博士（ 獣医学 ）ノー ハデイ

ビンア ブダウ

学位論文題名
Modeofhantavirus infectionamonghostrodentsand
characterizationofavacclne candidatestrainof
PuumalavlruS（宿主げっ歯類におけるハンタウイルスの感染様式とプー マラウイ ルスの ワクチン 候補株 の性状解 析）
学 位論文内容の要旨
ハン タウイルス属に含まれるプーマラウイ′レス￠Uu¥o
はヨーロッパヤチネズミを自然宿主としてヨーロッパや．ロシアに広く分布し、人に感染すると腎症候性出血熱(HFRS)を引き 起こ す 。日 本に はPUUVは 存 在し なぃ が、近 縁なホッカイドウウイルス(HOKめがエゾ
ヤチネ ズミに保有されている。しか し、現在までにH()KVによる人の感染例は報告されていなぃ 。自然宿主である野生げっ歯類集団におけるハンタウイルスの感染様式や伝播様式を知る ために、北海道の森林でエゾ ヤチネズミを捕獲し、抗HOKV抗体、ウイルス抗原、およぴ ウイルス遺伝子を検出するこ とにより、HOKVの感染状況 を解析した。その結果、捕獲された199匹中、10例（6，Oo/r)で抗体が検出された。200
4年に実施した当別町と中川町の抗体陽性率はオスではそれぞれ25％(1/4)と45．6％（5´lDであったが、メスではそれぞれ5.00/6(4/80と0％（0′3）であった。いずれのげっ歯類の集団においてもオスの抗体陽性率が有意に 高かったことから￠く0．OD、オスがメスよりもHOKVの感染維持や伝播により重要な役割 を果たしていることが示唆された。中川町で捕獲されたエゾヤチネズミのうち、2匹で憾抗 体陰性であったが、ウイルス抗原とウイルス遺伝子が陽性であったことから、これら2匹は 抗体産生前の急性感染期の 個体であると考えられた。抗体もしくはウイルス遺伝
子 が検 出 され た12例の個体について恥d．d皿eRI甲CRを実施して、各種臓器 中のウイルスRNA量 を測定したところ、急性感 染期個体の肺と脾臓中のウイル・スRN．Aコピー数は急性期以 外の感染個体よりも10倍以上高かったことから、慧陸感染期の個体も感染の拡大に関与しているものと考えられた。
ロシアやヨーロッパ諸国などで年間7，00（人ほどのほぬ8患者が班几Wの感染によって発 生し て いる が、 未だにPUUV感染に対するワク チン．は開発されていなぃ 。一般にHRWの培養 細胞中に沿ける増殖はl08係 1胤程度と著しく悪いため、 少しでも増殖のよいウイルス株 を見出すことがワクチン開発 の最初の段階として重要である。ロシアのH珊鴻患者
よ り分 離 され たPmWの DT・ K凡 ぬ． 97株 は比較 的よく増殖することが予備実 験によって明らか にきれた。そこで、本ウイルス株にっいて抗原解析や遺伝子解析を行って、ワクチン候補 株として適するかどうかにつ いて検討を行った。無血清 培地で培養したveroEB細胞に洳 けるウイルスの増殖状況を罷ぺたところ、感染14日目の培地中のDTK凡H涵‐9マ株の― 737 ‑ウ イル ス感 染価 は 8，5x l04錨 畑1を示 し、 PUUVの標 準 株であるSotkamo株の 8．5xl弔ffulmlより も約24倍高かった。ウイルス 遺伝子全長の塩基酉己列を決定して他のPIJUVと比較したと ころ、DI'KIUfa‑97株のエン ベロープ糖蛋白質のアミノ酸 配列はSo
tkamo
採の配列と92.6％一致した。また、ハンタウイルスのエンベロープ蛋白質に対する各種モノク
ローナガ抗 体はDTKtUfa． 97株と他のPUUV株でほとんど同じ反応パ ターンを示した。また 、DIPKtUfa‑97株 とそ の 他の PUUV株の 抗D．CKIUfa‑97株血清に対する中和 抗体価は1:160から 1:640と 誰常 に近 い値 を示したことか ら、DTK/Ufa‑97株の抗原性ほ 他のPUUV
株 に類 似し てい る こと が明 らか になった。以上 のことから、DTK/Ufa‑97株は PUUV感染に よ る 日 斑礪に 対す るワ クチ ン候補 株に 燈り うると 考え られ た。
本研究に より、げっ歯類集団でのハンタウイルスの存続にはオスが〆スよりも重要である可能性が 示唆された。また、急性感染期の個体は持続感染期の個体よりも体内に保持されるウイル・スRNAが多いことから、げっ歯類集団の密度が高い時には、急性感染期の個体が 感染 の拡大に関与 するものと考えられる。また 、PI兀WのDTK/U a‑97株は培 養細胞中で よく 増殖 し、 し かも 抗原 性状 が他のPUUVとほ とんど同じであることから、 PUUV感染に対するワ クチンの候補株として有用であることが示きれた。本研究で得られたハンタウ
イルスの自 然界での存続様式とHFRSのワ クチン開発に関する知見弦 ハンタウイルス感染症の制御に とって有用な情報とぬると思 われる。

