博士（医学）安田一恵
学 位 論 文 題 名

小児糸球体疾患における尿中Terminal Complement Complex (TCC)測定の意義
学位論文内容の要旨【はじめに】
1980年Sala］ユtらの報告以来，糸球体腎炎における組織障害あるいは尿蛋白の出現に関与
す る 因 子の ーつ とし て補 体 後半 成分 であ るC5b
一 9complex； MAC（Mernbraneattackconplex） が注目されてきた，MACには 膜障害活性を持つ膜結合型MACと，膜障害活性を持た ない 可溶 型乳 臉 Cが あり ，両 者は ter
minalcompbmentcom
ponents（TCC）と総称される．申請者はこれまでの報告から，糸球体腎炎組織病変部にTCCの沈着がみられる点，尿中TCCが 巣状糸球体硬化症，糖尿病性腎症の疾患活動性を反映するという点に着目し，小児期発症の各種糸球体疾患を対象にT
CCの尿中排泄を測定し，臨床的意義について検討した ．ま た，腎炎組織へのTCC沈着と，同時に補体制御因 子であるutronectm（VN），
clusterirlの 局 在 を 観 察 し ， 腎 炎 組 織 で の 1℃ Cの 役 割 を 考 察 し た ．
【対象と方法】
小児期発症の腎疾患患者129例〔特発性ネフローゼ症候群（NS冫ステロイド反応群ほ群）
30例，NSステロイド抵抗群（B群）10例，IgA腎症（培心D
48例，膜 性増殖性糸球体腎炎（MPGN冫16例，ループス腎炎（LよD
16例，特発性膜性腎症（MN冫4例，紫斑病性腎炎（HSnD5例〕を対象とし，A群は蛋白尿陽性時〔A群（UP十）〕，陰性時瞼群（UPう〕について検討した．
1． TCCの 測 定 ： KusunoHら に よ り 作 成 さ れ た TCCを 構 成 す る C9ポ リ マ ー 上 のneoantlg
enに対 する モノ ク ロー ナル 抗体 184を一 次抗 体 とす るEuS
Aの sand噺ch法で行なった．検体は，発症から8週以降または腎生検から30月以内の新鮮尿，血液を，EぴI、Aを入 れて 採取 し， 遠 心し た上 清を 用いた．検体中のTCCの濃度は，びmosanactivatedsen】 mを 作成 し， こ れに 含ま れる TCCを200
AU/mlとして算出した．正常範囲は，血中TCC0．75AU/m1以下，尿中TCCO．06AU/ml以下とした．
2．螢 光抗 体法によるTCC，VN，clustermの染包：4皿の凍 結切片を風乾後4℃エタノー
ルで 固定 し， PB
Sで 洗浄 後， 一次 抗体 として抗TCC
抗体は 184を，抗VN
抗体は国立がんセンターの矢追先生にご提供頂いたものを，抗dust甜n抗体はアルツハイマー患者脳ホモジネイトより高丸らが作成したモノクローナル抗体Az172/4を用い，二次抗体としてFrI℃標識抗マウスI
gG（Cappel社）を用いた．
【結果】
1．血中T（ニC
値：A群（UPう5/30例，A群（UP十）6/30例，B群2/10例が軽度高値，I剛丶N
9/48例 ， MPGN10/16例 ， LN10/16例 が 高 値 を 示 し ， 平 均 値 は MPGNと INが 高 値 であった．
2．尿 中TCC
値 ：B群 では 9/10例が 高値 で， 平均 士 S
Dは 0． 82
4士 O．93
5AU/m1と最も高か っ た ．A群 （UP十） では 2/30例が 軽度 高値 ，I母 蝋で 13/48例， M
PGNで5/16例 ，LNで7/16例，MNで1/4例，HSPNで2/5例が高値であった．
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3． 血中TCC値と尿中1℃C値との関連：MPGNで正の相関関係（P0．7，p=0.
