ISSN 1347−6602

昭和62年６月９日学術刊行物認可

家畜衛生学雑 誌
The Japanese Journal of Animal Hygiene

日本家畜衛生学会
Vol .43 No.1
2017. MAY

The Japanese Society ofAnimal Hygiene

家

畜

衛

生

学

雑

日本家畜衛生学会

発行

誌

理 事 長：白井淳資
副理事長：宮﨑編集委員長：宮﨑茂

茂

編集委員：末吉益雄・髙井伸二・長井誠

野上貞雄・福士秀人"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""The Japanese Journal of Animal Hygiene
Published by the Japanese Society of Animal Hygiene
President : Junsuke SHIRAI（）

Vice President : Shigeru MIYAZAKI（）

Editor-in-Chief : Shigeru MIYAZAKI（））

Editorial Board : Masuo SUEYOSHI（
Shinji TAKAI（））

Makoto NAGAI（
Sadao NOGAMI（
Hideto FUKUSHI（））

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「家畜衛生学雑誌」第43巻第 1 号の送付にあたって
会員の皆様におかれましては，ますますご清栄のこととお慶び申し上げます．
ここに，「家畜衛生学雑誌」第43巻第 1 号を刊行する運びとなりました．本学会は1974年に創立され，本年は創立43年目となります．本号は学会創立43年目の最初の号となりますが，依然として投稿論文が少なく，編集委員会が苦慮しております．日本家畜衛生学会では，昨年度より投稿された論文の中から優秀論文賞を選出し，夏の研究会で論文内容を講演していただくことにしております．2016年度は第42巻 ４ 号に掲載された北海道十勝家保の「ヨーネ病が牛飼養農場に与える損失の評価」が選出されました．このように家畜衛生学雑誌は，畜産現場で役に立つことを主体に掲載している雑誌で，広く家畜衛生に貢献できる原稿を受け付けております．
「家畜衛生学雑誌」は効率の良い審査を行い，出来るだけ迅速な掲載を目指しております．「家畜衛生学雑誌」の更なる充実のため，学会役員一同，努力や工夫をして行きたいと思いますが，何よりも会員の皆様のご支援が重要ですので，何とぞよろしくお願い致します．
日本家畜衛生学会理事長

白井淳資

家畜衛生学雑誌編集委員長

宮﨑茂（日本家畜衛生学会副理事長）

日本家畜衛生学会・学会費納入のお願い
ご承知のように，学会は会員の皆様からの会費をもって運営されています．学会の運営を円滑に運ぶために，所定の会費を納入していただきますようお願いします．
＊会費は，正会員5,000円，学生会員2,000円です．
＊平成27年度までの未納分をお支払いいただく場合，正会員年会費は4,000円です．
日本家畜衛生学会

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日本家畜衛生学会

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家畜衛生学雑誌
第43巻
目

第1号

2017

次

〈総 説〉
牛乳房炎用医薬品の臨床試験 ─適切かつ効率的な試験実施の手引き─･････････････････････････････････････････････････････････清水裕仁・能田 健・平山紀夫・小沼 操・
明石博臣・林 智人・河合一洋･･･････････････････････････ 1〜20
〈原 著〉
Gas chromatography-mass spectrometry analysis of propoxur residue level in cattle tissueduring withdrawal period after liquid spraying administration････････････････････････Kouko Hamamoto, Ryoko Akama, Kenji Kinoshita, Yasuharu Mizuno･･････････････････････････ 21〜26
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 27〜29
家畜衛生学雑誌投稿規程････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 30〜31

日本家畜衛生学会会則･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 32〜33

家畜衛生学雑誌

The Japanese Journal of Animal HygieneVol. 43  No. 1

2017Contents〈Review〉
Clinical Trials for Veterinary Medicinal Products on Bovine Mastitis Control
─ Guidance and Strategy for the Streamlined Study Designing ─･････････････････････････････････････････････････････････････････ Yasuhito Shimizu et al.･･･････････････････････････････････････････････ 1〜20
〈Original report〉
Gas chromatography-mass spectrometry analysis of propoxur residue level in cattle tissueduring withdrawal period after liquid spraying administration････････････････････････････････････････････････････････････････ Kouko Hamamoto et al.･･････････････････････････････････････････････ 21〜26
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 27〜29
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 30〜31
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 32〜33

Jpn. J. Anim. Hyg.

総

1

説

牛乳房炎用医薬品の臨床試験
─適切かつ効率的な試験実施の手引き─
清水裕仁 1 ）・能田

健 2 ）・平山紀夫 3 ，4 ）・小沼

操 3 ，5 ）・明石博臣 6 ）・林智人 7 ）・河合一洋 8 ）＊Clinical Trials for Veterinary Medicinal Products on Bovine Mastitis Control
─ Guidance and Strategy for the Streamlined Study Designing ─Yasuhito Shimizu 1), Ken Noda 2), Norio Hirayama 3, 4), Misao Onuma 3, 5), Hiroomi Akashi 6),
Tomohito Hayashi 7) and Kazuhiro Kawai 8) ＊（1) Chubu Veterinary Clinical Center, Hidaka Branch, NOSAI MINAMI, Niikappu 059-2403, Japan.
2)

National Veterinary Assay Laboratory, Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, Tokyo 185-8511, Japan.
3)

The Japanese Society for Animal Vaccine and Biomedical Research, Sagamihara 252-0132, Japan.

6)
7)

4)

Visiting Professor, Azabu University, Sagamihara 252-5201, Japan.

5)

Professor Emeritus, Hokkaido University, Sapporo 060-0808, Japan.

Professor Emeritus, The University of Tokyo, Tokyo 113-8654, Japan.

National Institute of Animal Health, NARO, Hokkaido Research Station, Sapporo 062-0045, Japan.
8)

School of Veterinary Medicine, Azabu University, Sagamihara 252-5201, Japan＊

Corresponding Author: Kazuhiro Kawai（kawai@azabu-u.ac.jp））（2017. 4. 17  受付／2017. 5. 1  受理）キーワード：牛乳房炎，動物用医薬品，臨床試験，手引き  家畜衛生学雑誌

43， 1 〜20（2017）

Ⅰ．本手引きの位置付けと目的
みなみ北海道農業共済組合日高支所中部家畜診療センター〒059−2403 新冠郡新冠町字北星町 8 −71
2）農林水産省動物医薬品検査所〒185−8511 国分寺市戸倉 1 −15− 1
3）
動物用ワクチン・バイオ医薬品研究会〒252−0132 相模原市緑区橋本台 3 − 7 −11
4）
麻布大学客員教授〒252−5201 相模原市中央区淵野辺 1 −17−71
5）北海道大学名誉教授〒060−0808 札幌市北区北 8 条西 5 丁目
6）
東京大学名誉教授〒113−8654 文京区本郷 7 − 3 − 17 ）
国立研究開発法人 農業・食品産業技術総合研究機構動物衛生研究部門北海道研究拠点〒062−0045 札幌市豊平区羊ケ丘 48）
麻布大学獣医学部〒252−5201 相模原市中央区淵野辺 1 −17−71＊
連絡著者：河合一洋（kawai ＠ azabu-u.ac.jp）
1）

1 ．目的
牛の乳房炎疾患に対する抗菌剤療法が一定の有効性を示し，臨床現場においてその有用性が認められているのは周知のとおりである．しかしながら，乳房炎の発生率は決して減少しているとはいえない 1 ）．そのような中，
平成18年度のポジティブリスト制度の施行及び使用基準の改正により，動物用医薬品の食品残留に対する規制が厳格化された 2 － 4 ）．さらに，耐性菌発生の問題から抗菌剤の適正使用，慎重使用が推奨されている 5 ）．このような家畜衛生の現場の変化により，サイトカインをはじめとするいわゆるバイオ医薬品や実用化が遅れている乳房炎用ワクチン等，新たな作用機序の医薬品開発が望まれており，その基礎研究が研究所，大学，企業等で精力的に進められている 6 ， 7 ）．これまでのところ，乳房炎疾患

家畜衛生学雑誌

2

第43巻第 1 号（2017）

領域で使用される抗菌剤など直接的な抗微生物活性・抗本手引きは，臨床試験及び臨床研究を推進するととも菌スペクトルを示す製剤では，その作用機序を鑑みた臨に，質の良い獣医学的なエビデンスを効率よく集積し，床試験の設計の概念が確立されてきたが 8 ， 9 ），病原体に牛の乳房炎疾患領域に対する国内治療指針の作成に貢献

直接作用せず，生体の免疫機能の調整等により効果を発することが期待される．

揮するバイオ医薬品やワクチン等に関する臨床試験の設Ⅱ．臨床試験とは計概念はいまだ定着していない．そこで，乳房炎疾患領域を改めて見直し，より多くの臨床試験がスムーズに進

臨床試験とは，臨床現場におけるある製剤の有効性及められ，有効性及び安全性が担保された新薬が少しでもび安全性を評価するための試験である（一般に「臨床試

早く畜産現場に届けられることを目的として本手引きを験」と「治験」は同義に用いられる）．この試験は統計作成した．

学的な手順をとることが主流の考え方であり，獣医学分野においても軽視することはできない．一方，開発コス

2 ．構成

トや実施可能性，希少疾病，動物福祉等を勘案すると，本手引きは，乳房炎薬の臨床的な有効性及び安全性評

必ずしも統計学的に成立する試験設計ができない場合も価に関する考え方を提供するものであり，臨床試験設計ある．したがって，この手引きでは，統計学的原則と試や開発手順において重要な内容を含んでいる．個別の事

験の実施可能性の 2 つの観点から，開発者が考慮するべ

例に関しては製剤毎の特性を加味してデザインされるべき事項を整理し，実際の試験設計では個別にそのバランきであるため，サイトカイン及びワクチン等についてはスをとった試験が実施されることを推奨する．

それぞれガイドラインが必要となる．抗菌活性物質に関臨床試験は，「有効性の検証」すなわち予定している

しては抗菌剤研究会のガイドラインがある 8 ）．本手引き「効能又は効果」の有無を確認するという承認申請資料

は，それら各論的ガイドラインの背景となる総論的な概として最も重要な試験であり，その試験成績は臨床現場念を提供するため，乳房炎の臨床試験を新たに見直し，に直接もたらされる効果に関する重要な情報が多く含ま乳房炎に関する臨床試験全体の概念を提供するよう構成れている．また，臨床試験実施前には，原薬及び製剤にした．また乳房炎疾患における基礎研究，臨床研究及び関わる情報と動物福祉，畜産経営，取扱者の安全，家畜

新薬開発を推進するため，既存の一般的な臨床試験ガイ衛生及び公衆衛生上のリスクに関しても十分配慮されてドラインでは触れられていない乳牛の臨床試験の考えいなければならない．したがって，臨床試験開始前に完方，臨床試験設計に必要な基礎試験，そして，リスクベ了すべき物理的化学的生物学的試験，毒性試験，対象動

ネフィットバランスの検討という，これまであまり重要

物安全性試験，薬効薬理試験，一般薬理試験，対象動物

視されてこなかった考え方についても言及した．

を供した薬理及び薬物動態試験並びに残留試験が適切に実施されている必要がある．また，有効性を検証するた

3 ．期待される効果めの臨床試験プロトコールは，対象動物を供した安全臨床試験実施の基本的枠組みは，動物用医薬品承認申性，薬理及び薬物動態試験結果に基づいて，あらかじめ請資料となる GCP に対応する臨床試験の法令10） に定め

十分に検討することが大切である．この場合は，統計学られており，本手引きはその中で行われる試験のガイド的な原則や実施可能性も十分配慮する．さらに，「効能となることが期待される．他方，各研究所，大学，獣医又は効果」や「用法及び用量」も試験設計上重要なポイ

診療施設及び家畜保健衛生所等に勤務する研究者，獣医ントである．予定する「効能又は効果」を評価するため師等による臨床研究においても，この手引きを役立てての評価指標を薬理試験等から適切に設定する必要があいただければ幸いである．このような臨床研究がエビデる．一方，「用法及び用量」は事前の試験で設定するこンス性の高いものとなれば，該当する効能の承認申請時ともあるが，臨床試験の中で異なる用量又は用法を複数における牛を供した薬理試験の参考資料となる可能性が群設定することもある．ただし，多重性の観点からは，ある．

無意味に多数となる群を設定することは推奨されない．

本手引きにより，臨床試験設計につながる基礎研究の在り方（どのような基礎研究が必要か），臨床研究においてどのような評価方法を用いるべきか（必要な評価方
法の蓄積），新薬開発をサポートするエビデンスになり得る事象とはなにかについての大きな方向性が共有されることを期待する．

1 ．開発の手順
以下に臨床試験開始前の状態である新薬開発の一般的手順の例を示す．

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き〈Step 1〉
． 開発の意義（現場ニーズ，ベネフィット
として），対象疾患領域，開発薬の臨床的位置づけを調べる〈Step 2〉． 対象動物安全性試験，薬効及び安全性薬
理試験並びに罹患動物を用いた薬理試験結果から，適切な用法及び用量，試験期間等を設定する〈Step 3〉． 期待する薬効を評価するための，有効性評価項目及び安全性評価項目を十分吟味する〈Step 4〉
． 統計学的な観点から，適切な試験設計をする〈Step 5〉
． 治験届提出の数カ月以上前に，農林水産省動物医薬品検査所に承認相談をする（注）〈Step 6〉
． 同意を得た方法において，臨床試験の治験届を提出する（注）サイトカイン製剤等は有効成分，標榜する
効能・効果によって評価基準が異なると考えられることから，治験届けを提出する前に試験設計について相談することが望ましい。

3

れるべきであるのかを示しており，それに準じることで新薬開発の意義を開発者以外の者にわかりやすく説明することが可能となる．
2 ．乳牛を供する試験1 ）乳牛の臨床試験に至る開発の相臨床試験といっても，はじめから効果を検証する臨床試験が実施されるわけではない．その臨床試験を実施するための準備として，対象動物である乳牛を供する各種試験がある．それらの試験は，各目的からいろいろな相で実施される（図 2 − 1 ）．それらは一般的に，対象動物安全性試験，作用機序検討等のための薬効薬理試験，
薬物動態（PK），薬物動力学（PK/PD）・バイオマーカー
探索等試験，用法用量設定のための薬効薬理試験，代謝残留試験，そしてそれらを総合的に勘案して実施される臨床試験となっている（各試験の詳細を後述する）．な
お，この手引きでの in vivo という用語は，特段他の動物種の記載がない限り，乳牛を示している．
（ 1 ） GLP（Good Laboratory Practice）準拠対象動物安全性試験
この試験の目的は，開発する薬が健常な乳牛に対して，どのような忍容性を有するかを目的として実施される．したがって，安全性に関する検査項目を網羅的

各試験の結果が適切な申請資料として反映されるために設定し試験が実施される．このとき，泌乳期，乾乳には，農林水産省動物医薬品検査所長から発出されてい期などの使用時期は，効能又は効果から考えて適切なる関連通知（以下，「所長通知」という）の別添 2 「動時期にすべきである．また，その試験期間及び剖検す物用医薬品等の承認申請資料のためのガイドライン等」

る時期についても，重要な所見が検出できるように設及び別添 3 「動物用医薬品（体外診断用医薬品を除く）

定すべきであろう．さらに，症例数及び用量に関しての承認販売申請書に添付する概要書の作成要領についは， 動 物 福 祉 や3R（Replacement，Reduction，て」11） の一部を踏まえる必要がある．とくに，概要書

Refinement）の観点から，無用な再試験が行われなの作成要領は，申請時に必要な情報がどのように提示さいよう十分考慮して設計するべきである（詳細は所長

図2－1

乳牛の臨床試験に至る開発の相のイメージ

家畜衛生学雑誌

4

通知別添 2 の10，10− 1 及び10− 2 項を参照する）．

第43巻第 1 号（2017）てもこの相・段階で検討しておく必要がある．

再試験になる可能性としては，最終的な臨床用量や投乳房炎疾患に対する作用機序検討とは，ある薬がど与期間を下回る試験が実施された場合等がある．こののように病原微生物に作用し，全身・乳房組織の炎症

