Imaging Hepatic CT26 Tumors in BALB/c Mice as aModel of Metastatic Liver Cancer 	  This	  case	  study	  provides	  guidance	  and	  recommendations	  for	
  visualizing	  hepatic	  focal	  lesions	  and	  anatomy	  with	  Fenestra	  LC.	  You	  should	
  note	  that	  other	  examples	  of	  the	
  capabilities	  of	  Fenestra	  and	  a	  selection	  of	  additional	  case	  studies	  are	  available	  on	  the	  MediLumine	  website	  at	  http://www.medilumine.com/resources	  	  The	  Fenestra®	  line	  of	  imaging	  products	  provide	  flexible,	  long-­‐lasting	  contrast	
  enhancement	  for	  a	  wide	
  range	  of	  computed	  tomography	  imaging	  applications,	  including	  vascular	  and	  hepatobiliary	  anatomy	  and	  function.	  

Animal	  Model	  StrainBalb/c	  mice	  (20	  to	  21	  g	  males)	  bearing	  solitary	  hepatic	  CT-­‐26	  tumors.	  

ModelA	  solitary	  CT-­‐26	  tumor	  (adenocarcinoma	  of	  colonic	  origin)	  was	  created	  in	  the	
  liver	  of	  each	
  of	  three	  anesthetized	  male	  Balb/c	  mice	
  by	  direct	  injection	  of	  5	  ´	  105	
  cells	  in	  50	  ml	  PBS	  into	  the	  exposed	  medial	  lobe	  of	  the	  liver	
  through	  a	  30-­‐gauge	  needle.	  Stasis	  was	  achieved	  with	  light	  pressure	  at	  the	  site	
  of	  needle	
  insertion.	  The	
  laparoscopic	  incision	  was	  closed	  with	  surgical	  staples,	  which	  were	  removed	
  prior	  to	  imaging.	  Tumors	
  reached	  a	  size	  of	  2	  to	  3mm	  in	  diameter	  within	
  five	  days	  of	  implantation.	  

MediLumine  Inc.    

medilumine.com     5795  De  Gaspe  Avenue,  Suite  #112  CTS  Healthcare  Campus  Montreal  (Quebec),  Canada  H2S  2X3  	      	  Tel:  514.360.1574    Toll  free:  1.844.360.1574    Cell:  514.929.9744  Fax:  514.360.6014  	  	  	  Animal	
  Preparation	  AnesthesiaMice	  were	  anesthetized	  with	  an	  intraperitoneal	  injection	  of	  a	  mixture	  of	  ketamine	
  (80	  mg/kg	  body	  weight)	  and	  xylazine	  (5	  mg/kg	  body	  weight),	  which	  afforded	  45	  to	  60	  minutes	  of	  anesthesia.	  Anesthesia	  was	  maintained	  with	  quarter	  dose	  increments	  during	  the	  duration	  of	  the	  study.	  

Administration
Fenestra	  LC	  was	  injected	  intravenously	
  into	  the	  lateral	
  tail	  vein	  of	  anesthetized	  mice	  at	  a	  dose	  of	  0.4	  ml	  per	  20	  g	  body	  weight	  over	
  a	
  period	  of	  30	  to	  60	  seconds.	
  A	  1	  ml	  disposable	  syringe	  fitted	  with	  a	  30-­‐gauge	  needle	  was	  used	
  to	  inject	  the	  contrast	  agent.	
  Prior	  to	  injection,	
  the	
  tail	  vein	  was	  immersed	  in	  warm	  water	  for	  30	  to	  60	  seconds	  to	  increase	  blood	  flow	  to	  the	
  tail	  and	  dilate	  the	  vessels.	  

NOTE	
   Refer	  to	  the	  MediLumine	
  publication	  ‘Optimal	  Usage	  of	  Fenestra	  Contrast	  Agents’	  for	  recommendations	  and	  detailed	
  instructions	  related	  to	  dosage,	  animal	
  preparation,	  and	  administration.	  	
  	  	  	  MediLumine  Inc.    

medilumine.com     5795  De  Gaspe  Avenue,  Suite  #112  CTS  Healthcare  Campus  Montreal  (Quebec),  Canada  H2S  2X3  	      	  Tel:  514.360.1574    Toll  free:  1.844.360.1574    Cell:  514.929.9744  Fax:  514.360.6014  	  	  	  Image	
  Acquisition	  EquipmentImTek	  (now	  Siemens)	  MicroCAT	  II	  microCT	  scanner.	  

