博士 （ 医 学 ） 吉 田 武 史

学位論文題名
食道癌におけるhuman papillomavirus
感染の解析
学位論文内容の要旨【背景と目的】
食道扁平上皮癌における最大の危険因子は、飲酒および喫煙であるが、非飲酒・非喫煙の食道 癌 症例もし ぱしぱ 経験し、 我が国 において は、alcohol代謝遺 伝子で あるAL
DH2．
ADH
IBの遺 伝子多型を含めた飲酒・喫煙以外の因子による発癌の可能性も考えられる。子宮頚癌発 癌に関 わってい るとさ れるhumanpapillomavirus(HPV)
も、食道癌の危険因子と考 え られてい るが、 既報の食 道癌患 者のHP
V感染頻 度は、本 邦のPCRによる 報告だけを見ても0〜42％と様々で一定の見解が得られていなぃ。今回、食道扁平上皮癌、特に上皮内癌症例 におけ るHPV感 染の有 無を明ら かにし、さらにalcohol
代謝遺伝子との関連も含めて臨床病理学的に検討を行う事を目的とした。
【対象と方法】
2002年1月から 200
7年1月 までの 期間に、 北海道 大学病院 光学医療 診療部 にて内視 鏡的粘膜切除術を施行された食道扁平上皮癌症例のうち、上皮内癌50例（以下ml群）、および当院外科にて外科手術により切除された食道扁平上皮癌症例のうち、深達度粘膜下層以深の 浸潤癌40例（以下≧sm群）について検討した。臨床検体から塩析法を用いてDNAを抽出し 、 HP
Vゲ ノ ム間 で homologyの 高 いLl
領域 、及ぴ 癌遺伝子 を含んで いると 考えられ て
い る E6/E7領域 、 そ れぞ れ に 対 する 相 同 性の 高 い primerを 用 いるconsensus PC
RにてHPVを 検 出 し た 。 ALDH2・ ADHIB遺 伝 子 多 型に つ い ては 、 target
遺 伝 子 の一 部 を PC
Rに て増幅し たPC
R産物を、 制限酵 素切断に よるバ ンドの違 いで多型 を診断するP
CR‑RFLP法により判定を行った。
【結果】
HP
V陽性 群と陰性群で臨床病理学的検討を行ったが、年齢・性別・喫煙・腫瘍部位におい て統計 学的な差 を認めな かった 。また深 遠度でも、ml
群20.
0％に対し、≧8m群27.
5％と、深達度の深い群で陽性率がより高いものの、統計学的には両群間に有意差を認めなかった 。一方 、飲酒量 との関係では、飲酒量の多い症例でHPV陽性例が多い結果となった。飲酒 量 に 関し ては、 al̲
coholの1日摂取量 (g/day)が66未満の群 と66以上 の群で有 意差を認めた。また生涯飲酒量を定量化した指標であるModifiedDrinkingIndexを用いた検討では 、 MDIく 735の 群で HPV
陽 性 が 50
例 中 5例（ 10.
0％ ） であ っ た のに 対 し て、 DI≧ 735の群でHPV陽性が 40例中16例(40.0％） と有意に 高かっ た。多飲 酒者に 多くみら れる平均 赤 血 球 容 積 の 増 大 と HPV感 染 に つ い て は 有 意 な 差 は 認 め な か っ た 。
ま た 遺 伝 子 多 型 に っ い て は 、 acetaldehyde代 謝 活 性 の 弱 い ALDH2欠 損 者 の 群 とALDH
2*1/*1型群での HPVの感 染率に 差を認め ず、さ らにalcohol代謝速 度が遅い とされる ADH lB*1/*1と、 alcohol
代 謝 の 速い 変 異 型の ADH
IB*2保有 者 との間 でもHP
Vの感染率に差を認めなかった。
【 考察 】
HP
V感 染 が成 立 す ると 、 ウ イ ルス DNA
は epi
someの 形 で 宿主 細胞 に存在 するが、 子宮― 303―

