漁業集落排水処理施設におけるノロウイルス対策について
Anti roe dear virus measures for the waste water treatment facility inthe fishing community

伊藤敏朗*・久保田弘道**
Toshiaki ITO and Hiromichi KUBOTA*（財）漁港漁場漁村技術研究所

第２調査研究部

部長**（財）漁港漁場漁村技術研究所

第２調査研究部

主任研究員

Roe dear virus is one of the major factors to cause viral stomach and intestines flame infood poisoning. Roe dear virus is , in particular, well-known as a typical pathogen in foodpoisoning by eating raw oysters. Accordingly the fishery workers engaged in oyster
culturing in some region worry about this risk. Considering that the waste water
treatment facility is mostly located close to the culture grounds, anti roe dear virus
measures for such treatment facility have been studied . This report introduces theinvestigation・experiment results carried out till now relating to measures against roe dearvirus.
Key Words : Norovirus、ultraviolet rays

1. はじめに
最近、ノロウイルスによる食中毒が注目を集めているが、その病原因子の代表的な食品としてカキの生食によるものが知られている。伝搬経路（図−１）としては、感染した人の腸内で増殖したウイルスが糞便とともに排出され、汚水処理施設等を経由して海域を汚染し、カキにウイルスが蓄積され、それを生で食べると感染するという循環経路が解明 1)されている。
筆者らは、ノロウイルスによる沿岸海域の汚染を防止し、安全なカキを生産するためには、この循環経路を断ち切る必要があると考え、汚水処理施設での対策を検討した。
排水処理施設以外の発生源 (不明)

排水処理施設(漁業集落排水処理施

糞便河 川

沿岸海域(汚染)

生食
人(SRSV の感染・増殖)

カキの体内(蓄積)

カキ以外の感染源
図−１ ノロウイルスの感染伝搬経路

汚水処理施設で用いられる代表的な消毒(殺菌)法は、塩素、紫外線、オゾン等があるが、残留性による放流水域の生物に与える影響が無く、漁業集落排水のような小規模な施設の場合、比較的安価に設置できる等の理由から紫外線消毒法が最も有効な対策方法のひとつと考えた。
しかし、これまでの紫外線消毒は、大腸菌群の殺菌を目的としており、ノロウイルスの不活化に必要な紫外線照射量は把握されていなかった。また、ノロウイルスは、培養できる細胞が見つかっておらず、ウイルス量を直接確認する方法がないため、定量計測が可能でノロウイル
スに類似するウイルスを用いて紫外線照射実験を行った。

２. SRSV について
ＳＲＳＶとは小型な球形をした胃腸炎性ウイルスの総称であり、Small Round Structured Virus の略称で、日本語では小型球形ウイルスと呼ばれる。
最初に発見されたＳＲＳＶは、1968 年に米国のオハイオ州ノーウォークという町の小学校で集団発生した急性胃腸炎の患者の糞便からウイルスが検出され、その土地の名前からノーウォークウイルスと呼ばれた。
その後、非細菌性急性胃腸炎の患者からノーウォークウイルスに似たウイルスが次々と発見されたため、一時的にノーウォークウイルスあるいはノーウォーク様ウイルス、あるいはこれらを総称して「小型球形ウイルス（ＳＲＳＶ）」と呼称されることとなった。我が国でも、1997
年 5 月に改正された食品衛生法で、食中毒病因物質に「小型球形ウイルス」が追加された。

-71-その後、ウイルスの遺伝子解析技術が発展し、2002 年
8 月に開催された国際ウイルス学会で正式な分類学上の名称が定められ、ノーウォークウイルスは、カリシウイルス科のノロウイルス属に分類されることとなった。
この新しいウイルス分類に基づいて、食品衛生法の食中毒病因物質名「小型球形ウイルス」は「ノロウイルス」と「ノロウイルス以外の小型球形ウイルス」に変更された。
ＳＲＳＶの構造は、直径 27〜38 ナノメートル※1 の球形構造で、ウイルスとしては小型である。構成物質は一本鎖ＲＮＡ（リボ核酸）とそれを取り巻く淡白質から成る。
※1 ナノメートル(nm)：1mm の百万分の 1
ＳＲＳＶの分類は以下のとおりである。
ＳＲＳＶ

カリシウイルス科

ノロウイルス
サポウイルス

アストロウイルス科

アストロウイルス

36.5％であった。
ノロウイルスは人以外にウイルスの増殖が確認された動物はなく、また、培養細胞を用いても増殖させることができない。
一般に用いられる検出方法は、ＲＴ−ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法が用いられている。

