博士（獣医学）野村直樹
学位論文題名Characterization of influenza vlruSeSiSOlatedfrom
domeStiCduCkSinVietn
amandeValuat
ionofH
9innuenZ
aVlruS
Va
CClne（ベトナムのアヒルから分離されたインフルエンザウイルスの性状およびH
9インフルエンザウイルスワクチンの評価）

学位論文内容の要旨
2009年 4月 お よ ぴ 201
0年 5月 に べ 卜 ナ ム で 収 集 され た600
羽 のア ヒル の気 管お よび 総排泄 腔の スワ ブサ ンプル から 40株 のイン フル エンザAウイルスが 分離された。ウイルスのへマグルチニン（HA)およびノイラミニダーゼ(NA)の 亜型 をそ れぞれ HI
お よび NI試 験により同定した。ウイルス亜型の内訳は、H9N2（26株）、H9N6（1株）、H3N2（1株）、H3N8（1株）、H4N6（7株）、H11N3（ 3株）お よび H
11N9（1株 ）で あっ た。 次に、 40株 全て のウ イルス遺伝子の塩 基配 列を 決定し た。 H
9N2ウイ ルスが特に多く分離されたことから、27株のH9ウイ ルス につい て系 統解 析し た。その結果、これらは韓国およびGl亜系統に区分された。また、1株のH9N2ウイルスは、PB
2遺伝子が韓国亜系統に属し、他 の7分節 の遺 伝子 がGl亜 系統 に属 する 遺伝子 再集 合体 であ ることがわかった 。H9N
2ウ イルス 3株を選 抜し 、カ モ、 ニワト リ、 ブタ 、お よびマウスに対す る病原性を感染実験により調べた。3株をそれぞれ接種した全てのカモの気管または総排泄腔からウイルスが回収された。ウイルスを接種したニワトりの脳、気管、肺および結腸からウイルスは回収されなかったが、抗体が検出された ことから、感染したものと判断された。また、3株のウイルスをそれぞれ接種 したブタの鼻腔スワブからウイルスが回収された。そのうち2株を接種した
マ ウスの肺からウイルスが回収され、1株はマウスの体重を減少させた。ブタに おけ る増 殖が確 認さ れた H
9N2ウイルスは、ブタの間で受け継がれるとヒトへの伝播能を獲得するものと推定されたことから、ブタインフルエンザの疫学調査を継続することが重要である。
次 に、 H
9ウイ ルス がヒ トに 伝播、流行する可能性が考えられるので、不活 化H9ウイ ルスワ クチ ンを 試製 し、効果を評価した。当教室のインフルエン
ザ ウイ ルス ライブ ラリ ーに 保存 されているH9N2ウイルスから22株選抜し、抗原 性と 遺伝 子を解 析し た。 その 結果、 これ ら22株のHA遺伝 子は3つの亜系統に 分類 され た。HI試験 の結 果か ら、韓国亜系統に属するウイルスは、どの系‑ 663―

統 のウイルスに対する抗血清とも広く反応することがわかった。そこで、韓国
亜 系統に属す るDk/Hok/
49/98(H9N2)株をワクチン株として選抜し、不活化全粒 子ワクチンを試製した。マウスを用いてワクチンの効果を評価したところ、
中 和抗体が検 出され、異 なる亜系統 に属するH
K/1073/99(
H9N2)株の攻撃に対し て、体重減 少および肺 におけるウ イルス増殖 を抑制する ことがわかった。
以上の結果から、インフルエンザウイルスライブラリーから試製した不活化 全粒子ワク チンは、H9N2
ウイ ルスによる パンデミッ クの初期段 階における緊 急用ワクチ ンとして有 用であるこ とが示唆さ れた。

