博 士 （獣 医 学 ） 川森 文 彦

学位論文題名静岡県にお ける恙虫病 の疫学と恙虫病リケッチアの生態に関する研究
学 位 論 文 内容 の 要 旨恙 虫病 は ツ ッガ ム シに よ っ て媒 介 され る ヒ トの り ケッ チ ア 性熱 性 感 染症で東 ア ジ アや 東 南ア ジ ア など に 広 く分 布 して い る 。病 原 体で あ る Riclzet tsia
tSILtsugamL
LSん｛には，これまで幾っかの血清型が知られているが，我が国では ， Gilliam， Karpお よ び Katoの 3血 清 型 株 が 恙 虫 病 の 血 清診 断 用の 標 準 株と し て 用い ら れて き た 。し か し ，最 近 ，国 内 の 患者 か らKawasaki株 ， Kuroki
株 ， Shimokoshi株 な ど標 準 株 とは 抗 原性 の 異 なる り ケ ッチ ア が相 次 い で発 見
さ れ た 。一 方 ，R． tsutsugcunushiの 血清型は 媒介ツツ ガムシの 種類と関 連して い る こと が 知ら れ て いる 。 静 岡県 で は， 媒 介 ツッ ガ ムシ と し て， こ れま でタ テ ツ ッ ガ ム シ LeDtotrombidium scutelえ areと フ 卜 ゲ ツ ッ ガ ム シ LeDto‑trombidiumbaui〔 h鳳 の2種類 が 採 取さ れ てお り，同時 に血清型 の異ナょ る幾
っ か の りケ ッ チア が 存 在す る こ とが 示 唆さ れ て いる 。 そこ で ， 著者 は この 地
域 に お いて 恙 虫病 患 者 とツ ッ ガ ムシ の 地理 的 分 布な ら びに 季 節 変動 を 調査 す
る と と もに ， 患者 ， 野 ネズ ミ お よび ッ ツガ ム シ から の りケ ッ チ ア分 離 を行 い媒 介 ツ ｀ソ ガ ムシの 種類と分 離株の血 清型との 関係を検 討した。 また，従来 の血 清 診 断 法 の 代 わ り に Polymerasechainreaction（ PCR） 法 を 早期 確 定 診断法 として導 入し，実 用化を試 みた。
静 岡 県 に お け る 1982年 か ら 1991年 まで の 10年 間 の恙 虫 病届 出 患 者数 は 151
名 で あ っ た 。 こ の 内 147名 の 血 清に っ いて 標 準 3株 （Gilliam， Karp，Kato）

を月jしヽた間接螢光抗体法（Immunofluorescenceantibodyassay:IFA)により抗体測定を実施したところ，110症例が恙虫病と確定診断された。抗体陽性患者は県東部から伊豆にかけてと西部の浜名湖周辺で検出されたが，特に富士山東山麓(72.7％）に偏在する傾向がみられた。また，本病の大半の症例は10〜12月(82.7％）に集中していた。さらに，県内で捕獲したアカネズ
ミADodemus sDeciosus 385頭について各脾臓材料からのマウス腹腔内接種法によるりケッチア分離ならびにIFAによる血清抗体価の測定を実施したところ，リケッチア分離率は28.6％，また抗体保有率は37.6％に達した。分離率と抗体保有率のいずれも富士山東山麓，県東部および伊豆で高く，これらの地域がR． tSLLtsugomushiの濃厚汚染地であることが判明したが，患者は富士山東山麓に集中して発生し，患者の地理的分布とは一致しナょかった。
野ネズミ484頭にっいてツツガムシ幼虫の寄生状況を調べたところ，恙虫病媒介種であるタテツツガムシおよびフトゲツツガムシを含む37，942匹，4属11種の寄生が確認された。夕テツッガムシの大半は恙虫病患者の集中する富士山東山麓で採取されたが，フトゲツツガムシはアカネズミにおけるりケッチア分離率の高い県東部から伊豆にかけて多数認められ，特に伊豆において寄生数が著しく多かった。これらの成績と患者の分布ナょらびにアカネズミにおけるりケッチアの感染状況を総合すると，フトゲツッガムシはアカネズミに対するりケッチアのべクターとして，またタテツッガムシはヒ卜に対するべクターとして重要であり，特に富士山東山麓ではタテツッガムシに基づく恙虫病が多発していると推測された。
富士山東山麓の土壌サンプルからTullgren装置によルツッガムシ幼虫を採取して分類したところ，6属16種に同定された。フ卜ゲツツガムシはこの山麓で広範囲に採取されたが，最も密度の高かったのは大型水田の畦畔であった。一方，夕テツ｀ソガムシは束富士演習場に多く存在するススキのまばらに生えた砂礫土壌地域で多数採取された。この火山性砂礫（1707年の富士山の―556−

