FLUOVIEW
ＦＶ１０００

画像解析
Viewer＆Review Station

簡易操作説明書11目 次【Viewer】
Viewerのインストール

４【２D画像の解析】
画像の保存
連続断層像の重ねあわせ / Tile表示
スケールバーを入れる
画像の色・コントラスト編集
XY方向のZ断面画像
各Z軸断面による Intensity Profile

５６７８９１０【Review Station】
MeasureIntensity Profile
HistogramLine Series Analysis
Co-localization
Series Analysis
Ratio
Unmixing
・各蛍光Dyeの場所がわかっている場合 の分離

１２
１３
１４１５１６１７１８-１９２０-２２

・登録済みスペクトル情報からの分離
・蛍光dyeの種類がわからない場合の分離

2

Edit experiment

２３【３D画像の構築】 （立体画像再構築/3D立体画像のファイル作成）

２４-２５2

Viewer33

Viewerのインストール１．Viewerインストール用CDをセットします。

２

２．インストール画面が現れ、〝Viewer Setup〟を選択します。

３
３．〝FV1000 Viewer Installation〟
を選択します。

４．

をクリックします。

５．

〝Agree〟を選択します。

６．

オンラインヘルプの言語を

４

５
６選択します。

７．

で進み、最後にをクリックしてインストールを完了します。

７
4

4

画像の保存（TIFF、BMP、JPEG Fileの保存方法）

１．Menu barよりFileからExportを選択します。

１

２．保存するフィル形式を選択します。

５
２
３．
で〝All ROI〟を選択するとROI情報がそのまま画像上に反映されます。

３※No Overlayを選択するとROI情報は画像には反映されません。

４

ROI情報

４．
を選択するとMerge画像だけが作成されます。
を選択すると各Chごとの画像が作成されます。
※Merge画像は作成されません。

取得後の画像5

５．

をクリックして画像を作成します。
52D画像の解析（連続断層像の重ね合わせ）１

１．

をクリックします。

２．

を選択します。

２４

３． Projection画像が作成されます。

■■ MEMO ■■New Tile 機能よりProjection画像の作成

４．

をクリックして〝２D Control Panel〟を表示させます。

５．

″New Tile〟をクリックすること新規でProjection画像ファイルを作成することができます。

５
2D画像の解析（Tile表示）
１．

をクリックして〝２DControlPanel〟を表示させます。

２．

TileAutomaticSettingよりタイリング表示を行います。

各Chごとに全てのZ画像を表示

66

2D画像の解析（スケールバーを入れる）
１．

ボタンをクリックします。

２．画像上で左クリックしたまま引っ張り、適当なところで離します２

１３

３．Scale Barを選択して右クリックし、〝Scale〟を選択することでフォーマットの変更を行うことができます。

チェックを外すとスケールバーのスケールラベルが表示されません。のチェックを外すとスケールバーの目盛が表示されません。

４．〝Format Setting〟を選択することでスケールバーのColor等のフォーマット変更ができます。

77

２D画像の解析（画像の色、コントラスト編集）
１

１．

〝LUT〟をクリックして、下のLUT tableを表示させます。

２

３．Min、Maxの値が設定され画像のコントラストが変更されます。

２．のカーソル左右に動かすもしくはMinとMaxに数値を入力してコントラストを自由に設定することができます。
（Max4095、Min０）※Min値を上げることによって画像のバックグラウンドを除去することができます。

３

各Chごとに設定できます。

コントラスト設定後の画像

４
４．Redをクリックすることで擬似カラーを緑色から赤色またはその他のカラー変更することが可能です。

88

2D画像の解析（XY軸方向のZ断面画像）
１

１．XYZ画像取得後、２D View にてを選択してProjection画像を表示させます。

２．

２をクリックしを選択します。

３．X、YそれぞれのZ軸方向の縦断面が現れます。
X方向に上下、Y方向に左右動かすことで各ポジションのZ軸縦断面を観察することができます。

４５

４．Y軸方向のZ軸縦断面になります。

５．X軸方向のZ軸重断面になります。

99

2D画像の解析（各Z断面におけるIntensitiy Profile）
１．
をクリックして、以下の2D Control Panel を表示させます。

１２
２．Profileをクリックして以下のような任意ZポジションにおけるXY方向のIntensityのProfileを表示することができます。
Z軸方向を移動させて各Z位置でのIntensityProfileを確認します

４
XYをマウスでドラッグして任意のIntensityProfileのポジションを決定します。

３

３．
をクリックすることでProfileにIntensity Scaleを表示させることができます。

４．
をクリックすること
で画像のSIZEに対して１：１表示でProfileをwindowを表示させます。

1010

ReviewStation1111

２D画像の解析（計測 (Measure) ）２

１.

