SpyTag Technology

革新的な SpyTag と SpyCatcher の技術は、「分子の瞬間接着剤」とも呼ばれ、科学界では新しい性質を持つタンパク質を構築するために様々な方法で採用されてきました。バイオ・ラッドの「TrailBlazer カスタム
抗体作製サービス*」は SpyTag 付リコンビナント抗体を、既成の SpyCatcher モジュールと組み合わせることで、これまでにない 柔軟なアッセイデザインを可能にする ブランドとして誕生しました。 SpyTag とSpyCatcher の反応は自己触媒的に起こり、数分で定量的に反応します。使用する SpyCatcher に応じて、抗体は、例えば HRP、ビオチン、蛍光色素などで部位特異的に標識されるか、多量化されるか、異なるア
イソタイプや様々な種由来の Fc ドメインを持つ免疫グロブリン（Ig）様コンストラクトに形成することができます。

SpyTag テクノロジーの紹介（Keeble et al. 2019）。

SpyTag 技術は、Sｔreptococcus pyogenes（SPY:

SpyTag と SpyCatcher は全てのバージョンで互換

化膿性連鎖球菌）のフィブロネクチン結合タンパク性があります。

質（FbaB）の第 2 の免疫グロブリン様コラーゲン付
着因子領域（CnaB2）由来の SpyTag(Sy)ペプチドと SpyCacher タンパク質（Zakeri et al.2012）を用いたタンパク質ライゲーション法です。CnaB2 ドメイ
ンは、リシンとアスパラギン酸の側鎖間に鎖内イソ◼

自発的（自己触媒的）反応

ペプチド結合を持つのが特徴であり、このイソペプ◼

2 価のイソペプチド結合の形成、不可逆的チドが CnaB2 ドメインに結合しています。このドメイ◼

高速で定量的な反応

ンを分割し、合理的に断片化することで、混合す◼

pH5～8、温度+4～+37℃

ると自発的にアミド結合を形成するペプチド（反応◼

緩衝液に強く、Ca2+/Mg2+を必要としない性 Asp 残基を含む SpyTag）と小さなタンパク質◼

洗浄剤(detergents)に強い（反応性 Lys 残基と触媒の三重鎖形成に必要な◼

細胞内でも反応する（in vivo）

Glu 残基を含む SpyCatcher）を得ることができまし

図 1. SpyTag2 と SypCatcher2 の反応は、混ぜるだけた。この反応は、pH、温度、バッファーの多様な条で済み、迅速かつ高収率で、特異性が高い。

件下で高い収率で起こります。2 つの成分
（SpyTag2 と SpyCatcher2）の最適化（Keeble etal. 2017）に続き、反応時間を数時間から数分に短縮し（図 1）、その後、さらに反応速度を上げる
改良（ SpyTag3 と SpyCatcher3） を して い ます
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能である。FcCatcher は、一級アミンを介してコンジュゲートされ、DOL が測定されます。

SpyTag テクノロジーによるリコンビナント抗体
バイオ・ラッドは、SpyTag テクノロジーとリコンビナント抗体の発現を組み合わせ、抗体に全く新しい多様性を導入しました（Hentrich et al.2021）。
SpyTag2 は、遺伝子工学的にリコンビナント抗体の C 末端に融合されています（図 2；ここではSpyTag は Fab 抗体断片の重鎖 C 末端に遺伝子工学的に融合されている）。SpyCatcher 由来のアダプターは、混合・インキュベートすることでSpyTag 付抗体とカップリングできるシリーズが作成されています。SpyCatcher には、HRP やビオチンなどの標識が用意されています。2 つのSpyCatcher を遺伝子工学的に連結し、2 価のFab2 を形成させる BiCatcher や、SpyCatcher を

図 4. SpyTag を含む一価 Fab (中央) は、選択したキャッチャーとの共有イソペプチド結合の形成を介して、複数の異なる形状に変換することができます。

Ig Fc ドメインに融合し、2 つの SpyTag Fab との反応後に合成 Ig 様分子を作る FcCatcher などのバリエーションが設計されています（図 3）。SpyTag

