抗体アドバイスガイド
抗体の選択からアプリケーションまで

付録

抗体の使用

標的を知る

抗体の取り扱い抗体の選択

抗体アドバイスガイド抗体の使用に関するベストプラクテ
ィスに従うことで、論文掲載可能な結果を得ることができ、トラブルシューティングに費やす時間が最小限に抑えられます。この抗体アドバイ
スガイドでは、抗体の選択、取り扱い、使用方法に関する詳細な推奨事項を紹介しています。また、標的を理解することの重要性についても考察しており、役立つツールとプロトコー
ルへのリンクを提供しています。

目次

抗体の選択

抗体の選択

抗体の構造とクラス抗原エピトープ
モノクローナル vs ポリクローナル抗体
宿主とターゲット種
抗体フォーマット
抗体組成
抗体の検証
蛍光標識抗体抗体の取扱いターゲットを知る

抗体の取り扱い

保存
分注
無菌状態
解凍

発現
細胞内局在
分子量
複合体内のターゲット

プロトコールコントロール
作業用希釈と滴定
緩衝液
抗体の詳細な記録

標的を知る

抗体の使用

付録
抗体の使用

用語集
抗体選択ツール
人気の資料

付録

抗体アドバイスガイド

抗体の取り扱い

抗体の選択

抗体の選択 [Selecting Your Antibody]
抗体、または免疫グロブリン（Ig）は、Ｂ細胞により産生されるＹ字型の大型タンパク質です。
すべての抗体は、異なる標的または抗原に特異的に結合します。抗体は免疫系の重要な部分を構成し、それにより、人体が感染に対して免疫応答を生じることが可能になります。抗体には、特定のタンパク質に選択的に結合する能力があるため、ライフサイエンス研究における有用なツールとして、細胞や細胞溶解物中の標的タンパク質の検出や捕捉を可能にします。そのため、抗体は商業的に生産されており、ウエスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫組
織化学(IHC)などの技術で汎用されています。
一次抗体は目的の標的に特異的に結合します。二
次抗体は一次抗体に結合し、通常は酵素や色素を結合させて、目的の標的を間接的に検出可能にします。場合によっては、一次抗体に酵素や色素を結合させて、二次抗体なしで検出可能です。お客様の実験では、一次抗体と二次抗体、または一次抗体のみを使用することができます。

抗体の使用

標的を知る

このセクションでは、抗体と関連用語を紹介し、抗体データシートとウェブページに掲載されている情報について説明します。この情報は、抗体選択時に役立ちます。
抗体の構造とクラス [Structure and Class]
抗体構造として最も多くみられるのは、２本の重鎖（H 鎖:Heavy Chains）と２本の軽鎖（L 鎖:Light
Chains）によって形成される特徴的なＹ字型です。
各重鎖は軽鎖と会合して、標的タンパク質に特異的な抗原結合部位をＮ末端に含む抗原結合フラグ
メント（Fab:Antigen Binding Fragment）ドメインを生成します。２本の重鎖は相互作用してフラグメント結晶化可能（Fc:Fragment, Crystallizable）
ドメインを形成します。これは、マクロファージなどの免疫細胞との抗体相互作用のために重要です
（図１）
。

付録

抗原結合
部位

抗原結合
部位

Fc ドメイン

軽鎖

重鎖

図 1．抗体構造。 Fab、抗原結合フラグメント；Fc、結晶化可能
フラグメント；C、C 末端；N、N 末端。

ヒトの場合、抗体は 5 種類の重鎖を持ち、Ig クラス、別名アイソタイプと呼ばれるものを定義します。体内では、これらのクラスが免疫反応の種類と段階に応じて機能します。IgA、IgG 免疫グロブリ
ンは、さらにサブクラスに分類できます（表１）。
血液中の免疫グロブリンの大部分は IgG 型であり、免疫グロブリンの主要なクラスとなっています。
すべての市販抗体は、クラス、場合によりサブクラ
スにより特徴付けられます。これは、抗体データシートまたはウェブページの「アイソタイプ(Isotype)」の項目で確認できます。実験室では、Ig クラスが実験での抗体性能に影響を与える可能性があります。二次抗体については、一次抗体の宿主種に加えて、検出するために一次抗体のアイソタイプも一致させる必要があります。
表 1．ヒトおよびマウスの Ig サブクラス。
ヒト Ig サブクラス

マウス Ig サブクラス

IgA1

IgG1

IgA2

IgG2a

IgG1

IgG2b

IgG2

IgG3

IgG3
IgG4

各哺乳動物のアイソタイプとそれらに関連する結合価の詳細な説明については、Immunoglobulins：
Classes and Subclasses（免疫グロブリン：クラスとサブクラス）のウェブページを参照してください。

抗体の選択抗原エピトープ [Antigen Epitopes]
エピトープは、抗体の抗原結合部位により認識される抗原の一部です（図２）。同じタンパク質に対する異なる抗体は、異なるエピトープを認識することができます。

抗原

宿主種と標的種 [Host and Target Species]
抗体産生のために、マウスなどの宿主動物に、異なる標的種からの抗原を注射します。種を識別する
ために、抗体にラベル付けすることがよくありま
す（図３）
。
宿主種

標的種

マウス抗ヒトアディポネクチン
図 3．抗体の命名規則。

付録

ヒトのタンパク質を標的とするためにマウスで産生された抗体は、マウスでヒトのタンパク質に対して産生されたと言うこともできます。抗体の選択時には、理想的には、標的種は細胞または組織の種と一致していなければなりません。例えば、ヒトの皮膚細胞を研究する場合、ヒトのタンパク質を標的とする抗体を選択しなければなりません。ただし、一部のタンパク質の構造については、種間でほとんど違いがない場合があります。従って、ヒトのタンパク質に対して産生された抗体は、そのマウス型タンパク質も認識する可能性があります。
これは種間交差反応性(Species Cross-Reactivity)と呼び、実験計画時に役立つように抗体データシー
トに記載されていることが多いです。

抗体の使用

モノクローナル抗体とポリクローナル抗体
モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のMonoclonal and Polyclonal Antibodies（モノクローナル抗体とポリクローナル抗体）に関する専用ウェブページを参照してください。抗体の種類間での違い、それぞれの長所と短所について概説しています。

標的を知るほとんどの場合、タンパク質を検出しようとする
際、そのタンパク質を標的とする抗体を選ぶだけでよいのです。ただし、標的タンパク質の特定のエピトープを検出するための抗体が必要になることがあります。この場合、抗体作製時に標的となった
エピトープまたは配列に関する情報が提供されている抗体を探してください。例えば、タンパク質のＣ末端内の領域を検出する場合、Ｃ末端配列が免疫原として使用されている抗体を選ぶことが重要です。この情報は、抗体データシートまたはウェブ
ページの「免疫原(Immunogen)」で確認できます。
エピトープはタンパク質の部位であり、タンパク
質は細胞内の様々な場所（細胞膜、細胞質、核など）に存在します。標的エピトープの細胞内局在も、以下の実験条件に影響を与える可能性があります。
▪ 緩衝液の選択－細胞内エピトープでは、抗体がその標的に接近可能にするために透過性緩衝液が必要です。核エピトープでは、他の細胞内エピ
トープよりも厳しい透過性が必要となる場合があります。
▪ 固定－固定により細胞膜の透過性が高まり、抗体が細胞内エピトープに接近可能になります。
細胞膜を損傷させることなく固定と透過性を最適化するために、慎重に固定処理を選択することが重要です。
▪ ELISA の抗体適合性－エピトープは、酵素結合免疫吸着法（ELISA）の捕捉(Capture)抗体と検出(Detection)抗体のいずれでも利用できる必要があります。

