ISSN 1347−6602

昭和62年６月９日学術刊行物認可

家畜衛生学雑 誌
The Japanese Journal of Animal Hygiene
家畜衛生フォーラム2015
日本家畜衛生学会第83回大会

要旨集
要旨集

日本家畜衛生学会
Vol .41 No.3
2015. Dec.

The Japanese Society ofAnimal Hygiene

家

畜

衛

生

学

雑

日本家畜衛生学会

発行

誌

理 事 長：白井淳資
副理事長：宮﨑編集委員長：宮﨑茂

茂

編集委員：柿市徳英・高井伸二・永幡肇

野上貞雄・福安嗣昭・渡邊忠男"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""The Japanese Journal of Animal Hygiene
Published by the Japanese Society of Animal Hygiene
President : Junsuke SHIRAI（）

Vice President : Shigeru MIYAZAKI（）

Editor-in-Chief : Shigeru MIYAZAKI（）

Editorial Board : Norihide KAKIICHI（
Shinji TAKAI（）））

Hajime NAGAHATA（
Sadao NOGAMI（
Tsuguaki FUKUYASU（））

Tadao WATANABE（）

複写される方へ
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「家畜衛生学雑誌」第41巻第 3 号の送付にあたって
会員の皆様におかれましては，ますますご清栄のこととお慶び申し上げます．
ここに，「家畜衛生学雑誌」第41巻第 3 号を刊行する運びとなりました．本号は「家畜衛生フォーラム2015」および「第83回大会」の講演要旨号です．
「家畜衛生フォーラム2015」では，「家畜疾病の診断法の新しい潮流」をテーマに， 4 人の先生方に家畜感染症の診断法に関する最新の成果をご紹介いただくとともに，診断法の精度管理に関する話題もあわせて企画しました．家畜の生産阻害要因を効率的に排除するためには，迅速で正確な感染症の診断が重要です．この企画が，家畜衛生現場で活躍されている会員の皆様のお役に立てば幸いです．
毎回お願いしていることですが，「家畜衛生学雑誌」への積極的なご投稿をよろしくお願い致します．「家畜衛生学
雑誌」は効率の良い審査を行い，出来るだけ迅速な掲載を目指しております．「家畜衛生学雑誌」の更なる充実のため，学会役員一同，努力や工夫をしていきたいと思いますが，何よりも会員の皆様のご支援が重要ですので，よろしくお願い致します．
日本家畜衛生学会理事長

白井淳資

家畜衛生学雑誌編集委員長

宮﨑茂（日本家畜衛生学会副理事長）

日本家畜衛生学会・学会費納入のお願い
ご承知のように学会は会員の皆様からの会費をもって運営されています．学会の運営を円滑に運ぶために速やかに，所定の会費の納入をお願い申し上げます．
＊学会費は正会員4,000円，学生会員2,000円となっています．
＊平成28年度から，正会員会費は5,000円となります．
日本家畜衛生学会

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日本家畜衛生学会

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（消費税込み）

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裏面の注意事項をお読みください。

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百記載事項を訂正した場合は︑その箇所に訂正印を押してください︒

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白井淳資

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切り取らないで郵便局にお出しください︒

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この受領証は、郵便振替の払込
みの証拠となるものですから大切に保存してください。

この払込取扱票の裏面には、何も記載しないでください。

家畜衛生学雑誌
第41巻

目

第3号

2015

次

〈家畜衛生フォーラム2015要旨集〉
座長のことば「家畜疾病の診断法の新しい潮流」･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････明石博臣･･････････････････････････ 53〜54
大腸菌の全血清型を遺伝学的に判定する PCR 法の開発･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････井口 純･･････････････････････････ 55〜59
遺伝子組換え抗原を用いたヨーネ病の迅速・高感度診断法の開発･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････永田礼子･･････････････････････････ 61〜64
口腔液を用いた PRRS ウイルス抗体および遺伝子の検出･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････會田恒彦･･････････････････････････ 65〜68
次世代シークエンス技術の微生物感染症診断への応用･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････黒田 誠･･････････････････････････ 69〜73
家畜疾病の診断における検査精度の管理（検査の信頼性確保に向けて）･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････福田苗美･･････････････････････････ 75〜77〈第83回大会講演要旨集〉
β ヒドロキシ酪酸はウシ好中球の化学発光（CL）を抑制しアルギニンは CL を高める･････････････････････････････････････････････山城良介・澄川莉那・三上貴史・樋口豪紀・永幡 肇･･････････････････････････ 82〜83
牛乳房炎分房への Bifidobacterium breve およびラクトフェリン分解産物注入に伴う乳腺の反応性とサイトカイン産生への影響･･････････････････････････････････････････････････････澤田知佳・丸山久美子・浅井友紀子・國分千尋
権平 智・河合一洋・樋口豪紀・永幡 肇･･････････････････････････ 84〜85
微酸性電解水が乳房炎由来菌株産生バイオフィルムに及ぼす影響･････････････････････････････････････････････湯浅麗子・河合一洋・篠塚康典・松山公喜・天羽由知･･････････････････････････ 86〜87
食肉の赤色化における一酸化炭素の特性･･････････････････････････････三木 優・和賀正洋・竹田志郎・猪股智夫・押田敏雄・坂田亮一･･････････････････････････ 88〜89「エアシャワー」における抗菌剤（次亜塩素酸ナトリウム溶液）を用いたエアロゾル噴霧による抗菌効果試験･････････････････････････････････････････････････････････野崎雄幸・今野幸浩・白井淳資・宮地洋二郎･･････････････････････････ 90〜91
卵黄抗体製剤の初乳効果の検討･･････････････････････････････････････････磯日出夫・原田宗範・北山しおり・内山史一・野村茂之･･････････････････････････ 92〜93
会員へのおしらせ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 95〜106
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 107〜108
日本家畜衛生学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 109〜110

家畜衛生学雑誌

The Japanese Journal of Animal HygieneVol. 41  No. 3

2015

Contents〈Abstracts of Animal Hygiene Forum 2015〉････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 51〜77〈Abstracts of oral presentations on 83rd academic meeting〉･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 79〜93

Information for Members ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 95〜106
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 107〜108
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 109〜110

Jpn. J. Anim. Hyg.

家畜衛生フォーラム2015
フォーラムテーマ「家畜疾病の診断法の新しい潮流」

要

旨

集

主催：日 本 家 畜 衛 生 学 会
共催：（一財）生物科学安全研究所
後援：農
林
水
産
省

家畜衛生フォーラム2015と き：平成27年12月18日（金） 13：00〜17：30
ところ：Meiji Seika ファルマ（株） 本社講堂

座長

明石

博臣（東京大学名誉教授）

13：00〜13：05
挨拶

日本家畜衛生学会理事長

13：05〜13：10
今年度の企画について
明石

博臣（東京大学名誉教授）

13：10〜13：55（うち討論 5 分）
（ 1 ） 大腸菌の全血清型を遺伝学的に判定する PCR 法の開発
井口純（宮崎大学）13：55〜14：40（うち討論 5 分）（2） 遺
 伝子組換え抗原を用いたヨーネ病の迅速・高感度診断法の開発
永田礼子（国立研究開発法人農研機構動物衛生研究所）

14：40〜15：25（うち討論 5 分）
（ 3 ） 口腔液を用いた PRRS ウイルス抗体および遺伝子の検出
會田休憩

恒彦（新潟県）15：25〜15：40

15：40〜16：25（うち討論 5 分）
（ 4 ） 次世代シークエンス技術の微生物感染症診断への応用黒田誠（国立感染症研究所）

16：25〜17：10（うち討論 5 分）
（ 5 ） 家畜疾病の診断における検査精度の管理（検査の信頼性確保に向けて）福田
17：10〜17：25
まとめ苗美（（一財）生物科学安全研究所）

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

53

家畜衛生フォーラム2015 「家畜疾病の診断法の新しい潮流」
東京大学名誉教授

本年 9 月から10月にかけて新聞紙上を賑わせた話題は

明

石

博

臣

武器に世界と戦うことも夢では無いかも知れない．

多かったが，その中のいくつかは畜産分野に関連したもしかし，現実問題として家畜衛生対策費は，農家の支のであった．一つは大変おめでたいニュースで，大村智

出において大きな割合を占めているのが現状である．

北里大学特別栄誉教授のノーベル賞受賞である．先生の従って，現時点における最良の方策は，疾病対策にかか発見された数多くの物質の一つにエバーメクチンがある費用をなるべく軽減することであろう．そのためにり，これの誘導体であるイベルメクチンは人用抗寄生虫は，もちろん新しい治療薬やワクチンの開発は続けると薬として新聞で詳しく報道された．人用に比べて話題性して，可能な限り早く，正確に病気を診断し，病気にかは劣ったが，イベルメクチンを主剤とする牛，豚，馬，

かった動物に対し適切な治療を行うことが重要となる．

犬，猫の駆虫薬は多くの製薬会社が製品化し，現在でもつまり，正確で迅速な診断が無ければ，どれほど有効な畜産現場を含め，動物薬として広く使用されている．も治療薬が存在しようと，病気を制御することは困難であう一つは，環太平洋経済連携協定（TPP）が大筋合意にる．同時に，正確な診断を行うためには，病原体の性状達したという記事である．畜産関連品は，セーフガード

への深い理解が必要とされる．病原体の性状解明は基礎

付きとは言え，段階的に関税が低くなり，特に牛肉では研究に属し，診断法の開発は応用研究に含まれる．基礎

16年で関税が 1 / 4 以下となるとのことである．TPP が研究と応用研究がうまくかみ合ってこそ，適切な予防・調印，発効した場合，わが国の畜産に及ぼす影響を現時治療を行うことができる訳である．さらに，基礎研究と点で正確に見積もることは難しいが，新聞等によればマ

応用研究を一人の研究者が行うことができるなら問題はイナスの影響を与えるのでは無いかという意見が大半で無いが，別々の研究者が行う場合は，情報交換が大変重ある．しかし，奇しくもこの二つの報道はポジティブと要となる．本フォーラムの意義もそこにあると考えられネガティブという面で相反しながら，畜産の将来に大きる．

な示唆を含んでいるように思われる．
経済効率から考えると，輸入飼料に依存するわが国の本フォーラムでは「家畜疾病の診断法の新しい潮流」

畜産は大きな制約を課せられている．しかし，確かに飼と題し，細菌，ウイルスの新しい診断法や次世代型の診料面では大きな改善は難しいのかも知れないが，経済的断法ないしは診断精度の管理法など感染症診断についてに損失として計上される家畜衛生対策費についてはコス最新の知見を 5 名の演者の方々に講演していただく予定

トカットが可能では無いかと考えられる．家畜衛生対策である．まず，宮崎大学の井口氏に大腸菌ゲノムの研究

費には，家畜を健康な状態に保つために要する費用，例

から血清型が多様な O 血清群の型別を簡便に行うことのえば，畜舎を清浄に保ち，感染の機会を軽減する消毒薬

出来るマルチプレックス PCR の手法について開発から等の薬剤費やワクチン代等が含まれる．さらに，いった応用についてお示しいただく．次に，その病状および菌ん疾病が発生した場合，治療に要する費用も大きな割合の性状ゆえに診断の難しいヨーネ病について，動物衛生を占める．ある疾病に対し，効果的かつそれほど高価で研究所の永田礼子氏に現行診断法の問題点をまとめておは無い治療薬，冒頭のイベルメクチンは一つの例であろ話しいただくと共に，新しい早期，高感度診断法についう，が存在するなら，治療に関わる費用を軽減することても成果をご紹介いただく．さらに，新潟県畜産課の會が可能となる．従って，日本発の新しい治療薬やワクチ

田恒彦氏には豚繁殖・呼吸障害症候群の診断に血清の代ンを含む予防薬を開発することが出来れば，日本の畜産わりとして口腔液が使用可能であり，実際に口腔液を用に大きく寄与するのみで無く，外貨獲得にも貢献するでいた血清学的，遺伝学的診断の野外応用についての成果あろう．一方，衛生的に清浄な環境で家畜を飼育するこをご説明いただく．これら個別の疾病診断法紹介に続とが出来れば，疾病に罹患するリスクを軽減し，ひいてき，感染症研究所の黒田誠氏には次世代シークエンサー

は衛生対策に要する費用を抑えることが可能になる．

を用いた網羅的遺伝子解析から，個々の微生物をどの様

TPP の締結を機に，衛生対策費を軽減できるような日に同定し，感染症の診断につなげていくか，実例を交え本型畜産モデルを樹立できれば，安心・安全な畜産物をて解説していただく．最後に，生物科学安全研究所の福54

家畜衛生学雑誌

第４1巻第 3 号（2015）

田苗美氏には正確な診断を行うために必要とされる人，

時，その原因を正確に把握することは疾病対策の最初の器具，施設等の精度管理についてまとめていただくと共一歩である．診断法は，個々の疾病に対しても，診断法に，農林水産省の「平成27年度家畜疾病診断精度管理向そのものに対しても日々進化しており，また進化せねば上事業」についてもご紹介いただく予定である．

ならない．しかし，時として立ち止まり，現状を正しくかつ深く認識することによって，次の一歩を効率よく踏極めて有効な治療薬や治療法が存在したとしても，疾み出すことが出来ることも明らかである．本日のフォー

病を正しく診断できなければ，その有効性が半減するこラムが診断法向上のための道しるべとなり，日本の畜産とは先に書いた通りである．人や動物が異常を示したの将来が明るいことを期待して緒言としたい．

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

55

大腸菌の全血清型を遺伝学的に判定する PCR 法の開発
宮崎大学農学部畜産草地科学科 井口純

1 ．はじめにには培養を含めて数日間を要することや，一部の分離株

病原細菌の分類・同定には，グラム染色による形態観では鞭毛を発現しておらず H 型をあてがうことができな

察をはじめ，代謝能や薬剤感受性の多様性を利用した選いことから，検査現場では O 血清群の判定が先行して行択培地や生化学的試験が工夫され，細菌学としての体系

われる．大腸菌の O 血清群はデンマーク国立血清学研究

的な分類基準が構築されてきた．さらに同種内での細分所（Statens Serum Institut: SSI）
（兼 WHO Collaborating

類には菌体表層に発現する構造物の免疫学的（または構Centre for Reference and Research on Escherichia and造的）な多様性に注目した血清型分類法が考案され，疫Klebsiella）により現在のところ O1から O188までが定学調査や特定集団の識別に用いられてきた．このようなめられており〔 3 種類の亜型（O18ab/ac，O28ab/ac，

表現型による分類手法は，現在においても細菌検査の現O112ab/ac）と 6 種類の欠番（O31，O47，O67，O72，

場では欠かすことが出来ない手法である．一方で分子生

O94，O122）が含まれる〕，大腸菌を細分類する上での物学やゲノム科学の進展により，遺伝子型や塩基配列型

国際的な指標となっている．SSI からはすべての O 血清に基づく分類手法も数多く開発され，再現性や分解能の群に対する抗血清試薬が販売されているが， 1 種類あた面で優れていることから研究や検査で多用されるようにり数万円と高価であることから各検査機関で全種類を揃なった．今回のフォーラムでは，大腸菌のゲノム研究かえることは経済的に難しい．国内メーカーからは病原大ら発展した，大腸菌 O 血清群の遺伝学的判定法の開発と腸菌の主要な50種類に対しての抗血清試薬が販売されてその実用例について紹介したい．

おり，多くの検査現場で用いられている．

2 ．開発に取りかかるまでの背景

1 ）大腸菌の O 血清群

2 ）腸管出血性大腸菌にみられる O 血清群の多様化
腸管出血性大腸菌（enterohaemorrhagic Escherichia
coli: EHEC）はヒトに対して下痢症や腹痛，出血性大腸

大腸菌の血清型は，菌体表層に発現するリポ多糖体の炎などを引き起こし，患者の一部は溶血性尿毒症症候群

糖鎖部分（O 抗原）を標的とした「O 血清群」と，鞭毛（HUS）や脳症を併発して死に至ることもある．EHEC

タンパクを標的とした「H 型」の組み合わせ（例えば感染症は感染症法において 3 類に区分され，診断した医O157:H7）によって表される（図 1 ）．分離株間で血清型師の全数届出が義務付けられている．病原微生物検出情が同一であった場合，それらは同一起源から派生した菌報によると，2014年には4,153例の EHEC 感染者報告（無株群である可能性が高いと考えられる．そのような特徴

症状保菌者を含む）があり，地方衛生研究所から報告さを利用して，感染事例の調査や国や地域における特定菌れた2,289例についてみると，上位から O157（59％），

群の流行調査に血清型別は用いられている．H 型の判定

O26（22％），O145（4.1％），O103（4.1％），O111（3.4％），
O121（2.9％）となり ，これら 6 種類は特に注意が必1）

要な O 血清群として位置付けられている．一方で，その他の O 血清群に属する EHEC の感染も年間100例程度（全体の 3 〜 4 ％）が報告されている．2007年から2011
年にかけて調べると，上記 6 種類以外で少なくとも80種類の O 血清群に属する EHEC が確認されており，その一部は血便や HUS を呈した重症患者から分離されていることから，稀なO 血清群に対する検査法も必要となる場合がある．2011年にはドイツを中心とした EHEC O104:H4
による大規模な集団事例が発生し，50名以上の死者を出した ．事例発生直後から旅行者などを介した本菌の我2）が国への侵入も警戒されたが，O104は稀な O 血清群で図 1 ．血清型別の標的となる O 抗原と H 抗原の模式図あったことから，国内メーカーが販売する抗血清試薬の家畜衛生学雑誌

56

第４1巻第 3 号（2015）

中に O104は含まれておらず，遺伝学的な検出法も確立れまでに培ってきたゲノム解析技術を用いて大腸菌 O 抗されていなかった．
「EHEC O104が猛威をふるってい

