QX200™ Droplet Generator
取扱説明書

カタログ番号 186-4002JA

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日本のテクニカルサポート部門の受付時間は、
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法的通知
本書のいかなる部分も、バイオ・ラッド ラボラト
リーズから書面による許可を得ることなく、写真複写や記録を含む電子的または機械的ないかなる形式や手段によっても、あるいはいかなる情報記
憶または情報検索システムによっても、複製または送信してはならないものとします。
バイオ・ラッドは、当社の製品とサービスをいつでも変更できる権利を有しています。本書は、事前の通知なく、変更されることがあります。
バイオ・ラッドは、本書の正確性に万全を期していますが、本書の誤りや、本書を利用したことによって生じた損害についての責任は一切負わない
ものとします。
EvaGreen は Biotium, Inc. の商 標 です 。 Excel はMicrosoft Corporation の商標です。FAM、HEX、およ び VIC は Applera Corporation の 商 標 で す 。
Pipetman は Gilson, Inc. の 商 標 で す 。 SYBR は
Molecular Probes, Inc.の商標です。TaqMan は Roche
Molecular Systems, Inc. の 商 標 で す 。 twin.tec はEppendorf AG の商標です。
バイオ・ラッド社のサーマルサイクラーとリアル
タイムシステムに関する注意：本製品を購入すると、購入者自身の内部的な研究および開発用途、
ヒト体外診断および Applera Corporation が所有する米国特許番号 5,475,610（請求項 1、44、158、160-163、および 167 のみ）、または米国以外での対応する特許に基づく他のすべての適用分野での用途のみに使用するための限定された、譲渡禁止の免責が譲渡されます。装置、試薬、キット、または 5'ヌクレアーゼ法に対する特許請求など、その他
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ライセンス購入に関する詳しい情報は、Director ofLicensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre
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ただければ入手できます。
バイオ・ラッド社のサーマルサイクラーとリアル

タイムサーマルサイクラーは、Eppendorf AG が所有する米国特許番号 6,767,512 および 7,074,367 または相当する外国特許の 1 つあるいは複数によって保護されています。
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バイオ・ラッド ラボラトリーズの情報サービス
弊社では科学研究者を対象として多くの資料等情報をご提供しております。以下に示すウェブサイトでは実験に有益な情報を提供しております。
Life Science Research web site
http://www.bio-rad.com
このウェブサイトでは、技術的な情報、取扱説明書、製品情報、技術サポートなどの情報へアクセスして頂けます。
さらに、製品に関連する実験手法と多様なアプリケーションに関する技術情報もご提供しています。
下表に、弊社が提供する情報サービスと情報の入手方法を示します。
バイオ・ラッド社の技術情報サービス
リソース

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技術専門要員（テックコール）

弊社では、高品質の技術サポート体制を整えています。また、技術サ
ポート部門に経験豊富なスタッフを配置しており、お客様のお問い合わせに対応して、実践的で専門的な解決方法をご提供いたします。
技術サポートをご希望の場合は、弊社テックコールへご連絡ください。
テックコールの連絡先は本書「バイオ・ラッド テックコール」の項目をご参照ください。

保証
本製品とその付属品における不具合については 1 年間保証いたします。保証期間中に本体あるいは付属品に不具合が発見された場合、不具合のある部品の修理を無償にて行います。ただし、消耗品は保証対象外となります。
下記の場合は保証対象外となります。
1. 適切でない使用方法による故障
2. 弊社あるいは弊社が認定した者以外が、修理あるいは改造を行った場合
3. 指定以外の部品を使用したために起きた故障
4. 弊社以外から供給された部品等を使用した場合
5. 事故あるいは間違った使用方法によって生じた故障
6. 天災による故障
7. サンプルなどによって生じた腐蝕
保証期間内であっても、再度の納品検収、移動設置、製品点検については有償となります。保証期間外でも修理によって機能が維持できる場合には有償にて修理を承ります。
修理の依頼およびお問い合わせは、機器のモデル名とシリアルナンバーを添えてお近くの弊社営業所あるいは弊社販売代理店までお願いいたします。
この機器の使用目的に合わない状態での使用や、弊社あるいは弊社指定の者以外による改造によって怪我あるいは災害にあわれた場合、弊社では一切の責任を負いません。

保証内容の詳細については、製品付属の製品保証書をご参照ください。

保証登録
保証サービスをお受けいただく際には登録が必要になります。必ず保証書に必要事項を記入の上、弊社へ FAX
頂くか以下のウェブサイトからご登録をお願いいたします。
http://warranty-registration.bio-rad.co.jp/registration.htm
製品保証書は修理時などに必要になりますので、大切に保管してください。

修理依頼について修理をご依頼される際には修理品と一緒に不具合詳細を記載する「修理依頼書」と運搬者や作業者の安全を確保するための「デコンタミネーション確認のお願い」をコピーして、ご記入の上、修理品と一緒に弊社販売代理店へお引き渡し下さい。両書類は本書 Appendix B および C に掲載されています。

