日大生活科研報（Rep. Res. Inst. Sci for Liv., Nihon Univ.）44；83～88, 2021

論

業績

第861号

文

高濃度ビタミン C 投与がヒラメの栄養特性に与える影響について
難波

※１

亜紀・森

※２

※３

美里・柴崎

康宏・間野

※４

伸宏・安齋

※５

寛・上田

※６

龍太郎

Nutritional characteristic of Japanese flounder Paralicthys olivaceus uponfeeding a diet supplemented with high concentration of ascorbic acid
※１

※２

※３

※４

Aki NAMBA, Misato MORI, Yasuhiro SHIBASAKI, Nobuhiro MANO,※５※６

Hiroshi ANZAI and Ryutaro UEDA
ABSTRACT

Flounder is a globally important fish species in aquaculture. In the present study, we analyzed the effect ofhigh concentration vitamin C administration on fatty acids in the muscle of Japanese flounder Paralichthys
olivaceus. Although the fatty acid content in the muscle of the vitamin C administrated fish tended to be higher than that of the control fish, the fatty acid ratio did not differ between two administrated groups. In the future,
it must divide muscles into sections such as the lateral body and engawa muscles, and then analysis each section
separately.

期待されている。実際、世界的にみると養殖生産

１．はじめに水産物は、良質のタンパク質を含む一方、カロ量は年々増加しており、2014年には養殖生産量はリーが低いという特徴がある 。またビタミンや漁業生産量を上回った２）。このような養殖生産量

必須ミネラル、高度不飽和脂肪酸など健康維持にの大幅な増加は、初期餌料や育種など多岐にわた

役立つ栄養素が多く含まれており、世界的に需要る育成技術の進展によるところが大きいが、課題が増加している。一方で漁業による水産物の確保も多く残されている。魚類養殖では、経営的な問は限界に達しており、養殖産業による供給増大が題から高密度の状態で飼育されることが一般的で

１）※１

日本大学短期大学部（三島校舎）食物栄養学科非常勤講師 Part-time lecturer, Department of Food and Nutrition,

Junior College (Mishima Campus), Nihon University※２

日本大学大学院生物資源生産科学専攻・博士後期課程学生 Graduate School of Bioresource Sciences, Bioresource

Production Sciences Nihon University※３

日本大学生物資源科学部海洋生物資源科学科

助教 Assistant Professor, Department of Marine Science and Re-

sources, College of Bioresources Sciences, Nihon University※４

日本大学生物資源科学部海洋生物資源科学科

准教授

Associate Professor, Department of Marine Science andResources, College of Bioresources Sciences, Nihon University※５

日本大学生物資源科学部くらしの生物学科教授 Professor, Department of Bioscience in Daily Life, College of

Bioresources Sciences, Nihon University※６

日本大学短期大学部（三島校舎）食物栄養学科

教授 Professor, Department of Food and Nutrition, Junior College(Mishima Campus), Nihon University― 83 ―あり、それだけ魚病の発生リスクが高く、毎年多投与水槽および対照水槽として、１水槽につき６くの被害が生じている３）。また国内だけをみると、尾ずつ収容した。その後、総体重の３％となるよ

