試験研究用

ID3EAL™ miRNA Proﬁling Solutions
高感度 · 高特異的な RT-qPCR システム

mirxesjapan.com

Class-leading Performance - ID3EAL テクノロジー
ID3EAL（アイディール）テクノロジー 〜課題への挑戦〜
マイクロ RNA (miRNA) は 21-25 塩基長の小さな RNA であり、ヒトで 1,000 以上のA
RT-PCR分子が存在します。その miRNA を定量的に検出する手法としては、RT-qPCR 法が広く用いられています。miRNA には 1 塩基差程度の相同性の高い配列が複数存在するため、類似した miRNA を正確に区別する RT-qPCR を行うには、特異的なプライマーの設計が必要となります。しかし、miRNA は圧倒的にサイズが小さいため、個々の miRNA に特異的なプライマーを設計するには技術的な課題がありました。しかし弊社の特許技術

ID3EAL™
Vendor A
Vendor B
Vendor CRT
PRIMERqPCR FORWARDPRIMER

qPCR REVERSEPRIMER

Speciﬁc
Speciﬁc
Universal
Universal

Speciﬁc
Speciﬁc
Speciﬁc
Speciﬁc

Speciﬁc
Universal
Speciﬁc
Universal

Table 1. 他社 RT-qPCR システムとのプライマータイプ比較。
弊社のプライマーはすべてターゲット miRNA に特異的な配列で設計されている。

BqPCR

ID3EAL テクノロジーなら、その課題を克服することができます。ID3EAL の独自のアルゴリズムを用いて設計された RT プライマーは、すべての miRNA それぞれに特異的にデザインされており (Table 1)、ステムループ構造を有することで成熟した miRNA のみを識別します (Figure 1. A)。qPCR ステップにおけるプライマーも miRNA ごとに設計されており、RT プライマー配列が付加された cDNA を鋳型として qPCR 反応を行うことで(Figure 1. B)、高い特異性と再現性を実現します。

Figure 1. ID3EAL テクノロジーを用いた RT-qPCR システム。RT プライマーのステムループ構造により成熟 miRNA だけと結合する（A）。cDNA には RT プライ
マーの配列が付加され、qPCR ステップでは RT プライマー配列をターゲットに含む
Nested reverse primer と、miRNA 配列に特異的な Forward primer を用いることで高感度 · 高特異性を実現した（B）。

困難な miRNA も安定した検出
ID3EAL テクノロジーによる RT-qPCR は、増幅が難しいとされる AT 含有率の高いテンプレートにおいても、他社製品と比べ低い Ct 値で検出することができます（Table 2）。また、各プライマーは検証実験で有効性を確認した後、ISO13485取得の弊社工場から出荷し、Ct 値のばらつきが少なく常に安定した検出パフォーマンスを発揮します。

hsa-miR-27a-5p
hsa-miR-500a-5p
hsa-miR-30e-3p
hsa-miR-215-5p
hsa-miR-32-3p% ATMiRXES

45%
52%
55%
62%
73%

12.6
12.5
13.1
12.8
13.0

Vendor Vendor Vendor
DEF

16.5
16.3
14.8
16.0
21.1

18.1
19.8
17.2
19.5
21.2

N/A
15.8
14.5
15.6
N/A

Table 2. AT 含有率の高い miRNA を増幅した際の Ct 値の比較。他社に比べ低いCt 値で安定したパフォーマンスを示した。

優れた特異性ID 3 EAL テクノロジーは、高い相同性 を も つ miRNA フ ァ ミ リ ー を 識

別 す る こ と が 可 能 で す。 RT お よ び

qPCR 用 の 3 つ の 特異的プライマーを用いることで、1 塩基程度の違いしか持たない let-7 miRNA ファミリーの各アイソフォームを特異的に識別することができます（Table 3）。今まで検出が難しかった miRNA の検出も可能にし、お客様のバイオマーカー探索