原の多様性に注目した研究をスタートさせた．特に注目る」という情報が世界を駆け巡る中で，国内検査機関のしたのは O 抗原多様化の遺伝学的なメカニズムと糖鎖構多くは疑いのある分離株を O104と特定する術が無い状造の多様性がもたらす環境適応性であった．多様化のメ況であった．結果として本菌の我が国への侵入は確認さ

カニズムを明らかにする糸口を掴むために，様々な O 抗れなかったが，この事例は広域な O 血清群に対する検査

原コード領域を比較することにした私は，既に塩基配列体制の必要性を示す一件となった．

データベースで公開されていた情報の収集から始めた．

3 ）O 抗原コード領域

しかし，上述したように約90種類の配列情報しか公開さO 抗原の合成には 3 種類の機能〔①構成単糖の合成れておらず，その中には不完全なものも多く含まれてい系，②糖鎖合成（糖転移），③糖鎖輸送と O 抗原の組みた．そこで国立感染症研究所にも協力していただきなが立て〕を担う10から20個程度の遺伝子が必要となる．こら SSI が提供する全種類の大腸菌 O 血清群参考株を収集

れらの遺伝子は染色体上の特定遺伝子座にクラスター

し，未発表および不完全なものから順に O 抗原コード領（O 抗原コード領域）を形成して存在する（図 2 ）．私が域の塩基配列を自分の研究室で決定することにした．研

本研究に取りかかった2011年当時，病原大腸菌と関連が究開始から 1 年と数ヶ月が経ち，すべての参考株の収集あるものを中心に約90種類の O 血清群株について O 抗原が終わり，新たに20種類近くの O 抗原コード領域の塩基

コード領域の塩基配列が報告されていた ．さらに，遺配列が決まった頃，ドイツで EHEC O104による事例が伝子構成や塩基配列の比較などから糖転移や糖鎖輸送に勃発した．我々が既に得ていた全参考株と配列情報は，関わる遺伝子の塩基配列が各血清群にユニークであるこO104をはじめとする O 血清群を見分ける遺伝学的手法のとも知られており ，それらの配列を標的とした遺伝学

開発には欠かせない情報だった．そのような状況の中，的な O 血清群判定法（主に PCR 法）も，約60種類の O

国立感染症研究所の先生からお声がかかり，厚生労働省

血清群について発表されていた ．しかし，稀な O 血清

による EHEC 研究グループで，「大腸菌 O 血清群の網羅群をカバーした網羅的な遺伝学的判定手法は存在しな的な遺伝学的検査法の開発」を担当することとなった．

3）

3）

3）

かった．
4 ）開発にとりかかるまでの私的な背景
2007年から2009年までの 3 年間，私は宮崎大学医学部
微生物学教室で博士研究員をしていた．当時の研究室で3 ．大 腸菌の O 血清群を網羅的に判定できる PCR法の開発

1 ）O 抗原コード領域の配列情報の収集と比較解析

は病原細菌を中心に，世界をリードするゲノム研究が進

まずはO1からO187までの大腸菌 O 血清群（計184種類）

められていた．そして EHEC O26，O111，O103と腸管について，O 抗原コード領域の塩基配列情報を収集した．

病原性大腸菌 E2348/69株の全ゲノム解析プロジェクト

コード領域のサイズ（共通遺伝子 galF と gnd で挟まれたに私も参加することとなった．あるときは病原遺伝子領領域）は，最小で4.5 kbp（ 4 遺伝子を含む，O155），最域の有無に注目して，またあるときは一遺伝子上の一塩大で19.5 kbp（18遺伝子を含む O108）であった．全コー

基の違いに注目して，病原大腸菌がどのように病原性をド領域について遺伝子予測と機能予測を行ったところ，獲得し，進化してきたのかを明らかにしていった．そのO14と O57は O 抗原の合成に必要な遺伝子を含んでおら後，2010年に宮崎大学の若手研究者を育成する制度にず，糖鎖解析などから O 抗原を発現していないことが確

よって自身の研究室を立ち上げることになった私は，こ認された．既に Jensen と Reeves

4）は，O14は O 抗原を発現せず，R コア糖鎖が抗原となっていることを報告している．領域レベルでの相同性比較の結果，35種類の O
血清群は相同または類似した O 抗原コード領域を共有す
る15グループにまとめられた．O 血清群と O 抗原コード
領域の関係を整理すると，図 3 で示すように全184種類の O 血清型のうち， 2 種類（O14と O57）はコード領域を持たず，35種類は相同な15グループにまとめられ，残る147種類はユニークな領域を保有することが明らかとなった．我々はこのように区分され O 抗原コード領域の遺伝学的な分類を『O-genotype』として定めることに図 2 ．O 抗原コード領域の模式図

した ．
5）

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

57

O 抗原の合成には糖鎖を輸送して連結する必要があ化された O-genotype 内ではそれぞれ97％以上の塩基配

り， そ の ス テ ッ プ を コ ー ド し た 2 種 類 の ペ ア 遺 伝 子

列相同性を保ち，一方で，ほぼすべての O-genotype 間（wzx/wzy または wzm/wzt）が大腸菌では知られていでは最も似ているものであっても70％以下の相同性である．O 抗原コード領域には必ずどちらか一方のペア遺伝

る こ と が 確 認 さ れ た（ 図 4 ）． つ ま り，O-genotype は子が含まれる．上記 4 遺伝子の配列は O 血清群間で多様wzx/wzy または wzm/wzt の塩基配列に基づいて明確にであることが知られており，多くの研究者たちがこれら識別できることが確認された ．

の遺伝子を O 血清群判定の遺伝子マーカーとして用いて2 ）各 O 血清群を判定する PCR プライマーのデザイン

きた ．本研究ではすべての wzx/wzy および wzm/wzt

O 血清群を遺伝学的に判定する方法としては，リアル

遺伝子の詳細な比較解析を行った．その結果，グループ

タイム PCR 法や LAMP 法，マイクロアレイなどのハイ

3）5）

ブリダイゼーション法が候補として挙がったが，結局は広域な検査現場での実用性と使用者のコスト負担を考慮して，単純な PCR 法を採用することとなった．あとの作業はシンプルで，PCR プライマーを wzx/wzy または
wzm/wzt のいずれかの遺伝子上にデザインし，PCR 反応によって対象とする O 血清群株のみで増幅することを確認した．この作業を162種類すべての O-genotype について行った．デザインする上で工夫したのは，プライ
マーの Tm 値（ 2 本鎖 DNA が解離して 1 本鎖になる温度）を58℃付近で揃えることと，増幅産物サイズを階段状にすることだった．後述するように計画当初から最終
的にはマルチプレックス PCR による反応系の作製を目指しており，PCR 反応条件を単一化するためには上記
図 3 ．O 血清群とその遺伝子型（O-genotype）の対応の条件をクリアする必要があった．そして，すべてのO-genotype を識別出来る162種類のプライマーセットが完成した（図 5 ）．
3 ）効率的な検査系（マルチプレックス PCR）の開発
検出したい O 血清群の種類が明らかな場合は，それに対応する単独プライマーセットを用いて確認すればよいが，O 血清群が不明な場合は162本の PCR 反応チューブを用いたフルスクリーニングが必要となる．この操作はコストや手間の面で大きな負担が生じる．そこで，全162種類のプライマーセットを詰め込んだ20種類のマル
チプレックス PCR 反応系をデザインした（図 6 ）．それぞれの反応チューブには増幅産物のサイズが明らかに異図 4 ．Wzx と Wzy の相同性解析

グループ（Gp）内の遺伝子間は97％以上の塩基配列相同性を示した．一方で，それ以外の遺伝子間は70％以下の相同性を示した．

なる 6 から 9 種類のプライマーセットを組み合わせ，これにより20反応チューブによるフルスクリーニングが可図 5 ．O-genotype が判別できる162種類のプライマーセットから得られた PCR 産物の泳動像

家畜衛生学雑誌

58

第４1巻第 3 号（2015）
認している．一方で，174種類の O 血清群に属する野生株を用いた評価では，90.8％（522/575株）の対応率であった．対応しなかった理由としては，不一致が13株，PCR
産物が得られない場合が35株， 2 種類の PCR 産物が得られた場合が 5 株であった ．これらについてはゲノム6）解析などによりその原因を追及中である．さらに，交差反応によって O 血清群の判定が難しい菌株や，いずれの抗血清にも凝集しない菌株などを集めて ECOG-PCR を実施したところ，71.1％（81/114株）で O-genotype が決定した．このように，強い交差反応を示す菌株や，何ら
図 6 ．マルチプレックス PCR のプライマーの組み合わせ

かの原因によって O 抗原の発現が失われた菌株に対しては，ECOG-PCR は特に有効であることが示された．

4 ．E. coli O-genotyping PCR を用いた調査・研究

上述したように，大腸菌分離株の O 血清群判定は，病原タイプ別や分離源別でどのような系統集団が流行しているのかを調査するのに有効である．そして，その情報を得るための方法として ECOG-PCR の利用が期待される．ヒトから分離される EHEC については臨床的な重要性から詳細な O 血清群解析が行われており，国立感染症研究所ではその一次スクリーニング法として ECOG図 7 ．各 マ ル チ プ レ ッ ク ス PCR で 得 ら れ る す べ て のPCR 産物パターンの泳動像

PCR が既に用いられている．さらに，抗血清の価格的な問題などから網羅的な O 血清群判定の情報がこれまで乏しかった（または無かった）タイプの大腸菌について
も ECOG-PCR を用いた解析を進めており，これまでに能となった（図 7 ）．マルチプレックス化した状態でも4,000株以上の結果を得ている．例えば，大阪府立公衆特異性が失われないことを確認した．さらにテンプレー

衛生研究所とは海外渡航者や国内事例から分離された腸ト DNA は培養液を単純にボイルしたものでも良好な結管毒素原性大腸菌と腸管凝集付着性大腸菌の果が得られることを確認した．

O-genotype を判定し，海外流行株との比較を行ってい我 々 は，20種 類 の マ ル チ プ レ ッ ク ス PCR か ら 成 る

る．動物衛生研究所とはブタの下痢症や浮腫病からの分O-genotype の フ ル ス ク リ ー ニ ン グ 法 を『E. coli

離株について（図 8 ），国立病院機構・大阪南医療セン

O-genotyping PCR（ECOG-PCR）』と名付けた．本法はターとは尿路感染症や敗血症患者からの分離株につい

単離コロニーまたは純粋培養液が準備された状態からスて，大阪市立環境科学研究所とは健康なヒトの糞便からタートして 3 時間以内で判定結果が得られ， 1 検体あたの分離株について（図 9 ）の解析を進めており，それぞりに要する消耗品のコストは1,000円を下回る．全プラ

れの特徴が徐々に明らかとなってきている．さらに各菌

イマーの配列を含め，本法を実施する上で必要なすべて

株の進化系統タイプ，薬剤耐性能，保有する病原性関連の情報は論文および研究室 HP で公開している．さら遺伝子などの解析も併せて進めている．これらの結果をに，各自でのプライマー調整は大変な作業となるため，踏まえた将来的な計画として，① O-genotype の照会に調整済みプライマーミックスの有償提供も行っているより付随する情報が得られるデータベースの構築と，②（ 詳 し く は 研 究 室 HP を ご 覧 下 さ い．http://www.

目的別（病原タイプ別や宿主別）の簡易検査キットの開cc.miyazaki-u.ac.jp/iguchi）．

発に取り組む予定である．EHEC については，主要な O

6）4 ）E. coli O-genotyping PCR の妥当性

血清群と病原遺伝子を 1 反応で判定できる検査キット

ECOG-PCR は再現性やコストの面で優れており，O 血〔EHEC (O antigens) PCR Typing Kit〕をタカラバイオ

清群判定に準ずる遺伝学的手法としてその実用性が期待との共同研究により開発し，既に販売を開始している．

さ れ て い る． 全 参 考 株 を 用 い た 評 価 で は O 血 清 群 と大腸菌は多様な病気を引き起こす原因菌となり，そのO-genotype は100％（182/182株）で対応することを確

宿主域や汚染域は広い．我々の研究グループでは病原大「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

59

図 8 ．下痢症のブタから分離された大腸菌の O-genotypeの分布

図 9 ．健康なヒトの糞便から分離された大腸菌のO-genotype の分布

腸菌の横断的な調査結果を基に，食の安全や家畜衛生，

4 ）Jensen SO. Reeves PR. Deletion of the Escherichia

国民の健康に寄与できる包括的なネットワークを構築しcoli O14:K7 O antigen gene cluster, Can Jていきたいと考えている．

Microbiol, 50:299–302 (2004)（Kusumoto M et al, unpublished data）（Iguchi A et al, unpublished data）

5 ）Iguchi A, Iyoda S, Kikuchi T, Ogura Y, Katsura K,

5 ．参考文献

Ohnishi M, Hayashi T, Thomson NR. A complete

1 ）国立感染症研究所感染症情報センター：腸管出血性
大腸菌感染症2015年 4 月現在

36：84-86（2015）

2 ）Buchholz U, Bernard H,Werber D, et al. German
outbreak of Escherichia coli O104:H4 associatedwith sprouts, N Engl J Med., 365:1763–70 (2011)

view of the genetic diversity of the Escherichia
coli O-antigen biosynthesis gene cluster. DNA Res,
22:101-7 (2015)6 ）Iguchi A, Iyoda S, Seto K, Morita-Ishihara T,
Scheutz F, Ohnishi M. Escherichia coli3 ）DebRoy C, Roberts E. Fratamico PM. Detection of

O-Genotyping PCR: a comprehensive and practicalO-antigens in Escherichia coli, Anim Health Res

platform for molecular O serogrouping. J Clin

Rev, 12:169–85 (2011)

Microbiol, 53:2427-32 (2015)

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

61

遺伝子組換え抗原を用いたヨーネ病の迅速・高感度診断法の開発
国立研究開発法人

農業・食品産業技術総合研究機構

永動物衛生研究所田礼子

1 ．はじめにている．諸外国においても，特異的なヨーネ菌成分の同

ヨ ー ネ 病 は ヨ ー ネ 菌（Mycobacterium avium subsp.

定，遺伝子組換体を用いる診断法の開発が行われてきた

paratuberculosis）の経口感染により起こるウシ，ヤギ，が，ヨーネ菌全ゲノムが公開されてから10年経過した現

ヒツジ等の反芻獣の慢性消化器感染症として古くから知在でも，実用化された診断法はない．ここでは，現行診られている感染症であり，長い潜伏期間（半年〜数年）

断法の問題点と遺伝子組換え抗原を用いた新たな診断法の後，持続性の下痢，栄養状態の悪化による削痩等を起の開発について述べたい．

こし，やがて死に至る．感染しても多くのものは発症せず，無症状に経過するが，無症状の時期においても，糞便中にはヨーネ菌が排菌されることがある．診断も困難

2 ．現行診断法と問題点

2 − 1 ．培養検査であるため，現在世界中に蔓延している．特にヨーロッ

ヨーネ病の最も重要な検査法の一つはヨーネ菌を分離

パ諸国やカナダ，米国等ではヨーネ病の感染率が極めてすることだが，菌の発育が遅いためコロニーを確認する

高く，50〜70％の農場に感染が広がっているとの報告もためには寒天培地で 2 〜 5 ヵ月間の培養期間を必要とすある．これに対して，我が国ではヨーネ病を家畜伝染病

る．一方，液体培地では通常 2 〜10週間以内にヨーネ菌予防法における，いわゆる「撲滅対象疾病」として診の増殖を確認することが可能である．特に，ヒツジ型

断・淘汰による防疫対策を実施しているため，諸外国にヨーネ菌のように寒天培地での分離が難しい株は，液体

比べるとヨーネ病感染率は極めて低いレベルに保たれて培養法が必須である．また，寒天培養法と比較して液体いる．しかし，現在でも年間数百頭がヨーネ病として摘培養法の方が検出感度も高い ．病性鑑定指針改訂版に発されているため，本病の撲滅に向けて，2013年 4 月かは，液体培地によるヨーネ菌培養法も併記されている．

らリアルタイム PCR 検査による糞便の遺伝子検査が法

しかし，牛糞便希釈液を抗菌剤で処理する過程におい定検査に加わり，より迅速な診断が可能となった．検査て，生菌が1/10程度に減少してしまうという問題点があを繰り返すことでヨーネ病感染牛をできるだけ早期に発る．従って，菌数の少ない検体や菌の活性が低下してい見することが防疫対策上重要であるが，ヨーネ病感染牛る場合，培養検査で検出されない可能性もある．

群の氷山現象（図 1 ） から，現行の診断法では摘発さ

2 − 2 ．遺伝子検査（リアルタイム PCR 検査）

1）

2）

れない多くの感染牛がいることが懸念される．そのた培養検査の結果が出るまでの間，罹患牛が排菌を続けめ，早期診断法の開発，診断法の改良，高度化が望まれて感染拡大の怖れがあるため，現行の培養法に代わる迅
速な診断法としての遺伝子検査は，ヨーネ病防疫対策上有用な検査法である．平成25年 4 月からリアルタイム
PCR に よ る 糞 便 の 遺 伝 子 検 査 が 法 定 検 査 に 加 わ り，
ヨーネ病検査体制が大きく変わった．本検査法の特異性は高く，精度は糞便培養と同程度とされ，糞便1g 中にヨーネ菌数十個から検出可能である．さらに，本検査の優れている点は，ヨーネ菌 DNA 量も測定することができるため，罹患牛の排菌が大量か少量なのかを迅速に判定することも可能である．0.001pg/2.5ml 以上を定量陽性とし，法律上患畜と診断する ．本検査は感度，特異3）度共に優れているが，技術的に煩雑なこと，費用がかかることから，現状では多頭飼育農場において，個体診断
を遺伝子検査のみで行うことが難しい場合もある．
図 1 ．ヨーネ菌感染牛群の氷山現象（2013 Magombedze G et al.）

