福岡県保健環境研究所年報第32号，64−68，2005

原著論文
健康食品中のビサコジルの HPLC 分析法
森田邦正，毛利隆美，中川礼子
逆相系の高速液体クロマトグラフを使って，健康食品中のビサコジルの分析法を検討した．健康食品
中のビサコジルは 0.1 ％酢酸メタノールを用いて抽出し，Bond Elut C18 及び Bond Elut Certify カートリッジ(固相抽出法)を用いてそれぞれ 0.1 ％酢酸メタノール及び 2 ％アンモニア水-メタノール溶液でクリーンアップした．高速液体クロマトグラフはカラムに LiChrosorb RP18 (4.6 x 150 mm, 5 microns)を，移動相に pH7 の 0.02 mol/L リン酸塩緩衝液／アセトニトリル（55:45，v/v）を用い，測定波長 260 nm で分析した．本法による健康食品からのビサコジルの回収率は 73 − 97 ％，定量下限値は 0.02 mg/g であった．
［キーワード : ビサコジル，HPLC，固相抽出法，健康食品，下剤］
１

門部痛などの症状が現れることがある

はじめに1),2)．

平成 14 年 12 月−平成 17 年 9 月，タイから個人輸入により入手した「ホスピタルダイエット」などと称される製品を服用したことによる健康被害 4 例（内１例が急性心不全で死亡）が厚生労働省から発表された．該当品
4,4'-(2-ﾋﾟﾘｼﾞﾙﾒﾁﾚﾝ) ﾋﾞｽﾌｪﾉｰﾙ（desacetyl bisacodyl）にはビサコジルをはじめとする 4 − 7 種類の無承認無許可医薬品が混入され， 5 種類の該当品に合計 11 成分の医薬品が検出された．
ビサコジルは白色粉末で氷酢酸に溶けやすく，アセトンにやや溶けやすく，エタノール又はエーテルに溶けにくく，水にほとんど溶けない．希塩酸に溶けるが速やかに 分 解 し ， 4,4'-(2-ﾋ ﾟ ﾘ ｼ ﾞ ﾙﾒ ﾁ ﾚﾝ ) ﾋ ﾞｽ ﾌ ｪﾉ ｰ ﾙ （ desacetyl

4,4'-(2-ﾋﾟﾘｼﾞﾙﾒﾁﾚﾝ) ﾋﾞｽﾌｪﾉｰﾙﾓﾉｱｾﾃｰﾄbisacodyl） 及び 4,4'-(2-ﾋ ﾟﾘｼﾞﾙﾒﾁﾚﾝ ) ﾋﾞｽﾌｪﾉｰﾙﾓﾉｱｾﾃｰﾄ（monoacetyl bisacodyl）（monoacetyl bisacodyl） を生成することが日本薬局方に記載されている 1)．化学式はビサコジルが C22H19NO4（m.w. 361.4） である．
ビサコジルは坐剤用緩下薬である．結腸，直腸粘膜のビサコジル

副交感神経末端に作用してぜん動を高め，また腸粘膜への直接作用により排便反射を刺激する．さらに結腸腔内

図1における水分や電解質の吸収を抑制する．直腸坐剤とす

コジルの化学構造式

desacetyl bisacodyl， monoacetyl bisacodyl 及 びビサ

れば 15 − 60 分以内に作用が現れる．便秘症，消化管検査時又は手術前後における消化管内容物の排除に適応さビサコジルの測定方法として逆相カラムと移動相にれる．ビサコジルは 1 回 10 mg， 1 日 1 − 2 回肛門内に0.01 mol/L ク エ ン 酸 ／ ア セ ト ニ ト リ ル ／ メ タ ノ ー ル

挿入する（20:10:10, v/v）

1)

．ビサコジルは 1 個 2 mg 及び 10 mg 含ま1), 3)， 0.05 mol/L リ ン酸二水素カリウム

れる坐薬が販売されているが 2)，肥満の治療のために使／アセトニトリル（45:55, v/v） 4) を用いた HPLC 法が報用される医薬品ではない．ビサコジルの副作用として，告されている．近年，国民の健康志向に伴っていわゆる直腸刺激感，直腸炎，またときに腹部不快感，腹痛，肛健康食品に医薬品が添加されたものが，店頭や通信販売

