福岡県保健環境研究所年報第32号，59−63，2005

原著論文
健康食品中の脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンの HPLC 分析法
森田邦正，毛利隆美，中川礼子
逆相系の高速液体クロマトグラフを使って，健康食品中の脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンの分析法を検討した．健康食品中の脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンはメタノールを用いて抽出し，Bond Elut Certify カートリッジ(固相抽出法)を用いて 2 ％アンモニア水-メタノール溶液でクリーンアップした．高速液体クロマトグラフはカラムに LiChrosorb RP18 (4.6 x 150mm, 5microns)を ，移動相に pH7 の 0.02mol/L リン酸塩緩衝液／メタノール（15:85，v/v）を用い，測定波長 225nm で分析した．本法による健康食品からの脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンの回収率はそれぞれ 88− 96%及び 87 − 91%，定量下限値はそれぞれ 0.001mg/g であった．
［キーワード : 脱Ｎ−ジメチルシブトラミン，シブトラミン，HPLC，固相抽出法，健康食品，食欲抑制剤］
１

C17H26ClN（ m.w. 279.85） である．

はじめに
平成 15 年 11 月，福岡県内の 2 業者が納豆菌ダイエットと称してインターネット販売した，いわゆる健康食品から脱Ｎ−ジメチルシブトラミンあるいはシブトラミンのいずれかが検出された．厚生労働省，宮崎県，富山県
及び福岡県の調査で，該当品は中国産原材料を輸入し国内で錠剤化したものであり，一物多名称で多種類の製品
脱Ｎ−ジメチルシブトラミンがあることが判明した．
シブトラミンは肥満症の治療薬として用いられる食欲抑制剤である1), 2), 3), 4)． 1997 年に米国において承認された

Meridia（ 商品名）には，シブトラミンの塩酸塩が 1 カ
プセル当たり 5， 10 及び 15mg 含まれている． Meridiaの投与量は初回毎朝 10mg から開始し，数週間後に 15mgまで増量する．日本では，エーザイ（株）とドイツのクシブトラミン

ノール AG 社が共同で臨床開発を行い， 2005 年の発売が予定されている．シブトラミンとその代謝物はノルア

図 1

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンのドレナリンとセロトニンの再吸収を阻害することにより化学構造式

食欲調節系の中枢に作用し，満腹感を亢進させる．シブトラミンの副作用として血圧上昇，心拍数増加，頭痛，シブトラミンに関する試験法として，血中のシブトラ口渇，便秘，鼻炎等がみられるが，食欲抑制剤のデック

ミン代謝物を逆相カラムと 0.1%トリフロロ酢酸・アセスフェンフルラミンにみられるような肺高血圧症や心臓トニトリル／ 0.1%トリフロロ酢酸(55:45, v/v)の 移動相弁膜症の副作用は認められない ．脱Ｎ−ジメチルシブを用いて LC/MS/MS で 測定する方法 6)と，健康食品中のトラミンはシブトラミンの主要な代謝物の１つである

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン 7)及びシブトラミン 8)を逆が，国内外で医薬品として承認されていない．

相カラムと 0.1%ギ酸アセトニトリルの移動相を用いて5)

図 1 に脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミン

LC/MS で 測定する方法が報告されている．近年，国民の化学構造式を示す．化学式は脱Ｎ−ジメチルシブトラの健康志向に伴っていわゆる健康食品に医薬品が添加さ

ミ ン が C15H22ClN（ m.w. 251.79）， シ ブ ト ラ ミ ン がれたものが，店頭や通信販売で流通するようになった．

福岡県保健環境研究所（〒818-0135 太宰府市大字向佐野39）- 59 -

このような無承認無許可医薬品あるいは健康被害が発生

タノールは和光純薬工業（株）製の HPLC 分析用を用するおそれがある製品について，著者らは健康被害を未いた．

然に防ぐため，医薬品等の成分検査を実施している．しかし，健康食品中の脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシ2 ％アンモニア水 -メタノール溶液はアンモニアを 2％含むアンモニア水-メタノール溶液を調製した．

