ISSN 1347−6602

昭和62年６月９日学術刊行物認可

家畜衛生
学雑誌
家畜衛生学
The Japanese Journal of Animal Hygiene

日本家畜衛生学会
Vol .46 No.4
2021. MAR.

The Japanese Society ofAnimal Hygiene

家

畜

衛

生

学

雑

日本家畜衛生学会

発行

誌

理 事 長：河合一洋
副理事長：樋口豪紀
編集委員長：長井誠

編集委員：末吉益雄・髙井伸二・宮﨑茂

野上貞雄・福士秀人"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""The Japanese Journal of Animal Hygiene
Published by the Japanese Society of Animal Hygiene
President : Kazuhiro KAWAI（）

Vice President : Hidetoshi HIGUCHI（
Editor-in-Chief : Makoto NAGAI（
Editorial Board : Masuo SUEYOSHI（
Shinji TAKAI （

）
）
）

）

Shigeru MIYAZAKI（
Sadao NOGAMI（
Hideto FUKUSHI（））

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「家畜衛生学雑誌」第46巻第 4 号の送付にあたって
会員の皆様におかれましては，ますますご清栄のこととお慶び申し上げます．ここに，「家畜衛生学雑誌」第46巻
第 4 号を刊行する運びとなりました．本号では，総説 1 編，原著論文 3 編，技術資料 1 編を掲載しております．
本誌では，原著論文・短報以外にも，総説，数ページ程度のミニレビュー，技術資料等の原稿を受け付けておりま
すので，会員の皆様の積極的なご投稿をよろしくお願い致します．ご不明な点は遠慮なく編集委員会事務局へお問い
合わせください．
日本家畜衛生学会
家畜衛生学雑誌

理事長

河合一洋

編集委員長

長井

誠



日本家畜衛生学会・学会費納入のお願い
ご承知のように，学会は会員の皆様からの会費をもって運営されております．学会の運営を円滑に運ぶために，所定の会費を納入していただきますようお願い致します．
＊会費は，正会員5,000円，学生会員2,000円です．
日本家畜衛生学会

払

※

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4 3 1 7 1

2018

2019

2020

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4 3 1 7 1※

日本家畜衛生学会

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千

百

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2016

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家畜衛生学雑誌
第46巻
目

第4号

2021

次

〈総 説〉
日本における家畜用ワクチンの現状と将来展望････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 平山紀夫･･･････････････････････ 165〜179〈原 著〉
パイン粕サイレージおよび紅茶粕が乳牛のルーメン発酵と乳生産に及ぼす影響････････････････････････････････････････････ 青木直人・東浦裕紀・佐藤 幹・神田修平・板橋久雄･･･････････････････････ 181〜188
Effect of Sampling Volume for Viable Bacterial Count and Somatic Cell Count in Cows’ Foremilk･･････････････････････ Nana Kitano・Yoshio Kiku・Satoshi Gondaira・Toshihiko Takahashi･･･････････････････････ 189〜193
新型コロナウイルス SARS-CoV- 2 診断キットにおける前処理試薬のウイルス不活化効果の評価･････････････････････････････････････ 松浦遼介・Lo Chieh-Wen・中川 優・武井正美・間陽子･･･････････････････････ 195〜203〈技術資料〉
2019年に埼玉県で発生した豚熱（CSF）の概要と防疫対応･････････････････････････････ 伊藤麗子・留場寛子・椚 友香・田代卓也・成田沙織・福田昌治･･･････････････････････ 205〜215
第46巻総目次 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 217〜220
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 221
家畜衛生学雑誌投稿規程
日本家畜衛生学会会則･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 222〜223････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 224〜225

家畜衛生学雑誌

The Japanese Journal of Animal HygieneVol. 46  No. 4

2021

Contents〈Review〉
The present and future of domestic animal vaccines in Japan･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Norio Hirayama･･･････････････････････････････････････････ 165〜179〈Original report〉
Effect of pineapple bran silage and dried black tea residue on rumen fermentation and milk production
in dairy cows･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Naoto Aoki et al.･･･････････････････････････････････････････ 181〜188
Effect of sampling volume for viable bacterial count and somatic cell count in cows’ foremilk････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Nana Kitano et al.･･･････････････････････････････････････････ 189〜193
Evaluation of SARS-CoV-2 inactivation efficiency mediated by the reagent of COVID-19 diagnosis kits･･･････････････････････････････････････････････････････････････ Ryosuke Matsuura et al.･･･････････････････････････････････････････ 195〜203〈Technical report〉
An outbreak of classical swine fever (CSF) and epidemic prevention measures in Saitama Prefecture, 2019････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Reiko Ito et al.･･･････････････････････････････････････････ 205〜215
Contents of volume 46 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 217〜220
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 221
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 222〜223
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 224〜225

Jpn. J. Anim. Hyg.

総

165

説

日本における家畜用ワクチンの現状と将来展望平山紀夫 1 ）＊The present and future of domestic animal vaccines in Japan
Norio Hirayama 1）＊（1）Nippon Veterinary and Life Science University, 1-7-1, Kyonancho, Musashino, Tokyo, 180-8602, Japan＊

Corresponding Author : Norio Hirayama（hirayamanorio@gmail.com））（2020. 11. 10  受付／2020. 12. 24  受理）

Summary
The vaccination is the best method to control the infectious diseases.   For example, smallpox and rinderpest
have been eradicated by mass vaccination.   Many vaccines for domestic animals have been developed in Japanand are useful to produce healthy animals.  In the 1880’s, Pasteur found the methods to attenuate the pathologicalvirus or bacteria.  Thereafter numerous live vaccines were developed by the Pasteur’s methods.  Since the 1990’s
new vaccines were developed by the gene recombination technology, such as the gene deletion vaccine, subunit
vaccine, recombinant live vaccine.   Just coming, DNA vaccine and mRNA vaccine are looking forward toinnovative vaccines.  
Key words：domestic animal vaccines, Pasteur, recombinant live vaccine, DNA vaccine, mRNA vaccine
  家畜衛生学雑誌

Ⅰ．はじめに2019年12月中国武漢市で発生した新型コロナウイルス

46，165〜179（2021）

ついて，その現状と将来展望を解説する．なお，個々のワクチンについての具体的な解説は，成書 3 ， 4 ） に詳細に記載されているので，本稿では省略する．

感染症（COVID-19）は，パンデミックとなり，その対策のためのワクチン開発が世界中で進められている．通常，感染症の成立要件として①病原体，②感染経路，③・３つの要件のどれかを断ち切ること

宿主の 3 つの要件があり，感染症はこの要件のどれかを断ち切ることにより防ぐことができる（図 1 ）．病原体

感染経路に対しては消毒薬の使用，感染経路に対しては隔離等が有効な手段である．宿主に対しては抵抗力を付けるワクチンの使用が効果的であり，各家畜における感染症に対

消毒薬

病原体

宿主（動物）

して多くのワクチンが開発されてきた．健康な家畜を生産するための無くてはならないツールであるワクチンに
日本獣医生命科学大学（客員教授）〒180−8602 東京都武蔵野市境南町 1 − 7 − 1＊
連絡著者：平山紀夫（hirayamanorio@gmail.com）
1）

宿主に抵抗力を付けるワクチン
図 1 ．感染症を防ぐには

家畜衛生学雑誌

166

Ⅱ．ワクチンは感染症根絶に貢献した
1 ．痘そう（天然痘）及び牛疫の根絶
人類が地球上から根絶した感染症は，1980年の痘そうと2011年の牛疫であるが，これらの快挙に大きな役割を

第46巻第 4 号（2021）
ける事例を 2 ・ 3 紹介する．
犬の狂犬病は，1950年には867頭の発生があったが，狂犬病予防法に基づき狂犬病不活化ワクチン49） の義務接種を行うことにより1957年には発生がなくなり，以降
日本は狂犬病清浄国を維持している．
豚熱（豚コレラ）は，1960年代に年間 2 万頭の発生が果たしたのはワクチンである．
1 ）天然痘ワクチンあった．当時は不活化ワクチンが使用されていたが，効人類最初のワクチンである Jenner が開発した牛痘接果が十分でなかった．1969年から弱毒 GPE −株47）による種法は，同属異種ウイルスを用いた自然の弱毒生ワクチ

生ワクチンが使用された．本ワクチンの特徴は，接種後ンであった36）．1958年世界保健機関が世界天然痘根絶計

3 日で感染防御するという極めて有効なワクチンであっ画を開始したが，この計画に使用されたワクチンは，ワたことから，この生ワクチンの使用に伴い，豚熱の発生

クシニアウイルスを用いて牛の皮膚で製造された生ワクは激減し，2007年には撲滅を宣言し，2015年 OIE から豚チンであった．日本では1948年ワクチンの義務接種で流熱清浄国のステータスが認定された．豚熱は2018年 9 月

行が沈静化し，1956年以降発生がなくなり，1976年ワク

岐阜県で再発し，野生イノシシでの感染が防疫を困難にチン接種が中止された．なお，日本ではウサギ腎細胞のしているが，2019年10月からの豚へのワクチン接種によ培養継代とクローニングにより作出されたワクシニアウ

り豚での発生が抑えられている．

イルス LC16m8株を用いた生ワクチンが，副作用がない

ニューカッスル病は，1967〜1968年には年間200万羽

優れたワクチンとして1975年に承認されたが，翌年のワの鶏に発生があったが，不活化ワクチンから B1株を用クチン接種の中止に伴い使用されることがなかった 8 ）．

いた生ワクチン21） に切り替えたところ発生が激減し，一方，このワクチンは，バイオテロに備えた備蓄用ワク

現在でもワクチン接種することにより確実に発生を抑えチンとして期待されるほか，LC16m8 株は組換え生ワクている．

チンのベクターとして活用されている．
2 ）牛疫ワクチン

このようにワクチンは，感染症を防ぐために無くてはならない医薬品である．このことは，医薬品の販売高に牛疫に対する最初のワクチンは，1917年に蠣崎が開発

おいても如実に示されている（図 2 ）．日本における動56）

した不活化ワクチンであり ，感染牛の脾臓乳剤をグリ物用医薬品の販売高は，800〜1,100億円台で推移していセリンで不活化したものであった．その後蠣崎は，トルる29）．2000年までは感染症に対して抗菌薬による治療がエンで不活化することにより免疫持続時間が長くなるこ

主に行われ，その販売高は50％を占めていたが，2005年とを見出した．この不活化ワクチンは，朝鮮・満州国境

以降はワクチン等の生物学的製剤の販売高が抗菌薬を上の牛に接種され，免疫ベルト地帯作成に威力を発揮し，回るようになり，2014年にはワクチン等の販売高が40％

朝鮮・日本への牛疫の侵入を防いだ．また，1938年に中近くを占めるようになった．このことは，一戸当たりの村は，ウサギに百数十代連続継代して弱毒した L 株を作

飼養頭羽数の増加に伴い，感染による被害拡大を防ぐ方

出し24），1953年にはこの L 株を発育鶏卵で330代継代し策としてワクチンによる予防に重点が移っていることを25）

更に弱毒化した LA 株を開発した ．これらの生ワクチ示している．

ンは，中国や東南アジアでの牛疫撲滅に貢献した．1962
年 Plowright らが牛腎培養細胞に90代継代した弱毒生ワクチンを開発し ，国連食糧農業機関が1993年に開始した牛疫撲滅プログラムで使用された．凍結乾燥された本
ワクチンはアフリカ等の熱帯地域でも有効性を維持し，牛疫の発生は2001年ケニアの水牛が最後となった．2007
年以降血清サーベイランスに切り替え，野外ウイルスによる抗体陽性例がないことを確認し，2011年国際獣疫事務局（OIE）が牛疫の根絶を宣言した．
2 ．ワクチンの効果
天然痘ワクチンと牛疫ワクチン以外のワクチンでも感染症をコントロールしたワクチンが多くある．日本にお1,200販売高︵億円︶

42）

1,000

生物学的製剤
抗菌薬
全体

800
600
400
200
0

1985 1990 1995 2000

2005 2010 2015 2018

図 2 ．動物用医薬品販売高の推移

平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望

167や局長通知で示されており，その詳細は成書26） を参考

Ⅲ．ワクチンの法規制にされたい．

ワクチンを含む医薬品は，「医薬品，医療機器等の品
質，有効性及び安全性の確保に関する法律」（医薬品医3 ．承認審査の流れ

療機器等法：旧薬事法）により規制されている．本法

承認審査の流れを図 3 に示す．ワクチン開発メーカー

は，人用の医薬品等に関する法律であるが，専ら動物にから提出された承認申請書は，先ず農林水産省動物医薬

使用する医薬品等に関しては，「厚生労働大臣」や「厚品検査所（魚用ワクチンの場合は農林水産省消費・安全

生労働省令」は，「農林水産大臣」，「農林水産省令」と

局畜水産安全管理課水産安全室）で事務局審査が行われそれぞれ読み替えることとなっている（法第83条）．

る．事務局審査が終了し添付資料等の整備が終われば，
薬事・食品衛生審議会に諮問され，調査会，部会，薬事

1 ．ワクチンを製造販売するためには分科会の三段階で審査を受ける．更に，食用動物に使用ワクチンを含む医薬品は，人や動物に強く作用し，場するワクチンの場合には，内閣府食品安全委員会でワク合によってはそれらの生命を奪うこともあり，誰でも製チンが接種された動物由来の食品（肉，乳，卵等）につ造販売できるような物ではなく，医薬品医療機器等法

いて人の健康に与える影響が評価される．これらの審査

上，大臣の許可及び承認を受けた者でなければ製造販売

及び評価の結果，承認して差し支えないとの結論が出たをしてはならないと規制されている．ワクチンを製造販場合に農林水産大臣が承認を与える．

売するためには，①法第12条の製造販売業の許可，②法第13条の製造業の許可及び③法第14条の製造販売の承認

4 ．ワクチンの国家検定（品目ごとの承認）が必要である．②は，医薬品を製造

ワクチンは，製造したロット毎に国家検定に申請しなする工場（製造所）の許可であり，工場を持たない者はければならず，国家検定に合格したロットだけが市販で製造を他者に委託することができる．

きる（法第43条）．国家検定は，動物用生物学的製剤検定基準に基づき動物医薬品検査所で実施されている．
1 ）国家検定の変遷

2 ．ワクチンの製造販売の承認
ワクチンの製造販売をしようとする者は，品目ごとに2008年にシードロットシステムが導入され，シード

その製造販売について大臣の承認を受けなければならなロット製剤として承認されたワクチンは，原則国家検定い（法第14条第 1 項）
．ワクチンの製造販売業者は，有の対象から除外されるようになった28，31）．ただし，①家

効性，安全性及び品質の良さを証明した試験成績資料を

畜伝染病予防法第 2 条の家畜伝染病を対象とするワクチ添付して申請する（法第14条第 3 項）
．具体的な試験資

ン，②狂犬病予防法で接種が義務付けられている狂犬病

料は，動物用医薬品等取締規則（以下「規則」）第26条のワクチン及び③新規に承認され再審査中のワクチン

申

請

者

申請

承認

薬事・食品衛生審議会

農林水産省
動物医薬品検査所（魚用ワクチン：畜水産安
全管理課水産安全室）

諮問

答申

動物用生物学的製剤調査会
又は水産用医薬品調査会
動物用医薬品等部会
薬事分科会

消費・安全局
畜水産安全管理課

諮問
内閣府食品安全委員会
答申

図 3 ．承認審査の流れ

家畜衛生学雑誌

168

第46巻第 4 号（2021）

・シードロット製剤は原則国家検定の対象から除外
・ただし以下のワクチンは検定を実施
検定を実施するワクチン

要約書(SLP)審査（2019年から）

法定家畜伝染病を対象とする
ワクチン
狂犬病ワクチン上記以外の再審査中のワクチン現物を用いた
試験＊

〇

〇

〇

〇

〇

×

＊生ワクチン：ウイルス含有量試験・生菌数試験
不活化ワクチン：力価試験

図 4 ．国家検定における要約書審査（①及び②を除く）は検定が実施されている．混合ワク

外に要指示医薬品を販売・授与してはならないとされてチンの場合，例えば「ニューカッスル病・鶏伝染性気管いる（法第49条）．この規定に反して販売した販売業者

支炎生ワクチン」は，家畜伝染病であるニューカッスルには， 3 年以下の懲役若しくは300万円以下の罰金が科病のワクチンが含まれるので，検定対象製剤であるが，せられる．なお，ワクチンのうち鶏痘ワクチンは，使用検定はニューカッスル病についてのみ実施され，鶏伝染法が簡単であること，長期間安全に使用されてきたこと性気管支炎については実施されない．なお，検定項目もから要指示医薬品から除外されている．要指示医薬品の合理化され，生ワクチンの場合はウイルス含有量試験又制度は，販売規制であるが，上記の指定理由からもわかは生菌数試験，不活化ワクチンの場合は力価試験のみがるように，その使用に当たっては獣医師の指導等を受け現物のワクチンを用いて実施されている．

る必要がある．

2020年 1 月時点で240製剤がシードロット製剤として

2 ）獣医師法による規制

承認されている．シードロット製剤は，一般的名称の末獣医師が診療を行うことなく，農家等の依頼に応じて尾に（シード）と記載して区別される．例えば，イバラ投与または処方した場合に，家畜の死亡，病原体のまん

キ病生ワクチンの場合「イバラキ病生ワクチン（シー延等の危害が生じる恐れのある医薬品については，そのド）」と記載されていれば，シードロット製剤として承投与・処方にあたっては獣医師自らが診察することが義認されたワクチンのことである．

務付けられている（獣医師法第18条）．ワクチンもこの2 ）書面審査の導入

ような要診察医薬品に指定されており，この規定に違反

2019年 9 月からは，国家検定の申請の際に製造工程全した獣医師には20万円以下の罰金が科せられる．

体 に 渡 る 記 録 等 を 要 約 し た 書 類（ 要 約 書；Summary

なお，獣医師法第18条の「診察」とは，獣医学的見地

Lot Protocol）の添付が義務化され，当該書類の書面審からみて疾病に対して一応の診断を下しうる程度の行為査を行う制度（製造・試験記録等要約書（SLP）審査制

をいい，獣医師が自ら定期的に巡回して当該農場の飼育32）度）が導入された ．本制度の導入に伴い，上記 1 ）の動物の健康状態を把握している場合等において，飼育者③のワクチンについては書面審査のみで現物を用いた試

から病状の聴取等をもって行うものも含まれる．

験は実施されないこととなった（図 4 ）．
6 ．未承認ワクチン
5 ．ワクチンの適正使用のための法的規制
1 ）ワクチンの販売規制

2010年宮崎県で発生した口蹄疫の際使用された口蹄疫
不活化ワクチン及び2019年岐阜県等で発生した豚熱で使

動物用医薬品のうち，①使用に当たって獣医師の専門用されているイノシシ用の経口生ワクチンは，いずれも的な知識と技術を必要とするもの，②副作用の強いも日本で承認されていない海外のワクチンである．このよの，③病原菌に対して耐性を生じやすいもの，④使用期

うな未承認のワクチンが日本で使用できる理由は以下の間中獣医師の特別の指導等を必要とするものを要指示医

法的根拠による．

薬品として農林水産大臣が指定している．ワクチンも要医薬品医療機器等法第83条の 2 で製造業の許可業者で指示医薬品である．薬局開設者又は医薬品の販売業者なければ動物用医薬品の製造及び輸入が禁止されている

は，獣医師からの処方せんの交付又は指示を受けた者以（動物用医薬品の製造及び輸入の禁止）．しかし，この禁平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望

169

2 ．混合ワクチン止規定には，試験研究の目的で使用するために製造又は輸入をする場合その他の農林水産省令で定める場合に家畜の飼養頭羽数の増大につれ，ワクチン接種の省力は，適用しないという例外規定（同条第 3 項）が設けら化が求められ，混合ワクチンや多価ワクチンが市販されれているからである．農林水産省令である規則第213条

るようになった．混合ワクチンとは，複数の感染症を予第 1 項の第 4 号で，国や都道府県が家畜伝染病の予防の防するため 2 種類以上のワクチンを混合したもので， 1目的で使用するために未承認の生物学的製剤を輸入（製種類のみの場合，単味ワクチンと称している．同一の感造）できることが定められている．なお，家畜伝染病予染症で複数の血清型がある場合，それらを混合したワク

防法第50条では，未承認の生物学的製剤は都道府県知事

チンを多価ワクチンと呼ぶが，表 2 では混合ワクチンにの許可を受けなければ使用してはならないとされている含めてある．多価ワクチンの例として，鶏伝染性コリーので，使用に当たっては都道府県知事の許可が必要とな

ザ A 型と C 型が，また，牛ウイルス性下痢（BVD）でる．

はⅠ型とⅡ型を混合したワクチン等が市販されている．
混合ワクチンの比率は，55％で単味より少し多い．

Ⅳ．市販ワクチンの現状

表 2 にも示すが，混合ワクチンには生ワクチン同士あ1 ．市販ワクチンの種類

るいは不活化ワクチン同士を混合するものが主である
が，中には生ワクチンと不活化ワクチンを混合したもの

日本で市販されている家畜用ワクチンの種類を対象家
30）

畜別に表 1 に示す（2018年度） ．全体で132種類も市もある．牛用ウイルスワクチンでは牛伝染性鼻気管炎ウ

販されており，豚用ワクチン及び鶏用ワクチンが45種類

イルス等が生で，BVD ウイルスが不活化された製剤がと多い．生ワクチンより不活化ワクチンが約 2 倍も多あるが，BVD 生ワクチンは妊娠牛等に接種できないこく，魚用ワクチンは全て不活化ワクチンである．これとから，このような製剤設計となった．

は，1998年水産庁長官より魚用ワクチンの実用化は当ワクチンの名称として商品名の他に「一般的名称」が面，不活化ワクチンのみとする通知が出されているためあり，ワクチンの添付文書には両方が記載されている．

である52）．

しかし，動物用生物学的製剤基準や成書では一般的名称で記載されている．混合ワクチンの一般的名称をつける
ルールとして，生ワクチンのみの混合の場合は「混合生ワクチン」，不活化ワクチンのみの混合の場合は「混合表 1 ．日本で市販されている家畜用ワクチンの種類

不活化ワクチン」，生と不活化が混合されている場合は不活化
家畜種 生ワクチン
ワクチン
牛
7
15
馬
1
6
豚
14
30
鶏
21
24
魚
0
11
計
43
86

ら混合の状態が推測できる．

生・不活化
混合ワクチン20
1
003

単に「混合ワクチン」とされているので，一般的名称か

合計
24
7
45
45
11
132

3 ．油性アジュバントワクチン
アジュバントは，ワクチンの抗原性を高めるために添加される物質である．ワクチン接種の省力化は，ワクチンの種類が多くかつ何回も接種しなければならない畜産
農家にとって切実な要望であった．混合ワクチン化する

表 2 ．混合ワクチンの比率

家畜種

単味
生

単味
不活化

混合
生

混合
混合
混合ワクチン
不活化 生・不活化 の比率(%)

牛

4

2

3

13

2

75

馬
豚

1
10

3
11

0
4

3
19

0
1

43
53

鶏

16

9

5

15

0

44

魚

0

4

0

7

0

64

計

31

29

12

57

3

55

家畜衛生学雑誌

170

第46巻第 4 号（2021）

以外の方法として実用化されたのが油性アジュバントワ

Ⅴ．ワクチン接種の注意点

クチンで，免疫を長期間持続させたものである．1990年に市販されたニューカッスル病（油性アジュバント加）

家畜用のワクチンは，上述のごとく多数市販されてい不活化ワクチンでは，それまで 3 か月間程度であった免る．個々のワクチンの特徴や使用法の詳細は，成書に譲

疫持続期間が 1 年間以上の免疫持続が可能となった．

り，ここではワクチン接種に関する一般的な注意点を解

2018年度現在，鶏用の不活化ワクチンは，油性アジュバ

説する．

ント製剤が主流を占め（40％），豚用ワクチン（20％）にも応用されている．

1 ．ワクチンの選択と保管

なお，アジュバントが添加されたワクチンの一般的名

ワクチンは，不活化ワクチンと生ワクチンに大別され称として，古くから使用されている水酸化アルミニウム

る．文字通り，ワクチンの本体であるウイルス株や細菌やリン酸アルミニウムが添加されたワクチンは，単に株が生きているもの（感染性があるもの）を生ワクチ「○○（アジュバント加）不活化ワクチン」，流動パラ

ン，不活化され感染性がないものを不活化ワクチンと呼フィン等の油性アジュバントが添加されたワクチンは，ぶ．なお，細菌の毒素をホルマリン等で不活化したトキ「○○（油性アジュバント加）不活化ワクチン」とされソイドも不活化ワクチンの範疇である．生ワクチンは，る．近年ではカルボキシビニルポリマーや酢酸トコフェ接種された動物の体内で増殖し，液性免疫だけでなく細ロール等も使用され，それぞれ括弧書きで記載されてい胞性免疫も惹起し，その結果，免疫の持続が長いというる．

特徴を持つ．不活化ワクチンは体内増殖がないため，接種量（抗原量）を多くし，かつ免疫効果を上げるために

4 ．食用動物に用いるアジュバント加ワクチンの使用制
限期間の見直し
上述のように，免疫の長期間の持続を図るため，油性

アジュバントが必要となる．ワクチンの使用に当たっては，先ず，生ワクチンと不活化ワクチンの特徴を理解した上で選択することが重要である．

アジュバント等を加えたワクチンが多く承認されていワクチンは，上述のとおり要指示医薬品に指定されてる．これらのワクチンでは接種部位にアジュバントが長いるため，獣医師の処方せんの交付又は指示を受けなけ期間残存することから，食肉としての安全性に配慮し，れば購入できないことになっている．その貯蔵方法とし接種部位からアジュバントが消失するまで当該動物をとて通常， 2 ～10℃となっており，直射日光，加温又は凍畜場又は食鳥処理場に出荷しないことで対応していた．

結により品質が保てなくなるので，冷蔵庫に保管しなけ

この期間を「使用制限期間」と呼んでおり，その旨が使ればならない．なお，鶏用ワクチンのうちマレック病ワ

用上の注意としてワクチンの添付文書に記載されていクチンは液体窒素で，マイコプラズマ・ガリセプチカム

た．使用制限期間は，製剤ごとに決められており，鶏用とマイコプラズマ・シノビエ感染症凍結生ワクチンは−ワクチンでは60週間と長いものもあった．

20℃で保管することとなっている．

しかし，2015年からは，畜水産物の安全を的確に確保する観点から，使用制限期間の設定の考え方を，注射部

2 ．用法用量を守り使用上の注意をよく読む

位からのアジュバント等の異物の消失に基づく方法か

最近，テレビで「医薬品は用法用量を守り，使用上のら，アジュバント等添加剤として含まれる成分の人への注意をよく読んで正しく使いましょう」というコマー

健康影響評価に基づく方法に変更された．食品健康影響

シャルが流れているが，ワクチンを使用する際にも同様評価済みの成分（ワクチンの添加剤として使用される限である．

りにおいて人への健康影響は無視できると考えられる成1 ）用法用量の厳守

分）のみを添加剤として使用するアジュバント加ワクチ

用法とは「皮下注射」などの接種方法・経路のことでンについては，使用制限期間の設定を要しなくなった．

あり，用量とは「1mL」などの接種量のことである．ワ

その結果，ほとんどのアジュバント加ワクチンで使用制

クチンの開発にあっては，基礎的な試験や野外臨床試験

限期間がなくなった．

を実施してこの用法用量を定めており，その他の用法用

ただし，「と畜場法」では生物学的製剤により著しい反応を呈しているものはと殺・解体が禁止されており，量では安全性や有効性が保証できないので，用法用量は厳守しなければならない．

