Rep. Grant. Res., Asahi Glass Foundation (2017)

No.01

第１−研究奨励天然変性蛋白質による標的分子認識機構の解明
Elucidation of the coupled folding and binding mechanisms
of intrinsically disordered proteins新井 宗仁

Munehito Arai

「天然変性蛋白質」は，近年発見された新しいカテゴリーの蛋白質であり，真核生物が持つ蛋白質の30 〜 40% を占め，転写・翻訳・シグナル伝達など重要な生命活動に関与することから，その機能発現機構の解明が重要課題となっている．天然変性蛋白質は，生理的条件下では特定の構造を持たないが，標的分子と相互作用するという機能発現と同時にフォールディング（構造形成）する．しかし，その詳細な分子機構は未解明であった．そこで本研究では，NMR 緩和分散法などを用いた結果，天然変性蛋白質が標的分子と相互作用してフォールディングする反応の分子機構を解明することに成功した．さらに，天然変性蛋白質は，二次構造形成能に応じて 2 つのメカニズム（構造選択機構と誘導適合機構）を使い分けて標的分子と結合することを見出した．

"Intrinsically disordered proteins" (IDPs) are those involved in a new category of proteins. It is known thatthirty to forty percent of eukaryotic proteins are IDPs and they are related to many important functions,such as transcription, translation, and signal transduction. Therefore, it is important to elucidate
mechanisms of how IDPs function. IDPs are disordered in isolation, but fold into specific structures whenbound to their targets. However, the detailed mechanism of IDP folding upon binding was poorly
understood. Here, we succeeded in elucidating the molecular mechanisms of IDP folding upon binding to
its target by NMR relaxation dispersion experiments. Moreover, we found that IDPs bind their target
molecules by two mechanisms, induced-fit and conformational selection, depending on theirconformational propensities.

研究の背景と目的「天然変性蛋白質」は，近年発見された新しいカテゴリーの蛋白質であり，真核生物が持つ蛋白質の約 3 〜 4 割を東京大学大学院総合文化研究科広域科学専攻生命環境科学系 准教授
Department of Life Sciences, Graduate School of Arts and Sciences, The University of Tokyo, Associate Professor
Email：arai@bio.c.u-tokyo.ac.jp

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旭硝子財団

助成研究成果報告（2017）

占め，転写・翻訳・シグナル伝達など重要な生命活動に関与することから，その機能発現機構の解明が重要課題となっている [1,2]．一般に球状蛋白質は，生体内で合成されたあと，安定な立体構造へと折りたたまれる（フォールディングする）．その後，標的分子等と結合し，触媒などの機能を発揮する（図 1）．一方，天然変性蛋白質は，生理的条件下では特定の構造を持たないが，標的分子と相互作用するという機能発現と同時にフォールディング（構造形成）する（図 1）．したがって，天然変性蛋白質による相互作用機構の全貌を解明するためには，フォールディングという物理化学的な観点からの研究が必要である．そこで本研究では，天然変性蛋白質が，標的分子と相互作用してフォールディングする反応の分子機構の全貌を，最新のフォールディング研究手法を用いて，世界最高レベルの分解能で解明することを目標とした．

図1. 球状蛋白質と天然変性蛋白質の比較．

Fig.1. Comparison of globular proteins and IDPs.
これまでにさまざまな蛋白質が天然変性蛋白質であることが明らかになっている．代表的なものが，ヒトやマウスなどが持つ pKID，c-Myb，MLL，c-Jun 等の転写因子であり [1-4]，白血病やがんなどの疾患と密接に関係している．これらの転写因子は，転写コアクチベータ CBP の KIX ドメインを標的分子として結合することが知られている．これまでに，天然変性蛋白質 pKID による KIX 認識機構については報告されているが [5]，それ以外の天然変性蛋白質の分子認識機構は明らかにされておらず，普遍的なメカニズムは未解明であった．
また，ウイルスが持つ蛋白質の中にも天然変性蛋白質が多く，ヒト免疫不全ウイルス１型（HIV-1）の転写活性化因子である Tat 蛋白質や [6-8]，アデノウイルスの E1A 蛋白質などがその代表例である．HIV-1 由来 Tat は，ウイルス RNA の TAR 領域や，ヒトの転写コアクチベータ CBP の KIX ドメインなどに結合する．これらの相互作用は

