380235－A＜測定にあたっての注意＞
１．LAMP 反応は非常に鋭敏な反応であり、標的遺伝子や増幅産物が極微量でも混入すると誤った結果をもたらす原因となるおそれがあります。このようなコンタミネーションを回避するために、検体採取及び核酸抽出操作は本製品を使用する部屋とは別の部屋で実施するか、あるいは検査区域を分割して別のエリアで行ってください。
必要に応じて、クリーンベンチの使用又は手袋やアイソレーションガウンの着用等でコンタミネーションを防ぐ措置をとってください。
２．本製品を取り扱う際には、微生物や核酸分解酵素（DNase，RNase）のコンタミネーションを避けてください。
３．乾燥試薬の溶解は確実に行ってください。溶解が不十分な場合、感度が低下する等十分な性能が得られないことがあります。特に転倒した状態では 2 分間以上放置しないでください。
４．サンプル溶液を混合後、反応液の液面に気泡があると誤判定の原因となるので、スピンダウンして、測定前に取り除いてください。
５．反応後のチューブの蓋は決して開けないでください。特に反応後のチューブを装置から取り出すときにチューブの蓋が開かないよう、慎重に取り出してください。増幅産物によるコンタミネーションは誤判定の原因となるばかりでなく、測定環境そのものを汚染し、汚染を完全に除去しない限り、以後正しい結果が得られなくなる可能性があります。
６．電気泳動等での増幅産物の取扱いは避けてください。

2015 年 4 月作成（第 1 版）

研究用試薬

TM

コントロールセットＤＮＡ
本製品は研究用試薬です。診断又はその補助を目的としては使用しないでください。
この説明書をよく読んでから使用してください。

【はじめに】LAMP（Loop－mediated Isothermal Amplification）法は、①等温で遺伝子増幅反応が進行する 1）, 2），②6 領域を認識する 4 種類のプライマーを使用するため特異性が高い，③増幅効率が高く、短時間に増幅可能である，④増幅産物量が多く、簡易検出に適している 3）, 4），等の特徴を有する遺伝子増幅法です。
本製品は、Loopamp DNA 増幅試薬 D（栄研化学株式会社別売品）と組み合わせて使用するコントロール反応用キットです。

【内容】【 取扱い上（危険防止）の注意 】

12 回分

１．Primer mix dBP（PM dBP）
２．Positive control dBP（PC dBP）
３．Negative control（NC）

１．本製品は、体外診断用医薬品ではありません。
２．蛍光目視判定時に紫外線照射装置を使用する場合、ランプより放射される紫外線（殺菌線）は有害なので、紫外線を直接目に入れることは避けてください。また点灯中のランプを見る必要があるときは、必ずガラス板を通すか、広幅の眼鏡又は防護面をかけて判定してください。
３．Primer mix dBP（PM dBP）, Positive control dBP（PC dBP）及び Negative control（NC）には、保存剤として微量のアジ化ナトリウムが含まれています。アジ化ナトリウムには毒性があるので、目や口に入らないよう、また皮膚に付着させないよう注意してください。
４．試薬が誤って目や口、皮膚に付着したときは、直ちに大量の水で十分に洗い流し、必要があれば医師の手当てを受けてください。

0.72 mL × 1
0.16 mL × 1
0.16 mL × 1【使用方法】
１．必要な器具・器材・試料等
Loopamp DNA 増幅試薬 D の説明書をご参照ください。

２．試薬の調製方法（詳細は Loopamp DNA 増幅試薬 D の手順に従ってください。）

１）必要本数（サンプル数＋コントロール数）の Dried DNA Amplification Reagent を取り出し、残りの試薬は直ちに元のアルミパックで密封する。
〇 コントロール反応用（本製品）＜試 薬＞
Primer mix dBP（PM dBP）

【 使用上の注意 】
１．本製品は凍結及び温度の急激な変化は避け、指定の貯蔵方法で保管してください。
２．Positive control dBP（PC dBP）は、他の試薬と離して保管してください。
３．遺伝子検査の知識や経験をもたない場合、検査結果の判定を誤る危険性があります
ので、本製品の使用にあたっては遺伝子検査の知識、経験を有した技術者の指導のもとで検査を実施してください。
４．本製品の性能に由来しない事由（操作方法を誤った場合等）による誤った判定、またその判定に由来して発生した事項に対して、弊社は一切の責任を負いません。
５．本製品は使用期限内に使用してください。
６．本製品の容器、付属品等を再利用又は他の目的に転用しないでください。
７．Loopamp DNA 増幅試薬 D 以外の試薬と組み合わせて使用しないでください。

＜用量＞
15.0μL／テスト

２）チューブを軽く叩いて混合する（タッピング）か、又は転倒混和、あるいはボルテッ
クスミキサー1 秒間×3 回撹拌し、スピンダウン後プライマーミックスとします。
（氷上保存）

