福岡県保健環境研究所年報第40号，90-93, 2013短報
2012/13シーズンに分離されたインフルエンザウイルスの抗原性及び系統解析
吉冨秀亮・石橋哲也・中村朋史・世良暢之
福岡県における2012/13シーズンのインフルエンザ流行の原因ウイルスはインフルエンザウイルス
A/H3亜型及びインフルエンザウイルスB型であった。同シーズンに当所で分離されたインフルエンザ
ウイルスA/H3亜型67株及びインフルエンザウイルスB型1株について抗原性解析を行った。HI試験の結果、解析されたインフルエンザウイルスA/H3亜型及びインフルエンザウイルスB型の大半はワクチン類似株であることが推察された。さらに詳細な系統解析を行った結果、インフルエンザウイルスA/H3亜型はワクチン株A/Victoria/361/2011と同じサブクレード3Cであったが、インフルエンザウイルスB型はワクチン株B/Wisconsin/1/2010と異なるクレード3であった。
［キーワード：2012/13シーズン、インフルエンザ、HA試験、HI試験、系統解析］
１

はじめに

エンザウイルス同定用キット（A/California/7/2009、

福岡県における2012/13シーズンのインフルエンザは、A/Victoria/361/2011、B/Wisconsin/1/2010（Yamagata系

2012年第49週以降徐々に報告数が増加し、2013年第4週か統）、B/Brisbane/60/2008（Victoria系統））を用いて血球ら第5週にかけてピークを迎えた。感染症発生動向調査事凝集抑制（HI）試験を行った。HA試験及びHI試験には 0.75%

業において搬入されたインフルエンザ疑い症例について、モルモット血球を用いた。

当所はリアルタイムPCR法及びMDCK細胞を用いた分離培養法によってインフルエンザウイルスの同定を行った。その

２・３

系統解析

結果、インフルエンザ流行の原因ウイルスはインフルエン

系統解析は当所で分離されたインフルエンザ株のうち、ザウイルスA/H3亜型及びインフルエンザウイルスB型であ感染研において塩基配列を解析されたインフルエンザウった。そこで、インフルエンザ流行の実態解明を目的に、

イ ル ス A/H3 亜 型 2 株 （ A/FUKUOKA/1/2012 及 び A/FUKUOKA

抗原性及び系統解析を行い、分離培養法によって得られた/2/2012）及びインフルエンザウイルスB型1株（B/FUKUOKA

インフルエンザ分離株と2012/13シーズンに用いられたイ/27/2013）のHA遺伝子領域の系統樹を塩基配列解析ソフト

ンフルエンザワクチン株との比較を行った。

ウェアMolecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA)
version5 を用いて作成することにより行った。分離株及２び参照株のHA遺伝子領域の塩基配列は、インフルエンザ遺材料と方法

２・１

伝子情報バンクであるThe Global Initiative on Sharing

材料

2012 年 12 月から 2013 年 2 月に感染症発生動向調査事

All Influenza Data (GISAID)2)を通して入手した。インフ業において搬入されたインフルエンザ疑い症例検体につルエンザウイルスA/H3亜型分離株は1023bp、インフルエン

いて MDCK 細胞を用いた分離培養を行い、分離できたイン

ザ ウ イ ル ス B 型 分 離 株 は 1038bp に つ い て 、フルエンザウイルス A/H3 亜型 67 株及びインフルエンザウ

kimura-2-parameter法で塩基配列を整列し、近隣結合法

イルス B 型 1 株を材料とした。分離の確認はエスプライン(NJ法)により系統樹を作成した。

インフルエンザ（富士レビオ社）により行った。分離株数の推移は図 1 に示す。
２・２

抗原性解析

抗原性解析は合計 68 株の分離株について、国立感染症研究所（以下、感染研）が示す「インフルエンザ診断マニ
ュアル（第２版）」1)に準拠し、赤血球凝集（HA）試験により分離株の力価を測定後、感染研から配布されたインフル
図1.インフルエンザウイルス分離株数の推移

福岡県保健環境研究所（〒818-0315 太宰府市大字向佐野 39）)-90-

表 1. インフルエンザウイルス同定用キットの HI 試験結果
標準株
A/California/7/2009
A/Victoria/361/2011
B/Wisconsin/1/2010
B/Brisbane/60/2008

抗A/California/7/2009
1280<10<10<10抗血清
抗A/Victoria/361/2011
抗B/Wisconsin/1/2010<10<105120<10<10160<10<10抗B/Brisbane/60/2008<10<10<10160

