国立大学法人熊本大学

平成２７年１１月１３日
報道機関各位熊本大学

マウスにおける超過剰排卵誘起剤の実用化について-１匹の雌マウスから１００個の卵子（概要）熊本大学 生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設 （CARD）の 中潟直己教
授 、竹尾透講師らは 、1 匹の雌マウスから１００個以上（従来法の３～４倍）の卵子を排卵させる技術を開発し、平成 27 年 6 月 1 日付けプレスリリースにて、発表したところですが、このたび、九動株式会社より実用化され、平成 27 年 11 月 16 日付で販売開始されることとなりました（製品名：CARD HyperOva）。
これにより、より効率的な実験動物の繁殖に繋がり、ひいては卵子を採取する雌の数を大幅に減少させ、実験動物の愛護・福祉に寄与することが可能です。また、超過剰排卵誘起法が未だ確立されていないラット、ハムスター、モルモットなどへの応用の可能性が極めて高く、今後その利用範囲がさらに広がるものと思われます。
（説明）
熊本大学 生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設（CARD）では体外受精システムに関する技術開発に取り組んでおり、汎用的に実施できるよう、開発した技術を基にしたキットの実用化に努めて参りました。その結果、これまでに新規の凍結保存方法等を開発し、極めて高い受精率が得られる体外受精システムを確立しました（Fertiup ®, CARD MEDIUM®として九動株式会社より商品化）。
効率的に体外受精を行うためには、1 匹の雌からいかに多くの排卵卵子を得るかが重要になります。しかし、これまでの過剰排卵誘起法では、1 匹の雌から平均２０個程度の排卵卵子しか得られませんでした。
熊本大学 生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設 （CARD）の 中潟直己教授 、竹尾透講師らは 、1 匹の雌マウスから１００個以上（従来法の３～４倍）の卵子を排卵させる技術を開発しました（特許出願中：特願 2015-092485）。
（→ 別紙 平成 27 年 6 月 1 日付けプレスリリース参照）
この度、九動株式会社より実用化された超過剰排卵誘起剤が平成 27 年 11 月 16 日付で販売開始されることとなりました（製品名：CARD HyperOva）。
本技術の利用効果としては、以下のとおり期待しております。
(1) 使用動物数の軽減

卵子採取に用いる雌の数を 1/3 ～ 1/4 以下に減らすことが可能です。実験動物の使用匹数の削減は、実験動物の愛護・福祉の重要な柱の一つです。ライフサイエンス研究という観点からのみならず、実験動物の愛護・福祉に対する社会的配慮と言う観点からも極めて意義深いもので、国際的に高い評価を得る様々な研究の推進に寄与することができます。
(2) 遺伝子改変マウスの作製・収集・保存・提供の効率化
少数の雌マウスから大量の卵子を排卵させることで、体外受精や胚移植が容易になります。よって、遺伝子改変マウスの収集・保存・提供の効率化を図ることが可能となります。
(3) 他の動物種への応用
超過剰排卵誘起法が未だ確立されていないラット、ハムスター、モルモットなどへの応用の可能性が極めて高く、今後その利用範囲がさらに広がるものと思われます。
熊本大学生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設(CARD) では、これまでに様々な生殖工学技術の開発・改良を行い、マウスバンクシステムの効率化を図って参りました。当センターのバンクシステムには、以下の 2 つがあります。一方は、マウスの寄託を受け、保存された系統（遺伝学上の血統）について情報を公開し、第三者へ広く供給する「寄託・供給システム」で、マウスの CARD への輸送や凍結保存経費など、寄託に関する一切の経費は無料であり、WEB 公開・供給に関しては共同研究に限る、研究目的により制限する、樹立者の承諾を得る、一定期間 は分与不可とする等の条件をつけて寄託することも可能です。
供給に関しては、有料(実費)で、WEB で公開された情報を閲覧した供給依頼者が、寄託者と承諾書の取り交わし、CARD へ個体または胚 / 精子の供給申し込みを行うシステムとなっています。他方は、有償にてマウス胚/ 精子の凍結保存サービスを行う「プライベイトバンクシステム」で、 保存したマウスを第三者へ分与しない、そのマウスの情報を公開しないという条件で実施しています。また、依頼者本人にのみ、凍結した胚や精子から個体を作製、供給するサービスも行っています。
今後、開発した超過剰排卵誘起法を様々な形で上記マウスバンクシステムに応用することで、更なる効率化を図っていきたいと考えています。より多くの研究者皆さまのご利用を期待しております。なお、本技術を含めた生殖工学技術は、オンラインマニュアル（http://card.medic.kumamoto-u.ac.jp/card/japanese/manual/index.html）でも公開しています。