調理が面倒などの面から水産物の需要はむしろ減うに市販の配合飼料（ひらめEP F-4、日清丸紅飼

少傾向にあり、魚価も低迷している。

料株式会社：粗蛋白50.0％、粗脂肪6.0％、粗繊維

このような状況を背景として、魚病の発生を予2.0％、粗灰分17.0％、カルシウム2.5％、リン1.7％）

防し、より付加価値の高い水産物の養殖生産が模を毎日与えることにより馴致した後、下記試験を索されている。魚類養殖における魚病対策として実施した。

は、魚類の自然免疫を向上させる免疫賦活剤が期待されており１）４）、アスコルビン酸（ビタミン C）

２．２

供試薬剤および調整などの栄養素、グルカンなどの多糖類、ラクトフェ

供試薬剤には、L-アスコルビン酸（以後、ビタリンなどの機能性タンパク質などが用いられていミン C；Wako）を使用した。既報11）に従い、ビタ

る５）６）。著者らも安価で安全性の高いビタミン C

ミン Cは蒸留水で溶解後、直ちにビタミン C濃度に着目し、配合飼料に過剰添加することにより（以が2,000 mg/kg飼料となるように配合飼料に展着さ後、高濃度ビタミン C投与法と称す）、魚類の高水せた（以後、ビタミン C展着飼料）。なお、対照用

温耐性や複数の魚類病原体に対する抗病性向上効の飼料には同量の蒸留水を加えた配合飼料を用い果を確認している

た（対照飼料）。調整した各飼料は使用時まで－

。

７）
８）

ビタミン Cは生体内の結合組織（コラーゲン）

20℃で保存した。

の生合成に必須であり 、牛などの脂肪前駆細胞
９）にビタミン Cを加えると脂肪細胞への分化が促進

２．３

飼育試験およびサンプリング手順

されるなど 、肉質の改善にも寄与することが期

２．２で調整した飼料を１日１回、総体重の３％待されるが、高濃度ビタミン C投与が魚類生体内となるように給餌した。７日間給餌した後、全尾での脂肪代謝に及ぼす影響についての知見は乏し

取 り 上 げ 、 0.2g/L 3-aminobenzoic acid ethyl ester

い。魚種により含有量は異なるが、魚類の可食部（Sigma）を用いて麻酔した。体重を測定後、尾柄にはドコサヘキサヘン酸（DHA）やイコサペンタ

血管より採血を行い、脱血した。次に包丁を使っエン酸（EPA）など、人の健康に寄与する多価不

てえんがわを含む筋肉を切り出し、皮を剝いで細飽和脂肪酸が含まれており、免疫賦活剤を利用し切した。１尾当りの筋肉重量が29.5 ±7.1 gと測定てこのような脂肪酸も増やすことができれば、栄必要量である50 gに達しなかったため、２尾分の養学的に価値の高い食材として、より付加価値を筋肉をプールしたものを１筋肉試料として、脂肪つけることが期待できる。