表 2. インフルエンザウイルス A/H3 亜型分離株の HA 試験結果

分離株数３<2292546

HA価/50µL （0.75%モルモット血球）81632642042112802561

ルス B 型分離株である B/FUKUOKA/27/2013 の解析を行った

結果及び考察
感染研より配布されたインフルエンザウイルス同定用

結果、B/FUKUOKA/27/2013 はクレード 2 に分類された。

キットのホモ価測定を行った結果、A/California/7/2009

2012/13の HI 価は 1280 倍、A/Victoria/361/2011 の HI 価は 5120

B/Wisconsin/01/2010 は ク レ ー ド 3 に 分 類 さ れ 、倍、B/Wisconsin/1/2010 の HI 価は 160 倍、B/Brisbane/

B/FUKUOKA/27/2013 とは異なるクレードであったことから、60/2008 の HI 価は 160 倍であった(表 1)。

B/FUKUOKA/27/2013 の塩基配列はワクチン株に類似してい当所で分離されたインフルエンザウイルス A/H3 亜型分

シ ー ズ ン の ワ ク チ ン 株 で あ るなかったことが明らかになった。

離株 67 株の HA 試験結果を表 2 に示す。HA 試験の結果、抗原性解析及び系統解析の結果から、福岡県におけるインフルエンザウイルス A/H3 亜型分離株のうち、HI 試験

2012/13 シーズンのインフルエンザウイルス A/H3 亜型はを行うことが可能な 8HA 価/50µL を有する分離株は、67 株

抗原性及び塩基配列がワクチン株 A/Victoria/361/2011

中 27 株 (40％)であった。インフルエンザウイルス B 型分に類似し、インフルエンザウイルス B 型はワクチン株

離株 1 株の HA 価は 256 倍であり、合計 28 株について HI

B/Wisconsin/1/2010 と抗原性は類似しているが塩基配列試験を行った。

は類似していないことが明らかになった。しかし、今回のHI試験の結果を表3に示した。インフルエンザウイルス

報告においてインフルエンザウイルス A/H3 亜型分離株のA/H3亜型離株のHI価は640倍が1株、1280倍が12株、256067 株中 40 株（60%）は 8HA 価/50µL 未満であり、HI 試験倍が8株、5120倍が6株であった。ワクチン株A/Victoria/を行うことができなかった。今後の課題は分離株総数を増361/2011（ホモ価 5120倍）と比較して抗原変異の目安とやすこと、及び 8HA 価/50µL 以上の分離株を安定的に分離なる8倍以上の差を示したのは1株(FS171)であり、ワクチする方法を構築することである。また、インフルエンザ Bン類似株は27株中26株（96%）であった。さらに、インフ型は 3 月までに 1 株しか分離されなかったため、B 型につルエンザウイルスB型分離株1株は抗B/Wisconsin/1 /2010

いては詳細な傾向を明らかにすることはできなかった。4に対しHI価160倍であったことからYamagata系統であるこ月以降に分離されたウイルス株と併せて再評価を行う必とが分かった。さらに、ワクチン株B/Wisconsin/1 /2010

要がある。

はホモ価160倍であったことから、インフルエンザウイル
スB型分離株1株はワクチン類似株であることが明らかに４まとめなった。当所における抗原性解析の結果は、感染研におけ福岡県における2012/13シーズンのインフルエンザウイる全国の地方衛生研究所において分離されたインフルエ

ルスA/H3亜型は抗原性及びHA遺伝子領域がワクチン株

3)

ンザウイルス株の抗原性解析の結果 と類似していた。

A/Victoria/361/2011に類似していたことが分かった。ま次に、インフルエンザウイルス A/H3 亜型分離株の系統

た、インフルエンザウイルスB型はワクチン株解析の結果を図 2 に、インフルエンザウイルス B 型分離株

B/Wisconsin/1/2010と抗原性は類似していたがHA遺伝子の系統解析の結果を図 3 に示した。インフルエンザウイル

領域は類似していないことが分かった。

ス A/H3 亜 型 分 離 株 で あ る A/FUKUOKA/1/2012 及 び
A/FUKUOKA/2/2012 はサブクレード 3C に分類された。

４2012/13 シーズンのワクチン株 A/Victoria/361/2011 もサ
ブクレード 3C に分類されたことから、A/FUKUOKA/1/2012

謝辞
調査にあたり、検体採取にご協力いただいた医療機関及び各保健福祉環境事務所の関係各位に深謝致します。

及び A/FUKUOKA/2/2012 の塩基配列はワクチン株に類似していたことが明らかになった。同様にインフルエンザウイ-91-表 3. インフルエンザウイルス分離株の HI 試験結果
分離株継代数