製品を安全にご使用いただくためにはじめに
バイオ・ラッドラボラトリーズ株式会社 ライフサイエンス事業部が販売している製品はすべて研究用途を目的として販売しております。医療用・医療診断機器ではありません。研究用途以外は使用しないでください。
製品の仕様・外観は改良のため予告なしに変更されることがありますので、予めご了承願います。
QX200 Droplet Digital PCR システムを安全に操作するため、本章および本書中に記載する安全性基準を順守してください。

安全にご使用頂くための注意事項
警告！QX200 Droplet Digital PCR システムや他のアクセサリーの外側ケースを取り外そうとしたり修理しようとしたりしないでください。本装置の外部ケースを開けると、感電によって負傷したり、装置が損傷したりする危険性があります。
注意：本ユニットを水がかかる可能性のある場所に保管したり、使用したりしないでください。感電の原因となることがあります。ユニットは、実験台の端で保管したり、使用したりしないでください。

安全規格と規制への適合性
本装置は、試験の結果、以下に示す安全規格と電磁両立性規格の該当するすべての要求事項に適合していることが確認されています。
・・IEC 61010-1:2001（第 2 版）
、EN61010-1:2001（第 2 版）－計測、制御、および実験室用電気機器の安全要求事項－第 1 部：一般要求事項
EN 61326-1:2006（クラス A）－計測、制御、および実験室用電気機器の EMC 要求事項－第 1 部：一
般要求事項

本装置は、無線周波数エネルギーを作製および使用しており、このようなエネルギーを放射する可能性があります。この取扱説明書に従って設置および使用しないと、無線通信に有害な妨害を引き起こすことがあります。住宅地域で本装置を使用すると、有害な妨害を引き起こすことがあります。このような場合、ユーザーは自費でこの妨害の対策を講じなければなりません。
CE マークは、製品が該当する EC 指令の必須要求事項に適合していることをメーカーが保証していることを示しています。
CSA マークは、製品、工程、またはサービスがカナダあるいはアメリカの規格に適合するかどうかを試験した結果、該当する CSA 規格の要求事項に適合していたことを示しています。
本装置は、FCC 規則パート 15 に従って試験した結果、クラス A デジタル機器の規制に適合していることが確認されています。これらの規制は、商業的環境で本装置を使用した場合に、有害な妨害を引き起こさないようにするための十分な保護を規定することを目的としたものです。
WEEE 指令マークは、エンドユーザーがこの製品を廃棄したいと思ったとき、その製品を回収およびリサイクルするために個別の収集施設に送らなければならないことを示しています。

装置の安全性に関する警告本装置を改造すると、保証と安全認証が無効になるとともに、安全上の問題が発生する可能性があります。
本装置は、実験専用の装置です。バイオ・ラッド ラボラトリーズは、本来の用途以外で本装置を使用した
り、バイオ・ラッド ラボラトリーズまたは正規代理店以外が本装置の変更を行ったりした結果、負傷ある
いは損害が発生しても、一切の責任を負いません。本書に記載されている安全仕様を守ってください。本装置に付属の電源コード以外は使用しないでください。また、使用する地域の電源コンセントに対応したプラグアダプター以外は使用しないでください。承認されていない試薬を使用すると、装置が損傷し、保証が無効になることがあります。

PPE（個人防護具）トレーニング
オイルやサンプルプレートを使用する場合は、手袋を正しく使用することをお勧めします。PPE に関する
OSHA の要求事項は、連邦規則集（CFR）の 29 CFR 1910.132（一般要求事項）、29 CFR 1910.138（手の保護）、29 CFR 1926.95（標準的な個人防護具の基準）に明記されています。保護能力が低下した手袋は廃棄して、新しい手袋と交換してください。化学物質にさらされた手袋を再使用しようとする場合は、曝露時間、保管期間、温度などの要因と化学物質の毒性を考慮してください。装置、アッセイ、オイル、および洗浄溶剤を取り扱う場合に手袋を選択しやすいように、以下に各種手袋の特徴をまとめています。
・ブチル手袋は合成ゴム製で、過酸化物、フッ化水素酸、強塩基、アルコール、アルデヒド、およびケトンから保護してくれます。

・

天然（ラテックス）ゴム手袋は、着用感が快適で、引張強度、弾力性、および耐温度性に優れています。

・

ネオプレン手袋は合成ゴム製で、柔軟性と作業性が高く、高密度で耐引裂性にも優れています。この
手袋は、アルコール、有機酸、およびアルカリから保護してくれます。

・ ニトリル手袋は共重合体製で、トリクロロエチレンやテトラクロロエタンなどの塩素系溶剤から保護してくれます。この手袋は、オイル、グリース、酸、および苛性物質を取り扱う場合に保護してくれ
ます。

Memo

目次
1. QX200™ Droplet Generator .................................................................................................... 1

1.1
1.2
1.3

はじめに........................................................................................................................ 1
QX200 Droplet Generator ........................................................................................... 2設置と一般的な操作 ..................................................................................................... 3

2. ドロップレットの作製 .............................................................................................................. 4

2.1
2.2
2.3

サンプルの調製............................................................................................................. 4
QX200 Droplet Generator の操作 ............................................................................... 5
PCR の準備................................................................................................................. 10

