培養細胞から RNA 精製が不要で、高品質な cDNA 合成が可能

特長 5 さまざまな qPCR 試薬との組み合わせ可能
さまざまなリアルタイム PCR 試薬 (SYBR™ Green I, TaqMan アッセイ両⽅に対応可能 ) と組み合わせて使⽤可能です。
®

弊社 THUNDERBIRD Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101]、THUNDERBIRD Next Probe qPCR Mix [Code No. QPX-101]、®

®

KOD SYBR™ qPCR Mix [Code No. QKD-201] 等と組み合わせて⽤いることによって、培養細胞から簡便かつ⾼精度の遺伝⼦発現解析が可能であることを確認しています。また、弊社 THUNDERBIRD Probe One-step qRT-PCR Kit [Code No. QRZ-101]、®

RNA-direct ® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix [Code No. QRT-201] 等の 1-step リアルタイム RT-PCR 試薬と組み合わせる簡易アッセイも可能です。

リアルタイム PCR 用細胞溶解 & cDNA 合成キット ( 培養細胞用 )SuperPrep ® II

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR と種々の qPCR 試薬との組み合わせによる性能比較

実施例 4

Cell Lysis & RT Kit for qPCR®

SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] を⽤いて、ヒト
4

3

2

1

®

間葉系幹細胞 1×10 、1×10 、1×10 、1×10 cells から細胞ライセートを調製し、THUNDERBIRD

続 い て cDNA 合 成（40 μL 反 応 系）を ⾏ い ま し た。そ れ ぞ れ の cDNA を 鋳 型 に

A 社 qPCR 試薬®

THUNDERBIRD Probe qPCR Mix [Code No.QPS-101]、
Ａ社 及 びＣ社 製 リ ア ル

SuperPrep® の改良版 !

C 社 qPCR 試薬®

タイム PCR 試薬を⽤いて、GAPDH 遺伝⼦について TaqMan アッセイを⾏いました。
その結果、いずれのリアルタイム PCR 試薬においても良好な増幅を認めることができ®

ました。特に、THUNDERBIRD Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101] との組み合培養細胞から cDNA 合成が約 30 分で可能

わせにおいて、最も良好な Ct 値を⽰しました。

価格表
品名および内容包装

保存温度

Code No.

価格 ( 税別 )100 回用 *1-20℃

SCQ-401￥84,000

ハイスループット解析のバラツキ低減
サンプル

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR
<Lysis Reagents>
・Lysis Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor<RT Reagents>

・5 × RT Master Mix
・5 × RT Master Mix no-RT Control
・Nuclease-free Water

付いている製品

100 回用 X5-20℃

SCQ-401X5￥360,000

サンプル®

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [QPS-101]*2 とのセット

SuperPrep II / THUNDERBIRD Next Probe qPCR Set®

は、評価⽤の無償サンプルをご⽤意

１セット

-20℃

SCQ401/QPS101￥107,500

１セット

-20℃

SCQ401/QPX101￥107,500

ライセートは反応系の 20% まで持ち込み可能®

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] とTHUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix [QPX-101]*2 とのセット

DNaseI 処理でバックグラウンド低減
処理でバックグラウンド低減

SuperPrep® II / KOD SYBRTM qPCR Set
SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] とKOD SYBRTM qPCR Mix [QKD-201]*2 とのセット

SuperPrep® II Cell Lysis Kit for qPCR *3<Lysis Reagents>
・Lysis Solution

・gDNA Remover

１セット

-20℃

SCQ401/QKD201￥110,000

100 回用-20℃

SCQ-501￥43,000

サンプル請求さまざまな qPCR 試薬と組み合わせ可能

RT Reagents・RNase Inhibitor*1 40 μL で逆転写反応をした場合に 100 回用としてご使用になれます。
*2 50 μL 反応で 200 回用、 20 μL 反応で 500 回用としてご使用になれます。
®
*3 SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR に含まれる Lysis Reagents の別売り品です。 1-step リアルタイム RT-PCR 試薬と組み合わせる簡易アッセイのための細胞ライセート調製にご使用になれます。

関連商品

cDNA は精製 RNA からの合成と同様に定量可能

Lysis Reagents

しています。

SuperPrep II / THUNDERBIRD Probe qPCR Set®

ライセート ( 細胞溶解液 ) は氷上で 6 時間安定サンプルマークの改良点１ 反応停止液の添加が不要

高効率 1-step リアルタイム RT-PCR 試薬
品 名(TaqMan アッセイ用 )

包装 *

保存温度

Code No.

