接触性皮膚炎の研究：皮膚刺激とマクロファージ「細胞交通」の関与
静岡県立大学

今薬学部微生物学教室

井康之During the sensitization phase of contact hypersensitivity through skin, it is widely accepted that Langerhans cells
pick up antigens within epidermis and then migrate to the draining lymph nodes to present antigens to recirculating
T lymphocytes in association with major histocompatibility complex class II molecules. We discovered traffickingof connective-tissue macrophages from dermis to draining lymph nodes during skin sensitization as an independent
phenomenon from Langerhans cell trafficking using FITC as an antigen. We could differentiate trafficking ofmacrophages from that of Langerhans cells using monoclonal antibodies specific for macrophage calcium-type lectin(MMGL) that is a connective-tissue specific macrophage marker. The extent of dermal macrophage migration wasgreatly influenced by the selection of vehicles to dissolve FITC. Using several kinds of vehicles, we observed apositive correlation between the efficiency of skin sensitization and the extent of macrophage migration. Theseresults indicated that chemicals in the vehicles may exhibit an adjuvant activity through the induction of tissue
macrophage trafficking. We directly demonstrated macrophages migration upon skin sensitization by local celltransfer experiments. Interestingly, the migration was induced by vehicle alone, such as acetone/dibutyl phthalate(AD), without FITC. These results also confirmed the critical role of vehicles with adjuvant activity.
We observed the initiation of dermal macrophage trafficking using mouse skin after epicutaneous application ofAD. Thus, we immunohistochemically detected that MMGL-positive dermal macrophage density was transiently andreversibly decreased after epicutaneous application of AD. We also developed an organ culture system, in whichskin fragments taken from the site of AD application were subjected to a short term organ culture. The densityof MMGL-positive dermal macrophage decreased irreversibly in this system. Using the organ culture system, wediscovered that AD treatment induced local production of pro-inflammatory cytokines during skin sensitization.
Furthermore, we also found the activity that induces dermal macrophage exit was mediated by pro-inflammatory
cytokines, such as IL-1β, using recombinant cytokines and antibodies against cytokines. A possibility that IL-1βtreatment down regulates MMGL expression in macrophages has been excluded.
In conclusion, our studies revealed importance of connective tissue macrophage trafficking during skin sensitization
as a mechanism of adjuvant activity of chemicals. Our ex vivo organ culture system using skin fragments will beuseful to examine chemicals that might enhance skin sensitization.

１．緒

皮膚からの接触感作では、表皮に存在する抗原提示細胞言であるランゲルハンス細胞が経皮的に侵入した抗原を拾い接触性皮膚炎は、遅延型アレルギー反応の一種であり、上げ、自ら所属リンパ節の T 細胞領域に移動し、リンパ化粧品に限らず生活環境にある様々な化学物質の抗原性が節に再循環してきた T 細胞に対して主要組織適合遺伝子原因となっている場合がある。化粧品の安全性を確保する複合体（MHC）クラスⅡ分子を介して抗原提示を行い感上でも、接触による抗原感作がどのようにして起こるのか作が成立すると一般に考えられている。リンパ節に移動しを正しく理解することが重要である。また、シックハウス

たランゲルハンス細胞は、相互連結性樹状細胞とも呼ばれ症候群として問題となっているアレルギーでは、複数の化ている。我々は、マクロファージ細胞表面に存在するカル学物質による感作や、ある種の化学物質がそれ自身の抗原シウム依存性レクチン（MMGL）の研究を通じて１〜３、５、７）、性とは別に何らかの作用機構を通じて抗原に対する感受性

この分子が表皮のランゲルハンス細胞と真皮の組織マクロを高めている可能性が推察される。すなわち、化学物質のファージを区別しうる、特異性の高いマーカーであること

アジュバント活性について、その実態を明らかにすると共を見出してきた４）。すなわち、MMGL は、真皮の組織マに、作用メカニズムを解明する必要がある。

クロファージに発現しているが、表皮のランゲルハンス細胞には発現していない。
我々の作製した MMGL に対するラットモノクローナル

Involvement of Macrophage Trafficking
in Contact Dermatitis during Skin
Sensitization

胞の所属リンパ節への移動とは別に、真皮マクロファージ

Yasuyuki Imaiの所属リンパ節への移動が起こることを発見した６）。本研

Department of Microbiology, Universityof Shizuoka School of PharmaceuticalSciences

