オルガネラゾーン―総 説―

小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答
兵庫県立大学吉田 秀郎・佐々木 桂奈江―注目の研究―ER-ThT を用いた小胞体ストレス下におけるタンパク質凝集体の検出
株式会社同仁化学研究所

新 製 品

末永 元輝

細胞膜染色試薬 P.5
エンドサイトーシス検出試薬 P.6
エクソソーム染色キット P.7
MT-1 ミトコンドリア膜電位検出キット P.9
α - ケトグルタル酸測定キット P.11
ATP 測定キット P.11
ROS 検出キット P.12

開 発 中グルコース細胞内取り込みアッセイキット P.13

No.175(2020)

2020 No.175

表紙撮影：熊本県阿蘇市
草千里から烏帽子岳を見る
冬の阿蘇草千里は樹氷がつくほど冷え込む。
photo：永島俊介氏

ドージンニュース

CONTENTS
Review
小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答
兵庫県立大学［1］●

吉田 秀郎・佐々木 桂奈江

Topics on Chemistry
ER-ThT を用いた小胞体ストレス下におけるタンパク質凝集体の検出 ●株式会社同仁化学研究所

［4］

末永 元輝

Commercial［8］

ミトコンドリア膜電位検出キット（JC-1）●［8］

ミトコンドリア染色試薬 ●［10］

細胞内代謝関連製品 ●［13］

酸化ストレス検出試薬 ●新製品
細胞膜染色試薬 ●［5］［6］

エンドサイトーシス検出試薬 ●［7］エクソソーム染色キット ●MT-1 ミトコンドリア膜電位検出キット ●α - ケトグルタル酸測定キット
ATP 測定キット ●ROS 検出キット ●

●

［9］

［11］
［11］
［12］

開発中
グルコース細胞内取り込みアッセイキット ●

［13］

ツイッター
※希望納入価格には消費税等は含まれておりません。

＠dojindoinfo

No.175(2020)

小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答
ER stress response and Golgi stress response

Abstract
吉田秀郎

The endoplasmic reticulum (ER) and the Golgi apparatus areorganelles where secretory and membrane proteins are correctly
folded and post-translationally modiﬁed, respectively. When cells
increase synthesis of secretory and membrane proteins, thecapacity of the ER and the Golgi becomes insufﬁcient (ER stressand Golgi stress), resulting in stress-induced cell death. To copewith these stresses, eukaryotic cells activate the homeostaticmechanisms called the ER stress response as well as the Golgi
stress response, and increase the capacity of these organelles.
In this review article, we described basics of the ER stressresponse and the Golgi stress response.

兵庫県立大学
大学院生命理学研究科
教授

佐々木

桂奈江

兵庫県立大学
大学院生命理学研究科
助教

1．はじめに細胞の中には小胞体やゴルジ体など様々な細胞小器官が存在す
るが、同じ細胞種であればどの細胞でもそれぞれの細胞小器官の存在量はほぼ一定である。細胞が分裂して細胞小器官の量が半分に減っても、やがて細胞小器官の量も 2 倍に増えて、量が一定になるように調節されているように見える。細胞分裂によって細胞から小胞体がなくなってしまったり、細胞がゴルジ体だらけになってしまうことはない。細胞に眼がついているわけでもないの

図1に、どうやって調節しているのか、とても不思議である。一方、抗体産生細胞などのようにタンパク質の分泌が盛んな細胞では、分泌タンパク質の合成と加工を行う小胞体やゴルジ体が著しく発達している。細胞小器官の量は、細胞の需要に応じて厳密に調節されているように見える。そう考えれば、細胞が分裂しても細胞小器官の量が一定に保たれることも説明が付く。このような細胞小器官の量的調節機構は細胞が自律的に機能するために必須の機能であり、細胞生物学の根本的な命題の一つであるが、長い間核哺乳類の小胞体ストレス応答機構1No.175(2020)

図2

哺乳類のゴルジ体ストレス応答機構の量的調節機構（細胞周期）の研究以外は、ほとんど顧みられることがなかった 1）。本総説では、小胞体及びゴルジ体の量的調節機構である小胞体ストレス応答、ゴルジ体ストレス応答について概説する。

