プロテインアッセイ
取扱説明書

5000001
50000025000006
5000005
5000007
ご使用の前に本製品を正しく安全にお使いいただくために、ご使用の前に必ずこの取扱説明書を十分にお読みください。
お読みになったあとは、いつでも見られるところに必ず保管してください。

プロテインアッセイ取扱説明書
目 次
Section 1

はじめに ............................................................................................................................................. 1

1.1 原理 ................................................................................................................................................................. 11.2 製品概要 ....................................................................................................................................................... 3
1.3 必要な装置と器具 ..................................................................................................................................... 3
Section 2

使用方法 ............................................................................................................................................ 4

2.1 スタンダードの調製 ................................................................................................................................... 4
2.2 試験管を用いたスタンダードアッセイ法 操作手順...................................................................... 4
2.3 試験管を用いたマイクロアッセイ法 操作手順 .............................................................................. 5
2.4 マイクロプレートを用いたプロテインアッセイ操作手順 ............................................................... 6
2.5 改良版プロテインアッセイ ....................................................................................................................... 8
2.6 保存 ................................................................................................................................................................. 8
Section 3

Q＆A .................................................................................................................................................. 9

Section 4

トラブルシューティングガイド ................................................................................................... 12

Section 5

参考文献 ......................................................................................................................................... 13

Ordering Information ........................................................................................................................................... 14

Section 1

はじめに

バイオ・ラッドのプロテインアッセイは Bradford 法に基づいており、溶液中のタンパク質濃度を簡単かつ正確に定量することができます。定量の手順は、サンプル溶液に酸性の呈色試薬を加え、分光光度計やマイクロプレートリーダーを用いて 595 nm の吸光度を測定します。検量線との比較によってサンプル中のタンパク質濃度を求めることができます。

1.1 原理バイオ・ラッドのプロテインアッセイは、タンパク質濃度によって呈色に違いのある色素を用いた色素結合法です 1。使用する色素は、酸性色素のクマシーブリリアントブルーG-250 で、タンパク質と結合することにより最大吸収波長が 465 nm から 595 nm に移動します 2,3,4。クマシーブルー
は、主に塩基性アミノ酸（特にアルギニン）や芳香族アミノ酸残基に結合します 5。Spector6 によって、クマシーブルーとアルブミンの結合体の分子吸光係数は 10 倍以上の濃度範囲にわたって一定であることが報告されています。すなわち、サンプル濃度にあった比率で色素を加えることによって、Lambert–Beer の法則に従い、タンパク質の正確な測定が可能になります。
この反応では、化学物質－タンパク質間相互作用、あるいは化学物質－色素間相互作用に起因して干渉が引き起こされる可能性があります。Table 1 では、色素の発色に直接影響しない試薬
情報をまとめました（数々の塩基性バッファーや界面活性剤がこの測定法を妨害することが報告されています）。しかし、化学物質－タンパク質の組み合わせのすべてを調べたものではありませんので､リストアップした試薬の中でも､ある種のタンパク質と組み合わせた場合に干渉が起こる可能性は否定できません｡しかし、少なくともウシ血清アルブミン（BSA）やウシγグロブリン（BGG）のようなタンパク質においては、これらの条件で全く干渉を起こさないか、ほとんど影響がありません。
Table 1 では、スタンダードアッセイ法における共存可能な試薬濃度を示しています。マイクロアッセイ法（Section 2.3 参照）における同様の共存許容濃度は、この表に示された濃度の 1/40 となります。これはサンプルと色素の混合比率が、スタンダードアッセイ法とは異なるためです。

1

Table １

プロテインアッセイの共存許容試薬・濃度（スタンダードアッセイ法）
試薬名

試薬名

Acetate

0.6 M

KCl

1M

Acetone○Malic Acid

200 mM

Acid pH○

Mercaptoethanol

1M

Adenosine

1 mM

MES

700 mM

Amino Acids○

Methanol○Ampholytes

0.5%

MgCl2

1M

Ammonium Acetate (pH 5.5)

