博 士（ 医 学） 谷 野 洋子
学 位 論文 題 名●●Sequence varlantSOftheSPPlgeneareaSSOClated
WithtotalSerumIgEleVelSinaJapaneSepopulation（日本人におけるSPP1遺伝子多型と血清総I9E値との関係）

学位論文内容の要旨【背景】これまでの多くの遺伝解析の結果から、アレルギ一性疾患を含む種々の免疫炎症性疾患の感受性遺伝 子は特定の染色体領域にクラスターを形成して存在していることが明らかとなってきた。共通の遺伝子群が異なる免疫炎症性疾患の病態に遺伝的な影響を与えている可能性があり、生体の包括的な免疫反応や炎症のネットワ―クを調節する遺伝子群がアレル ギ一 疾患 の病 因、 病態 にお いて も 中心 的な 役割 を果 たし てい る可能性がある 。SPP1(osteopontm，ear
りTりmphOCyteaC廿vam皿protem1，boneSi
むOprotei111）は活性化T細胞、マクロファ―ジなどにより産生されるりン酸化糖蛋白で、マクロファージの遊走、活性化による冊n免疫反応の誘導、B細胞の活性化、アポトーシスなど幅広く生体の免疫、炎症反応に関与している。 SPP1遺伝子は4番染色体長腕 に存在し、近年その遺伝子多型と多発性硬化症、SLE、C型肝炎など、いくつかの免疫炎症性疾患との関連が報告された。さらにはSPP1
遺伝子多型の特定 のハブロタイブとSPP
1産生亢進や自己免疫性リンバ増殖性疾患の進行との関連を認めた報 告もある。
これらの事実を もとに、我々はSPP1遺伝子がアレルギ―性疾患の発症や病態においても童要な役割を果たしている可能性があると考えた。最近、今野らは蜂毒の免疫療法において
SPP1が その 効果 発現 の童 要な 生物 学 的マ ーカ ーで ある こと を報 告し、sP
P1のnn誘導活性がアレルギ一反 応を修飾する可能性があると報告した。しかし喘息やIg
E反応性などのア
レ ル ギ 一 形 質 に お け る SPP1遺 伝 子 多 型 の 意 義 を 検 討 し た 報 告 は 未 だ 存 在 し な い 。
【目的】日本人に おいてS
PP
1遺伝子多型と血清総Ig
E値、アトピ一及び喘息との遺伝的関連 解 析 を 行 い 、 SH1遺 伝 子 の ア レ ル ギ 一 形 質 に お け る 意 義 を 検 討 す る 。
【方法】対象は札 幌市及び近郊在住の非血縁成人611人。当科において気管支喘息と診断された268人の喘息患者を含む。喘息の診断は咳 、喘鳴、呼吸困難等のうち反復する症状を2つ以上持ち、かつ 気道可逆性または気道過敏性のあるものとした。健常対象群343人は、喘息を含む慢性呼吸 器疾患の既往歴のない群とした。全対象者において血清 総Ig
E値及び10種類の吸入抗原に 対する特異的IgE値を測定し た。アトピ―の定義は、1つ以上の吸入抗原に 対 す る 特 異 的 IgE値 が 陽 性 の 場 合 と 定 義 し た 。 特 異 的 IgE値 は 、 IgECAPRAST法 で0．35UA/ml以上、 またはMAST法で1．0h】Inicont以上の場合に陽性とした。これまでに日本 人で はSPP1遺伝子プ口 モー夕一領域に4ケ所、エク ソン領域に3カ所、イント口 ン領域に10ケ所の遺伝子 多型が報告されているが、今回はこれまでに免疫炎症性疾患と遺伝的な関連の報告が認め られる3つのプロモ―夕一領 域及び2つのエクソン領域の多型について検― 57―