ときの用量設定根拠は非 GLP の牛を供した薬効薬理が治まっていくかを検討することが第一歩である．

試験結果が参考になる場合もある．

ⅰ）直接的な抗病原微生物活性を有する製剤においさらに，乳牛において最も重要な安全性の 1 つに健ては，この説明は in vitro の抗菌スペクトル検

常胎子の正常な分娩がある．新規作用機序の製剤が，索等に基づいて，in vivo 試験においての微生物

牛の胎子発生にどのような影響をするかについて，薬病巣における薬剤到達の検出と当該微生物の死

理作用の延長上から懸念される場合には，牛の生殖発滅等（抗微生物活性）を確認し，炎症所見が消生毒性を実施する必要がある．これは齧歯類やウサギえることを臨床的に確かめられれば，作用機序を用いた毒性試験において，生殖発生毒性試験結果がが説明可能になったということになる．

陰性であったとしても，牛に対する生物活性が大きく

ⅱ）抗微生物活性ではなく，炎症そのものを対象に異なる場合にはとくに重要となる．懸念される毒性とし，生体内の受容体，酵素，それ以外の炎症組しては，胚早期死滅，催奇形性，異常胎子，流産，早織等に作用することで，抗炎症効果を示す製剤産等である．また，仮にこのような毒性があったとしに つ い て は，in vitro の 抗 炎 症 効 果 に 基 づ いても，胎子発生の時期から投薬を制限することによりて，in vivo 試験においての薬理学的作用点への異常産等が起きないことが確認されれば，使用上の制薬剤到達の検出及び炎症所見が消失することを限の下で，臨床上有益であると判断されることもあ

臨床的に確かめられれば，作用機序が説明可能

る．

になったということになる．ただし，免疫抑制

これらの試験結果のもっとも有益な情報は，臨床試
験設計に関わる用法及び用量だけではなく，新薬投与による微生物病巣の活発化なども確認することが後の相の試験で重要となる．

により起こりうる罹患乳牛に対するリスクの予測に役

ⅲ）特異的な抗病原微生物免疫（獲得免疫）を誘導立つという点である．当然ながら，健康牛と乳房炎罹するワクチンにおいては，微生物体分解物等

患牛との病態の違いを考慮したリスクを，安全性試験

が，液性免疫及び細胞性免疫を誘導することを結果から検討する知識及び技術が必要であることは言in vivo 試験において確認し，その免疫誘導を臨

うまでもない．

床的な炎症抑制，場合によっては抗微生物活性（ 2 ） 薬効薬理試験Ⅰ：作用機序検討・評価項目探索と結び付けることができれば，作用機序が説明

等可能になったということになる．とくに乳房炎

乳牛を供する薬効薬理試験は，対象動物安全性試験に関しては，乳汁中や血液中の特異的な抗体がのための用量設定，乳房炎罹患牛における①作用機序

必ずしも臨床所見上の治癒に結びつかない場合検討，②有効性及び安全性評価項目の探索，③薬力学もあるため，治癒に関連する適切な免疫応答（PD）の確認，④バイオマーカーの検討，⑤対象疾患

マーカーを見出すことが重要である．

の検討など，臨床試験実施のための基礎データ収集を目的としている．

ⅳ）自 然免疫系の内因性物質に関しては，in vitroの薬理作用を十分検討した上で，in vivo 試験に

これらの薬効薬理試験は，対象乳房炎を誘発した乳おいてその作用を確認し，臨床的な炎症抑制や牛を供した試験を実施し，用量反応関係や用法及び用場合によっては抗微生物活性と結び付けること

量など治療期間の基礎データを作るために，実施されができれば，作用機序が説明可能になったといるべき試験である．とくに抗菌剤以外の免疫調整剤

うことになる．

は，直接病原体に抗微生物作用を示すわけではなく，

ⅴ）免疫系を誘導するサイトカイン・ケモカインに

生体内の免疫系を誘導もしくは抑制することにより，関しては，in vitro の薬理作用を十分検討した

結果として間接的に乳房炎に作用するという作用機序

上で，in vivo 試験において何らかの免疫誘導に関する根拠をこの相の試験で示さなくてはならな

マーカーの変動を確認し，臨床的な炎症抑制及い．このためには，乳房炎モデルの成立条件が重要とび，場合によっては抗微生物活性と結び付ける

なる．

ことができれば，作用機序が説明可能になった

さらに，泌乳期に用いなくてはならない繁殖用薬，消毒薬等や，乾乳期では，乳熱予防用薬の影響についということになる．
ⅵ）そ の他の作用機序が想定されるものに関して

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き

5は，in vitro の薬理作用を十分検討した上で，的レベルを考慮する．全身投与と乳房炎内投与においその薬理作用の特性を踏まえた in vivo 薬理試て，Cmax となる時間（Tmax）が血中（血漿中）及験を設計し，試験結果から何らかのバイオマー

び乳汁中で異なると想定されるため，有効性としては

カーの変動を確認し，臨床的な炎症抑制や場合

乳汁中，安全性としては血中（血漿中）などのようにによっては抗微生物活性と結び付けることがでどちらの評価にも対応できるようにする必要がある．

きれば，作用機序が説明可能になったというこ（ 4 ） 薬 動 力 学 PK/Pharmacodynamics（PD） 試 験とになる．このとき，薬理作用から想定される及びバイオマーカー探索試験

毒性と，毒性試験結果から得られた毒性を踏ま

用量と薬力学の関係を明らかにし，用量反応関係をえて，安全性に関わる情報をこの時点で探索す明確にし，用法及び用量の設定試験や検証的臨床試験

ることで，後の相の試験設計において重要とな実施の基礎データとする．ここでの薬力学とは，作用ることに留意したい．

機序を明らかにし，生体内免疫系（サイトカイン，ケ（ 3 ）薬物動態試験（PK）
乳牛を供する薬物動態試験においては，薬物の吸モカイン類及び免疫系細胞），抗微生物効果及び臨床所見等の用量との相関について検討することである．

収，全身及び乳汁中への分布，代謝，排泄を検討する

PK/PD 試験は，①薬物濃度測定による体内へ薬物ために実施される．とくに，薬物の体内動態を評価す

移行性，②随伴バイオマーカーの検出による薬物のシることにより，適切な用法及び用量を設定するためにグナルの体内での伝達，③臨床評価項目を評価するこ

重要な基礎データである．この試験結果に基づいて，とで，実際に目的となる薬効を示したかを各々確認で

PK/PD 試験が実施される．

きる．これらは，乳房炎原因微生物に対する直接作用

採材部位としては，血液，血漿及び乳汁を基本とし，必要な場合には他の部位も対象となる．サンプリ

ではなく，間接的な作用を示す製剤には特に有効であることが特徴である．

ングポイントは吸収及び排泄速度が十分評価できるよ牛乳房炎において，有効性バイオマーカーの発見がうに設定すべきである．また，事前に，もしくはこの

当疾患領域の治療方法を発展させる糸口となる可能性

試験で，有効成分の血球／血漿の分配比や血漿タンパがある．これにより，現在の疾患分類（表 3 − 3 ）だ

ク質結合率，乳汁タンパク質結合率を評価する必要がけではわからない，乳房炎の病態の違いが，治療の反ある．

応性を左右していることが想定されるからである．ま投与されたサイトカイン製剤の薬物動態が，内因性た，サイトカインなどの免疫誘導をするような物質にのサイトカインと異なる場合には，両者を識別できる

関しては，マーカーの変動が激しいと想定されるた測定系を開発しバリデーションする必要がある．一め，複数マーカーの選択も十分考慮される（図 2 −方，同一の場合には投与前後の違いで確認し，生理学

2 ）．

図2−2

サイトカイン投与後に変動する生体内のバイオマーカー等や治療効果（太線）のイメージ

家畜衛生学雑誌

6

第43巻第 1 号（2017）

この有効性バイオマーカー探索は，臨床獣医師と研かを確かめた上で，国内外の飼養実態を詳細に比較分究者が，乳房炎治療戦略や有効性評価に最も貢献でき

析して試験設計を行う必要がある．したがって，臨床る研究分野の 1 つである．

試験の設計の元となる各試験については，国内外で異（ 5 ） 薬効薬理試験Ⅱ：乳房炎罹患乳牛を供する用法

なる要因がある場合には，（ 1 ）〜（ 6 ）までの試験及び用量設定試験も国内施設で実施した方が，臨床試験設計が適切とな

PK/PD 試験を実施して，in vivo 用量反応関係を調る可能性が高い．日本の現状とかけ離れた飼養状況のべて，適切なバイオマーカーや臨床評価項目が決まれ下で実施された海外試験は評価資料にはならず，諸外ば，臨床試験実施のための用法及び用量並びに試験期

国の状況として参考資料として取り扱われる場合があ間の検討を目的とした当該試験を実施すべきである．

る．臨床試験が，（ 1 ）〜（ 6 ）までの試験と大きく

この相では，臨床試験の結果を大きく左右する評価項異なる点は，管理された実験的環境ではなく，実際の目並びに用法及び用量の設定に関わるため，ある程度生産現場及び獣医臨床現場の試験である点である．その規模の例数での試験が推奨される．

のため，ばらつきや結果に影響する要因が多くなるた

この試験においても用法及び用量が決定されない場

め，詳細は，Ⅲ章以降で述べる．

合には，臨床試験で複数群を設定することも可能であ

また，臨床試験の大きな特徴は，事前に設定したプるが，症例数は 1 群30例以上として，多重性の観点か

ロトコール以外の解析による後付け解釈は一切認めら

ら 3 群を超えない程度にするべきである．なお，臨床れない点である．そのような場合は，当該試験を探索

試験以外において，用量設定試験を実施する場合に的試験結果として位置づけ，再度検証的な臨床試験をは，探索目的から群数の設定にはとくに制限はない．

実施しなくてはならない．

試験期間設定に関しては，PK/PD 試験結果等を踏2 ）試験数の最少化と動物福祉

まえて，PD が持続する期間を十分考慮に入れるべきⅡの 2 ．の 1 ）「乳牛の臨床試験に至る開発の相」で示である．とくに，免疫誘導や抑制をする薬の場合にした各試験のうち，GLP 及び GCP 試験以外は， 1 つのは，PD に何を設定するかにより，試験期間設定が大試験で 2 つ以上の目的により実施することが試験動物のきく異なると考えられる．そのため，試験終了後に乳3R や動物福祉の観点から重要である．in vivo 薬理試験

牛及び生産者に不利益が生じないように，事後の観察においても，クロスオーバー試験なども検討し，試験に期間を十分長く設定し，臨床症状，乳や繁殖成績，胎供する乳牛の数を減らすことも十分受入れられる．ま子，新生子牛等に関する動物の安全性や生産性に関わた，用量反応関係やバイオマーカー探索は，部分的に安る有害事象を見逃さないようにすべきである．

全性試験の中に組み入れることも可能である．その場合（ 6 ）GLP 代謝残留試験

は，所長通知別添 2 の10，10− 1 及び10− 2 項の要求事

この試験は，承認予定の用法及び用量における休薬
期間を設定するための試験である．詳細は所長通知別項に適切な試験項目を追加することになる．
3 ）公知の文献の利用について

添 2 の14項を参照する．また，この試験は，乳牛を供

Ⅱの 2 ．の 1 ）で示した GLP 及び GCP 試験以外は，乳する薬物動態試験とは別の目的で臨床試験及び市販後牛を供した公表文献にて代替することも可能な場合があの休薬期間の設定根拠のために，GLP 試験として実施

る．例えば，当該申請に係る事項が薬学又は獣医学上公しなくてはならない．なお，この試験は公衆衛生上の知である場合がそれに該当する12）．また，用量設定の予

食品の安全性確保のために特化した重要な試験である

備試験の代わりに文献を用いた場合，それらを根拠にしが，効果を検証する目的の臨床試験設定には直接関係た本試験がそのまま成功すれば十分な根拠となる．

しないため，この手引きでは触れないこととする．

4 ）承認相談の利用（ 7 ）GCP（Good Clinical Practice）準拠臨床試験

新規の効能又は効果，新たな作用機序の臨床試験実施目的とする効能又は効果を検証するための臨床試験

前には，30日前の届出よりも数カ月以上前に，農林水産は，少なくとも 1 か所以上日本国内で実施しなければ

省動物医薬品検査所への承認相談などにおいて開発計画ならない．ただし，日本・米国・欧州の GCP 基準にの概要や臨床試験プロトコールについて審査当局と相談したがって実施した試験であれば，市販後調査に関すすることが望ましい．

る条件付きで，国内試験を代替できる（生物学的製剤等を除く）。この場合も，乳牛の飼養環境は国や地域で大きく異なることから，日本の畜産現場及び獣医療の実態の中で，実際にどのようにその薬が使用される

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き

71 ）疾病の定義

Ⅲ．臨床試験設計の概要（ 1 ） 乳房炎とは，牛の乳腺組織の炎症による疾患で臨床試験成功の鍵は，事前の準備であり，計画の元とある．炎症は様々な原因，誘因，要因によってなる乳牛を供した薬理試験等の試験成績の質が重要なこ起こるが，乳房炎の原因の多くは乳房内に侵入とは既に述べている．ここでは，適切な事前の薬理試験

し，増殖する病原性微生物である．乳房炎か否

結果を踏まえて，どのように臨床試験を設計すべきかにかは，乳房毎の臨床症状の有無，乳汁の体細胞ついて述べる．以下に，乳房炎の病態と分類，効能又は数スコア又は色調スコア，乳房炎原因微生物の効果の総論的考え方，乳牛の臨床試験のための統計学的検出等で総合的に診断する．

原則，そしてそれらを考慮して設定される評価項目につ（ 2 ）「乳房炎と診断された牛」とは，乳房炎と診断された乳房を 1 つ以上保有する牛をいう．

いて示す．

2 ）乳房炎の病態
1 ．乳房炎の病態と分類（ 1 ） 乳房又は乳頭の異常

対象疾患を明確にし，組入れ基準及び除外基準を的確（ 2 ） 乳汁性状の肉眼的な異常，体細胞数の上昇等に設定することが大切である．そのためには，乳房炎の（ 3 ） 食欲減退，体温上昇などの全身症状

病態を踏まえて分類をし，各診断方法を明確にすること

3 ）乳房炎の分類

で，予定する効能又は効果に適切な症例を集めることが（ 1 ）泌乳ステージによる分類
泌乳期と乾乳期に分けられるが，泌乳期の乳房炎を

できる．

表3−1

目的

泌乳ステージ

臨床型別

一般的な乳房炎の分類と病態との関係
病態

全身性又は
乳房局所
全身

泌乳期乳房炎
治療
又は
予防

臨床型
局所
潜在性

局所
全身

乾乳期乳房炎臨床型
局所
潜在性〇：よく見られる

局所

伝染性
経過

A

B

甚急性

△

急性

〇

〇

急性

〇

〇

慢性

△

△

──

〇

〇

C

〇
〇

環境性
D

K

L

M

N

O

△

△

△

△

〇

〇

〇

〇

〇

△

△

〇

〇

〇

〇

〇

〇

〇

〇

〇

△

△

〇

〇

△

〇

〇

〇

〇

〇

△

△

△

△

△

甚急性
急性
急性
慢性

△

──

△

△：稀に見られる

伝染性グループＡ：黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureus
グループＢ：無乳連鎖球菌 Streptococcus agalactiae
グループＣ：コリネバクテリウム Corynebacterium bovis
グループＤ：マイコプラズマ Mycoplasma spp.
環境性グループＫ：大腸菌群；Escherichia coli，Klebsiella spp.
グループＬ：その他のグラム陰性菌，；Pseudomonas aeruginosa
グループＭ：環境性連鎖球菌
グループＮ：黄色ブドウ球菌以外のブドウ球菌
グループＯ：真菌性乳房炎，；酵母：Candida spp.，糸状菌：Aspergillus fumigatus
グループＰ：プロトセカ；Prototheca zopfii

