LC/MS用オンライン脱塩アクセサリ

ソルナックチューブ
ソルナックカートリッジ
LC/MSの悩みを一発解決！
★ 不揮発性溶離液でのLC/MS測定
リン酸塩緩衝液
イオン対試薬★ 酸, 塩基によるイオン化抑制
トリフルオロ酢酸
トリエチルアミン
イオン対試薬★ Na, Kなどの付加イオン◎ 流量 0.2 ~ 1.0 mL/min 対応◎ 簡単操作 (UV検出器とMSの間に繋ぐだけ)【特許第6609844号】

製造元 エムエス・ソリューションズ株式会社〒187-0035 東京都小平市小川西町 2-18-13
E-mail : info@sitsuryobunsekiya.com
URL : https://www.sitsuryobunsekiya.com/

販売元

アルテア技研株式会社〒222-0033 神奈川県横浜市港北区新横浜3-23-3
E-mail : support.sales@altair.co.jp
URL : https://www.altair.co.jp/
TEL : 045-473-6211
FAX : 045-473-2884

・・・・・・・・ 装インジェクター

置

構

成

バルブ

HPLCカラム

例・・・・・・・・
ライン
フィルター

ユニオン

質量分析計

UV検出器

ポンプ

溶離液

ソルナックチューブ
ソルナックカートリッジ

廃液

内径1.6mm

内径1mm
フィッティングは別売（内径1.6mmは、専用フィッティングが必要です）★

CFAN（アニオン交換＋カチオン交換）：リン酸塩緩衝液のオンラインLC/MS測定★

OOAN（カチオン交換） ： Na，Kなどの付加イオン削減
トリエチルアミン，ジブチルアミンによるイオン化抑制の改善★

CFOO（アニオン交換） ：リン酸,リン酸アンモニウム溶離液のオンラインLC/MS測定
トリフルオロ酢酸によるイオン化抑制の改善★

CAOO（アニオン交換） ：ドデシル硫酸アンモニウム溶離液のオンラインLC/MS測定
揮発性イオン対試薬によるイオン化抑制の改善

ソルナック カートリッジ
ご使用の流れ・・・使用方法・・・
ソルナックチューブ

お客様

エムエス・ソリューションズ： ディスポタイプ

ソルナックカートリッジ

ソルナック カートリッジ購入： 再充填可能（右図のフロー参照）

LC/MS測定

再充填カートリッジ送付

使用済カートリッジ送付

カートリッジ充填

使用可能溶離液※１：アセトニトリル，メタノール，水

使用可能

2～12

pH

：

測定不可化合物※２ ： CFAN ・・・ リン酸基，スルホン酸基及び四級アンモニウム基などを持つ強イオン性化合物
OOAN ・・・ 四級アンモニウム基などを持つ強塩基性化合物
CFOO, CAOO ・・・ リン酸基，スルホン酸基などを持つ強酸性化合物※１※２

有機溶媒だけでは使用できません。水を20%以上含む必要がございます。
強イオン性化合物以外でも、ソルナック チューブに吸着してピークが消失したりブロード化することがございます。

・・・・・・・・・・ 測

定例★ CFAN：リン酸塩緩衝液での測定

・・・・・・・・・・★ OOAN：Na付加イオンの除去
Subtract [MS: 7.2270-7.2603, MS: 7.3770-7.4270] / 20170726_SolnacTube_steroid_02 / …

ソルナックチューブ無5x10Intensity

UVクロマトグラム(801806)

303 [M + H] +303.24

7.50[M + Na] +325
357 [M + Na + MeOH] +357.255.00

325.22
2.50

0.00
100

150

200

250

300

350

400

450

500

m/z
m
/z

TIC
クロマトグラム

Subtract [MS: 7.3218-7.4052, MS: 7.4885-7.5885] / 20170726_salnactube_OONH10100…

1.00
ソルナックチューブ有6x10(824594)303 [M + H] +303.24

Intensity

0.75
0.50

0.25

保持時間 [min]

0.00
100

リン酸塩緩衝液でも、時間軸に沿った形でLC/MSの測定ができます。

150

200

250

300

350

400

450

500

mm/z
/z

Na付加イオンが小さくなります。

★ CFOO：トリフルオロ酢酸溶離液でのLC/MS負イオン測定
0.1%TFA溶離液
ソルナックチューブ無マスクロ[1];148.03000..148.13000; / ESI- / 20180115_Met_neg03
0.1%TFA溶離液
強度 (60)60
ソルナックチューブ無MS[1];0.026..1.000; / ESI- / 20180115_Met_neg03
3x10

強度 (182503)

113.01

113

m/z 113100

強度（ 182503 ）
m/ z

200

インタクトタンパク質の分析にも効果的！

40

-0
100

3.025

20

300

質量電荷比(m/z)

0

ソルナックチューブ有
3

x10

2.0
4.0
経過時間[min]
マスクロ[1];148.03000..148.13000; / ESI- / 20180115_Met_CFOO_neg02

6.0

保持時間（min）

ソルナックチューブ有強度 (368)

MS[1];0.028..0.980; / ESI- / 20180115_Met_CFOO_neg02

3.593

350

強度 (182503)

3.59

3.643

m/z 113100

強度（1901）
50
-0
100

m/ z

200

300

質量電荷比(m/z)

バッググラウンドのトリフルオロ酢酸強度が約1/100になります。

0

2.0

4.0

6.0

経過時間[min]

保持時間（min）

TFA溶離液でも分析種の負イオンを検出できます。

★ OOAN：トリエチルアミンによるヌクレオチドのイオン化抑制改善
試料：ヌクレオチド（AMP, ADP, ATP） 溶離液：0.1%トリエチルアミン水溶液

トリエチルアミン溶離液中でも、ヌクレオチドをPos.で高感度検出できます！
ソルナックチューブ無m/z 348 [AMP+H]+
m/z 428 [ADP+H]+ m/z 529[ADP+TEA+H]+
m/z 449[AMP+TEA+H]+
m/z 609m/z 508[ATP+TEA+H]+[ATP+H]+m/z 102

ソルナックチューブを接続してオンラインでTEAを除去しましたところ、EIC強度は4～8倍高い値を示しました。さらに、トリエチルアンモニウム付加イオンが検出されずにプロトン付加イオンだけを検出することができました。

☆ 感度向上！
☆ TEA付加イオン無！

ソルナックチューブ有拡大[TEA+H]+m/z 348 [AMP+H]+ 強度:4100m/z

428 [ADP+H]+ 強度:728m/z

508 [ATP+H]+ 強度:300

m/z 348 [AMP+H]+ 強度:15900
m/z 428 [ADP+H]+ 強度:3380
m/z 508 [ATP+H]+ 強度:2540

TEA, DBAを含む溶離液でも、イオン化抑制の改善と付加イオンが無いスペクトルが得られます・・・・・・・ アプリケーションデータ ・・・・・・・

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エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ

No.SAL-001

LC/MS用脱塩カートリッジ “ソルナックカートリッジ”
を用いたレセルピン不純物の分析例
シナプス小胞へのカテコールアミンやセロトニンの取り込みを抑制する作用をもつ、アドレナリン作動性ニューロン遮断薬の1つであるレセルピン（reserpine）を試料として、局方で採用されているリン酸塩
緩衝液を用いたLC条件で分析を行いました。

HPLCカラム

ソルナックカートリッジ

UV検出器

分子量：608.68
モノアイソトピック質量 ： 608.2734
分子式：C33H40N2O9

質量分析計

リン酸塩緩衝液装置概略図【LC条件】【MS条件】

装置： Agilent 1200
カラム ： CERI L-column2 ODS, 40 ℃
(3μm, 4.6 mm i.d.×150 mm)
移動相 ： A ･･･ 10mM KH2PO4水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=80/20 ⇒ 20/80 (0’⇒10’)
流量： 0.8ml/min
検出器 ： UV（215 nm）
試料： レセルピン試薬 50 ppm溶液
注入量 ： 10 μL【LC/MS分析結果】
レセルピン
UVクロマトグラム

不純物①

不純物②
不純物③

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 85 V： 350 ℃
： 80 ℃： m/z 50～1000

ソルナックカートリッジ ： CFAN46030

レセルピンの構造は既知ですので、その[M+H]+ (m/z609.2807)の精密質量を内標準として、不純物①と②のマススペクトルのm/z 値を補正しました。2つの不純物の推定組成は、C33H41N2O10 (+0.93ppm), C32H39N2O8(+5.1ppm)であり、それぞれレセルピンからの構造変化
は+O (+16 Da)、-CH2O (-30 Da)であると推測されます。
不純物③は、①と同じマススペクトルでした。両者は異性体の関係にあると推測されます。
[M+H]+

