第5部

アニコムの取組み［アニコムの取組みについて］
アニコムグループでは、アニコム先進医療研究所株式会社を中心に、2016 年から本格的な腸内細菌に関する研究を、2017 年からは遺伝病に関する研究を行っている。これらの研究と保険金請求データから得られる疾患情報とを組み合わせて、病気との関連性を明らかにしていくことを目指すものである。
また、富士フイルム株式会社とアニコム ホールディングス株式会社が 2016 年に設立した合弁会社のセルトラスト・アニマル・セラピューティクス株式会社では、動物の再生医療に関する実用化を進めている。
これらはいずれも、「これまで治せなかった病気を治す」こと、そして最終的には「予防」に資するための取組みである。本稿では、それぞれの研究の概要についてご紹介する。

第部 アニコムの取組み

x

5.

OurInitiatives

WhitePaperon

HouseholdAnimals

201855

第5部 アニコムの取組み

1. 遺 伝 的 な 病 気 リ ス ク の な い 世 界 を 目 指 し て
ヒトのかけがえのない使役動物（パートナー）
として、それぞれのフィールドに合わせて進化してきた「犬種」。その歴史がある一方で、病的な遺伝子も色濃く受け継がれることがある。ヒトの遺伝病対策は、倫理上の問題等もあり困難なことも多いが、ペットの遺伝病は、ブリーディング等により撲滅できる可能性がある。アニコムグループでは、生まれながらに病気のリスクを抱えるペットを少しでも減らすため、また原因を突き止めることで治療に役立てるために、ペットの遺伝子に関する研究を進めている。

イヌとネコの遺伝子に関する研究

遺伝構造の品種間・集団間比較

アニコム先進医療研究所株式会社では、2018 年 9 月に開催された

SNP の Quality Check を PLINK1.9（Changetal.2015）により行っ

日本動物遺伝育種学会 第 19 回京都大会において「集団ゲノム解析たのち、MEGAX（Kumaretal.2018）の Neighbor-joining method（※）
」というタイによるイヌおよびネコの近交度と遺伝構造の解明を用いて各個体の系統関係を、
ADMIXTURE（Alexanderetal.2009）

トルで、日本国内に住んでいるイヌとネコの遺伝子に関する研究成を用いて遺伝構造を推定した。

果を発表した。これまでわが国において、イヌ・ネコに関してマクその結果、イヌではビーグル、ボーダー・コリー、ゴールデン・ロ的に遺伝的解析を行った研究事例は少ない。今回、両種においてレトリーバー、柴の４品種の国内の集団で、品種独自の遺伝構造を国内外の集団に由来するゲノム情報を用い、近交度と遺伝構造を明もつことがわかった（図１）。ネコではスコティッシュ・フォール

らかにすることを目指した。

ド、マンチカンは他の品種と共通した遺伝的特徴を多くもつ一方で、ゲノムワイドな解析を行うため Illumina プラットフォームのシンガプーラ、ソマリなどの独自の遺伝構造をもつ品種も存在した

一 塩 基 多 型（SNP） ア レ イ（CanineHD 170K Whole-Genome（図２）。イヌとネコで遺伝構造を比較した場合、ネコにおいて異品

Genotyping BeadChip および Feline 63K iSelect DNA array）お種間で共通した遺伝的特徴をもつ割合がより大きかったが、これはよび iscan システムを用い、日本国内と海外の集団のイヌおよびネ交配環境の違いによるものと考えられる。

コの遺伝情報を大規模に調査した。サンプルは非侵襲的に採取した口腔内スワブを用いた。

近交度の品種間・集団間比較
遺伝プールの狭さ、血の濃さに関する指標として、近交度（F）
PLINK1.9 を用い算出し、F 値に対する品種および集団の効果を２要因分散分析により検討した。その結果、F 値はイヌにおいては集、品種間差がみられた一方（P < 0.01）、団間差がみられず（P = 0.90）。さらに、ネコでは品種間、集団間差の両方がみられた（P < 0.01）
18 犬種を対象に、得られた F 値を箱ひげ図にプロットした（グラフ１）。犬種ごとに差が認められることに加え、当然であるが混血犬がもっとも低い近交度を示すことが判る。
また、イヌの各品種における平均近交度と、保険金請求データをもとに算出した平均保険金請求額との相関関係を調査した（グラフ、年齢を２）。０歳においては認められなかった相関が（r 2 =0.024）重ねるごとに認められ、近交度が高い（遺伝プールが狭い）品種において、平均保険金請求額が高い傾向が認められ、５歳での相関係
iscan システム数はr 2 =0.943 となった。

