J. Inst. Electrostat. Jpn.

論

静電気学会誌，34, 2 (2010) 81-86

文

銀電極を用いた高電圧パルス殺菌装置による種々の菌に対する不活性化効果
吉 野

功＊,＊＊,1，大 嶋 孝 之＊, 谷 野 孝 徳＊, 佐 藤 正 之＊（2009 年 10 月 6 日受付; 2009 年 12 月 15 日受理）

Effect of Silver Electrode in High Voltage Pulsed Electric Field System on
Inactivation of Various Microorganisms
Isao YOSHINO＊,＊＊,1 , Takayuki OHSHIMA,＊ Takanori TANINO＊ and Masayuki SATO＊(Received October 6, 2009; Accepted December 15, 2009)

Inactivation effects of the silver electrode high voltage pulse (Ag-PEF) system on 3 kinds of microorganisms,
Staphylococcus aureus, Aspergillus niger spore, and Saccharomyces cerevisiae were studied. Ag-PEF systemsignificantly decreased survival ratio of each microorganism. In case of 7 kV Ag-PEF treatment was applied to eachmicroorganism, no colony formation of S. aureus, A. niger and S. cerevisiae was observed after 5, 7.5 and 1.25 mintreatment, respectively. Moreover, the inactivation effect of the Ag-PEF system on the mixture solution of 3
microorganisms above and Escherichia coli was confirmed. In addition, the comparison of inactivation effects with
Ag-PEF and PEF in the presence of silver nitrate instillation had shown that Ag-PEF exhibits synergistic
microorganism inactivation effect.
1.

はじめに

と外側の電位差を生じさせることにより，膜に電気穿孔とい人類が生活する環境には様々な微生物が存在し，衣食住す

われる破壊をさせる殺菌法である4)．電圧印加は短時間であべてにその影響を受けている．細菌は細胞膜や細胞壁の形状るため，温度上昇が少ない非加熱殺菌であり，現在実用化ににより，グラム陰性菌とグラム陽性菌に大きく分類され，殺向け研究が行われている5-8)．また，PEF による菌の不活性化

菌耐性も異なる．公的な抗菌試験1)では，大腸菌と黄色ブド効果を高めるためにオゾンなど他の非加熱殺菌手法9,10)とのウ球菌がそれぞれの代表菌として用いられている．また真菌併用も研究されており，我々は前報11)で銀との併用効果を検では清酒製造などに利用されているコウジカビや酵母など証した．銀の殺菌効果については古くから知られており12)，の有用菌がいる一方で，カビは環境中で様々な場所に発生し殺菌原理としては銀が触媒となり作られる活性酸素によて不潔感を与えると共に，工業製品などにも腐食や変形などるもの13)，細胞内部に侵入した銀による生体活動の阻害によ危害をもたらす．抗カビ試験法2)も公的に定められており，るものが考えられている14)が，カビには効きにくいとされて

黒コウジカビ（Aspergillus niger）も対象となる菌種の一つでいる15)．我々は銀ワイヤーをスパイラル電極に用いた高電圧

ある．

パルス(Ag-PEF)処理装置を作成しグラム陰性菌である大腸

これらの菌を殺菌するために様々な手法が用いられているが，その中でも加熱処理は現在最も広く用いられている方菌に対する効果を検証した結果，PEF 処理に比べて Ag-PEF
処理が大きな不活性化効果を持つことを見いだした11)．

法である．しかし，加熱処理は菌以外の成分にも影響を及ぼ

PEF 処理による菌の不活性化効果は菌の大きさや，膜の構すため，非加熱的な殺菌手法が研究されている3)．高電圧パ造により異なるとされており16)，実用化するためには様々な

ルス電界印加法（PEF）は，対象となる菌体の細胞膜の内側菌に対する不活性化効果の知見の集積が必要である．大腸菌については，多くの報告があり8,10,11)，Sato らはスパイラル電

