課題番号：２５指１０４
研究課題名 ：炎症性腸疾患における治療抵抗性メカニズムの解明とその診断・治療への応用
主任研究者名 ：土肥 多惠子
分担研究者名 ：鈴木 春巳、高木 智
キーワード ：炎症性腸疾患 大腸、炎症シグナル、エピゲノム
研究成果：
A. 患者検体およびマウスモデルを用いた遺伝子発現およびエピゲノム網羅的解析の成果に基づく、治療抵抗性克服のための標的の探索
A-1. UC手術摘出標本のトランスクリプトーム解析および網羅的エピゲノム解析に基づく新規治療標的の探索。
【方法】IBD患者試料で行ってきた網羅的解析の結果を利用し、特に治療抵抗性という観点から新規治療標的をin silicoで選定した。まず、トランスクリプトーム解析結果より、病変部で発現が著変している遺伝子をピックアップし、次にPathway解析等により、周辺遺伝子の発現パターンを確認し、整合性のあるPathwayを絞り込んだ。絞った対象に対して網羅的エピゲノム解析結果を統合し、遺伝子発現に影響を及ぼすエピゲノム変化を有している遺伝子を新規治療標的候補とした。上皮細胞で産生される分子、TNF-の産生や活性化、TNF-下流のシグナル作用を増幅・遷延に関連する分子／シグナル経路／エピゲノム変化を優先しておこなった。
【成果と考察】UC手術症例3例の病変部粘膜、大腸がん摘出症例2例の健常粘膜から樹状細胞/マクロフ
ァージ分画であるCD33+細胞、CD3+T細胞を分離精製し、epigenome網羅的解析(活性化マーカー
H3K4me3、発現抑制マーカーH3K27me3に対する抗体を用いたChIP-seqおよび、DNAメチル化解析
MeDIP)及びトランスクリプトーム解析(SAGE)の生データが得られている。これらについて、我々の手でおおまかな統合解析を行った。その結果、H3K4me3+H3K27me3のいわゆる二価修飾と疾患との関連がみいだされた。これはUCにおいては特定の遺伝子の発現制御領域にエピゲノム異常が生じるというより、エピジェネティック修飾機構そのものが病的であること示唆する新規な結果である。より正確な統合解析を進めるためには、バイオインフォマティシャンの協力が必要となったため統合解析プラットフォーム構築としてバイオインフォマティクスは解析委託した。統計解析により、Non-IBD症例とUC症例またはCD症例との間で発現に有意差が認められるエピジェネティック修飾関連18遺伝子を抽出した。これらを用いてクラスター解析を行った結果、Non- IBD症例とIBD症例(UC症例＋CD症例)は異なるクラスターに分類されたが、UC症例とCD症例の違いは認められなかった。IBD症例では特に
H3K4me3 writers、H3K27me3 writersの発現亢進と、一部のH3K27me3 erasersの発現低下が顕著であり、IBD症例で見られた病的エピジェネティック修飾機構の原因と考えられた。これらのエピジェネティッ
ク修飾機構の破綻をin vitroで再現するため、エピジェネティック修飾関連遺伝子計84遺伝子の発現を、
次世代簡易シークエンサーIon Protonを用いたAmpli-seq法にて測定する系を確立し、新たに非IBD例7
例、UC5例、クローン病2例の測定を行った。
A-2マウス腸炎モデルの網羅的解析に基づく抗TNF療法の治療効果を高める新規治療標的の選択。
【方法】腸炎モデルでsuboptimal doseによる不完全なTNF-中和療法をTNF スーパーファミリー分子
TWEAKやIL-13中和療法で補完した時の効果と網羅的遺伝子発現解析によって、それぞれ単独の効果と混合治療の効果をもたらしている遺伝子発現変化を同定した。これにより、TNF スーパーファミリー分子TWEAKとその受容体Fn14, IL-13によるTNF炎症シグナルの増幅機構を調べた。
【成果と考察】マウスIBDモデルであるトリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)注腸投与による、急性腸炎誘導時に、suboptimal doseのTNF中和剤および抗TWEAK抗体投与、またはその併用を行った。その結果、それぞれの単独ではほとんど治療効果が得られないのに対して、併用によって相加以上の効果がみられた。そのメカニズム解析のために、大腸より上皮細胞および粘膜固有層細胞を分離し、TNF
中和剤と抗TWEAK抗体、及び併用したときのマウス大腸の遺伝子発現網羅的比較解析を行った。その結果、同じ投与量のTNF中和剤、TWEAK中和剤単独では見られない遺伝子発現変化が併用療法では見られることが明らかとなった。パスウェイ解析の結果、特にLPS、NF-κB関連シグナル経路の抑制が著しいことがわかった。この結果を基に、NF-κBシグナル経路に関連する遺伝子発現、タンパク発現変化