SpyCatcher 製品とサービスを持つ Fab は、選択された Catcher と共有結合ですべての SpyCatcher とその誘導体（表 1）は、あるイソペプチド結合を形成し、1 時間以内に標識

SpyTag2 を重鎖の C 末端に組み込んだ当社の組や複数のフォーマットへの変換が可能になります

換え抗体、例えば FLAG-と His-タグも含むフォー（図 4）。

マ ッ ト Fab-Spy2-H と 互 換 性 が あ り ま す 。
TrailBlazer カスタム抗体作製サービス*の一環として、SpyCatcher をリコンビナント Fab 抗体にカップ
リ ン グ す る こ と が 可 能 で す 。 ま た 、 SpyTag1 、
SpyTag2、SpyTag3 を持つ抗体やタンパク質にカップリングさせるために、各種 Catcher 製品を購入することも可能です。

図 2. A：完全長の免疫グロブリンの模式図
B,：SpyTag（灰色）、精製・検出タグ（青）付き一価 Fab フォー
マット。

図 3. 異なるキャッチャー（灰色）の非標識（左）と共役（オレンジ色の円、右）の模式的イメージ。SypCatcher と BiCatcher は、
システイン残基を含むように改良され、標識度（DOL: Degreeof Labeling）を知ることで部位特異的なコンジュゲーションが可

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2

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FcSpyCatcher3

表１． SypCatcher 製品
製品

説明

SpyCatcher2
SpyCatcher2-CYS

SpyCatcher2:Biotin
SpyCatcher2:HRP
SpyCatcher2:PE
SpyCatcher3
SpyCatcher3-CYS

SpyCatcher2 タンパ
ク質
システ イン 残基を １
つ あ るように 操作 さ
れ SpyCatcher2。
好 み の 標 識を 部 位
特異的に 化学結合させることが可能
SpyCatcher2 にビオ
チンを標識
SpyCatcher2 に HRP

BiSpyCatcher2-CYS

BiSpyCatcher2-CYS3

BiSpyCatcher2:Biotin
BiSpyCatcher2:HRP
BiSpyCatcher2:PE

higG1FcSpyCatcher3:Biotin
higG1FcSpyCatcher3:HRP
higG2-FcSpyCatcher3

higG3-FcSpyCatcher3

higG4-FcSpyCatcher3

higG4-Pro-

TZC001有TZC001CYS

BiSpyCatcher2 タ ン
パク質
システ イン 残基が １つあるように操作した
SpyCatcher2。
好 み の 標 識を 部 位
特異的に 化学結合させることが可能
システイン残基が 3つあるように操作した
SpyCatcher2。
好 み の 標 識を 部 位
特異的に 化学結合させることが可能
SpyCatcher2 にビオ
チンを標識
SpyCatcher2 に HRP
を標識
SpyCatcher2 に PEを標識

ヒト IgG1 のヒンジ領域、CH2、CH3 と融合した SpyCatcher3
ビオチン標識 Human
IgG1FcSpyCatcher3
HRP 標 識 Human
IgG1FcSpyCatcher3
ヒト IgG2 のヒンジ領域、CH2、CH3 と融合した SpyCatcher3
ヒト IgG3 のヒンジ領域、CH2、CH3 と融合した SpyCatcher3
ヒト IgG4 のヒンジ領域、CH2、CH3 と融合した SpyCatcher3
ヒト IgG4-

higA-FcSpyCatcher3

mIgG2aFcSpyCatcher3

rIgG-FcSpyCatcher3
有TZC001B

有

お問い合わせカスタム
サービス

Ig 様フォーマット
higG1-FcSpyCatcher3

有を標識
SpyCatcher2 に PE お問い合を標識
わせ
SpyCatcher3 タンパ
有ク質
システイン残基を操有作した
SpyCatcher3。
好みの標識を部位特異的に化学結合
させることが可能

二価フォーマット
BiSpyCatcher2

入手性
カスタム
カタログ番号サービス

1 価フォーマット

Pro(S228P)のヒンジ
領域、CH2、CH3 と融合した
SpyCatcher3。
ヒト IgA1 のヒンジ領域、CH2、CH3 と融合した SpyCatcher3
マウス IgG2a のヒン
ジ領域、CH2、CH3と融合した
SpyCatcher3
ウサギ IgG のヒンジ領域、CH2、CH3 と融合した SpyCatcher3

有TZC020有TZC012

有TZC013

SpyCatcher, BiSpyCatcher, FcSpyCatcher へのFab 抗体のカップリングプロトコール

お問い合わせSpyTag と SpyCatcher のカップリング反応は、簡TZC025単で高速です。

TZC025CYS

1.