家畜衛生学雑誌

62

2 − 3 ．抗体検査

第４1巻第 3 号（2015）
つとされている．IFN-γは，抗原提示細胞から抗原提示罹患牛は排菌を繰り返し，やがて抗体が検出されるよを受けた活性化 T 細胞から主に産生されることから，病うになる．抗体上昇は感染後期に起こるため，抗体検査

原体由来の抗原で末梢血単核球等を刺激し，一定時間培は簡便かつ安価で一度に多数検体を検査する点で優れて養後の上清中 IFN-γ濃度を測定することにより，その抗いるが，抗体検査のみで診断する方法では排菌牛を見逃原に対する宿主の細胞性免疫の状態を知ることが可能でしてしまう可能性がある．ヨーネ病抗体検査法はいくつある．感染から発症までの経過に個体差はあるが，感染か開発されてきたが，現在は ELISA が最も利用されて

後 2 〜 6 ヵ月くらいから免疫細胞がヨーネ菌抗原を認識いる．平成25年 4 月からヨーネ病の抗体検査をスクリー

して，細胞性免疫応答を引き起こす．しかし，ここで使ング検査として位置づけ，抗体検査陽性牛の確定検査を用されるヨーネ菌抗原は抗酸菌共通抗原を含むため，宿リアルタイム PCR 検査で行う現在の検査体系に組み込

主の細胞性免疫応答はヨーネ菌特異的でない可能性が残まれている．現行の ELISA は，抗原が全菌体の抽出産

る．

物であり，抗酸菌共通抗原物質を含むため，交差抗体による非特異反応が問題となる．通常はフレイ菌吸収によ3 ．遺伝子組換え抗原を用いた診断法の開発

り交差抗体を除くことが可能である．しかし，数年前か

3 − 1 ．抗酸菌増殖促進物質を利用したヨーネ菌培養法

ら ELISA 抗体陽性であるが，病変が認められず，菌分我々は，非感染牛と比較して，ヨーネ菌感染牛回腸粘膜

離や遺伝子検査も陰性である事例が確認されている．

固有層の上皮細胞及び粘液産生細胞にウシ Regenerating

2 − 4 ．細胞性免疫を指標とする検査

islet-derived 3 gamma（RegIIIγ）遺伝子が高発現して検査法としてはヨーニン皮内反応，インターフェロ

いることを発見した．RegIIIγは腸管に発現する C 型レン・ガンマ（IFN-γ）検査があり，感染早期の診断法とクチンであり，ヒトやマウスの腸管レクチン RegIIIγ

して有用である．IFN-γは種々の機能を有するサイトカ

は，自然免疫に役立つことが知られており，近年では抗インであり，マクロファージ機能を活性化する作用によ菌活性も報告されている．遺伝子組換えウシ RegIIIγをり，感染症の防御に重要な役割を担うサイトカインの一作製し，ヨーネ菌との相互作用を調べたところ，ヨーネ
菌体表面にウシ RegIIIγは強く結合した．ヨーネ菌にウ
シ RegIIIγを添加し，37℃ 2 時間感作させた後に培地へ接種することで，ウシ RegIIIγを添加しない従来の培養法と比較して，菌検出までの日数が短縮され（図 2 ），生菌数が多く検出された．このウシ RegIIIγ前処理法による増殖促進作用は，ヨーネ菌だけではなく，抗酸菌に共通して認められたが，一般細菌に対しては認められなかった（図 3 ）．さらに，ヨーネ病診断法の培養検4，5）査として応用するため，牛糞便希釈液を抗菌剤で前処理
図 2 ．ウシ RegIIIγ前処理培養におけるヨーネ菌検出の早期化

した後，抗生物質とウシ RegIIIγで前処理する方法により，従来法に比べて早期且つ高感度にヨーネ菌の検出が図 3 ．抗酸菌及び一般細菌のウシ RegIIIγ前処理培養による菌数の比較

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

63可能であった．本方法は菌数が少ない検体や従来の培養の遺伝子組換え抗原を作製し，宿主免疫応答を調べた．

法 で は 検 出 で き な か っ た， い わ ゆ る viable but non-

実験感染牛の血液を経時的に採取し，血液細胞をヨー

culturable（VNC）菌の検出に有用であることが示唆さ

ネ菌 PPD（purified protein derivative）抗原で刺激するれた．

と，早くて感染後 2 ヵ月から IFN-γが産生誘導される

3 − 2 ．免疫応答を指標とする早期診断法

が，これに先駆けて血液細胞を Map41抗原で刺激する

我々は，ヨーネ菌遺伝子発現ライブラリーを作製し，

こ と で， 感 染 2 週 後 か ら IL-10産 生 が 誘 導 さ れ た（ 図IFN-γ産生を指標としたスクリーニングを行い，ヨーネ

4A）．IL-10は活性化 T 細胞からの IFN-γ産生誘導を抑制

菌感染早期に宿主細胞性免疫応答を誘導する抗原遺伝子することが知られている．Map41抗原刺激により主にマMap41を同定した．Map41抗原は IFN-γ産生誘導するとクロファージから IL-10産生が誘導され，ヨーネ菌及び同時に，免疫抑制性サイトカインであるインターロイキ

種々の抗酸菌感染牛の血液細胞を Map41抗原で刺激しン10（IL-10）を強く産生誘導した ．また，ヨーネ菌遺たときに産生される IL-10量を比較したところ，ヨーネ

伝子発現ライブラリーから，抗体価の高いヨーネ病発症

菌感染特異的な応答であることが示唆された（図 5 ）．

牛血清を用いて，免疫原性の強い抗原遺伝子 Map-echA

また，現行の ELISA 抗原は菌体破砕物を用いており（enoyl coenzyme A hydratase）を同定した ．これら

抗酸菌共通抗原を多く含むが，単一の遺伝子組換え抗原

6）7）

図 4 ．ヨーネ菌実験感染牛における各種検査法の比較

図 5 ．各種抗酸菌接種子牛血液細胞における Map41抗原刺激による IL-10産生応答の特異性

家畜衛生学雑誌

64

第４1巻第 3 号（2015）

表 1 ．ROC 解析による各 ELISA の AUC，感度，特異度

Map-echA を 用 い る「Map-echA ELISA」 は， 従 来 の
ELISA と比較して感度，特異度がともに高く，特に非参考文献

1 ）Magombedze G et al. Evalution of the “Iceberg

特異反応が疑われる血清に対する反応性が低く，排菌量P h e n o m e n o n ” i n J o h n e ’s D i s e a s e t h r o u g hの少ない罹患牛血清では高い陽性率を示す点が優れてい

Mathematical Modelling. PlosOne (2013) 8:10:e76636

た（表 1 ）
．さらにヨーネ菌実験感染牛において，従来2 ）川治聡子らの ELISA で陽性となる時期より 2 〜 7 ヵ月早期に Map-法の確立

畜産技術（2015）718： 7 -11

echA 抗原に対する抗体上昇が有意に認められた（図3 ）川治聡子

ヨーネ病清浄化への新戦略

4D）．
これら遺伝子組換え抗原を用いる新しい検査法は，遺伝子組換え抗原の安定した大量生産と精製方法を確立する必要があり，今後民間メーカー等との共同研究等が必須である．

液体培地を用いたヨーネ菌分離・同定
家畜衛生学

雑誌（2013）39：103-106
4 ）永田礼子ら

抗酸菌の増殖促進剤，これを添加して培養する抗酸菌の培養方法，及び，これを含有する
抗酸菌の培地用培地

特許第5515104号（2014）5 ）永田礼子 第 5 回 農研機構 新技術説明会（2015）
http://shingi.jst.go.jp/abst/2014/naro.affrc/program.

4 ．おわりに

現行の診断法では全ての感染牛を摘発することは出来

html
6 ）Nagata R et al. A specific induction of interleukin-10

ないため，新しい高感度且つ特異度の高い診断法の開発

by the Map41 recombinant PPE antigen ofに向けて尽力する必要がある．同時に，ヨーネ病対策はMycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Vet.

長い時間と労力，また摘発・淘汰による生産者の苦痛をImmunol. Immunopathol. (2010) 135:71-78

伴うが，ヨーネ病の特性をよく理解し，防疫対策に取り7 ）Nagata R et al. Use of enoyl coenzyme A hydratase

組むことが極めて大切である．早期発見のための検査とof Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

摘発・淘汰を繰り返すことによりヨーネ病感染牛群の氷

for the serological diagnosis of Johne’s disease. Vet.

山（図 1 ）を小さくしていくことがヨーネ病撲滅につな

Immunol. Immunopathol. (2013) 155:253-258

がる．

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

65

口腔液を用いた PRRS ウイルス抗体および遺伝子の検出
新潟県農林水産部畜産課

會

田

恒

彦

1 ．はじめに材は誰にでも容易に出来るほか，採材時に豚にストレス

豚繁殖・呼吸障害症候群（PRRS）は豚の呼吸障害やがかからないこと，複数の個体から採集されるため群単

流死産を主徴とし，国内の養豚場における発生被害額は位でのウイルス検出が可能であることなど検査材料とし年間約280億円と試算されるなど，その被害が極めて大て有用な面がある．このため，農場の状況に応じて利用きく，重要視されているウイルス性疾病である．養豚場

することで豚群の PRRS ウイルス感染状況を把握しやすにおいては，飼養環境の改善による豚のストレス低減，

くなると考えられる．最近では国内でも口腔液を用いた

オールインオールアウト，母豚の免疫安定化等の複合的検査が行われ始めているが，新潟県においても平成23年

な対策が実施されるが，対策の立案と効果判定には豚のより口腔液を用いた PRRS ウイルス抗体および遺伝子検

感染状況を把握する必要があるため，抗体検査や遺伝子査を行っており，今回はそれらの内容を中心に口腔液関検査が多くの農場で行われている．

連の知見について紹介する．

口腔液とは唾液の他に口腔粘膜からの浸出液が混ざった液体のことで，人や豚で各種病原体やそれらの抗体が検出されることが知られている．PRRS ウイルスについ2 ．豚の口腔液採材方法

豚の口腔液は無漂白の綿ロープ（直径 9 mm）を用いても口腔液から抗体および遺伝子が検出され，近年アメて採集する．口腔液が浸み込み易いように端をほどいた

リカでは口腔液を用いた PRRS ウイルスの研究や検査がロープを複数本束ね，それを，豚が咬みやすいように床数多く実施されている．

からの高さを調節して豚房の柵等に結紮する．豚の頭数

一方，国内での PRRS ウイルス検査には一般的に血清が多い場合などは，なるべく多くの豚が咬めるようにが用いられており，これまでに多くの知見が蓄積されてロープを 2 〜 3 か所に取り付ける．約20分間放置後，アきた．しかし，豚の採血は技術修得が必要なほか，豚のルコール綿で拭いた鋏でロープを切り取ってフリーザー

保定に労力を要し，時に危険も伴う．また，個体数が多バック等に回収し，浸み込んだ口腔液をバック内に絞りい場合は検査コストも増加することなどから，定期的な出し，さらに，滅菌チューブ等に移して検査に供するま検査の実施が難しくなる場合も考えられる．口腔液の採で−20℃以下で保存する（図 1 ， 2 ）．得られた口腔液

図1

家畜衛生学雑誌

66

第４1巻第 3 号（2015）

図2は著しく懸濁しているため，検査では遠心分離した上清を用いた．
なお，保存温度については，10℃， 4 ℃，−20℃では
いずれも10日間以上，qRT-PCR および ELISA キットの
平均 S/P 比の結果がほとんど変わらないこと，20℃以上
では検出率が低下するため不適当であることが報告されている（Prickett ら2010）．

3 ．口腔液を用いた PRRS ウイルス抗体および遺伝子の検出方法の検討
口腔液からの PRRS ウイルス抗体が間接蛍光抗体法（IFAT）及び血清用の市販 ELISA キット（PRRS エリー
ザキット）で検出可能かどうか検討した．
IFAT 用プレートは，MARC-145細胞に PRRSV EDRD-

図 3 ．口腔液を用いた IFATPRRS ウイルス感染細胞の特異的な蛍光（矢印）が認められた（×100）

1 株を接種し，80％アセトンで固定したものを用いた．
口腔液の IgG 濃度は 5 検体の平均値が0.018mg/ml で，ものと，添付の検体希釈液で 4 倍に希釈したものの 2 種

同一群の血清の平均値10.83mg/ml と比較すると極めて類を用いて S/P 比を算出した．

微量であった．このため，口腔液を3,000rpm で 5 分間
遠心分離した上清を希釈せずにプレートに加え，感作時

PRRS ウイルス遺伝子の検出は，Christopher ら（1995）の方法による RT nested PCR 法により行った．

間を延長して 4 ℃で一晩（17時間）反応させ，通常の 2

平成23年度，新潟県内の14農場の 2 〜 8 か月齢の豚を倍濃度の20倍希釈の二次抗体と37℃で40分間反応後に蛍対象に，一豚房内の豚を一群として，50群の口腔液を用

光顕微鏡による観察を行った．その結果，PRRS ウイル

いて上述した方法により抗体および遺伝子検査を行っ

ス感染細胞に特異的な蛍光が観察された（図 3 ）．

た．併せて，同群から 2 〜10頭（平均4.6頭）ずつ計233

ELISA については，口腔液の上清原液をプレートに頭の血清を採材し，個体別または群でプールして血清で加え 4 ℃で一晩（17時間）反応させ，以降は添付マニュの常法により検査を行い，口腔液の成績と比較した．そアルに従って実施し，血清と同様に S/P 比≥0.4を陽性との結果，口腔液は，IFAT および指示血清を 4 倍希釈し判定した．なお，陽性及び陰性指示血清は原液を用いたた場合の ELISA 成績がいずれも血清と一致率96％を示

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

67

表 1 ．IFAT 及び ELISA による PRRS ウイルス抗体検査成績（平成23年度）

表 2 ．PRRS ウイルス遺伝子の検出成績（平成23年度）

した（表 1 ）．なお，エライザキットについては平成26
年に後継の PRRS X3エリーザキットが販売されたことから，その後は IFAT および旧キットでの成績と比較

4 ．口腔液を用いた PRRS ウイルス検査の対象豚群について
平成23年度は 2 か月齢以上を検査対象月齢とし，血清し，Kittawornrat ら（2012）の方法を一部変更（指示血と口腔液で抗体検査の判定が良く一致することを確認し清の希釈を30倍ではなく10倍）し検査を実施している．

た．その後，離乳後の 1 か月齢以降の豚も対象にしたと

PRRS ウイルス遺伝子の検出は，プール血清で陽性18

ころ，血清と口腔液の ELISA 判定が一致しない群が増群，陰性32群で，口腔液では陽性15群，陰性35群であっえ，一致率が70％台に低下したことからその原因を検討た．両者の判定は45群で（陽性14群，陰性31群）一致した．平成25年度の11農場22群の 1 〜 2 か月齢未満につし，一致率は90％であった（表 2 ）．その後，平成24年

いてみると，血清の陽性群は 4 群であったが，口腔液の度に80群について遺伝子検査を実施したところ，プール

陽性群は血清陽性の 4 群を含む16群であった．血清と口血清と口腔液の判定一致は59群（陽性13群，陰性46群）

腔液で判定が一致した群は22群中10群（陽性 4 群，陰性で，一致率は73.8％に低下した．このため，平成25年度

6 群）で，判定一致率は45.4％と低い値を示した．

は Chittick ら（2011）を参考に口腔液の RT-PCR の酵素

当該月齢群の飼料には豚の血しょう蛋白質が含まれてを倍量添加して実施したところ，血清と口腔液の判定はいる場合があるが，採材した口腔液には口腔内の飼料の76群中66群（陽性 9 群，陰性57群）で一致し，一致率は混入が確認された．このため，血しょう蛋白質由来の86.8％となった．個体の感染実験では，血清と口腔液か

PRRS ウイルス抗体が検出され，血清の成績との不一致

ら PRRS ウイルス遺伝子が検出される時期はほぼ一致すが増加した可能性が考えられたことから，血しょう蛋白ることが報告されている（Kittawornrat ら 2010）こと質を含有する豚飼料から PRRS ウイルス抗体が検出されから，血清をプールする頭数，プライマーの種類，添加

るかについて検討を行った．口腔液を採材した農場とはする試薬の種類および濃度等の条件検討を行うことによ異なるが， 4 農場から採材した哺乳豚用飼料（代用乳）り血清と口腔液の遺伝子検査の判定一致率を上げること

4 検体について IFAT を実施したところ，いずれも640は可能と思われる．

倍以上の抗体価を示し，特異的な蛍光が観察された（図4 ）．一般的に血しょう蛋白質は代用乳と前期の人工乳に含まれることから，口腔液を用いた PRRS ウイルス検家畜衛生学雑誌

68

第４1巻第 3 号（2015）
陽転ステージの現状確認，洗浄消毒を行ったオールアウ
ト後の豚舎に豚を導入した際の感染有無の確認，ワクチ
ン 接 種 後 の 抗 体 陽 転 確 認 な ど が あ げ ら れ る． ま た，
PRRS ウイルス ORF5遺伝子領域のシーケンスにおいても，口腔液から得られた塩基配列は血清や病性鑑定の肺由来のものと一致したことから，利用が可能と考えられた．
今回は PRRS ウイルスについての検査成績を紹介したが，豚インフルエンザウイルス，豚サーコウイルス 2

図 4 ．哺乳豚用の飼料（代用乳）を用いた IFATPRRS ウイルス感染細胞の特異的な蛍光が認められた（×100）

型，豚流行性下痢ウイルス，マイコプラズマ等の病原体についても口腔液から検出可能であることが報告されており，それらを対象にした検査が既に実施されている．
複数の病原体をモニタリングすることで，口腔液の検査材料としての有用性はより高まるものと思われる．

