ヒト血漿中の PCBs 水酸化代謝物の分析
愛媛大学農学部○榎本剛司、西尾悠、濱田ゆかり
松田宗明、河野公栄、脇本忠明

Analysis of Hydroxylated PCB Metabolites in Human Blood Plasma Samples，by Takeshi ENOMOTO，Yu NISHIO
Yukari HAMADA，Muneaki MATSUDA，Masahide KAWANO，Tadaaki WAKIMOTO（Department of EnvironmentConservation，Ehime University）
１．はじめにPCBs は生体内で水酸化体等に代謝され、抱合反応を経て、一般に速やかに体外に排出される。しかし、特異な構造を持つ水酸化体が血液中に選択的に残留し甲状腺ホルモンの撹乱を引き起こすことが指摘され、それら水酸化体 PCBs の毒性影響が近年注目されている。
甲状腺ホルモンは脳の機能発達においてきわめて重要なホルモンである。鯉渕らは甲状腺ホルモン受容体と甲状腺ホルモン応答配列を組み込んだレポータ･アッセイにおいて、甲状腺ホルモンにより調節される遺伝子の発現を水酸化体 PCBs が低濃度(pM オーダ)で阻害すること見いだした１)。このことは、水酸化体 PCBsが脳機能発達に何らかの影響を及ぼすことを示唆している。
本研究では、日本人のヒト体内での水酸化体 PCBsの濃度レベルを明らかにすることを目的として血液試料中の PCBs と水酸化体 PCBs 分析を行った。
２．試料及び方法
松山市内に在住する健常人を対象にインフォームドコンセントを行い、血液試料を入手した。血液試料は遠心分離で血漿を分離し分析に供した。
１)分析方法
抽出は、血漿(15g)に 6N-塩酸と 2-プロパノールを加え酸性下、50％ジクロロメタン/ヘキサンで 3 回抽出した。抽出液に 13C ラベル化 PCBs をクリーンアップスパ
イクとして、4OH-2’,3,3’,4’,5,5’HexaCB （4OH-CB159）
をサロゲート物質として加えた後、硫酸処理、5％含水シリカゲルカラムでクリーンアップを行い、PCBs と水酸化体 PCBs 画分を分取した。PCBs はヘキサンで溶出させ、水酸化体 PCBs は 25％ジクロロメタン/ヘキサンで溶出させた。さらに、PCBs 画分はアルミナカラムクリーンアップを行い、ヘキサンで夾雑物質を溶出させた後、50％ジクロロメタン/ヘキサンで PCBs を溶出させ、HRGC/HRMS により測定を行った。水酸化体 PCBs画分は、ジアゾメタンを用いる誘導体化で水酸基をメチル化した後、同じく HRGC/HRMS を用い測定を行なった。

２)測定条件測定には、HRGC/HRMS (Agilent 6890GC / JEOL
JMS-700S) を用いた。以下に分析条件を示す。
PCBs 測定条件：
ColumnHT8-PCB （60m，0.25mm i.d.）Oven
120℃(1min)-20℃/min180℃-2℃/min-280℃(3min)
水酸化体 PCBs 測定条件：
ColumnDB-５MS （60m，0.25mm i.d.）Oven
150℃(1min)-20℃/min-200℃-2℃/min270℃-5℃min-290℃（5min）３)分析対象とした水酸化体 PCBs
左側に親化合物を、右側にその代謝物を示す。
ClCl

Cl

HO

CB105
CB118

Cl
Cl

4OH-2,3,3’,4’,5-pentaCB(4OH-CB107)
HOCB130
CB138
CB157

Cl

Cl

Cl
Cl

3OH-2,2’,3’,4,4’,5-hexaCB(3OH-CB138)
Cl

CB138
CB146
CB156

Cl Cl

Cl

Cl

HO

Cl
Cl

Cl

4OH-2,3,3’,4’,5,6’-hexaCB(4OH-CB146)
HOCl

Cl

Cl

CB146
CB156

Cl
Cl

Cl

CB170
CB172
CB180

Cl

3OH-2,2’,4,4’,5,5’-hexaCB(3OH-CB153)
Cl Cl

Cl

HOCl
Cl

Cl

4OH-2,2'3,3',4',5,5'-heptaCB(4OH-CB172)
ClCl ClClHO

CB183
CB187

ClClCl

4OH-2,2',3,4',5,5',6-heptaCB(4OH-CB187)

