ISSN 1347−6602

昭和62年６月９日学術刊行物認可

家畜衛生学雑 誌
The Japanese Journal of Animal Hygiene

日本家畜衛生学会
Vol .41 No.4
2016. FEB.

The Japanese Society ofAnimal Hygiene

家

畜

衛

生

学

雑

日本家畜衛生学会

発行

誌

理 事 長：白井淳資
副理事長：宮﨑編集委員長：宮﨑茂

茂

編集委員：柿市徳英・高井伸二・永幡肇

野上貞雄・渡邊忠男"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""The Japanese Journal of Animal Hygiene
Published by the Japanese Society of Animal Hygiene
President : Junsuke SHIRAI（）

Vice President : Shigeru MIYAZAKI（）

Editor-in-Chief : Shigeru MIYAZAKI（）

Editorial Board : Norihide KAKIICHI（
Shinji TAKAI（）））

Hajime NAGAHATA（
Sadao NOGAMI（）

Tadao WATANABE（）

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「家畜衛生学雑誌」第41巻第 4 号の送付にあたって
会員の皆様におかれましては，ますますご清栄のこととお慶び申し上げます．ここに，「家畜衛生学雑誌」第41巻
第 4 号を刊行する運びとなりました．
環太平洋戦略的経済連携協定（TPP）の署名式がニュージーランドで行われるなど，畜産業の置かれた状況はより厳しくなり，家畜の生産性向上における家畜衛生学の役割はますます重要になっています．したがって，日本家畜衛生学会の活動もより活発にし，畜産業へ貢献していく必要があります．
「家畜衛生学雑誌」への研究成果の公表も成果の社会還元の一環であり，会員の皆様の積極的なご投稿をよろしくお願い致します．
「家畜衛生学雑誌」は効率の良い審査を行い，出来るだけ迅速な掲載を目指しております．
「家畜衛生学雑誌」の更なる充実のため，学会役員一同，努力や工夫をして行きたいと思いますが，何よりも会員の皆様のご支援が重要ですので，何とぞよろしくお願い致します．
日本家畜衛生学会理事長

白井淳資

家畜衛生学雑誌編集委員長

宮﨑茂（日本家畜衛生学会副理事長）

日本家畜衛生学会・学会費納入のお願い
ご承知のように学会は会員の皆様からの会費をもって運営されています．学会の運営を円滑に運ぶために速やかに，所定の会費の納入をお願い申し上げます．
＊学会費は正会員4,000円，学生会員2,000円となっています．
＊平成28年度から，正会員会費は5,000円となります．
日本家畜衛生学会

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日本家畜衛生学会

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十加入者名 金24

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家畜衛生学雑誌
第41巻

目

第4号

2016

次

〈原 著〉
散気式オゾン水生成装置により生成されたオゾン水のウイルスおよび細菌に対する消毒効果･･････････････････････････････････････････････････････鈴木遊大・福原麻衣・釜瀬幸広・立石健太郎・
二階堂啓吾・長井 誠・白井淳資 ･･･････････････････････ 117〜125
下痢を呈した豚群におけるデルタコロナウイルス遺伝子の検出と宮城県内浸潤状況･･････････････････････････････････････････････････････小寺 文・曽地雄一郎・西 清志・千葉直幸・
植木 洋・矢島りさ・竹田百合子・結城瑞希 ･･･････････････････････ 127〜133
第41巻の総目次 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 135〜138

会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139
家畜衛生学雑誌投稿規程･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 140〜141

日本家畜衛生学会会則････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 142〜143

家畜衛生学雑誌

The Japanese Journal of Animal HygieneVol. 41  No. 4

2016

Contents〈Original report〉
Evaluation of sterilize and virucidal effects of ozone water produced by the bubbling micro ozone gas
mixture ozone water generator.
･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ Yudai Suzuki et al.･･･････････････････････････････････････････ 117〜125
Detection of deltacoronavirus gene in pigs showed diarrhea and its prevalence in pigs in
Miyagi prefecture, Japan.
･････････････････････････････････････････････････････････････････････････Aya Kodera et al.････････････････････････････････････････････127〜133
Contents of volume 41 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 135〜138
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 140〜141
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 142〜143

Jpn. J. Anim. Hyg.

原

117

著

散気式オゾン水生成装置により生成されたオゾン水のウイルスおよび細菌に対する消毒効果
鈴木遊大 1 ）・福原麻衣 1 ）・釜瀬幸広 2 ）・立石健太郎 1 ）・二階堂啓吾 1 ）・長井

誠 1 ）・白井淳資 1 ）＊Evaluation of sterilize and virucidal effects of ozone water producedby the bubbling micro ozone gas mixture ozone water generator.
Yudai Suzuki 1）, Mai Fukuhara 1）, Yukihiro Kamase 2）, Kentaro Tateishi 1）, Keigo Nikaido 1）,
Makoto Nagai 1）, Junsuke Shirai 1）＊（1）Tokyo University of Agriculture and Technology, Laboratory of Epizootiology,
Cooperative Department of Veterinary Medicine, Faculty of Agriculture
3-5-8, Saiwai-cho, Fichu, Tokyo, 183-8509, Japan2）

IHI Shibaura Machinery Corporation Matsumoto Factory
1-1-1, Ishishiba, Matsumoto, Nagano, Japan）（2015. 8. 20  受付／2015. 12. 24  受理）

Summary
Disinfection of animal facility and animal hospital by ozone water is considered to be useful method, therefore
sterilized and virucidal effect of ozone water was evaluated. Ozone water produced by the bubbling micro ozone
gas mixture ozone water generator was used for disinfection effect evaluation against infectious bovine
rhinotrachitis virus (IBRV: enveloped virus), bovine enterovirus (BEV: non enveloped virus), Listeria
monocytogenes (gram positive bacteria) and spore (Bacillus subtilis) (strong resistant against disinfectants). Twohundred mL of ozone water and 1 mL of viral or bacterial material reacted at 1 min and immediately 10 folddiluted, and inoculated to the PFU/0.1 mL or CFU/0.1 mL examination. One ppm ozone water killed completely
against IBRV and BEV at 10℃, 20℃, and 35℃. Five ppm ozone water could not kill well against a spore at 10℃,
however 3 ppm ozone water reacted well and 4 ppm one killed completely against a spore at 35℃. One ppm
ozone water reacted well against Listeria monocytogenes at 10℃, 20℃, and 35℃, and its higher reaction wasobserved in the higher temperature. From these results, it was not necessary to prepare the high concentration(ppm) of ozone water used for disinfection against virus, bacteria and spore, and low ppm ozone water wasconsidered to be so effective and useful against these pathogens.  
Key words：Bubbling micro ozone gas mixture ozone water generator, Ozone water, low ppm, High disinfection
effect  家畜衛生学雑誌
東京農工大学農学部共同獣医学科獣医伝染病学研究室〒183-8509 東京都府中市幸町 3 - 5 - 8
2）
株式会社 IHI シバウラ機械事業本部開発部環境・制御機器開発グループ〒390-8714 長野県松本市石芝 1 - 1 - 1＊
連絡著者：白井淳資（jshirai@cc.tuat.ac.jp）
1）41，117〜125（2016）

家畜衛生学雑誌

118

序第41巻第 4 号（2016）
間を延長させる効果も報告されている15）．オゾンは生物文

活性炭とともに飲料水の処理に使用されており，殺菌効

近年，日本において口蹄疫，鳥インフルエンザ，豚流果に加えて，臭気を除去する効果があるためである35）．

行性下痢などの重要疾病が発生し，食の安全に対する社

このようにオゾンはその有効性の高さから，様々な分野

会的不安から国内の消費を低迷させ，わが国の畜産業にで使用されている．しかし，畜舎や動物病院などの現場

大打撃を与えかねない脅威を与えている．このような疾で衛生管理に使用されている例はあまりない．その理由

病の侵入，蔓延を防止するためには畜舎における衛生管はオゾン水の安全性への不安，および有効濃度・温度が理や家畜の集まる家畜市場や食肉・食鳥処理場等での徹明確にされていないためと考えられる．オゾン水の生成

底した衛生管理が重要である．徹底した衛生管理のため

方法には電解法，循環式法，散気式法などがあるが，電には，病原体の浸入防止や病原体の消滅のための徹底し解法や循環式法で得られたオゾン水の殺菌，殺ウイルス

た消毒作業が必須となる．しかし，畜舎で使用されてい効果は報告ごとに異なり安定した成績が得られていない

る一般消毒薬の多くは環境中に残留し，環境を汚染するのが現状である．そこで，本研究では散気式オゾン水生可能性が高い．また消毒薬購入コストも家畜農家の経営成装置を用いてオゾン水を生成し，オゾン水のウイルスを圧迫する．全ての病原体に対して優れた効果を示す一や細菌に対する詳細で正確な消毒条件を検討した．

般消毒薬はほとんどなく，消毒の対象となる病原体に対材料および方法

して最も有効な薬剤を選択する必要があり，人および家畜に対する安全性，消毒対象物に及ぼす影響などを考慮

散気式オゾン水生成装置する必要がある．また使用に際しては，発癌性・胚子奇散気式オゾン水生成装置は，図 1 のように，オゾン水

形誘発性の有無などの人への影響も考慮する必要があの効果を調べるために，実験用として組まれた装置で，る．これらのことから環境中に残留せず，人や家畜に対オゾン発生装置（オゾナイザー），オゾン濃度計，排気する安全性が高い消毒方法の必要性から，オゾンと水か乾燥装置，窒素吸収装置，電圧調整装置（PSA：Powerらなるオゾン水に着目した．

Supply Amplifer）および温度調整のための恒温水槽か

オゾン（O 3 ）は 3 酸素原子から成る三原子分子で不安定であり，半減期が短く，分解して O 2 になり10），金属

ら組み立てられている．各装置は株式会社 IHI シバウラ
（長野県松本市石芝 1 - 1 - 1 ）で実験用に使用されているに対する腐食性の低い強力な酸化剤である．また O 3 とものを，本実験用に使用した．

腹腔や肺胞のマクロファージなどの食細胞の活性を調整

ウイルスおよび細胞

O 2 の混合ガスは人へのオゾン治療で使用されており 6 ），し，免疫機構に影響を及ぼすことが知られている 4 ， 5 ）．

ウイルスは牛伝染性鼻気管炎ウイルス（IBRV）と牛低濃度のオゾンガスに極度な毒性はないが，高濃度のオ

エンテロウイルス 2 型（BEV）の 2 種類を使用した．

ゾンガスは人や動物に対し障害性があり，吸入すると呼IBRV は エ ン ベ ロ ー プ を 有 す る 二 本 鎖 DNA ウ イ ル ス

3）

吸器系を障害する ．このようにオゾンは気体の状態でで，一般消毒薬に対して抵抗性が弱いウイルスの代表とは危険で，使用方法が限られるが，オゾンを水に溶かしして，BEV はエンベロープの無い一本鎖 RNA ウイルスた状態であるオゾン水であれば有効性や安全性が向上しで，一般消毒薬に対して抵抗性が強いウイルスの代表と安心して使用できる．オゾン水はオゾンガスよりも半減して使用した．ウイルスの増殖および試験にはウシ腎由

27）

期が短く ，分解すると O 2 と水になる．オゾン水には来株化細胞の MDBK 細胞を使用した．

グラム陽性菌，グラム陰性菌および芽胞などの細菌に対細菌および培地26，29）

殺菌・殺ウイルス効果があることがわかっており，

13，14，22，26）．オゾ

細 菌 は Bacillus subtilis（B.subtilis） と Listeria

ンはベネズエラ馬脳炎ウイルス，A 型肝炎ウイルス，水monocytogenes（L.monocytogenes） の 2 種 類 を 使 用 し疱性口炎ウイルスなど様々な種類のウイルスに効果を示た．B.subtilis は芽胞を形成する細菌の代表として，L.