究では、接触性感作を増強する化学物質自体が、真皮から抗体を使って２、８）、接触性感作においてランゲルハンス細所属リンパ節へのマクロファージの細胞交通を誘導することを明らかにしたうえで、細胞交通の誘導活性と接触性感− 77 −

作を増強する活性との間の相関を検討した。また、該当す植した（106 個／ 20 µL）。16 時間後、移植部位の皮膚にる化学物質が皮膚局所から組織マクロファージの細胞交通

FITC ／ AD または AD のみを塗布した。さらに 24 時間を開始させる活性があるかどうかを、皮膚局所を直接観察後に所属リンパ節である上腕（brachial）リンパ節を採取し評価する実験系を構築して解析した 。さらに、この過して凍結切片を作製し、トレーサー陽性細胞を赤色蛍光に程において、炎症性サイトカインが関与することを明らかて検出するとともに、抗原である FITC を緑色蛍光、細胞にした 10）。の同定をモノクローナル抗体 LOM—14 /Cy 5 標識抗ラット

９）

２．実
２. １

IgG による深赤色蛍光によって、３重標識蛍光を検出可能験

なレーザー共焦点顕微鏡にて解析した。

接触感作と感作成立の評価

マウス（ICR または BALB/c、雌）の上腕部の毛を刈

２. ６

皮膚小片の器官培養９、10）

り、溶媒に溶解した FITC（0 . 5％、w/v）を 80 µL 塗布しマウス皮膚の小片（1 cm× 1 cm）を直径１µm の小孔のた。６日後に、アセトン／フタル酸ジブチル（AD）に溶あるポリエチレンテレフタレート膜上に、表皮側を上に解した FITC 20 µL をマウスの右の耳介外面に塗布して惹して設置した（図１）。これを、細胞培養用の６穴プレー起を行い、その 24 時間後の耳介の厚さをダイヤルシックトに置き、無血清培地 ASF 104（味の素）を加え、皮膚小ネスゲージで計測した。左耳介を対照とした。

片が液相と気相の界面に来るように培養液の量を調整し２. ２を用いて 37℃で培養した。また、マウス皮膚小片を 24 時た。５％ CO 2 ／ 95％空気の条件で CO 2 インキュベーター

接触感作における溶媒の効果

感作時に FITC を溶解した溶媒は、以下の通りであ間培養し、培養上清を調製した。培養上清中の IL—1β 量る。AD：アセトン／フタル酸ジブチル（１：１）、AO：

を ELISA で測定した（R&D Systems）。組換え型マウス

アセトン／オリーブオイル（４：１）、EtOAc：酢酸エチ

IL—1 α、IL—1 β、TNF—α およびハムスター抗マウス IL—ル、EtOH：エタノール、DMF：ジメチルホルムアミド、

1 α、抗マウス IL—1 β、抗マウス TNF—α を Genzyme よDMSO：ジメチルスルホキサイド、SDS：30％ラウリル硫り購入し、皮膚器官培養系で用いた。

酸ナトリウム水溶液。惹起には、すべて AD を用いた。

２. ３

３

MMGL 陽性組織マクロファージの免疫組織化

３. １

学的検出

結果および考察

FITC を用いた接触性皮膚炎モデルの評価

接触性皮膚炎の実験モデルにおいては、いかなる溶媒をリンパ節および皮膚の凍結切片を作製し、アセトン固定用いて動物を感作するかが実験の成否をわける重要なポイ

後、MMGL に対するラットモノクローナル抗体 LOM—14ントであることが従来より指摘されていた。FITC を抗原を用いて、免疫組織染色を行なったとして用いたマウス接触性皮膚炎のモデルにおいては、ア。

３、４）

セトン / フタル酸ジブチル（１：１）を溶媒として用いる

２. ４

皮膚からの MMGL 陽性マクロファージの分離・のが最適であることが報告されている。まず、この実験モ精製と蛍光トレーサー標識

デルにおいて、FITC 自身が抗原性を担っており、溶媒とマウス皮膚（腹部、背部、前後肢）の毛を刈ったのち細して用いた AD が抗原として相加的に働いてはいないこ切し（１辺２mm 程度）、コラゲナーゼ消化によって皮膚とを確認するため、感作時および惹起時に AD に溶解し細胞を単離した。MMGL に対するラットモノクローナル

