福岡県保健環境研究所年報第43号，110－113，2016

短報
福岡県で2015/16シーズンに検出されたインフルエンザウイルスについて
芦塚由紀・吉冨秀亮・中村麻子・濱﨑光宏・世良暢之
福岡県における2015/16シーズンのインフルエンザの流行は2016年の第1週頃から立ち上がり、定点当たりの報告数は2016年の第5週と9週頃がピークであった。流行の主流はA/H1pdm09亜型であった。
流行株の抗原性を評価するため、A/H1pdm09亜型の分離株について抗原性解析を行った結果、すべてワクチン株類似株であった。また、流行株の遺伝的変化を調べるため、A/H1pdm09亜型の系統樹解析を行った結果、分離株はすべて近年の主流であるクレード6Bに属していたが、シーズン前半と後半の分離株では異なるアミノ酸変異を持つサブクレードであった。A/H1pdm09亜型についての薬剤耐性サーベイランスを実施した結果、タミフルに耐性を示すH275Yの変異を持った株は検出されなかった。
［キーワード：2015/16シーズン、インフルエンザ、分離、遺伝子解析、系統樹解析］
１

はじめににおいて、福岡市と北九州市を除く県内の病原体定点医療

インフルエンザは、オルトミクソウイルス科に属するイ機関でインフルエンザと診断され、当所に搬入された咽頭ンフルエンザウイルスによるウイルス性呼吸器感染症で、ぬぐい液148件、その他1件を検査した。また、インフルエ毎年冬期に流行を繰り返している。近年主に流行している

ンザ集団発生事例の検査として、福岡県“インフルエンザ

季節性インフルエンザウイルスは、A型がA/H1pdm09亜型と様疾患発生報告”実施要領に基づき、県内の４ブロック（福A/H3亜型、B型はビクトリア系統と山形系統に分けられる。

岡、筑後、筑豊、北九州）でのインフルエンザ様疾患の初2015/16シーズンは初期から全国的にA/H1pdm09亜型が発施設（小学校及び中学校）における患者23名から採取さ

1)流行した 。A/H1pdm09亜型は2009年に発生した新型インフれた検体（うがい液）を検査した。

ルエンザウイルスで、2009/10シーズンの主流行株であっ患者の臨床症状及び抗インフルエンザ薬の使用状況は、た。その後の流行状況は、2010/11シーズンにA/H1pdm09

感染症発生動向調査事業による感染症発生動向調査検査

亜 型 と A/H3 亜 型 の 同 時 流 行 、 2013/14 シ ー ズ ン に は票もしくはインフルエンザ集団発生事例の調査票に基づ

A/H1pdm09亜型及びB型山形系統を中心とした4種のインフき集計した。

2)

ルエンザウイルスによる流行 があった。
インフルエンザウイルスは、ウイルス遺伝子に起こる変２・２型・亜型の検査方法及び抗原性解析

異の蓄積によって、同一の亜型内でも抗原性は少しずつ変国立感染症研究所が示すインフルエンザ診断マニュア化し、毎年のように流行を繰り返す。そのため、ウイルス

ル3)に準拠し、型・亜型の検査はリアルタイムRT-PCR法にの型・亜型の検査だけではなく、シーズン毎の流行株の遺より行い、ウイルスの分離はMDCK細胞を使用して行った。

伝子解析及び抗原性解析を行い、遺伝子レベルでの流行株

MDCK細胞によりウイルスが分離された検体については、赤の変遷や抗原性の変化等を把握することが必要である。

血球凝集試験を実施した。凝集力価が8倍以上であった検

本稿では、2015/16シーズンの感染症発生動向調査及び体はワクチン株に対する抗血清を用いた赤血球凝集阻止

インフルエンザ集団発生事例における流行状況の解析、シ（HI）試験により抗原性解析を行った。

ーズンの主流行亜型であるインフルエンザウイルス
A/H1pdm09亜型の県内分離株の抗原性解析、系統樹解析及

２・３

び薬剤耐性変異の検出を行ったので報告する。

インフルエンザウイルスの系統樹解析

2015/16シーズンに、福岡県内で採取された検体から分離されたインフルエンザウイルスA/H1pdm09亜型のヘマグ

２

方法

２・１

検体及び患者情報

ルチニン(HA)遺伝子の塩基配列を決定し、系統樹解析を行った。

2015年第36週から2016年第23週に感染症発生動向調査
福岡県保健環境研究所（〒818-0315 太宰府市大字向佐野 39)

