Automated Droplet Generator クイックガイド
Vol.1.3

M10723 1506A

QX200 ddPCR ワークフロー

201234

サンプル調製

ドロップレット
作製PCRドロップレット
蛍光測定

データ解析

DropletGenerator

ThermalCycler

DropletReaderSoftware3

QX200 ddPCR ワークフロー 0. サンプル調製
 反応液はチューブやプレート中で調製し、よく混合します
サンプル構成要素
プライマーとTaqManプローブ
ddPCR Supermix
DNAサンプル20μl/サンプル

反応組成例
2×ddPCR Supermix
90 uM primer Fw
90 uM primer Rv
10 uM probe
Template
Water
TotalPrimer
Probe

final 900 nM
final 250 nM

サンプルを96Wellプレートにセット

11μL
0.2
0.2
0.5
19.122μL

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AutoDGの概要

26 inches(66 cm)

背面(電源＋LAN）

内部

7インチディスプレイ
(横：15.3 x 縦：9.4cm）

左側面（トレイ回収）・排気スペースとして左右各13ｃｍ以上、背面10ｃｍ以上を確保して下さい。
・ドア開閉スペースとして高さ方向90ｃｍを確保して下さい。

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AutoDG作動準備
 AutoDGの消耗品を確認してください。
製品名
DG32カートリッジ
型番：186-4108 or 186-4109

製品名
Automated Droplet Genetatorオイル
for Probes
型番：186-4110

製品名
Automated Droplet Generator専用
ピペットチップ

型番：186-4120 or 186-4121

製品名
Automated Droplet Generatorオイル
for EvaGreen
型番：186-4112

製品名
Automated Droplet Generator専用
ピペットチップ回収トレイ
型番：186-4125

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AutoDG作動準備① 電源を入れます。エアーレーションを常時運転させるため、またピペットチップのポジションを記憶するため、電源は常に入れておくことをお勧めします（通常は④から開始してください）。
② 電源を入れるとAutoDGが起動し、セルフチェックが始まります。
AutoDGのリッドが完全に閉まっている事を確認してください。

（セルフチェック時）（セルフチェック終了時）

AutoDGに何も消耗品がセットされていない場合は上記右側の画面がディスプレイに表示され、各ポジションはStatasがEmptyとなります。

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AutoDG作動準備③ 停電後などで一度電源が切れた後、再度電源を入れた時に前に使用した消耗品がデッキポジションに残っている場合は下記のエラーが表示されます。
確認後、OKボタンをタッチしてください。一度電源を切ると、前回までの工程はすべてリセットされ、カードリッジやピペットのポジションは全て初期化されます。
ご注意ください。

（前回使用したカートリッジ・ピペットチップ・プレートがAutoDGにセットされた状態の時）（前回使用したオイルがAutoDGにセットされた状態の時）（注意） 一度電源を切ると、前回使用したピペットチップのポジションの情報は初期化されます。使用途中のピペットは方向を逆にする、もしくは詰め替えの操作により、左側からピペットがピペットチップをピックできるように調整をお願いいたします。またDG32カードリッジも左から使用されますので、使用済みDG32カートリッジを廃棄し、新しいものを左から順番にセットしてください。具体的な操作は④以降をご参照ください。

QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成④ 電源を投入されていて、動作していない場合、AutoDGはアイドルモードになっています。タッチスクリーンにタッチすると、アイドルモードから解除されます。セルフテストが終了したら、デッキの表示灯とタッチスクリーンの消耗品アイコンをチェックします（下記参照）。
デッキライト

タッチスクリーンアイコンステータス

詳細説明

グレー, Empty

新しいRunの設定が可能です。

offグレー, Used

新しいRunの設定が可能ですが、前回使用分の消耗品がセットされている状態ですので、必要に応じて新しい消耗品をセットしてください。

緑色

緑色, Ready

新しいRunの設定が可能です。消耗品が正しい位置にセットされています。

黄色

黄色, Load

Runのための消耗品がセットされていないことを示しています。消耗品をセットしてください。

青色

青色, Complete

Runが完了し、Dropletが作成済みの状態を示しています。

off8

QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑤ Configure Sample Plateをタッチします。
⑥ サンプルをセットしたWellと同じカラムを縦8Wellごとに選択します。連続しないカラムも選択できます。再度選択すると選択を解除する事が出来ます。