ブトラミンを HPLC で 測定する方法は報告されていな
い．市販の健康食品には多種類の妨害成分が存在するた

２・２装置

め，HPLC を用いて分析するには精製が必要である．そ紫外吸光度検出器（ SPD-10AV） 及びデータ処理装置

こで，固相抽出法でクリーンアップし，HPLC で分析す（C-R3A）付 HPLC は島津製作所（株）製の LC10A を ，る方法を検討した．

カラムは GL サイエンス（株）製の LiChrosorb

RP18（4.6×150mm, 5 μ m）を使用した．
２実験方法

２・１２・３試薬

実験操作

シブトラミン標準品は Alexis 製 のシブトラミン塩酸

２・３・１塩（一水和物）を用いた．脱Ｎ−ジメチルシブトラミン

ミンの分析法

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラの標準品は市販されていないため，納豆菌ダイエットの健康食品 0.2g を 10ml の試験管に秤量し，メタノール該当品（商品名：美的身源）から精製した．脱Ｎ−ジメ

2ml で 2 回，10 分間振とう抽出した． 遠心分離（2500

チルシブトラミンは図 1 に示したシブトラミンの脱Ｎ−rpm）した後メタノール層を採取し， 0.1 ％酢酸を加えジメチル体の化学構造で塩基性物質である．このことかて 10ml とした． Bond Elut Certify カ ートリッジにメタら，美的身源を粉砕し，その 8g に 10 ％アンモニア水

ノール 2ml，水 2ml， 0.1 ％酢酸 2ml を順次流しコンデ25ml を加えて塩基性とし，エーテル 10ml で 3 回超音波ショニングした．これに抽出溶液 10ml を流し込み，脱抽出を行った．64g の美的身源から抽出したエーテル溶

Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンを保持させ液を合わせ濃縮乾固した後，乾固物中の脱Ｎ−ジメチルた後，水 2ml 及びメタノール 2ml で洗浄した．2 ％アン

シブトラミンを 20ml のメタノールで 2 回抽出した．抽モニア水 -メタノール溶液 4ml を流し脱Ｎ−ジメチルシ出液を濃縮乾固後，10ml のエーテルに溶かし，2N 水酸ブトラミン及びシブトラミンを溶出した．溶出液は窒素化ナトリウム溶液 30ml で軽く洗浄した．エーテル層をガス気流下 40 − 50 ℃で 2ml 以下まで濃縮後，メタノ分取後，水層はエーテル 10ml で 2 回抽出した．抽出液ールを加えて HPLC 用溶液を調製した．

を濃縮乾固後，メタノール 6ml を加えて溶かし，0.1 ％酢酸 12ml を加えた．この溶液をそれぞれ 10ml のメタ

２・３・２

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラ

ノール，水及び 0.1 ％酢酸を流してコンデショニングしミンの HPLC 測定条件

た Varian 製の Mega Bond Elut SCX カ ートリッジ（5g,カラムLiChrosorb RP18 (4.6×150mm, 5 μ m)20ml） に流し込み脱Ｎ−ジメチルシブトラミンを保持

カラム温度

45 ℃させた．カートリッジを水 10ml，メタノール 30ml で洗移動相

pH7 の 0.02mol/L リ ン酸塩緩衝液／メタノール（15:85， v/v）

った後，4 ％アンモニア水-メタノール溶液 30ml で脱Ｎ−ジメチルシブトラミンを溶出した．溶出液は濃縮乾固

流量1.2ml / 分

後，少量のエーテルに溶かしろ紙を用いてろ過した．そ注入量

10 μ lのろ液を濃縮乾燥して美的身源 64g から 29.2mg を得た．

測定波長225nm

HPLC で測定した結果，クロマトグラム上に単一ピーク

保持時間

脱Ｎ-ジメチルシブトラミン：5.6 分
シブトラミン：12.5 分が得られたことから，以後，二次標準品として本標準品を用いた．
脱Ｎ−ジメチルシブトラミンを 10.0mg， シブトラミ