た FITC、もしくは AD を単独でマウス皮膚に塗布し、耳抗体 LOM—8 . 7 を反応させた後、抗ラット IgG の結合した介を用いた常法にしたがって遅延型過敏症の発症を観察しマグネチックビーズを反応させ、抗体の結合した細胞をマた（図２）。その結果、感作時および惹起時に FITC が存グネチックセルソーターを用いて回収した。MMGL 上の別の抗原決定基に対する抗体 LOM—14 を用いて評価した
結果、皮膚細胞浮遊液中に２〜３％程度含まれる MMGL陽性細胞が 90％以上にまで濃縮精製されることが分かった。精製した皮膚由来の MMGL 陽性マクロファージを、蛍光トレーサー CMTMR で標識した。

２. ５

マクロファージ細胞交通の検出６）

CMTMR 標識した BALB/c マウスの皮膚由来 MMGL陽性マクロファージを BALB/c マウスの前肢に皮内移− 78 −

図１

皮膚小片の器官培養法

接触性皮膚炎の研究：皮膚刺激とマクロファージ「細胞交 」の関与在しているときにのみ、有意な耳介の膨らみが観測された。

AD が最も有効な溶媒であり、他方 DMSO を用いた場合FITC の抗原性が確認され、AD の抗原としての貢献度は全く感作が成立しなかった。

低いことが示された。

３. ３
３. ２

感作時に用いた溶媒中の化学物質の感作成立

所属リンパ節における MMGL 陽性マクロファージの増加におよぼす影響

FITC を抗原として経皮的感作に用いる一つの利点は、次に、抗原 FITC を溶解する溶媒を変えて感作を行い、抗原としてランゲルハンス細胞に取り込まれた FITC を蛍感作における溶媒の効果を比較検討した。なお、耳介にお光で容易に追跡できる点である。実際、マウス上腕部にける惹起時の溶媒としては、AD を用いた。免疫系がどのFITC を塗布した 24 時間後、上腕リンパ節の凍結切片を程度強く感作されるのかは、感作に用いた溶媒によって違作製して蛍光顕微鏡下観察すると、リンパ節の T 細胞領うことが示された（図３）。従来から知られていたように、域に FITC を取り込んだ細胞が観察された。
一 方、上 腕 リ ン パ 節 の 凍 結 切 片 を 経 時 的 に 作 製 し、MMGL に対するモノクローナル抗体を用いて免疫組織化学的に検出すると、感作後 24 時間をピークとして一過性にリンパ節内で MMGL 陽性細胞数の増加が観察された。
ランゲルハンス細胞は、表皮において MMGL 陰性であるため、この増加した MMGL 陽性細胞はランゲルハンス細胞由来ではなく、真皮の組織マクロファージ由来ではないかと考えられたが（この証明は、３. ５項参照）、これを支持する別の実験結果として、FITC を保有する細胞のうちMMGL 陽性である割合が 10％未満に過ぎなかったことがあげられる。このことは、表皮からリンパ節に抗原を運ん

図２ フルオレッセイン（FITC）を抗原として用いたマウス
接触皮膚炎モデル。FITC の溶媒としてアセトン／フタル酸ジブチル（AD）を用いている。耳介における遅延型過敏症応答には、感作／惹起とも FITC が必要であり、AD 単独では抗原として有効ではない。

できた抗原提示細胞（ランゲルハンス細胞／相互連結性樹状細胞）とは独立に、真皮から組織マクロファージの細胞交通が存在することを示唆する。さらに、MMGL 陽性細胞の増加が FITC を溶解していない AD 単独で起こることがわかった。したがって、この過程は、抗原である FITCのランゲルハンス細胞への取り込みやプロセッシングとは別の現象としてとらえることが出来る。