カップリングさせたい Fab の量から、必要なFab と SpyCatcher 製品の量を計算する。

カタログ番号

有TZC002有TZC002CYS

2.

Fab と SpyCatcher 製品を混合する。

3.

RT で 1 時間インキュベートする。

詳細なプロトコルは、弊社ホームページでご覧いただけます。本ガイドラインは、反応性 SpyTag を持
つタンパク質を SpyCatcher 製品にカップリングさ有せる場合にも適用できます。

TZC002CYS3

bio-rad-antibodies.com/spycatcher でプロトコー
ルをダウンロードして頂けます。
有TZC002B

有TZC002P

有

お問い合わせカスタム
サービス

カタログ番号

有TZC009有TZC009B

有

お問い合わせ有

TZC016

有TZC017

有TZC018有TZC019図 5. SpyTag-SpyCatcher 反応のカップリングの例。 HisSpyCatcher2(カタログ番号:TZC001)のカップリングカイネティ
ク ス を Criterion TGX Stain-Free AnykD( カ タ ロ グ 番
号 :5678125) 上 で 解 析 し た も の で す 。 SpyTag 付
Fab(AbD35759, Fab-F-Spy2-H format)をレーン 1 に、HisSpyCatcher2 をレーン 2、レーン 4 には、プレシジョン Plus
Protein 未着色スタンダード (カタログ番号:1610363)、レーン
6-12 には、Fab と 25%モル過剰の His-SpyCatcher2 とのカッ
プリング反応物（RT）をアプライした。4X Laemmli サンプルバッ
ファー (カタログ番号:1610747)を添加し、指定時刻に反応を停止させた。すべてのレーンに 3ug タンパク質量をロードしました。

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よくあるご質問 (FAQs:Frequently Asked Questions)# 質問
回答
1 SpyTag と SpyCatcher の生 表 2. オリジナルの SpyTag および SpyCatcher タンパク質の生物
物物理学的なパラメーター 物理学的パラメータ
を教えてください？

2

SpyTag、SpyTag2、SpyTag3 と SpyCatcher、
SpyCatcher2、SpyCatcher3 の違いは何ですか？

3

FcCatcher には
SpyCatcher3、それ以外のCatcher には SpyCatcher2が何故使われているのですか？

4

SpyTag-SpyCatcher の 結合は安定していますか？

5

SpyTag や SpyCatcher は、細胞やライセート中の他のタンパク質と反応することがありますか？
抗体と直接標識するのではなく、SpyCatcher を経由して標識する方が良いのはなぜ
ですか？