生物学的製剤を注射して20日以内の家畜の検査申請は受接種時の注意としてワクチンは，よく振り混ぜて均一

け付けないとの通知16） が出されているので注意が必要にする．雑菌等の混入を避けるため，ワクチン容器のゴである．

ム栓の消毒，接種部位の消毒を行い，滅菌済みの注射器

平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望

171（特に注射針）は 1 頭ごとに取り替える．注射針の使い同時注射すると，ウイルス間の相互干渉作用により効果

回しは，感染拡大につながるので避けなければならなが抑制されるので，2 週間以上の間隔をあけること」とい．使い残りのワクチンは，雑菌の混入や効力の低下のされている．

恐れがあるので使用すべきでない．
2 ）使用上の注意

3 ．ワクチンの接種適期

使用上の注意は，基本的事項と専門的事項に大別されワクチンの接種時期に大きな影響を与えるのが親からワクチンの添付文書に記載されている．全てのワクチン移行する抗体レベルである．

に共通する注意が多く記載されているが，当該ワクチン

1 ）抗体移行の様式のみの注意があるので，よく読むことが必要である．使

親から子への抗体移行の様式は，動物種による胎盤構用上の専門的事項として①警告，②対象動物の使用制限

造により異なる（表 3 ）．人では母親の血清濃度と同レ等，③重要な基本的注意，④相互作用等が記載されていベルにまで IgG が胎生期に移行し，生後，IgA，IgM がるので，必ず使用前に読み，それらの指示に従わなけれ

乳により移行する．これに対して牛，豚，馬では胎生期ばならない．

に抗体は全く移行しないで，初乳を飲むことで抗体が子警告の例としては，BVD に対する生ワクチン株は，に移行する．牛では初乳，通常乳とも IgG が主体である胎子に感染し持続感染牛を生じさせることから，BVDが，豚，馬では初乳は IgG が主体で，通常乳は IgA が主生ワクチンを含む混合生ワクチンは，「妊娠牛，交配後体となる．一方，犬・猫では胎生期に IgG が少し移行

間がないもの又は 3 週間以内に種付けを予定している牛

し，初乳，通常乳で IgG，IgA が移行する．当然のことには接種しないこと」とされている．

であるが，初乳を十分に飲ませることにより親と同レベ

重要な基本的注意の例としては，豚繁殖・呼吸障害症

ルの IgG が移行する．初乳の必要量として，生後 2 時間

候群（PRRS）生ワクチンでは，「PRRS 陰性農場では使以内に子牛の体重の 4 ％，24時間までに合計10％の初乳

用しないこと．PRRS 汚染農場に PRRS 陰性豚を導入すを飲ませることが重要と言われている．その理由は以下

る際にワクチンを投与する場合，ワクチン株が繁殖用豚のとおりである．

へ伝播する機会を減少させるために，ワクチンを投与し①た豚を接種後 6 週間は繁殖用豚から隔離して飼育するこは，免疫グロブリンのような大きな分子であってと．ワクチンウイルスは投与豚から排泄され水平感染すもそのまま吸収できようになっている．

る場合があるので，妊娠中の雌豚及び繁殖用種雄豚へワ②

クチンウイルスが伝播しないように投与豚（群）の飼育管理には注意すること．野外ウイルスが体内で増殖して新生子牛の腸管は，生後から24～36時間までの間

母牛は分娩の経過と共に初乳中の IgG 濃度が低下していき，分娩後 2 時間がピークである．

2 ）ワクチン接種適期いる豚にワクチンを投与した場合，ワクチン株と野外ウワクチンの接種時期の注意点を図 5 に示す．出生後のイルスの組換えが起こる可能性が否定できない．本剤を動物は，親からの移行抗体をもらうため，特に生ワクチ

幼若な豚に投与する場合，母子免疫の影響を受けてワクンの接種には注意を要する．移行抗体は，一般的には生チン効果が抑制されることがある．
」と多くの注意が記

後 3 ヵ月齢で消失するので，その時期（図中の③）での載されている．

接種が推奨される．移行抗体の高い時期（図中の①）に相互作用の例としては，アカバネ病生ワクチンは，「イバラキ病生ワクチンあるいは牛流行熱生ワクチンを接種された生ワクチンは，移行抗体により中和され，体内で増殖することができず，抗体が産生されない．

表 3 ．動物種による移行抗体の違い
動物種

胎盤構造

出生前の抗体レベル

出生後の抗体レベル

牛

結合織絨毛型

－

＋＋＋

豚、馬

上皮絨毛型

－

＋＋＋

犬、猫

内皮絨毛型

＋

＋＋

人

血絨毛型

＋＋＋

±

家畜衛生学雑誌

172

第46巻第 4 号（2021）

ワクチン接種時期
① ②
③

抗
体
価

━：移行抗体━：②でワクチン接種した際の抗体━：③でワクチン接種した際の抗体

移行抗体

感染防御に
必要な抗体価

0

1

2

3
4
出生後月例

5

6

7

図 5 ．ワクチンの接種時期

一方，親の抗体価や子の移行抗体価を測定するのは，超強毒株による感染があった等が考えられるので，日頃費用や時間がかかり現実的ではなく，個体毎の抗体価レからワクチン接種に注意したいものである．

ベルも一様ではない．また，移行抗体が完全に低下する

2 ）感染予防か発症予防かまでワクチン接種をしないことは，感染のリスクが増加「○○病の予防」という効能効果には，感染そのもの

することとなる．このため，移行抗体消失前にワクチンを防ぐ（感染予防）場合と発症を防ぐ（発症予防）場合を接種し， 1 ヵ月程度後に再接種する方法がとられる場があり，見かけ上は区別できない．現在，市販されてい合もある．

るワクチンについて感染予防型か発症予防型かを区分け

なお，犬用では抗体レベルを簡単に測定できる体外診することは困難であるが，ワクチン接種後強毒株で攻撃断薬が市販され，ワクチン接種時期の判断に使用されてし，その抗体価を測定することにより判別できる（図いる．多くの感染症についてこのような体外診断薬の開6 ）．すなわち，攻撃後抗体価の変動がない場合は，感発が待たれる．

染そのものを防ぎ，体内での増殖をさせなかった証であり，感染予防型ワクチンと判断できる．一方，攻撃後抗4 ．接種後の注意

体価が上昇する場合は，攻撃株の感染，体内での増殖をワクチン接種後，少なくとも 2 日間は安静に努め，輸完全に抑えられず，部分的な増殖を許したが，発症させ送等は避けることが重要である．また，ワクチン接種後るほどの増殖を防いだ証であり，発症予防型と判断できの副作用，特に接種後短時間で起きるアナフィラキシー

る．

ショックに注意しなければならない．エンドトキシンが3 ）効能効果の多様性

含まれる細菌性不活化ワクチン（牛サルモネラ症，牛大1990年以前のワクチンの効能効果は，ほとんど「○○

腸菌性下痢症等の不活化ワクチン）は要注意である．

病の予防」であったが，1991年に承認された豚オーエス
キー病生ワクチンの効能効果は，豚オーエスキー病の発5 ．ワクチンの効能効果

症予防と，初めて「発症予防」とされた．本ワクチン1 ）ワクチンは必ず効くかは，ヘルペスウイルスの特性である神経節への持続感染ワクチンの効能効果は，一般的には「○○病の予防」を防止できないので，科学的にも妥当な効能効果であっであり，使用する方もワクチンを接種すれば完全に○○た．その後，「マイコプラズマ・ガリセプチカム感染に病を予防できると期待している．しかし，接種した中による産卵率の低下の緩和」，「豚サーコウイルス 2 型感染は○○病に罹るものがあり，効果がなかったいうクレーに起因する死亡率の低下， 発育不良豚の発生率の低

ムが出ることがある．この理由として①ワクチンの取扱

減，増体重の低下の改善，臨床症状の改善及びウイルス

いや接種方法が不適切であった，②接種動物の健康状態

血症発生率の軽減」等多様な効能効果が承認されるようが悪かった，またはストレス状態にあった，③もともとになった．

免疫能が低い個体であった，④移行抗体が高かった，⑤

このような効能効果の多様性は，ワクチンの効果を狭平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望

173

1ヵ月後に強毒株で攻撃ワクチン接種

攻撃3週間後に抗体価を測定
し、攻撃前の抗体価と比較

抗体価の変動
なし

抗体価上昇

感染予防

発症予防

図 6 ．感染予防か発症予防かい範囲で捉え，使用者にも誤解されないようにとの意図

表 4 ．Pasteur の弱毒生ワクチン株の作出方法でもあるが，ワクチン開発を容易に行えるようにした契機にもなった．

Ⅵ．ワクチンの将来展望
1 ．これまでのワクチン株の作出方法
Jenner の天然痘ワクチンは，同属異種ウイルスを用

作出方法

病原体

開発年

長期間培養

Pasteurella

高温培養

炭疽菌

1881年

異種動物での継代

狂犬病ウイルス

1885年

multucida

1880年

いた自然の弱毒生ワクチンであったが，Pasteur は，人為的に変異させた弱毒株を用いるワクチンを開発し，その後のワクチン開発の基礎を築いた（表 4 ）．

弱毒株（Ⅱ苗）は，30～35℃で培養しても強毒株に復帰

1 ）長期間培養することがなく，強毒株の攻撃に耐える免疫原性を保持

Pasteur は， 家 禽 コ レ ラ の 病 原 菌（Pasteurella

していた．そこで，1881年，60頭の羊を用いて野外の農

multocida）をたまたま培養したまま長期間放置してい場で公開試験を行った．先ず25頭により長く（24日間）て，その菌をヒヨコに接種したが発症しなかった．そこ

高温で培養した菌（Ⅰ苗）を接種し，12日後Ⅱ苗を追加で，これらのヒヨコに新鮮培養菌を再接種したところ，

接種し，その 2 週後に強毒株で攻撃した．攻撃 2 日後，新たに準備したヒヨコは全て発症したにもかかわらず，

25頭の対照群のうち22頭は死亡， 3 頭も瀕死状態であっこれらのヒヨコは発症しないことを観察し，ワクチンとたが，免疫した群の25頭と無投与無攻撃の10頭はいずれして使用できることを偶然に発見した．その後， 8 か月

も異常が見られなかった15）．この炭疽菌Ⅱ苗は，多くの間まで培養期間を延ばし，経時的に病原性を調べた論文

国で生ワクチンとして使用され，日本でも1977年度まで

6）を1880年に発表した ．

市販されていた．この弱毒生ワクチンの開発から100年

2 ）高温培養後の1983年に Mikesell らにより，高温培養することで1880年頃フランスでは牛及び羊の炭疽が大きな被害を110メガダルトンのプラスミドが脱落し弱毒化されるこ出していた．Pasteur は，鶏が炭疽菌に対して抵抗力がとが証明された22）．

強いことに着目し，鶏の体温に近い42～43℃という高温

3 ）異種動物での継代で培養したところ，病原性が弱くなってくることを発見

Pasteur は，狂犬病に自然感染した犬の脊髄をウサギした．10頭中10頭の羊を殺す菌が，高温で 8 日間培養すの脳硬膜に接種し，継代を繰り返したところ，平均14日

ると 4 ～ 5 頭しか殺さなくなり，10～12日間培養すると間であったウサギでの潜伏期間（ウイルス接種から発症

もはや 1 頭も死亡させることがなくなった．しかもこのするまでの期間）が徐々に短縮し，継代90代で 7 日間に

家畜衛生学雑誌

174

第46巻第 4 号（2021）

一定することを発見した．不定であった潜伏期間が 7 日

チン等があり，盛んに開発されている．

間に固定されたことから，固定毒（fixed virus）と呼（ 1 ） 遺伝子欠損ワクチン

び， 野 外 で 流 行 し て い る ウ イ ル ス を 街 上 毒（street

日本で最初に承認された（1991年）遺伝子欠損ワクチ

virus）と呼ぶ．固定毒は，街上毒と比べると末梢からンは，豚オーエスキー病生ワクチンである 9 ）．本ワクチの感染性が低くなっているが，そのままワクチンとする

ン株は，糖たん白 g Ⅰ遺伝子等が自然欠損したもので遺のにはまだ病原性が強かった．Pasteur は，水酸化カリ

伝子組換え技術によるものではない．なお，本ワクチン

ウムを入れたビンに固定毒感染ウサギの脊髄を吊し乾燥の承認に当たっては，ワクチン抗体と自然感染抗体を識させることにより減毒を図った．この乾燥固定毒を狂犬別する診断キットが同時に承認されたが，薬事行政にお病の犬に咬まれた少年に応用した．11日間で13回（ 2 及ける画期的なことであった．これによりオーエスキー病

び 3 日目は朝夕の 2 回）
，最初は15日間乾燥したもの，の防疫体制を構築することが可能となった．家畜防疫に

その後順次乾燥日数を短くしたもの，最後は乾燥 1 日間

とって，ワクチン抗体と自然感染抗体を識別すること

49）のものを接種し，発病を防ぐことに成功した ．

（differentiating infected from vaccinated animals:

なお，ワクチンは，通常感染症を予防するために当該

DIVA）が重要であり，その目的で使用されるワクチン

病原体に感染する前に接種（暴露前予防）するが，狂犬を DIVA ワクチンとも称されるが，豚オーエスキー病生

病では潜伏期が長いため，人が狂犬病感染動物に咬まれワクチンはその先がけであった．

た後にワクチンを接種し発症を防ぐことが可能で，暴露

その後に市販された（2013年）遺伝子欠損ワクチン
は，馬鼻肺炎生ワクチンで糖たん白 gE 遺伝子を欠損し後予防と称されている．

たものである37）．
（ 2 ） サブユニットワクチン

2 ．現在と将来のワクチン株作出方法
1 ）従来法

感染防御を担う抗原遺伝子のみを他種の微生物に組みこれまで開発されたワクチン株の作出方法の多くは，込み，発現した抗原を精製しワクチンとしたものであ

Pasteur の方法の踏襲か応用である．すなわち，①何回る．人用ワクチンでは培養が困難であった B 型肝炎ウイも継代を繰り返す方法（長期間培養の一種），②25～

ルスの表面蛋白の遺伝子を酵母で発現させ，ワクチンと32℃の低温培養（ウイルスの場合），③発育鶏卵や培養したものが1988年に市販された．動物用ワクチンで最初細胞を用いた異種宿主での継代の 3 種類である．これらに（1996年）市販されたのは，猫白血病ウイルスのエンの方法により，被害の大きな急性感染症に対する多くのベロープ糖たん白遺伝子を大腸菌で発現させたワクチン

ワクチンが開発された．

でフランスからの輸入であった（表 5 ）．一方，1989年

20世紀前半までは，牛疫や狂犬病ウイルスのように，～1993年に当時の動物用生物学的製剤協会が国からの補動物での継代を繰り返すことにより弱毒株が作出され助を受け，遺伝子組換え技術を用いロイコチトゾーン病

た．20世紀後半に入ると，細胞培養が普及し始め，ウイ

ワクチンの開発研究事業を実施していた．本事業では，

ルスの分離・継代に用いられるようになり，弱毒株の作

Leucocytozoon caulleryi の第 2 代シゾントが主な感染防出にも盛んに応用された．更に低温培養での継代により御抗原となることが示され，クローニングした遺伝子を多くの弱毒株が作製された．例えば，当時の家畜衛生試

大腸菌で発現し，ワクチン開発に成功した12）．ワクチン

験場で開発された牛伝染性鼻気管炎ウイルスの No.758-

として市販されたのは2000年と遅かったが，本事業は，

13）

17）

わが国の動物用生物学的製剤の開発に遺伝子組換え技術

は，現在も弱毒生ワクチンの製造を普及させる契機となった．その後，表 5 に示すように

43株 ，アカバネウイルスの TS-C2 株 ，豚パルボウイ−

ルスの HT /SK 株

7）

用株として用いられている．
2 ）遺伝子組換え技術
1970年代に開発された遺伝子組換え技術は，ワクチン開発にも応用された．

多くのサブユニットワクチンが市販されている．
なお，抗原の発現系として植物を応用する試みもなされている．ニューカッスル病ウイルスのヘマグルチニン
及びノイラミニダーゼをタバコの浮遊培養細胞で発現さこれには①病原遺伝子を削除した遺伝子欠損ワクチ

せたワクチンが2006年アメリカで市販された40）．植物をン，②抗原遺伝子を他種の微生物に組み込んだサブユ

発現系とする研究は，後述するように食べるワクチンとニットワクチン，③抗原遺伝子を他の弱毒生ワクチン株

して開発されているが，このニューカッスル病ワクチン

等に組み込んだ遺伝子組換え生ワクチン，④プラスミド

は皮下注射型のワクチンである．

という環状の DNA に病原体の抗原遺伝子を組み込んだ（ 3 ）組換え生ワクチン

DNA ワクチン，⑤メッセンジャー RNA（mRNA）ワク

1982年 Paoletti38） 及び Moss19） のグループは，ワクシ

平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望

175

表 5 ．遺伝子組換えサブユニットワクチン
対象動物
豚

鶏

猫

疾

病

名

発

現

系

承認年

豚アクチノバシラス・
プルロニューモニエ感染症

豚アクチノバシラス・プルロニューモニエの無毒変異型毒素遺伝子を組み込んだ大腸菌

1998

豚サーコウイルス感染症

豚サーコウイルス2型のORF2遺伝子を組み込んだバキュロウイルスを感染させた昆虫細胞

2008

豚サーコウイルス感染症

豚サーコウイルス1型のORF2遺伝子を2型のORF2遺伝子に置換したキメ
ラウイルスを感染させた培養細胞

2009

豚丹毒

豚丹毒菌の表層防御抗原遺伝子を組み込んだブレビバチルス・チョー
シネンシス

2013

萎縮性鼻炎

無毒変異型皮膚壊死毒遺伝子を組み込んだ大腸菌

2015

鶏大腸菌症

F11 線毛抗原及びベロ細胞毒性抗原遺伝子を組み込んだ大腸菌

1999

ロイコチトゾーン病

ロイコチトゾーン・カウレリー第2代シゾントのR7遺伝子を組み込ん
だ大腸菌

2000

鶏伝染性コリーザ

ヘモフィルス・パラガリナルム（Ａ型菌及びＣ型菌）の組換え融合抗原遺伝子を組み込んだ大腸菌

2013

猫白血病

猫白血病ウイルスのエンベロープ糖たん遺伝子を組み込んだ大腸菌

1996

ニアウイルスに外来抗原遺伝子を挿入して組換え生ワク

されていない．また，豚丹毒菌等の細菌ベクターを用いチンが作製できるという考えを発表し，その後多くの感る研究も盛んに行われているが34，48），まだ実用化された

46）染症で組換え生ワクチンの開発が試みられた ．1990年

ものはない．

に は 鶏 痘 ウ イ ル ス に ニ ュ ー カ ッ ス ル 病 ウ イ ル ス の（ 4 ） DNA ワクチン

HN 1 ， 5 ）あるいは F 遺伝子54）を挿入する報告が相次いで哺乳類の細胞内で機能する発現プロモーター（人サイなされ，1994年米国でニューカッスル病ウイルスの F 遺トメガロウイルスが良く使用される．
）の下流に病原体

伝子を鶏痘生ワクチンウイルス株に組み込んだ世界初のの抗原遺伝子を挿入したプラスミドが DNA ワクチンで組換え生ワクチンが承認された14）．その後，鶏痘ウイル

ある．DNA ワクチンの特徴23，44）として，①病原体の遺スをベクターとする鳥インフルエンザ，伝染性喉頭気管

伝子配列が決まれば，直ぐに製造に取り掛かれる，②細炎，鶏脳脊髄炎等のワクチンが主に米国やカナダで市販

胞内に取り込まれた DNA から mRNA が転写され，抗原されている．

タンパク質が作られるので，本来の病原体の感染成立過日本で最初の組換え生ワクチンは，ニューカッスル病

程と同様に免疫系に作用し，抗体と共に強い細胞性免疫ウイルスの F 遺伝子をマレック病Ⅰ型生ワクチン株に組が誘導できる，③生きた病原体を使用しないので安全でみ込んだもの

50）

10）で，2010年に承認された ．しかし，こある，④プラスミドは大腸菌等で安価に大量製造できるのような組換え生ワクチンが接種された鶏肉を食べたく等の利点がある．一方，ほとんどないとされているが宿ないという消費者に配慮して，承認を取ったメーカーは

主ゲノムへの組込み，がん遺伝子の活性化，抗核酸抗体

ほとんど市販しなかったばかりか，当該ワクチンの承認の産生等の不安が指摘されている．人用ワクチンとしてそのものを整理した．現在日本で市販されている組換え

多くの感染症で開発が試みられたが，まだ承認されたも生ワクチンは，2012年に承認された猫白血病に対するワのがない．現在開発が急がれている COVID-19に対する

35）

クチンのみである ．これは，カナリア痘ウイルスに猫DNA ワクチンが承認されるか注目される．一方，動物白血病ウイルスの env，gag 及び pol 遺伝子の一部を組用ワクチンとしては，2005年にカナダでサケ科魚類の伝

み込んだものである．カナリア痘ウイルスは，哺乳動物

染性造血器壊死症27），並びに米国で馬用のウエストナイの体内では感染性ウイルス粒子を形成できないことか

ルウイルス感染症 2 ）の DNA ワクチンが世界で初めて承ら，組換え生ウイルスが接種動物から排泄・伝播される認された．この 2 種類の DNA ワクチンの用法は，いずことがない．なお，家畜用としてはカナリア痘ウイルス

れも筋肉内注射である．感染症に対する DNA ワクチンをベクターとする馬インフルエンザとウエストナイルウ

として承認されているのはこの 2 種類だけであるが，おイルス感染症のワクチンが米国等で承認されているが，そらく投与された動物細胞への遺伝子の導入効率や抗原

牛及び豚用ワクチンとしてまだ組換え生ワクチンが市販

発現効率が高いことにより有効性が発揮されたものと思

家畜衛生学雑誌

176

第46巻第 4 号（2021）にかかるものと思われる．mRNA ワクチンの効果を高われる．
なお，DNA の導入効率を上げる方法として遺伝子める工夫として，①細胞内で mRNA を自己増殖させる

銃，皮膚パッチ，エレクトロポレーション等の投与法がプロモーターを組み込み20），抗原の発現を高める，②ア

試みられている．

ジュバント効果を狙い，mRNA のポリアデニン配列の（ 5 ） mRNA ワクチン

部分にポリウラシルを結合させた 2 本鎖 RNA 構造を付DNA ワクチンは，細胞内で mRNA に転写され抗原た

加する55）等の試みが行われている．

ん白を合成するが，mRNA そのものを細胞内に送り込（ 6 ） 組換え植物による食べるワクチン

むとの発想で開発されたのが mRNA ワクチンである．

多くのワクチンの用法は筋肉内や皮下に注射するのmRNA ワクチンの開発は，周辺技術の進展により可能

で，大規模経営となっている近年の畜産農家では接種すとなった．本来，mRNA は生体内では極めて不安定なる手間と経費が問題となっている．この改善策として，物質であるため，① mRNA の改変・最適化，②薬物輸

病原体の感染防御抗原遺伝子を植物体に移入し，発現し送システム（drug delivery system:

DDS）等の開発がた抗原を食べさせるという経口ワクチンの開発が行われ不可欠であった11）．①としては， 1 個のアミノ酸を決めている．ワクチンの種類としては上述したサブユニット

る配列（コドン）は複数あるので翻訳効率の高いコドンワクチンの範疇である．発現用植物としてトウモロコシに改変することや核酸分解酵素に対する耐性を向上させやコメが利用できれば，飼料にもなり有用性が増し，室る修飾核酸の導入等である．②としては，mRNA を脂温でも保存できることから貯蔵・輸送の経費削減にもな

質ナノ粒子43） やポリマー粒子に抱合させ，効率よく標る．経口ワクチンは，特に粘膜感染する感染症に対して的細胞へ輸送させる方法が応用されている．なお，この有効性が期待され，粘膜ワクチンとも称されている．

ような DDS は，サブユニットワクチンや他の医薬品にも応用可能であり，さらなる開発が望まれる．

まだ承認されたワクチンはないが，豚伝染性胃腸炎（TGE）での試みを紹介する18，51）．トウモロコシの実にmRNA ワクチンのメリットを表 6 に示す．安全性にTGE ウイルスのスパイクたん白を発現させた経口ワク

関しては DNA ワクチンの不安を解消し，極めて安全なチンを作製し，10日齢の子豚に経口投与し12日後に強毒ワクチンである．有効性や開発性に関しては，DNA ワ

ウイルスで攻撃したところ，50％の子豚が発症防御しクチンと同程度と思われる．これまで人用ワクチンとした．また，市販の TGE 生ワクチンで免疫した妊娠豚にてインフルエンザ，ジカ熱，狂犬病，ヒト免疫不全ウイ

経口ワクチンを投与したところ，血中，初乳及び通常乳

ルス感染症等で研究が進められているが承認されたものの中和抗体の上昇がみられ，ブースター効果を確認し39）はない ．狂犬病での報告

45）

では， 3 週間隔で 2 回皮内た．経口ワクチンの実用化には，抗原の発現量を増加さに接種すると市販ワクチンと同程度の中和抗体がマウス

せ胃酸や消化酵素による分解を防ぎ，確実に腸管粘膜まで産生され，脳内攻撃にも耐過し，抗体は 1 年間持続すで到達させる工夫が求められる．

るという．また，新生子豚及び成豚においても抗体産生を確認している．

なお，ワクチンではないが，2013年日本で世界初の遺伝子組換え植物が動物用医薬品として承認された．イヌ

COVID-19に対しても mRNA ワクチンの開発が盛んに

インターフェロンα- 4 遺伝子をイチゴに組み込み，イ

進められており，承認されるか否か注目したい．おそら

チゴの実を粉末とした製剤で，イヌの歯肉炎を軽減する

く，DNA ワクチンと同様に有効性が認められるか否かものである53）．
3 ．開発が期待されるワクチン

表 6 ．mRNA ワクチンのメリット
事項
メリット
安全性 病原体や毒素を用いない宿主のゲノムに挿入されるリスクがない
標的細胞をがん化させる危険はない
標的細胞内で自然に消滅
有効性 抗体産生と細胞性免疫の活性化標的とする抗原の遺伝子配列が決まれば直ち
開発性に作成
新興感染症に対応できる
mRNAは容易・大量に製造可能

1 ）未開発ワクチンの実用化
急性感染症に対するワクチンは，ほとんど開発されたが，慢性で難治性の感染症に対するワクチンの開発が望まれている．例えば，牛伝染性リンパ腫（牛白血病），
ヨーネ病，ピロプラズマ症等の原虫症に対するワクチンである．また，人の食中毒の原因菌を動物体内で減少させるワクチンとして，既に鶏サルモネラ症ワクチンが市販されているが，カンピロバクターや大腸菌 O157に対するワクチンが求められている．

平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望
2 ）現行ワクチンの改良

177

4040-4047.  

