固相誘導体化法による短鎖脂肪酸と有機酸の一斉分析法の開発○佐々野僚一1、杉立久仁代2、野原健太2、古野正浩3、福﨑英一郎3（1アイスティサイエンス, 2アジレント・テクノロジー, 3阪大院・工）【Abstract】
従来のメタボローム分析において、短鎖脂肪酸は、凍結乾燥/遠心乾固の工程における気化損失が懸念されるため、通常のメタボローム解析と同じ手法での前処理が難しく、塩酸酸性下でのジエチルエーテル抽出などの手法が取られることが多い。そこで、本研究では凍結乾燥工程を必要としない自動固相誘導体化オンライン
SPE/GC/MSシステムを用いて、MTBSTFA誘導体化試薬による短鎖脂肪酸と有機酸の一斉分析のメソッド開発を行った。
【Experimental】■ 自動固相誘導体化オンラインSPE/GC/MSシステム■ 固相誘導体化法
STEP ①

STEP ②

STEP ③

STEP ④

STEP ⑤

試料負荷＆保持洗浄

脱水／１分

誘導体化／１分

溶出

誘導体化試薬を固相に含侵させて、目的成分を固相中で誘導体化

誘導体化物をヘキサンで溶出MTBSTFA

ヘキサン

短鎖脂肪酸と有機酸をイオン交換相互作用により固相に保持

水-ACNで固相に残存している非イオン性化合物を除去

ACNで固相に残存している水分を除去

試料水-ACNACN-N ⊕ ⊝ OOC-R-N ⊕ ⊝ OOC-R

カルボキシル基

固相-N ⊕-N⊕3 ⊝OOC-R-N⊕(CH3)3(CH3)(CH3)3(CH3)3

Flash-SPE
AX-N ⊕-N⊕(CH3)3(CH3)3誘導体化から注入するまでの時間が常に一定

溶出&注入-N ⊕ tBDMS-OOC-R-N⊕(CH3)3

自動前処理時間（脱水・誘導体化含む）: 10 min

LVI-S250
Spiral Insert-N⊕(CH3)3(CH3)3(CH3)3GC-MS
非イオン性化合物

R-COO-tBDMS

水

試料負荷

コンディショニ
ング

洗浄・脱水MTBSTFA含浸
誘導体化

前処理装置にはオンラインSPE-GCインターフェース（SGI-M100, AiSTI製）、測定装置には大量注入口装置（LVI-S250, AiSTI製）を備えたGC-MS（GC: 7890B, MS: 5977B, Agilent製）を用いた。固相カートリッジには、強イオン交換相互作用の固相カートリッジ(Flash-SPE AX, AiSTI製) を用いた。測定試料は短鎖脂肪酸と有機酸をアセトニトリル-水混合溶液（4/1）で調製した。自動前処理の手順は、固相カートリッジをコンディショニングした後に、試料溶液を通液し目的物質を固相にイオン交換相互作用により吸着させ、アセトニトリル-水混合溶媒で洗浄し、アセトニトリルを流すことで脱水を行った。その後、誘導体化試薬MTBSTFAを固相に直接添加して含浸させて、固相中でtBDMS誘導体化を行い、ヘキサンで溶出しながら直接GCへ注入した。

Automation
試料： 100mg

Online SPE-GC-MS System
バイアル

添加 水 100µL

R-COOH ＋コンディショニング
ACN-水

分取 : 20, 40µL

添加 ACN 800µL

通液することで固相に残存している水分を取り除く。

固相誘導体化：強イオン性固相に短鎖脂肪酸を吸着させてた状態

溶出 ヘキサンバイアル

Online SPE-GC-MS System

脱水：強イオン性固相に短鎖脂肪酸を吸着させてアセトニトリルを固相誘導体化反応 1 min

添加 0.1N NaOH水 （pH調製）

Pump Unit■ 固相抽出技術

含侵 MTBSTFA-トルエン

添加 ACN-水 600µL

t-BDMS化

TMS 誘導体は加水分解されやすいのに対し，t-BDMS 誘導体は加水分解に対し非常に安定。

脱水 ACN分取 上澄み液：200µL→ R-COOMTBSTFA

洗浄 ACN-水遠心分離（14000rpm, 5min）

Pre-treatment
Unit

脂肪酸

固相：Flash-SPE AX

振とう （37℃, 30min）■ Condition of SPE-GC/MS System■ MTBSTFAによるt-BDMS誘導体化

で誘導体化試薬をその固相に含浸させて、誘導体化。

GC-MS： LVI-Split（1:20）【Results】■ スタンダードによる条件検討と評価■ 実試料による評価◆ 誘導体化試薬の濃度について◆ クロマトグラム比較◆ 定量ピークの再現性