0025)が得られた・
4． 尿中 TC
C高 値症 例の 検討 ：最 も高 値を 示 した B
群 の組 織像 は， 巣状 糸 球体 硬化 症
(FSGS)2例， 微小 変化 群(MCNS)4例， foc
al globalc）bsolescenSe
1例であった．経時的 に尿中 T
CC値を測定したB群の症例では尿中TCCが持続高値であったが，A群の症例では，治療に反応する時期に尿中TCCの正常化がみられた．I
A
Nでは組織障害が高度の症例，MPGN
で は血 中 T
CC高値 と低 補体 血症 を示 す 症例 が多 かっ た．I
餅 州とMPG
Nでは，尿中TC
C値と尿蛋白量の問に弱い正の相関関係（IgA：r印．411，p印．0037，MPGN；r印．632，p O． 0086） が 得 ら れ た ． MNと HSPNで は ， 100mg/dl以 上 の 蛋 白 尿 が み ら れ た ．
5． TCC， VN， clusterin沈 着 の 検 討 ： A群 1例 ， B群 3例 ， IgAN16例 ， MPGN11例 ，Iバ7
例 ，MN2
例に螢光抗体法染色を 施行し，−，tr，十，2十，3十の5段階の強度で示した．正 常腎組織とA群では，TCCは糸球体では殆ど染色されず，小血管壁や尿細管基底膜の一部 にtr程度の顆粒状の沈着が認められた．VNとcluStennは糸球体基底膜，ポウマン嚢，血 管壁や尿細管基底膜の一部にtrで沈着が認められた．B群では3/3例で糸球体硬化部位に TCCの沈着が強く認められ， 尿細管問質への沈着も強く認められた．他群ではTC
Cは ，塒 ANでは12/16
例 でメ サン ギウ ム領 域 を中 心に 十〜 2十で粗 顆粒状に，MPG
Nでは10/1
1例で糸球体基底膜に沿って十 〜3十で，LNでは7/7例で十〜2十で糸球体基底膜，メサンギウム領域を中心に，MNでは2/2例で糸球体基底膜に沿って細顆粒状の沈着がみられ，いずれも免疫染色の局在とほぽ同様であった．V
NとclusterinはTCCとほぼ同様の局在で，TCCより弱い沈着がみられた．
【考察】
健常児では，血中TCC値，尿中TCC値とも低値であった．
尿中TCC値はB群で最も高値を示し，A群（UP十）では低値であった．小児期ステロイド抵抗性I
NSでは ， M
CNSとFSGSの 鑑別 診断 が問 題と なる が， B群の 症例 の様 に尿 中TCCが持続高値を示す場合は，ステロイド治療に抵抗性でありMCN
S以外の組織像を呈する可能性が高い と考えられた．尿中TCC高値の症例は，IgAN
では，組織傷害の重症度を反映している 可能性 が，MPG
Nでは，低補体血症や蛋白尿など疾患活動性との 関連が予測された，腎組 織へ の T
CCの沈 着は ，IgAN， IN， MPG
Nで はimm
urledepositsとほぽ同じ分布に認めら れ，FSGS
では糸球体硬化部位に強く認められた．腎炎組織でのTCCの沈着機序は，
immunecompleX（に）の関与により補体系が活性化され，膜結合型C5b―9が局所で形成される可 能性や，流血中のSC5bー9がV
Nreceptor等を介して糸球体へ沈着することなどが考えられた．一方，硬化性病変を含む組織障害の強い部位では，組織傷害による補体活性化や，傷害部位に補体成分がnonIspecifictrappingされることも考えられた．VN，clustenr1の沈着は，TCCと同様の分布を示したことから，腎組織傷害部位では，補体とその制御因子が組織攻撃と防御に関わっていることが推測された．
TCCの分子量は約1，000，000またはそれ以上と大きく，等電点は5．8と陰性であることから， TCCが通常の糸球体基底膜を 通過するのは非常に困難である，TCCの尿中排泄に関して， 糸球体局所で形成されたTCCが細胞内輸送を介する機序や，糸球体障害により漏出した分子量の大きな補体成分の尿細管腔での活性化などが考えられる．組織障害部位にTCC沈着が 認められ，血中TCC値に殆ど 差のみられない群間において，尿中TCC値に明らかな差が認 められたことは，尿中TCCが糸球体あるいはそれ以降の過程で形成されると考えられた． Invitro
