ISSN 1347－6602

昭和62年６月９日学術刊行物認可

家畜衛生 学 雑 誌
The Japanese Journal of Animal Hygiene

日本家畜衛生学会
V ol.44 No.3
2019. MAR.

The Japanese Society ofAnimal Hygiene

家

畜

衛

生

学

雑

日本家畜衛生学会

発行

誌

理 事 長：白井淳資
副理事長：宮﨑編集委員長：宮﨑茂

茂

編集委員：末吉益雄・髙井伸二・長井誠

野上貞雄・福士秀人"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""The Japanese Journal of Animal Hygiene
Published by the Japanese Society of Animal Hygiene
President : Junsuke SHIRAI（Tokyo Univ. of Agric. and Technol.）Vice President : Shigeru MIYAZAKI（Res. Inst. for Anim. Sci. in Biochem. and Toxicol.）Editor-in-Chief : Shigeru MIYAZAKI（Res. Inst. for Anim. Sci. in Biochem. and Toxicol.）Editorial Board : Masuo SUEYOSHI（Miyazaki Univ.）
Shinji TAKAI（Kitasato Univ.）
Makoto NAGAI（Ishikawa Pref. Univ.）
Sadao NOGAMI（Nihon Univ.）
Hideto FUKUSHI（Gifu Univ.）
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「家畜衛生学雑誌」第44巻第 3 号の送付にあたって
会員の皆様におかれましては，ますますご清栄のこととお慶び申し上げます．ここに，「家畜衛生学雑誌」第44巻
第 3 号を刊行する運びとなりました．
本号では，原著論文 1 編及び技術資料 1 編を掲載しています．
本誌はこれまで年間 4 号を刊行してきましたが，残念ながら投稿論文が少なく，今年度（第44巻）は 3 号の刊行にとどまってしまいました．本誌では，原著論文・短報以外にも，総説，数ページ程度のミニレビュー，技術資料等の原稿を受け付けておりますので，会員の皆様の積極的なご投稿をよろしくお願い致します．ご不明な点は遠慮なく編集委員会事務局へお問い合わせください．
日本家畜衛生学会理事長

白井淳資

家畜衛生学雑誌編集委員長

宮﨑茂（日本家畜衛生学会副理事長）

日本家畜衛生学会・学会費納入のお願い
ご承知のように，学会は会員の皆様からの会費をもって運営されております．学会の運営を円滑に運ぶために，所定の会費を納入していただきますようお願い致します．
＊会費は，正会員5,000円，学生会員2,000円です．
＊平成27年度までの未納分をお支払いいただく場合，正会員年会費は4,000円です．
日本家畜衛生学会

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日本家畜衛生学会

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家畜衛生学雑誌
第44巻
目

第3号

2019

次

〈原著〉
牛ウイルス性下痢ウイルス（BVDV）ワクチン製造のための増殖効率の高い細胞株の作出･･････････････････････････････中川健斗・池田凡子・安田奏平・宮﨑朋美・長井 誠・白井淳資･･･････････････････････ 111〜122〈技術試料〉
ジビエとしてのイノシシの安心・安全の観点からアフリカ豚コレラ，豚コレラを考える･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････押田敏雄･･･････････････････････ 123〜132
第44巻総目次 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 133〜137
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 138
家畜衛生学雑誌投稿規程
日本家畜衛生学会会則･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139〜140････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 141〜142

家畜衛生学雑誌

The Japanese Journal of Animal HygieneVol. 44  No. 3

2019

Contents〈Original report〉
Cloning the high growth efficiency of bovine viral diarrhea virus (BVDV) cell line forthe production of BVDV vaccines･････････････････････････････････････････････････････････････････ Kento Nakagawa et al. ･･････････････････････････････････････････ 111〜122〈Technical report〉
Considering African swine fever and classical swine fever from the viewpoint ofwild boar on safety and security as the game meat･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Toshio Oshida ･･････････････････････････････････････････ 123〜132
IContents of volume 44 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 133〜137
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 138
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139〜140
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 141〜142

Jpn. J. Anim. Hyg.

原

111

著

牛ウイルス性下痢ウイルス（BVDV）ワクチン製造のための増殖効率の高い細胞株の作出
中川健斗 1 ）・池田凡子 2 ）・安田奏平 1 ）・宮﨑朋美 1 ）・長井

誠 3 ）・白井淳資 1 ）＊Cloning the high growth efficiency of bovine viral diarrhea virus (BVDV) cell line
for the production of BVDV vaccines
Kento Nakagawa 1）, Namiko Ikeda 2）, Sohei Yasuda 1）, Tomomi Miyazaki 1）,
Makoto Nagai 3）, Junsuke Shirai 1）＊（1） Tokyo University of Agriculture and Technology, Laboratory of Epizootiology,
Cooperative Department of Veterinary Medicine, Faculty of Agriculture,
3–5–8, Saiwai–cho, Fichu, Tokyo, 183–8509, Japan
2）
Tokyo University of Agriculture and Technology, Laboratory of Veterinary Surgery,
Cooperative Department of Veterinary Medicine, Faculty of Agriculture,
3–5–8, Saiwai–cho, Fichu, Tokyo, 183–8509, Japan3）
Azabu University, Laboratory of Infectious Diseases, Department of Veterinary Medicine, Faculty of Veterinary Science,
1–17–71, Fuchinobe, Sagamihara, Kanagawa, 252–5201 Japan＊
Corresponding Author: Junsuke Shirai（jshirai ＠ cc.tuat.ac.jp））（2018.1.26  受付／2018.12.4  受理）

Summary
Bovine viral diarrhea (BVD) is a disease that causes an economic loss due to reduction in bovine body weightand milk production, decreased reproductive performance and provoke the immunodeficiency of the herds. BVD
virus (BVDV) shows two biotypes, as cytopathic (CP) strain and non–cytopathic (NCP) strain. BVDV contaminatedin almost fetal bovine serum or bovine serum used for vaccine production. Therefore, the development ofproliferate the vaccine strains more efficiently for provide an inexpensive vaccine is required. The purpose of thisstudy is cloning the cell line for the better growth BVDV for vaccine production. MDBK and SK–L cells has beenused for BVDV vaccine production. These cells were used for the candidate cell line of cell cloning. Nose strain
used as representative CP strain and KZ–91NCP strain as representative NCP strain for growth efficiency test.
Limiting dilution method was adopted for cloning method. For the comparison of the grow efficiency of BVDV ineach clone cell lines, the virus titration was used for the Nose strain and the real–time PCR for detection of geneproduction was used for both strains. As the result of multiple cloning, five clone cell lines from MDBK (M–CL1 –CL5) and SK–L (S–CL1 – CL5) were established. M–CL4, M–CL5 and S–CL1 showed highly growth efficiency for
Nose strain and M–CL1, M–CL3, S–CL2, S–CL3 showed for KZ–91NCP strains.
Key words：BVDV, cell cloning, vaccine production
  家畜衛生学雑誌

東京農工大学農学部共同獣医学科獣医伝染病学研究室〒183−8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
2）東京農工大学農学部共同獣医学科獣医外科学研究室〒183−8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
1）44，111〜122（2019）麻布大学獣医学部獣医学科伝染病学研究室〒252−5201 神奈川県相模原市中央区淵野辺 1 −17−71＊
連絡著者：白井淳資（jshirai ＠ cc.tuat.ac.jp）3）家畜衛生学雑誌

112

序第44巻第 3 号（2019）
より良い実験系および増殖系が確立された11，20，34）．さ文らに，豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（PRRSV）で牛ウイルス性下痢症（Bovine Viral Diarrhea：BVD）

は，この MA–104細胞からクローニングされた MARC–

は牛の増体量及び乳量の減少，繁殖成績の低下及び牛群

145細胞や L– 1 細胞が豚の肺胞マクロファージ以外の細の免疫力低下により経済的損失をもたらす疾病であ胞として PRRSV の実験に使用できる事が報告されていり12），わが国を始め世界各地で発生が認められ，わが国る16）．

では家畜伝染病予防法で届出伝染病に指定されている．

これらの背景を受け，本研究は，今まで BVDV のワ

牛 ウ イ ル ス 性 下 痢 ウ イ ル ス（Bovine Viral Diarrhea

クチン製造や実験に使用されてきた細胞株をクローニン

Virus：BVDV）は様々な病態を引き起こすが，特に胎グし，ウイルスへの感受性が高い細胞株を作出する事を

齢100日齢前後に感染した場合，本ウイルスに対する免目的として実験を行なった．

疫 寛 容 が 誘 発 さ れ， 子 牛 が 持 続 感 染（Persistent

材料および方法

Infection：PI）牛として分娩される 1 ，23）．PI 牛は無症状の場合が多く摘発が難しい．そのため，PI 牛は最も重要な BVDV の感染源となり，畜産業において世界各国で深刻な経済的損失をもたらしている13）．

1 ．ウイルス
BVDV1型 の 代 表 株 で あ り CP 株 で あ る Nose 株 と，
BVDV2型の国内標準株の一つであり，NCP 株でもある

原因ウイルスはフラビウイルス科ペスチウイルス属のKZ–91NCP 株 を 用 い た．KZ–91NCP 株 は1991年 に 粘 膜

BVDV 1型及び 2 型で，それぞれの中には更に抗原的に病を発症した30ヶ月齢のホルスタイン牛から分離された．また，株であり21），日本で最初に発見された BVDV 2株であBVDV は培養細胞に対する病原性の有無から細胞病原る．Nose 株は，慢性下痢の症状を呈した牛から分離さ性（Cytopathic：CP） 株 と 非 細 胞 病 原 性（Non–

れた CP 株で17），ワクチン株としても用いられている

cytopathic：NCP）株の 2 つの生物型に分類され，BVD

BVDV1型の国内代表株である．

多様な型（サブグループ）が認められる

7 ，30）

発症牛からは CP 及び NCP 両株が検出されるが，通常 PI
牛からは NCP 株が検出される29）．BVD の予防は主に，生ワクチンと不活化ワクチンの 2 種類によって行われて
22）

2 ．細胞
ウイルスの増殖，細胞クローニングには，BVDV がいる ．しかし，BVDV のワクチンを製造する過程で，混入していない牛腎臓由来細胞（MDBK 細胞）と豚腎使用する細胞を増殖・維持するために，牛胎児血清もし

臓由来株化細胞（SK–L 細胞）を用いた．細胞培養には

くは牛血清を用いるが，牛胎児血清の多くには BVDVイーグル MEM ①培地（日水製薬株式会社が迷入し，また，牛血清の多くが，BVDV に対する中

東 区 上 野 ）9.4 g/L，N，N–Bis ［2–hydroxyethyl］ –2–和抗体を有しているため 3 ， 4 ， 8 ），目的のワクチンウイ

aminoethanesul folic acid（BES）1.0 g/L を混合した溶ルスの増殖の妨げとなっている18）．この影響をなくすた

液1L に10％炭酸水素ナトリウム10 mL を添加した培地

め，様々な取り組みが行われているが，有効な手段は未（ 5 ％〜20％ FBS MEM）を，細胞の増殖速度に応じてだ 確 立 さ れ て お ら ず， 牛 血 清 を 使 用 す る 場 合 に は，使い分けた．

東京都台

BVDV 混入に対する事前の検査が必要となっており，
そのことがワクチンの価格に反映されているものと推察

3 ．細胞クローニング

される．従って，BVDV ワクチン製造においては，よ細胞のクローニングは限界希釈法により行なった．約り効率的にワクチン株を増殖させる手段を開発し，安価

4.0×106個 /mL まで増殖した MDBK 細胞，SK–L 細胞そなワクチンを提供することが必要である．

れぞれを96穴プレートで 4 倍段階希釈し，高希釈の列の従来，細胞株は株化された時点で，均一の性質を維持

ウェルを顕微鏡において観察し，細胞が 1 個 / ウェルとしており，多様な性質を持ち合わせていないとされてきなったウェルを選択した．それぞれの選択した細胞が約たが，ウイルス学の研究が進むにつれて，現在では，多50個 /colony 以上増殖した時点で，24穴プレートに継代

くの細胞株は，多様な性質を持った細胞が混在して存在し，その後，25 cm2細胞培養フラスコに継代し実験に用している事が知られている27）．また，この様な細胞株のいた．最初の細胞播種の際には FBS 添加 MEM で培養

クローニングにより新たに得られた細胞株を，ウイルス

し，トリプシン処理の時間短縮を行い細胞の洗浄を 2 回増殖に用いる研究も多く知られている．ロタウイルスで行うなど，細胞へかかるダメージを軽減した .