残存誘導体化試薬

MTBSTFA-トルエン
13

相対面積値

21:08421:3

11:1
1:3
MTBSTFA -トルエンの混合比

1:4

1:9628262922119272325

1. Methanoic acid-tBDMS

31:4
1:021

A. ロックフォール

1:124

2. Ethanoic acid-tBDMS

1:9

B. ブルーステイルトン
SCANトータルイオンクロマトグラム比較
 MTBSTFA濃度が低いと誘導体化率が悪くなり、濃く過ぎても一部の成分で悪くなった。
 誘導体化試薬はMTBSTFA - トルエン（1:3）を最適条件とした。

 MTBSTFA濃度が高いとその残存量が多くなり、リテンションタイムやピーク形状に悪影響をあたえることがわかった。

◆ 誘導体化反応時間◆ 抽出後の pH調製
3. Propanoic acid-tBDMS 4. Butanoic acid-tBDMS

相対面積値

相対面積値

C. ゴンゴンゾーラ

図2. 本法によるブルーチーズ3種のSCANトータルイオンクロマトグラム比較
試料：ブルーチーズ３種

反応時間（min）

 固相に負荷する抽出液はpH=7以上を最適条件とした。
 固相の保持には対象物質のpKaに関係しており、解離していることが重要であることがわかった。

 MTBSTFAと短鎖脂肪酸の固相誘導体化法は、直ぐに反応していることがわかった。

CBA◆ クロマトグラム

61123456789101112131415167954313152161110 12検出器OFF814

Methanoic acid-tBDMS pKa = 3.7
Ethanoic acid-tBDMS
pKa = 4.6
Propanoic acid-tBDMS pKa = 4.8
Butanoic acid-tBDMS
pKa = 4.8
Pentanoic acid-tBDMS pKa = 4.8
Hexanoic acid-tBDMS
pKa = 5.1
Heptanoic acid-tBDMS pKa = 5.1
Lactic acid-2tBDMS
pKa = 3.8
Octanoic acid-tBDMS
pKa = 5.2
Maleic acid-2tBDMS
pKa = 3.1
Succinic acid-2tBDMS pKa = 3.5
Fumaric acid-2tBDMS pKa = 3.6
Malic acid-3tBDMS
pKa = 3.2
a-Ketoglutaric acid-3tBDMS
Tartaric acid-4tBDMS
pKa = 2.7
Citric acid-4tBDMS
pKa = 3.0

図１. 本法によるスタンダードのSCANトータルイオンクロマトグラム◆ 再現性
Table 1. 本法の繰り返し測定によるスタンダードのピーク面積値の再現性（ n = 10 ）N o. 化合物名

12345678910

A ve.