不純物①

不純物③

不純物①

+0.93ppm

C33H41N2O10+5.1ppm

C32H39N2O8

EIC: m/z 625

m/z

不純物②

不純物②

[M+H]+

EIC: m/z 579

m/z

レセルピン不純物のUVクロマトグラム、EIC及びマススペクトル

エムエス・ソリューションズ アプリケーションデータ

No.SAL-002

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
エリスロマイシン不純物の分析例
呼吸器や軟部組織などの多くの感染症に適応があるマクロライド系抗生物質の1つであるエリスロマ
イシン（erythromycin) を試料として、リン酸塩緩衝液を用いたLC条件で分析を行いました。エリスロ
マイシンは、UV吸収が弱いことから低波長での検出が必要であり、局方では215nmで検出しています。

HPLCカラム

ソルナック チューブ

UV検出器
分子量：733.93
モノアイソトピック質量 ： 733.4612
分子式：C37H67NO13

ユニオン
溶離液

移動相

流量
検出器
試料
注入量

質量分析計

装置概略図

【LC条件】
装置
カラム

ライン
フィルター

： Agilent 1200
： TOSOH ODS-100V, 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)： A ･･･ 10mM KH2PO4水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=80/20 ⇒ 20/80 (0’⇒10’)： 0.3 ml/min： UV（215 nm）： エリスロマイシン試薬 50 ppm溶液： 5 μL【MS条件】
装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 65 V： 250 ℃
： 100 ℃
： m/z 50～1000

ソルナックチューブ： CFAN10100【LC/MS分析結果】
エリスロマイシンの構造は既知ですので、その[M+H]+ (m/z 734.4691)の精密質量を内標準として、不純物のマススペクトルのm/z 値を補正しました。 不純物Xの推定組成はC37H68NO14 (-4.58ppm)、不純物YはC36H66NO13(-0.71ppm)、不純物ZはC37H66NO14 (-3.97ppm)であり、それぞれエリスロマイシンからの構造変化は+O (+16 Da)、
-CH2 (-14 Da)、 +O-2H (+14 Da)であると推測されます。

750.4605
TICC

不純物 X

[M+H]+C37H68NO14(-4.58ppm)

X

EIC: m/z 750

720.4529

Y[M+H]+C36H66NO13(-0.71ppm)

Y
EIC: m/z 720
748.4454Z
Z[M+H]+C37H66NO14(-3.97ppm)

EIC: m/z 748
734.4691

エリスロマイシン

エリスロマイシン
EIC: m/z 734
保持時間 (min)エリスロマイシン不純物のTICC、EIC及びマススペクトルm/ z[M+H]+

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ

No.SAL-003

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いたサルファ剤の分析例
サルファ剤とは、スルファミンを母体とした一群の化学療法剤の総称です。動物用医薬品として用いられています。資生堂㈱のアプリケーションデータにリン酸塩緩衝液を用いた例が掲載されていましたので、それを参考に溶離液条件を検討しました。
O
N
NH
H2N

S

O

NH
N

O

CH3

H2N

S

O

CH3

N
N

HPLCカラムO

スルファメラジン
分子量：264.3
モノアイソトピック質量 ：264.0681
分子式：C11H12N4O2S

スルファモノメトキシン
分子量：280.3
モノアイソトピック質量 ： 280.0630
分子式：C11H12N4O3S

O

CH3ソルナック チューブ

UV検出器

CH3

N
NH
H2N

S

O

NH
N

O

H2N
CH3

S
O

スルファジミジン
分子量：278.33
モノアイソトピック質量 ： 278.0837
分子式：C12H14N4O2S

O

N
N

ユニオン
O

ライン
フィルター

CH3

溶離液

スルファジメトキシン
分子量：310.33
モノアイソトピック質量 ： 310.0736
分子式：C12H14N4O4S

質量分析計

装置概略図

【LC条件】【MS条件】

装置： Agilent 1200
カラム ： YMC Triart C18 , 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)
溶離液 ： A ･･･ 10mM KH2PO4水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=80/20 ⇒ 20/80 (0’⇒5’)
流量： 0.3 ml/min
検出器 ： UV（215 nm）
試料： サルファ剤4種混合試薬 20 ppm溶液
注入量 ： 4 μL

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 50～1000

ソルナックチューブ： CFAN10100【LC/MS分析結果】①のスルファメラジンと③のスルファモノメトキシン（特に③）については、分子のイオン交換樹脂への相互作用によってピークのブロードニングが起こりましたが、リン酸塩緩衝液を用いたLC/MSにおいて4種類のサルファ剤を測定することができました。
Analog #1; / Sulfa-4mix-CFAN10100-02④②3.28 ③
3.85

UVクロマトグラム
(0)

①

5.00

2.65

0.10

5.51

6.93
5.81

7.40

8.01

8.51

9.00

9.43

9.93

6.13 6.46

0.05

マスクロ[1];265.07000..265.13100; / ESI+ / Sulfa-4mix-CFAN10100-02

265.10 [M+H]+

強度 (1636)
1500

EIC ①, m/z 265
スルファメラジン

2.91

3.51

3.54

4.31

EIC ③, m/z 281
スルファモノメトキシン100

マスクロ[1];279.08300..279.12700; / ESI+ / Sulfa-4mix-CFAN10100-02

279.10 [M+H]+

強度 (6571)

2000

281.09 [M+H]+

強度 (307)
300

500

6000

マスクロ[1];281.06600..281.11900; / ESI+ / Sulfa-4mix-CFAN10100-02

3.51

EIC ②, m/z 279
スルファジミジン

マスクロ[1];311.07700..311.17500; / ESI+ / Sulfa-4mix-CFAN10100-02

311.12 [M+H]+

強度 (927)
5.21

800

EIC ④, m/z 311
スルファジメトキシン

200

m/z
0

2.0

4.0

6.0
経過時間[min]
保持時間

サルファ剤4種のUVクロマトグラム、EIC及びマススペクトル8.0

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ

No.SAL-004

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
ナリジクス酸の分析例
キノロン系抗菌剤の一種であるナリジクス酸を試料として、リン酸塩緩衝液を用いたLC条件で分析を行いました。局方記載の確認試験では紫外可視吸光光度法が採用されていますが、資生堂㈱のアプリケー
ションデータにリン酸緩衝液を用いた例が記載されていましたので、それを参考にしました。

HPLCカラム

ソルナック チューブ

UV検出器

分子量：232.235
モノアイソトピック質量 ： 232.0848
分子式：C12H12N2O3

ユニオン

ライン
フィルター

溶離液

質量分析計

装置概略図

【LC条件】【MS条件】

装置
カラム

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 50～1000

ソルナックチューブ： CFAN10100

溶離液

流量
検出器
試料
注入量

： Agilent 1200
： YMC Triart C18 , 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)： A ･･･ 10mM KH2PO4水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=80/20 ⇒ 20/80 (0’⇒5’)： 0.3 ml/min： UV（215 nm）： ナリジクス酸試薬 20 ppm溶液： 2 μL【LC/MS分析結果】
UVクロマトグラムとEIC（extracted ion chromatogram、抽出イオンクロマトグラム）のピーク時間
差は約10秒です。元々UV検出器の出口をMSに接続しているため、両クロマトグラムピークには時間差があります。EICピークは殆どブロードニングしておらず、分析種のソルナックチューブ内での拡散、樹脂への吸着は殆どないと考えられます。
Analog #1; / Nardicsacid-CFAN10100-01
(0)
5.48

5.48

0.14

UVクロマトグラム

0.04

MS[1];5.61..5.70;-1.0*MS[1];5.52..5.56; / ESI+ / Nardicsacid-CFAN10100-01
強度 (3463)

マスクロ[1];233.08300..233.14600; / ESI+ / Nardicsacid-CFAN10100-01
強度 (4304)[M+H]+
233.11233.11

5.64

5.64

4000

EIC: m/z 233

2000

1000

234.13 271.08
0

0

2.0

4.0

保持時間
(min)
経過時間[min]

