Agilent AdvanceBio
Gly-X グリカンサンプル前処理とInstantDye の自動化

AdvanceBio Gly-X キットによる自動サンプル前処理

Agilent AdvanceBio Gly-X で N-グリカンのサンプル前処理を自動化

自動化により、手作業の時間を短縮し、誤操作やデータのばらつきを低減できます。
迅速な脱グリコシル化、ラベリング、クリーンアップなど、Agilent Gly-X グリカン

サンプル前処理および InstantDye (旧 ProZyme) プロトコルの各手順は、96 ウェ

ルプレートで実行します。これにより、大半の分注ワークステーションで Gly-X キットを直接使用できるようになります。変更 は 不要で、特別 なキットコンポーネントやキットフォーマットも必要ありません。

Gly-X による N-グリカンのサンプル前処理は、手動での実行も、自動化ワークステーションでの実行も可能です。このため、スループットやワークフローのニーズに基づいて、柔軟かつ効率的にキットモジュールを使用できます。

糖鎖分析を加速する

トータルソリューション

アジレントのバイオ医薬品向け製品群に ProZyme の製品とサービスが加わりました。今後は、糖鎖分析のあらゆるステップをサポートする機器および消耗品をすべてアジレントからご購入いただ
けます。サンプル前処理から始まり、確かな分析結果を得るまでの包括的なグ糖タンパク質 40 μg
変性 3 分間

生産性向上を実現する要素– Gly-X キットは手動と自動の両方のメソッドをサポート

N-グリカナーゼ消化 5 分間

– 自動メソッドで得られるデータはInstantPC ラベリング 1 分間

– メソッド間でキットモジュールを柔軟に

96 ウェルクリーンアッププレート– LC/MS 用標識色素と CE 用標識色素

グリカンの遊離

ラベル化グリカン

UHPLC、LC/MS、CE

データ解析

手動ワークフローの場合と同じ使用可能の両方で実証済み

リカン分析ワークフローをアジレントが実現します。これにより、お客様の求める信頼性と再現性に優れた結果を容易に得られるようになります。

詳しくはこちら:www.agilent.com/chem/jp

基本的なガイドライン

自動化ワークフロー

Gly-X による N-グリカンの脱グリコシル化と InstantDye ラベリ
ングは 96 ウェルプレートで、クリーンアップは 96 ウェル真空プレートで実行されます。Gly-X キットを自動化する場合、自動プラットフォームでのピペッティングには 4 ～ 400 μL の容量 が必要です。プラットフォームには、バイアル、トラフ、96 ウェルプレートを設置する場所を確保する必要があります。また、96 ウェルプ

るソースプレートのウェルに移し、混合して、サンプルプレートへがあります。

ベーションします。

レートをデッキ上のステーション間で移動できるようにする必要

Gly-X の脱グリコシル化とラベリングには、2 種類のインキュベーション温度 (50 ° C と 90 ° C) が必要です。これらは 96 ウェル
PCR プレート上で実行します。これらの手順は通常、デッキ上にある 2 つのヒーターブロック、または 1 つのサーマルサイクラーで実施します。

Gly-X のクリーンアップは、96 ウェル真空プレートで実行します

が、これにはオンボード自動加圧式マニホールドを推奨します。

オンボード真空マニホールドも使用できます。

ラベル化 N-グリカンは、クリーンアッププレートから PCR プレー

トに溶出されます。これにも加圧式マニホールドを用います。

自動化ワークフロー (図 1) ではまず、3 種類の試薬原液 (Gly-X変性剤、N-グリカナーゼ、選択した InstantDye) の必要量をバイアルから 96 ウェル「ソース」プレートへ移します。試薬はそれぞれ、処理対象サンプルと同じ番号のウェルに移します。次に、糖タンパク質サンプルを、サンプルプレートから、試薬が入ってい戻します。その後、サンプルプレートを指定された温度でインキュこのようにして、すべてのインキュベーションをサンプルプレートで行います。サンプルプレートからソースプレートへサンプルを移してから、サンプルプレートへ戻すときには、マルチチャンネルピペットを使うことができます。

Gly-X 変性剤の添加後、サンプルを 90 ºC で 3 分間インキュベーションします。N-グリカナーゼを入 れた後、 サンプルプレートを50 ° C で 5 分間インキュベーションします。脱グリコシル化に続いて、ラベリング試薬を添加し、50 ° C で 1 分間インキュベーションします。その後、サンプルを Gly-X クリーンアッププレートに移し、Hamilton 社の Nimbus デッキで [MPE]2 加圧式モジュールを用いて、圧力勾配によって洗浄します。InstantPC ラベル化
N-グリカンの溶出バッファは、キットに含まれており、InstantQ
ラベル 化 グリカンの 溶出液 は 脱イオン水です。ラベル 化 N-グリ
カンを、溶出液 100 μL で PCR プレートに溶出します。これでAgilent Gly-Q グリカン 分析 システム (旧 ProZyme) を使った
LC/MS (InstantPC) または CE (InstantQ) による分析の前処理は完了です。