50 mM

MOPS

200 mM

ATP

1 mM

NaCl

5M

Barbital

○

NAD

1 mM

BES

2.5 M

NaSCN

3M

Boric acid○(NH4)2SO4

1M

Cacodylate-Tris

100 mM

Peptones

○

CDTA

50 mM

Phenol5%

Citrate50 mM

Phenol Red○

Deoxycholate

0.1%

Phosphate

1M

Dithiothreitol (DTT)

1M

PIPES

500 mM

DMSO

10%Polyadenylic acid

1 mM

DNA

1 mg/ml

Polypeptide (<3000Da)○

Eagle's MEM○

Pyrophosphate

0.2 M

Earle's salt solution

○

rRNA

0.25 mg/ml

EDTA

100 mMtRNA

0.4 mg/ml

EGTA

50 mM

total RNA

0.3 mg/ml

Ethanol○

Sodium Azide (NaN3)

0.5%

Formic acid

1M

SDS

0.1%

Fructose○

Sodium Phosphate○

Glucose○Streptomycin Sulfate

20%

Glutathione○

Thymidine

1 mM

Glycerol99%

Tricine○Glycine

0.1 M

Tris

2M

Guanidine-HCl

6M

Triton X-100

0.1%

Hank's salt solution○

Tyrosine

1 mM

HEPES

100 mM

Urea

6M

Imidazole

0.5 M

Vitamins○※ マイクロアッセイ操作法で許容される試薬濃度は Table１に示した数値の 1/40 です。
これは、スタンダードアッセイとマイクロアッセイでは、タンパク質と色素の混合比率が異なることに起因します｡

2

1.2 製品概要
プロテインアッセイ染色液（カタログ番号 5000006）には、色素、リン酸、メタノールを含む溶液が450 ml 入っています｡これ 1 本で、スタンダードアッセイ法なら 450 回、マイクロアッセイ法なら 2,250
回の測定が可能です｡
プロテインアッセイキットⅠ（カタログ番号 5000001）にはプロテインアッセイ染色液にプロテイン
スタンダードⅠ（ウシγグロブリン）が付属し、プロテインアッセイキットⅡ（カタログ番号 5000002）にはプロテインアッセイ染色液にプロテインスタンダードⅡ（ウシ血清アルブミン）が付属します｡
バイオ・ラッドのプロテインアッセイは、研究目的でのみご使用ください｡

1.3 必要な装置と器具
試験管、マイクロチューブを使用するとき
・ 595 nm での測定が可能な分光光度計
・ 分光光度計に適合する光路長 1 cm のキュベット（バイオ・ラッドのディスポーザブルキュベット[カタログ番号 2239950] もご使用いただけます）
・ 13×100 mm 試験管
・ 試験管立て・ ボルテックスミキサー
・ ろ紙（Whatman＃1 相当）、ロート ・・・ 染色液のろ過に使用
・ 計量用メスシリンダー、ピペット（100μl および 5.0 ml を正確に計量できるもの）
・ 分注および保存用の容器
マイクロプレートを使用するとき
・ 595 nm での測定が可能なマイクロプレートリーダー
・ マイクロプレート
・ ピペット（200μl および 800μl を正確に計量できるもの）

3

Section 2

使用方法

2.1 スタンダードの調製
凍結乾燥されたプロテインスタンダードに精製水またはバッファーを 20 ml 加えて溶解します。より正確な値を得るために、スタンダードを溶解するバッファーには、サンプルと同じものを使用するのをお勧めします。20 ml で溶解したスタンダードのタンパク質濃度は、製品ラベルに表示されていますのでご確認ください（約 1.4±0.2 mg/ml で記載）。調製したスタンダードを 60 日以内に使用しない場合は、小分けして-20 ℃のフリーザーで保存してください。
注意： プロテインスタンダードにはタンパク質を溶解させるためにバッファー・塩が含まれています｡
2.2 試験管を用いたスタンダードアッセイ法 操作手順
試験管、マイクロチューブを使用するときの測定可能範囲、サンプル量、染色液量

