ISSN 1347−6602

昭和62年６月９日学術刊行物認可

家畜衛生学雑 誌
The Japanese Journal of Animal Hygiene
日本家畜衛生学会第84回大会

要旨集

日本家畜衛生学会
Vol .42 No.2
2016. JUL.

The Japanese Society ofAnimal Hygiene

家

畜

衛

生

学

雑

日本家畜衛生学会

発行

誌

理 事 長：白井淳資
副理事長：宮﨑編集委員長：宮﨑茂

茂

編集委員：柿市徳英・高井伸二・永幡肇

野上貞雄・渡邊忠男"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""The Japanese Journal of Animal Hygiene
Published by the Japanese Society of Animal Hygiene
President : Junsuke SHIRAI（）

Vice President : Shigeru MIYAZAKI（）

Editor-in-Chief : Shigeru MIYAZAKI（）

Editorial Board : Norihide KAKIICHI（
Shinji TAKAI（）））

Hajime NAGAHATA（
Sadao NOGAMI（）

Tadao WATANABE（）

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「家畜衛生学雑誌」第42巻第 2 号の送付にあたって
会員の皆様におかれましては，ますますご清栄のこととお慶び申し上げます．ここに，「家畜衛生学雑誌」第42巻
第 2 号を刊行する運びとなりました．
本号では，総説 1 編と第84回大会の講演要旨を掲載しています．
第84回大会では，教育講演 1 題，一般演題 8 題のご発表のほか，平成27年度家畜衛生学雑誌論文賞受賞講演もございますので，ご参加の皆様の積極的なご討論をお願いいたします．また，「家畜衛生フォーラム2016」の開催を予定
している12月 2 日の午前中には第85回大会を開催いたしますので，こちらでの一般講演発表についても積極的なエントリーをお願いいたします．
なお，本号には総説 1 編も掲載しております．家畜衛生学雑誌では，原著論文・短報以外にも，総説，数ページ程
度のミニレビュー，技術資料等の原稿を受け付けておりますので，会員の皆様の積極的なご投稿をよろしくお願い致します．ご不明な点は遠慮なく編集委員会事務局へお問い合わせください．
日本家畜衛生学会理事長

白井淳資

家畜衛生学雑誌編集委員長

宮﨑茂（日本家畜衛生学会副理事長）

日本家畜衛生学会・学会費納入のお願い
ご承知のように，学会は会員の皆様からの会費をもって運営されています．学会の運営を円滑に運ぶために，所定の会費を納入していただきますようお願いします．
＊会費は，正会員5,000円，学生会員2,000円です．
＊平成27年度までの未納分をお支払いいただく場合，正会員年会費は4,000円です．
日本家畜衛生学会

払

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3

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欄

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日本家畜衛生学会

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家畜衛生学雑誌
第42巻

目

第2号

2016

次

〈総 説〉
豚胸膜肺炎の起因菌 Actinobacillus pleuropneumoniae の生物型，血清型及び遺伝子型について･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････伊藤博哉･･････････････････････････ 29〜60〈第84回大会一般講演要旨〉
焼成カルシウムと次亜塩素酸ナトリウムの殺菌作用･･････････････････････････豊福千遙・山田匡之・古村みゆき・鈴木真結子・Hakim Hakimullah
Sangsriratanakul Natthanan・Alam Md. Shahin・Shoham Dany・竹原一明･･････････････････････････ 64〜65
Study of virus and bacteria inactivation using various sources of fresh charcoal ash in Thailand･････････････････････････Kittima Lorcharoenrungroj・Sakchai Ruenphet・Kazuaki Takehara･･････････････････････････ 66〜67
Quantitative risk assessment of the introduction of rabies into Japan throughthe importation of dogs and cats worldwide････････････Katsuaki Sugiura・Nigel C.L. Kwan・Y. Hosoi・Akio Yamada・Emma Snary･･････････････････････････ 68〜69
日本の家畜の抗菌剤使用量の欧州との比較･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････松田真理・Nigel Kwan・杉浦勝明･･････････････････････････ 70〜71
犬の膀胱炎および抗生剤使用に関する調査･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････井上 舞・杉浦勝明･･････････････････････････ 72〜73
MALDI Biotyper による動物由来細菌株の遺伝子型・血清型鑑別････････････････････････････････････････････････････････････村田 亮・井上正亮・岡 良彦・菊池直哉･･････････････････････････ 74〜75
輸入初生ひなから分離された鶏大腸菌症由来 E.coli の性状調査･･･････････････････････････････････････････････････下平久美子・小菅千恵子・長谷川未央・楠本正博･･････････････････････････ 76〜77
馬の敗血症の原因菌 Actinobacillus genomospecies 2の日本における初分離及び16S rDNA と housekeeping gene の遺伝子解析による同定･････････････････････････････････････････････伊藤博哉・村上美雪・下西儀政・帆保誠二・丹羽秀和･･････････････････････････ 78〜79〈平成27年度家畜衛生学雑誌論文賞授賞講演要旨〉「下痢を呈した豚群におけるデルタコロナウイルス遺伝子の検出と宮城県内浸潤調査」の平成27年度家畜衛生学雑誌論文賞受賞にあたって･････････････････････････････････････････････････････････小寺 文・曽地雄一郎・西 清志・千葉直幸
植木 洋・矢島りさ・竹田百合子・結城瑞希････････････････････････････････ 81〈第84回大会教育講演要旨〉
ジビエに関する食肉衛生 ─現場からの提言─
･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････小谷浩治･･････････････････････････ 83〜85
会員へのおしらせ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 87
家畜衛生学雑誌投稿規程 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 88〜89
日本家畜衛生学会会則 ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 90〜91

家畜衛生学雑誌

The Japanese Journal of Animal HygieneVol. 42  No. 2

2016

Contents〈Review〉
Actinobacillus pleuropneumoniae biotypes, serotypes and genotypes･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ Hiroya Ito･･････････････････････････････････････････････ 29〜60･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 61〜79〈Abstracts of oral presentations on 84th academic meeting〉〈Abstract of JJAH award lecture〉････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 81〈Abstract of the educational lecture on 84th academic meeting〉･････････････････････････････････････････････････････････････････ 83〜85

Information for Members ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 87
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 88〜89
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 90〜91

Jpn. J. Anim. Hyg.

総

29

説

豚胸膜肺炎の起因菌 Actinobacillus pleuropneumoniae の生物型，血清型及び遺伝子型について
伊

藤

博

哉＊

Actinobacillus pleuropneumoniae biotypes, serotypes and genotypes
Hiroya ITO ＊（＊ National Institute of Animal Health, NARO, 3-1-5 Kannondai, Tsukuba, Ibaraki 305-0856, Japan）（2016. 4. 22  受付／2016. 6. 6  受理）

Summary
Actinobacillus pleuropneumoniae, a Gram-negative bacterium belonging to the Pasteurellaceae family, is acausative agent of swine pleuropneumonia, a highly contagious repiratory disease that causes important economic
losses to the swine industry worldwide. To date, 2 biotypes and 16 serotypes are recognized in A.
pleuropneumoniae. Serotyping is of major interest for A. pleuropneumoniae due to different virulence potential
among serotypes and serotype-specific protection with bacterins. Serotype prediction methods based on
genotyping have been developed lately and can be used as diagnostic tools by veterinary diagnostic laboratories.
Here, I review current knowledge on A. pleuropneumoniae biotypes, serotypes and genotypes.
Key words：Swine pleuropneumonia, Actinobacillus pleuropneumoniae, biotypes, serotypes, genotypes
  家畜衛生学雑誌

1 ．豚胸膜肺炎及び豚胸膜肺炎菌について
豚胸膜肺炎は世界各国で多発し，養豚産業に多大な経45）済的損失を与える豚の重要な呼吸器系疾病である ．本ゼ（Actinobacillus 属以外の菌種との鑑別時に重要な性状），マンニットの分解（Actinobacillus suis との鑑別時に重要な性状），CAMP テスト，血液寒天上での溶血性は，いずれも陽性である68，73）．

症の主要な臨床症状は，急性の場合は食欲不振，沈鬱，

2 ．生物型について

発熱，発咳，呼吸促拍，呼吸困難であるが，剖検後，初45）

めて本病と診断される場合も多い ．飼料効率及び一日42，29〜60（2016）

2.1．はじめに平均増体量の低下等を示す慢性症例も多く，これらではApp は，発育の際のニコチンアミド・アデニン・ジヌ

食肉衛生検査時に肺と壁側胸膜の癒着，肺における膿瘍

クレオチド（Nicotinamide adenine dinucleotide）（NAD）及び結節等の病変が観察されることが多い45）．

要 求 性 の 有 無 に 基 づ き， 2 つ の 生 物 型 に 型 別 さ れ

豚 胸 膜 肺 炎 の 起 因 菌 で あ る Actinobacillus

る 68，73，166）．NAD 要 求 性 の 生 物 型 1 は， か つ て は

pleuropneumoniae（App）は，莢膜を保有するグラム陰Haemophilus pleuropneumoniae（その前は Haemophilus

性の小桿菌であるが，しばしば多形性を示す．ウレアー＊

 立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
国
衛生研究部門〒305-0856 茨城県つくば市観音台3-1-5
連絡著者：伊藤博哉（itohiroy@affrc.go.jp）

動物

parahaemolyticus），一方，NAD 非要求性の生物型 2 は，か つ て は Pasteurella haemolytica-like organism に 分 類
され別菌種とされていた．しかし，DNA 相同性試験及び生化学的性状試験の成績から，共に Actinobacillus 属に移行され，同一菌種の App に再分類された166）．この家畜衛生学雑誌

30

第42巻第 2 号（2016）

ために，現在でも App のことを「Haemophilus ヘモフィド）を保有することが明らかにされ，この事が生物型 1ルス」の最初の 2 文字である「ヘモ」と呼ぶ人も多い．

の NAD 要求性の生化学的及び遺伝学的背景である可能性が示唆された204）．しかしさらにその後，生物型 2 （血2.2．生物型 1 と 2 の分離頻度について

清型13）も生物型 1 （血清型 3 ）と同様に nadV’ を保有

App 生物型 1 による豚胸膜肺炎は頻発し，アウトブレ

することが明らかになったため203），上記の仮説に矛盾イク例も多いが，App 生物型 2 による豚胸膜肺炎の発生が生じた．したがって，生物型 1 の NAD 要求性の生化は少なく，散発例が多い．App 生物型 2 の分離例は世界学的及び遺伝学的背景の解明のために，今後のさらなる的にも少ないが72−74）ドイツ35），ハンガリー35），ベルギー94），

解析が必要と思われる．

94）

オランダ ，デンマーク

151）

及びスペイン

120−122）

等の欧3 ．血清型について

州や米国37） 等での分離報告がある．日本では，筆者の知る限り，生物型 2 の分離報告は 2 例のみである81，135）．

3.1．はじめに2.3．生物型 1 及び 2 の病原性について

15の血清型が存在することが知られてきた13，149）．しかApp には，莢膜の抗原性の違いに基づきこれまでに実験感染の成績に基づき，生物型 2 は生物型 1 よりもし，昨年末になって最も新しい血清型16が提唱された175）．

病原性が弱いと考えられてきた31，85）．しかし，胸膜肺炎

血清型 1 及び 5 は，リポ多糖（LPS）の O 抗原及び莢膜症例から生物型 2 が純培養的に分離された報告例がいくの抗原性の違いに基づき，さらに 2 つの亜型（それぞれつかあり37，120−122），米国で分離された生物型 2 を用いた

1a，1b 及び5a，5b）に型別される88，89，148）．しかし，臨床

実験感染で，胸膜肺炎を再現させた報告もある37）．さら

細菌学的観点からみると亜型の鑑別の重要性は低い44）．

に 7 年にわたる調査により，スペインでは App 生物型

生物型 1 では，血清型14を除くすべての血清型の分離が2 が豚胸膜肺炎に強く関与している可能性が示唆されて報告されている13，149，162，167，175）．一方，生物型 2 では，いる．すなわち，典型的な急性胸膜肺炎を呈した豚の肺血清型 2 ， 4 ， 7 ， 9 ，11，13，14のみが分離されていから App 生物型 2 がほとんどは純培養状あるいは優勢

る 9 ，35，120−122，151）． ま た 両 生 物 型 と も に， 型 別 不 能 の菌として分離され，それらの割合は，8.9〜39.4％（平均株も存在するが，複数の血清型特異抗血清に反応する

25.3％）を占め比較的高率であった122）．

ために型別不能な場合と，既知の血清型特異抗血清のいずれとも反応しないために型別不能な場合とがあ

2.4．パスツレラ科細菌の NAD 合成経路と App 生物型 1の NAD 要求性の遺伝学的背景について
パスツレラ科細菌の NAD は，以下の経路で合成されると考えられている124）．
（ⅰ）ニコチンアミドと 5 - リンる16，86，100，122，136，137，196）．血清型別不能株となった遺伝学的背景（動く遺伝子 ISApl1 の莢膜多糖合成遺伝子への挿入による変異）が明らかとなっている型別不能株もある78）．

酸リボシルピロリン酸から，ニコチンアミド・リン酸転移酵素（NAmPRTase）によって，ニコチンアミド・モ

3.2．血清型別の検査法について

ノヌクレオチド（NMN）が合成される．
（ⅱ）次いでニ

スライド凝集試験129，170）及び共凝集試験131，132）等が，コチンアミド・アデニル転移酵素によって，NMN から分離株の簡易・迅速な血清型別法として広く用いられてNAD が合成される．

いる．血清型別には，高力価で特異性の高い血清型別用

なぜ App 生物型 1 は NAD 要求性であるかを明らかに抗血清が必要であるが，市販されていない．そのためするための実験が行われている．すなわち，NAD 非要

通常はホルマリン不活化した各血清型参考株の全菌体を求 性 の Haemophilus ducreyi の NAmPRTase（495ア ミ

ウサギに免疫して作製した自家製の抗血清が用いられてノ酸（aa））をコードする nadV 遺伝子を App 生物型 1いる．しかし，この方法で作製した抗血清中には，血清（血清型 1 ）に形質転換し，発育に NAD が不要になるか

型特異抗原に対する抗体だけでなく，共通抗原を含む

検討された

124）

．その結果，形質転換体は発育に NAD を様々な菌体抗原に対するポリクローナルな抗体を含有添加する必要がなくなり，nadV 遺伝子の欠損あるいはすると考えられる．そのため，異なる血清型間で交差機能不全が App 生物型 1 の NAD 要求性の理由であると反応がしばしば認められ，血清型別不能となることがあ考えられた124）．その後，生物型 1 （血清型 3 ）は495 aa

る45，51，58，68，72−74，127，128，132，134）．

の NAmPRTase をコードする nadV 遺伝子ではなく，ア交差反応が認められた場合には，間接赤血球凝集試験130）

ミノ酸長が1/2以下と短く，酵素として機能しなくなっやゲル内沈降反応132，133，186） による確定診断を実施するたと思われる偽遺伝子 nadV’（203aa のタンパクをコーことが推奨されている．なおスライド凝集試験では血清

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

31型 2 と型別可能な株が，ゲル内沈降反応では型別できず性の差に強く関与すると考えられている38，45，46，68，72−74）．

に型別不能株と同定される株や73，138），凝集試験及びゲ

各 Apx 毒素の性状，各血清型の株が分泌する Apx 毒素

ル内沈降反応のいずれの検査法でも型別できない株も存の種類と各血清型の株の病原性について表 1 及び 2 にま在する78）．

とめた．
3.3.1.2．各血清型のAppにおけるApx 毒素の分布について

3.3．血清型別実施の意義について

細胞毒性の強い ApxI 及び細胞毒性が中程度の ApxII

3.3.1.1．血清型間の病原性の強さに差が認められるための 2 種類の Apx 毒素を分泌する血清型 1 ， 5 ， 9 及びに，血清型別は重要である

11が最も病原性が強いと考えられており38，45）（表 1 〜

App は，血清型に関わらず病原性を有するが，血清型2 ），様々な国々で問題となっている（表 3 〜 6 ）．さらによって病原性の強さが異なると言われている45，68，72−74）．

に，ApxII 及び細胞毒性の強い ApxIII の 2 種類の Apx

病 原 性 因 子 は 複 数 あ る と 考 え ら れ る が45），Apx 毒 素

毒素を分泌する血清型 2 ， 4 ， 8 及び15による豚胸膜肺（ApxI 〜 ApxIV 毒素）は，App の最も重要な病原性因炎が，それぞれ日本・欧州全土，スペイン，イギリス及び子の一つである38）．ApxIV 毒素は全ての血清型が in vivo

オーストラリアで問題となっている．
（表 3 〜 6 ）45−47），で分泌するが，in vitro では分泌しない毒素である177）．

したがって，ApxI 及び Apx Ⅲ毒素のいずれかに加え，

一方，Appは，ApxI 〜 ApxIII 毒素のうち， 1 種類または

Apx Ⅱ毒素を分泌する血清型の臨床学的重要性が高い

38）と考えられる．

2 種類の Apx 毒素をin vitro で分泌する ．しかし，血清

ApxI 毒素のみ分泌する血清型10（表 2 ）は，ApxI を型毎にその種類が異なり，その違いが各血清型間の病原表 1 ．App 毒素の性状について38，45，68，72−74，94）
Apx 毒素

細胞毒性ａ

溶血性ｂ

病原性への
関与

ワクチンへの
利用

診断への
利用

備考

ApxI

強

強

＋

＋

△
（種特異性－）

Actinobacillus suis も分泌

ApxII

中程度

弱

＋

＋

△
（種特異性－）

A. suis も分泌

ApxIII

強

無

＋

＋

−

ApxIV

？

有

＋

−

＋

ａ
ｂ

in vivo でのみ発現．
感染抗体とワクチン抗体を識別可能な診断用抗原に利用．

多形核白血球及びマクロファージの膜に穴を開けて溶解することによって，細胞毒性を示す．
赤血球の膜に穴を開けて溶解することによって，溶血性を示す．

表 2 ．各血清型の株が分泌する App 毒素の種類と各血清型の株の病原性について38，45−47，68，72−74）
血
毒素

清

型

1，5，9，11

2，4，6，8，15

7，12，13

2 45−47）（北米分離株）

ApxI

＋

−

−

−

＋

−

ａ
（＋）

ａ
（＋）

ａ
（−）

ApxII

＋

＋

＋

＋

−

−

ａ
（＋）

ａ
（−）

（−）ａ

ａ

ａ

10，14

3

16 175）

非典型的12
非典型的13（K13：O10 162）） （K12：O3 77））

ApxIII

−

＋

−

−

−

＋

（−）

（−）

ａ
（＋）

ApxIV

＋

＋

＋

＋

＋

＋

？

？

？

中程度

7 →中程度
12，13→中程
度または弱？
（血清型 7以外は臨床例
少ない）

弱？
（臨床例
少ない）

弱？
（病豚から
はほとんど
分離されて
いない46））

弱

強？ａ

中程度？
（臨床例162）か
ら分離）

中程度？
（臨床例77）か
ら分離）

病原性

ａ

強

毒素タンパク分泌の確認はされていないが，Apx 毒素の遺伝子プロファイル

39，56，171）から推測．

家畜衛生学雑誌

32

第42巻第 2 号（2016）

表 3 ．1974〜2013年に日本で分離された App の各血清型（株数）
血清型
文献

分離年

1

2

3

5

6

7

8

9

11

12

13

15

1/2/5

1/2/5
以外

20

1974

0

18

1

0

0

0

0

0

0

0

0

0

18

1

66

1975−1982

0

85a

1a

0

0

0

0

0

0

0

0

0

85

1

106

1982−1983

0

272

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

272

0

104

1983−1984

0

103

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

103

0

84

1982−1985

0

6

0

51

0

0

0

0

0

0

0

0

57

0

141

1985

0

24

0

23

0

0

0

0

0

0

0

0

47

0

82

1986

0

1

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

1

0

95

1974−1986

0

107

0

22

0

0

0

0

0

0

0

0

129

0

83

1985−1987

0

48

0

7

0

0

0

0

0

0

0

0

55

0

174

1987

2

21

0

0

0

0

2

1

0

0

0

0

23

3

3

1987

0

93

0

8

0

0

0

0

0

0

0

0

101

0

41

1987

14

85

3

10

0

7

2

1

0

1

0

0

109

14

205

1987

0

0

0

0

1b

0

0

0

0

0

0

0

0

1

105

1986−1987

7

43

0

24

2

11

0

0

0

0

0

0

74

13

185，186

1986−1987

6

178

0

2

0

4

0

0

0

0

0

0

186

4

190

1988

0

c
4（1）

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

4（1）c

0

155

1988−1989

c
6（2）

5（3）c

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

11（5）c

0

62

1989

c
3（1）

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

3（1）c

0

140

1991

0

c
2（1）

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

2（1）c

0

65

1989−1992

3

88

0

4

0

0

0

0

0

0

0

0

95

0

207

1991−1992

c
3（1）

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

3（1）c

0

142

1992

0

0

0

0

0

0

c
3（1）

0

0

0

0

0

0

3（1）c

1

1982−1994

1

19

0

5

0

1

0

0

0

0

0

0

25

1

6

1992−1994

22

29

0

7

0

7

2

0

0

0

0

0

58

9

40

1989−1995

523

757

20

90

0

22

21

1

0

7

0

0

1370

71

209

1995−1997

14

49

0

2

2

1

0

0

0

0

0

0

65

3

137

1999−2000

24

76

1

15

2

2

0

0

0

0

0

0

115

5

1986−2000
620
2107
小計
（19.8％） （67.4％）

26

270（8.6％）

755（1.8％）

28

3

0

8

0

2001

0

0

0

0

0

0

c
2（1）

0

0

189

0

0

合計

0
2997
127
3124
（0％） （95.9％）（4.1％）
0

0

2（1）c

101

2003

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

1

0

1

136

2002−2005

8

66

0

14

0

0

0

0

0

0

0

2

88

2

154

2008

0

20（8）c

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

20（8）c0183

2001−2010

116

248

?