３. ４

リンパ節内の MMGL 陽性細胞の増加と抗原感作成立との関係
そこで、様々な溶媒を用いて感作を行なったとき、感作の成立の程度と⑴ランゲルハンス細胞の細胞交通の誘導能および⑵所属リンパ節における MMGL 陽性マクロファー
ジの一過的増加を比較検討した。その結果、強力に感作を成立させる溶媒（例えば AD）の場合、ランゲルハンス細胞の細胞交通の促進および MMGL 陽性細胞の増加ともに大きいことが判明した。一方、典型的には SDS の場合であるが、FITC を提示したランゲルハンス細胞の移動は少ない場合でも、ある程度の有効な感作が成立する場合があり、この場合 MMGL 陽性細胞の増加が顕著に認められる
図３ FITC を抗原としたマウス接触皮膚炎モデルにおける溶媒の効果。FITC を様々な溶媒（横軸）に溶解しマウスを感作した。AD に溶解した FITC を耳介に塗布して惹起後、耳介の膨らみを測定した。AD で感作した場合の応答を 100 として標準化した。

ことが分かった。
そこで、リンパ節における MMGL 陽性細胞の増加をリンパ節内のコンパートメントごとに整理して観察し、それをスコアー化した。すなわち、⑴ T 細胞領域（とくに傍皮質とリンパろ胞の境界）での分布、⑵皮膚から輸入リン− 79 −

パ管経由で細胞やリンパ液が入ってくる辺縁洞での分布、⑶未感作の状

表１ 感作時に用いた様々な溶媒による感作成立の程度と所属リンパ節におけるMMGL 陽性細胞の皮膚からの移動との関係態において最も MMGL 陽性細胞の密度が高い髄質での分布にわけて整理した。その結果、T 細胞領域でMMGL 陽性細胞の増加がみられること、および髄質で MMGL 陽性細胞の枯渇が起きていないことが有効な感作成立のための条件であることが示唆された（表１）。MMGL 陽性細胞のリンパ節内での分布のスコア
ーの合計点と抗原で惹起した後の耳介の厚さにより評価した感作成立の程度との間には、良好な相関が認められた（図４）。このことは、所属リンパ節において MMGL 陽性細胞を増加させる溶媒中の化学物質の働きが、接触性皮膚炎の感作成立に重要な役割を担っていることを示唆している。

３. ５

アジュバント活性のある化学物質による皮膚組織マクロファージの細胞交通の誘導：in vivo での証明
所属リンパ節において MMGL 陽性細胞が増加することが、真皮からの組織マクロファージの細胞交通によっていることを証明するために、以下の実験を行った。皮膚から MMGL 陽性細胞を単離し蛍光トレーサーで標識した後、レシピエント動物の皮内に移植し、移植部位より経皮的に感作した。感作 24 時間後に所属リンパ節の凍結切片を作製し、T 細胞領域の任意の視野における蛍光トレーサー陽性細胞の分布密度をレーザー共焦点顕微鏡を用いて計数した（図５）。FITC ／ AD により経皮的感作を行なうと、所属リンパ節の T 細胞領域に蛍光トレーサー陽性細胞が観察された。抗体を用いた多重染色によって蛍光トレーサ

図４ 感作時に用いた様々な溶媒による感作成立の程度と所属リンパ節における MMGL 陽性細胞数変動との相関性。リンパ節での MMGL 陽性細胞の存在程度をスコアー化した overall index（表１参照）を横軸にとり、耳介反応の強度（相対値）を縦軸にとって、各溶媒を用いたときの結果をプロットした。
各点の近くに、感作時に用いた溶媒の種類を示した。

ー陽性細胞に MMGL が発現していることを確認した。さらに、蛍光トレーサー陽性細胞の出現は、抗原 FITC を加LOM—14 で免疫組織染色後、MMGL 陽性組織マクロファえずに AD のみを塗布した場合にも同様に見られたが、全ージの真皮内での分布を調べた。結果をヒストグラムとく感作していない場合には認められなかった。この結果は、して整理した（図６）。AD 塗布４時間後より、真皮内の真皮から所属リンパ節への MMGL 陽性細胞の細胞交通が、MMGL 陽性細胞の分布密度が減少し、８時間後に最も低溶媒である AD によって開始されたことを示唆している。

密度となった。この変化は可逆的で、24 時間後には ADを塗布する前の状態に復帰した。

３. ６

化学物質による組織マクロファージ細胞交通

次に、真皮からの MMGL 陽性細胞の減少を試験管内での開始：皮膚局所での証明再現することを試みた。すなわち、マウスの腹部皮膚に真皮の組織マクロファージは、組織中にとどまっており、AD を塗布後、塗布した部位の皮膚を採取し、図１に示ランゲルハンス細胞の様に移動しないと一般には信じられした方法によって器官培養した。経時的に皮膚サンプルている。そこで、この常識に反論するためには、皮膚局所の凍結切片を作製した後、MMGL 陽性細胞の密度の多いで組織マクロファージの移動が AD などの化学物質の塗布領域（＞ 15％）の数と観察した領域の総数との比率を求によって実際に開始されていることを示す必要がある。