酸組成および脂肪酸含有量の分析に用いた。更に、

10）

そこで本研究では、魚類に対する高濃度ビタミ

ビタミン C組織含有量測定のため、開腹して肝膵ン C投与法を栄養学的な観点から評価することを臓を採取し12）、使用時まで－80℃で保存した。

目的として、同投与を行った重要養殖魚の一種であるヒラメ Paralichthys olivaceusを対象に、筋肉の２．４

脂肪酸組成および脂肪酸含有量に及ぼす影響について解析を行った。

ビタミン C組織含有量の測定

ビタミン Cの測定は、ヒドラジン法により肝膵臓からビタミン Cを抽出した後、高速液体クロマ
トグラフィー（HPLC）法により実施した（衛生２．材料および方法

試験法・注解2000. 219-220）。実施の詳細は下記

２．
１

に示す。

供試魚

実験には、マリンテック株式会社より購入した２歳魚のヒラメ70.1±15.6 g（平均値±標準偏差）１）ビタミン Cの抽出

12尾を用いた。水温を20℃に設定した500 Lの上ビタミン Cの抽出はヒドラジン法により行った。

面濾過式水槽を２槽設置し、それぞれビタミン C

すなわち、２．３で得た肝膵臓0.02gに1,200 µlの― 84 ―

５％（W/V）メタリン酸を加え、ホモジナイズし

２．６

脂肪酸含有量の測定た。遠心後（４℃, 12,000×g, 10分）
、得られた上脂肪酸含有量の測定は、筋肉試料からクロロホ

清１mlにインドフェノール溶液を色が消失しない

ルム―メタノール混合液を用いて脂質を抽出した程度に数滴加え、さらに２％チオ尿素-メタリン酸

後、ロータリーエバボレーターにて濃縮・乾固し溶液2,000 µlおよび２％ヒドラジン硫酸溶液500 µl

た。得られた総脂質を少量のクロロホルムなどにを加え、50℃で90分加温した後、酢酸エチルを２溶かして－20℃で測定まで保存した。その後、２．

ml加え、60分間混和した。遠心後（室温, 2,000×５の脂肪酸組成と同一手順で実施した。

g, ５分）、得られた上清に対して、無水硫酸ナトリ
ウムを少量加えて脱水させた。最後に0.50 µmの２．７

脂肪酸含有量の算出

PTFEフィルター（ADVANTEC社）で濾過したも試料中の脂肪酸含有量は、以下の計算式を用いのを抽出試料として、測定まで常温暗所で保存してヘプタデカン酸メチルによる内部標準法により

た。

算出した。

また、ビタミン Cの検量線を作成するため、ビ
タミン Cを５％（W/V）メタリン酸溶液に直接溶
解させ、０、２、６、10、および20 µg/mlとなるように調整した。以後、肝膵臓と同一手順で各濃度溶液1.0 mlからビタミン Cの抽出を行った。
２）HPLC法による定量
ビタミン Cの測定は、シリカゲルカラム（Silica215-N, 株式会社センシュウ科学）を用いたHPLC

３．結果
３．１

肝膵臓中のビタミン C含有量法により実施した。なお、移動相には酢酸、n-ヘ

ヒラメ肝膵臓中のビタミン C含有量を測定した

キサン、酢酸エチルを１：４：５（V/V/V）の割

結果、ビタミン C展着区では20.4±3.2 mg/100g組

合で混和し、0.50 µmのPTFEメンブレンフィルター

織重量であったのに対し、対照区では8.2±1.7（ADVANTEC）により濾過したものを用いた。測mg/100g組織重量となり、ビタミン C展着区にお定は、抽出試料20 µl をアプライし、流速1.5 ml/

いて有意（p<0.05）な増加が認められた（図１）。

min、カラムオーブン温度40℃、検出495 nmの定量条件で行った。なお、１試料につき測定は３回

３．２

脂肪酸組成

行い、その平均値を１）で抽出処理したビタミン

表１にヒラメ筋肉中の脂肪酸組成を示した。ビ

C標準液で求めたピーク面積を基準として作成しタミン C展着区と対照区を比較したところ、脂肪た検量線にあてはめることにより、ビタミン C濃酸組成比に明瞭な差異は認められなかった。比率度を得た。そして、最終的に組織含有量100 g当りの高い脂肪酸をみると、飽和脂肪酸ではパルミチのビタミン C含有量を算出した。

ン酸が最も高く、ビタミン C展着区18.3～18.7％、対照区18.8～18.9％であった。一価不飽和脂肪酸

２．
５ではオレイン酸/cis-パクセン酸が高く、ビタミン

脂肪酸組成

脂肪酸組成は、筋肉試料に0.5 M水酸化ナトリウ

C展着区14.0～15.3％、対照区13.4～14.3％であっ

ムのメタノール溶液を加えてけん化した後、三フッた。多価不飽和脂肪酸ではドコサヘキサエン酸が化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液に溶解さ高く、ビタミン C展着区21.8～24.7％、対照区22.9