福岡県保健環境研究所（〒818-0135 太宰府市大字向佐野39）- 64 -で流通するようになった．このような無承認無許可医薬％酢酸メタノール層を採取した．残渣は 0.1 ％酢酸メタ品あるいは健康被害が発生するおそれがある製品についノール 2 ml でさらに 1 回抽出した ．抽出液を合わせ，0.1て，著者らは健康被害を未然に防ぐため，医薬品等の成％酢酸を加えて 10ml とした． Bond Elut Certify カ ート

分検査を実施している．

リッジはメタノール 2 ml，水 2 ml， 0.1 ％酢酸 2 ml をこれまでに報告されたビサコジルの HPLC 分析法1), 3),順次流しコンデショニングした．10 ml の試料液を Bondは腸溶性錠剤及び坐薬の試験法であり，健康食品の試Elut Certify カ ートリッジに流し込みビサコジルを保持験法ではない．多種類の妨害成分が存在する健康食品にさせた後，水 2 ml 及びメタノール 2 ml で洗浄した．受適用するには精製が必要である．そこで，固相抽出法で器に 50 ％酢酸メタノール 1 ml を入れ，2 ％アンモニアクリーンアップし，HPLC で分析する方法を検討した．

水-メタノール溶液 3 ml でビサコジルを溶出し試料溶液4)とした．
２

実験方法

２・１

試薬

２・３・２

ビサコジルの HPLC 測定条件

ビサコジル標準原液はビサコジル（Sigma 製 ）を 20 mg

カラム

LiChrosorb RP18 (4.6×150 mm, 5 μ m)

秤量し，0.1 ％酢酸メタノールを加えて 100 ml とし冷暗移動相

pH7 の 0.02 mol/L リ ン酸塩緩衝液／アセ所に保存した．用時，標準原液 5ml をとり 0.1 ％酢酸

トニトリル（55 : 45， v/v）
流量1.0 ml/min

カラム温度45 ℃

固相抽出には Varian 製の Bond Elut C18 カ ートリッジ

注入量10 μ l（LRC, 500 mg, 10 ml） 及び陽イオン交換体ミニカラム

測定波長260 nmの Bond Elut Certify カ ートリッジ（LRC, 300 mg, 10 ml）

保持時間

ビサコジル：9.5 分

メタノールを加えて 50ml としたものを標準溶液とした．

を用いた．メタノールは和光純薬工業（株）製の HPLC
３

分析用を用いた．
2 ％アンモニア水 -メタノール溶液はアンモニアを 2

結果及び考察

３・１

ビサコジルの分解性％含むアンモニア水-メタノール溶液を調製した．
２・２

装置

紫外吸光度検出器（ SPD-10AV） 及びデータ処理装置（C-R3A）付 HPLC は島津製作所（株）製の LC10A を ，カラムは GL サ イエンス（株）製の LiChrosorb

RP18（4.6×150 mm, 5 μ m）を使用した．
２・３

実験操作

２・３・１

ビサコジルの分析法

Bond Elut C18 カ ートリッジ法）

健康食品 0.2 g を10 ml の試験管に秤量し，0.1 ％酢酸メタノール 2 ml を
図2加え振とう抽出した．2500 rpm で遠心分離した後，0.1ビサコジル標準溶液の HPLC クロマトグラム％酢酸メタノール層を採取した．残渣は 0.1 ％酢酸メタ
ノール 2 ml でさらに 1 回抽出した．抽出液を合わせ，図 2 に 2･ 3･2 の条件で測定した 20 μ g/ml のビサコジ

窒素ガス気流下 40 − 50 ℃で約 1 ml まで濃縮し，0.1 ％ル標準溶液の HPLC クロマトグラムを示す．ビサコジ酢酸を加えて 5 ml とした．Bond Elut C18 カ ートリッジ