HIV-1 遺伝子の転写に必須であり，エイズ治療薬開発のターゲットであるが，その分子機構の詳細は未解明である．
同様に，E1A は CBP の NCBD ドメインなどに結合するが，その結合様式や分子認識機構は未解明である．
そこで本研究では，代表的な天然変性蛋白質である HIV-1 Tat や，c-Myb などをモデル蛋白質として用い，それらがそれぞれの標的分子と相互作用してフォールディングする反応の分子機構の全貌を，世界最高レベルの分解能で解明することを目的とした．
この目的を達成するためには，天然変性蛋白質と標的分子との結合反応を測定し，反応速度，及び，反応の中間2

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体の構造特性を特徴づけることが必要である．そのために本研究では，最新のフォールディング研究手法である

NMR R 2緩和分散法を用いた． R 2緩和分散法は，マイクロ秒の時間分解能と，アミノ酸レベルの空間分解能で，反応速度や中間体の構造を一挙に解明できる画期的な NMR 法である．この最先端手法から得られる描像は，世界最高レベルの分解能を持っており，天然変性蛋白質による標的分子認識の物理化学的基盤を構築できると期待される．

研究経過
本研究では，天然変性蛋白質として HIV-1 由来 Tat と，マウス由来の c-Myb をモデル蛋白質として用い，単独での立体構造，標的分子との結合状態での立体構造，および，標的分子認識機構を解明することを目指して研究を進めた．また，その他の天然変性蛋白質についての測定や，変性蛋白質の構造ダイナミクスを測定する手法の開発や応用などにも取り組んだ．
［１．HIV-1 Tat 単独での立体構造解析］ まず，全長の Tat 蛋白質（86 残基）を大腸菌内で大量に発現する系を構築し，Tat 蛋白質の高純度精製を行った．この実験にはかなりの困難を伴ったため時間を要したが，最終的には問題を解決し，高純度精製された Tat 蛋白質を得ることができた．この蛋白質試料を用いて，円二色性（CD）分光法，核磁気共鳴分光（NMR）法，X 線溶液散乱法などの手法により，Tat 単独での立体構造とその pH 依存性，および，亜鉛依存性を詳細に測定した．X 線散乱測定は，茨城県つくば市にある高エネルギー加速器研究機構の放射光研究施設（BL-10C）にて実施した．
［２．HIV-1 Tat と TAR との相互作用］ HIV-1 Tat と TAR の相互作用解析を容易にするために，Tat 内の TAR 結合領域（37-72 残基目）のみの蛋白質断片 Tat[37-72] を，プロテイン A の B ドメイン（BDPA）と連結させた融合蛋白質として大腸菌内で発現させ，Ni 親和性クロマトグラフィーで精製後，スロンビンで限定分解して Tat のみを単離した．しかし，この方法では大量の Tat 蛋白質を得られなかった．そこで，BDPA-Tat[37-72] 融合蛋白質の状態で NMR 測定を行うこととし，M9 最少培地を用いて大腸菌を大量培養することにより，15N 安定同位体でラベルした BDPA-Tat[37-72] を得た．次に，[15N]-BDPA-Tat[37-72] と TAR との相互作用を NMR 法によって測定した．TAR核酸として，一本鎖 DNA を RNA のモデルとして用いた．
［３．HIV-1 Tat と CBP KIX との相互作用］ CBP の KIX 蛋白質を大腸菌で発現させ，高純度精製を行った後，HIV-1 Tat と結合したときの立体構造を，円二色性 CD スペクトルで測定した．また，全長 Tat の 15N 安定同位体ラベル体の作製に向けて，培養・精製方法の最適化を行った．
［４．c-Myb と CBP KIX との相互作用］ 代表的な天然変性蛋白質である c-Myb の KIX 分子認識機構の研究も進めた．c-Myb の KIX 結合領域（284-315 残基目）のみの蛋白質断片 Myb32 を用いた．これを 13C と 15N 安定同位体でラベルした [13C,15N]-Myb32 を作製し，1H-15N HSQC，HNCACB，CBCACONH などの NMR スペクトルを測定し，ピーク帰属や 13C α化学シフト等を求めることにより，c-Myb 単独での立体構造を解析した．次に，[15N]-Myb32と KIX をほぼ 1:1 の濃度比で混合した試料を複数作製し，R 2緩和分散測定を行った．得られたデータを，自作の解析プログラム [9] を用いて解析し，Myb32 中の各残基の結合速度，解離速度，化学シフトなどを求めた．
［５．その他の天然変性蛋白質の分子認識］ アデノウイルス由来 E1A 蛋白質が標的蛋白質 NCBD と結合したときの NMR スペクトルは共同研究者によって測定された．そのデータを，自作の解析プログラム [10] を用いて解析し，E1A と NCBD との相互作用様式を求めた．また，天然変性蛋白質 c-Jun については，大腸菌を用いた発現系を構築後，大量発現と高純度精製を行い，単独での立体構造解析と，標的蛋白質 KIX との結合についての解析を進めた．
［６．変性蛋白質の立体構造ダイナミクス］ 上記の研究と並行して，変性蛋白質の構造ダイナミクスを測定するための新しい手法である一分子蛍光計測法の開発や応用に関する共同研究も行った．筆者は主に変性蛋白質の試料作製を担当した．
研究成果及び考察
本研究では，以下の 6 つのテーマについて研究を行った．

