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Protease Inhibitor; ZPI)ߩࠕ࠶࠮ࠗ♽ࠍ㐿⊒ߔࠆὑߦᔅⷐߥ⚵឵߃࠲ࡦࡄࠢ⾰ࠍ⊒⃻ߔࠆ⚦⢩ߩ᮸┙ࠍ⹜ߺߚߣߎࠈ‫ߥ⊛⇣․ޔ‬᛫૕ࠍ↪޿ߚ࠙ࠚࠬ࠲ࡦࡉࡠ࠶࠻ߦࠃߞߡູ੃㘃⚦⢩ߣ᣸⯻⚦⢩ߩၭ㙃♽ߢ᣿ࠄ߆ߥ⊒⃻߇⏕⹺ߐࠇߚ‫੹ޕ‬ᓟ‫ᧄޔ‬᛫૕ࠍ↪޿ߡᣂ
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(Proc Natl Acad Sci USA, 1998)ࠍෳ⠨ߦߒߡ‫ޔ‬
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Step 3: ࡐ࡝ࠛ࠴࡟ࡦࠣ࡝ࠦ࡯࡞(PEG)ಽ↹
(7.5~18%↹ಽ)
Step 4: 㓁ࠗࠝࡦ੤឵ࠢࡠࡑ࠻ࠣ࡜ࡈࠖ࡯(Phosphocellulose)
Step 5: ࡋࡄ࡝ࡦ࠮ࡈࠔࡠ࡯ࠬߦߟ޿ߡ‫৻ޔ‬ㇱߩࠬ࠹࠶ࡊࠍ⚵ߺวࠊߖߡ
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diisopropylfluorophosphate (DFP) ߦ ṁ ⸃ ߒߚ‫ޕ‬ᰴߦ‫ޔ‬ฦ⎫቟↹ಽߦ PEG ࠍᷝടߒߡಽ↹ߒߚ‫ޕ‬ᴉᲚߪ 5 mL ߩ 20 mM ࡝ࡦ㉄✭ⴣᶧ(pH 6.4), 1 mM DFP ߦṁ⸃ߒߚ‫ޕ‬Step 4 ߦߟ޿ߡߪ‫ޔ‬90 mL ߩಓ⚿ⴊẏࠍࡃ࡝࠙ࡓๆ⌕ᓟ‫ޔ‬30-75%⎫቟↹ಽ‫ޔ‬7.5-18% PEG ↹ಽࠍ㗅ᰴ࿁෼ߒ‫ޔ‬40 mL ߩ 0.1% Tween 20, 20 mM ࡝ࡦ㉄✭ⴣᶧ (pH 6.4)‫ޔ‬㧝mM DFP ߦṁ⸃ߒߚ߽ߩࠍ Phosphocellulose P-11 (15 mL) ࠍ↪޿ߡ㓁ࠗࠝࡦ੤឵ࠢࡠࡑ࠻ࠣ࡜ࡈࠖ࡯ࠍⴕߞߚ‫ޕ‬
20~500 mM ࡝ࡦ㉄✭ⴣᶧߩỚᐲ൨㈩ߦߡๆ⌕࠲ࡦࡄࠢ⾰ࠍṁ಴ߒߚ‫ޕ‬Step 5 ߦߟ޿ߡߪ‫ޔ‬
Phosphocellulose ↹ಽ (6-10)ࠍ 0.1% Tween20 ߢ㧟୚ߦᏗ㉼ᓟ‫ޔ‬Heparin-Sepharose ࠞ࡜ࡓ (4 mL) ߦࠕࡊ࡜ࠗߒߚ‫ޕ‬20 mM ࡝ࡦ㉄✭ⴣᶧ (pH 6.4)ߢᵞᵺᓟ‫ޔ‬20~500 mM ࡝ࡦ㉄✭ⴣᶧߩỚᐲ൨㈩ߦߡๆ⌕࠲ࡦࡄࠢ⾰ࠍṁ಴3) ⚵឵߃ ZPI