3. 仕様とメンテナンス ............................................................................................................... 12

3.1
3.2

仕様 ............................................................................................................................. 12
メンテナンス .............................................................................................................. 13

Appendix A Ordering Information ......................................................................................... 14
Appendix B: 修理依頼書 ........................................................................................................... 15
Appendix C: デコンタミネーション確認のお願い ................................................................... 16

1. ™ Droplet Generator

1

QX200™ Droplet Generator

1.1 はじめにQX200™ Droplet Digital™ PCR（ddPCR™）システムは、非常に高感度かつ高精度なデジタル PCR を行います。このシステムは、QX200 Droplet Generator と QX200 Droplet Reader という 2 つの装置とその関連消耗品で構成されています。QX200 Droplet Generator は、サンプルを 20,000 個のナノリットルサイズのドロップ
レットに分割します。サーマルサイクラーで PCR を実施した後、各サンプルのドロップレットを QX200
Droplet Reader で個別に解析します。PCR ポジティブと PCR ネガティブのドロップレットをカウントし、
デジタル形式でターゲット DNA の絶対定量を行います。
ddPCR システムでは、以下のことを行うことができます。
・・・

ターゲット DNA を極めて高い感度で検出することができます。
コピー数多型（CNV）を比類のない精度で決定することができます。
遺伝子発現レベルを最高の精度で測定することができます。

用途と用法：・・・・・・

コピー数多型（CNV）
レアシーケンス検出
Mutation 検出
遺伝子発現解析
miRNA 解析
次世代シーケンシングサンプル定量

本書では、QX200 Droplet Generator の使用方法と PCR の準備について説明します。QX200 Droplet Readerについては、Bulletin 10031906 を参照してください。

11.2 QX200 Droplet Generator
QX200 Droplet Generator は、微細流路を用いてオイルと水溶液（サンプル）を混合し、ddPCR 解析に必要なドロップレットを作製します。2 分以内に、最大 8 サンプルを同時に処理します。
プローブ用の ddPCR Supermix か One-Step RT-ddPCR キットを使用してサンプルを 20 μl に調製した後、8サンプル（またはブランク溶液）と Droplet Generator オイルをそれぞれ Droplet Generator（DG™）カート
リッジに移します。
カートリッジを DG8 カートリッジホルダーにセットしガスケットで覆い QX200 Droplet
Generator の中にセットします。ここで、サンプルとオイルがカートリッジのマイクロチャンネル内で混合され、最大 20,000 個のナノリットルサイズの粒子径がそろったドロップレットのエマルジョンがサンプルごとに作製されます。ドロップレットが作製された後、これらのドロップレットは標準的な 96 ウェル PCR
プレートに移され、標準的なサーマルサイクラーを使用してエンドポイントまで増幅反応が加えられます。
サイクルが完了したら、プレートを QX200 Droplet Reader,にロードします。 Droplet Reader,が各サンプルを吸い取り、ドロップレットを 1 列に並べ 2 色検出器を通過させます。検出器が各ドロップレットを読み取り、ターゲットを含んでいるドロップレット（+）
、ターゲットを含んでいないドロップレット（-）を検出します。ドロップレットの定量を目的としない場合は、増幅した PCR 産物を回収し他のアプリケーションに使用することが可能です。
QX200 Droplet Generator には、表 1.1 に示す構成品が含まれています。ドロップレットの作製と PCR に必要なその他の製品については、表 1.2 に示してあります。完全なシステム要件については、『QX200 Droplet
Reader 取扱説明書（Bulletin10031906）』を参照してください。
表 1.1：QX200 Droplet Generator 構成品。カタログ# は再注文時のカタログ番号です。
構成品

説明

カタログ#

QX200 Droplet Generator

ドロップレットを作製するために使用する装置。

186-4002JA

DG8 カートリッジ（24）

微細流路カートリッジは、サンプルとオイルを混合し、ドロップレットを生成するために使用します。

186-4008

DG8 ガスケット（24）カートリッジをシールして蒸発を防ぎ、ドロップレットの形成に必要な圧力をかけます。

186-3009

DG8 カートリッジ&ガスケットセット(120)

DG8 カートリッジと DG8 ガスケットのセットです。

186-4007

DG8 カートリッジホルダー（2）ドロップレットを作製するために、 Droplet Generator カー
トリッジを装置に配置および固定します。

186-3051

電源コード

QX200 Droplet Generator を電源に接続します。

－

186-3051 は単品オーダー時の入数は 1 になります。

QX200 Droplet Generator2表 1.2：ドロップレットの生成に必要なその他の材料
構成品

推奨

カタログ#

PCR Supermix（プローブ）

ddPCR Supermix for Probes (No dUTP)

カートリッジダミーウェル用(プローブ)

One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes
ddPCR Buffer Control Kit for Probes

186-3023, 186-3024,
186-3025
186-3010, 186-3026,
186-3027, 186-3028
186-4021, 186-4022
186-3052

Droplet Generator オイル(プローブ)

Droplet Generation オイル for Probes（10 x 7 ml）

186-3005,

ddPCR Supermix for Probes

TM

PCR Supermix (EvaGreen)

ddPCR

Droplet generator oil (EvaGreen)