査の対象月齢は，それらの飼料が切り替わり一定期間が経った 2 か月齢以降が適当と思われた．

家畜衛生の現場では，従来から血清，糞便および病性鑑定の臓器等が検査材料として用いられてきており，それらの検査方法や得られたデータの活用方法については

5 ．口腔液を用いた検査の利用状況

多くの知見が積み重ねられている．口腔液の利用につい血清の検査成績との比較から，豚群の PRRS ウイルスてはまだ一般的ではないものの，材料としての特性を理

感染を調査する際の材料として口腔液の利用は可能と判解し，調査の目的に応じて利用すれば，省力的に有用な断されたことから，新潟県では一部の農場で口腔液を用データが得られるものと思われる．今後，検査材料の一いた PRRS ウイルスモニタリング検査とその成績に基づつとして利用が進むことを期待したい．

いた衛生対策指導を実施している．具体例として，感染「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

69

次世代シークエンス技術の微生物感染症診断への応用
国立感染症研究所

黒田

誠

1 ．はじめにと経費が未だ高額であるため，残念ながら現状では即活NGS）による技術革新は目覚ましく，全ゲノム情報を俯

エンサー技術の飛躍的な進展に期待したい．

次世代シークエンサー（Next-Generation Sequencing:

用できるシステムではない．今後の “次次” 世代シーク瞰的に把握して全体像を理解するほうが効果的な時代に突入した．NGS を利用した基礎・応用研究の進展はめ
ざましく，数多くの情報解析アプリケーションが開発さ

2 ．NGS 検査の不明症例への応用

全ての条件が整えば，“効率化・省力化・可用性の高れ，高度な感染症診断へと応用が期待されている．人獣い” 検査法として機能する日が想定される．臨床分野で共通感染症と疑われる MERS コロナウイルス等，獣医は NGS は不明症例への対応として感度・特異性の高い学領域から数多くのウイルス病原体が明らかになり，逐

包括的な病原体検査法としても有用であり，既存の検査

次それらに対応するためには多様な検査法の開発が急務

プライマーに合致しない易変異 RNA ウイルス等でも検である．新規病原体が増えるたびに検査が重複し煩雑化出が可能になった．現在，脳炎等重症例を中心に NGSする傾向にあるが，NGS によるメタゲノム解析法は配検査を行い，その有効性について症例ごとに検討してい列まるごと解読できるゆえ， 1 度の解析ランで全ての病る．予めお断りしておくと，回復期の検体においては抗原体検出を対象とするといっても過言ではない．仮に複体検査のほうが適しており，NGS 含む核酸診断では確数の病原体が病態に関与していても，NGS はその生物定できず，適切な検査材料を用いることが肝要であろう

種と存在比を定量的に検出することが可能である．偏見（図 1 ）．これまでの不明症例のメタゲノム検査の経験上，なく病原体を検査できる核酸診断法であるため， 1 次ス

一般的な呼吸器ウイルス（ライノウイルス，メタニュー

クリーニングとして適している．ただし，数日要するのモウイルス等）は咽頭拭い液の全 RNA から〜0.001％未

図 1 ．NGS 検査の特徴 1 ．NGS 検査は核酸診断であるがゆえ，病原体を検出できる採材時期であるか充分な検討を要する．経過日数を経ている場合，NGS 検査でも期待される結果を得られないと想定される．検体の DNA ま
たは RNA のどちらを優先して NGS 検査するのか，対象病原体の特徴によって網羅・包括性と特異度が異なる．NGS 検査で得られたメタゲノム解読リードの情報解析パイプライン MePIC2（https://mepic.niid.go.jp/
cgi-bin/mepic/index.cgi）を公開している．

家畜衛生学雑誌

70

第４1巻第 3 号（2015）

満の存在比と非常に少ない症例が多い．断片的な配列で全ゲノム情報から遺伝型 G1P［8］であることも同時に確もウイルス種と遺伝型の推定は可能であるが，全ゲノム定することができた．当初，ロタウイルス抗原を検出す

情報にまで辿り着かない事が多い．一方，ウイルス血症

る迅速検査では陰性であったが，NGS 検査によって調を伴うウイルス種（JC ウイルスやデングウイルス等）

理師からも同一の塩基配列を検出できた．迅速・簡易検や腸管下痢症（ロタウイルス，ノロウイルス）ではウイ

査で陰性であっても核酸診断の併用も行っておきたいとルス量が際立って多いことが特徴であり，全ゲノム解読ころである．

は比較的容易な対象であろう．

不明症例の NGS 検査では病原体が不明なため臨床検

既存の核酸・抗血清診断で不明になってしまう感染症

体のダイレクト解読が軸になっている．そのため，得ら疑い事例は後を絶たない．感染症疑いの不明症例の解明れる配列の多くはヒト配列であり，非常に無駄が多い反に NGS が有効であることは数多くの報告例があり，臨面，漏れのない検査法として利点もある．しかしながら

床診断ツールとして汎用される日も近いと予想される．

情報量が多いために迅速検査としては未だ改善の余地がこれまで，行政・依頼検査として数多くの不明症例の解あり，“情報解析ツール，判断基準，経費” 等に課題が析に従事してきた．その中でも直近の成果を紹介すると，山積みである．それら一つ一つ解決すべく，我々は不明

フィリピンで不明脳炎の症例の髄液から Nipah virus を症 例 解 析 用 の web 情 報 解 析 ツ ー ル MePIC2（https://

検出した（感染研・獣医科学部との共同研究）．PCR 等

mepic.niid.go.jp/cgi-bin/mepic/index.cgi）を公開し，検様々な核酸診断が陰性で，IgM 抗体の陽性を確認できた

査現場での有効活用を期待している．

ことから，より感度・特異性の高い NGS 検査が必要であった．0.0002％の頻度（解読リード 1 本陽性 / total
460,780本リード）のギリギリのところで明らかな Nipah

3 ．ウイルス株の遺伝型を指標にしたマッピング

感染症のグローバルな伝播を把握するためには当該病

virus 配列（W protein に該当）を検出した．PCR より

原体の遺伝型を把握することが先決である．アウトブレ

も感度よく検出し，明らかな “病原体配列” として提示

イクは元となる汚染源が必ずどこかに存在し，危機管理できるところが NGS 検査の総合力といえるだろう（図対応として被害を最小限に留めるために汚染源の特定は2）．

必須である．それ故，出来る限り病原体の遺伝型特定は同一食材による集団食中毒事例でも病原体を特定でき行なっておきたい．海外からの来訪者が増えつつある日ないケースが散見される．ある事例を紹介すると，集団本において，2014年夏のデングウイルスの国内症例を経食中毒と思われる下痢便のメタゲノム解析からロタウイ

験した今，病原体の由来特定は重要になってきている．

ルスを大量に検出し， 2 本鎖 RNA ウイルス・11分節のそこで我々は公開データベースに登録されている全ての図 2 ．NGS 検査法の特徴 2 ．従来の核酸診断法は特異ターゲットの増幅・検出がメインであり，特異度が高いが網羅性が低い鑑別診断法である．NGS 検査法は研究開発途上であるため鑑別診断として確立された検査系ではないが，網羅性を特徴とし，感度だけでなく配列類似性による遺伝型の評価も可能にした配列検査法である．

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

71

デングウイルス配列（1943−2014年）を収集し，分離開）．一目瞭然，ある特定の遺伝型ごとに大陸によって国・地域と血清型および遺伝型としてデータベース化し生息分布が制限されている．そもそもデングウイルスは

Google Maps 上で表現できるよう作成した（図 4蚊媒介感染症であり，中間宿主の蚊の種類を生息域に制未公

図 3 ．NGS 検査法にて得られた解読リードからのウイルス配列の検索ツール VirusTAP（近日公開）．当研究所にて開発中のウェブ・アプリケーションの概要で，患者検体（髄液当）の DNA/RNA を NGS 解読したリードを処理する情報解析パイプライン．質の悪いリードのトリミング処理，ヒト配列等，ウイルスに該当しない配列
リードの除去，そしてウイルス配列の de novo assembly が効率良く行えるよう，複数のスクリプトを採用しパラメーター調整した．参考例はデングウイルスの検出例である．

図 4 ．デングウイルス配列（1943−2014年：70年間）の分離国・地域と血清型および遺伝型データベース（図では血清型 2 の遺伝型分布のみ表示）．大陸・地域に特化した遺伝型が優位に検出されていることが伺える．

家畜衛生学雑誌

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第４1巻第 3 号（2015）

限されることが主要因であろう．このデータベースを有核菌ゲノム分子疫学ツールを開発し（TGS-TB：http://

効に活用すれば，患者個々の感染デングウイルス株をゲ

gph.niid.go.jp/tgs-tb），実地疫学を強固に補完する情報ノ ム 情 報 と し て 取 得 し， こ の Google Maps/ デ ン グ・

提供を可能にした（図 5 ）．世界各国の研究グループか

データベース上で検索すれば最も近縁のデングウイルス

ら結核菌ゲノム情報が多数登録されるようになったことを検出することができる．残念ながら，現在の公開配列から，従来法の分子疫学よりもゲノム分子疫学法のほう

データベースは世界で発生するデング熱症例の全てを網が高精度な分子疫学データを提供できるようになった．

羅しているわけではなく，今後，書庫としてのデータ
ベースの更なる充実が期待される．

グローバルに伝播する薬剤耐性細菌，特に臨床上重要な抗菌薬（キノロン，セフェム・カルバペネム系）に対する耐性頻度の上昇から治療薬剤の制限が懸念されてい4 ．ゲノム情報を活用した伝播の “追跡・トレーサ
ビリティー”

る 5 つの重点項目の 1 つとして薬剤耐性と高度な遺伝学

ゲノム情報は院内感染対策やグローバルな伝播の “追手法を用いた検出（Antibiotic Resistance & Advanced

跡・トレーサビリティー” に有効であり，結核菌の市中

Molecular Detection）を挙げている．世界中で問題と伝播，MRSA の院内・市中・家族内アウトブレイク，なっている薬剤耐性菌の分布は一様でないこともあり，

流通食材による食中毒菌の追跡など実際のアウトブレイ

ホットスポットが存在することが示唆されている．これ

ク対策に貢献している．米国 FDA/CDC ではサルモネ

らの地域からヒト・家畜・食糧等の移動に伴い，耐性菌

ラ等の広域食中毒事例に対応すべく， 1 万株以上のゲノが世界中に拡散している可能性に留意すべきだろう．薬ム情報を蓄え迅速な事態収拾に活用している．我々は結剤耐性菌の多くは薬剤耐性プラスミドによる耐性獲得でる．米国疾病予防管理センター（CDC）も2014年におけ図 5 ．結核菌ゲノム情報を用いた感染伝播様式の情報解析パイプライン TGS-TB（https://gph.niid.go.jp/tgs-tb）．
MIRU-VNTR 等の従来法では同一と示された 7 株（JP01−07）のゲノム情報から 6 箇所の特有な塩基変異を検出し，分離菌株の異同判定をより正確に判定することを可能にした．結核菌ゲノムは0.3−0.5塩基 / 年 / ゲノムの変異速度を示すと算定されており，JP05は 3 箇所の塩基ミスマッチを有し，疫学調査からも他の分離株とは因果関係が低いと示された．ゲノム分子疫学データは疫学調査を強く補完し，無駄のない調査を遂行するための貴重な情報源となりうる．

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

73あり，プラスミド単位で菌種・株間の伝播を追跡できるは更なる実験・疫学調査が必須である．病原体分離は重のであれば，より正確な耐性伝播の様式を明確にできる要であり，分離できない場合でも抗体価（IgM，ペアものと考えている．薬剤耐性プラスミドのネットワーク

IgG）の上昇は確認したい検査項目である．NGS を 1 次

解析ツールも開発し，臨床・家畜・食品・環境にまたがスクリーニングに適用できるのであれば検査対象を絞りる薬剤耐性細菌のプラスミド伝達を追跡するシステムもこむことができ，分離・抗体検査へのステップへ無駄の考案中である．

ない道筋・手順を示してくれるだろう．今後，ゲノム情
報と疫学情報が融合したビッグデータの活用が促進されおわりにれば，様々な感染症診断・対策において包括的なセーフゲノム情報は病原体の種・遺伝型・薬剤耐性・病原性

ティーネットとして貢献できると期待される．NGS をといった複合的な情報を一度に提示してくれる上，可用検査現場にも普及しかつ公衆衛生に有効に還元すべく，性・継続性の高い情報源である．ただし，“NGS で新規

我々は研究協力者とともに高度化と簡易化の両方を満た（未知）病原体の発見が容易に！” と思われている節がす次世代型病原体検索システムの開発を遂行中である．

あるが，それは候補の探索であって病原体と規定するに

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

75

家畜疾病の診断における検査精度の管理（検査の信頼性確保に向けて）
一般財団法人生物科学安全研究所

1 ．初めに

福田苗

美

実施の時期については，対象となる疾病によって異な家畜疾病の診断は，各都道府県の家畜保健衛生所が実る可能性がある．すなわち，常に発生する可能性のある施しており，その結果によっては，家畜伝染病予防法に疾病で，定期的に検査が行われている場合と，いつどこ

従って患畜の殺処分等の処置を執行することになる．

で発生するか予想がつかない疾病あるいは季節性のある

従って，家畜保健衛生所の診断技術は高い精度が要求さ疾病に分けられる．

れ，そのためには，家畜保健衛生所の検査員の確かな診前者の場合，食品登録検査機関制度における精度管理

断技術の確保とこれを維持するための精度管理体制を構の一般ガイドライン「食品衛生検査施設等における検査

築する必要がある．

等の業務の管理の実施について（平成 9 年 4 月 1 日付け

さらに，この精度管理体制は，畜産物を輸出する際の衛食第117号

厚生省生活衛生局食品保健課長通知）」で我が国の家畜疾病の診断体制に対する輸出先国の信頼をは，週 1 回以上の頻度で検査等を実施するか否かによっ確保する観点からも重要であると考えられる．

て技能評価を行うタイミングが定められていることか

一方，家畜疾病の診断における精度管理については具体的にどのようなことが求められるのか，これまで明確

ら，これを一例として具体的な実施基準を定めることが妥当と思われる．

にされておらず，現在，農林水産省の「平成27年度家畜問題は後者の場合である．いつ発生するかわからない

疾病診断精度管理向上事業」において検討されていると疾病，つまり，いつ検査が必要となるか予想がつかないころである．

性質の疾病については，その検査技術が常に標準以上の今回のフォーラムでは，まず，精度管理とは何か，検査の信頼性確保には何が必要であるかについて，家畜疾レベルに維持されていることを証明するために，実施時期を定め，技能評価を行わなければならない．

病の診断における検査あるいは既に精度管理体制が構築

具体的にどのような頻度で実施するかは，各疾病の特されている輸入食品の監視における食品検査体制の事例

徴によるが，少なくともその発生状況に季節性のある疾を参考に，「内部精度管理」，「使用機器の精度管理」，「外病については，万一，技能評価において問題となる所見

部精度管理」，「精度管理体制」及び「外部認証制度」のが見られた時，これを改善するための時間が必要となる各観点から紹介したい．

ため，流行の季節に突入する前に余裕を持って評価を行っておく必要がある．

2 ．内部精度管理

内部精度管理とは，いわゆる検査室内あるいは検査施

設内における精度管理を示す．
内部精度管理には大きく分けて 2 種類あり， 1 つは 1回の検査毎にその検査の精度を管理するもの，もう 1 つ

3 ．検査機器等の精度管理

上記の内部精度管理と並行して，検査に使用する測定機器，電子天秤，マイクロピペット等の精密機器・器具の精度管理が必要となる．

は検査担当者の検査技術の水準を管理するものである．

基本的には，検査の都度実施する使用時点検と定期的検査毎の精度管理は，検査の都度，検体の検査と並行に実施する定期点検があり，特に定期点検については，

して数値が判明している陽性試料あるいは標準試料等及当該精密機器のメーカーによる専門的な点検が求められ

び陰性試料を検査し，陽性試料からは所定の数値が得らている．

れ，陰性試料からは検出されないことを確認し，当該検査の精度を担保するものである．

つまり，精度管理においては，「機器に異常が生じたら修理する」のではなく，常に高精度の検査ができるよ

検査技術の面においては， 1 つの検査方法について，う，使用する機器については計画的かつ定期的な点検にその検査を担当する全ての検査員を対象に，数値が判明

よる管理を行い，機器の性能を積極的に維持することがしている陽性試料あるいは標準試料等を用いて定期的に重要とされている．

検査を行い，期待される数値が得られるか否か技能評価を行い，個々の検査精度を管理する．

また，前述の内部精度管理において，異常とは言えな
いが，不安定な数値の変化が見られる場合，それは使用

家畜衛生学雑誌

76

第４1巻第 3 号（2015）

機器の不具合の初期症状の可能性がある．内部精度管理

ンを各検査施設の検査環境において，どのように適用においては，検査担当者の検査精度のみを管理するだけし，精度が確保される検査を実施するのかについて具体でなく，使用機器のわずかな異常を監視する目的も含ま的な文書が必要とされるのである．

れているのである．

また，新しい検査方法あるいは検査機器の操作・管理方法について SOP が制定された際には，これを検査担

4 ．外部精度管理

当者へ周知させるため，教育訓練が必要となる．その内部精度管理が検査の精密さを管理する一方で，外部他，検査精度の維持・向上のためには，疾病あるいは検精度管理においては，同一試料を複数の試験検査機関で査技術に対する外部研修への計画的な参加，新たに検査測定し，測定結果を比較・解析する外部精度管理調査に担当者となった者に対しては，新人研修が必要となる．

参加することにより，測定値の正確性を評価する．

精度管理に必要な上記の数々の作業については，SOP

食品登録検査機関制度においては，「食品衛生検査施に従い，常に確実に実施されなければならず，そのため設等の外部精度管理調査の実施機関について（平成 9 年に，これを自ら点検する自己点検の作業が必要となる．

