RC DC プロテインアッセイ
取扱説明書

5000120
50001225000121

5000119
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5000118
5000005
5000007
ご使用の前に本製品を正しく安全にお使いいただくために、ご使用の前に必ずこの取扱説明書を十分にお読みください。
お読みになったあとは、いつでも見られるところに必ず保管してください。

RC DC プロテインアッセイ取扱説明書

目次
Section 1 はじめに .................................................................................................................................... 1
Section 2構成 .......................................................................................................................................... 1

Section 3

共存許容試薬・濃度 ......................................................................................................... 2

Section4

操作手順 ................................................................................................................................. 3

Section5

保存 ........................................................................................................................................... 4

Section6

トラブルシューティング....................................................................................................... 4

Section７ 参考文献 ................................................................................................................................... 4
Ordering Information .................................................................................................................................. 5

Section 1 はじめに
RC DC プロテインアッセイは、従来の DC プロテインアッセイに改良を加えたタンパク質比色定量用試薬です。本製品は Lowry 法に基づいていますが、界面活性剤だけではなく、還元剤が共存していても、測定に際して影響が少なくなるように改良されています。製品名の RC は Reducing
agent Compatible、DC は Detergent Compatible に由来します。

Section 2構成

RC 試薬セット(カタログ番号 5000119)には、以下の試薬が含まれます。
 RC Ⅰ試薬（250 ml）
 RC Ⅱ試薬（250 ml）
この試薬は、スタンダードアッセイ法の試験管利用で 500 回分、マイクロチューブ利用で 2000 回分の量になります。

RC DC プロテインアッセイ試薬セット(カタログ番号 5000120) には、RC 試薬セットに以下の DC プロテインアッセイ試薬セット(カタログ番号 5000116) が付属します。
 A 試薬 （250 ml）： 酒石酸銅を含む溶液
 B 試薬 （1000 ml x 2 本）： Folin 試薬を含む溶液
 S 試薬 （5 ml）
なお、RC DC プロテインアッセイキットⅠ(カタログ番号 5000121) には、RC DC プロテインアッセイ
試薬セットにスタンダードⅠ（ウシγグロブリン） が付属し、RC DC プロテインアッセイキットⅡ(カタログ番号 5000122) にはスタンダードⅡ（ウシ血清アルブミン） が付属します。

1Section 3

共存許容試薬・濃度

RC DC プロテインアッセイを用いてのタンパク質定量に影響を与えないことが確認された試薬を以下に示します。サンプル溶液中にこれらの試薬が存在していた場合、本試薬に対するタンパク質の反応性に変化が生じている可能性もありますので、検量線を作成する場合のスタンダードは、目的のサンプルと同じバッファーで希釈してください。
試薬
Dithiothreitol（DTT）
Tributylphosphine（TBP）
β-mercaptoethanol
ReadyPrep Reagent 2☆
ReadyPrep Reagent 3☆☆
Laemmli Buffer(with 5% β-mercaptoethanol)
CHAPS
Tween 20※
Triton X-100※※
EDTA
ImidazoleTris, pH 8.4
NaOH※
※※

One Wash
100 mM
2 mM
5%
使用不可
使用不可
使用可能2%2%2%
100 mM
500 mM
500 mM2.5 M

Two Washes (オプション)
350 mM－10%
使用可能
使用可能－－－－－－－－Tween は ICI Americas 社の登録商標です。
Triton は Rohm and Haas 社の登録商標です。

☆

ReadyPrep Reagent 2 (カタログ番号 1632103)
40 mM Tris, ８ M urea, 4%（w/v）CHAPS, 0.2%(w/v) Bio-Lyte3/10, 2 mM TBP☆☆ ReadyPrep Reagent 3 (カタログ番号 1632104)
40 mM Tris, 5 M urea, 2 M thiourea, 2%（w/v）CHAPS, 2%(w/v)SB 3-10, 0.2%(w/v) Bio-Lyte3/10, 2 mM TBP