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助成研究成果報告（2017）［１．HIV-1 Tat 単独での立体構造解析］
まず，ヒト免疫不全ウイルス HIV-1 由来 Tat 蛋白質の試料調製を行った．Tat にはシステイン（Cys）残基が 7 個も存在するため，きわめて凝集しやすく，取扱いが困難であった．様々な条件検討の結果，凝集を防ぎ，かつ，Cys残基に亜鉛イオンを正しく配位結合させた全長 Tat を中性 pH で得ることに成功した．そこで，Tat の構造特性を CDスペクトルや一次元 NMR 法（パルスフィールド勾配法），および，X 線溶液散乱法などを用いて多角的に測定した．
その結果，Tat 単独ではαヘリックスなどの二次構造をほとんど形成しておらず，天然変性状態であることが示された．また，分子サイズは完全変性状態よりもコンパクトであり，ミリ秒程度の構造揺らぎを持っていた．以上のことから，単独の Tat はモルテン・グロビュール状態様の構造特性を持つことが明らかになった．生理的条件下（中性 pH で亜鉛を結合した状態）における Tat 単独の立体構造解析はこれが世界初である．さらに，pH 4 〜 7 の範囲で Tat の立体構造の pH 依存性を測定した結果，Tat は pH 4.5 以下で完全変性状態になること，および，Tat はフレームワークモデルでフォールディングし，亜鉛結合部位でαへリックスを形成することが示唆された．以上の成果をまとめた論文を現在執筆中である．
［２．HIV-1 Tat と TAR との相互作用］

Tat と TAR の相互作用解析は大変興味深いテーマであるが，非常にチャレンジングな研究課題であり，多くの問題に直面した．試料として，Tat 内の TAR 結合領域（37-72 残基目）のみの蛋白質断片 Tat[37-72] を用いることを試みたが，大量の試料を得ることができなかったため，プロテイン A の B ドメイン（BDPA）と Tat[37-72] を連結させた融合蛋白質を用いて，TAR 核酸との相互作用解析を行った．その結果，NMR 測定を行うような高濃度の Tat-TAR 存在下では，静電相互作用によって Tat が TAR に非特異的結合を起こすことが示唆された．R 2緩和分散法で分子間相互作用を詳細に解析するためには，相互作用の形態ができるだけ単純で，1 対 1 結合であることが望まし
い．それゆえ，非特異的結合の存在は，R 2緩和分散測定の解析を複雑にし，Tat-TAR 認識機構の詳細解明が困難になる．そこで，塩濃度を上げることにより，非特異的な静電相互作用を弱めることを試みた．しかし，非特異的結合を完全に除去することはできず，1 対 1 結合は実現できなかった．今後は，溶媒条件などのさらなる検討や，Tatや TAR コンストラクトの改変などの検討を続ける予定である．
［３．HIV-1 Tat と CBP KIX との相互作用］
次に，HIV-1 Tat と転写コアクチベータ CBP の KIX ドメインとの相互作用を CD スペクトルで測定した．その結果，Tat-KIX 結合によってαヘリックス状の構造形成が誘起されることが示唆された．そこで，Tat-KIX 結合状態の詳細構造を NMR 法で明らかにするために，全長 Tat の 15N 安定同位体ラベルの作製を行った．最少培地を用いた大腸菌の培養では，Tat に亜鉛を結合させることが困難であり，この問題を解決するために多くの時間を要した．しかし最終的に，Tat の 15N ラベル体を作製できる条件を見つけることができたため，今後，Tat と KIX が相互作用して形成する立体構造や，Tat による KIX 分子の認識機構を，NMR R 2緩和分散法などを用いて，アミノ酸残基レベルの空間分解能と，マイクロ秒〜ミリ秒レベルの時間分解能で，詳細に解析する予定である．
［４．c-Myb と CBP KIX との相互作用］
本研究で Tat の他に用いた代表的なモデル天然変性蛋白質は，マウス由来の c-Myb である．まず，c-Myb の KIX結合領域（284-315 残基目）のみの蛋白質断片 Myb32 を用い，c-Myb 単独での立体構造を解析した．その結果，Myb32 の N 末端側は不安定なαヘリックスを形成していたのに対し，C 末端側は変性状態様の構造をとることが示された．次に，標的分子である CBP の KIX ドメインとの結合様式を NMR 滴定法で測定した結果，一分子の KIXに対して二分子の Myb32 が結合することが示された．KIX 上にある 2 つの c-Myb 結合部位のうち高親和性の結合部位は，本来の c-Myb 結合部位であった．一方，低親和性結合部位は非特異的な結合であり，これが存在すると分子認識機構の解析を複雑にしてしまうため，この部位に結合する転写因子 MLL を KIX の 2 倍量添加することにより，c-Myb による KIX への非特異的結合を阻害した．そこで，[15N]-Myb32:KIX:MLL = 1:1:2 の濃度比で混合した試料を作製し，最新のフォールディング研究手法である NMR R 2緩和分散法による測定を行い，分子認識機構の解析を行った．