HA遺伝子の塩基配列の決定は、インフルエンザ診断マニ
ュアル3)に準拠し、A/H1pdm09亜型の1085bpの塩基配列を決-110-

定した。参照株（ワクチン株及び国内外の流行株）の遺伝（52.2%）、タミフルが 4 件（17.4%）、リレンザは 4 件

子 配 列 デ ー タ は Global Initiative on Sharing All（17.4％）、服用無しが 2 名（8.7%）であった。小学生にInfluenza Data(GISAID) EpiFlu database4) からダウンロ

はタミフルが処方され、タミフルは原則 10 代には処方しードした。系統樹は、近隣結合(Neighbor-joining, NJ) 法

ないため中学生にはイナビルが多く使用されていた。

により作成した。解析ソフトフェアは塩基配列解析ソフト
ウェアMolecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA３・２

県内におけるインフルエンザの発生状況及びイン5.1) を用い、検定はブートストラップ法（500回サンプリ

フルエンザウイルスの遺伝子型・亜型の検査
図 1 に感染症発生動向調査週報から集計した 2015/16 シング）により行った。

ーズンの福岡県における定点当たり報告数及びインフル
抗インフルエンザ薬剤耐性サーベイランス

エンザウイルスの週別検出数を示した 1)。前シーズンは全インフルエンザ診断マニュアル3)に従い、インフルエン

国的に A/H3 亜型が主流であり 5)、流行開始時期は平年よザウイルスA/H1pdm09亜型のノイラミニダーゼ(NA)タンパ

り早い立ち上がりで、第 48 週頃から検出され、ピークはク質における薬剤耐性変異について試験した。薬剤耐性変2015 年 の 第 2 － 4 週 で あ っ た 。 2015/16 シ ー ズ ン は異の検出は、Allele-specific RT-PCR法により行い、H275Y

A/H1pdm09 亜型が主流で 1)、流行の立ち上がりはほぼ例年タミフル耐性マーカーの有無を調べた。

並みの 2016 年の第 1 週頃、ピークは第 5 週目と第 9 週目２・４頃であった。
３

結果及び考察

３・１

感染症発生動向調査で搬入された 149 件の遺伝子検査

インフルエンザ患者の情報

結果は 135 検体がインフルエンザ陽性で、A/H1pdm09 亜型

感染症発生動向調査で検体が採取された患者の内訳はが 95 件(63.8%)、
B 型ビクトリア系統が 17 件(11.4%)、A/H3

男性 79 名、女性 70 名の計 149 名で、年齢は 0～93 歳、平亜型が 10 件（6.7%）、B 型山形系統が 8 件(5.4%)、A 型系

均年齢は 29.1 歳であった。臨床症状は、発熱が 144 名

統不明が 3 件(2%)、B 型系統不明が 1 件(0.7%)、陰性が 14（96.6%）、頭痛が 58 名（38.9%）、関節痛が 41 名（27.5%）、件（9.4%）であった。インフルエンザ集団発生事例の初発

上気道炎が 75 名（50.3%）、筋肉痛が 16 名（10.7%）、下気は福岡ブロックで発生した第 49 週の事例であり、昨シー道炎が 9 名（6.0%）、及び胃腸炎が 12 名（8.0%）であった。

ズン発生時期と同じであったが、北九州ブロックが 2016

抗インフルエンザ薬の服薬状況では、調査票に記載があっ年の第 2 週、筑後、筑豊ブロックが第 3 週と、例年と比べた 140 件を集計した結果、イナビルが 63 件（47.7%）、タて比較的遅かった。前シーズンの集団発生事例は、すべてミフルが 47 件（35.6%）、リレンザが 11 件（8.3％）、ラピ流行の主流の A/H3 亜型であったが、2015/16 シーズンはアクタが 5 件（3.8%）、薬剤不明が 6 件（4.5%）で、2013/14流行亜型である A/H1pdm09 による事例が 3 事例、B 型/ビシーズン、2014/15 シーズンと同様に、イナビルの使用率クトリア系統による事例が 1 事例あった。

が最も高かった 2),5)。
インフルエンザ集団発生事例の検査で検体が採取され

３・３

抗原性解析の結果た患者は小学生（6－7 歳）9 名及び中学生（12－14 歳）

集団発生事例及び感染症発生動向調査事業において14 名の合計 23 名で、内訳は男児 11 名、女児 12 名であっMDCK 細胞により分離されたインフルエンザウイルス A/H1た。
臨床症状は、発熱が 23 名（100%）、頭痛が 18 名（69.6%）、pdm09 亜型の 43 株（集団発生事例 9 株、感染症発生動向