安全性，有効性，利便性等を求めて現行ワクチンを改

3 ）動物用ワクチン─その理論と実際─（2011）．動物

良することも重要であり，以下の課題の克服が求められ用ワクチン─バイオ医薬品研究会編．文永堂．東る．①免疫持続に優れ，かつ接種部位での炎症が少ない

京．

アジュバントの開発，②接種時期が近いもの同士の混合4 ）動 物 用 ワ ク チ ン と バ イ オ 医 薬 品 ─ 新 た な 潮 流 ─化，③逆にブースター効果を上げるための単味ワクチン（2017）．動物用ワクチン─バイオ医薬品研究会監のラインナップ，④畜水産動物では接種経費の削減を目
指し，より手間のかからない接種方法の開発，⑤副作用

修．文永堂．東京．
5 ）Edbauer, C., Weinberg, R., Taylor, J., et al.   (1990)の少ないワクチン等である．

Protection of chickens with a recombinant fowlpox

3 ）新技術を用いたワクチン開発

virus expressing the Newcastle disease virus

未開発ワクチンの実用化や現行ワクチンの改良のため，遺伝子組換え技術を活用した開発が期待される．特hemagglutinin-neuraminidase gene.  Virology.  179,
901-904.  

に上述した組換え生ワクチン，DNA ワクチン，mRNA

6 ）藤野恒三郎（1985）ニワトリコレラ病原体の弱毒ワクチン，食べるワクチン等に注目したい．また，リ化．微生物学の一里塚．169−174．藤野恒三郎監

バースジェネティクス法41） を用いワクチン候補株をデ訳．近代出版．東京．

ザインする方法を活用することにより，より早くワクチ7 ）Fujisaki, Y., Murakami, Y., Suzuki, H.   (1982)
Establishment of an attenuated strain of porcine

ン開発が進むものと思われる．

Ⅷ．おわりにparvovirus by serial passage at low temperature.  
National Institute of Animal Health Quarterly.  22,

ワクチンには，感染症を撲滅させるような優れた効果

1-7.  を発揮するものがある一方，単に症状を軽減する効果し8 ）橋爪壮（2011）弱毒痘苗株 LC16m8の開発とこのかないものもある．それぞれのワクチンの特徴を理解しワクチンの現状．小児感染免疫．23．181−186．

た上で適正に使用することが肝要である．ワクチンを接9 ）平山紀夫（2008）．日本における動物用ワクチンの種すると感染症に罹らないので，飼養管理の手間が省け

歴史．日本獣医史学雑誌．45．64−89．

るという考えは大間違いである．飼養衛生管理基準を遵

10）平山紀夫（2017）．日本初の組換え生ワクチン承認

守した上でワクチン接種を行えば，鬼に金棒であり，ワまでの法律・審査体制の整備．動物用ワクチンとバ

クチンを上手に使用し感染症をコントロールしたいものイオ医薬品─新たな潮流─．62．動物用ワクチン─

である．

バイオ医薬品研究会監修．文永堂．東京．

COVID-19の流行により，ワクチン開発が世界の注目

11）位高啓史・秋永士朗・井上貴雄（2019）．mRNA 医を浴びており，遺伝子組換え技術等でこれまでにないワ

薬開発の世界的動向．医薬品医療機器レギュラト

クチンが実用化するものと思われる．家畜用ワクチンにも応用され，有効，安全で安価なワクチンが開発される

リーサイエンス．50．242−249．
12）伊藤亮（2007）．ロイコチトゾーン病（油性アジュ

バント加）ワクチン（組換え型）．動物用ワクチン

ことを期待する．

引

用

文

献

1 ）Boursnell, M.E.G., Green, P.F., Samson, A.C.R., et al.  
(1990) A recombinant fowlpox virus expressing thehemagglutinin-Neuraminidase gene of Newcastle
disease virus (NDV) protects chickens against
challenge by NDV.  Virology.  178, 297-300.  
2 ）Davis, B.S., Chang, G.J., Cropp, B.   et al.   (2001).  
West Nile virus recombinant DNA vaccine

─その理論と実際─．257−259．動物用ワクチン─
バイオ医薬品研究会編．文永堂．東京．
13）稲葉右二・高橋英二・黒木洋ら（1975）牛伝染性

鼻気管炎生ウイルスワクチンの開発．日本獣医師会
雑誌．28，410−414．
14）入谷好一（1995）遺伝子組換え鶏用ワクチンについて．鶏病研究会報．31，153−159．
15）葛西勝彌（1935）炭疽研究の回顧．中央獣医学雑誌．48．245−259．

protects mouse and horse from virus challenge16）厚生省環境衛生局乳肉衛生課長通知．と畜場法施行

and expresses in vitro a noninfectious recombinant

規則の一部を改正する省令等の施行について．昭和

antigen that can be used in enzyme-linked

47年 6 月20日付け．環乳第52号．

immunosorbent assays.   Journal of Virology.   75.  

17）Kurogi, H.  Inaba, Y.  Takahashi, E.  et al.  (1979)

家畜衛生学雑誌

178

第46巻第 4 号（2021）

An attenuated strain of Akabane virus: a

医薬品等販売高年報．

candidate for live vaccine.   National Institute ofhttps://www.maff.go.jp/nval/iyakutou/hanbaidaka/

Animal Health Quarterly.  19, 12-22.  
18）Lamphear, B.J., Jilka, J.M., Kesl.  L., et al.  (2004) A

index.html
30）農林水産省動物医薬品検査所ホームページ．検定・

corn-based delivery system for animal vaccines: an

検査情報

oral transmissible gastroenteritis virus vaccine

http://www.maff.go.jp/nval/kentei_kensa/index.

boosts lactogenic immunity in swine.  Vaccine.  22,2420-2424.  

html
31）農林水産省消費・安全局長通知．動物用シードロッ

19）Mackett, M., Smith, G.L., Moss, B.  (1982) Vaccinia

ト製剤の品質確保に必要な措置に係る留意点等につvirus: a selectable eukaryotic cloning andいて．平成21年 7 月 1 日付け．21消安第2928号．

expression vector.   Proceedings of the National

32）農林水産省消費・安全局長通知．動物医薬品等取締

Academy of Sciences of the United States of

規則及び動物用医薬品の製造管理及び品質管理に関America.  79, 7415-7419.  

する省令の一部を改正する省令の施行等について．

20）Maruggi, G., Zhang, C., Li, J.  et al.  (2019).  mRNA
as a transformative technology for vaccine

令和元年 9 月19日付け．元消安第2051号．
33）Ogawa, R., Yanagida, N., Saeki.   S., et al.   (1990)

development to control infectious diseases.  

Recombinant fowlpox viruses inducing protective

Molecular Therapy, 27, 757-772.  

immunity against Newcastle disease and fowlpox

21）増渕啓一（2011）．ニューカッスル病生ワクチン．
動物用ワクチン─その理論と実際─．182−184．動

viruses.  Vaccine.  8, 486-490.  
34）Ogawa, Y., Oish, E., Muneta, Y.  et al.  (2009) Oral

物用ワクチン─バイオ医薬品研究会編．文永堂．東vaccination against mycoplasmal pneumonia of京．

swine using a live Erysipelothrix rhusiopathiae22）Mikesell, P., Ivins, B.E., Ristroph, J.D et al.  (1983).  
Evidence for plasmid-mediated toxin production in
Bacillus anthracis.   Infection and Immunity.   39.  
371-376.  

vaccine strain as a vector.   Vaccine.   16.   45434550.  
35）小野恵利子・出浦裕理（2017）．猫ウイルス性鼻気管炎・猫カリシウイルス感染症 2 価・猫白血球減少

23）村上賢二（2017）．DNA ワクチン． 動物用ワクチ症・猫白血病（猫白血病ウイルス由来防御抗原たんンとバイオ医薬品─新たな潮流─．225−229．動物

白遺伝子挿入カナリア痘ウイルス）・猫クラミジア用ワクチン─バイオ医薬品研究会監修．文永堂．東感染混合ワクチン．動物用ワクチンとバイオ医薬品京．

─新たな潮流─．180−183．動物用ワクチン─バイ24）中村稕治・我妻正三郎・福所金松（1938）家兎ニ於ケル牛疫毒感染ニ就テ

第Ⅰ報告：基礎的試験．応用獣医学雑誌．17．185−204．
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オ医薬品研究会監修．文永堂．東京．
36）小沼操（2017）．動物用ワクチンの現状と疾病予防．動物用ワクチンとバイオ医薬品─新たな潮流
─． 1 −17．動物用ワクチン─バイオ医薬品研究会
監修．文永堂．東京．
37）大 森 崇 司・ 佐 藤 朋 子（2017）．馬鼻肺炎生ワクチ

26）中村成幸（2011）ワクチンの許認可制度．動物用ワン．動物用ワクチンとバイオ医薬品─新たな潮流

クチン─その理論と実際─．53−58．動物用ワクチ

─．95−98．動物用ワクチン─バイオ医薬品研究会

ン─バイオ医薬品研究会編．文永堂．東京．
27）中西照幸・乙竹監修．文永堂．東京．

充（2009）．新しいワクチンの開38）Panicali, D., Paoletti, E.   (1982) Construction of

発動向．水産用ワクチンハンドブック．58−64．中

poxviruses as cloning vectors: insertion of the

西照幸・乙竹thymidine kinase gene from herpes simplex virus

充編．恒星社厚生閣．東京．

28）農林省水産省告示．医薬品，医療機器等の品質，有into the DNA of infectious vaccinia virus.  

効性及び安全性の確保等に関する法律第43条第 1 項

Proceedings of the National Academy of Sciencesの規定に基づき，農林水産大臣の指定する医薬品をof the United States of America.  79, 4927-4931.  

定める等の件．昭和36年 2 月 1 日付け．第66号．

39）Pardi, N., Hogan, M.J., Porter, F.W.   et al.   (2018).  

29）農林水産省動物医薬品検査所ホームページ．動物用

mRNA vaccines – a new era in vaccinology.  

平山：日本の家畜用ワクチンの現状と将来展望
Nature Reviews Drug Discovery, 17, 261-279.  
40）Permyakova, N.V., Uvarova, E.A., Deineko, E.V.  

179

1 in commercial chickens with maternal antibodies.  
Journal of Virology.  74, 3217-3226.  

(2015) State of research in the field of the creation51）Streatfield, S.J., Jilka, J.M., Hood, E.E., et al.  (2001)of plant vaccines for veterinary use.   Russian

Plant-based vaccines: unique advantages.  Vaccine.  

Journal of Plant Physiology.  62, 23-38.  
41）Ping, J., Lopes, T.J.S., Nidom, C.A.   et al.   (2015)
Development of high-yield influenza A virus
vaccine viruses.   Nature Communications.   6:8148.  
Doi: 10.1038/ncomms9148.  
42）Plowright, W., Ferris, R.D. (1962) Studies withrinderpest virus in tissue culture: the use of19, 2742-2748.  
52）水産庁長官通知．水産用生物学的製剤の開発研究について．平成10年 1 月26日付け． 9 水推第132号．
53）田村紀子・松村

健（2014）遺伝子組換えイチゴを原 薬 と す る 動 物 薬 の 開 発． 生 物 工 学．92，537−
539．
54）Taylor, J., Edbauer, C., Rey-Senelonge, A., et al.  

attenuated culture virus as a vaccine for cattle.  

(1990) Newcastle disease virus fusion protein

Research in Veterinary Science.  3.  172-182.  

expressed in a fowlpox virus recombinant confers43）Reichmuth, A.  M., Oberli, M.  A., Jaklenec, A.  etal.   (2016).   mRNA vaccine delivery using lipid
nanoparticles.  Therapeutic Delivery, 7, 319-334.  
44）佐々木津・福島

protection in chickens.   Journal of Virology.   64,1441-1450.  
55）Utida, S., Yosinaga, N., Yanagihara, K.  et al.  (2018).  

淳・奥田研爾（1998）．DNA ワ

Designing immunostimulatory double stranded

クチンの現状と展望─感染症制圧のための新たなア

messenger RNA with maintained translational

プローチ．日本細菌学雑誌．53．407−424

activity through hybridization with poly A45）Schnee, M., Vogel, A.B., Voss, D. et al. (2016). An
mRNA vaccine encoding rabies virus glycoprotein
induces protection against lethal infection in miceand correlates of protection in adult and newborn
pigs.   PLOS Neglected Tropical Diseases.   10,e0004746.  

sequences for effective vaccination.  Biomarterials.  
150, 162-170.  
56）山内一也（2009）最初の牛疫ワクチン．57−60．史上最大の伝染病牛疫．岩波書店．東京．

要旨46）志田壽利（1986）ワクシニアウイルス・ベクター─

感染症を防ぐにはワクチン接種が最も効果的な方法でワクシニアウイルスの分子生物学と新型ワクチンのあり，天然痘及び牛疫の根絶に威力を発揮したワクチン開発─．ウイルス．36，23−33．

が如実に物語っている．家畜の感染症に対しても多くの

47）Shimizu, Y., Furuuchi, S., Kumagai, T.  et al.  (1970)

ワクチンが開発され，健康な家畜の生産に役立っていA mutant of hog cholera virus inducing

る．1880年代に Pasteur は，弱毒生ワクチンの作出方法

interference in swine testicle cell cultures.  

を発明した．現在の多くの生ワクチンは，彼の作出方法

American Journal of Veterinary Research.   31.  

を応用して開発された．1970年代以降，遺伝子組換え技

1787-1794.  

術を用いたワクチン開発が行われるようになり，1990年

48）Shimoji, Y., Oish, E., Kitajima, T.   et al.   (2002)

代には病原遺伝子を削除した遺伝子欠損ワクチン，抗原Erysipelothrix rhusiopathiae YS-1 as a live vaccine

遺伝子を他種の微生物に組み込んだサブユニットワクチ

vehicle for heterologous protein expression andン，抗原遺伝子を他の弱毒生ワクチン株等に組み込んだ

intranasal immunization of pigs.   Infection and

遺伝子組換え生ワクチンが実用化された．今後は，プラ

Immunity.  70.  226-232.  

スミドという環状の DNA に病原体の防御抗原遺伝子を49）添川正夫（1979）．わが国における狂犬病ワクチ
ン．動物用ワクチン．80−101．文永堂．東京．

組み込んだ DNA ワクチンやメッセンジャー RNA ワク
チン等に期待が寄せられている．

50）Sonoda, K., Sakaguchi, M., Okamura, H.  et al.  (2000)
Development of an effective polyvalent vaccine

キーワード：家畜用ワクチン，Pasteur ，遺伝子組換え

against both Marek’s and Newcastle diseases

生ワクチン，DNA ワクチン，mRNA ワクチン

based on recombinant Marek’s disease virus type

原

181

著

パイン粕サイレージおよび紅茶粕が乳牛のルーメン発酵と乳生産に及ぼす影響
青木直人 1 ）・東浦裕紀 1 ）・佐藤 幹 1 ， 2 ）・神田修平 1 ）・板橋久雄 1 ， 3 ）＊Effect of pineapple bran silage and dried black tea residue on rumen
fermentation and milk production in dairy cows
Naoto Aoki 1），Yuki Higashiura 1），Kan Sato 1, 2），Shuhei Kanda 1），Hisao Itabashi 1, 3）＊（1）Tokyo University of Agriculture and Technology, Faculty of Agriculture, 
3-5-8, Saiwai-cho, Fuchu, Tokyo, 183-8509, Japan
2）

Tohoku University, Graduate School of Agricultural Science, 468-1, Aoba, Sendai, 980-8752, Japan
3）

Japan Scientific Feeds Association, 2-6-16, Shinkawa, Chuo, Tokyo, 104-0033, Japan＊

Corresponding Author : Hisao Itabashi（hita@cc.tuat.ac.jp））（2020. 10. 19  受付／2020. 11. 13  受理）

Summary
The objective of this study was to investigate the effects of pineapple bran silage (PS) and dried black tea
residue (BR) on rumen fermentation, blood metabolites and milk production in dairy cows.  In trial 1, five Holsteincows were used to compare the diets in which PS replaced corn silage at rates of 0 (Control diet), 5% (PS5 diet) or
10% (PS10 diet) in dry matter.   In trial 2, seven Holstein cows were used to compare the diets in which BR
replaced corn silage and soybean meal at rates of 0 (Control diet) or 7% (BR diet) in dry matter.   In trial 1,
concentration of rumen ammonia was similar between the control and PS diets, while that of volatile fatty acidincreased by PS5 diet before feeding.  Proportion of propionic acid tended to be higher by PS5 and PS10.  Drymatter intake, milk yield, milk composition, and milk anti-oxidant activity were similar between treatments.  
Palmitic acid contents in milk of cows fed PS5 and PS10 diets tended to be higher than those of control group.  In
trial 2, rumen fermentation was not affected by BR diet, but concentration of plasma non-esterified fatty acids
increased by BR diet.  Dry matter intake, milk production, milk somatic cell counts and anti-oxidant activity were
not affected by BR.  Proportion of conjugated linoleic acid (CLA) in milk fat tended to be increased by BR diet.  
These results indicated that both PS and BR would be practically possible to use the feedstuffs as the “eco-feed”
for dairy cows.  
Key words：pineapple bran, black tea residue, rumen fermentation, milk production
  家畜衛生学雑誌

東京農工大学農学部〒183−8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 82）東北大学大学院農学研究科〒980−8752 宮城県仙台市青葉区468− 1
1）

46，181〜188（2021）

日本科学飼料協会〒104−0033 東京都中央区新川 2 − 6 −16＊
連絡著者：板橋 久雄（hita@cc.tuat.ac.jp）3）家畜衛生学雑誌

182

序第46巻第 4 号（2021）
紅茶抽出残渣を加熱乾燥させた乾燥紅茶粕（BR）を給文

与し，ルーメン発酵，血液性状および乳生産に及ぼす影

反芻家畜の生産では粗飼料と濃厚飼料の両方の安定供響を検討して，これらのエコフィードの使用による乳生

給 が 必 要 で あ る が， わ が 国 の 飼 料 自 給 率 は， 粗 飼 料

産が可能であるかを明らかにすることを目的として試験

77％，濃厚飼料12％，全体として25％で低く推移していを行った。

る。輸入飼料に過度に依存した状況から国産飼料に立脚した畜産経営を図るため，飼料自給率の向上をめざした材料および方法

取組みが重要となっており，その一環として地域の未利

本研究における動物実験は，東京農工大学農学部附属用資源や食品残渣等を利用したエコフィードの生産の拡広域都市圏フィールドサイエンス教育研究センターにお大が推進されている20）。

いて，東京農工大学の「動物実験などに関する規定」に

パイン粕は，パイナップルジュース製造時に廃棄され基づいて実施した。

る搾り粕や外皮で，繊維質を豊富に含み，またパイナッ
プル由来の有機酸を適度に含んでおり嗜好性が良いこと
から養牛用飼料として一部で利用されている。野中ら

21）

1 ．実験 1 ．パイン粕サイレージの給与がルーメン発酵と乳生産に及ぼす影響および Sruamsiri 24）は，パイン粕を乾燥またはサイレー

ホルスタイン種泌乳牛 5 頭（平均体重631 kg，平均乳ジ化した際の栄養成分量について，乾物（DM）当たり量22.4 kg/ 日，平均分娩後日数186日，平均産次数1.6）

粗タンパク質（CP）は 4 ～ 8 ％，中性デタージェント

を供試した。供試牛はフリーストール牛舎で飼養し，採繊維（NDF）は60～72％，可溶性糖類は40～75％含ま

食，飲水，運動および休憩が自由にできるようにした。

れていることを報告している。内田ら25）は，パイン粕の給餌は 1 日 2 回（ 9 ：30，17：30）行い，搾乳はオート

可消化養分総量（TDN）は74％であり，エネルギー源

タンデムミルキングパーラーで 1 日 2 回（ 9 ：00，17：

飼料としてかなり有効であるとしている。また本田ら10）00）行い，乳量は自動的に記録した。

は，黒毛和種去勢牛へ粗飼料源としてパイン粕を給与し給与飼料の構成を表 1 に示した。主にトウモロコシサ

たところ，牧草パンゴラグラス「トランスバーラ」の給イレージ，ヘイキューブ，スーダン乾草と濃厚飼料から

与と比較して肥育成績に差は無く，食感が柔かくなるな

成る基礎飼料を給与した対照区と，サイレージと濃厚飼

ど肉質の改善が認められたことを報告している。しか料の割合を減らし乾草を増やし，PS を DM 当たり 5 ％し，乳牛へパイン粕を給与した研究は少なく，特にルー配合した PS5区と，同様に10％配合した PS10区を設定

メン発酵や乳生産への影響に関しては明らかにされていし， 3 区の成分含量がほぼ同等になるように調製した。

ない。

PS の成分組成（DM％）は，CP；6.6，粗脂肪（EE）；

また，近年，茶系飲料の消費が増大しており，茶殻が0.9，NDF；67.9， 酸 性 デ タ ー ジ ェ ン ト 繊 維（ADF）；

大量に発生し，その多くは産業廃棄物として排出されて27.7であった。試験は，初めの 3 日間を基礎飼料を給与いる。茶系飲料残渣はタンパク質を豊富に含み，飼料価

した予備期とし，以後，PS5区，PS10区，対照区の順に値が高いとされており，その一種の緑茶粕はサイレージ

1 期14日間で全 3 期の泌乳試験を行った。各飼料は給与化等により，乳牛への飼料利用が進められている

3，4）

。

前に混合し，TMR として給与した。

茶葉にはカテキン等のポリフェノール化合物類が多く含

乾物摂取量（DMI）と乳量は，各期最終 3 日間の平均

まれ，茶カテキン類には血圧上昇抑制作用，抗酸化作用値を用いた。乳試料はミルクメーターに付けたオートサ

および抗菌性等，さまざまな効果があることが知られてンプラーで乳量に応じて自動的に採取し，朝・夕の牛乳

おり 8 ），水谷ら17）は緑茶抽出物の乳牛への給与が，暑熱を乳量割合で合乳した後，乳成分測定に供した。乳脂

ストレスによる乳生産能低下の軽減に有効であると報告

率，乳タンパク質率，乳糖率，無脂乳固形分率および全している。一方で，ヤギにおける過去の試験において，固形分率は近赤外線自動分析機（Milko-Scan 133，Foss

飼料乾物中の茶葉含量が多くなると，ルーメンの発酵にElectric，Hillerrød，Denmark） に よ り 測 定 し た。 ま影響して，生産性に負の影響を与えることが危惧されてた，乳試料の一部を−80℃で凍結保存し，乳脂肪酸組成

いる 。しかし，紅茶粕が乳牛に与える影響についてのの測定に供した。脂肪酸組成の測定は，Miyazawa ら16）

研究は少ない。

の方法に準じて行った。ガスクロマトグラフは GC-14B

12）

そこで本研究では，乳牛の粗飼料の一部代替として，（島津製作所，京都）を用い，スプリット比；1/50で試実験 1 ではパイナップルジュース搾り粕をサイレージ化

料注入した。カラムは溶解シリカ・キャピラリーカラム

したパイン粕サイレージ（PS）を給与し，実験 2 では

（HR-SS-10，60 m×0.24 mm，ID，信和化工，京都）を

青木ら：パイン粕・紅茶粕給与と乳生産

183

Table 1.  Ingredient and chemical composition of diets in Trial 1 and Trial 2.
Diet 1 (Trial 1)

Item

Diet 2 (Trial 2)Control

PS5

PS10

Control

BR

8.7

12.0

13.0

8.7

8.9

Ingredient (% of DM)
Sudangrass hay
Corn silage

27.0

20.4

17.0

38.5

31.5

Alfalfa hay cube

19.6

19.6

18.8

─

─

33.6

32.0

30.7

39.7

40.6

1.8

1.8

1.7

2.4

2.5

Concentrate mixture

1

Wheat bran
Beet pulp

3.0

3.0

2.8

3.0

3.1

Rolled barley

1.5

1.5

1.4

1.2

1.3

Cotton seed

3.8

3.7

3.6

3.9

3.9

Soybean meal

1.2

1.2

1.1

2.6

1.3

Pineapple bran silage

─

5.0

10.0

─

─

Black tea residue

─

─

─

─

7.0

Total degestible nutrients 2

73.7

73.1

72.8

72.8

72.4

Crude protein

16.0

15.7

15.4

14.9

15.5

Nutrient composition (% of DM)

1

2

Ether extract

3.0

2.8

2.7

3.2

3.2

Neutral detergent fiber

35.3

38.0

40.3

33.3

33.4


Contained 47% grain (heat treated corn, barley, wheat flour, milo, rye), 27% chaff and bran (rice bran, corn gluten
feed, wheat bran), 22% oil seed meals (soybean meal, rape seed meal, corn gluten meal, linseed meal), 4%
others(molasses, calcium carbonate, sodium chloride, calcium phosphate).  

Estimated from Standard Tables of Feed Composition in Japan (Agriculture, Forestry and Fisheries ResearchCouncil Secretariat 2009).