18

?

?

?

?

?

?

?

?

382

39

76

2009−2010

0

0

0

0

2d

0

0

0

0

0

0

0

0

2

92

2006−2011

5

29

0

7

1e

1

0

0

0

1f

0

4

41

7

152

2012

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

61（1）c061（1）c

184

2013

0

0

0

0

4（1）c

0

0

0

0

0

0

0

0

4（1）c

30

2006−2013

30

343

4

48

1

2

0

0

0

2

5

15

421

29

2001−2013
159
694
小計
（15.5％） （67.8％）

487（8.5％）

4

3（0.3％）

0

0

1

3

5

23
940
83
1023
（2.2％） （91.9％）（8.1％）

1986−2013
779
2801
合計
（18.8％） （67.5％）

30357（8.6％）

1158（1.4％）

28

3

1

11

5

23
3937
210
4147
（0.6％） （94.9％）（5.1％）

表中の各数字は分離株数ａ 文献20の菌株数を示してカウントしているので，その株数（それぞれ20及び 1 ）を差し引いた数を示した．
ｂ 輸入検疫中に死亡した豚から分離
ｃ 括弧内の数字は農場数．同一農場から分離された株は， 1 株としてカウントした．
ｄ 遺伝学的に非典型的な血清型 6
ｅ 文献76の株と同一株
ｆ 血清型12の非典型的株 K12：O3

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

33

表 4 ．日本を除く世界各国で分離される App の血清型の割合（％）（型別用抗血清で菌株を血清型別）
州及び国

文献

分離年

検査株数

主要な血清型分離されたことのある血清型

126

不明

100

2（56）a，5（28）2，5，6，7

208

2006−200968

5（66），2（16）1，2，4，5，7

208

2010

34

5（38），1（35）

1，2，4，5，7，8

中国山東省

29

不明

20

7（30），5（25），3（20）3，4，5，7，8

台湾

21

不明

60

1（53）

1，2，5

179

2007−2008

56

1（79）

1，2，4，5，7

206

2002−2007

211

1（65），2（34）

1，2，5

フィリピン

192

不明

57

5（60），3（16）1，3，4，5，11

イスラエル

167

2010

不明

156

1994

51

8（35），6（28），3（18）2，3，6，7，8，9，10

156

2004

96

3（52），8（27）2，3，6，7，8，12

93

不明

不明

9（49），3（32）1，2，3，5，7，8，9

34

2008

63

2（70），9（25）2，9，13，9/11b

176

1999−2000

122

9（66），2（16）1，2，3，5，7，8，9，11，12

143

2001−2003

238a，9（34），2（22）1/9/11（41）

2，8，9，11，12，1/9/11b

アジア
韓国

13

欧州
イギリス
オランダ
チェコ

102

2003−2004254a

9/11（55）

2，4，5，7，11，12，1/9/11b，
9/11b

フランス

23

1989−1996

1154

1/9/11 ，2

2，4，5，7，10，12，1/9/11b，
3/6/8bベルギー

32

1991−1992

199

2（48），3（21）2，3，5，7，9，10，11

ハンガリー

35

不明

不明

175

不明

不明

60

不明

71

4（42），7（23）1，2，3，4，6，7，8，9，12

59

1997−2004

229

2（41），4（40）

1，2，4，5，6，7，8，11

120，121

不明

不明

122

2002−2008不明

c7（69），UT（21）

57

不明

不明

d
，12（>90）d2（>90）d，6（>90）

86

不明

不明

2（63），6（26）

151

不明

不明

56

不明

100（扁桃由来）

2（45），12（27）2，5，6，8，9，10，12

56

1996

102（肺由来）2（56），6（27）

1，2，5，6，8，9，10，12

181

不明

不明

米国及びカナダ

162

不明

不明

カナダ

52

2011−2014

134

メキシコ

46

不明

不明

ブラジル

107

1993−1999

94

5（35），3（34）1，3，4，5，7，11，12

107

2000−2006

144

10（29），6（26），5（24），3（21）1，3，4，5，6，7，8，10，11

28

2003−2011234

3（25），15（21），8（15）1，2，3，4，5，6，7，8，10，15

197

不明

不明

7（48），5（25），1（22）

1，2，5，7165

1989−1994

50

1（48），7（24）

1，2，3，4，6，7

210

不明

不明

12

不明

378

e
15（38），1（28），7（22）

1，2，5，7，15

195

2002−2011不明

15（35），7（26），5（19）1，5，7，12，15

195

2012−2013

7（42），15（22），12（16）1，5，7，12，15

172

不明

5（56），7（37）

5，7，8

スペイン

デンマーク

スウェーデン

a

13
16

13，14
1，2，7，11
2，5，6
14

2，3，4，5，6

北米
13（K13：O10）
5（39），7（37）

1，2，5，7，8，12

中南米

ベネズエラ
アルゼンチン15

1，3，5，7，8，12，15

オセアニア
豪州

ニュージーランド
ａ
ｂ
ｃ
ｄ
ｅ

27

括弧内の数値は分離率．
複数の血清型の抗血清で凝集．
型別不能．
血清型 2 ， 6 ，12あわせて90％以上．
原著では当時血清型12となっているが，後に実際には血清型15と判明．

家畜衛生学雑誌

34

第42巻第 2 号（2016）

表 5 ．日本を除く世界各国で分離される App の血清型の割合（％）（PCR 法で血清型を予測）
州及び国

文献

分離年

91
96

分離されたことのある血清型

型別法

5（50），1（22），2（16）1，2，5，12

PCR（遺伝子不明）

2（42），5（33）

1，2，4，5，7，12

cps/apx/omlA PCR

a5（37），1（28），UT（24）

1，2，5，7，12

cps PCR

15

apxIV REA b

3（52），8（30）

2，3，6，7，8，12

従来の血清型別法（凝集試験）

8（82）2，3，6，7，8，12

cps PCR

株数

主要な血清型

2008−201032

2011−201248

111

2012−2013

54

191

不明

1

156

2004

66
（同一検体）

156

2009

378

8（78）

51

2007−2013

96

アジア
韓国

タイ
欧州
イギリス

cps PCR

北米
カナダ

6，8，3/6 c，15?

cps PCR（ 血 清 型 3 ，6 及び 8 抗血清で交差する株のみを検査．
）

4，6，7

apx PCR

1，5，7

apxIV PCR

南米
チリ

144，145

2007−2009

60

コロンビア

173

不明

不明

7（36），6（17）ａ型別不能株．
ｂ restriction analysis（制限酵素切断解析）
ｃ 血清型 3 及び 6 に特異的なサイズの PCR 産物が 2 本増幅されたため，非典型的な血清型 6 76）．
下線は PCR 法ではなく，抗血清を用いた従来の血清型別法（スライド凝集試験）での成績．

表 6 ．世界各国における App の各血清型に対する抗体陽性率（％）
州及び国

文献

抗体検査の
実施年

頭数

農場数 主要な血清型

106

1982−1983

119

18

104

1983−1984

200

141

1985

83

抗体陽性を示した血清型

備考2（44）a2

血清型2のみ検査

48

2（52）

2

血清型2のみ検査

64

65（36），2（38）2，5

血清型2，5のみ検査

1983−1986

629

220

2（62），5（10）2，5血清型2，5のみ検査

207

1992

473

1

b
5（91）
，2（83）b，1（47），6（44），7（17） 1，2，5，6，7

血清型1，2，5−7のみ検査

188

2012−201331c2（74），5（61），1/9/11（19）1/9/11，2，5

血清型1/9/11，2，5のみ検査
血清型1/9/11，2，5のみ検査

アジア
日本

188

2012−2013

144

2（62），5（25）1/9/11，2，5

韓国

96

2011−2012

452

2（19）

1/9/11，2，3/6/8d，4/7e，5

タイ

7

不明

549

1/9/11（29），3/6/8（26），5a（26）1/9/11，3/6/8，5a，5b，12

118

不明

150

3（90），2（81），9（39）

農場内平均感染率
血清型2，3，9のみ検査

119

不明

50

2（57），3（54），9（41）

農場内平均感染率
血清型2，3，9のみ検査

欧州
ベルギー

オランダ

34

2008

500

2（35），12（28），4/7（21），3/6/8（17） 1/9/11，2，3/6/8，4/7，5a/5b，10，12

スウェーデン 199

2000

500

4/7（59），2（49），3（39）フィンランド 112

不明

692

3（51），2（26）

農場内平均感染率61

2007−2008

206

4/7（35），1/9/11（15）1/9/11，2，3/6/8，4/7，5，12

115

2003

50

4/7（26），12（17），3/6/8（15）1/9/11，2，3/6/8，4/7，5，12

19

不明

北米
カナダ
中南米
メキシコ
ａ
ｂ
ｃ
ｄ
ｅ

556

2（89），3（86），1（50）

括弧内の数値は抗体陽性率．
ワクチン抗体？
血清型 LPS の O 抗原を用いた ELISA で検査したので，血清型1/9/11間の識別はできない．
血清型 LPS の O 抗原を用いた ELISA で検査したので，血清型3/6/8間の識別はできない．
血清型 LPS の O 抗原を用いた ELISA で検査したので，血清型4/7間の識別はできない．

野生及び家畜化した猪伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について35

分泌する事とマウスを用いた感染実験での高い致死性か

血清型 7 及び12はともに ApxII 毒素のみを分泌するがら，病原性が高いと考えられていたが，世界的にも血清（表 2 ），カナダでは血清型 7 は 2 番目に多く分離される型10の（特に臨床例での）分離例は少なく，豚を用いた

臨床的に重要な血清型であり（表 4 ），血清型12よりも

実 験 感 染 試 験 で も 病 気 が 再 現 さ れ な い46）． 同 様 に，病原性が強い46）．デンマークでも血清型12の病原性は低

ApxI 毒素のみを分泌する血清型14の分離報告も非常にいと考えられている56）．

120−122，151）

少ない．血清型12は ApxII 毒素のみを分泌するが（表 2 ）
，デンマークでは病豚の肺からの血清型12の3.3.2．ワクチンの効果は，血清型特異的であるために，
血清型別は重要である

分離率は低く，健康豚の扁桃から血清型12が高率に分離

一部の報告例（血清型 8 ，3 及び 6 間での交差防御免疫）される56）（表 4 ）．そのため，血清型12はデンマークでを除き147），異なる血清型の菌体をワクチンとして接種

は低病原性の扁桃に親和性の高い血清型であると考えらしても十分な効果が期待できない45，68，72−74，146，193，194）．

れている56）．ApxIII 毒素のみ分泌する血清型 3 （表 2 ）の全ての血清型に効果・効能を示すワクチンはまだ開発さ45）

病原性が低いことは，これまで広く認識されている ．

れていない．したがって，農場にどの血清型が浸潤して同じ血清型であっても病原性の強さに差が認められるいるか把握し，各農場におけるワクチンの選択及びワク

場合がある．すなわち日本及び欧州では血清型 2 の病原

チンプログラムの検討を行うために，分離株の血清型別性が強いと考えられており，血清型 2 による胸膜肺炎のは，重要な検査項目の一つであると言える．

被害が多く問題となっているが（表 2 〜 4 ），北米では血清型 2 による胸膜肺炎は問題となっていない（表 2 及
び4）46，47）．この違いは分泌される Apx 毒素の種類に3.4．各国及び大陸で流行している血清型の違いについて
3.4.1．日本における主要な血清型についてよるものと考えられている．すなわち，日本及び欧州由App 分 離 株 の 血 清 型 は， 国， 地 域， 農 場 に よ っ て

来 の 血 清 型 2 は，ApxII 及 び ApxIII 毒 素 を 分 泌 す る

様々である33，45，46，68，72−74）．日本では血清型 2 の分離がが，北米由来の血清型 2 は ApxII 毒素しか分泌しない

最も多く，次いで血清型 1 または 5 が多い（表 3 ）．過（表 2 ）

46，47）．一方，血清型 4 は，スペインでは病原性

去約40年間の文献を集計すると上記 3 つの血清型で約が強く，臨床上重要な血清型であるが，他国では血清型

94.9％，血清型 2 だけで約67.5％を占めている（表 3 ）．

4 は問題となっていない46）（表 4 ）．しかし，カナダで日本で最も分離頻度の高い血清型 2 は全国各地で分離さ分離された健康豚由来の App 血清型 4 （北米での分離れるが，血清型 1 及び 5 の分離の有無及び分離率は地域は非常に希）とスペインの血清型 4 の Apx 毒素パター

によって差がある．日本では血清型 4 ，10及び14の分離ンは同一であり（表 2 ），病原性の差及び臨床学的重要報告はなく，血清型 1 ， 2 ， 5 以外の血清型は農場での度の違いを分泌する Apx 毒素の違いで説明できない46）．

豚胸膜肺炎の散発的発生や食肉衛生検査の際における分同様に血清型15は，オーストラリアでは病原性が強く，離報告が多い（表 3 ）．血清型15は2001年以降の日本で臨床上重要な血清型であるが（表 4 ），オーストラリアは血清型 2 ， 1 及び 5 に次いで 4 番目に分離率の高い血以外の国で分離される血清型15の病原性は中程度であ清型である．血清型15は，1990年にオーストラリアで分り，分離率も高くない（表 2 〜 4 ）46）．このように同一離され，血清型12と同定されていた株12） を再解析した

血清型での病原性の強さの差及び各国における臨床学的結果，2002年に新しい血清型として提唱された血清型で重要度の違いを Apx 毒素では説明できない46）．ApxII 毒ある13）．日本では2003年に初めて血清型15が分離されて素しか分泌しない典型的な生物型 2 血清型13（K13：O13）

いる101）．しかし，筆者は血清型15がまだ提唱されてい35）はハンガリーで初めて分離されたが ，その後ハンガリー

ない1990年代に分離された株（当時は型別不能株として及びその他の国においての分離報告はきわめて少数で保存）を，近年再検査した結果，血清型15と型別され

30，162，167）

た74）．したがって，血清型15は1990年代（ 1 株は1995年，（表 2 及び 4 ）．一方，近年アメリカ及びカナダで ApxI

もう一株は分離年不明）には既に日本に侵入していた事毒素のみを分泌する非典型的な生物型 1 血清型13（K13：になる74）．

O10）が分離され（表 2 及び 4 ），その後 5 年間に 8 例

3.4.2．日本以外の世界各国での主要な血清型についてあるため

30，162，167），病原性は弱いと推測される，ApxII 毒素のみを分泌す

Dubreuil ら33） は，世界各国の最も主要な血清型及びる血清型13（K13：O13）よりも病原性が強いと考えられ分離例のある血清型についてまとめているので，この総る（表 2 ）．

説を参照されたい．しかし，この総説は2000年以前に発臨床例から分離されており

162）

さらに異なる血清型間での病原性の強さの違いを表された報告をまとめたものであるため，2000年以降にApx 毒素のみでは説明できない場合もある．すなわち発表された報告及び Dubreuil らの総説33） に記載のない

家畜衛生学雑誌36

報告を表 4 〜 6 にまとめた．表 4 は各血清型の App を

第42巻第 2 号（2016）
3.4.5．北米での主要な血清型について免疫して作製した抗血清を用いた traditional な血清型別

20年以上前のカナダでは血清型 1 （68％），次いで 5法による報告，表 5 は後述する PCR による遺伝子検査（23％）がよく分離されていたが，2011〜2014年にカナで分離株の血清型を推定した報告，表 6 は抗体検査にダで分離された App の血清型に関する報告によれば，

よって各血清型の感染率を調査した報告（日本での報告

血清型 5（39％）及び 7（37％）が主要な血清型であり，を含む）をとりまとめたものである．

次いで血清型 8 （ 8 ％），12（ 7 ％）， 1 （ 5 ％）及び 2

3.4.3．アジアでの主要な血清型について（ 5 ％）の順に分離率が高かった52）（表 4 ）．このように韓国ではかつては，血清型 5 及び 2 が主要な血清型で126）

病原性が最も強いと考えられている血清型 1 の分離率があった （表 4 ）．しかし，近年では血清型 1 の分離率激減した一因は，App 血清型 １ 清浄化のための特別なが上昇し，現在は血清型 5 についで主要な血清型であプログラムによって繁殖豚の感染率を減少させたためで

91，111，208）

る（表 4 及び 5 ）．台湾では血清型 1 が最も主要な血清型である

21，179，206）あると推察されている52）．

（表 4 ）．世界第一位の豚飼育頭

カナダのオンタリオ州で2003年に実施した抗体検査で数を誇る中国で分離される App の血清型についての情は，血清型4/7（おそらく 7 ）（26％），12（17％），3/6/8

報は，山東省での調査報告（表 4 ）しか見当たらない29）．

（おそらく 8 ）（12％），5 （ 6 ％），2 （ 4 ％），1/9/11（お3.4.4．欧州での主要な血清型について

そらく 1 ）（ 2 ％）の順に抗体陽性率が高く，病原性が欧州のほとんどの国では日本と同様に血清型 2 が主要な強いと考えられている血清型 1 及び 5 （表 2 ）の抗体陽血清型である（表 4 ）．フランス23，33），オランダ33，34，93），

性率は低かった115）（表 6 ）．また北米では，臨床症状がベルギー 118，119） 及びチェコ33，102，143，176） 等，血清型 2 に認められない農場であっても，血清型 3 ， 6 ， 8 ，12及

次 い で 血 清 型 9 が 主 要 な 血 清 型 で あ る 国 も 多 い（ 表び15のいずれかの血清型に対する抗体を保有する豚が高4）．日本における豚肉の主要輸入先国であるデンマー

頻度に検出される農場が多い．さらにこれらの血清型のクでは，肺または扁桃から分離された App の90％以上

農場内での感染率が高いため，少数の豚の検査でも摘発

57）

が血清型 2 ，6 または12であるという報告 （表 4 ）と，が可能であると言われている46，47）．これらの血清型はい血清型 2 （63％）， 6 （26％）， 5 （ 5 ％）の順で分離率ずれも病原性が中程度か弱いと考えられている血清型でが高いという報告があり，日本と同様に血清型 2 が主要ある（表 2 ）．
3.4.6．中南米での主要な血清型について

86）

な血清型である （表 4 ）．
イギリスとスペインでは他の国ではほとんど分離され日本の豚肉輸入先の主要国の一つである南米のチリでない血清型 8 及び 4 がそれぞれ臨床学的に重要な主要血は，1980年代は北米と同様に血清型 1 及び 5 が主要な血清型である．イギリスではかつては血清型 3 （表 4 及び清型であったが33），2007〜2009年に分離された App の血5 ）が最も主要な血清型と考えられてきた（スライド凝清型は，血清型 7 （36％）， 6 （17％）， 4 （ 7 ％）のい

