XL-Bradford [界面活性剤適応]
Cat No. KY-1040、1041【目的・用途】

一般的な Bradford 法によるタンパク質定試薬は、界面活性剤の影響を大きく受けてしまいます。本試薬は、様々な界面活性剤を含む溶液に溶解されたタンパク質濃度を正確に測定できるよう、Bradford 試薬を改良したものです。タンパク質抽出や精製の工程で添加した界面活性剤の存在を気にせずに正確なタンパク質定量ができます。

操作手順は本試薬とタンパク質溶液を混合して 595nm の吸光度を測定するだけで迅速・簡便な定量が可能です。混合してから加温する必要なく、また、混合後 1 時間程度は吸光度が変化しませんので、多検体を処理する場合【通常法プロトコール】
１） BSA スタンダード溶液の調製
0.0〜1.0mg/mL の範囲で 6 点以上、n=2 で BSA スタンダード溶液を調製します。
※BSA 以外のタンパク質をスタンダードとして用いることもできます。
（例）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL の BSA スタンダードを調製する場合①2mg/mL の BSA 溶液を調製します。
BSA 粉末を溶解して調製する場合は、測定する濃度未知サンプルと同にも最適です。

じバッファーで溶解します。BSA 溶液を希釈して調製する場合は、測SDS-PAGE サンプルバッファー（2%SDS 含有）中のタンパク質濃度を測定する濃度未知サンプルと同じ終濃度のバッファー組成となるように定したい場合は、XL-Bradford[SDS-PAGE 適応]（Cat No. KY-1030）をご使用ください。

希釈します。
②表の通り、BSA スタンダード溶液の希釈系列を調製します。

【特徴】※BSA スタンダードは n=2 で調製してください。

● 様々な界面活性剤を含む試料中のタンパク質定量が可能● 簡便な操作

BSA 溶液の2mg/mL

終濃度

BSA 溶液(mg/mL)(μL)

1.050500.840600.630700.420800.210900.00100【内容・保存方法】
Cat No.

容量KY-1040

100mL（5×）

KY-1041

500mL（5×）

保管温度
4℃

使用期限
1年

【基本情報】
表1[×5] XL-Bradford 試薬を室温に戻し、超純水で 5 倍希釈した後に十分混

通常法

微量法

0.1〜1.0 mg/mL

2〜50μg/mL

表 2 サンプルに含まれていても測定に影響がない化学物質の上限濃度

酸・塩基

バッファー

界面活性剤

還元剤

その他

HCl
NaOH
AcetateAmmonium sulfate
CitrateGlycine
HEPES
Phosphate
TrisSDS
Deoxycholate
Triton X-100
o-β-D thioglucoside
Tween20
Briji35
D-β-D maltoside
Zwittergent
o-β-D glucoside
CHAPSNP-40
Dithiothreitol
2-Mercaptoethanol
EDTA
GlycerolKCl
NaCl
SucroseUrea【本品以外に準備が必要な器具】





(μL)

２） XL-Bradford 試薬の準備定量できるタンパク質濃度の範囲

成分

希釈溶液

通常法
100mM
100mM
600mM
1M
50mM
100mM
100mM
2M
2M
1%
2%
5%
10%
2%
7.5%
5%
4%
10%
10%
7.5%
1M
1M
100mM
100%
1M
5M
300mM
6M

許容上限

微量法
2.5mM
2.5mM
15mM
25mM
1.25mM
2.5mM
2.5mM
50mM
50mM
0.025%
0.05%
0.125%
0.25%
0.05%
0.188%
0.125%
0.10%
0.25%
0.25%
0.188%
25mM
25mM
2.5mM
2.5%
25mM
125mM
7.5mM
150mM

595nm の吸光度測定が可能な分光光度計もしくはプレートリーダー
分光光度計に適合したキュベット(試験管・チューブを使用する場合)
試験管・チューブ・マイクロプレート
ボルテックスミキサー
0.45μm フィルター
正確なピペット合します。XL-Bradford 試薬（1×）は 1 サンプルにつき 0.5 mL 必要です。
※沈殿が見られる場合はろ紙などを用いてフィルトレイトします。
※5 倍希釈した試薬は、当日中に使い切ってください。
３） サンプルと XL-Bradford 試薬の混合①濃度未知サンプル及びスタンダードタンパク質溶液を、それぞれ別のチューブに 10μL ずつ分注します。
②２）で調製した XL-Bradford 試薬（1×）を各チューブに 0.5 mL 加え、混合します。
※液量を変更する場合は、サンプル：試薬の比率を変えないでください。
→ 例えば、サンプル 20μL

+ XL-Bradford 試薬(1×) 1.0mL４） インキュベート
室温で 5 分間インキュベートします。
※インキュベート時間が⻑くなると徐々に吸光度が⾼くなりますので、室温で 1 時間以内にしてください。
５） 測定
濃度未知サンプル及びスタンダードを、キュベットに分注し、595nm における吸光度を測定します。
※ブランク(0mg/mL スタンダード溶液)の吸光度を 0 に合わせ、1 本のキュベットを使用する場合は濃度の低い順に測定してください。
６） 検量線の作成①n=2 で測定した BSA スタンダードの、吸光度(Abs.595)の平均値を算出します。
② ①で算出した吸光度(Abs.595)の平均値を Y 軸、BSA スタンダードの濃度(mg/mL)を X 軸にとり、最小二乗法により近似曲線を引き、検量線を作成します。

例）Standard curve
0.3 00.2 5⊿Ab s.595

0.2 00.1 50.1 0y = 0.2688x-0.0004

0.0 5

R2 = 0.9966

0.0 0-0.0 500.2

0.40.60.811 .2m g /m L

７） 濃度未知サンプルのタンパク質濃度の算出
作成した検量線の数式を用いて、濃度未知サンプルのタンパク質濃度を算出します。
例）濃度未知サンプルの吸光度が 0.4015 の場合、（吸光度）ー（ブランク）
一次式の y に代入

0.4015ー0.2468＝0.1547
0.1547＝0.2688ｘ−0.0004
ｘ＝0.5770 mg/mL【微量法プロトコール】
１） BSA スタンダード溶液の調製
通常法と同様にスタンダード溶液を調製します。
２） XL-Bradford 試薬の準備[×5] XL-Bradford 試薬を室温に戻します。希釈はしません。
３） サンプルと XL-Bradford 試薬の混合
サンプル及びスタンダード 400μL に対して、[×5] XL-Bradford 試薬を 100μL 加え、混合します。
４） インキュベート
室温で 5 分間インキュベートします。
※インキュベート時間が⻑くなると徐々に吸光度が⾼くなります
ので、室温で 1 時間以内にしてください。
５） 測定
濃度未知サンプル及びスタンダードを、キュベットに分注し、595nmにおける吸光度を測定します。
※ブランク(0mg/mL スタンダード溶液)の吸光度を 0 に合わせ、1 本のキュベットを使用する場合は濃度の低い順に測定してください。
６） 検量線の作成①n=2 で測定した BSA スタンダードの、吸光度(Abs.595)の平均値を算出します。
② ①で算出した吸光度(Abs.595)の平均値を Y 軸、BSA スタンダードの濃度 (mg/mL)を X 軸にとり、最小二乗法により近似曲線を引き、検量線を作成します。
７） 濃度未知サンプルのタンパク質濃度の算出
作成した検量線の数式を用いて、濃度未知サンプルのタンパク質濃度を算出します。