キーワード：パルス電界，銀，非加熱殺菌* 群馬大学大学院工学研究科環境プロセス工学専攻（376-8515 群馬県桐生市天神町 1-5-1）
Department of Chemical and Environmental Engineering,
Gunma University, 1-5-1 Tenjin-cho, Kiryu, Gunma
376-8515, Japan** 群馬県立産業技術センター（379-2147 群馬県前橋市亀里町 884-1）
Gunma Industrial Technology Center, 884-1 Kamesato,
Maebashi, Gunma 379-2147, Japan1
yoshino-i@pref.gunma.jp

極を用いた20分の処理で最大5桁以上の生菌数の減少を報告
している17)．黄色ブドウ球菌については Evendilek らが35kV/cm，450 s のパルス処理により最大3桁の生菌率の減少
を18)，酵母についても Donsì らが22.6 kV/cm, 1,500 s の条件
でパルス電圧印加時に攪拌することにより，6桁以上の効果が得られると報告している19)．このように PEF 処理による微生物の不活性化の報告例は非常に多く存在するが，同一条件で様々な菌に対する不活性化効果の比較を行った報告はあまりなされていない．また，複数の菌種が混在する際の不活82(36)

静電気学会誌

第 34 巻

第 2 号 (2010)

性化効果を確認した知見は報告されていない．そこで本研究であった．長さ 330 mm のワイヤー電極を 15 mm のピッチ

では，大腸菌（グラム陰性菌）の不活性化に効果的であったで対向らせんに 5 巻きし，電極間隔を 7.5 mm とした．ス

Ag-PEF による不活性化試験を同一条件下で黄色ブドウ球菌

テンレス電極槽は両方のワイヤーを直径 0.8 mm のステン

（グラム陽性菌），黒コウジカビ胞子（真菌胞子），酵母（真レスに，銀電極槽は高電圧側を直径 0.8 mm の銀ワイヤー菌）に対して行い，さらに単一の菌への効果だけではなく大に変更した同規格のものを作製した．試料液体は下から上腸菌も含めた4菌種の混在状態に対する不活性化効果の比較

への流路とし，気泡が滞留しないようにした．ビーカーにを行ったので報告する．

入れた試料液体 200 mL をスターラーで攪拌し，マイクロチューブポンプで流量 160 mL/min に設定して循環させた．

2.

実験方法

硝酸銀滴下試験では，マイクロチューブポンプを用いて 100

2.1 実験装置 11)

ppm に希釈した硝酸銀標準液(関東化学社製)を 1 mL/1 min のコンデンサ容量8 nF，周波数50 Hz の高電圧パルス電源

速度で試料液体の入ったビーカーに滴下した．

8)を用いた ． 出力パルス電 圧と電流は高 電圧プローブ

2.2 使用菌体(P6015A, Tektronix）と広帯域電流変換器（M411, Pearson

標準試験菌株としては黄色ブドウ球菌（Staphylococcus

Electronics ） で 測 定 し ， デ ジ タ ル オ シ ロ ス コ ー プ

aureus NBRC12732），黒コウジカビ胞子（Aspergillus niger(TDS1002,Tektronix）で観察した．図1にステンレス電極とNBRC6341 spores），酵母（Saccharomyces cerevisiae きょ

銀電極を用いた場合の処理開始直後の典型的な電圧波形

うかい酵母 901 号），大腸菌（Escherichia coli K-12）を用(7 kV）を示す．銀電極を用いた場合には処理時間と共にいた．

若干半値幅が小さくなる傾向があったが，電圧波形的には試料液の調整条件を下記に示す．

大きな差異は認められなかった。

2.2.1

黄色ブドウ球菌

処理槽には二重らせん電極を用いた．これは図 2 のよう

標準寒天平板培地（栄研化学製）で 37℃，24 時間前培に径の異なる 2 つのアクリル円筒を組み合わせ，その隙間養した培地上のコロニーを標準白金耳で 4 白金耳量（約 8に 2 本のワイヤー電極を対向にらせん状に巻いたもので，mg）採取し，5 mL の滅菌水に懸濁したものを黄色ブドウ