0.70.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.10
ヨークシャー・テリア

シー・ズー

2018

柴Animals

パグHousehold

トイ・プードルon

イヌの品種ごとの近交度

ポメラニアン

Paper

10

パピヨン

White

混血犬︵体重 ㎏ 未満︶

56

ミニチュア・
シュナウザー

グラフ１

ミニチュア・
ダックスフンドマルチーズ

ジャック・ラッセル・テリア

ゴールデン・レトリーバー

フレンチ・ブルドッグ

ウェルシュ・コーギー・
ペンブロークチワワ

キャバリア・
キングチャールズ・
スパニエル

ビーグル

–0.1

Our Initiatives

5部 アニコムの取組み

Ancestry

1.0
0.8
0.6
0.4
0.20.0

Ancestry

第図1

イヌの遺伝構造の品種間・集団間比較

図２0歳

60,00050,00040,00030,00020,000
10,000

○

○×△
□●

▲

※
■
◎×△
□◎

▲
●

※

■

000.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45
平均近交度（血の濃さ、遺伝プールの狭さに関する指標）

平均保険金請求額︵病気のなりやすさ・重篤度に関連する指標︶

平均保険金請求額︵病気のなりやすさ・重篤度に関連する指標︶

（円）

1.0
0.8
0.6
0.4
0.20.0ネコの遺伝構造の品種間・集団間比較

5歳

（円）

60,00050,000○40,000◎△ ●※30,00020,000

□△
×●

○■
◎※
▲

□▲ ■

×10,000
000.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45
平均近交度（血の濃さ、遺伝プールの狭さに関する指標）○混血犬（体重 10 ㎏未満） ×ポメラニアン △トイ・プードル □ジャック・ラッセル・テリア ●チワワ ▲パピヨン ■ビーグル ◎マルチーズ ※ヨークシャー・テリア○フレンチ・ブルドッグ ×ミニチュア・ダックスフンド △ゴールデン・レトリーバー □柴 ●シー・ズー ▲ウェルシュ・コーギー・ペンブローク ■ミニチュア・シュナウザー
◎キャバリア・キングチャールズ・スパニエル ※パグ

グラフ２

イヌの各品種における近交度と保険金請求額の関係

第健康な個体を生み出すブリーディングのためにるブリーディング等によって、より健康な子と出会うことができる可能性を強く示すものである。今後も、ペットの健康に寄与する研究・検査を進めていく中で、当社グループからの「研究協力のお願い」があった際には、ご協力いただけると幸いである。

（※）
集団ゲノム解析によるイヌおよびネコの近交度と遺伝構造の解明

x部 アニコムの取組み

これらの結果は、日本国内の家庭どうぶつにおける近交弱勢の状況を調査した結果であると同時に、遺伝的な病気のリスクを低減す松本悠貴 1,2）、大橋健 1）、卯川尚史 1）、ルアムランスリーナパット 1）、石原玄基 1）
アニコム先進医療研究所株式会社、2）国立遺伝学研究所

1）WhitePaper

onHouseholdAnimals

201857

第5部 アニコムの取組み

2. 腸 内 細 菌 に 関 す る 研 究 と 未 病 へ の 取 組 み
近年、疾患や健康との関連性の高さから世界中の研究者たちの関心を集める腸内細菌。アニコムグループ（以下、アニコム）では、2016 年から動物における腸内細菌に関する研究をスタートし、すでに２万検体を超える膨大な検査データを有している。本稿では、その研究の一部をご紹介する。

様性が変動していることが認められた。われわれは、引き続検体の解析方法
各個体より採取した検体（糞便）からは、細菌由来の DNA

き動物における腸内細菌の検査結果を、保険金請求データやを抽出し、16S rRNA 遺伝子の V3-V4 領域を増幅して Illumina

生活習慣に関するアニコム独自の調査と照合し、疾病や生活株式会社 MiSeq によりシーケンシングを行っている。得られ習慣との関連について研究を進めている。

た結果については、微生物群衆解析ツール Qiime2 等を用いた解析を実施している。

短鎖脂肪酸の分析

動物種ごとの腸内細菌叢便中の化学物質（短鎖脂肪酸）についても研究を進めている。

また、腸内細菌叢だけではなく、腸内細菌と関連のある糞図 1 は、イヌ、ネコ、トリ、ウサギ、フェレット、ハリネズ

短鎖脂肪酸は腸内細菌によって産生される発酵代謝物である。

ミの６種の動物において、動物種間における種構成の類似度

短鎖脂肪酸の量と種類は腸内細菌の多様性などにより影響を（β多様性）に関して、系統樹解析を行い、細菌の構成比を考受けて変動し、宿主である哺乳類の健康状態にも関係する。