Configure Sample Plateをタッチ

カラムを任意に選択

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QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑦ 必要に応じてプレートのファイル名とコメントを記載できます。記載事項が無ければそのままOKをタッチしてください。
⑧ 設定したカラムに応じて、必要とされる消耗品のポジションがアイコン上に黄色で点灯します。必要とされるDG32カートリッジ、専用ピペットチップ、Generatorオイル及びピペットチップ回収トレイを準備してください。
黄色のアイコンにLoadが表示されている場合は、表示に従い、新しい消耗品を所定の位置にセットしてください。
黄色のアイコンにUsedが表示されている場合は、前回使用した消耗品を取り除き、新しい消耗品を所定の位置にセットしてください。
この時点で緑色のReadyがアイコンが表示されている場合はそのままRunに進めます。

消耗品の交換必要なし

消耗品の交換必要10

QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成

Generatorオイル
DG32カートリッジ
ピペットチップ回収トレイ

専用ピペットチップ
96Wellドロップレットプレート
96Wellサンプルプレート⑨ AutoDGのリッドを上げ、上記のポジションに必要とされる消耗品をセットします。
コンタミネーションを防ぐため、消耗品は奥から手前の順でセットしてください。
AutoDGの内部環境をクリーンに保つため、AutoDGのリッドが上がっている状態で20分以上アイドリング状態続くとリッドは自動的に閉まります。ご注意ください。

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QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑩ DG32カートリッジを装置の定位置にセットします。DG32カードリッジの緑色のガスケットが右側に来るようにセットしてください。 DG32カードリッジが所定の位置にセットされますと、デッキのLEDライトは赤色から緑色に変わり、カラータッチスクリーンのアイコンは黄色から緑色となりReadyの表示になります。

DG32カードリッジセット前のデッキ

緑色のガスケットを右側にセットセット前もしくは正しくセットされていない時のアイコン

DG32カードリッジが正しくセットされ、表示がReadyに変化

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QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑪ 専用ピペットチップを装置の定位置にセットします。DG32カードリッジと同様に奥から2列目に専用ピペットチップをセットします。専用ピペットチップのチップボックスからプラスチックの蓋を取り外しセットしてください。方向はありません。
この時、同列のピペットチップ回収トレイに前回使用した使用済みピペットチップが残っているようであれば、新しいピペットチップ回収トレイに交換してください。
AutoDGの故障の原因及び実験の結果に影響を与えますので、専用ピペットチップもしくは弊社推奨のピペットチップを必ずご使用ください。

専用ピペットチップが所定の位置にセットされますと、デッキのLEDライトは赤色から緑色に変わり、カラータッチスクリーンのアイコンは黄色から緑色となりReadyの表示になります。

セット前もしくは正しくセットされていない時のアイコン

専用ピペットチップが正しくセットされ、表示がReadyに変化

13QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑫ 各Wellに22μlの反応溶液が入った96Wellサンプルプレートを装置の定位置にセットします。前回の作業と同様に一番手前の列の左側に調整済みの96Wellサンプルプレートをセットします。事前に96WellサンプルプレートをPX1を用いてシーリングすることにより、調整中サンプルの蒸発を防ぐことができます。
サンプルの取り間違え等の原因となりますので、サンプルプレートの方向が正しいことを再度ご確認ください。
AutoDGの故障の原因及び実験の結果に影響を与えますので、弊社推奨の96Wellサンプルプレートを必ずご使用ください。

96Wellサンプルプレートが所定の位置にセットされますと、デッキのLEDライトは赤色から緑色に変わり、カラータッチスクリーンのアイコンは黄色から緑色となりReadyの表示になります。

セット前もしくは正しくセットされていない時のアイコン

96Wellサンプルプレートが正しくセットされ、表示がReadyに変化

14

QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成
クーリングブロックは使用前2時間以上-20℃の冷凍庫の中で保存してください。
クーリングブロックの色がピンク色から青紫色に変わっていれば使用できます。

⑬ 冷凍庫から十分に冷えたクーリングブロックを取り出し、前回の作業と同様に一番手前の列の右側にセットします。この時クーリングブロックが青紫色であることを再度確認ください。クーリングブロックが正しくセットされると、デッキのLEDライトは赤色から緑色に変わり、カラータッチスクリーンのアイコンは黄色から緑色となりReadyの表示になります。

