■ XF培地・バッファー・サプリメント
製品名

型式容量

XF用DMEM培地①103575-100（PhenolRed無/pH7.4/HEPES含）

500mL

②

XF用RPMI培地
103576-100（PhenolRed無/pH7.4/HEPES含）

500mL

37℃でpH7.4を示すように予め調製されたXFアッセイ用培地です。

細 胞 外 フラックスアナライザー

全XFアッセイに適合します。専用のXF サプリメント溶液（グルコース溶液（型式:XF HS Mini103577-100）
・ピルビン酸塩溶液（型式:103578-100）・グルタミン溶液（型式 :103579-100））を推奨濃度でお使いいただく場合、pH調整が必要ありません。

※XF24／XF24-3モデルにはご使用いただけません。※使用期限：製造より12カ月（未開封時）※開封後は30日以内の使用が推奨されます。※4℃冷蔵保存③④

XF用DMEM培地（PhenolRed無） 103335-100

500mL103193-100

100mL

XF用DMEM培地（PhenolRed含） 103334-100

500mL

102353-100 1L×2本/箱⑤

ATP Rate キットを用いた計測にはHEPESを添加して使用します。
ミトストレステスト、Cell Energy Phenotypeテスト、Mito Fuel Flex
テスト、解 糖ストレステストに適合する培地です。

103337-100

30mL

XF 1.0M グルコース溶液

103577-100

50mL①②にメーカー推奨の 0〜10mM範囲でご使用の場合、培地のpH調整が不要です。

XF 100mM ピルビン酸塩溶液

103578-100

50mL①②にメーカー推奨の0〜1mM範囲でご使用の場合、培地のpH調整が不要です。

XF 200mM グルタミン溶液

103579-100

50mL①②にメーカー推奨の0〜2mM範囲でご使用の場合、培地のpH調整が不要です。

XF 1M HEPESバッファー※使用期限：製造より18カ月⑥

全XFアッセイに適合する培地です。XF Glycolytic Rate キット、XF リアルタイム※使用期限：製造より18カ月

Glycolytic Rate アッセイ、ATP Rate アッセイに必須※4℃冷蔵保存※4℃冷蔵保存：XF 1.0M グルコース溶液、XF 100mM ピルビン酸塩溶液※-20℃保存：XF 200mM グルタミン溶液

培地 パックXF DMEMアッセイ培地 パック

103680-100①と⑥（3種類全て）各1個ずつのセットです。

XF RPMIアッセイ培地 パック

103681-100②と⑥（3種類全て）各1個ずつのセットです。
※キット・試 薬・消耗品は、有 効使 用期限が 残り3カ月以 上のものが出荷されます。

細胞外フラックスアナ ライザ ー XF HS Mini

本体仕様

ご注文型式

X F HS Mi ni

装置寸法（W）30×（D）5 8 ×（H）43 (cm)

重量15（kg）

電源要件

100-240VAC, 6A/3A, 60/50Hz

温度制御範囲16〜40℃

同時計測項目O 2・H +

データ出力形式

Microsoft Excel または GraphPad Prism

アッセイ・フォーマット

専用ミニプレート中の生細胞

アッセイ・サンプル数

6 ウェル

インジェクションポート

1 ウェルあたり４個（各2 5 μL）

ア ッ セ イ・実 行 容 量

150 - 2 7 5 μL／ウェル

必要サンプル数

5 K - 2 0 0 K 細胞／ウェル

専用ミニプレート素材

組織培養処理済ポリスチレン

装 置 コ ント ロ ー ラ ー

一体型タッチスクリーン・インターフェース、
US B ／イーサネットポート

様々な研究領域において、XF 技術を利用した研究成果論文が、4000 報以上発表されています。

Win 10 Embedded

http://www.agilent.com/publications-database/OS※外観及び規格は予告なく変更することがありますので予めご了承ください。
※ご注意：本パンフレットに掲載の製品は、すべて研究・実験用です。人・動物の診断あるいは治療等の臨床用途に使用することはできません。