一方が高電圧側，一方がアース側となっている．処理槽は

球菌懸濁液とした．200 mL の滅菌蒸留水に 0.5 mL の菌懸内径 19 mm，外径 22 mm，長さ 87 mm で処理容量は 8.4 mL

濁液を加え，試料液体とした．初期菌体濃度は，約 5×106
cfu/mL であった．
2.2.2

黒コウジカビ胞子PDA 培地（栄研化学製）で 25℃，7 日前培養し，5℃で保存した後，培地上の胞子を標準白金耳で 50 白金耳量（約100 mg）採取し，10 mL の滅菌した 0.01% Tween 80（関東化学社製）溶液に懸濁し，黒コウジカビ胞子懸濁液とした．
200 mL の滅菌蒸留水に 2 mL の菌懸濁液を加え，試料液体とした．初期菌体濃度は，約 5×10４ cfu/mL であった．

図 1 パルス波形：(a)ステンレス電極，（b）
銀電極
Fig. 1 Pulsed electric field (PEF) wave formof (a) stainless steel wire or (b) silver wire as
the high voltage electrode.

図 2 パルス殺菌装置の概略図
Fig. 2 Schematic diagram of PEF treatment system.

銀電極を用いた高電圧パルス殺菌装置の種々の菌に対する不活性化効果（吉野功ら）
2.2.3

1

酵母

Survival ratio [-]10 mL の YPG 培地（Glucose 40 g/L, Peptone 10 g/L, Yeast
extract 5 g/L, KH2PO4 5 g/L, MgSO4･7H2O 2 g/L）で 30℃，
18 時間振とう培養した菌液を 3,000 rpm，5 min 遠心分離し，上澄みを捨ててから滅菌水 5 mL を加えて懸濁させたものを，酵母懸濁液とした．200 mL の滅菌蒸留水に 0.5 mL の菌懸濁液を加え，試料液体とした．初期菌体濃度は，約

大腸菌

10-2
10-3
10-4

(a)
Stainless steel
0 kV
4 kV
7 kV
12 kV

10
20
Treatment time [min]1

10 mL の LB 培地（Peptone 10 g/L, Yeast extract 5 g/L, NaCl

Survival ratio [-]5 g/L）で 30℃，18 時間振とう培養した菌液を 3,000 rpm，
5 min 遠心分離し，上澄みを捨ててから滅菌水 5 mL を加えて懸濁させたものを，大腸菌懸濁液とした．200 mL の滅菌蒸留水に 0.5 mL の菌懸濁液を加え，試料液体とした．
初期菌体濃度は，約 1 × 107 cfu/mL であった．
2.2.5

10-1

10-5
0

5×105 cfu/mL であった．
2.2.4

83(37)

10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
0

混合菌液

単一菌種試験と同じ初期菌体濃度になるように，4 種の(b)Silver
0 kV
4 kV
7 kV
12 kV

10
20
Treatment time [min]

菌懸濁液を 200 mL の滅菌蒸留水に加え混合菌試料液体と図 3 PEF 処理印加電圧の違いによる黄色ブドウ球菌のした．

生菌率変化：(a)ステンレス電極，(b) 銀電極

2.3 生菌率の測定法

Fig. 3 Time courses of S. aureus survival ratios during various

高電圧パルス処理中，一定時間ごとに試料液を 0.5 mL

voltage PEF treatments with (a) stainless steel wire or (b)サンプリングし，あらかじめ用意した滅菌生理食塩水 4.5

silver wire as the high voltage electrode. Values are means ±mL に加え，適当な濃度に希釈した後，原液および希釈液

S.E. (n ≥ 4).

0.1 mL を平板培地に塗布した．大腸菌，黄色ブドウ球菌にかった．一方，銀電極を用いた場合では，パルス電圧無印

ついては，標準寒天培地（栄研化学製）にて 37℃で 18 時加(Ag-0 kV)処理時の生菌率は，処理時間 5 min，20 min

間培養，黒コウジカビ，酵母については Triton X-100

でそれぞれ 2.4 × 10-1，5.9 × 10-1 であり，わずかではあるが(SIGMA 社製)を 0.25%添加した PDA 培地（栄研化学製）

不活性化効果が確認された．これは，試料液中の菌の銀電にて 30℃，48 時間培養，形成したコロニー数を計測する

極への接触や，微量に溶出した銀の効果と考えられた．しかことにより生菌数を求めた．生菌率(S)は以下の式で求めた．

し，前報 11)で大腸菌に対する同条件の不活性化効果が 2.4 ×(1)