は，細胞株のクローニングにより，アカゲザルの腎細胞株からクローニングを行った MA–104細胞が樹立され，

中川ら：クローニングによる BVD ワクチン製造細胞株の作出
4 ．各クローン細胞における BVDV 増殖試験

113

6 ．リアルタイム RT–PCR

作出したクローン細胞を新しいフラスコに継代して 1

RNA 抽出には RNeasy Mini Kit（株式会社キアゲン

日後に，細胞が十分に増殖したフラスコを PBS で洗浄

東京都中央区勝どき）を用いた．リアルタイム RT–PCR

後，ウイルス液を1mL 接種し，37℃で90分間吸着を行は坂下らの報告26） に基づき，TaKaRa One Step SYBR

な っ た． ウ イ ル ス 吸 着 後，PBS で 洗 浄 し， 5 ％FBS

PrimeScript RT–PCR Kit（タカラバイオ社）を用いた

MEM を8 mL 加え，37℃で培養を行なった．ウイルスSYBR 法により実施した．プライマーは Vilcek らの報接種後， 1 日目， 2 日目， 3 日目， 4 日目の培養液をそ告33）によるぺスチウイルス属の 5 ’ 末端非翻訳領域を増

れぞれ1 mL ずつ採取し，凍結チューブで−80℃に凍結

幅する324–326のペアを用いた．

保存した．

結

5 ．各クローン細胞における BVDV のウイルス力価測定

果1 ．細胞クローニング

ウイルス力価測定には，CP 株である Nose 株を用い，MDBK 細胞及び SK–L 細胞に対し，複数回限界希釈法

MDBK 細胞，SK–L 細胞から作出した各クローン細胞をによる細胞クローニングを行なった結果，MDBK 細胞

接種対象として実施した．作出したクローン細胞の細胞由来のクローン細胞を 5 株，SK–L 細胞由来のクローン

数をカウントし，細胞を 5 ％FBS MEM で約 2 ×105個 /細胞を 5 株得る事が出来た．MDBK 細胞から得られた

mL になる様に希釈を行ない，96穴プレートに100 µL/

クローン細胞はそれぞれ MDBK–CLONE1（M–CL1），

ウェルずつ播種し，約 1 日間培養を行なった．

MDBK–CLONE2（M–CL2），MDBK–CLONE3（M–

小試験管 8 本に維持培地（増殖培地から血清を抜いたCL3），MDBK–CLONE4（M–CL4），MDBK–CLONE5もの）を900 µL ずつ分注し，Nose 株のウイルス原液（M–CL5）と名付け，SK–L 細胞から得られたクローン

100 µL を10− 1 希釈用の試験管に加えて撹拌し，10倍階

細 胞 は そ れ ぞ れ SK–L–CLONE1（S–CL1），SK–L–

段希釈したウイルス液を低濃度の方から25 µL/ ウェル

CLONE2（S–CL2），SK–L–CLONE3（S–CL3），SK–L–接種した．陰性コントロールとして 8 列目には維持培地

CLONE4（S–CL4），SK–L–CLONE5（S–CL5） と 命 名を分注した．接種後 2 〜 3 日で CPE が観察されたら，し使用した．

6 日目まで毎日観察し，Behrens–Kärber 法でウイルス作出したクローン細胞の顕微鏡像（×100）を図 1 に力価を測定した．また，各クローン細胞におけるウイルス示した．MDBK 細胞から得られたクローン細胞はいず

力価を評価する対照として，77代継代の MDBK 細胞とれも上皮様の多角型の細胞であったが，M–CL2及び M–

65代継代の SK–L 細胞に対しても同様の操作を行った．

CL3は他のものより小型で，個々の細胞の境界がやや不

A

B

C

D

E

F

G

H

I

J

図 1 ．作出したクローン細胞の光学顕微鏡像（×100）（A） M–CL1（B） M–CL2（C） M–CL3（D） M–CL4（E） M–CL5（F） S–CL1（G） S–CL2（H） S–CL3（I）（J） S–CL5

S–CL4

家畜衛生学雑誌

114

第44巻第 3 号（2019）

明瞭であった．一方，SK–L 細胞から得られたクローン

種し， 5 日間の顕微鏡観察において CPE を顕著に示し細胞は，いずれも紡錘形の細胞であったが，SK–L1，

たウェルをプラス，起こさなかったウェルをマイナスとSK–L3は他のものより小型で，SK–L5は小型で比較的丸して判定を行なった（表 1 ）．同様に，SK–L 細胞から作型の形態という特徴を示した．

出したクローン細胞にも Nose 株を接種し， 5 日間の顕

SK–L 細胞に対して行ったクローニングの経過の 1 例

微鏡観察において CPE を顕著に示したウェルをプラ

を顕微鏡像（×100）で示した（図 2 ）．この細胞は非常ス，起こさなかったウェルをマイナスとして判定したに増殖が良く， 1 つのウェルに入った単一の細胞が増殖（表 2 ）．
これらの結果から，Nose 株接種後 2 〜 5 日目までのし，培養 3 日後には50〜100個の同じ形態を持つ細胞がコロニーを形成し， 6 日後には100個 /colony 以上まで

log TCID50/mL を Behrens–Kärber 法を用いて算定した

増殖した．

（図 3 ）．MDBK 細胞由来のクローン細胞及び対照の77
代 MDBK 細胞の Nose 株接種 5 日後におけるウイルス感2 ．作出クローン細胞における Nose 株のウイルス感染価

染価は，M–CL1で5.6 log TCID50/mL，M–CL2で5.1 log
TCID50/mL，M–CL3 で 6.35 log TCID50/mL，M–CL4，

MDBK 細胞から作出したクローン細胞に Nose 株を接M–CL5，MDBK 細胞でいずれも5.35 log TCID50/mL を

b

a

c

図 2 ．クローン細胞作出例（a） 1 日目のウエル（b） 3 日目のウエル（c） 6 日目のウエル

表 1 ．MDBK 細胞から作出したクローン細胞における Nose 株の力価測定の結果（ 5 日目）
M-CL1
CONTROL
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1

M-CL2

M-CL3

M-CL4

M-CL5

MDBK

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + + - - - - - - - - - - - - - + + - - - - - - + + - + - - - + + - - - + - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +-1～-7：ウイルスの希釈倍率（10の-1乗希釈から-7乗希釈まで）
CONTROL：陰性コントロール（維持培地のみ接種）＋：CPEが認められたもの-：CPEが認められなかったもの

中川ら：クローニングによる BVD ワクチン製造細胞株の作出

115

表 2 ．SK–L 細胞から作出したクローン細胞における Nose 株の力価測定の結果（ 5 日目）
S-CL1

S-CL2

S-CL3

S-CL4

S-CL5

SK-L

CONT
ROL

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - --7- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + + - - + + - - + - - - - + - - - - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

-6
-5
-4
-3
-2
-1

S‒CL1～S‒CL5：各クローン細胞を示す．SK‒L：クローン細胞の親細胞．
-1～-7：ウイルスの希釈倍率（10の-1乗希釈から-7乗希釈まで）
CONTROL：陰性コントロール（維持培地のみ接種）＋：CPEが認められたもの-：CPEが認められなかったもの

logTCID₅₀/mL

a

M-CL1

M-CL2

M-CL3

M-CL4

M-CL5

MDBK

7

M–CL5は対照である MDBK 細胞と同様の感染価を示し

6

た．M–CL1，M–CL3は 対 照 と 比 べ て 良 好 な 増 殖 を 示

5し，とりわけ M–CL3においては CPE の程度が強く，増4

殖速度も他の細胞と比べて優れていた．
一方，SK–L 細胞由来のクローン細胞及び対照の65代

3

SK–L 細胞における Nose 株接種 5 日後の感染価は，S–

2

CL1，SK–L で5.1 log TCID50/mL，S–CL2，S–CL3で5.6

10log TCID50/mL，S–CL4，S–CL5 で 5.35 log TCID50/mL
0

2DAYS

3DAYS

4DAYS

5DAYS

接種後日数

b

S-CL1

S-CL2

S-CL3

であった．いずれも対照と同等か優れた増殖性を有しており，中でも S–CL2，S–CL3は CPE の程度が強く，増

S-CL4

S-CL5

SK-L

6

殖速度も優れていた．
3 ．リアルタイム RT–PCR によるウイルス遺伝子の測5定4logTCID₅₀/mL

示した．M–CL2における CPE の程度は弱く，M–CL4，

蛍光シグナルにほとんど変動がない，PCR の初期サ

3

イクル（通常 3 〜15サイクル）におけるシグナルレベル

2であるベースラインから，統計学的に有意な増加が見ら

1

れる様になったシグナルレベルを閾値に設定した．反応0の蛍光シグナルが閾値と交差する時点のサイクル数を
0

2DAYS

3DAYS

4DAYS

5DAYS

接種後日数

図 3 ．接種 2 日後〜 5 日後の各クローン細胞におけるNose 株のウイルス感染価（a） MDBK から作出したクローン細胞における Nose 株のウイル
ス感染価（b） SK–L 細胞から作出したクローン細胞における Nose 株のウイ
ルス力感染価Threshold Cycle（Ct）として，Ct 値を RNA 量の相対的な指標とし比較を行なった．
MDBK 細胞由来のクローン細胞及び76代 MDBK 細胞
へ，Nose 株及び KZ–91NCP 株を接種して得られた上清からの抽出 RNA サンプルを，リアルタイム RT–PCR に供し，得た Ct 値を比較した（図4a，b）．また，SK–L 細
胞由来のクローン細胞及び65代 SK–L 細胞へ Nose 株及家畜衛生学雑誌

116

表 3 ．リアルタイム RT–PCR 反応条件

び KZ–91NCP 株 を 接 種 し て 得 ら れ た 上 清 か ら の 抽 出

反応条件

反応時間
mm: ss

温度
（℃）

cycle

Stage 1・2
（RT）

5:00
0:10

42
95

×1
×1

0:50
0:30

95
55
72

Stage3
（PCR）

0:34
（検出）

Stage4（Dissociatio）

a

0:15
1:00
0:15
0:15

第44巻第 3 号（2019）

RNA サンプルを，リアルタイム RT–PCR に供し，得たCt 値を比較した（図4c，d）．さらに，BVDV 接種 4 日後に採取したサンプルに関して，各クローン細胞における RNA 量が対照である76代 MDBK 細胞及び65代 SK–L×40

細胞におけるウイルス RNA 量の何倍量であるかを示した指標である 2 −ΔCt を算出した（図 5 ）．まず， 1 サイ
クルごとに初期サンプルは 2 倍に増幅されるので，サン

95
60
95
60

プルが Ct 値までの増幅倍率／対照コントロールが Ct 値×1までの増幅倍率＝2ΔCt を求めた．サンプル中に含まれている RNA 量は，サイクルが小さければ小さいほど多いc

M-CL1～5nose株接種
25.5

34
32

23.5

Threshold Cycle (Ct)Threshold Cycle (Ct)

24.5

22.5
21.5
20.5
19.5

26
24
22
20
18

1days

2days
接種後日数
M-CL2

M-CL3

3days

M-CL4

M-CL5

S-CL1

MDBK

d

30

2days

3days

4days

S-CL2

S-CL3

S-CL4

S-CL5

SK-L

S-CL1～5 kz-91ncp株接種
31

30.5

Threshold Cycle (Ct)

