プロトコル
細 胞
増殖 / 毒性酸化
ストレス
分 子
生物学
細 胞 内
蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤ラベル化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極
その他
機能性
有機材料

残留塩素を測定したい
使用製品
残留塩素測定キット -SBT 法
残留塩素測定キット -SBT 法[ZK01-50][ZK01-60][ZK01-70][ZK01-80]

色素液
検水調整液

I はじめに
古くから水道水およびプール水中の消毒には次亜塩素酸ソーダなどの塩素剤が用いられているが、わが国の水道法では水道水中の遊離残留塩素濃度は 0.1 mg/l(0.1 ppm) 以上を維持することと定められている。そのため各水道局などでは塩素濃度を常に監視しなければならない。また、公衆浴場等の浴槽水からのレジオネラ菌類による集団感染が問題となっているが、塩素剤を用いた浴槽水の殺菌が有効であるために、厚生労働省から浴槽水中の遊離残留塩素濃度を維持・管理するよう指針が出されている。
水中の残留塩素濃度の測定法はいくつかあるが、安価で操作性の良い N,N -Diethylphenylenediamine(DPD) を用いた吸光光度法が汎用されている。しかしながら DPD は、1) 検水への溶解・混和が煩雑である、
2) 溶液状態で不安定などの問題をかかえており、優れた残留塩素測定法とは言い難い。
この章では、小社残留塩素測定キット -SBT 法による水中の残留塩素測定法について紹介する。
残留塩素測定キット -SBT 法は、水溶性発色試薬 SBT を用いた水中の残留塩素 ( 次亜塩素酸 ) 濃度を比色により測定するキットである。図 1 に SBT の構造式を、また、図 2 にその発色スペクトルを示す。残留塩素には遊離残留塩素と結合残留塩素があるが、本キットでは DPD とは異なり殺菌効果が高いとされる遊離残留塩素のみを測定することができる。SBT は水溶液での提供が可能な安定な試薬であり、測定操作が容易になった。また、遊離残留塩素と瞬時に反応し青緑色を示し、その感度は DPD の約2 倍である。さらに DPD で懸念されていた変異原性が SBT では認められず、細胞毒性も非常に低いことから安心して残留塩素測定を行うことができる。また、「衛生試験法・注解 2005 年」に
SBT 法は塩素測定法の一つとして採択された。

II キット内容
・検水調整液 ( 白キャップ点眼瓶 )・色素液 ( 青キャップ点眼瓶 )・色調比色計・試験管・スポイド・高温用色調比色板

1本
1本
1式
2本
1本
1枚

H3C

CH3HN

NHSO3Na

NaO3S

NaO3S

図1SO3NaSBT の構造式

遊離塩素濃度 (mg/l)=2.0

図2

次亜塩素酸による SBT の発色スペクトルIV 使用上または取扱上の注意
1) 本キットは冷暗所に保存し、高温多湿となる車中やボイラー室等に放置しないで下さい。
2) 購入後、6 ヶ月以内に使い切って下さい。
3) 浴槽水等の温度が高い検水の場合、添付の高温用色調比色板をご使用下さい。
4) 色調比色板での検色は、蛍光灯などのあかりにかざして行なって下さい。

III キットの使用方法 ( 下図参照 )１)2 本の試験管それぞれに下部の線まで検水を取る。

2) 片方の試験管に検水調製液（白キャップ）を2 滴加え、軽く振り混ぜる。

3) さらに色素液（青キャップ）を1 滴加え、軽く振り混ぜる。

（検水そのまま）

4) 検水そのままの試験管を左側に、発色させる試験管を右側に入れる。

5)2 つの窓に色が同じになるように色調比色板を回す。
同じ色になったところの数字を読みとる。

147

技術的な内容に関するお問い合わせ先：カスタマーサポート Free Fax:0120-021557 Free Dial:0120-489548
在庫や価格(記載容量以外もしくは request)に関するお問い合わせ：マーケティング部 Tel:096-286-1515 Fax:096-286-1525(株)同仁化学研究所