スタンダードアッセイ法
0.2-1.5 mg/ml BGG
0.2-0.9 mg/ml BSA
100μl
20μl
5 ml
1 ml

測定可能範囲サンプル量
染色液量（５倍希釈）

１． 染色液を５倍希釈します。
染色液に 4 倍容量の精製水を加え、Whatman#1 ろ紙あるいは同等品でろ過して微粒子を除きます｡この希釈した染色液は、室温で 2 週間保存可能です｡
注：染色液は室温に戻してからご使用ください。

２． 検量線を作成するために使用するスタンダードの準備をします。
バイオ・ラッドのプロテインスタンダードのような既に濃度のわかっているタンパク質溶液を使用して、3～5 段階の濃度のタンパク質溶液を準備します｡BSA は 0.2-0.9 mg/ml の範囲で検量線が直線性を示します｡また、BGG の場合は 0.2-1.5 mg/ml の範囲で直線性を示します｡
検量線は測定の度に作成してください。タンパク質溶液の定量は一般的にデュプリケー
トまたはトリプリケートで行います｡
３． スタンダードおよびサンプルを試験管に分注します。
４． それぞれの試験管に１．で希釈した染色液を加え、ボルテックスします｡
５． 室温で少なくとも 5 分間インキュベートします。
吸光度は時間が経つにつれて高くなりますので、インキュベートは室温で 1 時間以内にしてください。
６． 595 nm で吸光度を測定します｡
1

スタンダードアッセイ法（20-140μg）

O.D.595

0.8
0.6

BSA

0.4

BGG

0.2
0
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

mg/ml

Fig．１．スタンダードアッセイ法による検量線例、（O.D.595 ブランク補正）
BSA：ウシ血清アルブミン（プロテインスタンダードⅡ）、
BGG：ウシγグロブリン（プロテインスタンダードⅠ）4

2.3 試験管を用いたマイクロアッセイ法 操作手順
試験管、マイクロチューブを使用するときの測定可能範囲、サンプル量、染色液量

マイクロアッセイ法
1.2-25μg/ml BGG
1.2-10μg/ml BSA
800μl
200μl

測定可能範囲サンプル量
染色液量

１． 検量線を作成するためのスタンダードを準備します。
バイオ・ラッドのプロテインスタンダードのような既に濃度のわかっているタンパク質溶液を使用して、3～5 段階の濃度のタンパク質溶液を作成します｡
BSA を用いたアッセイにおける検量線は 1.2-10μg/ml の範囲で直線性を示します｡また、BGG を用いたアッセイにおける検量線は 1.2-25μg/ml の範囲で直線性を示します｡（詳しくは Q&A をご覧ください｡）
検量線は測定の度に作成してください。タンパク質溶液の定量は一般的にデュプリケー
トまたはトリプリケートで行います｡
２． スタンダードおよびサンプルを試験管に分注します。
３． それぞれの試験管に染色液（原液）を加え、ボルテックスします｡
注：染色液は室温に戻してからご使用ください。

４． 室温で少なくとも 5 分間インキュベートします。
吸光度は時間が経つにつれて高くなりますので、インキュベートは室温で 1 時間以内にしてください。

５． 595 nm で吸光度を測定します｡
0.6

マイクロアッセイ法（1-20μg）

O.D.595

0.5
0.4
0.3

BSA
BGG

0.2
0.1
0
0

2.5

5

7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 25
μg/ml

Fig．２．マイクロアッセイ法による検量線例、（O.D.595 ブランク補正）
BGG：ウシγグロブリン（プロテインスタンダードⅠ）
BSA：ウシ血清アルブミン（プロテインスタンダードⅡ）5

2.4 マイクロプレートを用いたプロテインアッセイ操作手順
バイオ・ラッドのプロテインアッセイは、マイクロプレートリーダーを用いて測定することもできます。
マイクロプレートを用いる場合、測定可能範囲はスタンダードアッセイ法、マイクロアッセイ法の場
合と若干異なります。これは、タンパク質と色素の混合比率が異なることに起因します。

