福岡県保健環境研究所年報第33号，68−71，2006

原著論文
健康食品中の塩酸ヨヒンビンの HPLC 分析法
森田邦正，毛利隆美，中川礼子
逆相系の高速液体クロマトグラフを使って，健康食品中の塩酸ヨヒンビンの分析法を検討した．健康

食品中の塩酸ヨヒンビンは 0.1%酢酸メタノールで抽出し，Bond Elut Certify カートリッジ(固相抽出法)を用いて 2 ％アンモニア水-メタノール溶液でクリーンアップした．高速液体クロマトグラフはカラムに Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ (4.6 x 150 mm, 5 μ m)を，移動相に pH7 の 0.02 mol/L リン酸塩緩衝液／アセトニトリル（65:35，v/v）を用い，測定波長 276nm で分析した．本法による健康食品からの塩酸ヨヒン
ビンの回収率は 99.5%，定量下限値は 0.03 mg/g であった．
［キーワード : 塩酸ヨヒンビン，HPLC，固相抽出法，健康食品，強壮剤］

１

はじめに分であり，塩酸ヨヒンビンはその化学合成品である．強

平成17年12月，いわゆる健康食品から薬草に含まれる精・強壮剤として神経衰弱性陰萎，衰弱性射精，老人性医薬品成分が検出された．厚生労働省は健康被害の発生陰萎に適応される．副作用として皮膚の発疹・かゆみ，のおそれが否定できないため，「インヨウカク等強壮目めまい・発汗，吐き気・嘔吐の消化器症状が現れること的で使用される生薬が検出されたいわゆる健康食品につがある．日本では塩酸ヨヒンビンは医薬品に該当し，大いて」注意喚起し，商品名と検出された医薬品成分名を東製薬工業（株）の添付文書によると，1錠当たり 5 mg公表した．その成分名はヨヒンビン，インヨウカク及びを，1 日 3 回服用する．

ダミアナで，滋養・強精・強壮効果のある生薬として医図 1 に塩酸ヨヒンビンの化学構造式を示す．塩酸ヨヒ

薬品や薬用酒等に配合されている成分であった．塩酸ヨンビンの化学式は C21H26N2O3・HCl（m.w. 390.9）であヒンビンについては，東京都の調査で市販の健康食品 6る．
塩酸ヨヒンビンに関する試験法として，血中の塩酸ヨ製品から 0.10 − 5.56 mg ／錠，検出したと報告されて
1)

いる ．

ヒンビンを ODS カラムと pH3.5 の 0.025 mol/L リ ン酸塩緩衝液／メタノール（55:45，v/v）に 0.01 mol/L の ヘプ
タンスルホン酸ナトリウムを溶かした移動相を用いて測定する方法 2)と健康食品中の塩酸ヨヒンビンを ODS カラムとアセトニトリル／水／リン酸（450:550:0.7， v/v）に 6 g/L のラウリル硫酸ナトリウムを溶かした移動相を用いて測定する方法 1)，いずれもイオンペアー試薬を用いた試験法が報告されている．
近年，国民の健康志向に伴っていわゆる健康食品に医薬品が違法に添加されたものが，店頭や通信販売で流通するようになった．このような無承認無許可医薬品ある
いは健康被害が発生するおそれがある製品について，著図1

塩酸ヨヒンビンの化学構造式

者らは健康被害を未然に防ぐため，医薬品等の成分検査を実施している．しかし，市販の健康食品には多種類の妨害成分が存在するため，HPLC を用いて分析するにはヨヒンビンはアフリカ西部地方のヨヒンベという植物の葉や樹皮中に含まれるアルカロイドから抽出される成精製が必要である．そこで，固相抽出法でクリーンアップし，HPLC で分析する方法を検討した．

福岡県保健環境研究所（〒818‑0135 太宰府市大字向佐野39）- 68 -

２

実験方法

２・１

保持時間

塩酸ヨヒンビン：12.4分

試薬

塩酸ヨヒンビン標準品は和光純薬工業（株）製のヨヒンビン塩酸塩を用いた．塩酸ヨヒンビンを 20.0 mg 秤量

３

結果及び考察３・１

し，pH7 の 0.02 mol/L リ ン酸塩緩衝液／アセトニトリル

塩酸ヨヒンビンの HPLC 測定条件の検討

Cosmosil

5C18-MS-Ⅱのカラムを用いて10 ppmの塩酸（65:35，v/v）を加えて 100 ml とし冷暗所に保存した．

ヨヒンビン標準溶液を2種類の移動相：0.02 mol/L 酢酸

使用時，pH7 の 0.02 mol/L リ ン酸塩緩衝液／アセトニトアンモニウム溶液／アセトニトリル（70:30，v/v）及び pHリル（65:35，v/v）を加えて希釈し 10 − 20 ppm の標準