モノクローナル抗体とポリクローナル抗体のいずれを選択するかは、実験の目標によって決まり、いずれにも長所と短所があります。

抗体の取り扱い

図 2．抗原の構造。

抗体の選択

エピトープ

いずれかを購入します。
▪ モノクローナル抗体（mAb:Monoclonal Antibody）
は、単一の標的タンパク質上の固有のエピトー
プを認識します。mAb は、１つのＢ細胞のクローン集団から生成され、クローン名で識別できます。同じクローン名の抗体はいずれも同一のＢ細胞から生成されるため、実験を通して一貫した抗体を選択するのに役立ちます。クローン
名は、抗体の製品データシートかウェブページ
で確認できます。
▪ ポリクローナル抗体（pAb:Polyclonal Antibody）
は、単一の標的タンパク質上の複数のエピトー
プを認識します。Ｂ細胞の非クローン集団から生成されるため、抗体の混合物と見なすことができます。

抗体アドバイスガイド

表 2．従来の動物ベースの方法により生成された抗体に関連する機能。
抗体フォーマット説明

詳細

抗血清(Antiserum)

抗原を注射した動物からの部分精製された血液（赤血球と凝固タンパク質が除去されている）

■

抗体の選択

Ig 画分

追加精製された抗血清

組織培養上清ハイブリドーマ組織培養からの上清。ハイブリドーマは、(TCS:Tissue Culture 抗原を注射された動物から抗体産生 B 細胞を回収して不Supernatant)
死化細胞株と融合させることにより産生される。
精 製 さ れ た 免 疫 グ 組織培養上清から精製された抗体。
ロブリン
腹水(Ascites fluid)

ポリクローナル抗体
実験に影響を与えうる他の抗体など、不要なタンパク質が含まれている可能性がある。
■
ポリクローナル抗体■■

モノクローナル抗体
濃度が不明な場合がある。
■
精製されたものよりも濃度が低い場合がある。
■
モノクローナル抗体■
濃度がわかっている。
■
通常、他の形態よりも高濃度。
腹腔内でハイブリドーマ細胞を増殖させるために使用さ ■ モノクローナル抗体
れる、マウスまたはラットから得られた腹水（腹腔内の体 ■ 高濃度であることが多い。
■
液貯留）。
実験に影響を与えうる他の血清タンパク質が含まれて
いる。
■

付録

抗体の使用

標的を知る

抗体の取り扱い

Ig：免疫グロブリン

二次抗体の標的種は、一次抗体の宿主種と一致していなければなりません。例えば、ヤギ抗マウス二次抗体は、マウス抗ヒト一次抗体に結合します。
抗体フォーマット [Format]
抗体は、その製造方法に応じて、様々なフォーマッ
トで入手可能です。フォーマットに関する一部の情報は、抗体製品の詳細において「フォーマット
(fromat) 」、「 精 製 (purification) 」、「 製 造(manufacturer)」に記載されているはずですが、必要に応じて、製造元に詳細情報をお問い合わせください。フォーマットを理解することで、実験に最適な抗体を選択しやすくなります。
従来の抗体産生
従来の動物を使用した抗体産生法には長所と短所があります（表２）。抗体の産生方法を知る必要はないかもしれません。しかし、この情報は、お客様の必要条件を満たす最適な抗体を選択する際や、実験のトラブルシューティングに役立ちます。
データシートを読み取る際は、細胞培養、腹水、血清に由来する抗体は、精製されたフォーマットである可能性が高いことに注意してください。抗体の特定の製造方法に関する詳細については、追加の情報源を参照しなければならない場合があります。
組換え抗体産生動物を使用した従来の産生法に対する代替法として、モノクローナル抗体は組換え技術により産生することができます。動物の免疫系を利用して抗体を産生する代わりに、in vitro で抗体を産生させます。この目的のために、抗体遺伝子を発現ベクタ
ー中にクローン化した後、細菌細胞、酵母細胞、または哺乳動物細胞に導入します。

例えば、ファージディスプレイライブラリーは、細菌宿主により選択され、産生されることができる
発現ベクター中にクローン化された巨大な抗体遺伝子群です。この方法により、モノクローナル抗体が産生されます。
組換え抗体の産生には、従来の方法と比較して様々な利点があります。
▪ 一貫性－組換え技術による抗体産生では、抗体の正確な配列がわかっているため、バッチ間の一貫性が保たれます。さらに、従来のモノクロー
ナル産生に関連するハイブリドーマドリフト*の可能性がなくなり、一貫性とデータの再現性が向上します。
▪ フォーマットの柔軟性－抗体のアイソタイプ、サブタイプ、または種の変更がはるかに簡単です。
▪ 迅速な産生－通常、組換え抗体の産生では、従来のモノクローナル抗体ほど時間がかかりません。
▪ 動物を使用しない－抗体産生に関する動物福祉の懸念がなくなります。
市販品として入手可能な組換え抗体があります。
オーダーメイドの組換え抗体生成サービスも多くの企業により提供されています。ヒト免疫レパー
トリーの 95％以上をカバーするヒト抗体遺伝子を集 め た Human Combinatorial Antibody Libraries（HuCAL®）**を使用した組換え抗体産生サービス
をバイオ・ラッドから提供しています。これらの遺伝子をファージミドベクター中にクローン化させて、大腸菌でスクリーニングします。
HuCAL 組換え抗体産生に関する詳細
は、HuCAL® Technology Explained のウェブページをご覧ください。

抗体の選択抗体の取り扱い
標的を知る

抗体組成 [Antibody Formulation]
安定剤 [Stabilizers]
抗体組成は、バイアル中に存在する緩衝液、防腐剤、 安定剤により抗体の物理的な完全性を保持します
安定剤を表します。組成は実験に直接影響しうる（表 4）。
ため、上手く選択することが重要です。抗体は液体
表 4.一般的な抗体安定剤。
や凍結乾燥（フリーズドライ）でも提供されうるた
安定剤
目的
使用不可
め、再懸濁が必要になります。汎用される緩衝液、
■
BSA
安定剤
担体タンパク質不含抗
防腐剤、安定剤について以下に説明しますが、それ体を必要とするアッセがすべてではないことに注意してください。
イ*

