博 士 （ 医 学）

中 村美 智子

学 位 論 文 題 名MAMLDl/脇 mん Hが 精巣 機 能 に与 え る 影響
学位論文内容の要旨【背景】
MAMLDl (Mastermind‑like domain containing1）は、ヒト染色体Xq28から単離された尿道下裂の責 任遺伝子であり、現在までにナンセンス変異を含む複数の機能喪失変異が尿 道下 裂患 者で 同定 され てい る。これまでの 研究から、M
AM
LD1は胎児性分化臨界期の精巣におけるテ ス卜ステロン産生に関与し、その変異はテス卜ステロンの産生量低下を介し て尿 道下 裂を 引き 起こ すと 考えられている 。しかしながら、M
AM
LD1がどのような機序でテストステ ロン産生を制御しているかは未解明である。今回は、この機序を解明するため、マウスラ イディッヒ腫瘍細胞を用いて、Mamldl
ノックダウン実験を行った。また、テストステ口ン 産生低下は、尿道下裂発症に関わるだけでなく、出生後の性腺機能にも影響する可能性が ある。しかし、1VL
4MLDJの変異をもつ患児の出生後の性腺機能についての報告もない。 今回、A甜朋ED｜の変異が同定された尿道下裂患児の、経時的な内分泌学的検査所見を得たので同時に報告する。
【対象と方法】
Invitro実験では、マウスライディッヒ腫瘍細胞Q
II」TC・1）において、siRNAを用いて
朋a
田´めの発現を一過性に抑制し、1）コレステロールからテストステロンー至る8種類のステロイドホルモン代謝産物濃度、2）内在性コントロール遺伝子p2・mic
roglobuhnに対する相対的遺伝子発現量、3）M
I」T
C・1細胞数を測定した。
症例に関して は、A捌′比クJ変異が認められ、その機能低下が証明されている尿道下裂患児3例の、陰茎長、精巣容積、血清LH′FSH′restosterone値、超音波所見などを、変異発見時から数年単位で経時的に測定した。
【結果】
Invitro実験では、ル幽閉´加の発現抑制により、17．ヒドロキシプレグネノ口ン、17．ヒドロキシプロゲ ステロン、DHE
A、アンドロステンジオン、テストステロンが有意に減少し、のァJゐ´のmRNA発現量が有意に低下し た。ル幽閉´加の発現抑制効果は3日目まで− 304 ‑

続 い た が 、 そ の 問 MI」 TC・ 1の 細 胞 数 は コ ン ト ロ ー ル と 比 べ て 変 わ ら な か っ た 。
刪 A矼 ー ク J変 異 を も つ 尿 道 下 裂 児 3例 は 、 乳 児 期 か ら 学 童 期 前 の 時 期 で は 、 負 荷 試 験 を
含 め 、 血 清 の ホ ル モ ン 値 は 基 準 範 囲 内 で あ っ た 。 し か し 、 7才 を 過 ぎ た あ た り か ら 、 LH′ FSHの 上 昇 や 、 hCG負 荷 に 対 す る テ ス 卜 ス テ ロ ン の 反 応 性 の 低 下 が 認 め ら れ た 。 さ ら に 、 2例
では 精 巣 の 超音 波 検 査 にお い て 、 微小 石 灰 化 が認 め ら れ た。
【結語】
ル 幽 皿 ん Hは 、 精 巣 の ラ イ デ ィ ッ ヒ 細 胞 に お い て 、 ス テ ロ イ ド 合 成 酵 素 遺 伝 子 の ァ J勿 Jの 発 現 調 飾 を 介 し 、 テ ス ト ス テ ロ ン 産 生 に 関 わ っ て い る と 考 え ら れ る 。 ま た 、 彪 4朋 己 DJは、 胎 生 期 の性 分 化 に 必要 な テ ス トス テ ロ ン の産 生 を減少 させる だけで なく、 出生後 の精
巣機 能 に も 影響 を 及 ぼ すこ と が 示 唆さ れ る 。