せた。ヘキサンに溶解後、飽和食塩水を加え、ヘ～25.6％であった。

キサン層を採取した。得られたものをガスクロマ
トグラフィー（Agilent 7890B, アジレント・テク

３．３

脂肪酸含量

表１にヒラメ筋肉中の各脂肪酸含量を示した。

ノロジー株式会社）にて測定を行った。
― 85 ―

ビタミン C展着区の総脂肪酸含量は0.3～0.5 g/100g

中山・高嶋（2016）は、ヒラメの筋肉中の脂肪

可食部であったのに対して、対照区は0.3 g/100g可酸組成についてブリ、トラフグ、クロマグロと比食部であり、ビタミン C展着区の方が高い傾向が

較し、DHAについてはヒラメが最も高い比率でみられた。また、飽和脂肪酸も、対照区が0.1 g/100gあったことを報告しており、魚類の中でも栄養学

可食部であったのに対してビタミン C展着区は0.1

的に有用な水産物であるといえる。なお、ヒラメ～0.2 g/100g可食部と高い傾向を示した。しかし、などの異体類の筋肉組織は、通常の体側筋以外に両区ともに多くの測定項目が測定限界以下であり、背鰭や臀鰭を動かす軟条を動かす筋肉組織である

明瞭な差を示す測定項目は認められなかった。

縁側（えんがわ）があり、脂肪酸比率などが異なることが報告されている15）。本研究でも筋肉組織毎の測定も試みたが、魚体サイズ的に実施するこ

４．考察
本研究において、実験に供したヒラメの肝膵臓とができず、全ての筋肉部位を混合させて測定を中のビタミン C含量をみると、ビタミン C展着区

実施せざるをえなかった。今後、より大型の魚体は対照区と比較して２倍近い値であり、有意な差を用いて、えんがわなどの筋肉組織を区分して脂がみられたことから、実験期間を通して十分量の肪酸組成をみることで、ビタミン Cの投与のより給餌および魚体内での蓄積はできていたものと判

詳細な効果検証ができるものと考えている。

断した。
そこで脂肪酸含量をみると、ビタミン C展着区

文献は対照区と比較して多い傾向がみられた。哺乳動１）若林久嗣：第９章 環境性疾病およびストレス .

物では、ビタミン Cが脂肪前駆細胞の分化に影響「改訂・魚病学概論」（小川和夫、室賀清邦編）.

をもたらすことが報告されている 。本研究では恒星社厚生閣, 東京, 2008, 123-134.

13）

多くの測定項目が測定限界以下となり比較するこ２）岩下誠：第５章 養殖「水族育成学入門」（間とができなかったが、中山・高嶋（2016）は、養野伸宏、鈴木伸洋編）成山堂書店, 東京, 2020,

殖と天然のヒラメで脂肪酸組成を比較し、その比

57-73.

率が大きく変わることを報告している 。これは
14）

３）泉

庄太郎：第６章 養殖形態と関連施設.「水摂餌物の違いを反映したものと予想され、脂肪酸

族育成学入門」（間野伸宏、鈴木伸洋編）.成山の蓄積が外部から得る栄養素の影響を受けること

堂書店, 東京, 2020, 74-89.

を示唆している。しかし、本研究では、ビタミン４）小林牧人、金子豊二、会田勝美：第４章内分C展着区と対照区の間で、脂肪酸組成において明泌.「魚類生理学の基礎」（会田勝美編）恒星社

瞭な違いは認められなかった。

厚生閣, 東京, 2002, 128-159.

人の神経細胞に影響をもたらし、脳の発達促進

５）Roy A. Dalmo and Jarl Bogwald: β-glucans asや認知症予防などの効果が期待される栄養素とし

conductors of immune symphonies. Fish & Shellfishて注目していたDHAやEPAも、両区の間で差は認Immunology 25, 2008, 384-396.

められなかった。中山・高嶋（2016）が示した組

６）M. Sasaki: Current research status of fish

成比は、養殖ヒラメのDHAが平均37.9％であった

immunostimulants, Aquaculture 172, 1999, 65-92.

のに対し、本研究ではビタミン C展着区で21.8～

７）T. Ishikawa, N. Mano, K. Minakami, A. Namba, T.

