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現在のところ逆相クロマl､に固定してあるためイオン性のものは分離できない（逆相ODSでも出来ないこともないが...）。

分析を始めるにあたって考えなければならないのは次のパラメータである。
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１２カラムＯＤＳ（オクタデシルシラン）

移動相ａ）溶液系ＭｃＣＮ/Ｈ２０もしくはＭｅＯＨ/Ｈ２０ｂ）溶媒組成（水の比率〕
Ｓ） 検出波長４） 送液速度５） カラム温度(擬mm、６） サンプル量（〜s l）
ノ●基本的に１）、２ａ）は固定である（アントラキノンの詰まったプレカラムも付いている）。逆相クロマI､では一般に水と有機溶媒（MeCN、MeOH、THF）の混合溶液を移動相に用いるが、ＭｃＣＮとＭｅＯＨとでも分離は結構違ってくるものである（図１でアセI､フェノンとクミルアルコールの溶出順序が逆転していることがわかる)｡さらにこの場合1,4‑DimcthoxybcnzencのﾃｰﾘﾝグがMeCN系ではなくなっている。また、粘度の関係でMeOHのほうがカラムに圧がかかる。
●２ｂ）が分離の決定的なパラメーターで、基本的には含水率を多くすると分離が良くなるが、その分分析時間がかかる。図２ではアセトフェノンとクメンヒドロペルオキシドの分離が要で含水率55％では完全に分離が出来ていない。実際のクロマトグラムを見るとベースライン分離が出来ているのは含水率６７％の条件だが、このときベンゼンは50分もかかって溶離される。このことからわかるように極端に種類の異なるものの分離は難しい。また、水の比率によっては溶出順序が逆転する化合物もあるので要注意。もちろんピークはプロードになっていく。

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図１ＣＨＰの分離ａ）ＭｃＯＨ／水系ｂ）ＭｅＣＮ／水系
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WaterContents(％）

図２ＣＨＰの分離の含水率依存（ＭｅＣＮ系）(mIm駒、●３）の選択は定量分析のときには最も重要である。なぜなら検出感度は検出波長でのそれぞれのＥに比例するからで、出来れば移動相中でのサンプルの吸収スペクトルを測定するとよい（短波長にすれば良いというものでもない）。
●４）の送液速度を速くすると当然、圧力がかかり分離も悪くカラムにも良くない（今はOSml／ｍｉｎに固定）。

●５）の温度を高くするとピークがシャープになるが要注意。

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図２島津HPLCの概略図●６）のサンプル量を多くすると当然分離が悪くなる。ループは現在5皿のものを使用しているため、どんなに注入しても5〃1以上はカラムに導入されないが、なるべく少量にするのが賢い。

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【立ち上げ（図２参照）】
Ｏ）使用記録に記入する（ランプの寿命が特に気になる）。

１）デュアルポンプ送液ユニット（LC‑9A）の電源をつける。
２）紫外一可視光分光光度計検出器（SPD‑6AV）の電源をつけ、使用記録に記入。
Ｓ）クロマトパック・データ処理装置（C‑R6A）の電源をつける。必要なら日時の設定をする。
４）カラムオーブン（clo‑2A）の電源をつける、必要なら温度設定。
５）移動相の用意
ａＨＰＬＣ用もしくはフィルターをかけた溶媒か単蒸留溶媒をなすフラスコに用意する。混合溶媒のときは気合を入れて振り混ぜ均一にする。
※混合溶媒のときの混合比は混合する前の容積比（メスシリンダー）で表す。
ｂアスピレーターで吸引しながら超音波をかけて移動相を脱気する。
※脱気でなくて沸騰してしまうことがある。
※カラムに空気が入ると人生おしまい。