1

を詳細に解析した結果、非古典的経路(p100/RelB)の寄与は低く、併用時には古典的経路(p50/RelA)の活性化が顕著に抑制されていた。TWEAK受容体であるFn14は上皮細胞にのみ発現していたことから、上皮細胞におけるTWEAK-Fn14およびTNF-αによる古典的NF-κB活性化経路を同時に抑制することが炎症制御に重要であることが示された。これは、TWEAKによる非常に強いTNFシグナル増強機構が存在することのエビデンスである。さらに消化管上皮傷害の機構解明を進めるため、IL-13-EGFレポーター
マウス、IL-13ノックアウトマウスを入手し、さらに、CRISPR/Casシステムを用いたゲノム編集によりIL-13受容体 欠損BALB/cマウスを作製した。これらを用いてin vivoにおける消化管上皮細胞傷害におけるTWEAK/Fn14, TNF-αとIL-13との相互作用について検討した結果、TWEAK/Fn14はinnate lymphoidcell などによる消化管でのIL-13産生を増強する働きを持つとともに、筋線維芽細胞における内因性
IL-13 中和活性分子IL-13 受容体α2の発現を阻害する事により、IL-13活性を維持、増強する作用をもつことが明らかとなった。以前の研究で我々はTNF-αによる上皮細胞傷害も部分的にTWEAK/Fn14経路に依存している事を明らかにしている。In vivoでの上皮細胞傷害の臨床症状である下痢は、IL-13とTNF-のそれぞれ単独の作用でも誘導されるという結果が得られているが、Fn14遺伝子欠損あるいはTWEAKの中和抗体によるシグナル遮断によって、両方の経路が遮断され、下痢が軽減した。さらに我々はヒトIBDの局所粘膜においてTWEAK/Fn14とIL-13のmRNAが、病勢に相関して発現亢進している事も見いだした。27年度にはIBDにおける抗IL-13抗体の治験結果が発表され、有効とは言えないという結論が出ている。しかし、我々の以上の結果からは、IL-13は単独での傷害作用をもつだけでなく、TNF-
及びTWEAK/Fn14経路と複雑に相互作用しつつ、positive feedback loopを形成していることがあきらかとなり(PPTの図)、特に治療困難となった症例で有効な結果を得るには、これら三者のシグナル全体を遮断する必要があるのではないかと考えられる。ヒト抗TWEAK抗体は既にループス腎炎に用いられており、単独でこのループを遮断するにはもっとも有力な候補と考えられるので、難治性のIBDにおいては単独、あるいは抗TNF-, 抗IL-13抗体との併用を提案したい。
B. メタボローム解析による治療抵抗性克服のための標的探索
B-1. UC、クローン病手術症例について、その粘膜、血清を採取し健常粘膜との比較を行うとともに、遺伝子・タンパク発現、エピゲノム修飾を同一検体で測定出来るように試料を集積する。
【方法】神戸大学大学院医学研究科病因病態解析学（疾患メタボロミクス）分野長 吉田優准教授との共同研究により、血清、バイオプシー試料の集積を開始してUC血清および粘膜のメタボローム解析を行う。神戸大学で既に得られている結果を基盤としてアミノ酸、有機酸、脂質に関する解析をすすめ、重症症例、治療困難例での特徴を探した。また、一部の外科切除症例については当センター研究所の脂質シグナリングプロジェクトとの共同研究を行なった。
【成果と考察】本研究では、はじめに、動物検体やヒト検体を分析するための代謝物分析系を構築した。生体内には、約4,000種類の代謝物が存在するとされていることから、できるだけ幅広い代謝物群を測定できる必要がある。そこで、ガスクロマトグラフ質量分析計、あるいは、液体クロマトグラフ
質量分析計を用いた4種類の分析系の最適化を行った。その結果、ガスクロマトグラフ質量分析計を用いることで、アミノ酸やTCAサイクル関連分子などの水溶性代謝物を分析できる系を構築できた。また、液体クロマトグラフ質量分析計によるホスファチジルコリンなどの脂質分析系、アミノ酸や塩基などのカチオン性分子分析系、糖リン酸などのアニオン性分子分析系を構築した。続いて、構築した
ガスクロマトグラフ質量分析計、あるいは、液体クロマトグラフ質量分析計による代謝物分析系を用
いて、IBD患者検体の分析、ならびに、腸炎モデルマウス検体の代謝物分析を行った。UC患者血清と健常者血清の代謝物分析結果を比較したところ、複数の代謝物の有意な変動が確認され、これらの代謝物には、TCAサイクル関連分子や尿素回路関連分子、アミノ酸群が含まれるが、その多くがUC患者群で有意な減少を示した。さらに、UC患者の活動期、寛解期に依存した代謝物も存在することが明らかとなった。また、腸炎モデルマウスであるIL-10ノックアウトマウスから血漿、腸組織を採取し、ガスクロマトグラフ質量分析計、あるいは、液体クロマトグラフ質量分析計を用いて血漿、腸組織中代謝物を分析して、対照野生型マウスとの比較検討を行った。その結果、デキストラン硫酸ナトリウム誘発性腸炎マウス血漿やUC患者、クローン病患者血清中で減少していたグルタミンレベルが、IL-10
ノックアウトマウス血漿でも減少していることが確認できた。さらに、グルタミンレベルは、デキス

2トラン硫酸ナトリウム誘発性腸炎マウス、UC患者の病変腸組織でも減少していることを明らかにできた。さらに、IL-10ノックアウトマウスの病変腸組織では、PC18:0p-20:4などの抗酸化作用を有するプ
ラズマローゲン類が低下していた。また、多くの遊離脂肪酸、リン脂質が減少している傾向を確認できた。これらの結果から、IBDの発症と脂質プロファイルとの関連性も示唆することができた。これらの結果より、病勢及び予後に関連するメタボライトとして、脂質プロファイリングが重要と考え、特に脂質メディエーターの網羅的解析をまず手術検体で開始し、次の段階で血清の解析結果を統合して行うこととした。この目的のため非IBDの健常粘膜、UC病変部(大腸)を収集して脂質メディエーターの解析を行った。
C. 治療抵抗性克服のための標的候補項目の検証
C-1.A, Bで選定した項目について、臨床検体を用いた標的分子／エピゲノム修飾／代謝物の検出・測定法確立を開始【成果と考察】Aの統合バイオインフォマティクス解析により見出したエピジェネティック修飾機構の破綻を、多数の臨床検体について同時に評価するために、エピジェネティック修飾関連遺伝子計84遺伝子の発現を、次世代簡易シークエンサーIon Protonを用いたAmpli-seq法にて測定する系を確立した。
更に、生検検体を用いて活動度や治療抵抗性との関連を検討するために、解析項目を非IBD症例とUC症例またはクローン病症例との間で発現に有意差が認められるエピジェネティック修飾関連18遺伝子にまで絞り込んだ。一方、Bにより見出された代謝物の変化は、本研究で確立したGC-MSやLC-MS解析系を用いて多数の臨床検体の測定が可能である。現在、生検については目標の20例の収集を行なった。
C-2. C-1で検出・測定法を確立した新規治療標的項目の患者試料での検証。UCにおける寛解維持症例、ステロイド抵抗性または離脱不能例、CD症例における同一症例の治療前治療後の血清および病変組織を収集し、臨床情報と遺伝子あるいは特定の蛋白質発現、あるいは特定の遺伝子のエピゲノム修飾との関連を解析した。
【成果と考察】25年度に共同研究によって本研究を開始すべく倫理申請を行い、承認された。検体提供先および共同研究先施設での承認を得て、症例集積を開始した。活動度、治療応答性との関連を検討するために、同一症例の、年に一度の内視鏡検査時の生検検体を経時的に蓄積した。定期的に受診する患者は寛解維持症例が殆どであったが、研究期間中に寛解から増悪に転じた症例、検査時炎症から寛解へ転じた症例の検体などを収集した。
D. 治療抵抗性克服のための標的項目の機能・メカニズム解析と治療薬シーズの探索【方法】新規治療標的項目の機能について、メカニズム解析を行なった。
この際確立するin vitro実験系を利用して、阻害剤としての低分子化合物の試験を行った。LPS刺激時のヒト末梢血TNF分泌を抑制する低分子ライブラリーから標的分子などの阻害剤として働くものをスク
リーニングした。
【成果と考察】TWEAK/Fn14経路の炎症の増悪、遷延化における重要性に関して十分なエビデンスが得られたとともに、そのメカニズムの一部も明らかにすることができた。また我々は以前の研究で、マウスマクロファージでLPS刺激によるTNF- 産生を阻害する低分子化合物R243を見いだした。この活性はケモカイン受容体など多数のシグナル系を介していることがわかっており、TNF- 経路による腸管炎症の増幅機構の遮断に有用であると考えられた。そこで、本研究において、健常ボランティアのヒト末梢血単核球細胞を、LPS刺激後したときの高いTNF- 産生に対する影響を調べた所、R243はヒト細胞においてもTNF-産生阻害することがわかった。R243の構造関連低分子を新たに探索し、22種類の低分子化合物を入手して試験を行った所、いずれの化合物も、短期細胞毒性を発揮する事なく
TNF-産生を抑制する事が示された。更に、そのうち8個は対照の30%以下まで抑制された。本研究成
果はIBD患者の細胞でも有効かどうかなど、別のあらたな研究計画として進める予定である。

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Subject No.