マイクロプレートを用いたスタンダードアッセイ法
マイクロプレートを使用するときの測定可能範囲、サンプル量、染色液量測定可能範囲サンプル量
染色液量（５倍希釈）

スタンダードアッセイ法
0.05-0.5 mg/ml BGG & BSA
10μl
200μl

１． 染色液を５倍希釈します。
染色液に 4 倍容量の精製水を加え、Whatman#1 ろ紙あるいは同等品でろ過して微粒子を除きます｡この希釈した染色液は室温で 2 週間保存可能です｡
２． 検量線を作成するためのスタンダードを準備します。
バイオ・ラッドのプロテインスタンダードのような既に濃度のわかっているタンパク質溶液を使用して、3～5 段階の濃度のタンパク質溶液を作成します｡マイクロプレートアッセイにおける検量線は 0.05-0.5 mg/ml の範囲で直線性を示します｡
検量線は測定の度に作成してください。タンパク質溶液の定量は一般的にデュプリケート
またはトリプリケートで行います。
３． スタンダードおよびサンプルをマイクロプレートの各ウェルに分注します。
４． それぞれのウェルに１．で希釈した染色液を加え、マイクロプレートミキサーでよく混ぜます｡
また、マルチチャンネルピペットを使用して、ウェル中で染色液とサンプルやスタンダード
をピペッティングすることによって混ぜることもできます。この場合、次のウェルに移動する
際はチップを新しいものに取り替えてください。
５． 室温で 5 分間インキュベートします。
吸光度は時間が経つにつれて増加しますので、インキュベートは室温、1 時間以内にしてください。
６． 595 nm で吸光度を測定します｡

6

マイクロプレートを用いたマイクロアッセイ法
マイクロプレートを使用するときの測定可能範囲、サンプル量、染色液量測定可能範囲
サンプル量
染色液量

マイクロアッセイ法
8-80μg/ml BGG & BSA
160μl
40μl

１． 検量線を作成するためのスタンダードを準備します。
バイオ・ラッドのプロテインスタンダードのような既に濃度のわかっているタンパク質溶液を使用して、3～5 段階の濃度のタンパク質溶液を作成します｡マイクロプレートアッセイにおける検量線は 8-80μg/ml の範囲で直線性を示します｡タンパク質溶液のアッセイは一般的にデュプリケートまたはトリプリケートで行います｡
２． スタンダードおよびサンプルをマイクロプレートのウェルに分注します。
３． それぞれのウェルに染色液（原液）を加え、マイクロプレートミキサーでよく混ぜます
また、マルチチャンネルピペットを用いることで、ウェル中で染色液とサンプルやスタンダ
ードをピペッティングすることによって混ぜることもできます。この場合、次のウェルに移動する際はチップを新しいものに取り替えてください。
４． 室温で 5 分間インキュベートします。
吸光度は時間が経つにつれて高くなりますので、インキュベートは室温、1 時間以内にしてください。

５． 595 nm で吸光度を測定します｡

7

2.5 改良版プロテインアッセイ
IEF サンプルのような高濃度のカオトロープや界面活性剤が含まれているサンプルは、通常のプロテインアッセイ法には適用できませんが、以下の操作を行うことで測定が可能となります。
測定の際は、必ずスタンダードをサンプルと同じバッファーで希釈して検量線を作成してください。
改良版プロテインアッセイを使用するときの測定可能範囲、サンプル量、染色液量測定可能範囲サンプル量
0.12N HCl
染色液量（５倍希釈）

改良版プロテインアッセイ法
0.2-14 mg/ml BGG
20μl
80μl
3.5 ml１． プロテインスタンダードⅠ（ウシγグロブリン）を溶解します。
凍結乾燥したプロテインスタンダードⅠに精製水を 2 ml 加えて溶解します。
注：ラベルには 20 ml の精製水で溶解するように記載されていますが、2 ml で溶解することで約14 mg/ml のタンパク質溶液を作成します。