冷やす前のクーリングブロック

セット前もしくは正しくセットされていない時のアイコン

十分に冷えたクーリングブロック

クーリングブロックが正しくセットされ、表示がReadyに変化

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QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑭ ドロップレット回収用の96Wellドロップレットプレートをセットしたクーリングブロックの上にセットします。作成されたドロップレットは96Wellサンプルプレートからサンプリングした位置と相関した同様のポジションとして96Wellドロップレットプレートに回収されます。⑥にて設定したサンプルWellと同様の形状のドロップレットプレートが用意されているか、今一度ご確認ください。
クーリングブロックは作成されたドロップレットの蒸発を防ぐために使用します。
作成後のドロップレットプレートは素早くシーリングして頂く事をお勧めします。

⑮ Generatorオイルをセットします。使用するGeneratorオイルの蓋を開け、装置手前左側のオイルフォルダーにボトルを回転させてセットしてください。
次にオイルの選択をカラータッチスクリーンにて行います。オイルのセットが装置に認識されましたら、ProbeもしくはEvaGreenのどちらかをタッチします。

オイル選択前のアイコン

オイル選択後のアイコン

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QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成
選択されたオイルは青色に変わり、オイルセンサーによりオイルの残量が表示されます。事前にオイルがセットされている場合も、念のためオイルの種類をご確認ください。もし、前回のオイルと異なるオイルがセットされ、選択された場合、自動的にオイル交換が実行されます。
Automated Droplet Generator専用オイルを他のアッセイに併用しないでください。
QX100等に使用されますと装置に負荷がかかり故障の原因となる可能性があります。

⑯ 全ての消耗品及びプレートが正しい位置にセットされると、AutoDG内の全てのデッキのLEDライトは緑色となり、カラータッチスクリーンのアイコンも同様に全て緑色になります。この時、画面右下にStartボタンが表示されます。
Startボタンを押すと、使用オイルの種類・サンプルポジションに関する最終確認の画面が表示されます。

全てのアイコンが緑色になりStartボタンが表示されます

Startボタンを押すと、最終確認の画面が表示されます17

QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑰ 最終確認が終わりましたら、Start Runボタンをタッチしてください。リッドが自動的に閉まりRunが始まります。Runが終了する前にリッドを開閉しますとRunは強制的に終了となりますのでご注意ください。もし最終確認の画面でカラムの変更等が生じた場合はBackをタッチして再設定してください。
Start Run後はAutoDGが設定を読み込み、ドロップレット作成開始までのカウントダウンタイマーが表示され、続いてドロップレット作成終了時間が表示されます。

リッドが自動的に閉まります

AutoDGが設定を読み込みます

カウントダウンタイマーが表示されます

ドロップレット作成終了時間が表示されます18

QX200 ddPCR ワークフロー 1. ドロップレット作成⑱ 何らかの理由でRunを中断する場合はタッチスクリーン右下のAbortボタンをタッチしてください。確認画面が立ち上がり、YesをタッチするとRunが中断できます。中断すると現在作成中のドロップレット及びサンプルが上手く作成されない可能性がありますのでご注意ください。

中断の再確認が表示されます。

ドロップレット作成が中断されます⑲ ドロップレットの作成が終了すると、AutoDGの96Wellドロップレットプレート部分のデッキが青色に光り、カラータッチスクリーンのアイコンも青色になります。リッドのロックは解除され、作成された96Wellドロップレットプレートは取り出すことが出来るようになります。使用済みオイルの交換は、AutoDGから未使用のオイルがボトルに戻るまでお待ちください。
作成されたドロップレットサンプルは30分以内にシーリングする事をお勧めします。
シーリングの操作に関しましてはPX1のマニュアル及び各社推奨方法をご参照下さい。

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AutoDGのGenetatorオイル交換に関して Generatorオイルの交換に関して
AutoDGは電源が入り続けている間、前回のRunに使用したGeneratorオイルの種類を記録し、前回と異なるGeneratorオイルの種類が選択された場合、自動的にオイル供給アーム内の洗浄及びGeneratorオイル交換を行います。この洗浄及びオイル交換時間を短縮させたい場合は、ドロップレットを作成する前に、事前にGeneratorオイルを交換しておく事をお勧めします。Generatorオイル交換はアイドリング状態であればいつでも実行できます。
A ロックが掛かるまでAutoDGのリッドを上にあげます。
B セットされているGeneratorオイルをAutoDGから回転させて外し、蓋をします。
C 使用するGeneratorオイルの蓋を外し、AutoDGに回転させてセットします。
D カラータッチスクリーンのOil Typeアイコンをタッチし、オイル選択画面に移ります。
E オイル選択画面には前回使用したGeneratorオイルが選択されているので、今回使用するGeneratorオイルを選択し、Change Oilをタッチします（次のページに図を記載）。