価格 ( 税別 )100 回用-20℃

QRZ-101￥36,000

THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit

サンプル

TM

(SYBR Green I アッセイ用 )RNA-direct® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix

100 回用-20℃

QRT-201￥36,000

約30分!

培養細胞

®

cDNA

* 50 μL 反応で 100 回用、 20 μL 反応で 250 回用としてご使用になれます。
※ 本資料に記載している会社名および商品名 ・ ロゴマークなどは、 各社の商号、 商標または登録商標です。

Lysis solution
5分

Stop
S
to
op so
solution
sol

逆転写反応

2分

25 分

培養細胞
Stop Solution の添加・反応が不要

改良点２ より幅広い種類の細胞を用いるアッセイに対応
初代培養細胞を含む幅広い哺乳類細胞を用いることが可能
toyobo公式X

2024.10.01 THS24148

ハイスループット解析のバラツキを低減®

SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] は、リアルタイム PCR による遺伝⼦発現解析のための細胞溶解試薬 (Lysis Reagents) と逆転写反応試薬 (RT Reagents) からなるキットです。本製品を使⽤することで、96 ウェル
プレート等で培養した細胞から逆転写反応の鋳型として利⽤可能な RNA を含む細胞ライセートを簡便に調製できます。
さらに、本キットに含まれる RT Reagents は、この細胞ライセートからの RT 反応に最適化されています。

特長 3 幅広い哺乳類細胞を用いることが可能®

SuperPrep II では細胞の溶解性を向上させると共に RNase の影響を低減することで、弊社従来品に⽐べてより幅広い種類の細胞を⽤いるアッセイに使⽤可能です。下表の代表的な細胞について適⽤できることを確認しています。

®

弊社従来品では Lysis Solution の後に Stop Solution を添加する必要がありましたが、SuperPrep II では Lysis Solution

表 1. SuperPrep® II の適用確認済み細胞での処理の後にそのまま cDNA 合成ステップに移⾏することができます。また、より幅広い哺乳類細胞から⾼感度検出が可能になりました。本キットにより、簡便、迅速に培養細胞からリアルタイム PCR ⽤の鋳型 cDNA の合成が可能です。
培養細胞

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR
[Code No. SCQ-401]

従来法 約 2 時間
RNA 抽出DNase I 処理

cDNA 合成

Total RNASuperPrep® II

細胞名

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26

【Lysis Reagents】

・Lysis Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor

cDNA

約 30 分

【RT Reagents】
リアルタイム PCR

Lysis solution( DNase I , RNase inhibitor )・5×RT Master Mix
・5×RT Master Mix no-RT control*・Nuclease free Water

RT Master Mix* 逆転写酵素を含まないマスターミックスです。
コントロールとして使用します。

RNA

5分

・TaqMan® アッセイ

cDNA

SuperPrep® II Cell Lysis Kit for qPCR [Code No. SCQ-501] は、細胞溶解・SYBRTM Green アッセイ

試薬 (Lysis Reagents) の別売品です。

25 分

THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit [Code No. QRZ-101]、
RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix [Code No. QRT-101] 等の 1-step
リアルタイム PCR 試薬を用いる解析 （簡易測定）にご使用になれます。

特長 1 RNA の精製不要

接着／浮遊

種

接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
浮遊
浮遊
浮遊
浮遊
浮遊

H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
M. musculus
M. musculus
C. familiaris
C. griseus
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens

HPA
HEK
HA
HDF
HFLS
HBEpC
HUVEC
HPAEC
HC
HOb
HSkMC
HAOSMC
HFDPC
HMSC
A431
HeLa S3
HepG2
C2C12
NIH-3T3
MDCK
CHO-K1
Jurkat
K562
THP-1
U937
HMNC

細胞

由来

preadipocytes (primary cell)
epidermal keratinocytes (primary cell)
astrocytes (primary cell)dermal fibroblasts (primary cell)
fibroblast-like synoviocytes (primary cell)bronchial epithelial cells (primary cell)umbilical vein endothelial cells (primary cell)
pulmonary artery endothelial cells (primary cell)chondrocytes (primary cell)
osteoblasts (primary cell)skeletal muscle cells (primary cell)aortic smooth muscle cells (primary cell)
hair follicle dermal papilla cells (primary cell)marrow stromal cells (primary cell)
epidermoid carcinoma cell line
cervix carcinoma cell line
hepatocellular carcinoma cell line
myoblast cell line
embryo fibroblast cell line
kidney cell line
ovary cell line
T lymphocyte cell line
myelogenous leukemia cell line
acute monocytic leukemia cell line
leukemic monocyte lymphoma cell linemononuclear cells (primary cell)

前駆脂肪細胞
表皮角化細胞アストロサイト
皮膚線維芽細胞
滑膜細胞
気管支上皮細胞臍帯静脈内皮細胞
肺動脈内皮細胞
軟骨細胞
骨芽細胞
骨格筋細胞
大動脈平滑筋細胞
頭髪毛乳頭細胞
間葉系幹細胞
上皮様細胞がん
子宮頸がん
肝がん
筋芽細胞
胎仔由来線維芽細胞
腎臓
卵巣
白血病T細胞
赤芽球様白血病細胞
単球
単球
単核細胞

培養細胞から逆転写反応の鋳型として利⽤可能な RNA を含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。Lysis Solution で処理したライセートを鋳型としてそのまま逆転写反応を⾏うことができるため、解析時間を⼤幅に短縮することが可能です。

特長 4 ハイスループット解析のバラツキ低減

特長 2 ライセートから高品質な cDNA を合成

プロトコールから少量の分注⼯程や希釈⼯程を減らすことで、ハイスループット解析におけるバラツキを低減しました。また、細胞最適化されたバッファー組成により、RNase 等の細胞成分による RNA の分解を効果的に抑えます（調製したライセート中の RNA

不安定化する加熱⼯程などは不要です。

は氷上で 6 時間安定です）。また、gDNA Remover（DNase I）処理後に cDNA 合成を⾏うことから、ゲノム DNA のコンタミの少ない⾼品質な cDNA を合成することができます。逆転写試薬は弊社の⾼効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」をもとに最適化されたマスターミックスとなっており、簡便・⾼効率に cDNA 合成を⾏うことができます。合成した cDNA は⻑期保存可能です。

精製 RNA と細胞ライセートでの Ct の相関の検証

実施例 1

実施例 2

細胞ライセートの氷上安定性の確認

溶解時のピペッティング操作を無くし gDNA Remover 処理を並⾏して⾏うことで操作性を向上させました。反応の停⽌液や RNA を

実施例 3

SuperPrep™
SuperPrep™ Cell Lysis & RT Kit for qPCR とバラツキを考慮したアッセイ精度の評価

種々の qPCR 試薬と組み合わせによる性能比較

HeLa S3 細胞を 96 ウェルプレートに 2×104 cells/well ずつ播種し、100nM phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA) を加えて 24 時間インキュベートしました。その後、PMA 処理した 12 ウェル、未処理の 12 ウェルを PBS(-)
で細胞を洗浄し、SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] で処理して cDNA 合成を
⾏いました。この cDNA を鋳型に THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101] を⽤いて IL-6、
IL-1β、精製した Total RNA (Ct)SuperPrep®
SuperPrep® II
A 社試薬

