博 士 （ 獣医 学 ）ソウボン

学位論文題名
Studie
sonA
nti
tryp
anosomalActiv
ityofMedicinalP
lants（薬 用植物の抗トリパノソーマ活性に関する研 究）
学位 論文内容の要旨

Trypanosoma evansiはトリパノソーマ科の鞭毛虫であり、ウマ、ラクダ、ウシ、スイギュウ、ヤギ、ヒツジ、ブタなどの血液中で増殖し、スーラとして知られるトリパノソーマ症を引き起こす。本疾病は吸血昆虫、とくにアプ（Tabanusspp.
）やサシパ工(Stomoxysspp.
)によって機械的に伝播されるため世界的に蔓延しており、アフリカ、アジアおよび南アメリカにおいては大きな経済的損失をもたらしている。本症の治療に用いるおもな薬剤はdimi
naze
ne ac
eturate、surammおよびquinap
yramineであるが、これら既存の抗トリバノソーマ薬は副作用が大きな問題となっており、また、薬剤耐性株の出現が多くの地域で報告されている。このことから、ヒトのトリパノソーマ症である睡眠病やウシのナガナ病と同様に、スーラの治療に向けた新たな化合物の研究は、緊急かつ重要な課題である。
植物 由来 の天 然化 合物 はこれ まで 新薬 開発 の重 要な 資源 とな ってきた。薬用植物の1つであるBrucea javanicaは多種類のクアシノイドを含むが、これは多くの熱帯性二ガキ科植物において見いだされる苦味成分である。第一章では、カラムクロマトグラ
フイ ー、 超高 速液 体ク 口マ トグラ フイ ー(UPLC)、質量分析（MS/MS）および磁気共鳴法を用いて、ぢ． javan
icaに含まれるクアシノイドの種類と各含有量を解析した。筆者らのグループはこれまでの研究において、bruceineA、bruceineB、bruceineC、bruceineD、bruceantinol、

bruceantinolB、 brucei
ne
Jおよびyadanz
iolideAなどのC‑20型クアシ

ノイドをインドネシア産材料の抽出有機層から分離・精製したこと、また、brusat
ol、
bruceantin、dehydrobruceineA、dehy
drob
ruce
ineB、dehydro
brusatol、bruc
eo
sideA
および
yadanziosideGを中国産材料の有機層から分離したことを報告してきた。本研究においては、インドネシア産の本植物乾燥果実を70％メタノールで処理したのち、酢酸工チルを用いて水層と有機層に分離したが、水層にbruceineDが含まれていることを初めて見出した。次に、これらの分離・精製したクアシノイド類を標準化合物として、UPL
CーMS/MSを用いたクアシノイド迅速定量法を開発し、B． jav
anicaのメタノール粗抽出液中に含まれるクアシノイド類の含有量の評価を行った。その結果、各種クアシノイドの含有量は
ぉ， javanicaの産地によって異なること明らかとなり、同種植物のクアシノイド類の組成と成分含有量は地理的要因、薬用植物の収穫時期などに依存している可能性が示唆された。本迅速定量法は、未精製の植物抽出液からのクアシノイド類やその他の生理活性物― 749―

質 の 検 出 と定 量 的 スク リ ー ニ ング に 有 用で あ る と考 え ら れる 。 今 後は 、 有 効成 分 を 大 量に分離するための簡便かつ安価な手法の開発研究が必要である。
Bruceajavanを ロ よ り 分 離 さ れ た ク ア シ ノ イ ド 類 は 、 そ の 種 類 に 応 じ てPlasmodiumカlciparum丶