ߩູ੃㘃⚦⢩ߣ᣸⯻⚦⢩ߢߩ⊒⃻ᣂߒ޿ ZPI ߩࠕ࠶࠮ࠗ♽ࠍ㐿⊒ߒ‫ޔ‬ᮡḰ࠲ࡦࡄࠢ⾰ߣߒߡ↪޿ࠆὑߦᔅⷐߥ⚵឵߃࠲ࡦࡄࠢ⾰ࠍ⊒⃻ߔࠆ⚦⢩ߩ᮸┙ࠍ⹜ߺߚ‫ޕ‬DsRed࠲ࠣߣߩⲢว ZPI cDNA ࠍ BHK ⚦⢩ߦ৻ㆊᕈߦዉ౉ߒ‫ޔ‬ήⴊᷡၭ࿾ߢ 24 ᤨ㑆ࠗࡦࠠࡘࡌ࡯࠻ߒߚᓟߦ࿁෼ߒߚၭ࿾߅ࠃ߮⚦⢩ṁ⸃‛ࠍ‫ޔ‬᛫ ZPI ࡐ࡝ࠢࡠ࠽࡯࡞᛫૕ MQ-126㧔౒ห⎇ⓥ⠪ࠃࠅଏਈߐࠇߚ߽ߩ㧕޽ࠆ޿ߪ H-137㧔Ꮢ⽼ߩ߽ߩ㧕ࠍ↪޿ߚ࠙ࠛࠬ࠲ࡦࡉࡠ࠶࠻ߦࠃࠅ
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ZPI ⊒⃻ࡌࠢ࠲࡯ࠍዉ౉ᓟ G418 ߢㆬ೎ߒ‫ޔ‬ᓧࠄ ࠇ ߚ ࠢ ࡠ ࡯ ࡦ ߩ ၭ 㙃 ਄ ᷡ ࠍ ᛫ ZPI ᛫ ૕MQ-126 ࠍ↪޿ߡ࠙ࠛࠬ࠲ࡦࡉࡠ࠶࠻⸃ᨆߦࠃࠅࠬࠢ࡝࡯࠾ࡦࠣߒߚ‫ޕ‬BHK-ZPI ߩၭ㙃਄ᷡ (0.2% BSA-DMEM) 㧝mL ߦ⎫቟‫ޔ‬PEG
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߆ࠄ 75%⎫቟ߢᴉᲚߒߚ࠲ࡦࡄࠢ⾰ࠍㅘᨆ⣕182ߒߚ‫ޕ‬ฦ♖⵾ߩࠬ࠹࠶ࡊߩ೨ᓟߢ‫ޔ‬ZPI ࠍ᛫ ZPIࡐ࡝ࠢࡠ࠽࡯࡞᛫૕ MQ-126 ࠍ↪޿ߚ࠙ࠛࠬ࠲ࡦࡉࡠ࠶࠻ߦࠃࠅᬌ಴ߒߚ‫ޕ‬ ୶ℂ㕙߳ߩ㈩ᘦ ᧄ⎇ⓥߩ⚵឵߃ DNA ታ㛎ߦߟ޿ߡߪጊᒻᄢቇㆮવሶ⚵឵߃ታ㛎቟ోᆔຬળߩ‫ޔ‬േ‛ታ㛎ߦߟ޿ߡߪጊᒻᄢቇേ‛ታ㛎ᆔຬળߩክ⼏ߣᛚ⹺ࠍᓧߡⴕ߁‫ޕ‬㧯㧚⎇ⓥ⚿ᨐ1) PZ ߅ࠃ߮ ZPI ߩ⊒⃻㊂ߦኻߔࠆࠛࠬ࠻࡜ࠫࠝ࡯࡞߅ࠃ߮ࡊࡠࠥࠬ࠹ࡠࡦߩᓇ㗀PZ ߅ࠃ߮ ZPI ߩࠛࠬ࠻࡜ࠫࠝ࡯࡞߅ࠃ߮ࡊࡠࠥࠬ࠹ࡠࡦߦࠃࠆ⊒⃻ߩᄌൻࠍ⺞ߴߚߣߎࠈ‫ޔ‬PZ ߪ‫ߩ࡞࡯ࠝࠫ࡜࠻ࠬࠛޔ‬ᷝടߢߪ᦭ᗧߥ⊒⃻ߩჇട߇⷗ࠄࠇߥ߆ߞߚ߇‫࠹ࠬࠥࡠࡊޔ‬ࡠࡦߩᷝടߦࠃࠅ᦭ᗧߦ⊒⃻߇੣ㅴߒߚ(p<0.05)‫ࡦࡠ࠹ࠬࠥࡠࡊߣ࡞࡯ࠝࠫ࡜࠻ࠬࠛޕ‬ࠍหᤨߦᷝടߔࠆߣ‫߇⃻⊒ߦᦝޔ‬੣ㅴߔࠆ௑ะ߇⷗ࠄࠇߚ‫৻ޕ‬ᣇ‫ޔ‬ZPI ߪ‫࡞࡯ࠝࠫ࡜࠻ࠬࠛޔ‬߅ࠃ߮ࡊࡠࠥࠬ࠹ࡠࡦࠍᷝടߒߡ߽‫⃻⊒ߩߘޔ‬ߦ᦭ᗧߥᏅ߇⷗ࠄࠇߥ߆ߞߚ‫ޕ‬2) PZ ㆮવሶ⊒⃻ߦኻߔࠆࠛࠬ࠻࡜ࠫࠝ࡯࡞߅ࠃ߮ࡊࡠࠥࠬ࠹ࡠࡦߩᓇ㗀࡞ࠪࡈࠚ࡜࡯࠯ࠕ࠶࠮ࠗߩ⚿ᨐߢ߽‫ޔ‬RT-PCR ߣห᭽ߦ‫ޔ‬PZ ㆮવሶࠍዉ౉ߒߚ⚦⢩ࠍࡊࡠࠥࠬ࠹ࡠࡦߢಣℂߔࠆߣ᦭ᗧߦ⊒⃻ᵴᕈ߇੣ㅴߔࠆߎߣ߇ⷰኤߐࠇߚ (p<0.005) ‫ޕ‬৻ᣇ‫࡞࡯ࠝࠫ࡜࠻ࠬࠛޔ‬ᷝടߢߪ᦭ᗧߥᏅߪ⷗ࠄࠇߥ߆ߞߚ‫ޕ‬3) ⚵឵߃ ZPI ߩູ੃㘃⚦⢩෸߮᣸⯻⚦⢩ߢߩ⊒⃻᛫ ZPI ࡐ࡝ࠢࡠ࠽࡯࡞᛫૕ MQ-126 ߦࠃߞߡ‫ޔ‬DsRed Ⲣว ZPI ߇⚂ 80 KDa ߩ૏⟎ߦ࠙ࠛࠬ࠲ࡦࡉࡠ࠶࠻ߢၭ㙃਄ᷡਛߦᬌ಴ߐࠇߚ‫ޕ‬೎ߩ H-137 ࠍ↪޿ߚ࠙ࠛࠬ࠲ࡦࡉࡠ࠶࠻ߢ߽‫ޔ‬
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A: Unique secretion mode of humanprotein Z: Its Gla domain isresponsible for inefficient, vitamin

184K-dependent and warfarin-sensitive
secretion. Blood 2009, 113(6):3857-3864.
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Nakagaki T, Ichinose A: ǫ-Glutamyl
carboxylase is a cargo receptor forvitamin K-dependent proteins. XXIIInternational Society on Thrombosisand Haemostasis (ISTH) Congresswith 55th Annual Scientific andStandardization Committee (SSC)
Meeting, July 11-16, 2009, Boston,MA, USAᗉቝ೑ᱜༀ㧘ጤ↰ብ♿㧘ᒛ உశ㧘ਛ၂ᥓᒄ㧘৻ἑ⊕Ꮲ㧦⠡⸶ᓟୃ㘼෻ᔕࠍ⸅ᇦߔࠆǫࠣ࡞࠲ࡒ࡞ࠞ࡞ࡏࠠࠪ࡜࡯࠯ߪၮ⾰࠲ࡦࡄࠢ⾰ߩ⚦⢩ౝャㅍߦ߅ߌࠆⓍ⩄ฃኈ૕ߣߒߡ௛ߊ㧚╙ 17 ࿁ጊᒻಽሶ↢‛ቇ࠮ࡒ࠽࡯㧘㢬ጟ㧧2009 ᐕ 12᦬ 16 ᣣ㧴㧚⍮⊛⽷↥ᮭߩ಴㗿࡮⊓㍳⁁ᴫ㧔੍ቯࠍ฽߻‫ޕ‬㧕 ․⸵ขᓧߥߒ ታ↪ᣂ᩺⊓㍳ߥߒ ߘߩઁߥߒ


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3857-3864

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