S=N/N0

ここで，N は処理後の生菌数，
N0 は処理前の生菌数である．
2.4 銀濃度の測定方法

10-5 であったのと比較してかなり小さいことから，黄色ブドウ球菌は銀に対して耐性があると考えられる．
銀電極を用いた PEF(Ag-PEF)処理 4 kV の生菌率は処理

銀濃度の測定は，サンプリングした試料溶液を ICP-AES

時間の経過と共に大幅に減少し，処理時間 20 min では寒（optima 3000DV パーキンエルマー社）を用いて測定した．

天培地上にコロニーの形成は認められなかった．黄色ブド
ウ球菌の生菌率は PEF 処理(4 kV，10 min)では 6.1 × 10-1，

3.

実験結果および考察

Ag-0kV 処理(0 kV，10 min)では 4.6 × 10-1 とそれぞれ 1 桁

3.1 単一の菌種に対する不活性化効果も減少しなかったのに対して，Ag-PEF 処理(4 kV，10 min)

3.1.1

では 1.0 × 10-5 と 5 桁以上の減少が確認されたことから，

黄色ブドウ球菌に対する不活性化効果

図 3 にステンレス電極および銀電極を用いた PEF 処理における各種印加電圧による黄色ブドウ球菌生菌率の経時

Ag-PEF 処理により黄色ブドウ球菌に対しても大きな不活性化効果が得られることが明らかとなった．

変化を示す．ステンレス電極を用い PEF 処理を行った場合

黄色ブドウ球菌に対する Ag-PEF 処理では 7 kV，12 kV(PEF)，パルス電圧が上がるにつれて菌に対する不活性化と電圧が上がるにつれて不活性化効果は顕著に大きくな

効果は大きくなったが，12 kV，20 min 後の生菌率は 1.5 ×

り，7 kV，12 kV の電圧印加では，それぞれ処理時間 5 min，

-1

10 であり，前報-311)で試験した大腸菌に対する同条件の効

果が 1.9 × 10 であったのに対して不活性化の程度は小さ

2.5 min 以上では寒天培地上にコロニーの形成は認められなかった．

84(38)
3.1.2

第 34 巻静電気学会誌

第 2 号 (2010)

よる酵母生菌率の経時変化を示す．PEF 処理においても印

黒コウジカビ胞子に対する不活性化効果

図 4 に PEF および Ag-PEF 処理における各種印加電圧に加電圧が上がるにつれて菌の不活性化効果は大きくなり，

よる黒コウジカビ胞子生菌率の経時変化を示す．PEF 処理

PEF 処理（12 kV，20 min）の生菌率は 2.0 × 10-4 であった．

では印加電圧が上がるにつれて，不活性化効果は大きくな

これは今回試験した菌の中で最も PEF 処理の不活性化効-1

ったが,12 kV，20 min 処理後の生菌率は 1.9 × 10 であり，果が大きいものであり，前報 11)の大腸菌と比較しても不活

黒コウジカビ胞子についても黄色ブドウ球菌と同様に大性効果は大きかった．また，Ag-0kV の生菌率は，処理時腸菌よりも耐性があることが確認された．一方，Ag-0kV

間 2.5 min で 3.7 × 10-3 であり，5 min 以降では寒天培地上

処理の生菌率は，処理時間 5 min では 5.9 × 10-1 と黄色ブドにコロニーの形成は認められなかった．これは酵母が銀に-2

ウ球菌と同等であったが，20 min では 4.9 × 10 とやや大対して耐性が低く容易に不活性化されてしまうためであきな不活性化効果が認められた．Ag-PEF 処理 4 kV では

ると考えられる．Ag-PEF 処理では，4 kV，7 kV，12 kV の-3

黒コウジカビ胞子生菌率は処理時間 10 min で 2.7 × 10 で-1あり，PEF 処理(4 kV，10 min)では 6.4 × 10 ，Ag-0kV 処-1