2.2 サポウイルス（Sapovirus）
ノロウイルスと同じカリシウイルス科に属しており、電子顕微鏡像では、ノロウイルスと異なり、カリシウイ
ルスの名前の由来となっている“ダビデの星”と称される明瞭な表面構造が確認できる。乳幼児における急性胃腸炎の主要病原体のひとつであるが、食中毒の原因となることはほとんどないと言われている。
サポウイルスもノロウイルスと同様人以外の動物に感染せず、培養細胞でも増やすことができない。サポウイ
ルスは全塩基配列が明らかにされた２株しかなく、疫学調査、基礎的研究ともにノロウイルスに比べて大幅に遅れている。

2.3 アストロウイルス（Astrovirus）
電 子 顕 微 鏡 では、粒 子 が星 (Astorn)状 構 造 に見えるのでこの名 が付 いた。
乳 幼 児 の嘔 吐 下 痢 症 の約 数 ％から検 出 され、時に集 団 発 生 することがある。潜 伏 期 間 は 1〜2 日 で、下 痢 や嘔 吐 の症 状 を呈 する。
このウイルスは、人 工 的 に培 養 することが可 能 であるので、定 量 試 験 (プラック法 )が可 能 である。

写真−１ ノロウイルス電子顕微鏡写真

2.1 ノロウイルス（Norovirus）
ＳＲＳＶによる胃腸炎のほとんどがノロウイルスであり、食中毒の原因物質としてよく知られている。現在、
ノロウイルスは遺伝子のタイプにより、ＧⅠとＧⅡの２つの群に大きく分けられ、さらに何種類もの型に細かく分かれている。
症状は、吐き気やおう吐を始め、下痢・腹痛などの胃腸炎症状や、発熱、頭痛などの軽い風邪に似た症状を起こす場合もある。健康な人の場合、これらの胃腸炎症状は１〜３日で治まるが、体力の弱い幼児や高齢者などの場合は、ひどい下痢により脱水症状等をおこすことがある。平成 15 年度の食中毒発生件数のうち、ノロウイルスが原因物質として判明したものは 17.8％、患者数では３. ウイルスの紫外線照射実験
汚水処理施設で用いられる代表的な消毒(殺菌)法は、塩素、紫外線、オゾン等があるが、残留性による放流水域の生物に与える影響が無く、漁業集落排水のような小規模な施設の場合、比較的安価に設置できる等の理由か
ら紫外線消毒法が最も有効な対策方法のひとつと考えた。
しかし、これまでの紫外線消毒は、大腸菌群の殺菌を目的としており、ノロウイルスの不活化に必要な紫外線照射量は把握されていなかった。また、ノロウイルスは、培養できる細胞が見つかっておらず、ウイルス量を直接確認する方法がないため、定量計測が可能でノロウイルスに類似するウイルス（アストロウイルスとロタウイルス）を用いて下記の紫外線照射実験を行った。

-72-

実験１

ﾘｱﾙﾀｲﾑ PCR 法でﾉﾛｳｲﾙｽとｱｽﾄﾛｳｲﾙｽの紫外線照射実験＋

ｱｽﾄﾛｳｲﾙｽの減衰ｶｰﾌﾞとﾛﾀｳｲﾙｽの減衰ｶｰﾌﾞの類似性を見る

実験２

ﾌﾟﾗｯｸ法でｱｽﾄﾛｳｲﾙｽとﾛﾀｳｲﾙｽの紫外線照射実験

類似ｳｲﾙｽが不活化する紫外線照射量を確かめる

図−１ 実験装置の構造

ﾉﾛｳｲﾙｽの不活化に必要な紫外線照射量を推測

3.1 ﾉﾛｳｲﾙｽとｱｽﾄﾛｳｲﾙｽの紫外線照射実験（ﾘｱﾙﾀｲﾑ PCR 法）

アストロウイルスとロタウイルスを用いた理由としては、以下のとおりである。
① アストロウイルスはノロウイルスと同様な腸管系ウイルスであり、培養できプラック法による感染力価の評価が可能である。
② アストロウイルスは、ノロウイルスと同じＳＲＳＶ（小型球形ウイルス）に分類され、ウイル
ス粒子の大きさや１本鎖ＲＮＡの遺伝子を持つ等、ウイルス分類学上近い種であると言える。
③ ロタウイルスは、ノロウイルスと同様、腸管系ウイルスによる病原微生物として多く検出されることから、両ウイルス共自然界に多く存在するウイルスであると言える。また、季節的な消長等も類似している。
なお、ロタウイルスは、２本鎖ＲＮＡウイルスでノロウイルスよりもやや大きい