6

7

SpyCatcher のラベルは、どのようにして部位特異的に標識されるのですか？

バイオ・ラッドの SpyCatcher 各種タンパク質および誘導体の分子量は、タグやリンカーを追加することで異なるため、各製品のデー
タシートを参照してください。
SpyTag と SypCatcher は、S. pyogenes のフィブロネクチン結合タンパク質に基づいてに開発されました。このペアをファージディス
プレイにより反応速度を最適化し、SpyTag2 と SpyCatcher2 となり、オリジナルのペアより 10 倍速く反応しイソペプチド結合を形成します。SpyTag2 と SpyCatcher2 をさらに合理的設計によって最適 化 さ れ 、 反 応 速 度 が さ ら に 10 倍 向 上 し た SpyTag3 とSpyCatcher3 が作製されました。
すべての SpyTag と SpyCatcher のバージョンに互換性があります。TrailBlazer カスタム抗体には SpyTag2 が含まれています。
SpyTag2 のカップリング速度は、弊社の抗体カップリングプロトコー
ルで推奨する濃度では、SpyTag3 と同等です。
当社の SpyCatcher と BiCatcher は、SpyCatcher3 が登場する以前、SpyCatcher2 を使って開発されたものです。Fc キャッチャー
は 、SpyCatcher3 が利用可 能になった後に開発されま した。
SpyCatcher3 を SpyCatcher と BiCatcher で使用するためにテストしましたが、バージョン 3 はバージョン 2 よりも大きなパフォーマンス上の利点が見られなかったため、これらの製品は引き続き SpyCatcher2 を使用して製造されています。
タンパク質が結合してできるイソペプチド結合は、タンパク質内のアミノ酸間の他のペプチド結合と同様に安定であると考えられており、この結合は不可逆的であると考えられています。
SpyTag-SpyCatcher タンパク質のライゲーション反応は、非常に特異的です。
2 つの要素のどちらも、細胞やライセート中の他のタンパク質と反応しないことが確認されています。
標識済み Catcher タンパク質は、簡単、迅速、柔軟、そして標識
結合方向を指定して使用することができます。
従来の抗体標識はランダムなプロセスであり、各抗体は異なる位
置に異なる数のラベルが標識されていました。そのため、抗体の抗原結合部位にラベルが結合し、試薬の性能が低下することがあります。
標識済 Catcher は、抗体の C 末端に一定の化学量論で結合され、抗体結合部位は修飾されません。
さらに、SpyCatcher および BiCatcher では、部位特異的にビオチンなどの標識と結合できる遊離チオール基を設計しており、一定の 標 識 度 （ DOL: degree of labeling ） を 得 る こ と が で き ま す 。
SpyTag 付抗体は、簡単な混合操作で、どの Catcher にも結合させることができます。これにより、アッセイデザインの柔軟性が飛躍的に向上します。
SpyCatcher2、SpyCatcher3 はシステイン（Cys）を 1 つ含むように、BiCatcher2 はシステインを 1 つまたは 3 つ含むように遺伝子
工学的に設計されています。
これらの Cys 残基は、例えばマレイミド法による部位特異的標識に利用することができ、これらの Catcher に固定 DOL で付与することができます。
FcCatcher 製品では、不自然なフォールディングを避けるため、シBulletin 3217J
4

SpyTag Technology

#

質問

8

Catcher タンパク質は、どのようなプローブや標識と結合することができますか？

9

SpyTag-SpyCatcher 技 術
は、どのような抗体にも使用できるのですか？
合成 Ig 様抗体の組成は？

1011カップリング反応におけるSpyTag と SpyCatcher の比
率はどのくらいですか？
また、カップリング後の製品に未結合の Fab や Catcherは残りますか？