6.0

8.0

ナリジクス酸のUVクロマトグラムとEIC

100

200
質量電荷比(m/z) m/z

300

ナリジクス酸のマススペクトル400

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ

No.SAL-005

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いたナトリウム付加イオン低減の試み
Positive-ESIによるLC/MS分析において、特にメタノールを移動相に用いると、ナトリウム付加イオン（[M+Na]+）が観測され易いことが知られています。分析目的によっては、 [M+Na]+の強度を低減させてプロ
トン付加分子（ [M+H]+）に集約させることが求められます。ソルナックチューブを用いて、移動相中の微量のナトリウムイオンを除去して、 [M+Na]+ 強度を低減させることを試みました。

HPLCカラム

ソルナック チューブ

UV検出器
17α-メチルテストステロン
分子量：302.45
モノアイソトピック質量 ： 302.22458
分子式：C20H30O2

ユニオン
溶離液

ライン
フィルター

質量分析計

装置概略図

【LC条件】【MS条件】

装置
カラム： Agilent 1200
： TOSOH ODS-100V , 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)
溶離液 ： A ･･超純水B ･･･ CH3OH
A/B=90/10 ⇒ 0/100 (0’⇒5’)(ナトリウム付加イオンを生成させるために、B液に0.5mM-NaOHを疑似的に添加しました）
流量： 0.3 ml/min
検出器 ： UV（230 nm）
試料： 17α-メチルテストステロン50ppm溶液
注入量 ： 5 μL

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 50～1000

ソルナックチューブ：OOAN10050【LC/MS分析結果】
ソルナックチューブ OOANを用いることで、[M+Na]+ 強度は1/10以下に減少し、 [M+Na+CH3OH]+ はほ
ぼ消失しました。また、 [M+H]+ 強度は増加しました。本製品は、 [M+Na]+ 強度を低減させる効果がある
ことが確認できました。
ソルナックチューブ OOAN有ソルナックチューブ OOAN無Subtract [MS: 7.2270-7.2603, MS: 7.3770-7.4270] / 20170726_SolnacTube_steroid_02 / …

5x10

303.24303.246x10325.22325.22357.25357.242.50

1.00

Subtract [MS: 7.3218-7.4052, MS: 7.4885-7.5885] / 20170726_salnactube_OONH10100…
303.24303.240.75[M+Na]+

5.00

Intensity

Intensity

7.50(801806)[M+H]+

0.50[M+Na+CH3OH]+

0.25

0.00

0.00
100

150

200

250

300

350

400

450

500

100

150

200

250

m/z

1.50

Intensity(1160618)

0.50

6
x10

400

450

500

(1390117)

7.31

EIC (m/z 303)
強度：1.40×106

1.00

0.00

0.00
0.0

2.5

5.0

7.5

Time [min]EIC: 325.2062-325.2422 / 20170726_SolnacTube_steroid_02/ ESI+ / Estrone, 4-Choles …
5
x10

10.0

0.0

(406159)
4
x10

7.23

EIC (m/z 325)
強度：4.00×105

2.50

Intensity

Intensity

350

EIC: 303.2260-303.2562 / 20170726_salnactube_OONH10100_steroid_07 / ESI+ / Est…

7.21

EIC (m/z 303)
強度：1.15×106

1.00

300
m/z

EIC: 303.2317-303.2579 / 20170726_SolnacTube_steroid_02 / ESI+ / Estrone, 4-Chol …

Intensity

6
x10(824594)[M+H]+

2.00

2.5

5.0

7.5

10.0

Time [min]EIC: 325.2100-325.2373 / 20170726_salnactube_OONH10100_steroid_07/ ESI+ / Estro …
7.31

EIC (m/z 325)
強度：1.60×104

1.00(15914)8.71 9.26

0.00

0.00
0.0

2.5

5.0
Time [min]

7.5

10.0

0.0

2.5

5.0
Time [min]17α-メチルテストステロンのEIC及びマススペクトル

7.5

10.0

エムエス・ソリューションズ アプリケーションデータ

No.SAL-007

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
イオン液体の分析例：イオン対試薬への適用
イオン液体は「イオンのみで構成されており、100℃以下で液体状態の塩」と定義され、電解質を主用途として今後の開発が期待されています。主なイオン液体は、極性が高くUV吸収が弱いことから、低波長でも検出が可能なドデシル硫酸ナトリウム（SDS）などのイオン対試薬を添加した溶離液を用いてHPLC分析することが多いです。イオン液体の代表的骨格の一つであるイミダゾリウム塩を試料として、ドデシル硫酸アンモ
ニウムを添加した溶離液を用いてLC/MS分析を行いました。

CH3

+

N

Cl

-

HPLCカラムN

ソルナック チューブ

UV検出器

H3C

分子量：174.67
モノアイソトピック質量 ： 139.1230+34.9694
分子式：C8H15N2Cl

ユニオン
溶離液

ライン
フィルター

質量分析計

装置概略図

【LC条件】【MS条件】

装置
カラム

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲

溶離液

流量
検出器
試料
注入量

： Agilent 1200
： TOSOH ODS-100V, 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)： A ･･･ 10mM ドデシル硫酸アンモニウム水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=50/50 ⇒ 20/80 (0’⇒5’)： 0.3 ml/min： UV（215 nm）： 1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムクロリド 5 ppm溶液： 5 μL： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 40 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： COOO10100（特別仕様品）※市販品のCAOO10100でも同様な測定が可能です【LC/MS分析結果】
塩基性化合物向けのイオン対試薬としてはドデシル硫酸ナトリウム（SDS）が一般的ですが、SDS用のイオン
交換では分析種も一緒に吸着してしまうため、ドデシル硫酸アンモニウムを用いました。ソルナックチューブは、まだ市販していない特別仕様品です。グラジエントの初期条件が1:1であるにも関わらず、1-ブチル-3-メチルイミ
ダゾリウムクロリドの保持時間は2.88分であり、イオン対試薬の効果が確認できました。
ソルナックチューブにより不揮発性のドデシル硫酸を除去することで、オンラインLC/MS分析を行い、m/z 139イオンを検出することが出来ました
2.88

UV (215 nm)
139.1
3.14

抽出イオンクロマトグラム
m/z 139

保持時間 [min]1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムクロリドのUVクロマトグラムと抽出イオンクロマトグラム（EIC）

m/ z

1-ブチル-3-メチルイミダゾリウムクロリドのマススペクトルエムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ

No.SAL-006

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
インタクトタンパク質の分析
逆 相分配 クロマト グラフ ィーを 用いたイ ンタク トタンパ ク質の 分析に おいて、 トリフル オロ酢 酸（trifluoroacetic acid, TFA）を添加した溶離液が用いられます。しかし、TFAは酸性度が高すぎるために、
LC-ESI/MSに用いるとニードルと対向電極間に流れる電流量が大きくなり過ぎて分析種のイオン化を抑制してしまうことが知られています。タンパク質を酵素消化したペプチド混合物であればギ酸を添加した溶離液でも良い分離が得られますが、インタクトタンパク質で高分離能を得るためにはTFAの方がより適しています。

【LC条件】
HPLCカラム装置： Agilent 1200
カラム ： YMC Triart C18 , 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)
溶離液 ： A: 0.1%-TFA/超純水, B: 0.1%-TFA/CH3CN
A/B=98/2 ⇒ 20/80 (0’⇒10’)
流量： 0.3 ml/min
検出器 ： UV（210 nm）
試料： タンパク質 各10 pmol/µL溶液
注入量 ： 5 μL

ソルナック チューブ

UV検出器

ユニオン

ライン
フィルター

質量分析計

溶離液

図1

装置概略図

【MS条件】
装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 100 V
： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 200～3,000

【試料】
リゾチーム
ミオグロビン

分子量 約14,300
分子量 約17,800

ソルナックチューブ：CFOO10100【LC/MS分析結果】
1. TFA溶離液 ソルナックチューブCFOO有Analog #1; / Protein-mix_03(0)

UV 210 nm

8.05
8.05
8.81
8.81

0.60

0.40

図2

タンパク質混合試料のUVクロマトグラム

TIC[1]; / ESI+ / Protein-mix_03
x103

8.22 8.99

強度 (2390160)

8.22

8.99

2000

0

図3

TFA溶離液によるLC/MSにおいて、ソルナック
チューブCFOOを用いた際のタンパク質混合試料のUVクロマトグラムを図2に、TICクロマトグラムを
図3に、EICとマススペクトルを図4～7に示します。
図5, 7のマススペクトルで観測されているイオンは、
デコンボリューションの結果より、プロトン付加による多価イオンであることが分かります。
後述するソルナックチューブを用いない場合（TFAをイオン源に導入した場合）と比較して、EIC強度は3～4倍高い値を示しました。また、ギ酸
溶離液を用いた場合と比較すると、ピーク形状が良好であり高い分離能を示しました。

