GreenⅠの破棄方法は？
A EtBrの際と同様に活性炭を用いた濾過を行い、SYBRGreenⅠを吸着させて、吸着後の活性炭を焼却して下さ®

Q 使用できる電気泳動装置は？
A サブマリン型電気泳動装置で、ミューピッド等が使用できます。
Q アガロースゲルへのDNAサンプルのアプライ量は？
Bufferと合わせて12〜20μlです。DNA量として
A Loading
10ng〜10μgになります。
Q 電気泳動写真できれいなラダー像を得るには？
個相当になA アプライするDNA量がアポトーシス細胞10
るようTE Bufferで希釈して下さい。10 個以上のアポト®

い。活性炭フィルターにはEXTRACTOR（コードNo.
532-41011）が使用できます。
®

Q SYBR GreenⅠ染色したアガロースゲルに照射するUVの波長は？
A 短波長の方が効果的で、254nmで最も感度のよい結果が得られます。300nmでは感度が低下します。

4

5

Q SYBR GreenⅠ染色したアガロースゲルへの®

UV照射時間は？

®

ーシス細胞から得られるDNA量は、SYBR GreenⅠ染色では過剰な蛍光を生じるため、きれいなラダー像が得られません。

A UV照射による励起時間は1分間以内にして下さい。15分
間を越えると、著明に検出感度が低下します。低下の程Q 電気泳動は何分間くらいすればいいの？
Buffer中の色素
A 30〜40分間です。目安として、LoadingのうちBPB（泳動速度の速い方）がゲルの陽極端より約1㎝

度は照射時間に依存します。また、一度蛍光強度の減少が生じる（検出感度が低下する）と、UV再照射あるいはSYBR® GreenⅠで再染色後に照射しても蛍光強度は増加しません。

手前に到達するまでと考えて下さい。

◆トラブルシューティング

Q TAE Bufferの調製法とは？
A 以下の組成で50×ストック溶液を調製するか、あるいは50×TAE（コードNo. 313-90035）を用意し、使用時に50倍

Q 抽出して得られたDNAがTE Bufferに溶解しにくい時は？

希釈して下さい。50×ストック溶液：Tris Base 242g、Glacial Acid 57.1ml、0.5M EDTA 100ml（pH8.0）

A ペレットDNAは乾燥させすぎると溶解しにくくなります。この場合は、十分に（一晩程度）時間をかけて溶解しQ 泳動BufferにTBEは使えるの？
A 使えません。添付のアガロースゲルはTAEを用いて作製されていますので、泳動BufferもTAEを使って下さい。

て下さい。ピペッティングによる混合はDNA損傷の原因となりますので避けて下さい。

Q 十分な検出感度が得られない場合は？
個です。
A 本キットによる検出限界はアポトーシス細胞10
従って、アポトーシス誘導率が100％未満の試料では、
3◆SYBR® GreenQ SYBR GreenⅠとEtBrの違いは？
SYBR GreenⅠとEtBrと同様、核酸のインターカレータ
A ーです。EtBrに比べ、検出感度が25倍、変異原性が低い®

103個細胞からアポトーシス細胞は検出できませんので、初発細胞数を104〜106個に増やして検出を行って下さい。

®

ことなどが特長です。

Q SYBR GreenⅠを取り扱う場合に注意することは？
A DMSO溶液のため、保護手袋を二重に着用して使用して下さい。
®

Q 電気泳動写真上でLadder Markerのバンドが薄い、
あるいは、ほとんど見えない場合は？

MarkerやDNAサン
A カメラの露光が少ない時は、Ladder
プルのバンドが見えにくいことがあります。カメラのシャッタースピードや絞りを調節し、露光をより多くして写真撮影して下さい。

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

3

TUNEL法によるアポトーシス簡易検出キット

Apoptosis in situ Detection Kit wako
本キットは、TUNEL法（TdT-mediated dUTP nick end labeling）に基づいたキットで、パラフィン包埋組織切片
や凍結切片や中性ホルマリン固定した培養細胞中のアポトーシス細胞を高感度に検出することができます。本キットは、使用する主要な試薬がすべてそろっているため、簡便かつ迅速にアポトーシスを検出することができます。

【特 長】【キット内容】（各1本）●迅速な検出ができます。
例えばパラフィン包埋組織切片の場合、脱パラフィンから検鏡までの一連の作業時間は、約2時間です。
●操作が簡単です。
各ステップの主要な反応試薬を全てセット化、わずら
わしい試薬の調製は不要です。
●バックグラウンドが低く、きれいなシグナルを得ることができます。
●2cm2の大きな切片でも処理できます。

sProtein Digestion Enzyme ……………………… 1ml
sTdT ……………………………………………… 40μl
sTdT Substrate Solution ………………………… 4.4ml
s100×POD-Conjugated Antibody ……………… 44μl
sDAB Solution …………………………………… 4.4ml
sDAB Enhancer ………………………………… 200μl
sDNaseⅠ …………………………………………… 4μl
s10×DNaseⅠReaction Buffer …………………… 40ml

コードNo.
295-53501

品

名容

Apoptosis in situ Detection Kit wako

培養細胞CHO-K1：アポトーシス誘導後（クロルプロマジン処理） （×400）

ラット小腸

量

40回用

（×400）

希望納入価格（円）60,000

ヒトB cellリンパ腫：HE染色（×200）

Q
Q && AA

Q PBSは、予めどのくらい調製すればよいですか？
A パラフィン包埋切片の場合、PBSの洗浄操作は、計12回あります。また、DNaseⅠによる陽性コントロールの反応を行うと計14回になります。余裕を持って、2,000mlぐ
らい調製しておくことをお奨めします。

