博士（医学）森学位論文題名康明

大腸腫瘍性病変の背景粘膜の検討
学位論文内容の要旨
緒言
炎症は 悪性睡瘍発生の危険因子とさ れており、大腸睡瘍性病変 が背景粘膜の炎症に関連陞がある と仮 定す る と、 腫瘍性病変 の多発症伽R嘘絣発例では、 腫瘍性病変の存荏しない症 例に比べ、その背景 粘膜の炎症の程度は強いと推 測される。しかし、内視鏑 的に正常と診断される大腸粘膜には細織 学的にどの程度の炎症が存荏 しているのかは知られてお らず、また、正常例と腫瘍性嚆変の背景 粘膜を組織学的に検討した報 告もほとんどない。今回、 正常例と腫瘍髄帚渡を有する症例の背景 粘膜について細織学的な炎症 の所見を比較検討した。
一方、 活性酸素が炎症、動脈醴計匕 、発癌など多くの疾患の原因になることが知られており、今回 大腸 腫瘍 の 発生 において活 性酸素の関与を検言qするた めに、酸化ストレスマーカ ーとしての8− OHdGの 発現 を免 痴 組織 f蛸囈 絶 によ り正 常例 と 腫溯 封趨 馴の 背景 糊 戴こ っい て検 討し た 加
え て、 代表 的 な癌 抑制遺伝子 であるp53、細胞増殖能の指 漂であるproliferating cell nuclear
antigen餌 コ岫 、炎 症 と深 く関 係す るcyclooxygenase‑2 (COX‑2)に ついても同様に 免疫組織化学染色を 行い検討した。
対象と方 法2004年1月か ら2005年8月 まで の 間、 ゴ舗 鎹駄 学 病院 光学 医療 診療 部 にて 全大 腸の 内視 鏡 険査 の施 行例 を 対象 とし、対照 群、腫瘍群の2群に分類した 。対照群は腹的疉决がなく 、大腸内視鏡検査で も異常r を認めず、過去に大 腸疾患の翻維三がなし哺を例とした。歴翦鮮は大腸内視鏡検査 で少 なく て も1個 以 上の 悃動 雅尠 鮫を 認 めた症例でか f珥弼B織検査で順蝦Eまたは 癌と診断され た症 例と し た。 さらに、腫 瘍詳のうち全大腸に5個以上 の腫瘍性晦変を認めたもの を多発ポリー ブ群 、病 理 細織 診断 で癌 を併 発 して いた ものを癌併発 群とした。対象は、対照群 18例で平均年 齢 61. 2+15.5歳 、 男 性 7例、 女 陸11例で あっ た 。腫 瘍群 は37例、 平 均年 齢66. 5+10.0歳 であ り、 男性 24例、 女性 13例 で、 こ の両 群間 の背景に有意 差は認められなかった。そ のうち多発
ポ リ ー プ 群 は 12例 、 癌 併 発群 は8便認 めた 。免 疫 染色 検査 は、 対照 群 9例、 多 発ポ リー ブ群 8例、癌併 発群8例に施行した
背 景 粘 膜 例 鬮 蜘 險 と し て 、 盲 暘 丶 ヒ 行 結 腸 、 横 行 鰍 S状結 腸 丶直 腸か ら太 腸 内視 鏡t灸 斟 こて 生検 を1個施 行し 、さらに 多発ポリープ群ではポリープ が一番多く発生している部 位で最も大き いポ リー プ の基 部、癌併発 群は癌病変の基部で内視鏡 的に正常に見える粘膜よりそ れぞれ1個の生検を 施行した。得られた生機繊はHematoxylin―eosin法で婆ぎ色し、gobl
et ce
ll depleti
on、単核球浸 潤、好中球浸潤、好酸球浸潤 にっいて、normal、mild、 moderate、markedに分けそれぞれO、1、 2、3とscore化して検討を行 った。免疫組織学的検討とし て8―OhdG、p53、PCNA、COX一2の標本を 作製し、各部位ごとに全体の どのくらいの割合で陽性細 胞があるかを検討し、0から30%― 540 ‑