タンパク質混合試料のTICクロマトグラム

マスクロ[1];2044.72700..2045.94600; / ESI+ / Protein-mix_03

MS[1];8.19..8.28;-1.0*MS[1];7.94..8.03; / ESI+ / Protein-mix_03

強度（9868）
強度 (9868)80007+

強度 (8644)

8.22
8.22

8000

2045.32

8+EIC
m/z 2045

6+

1789.782386.04

9+
10+ 1591.06

2000

1301.961432.070

図4

リゾチームの[M+7H]7+に相当するm/z 値でトレースしたEIC

図5

保持時間8.2分の（リゾチームの）マススペクトルMS[1];8.94..9.07;-1.0*MS[1];8.71..8.80; / ESI+ / Protein-mix_03

マスクロ[1];942.87600..943.39900; / ESI+ / Protein-mix_03
強度 (5204)
強度（5204）18+
19+ 17+

強度 (4363)

5000

9.01
9.01

EIC
m/z 943893.57848.954000

998.581131.58
1212.3213+

11+1305.511542.68808.571696.818+9+1885.212120.787+2423.55

694.172827.36

0

0
0

図6

5

経過時間[min]
保持時間 [min]10

ミオグロビンの[M+18H]18+に相当するm/z 値でトレースしたEIC

500

図7

1000

1500
質量電荷比(m/z)

m/ z

2000

2500

保持時間9分の（ミオグロビンの）マススペクトル3000

2. TFA溶離液 ソルナックチューブCFOO無MS[1];8.02..8.12;-1.0*MS[1];7.75..7.84; / ESI+ / Protein-mix_Pos_06

マスクロ[1];2385.41000..2387.17000; / ESI+ / Protein-mix_Pos_06
強度 (2567)
強度（2567）2500

6+

強度 (2075)
2000

8.06
8.06

EIC
m/z 2386

2386.235+2863.301000

7+2405.282045.50500
0

図8

リゾチームの[M+6H]6+に相当するm/z 値でトレースしたEIC

図9

強度（1729）
強度 (1729)14+

強度 (1275)

12+ 11+1212.39

8.79
8.76

8.76

EIC
m/z 1414

1500

保持時間8.1分の（リゾチームの）マススペクトルMS[1];8.73..8.85;-1.0*MS[1];8.52..8.61; / ESI+ / Protein-mix_Pos_06

マスクロ[1];1413.93000..1414.70000; / ESI+ / Protein-mix_Pos_06

9+1542.761060.971000

1696.88

7+

1885.318+

998.63500

6+2827.55

2120.92

943.22893.62848.99447.512423.72

1708.34

1898.022135.14

0

0

5

10

500

1000

1500
質量電荷比(m/z)

m/ z

経過時間[min]
保持時間 [min]図10

ミオグロビンの[M+12H]12+に相当するm/z 値でトレースしたEIC

図11

2000

2500

3000

保持時間8.8分の（ミオグロビンの）マススペクトル3. ギ酸溶離液 ソルナックチューブCFOO無MS[1];6.92..7.24;-1.0*MS[1];5.55..5.95; / ESI+ / Protein-mix_Pos_08

マスクロ[1];1590.62600..1591.41600; / ESI+ / Protein-mix_Pos_08

強度（6174）
強度 (6174)9+強度 (4611)

1591.04

7.14
7.14

EIC
m/z 1591

5000

4000

10+
1432.068+
1789.787+2045.35

11+
1301.9602048.506+2386.110

リゾチームの[M+9H]9+に相当するm/z 値でトレースしたEIC

図12

マスクロ[1];942.89000..943.33700; / ESI+ / Protein-mix_Pos_08

x103

x103強度（22985）
強度 (22985)

保持時間7.1分の（リゾチームの）マススペクトル18+
19+ 17+強度 (18838)

893.54

7.72
7.72

EIC
m/z 94220

図13MS[1];7.66..7.80;-1.0*MS[1];7.52..7.59; / ESI+ / Protein-mix_Pos_08

20+
848.9215

998.541060.881131.54
1212.28

11+ 10+1542.63 1696.78

808.549+
1885.18

694.15

8+

7+

0

-0
0

5

10

500

経過時間[min]
保持時間
[min]

図14

ミオグロビンの[M+18H]18+に相当するm/z 値でトレースしたEIC

図15

1000

1500
質量電荷比(m/z)

m/ z

2000

2500

3000

保持時間7.7分の（ミオグロビンの）マススペクトル

TFA溶離液によるLC/MSにおいて、ソルナックチューブCFOOを用いない場合（TFAをイオン源に導入した場合）のタンパク質混合試料のEICとマススペクトルを図8～11に示します。前述した通り、TFAをイオン源に導入した時のEIC強度は、ソルナックチューブによってTFAを除去した場合に比べて1/3～1/4に減少しました。TFAによるタンパク質のイオン化抑制が起こった結果です。
また、比較のためにギ酸溶離液を用いた場合のデータを図12～15に示します。ギ酸によるタンパク質のイオン化抑制は起こっていないと考えられます。しかし、図12, 14に示したEICピーク形状は図4, 6や8, 10より悪く、ブロードニングしています。逆相分配クロマトグラフィーによるインタクトタンパク質の分析には、ギ酸よりもTFAが適していることが分かります。

MS[1];8.73..8.85;-1.0*MS[1];8.52..8.61; / ESI+ / Protein-mix_Pos_06

強度（1192）
強度 (1192)
プロトン付加による多価イオン

1000

1131.64

1060.97

1212.391305.58

プロトンお
よびTFA付加による多価イオン

998.63943.221068.111005.34

949.551139.241220.56

1314.320

図16

ミオグロビンのマススペクトル、CFOO無（m/z 900～1400）

MS[1];8.94..9.07;-1.0*MS[1];8.71..8.80; / ESI+ / Protein-mix_0318+
強度 (4363)
強度（4363）
943.16

4000

17+

16+

998.581060.9115+
1131.5814+
1212.3213+
1305.51933.66
0
900

図17

1000

1100

m z

/
質量電荷比(m/z)

1200

1300

1400

ミオグロビンのマススペクトル、CFOO有（m/z 900～1400）

TFA溶離液によるLC/MSにおいて、ソルナック
チューブCFOOを用いない場合と用いた場合のミオグ
ロビンのマススペクトル（m/z 900～1400）を図15,16に示します。両図において、強度の高いピークはプ
ロトン付加による多価イオンですが、図15ではそれらの右横に1/3程度の強度のピークが観測されています。
m/z 差と電荷数より、小さなピークはTFA付加イオン
であることが分かりました。
ソルナックチューブCFOOを用いることで、TFA共存によるタンパク質のイオン化抑制を低減させると共に、余分な付加イオンのない解析し易いマススペクト
ルが得られました。

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ

No.SAL-008

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
陽イオン界面活性剤の分析例：イオン対試薬への適用
界面に対して性質を変化させる界面活性剤は、1つの分子の中に「親水性」と「親油性」の2つの部分構造をもっています。
この特徴的な構造により、水と油のように本来混ざり合わないものを混ぜ合わせることが出来ます。代表的なものには石鹸（脂肪酸塩）があり、他にも医薬品、化粧品、食品などの成分として広く使われています。界面活性剤の親水性部分には、極性が高い酸や塩基をもつことが多いので、HPLC分析では、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS)などのイオン対試薬を添加した溶離液を用いることもできます。試料として、陽イオン界面活性剤のテトラブチルアンモニウムクロリド、セチルトリメチルアンモニウム
クロリド、セチルピリジニウムクロリドの混合溶液を用いて、LC/MSの測定を行いました。

H3C

CH3
+

N

Cl

-

H3C

テトラブチルアンモニウムクロリド
分子量：277.92
モノアイソトピック質量 ： 242.2842+34.9694
分子式：C16H36NCl

H3C

Cl

-

CH3

ソルナック チューブ

UV検出器

CH3
+ CH3
N

H3C

HPLCカラム

セチルトリメチルアンモニウムクロリド
分子量：320.00
モノアイソトピック質量 ： 284.3312+34.9694
分子式：C19H42NCl

+

N

H3C
Cl

ユニオン

-

セチルピリジニウムアンモニウムクロリド
分子量：339.99
モノアイソトピック質量 ： 304.2999+34.9694
分子式：C21H38NCl

溶離液【LC条件】【MS条件】

装置： Agilent 1200
カラム ： TOSOH ODS-100V, 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)
溶離液 ： A ･･･ 10mM ドデシル硫酸アンモニウム水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=50/50 ⇒ 10/90 (0’⇒5’)
流量： 0.3 ml/min
検出器 ： UV（215 nm）
試料： 各 2.5 ppm溶液
注入量 ： 5 μL