Droplet Generator オイル for EvaGreen

186-4033, 186-4034,
186-4035, 186-4036
186-4005, 186-4006

カートリッジダミーウェル用(EvaGreen)

ddPCR Buffer Control Kit for EvaGreen

186-4052

Droplet Generator オイル (EvaGreen)

Droplet Generation オイル for EvaGreen（10 x 7 ml） 186-4005, 186-4006

プレートシーラー

PX1 PCR Plate Sealer

181-4000

プレートシーラーホイルヒートシール

ddPCR 用 ホイルヒートシール (100 枚)

181-4040

ピペット*

サンプルロード用 20 μl ピペット
ドロップレット移動用 50 μl ピペット
オイル用 8 チャンネル、200 μl ピペット

Rainin L-20XLS
Rainin L-50XLS, L8-50XLS+
Rainin L8-200XLS+

ピペットチップ*

200 μl ピペットフィルター付き

Rainin GP-L10F, GP-L200F

96 ウェル PCR プレート*

twin.tec 96 ウェルセミスカートプレート

Eppendorf 95579

試薬リザーバー*

Droplet Generator オイル用

Thermo 95128095

8 キャップストリップ

任意

EvaGreen® Supermix*: 他社より入手が必要です。

1.3 設置と一般的な操作
・

付属の電源コードを使用して、QX200 Droplet Generator を電源に接続します。アースが確実に接続されていることを確認してから、装置の電源コードをコンセントに差し込んでください。

・

適切な通気が行われるように、装置の後ろに 5 cm、左右に 3 cm のスペースを空けておいてください。

・

電源コードをコンセントに差し込むと、Droplet Generator の電源が入ります。ステータスインジケー
ターが緑色に点灯し、電源がオンであることを知らせます。

・

緑色のふたの上にあるボタンを押して、装置を開閉します。

アースプラグ（タイプ 5-15P）と C5 コネクタ（10 A/125 V）
が付いているアメリカの標準的な電源コードセット

5 mm DC 電源プラグ差し込み口への電源

3

2. ドロップレットの作製

2

ドロップレットの作製

2.1 サンプルの調製
2x PCR Supermix、プライマーとプローブ、DNA サンプルを混合して、PCR 反応液を調製します。軽くボルテックスして混合し、短時間遠心分離機にかけます。
・インタクトなヒトゲノム DNA の濃度は、反応液 20 μl 当たり 66 ng 未満としてください。これよりも濃度を高くする場合は、ターゲットまたはリファレンスアンプリコンを切断しない制限酵素で DNA
を消化します。

・

表 1.2 に記載した ddPCR Supermix for Probes (No dUTP)、 ddPCR Supermix for Probes、ddPCR EvaGreen
Supermix または One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes Kit for Probes のいずれかをご使用ください。
これらには、ドロップレットを作製するのに必要な試薬が含まれています。添付文書の指示に従い、ドロップレットを作製するためのサンプルを調製します。

・－20°C で保管している間に濃度勾配が発生する可能性があるため、Supermix を十分にボルテックス
して均質性を確実にします。あるいは、10 回以上、上下にピペッティングして混ぜ合わせます。短時
間遠心分離機にかけて、チューブ底部に内容物を集めてから分注します。

・

反応成分を室温で解凍して平衡させます。サンプルが熱劣化する傾向がある場合は、室温で平衡化させずに、反応混合液を氷の上で調製してください。

・

バイアルまたは 96 ウェル PCR プレートに反応混合液を集めます。PCR プレートを使用するメリット
は、サンプルを 8 チャンネルピペットで DG8 カートリッジにロードできる点にあります。

・

手袋を着用する、クリーンなピペットを使用する、PCR フードなどのクリーンエリアで作業する、タ
ンパク質低吸着チューブを使用するなど、実験室における標準的な予防措置を講じて、反応混合液とサンプルのコンタミネーションを防止します。

4

2.2 QX200 Droplet Generator の操作
QX200 Droplet Generator は、8 サンプルのドロップレットを同時に作製します。ドロップレットの作製には、
8 サンプルセットごとに 2 分かかります（96 サンプルの場合は 20～30 分）
。
・

・

1.

DG8 Droplet Generator カートリッジの 8 つのサンプルウェルのすべてにサンプル（または1x 緩衝液）を注入しなければなりません。また、8 つのオイルウェルのすべてに Droplet
Generator オイルを注入しなければなりません。
DG8 カートリッジをまだホルダーにセットしていない状態で、サンプルまたはオイルをDG8 カートリッジにロードしないでください。

DG8 カートリッジのノッチがホルダーのノッチ
左上にくるようにして、DG8 カートリッジ
を以下のようにホルダーにセットします。 トップウェル（ﾄﾞﾛｯﾌﾟﾚｯﾄ）a.

中央にあるラッチを押して、カート
リッジホルダーを開けます。

b.

DG8 カートリッジをホルダーの右半分にスライドさせてから下ろしセッ
トします。

c.