２． 染色液を５倍希釈します。
染色液に 4 倍容量の精製水を加え、Whatman#1 ろ紙あるいは同等品でろ過して微粒子を除きます｡この溶液は室温で 2 週間保存可能です｡
注：染色液は室温に戻してからご使用ください。

３． 0.12 N HCl を調製します。
濃塩酸を 100 倍希釈して 0.12 N HCl（理論値）を作成します。
４． 検量線を作成するために使用するスタンダードの準備をします。
3～5 段階の濃度のタンパク質溶液を作成します｡ 0.2-14 mg/ml （2-280μg 相当）の範
囲で相関性を示しますが、非線形回帰となります｡検量線は測定の度に作成してください。
タンパク質溶液の定量は一般的にデュプリケートまたはトリプリケートで行います。
５． サンプルまたはスタンダード 20μl に対して 80μl の 0.12 N HCl を混合します。
注：試薬の混合の順序を遵守してください。0.12 N HCl を、先に染色液と混ぜると吸光度が高くな
り定量できない可能性があります。

６． 染色液を混ぜて 3.5 ml の染色液を加えてボルテックスをしてよく混ぜます。
７． 室温で５分間インキュベートします。
８． 595 nm で吸光度を測定します。

2.6 保存染色液の保存期間は、4 ℃保存で 1 年間です。
凍結乾燥品のプロテインスタンダードⅠ（BGG）、プロテインスタンダードⅡ（BSA）は、4 ℃で 1 年間保存できます。精製水で溶解したプロテインスタンダードは、4 ℃保存で 60 日以内に使用し、長期保存する場合には -20 ℃で保存するようにしてください。凍結融解を繰り返さないように、小分けして保存をしてください。

8Section 3

Q＆A

質問
実験でよく使用する試薬が共存許容試薬・濃度のリストにのっていないのですが、バイオ・ラッドのプロテインアッセイに干渉するかどうか、調べる方法はありますか？

対策問題となる試薬を加えたサンプルと加えないサンプ
ルでそれぞれ希釈系列をつくり、検量線を描いてみてください。（各サンプルに含まれるタンパク質量は同じにしてください。）同じような検量線が得られれば使用可能です。検量線が一致しなかった場合でも、部分的な干渉であればバッファーや干渉物質を検量線作成時に加えることで補正できます。

サンプルにプロテインアッセイの共存許容濃度 タンパク質濃度が十分に高い場合、サンプルを希釈以上の界面活性剤が含まれているのですが、ど して界面活性剤の終濃度を 0.1% またはそれ以下にのような対策が考えられますか？
して使用することができます。また過剰な界面活性剤
は、バイオ・ラッドのバイオビーズ SM-2 を用いてタンパク質溶液から除去することができます。
あるいは、DC（detergent compatible）プロテインアッ
セイを用いることもできます。DC プロテインアッセイ
は Lowry 法を改良したもので、サンプルに 1% のイオ
ン性、非イオン性の界面活性剤が存在していても測定が可能です。
プロテインアッセイと DC プロテインアッセイは、 この 2 つのキットにはどのようなアプリケーションで使どのように使い分けしますか？
用するかにより、全く異なった利点があります。プロテ
インアッセイは Bradford 法に基づいた方法で、DC プ
ロテインアッセイを干渉する糖や DTT、2-メルカプトエ
タノールの存在下でも測定が可能です。
一方、DC プロテインアッセイは Lowry 法に基づいた方法で、Bradford 法の測定で干渉する界面活性剤や水酸化ナトリウムの存在下でも測定が可能です。どちらのアッセイでも共存可能な試薬の入ったサンプ
ルであれば、どちらのキットもご使用いただけます。
サンプルには多種類のタンパク質が共存してい タンパク質定量において、スタンダードとして用いるるのですが、何を標準物質として使ったらいいで のに最適なのは、サンプルと同じタンパク質が精製
しょう？
分離され、すでに定量分析されたものを用いることです。このような絶対的な標準タンパク質がない場合
は、相対的なスタンダードとして他のタンパク質を使用します。目的タンパク質と性状が似ているもの、あるいは色素との反応性が同等のものがあれば、それを用いる方がいいでしょう。
相対的なタンパク質量を知るためのスタンダードには、精製されたタンパク質であれば何でも使用することが可能です。
バイオ・ラッドでは、標準物質としてプロテインスタン
ダードⅠ（BGG、カタログ番号 5000005）とプロテイン
スタンダードⅡ（BSA、カタログ番号 5000007）の 2 種類をご用意しております。