Table 3. ID3EAL RT-qPCR プライマーによる相同性の高い let-7miRNA ファミリーの検出率。もっとも識別成績が悪かった let-7b とlet-7c の間でも僅か 2.2% だった。Assay relative detection: それぞれの miRNA 由来の cDNA を鋳型にした際のターゲットプライマーとミスマッチプライマーそれぞれから得られた qPCR の Ct 値の差より計算した。

をより加速させることができます。

ID3EAL RT-qPCR システムでは、通常 100 ng 程度の RNA サンプルで解析が行え、さらに最少 ”1 pg” の RNA からアッセイを行った実績もあります。
miRNA 解析には微量とされる血清 200 μ L を用いて弊社内で行った miRNA検出試験では、他社プラットフォームは比較的存在率の高い miRNA を 100種類程度検出したのに対し、ID3EAL RT-qPCR プライマーでは僅かしか存在しない新規 miRNA を含む 450 種類以上の miRNA を検出することができました（Figure 2）。
Figure 2. 他社プラットフォームと ID3EAL RT-qPCR プライマーの miRNA 検出性能の比較。
ID3EAL RT-qPCR プライマーは血中存在率の低い miRNA 検出に強みを持っている。

miRNA Copy number

コピー数の少ない miRNA も高感度に検出

Vendor G
Vendor H
Vendor I

MirxesTop 100 cancer biomaker microRNAs (AUC>0.7)

ID3EAL
miRNA Assay 製品
効率的プロトコールによる迅速なアッセイをご自身で行うことができます。
製品タイプは 2 種類ございます。

ID3EAL Individual miRNA Assays

ID3EAL miRNA Knowledge Panel

個々の miRNA に対するプライマー疾患に関連した 3 種類のパネルキット

幅広い生物種に対応し、合計 80,000 点以上の RT および qPCR
プライマーの中から選択可能。

Bioﬂuid、Cancer、PanoramiR の 3 種類のパネルをご用意。
エキスパートが厳選した 176 〜 376 種類の miRNA をパネル化。

ヒト、マウス用のプライマーは miRBase 21, 22 の配列を基に設

検証済みマルチプレックス RT プライマーセット。

計された個別のプライマー。

Ready-to-use の qPCR パネルにより作業時間短縮を実現。

他の生物種や miRBase 以外のデータベースから得られた配列など

Spike in control やプレート間キャリブレータ―を付属。のカスタムプライマー作成も可能。

96well・384well プレートフォーマットをご用意。

ノイズを軽減し S/N 比を向上させた最適化された ID3EAL マス

主要なリアルタイム PCR 機器に対応。

ターミックス。

主要なリアルタイム PCR 機器に対応。

......
RNA
SampleRT
PrimerRNA
SampleRT
Primer......