2．小胞体ストレス応答
森和俊博士（京都大学）は、小胞体の量的調節機構である小胞
体ストレス応答の研究に果敢に挑戦し、その分子機構を明らかにした 2，3）。哺乳類の小胞体ストレス応答には ATF6 経路と IRE1
経路、PERK 経路という 3 つの応答経路が存在し、それぞれ異なる小胞体の機能を制御している（図 1）。それぞれの応答経路は、①小胞体の機能が不足していること（小胞体ストレス）を感知す
るセンサー、②センサーによって活性化される転写因子、③転写因子が結合するエンハンサー配列、④転写が誘導される標的遺伝子の 4 つからなっている。ATF6 経路は、小胞体でのタンパク質
フォールディング能力を増強する経路である。センサー分子の
pATF6
（P）
は、通常は小胞体膜上に存在している。フォールディ
ング能力が不足してフォールディングが完了していない異常タン
パク質が小胞体に蓄積すると（小胞体ストレス状態）、pATF6（P）は小胞輸送によってゴルジ体へ輸送され、ゴルジ体に存在する
2 つのプロテアーゼ（S1P と S2P）によって切断されて生じる転写因子 pATF6（N）がエンハンサー配列 ERSE に結合することで、小胞体シャペロン遺伝子の転写を誘導する。IRE1 経路は、小胞体に蓄積した異常タンパク質を分解する機構（小胞体関連分解（ERAD））を増強する経路である。小胞体膜上に存在するセン
サー分子 IRE1 は平常時には単量体であるが、異常タンパク質を感知すると多量体化して活性化し、XBP1 の前駆体 mRNA を細胞質でスプライシングすることによって成熟型 mRNA ヘと変換する。この成熟型 mRNA から翻訳された転写因子 pXBP1（S）が
エンハンサー配列 UPRE に結合することによって ERAD 因子遺伝子の転写を誘導する。PERK 経路は、一時的な翻訳抑制を行うとともに、翻訳関連因子や細胞死の誘導を行う経路である。センサーである PERK は小胞体膜上に存在し、IRE1 とよく似た機構

2によって活性化する。活性化した PERK は翻訳開始因子である
eIF2 のαサブユニットをリン酸化することで翻訳を一時的に抑制し、それ以上小胞体ストレスが悪化しないようにしている。その間に ATF6 経路や IRE1 経路によって小胞体内の異常タンパク質が処理されればよいが、依然として異常タンパク質が蓄積しているときには PERK 経路によって転写因子 ATF4 の翻訳が誘導され、ATF4 がエンハンサー配列 AARE に結合することで細胞死を誘導する転写因子 CHOP の発現が誘導される。

3．ゴルジ体ストレス応答
吉田秀郎博士（兵庫県立大学）は、森和俊博士の研究室から独立する際に、世界に先駆けてゴルジ体の量的調節機構であるゴルジ体ストレス応答の研究を開始し、現在は佐々木桂奈江博士（兵庫県立大学）とともに解析を進めている。ゴルジ体ストレス応答にも複数の応答経路が存在し、ゴルジ体の異なる機能を増強して（図 2）。TFE3 経路はゴルジ体の一般的な機能を増強する
いる 4）経路であり、その標的遺伝子にはゴルジ体の構造タンパク質である GCP60 や小胞輸送に関与する GM130、Giantin などが含まれる。これらの標的遺伝子の転写を制御するエンハンサー配列は
GASE（Golgi stress response element）と 呼 ば れ、そ の コ ン センサス配列は ACGTGGC である 5）。TFE3 経路を制御する転写因子には bHLH-ZIP 型転写因子である TFE3 6）と MLX 7）がある。
平常時には TFE3 はリン酸化されて細胞質に留められているが、ゴルジ体ストレス時（ゴルジ体の一般的な機能が不足した時）には脱リン酸化されて核へ移行し、GASE に結合することで標的遺伝子の転写を誘導する。MLX は GASE に競合的に結合すること
で、TFE3 の機能を抑制する転写抑制因子だと考えられている。
プロテオグリカン経路は、プロテオグリカン型の糖鎖修飾能力を増強する応答経路である。プロテオグリカンは軟骨の潤滑を担う分子であるが、その機能にはプロテオグリカン型の糖鎖修飾がきわめて重要である。標的遺伝子にはプロテオグリカンの糖鎖修飾酵素や硫酸化酵素などの遺伝子が多く含まれている。これらの標的遺伝子のプロモーター上に存在するエンハンサー配列 PGSE