12

タンパク質のライゲーション
反応にはどれくらいの時間がかかるのですか？

13

高バックグラウンドが検出された場合、どのように低減することができますか？

回答
ステイン残基を追加で導入していません。
FcCatcher は一級アミンを介して標識されているため、部位特異的な標識はありません。
しかし、標識プロトコールは制御されており、バッチ間で一貫した
DOL が確保されています。
FcCatcher は SpyTag 付抗体フラグメントに結合する前に標識されるため、抗体の抗原結合部位が損なわれることはありません。
未標識の SpyCatcher および BiCatcher は、お客様が選択したラベルで標識することが可能です。
SpyCatcher および BiCatcher タンパク質は、マレイミド法などを用いてチオール反応性基を介して部位特異的に標識できるように、
遊離システイン残基を持つものが用意されています。また、NHS
エステル反応により、一級アミンを介したランダムな標識も可能です。
C 末端に SpyTag を持つリコンビナント抗体を作製し、SpyCatcher
で使用することが可能です。カスタムサービスプロジェクトの実現
可能性については、弊社までお問い合わせください。
SpyCatcher3 は、その C 末端で Ig ヒンジ領域の N 末端と、抗体
Fc ドメインの定常ドメイン（IgG1 の場合は CH2 および CH3）と遺伝
子工学的に融合しています。このコンストラクトは FcCatcher と命名された。C 末端に SpyTag を持つ抗体は、FcCatcher と共有結合し、Ig 様分子を形成することができます。
当社のコンストラクトは、通常、ファージディスプレイで得られた完全ヒト Fab 断片（完全な軽鎖と VH および CH1 ドメインを含む重鎖を含む）を使用しています。
重鎖の C 末端には、通常 FLAG-tag、SpyTag2、His-tag といった一連のタグが遺伝子工学的に付加されています。
ライゲーション反応を完了させるために、1 つのライゲーションパー
トナーを過剰に使用することを推奨します。
◼ 一価 SpyCatcher：すべての Fab 抗体が SpyCatcher と反応し、結合していることを確認するために、25%過剰の一価
SpyCatcher を使用します；不均一アッセイを行う場合、過剰の SpyCatcher は洗い流されます。
◼ 二 価 の SpyCatcher （ 例 ： BiSpyCatcher2 ま た は
FcSpyCatcher3）：二価の SpyCatcher では 、25%過剰のSpyTag 付 Fab を使用し、すべての Catcher が 2 つの Fabを持つようにします。経験上、二価の結合体は通常より高い親和性で結合し、一価の結合していない Fab に取って代わるため、少量の未反応 Fab はアッセイに干渉せず、感度を低下させることもありません。
1：1 の比率でカップリング反応を設定することも可能ですが、タン
パク質濃度測定の誤差により、この比率から外れたり、カップリン
グ化学量論が予測できない場合があります。
当社のプロトコールでは、ライゲーション反応が完了するまでに 1時間を推奨しています。SpyTag2 と一価 SpyCatcher2 のライゲー
シ ョ ン は 10 分 程 度 で 完 了 し ま す 。 BiSpyCatcher2 お よ び
FcSpyCatcher3 への結合は、2 つの SpyTag 付き Fab 抗体をそれぞれの 2 価の Catcher 分子に結合させる必要があるため、数分長く かか り ます 。プ ロト コ ール を 簡略 化する た め 、 す べてのCatcher に対して 1 時間のカップリング時間を推奨しています。また、一晩反応させることも可能です。
SpyTag3 については、SpyTag2 と同じ反応時間を推奨します。
SpyTag1 については、カップリング速度論が濃度依存的であるため、実験的に決定する必要があるため、かなり長いカップリング時間を必要とします。
Catcher に結合した Fab 抗体は、異なるフォーマットの同じ抗体クローンと同じバックグラウンドを示すと予想されます。高いバックグ
ラウンドが観察される場合、まず様々な希釈倍率でテストし、抗体濃度を最適化することが推奨されます。未同定抗体を使用する
場合、標識抗体と未標識抗体を並行してテストし、両方に同じ二Bulletin 3217J
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SpyTag Technology

#

質問

回答
次検出抗体を使用することができます。
ウエスタンブロット実験では、HeLa 細胞など一部の動物細胞ライ
セートで 50kD 前後の微弱な追加バンドが観察されたが、これは調製液中の未反応 SpyCatcher に起因するものでした。このバンド
は 、 カ ッ プ リ ン グ 後 に フ リ ー の SpyTag3 ペ プ チ ド （ カ タ ロ グ 番
号:BLP086）を添加し、5 分間インキュベートすることで完全に除去することができます。これにより、SpyTag3 ペプチドは未カップリ
ングの Catcher に結合し、50kD タンパク質との結合を完全にブロックすることができます。Fab と FcCatcher をカップリングしたものをウェスタンブロッティングに使用する場合、メンブレンのバックグラ
ウンド染色を避けるため、PVDF ではなくニトロセルロースメンブレンを使用することをお勧めします。