2

ピペット

ピペット、取付クリップ、MPE

バーコードのスキャン

96 ウェル
プレート

タンパク質の前処理

試薬の添加

フィルター
プレート

オフライン分析

洗浄

溶出UHPLCまたは CE

プレートの平衡化

洗浄バッファの添加

溶出バッファの添加

測定

サンプルの移動[MPE] 2

[MPE] 2

[MPE] 2

インキュベーション

サンプルの添加繰り返し

グリカンの収集繰り返し[MPE] 2図 1: 自動化ソリューションの概要: Hamilton NIMBUS で Agilent AdvanceBio Gly-X N-Glycan Prep と InstantPC、InstantQ を用いたワークフロー

3

デッキの設定

必要なバッファのロード

消耗品とキットコンポーネントのロード– チップ (50 μL と 1000 μL) のロード

– 試薬ソースプレートのロード:PCR プレート、セミスカート付– Gly-X クリーンアッププレートスタックのロード– Gly-X コレクションプレートまたはスカート付 PCR プレートのロード

ロード/洗浄バッファ– InstantPC では、100 mL のロード/洗浄バッファを準備し、デッキのトラフに配置– InstantQ では、デッキのトラフにエタノールを配置

溶出試薬– InstantPC では、キットで提供された Gly-X InstantPC 溶出液をデッキのトラフに添加

キット試薬のロード– InstantQ では、デッキのトラフに水を配置

Gly-X 変性剤 –0.5 mL バイアルに入れ、脱イオン水で 1:1 に希釈– 試薬ブロックに配置

N-グリカナーゼ希釈標準溶液 – キットの指示に従って、消化緩衝液を使って準備し、混合液を 0.5 mL バイアルに入れ、脱イオン水で 1:1 に希釈– 試薬ブロックに配置

InstantDye – キットの指示に従って準備– 0.5 mL バイアルに入れて試薬ブロックに配置

ヒーター、
50 °C

バイアル内の試薬キャップ、

試薬ソースプレート

MPE2

加圧収集キャップ、空のステーション
プレート

クリーンアッププレート+ 保管プレート

ヒーター、
90 °C

1000 μL
チップ

50 μL

チップ

サンプル
プレート

ロード/洗浄溶出洗浄(InstantQ)

図 2: Hamilton NIMBUS デッキのレイアウト。プレート、バイアル、トラフ、ヒーター、MPE 加圧式マニホールドの位置

4信頼性の高い結果

融合タンパク質エタネルセプトと水ブランクは、碁盤の目状にサンプルプレートに配置され、ウェル間の再現性の検証およびクロスオーバーのテストが 行 われました。このテストは、InstantPC

色素 (UHPLC による) と InstantQ 色素 (Gly-Q の CE による) の両方について実施しました。下の図は、自動化ソリューションプロ

トコルの開発中に使用したメソッドにかかわらず、類似するデータが得られることを示しています。

25

手動

手動ピペット操作と NIMBUS クリーンアップ

面積 %20NIMBUS ピペット操作と手動クリーンアップ
全自動

151050G0G0F

Man5

G1F[6]

G1F[3]

G2

G2F

G1FS1

G2S1

G2FS1

G2S2

G2FS2

図 3: さまざまなメソッドで前処理されたエタネルセプトの InstantPC ラベル化 N-グリカン (n =8)

5

製品情報

AdvanceBio Gly-X および InstantPC
キットおよびモジュール
説明

AdvanceBio Gly-X および InstantPC キット(96 ct)AdvanceBio Gly-X および InstantQ
部品番号

GX96-IPC

AdvanceBio Gly-X および InstantPC キット(24 ct)

GX24-IPC

脱グリコシル化およびラベリングモジュール

GX96-201PC

AdvanceBio Gly-X および InstantPC
セット (96 ct)

AdvanceBio Gly-X および InstantPC

脱グリコシル化およびラベリングモジュールセット

GX24-201PC(24-ct)AdvanceBio Gly-X InstantPC ラベリングモジュール(96-ct)AdvanceBio Gly-X InstantPC ラベリングモジュール(24-ct)AdvanceBio Gly-X InstantPC クリーンアップ
モジュール、InstantPC 用 (96-ct)

AdvanceBio Gly-X 真空マニホールドスペーサ(2 パック)

AssayMAP PA50 Protein-A アフィニティ精製
キット (96 ct)

GX96-101
GX24-101
GX96-102

キットおよびモジュール
説明

部品番号

AdvanceBio Gly-X および InstantQ キット (96 ct)

GX96-IQ

AdvanceBio Gly-X および InstantQ キット (24 ct)

GX24-IQ

脱グリコシル化およびラベリングモジュールセットGX96-302IQ

AdvanceBio Gly-X および InstantQ(96 ct)AdvanceBio Gly-X および InstantQ

脱グリコシル化およびラベリングモジュールセット

GX24-302IQ

AdvanceBio Gly-X InstantQ ラベリングモジュール(96-ct)

GX96-301(24-ct)AdvanceBio Gly-X InstantQ ラベリングモジュール(24-ct)AdvanceBio Gly-X InstantPC クリーンアップ