す 2 ， 7 ， 8 ， 9 ，17，20，21，24，28，34）．

monocytogenes は消毒薬に対して抵抗性が強いグラム陽して効果があることも報告されている

オ ゾ ン ガ ス は 人 に 毒 性 が あ り， 作 業 環 境 の 基 準 は性菌の代表として使用した．L.monocytogenes は普通寒0.1ppm とされているが，オゾン水はその安全性や細天培地を用いて37℃で 2 日間培養し，集菌形成した．

菌，ウイルスの両方に高い効果があるため，食品産業で

B.subtilis は表 1 に示す培地と次項の方法で芽胞の状態

消毒資材として使用されている16）．オゾンは微生物汚染に調整した．

を防ぐだけでなく，残留農薬の除去や生鮮食品の貯蔵期

溶 液 A お よ び B を121℃ で15分 間， 高 圧 蒸 気 滅 菌 し鈴木ら：Ozone water sterilize and virucidal effect119

図 1 ．散気式オゾン水生成装置
本装置は，オゾン水の効果を調べるために，実験用として組まれた装置で，オゾン発生装置（オゾナイザー），オゾン濃度計，排気乾燥装置，窒素吸収装置，電圧調整装置（PSA：
Power Supply Amplifer）および温度調整のための恒温水槽から組み立てられている．本装
置は株式会社 IHI シバウラで実験用に使用されている機器により組み立てられた．

表 １ ．芽胞形成培地の組成
Soybean Casein-Digest Agar

溶液 A

溶液 B

40 g

MnCl 2 ・4H 2 O

2.5 g

CaCl 2 ・2H 2 O

蒸留水

980 mLMgSO 4 ・7H 2 O

25 g

0.01N HCl

溶液 A

10 mL

FeSO 4 ・7H 2 O

溶液 B

10 mL

0.01N HCl

Trypticase Soy Agar

15 g1000 mL

30 mg1000 mL

た．Trypticase Soy Agar 40 g を蒸留水980 mL に溶解

間熱処理を行った．培地は B.subtilis の場合は普通寒天

し，121℃で15分間，高圧蒸気滅菌した．滅菌後，温浴培地，L.monocytogenes の場合はリステリア選択増菌培

中で55℃になるまで静置してから，滅菌した溶液 A およ

地を使用した．

び B を各10 mL ずつ加え，混合し，シャーレに20 mL ず
つ分注して平板培地を作製した．

消毒効果の測定
ウイルス

集菌と芽胞の精製

滅菌蒸留水を使用して，散気式オゾン水生成装置によ作製した培地に B.subtilis を植菌し，37℃で 1 週間培り生成したオゾン水200 mL にウイルス液 1 mL（IBRV：養した．培養後，芽胞染色方法の 1 つである Wirtz 法を

4.0×106 PFU/0.1 mL，BEV：2.1×106 PFU/0.1 mL）を用いて，染色を行い，顕微鏡下で観察した．視野の範囲

加え 1 分間混合した．試料を0.1 mL ずつ採取し，10％で80％以上が遊離芽胞であることを確認した後，集菌し牛胎仔血清加培地で10倍段階希釈を行い MDBK 細胞を滅菌水を用いて懸濁液とした．懸濁液を遠心分離し，数シートさせた 6 穴プレートに0.2 mL 接種し， 1 時間感

回滅菌水で遠心洗浄した後，滅菌水に懸濁し75℃で30分作させた．ウイルス液除去後，0.8％Bacto Agar を含む

家畜衛生学雑誌

120

第41巻第 4 号（2016）

イーグル MEM 培地を重層し，37℃で 3 日間培養した．
3 日後に染色固定液（ 3 ％ホルマリン，10％メタノー
ル，0.25％クリスタルバイオレット）で染色固定し，形成 さ れ た プ ラ ッ ク 数 を 算 定 し た． 温 度 条 件 は10℃，
20℃，35℃に設定し，各々の温度においてオゾン濃度
0.5 ppm，1.0 ppm，2.0 ppm にオゾン水を調整し実験を行った．コントロールとしてオゾン水と同量200 mL の滅菌蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．
B.subtilis
生 成 し た オ ゾ ン 水200 mL に 菌 液 1 mL（2.2×105
CFU/0.1 mL）を加え， 1 分間混合した．試料を0.1 mLずつ採取し，滅菌蒸留水で10倍段階希釈を行い，普通寒天培地に0.1 mL 接種した．37℃で 2 日間培養後，コロ
ニー数を算定した．温度条件は10℃，20℃，35℃に設定
し，各々の温度においてオゾン濃度3.0 ppm，4.0 ppm，
5.0 ppm にオゾン水を調整し実験を行った．コントロー
ルとしてオゾン水と同量200 mL の滅菌蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．

図 2 ．IBRV に対するオゾン水の殺ウイルス効果
IBRV はエンベロープを有する二本鎖 DNA ウイルスで，一般消毒薬に対して抵抗性が弱いウイルスの代表として使用した．散気式
オゾン水生成装置により生成したオゾン水200 mL にウイルス液
1 mL（4.0×106 PFU/0.1 mL）を加え 1 分間混合し，直ちに力価をプラック数により測定した（Y 軸）．温度条件は10℃，20℃，
35℃に設定し，各々の温度においてオゾン濃度0.5 ppm，1.0 ppm，
2.0 ppm（X 軸）にオゾン水を調整し実験を行った．コントロール
としてオゾン水と同量200 mL の滅菌蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．

L.monocytogenes
生 成 し た オ ゾ ン 水200 mL に 菌 液 1 mL（9.0×104
CFU/0.1 mL）を加え， 1 分間混合した．試料を0.1 mLずつ採取し，0.2％ペプトン水で10倍段階希釈を行い，
リステリア選択増菌培地に0.1 mL 接種した．37℃で 2 日間培養後，コロニー数を算定した．温度条件は10℃，
20℃，35℃に設定し，各々の温度においてオゾン濃度
0.5 ppm，
1.0 ppm，
2.0 ppmにオゾン水を調整し実験を行った．コントロールとしてオゾン水と同量200 mL の滅菌
蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．

結果（ 1 ） IBRV に対する殺ウイルス効果
図 2 が示すように設定したすべての温度において，オ
ゾン濃度0.5 ppm では殺ウイルス効果を示すが IBRV を
完全に不活化することは出来なかった．しかし，オゾン濃度1.0 ppm 以上ではすべての温度において IBRV を完
全に不活化することが出来た（図 3 ）．また，0.5 ppm

図 3 ，オゾン濃度1.0 ppm におけるオゾン水の IBRV に対する殺ウイルス効果
散気式オゾン水生成装置により生成したオゾン水200 mL にウイル
ス液 1 mL（4.0×106 PFU/0.1 mL）を加え 1 分間混合し，直ちに力価を測定した．写真は20℃における反応で，オゾン水を感作させた試料は，10倍希釈でもプラックが観察されなかった．コント
ロールはオゾン水と同量の滅菌蒸留水と同様に反応させた試料を用いた．

では温度により効果に違いが見られ，10℃，35℃よりも20℃での殺ウイルス効果が高かった．

の殺ウイルス効果が最も高かった．また，BEV のほうが IBRV よりもオゾンに対して抵抗性が高い傾向が認め（ 2 ） BEV に対する殺ウイルス効果られた．

図 4 が示すようにオゾン濃度0.5 ppm では，10℃ではほとんど殺ウイルス効果を示さなかったが，20℃および（ 3 ） 芽胞に対する殺菌効果

35℃では殺ウイルス効果を示した．オゾン濃度1.0 ppm

図 6 が示すように10℃では5.0 ppm でも顕著な殺菌効以上では，すべての温度で BEV を完全に不活化するこ果は認められなかった．しかし，20℃では3.0 ppm でとができた（図 5 ）．0.5 ppm では IBRV と同様に20℃で10℃における5.0 ppm 以上の殺菌効果を示し，5.0 ppm

鈴木ら：Ozone water sterilize and virucidal effect121

図 4 ．BEV に対するオゾン水の殺ウイルス効果
BEV はエンベロープの無い一本鎖 RNA ウイルスで，一般消毒薬に対して抵抗性が強いウイルスの代表として使用した．散気式オ
ゾン水生成装置により生成したオゾン水200 mL にウイルス液 1 mL
（2.1×106 PFU/0.1 mL）を加え 1 分間混合し，直ちに力価をプラッ
ク数により測定した（Y 軸）．温度条件は10℃，20℃，35℃に設定
し，各々の温度においてオゾン濃度0.5 ppm，1.0 ppm，2.0 ppm（X軸）にオゾン水を調整し実験を行った．コントロールとしてオゾ
ン水と同量200 mL の滅菌蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．

図 6 ．芽胞（B.subtilis）に対するオゾン水の殺菌効果
散気式オゾン水生成装置により生成したオゾン水200 mL に菌液
1 mL（2.2×105 CFU/0.1 mL）を加え， 1 分間混合した．試料を0.1m L ずつ採取し，普通寒天培地に接種し，コロニー数を算定した（Y 軸）．温度条件は10℃，20℃，35℃に設定し，各々の温度においてオゾン濃度3.0 ppm，4.0 ppm，5.0 ppm（X 軸）にオゾン水を調整し実験を行った．コントロールとしてオゾン水と同量200 mLの滅菌蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．

図 5 ．オゾン濃度1.0 ppm におけるオゾン水の BEV に対する殺ウイルス効果
散気式オゾン水生成装置により生成したオゾン水200 mL にウイル
ス液1mL（2.1×106 PFU/0.1 mL）を加え 1 分間混合し，直ちに力価を測定した．写真は20℃における反応で，オゾン水を感作させた試料は，10倍希釈でもプラックが観察されなかった．コントロー
ルはオゾン水と同量の滅菌蒸留水と同様に反応させた試料を用いた．

では，ほとんどの芽胞を殺滅させる非常に高い殺菌効果を示した．20℃でのオゾン水5.0 ppm における殺菌効果
は，10℃に比べて1000倍以上高かった．さらに35℃まで

図 7 ．L.monocytogenes に対するオゾン水の殺菌効果
散気式オゾン水生成装置により生成したオゾン水200 mL に菌液
1 mL（9.0×104 CFU/0.1 mL）を加え， 1 分間混合した．試料を0.1 mL ずつ採取し，リステリア選択増菌培地にし，コロニー数を算定した（Y 軸）．温度条件は10℃，20℃，35℃に設定し，各々の温度においてオゾン濃度0.5 ppm，1.0 ppm，2.0 ppm（X 軸）にオ
ゾン水を調整し実験を行った．コントロールとしてオゾン水と同量200 mL の滅菌蒸留水と 1 分間反応させた試料を用いて同様に行った．