討した(‑1687A/G;
ー381T/C;‑
94deletion/G;5891C/T;7052T/C)。遺伝子型はそれぞれの対立 遺伝 子に 特異 的な ブライマーを用いたPCR(Allele‑specific PCR)によ って同定した。
【結果】
喘息の有無によらず ア卜ピ一群は非アトピ一群に比ベ血清総IgE値が高かった。またアトピ―の有無によらず喘 息患者では非喘息健常人に比べ血清総IgE値が高かった。いずれのSPP1遺伝子多型も喘息及 びアトピーの有無とは関連が認められなかった。本研究は、611人の対象者からなり、ある 特定の遺伝子型の疾患発症の相対危険度が1フ以上である場合に、統計学的にp=0.
05の有意水準において80％以上の検出カがあると推定された。従って本研究ではSPP1
遺伝子の影響が 喘息やア卜ピーに対してこれより小さい場合には、その影響を検出できなかった可能性がある。一方、健常対照群において、血清総Ig
E値はS
NP5891C/T（P〓0.
009、ANOVA)及 び SNP7052T/C（ p゜0.001）と 有意 な関 連を 認 めた 。特 に遺 伝子 型5891T/T及び7052C/
Cを有する者では、血清総Ig
E値が有意に高かった。遺伝子多型‑
1687A/G、‑381T/C、‑
94deletion/G
では血清総Ig
E{jlとの関連は認められなかった。また喘息患者においてはいずれの多型においても 血清総IgE値との関連は認め られなかった。今回検討した5つの遺伝子多型から構成されるハプロタイプの検討では、健常群において‑1687A/‑
381T/‑94deletion/5891T/7052Cが総Ig
E値高値と関連する傾向にあった（pく0.
1)。
また多変量解析にて 性別、年齢、喫煙状況、アトピーの有無で補正した場合にも同様の結果が得られた。
【考案】
遺伝子多型を用い た疫学的研究は対象とする疾患の発症や病態における特定の遺伝子の意義を検討するため に非常に有効な手段の―つである。今回の検討からは、SPP1遺伝子が多発性硬化症やSLE、C型肝炎、リンバ増殖性疾患等の免疫炎症性疾患に加えて、血清総Ig
E値とも関連することが推測された。特に興味深い結果は、多発性硬化症の発症と関連する遺伝 子型 (5891C/C)では 血清 総IgE
値 が低 く 、SLEの進行度に関係すると報 告された遺伝子型(7052Cニ ノC)では 血清総IgE値が高値であ るという結果である。疫学的にはThl病態が優位と考えられる多発性硬化症の患者では、アレルギ一症状が少なく、喘息の発症が少ない
こ とが 報告 され てお り、 ―方 Th2病 態が 優位 であるSL
Eでは、IgE産生の 増加も報告されている。SP
P1遺伝子 多型が、Thl/Th2のバランス などの免疫学的状態に促進的または抑制的に作用し、多発性 硬化症、SLEなどの免疫炎症 性疾患の発症や血清Ig
E値の多寡に影響している可能性が考えられた。
血清Ig
E産生には少なくとも2つの独立した遺伝的な制御機構が知られてい る。1つは抗原特異的なIgE産生で、もう1つは抗原非特異的なべースラインレベルでのIgEの産生である。今回SP
P1
遺伝子 多型とIgEとの相関が、健常 者のみ、さらには抗原特異的Ig
E反応（アトピ―）とは独立し て認められたことは、S
PP1遺伝子が抗原特異的なIgE応答ではなく、IgEのべースラインレベルの調節に関与していることが推測される。今回、喘息患者群ではSP
P1遺伝子多型と血 清総I
gE値との間には有意な 関連は認められなかった。喘息患者ではアトピーの有無にか かわらず血清総Ig
E値が高値であり、喘息に特徴的な遺伝因子、環境因子によって惹き起こ されるI
gE産生の誘導は、SPP1遺伝子の影響を凌駕してしまう可能性も考えられる。
5891C/Tと 7052T/Cの遺伝子多型はどちらもアミノ酸置換を伴っておら ず、それ自体が遺伝子の機能に影響 を与えているとは考えづらい。SP
P1
遺伝子のエクソン7にはアミノ酸置換を伴う多型も報告されているが、今回検討した日本人対象者においては、同部位には多型性は認められなか った。従ってS
PP
1遺伝子内またはその近傍に存在する未知の機能的な― 58―

多 型 が 血 清 総 IgE値 の 多 寡 に 真 の 影 響 を 与 え て い る 可 能 性 も 考 え ら れ た 。
【結語】SPP1の遺伝子多型は抗原特異的なIgE反応とは独立して、血清総Ig
E値のべースラインレベルの制御に影響を与えている可能性がある。

‑ 59―

学 位 論 文 審 査 の 要旨
主査
副査
副査

教授 上出利光
教 授 佐々 木秀直
教 授 西′ 村正治

学 位 論 文題 名1●
Sequence varlantSOftheSPPlgeneareaSSOClated
WithtotalSerumIgEleVelSinaJapaneSepopulation（日本人におけるSPP1
遺伝子多型と血清総I9E値との関係）

