English version
PRODUCT INFORMATION

商品名:

DynaCompetent Cells

JetGiga DH5α

(旧製品名 JetGiga Competent Cell (DH5α))

商品番号.:
容量:
形質転換効率:
付属試薬:

DS230
100 μl × 10
>1 × 109 CFU/μg (pUC19)
SOC medium, 1 ml ×10

本品は研究用試薬です
DynaCompetent Cells

JetGiga DH5α は以下の特長を持つクローニング用コンピテントセルです。

(1)迅速なトランスフォーメーション (6 分間)(2)高形質転換効率 (>1 × 109 CFU/μg)(3)融解後お好みの容量に分注し、再凍結可能 (図 2) (分注方法につては p3 をご覧ください)
本品は大腸菌株 DH5α(分子生物学実験においてスタンダードな株の一つ)をもとに、当社開発の技術によって製造しています。DH5α 株は φ80lacZΔM15 の変異を有しており、また laqIq 遺伝子を持たないため、X-gal の使用によりブルーホワイトセレクションを行うことができます(IPTG の添加は不要です)。

大腸菌株 DH5α の遺伝子型:
supE44, ΔlacU169(φ80lacZΔM15), hsdR17, recA1, endA1, gyrA96, thi-1, relA1

品質検査:
0.2 ng のスーパーコイル状態の pUC19 プラスミドを用いて、p2 に示す 6 分間形質転換法により形質転換を実施。その後 50 μg/ml のアンピシリンを含む LB プレートに塗布し、37℃で一晩インキュベート。得られたコロニー数により形質転換効率は 1 × 109 CFU/μg 以上であることを確認しています。

保存条件:−80ºC で保管してください。納品から 12 カ月間は形質転換効率の低下はありません。
コンピテントセルは温度の変化によって品質が低下します。納品時にはドライアイス同梱の容器から直接-80℃の冷凍庫に移してください。
SOC medium は室温または−80℃で保管してください。

注意点:
アンピシリン以外の抗菌薬(カナマイシン、テトラサイクリン等)を使用する場合には、『6 分間形質転換法』
では得られるコロニーが少なくなることがあります。
そのため、アンピシリン以外の抗菌薬を使用する場合には作業に*追加工程を加えてください (詳細については p2 および図 1 をご覧ください)。

1Ver. 2.0

PRODUCT INFORMATION

形質転換:●ご用意いただくもの• 抗菌薬を添加したLBプレート• 滅菌されたスプレッダー
ブルーホワイトセレクションを行う場合• 氷を入れた容器• 37℃インキュベーター

• 42℃ウォーターバス• 20 mg/ml X-Gal (dimethylformamide (DMF)に溶解)● 形質転換方法:
1) DynaCompetent Cells JetGiga DH5αを氷上で融解する(1本のチューブに含まれる量は100 μlです)。
2) DNA試料*をコンピテントセルに加え、10回程度チューブを指ではじくようにして**均一に撹拌する。
* DNA試料の液量はコンピテントセルの液量の5%を越えないようにしてください (例えば、100 μlのコンピテントセルに対しては5 μl以下のDNA試料をご使用ください).
** ボルテックスしないでください。
3) 氷上で5分間静置。
4) ウォーターバスで42℃、30秒加熱*。 この時、液を混ぜたりチューブを振ったりしないでください。
* 加熱時間はコンピテントセルの液量によって異なります。
液量/チューブ

加熱時間

50 – 100μl

30 秒<50 μl20 秒5) 室温のチューブラック上で冷却。
アンピシリンでの選択→ 工程7)
アンピシリン以外での選択→ 工程6) (追加工程)
追加工程:6) コンピテントセルを0.9 mlのSOC(あらかじめ室温もしくは37℃にしておく)の入った滅菌済み15 mlチューブに移す。これを37℃で60分間、振とうする。

7) コンピテントセルを一部取り、抗菌薬を添加したLBアガープレートに塗布する。
ブルーホワイトセレクションを行う場合は、25 μlの20 mg/ml X-GalをあらかじめLBアガープレートに塗布し、30分後にコンピテントセルの塗布を行う。DH5αはlaclq,遺伝子を持たないため、IPTGの添加は必要ない。
本工程においてコンピテントセルを希釈する場合は、SOC, SOB, LB等を使用してください。
8) 37℃で一晩静置。

2Ver. 2.0

PRODUCT INFORMATION

分注:
DynaCompetent Cells

JetGiga DH5αは 1 回 凍結融解を行っても、1 × 109 CFU/μg 以上の形質転換効率を保ちます(図 2)。
分注は下記方法に従い行ってください:● ご用意いただくもの:• 滅菌した1.5 mlチューブ• 温度計• 滅菌したピペットチップ• ディープフリーザー (−80ºC)• 氷水• 冷凍庫 (−20ºC)●分注方法:
繰り返しの凍結融解は形質転換効率を著しく低下させます。
2回以上の凍結融解を行わないでください。
1) 新しいチューブとピペットチップを−20ºC の冷凍庫で冷やしておく。
2) 氷水(氷を容器に満たし、その上端まで水を浸す)を準備し、氷水が充分に冷えるまで待つ** 0℃になっていることを温度計で確認してください。
3) DynaCompetent Cells JetGiga DH5αを氷水中で溶解させる(溶解に必要な時間は 100 μl のコンピテントセル
で 4 分程度)。
4) 5 分以内*に、冷やしたチップおよびチューブを用いて分注**を行う。
*コンピテントセルは融解後、時間経過とともに形質転換効率が低下します。そのため、できるだけ早く分注を行ってください。
**分注の容量は>20 μl/tube をお勧めします。これは、<20 μl/tube では、容量が少なすぎるため、形質転換作業中の 42℃での加熱時にチューブ内温度のコントロールが難しくなるためです。
5) ディープフリーザーで凍結する (−80ºC)。

3
Ver. 2.0

PRODUCT INFORMATION

1.0E+10

図 1: 種々の抗菌薬を用いた場合の DynaCompetent Cells JetGiga DH5αの形質転換効率

CFU/μgDynaCompetent Cells

JetGiga DH5 α に 対 し pBR322 (AmpicillinR,TetracyclineR)または pACYC177 (KanamycinR)で形質転換を行った。形質転換効率は 6 分間法および 6 分間+37℃ 60 分間 (+追1.0E+09加工程)法で測定した。

1.0E+08
AmpKanTet

6 min method

AmpKanTet+additional step(60 min outgrowth)

1.0E+10

CFU/μg (pUC19)

図 2: 繰り返しの凍結融解の形質転換効率への影響
融解した DynaCompetent Cells JetGiga DH5αを再度ディープフリーザーで凍結した。これらのコンピテントセルに対して 6 分間法を用いて
1.0E+09

pUC19 プラスミドで形質転換を行った。
*Fresh: 購入後最初の融解.

1.0E+08*FreshOnce

Twicefreeze-thaw cycle

参考文献:
Sambrook, J. and Russell, D.W. (2001) Molecular Cloning: A LaboratoryManual, 3rd ed., Cold Spring
Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.

関連製品:
DS210

DynaCompetent Cells

JM109

DS255

DynaCompetent Cells

Zip BL21(DE3)

DS220

DynaCompetent Cells

DH5α

約 5 分で形質転換操作が終了

4
Ver. 2.0