めた。すなわち、MMGL 陽性細胞の分布の多い領域の出

まず、ICR マウスの前肢皮膚に AD を塗布後、皮膚の現頻度を比較したことになる（図７）。その結果、生体内凍結切片を作製し、MMGL に対するモノクローナル抗体（in vivo）で AD を塗布した場合、24 時間後には塗布以前− 80 −

接触性皮膚炎の研究：皮膚刺激とマクロファージ「細胞交 」の関与

図５ 経皮的感作によって誘導された真皮組織マクロファージの所属リンパ節への移動。皮膚より単離した MMGL 陽性マクロファージを蛍光トレーサーで標識し、レシピエントマウ
スの皮内に移植した。24 時間後、FITC/AD あるいは AD 単独を移植局所の表皮に塗布した。Control は未処置群。所属リンパ節の T 細胞領域内に出現した蛍光トレーサー陽性細胞の密度を縦軸に示した。の頻度に復帰したが、器官培養によって生体から切り離した皮膚組織片の場合（ex-vivo）分布密度は回復せずに一方的に減少した。このことは、生体内では MMGL 陽性組織マクロファージが常に血液循環によって補充されている

図６ マウス皮膚へのアセトン／フタル酸ジブチル (AD) 塗布
後の、MMGL 陽性細胞の真皮中での密度の変化。任意の長方形（75×95μm）の領域内の全細胞数に対する MMGL 陽性細胞数の割合を、AD 塗布後の時間経過をおって調べた。
合計 50 領域を計測し、MMGL 陽性細胞の密度についてのヒストグラムを作製した。横軸が、MMGL 陽性細胞の密度、縦軸がその細胞密度を有する領域の出現頻度を表す。AD 塗
布後 MMGL 陽性細胞の密度の多い領域（＞ 15%）が減少し、24 時間後に塗布前の状態に復帰した。

が、宿主から切り離した皮膚片では補充が起こらないためと解釈できる。また、AD を塗布していない皮膚片を器官培養しても、MMGL 陽性細胞の分布密度に変化がなかったことから、この変化が皮膚への AD の塗布によって誘導されたことが明かとなった。
以上の結果より、AD による皮膚への刺激によって真皮から MMGL 陽性細胞の移動が開始されることを、直接皮膚局所の観察によって明らかにすることができた。

３. ７

化学物質による皮膚組織マクロファージ細胞交通の開始機構
AD のような化学物質が組織マクロファージの移動を開始させる機構の一
図７ マウス皮膚器官培養による MMGL 陽性細胞密度の変化。AD を塗布した 30 分後表皮から所属リンパ節に移動する場合、 （黒丸）、あるいは未処置 ( 白丸）のマウスの皮膚を図１の方法で器官培養した。経時的に皮膚サンプルを採取し、真皮内の MMGL 陽性細胞の分布を計測した。図６と同局所で産生された炎症性サイトカイン
様な方法でヒストグラムを作製し、AD 塗布後 MMGL 陽性細胞の密度の多い領域（＞が関与していることが報告されている。
15%）の出現頻度をプロットしてある。比較として、AD をマウスに塗布し、一定時また、ランゲルハンス細胞の所属リン間後に皮膚を採取した場合（in vivo）を示した（黒三角）。図７の右側のヒストグラムは、パ節への移動には、ケモカイン SLC
AD 塗布 24 時間後の MMGL 陽性細胞の密度についての例である。

端を解析した。ランゲルハンス細胞が− 81 −（図９）。また、抗マウス TNF—α にも同様に効果が認めの関与を示した報告もある。
組織マクロファージの細胞交通の開始における可溶性られた（not shown）。さらに、組換え型サイトカインの効因子の関与を調べるため、まず、AD を塗布したマウス皮果を調べた。マウス IL—1α、マウス IL—1β、マウス TNF