2

Section4操作手順

スタンダードアッセイ法 試験管（5ml）、マイクロチューブ（1.5ml） 操作手順
RC DC プロテインアッセイにおける測定可能範囲、サンプル量、染色液量

試験管(5ml)
マイクロチューブ(1.5ml)
0.2-1.5 mg/ml BGG & BSA
100μl
25μl
500μl
125μl
500μl
125μl
500μl
125μl
160μl
40μl
510μl
127μl
4 ml
1 ml

測定可能範囲サンプル量
RCⅠ試薬量RCⅡ試薬量オプション（two wash）*

RCⅠ試薬量RCⅡ試薬量A’ 試薬量**B 試薬量*オプション(two wash)：測定を阻害するものをさらに取り除きたい場合は、RCⅠ試薬の混合からの操作を２回行います。
** A’ 試薬は 1 ml の A 試薬に対して S 試薬を 20μl 加えたものです。

１． A’試薬を作成します。
DC プロテインアッセイ A 試薬 1 ml に対して DC プロテインアッセイ S 試薬 20μl を加え、A’試薬を作成します。
A’試薬は、調製後 1 週間の保存が可能です。沈殿が生じた場合は軽く温めてボルテックスし、完全に溶解させてからご使用ください。ピペッティングによる溶解は、結晶がチップに付着してしまい、サンプルに加える A’試薬の濃度が変わってしまうので行わないでください。
２． 検量線を作成するためのスタンダードを準備します。
タンパク質濃度が 0.2～1.5 mg/ml の間で 3～5 段階の希釈系列を作成したタンパク質溶液をスタンダードとして用意してください。検量線はアッセイを行うたびに作製する必要があります。正確な結果を得るためには、スタンダードの調製をサンプルと同じバッファーで行うのが望ましいです。
３． スタンダードとサンプルを分注します。
４． RCⅠ試薬をそれぞれのチューブに加え、ボルテックスします。チューブを 1 分間室温でインキュベートしてください。
５． RCⅡ試薬をそれぞれのチューブに加えて、ボルテックスします。そのチューブを 15,000xg で3～5 分間遠心してください。
６． 上清を捨て、ペレットの水分がなくなるまで、きれいなろ紙等の上でチューブをさかさまにして立てておいてください。
７． A’試薬をそれぞれのチューブに加え、ボルテックスします。チューブを約 5 分間、ペレットが完全に溶解するまで室温でインキュベートしてください。
８． DC プロテインアッセイ B 試薬をそれぞれのチューブに加え、すばやくボルテックスします。
15 分間室温でインキュベートしてください。

９． 750 nm で吸光度を測定します。吸光度は少なくとも 1 時間は安定です。
*オプション：測定を阻害する物質をさらに取り除きたい場合は、下記の操作を行います。
① 操作手順における ４．から ６．までの過程を 2 回行います。（two wash）
この時の、２回目の RCⅡ試薬は 160μl（マイクロチューブでは 40μl）になります。
② ６．を行う際、アスピレーターを使用して上清をできる限り取り除きます。
③ ６．の後、真空状態でチューブを乾燥させます。
3Section5

保存

プロテインスタンダードⅠ（ウシγグロブリン）とプロテインスタンダードⅡ（ウシ血清アルブミン）
は、凍結乾燥状態の時は ４℃で１年間保存できます。 溶解した後は、４ ℃保存で 60 日以内に使用し、長期保存する場合には -20℃で保存するようにしてください。凍結融解を繰り返さないよ
うに、小分けして保存をしてください。
RCⅠ試薬と RCⅡ試薬は、直射日光を避けて室温（20℃～30℃）で保存してください。これらの試薬の保存期間は 1 年間です。
DC プロテインアッセイ A 試薬、B 試薬、S 試薬は、直射日光を避け室温（20～30℃）で保存してください。（A 試薬、B 試薬は冷蔵保存も可能です。）試薬の使用期限はすべて、購入後６ヶ月です。
DC プロテインアッセイ試薬に関する詳しい情報は、DC プロテインアッセイの取扱説明書をご覧ください。