Animal PlacementAnesthetized	
  mice	  were	  placed	  on	  the	  imaging	
  table	  in	  the	  prone	  position	  with	  heads	  oriented	
  into	  the	  gantry.	  The	  desired	  body	  region	  was	  selected	
  from	  the	  scout	  view	  as	  the	  anatomic	  landmark	
  for	  image	  acquisition.	  

SettingsThe	  settings	  selected	
  for	  this	  medium	  resolution	  contrast-­‐enhanced	  study	  were	  as	  follows:	  X-­‐Ray CameraParameterSetting

Serial	  CCD	
  Length2048Parallel	
  CCD	
  Length3072

Serial	  Bin	  Factor2Parallel	
  Bin	  Factor2Exposure	  Time750	  msWarp	  CorrectionYes

Defect	  Map	  Correction

NoParameter	  SettingX-­‐Ray	  Voltage80.0	  kVpAnode	  Current500.0	  AX-­‐Ray Tube	  MediLumine  Inc.    

medilumine.com     5795  De  Gaspe  Avenue,  Suite  #112  CTS  Healthcare  Campus  Montreal  (Quebec),  Canada  H2S  2X3  	      	  Tel:  514.360.1574    Toll  free:  1.844.360.1574    Cell:  514.929.9744  Fax:  514.360.6014  	  	  	  CT ScanParameterSettingRotating	  Stage	  Start	  Position0.000	
  degreesBed	  Axis	  Position

313.863	  mmBed	  Height43.026	
  mmDetector	  Position0.000	  mmTotal	  Rotation

360	  degrees

Number	  of	  Rotation	  Steps520

Number	  of	
  Axial	
  Bed	  Steps0

Number	  of	  Detector	  Steps0

Number	  of	  Acquired	
  Calibration	
  Projection	  Display	  Period
Exposures
Raw	  Data20

Real	  Time	  ReconstructionNo

Total	
  Scan	
  Time11.07	  min1
Written	  to	  FileScanner Geometry SetupParameterSetting

Source	  to	  Detector	  Distance309.600	  mmSource	  to	  Center	  Distance

256.200	
  mmPhysical	  Detector	  Pitch32.700	
  mDetector	  Array	
  Height2048	  elementsDetector	  Array	
  Width3072	  elementsCenter	
  Offset4.7	  unbinned	
  detectors	  Images	  were	  obtained	
  immediately	  after	  administration	  of	  Fenestra	  LC	  (T	  =	  0)	  with	  subsequent	
  scans	  at	  30,	
  60,	  120,	
  180,	  and	  240	  minutes	  post-­‐injection.	
  At	
  T	  =	  0	  and	
  T	  =	  30	  minutes	  vessels	  typically	  have	  higher	  contrast	  levels	
  than	  the	  liver,	  but	  by	  T	  =	  60	  the	  liver	  should	  display	  similar	
  levels	  of	  contrast	  enhancement.	
  At	  later	  time	  points	  the	  vessels	  usually	  become	  hypodense	  relative	  to	  the	  liver,	  which	  will	  usually	  remain	  enhanced	  up	  to	  6	  hours	  post-­‐injection.	  Hepatic	  tumors	  normally	  display	  very	
  little	  or	  no	  contrast	
  enhancement.	  Hepatobiliary	
  elimination	  of	  Fenestra	  causes	  liver	  contrast	
  values	
  to	
  return	  to	  baseline	  levels	
  within	  18	  to	  24	  hours	  after	  administration.	  	  	  MediLumine  Inc.    

medilumine.com     5795  De  Gaspe  Avenue,  Suite  #112  CTS  Healthcare  Campus  Montreal  (Quebec),  Canada  H2S  2X3  	      	  Tel:  514.360.1574    Toll  free:  1.844.360.1574    Cell:  514.929.9744  Fax:  514.360.6014  	  	  	  Data	  Reconstruction	  and	  Visualization	  Data ReconstructionMachine-­‐based	  reconstruction	
  does	  not	  allow	
  for	  down-­‐sampling	  of	  projections	
  prior	  to	  reconstruction,	
  as	  does	  software-­‐based	  reconstruction	  programs.	  However,	  down-­‐sampling	  was	
  unnecessary	  for	  the	  selected	  resolution	  in	  this	  study.	  

NOTE	   Reconstructed	  image	
  files	  can	  be	
  stored	  as	  CT	  or	  ATT	  files,	
  which	  can	  be	  exported	  to	  a	  3D	  visualization	
  application	  such	
  as	  Visage	  Imaging’s	  Amira	  software	  for	  viewing	
  as	  axial,	  coronal,	  and	  sagittal	  images,	  in	  addition	  to	  a	  number	
  of	  other	  image	  representations.	  

