ハイスループットスクラッチアッセイ
AccuWound 96

96 ウェルプレートに同じサイズのスクラッチを同時に作り、細胞の移動を 96 ウェル同時に再現性高くリアルタイム測定します

国内販売元

スクラッチアッセイでこのような課題を感じたことがないですか？
スクラッチアッセイ （傷付けアッセイ、 創傷治癒アッセイ） は、 細胞の移動能を簡便に調べることができる優れた実験手法です。 しかし、 手作業によるスクラッチングと顕微鏡による画像解析では下記のような課題がありました。

✓ スループットが足りない✓ スクラッチの大きさがウェルごとに異なる✓ 顕微鏡による画像解析なので定量が主観的になる✓ エンドポイントでしか評価できず移動スピードを知ることができない

xCELLigence RTCA システムとAccuWound 96で課題を解決しませんか？

細胞移動をインキュベーターの中で、96 ウェル同時にリアルタイム測定※ ウェルの電気抵抗値を測定します。

AccuWound 96 で
96 ウェル同時に均一にスクラッチを作成（所要時間 1 分）

どの測定機を使える？
システム

xCELLigence RTCA SPxCELLigence RTCA MP

xCELLigence RTCA eSight

スループット

1 x 96 wells（96 ウェル同時測定）

6 x 96 wells（576 ウェル同時測定）

3 x 96 wells（288 ウェル同時測定）

Assay Overview
xCELLigence RTCA システムと AccuWound 96 スクラッチツールを用いた創傷治癒アッセイの手順とデータの解釈についてご説明します。
xCELLigence RTCA システムは、 専用のバイオセンサープレート （E-Plate） を用いることで、 細胞増殖 ・ 移動 ・ 形態変化などを非標識でリアルタイムに追跡することを可能にします。 E-Plate の各ウェルの底面には金電極が貼られており、 電気抵抗値の変化をモニタリングします。 スクラッチアッセイを行う前に、 細胞増殖を測定してコンフルエントをデータで確認し、続けて連続的に創傷治癒アッセイを行っていただくことが可能です。
AccuWound 96 スクラッチツールは、 バイオセンサープレートのウェル底面にスクラッチを作るのに使用します。 96 ウェル
同時に均一に“傷” を作ることができるので、 データの再現性が向上します。
xCELLigence RTCA システムと AccuWound 96 を用いることで、 コンフルエントの確認から細胞移動までのすべてのデータを、 ラベルフリーで、 ハイスループットに、 かつ再現性高く取得していただくことが可能になります。

ステップ １ - 細胞播種と増殖測定
接着細胞をバイオセンサープレート（E-Plate WOUND 96 あるいはE-Plate 96）のウェルに播種します。播種後30分間クリーンベンチに静置した後に、CO2インキュベーター内に設置したxCELLigence RTCA ステーションにプレートをセットし電気抵抗値（Cell Index）のモニタリングを始めます。xCELLigence RTCA システムは発色試薬や蛍光試薬を使用せずにラベルフリーで細胞増殖のモニタリングが可能です。細胞がウェル底面に接着し増殖するにしたがってCell Indexの数値が上がります。ウェル底面が細胞でカバーされ、コンフルエントに達すると、電気抵抗値カーブがプラトーに達します。
（図１：写真Ａ、Cell Index ポイントＡ）

ステップ ２ – スクラッチ
E-Plateをステーションから取り外し、クリーンベンチ内でAccuWound 96 ツールを用いて“傷”を付けます。ツール前面のノブを左右に回すだけで、96ウェル同時に均一サイズの“傷”をつけることができます。

ステップ ３ – 細胞移動・創傷治癒のモニタリング
E-Plateをインキュベーター内のステーションに戻します。ステップ２のスクラッチによりCell Indexがドロップしています（図１：写真Ｂ、Cell Index ポイントＢ）。細胞が移動し“傷”を埋めるしたがってCell Indexが回復し、やがてプラトーに達します。この過程の傾きを求めると移動スピードを算出することができます（図１：写真C-E、Cell IndexポイントC-D）。

Conﬂuent cells
completely cover
E-Plate biosensors

xCELLigence monitors wound healing as cells
migrate back onto the gold biosensors

AccuWound 96
creates scratch wound,removing cells fromgold biosensors

8 hourspost scratchDA

16 hours
post scratch

24 hours
post scratch

DAC

B

CB

図１．HT1080細胞を用いた創傷治癒アッセイ
上段：写真Ａ-Ｅ：E-Plate WOUND 96のウェル顕微鏡写真
下段左：Cell Index データ（96ウェルすべてのデータを別々の色でプロット）
下段右：Cell Indexデータ（96ウェルのSD値をエラーバーとして表示）
xCELLigence RTCA システムとAccuWound 96を用いることによりCV4%以下の高い再現性で細胞移動を測定することができる。

AccuWound 96 および E-Plate WOUND 96
製品番号

品名

380601440

AccuWound 96 キット- AccuWound 96 1 台- 洗浄用リザーバー 2 枚- E-Plate WOUND 96（1×6 プレート）

380601420

AccuWound 96 スクラッチツール- AccuWound 96 1台- 洗浄用リザーバー 2枚300600970

E-Plate WOUND 96（1×6 プレート）

300600980

E-Plate WOUND 96（6×6 プレート）

380101560

AccuWound 96 洗浄用リザーバー（1 枚）

ARed outline
denotes thearea of thescratch woundproduced by theAccuWound 96
scratch tool

E-Plate WOUND 96

B

図２． AccuWound 96 はスクラッチアッセイ専用のプレート （E-Plate WOUND 96） と通常のE-Plate 96 のどちらでもお使いいただけますが、 2つのプレートでは測定ウィンドウが異なります。

Standard E-Plate 96Ａ） E-Plate WOUND 96 のウェル図
金電極センサーがウェル中央のスクラッチ部分だけにあります。

CScratching an E-Plate WOUND 96

DＢ） 通常の E-Plate 96 のウェル図
金電極センサーがウェルウェル底面の全面を覆います。

Scratching a Standard E-Plate 96Ｃ） E-Plate WOUND 96 によるデータ例
スクラッチによる電気抵抗値 （Cell Index） のドロップが大きく、 細胞移動を測定するためのウィンドウを大きく確保できます。
Ｄ） 通常の E-Plate によるデータ例
スクラッチ部位はバイオセンサーの 40% 以下のため、スクラッチによる Cell Index のドロップが少なく、 細胞移動測定のためのウィンドウが少なくなります。

xCELLigence RTCA システム
製品番号

品名

380601030

xCELLigence RTCA SP システム

380601040

xCELLigence RTCA MP システム

380601600

xCELLigence RTCA eSight システム(フルシステム)

DE85424549

代理店※ 本製品は試験研究用です。医療や診断目的にはご使用いただけません。
※ 価格、外観、仕様などは、予告なしに変更することがあります。
※ それぞれの商標や登録商標、製品名は各社の所有する名称です。

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