P家畜衛生学雑誌

8

第43巻第 1 号（2017）

乾乳期から治療する場合も考えられる．また，泌乳期

学的検査から，乳房炎診断を実施する．

は，フェーズフィーディングの考えにより乳量が異な（ 1 ）全身症状る場合には，層別因子に入れることも考慮すべきかもしれない．
（ 2 ）臨床症状による分類
発熱等の全身症状があり，かつ乳房・乳頭・乳所見・体 温， 食 欲， 脱 水， 活 力， 下 痢， 起 伏 状 態，ショック症状（ 2 ）分房毎の乳房症状
・熱感，冷感，色調，腫脹，硬結，疼痛，損傷に症状があれば，全身性の臨床型乳房炎である．全身（ 3 ）分房毎の乳頭症状症状がないが，乳房・乳頭・乳所見に症状があれば，・乳頭口スコア，損傷

局所性の臨床型乳房炎である．全身及び乳房局所の臨床症状がなく，乳汁も肉眼的に正常であるが，乳汁中の体細胞数の上昇，乳房炎原因微生物の分離のいずれ（ 4 ）乳所見・乳 汁性状；色調，凝塊（ブツ），カリフォルニア
マスタイティステスト（CMT）

か或いは両方を示すものは，潜在性乳房炎となる．

・乳量（ 3 ）症状の経過による分類

・体細胞数

症状の経過が0.5〜 1 日で甚急性， 2 〜 3 日で急性，及び 1 週間以上で慢性の乳房炎に分類される．
（ 4 ）原因による分類
ア）伝染性乳房炎
・黄 色 ブ ド ウ 球 菌；Staphylococcus aureus（SA）・無乳性連鎖球菌；Streptococcus agalactiae（ 5 ）泌乳ステージ・産暦等
・フェーズフィーディングに従ったステージ，経産数（ 6 ）微生物学的検査
・個別の菌種に関しては上述参照．
5 ）乳房炎罹患牛の背景因子（ 1 ） 環境の背景因子；牧場の疾病発生率，乳房炎発生率，バルク乳データ，牛舎環境，飼養環境

・コリネバクテリウム；Corynebacterium bovis（ 2 ） 被験動物の背景因子：品種，年齢，体重，産暦・マ イ コ プ ラ ズ マ 性 乳 房 炎；Mycoplasma（初産もしくは経産・産次数），ディピング方bovis，M. californicum，M. bovigenitalium，法， 1 日の搾乳回数，年間泌乳量及び繁殖成績

M. canadense など（経産牛），牛体管理，ボディコンディションス

イ）環境性乳房炎
・大 腸 菌 群 Coliforms（CO）；Escherichia
coli，Klebsiella spp. Enterobacter spp. など
・環境性連鎖球菌 Streptococcus agalactiae 以外（OS）；Streptococcus uberis，S. dysagalactiae，コア（BCS），削蹄，搾乳形態，病歴（乳房炎並びにその他の主要な既往症，併発症）及び治療歴，ワクチン投与歴など
6 ）検査項目
効果を裏付ける基礎試験，用量設定試験及び安全性試

Aerococcus viridians，Enterococcus faecalis

験から適切に設定する．

など（ 1 ） 上記の診断方法に関する臨床スコア（全身症・黄色ブドウ球菌以外のブドウ球菌 Coagulase-状，乳房症状，乳汁性状）

n e g a t i v e s t a p h y l o c o c c i （ C N S ）；（ 2 ）（ 1 ）以外の要因となる項目

Staphylococcus chromogenes，S. hyicus，S.

ストレス指標としてのロコモーションスコ

epidermidis，S. hominis，S. xylosus，S.

ア，農場の乳房炎発生率，乳量，体細胞数，微simulans など

生物学的検査（原因菌の分離同定，菌数），免・そ の 他 の グ ラ ム 陰 性 菌；Pseudomonas
aeruginosa・その他のグラム陽性菌；Bacillus cereus など
ウ）環境性の難治性乳房炎
・真 菌性乳房炎，；酵母：Candida spp.，糸状菌：Aspergillus fumigatus
・プロトセカ乳房炎；Prototheca zopfii
4 ）乳房炎の診断方法
全身症状，乳房及び乳頭症状，乳所見（乳汁性状，乳量及び体細胞数），泌乳ステージ・産暦等並びに微生物

疫応答等について調査する．それを各々有効性
及び安全性評価項目として設定する．
（ 3 ） 分房毎の評価方法
全身投与もしくは局所投与においても他の分房に影響する製剤に関しては， 1 頭に 2 分房以上の乳房炎罹患乳房が存在したときには，分房毎に評価し，罹患分房の平均を算出すること
で，その個体の乳房炎所見とすることが 1 案である．このときも群割付で同じくらいの数になることが望ましい．

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き
2 ．効能又は効果の考え方

9

現在の科学的な根拠においては，乳房に対する何らか

治験時に予定する効能又は効果を設定し，治験計画書の刺激が，乳房における炎症を誘発し乳房炎となる．そを作成するが，事前の臨床薬理試験等を踏まえて，探索の要因となる刺激の多くは微生物感染である13）．微生物

的に得られた効果を十分検証するための試験デザインに感染の結果，毒素やその菌体成分により生体側が免疫反する必要がある．また，その効能を評価するための項目

応を引き起こし，それが炎症となって現れる14，15）．これとして，主要評価項目及び副次評価項目を設定する．こに対する治療又は予防のメカニズムは，「抗微生物作用の有効性に関する主要評価項目は，臨床的に意味のあるの結果や種々の免疫誘導などにより，乳房炎の炎症を押項目を設定すべきであり，副次評価項目は，主要評価項

さえる」というものである．抗微生物作用を有する医薬目と相関を示す項目，または，作用機序検討試験で見出品の候補としては，抗菌剤のような特異的な抗菌スペク

されるバイオマーカーなども含まれる．予定する効能又トルを有する薬剤，ワクチンのような特異的な免疫誘導は効果を設定したが，期待どおりの結果が得られなかっ剤，ラクトフェリンのような自然免疫物質である非特異た場合がよくある．こういった場合に備えて，評価項目

的な抗菌活性剤，そしてサイトカインのような非特異的の達成度をクラス分類し，a 以上で効能又は効果 A，b

な免疫誘導剤が考えられる．非特異的な抗炎症剤の単剤

以上 a 未満では効能又は効果 B，b 未満では効果なしと療法は，その製剤自体に抗微生物活性がない場合には，いう評価基準をあらかじめ臨床試験プロトコールに入れ

一時的には炎症を抑えても，すぐに再発し悪化することることで， 1 つの臨床試験から解釈できる情報を増やすが想定され，そのような製剤には，炎症抑制を評価することも可能である．このとき，効能又は効果は臨床的に時点を慎重に設定する必要がある．したがって，乳房炎

意味のあるものでなくてはならず，プラセボ効果と同等

治療の機序が，「抗微生物作用の結果としての乳房炎のの効能又は効果は認められない．

炎症抑制」という原則を踏まえ，「製剤による炎症抑制

また，評価項目には，畜主の満足度なども設定することで，被験薬の効果判定の参考になるかもしれない．
1 ）乳房炎疾患と効能又は効果効果を評価する」ことが乳房炎臨床試験には最も適切な方法であると考えられる．
現在，日本国内で承認されているほとんどの乳房炎治臨床試験では，予定している効能又は効果を検証する

療薬は，特異的な抗菌スペクトルをもつ抗菌剤（抗生物試験であることは先に述べた．乳房炎疾患における治療

質及び合成抗菌薬）であり，効能又は効果は「乳房炎の又は予防の最終目的について踏まえた上で，臨床現場で治療」である．抗菌剤療法は乳房炎治療のスタンダードの意義を考慮した効能又は効果を考えなくてはならなであり，一定の有効性が確認されている．しかしながい．

ら，それでも治癒しない乳房炎もあり，抗菌剤療法では酪農業が，「質の高い乳を多く生産すること」は，高乳量は改善しない場合も多い．したがって，生産現場や品質乳が評価され，農場の収益が向上することや，ヒト臨床現場では乳房炎治療の最終目的「乳房炎による乳質に良質乳を提供することでヒトに対する良質なタンパク及び乳量低下からの回復」を満たすための新薬開発が望質源を確保するという点において重要な食品需要に対応まれている．国内では，ワクチン，ラクトフェリン，サ

している．したがって，酪農業の根本的な目的が，「良イトカイン等の検討が行われている16）．これらの新薬は質乳を多く生産すること」であると規定できる．その目

病原微生物に対する直接的な又は強い作用を有するもの

的を達成させるための酪農経営及びそのための獣医療のではなく，生体免疫機能の活性化等によって効能を示す

目的は，「良質乳を多く生産する乳牛の健康維持」であ製剤であることから，投与後短時間で劇的な作用発現はる．そこに現れる乳房炎は，乳質の低下及び乳量の低下

期待されないと考えられる．そのような状況下で，既承による収益の低下と，ときに症状の悪化においては，動認の抗菌剤を実薬対照として臨床試験を実施すること

物福祉の観点から乳牛に対する健康危害そのものであで，異なる作用機序を有する製剤の可能性を十分検証でる．そのような状況で求められる獣医療は，乳牛の快適きない懸念がある．そこで，効能又は効果の評価方法は性及び安全性を担保するための治療や予防行為であり，新たなる観点から検討されるべきである．以下に，治療その結果期待されるものは，乳質及び乳量の改善であと予防に大別して考える．

る．このようなことから，乳房炎の治療目的は「乳房炎（ 1 ）牛乳房炎の治療に対する評価方法

による乳質及び乳量低下からの回復」であり，予防内容

前述のとおり，乳房炎の治療目的は「乳房炎によるは「乳質及び乳量低下を伴う乳房炎発生の防止」であ

乳質及び乳量低下からの回復」であることから，それる．では乳房炎の発現機序から，どのように治療又は予を達成するまでの途中の効果も補助療法として効能又防行為について考えるべきであろうか．

は効果を与えることが可能と考えられる．

家畜衛生学雑誌

10

第43巻第 1 号（2017）
果であるのか，あるいは設定したすべての複数評価項（ 2 ）牛乳房炎の予防に対する評価方法

目に対する効果であるのかを明らかにするべきであ予防に関しては，抗体価上昇や細胞性免疫の誘導がる．

乳房炎の治癒と直接的に結びついているときは，それ2 ）効能又は効果の例示

らを免疫応答マーカーとしてもよいが，副次評価項目とすべきであろう．主要評価項目は，対照群に比べた

現在報告されている乳房炎は，おおまかにⅢの 1 ．の臨床スコアの改善，乳房炎治療をするまでの期間又は3 ）「乳房炎の分類」に示されているとおりである（表発症までの期間延長等を評価する方法が妥当かもしれ3 − 1 ）．効能又は効果に関しては，表 3 − 2 を参照．

ない．

（ 1 ）泌乳期乳房炎の治療効果に関して
ア）臨床型乳房炎の治療（ 3 ）主要評価項目と副次評価項目

イ）臨床型乳房炎の症状緩和

一つの効能又は効果に対しては，一つの主要評価項ウ）潜在性乳房炎における体細胞数低下若しくは乳目を設定すべきである．臨床試験設計前には，様々な汁性状の向上試験（対象動物安全性試験，探索的な薬理試験，薬物

エ）臨床型乳房炎における免疫細胞の活性化による動態試験等）の結果が得られている．これらの試験結抗菌剤療法の効果向上

果から，開発している製剤が乳房炎に対してどのようオ）甚急性乳房炎における免疫反応誘導による蘇生な用法及び用量で，どのような効能又は効果があるか率の向上について，おおよその見当がついているはずであり，

カ）その他

臨床試験ではその見当が正しいのかを検証するために（ 2 ）乾乳期乳房炎の治療効果に関して実施される．そのため，効果を検証するべき一つの効能又は効果に対しては，少なくとも一つの評価項目がア）乾乳期乳房炎の治療規定されるはずである．ただし，治療の及ぼす効果のイ）臨床型乳房炎における免疫細胞の活性化による抗菌剤療法の効果向上

範囲を一つ一つの評価項目が包含するような，複数のウ）その他

評価項目を用いることが望ましいと考えられる場合に（ 3 ）泌乳期乳房炎の予防効果に関しては，複数の評価項目で行う妥当性を十分説明する必要がある．またその場合，検証的試験において確かめる

ア）細菌性乳房炎の抗菌剤治療後の再発防止べき有効性が，複数の評価項目のいずれかに対する効

イ）その他

表3－2

目的

治療
要素

予防
要素

現在想定される乳房炎領域の効能又は効果の概要
ステージ

単剤
・
併用

臨床型
・
潜在性

単剤

臨床型

治療

治療

治療

単剤

臨床型

症状緩和

症状緩和

症状緩和

単剤

潜在性

体細胞数低下もしくは乳汁性状の向上

体細胞数低下もしくは乳汁性状の向上

体細胞数低下もしくは乳汁性状の向上併用

臨床型

免疫細胞の活性化による 免疫細胞の活性化による 免疫細胞の活性化による 免疫細胞の活性化による抗菌剤療法の効果向上 抗菌剤療法の効果向上 抗菌剤療法の効果向上 抗菌剤療法の効果向上

併用

臨床型

甚急性乳房炎の治療

単剤

臨床型

乾乳期治療による泌乳
期乳房炎の発症予防

単剤

臨床型

予防

予防

予防

予防

単剤

潜在性

予防

予防

予防

予防

併用

臨床型

抗菌剤療法の効果向上

抗菌剤療法の効果向上

抗菌剤療法の効果向上

抗菌剤療法の効果向上

臨床型

黄色ブドウ球菌性乳房炎の抗菌剤治療後の再発防止

黄色ブドウ球菌性乳房炎の抗菌剤治療後の再発防止

黄色ブドウ球菌性乳房炎の抗菌剤治療後の再
発防止

併用

泌乳期
初期

中期

甚急性乳房炎の治療

乾乳期

後期
治療

甚急性乳房炎の治療
予防清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き（ 4 ）乾乳期乳房炎の予防効果に関して
ア）乾乳期乳房炎の予防
イ）その他（ 5 ）未経産牛乳房炎の治療効果に関して11

すべきである．また，それ以外の乳房内投与であっても血流を介して全身に分布する場合にも，同様に考えるべきであろう．
（ 2 ） この60頭以上とは，試験群が 2 群のときであア）細菌性乳房炎の抗菌剤治療後の再発防止

り，少なくとも30頭以上は承認予定の用法及び

イ）その他

用量で投薬される使用経験が必要であると解釈（ 6 ）未経産牛乳房炎の予防効果に関してされている．したがって，用量設定を含む臨床

ア）未経産乳房炎の予防試験を実施する場合には，この症例数では少なイ）その他

く，適切ではない．また，必要以上に試験群を3 ）現在の科学的水準から想定されうる乳房炎領域の新薬

設定することも多重性の観点から推奨されない．

現在の科学的水準から想定できる乳房炎領域の新薬と（ 3 ） 乳牛に対する既承認の動物用医薬品の効能追加

して，タンパク質製剤としてサイトカイン製剤，抗体医の開発・申請において，乳房炎の中でも，非常薬（Fab 断片も含む），酵素，ペプチドワクチン，微生に症例数が集めにくい乳房炎を対象とする場合

物体タンパク質を抗原としたワクチン，乳房内フローラには，実施可能性の観点から，症例数を設定しを改善するためのプロバイオティクス，DNA ワクチてもよい．この場合には，その希少性を十分にン，アプタマー，核酸アンチセンス，抗炎症性の低分子説明でき，当該医薬品が有する他の効能におい化合物等が可能性としては挙げられる．どのような種類て日本国内での使用実績が一定数以上存在するの開発においても，その薬物の特性を踏まえた試験設計場合に限られる．たとえば，甚急性乳房炎の治がなされるべきである．