FS133
FS134
FS127
FS136
FS137
FS139
FS145
FS152
FS140
FS171
FS172
FS175
FS179
FS183
FS184
FS185
FS186
FS182
FS190
FS210
FS216
FS239
FS241
FS242
FS248
FS249
FS250
FS232

#1
#1
#2
#2#2#2
#1
#1
#2
#2
#2
#2
#2
#2
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#2
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#1
#2
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#1
#1

抗血清
抗A/California/7/2009 抗A/Victoria/361/2011 抗B/Wisconsin/1/2010<102560<10<102560<10<101280<10<101280<10<101280<10<105120<10<101280<10<101280<10<101280<10<10640<10<105120<10<101280<10<102560<10<105120<10<101280<10<101280<10<101280<10<105120<10<105120<10<105120<10<10<10160<102560<10<101280<10<102560<10<102560<10<101280<10<102560<10<102560<10抗B/Brisbane/60/2008<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10<10A/HYOGO/3056/2012

A/FUKUOKA/2/2012*
A/EHIME/37/2012
A/OKINAWA/60/2012
A/OSAKA/63/2012
A/SAPPORO/125/2012
A/Hong Kong/15/2013
A/New York/60/2012
A/YOKOHAMA/155/2012

3C

A/FUKUOKA/1/2012*

A198S,
N312S
V223I

S45N,
T48I

N145S
A/TOKYO/12003/2012
A/SAITAMA/89/2012
Q33R,
N278K
A/YAMAGUCHI/72/2011A/KAGOSHIMA/3/2012
A/Hawaii/22/2012
A/Texas/50/2012

A/Victoria/361/2011**

3B

A/MIE/31/2011

A/Ohio/02/2012
A/Ghana/FS-12-758/2012
A/Arkansas/05/2012
A/Virginia/09/2012
A/Maryland/15/2012
A/Brisbane/11/2010
A/Brisbane/299/2011
A/CANBERRA/1001/2012
A/Austria/710638/2012
A/Alabama/03/2011
A/NIIGATA/403/2009
A/Perth/16/2009
A/Hunan-Beihu/1313/2009

3A

T212A
K158N,
N189K

7

42K173Q

1HK2000

A/BRISBANE/10/2007
Uruguay/716/2007
0.002

図 2. インフルエンザウイルス A/H3 亜型分離株の系統解析結果（*：福岡県において分離した株、**：2012/13 シーズンのワクチン株）-92-65B/Florida/4/2006

1
B/HYOGO/4002/2012
B/SAKAI/36/2011

B/Wisconsin/01/2010**

N202S

3

B/Hubei-Wujiagang/158/2009
B/SAKAI/68/2009
B/Nevada/15/2012

S150I,N165Y,S229D

B/Texas/06/2011
B/Bangladesh/3333/2007
B/YAMAGATA/263/2012
B/HIROSHIMA/35/2012

K88R

B/Florida/57/2012
B/England/706/2012
B/Massachusetts/02/2012

P48K,T181A

B/FUKUOKA/27/2013*

2

B/KANAGAWA/37/2011

P108A,S229G

B/Brisbane/36/2012
B/Sendai-H/114/2007

0.002

図 3. インフルエンザウイルス B 型分離株の系統解析結果（*：福岡県において分離した株、**：2012/13 シーズンのワクチン株）

文献1) 感染研：インフルエンザ診断マニュアル（第２版）
2) GISAID , http://platform.gisaid.org/epi3/start3) IASR＜速報＞国内インフルエンザ流行株の抗原性解析
および薬剤耐性株の検出状況（途中経過）,
http://www.nih.go.jp/niid/ja/flu-m/flu-iasrs.html（英文要旨）

Serologic and genetic characterization of influenza virus in 2012/13 in Fukuoka
Hideaki YOSHITOMI，Tetsuya ISHIBASHI，Tomofumi NAKAMURA, and Nobuyuki SERA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
We performed serologic analysis by Hemagglutination inhibition test. Among the isolates, 96% of influenza virus type A/H3
and influenza type B were similar to vaccine strain of 2012/13 season. From the results of phylogenic analysis, epidemic influenza
virus type A/H3 was classified into clade3C, same clade with vaccine strain. On the other hand, epidemic influenza virus type B
was classified into clade3, different clade which vaccine strain located.
[Key words ; 2012/13 influenza season, Hemagglutination inhibition test, Phylogenetic analysis ]-93-