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学位論文審査の要旨

主査教 授高島郁夫
副査教 授大橋和彦
副査准教授前田秋彦
副査准教授苅和宏明、
学位論文題名N/Iodeofhantavirusinfe
cti
onamo
nghos
tro
den
tsand
characterizationofavaccin
ecandidates
trainof
Puum
alavlruS（宿主げっ歯類におけるハンタウイルスの感染様式とプー マ ラウ イ ル スの ワ クチ ン 候補株 の性状解析 ）ハン タゥ イル ス 属に 含ま れる プー マ ラウイ ルス(PUU Dはヨーロッパヤ チネズミを自然宿主 とし てヨ ーロ ッ パや ロシ アに 広く 分 布し、 人に感染すると腎症候性出 血熱(HFRS)を引き起 こ す 。 日 本 に は PUUVは 存 在 し な い が 、 近 縁 な ホ ッ カ イド ウウ イル ス(HOKV)が エゾ ヤチネズミに保 有されている。自然宿主で ある野生げっ歯類集団におけ るハンタウイルスの感染 様式 や伝 播様 式 を知 るた めに 、北 海 道の森 林でエゾヤチネズミを捕獲 し、抗HOKV抗体、ウ イ ルス 抗原 、潟 よ びウ イル ス遺 伝 子を 検出 する こと に より 、HOKVの 感染 状 況を 解析 した 。そ の結 果、 捕 獲された199匹中、10例(5.0％）で抗体が検出された。 抗体陽陸率はオスとメスでそれ ぞれ11.5% (6/52)と2.7％(4/147)であり、オスの抗体陽性率が有意に高かったこと から CPく 0． 01)、オ スが メス より も HOKVの 感染維持や伝播により重要 な役割を呆たして
い る こ と が 示 唆 さ れ た 。 ロ シ ア の HFRS患 者 よ り 分 離 さ れ た PUUVの DTK[t脇 ‑97株 の ワ
ク チン 株と して の 有用性について解析を行っ た。無血清培地で培養したVero E6細胞における ウ イル スの 増殖 状 況を 調ぺ たと こ ろ、 感染 14日 目の 培 地中 のDTKIUfa‑97株 のウ イル ス
感 染 価 は PUUVの 標 準 株 で あ るSotkamo株 より も約 24倍 高 かっ た。 ウイ ´レ ス 遺伝 子全 長の 塩 基 配 列 を 決 定 し て 他 の PUUVと 比 較 し た と こ ろ 、 DTKFUfa‑97株の エン ベ ロー プ糖 蛋
白 質 の ア ミ ノ 酸 配 列 は Sotkamo株 の 配列 と92.6％ 一致 し た。 また 、DTK/Iぬ‑97株 とそ の他 の PUUV株 の 抗 DT:WUfa‑ 97株 血 清 に 対 す る 中 和 抗 体 価 は 1:160か ら 1:640と 非 常に 近い 値 を 示 し た こ と か ら 、 DTK/Ufa‑97株 の 抗 原 性 は 他 の PUUV株に 類似 して い るこ とが 明
ら か に な っ た 。 以 上 の こ と から 、DTKF Ufa‑97株 はP，UUV感 染に よる HFRSに 対す るワ クチン候補株に なりうると考えられた。
本 研究 によ り得 ら れた ハン タウ イ ルス の自 然界 での 存 続様 式と HFRSのワ ク チン 開発 に― 739 ‑関す る知見 はハン タウイ ルス感 染症の 制御にとって有用な情報となると思われる。よって審査 員 一同 は 上 記 論文 提 出 者 Nw HardybinAbuDaud氏の 博 士 論 文は 北 海 道 大学 大学院 獣医 学 研究 科 規 定 第6条 の規 定 に よ る本 研 究 科 の行 う 博 士 論文 等 の 審 査に 合 格 と認め た。

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