ミドルウェル（サンプル 20 μl）
ボトムウェル（ｵｲﾙ 70 μl）

DG8 カートリッジ

ホルダーの両側を同時に押して、カ
チッと閉じます。

押して開ける

スライドさせて閉じる

押す

DG8 カートリッジをカートリッジホルダーにセットします。

5

2.

調製した各サンプルを 20 μl、DG8 カートリッジのサンプルウェル（中央の列）に移します。
気泡がウェルの底面を覆うと、ドロップレットが少なくなり、データ品質が低下することがありますが、このことを目で見て確認するのは難しいといえます。気泡が発生しないようにするには、以下のようなピペット操作技術を利用します。これにより、サンプルがウェルの底面を濡らすようになるため、マイクロチャンネルにも確実に吸い上げられるようになります（これは、ドロップレットを適切に作製するために不可
欠です）
。

・

20 μl エアロゾルバリア（フィルター付き）Rainin ピペットチップの使用を推奨します。200 μl のピペッ
トチップは使用しないでください（表 1.2 を参照）。

・

ピペット先端が底面付近のリッジを通過するまで、約 15 ﾟの角度でウェルの側面をゆっくりと下に滑らせます。この角度を維持したまま、ピペット先端をサンプル底面の端に置き、少量のサンプルをゆっ
くりと分注します。このとき、ピペットをウェルの側面（壁）に直接接触させないでください。

・

約半分の量のサンプルを分注したら、ピペット先端を壁からゆっくりと引き上げながら、残りのサン
プルを分注します。このとき、第 1 ストップを越えるところまでピペットプランジャーを押さないで
ください。

15 ﾟ
先端

ウェルの
リッジ

サンプルを DG8 カートリッジのサンプルウェル（中央の列）に移します。ピペット先端がウェルの底面で15 ﾟの角度になるように保持します（中央および右側のパネル）。サンプルをウェルの壁や側面に分注しないようにしてください。

6

3.

Droplet Generator（DG）オイルを試薬リザーバーに分注します。リザーバーに分注する容積の目安は、
8 サンプルの調製時は 700 μl、96 サンプルの調製時は 7 ml (186-3005, 186-4006 ボトル 1 本分) です。

オイル必要量目安
ウェル数
オイル量
8
700 μl24
1,820 μl48963,500 μl
6,860 μl

試薬リザーバーと Droplet Generator オイル－ 使用オイルにご注意ください －PCR supermix として、ddPCR Supermix for Probes (186-3010, 186-3026, 186-3027,
186-3028)、ddPCR Supermix for Probes (no dUPT) (186-3023, 186-3024, 186-3025)、
および、One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes (186-4021, 186-4022)を用いる
場合は、Droplet Generator オイル for Probes (186-3030, 186-3005)をご使用ください。
また、ddPCR EvaGreen Supremix (186-4033, 186-4034, 186-4035, 186-4036)を用いる場合は、Droplet Generator oil for EvaGreen (186-4005, 186-4006)をご使用ください。
正しいオイルを用いないと、リーダーの流路を色素で汚染する可能性があります。

4.
マルチチャンネルピペットを使用して、試薬リザーバーから取った 70 μl の DG オイルを各オイルウェ
ル（一番下の列）に注入します。

オイルウェルに Droplet Generator オイルを注入します。

7

5.

両側のホールを使用して、カートリッジホルダーの上にガスケットを引っ掛けます。ガスケットはホルダーの両端にしっかりと引っ掛けてください。ガスケットがしっかり引っ掛かっていないと、ドロップレットを作製するのに十分な圧力がかかりません。

カートリッジホルダー上のガスケットの正しい配置。

6.

カートリッジホルダーを QX200 Droplet Generator の中に入れ、ドロップレットの作製を開始します。
a.

緑色のふたの上にあるボタンを押して、装置を開けます。

b.

カートリッジホルダーを装置の中に入れます。ホルダーが正しい位置にセットされている場合は、電源（左側のランプ）とホルダー（中央のランプ）の両方のインジケーターランプが緑色に点灯
します（次頁表 2.1）
。

8

7.

ふたの上にあるボタンをもう一度押して、ドアを閉めます。これで、ドロップレットの作製が開始されます。マニホールドがアウトレットウェルの上にセットされ、ドロップレットが作製されるマイク
ロフルイディクチャンネルを通してオイルとサンプルが吸い込まれます。ドロップレットはトップ
ウェルへ流れ、ここで蓄積します。10 秒後、ドロップレットインジケーターランプ（右側）が緑色に点滅し、ドロップレットの作製が進行していることを知らせます。
押して開閉する

ステータスインジケーター
ランプ

DG8 カートリッジをセットした QX200 Droplet Generator。

8.