ではTC
Cは細胞融解に至らない濃度で，ヒト糸球 体上皮細胞でのW型コラーゲン産生の増加などをはじめとする種々の生物学的活性が報告されており，TCCはメサンギウム細胞や，上皮細胞を刺激して組織障害や糸球体硬化の機序に関与する可能性が考えら
れた，

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学位論文審査の要旨
主 査 教 授 小 林 邦 彦
副 査 教 授 吉 木敬
副 査 教 授 小 池 隆 夫

学 位 論 文 題 名

小児糸球体疾患における尿中Terminal Complement Complex (TCC)測定 の意義
近 年、糸 球体腎 炎にお ける組 織障害 あるい は尿蛋 白の出現 に関与 するする因子のーつとして 補 体 後 半成 分 で あ るterminalcomplementcomponentsくTCC)が 注目さ れてき た。今 回、小 児 期 発 症の 各 種 糸 球体 疾 患 を 対象 に 尿 中 TCCを 測 定し臨 床的意義 につい て検討 すると とも に 、 組 織へ の TCC沈 着と 補体制 御因子 である vitronectin(VN)， clusterinの局 在を観 察し ，腎炎 組織で のTCCの役 割を考 察した 。
対 象 は小 児 期 発 症の 腎 疾患患 者129例〔 特発性 ネフロ ーゼ症 候群(INS)ス テロイ ド反応 群(A群 ） 30例 ， INSステ 口 イ ド 抵抗 群 (B群） 10例， IgA腎 症（I圏 ゜州） 48例，膜 性増殖 性糸球 体腎炎 （MP（ニ N）16例，ループス腎炎（LN）16例，特発性膜性腎症（MN）4例，紫斑病性腎炎 （HSPN） 5例〕と し、A群は蛋白尿陽性時：A群（UP十）、陰性時：A群（UP―）各々について
測 定 し た 。 TCCの 測 定 は Kusunokiら に よ り 作 成 さ れ た TCCを 構 成 す る C9ポ リ マ ー 上 のneOと mtigenに 対 す る モ ノ ク 口 ー ナ ル 抗 体 lB4を 一 次 抗 体 と す る EuSAの sandwich法 で行 な っ た 。 正 常 範 囲 は ， 血 中 TCC0． 75AU/m1以 下 ， 尿 中 TCCO． 06AU/ml以 下 と し た 。
TCC． VN， clustenr1の 染 色 は 、 二 次 抗 体 に FrrC標 識 抗 マ ウ ス 瓸 Gを 用 い た螢 光 抗 体 間接 法で行 った。
尿 中 TCC値 は 、 INSでは B群が 最 も 高 値で ， A群 （ UP十 ） で は 殆ど 低 値 で あり、 両群の血中 TCCは 低 値 で あ っ た 。 経 時 的 に 尿 中 TCC値 を 測 定 し た B群 の 症 例 で は 尿 中 TCCが 持 続
高 値 で あ った が ， A群 の 症例 で は ， 治療 に 反 応 する 時期に 尿中TCCの正常化 がみら れた。 B群 の組織 像には 巣状糸 球体硬 化症（ FSGS）2例が 含まれ ていた 。腎炎 群では 、I圏゜ Nでは組織 障 害 が 高 度 の症 例 が 、 MPGNで は血 中 TCC高 値と 低 補 体 血症 を 示 す 症例 が 多 か った 。 LNで は低補 体など との明 らかな 関連は みられな かった 。
TCC， VN， clustenn沈 着 の 検 討 で は 、 正 常 腎 組 織 と A群 で は ， TCCは 糸 球体 で は 殆 ど
染 色 さ れ ず 、 VNと clustennは 糸 球 体基 底 膜 の 一部 な ど に わず か な 沈 着が 認 め ら れた 。 B群 で は 糸 球 体 硬 化 部 位 に TCCの 沈 着 が 強 く 認 め ら れ IgAN、 MPGN、 LN、 MNで は い ず れも 免 疫 染 色 の 局在 と ほ ぼ 同様 で あ っ た． VNと clusterinは TCCと 同様 の 局 在 で， TCCよ り