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AutoDGのGenetatorオイル交換に関して前回のGeneratorオイルが選択されています

今回使用するGeneratorオイルを選択しChange Oilを押します

F AutoDGがセットされたGeneratorオイルが正しくセットされている事とGeneratorオイルの残量が適切であるかを自動で確認します。もし、正しくセットされていない場合は、前回使用したGeneratorオイルを再度セットするようメッセージが出ます。正しくセットされている場合は、AutoDGが自動的にオイル供給アーム内の洗浄及びGeneratorオイル交換を行います。
G 上記の操作が終了するとオイル供給アーム内の洗浄及びGeneratorオイル交換が終了しGeneratorオイルが装填された事がカラータッチスクリーンに表示されます。

H 表示を確認し、OKボタンをタッチしてください。

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AutoDGのメンテナンスに関して
 日常メンテナンスに関して
1. AutoDGの本体が汚れた場合はイオン交換水を含ませたキムタオル等で表面を拭いてください。
2. リッド以外の場所に関してデコンタミネーションが必要な場合は、10%ブリーチを含んだキムタオル等で拭いた後、70%エタノールもしくはイオン交換水を含んだキムタオル等にて表面を拭き取ってください。アセトンや水道水は使用しないでください。
3. 装置を定期的に点検し、外部部品や配線が損傷していないか確認してください。
損傷している場合は、装置を使用しないでください。
4. 本体付属の電源ケーブル以外は使用しないでください。
5. 最低でも3か月に一回は廃液オイルリザーバーの洗浄を行ってください。廃液オイルリザーバーにはオイルの交換時などに生じる廃液が回収されています。
次のページに廃液オイルリザーバーの交換の仕方が記載されています。

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23

AutoDGのメンテナンスに関して
 廃液オイルリザーバーの交換
A カラータッチスクリーンのSettingボタンをタッチします。
B メニューのSystem Maintenance にあるRemove Oil Waste Reservoirをタッチます。

Remove Oil Reservoirをタッチ

C リッドが空いている場合は自動的に閉まります。カラータッチスクリーンのOKをタッチしてください。
D AutoDG本体奥のオイル供給アームが右側に移動します。この時、カラータッチスクリーンはMoving droplet generation headというメッセージが現れます。
右に移動

回収

AutoDGのメンテナンスに関して
E 作業が完了するとカラータッチスクリーンに廃液オイルリザーバーを外すよう指示が出ます
ので、廃液オイルリザーバーを外してください。マグネットで固定されているので簡単に取り外しできます。取り外しましたら残っているオイルを廃棄し、廃液オイルリザーバーをイオン交換水で洗浄し、完全に乾かした後に元の位置に戻して下さい。
F カラータッチスクリーンのOKをタッチするとAutoDGのリッドが閉まり、オイル供給アームが元のポジションに移動します。
G オイル供給アームが元のポジションに移動し終わると、カラータッチスクリーンにCompleteのメッセージが表示され、全ての作業が終了します。

6. バイオ・ラッド社のドロップレット作製およびDroplet Reader用液は、フッ素を含む炭化水素化合物を主成分としているため、所属機関、都道府県、地域の規則に従って処分してください。これらの不燃性液は不活性であるため、環境に与える影響も毒性も低いといえます。廃棄物はポリエチレン容器に収集し、1カ月以内に処分してください。
7. バイオ・ラッド社のマスターミックスで作製したドロップレットには抗菌性がありますが、微生物が増殖する可能性もあります。廃棄物にフッ素を含む炭化水素化合物、水、蛍光染料（プローブから発生）、タンパク質、および核酸が含まれます。Droplet Generatorは、バイオハザード物質を使用することを想定していません。

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Ordering Information
AutoDG関連消耗品
メーカー名

分類

カタログ番号

品名

ウェル数換算価格

保存温度

186-3004

Droplet Readerオイル（1Lボトル×2本）

1,000 ウェル分

¥180,000

室温

Probe使用時

186-4110Automated Droplet Genetatorオイル for Probes(1920ウェル分)

1,920 ウェル分

¥57,000

室温

EvaGreen使用時

186-4112

Automated Droplet Generatorオイル for EvaGreen(1920ウェル分)

1,920 ウェル分

¥78,000

室温

186-4108

DG32カートリッジ(30個)960 ウェル分¥234,000

室温

186-4109

DG32カートリッジ(60個)