【お問い合わせ先】
熊本大学生命資源研究・支援センター
動物資源開発研究部門(CARD)・資源開発分野
担当：中潟直己
電話：096-373-6564
e-mail: nakagata@kumamoto-u.ac.jp

別紙
国立大学法人熊本大学

平成 27 年 6 月 1 日
報道機関

各位
熊本大学

1 匹の雌マウスから 100 個の卵子を排卵させることに成功！
（ 概 要説 明）
現 在、遺 伝子破 壊 マウス（ノックアウトマウス）※ １ のバッ ク グラウン ドで ある C57BL/6系 統マウ ス において、通常 の過 剰排 卵誘起で得られる卵子数は平 均20個 前 後で あり、 排 卵数が10個以下であるケースもしばしばです。排卵数が少な
い と いう ことは 研 究効率化の妨げとなっているだけでなく、採卵はマウスを安楽 死 させ て行う た め、多数の雌を犠牲にしなければならないことも、動物の愛護 ・ 福祉 の観点 か らきわめて大きな問題となっていました。
そ こで 、今回 、私た ちは超過剰排卵誘起法を開発し、1匹 の雌 マウ スから 100個 の 卵 子 を排 卵さ せ る こと に成功 しま した 。
こ れら の卵子 は 、体外受精-胚移植により正常な２細胞期胚 ※ ２（図1）およ び産 子 （図 2）へ 発生す ることも確認 され てお り、 今 後の ノック アウ トマウ スの大 量 作 出 に極 めて 有 用 な技 術とな り得 るも のと 期待 されています。
こ の超 過剰排 卵 誘起法は、ナショナルバイオリソースプロジェクト
術 整 備プ ログラ ム の支援により、生命資源研究・支援センター
研 究 部門 (CARD)・資 源開発分野の 中潟 直己 教授、竹尾

基盤 技

動物資源開発透講師らのグループが開 発 した もので あ り、その成果は5月29日に PLOS ONE に発表されました。
論文著者・タイトル
Superovulation using the combined administration of inhibin antiserum and equinechorionic gonadotropin increases the number of ovulated oocytes in C57BL/6
female mice. Takeo Toru, Naomi Nakagata
掲載雑誌
PLOS ONEMay 29, 2015DOI: 10.1371/journal.pone.0128330

