博士（医学）石田淳一
学 位 論 文 題 名

胃癌組織 におけるLUCA15発現量の臨床病理学的検討
学位論文内容の要旨【緒言】
LUCA
15は 815個 のア ミ ノ 酸よ り 構 成さ れ る分子 量約lO
Ok
Daの 核内蛋白 質であ り，そのmR
NAの発 現はほ ば全ての 組織に検 出され ているが，組織間の蛋白発現レベルを検討した報告はない．その生理的な機能は十分に解明されていなぃが，細胞増殖抑制，アポトーシスに関与することが示唆されている，
L
U（溝15の 悪性腫 瘍におけ る検討 では，肺 癌組織や神経系腫瘍組織におけるmRN
Aの発現低下の報告はあるが，蛋白発現量の検討は肺癌において一報あるのみで，胃癌組織における検討は報告されていなぃ，そこで本研究ではI
朋C
愴15の胃癌における病理学的な意義を調べるために，LUC
強15のモノクロナール抗体を独自に作成し，胃癌手術標本を用いて癌部，非 癌部 を 免 疫組 織学的に 比較検 討し，臨 床病理 学的事項 との関連 性の検 討を行っ た．
【方法と結果】
1．抗LU
C
A15抗体の反応性，特異性の確認
作 成 し た抗 LUC
A15モノ ク ロナ ール抗 体は，LU
CA15のC末 側を特異 的に認 識し，ヒ ト胃癌細胞株MK
N45を用いた螢光染色により，核内に限局して存在していることを確認した．
2．免疫組織学的検討
北海道 大学病 院におい て1990年か ら2000年までの10年間に胃癌と診断され，胃切除術を施行 された106
症例 の胃癌手術標本を用いて，LUC
A15の発現量の検討を行った．LUC
A15は胃組織でも核に特異的に染色された．非癌部の胃腺管上皮の核の染色強度をscore2とし，それよ りも染色 が弱い ものをscore1，強いも のをscore3，全く染まらなぃものをscoreOとして 4段階 評価を 行った．
score1群 は29例，score2群は33例，score3群は44例であったが，今回の検討症例内では，score0群は認めなかった．
3．臨床病理学的検討
低発現 群(score1） と正常 もしくは 高発現 群(
score2
あ るいは score3）の2群に大別して臨床病理学的因子を統計学的に検討した．胃癌組織型を分化型と未分化型の2群に分類した場 合 ， 分化 型 59症 例 中 5例の み が scorelを 示 したが， 未分化 型では47症 例中24例がscorelを示し有意差を認めた．
胃 壁 深 達 度 で は T2以 深の 58症例 中 25例 (42.4％ ） がscore1を 示し た が ，Tl症 例では47症 例中 4例 (8.5％）の みがscore1を 示し，深 達度の 進行して いる腫瘍 がI」U
C塊15の発現低下している傾向を示した．さらにりンパ節転移，リンパ管侵襲，静脈侵襲の検討では，8corel群の陽性率はいずれも有意に高かった．これらの病理学的因子を総合評価した進行度 で は ，StageI， I
Iに占める 8co弛1群の 割合（17．8％ ）よりも S
tagem，Wに占める割合（48．5％）は有意に高かった．また腫瘍量とLUCA15の発現量の検討において，8core− 387−