関節痛及び筋肉痛が 8 名（34.8%）、胃腸炎が 7 名（30.4%）、調査事業 34 株）について HI 試験により抗原性解析を実施

上気道炎が 7 名（30.4%）、結膜炎が 2 名（8.4%）であった。

した。A/H1pdm09 亜型のワクチン株である A/ California/抗インフルエンザ薬の服薬状況では、イナビルが 12 件07/2009 を比較対照として HI 試験を行った。その結果、

定点
当たり報
告数

図1

検
出数

2015/16 シーズンの福岡県におけるインフルエンザの週別報告数及びインフルエンザウイルスの検出数-111-a)b)1280
HI
価*1280HI640**

640**

価*320320

株数

株数

図 2 インフルエンザウイルス分離株の赤血球凝集阻止(HI)試験の結果
a) 集団発生事例の分離株 b)感染症発生動向調査事業の分離株* 抗 A/California/07/2009 に対する HI 価 ** ホモ価

すべての分離株はワクチン株の HI 価 640 の 4 倍以内の抗ランスの強化が必要と考えられる。

原性の差であった（図 2）。標準株から 8 倍以上反応性の低下した株は抗原変異株とみなされることから、今回分離

４

まとめ2015/16 シーズンの県内で流行したインフルエンザウイされた株はすべてワクチン株類似株であった。

ルス A/H1pdm09 亜型の分離株について、抗原性解析、HA
３・４

インフルエンザウイルス A/H1pdm09 亜型分離株の遺伝子による系統樹解析及び薬剤耐性サーベイランスを実施した。抗原性解析を行った結果、2015/16 シーズンに系統樹解析
2015/16 シーズンの主流行亜型であるインフルエンザウ

分離された株はすべてワクチン株 A/Calfornia/07/2009

イルス A/H1pdm09 亜型の県内における流行株について解類似株であった。系統樹解析の結果では、今シーズンの分析するため、インフルエンザウイルスの HA 遺伝子の塩基離株は近年の主流であるクレード 6B に属していた。ワク

配列の系統樹解析を行った（図 3）。

チン株と比較して抗原性には大きな変化は見られていな

2015/16シーズンの集団発生事例及び感染症発生動向調

いが、シーズン前半と後半の分離株は異なるアミノ酸変異

査事業で分離された株は、すべて2013/14から2014/15シーをもったサブクレードに属していることから、県内の流行ズンの国内流行株と同じクレードであるクレード6Bに属株はシーズンの途中で変わっていた可能性が示唆された。

した。さらに、12月と1月に発生した集団発生事例からの薬剤耐性サーベイランスにおいては、シーズンを通してタ分離株5株については2014/15シーズン流行株と比較してミフルに耐性を示す H275Y の変異を持った株は検出されV152T、V173Iのアミノ酸変異をもつサブクレード6B.2に属なかった。

した。また、感染症発生動向調査事業からの分離株5株は、謝辞2014/15シーズンのインド流行株と同じアミノ酸変異調査にあたり、検体採取にご協力頂きました医療機関及（S84N）を持ち、加えて2015/16シーズンの初めに三重県
6)7)や愛知県 で分離された株と同じS162NとI216Tの変異も持つサブクレード6B.1に属し、集団発生事例の分離株とは異なるグループであった。このことから、2015/16シーズ
ンの県内の流行株は12－1月の前半とそれ以降の後半で変び保健（福祉）環境事務所の関係各位に深謝致します。
文献1) 国立感染症研究所：インフルエンザウイルス分離・検出速報, http://www.nih.go.jp/niid/ja/iasr-わっていたことが推察される。
３・５

inf.html 発生動向調査週報2) 吉 冨 秀 亮 ら ： 福 岡 県 保 健 環 境 研 究 所 年 報 , 第 41

抗インフルエンザ薬剤耐性サーベイランス号,88-89, 2014.

インフルエンザウイルス A/H1pdm09 亜型の分離株について、NA タンパク質における H275Y タミフル耐性マーカ

3) 国立感染症研究所：インフルエンザ診断マニュアル（第二版）, 2010年3月.

ーの有無を試験した。インフルエンザ集団発生事例で搬入された検体から分離された 8 株と、感染症発生動向調査事

4) Global

InitiativeonSharingAllInfluenza

業で搬入された検体から分離された 36 株の合計 44 株につData(GISAID) EpiFlu database，http://platform.