３．操作方法
（氷上操作）
反応チューブ 1 本あたり PM dBP を 15.0μL を分注
コントロールをそれぞれ 10.0μL 添加【 廃棄上の注意 】（LAMP 反応液として合計 25.0μL）
陰性コントロールには Negative control（NC）を、陽性コントロールには Positive control dBP（PC dBP）を使用

１．反応後のチューブは蓋を開けずに、焼却処理又は密閉できるビニールの袋を二重に施し適切に処理してください。増幅産物の飛散防止のため、廃棄の際にオートクレーブ処理は行わないでください。
２．構成試薬チューブはポリプロピレン（PP）、キットケースは紙を主な材質としています。
３．未使用及び使用後の本品や容器及び器具類は、廃棄物の処理及び清掃に関する法律や水質汚濁防止法等に従い、各施設の責任において処理してください。

蓋を閉めた後、反応チューブを転倒して溶液を蓋に移し、転倒した状態のまま 2 分
間氷上で放置する。
反応チューブを 5 回転倒混和後、8 連マイクロチューブ用簡易遠心機でスピンダウンする。

【 貯蔵方法・有効期間・包装単位・製品コード 】
製〈ＬＡＭＰ反応〉

品名

LoopampTM
コントロールセット DNA

リアルタイム濁度測定装置又はインキュベーターの反応ブロックにセットして反応をスタート
コントロール反応は 66℃，40 分間

貯蔵方法

有効期間

包装単位 製品コード

2～8 ℃

1年 間

12 回分

LMP208【 主要文献 】

酵素失活（80℃，5 分間又は 95℃，2 分間）

1） Notomi T. et al.,: Nucleic Acids Research, 28（12）: e63, 2000.
2） Nagamine K. et al.,: Clin. Chem, 47（9）: 1742－1743, 2001.
3） Mori Y. et al.,: Biochem. Biophys. Res. Commun, 289（1）: 150－154, 2001.
4） Tomita N. et al.,: Nat Protoc, 3（5）: 877－882, 2008.
5） Nagamine K. et al.,: Molecular and Cellular Probes, 16（3）: 223－229, 2002.

（リアルタイム濁度測定装置では自動処理されます。）
濁度測定・判定

４．検出
Ａ．リアルタイム濁度検出
リアルタイム濁度測定装置（LAMP 法専用）を用いることで、リアルタイム検出ができます。操作の詳細は装置の添付文書及び取扱説明書等をご参照ください。
Ｂ．蛍光目視検出
別売の Loopamp 蛍光・目視検出試薬を用いることで目視判定が可能です 4）。詳細は蛍光・目視検出試薬の使用説明書をご参照ください。

【 問い合わせ先 】
栄研化学株式会社
フリーダイヤル

お客様相談窓口
0120－308－421

５．増幅曲線パターン

（EKN）

製造販売元
栃木県下都賀郡野木町野木143 番地

1／1

＜Precautions for measurement＞

For research use only

１．Because the LAMP reaction is very sensitive, any contamination withextremely minimum of the target gene or amplification product may result in
an incorrect result. To avoid such contamination, the use of this product andspecimen collection/nucleic acid extraction procedure should be performed inseparate rooms or in different areas by partitioning the laboratory area. Take
appropriate measures to prevent contamination including the use of clean
benches, gloves, and isolation gowns, as required.
２．Avoid the contamination by microorganisms or nucleic acid degrading enzymes（such as DNase and RNase）in handling this product.
３．Completely dissolve the dry reagent. Incomplete dissolution may result in poor
performance including low sensitivity. Do not leave more than 2 minutes instate of inverting reaction tubes.
４．Air bubbles may appear on the liquid level of the reaction solution after mixing
the sample solution. Remove them to prevent measurement errors byspinning down the reaction mixture.
５．Never open the tube cap after reaction. Particularly, carefully remove the tube
from the equipment so as not to open the cap after reaction. The contamination
with amplification products not only results in an erroneous decision, but also
causes the contamination of the measurement environment. Suchcontamination may persistently inhibit correct measurement unless it iscompletely eliminated.
６．Avoid handling amplification products using electrophoresis.

TMControl Set DNA
This product is a reagent for research purpose. Do notuse this product for making or supporting a diagnosis.
Read this explanatory leaflet carefully before use.

【Introduction】
The LAMP（Loop－mediated Isothermal Amplification）method is a gene
amplification technique characterized by（1）isothermal gene amplification
reaction1）, 2）,（2）high specificity due to the use of 4 primers recognizing 6 regions,（3）high amplification efficiency resulting in amplification in a short time,（4）alarge amount of amplification product facilitating simple detection3）, 4）.
This product is a control reaction kit to be combined with Loopamp DNA
Amplification Reagent D（separately provided by Eiken Chemical）.