R S D ,%

1M ethanoic acid-tB D M S

30,227,430

30,889,896

30,429,839

30,948,441

31,244,577

31,557,736

32,493,298

32,124,585

32,670,291

31,126,554

31,371,265

2.7

2Ethanoic acid-tB D M S

12,340,883

12,538,808

12,137,282

12,298,944

12,381,311

12,578,273

13,094,081

12,862,755

12,800,785

12,135,503

12,516,863

2.6

3

P ropanoic acid-tB D M S

12,823,811

12,909,258

12,779,143

12,845,278

13,087,033

13,015,973

13,636,656

13,327,889

13,578,399

12,345,834

13,034,927

3.0

4B utanoic acid-tB D M S

11,475,299

11,581,97811,808,966

11,688,344

11,946,609

12,009,882

12,394,007

11,964,797

12,362,085

11,127,740

11,835,971

3.3

5

P entanoic acid-tB D M S

11,588,243

11,720,223

12,243,830

11,920,575

12,135,019

12,354,232

12,670,558

12,084,388

12,720,821

11,576,139

12,101,403

3.4

6

H exanoic acid-tB D M S

11,580,646

11,842,742

12,353,900

11,988,066

12,169,039

12,387,848

12,572,832

12,065,398

12,647,753

11,874,440

12,148,266

2.8

7H eptanoic acid-tB D M S

11,606,883

11,805,299

12,464,553

12,009,352

12,146,574

12,496,200

12,573,604

11,959,907

12,691,060

12,106,993

12,186,043

2.9

8Lactic acid-2tB D M S

1,077,185

1,230,088

1,131,334

1,076,805

1,162,595

1,154,103

1,154,143

1,145,913

1,187,630

1,112,992

1,143,279

4.1

9

O ctanoic acid-tB D M S

10,608,992

10,881,088

11,527,448

11,111,574

11,200,905

11,651,375

11,407,126

10,950,090

11,613,534

11,248,975

11,220,111

3.0

10 M aleic acid-2tB D M S

1,867,779

1,969,324

2,040,317

1,900,232

2,065,959

2,002,221

1,949,168

1,898,625

2,022,759

2,113,877

1,983,026

4.0

11 Succinic acid-2tB D M S

2,406,066

2,438,793

2,495,130

2,401,336

2,499,333

2,510,922

2,491,212

2,377,200

2,506,791

2,573,343

2,470,013

2.5

12 Fum aric acid-2tB D M S

4,193,048

4,331,927

4,480,305

4,218,660

4,487,927

4,390,857

4,285,980

4,205,144

4,422,052

4,579,983

4,359,588

3.1

13 M alic acid-3tB D M S

1,570,355

1,544,780

1,523,746

1,576,209

1,573,185

1,590,439

1,612,939

1,578,652

1,571,389

1,623,141

1,576,484

1.8

14 a-K etoglutaric acid-3tB D M S

553,488

530,143534,318

509,953

582,938

521,569

534,178

552,656

537,514609,245546,600

5.415 Tartaric acid-4tB D M S

563,021521,446

497,159546,241

530,917526,143

540,008

583,506

526,641

580,916

541,600

5.1

16 C itric acid-4tB D M S

924,916

849,805

796,506

911,965

892,992

862,443

834,170

973,466

842,453

1,025,026

891,374

7.8

123468
91121
2223
24
25
26
27
28
29

Methanoic acid-tBDMS
Ethanoic acid-tBDMS
Propanoic acid-tBDMS
Butanoic acid-tBDMS
Hexanoic acid-tBDMS
Lactic acid-2tBDMS
Octanoic acid-tBDMS
Succinic acid-2tBDMS

Decanoic acid-tBDMSDodecanic acid-tBDMS
Benzenepropanoic acid-2tBDMS
Tetradecanoic acid-tBDMS
Aspartic acid-3tBDMS
Glutamic acid-3tBDMS
Hexadecanoic acid-tBDMS
cis-9-Octadecenoic acid-tBDMS
Stearic acid-tBDMS

5. Pentanoic acid-tBDMS

6. Hexanoic acid-tBDMS

図3. 本法によるブルーチーズAの定量イオ
ンクロマトグラム重ね描き（ n = 10 ）◆ 再現性
Table 2. 本法の繰り返し測定によるブルーチーズAのピーク面積値の再現性（ n = 10 ）N o. 化合物名

12345678910A ve.

6,087,241

6,025,118

5,973,966

6,068,586

5,802,239

6,134,522

6,101,179

5,798,742

R S D ,%

1M ethanoic acid-tB D M S

5,662,335

5,777,3805,943,131

2.8

2Ethanoic acid-tB D M S

18,770,224 20,146,848 19,677,295 20,067,483 20,422,968 19,469,683 21,313,154 20,143,063 20,431,335 20,147,390

20,058,944

3.3

3

P ropanoic acid-tB D M S

576,679

571,387

4.0

4

B utanoic acid-tB D M S

13,001,525 14,053,261 13,282,154 14,064,781 14,082,758 13,297,350 14,175,957 13,582,032 13,870,275 13,807,788