ドロップレットの作製が完了すると、3 つのインジケーターランプがすべて緑色に点灯します。ドアを開けて、装置からホルダーを取り外します（DG8 カートリッジはまだ所定の位置にセットしたままにしておきます）。ホルダーから使い捨てガスケットを取り外して廃棄します。このとき、トップウェ
ルにはドロップレットが収容されていますが、ミドルウェルとボトムウェルには少量のオイルが残っています。

DG8 カートリッジはホルダーの中にセットしたままにしておいてください。

表 2.1：QX200 Droplet Generator のステータスインジケーターランプ。中央の LED ランプが黄色に点滅する場合は、ガスケットがホルダー上に正しくセットされていないか、あるいはガスケットがないために、密閉ができていません。右側の LED ランプが黄色に点滅する場合は、少なくとも 1 つのウェルで量が少なすぎるために、処理エラーが発生しています。

緑色に点灯

電源オン

DG8 カートリッジがセットされている

ランの完了

緑色に点滅

---

---

ランの実行中黄色に点滅---

ガスケットがない、ウェルが空である、または密閉ができていない

ウェルの量が少なすぎる

電源オフ

DG8 カートリッジがセットされていない

アイドル

消灯

9

2.3 PCR の準備
1.

トップウェル（ドロップレット）の内容物を 40 μl ピペットで取り、96 ウェルプレートの 1 列に分注します。
以下のようなピペット操作技術を利用して、ドロップレットがこわれたり、融合したりしないよ
うにします。

DG8 カートリッジからドロップレットを吸引するには：・8 チャンネル手動の P-50 Pipetman と 200 μl チップ（ワイドボア、またはナローボアのものを使用しな
いでください）を使用します。P-20 または P-1000 Pipetman は使用しないでください。

・

カートリッジホルダーを平らな面の上に置き、ピペットチップを 8 つのトップウェルのそれぞれに約30～45 ﾟの角度になるようにして、側壁がウェルの底面と接触する接合部まで差し入れます。ピペッ
トチップを垂直方向（90 ﾟ）になるように、またピペットチップをウェルの底面にぴったりと接触させないでください。

・ドロップレット 40 μl をピペットチップにゆっくりと吸引します（ウェル中の液量が 40 μl に満たない場合もあるため、5 秒程度かけてゆっくりと吸引してください）。空気がドロップレットに浸透する原因となるため、40 μl を超える量は吸引しないでください。

・

ゆっくりとピペットで取ります。一定の抵抗力をプランジャーにかけ、ピペットチップに出入りする
ドロップレットをスムーズに吸引します。

ドロップレットを 96 ウェルプレートに分注するには：・・

ピペットチップをウェルの側面に沿わせ、ウェルの底面上ではなく、ウェルの底面付近まで差し入れ
ドロップレットをゆっくりと分注します（約 5 秒）。
蒸発や微粒子によるコンタミネーションを防止するために、プレートを（例えば、8 キャップストリッ
プやピペットチップの箱のふたなどで）覆います。

DG8 カートリッジからドロップレットを吸引します。

96 ウェル PCR プレートにドロップレットを分注します。

10

2.

3.

ドロップレットを移したらすぐに、蒸発を防止するために PCR プレートのウェルをホイルで密閉します。PX1 PCR Plate Sealer および ddPCR 用ホイルヒートシールを使用します。(詳細については、PX1
PCR Plate Sealer 付属の取扱説明書およびクイックガイドを参照してください。)
a.

本体後部の電源スイッチを押して、電源を投入します。起動後、開閉ボタンを押して引き出しを開き、プレートサポートブロックを取り出します。プレートサポートブロックを取り出したら、開閉ボタンを押して引き出しを閉じます。OK ボタンをタッチするとメイン画面が表示されます。

b.

Set Temperature ボタンをタッチして、設定したい温度を入力します。Set Time ボタンをタッチして、設定したい時間を入力します。
（ホイルヒートシール(#181-4040)、twin.tec 96 ウェルセミス
カートプレート(Eppendorf, # 95579)を用いる場合は、”180℃、5 秒”を設定します。
）設定したい
温度に到達すると Seal ボタンがアクティブになり、シーリングすることが可能になります。

c.

シーリング可能となったら、開閉ボタンをタッチして引き出しを開き、プレートサポートブロッ
クをセットします。ブロックには 96 ウェルプレート側と 384 ウェルプレート側があるので、96
ウェルプレート側を上にしてセットします。プレートをプレートサポートブロックに置き、プ
レートの上にシーリングフィルムを置きます。

d.

Seal ボタンをタッチすると、引き出しが閉じて、シーリングが行われます。シーリングが終了す
ると、自動的に引き出しが開き、プレートが取り出せます。

e.

プレートのすべてのウェルが密閉されていることを確認します。ウェルのくぼみがホイル上から確認できます。密閉したら、プレートを PCR サイクルにかけることができます。

ドロップレットを移したら、DG8 カートリッジホルダーのラッチを押して開けます。空の DG8 カー
トリッジを取り外して廃棄します。

プレートの密閉後 30 分以内に PCR サイクルを開始します。また、PCR サイクル後に保存時は、4℃で最長
4 時間までとしてください。PCR サイクル条件については、Supermix の添付文書を参照してください。

PX1 PCR Plate Sealer（左側）と密閉された 96 ウェルプレート（右側）113. 仕様とメンテナンス

3仕様とメンテナンス

3.1 仕様重量：
サイズ（W x D x H）
：
電源要件：
温度：
高度：
湿度：
汚染度：
設置カテゴリー：
換気要件：

4.5 kg279 x 356 x 127 mm
100-240 V、50/60 Hz 60W、電圧変動が+10%の比率を越えないこと
15-28℃
0-2,438 m
最高 85%（結露なし）
2（室内使用）II（標準的な AC コンセントへの外部電源供給プラグ）
装置の左右で 3 cm、背後で 5 cm は適切な換気のために閉塞させないこと