7の0.02 mol/L リン酸塩緩衝液／アセトニトリル（65:35，溶液を調製した．

v/v）で測定した．生体試料及び医薬品製剤の塩酸ヨヒ
Elut

ンビンの分析法として，ODSカラムを用いてイオンペア

Certify カートリッジ（LRC, 300 mg, 10 ml） を用いた．

ークロマトグラフィーが報告されているが 1−2)，図 2 のメタノール及びアセトニトリルは和光純薬工業（株）製HPLC クロマトグラムに示すように2種類の移動相いずの HPLC 分析用を用いた．2 ％アンモニア水-メタノー

れも良好な形状のピークが得られたため，本法ではイオ

ル溶液はアンモニアを 2 ％含むアンモニア水-メタノーンペアー試薬を使用しないことにした．

陽イオン交換体ミニカラムは Varian 製の Bond

ル溶液を調製した．
２・２装置

紫外吸光度検出器（SPD-10AV） 及びデータ処理装置（C-R3A）付 HPLC は島津製作所（株）製の LC10A を，カラムはナカライテスク（株）製の Cosmosil 5C18-MSⅡ（4.6 ~150mm, 5 μ m）を使用した．
２・３

実験操作

２・３・１

塩酸ヨヒンビンの分析法

健康食品 0.1 g を 10 ml の試験管に秤量し，0.1 ％酢酸

図22 種類の移動相；0.02 mol/L 酢 酸アンモニウム溶

メタノール 2 ml で 2 回，10 分間振とう抽出した．遠心液／アセトニトリル（70:30，v/v）（a），pH7 の 0.02 mol/L分離（2500 rpm）した後 0.1 ％酢酸メタノール層を採取

リン酸塩緩衝液／アセトニトリル（65:35，v/v）（b）でした．抽出液は窒素ガス気流下 40 − 50 ℃で約1 ml ま

測 定 し た 各 々 10ppm の 塩 酸 ヨ ヒ ン ビ ン 標 準 溶 液 ので濃縮後，0.1 ％酢酸溶液を加えて 5HPLC クロマトグラムml とした．Bond

Elut Certify カ ートリッジにメタノール 2 ml，水 2 ml，0.1１，塩酸ヨヒンビン％酢酸溶液 2 ml を順次流しコンデショニングした．これに抽出液 5 ml を流し込み，塩酸ヨヒンビンを保持さ

３・２標準溶液の溶剤が保持時間，ピーク高さ及びピせた後，水 2 ml 及びメタノール 2.5 ml で洗浄した．2ーク面積に及ぼす影響％アンモニア水-メタノール溶液 2 ml を流し塩酸ヨヒン

9種類の溶剤を用いて各々20 ppm 標準溶液を調製した

ビンを溶出した．溶出液は窒素ガス気流下 40 − 50 ℃で後，塩酸ヨヒンビンを2種類の移動相で測定し，標準溶乾固後，移動相を加えて 4 ml にした後，0.45 μ m のフ液の溶剤が保持時間，ピーク高さ及びピーク面積に及ぼィルターでろ過し HPLC 用試験溶液を調製した．

す影響を比較検討した．その結果を表1に示した．
0.02 mol/L 酢酸アンモニウム溶液／アセトニトリル

２・３・２

塩酸ヨヒンビンの HPLC 測定条件（70:30）で測定した場合，移動相に溶かした標準溶液

カラム

Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ(4.6 ~150mm, 5 μ m)の保持時間は11.5分であったが，塩基性のアンモニア水-カラム温度