集試験による血清型別）156）．しかし，2004年に分離さずれか（PCR による型別）であった144，145）（表 5 ）．病原れた株を，スライド凝集試験と後述する莢膜多糖合成遺性が最も強いと言われている血清型 1 及び 5 から，他の伝子を標的 DNA とする PCR 法の両方で検査し比較した血清型にシフトした理由が，北米での例と同様に，検査ところ，多数の血清型 8 を血清型 3 とミスタイピングしによるモニタリング，バイオセキュリティーの強化や管ていた可能性が示唆され，イギリスでは以前から血清型

理手法の向上によるものなのか，あるいは検査した地域

156）

8 が主要な血清であったと考えられている （表 4 及びや農場の違いによるものなのかは不明である．また中米

5）．このように血清型 3 ， 6 ， 8 （及び15）は，スラのメキシコも我が国の豚肉輸入先の主要国の一つである

イド凝集試験では交差反応の頻度が高くミスタイピング

が，メキシコの CHIAPAS 州における抗体調査の結果，する危険性が高いため，最近では血清型 3 ， 6 ， 8 また

556頭中89％が血清型 2 ，86％が血清型 3 ，50％が血清は15と思われる株については，PCR で型別している例

型 1 に対する抗体を保有していたと報告している19）（表もある51）（表 5 ）．スペインで1990年代〜2004年に分離

6 ）．

された株では，血清型 4 ， 2 及び 7 の分離率が高かった

3.4.7．オセアニアでの主要な血清型について

が33，59，60）（表 4 ），2002〜2008年に分離された株（生物オーストラリアでは，血清型15が病原性の高い臨床上型 1 ）でも同様な傾向が続いている122）．一方生物型 2

重要な血清型であり13，195，196），血清型 7 及び 5 の分離率もでは，血清型 7 の分離率が最も高く（69％），型別不能

高い195，196）（表 4 ）．北米46），メキシコ46），ブラジル28，46）株（21％），血清型2/4（ともに 5 ％），11（ 2 ％）と続

（表 4 ），タイ191）（表 5 ）及び日本30，92，101，136，152）（表 3 ）く122）（表 4 ）．

においても血清型15は，低頻度であるが分離されている

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について
が，これらの諸国では大きな問題とはなっていない46）．

37

型 3 ，6 ，8 及び15間51，132），血清型 4 及び 7 間128）では，交差反応が頻繁に認められる．これは LPS の構造が，3.5．App の血清型に関するその他のトピックについてそれぞれの血清型間で同一または非常に類似しているた

同一時期に一農場で複数の血清型の App が分離されめである33，161，164）．また LPS の O 多糖抗原だけでなく，る報告例はある17）．また，「ある血清型の App に感染し外膜タンパク質等も各血清型間で交差する原因となる抗た豚は，他の血清型に感染しない」と考えられてきた時原である．従来のポリクローナルな抗体を含む血清型別期もあるが， 1 個体から複数の血清型の App が分離さ法では，複数の抗原が血清型別に影響を与えるため，血れた報告例がいくつかある17，174）．

清型特異的モノクローナル抗体を用いた血清型別を実施する方法もあるが実用化されていない．
3.6.2．新しい血清型の命名方式の提案について

3.6．血清型に関与する抗原及びその遺伝子について
3.6.1．はじめに以上の知見から，大腸菌やサルモネラで使用されていどの抗原が血清型に関与し，さらにどの抗原が血清学

る（K）：O：H という血清型命名方式と同様に，App にお的交差反応性に関与しているかを明らかにするための研いても K（莢膜抗原）：O（LPS O 抗原）を使用した血清究が多数行なわれてきた結果，App の血清型は主に莢

型命名方式が提唱された（表 7 ）11）．App の血清型参考

膜多糖の抗原性に基づき型別されることが，明らかと株及び野外分離株のほとんどは表 7 の左から 2 番目のカなった

11，33，117，161，163，164）．さらに，一部の血清型では，

ラムに示す K：O の組合せの K 及び O 抗原を発現する．

リポ多糖（LPS）の O 多糖抗原も血清型別の際の交差反例数は少ないが非典型的な K 抗原と O 抗原の組合せが非応に影響を与える重要な抗原である事が明らかとなっ典型的な株が北米（K1：O753） 及び K13：O10162）），欧州

た33，117，161−164）．特に血清型 1 ， 9 及び11間（K2：O7150））及び日本（K12：O377，187））で，分離されて

127，134），血清表 7 ．App 血清型 1 〜16の莢膜多糖及び LPS の O 多糖抗原の化学構造に基づいた K：O 血清型11）
莢膜血清型

血清型参考株及び典型的な野外株の K：O 血清型

O 多糖抗原の化学構造が同一か類似性しているために血清型学的交差性が認められる莢膜血清型群

非典型的な野外株のK：O 血清型

非典型的な K：O 血清型野外株と同一あるいは類似した K またはO 抗原を発現する K：O 血清型

1

K1：O1

1/9/11

K1：O7 53）
（北米のみで分離）

K1：O1
a
K4：O4，K7：O7,（K13：O13）

9

K9：O9

1/9/11

11

K11：O1

1/9/11

2

K2：O2

K2：O7 150）
（欧州のみで分離）

K2：O2
a
K4：O4，K7：O7,（K13：O13）

3

K3：O3

3/6/8/15

6

K6：O6

3/6/8/15

8

K8：O3

3/6/8/15

15

K15：O3

3/6/8/15

4

K4：O4ａ4/7/（13）a

7

ａ

K7：O7

4/7/（13）a13

K13：O13ａ4/7/（13）a

K13：O10 162）
（北米のみで分離）

K13：O13
K10：O10ａ5aK5a：O55b

K5b：O5

10

K10：1012

K12：O12

K12：O3 77）（日本のみで分離）

K12：O12
K3：O3，K6：O6，K8：O3，
K15：O3

14

K14：O？b

16

K16：O？C45，47）ａ 血清型 7 及び13の O 多糖抗原の化学構造は同一であるにも関わらず（図 3 ），血清学的交差反応が認められる例と，認められない例が報告されている．したがって，化学構造では K13：O7と記載すべきであるが，ここでは K13：O13を使用する．

ｂ O 抗原の化学構造は未決定．

ｃ K 及び O 抗原の化学構造は未決定であるが，血清型 1 〜15のいずれの抗血清にも反応しない175）ため，K16と記載．

家畜衛生学雑誌

38

第42巻第 2 号（2016）

いる（表 7 ）．しかし，K 抗原及び O 抗原を同定するたノ - 2 - オクツロソン酸（dOclA）の合成に必要な KdsA

めには，莢膜や LPS O 抗原の化学構造及び遺伝子構造（dOclA 8リン酸合成酵素）ホモログが存在する203）．

等を決定する事が必要であり，K：O 血清型別には，K 及

な お 血 清 型 7 及 び13は と も に， 同 一 の 塩 基 配 列 のび O 抗原に特異的な抗血清（莢膜及び LPS の O 抗原に対

cps2 A，cps2 B，cps2 C，cps2 D 及 び cps7 E を 保 有 す る がするモノクローナル抗体等）が必要であるため，限られ（図2B），異なる化学構造33，117，161）（図1B）及び抗原性47）

た検査室または研究室以外では検査の実施は困難であを呈する．したがって，これらの遺伝子以外にも莢膜血る．そのため新たに提唱された K：O による血清型命名

清及び血清型に関与する遺伝子及びそれらがコードする

方式は普及していない．

タンパクの存在が示唆される．同様に血清型 9 及び11は3.6.3．K 抗原（莢膜多糖）の化学構造について

ともに，同一の塩基配列の cps2 A，cps2 B，cps2 C 及び

血 清 型 1 〜 13及 び 血 清 型15の K 抗 原 の 化 学 構
造

33，117，161，164）

cps9 D を保有するが（図2B），異なる化学構造を有するを図 1 に示した．血清型14及び今年新た（図1B）．したがって，これらの遺伝子以外にも莢膜血に提唱された血清型16の K 抗原の化学構造に関する報告

清及び血清型に関与する遺伝子がゲノム上の他の場所にはまだない163，175）．Appは K 抗原の化学構造及び抗原性の存在し，それらの遺伝子がコードする酵素によって莢膜違いに基づき，血清型別される．K 抗原の化学構造は，多糖が修飾され，異なる抗原性を示している可能性が示

ホスホジエステル結合した直鎖オリゴ糖ポリマーで構成

唆される．

33，161，164）（図

血清型14の K 抗原の遺伝子構造はタイプⅠに属する

1A），ホスホジエステル結合したタイコ酸ポリマーで構が75），App とは異なる菌種の A. suis の K 抗原の遺伝子成されるグループⅡ（血清型 2 ， 3 ， 6 ， 7 ， 8 ， 9 ，構造18，116） とほぼ同一であることに興味がもたれる．

されるグループⅠ（血清型 1 ，4 ，12，15，）

11，13）

33，117，161）（図1B）及び通常は LPS のリピッド A

App の K 抗原合成遺伝子の GC％は，App の全ゲノムのと内部コアの連結部分に存在する 2- ケト -3- デオキシオ

平均 GC％（約41％）よりも低く，水平伝播で獲得したクトン酸（KDO）を保有し，単純なオリゴ糖のポリマーものと考えられている75，79，87）．さらに，App，A. suis，で構成されるグループⅢ（血清型 5 ，10）33，161）（図1C）

Actinobacillus minor，Haemophilus influenzae，の 3 つにグルーピングされる．

Mannheimia haemolytica，Pasteuella multocida 及び

3.6.4．K 抗原の遺伝子構造について

Neisseria meningitids の K 抗原合成遺伝子領域は，モザ

血清型 1 〜15のK 抗原合成遺伝子の遺伝子構造と塩基配

イク様構造を呈して類似しており，パスツレラ科及びナ列が決定されている 8 ，14，36，75，77，79，87，113，160，200，203，204，211）．

イセリア科に属する異なる属及び種間で莢膜合成遺伝子

上述のように App 血清型は，各血清型の K 抗原の化学に関わる遺伝子が水平伝播している可能性が示唆されて構造に基づき 3 つのグループに分けられるが，遺伝子構いる109）．図2A 〜 C を参照して分かるように，cps1 AB造でも同様に， 3 つのタイプに分けられる75，79，87，203）（図（グループⅠ），cps2 ABC（グループⅡ）及び kdsABF（グ2A 〜 C）．

ループⅢ）の基本骨格を持った血清型に，他菌種から水まずタイプⅠに属する血清型 1 ，4 ，12，14及び15（図平伝播された様々な遺伝子がそれらの遺伝子の下流また2A）には，cps1 A（莢膜多糖リン酸転移酵素）が存在は上流に挿入されたために，多様な化学構造及び抗原性し，莢膜のリニアバックボーンを構築するリン酸結合にを持った莢膜多糖及び莢膜血清型が誕生したと推察でき関与する75，79，203）．次に，タイプⅡに属する血清型 2 ，る．K 抗原合成遺伝子の水平伝播は，App が属するパス

203，204），タ

ツレラ科に属する菌種や，同じ Gram 陰性菌のナイセリ

イコ酸の合成に関与する cps2 A（タイコ酸グリセロール

ア科に属する菌種にとどまらず，Gram 陽性菌との間で転移酵素遺伝子）及び cps2 B（グリセロール - 3 - リン酸

も水平伝播が起こっている可能性が示唆されている．例

3 ， 6 ， 7 ， ８ ， 9 ，11及び13（図2B）にはシチジル転移酵素）と機能不明な cps2 C 遺伝子が存在す

え ば 血 清 型 6 の K 抗 原 合 成 遺 伝 子（cps2 A，cps2 B，る．タイプⅡに属する血清型は，タイコ酸合成酵素遺伝

cps6 D 及び cps6 E）（図2B）がコードするタンパクのア子（cps2 D，cps6 D 及 び cps9 D） も 保 有 す る．cps2 D，ミノ酸配列を用いてホモロジー検索を行なうと，Gram

cps6 D 及び cps9 D 遺伝子がコードするタンパク間のアミ陽性菌である Bacillus 属菌のタイコ酸合成に関わる遺伝

ノ酸配列の相同性は低いが，共に保存された二つのドメ子がコードするタンパクのアミノ酸配列と局所的あるいインを保有する．cps9 D（タイコ酸合成酵素遺伝子）はは広範囲に渡ってホモロジー（それぞれ31−37％，67−

血清型 9 及び11に存在するが，血清型 3 では機能しない

73％，28−41％及び32−35％）を有する87）．教科書的に

偽遺伝子 cps9 D’ しか存在しない．最後に，タイプⅢのはタイコ酸はグラム陽性菌が発現するとされているが，血清型 5 及び10（図2C）には，単糖 3 - デオキシ -d- マン

Gram 陰性菌である App がタイコ酸を発現することは非伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

39

図 1 ．App 血清型 1 〜13及び血清型15の莢膜多糖の化学構造．
75）
血清型14の莢膜多糖の化学構造は未決定であるが，K 抗原の遺伝子構造（図 2 ）によって，化学構造もグループⅠに属すると考えられる．

＊

40

家畜衛生学雑誌

第42巻第 2 号（2016）

図 2 ．App の各血清型の莢膜多糖合成遺伝子の遺伝子構造．
（Ａ）App の各血清型（グループⅠ）の莢膜多糖合成遺伝子の遺伝子構造．
（Ｂ）App の各血清型（グループⅡ）の莢膜多糖合成遺伝子の遺伝子構造．
（Ｃ）App の各血清型（グループⅢ）の莢膜多糖合成遺伝子の遺伝子構造．
cpxD，全ての App 血清型で保存されている莢膜多糖の合成に関与する
4 つの cpx 遺伝子のうちの一遺伝子．

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について
常に興味深い（図 1 ）．さらに血清型15の K 抗原合成遺413.6.6．O 抗原の遺伝子構造について

伝子のうち cps15 C（図2A）がコードするタンパクのア

血清型 1 〜13及び15のO 抗原合成遺伝子の遺伝子構造とミノ酸配列は，Gram 陽性菌 Corynebacterium resistens の塩基配列が決定されている（図 4 ）14，36，77，108，113，160，203，204，211）．

遺伝子がコードするタンパクのアミノ酸配列と最も高い

交差反応が頻繁に認められる血清型間（血清型 1 ， 9 及80）

相同性を示す ．以上のことから，Gram 陰性・陽性菌

び11； 血 清 型 4 及 び 7 ； 血 清 型 3 ， 6 ， 8 及 び15） でを問わず，App と様々な菌種との間で遺伝子の水平伝は，同一あるいは類似した遺伝子構造をしており，これ播が起こり，App の莢膜は進化してきたと考えられる．

らの血清型間での O 抗原の化学構造の同一性・類似性な

このように各血清型の K 抗原合成遺伝子の塩基配列は

らびに血清学的交差性を説明可能である．一方，O 抗原

血清型特異的であり多様性に富むため，本遺伝子を利用の化学構造と同様に血清型 7 及び13の O 抗原の遺伝子構した PCR による遺伝子型別法（5.1.1．莢膜多糖合成遺伝

造及び O 抗原の合成に関与する遺伝子の塩基配列が同一子及び莢膜多糖輸送遺伝子型別用 PCR 参照）が多数開である113，203）にも関わらず，両血清型間で血清学的交差

発されている．

性が認められない理由は不明であり47），今後の検討が必

3.6.5．O 抗原の化学構造について要である．
33，117，161，163，164）

グラム陰性菌の O 抗原合成経路には 3 種類の経路が知に示した．昨年末新たに提唱された血清型16の K 抗原のられているが，App では 2 つの O 抗原合成経路が存在

化学構造に関する報告はまだない175）．血清型 1 及び11することが，明らかになっている33，198，203）．その一つはの O 抗原の化学構造は同一であり，さらに血清型 9 の O

Wzy/Wzx 依存性経路によって O 抗原を合成するグルー抗原と著しく類似している（図 3 ）．さらに血清型 3 ，プⅠ（血清型 2 ， 3 ， 4 ， 6 ， 7 ， 8 ，13及び15）（図4A）

8 及び15の O 抗原の化学構造は同一であり，血清型 6 ので，もう一つは ABC- 2 輸送体依存性経路によって O 抗O 抗原と著しく類似している（図 3 ）．さらにまた血清原を合成するグループⅡ（血清型 1 ，5b， 9 ，10，11及

型 7 及び13の O 抗原の化学構造は同一であり，血清型 4

び12）（図4B）である．グループⅡに属する血清型は，の O 抗原と著しく類似している（図 3 ）．そのため，血いずれも ABC- 2 トランポーターをコードする Wzm（膜清型 1 ， 9 及び11の間，血清型 3 ， 6 ， 8 及び15型の間貫通蛋白質）及び Wzt（ATP 結合性サブユニット）遺ならびに血清型 4 及び 7 の間では，血清学的交差反応が伝子を保有する．血清型14及び16の O 抗原合成遺伝子の認められると考えられている．血清型 8 の死菌を免疫し塩基配列がまだ決定されていないため，Ⅰ，Ⅱどちらのた豚は血清型 6 の攻撃に交差防御反応を示したという報

合成経路グループに属するか不明である．

血清型 1 〜15の O 抗原の化学構造を図 3

告があるが，O 抗原の共通性が交差防御に貢献したもの
3.7．App と血清学的交差反応の認められる細菌についてと考えられる147）．
血清型 7 及び13の O 抗原の化学構造は同一であるにも3.7.1．Actinobacillus porcitonsillarum

かかわらず（図 3 ），これらの血清型間での交差反応性

健康豚の扁桃，肺，肝臓54） や豚の肉芽腫性リンパ節は報告されていないが47），その理由は不明である．筆者

炎153） から Actinobacillus porcitonsillarum が分離され，の経験では，ゲル内沈降反応で血清型 7 と同定された異新菌種として提唱されている54）．本菌は主に扁桃から分なる10県で分離された株を用いて，凝集反応による血清

離され，発育に NAD を要求するなど生物学的・生化学

型別を実施したところ，2/10株は血清型 7 及び13抗血清

性状が App と似ており，ゲル内沈降反応，共凝集試験の両方で凝集したが，8/10株が血清型 7 抗血清のみで凝及び間接赤血球凝集試験による検査成績から，当初は集し，血清型 7 及び13間で交差反応が認められる株と認App 血清型 1 や 9 と誤認された54）．一方，肉芽腫性リンパめられない株の両方があった（未発表データ）．他の血節炎から分離された A. porcitonsillarum は，血清型12抗

清型との血学清的交差反応の報告がほとんど認められな血清で凝集し，免疫組織学的検査では血清型 2 及び12抗い血清型 2 ， 5 ，10，12及び14の O 抗原の化学構造はそ

血清で陽性反応が認められるなど，App と血清学的に交れぞれ血清型特異的である．

差する共通抗原を発現することが報告されている153）．

血清型14の O 抗原の化学構造はユニークで，他のどのそのため共通抗原を保有する A. porcitonsillarum に感染

163）

血清型とも類似しておらず，肺炎球菌 Streptococcus

し た 豚 は，App に 感 染 し て い な く て も 抗 体 陽 性 と なpneumoniae type 37が産生する櫛状の D- グルカン 2 ） やり，抗体検査による豚胸膜肺炎の血清診断の妨げになる

180）

放線菌 Streptomyces sp. が産生するガラクトマンナンと考えられている54）．筆者も App 血清型 1 ， 2 ， 9 及びに類似していると報告されている．

12以 外 の 他 の 血 清 型 の App と 共 通 抗 原 を 保 有 す る
A. porcitonsillarum に遭遇している（未発表データ）．

42

家畜衛生学雑誌

第42巻第 2 号（2016）

図 3 ．App 血清型 1 〜13及び血清型15の LPS

O 抗原の化学構造．

（Ａ）Wzy/Wzx 依存性合成経路 で合成される O 抗原．
（Ｂ）ABC- 2 輸送体依存性合成経路198）で合成される O 抗原．
（Ｃ）合成経路不明．
198）

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

43

図 4 ．App の各血清型の O 抗原合成遺伝子の遺伝子構造．
（Ａ）グループⅠ（Wzy/Wzx 依存性合成経路によって O 抗原を合成）の血清型の O 抗原合成遺伝子の遺伝子構造（Ｂ）グループⅡ（ABC － 2 輸送体依存性経路によって O 抗原を合成）の血清型の O 抗原合成遺伝子の遺伝子構造