3 月26日衛食第91号）」に基づき，適当と認められた機

計画的かつ定期的に自らの作業あるいは記録等をチェッ

関の実施する外部精度管理調査を検査項目群ごとに年 1クすることにより，問題点をいち早く検出し，改善する

回以上受けることとされており，該当する外部精度管理ことが求められる．

調査実施機関として一般財団法人食品薬品安全センター

検査精度の維持向上及び管理には，組織としてこれら

秦野研究所が，調査の計画，調査用試料の作製および調を計画的に実行し，問題点が見つかれば改善し，これを査結果の統計解析を行っている．

標準化するという流れを恒常的に繰り返すことが重要と

家畜疾病の診断に必要な検査の場合，現時点において，外部精度管理調査実施機関が存在しない．現在，なる．これには，運営管理者を中心とした検査体制の構築が必須となる．

「家畜疾病診断精度管理向上事業」において外部精度管

具体的には，検査施設の所長あるいは検査部門の部門

理調査実施要領案が検討されており，この事業で家畜疾長を運営管理者として，検査現場の各責任者を統括し，病診断における外部精度管理の基礎が構築されれば，し各検査責任者は各検査担当者を統括するという体制に，かるべき機関が外部精度管理調査実施機関を担当するこ

自己点検部門の設置あるいは自己点検担当者の指名が加とになると思われる．

えられる．

外部精度管理調査においては，調査実施機関から検査機関に対し，値を伏せた調査用試料が提供され，定められた期間内に各検査施設において検査を行い，結果を提6 ．外部認証制度（ISO17025試験所認定制度）

これまで紹介した精度管理に必要な組織体制，組織運出するが，その際には，調査前に必ず内部精度管理等で営及び検査実施体系等について，国際的な基準となって検査担当者における検査の精密性が確保されていることいるのが ISO17025であり，外部認証機関に申請し，試を確認しておく必要がある．

験施設がこの基準に準じて運営され，検査が実施されてつまり，各検査施設においては，検査の精密性については問題が無いことを前提に調査を受け，結果に問題があった場合は，検査手順，検査試薬及び検査機器等について十分検証し，その原因を明確にするのである．

いるかどうか確認を受け，合格すると ISO17025に準拠した試験所として認定される．
この認定制度は，国際的に通用する認定制度であるため，海外では，多くの公的な試験・検査施設で認定を取得している．特に法に基づく試験・検査を実施する施設

5 ．精度管理体制

では，認定取得は必須であると言っても過言ではない．

内部精度管理，検査機器等の精度管理及び外部精度管

精度管理の実施，その方法の標準化，教育訓練，自己理について紹介したが，これらについては，施設ごとに点検，そして，それを支える組織体制の構築と紹介して手順が標準化され，これを文書化した標準操作手順書

きたが，家畜疾病の診断を担う検査施設が最終的に目指（以下，「SOP」と言う）の制定が必要となる．

すところは，それら施設の精度管理体制が国際的に認め当然ながら，検査手順についても SOP の制定が必要となるが，検査環境，使用する機器・器具・試薬メー
カー等が検査施設によって異なることから，検査方法のガイドライン等自体を複写したものを SOP とすることは不適切とされている．広く一般的な検査法ガイドライられた証としての，ISO17025試験所認定の取得であると思われる．

「家畜衛生フォーラム ’15」要旨集

77

7 ．おわりに

精度管理向上事業」は，国立研究開発法人農研機構動物

一度蔓延すれば甚大な被害となる家畜疾病の診断に

衛生研究所が受託し，一般財団法人生物科学安全研究所

は，確実な検査技術，検査精度及びこれらを恒常的に維が再委託機関として事業の一部を担当している．本事業持するための組織体制の構築が必須であると考える．

では，家畜保健衛生所における精度管理体制確立に資す

また，家畜疾病の防疫対策には，国際的な協調が必要

るため，SOP の雛形の作成，内部精度管理ガイドライ

であり，そのためには，検査体制の基準についても国際ン案の作成，外部精度管理調査実施要領の作成等を検討的な試験所基準に準拠し，名実ともに国際的に通用するしており，この成果を通じて，我が国の家畜疾病検査体

検査結果が求められると考える．

制が国際的な基準の下にいち早く構築されることを期待

今年度から 3 年間の予定で開始された「家畜疾病診断する．

日本家畜衛生学会
第83回大会

講演要旨集

主 催：日本家畜衛生学会

日本家畜衛生学会第83回大会と き：平成27年12月18日（金） 10：00〜11：45
ところ：Meiji Seika ファルマ（株） 本社講堂

座長

宮﨑茂（生物科学安全研究所）

10：00〜10：15
1 ．β ヒドロキシ酪酸はウシ好中球の化学発光（CL）を抑制しアルギニンは CLを高める○山城良介・澄川莉那・三上貴史・樋口豪紀・永幡座長

肇

斎藤康倫（ちば NOSAI 連）
10：15〜10：30

2 ．牛乳房炎分房への Bifidobacterium breve およびラクトフェリン分解産物注入に伴う乳腺の反応性とサイトカイン産生への影響○澤田知佳・丸山久美子・浅井友紀子・國分千尋・権平
樋口豪紀・永幡座長

智・河合一洋・肇

白井淳資（東京農工大学）
10：30〜10：45

3 ．微酸性電解水が乳房炎由来菌株産生バイオフィルムに及ぼす影響○湯浅麗子・河合一洋・篠塚康典・松山公喜・天羽由知
座長

柿市徳英（日本獣医生命科学大学名誉教授）
10：45〜11：00

4 ．食肉の赤色化における一酸化炭素の特性○三木座長

優・和賀正洋・竹田志郎・猪股智夫・押田敏雄・坂田亮一

押田敏雄（麻布大学名誉教授）
11：00〜11：15

5 ．
「エアシャワー」における抗菌剤（次亜塩素酸ナトリウム溶液）を用いたエアロゾル噴霧による抗菌効果試験
野崎雄幸・○今野幸浩・白井淳資・宮地洋二郎

座長

長井

誠（東京農工大学）

11：15〜11：30
6 ．卵黄抗体製剤の初乳効果の検討○磯日出夫・原田宗範・北山しおり・内山史一・野村茂之

家畜衛生学雑誌

82

1

第41巻第 3 号（2015）

βヒドロキシ酪酸はウシ好中球の化学発光（CL）を抑制しアルギニンは CL を高める
○山城良介 1 ）・澄川莉那 1 ）・三上貴史 2 ）・樋口豪紀 1 ）・永幡
（ 1 ）酪農学園大獣医学部・ 2 ）味の素（株）バイオファイン研

肇1）

素材用途開発研）

key words：arginine, β- hydroxybutyric acid, bovine neutrophils, chemiluminescence【目的】
分娩前後の乳牛は負のエネルギーバランスにより血中ケトン体（β ヒドロキシ酪酸：BHBA）が増加することが知られている．BHBA は好中球の機能を抑制することが知られており，免疫機能の低下や感染症などへの罹患リスクが高まることが知られている．感染防御に重要な役割を演じている好中球の機能はアミノ酸に影響され，なかでもアルギニン（Arg）は好中球活性酸素産生を増加させることが明らかとなっている．本研究では BHBA 処置後の好中
球への Arg 添加が好中球化学発光（CL）に及ぼす影響と分娩直後の乳牛の好中球への Arg 添加が好中球化学発光（CL）に及ぼす影響を検討した．

【材料と方法】
酪農学園大学付属農場で飼育されている臨床的に健康なホルスタイン雌牛 6 頭（ 3 〜 4 歳齢）から採血し比重遠心法で得た分離好中球を 2 ×10 cells/ml に BHBA（最終濃度1.0〜4.0mM）を添加し30分37℃で静置した．Arg（最終濃5

度0.2〜0.8mM）を添加し20分37℃で静置して，ルミノール：10µl（：0.5mg/ml）および刺激剤（オプソニン化ザイモザン）10µl：10mg/ml）を加えて，化学発光装置により37℃，30分間の CL を測定（cpm）した．また分娩直後の乳牛 3 頭から得た好中球への Arg 添加が CL に及ぼす影響について検討した．

【結果】
BHBA 添加によって CL は減少傾向を示し，対照群（0mM）と2.0mM の間において有意差が認められた．Arg 添加によって CL は増加し BHBA 添加によって惹起された CL の抑制が，Arg 添加によって増加傾向を示した．BHBA
4.0mM 添加時において Arg 非添加群（0mM）と添加群（0.8mM）との間に有意差が認められた．また分娩直後の乳牛の好中球へのアルギニン添加は CL を増加させる傾向があった．

【考察】
BHBA の添加による CL の減少は，白血球膜に対する直接的な作用や BHBA が受容体の構造を変化させることに起因して生じるものと考えられる．しかし BHBA 処置後においても Arg の添加により CL は増加したため，Arg は
BHBA によって阻害されることなく好中球内に取り込まれ，NO などの産生による好中球の殺菌能の向上に関与している可能性が示唆された．また分娩直後の乳牛への Arg 添加のよる好中球の CL を増加させる傾向が明らかとなった．これらの結果から Arg は BHBA 添加好中球や分娩直後の乳牛の好中球に対して機能を高める作用があり，分娩前後の免疫力低下やケトーシス罹患に付随して起こる好中球機能低下をはじめとした免疫機能の改善につながる可能性が示された．

「日本家畜衛生学会第83回大会」要旨集

83

図 1 ．アルギニンの添加による好中球化学発光能の変化
アルギニン（0.2〜0.8mM）；mean±SE（n ＝ 4 ）＊：p<0.05，＊＊：p<0.01

図 2 ．β- ヒドロキシ酪酸の添加による好中球化学発光能の変化
β- ヒドロキシ酪酸；mean±SE（n ＝ 6 ）＊：p<0.05）

図 3 ．β- ヒドロキシ酪酸およびアルギニン添加による
好中球化学発光能の変化
β- ヒドロキシ酪酸（ 0 〜 4 mM）;
アルギニン溶液（0.8mM）
mean±SE（n ＝ 6 ）＊：p<0.05

図 4 ．分娩牛由来好中球への Arg 添加が好中球化学発
光能に及ぼす影響
アルギニン溶液（0.8mM），mean±SE（n ＝ 3 ）家畜衛生学雑誌

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第41巻第 3 号（2015）

牛乳房炎分房への Bifidobacterium breve およびラクトフェリン分解産物注入に伴う乳腺の反応性とサイトカイン産生への影響○澤田知佳 1 ）・丸山久美子 1 ）・浅井友紀子 1 ）・國分千尋 1 ）・権平
樋口豪紀 1 ）・永幡

智 1 ）・河合一洋 2 ）肇1）（ 1 ）酪農学園大学獣医学部・ 2 ）麻布大学獣医学部）
key words：Bifidobacterium breve, bovine mammary gland, cytokine mRNA, infusion【はじめに】
牛の乳房炎は病傷件数がもっとも多い乳牛の疾病であり，乳量および乳質に損失をきたし生産性に多大な影響を与えるため経済的損失が大きい疾患の一つである．抗生物質治療が一般的であるが，薬物残留や薬剤耐性菌の問題など
効果的な代替療法の探索とその利用が待たれている．本研究では，乳房炎牛の分房に乳酸菌 Bifidobacterium breve（死菌）とラクトフェリン分解産物（LFH）を併用注入し，乳腺の反応性および乳汁中のサイトカイン産生を検討した．

【材料・方法】
本学附属農場で飼育されているホルスタイン種泌乳牛の中で，体細胞数が300×10 cells/ml 以上の 7 頭 7 分房を用3いた．乳酸菌 B. breve（ 1 ×10 CFU/ml） 3 ml および LFH 7ml の計10ml を搾乳後の分房に24時間間隔で 2 回注入
9し，注入前と注入 1 ， 3 ， 7 および21日後の搾乳直前の分房乳を採取した．注入21日後の体細胞数を指標とし治癒群（注入21日後に体細胞数が300×10 cells/ml 以下に減少した個体）および非治癒群（注入21日後に300×10 cells/ml 以
33上となった個体）に分類し，以下の項目について分房乳を比較した．測定項目：体細胞数，乳成分，電気伝導度，pH，NAGase 活性，ラクトフェリン（LF）濃度，細菌学的性状，CL 反応および乳体細胞の IL-1β，IL- 6 ，IL- 8 ，IL-12，TNF-α，および IgG の mRNA 発現およびそれらをサンドイッチ ELISA 法により定量した．

【結果】
乳房炎の原因菌は治癒群で Other streptococci（ 1 頭），Coagulase negative staphylococci（ 2 頭），菌分離陰性（ 1頭）であり非治癒群は 3 頭すべて Staphylococcus aureus であった．体細胞数は両群ともに注入 1 日後に最高値を示し，治癒群では注入21日後に有意に低下した（p<0.05 ）．乳糖率および無脂固形成分率は，治癒群で注入 3 日後に最低値を示した．LF 濃度は治癒群で注入 3 日後に最高値を示し，注入21日後に有意に減少した（p<0.05 ）．NAGase は両群ともに注入 1 日後に増加，その後減少した．非治癒群の乳汁中 IL-1β，IL- 6 ，IL-12および TNF-α産生量は注入
1 日後で最高値を示しその後減少した．また mRNA の発現は IL-1βおよび IL- 8 は注入 0 日目と比較し注入 3 日後に発現が増加した．

【考察】
両群ともに体細胞数，NAGase 活性，LF 濃度および CL 反応は注入 1 日後に顕著に増加する傾向が認められた．治
癒群のサイトカイン mRNA 発現は非治癒群に比べ高値を示す傾向が認められるとともに，本研究により環境性乳房炎および菌分離陰性分房に対する治療効果が期待され，その有用性が示唆された．

「日本家畜衛生学会第83回大会」要旨集

図 1 ．B. breve および LFH 併用注入に伴う分房乳の体細胞数の推移
0 日：投与前 1 〜21日：投与後．Mean±SE（n ＝ 6 ）分子／分母：検出分房群／注入分房群

図 2 ．B. breve および LFH 併用注入に伴う分房乳中の IL- 1β産生の推移
0 日：投与前 1 〜21日：投与後．Mean±SE（n ＝ 6 ）分子／分母：検出分房群／注入分房群

図 3 ．B. breve および LFH の併用注入に伴う分房乳中の IL- 1βの mRNA 発現の推移
0 日：投与前 1 〜 7 日：投与後．Mean±SE（ 6 ）分子／分母：検出分房群／注入分房群85

家畜衛生学雑誌

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3

第41巻第 3 号（2015）

微酸性電解水が乳房炎由来菌株産生バイオフィルムに及ぼす影響○湯浅麗子 1 ）・河合一洋 1 ）・篠塚康典 1 ）・松山公喜 2 ）・天羽由知 2 ）（ 1 ）麻布大学獣医学部・ 2 ）森永乳業（株）装置開発研究所）
key words：slightly acidic electrolyzed water, mastitis, biofilm, bactericidal effect【目的】
微酸性電解水は， 2 〜 6 ％の塩酸を電解槽で電気分解することにより生成される微酸性の次亜塩素酸水溶液である．これまで種々の微生物に対する微酸性電解水の殺菌効果は報告されているものの，牛難治性乳房炎の要因の一つと考えられている，原因微生物が産生するバイオフィルムに対する作用は明らかにされていない．また，乳房炎の原因菌は環境由来菌が全体の 8 割以上を占めることから，乳房炎防除のための環境衛生の重要性が指摘されている．そこで，乳房炎由来菌株を用いて，微酸性電解水の菌株産生バイオフィルムに対する作用を調査した．

【材料・方法】
乳房炎乳汁から分離された 4 菌種（Klebsiella pneumoniae，Escherichia coli，Staphylococcus aureus，Pseudomonas
aeruginosa）を各 5 株ずつ供試した．微酸性電解水はピュアスター

Mp-300（森永乳業（株））を用いて作製後，デジタルパックテスト（（株）共立理化学研究所）を用いて塩素濃度を調整した．最小殺菌濃度（MBC）の測定は，37℃温度下において，10 CFU/2µl 菌液を各濃度の微酸性電解水200µl（0.1，0.5， 1 ， 5 ，10，25ppm）に加え，各4

感作時間（ 1 ，2.5， 5 ，10，15分）後に0.1N チオ硫酸ナトリウムを加え，塩素を失活することで反応を停止した．
その後，この感作菌液をミューラーヒントンブロスで培養し，18時間後に凝集・白濁が見られなかったものを殺菌されたものと判定した．最小バイオフィルム殺菌濃度（MBEC）の測定は，MBEC

TM

Biofilm Assay Plate（InnovotechInc.）を利用し形成させたバイオフィルムに対し，MBC 測定と同様の感作方法，条件で測定した．

【結果】
乳房炎由来菌株に対し，微酸性電解水25ppm 以上， 1 分感作ですべての菌株を殺菌した（表 1 ）．バイオフィルム
殺菌濃度については，10分感作では殺菌効果が見られなかったが，P. aeruginosa を除く菌株では10ppm 以上，15分
感作で殺菌効果がみられた（表 2 ）．

【考察】
本研究では，微酸性電解水を高濃度に，または感作時間を長くすることによって，バイオフィルム形成後の菌に対しても殺菌効果を示すことが明らかになった．バイオフィルムは，微生物細胞およびその間隙や表層を覆うマトリクスから構成され，微生物によってその構成分子が違うことが報告されている．P. aeruginosa に対しては感作時間を長くしても効果が得られなかったことから，P. aeruginosa が形成するバイオフィルムは，微酸性電解水が作用しにくい構成であることが推察された．
以上のことから，微酸性電解水は殺菌作用だけでなく，菌種によってはそのバイオフィルム破壊効果も併せ持っていることが明らかとなった．したがって，微酸性電解水は環境における乳房炎原因菌の制御に有用である可能性が示
唆された．