ParameterSetting

Number	  of	
  Voxels	  in	
  Volume

512	   512	
  (transaxial)	   768	   (axial)Voxel	  Size
Reconstruction	
  Filter100	  m	  (transaxial)	  150	
  m	  (axial)Shepp-­‐Logan

Reconstruction	  AlgorithmFledkamp	  cone-­‐beamData VisualizationData	  is	  routinely	  imported	  from	  reconstruction	  programs	  as	  raw	  CT	  image	  data	  or	  as	  bitmaps	  windowed	  to	  a	  vascular	  contrast	  setting.	
  Data	  can	  be	
  viewed	
  in	  Amira	
  using	  the	  Standard	  Display	  format	  with	  simultaneous	  display	  of	  the	  axial,	  coronal,	  and	  sagittal	  images,	  or	  as	  3D	  isosurface	  images	
  that	  can	  be	  manipulated	  to	  view	  anatomic	  structures	  with	  or	  without	  orthoslice	  display	  of	  1,	  2,	  or	  all	  3	  of	  the	  planar	  slices.	  The	  isosurface	
  image	
  can	  also	  be	  cropped	  to	  eliminate	  extraneous	  data	
  and	  saved	  as	  an	  Amira	  map	  file,	
  which	  can	  accelerate	  isosurface	  viewing	
  and	  save	  storage	  space.	  
Using	  Amira’s	  image	  capture	  feature,	  planar	  and	
  3D	  images	  can	  be	  captured	  for	  presentations	  or	  publication	  purposes,	  while	  movies	  can	  be	  created	  for	  fly-­‐through	  of	  3D	  image	  data	  sets.	  	  	  MediLumine  Inc.    

medilumine.com     5795  De  Gaspe  Avenue,  Suite  #112  CTS  Healthcare  Campus  Montreal  (Quebec),  Canada  H2S  2X3  	      	  Tel:  514.360.1574    Toll  free:  1.844.360.1574    Cell:  514.929.9744  Fax:  514.360.6014  	  	  	  Representative	  Images	  Representative	  images	  from	  studies	  conducted	  in	  CT-­‐26	  tumor-­‐bearing	  BALB/c	
  male	  mice	  using	  Fenestra	
  LC,	
  and	
  that	  were	  obtained	  with	  Siemens’	  MicroCAT	  II	  scanner,	  are	  provided	  in	  the	  figures	  below.	  	  Figure	  1.	  

	  Figure	  2.	  	  	  Figure	  3.	  

Figure	  4.	  	  Figure	  1.	  Non-­‐contrast	  coronal	  scan	  of	  a	  male	  mouse.	
  Poor	  soft	  tissue	  contrast	  is	  evident	  in	  the	  thoracic	  and	  abdominal	  cavities.	  The	  bright	  spots	  observed	  in	  the	  intestines	  were	
  caused	  by	  minerals	  in	  the	  rodent	  chow	  that	  attenuated	  X-­‐ray	  energy.	  
Figures	  2	  to	  4.	  Coronal	  view	  (figure	  2),	  transverse	  view	  (figure	  3),	  and	  3D	  reconstruction	  (figure	  4)	  of	  male	  Balb/c	  mouse	  with	  hepatic	  CT-­‐26	  adenocarcinoma	  2	  hr	  after	  IV	  injection	  of	  Fenestra	  LC.	  At	  this	  time	
  point	  the	  vascular	
  system	
  is	  still	  enhanced	  as	  evidenced	  by	  the	  lack	  of	  hepatic	  vascular	  detail	  and	
  isodensity	  of	  the	  ventricles	  of	  the	  heart.	  The	  hypodense	  gall	  bladder	
  near	  the	  dome	  of	  the	
  liver	  is	  readily	
  visualized	  in	  the	  coronal	
  view.	  The	  CT-­‐26	
  tumor	  is	  observed	  at	  the	  lower	  edge	  of	  the	  liver	  with	  a	  narrow	  rim	  of	  enhanced	  liver	  below	
  the	  tumor	  and	  was	  colorized	  (purple)	  in	  the	  3D	  reconstruction.	  The	  absence	  of	  artifacts	  in	  the	  lower	  abdomen	  is	  a	  result	  of	  the	  mouse	  having	  been	  fed	  a	  soft,	  non-­‐chow	
  diet	  for	
  48	  hours	  prior	  to	  imaging.	  	  MediLumine  Inc.    

medilumine.com     5795  De  Gaspe  Avenue,  Suite  #112  CTS  Healthcare  Campus  Montreal  (Quebec),  Canada  H2S  2X3  	      	  Tel:  514.360.1574    Toll  free:  1.844.360.1574    Cell:  514.929.9744  Fax:  514.360.6014