1を選択して画面上で関心領域を囲んでROI指定を行います。
を選択して画像上で関心領域を直線として引き、ROI指定を行います。

1
２．

measureのアイコンをクリックします。

３．画像のROI指定された領域の計測結果および統計結果が計算されます。

４
３

４．〝Measure All ROIs〟をクリック
すると画面上に指定した全てのROIROI情報が計算されます。

５
５．全ての指定したROI情報が計算されます。

６■■ ROI情報の保存 ■■６．
７．

12をクリックします。
CSVファイルとして保存します。

ROI情報をテキスト形式で開くことができます。

12

２D画像の解析 （Intensity Profile）
１

２
１．計測したい対象に対して直線を描きます

２．

を選択して

〝Intensity Profile〟をクリックします。

３．左の〝Intensity Profile〟が表示され指定されたLine上の輝度がY軸を蛍光強度としてグラフ化されます。

３４■■ Intensity Profileの保存 ■■４．

５．

をクリックします。

保存形式を選択します。

５６13

６． 例：CSVファイルで保存したデータ

13

２D画像の解析 （Histogram）
１. 計測したい対象をROI指定します。

２

２．

〝Histogram〟のアイコンをクリックします３． 〝Histogram〟 windowが現われ、ROIで指定された領域内のﾋﾟｸｾﾙの輝度の頻度分布がプロットされます。

３■■ Histogramの保存 ■■４４．

をクリックします。

５．

保存形式を選択します。

５

６．例：CSVファイルで保存したデータ

６
14

14

2D画像の解析（Line Series Analysis）
２

１．計測したい対象に対して直線を描きます

１
２．

Line Series Analysis をクリックします

３．ROI指定されたLine上の輝度のZ軸/時間に沿ったintensity変化を３４解析します。

■■ Line Series Analysis の保存 ■■４．

をクリックします。

５．保存形式を選択します。

５６．例：CSVファイルで保存したデータ

６1515

２D画像の解析（Co-localization）
１.計測したい対象を左の画像のようにROIで囲みます

２

２.

１

〝Co-Localization〟
をクリックします。

Co-localize
Image

３．のAnnotation ModeのThresholdを選択

３

４．

〝Extract Area〟
Bを選択します。

４
５．プロット上で各Chの閾値（赤で囲んだ縦軸、横軸）、を動かすことによって設定します。
コロカライズされたﾋﾟｸｾﾙが白色のプロットでｵｰﾊﾞｰﾚｲ表示されます。

５

６

またコロカライズされたﾋﾟｸｾﾙ数、全体のﾋﾟｸｾﾙ数に対する%が計測されます。

■■ Co-localization の保存 ■■

６．

７

７．保存形式を選択します。

８16をクリックします。

８．例：CSVファイルで保存したデータ
16

２D画像の解析（Series Analysis ）２

１. 計測したい対象のIntensityの範囲をROIで設定します１

２.

〝Series Analysis〟をクリックします３． 〝Series Analysis〟 のwindowが現れ、ROI指定された領域の時間軸（横軸）に沿ったintensity変化をグラフにプロットされます。

３■■ Series Analysis の保存 ■■4４．

をクリックします。

５．保存形式を選択します。

5６．例：CSVファイルで保存したデータ

６1717

２D画像の解析（Ratio解析）※ここではTimeSeries画像のRatio解析を行います２

１．Ratio解析を行いたい画像を開きます。

２．

〝Ratio/Concentration〟をクリックします。

３．Ratio解析する画像ファイルを選択します。

４．Ratio解析した画像の各Chの分子/分母を選択します。

５．R（Ratio）を選択します。

７

６．Ratioの最大値、最小値を入力します。

Ratio画像18

７．
〝New Image〟をクリック
してRatio画像を作成します。
18

２D画像の解析（Ratio解析）※ここではTimeSeries画像のRatio解析を行います

８．Ratio ColorBarの表示をクリックしてを選択します。

〝ColorBar〟

画面上に左クリックしながら任意のサイズのColorBarを表示させます。

８1919

2D画像の解析（蛍光分離 Unmixing）
各蛍光Dyeの場所がわかっている場合近似した蛍光スペクトルをもつ蛍光Dyeが複数共存するXYL画像の中から、各蛍光Dyeの蛍光スペクトルを導き出し、その蛍光スペクトルをリファレンスにして蛍光分離画像を得る方法
サンプル例：緑色蛍光（AlexaFluor488）＋緑色蛍光（YOYO-1）の二重染色１． AlexaFluor488 ＋YOYO1の二重染色のXYL画像ファイルを開きます。

