展 示 用別寒辺牛湿原の淡水微細藻類の系統保存
北海道大学 傳法 隆
概要
本研究では，別寒辺牛湿原並びに周辺河川に生息する淡水微細藻類を採集し，まず人工合成培地を用いて単藻培養することによって，種の系統保存を図り，次にこれを用いて当地の淡水微細藻類相を同定し，記載することを目的として行った。
結果として，別寒辺牛湿原並びに周辺河川から珪藻類13属25種，緑虫藻類1属1種，並びに緑藻類9属18種を単離・同定し，それらの単藻培養株を確立することに成功した。珪藻類では，
別寒辺牛湿原の林道沿いの地塘や小川から好清水性種が採集され，反対に大別川から好汚濁性種が採集される傾向にあった。
また，同様に緑藻類ホシミドロ目でもどこにでも普通に見られるC. moniliferumやC. peracerosum-strigosum-littrale種複合体が大別川から得られ，その他のデスミッド類は林道沿いの池塘や小川から得られた。デスミッド類は，珪藻類の種のように生態的に詳しく研究されていないが，水質に適応した種類がそこで増えているのが明らかである。ミズゴケ湿原は水質が酸性で貧栄養であるが，そのような場所に平地の池沼では見られないデスミッド類が多く生息しているのなら，別寒辺牛湿原のような湿原が失われることにより最も影響を受ける淡水微細藻類はデスミッド類であるかも知れない。

淡水微細藻類採集地点とその物理化学的性状
７N

６パイロットフォレスト１号

５４

別寒辺牛川

別寒辺牛湿原
トライベツ川チャンベツ川

WT＊

pH

EC ＊

DO＊

①大別川

11.5

7.44

17.37

15.83

②別寒辺牛川中流

12.4

7.04

9.93

7.01

③ビッチィ川

11.6

7.03

9.81

ビッチィ川

別寒辺牛川橋
サッテベツ川

8.69

１
大別川橋

④池塘

11.7

6.80

5.63

12.12

⑤池塘

12.8

7.19

7.22

6.14

⑥小川

12.2

6.74

6.68

8.50

⑦別寒辺牛川上流11.6

6.64

7.98

8.90

３

道道８１３号

２大別川＊WT:水温（℃），EC;電気伝導度（mS/m），溶存酸素濃度（mg/L）
２００７年９月２５日計測

淡水微細藻類培養用培地の調製
各々の培地は，蒸留水100ml当たりの試薬の添加量を示した。C培地は接合藻類，CSi培地は珪藻類，CA培地は緑藻類と接合藻類，AF6培地は緑色鞭毛藻類の培養に使用した。
３）CA培地

１）C培地

４）AF6培地

硝酸カルシウム

CaNO3・4H2O

15mg

硝酸カルシウム

CaNO3・4H2O

2mg

硝酸ナトリウム

NaNO314mg

硝酸カリウムKNO310mg

硝酸カリウムKNO310mg

硝酸アンモニウム

NH4NO32.2mg

グリセロリン酸 ナト
リウム

Na2glyceroPO4・5H2O

5mg

硝酸アンモニウム

NH4NO35mg

硫酸マグネシウム

MgSO4・7H2O3mg

MgSO4・7H2O

4mg

グリセロリン酸 ナトリウムNa2glyceroPO4・5H2O

3mg

硫酸マグネシウム

リン酸一カリウム

KH2PO41mg

ビタミンB12Vitamin B120.01μg

硫酸マグネシウム

MgSO4・7H2O2mg

リン酸二カリウム

K2HPO40.5mg

ビタミンB12Vitamin B120.01μg

塩化カルシウム

CaCl2・2H2O1mg

クエン酸鉄

Iron citrate

0.2mg

ビオチン

Biotin0.01μgチアミン

Thiamine HCl

1μg

PⅣ微量金属混液*PⅣ metals

0.3ml

チアミン

バッファー

Tris (hydroxymethyl)aminomethane

50mg

D.W.