9

質問
他のアッセイ法と比較してどうですか。

対策
バイオ・ラッドのプロテインアッセイと Biuret 法やLowry 法との比較を行いました。市販の種々のタンパ
ク質 10 mg/ml 溶液を用いて比較した結果を Table 2（p.13 参照）に示します。スタンダードは、バイオ・ラッドのプロテインアッセイと Lowry 法ではプロテインスタ
ンダードⅠ（BGG）を、Biuret 法には BSA を使用しました。3 種類のアッセイで測定結果を比べると、タンパ
ク質によって差異のあるものもありますが、それぞれの平均値はほぼ同等です。

何かサンプルに前処理は必要ですか？

通常必要ありません。ただし、タンパク質は十分溶解している必要があります。（縣濁液や、ホモジナイズ
後ろ過していないものは避けてください。）

溶液中に溶けていないタンパク質を測定したい クロマトの固相担体に固定化されたタンパク質の評のですが？
価方法として、色素直接結合法(*)が報告されています。これはプロテインアッセイに用いられている
Bradford 法を応用したものであり、目的タンパク質が結合した担体をそのまま発色試薬と反応させています。この場合、通常使用される 595 nm ではなく、495nm を使用しています。この方法は、目的タンパク
質の免疫能の評価法として用いられています。
(*) M. Bonde, H. Pontoppidan and D. S. Pepper,
Anal.Biochem. 200, 195 (1992)
キュベットに付着した色素は検量線に影響しま キュベット（特に石英キュベット）に付着した色素は、すか？
結果にほとんど影響しませんので 1、キュベットに付着した色素を測定するたびに取り除く必要はありません。
次の測定に備えてキュベットの色素を取り除くには、
以下の３つの方法があります。
(a) メタノールで十分洗います。
(b) ガラス用洗剤の原液にてよく洗い、十分量の精製水で洗剤を洗い流します。最後にアセトンで洗います。
(c) 0.1 N HCl に数時間つけた後、(b) と同様に洗浄します。
バイオ・ラッドでは、ポリスチレン製ディスポーザブル
キュベット（カタログ番号 2239950）を販売しております。このキュベットはガラス製のものより色素の付着が少なく、スタンダードアッセイ法においてサンプルと染色液を混合する容器（サンプル 50μl＋染色液 2.5ml）としてもご使用いただけます。これによって試験管が不要になり、より多くのアッセイ（約２倍）に染色液を利用可能となります。

10

質問
対策
プロテインスタンダードは BGG と BSA のどちら Bradford 法では、BSA は BGG などの他のタンパクを使用すればよいですか？
質に比べて発色量が高くなります。したがって、広範
囲のタンパク質の測定には BGG をご使用ください。
アルブミン濃度の高いサンプルには BSA の使用をおすすめいたします。
色素溶液を添加したサンプルの吸光度が、徐々 一般的に Bradford 法では、染色液の添加後 10 分位に高くなっているようです。
まで徐々に吸光度が上がります。15 分～1 時間の間は比較的安定ですが、若干低下する傾向にあります。
より正確に測定するに、サンプル測定までの反応時間をできるだけ一定にすることをお勧めします。
希釈した染色液またはサンプルに染色液を添加 次の原因が考えられます。
した状態で、色素の凝集が見られます。
1) 試薬が古い。
試薬が古くなると、色素が凝集しやすくなります。
新しいものに交換してください。
2) プレフィルターをかけていない。
染色液は使用する前に凝集物を取り除くために、
Whatman の定性ろ紙 No.1 用いて、ろ過を行ってください。
3) 染色液を混合後、時間が経過しすぎている。
染色液とサンプルを混合後した後、5 分から 1 時間以内に測定を行ってください。これ以上経過すると、凝集が生じる可能性があります。
4) スタンダードタンパク質で見られない場合、サンプ
ルの特性による可能性が考えられます。
染色液およびサンプルを混合後、再度ろ過、もしくはボルテックス等を行ってみてください11Section 4