24.7％、対照区で22.9～25.6％と約半分程度の値でKojima, H. Hirose and T. Nakanishi : Efficacy ofあった。一方、EPAは6.4％であったのに対して本

high-concentration ascorbic acid supplementation

研究におけるビタミン C展着区では7.9～8.2％、対against Infectious Hematopoietic Necrosis in salmonid

照区では８～8.3％と数割高い値を示した。これら

fish influenced by viral strain and fish size. Fishの相違は、魚体サイズ、給餌期間、配合飼料中にPathology, 48(4), 2013, 113-118.

含まれる脂肪酸含量や組成の違いによるものと推８）T. Ishikawa N. mano, T. Nakanishi and H. Hirose:

察される。

Adverse and benerical effects of long-term high― 86 ―concentration ascorbic acid supplementation in12）K-J Lebastese, K-W Kim and S C Bai: Effects ofrainbow trout Oncorhynchus mykiss. Fisheries

different dietary levels of L-ascorbic acid on growth

Science 77(6), 2011, 1009-1014.

and tissue vitamin C concentration in juvenile Korean

９）池田静徳、佐藤守、𠮷中禮二：魚類のコラー

rockfish, Sebastes schlegeli (Hilgendorf). Aquaculture
Research, 29, 1998, 237-244.

ゲン合成におけるビタミン Cの役割. ビタミ

13）末長将志、河内浩行、松井徹：アスコルビン

ン , 57, 1983, 433-449.
10）鳥居伸一郎、松田恭子、大山路世、松井徹、

酸リン酸による3T3-L1脂肪前駆細胞の分化促

矢野秀雄：黒毛和種から単離した脂肪前駆細進 作 用 の メ カ ニ ズ ム の 検 討 , Trace Nutrients

胞の影響. 肉用牛研究会報, 60, 1995, 27-28.

Research, 25, 2008, 61-64.
14）中山祐輔、高嶋康晴：脂肪酸分析によるブリ、

T. Yabu, D. Iwazaki, N. Wada, H. Anzai, H. Shiba,

ヒラメ、トラフグ、クロマグロの養殖判別法

T. Nakanishi and N. Mano: Enhancement of immuneの検討, 食品関係等調査研究報告, 2016, 40.

proteins expression in skin mucus of Japanese

15）佐藤守、吉中禮二、西中義裕、森本晴之、小flounder Paralicthys olivaceus upon feeding a diet

島朝子、山本義和、池田静徳：天然および養supplemented with high concentration of ascorbic

殖ヒラメ肉の栄養成分の比較 . Bulletin of theacid. Fish and Shellfish Immunology, 114, 2021,

Japanese Society of Scientific Fisheries, 52(6), 1986,

20-27.

1043-1047.

肝膵臓中におけるビタミンC含有量（mg/100g）11）M. Mori, T. Ito, R. Washio, Y. Shibasaki, A. Namba,

図１

*

25
20
15
10
5
0

対照区

ビタミンC
展着区

ヒラメ肝膵臓中におけるビタミン C含有量.
*；p <0.05, studentのt検定.

