原著

１％酸フクシンの濃度差によるEVG 染色（Elastica van Gieson stain）の染色性の検討
田部井恭子1），藤原要誠1），丸山理留敬2）

旨：背景：Elastica van Gieson stain（以下 EVG 染色）に使用するワンギーソン液の飽和ピクリン酸と１％酸フクシンの調整比率は施設によって若干の差がある。
方法：ヒト大腸の10％ホルマリン固定パラフィン包埋組織を３μm に薄切して作成した未染標本に，１％酸フクシンの濃度を変えて EVG 染色を行い，弾性線維と膠原線維が明瞭に染め分けられ，かつ，筋線維や赤血球も鑑別できるワンギーソン液の最適混合比を非常勤病理医１名の判断から評価した。
結果：最適混合比は，飽和ピクリン酸 40 ml に対し，１％酸フクシンが 9.09 ～11.11％の比率になるように加えて調整したワンギーソン液であった。
まとめ：当院の病理診断において，ワンギーソン液の調整は，飽和ピクリン酸 40ml に対し１％酸性フクシン4.5 ml（10.11％）が最適混合比であると考えられた。
キーワード：EVG 染色，１％酸フクシン，最適混合比（雲南市立病院医学雑誌

はじめに2017; 14（1）: 65-68）

おける心筋の線維化などを鏡検し診断するに当たり，有用な染色法である 4）。

線維性結合組織とは，組織の間隙を埋める役をする

さまざまな染色法の染色時間はある程度の幅を持っもので，①繊維芽細胞，②線維，③基質の３つから構て文献に記載されているが，ワンギーソン液に関して成され，硬蛋白（アルブミド）と呼ばれる物質から成る。

は染色時間に加え飽和ピクリン酸と１％酸フクシンの

この硬蛋白は①コラーゲン（膠原線維），②エラスチン混合比についても言及してあるものが多い。その理由（弾性線維），③レチクリン（細網線維），④オッセイン

は，飽和ピクリン酸と酸フクシンの混合比で微妙な色1）（骨・歯）の４つに分類される 。

調のコントラストを得ることが可能 4），また，ピクリ

Elastica van Gieson stain（以下 EVG 染色）は，線維性ン酸，酸フクシンの調整量により染色性が異なる 1）た結合組織のなかの弾性線維を前田変法レゾルシンフクめである。そのために，飽和ピクリン酸水溶液 100 ml

シン液で，膠原線維をワンギーソン液で染め分けるこに対し 10％酸フクシン 0.6 ml 加えた後に 10％酸フクシとができ，かつ筋線維や赤血球等との鑑別も可能であンを１滴ずつ加える 3），といったことが推奨されているという同時多目的染色法である 2）。血管，肺，皮膚る文献もある。など弾性線維の豊富な組織の病変，あるいは腫瘍の脈当院では，今まで，飽和ピクリン酸 40 ml に対し１％

管侵襲や深達度など，多くの臓器で病変の把握に用い酸フクシンを６ ml 加えて調整したものを使用してきた

られる 3）。特に血管炎における弾性線維の状態や肺線が，黄色の輝度が弱いとの指摘があった。そこで，今維症における弾性線維と膠原線維の状態，心筋梗塞に回，良質と判定される標本を作成し，病理診断の精度

１）

雲南市立病院医療技術部検査科，２）雲南市立病院病理部・島根大学医学部病理学教室
著者連絡先：田部井恭子 雲南市立病院医療技術部検査科〔〒 699-1221 雲南市大東町飯田 96-1〕
E-mail: hospital-soumu@city.unnan.shimane.jp（受付日：2018 年２月８日，受理日：2018 年３月 31 日）

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雲南市立病院医学雑誌

第 14 巻第１号（平成 30 年３月）を上げるために，１％酸フクシンの濃度を変えること検討に使用した組織の使用については，既に病理によってワンギーソン液の最適混合比を求めたので報組織診断が確定している手術標本の余剰を用いた。臨告する。

床検体の余剰を研究へ流用することに関しては，当該患者からは入院時包括同意書により包括的に同意を得対象と方法ている。

試料：弾性線維と膠原線維が豊富なヒト大腸の結10％ホルマリン固定パラフィン包埋組織を３ μm に薄果切し，スライドガラスに載せて 50℃の伸展板で２時間染色の結果の写真を示す（図１）。