温度を上昇させると3.0 ppm で20℃における5.0 ppm と同等の非常に高い殺菌効果を示し，4.0 ppm 以上では検出（ 4 ） L.monocytogenes に対する殺菌効果

限界以下となり完全に不活化されると考えられた．芽胞図 7 が示すように設定したすべての温度において，オの場合は作用温度が高くなるにつれて殺菌効果が顕著にゾン濃度0.5 ppm で90％以上の細菌を殺滅することが可上昇した．

能であった．1.0 ppm ではすべての温度において99％以家畜衛生学雑誌

122

第41巻第 4 号（2016）

上の細菌を殺滅することが示された．2.0 ppm でも同様

菌（Clostridium botulinum），セレウス菌（Bacillus cereus）にすべての温度で99％以上の細菌を殺滅することが示さなどがある．現在，日本では発生はないが炭疽が法定伝

れたが，L.monocytogenes を完全に不活化することはで染病に指定されており，ボツリヌス菌は重篤な食中毒をきなかった．L.monocytogenes に対しては温度を上昇さ引き起こすため公衆衛生上重要な細菌となっている．本せると殺菌効果は上昇したが，芽胞（B.subtilis）と比研究ではこれらの芽胞形成細菌の代表として枯草菌べるとその割合は小さかった．

（Bacillus subtilis）を芽胞の状態にして使用した．反応考

温度10℃ではオゾン濃度5.0 ppm のオゾン水でも芽胞に察

対して殺菌効果はほとんど見られなかったが，20℃では畜産現場で病原体は人，野生動物や野鳥，車両といっ

3.0 ppm で殺菌効果を示し，4.0 ppm では約99.9％の芽胞た様々な経路から運び込まれる．病原体の細菌やウイルを殺滅しており，5.0 ppm では99.99％以上の芽胞を殺滅

スの侵入，蔓延を防止するためには，現場での衛生管理

す る ほ ど の 非 常 に 高 い 殺 菌 効 果 を 示 し た．35℃ で はが非常に重要である．衛生管理に使用される消毒薬の理

3.0 ppm で20℃での5.0 ppm と同等の非常に高い殺菌効

想的な条件として①細菌，ウイルス，真菌，寄生虫卵な果を示した．また，35℃では4.0 ppm 以上で芽胞を完全ど広範囲の病原体に対して消毒効果があること，②環境に殺滅することが可能であることを示した．このことか

中への残留や汚染がないこと，③家畜や人に対して毒性

らオゾン水の芽胞に対する殺菌効果は反応温度に左右さがないこと，④金属腐食性がなく車両や畜舎に対してダれ，反応温度が高いほど顕著に効果が上昇することが明

メージがないこと，⑤発癌性や胚子奇形誘発性のないこ

らかとなった．この殺菌効果の顕著な上昇は，周囲の温と，⑥地下水や大気を汚染しないことなどが挙げられ度が上昇したために枯草菌が芽胞の状態から発芽して栄る．

養型になり耐久性が低下したためとも考えられるため，本研究で使用したオゾン水は，グラム陽性菌，グラム陰今後芽胞そのものに対するオゾン水と温度の影響につい性菌，芽胞，ウイルスなど広範囲の病原体に対して効果がて検討していく必要があると考えられる．オゾン濃度，

11.0 ppm のオゾン水により枯草菌の芽胞殻がひどく損

オゾン水には耐性菌が出現しないという利点がある．オ

傷するという報告もあり23），オゾン水は芽胞に対して殺ゾン水は半減期が短く，分解して酸素と水になるために菌効果があると考えられる．また，本研究では反応時間

環境中に残留しないため，環境汚染の心配が全くない．

が 1 分間と短時間で反応温度を上昇させることにより高オゾンガスは呼吸器系に障害を与えるがオゾン水はそのい殺菌効果を示したが，反応時間を長くすれば低温でも16，27）．このようなことからオゾ

殺菌効果が上昇することも考えられる．以上のことか

ン水は塩素系消毒薬，ヨウ素系消毒薬，アルコール消毒

ら，今まで高濃度のオゾン水が必要であると考えられて薬などの従来の消毒薬に代わる，畜舎や動物病院におけいた芽胞に対しても，反応温度を調整することによってる有効な消毒資材であると考え，その有効性を検討し低濃度のオゾン水で殺菌効果を示すことが確認された．

13，14，16，22，26）あることが明らかにされている消毒資材で心配がなく安全性が高い

た．

リステリア菌（Listeria monocytogenes）はグラム陽本研究から得られた結果から，IBRV，BEV に対して性桿菌で，リステリア症の原因菌である．リステリア症

オゾン水はオゾン濃度1.0 ppm で両ウイルスを完全に不は人獣共通感染症であり，全世界的に発生している．グ

活化することが明らかとなった．すなわちオゾン水はエ

ラム陽性菌はグラム陰性菌に比べて，細胞壁のペプチド

ンベロープを有するウイルスおよび有しないウイルスのグリカン層が厚く，一般消毒薬に対して抵抗性が強い．

両方を1.0 ppm で完全に殺滅することができるものと考本研究では畜舎汚染で発生することのある，一般消毒薬

えられる．また，オゾン濃度0.5 ppm の結果から，IBRVに対して抵抗性の強いグラム陽性菌としてリステリア菌

よりも BEV の方がオゾン水に対して抵抗性が高いことを選択した．すべての反応温度においてオゾン濃度が明らかとなり，この結果は一般消毒薬の結果と同様で0.5 ppm のオゾン水で90％以上のリステリア菌を殺滅すあった．今回の成績から，今回使用した代表的なウイルる効果があり，1.0 ppm では約99％のリステリア菌を殺スに対しては，オゾン水のオゾン濃度1.0 ppm で高い殺滅するほどの高い殺菌効果を示すことが明らかとなっウイルス効果があると考えられる．芽胞は極めて高い耐た．反応温度が高いほどリステリア菌に対する殺菌効果

久性を持っており，土壌中で長期間生存することができは高くなるが，その程度は芽胞に対するそれに比して顕る．芽胞を形成する細菌は Bacillus 属と Clostridium 属

著ではなかった．

で， 代 表 的 な も の に は 炭 疽 の 原 因 菌 で あ る 炭 疽 菌

今回の実験では，リステリア菌の増菌には普通寒天培（Bacillus anthracis）や食中毒原因菌であるボツリヌス

地を用い，菌数の測定には選択培地を用いた．菌数の計

鈴木ら：Ozone water sterilize and virucidal effect123

測にはコンタミの防止のために選択培地を使用し，正確は pH が5.7−10.1において殺菌効果に差異は認められなにリステリア菌を計測した．芽胞試験では，栄養型細菌

いが12），ロタウイルスやポリオウイルスⅠ型に対してはの菌数測定に普通寒天培地を用いているが，この場合，

pH が高いと殺ウイルス効果が低下するという報告があコロニーの形状から容易に菌を区別出来るので，普通寒る19）．オゾンは pH が低いほど安定性が高く，pH が低い

天で菌数測定を行っている．

時は分子型のオゾンが微生物と反応し，pH が高い時はオゾンの殺菌メカニズムは，主にタンパク質，不飽和

オゾンが分解した結果生じたヒドロキシラジカルと微生

脂質，酵素，ペプチドグリカン，核酸などの細胞成分の物が反応して，微生物が不活化されると考えられてい酸化によるものである．細胞外殻の成分を酸化し，そのる．

結果，細胞内容物が漏出して細胞が融解する

25，29）．不飽

有機物の混入は一般消毒薬の消毒効果を大きく減弱さ

和脂肪酸の二重結合や酵素に含まれる SH 基が酸化されせる要因の一つである．オゾン水の場合も有機物の混入

ると細胞膜透過性などの通常の細胞活動が崩壊し，細胞は消毒効果が減弱させることがわかっている．そのた死に至る．オゾンによる酵素の不活化は細胞死をおこす

め，畜舎など有機物が多く存在する場所で使用する場合上で重要なメカニズムであり，酵素の不活化はシステイ

は大量にオゾン水を生成し，使用する必要があると考え

11，33）．

られる．また，今回は滅菌蒸留水をオゾン水の生成に使塩素が選択的に特定の酵素を不活化するのに対して，オ

用したが，一般的に畜舎での利用を想定した場合，水道ゾンはすべての酵素を不活化することができる．核酸と水を使用して生成したオゾン水の殺菌効果を今後検討しオゾン水が反応すると核酸物質が障害されることが inていく必要があると考えられる．以上のことから，散気

vitro の実験で分かっており，チミンが核酸物質の中で式オゾン水生成装置により生成されたオゾン水は，今ま

最も感受性が高い29）．他の研究で，オゾンがプラスミド

で高濃度のオゾン水が消毒資材として必要と考えられての DNA を開環させ，一本鎖あるいは二本鎖を破壊し，いた病原体に対して，反応温度を調整することにより，転写能力を低下させることが分かっている18，30）．オゾン

低濃度オゾン水生成能力の装置から生成されるオゾン水

水はカプシドタンパクを傷害することにより，核酸の遊であっても殺滅効果があることが示された．現在までオ離と不活化を起こし，バクテリオファージ f2とバクテリ

ゾン水の殺菌効果および殺ウイルス効果についての報告

ン残基にある SH 基の酸化に起因するものである

オファージ T4を不活化する ．また，オゾン水を作用はあったが，反応温度やオゾン濃度を詳細に検討したもさせることによりタバコモザイクウイルス（TMV）はのはほとんどなく，本研究によりオゾン水のウイルスやお互いに凝集し，ウイルス RNA を架橋することが分細菌に対する詳細な消毒条件が示された．オゾン水は高32）

かっている ．感染力の消失とウイルス RNA の再生力

い殺菌，殺ウイルス効果，広範囲の病原体に対する消毒減少の相関関係が観察されているが，オゾンによる効果，環境への安全性が高いなどの利点があることか

TMV の不活化の主な作用はウイルスが脱殻できなくなら，従来使用されてきた一般消毒薬に代わる消毒資材にる た め で あ る と 考 え ら れ て い る31）． 作 用 温 度， 作 用

なりえる有用なものであると考えられる．

36）

pH，有機物の存在などの因子は，オゾンの可溶性，安定性，反応性に影響を与える．一般的に温度を上昇させ

本研究は株式会社 IHI との共同研究により行われた。

ると殺菌剤の効果は上昇すると考えられている．作用温度は微生物表面への殺菌剤の拡散率や基質との反応速度の一部を決定している．一定の試薬温度で温度を10℃上

引

用

文

献

昇させると，反応速度は 2 〜 3 倍になる．オゾンの場

1 ）Achen, M., Yousef, A.E. (2001) Efficiency of ozone

合，温度が上昇すると可溶性や安定性は低下するもの

against Escherichia coli O157:H7 on apples. Journalの，反応性は上昇する．しかし，殺菌効果は一般消毒薬とは異なり上昇しないという報告がある 1 ）．このことはof Food Science. 66, 545–548.
2 ）Akey, D.H., Walton, T.E. (1985) Liquid-phase study

温度が上昇することによってオゾンの分解や反応性が上

of ozone inactivation of Venezuelan equine

昇するためではないかと考えられている．本試験結果よencephalomyelitis virus. Applied andり，オゾン水の場合はウイルスに対して，室温（20℃）
で効果が最も高いことが明らかとなった．畜舎や動物病

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3 ）Barlett, D., Faulkner, C.S., Cook, K. (1974) Effect of

院で使用する場合においては，正確な温度管理をしなくchronic ozone exposure on lungelasticity in youngても十分な効果が得られるので，室温での効果が高いこ

rats. Journal of Applied Physiology. 37, 92–96.