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学位論文審査の要旨
主副副副査
査
査
査

教授
教授
教 教 授
准授

喜大高迫

田宏
橋 和 彦
田 礼 人
田 義 博

学 位 論 文 題名

Characterization of influenza viruses isolated fromdomestic ducks in Vietnam and evaluation of H9infiuenza virus vacclne（ベト ナムのアヒルから分離されたインフルエンザウイルスの性状およびH
9インフル エンザウイ ルスワクチ ンの評価）
2009年 4月 お よ び 2010年 5月 に べ ト ナ ム で 収 集 さ れ た 600羽 の ア ヒ ル の 気 管 お よ び 総 排 泄腔の スワ ブ サン プル か ら40株の イ ンフ ルエ ン ザAウイルス が分離された。ウ イルスのへマグルチ ニン（ HA)お よび ノ イラ ミニ ダ― ゼ（NA)の 亜型をそれぞれHIおよびNI試験によ り同定した。ウイル スの亜 型 は 、 H9N2、 H9N6、 H3N2、 H3N8、 H4N6、 H11N3お よ び H11N9が そ れ ぞ れ 26、 1、 1、 1、 7、3
お よび 1株で あ った 。次 に 、こ れら 40株の ウイ ル ス遺 伝子 の 全塩 基配 列 を決 定し た 。H9N2ウ イルス が特 に 多く 分離 さ れた ことから、27株のH9ウイルスに ついて系統解析し た。その結果、これ らは
韓 国 お よ び G1亜 系 統 に 区 分 さ れ た 。 1株 の H9N2ウ イ ル ス は 、 P82遺 伝子 が 韓国 亜系 統 に属 し、他 の 7分 節 の 遺 伝 子 が G1亜 系 統 に 属 す る 遺伝 子再 集 合体 であ る こと がわ か った 。H9N2ウイ ルス
3株を選抜し、 カモ、ニワトリ、 ブタ、およびマウスに対する病原性を感染実験により調ぺた。3株をそれ ぞれ 接 種し た全 て のカ モの気管また は総排泄腔からウ イルスが回収され た。ウイルスを接種 した
ニワ トりの脳、気管、肺 および結腸からウイルスは回収されなかったが、抗体が検出されたことから、感染 したものと判定した 。3株の ウイルスをそれぞれ 接種したマウスの うち、2株 を接種したマウスの肺 から ウ イル スが 回 収さ れ、1株はマウスの体 重を減少させた。3株のウイ ルスをそれぞれ接種 した
ブ タ前 頭 の鼻 腔ス ワ ブか らウ イ ルス が回 収 され た。 ブ タに おけ る 増殖が 確認されたH9N2ウイ ルス
は、 ブタの聞で受け継が れると、ヒ卜への伝播能を獲得するものと想定されるので、ブタインフルエン
ザの 疫学調査を継続する ことは重要である 。
H9ウ イ ルス がヒ ト に伝 播、流行して 、パンデミックを 起こす可能性が考 えられるので、不活 化H
9ウイ ルスワクチンを試製 し、効果を評価した。当教室のインフルエンザウイルスライブラリーに保存され て い る H9N2ウ イ ルス から 22株選 抜し 、 抗原 性と 遺 伝子 を解 析 した 。そ の 結果 、こ れ ら22株のHA遺 伝 子 は 3つ の 亜系 統 に分 類さ れ た。 H｜試 験の 結 果か ら、 韓 国亜 系統 に 属す るウ イ ルス に対する 抗血清は、どの系統 のウイルスとも広 く反応することが わかった。そこで、 韓国亜系統に属する
Dk/Hok/49/98（H9N2)株をワクチン株と して選抜し、不活 化全粒子ワクチン を試製した。このワ クチン を接 種 した マウ ス は、 中和抗体を産 生し、異なる亜系 統に属するH K/107 3/99（H9N2）株の 攻撃によ る体童減少および肺 におけるウイルス 増殖を抑制するこ とがわかった。以上 の結果は、インフルエ ンザ ウ イル スラ イ ブラ リーから選抜 したウイルス株で 試製した不活化全 粒子ワクチンは、H9N2ウイル スによるパンデミッ クの初期段階にお ける緊急用ワクチ ンとして有用である ことを示している。
審 査貝ー同は、野村直 樹氏の上記論文を 慎重に審査した結 果、北海道大学大学 院獣医学研究科規程第6条の規定に よる本研究科の行 う博士論文の審査に 合格と認めた。
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