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Yoshida, PGSE Is a Novel Enhancer Regulating the Proteoglycan Pathway（proteoglycan-type Golgi stress response element）が 転 写 誘 導of the Mammalian Golgi Stress Response, Cell Struct. Funct., 2019, 44,を制御していることがわかっているが 8）、センサー分子や転写因1-19.
子はまだ未知である。軟骨細胞などプロテオグリカンを産生する
9. M. I. Jamaludin, S. Wakabayashi, M. Taniguchi, K. Sasaki, R. Komori, H.
細胞では、プロテオグリカン経路が活性化されることで、プロテKawamura, H. Takase, M. Sakamoto and H. Yoshida, MGSE Regulates
オグリカン型糖鎖修飾能力を増強していると考えられる。
Crosstalk from the Mucin Pathway to the TFE3 Pathway of the Golgi
ムチン経路は、ムチン型の糖鎖修飾能力を増強する応答経路でStress Response, Cell Struct. Funct., 2019, 44, 137-151.
10. M. Kimura, K. Sasaki, Y. Fukutani, H. Yoshida, I. Ohsawa, M. Yohda and K.
ある。ムチンは多量のムチン型糖鎖修飾を受けており、これらのSakurai, Anticancer saponin OSW-1 is a novel class of selective Golgi
糖鎖が粘膜を形成することに重要である。標的遺伝子はムチン型
stress inducer. Bioorg. Med. Chem. Lett., 2019, 29, 1732-17369.
糖 鎖 修 飾 酵 素 群 の 遺 伝 子 で あ り、エ ン ハ ン サ ー 配 列 MGSE
11. J. H. Reiling, A. J. Olive, S. Sanyal, J. E. Carette, T. R. Brummelkamp, H. L.
9）（mucin-type Golgi stress response element）が同定されている 。
Ploegh, M. N. Starnbach and D. M. Sabatini, A CREB3-ARF4 signalling
センサーと転写因子は未同定である。
pathway mediates the response to Golgi stress and susceptibility to
コレステロール経路は、小胞体からゴルジ体へのコレステロー
pathogens, Nat. Cell Biol., 2013, 15, 1473-1485.
ルの輸送能力を増強する応答経路である 10）。標的遺伝子として
12. S. Miyata, T. Mizuno, Y. Koyama, T. Katayama and M. Tohyama, The
endoplasmic reticulum-resident chaperone heat shock protein 47
OSBP2 は同定されているが、その他の制御因子は同定されていprotects the Golgi apparatus from the effects of O-glycosylation
ない。
inhibition, PLoS One, 2013, 8, e69732.
上記の応答経路以外にも、他の研究者からいくつかの応答経路が報告されている。Jan Reiling 博士（MIT）は、CREB3 経路を同定した。膜貫通型センサーである CREB3 が活性化されると ［著者プロフィール］
CREB3 が切断され、膜から遊離した CREB3 が転写因子として
氏名：佐々木 桂奈江（SASAKI Kanae）
働いて ARF4 遺伝子の転写を誘導し、結果としてアポトーシスを所属：兵庫県立大学大学院生命理学研究科
誘導する 11）。宮田信吾博士（近畿大学）が同定した HSP47 経路〒 678-1297 兵庫県赤穂郡上郡町 3-2-1
は、逆にゴルジ体ストレスによるアポトーシスを抑制する経路でE-mail：sasaki@sci.u-hyogo.ac.jp
ある 12）。
出身学校：名古屋大学大学院生命農学研究科
学位：博士（農学）4．おわりに
専門分野：細胞生物学、細胞小器官、ストレス応答
以上、小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答について概現在の研究テーマ：ゴルジ体ストレス応答
説した。今後小胞体ストレス応答については、その分子機構の詳細な解析が進むとともに、個体における小胞体ストレス応答の生
氏名：吉田 秀郎（YOSHIDA Hiderou）
理的役割の解析が進んでいくものと考えられる。ゴルジ体ストレ
所属：兵庫県立大学大学院生命理学研究科
ス応答に関しては、未同定の制御因子群を網羅的に同定するとと〒 678-1297 兵庫県赤穂郡上郡町 3-2-1
もに、これらの応答経路のノックアウトマウスの表現型を解析す
E-mail：hide@sci.u-hyogo.ac.jp
ることによって、ゴルジ体ストレス応答の全体像を明らかにして出身学校：京都大学大学院理学研究科
いくことが肝要と考えている。
学位：博士（理学）
専門分野：細胞生物学、細胞小器官、ストレス応答
現在の研究テーマ：ゴルジ体ストレス応答［参考文献］
1.

2.
3.
4.
5.

6.

7.

8.