とは有用な利点であると考えられる．同じオゾン濃度で4 ）Bocci, V. (2004) Ozone as Janus: this controversial

家畜衛生学雑誌

124

gas can be either toxic or medically useful.
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125

要

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旨30）Scott, D.B.M. (1975) The effect of ozone on nucleic

オゾン水を畜舎や動物病院における消毒に有用な資材

acids and their derivatives. In: Aquatic applications

であると考え，ウイルスや細菌に対する消毒条件を検討

of ozone. pp1–15. Blogoslawski W.J. and Rice R.G.

した．オゾン水の生成には散気式オゾン水生成装置を用

eds. International Ozone Institute, Syracuse, NY.

い，ウイルスはエンベロープを有する家畜ウイルスの代

31）Shriniki, N., Ishizaki, K., Yoshizaki, T., et al. (1988)

表として牛伝染性鼻気管炎ウイルス（IBRV），エンベ

Mechanism of inactivation of tobacco mosaic virus

ロープの無いウイルスの代表として牛エンテロウイルス

with ozone. Water Research. 22, 933–938.

（BEV）を用いた．細菌はグラム陽性菌で抵抗性の強い32）Sproul, O.J., Kim, C.K. (1980) The mechanism of

リステリア菌，および芽胞の状態にした枯草菌を用い

ozone inactivation of waterborne viruses. Project

た．生成したオゾン水200 mL に菌液およびウイルス材

Completion Report No.710836.United States

料 1 mL を加え 1 分間感作させた後，10倍階段希釈しDepartment of Interior.

PFU/0.1 mL も し く は CFU/0.1 mL を 測 定 し た．10，

33）Takamoto, Y., Maeba, H., Kamimura, M. (1965)

20，35℃いずれの温度下でも1.0 ppm の濃度で IBRV お

Changes in survival rates of enzyme activities in

よび BEV は検出されず，従来の報告よりも低い濃度でEscherichia coli with ozone. Applied Microbiology

有効性が確認された．芽胞に対しては10℃の条件下ではand Biotechnology. 37, 393–395.

5.0 ppm のオゾン濃度でも殺菌効果はほとんど観察され

34）Tyrrell, S.A., Rippey, S.R., Watkins, W.D. (1995)

なかったが，温度を35℃まで上昇させると3.0 ppm のオ

Inactivation of bacterial and viral indicators in

ゾン濃度で非常に高い殺菌効果が観察され，4.0 ppm でsecondary sewage effluents, using chlorine andは完全に殺菌された．リステリア菌に対しては，10，ozone. Water Research. 29, 2483–2490.

20，35℃いずれの温度下でも1.0 ppm で高い殺菌効果が35）Wang, Y., Yu J., Zhang, D., et al. (2014) Addition of

観察され，反応温度が高いほど殺菌効果は高かった．こhydrogen peroxide for the simultaneous control of

れらのことから今まで高濃度のオゾン水が必要と考えら

bromate and odor during advanced drinking water

れていた病原体に対し，低濃度オゾン水生成装置から生

treatment using ozone. Journal of Environmental

成されるオゾン水でも温度を調整することにより高い殺Science (China). 26, 550–554.

菌効果を示すことが明らかとなった．

36）Yoshizaki, T., Miura, K., Ueda, T. (1988) Mechanismof inactivation of tobacco mosaic virus with ozone.

キーワード：散気式オゾン水生成装置，オゾン水，低濃Water Research. 22, 933–938.

度，高い殺菌効果

原

127

著

下痢を呈した豚群におけるデルタコロナウイルス遺伝子の検出と宮城県内浸潤状況
小寺

文 1 ）※・曽地雄一郎 1 ）・西 清志 1 ）＊ 1 ・千葉直幸 1 ）・植木
矢島りさ 1 ）＊ 2 ・竹田百合子 1 ）・結城瑞希 1 ）洋 2 ）・

Detection of Deltacoronavirus gene in pigs showed diarrhea andits prevalence in pigs in Miyagi prefecture, Japan.
Aya Kodera 1）※ , Yuichiro Sochi 1）, Kiyoshi Nishi 1）＊1, Naoyuki Chiba 1）, Yo Ueki 2）,
Risa Yajima 1）＊2, Yuriko Takeda 1）, Mizuki Yuki 1）（1）Miyagi Prefectural Government Sendai Livestock Hygiene Center,
3-11-22 Anyoji, Miyagino, Sendai, Miyagi 983-0832, Japan
2）

Miyagi Prefectural Government Health and Environment Center,
4-7-2 Saiwaicho, Miyagino, Sendai, Miyagi 983-0836, Japan＊1  

Present address: Agricultural Department, Miyagi Prefectural Government Toubu Regional Promotion Office,1-4-32 Higashinakasato, Ishinomaki, Miyagi 986-0812, Japan＊2  

Present address: Miyagi Prefectural Government Livestock Experiment Station,
Hiwatashi, Minamisawa, Iwadeyama, Osaki, Miyagi 987-0511, Japan）（2015. 9. 18  受付／2016. 1. 20  受理）

Summary
In late April 2014, we came across a farrow-to-finish farm in the Miyagi prefecture, where breeding pigs inparticular were affected by an epidemic of diarrhea and vomiting. On bacteriological and virological diagnosis,
diarrhea samples obtained from pigs evaluated for the presence of bacteria by culture, and viral genes bypolymerase chain reaction (PCR) tested negative for known causative pathogens of porcine diarrhea but positive
for porcine deltacoronavirus (PDCoV) ORF1, M, and S genes.
As the PDCoV genes was detected in diarrhea samples obtained from pigs for the first time in the prefecture,
we performed a field survey of PDCoV in 128 pigs across 21 farms wherein an epidemic of diarrhea occurred ataround the same time (April to July 2014), in 88 healthy pigs across 15 farms, and in preserved diarrhea samples
that were collected among 2005 to 2013 from 20 pigs across 13 farms. We detected the PDCoV N genes only fromdiarrhea samples obtained from 21 pigs across 4 farms from late April to early June 2014. Therefore, we concluded
that PDCoV, which causes diarrhea in pigs, is a newly emerging virus in the prefecture.
Key words：Pocine deltacoronavirus, diarrhea

  家畜衛生学雑誌
宮城県仙台家畜保健衛生所〒983-0832 仙台市宮城野区安養寺 3 -11- 2
2）
宮城県保健環境センター〒983-0836 仙台市宮城野区幸町四丁目 7 - 2
1）

41，127〜133（2016）

現所属：宮城県東部地方振興事務所〒986-0812 石巻市東中里 1 - 4 -32＊2
現所属：宮城県畜産試験場〒987-0511 大崎市岩出山南沢字樋渡 1※
連絡著者：小寺 文（kodera-ay812@pref.miyagi.jp）＊1家畜衛生学雑誌

128

序第41巻第 4 号（2016）
を用い，空腸及び回腸標本を材料に，染色キット（ヒス

文

トファイン

2013年10月から2014年 8 月までに38道県817農場に豚シンプルステイン MAX-PO（MULTI），

ニチレイバイオサイエンス，東京）を用いた免疫組織化

流行性下痢（PED）の発生が確認され，宮城県でも，学染色を行った．

2014年 4 月中旬から 7 月初旬に16農場で発生があり，特細菌学的検査：被剖検豚 1 頭の一般細菌検査として，肝に哺乳豚に重篤な水様性下痢が認められた．豚に下痢を臓，脾臓，腎臓，心臓，肺及び大脳を材料に， 5 ％羊血起こすウイルス性疾病には，PED ウイルス（PEDV）に液寒天培地及び DHL 寒天培地を用い，37℃，18〜48時

よる PED の他，伝染性胃腸炎ウイルス（TGEV）による間好気培養， 5 ％卵黄加 GAM 寒天培地を用い37℃，18

TGE，A 〜 C 群ロタウイルス（GARV，GBRV，GCRV）〜48時間，アネロパック・ケンキ（三菱ガス化学，東等による豚ロタウイルス病があり，その対策には，適切京）を用いて嫌気培養を行った．さらに，小腸内容につで迅速な診断が重要となる．

いては，DHL 寒天培地，ES サルモネラ寒天培地Ⅱ及び豚デルタコロナウイルス（PDCoV）は，2012年に香10）

港の豚の保存材料から初めて確認された ．豚の下痢と5 ％卵黄加 CW 寒天培地を用い，定法に従い定量培養を行った．

の関連は，2014年に米国で初めて報告され ，同国でウイルス学的検査：被剖検豚 1 頭の空腸内容及び同居豚は，同年 4 月から，PED とともに届出感染症に指定 7 ）10頭の下痢便についてウイルス遺伝子の検索を行った．

9）

され，発生の届出が義務化されている．国内の豚での市販のキット（QIA-amp Viral RNA Mini，QIAGEN，

PDCoV感染の確認及び下痢との関与に関する報告はない．

U.S.A.）を用いて RNA を抽出し，検査まで−20℃保存し我々は，既知の下痢関連ウイルス陰性で，下痢発症にた．抽出 RNAに対して，PrimeScript One Step RT-PCR

PDCoV の関与が疑われる事例に遭遇したので，その詳

Kit Ver.2（TAKARA，滋賀）を用い，PEDV の ORF3遺細及び防疫対応について報告する．

伝子領域 5 ）及び M 遺伝子領域 1 ），TGEVS 遺伝子領域 8 ），

材料および方法GARV VP6遺 伝 子 領 域 2 ），GBRV VP7遺 伝 子 領 域 3 ），GCRV VP7遺伝子領域 6 ）について，PCR 法を実施した．

発生状況：農場は，繁殖雌豚150頭飼養の一貫経営であ

これらのウイルス学的検査，細菌学的検査の結果，下る．2014年 4 月下旬，分娩舎の繁殖雌豚 3 頭が下痢を呈

痢の主原因が特定できなかったことから，PDCoV の関

し，うち 1 頭の出産した 5 日齢哺乳豚数頭も下痢を呈し与の可能性を考え，PDCoV N 遺伝子領域 9 ） の RT-PCRていると，農場から家畜保健衛生所に通報があった．たを実施し，陽性 2 検体について，Applied Bio-systems

だちに農場に立入し，食欲不振を伴う水様性の下痢及び3130 Genetic Analyzer（Life Technologies，U.S.A.）を

一部の豚での嘔吐を確認した．PED 発症を疑い，下痢

用い遺伝子配列を決定し，MEGA6を用い ClastalW によを呈していた 3 頭の繁殖母豚とその産子の一部を検体とるマルチプルアライメントと NJ 法による分子系統樹解するため，哺乳豚 1 頭（No. 1）を剖検して生体材料を析を行い，既知の PDCoV と比較した．併せて，PDCoV