Q 1回の反応で検出できる切片の大きさはどのくらいですか？

Q 発色後の脱水処理は、エタノールとn-ブタノール
どちらがよいですか？
A n-ブタノールの方が色彩鮮やかに染まります。
Q メチルグリーン溶液は販売していますか？
A アポトーシス研究用のメチルグリーン溶液を販売しています（コードNo.138-12701、100ml 4,000円）。

以下の切片が理想ですが、最大では約2cm の切片をA 1cm処理することができます。

I
Q 検体として培養細胞を用いたのですが、DNase
処理しても全くシグナルが観察できなかったので

DAB溶液に沈澱が生じているのですが、発色に影響はないですか？

A 筋組織由来の培養細胞など細胞の種類により浸透化処理
だけでは不十分な場合があります。その場合、浸透化処

A 多少沈殿が生じているだけでは問題ありません。上清を使用して下さい。キット開封後は、なるべく超低温（−80

理後にタンパク質分解酵素処理（例えば37℃、5分間）を行って下さい。

2

Q

2

すが…

℃）に保存して下さい。

Q シグナルがでないのですが…
Q POD標識抗体の免疫動物は何ですか？
A シグナルがでない理由として、DNAの切断を伴うアポトーシスが生じていない場合と反応がうまくいっていない
A ヒツジです。
ため検出できない場合の２つが考えられます。
Q バックグラウンドが高いのですが…
その場合、DNaseⅠにより陽性コントロールを同時に行うことで判定することができます。
POD標識抗体反応の前にブロッキング反応を行って下さい。
A 1% ヒツジ血清／5% BSA／0.1%Tween20／3M NaCl／
陽性コントロールにシグナルが検出され、標準検体にシ10mMりん酸Buffer（pH7.4）を調製し、室温で約1時間反
応後、PBSで5分間、3回洗浄して抗体反応に移って下さい。組織の状態や種類などによりますが、バックグラウ
ンドが下がる場合があります。

グナルがでない場合は、DNA切断を伴なうアポトーシスが生じていない場合が考えられます。陽性コントロールにもシグナルが確認されない場合は、反応がうまくいっていない場合が考えられます。その場合、タンパク質分
解時間を長くするか、分解酵素の添加量を多くすると効
果的な場合があります。

〔参考文献〕
１）Nobuo, F., Hironobu, S., Soichirou, S., Masaki, N., Daiji, I., Ryoji, O. and Hiroshi, N. : J. Pathol., 186, 429（1998）.
２）Hong-Chuan, L., Shinji, Y., Junichiro, S., Hong, L., Subrata, G., Jhon, B., Carolina, L., Toshinobu, F., Mitsuaki, K.
and Shunro, S. : Jpn. J. Cancer Res., 91, 34（2000）.
３）Shibata MA, Morimoto J, Otsuki Y. : Cancer Gene Ther. 2002 Jan ; （9 1）: 16-27.
４）Shibata MA, Horiguchi T. Morimoto J, Otsuki Y. : J Gene Med. 2003 Mar, （5 3）: 219-31.
５）柴田雅朗・森本 純司・伊藤 裕子・大槻 勝紀：乳癌基礎研究 Vol. 12. 17-22 2003.

4

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

ドラッグスクリーニングに…

Apoptosis Screening Kit wako
アポトーシスの生化学的検出法であるTUNEL法（TdT-mediated dUTP nick end labeling）の原理を利用し、アポトーシス細胞をマイクロプレート内で標識、発色させるキットです。多検体処理が可能ですので、ドラッグスクリーニングに適したキットです。

【特長】●96穴のマイクロプレートで検出できます。
●104個の細胞に含まれる103個以上のアポトーシス細胞を検出できます。
●使用する試薬がすべてセット化されているため、簡単かつ迅速に検出できます。
●全工程を3時間で行うことができます。

【キット内容】●アポトーシスの程度を数値化できます。

sFixation Solution ………………………… 580μl×1本
sPermeabilize Solution …………………… 19.2ml×1本【備

sTdT Substrate Solution ………………… 4.8ml×1本
sHydrogen peroxide ……………………… 340μl×1本

sTdT ………………………………………… 20μl×1本

考】実績のある細胞●付着細胞：HepG2, CHO, HT-29

s500×POD-conjugated Antibody ………… 20μl×1本
sAntibody Dilution ………………………… 9.6ml×1本●浮遊細胞：HL-60, U937

sChromogenic Substrate（DAB）……… 2mg錠×5錠
sChromogenic Substrate Buffer ………… 10ml×1本
sStop Solution ……………………………… 9.6ml×1本
sSterilized Microtiter Plate …………… 96ウエル×1枚【HL60細胞（Actinomycin D誘導）】
HL-60 細胞のアポトーシス誘導100

HL-60細胞（Actiomycin D）
HL-60細胞（ActiomycinD）

誘導時間（hr.）

M

0.8

1

2

3

4

5

6

死細胞率
アポトーシス検出

80

60
0.4
40

吸光度
吸光度

死細胞率
（％）
死細胞率
（％）

0.6

0.2
20

0

0

1

2

3

4

5

6

0

DNAラダー検出

誘導時間（hr.）
誘導時間
（hr.）

コードNo.
291-55801

品

名

Apoptosis Screening Kit wako

10 4個のHL-60を各ウェルに分注し、1
時間おきに1μg/mlアクチノマイシンDを添加して培養し、経時的に吸光度を測定した。その後、プロトコールに従って検出を行い、顕微鏡下で細胞の形態的観察により死細胞率を算出し、吸光度との関係を見た。また、経時的にラダー検出を行った。