アストロウイルス及びノロウイルスについて紫外線照射実験を行い、リアルタイムＰＣＲ法によるウイルス減少率を測定したところ、図−２に示すとおり、アストロウイルスの減衰カーブとノロウイルスの減衰カーブはほぼ一致した。
UVenerg y量10

ウイルス減少率1NV 10.1

NV 20.01

A strovirus

0.001

今回の実験には次のような実験装置（写真−２、図−１）を用いて紫外線の照射量を変えておこなった。

0.0001110100100010000

UV 照射量( m W ・ sec/cm 2 )■ノロウイルス(濃度1.0×107個/ml)■ノロウイルス(濃度2.2×108個/ml)■アストロウイルス

図−２ リアルタイムＰＣＲ法による紫外線照射量とウイルス不活化率

3.2 プラック法によるｱｽﾄﾛｳｲﾙｽとﾛﾀｳｲﾙｽの紫外線照射実験

写真−２ 紫外線照射実験装置

プラック減衰法により感染力価を測定した結果、
55mJ/cm2(図−３ 3log 低下換算値 66mJ/cm2)の紫外線を-73-

照射すればアストロウイルス（1.82×106PFU/ml）を99.7％不活化させることが出来ることがわかった。またロタウイルス（3.8×105PFU/ml）では、70mJ/cm2（図−４）の紫外線を照射すれば 99.9％不活化させることができることがわかった。

不活化率 LOG

0

排水処理施設におけるノロウイルス対策として 70mJ/cm2の紫外線を照射すれば、99.9％不活化させることが出来ると推測される。
ただし、引き続きノロウイルスの他の基礎研究の動向等を見据え、必要に応じて見直しをする必要がある。

４. 今後の課題-0.5-1-1.5-2-2.5-301020304050607080

UV 照射量(mJ/cm2)
図−３ 紫外線照射によるアストロウイルスの不活化率

これまでの紫外線照射実験の成果は室内実験の結果であり、更に信頼性を高めるため、既存の処理施設で１年間を通じて実証実験を行いデータの蓄積を行う必要がある。
また、漁業集落排水処理施設でのＳＲＳＶ（ノロウイルス）の不活化率については、集落排水施設から放出されたウイルスがカキの体内へどのように取り込まれ、どれくらいのウイルス量で発症するのか等の調査研究の発展が必要である。

５. あとがき

図−４ 紫外線照射によるロタウイルスの不活化率

3.3 考察本来、ノロウイルス対策は漁業集落排水処理施設独自の問題ではなく、公共下水道はじめ農業集落排水施設等下水道処理関連全体に及ぶ問題である。今後は、漁業集落排水以外の施設でも対策が行われるよう各関係機関との情報交換が必要である。
また、沿岸海域のノロウイルス汚染を防ぐためには、汚水処理施設による循環経路の遮断が重要であるが、より高い海域汚染防止効果を得るためには、循環経路に関係する河川、食品衛生、医療などの行政機関やカキ生産者、飲食店、食品加工販売などの民間を含めた総合的なノロウイルス対策の構築が必要であり、各方面の関係者が一体となった取り組みが求められる。

謝辞
本実験を行うにあたり紫外線実験装置については、岩崎電気株式会社より貸与して頂きました。ここに記して謝意を表します。

プラック減衰法で測定した結果、66mJ/cm2 の照射量の紫外線を照射すれば、アストロウイルス量を 99.9％不活化（3Log 低下）できることがわかった。一方、リアルタ
イムＰＣＲ法で測定した結果、約 1,000mJ/cm2 で 99.9％（3Log 低下）の不活化が確認された。これは、紫外線照【参考文献】
射後のウイルス量をリアルタイムＰＣＲ法で測定すると、
１） 植木洋，秋山和夫，渡部徹，大村達夫：遺伝子相同性にも紫外線照射による不活化したウイルスを検出してしまうとづく Norovirus(NV)のカキへの汚染経路の解明、環境工ことが推測される。
学研究論文集・第 40 巻･2003
図−２のとおり、ノロウイルスとアストロウイルスの減衰カーブが一致することから、ノロウイルスは、アストロウイルスと同様な紫外線量で不活化が可能であると考えられる。このことから、現時点において、漁業集落-74-