29
28.5
28
27.5
27

30

29.5

29

28.5

26.5
26

1days

接種後日数

M-CL1～5kz-91ncp株接種

30.5

16

4days

29.5

Threshold Cycle (Ct)

28

17.5

M-CL1

b

30

18.5

16.5

S-CL1～5nose株接種

36

1days

2days

3days

4days

28

1days

2days

接種後日数
M-CL1

M-CL2

M-CL3

M-CL4

3days

4days

接種後日数
M-CL5

MDBK

S-CL1

S-CL2

S-CL3

S-CL4

S-CL5

SK-L

図 4 ．作出したクローン細胞におけるウイルス増殖性の比較（a） MDBK 細胞から作出したクローン細胞 M–CL 細胞 1 〜 5 に Nose 株を接種し，接種後 1 日目， 2 日目， 3 日目， 4 日目の培養
上清を採取して，ウイルス RNA を抽出し，リアルタイム RT–PCR で分析した Ct 値を比較した．
（b） MDBK 細胞から作出したクローン細胞 M–CL 細胞 1 〜 5 に KZ–91NCP 株を接種し，接種後 1 日目， 2 日目， 3 日目， 4 日目の培養上清を採取して，ウイルス RNA を抽出し，リアルタイム RT–PCR で分析した Ct 値を比較した．
（c） SK–L 細胞から作出したクローン細胞 S–CL 細胞 1 〜 5 に Nose 株を接種し，接種後 1 日目， 2 日目， 3 日目， 4 日目の培養上清を採取して，ウイルス RNA を抽出し，リアルタイム RT–PCR で分析した Ct 値を比較した．
（d） SK–L 細胞から作出したクローン細胞 S–CL 細胞 1 〜 5 に KZ–91NCP 株を接種し，接種後 1 日目， 2 日目， 3 日目， 4 日目の培養上清を採取して，ウイルス RNA を抽出し，リアルタイム RT–PCR で分析した Ct 値を比較した．

中川ら：クローニングによる BVD ワクチン製造細胞株の作出

117

ので，逆数をとって 1 ／2ΔCt ＝ 2 −ΔCt を各クローンにおく，M–CL1は76代 MDBK 細 胞 よ り 約1.4倍，M–CL3はける BVDV 増殖能が対照コントロールと比べ，どの程

約1.6倍ウイルス増殖性が優れていた．M–CL4， 5 は76

度優れているかの指標とした．

代 MDBK 細胞とほぼ同等の Nose 株増殖能を持ち，M–

Nose 株を接種した各細胞クローン及び対照コント

CL2は約0.1倍と増殖が弱く Nose 株の増殖には適してい

ロールにおけるウイルス増殖性の優劣は，概ねウイルスなかった．SK–L 由来のクローン細胞の Nose 株増殖能

感染価の測定結果と同じだった（図 3 ， 4 ， 5 ）．Noseは，優劣は特に感染価測定結果と概ね変わらないもの

株接種 4 日後において M–CL1， 3 は Nose 株の増殖が良の，より大きな差が認められる結果となった（図 3 ，

a

M-CL1

7

M-CL2

M-CL3

M-CL4

M-CL5

S-CL4

S-CL5

2 －ΔCt

6
5
4
3
2
1
0
Nose

b

S-CL1

6

S-CL2

KZ-91NCP

S-CL3

2 －ΔCt

5
4
3
2
1
0
Nose

2 －ΔCt = 1 / 2 ΔCt= 1 / 2 Ct (sample)/ 2 Ct (control) =KZ-91NCP

各クローン細胞におけるウイルスRNA量対照コントロールにおけるウイルスRNA量（a）

MDBK細胞から作出した各クローン細胞における 2 - ΔCt（b）

SK-L細胞から作出した各クローン細胞における 2 - ΔCt：nose株接種時
点線：2- Δ Ct：KZ-91NCP株接種時= 1の基準線（対照コントロールよりウイルス感受性が優れているか劣っているかの基準線）

図 5 ．作出した各クローン細胞における 2 −ΔCt

家畜衛生学雑誌

118

第44巻第 3 号（2019）

4 ，5 ）．S–CL2，3 ，5 は非常に Nose 株の増殖が良く，清のガンマー線照射や非働化を行い，BVDV がどの程S–CL2は65代 SK–L 細胞より約2.4倍，S–CL3は約4.8倍，度減少するか調べた結果，ガンマー線非照射の血清ではS–CL5は約1.7倍 Nose 株の増殖性が優れていた．S–CL4

21のロット中13ロットが陽性（62％）であったのに対は0.9倍と65代 SK–L 細胞とほぼ同等の Nose 株増殖能をし，ガンマー線照射の血清では 9 ロット中 1 ロットの陽持ち，S–CL1は0.4倍と増殖が悪く，Nose 株への感受性性（10％）であった．このことからガンマー線照射は，は低いと考えられた．

ある程度の効果を示すものの，完全ではなく，血清を使KZ–91NCP 株を接種した各クローン細胞及び対照コ用する際には迷入ウイルスの検査が必要である事が指摘

ントロールにおけるウイルス増殖性は，Nose 株とは大されている．また，血清中の補体成分を不活化させるた

きく異なっていた（図 4 ，5 ）．MDBK 細胞由来のクロー

めの非働化（56℃30分）は迷入ウイルスの不活化に全く

ン細胞における増殖性は概ね MDBK 細胞と同等かそれ効果がない事が報告されている25）．

以上で，Nose 株と比べると Ct 値は全体的に大きく，ウ

このように現状のワクチン製造工程には BVDV に対

イルス量は少なかった．KZ–91NCP 株接種から 4 日後する中和抗体を含有せず，また BVDV の混入もない特に お い て，M–CL1は76代 MDBK 細 胞 の1.6倍，M–CL2

別な牛血清を使用しなければならないなど，製造費が高は1.4倍，M–CL3は1.0倍，M–CL4は5.4倍，M–CL5は5.6額となる課題が残っており，価格の面から BVD ワクチ

倍のウイルス増殖能を持っており，M–CL4， 5 は KZ–

ン接種率が伸び悩んでいる事は，これらのことに起因す

91NCP 株に対して優れた感受性を示した．SK–L 細胞由るであろうと考えられる．北海道で行われた調査による来のクローン細胞における増殖能は全体的に低く，と，2008年において BVDV ワクチンの接種率は30％とNose 株と比べると Ct 値は大きく，ウイルス量は少ない

低い水準にある事がわかっている15）．しかし，BVD に傾向を示した．KZ–91NCP 株の増殖能については，S–

対するワクチンには，細菌やマイコプラズマ等が関与しCL1が特に優れており，65代 SK–L 細胞の2.8倍のウイル引き起こされる牛呼吸器複合病の一次要因となりうるス 量 だ っ た．S–CL4は65代 SK–L 細 胞 と ほ ぼ 同 等 で1.1

BVDV の集団的急性感染を防ぐ事と，妊娠牛が BVDV倍，S–CL2， 3 ， 5 は増殖が弱く，それぞれ，0.4倍，0.2に暴露されても流産や持続感染牛産出の原因である胎盤

倍，0.6倍と，KZ–91NCP 株に対する感受性は低かった．

感染を防ぐ事が期待できる 6 ）．ワクチン接種はこれらを

増殖速度は全体的に非常に緩慢であったが，クローン細100％保証することはできないものの，適切な使用によ

胞の中では M–CL4， 5 が優れていると考えられ， 2 日

り効果を最大限に高めることが出来ることから，早急な後から 4 日後にかけて約5.5倍まで急速にウイルスを増安価なワクチンの普及によるワクチン接種率の増加が重殖させ，増殖速度においても非常に優れていた．

要である．そのため，BVD ワクチン製造においては，

考

察

より効率的にワクチン株を増殖させる手段を開発し，安価なワクチンが提供されることが必要である．そこで，

現在用いられている BVD のワクチンには，いくつか

効率的にワクチン株を増殖させる方法を開発するため，の問題点が存在する．BVDV のワクチンを製造する過ウイルス感受性の高い細胞の既存培養細胞株からのク程で使用する牛胎児血清の多くには既に，BVDV が迷ローニングを試みた．

入し，牛血清の多くには BVDV に対する中和抗体が含本研究では，細胞クローニングには限界希釈法を用いまれており，目的のワクチンウイルスを増殖するためのたが，96穴プレートのウェルに偶発的に 1 つの細胞が入妨げとなっている．これまでの報告によれば，アルゼンる確率が低いことや，単一の細胞からではなかなか細胞チンで組織培養に使用するため販売されている牛胎児血が増殖してこない事などが影響し， 5 つのクローン細胞

清の80％が蛍光抗体法による検査で，BVDV の汚染が株を得るのに，計 6 回の限界希釈法を行わなければなら認められており，この結果は米国における報告と同じ割なかった．Kim らは，細胞を希釈して96穴プレートに播合である36）．さらに，2004年には今まで報告されている種する際には，30％ FBS MEM を用いるなどの工夫を

BVDV とは抗原学的及び遺伝学的に異なる HoBi–like ペ

しており16），本研究においても，20％ FBS MEM で培

スチウイルスと呼ばれるウイルスが，市販されているブ

養，トリプシン処理の時間短縮など，細胞へかかるダ

ラジル産の牛胎児血清から高率に検出された事が報告さ

メージを軽減するなどの工夫をしたところ，単一の細胞

れ た27）． こ の よ う な BVDV の 牛 胎 児 血 清 へ の 混 入 はからの増殖性をかなり上昇させる事が出来た．

BVDV のワクチン製造において，ワクチンウイルス以

本研究の結果から，各クローン細胞における BVDV

外の混入及びワクチンウイルスの増殖阻害をもたらす事に 対 す る 感 受 性 は 様 々 で， 株 化 さ れ た MDBK 細胞，が報告されている18）．この影響をなくすため，牛胎児血

SK–L 細胞共に BVDV に感受性の高い細胞と感受性の低中川ら：クローニングによる BVD ワクチン製造細胞株の作出

119

い細胞が混在している事が示唆された．豚サーコウイル

受性を，共通の手順で，同時に迅速に比較する事が出来

ス 2 型（PCV2）を豚腎臓由来細胞株（PK15細胞）で増る事から，リアルタイム RT–PCR という手法を選択し殖させた研究では，株化細胞におけるウイルス力価が比た．ウイルス感染価測定では，ウイルス接種から 2 日後較的低く，104〜105TCID50を超えないのは，この細胞のに CPE が観察され始め，その数を増やし続け， 5 日間

9 ，19）．また，その後の研の観察を終えたが， 6 日目の結果が 5 日目のものと変わ究において，この PK15細胞のクローニングを行う事にりはなかったことから， 5 日目のウイルス力価が最大でよって，PCV2に高感受性の細胞株（PK15–C1）と低感あると考えた．リアルタイム RT–PCR では， 1 日目か

受性の細胞株（PK–15–A2）が得られている37）．本研究

ら 4 日目の培養上清の採取は行ったが， 5 日目に関してにおいても，Nose 株に高感受性の細胞株（M–CL1，M–

は行わなかった．しかし， 5 日目のウイルス感染価とウ

CL3，S–CL2，S–CL3）と低感受性の細胞株（M–CL2，

イルス接種 4 日目における各クローン細胞のウイルス

S–CL1）を得る事が出来た．KZ–91NCP 株においても，

RNA 量を比べた時の値は概ね一致しており， 1 〜 3 日

高感受性の細胞株（M–CL4，M–CL5，S–CL1）と低感目の結果では少し異なっていた．特に，ウイルス接種か受性の細胞株（S–CL2，S–CL3，S–CL5）を得る事が出ら 2 ， 3 日目に，ウイルス力価は低い値を示している