Ct 値

R2 = 0.9826

リアルタイム PCR 解析を⾏いました（逆転写とリアルタイム PCR 試薬も A 社キット付属品を使⽤）。IL-6、IL-1
β遺 伝 ⼦ の Ct 値 をβ-actin 遺 伝 ⼦ で 補 正 し (ΔCt)、PMA 処 理 の 有 無 の 差 (ΔΔCt) を 算 出 し ま し た。続 い てZʼ-factor を算出し、⽐較を⾏いました。
＊Zʼ-factor︓

On ice ( 時間 )SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] を⽤いてSuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] を⽤いて

HUVEC（ヒト臍帯静脈内⽪細胞）2.5x104 cells から細胞ライセートを調製しHeLa S3 細胞 4x104 cells から細胞ライセートを調製し、氷上に移した後、0 〜 6

た後、cDNA 合成（40μL 反応系）を⾏いました。また同時に、HUVEC から抽出

時間後に細胞ライセートをサンプリングし、すぐに cDNA 合成を⾏いました。

した Total RNA 66.6ng から ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix [Code No.

同様に弊社従来品（SuperPrep®）及び A 社試薬を⽤いて細胞ライセートを調製し、FSQ-201] を⽤いて cDNA 合成（40μL 反応系）を⾏いました。それぞれの cDNA

同様にサンプリングして cDNA 合成を⾏いました。この cDNA を鋳型にを鋳型に THUNDERBIRD® SYBRTM qPCR Mix [Code No. QPS-201] を⽤いて 15

THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101] を ⽤ い て GAPDH

種類のHouse Keeping GeneについてリアルタイムPCR解析を⾏い⽐較しました。

遺伝⼦の発現量をリアルタイム PCR を⾏って解析しました。

その結果、今回解析した 15 種類の遺伝⼦において精製 RNA と細胞ライセー

その結果、HeLa S3 細胞において氷上に 6 時間放置しても顕著な Ct 値の遅れトを⽤いた解析に良好な相関が認められました。

は認められませんでした。

®

IL-6
IL-1β
β-actin

データのバラツキを考慮した、ハイスループットアッセイ系の質の⽬安となる数

PMAの添加Zʼ-factor = 1-3 x (ΔCt(+) 標準偏差 + ΔCt(-) 標準偏差 ) / |ΔΔCt|®

SuperPrep® IIβ-actin 遺伝⼦について TaqMan® プローブアッセイを⾏いました (n=12 にて実施）。同様に A 社試薬を⽤いて値です。⼀般に 0.5 以上で良好と考えられます。今回は下記の式で算出しました。

細胞ライセート (Ct) <SuperPrep II>< 増幅曲線の比較 >IL - 6PMA

Ct(IL-6)
平均

ΔCt(IL-6 - β-actin)
平均
標準偏差SuperPrep® II

(+)
(-)

25.35
29.60

3.45
7.50

A 社試薬

(+)
(-)

25.64
29.76

2.24
6.18

®

SuperPrep II

(+)
(-)

Ct(IL-1β）
平均
27.83
34.85

A 社試薬

(+)
(-)

28.42
35.98

IL - 1β

PMA

5.01
12.39

Z'

0.20
0.26

-4.05

0.66

0.19
0.29

-3.94

0.64

0.28
0.74

-

A 社試薬

ΔΔCt

ΔCt(IL-1β - β-actin)
平均
標準偏差
5.93
0.18
12.75
0.59

+- + + -

ΔΔCt

Z'

-6.81

0.66

-7.38

0.59

IL-6
IL-1β
β-actin
PMAの添加

®

その結果、いずれも Zʼ-factor としては良好なアッセイ系の⽬安となる 0.5 をクリアしましたが、SuperPrep II /®
THUNDERBIRD Probe qPCR Set [Code No. SCQ401/QPS101] を⽤いた実験において、A 社試薬と⽐較して⾼いZʼ-factor を⽰し、
アッセイ系としてよりバラツキが少なく良好であることが分かりました。