A. porcitonsillarum は扁桃や上気道の正常細菌叢を構成高く，A. lignieresii の豚からの分離報告もないため，現する非病原性細菌の一つであると考えられているが，血時点では抗体検査による App の血清診断の妨げになる

清学的に交差する共通抗原をもつだけでなく，App の可能性は低いと考えられる．

病原性因子の一つである ApxII 毒素も分泌するため，

3.7.3．Actinobacillus suis

App と A. porcitonsillarum の類似性は，両菌の進化をApp には，タイプⅠ（血清型 2 ，3 ，4 ，5 ，7 ，8 ，

考える上で大いに興味が持たれる．

10，12）と，タイプⅡ（血清型 1 ， 6 ， 9 及び11）の 2

3.7.2．Actinobacillus lignieresii

タイプの LPS コアが存在し，異なるタイプの LPS コアで牛のアクチノバシラス症から分離される Actinobacillus

は，構造の類似性や血清学的交差性は認められない43，125）．

lignieresii は，App 血清型 4 及び 7 と血清学的に交差する

一方，タイプⅠに属する App の血清型及び A. suis 血清

110）

LPSを保有する．さらに馬から分離された A. lignieresii

型 K1/O1の LPS のコアの構造は類似しており，血清学（牛から分離される A. lignieresii と生化学性状では識別的交差性が認められる43）．

できないが，DNA 相同性試験及び16S rDNA 塩基配列

3.7.4．Escheichia coli 血清型K62（K2ab），N. meningitidis

解析では同一菌種とはいえない低い相同性を示す．

血清群 H 及び Bibersteinia trehalosi（Pasteurella

Actinobacillus genomospecies 1とも呼ばれる）は，App

haemolytica）血清型 T15

血清型 3 特異抗血清と血清学的交差反応が認められる26）．

Nuclear magnetic resonance（NMR）（ 核 磁 気 共 鳴 ）しかし，Actinobacillus 属に属する菌種の宿主特異性は

法 を 用 い た 解 析 に よ り，App 血 清 型 9 と E. coli K62

家畜衛生学雑誌

44

第42巻第 2 号（2016）（K2ab），N. menigitidis 血 清 群 H 及 び P. haemolyticaや導入豚の検疫検査が必要な App フリーの農場では，（現在の菌種名は B. trehalosi）血清型 T15の莢膜多糖抗

ELISA がベストな抗体検査法であると考えられる．

10）

原の基本構造は同一であることが報告されている ．さら

血清型または血清型群特異的な抗体検査用の ELISA 抗に，抗 N. meningitidis 血清群 H 免疫血清を用いたゲル内原として，精製 LPS 4，97−99，188），精製長鎖LPS 48−50，57，168，169）

沈降反応を実施すると，App 血清型 9 ，N. meningitidis

及び精製莢膜等15，67）が使用されている．

血清群 H 及び B. trehalosi 血清型 T15の莢膜抗原間に血10）

清学的交差性が認められている ．

LPS は，簡便，安価かつ大量に精製できるため，LPS
が血清型または血清群特異的な ELISA 抗原に適していると考えられている．また，非特異反応の原因となる

3.8．血清型による抗菌剤感受性の違いについて

短鎖（低分子量）の LPS をゲル濾過で取り除いた画分

我が国で分離された血清型 1 及び 5 では，血清型 2 よ（＝長鎖 LPS）を診断用抗原に用いた ELISA（長鎖 LPS-

りも抗菌剤（特にテトラサイクリン系抗菌剤）耐性の株

ELISA） が 開 発 さ れ て い る48−50，57，168−169）． 長 鎖 LPS-が多いと報告されているが92，136，137，159，209），その理由はELISA のキットが海外で開発されているが，日本では
体外診断薬として承認を受けていないため使用できな不明である．

い．精製抗原（LPS）を使用しているためか，CF より

4 ．血清型または血清群特異的な血清学的診断法（抗体検査法）についても特異性が高いという報告もある157）．LPS の O 抗原は，

豚胸膜肺炎の生前診断法として，鼻腔や扁桃からの3/6/8/15，4/7， 5 ，10及び12のいずれの血清型 / 血清

App の分離や App の遺伝子の検出が試みられているが，群に感染したかを検査できる．血清型 7 及び13の LPS

抗体検査による血清学的診断がベストであると考えらの O 多糖抗原の化学構造は同一であるにもかかわらず，

45，47）

血 清 型 / 血 清 群 特 異 的 で あ り， 血 清 型1/9/11， 2 ，．App の抗体検査法には，血清

血清型4/7の長鎖 LPS を抗原に用いた ELISA では，血清型または血清群特異的な抗体検査法と，血清型または血型13感染抗体を検出できない47）．この矛盾点を説明でき

清群を特定できない App 種特異的な抗体検査法の 2 種

る報告はない．また表 7 に示したように，K1：O7 53），

れ，実施されている類があるが45，47），ここでは前者のみについて概説する．

K2：O7 150），K12：O3 77）及び K13：O10 162）といった非典型的な K 及び O 抗原の組合せの株も分離されているため

4.1．補体結合反応（CF）についてに，長鎖 LPS-ELISA では，感染した App の莢膜血清型

CF は，血清型特異的な抗体検査法として，古くからを推定できないことがある．しかし，非典型的な K：O

実施されてきた．血清型 8 に感染した豚血清は血清型 3

血清型の分離例はごくわずかであるため，現時点では大及び 6 と血清学的交差反応を示すことが報告されているきな問題とはならないと考えられる．長鎖ではなく，市147），CF はいくつかの血清型については，血清型特販の LPS 精製キットで精製した LPS を使用して，抗体異的というよりも，共通の LPS O 抗原を発現する血清検査を実施した報告もある188）（表 6 ）．しかし，自家製群に特異的であると思われる．しかし，血清型3/6/8との LPS-ELISA を実施する場合は，非特異反応を防ぐた

同様に O 多糖の抗原性が類似した血清型1/9/11及び血清

めに，LPS の純度検定の実施や，LPS の抽出・精製に用

型4/7間での CF における交差性に関する報告は筆者のいる菌株にはできる限り LPS O 多糖の長い菌株を用い知る限り無い．CF は，補体と結合する抗体を検出するる等の注意が必要であると思われる．

ため方法であり，IgG だけでなく IgM も検出可能であり，感日本ではラテックス凝集反応（Latex agglutination

染初期の動物も検出できる点が長所である．CF は，か（LA））による血清型 2 に対する抗体検出法が開発さつては豚胸膜肺炎の血清診断法の gold standard であれ，市販されている．LA の感度及び特異性は，CF やり，現在でも中国やロシアでは豚の生体輸入の際には，

ELISA に劣るが，簡単に入手可能な点では両手法，簡CF による抗体検査が必要であると聞く157）．CF は，一般

便性では CF に勝る．

の細菌検査室であればどこででも実施可能な特異性の高抗体検査で抗体陽性となる血清型と，病豚の肺等からい検査法であるが，感度が低く，操作が煩雑なことから，分離される血清型の傾向はしばしば異なる46，47，115）ため，

海外では現在は Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

各血清型の特徴を把握しておく必要がある．オランダで（ELISA）による抗体検査が主流となっている45−47）．

は 血 清 型 2 （35％） に 次 い で， 血 清 型12（28％），4/7（21％）及び3/6/8（17％）に対する抗体を保有する豚が4.2．ELISA について
ELISA の感度は一般的に高いため App 保菌豚の摘発多いが，血清型1/9/11（おそらく 9 ）に対する抗体を保有する豚は 6 ％のみであった34）（表 6 ）．しかし，肺か伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

45

ら分離された株の血清型をみると，血清型 2 および 9 のス PCR が開発され利用されてきた213）．しかし近年，ゲ

分離率はそれぞれ70及び25％であったが，血清型12，

ル内沈降反応で血清型 6 と型別できるが，このマルチプ

34）

4/7及び3/6/8は分離されなかった （表 4 ）．

レックス PCR では型別できない遺伝学的に非典型的な血清型 6 が福井県及び栃木県で分離されており注意が必5 ．遺伝子型について

要である76）（表 3 ）．その後，富山県でも同様の株が分5.1．血清型を推測可能な遺伝子型別法について離されている184）（表 3 ）．これらの株は，血清型 3 特異

5.1.1．莢膜多糖合成遺伝子及び莢膜多糖輸送遺伝子型用

的に増幅するサイズと血清型 6 特異的に増幅するサイズ

PCRの 2 本の PCR 産物が増幅され型別不能となる．その理

血清型 1 〜15の莢膜多糖合成に関わる遺伝子（図 2 ）由は，非典型的血清型 6 は，血清型 6 型別用 PCR プラ

及び輸送に関与する遺伝子が同定されている．莢膜血清

イマーだけなく，血清型 3 型別用 PCR プライマーにも型を推測可能な方法として，主に莢膜多糖の合成及び一結合可能な塩基配列を保有しているためである76）．その部は輸送に関与する遺伝子の塩基配列を利用して設計し後，イギリス16） 及び北米51） においても，日本と同様にた特異プライマーによる血清型 1 − 3 ， 5 − 8 ，10，12

非典型的な血清型 6 の存在が報告されており，非典型的及 び15の 同 定・ 検 出 用 の PCR 法 や マ ル チ プ レ ッ ク ス

な血清型 6 にも対応した新しいマルチプレックス PCR

PCR 法が開発されている 5 ，16，64，71，80，87，114，178，212，213）．

が最近開発された16）．

上記のように App の血清型は主に莢膜抗原の抗原性で5.1.2．O 抗原合成遺伝子型別用 PCR規定されることから，莢膜多糖の合成に関与する遺伝子

O 型を推定可能な O 抗原合成遺伝子型別用 PCR が一を標的とした PCR は，血清型別を推定する方法とし種のみ開発されている．それは，O 抗原の構造が同一あて，最もふさわしい遺伝子型別法であると考えられているいは類似する血清型1/9/11と他の血清型を識別可能な47）

る ．日本で分離される App のほとんどが血清型 1 ，リアルタイム PCR である123）．O 抗原の化学構造が同一

2 ， 5 のいずれかである状況（表 3 ）をふまえ，血清型

あるいは類似する血清型3/6/8/15と他の血清型を識別可

1 ， 2 及び 5 の莢膜合成遺伝子を標的としたマルチプ

能な PCR 開発の可能性を示唆する論文もあるが，野外

71）

レ ッ ク ス PCR 法 が 開 発 さ れ て い る ． さ ら に 日 本 で株を用いた検証がなく，各血清型参考株 1 株のみでしかは，血清型 7 及び15は，血清型 1 ， 2 及び 5 に次いで 4

検証していないため，今後多数の野外株を用いた検証があるいは 5 番目に多い血清型であり，特に近年血清型15必要である202）．

の分離が増加しているため，血清型 1 ， 2 ， 5 ， 7 及び5.1.3．Apx 毒素の遺伝子型別用 PCR

15（ 5 つの血清型の割合＝96.9％）（表 3 ）の莢膜合成

Appが分泌するApx 毒素（ApxI，ApxII，ApxIII）9 ，38，94）

遺伝子を標的としたマルチプレックス PCR 法も開発さの種類は，おおむね血清型特異的であると言われてい80）

る 9 ，38，94）（表 8 ）．そのため，Apx 毒素を遺伝子型別するれている ．
Traditional な抗血清を用いた凝集試験等の簡易な血ためのマルチプレックスPCR が開発されている39，56，171，182）

清型別法では，血清型3/6/8間では血清学的交差が頻繁に（表 8 ）．スイス / ドイツ，日本及び北米ではそれぞれ血認められるために，型別できない場合が多い51，213）．そ清型 3 103），血清型12（K12：O3）77） 及び血清型13（K13：のためこれらの血清型を識別するためのマルチプレック

O10）162） で，非典型的な apx 遺伝子パターンを示す株の表 8 ．マルチプレックス PCR による App の血清型推定法（Frey ら39）の apx 毒素遺伝子マルチプレックス PCR）

莢膜血清型

I

1，5a，5b，16 175），9，11

II

2，4，6，8，15

＋

＋

−

＋

＋

III

77）
，
ａ
3，12（K12：O3）

−

＋

−

＋

＋

IV

7，12，13

＋

−

−

＋

−

V

161）
，
ａ
10，13（K13：O10）
，14

＋

−

＋

−

−

−

＋

−

−

＋

VI
ａ

apxI，apxII 及び apxIII PCR profile 39）

グループ

3

103）
，
ａ

非典型的な血清型または K：O 血清型．

apxIBD

apxIIIBD

apxICA

apxIICA

apxIIICA

＋

−

＋

＋

−

家畜衛生学雑誌

46

第42巻第 2 号（2016）

分離報告もある（表 8 ）．しかし，その頻度は非常に少いる55）．しかも OmlA には遺伝学的多様性があり， 5 つないと考えられれ，apx 毒素遺伝子を利用した遺伝子型の遺伝子型群に分かれる（表10）25，56，69，70，158）．さらに，別による血清型推定の信頼度は100％ではないが，抗血App の各血清型株の omlA の遺伝子型はおおむね血清型

清を用いた血清型別の補助法として広く使われてきた

特異的である25，56，70，158）．すなわち，PCR-RFLP によっ（表 5 ）．

て App 血清型 1 〜15の参考株及び野外分離株のほとん

ApxIV は全ての血清型が in vivo でのみ分泌する Apx
毒素である

177）

どは，血清型 1 ， 9 ，11及び12からなる I 群，血清型 2．しかし，apxIV 遺伝子の塩基配列に多様

及び 8 からなる II 群，血清型 3 ， 6 ， 7 及び 8 からなる性が認められることを利用し，apxI，apxII 及び apxIII

III 群，血清型 4 からなる IV 群，血清型 5 及び10からな

38）と apxIV の PCR の両方の結る V 群に群別できる（表10）25，70，158）．したがって，omlA

果を組み合わせて識別能を高めた PCR 血清型（群）別の遺伝子型別用の PCR-RFLP（表10）を実施すれば，日171）が開発されている（表 9 ） ．

本で流行している主要な血清型（血清型 1 ， 2 及び 5 ）5.1.4．外 膜 リ ポ 蛋 白 質 OmlA 遺 伝 子 型 別 用 PCR 及 びのいずれであるか，おおよその見当がつく158）．後に，PCR-Restriction Fragment Polymorphism（RFLP）

Gram らは，識別能を高めるために文献39の apx PCR を

OmlA はすべての App が発現する種特異的な抗原であ改良した PCR と omlA を利用して開発したマルチプレッり70），PCR による種特異的な同定・検出法が開発されて

クス PCR の 2 つの試験の結果を元に App を11のグルーのマルチプレックス PCR

表 9 ．マルチプレックス PCR による App の血清型推定法（Rajyamajhi ら171）の apx 毒素遺伝子マルチプレックス PCR）

ａ

apxI，apxII，apxIII 及び apxIV PCR profile 171）

グループ

莢膜血清型

apxIB

apxIA

apxII

apxIII

apxIV

I

1

＋

＋

＋

−

2400ａ

II

2，8，15

＋

−

＋

＋

2800ａ

III

3

−

−

＋

＋

2400

IV

4

＋

−

＋

＋

1600ａ

＋

＋

＋

−

2800

175）

V

5a，5b，16

VI

6

＋

−

＋

＋

2000ａ

VII

7

＋

−

＋

−

2800

VIII

9，11

＋

−

＋

＋

1600

IX

10

＋

＋

−

−

2800

X

12，13

＋

＋

−

−

2400

XI

14

＋

＋

−

−

2400

PCR 産物のサイズ（bp）

表10．PCR-RFLP による App の血清型推定法（Osaki ら158）の omlA 遺伝子を利用した omlA-PCR）

グループ
I

莢膜血清型
1 ， 9 ，11，12

HinfI
520，450VspI
ａ590，290，75，15ａａ680，290ａII2，8

460，450，60

III

3，6，7，8

440，405，125ａ

520，450ａａ

550，450ａIV4

470，405，125V

5a，5b，10

330，290，170，120，45，15ａ

410，405，155ａ?

13，14，15，16 175）

NT

NT

PCR 産物のサイズ（bp）
NT，未実施のため不明．

aomlA-RFLP 158）

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

47

表11．マルチプレックス PCR による App の血清型推定法（Gram ら56）の apx 毒素及び omlA 遺伝子を利用したマルチプレックス PCR）
apx/omlA PCR profile56

グループ

莢膜血清型 aapxIBD

apxIIIBD

apxICA

apxIICA

apxIIICA

omlA

I

1，9，11

＋

−

＋

＋

−

Iｂ

II

2，8

＋

＋

−

＋

＋

II ｂ

III

77）
，
ｃ
3，12（K12：O3）

−

＋

−

＋

＋

III ｂ

IV

4

＋

＋

−

＋

＋

IV ｂ

V

5a，5b

＋

−

＋

＋

−

Vｂ

VI

6,（8），15

＋

＋

−

＋

＋

III

VII

7,（12），13

＋

−

−

＋

−

III

VIII

10

＋

−

＋

−

−

V

IX

12

＋

−

−

＋

−

I

X

（12）

＋

−

−

＋

−

II

XI

14

＋

−

＋

−

−

I

?

13（K13：O10）162），ｃ

＋

−

＋

−

−

NT

＋

−

＋

＋

−

NT

?