慮せず細菌叢の構成種を計算し（Unweight-UniFrac 解析）、

例えば、アレルギー疾患、炎症性腸疾患、過敏性大腸炎、肥主座標分析（PCoA:Principal Coordinate Analysis）によるク

満、精神疾患といった種々の疾患との関連性も報告されていラスタリング解析により３次元空間に配置、可視化した結果る。近年ヒトでは、腸内環境改善効果を目的とした乳酸菌等である（写真 1、2）。それぞれの点が各サンプルを、形状が動の菌種研究が盛んなうえ、健康食品やサプリメントの開発も物種を示しており、類似した試料同士は近く、そうでないも顕著となっている。短鎖脂肪酸の生物学的重要性が認識されのは遠くに配置される図である。てきた一方、親水性で揮発性が高い物性のため、これまで測この解析の結果、動物種ごとにクラスター（一定のまとまり、集団）を形成していることが明らかとなった。また、今回解定の最適化は困難とされてきた。とくに水溶液を乾燥させずに誘導体化することがボトルネックとなっていた。

析した動物種のうち、唯一草食動物であるウサギがもっとも

今回新たに行った研究では、短鎖脂肪酸の高い揮発性を考特徴的な細菌叢の構成をしている点、フェレットとハリネズ

慮し、水中での誘導体化が可能な Chloroformate を用いた誘ミの細菌叢が類似している点が認められる。完全肉食の小動導体化の最適化を行った。その結果、ギ酸を含む 15 種の直鎖物であるフェレットやハリネズミには、Lactobacillus 属が多および分岐短鎖脂肪酸の一斉分析が可能となった。これらのく認められ、肉食や腸管内の低 pH の影響が示唆される結果で結果は、論文にて公表を行っている（Furuhashi et al.: Rapidあった。

profiling method for mammalian feces short chain fatty
acids by GC-MS. Anal Biochem. 2018）。
グラフ２は、今回開発した手法によりネコの糞便中の短鎖腸内細菌叢と疾患との関連性腸内細菌叢と疾患の関連について、その多様性が著しく変脂肪酸のバランスを調査した結果の例である。通常時と比較化することでさまざまな疾患の原因になりえることや、疾患し、下痢などの消化器症状がある際には、分子量の高い短鎖兆候との相関性があることは、ヒトの医療分野においても明脂肪酸の構成比が高い傾向も示唆されている。

らかになってきている。グラフ１は、健康群と疾患群における腸内細菌叢の多様性に関して、各群のα多様性（ある 1 つ

このように、測定手法の課題を解決しながら、動物の腸内の環境における細菌の多様性）を評価する指標である Shanon

細菌に関する研究を進めてきた。動物の状態の変化にいち早Index について箱ひげ図にてプロットした。各群は Kruskal-

く気付けるツールとして腸内細菌叢の測定が汎用されるよう、Wallis 検定（ノンパラメトリック法）により検定を実施した。

日々新しい研究成果を追及している。

その結果、９の疾患群において健康群と比較して優位にα多こうした研究成果をもとに、アニコム損害保険株式会社では、2018 年 12 月始期以降の保険契約に対し、付帯サービスとして『どうぶつ健活』を開始した。人間でも話題の腸内細菌叢測定を毎年受けることができ、その測定結果から、アニコム独自の指標を用いて疾患のなりやすさを判定する。さらに判定結果によって、無料で指定動物病院での健康診断が受けられるというものである。
「入ると健康になる “予防型保険”」を目指す、アニコムならではのサービスである。この腸内細菌叢測定そのものは病気の診断ではないが、飼い主の皆様がペットの健康状態の変化にいち早く気づく一助となれば幸いである。
■『どうぶつ健活』詳細：https://www.anicom-sompo.co.jp/special/doubutsu̲kenkatsu/