【Contents】

For 12 tests

１．Primer mix dBP（PM dBP）
２．Positive control dBP（PC dBP）
３．Negative control（NC）

0.72 mL × 1
0.16 mL × 1
0.16 mL × 1【Precautions for handling（hazard prevention）】【Instructions for use】

１．This product is not designed as an in vitro diagnostic（IVD）.
２．Take care not to directly gaze at the ultraviolet ray（sterilizing ray）from thelamp of the ultraviolet irradiation device for fluorescent/visual evaluation
because it is dangerous. When it is necessary to gaze at the lamp that is on,
make sure to do that through a glass plate or using wide eyeglasses or shield.
３．A minute amount of sodium azide is contained as a preservative in the primer
mix dBP（PM dBP）, positive control dBP（PC dBP）, and negative control（NC）. Take care to prevent sodium azide from entering the eyes or mouth orattaching to skin because it is toxic.
４．If the reagent accidentally enters the eyes or mouth or attaches to skin, immediately
rinse it off with a large amount of water and seek medical treatment, if needed.

１．Essential apparatus, equipment, and reagents, etc.

Refer to the instruction manual of Loopamp DNA Amplification Reagent Dry.

２．Reagent preparation method（follow the procedure of Loopamp DNA
Amplification Reagent Dry for details）.
１） Take a necessary number（total number of samples and controls）of the Dried
DNA Amplification Reagent. Immediately return the remaining reagent to theoriginal aluminum pack and seal it.
○ For control reaction（this product）＜Reagent＞
Primer mix dBP（PM dBP）

＜Dose＞
15.0μL/test【Precautions】

２） Mix the reagent（PM dBP）by inverting, tapping or using a vortex mixer for 1
second 3 times and spin down before using as the primer mix.（Operationon ice）.

１．This product should be stored as specified while avoiding freezing or suddenchange in temperature.
２．Keep the positive control dBP（PC dBP）away from other reagents.
３．Perform gene test with this product only under the supervision of experts withthe knowledge and experience of gene test because the lack of knowledge orexperience may result in incorrect judgment of the test result.
４．Eiken Chemical Co., Ltd. does not bear any responsibility for false judgment
or any consequential damage derived from the false judgment caused by
non-capability problems such as operation error.
５．Use this product within the expiration date.
６．Do not recycle the containers or accessories of this product or use them forother purposes.
７．Do not use it in combination other regents with the Loopamp DNA Amplification
Reagent D.

３．Operating procedure（Operation on ice）
Dispense 15.0μL of PM dBP to each reaction tube.
Add 10.0μL of the control to each tube.
（25.0μL in total as the LAMP reaction solution）
Use negative control（NC）for the negative control and positive controldBP（PC dBP）for positive control.
After closing the cap, invert the reaction tube to transfer the solution onto the cap,
and allow it to stand on ice for 2 minutes.

【Precautions for disposal】

Repeat the inversion 5 times and spin down the reaction mixture using an 8－
microtube simple centrifuge.

１．Appropriately dispose of tubes after reaction with the cap closed by putting
them in double plastic bags that can be incinerated or sealed. To prevent
dispersion of amplification products, do not autoclave tubes before disposal.
２．The constituent reagent tube is mainly made of polypropylene（PP）. The kit
case is mainly made of paper.
３．Dispose of this product, containers, and materials before or after use on theresponsibility of the laboratories in compliance with applicable laws on waste
disposal and cleaning and water pollution prevention law.

〈LAMP reaction〉
Set it in the real－time turbidimeter or incubator reaction block to start reaction.
The control reaction occurs at 66°C for 40 minutes.
Enzyme deactivation（80℃ for 5 minutes or 95℃ for 2 minutes）（will be automatically processed in the real－time turbidimeter）
Turbidity measurement/evaluation【Storage method，shelf life，packaging unit，and product code】

４．Detection
Ａ．Real－time turbidity detection

The target gene can be detected in real time using the real－time turbidimeter（designed for the LAMP method）. Refer to the package insert or operation manual,etc. for the detailed operating procedure.

Ｂ．Fluorescent/visual detection

Product nameStorage method

Shelf life

Package unit

Product code

LoopampTM
Control Set
DNA

2－8℃

1 yearFor 12 tests

LMP208【References】

The target gene can be visually evaluated using the separately provided Loopamp
fluorescent/visual detection reagent 4）. Refer to the instruction manual of thefluorescent/visual detection reagent for details.

1）Notomi T. et al.,: Nucleic Acids Research, 28（12）: e63, 2000.
2）Nagamine K. et al.,: Clin. Chem, 47（9）: 1742－1743, 2001.
3）Mori Y. et al.,: Biochem. Biophys. Res. Commun, 289（1）: 150－154, 2001.
4）Tomita N. et al.,: Nat Protoc, 3（5）: 877－882, 2008.
5）Nagamine K. et al.,: Molecular and Cellular Probes, 16（3）: 223－229, 2002.

５．Amplification curve pattern

Manufacturer
1／1143 Nogi, Nogi－machi, Shimotsuga－gun, Tochigi 329－0114, Japan
380235－A

Date of Revision : April 2015（Ver.1）