+- + + --®

SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] は、リアルタイム PCR による遺伝⼦発現解析のための細胞溶解試薬 (Lysis Reagents) と逆転写反応試薬 (RT Reagents) からなるキットです。本製品を使⽤することで、96 ウェル
プレート等で培養した細胞から逆転写反応の鋳型として利⽤可能な RNA を含む細胞ライセートを簡便に調製できます。
さらに、本キットに含まれる RT Reagents は、この細胞ライセートからの RT 反応に最適化されています。

特長 3 幅広い哺乳類細胞を用いることが可能®

SuperPrep II では細胞の溶解性を向上させると共に RNase の影響を低減することで、弊社従来品に⽐べてより幅広い種類の細胞を⽤いるアッセイに使⽤可能です。下表の代表的な細胞について適⽤できることを確認しています。

®

弊社従来品では Lysis Solution の後に Stop Solution を添加する必要がありましたが、SuperPrep II では Lysis Solution

表 1. SuperPrep® II の適用確認済み細胞での処理の後にそのまま cDNA 合成ステップに移⾏することができます。また、より幅広い哺乳類細胞から⾼感度検出が可能になりました。本キットにより、簡便、迅速に培養細胞からリアルタイム PCR ⽤の鋳型 cDNA の合成が可能です。
培養細胞

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR
[Code No. SCQ-401]

従来法 約 2 時間
RNA 抽出DNase I 処理

cDNA 合成

Total RNASuperPrep® II

細胞名

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26

【Lysis Reagents】

・Lysis Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor

cDNA

約 30 分

【RT Reagents】
リアルタイム PCR

Lysis solution( DNase I , RNase inhibitor )・5×RT Master Mix
・5×RT Master Mix no-RT control*・Nuclease free Water

RT Master Mix* 逆転写酵素を含まないマスターミックスです。
コントロールとして使用します。

RNA

5分

・TaqMan® アッセイ

cDNA

SuperPrep® II Cell Lysis Kit for qPCR [Code No. SCQ-501] は、細胞溶解・SYBRTM Green アッセイ

試薬 (Lysis Reagents) の別売品です。

25 分

THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit [Code No. QRZ-101]、
RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix [Code No. QRT-101] 等の 1-step
リアルタイム PCR 試薬を用いる解析 （簡易測定）にご使用になれます。

特長 1 RNA の精製不要

接着／浮遊

種

接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
接着
浮遊
浮遊
浮遊
浮遊
浮遊

H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
M. musculus
M. musculus
C. familiaris
C. griseus
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens
H.sapiens

HPA
HEK
HA
HDF
HFLS
HBEpC
HUVEC
HPAEC
HC
HOb
HSkMC
HAOSMC
HFDPC
HMSC
A431
HeLa S3
HepG2
C2C12
NIH-3T3
MDCK
CHO-K1
Jurkat
K562
THP-1
U937
HMNC

細胞

由来

preadipocytes (primary cell)
epidermal keratinocytes (primary cell)
astrocytes (primary cell)dermal fibroblasts (primary cell)
fibroblast-like synoviocytes (primary cell)bronchial epithelial cells (primary cell)umbilical vein endothelial cells (primary cell)
pulmonary artery endothelial cells (primary cell)chondrocytes (primary cell)
osteoblasts (primary cell)skeletal muscle cells (primary cell)aortic smooth muscle cells (primary cell)
hair follicle dermal papilla cells (primary cell)marrow stromal cells (primary cell)
epidermoid carcinoma cell line
cervix carcinoma cell line
hepatocellular carcinoma cell line
myoblast cell line
embryo fibroblast cell line
kidney cell line
ovary cell line
T lymphocyte cell line
myelogenous leukemia cell line
acute monocytic leukemia cell line
leukemic monocyte lymphoma cell linemononuclear cells (primary cell)