16

175）

ａ

括弧無しは血清型参考株，括弧は野外分離株を意味する．
ｂ omlA 遺伝子型．
ｃ 非典型的な K：O 血清型．
NT，未実施のため不明．
？，omlA の型別が実施されていないため，そのグループに属するか不明．

プに群別する方法を開発した56）（表11）．その結果，血用して血清型を推定した研究報告は初報以外にはなく，

清型 8 及び12野外分離株は，それぞれ III 群及び II/III 群

本法の評価はまだ定まっていない．

に属するバリアント株が確認されているが（血清型 8 及

5.1.6．DNA マイクロアレイ法について

び12参考株はそれぞれ II 群及び I 群）
，その他の血清型

App の型別及び同定に利用できる DNA マイクロアレの野外分離株は，血清型参考株と同じ omlA 遺伝子群にイ法が開発されている201）．DNA マイクロアレイ法と56）属していた （表11）．筆者も遺伝学的及び血清学的には，血清型特異的 DNA 及び App 種特異的 DNA 等存在

従来の典型的な株とは異なる非典型的な野外分離株に遭の有無を調べたい DNA を合成し，ガラス板上にスポッ

遇した時には，莢膜多糖の合成及び輸送に関与する遺伝

トし，検査株のゲノム DNA がスポットした DNA（標的5，16，64，71，80，87，114，178，212，213）に加え，omlA遺伝子）と結合（ハイブリダイゼーション）するか検査（及び必要に応じて apx）を利用したマルチプレックス

することによって，各遺伝子の有無を調べる方法であ

子型別用 PCR
56）

PCR （表11）を traditional な抗血清を用いた血清型別る．上記の DNA マイクロアレイ法に使用される血清型法の補助法としてよく実施している．

別用の標的遺伝子には，血清型用 PCR の標的遺伝子に5.1.5．Arbitrarily primed（AP）（任意プライム）-PCR にも使用されている K 抗原合成遺伝子，omlA 及び apx 遺ついてAP-PCRによるAppの血清型別法が開発されている63）．

伝子，App 種特異的遺伝子には，apxIV，dsbE（チオー
ル：ジスルフィド交換タンパク遺伝子）及び cpx（莢膜AP-PCR で使用するプライマーは，目的の細菌が保有す多糖の輸送に関与する遺伝子）遺伝子が使用されておりる特定の遺伝子を元に設計しておらず，配列は任意でよ（合計15種類の DNA がスポット），App の同定及び型別

く，文献63ではプラスミドにクローニングした遺伝子のを同時に行えるよう設計されている．このように DNA

塩基配列決定時によく使用される M13，T7及び T3プラ

マイクロアレイ法は，複数の遺伝子の有無を一度に確認

イマーを利用している．通常の PCR では 2 種の特異的できるので，個々の遺伝子を標的とした PCR よりも迅

プライマーで目的の DNA 断片 1 本のみが特異的に増幅速・簡便な方法であるが，DNA マイクロアレイ法普及されるが，AP-PCR 法では任意のプライマーによって複のためには解析装置の普及が必要である．

数の DNA 断片が増幅される．そして，増幅した DNA
断片の数及びサイズの違いで菌株を型別する．本法を利家畜衛生学雑誌

48

5.2．その他の遺伝子型別法について
以下に紹介する方法は，本来は菌株の識別及び系統解第42巻第 2 号（2016）
PFGE の操作は煩雑であり，解析に時間を要する．
5.2.2．Multilocus sequence typing（MLST）について

析のために開発され，多数の菌種で利用されている遺伝

MLST は複数の遺伝子（通常 7 種類以上）のそれぞれ子型別法である．血清型は系統の一種であるため，系統の塩基配列を決定し，それらをもとに菌の型別を行なう

解析用に開発されたこれらの方法は，血清型別法をある手法であり，種々の病原細菌の系統解析及び疫学解析に程度は推測可能であるが，これらの方法は，あくまで利用されている．App においては，frdB，fucK，glnA，

App のゲノムの類似性及び遺伝学的多様性の解析に使

gph，pgk，ureC 及 び pgi の 7 種 の housekeeping 遺 伝 子

用された方法である．

（細菌が生存していく上で必須な遺伝子）の塩基配列に5.2.1．パ ル ス フ ィ ー ル ド 電 気 泳 動 Pulsed-Field Gel

基づき，中国，デンマーク，スイス，アイルランド及びElectrophoresis（PFGE）

イギリスで分離された株（n=337，血清型 2 ， 5 ， 6 ，PFGE は，細菌のゲノム DNA を制限酵素処理して，

7 及び 8 ）を MLST 解析した報告が一例のみある27，90）．

切断された断片の長さの違いを解析する手法であり，疫その結果，同一の血清型株は，概ね同一あるいは非常に学的解析を目的とした遺伝子型別法の gold standard で

近 縁 な Sequence type（ST） に 属 す る が， 同 じ ST 内

ある．App 血清型 1 〜12の PFGE 型を比較すると，血清に，複数の血清型が存在する例もあり，MLST による血型的交差の認められる血清型1/9/11間の PFGE 型は非常

清型別の信頼度は100％ではない．MLST は，系統解析に似ており，PFGE でこれらの血清型間の識別はできな

及び疫学解析の gold standrad である PFGE よりも，よい24）．一方，これらの血清型以外の血清型では，それぞり簡便迅速に解析を実施でき，再現性も高いため，有望

れの血清型に特有な PFGE を示し，他の血清型との識別な App の遺伝子型別法であると考えられる．しかし，が可能である24）．血清学的交差が頻繁に認められる血清

App の MLST 用のプライマー配列情報等が文献27及び型3/6/8間及び4/7間においても，PFGE によって明瞭に

90には記載されておらず，日本で分離された野外分離株

血清型3/6/8間または4/7間を識別できると報告されてい等での追試ができないため，MLST の評価を行なうこと

24）ができない．

その他に，異なる国及び同一国内で分離された株の5.2.3．Amplified fragment length polymorphism（AFLP）

る ．
PFGE 解析を行い，同一国だけでなく異なる国で分離さについてれた同一血清型の株でもある程度 PFGE 型に単一クロー

AFLP と は， 制 限 酵 素 を 用 い て 断 片 化 し た ゲ ノ ム

ン性が認められる事を示した報告もいくつかある22，42）．

DNA を選択的に PCR 増幅する事により，制限酵素認識

日 本 で 分 離 さ れ た App の PFGE 型 を 解 析 し た 報 告部位および PCR 増幅部位での多型を調べる再現性の高は，少なくとも 3 つある．一つは，我が国で分離されたい解析手法である．App で AFLP と上述の PFGE の識別

血清型 2 の81％，血清型 5 の79％が，それぞれほぼ同一能を比較した結果，AFLP の方が PFGE よりも識別能がの PFGE 型であり，日本で分離された血清型 2 及び 5 の高かったと報告されている100）．また AFLP によって，ほとんどは，それぞれ単一のクローンを起源としている

系 統 発 生 学 的 に App と 非 常 に 近 縁 な A. lignieresii と可能性を示した報告である139）．二つ目は，スライド凝App を明確に識別可能であった．さらに血清型10，K1：

集試験では血清型 2 と型別されるが，ゲル内沈降反応で

O7及び K2：O7を除き，同一の血清型の株は，同一あるは型別不能となる非典型的な血清型 2 の国内分離株と，いは非常に近縁な clade（系統群）に属し，AFLP によっ

典型的な血清型 2 の国内分離株の PFGE 型は同一であって血清型の推定がある程度可能であると思われる．しか138）．三つ目は，血清型別不能

し，本法を利用して血清型を推定した研究報告の続報は

株 の PFGE 型 は， 同 一 農 場 で 分 離 さ れ た 血 清 型15のない．さらに，本手法を実施するためには高額な DNA

PFGE 型とほぼ同一である事と，型別不能株の莢膜多糖

シークエンサーを必要とするため，限られた研究室等で合成遺伝子の解析等の複数の成績から，型別不能株は血しか実施できない．

た事を示した報告である

清型15が莢膜を失ったために型別不能となった可能性を示した報告である78）．

6 ．各血清型のゲノム塩基配列解析について

以上のことから PFGE は系統解析だけでなく，App 血

近年急速に普及し始めている次世代シークエンサーを清型の推測にもある程度利用できると考えられる．しか用いて，App 生物型 1 血清型 3 ，5b， 7 及び 8 の完全ゲ

し，どのような PFGE 型を示せばどの血清型と推測でき

ノム塩基配列がすでに決定されている14，36，204）．一方，生

るか，PFGE の泳動パターンがどの程度違えば異なる血物型 1 血清型 1 ， 2 ， 4 ， 6 〜12及び生物型 2 血清型13の清型であるといえるかの明確な基準がない．さらにドラフトゲノム塩基配列も決定されている113，160，203，211）．

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型について

49

生物型 1 血清型15及び16，ならびに生物型 2 血清型14の

a blocking enzyme-linked immunosorbent assay.

ゲノム塩基配列は未決定である．

Veterinary Microbiolgy．89, 61-67.

ゲノム塩基配列を利用した解析から，様々な新知見が5 ）Angen, Ø., Ahrens, P., Jessing S. G. (2008)  

得られる．莢膜多糖及び LPS の O 抗原の合成に関与す

Development of a multiplex PCR test forる遺伝子群を確認する事によって，K：O 遺伝子型別がidentification of Actinobacillus pleuropneumoniae

可能である．さらに，莢膜及び O 抗原の合成に関与する

serovars 1, 7, and 12.  Veterinary Microbiolgy. 132,

新規の遺伝子群が検出された場合には，その株が新しい血清型である可能性が示唆される．さらに，病原性が強312-318.
6 ）Asawa, T., Kobayashi, H., Mitani, K. et al. (1995)  

いと言われている血清型 1 ， 5 ， 9 及び11には存在する

Serotypes and antimicrobial susceptibility ofが，病原性が弱いと言われている血清型 3 には無い54個

Actinobacillus pleuropneumoniae isolated fromの遺伝子が確認されており，これらの遺伝子がコードす

piglets with pleuropneumonia.   Journal ofるタンパクが病原性に関与する可能性が示唆されてい

Veterinary Medical Science. 57, 757-759.

る203）．またゲノム塩基配列によって，各血清型の株間7 ）Assavacheep, P., Persson, M., Luengyosluechakul, S.

の系統発生学的関係も調べることができ，病原性が強い

et al. (2003) Actinobacillus pleuropneumoniae inと言われている血清型 1 ， 9 及び11は他の血清型とは異Thai pig herds. Prevalence of serum antibodies

なる単一の Clade（系統群）に属し，これらの血清型はand relation to performance. Journal of Veterinary

ごく最近に共通祖先から 3 つの異なる血清型に進化した

Medicine. B, Infectious Diseases and Veterinary

可能性が明らかにされている203）．同様に血清型 7 及びPublic Health. 50, 390-395.

13もこれら 2 つの血清型のみで構成される単一の Clade8 ）Bandara, A. B., Lawrence, M. L., Veit, H. P. et al.

に属しており203），血清型 7 及び13の近縁性が示されて(2003) Association of Actinobacillus

いる．

pleuropneumoniae capsular polysaccharide with

さらに全ゲノムの遺伝情報を用いて全ての App 血清型に共通な感染防御抗原が発見され，それらの抗原を用いた全ての血清型に有効なワクチンが開発されることを

virulence in pigs. Infection and Immunity. 71, 33203328.
9 ）Beck, M., van den Bosch, J. F., Jongenelen, I. M. etal. (1994) RTX toxin genotypes and phenotypes in

大いに期待したい．

Actinobacillus pleuropneumoniae field strains.

7 ．謝辞

Journal of Clinical Microbiology. 32, 2749-2754.

本原稿を執筆するにあたり，貴重なご助言をいただい10）Beynon, L. M., Richards, J. C., Perry, M. B. (1992)

た元東京農業大学教授の山本孝史先生に深謝いたしま

Nuclear-magnetic-resonance analysis of theす．

capsular antigen of Actinobacillus

引

用

文

献

pleuropneumoniae serotype 9. Its identity with thecapsular antigen of Escherichia coli K62 (K2ab),1 ）阿 部 成 章， 立 花 智， 渡 辺 卓 俊 ら（1996） 豚

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家畜衛生学雑誌

50

第42巻第 2 号（2016）

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genotyping of Actinobacillus pleuropneumoniae181）S j ö l u n d , M . ( 2 0 1 0 ) A c t i n o b a c i l l u s

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identificación simultánea y discriminación delgenes. Mollecular and Cellular Probes. 17, 301-305.

Actinobacillus pleuropneumoniae serotipos 1, 5 y183）Shimizu, A., Shoji, Y., Umemura, K. et al. (2015)

7 por técnicas de PCR múltiples basadas en genes

Antimicrobial susceptibility of Actinobacillus

apxIVA y cps. Tesis magistral, Facultad depleuropmeumoniae isolated between 2001 andCiencias, Pontificia Universidad Javierana, Bogotá,2010 in Japan. Proceeding of International

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174）Sakpuaram, T., Fukuyasu, T., Ashida, K. (1989)

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Diseases. 4, 243.

Isolation of Actinobacittus (Haemophilus)

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pleuropneumoniae from pneumonic lungs of

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Identification of a proposed new serovar of

Antimicrobial susceptibility of Actinobacillus

Actinobacillus pleuropneumoniae: Serovar 16.

(Haemophilus) pleuropneumoniae isolated fromActa Veterinaria Hungarica. 63, 444-50.
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Science. 50, 1264-1267.

Characterization of apxIVA, a new RTX187）鈴木俊成（2016）Actinobacillus pleuropneumoniae

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12型による豚胸膜肺炎発生事例及び県内他分離株

伊藤：豚胸膜肺炎菌の生物型，血清型及び遺伝子型についてとの薬剤感受性の比較．平成27年度日本獣医師会
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http://www.akita-yoitoko.com/speech/pdf/1-6216.pdf

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194）Tumamao, J. Q., Bowles, R. E., van den Bosch, H.,

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195）Turni, C., Singh, R., Blackall, P. J. (2014) A.

死亡例からの Haemophilus pleuropneumoniae 血清
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208）Yoo, A. N., Cha, S. B. Shin, M. K. et al. Serotypes

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and antimicrobial resistance patterns of the家畜衛生学雑誌

60

第42巻第 2 号（2016）

recent Korean Actinobacillus pleuropneumoniae

immunologically cross-reactive serovar 3, 6, and 8

isolates. Veterinary Record. 174, 223. doi: 10.1136/

Actinobacillus pleuropneumoniae strains. Journal

vr.101863.

of Clinical Microbiology. 46, 800-803.

209）Yoshimura, H., Takagi, M., Ishimaru, M. et al.

要(2002)   Comparative in vitro activity of 16

旨

antimicrobial agents against Actinobacillus

Actinobacillus pleuropneumoniae はパスツレラ科に属

pleuropneumoniae. Vetetrinary Research

するグラム陰性菌で，伝染性の強い呼吸器系疾病である

Communications. 26, 11-19.

豚胸膜肺炎の起因菌であり，世界中の養豚産業に多大な

210）Z i e l i n s k i , G . C . ( 2 0 0 6 ) A c t i n o b a c i l l u s

被害をもたらしている．現在までに，本菌には 2 つの生

pleuropneumoniae: Situacion en Argentina.

物型と16の血清型の存在が確認されている．異なる血清

Congreso de Producción Porcina del Mercosur.

型間で病原性の際に差が認められる事と豚胸膜肺炎用ワ225-231.［In Spanish without Englsih abstract］

クチンは血清型特異的防御を示す事から，分離された

211）Zhan, B., Angen, Ø., Hedegaard, J. et al. (2010)

A. pleuropneumoniae の血清型の情報は重要であると考Draft genome sequences of Actinobacillus

えられる．近年遺伝子型別を利用して血清型を推定する

pleuropneumoniae serotypes 2 and 6. Journal of方法が開発され，臨床検査室での利用が可能となってきBacteriology. 192, 5486-5487.

ている．本稿では，A. pleuropneumoniae の生物型，血212）Zhou, L., Jones, S.C.P., Angen, Ø. et al. (2008)  PCRspecific for Actinobacillus pleuropneumoniae

清型及び遺伝子型に関する最新の知見について概説する．

serotype 3. Veterinary Record. 162, 648-652.
213）Zhou, L., Jones, S. C., Angen, Ø. et al. (2008)
Multiplex PCR that can distinguish between

キーワード：豚胸膜肺炎，Actinobacillus pleuropneumoniae，
生物型，血清型，遺伝子型

日本家畜衛生学会
第84回大会

講演要旨集

主 催：日本家畜衛生学会

日本家畜衛生学会第84回大会と発表会11：00〜16：45（総 会13：00〜13：30）
ところ：東京農工大学農学部（第一講義棟）

一般講演
座長

き：平成28年 7 月 9 日（土）11：00〜11：30,

13：30〜15：00

押田敏雄（前麻布大）
11：00〜11：15

1 ．焼成カルシウムと次亜塩素酸ナトリウムの殺菌作用○豊福千遙・山田匡之・古村みゆき・鈴木真結子・Hakim Hakimullah・Sangsriratanakul Natthanan・Alam Md. Shahin・Shoham Dany・竹原一明
座長

白井淳資（農工大）11：15〜11：30

2 ．Study of virus and bacteria inactivation using various sources of fresh
charcoal ash in Thailand○ Kittima Lorcharoenrungroj・Sakchai Ruenphet・Kazuaki Takehara休憩

11：30〜13：00

総会

13：00〜13：30

座長

白井淳資（農工大）13：30〜13：45

3 ．Q uantitative risk assessment of the introduction of rabies into Japanthrough the importation of dogs and cats worldwide
Katsuaki Sugiura・○ Nigel C.L. Kwan・Y. Hosoi・Akio Yamada・Emma Snary座長

宮﨑茂（安全研）

13：45〜14：00
4 ．日本の家畜の抗菌剤使用量の欧州との比較○松田真理・Nigel Kwan・杉浦勝明
14：00〜14：15
5 ．犬の膀胱炎および抗生剤使用に関する調査○井上

舞・杉浦勝明座長

伊藤博哉（農研機構・動物衛生研究部門）
14：15〜14：30

6 ．MALDI Biotyper による動物由来細菌株の遺伝子型・血清型鑑別○村田座長

亮・井上正亮・岡良彦・菊池直哉

山本孝史（前東京農大）
14：30〜14：45

7 ．輸入初生ひなから分離された鶏大腸菌症由来 E.coli の性状調査○下平久美子・小菅千恵子・長谷川未央・楠本正博
14：45〜15：00
8 ．馬 の敗血症の原因菌 Actinobacillus genomospecies 2の日本における初分離
及び16S rDNA と housekeeping gene の遺伝子解析による同定○伊藤博哉・村上美雪・下西儀政・帆保誠二・丹羽秀和
休憩

15：00〜15：15

家畜衛生学雑誌論文賞受賞講演
座長

15：15〜15：45

大石弘司（動薬検）「下痢を呈した豚群におけるデルタコロナウイルス遺伝子の検出と宮城県内浸潤調査」の平成27年度家畜衛生学雑誌論文賞受賞にあたって
小寺
教育講演
座長

文

先生

15：45〜16：45

坂田亮一（麻布大学）

ジビエに関する食肉衛生
小谷浩治

先生

─現場からの提言─

家畜衛生学雑誌

641

第42巻第 2 号（2016）

焼成カルシウムと次亜塩素酸ナトリウムの殺菌作用○豊福千遥 1 ）・山田匡之 1 ）・古村みゆき 1 ）・鈴木真結子 1 ）・Hakim Hakimullah2）・
Sangsriratanakul Natthanan2）・Alam Md. Shahin2）・Shoham Dany1）・竹原一明 1 ， 2 ）（ 1 ）農工大獣医衛生・ 2 ）岐阜大院連獣）
Key word：bacteria, Ca（OH）2 , cross contamination, disinfection, NaOCl【目的】
近年，食品の安全性に対して関心が高まっており，今後 2 年以内をめどに食品事業者に対して HACCP（Hazard
Analysis and Critical Control Point）導入を義務化する方針が明らかにされた．また，国際的にも EU や米国をはじめ，HACCP を衛生基準として求める傾向があり，輸出の観点からも HACCP が重要である．衛生管理手法である
HACCP を適切に機能させるためにはバイオセキュリティの強化が必須である．現在，食鳥処理場等で一般的に用いられている次亜塩素酸ナトリウム（NaOCl）は，有機物存在下で殺菌効果が著しく低下する．殺菌が不十分な場合，
交差汚染（図 1 ）の発生が増え，結果としてヒトの食中毒の発生を増大させる．そこで今回，食品添加物級の焼成カ
ルシウム資材（主成分：Ca（OH）2）について，NaOCl を補強する目的で，大腸菌あるいは Salmonella Infantis に対する有機物存在下での殺菌効果を評価するとともに，食鳥処理場のチラー槽を想定した交差汚染抑制能について検討した．さらに，活性汚泥法による排水処理を可能にするため，排水時の曝気処理についても検討した．

【材料と方法】①有機物存在下・非存在下での殺菌効果
各被験液の殺菌能を評価する場合，各濃度の有機物（仔牛血清）を含む200ppm NaOCl，0.17％Ca（OH）
2 又はこれら混合液を大腸菌または S. Infantis の菌液と感作させた．一定時間後に1M Tris-HCl（pH 7.2）及び仔牛血清を加え，pH を下げることあるいは消毒効果を減退させることで反応を止めた．10倍段階希釈した反応液を DHL 寒天培地に接種し，菌数を測定した．
②食鳥処理場のチラー槽を想定した交差汚染抑制強化試験
4 ℃にて有機物として仔牛血清を添加した200ppm NaOCl，0.17％ Ca（OH）
2 ，混合液，RO 水（陽性対照）を作製した．鶏肉にリファンピシン耐性大腸菌または S. Infantis の菌液を接種し，一定時間静置することで汚染鶏肉を作製した．汚染・非汚染鶏肉を同時に加え， 5 分間攪拌し感作させた．非汚染鶏肉を取り出し RO 水で洗浄，PBS で乳剤を作製した．10倍段階希釈した乳剤液を DHL 寒天培地に接種し，菌数を測定した．
③曝気による排水処理
100ml の0.17％ Ca（OH）
2 に対し，コンパクトエアーステーション（排気量：9.2L/min）を用いて一定量の空気を吹き込み，pH が8.5以下になるまでの時間を計測した．
交差汚染
汚染度の低いものが汚染度の高いものと接触することでより高く汚染されてしまう現象である．チラー槽内での交差汚染抑制のためには，汚染鶏肉から剥がれ落ちた病原菌が非汚染鶏肉に到達するまでに十分殺菌される必要がある．そのため消毒剤には有機物存在下であっても高く・迅速な殺菌効果が求められる．

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

65【結果及び考察】①有機物存在下・非存在下での殺菌効果
200ppm NaOCl は有機物非存在下では，高く・迅速な殺菌効果を示した．0.17％ Ca（OH）
2 は有機物存在下でも殺菌効果が持続した．200ppm NaOCl 及び0.17％ Ca（OH）
2 の混合液は有機物存在下でも高く・迅速な殺菌効果を示し，相乗効果と考えられた．
②食鳥処理場をのチラー槽を想定した交差汚染抑制強化試験
混合液で処理した際，大腸菌と S. Infantis ともに交差汚染が抑制された．
③曝気による排水処理pH8.5以下になるまでに 2 時間半を要した．
以上のことから，Ca（OH）2 が NaOCl の殺菌効果を補強することが示された．

図 1 ．交差汚染模式図

家畜衛生学雑誌

66

2

第42巻第 2 号（2016）

Study of virus and bacteria inactivation
using various sources of fresh charcoal ash in Thailand○ Kittima Lorcharoenrungroj 1)・Sakchai Ruenphet 2)・Kazuaki Takehara 3)( 1 ) The 2nd year master student, Mahanakorn University of Technology・2)

Immunology and Virology Department, Mahanakorn University of Technology・

3)

Laboratory of Animal Health, Tokyo University of Agriculture and Technology)
Key word：Bactericidal, Fresh charcoal ash, Virucidal[Background and Objective]
Fresh charcoal ash (FCA) is the residue powder left after the combustion of wood. In the present study, FCAs
derived from various sources such as household, Thai Bar-B-Q and grilled chicken were evaluated for theirvirucidal and bactericidal activities against Newcastle disease virus (NDV), avian influenza virus (AIV), Escherichia
coli (EC) and Salmonella Infantis (SI).