弱 い沈着 がみら れた。
尿 中 TCCの 測 定 結 果か ら 、 INSでは ス テ ロ イド 治 療 反 応性 の 指 標 とし て 臨床 的に有 用であ り 、 尿 中TCCの 持 続 高値 は 微 少 変化 以 外 の 組織 像 を 呈 する 可 能 性 が考 え られた 。kANでは 組 織 傷 害の 重 症 度 を反 映し ている 可能性 が，MPGNで は低補 体血症 や蛋白 尿など疾 患活動
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性 との関 連が予 測され た。
腎 組 織 へ の TCCの 沈 着 は 、 IgAN， LN， MPGNで は immune depositsと ほ ぼ 同 じ 分 布 に認 められ 、糸球 体硬化部位を含む組織傷害の強い部位に認められた。Clusterin，vitronectinの 沈着は 、TCCと 同様の分 布を示 すこと から， 病変部 では， 補体と その制 御因子が 組織攻 撃と 防御に 関わっ ている ことが 推測さ れた。 TCCの組織 への沈 着機序 は，組 織傷害の 強い部 位
で の celldebrisや 、 immuneCOITiplexに よる補 体の活 性化、 傷害部 位に補 体成分が non‑specifictrappingされ る可能 性が考 えられ た．TCCの 分子量 は約1， 000，000ま たはそ れ以
上 と 大 き く糸 球 体 局 所の TCCが 全 て その ま ま 尿 中に排泄 される ことは 考えに くいが 、細胞内 輸送を 介する 機序も 報告さ れてい る。組 織傷害 の強い部 位では sizebarrierの破綻によりTCCがその まま、 あるいは 漏出し た分子 量の大 きな補 体成分 の尿細 管腔で の活性化 なども 推測 された 。
今後、 腎での補 体成分 の局所 産生の 詳細や 、血中 および 腎組織構成細胞上に存在する補体
制 御因子 につい ての検 討がよ り進む ことに より、 糸球体障 害，問 質障害の両面において、補体 と 補 体 調節 蛋 白 の役 割 に 注目 し た 特異 的 治 療に も 発 展し ていくと 考えられ た。
公開発 表に際し ，副査 の古木 教授か ら，糸 球体疾 患にお けるTCCの 生成部 位と形 成される
機 序につ いて、 TCCを実際 に治療 のマー カーと して用 いた場 合の有 用性、 補体制御 因子の 治
療 への応 用につ いての 知見な どに関 しての 質問が あった． 次いで 副査の小池教授から、分子量 の 大 き いTCCが 尿 中 に 排泄 さ れ る 機序 に つ い て、 他 の 分 子量 の 大 き い物質 ではな くTCCを 測定す る意義 につい て、免 疫学的 機序の 関与が 考えにく い腎炎 でのTCCの役割、 測定法 の簡 便化の 可能性 につい て質問 があっ た．次 いで主 査の小林 教授か ら液相 中と膜 上での TCC形成 、糖尿 病性腎 症など での血 管内皮 傷害と TCC形成の 関連に ついて の質問 があった ．申請 者
は い ず れ の質 問 に 対 して も 実 験 結果 や 他 の 研究 者 の 報 告を 引 用 し 妥当 な 回答を 行った ．
本 研 究は 、 小 児 の糸 球 体 疾 患患 者 を 対 象に 血 中 尿 中TCCを 測 定 し、 特 に尿中 TCC値測 定の 臨床的 有用性 （ステ ロイド 反応性 、疾患 活動性 、重症度 の判定 ）を明らかにし、さらに組織 上にお けるTCCの役割と その制 御因子 との関 わりを 推察し たもの で、今 後の臨床 面にお ける 応用が 期待さ れる。
審査員 一同は、 これら の成果 を高く 評価し 、申請 者が博 士（医学）の学位を受けるのに十分 な資格 を有す るもの と判定 した。

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