容

量

96回用

希望納入価格（円）46,000

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

5

フローサイトメーターによる初期アポトーシス検出キット

アネキシン Ⅴ- フルオレセイン染色キット
アポトーシスの初期段階では、通常細胞膜の内側に存在するホスファチジルセリンが細胞膜表面へ移動することが知られています。アネキシンVはCa2＋の存在下でホスファチジルセリンと特異的に結合しますので、本品は蛍光法によりアポトーシス細胞を検出することができます。また、DNAと結合するよう化プロピジウムを用いて二重染色することにより、初期段階のアポトーシスとネクローシスを容易に区別することが可能です。

【染色方法】
A. フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡

B. 付着細胞1）106個の細胞をPBSで洗い、5分間、200×gで遠心分

1）染色する前にチャンバースライドで細胞を成長させ、離します。
2）細胞ペレットを染色液100μlで再懸濁させ、15〜

アポトーシスを誘導させます。
2）チャンバーを取り除きます。

25℃で10〜15分間インキュベートします。
3 ）蛍 光 顕 微 鏡 で 分 析 す る 場 合 は 、 励 起 波 長 4 5 0 〜

3）培養液を取り除き、染色液100μlでスライドを覆い500nm、検出波長515〜565nmで行います。フロー

ます。
4）スライドにカバースリップを被せ、15〜25℃で10〜

サイトメトリーを用いる場合は、細胞濃度に従いBinding Bufferを0.4〜0.8ml加えます。励起波長

15分間インキュベートします。
5）A．3）と同様の操作を行います。

488nm、Fluorescein検出には515nm、Propidium
Iodide検出には600nm以上のフィルターを用いて分析します。

【キット内容】【染色液の調製】

sAnnexinⅤ-Fluorescein …………………………110μl

10サンプルを染色するには、Annexin V-FluoresceinsPropidium Iodide…………………………………150μl
sBinding Buffer ……………………………………50ml

20μ lを Binding Buffer 1,000μ lで 希 釈 し た 後 、Propidium Iodide 20μlを加えます。

アネキシン Ⅴ

ヨウ化プロピジウム

デュアル分析

正常細胞

アポトーシス細胞

カンプトテシン処理したU937細胞のFACS分析（上段）カンプトテシン未処理、（下段）カンプトテシン処理（4μg/ml）

コードNo.

品

名297-55901 Annexin Ⅴ-Fluorescein Staining Kit

規格

アポトーシス研究用

容量

希望納入価格（円）

50回用〔参考文献〕
Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H. and Reutelingsperger, C. : J. Immunol. Methods, 184, 39（1995）

6

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

40,000アポトーシスの初期判定に…

PARP Western Blot Kit wako
アポトーシスの実行過程において、様々なタンパク質がカスパーゼによって分解されます。ポリ（ADP-リボース）ポリメラーゼ〔PARP〕もその一つで、アポ【実験操作フローチャート】
遠心管（0.5×107〜5×107細胞/ml）

トーシスの初期にカスパーゼ3によって分解されることが知られています。本キットはこのPARPの分解産物を生化学的解析手法の1つであるウエスタンブロット法
を用いて検出するシステムです。アポトーシスの生化
学的な検出法には従来より、アネキシンⅤ法、TUNEL

遠心（1,000rpm, 5分、室温）、沈殿
上清の除去
5ml PBS遠心（1,000rpm, 5分、室温）、沈殿法などが知られていますが、それらと本キットを組み合わせて使用することでより正確なアポトーシスの判定が可能になります。

【特

上清の除去
超音波破砕処理

凍結融解処理電気泳動用サンプル
バッファー1ml添加、15秒間破砕処理

長】−80℃で約1時間凍結後、室温に戻し融解、攪拌 。数回繰り返し、電気泳動用サンプルバッファー1ml
添加●各ステップの主な反応試薬をセット化●PARP分解産物（85kDa）およびPARP（116kDa）を検

65℃の恒温槽中で15分加熱処理

出可能

20μl/レーンをSDS-ポリアクリルアミドゲルにアプライ【キット内容】（各1本）
s一次抗体…………………………………………… 40μl
sALP標識二次抗体 ……………………………… 40μl

転写、200mA, 2時間
ブロッキングs洗浄液（5×）…………………………………… 100ｍl

30mlブロッキング溶液

sブロッキング溶液………………………………… 90ｍl
s基質発色液（BCIP）……………………………… 70μl

37℃、30分または4℃で一晩放置
一次抗体液

s基質発色液（NBT）……………………………… 150μl
s発色用緩衝液……………………………………… 25ｍl

室温、１時間
NC膜洗浄（洗浄液40ml、3分間振盪）×3回＊メンブレンはキットに付属しておりません。別にご用意下さい。PVDF膜ではバックグラウンドが高く、

室温、
１時間

検出感度が低いため本キットには適していません。
ニトロセルロース膜(ミリポア社イモビロン-NC

NC膜洗浄（洗浄液40ml、3分間振盪）×3回

二次抗体液

Standard)を推奨いたします。

発色＊お使いになる細胞によって実験プロトコールが変わりますので、最適な系を実験毎にご確認の上ご使用下さい。
＊サンプルバッファー中に6M Ureaを添加、また超音

発色液

水洗、風乾
上記フローチャートは、NC膜１枚分使用時のプロトコールです。

波破砕を行っているのは、PARP/DNA結合体から効率よくPARPを分離するためです。
コードNo.

品

名規295-56801 PARP Western Blot Kit wako

格容アポトーシス研究用量24レーン用

希望納入価格（円）35,000【関連製品】
種

別

コードNo.