45 ℃

メタノール溶液の保持時間は移動相溶液と比べて1.0−

移動相pH7 の 0.02 mol/L リ ン酸塩緩衝液／アセ3.5分長くなり，逆に酸性のリン酸及び酢酸系溶液の保トニトリル（65:35，v/v）

持時間は0.4−0.5分短くなった．ピーク高さは移動相溶

流量0.8 ml / 分液と比べて酸性のリン酸及び酢酸系溶液が33−40％低注入量

10 μ lく，かなりの低下を示したが，一方，ピーク面積は1−4

測定波長276nm％の低下で大きな変動は認められなかった．

- 69 -

pH7の0.02 mol/L リン酸塩緩衝液／アセトニトリル（6を添加した0.2 gの健康食品Ａに，表2に示す9種類の溶5:35，v/v）で測定した場合，移動相に溶かした標準溶剤を各々2 ml 加え5分間振とうした後，30秒間超音波処液の保持時間が12.4分であったのに対して，その他の溶理した．遠心分離後，上清を採取し 0.45 μ m のフィル剤が12.3−12.5分の範囲で大きな変動は認められなかっターでろ過し試料溶液とした．HPLC の移動相には pH7た．ピーク高さ及びピーク面積は0.2%アンモニア水-メの0.02 mol/L リン酸塩緩衝液／アセトニトリル（65:35，タノール溶液が移動相溶液と比べて13−15％低下したv/v）を使用し，塩酸ヨヒンビンをピーク面積で定量しが，その他の溶剤には大きな変動はみられなかった．本た．その結果，9種類の溶剤の抽出率は77％以上と良好

法では保持時間とピーク高さ及びピーク面積の変動が少であった（表2）．メタノールを使用した0.1%リン酸メ

なかった pH7の0.02 mol/L リン酸塩緩衝液／アセトニ

タノール及び0.1%酢酸メタノールが0.1%リン酸溶液及トリル（65:35，v/v）を移動相に使用することにした．

び0.1%酢酸溶液に比べて抽出率が向上した．本法では9種類の溶剤の中で最も抽出率が高かった0.1%酢酸メタ

表 1

標準溶液の溶剤が保持時間，ピーク高さ及びピノールを抽出溶剤に用いた．

ーク面積に及ぼす影響
表2

塩酸ヨヒンビンの抽出溶剤の検討

ピーク溶剤保持時間

高さ溶剤

面積

移動相：0.02 mol/L 酢酸ｱﾝﾓﾆｳﾑ溶液／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ
ﾒﾀﾉｰﾙ

11.5

81

840.1%ﾘﾝ酸ﾒﾀﾉｰﾙ

11.0

5898

0.1%ﾘﾝ酸溶液

11.0

64

101

0.1%酢酸ﾒﾀﾉｰﾙ

11.1

63

1000.1%酢酸溶液

11.1

65

1002%ｱﾝﾓﾆｱ水-ﾒﾀﾉｰﾙ溶液

15.0

111

98

0.2%ｱﾝﾓﾆｱ水-ﾒﾀﾉｰﾙ溶液

12.5

9385

0.02 mol/L 酢酸ｱﾝﾓﾆｳﾑ／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ

11.5

97102

ﾘﾝ酸塩緩衝液／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ *11.5100100

抽出率

ﾒﾀﾉｰﾙ

93.8

0.1%ﾘﾝ酸ﾒﾀﾉｰﾙ

88.0

0.1%ﾘﾝ酸溶液

78.9

0.1%酢酸ﾒﾀﾉｰﾙ

98.0

0.1%酢酸溶液

77.3

2%ｱﾝﾓﾆｱ水-ﾒﾀﾉｰﾙ溶液

84.6

0.2%ｱﾝﾓﾆｱ水-ﾒﾀﾉｰﾙ溶液

87.9

0.02 mol/L 酢酸ｱﾝﾓﾆｳﾑ溶液／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ

87.0

pH7の0.02 mol/L ﾘﾝ酸塩緩衝液／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ

88.5*健康食品Ａにおいて塩酸ヨヒンビンは不検出であった．
**0.2g の健康食品Ａに塩酸ヨヒンビンをそれぞれ40 μ g 添加した．実験

移動相：pH7の0.02 mol/L ﾘﾝ酸塩緩衝液／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ

回数1回

ﾒﾀﾉｰﾙ

12.4

9091

0.1%ﾘﾝ酸ﾒﾀﾉｰﾙ

12.3

8890

0.1%ﾘﾝ酸溶液

12.4

99

98

0.1%酢酸ﾒﾀﾉｰﾙ

12.3

98

98

0.1%酢酸溶液

12.4

93

93

2%ｱﾝﾓﾆｱ水-ﾒﾀﾉｰﾙ溶液

12.5

102

97

0.2%ｱﾝﾓﾆｱ水-ﾒﾀﾉｰﾙ溶液

12.4

87

85

0.02 mol/L 酢酸ｱﾝﾓﾆｳﾑ／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ

12.4

9392

保持させ，2 ％アンモニア水-メタノール溶液の溶出量

ﾘﾝ酸塩緩衝液／ｱｾﾄﾆﾄﾘﾙ *12.4100100を検討した．その結果，2 ％アンモニア水-メタノール

３・４

共存物質の除去

試料抽出液中の共存物質を Bond Elut Certify カ ートリッジを用いてクリーンアップする方法を検討した．塩酸
ヨヒンビン200μ g を Bond Elut Certify カ ートリッジに溶液 0 − 1 ml では塩酸ヨヒンビン溶出量は添加量の97.
*pH7の0.02 mol/Lリン酸塩緩衝液／アセトニトリル