用いた。
各期最終日の朝の飼料給与前（0h），給与 2 時間後（2h），給与 5 時間後（5h）にステンレス製胃カテーテ

コースはムロターゼ・GOD 法によるグルコース CⅡ- テ
ストワコー（和光純薬工業）の手順にそれぞれ従って測定した。

ル（ルミナー，富士平工業，東京）を用いてルーメン内

牛 乳 の 抗 酸 化 能 の 評 価 の た め に，1,1-diphenyl-2-容物を経口的に吸引採取した。採取後，二重ガーゼで内picrylhydrazyl（DPPH）を人工のラジカルとしてその容物をろ過し，ルーメン液を−30℃で凍結保存し，分析

消去活性を測定した。乳試料をクロロホルム ‐ メタに供した。揮発性脂肪酸（VFAs）は，ルーメン液試料

ノールで 2 層に分離し，上層の水溶性画分を乾固し，蒸を除タンパクして遠心分離した上清を分析用試料とし，

留 水 で 溶 解 後，DPPH 溶 液 と 反 応 さ せ，30分 後 に517

ガスクロマトグラフ GC-8A（島津製作所，京都）により

nm の吸光度を測定し，蒸留水との差によりラジカル消分 析 し た。 カ ラ ム は Thermon 3000-5％ Shincarbon A

去活性を求めた 5 ）。

（1.6 m×3.2 mm，ID，信和化工，京都）を用い，カラム温度130℃で分析した。アンモニア -N 濃度はインド
フェノール青法によるアンモニアテストワコー（和光純
薬工業，京都）の手順に従って行った。

2 ．実験 2 ．乾燥紅茶粕の給与がルーメン発酵と乳生産に及ぼす影響
ホルスタイン種泌乳牛 7 頭（平均体重657 kg，平均乳血液試料は各期最終日の朝の飼料給与2 h 後に，頸静量23.3 kg/ 日，平均分娩後日数180日，平均産次数2.1）

脈からヘパリン加真空採血管を用いて採取し，遠心分離を供試した。供試牛を平均体重や乳量が同等になるよう後に血漿を−30℃で凍結保存した。解凍後，尿素態窒素に 3 頭と 4 頭の 2 群に分け，予備期 3 日間，試験期14日（BUN）はウレアーゼ・インドフェノール法による尿素間のクロスオーバー法で試験を行った。

態窒素 B- テストワコー（和光純薬工業）の手順，グル給与飼料の構成を表 1 に示した。主にトウモロコシサ

家畜衛生学雑誌

184

第46巻第 4 号（2021）
3 ．統計処理方法

イレージ，スーダン乾草，濃厚飼料と大豆粕等から成る
基礎飼料を給与した対照区と，基礎飼料中のサイレージ

実験 1 は一般線形，実験 2 はクロスオーバーデザインと大豆粕を減らし，BR を DM 当たり7 ％配合した BR 区の 混 合 モ デ ル に よ り 分 析 し た（PASW Statistics 18.0,を設定し，両区の成分含量がほぼ同等になるように調製

IBM, NY 10504）。処理区，期を固定効果とし，個体をした。BR の成分組成（DM％）は CP；24.6，EE；1.8，

ランダム効果とした。有意水準は P ＜0.05とし，0.5≦ P

NDF；43.6，ADF；28.6であった。また，タンニンが5.6＜0.1を傾向ありとした。なお，処理区と期の相互作用％，無水カフェインが3.8 mg/g，エピガロカテキンガに有意な差は認められなかった。

レートが4.3 mg/g 含まれていた。

結果および考察

DMI，乳量，乳成分，乳脂肪酸組成，ルーメン液性状

1 ．パイン粕サイレージの給与がルーメン発酵と乳生産

および牛乳の抗酸化活性の測定は，実験 1 と同様に行っに及ぼす影響（実験 1 ：Diet 1）

た。 ま た 牛 乳 の 体 細 胞 数 を Fossomatic 90（FossElectric）により測定した。血漿性状は，グルコースおルーメン発酵および血液性状に及ぼす PS 給与の影響

よび BUN に加え，遊離脂肪酸（NEFA）濃度を ACS・について，表 2 に示した。ルーメン液中のアンモニア

ACOD 法による NEFA C テストワコー（和光純薬工業）-N 濃度は，各試験区間で有意差は認められなかった。

の手順に従って測定した。

飼料給与前（0h）の総 VFA 濃度は対照区に比べ，PS5区で有意に高かった。VFA 組成については，酢酸の比率

Table 2.  Effect of pineapple bran silage (PS) or black tea residue (BR) on ammonia-N, volatile fatty acid (VFA) inthe rumen fluid, and glucose, BUN and NEFA in the blood plasma

Item

Hrs. aftter
feeding

Diet 2

Diet 1
Control
(n=5)

PS5
(n=5)

PS10
(n=5)

P-value 1

9.5

8.6

7.9

0.68

Control
(n=7)

BR
(n=7)

P-value 1

9.2

10.7

0.64

Rumen fluid
Ammonia-N (mg/dL)

Total VFA (mM)

0
2

8.7

8.7

11.5

0.73

11.3

12.7

0.64

5

5.7

5.3

6.9

0.56

10.2

6.3

0.26

0

51.0 a99.7 b70.9 ab

0.02

59.6

60.4

0.83

2

96.1

96.8

87.4

0.70

72.1

71.7

0.90

5

75.8

70.7

87.4

0.43

79.3

78.2

0.73

0

67.2

65.6

67.9

0.45

62.5

61.4

0.30

VFA (molar %)Acetic acid

Propionic acid

Butyric acid

2

66.0

67.4

65.3

0.41

57.5

57.8

0.84

5

66.6

66.9

66.0

0.70

59.2

59.9

0.42

0

17.1

19.3

17.1

0.10

19.4

19.4

0.95

2

18.4

19.4

19.8

0.22

20.2

20.3

0.87

5

17.9

18.8

19.4

0.17

19.7

19.6

0.96

0

11.1

10.8

11.8

0.58

9.1

9.1

0.97

2

11.3

9.6

11.6

0.18

12.6

12.7

0.74

5

11.7

11.1

12.1

0.51

12.3

12.2

0.86

Glucose (mg/dL)

2

56.3

69.5

59.3

0.17

50.4

50.4

0.99

BUN (mg/dL)

2

18.0

22.3

9.6

0.08

29.2

Blood plasma

NEFA (µEq/mL)12

─

Different scripts within a row are significantly different (p<0.05).

─

─

─

89.1

26.7
a

117.7

0.18
b

0.01

青木ら：パイン粕・紅茶粕給与と乳生産

185は処理区間で差は認められなかったが，プロピオン酸の牛乳の抗酸化活性は，PS 添加区と対照区との間で差比率は対照区に対し PS5区では0 h で高い傾向を示し，は認められなかった。パイン粕には抗酸化成分として

PS10区では飼料給与2 h および5 h 後で高い値を示し

β- カロテンやビタミン C が含まれ，パイナップルの果皮には脂溶性の抗酸化物質が多く存在する18） ことから，牛乳の抗酸化活性の増強が期待されたが，そのような効果は認められなかった。本実験では抗酸化活性の測定
は，脂肪を除去した画分で行ったが，脂肪を含めた牛乳
全体についても今後は検討することが必要と考えられる。

た。内田ら25） は，パイン粕をヒツジに給与した結果，
ビートパルプ給与に比べプロピオン酸の比率が約10 ％高まったと本実験と類似の報告をしている。パイナップ
ル果実にはクエン酸やリンゴ酸等の有機酸が 1 ％程度
含まれているので23），パイン粕にもこれらが残存し，ルーメン内の中間代謝産物利用菌に利用されプロピオン
酸生成が促進されたものと推察される。
血中のグルコース濃度は対照区と比べて PS5区，PS10
区ともに高い値を示したが，有意差は認められなかっ

2 ．乾燥紅茶粕の給与がルーメン発酵と乳生産に及ぼす影響（実験 2 ：Diet 2）

た。BUN 濃度は対照区に比べ PS5区では差はなかった

ルーメン液中のアンモニア -N，VFA 濃度および血液が PS10区では低い値を示した。Gowda ら 7 ）は，トウモ

性状の分析結果を表 2 に示した。アンモニア -N 濃度はロコシサイレージの一部を PS に置換しヒツジに給与しBR 区と対照区との間に差は認められなかった。額爾敦

た結果，BUN 濃度に差がなかったことを報告していら 3 ）は緑茶粕サイレージを飼料に10 ％配合し乳牛に与る。本実験においては，ルーメン液中のアンモニア -N

えた場合，ルーメンアンモニア -N 濃度は飼料給与後に濃度に処理区間で差がなかったので，BUN 濃度にも明低下すると報告している。これは茶葉に含まれるタンニ

確な差が生じなかったと考えられる。

ンが，飼料中のタンパク質やルーメン微生物由来の酵素

DMI および乳生産の結果について表 3 に示した。PS

と強く結合し，ルーメンでのタンパク質分解を抑制するの嗜好性に問題はなく DMI に区間差は認められなかっため15）と考えられる。さらに，BR には緑茶粕サイレー

た。乳量，各乳成分率および乳成分量についても区間差

ジよりも中性デタージェント不溶性タンパク質や酸性デは認められなかった。Otagaki ら

22）

は，粗飼料源としてタージェント不溶性タンパク質が多く含まれており，in

パイン粕を飼料中に30％配合し乳牛に給与した結果，乳vitro の試験においてアンモニア -N 濃度が低下したが13），

生産に影響はなかったことを報告しており，本実験の結

本実験の結果は異なった。本実験では BR は飼料中 7 ％果も同様であった。

であったが，この程度の配合ではアンモニア -N 濃度へ

乳中脂肪酸組成および DPPH ラジカル消去活性を指標の影響は認められないと考えられる。

にした牛乳の抗酸化活性の結果について表 4 に示した。

総 VFA 濃度および VFA 組成は，対照区と BR 区の間

PS を添加した両区では対照区と比べ，乳脂肪中のパルで有意差は認められなかった。なお，生田ら11） は，乳

ミチン酸割合が増加する傾向が認められた。

牛の飼料に乾燥茶殼を7.2 ％配合すると酢酸の比率が低

Table 3.  Effect of pineapple bran silage (PS) or black tea residue (BR) on feed intake, milk yield and milk
composition
Diet 1
Item

Diet 2Control
(n=5)

PS5
(n=5)

PS10
(n=5)

P-value

Control
(n=7)

BR
(n=7)

P-value

Dry matter intake (kg/d)

22.2

22.2

22.9

0.71

21.0

21.3

0.86

Milk yield (kg/d)

22.3

21.2

23.4

0.73

23.1

23.7

0.86

Milk compositon (%)
Fat

4.50

4.24

4.28

0.48

4.36

4.50

0.59

Protein

3.59

3.47

3.55

0.61

3.81

3.73

0.57

Lactose

4.55

4.67

4.59

0.32

4.33

4.25

0.13

Total solids

13.64

13.38

12.75

0.98

13.54

13.51

0.93

Solids non-fat

9.14

9.13

9.14

0.45

9.24

9.06

0.28

─

─

─

─

152

140

0.82

Somatic cell counts (×103/mL)

家畜衛生学雑誌

186

第46巻第 4 号（2021）

Table 4  Effect of pineapple bran silage (PS) or black tea residue (BR) on fatty acid composition of milk fat and
DPPH 1 radical scavenging activity in milk
Diet 1
Item

Diet 2Control
(n=5)

PS5
(n=5)

PS10
(n=5)

1.63

1.70

1.73

P-value 2

Control
(n=7)

BR
(n=7)

1.68

1.61

P-value 2

Fatty acid (mg/100mg FAME3)
Caproic acid (C6:0)

1
2
3
4
5

0.39

0.58

Caprylic acid (C8:0)

1.16

1.19

1.24

0.46

1.22

1.16

0.46

Capric acid (C10:0)

2.74

2.86

2.92

0.46

3.04

2.86

0.54

Lauric acid (C12:0)

3.33

3.49

3.56

0.46

3.66

3.42

0.55

Myristic acid (C14:0)

11.39

11.65

11.78

0.48

11.57

11.14

0.56

Myristoleic acid (C14:1)

0.99

0.96

1.06

0.61

1.18

1.08

0.34

Palmitic acid (C16:0)

32.24

33.52

33.95

0.08

31.19

30.32

0.60

Palmitoleic acid (C16:1)

1.55

1.57

1.43

0.71

1.73

1.67

0.38

Stearic acid (C18:0)

10.66

10.07

10.14

0.37

9.63

10.23

0.62

Oleic acid (C18:1)

21.47

20.58

19.69

0.23

21.20

22.58

0.41

VA4 (t-11 C18:1)

0.94

0.96

0.96

0.66

1.02

1.07

0.27

Linoleic acid (C18:2)

1.78

1.76

1.97

0.61

2.27

2.34

0.63

CLA5 (c-9, t-11 C18:2)

0.81

0.79

0.84

0.44

0.80

0.88

0.09

Linolenic acid (C18:3)

0.62

0.55

0.51

0.40

0.54

0.59

0.39

Saturated fatty acids

69.16

70.36

71.18

0.18

68.31

66.78

0.17

Unsaturated fatty acids

30.84

29.64

28.82

0.18

31.69

33.22

0.18

DPPH (Unit/µL)

7.27

7.60

6.75

0.25

2.69

2.57

0.84

1,1-diphenyl- 2 -picrylhydrazyl.  
P<0.10; tended to be increased or decreased.  
Fatty acid methyl ester.  
Vaccenic acid.  
Conjugated linoleic acid.

下するとし，額爾敦ら 4 ） は，緑茶粕サイレージを飼料

固形分率が低下し，これは飼料タンパク質の消化吸収が中10％以上配合するとプロピオン酸の比率が低下すると抑制されたためと考察している。さらに，額爾敦ら 4 ）

報告しているが，本実験の結果はこれらとは異なった。

は緑茶粕サイレージを乳牛に給与した場合，10％添加で血漿グルコースおよび BUN 濃度については両区間で乳量と乳成分は低下し始め，15％添加で有意に低下した差は認められなかった。額爾敦ら

3）は緑茶粕サイレー

が，これはタンニンによる影響と報告している。その場ジの給与で BUN 濃度が低下したと報告しているが，本合，緑茶粕サイレージ区の DMI は20.7 kg，サイレージ

実験では BR 給与でルーメンアンモニア -N 濃度が変化しのタンニン濃度は9.0 ％で， 1 日当たり279 g のタンニンなかったので，BUN 濃度に区間差が生じなかったと考

摂取量であったが，本実験では紅茶粕のタンニン濃度はえられる。一方，血中 NEFA 濃度は BR 区で有意に増加

5.6 ％ で 1 日 当 た り83.5 g の タ ン ニ ン 摂 取 で あ っ た た

したが，乳牛へのカフェインの投与により NEFA 濃度

め，乳生産への影響は認められなかったと考えられる。

9）が高まることが知られており ，本実験でも紅茶粕に含乳中脂肪酸組成の分析結果について表 4 に示した。

まれるカフェインによってその濃度が高まった可能性がBR 区では対照区に比べ，総不飽和脂肪酸割合が高い値ある。

を示した。抗がん作用などの機能性成分として知られてDMI および乳生産についての結果を表 3 に示した。

いる共役リノール酸（CLA）の割合は，BR 区の方が対DMI，乳量，乳成分および乳中体細胞数には BR 給与の照区よりも高い傾向が認められた。リノレン酸を多く含11）は本実験と同程度

むアマニの給与により，乳中の CLA が増加することがの割合で茶殻を給与した結果，乳量，乳糖率および無脂報告されている 2 ）。また，茶葉に含まれる脂肪酸の約影響は認められなかった。生田ら青木ら：パイン粕・紅茶粕給与と乳生産

187

40％はリノレン酸，約25％はリノール酸であるので 1 ），profile of cow milk.  Journal of Dairy Science.  93,

BR 給与による CLA や不飽和脂肪酸の増加傾向は，これ2580-2588.  

らの多価不飽和脂肪酸が多く供給されたことが一因と考えられる。

3 ）額爾敦巴雅爾・西田武弘・細田謙次ら（2003）泌乳
牛の飼料消化，ルーメン発酵および血液性状などに

牛 乳 の 抗 酸 化 活 性 に つ い て 表 4 に 示 し た。 牛 乳 のDPPH ラジカル消去活性は，両区間に差は認められな及ぼす緑茶飲料製造残渣サイレージ給与の影響．日
本畜産学会報．74，483−490．

かった。茶葉にはエピガロカテキンなど各種のカテキン

4 ）額爾敦巴雅爾・西田武弘・松山裕城ら（2005）緑茶類が含まれているが，紅茶などの発酵茶ではカテキン類

飲料製造残渣サイレージの給与水準の違いが採食量

が製造途中に二量体に酸化され緑茶の半分程度まで減少

および乳生産に及ぼす影響．日本畜産学会報．76，

し，抗酸化力についても緑茶より低下することが報告さ

295−301．

14）

れている 。本実験で用いた紅茶粕は4.3 mg/g のエピガ

5 ）Gazi, M.R., Yokota, M., Tanaka, Y., et al.   (2007)

ロカテキンガレートを含有しているので，DM 当たり

Effects of protozoa on the antioxidant activity in

BR の 7 ％給与により， 1 日当たり約 6 g のエピガロカ

the ruminal fluid and blood plasma of cattle.  

テ キ ン ガ レ ー ト が 乳 牛 へ 供 給 さ れ た こ と に な る。

Animal Science Journal.  78, 34-40.  

Gessner ら 6 ）の乳牛に緑茶抽出物を給与した試験では，

6 ）Gessner D.K., Brock C., Hof L.M., et al.(2020) Effects

本実験と同程度量のポリフェノールが添加されたが，血of supplementation of green tea extract on the中の抗酸化能や肝臓の抗酸化酵素の mRNA 発現量の増milk performance of peripartal dairy cows and the

強は認められなかった。このため，本実験でも十分な量

expression of stress response genes in the liver.  

のカテキン類が供給されなかったので，乳の抗酸化活性

Journal of Animal Science and Biotechnology.  11:の向上にはつながらなかったと考えられる。このよう

57.  

に，紅茶粕はルーメン発酵に大きな影響を与えることな

7 ）Gowda N.K.S., Vallesha N.C., Awachat V.B., et al.  

く，CLA 等の多い牛乳の生産に寄与できる可能性が示(2015) Study on evaluation of silage from pineapple

唆された。

(Ananas comosus) fruit residue as livestock feed.  

以上の実験 1 と実験 2 の結果より，PS は乾物比10％程度，BR は 7 ％程度の飼料配合であればルーメン発酵と栄養素の体内代謝に大きな影響を及ぼすことなく，エコフィードを使用した安全な牛乳生産に利用できること

Tropical Animal Health and Production.   47, 557561.  
8 ）原征彦（2000）茶カテキン類の機能性とそれらの応用例．日本食品保蔵科学会誌．26，47−54．
9 ）Hawkins G.E., Davis W.E.   (1970) Changes inが明らかになった。

plasma free fatty acids and triglycerides in dairy
本研究の実施に際し，PS は雪印種苗株式会社より，
BR は全国酪農業協同組合連合会を介して提供いただいcattle after dosing with coffee or caffeine.  Journalof Dairy Science.  53, 52-55.  

た。泌乳試験の遂行にあたっては東京農工大学農学部附10）本田祥嵩・翁長桃子・安里直和ら（2015）パイン

属フィールドサイエンス教育研究センターの小林 優

アップルジュース搾り粕給与が黒毛和種肥育牛の肉氏，乃万 了氏をはじめとする技術職員の方々に多大の質に及ぼす影響．沖縄県畜産研究センター試験研究

ご支援をいただいた。乳成分分析については東京都農林報告．53，1−6．

水産振興財団農林総合研究センター青梅庁舎の皆様に多11）生田健太郎・山口悦司・片岡敏（2011）泌乳牛への大のご助力をいただいた。ここに記して感謝の意を表す

茶飲料製造残さ給与が乳生産性と栄養代謝に及ぼする。

影響．兵庫県立農林水産技術総合センター研究報

引

用

文

献

告．畜産編．47，16−22．
12）Kondo M., Hidaka M., Kita K.  et al.  (2007) Feeding1 ）阿南豊正・中川致之（1977）茶葉の脂質に関する研value of supplemented diet with black tea by-

究（第 1 報）茶期・熟度による脂質含量および脂肪product silage : Effect of polyethylene glycol

酸 組 成 の 変 化． 日 本 食 品 工 業 学 会 誌．24，305−

addition to the diet on digestibility of protein

310．

fractions in goats.  Grassland Science. 53, 131-137.  

2 ）Caroprese M., Marzano A., Marino R., et al.  (2010)13）Kondo M., Hirano Y., Kita K.   et al.   (2014)

Flaxseed supplementation improves fatty acidFermentation characteristics, tannin contents and家畜衛生学雑誌

188

第46巻第 4 号（2021）

in vitro ruminal degradation of green tea andNet energy of pineapple bran and pineapple hay

black tea by-products ensiled at different

when fed to lactating dairy cows.  Journal of Dairy

temperatures.   Asian-Australasian Journal ofAnimal Science.  27, 937-945.  
14）栗木隆吉・黒岩力也（2004）地域食品製造副産物を利用した高機能畜産物の生産技術の開発─地域食品

Science.  44, 491-497.  
23）塩見慎次郎・丁野久美・中村怜之輔（2004）成分変化からみたパイナップル果実の追熟性について．日
本食品保蔵科学会誌．30，231−234．

製造副産物に含まれる機能性成分と飼料特性につい24）Sruamisri S.   (2007) Agricultural wastes as dairyて─．岡山県総合畜産センター研究報告．15， 6 −feed in Chiang Mai.   Animal Science Journal.   78,10．

335-341.  

15）Makkar H.P.S., Blummel M., Becker K.   (1995)

25）内田仙二・Lana I.K.・堀米隆男（1980）フィリピン

Formation of complexes between polyvinyl

産パイナップルカスの飼料価値．岡山大学農学部学

pyrrolidones or polyethylene glycols and tannins,

術報告．56，55−62．

and their implication in gas production and true
digestibility in in vitro techniques.  British Journalof Nutrition.  73, 897-913.  

要旨パイン粕サイレージ（PS）と乾燥紅茶粕（BR）が乳

16）Miyazawa K.,Sultana H.,Hirata T.   et al. (2007)

牛のルーメン発酵，血液性状および乳生産に及ぼす影響

Effect of brewer’s grain on rumen fermentation,について 2 つの実験を行った。実験 1 では 5 頭の乳牛を

milk production and milk composition in lactating

供試し，基礎飼料のみを給与した対照区と基礎飼料のト

dairy cows.  Animal Science Journal.  78, 519-526.  

ウモロコシサイレージを PS で 5 ％および10％置き換え

17）水谷将也・山本泰也・濱口勇（1999）緑茶抽出物のた区を設定した。実験 2 では 7 頭の乳牛を供試し，対照

飼料への添加による夏期における乳生産能低下の軽区と基礎飼料のトウモロコシサイレージと大豆粕を BR

減効果．三重県農業技術センター研究報告．26，13

で 7 ％置き換えた区を設定した。実験 1 では PS の給与−19．

によりルーメンアンモニア濃度に区間差は認められな

18）西場洋一・正田守幸・崎山澄寿ら（2011）沖縄県産

かったが，総 VFA 濃度は PS5％区で飼料給与前（0h）パインアップル（Ananas comosus（L.）Merr.）にに有意に高かった。VFA 中のプロピオン酸の割合はおけるラジカル消去成分の品種間差異．日本作物学

PS5区および PS10区で高い傾向が認められた。DMI，会九州支部会報．77，73−76．

乳量，乳成分および抗酸化活性には区間差はなかった

19）農業・食品産業技術総合研究機構（2009）日本標準

が，乳脂肪のパルミチン酸の割合は PS5区と PS10区で飼料成分表．2009年版．中央畜産会．東京．

高い傾向が認められた。実験 2 では BR の給与により20）農林水産省（2020）飼料をめぐる情勢．
［homepage

ルーメン発酵は変化しなかったが，血漿 NEFA 濃度はon the Internet］． 農 林 水 産 省， 東 京 ;［cited 6増加した。DMI，乳量，乳成分，乳の体細胞数と抗酸化February 2020］．Available from URL :活性は変化しなかった。BR 給与により乳脂肪の共役リ

https://www.maff.go.jp/j/chikusan/sinko/lin/

ノール酸（CLA）の増加傾向が認められた。本研究に

l_siryo/attach/pdf/index-499.pdf

おいて PS と BR は，乳生産についてどちらも負の影響を

21）野中和久・名久井忠・篠田 満（1994）パイナップ
ル粕・醤油粕混合飼料の飼料価値．北海道畜産学会

及ぼすことなく，エコフィードとして飼料の一部代替が可能であることが示された。

報．36，18−20．
22）Otagaki K.K., Lofgreen G.P., Cobb E.  et al.  (1961)

キーワード：パイン粕，紅茶粕，ルーメン発酵，乳生産

189

Original report

Effect of Sampling Volume for Viable Bacterial Count andSomatic Cell Count in Cows’ Foremilk
Nana Kitano 1）, Yoshio Kiku 2）, Satoshi Gondaira 3）＊ , Toshihiko Takahashi 1）＊

ウシ前搾り乳量が乳汁生菌数および体細胞数に及ぼす影響
北野菜奈 1 ）・菊佳男 2 ）・権平

智 3 ）＊・髙橋俊彦 1 ）＊

（1）Animal Hygiene Laboratory, Graduate School of Rakuno Gakuen University, 
582 Midorimachi Bunkyodai Ebetsu, Hokkaido 069-8501 Japan
2）

National Institute of Animal Health, National Agriculture and Food Research Organization, 
4 Hitsujigaoka, Toyohira, Sapporo, Hokkaido 062-0045, Japan

3）

Animal Health Laboratory, Graduate School of Veterinary Medicine, Rakuno Gakuen University, 
582 Midorimachi, Bunkyodai, Ebetsu, Hokkaido 069-8501 Japan＊

Correspondence to: Satoshi Gondaira（s-gondaira@rakuno.ac.jp）
Toshihiko Takahashi（toppi@rakuno.ac.jp））（Received 13. Nov. 2020／ Accepted  27. Nov. 2020）

Summary
The present study sought to investigate the relationships between the foremilk and viable bacterial counts andsomatic cell counts in milking cows.  Milk samples were collected from 12 quarters of 12 clinically healthy Holsteincows prior to milking; 150 mL of foremilk per quarter were split into 10 groups (0-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-50,
50-75, 75-100, 100-125, 125-150mL).  The mastitis-inducing bacteria present within the foremilk were identified, andthe viable bacterial counts and somatic cell counts in the samples were also measured.   Coagulase-negative
staphylococci (CNS) were isolated from 4 quarters, other Streptococci (OS) were detected in 4 quarters, both CNS
and OS were found in 4 quarters, and Staphylococcus aureus was identified in 1 quarter.  The amounts of bacteria
in foremilk samples ranging from 20 to 150 mL were significantly lower than in foremilk samples from the first 0
to 5 mL.   The foremilk harvested at 5 to 10 mL showed significantly higher bacterial counts than the foremilkbacterial levels in samples from 25 to 150 mL.  While examining somatic cell counts, it was discovered that there
were no significant differences according to the amount of foremilk.  It was clarified that at least 20 mL or more of
foremilking was necessary to maintain hygienic milk quality.  
Key words：foremilk, mastitis, bacterial counts, somatic cell counts, cow
  Jpn. J. Anim. Hyg. 46, 189〜193（2021）

酪農学園大学 畜産衛生学ユニット〒069−8501 北海道江別市文京台緑町582番地
2）
農研機構 動物衛生研究部門〒062−0045 北海道札幌市豊平区羊ヶ丘 41）

酪農学園大学 獣医学類獣医衛生学ユニット〒069−8501 北海道江別市文京台緑町582番地＊
連絡著者：権平 智（s-gondaira@rakuno.ac.jp）
髙橋俊彦（toppi@rakuno.ac.jp）
3）Jpn. J. Anim.Hyg. Vol. 46, No.4（2021）

190

Introduction

Milk sampling
Following pre-dipping of the cow teat, sampling after

Mastitis is caused by the invasion of microorganisms

cleanup using a fresh towel was conducted with up to

into the mammary gland 4).  Since mastitis lowers milk

150 mL per quarter.  A total of 150 mL of foremilk peryield, the disease has caused enormous economic losses

quarter were split into 10 groups, and then each wasfor dairy farms worldwide 5, 7) .   Mastitis also hasplaced into a separate sterile tube.   The first 5-mL

significant effects on public health and the dairy

sample of foremilk was placed into a sterile tube (5 mL

industry in the production of safe, raw milk.  

group), and the next 5 mL (i.e., 5 to 10 mL of foremilk)

6)

and somatic cell counts are

sample was placed into another sterile tube (10 mL

mainly used to monitor mastitis and make a clinicalgroup).   The next 5 mL sample (10 to 15 mL of

diagnosis.  Milk is created by mammary epithelial cells

foremilk) was collected (15 mL group), and so forth for

Bacteriological tests

from the blood, which synthesize milk and secrete thethe 15 to 20 mL (20 mL group), 20 to 25 mL (25 mL

milk into the mammary alveoli.   The milk storedgroup), 25 to 50 mL (50 mL group), 50 to 75 mL (75 mL

within the mammary gland then descends via the milkgroup), 75 to 100 mL (100 mL group), 100 to 125 mLduct and, in its final position, is stored within the gland(125 mL group), and 125 to 150 mL (150 mL group)

cistern or teat cistern.   It is possible that bacteria

samples, all collected in the same manner.  

invade the teat via the top of the teat prior to milking,and that the milk located in the gland cistern or teat

Bacterial isolation and identification

cistern is contaminated with high bacteria and somatic

The milk from each quarter was prepared following

cell counts.   It is known that the composition of milk

the method previously described 1) .   Briefly, thevaried before and after milking, and the electricalsampled milk was applied to an approximately 5%

conductivity, which is an index of mastitis, is higher

sheep blood agar medium (BD, Franklin Lakes, NJ,

before milking 8).  Thus, monitoring for and diagnosis ofUSA), and the culture was then incubated at 37℃ formastitis were generally conducted using milk after

24 h.   After cultivation, the isolated strains werediscarding the foremilk sample 3 to 4 times.  However,identified by the presence or absence of hemolysis,no reported study has quantitatively analyzed foremilk

Gram staining reaction, catalase test, and coagulasecontamination, and the foremilk volume appropriate fortest using rabbit plasma.   The viable bacterial countthe mastitis test has not been determined.  

was measured in 1 mL using a 3M Petrifilm AC Plate

In the present study, the relationships between the(3M Health Care, Minneapolis, MN, USA).  

foremilk and viable bacterial counts and somatic cellcounts in cows’ milk were examined, and theappropriate stable milk volume needed to conduct a
mastitis test with the foremilk was determined.  