品

名

規

格

酵

素

168-18821 Poly（ADP-ribose）polymerase, from Bovine Thymus 生化学用容量

希望納入価格（円）100μg

52,000PARP阻害剤 018-18611 4-Amino-1,8-naphthalimide

生化学用

20ｍg

11,000PARP阻害剤 166-20211 （6 5H）-Phenanthridinone

生化学用

500ｍg

24,000

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

7

Apotech社

アポトーシス／ミトコンドリア関連抗体
約1,000品目のアポトーシス関連抗体、測定キット及び関連試薬をラインナップしているApotech社製品の取り扱いを開始致しました。

【主な分野】●Apoptosis/Detection, Death Receptors, Caspases, Bcl-2 Family, Mitochondria, DNA Fragmentation, PARP-1●Inflamation/TNF & TNF-R Superfamily, IL-1R & TLR, NFκB & JNK Signaling●Cancer Research/MDR●Obesity & Diabetes Research
下記11品目について在庫致しております。

【在庫品】
コードNo.

メーカーコード

品

名

容

量

希望納入価格（円）575-72451

APO-20A-069-C100

Anti Mouse Smac/DIABLO, Monoclonal Antibody

100μg

69,600572-72461

APO-20A-066-C100

Anti Human Smac/DIABLO, Monoclonal Antibody

100μg

69,600579-72471

APO-20A-060-C100

Anti Human Apaf-1, Monoclonal Antibody

100μg

76,800576-72481

APO-20A-061-C100

Anti Mouse Apaf-1, Monoclonal Antibody（13F11）100μg76,800573-72491

APO-20A-062-C100

Anti Mouse Apaf-1, Monoclonal Antibody（18H2）

100μg76,800576-72501

APO-20A-063-C100

Anti Rat Native Cytochrome c, Monoclonal Antibody

100μg

63,800573-72511

APO-20A-007-C100

Anti Horse Denatured Cytochrome c, Monoclonal Antibody

100μg

56,500570-72521

APO-25A-011-C100

Anti Active Caspase-3, Rabbit

100μg

107,000

577-72531

APO-25A-025-C100

Anti Active Caspase-9, Rabbit

100μg

108,000

574-72541

APO-25A-023-R100

Anti Mouse Survivine, Rabbit

100μl

63,800571-72551

APO-20A-059-C100

Anti Human HtrA2/Omi, Monoclonal Antibody

100μg

75,400K. T.

【染色写真】-UV+UV

Cytochrome c

Smac/DIABLO

Anti Human Smac / DIABLO, Monoclonal Antibodyによる
ヒトNT2細胞の免疫蛍光染色

Anti Mouse Smac / DIABLO, Monoclonal AntibodyによるマウスSmac / DIABLOの免疫組織染色8Wako Bio Window No.54 NOV.2003

Anti Mouse Apaf-1, Monoclonal Antibody（13F11）
による
各種マウス組織でのウエスタンブロッティング

ウイルス法に代わる簡易な遺伝子導入法

NucleofectorTM System
遺伝子導入は遺伝子機能の研究や遺伝子治療の開発等において重要な手法の一つであります。しかしながら、プ
ライマリー細胞に遺伝子を導入するために用いる従来法（リポソーム法、ウイルスベクター法）では手間がかかり、又わずかに導入された遺伝子も十分な発現が得られない等多くの問題があります。
amaxa社が開発したNucleofectorTM はエレクトロポレーション法を応用しNucleofectorTM Deviceと細胞専用試薬を使用することによりプライマリー細胞、導入の難しい株化細胞に高い導入効率を実現しました。遺伝子を核内に直接導入するため発現時間が早く、早い時間に発現確認が可能です。また、本システムはプラスミドDNAの他にオリゴDNA、ｍRNA、siRNAについての遺伝子導入アプリケーションも可能です。

【操作概要】
1. 細胞を用意します。
2. 細胞に最適なNucleofectorTM溶液と遺伝
子、細胞を混合しキュベットに移します。
3. キュベットをNucleofectorTM Deviceにセットし、各細胞ごとに特化した最適プ
ログラムを選択後、電気を流します。
4. キュベットから細胞を培養プレートに戻し培養を行います。
NucleofectorTM Device【特長】●高い遺伝子導入効率/低い死細胞率●導入の際にサイトカイン等の刺激を必要としない●ウイルス法に比べ操作が簡単【キット内容】（25回用）●siRNAの導入が可能●遺伝子導入のためのわずらわしい条件設定が不要

sNucleofectorTM Solution ……………………… 2.25ml
sSupplement ……………………………………… 0.5ml【原sキュベット ………………………………………… 25個
sピペット …………………………………………… 25本

理】

従来の非ウイルス法

NucleofectorTMテクノロジー【CD4＋ T cell（helper T cell）における発現タイムコース】

核にDNAを効果的に導入するた DNAを核に直接導入できるた
めには、細胞の増殖が必要
め、すぐに遺伝子が発現する●分裂細胞が盛んな細胞に適 ●プライマリー細胞や株化細胞した方法に適した方法●インキュベーション時間が ●発現までの時間が短い
長い（24〜48時間）（株化細胞：2〜4時間、●従来のエレクトロポレーシ
プライマリー細胞：
ョンでは死細胞率が高い
4〜16時間）

コードNo. メーカーコード
500-98921 AAD-1001 NucleofectorTM Device

品

DNAが直接核へ導入されているので、短時間で発現している。
新たに分離された末梢血単核細胞において、細胞質での発現（●：EGFP）および細胞表面分子での発現（■：H-2Kk）

名

容

量

1台

希望納入価格（円）2,500,000

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

9血液学/免疫学研究

免疫細胞への導入
Human Dendritic Cell用キット
免疫学的治療の分野にて注目を浴びるHuman Dendritic Cell用の専用試薬をご紹介致します。
非ウイルス法では、導入が不可能とされていましたが、本システムでは、簡易な操作で約40％の遺伝子導入効率を実現します。導入後も細胞機能を失わせずに、免疫機能を保持します。

【遺伝子導入後のDendritic Cellの免疫機能保持】
TNF-αrelease（pg/ml）

IL-6 release（pg/ml）

LPS（Lipopolysaccharide）を加えたものと加えていないDendritic CellのTNF-α、IL-6の分泌量をELISA法にて測定した。
〔参考文献〕
Dendritic cells：Mordmüller B, Krappmann D, Esen M, Wegener E Scheidereit C. EMBO Rep. 2003 Jan；4（1）：82-87.

