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サンゴ礁魚類の性分化，性転換機構の形態学的，生理学的研究
中村將＊1，2・小林靖尚＊1，2・三浦さおり＊1Morphological and Physiological Studies on Sex Differentiationand Sex Change in Coral Reef FishMasaru NAKAMURA＊1，2,3, Yasuhisa KOBAYASHI＊1，2 and Saori MIURA＊1，2

Abstract In addition to gonochorism, several types of hermaphroditism are seen in fish.
Individuals of some fishes bear gonads containing both mature ovary and mature testis.
Some fishes change sex from male to female (protandrous sex change), others change
from female to male (protogynous sex change), and a few can change sex either way andmultiple times (bothway sex change). In many cases, sex change is cued by social factors,
such as the disappearance of a male or female from a group. These phenomena reveal thatthe mechanisms of sex determination and sex differentiation in fishes, in being diverseand more plastic, differ from those of other higher vertebrates. First, our research
focuses on analyzing the mechanism of sex differentiation in gonochoristic fish, using
genetically controlled all-female and all-male tilapia Oreochromis niloticus. Second, we
examined the sex change from an endocrinologic viewpoint, using morphological,
physiological, and molecular techniques. In order to further characterize protandrous,
protogynous, and bothway sex changes, we carry out experimental studies with the sea
anemone fish Amphiprion clarkii, the three spotted wrasse Halichoeres trimaculatus andthe honeycomb grouper Epinephelus merra, and the gobiid fish Trimma okinawae,
respectively.
Key words:
aromatasesex differentiation, sex change, hermaphrodite, estrogen, androgen,

はじめにand Nagahama, 2002）。 この事実は，魚類の雌雄性は他の両生類以上の高等な脊椎動物とは異なり多様で魚類では，雌雄異体現象の他に雌雄同体現象が多くあり，著しい可塑性があることを示している。性転換知られている（Table 1 ）。雌雄同体現象には一個体のする魚の殆どは熱帯，亜熱帯を中心としたサンゴ礁域

生殖腺内に成熟した卵巣と精巣を同時に持つ種（同時に生息することが知られている。本来有性生殖は遺伝的雌雄同体），雌から雄（雌性先熟），または雄から雌子の新しい組み合わせの頻度を高め生物多様性を育むに性転換する種（雄性先熟），雄，雌どちらに何度でも根元となっているが，一生の間に雄と雌を経験する性性転換する種 （両方向性転換） などが知られている転換魚ではより新しい遺伝子の組み合わせを可能にし，（Atz, 1964; Yamamoto, 1969; 余呉， 1986; Devlin

熱帯性魚類の多様性を加速させる要因となっているも2006年 1 月 6 日受理（Accepted on January 6, 2006）*1 琉球大学熱帯生物圏研究センター，瀬底実験所 〒905-0227 沖縄県国頭郡本部町瀬底3422番地（Sesoko Station, Tropical Biosphere ResearchCenter, University of the Ryukyus. 3422 Sesoko, Motobu, Okinawa 905-0227, Japan）*2 CREST, JST, 科学技術振興機構（Core Research for Evolutional Science and Technology）*3 SORST, JST, 科学技術振興機構（Solution Oriented Research for Science and Technology）

20

中村

將・小林靖尚・三浦さおりのと考える。これらを研究材料として，他の脊椎動物性分化期にはすでにステロイド産生細胞が分化し，性では実現困難な研究手法により，脊椎動物の性の可塑分化に伴って急激に発達することが明らかとなった。

性や進化の解明に迫れるものと考える。現在，雌から性分化期の生殖腺は著しく小さいため合成されるホル雄へ性転換する種としてベラ科のミツボシキュウセン

モンを正確に測定することは困難である。そこで，遺Halicoeres trimaculatus, ハワイのベラThalassoma

伝的に産み分けられた全雌，全雄のティラピアを用いduperrey，雄から雌へ性転換する種としてスズメダイてステロイド合成酵素の発現を免疫組織化学的手法に科のクマノミAmphiprion clarkii，両方向の性転換すより明らかにすることを試みた （Nakamura et al.,