伸展を行った後，37 ℃孵卵器で一晩乾燥させた未染標

１％酸フクシンとして 2.44～6.98％のワンギーソン本を使用した。なお未染標本は，同一の 10％ホルマリ液は，相対的にピクリン酸の量が多くなり，ピクリンン固定パラフィン包埋組織から複数枚作成した。

酸の黄色が全体的に優勢となった。筋線維や赤血球は試薬：パラフィンは化学用パラフィン融点 58.0℃（±染まるもののコントラスが少なく良質な標本と判定さ0.5 ℃）（Fisher）を使用し，脱パラ試薬はキシレン（関れなかった。

東化学），エタノール（関東化学）を使用した。染色試

逆 に １ ％ 酸 フ ク シ ン と し て 13.4～14.89 ％ の ワ ン

薬は前田変法レゾルシンフクシン液（武藤化学），ワギーソン液は，相対的に酸フクシンの量が多くなり，イゲルト鉄へマトキシリン液Ⅰ（武藤化学），ワンギー酸フクシンの赤色が優勢となる。膠原線維の染まりがソン液 A（飽和ピクリン酸１％水溶液，武藤化学）ワ強くなりすぎ良質な標本と判定されなかった。

ンギーソン液 B（１％酸フクシン水溶液，武藤化学）

１％酸フクシンとして 9.09～11.11％のワンギーソを使用した。

ン液は，弾性線維と膠原線維が明瞭に染め分けられ，表１に示す工程で EVG 染色を行った。工程⑥のワンかつ筋線維や赤血球も鑑別でき良質な標本と判定されギーソン液において飽和ピクリン酸と１％酸フクシンた。の最適混合比を調べるために，飽和ピクリン酸 40 ml

考に対し，１％酸フクシンを１，２，３，４，５，６，７，８ml

察加えて１％酸フクシンとして各 2.44，4.76，6.98，9.09，EVG 染色の染色結果は弾性線維は紫黒色に，細胞核11.11，13.04，14.89％（酸フクシンとしては各 0.024，は黒褐色に，膠原線維は赤色に，筋線維は黄色に染ま0.048，0.070，0.091，0.111，0.130，0.149 ％）に 調

らなければならない。例えば心筋梗塞の症例では，従整したものを用いた。この１％酸フクシンの調整量は来の心筋細胞は黄色に染まらなければならないが，心武藤化学が推奨している比率である 9.09～13.04％を筋細胞が膠原線維に変化しているため，全体に赤色中心に設定した。

調に染色される。単にヘマトキシリン・エオジン染色

標本の判定方法は，①筋線維や赤血球がピクリン酸（Hematoxylin-Eosin stain）で染めた標本に比べ病変部位が明瞭に確認できる 4）。

により明瞭に染っていること，②膠原線維が酸フクシンにより明瞭に染まっていること，③膠原線維と弾この原理の一つとして，ワンギーソン染色に使用さ性線維が染め分けられストレスなく鏡検できることとれるピクリン酸は，フェノール性 OH 基がイオン化し，し，その総合判定は当院非常勤病理医（１名）に依頼ピクリン酸本体が負（－）に荷電する。また酸フクシンした。

も，スルホン酸基 SO₃Na がイオン化し，色素本体は負表１

EVG 染色工程①脱パラ（キシレン）→脱水（99％，95％，90％，80％，70％エタノール）

工程②

前田変法レゾルシンフクシン液（３時間）

工程③

99％エタノール３層，水洗（３分）

工程④

ワイゲルト鉄へマトキシリン液Ⅰ（15 分）

工程⑤

水洗（10 分）工程⑥

ワンギーソン液（１時間）

工程⑦

脱水（95％，99％エタノール）→透徹（キシレン４層）→封入

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１％酸フクシンの濃度差による EVG 染色の染色性
2.44％

4.76％

6.98％

11.11％

13.04％

14.89％

図１

１％酸フクシンの量とその混合比での染色写真（－）に荷電する。両者はともに負（－）に荷電するので，9.09％であった。

化学的挙動は同じである。しかし両者は分子の大きさワンギーソン液の最適混合比を求めることで，試薬が異なり，その大きさの違いが染色の選択性をもたらの調整時間の短縮と安定した染色性の確保，そして病すことになる。小さなピクリン酸は構築の密な部位（筋理診断の精度を上げることができると期待されるた。