理(10 min)では 2.9 × 10 とそれぞれ 1 桁も減少しなかった

各印加電圧において，処理 1.25 min 後には，寒天培地上にコロニーの形成は認められず酵母に対し不活性化効果が非常に大きいことが示された．

のに対して，2 桁以上の高い不活性化効果が得られた．さ

3.1.4

らに処理時間 20 min では寒天培地上にコロニーは認めら

これまでの結果から PEF ならびに Ag-PEF 処理の各菌種にれなかった．黄色ブドウ球菌の場合と同様に黒コウジカビ

対する不活性化効果を比較すると，PEF 処理において酵母で胞子の場合にも Ag-PEF 処理では 7 kV，12 kV と印加電圧

は大腸菌以上に不活性化効果は大きかったが，黄色ブドウ球が上がるにつれて不活性化効果は顕著に大きくなった．パ菌，黒コウジカビ胞子では不活性化効果が小さかった．一方，

ルス電圧印加 7 kV，12 kV では，それぞれ処理時間 7.5 min，

Ag-PEF 処理では PEF 処理に比べ大きな不活性化効果が得ら

3.75 min 以上では寒天培地上にコロニーの形成は認められれた．酵母と大腸菌は 4 kV から非常に大きな不活性化効果なかった．

が得られるのに対して，黄色ブドウ球菌では，7 kV 以上から

3.1.3

非常に大きな不活性化効果が得られた．黒コウジカビ胞子は酵母に対する不活性化効果

菌種間の不活性化効果の差異

図 5 に PEF および Ag-PEF 処理における各種印加電圧に

1

10-1
10-2
10-3

(a)

10-4

Stainless steel
0 kV
4 kV
7 kV
12 kV

10-5
0

Survival ratio[-]

Survival ratio[-]

1

10-4
10-5
0

(b)
Silver
0 kV
4 kV
7 kV
12 kV

10
20
Treatment time[min]図 4 PEF 処理印加電圧の違いによる黒コウジカビ胞子の生菌率変化：(a)ステンレス電極，(b) 銀電極
Fig. 4 Time courses of A. niger survival ratios during various
voltage PEF treatments with (a) stainless steel wire or (b) silver wireas the high voltage electrode. Values are means ± S.E. (n ≥ 4).

Survival ratio[-]

Survival ratio[-]

10-3

10-3
10-4

(a)
Stainless steel
0 kV
4 kV
7 kV
12 kV

10
20
Treatment time[min]

1

1

10-2

10-2

10-5
0

10
20
Treatment time[min]

10-1

10-1

10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
0

(b)
Silver0 kV

1020Treatment time[min]図 5 PEF 処理印加電圧の違いによる酵母の生菌率変化：(a) ステンレス電極，(b) 銀電極
Fig. 5 Time courses of S. cerevisiae survival ratios during
various voltage PEF treatment with (a) stainless steel wire or (b)silver wire as the high voltage electrode. Values are means ±S.E. (n ≥ 4).

銀電極を用いた高電圧パルス殺菌装置の種々の菌に対する不活性化効果（吉野功ら）

85(39)

黄色ブドウ球菌よりもやや耐性を有しているものの実験結められない Ag-PEF 処理の不活性化特性として，単一菌液，果からは 7 kV で非常に大きな不活性化効果が期待できる．

混合菌液に関わらず時間とともに生菌率の減少度が大きく

PEF 処理による不活性化効果の菌種による差は菌のサイズなる傾向が観察された．これは処理時間とともに処理液中のが大きいほど膜にかかる電圧が大きくなり，膜破壊がおこり

Ag 濃度が上昇することに起因しているのではないかと思わ4)やすくなるためであると考えられている ．今回の研究におれる．

いても酵母（5-10 m），大腸菌（1-2 m），黄色ブドウ球菌

3.3 Ag-PEF 処理と硝酸銀溶液との不活性化効果比較(1 m）については，そのサイズが大きいほど不活性化効果

Ag-PEF 処理溶液中の銀濃度を測定したところ，印加時間が大きくなっている．しかし，黒コウジカビ胞子（5 m）にに比例して直線的に増加しており，これはファラデーの法則

