製品使用例
Human Tissue Array (Cybrdi, Inc.)

組織アレイを用いた
Podoplanin の発現解析
組織アレイを用いたPodoplanin
産業技術総合研究所 糖鎖工学研究センター
加藤 幸成 先生

表 1 今回使用した Cybrdi 社組織アレイの一覧
Cat#CS17-01-001
CS17-01-002
CS17-01-003
CS17-01-004
CC04-01-001
CS04-03-001
CS04-07-001
CS04-08-001
CS04-10-001
CS04-11-001
CC23-01-001
CC02-01-002
CS38-01-001
CS01-01-002
CC05-01-002
CC06-01-001

表 2 Cybrdi 社の組織アレイを用いた Podoplanin の解析（578 症例）

Product nameBrain glioma
Brain glioma
Brain glioma
Brain glioma
Lung carcinoma
Lung squamous cell carcinoma
Lung adenocarcinomaLung adenocarcinoma
Large cell carcinoma of lung
Lung small cell carcinoma
Testis carcinoma
Esophagus squamous cell carcinoma
Skin malignant melanoma
Stomach adenocarcinoma
Colon carcinoma
Rectum carcinoma

Tumor typeNo. of cases
Brain glioma
diffuse astrocytoma (grade 2)
22anaplastic astrocytoma (grade 3)
29
glioblastoma (grade 4)
81
Lung carcinoma
squamous cell carcinoma
23
adenocarcinoma
51
large cell carcinoma
23
small cell carcinoma
31
Testicular tumor
seminoma13
B cell lymphoma
7
Esophagus squamous cell carcinoma
65
Malignant melanoma
38
Stomach adenocarcinoma
72
Colon adenocarcinoma
66
Rectal adenocarcinoma
57

Podoplanin immunostaining++++++
032302801522234520002000100018512331130500000030000006000007513872
66
57

10 µm
図１：glioblastoma における Podoplanin の発現
抗 Podoplanin 抗体により腫瘍細胞の膜が特異的に染色されている。
使用パネル： CS17-01-004

図２：肺扁平上皮癌における Podoplanin の発現
肺癌では扁平上皮癌に特異的に Podoplanin の発現が見られる。
（挿入図： HE 染色）
使用パネル： CS04-03-001

【解説】Podoplaninは、LYVE-1, Prox1, VEGFR-3とともに、リgrade 1 から grade 4 に分類される。grade が上がると臨ンパ管内皮細胞の特異的マーカーとして発見され、これ床的悪性度が高くなるが、Podoplanin の発現が grade とまで困難であった血管内皮細胞との組織学的鑑別が容易相関して上昇していることが示された（図 1）。また、となった。我々は、Podoplanin（別名 Aggrus）が血小板皮膚の扁平上皮癌で Podoplanin が発現していることが報凝集活性を持つことを発見し、癌細胞による血小板凝集告されていたが、今回、肺や食道の扁平上皮癌においてや、ある種の癌細胞の血行性転移に重要であることを報も Podoplanin の発現が確認された（図 2、3）
。精巣腫瘍

告してきた（参考文献 1、2）。さらに近年、精巣腫瘍、の組織アレイでは、セミノーマの全例において肺癌、脳腫瘍などのヒト腫瘍において、Podoplanin が組Podoplanin の発現が見られたのに対し、他の組織型では織型特異的に発現していることも発見し、腫瘍マーカー全く発現が見られなかった（図 4）。

としての開発も期待されている（参考文献 3 - 6）
。また、使用した組織アレイスライドグラスには、直径 1.5

ヒト Podoplanin に対する特異的抗体が何種類か販売されmm の腫瘍組織がパネルとしてのせられている。特にヒているが、特に我々が作製した抗 Podoplanin 抗体

ト肺癌の各種組織アレイは、症例数が多いだけでなく、（AngioBio 社)は、感度、特異度共に高く、免疫組織学的手術件数が少なく入手困難な組織型である小細胞癌や大染色においても有用性が高い。

細胞癌も多く含まれている。また、精巣腫瘍の症例数はPodoplanin がどの腫瘍で、どのような組織型に発現し世界的に非常に少ないため、一度に多くの病理切片を集ているかを調べるには、感度、特異度の高い抗体を使うめることが困難であるが、Cybrdi 社の組織アレイを用いことだけでなく、多くのヒト腫瘍組織での発現解析が重ることにより、これまでの結果を症例数を増やして確認要である。今回、Cybrdi 社の各種ヒト腫瘍組織アレイすることができた。また Web サイトですべての HE 染色（表 1）を用いて、Podoplanin の発現解析を行った。合計像と臨床的・病理学的診断を確認できるので、最も目的

578 症例における Podoplanin の発現解析の結果を表 2 にに合ったアレイを選択することができる。直径 1.5 mm示した。それぞれの症例について、以下簡単に結果を示と組織片は小さいが、各診断に相当する代表的な視野がす。

選ばれており、Podoplanin の発現の判定をするには十分

脳腫瘍では、astrocytic tumor における Podoplanin のな面積であった。各標本の固定状態は良好であり病理診発現解析を行った。astrocytic tumor は WHO の分類で、断に適した切片である。実際に今回は、通常の病理切片

図３：食道癌における Podoplanin の発現（挿入図： HE 染色）
使用パネル： CC02-01-002

図４：セミノーマにおける Podoplanin の発現
精巣腫瘍ではセミノーマに特異的に Podoplanin の発現が見られる。
（挿入図： HE 染色）
使用パネル： CC23-01-001

での Podoplanin の発現解析も平行して行い、同様の結果参考文献が得られたことから、組織アレイを用いた解析が有効で1．Kato Y. et al. J Biol Chem. 2003; 278(51):51599-51605.

あることを示すことができた（参考文献 6）。組織アレイで最も問題となるのは、腫瘍の heterogeneity であるが、事前に解析したいタンパクの発現パターンを通常の病理切片で調べておくことが重要である。Cybrdi 社の組織アレイでは、同一症例から複数個サンプリングされているものもあり、この問題をある程度は解決できるものと思われる。

（Podoplaninのクローニング）
2．Kaneko M., Kato Y. et al. J Biol Chem. 2004; 279(37):3883838843.（Podoplaninの糖鎖構造解析）
3．Kato Y. et al. Oncogene. 2004 ;23(52):8552-8556.（精巣腫瘍における Podoplaninの発現解析）
4．Kato Y. et al. Tumour Biol. 2005; 26(4):195-200.（肺癌における Podoplaninの発現解析）

このように、今回のような大量の症例に対しても、組5．Mishima K., Kato Y. et al. Acta Neuropathologica. in press（脳織アレイを用いることにより、抗体の希釈濃度、反応時腫瘍（germ cell tumor）における Podoplaninの発現解析）

間、検出方法による差が生じない点や、検鏡や評価が簡6．Mishima K., Kato Y. et al. Acta Neuropathologica. in press（脳便な点が利点として挙げられる。さらに、少数の病理切腫瘍（astrocytic tumor）における Podoplaninの発現解析）

片で特定のタンパクの発現が確認された場合、その症例数を有意に増やすことができる。繰り返しになるが、組織アレイと通常の病理切片とを組み合わせて発現解析を行うことが重要であり、研究の信頼性も上がることを強調したい。