【ヒトB細胞への導入例】

100transfection efficiency（％）

90
80
70

71

66

60
50

50
40

36

30
17

20
10
0
B cell5μgのpEGFPを導入。
上) 顕微鏡像下) 蛍光顕微鏡像

コードNo. メーカーコード

品DC504-98941 VPA-1002 Human T Cell Nucleofector

CD34 cell

血球/免疫細胞への導入

NK

H-2KK
EGFP

導入後16〜24時間後の導入効率

名容507-98931 VPA-1001 Human B Cell NucleofectorTM Kit
TM

T cellKit

501-98951 VPA-1003 Human CD34 Hematopoietic Progenitor Cell NucleofectorTM Kit
TM

579-32671 VPA-1004 Human Dendritic Cell Nucleofector

Kit571-77051 VPA-1005 Human Natural Killer Cell Nucleofector

TM

Kit

量

希望納入価格（円）

25回用

60,00025回用

60,00025回用

60,00025回用

60,00025回用

60,000〔参考文献〕
T cells：１）Cron RQ. Immunol Res. 2003 ; 27（2-39）. 185-202.
２）Harriague J, Bismuth G. Nat Immunol. 2002 Nov ; （3 11）: 1090-1096.
３）Kunzmann S, Wohlfahrt JG, Itoh S, Asao H, Komada M, Akdis CA, Blaser K, Schmidt-Weber CB. FASEB J. 2003 Feb; 17（2）: 194-202.
４）Kunzmann S, Mantel PY, Wohlfahrt JG, Akdis CA, Blaser K, Schmidt-Weber CB. FASEB J. 2003 Jun ; 17（9）: 1089-95.
５）Messi M, Giacchetto I, Nagata K, Lanzavecchia A, Natoli G, Sallusto F. Nat Immunol. 2003 Jan ; 4（1）: 78-86.
６）Moriuchi M, Moriuchi H. J Biol Chem. 2003 Apr 11 ; 278（15）: 13003-7.
７）Murphy LL, Hughes CC. J Immunol. 2002 Oct 1 ; 169（7）: 3717-25.
８）Nambiar MP, Fisher CU, Kumar A, Tsokos CG, Warke VG, Tsokos GC. J Immunol. 2003 Mar 15 : 170（6）: 2871-6.
９）Roy J, Paquette JS, Fortin JF, Tremblay MJ. Antimicrob Agents Chemother. 2002 Nov ; 46（11）: 3447-55.
10）Schmidt-Weber CB, Wohlfahrt JG, Akdis CA, Blaser Eur J Immunol. 2002 Apr ; 32（4）: 1196-204.
11）Tenbrock K, Juang YT, Tolnay M, Tsokos GC. J Immunol. 2003 Mar 15 ; 170（6）: 2971-6.
B cells：１）Shi GX, Harrison K, Wilson GL, Moratz C, Kehrl JH. J Immunol. 2002 Sep1 ; 169（5）: 2507-15.
２）Tolnay M, Vereshchagina LA, Tsokos GC. J Immunol. 2002 Dec 1 ; 169（11）: 6236-43.

10

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

80

心臓血管系研究70
transfection efficiency（％）

心臓血管系細胞への導入【HUVECへの導入例】
pEGFPをプログラム
U-01にて導入後24時
間後に観察。
上）顕微鏡像下）蛍光顕微鏡像

60
50

47

50

51

47

40

40

35

30
20
10
0
HMVEC-L（20〜24h）

AoSMC
（24h）

HUVEC
HCAEC
（20〜24h） （20〜25h）

508-98961

品

名容

VPB-1001 Human Coronary Aretry Endothelial Cell NucleofectorTM Kit
TM

Kit

Rat Cardiomyocyte
Neonatal
（48h）

H-2KK
EGFP

心臓血管系細胞への導入効率

コードNo. メーカーコード

HMSC
（24h）

量

25回用

希望納入価格（円）60,00025回用

60,00025回用

60,000505-98971

VPB-1002 Human Umbilical Vein Endothelial Cell Nucleofector

573-35491

VPB-1003 Human Microvascular Endothelial Cell-Lung NucleofectorTM Kit

502-98981

VPC-1001 Human Aortic Smooth Muscle Cell NucleofectorTM Kit

25回用

60,000576-35481

VPE-1001 Human Mesenchymal Stem Cell NucleofectorTM Kit

25回用

60,000574-77041

VPE-1002 Rat Cardiomyocyte NucleofectorTM Kit

25回用

60,000〔参考文献〕HUVEC：１）Zernecke A, Erl W, Fraemohs L, Lietz M, Weber C. FASEB J. 2003 Jun ; 17（9）: 109.
２）Wojciak-Stothard B, Ridley AJ. J Cell Biol. 2003 Apr 28 ; 161（2）: 429-39. 9-101.