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天然変性蛋白質による標的分子認識機構として代表的なメカニズムは，構造選択機構と誘導適合機構である（図 2）．
構造選択機構では，天然変性蛋白質は最初に特定の立体構造へとフォールディングし，そのあとに標的分子と結合する．これに対し誘導適合機構では，天然変性蛋白質が標的分子と弱く結合したあとにフォールディングする．得られた実験結果がこれらのモデルのどちらと最も良く適合するのかを検討した．その結果，Myb32 の N 末端側の領域が構造選択機構で KIX を認識するのに対し，残りの C 末端側の領域が誘導適合機構で KIX と結合することが明らかになった．
従来，天然変性蛋白質による分子認識機構は誘導適合機構が主流であり，構造選択機構の例は少ないと考えられてきた．しかし今回，誘導適合機構と構造選択機構の両方のメカニズムが 1 つの分子内で共存するという極めて興味深い例が明らかになった．さらに，天然変性蛋白質が持つ二次構造形成能が，分子認識反応のメカニズムを決定しうることが示唆された．このように，本研究の成果は画期的であったため，高インパクトファクターの雑誌である Proceedings of National Academy of Sciences of the United States of America 誌に掲載され，東京大学からプレスリリースされて，2015 年 7 月 31 日付で日経産業新聞などに記事が掲載された [9]．

図2.

天然変性蛋白質が標的分子を認識する2つのメカニズム．（上）構造選択機構では，最初に一時的なフォールディングによって立体構造が形成された後，標的分子がその構造に選択的に結合する．（下）誘導適合機構では，天然変性蛋白質が変性状態のまま標的分子と弱く結合した後にフォールディングする．

Fig.2. Two mechanisms of coupled folding and binding of IDPs. (Upper) Conformational selection mechanism. An IDP
transiently folds into a specific structure, which is selected by its target molecule for binding. (Lower) Induced-fitmechanism. An IDP weakly binds to its target before folding.
［５．その他の天然変性蛋白質の分子認識］
アデノウイルス由来 E1A 蛋白質が，標的蛋白質である CBP の NCBD ドメインと相互作用するときの結合様式を，NMR 滴定法によって詳細に解析した．その結果，病原性を持つ AdV12 E1A と病原性を持たない AdV5 E1A では，標的分子 NCBD との結合様式や結合強度が異なり，病原性を持つ E1A のほうが NCBD と強く結合することが示唆された [11]．
転写因子 c-Jun はがん原遺伝子であるとともに天然変性蛋白質であり，CBP の KIX ドメインと相互作用することによって転写活性が促進される [4]．この c-Jun 蛋白質を発現・精製後，CD スペクトルや NMR 法によって単独での立体構造を解析した．その結果，c-Jun は二次構造をほとんど失っているが，HIV-1 Tat よりもコンパクトな分子形状を持った天然変性蛋白質であることが明らかになった．また，標的分子である CBP の KIX ドメインと結合するとαヘリックスを形成することが示唆された．現在，KIX 結合時の詳細構造等を解析中である．