る 種 と し て ハ ゼ 科 の オ キ ナ ワ ベ ニ ハ ゼ Trimma

1998; Nakamura et al., 2000; Nakamura et al., 2003）。

okinawaeを用いて，性転換機構の形態学的，生理学的，本研究では，ステロイド合成酵素の中でコレステロー分子生物学的解明に取り組んでいる。また，水産増養

ル側鎖切断酵素（P450scc），17β-水酸化酵素（P450c

殖上重要なハタの性転換技術の開発についてもハタ科

17），3β-水酸基脱水素酵素（ 3β-HSD），女性ホルモのカンモンハタEpinepherus merraを用いて取り組ん

ン合成に必須のアロマターゼ（P450arom）に対するでいる。

特異抗体を用いた。その結果，遺伝的雌では，性分化前の生殖腺にすべての酵素の発現が見られ，卵巣分化，正常性分化と内因性性ホルモン発達に伴い陽性反応が強くなり，陽性細胞数が増加することが明らかとなった。これら酵素群の免疫組織化

性転換の複雑な機構を解明するには，雌雄異体魚の学的証明は，性的分化期以前の生殖腺ですでに女性ホ性分化機構，即ち，発生に伴い未分化生殖腺が卵巣又ルモンの合成が始まっていることを強く示している。

は精巣に分化する機構を明らかにする必要があると考この事実より遺伝的雌では女性ホルモンが卵巣分化誘える。はじめに，雌雄異体魚の性分化機構について今導物質として働いているものと考えられる。一方，遺までの研究成果を概説する。魚類の性分化過程の形態

伝的雄の未分化生殖腺，精巣分化時及び分化直後の生的 観 察 に つ い て は す で に 総 説 （Nakamura et al.,

殖腺にはこれら酵素の抗体の免疫陽性反応は見られな

1998; 中村，2000; Strüssmann and Nakamura, 2002）

かった。このことから，男性ホルモンを含む性ホルモとしてまとめているのでそちらを参照して貰いたい。

ンが直接精巣分化に関与している可能性は少ないもの

性分化期に性ホルモン処理すると遺伝的な性と反対のと考えられる（Fig. 1 ）。

性に誘導することが可能である。このことから，内因以上の様に内因性の女性ホルモンが卵巣分化に重要性の性ホルモン（様物質）が性分化に関与しているとな働きをしているものと考えられた。卵巣分化時の女考えられてきた（Yamamoto, 1969）。そこで，雌雄異性ホルモンの機能を詳細に解明するために抗女性ホル

体魚のティラピアとアマゴの性分化過程でのステロイモン物質を作用させ卵巣分化に及ぼす影響を実験的にドホルモンを合成する細胞であるステロイド産生細胞調べた。はじめに，全雌を用いて性分化期にアロマターの 分 化 を 微 細 構 造 学 的 に 調 べ た （Nakamura andNagahama,

1985;

NakamuraandNagahama,

1989a; Nakamura and Nagahama, 1993）。その結果，
Table 1魚類の雌雄性（余呉，1986 改変）．
Ⅰ．雌雄異体現象
Ⅱ．雌雄同体現象
Ａ．機能的雌雄同体
ａ．同時的雌雄同体
ｂ．隣接的雌雄同体
１．雄性先熟２．雌性先熟３．両方向性転換
Ｂ．痕跡的（非機能的）雌雄同体
ａ．副雌雄同体現象
ｂ．幼時雌雄同体現象

Fig. 1. ティラピアの性分化に伴うステロイド代謝酵素の発現．遺伝的雌の未分化生殖腺にアロマターゼ酵素を含む酵素群の発現が見られる．遺伝的雄では精巣分化前後でも発現は見られない．

魚類の性分化と性転換機構

21

ゼの酵素活性を阻害し女性ホルモンの合成を低下させ素の発現抑制，女性ホルモンの合成の抑制を介して，る ア ロ マ ー タ ー ゼ ・ イ ン ヒ ビ タ ー （AI） 処 理 し た