一 305―

学位 論文審査の要旨
主査
副査
副査
副査

教 授
教 授
教 授
教 授

水 上 尚典野々村克也
櫻 木 範明清野研一郎

学位 論 文 題名
MAMLD1／ 働 mん nが 精 巣 機 能 に 与 え る 影 響
本 研 究 は 、 尿 道 下 裂 の 原 因 遺 伝 子 の 1っ と し て 同 定 さ れ た MAMLDl/Mamldl(Mastermind‑like domain containing1） について、invi
tro
実験と臨床データから、Mamldlが 、 精 巣の ラ イ ディ ッ ヒ 細胞 に お いて 、 ス テ ロイ ド 合 成酵 素 遺 伝子 Op17al(Cytochrome P450， fam
ily 17 s
ubfa
mil
yAp
ol
ypeptide1）の発 現調節を 介し、 テス
トス テロン 産生に関 わってい ること 、WIAML
Djは、胎生期の性分化に必要なテストステロンの産生減少から尿道下裂の発症に関わるだけでなく、出生後の精巣機能にも影響を及ばすことを示唆したものである。
発表終了後、清野教授から、今回は、皿RNAレベルでの実験だが、タンパクレベルでの証明 はでき たのか質 問があっ た。MA
MLDl／Mamld1に対す るいい 抗体が見っからず、ウエスタンブロット法などのタンパクレベルでの解明には至らなかったが、テストステ口ンなどの代謝産物を測定することで間接的な証明が出来たものと考えていると返答した。さらに 、マイ クロアレ イで脇皿ロjの発現抑制により変動した遺伝子の中に、の′pJ7ajと関連する遺伝子はあるのか質問があった。これに対し申請者は、の′pj
7ajと関連する遺伝子は本研究では検出することができず、変動があった遺伝子も、もともと発現量が低いもの が多 く 、偽陽 性の遺伝子を 拾っている可 能性もあると 返答した。
櫻木 教授か ら‥M鉗沍LD1変異陽性症例では、乳児期の内分泌学的検査では異常を認めなか ったと いうこと だが、尿 道下裂 の発症と 脳眦Djは 、どのよ うに関 連しているのか質問があった。尿道下裂には胎児期のアンドロゲン効果が必須であるが、さらに性分化には臨 界期が あり、そ の時期でのアンドロゲン不足と関連しているかが問題となるが、inv
itro実験では、短期間では脇皿坩jはライディッヒ細胞の増殖に影響を与えなかったが、生体内では、精巣の発達にも影響を及ばし、＾伽M
己D
jが正常に機能しないと、臨界期におけるテストステロン産生が不足する可能性があると返答した。また、以前イタリアでダイオキシンが問題となった際、尿道下裂の発症が増加したとの報告があるかとの質問があったが、そのような報告はないと返答した。
−306
一野 々 村 教 授 か ら 、 MAMLD1に 近 接 す る 遺 伝 子 で あ る MTM1の 異 常 で 発 生 す るmyotubu
lar myopathyの遺伝形式と母親の表現型に関して質問があ り、母親が保因者となる伴性遺伝と、突然変異などによる新規発生の場合があり、母親には外性器や生殖に異常を認めず、また男児はその筋症状が重く、男児から次世代へは引き継がれないと返答した。また、タンパクレベルでの解明は今後必要なこと、ステロイド代謝にはバックドアパスウェイなど様々な経路があり、今後、広い視点での検討が必要であるとの指摘があった。
水 上教 授から、MAML
D1
変異 陽性症例には今後加療が必要かとの質問があった。現在のところ、まだ思春期前であるが、すでにヒト胎盤性ゴナドトロピンに対するテストステロンの反応性が悪くなっているため、第2次性徴が発現しない可能性もあり、テストステロン補充なども考慮する必要があると考えていると返答した。また、尿道下裂と原発性性腺機 能不 全を合併している症 例の中には、MAM
LD1に異常がある症例がいる可能性を考えており、それら症例における遺伝子解析をしてみたいと考えていると回答した。さらに、胎児期のテストステロン産生にはピークがあるとのことだが、それを証明した論文はあるのかとの質問があった。申請者はこれ に対し即答できなかったが、野々村教授から1970
年代にS
imonらにより証明されているとの助言があった。胎児発育不全症例に、尿道下裂が多い印象を受けるが、この両者を一元的に説明するような研究報告はあるかとの質問があった。これに対し申請者は尿道下裂症例では低出生体重児の割合が多い報告は散見されるが、胎児発育不全と尿道下裂との直接の関連やその原因にまで言及した報告はないと返答した。
本研究の一部は、P
Lo
SOne，2011，Apr29;6(4):e19123に掲載されており、この知見は、Mamldlが Cy
p17ajの 発現 に影 響を 与え ることを初めて報告したものであり、今後のステロイド代謝やテス卜ステロン産生の機序の解明に役立っものと期待される。また，尿道下裂症例の原因解明に資するものである。
審査員一同は、これらの成果を高く評価し、大学院課程における研鑽や単位取得なども併せ 申請 者が博士（医学）の 学位を受けるのに充分な資格を有するものと判定した。