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助成研究成果報告（2017）［６．変性蛋白質の立体構造ダイナミクス］

NMR R 2緩和分散法は画期的手法であるが，変性蛋白質の構造ダイナミクスを多角的かつ詳細に測定するためには，他の新しい測定法の開発や応用も必要である．そこで筆者はこれまで，一分子蛍光計測を用いた新しい構造ダイナミクス測定法の開発と応用に関する共同研究も行っている [12]．プロテイン A の B ドメインを尿素で変性させた状態を変性蛋白質のモデルとして用いて測定した結果，変性蛋白質は多様な構造をもち，それらの構造間を数ミリ秒以上の時間スケールで遷移するケースも観測された [13,14]．

今後の展望
本研究により，天然変性蛋白質は構造選択機構と誘導適合機構の両方のメカニズムを用いて標的分子を認識しうることが示された．また，それらのメカニズムの決定因子が二次構造形成能であることが示唆された．これらの結果は，天然変性蛋白質による分子認識機構を統一的に理解する上での大きな一歩である．今後，HIV-1 Tat，c-Jun，MLL などをはじめとするさまざまな天然変性蛋白質の分子認識機構を明らかにすることより，天然変性蛋白質による分子認識機構の統一的理解が可能になると期待される．
天然変性蛋白質の中には，がん，アルツハイマー病，パーキンソン病，狂牛病，エイズなどのさまざまな病気が関与する蛋白質が含まれている．本研究の成果は今後，これらの蛋白質が機能を発揮する仕組みの解明や，これらが関与する病気の治療法開発につながると期待される．

謝辞
本研究は，椢原朋子さん，林勇樹助教，吉崎慧君をはじめとする東京大学大学院総合文化研究科広域科学専攻生
命環境科学系新井研究室のメンバー，米国スクリプス研究所の Peter E. Wright 教授とその研究室メンバー，東北大学の高橋聡教授とその研究室メンバー，および，理化学研究所の田原太平主任研究員とのその研究室メンバーとの共同研究によって実施されました．この場を借りて深く感謝いたします．

引用文献[1]P.E. Wright and H.J. Dyson. 1999. J. Mol. Biol., 293(2): 321-331.
[2]H.J. Dyson and P.E. Wright. 2005. Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 6(3): 197-208.
[3]M. Arai, H.J. Dyson and P.E. Wright, 2010. FEBS Lett., 584(22): 4500-4504.
[4]K.M. Campbell and K.J. Lumb. 2002. Biochemistry, 41(48): 13956-13964.
[5]K. Sugase, H.J. Dyson and P.E. Wright. 2007. Nature, 447(7147): 1021-1025.
[6]A.C. Vendel and K.J. Lumb. 2003. Biochemistry, 42(4): 910-916.
[7]S. Shojania and J.D. Oʼ Neil. 2006. J. Biol. Chem., 281(13): 8347-8356.
[8]S. Shojania, G.D. Henry, V.C. Chen, T.N. Vo, H. Perreault and J.D. O'Neil. 2010. J. Virol. Methods, 164(1-2):
35-42.
[9]M. Arai, K. Sugase, H.J. Dyson and P.E. Wright, 2015. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 112(31): 9614-9619.
[10]M. Arai, J.C. Ferreon and P.E. Wright. 2012. J. Am. Chem. Soc., 134(8): 3792-3803.
[11]P. Haberz, M. Arai, M.A. Martinez-Yamout, H.J. Dyson and P.E. Wright. 2016. Protein Sci., 25(12): 2256-2267.
[12]H. Oikawa, Y. Suzuki, M. Saito, K. Kamagata, M. Arai and S. Takahashi. 2013. Scientific Reports, 3: 2151.
[13]H. Oikawa, K. Kamagata, M. Arai and S. Takahashi. 2015. J. Phys. Chem. B, 119(20): 6081-6091.
[14]T. Otosu, K. Ishii, H. Oikawa, M. Arai, S. Takahashi and T. Tahara. 2017. J. Phys. Chem. B, in press.