精巣へと分化させるものと考えられた。

（Nakamura et al., 2000）。その結果，すべての個体は精巣を持つ雄へと転換した。卵巣分化時の女性ホル

性分化後の生殖細胞，体細胞の両性能モンの合成が阻害されると性転換することが明らかとなった。AIと女性ホルモンのエストラジオール（ E 2 ）雌雄異体魚は，性分化時に性ホルモン処理すると遺伝を同時投与すると性転換が抑制された。このことは，的性とは反対の性に容易に性転換を誘導することがでAIは内因性の女性ホルモンの合成を抑制するが，外因きる。しかし，性分化後に性ホルモン処理しても性転性の女性ホルモンにより再び卵巣に分化するものと考換することはない。このことから，生殖腺中の生殖細えられた。また，女性ホルモンの働きを拮抗阻害する胞，体細胞は性分化後に両性能を失うものと考えられタモキシフェンで処理すると卵巣腔の形成の遅れや卵ていた。しかしながら，最近，ティラピアの成熟直前

巣中に成熟した精巣組織の分化が見られ，雄化するこの発達した卵巣を持つ雌であってもアロマターゼ・イとが確かめられた（Nakamura et al., 2003）。以上のンヒビター処理し女性ホルモンを著しく低下させると実験から，性分化期前後に合成される女性ホルモンの精子形成を活発に行う精巣へと完全に転換することを働きを阻害すると卵巣分化が抑制され精巣へ分化する発見した（Nakamura et al., 2003）。このことは，少ことが明らかになった。このことからティラピアの卵なくとも性分化後の卵巣にある卵原細胞の一部は，精巣分化には女性ホルモンが決定的役割を果たしている子にも分化する両性能を持つこと，卵巣を構成する体と考えられた。ステロイド合成酵素の免疫組織化学的細胞の一部の細胞もライデッヒ細胞，セルトリ細胞に観察より精巣分化に男性ホルモンが関与していないと分化する能力を持つことを示している。更に，卵巣中考えられたが，一般に遺伝的雌（XX）に男性ホルモの卵原細胞，体細胞は卵巣で作られる女性ホルモンにン処理すると雄へと性転換する。その理由は不明であっ絶えず曝されていなければ精巣へと分化してしまうこた。 全雌に男性ホルモンのメチルテストステロンとを示している。このことは次に説明する親での性転（MT）を投与し性転換を誘導した。その性転換過程の換機構と密接な関係を持つものと考える。

アロマターゼを含むステロイド代謝酵素の発現を調べた（Bhandari et al., 2006）。その結果，MT処理魚の性転換魚の性分化，性転換と性ホルモンの役割生殖腺にはいずれのステロイド代謝酵素の発現が見られなかった。このことは，MTは，ステロイド代謝酵性転換魚の性分化過程についての観察は少ない。雄Fig. 2. クマノミの生殖腺． A：雄の生殖腺，成熟した精巣組織と未熟な卵巣組織を持つ両性生殖腺． B：雌の生殖腺，成熟した卵巣組織からなり精巣組織は見られない．

22中村

將・小林靖尚・三浦さおり

性先熟魚クマノミの雄期の生殖腺は成熟した精巣と未急激な低下が重要であると考えられた。そこで，ミツ熟 な 卵 巣 を 持 つ 両 性 生 殖 腺 を 示 す （Fig. 2 ）ボシキュウセンを用いてアロマターゼ・インヒビター（Nakamura et al., 1994）。はじめに両性生殖腺の分（AI）を雌に投与することにより女性ホルモンを低下化， 発達過程を組織学的に観察した （Miura et al.,

させ生殖腺に及ぼす影響を調べた（Higa et al., 2003）。

2003）。孵化後30日目までに始原生殖細胞は体腔上皮由その結果，全ての個体は，成熟した精巣を持つ雄へと来の体細胞に取り囲まれて生殖腺原基を形成した。孵性転換した。AIと E 2 を同時に投与した雌は性転換し化後61日目の個体では，卵形成のための減数分裂期のなかった。このことから，女性ホルモンの低下が性転生殖細胞の包嚢の出現と，卵巣腔形成のための体細胞換の引き金になるものと考えられる。の集塊が生殖腺基部と先端部に見られた。その後，孵オキナワベニハゼは，体長 2 〜 3 cm程の小型のハゼ化後122〜183日目の個体で卵母細胞の急激な増加と発で鹿児島・沖縄のサンゴ礁に生息している。この魚の達が見られた。孵化後214〜273日目では，卵巣組織を大きな雌と小さな雌を同じ水槽に入れると，大きな雌取り囲む状態で精巣組織が生殖腺の外縁部に初めて認が性転換を起こし雄となる（Sunobe and Nakazono,められ，完全な両性生殖腺が形成された。以上の結果1993）。逆に，大小の雄をペアにした状態では，小さなから，クマノミでは，未分化生殖腺は始めに卵巣へと雄が性転換し雌となる（Fig. 3 ）。この様な飼育実験を分化し，その後しばらくして，精巣組織が卵巣内に分繰り返す事により，オキナワベニハゼを何度でも両方化してきて両性生殖腺が形成されることが明らかとなっ向に性転換させることが可能である。この実験で，性た。精巣のみを持つ生まれつきの雄（一次雄）は見ら行動は性転換の方向に関係なく30分以内で性転換する。