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Im,、ｃ脱気した移動相の一部をループ洗浄用としてサンプル管に分け取っておく。
６）サクションフィルターを取り出し、溶媒（使用しないときは流路を全てＭｅＣＮ100％で置換してある）をよく切った後、移動相に入れる。
７）ドレインバルブをドレイン側にして9.9ml／ｍｉｎでしばらく送液し、サクションフィルターードレインまでの流路を移動相で置換する。
８）0.5ml／ｍｉｎにしてドレインバルブをカラム側に切り替える。
９）ｎ５ＴｍＴ１でベースラインプロット（1ｃｍ/ｍin）を行い、クロマトグラムが安定するまで待つ。初めはかなり変動してチャートから振り切れるので時々ZEROボタンでゼロ点に戻す。
１０）インジェクターを洗浄する。
【停止】

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※混合溶媒を用いたときはカラム中に溶出の遅いサンプルが残っていることがある
ため、最も溶出力の強いＭｅＣＮあるいはＭｅＯＨのみで流路を洗浄する。
１）SPD‑6AV、C‑R6A、CAOZAの電源を切り、使用記録に記入。

２）移動相を超音波脱気したＭｅＣＮで置き換え、まずドレインまでの流路を9.9m,／ｍｉｎで置き換える。

Ｓ）0.5ml／ｍｉｎで送液し十分カラムを洗浄する（少なくとも,時間以上、ＭｅＣＮだけだと現在のカラムでは圧力は2,kg／ｃｍ２になる）。
４）LC‑9Aの電源を切る。
※睡眠時間確保のために一定時間後にオフとなるタイマーがある。
【分析（定常的）】

1）ベースラインが安定したらZEROボタンを押して、ＩＦｱ工びT]でベースラインプロットを終了。

２）面魂．を確認。
３

忠評過当霊

ケ､

今

３）侭孟爾rlでスロープテスト開始。

４）広面雨司でクロマI､グラムを記録（[Z…＋番号で順に保管できる）。
５）サンプルを打ち込み、インジェクターをINJECT側にすると同時に…で測定開始。

６）シリンジを抜き、インジェクターを洗浄する。

７）分析が終われば皿、インジェクターをLOOP側にする。
【分析（溶出時間未知のサンプル）】●まずはＭｅＣＮあるいはＭｅＯＨのみで溶離してみて、溶出するまで少なくとも2時間は待つ苧&●着色サンプルは可視光（Ｗランプ）で位置を再確認する●必ず吸収スペクトル（ｅ）をとっておく、特にベンゼン環を持つものは紫外領域でＥが微妙に異なることがある（Ｂ２u←Ａ１ｇ遷移のVibronic構造のため）●遅いサンプルは出てこなくするか、待つかのどちらかにする(i感､陰、【注意、Ｉ、ラブル】●パイプカッターは工業分析化学研究室にあるので必要なときは借りる。

●サンプルループは現在5座 のものがセツI､してあるが、２｡〃，のもある。

●サクションフィルターが詰まると流路（サクションフィルターーポンプ）に気泡が現れるようになる。このため圧力が急激に変動するのでカラムを痛める。この場合はサクションフィルターを外し、超音波（ＭｃＣＮ、CHCl3、MeOH等）で徹底的に洗浄する。
●現在のところSPD‑6AVの感度は最高値に設定してあるのでいろいろなものが見えてくる。そこで、クロマトグラムの出力はクロマトパック側のＦ而這N1で調整する●ドレインバルブをドレイン側にしておくと流路が空になるので注意。

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●圧力が２kg／cm2以上変動するようだったら何かがおかしい（サクションフィル
ターの詰まりや流路の洩れをチェックする）。
●ときどきデュアルポンプからの漏れをチェックする、もしあればシールの交換とついでにチェックバルブの洗浄を行う。

【マーフィーの法則、液クロ編】●液クロには魔物（ゴースト）が住んでいる●君のサンプルはいつまでもカラムに残っている（いつか大事なときに出てくる）。

●初めてのサンプルを続けて打つとろくなことがない。短気は損気（前に打った残りが出てくる）。

●でかいもの、極性の小さいものはなかなか出てこない（とは限らない）。
●あわてて打つとインジェクターはINJECr側になっている。

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