K. Sasaki and H. Yoshida, Organelle autoregulation-stress responses inthe ER, Golgi, mitochondria and lysosome, J. Biochem., 2015, 157, 185195.
K. Mori, The unfolded protein response: the dawn of a new ﬁeld, Proc.
Jpn. Acad. Ser. B Phys. Biol. Sci., 2015, 91, 469-480.
H. Yoshida, ER stress and diseases, FEBS J., 2007, 274, 630-658.
M. Taniguchi and H. Yoshida, TFE3, HSP47, and CREB3 Pathways of theMammalian Golgi Stress Response, Cell Struct. Funct., 2017, 42, 27-36.
M. Oku, S. Tanakura, A. Uemura, M. Sohda, Y. Misumi, M. Taniguchi, S.
Wakabayashi and H. Yoshida, Novel cis-acting element GASE regulates
transcriptional induction by the Golgi stress response, Cell Struct. Funct.,2011, 36, 1-12.
M. Taniguchi, S. Nadanaka, S. Tanakura, S. Sawaguchi, S. Midori, Y.
Kawai, S. Yamaguchi, Y. Shimada, Y. Nakamura, Y. Matsumura, N. Fujita,
N. Araki, M. Yamamoto, M. Oku, S. Wakabayashi, H. Kitagawa and H.
Yoshida, TFE3 is a bHLH-ZIP-type transcription factor that regulates the
mammalian Golgi stress response, Cell Struct. Funct., 2015, 40, 13-30.
M. Taniguchi, K. Sasaki-Osugi, M. Oku, S. Sawaguchi, S. Tanakura, Y.
Kawai, S. Wakabayashi and H. Yoshida, MLX Is a Transcriptional
Repressor of the Mammalian Golgi Stress Response, Cell Struct. Funct.,2016, 41, 93-104.
K. Sasaki, R. Komori, M. Taniguchi, A. Shimaoka, S. Midori, M.
Yamamoto, C. Okuda, R. Tanaka, M. Sakamoto, S. Wakabayashi and H.

3

No.175(2020)

Topics on Chemistry
ER-ThT を用いた小胞体ストレス下におけるタンパク質凝集体の検出
株式会社同仁化学研究所

末永

元輝

小胞体（endoplasmic reticulum, ER）は、タンパク質が正しく機能するようにフォールディングや翻訳後修飾を行う重要なオルガネラである。小胞体の機能に障害が起きると、タンパク質が正
常にフォールディングせず、不良タンパク質が凝集体として蓄積していき、小胞体ストレスが誘導される。これに対し細胞は小胞体ストレス応答を起こすことで細胞へのダメージを防いでいる
が、過度なストレスによって防御機構が破綻すると細胞がアポトーシスを起こし、細胞の脱落や組織の機能不全が起きるなど、様々な障害が起きる。小胞体ストレスは糖尿病、神経変性疾患、代謝性疾患、がんなどの多くの疾患との関連が報告 1）-4）されており、その要因となるタンパク質凝集体の解析は疾患との関連を明
図 1 ER-ThT の構造
らかにするうえで重要である。本稿では、Verwilst らが開発した、 （赤色の部分が Eeyarestatin Ⅰ の構造の一部、青色は Thioﬂavin T 由来の構造を示す）
小胞体内のタンパク質凝集体を観察できる蛍光プローブ、ERthioﬂavin T（ER-ThT）について紹介する 5）。
Thioﬂavin T（ThT）は、従来よりアルツハイマー病やプリオン病などに共通してみられるアミロイド線維の検出に用いられてきたプローブであり、アミロイド線維あるいはタンパク質凝集体と結合することにより非常に強い蛍光を発する。Verwilst らは、
ThT の構造をタンパク質凝集体のセンサーとし、そこに小胞体特異的な Eeyarestatin Ⅰの構造の一部を組み合わせ、ER-ThT を合成した（図 1）
。この ER-ThT を用い、Dithiothreitol（DTT）添加により変性させたリゾチームや BSA といったタンパク質に反応させたところ、時間依存的、濃度依存的に ER-ThT の強い蛍光を示したことから、ER-ThT がタンパク質凝集体に特異的な蛍光プローブであることが示されている。また、DTT 処理した Hela 細胞が ER-ThT によって蛍光染色されること、さらに小胞体ストレス誘導剤（Thapsigargin）を処理した Hela 細胞においても ER図 2 ER-ThT のタンパク質凝集体への結合
ThT により蛍光染色されていることが確認されている。また、小胞体を染色する ER-Tracker と局在が一致しており、小胞体内のタンパク質凝集体に特異的な ER-ThT による蛍光染色が確認され ［参考文献］
1） S. E. Thomas et al., “Diabetes as a disease of endoplasmic reticulumている。これらの結果に加えて、Thapsigargin で処理した HeLa
stress”, Metab. Res. Rev., 2010, 26, 611.
細 胞 に 小 胞 体 ス ト レ ス 応 答 を 抑 制 す る 薬 剤（TUDCA, TMAO,
2） C. Hetz et al., “ER stress and the unfolded protein response inPBA）で処理したところ、ER-ThT による蛍光を示さなかった。
neurodegeneration”, Nat. Rev. Neurol., 2017, 13, 477.
これらの結果から、ER-ThT が小胞体内で蓄積したタンパク質凝3） N. Kawasaki et al., “Obesity-induced endoplasmic reticulum stress
集体に特異的に結合し、可視化できることが示唆された（図 2）。
causes chronic inﬂammation in adipose tissue”, Sci. Rep., 2012, 2, 799.
タンパク質の異常構造に起因する疾患は数多くあるが、凝集体
4） C. Han et al., “New Insights into the Role of Endoplasmic ReticulumStress in Breast Cancer Metastasis”, J. Breast Cancer, 2018, 21, 354.
を検出すること、及び凝集を抑制する薬剤を見つけることは、こ
5）
P. Verwilst et al., “Revealing Protein Aggregates under Thapsigarginれらの疾患の診断、治療において重要である。本稿で紹介したInduced ER Stress Using an ER-Targeted Thioﬂavin”, ACS Sens., 2019,
ER-ThT は、生細胞の小胞体内で起きているタンパク質凝集体を11, 2858.
検出でき、さらには、化学シャペロンなどの小胞体ストレス応答を抑制する薬剤のスクリーニングにも有用なツールである。小胞体をはじめとした細胞小器官の機能解析は未解明な点も多く、これらの研究を発展させる更なる新技術開発が望まれる。