来た．各クローン細胞の形態とウイルスの増殖能力につが，リアルタイム RT–PCR では高い値を示しているといては，関連性は見いだせなかった．しかし，クローンいう対比関係が多く認められた．この事は，確認しては細胞の形態がそれぞれ異なることが示されたことによいないが，CPE を起こしていない，または顕著ではなり，現在使用されている細胞株中には，多数の種類の細いがウイルスが増殖していたウェルが多数あり，ウイル

胞が存在することが示された．また，本研究の結果でス感染価が低い値となってしまったとも考えられる．

は，それぞれのクローン細胞におけるウイルス感受性

CPE を起こさない NCP 株も，CP 株と共通の方法でウイは，ウイルスの株の違いにより全く異なっていた．例えルスの増殖をウイルス遺伝子の検出により確認する事がば，S–CL3は Nose 株 に は 非 常 に 感 受 性 が 高 い（76代

できるリアルタイム RT–PCR は，ウイルスの増殖をモMDBK 細胞の4.8倍）が，KZ–91NCP 株には感受性が低ニタリングする有利な手段であると再認識する事が出来

か っ た（65代 SK–L 細 胞 の0.2倍 ）．このような結果かた．また，BVDV1型と BVDV2型を同時に検出するリア

ら，細胞におけるウイルス感受性はそのウイルスの株にルタイム RT–PCR 手法は，BVDV を広く検出する事がよ っ て 異 な る と 推 察 さ れ る． し か し， こ の 結 果 が出来る優れた検査法であることが再確認された．

不均一性が原因だと述べている

BVDV の 1 型と 2 型による違いなのか，CP 株と NCP 株

本研究において，MDBK および SK–L 細胞から得られによる違いなのかなどは，本研究の結果からは判断するたクローン細胞でウイルスの増殖能力が異なることが示

事が出来なかった．今後の研究において，各クローン細さ れ， 同 じ BVDV で も ウ イ ル ス 株 の 違 い に よ り， ク

胞の様々なウイルス株に対する感受性を確かめる必要がローン細胞での増殖能力に違いがあることが示された．

あると考える．

このことは，より感受性の高い細胞を選択することによKZ–91NCP 株接種時の各クローン細胞におけるウイり，より効率の良いワクチン製造工程を構築できる可能

ルス増殖は，Nose 株と比べると Ct 値も大きくウイルス性を示唆するものである．BVDV の Nose 株に高感受性

量は少なかったが，同条件下では CP 株は NCP 株よりもを 示 す M–CL1，M–CL3，S–CL2，S–CL3， 及 び KZ–

複製能力が高いとされており31），KZ–91NCP 株のウイル

91NCP 株に高感受性を示す M–CL4，M–CL5，S–CL1のス力価がもともと低下していた訳ではないと考えられ優れたクローン細胞を作出することに成功した．今回得る． ま た，BVDV の 増 殖 試 験 の 対 照 細 胞 と し て76代られたクローン細胞のいずれも，増殖は比較的緩慢であMDBK 細胞と65代 SK–L 細胞を用いたが，クローニング

ることが難点であるが，血清濃度を高めるなどの処置をの親細胞には60〜80継代の細胞株を用いたので，継代をした際に増殖速度に変化があるかどうかなどを今後検討

重ね，対照細胞が BVDV に対する感受性を低下させたする必要がある．また，長期継代することによって，株という影響は無視できるものと考えた．

化細胞の性質が変化する事が報告されているので24，35），

本研究においては，各クローン細胞における BVDV

今回得られた高感受性の株を長期継代した時の，BVDV

感受性を比較するためにリアルタイム RT–PCR による感受性に対する変化も検討する予定である．今後はより

ウイルス遺伝子量の測定を用いた．BVDV に関して，優れたワクチン株増殖細胞を得るため，今回作出した

一般的にリアルタイム RT–PCR はスクリーニング検査

BVDV 高感受性のクローン細胞（M–CL4， 5 ）の無血や特定の遺伝子の発現量を測定する実験などで用いられ清培地への馴化を行い，無血清でワクチン株に高感受性ている．本研究では，CP 株と NCP 株に対する細胞の感の細胞を樹立する事を目指したい．それにより，より安家畜衛生学雑誌

120

価なワクチン開発が可能となり，農家のワクチン接種率

用文

Immunology and Immunopathology. 94, 149–161.
10）Griebel P.J. (2015) BVDV vaccination in North向上の一助となる事を期待する．

引

第44巻第 3 号（2019）

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済的損失をもたらす疾病で，BVD ウイルス（BVDV）

atypical pestivirus isolate, a putative member of aは培養細胞に対する病原性の有無から CP 株と NCP 株のnovel pestivirus species, Journal of General

2 つの型に分類される．BVD ワクチンを製造する過程

Virology. 85, 3647–3652.

で用いられる牛胎児血清もしくは牛血清に，BVDV が29）Thiel H.J., Plagemann P.G.W., Moenning V. (1996)

混入しているため，ワクチンウイルスを増殖させる妨げ

Pestiviruses. In: Fields B N, et al. eds. Fieldと な っ て い る． 従 っ て，BVD ワ ク チ ン 製 造 に お い て

Virology. 3rd ed. Philadelphia: Lippincott–Raven,は，効率的にワクチン株を増殖させる手段を開発し，安pp1059–1073

価なワクチンの提供が求められている．これらの背景か30）Thiel H.J., Colett M.S., Gould E.A., et al. (2005)

ら，本研究は，BVDV のワクチン製造に使用されていVirus Taxonomy Eighth Report of the

る MDBK 細胞や SK–L 細胞のクローニングを行い，CPInternational Committee on the Taxonomy of株である Nose 株及び NCP 株である KZ–91NCP 株がより

Viruses Flaviviridae, Fanquet CM, et al eds.,

良く増殖するための細胞株を選択することにより，効率

pp981–998 Elsevier, San Diego

的なワクチン製造系を確立する事を目的とした．クロー

31）Turin L., Lucchini B., Bronzo V., et al. (2012) In

ニングには限界希釈法を用い，各クロ – ン細胞におけるvitro replication activity of bovine viral diarrhea

BVDV の 増 殖 測 定 に は，Nose 株 は 感 染 価 測 定，KZ–

122

家畜衛生学雑誌

第44巻第 3 号（2019）

91NCP 株と両株は，リアルタイム RT–PCR による遺伝

作出することに成功した．Nose 株で増殖が良いクロー

子量測定により行なった．限界希釈法によるクローニン

ン細胞で，KZ–91NCP 株でも増殖が良いということはグを行なった結果，MDBK 細胞および SK–L 細胞由来のなく，ウイルス株により各クローン細胞における増殖能

ク ロ ー ン 細 胞 を そ れ ぞ れ 5 株（M–CL1–CL5, S–CL1–が異なることが示された．

CL5）得られた．本研究では，Nose 株に高感受性を示
す M–CL1，M–CL3，S–CL2，S–CL3， お よ び KZ–
91NCP 株に高感受性を示す M–CL4，M–CL5，S–CL1をキーワード：BVDV，細胞クローニング，ワクチン製造

123

技術資料

ジビエとしてのイノシシの安心・安全の観点から
アフリカ豚コレラ，豚コレラを考える
押

田

敏

雄＊

Considering African swine fever and classical swine fever
from the viewpoint of wild boar on safety and security
as the game meat
Toshio Oshida ＊（Professor emeritus, Azabu University,
1-17-71 Fichinobe, Chuo-ku, Sagamihara, Kanagawa, 252-5201 Japan ）（2019. 2. 8  受付／2019. 3. 10  受理）キーワード：ジビエ，イノシシ，安心・安全，アフリカ豚コレラ，豚コレラ
  家畜衛生学雑誌

はじめに
鳥獣対策・利活用の一つとして，ジビエ利用が注目を浴びるようになってきた

8 −12）．食肉・畜産関係者のなかでは，「ジビエが進出して，食肉分野が脅かされるので

44，123〜132（2019）

なお，この原稿を執筆している間にも，残念なことであるが，CSF の発生情報が増えている．つまり，発生状
況については ing の状態である．

アフリカ豚コレラに関する EU の動向は」と言った心配が聞かれるようになっている．しかASF は東欧諸国では常在化しつつあるような豚やイし，現状では市場規模や，これまでの実績の違いでそのノシシに感染する致死率が100％とされるような脅威的ような話は単なる夢物語，勘違い，妄想の域を脱してはな疾病である．養豚が盛んなベルギーでの ASF 感染源

いない．

について調査が進んでいるとの情報がある．伝播経路や

ここで，整理して考えておく必要があるのは，ジビエ

速度から判断して，野豚などによる自然な感染伝播ではと食肉の共栄共存の問題である．市場規模，流通，利用なく，ヒトの媒介説，つまり靴底の土や生肉の持ち込み

範囲の問題があげられるが，何よりも大切なことは人へなどが濃厚との説である．ベルギーの専門家は，とりあの安心・安全10）に尽きる．ここで，食肉とジビエを比較した表を示す（表 1 ）．

えず東欧から西欧へのヒトの流れ，特に高速道路などの利用にチェックをかけることを提案している．

今回，アフリカ豚コレラ（African swine fever，以下

また，EU が ASF ワクチンの基礎研究を始めるようで

ASF） や 豚 コ レ ラ（classical swine fever， 以 下 CSF）

あるが，ASF ワクチンの開発について，2018年10月にの脅威のもと，イノシシをジビエとして安心に食べるた

EU 会議が開かれ，2019年の早い時期には最終的な結論

めに考えておかなければならない事柄を整理してみるこが出るとのことである．ワクチンプログラムの基金はととした．

1400万ユーロ（1600万ドル）になる見込みで15），EU 会
議の後に，ヨーロッパ委員会の担当官は「ワクチンが世＊

麻布大学名誉教授〒252−5201
神奈川県相模原市中央区淵野辺 1 −17−71に出るのは20年ほど先であろうし，出来てもおそらくは注射タイプであろう」と欧州議会の農業担当者に語ったそうである 1 ）．なお，ベルギーでの発生（4,000頭を殺処

家畜衛生学雑誌

124

第44巻第 3 号（2019）

表 1 ．食肉とジビエの比較
項

目

一般の食肉

ジ

ビ

エ

動物の種類

牛、豚、馬、めん羊、山羊、(鶏 )シカ、イノシシ、クマ、カモなど根拠となる法律など

と畜場法、食品衛生法、(食鳥検査法)野生鳥獣肉の衛生管理に関する指針、
食品衛生法

由来・来歴

生産農場が明確(HACCP)

どの地域で獲れたかのみ分かる

大前提

食用適のものだけが処理(生体検査に合格が必須条件)

食用の適否は問題とせず(病気や問題を含む可能性大)と畜場所と畜場に限定多くは山野(止め刺し)

解体場所

と畜場に限定(全国に200ヶ所)

処理施設が主(全国に630ヶ所)

食肉衛生検査と畜検査員(有資格者)が実施処理業者(資格は無し)が実施

密殺・密流通の可能性

100％ない(罰則規定あり)

自家消費の可能性あり

食中毒発生の
可能性

可能性低い

可能性あり

流通ルート

確立されている未確立(発展段階)分）があって，緊急度が上がり，非 EU 国の一部では既

わが国は CSF については膨大な予算および豚の犠牲にベルギー産の豚肉製品を輸入禁止にしている．フランをもって，清浄国となったが，残念ながら，再び発生し

スやポーランドの状況については AFP が写真とともにてしまった．

詳細な報道をしている．なお，ASF については「畜産の研究」に小野が詳述 6 ， 7 ）している．

中国でのアフリカ豚コレラの発生

今回，その感染経路は未だ不明であるが，感染豚を材料とした加熱不十分な弁当類の食べ残しを豚が摂食した可能性も否定出来ない．
中国の大きなお祭りは「春節」と「国慶節」の 2 つで2018年 8 月以降，隣国である中国で ASF が発生し，ある．春節は 2 月であるが，2018年についての時期には被害が蔓延している（図 1 ）．その規模は2019年 3 月 4