XF シリーズ 日本総代理店：

製造元：

www.primetech.co.jp
本社：〒112-0002 東京都文京区小石川1-3-25 小石川大国ビル2F
Phone（03）3816-0851（代表） Fax.（03）3814-5080
大阪営業所：〒564-0063 大阪府吹田市江坂町1-12-4 第2江坂ソリトン9F
Phone（06）6310-8077（代表） Fax.（06）6310-8081
E-mail : sales@primetech.co.jp

05.2020

細 胞 の 2 つ の エ ネ ル ギ ー 代 謝 ： ミト コ ンド リ ア 呼 吸 ≒ 酸 素 消 費 速 度 ( O C R )生細胞を用い た 代 謝 計 測の ゴールド スタンダード：

解糖系≒細胞外酸性化速度(ECAR)を同時に計測。

▼S eahors e XF 技 術 を よ り 高 精 度 に 。

解糖

細胞内に取り込まれ たグルコースを細胞 質でピルビン酸に分解する過程でATP を産生し、嫌気的な条件下では 細胞外に乳酸を排出する経 路です。 この経路では、細胞外に排出される乳酸に由来する水素イオンによって、細胞外のpHが酸性に傾きます。

細胞外フラックスアナライザーXF HS Mini は、Agilent Technologies 社が開発する世界最先端の細胞代謝測定機器の最新モデルです。細胞の主要なエネルギー 代謝経路の非侵襲的な計測を、従来以上に高精度に行えるように▼なりました。また、コンパクトな設計で個々の研究室への設置に最適です。

3 種 類 の 標 準 的 な X F アッセイ
XF 解糖ストレ ス 試 験 (解 糖 )ミトコンドリア 呼吸

TCA サイクルで 得られたNADH 2 + 等 の 電 子 を、ミトコン
ドリア内膜上の酵素 間で伝達し、ATPを大量に産生し ます。
この過程で酸素が消 費されます。

ゲノムまたはプロテオミクス・データを検証するための対比較試験や、患者由来および他の希少なサンプルを用いた代謝機能・表現型の評価に適しています。また、初代細胞・接着細胞・浮遊細胞を含む、好気性代謝レベルの低い細胞の計測にも最適です。

グルコース

脂肪酸

リボース

G6P

アシルCoA

O2

グルタミン

グルタミン酸NAD+
NADH

T HE PO WER OF

ADP

TCA

解糖サイクル

ATPFAD
FADH 2OCR

酸化的リン酸化

Input

O2
H 2O

ADPATP

ピルビン酸

XF解糖ストレス試験プ ロ フ ァ イ ル は 、解 糖 能 の
主 要 な 3 つ の 指 標：解 糖・解 糖 能・解 糖 予 備 能 を示します。

XF ミトストレス試験(ミト コ ンド リ ア 呼 吸 )アセチルCoA
乳酸

XF T ECHNO LOGY

OutputH+

主要なエネルギー代謝経路【 解糖・ミトコンドリアによる好気呼吸 】

細 胞 の 酸 素 消 費 を 酸 素 消 費 速 度 [ OCR : Oxygen Consumption
R a t e ( p m o l / m i n ) ]、細 胞 外 に 排 出 さ れ る 水 素 イオン 濃 度 の 変 化 を
細 胞 外 酸 性 化 速 度 [ ECAR : Extracellular Acidiﬁcation Rate
( m p H / m i n ) ] と し て、 フォト ル ミ ネッセ ン ス 法 に よ り 検 出 、指 標 とすることにより、細胞レベルのエネルギー代謝状態を評価します。

F OR EVERY LA B

XF ミトストレス試験プロファイルは、ミトコンドリア機能の主要な指標：基 礎 呼 吸・ATP 産 生・プ ロト ン
リーク・最大呼吸・予備呼吸能を示 し ま す。

自動計測：
細胞 を 専 用 の ミ ニ プ レート上で培養し、本体 に セ ット す る だ けで、計測は自動的に行われます。

ラベルフリー・無侵襲計測：XF フェノグラム(代 謝 ス イッ チ ン グ )放 射 性 同 位 体 を 使 用 せ ず、 細 胞 を 傷 つ けることなく生 き た 状 態 で 計 測 す る た め、計 測 後 の 細 胞 を他 の 実 験 に も 使 用 可 能 で す。