皮膚病学/細胞工学研究

マウス胚線維芽細胞
（MEF）
への導入
本キットは多種に渡るMEF細胞株に対応するため、初回にスターターキットを用いて導入条件を検討します。
（A-23、T-20）
を実行します。
キット中のMEF 1 およびMEF 2 NucleofectorTM Solutionを用い、下記表の2プログラム得られた結果より、単品のMEFキットを購入して頂きます。
①Nucleofector TM Solution
MEF1, MEF2の各試薬を用いA-23、T-20を実行します。

【キット内容】●スターターキット（10回用）
sMEF 1 NucleofectorTM Solution ……………… 0.45ml②一番効率の良かった試薬

sMEF 2 NucleofectorTM Solution ……………… 0.45ml
sMEF 1 Supplement ……………………………… 0.1mlとプログラムの組み合わせを見つけます。
③②の結果をもとに、次回よりMEF1またはMEF2キッsMEF 2 Supplement ……………………………… 0.1ml
s専用キュベット …………………………………… 10個

トの25回用を使用します。

s専用ピペット ……………………………………… 10本【導入効率】

MEF（C57B6Jx129SV）へNucleofectorTM Solution MEF 1、プ
ログラムA-23にてpEGFP導入後、24時間経過時に、蛍光顕微鏡にて観察。

MEF細胞へプログラムA-23を使用し
pEGFPを導入後、24時間経過後の導入効率
細胞生存率：60-80％
Ａ.MEF（C57BL/6, spontaneously immortalized）へ1.5μgのpEGFPを導入。
継代数：20 継代（Courtesy of Dr. H. Hermanns and Prof. P.H. Heinrich,
University of Aachen, Germany.）transfection efficiency（％）

【導入例】〔参考文献〕
Mouse embryonic fibroblasts ：１）Verrecchia F, Tacheau C, Wagner EF, Mauviel A. J
Biol Chem. 2003 Jan 17 ; 278（3）: 1585-93.
２）Verrecchia F, Wagner EF, Mauviel A. EMBO Rep. 2002
Nov ; （3 11）: 1069-1074.

Ｂ.MEF（C57B6Jx129SV, SV40-transformed）へ7μgのpEGFPを導入。
継代数：4継代（Courtesy of Prof. Saftig, University of Kiel, Germany.）

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

11

100

【Keratinocyte-adultへのpEGFPの導入例】

Keratinocyte Nucleofector
2.5μgのpEGFPを導入。

TM

90

90

導入後24時間経過時の蛍光顕微鏡像

transfection efficiency（％）

導入後24時間経過時の顕微鏡像

80
70

69

70

NHDF-Adult（24h）

NHEM-Neo
（5h）

65

60

53

51

50
40

36

30
20
10

Kitを用い、プログラムT-24にて0
Chond,
human
（24h）

Kera,
human,
neo（24h）Kera,human,
adu light.
（24h）

Kera,
human,
adu dark.
（24h）

NHDF-Neo
（5h）

H-2KK
EGFP

皮膚系細胞への導入効率

コードNo. メーカーコード
509-98991

品

名容

VPD-1001 Normal Human Dermal Fibroblast NucleofectorTM Kit
TM

量

希望納入価格（円）

25回用

60,000506-99001

VPD-1002 Normal Human Epidermal Keratinocyte Nucleofector

Kit

25回用

60,000503-99011

VPD-1003 Normal Human Epidermal Melanocyte-Neonatal NucleofectorTM Kit

25回用

60,000TM577-76431

VPD-1004 Mouse Embryonic Fibroblast 1 Nucleofector

Kit

25回用

60,000574-76441

VPD-1005 Mouse Embryonic Fibroblast 2 NucleofectorTM Kit

25回用

60,000

10回用

35,000570-76421

VPD-1006 Mouse Embryonic Fibroblast Nucleofector
TM573-35511

VPF-1001 Human Chondrocyte Nucleofector

574-70721

VPH-1001 Mouse ES Cell NucleofectorTM Kit

TMStarter Kit

Kit

25回用

60,00025回用

60,000

神経研究

神経幹細胞から中枢神経、グリア細胞まで幅広く導入できます【ラット海馬状神経細胞への導入例】
導入後48時間経過時の顕微鏡像

導入後48時間経過時の蛍光顕微鏡像

導入後48時間経過時の顕微鏡像

導入後48時間経過時の蛍光顕微鏡像

Rat Neuron NucleofectorTM Kitを用い、pEYFPをプログラム
O-03により導入。

Mouse Neuron NucleofectorTM Kitを用い、3μgのpEGFPをプロ
グラムO-05により導入。

【マウス神経幹細胞への導入例】【ラット神経幹細胞への導入例】

導入後48時間経過時の顕微鏡像

導入後48時間経過時の蛍光顕微鏡像

マウス胚から神経幹細胞を単離し、Mouse Neural Stem Cell
NucleofectorTM Kitを用いてプログラムA-33よりpEGFPを導入。