4

No.175(2020)

新製品
細胞膜染色試薬
PlasMem Bright Green
PlasMem Bright Red＜特長＞
・生細胞で使用できる、染色後に固定できる・低毒性で試薬の滞留性が高い・培地に試薬を加えるだけ

PlasMem Bright シリーズは低毒性で色素の細胞膜滞留性が高く、生細胞や染色後に固定した細胞を用いた様々な実験でご利用いただくことが可能です。既存の細胞膜染色試薬に対して特に多かった不満を PlasMem Bright シリー
ズが解決します。
製品名
PlasMem Bright（Green, Red）
S 社 製品 P
T 社 製品 D
T 社 製品 C

細胞毒性※ 1

滞留性※ 2

染色後の洗浄血清入り培地の使用

染色後の固定化

低

24 時間

不要

可

可（PFA）−−
高

0.5 時間以下
0.5 時間以下
1.5 時間

必要
必要
必要

不可
可
可

可
不可
可（PFA）※1

各染色試薬で染色後、神経細胞の形態変化（凝集）を比較した場合※2

試薬滞留性は細胞腫により異なる場合がございます。（上記は HeLa 細胞および SH-SY5Y 細胞を用いた際の実績）＜細胞膜の鮮明な可視化：神経細胞の形態と軸索内のミトコンドリア局在観察＞〈観察条件〉PlasMem Bright Green: Ex 488 nm / Em 500-600 nm〈観察条件〉PlasMem Bright Red: Ex 561 nm / Em 560-700 nm＜細胞膜への長期滞留性＞
各細胞膜染色試薬で染色した細胞を 24 時間培養したのち、それぞれの蛍光画像を比較しました。既存試薬に比べ、PlasMem Bright
シリーズは長時間、膜に滞留することが確認されました。

品名
PlasMem Bright Green
PlasMem Bright Red

容量100 μl × 1
100 μl × 1

希望納入価格（￥） メーカーコード
25,000P504
25,000
P505※〈使用回数の目安〉100μl あたり、35 mm dish 10 枚、μ-Slide 8 well 10 枚製品の詳細や他社製品と比較した実験例などは、小社 HP をご覧ください。

膜染色

同仁

検索

5

No.175(2020)

新製品
エンドサイトーシス検出試薬
ECGreen-Endocytosis Detection＜特長＞
・より正確にエンドサイトーシスを可視化できる・生細胞でエンドサイトーシスを追跡できる・pH 変化に対する応答性が高い
ECGreen-Endocytosis Detection は小胞膜に局在し、pH に依存して蛍光を発する試薬で、蛍光アナログよりも直接的にエンドサイ
トーシスを可視化することができます。また、本品は従来用いられてきた蛍光標識デキストランと比較して、pH 変化に対する応答性に優れています。そのため、初期エンドソームも高感度に検出することが可能です。

染色原理の模式図

各試薬の pH に対する蛍光強度変化＜実験例：細胞内小胞輸送系を鮮明に可視化＞
Wortmannin はエンドソームのリサイクリングやリソソームへの移行を阻害し、エンドソームの肥大化を惹起することが知られています。Wortmannin によるこれらの変化を ECGreen と初期エンドソームマーカータンパク質 Rab5-RFP（蛍光タンパク質）との共染色、および ECGreen とリソソーム染色試薬との共染色で確認しました。その結果、Wortmannin 添加時には ECGreen は肥大化したエンド
ソーム（Rab5-RFP）と共局在（左図：Merge）し、リソソームとは共局在しない（右図：Merge）ことが確認できました。これらの結果から、ECGreen は細胞内小胞輸送系の変化を可視化できることがわかりました。