1ウェルにつき最大 4 種類の化合物をインジェクション可能：
セン サ ー カ ート リッ ジには、化合物等を充填できるインジェクション
ポ ート が 装 備 さ れ て います。 設定したプロトコルに従い、１ウェルに装置内部を 37℃にインキュベーション可能：つき 最 大 4 種 類 の 化合物をインジェクション可能です。

細 胞 の 生 理 機 能 を 維 持 す る た め、 温 度 調 節システム が 装 置 の 内 部 環 境 を 37 ℃ に 維 持 し ま す。

コ ン パ クト で ユーザーフレンドリー な ベ ン チトップ設計
好気性代謝レベルの低い細胞にも対応する計測精度
XFフェノグラムは、2つの条件下での、細胞代謝の状態を相対的に描写します。 XFフェノグラムを利用した代 謝 スイッチング の 評価事例には、ワールブルク効果・クラブツリー効果・パスツール 効果などがあります。
例えば OCR・ECAR の計測時、細胞の好気呼吸が亢進した場合、エネ
ルギー代謝プロファイルは ベースラインより左上 の 領域 に、解糖 が亢進した場合はベースラインより右下の領域にプロファイルされます。

合 理 化 さ れ た ワ ー ク フ ロ ー に より、迅 速 な アッ セ イ を 支 援

PAIRWISE COMPARISONS
− 対比較

01

•

PHENOTYPING− 表 現 型 の タ イピング•

PATIENT-DERIVED SAMPLES−患者由来サンプル

02

APPLICATIONS

特許取得済の独自技術：半閉鎖的微小環境
ミトコンドリア呼吸と解糖の活性評価は、「半閉鎖的微小環境」

アプリケーション

専用カートリッジ ▶

※いずれも旧モデル（XFp）によるデータです。XF HS MiniではOCR≤40pmol/minの計測をより高精度に行えます。と、「蛍光センサー (O 2 とpH センサー ) のクエンチング現象」

初代免疫細胞における代謝再プログラミングの解析を利用して行われます。
「半閉鎖的微小環境」

専用プレート

免疫細胞は異種抗原に応答し、代謝を増加させます。左図は、強い▶

微小環境は、右図のような専用のプレートと専用のカートリッジにより、形成されます。この空間の容量は 2uL と非常に小さく、解析培地中の細胞によるわずかな酸素消費、酸性化(pH 変化 )を捉える重要な技術です。
Agilent Technologies 社はこの技術に特許を取得しています。

専用カートリッジ

エネルギー応答に応じた マクロファージのグルコース要求性を示した事例です。 マウスの骨髄由来マクロファージは、オーバー光ファイバープローブ

ナイト の LPS 刺激 により活性化 され、解糖機能を亢進します。

専用プレート「蛍光センサーのクエンチング現象」

XFp を用いた解糖ストレス試験は、休止期の細胞と比較し、このO2 とpH を測定するための蛍光センサーが、専用のカートリッジの先端に細胞で解糖能と予備解糖能の増加を明らかにしました。

固 定 さ れ て い ま す。 計 測時には、右図のようにカートリッジは降下し、解析培地に浸漬します。 培地中の酸素とプロトンによってクエンチしたカートリッジの降下

蛍光から酸素濃度と pH が求められ、時間当たりの変化量から酸素消費速度（OCR）、細胞外酸性化速度（ECAR）がそれぞれ算出されます。

解 糖 ストレス 試 験

O2・pH蛍光センサー: LPSによる活性化 > コントロール• 解糖能: LPSによる活性化 > コントロール• 解糖予備能 : LPSによる活性化 = コントロール

半閉鎖的微小環境(2μL)