[Materials and Methods]
FCAs were tested in powder or in solution with or without 5 ％ fetal bovine serum (FBS) as organic material.
Microorganisms mixed with FCA were incubated at room temperature for indicated periods, then the remained
viable microorganisms were titrated in each susceptible cell or medium. Inactivation of microorganisms wasconsidered effective when reduction factor (RF) was more than 10 .
3

[Results and Discussion]
The results revealed that FCAs derived from household and Thai Bar-B-Q could inactivate NDV and AIV withor without organic material in powder form, while FCA from grilled chicken could not inactivate them. These
results suggested that FCA from grilled chicken might be contaminated with a lot of organic material during
chicken grilling. In liquid form, 10％ FCA solution from household could inactivate NDV, AIV, EC and SI within 3min, 5 min, 5 sec and 5 sec, respectively. FCA at 5％ solution required longer contact time to inactivate viruses, as
5 min for NDV and 30 min for AIV, while it could inactivate both bacteria within 5 sec. The present study
indicated that FCA might potentially be used as an alternative disinfectant for biosecurity applying especially on
and around poultry farms not only commercial chicken farm but also backyard chicken in countryside of Thailand.

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

67

Table 1. Newcastle disease virus inactivation using various sources of fresh charcoal ash in powder reaction withand without organic material during a 3-minute incubation period (mean ± SD)

FBS a)

SourceGrilled chicken+++

Thai Bar-B-Q
Householda)Treated5.50±0.87
6.67±0.80
4.50±0.43
4.08±1.38
2.50±0.00
2.50±0.00

Log10TCID50/ml
Control
8.00±0.43
8.50±0.43
8.00±0.43
8.50±0.43
8.00±0.43
8.50±0.43

RF b)
2.50±1.15
1.83±0.76
3.50±0.00
4.42±1.18
5.67±0.14
6.00±0.43

Fetal bovine serum; added (+), not added (–). b) Reduction factor (RF) = log10 (control) – log10 (treated)

Table 2. The virucidal and bactericidal efficacy against Newcastle disease virus, Avian influenza virus, Salmonella
Infantis and Escherichia coli using 10％ and 5％ fresh charcoal ash solution.

tpc c)
0 sec d)5 sec e)30 sec
1 min
3 min
5 min
10 mina)

Newcastle disease virus a)
10%
5%

8.25
8.25
9.00
8.00
7.50
4.50
2.50
1.75

NT f)
NT
NT
NT
NT
NT
NT
NT

Avian influenza virus a)
10%
5%

6.75
7.50
NT
NT
3.00
<2.50
NT
NT

6.75
7.00
NT
NT
NT
5.75
5.75
5.50

Salmonella Infantis b)10%
5%

2.1x1073.4x107<4x102<4x102<4x102NT
NT
NT

1.2x1073.4x107<4x102<4x102<4x102NT
NT
NT

Escherichia coli b)
10%5%2.2x106
1.2x107<4x102<4x102<4x102NT
NT
NT

2.2x106
4.0x104<4x102<4x102<4x102NT
NT
NT

the virus titer converted into an index in log10TCID50/ml. b) the bacteria titer in CFU/ml. c) the titer of the positive
control. d)Fresh charcoal ash solution was neutralized with 1M Tris-HCl before add virus or bacteria. e) the titer of therecovered virus or bacteria from the treated tube at the end of incubation time. f) NT: Not tested.

家畜衛生学雑誌

68

3

第42巻第 2 号（2016）

Quantitative risk assessment of the introduction of rabies
into Japan through the importation of dogs and cats worldwide
Katsuaki Sugiura 1)・○ Nigel C.L. Kwan 1)・Y. Hosoi 2)・Akio Yamada 1)・Emma Snary 3)( 1 ) Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo・2)Agricultural Production Bureau, Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries・3)

Center for Epidemiology & Risk Analysis, Veterinary Laboratories Agency)
Key word：rabies, importation, risk assessment, pet［Purpose］
Japan has been free from rabies since 1958. Under the Rabies Prevention Law enforced since 1950, Japan has astrict regime for dogs and cats imported from countries and territories in the world. An old regime consisting ofrabies vaccination, a waiting period of 30 to 180 or 30 to 365 days (depending on the type of vaccine used in the
country of origin) and a 14-day quarantine upon arrival in Japan was in place until October 2004. In response to
the sharp increase in young puppies imported from the Southeast Asia since the early 2000s, the government ofJapan adopted a new import regime from November 2004 consisting of identification of the animal with microchip,
two-time rabies vaccination (not necessary for dogs and cats from rabies-free regions), neutralizing antibody
titration test and a waiting period of 180 days.
Importation of pets into Japan is mainly through the Animal Quarantine Service (AQS) and there are up to
13,903 dogs and cats imported each year. Apart from the importation through AQS, there are also a significant
number of dogs and cats (up to 1712) imported into Japan each year through the United States Force Japan(USFJ). Based on the U.S.–Japan Status of Forces Agreement, animals imported by the USFJ have to follow theimport regime equivalent to that of AQS.
Quantitative risk assessment (QRA) is the main tool in import risk analysis of rabies and has widely been used
to provide scientific evidence for policy decision at both a national and international level. This study aims toquantitatively assess the risk of rabies introduction into Japan through the importation of dogs and cats from theworld, with particular emphasis on evaluating the effectiveness of the current import regime.

［Materials and Methods］
A stochastic scenario model was developed based on Goddard et al. (2012) with specific re-parameterization toaccommodate the situation in Japan. In this model, a total of 14 risk pathways through which rabies may enter
Japan were identified (Fig. 1). Pathway 1 to 12 represent the risk of rabies entry associated with the standard
importation of dogs and cats from the world into Japan through the AQS, while Pathway 13 to 14 represent a
special case where the risk of rabies entry is associated with the importation of dogs and cats through the USFJ.
Monte Carlo simulation of the model was run using software @RISK.

［Results and Discussion］
The probability that one rabies infected dog or cat is imported into Japan is estimated to be 2.14×10
prediction interval (PI): 1.55×10

−11

−9

(90％

–7.84×10 ); the annual probability that at least one infected dog or cat is−9

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集
imported into Japan is 2.69×10−5(90％ PI: 1.16×10−5–5.41×10−569); the number of years between rabies entry(Yworldwide) is therefore estimated to be 46,280 (90％ PI: 18,460–86,261).
In terms of scenario analysis, non-compliance such as smuggling would severely increase the risk of rabies
introduction into Japan with Yworldwide decreasing to 462 (90％ PI: 427–497) with a 90％ compliance level. Increases
in import level and rabies prevalence in exporting countries would also increase the risk of rabies introduction
accordingly. When compulsory serological testing is removed from the current import regime, the risk of rabies
introduction would increase considerably with Yworldwide becoming 1939 (90％ PI: 809–3943). Finally, the risk ofrabies introduction would increase accordingly as the waiting period is shortened in a stepwise manner.
Overall, the risk of rabies introduction into Japan through the importation of dogs and cats worldwide is very
low. The current import regime will be effective in preventing the introduction of rabies into Japan, even if theimport level and rabies prevalence in the world increase in the future. In terms of policy amendment, the waiting
period may be reduced (to 90–150 days) but the serological testing should not be removed. Lastly, non-compliancecould greatly undermine the current rabies prevention system in Japan and so border control should be alert tosmuggling activities.

[Reference]
Goddard et al., 2012. A quantitative release assessment for the noncommercial movement of companion animals:
risk of rabies reintroduction to the United Kingdom. Risk Analysis 32, 1769-1783.

Fig. 1.  Scenario trees showing the 14 risk pathways of rabies entry into Japan家畜衛生学雑誌

70

4

第42巻第 2 号（2016）

日本の家畜の抗菌剤使用量の欧州との比較○松田真理・Nigel Kwan・杉浦勝明（東京大学大学院）
Key word：antimicrobial use, food-producing animals, population correction unit

【はじめに】
薬剤耐性菌の出現と広がりは現在世界的な問題であり，家畜においてもその増加は家畜自身の治療を困難にするのみならず公衆衛生上の問題と考えられている．耐性菌の増加を抑えるためには抗菌剤の責任ある使用が効果的であり，そのためにはどの家畜にどの抗菌薬がどれだけ使用されたかの把握が重要である．また耐性菌は 1 国のみの問題
ではないので，国間で比較可能な方法で評価する必要があるが，国によって家畜の種類も数も異なり，また得られるデータには限りがある．今回我々は公表されたデータを基に日本の家畜用抗菌剤の使用量について欧州で用いられている方法で解析し，欧州各国との比較を行った．

【材料と方法】〈材料〉 日本のデータは農林水産省の HP で公開されている「各種抗生物質・合成抗菌性物質・駆虫剤・抗原虫剤の販売高と販売量」，「畜産統計調査」および「畜産物統計調査」から得た．欧州のデータは European Surveillance ofVeterinary Antimicrobial Consumption（ESVAC）の2013年版公開データより得た．
〈方法〉 抗菌剤販売量は薬剤ごとに原末換算量（kg）に対象動物別推定割合（％）を乗じて肉用牛，乳用牛，豚，
肉用鶏に分けて計算した．薬剤は WHO の推奨する ATCvet 分類に基づき分類し，集計した．抗菌剤で治療されたと考えられる家畜のバイオマス量は ESVAC の提唱する Population Correction Unit（PCU）に従って計算した（表 1 ）．
PCU は抗菌剤使用量を家畜バイオマス量で正規化するために欧州で用いられている数値で，カテゴリーごとに治療されたと考えられる動物の体重が設定されており，その体重に頭数（と畜頭数，飼養頭数または処理羽数）を乗じて
算出する．

【結果】
PCU を用いて算出した2013年の日本の家畜のバイオマス量は約300万トンであり，この10年ほど微減しているが，大きな変化はなかった（データ示さず）．このバイオマス量を欧州各国と比較すると 7 番目に多く，オランダと同程度の規模であった（図 1 ）．また，各国で飼養されている家畜のバイオマス量あたりの抗菌剤販売量を比較する（図2 ）と，日本は222.4 mg/kg PCU となり，欧州と日本を合わせた27か国中 5 番目であり，比較的使用量が多いことがわかった．薬剤としてはテトラサイクリン系が最も多く，次いでサルファ剤，ペニシリン系，マクロライド系で
あった．

【考察】
本研究では欧州のバイオマス評価法 PCU を用いて日本の抗菌剤販売量を解析し，比較した．今回のデータは抗菌薬販売量であって実際の使用量ではなく，また PCU による正規化は各国の家畜の量を補正して比較できる点で優れているが，薬剤の効力などについては反映されない．薬剤の効力を考慮に入れた方法として人の Defined Daily Dose
（医薬品の主な適応症に対する成人の仮想平均維持日量）の動物版を用いる動きも始まっており，今後は，より家畜への抗菌薬の暴露を反映する評価法とともに，抗菌薬の代替となる方策についても併せて検討していきたいと考えている．

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

71

表 1 ．ESVAC 家畜補正バイオマス重量（PCU）の計算に用いられる畜種ごとの体重
家畜の分類

と畜乳用牛

と畜去勢牛および雄牛

乳用牛

豚

ブロイラー

体重（kg）

425

425

425

65

1

（Sales of veterinary antimicrobial agents in 26 EU/EEA countries in 2013 p.131 より）

図 1 ．2013年度の PCU で評価した日本と EU 各国のバイオマス量の比較

図 2 ．2013年度のバイオマス量（PCU）あたりの抗菌剤販売量の日本と EU 各国の比較

家畜衛生学雑誌

72

5

第42巻第 2 号（2016）

犬の膀胱炎および抗菌薬使用に関する調査○井上

舞 1 ， 2 ）・杉浦勝明 2 ）（ 1 ）アニコム HD・ 2 ）東京大学農学国際専攻

国際動物資源科学研究室）

Key word：dog, cystitis, antibiotics【背景】
犬の膀胱炎は発生頻度が高く，臨床現場でよく遭遇する疾患である．膀胱炎の主な原因である尿路感染症（Urinary Tract Infection: UTIs）で最も多いのは細菌性であり，UTIs の多くを占める細菌病原体は腸管もしくは陰部や包皮などの周辺皮膚からの逆流性・上向性に膀胱内に侵入する．明らかな基礎疾患が認められない単純性と基礎疾患を有する複雑性とに分類される．過去の報告ではオスよりもメスが多い（尿培養では雄の陽性29％に比べ雌は37％）と言われているが，品種や年齢等の影響などの疫学情報は十分ではない．
また，治療としては抗菌薬投与が一般的である．昨今の抗菌薬使用による耐性菌の蔓延が懸念される中，小動物臨床においても世界的なガイドラインが策定された．
本研究では，ペット保険会社のデータを用いて危険因子や予後情報などの疫学的な情報および臨床獣医師に対する抗菌薬使用に対するアンケート調査の結果を基に，犬の膀胱炎における適切な抗菌薬使用に関して考察する．

【材料と方法】
1 ）保険金支払いデータから見る日本の膀胱炎の発生頻度
対象データ：アニコム損保の支払いデータから，「膀胱炎」を請求理由としたものを抽出し，本分析に用いた．
解析対象としたデータは2008年 4 月 1 日から2014年 3 月31日までの 6 年間に保険の契約を開始もしくは更新した
2,521,887件である．
年間有病率：2013年の 1 年間に契約を開始した犬について犬全体および年齢・性別・品種別に，契約頭数を分母に，契約期間中 1 回以上膀胱炎で請求があった犬を分子として年間有病率を算出した．
保険請求分析：個体ごとの膀胱炎での請求の回数および治療期間，保険金の割合などを集計し，その構成を分析した．
2 ）臨床獣医師へのアンケート調査
アニコム損保提携病院の請求件数上位の585病院に対して調査用紙を送付し，85件の回答を得た．調査項目は抗菌薬処方の時期，第1/2選択薬と選択理由，抗菌薬の切り替え時期，感受性試験の実施時期．

【結果】
犬の泌尿器疾患の内訳をみてみると，膀胱炎は約30％を占めており，最も多くみられる疾患だということがわかる．次に，犬の膀胱炎の年間有病率は2.6％であった．また，性別の罹患率では雄が2.0％，雌が3.3％であり，雌が優位に高い値を示していた．年齢別には 0 歳時点で最も罹患率が低く0.9％であるが，加齢とともに上昇しはじめ， 4
歳時点で全年齢と同様の2.6％を示し，10歳を超えると， 5 ％以上の値を示している．
さらに，品種別に見てみると，最も罹患率が高かったのはパグの6.7％，続いてウェルシュ・コーギー・ペンブロー
グ6.2％，フレンチ・ブルドッグ5.4％，ミニチュア・シュナウザー5.3％であった．
また，膀胱炎での請求があった犬53,500頭の各個体の請求回数および初請求から最終請求までの期間を集計すると最も多かったのは初診のみの請求であり全体の約 3 割，1 週間以内の個体は約 1 割であった．残りの 6 割に関しては，

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

73

複雑性 UTIs の可能性が考えられるため，基礎疾患の評価や尿培養等が必要になる症例であると考えられる．
獣医師向け調査の結果から，抗菌薬を処方する時期について，臨床症状を把握後および尿試験紙検査のみで投与との回答が約 3 割あり，細菌性病原体の確認無く処方される症例が存在することが明らかとなった．このようなデータは適切な抗生剤使用を推進する根拠となると考えられる．

図 1 ．犬の膀胱炎の年齢別有病率

図 2 ．犬の膀胱炎に対して抗菌薬を投与する時期

家畜衛生学雑誌

74

6

第42巻第 2 号（2016）

MALDI Biotyper による動物由来細菌株の遺伝子型・血清型鑑別○村田亮・井上正亮・岡良彦・菊池直哉（酪農大獣医細菌学）
Key word：MALDI-TOF MS, genotype, serotype【背景と目的】
マトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）飛行時間型（TOF）質量分析法（MS）によって，タンパク質の質量分析技術は飛躍的に進歩した．細菌分野においても，菌体を構成する分子量 2 〜20kDa のタンパク質（主にリボソーム）を解析し，得られた波形を既知の波形ライブラリと比較することで菌種を同定する方法が活用されている．本法は従来の生物学的性状検査や rRNA 遺伝子配列の決定に比べてはるかに迅速であり，ランニングコストも非
常に低いことが特徴である．
菌種レベルよりもさらに詳細な遺伝子型・血清型の鑑別は，しばしば感染源の特定や疾病の流行拡大経路などの重要な疫学的情報につながる．しかし複数の PCR 反応や塩基配列の解析には時間がかかり，抗原−抗体反応には免疫血清の入手が必要となる．そこで本研究では，MALDI TOF-MS 技術を動物由来細菌種の遺伝子型別および血清型別に応用可能かどうか検討した．

【材料と方法】
Mannheimia haemolytica の国内分離株33株および基準株 1 株（ATCC33396 ）について MLST を実施し，各株のT

Sequence Type（ST）を決定した．さらに MALDI-TOF MS を用いてこの34株のマススペクトルを得，ST 毎にスペクトルを統合したオリジナルのライブラリを構築した．この新たに作成したライブラリは，野外分離株94株でその有用性を検討した．また，16および23SrRNA 遺伝子の塩基配列を決定し，進化系統樹を作成した．
Actinobacillus pleuropneumoniae（App）国内分離株56株について，Multiplex PCR（伊藤，2011年）による血清型鑑別を行った．これらについて MALDI-TOF MS によってマススペクトルを得，プロテオミクスベースのデンド
ログラムを作成した．また App についても rRNA 遺伝子の塩基配列を決定し，進化系統樹を作成した．
マススペクトルの解析には，MALDI Biotyper version3.1 software（Bruker Corporation）を使用した．

【結果と考察】MLST を行った国内分離 M. haemolytica 34株について，ST1が28株，ST2が 6 株であることが判明した．34株のマ
ススペクトルを用いて 2 つの遺伝子型鑑別用ライブラリ「Mannheimia ST1」，「Mannheimia ST2」作製した．このライブラリを用いて野外分離株94株に MALDI Biotyper を実施したところ，全ての菌株について MLST による ST と完全に一致した（図 1 ）．
App は Multiplex PCR によって血清型 1 は 3 株， 2 は27株， 5 は16株と鑑別された．マススペクトルによるデンド
ログラムにおいても，これらの血清型と完全に一致するクラスター形成が認められた．
rRNA 遺伝子の進化系統樹において，M. haemolytica は ST 毎に異なるクラスターを形成したことから，リボソー
ムタンパク質構造において ST 間に差異があることが示唆された（図 2 ）．さらに App においても血清型 1 ， 2 ， 5の間に特徴的な変異箇所が存在した．これらが MALDI-TOF MS によって遺伝子型・血清型鑑別が可能となった理由であると考えられる．今後，rRNA 遺伝子内にわずかにでも塩基変化を保有する菌種であれば，M. haemolytica やApp と同様に MALDI-TOF MS による種レベルよりも詳細な鑑別が可能となるかもしれない．