14

SpyTag-SpyCatcher 結 合
抗体は、従来の抗体と性能に違いはありますか？

15

合成 Ig 様抗体は、従来の完全長 Ig と全く同じように機能するのでしょうか？

16

SpyTag 技術により、抗体をビーズや樹脂に固定化することは可能ですか？

17

18

SpyTag-SpyCatcher 技 術を使って、他のタンパク質と結合させることはできますか？
一般的な抗 Fab 抗体や抗 Ig
抗 体 の 二 次 抗 体 にSpyTag 付キャプチャー抗体と Catcher 結合検出抗体を用いたサ
ンドイッチまたはブリッジング ELISA では、キャプチャー抗体のSpyTag と反応する SpyCatcher 部位が未反応のため、バックグラ
ウンドが増加する可能性があります。この現象は、SpyTag3 ペプチド（カタログ番号:BLP086）をキャプチャー検出抗体に添加すること
で防ぐことができます。
SpyCatcher 部位に対して 2.5 倍モル過剰のペプチド、すなわちSpyCatcher- 結 合 抗 体 で は 2.5 倍 過 剰 、 BiCatcher- お よ び
FcCatcher-結合抗体では 5 倍過剰を使用し、少なくとも 5 分間イ
ンキュベートすることを推奨します。
SpyTag-SpyCacher 結合抗体は、同じアプリケーションにおける他の一価または二価の Fab 抗体や完全長 Ig と同じように機能することが期待されます。SpyTag Fab 抗体と標識済 Catcher タンパク質の結合により、従来の抗体のランダムラベルのように標識が抗体の抗原結合部位に付加される可能性を避けることができます。
これにより、SpyTag-SpyCatcher 結合抗体の性能が向上し、その結果、通常より低い濃度で測定が可能になります。
この 2 つのフォーマットの抗体-抗原結合部位は同一であり、したがって結合特異性は同じです。両分子とも二価であり、同じ親和性を持っています。当社の FcCatcher タンパク質は、当社の完全
長 Ig と同じプロセスを用いて哺乳類細胞株で生産されており、グリコシル化を含む Fc ドメインが同一となっています。Ig 様分子と全長 Ig の構造は同一ではないため、両者のコンフォメーションは完
全には一致せず、このような形状の違いが特定のアッセイに影響を与える可能性があります。Fab は E.coli で生産されるため、調製品には細菌膜由来のリポポリサッカライド（エンドトキシン）が含まれます。
必要に応じて、Catcher にカップリングする前にエンドトキシンのレベルを下げることができます。
ビオチン化 Catcher タンパク質と結合した SpyTag 付 Fab 抗体
は、ストレプトアビジン-結合ビーズに捕捉させることができます。
Fab と ビ オ チ ン 化 Catcher （ SpyCatcher2:Bio ま た は
BiSpyCatcher2:Bio）を結合してビーズに固定化する場合は、Fabを過剰に使用し、溶液に未反応の SpyCatcher 部位が含まれないようにすることが推奨されます。未反応の Fab は、ストレプトアビ
ジンビーズとの反応後、洗浄工程で除去されます。
また、SpyCatcher3-CYS のようにシステインを介して部位特異的に、あるいは SpyCatcher3 のように一級アミンを介して、ビーズやカラム樹脂に直接固定化することも可能です。SpyTag 付抗体とSpyCatcher 樹脂を 1 時間インキュベートするだけで、SpyCatcher
樹脂上に抗体を固定化し、配向させることができます。
SpyCatcher ドメインを持つタンパク質であれば、SpyTag 付抗体とカップリングさせることができます。遺伝子工学を利用して、目的のタンパク質の N 末端または C 末端に SpyCatcher を融合させた
融合タンパク質を作製することをお勧めします。
抗 FLAG タグ、抗 His タグ、抗ヒト Fab の 2 次抗体と、SpyTag 付
き Fab 抗体、SpyCatcher タンパク質が結合したもの、結合していBulletin 3217J
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SpyTag Technology#

質問
SpyCatcher 結合抗体を使用することは可能ですか？

19

ELISA において、HRP 標識
Catchrer に 結 合 し た
SpyTag 付 Fab を、HRP 標
識の従来の抗体と同様に検出抗体として使用することは可能ですか？