別紙
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.01283
30
ISTT blog（ International Society for Transgenic Technologies BLOG）
http://transtechsociety.org/blog/?p=1575（ 説 明）
近 年、 ヒト遺 伝 子は 2 万数千 程度 であることが明らかになりました。そ の全
遺 伝 子の 機能を 解 析するために、世界中で個々の遺伝子を破壊したノックアウ
ト マ ウス を網羅 的 に作製し、それらマウスの基礎的表現型（実際に現れる遺伝的 な 性質 ）の解 析 が精力的に行われています。そのために遺伝子改変マウスの作 製 ・収 集・保 存 ・提供の効率化が必要とされています。
し かし ながら 、 ノックアウトマウスを迅速、大量かつ効率的に作製するた めに は 、体 外受 精 -胚 移 植技術の確立が必須であり、1 匹の雌から多数の卵子を排卵 さ せる 超過剰 排 卵誘起法の開発が望まれていました。
● 従 来の 過剰排 卵 誘 起 法
マ ウス におけ る 従来の過剰排卵誘起法は、妊馬血清性腺刺激 ホルモン（PMSG：卵 胞 刺 激 ホ ル モ ン （ FSH ※ ３ 様 ホ ル モ ン ） ） を 投 与 す る こ と で、 多 数 の 卵 胞 を 発育 さ せる もので す が、1 匹の雌マウスから得 られる排卵数は、多く ても 30 個 が限 度 で した 。
● 新 規開 発した 超 過 剰 排卵 誘起法 の原 理と 方法
イ ンヒ ビンは 発 育卵胞中から放出されるホルモンで、下垂体（ホルモンを分泌 す る内 分泌器 官 ）から分泌される FSH の分 泌量調節因子として、排卵数 を制
限 す るた め、PMSG の単 独投与で は限 られ た排 卵数しか得られませんでした。そこ で 、抗 インヒ ビ ン血清を用いて雌の体内のインヒビンを中和することで FSHの 分 泌を 過剰に 促 進し、同時に PMSG を投与することで多数の卵胞を発育さ せる
こ と によ り、1 匹 から 100 個 以 上（従 来法の 3～4 倍）の卵子 を排 卵させ るこ とに 成 功 しま した（ 超過剰排 卵誘 起法 ）（ 図３ ）。
● 利 用効 果（ １ ）使 用動物 数 の軽減
卵子 採取に 用 いる雌の数を 1/3～1/4 以下に減らすことが可能です 。実
験 動物 の使用 匹 数の削減は、実験動物の愛護・福祉の重要な 柱の一つで す。

別紙
ラ イフ サイエ ン ス研究という観点からのみならず、実験動物 の愛護・福 祉に 対す る社会 的 配慮と言う観点からも極めて意義深いもので、国際的に 高い 評価 を得る 様 々な研究の推進に寄与することができます。
（ ２ ）遺 伝子改 変 マウスの作製・収集・保存・提供の効率化
少数 の雌マ ウ スから 大量の 卵子 を排 卵さ せる こと で、体 外受 精や 胚移 植が 容易 になり ま す。よ って、遺伝子改変マウスの収集・保存・提供の効 率化 を図 ること が 可能となります。
（ ３ ）他 の動物 種 への応用
超過 剰排卵 誘 起法が 未だ確 立さ れて いな いラ ット 、ハム スタ ー、モ ルモッ トな どへの 応 用の可能性が極めて高く、その利用範囲がさらに広が るもの と思 われま す 。

● 今 後の 展開
現 在、 特許申 請 中であり（特願 2015-032354）、本排卵誘発剤を企業か ら発売 予 定で す。
● 用 語の 説明※１ノ ック アウ ト マ ウス （Knock-out mouse）
遺 伝 子 操作 に より 1 つ 以 上 の遺 伝 子を 欠 損さ せ た マウ ス 。遺 伝 子の 塩 基 配列は決定しているものの、その遺伝子産物の機能が不明な場合にその機能を 推 定 する た めの 重 要な モ デ ル動 物 。

※２２ 細胞 期胚 ：卵が分裂して２個の細胞になった状態。受精卵は発生の過程で２個、４個と 分 割 を繰 り 返し て 成長 す る 。

※３FSH
卵 巣 に 存在 す る卵 胞 を刺 激 し て、 発 育を 促 す働 き を 持つ ホ ルモ ン 。

別紙【 図 １ 】1 匹の 雌マウスか ら 排卵された卵子を体外受精して得られた 2 細胞 期胚【 図 ２ 】1 匹の 雌マウスの 卵 子から得られた 2 細胞期 胚を仮親の 卵管に移植して 生 まれ た産子別紙【 図 ３ 】超 過剰排 卵誘起法

【お問 い合わせ先 】
熊本大 学生命資源 研究・支援センター
動物資 源開発研究 部門(CARD)・資源開発分 野
担当： 中潟直己
電話： 096-373-6564
e-mail: nakagata@kumamoto-u.ac.jp