12【マウス海馬状隆起神経細胞への導入例】

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

導入後2日経過時の蛍光顕微鏡像

導入後7日経過時の蛍光顕微鏡像

ラット胚から神経幹細胞を単離し、Rat Neural Stem Cell
NucleofectorTM Kitを用いてプログラムA-31よりEGFPを導入。

【ラット アストロサイトへの導入例】【マウス アストロサイトへの導入例】

ラット胚（E17）よりラットアストロサイトを単離後プログラ
ムT-20にてpEGFPを導入し24時間後に蛍光顕微鏡にて観察。

マウス胚（E14）よりマウスアストロサイトを単離後プログラ
ムT-20にてpEGFPを導入し2日後に蛍光顕微鏡にて観察。

【神経細胞系への導入効率】
transfection efficiency（％）

80
67

70
60

59

58

60

60

54

50

46

43

40

40

35
30

30
20
10

yt
e
oc

oc

en
dr
od
ig
ol

ta
ra

se
ou

ch

ik

m

m

st
or

to
r
as

ls
ra
eu
tn
ra

se
ou

yt
e

yt
e
oc

ce
te
m

st
em
ur
al
ne

ro
al
rs
do
en

ll

ll
ce

al
tic
ra

tc

ga
ot

tg
oo
lr
sa
or
td

ra

or

ng
l

an
gl

io

io

n

n

l
m
pa
ca
po
th
ip

ra

hi
p
n
ke
ic
ch

m

ou

se

hi
p

po

po

ca

ca

m
pa

m
pa

l

l

0

pEGFP（EYFP）導入から24時間後、48時間後の導入効率

コードNo. メーカーコード

品
TM

名

容

量

希望納入価格（円）570-35521

VPG-1001 Mouse Neuron Nucleofector

Kit

25回用

60,000577-35531

VPG-1002 Chicken Neuron NucleofectorTM Kit

25回用

60,000TM570-38681

VPG-1003 Rat Neuron Nucleofector

572-72341

VPG-1004 Mouse Neural Stem Cell NucleofectorTM Kit

579-72351

VPG-1005 Rat Neural Stem Cell NucleofectorTM Kit

25回用

60,000570-77021

VPG-1006 Mouse Astrocyte NucleofectorTM Kit

25回用

60,000577-77031

VPG-1007 Rat Astrocyte NucleofectorTM Kit

25回用

60,000578-77061

VPG-1008 Mouse Oligodendrocyte NucleofectorTM Kit

25回用

近日発売予定575-77071

VPG-1009 Rat Oligodendrocyte NucleofectorTM Kit

25回用

近日発売予定Kit

25回用

60,00025回用

60,000jjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj

NucleofectorTM Deviceのプログラムバージョンアップ（V2.1）のお知らせ
U937、THP-1細胞等用にプログラム（V-01〜V-33）を追加するため、NucleofectorTM Deviceのプログラムのアップデートを行っております。アップデートは、お持ちの装置にチップカードを差し込み、読み込むだけと、簡単な操作で完了します。

【現在のソフトウェアバージョンの確認方法】
現在のソフトウェアのバージョン確認方法はNucleofectorTM本体の電源を入れ、画面にV2-1と表示されない場合はバージョンアップを行なって下さい。V2-1と表示された場合はアップデートの必要はありません。

このバージョンアップは無償で行いますのでお持ちのDeviceのプログラムバージョンをご確認下さい。アップ
グレードのお済みでない方は弊社の営業担当、取り扱い代理店までお問い合わせください。

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

13株化細胞への導入
NucleofectorTMでは株化細胞にも高い導入効率が可能です。従来1％しか導入できなかった細胞に60％以上導入できたというデータもあります。試薬は株化細胞用試薬を3種類（R. T. V）から、お手持ちの細胞に一番最適な試薬を使用します。現在までの株化細胞への導入実績は下記の通りです。

■株化細胞
293

C6

CHO-K1

COS-7

HaCaT

HeLa

HepG2

HL-60

JurkatK562

NIH3T3

PC-12

THP-1

U937

23132/87

32D

3T3-L1

ATDC

BAF-3

BCBL-1

b-END

BJAB

BJBC3879

BWα、β

C2C12

CA46

CEM.NKR

CH27

Colo-201

Colo-205

daudi

DT40

DU145

EBV-transform B cell

EL-4

F36P

FDC-P

H1299

H9(AHT78)

HMC-1

HT29

h-tert BJ1Hydra cellKarpas299

KG1

L1.2

L-52

LCL

LNCaP

MCF-7

MDA-MB231

MDCK

MDCKII

Meg-01

MNT-1

Mouse L Cell

MT2

MT4

Namalwa

NK3.3

NK92

NKL-1

NRK52E

NS0

OCI-AML1a

Panc-1

Ramos

RAW 264.7

RBL

RPMI8226

RTB3

SAOS-2

SK-MEL-28

SP2/0

SP9

SW13

SW1353

SW48

SW480

T1165

T2

tet-E

TF-1

TG40

TK-1

U87MG

UT-7/Epo

UT-7/GM

UT-7/Original

WEHI

y189/111

YT

Z70

ZYGF
赤字は専用プロトコール有り

transfected cells（％）

【Jurkat細胞での一過性の発現タイムコース】

Jurkat細胞（ACC 282, DSMZ）にマウスMHC classⅠ
moiecule H-2KKをコードしたプラスミドを導入し、生細胞中の発現率をフローサイトメリーにて分析をおこなった。

コードNo. メーカーコード品TM

500-99021 VCA-1001

Nucleofector

名

Kit R for Cell Line（e.g. for HeLa, NIH 3T3, UT7/Epo）507-99031 VCA-1002 NucleofectorTM Kit T for Cell Line（e.g. for CHO）
504-99041 VCA-1003

14

NucleofectorTM Kit V for Cell Line（e.g. for 293, COS-7, K562, PC12, Jurkat, HepG2, HL60, HaCaT）

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

容量

希望納入価格（円）

25回用

60,00025回用

60,00025回用

60,000導入実績のない細胞へ導入をお考えの方にCell Line Optimization NucleofectorTM Kit
NucleofectorTMは最適化された条件で遺伝子導入を行なうシステムですが、本キットは導入条件が最適化されていない細胞に対して最適導入条件を検討するキットです。検討方法はプロトコールに指示された下記プログラムを
用 い て 遺 伝 子 導 入 を 行 な う こ と に よ り 最 適 試 薬 と 最 適 プ ロ グ ラ ム を 決 定 し ま す。 キ ッ ト 内 容 は Cell Line
Nucleofector Kit R, T, Vの三種類の試薬から成り、50回用になっています。

〈ステップ1〉〈ステップ2〉

死細胞が少なく、高導入効率である試薬、プログラムを見つけます。

見つけたプログラムを基にさらに有効なプログラム条件の検討も可能です。弊社にお問い合わせ下さい。

各試薬について上記の8つのプログラム（8×3＝24通り）
で遺伝子導入を行ないます。

【Cell Line Optimization Kitの使用例】
MLO-Y4-A2細胞の導入条件の最適化（北海道医療大学歯学部 口腔生化学講座より提供データ）
MLO-Y4-A2細胞へEGFPとLuciferase遺伝子プラスミドをco-transfectionし導入効率の検討を行った。
従来法での導入効率は非リポソーム系脂質の導入試薬により30％程度であった。