Materials and Methods
Animals

Somatic cell counts
The numbers of somatic cells within the milk werecounted using a DeLaval cell counter DCC (DeLaval,
Tumba, Sweden).  
Statistical analysis

Holstein cows were fed and housed within the free

The results are expressed as means ± standard

stall barn of Rakuno Gakuen University Field

deviation.  A Friedman test was used for comparisons,

Education and Research Center, which was set up as awith p < 0.05 considered significant.  

dairy production station.   Holstein cows during earlylactation (n = 2), peak lactation (n = 1), mid-lactation (nResults= 1), and late lactation (n = 8) were used.  Of these 12

Mastitis-inducing bacteria were detected in 12

cows (2 to 6 years of age), 12 quarters in whichquarters: coagulase-negative Staphylococci (CNS) werebacteria were detected within the foremilk were used.  

detected in 3 quarters, other Streptococci (OS) in 4

The parity of cows was 1 to 4.  

quarters, both CNS and OS in 4 quarters, andStaphylococcus aureus was detected in 1 quarter.  The

Kitano et al.：Bacterial and Somatic Cell Counts in Foremilk

191

numbers of CNS, OS, CNS and OS, and SA in foremilk

by bacterial species (CNS, OS, CNS and OS) were notare shown in Table 1.  The highest bacterial count wasobserved.   In one quarter where SA was detected,

detected in the 5 mL group in CNS, OS, CNS and OS,

unlike other bacterial species, somatic cell counts wereand SA-containing milk, and tended to be larger thanvariation.   There was no significantly variation in thein the other volume groups.   However, there was nosomatic cell counts in the total group.  

significantly variation in the viable bacterial count in

Discussion

any amount of foremilk group depending on thespecies of CNS, OS, and CNS and OS.  In one quarter

It is not yet possible to accurately determine thein which SA was detected, a similar pattern to otherdevelopment of mastitis and the occurrence ofbacterial species was noted.   The highest bacterial

inappropriate treatment in cows with current

count was recognized within the 5 mL group in total

techniques 3).  The method using foremilk intended for

milk, and it was significantly (p < 0.05) higher than in

mastitis testing has not yet been standardized.  In thethe 20 mL to 150 mL groups.  The milk of the 10 mL

present study, viable bacterial counts and somatic cellgroup had a significantly higher bacterial count (p <counts of sampled cow foremilk were both0.05) than the 50 to 150 mL group milk.  

quantitatively measured to develop an appropriate

The somatic cell counts in foremilk found to havemastitis test.  

CNS, OS, CNS and OS, and SA are shown in Table 2.  

In the present study, the viable bacterial counts andSignificantly variations in the numbers of somatic cells

the somatic cell counts did not differ significantly by

Table 1  Bacterial counts (cfu/ml) in foremilk
Isolatedbacteria

n

5

10

15

20

25

50

75

100

125

150mL (ml)CNS

315.8±12.9

1.9±1.4

1.7±1.1

1.2±0.7

1.2±0.9

0.4±0.4

0.5±0.3

1.8±2.1

1.6±2.4

0.8±0.6OS4

3.1±1.9

1.5±0.8

0.9±0.6

0.5±0.6

0.1±0.2

0.2±0.2

0.3±0.5

0.7±0.8

0.3±0.5

0.3±0.5

CNS+OS410.8±16.2

1.0±0.6

0.9±0.7

0.3±0.3

0.3±0.3

0.2±0.1

0.2±0.1

0.1±0.2

2.2±4.2

0.1±0.2

SA

1

7.0

0.3

0.2

0.3

0.1

0.02

0.03

0.03

0.01

0.01

Total

12

9.1±11.4a

1.3±0.9c

1.0±0.8

0.6±0.6b

0.4±0.6b0.2±0.2bd

0.3±0.3bd

0.7±1.2bd

1.2±2.6bd

0.3±0.5bd

CNS; Coagulase-negative staphylococci, OS; Other Streptococci, SA; Staphylococcus aureusa b c d- , - ; p < 0.05

Table 2  Somatic cell counts (104 cells/ml) in foremilk
Isolatedbacteria

n

5mL

10mL

15mL

20mL

25mL

50mL

75mL

100mL

125mL

150mL

CNS

3

30.8±46.9

33.8±71.3

29.8±60.2

30.5±84.0

26.9±107.3

17.7±88.4

18.9±102.7

16.4±79.6

16.7±87.9

18.3±91.2OS490.1±59.7

91.9±64.3

69.9±30.7

57.6±19.0

34.6±14.736.4±19.7

37.7±19.3

40.2±19.8

41.9±22.942.4±24.9

CNS+OS444.1±23.4

47.6±25.5

36.7±20.6

31.2±24.1

30.7±23.6

30.0±24.5

27.5±22.8

29.5±30.1

30.1±30.7

30.3±30.5

SA

1

200.2

25.9

265.8

262.4

238.1

280.2

273.5

95.0

92.4

102.3

Total

12

69.1±60.0

57.1±45.0

65.1±68.4

59.1±67.3

48.3±61.7

49.9±74.8

49.2±72.935.2±28.4

35.9±28.837.3±30.7

CNS; Coagulase-negative staphylococci, OS; Other Streptococci, SA; Staphylococcus aureusJpn. J. Anim.Hyg. Vol. 46, No.4（2021）

192

https://doi.org/10.1017/S0022029916000625

the bacterial species in the foremilk.   The viablebacterial count in the SA-isolated foremilk was not

4)

Grönlund U., Johannisson A., Persson Waller K.,

significantly different from the foremilk with other(2006) Changes in blood and milk lymphocyte sub-bacterial species isolated.   However, the somatic cell

populations during acute and chronic phases ofcounts in the SA-isolated foremilk tended to be higher

Staphylococcus aureus induced bovine mastitis.  

than in the foremilk with other bacterial species

Research in Veterinary Science 80, 147-154.  DOI:
https://doi.org/10.1016/j.rvsc.2005.05.002

isolated.   The somatic cell counts did not change
significantly by differences in the foremilk volume

5)

Halasa T., Nielen M., De Roos A.P., et al., (2009)

samples, but bacterial counts in foremilk were

Production loss due to new subclinical mastitis insignificantly higher in the 5 mL group than in the 20

Dutch dairy cows estimated with a test-day model.  

mL to 150 mL groups.  The bacterial counts in foremilk

Journal of Dairy Science 92, 599-606.  DOI:
https://doi.org/10.3168/jds.2008-1564

were significantly higher in the 10 mL group than in
the 50 mL to 150 mL groups.   It has been reported

6)

Jones G., Bork O., Ferguson S.A., et al.   (2019)that the somatic cell counts decrease in about 80

Comparison of an on-farm point-of-care diagnostic

seconds immediately after the start of milking 2, 9).   Inwith conventional culture in analyzing bovine

addition, it has been reported that the electric

mastitis samples.   Journal of Dairy Research 86,

conductivity values before and after milking are

222-225.  DOI:
https://doi.org/10.1017/S0022029919000177

8)

different , suggesting that the milk composition of theforemilk are different at the beginning, especially the7)Jones G.M., Pearson R.E., Clabaugh G.A., et al.  

first 5 ml.   Thus, strict foremilk may not be properly(1984) Relationships between somatic cell counts

tested for mastitis-causing bacteria.  

and milk production.  Journal of Dairy Science 67,
1823-1831.  DOI:

The current study measured the somatic cell andhttps://doi.org/10.3168/jds.S0022-0302(84)81510- 6bacterial counts in cow foremilk, and the findings
suggest that there are higher levels of bacteria present

8)

Khatun M., Bruckmaier R.M., Thomson P.C., et al.  

in foremilk at the beginning of forestripping.  Although(2019) Suitability of somatic cell count, electricalsomatic cell counts were not related to the amount ofconductivity, and lactate dehydrogenase activity inforemilking, it is related to the viable bacterial counts.  

foremilk before versus after alveolar milk ejection

Therefore, it was clarified that at least 20 mL or more

for mastitis detection Journal of Dairy Science 107,of foremilking was necessary to maintain hygienic milk

9200-9212.  DOI:

quality.  

https://doi.org/10.3168/jds.2018-15752

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1)

2)

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National Mastitis Council Inc., New Prague, MN,

of Dairy Research 82, 129-134 DOI:

USA

https://doi.org/10.1017/S002202991400065X

Bruckmaier R.M., Weiss D., Wiedemann M., et al.  
(2004) Changes of physicochemical indicators

3)

9)

要

旨

during mastitis and the effects of milk ejection on

本研究では，乳牛における前搾り乳汁量が生菌数およ

their sensitivity.   Journal of Dairy Research 71,

び体細胞数に及ぼす影響を検討した．臨床的に健康なホ

316-321 DOI:

ルスタイン種雌牛12頭から12分房の乳汁を採取した．そhttps://doi.org/10.1017/S0022029904000366

れ ぞ れ の 分 房 乳150mL は， 0 − 5 ， 5 −10，10−15，

Cha E., Smith R.L., Kristensen A.R., et al.   (2016)15−20，20−25，25−50，50−75，75−100，100−125

The value of pathogen information in treatingおよび125−150mL に分割して採取された．それぞれのclinical mastitis.  Journal of Dairy Research 83, 456-

前搾り乳汁において乳房炎原因菌の同定，生菌数および463.  DOI:

体細胞数を測定した．コアグラーゼ陰性ブドウ球菌

Kitano et al.：Bacterial and Somatic Cell Counts in Foremilk

193（CNS）および連鎖球菌（OS）の単独感染がそれぞれ 4胞数では，各前搾り乳汁量による差は認められなかっ分房で検出され，両者の混合感染も 4 分房で検出された．乳房炎防除を目的とした乳汁検査では，少なくともた．また，黄色ブドウ球菌が 1 分房で検出された． 0 − 5

20mL 以上の前搾りを実施した後に，採乳することが重および 5 −10 mL で採取された前搾り乳汁の細菌数は，要であることが考えられる。

25−50，50−75，75−100，100−125および125−150mLのそれに比較し有意（p ＜0.05）に高値を示した．体細キーワード : 前搾り乳，乳房炎，生菌数，体細胞数，ウシ

原

195

著

新型コロナウイルス SARS-CoV-2診断キットにおける前処理試薬のウイルス不活化効果の評価
松浦遼介 1 ）・Lo Chieh-Wen 1 ， 2 ）・中川

優 1 ）・武井正美 1 ）・間

陽子 1 ， 2 ， 3 ）＊Evaluation of SARS-CoV-2 inactivation efficiency mediated by the reagent of
COVID-19 diagnosis kits
Ryosuke Matsuura 1）, Chieh-Wen Lo 1, 2）, Masaru Nakagawa 1）, Masami Takei 1）, Yoko Aida 1, 2, 3）＊（1）Division of Hematology and Rheumatology, Department of Medicine, Nihon University School of Medicine,30-1 Oyaguchi, kami-cho, Itabashi, Tokyo 173-8610, Japan
2）

Laboratory of Global Animal Resource Science, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, 
the University of Tokyo, 1-1-1 Yayoi, Bunkyo-ku, Tokyo 113-8657, Japan

3）

Benno Laboratory, Baton Zone Program, RIKEN Cluster for Science, Technology and Innovation Hub.
2-1 Hirosawa, Wako, Saitama 351-0198, Japan＊

Corresponding Author : Yoko Aida（aida@riken.jp））（2021. 1. 28  受付／2021. 1. 31  受理）

Summary
Diagnosis of coronavirus disease 2019 (COVID-19) is mainly based on the detection of the RNA of severe acuterespiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2).   Since the handling of the clinical specimens which obtained
from suspected or confirmed COVID-19 patient is conducted in biosafety level (BSL)-2 or BSL-3, respectively,
sample transportation between the specimen collection facilities to the inspection facilities is sometimes needed.  
On the other hand, the handling of the clinical specimens in which SARS-CoV-2 is inactivated is in BSL-1.  Longterm storage and transportation of clinical specimens for diagnosis have the potential risk of leakage as it isunclear whether SARS-CoV-2 within specimens is inactivated or not during the RNA extraction step.  Here weshow that all sample treatment reagents of viral RNA extraction kits and three out of four SARS-CoV-2 detection
kits used in Japan could inactivate more than 99% SARS-CoV-2 in one minute.   On the contrary, Universal
Transport Medium which is recommended for the transportation of clinical specimens by World HealthOrganization and National Institute of Infectious Diseases did not inactivate SARS-CoV-2.  These results provide
the insight into the process by which SARS-CoV-2 is inactivated from RNA extraction to detection and ensure thesafety during COVID-19 diagnose.  In addition, we propose the possibility of a faster and safer diagnosis methodby inactivating the collected clinical specimen on the spot and detecting the RNA of SARS-CoV-2 without BSL-2
and BSL-3 facilities.  
Key words：COVID-19, SARS-CoV-2 inactivation, SARS-CoV-2 diagnosis kit reagent, viral RNA extraction kit
reagent, Universal Transport Medium
  家畜衛生学雑誌

日本大学医学部 内科学系 血液膠原病内科学分野〒173−8610 東京都板橋区大谷口上町30− 12）
	東京大学大学院農学生命科学研究科 農学国際専攻国際動物資源科学研究室〒113−8657 東京都文京区弥生 1 − 1 − 1
1）46，195〜203（2021）

	国立研究開発法人理化学研究所科技ハブ産連本部別研究室〒351−0198 埼玉県和光市広沢 2 − 1＊
連絡担当：間 陽子（aida@riken.jp）3）辯野特家畜衛生学雑誌

196

序

第46巻第 4 号（2021）
能な限り早期に SARS-CoV-2を不活化することが求めら

文

れている．

新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）は2019年12月に

日本では SARS-CoV-2の下気道由来検体はパラフィル

中国の湖南省武漢市で感染が報告されて以降，世界中にムで封をしたスクリューキャップ付きプラスチック

感染が広まり，パンデミックを引き起こしている 8 ）．我チューブに採取される 7 ）．咽頭ぬぐい液は，スピッツ管

6）が国でも感染者数は増加の一途をたどり ，日本政府は中のウイルス輸送液あるいはリン酸緩衝液（PBS）に懸2020年 2 月 1 日に新型コロナウイルス感染症（COVID-19）

濁される 7 ）．唾液は滅菌容器に患者によって自己採取さを指定感染症とした．現在の市中への蔓延化に伴って，れる 7 ）．これらの検体は基本三重梱包を行い，公用車・COVID-19の診断に供する検体数の増加が見込まれる

社用車などの自動車または，世界保健機構（WHO）のが，採材から遺伝子診断までの課程における検体の取り「感染性物質の輸送規制に関するガイダンス」における扱いに関わる感染リスク要因は未だ明らかになっていな

カテゴリー B に分類される臨床検体などの取り扱い可能

い． 臨 床 の 現 場 で は， い か に 安 全 に 感 染 を 広 げ ず にな輸送業者を利用して，輸送される 7 ）．つまり，現在日

SARS-CoV-2を診断するか，その検体の取り扱い手法の本で推奨されているマニュアルにおいて，検体は採材さ確立が急務となっている．

れた後に，検査機関に到着し，ウイルス RNA の抽出がSARS-CoV-2遺伝子検査において，ヒト検体（主に喀

行われるまでは，感染性を有している．感染性を維持し痰や気管吸引液の下気道由来検体，鼻咽頭ぬぐい液，唾

たウイルスの長期間の保存や輸送は時にウイルスの漏出液）の採取は biosafety level（BSL）-1レベルで行われのリスクとなりうる．仮に BSL-2レベル設備を有していているが，採取された検体からの RNA 抽出から遺伝子ない機関においても，検体を採取と同時に確実に不活化検査までの作業は SARS-CoV-2存在の疑い検体は BSL-2

することができれば，後の核酸増幅などの操作も含めレベル，SARS-CoV-2存在の確定検体は BSL-3レベルがて，BSL-1レベルの設備でもウイルス RNA の検出が可求められている 5 ）．RNA ウイルスである SARS-CoV-2の能となると考えられる．

遺伝子診断は検体からの RNA 抽出を行うことが基本で
2）

本研究では，国内で使用されているウイルス RNA 抽

ある ．このウイルス RNA 抽出の過程において，ウイ

出キットおよび SARS-CoV-2遺伝子検出キットのサンプ

ルスの溶解が必要であるため，基本的に RNA 抽出液はル 処 理 試 薬， ウ イ ル ス 輸 送 液 で あ る Universal

ウイルスが不活性化された状態となる．ウイルス検査のTransport Medium の SARS-CoV-2の不活化能を明らか運用においては，ウイルスが不活性化された検体の取りにした．

扱いは BSL-2レベルを必要としないと定義されているた

材料と方法

め，RNA 抽 出 後 の real-time reverse transcription
polymerase chain reaction（RT-PCR）等を用いた核酸（ 1 ） 細胞およびウイルス

増幅法によるウイルス遺伝子検査自体は，BSL-1レベル

SARS-CoV-2（SARS-CoV-2/JPN/TY/WK-521 株）3 ）での実施が可能である 5 ）．そこで，一般的に検体採取後は国立感染症研究所より分与していただいた．Veroにできるだけ早期の段階でウイルス不活性化が担保され

E6/TMPRSS2細胞 3 ） は10％ 牛胎児血清（FBS），ペニ

ることが重要である 1 ）．しかし，実際には SARS-CoV-2

シ リ ン， ス ト レ プ ト マ イ シ ン お よ び L- グ ル タ ミ ンと同様に RNA ウイルスであるエボラウイルスは SARS-（PSG）および 2 ％ G418添加 Dullbecco’s Modified Eagle

CoV-2の RNA 抽出に使われている QiaAmp viral RNA

Medium（DMEM）にて培養した．ウイルスの不活化試

mini kit（QIAGEN）のサンプル処理試薬だけでは不活験 に は， 2 ％ FBS お よ び 1 ％ PSG 添 加 DMEM 中 の化されないという報告がある 4 ）．事実，RNA 抽出キッVero E6/TMPRSS2細 胞 に SARS-CoV-2を0.001 50％

トによって，SARS-CoV-2が本当に不活化されるどうか

Tissue Culture Infectious Dose（TCID50） の 力 価 で 感は検証されていない．

染させ， 2 日後に培養上清として，回収したものを使用

最近，検体中のウイルスから RNA を溶出したのちした．

に，RNA の抽出・精製過程を省き，直接 SARS-CoV-2の遺伝子検査を行うキットも販売されている．これらの（ 2 ） 各試薬のウイルスの不活化能の測定キットを使用することで，より短時間かつ簡便に SARS-

試験に供した試薬は表 1 のとおりである．ウイルス

CoV-2の遺伝子診断が可能であるが，ウイルスの不活化RNA 抽出キットである Smart Extract（株式会社ダナの過程が含まれていないために検体の取り扱いについてフ ォ ー ム ） の SSB，QIAamp Viral RNA mini kit

は，RNA 抽出と同様の設備が必要である．従って，可（QIAGEN） の Buffer AVL，Quick-RNA Viral kit

松浦ら：新型コロナウイルスの不活化効果

197

表 1 ．試験に用いた試薬
本試験に用いた
試薬名

キット名

製造会社

URL
https://www.dnaform.jp/ja/information/％e7％a0％94％e7％a9％
b6％e7％94％a8％e8％a9％a6％e8％96％ac％e3％80％8c％e3％82％
a6％e3％82％a4％e3％83％ab％e3％82％b9％e6％a4％9c％e4％bd％
93％e6％8e％a1％e5％8f％96％e5％be％8c％e5％87％a6％e7％90％
86％e6％b6％b2％e3％80％8d％e3％81％ae％e7％99％ba％e5％a3％
b2/

SSB

SMART Extract

株式会社
ダナフォームBuffer AVL

Viral RNA mini kit

QIAGENhttps://www.qiagen.com/jp/shop/pcr/qiaamp-viral-rna-miniqiacube-kit/#resources

Viral RNA Buffer

Quick-RNA Viral Kit

Zymo
Researchhttps://www.zymoresearch.com/collections/quick-rna-viral-kits/
products/quick-rna-viral-kit#components

Lysis Buffer ＋Proteinase K
solution

Maxwell Ⓡ RSC Viral
Total Nucleic Acid
Purification Kit

Promegahttps://www.promega.jp/products/nucleic-acid-extraction/
viral-rna-extraction-viral-dna-extraction/maxwell-rsc-viral-totalnucleic-acid-purification-kit/?catNum=AS1330#specifications

DSR

Direct-SmartAmp 法

株式会社
ダナフォームhttps://www.dnaform.jp/ja/information/%e3%83%80%e3%82%a4%
e3%83%ac%e3%82%af%e3%83%88%e6%96%b9%e5%bc%8f%e3%81%ab%e5%af%be%e5%bf%9c%e3%81%97%e3%81%9f%e6%96%b0%e5%9e%8b%e3%82%b3%e3%83%ad%e3%83%8a%e3%82%a6%e3%82%a4%e3%83%ab%e3%82%b9%e5%89%8d/

Sample Treatment
Reagent

2019新型コロナウイ
ルス検出試薬キット

株式会社
島津製作所

https://www.an.shimadzu.co.jp/bio/reagents/covid-19/index.htm

前処理液

新型コロナウイルス
検出キット

東洋紡
株式会社

https://lifescience.toyobo.co.jp/detail/detail.php?product_detail_id=265

SolutionA

新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）
検出キット

タカラバイオ
株式会社

サンプル
輸送用
試薬

Universal
Transport
Medium─

Copan

https://www.copanusa.com/sample-collection-transportprocessing/utm-viral-transport/

陰性対照

リン酸緩衝液─

ニッスイ

https://www.nissui-pharm.co.jp/pdf/products/059/05908.pdf

ウイルス RNA
抽出キット

SARS-CoV-2
遺伝子
検出キット

https://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.
php?unitid=U100009449（Zymo Research） の Viral RNA Buffer，Maxwell Ⓡ

TCID50/mL）を加え，指で10度揉み，懸濁し， 1 ， 5

RSC Viral Total Nucleic Acid Purification Kit

および10分間室温で静置した．その後，50 µL の懸濁液

（Promega）の Lysis buffer と Proteinase K solution の混を，0.5％ウシ血清アルブミン添加 PBS で 1 時間平衡化

合液を SARS-CoV-2に対する不活化能を測定するためにした MicroSpin G-25 column（GE Healthcare）に加え，用いた．加えて，RNA 精製工程を省略し，直接試薬を750×g で 2 分間遠心した．濾液を再度 MicroSpin G-25

混 ぜ る だ け で SARS-CoV- 2 の 遺 伝 子 診 断 が 可 能 なcolumn に添加し，750×g で 2 分間遠心後，濾液を450

SARS-CoV-2遺伝子検出キットである Direct-SmartAmpµL の PBS で10倍希釈した．その後，ウイルス力価の測（株式会社ダナフォーム）の DSR，2019新型コロナウイ

定を行った．

ルス検出試薬キット（株式会社島津製作所）の Sample
Treatment Reagent，新型コロナウイルス検出キット（ 3 ） ウイルス力価の測定（東洋紡株式会社）の前処理液，新型コロナウイルス

SARS-CoV-2の力価の測定は TCID50法を用いて行っ（SARS-CoV-2）検出キット（タカラバイオ株式会社）のた．ウイルス感染の24時間前に100 µL の2.0×105個 /mL

Solution A を SARS-CoV-2に対する不活化能を測定するの Vero E6/TMPRSS2細胞を96穴プレートに播種した．

た め に 用 い た． さ ら に， ウ イ ル ス 輸 送 試 薬 で あ る

力価を測定するウイルスサンプルを 1 倍から107倍まで

Universal Transport Medium（Copan）を SARS-CoV-2

10倍段階希釈し，培養上清を除いた Vero E6/TMPRSS2に対する不活化能を測定するために用いた．また，陰性細胞に100 µl のウイルス液を添加した．37℃， 5 ％CO2

対照として，PBS を用いた．

環境下で 1 時間，静置したのちに，ウイルス液を取り除滅菌済みのフィンガーマッシャー（ザルスタット株式

き，100 µL の10％ FBS 含有 DMEM を加え， 3 日間培会社）中の200 µL の試験試薬に，20 µL の SARS-CoV-2

養し，顕微鏡下で細胞変性効果を観察し，ウイルスの感（ウイルス力価：1.78×106 TCID50/mL あるいは3.16×107

染性を判定した．

第46巻第 4 号（2021）

a

各試薬の 1 分間の処理による SARS-CoV-2の感染性の間 の 処 理 に よ る SARS-CoV-2の 感 染 性 の 減 少 率 ）（％）

ゲルろ過後も細胞毒性を確認の PBS 処理後の感染性））× 100＝（各試薬の 1 分

104

ゲルろ過後も細胞毒性を確認（ 1 −（ 1 分間の試薬処理後の感染性）÷（ 1 分間

Titer (TCID50/ml)

減少率は以下の計算式で，算出した．

105

1min
5min
10min

（ 4 ） SARS-CoV-2の感染性の減少率の算出

(-)

(-)

SSB

Buﬀer
AVL

Viral
RNA
buﬀer

1min
5min
10min

家畜衛生学雑誌

198

(-)

103
102
10

試薬の 1 分間の処理による SARS-CoV-2の感染性の減少率「以上」の不活化能を有すると判定した．

PBSb

Smart Extract の SSB，QIAamp Viral RNA mini kit の

102
10
(-)

Buffer AVL，Quick-RNA Viral kit の Viral RNA
Buffer，Maxwell Ⓡ RSC Viral Total Nucleic Acid