：25-104

Title：Intractable inflammatory bowel diseases- its mechanism, diagnosis andtreatments
Researchers ：Taeko Dohi, Harumi Suzuki, Satoshi Takaki
Key word：Inflammatory bowel disease, colon, inflammatory signaling pathway, epigenetic

changes
Abstract：

The aim of this project is to clarify the mechanism of intractable types inflammatory bowel disease(IBD) and eventually develop remedies to treat IBD or prevent disease progression to severe
reflactory type of disease.
Exploration of targets to overcome in intractable disease based on the result of global
gene expression analysis and epigenetic analysis using tissue derived from patients and diseasemodel mice. ;We have done global study of gene expression and epigenetic changes using mucosal tissues from
IBD patients. Based on these data, se selected genes with altered expression in the lesions. Then
examined related genes to identify particular pathways. On these selected genes, those that may
affect the expression of selected genes were set as the initial targets. As a result we focused on the
TNF activation and its down stream pathway, which sustain and amplify the TNF signal. We
purified CD33+ macrophage/DC fraction and CD3+ T cell fraction from the surgically resectedcolon tissues from the patients treated for ulcerative colitis or colorectal cancer, and performed
global epigenetic analysis including ChIP-seq for H3K4me3, H3K27me3, DNA methylation
analysis (MeDIP) and transcriptome (SAGE) analysis. As a result, so-called bivalent modificationof H3K4me3 plus H3K27me3 was found to related to the disease. Cluster analysis resulted in the
different clustering of non-IBD and IBD, but there was no difference between ulcerative colitis(UC) and Crohn’s disease (CD). In IBD cases, enhanced expression of H3K4me3 writers,
H3K27me3 writers and attenuated expression of some 3K27me3 erasers was obvious, which was
assumed to pathological epigenetic changes found in IBD cases. To confirm the effect of theseabnormal epigenetic changes, expression of 84 genes related to epigenetic changes were analyzed
using a NGS using Ampli-seq with Ion Proton in 7 non-IBD, 5UC and 2CD cases.
New therapeutic targets to enhance the effect of anti-TNF biologics based on the global
analysis murine colitis models;We performed global gene expression analysis of the murine colonic tissues obtained from colitis
models and in this study. We treated mice with colitis with tumor necrosis factor (TNF)-
neutralizing reagents at suboptimal dose to mimic treatment-resistant or refractory patients inanti-TNF therapy. We also treated mice with a neutralizing reagent of one of TNF superfamily
molecules TWEAK and nati-IL-13 therapy. They were used with a single therapy, or combination.
Global gene expression analysis demonstrated the effect of each single therapy and combination
therapy. Acute colitis was induced by rectal injection of trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS), withadministration of control IgG, TNF receptor (TNFR)-Ig chimeric protein, anti-TWEAK monoclonal
antibody, or the combination of TNFR-Ig and anti-TWEAK antibody. On day 4, disease severity
Researchers には、分担研究者を記載する。

1

was evaluated and gene expression profiling was analyzed using whole colon tissue. NF-B
activation was investigated with Western blot. Since protein extract from whole colon tissue mightmask cell type specific inflammatory responses, we investigated inflammatory responses at thecellular level. For this purpose, we obtained highly purified live colonic ECs with flow cytometry.
Levels of transcript of TWEAK, Fn14 and NF-B-related molecules were measured in purified
colon epithelial cells (ECs). As a result, colitis induced upregulation of Fn14 only in ECs but not inother cell types. As a tool for TNF or TWEAK inhibition in the mouse system, we used suboptimaldose of TNFR-Ig fusion protein and anti-TWEAK monoclonal antibody, respectively. We foundthat combination treatment resulted in a more than additive protective effect from acute colitis ascompared to single agent treatment. Administration of either single agent, 0.3 mg/kg of TNFR-Ig
or 10 mg/kg anti-TWEAK mAb, showed limited or no efficacy with respect to the body weight,
colon length, and macroscopic/histological analysis. The TNFR-Ig-, anti-TWEAK mAb- and control
Ig-treated groups each showed a trend of better recovery of body weight as compared to theuntreated group, with no significant difference between the three treated groups on day 4. In
marked contrast, treatment with the combination of TNFR-Ig and anti-TWEAK mAb resulted insignificantly less weight loss and more rapid recovery of body weight than any of the other groups.
In addition, the colon was significantly longer in the combination-treatment group than any ofother experimental groups. Combination treatment of TNFR-Ig and anti-TWEAK antibody
synergistically reduced disease severity in comparison with the control antibody or single agent
treatment. Many mice treated with the combination exhibited minimal open ulcers with only
redness of the mucosal surface. And the area of open ulcer was significantly less in the
combination treated as compared to all other groups. In a global gene expression analysis, a totalof 781 genes changed more than 2-fold in both the control immunoglobulin G (Ig)-treated anduntreated mice as compared to naïve mice. We investigated whether any of these genes were
specifically changed as a result of monotherapy. However, in a comparison of the TNFR-Ig treated
vs. untreated or control Ig-treated group, no such genes were found. Using this list of 62
downregulated genes, we searched the possible upstream pathways that were affected by
combination treatment using the Upstream Regulator Analysis Software, leading to a list of
possible upstream pathways. In addition to TNF-, TNFRSF1A (TNF receptor 1), TWEAK,
lipopolysaccharide (LPS) and innate sensors like Toll-like receptor (TLR), were identified as
potential as upstream regulators. Of note, IKBKG (IKK-c/NEMO) and NFKBIA (I
included as upstream regulators, suggesting that the canonical pathway of NF-B was
significantly downregulated. Further gene expression analysis and Western blot analysis
confirmed that activation of the canonical (p50/RelA), but not noncanonical (p100/RelB)-mediatedpathway was the hallmark of inflammatory responses in this model. In conclusion, our study
indicates that TNF- and TWEAK/Fn14 pathways mutually support activation of NF-B
canonical pathway in a significant synergistic manner, which is critical in the tissue damage ofacute inflammation. This result also indicates the presence of TNF-signal-enhancing system
mediated by TWEAK. Thus, TWEAK is very likely to be involved in the mechanism of severe
relapsing colitis. Next, to further investigate the mechanism of intestinal epithelial cell damage,Researchers には、分担研究者を記載する。

2

we obtained IL-13-EGF reporter nice and also generated IL-13 receptor 1 gene disrupted mice,and IL-13 receptor 2 gene disrupted mice with the method of genome editing using CRIPR-Cas
system. Using these gene manipulated mice, we investigated the interaction of TWEAK/Fn14,
TNF- and IL-13. As a result, we found that TWEAK/Fn14 signaling pathway enhances the IL-13
secretion by lamina propria innate lymphoid cells and CD4+ T cells. TWEAK/Fn14 also inhibitedthe expression of IL-13 receptor  2 in intestinal myofibroblast and fibroblast, resulting theaggravating and maintaining the devastating action of IL-13 to epithelial cells. We previously
found that cell-damaging effect of TNF- is also supported by TWEAK/Fn14 pathway. These
results suggest that IL-13 itself is not only epithelial cell-damaging, but also interacts with TNF-
and TWEAK/ Fn14 pathway to form a positive feedback loop leading further tissue damage.
When we analyzed gene expression in the human colonic mucosa of ulcerative colitis, TWEAK,
Fn14 and IL-13 were all upregulated along with the severity of the disease. Although it wasreported in 2015 that anti-IL-13 singly therapy was not effective in the patient with ulcerative
colitis, inflammatory bowel disease, we like to propose the possibility of combination therapy ofanti-TWEAK antibody and anti-IL-13 antibody with anti-TNF reagents, especially in cases withtreatment-resistant or secondary refractory patients to anti-TNF- reagents.
Metabolome analysis searching for targets to overcome treatment-resistance was
performed in collaboration with Dr. M. Yoshida in Kobe University Graduate School of Medicine.
We established a metabolome analysis system and applied to sera from IBD patients or IBD
mouse models. We found some metabolites changing their levels along with disease severity andrelapse. Especially an amino acid glutamine was decrease in patients’ sera as well as sere from
IL-10 knockout mice with colitis. Further, decrease in free fatty acids, and phospholipid wasobserved, which suggested the importance of lipid metabolism in colitis. We performed lipid
profiling in colonic mucosal specimens obtained from ulcerative colitis patients in collaboration
with Lipid Signaling Project in our Research Institute, and found deviation fatty acid metabolism
pathways in affected mucosa,