RT
Primer N（N≤RT10）

Primer N（N≤10）RNA Sample

RT
Reverse
Buffer TransciptaseRNA Sample

RT
Reverse
Buffer Transciptase

RT
RT

2h2h

cDNA Synthesis

cDNA Synthesis

cDNA

3-4h
cDNA Synthesis
Synthesis

3-4h

cDNA Aliquoting（1 to N）
cDNA Aliquoting（1 to N）

qPCR
qPCR
MasterMix
MasterMix

qPCR
qPCR
Master Mix
MasterMix

qPCR
qPCR
MasterMix Mix
Master

1miRNA
1Primer
miRNA
qPCR
qPCR
PrimermiRNA 22miRNA
qPCR Primer
qPCR
Primer

miRNA
N N
miRNA
qPCR
PrimerqPCR
PrimerqPCRqPCR

Results

Results

qPCR

qPCR

qPCR

miRNA 1 Ct

miRNA 2 Ct

miRNA 3 Ct

qPCR

miRNA 1 Ct

qPCR

miRNA 2 Ct

qPCRqPCR

ResultResultqPCR

miRNA 3 Ct

Knowledge Panel kits
品名ターゲット miRNA

包装

ID3EAL PanoramiRmiRNA Knowledge Panel

心臓、代謝、神経、呼吸器、消化器、生殖器等の疾患に関連する 376 種

ID3EAL Cancer
miRNA Knowledge Panel

主要ながん遺伝子・がん抑制遺伝子とそのシグナル伝達経路に関連深い 352 種類

96 well plate（12 or 24 Sample）
384 well plate（12 or 24 Sample）

ID3EAL Bioﬂuid
miRNA Knowledge Panel

20,000 検体以上のヒト血清、血漿、尿サンプルなどの自社データから厳選した 176 種

96 well plate（12 or 24 Sample）
384 well plate（12 or 24 Sample）

384 well（12 Sample）

References

1. Mestdagh, P. et al. Evaluation of quantitative miRNA expression platforms in the microRNA quality control（miRQC）study. Nat Methods 11, 809–815（2014）.
2. Wan G. et al. High-performance quantiﬁcation of mature microRNAs by real-time RT-PCR using deoxyuridine-incorporated oligonucleotides and hemi-nested primers.
RNA 16, 1436-1445（2010）

ID3EAL miRNAプロファイリングサービス
弊社のサービスは、プロジェクトコンサルティングから研究デザインサポート、miRNA 発現解析実験、バイオマーカー同定、パスウェイ解析、研究結果報告まで、マイクロ RNA 解析に関する研究・開発を包括的にサポートいたします。また、サービスでしか実施できない 700 種類の miRNA を測定できるラージパネルをご用意しております 。サービスをご活用いただくことで、お客様の研究をより効率的に推進することができます。

Premium 700 プロファイリングサービス

PanoramiR パネルプロファイリングサービス
High-impact 論文、 miRBase 22 、 HMDD 3 . 2 、TCGA から厳選した、心臓、代謝、神経、呼吸器、消化器、生殖器等の疾患に関連する 376 種類のmiRNAを検出します。

プロファイリングサービスでのみ実施可能なラージプロファイリングパネルです。弊社のデータベー
スから厳選した 700 種類の miRNA を検出・定量（コピー数）します。バイオマーカーの網羅的な探索に最適です。

Cancer パネルプロファイリングサービス

Bioﬂuid パネルプロファイリングサービス
20 , 000 検体以上の健康者および様々な疾患患者

各種癌・miRNA に関する論文より厳選した、主要ながん遺伝子・がん抑制遺伝子とそのシグナル伝達経路の血清、血漿、尿サンプルから得られた社内デーに関連深い 352 種類の miRNA を検出します。

タをもとに厳選した 176 種類の miRNA を検出します。

プロファイリングサービスの流れ
miRNAプロジェクト
コンサルティング

バイオインフォマティクス
解析 *1

発現解析実験

研究デザイン
サポート

データ解析
バイオマーカー同定

研究結果報告*1：別途費用が掛かります。

*2

プロファイリングサービス

最低オーダーサンプル数 *3

キット販売の有無

絶対コピー数定量

納期目安

ID3EAL miRNA Premium700 Proﬁling Service72

無有4 − 8 週間

ID3EAL miRNA PanoramiR Panel Proﬁling Service

12

有無4 − 8 週間

ID3EAL miRNA Cancer Panel Proﬁling Service12

有無4 − 8 週間

ID3EAL miRNA Bioﬂuid Panel Proﬁling Service

12

有無4 − 8 週間

品名

*2：ご提出いただくサンプル種類やプロジェクト内容によってはさらに追加のサービスが必要になる場合がございます。
*3：最低オーダーサンプル数以上からご注文いただけます。

特別な明示が無い限り、MiRXES の製品は研究目的にのみ提供され、治療・診断・検査に用いることは出来ません。
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MiRXES Japan 株式会社

販売代理店

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