SSB

Viral
RNA
buﬀer

PBS

(-)

(-)

(-)

SSB

Lysis buﬀer+
Proteinase K
Solution

Purification Kit の Lysis buffer と Proteinase K solution
×106 TCID50/mL）を添加した．また，陰性対照として，PBS を用いた． 1 分後， 5 分後，10分後に試薬の成分 を 除 去 す る た め に，MicroSpin G-25 column を 用 いて， 2 度濾過した．これらのサンプルの力価を測定した
ところ，Smart Extract の SSB あるいは Buffer AVL で
1 分間， 5 分間，10分間処理したサンプルのいずれにおいても，感染性が認められず，力価は検出限界である
1.0 TCID50/mL 以 下 で あ っ た（ 図1a）
． 一 方 で，Viral
RNA buffer および Lysis Buffer と Proteinase K solutionで処理したサンプルは，カラム濾過後にも細胞毒性が確認されたため，本実験では感染性を測定ができなかった（図1a）．陰性対照である PBS で処理し， 1 分後にカラ4

ム濾過をしたサンプルの力価は，1.0×10 TCID50/mL であった（図1a）．このことから， 1 分間の SSB あるいはBuffer AVL による処理で99.99％以上の SARS-CoV-2の不活化が可能であることが分かった．
カラム濾過後にも細胞毒性の残った Viral RNA buffer
および Lysis Buffer と Proteinase K solution の混合液については，より正確に不活化能を測定するために，より高力価の SARS-CoV-2を用いて，再試験を行った．20µL の SARS-CoV-2（ ウ イ ル ス 力 価：3.16×107 TCID50/mL）を200 µL の Viral RNA buffer および Lysis Bufferと Proteinase K solution の混合液に添加し， 1 分後， 5
分後，10分後に 2 度濾過した．これらのサンプルの力価c105
Titer (TCID50/ml)の混合液に20 µL の SARS-CoV-2（ウイルス力価：1.78

(-)

104
103
102

1min
5min
10min

SARS-CoV-2の不活化能を確かめるために，200 µL の

103

1min
5min
10min

ウ イ ル ス RNA 抽 出 キ ッ ト の サ ン プ ル 処 理 試 薬 の

104

1min
5min
10min

SARS-CoV-2の不活化能

1min
5min
10min

（ 1 ） ウ イルス RNA 抽出キットのサンプル処理試薬の

105

1min
5min
10min

果

Titer (TCID50/ml)

結

Lysis buﬀer+
Proteinase K
solution

(-)

1min
5min
10min

1min
5min
10min

以下に達していた場合には，上記の計算で産出された各

(-)

1min
5min
10min

(-)

1min
5min
10min

1

各試薬の 1 分間の処理によって，感染性が検出限界値

PBS

図 1 ．ウイルス RNA 抽出キットのサンプル処理試薬のSARS-CoV-2の不活化能の測定．
200 µL の Smart extract の SSB，QIAamp Viral RNA mini kit のBuffer AVL，Quick-RNA Viral kit の Viral RNA Buffer，MaxwellⓇ
RSC Viral Total Nucleic Acid Purification Kit の Lysis buffer とProteinase K solution の混合液に20 µL の SARS-CoV-2（ウイルス
力価：1.78×106 TCID50/mL）を添加し， 1 分後， 5 分後，10分後に，MicroSpin G-25 column を用いて， 2 度濾過し，TCID50法で力価を測定した（a）．カラム濾過後にも細胞毒性の残った Viral
RNA Buffer（b）および Lysis Buffer と ProteinaseK solution の混合液（c）については，より正確に不活化能を測定するために，より高力価の SARS-CoV-2（ウイルス力価：3.16×107 TCID50/mL）を用いて，試験を行った．また，陰性対照として PBS を用いた．
棒グラフは力価の平均値と標準偏差を示している．（−）はカラム
濾過なしを示している．

松浦ら：新型コロナウイルスの不活化効果

199

を TCID50法によって測定した（図1b，c）．Viral RNAを行ったサンプルとカラム濾過を行わなかったサンプル

buffer で処理したサンプルは 1 倍希釈では細胞毒性が確

間に，大きな感染性の減少は認められないことから，各認されたが，10倍希釈することで細胞毒性が認められな

試 薬 の 処 理 に よ る 感 染 性 の 減 少 は 試 薬 に よ る SARS-

くなった．そのため，検出限界10 TCID50/mL での力価

CoV-2の不活化であると考えられる．

の検出が可能であった．また，10倍希釈したサンプルを加えた細胞において，SARS-CoV-2による細胞変性は確認されなかった．このことから，Viral RNA buffer で処（2） S ARS-CoV-2遺伝子検出キットのサンプル処理試
薬の不活化能理したサンプルの力価は検出限界である10 TCID50/mL

SARS-CoV-2遺伝子検出キットのサンプル処理試薬の以下であった（図1b）．一方，Lysis Buffer と Proteinase

SARS-CoV-2の不活化能を確かめるために，200 µL の

K solution の混合液で処理したサンプルは 1 倍希釈，10

Direct-SmartAmp の DSR，2019新型コロナウイルス検

倍希釈では細胞毒性が確認されたが，100倍希釈するこ

出試薬キットの Sample Treatment Reagent，新型コロとで細胞毒性がみられなくなった．そのため，検出限界

ナウイルス検出キットの前処理液，新型コロナウイルス

100 TCID50/mL での力価の検出が可能であった．また，（SARS-CoV-2） 検 出 キ ッ ト の Solution A に20 µL の100倍希釈したサンプルを加えた細胞において，SARS-SARS-CoV-2（ウイルス力価：1.78×106 TCID50/mL）を

CoV-2による細胞変性は確認されなかった．このことか添加した．また，陰性対照として，PBS を用いた． 1 分

ら，Lysis Buffer と Proteinase K solution の混合液で処後， 5 分後，10分後に試薬の成分を除去するために，理したサンプルの力価は検出限界である100 TCID50/mL

MicroSpin G-25 column を用いて， 2 度濾過した．これ以下であった（図1c）．陰性対照である PBS で処理し，らのサンプルの力価を測定したところ，DSR あるいは

1 分後にカラム濾過をしたサンプルの力価は，1.0×104

前処理液で処理し， 1 分後， 5 分後，10分後にカラム濾

TCID50/mL であった．

過したサンプルでは，感染性が認められず，力価は検出

このことから， 1 分間の Viral RNA buffer による処理限界である1.0 TCID50/mL 以下であった（図2a）．一方で99.9％ 以 上 の SARS-CoV-2の 不 活 化 が 可 能 で あ る こ

で，Sample treatment reagent で処理したサンプルは 1と， 1 分間の Lysis Buffer と Proteinase K solution の混

分間の処理で1.0×103 TCID50/mL， 5 分間の処理で4.6合液による処理で99％以上の SARS-CoV-2の不活化が可×102 TCID50/mL，10分間の処理で4.6×10 TCID50/mL

能であることが明らかになった．

と時間依存的に感染性が減少したが，SARS-CoV-2は完

また，PBS で処理したサンプルにおいて，カラム濾過a

全には不活化されなかった（図2a）．また，Solution Ab
Titer (TCID50/ml)

105

10

Sample 前処理液
treatment
reagent

Solution A

(-)

102
1min
5min
10min

DSR

(-)

1min
5min
10min

(-)

1min
5min
10min

(-)

1min
5min
10min

(-)

1min
5min
10min

1

103

PBS

(-)

(-)

DSR

Solution A

(-)

1min
5min
10min

102

104

1min
5min
10min

103

1min
5min
10min

104

ゲルろ過後も細胞毒性を確認

Titer (TCID50/ml)

105

PBS

図 2 ．ウイルス RNA 抽出キットのサンプル処理試薬の SARS-CoV-2の不活化能の測定．
20 µL の SARS-CoV-2（ウイルス力価：1.78×106 TCID50/mL）を200 µL の Direct-SmartAmp の DSR，2019新型コロナウイルス検出試薬キッ
トの Sample Treatment Reagent，新型コロナウイルス検出キットの前処理液，新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）検出キットのSolution A に混合し， 1 分後， 5 分後，10分後に，MicroSpin G-25 column を用いて， 2 度濾過し，TCID50法で力価を測定した（a）．カ
ラム濾過後にも細胞毒性の残った Solution A については，より正確に不活化能を測定するために，より高力価の SARS-CoV-2（ウイルス
力価：3.16×107 TCID50/mL）を用いて，試験を行った（b）．また，陰性対照として PBS を用いた．棒グラフは力価の平均値と標準偏差を示している．（−）はカラム濾過なしを示している．

ム濾過をしたサンプルの力価は，2.2×103 TCID50/mL であった（図2a）．
この結果から， 1 分間の Direct-SmartAmp の DSR あ
るいは新型コロナウイルス検出キットの前処理液による処理で99.9％以上の SARS-CoV-2の不活化が可能であっ

103
102
10
1

(-)

(-)

SSB

Universal
Transport
Medium

たが， 1 分間の Sample Treatment Reagent による処理では53.6％の不活化であることが明らかになった．
カラム濾過後にも細胞毒性の残った Solution A については，より正確に不活化能を測定するために，より高力
価の SARS-CoV-2を用いて，再試験を行った．20 µL の
7

SARS-CoV-2（ウイルス力価：3.16×10 TCID50/mL）を
200 µL の Solution A に添加し， 1 分後， 5 分後，10分
後に 2 度濾過した．これらのサンプルの力価を TCID50法によって，測定した．Solution A で処理したサンプル

(-)

1min
5min
10min

（図2a）．陰性対照である PBS で処理し， 1 分後にカラ

1min
5min
10min

認されたため，本実験で感染性は測定できなかった．

105
104

1min
5min
10min

で処理したサンプルは，カラム濾過後にも細胞毒性が確

第46巻第 4 号（2021）

Titer (TCID50/ml)

家畜衛生学雑誌

200

PBS

図 3 ．ウイルス輸送用試薬である Universal Transport
Medium の SARS-CoV-2の不活化能の測定．
20 µL の SARS-CoV- 2 （ウイルス力価：1.78×106 TCID50/mL）を
200 µL の Universal Transport Medium に混合し， 1 分後， 5 分
後，10分後に，MicroSpin G-25 column を用いて， 2 度濾過し，TCID50法で力価を測定した．また，陽性対象として SSB を，陰性対照として PBS を用いた．棒グラフは力価の平均値と標準偏差を示している．（−）はカラム濾過なしを示している．

は 1 倍希釈，10倍希釈では細胞毒性が確認されたが，100倍希釈することで細胞毒性がみられなくなった．そのため，検出限界100 TCID50/mL での力価の検出が可能であった．また，100倍希釈したサンプルを加えた細胞において，SARS-CoV-2による細胞変性は確認されなか っ た． こ の こ と か ら，Lysis Buffer と Proteinase K
solution の混合液で処理したサンプルの力価は検出限界である100 TCID50/mL 以下であった（図2b）．陰性対照である PBS で処理し， 1 分後にカラム濾過をしたサン
4

プルの力価は，1.0×10 TCID50/mL であった．この結果

た． こ れ ら の サ ン プ ル の 力 価 を 測 定 し た と こ ろ，
Universal Transport Medium を 1 分 間， 5 分 間，10分
間処理し，カラム濾過をしたサンプルにおいて，感染性の減少が認められなかった（図 3 ）．
このことから，ウイルス輸送用試薬である Universal
Transport Medium の SARS-CoV-2に対する不活化能を有さないことが明らかになった．

考から，新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）検出キットの Solution A による 1 分間の処理で99％以上の SARSCoV-2の不活化が可能であることが明らかになった．
また，PBS で処理したサンプルにおいて，カラム濾過を行ったサンプルとカラム濾過を行わなかったサンプル
間に，大きな感染性の減少は認められないことから，各
試 薬 の 処 理 に よ る 感 染 性 の 減 少 は 試 薬 に よ る SARSCoV-2の不活化であると考えられる．
（ 3 ） Universal Transport Medium の SARS-CoV-2の不活化能
ウ イ ル ス 輸 送 用 試 薬 で あ る Universal Transport
Medium の SARS-CoV-2に対する不活化能を測定するため に，20 µl の SARS-CoV-2（ ウ イ ル ス 力 価：1.78×106
TCID50/mL）を200 µL の Universal Transport Mediumに混合した．また，陽性対象として SSB を，陰性対照として PBS を用いた．混合後， 1 分後， 5 分後，10分
後に Universal Transport Medium の成分を除去するた
め に，MicroSpin G-25 column を 用 い て， 2 度 濾 過 し察

本研究ではウイルス RNA 抽出キットおよび SARSCoV-2遺伝子検出キットのサンプル処理試薬，ウイルス
輸 送 液 で あ る Universal Transport Medium の SARSCoV-2の不活化能について検証し（表 2 ）， 3 つの主要な成果が得られた．
第一に日本国内で使用されているウイルス RNA 抽出
キ ッ ト の サ ン プ ル 処 理 試 薬，Smart Extract の SSB，
QIAamp Viral RNA mini kit の Buffer AVL，QuickRNA Viral kit の Viral RNA Buffer お よ び Maxwell Ⓡ
RSC Viral Total Nucleic Acid Purification Kit の Lysis
buffer と Proteinase K solution の 混 合 液 は 全 て SARSCoV-2に対する不活化能を有し， 1 分間の処理で99％以上の SARS-CoV-2を不活化することが明らかになった．
各キットのサンプル処理試薬は，検体をはじめに処理する試薬であることから，本結果は検体からのウイルス
RNA 抽出の際に，速やかにウイルスが不活化されることを示している．第二に SARS-CoV-2遺伝子検出キットのサンプル処理試薬である Direct-SmartAmp の DSR，

松浦ら：新型コロナウイルスの不活化効果

201

表 2 ．各試薬の SARS-CoV-2に対する不活化能のまとめ

ウイルス RNA 抽出キット

SARS-CoV-2遺伝子検出キット
サンプル輸送用試薬

本試験を用いた試薬名

感染性の減少（ 1 分後）

SSB

99.99％以上

Buffer AVL

99.99％以上

Viral RNA Buffer

99.9％以上

Lysis Buffer ＋ Proteinase K solution

99％以上

DSR

99.9％以上

Sample Treatment Reagent

53.60％

前処理液

99.9％以上

SolutionA

99％以上

Universal Transport Mediumなし

図 4 ．SMART Extract の唾液サンプルの採材法．
SMART Extract に付属するスワブを被検者自身が口腔内に入れて，30秒以上唾液をスワブに含浸させる．その後，スワブをフィンガーマッシャー中の SSB に浸し，懸濁する．懸濁後に速やかに唾液中の SARS-CoV-2は不活化されると考えられる．

新型コロナウイルス検出キットの前処理液，新型コロナ

が SARS-CoV-2の不活化能を有さないことを明らかにしウ イ ル ス（SARS-CoV-2） 検 出 キ ッ ト の Solution A がた．Universal Transport Medium はウイルスや微生物

SARS-CoV-2に 対 す る 不 活 化 能 を 有 し， 1 分 間 の 処 理の 輸 送， 維 持， 長 期 保 存 を 行 う た め の 試 薬 で あ り，で，99％以上の SARS-CoV-2を不活化することを明らか

SARS-CoV-2の不活化能がないことは，ウイルスの感染とした．一方で，2019新型コロナウイルス検出試薬キッ性を保ったまま，BSL-2や BSL-3を有する研究施設に輸トの Sample Treatment Reagent は時間依存的に SARS-

送することで，ウイルスの単離や性質の調査が可能とな

CoV-2を不活化したが，他の試薬と比較した際にはそのるため，非常に重要な性質である．国立感染症研究所も不活化能は弱く，10分間の処理でも，完全には SARS-

Universal Transport Medium や Universal Transfer

CoV-2を不活化することができなかった．本研究で用い

Medium や Viral Transport Medium で輸送することをた SARS-CoV-2遺伝子検出キットは全てサンプル処理試

推奨している 7 ）．しかし，ウイルスから RNA の抽出が薬との混合後， 5 分間の加熱処理を必要とし，ウイルス行われていない場合には基本三重梱包を行い，公用車・もその過程で不活化されると考えられる．しかし，本研

社用車などの自動車または，WHO の「感染性物質の輸究の結果から試薬との混合だけでは，ウイルスが完全に送規制に関するガイダンス」におけるカテゴリー B に分は不活化されない試薬もあることから，検体の取り扱い類される臨床検体などの取り扱い可能な輸送業者を利用は慎重に行う必要がある．また，採材した検体を直接試した輸送が必須である．このように厳重に輸送をするた薬で処理し，不活化することで，BSL-2設備がない施設

め，漏出のリスクはきわめて低いと考えられるが，ウイにおいても，速やかに SARS-CoV-2の診断が可能となる

ルスの遺伝子診断のみを行う際には，ウイルスを不活化ことが考えられるが，サンプル処理試薬の不活化能が弱してから運ぶことにより，さらに感染リスクを低減する

い場合にはそのような適応は難しいと考えられる．第三ことができると考えられる．

にウイルス輸送液である Universal Transport Medium

本研究で試験した試薬のうち，特に Smart Extract の202

家畜衛生学雑誌

第46巻第 4 号（2021）

SSB および Direct-SmartAmp の DSR は鼻咽頭ぬぐい液

成30年度採択事業，神奈川県および地方独立行政法人神あるいは唾液をスワブで採材したのちに，直接スワブを

奈川県立産業技術総合研究所（KISTEC）による神奈川

SSB に浸し，ウイルスを溶出することが想定されている

発「ヘルスケア・ニューフロンティア」先導プロジェク（図 4 ）．本研究結果から，スワブで採材された検体中のトからのご支援を頂きましたこと，深く感謝いたしま

ウイルスは採材後に SSB および DSR によって速やかにす．

不活化されると考えられる．これは SARS-CoV-2の漏出引や検体からの感染のリスクを非常に低減するだけでな

用

文

献

く，BSL-2設備を持たない施設においても，採材後速や電子ジャーナル

かにウイルス RNA の抽出及び検出が行える可能性を示

1 ）van Bockel D., Munier CML., Turville S., et.   al.  

唆 し て い る． 同 様 に QIAamp Viral RNA mini kit の(2020) Evaluation of Commercially Available Viral

Buffer AVL は，検体との混合後，10分以上のインキュTransport Medium (VTM) for SARS-CoV-2

ベートがマニュアル中で推奨されていないが，注釈としInactivation and Use in Point-of-Care (POC)て，10分 以 上 の イ ン キ ュ ベ ー ト を し て も， ウ イ ル ス

Testing.  Viruses.  12:1208.  doi:10.3390/v12111208.  

RNA の品質に影響しないことが明記されている．この2 ）Corman VM., Landt O., Kaiser M., et.   al.   (2020)

ため，採材した検体を速やかに Buffer AVL で処理する

Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV)

ことで，ウイルスを不活化した状態で輸送・保存が可能

by real-time RT-PCR.   Euro Surveill.   25:2000045.  

であるかもしれない．一方で，現行の唾液の採取は，主doi: 10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045.  

に患者によって滅菌チューブの中に 1 -2 mL 程度の自己3 ）Matsuyama S., Nao N., Shirato K., et.   al.   (2020)採取とされている 7 ）．採取された検体は，その後 BSL2

Enhanced isolation of SARS-CoV-2 by TMPRSS2-

設備へと輸送され，診断に用いられるが，それまでのexpressing cells.   Proc Natl Acad Sci U S A.  

間，検体中のウイルスは感染性を維持しているものと考

117:7001-7003.  doi: 10.1073/pnas.2002589117.  

えられ，ウイルスの漏出のリスクを有すると考えられる．

4 ）Smither SJ, Weller SA, Phelps A, et.   al.   (2015)

本研究において，2019新型コロナウイルス検出試薬

Buffer AVL Alone Does Not Inactivate Ebola

キットの Sample Treatment Reagent は他の試薬と比較

Virus in a Representative Clinical Sample Type.  J

して，不活化能が弱いことが示された．本研究で使用しClin Microbiol.   53:3148-54.   DOI: 10.1128/

た試薬の組成は完全には公開をされていないため，推測

JCM.01449-15.  

の域を出ないが，このような不活化能の違いは試薬の組成を反映しているものと考えられる．試薬の成分が完全

インターネットには公開されていない現状においては，各キットの試薬5 ）厚生労働省：新型コロナウイルス感染症に係る病原が不活化能を有するかは本研究のような試験が必要であ

体核酸検査のみを行うために臨時的に開設した衛生ると考えられる．一方で，本研究成果は全ての試薬につ検査所における感染管理や精度管理等について

いて，推奨されているプロトコールとは異なる一定の液［Internet］.2020 Mar.

量で，培養ウイルス液と混合して，行われたものである［cited 2021 Jan. 27］; Available from:

ため，実際の検体を処理した際に，本研究と全く同じ不https://www.pref.ehime.jp/h25500/kansen/

活化能を示さない可能性は存在する．しかし，本研究に

documents/eiseikensajo-kanri.pdf.  

おいて得られた各キットのサンプル処理試薬の不活化能

6 ）厚生労働省：新型コロナウイルス感染症の現在の状の有無の知見は，今後医療従事者が遺伝子診断をするに

況と厚生労働省の対応について（令和 3 年 1 月27日

あたり，どのキットをどのように使用することで感染防版）

御ができるかを示すきわめて重要なものである．また，［Internet］．2021 Jan.

本研究成果は，BSL-2や BSL-3設備のない施設において［cited 2021 Jan.  27］; Available from:

も，採取された検体をその場で不活化し，診断すること

https://www.mhlw.go.jp/stf/newpage_16375.html

で，より速やかな遺伝子診断ができる可能性を提言しう

7 ）国立感染症研究所：2019-nCoV（新型コロナウイル

る成果である．

ス）感染を疑う患者の検体採取・輸送マニュアル（2020年 7 月17日更新版）

本評価研究の遂行にあたり，文部科学省「地域イノベーション・エコシステム形成プログラム」における平［Internet］.  2020 Jun.
［cited 2021 Jan.  27］: Available from:松浦ら：新型コロナウイルスの不活化効果

203

https://www.niid.go.jp/niid/images/pathol/

確になっていない．本研究では，国内で使用されている

pdf/2019-nCoV_200717.pdf

ウイルス RNA 抽出キットのうち，研究に使用した 4 種8 ）World Health Organization:Novel coronavirus

中 4 種のサンプル処理試薬および SARS-CoV-2遺伝子検(2019-nCoV) situation report-1

出キットのうち，研究に使用した 4 種中 3 種のサンプル[Internet].  2020 Jan 21

処理試薬が 1 分以内に SARS-CoV-2を99％以上不活化す[cited 2020 Mar.  10] ; Available from :ることを明らかとした．一方で，ウイルス輸送液である

https://www.who.int/docs/default-source/

Universal Transport Medium は SARS-CoV-2を 不 活 化

coronaviruse/situation-reports/20200121-sitrep-1-

しないことが確認された．本成果は，ウイルス RNA 抽

2019-ncov.pdf.  

出キットおよび SARS-CoV-2遺伝子検出キットを使用す

要旨るにあたり，どの過程において，SARS-CoV-2が不活化されるかの知見を与え，より安全にウイルス感染の診断

新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）の遺伝子検査にが可能となる．また，BSL-2や BSL-3設備のない施設に供する検体の取り扱いは，SARS-CoV-2存在の疑い検体

おいても，採取された検体をその場で不活化し，診断すは biosafety level（BSL）-2レベル，SARS-CoV-2存在のることで，より速やかな遺伝子診断ができる可能性を提確定検体は BSL-3レベルが求められているため，時に検言しうる成果である．

体を採材した施設から検査施設への輸送が必要となる．
一方，SARS-CoV-2が不活化された検体の取り扱いは

キ ー ワ ー ド：COVID-19，SARS-CoV-2不 活 化，SARS-

BSL-1レベルとなる．しかし，感染性を維持したウイル

CoV-2遺 伝 子 検 出 キ ッ ト 試 薬， ウ イ ル ス RNA 抽 出 試スの長期間の保存や輸送は時にウイルスの漏出のリスク

薬，Universal Transport Mediumとなりうるが，SARS-CoV-2が不活化されているかは明

205

技術資料

2019年に埼玉県で発生した豚熱（CSF）の概要と防疫対応
伊藤麗子 1 ）・留場寛子 2 ）・椚

友香 2 ）＃・田代卓也 3 ）・成田沙織 3 ）・福田昌治 4 ）＊An outbreak of classical swine fever (CSF) and epidemic prevention measures in
Saitama Prefecture, 2019
Reiko Ito 1）, Hiroko Tomeba 2）, Yuka Kunugi 2）＃ , Takuya Tashiro 3）, Saori Narita 3）,
Masaharu Fukuda 4）＊（1）Livestock Safety Division, Department of Agriculture and Forestry, Saitama Prefectural Government,
3-15-1 Takasago, Saitama-shi, Saitama 330-9301, Japan
2）

Saitama Prefectural Kumagaya Livestock Hygiene Service Center,
1-8-30 Enko, Kumagaya-shi, Saitama 360-0813, Japan

3）

Saitama Prefectural Kawagoe Livestock Hygiene Service Center,
152 Ishida, Kawagoe-shi, Saitama 350-0837, Japan

4）

Saitama Agricultural Technology Research Center,784 Sugahiro, Kumagaya-shi, Saitama 360-0102, Japan＃

Present address : Repro Co., Ltd.,1472-5 Shimonara, Kumagaya-shi, Saitama 360-0802, Japan＊

Corresponding author : Masaharu Fukuda（fukuda.masaharu@pref.saitama.lg.jp））（2021. 1. 13  受付／2021. 1. 27  受理）  家畜衛生学雑誌

1 ．緒

言46，205〜215（2021）

2 ．発生概要

2018年 9 月 に 岐 阜 県 に お い て 豚 熱（Classical Swine

2019年 9 月13日，埼玉県秩父市の養豚場で国内41例目

Fever : CSF）が発生した．国内では1992年以来，26年となる CSF の発生が確認された．その後，同月17日に振りであり，その後，防疫対策の再徹底などの方策が図2 例目，10月に 3 ， 4 例目，11月 9 日に 5 例目が確認さられたが，愛知県，三重県，福井県と中部地方を中心にれた（図 1 ）．5 例 6 農場はいずれも県北西部に位置し，感染拡大が続いた．この間，野生イノシシでの感染拡大殺処分した豚の頭数は合計7,612頭であった．埼玉県内も確認され，岐阜県での初発からちょうど 1 年になる

では36年振りの発生であり，現役の県職員にとっては未2019年 9 月 に は， 埼 玉 県 で CSF が 発 生 し た． こ れ は経験の CSF 発生となった．特に 3 例目では，台風と重2018年以降，関東における初めての農場発生であり，関なり，防疫対応は困難を極めた． 5 例目は，県内のワク係者に与えた衝撃は大きく，国の CSF 防疫政策がワクチン接種開始に伴い実施したワクチン接種前の清浄性確チン接種へと大きく舵を切る転機となった．本稿では，