３

結果及び考察ン塩酸塩を 11.9mg 秤量し，メタノールを加えて 50ml と３・１し冷暗所に保存した．用時，メタノールを加えて希釈しの HPLC 測定条件の検討
LiChrosorb RP18 の カラムを用いて脱Ｎ−ジメチルシ

20 − 50 μ g/ml の標準溶液を調製した．
陽イオン交換体ミニカラムは Varian 製の Bond

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミン

Elutブトラミン及びシブトラミンの HPLC の移動相を 2･3･2

Certify カートリッジ（ LRC, 300mg, 10ml） 及び Megaの測定条件で同様に検討した（図 2）． 0.6 ％ギ酸・ 0.5

Bond Elut SCX カ ートリッジ（5g, 20ml）を用いた．メ％トリエチルアミン溶液／アセトニトリル（20:80, v/v），- 60 -

pH7 の 0.02mol/L リ ン酸塩緩衝液／メタノール（ 15:85，は添加量のそれぞれ 0 ％， 1 − 2ml の溶出量は添加量のv/v）及び 0.04mol/L 酢 酸アンモニウム／メタノール／ト1.1 及び 0 ％ ，2 − 3ml の溶出量は添加量の 90.8 及び 91.3

リエチルアミン（20:80:0.05, v/v） の 3 種類の移動相い％，3 − 4ml の溶出量は添加量の 6.0 及び 5.6 ％ ，4 − 5ml

ずれも，良好な分離が得られた．トリエチルアミンを使の溶出量は添加量の 0 ％であった．このことからクリー用した移動相はカラムの平衡化に時間がかかるため，本ンアップ操作時において， 2 ％アンモニア水 -メタノー試験法では，図 2b に示した HPLC クロマトグラムの pH7ル溶液量は 4ml とした．実試料の測定時には溶出液をの 0.02mol/L リ ン酸塩緩衝液／メタノールを用いた．

窒素ガス気流下で 2ml 以下まで濃縮後，メタノールを加え 2ml にした．添加回収試験で得られた健康食品Ａ及びＢのクリーンアップ前のクロマトグラムを図 3a 及び図 3c に示す．図 3b 及び図 3d にクリーンアップ後のクロマトグラムを示す．このクリーンアップ操作によって健康食品中の共存物質を効果的に除去することができた．

図 23 種類の移動相；0.6 ％ギ酸・0.5 ％トリエチルア

ミ ン 溶 液 ／ ア セ ト ニ ト リ ル （ 20:80）（ a）， pH7 の0.02mol/L リ ン酸塩緩衝液／メタノール（ 15:85）（ b），0.04mol/L 酢 酸アンモニウム／メタノール／トリエチルアミン（20:80:0.05）（c）で測定した標準溶液（各々 250ng）

図 3の HPLC クロマトグラム

アップ後（b）及び健康食品Ｂのクリーンアップ前（c）

１，脱Ｎ−ジメチルシブトラミン；

健康食品Ａのクリーンアップ前（ a）とクリーンとクリーンアップ後（d）の HPLC クロマトグラム

２，シブトラミン

１，脱Ｎ−ジメチルシブトラミン；

３・２２，シブトラミン

共存物質の除去

試料抽出液中の共存物質を Bond Elut Certify カ ートリッジを用いてクリーンアップする方法を検討した．脱Ｎ

３・３

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンの回収率と再現性−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンそれぞれ 40

市販されている健康食品Ａ及びＢ（納豆菌を含有するμ g を Bond Elut Certify カ ートリッジに保持させ，2 ％ダイエット用健康食品）を用いて添加回収実験を行った．

アンモニア水 -メタノール溶液の溶出量を検討した．そ健康食品 0.2g に脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブの結果，2 ％アンモニア水-メタノール溶液 0 − 1ml でトラミンをそれぞれ 50 μ g 添加し実験操作に従って回は脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミン溶出量収率を求めた．繰り返し実験は 5 回行い，その結果を表 1- 61 -に示す．