3％，1 − 2 ml の溶出量は添加量の2.3％，2 − 3 ml の**各々の溶剤で20ppm塩酸ヨヒンビン標準溶液を調製した．

溶出量は添加量の 0 ％であった．このことからクリーン**ピーク高さ及びピーク面積はpH7の0.02 mol/Lリン酸塩緩衝液／アセアップ操作時において，2 ％アンモニア水-メタノール溶液量は2 ml とした．実試料の測定時には溶出液を窒トニトリル移動相溶液を100として示した．

素ガス気流下で乾固後，移動相を加えて4 ml にした．
３・３

抽出溶剤の検討

図3に添加回収試験で得られた健康食品Ｂのクリーン

HPLC クロマトグラム上で，塩酸ヨヒンビンの保持時アップ前（a）とクリーンアップ後（b）の HPLC クロ間付近に共存する成分が認められなかった健康食品Ａをマトグラムを示した．Bond Elut Certify カ ートリッジを用いて，抽出溶剤の検討を行った．塩酸ヨヒンビン40μ g

用いることにより，クリーンアップ前の健康食品Ｂのク- 70 -

ロマトグラム上で，塩酸ヨヒンビンと重なるピークと塩った（S/N≧5）．

酸ヨヒンビンの保持時間付近に出現するピークを効果的に除去することができた．

本法を医薬品として販売されている大東製薬工業（株）製のガラナポーンに応用した（図3c）．その結果，塩酸ヨヒンビンが47 mg/g検出された．図3cに示すように，本法は医薬品試験にも十分応用できることが分かった．
表3

健康食品からの塩酸ヨヒンビンの添加回収試験
結果
塩酸ヨヒンビン回収率 }標準偏差**
健康食品Ｂ

99.5 } 3.1*健康食品 B において塩酸ヨヒンビンは不検出であった．
**健康食品 0.1g に塩酸ヨヒンビンをそれぞれ40 μ g 添加した．実験回数（n=4）

図3

健康食品Ｂのクリーンアップ前（a）とクリーンア
４．まとめップ後（b）及び医薬品（c）のHPLCクロマトグラム

健康食品中の塩酸ヨヒンビンの HPLC 分析法を検討

１，塩酸ヨヒンビン

した．その結果，ODSカラムに pH7 の 0.02 mol/L リ ン酸
３・５

塩酸ヨヒンビンの回収率と再現性

塩緩衝液の移動相を使用し良好な分離が得られた，また市販されている健康食品Ｂ（納豆菌を含有するダイエ

Bond Elut Certify カ ートリッジを用いることにより共存ット用健康食品）を用いて添加回収実験を行った．健康物質を効果的に除去することができた．回収率，再現性

食品 0.1 g に塩酸ヨヒンビンをそれぞれ40 μ g 添加し実ともにほぼ満足する結果を得た．

験操作に従って回収率を求めた．繰り返し実験は4回行
文献

い，その結果を表3に示した．
塩酸ヨヒンビンの回収率は 99.5 ％（96.4−102.5％）

1) 宮武ノリヱ他：東京衛研年報，51, 29-33, 2000.

で，変動係数は 5 ％以内でありほぼ満足する結果を得た．

2) R. Chiba et. al. : Anal. Sci., 1 4，975-978, 1998.

本法による塩酸ヨヒンビン定量下限値は 0.03 mg/g で あAnalysis of Yohimbine Hydr ochlor ide in Health Foods by HPLC
Kunimasa MORITA, Takami MOHRI, Reiko NAKAGAWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, JapanA reverse-phase HPLC method for determining yohimbine hydrochloride in health foods is described. Yohimbinehydrochloride in health foods was extracted with 0.1% acetic acid in methanol. The sample solution for HPLC was applied to
Bond Elut Certify (solid phase extractions) with 2% ammonium hydroxide in methanol as the mobile phase. HPLC analysis was
carried out on a column of Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ (4.6 x 150 mm, 5 microns) with 0.02 mol/L phosphate buffer pH 7.0/acetonitrile (65:35, v/v) as the mobile phase and the eluate was monitored by UV detection at 276 nm. The average recovery ofyohimbine hydrochloride from health food was 99.5%. The quantitation limit of this method was 0.03mg/g.
[Key words; Yohimbine hydrochloride, HPLC，Solid phase extractions, Health Food]- 71 -