認検査において摘発された農場である．清浄性確認検査

今後の初動対応の参考とするため，2019年 9 ～11月に埼は，当該農場が最後であったため，発生農場の防疫措置

玉県で発生した CSF の概要と発生農場における防疫対と他の農場のワクチン初回接種を同時並行で実施するこ応の実際について報告する．

ととなった．さらに， 1 例目発生直後に県内で初めて死

埼玉県農林部畜産安全課〒330−9301 埼玉県さいたま市浦和区高砂 3 −15− 1
2）埼玉県熊谷家畜保健衛生所〒360−0813 埼玉県熊谷市円光 1 − 8 −30
3）埼玉県川越家畜保健衛生所〒350−0837 埼玉県川越市石田152

埼玉県農業技術研究センター〒360−0102 埼玉県熊谷市須賀広784＃
現所属：リプロ㈱〒360−0802 埼玉県熊谷市下奈良1472− 5＊
連絡著者：福田昌治（fukuda.masaharu@pref.saitama.lg.jp）

1）4）家畜衛生学雑誌

206

第46巻第 4 号（2021）

亡野生イノシシでの CSF 感染が確認され，その後，農2,430名）を動員した．他部局からの応援獣医師数は延場発生地域を中心に野生イノシシの CSF 陽性事例が確

べ145名であった．一連の CSF 発生農場における防疫対認された．

応（殺処分，埋却，消毒ポイント，集合施設）の状況と課題について以下に報告する．

3 ．防疫対応
埼玉県内で特定家畜伝染病が発生した場合，「埼玉県（ 1 ） 殺処分

1）

患畜の殺処分等，発生農場の防疫対応は，現地対策本に基づき図 2 に示す体制で防疫措置を行うこととしてい部（図 2 ）のうち，発生農場班が担当した． 5 例の CSF

特定家畜伝染病防疫事務の手引き」（以下，手引き）た．現地作業班の班員は県内 3 カ所の家畜保健衛生所

発生農場において，殺処分にはそれぞれ 1 ～ 4 日を要（以下，家保）及び畜産関係機関の職員（全て家畜防疫

し，防疫措置の完了には 3 ～ 8 日を要した（表 1 ）． 1

員）である．防疫作業従事者（以下，作業員）は広く県

班13～18名の家畜防疫員で作業に従事した． 1 ， 2 例目

職 員 か ら 構 成 さ れ， 延 べ3,196名（ う ち 農 場 内 作 業 員は防疫措置完了まで全員が交代無しで作業し， 3 例目以

図 1 ．発生状況

図 2 ．埼玉県内における特定家畜伝染病発生時の体制

伊藤ら：2019年に埼玉県で発生した CSF の防疫対応

207

路に敷き，シート上に粘稠性のある消毒薬と水を撒き，降は 1 日 3 交代制で作業に従事した．

死体を引き出す際の摩擦を減らす工夫をした．

1 ）概要

2 ）課題

殺処分方法は， 1 例目では育成豚以下の子豚はガス殺処分作業遂行上の課題として以下の 3 点が挙げられ

殺，肥育豚以上の豚は 1 ， 2 頭を豚舎出入口まで追い出た．

して電殺・薬殺を行った．しかし，ガス殺は時間がかかａ）作業マニュアル通りの対応が困難

ること，電殺は追い出しに時間がかるなどの問題が判明

ア．農場の立地や構造の違いしたため，その後の発生では少人数で実施可能な簡易的2 例目では，山間地域に豚舎があり，平坦な場所が少な殺処分法に適宜変更するとともに動線も見直していっなかったため，フレコンの集積場所が豚舎から遠かった． 2 例目では肥育豚は 1 頭ずつ通路に出すのではな

た．また， 3 例目及び 5 例目では，豚舎間の通路幅や農く，豚房内で一気に殺処分した後に引き出す方法にした場の敷地が狭く，重機利用に制限があった．これらの条

ところ，作業時間が短縮された．以後，哺乳豚のみガス

件により，搬出作業に時間を要した．

殺を行い，他の豚は豚房内およびストール内で電殺した

イ．豚舎内の電源や給水設備の不足（図 3 ）．雄豚は， 2 例目ではストール内に追い込んだ

複数の電殺機や夜間の照明に利用できる電気容量，洗後，鎮静剤（マフロパン 1 ％注射液，DS ファーマアニ

浄や消毒に用いる水道の不足などで作業効率が低下し

マルヘルス㈱，大阪）で鎮静し電殺したが，より安全にた．

実施するため， 3 例目以降はストール内に追い込んだ

ウ．自然災害の影響

後，ストール上部に縄をかけ，豚の飛び出しを物理的に封じたうえで電殺を行った．

3 例目では台風19号の関東直撃と重なったため，人命を優先し，発生の 3 日後からの作業開始となったが，豚死体はフレコンバック（以下，フレコン）に詰めた
後，重機で移動させ，埋却地へ搬出されるまで農場内に舎屋根の破損と雨水の浸入により豚房の泥漿化が発生し（図 4 ），殺処分が難航した．

集積した．豚舎内で殺処分した死体は，豚舎外まで人力で引き出す必要があったため，ブルーシートを豚舎の通表 1 ．防疫措置の概要
発生例

発生場所

農場数

殺処分
頭数

殺処分日数
（時間）

防疫措置
日数

1

秩父市

1

924

2 （26）

4

420

19

2

小鹿野町

1

1,307

2 （25.3）

3

550

33

3

神川町・本庄市

22,234

4 （73.5）

8

900

24

4

本庄市

1

994

1 （23）

3

240

15

5

深谷市

1

2,153

2 （48）

7

320

54

合

6

7,612

2,430

145

計

図 3 ．豚房内での殺処分

農場動員
作業員数

応援獣医師数

図 4 ．豚房の泥漿化

発生農場
防疫員
24時間体制（13～18人）
交代制（14人）

家畜衛生学雑誌

208ｂ）資材調達の遅れ

第46巻第 4 号（2021）
る．本県での発生事例における埋却地の立地状況として発生が週末や祝日に重なってしまったため，物資が発次のような問題点があった．

生農場に届くまで時間がかかり，殺処分開始の遅れなど（ 1 ， 4 例目）埋却地に住宅が隣接が見られた．また，事前に準備していた資材リストに記（ 2 ， 3 ， 5 例目）埋却地から200m 以内に住宅載がなかったフレコンなどの資材が届かないトラブルも（ 4 ， 5 例目）水路や国道，高速道路が近接発生した．

埋却処理は，死体を直接埋却溝に投入する方法が一般

ｃ）発生農場での家畜防疫員の不足的であるが，本県の発生例においては，埋却地が農場か発生農場での家畜防疫員は，農場内での殺処分や搬出ら離れた場所にある事例が多かったため，死体はフレコ

導線を把握・共有し，一般作業員や応援獣医師へ指示出ンに梱包して運搬後，埋却溝に投入した．消毒は，フレしに専念することが理想であるが，仮設テントの設営，コンをトラックに積み込む際に 1 つずつ実施し，さらに機材準備等の雑務に追われ，本来の業務に支障が生じ発生農場および埋却地に設置した動力噴霧器で車両全体た．

の消毒を実施した．

また， 3 例目以降，家畜防疫員は 1 日 3 交代のシフト

飼養衛生管理基準 3 ） では，埋却地の広さは肥育豚 1制に変更したが，これにより農場内に常時いる家畜防疫

頭当たりおよそ0.9㎡と想定している．本県の発生にお員が 1 ， 2 例目に比べ極端に少なくなってしまった．さいても，これに基づいて埋却に必要な面積を決定した．

らに，家畜防疫員と応援獣医師のシフトがずれていたた

埋却作業は，以下のような手順で実施した（図 5 ）．

め，情報共有がうまくできず農場内の作業効率が上がら

ａ）掘削

なかった．

ｂ）底面に消石灰を散布

3 ）対応策ｃ）底面および法面をブルーシートで覆うａ）作業マニュアルの作成

ｄ）ブルーシート上に再度消石灰を散布

農場の畜舎構造や配置などに応じて対応できる作業マｅ）死体や汚染物品を詰めたフレコンを投入
ｆ）投入完了後，土を少し埋め戻して平坦にし，消ニュアルを作成する．
ｂ）必要資材リストの作成

石灰を散布

必要な資材を網羅したリストを作成するとともに，備ｇ）法面を覆っていたブルーシートはフレコンを包むように折り返し，消石灰を散布

蓄を充実させることや，民間企業等との資材調達協定を締結することも重要であると考える．特に備蓄に関して
は投光器や動力噴霧器など，発生後すぐに必要になる資材を中心に準備する必要がある．
ｃ）応援獣医師との連携強化ｈ）完全に土を埋め戻して転圧
ｉ）消石灰散布
殺処分した頭数，埋却したフレコンの数，実際に埋却に使用した埋却地の面積，掘削した埋却溝のサイズは，

家畜防疫員と応援獣医師のシフトを調節するなど，応
援獣医師を家畜防疫員と同じ立場で作業ができるように
他部局との連携を図ることが重要である．

表 2 のとおりである．
5 例のうち，指針に定められている72時間以内に埋却を完了したのは 2 例のみで，他の 3 例では，農場内の堆肥や飼料の搬出に時間を要したこと，砂利質土壌のため（ 2 ） 埋却

埋却溝崩落の危険があったこと，埋却地が農場から遠い

死体の埋却作業は，現地対策本部（図 2 ）のうち，処理班が担当する．
「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指ことなどから，作業に時間を要した（図 6 ）．
2 ）課題

針」
（以下，指針） 2 ）には，死体の処理は原則として発埋却地に関する課題は，以下の 3 点に集約された．

生農場の病原体拡散防止措置完了後72時間以内に完了すａ）埋却地と住宅や水路との位置関係や道路状況等の周ることと記載されており，埋却地の選定から埋却完了ま辺環境に関する事前情報の不足

で迅速な対応が求められる．しかし，実際の現場では事発生以前に家保で保有している埋却地に関する情報が例ごとに様々な問題が発生し，それぞれの状況により個限られ，実際に現地確認をした際に明らかになる情報が別に埋却方法を検討する必要があった．

多くあった．

1 ）概要ｂ）湧水，土壌の性質等の影響

埋却地の選定について指針

2）には，「埋却地は人家，

湧水や土壌の性質等により，掘削の際に特別な対応が水源，河川および道路に近接しない場所であって，日必要となる場合があった．これらも実際に現地での掘削

常，人及び豚等が接近しない場所に限る」とされてい作業開始後に判明するケースが多く，その都度柔軟な対伊藤ら：2019年に埼玉県で発生した CSF の防疫対応

図 5 ．埋却方法

表 2 ．埋却状況の詳細
発生例

合

頭

数

フレコン数

面積（a）

埋却溝サイズ（幅×長さ×深さ m）

1

924

899

30

5 ×20× 5 × 2 本
＋県有地

2

1,307

738

20

6 ×30× 5

3

2,234

705

16

6 ×50×4.5＋ 6 ×15×4.5（L 字型）

4

994

374

27

5 ×40× 4

5

2,153

819

23

5 ×50× 4＋ 4 ×15× 4 （L 字型）

7,612

3,535

116

計

図 6 ．埋却処理の経過

209

210

家畜衛生学雑誌

第46巻第 4 号（2021）

応が必要となった．

1 ）概要

ｃ）近隣住民への説明

ａ）消毒ポイント設置状況

本県では農場および埋却地が住宅街に近いケースが多消毒ポイントの設置場所については，市町村との事前

く，防疫措置の開始にあたって近隣住民への説明が必要

調整により選定した候補地を基本とし，特定家畜伝染病であり，時間を要した．

の発生時には道路網の状況，車両の通行量等を考慮してこれらは他の農場において発生した際にも埋却地選定設置場所を決定した．埼玉県では便宜上，消毒ポイントの際に明らかになり得る課題であり，家畜伝染病発生のを表 3 に示すとおり緊急消毒ポイントと通常消毒ポイン

際の円滑な埋却処理の妨げとなる可能性が考えられた．

トの 2 種類に区分した． 5 例の発生に伴い設置した緊急3 ）対応策

消毒ポイント及び通常消毒ポイント計12カ所の位置及びａ）発生経験を活かした農家指導

概要について図 7 および表 4 に示す．

日頃の農家立入の中で，埋却地の土壌の性質や湧水が3 例目では発生農場から直線距離で約6km の距離にあ出る可能性の有無，周辺道路の広さについての聞き取りる関連農場でも発生農場と同様の防疫措置を実施したたおよび現地確認を行っておくことが必要である．また，め，それぞれの農場から1km 付近に計 2 カ所の緊急消毒

発生に備え埋却地への進入路を広く確保し，木などの障ポイント（⑥⑦）を設置した．また，一連の発生では，害物を除去しておく指導も必要である．

近距離に所在する農場で相次いで発生したため，続発すｂ）不測の事態への対応方法についての事前の検討

る発生農場で継続使用した箇所が多かった（②～④，⑥

湧水や土壌の性質等に関しては実際に掘削するまで不明なことが多いため，事前にあらゆる事案を想定し，ど⑧⑨）．
ｂ）消毒実績

のような対応ができるかを演習する．本県での発生経験

2 ～ 4 例目の緊急消毒ポイント（⑤⑥）は，防疫作業や他県の発生事例からの情報を収集し，起こり得る様々

従事者の集合施設を兼ねており，関係車両を消毒する頻な問題を想定しておくことで，発生の際の想定外の事態度が高かったため，消毒台数が多かった．

にも柔軟に対応することができるようになると考えられ

通常消毒ポイントでは，畜産農家の比較的多い県北地

た．

域に向かう関係車両の通行が多い箇所（②）や，付近にｃ）市町村との協力体制の強化

と畜場が存在する箇所（⑧）の消毒台数が多かった．消近隣住民への説明は，資料を作成し地域で回覧板を回

毒実施時間帯の調査では，②において稼働開始時刻の午

す，住民を集めて説明会を開催するなど，様々な方法が前 9 時前にも消毒の記録があり，⑧でも午前 7 ～ 9 時が考えられる．発生後の住民対応の方法を事前に市町村と19％と割合が高く，比較的早い時間帯にも需要があるこ

協議し，役割分担を整理しておくことで，発生の際の住とが示唆された．また，消毒車両の職種別割合は，②に民対応をより円滑に行うことができると考えられた．

おいては飼料運搬会社35％，農協15％，家畜商13％と続き，家畜診療獣医師（ 3 ％）や養豚農家（ 1 ％）も含ま（ 3 ） 消毒ポイント
現地対策本部（図 2 ）のうち，移動規制班は，消毒ポれていた．⑧では，飼料運搬会社が60％を占めた他，付近にと畜場が存在するため，養豚農家が23％（31台）とイントの設置および発生農場における防疫措置を円滑に比率が高く，うち 4 台は県外農家であった．

進めるための通行制限を担当した．消毒ポイントでは，

2 ）課題

車両外部の消毒，ハンドルやペダルなどの運転席内部のａ）敷地の広さ

消毒，運転手等の手指及び靴底消毒を実施し，消毒作業

消毒ポイント（⑪）は，敷地が狭く，大型車両が進入終了後，運転手に消毒日時，積荷，発着地等を記録さできなかったため，広い敷地へ変更して欲しいという要

せ，最後に消毒済証明書を発行した．
今回， 5 例の発生に伴い，移動規制班は合計12カ所の消毒ポイントを設置し，その運営と消毒業務について

表 3 ．消毒ポイントの区分

は，「口蹄疫等家畜伝染病発生時における緊急対策に関

区分

設置場所

設置期間

する基本協定」に基づき，一般社団法人埼玉県ペストコ

緊急消毒ポイント（24時間稼働）

発生農場周辺（農場から概ね1km）

防疫措置
完了まで

通常消毒ポイント（ 9 ～17時が基本）

移動制限区域・搬出制限区域の境界（CSF では3km・10km）

制限解除
まで

ントロール協会（以下，PC 協会）に委託して実施した．

伊藤ら：2019年に埼玉県で発生した CSF の防疫対応

211ｃ）稼働期間望が飼料運搬業者などから挙がった．
ｂ）稼働時間

稼働期間延長及び年末年始の稼働についても飼料運搬

と畜場への生体の運搬は早朝に行われることが多いた
め，と畜場周辺の消毒ポイントでは午前 6 時や午前 7 時

業者などから要望された．
3 ）対応策からの稼働が必要となった．また，飼料運搬車両は早朝

狭い敷地の消毒ポイント（⑪）については，市役所等

や夜間に運行していることも多いため，飼料工場周辺のの関係機関と調整し，大型車両が進入可能な広い場所

消毒ポイントでは，必要に応じ稼働時間を延長した．

（⑫）に変更して対応したところ，消毒台数が大幅に増

図 7 ．消毒ポイント12カ所の位置
表 4 ．消毒ポイント12カ所の概要
稼働期間
（日）

1 日平均消毒
台数

21

3

7.0

247

35

7.1

62

35

1.8

1，2

12

35

0.3

2

246

4

61.5

防疫作業者の集合施設内

緊急・通常※

3，4，5

627

48

13.1

防疫作業者の集合施設内

緊急

3

342

8

42.8

関連農場付近

⑧

通常

3，4，5

135

9

15.0

付近にと畜場あり

⑨

通常

3，4

48

33

1.5

大型車両の侵入不可

⑩

緊急

5

235

8

29.4

⑪

通常

5 （変更前）

10

3

3.3

⑫

通常

5 （変更後）

274

19

14.4

No.

区分

発生例

①

緊急

1

②

通常

1，2

③

通常

1，2

④

通常

⑤

緊急

⑥
⑦

消毒台数

※ 3 ， 4 例目で緊急消毒ポイントとして使用後， 5 例目で通常消毒ポイントとして使用

立地状況⑪は大型車両が侵入不能のため，より広い⑫に変更

家畜衛生学雑誌

212

第46巻第 4 号（2021）

加した．稼働時間については，市町および PC 協会と調収容が可能であること，出発前と帰着後の動線が区分可

整し，午前 6 時30分から，または午後 7 時まで延長して能であること等が挙げられる．

対応した．稼働期間延長および年末年始の稼働について

今回の CSF 発生における集合施設の運営にあたって

は，関係市に改めて協力依頼するとともに PC 協会と調は，「動線の確保，資機材の管理，従事者の作業中の安整し，通常消毒ポイント 2 カ所（⑧⑫）について年度末

全確保，ウイルスが持ち込まれないための備え」の 4 点（2019年 3 月31日）まで稼働を延長した．また，年末年に配慮した．なお，一連の集合施設稼働状況は表 5 のと始は運転手自身が消毒する形式で運営を継続した．

おりである．

今後の対応として，消毒ポイント候補地について平時

ａ）動線の確保について

から市町村と再度調整を行うこととした．この際，現地動員された従事者は，集合施設に到着後，受付をし，で大型車両の進入の可否並びに水源，排水経路及び電源健康調査や作業内容等の説明を受け，必要資材を受け取の有無を確認し，設置箇所や車両動線を想定しながら候り，着替えて，バスで農場に出発した．作業が終了し，補地を選定することとした．緊急時において，と畜場，

バスで集合施設に戻ると帰着時入口で手指の消毒やうが飼料工場周辺および県境付近では車両消毒の需要が高いいを行い，自分の荷物を受取り，出発時とは別の更衣室ため，消毒ポイントの設置を積極的に検討することとしで着替え，退庁時刻を記帳し，帰宅した（図 8 ）．

た．消毒ポイントを運営する中では利用者から様々な要

各集合施設により使用できる出入口やトイレ，更衣室

望が挙がるため，市町村等の関係機関と調整し，可能な等の数や位置が異なるため，作業に出発する従事者と農限り積極的に応じていくことが重要であると考えられ場から帰着する従事者の動線を交差させないよう考慮した．

た．集合施設が体育館の場合（図 9 ）では，構造的に使用できる部屋数が少ないことから，アリーナ部分を出発（ 4 ） 集合施設

エリアと帰着時エリアの半分に区切り，帰着時エリアに

特定家畜伝染病が発生すると，防疫措置のために防疫

仮設の更衣エリアを設置して対応した．また，市の福祉作業従事者（以下，従事者）が動員され，発生農場近隣施設を活用した場合では，110畳の和室をパーテーショに設置した集合施設を基点として防疫作業に従事する．

ンで 3 部屋に区切り，出発時の作業説明や更衣室としてこの際に集合施設の運営を担当するのが防疫活動支援班

使用し，帰着時の更衣室として大浴場を活用した．

（以下，支援班）である．支援班担当者は 6 名から成ｂ）資機材について

り，発生を疑う段階から防疫作業の開始までに集合施設

集合施設には従事者だけでなく，数多くの資機材も搬の体制整備を行った．

入され，支援班はこれらの管理も行った．初動で全てを1 ）概要揃えることができないため，随時発注や搬入・搬出を

支援班の具体的な業務内容は，集合施設の調整，従事行った．迅速かつ効率的に初動防疫を行うため，従事者者の受け入れ・送り出し，従事者の健康管理，必要資機へ配布する資材は全て袋から出して事前に準備した．

材の調達・搬入・搬出，従事者の食事等の調達などが挙ｃ）従事者の作業中の安全確保げられる．集合施設を選ぶ際の条件として，24時間かつ作業中の安全を確保するため，従事者に対し，出発前

1 週間程度の借り上げが可能であり，最大200人程度のに作業内容・注意事項，防護服の着用方法を丁寧に説明

表 5 ．集合施設稼働状況
発生例

発生場所

支援班員数

稼働日数

従事者動員数

バス実台数

バス延べ便数

1

秩父市

6

5

570

中型 2 台

54

2

小鹿野町

6

5

591

大型 1 台中型 2 台60

3

神川町・本庄市

6

12

969

中型 1 台

152

4

本庄市

6

5

392

大型 2 台中型 2 台

42

5

深谷市

6

8

674

大型 1 台

20

35

3,196

合

計

328

伊藤ら：2019年に埼玉県で発生した CSF の防疫対応

213

図 8 ．従事者の受け入れから退出まで

図 9 ．集合施設の動線設置例（ 3 例目：体育館）

するとともに，保健師や看護師も動員し，従事者への健合施設での支援班業務へ作業を変更した．健康状態に

康調査や救急対応を行った．また，救急対応や少人数のよっては，従事させずにそのまま帰宅させたケースも輸送，資機材の移送を行う公用車ドライバーの他， 2 例

あった．また，農場での作業中に体調不良者や負傷者が目以降からは集合施設内で支援班業務を補助する従事者

発生することもあり，保健師が現場に急行することもも動員された．

あった．

健康調査の結果，計60人以上が腰痛等，体調に不安があり，保健師と相談のうえ，農場での作業ではなく，集ｄ）ウイルスが持ち込まれないための備えについて
帰着時の消毒は，農場から CSF ウイルスが持ち込ま

214

家畜衛生学雑誌れた場合に備え，従事者の手指消毒とうがいに加えて足元の消毒も重視し，使い捨て靴下の使用や消毒槽の設置による素足の消毒も行うようにした．

第46巻第 4 号（2021）

4 ．まとめおよび現在の取組み
一連の発生では，地元市町，県警，協定締結団体など

3 ）課題

多方面の協力を得，初発からほぼ 3 カ月目の12月15日，発生例を重ねるごとに改善された点も多いが，課題も県内全ての発生例の制限区域を解除した（図10）．本県
では以前から発生を想定した資材のリストアップおよびいくつか残った．
集合施設を中心とした交通手段については，バスの大備蓄，作業マニュアルの整備，防疫演習などを実施してきさや使用台数が農場の周辺環境によって変わり，路線

いたが，実際の防疫措置では想定外の事象が多く発生

数が多く運行シフトが非常に複雑となるケースもあり，し，現場の混乱は大きかった．

運行管理や乗り間違い防止等に細心の注意が求められ同年11月 1 日からは，県内でワクチン接種を開始した

た．そのため，輸送計画の見直しが課題であると考えらが，農場の防疫措置と同時進行で制限区域内の全ての農れた．従事者に対しては，要所での人員点呼確認や体調場についてワクチン接種前の清浄性確認検査を実施する

不良者への速やかな対応と負傷者発生の防止，従事者のこととなり，家畜防疫員は一層不足した．各県から家畜従事後の心のケアが課題と考えられた．資機材に関して防疫員を派遣いただき検査を進めることができたが，最は，安定的な確保や，フォークリフトの運転手等有資格

後に検査を実施した農場が 5 例目の発生となってしまっ者の確保が課題と考えられた．

たことは非常に残念であった．続発を防ぐには，ワクチ4 ）対応策ンの初回接種を早急に完了させる必要があったため，新今後の対応として，マニュアルの見直しや従事者の安たに他部局の獣医師を家畜防疫員に任命し，230余名の全・安心のための動員前の情報提供が必要であると考え体制で2020年 1 月22日に初回接種を完了させた．そのられた．また，支援班担当者 6 名が24時間体制で運営せ

後，県内における新たな農場発生はなく，発生農場 5 戸

ざるを得なかったことから，集合施設運営スタッフの人のうち， 3 戸は2020年度に経営を再開した．

員確保や，平時からの各関係機関との連携も重要である

飼養豚での CSF 発生に伴い，野生イノシシの浸潤状と考えられた．今後もより迅速かつ効率的な集合施設の況確認検査も始まった．農場発生以降，県内の野生イノ運営に向け検討を重ね，体制を整える必要がある．

シシでも CSF 感染が確認されていたことから，交差汚染防止対策のため2019年12月より，野生イノシシの CSF

図10． 5 例の防疫対応の経過

伊藤ら：2019年に埼玉県で発生した CSF の防疫対応
検査場所を病性鑑定施設のある中央家保から川越家保に引移し，専任の担当者を配置した．また，県内 3 家保の家畜防疫担当者を発生前の18名から2020年度は24名に増員するとともに，畜産安全課の家畜防疫担当者も 4 名から6 名に増員した他，家畜衛生業務を総括する家畜衛生幹を新たに配置した．
今回，県内の CSF 発生に係る防疫対応により明らかになった様々な課題を検証した結果，本県では家畜防疫

215

用

文

献

1 ）埼玉県農林部畜産安全課（2017）埼玉県特定家畜伝
染病防疫事務の手引き．埼玉県．
2 ）農林水産省 HP: 豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針，
https://www.maff.go.jp/j/syouan/douei/katiku_
yobo/k_bousi/attach/pdf/index-31.pdf

員が本来の役割を発揮できるような防疫体制の整備が必

3 ）農林水産省 HP: 飼養衛生管理基準（豚，いのしし），要であることが明らかとなった．防疫措置において家畜

https://www.maff.go.jp/j/syouan/douei/katiku_

防疫員である獣医師が従事すべき業務，家畜防疫員であyobo/k_shiyou/attach/pdf/index-127.pdf

る必要がない業務を精査し，現在，防疫体制の抜本的な見直しを進めている．高病原性鳥インフルエンザを始め
アフリカ豚熱などの発生リスクを踏まえ，今後も発生時の迅速かつ的確な防疫対応に備えていきたい．