トラブルシューティングガイド

質問
対策
色素との反応が弱いタンパク質を測定するには まれに、バイオ・ラッド プロテインアッセイを用いて測どうしたらよいでしょうか？
定した場合、非常に発色の弱いタンパク質があります。ゼラチンはこのようなタンパク質の一つであり、スタンダードアッセイ法を用いてもスタンダードレンジ（20－140μg）での測定ができません。しかし、サンプルと染色液の混合比を変えることで定量できるようになります。サンプルと染色液の混合比をマイクロアッ
セイ法の割合（サンプル 800μl ＋ 染色液 200μl）に変えることで、ゼラチン濃度に対応した検量線を描くことができます。
発色の弱いタンパク質の測定では、感度を上げるた
めマイクロアッセイ法のサンプルと染色液の混合比を用いて測定してください。
さらに感度を上げる変法も報告されています 7，8。
タンパク質の吸光度が非常に低い。どのような 染色液が古い可能性があります。製品がお手元に届
原因が考えられますか？
いてから 1 年以上が経過している場合、新しいものをお買い求めください。
サンプルに色素との結合を阻害する物質、例えば界面活性剤や水酸化ナトリウム等が含まれている可能性があります。サンプル中試薬の共存許容濃度を確認し、サンプルを調製し直すか、バイオ・ラッドの DC
プロテインアッセイまたは RC DC プロテインアッセイを用いたアッセイに変更してください。
タンパク質の分子量が低すぎる可能性があります。
この方法で測定できるタンパク質の分子量の下限は3,000 ～ 5,000 Da 以上です。
検量線に直線性が得られませんが、どのように 測定範囲内であっても、高濃度のタンパク質溶液に対応すればよいですか？
おける吸光度が低くなり、直線性が得られない場合があります。この測定結果は検量線として使用できな
いのではなく、測定したいサンプルもスタンダードと同様の発色をしているため、検量線の多項式の近似曲線を用いて検量線として使用することができます。

12

Table 2．バイオ・ラッド プロテインアッセイ、Lowry 法、Biuret 法の比較
すべてのアッセイは、よく使用されるさまざまなタンパク質の 10 mg/ml 溶液を用いて行っています。スタンダードアッセイ法は取扱説明書に従います。

1. Alcohol dehydrogenase
2.α-Amylase
3. Bovine serum albumin
4. Carbonic anhydrase
5. Catalase
6.α-Chymotrypsin
7. Cytochrome c*
8. Ovalbumin
9. Fibrinogen
10. Gamma globulin(rabbit)
11.β-galactosidase
12. Hemoglobin (bovine)*
13. Histones
14. Hemocyanin
15. Lysozyme
16. Myoglobin*
17. Ovomucoid
18. Pepsin
19. Ribonuclease
20. Trypsin inhibitor (soy)21. Transferrin
22. Trypsin
23. Thyroglobulin
Average*Average

結果（タンパク質量 mg/ml）
Biuret 法 Lowry 法 Bio-Rad
ﾌﾟﾛﾃｲﾝｱｯｾｲ
5.8
5.0
7.8
6.8
6.0
8.3
9.7
8.4
21.1
8.8
8.9
13.0
7.6
6.3
9.7
9.4
11.6
7.8
25.7
11.3
25.3
10.2
10.1
9.4
6.2
7.3
7.8
9.4
11.8
8.0
9.5
9.9
7.9
16.2
8.3
19.9
9.7
9.2
15.8
6.6
5.4
9.2
10.4
12.6
9.9
13.7
7.9
20.7
7.8
8.3
5.9
9.8
12.4
4.1
11.8
15.9
5.3
9.1
10.3
6.1
8.5
9.0
12.6
11.4
15.5
4.9
7.7
8.2
9.3
10.1
8.8