多くの 遺伝解 析の結果 から、 アレルギ ―性疾患 を含む種々の免疫炎症性疾患の感受性遺伝子 が特定 の染色体 領域にク ラスタ ―を形成 して存在していることが明らかとなり、共 通の 遺 伝 子群 が 異なる 免疫炎 症性疾患 の病態 に遺伝的 な影響 を与えて いる可能 性が想 定さ れ て いる 。 才 ステ 才 ポ ンチ ン と し ても 知ら れるSP
P1
は 活性化T細胞、 マク□ フア―ジ などに より産生 されるり ン酸化 糖蛋白で 、マク□ファ―ジの遊走、活性化によるThl
免 疫反応 の誘導、 B細胞 の活性 化をど幅 広く生 体の免疫、炎症反応に関与している。
SP
P1遺 伝子 は 4番染 色体 長腕に存 在し、近 年その 遺伝子多 型と多 発性硬化 症、SLE、.C型 肝炎 な ど 、免 疫 炎症性 疾患と の関連が 報告さ れた。さ らに蜂 毒の免疫 療法にお いてSP
P1が その 効 果 発現 の 生 物学 的 マ ― カ― と し て有用で 、SPP1のThl誘導活 性がア レル
ギ一反 応を修 飾する可 能性が報 告され た。しか し喘息 やIgE
反 応性な どのアレ ルギ一形
質 にお け る S
PP1遺伝 子多型 の意義を 検討し た報告は 未だ存在 しない 。本研究 は日本 人に おい て SP
P1遺 伝子 多 型 と血 清 総 Ig
E値 、 アト ピ一及 び喘息 との遺伝 的関連解 析を行い 、SPP1
遺 伝 子 のア レルギ ―形質に おける 意義を検 討するこ とを目 的として 行った 。
対 象は 札 幌 市及 び 近郊在 住の、 268
人の 喘息患 者を含む 非血縁 成人611人。喘息 の診断は咳、 喘鳴、 呼吸困難 等のうち 反復す る症状を 2
つ 以上持ち 、かつ気 道可逆 性または気道過敏 性のあ るものと した。健 常対象 群343
人 は、喘 息を含む 慢性呼 吸器疾患 の既往歴の 愆い 群 。 全対 象 者 にお い て 血清 総 IgE
値及ぴ10種 類 の吸 入 抗 原に 対 す る特異 的I
gE
抗 体価 を 測 定し た 。アト ピ―の 定義は、 1つ 以上の吸 入抗原に 対する 特異的Ig
E抗体 価が陽性 の場合 と定義し た。これ までに 免疫炎症 性疾患 との遺伝 的な関 連が報告された3つ の プ 口 モ 一 夕 ― 領域 及 び 2
つ の ェ クソ ン 領 域の 多 型 につ い て 検討 し た (‑1687
A/G;‑381T/C;‑
94
deletion/G;5891C/T;7052T/C)。遺伝子型はそれそれの対立遺伝子に特異‑ 60―

的なプライマーを用いたPCRによって同定した。いすれのSPP1遺伝子多型も喘息及びアトピーの有無とは関連が認められなかった。一方、健常対照群において、血清総IgE
値 はSNP5891C/T及 びSNP7052T/Cと有意な関連を認めた。特に遺伝子型5891T/T及び7052C/Cを有する者では、血清総IgE値が有意に高かった。また喘息患者においてはいすれの多型においても血清総IgE値との関連は認められなかった。5つの遺伝子多型から構成されるハプ□夕イプの検討では、健常群で‑1687A/‑381T/‑94
deletion/
5891T/7052C
が総IgE値高値と関連する傾向にあった。
遺伝子多型を用いた疫学的研究は対象とする疾患の発症や病態における特定の遺伝子の意義を検討するために非常に有効な手段のーつである。今回の検討からは、SPP1
遺伝子が多発性硬化症やSLE、C型肝炎、リンパ増殖性疾患等の免疫炎症性疾患に加えて、血清総IgE値にも遺伝的な影響を与えることが推測された。特に興味深い結果は、多発性硬化症の発症と関連する遺伝子型(5891C/C)では血清総IgE値が低く、SLEの進行度に関係すると報告された遺伝子型(7052C/C)では血清総IgE値が高値であるという結果である。SPP
J‑遺伝子多型が、Thl/Th2のバランスなどの免疫学的状態に促進的または抑制的に作用し、多発性硬化症、SLEなどの免疫炎症性疾患の発症や血清IgE値の多寡に影響している可能性が考えられた。，
審査にあたり、副査佐々木教授より、1） SP
P1
遺伝子の長さと連鎖不平衡係数についてどう考えるか、2）単一遺伝子で多因子が関係した疾患を説明する難しさ、3）多発性硬化症、SLE，さらには血清総IgE値との関連で、本当に今回のSPP1遺伝子多型が関係しているといえるのかについての質問があった。主査の上出教授からは、1）アミノ酸置換を伴わないSPP1
遺伝子多型にどのような生物学的な意義があるのか、2）遺伝子型によって血清総IgE値に差がみられたが、実測値ではどのくらいの差があり、臨床的な意味はどのようなものなのか、3） SP
P1
遺伝子多型と、なんらかの感染症との関係について質問があった。副査西村教授からは、今回のような遺伝子多型の研究の意義と臨床応用をどう考えていくかについて質問があった。申請者はこれらの質問に対して、自験デ一夕と文献を弓｜用して概ね適切な回答を行った。
審査員一同は、本研究が、血清総IgE値とSPP1遺伝子多型の関係を初めて報告した点を高く評価し、申請者が博士（医学）の学位を受けるのに充分な資格を有すると判定した。

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