いて試験したところ、タミフルに耐性を示す H275Y の変異

gisaid.org/epi3/frontend#58252dを持った株は検出されなかった。しかしながら、2015/16

5) 芦 塚 由 紀 ら ： 福 岡 県 保 健 環 境 研 究 所 年 報 , 第 42号,69-73, 2015.

シーズンに国内で H275Y/G147R の二重変異によりタミフルとラピアクタに対する交差耐性を持った株が見つかっ

6) 矢野拓弥ら：IASR, Vol.36,223-224,2015.ていることから 8)、今後も薬剤耐性株についてのサーベイ

7) 安井善宏ら：IASR, Vol.36, 224-225, 2015.
8)

-112-

E Takashita et a1.: Eurosurveillance, 21, 2016.

A/FUKUOKA/15397/2016 MAR●
A/FUKUOKA/15356/2016 FEB●A/FUKUOKA/15353/2016 FEB●
A/KUMAMOTO/25/2016

S162N
I216T

A/MIE/20/2015

6B.1

A/AICHI/100/2015
A/KITAKYUSYU/4/2016
A/FUKUOKA/15437/2016 MAR●
A/FUKUOKA/15368/2016 FEB●S84N

A/KANAGAWA/IC43/2016
A/Fukuoka/SDC1/2015
A/India/1399/2015★
A/India/1268/2015★
A/India/1245/2015★
A/FUKUOKA/15036/2015 DEC◆
A/FUKUOKA/15032/2015 DEC◆
A/FUKUOKA/15034/2015 DEC◆

V152T
V173I

A/FUKUOKA/15031/2015 DEC◆
A/FUKUOKA/15044/2015 JAN◆

6B.2

A/HIROSHIMA/13/2016
A/YAMAGUCHI/26/2016
A/Okinawa/14T001/2014

6B

A/Niigata/14F019/2015
A/YAMAGUCHI/43/2013
A/FUKUOKA/1417/2013 JAN
A/FUKUOKA-C/23/2014
A/FUKUOKA/1414/2013 FEB
A/TOKYO/32668/2014
A/WAKAYAMA/75/2015
A/IBARAKI/21/2015
A/MIE/15/2015
A/SAGA/32/2015
A/FUKUOKA-C/6/2015
A/KANAGAWA/55/2015
A/YAMAGUCHI/23/2015

D97N
K163Q
A256T
K283E

A/YOKOHAMA/50/2015
A/SAITAMA-C/45/2014
A/FUKUOKA/14432/2015 MERA/FUKUOKA/14363/2015 FEB
A/FUKUOKA/1419/2013 FEB
A/YAMAGATA/157/2013
A/MIE/27/2013

T15S
E283D

S185T

A/KANAGAWA/146/2013
A/SAPPORO/107/2013
A/TOKYO/32556/2014
A/HOKKAIDO/2/2014
A/Kanagawa/163/2014
A/HIROSHIMA/63/2014
A/YAMANASHI/14332/2014

E112K
S143G

A197T

A/NEWCASTLE/151/2011
A/NEWCASTLE/17/2011

A/FUKUOKA/35/2011
A/FUKUOKA/40/2011
A/PERTH/265/2009
A/PERTH/261/2009
A/FUKUOKA/1/2010
A/Narita/1/2009
A/California/07/2009＊
0.002

図 3. インフルエンザウイルス A/H1pdm09 亜型の HA 遺伝子（1085bp）
系統解析結果下線は、福岡県の検体から分離された株●2015/2016 シーズン感染症発生動向調査事業で分離された株◆2015/2016 シーズン集団発生事例で分離された株★インド分離株*：2014/15 シーズンのワクチン株（英文要旨）

Serologic and Genetic Characterization of Influenza Virus from the 2015/16 Season inFukuoka, Japan
Yuki ASHIZUKA，Hideaki YOSHITOMI，Asako NAKAMURA，
Mitsuhiro HAMASAKI, and Nobuyuki SERA
FukuokaInstitute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
Patient numbers infected with influenza virus began increasing in the first week of 2016, and peaked in the fifth and ninth weeksof 2016. Influenza activity was dominated by circulation of the influenza A/H1pdm09 virus. Serologic analyses showed that all
strains of influenza A/H1pdm09 were similar to the vaccine strain for the 2015/16 season. Phylogenetic analyses of thehemagglutinin genes showed that isolates of A/H1pdm09 belonged to clade B. Early and late season strains were in clusters withdifferent amino acid mutations.
[Key words ; 2015/16 season, influenza, Isolation, serologic analyses, Phylogenetic analysis,]-113-