13,721,788

3.0

5

P entanoic acid-tB D M S

85,54090,56186,590

92,154

94,20586,63690,47588,60388,35088,237

89,1353.0

6

H exanoic acid-tB D M S

885,558

909,180

860,093962,674

948,573

900,324

908,790901,709906,454902,439

908,579

3.2

7

H eptanoic acid-tB D M S

108,089

106,675

100,268

116,243

111,757

107,815

107,017108,204

106,638

107,850

108,0563.7

8Lactic acid-2tB D M S

2,937,700

2,896,698

2,933,690

3,024,671

3,004,121

3,016,702

3,054,493

2,995,071

3,028,298

2,984,398

2,987,584

1.7

9O ctanoic acid-tB D M S

7,698,998

7,401,664

7,429,620

8,050,950

7,874,511

7,738,806

7,568,072

7,785,579

7,625,665

7,743,874

7,691,774

2.6

10

M aleic acid-2tB D M Sーーーーーーーーーーーー

11

Succinic acid-2tB D M S

930,429

907,160

953,785

962,154959,702

976,303951,261

990,590989,084993,676

961,414

2.9

12

Fum aric acid-2tB D M S

97,01595,707

107,631

99,765

108,764

114,054

109,247

116,137

106,451

101,762

105,653

6.5

13M alic acid-3tB D M S

168,152

158,283

162,771

167,983

158,269

167,363

170,771

181,388

176,893

177,783

168,966

4.7

14

a-K etoglutaric acid-3tB D M S

63,20655,23160,496

63,38059,28961,57559,89164,92470,24965,13562,338

6.5

15

Tartaric acid-4tB D M Sーーーーーーーーーーーー

16

C itric acid-4tB D M S

20,40016,533

19,18520,28918,807

19,405

18,88820,926

20,03718,756

19,323

6.4

524,184

593,124554,110579,284

587,008

547,840

600,395

572,069

579,179【Conclusion】
その結果、ギ酸および酢酸を含む短鎖脂肪酸および有機酸とも良好なクロマトグラムを得ることができた。また、誘導体化反応時間は1分で、自動前処理にかかった時間は約10分であった。MTBSTFAによる固相誘導体化法により、凍結乾燥工程を行わずに、自動で迅速な分析が可能となった。本法は短鎖脂肪酸および有機酸の一斉分析に有効であることがわかった。

メタボロームシンポジウム2018
2018年10月17-19日, 鶴岡市

固相誘導体化法による短鎖脂肪酸と有機酸の一斉分析法の開発○佐々野僚一1、杉立久仁代2、野原健太2、古野正浩3、福﨑英一郎3（1アイスティサイエンス, 2アジレント・テクノロジー, 3阪大院・工）Abstract
従来のメタボローム分析において、短鎖脂肪酸は、凍結乾燥/遠心乾固の工程における気化損失が懸念されるため、通常のメタボローム解析と同じ手法での前処理が難しく、塩酸酸性下でのジエチルエーテル抽出などの手法が取られることが多い。そこで、本研究では凍結乾燥工程を必要としない自動固相誘導体化オンラインSPE/GC/MSシステ
ムを用いて、MTBSTFA誘導体化試薬による短鎖脂肪酸と有機酸の一斉分析のメソッド開発を行った。

固相誘導体化法

STEP ①

STEP ②

STEP ③

STEP ④

STEP ⑤

試料負荷＆保持洗浄

脱水／１分誘導体化／１分

溶出

短鎖脂肪酸と有機酸をイオン交換相互作用により固相に保持水-ACNで固相に残存している非イオン性化合物を除去

ACNで固相に残存している水分を除去

誘導体化試薬を固相に含侵させて、目的成分を固相中で誘導体化

誘導体化物をヘキサンで溶出

試料
カルボキシル基-N ⊕-N⊕3 ⊝OOC-R(CH3)(CH3)3

水ACN-N ⊕ ⊝ OOC-R-N⊕(CH3)3(CH3)3

非イオン性化合物

ACN-N ⊕ ⊝ OOC-R-N⊕(CH3)3(CH3)3
水MTBSTF
A-N ⊕ tBDMS-OOC-R-N⊕(CH3)3(CH3)3

ヘキサン-N ⊕-N⊕
(CH3)3(CH3)3

R-COO-tBDMS

自動固相誘導体化オンラインSPE-GC-MSシステム

自動前処理時間 （精製・脱水・誘導体化）:10 min       
Flash-SPEAXLVI-S250
Spiral Insert
GC-MS     前処理フローAutomation

試料： 100mg
バイアルOnline SPE-GC-MS System

添加 水 100µL
添加 ACN 800µL

振とう （37℃, 30min）
遠心分離（14000rpm, 5min）
分取 上澄み液：200µL
添加 ACN-水 600µL
添加 0.1N NaOH水 （pH調製）