頸癌では 異形成が 高度に なるとウ イルス DNAは宿 主細胞 にintegrate
さ れ、E6/E7蛋白を発現して p53とRbに作用し 癌化の一端を担うと考えられている。過去の中国を中心とした既報をみ ると、飲 酒・喫 煙以外での食道癌癌化の原因として、HPVがその一因である可能性が考えられるため、特に非飲酒非喫煙症例や女性あるいは若年発症の食道扁平上皮癌症例にHPV感 染が多い のでは ないか、 と推測 し今回の 検討に至ったが、HPV陽´陸者が占める割合はむしろ多量飲酒者で多く、予想と反対の結果であった。
国際がん 研究機 関(IARC)は2007
年 、alcoholと 飲酒習 慣自体に 十分な 食道扁平 上皮癌に対 す る 発癌 性 が ある (Group1） と認定し 、ALDH2のhetero欠損 が食道扁 平上皮癌 発癌に寄与する十分なevidenceがあると結論づけた。今回の食道癌患者における検討では、多量飲 酒 者 で有 意 に HPV感染率が 高かっ たが、食 道癌の 危険因子 である 遺伝子多 型とHPV感染率に関連は認められなかっ．ナこ。頭頚部癌においては、癌患者のおよそ20％にHP
V
感染を認め、 alcoholとHPV
感染 がそれ ぞれ独立 した危険 因子で あり、ま た多量 飲酒者にH
PV
感染が多 く、多量 飲酒お よびHP
V感染の 相乗効果 が頭頚 部癌のriskを 高める という報告がある。 多量飲酒 によっ て脆弱な、あるいは小さな傷ができた食道粘膜へのH
PV
感染は、多量飲酒 と相乗的 に、食 道癌riskを 高める可 能性があ り、多 量飲酒と HPV感 染の相乗効果が、遺伝子多型とは別の、食道癌における危険因子である可能性が示唆された。また、頭頚部癌におけるHPV
感染率が高く、また生涯に経験した(oralor/andv
aginal)se
xpartnerの人数が 多い人ほ ど頭頚 部癌riskが高まるとして、HP
V感染と頭頚部癌発癌に関連があるとする報告がある。今回の検討では性行動との関連について今回interview
を行っておらず詳細は不 明である が、検 討した食道癌患者でH
P
V陽性であった症例には高齢の症例も含まれており 、高齢に なって から性行動によりHPVが感染したとは考えにくい部分もある。したがって 食道にお いては 、比較的若く性生活のある時期にHPVが感染し、その後持続感染している可能性が高いと思われる。
【結語】
食道扁平 上皮癌 、特に上皮内癌症例における感染率と、HP
V陽性例における臨床病理学的検討を 行った。 上皮内 癌症例と sm以深浸 潤癌症例 とでは H
PVの感 染率に 大きな差を認めなかっ たが、多 量飲酒 者で有意 にHPV感染が高 かった 。また食 道癌の危 険因子である
ALDH2． ADHIBの 遺 伝子 多 型 とHPV感染 率 に 関連 は 認 めら れ ず 、多 量 飲 酒 とHPV感染の相乗効果が、遺伝子多型とは別の、食道癌における危険因子である可能性が示唆された。