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

75

血清型 2*

血清型 2
血清型 5

血清型 1

図 1 ．M ALDI Biotyper による App マススペクトルから作成したデンドログラム（左）と App の rRNA 遺伝子をもとに作成した App 系統樹（右）．

図 2 ．MLST 解析の対象とした M. haemolytica 株16S rDNA の NJ 法による進化系統樹．
クラスターの分岐位置にブーツストラップ値（％）を示した．
P. multocida（Pm70）株をアウトグループとして用いた．

家畜衛生学雑誌

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7

第42巻第 2 号（2016）

輸入初生ひなから分離された鶏大腸菌症由来 E.coli の性状調査○下平久美子 1 ）・小菅千恵子 1 ）・長谷川未央 1 ）・楠本正博 2 ）（ 1 ）動物検疫所・ 2 ）農研機構・動物衛生研究部門）
Key word：imported chick, avian pathogenic Escherichia coli

【目的】
鶏大腸菌症を引き起こす原因菌は鶏病原性大腸菌と呼ばれ，腸管外に様々な病変を惹起する腸管外病原性大腸菌に分類されている．大腸菌症の発症には，宿主の健康状態や環境ストレス，他の病原体の関与など様々な要因が影響し，中でも輸入初生ひなについては輸送ストレスが誘発要因として関与する事が推察される．近年の輸入検疫中での疾病発生状況をみると，監視伝染病の摘発はないが，鶏大腸菌症の発生は毎年認め，損耗の大きな原因となっている．今回，輸入検疫時の初生ひなに鶏大腸菌症を引き起こした菌株の性状調査を目的に，O 群血清型別，病原性関連
遺伝子検索，薬剤感受性検査，パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）を行った．

【材料と方法】〈材料〉 供試菌株は2014年 8 月から2015年 3 月の輸入検疫中に，鶏大腸菌症と診断された14群311株である． 1 検体
あたり 2 株以内を供し，14群のうち 1 群（A 群）は群内での大腸菌の多様性を把握するために集中的な分離を実施した（238株）．輸出国はフランス，アメリカ，イギリス，カナダ，ニュージーランドの 5 ヶ国で，用途は肉用原種鶏用，肉用種鶏用，卵用種鶏用，卵用であった（図 1 ）．
〈方法〉 全311株について以下 1 ）〜 3 ）を実施した． 1 ）O 群血清型別検査：病原大腸菌免疫血清（デンカ生研）
を用い，血清型 O2については E.coli 抗血清（Statens Serum Institut）を用いた． 2 ）病原性関連遺伝子検索：iss，
iucD，irp2，tsh，cva/cvi，aggR，eae，papC，astA，stx2f，cdtIII，vat の12遺伝子について PCR を実施した． 3 ）薬剤感受性検査： 7 薬剤（アンピシリン：ABPC，セファゾリン：CEZ，セフォタキシム：CTX，テトラサイクリ
ン：TC，ナリジクス酸：NA，シプロフロキサシン：CPFX，ノルフロキサシン：NFLX）について，センシディス
ク（日本 BD）を用いた 1 濃度ディスク法により実施した． 4 ）PFGE：血清型 O2のうち 7 群由来15株について制限
酵素 Xba Ⅰで消化後，泳動像の解析を行った．

【結果】
A 群を除く13群からは国内の鶏大腸菌症例からの分離頻度が高いとされている血清型 O2を最も多く認め，その由来も 4 ヶ国 7 群にわたっていた．一方，A 群からは国内発症鶏で報告の少ない O161，O53等も確認された．全体では計20種類の血清型を認めた（図 2 ）．病原性関連遺伝子は，iss，iucD，irp2，tsh，cva/cvi，papC，astA，vat，の計 8 種類の保有を認め，なかでも iss，iucD の保有率が高く，国内分離株における保有状況と似た傾向がみられた．
また，血清型によらず共通して高い保有率を示す遺伝子と，血清型により保有率が大きく異なる遺伝子がみられた（表 1 ）．薬剤感受性検査の結果，TC（36.7％），CEZ（24.8％），ABPC（18.3％）の順に高い耐性菌分布率を認めた．
一方，NA，CPFX，NFLX 耐性菌は国内の病鶏から分離例が報告されているが，輸入初生ひな由来大腸菌における耐性菌分布率は低かった（図 3 ）． 4 薬剤以上耐性の多剤耐性は 3 ヶ国 4 群の 7 株で認めた．これらは，全てABPC，CEZ，CTX に耐性で，O 群血清型は O25，O103，O2，O18，不明と多様であった．PFGE は群毎に泳動パターンが異なる傾向にあった．

「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

77

【まとめ】
輸入初生ひなから分離された鶏病原性大腸菌の性状は多様であった．国内分離菌とは異なる薬剤耐性傾向もみられたことから，今後も病鶏から分離された鶏病原性大腸菌の性状調査を継続していきたい．

図 1 ．輸入国別，用途別の群数

図 2 ．分離菌株の血清型別（分離株数）

図 3 ．薬剤耐性保有状況
表 1 ．病原関連遺伝子保有状況
病原性関連遺伝子
血清抵抗性

計３１１株
陽性株数
保有率％

鉄獲得能

赤血球凝集性 コリシンVﾌﾟﾗｽﾐﾄﾞ

接着因子

毒素

線毛

iss

iucD

irp2

tsh

cva/cvi

aggR

eae

papC

astA

stx2f

cdtIII

vat

303
97.4

248
79.7

104
33.4

156
50.2

192
61.7

0
0.0

0
0.0

113
36.3

71
22.8

0
0.0

0
0.0

84
27.0

26
100.0

24
92.3

19
73.1

18
69.2

26
100.0

0
0.0

0
0.0

9
34.6

11
42.3

0
0.0

0
0.0

20
76.9

53
100.0

50
94.3

53
100.0

4
7.5

7
13.2

0
0.0

0
0.0

53
100.0

2
3.8

0
0.0

0
0.0

53
100.0

46
100.0

44
95.7

1
2.2

39
84.8

40
87.0

0
0.0

0
0.0

2
4.3

2
4.3

0
0.0

0
0.0

1
2.2

血清型O2
陽性株数
保有率％

血清型O161
陽性株数
保有率％

血清型O103
陽性株数
保有率％

家畜衛生学雑誌

78

8

第42巻第 2 号（2016）

馬の敗血症の原因菌 Actinobacillus genomospecies 2の日本における初分離及び16S rDNA と housekeeping gene の遺伝子解析による同定○伊藤博哉 1 ）・村上美雪 2 ）・下西儀政 2 ）・帆保誠二 3 ）・丹羽秀和 4 ）（ 1 ）農研機構・動物衛生研究部門・ 2 ）熊本県・ 3 ）鹿児島大学・ 4 ）JRA 総研）
Key word：Actinobacillus genomospecies 2, first isolation, horse, 16S rDNA, housekeeping genes【背景及び目的】
馬の敗血症例から分離された Gram 陰性桿菌の生化学及び遺伝子解析による同定を試みた．

【材料と方法】
敗血症によって死亡したと思われる 2 日齢の子馬から分離された Gram 陰性桿菌（KMM1株）の同定を行なった．
生化学解析は，簡易同定キット（ID テスト HN-20ラピッド）を用いて実施した．遺伝子解析は，菌種同定に利用されている16S rDNA 及び housekeeping gene（infB 及び rpoB）の塩基配列を決定し，DNA database に登録済の遺伝
子の塩基配列と比較した．さらに housekeeping gene（recN，rpoA 及び thdF）の塩基配列を利用した DNA-DNA 交雑試験（菌種の分類及び同定の gold standard）の代替法（文献 1 ）によって，全ゲノム DNA の DNA-DNA 相同性を推定した．

【結果および考察】
1 ．簡 易同定キットでは，KMM1株の 7 桁の生化学プロファイルは，Actinobacillus arthritidis 及び Actinobacillus
lignieresii と同一であり，キットを用いた生化学検査では同定できなかった（表 1 ）．また亜硝酸塩還元を除いた性状は全て Actinobacillus genomospecies 2と同一であった．
2 ．KMM1株の16S rDNA の塩基配列（1402bp）は，A. genomospecies 2の16S rDNA の塩基配列と最も高い相同性を 示 し た（99.6−99.8％）（表 2 ）． 一 方，A. genomospecies 2以 外 の 馬 の 病 原 菌 Actinobacillus equuli subsp.
haemolyticus，A. arthritidis，A. equuli subsp. equuli，A. genomospecies 1（馬由来 A. lignieresii）との相同性は，それぞれ98.1，97.7−97.9，97.6，97.4−97.5％であった（表 2 ）．
3 ．KMM1株の recN，rpoA 及び thdF の塩基配列（それぞれ1193，884及び1198bp）を利用して，全ゲノム DNA のDNA-DNA 相同性を推定した．その結果，KMM1の全ゲノム DNA は A. genomospecies 2 の全ゲノム DNAと最も相同性が高かった（90.7％）．一方，A. genomospecies 2以外の馬の病原菌 A. arthritids，A. genomospecies 1，
A. equuli subsp. haemolyticus，A. equuli subsp. equuli とのゲノム相同性はそれぞれ84.7，71.3，70.5，68.2％であった（表 2 ）．
4 ．KMM1株の infB（437bp）の塩基配列は，A. genomospecies 2の infB の塩基配列と最も高い相同性を示した（97−100％）．一方，A. genomospecies 2以外の馬の病原菌 A. arthritidis，A. genomospecies 1，A. equuli subsp.
haemolyticus，A. equuli subsp. equuli とのゲノム相同性はそれぞれ91.5−91.8，90.4−92.0，90.2，89.5％であった（表 2 ）．
5 ．KMM1株の rpoB（458bp）の塩基配列は，A. arthritidis の rpoB の塩基配列と最も高い相同性を示した（99.1％）．
一方，A. arthritidis 以外の馬の病原菌 A. genomospecies 2，A. genomospecies 1，A. equuli subsp. haemolyticus，
A. equuli subsp. equuli とのゲノム相同性はそれぞれ98.7，97.2，90.2，95.0％であった（表 2 ）．
6 ．16S rDNA の塩基配列解析及び 3 種の housekeeping gene から推定したゲノム DNA の DNA-DNA 相同性値の成「日本家畜衛生学会第84回大会」要旨集

79

績から，KMM1株は A. genomospecies 2と同定された．A. genomospecies 2の日本での分離は初めてであると思われる．また，infB の塩基配列は A. genomospecoes 2の同定に利用可能と思われるが，rpoB の塩基配列解析
はかつて同じ Bisgaard taxon 9に分類されていた A. genomospecies 2と A. arthritidis を識別できなかった．
7 ．本発表のデータの一部は，文献 2 において発表した．

【文献】
1 ．Kuhnert, P. and Korczak, B. M. 2006. Prediction of whole genome DNA-DNA similarity, determination of G+C
content and phylogenetic analysis within the family Pasteurellaceae by multilocus sequence analysis (MLSA).
Microbiology 152: 2537-2548.
2 ．Murakami, M., Shimonishi, Y., Hobo, S., Niwa, H. and Ito, H. 2016. First isolation of Actinobacillus
genomospecies 2 in Japan. J. Vet. Med. Sci. 78:701-703.

表 1 ．ID テスト HN-20ラピッドの結果

生化学性状

KMM1

A. arthritidisa

A. genomospecies 2b

A. lignieresiic

7 桁の生化学プロファイル

7107373710737371073717107373

亜硝酸還元

＋

＋

－

＋

a

A. arthritidis CCUG 24862T 株、bA. genomospecies 2 CCUG 15571 株、cA. lignieresii NCTC4189T 株、T

基準株 (Type strain)

表 2 ．KMM1株と馬由来病原細菌の16S rDNA，ゲノム DNA infB 及び rpoB 遺伝子との相同性（％）

菌 種

株 名

16S rDNA

ゲノム DNA

infB

rpoB

A. genomospecies 2

CCUG15571

99.6

90.7

97.0

98.7

H4272/4

99.8

-

100

-

CCUG19799T

98.1

70.5

90.2

95.0

CCUG24862T

97.9

84.7

91.8

99.1

13/225/95

97.7

-

91.5

-

ATCC19392T

97.6

68.2

89.5

93.9

CCUG22229

97.5

71.3

92.0

97.2

F264

97.4

-

90.4

97.2

A. equuli subsp.
haemolyticus
A. arthritidis
A. equuli subsp.
equuliA. genomospecies 1
T

基準株 (Type strain)、－, 未決定、最も高い相同性を示した菌種を灰色で塗りつぶした。

81

平成27年度家畜衛生学雑誌論文賞授賞講演「下痢を呈した豚群におけるデルタコロナウイルス遺伝子の検出と宮城県内浸潤状況」の平成27年度家畜衛生学雑誌論文賞受賞にあたって
小寺 文 1 ）・曽地雄一郎 2 ）・西 清志 3 ）・千葉直幸 4 ）・
植木 洋 5 ）・矢島りさ 6 ）・竹田百合子 7 ）・結城瑞希 7 ）（1）宮城県仙台家保，（現）大河原家保，2）宮城県仙台家保，（現）宮城県環境生活部食と暮らしの安全推進課，
3）

宮城県仙台家保，（現）宮城県東部地方振興事務所畜産振興部，4）宮城県仙台家保，（現）宮城県東部家保，5）

宮城県保健環境センター微生物部，6）宮城県仙台家保，（現）宮城県畜産試験場，7）宮城県仙台家保）  家畜衛生学雑誌

国内で豚流行性下痢（PED）が流行していた2014年 4月に，宮城県内の繁殖肥育一貫経営養豚農場で，既知の謝

42，81（2016）

辞

下痢症と異なる，母豚を中心とした嘔吐及び水様性下痢研究に使用した抗 PEDV ウサギ血清は，国立研究開症を確認した．これらの下痢便材料からは，下痢をおこ

発法人農業・食品産業技術総合研究機構動物衛生研究所

す既知の病原体の直接的関与を証明できず，全検体からから分与して頂きました．また，同研究所の大橋誠一先

豚デルタコロナウイルス（PDCoV）遺伝子を検出した．

生及び鈴木亨先生には多大な御助言を賜りました．さら

PDCoV 遺伝子の検出は県内初であったことから，県内に，投稿論文の審査をご担当頂いた先生方からは，貴重豚飼養者に対し，PDCoV に関する情報提供をするととなご助言を頂いてより良い論文とすることが出来ましもに，同時期（2014年 4 月中旬から 7 月上旬）に下痢症

た．今回の受賞は，PED を疑う下痢症に迅速かつ的確が発生した21戸128頭の下痢便と，過去 2 ヶ月以内に農に対応してもらった本県の家保職員，各専門分野でご尽場内に感染性の下痢症を認めなかった農場の健康豚15戸

力頂いた共同研究者及び緊張感ある防疫措置中にも関わ88頭についての浸潤調査と，2013年以前に下痢症の発生

らずご協力頂いた畜産農家や臨床獣医師の皆様方の存在があり保存されていた13戸20頭の下痢便について遡及調がなければ叶わず，皆さまの代表で受賞できたものと心査を実施した．その結果，2014年に発生した下痢便 4 戸に刻み，全ての方々に深謝いたします．

21頭のみから PDCoV 遺伝子が検出されたことから，
PDCoV は，県内に新たに侵入した下痢に関与するウイルスであることが示唆された．本病は，その後，群馬県，栃木県，山形県等でも発生が確認されており，その存在は全国的なものと考えられているが，詳細は不明
で，全国的な野外症例の蓄積とそれらの疫学解析及び関係者間の情報共有を進めることが重要と考える．

83

教育講演

ジビエに関する食肉衛生─現場からの提言─
小

谷

浩

治＊

  家畜衛生学雑誌

1 ．はじめに

42，83〜85（2016）

肉バーガーなどが販売されている．他にも取り扱いたいとする企業もあるが，野生鳥獣であるがために解体処理

平成26年11月に厚生労働省が「野生鳥獣肉の衛生管理の衛生管理に不安があったり，牛肉や豚肉と同じ施設でに関する指針（ガイドライン）」（以下，ガイドライン）

調理することへの不安感により，なかなか進まないのがという」の作成を機に，野生鳥獣肉の衛生管理に関心が現状である．

高まってきた．外食産業や流通において畜肉と同じよう

特定非営利活動法人日本ジビエ振興協議会が知り得るな衛生管理体制の整備が必要との要望がある一方，一部

中で，外食産業が求める衛生管理の基準は，第一に履歴の食肉処理施設では外食産業の要望に添って衛生管理体

管理が行われていること．次に金属検出を行っているこ制を整備する動きが出始めた．食肉処理施設を直接的にと．まだ細菌検査などを求める動きはない．

運営はしていないが，管内に食肉処理施設を抱える地方

3 ．食肉処理施設の対応

自治体では，必ずしも効果的な対策が講じられているとは限らない．

食肉処理施設の設備や構造と衛生管理の善し悪しは必

食肉処理施設や自治体の目線から，食肉衛生の対策や課題について述べたい．

ずしも比例しないが，傾向として新しい食肉処理施設ほど衛生管理が徹底できる構造であり，機器も整備されて

2 ．外食産業の動き
野生鳥獣肉（以下，「ジビエ」という）の流通量について統計データがないので分からないが，昨年度，農林水産省が㈱ぐるなび総研に依頼した調査では，全国で約いる．
（ 1 ）食肉処理施設の規模
平成26年度に厚生労働省が行った調査は次のとおりである．

600店 舗 で ジ ビ エ が 取 り 扱 わ れ て い た． 外 食 産 業「食肉処理業の許可施設については，平成24年度末（チェーン店）では，カレーハウスの CoCo 壱番屋が良く時点で全国に9,669施設あり，そのうち自治体が把知られているが，関東では JR 東日本のエキナカ（ベッ握している野生鳥獣をと殺または解体する処理場はカーズ，ベックスコーヒーなど）でシカ肉カレーやシカ

355施設であった．そのうちシカ専用91施設，イノ

小谷

浩治（こたにこうじ）

島根県出身．
平成22年 2 月 社団法人全国農業改良支援協会を退職．同年 3 月 野生動物対策技術研究会を設立し事務局に就
任．自治体職員等鳥獣被害対策に係る関係者の情報交換として年 1 回全国大会を開催．同年 4 月 H22年度技術指導者育成等事業の事務局に就任．野生鳥獣被害防止マニュアル 捕獲獣肉利活用編シカ・イノシシを作成．平
成23年 4 月 H23年度対策手法確立事業の事務局に就任．野生動物管理システムハンドブック「ニホンザル，ニホンジカの総合的な被害対策のすすめ方」を作成．平成24年 4 月 H24年度対策手法確立事業の事務局に就任．
イノシシ被害対策の進め方 捕獲を中心とした先進的な取組のマニュアルを作成．同年 5 月 日本ジビエ振興協
議会の事務局長に就任．平成26年 7 月 特定非営利活動法人日本ジビエ振興協議会の事務局長に就任＊
特定非営利活動法人日本ジビエ振興協議会事務局長

家畜衛生学雑誌

84

第42巻第 2 号（2016）

シシ専用82施設，シカ・イノシシ専用125施設，シ
カ・イノシシ以外も取扱う処理場43施設であった．」

ガイドラインはジビエの衛生管理の要である．しかし，二つの大きな課題がある．

大体であるが，シカやイノシシの食肉処理施設は300

一つは，食肉処理施設ごとに設備機器が異なっている箇所前後といえる．食肉処理施設あたりの処理頭数は，ことである．ナイフの消毒では，83℃の温湯設備，湯沸同じく厚生労働省の調査では表 1 のとおりとなっていかし器，アルコール消毒，次亜塩素酸ナトリウムの併用

る．

または単体での使用に分かれる．上述の懸吊でも，レー

見ての通り，シカ，イノシシとも年間300頭以下の頭数を処理している食肉処理施設が大半を占めている．

ルで懸吊とクレーンでの懸吊と作業台に分かれる．
もう一つは，食肉処理業者の衛生管理を含めた知識やこうした食肉処理施設では，地元の飲食店や大都市圏

技能に差が生じていることである．食肉処理業者を大別の飲食店への販売は可能であるが，一定量を安定的に消すると，と場や食肉センターの OB（いわゆる経験者），

費する外食産業への販売は難しい．

狩猟者がそのまま行う二パターンに分かれる．問題なの

平成26年度以降に設置された食肉処理施設では，300頭を超える解体処理を行っているケースが目立つ．採算ベースで考えれば，それ相応の処理を行わなければ運営できないことを暗示している．