Researchers には、分担研究者を記載する。

3

課題25-104 の研究成果

統合解析により治療抵抗性克服のための標的を探索ー動物モデルからマウス腸炎モデルを用いてTWEAKによるTNFシグ
ナル増強作用をみいだした

TWEAKによるTNFシグナ
ル増強作用では古典的
NF-κB経路活性化が重要であることをみいだした

GC-MS, LC-MSによるメタ
ボローム測定系の確立と症例の集積継続

IBD症例とマウス腸炎モデ
ルに共通する変化を見出した

TWEAK、TNFa、IL−13の相乗的シグナル増強作用が腸炎の重症化に働く事を見出した

治療薬の探索Reporter

リウマチやループス腎炎にすでに用いられている抗TWEAK抗体の、IBDにおける有用性について、メカニズム解明を含む
エビデンスを蓄積した

ヒト末梢血単核球細胞によるTNFa
産生を抑制する低分子化合物をみ
いだした

WT

課題25-104 の研究成果

臨床検体の統合解析による治療抵抗性克服のための標的を探索
標的候補の検証
潰瘍性大腸炎epigenome
網羅的解析及びトランスク
リプトーム解析統合解析

GC-MS, LC-MSによるメタ
ボローム測定系の確立と症例の集積

H3K4me3+H3K27me3のいわゆる二価修飾と疾患との関連を見出した

IBD症例とマウス腸炎モデ
ルに共通する変化を見出した

潰瘍性大腸炎においてはエピジェネティック修飾機
構そのものが病的である

IBD大腸の脂質プロファイ
リング

神戸大学大学院医学研究科病因病態解析学（疾患メタボロミクス）研究室 及び、NCGM脂質シグナリングプロジェクトとの共同研究
による

簡易次世代シークエンサーを用いた多検体のエピジェネティック
修飾機構評価系を確立

IBDとnonIBDとの間に差のあるエ
ピジェネティック関連18遺伝子を同定

本研究成果によって明らかとなったTWEAK/Fn14経路の活性化とTNFa, IL-13の相互作用による消化管上皮細胞傷害のpositive
feedback loop
バリア傷害
細胞死

TWEAKシグナル

Fn14
TNFa

NF-kBの増幅
Fn14

IL-13

上皮細胞

アポトーシス
上皮細胞

IL-13Ra2

FB/MyoFB

IL-13

WBC

ILC2/ T cells
TWEAKは、TNFa、IL−13の細胞傷害作用を増幅し、相乗的シグ
ナル増強作用が腸炎の重症化に働く

本研究成果によって明らかとなったIBD重症化に関わる
エピゲノム修飾K27 erasers
K27 writers

K4 readers• IBDにおけるH3K4me3+H3K27me3修飾異常は、エピジェネティック修飾
関連遺伝子の発現異常により生じる• IBDでみられるH3K4me3+H3K27me3修飾異常は、いわゆるバイバレン
ト修飾とは異なり遺伝子発現には影響しない課題番号：２５指１０４
研究課題名 ：IBD治療抵抗性に関わる炎症シグナル研究主任研究者名 ：土肥 多惠子
分担研究者名 ：鈴木 春巳
キーワード ：炎症性腸疾患 大腸、組織幹細胞、炎症シグナル、エピゲノム
研究成果：
A.マウスモデルを用いた遺伝子発現およびエピゲノム網羅的解析の成果に基づく、治療抵抗性克服のための標的の探索-マウス腸炎モデルの網羅的解析に基づく抗TNF療法の治療効果を高める新規治療標的の選択。
【方法】これまでに行ったマウス腸炎大腸組織の遺伝子発現の網羅的解析データを利用した。また、腸炎モデルでsuboptimal doseによる不完全なTNF中和療法をTWEAKやIL-13中和療法で補完した時の効果と網羅的遺伝子発現解析によって、それぞれ単独の効果と混合治療の効果をもたらしている遺伝子
発現変化を同定した。これにより、TWEAKやIL-13によるTNF炎症シグナルの増幅機構を調べた。
【結果】マウスIBDモデルであるトリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)腸炎誘導時にsuboptimal doseのTNF中和剤および抗TWEAK抗体投与、またはその併用を行った。その結果、それぞれの単独ではほとんど治療効果が得られないのに対して、併用によって、相加以上の効果がみられた。そのメカニズム解析のために、大腸より上皮細胞および粘膜固有層細胞を分離し、TNF中和剤と抗TWEAK抗体、及び併用したときのマウス大腸の遺伝子発現網羅的比較解析を行った。その結果、同じ投与量のTNF中和剤、
TWEAK中和剤単独では見られない遺伝子発現変化が併用療法では見られることが明らかとなった。この結果を基に、NF-κBシグナル経路に関連する遺伝子発現、タンパク発現変化を詳細に解析した結果、
非古典的経路(p100/RelB)の寄与は低く、併用時には古典的経路(p50/RelA)の活性化が顕著に抑制されていた。TWEAK受容体であるFn14は上皮細胞にのみ発現していたことから、上皮細胞におけるTWEAK-Fn14およびTNFαによる古典的NF-κB活性化経路を同時に抑制することが炎症制御に重要であることが示された。これは、TWEAKによる非常に強いTNFシグナル増強機構が存在することのエビデンスである。さらに消化管上皮傷害の機構解明を進めるため、IL-13-EGFレポーターマウス、IL-13ノッ
クアウトマウスを入手し、さらに、CRISPR/Casシステムを用いたゲノム編集によりIL-13受容体 欠損BALB/cマウスを作製した。これらを用いてin vivoにおける消化管上皮細胞傷害におけるTWEAK/Fn14,
TNF- とIL-13との相互作用について検討した結果、TWEAK/Fn14はinnate lymphoid cell などによる消化管でのIL-13産生を増強する働きを持つとともに、筋線維芽細胞における内因性IL-13 中和活性分
子IL-13 受容体α2の発現を阻害する事により、IL-13活性を維持、増強する作用をもつことが明らかとなった。以前の研究で我々はTNF-による上皮細胞傷害も部分的にTWEAK/Fn14経路に依存している事を明らかにしている。In vivoでの上皮細胞傷害の臨床症状である下痢は、IL-13とTNF-のそれぞれ単独の作用でも誘導されるという結果が得られているが、TWEAKの遺伝子欠損あるいは中和抗体によるシグナル遮断によって、両方の経路が遮断され、下痢が軽減する。さらに我々はヒト炎症性腸疾患の局
所粘膜においてTWEAK/Fn14とIL-13のmRNAが、病勢に相関して発現亢進している事も見いだした。27年
度には炎症性腸疾患における抗IL-13抗体の治験結果が発表され、有効とは言えないという結論が出ている。しかし、我々の以上の結果からは、IL-13は単独での傷害作用をもつだけでなく、TNF-及び
TWEAK/Fn14経路と複雑に相互作用しつつ、positive feedback loopを形成していることがあきらかとなり(PPTの図)、特に治療困難となった症例で有効な結果を得るには、これら三者のシグナル全体を遮断する必要があるのではないかと考えられる。ヒト抗TWEAK抗体は既にループス腎炎に用いられており、単独でこのループを遮断するにはもっとも有力な候補と考えられるので、難治性の炎症性腸疾患においては単独、あるいは抗TNF, 抗IL-13抗体との併用を提案したい。
B. 治療抵抗性克服のための標的項目の機能・メカニズム解析と治療薬シーズの探索【方法】新規治療標的項目の機能について、メカニズム解析を行なった。
この際確立するin vitro実験系を利用して、阻害剤としての低分子化合物の試験を行った。LPS刺激時のヒト末梢血TNF分泌を抑制する低分子ライブラリーから標的分子などの阻害剤として働くものをス
クリーニングした。