抗体の選択

表 3．一般的な抗体保存剤。
標識抗体 [Conjugated Antibodies]
保存剤
目的
使用不可
精製フォーマットの他、標識抗体が利用可能です。
EDTA
脂質保存用キレート剤 ■ 機能アッセイ
これらの抗体は、酵素または蛍光色素に結合させ■インテグリン検出
ることができます。多くの二次抗体は、例えば、西ゲンタマイシン硫 抗生物質（タンパク質 洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）に結合させて、酸塩合成を阻害）
抗菌剤および抗ウイル イムノブロッティングで化学発光を検出できます。 グリシン
ス剤
一部の用途として、特定波長の光の下で蛍光を発プロクリン
広範囲の抗菌性を持ち セルソーターの生細胞の免する色素に抗体を結合させることが有用です。結
(ProClin)防腐剤
保存期間を延長するこ 疫染色に対して悪影響を与合した抗体にレーザー光を当てると蛍光が生じ、とができます。
える可能性がある。
■
アジ化ナトリウム 防腐剤
生細胞の染色
適切な撮像装置、顕微鏡、またはフローサイトメー■
インビボ試験と機能アッターで検出可能です。蛍光によって、目的タンパク
セイ■
質の発現の有無（及び細胞内局在）が示されます。
HRP 検出ラベル■
アミン基を含む結合
抗体を酵素または蛍光色素に結合させる場合、こホウ酸ナトリウム 抗菌剤
れは製品名に反映されています（例えば、「マウス
チメロサール
防腐剤および抗真菌剤 抗ヒトアディポネクチン：HRP」では、抗体を HRP（メルチオレートとしても知られてに結合させていることを示します）。この章の「蛍いる）
光標識抗体」のセクションで、蛍光色素結合抗体のEDTA:エチレンジアミン四酢酸 HRP:西洋ワサビペルオキシダーゼ
詳細について確認できます。
(Hoseradish Peroxidase)■

防腐剤 [Preservatives]
防腐剤を使用して、微生物の増殖や他の望ましくない変化による分解から抗体を保護します（表３）。

***

日本国内では、ジーンフロンティア株式会社より「抗体職人」として本受託作成サービスを提供しております。詳しく
は ジ ー ン フ ロ ン テ ィ ア 株 式 会 社(https://www.genefrontier.com)までお問合せください。利
用制限があります。最終ページをご確認ください。

酵素活性阻害用の安定剤

補体試験（安定剤は in vitro で補体活性を阻害する）-

タンパク質用の安定剤；溶液中での酵素活性を保持し、凍結乾燥
時に凍結保護をもたらす。
* BSA を含まない抗体は、担体タンパク質不含(Carrier protein-free)または担体不含(Carrier-free)と呼ばれることが多い。担体不含抗体は、
マスサイトメトリー、in vivo 試験、機能アッセイなどの多くの用途に最適である。BSA:ウシ血清アルブミン抗体の検証 [Antibody Validation]
市販抗体については、目的の用途で作用すること、
経時的な分解がないこと、結果を混乱させうる高レベルの非特異的結合がないことを確認するためにある程度検査されている必要があります。

付録

ハイブリドーマドリフト(Hybridoma Drift):ハイブリドーマ
細胞が分裂を繰り返すにつれて抗体をコードする遺伝子の塩基配列が経時的に変化する遺伝的浮動(Genetic Drift)により、ハイブリドーマから産生される抗体が変化すること。

タンパク質用の安定剤

抗体標識(コンジュケ
ーション)
-

抗体の使用

緩衝液 [Buffers]
水性緩衝液は、多くの抗体製剤の基剤となります。 タンパク質安定剤
pH を一定に維持するのに役立ち、通常は無毒です。 （#BUF069A）
E-アミノ-n-カプロ
最もよく使用される２つの緩衝液は、リン酸緩衝
ン酸
生理食塩水（PBS）とトリス緩衝生理食塩水（TBS）
トレハロースです。ただし、PBS はアルカリホスファターゼ検出法には使用できません。塩化ナトリウムは、pHを一定に維持するためにも使用できます。

抗体アドバイスガイド

付録

抗体の使用

標的を知る

抗体の取り扱い

抗体の選択

しかし、抗体の最も基本的な要件として、目的のタンパク質に正確に結合することがあります。抗体を選択する際には、抗体メーカーのデータを見て、どの程度の検証がなされているのかを理解することが重要です。
ターゲットへの正確な抗体結合を検証するためにいくつかの方法があります。ウエスタンブロッテ
ィングにより、抗体が標的を正確に検出していることを確認できます。抗体により、複数のサンプル型で同様のバンドが生成される必要があります。
しかし、より決定的な検査があります。一般的な方法として、標的タンパク質がノックアウトされた細胞株とその野生型の細胞株からのサンプルを並べて、抗体を検査します。抗体が標的タンパク質に特異的である場合、野生型細胞株ではバンドが認められ、ノックアウト（KO）細胞株では認められません。抗体を検証する他の方法として、免疫沈降と そ れ に 続 く 質 量 分 析 （ IP-MS ） お よ びsiRNA(Short Interfering RNA）ノックダウンがあります。

際に検出できます。抗体を選択するための一般原
則の他、蛍光標識抗体を選択する際には以下を考慮してください。
励 起 波 長 / 蛍 光 放 出 波 長 [Excitation andEmission]
蛍光物質には、励起スペクトル（照射に必要なレーザー光の波長）と蛍光放出スペクトル（蛍光に必要な波長の幅）があります。いずれも、検出装置と適合する必要があります。フローサイトメトリーを使用する場合、ご使用のフローサイトメーターのレーザーと検出器に適合する蛍光物質を結合した抗体を選択してください。
複数の蛍光標識抗体（マルチプレックス）を使用す
る場合、それらの蛍光スペクトルが重複しないよ
うにしてください。重複すると、いずれの抗体が蛍光に対応しているのかを区別するのが困難になることがあります。
当社の Spectraviewer オンラインツ
ールは、波長が重複しない、適合性のあるフルオロフォアを選択するのに役立ちます。

複数の細胞株や用途で検査された抗体を選択するのが最良であり、KO、siRNA、または IP-MS の検証データが利用可能であればさらに好ましいです。
バイオ・ラッドの PrecisionAb 抗体は、ウエスタ
輝度 [Brightness]
ンブロッティングを目的として複数の細胞株で検バックグラウンド蛍光と区別できるように、蛍光証されており、多くは KO 細胞株、siRNA、または物質が十分に明るいことが重要です。メーカーのIP-MS を使用した、強化された検証も受けていま
データを製品ページで確認することで、その輝度す。
を評価できます。例えば、フローサイトメトリーや細胞処理後に翻訳後修飾または活性化されたタン
蛍光抗体法のデータは、実験で検出可能な輝度をパク質に特異的な抗体を選択することは、処理細評価するのに役立ちます。
胞と未処理細胞の間でのいくつかの比較に有用で検出分解能を最適化するには、明るい蛍光物質をす 。 バ イ オ ・ ラ ッ ド の Phospho-Specific
使用して希少タンパク質を検出するのが最良です。
PrecisionAb 抗体については、処理細胞溶解物と暗い蛍光物質は、アバンタントなタンパク質の検
未処理細胞溶解物のリン酸化レベルを比較や、ウ
出に使用できます。
エスタンブロット膜を脱リン酸化によって検証されています。
バイオ・ラッドは他社と協力し、抗体の基準向上に努力しております。詳細について は、 Our Antibody Validation
Principles をご覧ください。