療に関しては，ショック状態の乳牛を組み入れることが非常に困難である場合などが想定され

3 ．臨床試験のための統計学的原則
現代の臨床試験においては，統計学的な検討を欠くことはできない．また，臨床試験の統計学的な原則は，獣る．
2 ）偏りを回避するための計画上の技法
臨床試験での偏りを回避するための最も重要な計画上医学の基礎研究で用いられるものとは一線を画した厳格の技法は，盲検化（遮蔽化）及び無作為化である．

な考え方が求められるべきである．

（ 1 ）盲検化（遮蔽化）臨床試験において最も重要なことは，偏り（バイア

盲検化（遮蔽化）は，臨床試験の実施及び解釈におス，Bias）を最小にすることである．ここでの偏りは，ける意識的，無意識的な偏りの発生を制限するために

統計学的及び臨床試験運営上の偏りを意味している．

行われる．産業動物獣医療の臨床試験においては，盲臨床試験における最も一般的な試験デザインとして，検化（遮蔽化）すべき対象となるのは，罹患動物，畜

無作為化対照試験と並行群間比較試験，クロスオーバー

主，投薬獣医師，臨床評価獣医師，その他の治験関係比較試験である．症例数の設定，バイアスの最小化の方者及び開発者である．ここで投薬の対象となる罹患動法，治験実施施設の考え方，比較試験の方法について紹物を挙げた理由として，治療するためには，捕獲，保介する．

定等が必要になる場合も多く，治験に組み入れられる

1 ）症例数ことにより通常とは異なる生活パターンになることが原則60症例以上とする．ただし，検出力を確保するたあり，その環境変化が動物自身になんらかのストレス

めに，事前の用量設定に関わる薬理試験結果等に基づいや影響を与え，それが試験結果に影響する可能性があて，統計学的な観点からサンプルサイズを検討し，症例るためである．したがって，プラセボ対照に割付けら数を増やすことも推奨される．以下に注意事項を示す．

れた乳牛に何の処置もしないこと自体が，乳牛に遮蔽（ 1 ） 現行の「動物用医薬品の臨床評価に関する一般化が担保されていないことになる．実薬対照の場合に指針」17）では乳房炎の治療を目的とする注入剤

は，投薬の処置がなされるが，被験薬と投与経路が異等の場合には，40頭60分房（症例）以上となっなる場合には，ダブルダミー法などを採用することもているが，乳房注入剤であっても，免疫系を誘一案かもしれない．

導又は抑制する製剤等，効果が投与された分房二重盲検の方法として，被験薬と偽薬（プラセボに限局されず，全身又は他の分房の治療効果に薬）の場合には，両者が同一の剤形かつ投与経路であ影響を与える可能性が高い場合は，60頭以上とる必要がある．また，プラセボ薬は見た目が被験薬と

家畜衛生学雑誌

12

すぐにわからないように，評価に影響しないような添
加剤などを含めることで，懸濁性や色を合わせた製剤

第43巻第 1 号（2017）（ 1 ）治験実施施設の単位（図 3 − 1 ）ア）動物飼育施設（牧場）にすることも重要である．また，畜主の利益及び動物

1 つの牧場を 1 単位とする場合は，ある乳房

福祉の観点から，不要な添加剤を投薬することが困難

炎の発生率が高い場合には症例数が確保できるな場合には，シャム（sham；擬似的処置）による方が，そうでなければ実施は難しいかもしれな法が重要である．ただし，このときは，投薬獣医師のい．予防を効能とした場合や，潜在性乳房炎のみがその割付けを知り，畜主，臨床評価獣医師等には治療の場合には，十分な症例数を確保できるこ

その情報が知り得ないようにすることが必須である．

とが想定されるため，同一牧場内での割付けがさらに，対照がプラセボではなく実薬対照の場合に可能であるならば，実施意義は十分あるが，一は，その実薬にラベルをし，被験薬と区別がつかない

般化可能性の観点からは，実施施設を通常よりようにするべきである．ただし，包装容器，剤形や投多く設定することが推奨される．

与経路が明らかに異なる場合には，投薬獣医師のみがイ）診療施設が担当する複数牧場を含む地域

その割付けを知ることで，有効性及び安全性評価に影

乳牛の獣医療は往診によるものがほとんどで響しないような努力が必要である．

あると想定されるため，「診療施設」という表（ 2 ）無作為化

現よりは，「診療施設が担当する複数牧場を含

既知及び未知の予後因子の分布が類似した試験グむ地域」と設定する方が妥当であろう．牛の乳ループを設定でき，乳房炎罹患牛の割付に，選択的な房炎の治験実施施設の 1 単位として最もスタン

偏りを回避できる．

ダードな考え方であり，症例を集めるためにも（ 3 ）割付と因子

効率的と考えられる．牧場毎に効果に違いがあ

割付は，偏り（bias）を最小化するように実施するる可能性が考えられるが，牧場を層別因子としことが原則である．その実現のためには，盲検化（遮て割り付けることで，牧場間による差を軽減す蔽化）が重要である．

ることが可能となる．この治験実施施設を複数（ 4 ）予後因子の種類

設定することで，一般化可能性が高くなると考有効性評価に影響を与える予後因子を挙げる．大きな影響を与える場合には，層別因子として割り付ける必要がある．

えられる．
注）実際には， 1 診療所の 1 獣医師グループを 1
治験実施施設と定義し， 1 群10例以上で実施

ア）環境要因；地域，牧場，診療施設，季節する．ここでいう 1 獣医師グループとは，同イ）個体の要因；臨床スコアの重症度，産次数，泌

一の診療所内で同じ農場に交代で往診してい乳ステージ（フェーズフィーディング），病る複数の獣医師からなるチームであって，か歴，繁殖成績，BCS，ロコモーションスコア

つ当該治験において評価すべき臨床評価項目注）環境要因として，地域は国内においても地形

その他，診断及び治療において，同じ基準でや気候，牧場は農業経営形態，飼養形態や搾実施され，かつ意思疎通可能な集団を示す．

乳形態など被験動物所有者の経営方針が大き

ただし，投薬担当獣医師は，臨床評価獣医師

く表れる要因であり，診療施設は獣医師グにその内容を漏らしてはならない．

ループの診療体制や方針が個別に異なる要因

ウ）複数の診療施設を含んだ地域であると考えられる．同一診療施設内の獣医

大規模な臨床試験では想定される単位であ師間の変動を少なくするように，臨床試験時

る．イ）のような診療施設が複数あり，この 1には診断，評価方法等その他の手技にばらつ

単位は，地域間の差を一般化するときに用いらきが生じないように工夫する必要がある．

れるかもしれない．層別因子としては，地域，

3 ）牛の乳房炎の治験実施施設の考え方

診療施設，牧場の順になる．この場合は，診断

牛の乳房炎の治験実施施設の 1 単位として，①動物飼方法，投薬方法，評価方法に関して，診療施設

育施設（牧場），②診療施設が担当する複数牧場を含む

間のばらつきを限りなく小さくすることが重要地域，及び③複数の診療施設を含んだ地域等が考えられ

である．

る．

（ 2 ）治験実施施設数と 1 施設あたりの症例数
治験実施施設数は，（ 1 ）のイ）又はウ）を 1 単位とした場合には， 2 実施施設以上とし， 1 施設あたり

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き

13ア）動物飼育施設（牧場）ごとの単位

治験実施施設

治験実施施設

動物飼育施設（牧場）

動物飼育施設
（牧場）
診療施設

診療施設

治験実施施設Ａ

治験実施施設Ｂ …

イ）１つの診療施設が担当する複数牧場を含む単位
治験実施施設

治験実施施設
動物飼育施設（牧場）

動物飼育施設
（牧場）
診療施設

診療施設
動物飼育施設（牧場）
動物飼育施設（牧場）
動物飼育施設（牧場）

動物飼育施設（牧場）

動物飼育施設（牧場）

治験実施施設Ａ

動物飼育施設（牧場）
動物飼育施設（牧場）

動物飼育施設（牧場）

治験実施施設Ｂ …

ウ）複数の診療施設を含んだ地域の単位

治験実施施設Ａ

動物飼育施設（牧場）

治験実施施設Ｂ …

診療施設

図3−1

治験実施施設の 1 単位のイメージ

は， 1 群10例以上の症例数で実施する必要がある．群らないことを確認するための試験を「非劣性試験」と呼の割付は， 1 つの牧場に偏らないように割り付けるこぶ．被験薬の臨床上の位置づけ等からどちらを設定するとが重要である．

ことも可能である．

4 ）比較試験5 ）対照群の設定と動物福祉・牧場経営上の問題

臨床試験は並行群間試験が基本であり，被験薬の有効

対照群の設定に関しては，「プラセボ対照」が被験薬

性及び安全性を評価するために，比較薬剤として，「プの有効性を検証するのに最も信頼性のある方法である．

ラセボ対照」及び「実薬対照」が設定可能である．比較

予防を効能とする場合の試験や，治療法が存在しない難薬剤よりも臨床効果が優れることを確認するための試験

治性の疾患に関しては，実施可能性が高い．しかし，既を「優越性試験」といい，比較薬剤よりも臨床効果が劣承認薬による治療法が確立している場合には，動物福祉家畜衛生学雑誌

14

第43巻第 1 号（2017）の観点や牧場経営上の問題から，被験動物所有者から同は，事前の試験において，被験薬の効果等に影響しない意が得られないかもしれず，この場合には，実薬対照をことを確認する必要がある．

設定することもやむを得ない．ただし，同じ疾患を対象

9 ）安全性評価とした場合の既承認の同種同効薬が存在していたとして

動物用医薬品の乳房炎領域における有害事象及び副作も，作用機序が異なることから，異なる効能又は効果の用としては，動物福祉の観点（安全性），牧場経営の経取得を目指した場合には，実薬対照をおくか，プラセボ

済的観点（生産性）及び動物飼育者及び獣医師の安全性対照を置くかについては，十分検討する必要がある．

の観点並びに家畜衛生上の観点から評価できるようにす

また，既承認薬の運用の範囲における治療法が確立しるべきである（詳細は，Ⅲの 4 ．の 2 ）「安全生評価」をている場合には，その上乗せ効果を検証する試験であれ

参照）．

ば，対照群にも治療が施されるため，動物福祉の観点や10）開発者の試験デザインの選択

牧場経営上の問題となることは少ないと考えられる．

ばらつきの少ない小規模な試験は，一般化可能性18）

したがって，疾病の重篤性を踏まえて，プラセボ対照が低くなる傾向があり，一方ばらつきが大きいが大規模が困難な場合には，何らかの治療を施した実薬対照群をで行う試験は一般化可能性が高いものの，実施可能性の必ず設定し，比較試験を実施する必要がある．

観点から実際の試験実施は難しい場合もある．開発者は6 ）試験期間の設定

試験のデザインをこの点からどちらかを選択し，設定しⅡの 2 ．の 1 ）の（ 6 ）の用量用法設定根拠でも説明したが，適切な試験結果に基づいて設定すべきであり，予後判定や動物の安全性及び生産性に関わる有害事象がた試験の欠点を補うための評価方法について事前に十分検討する必要がある．
事前の薬理試験結果から，検出力が担保される症例数観察できる十分な期間を設定すべきである．

を設定し，大規模な臨床試験を実施する場合には，臨床7 ）組入れ基準と除外基準

評価スコアと微生物学的検査を主要評価項目とし，詳細ばらつきを小さくし，有効性及び安全性の観点から，なバイオマーカーを設定しなくとも，有効性が検証でき組入れ基準と除外基準を適切に設定することが重要である か も し れ な い． ま た， こ の よ う な 試 験 は ITTる．ただし，あまりにも狭い選択基準や過剰な除外基準（Intention-to-treat） 解 析 の 原 則 に 従 い，FAS（Fullを設定すると，症例数が集まらないことによる実施困難

Analysis Set）集団や PPS（Per Protocol Set）解析にもや一般化可能性が小さくなることも考慮して，Ⅳ．「乳意義があり，一般化可能性が高い試験と言える．

牛の臨床試験を実施する際の注意事項」にて説明してい一方，事前の薬理試験結果から，検出力がすでに十分る内容を踏まえて，バランス良く設定する必要がある．

でないとわかっているが，実施可能性の観点から症例数（ 1 ）組入れ基準が60例しか確保できない場合には，さまざまなバイオア）背景因子に関する基準（試験実施施設である牧マーカーを副次評価項目に入れることで，全体集団に有場及び獣医診療施設）

効性が確かめられるかもしれない．また部分集団解析にイ）被検動物に関する基準

より，どのような症例が高い有効性を示すかを見出すこ（ 2 ）除外基準ア）予定している効能又は効果の対象となる乳房炎
以外の疾患を併発イ）その他一定の条件に達しない牧場や個体とで，臨床上有益と認められれば承認する価値が十分にある．このような場合に備えて，候補となりうる解析方法をプロトコールとして，治験実施計画書に事前に記載する必要がある．事前に記載のない方法による結果の後最も注意すべきは，過去の監視伝染病発生農

付け解釈は一切認められることはない．ただし，極端に場における感染症の再発などに十分留意する必少ない部分集団解析の結果にはそれほど大きな意義はな

要がある．とくにヨーネ病等の疾患は，分娩時いと考えられる．

のストレスによる免疫抑制により発症すると考11）その他注意すべき点

えられているため，免疫調整剤などはこの点に（ 1 ）解析の事前明記

十分配慮する必要がある．
8 ）併用療法
抗菌活性のある飼料添加剤等の医薬品は，特別な事情のある場合を除き治験中には控えるべきであろう．その治験実施計画書の統計の部分に，データの最終統計
解析について記載する．想定される解析方法は，事前に記載する必要がある．
（ 2 ）欠測値と外れ値

他の併用薬は，ディッピング時の消毒剤以外原則使用し中止基準により症例の脱落することがある．このとない．ただし，泌乳初期に用いられる繁殖用薬について

きは，60例より少なくなることから，最終的な判定時

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き

15に60例以上となるように，あらかじめ症例数を増やす

る．

必要があるだろう．

（ 3 ）被験動物所有者もしくは獣医師の満足度による（ 3 ）推定，信頼区間及び仮説検定

評価

試験の主要な目的に対応した検定すべき仮説及び推乳牛の治療を要求するのは被験動物所有者若しくは定すべき試験治療効果を記載する．片側検定2.5％も動物飼育者である．上述の評価項目は乳牛に対する評

しくは両側検定 5 ％のどちらを用いるかを記載する．

価であり，必ずしもクライアントが満足する治療方法（ 4 ）有意水準と信頼水準の調整

でない場合がある．そこで，治療法に対する満足度を多重性が存在する場合には，第一種過誤（偽陽性）の調整が必要である．

評価することで，新薬の需要及び生産現場での意義並びに主要評価項目が適切である事の確認が可能と考えられる．一方，投薬担当獣医師にとっては，その取り4 ．評価項目
評価項目には，有効性及び安全性の観点から各々設定する必要がある．
1 ）有効性評価

扱い等について不具合がないか，ユーザーとして満足度を評価するための参考となる．これらは，当然，割付は遮蔽されていなくてはならない．
2 ）安全性評価

臨床的意義と薬理試験等から適切に設定されるべきで

動物用医薬品の乳房炎領域における有害事象及び副作

ある．事前の薬理試験で用量相関などが不明なバイオ用としては，（ 1 ）動物福祉，（ 2 ）牧場経営の経済的損マーカーは有効性評価に用いるべきではない．乳牛の個失，（ 3 ）ヒトへの安全性，（ 4 ）家畜衛生及び（ 5 ）食体の評価として，ア）主要評価項目及びイ）副次評価項

品の安全性の観点からそれぞれ評価するべきである．こ目がある．それ以外にも経済性を考慮した潜在性乳房炎

れらは，市販後のリスクとして，新薬のベネフィット／の治療や予防の場合には，ハードヘルスの考えを導入

リスクバランスを検討する上で有用な情報となる．

し，牛群管理法による評価項目を設定することも可能で（ 1 ）動物福祉の観点からあろう．

ここでは個体及びその牛群に関する動物福祉の観点（ 1 ）個体の評価
ア）主要評価項目
個体評価のための主要評価項目は，乳房炎のから説明するが，家畜衛上の問題は，（ 4 ）で別途取り上げている．
ア）投薬対象牛の予後診断基準に関わる項目で，かつ治療目的が反映