【結果】TWEAK/Fn14経路の炎症の増悪、遷延化における重要性に関して十分なエビデンスが得られたとともに、そのメカニズムの一部も明らかにすることができた。また我々はマウスマクロファージでLPS刺激によるTNF-産生を阻害する低分子化合物R243を見いだした。R243は健常ボランティアのヒト
末梢血単核球細胞においてもLPS刺激後のTNF-産生を阻害することがわかった。これの構造関連低分子を新たに探索し、22種類の低分子化合物で試験を行った所、いずれの化合物もTNF産生を抑制する傾向をしめし、そのうち8個は対照の30%以下まで抑制された。本研究成果はIBD患者の細胞でも有効かど
うかなど、別のあらたな研究計画として進める予定である。

課題番号：２５指１０４

研究課題名：IBD 治療抵抗性に関わる組織傷害・修復因子の研究

主任研究者名 ：土肥 多惠子
分担研究者名 ：高木 智
キーワード ：炎症性腸疾患 大腸、組織幹細胞、炎症シグナル、エピゲノム
研究成果：
A. 患者検体を用いた遺伝子発現およびエピゲノム網羅的解析の成果に基づく、治療抵抗性克服のための標的の探索A-1. UC手術摘出標本のトランスクリプトーム解析および網羅的エピゲノム解析に基づく新規治療標的の探索。
【方法】IBD患者試料で行ってきた網羅的解析の結果を利用し、特に治療抵抗性という観点から新規治療標的をin silicoで選定した。まず、トランスクリプトーム解析結果より、病変部で発現が著変している遺伝子をピックアップし、次にPathway解析等により、周辺遺伝子の発現パターンを確認し、整合性のあるPathwayを絞り込んだ。絞った対象に対して網羅的エピゲノム解析結果を統合し、遺伝子発現に影響を及ぼすエピゲノム変化を有している遺伝子を新規治療標的候補とした。上皮細胞で産生される分子、TNFの産生や活性化、TNF下流のシグナル作用を増幅・遷延に関連する分子／シグナル経路／
エピゲノム変化を優先しておこなった。
【結果】潰瘍性大腸炎手術症例3例の病変部粘膜、大腸がん摘出症例2例の健常粘膜から樹状細胞/マク
ロファージ分画であるCD33+細胞、CD3+T細胞を分離精製し、epigenome網羅的解析(活性化マーカー
H3K4me3、発現抑制マーカーH3K27me3に対する抗体を用いたChIP-seqおよび、DNAメチル化解析MeDIP)
及びトランスクリプトーム解析(SAGE)の生データが得られている。これらについて、我々の手でおおまかな統合解析を行った。その結果、H3K4me3+H3K27me3のいわゆる二価修飾と疾患との関連がみいだされた。これは潰瘍性大腸炎においては特定の遺伝子の発現制御領域にエピゲノム異常が生じるというより、エピジェネティック修飾機構そのものが病的であること示唆する新規な結果である。より正確な統合解析を進めるためには、バイオインフォマティシャンの協力が必要となったため統合解析プ
ラットフォーム構築としてバイオインフォマティクスは解析委託した。統計解析により、Non-IBD症例とUC症例またはCD症例との間で発現に有意差が認められるエピジェネティック修飾関連18遺伝子を抽出した。これらを用いてクラスター解析を行った結果、Non- IBD症例とIBD症例(UC症例＋CD症例)は異なるクラスターに分類されたが、UC症例とCD症例の違いは認められなかった。IBD症例では特にH3K4me3
writers、H3K27me3 writersの発現亢進と、一部のH3K27me3 erasersの発現低下が顕著であり、IBD症例で見られた病的エピジェネティック修飾機構の原因と考えられた。これらのエピジェネティック修飾機構の破綻をin vitroで再現するため、エピジェネティック修飾関連遺伝子計84遺伝子の発現を、
次世代簡易シークエンサーIon Protonを用いたAmpli-seq法にて測定する系を確立し、新たにnon-IBD
例7例、UC5例、CD2例の測定を行った。
B. 治療抵抗性克服のための標的候補項目の検証
C-1.Aで選定した項目について、臨床検体を用いた標的分子／エピゲノム修飾／代謝物の検出・測定法
確立を開始【結果】Aの統合バイオインフォマティクス解析により見出したエピジェネティック修飾機構の破綻を、多数の臨床検体について同時に評価するために、エピジェネティック修飾関連遺伝子計84遺伝子の発現を、次世代簡易シークエンサーIon Protonを用いたAmpli-seq法にて測定する系を確立した。更に、生検検体を用いて活動度や治療抵抗性との関連を検討するために、解析項目をNon-IBD症例とUC症例またはCD症例との間で発現に有意差が認められるエピジェネティック修飾関連18遺伝子にまで絞り込んだ。一方、Bにより見出された代謝物の変化は、本研究で確立したGC-MSやLC-MS解析系を用いて多数の臨床検体の測定が可能である。現在、生検については目標の20例の収集を行なった。
C-2. C-1で検出・測定法を確立した新規治療標的項目の患者試料での検証。UCにおける寛解維持症例、ステロイド抵抗性または離脱不能例、CD症例における同一症例の治療前治療後の血清および病変組織を収集し、臨床情報と遺伝子あるいは特定の蛋白質発現、あるいは特定の遺伝子のエピゲノム修飾との関連を解析した。

【結果】25年度に共同研究によって本研究を開始すべく倫理申請を行い、9月19日に承認された。検体
提供先および共同研究先施設での承認を得て、症例集積を開始した。活動度、治療応答性との関連を検討するために、同一症例の、年に一度の内視鏡検査時の生検検体を経時的に蓄積した。定期的に受診する患者は寛解維持症例が殆どであったが、研究期間中に寛解から増悪に転じた症例、検査時炎症から寛解へ転じた症例の検体などを収集した。
D. 治療抵抗性克服のための標的項目の機能・メカニズム解析と治療薬シーズの探索【結果】新規治療標的項目の機能について、メカニズム解析を行なった。この際ヒト末梢血TNF分泌を抑制する低分子化合物のスクリーニングを行なうためのn vitro実験系を確立した。

研究発表及び特許取得報告について

課題番号：25指104
研究課題名：炎症性腸疾患における治療抵抗性メカニズムの解明とその診断・治療への応用
主任研究者名：

土肥多惠子

論文発表
論文タイトル

著者

Okada T, Fukuda S, Hase K, Nishiumi S,
Izumi Y, Yoshida M, Hagiwara T,
Microbiota derived lactate accelerates colon
Kawashima R, Yamazaki M, Oshio T,
epithelial cell turnover in starvation-refedOtsubo T, Inagaki-Ohara K, Kakimoto K,
mice.
Higuchi K, Kawamura YI, Ohno H, Dohi.
T.
Son A, Oshio T, Kawamura YI, Hagiwara
TWEAK/Fn14 pathway promotes a T helper T, Yamazaki M, Inagaki-Ohara K, Okada
2-type chronic colitis with fibrosis in mice. T, Wu P, Iseki M, Takaki S, Burkly LC,
Dohi T.