蛍光標識抗体 [Fluorescent Antibodies]
蛍光標識抗体は、蛍光色素に結合させた抗体です。
一次抗体または二次抗体を蛍光色素に結合させることができ、これを検出することで、目的のタンパ
ク質における空間的または時間的変化を明らかにすることができます。蛍光物質がより短い波長の光による励起に続いて特定の波長の光を放出する

フローサイトメトリー用の蛍光抗体の選択に関するガイダンスについては、フロー
サイトメトリー基礎ガイドのウェブペー
ジをご覧ください。

抗体の選択抗体の選択抗体の取り扱い

標的を知る

抗体の使用

付録

抗体アドバイスガイド

標的を知る

抗体の取り扱い

抗体の選択

抗体の取扱い [Handling Your Antibody]
抗体を受け取ったら、損傷したり劣化したりしないように適切に保存することが重要です。抗体を保存場所から取り出す場合も同様です。いくつかの簡単なガイドラインに従うことで、今後の実験のための抗体の適切な保存に役立ちます。
保存 [Storage]
推奨される保存条件については、抗体の製品デー
タシートを参照してください。抗体の保存温度は
主に抗体のフォーマットと組成により決まります
が、ほとんどの抗体は+4℃か–20℃で安定に保存できます。一部のデータシートには、「+4℃または必要に応じて–20℃」と記載されています。これは、抗体を冷蔵庫で短期保存できることを示していますが、–20℃で長期保存するのが最良です。

抗体の使用▪ 温度変化が少ない冷蔵庫や冷凍庫の奥側に抗体を保存してください。ドア付近では、冷蔵庫や冷凍庫の開閉時に温度が変動します。
▪ 氷を蓄積させないために温度変動サイクルがある、霜取り機能付き機器に抗体を保存しないでください。

抗体のフォーマットとその保存の詳細については、 分注 [Aliquoting]
凍結融解により損傷させないための別の方法とし
表５を参照してください。
て、抗体を小さなバイアルに分注し、使用のたびに
表 5．抗体保管に関する推奨事項
抗体のバイアルを保存場所から取り出す回数を減形態または成分保存
説明
らす方法があります。既知の容量に分注すること
凍結乾燥抗体+ 4℃または 凍結乾燥状態で供給されたで、抗体の残量を簡単にモニターできるという別（再懸濁前）–20℃
抗体は、凍結乾燥中での水の利点があります。
分除去により抗体の有効期間が延びるため、+ 4℃または–20℃で凍結乾燥された状態で何年も安定している。
凍結乾燥抗体データシー ト 製品を再懸濁すると、有効（再懸濁後）
を 参 照 の こ 期間が短くなる可能性があと。
る。
抗菌剤を含まないフォー 凍結
温度上昇時には、微生物のマット（例、アジ化ナト
蓄積により抗体活性が損な
リウム、プロクリン
われる可能性がある。
[ProClin]防腐剤）
血清および腹水付録

保存温度に関係なく、抗体を損傷しうる温度変動を避けるために、次の推奨事項に従ってください：

酵素結合抗体凍結

温度上昇時には、サンプル
中のプロテアーゼにより抗体が分解される可能性がある。
凍 結 さ せ な 酵素は温度変化に弱く、凍い。
結と解凍を繰り返すと触媒活性が低下する可能性がある。

抗体溶液の凝固点を–20℃未満に下げるために、保存前に抗体に 50％滅菌グリセロールなどの凍結防止剤を常時添加する研究者もいます。これによって、抗体構造を損傷させうる氷結晶の形成が防止されます。この方法では、ほとんどの抗体の性能に影響を及ぼすことはないと考えられますが、凍結防止剤の存在下で保存された抗体の安定性に関するデータはバイオ・ラッド社にはありません。

短時間のマイクロ遠心分離により容器の壁や蓋に付着しうる溶液をスピンダウンした後、タンパク質低吸着性マイクロ遠心チューブに抗体溶液を分注します。容量が少ないほど蒸発により濃度が変化しやすいため、各チューブに 10 l 以上の容量を分注してください。
蛍光結合抗体や酵素結合抗体を分注する際には、光により結合体が損傷する可能性があるため、暗色のマイクロ遠心チューブを使用するか、透明なチューブはアルミホイル等で遮光することが重要です。
低濃度（<1 mg/ml）で抗体を保存すると、分解しやすく、また、チューブ壁に付着しやすいため、分
注前に希釈しないでください。低濃度で販売されている抗体には、血管壁への抗体の付着を低減するために、BSA などの担体タンパク質が含まれていることが多いです。

抗体の取り扱い

無菌状態 [Aseptic Contidions]
無菌技術を十分に活用し、結果に影響を及ぼしうる混入がないことを確認してください。抗体は細菌汚染に非常に弱く、冷蔵温度でも経時的に抗体が分解することがあります。抗体を分注し、同じチューブ内でのピペッティングをしないことで、細菌混入リスクがさらに軽減されます。

抗体の使用

輸送温度 [Transport temperature]
近年、メーカー各社は地球環境保全のため、梱包材削減などの取組みを実施しています。抗体製品においてもバイオ・ラッドのみならず、世界中で梱包材の削減や保冷剤の削除が行われています。そのため、現在、多くの抗体製品は常温輸送されています。抗体は非常に安定なタンパク質のため、常温輸送により、活性喪失等の影響を受ける可能性はほとんどありません。
ただし、納品された抗体はデータシートの推奨条件に従って直ちに適切な条件で保管する必要があります。
製品のデータシートについては、製品に添付されている場合と Web からカタログ番号で検索して参照する場合があります。

標的を知る

保証期限 [Guarantee]
抗体製品は有効期限とは別にメーカーが製品の保証をする保証期限が示されている場合があります。
バイオ・ラッドの抗体製品では、日本国内倉庫の発送日から 12 か月もしくは製品に貼付されたラベル
日付のいずれか早い日付になります。

抗体の取り扱い同じ実験で複数の分割量を使用する際には、すべて同じ数の凍結融解サイクルを経ていること、す
べての分割量の内容物がプールされていることを確認してください。これにより、使用する抗体溶液の均一性が保たれます。

抗体の選択

解凍 [Thawing]
抗体の使用時には、抗体が損傷しないように解凍時に特に注意してください。急速解凍は避けてください（例、手で温める）。代わりに、抗体を氷上で徐々に解凍させ、使用時には氷上に置いてください。突然の温度変化により、抗体構造が不安定になる可能性があります。