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲

ライン
フィルター

質量分析計

装置概略図

： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 40 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： COOO10100（特別仕様品）※市販品のCAOO10100でも同様な測定が可能です【LC/MS分析結果】
塩基性化合物向けのイオン対試薬としてはドデシル硫酸ナトリウム（SDS）が一般的ですが、SDS用のイオン交換では分
析種も一緒に吸着してしまうため、ドデシル硫酸アンモニウムを用いました。ソルナックチューブは、まだ市販していない
特別仕様品です。 ソルナックチューブにより不揮発性のドデシル硫酸を除去することで、オンラインLC/MS分析を行い、各陽イオン界面活性剤を検出することが出来ました。
242.3
5.49

R.T.5.5’
テトラブチルアンモニウム

抽出イオンクロマトグラム
m/z 242

284.4

7.44

R.T.7.4’
セチルトリメチルアンモニウム

抽出イオンクロマトグラム
m/z 284

抽出イオンクロマトグラム
m/z 304

304.4

7.57

保持時間 [min]陽イオン界面活性剤の抽出イオンクロマトグラム（EIC）

R.T.7.6’
セチルピリジニウムアンモニウム

m/ z

陽イオン界面活性剤のマススペクトル

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ No.SAL-009

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いたTFA除去による負イオンの測定例
酸性化合物を逆相分配クロマトグラフィーにより分析する際、解離抑制のために酸性移動相（分析種のpKaより2以上低いpHに設定）を用いることがあります。通常LC/MSで使える酸性移動相としては、酢酸、ギ酸、トリフル
オロ酢酸（TFA）などが一般的であり、低いpHで使用するならTFAが適しています。しかし、TFAは酸性度が高すぎるために、分析種を正イオンで検出する場合でもイオン化抑制を起こすことがあります。まして分析種を負イオンで検出する場合、ほぼ100%の確率でイオン化抑制を起こすと考えられます。ソルナックチューブで溶離液中のTFAを除去し、負イオン測定を行いました。

HPLCカラム

ソルナック チューブ

UV検出器

トリプトファン
相対分子質量：204.225
モノアイソトピック質量 ： 204.08987
分子式：C11H12N2O2

ユニオン

ライン
フィルター

図1

装置概略図

【LC条件】【MS条件】

装置
カラム

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Neg.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 50～1000

ソルナックチューブ： CFOO10100

溶離液
流量
検出器
試料
注入量

質量分析計

溶離液

： Agilent 1200
： YMC Triart C18 , 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)： A: 0.1%-TFA/超純水, B: 0.1%-TFA/CH3CN
A/B=98/2 ⇒ 20/80 (0’⇒10’)： 0.3 ml/min： UV（210 nm）： トリプトファン20ppm溶液： 5 μL【LC/MS分析結果】
トリプトファンは塩基性アミノ酸ですが、今回は負イオン測定に用いました。
ソルナックチューブを用いない場合と用いた場合のm/z 203（トリプトファンの[M-H]－）のEIC（extracted
ion chromatogram、抽出イオンクロマトグラム）を図2に示します。CFOOなしでは、TFA共存によるイオン化抑制によってシグナルは検出されていませんが、CFOOありではソルナックによるTFA除去の効果でシグナルが検出されています。
ソルナックは、解離抑制を目的とした移動相条件でのLC/MSに有効であることが確認できました。
マスクロ[1];203.24500..203.33600; / ESI- / Trp_Neg_02
強度 (63)

CFOOなし

60

20

0

2

4

6

8

10

経過時間[min]
保持時間
[min]

マスクロ[1];203.24500..203.33600; / ESI- / Trp_Neg_01
強度 (736)600

MS[1];6.23..6.34;-1.0*MS[1];6.57..6.90; / ESI- / Trp_Neg_01
強度 (843)

CFOOあり

800

6.26

6.26

[M+Cl]－
239.30[M-H]－ 239.30
203.29203.29198.01
196.02241.31

89.12

0

0

0

2

4

6

8

10

100

経過時間[min]
保持時間
[min]

図2

m/z 203 ([M-H]－)のEIC

図3

200

質量電荷比(m/z)
m/ z

300

保持時間6.26分のマススペクトル、CFOO使用時

400

エムエス・ソリューションズ アプリケーションデータ

No.SAL-010

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いたTFA除去による負イオンの測定例（２）酸性化合物を逆相分配クロマトグラフィーにより分析する際、解離抑制のために酸性移動相（分析種のpKaより2以上低いpHに設定）を用いることがあります。通常LC/MSで使える酸性移動相としては、酢酸、ギ酸、トリフル
オロ酢酸（TFA）などが一般的であり、低いpHで使用するならTFAが適しています。しかし、TFAは酸性度が高すぎるために、分析種を正イオンで検出する場合でもイオン化抑制を起こすことがあります。まして分析種を負イオンで検出する場合、ほぼ100%の確率でイオン化抑制を起こすと考えられます。酸性基を持ち極性が高いアミノ酸のメチオニンを試料として、ソルナックチューブで溶離液中のTFAを除去して負イオン測定を行いました。
インジェクター

NH2
H3C

ライン
バルブ ユニオン フィルター 質量分析計

HPLCカラム

OH
S

ポンプ

O

メチオニン
相対分子質量：149.211
モノアイソトピック質量 ： 149.05105
分子式：C5H11NO2S

UV検出器

ソルナック チューブ

溶離液

廃液

図1

装置概略図

【LC条件】【MS条件】

装置
カラム

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Neg.
： 2000 V： 45 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： CFOO10100

溶離液
流量
検出器
試料
注入量

： Agilent 1200
： SHISEIDO CAPCELL PAK ADME , 40 ℃
(3μm, 2.1 mm i.d.×100 mm)： A: 0.1%-TFA/超純水, B: 0.1%-TFA/CH3CN
A/B=100/0 ⇒ 50/50 (0’⇒5’)： 0.3 ml/min： UV（210 nm）： メチオニン 20ppm溶液： 5 μL【LC/MS分析結果】
TFA溶離液をMSに導入した場合とソルナックチューブを用いてTFAを除去してから導入した場合のマススペ
クトルを図2に示します。TFAの[M-H]－であるm/z 113の強度は約1/100になりました。
メチオニンは、ギ酸溶離液では逆相カラムへの保持が弱く保持時間は2.03分でしたが、TFA溶離液にすることで保持時間は3.59分となり、カルボキシル基の解離抑制効果により保持を強くすることができました。TFA
溶離液でソルナックチューブを用いない場合と用いた場合のm/z 148（メチオニンの[M-H]－）のEICを図3に示します。ソルナックチューブ無では、TFA共存によるイオン化抑制によってシグナルは検出されていません
が、ソルナックチューブ有ではTFA除去の効果でシグナルが検出されました。
ソルナックは、解離抑制を目的とした移動相条件でのLC/MSに有効であることが確認できました。
マスクロ[1];148.03000..148.13000; / ESI- / 20180115_Met_neg03

MS[1];0.026..1.000; / ESI- / 20180115_Met_neg03
強度 (182503)
0.1%TFA溶離液
ソルナックチューブ無強度 (60)
0.1%TFA溶離液
ソルナックチューブ無

3

x10

100

60

113.01

m/z 113113
強度（ 182503 ）

3.025

40

20

-0
100

m/ z

200

300

0

2.0

4.0

m/z 148 検出

強度：約1/100
マスクロ[1];148.03000..148.13000; / ESI- / 20180115_Met_CFOO_neg02

MS[1];0.028..0.980; / ESI- / 20180115_Met_CFOO_neg02

3.59

強度 (368)
0.1%TFA溶離液
ソルナックチューブ有強度 (182503)
0.1%TFA溶離液
ソルナックチューブ有
3

x10

3.593

350

m/z 113強度（1901）100

6.0

経過時間[min]
保持時間（min）

質量電荷比(m/z)

3.643

50

-0
100

m/ z

200

質量電荷比(m/z)