を 陰陸、40から60%を 弱陽は 70%以上を 陽陸と した。
結果
対 照 群 の 背 罰 糊 莫 は 、 goblet cell depletion、 単 核球 瀦 閏 、 好酌 黼 に お いて 、 盲 腸 で最も 炎症scoreが 高く、 左側結 腸、直 腸と肛 門側にい くに従 って、 scoreは小 さくな る傾向を 示し
た goblet celldepletionに おい て は 、 直腸 と 盲 腸 丶お よ ぴ ヒ 行織 肋 間 、単 核球浸 潤にお いて は 、 直 腸 と 盲 腸 の 間 、 好 酸 球 浸 潤 に つ い て f繊 と 盲 臉 ヒ 行 結 腸 お よ ぴ 蘭 嚇 緲 間 に 有 意
差 を 認 め た 。 好 中 球 浸 潤 に っ い て は 、 1領 域 に の み 認 め ら れ る の み で あ っ た 。
大 ― に お い て 、 盲 腸 と 直 腸 で goblet cell depletionの 炎 症 scoreが 対 照群 よ り 高 し順向 を認めた が統計 学的有 意差は 認めず 、その 他の単 核球浸 潤、好酸 球浸潤の炎症scoreにおいても 対照群の それと を員戴 したが 、各葡 粒で有 意差は認めなかった。対照群ではほとんど認められな かったが 好中球 浸潤は 、腫瘍 群にお いて7部 位に認 められ たが、 対照群と比較して有意差は認め られなか った。
ま た、多 発ポリ ーブ群、 癌併発 群で同 様に検討してみたが、対照群と比較して各部位で有意な所 見は得ら れなか った。 多発ポ リーフ 群およ び癌併発群の腫瘍基部の細織像においても、対照群の 同部位の scoreと比 較して も、有 意詮所 見は得ら れなか った。
免 疫細織 学的検 討では、 8‑OHdGは腺 管より 上皮によく発現する傾向を認めた。上皮において各群 を比較す ると、 多発ポ リーブ 群にお いて、 発現率が高い傾向が認めたが、対照群と比較して有意 差 は 認め な か っ た。 p53は、ど の群にも 陽性の 症例は 認めず 、弱陽 性が対 照群で 2症例、 5区域 と多発ポ リープ 群で2症 例4区域 で認め 、癌併 発例で は認め なかっ た。PCNAは 、全群 で陰性 の症 例 は 認 め な か っ た 。 弱 陽 性 が 対 照 群 で 1症 例1区 1鍍 多発 ポ リ ー プ群 で 1症 例 2区 畷 癌 併発群 で 2症 例 3区 域 に認 め 、 そ れ以 外 は 全 て陽 性 で あった COX・2は 、全症例 で陽出 折見は 認めなか った。
考察
正 常群の 大腸背 景粘膜において、．gobl
etce
llde
pleti
on、単核球浸潤、好酸球浸潤など、軽度 から中等 度の炎 症が起 こって いるこ とが明 らかと 橙っ也 また、そ の炎症 の程度 は深部 大腸で最 も 強 く、 左 偲 燃 直腸 に い く にっ れ て 軽 度に な って いった 。腫瘍 性病変 を有して いる群 の背景 粘膜にお ける、 組織学 的炎症 の所見 は対照 群と同様であり、その傾向はポリープが多発している 場合、癌 を併発 してい る場合 も同様 であっ た。また、腫瘍性病変の基部の粘膜においても同区管 の背景湖 莫と差 ば認め られな かった
免 疫化学 染色に おいて、 酸化ス トレス マーカ ーとし ての8‑OHdGにっいて は、有 意差は 認めな
か っ た が、 多 発 ポ リー フ 群の背 景 勵ヒ 皮細胞 に8‑OHdGの 発現が 多し、傾 向を認 め、腫 瘍幽茜変発生に大腸料膜の酸化ストレスが関与している可能性が示唆され、今後さらなる検き寸が必要と
考 えられた 。代表 的な癌 抑制遺 伝子で あるp53は 、今回 の検討 におい て正常大腸粘膜ではほとんど 発現i嵩 認めなか った。 細雛蝋 灘の指 標であ るPCNAは、 ほぼ全 例、背景粘膜の腺管糸田胞の核に 良く染ま り、い ずれの 群の背 景粘膜 にも良 く染まったため、腫瘍性病変の背景粘膜の検討には適 さなかっ た。COX‑2に関し ては背 景粘膜 にはほと んどCOX‑2の発現 は認め ず、腫 瘍陸病変 の背景 粘膜の同 定にば 有用性 が低い と思わ れた。
結語
大腸粘膜において内視鏑訴完｜が正常であっても、組織学的には軽度から中等度の炎痼折見が存在 すること が明ら かにな った。 しかし 、大嬲 載劇蚶茜変の発生に背景粘膜の炎症がどのように関わ っている かにつ いては 十分な 結果が 得られ なかっ t‑ー 541 ‑学位論文審査の要旨
主 査 教 授 浅 香 正 博
副 査 教 授 小 池 隆 夫
副 査 教 授 今 村 雅 寛