噴 火に 由 来） は 富 士山 の 東方 に の み大 量 に 堆積 し たこ と が 報告 さ れて いるので ，こ の ようナ ょ土壌の 性状がタ テツッガ ムシ生息 の好適環境 となり， 本種がこの地 域に偏在 する原因と なったも のと思わ れる。
富 士 山 束 山 麓 の 患 者 から 分 離さ れ た R． tSILtSILgamusIiiの8株に っ い て
G川 iam， Karp， Kato， Kawasakiお よ び Kurokiの 各 株 に 対 する 型 特 異的 単 ク
口 ー ン 性 抗 体 な ら び に モ ルモ ッ ト免 疫 血 清を 用 いて ， IFAによ り 抗 原性 を 検討 し た 。 そ の 結 果 ， 2株 は Karp型 ， 4株 は Kawasaki型 お よ び 2株 は Kuroki型に 属す る ことが 判明した 。ナょお ，Karp型とKawasaki型 の分離株 の大半は， 標
準 株と は 多少抗 原性が異 ナょって いること が示唆さ れた。また ，Kawasaki型また は Kuroki型 に 分 類 さ れ た 6株 はマ ウ スに 対 し 病原 性 を示 さ ず ，Kawasaki株
お よ び Kuroki株 と 同 様 に 弱 毒 株 で あ る こ と が 示 唆 さ れ た 。
富 士 山 東 山 麓 に お け る 恙 虫 病 患 者 (24株 ） ， ア カ ネ ズ ミ (30株 ） お よび 寄
生 前の ツ ｀ソ ガ ム シ幼 虫 （夕 テ ツ ッガ ム シ 2株， フ ト ゲツ ッ ガ ムシ 3株） から分 離 さ れ た 計 59株 の り ケッ チ アに つ い て， Gilliam，Karp， Kato， Kawasaki
お よ び Kurokiの 各 株 に 対 す る型 特 異的 単 ク 口ー ン 性抗 体 を 用い て ， IFAに より 血清 型 別を 試 み た。 そ の結 果 ， 分離 株 は Karp型 が 35株 ， Kawasaki型が20株
お よ び Kuroki型 が 4株 の 3血 清 型 に 分 類 さ れ た 。 Kawasaki型 とKarp型 の り ケッ チア は ，それ ぞれ，夕 テツ｀ソ ガムシと フトゲツ ッガムシか ら分離さ れた。
こ れ ら 2種 類 の 血 清 型 の り ケ ッチ ア 株の 分 離 され た 患者 発 生 地と ア カネ ズ ミの 生息 地 の分布 ならびに それぞれ のツ｀ソ ガムシが 多数生息す る地域が ほぼ一致 して い た。 さ ら に， Kawasaki型 株が 分 離 され た 患者 は 早 秋に 集 中し ，またKarp型 株感 染 患者 は 晩 秋に 発 生の ピ ー クが 認 めら れ た 。こ れ ら のこ とから ，Kawasaki型とKarp型 のりケッ チアのべクターは，それぞれ，夕テ｀ソ｀ソガムシと フト ゲ ツ｀ソ ガムシで あるとい う結論が 得られた が，Kuroki型のり ケッチア
は 4名 の 患 者 か ら 分 離 さ れ た に過 ぎ ず， ベ ク ター の 検討 に は 至ら な かっ た 。
県 内 の恙 虫 病 患者 36名の 血 清に っ い て，Gilliam， Karp，Kato，Kawasaki，‑557―