Entamoebahistolytica、Giardiaintestinalis、Toxoplasmagondii、Babesia gibsoniなど の原虫 類の増殖 を阻害す ること が知られ ている 。第二章 におい ては、クア シ ノ イ ド化 合 物 のr ev
ansiの 血 流 型虫 体に 対する in vi
troにおけ る増殖阻 害活性 と化合物 構 造 と の相 関 について 検討し た。また 、クアシ ノイド 類のヒト 肺線維 芽細胞（ MRC‑5）に対 す る 細 胞毒 性 を 測定 し た 。そ の 結 果、 15
種類 のC‑20型ク アシノ イドのう ち、bruceineA、bruceantinctl、bru
ceineC、brusatolおよび bruceine
Bは2.
9n
Mから17.8n
Mの範囲の50％
増殖 阻 止 濃 度（ IC50)を 示し 、 強 い抗 ト リ パノ ソ ー マ活 性 を 示 すこ と が明 らかにな った。
これらの活性は、diminazeneacetu
rate(ICso二二8.
8nM)やsuramin(ICso
二43.
2nM)に匹敵するもの で あ っ た。 一 方 、dehy
drob
ruce
ineA、 dehydrob
ruce
ineBおよびdehy
drobrusatolは、brucei
neA、bruceine
Bお よ びbrus
atolと比 較 し て、 各 々 約2100
倍 、 900倍、 1200倍活性が低く 、 構 造 ｜活 性 相 関解 析 の 結果 か ら 、C‑15側 鎖 の 性状 と Aリ ング の ジオ スフェノ ールの存 在 が ク ア シ ノ イ ド の 抗 ト リ バ ノ ソ ー マ 活 性 に 重 要 で あ る こ と が 示 唆 さ れた 。 ま た 、bruceineA、 B、 Cお よ び Dの 抗 ト リ パ ノ ソ ー マ 活 性 の MRC‑5細 胞 に 対す る 選 択指 数 （ SI)は 1900か ら 4200の 範 囲で あ り 、こ れ ら のク ア シ ノイ ド 類 の細 胞 毒 性は 比 較 的 低い こ と が示された。
薬 用 植 物 Brucea javanicaの 果 実 よ り 分 離 さ れ た ク ア シ ノ イ ド 類 が 抗 バ ベ シ ア 活性 な ら び に抗 ト ル バノ ソ ー マ 活性 を 有 する と い う発 見 は 、家 畜 に おけ る 原 虫疾 病 に 対 す
る 薬 用 植 物抽 出 物 の有 用 性 を 示唆 し て いる 。 豊 富な 植 物 資源 を 有 する ミ ャ ンマ ー で は 、長 い 歴 史 の中 で 薬 用植 物 に よ る独 自 の 伝承 医 薬 療法 が 発 達し て い る。 第 三 章で は 、 ミ ャン マ ー の 薬用 植 物 の中 か ら 抗 トリ パ ノ ソー マ 活 性を 有 す る植 物 を 探索 し た 。60種 類 の薬用 植 物 よ り得 ら れ た55種 類 の新 鮮 材 料と 16種類 の 乾 燥材 料 に つい て 、 それ ぞ れ 70％エタノー ル と 70％ メ タ ノー ル で 粗成 分 を 抽出 し 、工eva
nszに対する in vi
troにおけ る増殖 阻害
活 性 と MRC‑5細 胞 に 対 す る 細 胞 毒 性 を 測 定 した 。 そ の結 果 、 本ス ク リ ーニ ン グ 法 にお いて、 3つ の 新鮮 材 料 と6つ の 乾燥 材 料 の粗 抽 出液が f eva
nsiに対し て100 ptg/ml
未 満のIC50値 を 示 し た こ と か ら 、 こ れ ら 9種 の 薬 用植 物 を 活性 成 分 の分 離 ・ 精製 を 実 施す る 候 補 薬用 植 物 と して 選 出 した 。 と く に、 Vitis repens、 Eucalyptus globulus
そ し て んtr ophapodagr
icaは高 い 抗 トリ パ ノ ソー マ 活 性と 選 択 指数 を 示 し 、そ の 有 望性 が示唆 された 。結論 と し て 、ミ ャ ン マー に お い て、 マ ラ リア 、 赤 痢、 腫 瘍 及び 肺 疾 患な ど の 様々 な 疾 患 の治 療 に 使 用さ れ て いる い く っ かの 薬 用 植物 は 、 F eva
nsi感染 の 治 療薬 と し て の潜 在 的 有用性をもつことが示された。

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学 位 論 文 審 査 の要 旨
主査 教授
副査 教授
副査 教授
副査 准教授

片倉 賢
伊藤茂男
杉本千尋
奥 祐三郎

学位 論文題名Studies on Anttrypanosom甜 ActiutyofMedicin甜P1ants（ 薬 用 植 物 の 抗 ト リ パ ノ ソ ー マ 活 性 に 関 す る研 究 ）Trypanosomaeva
nsiはトリパノソーマ科の鞭毛虫で、アブなどの吸血昆虫によって機械的に伝播されるため世界的に蔓延し、多種動物においてスーラとして知られる消耗性疾患を引き起こす。既存の抗トリパノソーマ薬は副作用や薬剤耐性株の出現が問題となっており、スーラの治療薬開発は重要である。本研究では、植物由来天然化合物がマラリア治療の中心的役割を果たしていることを踏まえ、薬用植物から抽出したクアシノイド化合物の抗トリパノソーマ活性にっいて検討し、また、ミャンマー産薬用植物の中から本活性を有する植物を新たに探索した。
ニガキ科植物に含有される苦味成分であるクアシノイド化合物は、マラリア原虫やバベシアなどの原虫類の増殖を阻害することが知られている。本研究では、クアシノイド化合物のf evansiの血流型虫体に対するinvitroにおける増殖阻害活性と二倍体ヒト線維芽細胞に対する細胞毒性を測定した。その結果、15種類のC‑20型クアシノイド化合物のうち、bruceineA、bruceineB、bruceineC、bruceantinolおよぴbrusatolは、既存の治療薬に匹敵する強い抗トリパノソーマ活性を有すること、また、クアシノイドの化学構造と活性には相関があることが示された。なお、検査したクアシノイド化合物の細胞毒性は比較的低いものであった。
豊富な植物資源を有するミャンマーでは独自の伝承医薬療法が発達している。そこ
で、60種のミ ャンマー 産薬用植 物より得 られた71種類のアルコール粗抽出物にっいて、抗トリ パノソー マ活性と細胞毒性を測定した。その結果、9種の薬用植物が潜在的有用性をもつ候補植物として選出された。
本研究は、薬用植物由来の天然化合物がFevansiの増殖阻害活性をもつことを示したものであり、卜リパノソーマ症治療薬開発に向けての有用な情報を提供している。
よって、審 査委員一 同は、上 記博士論 文提出者 ソウボン君の博士論文は、北海道大学大学院 獣医学研 究科規程第6条の規定による本研究科の行う博士論文の審査等に合格と認めた。
― 751一