前駆脂肪細胞
表皮角化細胞アストロサイト
皮膚線維芽細胞
滑膜細胞
気管支上皮細胞臍帯静脈内皮細胞
肺動脈内皮細胞
軟骨細胞
骨芽細胞
骨格筋細胞
大動脈平滑筋細胞
頭髪毛乳頭細胞
間葉系幹細胞
上皮様細胞がん
子宮頸がん
肝がん
筋芽細胞
胎仔由来線維芽細胞
腎臓
卵巣
白血病T細胞
赤芽球様白血病細胞
単球
単球
単核細胞

培養細胞から逆転写反応の鋳型として利⽤可能な RNA を含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。Lysis Solution で処理したライセートを鋳型としてそのまま逆転写反応を⾏うことができるため、解析時間を⼤幅に短縮することが可能です。

特長 4 ハイスループット解析のバラツキ低減

特長 2 ライセートから高品質な cDNA を合成

プロトコールから少量の分注⼯程や希釈⼯程を減らすことで、ハイスループット解析におけるバラツキを低減しました。また、細胞最適化されたバッファー組成により、RNase 等の細胞成分による RNA の分解を効果的に抑えます（調製したライセート中の RNA

不安定化する加熱⼯程などは不要です。

は氷上で 6 時間安定です）。また、gDNA Remover（DNase I）処理後に cDNA 合成を⾏うことから、ゲノム DNA のコンタミの少ない⾼品質な cDNA を合成することができます。逆転写試薬は弊社の⾼効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」をもとに最適化されたマスターミックスとなっており、簡便・⾼効率に cDNA 合成を⾏うことができます。合成した cDNA は⻑期保存可能です。

精製 RNA と細胞ライセートでの Ct の相関の検証

実施例 1

実施例 2

細胞ライセートの氷上安定性の確認

溶解時のピペッティング操作を無くし gDNA Remover 処理を並⾏して⾏うことで操作性を向上させました。反応の停⽌液や RNA を

実施例 3

SuperPrep™
SuperPrep™ Cell Lysis & RT Kit for qPCR とバラツキを考慮したアッセイ精度の評価

種々の qPCR 試薬と組み合わせによる性能比較

HeLa S3 細胞を 96 ウェルプレートに 2×104 cells/well ずつ播種し、100nM phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA) を加えて 24 時間インキュベートしました。その後、PMA 処理した 12 ウェル、未処理の 12 ウェルを PBS(-)
で細胞を洗浄し、SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] で処理して cDNA 合成を
⾏いました。この cDNA を鋳型に THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101] を⽤いて IL-6、
IL-1β、精製した Total RNA (Ct)SuperPrep®
SuperPrep® II
A 社試薬

Ct 値

R2 = 0.9826

リアルタイム PCR 解析を⾏いました（逆転写とリアルタイム PCR 試薬も A 社キット付属品を使⽤）。IL-6、IL-1
β遺 伝 ⼦ の Ct 値 をβ-actin 遺 伝 ⼦ で 補 正 し (ΔCt)、PMA 処 理 の 有 無 の 差 (ΔΔCt) を 算 出 し ま し た。続 い てZʼ-factor を算出し、⽐較を⾏いました。
＊Zʼ-factor︓

On ice ( 時間 )SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] を⽤いてSuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] を⽤いて

HUVEC（ヒト臍帯静脈内⽪細胞）2.5x104 cells から細胞ライセートを調製しHeLa S3 細胞 4x104 cells から細胞ライセートを調製し、氷上に移した後、0 〜 6

た後、cDNA 合成（40μL 反応系）を⾏いました。また同時に、HUVEC から抽出

時間後に細胞ライセートをサンプリングし、すぐに cDNA 合成を⾏いました。

した Total RNA 66.6ng から ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix [Code No.