付録

抗体アドバイスガイド

抗体の使用

標的を知る

抗体の取り扱い

抗体の選択

標的を知る [Knowing Your Target]
標的タンパク質の生物学的特性を理解することは、それを認識する抗体を理解することよりもさらに重要です。特定のタンパク質を研究対象として選択した場合、その局在、発現、活性についてすでに十分な知識がある可能性が高いです。実験計画時には、プロトコールによって成功に導かれるように、タンパク質に関するすべての知見を検証することが重要です。
発現 [Expression]
標的タンパク質の発現レベルは、細胞株や細胞の状態により変動します。有効な結果を得るには、標的タンパク質をその発現時に検出することができる抗体が必要です。タンパク質が存在しないということが事実であり、抗体によりタンパク質の存在を検出できなかったことによるものではないことを実証する必要がある場合、陽性コントロール
を用いてください。
細胞中に少量しか存在しないタンパク質を検出す
るには、抗体濃度を上げてみてください（次章 p16の「作業用希釈と滴定」に関する推奨事項を参照）。
あるいは、以下のようにサンプルを濃縮してみてください。
▪ 細胞溶解物の使用時には、溶解緩衝液を減らして細胞を調製するか、免疫沈降によりサンプルを濃縮してください。
▪ フローサイトメトリーに単一の細胞懸濁液を使用する際は、細胞を少量のシース液に懸濁し、より多くの細胞を収集することで細胞を濃縮します。
Cell Frequencies in Common Samplesには、一般的なヒト、マウス、ラット組織における抗原の相対頻度が示されています。これらの表を実験計画に役立ててくだ
さい。

付録

The Human Protein Atlas や UniProt などのウェブサイトや査読済みの文献の調査を通じて多くの標的の発現プロファイ
ルを評価することもできます。

細胞局在 [Cellular Localization]
抗体を標的抗原に接近可能にするには、細胞内での標的タンパク質の位置を知ることが不可欠です。
例えば、ウエスタンブロット分析を実施する際、細胞の透過処理が必要かどうかを判断し、溶解緩衝液の選択に有用です。
細胞分画は、細胞内成分やその中のタンパク質を物理的に分離するプロセスです。このプロセスは、
標的タンパク質の位置を特定するのに有用です。
また、サンプル中に少量しかない標的タンパク質を濃縮したい場合にも特に有用です。この手法は、特定の条件下で標的タンパク質が 1 つの細胞内区画から別の細胞内区画に移動するかどうかを判断するためにも使用できます。例えば、核・細胞質キットは、核画分を細胞質画分から分離し、その中のタンパク質を同定可能にします。
標的が細胞内エピトープと細胞外エピトープの両方を伴う膜結合タンパク質である場合、これらのエピトープのどちらに抗体が結合するかを知ることが重要です。例えば、CD3 受容体には、細胞外領域、膜貫通領域、細胞内領域があります。バイオ・
ラッドのマウス抗ヒト CD3 モノクローナル抗体（＃MCA2184）により、- または-サブユニット複合体のいずれかを含むヒト CD3 複合体の細胞
外エピトープが認識されます。したがって、フロー
サイトメトリー実験でこの抗体を使用する際には、結合する CD3 の領域に接近可能にするために透過処理は不要です。
分子量 [Molecular Weight]
ウエスタンブロッティングを実施する際、抗体による正確な同定を判断するには、選択した標的の分子量を知ることが不可欠です。標的、そして実施する実験に応じて、様々なアイソフォームの発現、グリコシル化、他の翻訳後修飾により分子量がどのように変化するかを知る必要があります。

標的を知る

例えば、標的タンパク質がリン酸化されている場
合、各リン酸化基は約 80 Da 増加するため、膜上でのバンドの位置に影響を与えます。UniProt などのウェブサイトは、タンパク質の予想分子量に関する情報を得るのに有用です。

抗体の取り扱い

ウエスタンブロッティングによる検出では、タン
パク質が他のタンパク質と複合体を形成している場合、単独の場合よりも分子量が大きくなります。
溶解物をゲルに添加する前に十分に変性・還元されていない場合、複合体中のタンパク質がサンプ
ル調製や電気泳動中に完全に解離せず、目的のタンパク質で観察される分子量が、予測される単量体型よりも実質的に大きくなることに注意してく
ださい。

抗体の選択

複合体内の標的 [Target in Complex]
標的タンパク質が他のタンパク質と複合体を形成している場合、タンパク質間相互作用によってエピトープがマスクされる可能性があるため、エピトープを抗体で検出することはできません。多くの異なるタンパク質を含むサンプルから標的タン
パク質を免疫沈降(Immunoprecipitation)により分離・濃縮することができます。

標的を知る
抗体の使用
付録

抗体アドバイスガイド

付録

抗体の使用

標的を知る

抗体の取り扱い抗体の選択抗体の使用 [Working with Your Antibody]
新たに抗体を入手した際には、他の抗体とまったく同じ方法で使用しようと思うかもしれませんが、それは間違っていることがあります。新たな抗体を使用した実験を最大限に活用するには、プロトコール、コントロール、作業濃度、緩衝液を再検討しなければならないかもしれま
せん。
プロトコール [Protocols]
実験計画時に、メーカーが提供する特定用途向け
プロトコールは、プロセスの各工程を案内するのに有用です。これらの推奨プロトコールには、特定の条件に基づいた一般的な手順が示されており、実験設定に応じて最適化するための枠組みとして使用してください。
発表された論文の「Material and Methods」に記載されているプロトコールは、お客様のプロトコー
ルを設計・最適化するための優れた情報源になります。ほとんどの場合、要件（例、同じ試薬の使用、同じサンプルタイプでの操作、同じ細胞の検証、同じ研究分野）を満たすプロトコールを見つけることができます。
バイオ・ラッド社では、次のようなたくさんの推奨
プロトコールを提供しています：▪ 特定アプリケーション用プロトコール：ELISA、
フローサイトメトリー、イメージング、ウエスタ
ンブロッティング
▪ 特定製品向けプロトコール：TidyBlot ウエスタ
ンブロット検出試薬:HRP および alamarBlue 試
薬

バイオ・ラッド製抗体を用いた個別の実
験ガイダンスについては、テクニカルサ
ポートにお問い合わせください。

コントロール [Controls]
すべての実験において、適切なコントロールを置くことにより結果を正確に解釈し、問題解決するために極めて重要です。使用すべきコントロールの種類は、用途と実験要件によって決まります。厳
密には、抗体の使用とは無関係の内容が以下に含まれていますが、実験を成功させるためには、適切なコントロールに関する知識が重要になります。