採取するとともに，哺乳豚 2 頭（No. 2， 3 ）及び繁殖の ORF1遺 伝 子，M 遺 伝 子，S 遺 伝 子 の 各 断 片 を 標 的

雌豚 3 頭（No. 6〜 8 ）の直腸便を採取した．翌日，別に，Marthaler D ら 4 ）の方法に準じ，市販のキット（One

豚舎の繁殖雌豚20頭程度に食欲不振及び12頭に下痢を確

Step PrimeScript RT-PCR Kit，TAKARA，滋賀）及び

認し，離乳豚舎でも23頭が下痢を呈し農場内に拡大傾向

リアルタイム PCR システム（Applied Biosystems7500，を認めたことから，新たな発生豚群の検体とするため，Life Technologies，U.S.A.）を用いてリアルタイム RT-

離乳豚 2 頭（No. 4， 5 ）及び繁殖雌豚 3 頭（No. 9〜11）

PCR 法 を 実 施 し た． 反 応 条 件 は， 逆 転 写 反 応48℃10の計 5 頭の直腸便を採取した．その後，数日間に約 6 割

分，酵素熱失活95℃10秒後，95℃ 5 秒，60℃35秒を40サの繁殖雌豚が下痢を呈したが，哺乳豚や離乳豚に大きなイクルとした．

流行を認めることなく，下痢の初発から 6 日程度で症状

PDCoV の浸潤調査：2014年 4 月13日〜 7 月 4 日に21戸は沈静化した．

128頭から採取した下痢便（検出率に反映させるため，

病理学的検査：15日齢の哺乳豚 1 頭（No. 1）を，鎮静

前述の県内初検出農場 1 戸11頭含む），聞き取りにより及び麻酔処置の上，放血殺後剖検した．採取した臓器及過去 2 か月以内に農場全体に感染性の下痢の発症を認め

び組織は，10％中性緩衝ホルマリン固定後，パラフィン

なかった農場15戸の健康豚88頭の直腸便（採取日：2014

包埋し，定法に従いヘマトキシリン・エオジン（H・E）

年 6 月30日〜12月24日）及び遡及調査として2005年〜

染色を実施した．また，1997年に農林水産省家畜衛生試2013年度に病性鑑定のため採取，保存してあった13戸20

験場より分与をうけた，抗 PEDV NK94P6株ウサギ血清

頭の下痢便について，PDCoV N 遺伝子領域の RT-PCR

小寺ら：豚デルタコロナウイルスの検出と浸潤状況

129を実施した．また，全ての PCR 陽性農場について，検染色では，ウイルス抗原陰性であった（図 1 D 1 〜 3 ）．

出した産物の一部の塩基配列を決定し，分子疫学解析に

なお，同居豚糞便は，哺乳豚 1 頭（No. 3）が宿便様固供した．なお，本浸潤調査に使用した下痢便について

形便の周囲に粘液の付着した状態であったほかは，全ては，別途，病性鑑定を目的に，PEDV，TGEV，GARV，

黄〜緑褐色の水様性下痢だった．

GBRV，GCRV の RT-PCR を実施した．

細菌学的検査：一般細菌検査では，検査した全ての臓器

結からの菌分離は陰性であった．また，小腸内容の定量培

果養では，溶血性大腸菌，サルモネラ及びクロストリジウ

臨 床 症 状 と 病 理 学 的 検 査： 剖 検 時 の 哺 乳 豚 は， 体 重

ム 属 菌 は 分 離 さ れ ず， 大 腸 菌 群 数 は10 4 cfu/g 未 満 で3 kg，体温39.6℃で，削痩は認めず自立していたが，元あった．

気消失し，黄色水様性下痢を呈していた（図 1 A）．剖ウイルス学的検査：既知の下痢原性ウイルスについて

検では，空腸から結腸にかけて，黄色水様性内容物及びは，被剖検豚を含め 6 頭で GARV 遺伝子の増幅を認め

中等度のガスの貯留を認め，腸管は菲薄化していた（図た以外，全て陰性であった（表 1 ）．GARV の RT-PCR

1 B）．H・E 染色標本では，十二指腸から空腸の腸絨毛の電気泳動像は，哺乳豚では微弱陽性 1 頭に限られ，一の一部が萎縮し，絨毛長の不均一を認めた．回腸及び回般的な哺乳豚の他の発症例との比較し，増幅反応は明ら

盲部では，腸絨毛が広汎に萎縮し（図 1 C），空腸及びかに微弱であった（図 2 ）．PDCoV は，全検体で目的の回腸の粘膜下リンパ組織では，リンパ濾胞の腫大と壊死

サイズの増幅産物が検出され，塩基配列を決定した 2 検細胞の散在が認められた．胃粘膜固有層にリンパ球のび体の配列は，米国の既報 PDCoV と完全に一致した（図漫性浸潤が認められ，直腸及び消化管以外の主要臓器に3 ）．また，リアルタイム RT-PCR でも，ORF1，M，S

は著変を認めなかった．また，抗 PEDV 免疫組織化学

遺伝子ともに，特異的反応を示した（表 1 ）．

図 1 ．剖検豚と組織病変
外貌所見；削痩はなく自立し，黄色下痢便の付着を認めた（A），剖検所見；腸管の菲薄化と黄色内容の貯留が透け見える（B），回腸 H・E 染色像（40倍）；腸絨毛の萎縮（C），PEDV 免疫染色（D）；剖検豚回腸（D1），陽性対照；
PED 発症豚回腸（D2），陰性対象；健康豚回腸（D3）130家畜衛生学雑誌

第41巻第 4 号（2016）

図 2 ．GARV の RT-PCR 結果
2 ％TAE アガロースゲル，エチジウムブロマイド染色，他症例哺乳：本県で確認した GARV 単独
感染 2 症例の哺乳豚各 1 頭の糞便，陽性：陽性対照（GARV NCDV 株1,356bp），陰性：陰性対照（DW），M：マーカー（200bp DNA Ladder Marker）
材料は水様性下痢で，全て発症後 2 日以内であったが，陽性は 6 頭と検出率は低く，特に，哺乳豚3 頭で微弱陽性 1 頭に限られた．

図 3 ．PDCoV N 遺伝子領域系統樹
陽性 4 農場 6 頭の PCR 産物の塩基配列を決定（農場 1 - 1 ；No.1；486nt，農場 1 - 2 ；No.9；483nt，農場 2 ；652nt，農場 3 ；632nt，農場 4 - 1 ；544nt，農場 4 - 2 ；546nt）し，MEGA6を用い，GenBank に登録されている既知の PDCoV と Clastal W によるマルチプルアライメントを行い，NJ 法による分子系統樹を作成した．
全ての PCR 産物の塩基配列は，米国の既報配列と完全に一致し，陽性農場 1 ， 2 及び 3 の 4 頭の塩基配列は完全に一致した．なお，陽性農場 2 ，陽性農場 3 の各 1 頭については，片側のプライマーに対する塩基配列を決定したのみであることから参考情報とする．

小寺ら：豚デルタコロナウイルスの検出と浸潤状況

131

表 1 ．遺伝子検査結果
No.

個体

1

PEDV

TGEV

GARV

GBRV

GCRV

ORF3

M

解剖豚

－

－

－

＋

－

2

哺乳豚 1

－

－

－

－

3

哺乳豚 2

－

－

－

4

離乳豚 1

－

－

5

離乳豚 2

－

6

母豚 1

7

PDCoV
N

M

ORF1

S

－

＋

＋

＋

＋

－

－

＋

＋

＋

＋

－

－

－

＋

＋

＋

－

－

＋

－

－

＋

＋

＋

＋

－

－

＋

－

－

＋

＋

＋

－

－

－

－

＋

－

－

＋

＋

＋

－

母豚 2

－

－

－

－

－

－

＋

＋

＋

＋

8

母豚 3

－

－

－

＋

－

－

＋

＋

＋

＋

9

母豚 4

－

－

－

＋

－

－

＋

＋

＋

＋

10

母豚 5

－

－

－

－

－

－

＋

＋

＋

－

11

母豚 6

－

－

－

－

－

－

＋

＋

＋

＋

＋：陽性，－：陰性※ PEDV，TGEV，GARV，GBRV，GCRV 及び PDCoV N 遺伝子については RT-PCR で，PDCoV ORF1，M 及び S 遺伝子についてはリアルタイム
PCR で実施した．

表 2 ．陽性 4 農場の疫学情報と遺伝子検査結果及び沈静化までの日数
農場
（所在）

導入元

出荷先
（と畜場）

遺伝子検査結果（陽性数／検体数）
PDCoV

PEDV

GARV

A県

C県

11

0

6

A 農場

県内 B

11

11

11

A県

C県

3

0

6

A 農場

県内 B

6

6

6

3
（A 市）

県内

県内 B

2

5

5

5

5

5

4
（B 市）

B県

県内 A

5

0

5

5

5

5

1
（A 市）
2
（A 市）

沈静化までの
日数

6日

3日

45日

7日

浸潤調査及び PDCoV 陽性農場の疫学情報：2014年の下2 も共通していた．陽性農場 3 は一貫経営で，繁殖育成

痢発症農場の21戸中 4 戸（19％），128頭中21頭（16％）

豚の導入は県内 B 農場，肥育豚の出荷先は県内 B と畜場

から PDCoV 遺伝子を検出した．陽性農場 1 ， 2 及び 3であった．陽性農場 4 は肥育経営で B 県から肥育素豚をは県内の同じ市内に所在し，下痢初発日も 4 月下旬に集導 入 し， 県 内 A と 畜 場 へ 出 荷 し て い た． 各 農 場 の中していた．一方，陽性農場 4 は，他の 3 農場と比較す

PDCoV，PEDV，GARV の陽性数は，陽性農場 1 は11ると地理的にも離れ，下痢初発も 6 月初旬であった．陽

頭中11， 0 ， 6 頭，陽性農場 2 は 6 頭中 3 ， 0 ， 6 頭，性農場 1 は前述の初確認農場で，一貫経営であり，A 県

陽性農場 3 は 5 頭中 2 ， 5 ， 5 頭，陽性農場 4 は 5 頭中A 農場から繁殖育成豚を導入し，C 県と県内 B と畜場に

5 ， 0 ， 5 頭であり，陽性農場 3 では PEDV との混合感

肥育豚を出荷しており，これらの経営体系は，陽性農場染が認められた（表 2 ）．なお，TGEV，GBRV，GCRV

家畜衛生学雑誌

132

については，全検体陰性であった．

第41巻第 4 号（2016）の PED 沈静化は24日を要したが，県内の PED16症例のさらに，PDCoV 陽性 4 農場の下痢初発から沈静化ま沈静化までの平均日数は36日で，本症例では，PDCoV

での日数は，それぞれ 6 日， 3 日，45日， 7 日で，PEDの介在する下痢の直後に発生した PED であっても，そとの混合感染を認めた陽性農場 3 を除き，沈静化までのの沈静化が長期化することはなかった．
PDCoV の浸潤調査では，2014年 4 月中旬から 7 月初

日数は最長 7 日であった．
陽性 4 農場 6 頭から検出された PDCoV N 遺伝子領域

旬に集中して県内養豚場に拡大した下痢症例のうち 4 戸の分子疫学解析の結果，全てが，米国の既報ウイルスに21頭から PDCoV 遺伝子を検出し，健康豚及び遡及調査完全一致した．また，陽性農場 2 ， 3 の各 1 頭について