れなかった。従って，全ての雌は両性生殖腺を持つ雄

また，生殖腺の性転換は雌から雄へは 5 日間，雄からから性転換して雌となる。雌は，精巣組織を全く持た雌へは10日間で完了する。これらの素早い性転換は，ない卵巣をもつことから，性転換後には精巣組織は消他の雌性先熟および雄性先熟型の性転換様式に比べ，失する。現在，性分化機構，精巣組織の分化機構，性魚類の性転換機構を理解する上で大変都合が良い。

転換機構の解明をおこなっている。

初めに我々は，オキナワベニハゼの生殖腺構造を詳ハワイのベラの雌から雄への性転換過程の生殖腺の細に観察した。その結果，オキナワベニハゼは同一個観察を行った（Nakamura et al., 1989b）。雌の生殖体内に精巣と卵巣を同時に持つことを明らかにした腺には，成熟した卵，若い卵の他に生殖原細胞が見ら（Fig. 4 ）。雌として機能しているときは卵巣が成熟し，れるが，精巣と判断される組織は全く見られない。性転換は成熟した卵，未熟な卵が退化，吸収により開始するがこの時期はまだ精巣組織は見られない。卵がほとんど無くなってくると，今度は精子を作るための精原細胞が現れてくる。卵は完全になくなり活発な精子形成する完全な精巣へと転換する。卵巣から精巣へと性転換するまでには 3 から 4 週間かかる。
P450sccの抗体を用いてステロイドホルモン産生細胞の性転換過程の変化について免疫組織化学的に調べた（Morrey et al., 1998）。主に免疫陽性細胞は成熟卵をFig. 3. オキナワベニハゼの両方向の性転換，社会的に性が決まる．

取り囲む莢膜細胞層にみとめられた。性転換の開始に伴って莢膜細胞層より離れ卵巣薄板中央部分に集合する。
その後，精原細胞が出現する時期に増殖し集塊をなす様になる。精子形成の進行に伴い，間質部分に分散する。
このことから，卵巣中の莢膜細胞は，性転換後にライディッヒ細胞へと分化することが明らかになった。
性ホルモンの性転換に伴う変化について調べた。性転換の開始に伴い，血中の女性ホルモン（ E 2 ）が急激に低下した（Nakamura et al., 1989b）。雄性ホルモンの11-ケトテストステロン（11-KT）は性転換開始後しばらくしてから上昇した。このことから，性転換の開始には男性ホルモンの上昇よりも女性ホルモンのFig. 4. オキナワベニハゼの生殖腺の形態，卵巣と精巣を同時に持つ．

23

魚類の性分化と性転換機構精巣は未発達であった。逆に機能的雄では精巣が発達自然の性転換過程の性ホルモンは，ベラ同様に性転換し，卵巣が未熟であることが分かった。性転換時には，開始には E 2 が低下し，性転換の後半で11-KTが有意成熟していた卵巣又は精巣が退行し，未熟な精巣又はに上昇した（Bhandari et al., 2003a）。雌のハタにAI卵巣が成熟して完了することを組織学的に明らかにし処理して性転換が誘導出来るか調べた（Bhandari et

た（Kobayashi et al., 2005a）。他の性転換魚と異なal., 2003b; Bhandari et al., 2004a; Bhandari et al.,