‑ 304―

学位論文審査の要旨
主 査 教 授 浅 香 正 博
副 査 教 授 田 中 伸 哉
副 査 教 授 松 野 吉 宏

学 位 論 文 題 名

食道癌におけるhumanp
api
llo
mavir
us感染の解析
Humanpapillomavirus(HPV)は、食 道癌の 危険因 子と考 えられ ている ものの、 既報の
食 道 癌患 者の HPV感染頻 度は様 々で一 定の見解 が得ら れてい ない。 申請者 は、食 道扁平 上皮 癌 、特 に上 皮内癌症 例にお けるHPV感染の有 無を明 らかに し、さ らにア ルコー ル代謝 遺伝子 との関 連も含め て臨床 病理学的に解析を行った。内視鏡的粘膜切除術を施行された上皮内癌 50例（以 下ml群） 、およ び外科 手術に より切除 された 深達度 粘膜下 層以深の浸潤癌40例 （ 以下 ≧ sm群 ） に つ いて 、 そ れぞ れ臨床検 体から DNAを抽 出し、L1領域、 E6/E7領域、そ れ ぞ れ に 対 す る consensus PCRに て HPVを 検 出 し た 。 ALDH2、 ADHIB遺 伝 子 多 型 につい ては、 PCR‑RFLP法によ り判定 を行っ た。
HPVの 陽 性 率 は、 ml群20.0％に 対 し 、 ≧sm群 27.5％ と、 深達 度の深 い群で 陽性率 がより 高 いも のの 、統計学 的には 両群間 に有意 差を認 めなか った。 HPV陽性群 と陰性 群で臨 床
病理 学的検 討を行っ たが、 年齢・性別・喫煙・腫瘍部位において統計学的な差を認めなかった 。 多飲 酒者 に多くみ られる 平均赤 血球容 積の増 大とHPV感 染につ いては 有意な 差は認 めな か っ た 。 ま た 遺 伝 子 多 型 に っ い て は 、 ALDH2、 ADHIBに お い て HPVの 感 染 率 に差 を
認 め なか った 。一方、 飲酒量 との関 係では 、飲酒 量の多 い症例 でHPV陽性 例が多 く認め られ 、 統計 学的 に有意差 を認め た。食 道癌に おいて 多量飲 酒がHPV感 染の一 因を担 ってい る可能 性が示 唆された 。
公開 発表で は、学 位論文 内容発表 の後、 副査田 中伸哉 教授よ り、今 回食道癌においてLl
領 域 よ り も E6/E7領 域 の consensusPCRの 結 果が 低 か っ た事 の 意 義 とE6/E7の 発現 や 変異 型 p53の 発 現 と の関 連 に つ いて 、今 回多量 飲酒者に HPV感染 が多か った事に ついて 免疫学的 な関与 の可能性 がある か、今回の解析したアルコール代謝遺伝子と飲酒量との関係につい て の質 問が あった。 申請者 はそれ に対し 、食道 癌にお けるHPVの 持続感 染形態 につい ては 不 明な 点 が 多 いが 、 HPVが integrationされ る 過 程 にお い てE6/E7は欠 失して いたり ある い は今 回 targetとし た E6/E7に 変 異 が 生じ て い る 可能 性 があり L1領域の 陽性率 に差が生 じ た可 能 性 が ある と 述 ベ 、ま た今 回直接 E6/E7やp53の 発現に ついて は調べ る事が 出来
なか ったが 、E6/E7が子 宮癌で みられ るよう にintegrationし ていな ければ発現していない
可 能 性が ある と述べた 。また 免疫学 的な関 与に関 しては 、HPVのク リアラ ンスに 直接関 与して いると いう明確 な報告 はなく、アルコール代謝遺伝子と飲酒量については、少量飲酒者
一305―

にお い て 代謝 の 遅い ア ル コー ル 遺 伝子 保有者 の割合が 多かった と述べた 。
次し｀ で副査 松野吉 宏教授 より、 microdissectionを 行う事に よって HPVの陽 性率がさらに 高ま る の か 、多 量飲 酒者に関 してHPV癌化の 一翼を担 ってい るのか どうか にっい ての質
問 があ っ た 。 申請 者 は そ れに 対 し 、 今回 解 析 し たHPV検 出 系 では 50ngのおよ そ一万分 のーまで の検出 が可能 であり 、microdissectionに より大 きな陽性率の変化は生じない可能性
が 高 く 、 HPV検 出に つ い て は抽 出 さ れ たDNA純 度 と type‑specificな target primerを用
い る事 で よ り 検出 率が 高まる可 能性が あると 述べ、 また多 量飲酒 者にお けるHPV癌 化の関連 性に つ い て は、 多量 飲酒者に おける HPVの感 染形態は 明らか ではな く、今 後コン トロー
ル群に おける HPV陽性率 と合わ せた比 較検討 が必要 と述べ た。
最後に 主査浅 香正博 先生よ り、今後この研究をどのように発展させていく予定があるのかについ ての質 問があ った。 申請者 はそれに対し、食道癌においては上皮内癌と進行癌において陽性 率に大 きな差 は認め ず、少 なくとの cancerprogressionには関与 しない と思われるが 、コ ン ト ロ ール 群と 比較して HPVが単 独の食 道癌リス クファ クター となり 得るの かどうか 、ま た 食 道 癌に おけ るHPV持続 感染の 形態を 、insituhybridizationやE6/E7発 現、シークエ ンス解 析と合 わせて 、今後 検討を行 いたい と述べ た。
本 研 究 は、 食 道 癌にお けるHPV感 染につ いて詳 細な背 景因子 との検討 を行い 、多量 飲酒
者 にお い て そ の陽 性率 が高い事 を初め て示し たもの で、今 後感染 が確認 された HPVが癌化に 関与 し て い るの かを 解析して いく上 で意義 のある 知見が 示され 、HPVと食 道癌双 方の関係解明 につい て、今 後の発 展が期 待される 。
審査員 一同は 、これ らの成 果を高く評価し、大学院課程における研鑽や取得単位なども合
わ せ 申 請 者 が博 士 （ 医 学） の 学 位 を受 け る の に充 分 な 資 格を 有 す る もの と 判 定 した 。

‑ 306−