では全て非検出であったことから，PDCoV は，県内には，片側のプライマーに対する配列決定のみで同定を2013年まで存在しない，新たに侵入した下痢に関与する行ったが，陽性農場 1 の 2 頭に完全一致した（図 3 ）．

ウイルスであることが強く示唆された．

PDCoV 遺伝子が検出された 4 農場全てから，GARVPDCoV 陽性 4 農場の疫学調査を実施した結果，陽性遺伝子が検出されたことから，その意義を検討するた

農場 1 ， 2 ，及び 3 は，同じ市に所在しているほか，発め，下痢発生のなかった養豚農家の健康豚15戸88頭の直生時期も重なっていた．陽性農場 1 及び 2 は，繁殖素豚

腸便を検査したところ， 5 戸21頭（23.8％）から GARVの導入元農場及び肥育豚の出荷先と畜場が一致してお遺伝子が検出され，月齢別の陽性数 / 検体数は，哺乳豚

り，陽性農場 3 は，陽性農場 1 及び 2 と同じ出荷先で3/6， 1 か月齢5/5， 3 か月齢3/5， 4 か月齢3/12， 5 かあった．この陽性 4 農場の 6 頭の分子疫学解析の結果，

月齢2/6，繁殖育成豚（未経産）5/23，繁殖豚1/32であっ地理的に離れ，豚の流通に共通事項のなかった陽性農場
4 以外完全に一致した結果となった．全ての陽性農場に

た．

考

察

は，過去に下痢の発症歴は見当たらないことからも，
2014年 4 月以降，一連の PED の流行にあわせ県内に侵

2014年に国内に拡大した PED の宮城県における発生

入し，新たな生産性阻害要因となった可能性が推察されは16農場であり，PED を疑う下痢症を認め，仙台家畜る．しかし，今回，PDCoV の県内及び農場への侵入経

保健衛生所に病性鑑定依頼された26症例のうち 1 農場

路を明らかにすることはできなかった．

で，既知の下痢症とは異なる嘔吐・下痢症に遭遇した．

陽性 4 農場に共通する臨床症状は，嘔吐及び水様性下

当該農場では，繁殖豚，離乳豚，哺乳豚と全てのステー

痢で，PED ウイルスとの混合感染のなかった 3 農場でジに水様性下痢が認められ，繁殖豚を中心に感染が拡大

は PED と比較し，下痢の程度は軽く，死亡する個体もした．発生状況及び剖検所見から，豚群が十分な免疫を極めて少なく，農場内の伝播も強くない傾向であった．

持たないウイルスの新たな侵入による下痢症を疑い，下症状の沈静化に要する期間も最長 7 日と速やかであった

痢便材料からの PEDV，TGEV，GBRV，GCRV 遺伝子のに対し，PEDV と混合感染を認めた陽性農場 3 では45の検出を試みたが，実施した遺伝子検査では全て陰性で日で，県内平均と比較し，長期間を要する結果となっあった．下痢発症豚の一部で検出された GARV についた．Marthaler D ら 4 ） は，米国の下痢に関与する293検ても，材料は全て下痢発症後 2 日以内と，一般的に最も体中89検体（30％）が PDCoV 陽性で，単独感染と PED

ウイルス量の多い時期のものであるにも関わらず，検出

ウ イ ル ス や ロ タ ウ イ ル ス と の 混 合 感 染 は， 各20検 体率は低く，特に哺乳豚で微弱陽性 1 頭に限られたこと，（22.5％），69検体（77.5％）と報告しているのに対し，他の典型的な症例と比較し，増幅反応は明らかに微弱で本県では，それぞれ 5 検体（23.8％）及び16検体（76.2％）あった（図 2 ）ことから，今回の下痢の主原因ではないであり，臨床症状を含め一致する結果となった．

と推察した．さらに，農林水産省動物衛生課から米国のGARV 遺伝子が健康豚の23.8％から検出され，その結新たな動向として情報提供のあった国内未報告の

果が母豚から乳汁免疫を受けていると思われる哺乳豚を

PDCoV の関与を疑って遺伝子検査を実施し，全頭から除き日齢耐性に応じた検出率であったことから，直腸便

PDCoV N 遺伝子を検出した．併せて ORF1，M，S 遺伝から GARV 遺伝子が検出されたという事実だけでは，子を検出したことから，検出した遺伝子断片は PDCoV

下痢との直接的関連は不明であることは，今後の下痢症であると判断した．

の類症鑑別と診断に活用したい．

なお，本症例の下痢は 6 日程度で沈静化したが，同農

今回，下痢発症豚群において PDCoV の存在を確認し場で，本症例の下痢の初発から18日後，新たに哺乳豚をた段階での PDCoV の浸潤調査を実施するにあたり，健中心に下痢が発生し PED と診断した．この時点での検康豚の調査を行うに先立ち，県内豚飼養者に対し，県内

査では，全検体で PDCoV は非検出であった．当該農場の下痢発症豚から PDCoV を検出したこと，米国で下痢小寺ら：豚デルタコロナウイルスの検出と浸潤状況

133症との関連に関する調査が進められていること及び調査

wild-and attenuated-type porcine epidemicへの協力要請について記載した PDCoV に関するリーフ

diarrhea viruses, Virus Genes, 36, 95-104.

レットを配布した．この情報提供及び今回の一連の調査

6 ）Tsunemitsu, H., Jiang, B., Saif, L.J. (1996) Sequence

結果の関係者への周知によって，農場管理者や関係者

comparison of the VP7 gene encoding the outer

は，PDCoV の下痢への関与の可能性を認識し，既知のcapsid glycoprotein among animal and human

疾病とは異なる下痢症が発生した場合の通報，診断体制

group C rotaviruses, Arch Virol, Arch Virol, 141が強化されたと考えるが，2015年12月現在，県内の他の農場で，PDCoV が検出される下痢症の発生は確認していない．

(3-4), 705-713.
7 ）United States Department of Agriculture News
Release. (2014) Required Reporting of Cases Latest

今回の調査で，PDCoV 単独感染により豚に下痢を起

M e a s u r e t o S l o w D i s e a s e S p r e a d, Release

こす可能性があること，また本ウイルスによる下痢は短No.0066.14. (http://www.usda.gov/wps/portal/

期間で鎮静化することが確認できた．しかし，PDCoV

usda/usdahome?contentidonly=true&contentと他のウイルスとの混合感染における症状の長期化も考

id=2014/04/0066.xml)

えられたことから，今後，全国的な野外症例の蓄積と，

8 ）Vaughn, E.M., Halbur, P.G., Paul, P.S. (1994) Three

それらの疫学解析及び関係者間の情報共有を進めること

New Isolates of Porcine Respiratory Coronavirusが重要であり，当所でも，ウイルス分離やウイルス抗体with Various Pathogenicities and Spike (S) Gene

浸潤調査を実施し，PDCoV の疫学及び病態解明を進め

Deletions, J Clin Microbiol, 32, 1809-1812.

ていきたい．

9 ）Wang, L., Byrum, B., Zhang, Y. (2014) Detection
and genetic characterization of deltacoronavirus in

稿を終えるにあたり，抗 PEDV ウサギ血清を分与して頂きました国立研究開発法人農業・食品産業技術総合

pig, Ohio, USA, 2014, Emerging Infectious Diseases,
20 (7), 1227-1230.

研究機構動物衛生研究所並びに多大な御助言を賜りまし10）Woo, P.C., Lau, S.K., Lam, C.S., et al. (2012) Discovery

た同研究所の大橋誠一先生及び鈴木亨先生に深謝しま

of seven novel mammalian and avian

す．

coronaviruses in the genus deltacoronavirus

引

用

文

献

supports bat coronaviruses as the gene source ofalphacoronavirus and betacoronavirus and avian

1 ）Duarte, M., Tobler, K., Bridgen, A., et al. (1994)

coronaviruses as the gene source ofSequence analysis of the porcine epidemic diarrhea

gammacoronavirus and deltacoronavirus, J Virol,

virus genome between the nucleocapsid and spike

86, 3995-4008.

protein genes reveals a polymorphic ORF,
Virology, 198, 466-476.

要旨2 ）Fujii, Y., Shimoike, T., Takagi, H., et al. (2012)2014年 4 月，宮城県内の繁殖肥育一貫経営の養豚農場

Amplification of all 11 RNA segments of group A

で，母豚を中心とした嘔吐及び水様性下痢を確認した．

rotaviruses based on reverse transcription

これらの下痢便材料からは，下痢をおこす既知の病原体

polymerase chain reaction, Microbiol Immunol, 56,の直接的関与を証明できず，全検体から豚デルタコロナ

630-638.

ウイルス（PDCoV）遺伝子を検出した．PDCoV 遺伝子3 ）Kuga, K., Miyazaki, A., Suzuki, T., et al. (2009)の検出は県内初であったことから，同時期（2014年 4 月

Genetic diversity and classification of the outerから 7 月）に発生した下痢便21戸128頭及び健康豚15戸

capsid glycoprotein VP7 of porcine group B rota-

88頭について浸潤調査と，2013年以前に発生した下痢便

viruses, Arch Virol, 154, 1785-1795.

のうち保存のあった13戸20頭の遡及調査を実施した．そ4 ）Marthaler, D., Raymond, L., Jiang, Y., et al. (2014)の結果，2014年 4 月下旬から 7 月上旬に発生した下痢便

Rapid Detection, Complete Genome Sequencing,

4 戸21頭のみから PDCoV 遺伝子が検出されたことか

and Phylogenetic Analysis of Porcine Delta-

ら，PDCoV は，県内に新たに侵入した下痢に関与する

coronavirus, Emerging infectious diseases. 20, 8.

