課題番号研究課題名：26 指 107：

非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)患者における疾患感受性遺伝子候補としてのHLA ハプロタイプ解析-肝疾患診療連携拠点病院のネットワークを通じた大規模な遺伝子解析への展開主任研究者名 ：柳瀬 幹雄
分担研究者名 ：キーワード：NAFLD/NASH、メタボリックシンドローム、脂肪肝研究成果：【研究計画と成果】〔研究計画の概要〕
1)

非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)の疾患感受性遺伝子候補として、HLA ハプロタイプ解析をおこなう。本研究の第一段階として、当センター(NCGM センター病院・国府台病院・肝炎・免疫研究センター)を主施設とした多施設共同研究にてパイロット研究を先行させる。研究の対象は、肝生検による病理学的診断により NASH と確定された症例で、十分なインフォームドコンセントのもとでの書面での同 意 が 得 ら れ た 患 者 の 約 300 症 例 を 目 標 と す る 。 NASH 診 断 で は 、 Matteoni 分 類(Gastroenterology.1999;116:1413-9.)、Brunt 分類(Am J Gastroenterol.1999;94:2467-74.)、NAFLD
activity score(NAS) (Hepatology.2005;41:1313-21.)を用いて専門病理医がおこなう。
それぞれの NASH 患者について、診断目的の肝生検時に採取された凍結肝組織あるいは末梢血単核球から抽出された DNA 検体を収集し、HLA 遺伝子のタイピングをおこない、NASH に特徴的なタイプについて検討する。この際、副次的に身体所見、問診、血液検査、画像検査データに加え、血清解析にて NASH 病態に関わる各種マーカー、SNP 解析では PNPLA3 についての解析などを実施し、データを収集・管理する。健常コントロール群として、公開データベースを利用して健常者データを含めた統計解析も予定する。

2)

第一段階で、予想されるように HLA ハプロタイプと NASH との強い関連性が示唆されれば、その後は更に多くの肝疾患診療連携拠点病院を中心に構成された全国 NASH 研究グループの共同研究を通じて、大規模な臨床研究による検証とデータベースの構築をおこなう予定である。
NASH 病態進展の”2nd hit”にあたる NASH 肝炎と HLA を介する免疫機構との関係について機序解明の基礎研究を立案するというような、基礎と臨床の橋渡し研究の一環として予定する。

〔達成度・成果〕
3 年の研究計画の 2 年目終了の時点にて、各施設の倫理委員会での承認や UMIN 登録を経た上で、登録症例数が目標症例数 300 症例に到達し、多施設共同での臨床データベースを作成した。収
集された DNA 検体を用いて、NCGM 肝炎・免疫研究センターにて HLA ハプロタイプ解析を実施し、現在解析作業に入っている。今後、公開データベースから得られる情報などを用いて、健常コントロール群を設定し、更に詳細な解析を行う予定である。
以上から、研究経過の進捗は概ね良好と判断している。

Subject No.:
Title:

Researchers:
Key words:
Abstract:

26-Shi-107
Analysis of HLA Haplotype as a Candidate Gene Encoding Disease
Susceptibility in Patients with Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH):
Progression into Large-Scale Gene Analysis via the Network of Core
Hospitals for Linked Liver Disease Management
Mikio Yanase
NAFLD/NASH, metabolic syndrome, fatty liver
Study outcome:[Study Plan and Outcome](Study Plan Outline)
1) We shall analyze HLA haplotype as a candidate gene encoding disease susceptibility inpatients with nonalcoholic steatohepatitis (NASH). As a preliminary step to this study, apilot study will be carried out at several facilities, including the main facility NCGM
Central Hospital, Kohnodai Hospital and the Research Center for Hepatitis andImmunology. The goal is to enroll about 300 patients with a definitive diagnosis ofNASH confirmed by pathological examination of biopsied liver tissue who are willing toprovide written informed consent after receiving a full explanation about the study. The
diagnosis of NASH will be made by specialists in pathology, based on the Matteoni
classification (Gastroenterology. 1999;116:1413-9), Brunt classification (Am J
Gastroenterol. 1999;94:2467-74) and NAFLD activity score (Hepatology.
2005;41:1313-21).
In each patient with NASH, DNA will be extracted from frozen liver tissue (collected byliver biopsy for diagnosis) or peripheral blood mononuclear cells, stored, and used for
HLA gene typing to analyze the HLA types characteristic of NASH patients. This analysis
will be accompanied by secondary analysis of the physical findings, history, blood tests,imaging, data on various markers of NASH obtained by serological testing, and data on
the PNPLA3 gene obtained by single nucleotide polymorphism analysis. Data collectionand management will be conducted in this way. A healthy control group will beincorporated into the statistical analysis of this study, using the information available fromopen databases.
2) If a strong association between HLA haplotype and NASH is suggested, as anticipated, in
this first step of the study, verification through a large clinical study and establishment ofa database will be undertaken through collaborative studies by the Nationwide NASH
Study Group, organized primarily by many core hospitals for linked liver disease
management.
This study is planned within the framework of bridging research between basic andclinical fields, including planning of basic research for elucidation of the mechanism
underlying the relationship between NASH hepatitis and the HLA-mediated immune
system (corresponding to the “second hit” of NASH progression).
[Goal Achievement Rate/Progress/Outcome]We are in the second year of the 3-year project. We have received approval for this study
from the ethics committee in each participating facility. We have completed registration with
the Clinical Study Registration System (UMIN Registration). Case registration at all
participating facilities and receipt of samples and data from these facilities have been
completed for 300 cases. A clinical database has been created jointly by theparticipating facilities. HLA haplotype analysis has been conducted on the DNA samples
collected to date at the Research Center for Hepatitis and Immunology, and the statisticalanalysis is in progress. From here, a healthy control group will be incorporated into the study,
Researchers には、分担研究者を記載する。