1群に おける 腫瘍最大 径は有 意に大き い傾向が あった ．
他 病 死 を除 い た 100症 例に お い て ，LUCA15の 発現 量 が 累積 生 存 率に 与 え る影 響 をK
aplan‑Meier曲線に検討したところ，score1群はscore2，3群に比較して有意に予後不良であった ．
【考察】
胃癌手 術症例106例中 ，LUC
A15の染 色強度が 非癌部よ りも低 下してい る症例 が29例存在 し た (score l).そ の う ち 未 分化 型 は 24例 (82.8％ ）あ り ， 腫瘍 の 分 化度 と LUCA15の発現量が関連していることが示唆された，しかし，未分化型のうち，8core1を呈した症例は ，47
症例 中24例（ 51.1％） でほば半数であった．このことは，同じ未分化型であっても ，LU
CA15の発現量が低下している群と低下していなぃ群が存在することを示している．
今回の結果では，LUCA15の発現量の低下している群はより悪性度の高い形質を示しており，癌 の悪性 度としては，同じ未分化型であっても，LU
C
A15の発現量の低下は，より後期に生じる形質変化であることが推察された．
胃癌を病理組織学的に分化型と未分化型に大別した場合，両者問に癌発生に関与する遺伝子異常に差があるか否かについて多くの検討がなされてきた．これまでp53，E‑cadherin，
K‐ scvnなどの発現異常が胃癌に高頻度で見られると報告されている．現在までのところ，それ ぞれの 遺伝子の発現異常の相互関連を検討した報告は無く，LUC
A15との関連も不明である が，核 内蛋白質 である L
UCA15が二次 的な遺伝 子異常を 惹起しないか興味の持たれる点である，腫瘍の分化度以外にもLUCA15のscorel群は，．リンパ節転移，リンパ管侵襲，静脈侵襲の 陽性率 が有意に高く，胃壁深達度ではT2以深の割合が有意に高かった．さらに胃癌の進行 度とし て総合的 に評価 した際， score1群ではStageHI，1V群が29症例中16例(55.
2％）
占 め る の に対 し ， score
2あ る いは sco
re3群で は 77症例 中17例(22.1％ ）と有意 に低かった． LUCA15の発現低下が腫瘍細胞の増殖性，悪性度に関与している可能性が示唆される．
こ れ ら の 因 子 は 術 後 生 存 率 に 反 映 さ れ ， score1群 は 有 意 に 予 後 不 良 で あ っ た ．
今回の検 討範囲内 では， LUC
A15の発現 が消失し ている 例は存在しなかったが，LUC
A15の発現量が消失していなくても，低下するだけで胃癌の発生や悪性化に関与していると仮定
す ると， 発現して いるLU
CA15が 変異な どにより ，蛋白質 としての機能異常が存在する可能 性 が 示 唆さ れ た ．今 後 は 胃癌組織 におい て発現し ている L
UC
A15のm
RN
Aのシ ークエンス情報を検討する必要があると思われた．また一部の癌抑制遺伝子では，発現量が低下する
ことのみで発癌に寄与できるha，p10泣8u
伍ciency型の癌抑制遺伝子が存在することが注目さ
れ て お り ， LU（ 強 15に つ い て も 詳 細 な 遺 伝 子 発 現 解 析 を 行 う 必 要 が あ る ．
今後，LUC
檎15の病理学的意義を一層明確にするには，原発巣と転移巣との比較，あるいはPCNAや駈． 67などの 他の癌細 胞増殖 関連因子 との多重 染色などにより，さらに詳細に検討する必要があると考えられた．
【結語】
LU
CA
15に対 する特 異的モノ クロナー ル抗体 を作成し，胃癌細胞，胃癌組織での染色性を検討し，臨床病理学的な検討を加えた．胃癌組織では，LUC
A15の発現量により，低，中，高発 現の3群に分類 された ．LUC
A15低発 現群は悪 性度が高 く，予 後不良で あり，LUC
A
15は胃癌の転移，浸潤のマーカーになりうることが示唆された．