２

２．AlexaFluor488だけの部分と、YOYO1だけの部分をROIで囲います。

３. メニューバーのProcessingからSpectral Deconvolutionを選択します。

３

４

４．ROI1とROI2を各々ダブルクリックします。

５．Processing Typeが「Normal」になっていることを確認し、をクリックします。

５６．蛍光分離された画像が得られます。
蛍光分離（Unmixing）後の画像のChの割り付けを示します。

６蛍光分離（Unmixing）した画像

20

20

画像の解析（蛍光分離 Unmixing）
登録済み蛍光スペクトルからの分離の場合
１． AlexaFluor488 ＋YOYO1の二重染色のXYL画像ファイルを開きます。

１
２．メニューバーのProcessingからSpectralDeconvolutionを選択します。
３．蛍光スペクトルのデータベースから、AlexaFluor488とYOYO1（先に登録したもの）をダブルクリックします。

２

４．ProcessingTypeが「Nomal」になっていることを確認し、をクリックします。

３４５．蛍光分離された画像が得られます。

１２

蛍光分離（Unmixing）後の画像のChの割り付けを示します。

蛍光分離（Unmixing）した後の画像

21

21

2D画像の解析（蛍光分離 Unmixing）
蛍光Dyeの種類の数しかわからない場合（Blind Unmixing）
近似した蛍光スペクトルをもつ蛍光Dyeが複数共存するXYL画像の中から、蛍光Dyeの種類の数だけをヒントに蛍光分離画像を得る方法
サンプル例：不明な二種類の蛍光をもつサンプル

１．不明な二種類の蛍光をもつサンプルのXYL画像ファイルを開きます。

１
２. メニューバーのProcessingからSpectralDeconvolutionを選択します。

３．Calculateのチェックボックスを2ヶ所クリックします。
（3種類の蛍光Dyeがある場合は、3ヶ所クリックします）

２

３
４

４．ProcessingTypeが「Blind」になっていることを確認し、をクリックします。

５．蛍光分離された画像が得られます。

５蛍光分離（Unmixing）後の画像のChの割り付けを示します。

蛍光分離（Unmixing）した後の画像

2222

２D画像の解析（Edit experiment)
異なるファイル同士を１つのファイルとして編集することができます。
例： ここでは別々に撮影をした蛍光画像、微分干渉画像１つのファイルとして編集します。

１．蛍光画像、DIC画像それぞれを 別ファイルとして画像の取得を行い、ファイルを開いた状態にします。

１

２. Processing のEdit experiment を選択

２３

３. Edit Channelsを選択し、Destination Image、Source Imageに重ねあわせたいファイル（蛍光、DIC）を選択します。

※各Image Infoに重ね合わせたいチャンネルにチェックをいれます。
全てのチェンネルにチェックを入れると全てのmerge画像を１つのファイルで作成することができます。

４

４. Merge CH をクリックすると蛍光画像、DIC画像それぞれが１つのファイルとして編集された画像が作成されます。

４
５.DICと蛍光をMergeした画像の一例です。

５23

23

３D画像の構築（立体画像の再構築）
画像を任意の角度から観察します１

１．２D View-（ファイル名）画像のをクリックします。
２．３D Viewが構築されます。
３．画像上でマウスをドラッグしながら動かし、任意の角度から観察します。

３
画像の任意の断面を観察します

４４．

をクリックし、を選択します。

５

５．画像上で、マウスをドラッグしながら左右に動かして、任意の縦断面を観察します。

６．

24をクリックして２D画像を作成することができます。

24

３D画像の解析（３D立体画像のファイル作成）
回転ファイルを動画像として保存する場合は、以下の方法で３D構築を行います。

１

例として、画像を180°回転させてみましょう。

２

１．

ボタンをクリックします。

２．Angle Rotationタブをクリックします。

３

３．回転軸を選択します。

７
４．回転角度を入力します。

４
５
６25

Start＝何度から / End＝何度までFrame/s＝回転速度 / Interval＝何度ずつ
５．AVI Fileを選択し、Createをクリックします。

６．ファイル名を入力し、Saveをクリックします25