図2

TFA溶離液でのマススペクトル

300

0

2.0

4.0
経過時間[min]
保持時間（min）

図3 メチオニン分析時のm/z 148 ([M-H]－)のEIC

6.0

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ No.SAL-011

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” に吸着しやすい塩基性化合物に対するポストカラム法による改善例
リン酸塩緩衝液条件にソルナックチューブCFANを用いた場合、測定対象化合物が塩基性の場合には解離型になりチューブ内の樹脂に吸着してしまうことがあります。そこで、チューブ導入前にポストカラム法によりアンモニア水を添加することで、チューブ内の溶離液を塩基性にして測定対象化合物を非解離型とすれば吸着を抑制できると考えました。三環系抗うつ剤のドキセピンのpKaは9.0であることから、中性条件下では解離型となりカチオン交換樹脂に吸着してしまいます。そこで、ポストカラム法でアンモニア水を添加して、ソルナックチューブへの吸着の改善を試みました。
インジェクター

3方ジョイント

HPLCカラム

バルブ

ユニオン

ライン
質量分析計
フィルター

凸
UV検出器

ポンプ

塩酸ドキセピン相対分子質量：315.84
モノアイソトピック質量 ： 315.1390
分子式：C19H22NOCl

ポンプ

ソルナック チューブ

溶離液

アンモニア水廃液

図1 装置概略図【LC条件】
装置
カラム
溶離液

流量
検出器
試料
注入量
ポストカラム【MS条件】： Agilent 1200
： YMC Triart C18 , 40 ℃
(3μm, 2.0 mm i.d.×100 mm)： A ･･･ 10mM KH2PO4水溶液
B ･･･ CH3CN
A/B=80/20 ⇒ 20/80 (0’⇒5’)： 0.2 ml/min： UV（215 nm）： 塩酸ドキセピン試薬 20 ppm溶液： 5 μL： 200mM アンモニア水 0.05 ml/min

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： CFAN10100【LC/MS分析結果】
ソルナックチューブCFANを用いて、そのまま分析した場合とアンモニア水をポストカラム法で添加した場合のm/z 280（塩酸ドキセピンの[M-Cl]+）のEICを図3に示します。アンモニア水を添加して分析した時のマススペクトルを図2に示します。
そのまま分析すると、塩酸ドキセピンはソルナッ
クチューブCFANに吸着することがわかります。アン
モニア水をポストカラム法で添加することで、ピー
ク形状は改善できました。
ソルナックに吸着しやすい塩基性化合物を分析する際には、アンモニア水をポストカラムで添加して塩基性化合物の解離を抑制させる方法が有効といえます。

Analog #1; / 20171212_Doxepin_CFAN10100+NH3_1(0)
UV(215nm)クロマトグラム

6.81

6.81

0.20

0.10
0

2.0

4.0

6.0

8.0

経過時間[min]
保持時間
[min]

マスクロ[1];280.17600..280.22100; / ESI+ / 20171212_Doxepin_CFAN10100_2
3

強度 (16779)
ソルナックチューブCFANを用いた分析

x10

15

m/z 280 EIC
ソルナック
に吸着

5

0

2.0

4.0

保持時間
[min]
経過時間[min]

6.0

8.0

ピーク形状改善MS[1];7.08..7.33;-1.0*MS[1];6.69..6.88; / ESI+ / 20171212_Doxepin_CFAN10100+NH3_1
3x10

マスクロ[1];280.17740..280.21470; / ESI+ / 20171212_Doxepin_CFAN10100+NH3_1
3

強度 (31869)x10

強度 (37812)

ソルナックチューブCFAN＋アンモニア水添加(ポストカラム法)

280.20280.207.16

20m/z 280 EIC

20

0

0
100

200

m/ z

300

400

質量電荷比(m/z)

図2 塩酸ドキセピンのマススペクトル

500

0

2.0

4.0

6.0

8.0

経過時間[min]
保持時間
[min]

図3 塩酸ドキセピン分析時のUVクロマトグラムとEIC

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ No.SAL-012

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
トリエチルアミン除去による正イオンの測定例
極性が高い酸性化合物を逆相分配クロマトグラフィーにより分析する際、塩基性のイオン種を溶離液中に添加することでイオン結合により中性のイオン対を形成して保持を向上させることがあります。通常LC/MSで使えるイオ
ン対形成用の塩基性移動相としては、トリエチルアミン（TEA）、ジブチルアミン（DBA）などが一般的です。しかし、これらのイオン対試薬は塩基性度が高すぎるために、正イオンで検出する場合、ほぼ100%の確率でイオン化抑制を起こすと考えられます。今回は、試料としてニコチン酸とウロカニン酸を使用して、ソルナックチューブで試料
溶液中のTEAを除去して正イオン測定を行いました。

H3C
N
H3C

ライン
バルブ ユニオン フィルター 質量分析計

トリエチルアミン
相対分子質量：101.19
モノアイソトピック質量 ： 101.12045
分子式：C6H15N

CH3

シリンジポンプ

ソルナック チューブ

O

ニコチン酸
相対分子質量：123.11
モノアイソトピック質量 ： 123.03203
分子式：C6H5NO2

廃液

ウロカニン酸
相対分子質量：138.12
モノアイソトピック質量 ： 138.04293
分子式：C6H6N2O2【MS条件】

OH
N
O
HN
OH

N

図1

【インフュージョン条件】
試料
溶解液
流量

： (1) ニコチン酸 10ppm溶液(2) ウロカニン酸 10ppm溶液： CH3CN / H2O = 50 / 50 + 0.1%TEA： 0.1 ml/min

装置概略図

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： OOAN10050【LC/MS分析結果】
シリンジポンプを用いたインフュージョン分析で、ニコチン酸とウロカニン酸をトリエチルアミン（TEA）共存下で測定したマススペクトルを図2, 3に示します。溶液中にTEAを含む場合、TEA共存によるイオン化抑制によって、ニコチン酸とウロカニン酸はともにシグナルが検出されませんでした。
ソルナックチューブを接続してオンラインでTEAを除去しましたところ、 m/z 124（ニコチン酸の[M+H]+）とm/z 139（ウロカニン酸の[M+H]+）が検出されました。尚、ソルナックチューブを接続した
ところ、TEA由来のm/z 102は検出されませんでした。
ソルナックは、イオン対試薬を含む移動相条件でのLC/MSに有効であることが確認できました。
MS[1];0.29..0.47; / ESI+ / Urocanicacid_TEAinACNH2O_non_10_01
non 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%TEA 0.1mL/min

MS[1];0.29..0.61; / ESI+ / Nicotinicacid_TEAinACNH2O_non_10_01
non 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%TEA 0.1mL/min

0.1%トリエチルアミン溶液
ソルナックチューブ無m/z 102x103

0.1%トリエチルアミン溶液
ソルナックチューブ無m/z 102x103

Intensity (893582)

Intensity (892950)

102.2

102.2

800

800

強度（ 893582 ）強度（ 892950 ）
0

0
50

100

mm/z
/150
z

200

50

250

100

mm/z
/z150

m/z 124 検出
x103

Intensity (22087)

20

250

m/z 139 検出

MS[1];0.99..1.52; / ESI+ / Nicotinicacid_TEAinACNH2O_OOAN_10_01
OOAN 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%TEA 0.1mL/min

0.1%トリエチルアミン溶液
ソルナックチューブ有200MS[1];0.55..1.02; / ESI+ / Urocanicacid_TEAinACNH2O_OOAN_10_01
OOAN 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%TEA 0.1mL/min

0.1%トリエチルアミン溶液
ソルナックチューブ有x103

m/z 124

124.1

Intensity (88390)80

強度（ 22087 ）m/z 139139.1

強度（ 88390 ）

10

0

0

50

100

150

m/z/ zm200

250

図2 TEA溶液でのニコチン酸のマススペクトル

50

100

mm/z/150
z

200

250

図3 TEA溶液でのウロカニン酸のマススペクトル

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ No.SAL-013

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いたジブチルアミン除去による正イオンの測定例
極性が高い酸性化合物を逆相分配クロマトグラフィーにより分析する際、塩基性のイオン種を溶離液中に添加することでイオン結合により中性のイオン対を形成して保持を向上させることがあります。通常LC/MSで使えるイオ
ン対形成用の塩基性移動相としては、トリエチルアミン（TEA）、ジブチルアミン（DBA）などが一般的です。しかし、これらのイオン対試薬は塩基性度が高すぎるために、正イオンで検出する場合、ほぼ100%の確率でイオン化抑制を起こすと考えられます。今回は、試料としてニコチン酸とウロカニン酸を使用して、ソルナックチューブで試料溶液中のDBAを除去して正イオン測定を行いました。