陽性コントロールと陰性コントロール
陽性コントロールとは、ポジティブな結果をもたらすことがわかっているサンプルのことです。陽
性コントロールにより、観察されたネガティブな実験結果は間違いではなく、抗体により標的を検出可能であることが確信できます。陽性コントロールがないと、ネガティブな実験結果を実験の失敗として解釈する可能性があります。
陰性コントロールとは、ネガティブな結果をもたらすことがわかっているサンプルのことです。陰
性コントロールにより、観察されたポジティブな実験結果は間違いではなく、抗体からのポジティ
ブシグナルが、単にバックグラウンド結合によるものではないことが確認できます。
二 次 単 独 コ ン ト ロ ー ル [Secondary-only
Controls]
二次単独コントロールは、二次抗体を使用する際に実験に含める必要がある陰性コントロールの一種です。この場合では、一次抗体を除外し、二次抗体のみを加えます。これにより、陽性が、二次抗体の非特異的結合による偽陽性ではなく、一次抗体への二次抗体の結合によるものであることが確認されます。
未染色コントロール [Unstained Controls]
フローサイトメトリー、蛍光免疫組織化学、免疫細胞化学については、未染色コントロール（抗体で染色されていないサンプル）を必ず含めてください。
未染色コントロールにより、実験手順に起因する偽陽性が否定され、細胞からのバックグラウンド
蛍光や自家蛍光のレベルを決定するのに有用です。
アイソタイプコントロール (Isotype Controls)
アイソタイプコントロール抗体は、一次抗体とほぼ同じ特性（同じ宿主および標的種、同じアイソタ
イプ、同じ標識）をもっていますが、、標的特異性は同じではありません。代わりに、分析対象の細胞型には存在しない抗原に対して産生されています。

抗体の使用フローサイトメトリーでのアイソタイプコントロールの使用の詳細については、Isotype Controls in Flow
Cytometry もしくは、「フローサイトメトリーで必要とされるさまざまなコントロール」のウェブページをご覧
い た だ く か 、 Crucial Controls and Tips for
Immunohistochemistry Experiments（免疫組織化学実験の重要なコントロールとヒント）の記事をお読みください。

ウエスタンブロッティング用コントロール
ローディングコントロールにより、ウェル間のタ
ンパク質量を比較可能です。等量のタンパク質がウエスタンブロットのすべてのウェルに確実に添加され、転写されます。これによって、目的のタン
パク質の発現において認められる差が正しいことが確信できます。通常は、ハウスキーピング遺伝子
によってコードされるタンパク質など、構成的に発現されるタンパク質を検出する抗体を用いて行います。あるいは、総タンパク質染色か、Stain-Free
テクノロジーにより測定された総タンパク質の標準化（TPN:Total Protein Normalization）により、各サンプルの総タンパク質量を測定することができます。
添加コントロールと標準化に関する詳細について
は 、 The How and Why of Normalizing Your
Western Blots（ウエスタンブロットを標準化する
方法と理由）および Loading Controls のウェブページを参照してください。

分子量スタンダードにより、標的タンパク質のサイズを推定できる他、電気泳動の進行状況をモニタリングし、転写効率をチェックできます。

付録

Fc ブロックコントロール [Fc Block Controls]
Fc ブロックコントロールを含めることで、

フローサイトメトリー用コントロールの詳細について
は、当社のガイド Take Control - Crucial Controls for
Flow Cytometry（コントロールの準備－フローサイト
メトリー用の重要なコントロール）をお読みください。
また、当社のブログ To Control or Not to Control, That
Is the Multicolor Flow Question…もお勧めします。

抗体の使用

FMO コントロール [Fluorescence Minus One]FMO コントロールは、ゲーティング境界の特定を補助します。FMO コントロールには、完全な抗体パネルから 1 つの抗体を引いたものが含まれ、結果における存在しない抗体の影響が明らかになります。データによって、隣接するチャネルへの各抗体
染色の拡散が示され、陰性集団から陽性を判定するのに有用であるため、ゲート設定に導かれます。

フローサイトメトリーの最良実施例に関する
詳細については、フローサイトメトリー基礎ガイドの第 5 章を参照してください。フロー
サイトメトリー実験の最適化について記載されています。

標的を知る

コ ン ペ ン セ ー シ ョ ン コ ン ト ロ ー ル[Compensation Controls]
コンペンセーションコントロールにより、各蛍光物
質の特定のシグナルだけが分析されます。各抗体が個々に染色されて（単一染色）、他の検出器チャネルへの蛍光物質発光のスピルオーバーを示します。このスピルオーバーシグナルは、コンペンセーションと呼ばれるプロセスで数学的に除かれます。あるいは、コンペンセーションビーズを使用することができ、これは、抗体に結合し、コンペンセーションを算出できるポジティブシグナルを生成します。

ダブレット除去 [Doublet Exclusion]
コントロールとは別に、ダブレットを除去することで、単一細胞のみがカウントされ、2 個の細胞が同時に分析されなくなります。ダブレット内の 2個の細胞の一方が陽性であると、両方の細胞が陽性としてカウントされることがあります。

抗体の取り扱い

フローサイトメトリーコントロール
既に述べたコントロールの他、フローサイトメト
リー実験に必要な他のいくつかのコントロールがあります。
生存コントロール [Viability Controls]
生存コントロールは、死細胞と生細胞を識別し、いくつかの異なるメカニズムを利用できます。PI、7AAD、DAPI などの DNA 結合色素は、死細胞や死にかけている細胞の DNA にのみ接近できます。そのため、これらの細胞だけが蛍光を発します。
VivaFix Cell Viability Assays などでのタンパク
質結合色素は、死細胞内の第一級アミンにのみ接近できます。

偽陽性が防止されます。Human Seroblock （＃BUF070）や Mouse Seroblock FcR（＃BUF041）などの Fc ブロッキング試薬を加えることで、一部の免疫細胞に存在する Fc 受容体が、抗体の定常 Fc
ドメインに結合しなくなります。

抗体の選択

アイソタイプコントロールを使用し、免疫細胞にある Fc 受容体や他の細胞タンパク質への一次抗体の非特異的結合を排除します。最適な結果を得るには、アイソタイプコントロールを一次抗体と同じ濃度で使用してください。アイソタイプコン
トロールは、フローサイトメトリー実験でよく使用され、免疫組織化学、免疫沈降、ウエスタンブロ
ッティング、ELISA でも使用できます。

抗体アドバイスガイド

付録

抗体の使用

標的を知る

抗体の取り扱い

抗体の選択

ウエスタンブロッティング用コントロールの詳
細 に つ い て は 、 Introduction to Western
Blotting（ウエスタンブロッティング入門）ガイドをお読みください。また、Taking Control ofYour Western[ELISA
Blotting Troubles（ウエスタンブ
ELISA 用コントロール
Controls]
ロッティングのトラブルをコントロールする）の記事もお勧めします。

最も基本的なレベルでは、ネガティブコントロー
ルとしてブランクサンプルを ELISA に含めてください。ただし、コントロールを追加することで、データの信頼性が増します。他の方法により検証された分析対象物の濃度でコントロールサンプルを追加することで、アッセイで得られた結果の正確性が保証されます。
スパイクコントロール（既知量の分析対象物を
ELISA に追加し、その後の回収率を評価する）により、アッセイの性能を判定可能です。
詳細については、ELISA Basic Guide を
お読みください。ELISA コントロールに関する特定のセクションが掲載されています。

免疫組織化学用コントロール [IHC Controls]
染色前に組織での自然蛍光を観察するには、未染
色のバックグラウンド組織コントロールが不可欠です。これは、自家蛍光が高い組織について特に重要です。
吸収コントロールは、一次抗体が、その産生のために使用された抗原に排他的に結合するか否かを示
すネガティブコントロールの一種です。これらのコントロールでは、一次抗体が、実験でのその使用前に精製抗原に吸収されます。この種のコントロールは、ペプチド免疫原で最も高い機能を発揮します。