中国国内での ASF の発生は無かった．しかし， 8 月に日現在で，計129ヶ所，範囲は21省， 3 区， 4 直轄市となり中国での発生があった．なお，春節や国慶節には中広範に及び，361,285頭が殺処分されたようである．

国国内外でのべ30億以上の人々が移動，700万人が出国

また，症状が似通っているとされる CSF が2018年 9すると言われ，その旅行先はタイの 1 位に続き，日本は月になってからは岐阜県で26年ぶりに発生した．その後

第 2 位の人気となっている（日本経済新聞，2019年 2 月に 5 例発生し，終息に向かったとされたが（表 2 ），新

4 日付記事）．

たに 7 例および 8 例目の発生が2019年 1 月29日にあっ北海道・新千歳空港で，2018年10月 1 日に北京からのた．なお， 6 例目までで8,083頭が殺処分された．岐阜

旅客の荷物にあったソーセージ（持ち込まれたソーセーのこの近辺はイノシシの生息地域で，捕獲および斃死イ

ジは約1.5kg あり，真空パックされ一定の加熱がしてノシシから豚コレウイルス陽性反応が112例（岐阜県，

あったという．その原料の豚肉が中国産かどうかは不愛知県），報告されている（2019.2.1現在）．

明）が没収され，そのソーセージから，日本では存在が

もちろん，イノシシも豚も ASF，CSF の感受性動物

報告されていなかった ASF ウイルスの遺伝子を確認

なので，イノシシから豚，豚からイノシシへの疾病伝播

し，陽性反応が出たことを農水省が発表した．その後，が危惧される．

2018年10月14日に上海から羽田への便の乗客の荷物から日本国内では，豚については「と畜検査」が義務付け

ASF の陽性反応がある餃子を摘発した．その餃子は非られているので，感染豚が市場に流通する心配は皆無と加熱の自家製のなま物であった．更に，11月 9 日に大連断言できる．しかし，イノシシについての国の認証は現から成田への便の乗客の任意放棄手荷物から ASF 陽性状の体制（施設に対しての認証）ではかなりの疑問が反応の豚肉ソーセージ（2.5kg）を確認した．このほか残っている．つまり，検査体制が必ずしも充分ではなの例も含めて，合わせて 8 例の同様事案がある（図 2 ）．

く，その不充分さから，イノシシは危険であるという短一般的には，畜肉製品は加熱処理されていて，ウイル

絡的な線引きがされたなら，醸成仕掛けたジビエブーム

スは死滅している可能性が高いとされている．しかし，が衰退することが考えられる．

国内で ASF ウイルスの持ち込み事例が確認されたのは

押田：イノシシ肉の安心安全と ASF/ 豚コレラ

図 1 ．中国・ベトナム・モンゴルにおけるアフリカ豚コレラ発生状況（農林水産省 web サイトから，http://www.maff.go.jp/j/syouan/douei/attach/pdf/asf-453.pdf，2019年 3 月10日参照）

表 2 ．岐阜県での豚コレラ発生概況（ 6 例目まで）
1）１例目（岐阜市内の農場）患畜確定日 9/9①殺処分完了 9/10

②埋却完了 9/10

③汚染物品処理・消毒完了 9/11

2）２例目（岐阜市畜産センター公園）患畜確定日 11/15①殺処分完了 11/16②埋却完了 11/16③汚染物品処理・消毒完了 11/16

3）３例目（岐阜県畜産研究所）患畜確定日 12/5
①殺処分完了 12/6

②埋却完了 12/7

③汚染物品処理・消毒完了 12/7

4）４例目（関市内のイノシシ飼育施設）患畜確定日 12/10①殺処分完了 12/10②埋却完了 12/11③汚染物品処理・消毒完了 12/11

5）５例目（岐阜県立農業大学校）患畜確定日12/15①殺処分完了 12/15②埋却完了 12/16③汚染物品処理・消毒完了 12/16

6）６例目（関市内の農場）患畜確定日12/25①殺処分完了 12/27②埋却完了 12/28③汚染物品処理・消毒完了 12/28（表の本文は著者が作成/写真は知人から提供）

125

家畜衛生学雑誌

126

初で，国は防疫を徹底する方針である．
農林水産省動物検疫所では中国からの春節や国慶節休
暇利用の訪日客を意識して ASF 予防の啓蒙活動を展開している（図 3 ）．

第44巻第 3 号（2019）

モンゴルでのアフリカ豚コレラの発生について
アジアでは中国に限局していると思っていた矢先に，モンゴル国内でも ASF の発生が報じられた．

もちろん中国からの畜産物はほとんどの場合，輸入禁制品（一部の加熱製品を除いて）であるが，これらの摘発がたまたまであったか，日常的に密輸行為がなされていたのかは定かではない．

2019年 3 月 4 日時点で， 6 つの県11農場で ASF が確認されている（図 1 ）．
地元メディアの関連記事を調べると，養豚場・養豚農
家の飼育豚での ASF の発症と死亡の発生例だけではな

なお，中国本土と日本を結ぶ国際航路は北京，瀋陽，大連，青島，済南，無錫，天津，重慶，南京，上海，杭く，豚肉加工品や食料残渣のサンプルからの ASF ウイ
ルスの検出も，発表に含まれているようだ．

州および香港など実に多くのルートがあり，ほとんどのモンゴルで養豚と不思議な感じがするが，近年は外国場合， 3 〜 4 時間程度での往来が可能な位置関係となっ資本のホテルの進出もあり，海外からの来訪者も増えてている．

おり，必然的に豚肉の需要が高まっている背景を見過ごす訳にはいかない．

ウイルスの侵入経路の可能性と水際防疫
今回のことに限定しなくても，中国からの旅行者や農場に勤務する中国人の土産品に畜産物が紛れていなかったとは断言は出来ない．また，豚コレラ以外でも，韓国人は対馬などに日帰り，あるいは短期間の旅行に，自国の畜産物を持参している可能性が極めて高いとの指摘もある（宮崎大学末吉益雄教授，第109回日本養豚学会大会講演（2018））．
図 2 ．中国から持ち込まれ任意放棄された豚肉製品の例（農林水産省動物検疫所 HP から，http://www.maff.go.jp/aqs/
topix/asf2018.html，2019年 3 月10日参照）

この背景として，実際に韓国の釜山では空前の対馬旅行ブームで，2017年に対馬を訪れた韓国人旅行者はおよそ36万人に上るとのことである．人口約31,000人の対馬

図 3 ．動物検疫所の啓蒙用ポスター（中国語）（農林水産省動物検疫所 HP から，http://www.maff.go.jp/aqs/topix/pamphlet.html，2019年 3 月10日参照）押田：イノシシ肉の安心安全と ASF/ 豚コレラ

127

市に，平均で 1 日約1,000人，多い日には3,000人ほどの持参したり，自国の肉製品でバーベキューをするような韓国人が押し寄せている事実がある．対馬と釜山との距

無頓着な者もいて，食べ残しを廃棄する例も多々あるよ離は49.5km しかなく（図 4 ），釜山を出港した高速船

うである．

は，70分後に対馬北部の比田勝港に入港する．その乗船賃は日本の JR 九州が運航する高速船「ビートル」の正規運賃で8,000円，釜山では往復3,000円ほどの安価なチ

岐阜県での豚コレラの発生とイノシシでの陽性反応についてケットも売られているようである．ちなみに釜山からソ前述したが，2018年 9 月 3 日に岐阜県において CSF

ウルは新幹線で約 3 時間，5,000円ほど掛かるので，対の発生があった．当該の農場は繁殖豚80頭，肥育豚530

馬がいかに魅力的な観光地と位置付けられているか納得

頭の飼養規模の一貫経営農場であった．県の家畜保健衛できる．なお，JR 九州以外に韓国企業 3 社が航路を開

生所と農研機構動物衛生部門が精密検査を行い，CSF の設し，シーズンには 1 日延べ10隻が満席の韓国人観光客

確定診断がなされた．CSF 陽性の判定を受けて，当該農を運んでいる事実がある．

場の飼養豚の殺処分，発生農場の消毒，周辺農場の移動

海外から，わが国に口蹄疫や鳥インフルエンザなどの制限などが実施された．なお，近隣には養豚農場が点在

悪性伝染病が持ち込まれる可能性がある．これらの伝染していたものの幸いなことに蔓延は防止された．約 2 ヶ病の感染を防ぐため，これらの国からの肉，ハム，ソー

月間沈静な期間が続いたと思っているうちに， 2 例目かセージ，ベーコンなどの肉製品は日本へ持ち込むことは

ら11例目まで感染は拡大して行った（表 2 ）．

認められていない．また，許可なく持ち込んだ場合は処CSF の診断は比較的に容易であるが，決して現場で行罰されることとなる．動物検疫所では韓国からの入国者

うべき性格のものではない．つまり，感染を疑った場合に対しても注意を喚起している（図 5 ）．

には最寄の家畜保健衛生所に連絡し，専門家の手に診断

パンフレットなどでは，「農場に立ち入ったり，家畜を委ねる必要がある．つまり，ジビエのような感覚で，に触れたり，ゴルフシューズ・トレッキングシューズな現場で「腹出し」をすれば，CSF 感染例ではウイルスは

ど土のついた靴をお持ちの方は，帰国時に動物検疫所の瞬く間に環境に拡散されることとなってしまう．

カウンターにお立ち寄り下さい．特に，お弁当のなかの一方で，話は前後するが，2018年 9 月13日にまさかと肉料理や，肉入りのキンパ（韓国海苔巻き），ソーセー

思うような事態が発生した．CSF 発生農場から10km 圏

ジ，ハム，ジャーキーなどは，「肉製品」と認識しない
まま持ちこまれるケースが多いので，ご注意下さい」な
どの注意喚起の文章を見掛ける．
「安い・近い」の気軽さから肉製品や肉入りの弁当を図 4 ．韓国と対馬の位置関係

図 5 ．ハングル表示の注意喚起のポスター「肉製品？それっていいの？」（Wikipedia から，https://ja.wikipedia.org/wiki/ 対馬，2019年 3月10日参照）（農林水産省動物検疫所 HP から，http://www.maff.go.jp/aqs/
topix/pamphlet.html，2019年 3 月10日参照）

128

家畜衛生学雑誌

第44巻第 3 号（2019）

図 6 ．水路で発見されたイノシシ（岐阜の知人から提供）

図 7 ．岐阜県および愛知県における豚コレラ感染イノシシ発見地点（農林水産省 HP から，http://www.maff.go.jp/j/syouan/douei/csf/attach/pdf/index-156.pdf，2019年 3 月10日参照）

図 8 ．ジビエに力を入れる岐阜県（左側ポスターは郡上市観光連盟 HP から，（http://www.gujokankou.com/event/01hachiman/1011.html，2019年 3 月10日参照），
右側の 3 枚は日本ジビエ振興協会から提供）

押田：イノシシ肉の安心安全と ASF/ 豚コレラ

129

内にある農業用水路から斃死イノシシ（図 6 ）が見つか

ここで最も重要なのは屋外での腹出しによって，イノり，遺伝子検査の結果，当該農場のウイルスと同じタイ

シシやシカが感染症などに罹患していれば，ウイルスなプのものが検出された．その後も，CSF に感染したイノ

どの病原体を山野や河川に拡散させる可能性が大きいこ

シシが次々と発見されている（図 7 ）．

とが指摘される．また，それとは逆に，肉が土壌や河川

岐阜県は地域振興の一環で野生鳥獣肉（ジビエ）料理

水によって汚染される可能性も否定できない．

の PR に力を入れてきたが（図 8 ），その後も野生イノシ

表 3 に示すが，日本国内で捕獲された野生鳥獣は E 型

シの感染が拡大し，看板食材の一つであるイノシシの食肝炎ウイルス，トリヒナなどをかなりの率で保有してい肉利用を控える店が相次ぎ，痛手となっている．

ることが分かる．

イノシシなどを現場で腹出しすることの可否について2）

現行のジビエガイドライン （野生鳥獣肉の衛生管理に関する指針）では内臓摘出を屋外で行うことを禁止してはいない．つまり，一定の条件下では認めている．そイノシシの肉の劣化が重要な問題なのか，ウイルス拡散が問題なのかを良く考えれば，現場での「腹出し」などは決して行ってはならない行為だと理解されるはずである．