58

White

PaperonHouseholdAnimals

2018

第Our Initiatives

5部 アニコムの取組み

図1

動物種ごとの腸内細菌叢の比較

疾患

疾患

疾患

疾患

F
グラフ１

化学物質の解析に用いる実験装置

疾患

疾患

E

写真 2

疾患

疾患

D

腸内細菌叢解析に用いる実験装置

疾患

疾患

C

健康群

疾患

B

疾患

疾患

A

写真 1

GH

I

JKL

M

腸内細菌叢の多様性と疾患の関係

60.0
50.0
40.0
第x

部 アニコムの取組み

30.0
20.0
10.0
ヘプタン酸

4-メチルヘキサン

2-メチルヘキサン

カプロン酸

イソカプロン酸

3-メチル吉草酸

2-メチル吉草酸

吉草酸

グラフ２イソ吉草酸

2-メチル酪酸

酪酸

イソ酪酸

プロピオン酸酢酸

ギ酸

0

ネコの糞便中の短鎖脂肪酸

White

PaperonHouseholdAnimals

201859

第5部 アニコムの取組み

3. 獣 医 療 に お け る 再 生 医 療 ・ 細 胞 治 療 の 実 用 化
昨年度のコラムでも記載したとおり、ヒト医療での注目の高まりと同様に獣医療分野でも「再生医療」や「細胞治療」に対する認知度が急速に高まっている。とくに、従前の治療法では治せなかった病気が、再生医療・細胞治療によって治せるようになるかもしれないという期待感は計り知れない。そのようななか、富士フイルム株式会社とアニコム ホールディングス株式会社との合弁会社として設立したセルトラスト・アニマル・セラピューティクス株式会社（以下、セルトラスト社）では、細胞治療の実用化に向けて臨床研究を進めており、その結果の一部を本稿でご紹介する。なお、セルトラスト社や細胞治療の概要は、昨年度のコラムを参照いただきたい。
●セルトラスト社の臨床研究● KCS

セルトラスト社では、これまで慢性腸症（CE）、乾性角結膜炎

KCS は、涙の量が減少して目の表面が乾き、結膜や角膜に炎症を（KCS）、関節炎、椎間板ヘルニア、骨折等の疾患を対象に臨床研引き起こす自己免疫疾患である。通常は、免疫抑制剤の入った眼軟究を実施してきた。このうち、CE と KCS については既に臨床研究

膏や人工涙液の点眼を用いた治療が行われるが、こうした標準治療を終えて実用化へと至っており、ほかの疾患については現在研究をの効果が十分に得られない難治性症例も少なくない。

進めている段階である。

これらの疾患に対する新たな治療法の開発として犬の間葉系幹細胞を涙腺に局所投与する臨床研究を行っており、その有効性が確認で● CEきたため、CEと同様実用化へと至っている。

CE は、小腸や大腸の粘膜に原因不明の慢性的な炎症を引き起こし、食欲不振、嘔吐、下痢といった症状をもたらす病気であり、自【症例１】

己免疫の異常が原因の１つと言われている。一般的には食事療法、抗菌薬、副腎皮質ステロイド剤による治療により症状が改善されるが、難治性の場合、こうした標準治療が奏効せず、致死的な経過を辿ることもある。
このような難治性 CE に対し、犬の間葉系幹細胞を静脈内に点滴投与する臨床研究を行ってきた。その結果、血液検査数値（アルブミン等）の改善とともに臨床症状の改善も認められ、その有効性が細胞投与前確認できたため、セルトラスト社の動物再生医療センター病院にて実用化へと至っている。

細胞投与３週間後【症例２】①細胞投与前の様子②１回目の細胞投与から約２ヶ月後の様子③２回目の細胞投与から約２ヶ月後の様子

細胞投与により、投与前に観察されたリンパ管の拡張の改善が認められた。
陰窩 腸絨毛 リンパ管

陰窩 腸絨毛 リンパ管

腸絨毛 リンパ管細胞投与前①細胞投与前の様子②１回目の細胞投与から約２ヶ月後の様子③２ 回 目 の 細 胞 投 与 から約２ヶ月後の様子

細胞投与により、腸粘膜の深層部に見られた陰窩の消失や腸絨毛の不整が改善され、拡張していたリンパ管の縮小などが確認された。

細胞投与３週間後

症例１、２ともに、細胞投与前は全体的に眼脂の付着と充血がみられ、角膜光沢も低下しているが、細胞投与３週間後には、眼脂の減少、充血の改善、角膜光沢の増加が認められる。
なお、この研究結果は第 20 回日本臨床獣医学フォーラムにおいて発表しており、詳細は次ページのとおりである。

