博士（獣医学）佐々木道仁
学位論文題名
Studies on M
HC class
I―mediat
ed entry ofequi
ne herpesvlruS―1int
OCe11S（MHCclass
Iを介したウマヘルベスウイルス1型の細胞内侵入機構の解析）

学位論文内容の要旨

ウマ ヘル ペスウ イル ス1型(EHV‑1）はへルペスウイルス科アルファヘルペスウイルス亜科に属し、馬に脳脊髄炎、流産、鼻肺炎を惹き起こす。罹患馬に重篤な神経症状をもたらす脳脊髄炎では、中枢神経系の血管内皮細胞へのウイルス感染が病態形成に大きな役割を果たすことが明らかにをっている。しかしな がら 、EHV‑1の血 管内皮 向性を規定する宿主因子に関しては不明な点が多い。
第 1章 で は 、 ウ マ脳 微小 血管内 皮細 胞(EBMECs)より 作製 した cDNA
発 現ライブラリーを用いて、EHV‑1レセプターのクローニングを試みた。スクリーニングの結果、EH
V‑1非感受性細胞であるマウス由来細胞株NIH
3T
3にE
HV‑1
感受性 を付 与す る遺伝 子と して 、ウ マ主要 組織 適合 遺伝子 複合 体(MHC) classI
重鎖遺伝子を同定した。ウマM
HC class
I重鎖遺伝子を安定発現させたNI
H
3T
3
細 胞 へ の EHV‑1感 染 は 、 抗 MHC classIモ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、 抗 EHV‑1
glycoproteinD(gD)ポリク ローナル抗体およびgD
ヒトイムノグロブリン(Ig)
融 合タ ンパ ク（gD‑Ig)によ って阻害された。また、gD‑IgはウマM
HC class
I
分子に特異的に結合した。これらの結果から、ウマMHC classIがEH
V‑1 gDをり ガ ン ド と す る エ ン ト リ ー レ セ プ タ ー で あ る こ と が 明 らか に な っ た 。
次に、EH
V‑1の自然宿主である馬の細胞を用いて、EH
Vー1
感染におけるウマMHC classI分子の関与を解析した。ウマ真皮由来株化細胞E．Derm、EBM
ECs、
ウ マ末 梢血 単核球 (PBMC)を 抗MHC classI
モ ノク ローナ ル抗 体で前処理すると 、EHV
‑1感染 は阻 害され た。また、p2ミクログロブリン（p2m)分子のノックダウンによってMHCclassI分子の細胞表面発現を抑制したE．Derm細胞は、EH
V‑1感受性が顕著に減少した。以上の結果から、ウマM
HC class
IはE
HV‑1のウ マ 細 胞 内 侵入 に 重 要 な 役割 を 果 た す こと が 明 ら か にな った。
EH
V‑1
は 既知 のア ルファ ヘルペスウイルスレセプターを発現していたぃハム スタ ー由 来細胞 株CHO‑K1に感染し増殖する。そこで、EHV‑1のC
HO‑K1細胞への侵入にハムスターMHCc
lass
I分子が関与しているかどうかを検討した。抗
MHC classIモノク ロー ナル 抗体の前処理によってEH
V‑1感染は阻害されなか― 823―

った。ま た、p2m
ノ ックダウン によってCHO‑K1
細 胞表面にお けるM
HC class
I分子の発現を抑制しても、EHVー1感受性の変化は認められなかった。従って、
CHO‑K1細胞にはMHC classIに依 存しなぃEH
V‑1の細胞内 侵入機構が 存在することが示唆された。
第2章 では、ウマ組織におけるMHCclassI
遺伝子発現の局在を解析した。成馬の全身主要臓器をノーザンハイブリダイゼーションにより解析した結果、検索し た 全 臓器 に おい て ウマ MH
C classImRNAが検出 された。ま た、成馬脳 組織に対してinsitu
ハイブリダイゼーション法を施行したところ、ウマM
HCclassIm
RNAの局在を示 すシグナル は血管内皮 細胞に限局しており、神経細胞を含むその他の細胞にシグナルは認められなかった。以上の結果より、馬の中枢神経系にお けるM
HC class
Iの遺伝子 発現はEHV‑1の標的細胞 である血管 内皮細胞に限局 しており、MHCclassIの遺伝子発現がEH
V‑1の脳脊髄炎の病態形成に関与している可能性が示唆された。
ウイルス の細胞内侵 入は、感染 の成立に重要なステップである。本研究によって、 ウマM
HCclassIがE
HV‑1のエントリーレセプターとして機能することが明らか となり、これはEH
V‑1の細胞内侵入機構の解明において重要な知見であると考えられる。また、抗体や組換えタンパクを用いた感染実験の結果より、
E
HV‑1 gDとMHC classIの結合阻害 が、EH
V‑1感 染症の治療 法として有 用である可能性が示唆された。

― 824―

学位論文審査の要旨
主 査 教 授 澤洋 文
副 査 教 授 梅孝 司
副 査 教 授 大 村 和 彦
副 査 教 授 高 橋 礼 人田

学位論文題名
Studies on M
HCclassI―mediated ent
ry ofequi
ne herpesvlru
s―1
into cells(MHC class
Iを介したウマヘルベスウイルス1型の細胞内侵入機構の解析）

ウ マ ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス1型 (EHV‑1)は 罹 患 馬 に 重篤 な神経 症状 をも たらす。EHV‑1感染症に起因する脳脊髄炎では、中枢神経系の血管内皮細胞へのウイルス感染が病態形成に大きを役割を果たす。しかしながら、EHV―1の血管内
皮 向 性 を規 定 す る宿 主 因 子に 関 し て は不 明 な 点が 多い。
第 1章 で は 、 ウ マ脳微 小血 管内 皮細胞 (EBMECs)より 作製し たcDN
A発 現ライ ブ ラ リ ー を 用 い て スク リ ー ニ ン グ を 行 い 、 EHV‑1
非感受性細胞である
NIH3T3細胞 にEHV‑1感受性 を付与する遺伝子として、ウマ主要組織適合遺伝子複合体（MHC) classI重鎖遺伝子を同定した。抗MHCclass
Iモノクローナル抗体、抗EH
V‑1 glycoproteinD(gD)
ポリクローナル抗体およびgD
ヒトイムノグロブリン（Ig)融合タンパク(gD‑Ig)を用いた解析によ．り、ウマMHC classI
がEH
V‑1 gDをりガンドとするエントリーレセプターであることを明らかにした。さらに、EH
V‑1の自然宿主である馬の細胞を用いた解析により、ウマMH
CclassIはEH
V‑1のウマ細胞内侵入に重要な役割を果たすことを明らかにした。
第2章では、ウマ組織におけるMHC classI
遺伝子発現の局在を解析した。成馬中枢神経系におけるMHC classIの遺伝子発現は、EHV‑1の標的細胞である血管内皮細胞に限局しており、MHC classIの遺伝子発現がEH
V‑1の血管内皮向性に関与している可能性が示唆された。
ウイルスの細胞内侵入は、感染の成立に重要なステップである。本研究によって、ウマMHC classIがE
HV‑1のエントリーレセプターとして機能することが明らかとなり、これはEHV―1の細胞内侵入機構の解明において極めて重要な知見であると考えられる。
審 査 委 員 一 同 は 、 上 記博 士 論 文 提 出 者 佐 々 木 道仁 氏が博 士（ 獣医 学）の 学位を授 与され るのに十分な資格を有する者と認めた。

ー 825一