り退行した生殖腺が消失・吸収されなかったことから，2004b; Bhandari et al., 2005b）。その結果，ベラとこの特殊な生殖腺構造がオキナワベニハゼの両方向性同様に処理した全ての雌は成熟した雄へと性転換した。

転換を可能にしていると考えられた。

自然の性転換と同様に血中のE2がはじめに低下し，そ続いて，女性ホルモン産生に必須なステロイド代謝の後，11-KTが上昇した。性転換した雄と雌との自然酵素の P450arom の両方向性転換時の卵巣内におけ交配により受精卵を得ることができた。受精卵は，正る発現変化を調べた。その結果，P450arom の遺伝子常に胚発生して孵化した。

発現には大きな変動が見られず，その発現は常に高かっ終わりにた。しかし，P450aromの蛋白発現を，特異抗体による免疫染色により調べた結果，雌機能時の卵巣で強く見られた発現が，雌から雄への性転換時や，雄機能時性分化に女性ホルモンの有無が重要であること，性の卵巣では，消失していた（Kobayashi et al., 2004;

分化後の卵巣の維持に女性ホルモンが重要であること，

Sunobe et al., 2005）。さらに，ステロイド代謝酵素性転換にも女性ホルモンが重要な役割を果たしている調節因子の一つであるAd4BP/SF-1の卵巣内での発現ことが明らかになってきた。今後は，女性ホルモンのは，雌機能時には高く，雄機能時には低かった。また，合成を支配している機構の解明，及び女性ホルモンのそれらの発現は，性転換の方向に従って変化し，雌か下流にある機構の解明が性分化，性転換機構を解明す

ら雄への性転換時には減少し，逆に雄から雌への性転る上で重要になってくるものと考えている。

換時には増加した（Kobayashi et al., 2005b）。これ
文らの結果から，P450aromの遺伝子から蛋白への翻訳

献調節やAd4BP/SF-1の遺伝子発現は，個体の優劣関係などの社会環境の変化により調節されており，このこ

Alam M. A., Komuro H., Bhandari R. K., Nakamuraとが，卵巣の活性化や生殖腺の性転換に関与している

S., Soyano K., and Nakamura M., 2005:と考えられた。

Immunohistochemical evidence possibly identifying the site of androgen production in the

人為的性転換の誘導と水産増養殖への応用

ovary of the protogynous grouper Epinephelus
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雌から雄へ性転換する。多くのハタでは全ての個体が"Intersexuality

はじめ雌として機能し，ある大きさになって性転換し（ed. By Armstrong C. N., Marshall A. J.）,て初めて雄が出現する。2 ，3 メートルに成長する大型

Vertebrates Including

Man"

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ハタでは雄が入手出来なくて養殖が困難となるケース

Bhandari R.K., Komuro H., Nakamura S., Higa M.,が多い。このため，雌を雄にする技術開発が望まれて

and Nakamura M., 2003a: Gonadal restructur-いる。小型のカンモンハタを用いて性転換の内分泌調

ing and correlative steroid hormone profiles

節機構の解明と人為的性転換を試みてきた。雌期個体

during natural sex change in honeycombの卵巣には，ステロイド代謝酵素のP450sccと雄性ホルgrouper （Epinephelus merra）. Zool. Sci., 20,

モンの11-KTの合成に重要な11β-水酸化酵素（P450111399-1404.

β）の抗体にともに免疫陽性反応を示す細胞群が卵巣

Bhandari R.K., Higa M., Komuro H., Nakamura S.,の外側を取り巻く卵巣白膜組織内に認められた。性転and Nakamura M., 2003b: Treatments with an

換に伴いこの細胞径が大きくなることを明らかにした。

aromatase inhibitor induces complete sex in

また，卵濾胞細胞層の莢膜細胞から由来すると考えら

protogynous honeycomb grouper（Epinephelus

れる細胞が性転換に伴いP45011β陽性反応を示す様にmerra）. Fish Physiol. Biochem., 28, 141-142.

なり，性転換後の精巣中のライディヒ細胞へと分化す

Bhandari R. K., Higa M., Nakamura S., andることを明らかにした（Alam et al., 2005）。ハタのNakamura M., 2004a: Aromatase inhibitor

24

中村

將・小林靖尚・三浦さおり

induces complete sex change in the protogynousG.,

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