モジュール、InstantPC 用 (96-ct)

GX100

AdvanceBio Gly-X 真空マニホールドスペーサ(2 パック)G5524-60010 KIT

キット (96 ct)

AssayMAP PA50 Protein-A アフィニティ精製
Gly-Q カートリッジモジュール

シアリダーゼ A
シアリダーゼ S

6

GX24-301
GX96-302
GX100
G5524-60010 KIT
GQ103
GK80040
GK80021

製品情報

AdvanceBio Gly-X および InstantPC
標準およびコントロール

InstantPC ラベル化個別標準およびコントロール

部品番号

InstantPC ラベル化 N-グリカンライブラリ

部品番号G0-N

GKPC-401

グリカンライブラリ

GKPC-005

G0

GKPC-301

G0F-N

GKPC-402

G0F

GKPC-302

G1GKPC-317

G1F

GKPC-316

G2

GKPC-304

G2F

GKPC-305

G1F + 1aGal

GKPC-403

G2F + 1aGal

GKPC-404

G2F + 2aGal

GKPC-318

G1S1 (α2,3)GKPC-329

グリカン標準G1S1 (α2,6)G1FS1 (α2,3)G1S1 (α2,6)G2S1 (α2,3)G2S1 (α2,6)G2FS1 (α2,3)G2FS1 (α2,6)G2S2 (α2,3)G2S2 (α2,6)G2FS2 (α2,3)AdvanceBio ヒト IgG N-結合型グルコースホモポリマー

CHO mAb N-結合型グリカンライブラリ

CHO mAb N-結合型グリカンライブラリ +CHO mAb 糖タンパク質α(2-3) シアル化 3 本鎖糖鎖ライブラリα(2-6) シアル化 3 本鎖糖鎖ライブラリα(2-3) シアル化 4 本鎖糖鎖ライブラリα(2-6) シアル化 4 本鎖糖鎖ライブラリ

GKPC-503
GKPC-020
GKPC-020-P
GKPC-233
GKPC-263
GKPC-234
GKPC-264

GKPC-319
GKPC-330
GKPC-320
GKPC-321
GKPC-311
GKPC-325
GKPC-315
GKPC-322
GKPC-312
GKPC-323

G2FS2 (α2,6)GKPC-313

Man5

GKPC-103

Man6

GKPC-104

Man7

GKPC-105

Man8

GKPC-106

Man9GKPC-1077製品情報

AdvanceBio Gly-X および InstantQ

AdvanceBio Gly-X および InstantQ

標準およびコントロール標準およびコントロール
InstantQ ラベル化個別
N-グリカン標準液

部品番号

GKSQ-401

Man5GKSQ-103

G0GKSQ-301

Man6

GKSQ-104

G0F-N

GKSQ-402

Man7GKSQ-105

G0F

GKSQ-302

Man8GKSQ-106

G1GKSQ-317

Man9

GKSQ-107

G1F

GKSQ-316

G2

GKSQ-304

G2F

GKSQ-305

G1F + 1aGal

GKSQ-403

G2F + 1aGal

GKSQ-404

G2F + 2aGal

GKSQ-318

A1 (α2,3)

GKSQ-321

InstantQ ラベル化個別
N-グリカン標準液

部品番号

G0-N

A1 (α2,6)

A1F (α2,3)A1F (α2,6)A2 (α2,3)A2 (α2,6)

A2F (α2,3)A2F (α2,6)A3 (α2,6)

GKSQ-311
GKSQ-325
GKSQ-315
GKSQ-322
GKSQ-312
GKSQ-323
GKSQ-313
GKSQ-314

ホームページ

www.agilent.com/chem/jp

カストマコンタクトセンタ

0120-477-111

email_japan@agilent.com
本製品は一般的な実験用途での使用を想定しており、医薬品医療機器等法に基づく登録を行っておりません。

本文書に記載の情報、説明、製品仕様等は予告なしに変更されることがあります。

アジレント・テクノロジー株式会社© Agilent Technologies, Inc. 2019
Printed in Japan, June 07, 20195994-1003JAJP

InstantQ N-グリカンライブラリ

部品番号

ヒト IgG N-グリカンライブラリ

GKSQ-005

リボヌクレアーゼ B N-結合型グリカンライブラリ

CHO mAb N-結合型グリカンライブラリ

CHO mAb N-結合型グリカンライブラリ +CHO mAb 糖タンパク質α(2-3) シアル化 3 本鎖糖鎖ライブラリα(2-3) シアル化 3 本鎖糖鎖ライブラリα(2-6) シアル化 3 本鎖糖鎖ライブラリ

GKSQ-009
GKSQ-020
GKSQ-020-P
GKSQ-233
GKSQ-234
GKSQ-263α(2-6) シアル化 4 本鎖糖鎖ライブラリ

GKSQ-264

InstantQ ラダーおよび部品番号

Gly-Q GU ラダー

GKSQ-503

泳動標準Gly-Q 泳動標準(上限および下限)

Gly-Q アライメント標準セット(GKSQ-500 & GKSQ-503)

GKSQ-500
GKSQ-505