安心・安全なジビエを提供するためにの理由はジビエ肉の品質劣化が大きい問題とされてい野生鳥獣が持っている細菌や寄生虫の危害防止のたる．現場で行うべきとの考え方は，例えば古老の猟師がめ，適切な衛生管理を行っている施設を認証する制度が言うには，「捕獲して，一刻も素早く腹出しを行わない

2018年 5 月から運用を開始した．認証を行う機関（現在と，肉・内臓が駄目になる，つまり鮮度の低下が懸念さは「日本ジビエ振興協会」のみ）は一定の基準を満たせれる」とのことである．しかし，これに対して，現場でば登録される．認証を受けることによって，厚労省制定行うべきではないとの考え方を「日本ジビエ振興協会」の「ジビエ衛生ガイドライン」に沿った施設には認証

は提唱13）している．その理由は，「開腹した段階で，肉マーク（図 9 ）の使用が認められ，処理施設，製品，認が土壌や河川を汚染する可能性が大きいこと」，「感染症証を受けたジビエを扱う飲食店にもマークが掲示できるなどに罹患している可能性があれば，ウイルスなどの病ようになっている．

原体を山野や河川に拡散させる可能性が大きいこと」が国内に現在ある処理施設（大小で630ヶ所）が認証を受け，安心・安全なジビエが普及されることを願うもの

上げられる．
一方で，「野外で内臓摘出したエゾシカ枝肉の衛生状である．

況」についての研究報告がある．これによると，従前のしかし，現行での国産ジビエ認証制度は「施設認証」

方法（処理施設での解体）と屋外での方法を比較した場のみの認証で，可食，不可食の判断は作業者の独自判断

合，肉表面の一般生菌，大腸菌群，O-157，カンピロバに委ねられることになっている．その対応として，一定

クター，サルモネラおよびエルシニアについて，ふき取の教育を施し，一定の技量を有した者に資格（例えば，り検査の結果，どちらの肉も一般生菌以外は検出されな

イギリスの「鹿狩猟資格」 3 ） やわが国の「食鳥処理衛かったとしている

4，5）．この結果のみを鵜呑みにする

生管理者」）を付与するような制度が必須と考えられる．

と，「だから，腹出しは屋外でも問題は無い」と考えるのは危険である．

表 3 ．国内での野生鳥獣（生体）の病原体保有状況
動

物

シカ
イノシシ

病

原

保有率（％）部位

腸管出血性大腸菌

15.5

ふん便

トリヒナ

77.7

筋肉

E型肝炎ウイルス

2.4

血液

トリヒナ

100

筋肉

カンピロバクター

14.5

ふん便

（農水省資料、（http://www.maﬀ.go.jp/j/seisan/tyozyu/higai/
attach/pdf/suisin_kaigi-6.pdf ，2019年3月10日参照）より作表）

図 9 ．国産ジビエ認証マーク（日本ジビエ振興協会承認済み）

家畜衛生学雑誌

130

食肉とジビエの安心・安全のために何が重要なのか〈動物検疫の重要性〉

第44巻第 3 号（2019）
嗅ぎ分けて発見する訓練を受けている．海外のいくつかの国で既に導入されており，その活躍が知られるようになってきた．
日本でも2005年12月に成田国際空港に 2 頭の検疫探知

図10は空港の手荷物引渡し場（ターンテーブルに荷物犬が導入され，その後，関西国際空港，羽田空港，福岡が載せられて受取る場所）で活躍する検疫探知犬を示

空港，中部国際空港，新千歳空港，那覇空港，川崎東郵

す．麻薬や覚醒剤などの持込を探知する犬（麻薬探知便局に導入され活動している．なお，2018年 9 月には羽犬）の活躍は知られているが，検疫探知犬は，手荷物の田空港に 1 頭が増え，現在，29頭の「動植物検疫探知犬」

中から動植物検疫の検査を必要とする肉製品，果物等をが活動している．
検疫探知犬は，間接的に鳥インフルエンザや口蹄疫といった家畜の伝染病が日本へ侵入することを防ぐという重要な役割を担っているが，海外から到着する訪日者に，身近で働く検疫探知犬を見て，動物検疫の存在を知って貰うこともひとつの抑止力になろう．
動物検疫により，海外からの伝染病を持ち込ませない
ような努力を動物検疫所は24時間体制で行っている．入国時の申告はもちろんのこと，当該国の法令を遵守し，持ち込み禁止の畜産物の持込は厳に慎まなければならない．また，海外から日本へ再入国する場合，靴底の泥や汚れた衣類の持ち込みも厳に避けるべきである．

図10．活躍中の検疫探知犬（農林水産省動物検疫所 HP から http://www.maff.go.jp/aqs/job/
detectordog.html），2019年 3 月10日参照）〈病気の早期発見と対応〉
動物を飼養する場合，自己が管理する家畜の健康管理に努め，万一，平常時との違いに気付いた時点で，対応

図11．家畜衛生管理基準と衛生管理区域（中央畜産会資料（https://www.chikusankyokai.or.jp/environment/rearing-hygiene/
pdf/pamphlet_pig.pdf，2019年 3 月10日参照）より作図）押田：イノシシ肉の安心安全と ASF/ 豚コレラ

131を行わなければならない．つまり，掛かりつけの獣医師

ば，最終発生は平成 4 年（1992年）で，その15年後の平や管轄の家畜保健衛生所などとの連携を忘れてはならな

成19年（2007年）に OIE より清浄国として認知された．

い．重篤な感染症・伝染病であってもそれなりの対応が1887年も2007年も干支は猪であるというのは偶然のこ期待できることとなる．疾病の原因となるべく病原体をとなのだろうが，清浄国になった祝典と記念出版も行わ

自家農場に入れないためには，「飼養衛生管理基準」をれ，「豚コレラ防疫史」16） と言う500頁程度の実に内容

遵守し，「衛生管理区域」を明確にする（図11）必要がのある本が出版されている．この本には病原体の確認，ある．

ワクチンの製造，ワクチン接種とその中止に至る経緯，
CSF の防疫などについて，筆者が大学で教わった教授陣〈イノシシだけでなくシカも心配〉
ASF や CSF は豚やイノシシに感染してもヒトに感染はしない．ところが，牛や山羊の結核病は家畜伝染病予の名前を見つけ，微生物学や伝染病学の教科書の内容を復習し，撲滅に参画し，体験記を著した大学の同級生の名前まで見ることができた．

防法の指定を受け，水牛やシカは政令で定められた動物

感動に浸るのではなく，この書を多くの人々に，「今である．この病気の原因は抗酸菌属の結核菌で菌種に更……」などと言わずに，いま一度，読み返して貰う必

よっては動物にもヒトにも感染する人獣共通感染症なの要性を強く実感したものである．

である．結核菌は空気感染，飛沫感染によって伝播され参考および引用文献

るので，飼料を経由して感染する可能性は極めて低いとされる．

1 ）Alessandro Mancosu (2018) ASF injectable vaccine

しかし，野生ジカの牧草盗食被害の例も報告（図12）
されているので，飼料に付着した泡沫を介しての感染のis 20 years away, claims European Commission.
Animal Pharm., Oct.09, pp.11.

可能性は否定できない．なお，幸いなことに，シカから2 ）厚生労働省．野生鳥獣肉の衛生管理に関する指針

牛，牛からシカへの感染例の報告はさほどは多くはない（ ガ イ ド ラ イ ン ） に つ い て（2014）https://www.

が，注意を払わなければならない．

mhlw.go.jp/file/06-Seisakujouhou-11130500Shokuhinanzenbu/0000065509.pdf
3 ）松浦友紀子・伊吾田宏正（2012）英国の一次処理と資格制度．JVM.65，451-454．
4 ）松浦友紀子・伊吾田宏正・岡本匡代・伊吾田順平（2015）野外で内臓摘出したエゾシカ枝肉の衛生状況．哺乳類科学．50，11-20．
5 ）松浦友紀子・伊吾田宏正・岡本匡代（2015）林産物としてシカ肉を衛生的に管理する．森林総合研究所
平成24年版研究成果選集．44-45．
6 ）小野嘉隆（2018）中国のアフリカ豚コレラが大蔓延

図12．ロールベールを盗食中のシカ（麻布大学塚田准教授より提供）

している．畜産の研究．72，909-918．
7 ）小野嘉隆（2019）中国でアフリカ豚コレラさらに拡大中！．畜産の研究．73，153-160．
8 ）押田敏雄・坂田亮一（2015）「第 1 回日本ジビエサ〈ジビエの安心・安全〉

ミット」に参加して．畜産の研究．69，317-322．

以上のような状況から，ジビエガイドラインを遵守

9 ）押田敏雄・坂田亮一（2016），「第 2 回日本ジビエサ

し，一日も早く，ジビエの認証を受けることが出来るよミット」に参加して．畜産の研究．70，321-340．

うに，施設の改良・改善を行い，管理者，作業者は自己

10）押田敏雄・坂田亮一（2016）ジビエの処理，危害・研鑽に努める必要があると思われる．

まとめ
この原稿を執筆している間にも，事態は深刻に進んでいる14）．日本では明治20年末（1887年）に CSF の発生が初めて確認されている．そして，今回の発生がなけれ

安 全 確 保 お よ び 将 来 に つ い て． 岩 獣 会 報．42，
3-11．
11）押田敏雄・近田康二・坂田亮一（2017）「第 3 回日
本ジビエサミット」に参加して．畜産の研究．71，
135-153．
12）押田敏雄・坂田亮一（2018）「第 4 回日本ジビエサ

家畜衛生学雑誌

132

第44巻第 3 号（2019）

ミット」に参加して．畜産の研究．72，279-297．

15）Peter Rixon (2018) EU to fund research into13）押田敏雄（2018）安心・安全なジビエ（特にイノシ

vaccine for ASF. Animal Pharm., Oct.03, pp.5

シ）を提供するために．畜産の研究．72，991-998．

16）豚コレラ防疫史編集委員会（2009）：豚コレラ防疫14）押田敏雄（2019）豚コレラ・どう対応すべきか．畜史．全国家畜畜産物衛生指導協会・畜産技術協会．

産の研究．73，171-172．

133

第44巻
第44巻

第1号

総目次

2018

〈原著〉
オゾン水の殺糸状真菌（カビ）効果における pH の影響････････････････････････････････････････････････････････････宮﨑朋美・安田奏平・中川健斗・高鳥浩介
釜瀬幸広・黒松 久・櫻井美栄・白井淳資･･･････････････････････････ 1〜 7
〈第88回大会一般講演要旨〉
SDS-PAGE を用いた中国産加熱処理鶏肉の加熱状況確認･･･････････････････････････････････････････････････永友恵美奈・山谷由香・三角さつき・牧田利和子
浅岡正弘・栁澤成江・鈴木一弘・守野 繁･･････････････････････････ 12〜13
臭気低減資材および消毒薬の脱臭能力の判定について･････････････････････････････････････････････小堤悠平・長峰孝文・田中康男・畠中哲哉・道宗直昭･･････････････････････････ 14〜15
ヤギの乳房内に LPS を投与した際の非投与分房の乳汁 pH の継時的変化･････････････････････････････････････････････････････････東谷暁人・篠塚康典・濵本欣城・佐藤礼一郎
上野大作・沖田美紀・磯部直樹・河合一洋･･････････････････････････ 16〜17
野生カラスの腸内容物からの Clostridium perfringens の分離および分離菌株の遺伝学的解析･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････鈴木菜月・成廣 隆・上塚浩司･･････････････････････････ 18〜19
日本の養豚場における動物用抗菌剤使用に及ぼす要因の疫学的解析･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････礒村れん・松田真理・杉浦勝明･･････････････････････････ 20〜21〈平成29年度家畜衛生学雑誌論文賞授賞講演要旨〉「散気式オゾン水生成装置により生成されたオゾン水の生活環境に存在するカビに対する消毒効果の検討」の
平成29年度家畜衛生学雑誌論文賞受賞にあたって･･････････････････････････････････････････････････････二階堂啓吾・高鳥浩介・宮崎朋美・篠原みなみ
釜瀬幸広・黒松 久・櫻井美栄・白井淳資････････････････････････････････ 23「牛白血病に関する衛生対策ガイドラインに基づく対策取り組み事例の検証」の
平成29年度家畜衛生学雑誌論文賞受賞にあたって･････････････････････････････････････････････････････････寺一未奈子・松本 瞳・中山卓也・富田啓介････････････････････････････････ 25〈第88回大会教育講演要旨〉
わが国における食肉加工技術：その発展と最近の話題･･････････････････････････････････････････坂田亮一･･････････････････････････ 27〜29
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 31〜33
家畜衛生学雑誌投稿規程 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 34〜35
日本家畜衛生学会会則 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 36〜37