ルは希塩酸に溶けるが速やかに分解すると日本薬局方にはメタノール 2 ml，水 2 ml を順次流しコンデショニン報告されている

グした．5 ml の試料液を Bond Elut C18 カ ートリッジに試料からの抽出に適した溶剤を選択するため，数種類の流し込み，ビサコジルを保持させた後，0.1 ％酢酸 2 ml溶剤を用いてビサコジル濃度 20 μ g/ml におけるその分及び 50 ％メタノール 3ml で洗浄した． 0.1 ％酢酸メタ解性について検討した．

1)．ビサコジルの標準溶液の調製及びビサコジル 20 μ g/ml の 0.01

ノール 5 ml でビサコジルを溶出し試料溶液とした．

N 塩酸メタノール溶液

健康食品 0.2 g

では，標準溶液調製 10 分後，図 3 に示すピーク 3（保を 10 ml の試験管に秤量し，0.1 ％酢酸メタノール 2 ml

持時間 9.5 分）のビサコジルと monoacetyl bisacodyl と 考を加え振とう抽出した．2500 rpm で遠心分離した後，0.1えられる小さなピーク 2（保持時間 4.7 分）の 2 つのピ

Bond Elut Certify カ ートリッジ法）- 65 -ークが検出された．さらに 24 時間後（図 3a），desacetylれた．このことからビサコジルは塩酸酸性及びアンモニbisacodyl と考えられるピーク 1（保持時間 2.8 分）が検ア塩基性では徐々に分解され，日本薬局方に記載されて出された．ビサコジル 20 μ g/ml のメタノール及びアセいる monoacetyl bisacodyl 及 び desacetyl bisacodyl が 生成

トニトリル溶液では，標準溶液調製 6 時間後ビサコジルされることが分かった．本試験法では，標準溶液の溶剤のみが検出されたが，メタノール溶液では 24 時間後（図及び抽出溶剤には標準溶液調製後１ヶ月まで分解ピーク3b）小さなピーク 2 が検出され，その後ピーク 2 は日々が全く検出されなかった 0.1 ％酢酸メタノールを用い高くなった．0.1 ％酢酸メタノール溶液では，図 2 に示た．

したように調製後１ヶ月までピーク 1 及び 2 の分解ピー
クは全く検出されなかった．

３・２

共存物質の除去

Bond Elut C18 及 び Bond Elut Certify カ ートリッジを用いて試料抽出液中の共存物質を除去する方法を検討した．ビサコジル 200 μ g を Bond Elut C18 カ ートリッジに保持させ，2･3･1 の操作に従って 0.1 ％酢酸メタノールの溶出液量を検討した．0 − 4ml の溶出量は添加量の約 100 ％であったことから，クリーンアップ操作時における 0.1 ％酢酸メタノールの溶出液量は 5 ml とした．
さらに，ビサコジル 200 μ g を Bond Elut Certify カ ートリッジに保持させ，2･3･1 の操作に従って 2 ％アンモニア水-メタノール溶液の溶出液量を検討した．0 − 2 mlの溶出量は添加量の約 100 ％であったことから，クリーンアップ操作時における 2 ％アンモニア水 -メタノール溶液の溶出液量は 3 ml とした．
25

ﾋﾞｻｺｼﾞﾙ , ppm

2015105000.10.20.30.40.50.60.70.8酢酸 ml

図3

ビサコジル 20 μ g/ml の 0.01 N 塩酸メタノール溶液（a ），メタノール溶液（b ）， 2 ％アンモニア水 -メタ

図4

ビサコジルの分解性

ノール溶液（c）及び 2 ％アンモニア水-アセトニトリル*2 ％アンモニア水-メタノール溶液 3 ml に酢酸 0 − 0.8 ml を加えた液溶液（d）の HPLC クロマトグラムに，ビサコジルをそれぞれ 200 μ g を添加しメタノールで 10 ml とした*(a)及び(b)； 標準溶液調製24時間後測定, (c)及び(d)； 標準溶液調製 10溶液を調製した．6 時間経過後，ビサコジル濃度を測定した．実験回数 1分後測定.

回

ピーク1；desacetyl bisacodyl，ピーク2；monoacetyl bisacodyl，ピーク3；ビサコジル.