12

3.2 メンテナンス
装置の表面には、一般的なクリーニングが必要になることがあります。脱イオン水／蒸留水を少し含ませた布で、装置全体の表面をきれいに拭いてください。装置のデコンタミネーションには、10%ブリーチを使用した後に 70%エタノールおよび／または脱イオン水／蒸留水を使用することができます。アセトンまたは水道水は使用しないでください。
装置を定期的に点検し、外部部品や配線が損傷していないか確認してください。損傷している場合は、装置を使用しないでください。
発生した廃棄物を処理したり、廃棄したりする場合は、標準的な MSDS（化学物質安全性データシート）と OSHA 基準（米国のみ）を適用してください。
バイオ・ラッド社のドロップレット作製および Droplet Reader 用液は、フッ素化炭化水素化合物を主成分としているため、所属機関、都道府県、地域の規則に従って処分してください。これらの不燃性液は不活性であるため、環境に与える影響も毒性も低いといえます。廃棄物はポリエチレン容器に収集し、1 カ月以内に処分してください。
バイオ・ラッド社のマスターミックスで作製したドロップレットには抗菌性がありますが、微生物が増殖する可能性もあります。廃棄物プロファイルにはフッ素化炭化水素、水、蛍光染料（プローブから発生）、
タンパク質、および核酸が含まれます。Droplet Generator は、バイオハザード物質を使用することを想定していません。

13

Appendix A Ordering Information
カタログ番号
製品名
QX200TM Droplet DigitalTM PCR システム
186-4001JA
QX200 Droplet Digital PCR システム
＜構成内容＞QX200 Droplet Generator システム, QX200 Droplet Reader システム, ddPCR 専用解析
用ノート PC

186-4001J1

QX200 Droplet Digital PCR システム C1000 Touch 付＜構成内容＞QX200 Droplet Generator システム, QX200 Droplet Reader システム, ddPCR 専用解析
用ノート PC, C1000 Touch サーマルサイクラー, 96Deep well リアクションモジュール

186-4001J2

QX200 Droplet Digital PCR システム PX1 付＜構成内容＞QX200 Droplet Generator システム, QX200 Droplet Reader システム, ddPCR 専用解析
用ノート PC, PX1 PCR Plate Sealer, ddPCR 用ホイルヒートシール

186-4001J3

QX200 Droplet Digital PCR システム C1000 Touch PX1 付＜構成内容＞QX200 Droplet Generator システム, QX200 Droplet Reader システム, ddPCR 専用解析
用ノート PC, C1000 Touch サーマルサイクラー, 96Deep well リアクションモジュール , PX1 PCR Plate
Sealer, ddPCR 用ホイルヒートシール

186-4002JA
QX200 Droplet Generator システム
186-4003JA
QX200 Droplet Reader システム
186-3007JA
ddPCR 専用解析用ノート PC
試薬・消耗品・その他関連製品
186-3031
Droplet Reader オイル (1L ボトル×1 本、500 ウェル分)
186-3004
Droplet Reader オイル (1L ボトル×2 本、1,000 ウェル分)
186-3030
Droplet Generator オイル for Probes (7ml ボトル×2 本、200 ウェル分)
186-3005
Droplet Generator オイル for Probes (7ml ボトル×10 本、1,000 ウェル分)
186-4005
Droplet Generator オイル for EvaGreen (7ml ボトル×2 本、200 ウェル分)
186-4006
Droplet Generator オイル for EvaGreen (7ml ボトル×10 本、1,000 ウェル分)
186-4007
DG8 カートリッジ&ガスケットセット (120 カートリッジ＆ガスケット、960 ウェル分)
186-4008
DG8 カートリッジ (24 カートリッジ、192 ウェル分）
186-3009
DG8 ガスケット (24 ガスケット、192 ウェル分)
186-3051
DG8 カートリッジホルダー (1 個)
186-3026
ddPCR Supermix for Probes (1ml×2 本、200 ウェル分)
186-3010
ddPCR Supermix for Probes (1ml×5 本、500 ウェル分)
186-3027
ddPCR Supermix for Probes (5ml×5 本、2,500 ウェル分)
186-3028
ddPCR Supermix for Probes (5ml×10 本、5,000 ウェル分)
186-3023
Droplet PCR supermix (1ml×2 本、200 ウェル分)
186-3024
Droplet PCR supermix (1ml×5 本、500 ウェル分)
186-3025
Droplet PCR supermix (5ml×5 本、2,500 ウェル分)
186-3021
One-Step RT-ddPCR Kit for Probes (1ml×2 本、200 ウェル分)
186-3022
One-Step RT-ddPCR Kit for Probes (1ml×5 本、500 ウェル分
186-4033
ddPCR EvaGreen Supermix (1ml×2 本、200 ウェル分)
186-4034
ddPCR EvaGreen Supermix (1ml×5 本、500 ウェル分)
186-4035
ddPCR EvaGreen Supermix (5ml×5 本、2,500 ウェル分)
186-4036
ddPCR EvaGreen Supermix (5ml×10 本、5,000 ウェル分)
186-4021
One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes (1ml×2 本、200 ウェル分)
186-4022
One-Step RT-ddPCR Advanced Kit for Probes (1ml×5 本、500 ウェル分)
186-3052
ddPCR Buffer Control Kit for Probes (4.5ml ボトル×2 本、2×バッファ)186-4052
ddPCR Buffer Control Kit for EvaGreen (4.5ml ボトル×2 本、2×バッファ)181-4000J1PX1 PCR Plate Sealer
181-4040
ddPCR 用 ホイルヒートシール (100 枚)