KurokiおよびOta（静岡県の患者から分離されたKarp型の株）の各株との反応性をIFAにより検討した。その結果，この地域における恙虫病起因リケッ
チアの大半はKa
wasaki，KurokiおよびOtaの各株のいずれかに属する抗原性を保有すると推測された。これらの反応性が認められた症例の地理的分布と発生時期ならびにツツガムシの採取状況や分類成績を総合すると，夕テツツ
ガムシは主に富士山東山麓においてKa
wasaki型株を，またフトゲツッガムシは県内の広域でOta
株類似のKarp型株を，それぞれ媒介していることが推測された。
Gilliam株の型特異的抗原蛋白の遺伝子配列に対応するプライマーを用い
nested PCR法を試みたところ，Gilliam，Karp，Kato，Kaw
asaki，Kuroki
およびSh
imokoshiのいずれの株からもR．tsutsugamusん｛に特異的なDNAが増幅されたぃさらに，これら6血清型株の増幅産物にっいて制限酵素（HんaI，SfaNI）による消化を行ったところ，これらはそれぞれ独立した切断パターンを示した。そこで，このPCR法で感染初期の患者血液および流行地由来のタテツツガムシ中からのR． tsutsugamushi DNAの検出を試みたところ，リケッチア特異DNAの増幅が認められ，しかもその増幅産物の制限酵素による切断パターンから推定されたりケッチアの血清型は，血清学的に同定された感染リケッチアの血清型と一致した。したがって，このP
CR法は恙虫病患者の早期確定診断法として優れているだけでなく，ヒトや野性動物の保有するり ケッ チア の血清 型を 同定 ，分類 する 上で も有 用であ ると 判断 された。

学 位 論文 審 査 の 要旨

主査 教授
副査 教授
副査 教授
副査 助教授

橋本信夫
神谷正男
小沼 操
高島郁夫

学 位 論 文 題 名静 岡 県 に おけ る 恙 虫 病の 疫 学 と恙 虫 病 リ ケ ッ チ ア の生 態 に 関 する 研 究

恙虫病tまツツガムシによって媒介されるヒトのりケッチア性熱病であって、わが国でtま古くから極めて危険な風土病として知 られ 、 これ ま で数 多くの病 原学的研究 がある。
申請者tま恙虫病の流行地において媒介ツツガムシと野ネズミの生 態調査 ならび に病 原リケ ッチア の分離と型別を行い、本病の 発 生原 因 にっ いて疫 学的解 析を試 みる ととも に、PCRを 用いた 恙 虫病 の 早期 診断法 の開発 を行っ た。 本論文 は邦文 101ベージからなり、参考論文11編を付している。
静 岡県 で は1982年か ら1991年まで の10年間に 110名の恙 虫病患者が発生した。これらの多くCま10月一12月に集中し、ま′こ富士山 束山麓 に偏在 して いた。 一方、 県内で捕獲されたアカネズ
ミで は恙虫 病リケ ッチ アの分 離率と 抗体保有率がともに県中央部・西部より富士山東山．麓を含む県東部で著しく高かった。またツ ツガム シの野 外調 査では 県東部 にフトゲツツガムシが広く分布 するの に対し 、富 士山束 山麓に はタテツツガムシも濃厚に生息してい′こふ
そ こで恙 虫病患 者、 アカネ ズミと ツツガムシから分離された
合計 59株の りケッ チア にっい て、単 クローン性抗体を用いて血清型別を行ったところ、これらCjKarp、KawasakiとKurokiの3型に分類された。゛しかし、患者の発生地域ならびに感染野ネズミ とツツ ガムシ の種 類や分 布など との対応から、Kawasaki型

の株 が ヒト ヘの吸血暗好性の 強いタテツツガム シに多く保有ぎれ 、 また Karp型の 株はヒトより野ネ ズミに吸血性の強 いフトゲ ツツ ガムシ に保有ぎれていることが判明し′こ。
次 に、 恙虫病 の早期診断を目的 として2段階 PCR法を用いて
恙虫 病 リケ ッチ ア のDNAの 増幅 を 試み た。 す なわち 、感染初期の患者血液から本法により高率に特異的DNAが検出され′こ。
また 増 幅産 物を制限酵素切断 法により型別した ところ、単ク
ロー ン 性抗 体による恙虫病リ ケッチアの血清型 別の成績と一致し 、 早期 診断 法と して の 本法 の実 用性 が証明ぎれ た。
こ れら の知見 は恙虫病の予防法 を確立する上で貢 献するところ が 大き い。よって審査員 一同は川森文彦氏 が博士（獣医学）の学位を受ける資格を有するものと認める。