掲載誌

掲載号

年

NatureCommunications

4

2013

MucosalImmunology

6

2013

Sugiura T, Kageyama S, Andou A,
Miyazawa T, Ejima C, Nakayama A, Dohi J Crohns Colitis
T, Eda H.

7

2013

Said HS, Suda W, Nakagome S, Chinen H,
Oshima K. Kim S. Kimura R, Iraha A,
Ishida H, Fujita J, Mano S, Morita H, Dohi
T, Oota H, Hattori M.

DNA Research

21

2014

Cytokine

69

2014

PLOS ONE

9

2014

Obata Y, Furusawa Y, Endo TA, Sharif J,
Takahashi D, Onawa S, Fujimura Y, Takahashi
The epigenetic regulator Uhrf1 facilitates
M, Ikawa T, Otsubo T, Kawamura YI, Dohi T, Nature Immunology
functional expansion of colonic regulatory T cells.
Tajima S, Ohara O, Hori S, Ohno H, Koseki H,
Hase K.

15

2014

Therapeutic adenoviral gene transfer of a
glycosyltransferase for prevention of peritoneal
dissemination and metastasis of gastric cancer.

21

2014

Retrotransposition of long interspersed nucleotide
Otsubo T, Hagiwara T, Okamura T, Ishizaka Y,
element-1 is associated with colitis but not tumors
PLOS ONE
Kawamura YI, Dohi T
in a murine colitic cancer model

10

2015

Aberrant DNA hypermethylation reduces theexpression of the desmosome-related molecule
periplakin in esophageal squamous cell
carcinoma.

Otsubo T, Hagiwara T, Tamura-Nakano M,
Sezaki T, Miyake O, Hinohara C, Shimizu T,
Yamada K, Dohi T and Kawamura YI.

4

2015

Zfat-deficiency results in a loss of CD3ζphosphorylation with dysregulation of ERK
and Egr activities leading to impaired
positive selection.

Ogawa M, Okamura T, Ishikura S, Doi K,
Matsuzaki H, Tanaka Y, Ota T, Hayakawa
PLoS OneK, Suzuki H, Tsunoda T, Sasazuki T,
Shirasawa S.

008

2013

Differential requirement for RhoH indevelopment of TCRab CD8aa IELs andother types of T cells.

Hiroyo Oda, Norimasa Tamehiro, Michael
S Patrick, Kunihiro Hayamakwa, Harumi
Immunol. Lett
Suzuki .
Matsutani M, Ogawa M, Takaoka N,
Hanaoka N, Toh H, Yamashita A, Oshima
K, Hirakawa H, Kuhara S, Suzuki H,
PLoS One
Hattori M, Kishimoto T, Ando S, Azuma Y,
Shirai M.

151

2013

009

2013

009

2014

Oral treatment with a novel small moleculealpha 4 integrin antagonist, AJM300,
prevents the development of experimental
colitis in mice.
Dysbiosis of Salivary Microbiota in
Inflammatory Bowel Disease and Its
Association With Oral Immunological
Biomarkers.

Pathological activation of canonical nuclearDohi T, Kawashima R, Kawamura YI, Otsubo
factor κB by synergy of tumor necrosis factor α
T, Hagiwara T, Amatucci A, Michaelson J,
and TNF-like weak inducer of apoptosis in mouse
Burkly LC.
acute colitis.
Chemokine receptor CCR8 is required forlipopolysaccharide-triggered cytokine production
in mouse peritoneal macrophages

Complete genomic DNA sequence of theEast Asian spotted fever disease agent
Rickettsia japonica.

Differential function of Themis CABIT
domains during T cell development.

Oshio T, Kawashima R, Kawamura YI,
Hagiwara T, Mizutani N, Okada T, Otsubo T,
Inagaki-Ohara K, Matsukawa A, Haga T,
Kakuta S, Iwakura Y, Hosokawa S and Dohi T

Kawamura YI, Adachi Y, Curiel DT,
Kawashima R, Kannagi R, Nishimoto N and
Dohi T.

Okada T, Nitta T, Kaji K, Takashima A,
Oda H, Tamehiro N, Goto M, Okamura T,
Patrick MS, Suzuki H.

Cancer Gene Ther

Cancer Medicine

PLoS One

研究発表及び特許取得報告について

Overexpression of RhoH permits to bypass the
pre-TCR checkpoint

Tamehiro N, Hiroyo Oda H, Shirai M, Suzuki H PLoS ONE

10

2015

The thymic cortical epithelium determines the
TCR repertoire of IL-17-producing γδT cells.

Nitta T, Muro R, Shimizu Y, Nitta S, Oda H,
Ohte Y,T Goto M, Yanobu R, Narita T,
Takayanagi H, Yasuda H, Okamura T, Murata
S, Suzuki H.

EMBO Rep

16

2015

The Ras GTPase-activating protein Rasal3
supports survival of naive T cells.

Muro R, Nitta T, Okada T, Ideta H, Tsubata T,
Suzuki H.

PLoS ONE102015

An epistatic effect of apaf-1 and caspase-9 onchlamydial infection.

Rhaman MA, Shirai M, Aziz MA, Ushirokita R,
Apoptosis
Kubota S, Suzuki H, Azuma Y.

20

2015

Thymic stromal cell subsets for T cell
development.

Nitta T, Suzuki H.

Cell Mol Life Sci

73

2016

Nishimura S, Manabe I, Takaki S,
Adipose natural regulatory B cells negatively Nagasaki M, Otsu M, Yamashita H, Sugita
Cell Metabolism.
control adipose tissue inflammation.
J, Yoshimura K, Eto K, Komuro I,
Kadowaki T, Nagai R.

018

2013

Nov/CCN3 regulates long-term repopulating Ishihara J, Umemoto T, Yamato M,
activity of murine hematopoietic stem cells Shiratsuchi Y, Takaki S, Petrich BG,
via integrin αvβ3.
Nakauchi H, Eto K, Kitamura T, Okano T.

Int J Hematol.

099

2014

Katayama H, Mori T, Seki Y, Anraku M,
Iseki M, Ikutani M, Iwasaki Y, Yoshida N, Eur J Immunol.
Takatsu K, Takaki S.

2014 Feb 17.
doi:
10.1002/eji.201
3438832014

Lnk prevents inflammatory CD8+ T-cellproliferation and contributes to intestinal
homeostasis.

Lnk/Sh2b3 controls the production and function ofMori T, Iwasaki Y, Seki Y, Iseki M, Katayama
dendritic cells and regulates the induction of IFNH, Yamamoto K, Takatsu K, Takaki S.
γ-producing T cells.

J Immunol

193

2014

Lnk prevents inflammatory CD8+ T-cellproliferation and contributes to intestinal
homeostasis.