H3C

NH

ライン
バルブ ユニオン フィルター 質量分析計

ジブチルアミン
相対分子質量：129.24
モノアイソトピック質量 ： 129.15175
分子式：C8H19N

CH3

シリンジポンプ

ソルナック チューブ

O

ニコチン酸
相対分子質量：123.11
モノアイソトピック質量 ： 123.03203
分子式：C6H5NO2

OH
N

廃液

図1
O

HN
OH

N

ウロカニン酸
相対分子質量：138.12
モノアイソトピック質量 ： 138.04293
分子式：C6H6N2O2【MS条件】【インフュージョン条件】
試料
溶解液
流量

装置概略図

： (1) ニコチン酸 10ppm溶液(2) ウロカニン酸 10ppm溶液： CH3CN / H2O = 50 / 50 + 0.1%DBA： 0.1 ml/min

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： OOAN10050【LC/MS分析結果】
シリンジポンプを用いたインフュージョン分析で、ニコチン酸とウロカニン酸をジブチルアミン（DBA）
共存下で測定したマススペクトルを図2, 3に示します。溶液中にDBAを含む場合、DBA共存によるイオン化抑制によって、ニコチン酸とウロカニン酸はともにシグナルが検出されませんでした。
ソルナックチューブを接続してオンラインでDBAを除去しましたところ、 m/z 124（ニコチン酸の[M+H]+）とm/z 139（ウロカニン酸の[M+H]+）が検出されました。尚、ソルナックチューブを接続したと
ころ、DBA由来のm/z 130は、強度が約870,000から1,500まで減少しました。
ソルナックは、イオン対試薬を含む移動相条件でのLC/MSに有効であることが確認できました。
MS[1];0.29..0.52; / ESI+ / Nicotinicacid_DBAinACNH2O_non_10_01
non 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%DBA 0.1mL/min

0.1%ジブチルアミン溶液
ソルナックチューブ無x103

Intensity (875928)

MS[1];0.40..0.66; / ESI+ / Urocanicacid_DBAinACNH2O_non_10_01
non 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%DBA 0.1mL/min

0.1%ジブチルアミン溶液
ソルナックチューブ無x103

m/z 130

130.2

800

Intensity (869125)

m/z 130

130.2

800

強度（ 869125 ）

強度（ 875928 ）
0

0

50

100

mm/z
/150
z

200

250

50

100

mm/z
/z150

m/z 124 検出x103

MS[1];0.68..1.22; / ESI+ / Urocanicacid_DBAinACNH2O_OOAN_10_01
OOAN 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%DBA 0.1mL/min

0.1%ジブチルアミン溶液
ソルナックチューブ有x103

Intensity (12715)

m/z 124

124.1

10

250

m/z 139 検出

MS[1];0.90..1.48; / ESI+ / Nicotinicacid_DBAinACNH2O_OOAN_10_02
OOAN 10ppm ACN/H2O=50/50+0.1%DBA 0.1mL/min

0.1%ジブチルアミン溶液
ソルナックチューブ有200

Intensity (63503)

m/z 139139.1

50

強度（ 63503 ）強度（ 12715 ）

74.1

144.2

0

0
50

100

m/z
m
/z
150

200

250

図2 DBA溶液でのニコチン酸のマススペクトル

50

100

mm/z
/150
z

200

250

図3 DBA溶液でのウロカニン酸のマススペクトル

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ No.SAL-014

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
ドデシル硫酸除去によるLC/MS測定例
極性が高い塩基性化合物を逆相分配クロマトグラフィーにより分析する際、酸性のイオン種を溶離液中に添加することでイオン結合により中性のイオン対を形成して保持を向上させることがあります。イオン対試薬として使用されているドデシル硫酸ナトリウム（SDS）は不揮発性であるため、MSのイオン化部で析出し導入困難になることや分析種のイオン化を抑制することから、オンラインでLC/MSの測定に用いることはできません。今回は、ドデシル
硫酸アンモニウム（ADS)を添加した系で、試料としてカフェインと塩酸チアミンを使用して、ソルナックチューブ
で試料溶液中のドデシル硫酸を除去して正イオン測定を行いました。

O

O

H3C

S
O

O
H3C

N

N
CH3

Cl
N

H3C

N

シリンジポンプ

ソルナック チューブ

廃液

図1

-

+

N

O

カフェイン
相対分子質量：194.19
モノアイソトピック質量 ： 194.08038
分子式： C8H10N4O2

N

NH2

ライン
バルブ ユニオン フィルター 質量分析計

ドデシル硫酸アンモニウム
相対分子質量：265.39+18.04
モノアイソトピック質量： 265.14790+18.03383
分子式： C12H25O4S･NH4

+

NH4

CH3

N

O

-

塩酸チアミン
相対分子質量：265.35＋35.45
モノアイソトピック質量 ： 265.11176+34.96940
分子式：C12H17N4OS ･Cl

S

H3C【MS条件】OH【インフュージョン条件】
試料

溶解液
流量

装置概略図

： (1) カフェイン 10ppm溶液(2) 塩酸チアミン 10ppm溶液： CH3CN / H2O = 50 / 50 + 10mM ドデシル硫酸アンモニウム： 0.1 ml/min

装置
イオン化法
ニードル電圧
オリフィス１電圧
脱溶媒室温度オリフィス１温度
測定範囲： JEOL JMS-T100LP： ESI Pos.
： 2000 V： 50 V： 250 ℃
： 80 ℃： m/z 10～1000

ソルナックチューブ： CAOO10100【LC/MS分析結果】
ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）を用いる際の分析種である塩基性基をもつ低分子化合物は、アニオン交換+カチオン交換を充填したソルナックでは塩基性の分析種が一緒に吸着してしまいます。しかし、対イオンを揮発性にしたドデシル硫酸アンモニウム（ADS）であればアニオン交換だけで良いので分析種はソルナ
ックに吸着しません。
アニオン交換樹脂

カチオン交換樹脂

ドデシル硫酸ナトリウムNa + 揮発性の酸

揮発性塩

アニオン交換樹脂

ドデシル硫酸アンモニウム

分析種も吸着揮発性塩

シリンジポンプを用いたインフュージョン分析で、カフェインと塩酸チアミンをドデシル硫酸アンモニウ
ム共存下でLC/MSの測定を試みました。ソルナックチューブを接続してオンラインでドデシル硫酸を除去しましたところ、 m/z 195（カフェインの[M+H]+）とm/z 265（チアミンの[M]+）が検出されました。
ソルナックは、イオン対試薬を含む移動相条件でのLC/MSに有効であることが確認できました。
MS[1];1.00..1.52; / ESI+ / Thiamin_C18SO4NH4inACNH2O_CCOO_10_01
CCOO 10ppm ACN/H2O=50/50+10mM C18SO4NH4 0.1mL/min

MS[1];0.40..0.87; / ESI+ / Caffein_C18SO4NH4inACNH2O_CCOO_10_01
CCOO 10ppm ACN/H2O=50/50+10mM C18SO4NH4 0.1mL/min

10ｍM
ドデシル硫酸アンモニウム溶液
x103 Intensity (10288)
ソルナックチューブ有10m/z 195

195.1

10ｍM
ドデシル硫酸アンモニウム溶液
x103 Intensity (41906)
ソルナックチューブ有
122.1
122
40
144.1
144

m/z 265
265.2

154.1
154

20

0

0
50

100

150

m/m/z
z

200

250

図2 ADS溶液でのカフェインのマススペクトル

100

200
m/z

m/ z

300

図3 ADS溶液での塩酸チアミンのマススペクトル400

エムエス・ソリューションズ

アプリケーションデータ No.SAL-015

LC/MS用脱塩チューブ “ソルナックチューブ” を用いた
トリエチルアミン除去によるヌクレオチドの測定例
極性が高い核酸及びヌクレオチドを逆相分配クロマトグラフィーにより分析する際、イオン種を溶離液中に添加することでイオン結合により中性のイオン対を形成して保持を向上させることがあります。核酸分析の場合は、イオン対形成用の塩基性移動相としてトリエチルアミン（TEA）、酸性移動相として1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-プロパノール（HFIP）を用いることが一般的です。しかし、TEAは塩基性度が高すぎるために、正イオンで検出する場
合、イオン化抑制を起こすと考えられます。今回は、試料としてアデニル酸（AMP）, アデノシン二リン酸（ADP）,
アデノシン三リン酸（ATP）を使用して、ソルナックチューブで溶離液中のTEAを除去して正イオン測定を行いました。
インジェクター