全身症状や乳房炎の悪化という点では，有効される項目とすべきである．それらの項目は，性の主要評価項目と共通になる．とくに，乳房

一般的な臨床現場で通常確認できる検査項目で等の所見には改善が見られるが，全身状態の悪

あ る こ と が 望 ま し い． 主 に Ⅲ の 1 ．の 4 ） の化や，その後の経過や乳量が改善されない場合「乳房炎の診断方法」に挙げられた項目が該当なども重要な評価項目となる．

する．
イ）副次評価項目イ）投薬対象牛の胎子に関する安全性（異常産等の調査）

薬理試験等で見出された，治療効果と相関す

泌乳中の初期以外は，乳牛は胎子を胎内に宿ることが確かめられているバイオマーカーを，していることがほとんどである．したがって，

副次的評価項目として設定することができる．

胎子の発生ステージにどのような影響を与える

主要評価項目で改善の傾向はあるが統計学的有かについては，新規作用機序の製剤においては意差が認められなかった場合でも，臨床試験実

安全性試験等で確認する必要がある（ここでの施前に設定した主要評価項目と密接に関連があ

異常産等は，妊娠率の低下，早期胚死滅，催奇る副次評価項目について有意差が認められた場

形性，虚弱胎子，流産，早産，分娩後発育不合には，当該主要評価項目についても有効と判良，子牛疾患罹患率増加等の胎子が母体にいる定できる場合がある．

間に投与されたことによる，子への垂直的なす（ 2 ）群の評価
個体の管理ではなく，牛群管理に必要な項目を設定

べての影響を意味している）．
ウ）投薬対象牛の安全性することも可能であり，それを主要及び副次評価項目

全身状態や他の感染症のリスクが増大する可に分けることで，牛群治療効果や生産性そのものの向能性がある場合には，適切な指標を用いるべき上を目指した治療法の有効性を評価できると考えられである．

家畜衛生学雑誌

16エ）投薬対象牛の同居牛の安全性
伝染性乳房炎の治療や，免疫活性化／抑制物
質による他の感染症の発生などにより，同居牛第43巻第 1 号（2017）
発症，拡大の懸念がある免疫調整剤に関しては，感染症を有害事象としてモニタリングし，その対策・対応方法を講じておく必要がある．

の疾病罹患率が上がっていないか確認する必要がある．
（ 2 ）牧場経営の経済的観点から

2 ．公衆衛生上の注意事項
乳牛を対象とする臨床試験は，他の畜産物とは異なア）予 後転帰による生産性：治験参加前後を比べり，乳の出荷・流通システムを十分考慮する必要があて，バルク乳の値などに変動がないか確認する

る．通常，乳は乳牛の分房・乳頭からミルカー，パイプ必要がある．

ラインを経て，バルクタンクに貯留され，冷蔵タンク

イ）生産性以外の治験に伴うコスト増大（ 3 ）治験薬取扱者（動物飼育者及び獣医師）への安全性の観点からローリーにて各農場から生乳工場へと搬送される．したがって，臨床試験に参加した 1 頭の乳牛の乳中の薬物残留が，適切に乳の廃棄がなされず，混入した場合には，投薬時にヒトへの曝露事故が起こりやすくないか，

バルク乳全体を汚染することになる。これを防止するた

投薬後の動物が凶暴になり，飼育が困難にならないかめ，バルク乳汁中濃度の推定と，休薬期間の設定のみななど，治験参加牧場及び診療所の担当獣医師に生じたらず，ADI や MRL 設定といったヒトの安全性を対象と不利益を有害事象として調査する必要がある．

した毒性試験結果及び乳の残留試験結果に基づいて，食（ 4 ）家 畜衛生の観点から（感染症の誘発・発症・拡品安全の観点からのリスク評価が事前に行われ，必要な大等）
投薬による，ⅰ）免疫抑制によるに日和見感染，ⅱ）潜在化していた感染症の発症，ⅲ）感染症の拡大

リスク管理措置が執られている必要がある．食肉として出荷する場合も，畜体に関して同様の措置が求められ
る．

感染が懸念される製剤の場合には，感染症をモニタリ
ング項目として適切に設定し，監視伝染病等の場合に3 ．製剤の安定性及び取り扱いについての注意事項

は，その診断方法は家畜伝染病予防法及び関連法規に

臨床試験に用いる製剤は，市販後製剤の規格と同一も準拠して，管轄の家畜保健衛生所に対して，そのリス

しくは，同等でなくてはならない．また，製剤の安定性クを周知する必要がある．

や保管方法，取り扱い上の注意についても，十分な情報

監視伝染病が過去に発生した農場やその地域においては，組入れ基準や設定項目に留意する必要がある．
（ 5 ）食品の安全性の観点から治療を施された動物由来の畜産物が人に摂取された
場合に，健康に対する影響の評価が必要である．

Ⅳ．乳牛の臨床試験を実施する際の注意事項
乳牛の臨床試験は，乳牛が家畜伝染病予防法の監視伝染病の対象動物に指定されていること，食品衛生法の家提供をする必要がある．
原薬及び製剤の規格及び検査方法に関しては，所長通知別添 2 の 1 項〜 8 － 8 項を参考にし，申請に耐えうる品質に関する試験成績を担保し，臨床試験を開始すべきである．
サイトカイン製剤のようないわゆるバイオ医薬品は，
生物活性などを規格値とするため，他の製剤よりも取り扱い上留意すべき点が多く，その妥当性に関しては，手引きを参考に，承認相談することが望ましい．

畜に指定されていること，農場より乳が集荷され，工場
で 1 つの容器内に集められた後には部分廃棄ができない
物流システムであること等を踏まえ，披験動物の所有者に同意を取る必要がある．また，治験には直接関係しない同地域内の臨床獣医師にも理解を得る必要があろう．
ワクチン等の生物学的製剤の場合は，治験実施場所を管轄する都道府県に使用許可申請を行う19，20）．
1 ．家畜衛生上の注意事項
最新の家畜伝染病予防法関連法規等を踏まえて，家畜衛生上の問題とならないような臨床試験プロトコールを設計する必要がある．治験参加により，感染症の誘発や4 ．その他の注意事項
製剤の剤形や投与方法により，適切に試験設定を定める．

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き

Ⅴ．乳房炎領域におけるベネフィット／リスクの検討と情報提供
1 ．乳房炎領域におけるベネフィット／リスクの検討
乳房炎領域においても当然，ある薬がもたらすベネ

17

ケースによっては効果が弱い場合や，何らかの副作用が生じたりすることもある．このようなリスクについて
は，臨床獣医師はそのバランスを検討し，被験動物所有者と相談の上，投薬の有無や薬剤選択をするべきであろう．

フィット／リスクバランスについて検討すべきである．
5 ．臨床試験参加の同意と治験薬の情報提供
2 ．乳房炎領域のベネフィット

臨床試験を実施するためには，参加者の同意を得なくある薬が乳房炎に対して，治療もしくは予防効果をもてはならない．そのために，まず治験薬に関する重要なたらすことである．場合によっては，他の薬の治療もし情報をわかりやすく説明する必要がある．また，その説

くは予防効果を向上させるというものも含まれる．

明内容は，獣医師向けと牧場長や飼育担当者向けには，用語や解説の表現を十分配慮すべきである．不利益とな

3 ．乳房炎領域のリスク
ここでいうリスクとは，有害事象や副作用，さらにるような情報，人への曝露時の適切な対処方法や動物への安全性に関する情報もわかりやすく説明する必要があ

は，生産性や経済性のコストということになる．ある薬

る．

が乳房炎に対して，治療又は予防効果をもたらしたとし

1 ）診療施設の獣医師に対してても，同時に生じた副作用による損失について検討しておく必要がある．ここで言う副作用には，胎子への悪影
響も含まれる．コストとは休薬期間中の乳の廃棄もコストであり，リスク要因の 1 つになると考えられる．

治験薬概要書，同意説明文書及び治験実施計画書が提示される．
治験薬概要書は，被験薬のプロファイルがよくわかる
ように，品質，毒性，対象動物安全性試験，薬理試験，

例えば，乳房炎治療効果を期待して薬を投与し，乳房

薬物動態試験，用法及び用量設定根拠試験及び残留試験

炎は回復したが，肺炎など他の感染症に罹患し，食欲低の結果を記載するとともに，取扱の注意事項を明確にす

下が続き，乳量と乳質が低下したり，繁殖成績が悪くなる必要がある．

る可能性がある．臨床試験参加時には，プラセボ薬で治その中で，臨床試験参加に伴い，生じるベネフィット療されるかもしれないこと，新薬の効果が低いかもしれ／リスクについても説明されている必要がある．このとないことにより，生産性に影響し，経済コストが生じる

き，治験薬の保管方法や取扱注意事項，ヒトに対する安かもしれない．

全性，及び動物に対する安全性についても記載されている必要がある．同意説明文書は，動物飼育施設と同じも

4 ．乳房炎領域のベネフィット／リスクバランスのでもよいが，獣医臨床上及び家畜衛生上，公衆衛生上

1 ）臨床試験参加時のベネフィット／リスクバランス

等のⅣ章で示した内容を十分理解してもらった上で，同ベネフィットは，期待の新薬に効果があるかもしれな
いこと，承認されることで後々の治療を受けることができるという点のみで，牧場経営者には，それほどメリッ

意してもらう必要がある．
2 ）診療施設が担当する動物飼育施設の責任者及び飼育担当者に対してトは多くないのかもしれない．とくに，治療を効能とし同意説明文書は，非専門家に対してもわかりやすい表たプラセボ対照試験の場合には，治療を受ける機会を逸現で，治験参加における注意事項等を含み，治験薬概要してしまうリスクがある．したがって，臨床試験参加に書を元に作成される必要がある．

は，臨床獣医師と被験動物所有者の信頼関係が大前提と3 ）臨床試験に参加を同意した後の同意撤回

なるが，開発者はこの関係を十分尊重し，不利益となる
ような情報を必ず開示する必要がある．

同意説明書には，一度同意しても，いつでも参加を拒否することを認めるという内容を記載すべきである．

2 ）承認申請後（市販後）のベネフィット／リスクバランス
開発の意義を定める上で，開発者はその新薬の臨床的6 ．治験関係者の義務
1 ）治験依頼者の義務意義について，十分調査していると考えられる．その新治験依頼者は，治験担当獣医師に治験薬の有する安全薬がもつ有効性に臨床的意義があるのであれば，その新性情報を正確に伝える義務がある．また，治験薬の毒性

薬は，生産現場及び臨床現場にベネフィットをもたらプロファイルから人への安全性に関して説明する．さらす．その一方で，臨床試験で確認された効果が，個別のに，治験薬の対象動物安全性試験等から得られた臨床所

家畜衛生学雑誌

18

第43巻第 1 号（2017）

見，病理所見，作用機序など安全性に関する情報を整理

Ⅵ．用語集

して，動物の予測されうる副作用や予期せぬ有害事象発現時に備えた治療等の対処方法をあらかじめ検討し，プ
ロトコールを記載する．
2 ）治験担当獣医師の義務

・動物実験の3R：
動物実験の実施における「Replacement（代替法の利用 ）」「Reduction（ 使 用 動 物 数 の 削 減 ）」「Refinement

治験担当獣医師は，治験計画実施書を精読し，同意文（苦痛の軽減）」の 3 つを表す概念．

書を被験動物所有者にわかりやすく説明する．動物の予・ITT（Intention-To-Treat）解析：

測されうる副作用や予期せぬ有害事象発現時に備えた治治験対象者が実際に割り付けられた治療を完結したか

療等の対処方法に対応可能なように準備する．

否かにかかわらず，当初割り付けた群にしたがって行う

3 ）治験を安全に遂行するために

結果分析．

製剤の取扱者に対する安全性について，十分考慮する

・FAS（Full Analysis Set）：

必要がある．とくに微量でもヒトに対して生物活性の高

ITT の原則に可能な限り近づけた被験者集団であり，いサイトカイン製剤の場合には，取り扱い方法の説明及ランダム化が行われた全被験者から，除くべき理由のあび取扱者の安全性の担保が重要であると考えられる．主る最低限の被験者を除外した集団．

に以下の 2 点が挙げられる．

・PPS（Per Protocol Set）解析：（ 1 ）ヒト型サイトカインを含めて，サイトカイン製

プロトコールから逸脱した患者を除外して実施する解剤の皮膚粘膜や吸入曝露による急性の免疫誘導

析．治療が最善に行われたときの治療効果をよりよく反もしくは抑制に対する安全性

映する．非劣性試験の解析と有害反応の解析に有用であ（ 2 ）ヒト型サイトカインを含めて，長期間のサイトる．

カイン製剤の皮膚粘膜や吸入曝露による慢性的・治験審査委員会（Institutional Review Board，IRB）：

な影響として，取扱者に自己の内因性サイトカ

治験実施機関が治験を実施する際に当局に届け出た治インを中和する自己抗体が出現することに対す

験デザインを審査する中立的な組織で，治験の倫理性，

る懸念

安全性，科学的妥当性を審査する委員会である．

どちらの場合にも，承認後の使用にも重要な点である
ため，治験の開始前にその対策方法について具体的な方法を準備する必要がある．

・プラセボ（偽薬）効果：
本物の薬のように見える外見をしているが，薬として効く成分は入っていない偽薬を処方しても，何らかの改善がみられることを言う．臨床試験において，被験薬や7 ．治験審査委員会（Institutional Review Board，IRB）の開催
治験審査委員会の開催について，現行の動物用医薬品

治療法の効果を検討するために，薬剤を投与されるグループと偽薬を投与されるグループに振り分け，「治療中の偶然の治癒や生活習慣，他の治療法の影響」といっ

GCP においては，治験実施に対する倫理面からの検討

た未知の要素による変化も考慮して投与される．

に関して，審査当局からの要求はない．ただし，家畜衛・サイトカイン製剤：

生上，公衆衛生上，畜産経営上，獣医臨床上，動物福祉細胞が分泌し，特定のレセプタータンパク質を介して上の観点から，治験の実施の妥当性については，開発者作用するタンパク性の因子で，その作用は免疫の調節

自らが十分考慮し，その妥当性を治験届出時の資料とし（促進，抑制），細胞増殖の促進，細胞分化の誘導・調て提出する必要があると考えられる．

節，アポトーシスの誘導，組織・臓器等の形態形成と多岐にわたる．

8 ．臨床試験結果の添付文書への記載

・GCP（Good Clinical Practice）：

臨床試験結果について，試験デザイン，症例数，評価

結果の信頼性と患者（罹患動物）の安全性を担保する

項目を具体的に示し，添付文書に記載することで，あるため，臨床試験の設計，管理，実施，監視，記録，分条件下で検証された有効性及び安全性であることを市販

析，報告等について守るべき基準．

後に使用者に周知するとともに，市販後に一般化可能性

・GLP（Good Laboratory Practice）：

を検討する必要があることも理解してもらう必要がある．

医薬品や食品の安全性を評価する検査や試験が，正確かつ適切に行われたことを保証するための基準．安全性評価試験の信頼性を確保するため，試験施設が備えるべき設備，機器，組織，試験の手順等について定めた基準．