学 位 論 文 題 名

大腸 腫瘍性 病変の背 景粘膜の検討
炎症は 悪性睡 瘍発生 の危険 因子と されて おり、 大腸腫 瘍性病変 が背景 粘膜の 炎症に 関連性 があると 仮定す ると、 腫瘍性 病変の 多発症 例や癌併 発例で は、腫 瘍性病 変の存 在しな い症例 に比べ、そ の背景 粘膜の 炎症の 程度は 強いと 推測され る。し かし、 正常と される 大腸粘 膜には 組織学的に どの程 度の炎 症が存 在して いるの かは知ら れてお らず、 また、 正常例 と腫瘍 性病変 の背景粘膜 を組織 学的に 検討し た報告 もほと んどない 。今回 、正常 大腸に おける 背景粘 膜の炎 症の程度と 、腫瘍 性病変 発生に 関して 腫瘍性 病変を有 しない 症例と 有する 症例の 背景粘 膜につ いて組織学 的に炎 症所見 に差が あるか を比較 検計尹る ために 、対照 群と腫 瘍群の 背景粘 膜より 採取した 生 検 材 料を 用 い 、 作成 した colitisscoreによ って検 討した 。さら に腫瘍 群にっい ては多発ポリー プ群、 癌併発 群を設定し同様に検討した。加えて酸化ストレスマーカーである8−OHdG、
千｜滾的 な癌抑 制遺伝 子であ るp53、細 脆囀殖 能の指 標であ るPCNA、炎 症と深く関I連するC
OX‑2につい ても免 疫組織 学的に 検討し た。そ の結果、 正常の 大腸に おいて 軽度か ら中等 度の炎 症が存在し、その程度は弼き部大腸で強く左汨嚇吉腸、直腸といくにっれて轌痩になっていることが明らかと なった 。また 、腫瘍 性病変 発生に 関して、 背景粘 膜の炎 症には 差がな いこと が明ら かとなった 。その 傾向は ポリー プが多 発して いる場合 、癌を 併発し ている 場合も 同様で あった 。免疫化 学 染 色 にお い て 、 8‑OHdGに つ い ては 、 有 意 差は 認めな かった が、多 発ポリ ープ群 の背景
粘膜 の 上 皮 細胞 に 8‑OHdGの発 現 が 多 い傾 向 を 認 め、 腫瘍性 病変発 生に大 腸粘膜 の酸化 ストレスが関 与して いる可 能性が 示唆さ れた。 p53、PCNA、COX‑2に関し ては背 景粘膜 に差は認 めず、腫瘍幽商 変の背 景粘膜 の同定 には有 用性が 低いと 思われ た。
口頭発 表に際 し、副 査の小 池教授 より正 常の大 腸にお いて部位 により 炎症所 見に差 がある 理
由、年 齢で分 けた場 合に炎 症所見 に差が でるのか にっい て質問 があっ た。こ れに対 して申 請者
は、腸 内細菌 の分布 や便の 停滞時 間、大 腸粘膜の 免疫能 、不揮 発性有 機酸に よる粘 廟璃瞎 の可能性な どが推 測され るがは っきり とした 原因に関 しては 不明で あると 答えた 。年齢 による 炎症の差 に つ い ては 、 今 回 40歳 以 下の 症 例 が 少な く き ちん とした検 討はで きてい ないが 、今回 の症例の範 囲内で は年齢 による 差は認 めなか ったと 回答し た。
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次いで副査今村教授より大腸腫瘍性病変の発生は背景粘膜の炎症とは関連性がないという最初の仮説と異なった結果となった理由、癌併発群より多発ポリープ群において8‑OHdGの発現が強く認める傾向を示した理由にっいての質問があった。これに対して申請者は、潰瘍陸大腸炎などのいわゆるcoliticc
ancer
はdys
plasia‑carcinomasequence経路が考えられており、典型的なadenom
aーcarcinomasequenceによる発癌では早期からk‑ras遺伝子に変異し、−ー般の大腸癌で50‑80%変異を生じるのに対し、潰瘍性大腸炎合併癌では2囃と低く、このような差異により一般の大腸癌が炎症粘膜を背景として癌を発生してくる潰瘍性大腸炎とは異なってくる可能性が推定されること、また、多発ポリープ群はadenoma一carcinomasequenceを表し、癌併発群はde novoを表していると考えられ、この違いが8‑OHdG発現の差異になった可能性があると考えられると回答した。
さらに主査浅香教授より大腸におけるgobletcelldepletionの意義、今後の検討課題について質問があった。これに対し申請者は、gobletcellde
pletionは細菌と大腸粘膜の相互反応によって起こるもので炎症を示 す指標となること、今後検討する課題としてはHRFなど
hypoxiaで 出 現 す る も の を 検 討 す る 余 地 が あ る の で は な い か と 回 答 し た 。
本研究は、正常な大腸粘膜の炎症についてその程度と分布を明らかにしたこと、通常の大腸癌発生に関して腸管の炎症の関与がないことを明らかにしたことで高く評価きれ、この研究を足掛 かり と して 今後 大腸 癌発 生の メカ ニズ ムの 究明 が進 んで いく ことが期待された。
審査員一同は、これらの成果を高く評価し、大学院課程における砌螢Fや取得単位なども併せ申請 者が博士（医学）の学位を受けるのみ十分な資格を有するものと判断した。

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