/100mlpH

7.5

蒸留水２）CSi培地（C培地に添加）
ケイ酸ナトリウム

Na2SiO4・7H2O

10mg

pH

7.50.01μg

クエン酸

Citric acid0.2mg

ビタミンB12Vitamin B120.1μg

Thiamine HCl1μg

ビオチン

Biotin0.2μg

PⅣ微量金属混液*PⅣ metals

0.1ml

チアミン

Thiamine HCl1μg

Fe液

Fe (as EDTA;1:1 molar)

0.1ml

ビタミンB6Vitamin B60.1μg

バッファー

HEPES

40mg

PⅣ微量金属混液*PⅣ metals

0.5ml

蒸留水

D.W.

/100ml

バッファー

MES

40mg

pH

7.2

蒸留水

D.W.

/100ml

pH

6.6

ビオチン

Biotin* PⅣ微量金属混液：蒸留水100mlにNa2EDTA100mgを溶解後，順次塩化第二鉄（19.6mg），塩化マンガン（3.6mg），塩化亜鉛（2.2mg），塩化コバルト（0.4mg），モリブデン酸Na（0.25mg）を溶解させる。

ピペット洗浄法による微細藻類の分離
培養試験管

クリーンベンチ

無菌条件下
液体培地を入れた培養試験管に目的の微細藻を移し替える。

本培養（１〜２ヶ月間）

単藻培養株（倒立）顕微鏡

時計皿

サンプルから液体培地を入れた時計皿に目的の微細藻（緑色）をパスツールピペットで分離する（他藻が混入する）。

実体顕微鏡

ウェルスライドグラス

無菌条件下液体培地を入れたウェルに目的の微細藻をパスツールピペットで順次移し替え（洗浄），セルプレートに植える。

24ウェルセルプレート

前培養（２週間）

サンプル稀釈法による微細藻類の分離クリーンベンチ

無菌条件下液体培地を入れた培養試験管に単藻増殖してきた微細藻を移す。

前培養（２週間）
24ウェルセルプレート

培養試験管
試験管（液体培地入）

寒天プレート（寒天培地入）
実体顕微鏡

本培養（３〜４週間）

接種
前々培養（１ヶ月間）

1/100
1/1000

1
1/10
1/100
1/10001/10000
1/100000

1/100

1/10001/10000

1/100000

1/10000
1/100000

サンプル液を一定量取り，液体培地で順次稀釈した
後，パスツールピペットを用いて寒天プレート上に接種する。

形成されたコロニーを無菌条件下顕微鏡下で個々に単離し，セルプレートに植付ける。

単藻培養株

別寒辺牛湿原から単離された珪藻類の種名と培養株番号
分類階級

種名

Chrysophyta 黄藻植物門
Bacillariophyceae 珪藻綱Centrophycidae 中心珪藻亜綱
Coscinodiscales コアミケイソウ目
Coscinodiscaceae コアミケイソウ科
Aulacoseira italica v. tenuissima
Cyclotella meneghiniana v. meneghiniana
Melosira varians

Pennatophycidae 羽状珪藻亜綱Diatomales イタケイソウ目
Diatomaceae イタケイソウ科
Fragilaria capucina v. vaucheriae
Fragilaria virescens
Synedra minuscula
Synedra rumpens v. familians
Synedra ulna
Tabellaria fenestrata
Tabellaria flocculosa
Eunotiales エウノチア目
Eunotiaceae エウノチア科
Euntia exigua v. exigua
Eunotia formica v. formica
Eunotia pectinalis v. pectinalis
Naviculales フナガタケイソウ目
Naviculaceae フナガタケイソウ科
Encyonema minutum
Navicula cryptocephalaPinnularia acrosphaeria v. acrosphaeria
Pinnularia major v. major
Pinnularia viridis
Neidium iridis v. amphigomphus
Stauroneis acuta
Stauroneis phoenicenteron v. phoenicenteron
Nitzschiaceae ササノハケイソウ科
Nitzschia augustiforaminata
Nitzschia obsoleta
Nitzschia palea v. debilis
Nitzschia vermicularis
不明種１

培養株No.