清水ら：牛乳房炎用医薬品の臨床試験の手引き
・フェーズフィーディング：

19

ス薬および乳房炎治療薬の開発．農林水産省農林水泌乳ステージを 4 〜 5 期に分類した乳期別の栄養管産技術会議事務局研究成果

561号288−305頁．

理．例えば 5 期の場合， 1 ：乾乳前期， 2 ：乾乳後期，

7 ）林智人（2016）粘膜免疫機構に立脚した乳房炎粘膜

3 ：分娩〜泌乳ピーク， 4 ：泌乳中期， 5 ：泌乳後期にワクチン開発（総説）．産業動物獣医学雑誌．7.3．

分類する．

131−139頁．

・ハードヘルス（herd health）：

8 ）臨床評価委員会編（2013）牛の細菌性乳房炎を適応

生産動物を群として捉え，総合的な疾病防除・制御・症とする動物用抗菌性物質製剤（泌乳期用乳房注入

生産管理等をおこなうことにより，集団としての健全性剤）の臨床試験実施基準．動物用抗菌剤研究会報．

を保つ概念のこと．扱う動物の単位は，一農場における飼育群から，時には地域で飼養されている動物すべてとなることもある．

35（増刊号・Supplememt）．111−122頁．
9 ）臨床評価委員会編（2013）牛の細菌性乳房炎を適応症とする動物用抗菌性物質製剤（注射剤）の臨床試
験実施基準．動物用抗菌剤研究会報．35（増刊号・Ⅶ．謝辞

Supplememt）．123−128頁．

本手引きの作成にあたり種々ご助言等をいただきました，東北大学大学院農学研究科の山口高弘様（元），酪農学園大学獣医学群の萩原克郎様，大塚浩通様，国立研

10）動物用医薬品の臨床試験の実施の基準に関する省令（平成 9 年10月23日

農林水産省令第75号）．

11）動物医薬品検査所長通知（平成12年 3 月31日

12動究開発法人農研機構動物衛生研究部門の犬丸茂樹様，渡薬 A 第418号）医薬品，医療機器等の品質，有効性

部淳様，地方独立行政法人北海道立総合研究機構の小原及び安全性の確保等に関する法律関係事務の取扱い

潤子様，平井綱雄様，セバ・ジャパン株式会社の岩田晃について．

様，一般財団法人生物科学安全研究所の江口正志様

別 添 2 （http://www.maff.go.jp/nval/hourei_tuuti/（元），西田由美様，西村昌晃様，小川友香様，農林水産

pdf/160805_betten2.pdf）［2017.4.10アクセス］

省動物医薬品検査所の守岡綾子様，小佐々隆志様，大森

別 添 3 （http://www.maff.go.jp/nval/hourei_tuuti/

純一様，遠藤裕子様に感謝いたします．

pdf/20160930_28-2108betten3.pdf）［2017.4.10アクセス］

Ⅷ．引用文献等12）動物用医薬品等取締規則（平成16年12月24日

1 ）動物用抗菌剤研究会編（2015）牛の乳房炎治療ガイ
ドライン：抗菌剤適正使用のための理論と実際，20

農林水産省令第107号）第26条（承認申請書の添付資料
等）．
13）National Mastitis Council (U.S.) Microorganisms−23頁．緑書房，東京．
2 ）厚生労働省医薬食品局食品安全部長通知（平成17年

that cause bovine mastitis (1996), In Current

11月29日，食安発第1129001号）食品衛生法等の一Concepts of Bovine Mastitis 4thed. p11-19. National

部を改正する法律による改正後の食品衛生法第11条

Mastitis Council, Madison, WI.

第 3 項 の 施 行 に 伴 う 関 係 法 令 の 整 備 に つ い て．

14）Ian R. Tizard 著， 多 田 富 雄・ 古 澤 修 一 ら 監 訳（http://www.mhlw.go.jp/topics/bukyoku/iyaku/（2011）細菌およびその関連物質に対する獲得免

syoku-anzen/zanryu2/dl/051129-4.pdf）［2017.4.10

疫．イラストでみる獣医免疫学─免疫疾患の仕組み

アクセス］から治療まで─〔第 7 版〕．259−266頁．インター3 ）厚生労働省（2006）ポジティブリスト制度についてのパンフレット．
（www.mhlw.go.jp/topics/bukyoku/

ズー社，東京．
15）河合一洋監訳（2016）乳房炎のワクチン戦略

牛のiyaku/syoku-anzen/zanryu2/dl/060516-1.pdf）

乳房炎（日本語版）．135〜151頁．デーリィマン社，［2017.4.10アクセス］

東京．

4 ）動物用医薬品及び医薬品の使用の規制に関する省令（平成25年 5 月30日

農林水産省令第44号）．

5 ）動物用抗菌剤研究会編（2013）動物用抗菌剤マニュ
アル

第 2 版， 2 −67頁．インターズー，東京．

6 ）宮澤光博・菊佳男・前田雅弘ら（2016）医薬品作

16）河合一洋・米山修・平田圭子ら（2017）「これからの乳房炎の新しい治療・予防戦略」日本産業動物獣医学会─シンポジウム．平成28年度日本獣医師会獣医学術学会年次大会（石川）講演要旨．350−359頁．
17）動物医薬品検査所長通知（平成12年 3 月31日付け12

物，医療用素材等の開発．第 5 編

カイコによるヒ

動薬 A 第418号）の別添 2 の12「動物用医薬品の臨

ト・動物用医薬品の開発．第 3 章

ウシ用抗ウイル

床評価に関する一般指針」．

家畜衛生学雑誌

20

第43巻第 1 号（2017）18）医 薬 品 規 制 調 和 国 際 会 議（ICH），ガイドライン
E9： 臨 床 試 験 の た め の 統 計 学 的 原 則．
（http://
www.pmda.go.jp/int-activities/int-harmony/

十勝乳房炎協議会，帯広．
32）Thomson R. G. 著，板倉智敏ら訳（1980）獣医病理

ich/0031.html）［2017.4.10アクセス］
19）家畜伝染病予防法（昭和26年 5 月31日法律第166号）

学総論，学窓社，東京．
33）中尾敏彦・津曲茂久・片桐成二ら編（2012）獣医繁第50条（動物用生物学的製剤の使用の制限）．
20）家畜伝染病予防法施行規則（昭和26年 5 月31日

堂出版，東京．
31）十勝乳房炎協議会編（2014）Mastitis Control II，

農

林省令第35号）第57条（動物用生物学的製剤の指殖学，文永堂出版，東京．
34）National Mastitis Council (U.S) (1999) Laboratory
handbook on bovine mastitis, Revised Edition,

定）．

National Mastitis Council, Inc., New Prague,（以下，引用外参考資料）

Minnesota, USA.

21）明石博臣・大橋和彦・小沼操ら編（2011）動物の感

Concepts of Bovine Mastitis 5th edition, National染症，近代出版，東京．
22）伊藤勝昭・伊藤茂男ら編（2013）新獣医薬理学，近代出版，東京．
関するガイドライン（ICH-E）．
（http://www.pmda.
go.jp/int-activities/int-harmony/ich/0011.html）［2017.4.10アクセス］36）日本獣医病理学専門家協会編（2015）動物病理学各論，文永堂出版，東京．
37）Blowey R., Edmondson P.（2003）酪農家と獣医師による牛の乳房炎コントロール，チクサン出版，東24）岩田祐之・押田敏雄・酒井健夫ら編（2012）家畜衛生学，文永堂出版，東京．

京．
38）Noden, D.M., De Lahunta, A. 著， 牧 田 登 之 監 訳

25）江口保暢（1999）動物発生学，文永堂出版，東京．
26）笠井憲雪・二宮博義・黒澤努監訳（2011）実験動物の原理，学窓社，東京．

（1992）家畜発生学：発生のメカニズムと奇形，学窓社．
39）ホクレン農業協同組合連合会編（1992）乳質改善ハ27）Sears P.M., Wilson D.J., 著，田口清ら訳（2004）牛の乳房炎，獣医輸液研究会，東京．
産局衛生課

Mastitis Council, Inc., New Prague, Minnesota,
USA.

23）医薬品規制調和国際会議（ICH），有効性：臨床に28）全国家畜畜産物衛生指導協会

35）National Mastitis Council (U.S) (2016) Current

企画，農林水産省畜監修（1998）生産獣医療システム

ンドブック，ホクレン農業協同組合連合会，札幌．
40）前出吉光・小岩政照監修（2002）牛の臨床，デイ
リーマン社，東京．

乳41）見上彪監修（2011）獣医微生物学，文英堂出版，東29）全国農業共済協会編（2003）家畜共済の診療指針42）Rosenberger G. 編， 其 田 三 夫・ 河 田 啓 一 郎 訳

牛編 1 ，農山漁村文化協会，東京．
Ⅱ，全国農業共済協会，東京．
30）高島郁夫・熊谷進編（2004）獣医公衆衛生学，文永京．
（1981）牛の臨床検査診断，近代出版，東京．

21

Original report

Gas chromatography-mass spectrometry analysis of propoxur residue
level in cattle tissue during withdrawal period after liquid spraying
administration
Kouko Hamamoto 1), Ryoko Akama 1), Kenji Kinoshita 2) and Yasuharu Mizuno 1)

牛へ噴霧投与したプロポクスル製剤の休薬期間経過後組織残留濃度のガスクロマトグラフ質量分析計法による分析
浜本好子 １ ）・赤間亮子 １ ）・木下賢治 ２ ）・水野安晴 １ ）（1)National Veterinary Assay Laboratory, Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries,
1-15-1, Tokura, Kokubunji, Tokyo 185-8511, Japan

2)

Laboratory of Racing Chemistry, 1731-2 Tsuruta-Machi, Utunomiya, Tochigi 320-0851, Japan＊

Corresponding author: Kouko Hamamoto（pf180358-7596@tbz.t-com.ne.jp））（Received 11. Nov. 2016 ／Accepted 30. Apr. 2017）

Summary
The residue levels of propoxur (PHC) at a 4-day withdrawal period in cattle tissues, after liquid spraying of a
0.25％ PHC solution, were measured using a gas chromatography-mass spectrometry technique. The mean
recoveries from muscle, fat, liver, kidney, and intestine tissues were in the range of 99.6–115.5％. The limits ofdetection and quantitation in all tissues were 0.0004 and 0.002 µg/g, respectively. Three young Holstein-Friesian
cattle were sprayed with a 0.25％ PHC solution [3 L/cattle] at once at its maximum dose and period. PHC levels at
4 days after administration were determined to be ≦0.015 µg/g in muscles, ≦0.009 µg/g in fats, and ≦0.013 µg/g
in intestines, while, no PHC was detected in liver and kidney. The detected amounts of PHC were well below theJapanese provisional maximum residue limits. These results indicate that our analytical method can be applied todetermine the withdrawal period of PHC.
Key words：cattle tissue, GC–MS, liquid spraying, propoxur, residue level
  Jpn. J. Anim. Hyg. 43, 21〜26（2017）

Introduction

based insecticide for veterinary treatments in Japan.
PHC is usually sprayed as 0.1–0.25％ liquid solution to

Propoxur (PHC, CAS: 114-26- 1 : N-methylcarbamic

domestic animals and poultry; the drug is also used asacid (2-isopropoxyphenyl) ester) is used as a carbamate-an insecticide in the barn for cattle, swine and poultry.
The existing withdrawal period of PHC in cattle after

農林水産省動物医薬品検査所〒185−8511 東京都国分寺市戸倉 1 −15− 1
2）
競走馬理化学研究所〒320−0851 栃木県宇都宮市鶴田町1731− 2＊
連絡著者：浜本好子（pf180358-7596@tbz.t-com.ne.jp）1）liquid spraying with a PHC product (Borho 50％, Bayer
Yakuhin, Ltd., Osaka, Japan) was established as 4 daysat the time of drug approval; however, residual
concentrations in all edible cattle tissues at the end of

Jpn. J. Anim.Hyg. Vol. 43, No.1（2017）22

the withdrawal period are not confirmed sufficiently.

standard (IS)) were purchased from Wako Pure

In 2006, the “positive list” system was implemented by

Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japan). Otherthe Ministry of Health, Labour and Welfare (MHLW)

reagents used in this study were of pesticide residue

for all residual agricultural chemicals, including

analysis grade or special grade. The GC-MS system

pesticides, veterinary drugs, and feed additives inconsisted of an Agilent 7890 (Agilent Technologies, CA,

foods3). Simultaneously, the MHLW decided to establishUSA) gas chromatograph and a JMS-Q1000G-C MkII

provisional maximum residue limits (MRLs) for these(Japan Electronic Optical Laboratory Co. Ltd., Tokyo,

chemicals. The Japanese provisional MRLs for PHC in

Japan) mass spectrometer.

cattle tissues were established as 0.02 µg/g in muscle,

Samples were injected into an Rxi-5ms column (0.53

0.04 µg/g in fat and kidney, and 0.05 µg/g in the liver

mm i.d. x 30 m, 1.0 µm film thickness, Restec Co., PA,

and other edible portions3).

USA). The flow rate of the He carrier gas was 10 mL/

Various analytical methods have been evaluated formin. The column temperature program was as follows:quantification of PHC residue: high-performance liquid

90 ºC to 105 ºC, at 15 ºC/min; 105 ºC to 320 ºC at 30

chromatography (HPLC) in blood and urine of rat7) andºC/min. Injection volume was 2 µL directly and thesnakes5), gas chromatography-mass spectrometry (GC-selected ion monitoring mode was used in

2)MS) in milk and egg , GC-MS in animal tissues

quantification analysis. The mass-spectrometer

following sample preparation by gel permeationacquisition settings were as follows: electron-impact, and LC-MS/MS in

ionization ＝ 70 eV, ionization current ＝ 300 µA, andanimal muscle tissues9). Gas chromatography using an

ion source temperature ＝ 230 ºC. Qualifier ions were

electron capture detector (GC-ECD) has been used tomonitored to quantify PHC (m/z 110) and IS (m/z 188).

measure residue concentration of PHC in cattle tissues

Six calibration standards with final PHC

at the time of approval of the PHC preparation. The

concentrations 0.002–0.1 µg/mL in methanol werelimits of quantification (LOQs) in the GC-ECD

prepared for every analytical run. An IS working

determination method were in the range of 20–50 ng/g,

solution was prepared at a concentration of 1 mg/mL

therefore, the LOQs are too low sensitive to determine

in ethyl acetate).

chromatography (GPC) cleanup

4, 10)

residue concentrations of PHC because of their similar

Each sample (5 g) was chopped into small portions.

sensitivities as the MRLs of cattle tissues. The residue

Three grams of the chopped sample was added to 30

analysis method by GC-MS in animal tissues

mL of acetonitrile and homogenized for 0.5 min with aestablished by the MHLW is highly sensitive (LOQ ＝

POLYTRON Model K homogenizer (Kinematica,

0.2 ng/g); however, the sample preparation procedure

Luzem, Switzerland). After centrifugation of the

by GPC separation is time-consuming.

homogenized samples at 1,882 ×g for 10 min, theIn this study, we aimed to develop a rapid method

supernatant of the sample was separated. The residue

for the determination of residual PHC in cattle tissues

was added to 30 mL of acetonitrile and shaken for 10(muscle, fat, liver, kidney, and intestine) using GC-MS

min and centrifuged again. The second supernatantwith sample preparation by solid-phase extraction

was separated and mixed with the first supernatant.

(SPE) instead of GPC separation. We also assessed

The mixed supernatant was added to 30 mL ofresidue concentrations in cattle tissues in a 4-day

n-hexane and 1 g of sodium chloride and shaken for 10

withdrawal period after liquid spraying administration

min. The hexane layer was discarded. The lower layerof PHC at the recommended dose (3 L/cattle) by a

was mixed with another 30 mL of n-hexane and shaken

marketing authorization holder.

Materials and methods
GC-MS analytical method

again; the hexane layer was again discarded. The
lower acetonitrile layer was dried by adding 5 g
sodium sulfate and stirring, and then filtrated througha cotton wool pad in a glass funnel. The sample

The PHC standard for Residual Agriculturalcontainer was rinsed with 20 mL acetonitrile and theChemicals (99.7％ purity) and isotopically labeledrinse solution was filtered in the same manner. The

anthracene (anthracene-d 10 ; used as the internal

filtrated solution was evaporated to dryness at 40 ℃.

