博士（獣医学） 李賢 敬

学 位 論 文 題 名Experimen
tal studies for attra
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抗 体 産 生 細 胞 の 脳 内 誘 導 に よ る 神 経 向 性 ウ ィ ル ス 感 染 症 制 圧 の た め の実 験 的 研 究 ）学 位 論 文 内 容 の要 旨
The inductio
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bodies (Abs) production
within the central nervous system (CNS) is regarded to be critical to prevent thetransneural spread of viruses. Previo
us studieshavebeenshow
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al (e.g.,intracereb
ralorsubarachnoid) immunization. However, the mechanism of Abs induction has not been wellunderstood. Therefore, CNS humoral immune response, especially antibody secre
tingcells(ASCs) kno
wn asplasma cells w
ere focused inthisstudy.
In the first experiment, the immune responses in both the CNS and lymphoid organs
were investigated following intracerebral (lC) immunization against pseudorabies virus(PRV) in mice. lC immunized mice had significantly higher PRV‑specific serum Abs andneutralizing Abs titers than subcutaneously (SC) immuniz
ed mice. T
he spleenand cervic
allymph nodes of lC immunized mice produced significantly more PRV‑specific Abs thanthat of SC immunized mice. The mRNAs of some chemokines and cytokines werepredominantly detected in the brain of IC immunized mice. Further,ASCswereinfiltrat
edin intrathecal region of IC immunized mice, and these mice (86%) survived more than SC.
immunized mice (33%) by suppression of virus propagation, when PRV was inoculated
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the chemokine as an inducer of peripheral ASCs into the CNS. CXCL12 and cocktail
chemokine (mixture of CXCL9, 10, 12 and 13) attracted antigen‑specific ASCs moststrongly, compared to CXCL9, 10 and 13 in in vitro chemotaxis assay and in vivo IC
chemokines injection experiment. CXCL12 and cocktail chemokine injections afterintra
perit
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In summary, lC immunization induced more effectiveimmune responses against aneurotropic viral infection by attracting ASCs into theCNS t
hat is par
tly u
ndert
akenbychemokine expression, suggesting the potentials of IC immunization and chemokine
treatment as preventive or therapeutic tools against the diseases caused by transn
euralinfec
tionof neurotr
opicvirus
es.

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学位 論文審査の要旨
主副副副

査
査
査
査

教
教
教
教

授
授
授
授

梅 村喜 田澤
堀 内孝
洋基司
宏
文
広学 位 論 文 題 名Experimental studies for attracting antibody‑secreting
cells into the CNS to control neurotropic viral infections（抗体産生細胞の脳内誘導による神経向性ウイルス感染症制圧のための実験的研究）
神経向性ウイルス感染症の制圧のためには、中枢神経系内の効果的な免疫反応、特に抗体の誘導が重要である。以前の研究により、実験的な鞘内免疫（脳内またはクモ膜下腔への抗原の投与）によって脳脊髄液中に抗原特異抗体が誘導されることが明らかにされた。しかし、その詳細なメカニズムは不明である。そこで、本研究はマウスを用いて鞘内免疫後の中枢神経系の液性免疫反応、特に抗体産生細胞の反応を解析すること、また神経向性ウイルス感染に対する効果を調べることを目的とした。
初めに、不活化pseudorabies virus (PRV)を脳内免疫した後の中枢神経系およぴりンパ系器官の反応を調べた。脳内免疫群で皮下免疫群に比べて有意に高い抗原特異的な血清抗体およびウイルス中和抗体が検出され、また脾臓と頚部リンパ節で高い抗原特異的な抗体産生が認められた。脳内免疫群マウスの脳ではケモカイン(CXC
L9，10，12，13)とサイ卜カイン(BAFF)の遺伝子発現が高く、抗体産生細胞の脳内浸潤が観察さ れた。さらに、致死量のPRVを脳内接種した結果、脳内免疫群マウスは皮下免疫群マウスに比べ有意に高い生存率を示した。次に、末梢組織の抗体産生細胞を中枢神経系内へ誘導するため、脳内への各種ケモカイン投与による効果を検討した。腹腔内に免疫したマウスの脾臓から分離した細胞を用いて、面ガなりのケモカイン走化性試験、さらにケモカインを免疫マウス脳内へ投与するむガ V
O実験を行なったと
ころ 、CXCL12とカ クテ ル・ ケモ カイ ン(CXCL9，10，12，13)に対して強い走化性が認められ、 これ らの細胞は抗原特異的な抗体産生を示 した。また、免疫したマウスにCXCL12またはカクテル・ケモカインを脳内投与した後に、致死量の狂犬病ウイルスを脳内接種したところ、対照群に比べて有意に高い生存率を示した。本研究は、鞘内免疫によって抗原特異的抗体産生細胞を脳内に誘導できること、神経向性ウイルスの脳内増殖を抑制できること、また抗体産生細胞 の 脳 内 浸 潤 に は ケ モ カ イ ン が 重 要な 役割 をす るこ とを 実験 的に 証明 した 。
これらの成績は、鞘内免疫やケモカインの投与による抗体産生細胞の脳内誘導によって、神経向性ウイルス感染症に対する新しい予防および治療への応用が可能であることを示唆してい る。 よって、審査委員一同は、上記博士論 文提出者李賢敬氏の博士論文は、北海道大学大学院獣医学研究科規程第6条の規定による本研究科の行う博士論文の審査等に合格と認めた。
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