ウイルスであることが示唆された．

5 ）Park, S.J., Moon, H.J., Luo, Y., et al. (2008) Cloning
and further sequence analysis of the ORF3 gene of

キーワード：豚デルタコロナウイルス，下痢

135

第41巻
第41巻

第1号

総目次

2015

〈原 著〉
畜舎汚水処理曝気槽からの微生物飛散抑制を目的とした防風ネットの利用方法･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････田中康男･･･････････････････････････ 1〜 8
〈短 報〉
牛乳房炎由来緑膿菌が産生するバイオフィルム形成に対するマクロライド系抗菌薬の減少効果･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････渡邉公平・木内明男･･･････････････････････････ 9〜11
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 13〜14
家畜衛生学雑誌投稿規程 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 15〜16
日本家畜衛生学会会則 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 17

第41巻

第2号

2015

〈第82回大会一般講演要旨〉
Actinobacillus pleuropneumoniae 血清型14の莢膜多糖合成遺伝子領域の遺伝子構成について･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････伊藤博哉･･････････････････････････ 26〜27
次世代シークエンスを利用した牛下痢便サンプルのウイルス遺伝子全長解析による牛感染性下痢症の原因解析･････････････････････････････････････････････････････････長井 誠・島田紗彩・大松 勉・青木博史・
増田恒幸・高井 光・水谷哲也・白井淳資･･････････････････････････ 28〜29
野外より分離した Mycoplasma spp. の消毒剤に対する感受性調査･･････････････････････････････････････････････････････井口真里奈・樋口豪紀・岩野英知・廣瀬和彦・
樺山 淳・清水敦之・篠塚康典・河合一洋･･････････････････････････ 30〜31
牛乳汁中の NAGase 活性値と体細胞数との関係･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････井上和貴・篠塚康典・河合一洋･･････････････････････････ 32〜33
牛の性判別精液による IVF 胚の胚盤胞率の比較と卵管移植法の検討･････････････････････････････････････････････磯日出夫・原田宗範・内山史一・原田友美・坂和由紀･･････････････････････････ 34〜35
脱酸素剤が食肉の色調に及ぼす影響･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････和賀正洋・押田敏雄・坂田亮一･･････････････････････････ 36〜37〈第82回大会教育講演要旨〉
デングウイルス感染症･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････大松

勉･･････････････････････････ 39〜40

会員へのおしらせ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 41
家畜衛生学雑誌投稿規程 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 42〜43
日本家畜衛生学会会則 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 44

136

第41巻

第3号

2015

〈家畜衛生フォーラム2015要旨集〉
座長のことば「家畜疾病の診断法の新しい潮流」･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････明石博臣･･････････････････････････ 53〜54
大腸菌の全血清型を遺伝学的に判定する PCR 法の開発･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････井口 純･･････････････････････････ 55〜59
遺伝子組換え抗原を用いたヨーネ病の迅速・高感度診断法の開発･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････永田礼子･･････････････････････････ 61〜64
口腔液を用いた PRRS ウイルス抗体および遺伝子の検出･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････會田恒彦･･････････････････････････ 65〜68
次世代シークエンス技術の微生物感染症診断への応用･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････黒田 誠･･････････････････････････ 69〜73
家畜疾病の診断における検査精度の管理（検査の信頼性確保に向けて）･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････福田苗美･･････････････････････････ 75〜77〈第83回大会講演要旨集〉
βヒドロキシ酪酸はウシ好中球の化学発光（CL）を抑制しアルギニンは CL を高める･････････････････････････････････････････････山城良介・澄川莉那・三上貴史・樋口豪紀・永幡 肇･･････････････････････････ 82〜83
牛乳房炎分房への Bifidobacterium breve およびラクトフェリン分解産物注入に伴う乳腺の反応性とサイトカイン産生への影響･･････････････････････････････････････････････････････澤田知佳・丸山久美子・浅井友紀子・國分千尋
権平 智・河合一洋・樋口豪紀・永幡 肇･･････････････････････････ 84〜85
微酸性電解水が乳房炎由来菌株産生バイオフィルムに及ぼす影響･････････････････････････････････････････････湯浅麗子・河合一洋・篠塚康典・松山公喜・天羽由知･･････････････････････････ 86〜87
食肉の赤色化における一酸化炭素の特性･･････････････････････････････三木 優・和賀正洋・竹田志郎・猪股智夫・押田敏雄・坂田亮一･･････････････････････････ 88〜89「エアシャワー」における抗菌剤（次亜塩素酸ナトリウム溶液）を用いたエアロゾル噴霧による抗菌効果試験･････････････････････････････････････････････････････････野崎雄幸・今野幸浩・白井淳資・宮地洋二郎･･････････････････････････ 90〜91
卵黄抗体製剤の初乳効果の検討･･････････････････････････････････････････磯日出夫・原田宗範・北山しおり・内山史一・野村茂之･･････････････････････････ 92〜93
会員へのおしらせ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 95〜106
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 107〜108
日本家畜衛生学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 109〜110

第41巻

第4号

2016

〈原 著〉
散気式オゾン水生成装置により生成されたオゾン水のウイルスおよび細菌に対する消毒効果･･････････････････････････････････････････････････････鈴木遊大・福原麻衣・釜瀬幸広・立石健太郎・
二階堂啓吾・長井 誠・白井淳資 ･･･････････････････････ 117〜125
下痢を呈した豚群におけるデルタコロナウイルス遺伝子の検出と宮城県内浸潤状況･･････････････････････････････････････････････････････小寺 文・曽地雄一郎・西 清志・千葉直幸・
植木 洋・矢島りさ・竹田百合子・結城瑞希 ･･･････････････････････ 127〜133
第41巻の総目次 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 135〜138
会員へのおしらせ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139
家畜衛生学雑誌投稿規程 ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 140〜141
日本家畜衛生学会会則 ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 142〜143

137

General Contents of Vol.41
Vol. 41 No. 1 2015
〈Original report〉
Utilizing method of windbreak net for reducing emission of hazardous
microbes from aeration tank of animal wastewater treatment facilities.
･･･････････････････････････････････････････ Yasuo Tanaka ････････････････････････ 1〜8〈Note〉The reduction effect of macrolide antibiotics over the biofilm formation thatthe bovine mastitis origin Pseudomonas aeruginosa produces･･･････････････････････････････････････････Kohei Watanabe et al. ･･･････････････ 9〜11
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 13〜14
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 15〜16
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 17

Vol. 41 No. 2 2015
〈Abstracts of oral presentations on 82nd academic meeting〉･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 23〜37〈Abstract of the educational lecture on 82nd academic meeting〉
Dengue･･･････････････････････････････････････････ Tsutomu Omatsu ････････････････････ 39〜40
Information for Members ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 41
Instruction for Authors ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 42〜43
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 44

Vol. 41 No. 3 2015
〈Abstracts of Animal Hygiene Forum 2015〉････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 51〜77〈Abstracts of oral presentations on 83rd academic meeting〉･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 79〜93
Information for Members ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 95〜106
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 107〜108
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 109〜110

138Vol. 41 No. 4 2016
〈Original report〉
Evaluation of sterilize and virucidal effects of ozone water produced by the bubbling micro ozone gas
mixture ozone water generator.
･･･････････････････････････････････････････Yudai Suzuki et al.･････････････････ 117〜125
Detection of deltacoronavirus gene in pigs showed diarrhea and its prevalence in pigs in
Miyagi prefecture, Japan.
･･･････････････････････････････････････････Aya Kodera et al.････････････････････127〜133
Contents of volume 41 ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 135〜138
Information for Members ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 139
Instruction for Authors ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 140〜141
The Regulations of The Japanese Society of Animal Hygiene ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 142〜143

139

学会活動報告会員へのおしらせ①「日本家畜衛生学会第83回大会」開催される
2015年12月18日に，都内中央区にある Meiji Seika ファルマ本社講堂において，「第83回大会」が午前10時から開催されました．今回は家畜衛生や畜産分野における 6 演題の研究発表が盛況に行われました．なお，当日の講演要旨については本誌41巻 3 号（2015.12発行）をご覧ください．

②「家畜衛生フォーラム2015」開催される同日午後 1 時から，同じく Meiji Seika ファルマ本社講堂において「家畜衛生フォーラム2015」が開催されました．今回のフォーラムは「家畜疾病の診断法の新しい潮流」というテーマで，（一財）生物科学安全研究所の共催，農林水産省の後援で開催されました．フォーラムは明石博臣先生の座長のもとに， 5 名の先生方が講演されました．家畜衛生で問題となる疾病の最新の診断法やこれから応用されることが考えられる診断法，さらには検査精度の管理についての話題に会場から多くの質問が寄せられ，おおいに盛り上がりました．なお，当日の講演要旨については本誌の41巻 3 号（2015.12
発行）をご覧ください．

140「家畜衛生学雑誌」投稿規程
1 ．本誌には原則として，家畜衛生に関する総説，原著

お，総説についてはこの限りではない．また，論文，短報を掲載する．なお，原稿は編集委員会事

カラーや特殊な用紙での印刷は，その費用を著者の負担とする．

務局へ電子メール添付（PDF ファイル）で提出す
る．印刷原稿 3 部（うち 2 部は鮮明なコピーでもよ8 ）使用する動植物・微生物などの学名はイタリッ
ク体で表記する．

い）の書留郵便あるいはレターパックによる提出も可とする．

9 ）度量衡の単位，略記は SI 単位系を基本とし，以下の例に従う．

2 ．投稿論文は他誌に未発表であること．また，筆頭著者あるいは連絡著者（コレスポンディングオーサー）［例］m，cm，mm，µm，nm，kg，g，mg，µg，ng，L，mL，µL，nL M，mM，µM，％，cm2，
m3，

は本学会会員であること．
3 ．掲載論文は総説，原著論文，短報とし，編集委員会

hr，min，sec，℃，pH，Pa（血圧は mmHg，が掲載の採否を決定する．
4 ．投稿論文は和文または英文とし，次の指示（記述順序など）に従うこと．
1 ）論文原稿は別に定める注意に従って作成するこ

生体内圧力は Torr）など．
10）表および図（写真を含む）は用紙 1 枚に 1 つとし，個々に番号と表題を記入し，投稿原稿の最後に添付する．

と．用紙サイズは A4とし，和文の場合は30字

11）引用文献は下記の例にならって，アルファベッ

で25行程度，英文の場合はダブルスペース（70ト順にならべ，本文中では 1 ，3 − 6 ） のように上字で25行程度）とする．

付き（superscript）で記入する．ただし，著者

2 ）和文の場合も句読点は，「 ，」，「 ．」を用いること．

名 は 3 名 ま で と し， 4 人 目 以 降 は 省 略 し，「ら」，「et al」で示す．

3 ）論文原稿は第 1 ページに表題，著者名，所属機［例］

関名およびその所在地を和文と英文で記載する

雑誌とともに，連絡著者とその電子メールアドレスを記載する．また，和文の場合は20字，英文の場合は40字以内の略表題（running head）を記載する．
4 ）原著論文の構成は原則として，Summary（本文が和文の場合も英語），序文（Introduction），
材料および方法（Materials and Methods），結果（Results）， 考 察（Discussion），引用文献（References），要旨（本文が和文であっても英文であっても，和文の要旨）とする．ただし，謝辞は，別項目を設けず，本文の最後に 1 行の空白をとった後に記載する．
5 ）英文 Summary は250語以内，和文要旨は600字以内とし，それぞれの最後の行に 5 つ以内のKey words（キーワード）をつける .
6 ）英語論文および和文論文の英文 Summary は，
投稿前にしかるべき校閲を受けること．
7 ）原著論文で刷り上り 6 頁（30文字×25行＝750
文字で，図表を含めて12枚程度）までは，印刷費を本学会で負担する．ただし，超過ページについては，その費用を著者の負担とする．な

1 ）内田孝治・藤井武・高山公一ら（1991）ブロ
イラーにおける実験的大腸菌症に対するラノ
フロキサシンの治療効果および用量設定試
験．家畜衛生研究会報．33，19-24．
2 ）Oshida, T., Fukuyasu, T., Kohzaki, K., et al.
(1993) A new treatment system for animal
waste water using microorganism, soil andvagetation. Asian-Australasian Journal ofAnimal Sciences. 6, 205-209.
電子ジャーナル3 ）Wilson, D.J., Rood, K.A., Bunnel, J., et al. (2014)
Johne’s disease, mycoplasma and BVD in
Utah-Bulk tank milk testing and comparison
to previous regional prevalence andindividual herd results over time. Journal of
Veterinary Science and Technology. 5:182.
doi: 10.4172/2157-7579.1000182.
単行書4 ）伊予部志津子（1980）薬剤耐性因子（R）の