Hamamoto et al.：Residues of propoxur in cattle tissues

23

The residue was dissolved in n-hexane to prepare twosacrificed after the withdrawal period, and their tissues

2-mL samples and two 5-mL samples. Each solution(longissimus muscle, perirenal fat, liver, left kidney, andwas added to a Sep-Pak silica plus cartridge column

intestine (jejunum)) were divided into 5 g lumps as(690 mg, Waters Corp., Massachussetts, USA) pre-soon as possible. The divided tissues were immediately

washed with n-hexane. PHC was eluted with 4 mL ofstored at -80 ℃ until PHC determination. All animal

ethyl acetate/n-hexane solution (4:6). The eluent was

experimental procedures were performed in

added to 0.6 mL of the IS solution and was evaporated

accordance with the Guidelines for Regulation of

to dryness at 40 ℃. The residue was dissolved again in

Animal Experimentation issued by the National

0.6 mL of ethyl acetate to prepare the sample solution,

Veterinary Assay Laboratory (2005).

which was injected into the GC-MS system.

Results and discussion

Blank samples with PHC concentration as per theJapanese MRL were prepared to spike PHC in the

In our GC-MS method for determining PHC, theblank tissues for determining the recovery of PHC.

linearity of the standard calibration curves (r) was

The blank tissues were obtained from the cattle bred

>0.9999 for PHC levels of 0.002–0.1 µg/mL. The LOD

under the same conditions as the cattle used in this(signal-to-noise ratio ＝ 3), LOQ (signal-to-noise ratio ＝study. The triplicate spiked samples in each tissue10), and recoveries in all the cattle tissues are shown inwere analyzed by the GC-MS method for determining

Table 1. The LOQ (2ng/g) was higher than that in thethe recoveries and precisions (n ＝ 3), according to the

GC-MS method reported by the MHLW (0.2 ng/g).

residue guideline prior to revision.

However, the LOQ in this study, which is one-tenth of
the MRL, is sufficiently sensitive to assess PHC residue

Animal experiments

concentrations in cattle tissues in the withdrawal

Three clinically healthy male Holstein-Friesian cattle

period, with rapid sample preparation using the SPE(230 (200–267) kg body weight, about 6 months old)

cartridge. In addition, the mean extraction recoveries

were used for the PHC residue study after liquid

at the MRL concentration for each tissue ranged fromspraying with 3 L/cattle of the PHC product solution

99.6％ to 115.5％. The mean recovery in the muscles

at the maximum concentration (0.25％ PHC). The cattle

was better than that obtained using the GC-MS method

were acclimated for over a month. The cattle were fedreported by Wu et al. The precisions (coefficient of

hay cubes and concentrated feed twice a day andvariation) ranged from 3.0％ to 8.9％ (n ＝ 3). Based onmade to drink water ad libitum during the acclimation

the recoveries and intra-day coefficient of variations inand experimental periods. The feed was confirmed tocattle tissues, we concluded that the present GC-MS

contain no PHC by the Food and Agriculture Material

method developed for PHC determination fulfilled theInspection Center (Saitama, Japan). The cattle wererequirements for the validation of residue analytical

Table 1. R ecovery and precision of the method for the determination of propoxur in cattle muscle, fat, liver, kidney,
and intestine by GC-MS (n ＝3).

Tissues

Concentration incontrol tissues

Recovery1(µg/g)

2
(％)

3

Mean
recovery

Coefficient ofvariation

Limit ofdetection

Limitofquantitation

(％)

(％)

(µg/g)(µg/g)

Muscle

0.02

92.3

103.3

103.2

99.6

6.3

0.0004

0.002

intestine

0.05

98.5

107.7

108.4

104.9

5.3

0.0004

0.002

Fat

0.04

109.5

105.6

117.0

110.7

5.2

0.0004

0.002

Liver

0.05

109.2

115.1

115.0

113.1

3.0

0.0004

0.002

Kidney

0.04

108.3

116.4

121.7

115.5

5.8

0.00040.002

Jpn. J. Anim.Hyg. Vol. 43, No.1（2017）24

m/z 110

Intencity

Propoxurm/z 110m/z 110

Propoxur

Propoxurm/z 188

m/z 188

IS

IS

IS

Retention time (min)Retention time (min)Retention time (min)

（A）

（B）

（C）

m/z 188

Figure 1. Typical chromatograms of propoxur in muscle.

(A) control muscle spiked with an internal standard (IS, anthracene-d10),(B) control muscle spiked with propxur (0.02 ppm) and the IS,(C) sample muscle spiked with the IS.

Table 2. Residual propoxur (PHC) concentrations in the muscles, intestines, fats, livers and kidneys at 4–day
withdrawal period after liquid spraying administration of 3 L/ cattle as 0.25％ PHC solution (n ＝3).
TissueSample No.

Residue level (µg/g)

Muscle

No.1
No.2
No.3

0.003
0.003
0.015
0.007
±0.005

No.1
No.2
No.3

NDa)
0.013
0.005

Mean
±SD
Intestine
Mean
±SD
Fat
Mean
±SD
Liver
Mean
±SD
KidneyMean±SD

MRL (µg/g)b)
0.02

0.05

─
No.1
No.2
No.3

0.009
0.003
0.005
0.006
±0.003

No.1
No.2
No.3

NDa)
NDa)
NDa)

0.04

0.05

─
No.1
No.2
No.3

NDa)
NDa)
NDa)

0.04

─

a) Not detected (<the limit of dtection)b) See the Ministry of Health, Labour and welfare (MHLW) Ministerial Notification No.499 (November 29, 2005) 2005.
http://www.mhlw.go.jp/english/topics/foodsafety/positivelist060228/

Hamamoto et al.：Residues of propoxur in cattle tissues
method according to the Guideline 49 of theReferences

International Cooperation on Harmonization ofTechnical Requirements for Registration of Veterinary

25

1)

Products (VICH GL49) 1).

International cooperation on harmonization oftechnical requirements for registration of

Typical chromatograms of PHC and IS in the blankveterinary products (VICH, OIE) Guideline for themuscle, PHC-spiked (0.02 µg/g) muscle, and sample

validation for the analytical method used inmuscle are shown in Figures 1. No interaction peakresidue depression study (VICH GL49) (2011),

was observed in the blank tissues under the present

http://www.vichsec.org/en/guidelines2.htm.

assay conditions. PHC levels after the withdrawal

2)

Lehotay, S.J., Mastovská, K., Yun, S.J. (2005)

period were determined as 0.007±0.005 µg/g in all

Evaluation of two fast and easy methods formuscle tissues, 0.006±0.003 µg/g in all fat tissues, andpesticide residue analysis in fatty food matrixes.
Journal of AOAC International. 88, 630-638.

0.005–0.013 µg/g in the two intestines, while PHC was
not detected in other tissues (Table 2). All

3)

Ministry of Health, Labour and welfare (MHLW)

concentrations detected in cattle tissues by the GC-MS

Ministerial Notification No.499 (November 29, 2005)

method were below the Japanese provisional MRLs.

(2005) http://www.mhlw.go.jp/english/topics/
foodsafety/positivelist060228/

The differences in residual PHC concentrations amongthe 3 types of cattle can be attributed to individual

4)

Ministry of Health, Labour and Welfare (MHLW)

differences; however, no specific factor was identified

Analytical Methods for Residual Compositional

for the individual differences because of the limited

Substances of Agricultural Chemicals, Feed

number of experimental animals.

Additives, and Veterinary Drugs in Food,

It has been shown that PHC is absorbed throughDepartment of food safety, Syoku-An

human skin, rat skin, and pig skin . In our study, we

No.0124001,January 24, 2005. Final amendments

found that PHC was absorbed through cattle skin andwere made on May 26, 2006) (2006) http://www.

was detected in the muscle, intestine, and fat tissues ofmhlw.go.jp/english/topics/foodsafety/positive8)

list060228/dl/060526-1a.pdf

cattle at 4 days after dermal administration. In
addition, the higher residual concentrations of PHC

5)

Primus, T.M., Tawara, J.N., Goodall, M.J., et al. (1998)

were determined in cattle intestine than in other

Determination of propoxur residues in whole bodyviscera (liver and kidney). It is inferred that the highbrown tree snakes. Journal of Agricultural andFood Chemistry. 46, 2647-2650.

PHC residue in cattle intestine after dermal
administration resulted from the oral exposure of PHC

6)

Ramagiri, S., Kosanam, H., Prakash P.K.S. (2006)

when cattle tended to lick their own bodies, despite

Stability study of propoxur (Baygon) in whole

the separate medication and pens for the cattle.

blood and urine stored at varying temperature
conditions. Journal of Analytical Toxicology. 30,

Only a slight decrease in blood and urine PHC

313-316.

concentrations has been reported under storage at
6)-80 ºC for 60 days ; therefore, the samples in this study

7)

Suma R., Sarin R.K., Saiprakash, P.K. et al. (2005)

were stored at an appropriate temperature (-80℃)

Simple liquid chromatographic method for theaccording to the storage period.

rapid and simultaneous determination of propoxur

In conclusion, a rapid GC-MS analytical method was

and its major metabolite isopropoxy phenol in rat

developed in this study for the determination ofblood and urine using solid-phase extraction.
Journal of Analytical Toxicology. 29, 728-733.

residual PHC in cattle tissues. The present withdrawal
period of PHC in cattle was confirmed to be8)

Van de Sandt, J.J.M., Meuling, W.J.A, Elliott, G.R. etappropriate by using this method. The developed GC-

al. (2000) Comparative in vitro-in vivo percutaneous

MS method is useful for routine residue monitoring ofabsorption of the pesticide propoxur. Toxicological
Sciences. 5, 15-22.

PHC in edible animal tissues.
9)

Yamada, R., Kozono, M., Ohmori, T. et al. (2006)
Simultaneous determination of residual veterinaryJpn. J. Anim.Hyg. Vol. 43, No.1（2017）26

drugs in bovine, porcine, and chicken muscle using（GC-MS）法により測定した．筋肉，脂肪，肝臓，腎臓

liquid chromatography coupled with electrospray

及び小腸の添加回収率の平均は，99.6％から115.5％の範

ionization tandem mass spectrometry. Bioscience囲であった．全組織の検出限界及び定量限界は，それぞBiotechnology and Biochemistry, 70, 54-65.

れ0.0004及び0.002 µg/g であった．若齢のホルスタイン

10) Wu, G., Bao, X, Zhao, S. et al. (2011) Analysis of

牛 3 頭に製剤の最高用量である0.25％の PHC 液（3L/ 頭）multi-pesticide residues in the foods of animalを単回噴霧投与し，休薬期間（ 4 日間）が経過した時点

origin by GC-MS coupled with accelerated solventの組織内 PHC 残留濃度を測定したところ，筋肉では≦

extraction and gel permeation chromatography

0.015 µg/g，脂肪では≦0.009 µg/g 及び小腸では≦0.013

cleanup. Food Chemistry, 126, 646-654.

µg/g であったが，肝臓と腎臓では検出されなかった．

要旨

これらの結果より，残留分析法は妥当であり，休薬期間も適切であることが示された．

0.25％のプロポクスル（以下，PHC と略す．
）液を牛に噴霧投与後，休薬期間（ 4 日間）経過時点の牛組織内

キーワード：牛の組織，GC-MS，液体噴霧，プロポクの PHC の残留濃度を，ガスクロマトグラフ質量分析計

スル，残留濃度27

会員へのおしらせ①第86回大会・通常総会について
平成29年度は下記のとおり 7 月 8 日（土曜日）に東京農工大学府中キャンパス 2 号館（22番教室）
で，定期大会および通常総会を開催します．演題のエントリーをよろしくお願いいたします．
国分寺

小金井警察署

都立武蔵
国分寺公園

蔵野
JR 武

府
中
街
道

国分寺

新
小
金
井
街
道

国
分
寺
街
道

東小金井

武蔵小金井

JR 中央線

小金井キャンパス

小金井市役所

連雀

通り

小
金
井
街
道

ＪＲ中央線
国分寺駅下車，南口 2 番乗り場から「府中駅行き」に乗り，明星学園下車
▼

西武鉄道
多摩湖線

西国分寺

新小金井

小金井
自動車学校
武蔵野公園

京王線
府中駅下車北口 2 番乗場から「国分寺駅南口行き」に乗り，晴見町下車
▼

東八道路

川線

府中キャンパス

多磨霊園

浅間山公園
府中市民球場
府中警察署

府中の森
公園

野川公園

ＪＲ武蔵野線
北府中駅下車徒歩約13分

▼

北府中

西武

鉄道

多摩

線

明星学苑

多磨

航空自衛隊
府中基地

調布飛行場

府中

20
京王電鉄
京王線

府中市役所
府中競馬正門前

東府中

甲州街道

20

武蔵野の森公園

Ⅰ

開催日時及び開催場所
日 時：平成29年 7 月 8 日（土）総 会 13：00〜
発表会 13：30〜（演題数が多い場合は午前開始となります）
場 所：東京農工大学農学部 2 号館22番教室

Ⅱ

発表演題申し込み
エントリー：演題名，発表者，所属
6 月 9 日（金）までに添付ファイルで下記まで
講 演 要 旨：1,000〜1,300字程度
6 月16日（金）までに添付ファイルで下記まで
jshirai@cc.tuat.ac.jp

Ⅲ

懇親会
大会終了後に大学本部内にある武蔵野莊ラウ
ンジにて，ビアパーティー（会費2,000円）を予定しております．

17 18

国
分
寺
街
道
26 25
24

晴見町

19
22
正門

11 13
9

ビアパーティー

8

6

1

20 21

7

12
14

5

27

36

28

2

10

23

北門

29

3

総会・大会
東門

4

30

16 15
37 南門
34
35

38
32 33
39
31

28

②家畜衛生フォーラム2017について
本年も「家畜衛生フォーラム2017」を企画進行中です．開催日時と開催場所は決定しておりますので，詳細が決まり次第，雑誌およびホームページでお知らせします．
東京国際
フォーラム

JR 東京駅

パシフィックセンチュリー
プレイス

福岡銀行

常陽銀行

八重洲南口

みずほ証券

八重洲
ブックセンター

京橋K-1ビル

Meiji Seika ファルマ株式会社
5番出口

ローソン

東京メトロ銀座線

京橋駅

パイロット

フィルム
センター

しんきん
信託銀行
A5出口

八重洲通り

鍛冶橋通り

日時：平成29年12月15日（金）午後 1 時半〜
場所：Meiji Seika ファルマ（株）講堂
東京都中央区京橋 2 − 4 −16（東京メトロ銀座線「京橋駅」下車徒歩 1 分，
JR「東京駅」下車徒歩10分）

中央通り
みずほ銀行

山形銀行

三井住友銀行

都営浅草線

宝町駅

昭和通り

秋田銀行

③平成28年度家畜衛生学雑誌論文賞の選考結果について
平成28年度発行の家畜衛生学雑誌（第42巻）に掲載された原著論文のうち，最も優秀な論文に贈られる論文賞は，以下の論文に決定しました．
平成29年 7 月 8 日に開催予定の平成29年度通常総会及び第86回大会において，表彰式と受賞講演が行われる予定です．
受賞論文
掲載巻号：第42巻，第 4 号
著者：榊原伸一・菅野 宏・立花 智
表題：ヨーネ病が牛飼養農場に与える損失の評価

29

学会刊行図書の紹介「最新

家畜衛生ハンドブック」を会員特別価格で提供します

日本家畜衛生学会編
監修：押田敏雄・平山紀夫・福安嗣昭
発行：株式会社
体裁：A5版

養賢堂

上製

536頁

CD 付

会員特別価格：7,000円（送料込み）
学会事務局へ電子メール（k-eisei@cc.tuat.ac.jp）で直接お申し込みください．お申し込みの際は，送付先と部数を忘れずにお知らせください．
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
日本家畜衛生学会の創立40周年にあたり，記念事業の一環として「家畜衛生ハンドブック」を株式会社 養賢堂より出版いたしました．
本書は，学会員を中心とする22名の執筆者からなる家畜衛生学の集大成です．設立から40年間にわたり培われてきた知識と経験が，この1 冊に凝縮されています．
衛生問題は生産，流通，販売，消費とすべてのステージに関わる大事な問題です．ですから生産現場をはじめとし，大学・試験研究機関
や獣医畜産に関わる業種の方々に，座右の書として利用していただけ
ることを願っております．

目

次

序

論

第1章

家畜の衛生管理

第2章

栄養と飼養衛生

第3章

繁殖衛生

第4章

一般疾病とその予防

第5章

感染症とその予防

第6章

畜産物の衛生第7章

畜産廃棄物と環境

第8章

家畜衛生に関する法的規制

索引

執筆者一覧（50音順）
青山

英俊／明石

博臣／安斉

柿市

徳英／佐藤

幹／佐藤

平山

紀夫／福士

秀人／福安

了／居在家
繁／白井

義昭／伊東

淳資／末吉

嗣昭／宮﨑

正吾／江口

茂／山本

益雄／永幡
孝史

正志／岡田

肇／野上

啓司／押田

貞雄／羽賀

敏雄／

清典／日佐

和夫／

30

「家畜衛生学雑誌」投稿規程
Key words（キーワード）をつける .