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本助成研究にかかわる成果〔論文発表〕

1.M. Arai, K. Sugase, H.J. Dyson and P.E. Wright, 2015. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 112(31): 9614-9619.
2.H. Oikawa, K. Kamagata, M. Arai and S. Takahashi. 2015. J. Phys. Chem. B, 119(20): 6081-6091.
3.P. Haberz, M. Arai, M.A. Martinez-Yamout, H.J. Dyson and P.E. Wright. 2016. Protein Sci., 25(12): 2256-2267.
4.T. Otosu, K. Ishii, H. Oikawa, M. Arai, S. Takahashi and T. Tahara. 2017. J. Phys. Chem. B, in press.
〔口頭／ポスター発表〕

1. 小井川浩之，鎌形清人，新井宗仁，高橋聡．第 51 回日本生物物理学会年会．国立京都国際会館，2013.10.29
2. 乙須拓洋，石井邦彦，小井川浩之，新井宗仁，高橋聡，田原太平．第 51 回日本生物物理学会年会．国立京都国際会館，2013.10.30

3. 小井川浩之，鎌形清人，新井宗仁，深澤宏仁，横田浩章，井出徹，高橋聡．第 14 回日本蛋白質科学会年会．
ワークピア横浜，2014.6.26

4. 乙須拓洋，石井邦彦，小井川浩之，新井宗仁，高橋聡，田原太平．第 8 回分子科学討論会．広島大学，2014.9.21
5. 椢原朋子，林勇樹，新井宗仁．第 52 回日本生物物理学会年会．札幌コンベンションセンター，2014.9.27
6. 小井川浩之，新井宗仁，深澤宏仁，横田浩章，井手徹，高橋聡．第 52 回日本生物物理学会年会．札幌コンベンションセンター，2014.9.27

7. 乙須拓洋，石井邦彦，小井川浩之，新井宗仁，高橋聡，田原太平．第 52 回日本生物物理学会年会．札幌コンベンションセンター，2014.9.27

8.H. Oikawa, K. Kamagata, M. Arai, A. Fukasawa, H. Yokota, T. Ide and S. Takahashi. Biophysical Society 59thAnnual Meeting. Baltimore Convention Center, Maryland, USA, 2015.2.8
9.T. Otosu, K. Ishii, H. Oikawa, M. Arai, S. Takahashi and T. Tahara. Biophysical Society 59th Annual Meeting.
Baltimore Convention Center, Maryland, USA, 2015.2.8
10. 椢原朋子，林勇樹，新井宗仁．第 4 回日本生物物理学会関東支部会．日本大学，2015.3.10
11. 椢原朋子，林勇樹，新井宗仁．第 16 回日本蛋白質科学会年会．あわぎんホール，2015.6.24
12. 椢原朋子，林勇樹，新井宗仁．第 53 回日本生物物理学会年会．金沢大学，2015.9.14
13. 小井川浩之，新井宗仁，深澤宏仁，横田浩章，井手徹，高橋聡．第 53 回日本生物物理学会年会．金沢大学，2015.9.14
14.H. Oikawa, K. Kamagata, M. Arai and S. Takahashi. Pacifichem 2015. Honolulu, Hawaii, USA, 2015.12.15
15. 椢原朋子，林勇樹，工藤恒，河合秀信，岡芳樹，新井宗仁．第 5 回日本生物物理学会関東支部会．桐生地域
地場産業振興センター，2016.3.10

16. 椢原朋子，林勇樹，工藤恒，河合秀信，岡芳樹，新井宗仁．第 16 回 東京大学生命科学シンポジウム．東京大学，2016.4.23

17. 新井宗仁．東京大学大学院理学系研究科物理学専攻 A7 サブコース第 3 回シンポジウム「生物物理の新展開」．東京大学，2016.5.20

18. 椢原朋子，林勇樹，工藤恒，河合秀信，岡芳樹，新井宗仁．第 16 回日本蛋白質科学会年会．福岡国際会議場，2016.6.8

19.T. Kunihara, Y. Hayashi, H. Kudo, H. Kawai, Y. Oka and M. Arai. ICMRBS2016 (27th International Conference
on Magnetic Resonance in Biological Systems). Kyoto International Conference Center, 2016.8.25
20.M. Arai, K. Sugase, H.J. Dyson and P.E. Wright. ICMRBS2016 (27th International Conference on Magnetic
Resonance in Biological Systems). Kyoto International Conference Center, 2016.8.25
21. 椢原朋子，林勇樹，工藤恒，河合秀信，岡芳樹，新井宗仁．第 54 回日本生物物理学会年会．つくば国際会
議場，2016.11.25

22. 吉崎慧，椢原朋子，林勇樹，新井宗仁．第 54 回日本生物物理学会年会．つくば国際会議場．2016.11.25
23. 新井宗仁．第 6 回岐阜構造生物学・医学・論理的創薬研究会シンポジウム．岐阜大学，2017.3.14

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