２) ヒト血漿中の PCBs、水酸化体 PCBs の分析
表 1 にヒト血漿中の PCBs と水酸化体 PCBs の定量結果を示す。ヒト血漿中では、分析対象とした６種の水酸化体 PCBs が検出された。このうち 4OH-CB107（N.D.
〜127pg/g wet weight）、4OH-CB146(3.7〜249pg/g wetweight)、4OH-CB187(9.1〜76.7pg/g wet weight)の 3 異性体が血漿中の主要異性体として検出された。
水酸化体 PCBs とそれらの親 PCBs の血漿中での存在比は 1/10〜1 であった。4OH-CB107、4OH-CB187 はそれら親 PCBs と同じレベルで血漿中に存在していた。本
実験で供した試料はすべて日本人であるが 4OH-CB107、4OH-CB187 とそれら親 PCBs の血漿中での存在比が欧米人と比較して、高い傾向が見られた。これらの差はPCBs の暴露量や代謝能力の違いによるものと考えられる。今後、試料数を増やして濃度と共に存在比についても詳細に検討する必要があると考えられる。
４．参考文献１) Iwasaki,T.et al. Biochem. Biophys. Res. Com. 299,384 (2002)

100
回収率（％）

8060
402004OHCB107

3OHCB138

HEX 100ml
25%DCM/HEX100ml

4OHCB187

10%DCM/HEX100ml
50%DCM/HEX100ml

図 1 水酸化体 PCBs の溶出溶媒の検討

254OH-CB107
3OH-CB138
4OH-CB18720

溶出量(ng)３．結果と考察
１) シリカゲルカラムによる分画条件の検討
5％含水シリカゲルを用い PCBs と水酸化体 PCBs の分画の検討を行った。図 1 は水酸化体 PCBs の溶出溶媒の 検 討 結 果 を 示 す 。 5 〜 7 塩 素 の 4OH-CB107 、3OH-CB138、4OH-CB187 の各水酸化体 PCBs を用い溶出溶媒の検討を行った。ヘキサン 100ml では各水酸化体 PCBs の溶出は認められなかった。10％ジクロロメタン/ヘキサン 100ml では高塩素になるに従い回収率が低下する傾向が見られた。25％ジクロロメタン/ヘキサン、50％ジクロロメタン/ヘキサン 100ml においては 80％以上の良好な回収率が得られた。
次に、溶離液として 25％ジクロロメタン/ヘキサンを用い溶出挙動の確認を行った結果を図 2 に示す。各水
酸化体 PCBs は 25％ジクロロメタン/ヘキサン 100ml 以上で良好な回収が得られた。
以上の結果より 5％含水シリカゲルを用い PCBs をヘキサンで溶出し、次に 25％ジクロロメタン/ヘキサンで水酸化体 PCBs を溶出することで分画が可能であると判断した。

1510500204060
80 10025％DCM/HEX溶媒量（ｍｌ）120

図２水酸化体 PCBs の溶出挙動

表１ 人血漿中の PCBs と水酸化体 PCBs の濃度
4OH-CB107
3OH-CB153
4OH-CB146
3OH-CB138
4OH-CB187
4OH-CB172
ΣPCBs(4-7Cl)

Mean
39.3
8.5
40.8
4.7
30.3
4.1468Range
N.D.-127
1.8-17.5
3.7-249
N.D.-12.1
9.1-76.7
1.1-10.7
185-1310(pg/g wet weight)