217

第46巻
第46巻

第1号

総目次

2020

〈原著〉
北海道東部における乾乳軟膏の使用状況と分娩後の泌乳期乳房炎発生との関連性････････････････････････････････････････････ 北野菜奈・菊 佳男・山田倫明・樋口雅也・髙橋俊彦･･････････････････････････ 1 〜 6
Effect of presence of ciliate protozoa on the rumen fermentation and antioxidant activity of calves････････････････････････････････ Masudur R Gazi・Naoto Aoki・Shuhei Kanda・Hisao Itabashi･･････････････････････････ 7 ～13〈特集〉 2018年より中部地方で発生している豚熱（CSF）について
1 ．我が国における豚熱（CSF）の発生 ･････････････････････････････････････････ 青木博史・佐藤真澄･･････････････････････････ 17〜19
2 ．我が国における豚熱（CSF）の発生と対応 ････････････････････････････････ 室賀紀彦・菊池栄作･･････････････････････････ 21〜26
3 ．2018年からわが国で発生している CSF について ････････････････････････････････････････ 深井克彦･･････････････････････････ 27〜32
4 ．イノシシによる国内での CSF ウイルスの拡散について ･･･････････････････････････････ 小寺祐二･･････････････････････････ 33〜38
5 ．豚熱（CSF）ウイルスの分子生物学とワクチン ･････････････････････････････････････････ 迫田義博･･････････････････････････ 39〜43
6 ．我が国における CSF の防疫 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 津田知幸･･････････････････････････ 45〜48
会員へのおしらせ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  49〜57
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  58〜59
日本家畜衛生学会会則 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  60〜61

第46巻

第2号

2020

〈原著〉
冬季の家畜運搬車におけるタイヤ噴射装置を利用した消毒法の検討と衛生意識の向上の取組み･････････････････････････････ 中薗将友・永井郁雄・手塚 聡・川内京子・宮根和弘・中岡祐司･････････････････････････  67〜71
バルク乳中体細胞数生産量上位牛の疫学を基にした乳房炎予防対策････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 榎谷雅文･････････････････････････  73〜80
泌乳期に接種した牛乳房炎多価不活化ワクチンの乳中生菌数および体細胞数に与える影響･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 北野菜奈・髙橋俊彦･････････････････････････  81〜87
2007～2019年における牛呼吸器由来菌の薬剤感受性･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 坂下満明・加藤晶子・廣瀬和彦･････････････････････････  89〜98
会員へのおしらせ  ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  99〜100
家畜衛生学雑誌投稿規程  ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  101〜102
日本家畜衛生学会会則  ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  103〜104

218

第46巻

第3号

2020

〈第92回大会講演要旨集〉
輸入初生ひなにおける薬剤耐性大腸菌保有状況調査････････････････････････････････････････････････････････ 吉田英二・久保顕志・古野美南子・西口明子･･･････････････････････ 113〜116
管内養豚場における CSF 発生予防に向けた取り組み･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 清水誠之・今井 文･･･････････････････････ 117〜120
カンガルー病に罹患した動物園飼育下オオカンガルーからのフソバクテリウム属菌の分離･･････････････････････････････････････････････････ 真砂聖令菜・髙橋能理子・谷地田敬佑・齊藤純子
外平友佳理・内田郁夫・鈴木一由・村田 亮･･･････････････････････ 121〜124〈特別 Web 座談会「The 消毒」要旨集〉
企画説明 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 白井淳資･･････････････････････････････ 127
消毒の基礎 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 三宅眞佐男･･･････････････････････ 129〜138
豚環境の消毒 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 三宅眞佐男･･･････････････････････ 139〜144
牛環境の消毒 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 高橋英穂･･･････････････････････ 145〜150
鶏環境の消毒 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 大内義尚･･･････････････････････ 151〜154
家畜衛生学雑誌投稿規程  ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 155〜156
日本家畜衛生学会会則  ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 157〜158

第46巻

第4号

2021

〈総 説〉
日本における家畜用ワクチンの現状と将来展望････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 平山紀夫･･･････････････････････ 165〜179〈原 著〉
パイン粕サイレージおよび紅茶粕が乳牛のルーメン発酵と乳生産に及ぼす影響････････････････････････････････････････････ 青木直人・東浦裕紀・佐藤 幹・神田修平・板橋久雄･･･････････････････････ 181〜188
Effect of Sampling Volume for Viable Bacterial Count and Somatic Cell Count in Cows’Foremilk･･････････････････････ Nana Kitano・Yoshio Kiku・Satoshi Gondaira・Toshihiko Takahashi･･･････････････････････ 189〜193
新型コロナウイルス SARS-CoV- 2 診断キットにおける前処理試薬のウイルス不活化効果の評価･････････････････････････････････････ 松浦遼介・Lo Chieh-Wen・中川 優・武井正美・間陽子･･･････････････････････ 195〜203〈技術資料〉
2019年に埼玉県で発生した豚熱（CSF）の概要と防疫対応･････････････････････････････ 伊藤麗子・留場寛子・椚 友香・田代卓也・成田沙織・福田昌治･･･････････････････････ 205〜215
第46巻総目次 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 217〜220
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 221
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 222〜223
日本家畜衛生学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 224〜225

219

General Contents of Vol.46
Vol. 46 No. 1 2020
〈Original report〉
The relationship between the use of antibiotics at drying off period and the occurrence of postpartum
mastitis in eastern Hokkaido････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Nana Kitano et al.･･････････････････････････････････････････････ 1 〜 6
Effect of presence of ciliate protozoa on the rumen fermentation and antioxidant activity of calves･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ Masudur R Gazi et al.･･････････････････････････････････････････････ 7 〜13〈Special topic〉 Outbreak of classical swine fever from 2018 in Japan
1.  Outbreak of classical swine fever in Japan･･･････････････････････････････････････････････････････ Hiroshi Aoki and Masumi Sato ･････････････････････････････････････････････ 17〜19
2.  Classical swine fever outbreak and control measure in Japan･････････････････････････････････････････････ Norihiko Muroga and Eisaku Kikuchi ･････････････････････････････････････････････ 21〜26
3.  Characteristics of classical swine fever that has occurred since 2018 in Japan･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Katsuhiko Fukai ･････････････････････････････････････････････ 27〜32
4.  Free-living wild boars spread classical swine fever in Japan････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Yuji Kodera ･････････････････････････････････････････････ 33〜38
5.  Molecular biology and vaccine of classical swine fever･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Yoshihiro Sakoda ･････････････････････････････････････････････ 39〜43
6.  Control strategies of classical swine fever in Japan･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Tomoyuki Tuda ･････････････････････････････････････････････ 45〜48
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 49〜57
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 58〜59
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 60〜61

Vol. 46 No. 2 2020
〈Original report〉
Analysis of truck tire disinfectants in cold weather and promotion of hygienic awareness among husbandry workers･････････････････････････････････････････････････････････････ Masatomo Nakazono et al.･････････････････････････････････････････････  67〜71
Improving of bulk tank milk quality based on epidemiology of cows with high producing somatic cell counts･････････････････････････････････････････････････････････････････････ Masafumi Enokidani･････････････････････････････････････････････  73〜80
Effects of bovine mastitis polyvalent inactivated vaccine inoculated during lactation on milk bacterial andsomatic cell counts････････････････････････････････････････････ Nana Kitano and Toshihiko Takahashi･････････････････････････････････････････････  81〜87
Antimicrobial Susceptibility of Microbial Isolates from Bovine Respiratory Organs in 2007-2019･･･････････････････････････････････････････････････････････････ Mitsuaki Sakashita et al.･････････････････････････････････････････････  89〜98
Information for Members ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  99〜100
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････  101〜102
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･････････････････････････････････････････････････････････････････  103〜104220Vol. 46 No. 3 2020
〈Abstracts of oral presentations on 92th academic meeting〉････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 111〜124〈Abstracts of web discussion meeting “The disinfection”〉････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 125〜154
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 155〜156
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 157〜158

Vol. 46 No. 4 2021
〈Review〉
The present and future of domestic animal vaccines in Japan･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Norio Hirayama･･･････････････････････････････････････････ 165〜179〈Original report〉
Effect of pineapple bran silage and dried black tea residue on rumen fermentation and milk production
in dairy cows･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Naoto Aoki et al.･･･････････････････････････････････････････ 181〜188
Effect of sampling volume for viable bacterial count and somatic cell count in cows’ foremilk････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Nana Kitano et al.･･･････････････････････････････････････････ 189〜193
Evaluation of SARS-CoV-2 inactivation efficiency mediated by the reagent of COVID-19 diagnosis kits･･･････････････････････････････････････････････････････････････ Ryosuke Matsuura et al.･･･････････････････････････････････････････ 195〜203〈Technical report〉
An outbreak of classical swine fever (CSF) and epidemic prevention measures in Saitama Prefecture, 2019････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Reiko Ito et al.･･･････････････････････････････････････････ 205〜215
Contents of volume 46 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 217〜220
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 221
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 222〜223
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 224〜225

221

会員へのおしらせ① 「日本家畜衛生学会第92回大会」開催される

日本家畜衛生学会第92回大会が誌上発表されました。本年は，新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の拡大防止の観点から，家畜衛生学雑誌第46巻 3 号において誌上発表により行われました。一般演題は 3 題の発表があり，内容に関する質疑応答は学会事務局で取り次ぐという形で行われました。

② 特別 Web 座談会「 The 消毒 」開催される
当初企画しておりました家畜衛生フォーラム2020の実施が新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の拡大防止の観点から困難であるとの判断から，代替企画としてオンラインリアルタイム配信による特別 Web 座談会が2020年12月19日（土）に実施されました。座談会は（一財）生物科学安全研究所との共催で開催され，白井淳資座長の進行により消毒の基礎と現場への応用について，以下の 3 名の先生方による 4 題の講演が行われました。当日は約170名の参加者があり，牛サルモネラ症や豚熱，高病原性鳥インフルエンザといった重要家畜伝染病防止に欠かすことのできない衛生管理の一つである消毒方法について活発な議論が交わされました。Web 開催という初の試みでありましたが，チャット機能を利用した活発な質疑応答がなされました。なお，特別 Web 座談会「The  消毒」講演要旨については，本誌46巻 3 号（2020.12発行）をご覧ください。
1 ．消毒の基礎
三宅眞佐男（AB Consulting（株））
2 ．豚環境の消毒三宅眞佐男（AB Consulting（株））
3 ．牛環境の消毒高橋英穂（北海道

計根別農業協同組合）

4 ．鶏環境の消毒大内義尚（茨城県畜産センター肉用牛研究所）【お詫び】
今回の特別 Web 座談会への参加は完全予約制とし，事務局から参加アドレスと講演要旨を事前にメール連絡することとしておりましたが，一部の方に不達となっておりました。事務局の不手際でご迷惑をおかけしたこと，心より深くお詫び申し上げます。

222「家畜衛生学雑誌」投稿規程
1 ．本誌には原則として，家畜衛生に関する原著論文，
短報，総説（刷り上がり 4 頁以下のミニレビューを

Key words（キーワード）をつける．
6 ）英語論文および和文論文の英文 Summary は，含む），技術資料を掲載する．なお，原稿は編集委

投稿前にしかるべき校閲を受けること．

員会事務局へ電子メール添付（PDF ファイル）で7 ）原著論文で刷り上り 8 頁（30文字×25行＝750

提出する．印刷原稿 3 部（うち 2 部は鮮明なコピー

文字で，図表を含めて16枚程度）までは，印刷でもよい）の書留郵便あるいはレターパックによる費を本学会で負担する．ただし，超過ページに提出も可とする．

ついては，その費用を著者の負担とする．な

2 ．投稿にあたり，論文掲載までの対応を行う連絡著者

お，総説についてはこの限りではない．また，（コレスポンディングオーサー）は，投稿原稿が他

カラーや特殊な用紙での印刷は，その費用を著

誌にすでに掲載あるいは投稿中ではないこと，著者全員が投稿論文の内容及び掲載に同意していることを記載した文書（カバーレター）を提出すること．
3 ．筆頭著者あるいは連絡著者は本学会会員であることが望ましいが，投稿の要件とはしない．
4 ．掲載論文は原著論文，短報，総説（刷り上がり 4 頁

者の負担とする．
8 ）使用する動植物・微生物などの学名はイタリッ
ク体で表記する．
9 ）度量衡の単位，略記は SI 単位系を基本とし，以下の例に従う．
［例］m，cm，mm，µm，nm，kg，g，mg，µg，ng，

以下のミニレビューを含む），技術資料とする．

L，mL，µL，nL，M，mM，µM，％，cm2，
m3，


5 ．全ての投稿論文は編集委員及び複数の審査員が審査

hr，min，sec，℃，pH，Pa（血圧は mmHg，
し，編集委員長が掲載の採否を決定する．
6 ．投稿論文は和文または英文とし，次の指示（記述順

生体内圧力は Torr）など．
10）表および図（写真を含む）は用紙 1 枚に 1 つと序など）に従うこと．

し，個々に番号と表題を記入し，投稿原稿の最1 ）論文原稿は別に定める注意に従って作成するこ

後に添付する．

と．用紙サイズは A4とし，和文の場合は30字

11）引用文献は下記の例にならって，アルファベッ

で25行程度，英文の場合はダブルスペース（70ト順にならべ，本文中では 1 ）， 3 − 6 ）のよ

字で25行程度）とする．原稿本文の左側に行番

うに上付き（superscript）で記入する．ただ号を表記すること．

し，著者名は 3 名までとし， 4 人目以降は省略

2 ）和文の場合も句読点は，
「，
」
，
「．
」を用いること．

し，「ら」，「et al」で示す．

3 ）論文原稿は第 1 ページに表題，著者名，所属機［例］

関名およびその所在地を和文と英文で記載する

雑誌とともに，連絡著者とその電子メールアドレスを記載する．また，和文の場合は20字，英文の場合は40字以内の略表題（running head）を記載する．
4 ）原著論文の構成は原則として，Summary（本文が和文の場合も英語），序文（Introduction），
材料および方法（Materials and Methods），結果（Results）， 考 察（Discussion），引用文献（References），要旨（本文が和文であっても英文であっても，和文の要旨）とする．ただし，謝辞は，別項目を設けず，本文の最後に 1 行の空白をとった後に記載する．
5 ）英文 Summary は250語以内，和文要旨は600字以内とし，それぞれの最後の行に 5 つ以内の1 ）内田孝治・藤井武・高山公一ら（1991）ブロ
イラーにおける実験的大腸菌症に対するラノ
フロキサシンの治療効果および用量設定試
験．家畜衛生研究会報．33，19−24．
2 ）Oshida, T., Fukuyasu, T., Kohzaki, K., et al.
(1993) A new treatment system for animal
waste water using microorganism, soil andvagetation. Asian-Australasian Journal ofAnimal Sciences. 6, 205-209.
電子ジャーナル3 ）Wilson, D.J., Rood, K.A., Bunnel, J., et al. (2014)
Johne’s disease, mycoplasma and BVD in
Utah-Bulk tank milk testing and comparison

223

する，その他の規定については原著の場合に準じ

		 t o p r e v i o u s r e g i o n a l p r e v a l e n c e a n d
individual herd results over time. Journal of
Veterinary Science and Technology. 5:182.

る．
8 ．総説及び技術資料の構成については特に規定を設けないが，引用論文の記載法は原著論文の場合に準じ

doi: 10.4172/2157-7579.1000182.
単行書

ることとする．
9 ．別刷り費用は著者の負担とするが，筆頭著者あるいは連絡著者が本学会会員の場合は，50部に限り無料4 ）伊予部志津子（1980）薬剤耐性因子（R）のとする．

検出法，薬剤感受性測定法．22−48頁．三橋

10．本誌の発行は原則として，年 4 回（ 4 月， 7 月，10

進編，講談社，東京．

月および 1 月）とする．

5 ）McDonrd, P. (1976) Trends in silage making,Microbiology in Agriculture, Fisheries and11．編集委員会事務局を下記に置く．
〒252−5201

Food. pp109-121. Shinner, F.A and Carr, J.G.

神奈川県相模原市中央区淵野辺 1 −17−71

eds. Acad. Press, London, NY.

麻布大学獣医学部伝染病学研究室内
12）図はグラフィックソフトウェアで作成すること

日本家畜衛生学会編集委員会

が望ましい．手書きで作成する場合は，そのまTel	  042（769）1643

ま製版できるよう，白色紙または青色方眼紙にE-mail：jjah@azabu-u.ac.jp

タイプやレタリングなどにより作成する．

12．本誌に掲載された論文の著作権は，日本家畜衛生学

13）投稿原稿が受理（掲載決定）されたならば，著会に帰属する．

者 は す み や か に 最 終 原 稿 の Microsoft Word
ファイルを電子メールで提出すること．図につ附則

いては，グラフィックソフトウェアで作成した

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

ファイルも併せて提出する．

本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

7 ．短報は，その内容を成績および考察（Results and本規程は，2016年11月 5 日以降の投稿論文に適用する．

Discussion） と し て ま と め， 要 旨（Summary） は

本規程は，2019年 7 月20日以降の投稿論文に適用する．

英文では200字以内の和文，和文では100語以内の英文をつける．原稿の長さは刷り上りで， 2 頁以内と論文原稿を作成する上での注意
1 ）執筆にあたり，投稿規定をもう一度，熟読すること．

5 ）写真は印刷に耐えうる鮮明なものを使用すること．

2 ）各行の行末での強制改行をしないこと．

6 ）図は，Microsoft PowerPoint，Excel，Adobe Photoshop，
3 ）投稿論文が和文，英文のいずれの場合も数字，欧文Illustrator 等のソフトウェアで作成するのが望ましい．

は全て 1 バイト文字（いわゆる半角）で入力するこ

7 ）論文受理後の最終原稿は，Microsoft Word（あるいと．ただし和文ではかっこ（ ）は 2 バイト文字

は Microsoft Word 互換ソフトウェア）ファイルと（いわゆる全角）とする．
「µ」（マイクロ）は半角して提出する．ただし，Microsoft Word 互換ソフ

立体で入力すること．

トウェアを使用した場合は，Microsoft Word で正4 ）投稿論文原稿は PDF ファイルとして事務局まで電しく表示されることを確認すること．グラフィック

子メールで提出すること．その際には必ずパスワー

ソフトウェアで作成した図データは，jpeg，tiff 等

ドロックし，パスワードは別メールで事務局まで連の汎用フォーマットで提出する．

絡すること．特段の理由がある場合は，印刷原稿 3部（うち 2 部は鮮明なコピーでも可）を事務局まで
書留郵便あるいはレターパックで送付すること．

日本家畜衛生学会
編集委員会

224

日本家畜衛生学会会則

第一章（総

則）

とし，毎年 7 月末までに納入するものとする．

第1条

会員資格

1 ．本 学 会 は， 日 本 家 畜 衛 生 学 会（ 英 文 表 記：The第7条

Japanese Society of Animal Hygiene）（以下，「学学会の会員になろうとする者は，所定の手続を行い，定会」とする．
）と称する．

められた会費を納入すること．



2 ．本学会の設立年月日を2002年 7 月 6 日とする．
会員の義務
第2条

第8条

学会の事務局は，理事長の所属する機関におき，学会の1 ．会員は本学会の会則に従い，本学会の運営に協力

住所は事務局所在地とする．

し，会費を納入する義務を負う．
2 ．理事長は常務理事の中から庶務・会計を担当する事

第3条

務局担当者を委嘱する．

学会は，家畜衛生とその関連領域における学究の向上を図り，畜産の進歩発展に寄与することを目的とする．

会員の退会・除名
第9条

第4条

退会を希望する会員は，理事長に退会する旨を届出るこ学会は，前条の目的を達成するために，次の事業を行う．

と．

（ 1 ） 研究発表会及び学術講演会等の開催（ 2 ） 学会誌「家畜衛生学雑誌」の発行

第10条（ 3 ） 学会の発展に貢献した者への表彰

学会の名誉を傷つけたり，目的に反する行為があった場（ 4 ） その他学会の目的達成のために必要な事業

合，または会費を 5 年分以上滞納した場合は除名とする．

第二章（会員および会費）

第三章 （役員，役員会および委員会）

学会の構成員

役員および役員会

第5条

第11条

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員および名誉会

1 ．理事は理事長が委嘱し，総会の承認を受ける．

員より構成する．

2 ．理事は理事会を組織し，理事長を補佐し，学会の運（ 1 ） 正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した個営に関して第 4 条の事項を行う．

人（ 2 ） 学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した

第12条

学生，大学院生．ただし会員期間は単年度とす

1 ．理事長は，常務理事の互選により選出する．

る．

2 ．理事長は，学会を代表し , 会務を総理する．



3 ．理事長は，常務理事の中から庶務・会計を担当する（ 3 ） 賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため，所定の会費を納入した個人又は団体事務局担当者（事務局長）を委嘱する．

（ 4 ） 名誉会員：学会に永年功労があり，総会において承認された個人

第13条
1 ．常務理事会および理事会は理事長が随時招集する．

第6条

2 ．常務理事会及び理事会は常務理事又は理事のそれぞ

会費は正会員にあっては年額5,000円，学生会員にあっれの過半数の出席をもって成立し，議事は出席者のては年額2,000円，賛助会員にあっては 1 口年額10,000円

過半数をもって決定する．

225

委員会
第14条

附

1 ．理事長は第 4 条の事業を達成するため常設の編集委（ 1 ） この会則は平成14年 7 月 6 日より施行する．

員会，学術企画委員会およびホームページ管理委員会を設置する．

則（ 2 ） 学会設立時の役員は家畜衛生研究会（以下「研究会」と略す）の役員が，暫定的に就任することと2 ．委員会の委員は，原則として理事長が常務理事の中し，理事長は研究会の会長が，常務理事は研究会から指名する．但し，常務理事会が必要と認めた場の幹事が，理事は研究会の評議員が，監事は研究

合には会員の中から指名することができる．

会の監事がそれぞれ就任する．



3 ．委員会の委員長は , 委員の互選により選出し，理事長が指名する．

（ 3 ） この会則は平成15年 7 月 5 日に改正し，同日に施行する．
（ 4 ） この会則は平成16年 7 月 3 日に改正し，同日に施第四章 （総会）

行する．
（ 5 ） この会則は平成17年 7 月 2 日に改正し，同日に施
行する．

第15条
通常総会は毎年 1 回，理事長が招集する．

（ 6 ） この会則は平成21年 7 月 4 日に改正し，同日に施

第16条（ 7 ） この会則は平成23年 7 月 2 日に改正し，同日に施行する．
理事長が必要と認めた場合は，臨時総会を招集すること行する．
（ 8 ） この会則は平成27年 7 月11日に改正し，同日に施ができる．

行する．ただし，平成27年度の会費は4,000円と第17条

し，平成28年度から会費を5,000円とする．

総会では次の事項を議決する．
（ 1 ） 事業計画および事業報告に関する事項（ 2 ） 予算および決算に関する事項（ 3 ） 会則の改正に関する事項（ 4 ） その他，学会の目的を達成するために必要な事項（ 9 ） この会則は平成28年 7 月 9 日に改正し，同日に施行する．
（10） この会則は2019年 7 月20日に改正し，同日に施行
する．
（11） この会則は2020年 6 月30日に改正し，同日に施行
する．

第五章 （会

計）第18条
学会の経費は会費その他の収入をもって，これにあてる．
第19条
会計年度は 4 月 1 日より，翌年 3 月31日までとする．

226

協賛企業一覧
日本家畜衛生学会は以下の企業からの協賛を受けております．ここに記して謝意を表します（五十音順）．
MSD アニマルヘルス（株）（一財）日本生物科学研究所

エランコジャパン（株）

日本ハム（株）（株）科学飼料研究所

日本全薬工業（株）

共立製薬（株）（株）微生物化学研究所

KM バイオロジクス（株）

フジタ製薬（株）

士別三協（株）プリマハム（株）

住化エンバイロメンタルサイエンス（株）

ベーリンガーインゲルハイムアニマルヘルス（株）

ゾエティス・ジャパン（株）

Meiji Seika ファルマ（株）

田村製薬（株）（株）メディプラス製薬

東亜薬品工業（株）〔2021年 2 月現在〕

日本家畜衛生学会入会のすすめ
日本家畜衛生学会は家畜衛生とその関連領域における学術の交流を図り、畜産の進歩発展に寄与することを目的とした学会です。
＜主な活動＞
・ 年２回（７月、12 月）の研究発表会
・ 年１回のフォーラム（12 月ごろ）の開催
これまでの主なテーマ「狂犬病」、「口蹄疫」、「鳥インフルエンザ」、「BSE」、「家畜ふん尿」など
・ 年４冊の機関誌「家畜衛生学雑誌」の発行
・ 学会賞の授与
年会費5,000円（但し、学生は2,000円）
御請求戴ければ、見本誌を贈呈します!!

家畜衛生学雑誌

The Japanese Society of Animal Hygiene
日 本 家 畜 衛 生 学 会〒252-5201 神奈川県相模原市中央区淵野辺1-17-71
麻布大学獣医学部獣医学科衛生学第一研究室内TEL ／ FAX：042−850−2508

http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@azabu-u.ac.jp
Hpで活動内容がご覧になれます!!（日本家畜衛生で検索）

第46巻第 4 号

令和 3 年 3 月 1 日発行（会員配布）
発

行

印 刷 所

日本家畜衛生学会
理事長 河合一洋〒252−5201 神奈川県相模原市中央区淵野辺 1 −17−71
麻布大学獣医学部獣医学科衛生学第一研究室内☎／ FAX：042−850−2508
ホームページ：http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@azabu-u.ac.jp
振替口座：00240－ 3 －43171
明誠企画株式会社〒208－0022 東京都武蔵村山市榎 2 － 25 － 5☎ 042−567−6233 FAX 042−567−6230

令和
日本家畜衛生学会

年

月

日

御中

入 会 申 込 書
貴会への入会を下記の通り申込ます．

記
フリガナ
氏

名：

所属名称：
部

署：

役

職

所属住所：〒TEL：

FAX：

e-mail：

自宅住所：〒

TEL：
e-mail：会員の種類 ： ○正 会 員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員
会報送付先 ： ○自宅 ・ ○勤 務 先○内にチェックを付して下さい．

１．入会申込書は必要事項をすべて正確に記入し，郵便またはFAX（042−850−2508）にてご送付下さい．
２．年会費は個人会員 5,000円，賛助会員 10,000円／口（１口以上）を郵便振替口座（加入者名：日本家畜衛生学会，No. 00240−3−43171）へお振込下さい．
３．申込先は〠252−5201

神奈川県相模原市中央区淵野辺１−17−71
麻布大学獣医学部獣医学科衛生学第一研究室内
日本家畜衛生学会事務局宛

TEL／FAX：042−850−2508

４．ホームページからも申し込めます：http://www.kachiku-eisei.jp/

令和
日本家畜衛生学会

年

月

御中

変
変更手続きを下記の通り致します．

更

届

記

フリガナ
○

氏

名：

○

所属名称：

○

部

○

所属住所：〒

署：

○

役

TEL：

○

自宅住所：〒

○

TEL：

職

FAX：

e-mail：e-mail：○会員の種類：○正会員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員○会報送付先：○自宅 ・ ○勤務先全てご記入の上，上記変更部位の○内にチェックを付して下さい．

１．変更届出書は必要事項を正確に記入し，郵便またはFAX（042−850−2508）にてご送付下さい．
２．届け先は〠252−5201

神奈川県相模原市中央区淵野辺１−17−71
麻布大学獣医学部獣医学科衛生学第一研究室内
日本家畜衛生学会事務局宛

TEL／FAX：042−850−2508

３．ホームページからも手続きできます：http://www.kachiku-eisei.jp/

日