14Appendix B: 修理依頼書
修理依頼書にご記入（*は必ずご記入ください）の上、修理品に添付してお送りください。
（修理品 1 台につき 1 枚ご記入ください）

*依頼日

年

月

日

【*法人名（エンドユーザー様】【*ご住所】【*ご担当者様名】【ご連絡先】（TEL）【*代理店様名】【*ご住所】【*ご連絡先】（TEL）【*製品名】【*ご担当者】【製造番号（S/N）】【*付属品】【*故障状況】【*修理条件】□保証期間中修理です。（保証期間

年

月

日）

□作業前に見積は必要ありません。修理をお願い致します。
□修理金額（\）以下の場合、見積りは必要ありません。修理をお願いします。

□作業前に見積が必要です。（故障箇所特定後の見積提出は、見積作業料を頂きます）【その他/備考欄】【注意事項】
お客様よりお預かりします機器に対し、細心の注意を払い作業を行いますが、プロトコールやデータは、不可抗力で消失する場
合や作業の都合上で消去せざるを得ない場合があります。お客様で作成されましたプロトコールやデータに関して、修理をご依頼される前に必ずバックアップを行なってください。それらに関しては復旧できない場合がございますので予めご了解ください。
尚、弊社にてプロトコールやデータのバックアップ、リストア作業のご依頼は承っておりません。

【連絡先】
東京サービスセンター
大阪営業所
リペアセンター

電話番号03-6404-0330
06-6308-6568
03-6404-0381

Fax 番号
03-6404-0332
06-6308-3064
03-6404-0332

修理品発送前に、発送先のご確認をお願い致します。

15

Appendix C: デコンタミネーション確認のお願い
バイオ・ラッドラボラトリーズ株式会社に修理機器及び修理代替機、デモ機器を返送される場合、当該機器が生物学的有害物質（感染性物質）及び化学的有害物質の汚染がないことをご確認いただき、下記へご記入・ご署名の上、機器に添付してご送付ください。訪問対応の場合は、作業を行う前に弊社エンジニアへお渡しください。
弊社販売店様及び弊社従業員の安全を確保するためでございますので、ご理解とご協力をよろしくお願いいたします。
尚、安全の確認がとれない場合には、サービスの提供ができない場合がございますので予めご了承く
ださい｡
製品名：

Serial No.（製造番号）：

1．上記装置は、感染性のあるサンプルを使用されましたか？
□ はい （感染性のある物質名：） □いいえ1-1．上記で “はい” とご回答いただいた方へ、そのサンプルが接触した部分を安全が保たれる状態まで洗浄されましたか？
□ はい
□いいえ
１-2．上記 1-1 で “ はい ”とご回答いただいた方へ、具体的にどのような方法で洗浄されましたか？

2．上記装置は、有害な化学物質または放射性物質のサンプルを使用されましたか？
□ はい （危険性のある物質名：） □いいえ2-1．上記で “はい” とご回答いただいた方へ、そのサンプルが接触した部分を安全が保たれる状態まで洗浄、除染されましたか？
□ はい
□いいえ
2-2．上記 2-1 で “ はい ”とご回答いただいた方へ、具体的にどのような方法で洗浄、除染されまし
たか？

デコンタミネーション確認書
上記の装置を人体及び環境の安全を保つため、人体への感染や危険が無い状態であることを確認し、バイオ･ラッド ラボラトリーズ社員または、代理人へ作業を依頼したことを承認します。

ご記入日：
会社(団体)名：

年

月

日

ご署名：
ご職位：

電話番号：
＊ ご署名は、実際に当該装置をご使用し、安全を確保していただいた方にお願いいたします。

16

Memo

17

バイオ・ラッド ラボラトリーズ株式会社

ライフサイエンス

www.bio-rad.com

社〒140-0002

東京都品川区東品川 2-2-24

天王洲セントラルタワー

大阪営業所〒532-0025

大阪市淀川区新北野 1-14-11

大阪新北野第一ビル

福岡営業所〒812-0013

福岡市博多区博多駅東 2-5-28※学術的お問い合わせは

博多偕成ビル
Email: life_ps_jp@bio-rad.com

本

FAX: 03-5463-8480
FAX: 06-6308-3064
FAX: 092-475-4858
FAX: 03-6404-0334

TEL: 03-6361-7000
TEL: 06-6308-6568
TEL: 092-475-4856
TEL: 03-6404-0331

M10574 1310A