「日本家畜衛生学会第83回大会」要旨集
表 1 ．各感作時間の微酸性電解水最小殺菌濃度（ppm）

表 2 ．各感作時間の微酸性電解水最小バイオフィルム殺菌濃度（ppm）

87

家畜衛生学雑誌

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第41巻第 3 号（2015）

食肉の赤色化における一酸化炭素の特性○三木優 1 ）・和賀正洋 1 , 2 ）・竹田志郎 1 ）・猪股智夫 1 ）・押田敏雄 1 ）・坂田亮一 1 ）（ 1 ）麻布大獣医・ 2 ）伊藤ハム）
key words：color development, meat processing, carbon monoxide【目的】
食肉の色調は商品価値を左右する重要な要素であり，ミオグロビン（Mb）やヘモグロビン（Hb）によって支配される．食肉製品に使用される発色剤はボツリヌス菌の増殖抑制や酸化抑制の効果もあり，食肉加工において重要な添加物である．しかし食品衛生法上，使用基準があり，食品添加物という観点から消費者から忌避される傾向にある．
そのため，発色剤と同等の効果が得られる加工技術の開発が食肉産業上，望まれている．一酸化炭素（CO）は食肉の赤色化に寄与することが既に知られているが（Hunt 2005），加熱塩漬食肉製品への応用に関する報告は希少である．一方で，CO は食肉の不慮の赤色化の一因とも考えられ，その原因追究にあたり一酸化炭素処理時の食肉の色調
特性や加工特性ついて調べる必要がある．
本研究では，通常発色剤として用いられる亜硝酸ナトリウム（NaNO2）の添加によって生じるニトロシルミオグロ
ビン（NOMb）をカルボキシミオグロビン（COMb）に部分的に代替可能かについて先ず試験管内でモデル溶液を調製し，検証した．また，Mb と同様に食肉の色調に寄与する Hb に着目し，カルボキシヘモグロビン（COHb）が加熱
食肉製品の色調に関わるか検討すると共に，色調以外の特性として食肉中における CO による酸化抑制能の有無について調べた．

【材料と方法】
NOMb の生成量の測定（実験 1 ）：0.1M 酢酸緩衝液（pH5.5）で溶解した Mb（0.5％），アスコルビン酸 Na（NaAsA，
1.0％）および NaNO2（ 5 〜1,000ppm）を混合し NOMb 溶液を調製した．この溶液に CO を通気し，注入前後の吸収スペクトルを比較した．また，吸収スペクトルに変化があった溶液にはアセトンを75％加え（坂田2001），その吸収スペクトルから NOMb の生成量を測定した．
COHb の加熱安定性の評価（実験 2 − 1 ）：0.1M 酢酸緩衝液（pH5.5）で溶解した Hb 溶液（0.1％）および亜二チ
オン酸 Na（0.005％）を混合し，N2 ガス注入による酸素除去後に CO を通気し COHb 溶液を作成した．この溶液の調製直後，ならびに75℃で20分加熱後 0 ，30，60，120および180分経過した時点で吸収スペクトルを測定し，COHb の
加熱安定性を評価した．
Hb と CO の親和性の検討（実験 2 − 2 ）：0.1M 酢酸緩衝液（pH5.5）を溶媒として調製した NaNO2（100ppm），Hb（0.1％）および NaAsA（1.0％）を混合し，NOHb 溶液を作成した．N2 で脱気後，CO を注入し，吸収スペクトルを測定パターンから，NOHb 溶液における Hb と CO の親和性を検討した．
豚生肉中における CO の脂質酸化抑制能の確認（実験 3 ）：豚モモ肉を用い，脂肪や結合組織部をできるだけ除去した後に 2 度挽きし（チョッパーのプレート φ：6mm，3mm），混合した．これに，加水率10％で NaAsA 0.1％添加した対照区，NaNO2（100ppm）添加した NO 区および CO を通気した CO 区をそれぞれ調製した．これらを30g ずつシャーレに入れ，食品包装用フィルムで覆って冷暗所（ 4 ℃）で保存した．豚生肉中における CO の脂質酸化抑制能の有無を調べるため，保存 1 ， 7 ，14，21日目に豚肉試料の TBA 値を水蒸気蒸留法（安藤・山内
測定した．

1967）により

「日本家畜衛生学会第83回大会」要旨集

89【結果と考察】NOMb の生成量：NaNO2を50〜1,000ppm 添加して調製した NOMb 溶液で，CO 添加前後にスペクトル変化は見られなかった．これは全ての Mb が NOMb に置き換わったためと考えられる．一方，NaNO2を 5 あるいは10ppm 添加
した NOMb 溶液では CO 添加後にその吸収スペクトル変化が見られた．このことやその溶液を75％アセトン抽出すると NOMb のピーク波長が観察されたこと（図 1 ）から，溶液中において NOMb と COMb も生成したと考えられた．
COHb の加熱安定性：COHb は75℃，20分の加熱によって分解が見られ，これは COMb では認められない性質であった．また，加熱後の冷却保存中180分まで吸収スペクトルの減少により，CO が Hb から解離する様子が観察された．COHb は COMb と比較して熱に対し不安定であることから，加熱 CO 処理肉において，赤色度への影響を及ぼしにくいと推察された．
Hb と CO の親和性：NOHb へ CO を処理してもスペクトルに変化が見られなかったことより，Hb も Mb と同様に CO
より NO の方が親和性が高いことが確認された．
豚生肉中における CO の脂質酸化抑制能：保存 7 日目までそれぞれの豚生肉試料の TBA 値に有意な差はみられな
かったが，14，21日目で NO 区，CO 区共に対照区と比較し，TBARS 値が低くなり，NO 区と CO 区において差は見られなかった．これより，豚生肉中への CO 通気は NaNO2と同等の酸化抑制能が有るということが確認された（図 2 ）．
本研究より，CO 有効利用による加熱塩漬製品の発色剤低減化の可能性や，色調特製の調査による不慮の赤色化追及の可能性があると考え，今後更に調査が必要と考える．

【文献】
1 ）坂田亮一，2001，食肉製品中の赤色色素の特性，食肉の科学

42，109-121．

2 ）Hunt M.C, Mancini. R.A. 2005. Current research in meat color. Meat Science 71, 00-121.
3 ）安藤則秀・山内清，1967，加熱肉の酸敗に関する研究，日本畜産学会報

図 1 ．NOMb 溶液の CO 通気による吸収スペクトルパ
ターン

39，41-47．

図 2 ．豚生肉保存中における TBA 値の変化

家畜衛生学雑誌

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5

第41巻第 3 号（2015）

エアシャワーにおける抗菌剤（次亜塩素酸ナトリウム溶液）を用いたエアロゾル噴霧による抗菌効果試験
野崎雄幸 1 ）・○今野幸浩 1 ）・白井淳資 2 ）・宮地洋二郎 3 ）（ 1 ）日本無機㈱・ 2 ）東京農工大学共同獣医・ 3 ）HACCP 実践研究会）
key words：Disinfection, Air shower, Sodium hypochorite solution, Aerosol, mist

【目的】
エアシャワー（図 1 ）は清浄作業区域に入室する際，作業者による塵埃持ち込みを最小限にするため設置され，「入室者の衣服及び物品の表面などに付着している比較的大粒径の粒子を高速気流により除去すると共にクリ－ンルーム
内外の空気のクロスコンタミネーションを避けること．」と設置目的が規定され，これまでに電子半導体・食品関連・医薬品製造等，多くの分野に設置され効果を発揮している．従来型エアシャワーは物理的方法により，粒子20〜30µm 以上の塵埃除去に有効だが，より高度な清浄環境が求められる指定医療・薬品・細胞治療等の研究機関では，微生物が衣服に残存したまま清浄区域内に持ち込まれることが懸念されている．このような背景から化学的な消毒機能を併せ持つ新規エアシャワーの開発に着手した．化学的な薬液候補としてアルカリ性次亜塩素酸ナトリウムに着目し使用した．この薬液は一般の次亜塩素酸ナトリウムと抗菌効果は同程度であるが，防錆性に優れ，かつ食品添加物として認可されている．エアシャワー採用にあたり人間との薬液接触を必要最小限に抑え，かつ衣服に万遍なく接触消毒させるにはエアロゾル噴霧方式が最適であると考えた．薬液濃度と接触時間において溶液に浸漬した抗菌効果の文献は多いが，空気中噴霧エアロゾルの抗菌効果の報告は見当たらない．そこで，抗菌剤噴霧エアロゾル法がどの程度の抗菌効果を示すかエアシャワー実機（図 2 ）により調査した．

【材料と方法】〈材料〉（ 1 ）試薬：高純度製法によるアルカリ性次亜塩素酸ナトリウム［商品名：ピーズガード，有効塩素量100ppm，販売元：㈱ピーズガード］（ 2 ）生地：セルロース材質，大きさ100mm×200mm，坪量13.9g/m［商品名：2

ベ ン コ ッ ト， 製 造 元： 旭 化 成 せ ん い ㈱ ］（ 3 ） 試 験 菌：Staphylococcus aureus（SA）ATCC6538［ 商 品 名：
BioBallMultiShot10E8, 販売元：シスメック・ビオメリュー㈱］〈方法〉（ 1 ）エアシャワー：室内容積1.6m （＝幅0.8m× 奥行1.0m× 高さ2.0m）空間に運転時は約10㎥ /min, 換気回
3

数375回 /h に設定．試験都度，あらかじめ試験菌液含浸付着させた生地テストピースを入れ替え吊下げておく．（ 2 ）エアロゾル噴霧：エアシャワー天井にスプレーノズル（ 2 か所）を設置，噴霧量は0.5g/s（ 1 ノズル0.25g/s）一定にする．ノズルから検体まで距離一定0.86m とした．
（ 3 ）生地：試験菌液は SA 濃度6.4×10 cfu/ml に希釈生理食塩水
5に調整．各検体には0.2ml を吸着させた．（ 4 ）検体へのエアロゾル付着量測定：送風機 ON 時は検体縦置と横置の 2
種，OFF 時は縦置 1 種，噴霧時間は10，30，60及び180s の 4 種で付着量測定を行った．（ 5 ）抗菌効果測定：試験後，各検体を生理食塩水（9ml）に入れ撹拌し，0.1ml ずつ SCD 培地表面に接種，コンラージ棒で均一に広げて35℃
48時間培養し，菌数を測定した．なお，エアロゾル噴霧なしの生地を検体としたものを対照とした．

【結果】
エアロゾル噴霧時間に比例して，生地への薬液付着量は増えた．送風 ON の場合は OFF 時より約 6 倍の付着が得られた（図 3 ）．菌数においては，送風 OFF，噴霧時間10，30，60及び180s において対照の 1 /10以下に減少した（図「日本家畜衛生学会第83回大会」要旨集

914）．さらに送風 ON の場合は総ての噴霧時間において菌数は一桁台となった（図 5 ）．

【考察】
①エアシャワー：送風 ON により生地付着量が顕著に増大する結果が得られた．このことは，エアロゾル単体の空気
中移動距離が活発となり，生地への衝突付着する効率を高めているものと思われる．
②液体中試験では細菌と次亜塩素酸ナトリウム溶液が混釈されるため菌細胞壁への接触は十分であるが，次亜塩素酸
ナトリウムを空気中エアロゾルとして細菌に接触させるにはその濃度，噴霧量，時間が未知であった．今回の試験
では噴霧時間10，30，60，及び180s の 4 種とし，SA には噴霧量0.5g/s，時間10s である程度の抗菌効果データーが得られた．しかし僅か10s 噴霧でも生地への湿感が認められた．今後，人には結露等の不快感の量と抗菌効果の見極めが重要となる．今回の試験では噴霧時間は5s 前後でも効果が見込めると思われた．
③検体には細菌液として6.4×10 cfu/ml 調整，0.2ml を吸収させた．細菌は大量の生食中に分散している状態で生地繊5維間にあり，菌単独では存在していない．噴霧エアロゾルの大半は生理食塩水に溶け込んで，その生理食塩水を介して細菌に接触した可能性も考えられる．今後は生地乾燥状態で，細菌単独とエアロゾル接触する試験を行う必要があるため，乾燥した芽胞等を使用した実験も行いたい．

図 1 ．在来型エアシャワー

入口通路には吹出ノズルより高速気流約15〜20m/s
により，衣服付着塵埃を脱落させる機能がある．

図 3 ．送風 ON/OFF 時の噴霧エアロゾル
付着量

図 2 ．新規開発エアシャワー

在来型機能に加えて，上部よりエアロゾル噴霧する．脱落しきれなかった衣服付着微生物の発育を阻止する機能がある．

図 4 ．送風 OFF 時の発菌数

図 5 ．送風 ON 時の発菌数

家畜衛生学雑誌

92

6

第41巻第 3 号（2015）

卵黄抗体製剤の初乳効果の検討○磯日出夫 1 ）・原田宗範 1 ）・北山しおり 1 ）・内山史一 1 ）・野村茂之 2 ）（ 1 ）磯動物病院・ 2 ）田村製薬株式会社）
key words：colostrum, diarrhea, IgG【はじめに】
近年，酪農家の多頭飼育による作業の分業化と労働時間の厳格化が求められている．飼養管理上問題となるのが，時間が不定な分娩管理であり，24時間体制で管理されているところは少なく，自然分娩に依存するところが多い．また子牛への初乳給与のための搾乳および IgG を含む人工初乳製剤を生後 2 時間以内に投与されていない．実際に分娩の始まる時間をコントロールすることはできない．よって，これらの初乳効果の高いとされる分娩後の早期の作業は行われることは少ないのが現況である．そこで今回，比較的投与時間が緩慢な生後12時間以内に投与することで，初乳としての卵黄抗体製剤の効果を検討し，良好な成績を得たので，その概要を報告する．

【材料および方法】
試験期間は平成27年 4 月〜 5 月，試験農場及び対象牛は当院管内の下痢予防ワクチン未接種の 4 農場で，出生した
2 時間以内に初乳および人工初乳製剤を飲乳していないホルスタインおよび F1子牛を供した．供試製剤は新規卵黄抗体として IgG を主成分としたものを用い，出生子牛または子牛の下痢発症時に強制的に経口投与した．試験項目として①分娩後12時間以内の新生牛又は哺育中に下痢が発生した子牛に対して供試製剤を給与し軽減効果を観察した．
②供試製剤を給与前または給与後の子牛の糞便と同農場の親牛の糞便を採取し細菌，ウイルス及び原虫検査を実施した．検査項目は細菌，ウイルス検査については大腸菌（溶血性，K99，F41，毒素），ロタウイルス，コロナウイル
ス，クリプトスポリジウム，コクシジウムを実施した．

【結果】
生後12時間以内に試験薬を投与した群 4 頭では下痢はみられなかった．一方生後 8 日齢および30日齢で下痢を発症してから投与した群 7 頭すべて翌日に回復した．
（表 1 ）
糞便検査では親から 1 農場で溶血性大腸菌 2 頭および毒素 1 頭， 2 農場の子牛でロタウイルス， 1 農場の子牛でコクシジウムが分離され，K99，F41およびクリプトスポリジウムは分離されなかった．また，下痢症を発症し投与した群の 5 頭からロタウイルスが分離され，残り 2 頭からは分離されなかった．対照群の 1 頭で下痢が発症したが， 4日間の治療で治癒した．

【考察】
本来，初乳を子牛に飲乳させる目的は免疫グロブリンである IgG を投与することであるが，分娩後 2 時間以内に投与することが困難な場合は，今回の試験結果から卵黄抗体 IgG100％含む製剤を投与することで下痢に対する予防効
果があり，初乳様効果があるものと推察された．また，ロタウイルスを原因とする下痢症に対して卵黄抗体製剤の治
療効果および初乳様効果の有効性が確認された．従来の時間的制約の大きい母牛の初乳投与および IgG を含む人工初乳製剤を 2 時間以内に投与することが困難な場合は，分娩後12時間と制約の少ない卵黄抗体製剤の使用もしくは下痢発症時に使用することで，飼養管理上有用なものと考えられた．

「日本家畜衛生学会第83回大会」要旨集
表1

93

95

会員へのおしらせ「福 安 嗣 昭 先 生 を 偲んで」
麻布大学名誉教授
前・日本家畜衛生学会理事長
押田敏雄

麻布大学名誉教授，日本家畜衛生学会常務理事の福安嗣昭（ふくやす つぐあき）
先生が，去る 9 月17日，肺炎のために亡くなられました．
押田は福安先生と同時期に麻布大学に勤務していましたので，僭越ながら福安先生を偲ぶ文章を書かせて頂きます．
福安先生は昭和44年 3 月に麻布獣医科大学獣医学部を卒業後，明治製菓株式会社（現在は Meiji Seika ファルマ）に入社し，同社中央研究所で13年間に亘って動物用医薬品の基礎研究・臨床試験に従事されました．その後，乞われて麻布大学獣医学部の講師として着任以来，28年間を家畜衛生学，特に健康な家畜を生産する農場の衛生管理（HACCP）の教育・研究に心血を注がれました．
大学勤務前の明治製菓における14年間は主に動物用医薬品の開発研究や農場の衛生技術サービスに従事されてきました．農場，開業獣医師，家畜保健衛生所の多くの先生方には，臨床試験の実施のみならず健康な家畜の生産に携わる産業動物獣医師に必要な幅広い知識や技術について有意義な示唆・教示を頂戴したようです．臨床現場における貴重な体験は，その後の大学における教育研究の糧になっているものとことある度に伺いました．
麻布大学に移ってからの28年間の前半は芦田淨美先生（故人）の指導のもとに，後半は二川慶子先生とともに，家畜衛生学の教育と細菌感染症の研究に従事されました．この間，学会・研究会・会議に参画され，学内外の皆様から指導・鞭撻や有益な情報，さらに，臨床現場の先生から戴いた獣医師教育への指摘・批判を真摯に受け止め，常に緊張と努力を怠ることなく教育に従事されてきました．それにもまして，研究室（獣医学部衛生学第二研究室）において毎日，研究生とともに研究できたことは，先生の人生にとって極めて有意義なことだったと思います．また，卒業
生の方々がそれぞれの職場で活躍され，社会・地域に貢献されている様子を色々な便りとして頂くことは，先生にとってこの上ない喜びであったようです．
先生は麻布大学に在任中，助教授，教授を歴任し，大学での公職は全学教務委員長，獣医学部生産獣医学系主任，
動物管理センター長，法人理事などの要職を務められました．
温和な性格の一方，筋の通らないことには徹底的に抵抗し，学生はもちろん，多くの教職員からも絶大な信頼を寄せられてきました．平成23年 3 月31日を以って，先生は麻布大学獣医学部教授を定年退職され，名誉教授となられましたが，退職時には「今後は安全な畜産食品の生産と人の食生活の安全安心に微力ながら尽力する」と仰っていました．
平成24年 2 月に福安先生の退職記念行事である『福安先生に感謝する会』が新宿ワシントンホテルで開催され，「次は私の番」と福安先生に伝えた筈でしたが，私の退職記念行事（10月17日）を待たずに，まだまだ，教えて戴かなけ
ればならないことが沢山ありましたが，福安先生は逝ってしまわれました．
ここに，生前の福安先生を偲び，安らかに天空より我々をお守りして下さるようにお祈り申し上げます．
合

