ビルベリーの抗潰瘍作用と作用機序に関する検討〜 岐阜薬科大学 ・ わかさ生活 〜（日本薬学会第130回大会 学会発表）

目的ビルベリー（Vaccinium myrtillus)
ブルーベリーの一種で主に北ヨーロッパ、北アメリカなどで自生している。樹高が15〜40 cmと低く、耐寒性がある。4月から6月に開花する。約150種類あると言われているブルーベリーの中でも最もアントシアニン含量が多く、その抽出エキスはVMA (Vaccinium myrtillus anthocyanoside）と呼ばれ36%、15種類のアントシアニンを含む。
＜効果＞• 視覚機能改善作用• 眼精疲労改善作用• 血小板凝固抑制作用• 毛細血管保護作用• 血管拡張作用

ESR （JES-FA200, JEOL） 条件

ESR 装置

VMA
アントシアニジン （Cyanidin, Delphinidin, Malvidin )TroloxTBARS (％)**60**
40**

200Co ntro l10 .110HOHOO+

1 20O+
OCH 3OHOHOHOH

HOHOHOCyanidin

Malvidin

Delphinidin

シアニジン、デルフィニジン及びマルビジンの構造式

スーパーオキシドアニオンラジカル（･O2−）捕捉活性
DMPO (230 mM)

Xanthine oxidase+● スーパーオキシドアニオンラジカル（･O2−）捕捉活性OHOH
HOO+

1 00
*60

**
**
**

**

1310

1 2 VMA
3 4Control+

30 10013

10 0.1 0.3 18Cyanidin
9 10 11
12 13 14Trolox
15 16Malvidin(µM)

ESR spectrometer
Measurement④µg/mL
1.2
1.2
32.8
1.0132

VMADelphinidin
Cyanidin
MalvidinTrolox( 0.02mM )After 1 minSample②10 10(µM)

(µM)

(mM)

・O2− ラジカル捕捉活性に対するIC50

FeSO4

H2O2 (0.2 mM)

35Delphinidin
6 7IC50DMPO (18 mM)+1

Mean ± S.E.M. （N=3）, **p<0.01，*p<0.05 v.s. Control

ヒドロキシラジカル（･OH）捕捉活性+

**

**

**

20

ESR spectrometerMeasurement******(µg)

After 1 min**
**

400**

**

80

( 0.4 unit/ml )（DMPO ： 5,5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide）①（µg /m l）

10 0

Fig.4 ESRスペクトロメトリー法
OCH3OH+

本試験で用いたビルベリーエキス（VMA，わかさ生活）について
HPLC分析にて以下に示すアントシアニン組成であることを確認した。

**80

Mean ± S.E.M. （N=5 ）, **p<0.01 v.s. Vehicle

OHOH

材料と試験方法

95%信頼限界
1.0 〜 1.5
0.9 〜 1.6
22.5 〜 52.5
0.7 〜 1.4
114 〜 155

µM
−
3.5
98.5
2.8523

95%信頼限界
2.5 〜 4.7
67.5 〜 158
2.0 〜 3.8
453 〜 615

● ヒドロキシラジカル（･OH）捕捉活性

結果⑧⑭⑩⑪⑫⑬⑨⑮① Delphinidin 3-O-galactopyranoside, ② Delphinidin 3-O-glucopyranoside,③ Cyanidin 3-O-galactopyranoside, ④ Delphinidin 3-O-alabinopyranoside,⑤ Cyanidin 3-O-glucopyranoside,⑥ Petunidin 3-O-galactopyranoside,⑦ Cyanidin 3-O-alabinopyranoside, ⑧ Petunidin 3-O-glucopyranoside,⑨ Peonidin 3-O-galactopyranoside, ⑩ Petunidin 3-O-alabinopyranoside,⑪ Peonidin 3-O-glucopyranoside,⑫ Malvidin 3-O-glucopyranoside,⑬ Peonidin 3-O-alabinopyranoside,⑭ Malvidin 3-O-galactopyranoside,⑮ Malvidin 3-O-alabinopyranoside

2．エタノール誘発マウス胃潰瘍
実験動物
ddYマウス 雄性 6週齢
実験の流れ
150mM HCl-EtOH(0.1ml/20g body weight)