134

第44巻

第2号

2018

〈技術資料〉
口蹄疫の発生に備えた牛及び豚の県内最大規模農場における初動防疫計画････････････････････････････････････････････････････････････吉田大志・成富英規・村上美雪・小池康司･･････････････････････････ 43〜51〈家畜衛生フォーラム2018要旨集〉
今回の企画について････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････学術企画委員会･･････････････････････････ 55〜56
世界における越境性動物疾病の状況と対策･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････釘田博文･･････････････････････････ 57〜59高病原性鳥インフルエンザ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････迫田義博･･････････････････････････ 61〜64
豚コレラ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････深井克彦･･････････････････････････ 65〜66
アフリカ豚コレラ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････山田 学･･････････････････････････ 67〜70
口蹄疫･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････森岡一樹･･････････････････････････ 71〜73
越境性動物疾病の侵入リスクに応じた水際検疫･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････伊藤和夫･･････････････････････････ 75〜78〈第89回大会講演要旨集〉
くん液添加による食肉製品由来微生物への影響
─腐敗関連乳酸菌の抑制効果について─
････････････････････････････････････････････････････････････高木千遥・加藤 唯・竹田志郎・坂田亮一･･････････････････････････ 82〜83
卵殻酵素分解物による食肉製品の発色促進作用機序の検討･･････････････････････････････････････････････････････堀越茉利江・千葉原聖康・竹田志郎・坂田亮一･･････････････････････････ 84〜85
フィリピンの家畜およびラットにおけるレプトスピラ保有状況調査････････････････････････････････････････････安島菜実・村田 亮・蒔田 浩平・内田郁夫・小沼 操･･････････････････････････ 86〜87
Mycoplasma bovis 特異抗原を用いた ELISA 系の構築･･････････････････････････････杉本侃司・西 航司・藤木純平・岩野英知・権平 智・樋口豪紀･･････････････････････････ 88〜89
腸内のウエルシュ菌量の死後変化についての検討モデルの開発（ 2 ）･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････石塚由佳・上塚浩司･･････････････････････････ 90〜91
豚コレラの発生を防ぐために
─モンゴルでの取り組み─
････迫田義博・Munkhduuren Shatar・Bazarragchaa Enkhbold・廣瀬和彦・今泉好能・
松野啓太・岡松正敏・Uyangaa Temuujin・Basan Ganzorig・梅村孝司･･････････････････････････ 92〜93
会員へのおしらせ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 95〜101
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 102〜103
日本家畜衛生学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 104〜105

135

第44巻

第3号

2019

〈原著〉
牛ウイルス性下痢ウイルス（BVDV）ワクチン製造のための増殖効率の高い細胞株の作出･･････････････････････････････中川健斗・池田凡子・安田奏平・宮﨑朋美・長井 誠・白井淳資･･･････････････････････ 111〜122〈技術試料〉
ジビエとしてのイノシシの安心・安全の観点からアフリカ豚コレラ，豚コレラを考える･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････押田敏雄･･･････････････････････ 123〜132
第44巻総目次 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 133〜137
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 138
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139〜140日本家畜衛生学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 141〜142

136

General Contents of Vol.44
Vol. 44 No. 1 2018
〈Original report〉
The evaluation of an influence of pH of ozone water on fungicidal effect･･･････････････････････････････････････････ Tomomi Miyazaki et al.････････････ 1〜7〈Abstracts of oral presentations on 88th academic meeting〉･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 9〜21
〈Abstracts of JJAH award lecture on 88th academic meeting〉････････････････････････････････････････････････････････････････････ 23〜25〈Abstracts of the educational lecture on 88th academic meeting〉････････････････････････････････････････････････････････････････ 27〜29
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 31〜33
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 34〜35
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 36〜37

Vol. 44 No. 2 2018
〈Technical report〉
Initial epidemic preventive plan prepared for the outbreak of foot-and-mouth disease at
the large cattle and hog farm in Kumamoto･･･････････････････････････････････････････Hiroshi Yoshida et al.･････････････････ 45〜51〈Abstracts of Animal Hygiene Forum 2018〉 ･･･････････････････････････････････････････ 53〜78〈Abstracts of oral presentations on 89th academic meeting〉･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 79〜93
Information for Members ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 95〜101
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 102〜103
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 104〜105

137Vol. 44 No. 3 2019
〈Original report〉
Cloning the high growth efficiency of bovine viral diarrhea virus (BVDV) cell line forthe production of BVDV vaccines･･･････････････････････････････････････････ Kento Nakagawa et al. ･･････････ 111〜122〈Technical report〉
Considering African swine fever and classical swine fever from the viewpoint ofwild boar on safety and security as the game meat･･･････････････････････････････････････････ Toshio Oshida ･････････････････････ 123〜132
IContents of volume 44 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 133〜137
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 138
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139〜140
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 141〜142138

会員へのおしらせ①「日本家畜衛生学会第89回大会」開催される
2018年12月14日（金）に，東京都中央区の Meiji Seika ファルマ株式会社本社講堂において「第89回大会」が午前10時より開催されました．今回は家畜衛生分野の 6 演題の研究発表が行われ， 6 名の座長の先生方の進行のもと，活発な質疑応答がなされました．なお，当日の講演要旨については本誌44巻 2 号（2018.12発行）をご覧下さい．

②「家畜衛生フォーラム2018」開催される同日午後 1 時から，同じく Meiji Seika ファルマ株式会社本社講堂において「家畜衛生フォーラム2018」が開催されました．今回のフォーラムは「越境性動物疾病の侵入および蔓延をいかに食い止めるか？」というテーマで，（一財）生物科学安全研究所との共催で，農林水産省からのご後援を受けて開催されました．フォーラムは，北海道大学の迫田義博先生と，当初予定していた東京大学の杉浦勝明先生が急遽出席できなくなったことにより，当日のお願いにも関わらずご快諾頂いた農研機構・動物衛生研究部門の部門長小倉弘明先生の 2 名の座長の進行により，以下の先生方の講演が行われました．当日は約110名の参加者があり，今後の研究展開に向けた活発な質疑応答がなされました．なお，家畜衛生フォーラム2018講演要旨については本誌44巻 2 号（2018.12発行）をご覧下さい．
1 ．世界における越境性動物疾病の状況と対策
釘田

博文（OIE アジア太平洋地域事務所）

2 ．高病原性鳥インフルエンザ
迫田

義博（北海道大学）

3 ．豚コレラ
深井

克彦（農研機構・動物衛生研究部門）

4 ．アフリカ豚コレラ
山田学（農研機構・動物衛生研究部門）

5 ．口蹄疫森岡

一樹（農研機構・動物衛生研究部門）

6 ．越境性動物疾病の侵入リスクに応じた水際検疫伊藤和夫（農林水産省動物検疫所）

139「家畜衛生学雑誌」投稿規程
Key words（キーワード）をつける .

1 ．本誌には原則として，家畜衛生に関する総説，原著論文，短報を掲載する．なお，原稿は編集委員会事

6 ）英語論文および和文論文の英文 Summary は，務局へ電子メール添付（PDF ファイル）で提出す

投稿前にしかるべき校閲を受けること．

る．印刷原稿 3 部（うち 2 部は鮮明なコピーでもよ

7 ）原著論文で刷り上り 8 頁（30文字×25行＝750い）の書留郵便あるいはレターパックによる提出も文字で，図表を含めて16枚程度）までは，印刷可とする．

費を本学会で負担する．ただし，超過ページに

2 ．投稿にあたり，論文掲載までの対応を行う連絡著者

ついては，その費用を著者の負担とする．な（コレスポンディングオーサー）は，投稿原稿が他

お，総説についてはこの限りではない．また，誌にすでに掲載あるいは投稿中ではないこと，著者

カラーや特殊な用紙での印刷は，その費用を著者の負担とする．

全員が投稿論文の内容及び掲載に同意していることを記載した文書（カバーレター）を提出すること．

8 ）使用する動植物・微生物などの学名はイタリッ
ク体で表記する．

3 ．筆頭著者あるいは連絡著者は本学会会員であるこ9 ）度量衡の単位，略記は SI 単位系を基本とし，と．

以下の例に従う．

4 ．掲載論文は原著論文，短報，総説（刷り上がり 4 頁
以下のミニレビューを含む），技術資料とする．

［例］m，cm，mm，µm，nm，kg，g，mg，µg，ng，L，mL，µL，nL M，mM，µM，％，cm2，
m3，

5 ．全ての投稿論文は編集委員及び複数の審査員が審査し，編集委員長が掲載の採否を決定する．

hr，min，sec，℃，pH，Pa（血圧は mmHg，

6 ．投稿論文は和文または英文とし，次の指示（記述順序など）に従うこと．

生体内圧力は Torr）など．
10）表および図（写真を含む）は用紙 1 枚に 1 つと

1 ）論文原稿は別に定める注意に従って作成するこ

し，個々に番号と表題を記入し，投稿原稿の最と．用紙サイズは A4とし，和文の場合は30字後に添付する．

で25行程度，英文の場合はダブルスペース（7011）引用文献は下記の例にならって，アルファベッ

字で25行程度）とする．原稿本文の左側に行番

ト順にならべ，本文中では 1 ，3 − 6 ） のように上号を表記すること．

付き（superscript）で記入する．ただし，著者

2 ）和文の場合も句読点は，「 ，」，「 ．」を用いること．

名 は 3 名 ま で と し， 4 人 目 以 降 は 省 略 し，「ら」，「et al」で示す．

3 ）論文原稿は第 1 ページに表題，著者名，所属機［例］

関名およびその所在地を和文と英文で記載する

雑誌とともに，連絡著者とその電子メールアドレスを記載する．また，和文の場合は20字，英文の場合は40字以内の略表題（running head）を記載する．
4 ）原著論文の構成は原則として，Summary（本文が和文の場合も英語），序文（Introduction），
材料および方法（Materials and Methods），結果（Results）， 考 察（Discussion）， 引 用 文 献（References），要旨（本文が和文であっても英文であっても，和文の要旨）とする．ただし，謝辞は，別項目を設けず，本文の最後に 1 行の空白をとった後に記載する．
5 ）英文 Summary は250語以内，和文要旨は600字以内とし，それぞれの最後の行に 5 つ以内の1 ）内田孝治・藤井武・高山公一ら（1991）ブロ
イラーにおける実験的大腸菌症に対するラノ
フロキサシンの治療効果および用量設定試
験．家畜衛生研究会報．33，19-24．
2 ）Oshida, T., Fukuyasu, T., Kohzaki, K., et al.
(1993) A new treatment system for animal
waste water using microorganism, soil andvagetation. Asian-Australasian Journal ofAnimal Sciences. 6, 205-209.
電子ジャーナル3 ）Wilson, D.J., Rood, K.A., Bunnel, J., et al. (2014)
Johne’s disease, mycoplasma and BVD in
Utah-Bulk tank milk testing and comparison

140

英文では200字以内の和文，和文では100語以内の英to previous regional prevalence andindividual herd results over time. Journal of
Veterinary Science and Technology. 5:182.
doi: 10.4172/2157-7579.1000182.