掌

96

学会活動報告①「日本家畜衛生学会第82回大会」開催される
日本家畜衛生学会第82回大会が，去る 7 月11日に開催されました．東京農工大学に事務局が移ってから最初の大会であり，開催場所は昨年までの麻布大学から，東京都府中市の東京農工大学農学部キャンパスに変わりました．
一般発表では 6 題の発表があり， 6 名の演者と 6 名の座長の先生方のご協力により，活発な質疑が行われました．
また教育講演では，東京農工大学農学部国際家畜感染症防疫教育研究センターの大松勉先生がデングウイルス感染症についての講演を行い，興味深い話題を提供してくださいました．
発表会終了後には，東京農工大学武蔵野荘ホールにおいて，ささやかなビアパーティーも開催され，参加者は懇親を深めました．

②「日本家畜衛生学会平成27年度通常総会」開催される
第82回大会に先立ち，午後 1 時から平成27年度通常総会が開催されました．以下に総会資料を掲載いたします．

日 本 家 畜 衛 生 学 会
平成27年度年通常総会

Ⅰ．開日時：平成27年 7 月11日（土） 13：00〜

場

所：東京農工大学第 1 講義棟25教室

会

Ⅱ．理事長挨拶
Ⅲ．議長選出Ⅳ．議 事1 ）第 1 号議案
2 ）第 2 号議案
3 ）第 3 号議案
Ⅴ．報告事項
Ⅵ．議長解任
Ⅶ．閉会

平成26年度事業報告及び収支決算報告並びに監査報告について
平成27年度事業計画（案）及び収支予算（案）について
日本家畜衛生学会会則の改正について

97

第 1 号議案
Ⅰ

平成26年度事業報告・収支決算報告並びに監査報告について

平成26年度事業報告

1 ．通常総会

平成26年 7 月 5 日（土） 於：麻布大学獣医学部棟 7 F 大会議室
・平成25年度事業報告及び収支決算報告並びに監査報告について審議⇒承認・平成26年度事業計画（案）及び収支予算（案）について審議⇒承認
2 ．研究発表会
第80回大会

平成26年 7 月 5 日（土） 於：麻布大学獣医学部棟 7 F 大会議室
一般講演 9 題

第81回大会

教育講演（石原章和先生） 1 題

平成26年11月28日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社・講堂
一般講演 7 題

3．
「家畜衛生フォーラム2014」－日本家畜衛生学会創立40周年記念－
平成26年11月28日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社講堂
テーマ：「家畜衛生の過去，現在そして未来」
座

長：平山紀夫（麻布大），押田敏雄（麻布大）

講演者：柿市徳英（日本家畜衛生学会常務理事），佐藤繁（岩大），大井宗孝（日本養豚開業獣医師協会），

安斉了（JRA 馬事部）
，橋本信一郎（株・ウェルファムフーズ），羽賀清典（畜産環境整備機構），

熊谷進（内閣府食品安全委員会）

参加者：149名（有料：127名，無料：22名）

マスコミ関係： 5 社

4 ．学会創立40周年記念行事①式

典

平成26年11月28日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社・講堂②祝賀会（パーティー）平成26年11月28日（金）センチュリーコート丸の内
参加者：62名③「家畜衛生ハンドブック」の出版
5 ．常務理事会
第1回

平成26年 5 月10日（土） 於：八重洲倶楽部（ヤンマービル地下） 21名出席

1 ）平成26年度の主な行事と日程の確定
2 ）第80回大会・通常総会の開催について
3 ）家畜衛生フォーラム2014について
4 ）編集委員会報告5 ）事務局報告6 ）40周年記念式典実行委員会報告7 ）役員の確認
8 ）賛助会員の確認
9 ）常設委員会・委員の確認
10）その他
第2回

平成26年 6 月 7 日（土） 於：田中田村町ビル（新橋） 19名出席

報告事項
1 ）平成26年度

総会・第80回研究発表会開催について

2 ）編集委員会報告3 ）事務局報告98

審議事項1 ）総会上程議案について
2）「家畜衛生フォーラム2014」開催について
3 ）その他
第3回

平成26年10月18日（土） 於：八重洲倶楽部（ヤンマービル地下） 22名出席

1 ）第 2 回理事会の開催について
2 ）第81回研究発表会について
3 ）学会創立40周年記念式典について
4 ）家畜衛生フォーラム2014について
5 ）学会賞選考委員会の設置について
6 ）編集委員会報告7 ）事務局報告8 ）その他
6 ．理事会
第1回

平成26年 7 月 5 日（土） 於：麻布大学獣医学部棟 3 F ゼミ室
総会の上程議案について，2014年度の事業の進行状況，フォーラム2014について，その他

第2回

平成26年11月28日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社・会議室
平成2014年度の事業の進行状況，2014年度日本家畜衛生学会賞，その他

7 ．編集委員会①40− 1 （2014年 4 月28日発行）
原著 3 編短報 1

合計32頁（ 1 〜35）
②40− 2 （2014年 7 月 2 日発行）
第80回大会要旨 9 編

教育講演要旨 1 編

合計39頁（36〜74）③40− 3 （2014年11月26日発行）
家畜衛生フォーラム要旨 7 編

第81回大会要旨 5 編

合計118頁（75〜192）④40− 4 （2014年 2 月24日発行）
原著 2 編

第40巻総目次

合計35頁（193〜227）8．
「家畜衛生ハンドブック」の出版
出版は2014年10月に出版．発行部数800部．
6 ／15午前までの販売数
会員向け

159冊（残部041冊）

計200部￥7,000販売

関係者向け

9冊（残部091冊）

計100部￥8,000販売

一般向け

75冊（残部425冊）

計500部

定価販売

合

243冊（残部557冊）

計800部

計

99

Ⅱ 平成26年度収支決算報告〈一般会計〉
収入の部

項
目
一般会費
賛助会費
広告掲載代

（単位：円）

予算額
800,000
260,000
200,000

決算額
712,000
270,000
343,200

雑収入

700,000

1,947,442

前年度繰越金
計1,574,656
3,534,656

1,574,656
4,847,298

予算額
2,000,000
200,000
300,000
300,000
200,000
300,000
100,000
134,656
3,534,656

決算額
1,877,688
152,000
330,043
172,724
110,1960
100,000
27,0752,769,726

差額（決算－予算）
備 考△88,000 のべ174名分，うち学生 8 名
10,000143,200
別刷り代，フォーラム・祝賀会参加費，1,247,442
フォーラム共催費等
0
1,312,642

支出の部
項
目
印刷費
会議費
事業運営費
通信運送費
事務経費
事務局人件費
役員交通費
予備費
計

差額（決算－予算）△122,312△48,000
30,043△127,276△89,804△300,000
0△107,581△764,930

備 考
家畜衛生学雑誌（ 4 号分）
室料，弁当代等
アルバイト，フォーラム謝金など
雑誌発送，案内葉書代など
HP 管理費など

一般会計収支差額＝決算収入額4,847,298－決算支出額2,769,726＝2,077,572 （次年度へ繰越）〈特別会計〉
収入の部

項
目
雑収入
前年度繰越金計（単位：円）

予算額
500
3,607,302

決算額
221,487
3,607,302

差額（決算－予算）
備 考
220,987 利子，祝賀会費のうち事務運営分
03,607,802

3,828,789

220,987

予算額
3,607,80203,607,802

決算額
3,252,200
03,252,200

差額（決算－予算）355,6020355,602

支出の部
項目
40周年事業費
予備費
計

備

考

特別会計収支差額＝3,828,789－3,252,200＝576,589 （次年度へ繰越）

平成26年度監査報告

日本家畜衛生学会会則第10条第 3 項の規定に基づいて，平成26年度の監査を実施した結果，一般会計および特別会
計ともに適正に処理されていることを認めます．
平成27年 6 月20日
監

事

山

城

富

男

㊞

監

事

牧

江

弘

孝

㊞

100

第 2 号議案
Ⅰ

平成27年度事業計画（案）・収支予算（案）について

平成27年度事業計画（案）1 ．通常総会

平成27年 7 月11日（土） 於：東京農工大学農学部第 1 講義棟25教室
・平成26年度事業報告及び収支決算報告並びに監査報告について
・平成27年度事業計画（案）及び収支予算（案）について
・役員人事（案）について
2 ．研究発表会
第82回大会

平成27年 7 月11日（土） 於：東京農工大学農学部第 1 講義棟25教室

第83回大会

平成27年12月18日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社・講堂

3．
「家畜衛生フォーラム2015」
平成27年12月18日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社・講堂
テーマ：「家畜疾病の診断法の新しい潮流」
4 ．常務理事会
第1回

平成27年 5 月 9 日（土） 於：東京農工大学本館第 2 会議室

第2回

平成27年 6 月20日（土） 於：東京農工大学本館第 2 会議室

第3回

平成27年10月上旬（予定）

5 ．理事会
第1回

平成27年 7 月11日（土） 於：東京農工大学第 1 講義棟21教室

第2回

平成27年12月18日（金） 於：Meiji Seika ファルマ（株）本社

6 ．編集計画表

題発行日（予定）41− 1

内
原著 1 報，短報 1 報

41− 2

7 月予定

一般講演要旨，教育講演要旨

41− 3

11月予定

フォーラム要旨，一般講演要旨

41− 4

2 月予定

原著，40巻総目次＊常設委員会（2014〜2015）
編 集 委 員 会 （○は委員長）
柿市

高井

永幡

野上

福安

渡邊

河合

磯

○宮﨑

学術企画委員会 （○は委員長）○伊藤（博）

高橋

長井

HP 管理委員会 （○は委員長）
河合容

5 月30日

樋口

坂下

○長井

平山

備

考

発行済

101

Ⅱ 平成27年度収支予算（案）〈一般会計〉
収入の部
項（単位：円）

目

平成26年度

平成27年度差

一般会費

800,000

800,000

賛助会費

260,000

260,000

広告掲載料

200,000

200,000

雑収入

700,000

700,000

前年度繰越金1,574,656

2,077,572

3,534,656

4,037,572

計

額

備

考

のべ200名分（過年度分名を含む）
1,960,000
フォーラム参加費，大会参加費，別刷り代など

支出の部
項

（単位：円）目

平成26度

平成27年度

差額

2,000,000

備

考

印刷費

2,000,000

会議費

200,000

50,000

事業運営費

300,000

300,000

講師謝金，アルバイト，フォーラム開催費など

通信運送費

300,000

300,000

雑誌発送，案内葉書代，フォーラムポスター送
料等

事務経費

200,000

200,000

事務局人件費300,000

300,000

役員交通費

100,000

100,000

予備費
計134,656

787,572

3,534,656

4,037,572「家畜衛生学雑誌」 4 冊分発行，封筒印刷代－150,000 室料，弁当代など

3,250,000

事務用品，HP 管理費，インターネット回線使
用料等
1,000円× 6 h× 4 d×12m ＝288,000円から起算

652,916〈特別会計〉
収入の部
項（単位：円）

目

雑収入

平成25年度

平成26年度

500

前年度繰越金
計

差
0

額

備

考

備

考

－500 預金利息

3,607,302

576,589－3,030,713

3,607,802

576,589－3,031,213

支出の部
項

目

40周年事業費
予備費
計

平成25年度

平成26年度差3,607,8020003,607,8020額－3,607,802－3,607,802

102

第 3 号議案

日本家畜衛生学会会則の改正について

大会の学生発表において，筆頭発表者は会員である規定から，発表者が学生会員として入会し，学生会員とならなければならない．しかし学生が卒業し，会員とならない場合は退会する必要がある．学生の発表を増やし，事務手続
き等の簡素化を図るため，第 5 条の学生会員の会員期を単年度とする．また，消費税の増税等にも対応し，学会の財政基盤を確実にするため，会費を年額5,000円とする．
現行（会員および会費）
第5条

改

案

（会員および会費）

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員お 第 5 条

学会の会員は正会員，賛助会員および名誉会

よび名誉会員より構成する．

員より構成する．

（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納
入した個人

入した個人

（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した学生，大学院生．ただし会員期納入した学生，大学院生

間は単年度とする．

（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため所定の会費を納入した業を援助するため所定の会費を納入した

個人又は団体

個人又は団体（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会において承認された個人
第6条

正において承認された個人

会 費は正会員にあっては年額4,000円，学生会 員 に あ っ て は 年 額2,000円， 賛 助 会 員 に 第 6 条

会 費は正会員にあっては年額5,000円，学生

あっては 1 口年額10,000円とし，毎年 7 月末

会 員 に あ っ て は 年 額2,000円， 賛 助 会 員 にまでに納入するものとする．

あっては 1 口年額10,000円とし，毎年 7 月末までに納入するものとする．

附則附（7）こ の会則は平成23年 7 月 2 日に改正し，同日に施行する．

則（7）こ の会則は平成23年 7 月 2 日に改正し，同日に施行する．
（8）こ の会則は平成27年 7 月11日に改正し，同日に施行する．ただし，平成27年度の会費は4,000円とし，平成28年度から会費を5,000円とする．

103

Ⅴ．報告事項1）「家畜衛生学雑誌」投稿規定の改正について
家畜衛生学雑誌への投稿増を図るため，投稿資格として筆頭著者あるいは編集著者が会員であることを求めるが，他の共著者に関する制限を撤廃する．
現

行

改

正

案

2 ．投稿論文は他誌に未発表であること．また，筆頭著

2 ．投稿論文は他誌に未発表であること．また，筆頭著者および連絡著者（コレスポンディングオーサー）

者 あ る い は 連 絡 著 者（ コ レ ス ポ ン デ ィ ン グ オ ー

は本学会会員に限るが，共著者は非会員でも差支えサー）は本学会会員であること．

ない．共著者が非会員の場合は 1 名につき，3,000円の投稿手数料を徴収する．
附則

附則

本規程は，
2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．
本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

2 ）論文賞内規について
論文賞の内規について，平成27年度第 2 回常務理事会における審議の結果，下記の内規が承認された．
家畜衛生学雑誌

論文賞内規日本家畜衛生学会は，学会誌「家畜衛生学雑誌」に掲載された論文のうち，特に優秀と認められた論文に対して論文賞を授与する．
（選考方法）
1 ．理事長は編集委員長を選考委員長として指名し論文賞選考を委嘱する．
2 ．選考委員長は選考委員若干名を指名し，選考委員会を主宰する．
3 ．選考委員長は，選考結果をすみやかに常務理事会に報告し，その承認を得る．
（選考対象論文）
4 ．論文賞の対象は，当該年度の家畜衛生学雑誌に掲載された原著論文および短報とする．
（受賞対象者）
5 ．受賞論文の著者全員を受賞対象者とする．
（授賞式）
6 ．選考後の学会大会で，論文賞授与式を行う．受賞者には賞状を授与する．
（附則）
7 ．この内規は，2015年 6 月20日より施行する．

1043 ）シンポジウム演者への謝金等についてシンポジウム演者への謝金等については，基本とする謝金の金額（学会の身の丈に合った金額），プロシーディン
グ原稿料を考慮するか，会員と非会員で差をつけるか等の議論があったが，平成27年度第 2 回常務理事会における審議の結果，下記の内規が承認された．
研究発表会および家畜衛生フォーラムにおける特別講演講師およびシンポジスト
ならびに家畜衛生フォーラム座長の招聘経費に関する内規学会研究発表会および家畜衛生フォーラムで企画する特別講演及びシンポジウムにおいて，講師およびシンポジ
ストならびに家畜衛生フォーラム座長として招聘する者への招聘経費については，経費の効率化に努め，以下により積算することを基本とする（表参照）．
1 ．会員について，謝金は考慮しないが，交通費を支給するするとともに，学会参加費及び交流会費は無料とす
る．
2 ．非会員については，謝金および交通費を支給するするとともに，学会参加費及び交流会費を無料とする．
3 ．非会員に支給する謝金は，10,000円を基本とする．
4 ．支給する交通費（含む宿泊費）は実費とし，切りの良い金額に切り上げる．
（附則）
本内規は，2015年 6 月20日より施行する．
表
謝金