バイアル

分取 : 20, 40µL

コンディショニング
ACN-水固相：Flash-SPE AX
洗浄 ACN-水脱水 ACN
含侵 MTBSTFA-トルエン
固相誘導体化反応 1 min
溶出 ヘキサン
GC-MS： LVI-Split（1:20）

MTBSTFA誘導体化■ MTBSTFAによるt-BDMS誘導体化
R-COOH＋→ R-COO

脂肪酸

MTBSTFA

t-BDMS化

TMS 誘導体は加水分解されやすいのに対し，t-BDMS 誘導体は加水分解に対し非常に安定。

■ 固相抽出技術
脱水：強イオン性固相に短鎖脂肪酸を吸着させてアセトニトリルを通液することで固相に残存している水分を取り除く。

固相誘導体化：強イオン性固相に短鎖脂肪酸を吸着させてた状態
で誘導体化試薬をその固相に含浸させて、誘導体化。

条件■ Condition of SPE-GC/MS System

誘導体化試薬の濃度について
140120相対ピーク面積値

1008060402001:0

1:1

1:3

1:4

1:9

MTBSTFA -トルエンの混合比

12345678910111213141516 MTBSTFA濃度が低いと誘導体化率が悪くなり、濃く過ぎても一部の成分で悪くなった。
 誘導体化試薬はMTBSTFA - トルエン（1:3）を最適条件とした。

誘導体化試薬の濃度について
残存誘導体化試薬

MTBSTFA -トルエンの混合比
1:01:11:31:41:9

SCANトータルイオンクロマトグラム比較

誘導体化反応時間120

相対ピーク面積値

1008060402001.01.52.03.0

反応時間（min）
123456789101112131415

 MTBSTFAと短鎖脂肪酸の固相誘導体化法は、直ぐに反応することがわかった。

16

抽出液のpH調製について
140

 固相に負荷する抽出液はpH=7以上を最適条件とした。

120

相対ピーク面積値

100806040200pH4.5

pH5.5

pH6.5

pH7.5

pH8.5

1 Formic acidpKa = 3.7

2 Acetic acidpKa = 4.6

3 Propanoic acidpKa = 4.8

4 Butanoic acidpKa = 4.8

5 Pentanoic acidpKa = 4.8

6 Hexanoic acidpKa = 5.1

7 Heptanoic acidpKa = 5.1

8 Lactic acidpKa = 3.8

9 Octanoic acidpKa = 5.2

10 Maleic acidpKa = 3.1

11 Succinic acidpKa = 3.5

12 Fumaric acidpKa = 3.6

13 Malic acidpKa = 3.2

Formic acid-tBDMS

Acetic acid-tBDMS

Propanoic acid-tBDMS

Butanoic acid-tBDMS

Pentanoic acid-tBDMS

Hexanoic acid-tBDMS

Heptanoic acid-tBDMS

Octanoic acid-tBDMS

Lactic acid-tBDMSMaleic acid-2tBDMS

14 a-Ketoglutaric acid

Succinic acid-2tBDMS

Fumaric acid-2tBDMS

15 Tartaric acidpKa = 2.7

Malic acid-3tBDMS

a-Ketoglutaric acid-tBDMS

16 Citric acidpKa = 3.0

Tartaric acid-4tBDMS

Citric acid-4tBDMS

本法によるスタンダードのSCANトータルイオンクロマトグラム

61795
3421315

検出器OFF8

1. Methanoic acid-tBDMS
2. Ethanoic acid-tBDMS
3. Propanoic acid-tBDMS
4. Butanoic acid-tBDMS
5. Pentanoic acid-tBDMS
6. Hexanoic acid-tBDMS

1110 121614

7. Heptanoic acid-tBDMS
8. Lactic acid-2tBDMS
9. Octanoic acid-tBDMS
10. Maleic acid-2tBDMS
11. Succinic acid-2tBDMS
12. Fumaric acid-2tBDMS

13. Malic acid-3tBDMS
14. a-Ketoglutaric acid-3tBDMS
15. Tartaric acid-4tBDMS
16. Citric acid-4tBDMS

再現性
Table 1. 本法の繰り返し測定によるスタンダードのピーク面積値の再現性（ n = 10 ）ブルーチーズ3種のSCANトータルイオンクロマトグラム比較
試料：ブルーチーズ３種C