は，この二つの課題が相乗しあって衛生管理の向上に影響していることである．
上述した83℃のお湯によるナイフの消毒を例にとって説明したい．ガイドラインを見れば，できるだけこまめに消毒を行う必要があることが読み取れるが，どのタイ（ 2 ）衛生管理

ミングで消毒すべきかを示した作業手順がないので，食全国約300の食肉処理施設のうち，構造が似通ってい

肉処理業者の判断に任されている．作業前に消毒するだ

る食肉処理施設は極少数であり，大半は食肉処理施設ごけで済ませるケースもあれば，こまめに消毒あるいはナとに構造が違っている．構造が似通っている最大の理由

イフを取り替えるケースもある．なぜ83℃以上のお湯では，計画段階で視察に行った食肉処理施設をモデルに設ナイフを消毒しなければならないのか，理由と目的が分計するためである．

かっていれば，作業者によって消毒方法が大きく異なる

保健所の検査に合格して食肉処理業の営業許可をとれ
ば食肉処理施設を開設できる．保健所がチェックする項
目は他の食肉処理業と同じ基準なので，例えば懸吊用のことはないと考える．

4 ．地方自治体

レールがなくても許可が下りるし，ナイフの消毒は83℃

鳥獣被害や食肉利用を担う行政の部局は，個人（法以上の温湯設備があれば良いので，ヤカンでお湯を沸か人）の食肉処理施設に対して指導する立場にないので，して行っても問題ない．また，加工した肉の保管温度に衛生管理についても協力依頼という形を取らざるを得

ついては定めがないので，ストッカーによる保管も可能

ず，効果的な対策を打ちにくい．衛生管理について，一である．

部の自治体では専門家を呼んで衛生管理の講習会を開催したり，ジビエに関するセミナーを開催しているが，参表 1 ．年間を通して処理を行う処理場の年間解体頭数（施設）

加は任意となっているため，衛生管理の知識や技能が容易には高位平準化しない．衛生管理を含めた認証制度（信州ジビエ）を導入している長野県では，平成27年度，17食肉処理施設のうち認証制度を取得しているのは
3 食肉処理施設に留まっている．県としても多くの食肉処理施設に認証制度を取得して欲しいと願っているが，食肉処理施設の整備機器などに一定の要件を課している
ため，なかなか申請が進んでいない．
一番の課題は，市町村はもとより多くの県庁でジビエを取り扱う部局に，獣医師などの専門家が配置されていないことである．衛生管理について地元の大学との連携も考えられるが，獣医学部を設置している大学が限られるため，専門機関とのタイアップも難しい．

「日本家畜衛生学会第84回大会」教育講演要旨

温湯器

ガス

懸吊レール

懸吊クレーン

85

殺菌保管庫

作業台

図1

最後に

の考え方が浸透，普及してゆかないと，大きな事故に繋がりかねない．もし事故が起きたとき，これまで一生懸川上（食肉処理施設），川下（飲食店）において，食命取り組んできた地方自治体や食肉処理施設にとって死肉であるという認識が欠けていることは否めない．今で活問題になりかねない．それだけに，衛生管理は早急にも，シカの刺身をメニューに載せている店もある．

取り組むべき課題である．

しかし，これだけジビエが一般化する中，食肉として

87

会員
員へのおしら会
らせせ①「家畜衛生フォーラム2016」の開催について
主催：日 本 家 畜 衛 生 学 会
共催：（一財）生物科学安全研究所
後援：農

林

水

産

省（予定）

テーマ：「21世紀の家畜の飼養管理及び食の安全性確保に求められるもの」
東京国際
フォーラム

日時及び場所

JR 東京駅

日時：平成28年12月 2 日（金）13：00〜17：15

パシフィックセンチュリー
プレイス（東京都中央区京橋 2 − 4 −16）
東京メトロ銀座線 京橋駅， 5 番出口徒歩 1 分

福岡銀行

変化しています．本フォーラムでは，今後の家畜飼養管理及び食の安全性確保に関わる 5 つの重要なトピックスの現状及び今後の展望と対策について，ご専門の先生方から概説していただきます．

5番出口

茂

京橋駅

パイロット

フィルム
センター

しんきん
信託銀行

先生（安全研）ローソン

東京メトロ銀座線

A5出口

先生（東京農工大学）
，宮﨑

みずほ証券

Meiji Seika ファルマ株式会社

21世紀に入り，畜産及び食の安全性を取りまく情勢及び環境は大きく

座長：白井淳資

八重洲
ブックセンター

京橋K-1ビル

JR 東京駅，八重洲南口徒歩 5 分

プログラム

常陽銀行

八重洲通り

鍛冶橋通り

場所：Meiji Seika ファルマ（株）本社講堂

八重洲南口

中央通り
みずほ銀行

山形銀行

三井住友銀行

都営浅草線

宝町駅

昭和通り

秋田銀行

演題と講演者：
1 ）アニマルウェルフェア
佐藤衆介2 ）農場 HACCP
伊地知俊一

─概説及び日本・海外における現況と今後の展望─

先生（帝京科学大学）
─概説及び日本・海外における現況と今後の展望─
先生（中央畜産会）

3 ）鹿児島県の輸出食肉取扱認定施設における HACCP システムによる衛生管理窪薗薫先生（鹿児島県志布志食肉衛生検査所）

4 ）薬剤耐性菌の低減に向けて田村豊─国際的な動向と日本における現況と今後について─

先生（酪農学園大学）

5 ）野生動物に由来する食肉の安全性確保について高井伸二

─ジビエの課題─先生（北里大学）②第85回大会の開催について「家畜衛生フォーラム2016」を開催する12月 2 日（金）の午前中に，フォーラムと同じ会場で第85回大会の開催を予定しています．詳細については改めてお知らせします．

88「家畜衛生学雑誌」投稿規程
1 ．本誌には原則として，家畜衛生に関する総説，原著

お，総説についてはこの限りではない．また，論文，短報を掲載する．なお，原稿は編集委員会事

カラーや特殊な用紙での印刷は，その費用を著者の負担とする．

務局へ電子メール添付（PDF ファイル）で提出す
る．印刷原稿 3 部（うち 2 部は鮮明なコピーでもよ8 ）使用する動植物・微生物などの学名はイタリッ
ク体で表記する．

い）の書留郵便あるいはレターパックによる提出も可とする．

9 ）度量衡の単位，略記は SI 単位系を基本とし，以下の例に従う．

2 ．投稿論文は他誌に未発表であること．また，筆頭著者あるいは連絡著者（コレスポンディングオーサー）［例］m，cm，mm，µm，nm，kg，g，mg，µg，ng，L，mL，µL，nL M，mM，µM，％，cm2，
m3，

は本学会会員であること．
3 ．掲載論文は総説，原著論文，短報とし，編集委員会

hr，min，sec，℃，pH，Pa（血圧は mmHg，が掲載の採否を決定する．
4 ．投稿論文は和文または英文とし，次の指示（記述順序など）に従うこと．
1 ）論文原稿は別に定める注意に従って作成するこ

生体内圧力は Torr）など．
10）表および図（写真を含む）は用紙 1 枚に 1 つとし，個々に番号と表題を記入し，投稿原稿の最後に添付する．

と．用紙サイズは A4とし，和文の場合は30字

11）引用文献は下記の例にならって，アルファベッ

で25行程度，英文の場合はダブルスペース（70ト順にならべ，本文中では 1 ，3 − 6 ） のように上字で25行程度）とする．

付き（superscript）で記入する．ただし，著者

2 ）和文の場合も句読点は，「 ，」，「 ．」を用いること．

名 は 3 名 ま で と し， 4 人 目 以 降 は 省 略 し，「ら」，「et al」で示す．

3 ）論文原稿は第 1 ページに表題，著者名，所属機［例］

関名およびその所在地を和文と英文で記載する

雑誌とともに，連絡著者とその電子メールアドレスを記載する．また，和文の場合は20字，英文の場合は40字以内の略表題（running head）を記載する．
4 ）原著論文の構成は原則として，Summary（本文が和文の場合も英語），序文（Introduction），
材料および方法（Materials and Methods），結果（Results）， 考 察（Discussion），引用文献（References），要旨（本文が和文であっても英文であっても，和文の要旨）とする．ただし，謝辞は，別項目を設けず，本文の最後に 1 行の空白をとった後に記載する．
5 ）英文 Summary は250語以内，和文要旨は600字以内とし，それぞれの最後の行に 5 つ以内のKey words（キーワード）をつける .
6 ）英語論文および和文論文の英文 Summary は，
投稿前にしかるべき校閲を受けること．
7 ）原著論文で刷り上り 6 頁（30文字×25行＝750
文字で，図表を含めて12枚程度）までは，印刷費を本学会で負担する．ただし，超過ページについては，その費用を著者の負担とする．な

1 ）内田孝治・藤井武・高山公一ら（1991）ブロ
イラーにおける実験的大腸菌症に対するラノ
フロキサシンの治療効果および用量設定試
験．家畜衛生研究会報．33，19-24．
2 ）Oshida, T., Fukuyasu, T., Kohzaki, K., et al.
(1993) A new treatment system for animal
waste water using microorganism, soil andvagetation. Asian-Australasian Journal ofAnimal Sciences. 6, 205-209.
電子ジャーナル3 ）Wilson, D.J., Rood, K.A., Bunnel, J., et al. (2014)
Johne’s disease, mycoplasma and BVD in
Utah-Bulk tank milk testing and comparison
to previous regional prevalence andindividual herd results over time. Journal of
Veterinary Science and Technology. 5:182.
doi: 10.4172/2157-7579.1000182.
単行書4 ）伊予部志津子（1980）薬剤耐性因子（R）の

89

検出法，薬剤感受性測定法．22-48頁．三橋進編，講談社，東京．
5 ）McDonrd, P. (1976) Trends in silage making,Microbiology in Agriculture, Fisheries and  
Food. pp109-121. Shinner, F.A and Carr, J.G.
eds. Acad. Press, London, NY.
12）図はグラフィックソフトウェアで作成することする，その他の規定については原著の場合に準じる．
6 ．総説の構成については特に規定を設けないが，引用論文の記載法は原著論文の場合に準じることとする．
7 ．別刷りは50部に限り無料とする．追加分についてその費用を著者の負担とする．
8 ．本誌の発行は原則として，年 4 回（ 4 月， 7 月，10月および 1 月）とする．
9 ．編集委員会事務局を下記に置く．

が望ましい．手書きで作成する場合は，そのま〒252−0132

ま製版できるよう，白色紙または青色方眼紙に

神奈川県相模原市緑区橋本台 3 − 7 −11タイプやレタリングなどにより作成する．

（一財）生物科学安全研究所内

13）投稿原稿が受理（掲載決定）されたならば，著

日本家畜衛生学会編集委員会

者 は す み や か に 最 終 原 稿 の Microsoft Word

Tel

ファイルを電子メールで提出すること．図につFax 042（762）7979

いては，グラフィックソフトウェアで作成した

E-mail：jjah@riasbt.or.jp042（762）2775

ファイルも併せて提出する．
5 ．短報は，その内容を成績および考察（Results and附則

Discussion） と し て ま と め， 要 旨（Summary） は

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

英文では200字以内の和文，和文では100語以内の英本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

文をつける．原稿の長さは刷り上りで， 2 頁以内と論文原稿を作成する上での注意
1 ）執筆にあたり，投稿規定をもう一度，熟読すること．
2 ）各行の行末での強制改行をしないこと．
3 ）投稿論文が和文，英文のいずれの場合も数字，欧文は全て 1 バイト文字（いわゆる半角）で入力するこ

6 ）図は，Microsoft PowerPoint，Excel，Adobe Photoshop，Illustrator 等のソフトウェアで作成するのが望ましい．
7 ）論文受理後の最終原稿は，Microsoft Word（あるい）は 2 バイト文字（いわゆるは Microsoft Word 互換ソフトウェア）ファイルと全角）とする．
「µ」（マイクロ）は半角立体で入力して提出する．ただし，Microsoft Word 互換ソフと．ただしかっこ（すること．

トウェアを使用した場合は，Microsoft Word で正4 ）投稿論文原稿は PDF ファイルとして事務局まで電しく表示されることを確認すること．グラフィック

子メールで提出すること．その際には必ずパスワー

ソフトウェアで作成した図データは，jpeg，tiff 等

ドロックし，パスワードは別メールで事務局まで連の汎用フォーマットで提出する．

絡すること．特段の理由がある場合は，印刷原稿 3部（うち 2 部は鮮明なコピーでも可）を事務局まで
書留郵便あるいはレターパックで送付すること．
5 ）写真は印刷に耐えうる鮮明なものを使用すること．

日本家畜衛生学会
編集委員会

90

日本家畜衛生学会会則
（総
第１条

則）

第８条

理事長は常務理事の互選により選出する．

本 学会は，日本家畜衛生学会（英文表記：

２．理事長は学会を代表し，会務を総理する．

The Japanese Society of Animal Hygiene）

３．理事長は常務理事の中から庶務・会計を担当する事務局担当者を委嘱する．

（以下，「学会」とする．
）と称する．
第２条
第３条

第４条

４．理事長は第4条の事業を達成するため常設の学会の事務局は，原則として理事長の所属する機関におく．

学術企画委員会，編集委員会を設置する．

学会は，家畜衛生とその関連領域における学（1）委員会の委員は原則として理事長が常務

究の向上を図り，畜産の進歩発展に寄与する

理事の中から指名する．但し，常務理事ことを目的とする．

会が必要と認めた場合には会員の中から指名することが出来る．

学会は，前条の目的を達成するために，次の（2）委員会の委員長は，委員の互選により選事業を行う．

出し，理事長が指名する．

（1）研究発表会及び学術講演会等の開催（2）学会誌「家畜衛生学雑誌」の発行

第９条

事長を補佐する．

（3）学会の発展に貢献した者への表彰（4）その他学会の目的達成のために必要な事業

副理事長は常務理事の互選により選出し，理第１０条

常務理事および監事は理事の互選により選出
し，総会において承認を受ける．
２．常務理事は常務理事会を組織し，理事長を補（会員および会費）
第５条

佐し，学会の運営に関して第４条の事項を行う．

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員お３．監事は理事長を補佐し，会務と会計を監査する．

よび名誉会員より構成する．
（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納

第１１条

２．理事は理事会を組織し，理事長を補佐し，学入した個人会の運営に関して第４条の事項を行う．

（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した学生，大学院生．た

第１２条

役員の任期は２年とし，再任を妨げない．
２．役員の補欠又は増員は，第８条第１項，第９だし会員期間は単年度とす

条，第10条若しくは第11条の規定により選任る．

し，その任期は前任者又は現任者の残任期間（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため所定の会費とする．ただし，常務理事会が会務の運営にを納入した個人又は団体支障がないと認めたときは，この限りでない．

（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会第１３条

常務理事会および理事会は理事長が随時招集する．

において承認された個人
第６条

理
 事は理事長が委嘱し，総会の承認を受ける．

会
 費は正会員にあっては年額5,000円，学生会員にあっては年額2,000円，賛助会員にあって（総は１口年額10,000円とし，毎年７月末までに

第１４条

会）
通常総会は毎年１回，理事長が招集する．

納入するものとする．

第１５条

理事長が必要と認めた場合は，臨時総会を招集することができる．

第１６条（役員および役員会）
第７条

総会では次の事項を議決する．

学会に次の役員をおく．

（1）事業計画および事業報告に関する事項（1）理 事 長

１名（2）予算および決算に関する事項（2）副理事長

１名（3）会則の改正に関する事項（3）常務理事若干名（4）その他，学会の目的を達成するために必

（4）監

事

２名

（5）理

事

35〜45名

要な事項

91

（会

計）

第１７条

（3）こ の会則は平成15年7月5日に改正し，

学会の経費は会費その他の収入をもって，これにあてる．

第１８条

会計年度は４月１日より，翌年３月31日までとする．

同日に施行する．
（4）こ の会則は平成16年7月3日に改正し，同日に施行する．
（5）こ の会則は平成17年7月2日に改正し，同日に施行する．

附則（6）こ の会則は平成21年7月4日に改正し，（1）この会則は平成14年7月6日より施行する．
（2）学会設立時の役員は家畜衛生研究会（以下「研究会」と略す）の役員が暫定的に同日に施行する．
（7）こ の会則は平成23年7月2日に改正し，同日に施行する．

就任することとし，理事長は研究会の会（8）こ の会則は平成27年7月11日に改正し，長が，常務理事は研究会の幹事が，理事同日に施行する．ただし，平成27年度のは研究会の評議員が，監事は研究会の監

会費は4,000円とし，平成28年度から会事がそれぞれ就任する．

費を5,000円とする．

92

協賛団体・企業一覧
日本家畜衛生学会は以下の各団体・企業からの協賛を受けています．ここに記して謝意を表します．（五十音順）（株）インターベット（株）科学飼料研究所

共立製薬（株）

コーキン化学（株）

住化エンバイロメンタルサイエンス（株）

ゾエティス・ジャパン（株）

田村製薬（株）日本イーライリリー（株）（一般財団法人）日本生物科学研究所

日本全薬工業（株）

日本ハム（株）

バイエル薬品（株）

ベーリンガーインゲルハイム・ベトメディカルジャパン（株）

Meiji Seika ファルマ（株）

日本家畜衛生学会入会のすすめ
日本家畜衛生学会は家畜衛生とその関連領域における学術の交流を図り、畜産の進歩発展に寄与することを目的とした学会です。
＜主な活動＞
・ 年２回（７月、11月）の研究発表会
・ 年１回のフォーラム（11月ごろ）の開催
これまでの主なテーマ「狂犬病」、「口蹄疫」、「鳥インフルエンザ」、「BSE」、「家畜ふん尿」など
・ 年４冊の機関誌「家畜衛生学雑誌」の発行
・ 学会賞の授与
年会費5,000円（但し、学生は2,000円）
御請求戴ければ、見本誌を贈呈します!!

家畜衛生学雑誌

The Japanese Society of Animal Hygiene
日 本 家 畜 衛 生 学 会〒183-8509

東京都府中市幸町3-5-8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内TEL ／ FAX：042−367−5780
http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
Hpで活動内容がご覧になれます!!（日本家畜衛生で検索）

第42巻第 2 号

平成28年 7 月 8 日発行（会員配布）
発

行

印 刷 所

日本家畜衛生学会
理事長 白井淳資〒183－8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内☎／ FAX：042−367−5780
ホームページ：http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
振替口座：00240－ 3 －43171
明誠企画株式会社〒208－0022 東京都武蔵村山市榎 2 － 25 － 5☎ 042−567−6233 FAX 042−567−6230

平成日本家畜衛生学会

年

月

日

御中

入 会 申 込 書
貴会への入会を下記の通り申込ます．

記
フリガナ
氏

名：

所属名称：
部

署：

役

職

所属住所：〒TEL：

FAX：

e-mail：

自宅住所：〒

TEL：
e-mail：会員の種類 ： ○正 会 員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員
会報送付先 ： ○自宅 ・ ○勤 務 先○内にチェックを付して下さい．

１．入会申込書は必要事項をすべて正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5780）にてご送付下さい．
２．年会費は個人会員 5,000円，賛助会員 10,000円／口（１口以上）を郵便振替口座（加入者名：日本家畜衛生学会，No. 00240−3−43171）へお振込下さい．
３．申込先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5780

４．ホームページからも申し込めます：http://www.kachiku-eisei.jp/

平成
日本家畜衛生学会

年

月

御中

変
変更手続きを下記の通り致します．

更

届

記

フリガナ
○

氏

名：

○

所属名称：

○

部

○

所属住所：〒

署：

○

役

TEL：

○

自宅住所：〒

○

TEL：

職

FAX：

e-mail：e-mail：○会員の種類：○正会員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員○会報送付先：○自宅 ・ ○勤務先全てご記入の上，上記変更部位の○内にチェックを付して下さい．

１．変更届出書は必要事項を正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5935）にてご送付下さい．
２．届け先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5935（042−367−5780）

３．ホームページからも手続きできます：http://www.kachiku-eisei.jp/

日