線維や赤血球など）へ入り込み，一方，大きな分子のま酸フクシンは構築の疎な部位（膠原線維）へ入り込んで，各々の部位を染め分ける 5）。とめ

当院の EVG 染色を用いた病理診断において，ワン相対的にピクリン酸の量が多くなると全体的に黄色

ギーソン液の調整は，飽和ピクリン酸 40 ml に対し１％優勢となり，逆に１％酸フクシンの量が多くなると赤

酸性フクシン 4.5 ml（１％酸フクシンとして 10.11％）色が優勢となる。

が最適混合比であった。

今回は，当院において１％酸フクシン水溶液とピク文リン酸飽和水溶液の最適混合比を求めた結果，最適混合比は，飽和ピクリン酸 40 ml に対し，１％酸フクシンとして 9.09～11.11％の比率になるように加えて調整したワンギーソン液であった。そのほぼ中間値である10.00％（酸フクシンとして 0.10％）を当院の最適混合比と仮に定めると，１％酸フクシンを 4.44 ml 加える計算になる。よって，調合しやすいように 4.5 ml 加えることにした。結果 10.11％とになりこの値は武藤化学
6）が推奨している 9.09～13.04％の範疇であった 。
また，非公式であるが，県内病院の病理部に問い合わせたところ，３施設が飽和ピクリン酸 100 ml に対し１％酸フクシンが 10 ml，２施設が飽和ピクリン酸

１）山下和也，舘林妙子，篠田献
宏．弾性線維の染色法．

検査と技術．1998; 26: 114-118.
２）高田多津男．ワンギーソン染色（エラスチカ・ワン ギ ー ソ ン 染 色 ）．MEDICALTECHNOLOGY．

1988; 16 別冊「染色法のすべて」: 31-33.
３）富 永

晋． エ ラ ス チ カ・ ワ ン ギ ー ソ ン 染 色．

MEDICAL TECHNOLOGY．2011; 39: 18-20.
４）高田多津男．エラスチカ・ワンギーソン染色．検査と技術．2001; 29: 651-653.
５）渡辺明朗．エラスチカ・ワンギーソン染色．検査と技術．2013; 41: 736-739.

100 ml に対し１％酸フクシンが 15 ml との回答を得た。

６）武藤化学．エラスチカ・ワンギーソン染色（前田

当院では染色瓶の容量が 50 ml であるため飽和ピクリ変法）．武藤化学．MUTO TOTAL PRODUCTS．東ン酸を 40 ml にしているが，100 ml に換算すると１％

京：武藤化学；2012. pp88.

酸フクシンは 11.25 ml となり，ほぼ中間に位置する値

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雲南市立病院医学雑誌

第 14 巻第１号（平成 30 年３月）

Which concentration of 1% acid fuchsin resultsin the clearest contrast in Elastica van Gieson staining?
Kyoko Tamegai1）, Makoto Fujihara1）, and Riruke Maruyama2）

Abstract: Background: Elastica van Gieson（EVG）staining has been performed using a combination of
EVG solution with various ratios of 1％ acid fuchsin and saturated picric acid.
Methods: Resected human colonic specimens were ﬁxed with 10％ formalin, embedded in parafﬁn blocks,
and dissected into 3 micrometre slices using a microtome. The slices were then mounted on slides and EVG
staining was performed using various ratios of 1％ acid fuchsin and saturated picric acid. One part-time
pathologist carefully examined the slides under a microscope and assessed the level of clarity of differentiation
between the elastic ﬁbres, collagen ﬁbres, muscle ﬁbres, and red blood cells in the samples.
Results: The pathologist observed that the elastic ﬁbres were more clearly differentiated than the collagenﬁbres, muscle ﬁbres, and red blood cells in the samples stained using the van Gieson solution of 9.09-11.11％
with 1％ acid fuchsin.
Conclusions: In our laboratory, the clearest staining was achieved using a combination of 4.5 ml of 1％ acidfuchsin and 40 ml of saturated picric acid（10.11％ of 1％ acid fuchsin）in EVG staining.
Key words: Elastica van Gieson（EVG）staining; 1％ acid fuchsin; the best mixture ratio of 1％ acidfuchsin and saturated picric acid１）

Clinical laboratory, Unnan City Hospital, ２）Department of clinicopathology, Unnan City Hospital
Correspondence: Kyoko Tamegai, Clinical laboratory, Unnan City Hospital〔96-1 Daito-cho Iida, Unnan, Shimane 6991221, JAPAN〕
Telephone: 0854-47-7500 / Fax: 0854-47-7501
E-mail: hospital-soumu@city.unnan.shimane.jp