品名ECGreen-Endocytosis Deteciton

容量40 μl × 1※＜使用回数の目安＞

希望納入価格（￥） メーカーコード
45,000E296

40 μl あたり、35 mm dish 20 枚、μ-Slide 8 well 20 枚製品の詳細や他社製品と比較した実験例などは、小社 HP をご覧ください。

6

エンドソーム同仁

検索No.175(2020)

新製品
エクソソーム染色キット
エクソソーム膜 蛍光染色キット
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green, Red, Deep Red
エクソソームタンパク質 蛍光染色キット
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green, Red, Deep Red＜特長＞
・細胞外で凝集しない・キットだけで蛍光標識から精製まで可能
・エクソソームの性質にほとんど影響しない製品の詳細や他社製品と比較した実験例などは、
小社 HP をご覧ください。

エクソソーム同仁

検索

ExoSparkler シリーズは、精製されたエクソソームの膜またはタンパク質を染色し、細胞に取り込まれるエクソソームをイメージングすることができます。
（1）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red 及び S 社製品 P（緑または赤）で染色したエクソソームを HeLa 細胞へ添加し、細胞内へ取り込まれるエクソソームを蛍光顕微鏡で確認した結果、ExoSparkler シリーズでは色素の凝集が見られなかったのに対し製品 P（緑または赤）で染色したエクソソームでは、色素の凝集が疑われる細胞外の蛍光輝点が確認されました。

〈観察条件〉
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red（紫）:Ex 640 nm / Em 640-760 nm
S 社 製品 P（緑）:Ex 488 nm / Em 490-540 nm
S 社 製品 P（赤）:Ex 561 nm / Em 570-640 nm（2）ExoSparkler シ リ ー ズ は、エ ク ソ ソ ー ム の 標 識 に 最 適 化 し た プ ロ ト コ ル に 加 え、蛍 光 標 識 後 の 未 反 応 色 素 を 除 去 で き る
フィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。
ExoSparkler シリーズにおける染色工程

精製手法（未反応色素の除去）と回収率の比較（3）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit（Green, Red, Deep Red）で 染 色 す る 前 後 の エ ク ソ ソ ー ム に つ い て、NTA（ナノ粒子トラッキング解析）とゼータ電位を測定した結果、小社製品は、エクソソームの性質にほとんど影響を及ぼさないことが確認されました。比較データは製品 HP に掲載しています。
品名
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
5 samples
25,000EX01
5 samples
25,000EX02
5 samples
25,000EX03
5 samples
20,000EX04
5 samples
20,000EX05
5 samples
20,000EX06※精製済エクソソーム（超遠心法）として、タンパク質：1-10 μg/sample、粒子数：10-100 × 108 個 /sample

7No.175(2020)

関連製品
ミトコンドリア膜電位検出キット（JC-1）
JC-1 MitoMP Detection Kit
ミトコンドリアは、ATP 等のエネルギー産生の場であり、その活性の変化や機能障害ががんや老化、神経変性疾患などと密接に関連しています。そのため、ミトコンドリアの状態を把握することは重要であり、その指標としてエネルギー産生に伴い生じる膜電位差が評価されています。

＜測定原理＞
ミトコンドリアが正常で膜電位が保たれた状態では JC-1 が凝集し赤色の蛍光を発し、膜電位が低下すると JC-1 が単量体として存在し緑色の蛍光を発します。この赤色と緑色の蛍光強度比により、ミトコンドリア膜電位の変化を評価することができます。
キットを使った蛍光顕微鏡やフローサイトメーター、プレートリーダーの解析
例や最新論文は小社 HP よりご覧頂けます。
品名JC-1 MitoMP Detection Kit

容量
1 set

希望納入価格（￥） メーカーコード
23,000MT09

キットを使用した最新論文は小社 HP よりご覧いただけます。

JC-1

検索

同仁

ミトコンドリア染色試薬
MitoBright LT Green, Red, Deep Red＜特長＞
・ミトコンドリアを長期間観察可能
・血清入り培地中で染色可能
・コラーゲンコートプレート上で培養した細胞のミトコンドリアを低バックグラウンドで検出可能

ミトコンドリアを長期間観察
HeLa 細胞を各 MitoBright LT または既存試薬で染色し、4 日間培養後ミトコンドリアを観察しました。その結果、既存試薬の蛍光強度は大きく低下したのに対し、MitoBright LT は蛍光強度が維持され、ミトコンドリアを明瞭に観察できました。
既存試薬（T 社）

MitoBright LT
Green

Red

Deep Red

Green

Red

Deep Red

染色直後＜検出条件＞
MitoBright LT Green、
既存試薬（T 社）Green：
Ex 488 nm / Em 500-560 nm

染色後 4 日間培養

MitoBright LT Red、
既存試薬（T 社）Red：
Ex 561 nm / Em 560-620 nm
MitoBright LT Deep Red、
既存試薬（T 社）Deep Red：
Ex 640 nm / Em 650-700 nm
スケールバー：20μm