しかし， 2 ％アンモニア水 -メタノール溶液を溶出液
塩基性溶液での分解性について検討した結果，ビサコに用いることにより，HPLC クロマトグラムに図 3 に示

ジル 20 μ g/ml の 2 ％アンモニア水-メタノール溶液でしたピーク 1 及び 2 の分解生成物が出現した．そこで，は，標準溶液調製 10 分後，ピーク 1 及び 2 が検出されビサコジルの分解を抑制するため受器にあらかじめ入れた（図 3c）．2 ％アンモニア水-アセトニトリル溶液では，て置く酢酸量について検討した． 2 ％アンモニア水 -メ

10 分経過後小さなピーク 2 が検出され（図 3d），さらにタノール溶液 3 ml と酢酸 0 − 0.8 ml の混合溶液にビサ24 時間後図 3c と類似した HPLC クロマトグラムが得らコジルをそれぞれ 200 μ g 添加し，メタノールを加えて- 66 -

10 ml とした 20 μ g/ml のビサコジル溶液を調製した．
標準溶液調製 6 時間経過後 HPLC でビサコジル濃度を測定した結果（図 4）， 2 ％アンモニア水 -メタノール溶
液 3 ml に対して酢酸 0 − 0.05 ml の混合溶液では，ビサコジルは 0 μ g/ml で図 3 に示したピーク 1 のみが検出され，ビサコジルはすべて分解されていた．酢酸 0.1 −0.2 ml の混合溶液では，ビサコジル濃度は 1.8 − 15.1 μg/ml で図 3 に示したピーク 1 及び 2 の分解生成物が検出された．酢酸 0.4 − 0.8 ml の混合溶液では，ビサコジ
ル濃度は 20 μ g/ml で，ビサコジルは全く分解されなかった．本試験法では，受器に入れる酢酸量は 0.5 ml，すなわち 50 ％酢酸メタノール 1 ml とした．
図 5 に添加回収試験で得られた健康食品Ａ及びＢのクリーンアップ前後の HPLC クロマトグラムを示す．健康食品Ａの場合，クリーンアップ前のクロマトグラム（図5a）は共存物質の影響を受けビサコジルのピークにテーリングが認められたが，Bond Elut C18 カ ートリッジで処理した後（図 5b）かなり改善された．Bond Elut Certify
カートリッジで処理した場合（図 5c） Bond Elut C18 カートリッジよりさらに効果的に共存物質を除去することができたが，クロマトグラムにピーク 1 及び 2 の分解生成物が認められた．これらのピークは 2 ％アンモニア水メタノール溶出液が Bond Elut Certify カ ートリッジを通過する際，ビサコジルが分解し生成したものと考えられた．健康食品Ｂの場合，クリーンアップ前のクロマトグラム（図 5d）は保持時間 1 − 6 分に大きなピークがあるが，ビサコジルのピークに極端なテーリングがみられないため，カートリッジ未処理で定量できる試料と考えられた．Bond Elut C18 カ ートリッジ処理後（図 5e）においても保持時間 1 − 6 分の共存物質は除去できなかったが，Bond Elut Certify カ ートリッジで処理した場合（図5f）共存物質を効果的に除去することができた．しかし，健康食品Ａの場合と同様にピーク 1 及び 2 の分解生成物が認められた．共存物質の除去を検討するために用いた
健康食品Ａ及びＢのクロマトグラム上に，ビサコジルの分析を妨害するような成分は認められなかったが，もしビサコジルの保持時間前後に共存物質が存在する健康食品があれば，図 5a 及び図 5d に示したように共存物質を
図5

健康食品Ａ及びＢのクリーンアップ前後の HPLCほとんど除去できた Bond Elut Certify カ ートリッジを用クロマトグラムいた方が良いと思われた．また Bond Elut Certify カ ート

*健康食品Ａのクリーンアップ前（a），Bond Elut C18 カ ートリッジ処理リッジで処理した後の分解生成物のピークの有無はビサ後（b）及び Bond Elut Certify カ ートリッジ処理後（c）．

コジルの確認試験として使用できると思われた．

**健康食品Ｂのクリーンアップ前（d），Bond Elut C18 カ ートリッジ処

３・３

理後（e）及び Bond Elut Certify カ ートリッジ処理後（f）．

ビサコジル.