O 2 センサー : 励起 : 532nm、検出 : 650nm• 解糖速度pH センサー : 励起 : 470nm、検出 : 530nm

疾患関連遺伝子の代謝表現型における評価
革新的で信頼性の高い Seahorse XF 技術：
半 閉 鎖 的 微 小 環 境 により 実 現 さ れ る 高 い 感 度・精 度

ミト ストレ ス 試 験
酸化的リン酸化 (OXPHOS) はミトコンドリア電子伝達系を含むプロセスで、ピルビン酸などの基質を利用します。
左図は、XFp を用いて行ったC2C12 由来筋管細胞のミトストレス試験の事例です。UK5099* はControl と比較し、OXPHOS は維持されていますが、MPC -1の 阻害により、予備呼吸能の抑制が観察されました。UK5099 による90分間の前処理は、MPC-1の化 合 物 の イ ン ジェクション が 可 能機能不全の影響を模倣しました。

センサーカートリッジに組み込まれた専用のポートより、最大• 基礎呼吸: UK5099 = コントロール• 最大呼吸: UK5099 ＜ コントロール• 予備呼吸能: UK5099 ＜ コントロール

4 種類までの化合物を、順にそれぞれのウェル内にインジェクションすることができます。

インジェクションポート

• プロトンリーク: UK5099 = コントロール*UK5099: MPC-1阻害剤、MPC:ミトコンドリアピルビン酸キャリア

それぞれの化合物に対するサンプルの用量-反応や、作動薬やセンサースリーブ

1 回 の 対 比 較 アッセイ に よ る 代 謝 スイッチング の 同 定

対比較試験 (フェノグラム使用)

XF HS Mini 用ミニプレートのウェル割当て

細 胞 は 、細 胞 の シ グ ナ ル 経 路 の 誘導により、 酸化的リン酸化拮抗薬の反応、代謝経路の変動解析を可能にします。
各インジェクションポートの容量は、25μL です。

バックグラウンド
ウェルインジェクションポート

攪拌

グループ 1(例：実験グループ)(OXPHOS)から解糖へと、エネルギー産生のモードをシフトします。
HIF-1α経路の塩化コバルト(CoCl2) による活性化は、 ヒト 卵巣がん細胞(SKOV-3)で観察されるような代謝スイッチを誘導します。
このフェノグラムに描写されている対比較試験は、ワールブルグ効果を示しています。処理された細胞は、コントロールと比較して、グループ 2(例：コントロールグループ )設定したプロトコルに従い、各インジェクションポートにセットした 化合物が 空気圧 によりウェル にインジェクション され、センサーカートリッジがバックグラウンド
ウェル上下することで、化合物が攪拌されます。
対比較試験例：コントロール v.s. 患者モデル

酸素 の 存在下においても OXPHOS が減 少し、解糖 の 増加が観察されます。
• 基礎呼吸 (OCRにより計測): CoCl 2 < コントロール• 解糖 (ECARにより計測): CoCl 2 > コントロール• コントロールの表現型: Aerobic• CoCl 2処置の表現型: Glycolytic• 代 謝 スイッチ: ワールブルク効果

野生型 v.s. ノックアウト、健常 v.s. 疾患
薬剤処理 v.s. 無し

0304

ソ フト ウ ェ ア

X F キ ット ・ 消 耗 品

各キット・試薬の詳細は別冊の XF アッセイキット・試薬カタログをご覧ください。
※XF HS MiniとXFpのキット・消耗 品は兼 用となります。

■ XF ストレス 評 価 キット・試薬
XFp用ミトストレスキット (アッセイx6回分)

型式：103010-100

ミト コ ンド リ ア 機能の評価を容易に行うことので き る 試 薬 キット で す。
※常温保存※使用期限：製造より1年間

XFp用解糖ストレスキット (アッセイx6回分)

型式： 103017-100

解 糖 能 の 評 価 を 容 易 に 行 うことの で き る 試 薬 キット で す。
※常温保存

※使用期限：製造より1年間

XFp用 Glycolytic Rate キット (アッセイx6回分)