品名
MitoBright LT Green

MitoBright LT Red

MitoBright LT Deep Red

8

容量
希望納入価格（￥） メーカーコード
20 μl × 1
6,000
400 μl × 1
12,000MT10400 μl × 3
30,00020 μl × 1
6,000
400 μl × 1
12,000MT11400 μl × 3
30,00020 μl × 1
6,000
400 μl × 1
12,000MT12400 μl × 3
30,000

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MitoBright LT

同仁検索No.175(2020)

新製品
MT-1 ミトコンドリア膜電位検出キット
MT-1 MitoMP Detection Kit

品名MT-1 MitoMP Detection Kit＜特長＞
・生細胞で使用できる、染色後に固定化できる・ミトコンドリア膜電位のモニタリングができる・ミトコンドリア膜電位の変化を高感度に検出できる

容量
1 set

希望納入価格（￥） メーカーコード
28,000
MT13※＜使用回数の目安＞

35 mm dish 30 枚分

9No.175(2020)

細胞内代謝関連製品
細胞内の代謝システムである解糖系や TCA 回路、ペントース - リン酸経路の解析は、細胞状態を理解する上で重要であり、グルコー＋/NAD（P）H、グルタミン、グルタミン酸などのエネルギーおよび代謝産物を指標に評価されています。
スや乳酸、NAD（P）＜はじめてでも分かりやすい簡単な操作＞
はじめて細胞内代謝を評価される方々のご要望にお応えし、測定に必要な試薬やコンポーネントを同梱して、より使い易い操作性を実現しました。

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No.175(2020)

新製品

新製品

α - ケトグルタル酸測定キット

ATP 測定キット

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

ATP Assay Kit-Luminescence〈特長〉
・ シンプルなサンプル前処理操作を採用
・ 試薬を加えてインキュベートするだけの簡単操作
・ マイクロプレートアッセイ（蛍光法）により多検体に対応〈特長〉
・試薬添加 10 分後に測定可能・安定した発光シグナル（発光半減期：3 時間以上）・高感度であるため、少ない細胞数から測定可能
・ATP 定量のためのスタンダード同梱

α- ケトグルタル酸（α-KG）は、TCA サイクルの中間代謝物として重要な基質です。グルコース代謝物の TCA 回路への取り込み亢進や、グルタミンを基質にα- ケトグルタル酸を供給する経路である「グルタミノリシス」亢進の指標に用いられています。
ま た、α- ケ ト グ ル タ ル 酸 は、神 経 伝 達 物 質 やγ- ア ミ ノ 酪 酸（GABA）の生成において重要な役割を果たすほか、最近のがん研究では腫瘍抑制に効果的に働くことが報告されています 1）。

ATP は、解糖系およびミトコンドリアにおける TCA 回路、電子伝達系でつくられ、細胞が生きていくためのエネルギー源として重要です。ミトコンドリア機能の異常は、がんや老化、アルツ
ハイマー病などの神経変性疾患、ミトコンドリア病などを引き起こすことが知られており、ミトコンドリア活性の指標の 1 つとして ATP が用いられています。

1）John, P. M. IV, et al., Nature, 2019, 573, 595-599.

＜測定原理＞＜測定原理＞＜薬剤刺激による細胞内α-KG の濃度の変化＞＜薬剤刺激による ATP 濃度の変化＞

Doxorubicin（DOX）添加による A549 細胞のα-KG の濃度変化を測定しました。その結果、DOX 添加によって細胞内α-KGは増加する結果が得られました。

Rotenone 刺激により Jurkat 細胞のミトコンドリア電子伝達系を阻害したところ、細胞内 ATP 量の減少が見られました。

品名
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric
ATP Assay Kit-Luminescence

学術情報から学べる
細胞内代謝マップ同仁

容量100 tests
50 tests
200 tests

希望納入価格（￥） メーカーコード
64,000K261
25,000A550
45,000

細胞内代謝測定検索

細胞内代謝の基礎から学べる動画コンテンツ
ご好評につきニュース読者様へご案内します。
ご希望の場合は小社カスタマーサポートまでご要望ください。

11No.175(2020)

新製品
ROS 検出キット
ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA本製品は ROS（Reactive Oxygen Species）を蛍光プレートリーダー、蛍光顕微鏡、もしくはフローサイトメーターを使って蛍光法により検出するキットです。一般的に ROS を検出するキットの蛍光基質は ROS により酸化されることで発蛍光する DCFH-DA が使用されていますが、本キットは細胞膜透過性を向上させた構造を有しており、DCFH-DA と比較して高感度に ROS を検出することができます。また、DCFH-DA と同等の蛍光波長を有することから DCFH-DA での検出と同じ検出器やフィルターを使用することが
できます。
蛍光顕微鏡