同様に弊社従来品（SuperPrep®）及び A 社試薬を⽤いて細胞ライセートを調製し、FSQ-201] を⽤いて cDNA 合成（40μL 反応系）を⾏いました。それぞれの cDNA

同様にサンプリングして cDNA 合成を⾏いました。この cDNA を鋳型にを鋳型に THUNDERBIRD® SYBRTM qPCR Mix [Code No. QPS-201] を⽤いて 15

THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101] を ⽤ い て GAPDH

種類のHouse Keeping GeneについてリアルタイムPCR解析を⾏い⽐較しました。

遺伝⼦の発現量をリアルタイム PCR を⾏って解析しました。

その結果、今回解析した 15 種類の遺伝⼦において精製 RNA と細胞ライセー

その結果、HeLa S3 細胞において氷上に 6 時間放置しても顕著な Ct 値の遅れトを⽤いた解析に良好な相関が認められました。

は認められませんでした。

®

IL-6
IL-1β
β-actin

データのバラツキを考慮した、ハイスループットアッセイ系の質の⽬安となる数

PMAの添加Zʼ-factor = 1-3 x (ΔCt(+) 標準偏差 + ΔCt(-) 標準偏差 ) / |ΔΔCt|®

SuperPrep® IIβ-actin 遺伝⼦について TaqMan® プローブアッセイを⾏いました (n=12 にて実施）。同様に A 社試薬を⽤いて値です。⼀般に 0.5 以上で良好と考えられます。今回は下記の式で算出しました。

細胞ライセート (Ct) <SuperPrep II>< 増幅曲線の比較 >IL - 6PMA

Ct(IL-6)
平均

ΔCt(IL-6 - β-actin)
平均
標準偏差SuperPrep® II

(+)
(-)

25.35
29.60

3.45
7.50

A 社試薬

(+)
(-)

25.64
29.76

2.24
6.18

®

SuperPrep II

(+)
(-)

Ct(IL-1β）
平均
27.83
34.85

A 社試薬

(+)
(-)

28.42
35.98

IL - 1β

PMA

5.01
12.39

Z'

0.20
0.26

-4.05

0.66

0.19
0.29

-3.94

0.64

0.28
0.74

-

A 社試薬

ΔΔCt

ΔCt(IL-1β - β-actin)
平均
標準偏差
5.93
0.18
12.75
0.59

+- + + -

ΔΔCt

Z'

-6.81

0.66

-7.38

0.59

IL-6
IL-1β
β-actin
PMAの添加

®

その結果、いずれも Zʼ-factor としては良好なアッセイ系の⽬安となる 0.5 をクリアしましたが、SuperPrep II /®
THUNDERBIRD Probe qPCR Set [Code No. SCQ401/QPS101] を⽤いた実験において、A 社試薬と⽐較して⾼いZʼ-factor を⽰し、
アッセイ系としてよりバラツキが少なく良好であることが分かりました。

+- + + --培養細胞から RNA 精製が不要で、高品質な cDNA 合成が可能

特長 5 さまざまな qPCR 試薬との組み合わせ可能
さまざまなリアルタイム PCR 試薬 (SYBR™ Green I, TaqMan アッセイ両⽅に対応可能 ) と組み合わせて使⽤可能です。
®

弊社 THUNDERBIRD Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101]、THUNDERBIRD Next Probe qPCR Mix [Code No. QPX-101]、®

®

KOD SYBR™ qPCR Mix [Code No. QKD-201] 等と組み合わせて⽤いることによって、培養細胞から簡便かつ⾼精度の遺伝⼦発現解析が可能であることを確認しています。また、弊社 THUNDERBIRD Probe One-step qRT-PCR Kit [Code No. QRZ-101]、®

RNA-direct ® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix [Code No. QRT-201] 等の 1-step リアルタイム RT-PCR 試薬と組み合わせる簡易アッセイも可能です。

リアルタイム PCR 用細胞溶解 & cDNA 合成キット ( 培養細胞用 )SuperPrep ® II

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR と種々の qPCR 試薬との組み合わせによる性能比較

実施例 4

Cell Lysis & RT Kit for qPCR®

SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [Code No. SCQ-401] を⽤いて、ヒト
4

3

2

1

®

間葉系幹細胞 1×10 、1×10 、1×10 、1×10 cells から細胞ライセートを調製し、THUNDERBIRD

続 い て cDNA 合 成（40 μL 反 応 系）を ⾏ い ま し た。そ れ ぞ れ の cDNA を 鋳 型 に

A 社 qPCR 試薬®

THUNDERBIRD Probe qPCR Mix [Code No.QPS-101]、
Ａ社 及 びＣ社 製 リ ア ル

SuperPrep® の改良版 !