文をつける．原稿の長さは刷り上りで， 2 頁以内とする，その他の規定については原著の場合に準じる．
8 ．総説及び技術資料の構成については特に規定を設けないが，引用論文の記載法は原著論文の場合に準じ単行書ることとする．

4 ）伊予部志津子（1980）薬剤耐性因子（R）の9 ．別刷りは50部に限り無料とする．追加分についてその費用を著者の負担とする．

検出法，薬剤感受性測定法．22-48頁．三橋

10．本誌の発行は原則として，年 4 回（ 4 月， 7 月，10

進編，講談社，東京．

月および 1 月）とする．

5 ）McDonrd, P. (1976) Trends in silage making,Microbiology in Agriculture, Fisheries and  

11．編集委員会事務局を下記に置く．
〒252−0132

Food. pp109-121. Shinner, F.A and Carr, J.G.

神奈川県相模原市緑区橋本台 3 − 7 −11

eds. Acad. Press, London, NY.

（一財）生物科学安全研究所内
12）図はグラフィックソフトウェアで作成すること

日本家畜衛生学会編集委員会

が望ましい．手書きで作成する場合は，そのまTel

ま製版できるよう，白色紙または青色方眼紙にFax 042（762）7979

タイプやレタリングなどにより作成する．
13）投稿原稿が受理（掲載決定）されたならば，著

042（762）2775

E-mail：jjah@riasbt.or.jp
12．本誌に掲載された論文の著作権は，日本家畜衛生学

者 は す み や か に 最 終 原 稿 の Microsoft Word

会に帰属する．

ファイルを電子メールで提出すること．図については，グラフィックソフトウェアで作成した

附則ファイルも併せて提出する．

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

7 ．短報は，その内容を成績および考察（Results and本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

Discussion） と し て ま と め， 要 旨（Summary） は

本規程は，2016年11月 5 日以降の投稿論文に適用する．

論文原稿を作成する上での注意
1 ）執筆にあたり，投稿規定をもう一度，熟読すること．
2 ）各行の行末での強制改行をしないこと．
3 ）投稿論文が和文，英文のいずれの場合も数字，欧文6 ）図は，Microsoft PowerPoint，Excel，Adobe Photoshop，Illustrator 等のソフトウェアで作成するのが望ましい．

は全て 1 バイト文字（いわゆる半角）で入力するこ

7 ）論文受理後の最終原稿は，Microsoft Word（あるいと．ただし和文ではかっこ（ ）は 2 バイト文字

は Microsoft Word 互換ソフトウェア）ファイルと（いわゆる全角）とする．
「µ」（マイクロ）は半角して提出する．ただし，Microsoft Word 互換ソフ

立体で入力すること．

トウェアを使用した場合は，Microsoft Word で正4 ）投稿論文原稿は PDF ファイルとして事務局まで電しく表示されることを確認すること．グラフィック

子メールで提出すること．その際には必ずパスワー

ソフトウェアで作成した図データは，jpeg，tiff 等

ドロックし，パスワードは別メールで事務局まで連の汎用フォーマットで提出する．

絡すること．特段の理由がある場合は，印刷原稿 3部（うち 2 部は鮮明なコピーでも可）を事務局まで
書留郵便あるいはレターパックで送付すること．
5 ）写真は印刷に耐えうる鮮明なものを使用すること．

日本家畜衛生学会
編集委員会

141

日本家畜衛生学会会則
（総
第１条

則）

第８条

理事長は常務理事の互選により選出する．

本 学会は，日本家畜衛生学会（英文表記：

２．理事長は学会を代表し，会務を総理する．

The Japanese Society of Animal Hygiene）

３．理事長は常務理事の中から庶務・会計を担当する事務局担当者を委嘱する．

（以下，「学会」とする．
）と称する．
第２条
第３条

第４条

４．理事長は第4条の事業を達成するため常設の学会の事務局は，原則として理事長の所属する機関におく．

学術企画委員会，編集委員会を設置する．

学会は，家畜衛生とその関連領域における学（1）委員会の委員は原則として理事長が常務

究の向上を図り，畜産の進歩発展に寄与する

理事の中から指名する．但し，常務理事ことを目的とする．

会が必要と認めた場合には会員の中から指名することが出来る．

学会は，前条の目的を達成するために，次の（2）委員会の委員長は，委員の互選により選事業を行う．

出し，理事長が指名する．

（1）研究発表会及び学術講演会等の開催（2）学会誌「家畜衛生学雑誌」の発行

第９条

副理事長は常務理事の互選により選出し，理事長を補佐する．

（3）学会の発展に貢献した者への表彰（4）その他学会の目的達成のために必要な事業第１０条

常務理事および監事は理事の互選により選出
し，総会において承認を受ける．
２．常務理事は常務理事会を組織し，理事長を補（会員および会費）
第５条

佐し，学会の運営に関して第４条の事項を行う．

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員お３．監事は理事長を補佐し，会務と会計を監査する．

よび名誉会員より構成する．
（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納

第１１条

理 事は理事長が委嘱し，総会の承認を受ける．
２．理事は理事会を組織し，理事長を補佐し，学入した個人会の運営に関して第４条の事項を行う．

（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した学生，大学院生．た

第１２条

役員の任期は２年とし，再任を妨げない．
２．役員の補欠又は増員は，第８条第１項，第９だし会員期間は単年度とす

条，第10条若しくは第11条の規定により選任る．

し，その任期は前任者又は現任者の残任期間（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため所定の会費とする．ただし，常務理事会が会務の運営にを納入した個人又は団体支障がないと認めたときは，この限りでない．

（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会

第１３条

第６条

常務理事会および理事会は理事長が随時招集する．

において承認された個人
会
 費は正会員にあっては年額5,000円，学生会員にあっては年額2,000円，賛助会員にあって（総は１口年額10,000円とし，毎年７月末までに

第１４条

会）
通常総会は毎年１回，理事長が招集する．

納入するものとする．

第１５条

理事長が必要と認めた場合は，臨時総会を招集することができる．

第１６条（役員および役員会）
第７条

総会では次の事項を議決する．

学会に次の役員をおく．

（1）事業計画および事業報告に関する事項（1）理 事 長

１名（2）予算および決算に関する事項（2）副理事長

１名（3）会則の改正に関する事項（3）常務理事若干名（4）その他，学会の目的を達成するために必

（4）監

事

２名

（5）理

事

35〜45名

要な事項

142

（会

計）

第１７条

（3）こ の会則は平成15年7月5日に改正し，

学会の経費は会費その他の収入をもって，これにあてる．

第１８条

会計年度は４月１日より，翌年３月31日までとする．

同日に施行する．
（4）こ の会則は平成16年7月3日に改正し，同日に施行する．
（5）こ の会則は平成17年7月2日に改正し，同日に施行する．

附則（6）こ の会則は平成21年7月4日に改正し，（1）この会則は平成14年7月6日より施行する．
（2）学会設立時の役員は家畜衛生研究会（以下「研究会」と略す）の役員が暫定的に同日に施行する．
（7）こ の会則は平成23年7月2日に改正し，同日に施行する．

就任することとし，理事長は研究会の会（8）こ の会則は平成27年7月11日に改正し，長が，常務理事は研究会の幹事が，理事同日に施行する．ただし，平成27年度のは研究会の評議員が，監事は研究会の監

会費は4,000円とし，平成28年度から会事がそれぞれ就任する．

費を5,000円とする．

143

協賛企業一覧
日本家畜衛生学会は以下の企業からの協賛を受けています．ここに記して謝意を表します（五十音順）．
（株）インターベット

エランコジャパン（株）（株）科学飼料研究所

共立製薬（株）

コーキン化学（株）

住化エンバイロメンタルサイエンス（株）

ゾエティス・ジャパン（株）

田村製薬（株）日生研（株）

日本全薬工業（株）

日本ハム（株）

バイエル薬品（株）

Meiji Seika ファルマ（株）

日本家畜衛生学会入会のすすめ
日本家畜衛生学会は家畜衛生とその関連領域における学術の交流を図り、畜産の進歩発展に寄与することを目的とした学会です。
＜主な活動＞
・ 年２回（７月、12 月）の研究発表会
・ 年１回のフォーラム（12 月ごろ）の開催
これまでの主なテーマ「狂犬病」、「口蹄疫」、「鳥インフルエンザ」、「BSE」、「家畜ふん尿」など
・ 年４冊の機関誌「家畜衛生学雑誌」の発行
・ 学会賞の授与
年会費5,000円（但し、学生は2,000円）
御請求戴ければ、見本誌を贈呈します!!

家畜衛生学雑誌

The Japanese Society of Animal Hygiene
日 本 家 畜 衛 生 学 会〒183-8509

東京都府中市幸町3-5-8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内TEL ／ FAX：042－367－5780
http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
Hpで活動内容がご覧になれます!!（日本家畜衛生で検索）

第44巻第 3 号

平成31年 3 月28日発行（会員配布）
発

行

印 刷 所

日本家畜衛生学会
理事長 白井淳資〒183－8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内☎／ FAX：042−367−5780
ホームページ：http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
振替口座：00240－ 3 －43171
明誠企画株式会社〒208－0022 東京都武蔵村山市榎 2 － 25 － 5☎ 042−567−6233 FAX 042−567−6230

平成日本家畜衛生学会

年

月

日

御中

入 会 申 込 書
貴会への入会を下記の通り申込ます．

記
フリガナ
氏

名：

所属名称：
部

署：

役

職

所属住所：〒TEL：

FAX：

e-mail：

自宅住所：〒

TEL：
e-mail：会員の種類 ： ○正 会 員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員
会報送付先 ： ○自宅 ・ ○勤 務 先○内にチェックを付して下さい．

１．入会申込書は必要事項をすべて正確に記入し，郵便またはFAX（042－367－5780）にてご送付下さい．
２．年会費は個人会員 5,000円，賛助会員 10,000円／口（１口以上）を郵便振替口座（加入者名：日本家畜衛生学会，No. 00240－3－43171）へお振込下さい．
３．申込先は〠183－8509

東京都府中市幸町３－５－８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042－367－5780

４．ホームページからも申し込めます：http://www.kachiku-eisei.jp/

平成
日本家畜衛生学会

年

月

御中

変
変更手続きを下記の通り致します．

更

届

記

フリガナ
○

氏

名：

○

所属名称：

○

部

○

所属住所：〒

署：

○

役

TEL：

○

自宅住所：〒

○

TEL：

職

FAX：

e-mail：e-mail：○会員の種類：○正会員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員○会報送付先：○自宅 ・ ○勤務先全てご記入の上，上記変更部位の○内にチェックを付して下さい．

１．変更届出書は必要事項を正確に記入し，郵便またはFAX（042－367－5935）にてご送付下さい．
２．届け先は〠183－8509

東京都府中市幸町３－５－８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042－367－5935（042－367－5780）

３．ホームページからも手続きできます：http://www.kachiku-eisei.jp/

日事業内容：動物用医薬品、動物用医薬部外品及び動物用医療機器の開発、製造、販売及び輸入

EWグループ：ワクチノーバインターナショナル(オランダ)、アビアジェン(Aviagen)、ハイライン(Hyline)、ローマン(Lohman Tierzucht)、アクアジェン(AquaGen)

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