Certify カ ートリッジを用いることにより共存物質を効

健康食品Ａの回収率は脱Ｎ−ジメチルシブトラミンが96.4 ％（ 89.8 − 99.5 ％ ），シブトラミンが 91.4 ％（ 84.2

果的に除去することができた．また，回収率，再現性ともにほぼ満足する結果を得た．

− 95.7 ％）であった．健康食品Ｂの回収率は脱Ｎ−ジメチルシブトラミンが 88.4 ％（83.1 − 91.1 ％ ），シブトラミンが 87.4 ％（ 83.7 − 94.0 ％）であった．変動係数
はいずれも 5 ％以内でありほぼ満足する結果を得た．本法による脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミン
定量下限値はそれぞれ 0.001mg/g で あった．
表1

健康食品からの脱Ｎ−ジメチルシブトラミン
及びシブトラミンの添加回収試験結果
脱Ｎ−ジメチルシブトラミン

シブトラミン

回収率 ± 標準偏差**
健康食品Ａ*

96.4 ± 3.9

91.4 ± 4.5

健康食品Ｂ*

88.4 ± 4.8

87.4 ± 4.2

図 4

脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンが検出された爽健美人（a）及び軽身美人（b）の HPLC ク*健康食品 A 及び B において脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラロマトグラム

ミンは不検出であった．

１，脱Ｎ−ジメチルシブトラミン；

２，シブトラミン**健康食品 0.2g に脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンをそれ文献

ぞれ 50 μ g 添加した．実験回数（n=5）1) C． Gundlah et al. : J. Pharmacol. Exp. Ther., 283,
本法を納豆菌ダイエットと称してインターネット販売された 6 種類の健康食品に応用した結果，脱Ｎ−ジメチ

581-591, 1997.
2) F. McMahon et al. : Arch. Intern. Med., 160,

ルシブトラミンあるいはシブトラミンのいずれかが検出

2185-2191, 2000.

された．6 種類の HPLC クロマトグラムは図4a 及び図4b3) A. Ruiz et al. : Obes. Res., 8, 71-82, 2000.に示す爽健美人あるいは軽身美人のクロマトグラムと類

4) R. Berkowitz et al. : JAMA, 289, 1805-1812, 2003.

似していた．脱Ｎ−ジメチルシブトラミンの含有量は爽

5) 深川光司・坂田利家：日薬理誌，118, 303-308,
2001.

健美人，美的身源，美姿宝及びスリムデルプロがそれぞれ 1.1， 0.7， 1.1 及び 1.3mg/g であった．シブトラミンの

6) J. Chen et al. : J. Chromatogr. B, 785, 197-203,

含 有 量 は 軽 身 美 人 及 び 貴 宝 美 健 が そ れ ぞ れ 1.7 及 び

2003.
7) 厚生労働省医薬食品局，薬食監麻発第1203002号脱2.0mg/g であった．

Ｎ−ジメチルシブトラミン
４．まとめ8) 厚生労働省医薬食品局，医薬監麻発第0411004号，健康食品中の脱Ｎ−ジメチルシブトラミン及びシブトラミンの HPLC 分析法を検討した．その結果，Bond Elut- 62 -第041101号シブトラミン

Analysis of Des-N-dimethylsibutramine and Sibutramine in Health Foods by HPLC
Kunimasa MORITA, Takami MOHRI, Reiko NAKAGAWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, JapanA reverse-phase HPLC method for determining des-N-dimethylsibutramine and sibutramine in health foods is described.
Des-N-dimethylsibutramine and sibutramine in health foods was extracted with methanol. The sample solution for HPLC wasapplied to Bond Elut Certify (solid phase extractions) with 2% ammonium hydroxide in methanol as the mobile phase. The
HPLC analysis was carried out on a column of LiChrosorb RP18 (4.6 x 150 mm, 5 microns) with 0.02 mol/L phosphate buffer
pH 7.0 /methanol (15:85, v/v) as the mobile phase and the eluate was monitored by UV detection at 225 nm. The average
recovery of des-N-dimethylsibutramine and sibutramine from health food was 88−96 and 87−91%, respectively. The
quantitation limit of this method was 0.001mg/g, respectively.
[Key words; des-N-dimethylsibutramine, Sibutramine, HPLC，Solid phase extractions, Health Food]- 63 -