1,920 ウェル分

¥370,000

室温

186-4120

Automated Droplet Generator専用ピペットチップ(20個）

960 ウェル分¥61,000

室温

186-4121

Automated Droplet Generator専用ピペットチップ(40個）

1,920 ウェル分

¥96,000

室温

ピペットチップ回収トレイ

186-4125

Automated Droplet Generator専用ピペットチップ回収トレイ(10個）

960 ウェル分¥3,000

室温

Droplet Reader用

ホイルヒートシール

181-4040

ddPCR用ホイルヒートシール (100枚)

9,600 ウェル分

¥14,000

室温

95579

ツインテクPCRプレート96セミスカート緑（25枚）

2,400ウェル分¥15,900

室温

Droplet Reader用

PCRプレート
95840

ツインテクPCRプレート96スカートレス, divisible青（20枚）

1,920ウェル分¥16,000

室温

Droplet Reader用
オイル
AutoDG用

カートリッジバイオ・ラッド
AutoDG用
消耗品

エッペンドルフ

消耗品

専用ピペットチップ※価格、使用等は予告無く変更することがありますので、ご了承ください。
※価格は2014年12月現在のもので、メーカー希望小売価格（税別）です。
※本リストに記載している会社名、商品名は各社の商標または登録商標です。

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Ordering Information
AutoDG関連試薬
メーカー名

分類

カタログ番号

品名

ウェル数換算価格

保存温度

186-3023

ddPCR Supermix for Probes (no dUTP) （1ml×2本） （製品名変更）

200 ウェル分¥40,000

冷凍-20℃

186-3024

ddPCR Supermix for Probes (no dUTP) （1ml×5本） （製品名変更）

500 ウェル分¥100,000

冷凍-20℃

186-3025

ddPCR Supermix for Probes (no dUTP) （5ml×5本） （製品名変更）

2,500 ウェル分

¥450,000

冷凍-20℃

186-3026

ddPCR Supermix for Probes（1ml×2本）

200 ウェル分¥40,000

冷凍-20℃

186-3010

ddPCR Supermix for Probes（1ml×5本）

500 ウェル分¥100,000

冷凍-20℃186-3027

ddPCR Supermix for Probes（5ml×5本）

2,500 ウェル分

¥480,000

冷凍-20℃

186-3028

ddPCR Supermix for Probes（5ml×10本）

5,000 ウェル分

¥950,000

冷凍-20℃

186-4033

ddPCR EvaGreen Supermix（1ml×2本）

200 ウェル分¥50,000

冷凍-20℃

186-4034

ddPCR EvaGreen Supermix（1ml×5本）

500 ウェル分¥120,000

冷凍-20℃

186-4035

ddPCR EvaGreen Supermix（5ml×5本）

2,500 ウェル分

¥570,000

冷凍-20℃

186-4036

ddPCR EvaGreen Supermix（5ml×10本）

5,000 ウェル分

¥1,100,000

冷凍-20℃

186-4021

One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes（1ml×2本）

200 ウェル分¥180,000

冷凍-20℃

186-4022

One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes（1ml×5本）

500 ウェル分¥400,000

冷凍-20℃

Probe使用時

186-3052

ddPCR Buffer Control Kit for Probes（10ml）-¥50,000

冷凍-20℃

EvaGreen使用時

186-4052

ddPCR Buffer Control Kit for EvaGreen（4.5ml）-¥30,000

冷凍-20℃

Probe使用時

ddPCR Supermix

試薬

EvaGreen使用時

One-Step RT-PCR用試薬

Probe使用時

Buffer control kit※価格、使用等は予告無く変更することがありますので、ご了承ください。
※価格は2015年12月現在のもので、メーカー希望小売価格（税別）です。
※本リストに記載している会社名、商品名は各社の商標または登録商標です。

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お問合せ先

バイオ・ラッド ラボラトリーズ株式会社
ライフサイエンス

本社大阪営業所
福岡営業所

www.bio-rad.com〒140-0002 東京都品川区東品川2-2-24〒532-0025 大阪市淀川区新北野1-14-11〒812-0013 福岡市博多区博多駅東2-5-28※学術的お問い合わせは天王洲セントラルタワー
大阪新北野第一ビル
博多偕成ビル
Email: life_ps_jp@bio-rad.com

FAX: 03-5463-8480
FAX: 06-6308-3064
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FAX: 03-6404-0334

TEL: 03-6361-7000
TEL: 06-6308-6568
TEL: 092-475-4856
TEL: 03-6404-0331

M10723 1506A