ついては大腸菌よりも大きいにもかかわらず，強い耐性を示に合致すると考えられる．また，処理対象となる菌を変えてした．これは，カビ胞子の形状が円や楕円でなく，突起のあも銀の溶出量に変化は確認されなかった．Ag-PEF 処理中のる構造であることも考えられるが，PEF 処理によるカビに対印加エネルギーが全て銀の溶出に使われたときの 1 パルスあする効果の知見は少なく，今後のさらなる検討が必要である．

たりの電極からの銀溶出量は，電荷量 CV を用いてファラデ

銀による微生物不活性化メカニズムの1つとして，細胞膜ーの法則により計算することができ，処理液中の銀濃度変化

や酵素との結合により微生物の生体活動を阻害すると考えもパルス回数から求めることができる．この濃度を理論値と14)られている ．一方 PEF 処理は微生物の細胞膜構造に揺らぎすると，7 kV Ag-PEF 処理時の溶液中銀濃度実測値は理論値4)を誘導すると考えられている ．したがって Ag-PEF 処理が極の 30%程度の値であった．このことから Ag-PEF 処理においめて大きな不活化効果を示すのは銀の溶出と PEF による細ては全てのエネルギーが電気化学的な反応に消費されてい胞内への取り込み促進が同時に起こるために不活化効果がないと示唆された．そこで，この濃度を超えないように硝酸大きいと推測される．

銀溶液を理論値のおよそ 50%となるよう試験菌液に逐次滴3.2 複数菌種の混合状態に対する不活性化効果

下し，Ag-PEF 処理と黄色ブドウ球菌の不活化効果を比較しAg-PEF 処理が前報も含めて酵母，大腸菌，黄色ブドウ球

た．試験溶液の銀濃度の変化を図 7(a)に示す．硝酸銀滴下処

菌，黒コウジカビ胞子の不活化に有効であることが示された．

理（AgNO3 ），硝酸銀滴下同時ステンレス電極 PEF 処理

つぎにこれらを混合した状態でも Ag-PEF 不活化が有効であ（AgNO3 + 7 kV）とも予定の銀濃度が確認できた．黄色ブドることを確認するために 4 菌種の混合菌液に対し 7 kV の

1では，酵母，大腸菌，黄色ブドウ球菌，黒コウジカビ胞子はそれぞれ 1.25 min，2.5 min，3.75 min，7.5 min 以上の処理時
間で寒天培地上にコロニー形成が見られなくなった（図 6(a)）．
一方，混合菌液では酵母，大腸菌，黄色ブドウ球菌，黒コウ

Survival ratio [-]Ag-PEF 処理を試みた．単一菌液に対する Ag-PEF 処理(7 kV)

ジカビ胞子はそれぞれ 1.25 min，3.75 min，7.5 min，10 min

10-1
10-2
10-3

(a)

10-4

A.niger
S.aureusE.coli10-50以上と単一菌液に比べ，寒天培地上のコロニー形成が見られなくなるにはわずかに長い処理時間が必要であったが，同時

1

不活性化効果は黄色ブドウ球菌よりも酵母に対して大きい

10-1など単一菌液の場合と同様の傾向を示した．これらの結果より Ag-PEF 処理は，多種の菌の混合状態でも同時に全ての菌を不活性化できる有用な手法であることが確認された．
不活性化効果が小さくなった原因として，今回の実験系では処理液中の初発菌の総数が混合菌液では単一菌液よりも多いことが不活性化効果に影響したと考えられる．一般に加熱殺菌では初発菌数にかかわらず，アレニウス式に従い不活性化速度は変化しないが，Ag-PEF 処理では菌の不活性化には PEF による電界効果に加え，系中の銀が関与しているため，菌濃度が増加すると一細胞あたりの銀濃度が低下し不活性化速度の低下が起こると考えられる．また，加熱殺菌では認Survival ratio [-]不活性化が確認された（図 6(b)）．また，Ag-PEF 処理による

10
20
Treatment time [min]

10-2
10-3

(b)

10-4

A.niger
S.aureusE.coli

10-5
0

10
20
Treatment time [min]図 6 7 kV Ag-PEF 処理による生菌率変化の菌種間差
異：(a) 単一菌種，(b) 混合状態
Fig. 6 Time courses of each microorganism survival ratios
during 7 kV Ag-PEF treatment. (a) Suspensions of pure
microorganism and (b) 4 kinds microorganism mixture weretreated, respectively. Values are means ± S.E. (n ≥ 4).