ビサコジルの回収率と再現性

市販されている健康食品Ａ及びＢを用いて添加回収試

ピーク1；desacetyl bisacodyl， ピーク2；monoacetyl bisacodyl， ピーク3；験を行った．健康食品 0.2 g にビサコジルをそれぞれ 200- 67 -

μ g を添加し実験操作に従って回収率を求めた．繰り返ーンアップ処理前のビサコジルの回収率は 99.9 ％（ 99.0し実験は 5 回行い，その結果を表１に示す．

− 100.6 ％ ），Bond Elut C18 カ ートリッジ処理後の回収率は 97.4 ％（ 96.7 − 98.6 ％ ），Bond Elut Certify カ ート

表１

健康食品からのビサコジルの添加回収試験結果

リッジ処理後の回収率は 73.0 ％（ 70.7 − 76.5 ％）であった．変動係数はいずれも 5 ％以内でありほぼ満足するビサコジル結果を得た．本法によるビサコジルの定量下限値は 0.02

回収率 ± 標準偏差**mg/g であった．

クリーンアップ処理前
健康食品Ａ*

99.5 ± 0.9

健康食品Ｂ*

99.9 ± 0.6４

まとめ
健康食品中のビサコジルの HPLC 分析法を検討した．

Bond Elut C18 カ ートリッジ処理後その結果，Bond Elut C18 及 び Bond Elut Certify カ ート

健康食品Ａ

96.9 ± 0.4

リッジを用い効果的に共存物質を除去することができ

健康食品Ｂ

97.4 ± 0.7た．また，回収率，再現性ともにほぼ満足する結果を得

Bond Elut Certify カ ートリッジ処理後
健康食品Ａ

92.3 ± 3.3

健康食品Ｂ

73.0 ± 2.3た．
文献1) 鈴木郁生ら：第 13 改正日本薬局方解説書，（日本薬局方解説書編集委員会編），C2000-2005, 東京，廣川*健康食品Ａ及びＢにおいてビサコジルは不検出であった．
**健康食品 0.2

書店，1998．

g を採り，ビサコジルをそれぞれ 200 μ g 添加した．実2) 長尾清ら：日本医薬品集，（日本医薬情報センター編）

験回数（n=5）．

1293-1295，東京都，薬業時報社．2000.
健康食品Ａの場合，クリーンアップ処理前のビサコジ

3) L. Valenti & C. Lau-Cam : J. Assoc. Off. Anal.

ルの回収率は 99.5 ％（ 98.8 − 100.7 ％ ）， Bond Elut C18
カートリッジ処理後の回収率は 96.9 ％（ 96.4 − 97.5 ％ ），Chem, 68, 529-532, 1985.
4) K. Bradshaw et al. : J. Pharm. Biomed. Anal., 13,Bond Elut Certify カ ートリッジ処理後の回収率は 92.3 ％

1355-1362, 1995.

（89.7 − 97.8 ％）であった．健康食品Ｂの場合，クリAnalysis of Bisacodyl in Health Foods by HPLC
Kunimasa MORITA, Takami MOHRI, Reiko NAKAGAWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, JapanA reverse-phase HPLC method for determining bisacodyl in health foods is described. Bisacodyl in health foods wasextracted with 0.1% acetic acid in methanol. The sample solution for HPLC was applied to Bond Elut C18 and Bond Elut
Certify (solid phase extractions) with 0.1% acetic acid in methanol and 2% ammonium hydroxide in methanol as the mobilephase, respectively. The HPLC analysis was carried out on a column of LiChrosorb RP18 (4.6 x 150 mm, 5 microns) with 0.02
mol / L phosphate buffer pH 7.0 /acetonitrile (55:45, v/v) as the mobile phase and the eluate was monitored by UV detection at260 nm. The average recovery of bisacodyl from health food was 73 − 97%. The quantitation limit of this method was 0.02
mg/g.
[Key words; Bisacodyl, HPLC，Solid phase extractions, Health Food, Cathartics]- 68 -