導入遺伝子
プログラム
A-23
A-27
G-16
O-17
T-01
T-16
T-20
T-27

EGFP
導入効率
（％）
0
0
0
0
0
0
50
20

Luciferase
導入効率

生存率
（％）

10855
2704
4724
28024
8655
65310
78570
48358

50
50
50
50
50
50
50
50

transfected
cells（％）
transfected cells(%)

EGFP
Luciferase
100

100000

90

90000

80

80000

70

70000

60

60000
50000

50

40000

40
30

30000

20

20000

10

10000

0

0
A-23

A-27

G-16

O-17

T-01

T-16

T-20

T-27

各試薬とプログラムにて導入を行った所、Vキットでの導入効率が良くプログラムT-20にて高い導入効率を示した。
（EGFP発現は蛍光顕微鏡により目視にて測定）
遺伝子量：2μg（EGFP）、2μg（Luciferase）
Luciferase分析時間：30秒
細胞生存率：50％

コードNo. メーカーコード

品■ステップ2結果
Vキット
導入遺伝子
プログラム
S-24
T-24
U-09
U-20
U-23
contral（none）

EGFP
導入効率
（％）
75
70
70
70
75

Luciferase
導入効率173793151537146255145398166057

80
80
80
80
80

0

138

100

生存率
（％）

EGFP
Luciferase% transfected
cells
transfected
cells（％）

Vキット

VVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVV■ステップ1結果

100

1900009018000080170000701600006015000050

14000040

130000301200002011000010

1000000

0Contral S-24

T-24

U-09

U-20

U-23

ステップ1のデータをamaxa社に送ると導入データを基にS24, T-24, U-09, U-20, U-23のプログラムの検討が提案された。
Vキットにて提案されたプログラムにて導入を行うとステップ1では得られなかった高導入効率（75％）が細胞を死滅させることなく得られた。
（EGFP発現は蛍光顕微鏡により目視にて測定）
細胞生存率：80％

名TM

573-26341 VCO-1001 Cell Line Optimization Nucleofector

容
Kit

量

50回用

希望納入価格（円）140,000

Wako Bio Window No.54 NOV.2003

15

siRNA導入アプリケーション
siRNAは特異的な遺伝子発現抑制作用を持つため、非常に注目を集めています。
この効果を高めるには細胞への導入効率が大きなポイントになってきますが、NucleofectorTMは操作が簡単であり、しかも高導入効率が得られるため、siRNAの導入法として最適です。また、多種の細胞に導入できるというメリットがあります。細胞ごとに最適化した試薬とプログラムを用いてPlasmidを導入する条件で導入できます。

【特長】●siRNAのタイプに関わらず細胞毎の同一試薬・プログラムにて導入可能●RNaseフリーを保証●操作が簡単¡導入条件：NucleofectorTM Solution

入した時の蛍光強度（100μl）
中に終濃度0.5〜

ダーク黒…GFPの蛍光強度
ライトブルー…コントロー
ルsiRNA（GFPの発現を1μMのsiRNAを加えた¡使用キット：NucleofectorTM Kit V for
Cell Line

阻害しない）を導入した
時の蛍光強度

2003.NOV.

グリーン…GFP-siRNAを導No.54【NucleofectorTMを用いたJurkat TAg細胞への合成siRNAの導入】

Wako Bio Window

NucleofectorTMを用いた¡プログラム： C-16

GFPを安定的に発現しているJurkat TAg細胞ヘGFP発現抑制siRNAの導入後、1日目と3日目の蛍光強度を測定。
3日目でも抑制効果が維持していた。

【マウス皮質へのsiRNAの導入例】
Mouse cortical neurons (E17) にEGFP plasmid,
EGFP発現阻害のsiRNAをco-transfectionした。
導入後4日経過時の蛍光顕微鏡像にて観察。
A)EGFP 3μg使用時のGFPの発現
B)EGFP3μg使用時のDAPI染色C)EGFP 3μg, siRNA1.5μg使用時のGFPの発現
D)EGFP 3μg, siRNA1.5μg使用時DAPI染色E)EGFP 3μg,siRNA 3μg使用時のGFPの発現
F)EGFP 3μg,siRNA 3μg DAPI染色〔参考文献〕
１）Chun HJ, Zheng L, Ahmad M, Wang J, Speirs CK, Siegel RM, Dale JK, Puck J, Davis J, Hall CG, Skoda-Smith S, Atkinson TP, Straus
SE, Lenardo MJ. Nature. 2002 Sep 26 ; 419（6905）: 395-9.
２）Bidere N, Lorenzo HK, Carmona S, Laforge M, Harper F, Dumont C, Senik A. J Biol Chem. 2003 Jun 2■RNAi用陽性コントロール用siRNA
コードNo.
314-05911
319-05841
316-05851
313-05861
310-05871
317-05881
314-05891
317-05901
311-05921
318-05931（以下の製品は、株式会社ニッポンジーン製です。
）

品 名Control siRNA duplex, Jellyfish GFP（EGFP）
Control siRNA duplex, Human β-actin
Control siRNA duplex, Human NuMA
Control siRNA duplex, Human cdk1
Control siRNA duplex, Human Eg-5
Control siRNA duplex, Human Lamin A/C
Control siRNA duplex, Human Lamin B1
Control siRNA duplex, Human Vimentin
Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL2（ピッカジーンベクターに相当）
Control siRNA duplex, Firefly Luciferase GL3（ピッカジーンベクター2に相当）

容 量
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol
5nmol

希望納入価格（円）20,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00020,00020,000I.K.

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