Katayama H, Mori T, Seki Y, Anraku M, Iseki
M, Ikutani M, Iwasaki Y, Yoshida N, Takatsu
K, Takaki S

Eur J Immunol

44

2014

Nov/CCN3 regulates long-term repopulating
activity of murine hematopoietic stem cells via
integrin αvβ3

Ishihara J, Umemoto T, Yamato M, Shiratsuchi
Y, Takaki S, Petrich BG, Nakauchi H, Eto K,
Kitamura T, Okano T

Int J Hematol

99

2014

Saleh MA, McMaster WG, Wu J,
Lymphocyte adaptor protein LNK deficiency Norlander AE, Funt SA, Thabet SR, Kirabo
exacerbates hypertension and end-organA, Xiao L, Chen W, Itani HA, Michell D,
J Clin Invest
inflammation.
Huan T, Zhang Y, Takaki S, Titze J, Levy
D, Harrison DG, Madhur MS.

125

2015

147

2016

Fukusaki E, Bamba T. Supercritical fluid
chromatography/Orbitrap mass spectrometry
Yamada T, Uchikata T, Sakamoto S, Yokoi
based lipidomics platform coupled withJ Chromatogr A.
Y, Nishiumi S, Yoshida M,
automated lipid identification software for
accurate lipid profiling.

013-01

2013

A novel gas chromatography mass
spectrometry-based serum diagnostic andassessment approach to ulcerative colitis.

Kohashi M, Nishiumi S, Ooi M, Yoshie T,
Matsubara A, Suzuki M, Hoshi N,
J Crohns Colitis.
Kamikozuru K, Yokoyama Y, Fukunaga K,
Nakamura S, Azuma T, Yoshida M.

doi:
10.1016/j.crohn
s.2014.01.024.

2014

Metabolome analysis for discovering biomarkers
of gastroenterological cancer.

Suzuki M., Nishiumi S., Matsubara A., Azuma
T., Yoshida M.

Journal ofchromatography

966

2014

Metabolomics for Biomarker Discovery in
Gastroenterological Cancer.

Nishiumi S., Suzuki M., Kobayashi T.,
Matsubara A., Azuma T., Yoshida M.

Metabolites

4

2014

Supercritical fluid extraction as a preparation
method for mass spectrometry of dried blood
spots.

Matsubara A., Izumi Y., Nishiumi S., Suzuki
Journal ofM., Azuma T., Fukusaki E., Bamba T., Yoshida
Chromatography B
M

969

2014

Interferon-γ constrains cytokine productionof group 2 innate lymphoid cells.

Kudo F, Ikutani M, Seki Y, Otsubo T,
Kawamura Y, Dohi T, Oshima K, Hattori
M, Nakae S, Takatsu K, Takaki S.

Immunology

研究発表及び特許取得報告について

Multi-Component Profiling of Trace Volatiles in
Kakuta S., Yamashita T., Nishiumi S., Yoshida
Blood by Gas Chromatography/Mass
Mass SpectrometryM., Fukusaki E., Bamba T
Spectrometry with Dynamic Headspace Extraction

4

2015

Interferon-γ-producing B cells induce theformation of gastric lymphoid follicles after
Helicobacter suis infection

8

2015

Yang L., Yamamoto K., Nishiumi S., Nakamura
MucosalM., Matsui H., Takahashi S., Dohi T., Okada T.,
Immunology
Kakimoto K., Hoshi N., Yoshida M., Azuma T

Profiling of volatile compounds in APCMin/+
Kakuda S., Nishiumi S., Yoshida M., Fukusaki
mice blood by dynamic headspace extraction andE., Bamba T.
gas chromatography/mass spectrometry

Journal of
Chromatography B

1003

2015

（特集 I．感染・炎症・免疫とメタボローム）
医学におけるメタボローム研究の現状

臨床免疫・アレル
ギー科

63

2015

Metabolomics

12

2016

那賀川 峻、 西海 信、東 健、吉田 優

LC-MS/MS-based metabolome analysis detectedchanges in the metabolic profiles of small andSuzuki M., Nishiumi S., Kobayashi T., Azuma
large intestinal adenomatous polyps in ApcMin/+ T., Yoshida M.
mice
学会発表
タイトル

発表者

学会名

場所

年月

Involvement of L1 retrotransposition in murine
experimental colitis-cancer model.

Otusbo T, Kawamura YI, Ishizaka Y, Dohi T.
Involvement of L1 retrotransposition in murine
experimental colitis-cancer model.

DDW2013

Orlando2013/5/20

TWEAK/Fn14 pathway promotes chronic colitis
and fibrosis mediated by IL-13-TSLP axis.

Dohi T, Kawamura YI, Kawashima R, Son A,
Oshio T, Wu P, Burkly LC.

Immunology 2013

Honolulu

2013/5/7

Cell type-specific, genome-wide epigenetic
analysis for lamina propria cells isolated from the Otsubo T, Kawamura YI, Dohi T.
colon with ulcerative colitis.

第42回日本免疫学
千葉会学術集会.

2013/12/1

消化管炎症の重症化・慢性化機構を担う因
子.

土肥多惠子

第50回日本消化器
東京
免疫学会

2013/8/1

Sialic-acid-binding Ig-like lectins, potential
peripheral markers for mucosal damage ofinflammatory bowel disease.

Kawamura YI, Maeyashiki C, Hagiwara T,
Otsubo T, Akiyama J, Dohi T.

United Eurpean
Gastroenterology
2014

食道扁平上皮癌におけるデスモゾーム関連
分子のDNAメチル化異常.

萩原輝記, 大坪武史, 中野（田村）美和, 山田
第87回日本生化学
和彦, 日野原千速, 三宅大, 清水利夫, 土肥多
京都会大会
惠子, 河村由紀.

2014年9月

Intestinal mucosal injury induced by anti-cancer
agents is mediated by TWEAK/Fn14 and IL-13.

Sezaki T, Hirata Y, Kawamura YI, Dohi T.

第43回日本免疫学
京都会総会

2014年12月

Integrative analysis of DNA methylome andtranscriptome detected loss of a desmosome
protein in esophageal squamous cell carcinoma.

Kawamura YI, Otsubo T, Hagiwara T, TamuraNakano, Sezaki T, Hirada Y, Igari T, Yamda K, DDW2015
Dohi T

Washington D.C.

2015年5月

5-Fluorouracil-induced intestinal injury is
mediated by TWEAK/Fn14 and IL-13

Sezaki T, Hirata Y, Burkly LC, Kawamura YI,
Dohi T.

Washington D.C.

2015年5月

DDW2015

Wienna

潰瘍性大腸炎における粘膜固有層免疫細 河村由紀, 大坪武史, 大島健志朗, 豊田哲
第52回消化器免胞のエピゲノム異常 シンポジウム2-炎症性 郎, 萩原輝記, 河村裕, 小西文雄, 矢野秀
東京疫学会
腸疾患・腸内環境と免疫の基礎と臨床−朗, 斉藤幸雄, 服部正平, 土肥多惠子.
Fn14 disruption suppresses 5-Fluorouracil第44回日本免疫induced-diarrhea by enhancing IL-33 and IL- Sezaki T, Hirata Y, Kawamura YI, Dohi T
札幌
学会学術集会
13Ra2 expression

2014年10月

2015年7月

2015年11月

Cortical thymic epithelial cells control
conventional and innate T cell development

Takeshi Nitta, Ryunosuke Muro, Hiroyo Oda,
Shigeo Murata, Harumi Suzuki

第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

An altered T cell repertoire in mice lacking
cortical thymic epithelial cells.