86(40)Ag concentration [ppm]

静電気学会誌

第 34 巻

第 2 号 (2010)
4.

10

3 種類の微生物に対し同条件下における銀電極高電圧パルス(Ag-PEF)装置による不活性化効果について研究を行った．
単一の菌種に対する試験では，黄色ブドウ球菌，黒コウジカ

5(a)Survival ratio[-]00--- Theoretical (100%）▲ Silver wire 7 kV
△ AgNO3□ AgNO3+7 kV

10
20
Treatment time[min]ビ胞子，酵母について Ag-PEF 処理で著しい生菌率の減少が見られた．黄色ブドウ球菌と黒コウジカビ胞子に対する PEF
処理または銀処理のみでは 20 min で１桁程度の生菌率の減
少にとどまったのに対し，7 kV の Ag-PEF 処理では，黄色ブドウ球菌では 5 min 以降，黒コウジカビ胞子では 7.5 min 以降

1で寒天培地上にコロニー形成が見られなかった．酵母につい

10-1ては，Ag-PEF の不活性化効果はより顕著であった．大腸菌

10-2を含めた 4 つの菌種を混合した状態で 7 kV の Ag-PEF 処理を行ったところ，単独状態よりやや効果は小さいものの，全て

10-3

(b)

10-4
10-5
10-6
0

○ Stainless wire 7 kV
▲ Silver wire 7 kV
△ AgNO3□ AgNO3+ 7 kV

10
20
Treatment time [min]図 7 硝酸銀溶液滴下処理試験における (a) 銀濃度変化と(b) 生菌率変化
Fig. 7 A silver nitrate solution dripping examination. (a) Timecourses of silver concentration and (b) S. aureus survival ratios.
Values are means ± S.E. (n ≥ 4).
ウ球菌生菌率の経時変化を図 7(b)に示す．AgNO3 処理では生菌率は処理時間 5 min，
10 min でそれぞれ 2.5 × 10-2，
8.2 × 10-4，
AgNO3 + 7 kV 処理では処理時間 5 min，10 min でそれぞれ 7.4
× 10-2，2.1 × 10-3 であり，どちらも生菌率の減少は直線的となり，Ag-PEF 処理による生菌率の減少曲線の形と異なっていた．また硝酸銀溶液中ではステンレス電極 PEF 処理による殺菌効率の向上は認められなかった．一方 7 kV Ag-PEF 処理では，同じ処理時間の溶出銀濃度は AgNO3 処理よりも低いにもかかわらず，3.75 分以降で培地上にコロニーが観察されないなど，大きな不活性化効果が得られた．Simonetti らは電気化学的に溶出した銀は硝酸銀に比べて有効であることを報告している 20)．Ag-PEF 処理でも NO3-イオンは存在しないため，より効率的に銀が作用するのではないかと考えられる．
また図 7 で示したような不活化速度の増大は硝酸銀を用いた系では時間と共に銀濃度が高くなっているのにも関わらず，確認できなかった．Ag-PEF 処理の高い不活化効果のメカニ
ズムは不明な点が多く，本報では解明しきれていないが，
Ag-PEF 処理が PEF 処理，硝酸銀処理単独よりもはるかに高い不活化能力を持ち，かつ条件を最適化すれば菌種を選ばずに殺菌することができる方法であることが実証できた．今後
はメカニズムの解明と共に，応用展開を図っていきたいと考
えている．

まとめ

の菌種について 10 min 以内に不活性化することが可能であった．Ag-PEF の不活性化効果は溶出する銀以上の硝酸銀を滴下し PEF 処理を施した時よりも顕著であり，有用な微生物の不活性化手法であることが実証できた．
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1)