型式：103346-100

正確な解糖速度を計測することが可能な試薬キットです。 細胞外へのプロトン流出からミトコンドリア由来のもの（CO2XF HS Mini は直感的な操作が可能です。

産生による）を差し引くことで、解糖由来のプロトン流出速度をGlycolytic Proton Eﬄux Rate(glycoPER) という本体フロント部に設置された大きなタッチスクリーンにより、簡便にアッセイを進めることができます。

新たな指標で評価することができます。
※常温保存※使用期限：製造より1年間

XFp用 Phenotypeキット (アッセイx12回分)

型式：103275-100細胞のエネルギー代謝表現型を容易に決定することができる試薬キットです。
細胞エネルギー 代 謝の3つの指標： Baseline Phenotype（基底状態の代謝表現型）、Stressed Phenotype（ストレス状態の代謝表現型）、Metabolic Potential（代謝の潜在能力）
を 計 測することができます。
※常温保存※使用期限：製造より1年間

XFp用 Mito Fuel Flexキット (アッセイx6回分)

型式： 103270-100

主要 な 呼吸基質である、グルコース、脂肪酸、グルタミンの各々の利用率を解析することができる試薬キットです。
3 つ の 指標：Fuel Dependency（ 基底状態における特定の基質の利用率）、Fuel Flexibility（CapacityとDependencyの差分）、Fuel Capacity（エネルギー需要に対して特定の基質を利用する割合）を 計測することができます。
※常温保存※使用期限：製造より1年間XFp用 リアルタイム ATP Rate キット (アッセイx6回分)

型式： 103591-100

生きた細胞のリアルタイムなミトコンドリア呼吸と解糖からATP産生速度を定量することのできる試薬キットです。
ミトコンドリア呼吸によるmitoATP産生速度、解糖系によるglycoATP産生速度、および total ATP産生速度を算出することが可能です。
※常温保存

Web ベースのデータ解析ソフトウェア：

Seahorse Analytics※使用期限：製造より18カ月

XFパルミチン酸塩-BSA 脂肪酸酸化評価試薬セット (アッセイx3回分)

型式： 102720-100

細胞の脂肪酸酸化評価実験に必要な試薬セットです。

XF HS Mini で取得したデータは、web ベースの Seahorse※到着後−20℃保存※使用期限：製造より1年間

Analytics ソフトウェアで解析・管理が可能です。
装置に付属のUSB メモリまたはネットワーク経由でご使用のX F 細 胞 膜 透 過 処 理 試 薬 (アッセイx6回分)

PC（Mac も可）に 移したデータを Seahorse Analytics に培養細胞の細胞膜に孔をあけて透過性を高め、ミトコンドリア膜は無傷に保つことのできる、組換え細胞溶解タンパク質を含む試薬です。XFを用いたミトコンドリア機能計測において、細胞膜を透過しない化合物や基質のミトコンドリアインポートすることで、直感的な操作でデータ解析・管理を機能に対する作用を、ミトコンドリアの単離や界面活性剤処理なしに計測することが可能です。

行うことができます。
アッセイキットのための解析ビューだけでなく、30 以上のグラフ化オプションを用いて カスタム解析ビューを作成し、利用することも可能です。 解 析データは Microsoft Excel
または GraphPad Prism 形式で出力できます。

型式： 102504-100※到着後−20℃保存※使用期限：製造より1年間■ FluxPak アッセイパック（型式：103022-100 FluxPak-XFp用（アッセイx12回分））

アッセイ12回分のセットです。アッセイキット・ミニプレートは、3連×4セット／箱が各1とキャリブレーション溶液（100mL入）がセットになっています。
※XFp用ミニプレート(入 数12 /箱 )※使 用期限：製 造より1年間

素 材：ポリスチレン( Tissue-culture treated)※個 別にご購入 頂くことも可能です。

■ キャリブレーション溶液（100 mL）（型式：103059-000）<別売>

細胞外フラックスアナライザーXFp専用のキャリブレーション溶液です。
※常温保存※使用期限：製造より18カ月※キット・試 薬・消耗品は、有 効使 用期限が 残り3カ月以 上のものが出荷されます。

05▶ 次ページにも消耗品のご紹介がございます。

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