C 社 qPCR 試薬®

タイム PCR 試薬を⽤いて、GAPDH 遺伝⼦について TaqMan アッセイを⾏いました。
その結果、いずれのリアルタイム PCR 試薬においても良好な増幅を認めることができ®

ました。特に、THUNDERBIRD Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101] との組み合培養細胞から cDNA 合成が約 30 分で可能

わせにおいて、最も良好な Ct 値を⽰しました。

価格表
品名および内容包装

保存温度

Code No.

価格 ( 税別 )100 回用 *1-20℃

SCQ-401￥84,000

ハイスループット解析のバラツキ低減
サンプル

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR
<Lysis Reagents>
・Lysis Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor<RT Reagents>

・5 × RT Master Mix
・5 × RT Master Mix no-RT Control
・Nuclease-free Water

付いている製品

100 回用 X5-20℃

SCQ-401X5￥360,000

サンプル®

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [QPS-101]*2 とのセット

SuperPrep II / THUNDERBIRD Next Probe qPCR Set®

は、評価⽤の無償サンプルをご⽤意

１セット

-20℃

SCQ401/QPS101￥107,500

１セット

-20℃

SCQ401/QPX101￥107,500

ライセートは反応系の 20% まで持ち込み可能®

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] とTHUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix [QPX-101]*2 とのセット

DNaseI 処理でバックグラウンド低減
処理でバックグラウンド低減

SuperPrep® II / KOD SYBRTM qPCR Set
SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] とKOD SYBRTM qPCR Mix [QKD-201]*2 とのセット

SuperPrep® II Cell Lysis Kit for qPCR *3<Lysis Reagents>
・Lysis Solution

・gDNA Remover

１セット

-20℃

SCQ401/QKD201￥110,000

100 回用-20℃

SCQ-501￥43,000

サンプル請求さまざまな qPCR 試薬と組み合わせ可能

RT Reagents・RNase Inhibitor*1 40 μL で逆転写反応をした場合に 100 回用としてご使用になれます。
*2 50 μL 反応で 200 回用、 20 μL 反応で 500 回用としてご使用になれます。
®
*3 SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR に含まれる Lysis Reagents の別売り品です。 1-step リアルタイム RT-PCR 試薬と組み合わせる簡易アッセイのための細胞ライセート調製にご使用になれます。

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Lysis Reagents

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ライセート ( 細胞溶解液 ) は氷上で 6 時間安定サンプルマークの改良点１ 反応停止液の添加が不要

高効率 1-step リアルタイム RT-PCR 試薬
品 名(TaqMan アッセイ用 )

包装 *

保存温度

Code No.

価格 ( 税別 )100 回用-20℃

QRZ-101￥36,000

THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit

サンプル

TM

(SYBR Green I アッセイ用 )RNA-direct® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix

100 回用-20℃

QRT-201￥36,000

約30分!

培養細胞

®

cDNA

* 50 μL 反応で 100 回用、 20 μL 反応で 250 回用としてご使用になれます。
※ 本資料に記載している会社名および商品名 ・ ロゴマークなどは、 各社の商号、 商標または登録商標です。

Lysis solution
5分

Stop
S
to
op so
solution
sol

逆転写反応

2分

25 分

培養細胞
Stop Solution の添加・反応が不要

改良点２ より幅広い種類の細胞を用いるアッセイに対応
初代培養細胞を含む幅広い哺乳類細胞を用いることが可能
toyobo公式X

2024.10.01 THS24148

ハイスループット解析のバラツキを低減