20

ELISA プレートなどの表面に抗体を固定化するために、
SpyTag を使用することはで
きますか？

回答
ないものの両方を使用することに成功しています。
また、抗ヒト、マウス、ウサギの Fc、抗 IgG（H+L）特異的な二次抗体も、それぞれの FcCatcher 結合抗体に使用することが可能です。SpyCatcher および BiCatcher は 6-His タグを有しており、検出に使用することができます。FcCatcher には追加のタグはありません。
ELISA で検出抗体として使用する場合、選択した Fab を HRP 標
識 し た BiCatcher （ BiSpyCatcher2 ： HRP ） ま た は FcCatcher（hIgG1-FcSpyCatcher3：HRP）にカップリングすることを推奨します。SpyTag-SpyCatcher 結合抗体は、同じクローンを全長 IgG フォーマットで直接 HRP に結合させるよりも 4～10 倍低い濃度で使用でき、同じアッセイ感度という結果になりました。
SpyTag 付キャプチャー抗体と HRP 標識 Catcher タンパク質とを組み合わせてサンドイッチアッセイやブリッジングアッセイを行う場
合、キャプチャー抗体の SpyTag と反応する検出抗体の Catcher部位が一部未結合のため、バックグラウンドが増加することがあります。SpyTag3 ペプチド（カタログ番号:BLP086）を加えた検出抗体では、このようなバックグラウンドが解消されます。
SpyCatcher 結合部位に対して 2.5 倍モル過剰のペプチド、すな
わ ち SpyCatcher- で は 2.5 倍 過 剰 、 BiCatcher- お よ び
FcCatcher-結合抗体では 5 倍過剰を使用し、少なくとも 5 分間イ
ンキュベートすることを推奨します。
SpyCatcher は ELISA プレートに直接コーティングすることも、ビオチン化した Catcher をストレプトアビジン-コートしたプレートに固相化することも可能です。表面でのカップリング反応は溶液中と比較して遅く、使用する抗体濃度も通常のカップリング反応より低いため、1 時間経過しても反応が完了しない場合があります。
抗体を SpyCatcher 表面にカップリングさせることにより、受動吸着による固相化に比べ、より活性の高い抗体を得ることができます。
そのため、同じシグナルをより低い抗体濃度で検出可能になります。
また、ビオチン標識 SpyCatcher（SpyCatcher：Bio）に Fab を結合させ、ストレプトアビジン-コートしたプレートにビオチン化抗体を固相化することも可能です。

Bulletin 3217J
7

SpyTag Technology

ご注文とお問い合わせ*

TrailBlazer カスタム抗体作製サービス

日本国内では、ジーンフロンティア株式会社を窓口として提供しております。詳しくは、ジーンフロンティア株
式会社(https://www.genefrontier.com) またはバイオ・ラッド（メール：life_ps_jp@bio-rad.com）までお問
い合わせください。利用制限がございますので下記をご参照ください。

[HuCAL 人工抗体の利用制限について]
HuCAL 人工合成作成サービスでご提供いたします抗体は、研究用途でのご使用に制限されており、医薬開発（therapeutic,
prophylactic, palliative を含む)目的でご使用頂くことはできません。
また、商業利用、治験内および診断用途等でご使用される場合は、別途契約が必要となります。
HuCAL generated antibodies are not intended for use in humans, and may not be used for therapeutic, prophylactic or palliative
purposes. Bio-Rad is a treadmark of Bio-Rad Laboratories, Inc. in certain jurisdictions. HuCAL, HuCAL PLATINUM, CysDisplay
and RapMAT are treademarks of MorphoSys AG.

SpyCatcher カタログ製品
バイオ・ラッド並びバイオ・ラッド販売代理店へお問い合わせください。
価格等：https//bio-rad-antibody.jp

References
Hentrich C et al. (2021). Periplasmic expression of SpyTagged antibody fragments enables rapid modular antibody assembly. Cell Chemical Biology 28, 1-12. bioRxiv preprint

Keeble et al. (2017). Evolving accelerated amidation by SpyTag/SpyCatcher to analyze membrane dynamics. Angew Chem Int Ed 56(52), 16,521-16,525

Keeble et al. (2019). Approaching infinite affinity through engineering of peptide-protein interaction. PNAS 116(52), 26,523-26,533

Keeble A and Howarth M (2020). Power to the protein: Enhancing and combining activities using the Spy toolbox. Chem. Sci., 11, 7,281-7,291.

Zakeri B et al. (2012). Peptide Tag forming a rapid covalent bond to a protein, through engineering a bacterial adhesin. PNAS 109(12), 690-697.

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Fax : 03-6404-0334

Bulletin 3217 Ver A

Z13291L 2306d