Ryunosuke Muro, Takeshi Nitta, Harumi Suzuki 第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

Differential function of two CABIT domains in
Themis.

Toshiyuki Okada, Takeshi Nitta, Hiroyo Oda,
Michael S Patrick, Harumi Suzuki

第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

A non-synonymous SNP variant of RhoH reduces
Norimasa Tamehiro, Hiroyo Oda, and Harumi
TCR mediated signal transducion via proteasomal
Suzukidegradation

第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

研究発表及び特許取得報告について

A missense mutation in Psmb11 impairs
thymoproteasome assembly and T cell
development”,

Novel mutant mice lacking cortical thymic
epithelial cells”
Differential function of Themis CABIT domains
during T cell development

The 35th Naito
Conference “TheUbiquitinTakeshi Nitta, Ryunosuke Muro, Sachiko Nitta, Proteasome System:
Sapporo, Japan
Shigeo Murata, Harumi Suzuki
From Basic
Mechanisms to
Pathopysiological
Roles”,The 6th International
Takeshi Nitta, Ryunosuke Muro, Sachiko Nitta,
Workshop of Kyoto Kyoto, Japan.
Shigeo Murata, Harumi Suzuki
T Cell Conference
Toshiyuki Okada, Takeshi Nitta, Kentaro Kaji,
Hiroyo Oda, Michael Patrick, Harumi Suzuki

Toshiyuki Okada, Takeshi Nitta, Kentaro Kaji,
Themis CABIT domains exert distinct functions in
Hiroyo Oda, Michael S Patrick and Harumi
thymocyte positive selection
Suzuki

The 6th International
Workshop of Kyoto Kyoto, JapanT Cell Conference
The 15th
International
Milan
Congress of
Immunology

2013.7.9-12

2013.6.3-7

2013.6.3-7

2013年8月

Themis regulates cytokine production in mature
naive T cells

Okada T, Nitta T, Oda H, Tamehiro N, Patrick 7th ThymOZMS, Suzuki H
meeting

Helon Island,
Australia

2014年4月

胸腺皮質上皮細胞によるγδT細胞の分化制御

新田 剛、室 龍之介、新田 幸子、小田 浩
代、鈴木 春巳

第24回 KTCC

京都

2014年6月

RhoH欠損マウスで認められる乾癬様皮膚炎の解析

爲廣紀正、小田浩代、鈴木春巳

第24回 KTCC

京都

2014年6月

Rasal3, a newly identified Ras GTPase activating
第43回日本免疫学
protein is important for survival of naïve T cells in Muro R, Nitta T, Okada T, Tubata T, Suzuki H
京都会総会
the periphery2014年12月

Overexpression of RhoH permits to bypass the
pre-TCR checkpoint

Norimasa Tamehiro, Hiroyo Oda, and Harumi
Suzuki

Venice Thymus
Meeting 2015

Venice, Italy

2015年4月

IL-17産生型γδT細胞の分化におけるRhoHの役
室龍之介、新田剛、為広紀正、鈴木春巳
割

第25回KTCC

京都

2015年5月

Differential roles of TCR-proximal signaling
adaptors in T cell development

SUZUKI Harumi, TAMEHIRO Norimasa,
MURO Ryunosuke, ODA Hiroyo, NITTA
Takeshi

The 44th JSI annual
meeting
札幌(Symposium)

2015年11月

NAD(P)H:quinone oxidoreductase (Nqo1)
regulates irritant contact dermatitis.

M Kitajima, A Kimura, H Suzuki:

The 44th JSI annual札幌
meeting

2015年11月

Identification of a novel factor on Th17 celldifferentiation.

Norimasa Tamehiro and Harumi Suzuki

The 44th JSI annual札幌
meeting

2015年11月

Akihiro Kimura, Akihiko Yoshimura, Harumi
Suzuki.

The 44th JSI annual札幌
meeting

2015年11月

Lnk/Sh2b3, an intracellular adaptor associatedwith celiac disease and autoimmune diabetes,
regulates accumulation of inflammatory T cells
and prevents intestinal villous atrophy.

Mori T, Katayama H, Iwasaki Y, Seki Y, Iseki M,
Ikutani M, Yoshida N, Takatsu K, Takaki S.

The 15th
International
Congress of
Immunology

Milan

2013年8月

An autoimmune disease-associated gene,
Lnk/SH2B3 controls production and functions of
DC subsets and regulates inflammatory T celldifferentiation.

Mori T, Seki Y, Iwasaki Y, Yamazaki-Suzuki N, Iseki 第42回 日本免疫学
千葉M, Takaki S.
会学術集会

2013年12月

AhR-Nqo1 axis selectively inhibits LPS-induced
protein.

IgE production and germinal center formation are
regulated by the adaptor protein Aps/Sh2b2 in B Iseki M, Kudo F, Takaki S.
cells.

第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

Lnk/Sh2b3 adaptor protein prevents theaccumulation of inflammatory CD8+ T cells andintestinal villous atrophy.

Seki Y, Katayama H, Mori T, Iseki M, Takaki S.

第42回 日本免疫学
千葉
会学術集会

2013年12月

Lnk/Sh2b3 adaptor protein controls cytokine
responses of dendritic cells, and regulates theinduction of IFN-γ-producing T cells .

Mori T, Iseki M, Takaki S.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

IgM+ plasma cells contribute to the sufficient
production of IgG by secreting IL-10 and IL-13.

Yamazaki N, Takaki S.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

Lnk/Sh2b family adaptor protein Aps/Sh2b2 in B
cells contributes to germinal center B cell survival Iseki M, Kudo F, Takaki S.
and optimal IgE production in vivo.

研究発表及び特許取得報告について

Suppression of cytokine production from group 2
Kudo F, Seki Y, Takaki S.
innate lymphoid cells by interferon-γ.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

Germinal center B cell survival and optimal IgE
production are controled by Lnk/Sh2b family
adaptor protein Aps/Sh2b2.

Iseki M, Kudo F, Takaki S.

第44回 日本免疫学
札幌
会学術集会

2015年11月

An autoimmune disease-associated gene,
Lnk/Sh2b3 controls inflammation in adipose
tissue and reduces the risk for onset of diabetes.

Mori T, Yamazaki N, Takaki S.

第44回 日本免疫学
札幌
会学術集会

2015年11月

Inhibitory effects of interferon-γ on cytokine
production in group 2 innate lymphoid cells.

Kudo F, Takaki S.

第44回 日本免疫学
札幌
会学術集会

2015年11月

メタボロミクスの医療応用吉田優

第61回 日本質量分
茨城析総合討論会2013

メタボロミクスの医学研究への応用吉田優

第25回日本消化器
福岡
癌発生学生総会

2014

Masaru Yoshida

29th ISMAS
International
インド
Symposium on Mass
Spectrometry

2015

日本臨床検査自動
神奈川
化学会第47回大会

2015/10/1

Metabolomics Analysis for medecal
Research

メタボロミクスによる新しい臨床検査の展開 吉田優
その他発表(雑誌、テレビ、ラジオ等)
タイトル
該当なし
特許取得状況について※出願申請中のものは(

発表者

発表先

場所

年月日

)記載のこと。

発明名称
該当なし※該当がない項目の欄には「該当なし」と記載のこと。
※主任研究者が班全員分の内容を記載のこと。

登録番号

特許権者(申請者）
登録日(申請日)（共願は全記載）

出願国