1 ．本誌には原則として，家畜衛生に関する総説，原著論文，短報を掲載する．なお，原稿は編集委員会事

6 ）英語論文および和文論文の英文 Summary は，務局へ電子メール添付（PDF ファイル）で提出す

投稿前にしかるべき校閲を受けること．

る．印刷原稿 3 部（うち 2 部は鮮明なコピーでもよ

7 ）原著論文で刷り上り 8 頁（30文字×25行＝750い）の書留郵便あるいはレターパックによる提出も文字で，図表を含めて16枚程度）までは，印刷可とする．

費を本学会で負担する．ただし，超過ページに

2 ．投稿にあたり，論文掲載までの対応を行う連絡著者

ついては，その費用を著者の負担とする．な（コレスポンディングオーサー）は，投稿原稿が他

お，総説についてはこの限りではない．また，誌にすでに掲載あるいは投稿中ではないこと，著者

カラーや特殊な用紙での印刷は，その費用を著者の負担とする．

全員が投稿論文の内容及び掲載に同意していることを記載した文書（カバーレター）を提出すること．

8 ）使用する動植物・微生物などの学名はイタリッ
ク体で表記する．

3 ．筆頭著者あるいは連絡著者は本学会会員であるこ9 ）度量衡の単位，略記は SI 単位系を基本とし，と．

以下の例に従う．

4 ．掲載論文は原著論文，短報，総説（刷り上がり 4 頁
以下のミニレビューを含む），技術資料とする．

［例］m，cm，mm，µm，nm，kg，g，mg，µg，ng，L，mL，µL，nL M，mM，µM，％，cm2，
m3，

5 ．全ての投稿論文は編集委員及び複数の審査員が審査し，編集委員長が掲載の採否を決定する．

hr，min，sec，℃，pH，Pa（血圧は mmHg，

6 ．投稿論文は和文または英文とし，次の指示（記述順序など）に従うこと．
1 ）論文原稿は別に定める注意に従って作成すること．用紙サイズは A4とし，和文の場合は30字

生体内圧力は Torr）など．
10）表および図（写真を含む）は用紙 1 枚に 1 つとし，個々に番号と表題を記入し，投稿原稿の最後に添付する．

で25行程度，英文の場合はダブルスペース（7011）引用文献は下記の例にならって，アルファベッ

字で25行程度）とする．原稿本文の左側に行番

ト順にならべ，本文中では 1 ，3 − 6 ） のように上号を表記すること．

付き（superscript）で記入する．ただし，著者

2 ）和文の場合も句読点は，「 ，」，「 ．」を用いること．

名 は 3 名 ま で と し， 4 人 目 以 降 は 省 略 し，「ら」，「et al」で示す．

3 ）論文原稿は第 1 ページに表題，著者名，所属機［例］

関名およびその所在地を和文と英文で記載する

雑誌とともに，連絡著者とその電子メールアドレスを記載する．また，和文の場合は20字，英文の場合は40字以内の略表題（running head）を記載する．
4 ）原著論文の構成は原則として，Summary（本文が和文の場合も英語），序文（Introduction），
材料および方法（Materials and Methods），結果（Results）， 考 察（Discussion），引用文献（References），要旨（本文が和文であっても英文であっても，和文の要旨）とする．ただし，謝辞は，別項目を設けず，本文の最後に 1 行の空白をとった後に記載する．
5 ）英文 Summary は250語以内，和文要旨は600字以内とし，それぞれの最後の行に 5 つ以内の1 ）内田孝治・藤井武・高山公一ら（1991）ブロ
イラーにおける実験的大腸菌症に対するラノ
フロキサシンの治療効果および用量設定試
験．家畜衛生研究会報．33，19-24．
2 ）Oshida, T., Fukuyasu, T., Kohzaki, K., et al.
(1993) A new treatment system for animal
waste water using microorganism, soil andvagetation. Asian-Australasian Journal ofAnimal Sciences. 6, 205-209.
電子ジャーナル3 ）Wilson, D.J., Rood, K.A., Bunnel, J., et al. (2014)
Johne’s disease, mycoplasma and BVD in
Utah-Bulk tank milk testing and comparison

31

to previous regional prevalence andindividual herd results over time. Journal of
Veterinary Science and Technology. 5:182.
doi: 10.4172/2157-7579.1000182.
単行書

英文では200字以内の和文，和文では100語以内の英文をつける．原稿の長さは刷り上りで， 2 頁以内とする，その他の規定については原著の場合に準じる．
8 ．総説及び技術資料の構成については特に規定を設けないが，引用論文の記載法は原著論文の場合に準じることとする．

4 ）伊予部志津子（1980）薬剤耐性因子（R）の検出法，薬剤感受性測定法．22-48頁．三橋

9 ．別刷りは50部に限り無料とする．追加分についてその費用を著者の負担とする．
10．本誌の発行は原則として，年 4 回（ 4 月， 7 月，10

進編，講談社，東京．
5 ）McDonrd, P. (1976) Trends in silage making,Microbiology in Agriculture, Fisheries and  
Food. pp109-121. Shinner, F.A and Carr, J.G.

月および 1 月）とする．
11．編集委員会事務局を下記に置く．
〒252−0132
神奈川県相模原市緑区橋本台 3 − 7 −11

eds. Acad. Press, London, NY.

（一財）生物科学安全研究所内
12）図はグラフィックソフトウェアで作成すること

日本家畜衛生学会編集委員会

が望ましい．手書きで作成する場合は，そのまTel

ま製版できるよう，白色紙または青色方眼紙にFax 042（762）7979

タイプやレタリングなどにより作成する．
13）投稿原稿が受理（掲載決定）されたならば，著

042（762）2775

E-mail：jjah@riasbt.or.jp
12．本誌に掲載された論文の著作権は，日本家畜衛生学

者 は す み や か に 最 終 原 稿 の Microsoft Word

会に帰属する．

ファイルを電子メールで提出すること．図については，グラフィックソフトウェアで作成した

附則ファイルも併せて提出する．

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

7 ．短報は，その内容を成績および考察（Results and本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

Discussion） と し て ま と め， 要 旨（Summary） は

本規程は，2016年11月 5 日以降の投稿論文に適用する．

論文原稿を作成する上での注意
1 ）執筆にあたり，投稿規定をもう一度，熟読すること．
2 ）各行の行末での強制改行をしないこと．
3 ）投稿論文が和文，英文のいずれの場合も数字，欧文は全て 1 バイト文字（いわゆる半角）で入力するこ

6 ）図は，Microsoft PowerPoint，Excel，Adobe Photoshop，Illustrator 等のソフトウェアで作成するのが望ましい．
7 ）論文受理後の最終原稿は，Microsoft Word（あるい）は 2 バイト文字

は Microsoft Word 互換ソフトウェア）ファイルと（いわゆる全角）とする．
「µ」（マイクロ）は半角して提出する．ただし，Microsoft Word 互換ソフと．ただし和文ではかっこ（
立体で入力すること．

トウェアを使用した場合は，Microsoft Word で正4 ）投稿論文原稿は PDF ファイルとして事務局まで電しく表示されることを確認すること．グラフィック

子メールで提出すること．その際には必ずパスワー

ソフトウェアで作成した図データは，jpeg，tiff 等

ドロックし，パスワードは別メールで事務局まで連の汎用フォーマットで提出する．

絡すること．特段の理由がある場合は，印刷原稿 3部（うち 2 部は鮮明なコピーでも可）を事務局まで
書留郵便あるいはレターパックで送付すること．
5 ）写真は印刷に耐えうる鮮明なものを使用すること．

日本家畜衛生学会
編集委員会

32

日本家畜衛生学会会則
（総
第１条

則）

第８条

理事長は常務理事の互選により選出する．

本 学会は，日本家畜衛生学会（英文表記：

２．理事長は学会を代表し，会務を総理する．

The Japanese Society of Animal Hygiene）

３．理事長は常務理事の中から庶務・会計を担当する事務局担当者を委嘱する．

（以下，「学会」とする．
）と称する．
第２条
第３条

第４条

４．理事長は第4条の事業を達成するため常設の学会の事務局は，原則として理事長の所属する機関におく．

学術企画委員会，編集委員会を設置する．

学会は，家畜衛生とその関連領域における学（1）委員会の委員は原則として理事長が常務

究の向上を図り，畜産の進歩発展に寄与する

理事の中から指名する．但し，常務理事ことを目的とする．

会が必要と認めた場合には会員の中から指名することが出来る．

学会は，前条の目的を達成するために，次の（2）委員会の委員長は，委員の互選により選事業を行う．

出し，理事長が指名する．

（1）研究発表会及び学術講演会等の開催（2）学会誌「家畜衛生学雑誌」の発行

第９条

事長を補佐する．

（3）学会の発展に貢献した者への表彰（4）その他学会の目的達成のために必要な事業

副理事長は常務理事の互選により選出し，理第１０条

常務理事および監事は理事の互選により選出
し，総会において承認を受ける．
２．常務理事は常務理事会を組織し，理事長を補（会員および会費）
第５条

佐し，学会の運営に関して第４条の事項を行う．

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員お３．監事は理事長を補佐し，会務と会計を監査する．

よび名誉会員より構成する．
（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納

第１１条

２．理事は理事会を組織し，理事長を補佐し，学入した個人会の運営に関して第４条の事項を行う．

（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した学生，大学院生．た

第１２条

役員の任期は２年とし，再任を妨げない．
２．役員の補欠又は増員は，第８条第１項，第９だし会員期間は単年度とす

条，第10条若しくは第11条の規定により選任る．

し，その任期は前任者又は現任者の残任期間（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため所定の会費とする．ただし，常務理事会が会務の運営にを納入した個人又は団体支障がないと認めたときは，この限りでない．

（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会第１３条

常務理事会および理事会は理事長が随時招集する．

において承認された個人
第６条

理
 事は理事長が委嘱し，総会の承認を受ける．

会
 費は正会員にあっては年額5,000円，学生会員にあっては年額2,000円，賛助会員にあって（総は１口年額10,000円とし，毎年７月末までに

第１４条

会）
通常総会は毎年１回，理事長が招集する．

納入するものとする．

第１５条

理事長が必要と認めた場合は，臨時総会を招集することができる．

第１６条（役員および役員会）
第７条

総会では次の事項を議決する．

学会に次の役員をおく．

（1）事業計画および事業報告に関する事項（1）理 事 長

１名（2）予算および決算に関する事項（2）副理事長

１名（3）会則の改正に関する事項（3）常務理事若干名（4）その他，学会の目的を達成するために必

（4）監

事

２名

（5）理

事

35〜45名

要な事項

33

（会

計）

第１７条

（3）こ の会則は平成15年7月5日に改正し，

学会の経費は会費その他の収入をもって，これにあてる．

第１８条

会計年度は４月１日より，翌年３月31日までとする．

同日に施行する．
（4）こ の会則は平成16年7月3日に改正し，同日に施行する．
（5）こ の会則は平成17年7月2日に改正し，同日に施行する．

附則（6）こ の会則は平成21年7月4日に改正し，（1）この会則は平成14年7月6日より施行する．
（2）学会設立時の役員は家畜衛生研究会（以下「研究会」と略す）の役員が暫定的に同日に施行する．
（7）こ の会則は平成23年7月2日に改正し，同日に施行する．

就任することとし，理事長は研究会の会（8）こ の会則は平成27年7月11日に改正し，長が，常務理事は研究会の幹事が，理事同日に施行する．ただし，平成27年度のは研究会の評議員が，監事は研究会の監

会費は4,000円とし，平成28年度から会事がそれぞれ就任する．

費を5,000円とする．

34

協賛団体・企業一覧
日本家畜衛生学会は以下の各団体・企業からの協賛を受けています．ここに記して謝意を表します．（五十音順）（株）インターベット（株）科学飼料研究所

共立製薬（株）

コーキン化学（株）

住化エンバイロメンタルサイエンス（株）

ゾエティス・ジャパン（株）

田村製薬（株）日本イーライリリー（株）（一般財団法人）日本生物科学研究所

日本全薬工業（株）

日本ハム（株）

バイエル薬品（株）

Meiji Seika ファルマ（株）

日本家畜衛生学会入会のすすめ
日本家畜衛生学会は家畜衛生とその関連領域における学術の交流を図り、畜産の進歩発展に寄与することを目的とした学会です。
＜主な活動＞
・ 年２回（７月、12 月）の研究発表会
・ 年１回のフォーラム（12 月ごろ）の開催
これまでの主なテーマ「狂犬病」、「口蹄疫」、「鳥インフルエンザ」、「BSE」、「家畜ふん尿」など
・ 年４冊の機関誌「家畜衛生学雑誌」の発行
・ 学会賞の授与
年会費5,000円（但し、学生は2,000円）
御請求戴ければ、見本誌を贈呈します!!

家畜衛生学雑誌

The Japanese Society of Animal Hygiene
日 本 家 畜 衛 生 学 会〒183-8509

東京都府中市幸町3-5-8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内TEL ／ FAX：042−367−5780
http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
Hpで活動内容がご覧になれます!!（日本家畜衛生で検索）

第43巻第 1 号

平成29年 5 月31日発行（会員配布）
発

行

印 刷 所

日本家畜衛生学会
理事長 白井淳資〒183－8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内☎／ FAX：042−367−5780
ホームページ：http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
振替口座：00240－ 3 －43171
明誠企画株式会社〒208－0022 東京都武蔵村山市榎 2 － 25 － 5☎ 042−567−6233 FAX 042−567−6230

平成日本家畜衛生学会

年

月

日

御中

入 会 申 込 書
貴会への入会を下記の通り申込ます．

記
フリガナ
氏

名：

所属名称：
部

署：

役

職

所属住所：〒TEL：

FAX：

e-mail：

自宅住所：〒

TEL：
e-mail：会員の種類 ： ○正 会 員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員
会報送付先 ： ○自宅 ・ ○勤 務 先○内にチェックを付して下さい．

１．入会申込書は必要事項をすべて正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5780）にてご送付下さい．
２．年会費は個人会員 5,000円，賛助会員 10,000円／口（１口以上）を郵便振替口座（加入者名：日本家畜衛生学会，No. 00240−3−43171）へお振込下さい．
３．申込先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5780

４．ホームページからも申し込めます：http://www.kachiku-eisei.jp/

平成
日本家畜衛生学会

年

月

御中

変
変更手続きを下記の通り致します．

更

届

記

フリガナ
○

氏

名：

○

所属名称：

○

部

○

所属住所：〒

署：

○

役

TEL：

○

自宅住所：〒

○

TEL：

職

FAX：

e-mail：e-mail：○会員の種類：○正会員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員○会報送付先：○自宅 ・ ○勤務先全てご記入の上，上記変更部位の○内にチェックを付して下さい．

１．変更届出書は必要事項を正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5935）にてご送付下さい．
２．届け先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5935（042−367−5780）

３．ホームページからも手続きできます：http://www.kachiku-eisei.jp/

日