膚を組織培養してその培養上清を回収した。未処置マウ—α は、正常マウス皮膚の器官培養系において、真皮からスの皮膚器官培養系に AD 塗布したマウス皮膚の培養上の MMGL 陽性細胞の減少を誘導した（図 10）。

清を添加し観察すると、培養上清の添加量に応じて真皮

次に、AD 塗布マウス皮膚の培養上清に、実際にサイトの MMGL 陽性細胞の分布密度の低下が観察された。次に、カインが含まれているかどうかを調べた。ELISA によっ培養上清をセントリコンフィルターを用いて分画すると、て、AD 塗布したマウス皮膚の培養上清中に IL—1 β が検活性は分子量 10 , 000 以上の画分に保持された。このこと出された（表２）。さらに、AD を塗布した皮膚におけるは、活性の本体がケモカインではなく、それ以外のサイトIL—1 β の産生細胞を免疫組織学的に調べると、表皮のラカインであることを示唆している。さらに、ケモカイン受ンゲルハンス細胞が主要な産生細胞であることがわかった。

容体は G タンパク共役型であり百日ぜき毒素によってシ

これらの観察結果は、AD の塗布によって皮膚局所で ILグナル伝達が阻害されることが知られているが、AD 塗布したマウス皮膚の器官培養系に百日ぜき毒素を共存させても、真皮の MMGL 陽性細胞の分布密度の低下を阻止しなかった。
AD 塗布したマウス皮膚の器官培養系に炎症性サイトカインに対する抗体を共存させて影響を調べた。抗マウス IL—1α、抗マウス IL—1 β 抗体の共存によって、AD 塗布後の真皮からの MMGL 陽性細胞の減少が有意に阻害されたが、対照のハムスター IgG では影響がなかった（図８）。また、抗マウス TNF—α にも同様に効果が認められた（notshown）。次に、正常マウス皮膚の器官培養で、AD 塗布したマウス皮膚の培養上清中の因子の活性を調べる実験系を用いて、抗体の作用を調べた。培養上清の効果は、抗マ
ウス IL—1 α、抗マウス IL—1 β 抗体によって解除された

図８ AD 塗布マウス皮膚器官培養における抗サイトカイン抗体の効果。AD を塗布したマウスの皮膚を器官培養する時に100μg/mL の抗体を共存させた。24 時間後の MMGL 陽性細胞の真皮中での密度を図７と同様に求めヒストグラムを作製した。横軸が、MMGL 陽性細胞の密度、縦軸がその細胞密度を有する領域の出現頻度を表す。AD 塗布後 MMGL 陽性細胞の密度の多い領域（＞ 15%）が減少するが (medium)、IL-1β や IL-1α に対する抗体を共存させるとその減少が抑制された。対照のハムスター IgG には効果がなかった。

図９ 正常マウス皮膚器官培養における AD 塗布マウス培養上清の効果と、抗体による中和。AD 塗布したマウス皮膚を培養し培養上清を作製した。正常マウス皮膚を器官培養する際に培養上清を添加するとともに、サイトカインに対する抗体も共存させた。縦軸に、器官培養 24 時間後の皮膚片の真皮における MMGL 陽性細胞の細胞密度の平均値を示した。培養上清添加によって減少した MMGL 陽性細胞密度が IL-1βや IL-1α に対する抗体によって回復したが、対照のハムス
ター IgG には効果がなかった。

図 10 正常マウス皮膚器官培養における炎症性サイトカインの効果。縦軸に、器官培養 24 時間後の皮膚片の真皮における MMGL 陽性細胞の細胞密度の平均値を示した。マウス
IL-1β、IL-1α および TNF-α は、正常マウス皮膚片の真皮中の MMGL 陽性細胞密度を減少させた。

− 82 −接触性皮膚炎の研究：皮膚刺激とマクロファージ「細胞交 」の関与

表２マウス皮膚片培養上清中に検出された IL—1β（引用文献）
１）Imai, Y. and Irimura, T. Quantitative
measurement of carbohydrate binding
activity of mouse macrophage lectin. J.
Immunol. Methods., 171 : 23 - 31 , 1994 .
２）Kimura, T., Imai, Y. and Irimura, T.
Calcium-dependent conformation of a mouse—1 などの炎症性サイトカインが産生され、その作用によmacrophage calcium-type lectin. Carbohydrate bindingって MMGL 陽性マクロファージの移動が開始されること

activity is stabilized by an antibody specific for a calcium-を強く示唆しているが、AD がマクロファージの MMGLdependent epitope. J. Biol. Chem., 270 : 16056 - 16062 ,

分子の発現自体を細胞レベルで下方調節している可能性

1995 .