Section6

トラブルシューティング

質問
750 nｍ以外の波長でも使用可能ですか。
3～5 分間遠心した後、ペレットが十分固くない場合はどうすれば良いでしょうか。

回答
650～750 nm の範囲で測定が可能です。
遠心時間を 6～10 分間に増やしてください。この場合、A’試薬を加えてペレットを溶解させるのに時間がかかる可能性があります。
測定範囲内であっても、高濃度のタンパク質溶液における吸光度が低くなり、直線性が得られない場合があります。この測定結果は検量線として使用できないのではなく、測定したいサンプルもスタンダードと同様の発色をしているため、多項式の近似曲線を用いれば検量線として使用することができます。

検量線に直線性が得られませんでした。

Note: その他のトラブルシューティングに関しては、DC プロテインアッセイの取扱説明書も併せてご参照ください。

Section７ 参考文献
Lowry,O.H.,Rosebrough,N.J.,Farr,A.L.,and Randall,R.J.,”Protein Measurement with the Folin
Phenol Reagent,” Journal of Biological Chemistry,193(1951):265-275

4

Ordering Information
カタログ番号 品名
5000001
50000025000006
5000201

5000202

5000203

5000204

5000205
5000206
5000207
5000208
5000209
500011150001125000116
500011350001145000115
5000121

50001225000120

5000119
5000005
5000007
22399502239955

保存プロテインアッセイキット Ⅰ
染色液 450ml、プロテインスタンダードⅠ：ウシ γ グロブリン
プロテインアッセイキット Ⅱ
染色液 450ml、プロテインスタンダードⅡ：ウシ血清アルブミン
プロテインアッセイ染色液、450ml

4℃

Quick Start プロテインアッセイキット１
1×染色液 １L、Quick Start BSA スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start プロテインアッセイキット２
1×染色液 １L、Quick Start BSA スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本
Quick Start プロテインアッセイキット３
1×染色液 １L、Quick Start IgG スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start プロテインアッセイキット４
1×染色液 １L、Quick Start IgG スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本
Quick Start プロテインアッセイ染色液、１L
Quick Start BSA スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start BSA スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本
Quick Start IgG スタンダード 2ml (2mg/ml)×5 本
Quick Start IgG スタンダードセット 2ml (0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml)×2 本

4℃

DC プロテインアッセイキット Ⅰ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、プロテインスタンダードⅠ：ウシ γ グロブリン
DC プロテインアッセイキット Ⅱ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、プロテインスタンダードⅡ：ウシ血清アルブミン
DC プロテインアッセイ試薬セット
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬 5ml
DC プロテインアッセイ A 試薬、250mlDC プロテインアッセイ B 試薬、1L
DC プロテインアッセイ S 試薬、5ml

4℃

RC DC プロテインアッセイキット Ⅰ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml、プロテインスタンダードⅠ：ウシ γ グロブリン
RC DC プロテインアッセイキット Ⅱ
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml、プロテインスタンダードⅡ：ウシ血清アルブミン
RC DC プロテインアッセイ試薬セット
A 試薬：250ml、B 試薬：2L、S 試薬：5ml、RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml
RC 試薬セット
RCⅠ試薬：250ml、RCⅡ試薬：250ml

4℃
4℃

4℃

4℃

4℃

4℃
4℃
4℃
4℃
4℃

4℃

室温
室温
室温
室温
4℃

4℃

室温

室温

プロテインスタンダードⅠ
ウシ γ グロブリン、20ml に溶解 約 1.4mg/ml
プロテインスタンダードⅡ
ウシ血清アルブミン、20ml に溶解 約 1.4mg/ml

4℃

ディスポーザブルキュベット
スタンダード 3.5ml 100/Tray
ディスポーザブルキュベット
セミマイクロ 1.5ml 100/Tray

－4℃

－5

バイオ･ラッド ラボラトリーズ株式会社

ライフサイエンス
本www.bio-rad.com

社 〒140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 天王洲セントラルタワー Tel : 03-6361-7000※ 学術的お問い合わせは Email: life_ps_jp@bio-rad.com Tel : 03-6404-0331

Fax : 03-5463-8480
Fax : 03-6404-0334※本製品は研究用であり、診断目的にはご利用いただけません。
M13483L 2310a