12345789112122242526272829B

A

Methanoic acid-tBDMS
Ethanoic acid-tBDMS
Propanoic acid-tBDMS
Butanoic acid-tBDMS
Pentanoic acid-tBDMS
Heptanoic acid-tBDMS
Lactic acid-2tBDMS
Octanoic acid-tBDMSSuccinic acid-2tBDMS
Decanoic acid-tBDMS
Dodecanic acid-tBDMS
Tetradecanoic acid-tBDMS
Aspartic acid-3tBDMS
Glutamic acid-3tBDMS
Hexadecanoic acid-tBDMS
cis-9-Octadecenoic acid
Stearic acid-tBDMS

再現性

1. Methanoic acid-tBDMS

2. Ethanoic acid-tBDMS

4. Butanoic acid-tBDMS

5. Pentanoic acid-tBDMS

3. Propanoic acid-tBDMS

6. Hexanoic acid-tBDMS

本法によるブルーチーズAの定量イオンクロマトグラム重ね描き（ n = 10 ）

再現性

Table 2. 本法の繰り返し測定によるブルーチーズAのピーク面積値の再現性（ n = 10 ）N o. 化合物名

123456789106,087,2416,025,1185,973,966

6,068,586

5,802,239

6,134,522

6,101,179

5,798,742

A ve.

R S D ,%

1

M ethanoic acid-tB D M S

5,662,335

5,777,380

5,943,131

2.8

2Ethanoic acid-tB D M S

18,770,224 20,146,848 19,677,295 20,067,483 20,422,968 19,469,683 21,313,154 20,143,063 20,431,335 20,147,390

20,058,944

3.3

3

P ropanoic acid-tB D M S

576,679

571,387

4.0

4

B utanoic acid-tB D M S

13,001,525 14,053,261 13,282,154 14,064,781 14,082,758 13,297,350 14,175,957 13,582,032 13,870,275 13,807,788

13,721,788

3.0

5

P entanoic acid-tB D M S

85,54090,561

86,59092,154

94,20586,63690,47588,60388,35088,237

89,1353.0

6

H exanoic acid-tB D M S

885,558

909,180

860,093962,674

948,573

900,324

908,790901,709906,454902,439

908,579

3.2

7

H eptanoic acid-tB D M S

108,089

106,675

100,268

116,243

111,757

107,815

107,017108,204

106,638

107,850

108,0563.7

8Lactic acid-2tB D M S

2,937,700

2,896,698

2,933,690

3,024,6713,004,121

3,016,702

3,054,493

2,995,071

3,028,298

2,984,398

2,987,584

1.7

9

O ctanoic acid-tB D M S

7,698,998

7,401,664

7,429,620

8,050,950

7,874,511

7,738,806

7,568,072

7,785,579

7,625,665

7,743,874

7,691,774

2.6

10

M aleic acid-2tB D M Sーーーーーーーーーーーー

11

Succinic acid-2tB D M S

930,429

907,160

953,785

962,154959,702

976,303951,261

990,590989,084993,676

961,414

2.9

12

Fum aric acid-2tB D M S

97,01595,707

107,631

99,765

108,764

114,054

109,247

116,137

106,451

101,762

105,653

6.5

13

M alic acid-3tB D M S

168,152

158,283

162,771

167,983

158,269

167,363

170,771

181,388

176,893

177,783

168,966

4.7

14

a-K etoglutaric acid-3tB D M S

63,20655,23160,496

63,38059,28961,57559,89164,92470,24965,13562,338

6.5

15

Tartaric acid-4tB D M Sーーーーーーーーーーーー

16

C itric acid-4tB D M S

20,40016,533

19,18520,28918,807

19,405

18,88820,926

20,03718,75619,323

6.4

524,184

593,124554,110579,284

587,008

547,840

600,395

572,069

579,179

まとめ
ギ酸および酢酸を含む短鎖脂肪酸および有機酸とも良好なクロマトグラムを得ることができた。また、誘導体化反応時間は2分で、自動前処理にかかった時間は約10分であった。MBSTFAによる固相誘導体化法により、凍結乾燥工程を行わずに、自動で迅速な分析が可能となった。本法は短鎖脂肪酸および有機酸の一斉分析に有効であることがわかった。