ポンプ

AMP
相対分子質量：347.22
モノアイソトピック質量 ： 347.0631
分子式：C10H14N5O7P

ADP
相対分子質量：427.20
モノアイソトピック質量 ： 427.0294
分子式：C10H15N5O10P2

UV検出器

ソルナック チューブ

溶離液

廃液

図1 装置概略図【LC条件】【MS条件】

装置
カラム

装置
イオン化法
ニードル電圧
コーン電圧
脱溶媒温度
測定範囲

溶離液
ATP
相対分子質量：507.18
モノアイソトピック質量 ： 506.9957
分子式：C10H16N5O13P3

ライン
バルブ ユニオン フィルター 質量分析計

HPLCカラム流量
試料
注入量： Waters UPLC H-Class： Waters BEH C18(1.7μm, 2.1 mm i.d.×50 mm)： A: 0.1%-TEA/超純水, B: CH3CN
A/B=100/0 ⇒ 80/20 (2’⇒5’)： 0.3 ml/min： AMP, ADP, ATP 各50μM溶液： 10 μL： Waters SYNAPT： ESI Pos.
： 4 kV： 50 V： 450 ℃
： m/z 50～1200

ソルナックチューブ： OOAN10050【LC/MS分析結果】
TEA溶離液によるLC/MSにおいて、ヌクレオチド（AMP, ADP, ATP）を測定したマススペクトルを図2に示します。ソルナックチューブを用いない場合（TEAをイオン源に導入した場合）と比較して、EIC強度は4～8倍高い値を示しました。また、ソルナックチューブを用いない場合は、プロトン付加イオン[M+H]+に加えてトリ
エチルアンモニウム付加イオン[M+TEA+H]+が検出され複雑なスペクトルであったのに対して、ソルナック
チューブを用いることで、トリエチルアンモニウム付加イオンが検出されずにプロトン付加イオンだけが検出されました。
ソルナックチューブOOANを用いることで、TEA共存によるヌクレオチドのイオン化抑制を低減させると共に、余分な付加イオンのない解析し易いマススペクトルが得られました。核酸分析への応用も期待できます。
ソルナックチューブ無m/z 348 [AMP+H]+
m/z 428 [ADP+H]+
m/z 449m/z 529[ADP+TEA+H]+[AMP+TEA+H]+

m/z 508

m/z 609[ATP+H]+m/z 102[ATP+TEA+H]+

ソルナックチューブ有拡大[TEA+H]+m/z 348 [AMP+H]+ 強度:4100
m/z 428 [ADP+H]+ 強度:728
m/z 508 [ATP+H]+ 強度:300

m/z 348 [AMP+H]+ 強度:15900
m/z 428 [ADP+H]+ 強度:3380
m/z 508 [ATP+H]+ 強度:2540

図2 TEA溶離液でのヌクレオチドのマススペクトル【ソルナックカートリッジ，ソルナックチューブ価格】
商品名

内径

長さ

最大流量 推奨流量

(mm)

(mm)

（mL/min） （mL/min）

1個入

5個入

※６

脱塩時間

脱塩率

※３

※4, ５

（min)

（％）

型番

価格
（円）

型番

価格
（円）

型番

価格
（円）

100,000

対象化合物

再充填 【1個】

ソルナック カートリッジ
CFAN

弱酸性～弱塩基性
化合物

4.6

30

1.0

0.8

20

90以上

CFAN46030-01

22,000

CFAN46030-05

CFAN46030-RF

2,500

ソルナック カートリッジ
OOAN

酸性～弱塩基性
化合物

4.6

30

1.0

0.8

60

90以上

OOAN46030-01

22,000OOAN46030-05 100,000 OOAN46030-RF

2,500

ソルナック カートリッジ
CFOO

弱酸性～塩基性
化合物

4.6

30

1.0

0.8

30

90以上

CFOO46030-01

22,000

CFOO46030-05 100,000 CFOO46030-RF

2,500

ソルナック カートリッジ
CAOO

弱酸性～塩基性
化合物

4.6

30

1.0

0.8

30

90以上

CAOO46030-01

22,000CAOO46030-05 100,000 CAOO46030-RF

2,500

推奨流量

商品名

ソルナック チューブ CFAN

ソルナック チューブ OOAN

※4, ５

（min)

（％）

型番

価格
（円）

型番

価格
（円）

0.3

10

90以上

CFAN10100-10

30,000

CFAN10100-50

125,000

1.0

0.8

20

90以上

CFAN16200-10

40,000

CFAN16200-50

160,000

2

0.3

0.3

15

90以上

OOAN10050-10

30,000OOAN10050-50

125,000

100

5

1.0

0.8

30

90以上

OOAN16100-10

40,000OOAN16100-50

160,000

100

2

0.3

0.3

15

90以上

CFOO10100-10

30,000

CFOO10100-50

125,000

1.6

150

5

1.0

0.8

20

90以上

CFOO16150-10

40,000

CFOO16150-50

160,000

1.0

100

2

0.3

0.3

15

90以上

CAOO10100-10

30,000

CAOO10100-50

125,000

1.6

150

5

1.0

0.8

20

90以上

CAOO16150-10

40,000

CAOO16150-50

160,000

耐圧

最大流量

(mm)

(mm)

(MPa)

（mL/min） （mL/min）

1.0

100

2

0.3

1.6

200

5

1.0

50

1.6
1.0

ソルナック チューブ CFOO

ソルナック チューブ CAOO

酸性～弱塩基性化合物

弱酸性～塩基性化合物

弱酸性～塩基性
化合物

50個入

脱塩率

※３

長さ

弱酸性～弱塩基性
化合物

10個入

脱塩時間

内径
対象化合物

内径

耐圧

最大流量

推奨流量

価格

商品名

内容
(mm)

(MPa)

ソルナック チューブ トライアルパック－０．３

CFAN10100, OOAN10050, CFOO10100 各２個入

1.0

2

0.3

0.3

TRY0.3-06

15,000ソルナック チューブ トライアルパック－０．８

CFAN16200, OOAN16100, CFOO16150 各２個入

1.6

5

1.0

0.8

TRY0.8-06

20,000型番（mL/min） （mL/min）（円）【ソルナック チューブ 用アクセサリ価格】
写真
番号

商品名

数量

型番

価格
（円）

①

PEEKインラインフィルター 10μm

1個

8501

11,900②

PEEKフリッツ 10μm （インラインフィルター交換用）

5個

8511

16,500③

外径1/16インチ用フィッティング

10個

9002

5,500

④

外径1/16インチ用ユニオン

1個

9005

2,200

⑤

外径1/8インチ用フィッティング

1個

0522671,300⑥

外径1/8インチ用フェラル

1個

048949700⑦

外径1/8インチ用レデューシングユニオン

1個

9110

3,300

－

ソルナックチューブ内径1.0ｍｍスターターキット（キット内容：①＋③＋④）

1式

AL56210

19,600－ソルナックチューブ内径1.6ｍｍスターターキット（キット内容：①＋③＋⑤×２＋⑥×２＋⑦×２）

1式

AL56216

28,000①

内径1mm（外径1/16インチ） ③
③
④

⑦ ③

③

⑥
⑤
⑤ 内径1.6mm（外径1/8インチ）
⑥

①

②

⑦

※３ CFAN, OOAN,CFOO : 10mMの塩を含んだ CH3CN/H2O=50/50 溶液を推奨流量で流した場合の値です。
CAOO : 10mMのドデシル硫酸を含んだ CH3CN/H2O=50/50 溶液を推奨流量で流した場合の値です。溶離液の条件によって変化します。
※４ 0分から脱塩時間終了までのトータルでの脱塩率です。
※５ 除去できないリン酸塩などがイオン源に付着することがございます。水で簡単に洗浄できるレベルですが、イオン源の洗浄に関してはご使用されている質量分析計の説明書に従って実施してください。リン酸塩がイオン源に付着した際の洗浄は補償いたしかねます。
※６ 再充填時の往復送料は、お客様のご負担となります。ソルナック カートリッジ到着後の翌日から数えて１０営業日以内に発送いたします。

製造元

エムエス・ソリューションズ株式会社〒187-0035 東京都小平市小川西町 2-18-13
E-mail : info@sitsuryobunsekiya.com
URL : https://www.sitsuryobunsekiya.com/

販売元

アルテア技研株式会社〒222-0033 神奈川県横浜市港北区新横浜3-23-3
E-mail : support.sales@altair.co.jp
URL : https://www.altair.co.jp/
TEL : 045-473-6211 FAX : 045-473-2884

MSSOL-F24003, 2024.04.26