141

検出法，薬剤感受性測定法．22-48頁．三橋進編，講談社，東京．
5 ）McDonrd, P. (1976) Trends in silage making,Microbiology in Agriculture, Fisheries and  
Food. pp109-121. Shinner, F.A and Carr, J.G.
eds. Acad. Press, London, NY.
12）図はグラフィックソフトウェアで作成することする，その他の規定については原著の場合に準じる．
6 ．総説の構成については特に規定を設けないが，引用論文の記載法は原著論文の場合に準じることとする．
7 ．別刷りは50部に限り無料とする．追加分についてその費用を著者の負担とする．
8 ．本誌の発行は原則として，年 4 回（ 4 月， 7 月，10月および 1 月）とする．
9 ．編集委員会事務局を下記に置く．

が望ましい．手書きで作成する場合は，そのま〒252−0132

ま製版できるよう，白色紙または青色方眼紙に

神奈川県相模原市緑区橋本台 3 − 7 −11タイプやレタリングなどにより作成する．

（一財）生物科学安全研究所内

13）投稿原稿が受理（掲載決定）されたならば，著

日本家畜衛生学会編集委員会

者 は す み や か に 最 終 原 稿 の Microsoft Word

Tel

ファイルを電子メールで提出すること．図につFax 042（762）7979

いては，グラフィックソフトウェアで作成した

E-mail：jjah@riasbt.or.jp042（762）2775

ファイルも併せて提出する．
5 ．短報は，その内容を成績および考察（Results and附則

Discussion） と し て ま と め， 要 旨（Summary） は

本規程は，2015年 1 月 1 日以降の投稿論文に適用する．

英文では200字以内の和文，和文では100語以内の英本規程は，2015年 7 月12日以降の投稿論文に適用する．

文をつける．原稿の長さは刷り上りで， 2 頁以内と論文原稿を作成する上での注意
1 ）執筆にあたり，投稿規定をもう一度，熟読すること．
2 ）各行の行末での強制改行をしないこと．
3 ）投稿論文が和文，英文のいずれの場合も数字，欧文は全て 1 バイト文字（いわゆる半角）で入力するこ

6 ）図は，Microsoft PowerPoint，Excel，Adobe Photoshop，Illustrator 等のソフトウェアで作成するのが望ましい．
7 ）論文受理後の最終原稿は，Microsoft Word（あるい）は 2 バイト文字（いわゆるは Microsoft Word 互換ソフトウェア）ファイルと全角）とする．
「µ」（マイクロ）は半角立体で入力して提出する．ただし，Microsoft Word 互換ソフと．ただしかっこ（すること．

トウェアを使用した場合は，Microsoft Word で正4 ）投稿論文原稿は PDF ファイルとして事務局まで電しく表示されることを確認すること．グラフィック

子メールで提出すること．その際には必ずパスワー

ソフトウェアで作成した図データは，jpeg，tiff 等

ドロックし，パスワードは別メールで事務局まで連の汎用フォーマットで提出する．

絡すること．特段の理由がある場合は，印刷原稿 3部（うち 2 部は鮮明なコピーでも可）を事務局まで
書留郵便あるいはレターパックで送付すること．
5 ）写真は印刷に耐えうる鮮明なものを使用すること．

日本家畜衛生学会
編集委員会

142

日本家畜衛生学会会則
（総
第１条

則）

第８条

理事長は常務理事の互選により選出する．

本 学会は，日本家畜衛生学会（英文表記：

２．理事長は学会を代表し，会務を総理する．

The Japanese Society of Animal Hygiene）

３．理事長は常務理事の中から庶務・会計を担当する事務局担当者を委嘱する．

（以下，「学会」とする．
）と称する．
第２条
第３条

第４条

４．理事長は第4条の事業を達成するため常設の学会の事務局は，原則として理事長の所属する機関におく．

学術企画委員会，編集委員会を設置する．

学会は，家畜衛生とその関連領域における学（1）委員会の委員は原則として理事長が常務

究の向上を図り，畜産の進歩発展に寄与する

理事の中から指名する．但し，常務理事ことを目的とする．

会が必要と認めた場合には会員の中から指名することが出来る．

学会は，前条の目的を達成するために，次の（2）委員会の委員長は，委員の互選により選事業を行う．

出し，理事長が指名する．

（1）研究発表会及び学術講演会等の開催（2）学会誌「家畜衛生学雑誌」の発行

第９条

副理事長は常務理事の互選により選出し，理事長を補佐する．

（3）学会の発展に貢献した者への表彰（4）その他学会の目的達成のために必要な事業第１０条

常務理事および監事は理事の互選により選出
し，総会において承認を受ける．
２．常務理事は常務理事会を組織し，理事長を補（会員および会費）
第５条

佐し，学会の運営に関して第４条の事項を行う．

学会の会員は正会員，学生会員，賛助会員お３．監事は理事長を補佐し，会務と会計を監査する．

よび名誉会員より構成する．
（1）正会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納

第１１条

理 事は理事長が委嘱し，総会の承認を受ける．
２．理事は理事会を組織し，理事長を補佐し，学入した個人会の運営に関して第４条の事項を行う．

（2）学生会員：学会の趣旨に賛同し，会費を納入した学生，大学院生．た

第１２条

役員の任期は２年とし，再任を妨げない．
２．役員の補欠又は増員は，第８条第１項，第９だし会員期間は単年度とす

条，第10条若しくは第11条の規定により選任る．

し，その任期は前任者又は現任者の残任期間（3）賛助会員：学会の趣旨に賛同し，その事業を援助するため所定の会費とする．ただし，常務理事会が会務の運営にを納入した個人又は団体支障がないと認めたときは，この限りでない．

（4）名誉会員：学会に永年功労があり，総会

第１３条

第６条

常務理事会および理事会は理事長が随時招集する．

において承認された個人
会
 費は正会員にあっては年額5,000円，学生会員にあっては年額2,000円，賛助会員にあって（総は１口年額10,000円とし，毎年７月末までに

第１４条

会）
通常総会は毎年１回，理事長が招集する．

納入するものとする．

第１５条

理事長が必要と認めた場合は，臨時総会を招集することができる．

第１６条（役員および役員会）
第７条

総会では次の事項を議決する．

学会に次の役員をおく．

（1）事業計画および事業報告に関する事項（1）理 事 長

１名（2）予算および決算に関する事項（2）副理事長

１名（3）会則の改正に関する事項（3）常務理事若干名（4）その他，学会の目的を達成するために必

（4）監

事

２名

（5）理

事

35〜45名

要な事項

143

（会

計）

第１７条

（3）こ の会則は平成15年7月5日に改正し，

学会の経費は会費その他の収入をもって，これにあてる．

第１８条

会計年度は４月１日より，翌年３月31日までとする．

同日に施行する．
（4）こ の会則は平成16年7月3日に改正し，同日に施行する．
（5）こ の会則は平成17年7月2日に改正し，同日に施行する．

附則（6）こ の会則は平成21年7月4日に改正し，（1）この会則は平成14年7月6日より施行する．
（2）学会設立時の役員は家畜衛生研究会（以下「研究会」と略す）の役員が暫定的に同日に施行する．
（7）こ の会則は平成23年7月2日に改正し，同日に施行する．

就任することとし，理事長は研究会の会（8）こ の会則は平成27年7月11日に改正し，長が，常務理事は研究会の幹事が，理事同日に施行する．ただし，平成27年度のは研究会の評議員が，監事は研究会の監

会費は4,000円とし，平成28年度から会事がそれぞれ就任する．

費を5,000円とする．

144

協賛団体・企業一覧
日本家畜衛生学会は以下の各団体・企業からの協賛を受けています．ここに記して謝意を表します．（五十音順）（株）インターベット（株）科学飼料研究所

共立製薬（株）

コーキン化学（株）

住化エンバイロメンタルサイエンス（株）

ゾエティス・ジャパン（株）

田村製薬（株）日本イーライリリー（株）（一般財団法人）日本生物科学研究所

日本全薬工業（株）

日本ハム（株）

バイエル薬品（株）

ベーリンガーインゲルハイム・ベトメディカルジャパン（株）

Meiji Seika ファルマ（株）

日本家畜衛生学会入会のすすめ
日本家畜衛生学会は家畜衛生とその関連領域における学術の交流を図り、畜産の進歩発展に寄与することを目的とした学会です。
＜主な活動＞
・ 年２回（７月、11月）の研究発表会
・ 年１回のフォーラム（11月ごろ）の開催
これまでの主なテーマ「狂犬病」、「口蹄疫」、「鳥インフルエンザ」、「BSE」、「家畜ふん尿」など
・ 年４冊の機関誌「家畜衛生学雑誌」の発行
・ 学会賞の授与
年会費4,000円（但し、学生は2,000円）
御請求戴ければ、見本誌を贈呈します!!

家畜衛生学雑誌

The Japanese Society of Animal Hygiene
日 本 家 畜 衛 生 学 会〒183-8509

東京都府中市幸町3-5-8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内TEL ／ FAX：042−367−5935（042−367−5780）
http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
Hpで活動内容がご覧になれます!!（日本家畜衛生で検索）

第41巻第 4 号
平成28年 2 月26日発行（会員配布）

発

行 日本家畜衛生学会
理事長 白井淳資〒183－8509 東京都府中市幸町 3 − 5 − 8
東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内☎／ FAX：042−367−5935（042−367−5780）
ホームページ：http://www.kachiku-eisei.jp/
e-mail：k-eisei@cc.tuat.ac.jp
振替口座：00240－ 3 －43171
印 刷 所 明誠企画株式会社〒208－0022 東京都武蔵村山市榎 2 － 25 － 5☎ 042−567−6233 FAX 042−567−6230

平成日本家畜衛生学会

年

月

日

御中

入 会 申 込 書
貴会への入会を下記の通り申込ます．

記
フリガナ
氏

名：

所属名称：
部

署：

役

職

所属住所：〒TEL：

FAX：

e-mail：

自宅住所：〒

TEL：
e-mail：会員の種類 ： ○正 会 員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員
会報送付先 ： ○自宅 ・ ○勤 務 先○内にチェックを付して下さい．

１．入会申込書は必要事項をすべて正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5935）にてご送付下さい．
２．年会費は個人会員 4,000円，賛助会員 10,000円／口（１口以上）を郵便振替口座（加入者名：日本家畜衛生学会，No. 00240−3−43171）へお振込下さい．
３．申込先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5935（042−367−5780）

４．ホームページからも申し込めます：http://www.kachiku-eisei.jp/

平成
日本家畜衛生学会

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月

御中

変
変更手続きを下記の通り致します．

更

届

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フリガナ
○

氏

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○

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○

部

○

所属住所：〒

署：

○

役

TEL：

○

自宅住所：〒

○

TEL：

職

FAX：

e-mail：e-mail：○会員の種類：○正会員 ・ ○学生会員 ・ ○名誉会員○会報送付先：○自宅 ・ ○勤務先全てご記入の上，上記変更部位の○内にチェックを付して下さい．

１．変更届出書は必要事項を正確に記入し，郵便またはFAX（042−367−5935）にてご送付下さい．
２．届け先は〠183−8509

東京都府中市幸町３−５−８

日本家畜衛生学会事務局宛

東京農工大学農学部獣医伝染病学講座内

TEL／FAX：042−367−5935（042−367−5780）

３．ホームページからも手続きできます：http://www.kachiku-eisei.jp/

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