プレートリーダー〈細胞種〉
HeLa 細胞 , 10,000 cells/well〈試薬濃度〉
H2DCFDA, 本キット共に 10 μmol/l〈反応条件〉
100 μmol/l H2O2/HBSS を添加後、37℃,
30 min インキュベート〈測定条件〉
・蛍光顕微鏡（GFP フィルター）露光時間 H2DCFDA（1.2 s）
本キット （0.13 s）
・マイクロプレートリーダー
Ex/Em: 490/530 nm

品名
ROS Assay Kit -High Sensitive DCFH-DA

容量
1 set

希望納入価格（￥） メーカーコード
18,000
R252※＜使用回数の目安＞

96 well プレート 1 枚分

関連製品
酸化ストレス検出試薬
小社では、酸化ストレス検出試薬を各種取り揃えています。各製品の測定例やプロトコルについては、小社 HP をご覧ください。
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製品コード

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No.175(2020)

開発中
グルコース細胞内取り込みアッセイキット
Glucose Uptake Assay Kit – Blue, – Green, – Red細胞の重要なエネルギー源であるグルコースの細胞内取り込み能力は、細胞の代謝活性の指標の一つとして利用されています。一般的にグルコースの細胞内取り込みをイメージングする試薬として 2-deoxy-2［（7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl）amino］-D-glucose（2-NBDG）が、広く用いられていますが、蛍光が弱く、感度が低いという課題がありました。そこで小社では Green の他、これまでにない Red 及び Blue を含めた 3 種類の新規高感度グルコース細胞内取り込みアッセイ用蛍光プローブ Glucose Uptake Probe を開発しました。グルコースの細胞内取り込みを明瞭にイメージングすることができ、フローサイトメーターを用いた測定も可能です。また Green、Red は蛍光強度が高いためプレートリーダーでの測定も可能です。さらに小社が開発した Washing and Imaging（WI）
solution を用いることで細胞からのプローブの漏出を抑制することができ、安定したデータを取得することが可能となりました。

＜グルコースの細胞内取り込みの可視化＞※ 1…本測定に最適化した WI Solution を用いることで細胞からの色素の漏れ出しを抑制できます。
※ 2…Glucose Uptake Probe − Green、− Red はプレートリーダー測定が可能です。

細胞：A549〈使用培地〉DMEM（0 mmol/L Glucose）〈染色条件〉x500 Glucose Uptake Probe
37℃, 15 min〈検出装置〉蛍光顕微鏡（BZ-X700, Keyence 社）〈検出条件〉
Blue：Ex: 360/40 nm, Em: 460/50 nm
Green：Ex: 470/40 nm, Em: 525/50 nm
Red：Ex: 545/25 nm, Em: 605/70 nm＜高濃度グルコースによるグルコース取り込み能力の阻害実験＞
Glucose Uptake Probe − Green とグルコースとの競合阻害実験を行った。高濃度（25 mmol/l）
グ ル コ ー ス 下 で は、Glucose Uptake Probe −Green の細胞内取り込みは阻害された。

細胞 : A549
染色培地：DMEM（0 or 25 mmol/l Glucose）
染色条件：x500 Glucose Uptake Probe – Green, 37℃, 15 min
検出装置：
フローサイトメーター （LSRFortessa X-20, BD 社
検出：Alexa Fluor 488 フィルター）プレートリーダー（Inﬁnite 200 PRO, TECAN 社
検出：Ex / Em = 488 / 520 nm）＜インスリンによる脂肪細胞のグルコース取り込み促進＞インスリンによる脂肪細胞のグルコース取り込み能の促進を Glucose Uptake Probe – Green を用いて蛍光観察した。

細胞：mouse adipocyte
染色培地：DMEM（5.5 mmol/l Glucose）
刺激条件：1 µmol/l Insulin / DMEM（5.5 mmol/l Glucose）, 37℃, 15 min
染色条件：x500 Glucose Uptake Probe – Green, 37℃, 15 min
検出装置：蛍光顕微鏡（BZ-X700, Keyence 社）
検出条件：Ex: 470/40 nm, Em: 525/50 nm
スケールバー：50 nm

ご興味がございましたら、小社カスタマーサポート（info@dojindo.co.jp

Free Dial：0120-489548）までお問い合せください。

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令和 2 年 12 月 7 日発行

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発行責任者 松野寛明 編集責任者 岩永竜弥 年４回発行 許可なくコピーを禁ず