BKB-335, 336
BKB-299*, 337**
BKB-9,* 49*, 50*, 168**, 235***,236*, 300*, 301*, 307*, 308***,318*, 331****

BKB-319
BKB-41*, 42*, 43*, 185*, 186*,212*, 213**
BKB-312
BKB-339
BKB-24
BKB-134, 135
BKB-33, 129, 140, 195, 268, 269

BKB-338
BKB-198*, 249**
BKB-246, 247

BKB-340
BKB-84
BKB-251
BKB-291
BKB-169
BKB-216
BKB-209, 210, 286, 287, 289
BKB-149, 151, 152, 157, 172
BKB-323
BKB-310
BKB-67, 71, 334
BKB-174
BKB-61, 311, 317, 329

Bourrelly (1966-1970) 並びに秋山・山岸 (1984-1998)の分類体系による。
アスタリスク（＊）によって，同一形態種であっても大きさが異なるものがあることを示している。

別寒辺牛湿原の珪藻類

12(×160)
Cyclotella meneghiniana

Melosira varians

45(×80)

Synedra ulna7(×80)(×80)

3(×80)

Fragilaria virescens(×80)

6Tabellaria fenestrata

T. flocculosa

89(×240)(×40)(×160)

Eunotia formica v. formica

E. formica v. formica

E. peclinalis v. pectinalis

101112(×80)

Pinnularia acrosphaeria

13(×240)

P. major v. major

14

N. iridis v. amphigomphus

Stauroneis acuta

1617S. phoenicenteron

(×40)

(×80)

(×80)

Neidium iridis(×80)

15(×160)

S. acuta(×160)

Nitzschia palea v. debilis

18(×80)Nitzschia vermicularis

別寒辺牛湿原から単離された緑虫藻類と緑藻類の種名と培養株番号
分類階級

種名

培養株No.

Euglenophyta 緑虫植物門
Euglenophyceae 緑虫藻綱
Euglenales ミドリムシ目
Euglenaceae ミドリムシ科
Phacus tortus

BKB-138

Chlorophyta 緑藻植物門
Chlorophyceae 緑藻綱
Volvocales オオヒゲマワリ目
Chlamydomonadaceae クラミドモナス科
Chlamydomonas augulosa

BKB-260

Chlorococcales クロロコックム目
Chlorococcaceae クロロコックム科
Chlorococcum spp.
Oocystaceae オーキスチス科
Chlorella spp.
不明種２不明種３
Zygnematales ホシミドロ目
Zygnemataceae ホシミドロ科
Mougeotia sp. 1
Spirogyra sp.1
Mesotaeniaceae サヤマメモ科
Gonatozygon kinahani v. kinahani
Desmidiaceae チリモ科
Closterium ehrenbergii
Closterium lanceolatum
Closterium lineatum v. lineatum
Closterium littorale
Closterium macilentum v. macilentum
Closterium moniliferum v. moniliferum

Closterium moniliferum v. submoniliferum
Closterium rostrarum v. rostratum
Closterium strigosum
Closterium sp.
Desmidium swartzii
Staurastrum variens f. truncata

BKB-82, 313, 314, 326, 327,333
BKB-64, 65, 72, 309, 316, 320,324, 325, 328, 332
BKB-321, 322
BKB-330

BKB-31*, 104**, 105*, 121**,264***
BKB-126
BKB-120, 343
BKB-85*, 86*, 94**, 95***,98***, 99***, 274***
BKB-101
BKB-176
BKB-295
BKB-277
BKB-45*, 113**, 116**, 118**,
119**, 219*, 220*, 222*, 238*,
239**, 241**, 242*
BKB-218*, 229*
BKB-14, 232
BKB-231
BKB-44
BKB-88, 89, 93
BKB-341

Bourrelly (1966-1970) 並びに秋山・山岸 (1984-1998)の分類体系による。
アスタリスク（＊）によって，同一形態種であっても大きさが異なるものがあることを示している。

別寒辺牛湿原の緑虫藻類と緑藻類1(×80)

Phacus tortus

4(×40)

Spirogyra sp.

7(×40)

C. ehrenbergii

102

Mougeotia sp.

56(×40)(×40)

Closterium ehrenbergii

8911

C. lineatum v. lineatum

C. littorale1314(×40)(×160)

Gonatozygon kinahani(×40)

C. ehrenbergii(×40)

3(×240)Chlamydomonas augulosa(×40)

C. lanceolatum(×80)

12(×40)C. macilentum v. macilentum(×40)

15(×80)C. moniliferum v. moniliferum

C. moniliferum v. submoniliferum

C. rostratum v. rostratum

161718C. strigosum(×80)

Desmidium swartzii(×40)(×240)

Staurastrum variens f. truncata