― 388―

学位論文審査の要旨
主副副査
査
査

教教教授
授授

浅近秋香藤田正．
弘博哲俊学 位 論 文 題 名胃癌組 織におけるLUCA15発現量の臨床病理学的検討
LUCA15は 815個 の ア ミ ノ 酸 よ り 構 成 さ れ る 分 子 量 約 115kDaの 核 内 蛋 白 質で ある 。 組 織間 の 蛋白発現 レベルを 検討した 報告はな く、その 生理的な 機能は
解 明さ れ て いな い が、細胞 増殖抑制 、アポト ーシスに 関与する ことが示 唆されて いる 。 LUCA15の 悪 性腫 瘍 に おけ る 検 討で は 、肺 癌 組 織や 神 経系 腫 瘍 組織 における 報告はあ るが、胃 癌組織に おける報告はない。そこで本研究ではLU(ニA15の胃癌 における 病理学的 意義を調 べるため に、LUくニ A15のモノクロ ナール抗体を 独自 に 作 成し 、 胃癌手術 標本を用 いて癌部 、非癌部 を比較検 討し、臨 床病理学 的解 析 を 行っ た 。症 例 は 北海 道 大 学病 院 にお い て 1990年か ら 2000年ま で の10年 間 に 胃癌 と 診 断さ れ 、胃 切 除 術を 施 行さ れ た106症例 の胃癌手 術標本を 用い た。 LUCA15は核 に 特異 的 に 染色 さ れ た。 非 癌部 の 胃 腺管 上 皮の 核 の 染色 強度をコ ントロー ルとして 、scoreO〜score3の4段 階評価を 行い、低 発現群(score1） と 正 常 も し く は 高 発 現 群 (score2あ るい は score3） の 2群 に大 別 し て臨 床病 理学 的 因 子を 統 計学 的 に 検討 し た 。胃 癌 組織 型を 分化型と 未分化型 の2群に分 類 し た 場 合 、 分 化 型 58症 例 中 5例の み がscore1を 示し た が、 未 分 化型 で は48症 例 中 24例 が scorelを 示 し 有 意 差 を 認 め た 。 胃 壁 深 達 度 で は T2以 深 の58症 例 中 25例 が scorelを 示 し た が 、 Tl症 例 で は 47症 例 中 4例 の み が score1を示 し、 深 達 度の 進 行し て い る腫 瘍 が LUCA15の 発現 が 低 下し て いる 傾 向 を示 した 。さ ら に りン パ 節転移、 リンパ管 侵襲、静 脈侵襲の 検討では 、score1群の陽性率は いずれも 有意に高 かった。 これらを総合評価した進行度では、StageI、IIに占め るscoref群の割 合よりも Stage III、IVに占め る割合は 有意に高かった。
他 病 死 を 除 い た 100症 例 に お い て 、 LUCA15発 現 量 と 累 積 生 存 率 の 関 係 をKaplan‑Meier法 で検 討 した と こ ろ、 scorel群は score2、3群に 比較して 有意に
予 後 不 良 で あ っ た 。 胃 癌 手 術 症 例 106例 中 、 LUCA15が 低 発 現 の 症 例 が 29例
存 在 し 、 そ の う ち 未 分 化 型 は 24例 を 占 め 、 腫 瘍 の 分 化 度 と LUCA15の発 現 量の 関 連 が 示 唆 さ れ た 。 ま た 分 化 度 以 外 に も LUCA15の score1群 は、 リ ン パ節‑ 389―

転移、リンパ管侵襲、静脈侵襲の陽性率と、胃壁深達度でのT2以深の割合が有意に高かった。さらに胃癌の進行度として総合的に評価した際、score1群ではStageIII、IV群が55.2%を占めるのに対し、score2、3群では22.1%と有意に低くかった。LU(ニA15の発現低下が腫瘍細胞の増殖性、悪性度に関与している可能性が示唆された。
口頭発表に際し、副査の秋田教授よりLUCA15の機能にっいての推察、胃癌で のLOHの 有無 、胃 癌と LUCA15の関 連性 にっい ての 質問 があった。これに対し申請者はLU(ニA15の機能は発癌よりも進行癌における転移や浸潤に関わる因子の可能性が高いこと、胃癌での3p21領域のLOHの報告は無いこと、胃癌とLUCA15の関連性が強いものは胃壁深達度、リンパ節転移があることを解答した。次いで副査の近藤教授から免疫染色の判定方法における客観性、LU(ニA15陽性細胞率の違い、LUCA15高発現の機序についての質問があった。これに対し 申請 者は 免疫染 色は 医師 2人で判定し、かつ強拡大3視野における1000個の細胞の核の染色強度を純粋に評価したこと、癌部、非癌部における陽性細胞率 は90%以 上で 差が なか ったこと、発現増加はDNAチェックポイント機構に関わるATM、Chk2等が癌化の早期段階では活性化されているが、進行に伴い不活化するという報告があり、LUCA15も進行の各段階において変化がある可能性があることを解答した。
最後に主査の浅香教授よりLUCA15のポリクロナール抗体とモノクロナール抗体の違い、胃癌におけるLUCA15の作用機序、p53とLUCA15との関連、LUCA15のノックアウト株についての質問があった。これに対し申請者はポリクロナール抗体は特異性、力価共に不十分であり、核以外にも染色されること、LUCA15は胃癌の転移・浸潤に関わっていると考えられること、p53のアポトーシスを増強する可能性があること、ノックアウト株があるとすれば癌の転移や進行が早くなる可能性があることを解答した。
本研究はLUCA15の胃癌組織における検討を行い、LU(ニA15が腫瘍細胞の悪性度、転移・浸潤に関与している可能性を初めて報告したことで高く評価され、今後の胃癌研究への更なる応用が期待された。
審査員一同は、これらの成果を高く評価し、大学院課程における研鑽や取得単位なども併せ申請者が博士（医学）の学位を受けるのに充分な資格を有するものと判定した。

‑ 390一