EOSAL-CNVpara
BRCA2/CHEK2
Ref. EOS-BRCA2-24
Ref. EOS-BRCA2-96

EOSAL_BRCA2_v1¿POR QUÉ ANALIZAR LAS CNVs EN BRCA2 y
CHEK2?
Mutaciones en heterocigosis en el gen BRCA2(OMIM 612555) son la segunda causa decáncer de mama hereditario (OMIM 600185).
Mutaciones en este gen también pueden
generar cáncer de ovario o cáncer de mamamasculino y aumentar el riesgo de otros tiposde tumores.
La frecuencia de CNVs en BRCA2
responsables de cáncer de mama hereditario
es elevada ya que hasta un 5% del total depacientes y hasta el 11% de los pacientes que
no presentan mutaciones puntuales en BRCA1o BRCA2 son portadores de un CNV en BRCA2(Ewald et al, 2016; Agata et al, 2005), aunquela proporción depende de la población
estudiada (Agata et al. 2005, Woodward et al.
2005, Casilli et al. 2006, Stadler et al. 2010).

EOSAL-BRCA2 (Ref. EOS-BRCA2)

Por otro lado, pacientes con mutaciones
afectando a los dos alelos de este genpresentan Anemia de Fanconni (OMIM605724).
La tercera causa de cáncer de mama
hereditario son mutaciones en el gen CHECK2(OMIM 604373), presentando el 5% de lospacientes mutaciones en este gen (Walsh etal., 2006). Entre las mutaciones descritas
sobresalen varias deleciones presentes endiferentes porcentajes, en función de lamuestra analizada, que puede llegar a ser del2,5% (Walsh et al. 2006; Leedom et al, 2016);
Apostolou et al, 2017).
Al contrario que en los genes BRCA1 yBRCA2, las CNVs descritas en CHEK2 selocalizan solamente en los exones 9 y 10 delmismo (Rouleau et al, 2012).

EOSAL_BRCA2_v1

Dada la elevada proporción de este tipo
de mutaciones en este gen, y la granvariabilidad de las mismas, es recomendable
realizar el estudio de CNVs en BRCA2 y CHEK2
en los casos de pacientes con alto riesgo decáncer de mama hereditario.

¿CÓMO SE PUEDEN ANALIZAR LAS CNVs?
Las CNVs que afectan a un gen no se detectan
mediante secuenciación Sanger estándar ymuchas veces tampoco por NGS. Muchas
metodologías empleadas en la detección deCNVs requieren que las CNVs identificadassean validadas con una segunda metodología
independiente. EOSAL-CNV puede detectar
estas alteraciones y, por tanto, complementa
el análisis de secuencia de BRCA2 y CHEK2 y

EOSAL-BRCA2 (Ref. EOS-BRCA2)

mejora así el diagnóstico genético de lospacientes.

¿EN QUÉ CONSISTE EL ANÁLISIS DE CNVs EN
BRCA2 y CHEK2 MEDIANTE EOSAL?
EOSAL-CNV es una tecnología muy sencilladesarrollada por Seqplexing, con la cual
podemos detectar la presencia de CNVs en elgen BRCA2 y CHEK2 en dos horas y media,
empleando solo 15 minutos de trabajomanual.
EOS-BRCA2 permite la detección de CNVs
que afecten a cualquiera de los exones del gen
BRCA2 y a los exones 1 y 9 del gen CHEK2.

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El kit EOS-BRCA2 incluye 1 o 4 tubos demezcla de reacción, dependiendo de si se tratadel formato 24 o 96 muestras. Esta mezcla sedistribuye en tubos de reacción de PCR a losque se le añade el ADN a analizar. Se colocan
en un termociclador, donde se realizan losciclos de PCR indicados en el protocolo. Al
finalizar, los productos de la reacción seanalizan directamente en un secuenciador
capilar, sin necesidad de purificación entre un
paso y otro. Por último, los resultados sonanalizados de forma sencilla y fiable mediante
un programa desarrollado específicamentepara ello. La siguiente figura muestra unesquema general de nuestro procedimiento.
Es importante decir que para que losresultados sean totalmente fiables, el kit EOSBRCA2 cuenta con varios controles internos

EOSAL-BRCA2 (Ref. EOS-BRCA2)

que permiten la normalización de losresultados. Sin embargo, para una total
normalización de los mismos es necesarioanalizar 3 muestras control de ADN obtenido
con los mismos procedimientos que los ADN
que se van a analizar, y que no van incluidos en

Mezcla de lareacción
ADN(Listaparausar)(Lista parausar)
Reacción de PCR

2 minutos de preparación
80 minutos termociclador

Análisis por
secuenciador
capilar

5 minutos de preparación de la carga
30 minutos electroforesis

Extracción de datos30y minutos electroforesis
5 minutos
análisis automáticoEOSAL_BRCA2_v1

el kit, dados los diferentes métodos deextracción de ADN que puede emplear cadalaboratorio.

EOSAL-BRCA2 (Ref. EOS-BRCA2)•Apostolou P, Papasotiriou I. Current
perspectives on CHEK2 mutations in breast
cancer. Breast Cancer (Dove Med Press).
2017;9:331-335.

•Ewald IP, Ribeiro PL, Palmero EI, et al. Genomic
rearrangements in BRCA1 and BRCA2: A
literature
review.
GenetMolBiol.
2009;32(3):437-46.

•Judkins T, Rosenthal E, Arnell C, et al. Clinicalsignificance of large rearrangements in BRCA1and BRCA2. Cancer. 2012;118(21):5210-6.

•Leedom TP, LaDuca H, McFarland R, et al.
Breast cancer risk is similar for CHEK2 founder
andnon-foundermutation
carriers.
Cancer Genet. 2016;209(9):403-407.

•Rouleau E, Jesson B, Briaux A, et al. Rare
germline large rearrangements in the BRCA1/2
genes and eight candidate genes in 472
patients with breast cancer predisposition.
Breast Cancer Res Treat. 2012;133(3):1179-90.

NOTAS:• El kit EOS-BRCA2 está disponible para el análisis de 24 o96 muestras.
•Los tránscritos de BRCA2 y CHEK2 utilizados para eldiseño de este kit tienen como referencia NM_00059(BRCA2) y NM_007194 (CHEK2)•Puede consultar el protocolo del procedimiento en el
Manual de EOSAL-CNV, al cual puede acceder a travésdela
webdeSequencing
Multiplex:
www.seqplexing.com.

Bibliografía:•Agata S, Dalla Palma M, Callegaro M, et al.
Large genomic deletions inactivate the BRCA2
gene in breast cancer families. J Med Genet.
2005;42(10):e64.

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EOSAL-BRCA2 (Ref. EOS-BRCA2)OTROS PRODUCTOS EOSAL-CNV

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