using the information available from open databases to perform the statistical analysis in moredetail.
We judge that the progress of the study to date is reasonably acceptable.

Researchers には、分担研究者を記載する。

【目的と必要性】
本邦で急増するメタボリックシンドローム患者の予後に大きく関わる進行型NASHの病態解明を進める。

多因子疾患であるNASH病態には環境因子、遺伝的因子双方の強い関与が明らかであるが、本研究ではNASHの疾患感受性遺伝子として、免疫に関与するヒト白血球抗原(HLA)のハプロタイプに注目する。

【方法】
NCGMを主とした多施設共同研究の形式で、NASH診療に携わる複数施設の検体提供のもと、肝炎・免疫研究センターにおいてNASH患者の遺伝子解析をおこない、NASHとHLAハプロタイプとの関連性とその意義について検討する。

【期待される成果】
NASH病態の中でも、関連性の強い遺伝子因子としてHLAの関与を明らかにすることで、NASH病態進展に影響する「炎症」との機序解明に繋がる。

n306

gender (M/F)
50±1628±53.5±1.4

ageBMINAS
Matteoni 140

Matteoni 252

Matteoni 3106

Matteoni 410846±1426±426±638±3161±4548±1726±424±644±2474±61

48±1528±523±6
58±34
96±59

54±15
28±5
19±672±127
84±63

Ⅳ型コラーゲン4.8±1.4

5.0±2.1

5.0±1.4

5.4±2.5NAS

1.9±0.8

2.5±0.94.2±1.1

4.0±1.2

ngender (M/F)
age
BMI
Plt
AST
ALT研究発表及び特許取得報告について

課題番号：26指107

研究課題名： 非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)患者における疾患感受性遺伝子候補としてのHLAハプロタイプ解析-肝疾患診療連携拠点病院のネットワークを通じた大規模な遺伝子解析への展開主任研究者名：

柳瀬幹雄

論文発表
論文タイトル

著者

掲載誌

掲載号

年

Hepatitis B virus vaccination-related
seroprevalence among health-care
Yanase M, et al. Hepatol Res.
personnel in a Japanese tertiary medicalcenter.

in press

2016

Generalized granuloma annulare
successfully treated with narrowband
Mikami E, Yanase
J Dermatol.
ultraviolet B and anti-hepatitis C virus M, et al.
therapy.

in press

2016

15(6):645-53

2015

Deficiency of eNOS exacerbates earlyBMC
stage NAFLD pathogenesis by changing the Nozaki Y, et al.
Gastroenterol.
fat distribution.

15(1):177.
doi:10.1186/s12876-015-0409-9

2015

Usefulness of Magnetic Resonance Imaging
for the Diagnosis of Hemochromatosis
with Severe Hepatic Steatosis inNozaki Y, et al. Intern Med.
Nonalcoholic Fatty Liver Disease: A Case
Report.

in press

2016

Tokushige K,
Hyogo H, Nakajima
T, Ono M,
Kawaguchi T,
Honda K, Eguchi
Y, Nozaki Y,
Kawanaka M,
Tanaka S, Imajo
J Gastroenterol. in press
K, Sumida Y,
Kamada Y, Fujii
H, Suzuki Y,
Kogiso T, KarioY, Munekage K,
Kuromatsu R,
Ooeda S, Yanase
Y, et al.

2015

Ledipasvir and sofosbuvir fixed-dose
combination with and without ribavirinfor 12 weeks in treatment-naive andpreviously treated Japanese patientswith genotype 1 hepatitis C: an openlabel, randomised, phase 3 trial.

Hepatocellular carcinoma in Japanesepatients with nonalcoholic fatty liverdisease and alcoholic liver disease:
Multicenter survey.

Mizokami M,
Yokosuka O,
Takehara T,
Sakamoto N,
Lancet InfectKorenaga M,Dis.
Mochizuki H,
Nakane K, Enomoto
H, Ikeda F,
Yanase M, et al.

研究発表及び特許取得報告について

学会発表
タイトル

発表者

学会名

場所

年月

発表者

発表先

場所

年月日

該当なし
その他発表(雑誌、テレビ、ラジオ等)
タイトル
該当なし
特許取得状況について※出願申請中のものは(発明名称)記載のこと。
特許権者(申請者）
登録番号
登録日(申請日)（共願は全記載）

該当なし※該当がない項目の欄には「該当なし」と記載のこと。
※主任研究者が班全員分の内容を記載のこと。

出願国