― 87 ―

― 88 ―

0.1 g
検出限界以下

検出限界以下
検出限界以下

16:00

16:01

16:02

17:00

17:01

18:00

18:01

パルミチン酸パルミトレイン酸

ヘキサデカジエン酸

ヘプタデカン酸

ヘプタデセン酸

ステアリン酸

オレイン酸/cis-バクセン酸

検出限界以下-18:3n-3

18:4n-3

20:00

20:01

20:2n-6

20:3n-6

20:3n-3

20:4n-6

20:4n-3

20:5n-3

21:5n-3

22:01

22:4n-6

22:5n-6

22:5n-3

22:6n-3

24:00:00

24:01:00

未同定

α-リノレン酸

オクタデカテトラエン酸

アラキジン酸

イコセン酸

イコサジエン酸

ジホモ－ɤ－リノレン酸

エイコサトリエン酸

アラキドン酸イコサテトラエン酸

イコサペンタエン酸

ヘンイコサペンタエン酸

ドコセン酸

ドコサテトラエン酸

ドコサペンタエン酸

ドコサペンタエン酸

ドコサヘキサエン酸

リグノセリン酸

テトラコェン酸

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下18:2n-6

18:3n-6リノール酸

ɤ-リノレン酸

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下14:00

検出限界以下n-9系多価不飽和脂肪酸

15:00

0.2 g

n-3系多価不飽和脂肪酸

ミリスチン酸

0.2 g

多価不飽和脂肪酸

ペンタデカン酸

検出限界以下

一価不飽和脂肪酸

0.1 g

可食部)

(g/100 g

含有量

飽和脂肪酸

二重結合数

炭素数：

0.3 g

項目

検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下
検出限界以下

14
3.6
0.6
0.9
0.2
2
0.3
0.2
0.2
2.2
0.5
8
0.3
0.8
0.2
1
2.7

4.8

-

検出限界以下

検出限界以下5.6

検出限界以下

検出限界以下0.3-

検出限界以下0.4

0.3

検出限界以下0.2

0.2 g

検出限界以下

3.2

25

0.1 g

検出限界以下18.9

検出限界以下0.4

検出限界以下

0.2 g

0.2 g

検出限界以下

0.1 g

0.3 g

可食部)

(g/100 g

含有量

5.4

0.4

-

22.9

2.6

0.9

0.2

1

0.3

8.4

0.5

2.3

0.2

0.1

0.3

2

0.2

0.9

0.6

-

3.9

14.3

5.5

0.3

0.5

0.2

3.4

18.9

0.5

3.3

組成(%)

脂肪酸

No. 2

対照区

3.1

組成(%)

脂肪酸

No. 1

-

検出限界以下

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下-

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下0.1 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

0.2 g

0.2 g

検出限界以下

0.1 g

0.3 g

可食部)

(g/100 g

5.8

0.3

-

25.6

2.7

1

0.2

0.8

0.3

7.9

0.5

2.3

0.1

0.2

0.3

1.9

0.2

0.8

0.5

-

3.6

13.4

5.7

0.3

0.4

0.2

3

18.8

0.4

2.9

組成(%)

脂肪酸

No. 3
含有量

各試験区におけるヒラメ筋肉組織中の脂肪酸含有量および脂肪酸組成

総脂肪酸

表１

-

検出限界以下

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下-

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

0.2 g

0.2 g

検出限界以下

0.2 g

0.4 g

可食部)

(g/100 g

含有量

5.2

0.4

-

24.7

2.9

1

0.2

1

0.3

8

0.5

2.2

0.2

0.1

0.3

2

0.2

0.9

0.6

-

3.7

14

5.6

0.3

0.4

0.2

3.1

18.7

0.4

2.9

組成(%)

脂肪酸

No. 1

-

検出限界以下

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下-

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下0.1 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

0.2 g

0.2 g

検出限界以下

0.1 g

0.3 g

可食部)

(g/100 g

含有量

5.8

0.4

-

23.2

2.7

1

0.2

0.9

0.3

8.3

0.5

2.3

0.1

0.1

0.3

2

0.2

0.9

0.6

3.8

14.3

5.6

0.3

0.4

0.2

3.4

18.3

0.4

3.3

組成(%)

脂肪酸

No. 2

ビタミンC展着区-

検出限界以下

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下

検出限界以下0.2 g

検出限界以下

検出限界以下

0.1 g

0.2 g

0.2 g

0.1 g

0.2 g

0.5 g

可食部)

(g/100 g

5.3

0.4

-

21.8

2.8

0.8

0.2

1

0.3

8.3

0.5

1.9

0.2

0.1

0.3

2.2

0.2

1.1

0.7

0.1

3.9

15.3

5.1

0.3

0.5

0.3

3.8

18.5

0.5

3.5

組成(%)

脂肪酸

No. 3
含有量