交通費
（含む宿泊費）

学会参加費

交流会費

非会員

10,000円

実費

無料

無料

会員

無し

実費

無料

無料

105

学会刊行図書の紹介「最新

家畜衛生ハンドブック」を会員特別価格で提供します

日本家畜衛生学会編
監修：押田敏雄・平山紀夫・福安嗣昭
発行：株式会社
体裁：A 5 版

養賢堂

上製

536頁

CD 付

会員特別価格：7,000円（送料込み）
学会事務局へ電子メール（k-eisei@cc.tuat.ac.jp）で直接お申し込みください．お申し込みの際は，送付先と部数を忘れずにお知らせください．
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
日本家畜衛生学会の創立40周年にあたり，記念事業の一環として「家畜衛生ハンドブック」を株式会社 養賢堂より出版いたしました．
本書は，学会員を中心とする22名の執筆者からなる家畜衛生学の集大成です．設立から40年間にわたり培われてきた知識と経験が，この1 冊に凝縮されています．
衛生問題は生産，流通，販売，消費とすべてのステージに関わる大事な問題です．ですから生産現場をはじめとし，大学・試験研究機関
や獣医畜産に関わる業種の方々に，座右の書として利用していただけ
ることを願っております．

目

次

序

論

第1章

家畜の衛生管理

第2章

栄養と飼養衛生

第3章

繁殖衛生

第4章

一般疾病とその予防

第5章

感染症とその予防

第6章

畜産物の衛生第7章

畜産廃棄物と環境

第8章

家畜衛生に関する法的規制

索引

執筆者一覧（50音順）
青山

英俊／明石

博臣／安斉

柿市

徳英／佐藤

幹／佐藤

平山

紀夫／福士

秀人／福安

了／居在家
繁／白井

義昭／伊東

淳資／末吉

嗣昭／宮﨑

正吾／江口

茂／山本

益雄／永幡
孝史

正志／岡田

肇／野上

啓司／押田

貞雄／羽賀

敏雄／

清典／日佐

和夫／

106

書

評

Dr.Ossy

畜産・知ったかぶり
押田敏雄

本学会の前理事長で麻布大学名誉教授の押田敏雄先生の著書，「Dr.Ossy

著

養賢堂

本体価格2,800円

畜産・知ったかぶり」が養賢堂から刊

行されました．この書名からお気づきの方も多いと思いますが，本書は，先生が月刊誌「畜産の研究」に2011年から2015年まで執筆された同名の連載記事を基に，単行書として再構成されたものです．「畜産の研究」誌への連載されてきた「Dr.Ossy

畜産・知ったかぶり」は，「知ったかぶり」という控えめな題名ですが，毎回，押田先生の博覧

強記ぶりが現れた興味深い記事が掲載されていたので，毎号楽しみにしておられた方も多かったのではないでしょう
か．今回刊行された本書は，これらの連載記事を基に，「家畜・動物編」，「畜産製品・関連品編」，「畜産うんちく編」に編集・再構成するとともに，カラー写真等も加えられているので，まさに押田先生の見識やセンスが凝縮された好著です．研究が細分化されてきたため，ついつい専門領域の情報にばかり目の行きがちな研究者にとっては，畜産業全般に関わる見逃しがちな情報が盛りだくさんに掲載されています．また，畜産現場におられる技術者の方々にとっては，農家とのコミュニケーションを深めるネタが満載されていいます．以上のことから，畜産に関わる全ての方にご一読をお勧めしたい一冊です．
（（一財）生物科学安全研究所

宮﨑

茂）

107

「家畜衛生学雑誌」投稿規程
1 ．本誌には原則として，家畜衛生に関する総説，原著

お，総説についてはこの限りではない．また，論文，短報を掲載する．なお，原稿は編集委員会事

カラーや特殊な用紙での印刷は，その費用を著

務局へ電子メール添付（PDF ファイル）で提出す
る．印刷原稿 3 部（うち 2 部は鮮明なコピーでもよい）の書留郵便あるいはレターパックによる提出も可とする．
2 ．投稿論文は他誌に未発表であること．また，筆頭著者あるいは連絡著者（コレスポンディングオーサー）

者の負担とする．
8 ）使用する動植物・微生物などの学名はイタリッ
ク体で表記する．
9 ）度量衡の単位，略記は SI 単位系を基本とし，以下の例に従う．
［例］m，cm，mm，µm，nm，kg，g，mg，µg，ng，3
L，mL，µL，nL M，mM，µM，％，cm 2 ，
m ，

は本学会会員であること．
3 ．掲載論文は総説，原著論文，短報とし，編集委員会

hr，min，sec，℃，pH，Pa（血圧は mmHg，が掲載の採否を決定する．
4 ．投稿論文は和文または英文とし，次の指示（記述順序など）に従うこと．
1 ）論文原稿は別に定める注意に従って作成すること．用紙サイズは A 4 とし，和文の場合は30字

生体内圧力は Torr）など．
10）表および図（写真を含む）は用紙 1 枚に 1 つとし，個々に番号と表題を記入し，投稿原稿の最後に添付する．
11）引用文献は下記の例にならって，アルファベッ

で25行程度，英文の場合はダブルスペース（70ト順にならべ，本文中では字で25行程度）とする．

き（superscript）で記入する．ただし，著者名2 ）和文の場合も句読点は，「 ，」，「 ．」を用いること．

「et al」で示す．
［例］

関名およびその所在地を和文と英文で記載する

雑誌を記載する．また，和文の場合は20字，英文の場合は40字以内の略表題（running head）を記載する．
4 ）原著論文の構成は原則として，Summary（本文が和文の場合も英語），序文（Introduction），
材料および方法（Materials and Methods），結果（Results）， 考 察（Discussion）， 引 用 文 献（References），要旨（本文が和文であっても英文であっても，和文の要旨）とする．ただし，謝辞は，別項目を設けず，本文の最後に 1 行の空白をとった後に記載する．
5 ）英文 Summary は250語以内，和文要旨は600字以内とし，それぞれの最後の行に 5 つ以内のKey words（キーワード）をつける .
6 ）英語論文および和文論文の英文 Summary は，
投稿前にしかるべき校閲を受けること．
7 ）原著論文で刷り上り 6 頁（30文字 ×25行＝750
文字で，図表を含めて12枚程度）までは，印刷費を本学会で負担する．ただし，超過ページについては，その費用を著者の負担とする．なのように上付は 3 名までとし， 4 人目以降は省略し，「ら」，

3 ）論文原稿は第 1 ページに表題，著者名，所属機とともに，連絡著者とその電子メールアドレス

1 ，3 − 6 ）1 ）内田孝治・藤井武・高山公一ら（1991）ブロ
イラーにおける実験的大腸菌症に対するラノ
フロキサシンの治療効果および用量設定試
験．家畜衛生研究会報．33，19-24．
2 ）Oshida, T., Fukuyasu, T., Kohzaki, K., et al.
(1993) A new treatment system for animal
waste water using microorganism, soil andvagetation. Asian-Australasian Journal ofAnimal Sciences. 6, 205-209.
電子ジャーナル3 ）Wilson, D.J., Rood, K.A., Bunnel, J., et al. (2014)
Johne’s disease, mycoplasma and BVD in
Utah-Bulk tank milk testing and comparison
to previous regional prevalence andindividual herd results over time. Journal of
Veterinary Science and Technology. 5 :182.
doi: 10.4172/2157-7579.1000182.
単行書4 ）伊予部志津子（1980）薬剤耐性因子（R）の108

検出法，薬剤感受性測定法．22-48頁．三橋進編，講談社，東京．
5 ）McDonrd, P. (1976) Trends in silage making,Microbiology in Agriculture, Fisheries and  
Food. pp109-121. Shinner, F.A and Carr, J.G.
eds. Acad. Press, London, NY.
12）図はグラフィックソフトウェアで作成することする，その他の規定については原著の場合に準じる．
6 ．総説の構成については特に規定を設けないが，引用論文の記載法は原著論文の場合に準じることとする．
7 ．別刷りは50部に限り無料とする．追加分についてその費用を著者の負担とする．
8 ．本誌の発行は原則として，年 4 回（ 4 月， 7 月，10月および 1 月）とする．
9 ．編集委員会事務局を下記に置く．

が望ましい．手書きで作成する場合は，そのま〒252−0132

ま製版できるよう，白色紙または青色方眼紙に

神奈川県相模原市緑区橋本台 3 − 7 −11タイプやレタリングなどにより作成する．

（一財）生物科学安全研究所内

13）投稿原稿が受理（掲載決定）されたならば，著

日本家畜衛生学会編集委員会

者 は す み や か に 最 終 原 稿 の Microsoft Word

Tel

ファイルを電子メールで提出すること．図につFax 042（762）7979

いては，グラフィックソフトウェアで作成した

E-mail：jjah@riasbt.or.jp042（762）2775

ファイルも併せて提出する．
5 ．短報は，その内容を成績および考察（Results and附則

Discussion） と し て ま と め， 要 旨（Summary） は

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

英文では200字以内の和文，和文では100語以内の英本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

文をつける．原稿の長さは刷り上りで， 2 頁以内と論文原稿を作成する上での注意
1 ）執筆にあたり，投稿規定をもう一度，熟読すること．
2 ）各行の行末での強制改行をしないこと．
3 ）投稿論文が和文，英文のいずれの場合も数字，欧文は全て 1 バイト文字（いわゆる半角）で入力するこ

6 ）図は，Microsoft PowerPoint，Excel，Adobe Photoshop，Illustrator 等のソフトウェアで作成するのが望ましい．
7 ）論文受理後の最終原稿は，Microsoft Word（あるい）は 2 バイト文字（いわゆるは Microsoft Word 互換ソフトウェア）ファイルと全角）とする．
「µ」（マイクロ）は半角立体で入力して提出する．ただし，Microsoft Word 互換ソフと．ただしかっこ（すること．

トウェアを使用した場合は，Microsoft Word で正4 ）投稿論文原稿は PDF ファイルとして事務局まで電しく表示されることを確認すること．グラフィック

子メールで提出すること．その際には必ずパスワー

ソフトウェアで作成した図データは，jpeg，tiff 等

ドロックし，パスワードは別メールで事務局まで連の汎用フォーマットで提出する．

絡すること．特段の理由がある場合は，印刷原稿 3部（うち 2 部は鮮明なコピーでも可）を事務局まで
書留郵便あるいはレターパックで送付すること．
5 ）写真は印刷に耐えうる鮮明なものを使用すること．

日本家畜衛生学会
編集委員会

109

日本家畜衛生学会会則
（総
第１条

則）

第８条

２ ．理事長は学会を代表し，会務を総理する．

The Japanese Society of Animal Hygiene）

３ ．理事長は常務理事の中から庶務・会計を担当する事務局担当者を委嘱する．

（以下，「学会」とする．
）と称する．
第２条
第３条

第４条

理事長は常務理事の互選により選出する．

本 学会は，日本家畜衛生学会（英文表記：

４ ．理事長は第 4 条の事業を達成するため常設の学会の事務局は，原則として理事長の所属する機関におく．

学術企画委員会，編集委員会を設置する．

学会は，家畜衛生とその関連領域における学（1）委員会の委員は原則として理事長が常務

究の向上を図り，畜産の進歩発展に寄与する

理事の中から指名する．但し，常務理事ことを目的とする．

会が必要と認めた場合には会員の中から指名することが出来る．

学会は，前条の目的を達成するために，次の（2）委員会の委員長は，委員の互選により選事業を行う．

出し，理事長が指名する．

（1）研究発表会及び学術講演会等の開催（2）学会誌「家畜衛生学雑誌」の発行

第９条

事長を補佐する．

（3）学会の発展に貢献した者への表彰（4）その他学会の目的達成のために必要な事業

副理事長は常務理事の互選により選出し，理第１０条

常務理事および監事は理事の互選により選出
し，総会において承認を受ける．
２ ．常務理事は常務理事会を組織し，理事長を補（会員および会費）
第５条

佐し，学会の運営に関して第 ４ 条の事項を行う．

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員お３ ．監事は理事長を補佐し，会務と会計を監査する．

よび名誉会員より構成する．
（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納

第１１条

２ ．理事は理事会を組織し，理事長を補佐し，学入した個人会の運営に関して第 ４ 条の事項を行う．

（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した学生，大学院生．た

第１２条

役員の任期は ２ 年とし，再任を妨げない．
２ ．役員の補欠又は増員は，第 ８ 条第 １ 項，第 ９だし会員期間は単年度とす

条，第10条若しくは第11条の規定により選任る．

し，その任期は前任者又は現任者の残任期間（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため所定の会費とする．ただし，常務理事会が会務の運営にを納入した個人又は団体支障がないと認めたときは，この限りでない．

（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会第１３条

常務理事会および理事会は理事長が随時招集する．

において承認された個人
第６条

理
 事は理事長が委嘱し，総会の承認を受ける．

会
 費は正会員にあっては年額5,000円，学生会員にあっては年額2,000円，賛助会員にあって（総は １ 口年額10,000円とし，毎年 ７ 月末までに

第１４条

会）
通常総会は毎年 １ 回，理事長が招集する．

納入するものとする．

第１５条

理事長が必要と認めた場合は，臨時総会を招集することができる．

第１６条（役員および役員会）
第７条

総会では次の事項を議決する．

学会に次の役員をおく．

（1）事業計画および事業報告に関する事項（1）理 事 長

１名（2）予算および決算に関する事項（2）副理事長

１名（3）会則の改正に関する事項（3）常務理事若干名（4）その他，学会の目的を達成するために必

（4）監

事

２名

（5）理

事

35〜45名

要な事項

110

（会

計）

第１７条

（3）こ の会則は平成15年 7 月 5 日に改正し，

学会の経費は会費その他の収入をもって，これにあてる．

第１８条

会計年度は ４ 月 １ 日より，翌年 ３ 月31日までとする．

同日に施行する．
（4）こ の会則は平成16年 7 月 3 日に改正し，同日に施行する．
（5）こ の会則は平成17年 7 月 2 日に改正し，同日に施行する．

附則（6）こ の会則は平成21年 7 月 4 日に改正し，（1）この会則は平成14年 7 月 6 日より施行する．
（2）学会設立時の役員は家畜衛生研究会（以下「研究会」と略す）の役員が暫定的に同日に施行する．
（7）こ の会則は平成23年 7 月 2 日に改正し，同日に施行する．

就任することとし，理事長は研究会の会（8）こ の会則は平成27年 7 月11日に改正し，長が，常務理事は研究会の幹事が，理事同日に施行する．ただし，平成27年度のは研究会の評議員が，監事は研究会の監

会費は4,000円とし，平成28年度から会事がそれぞれ就任する．

費を5,000円とする．

協賛団体・企業一覧
日本家畜衛生学会は以下の各団体・企業からの協賛を受けています．ここに記して謝意を表します．（五十音順）（株）インターベット（株）科学飼料研究所

共立製薬（株）

コーキン化学（株）

住化エンバイロメンタルサイエンス（株）

ゾエティス・ジャパン（株）

田村製薬（株）日本イーライリリー（株）（一般財団法人）日本生物科学研究所

日本全薬工業（株）

日本ハム（株）

バイエル薬品（株）

ベーリンガーインゲルハイム・ベトメディカルジャパン（株）

Meiji Seika ファルマ（株）

日本家畜衛生学会入会のすすめ
日本家畜衛生学会は家畜衛生とその関連領域における学術の交流を図り、畜産の進歩発展に寄与することを目的とした学会です。
＜主な活動＞
・ 年２回（７月、11月）の研究発表会
・ 年１回のフォーラム（11月ごろ）の開催
これまでの主なテーマ「狂犬病」、「口蹄疫」、「鳥インフルエンザ」、「BSE」、「家畜ふん尿」など
・ 年４冊の機関誌「家畜衛生学雑誌」の発行
・ 学会賞の授与
年会費4,000円（但し、学生は2,000円）
御請求戴ければ、見本誌を贈呈します!!

家畜衛生学雑誌

The Japanese Society of Animal Hygiene
日 本 家 畜 衛 生 学 会〒183-8509

東京都府中市幸町3-5-8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内TEL ／ FAX：042−367−5935（042−367−5780）
http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
Hpで活動内容がご覧になれます!!（日本家畜衛生で検索）

第41巻第 3 号

平成27年 12月18日発行（会員配布）
発

行

印 刷 所

日本家畜衛生学会
理事長 白井淳資〒183－8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内☎／ FAX：042−367−5935（042−367−5780）
ホームページ：http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
振替口座：00240－ 3 －43171
明誠企画株式会社〒208－0022 東京都武蔵村山市榎 2 － 25 － 5☎ 042−567−6233 FAX 042−567−6230

平成日本家畜衛生学会

年

月

日

御中

入 会 申 込 書
貴会への入会を下記の通り申込ます．

記
フリガナ
氏

名：

所属名称：
部

署：

役

職

所属住所：〒TEL：

FAX：

e-mail：

自宅住所：〒

TEL：
e-mail：会員の種類 ： ○正 会 員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員
会報送付先 ： ○自宅 ・ ○勤 務 先○内にチェックを付して下さい．

１．入会申込書は必要事項をすべて正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5935）にてご送付下さい．
２．年会費は個人会員 4,000円，賛助会員 10,000円／口（１口以上）を郵便振替口座（加入者名：日本家畜衛生学会，No. 00240−3−43171）へお振込下さい．
３．申込先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5935（042−367−5780）

４．ホームページからも申し込めます：http://www.kachiku-eisei.jp/

平成
日本家畜衛生学会

年

月

御中

変
変更手続きを下記の通り致します．

更

届

記

フリガナ
○

氏

名：

○

所属名称：

○

部

○

所属住所：〒

署：

○

役

TEL：

○

自宅住所：〒

○

TEL：

職

FAX：

e-mail：e-mail：○会員の種類：○正会員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員○会報送付先：○自宅 ・ ○勤務先全てご記入の上，上記変更部位の○内にチェックを付して下さい．

１．変更届出書は必要事項を正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5935）にてご送付下さい．
２．届け先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5935（042−367−5780）

３．ホームページからも手続きできます：http://www.kachiku-eisei.jp/

日