プロトコルAB
C
DE
F
GHIJ1.2

SBT 法と DPD 法の温泉水測定データ
SBT 法 (ppm)
0.91
0.88
0.60
0.51
0.81
0.23
0.94
0.86
0.73
0.92

DPD 法 (ppm)
0.93
0.94
0.58
0.40
0.85
0.18
0.90
0.85
0.88
1.05

1.00.8DPD 法

表10.60.40.2

V SBT と DPD の比較データ０

ここでは SBT 法と DPD 法とを比較したデータを示す。
(1) 温泉水での測定データ相関性
10 種類の検水 ( 温泉水 ( 源泉 )) に次亜塩素酸 1.0 ppm 添加し、SBT 法および DPD 法で測定した結果を表 1 に示す。図 3 はそれをプロットして相関性を見たものである。

０0.2

図3

温泉水での残留塩素測定の相関プロット

0.40.6
SBT 法

0.81.01.2(2) 細胞毒性ヒ ト 子 宮 ガ ン 細 胞 (HeLa 細 胞 ) を 用 い て、SBT と DPDの細胞毒性を細胞増殖アッセイキット (Cell Counting Kit8) を用いて求めたのが図 4 である。これより求めた LD50 は
SBT : 13,500 μ mol/l 、DPD : 50 μ mol/l となり、SBT は DPD と比べて非常に低い毒性であることがわかる。
(3) 遊離残留塩素選択性
アンモニアと遊離残留塩素を反応させた結合残留塩素との反応性を SBT 法と DPD 法で比較したのが図 5 である。DPDが結合塩素と反応するのに対して、SBT はほとんど反応しないのがわかる。KI を添加して、結合塩素を遊離残留塩素に変えるとすぐに反応する。

その他
機能性有機材料
図4参考文献細胞毒性比較データ

1) R. Sakamoto, D. Horiguchi, T. Ikegami, M. Ishiyama, M. Shiga, K.
Sasamoto and Y. Katayama,“A New Water-soluble ChromogenicIndicator - An Application to the Determination of Chlorine in AqueousSolutions”, Anal. Sci., 2003, 19,1445.

サンプル調製
2 mg/l HOCl 溶液↓← 2 mg/l NH4CI 溶液 ( 等量 )30 分間室温放置↓
測定サンプル〈SBT 法〉
サンプル 2.5 ml← 3 mol/l 酢酸緩衝液 (pH5.2, cont. 0.25% CyDTA) 30 μ l← 20 mmol/l SBT 溶液 15 μ l
吸光度測定 (675 nm, 5 分間 )←ヨウ化カリウム溶液 2.5 mg/50 μ l
吸光度測定 (675 nm,15 分間 )

↓

図5細 胞
増殖 / 毒性酸化
ストレス分 子生物学
細 胞 内蛍光プローブ細胞染色
ミトコンドリア
関連試薬
細菌研究用
試
薬
膜タンパク質可 溶 化 剤
ラベル
化 剤
二価性
試 薬
イオン
電 極

〈DPD 法〉
DPD 試薬 (4%DPD-Na2SO4)25 mg← 0.2 mol/l リン酸緩衝液 (pH6.5,cont. 0.1% CyDTA)125 μ l←サンプル 2,375 μ l
吸光度測定 (510 nm,5 分間 )←ヨウ化カリウム溶液 25 mg/50 μ l
吸光度測定 (510 nm,15 分間 )↓結合残留塩素との反応性

技術的な内容に関するお問い合わせ先：カスタマーサポート Free Fax:0120-021557 Free Dial:0120-489548
在庫や価格(記載容量以外もしくは request)に関するお問い合わせ：マーケティング部 Tel:096-286-1515 Fax:096-286-1525(株)同仁化学研究所

148