雑音比（SN 比）を与える濃度を選択することができます。抗体が過剰量であると、標的タンパク質以外のタンパク質への非特異的結合によってバックグラウンドシグナルを生じることがありますが、抗体が少量すぎると目的のタンパク質を検出できないことがあります。
新しいバッチの抗体バイアルを入手したら、滴定しなければなりません。これは通常、ラベルのバッ
チコードで識別できます。各バッチの機能に差はないはずですが、わずかな差が製品性能に影響を与える可能性があります。そのため、抗体の新しいバッチと古いバッチの機能に差がないことを確認することをお勧めします。最適濃度が用途により異なる場合があるため、使い慣れた抗体でも、新しい用途で使用する場合には滴定する必要があります。
新しい抗体バッチで、または新しい用途で滴定する場合にはいくつかの点を考慮してください。他の実験的要因（細胞や組織の種類および二次抗体など）を比較可能にするのが最良です。染色量を増やす必要がある場合、抗体量も増やして濃度を一定に保ってください。マルチプレックス実験では、すべての抗体を別々に滴定してください。様々な用途で実施可能な滴定を以下に例示します。
フローサイトメトリー用抗体の滴定陽性集団と陰性集団の分離比である染色指数（SI:Stain Index）を用いて最適な抗体濃度を見つけます。SI が最大となる抗体希釈率を選択する必要があります。例として、ラット抗マウス CD3：
StarBright Violet 440 （ ＃ MCA500SBV440 ） を
C57BL/6 脾細胞で滴定しました。図 4 には、結果として得られた SI をプロットしており、最適濃度
が抗体原液の 0.5～1 倍であることがわかります。

どのコントロールを含めるのか、またその理由の詳
細 に つ い て は 、 Crucial Controls and Tips for
Immunohistochemistry Experiments（免疫組織化
学実験の重要なコントロールとヒント）のウェブページを参照してください。

作業用希釈と滴定 [Dilutions and Titration]
抗体メーカーでは、データシートに作業濃度や希釈率を記載することがよくあります。有用な出発点となりますが、社内検査に基づいているため、実験において理想的ではないことがあります。抗体を広範囲の濃度や希釈で検査することは、滴定(Titration)とも呼ばれ、実験のために最大の信号対

濃度
図 4 ． C57BL/6 脾 細 胞 に お け る ラ ッ ト 抗 マ ウ ス CD3 （ ＃MCA500SBV440）の滴定。C57BL/6 脾細胞を 2 倍希釈系列により抗体染色した。算出された SI 値を図中にプロットした。SI、染色指数。

抗体の使用抗体の選択希釈係数
図 6．マウス-抗 hCG（＃MCA1026）の滴定。抗体の原液を段階希釈し、HRP 標識二次抗体で抗体染色を可視化した。ELISA の読み取り値を図中にプロットした。 ■ 、MCA1026（0409）；♦、MCA1026（L1803）；*、固相化抗原および二次抗体；●、二次抗体のみ。

付録

抗体の詳細な記録
実験に使用した抗体製品カタログ番号とバッチ番
号は忘れずに記録してください。抗体の性能を経時的にバッチ間で比較でき、トラブルシューティ
ング時にメーカーに製品情報を要求する際に必要になります。

抗体の使用

体のみのコントロール、コーティング抗原を伴わない二次抗体のみのコントロール。図６は、二次抗体ウサギ F（ab'）（＃STAR13B）
2 抗マウス IgG：HRPを使用した、ELISA での読み取り値のプロットを示しています。
Y 軸上の吸光度値が減少し始める X
軸上の点を決定することで最適な希釈率を読み標的を知る

緩衝液 [Buffers]
ほとんどの抗体を標準的なアッセイ緩衝液で使用できます。例えば、脱脂粉乳または BSA をブロッ
キング成分として含む PBS 緩衝液中で、ウエスタ
ンブロッティング用抗体のほとんどを使用できます。ただし、特定の緩衝液を必要とする抗体もあり、レーン重要なこととして、抗体データシートを読んで、緩衝液に関する要件が定められていることを確認してください。緩衝液に関する要件が定められている抗体およびアッセイの例を以下に示します。
▪ マウス抗ヒト S100 タンパク質抗体クローン
6G1（＃MCA2770）は、EDTA や他の二価結合剤に弱いです。アッセイ緩衝液中に 5 mM CaCl2が存在することで、性能を改善させることができます。
▪ ヤギ F（ab'）2 抗ラット IgG：FITC（＃STAR69）とマウス IgG の交差反応性は吸着によって低減されました。マウス組織で使用するために 10％（v/v）正常マウス血清を含む緩衝液を使用することでさらに低減させることができます
図5．マウス抗ヒトFアクチン（＃MCA358G）の滴定。
▪
ヤギ抗マウス IgG：FITC（＃STAR70）は、10％抗体の原液を段階希釈した。レーン 1、マーカー；レーン 2、二次抗正常ラット血清を含む緩衝液で希釈することで、体のみ（＃STAR13B、1/12,000 希釈）；レーン 3、4、5、6、マウス
抗ヒト F アクチン（＃MCA358G）のそれぞれ 1/2,000、1/1,000、
残留する交差反応性を除去することができます。
1/500、1/200 希釈。HRP 標識二次抗体で抗体染色を可視化する。
▪ マウス抗ヒトミエロペルオキシダーゼ抗体（＃
MCA1757）は、骨髄細胞と白血病のフローサイ
ELISA 抗体滴定 [ELISA Antibody Titration]
トメトリー試験に使用できます。標的結合には
ELISA で抗体を段階希釈し、最適な抗体濃度を決
細胞透過性が必要です。
定します。実験例では、マウス抗 hCG（＃MCA1026） ▪ サイトカイン染色では、ブレフェルジンＡやモ
ネンシンなどのゴルジ阻害剤が必要です。
を 10 回段階希釈しました。実験には、２つの異なるロットのマウス抗 hCG 抗体（L1803 および 0409） ▪ 機能アッセイでは、アジ化ナトリウム不含溶液が必要です。
が含まれました：コーティング抗原を伴う二次抗抗体の取り扱い

ウエスタンブロッティング用抗体の滴定
ウエスタンブロッティングでは、抗体量を減らし、ブロットの連続レーンで滴定し、最適な抗体濃度を視覚的に決定することで非特異的結合を最小限に抑えることができます。例として、分子量スタン
ダード、比較用の参照抗体バッチ、二次抗体のみのコントロールを含む実験においてマウス抗ヒト Fアクチン（＃MCA358G）の段階希釈物を分析しました。図５は、ウサギ F（ab'）2 抗マウス IgG：HRP
二次抗体（＃STAR13B）で可視化された、結果として得られたブロットを示し、最適な抗体濃度が抗体原液の 500 分の 1 希釈であることがわかります（シグナル対バックグラウンド比が最良であると思われます）。