Fig.１ エタノール誘発胃潰瘍モデルにおけるビルベリーの作用

Ulceration

100 (mｇ/kg)
VMA60

1h30

Lipid peroxide**4020010 30

100 0.1 0.35Delphinidin
6 78Cyanidin
9 10 11Malvidin
12 13 14Trolox
15 16(µg)

(mM)

(,mM)

1 2 VMA
3 4Control**

VMA
Delphinidin
Cyanidin
MalvidinTrolox

**

20**

10032

1 033041 00
5 Su cralfate
610 0

α7 toc ophe rol
10 0 (mg/ kg)

Fig.2 エタノール誘発胃潰瘍モデルにおけるHE組織評価

10.1 0.3

10.10.3(mM)

1 0.3

13(mM)

VMA
ShamVehicle

10μg/mL
116
240> 333> 367
328

95%信頼限界80 〜 192
196 〜 298

280 〜 396

mM―0.7> 1.0> 1.0
1.3

95%信頼限界
0.6〜 0.9

1.1〜 1.6

結果のまとめ・エタノール誘発胃潰瘍モデルにおいて、VMAの事前投与は用量依存的に胃潰瘍を抑制した。（Fig.1）
・HE組織評価において、VMAを事前投与は、マウスの胃粘膜において、エタノール誘発浮腫を抑制した。（Fig.2）
・マウス胃ホモジネートの脂質自動酸化において、VMAは濃度依存的に脂質過酸化を抑制した。（Fig.3）

Ethanol
100 (mｇ/kg)

・VMAは・O2−ラジカルおよび・OHラジカルに対して、ともに強い捕捉活性を示した。また3種のアントシアニジンは、それぞれ・O2−ラジカル捕捉活性を示したものの、・OHラジカルに対してはDelphinidinのみに強いラジカル捕捉活性が認められた。（Fig.4）

粘膜層粘膜層（拡大）10 µm

TBA ( thiobarbituric acid )

**

**

*

**

150 µmmeasurement(TBARS)

**
**

IC50

40

Mean ± S.E.M. （N=6-8）, **p<0.01，*p<0.05 v.s. Vehicle

3．マウス胃脂質過酸化 （TBARS測定）
532nm

**

・OHラジカル捕捉活性に対するIC50

VMA

1% formalin fix

95℃ boiled**

6050sacrificed
Sample 投与量 (0.1ml/10g body weight)
・Vehicle (0.5%CMC)
・VMA 100mg/kg b.w.
・ 〃30mg/kg b.w.
・ 〃10mg/kg b.w.
・ 〃3mg/kg b.w.
・Sucralfate 100mg/kg.b.w.
・α-Tocopherol 100mg/kg.b.w.

80

Mean ± S.E.M. （N=3）, **p<0.01 v.s. Control

VehicleEvaluation

Sample 経口投与

1 00Ethanol
70

12h

1h

10Vehicle

Ar ea of gastr ic ulcer （mm 2 ）⑦

Yields of DMP O-OH (％)

1 20⑤⑥homogenate

1 00

VM A

Hypoxanthine (5 mM)

1．ビルベリーエキス

0h1 20SampleSample③Fig.3 マウス胃ホモジネートの脂質自動酸化に対する
ビルベリーエキスの作用 （TBARS）

Center field ： 330 mT
Sweep width ： 1.5×10 mTTime ：4 min
Mod width ：2×0.1 mT
Amplitude ： 5.0×100
Time coast ：0.3 sec
Microwave power ：4.0 mW （･O2−）
8.0 mW （･OH）+

北欧産野生種
ビルベリー

一般栽培種
ブルーベリー

4．ESRスペクトロメトリー法

Yields of DMPO-O 2 ・ (％)

ビルベリー（Vaccinium myrtillus）はツツジ科スノキ属に分類されるブルーベリーの一種で、一般栽培種ブルーベリーに比べ青紫色素成分アントシアニンを豊富に含むため高い抗酸化力を有している。これまでに血流改善や抗炎症作用などの薬理作用が報告されており、またヨーロッパの一部の国では抗潰瘍薬として認可されているが、その詳細な作用機序は明らかにされていない。本研究では、エタノール誘発マウス胃潰瘍モデルを用いて、ビルベリーの抗潰瘍作用並びにその作用機序について検討した。

結語VMAは、マウスエタノール誘発胃潰瘍に対して抑制作用を示し、その作用機序の一部にはVMA並びにその主成分（Delphinidin、Cyanidin、Malvidin）の有するラジカル捕捉能が関与している可能性が示唆された。