9.5
9.6

10.9
9.2

（注：*Average は＊印のついたタンパク質 3 種類を除外した平均値です。）

Section 5

参考文献

１． Bradford, M., Anal. Biochem., 72, 248 (1976).
２． Reisner, A. H., Nemes, P. and Bucholtz, C., Anal. Biochem., 64, 509 (1975).
３． Fazakes de St. Groth, S. et al., Biochim. Biophys. Acta, 71, 377 (1963).
４． Sedmack, J. J. and Grossberg, S. E., Anal. Biochem., 79, 544 (1977).
５． Compton, S. J. and Jones, C. G., Anal. Biochem., 151, 369 (1985).
６． Spector, T., Anal. Biochem., 86, 142 (1978).
７． Duhamel, R. C., Meezan, E. and Brendal, K., J. Biochem. Biophys. Methods, 5, 67 (1981).
８． Macart, M. and Gerbaut, L., Clin. Chim. Acta, 122, 93 (1982).
※ Coomassie は ICI 社の登録商標です。

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Ordering Information
カタログ番号 品名
5000001
50000025000006
5000201

5000202

5000203

5000204

5000205
5000206
5000207
5000208
5000209
500011150001125000116
500011350001145000115
5000121

50001225000120

5000119
5000005
5000007
2239950
2239955

保存

プロテインアッセイキット Ⅰ
染色液 450ml、プロテインスタンダードⅠ：ウシ γ グロブリン
プロテインアッセイキット Ⅱ
染色液 450ml、プロテインスタンダードⅡ：ウシ血清アルブミン
プロテインアッセイ染色液、450ml

4℃

Quick Start プロテインアッセイキット１
1×染色液 １L、Quick Start BSA スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start プロテインアッセイキット２
1×染色液 １L、Quick Start BSA スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本
Quick Start プロテインアッセイキット３
1×染色液 １L、Quick Start IgG スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start プロテインアッセイキット４
1×染色液 １L、Quick Start IgG スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本
Quick Start プロテインアッセイ染色液、１L
Quick Start BSA スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start BSA スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本
Quick Start IgG スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start IgG スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本

4℃

DC プロテインアッセイキット Ⅰ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、プロテインスタンダードⅠ：ウシ γ グロブリン
DC プロテインアッセイキット Ⅱ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、プロテインスタンダードⅡ：ウシ血清アルブミン
DC プロテインアッセイ試薬セット
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬 5ml
DC プロテインアッセイ A 試薬、250ml
DC プロテインアッセイ B 試薬、1L
DC プロテインアッセイ S 試薬、5ml

4℃

RC DC プロテインアッセイキット Ⅰ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml、プロテインスタンダードⅠ：ウシ γ グロブリン
RC DC プロテインアッセイキット Ⅱ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml、プロテインスタンダードⅡ：ウシ血清アルブミン
RC DC プロテインアッセイ試薬セット
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml
RC 試薬セット
RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml

4℃
4℃

4℃

4℃

4℃

4℃
4℃
4℃
4℃
4℃

4℃

室温
室温
室温
室温
4℃

4℃

室温

室温

プロテインスタンダードⅠ
ウシ γ グロブリン、20ml に溶解 約 1.4mg/ml
プロテインスタンダードⅡ
ウシ血清アルブミン、20ml に溶解 約 1.4mg/ml

4℃

ディスポーザブルキュベット
スタンダード 3.5ml 100/Tray
ディスポーザブルキュベット
セミマイクロ 1.5ml 100/Tray

－

4℃

－

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バイオ･ラッド ラボラトリーズ株式会社

ライフサイエンス
本社

www.bio-rad.com〒140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 天王洲セントラルタワー Tel : 03-6361-7000※ 学術的お問い合わせは Email: life_ps_jp@bio-rad.com Tel : 03-6404-0331

Fax : 03-5463-8480
Fax : 03-6404-0334※本製品は研究用であり、診断目的にはご利用いただけません。

M11975L 2310f