取ることができます。

吸光度. 450 nm

フローサイトメトリーにおいて抗体滴定が非常に重要である理由、滴定実験の設定方法、染色指数に関する詳細情報については、その抗体濃度は最適ですか？フローサイトメト
リーにおける抗体濃度最適化の必要性をご覧ください。

抗体アドバイスガイド

抗体の選択

付録 [Appendix]
用語集
抗血清(Antiserum)：注射された抗原に対する抗体を含む動物の血液で、赤血球と凝固タンパク質が除去されています。

モノクローナル(Monoclonal)：「単一のクローン」
であるモノクローナル抗体は、単一のＢ細胞親クローンから産生され、そのため、標的タンパク質の単一のエピトープに結合します。

腹水液(Ascites Fluid)：腹腔内に蓄積した液体です。
マウスやラットの腹腔内での抗体産生ハイブリドーマ細胞の増殖に起因する可能性があります。

ポリクローナル(Polyclonal)：「多くのクローン」であるポリクローナル抗体は、複数のＢ細胞により産生される抗体の混合物であり、各抗体が同じ標的タンパク質上の異なるエピトープを認識します。

抗体の取り扱い

クローン名(Clone Name)：特定のハイブリドーマ
細胞株により産生された抗体に固有の識別名。
エピトープ(Epitope)：抗体の抗原結合部位により認識される抗原部分。
Fab ドメイン(Fab Domain)：１本の重鎖、１本の軽鎖、１つの抗体結合部位で構成される抗体の抗体結合領域。
Fc 受容体(Fc Receptor)：抗体の Fc 領域に結合す
る特定の免疫細胞の細胞表面受容体。

標的を知る

Fc ドメイン(Fc Domain)：Fc 受容体が結合する、
抗体結合領域を含まない抗体定常領域。
蛍光物質(Fluorophore)：抗体が結合されうる蛍光物質/蛍光タンパク質。
フォーマット(Format)：抗体の供給形態（精製または標識色素など）。

抗体の使用

宿主種(Host Species)：抗体が産生される動物種。
ハイブリドーマ(Hybridoma)：リンパ球腫瘍細胞の樹立された組織培養株と特定の抗体産生細胞の融合により形成された体細胞ハイブリッドであり、特定のモノクローナル抗体の In vitro 産生のために使用されます。
Ig 画分(Ig Fraction)：ポリクローナル抗体を含む精製抗血清。
免疫原(Immunogen)：免疫細胞と抗体により特異的に結合される抗原。

付録

免疫グロブリン（Ig:Immunoglobulin）：抗体の別称用語。
アイソタイプ(Isotype)：免疫グロブリン遺伝子ファ
ミリー内の表現型変異で、変異型免疫グロブリン
重鎖および免疫グロブリン軽鎖をコード化するものです。

組換え抗体(Recombinant Antibodies)：従来の動物免
疫方法ではなく、免疫グロブリンの可変領域の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子を用いて生成された抗体。
種間の交差反応性(Species Cross-Reactivity)：抗体が複数の種において標的タンパク質を認識する性質。
標的種(Target Species)：抗体を作用させる動物種（組織または細胞）。

付録

抗体選択ツール
適切な抗体の選択は複雑なプロセスになる可能性がありますが、バイオ・ラッドではお客様に有用な
複数のツールを提供しています（表６）。
表 6．抗体選択ツール。
リソース

種類とフォーマット

Lineage Biomarkers of Murine Immune
冊子；印刷物と PDF
System Guide
Human Immune Cell Lineage & Antigen
ポスター；印刷物と PDF
Expression Poster
ポスター；印刷物と PDF

Mouse Immune Cell Lineage & Antigen
ポスター；印刷物と PDF
Expression Poster
Biomarker Expression Patterns in
Murine Immune Cells
Biomarker Expression Poster in
Bovine, Canine, Porcine, and Avian
Immune Cells

ポスター；印刷物と PDF

Technical Support▪ Product Troubleshooting▪ Antibody Support：FAQs▪ バイオ・ラッド Technical Q&A

ポスター；印刷物と PDF

他のリソース
バイオ・ラッドには、研究のガイドとなる資料を豊富にご用意しております。

抗体の使用

アプリケーション別資料▪ Antibody Applications▪ Western Blot: What is Western Blotting?
▪ ELISA and Immunoassays▪ Flow Cytometry Explained▪ Immunofluorescence▪ Immunohistochemistry▪ Immunoprecipitation▪ Recommended Antibody Protocols

他 の リ ソ ー ス に つ い て は 、 bio-radantibodies.com にアクセスしてください。

標的を知る

一般的な資料▪ Antibody and Kit Brochures▪ Articles, Educational Summaries, Minireviews and Application Notes▪ Posters, Pathways, Guides, and Interactive
Tools▪ Batch/Lot Specific Datasheets▪ Spin Break: Podcasts▪ Antibody Webinars と Antibody Videos

抗体の取り扱い

Biomarker Expression Patterns in
Human Immune Cells Poster

Lab Crunches ブログ▪ “Is it the antibody?” Tips for caring for yourantibody for consistent results▪ Making the Switch to Non-Animal Derived
Antibodies▪ Standardizing Antibody Validation

抗体の選択Interactive Human Cell Marker Selction
対話型オンラインツール
ToolInteractive Mouse Cell Marker Selction
対話型オンラインツール
Tool
Lineage Biomarkers of Human Immune
冊子；印刷物と PDF
System Guide

人気のあるツール▪ alamarBlue Colorimetric and FluorometricCalculators▪ Fluorescent Spectraviewer —フローサイトメ
トリー、蛍光顕微鏡、ウエスタンブロッティングをサポートします。
▪ フローサイトメトリー用のマルチカラーパネル
ビルダー▪ 二次抗体選択ツール

Technical Brief～日本語での新製品や技術情報
付録

抗体アドバイスガイド

詳細については、bio-rad-antibodies.com/AntibodyAdvice をご参照ください。
“BIO-RAD”は、Bio-Rad Laboratories, Inc.の商標です。HuCAL は、特定の法域における MorphoSys AG 社の商標です。
本書で使用しているすべての商標が、それぞれの所有者に帰属します。
HuCAL 人工抗体の利用制限について
HuCAL 人工合成抗体作製サービスでご提供する抗体は、研究用途での使用に制限されており、医薬開発（therapeutic、
prophylactic、palliative を含む）目的でご使用頂くことはできません。また、商業利用、治験内および診断用途で使用する場合は、別途契約が必要となります。
HuCAL generated antibodies are not intended for use in humans, and may not be used for therapeutic, prophylactic or
palliative purposes. Bio-Rad is a treadmark of Bio-Rad Laboratories, Inc. in certain juriscictions. HuCAL, HuCALPLATINUM, CysDisplay and RapMAT are trademarks of MorphoSys AG.

バイオ･ラッド ラボラトリーズ株式会社

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*価格（税抜き）は 2022 年 10 月現在のもので、メーカー希望小売価格です。
*本ガイドに記載されている会社名、商品名は各社の商標または登録商標です。
*本ガイドに記載されている製品は、研究用であり、診断目的にはご利用いただけません。

Bulletin 3227 Ver A

Z13197L 2211a