を完全には否定できていない。そこで、マウス皮膚から

３）Imai, Y., Akimoto, Y., Mizuochi, S., Kimura, T., Hirano,MMGL 陽性細胞を単離し IL—1 β 存在下で培養した後、細H. and Irimura, T. Restricted expression of galactose/

胞を界面活性剤で可溶化した。可溶化した膜タンパク質をN-acetylgalactosamine-specific macrophage C-type lectin

電気泳動しウエスタンブロッティングを行った後、mAb

to connective tissue and to metastatic lesions in mouse

LOM—14 を反応させて MMGL を検出した。その結果、IL—1 β は、42 kDa の MMGL の発現量に細胞レベルでなんlung. Immunology, 86 : 591 - 598 , 1995 .
４）Mizuochi, S., Akimoto, Y., Imai, Y., Hirano, H. andら影響を与えないことがわかった。

４．総Irimura, T. Unique tissue distribution of a mouse
macrophage C-type lectin. Glycobilogy, 7 : 137 - 146 , 1997 .

括５）Hosoi, T., Imai, Y. and Irimura, T. Coordinated binding

皮膚を介した感作において、ランゲルハンス細胞の移動

of sugar, calcium, and antibody to macrophage C-typeとは別に、真皮内の組織マクロファージが所属リンパ節にlectin. Glycobiology, 8 : 791 - 798 , 1998 .

移動することを、組織マクロファージ特異的な細胞表面マ６）Sato, K., Imai, Y. and Irimura, T. Contribution ofーカーを用いて明らかにした。この現象は、抗原である

dermal macrophage trafficking in the sensitization phase

FITC を溶解した溶媒中の化学物質によって誘導されるこof contact hypersensitivity. J. Immunol., 161 : 6835 - 6844 ,とが分かった。また、マクロファージの移動を誘起する能1998 .

力の高い化学物質は、FITC による抗原感作を強めるアジ

７）Akimoto, Y., Imai, Y., Hirabayashi, J., Kasai, K. andュバントとして働くことを見出した。皮膚から単離した組

Hirano, H. "Histochemistry and Cytochemistry of織マクロファージを蛍光トレーサーで標識し、細胞移植実Endogenous Animal Lectins" Progress in Histochem.

験によって細胞が実際に移動することを証明した。さらに、

Cytochem., vol. 33 , number 1 , Gustav Fischer Verlag, pp.

皮膚局所の観察および皮膚片の器官培養によって、溶媒中

1 - 92 , 1998 .の化学物質が真皮からマクロファージの移動を開始させる

８）Kimura, T., Hosoi, T., Yamamoto, K., Suzuki, N., Imai,

ことを直接明らかにした。また、マクロファージ移動の開Y. and Irimura, T. Epitope mapping of monoclonal

始過程で IL—1 をはじめとした炎症性サイトカインが関与

antibodies specific for a macrophage lectin: a calcium-していることを発見した。

dependent epitope is in the carbohyudrate recognition

本研究により、真皮をはじめとする結合組織性マクロフ

domain. Molec. Immun. 37 : 151 - 160 , 2000 .

ァージの細胞交通が、抗原感作の局面で重要な役割を果た

９）Chun, K-H., Imai, Y., Higashi, N. and Irimura, T.

していることが明かとなり、化学物質のアジュバント作用

Migration of dermal cells expressing a macrophageの発現メカニズムとして重要であると考えている。また、

C-type lectin during the sensitization phase of delayed-

試験管内の皮膚器官培養系は、化学物質アレルギーを誘発

type hypersensitivity. J. Leukocyte Biol. 68 : 471 - 478 ,あるいは補助する恐れのある化学物質の検索に有用と思われる。

2000 .
10）C h u n , K - H . , I m a i , Y . , H i g a s h i , N . I r i m u r a , T .
Involvement of cytokines in the skin-to-lymph nodetrafficking of cells of the monocyte-macrophage lineage
expressing a C-type lectin. Int. Immunol. 12 : 1695 - 1703 ,2000 .

− 83 −