60

WhitePaperonHouseholdAnimals

2018Report

犬の難治性乾性角結膜炎における間葉系幹細胞を用いた治療法の有効性についての検討○鳥居こず恵 1）、森寿弘 2）、久保雄昭 2）
、岩木義英 2）
、矢作茉菜 1）
、花野みなみ 1）、牛草貴博 1）
、河本光祐 2）
、横山篤司 3）
、牧野快彦 2）
1）動物再生医療センター病院 2）セルトラスト・アニマル・セラピューティクス株式会社 3）さくら動物病院

材料と方法
01 cMSC 製造システム
皮下脂肪由来他家間葉系幹細胞（MSC）

02 症例
難治性 KCS 罹患犬計 8 頭（9 眼球）

健常なビーグル犬の皮下脂肪から MSC を培養し、凍結保存した。

対象動物：シクロスポリン眼軟膏またはタクロリムス点眼の治療を治療の際は融解、製剤化を行い投与を行った。

6 週間以上実施しているにもかかわらず STT が 10mm/

細胞培養機能・品質保証機能

min 以下の症例（眼球）動物再生医療センター病院内にヒト再生医療の基準に則した設備・除外基準：悪性腫瘍の既往歴、内分泌疾患や顔面神経麻痺、涙腺切除の経歴

規格・基準で細胞を培養し品質保証する体制を構築し、高品質に保証された細胞を準備した。

03 cMSC 投与
・8 × 106 個の細胞を 0.5 mL の生理食塩水に懸濁❶ クリーンルーム仕様の細胞培養室❷ スペシャリストによる細胞培養

・罹患眼球の主涙腺近傍へ 0.3 mL❸ ヒト再生医療新法に則した環境管理・第三眼瞼腺近傍へ0.2 mLを26G針にて局所投与❹ 徹底した品質管理

・細胞投与後、1 週間に 1 回計 4 回（4 週間）経過観察
・投与後はシクロスポリン眼軟膏及びタクロリムス点眼を休薬
04 評価＜評価項目＞

管理文書体系( 品質マニュアルを頂点とした体系の構築）

第２清浄区域（BSL2 実験室）＋

STT、綿糸法、臨床症状（充血、眼脂、角膜光沢）

設備 ( ヒト CPC モデルに則した構成）

臨床症状の各評価項目は正常（0）、軽度（1）、中等度（2）、重度（3）第 3 清浄区域（クラスＣクリーンルーム）

第１清浄区域（着衣着替え、一般実験室）

として評価

細胞の機能保証：形体特性、生存活性、表面抗原解析、サイトカイン分泌能免疫抑制能、分化能細胞の安全性保証：細菌・真菌検査、エンドトキシン試験、マイコプラズマ否定試験、核型解析軟寒天コロニー試験、イヌへの投与による安全性試験▶ MSC の品質の安全性・均質性を担保することにより、科学的エビデンスに基づいた治療効果について検討可能となった。

研究結果
各評価項目平均値（9 眼球）4STmm/min.

投与前と最大効果時の値の比較

STT・綿糸法

STT

綿糸法

綿糸法
mm/15sec.

153102510

投与前

投与

1 週後

2 週後

3 週後

4 週後

3 週後

4 週後

0

臨床症状（眼脂、充血、角膜光沢）

重度 98臨床スコア7654

軽度 3投与前

投与

1 週後

2 週後

１．MSC 投与後、STT・綿糸法・臨床症状ともに改善傾向が認められた。
２．各評価項目において、投与後 2-3 週で効果が最大となった。
３．STT 値において投与前と最大効果時の値との間で有意な差が認められた。
４．いずれの評価項目についても改善傾向が得られなかった症例が2 頭（2 眼球）存在した。

犬の KCS の多くは涙腺の免疫介在性炎症に起因すると考えられていることから、今回の KCS に対する MSC の効果は、涙腺の炎症鎮静と免疫調整により涙液の分泌障害を改善したものと考えられる。本研究結果は、標準治療に反応しない KCS 症例に対して、細胞治療が新たな治療の選択肢の１つとなる可能性を示すものである。

x部 アニコムの取組み

考察
第まとめ

●今後のセルトラスト社の取組み
今回ご紹介したとおり、セルトラスト社における細胞治療の実用化は着実に進んでいる。しかしながら、細胞治療の実用化が期待されている疾患はまだまだ多く残っており、今後も対象疾患の拡大に向けた臨床研究が必要である。ご興味がある場合は、下記問い合わせ先までご一報いただきたい。
【問い合わせ先】
動物再生医療センター病院（http://celltrust.jp/hospital/） 〒 231-0033 神奈川県横浜市中区長者町 2-6-3 シティーハーズ長者町ビル 2 階

WhitePaperonHouseholdAnimals201861