58抄録〔山梨大磯酵研 No.13,Nov.1
966〕
有 胞 子 乳酸 菌 に よる/くイ オ ア ッセイ (そ の 1)発 育 促 進 因 子 群

中 山 大 樹 :日本農芸化学会大会講演 (1966年 4月 ,於OokiNAKAYAMA京都 ,同志社大学)

Studieson t
heMi
cr
obi
oass
ay

byMeansofSporeBearing Lacti
caci
dBact
eria.
Par
tL Ont
heGr
owt
hPr
omot
i
ngFactors.
ア ミノ酸, ビタ ミン等のバ イオア ッセイのた物 :グ リシン,アラニン,アスパ ラギン酸,グめの接種菌として,保存に便利な有胞子乳酸菌

ルタ ミン酸,アル ギニン*,システイン*,メチの乾燥胞子を用いる場合,接種良が少ないと,オニン, ヒスチジン*,パ ラア ミノ安息香酸｡

通常の乳酸菌用合成培地に菌が生育 しにくい｡

但 し*印は単独でも有効であ り,他のア ミノ酸

この場合,培地のオ‑ トクレープによる加熱生や尿素などは無効であった｡ (2) グルタ ミン成物やペプ トンなどを添加すると発育が促進さ

酸 ソーダと次のものを水溶液中で強熟 したもの

れ るので,アウサ ノグ ラフ イーによ り,発育促:各種単糖,オ リゴ糖 (ラフ イノーズを除 く),進因子の検索をおこなった｡

多糖類｡ ラムノーズ,多価 アル コール,オキS/

方法と しては,地 とア ミノ酸等を分けて殺菌酸などは無効｡ (3) アスコル ビン酸,エ リソした合成培地に 10J
ルl当 り約106 個の洗縦胞子

ル ビン酸,チオグ リコール酸,モール氏塩のそを腺濁 してシャーレに流 し固め,試料を浸み込れぞれ単独使用｡

ませた泌紙片をIBいて培沓 し,滅片紙のまわ り

25〟 程度の中性塩 ,0.
5〟 程度の培地に0.に徽小集落群が現われた場合,発育促進効果あ糖 などを加えて菌の発育を妨げてお くと,促進りと判定 した｡

物質の効果が顕著に現われ る｡また,有効物質

その結果,次のものが有効であった｡ (1)ブ ドウ糖 と次のものを水溶懐中で強熟 した生成はいわゆる HIrontransportfactors"と関係があるよ うに思われ る｡

新 種 有 胞 子 乳 酸 菌 の分 臥分類

中 山 大 樹 ,矢 ノ師正義 : 日本農芸化学会関東支部大会講演(1966年10月,於東京 ,玉川大学)
OokiNAKAYAMA andMasayoshiYANOSHI:Taxonomi CStudiesont
heNewlyIsolated SporeBearing.
Lacti
cAcid Bacteria
今 までに知 られていた有胞子乳酸菌は,

Bacilll,'SCÒtglLIE7m 系統のものと Sporolac‑tobacL'll
us l株のみであ った｡前者はカタラー
ゼ陽性で L(+)乳酸を作 り,後者はカタラーゼ陰性でD(‑)乳酸を作 るものであるが,いずれも培地の pHを 4台にしか下げ得なか った｡ この度,勲淘汰と嫌気培養の組み合わせによ り,植物の根圏 (Rhizosphere)から培地の p
Hを 3台に下げる本格的有胞子乳酸菌13株を分離 し,次のように命名することを提唱 した｡
カタラーゼあ りD(‑) 乳酸を作 る:
Bacilluslaevolac
ticusnov.sp.
ラセ ミ乳酸を作る:

Bacil
LEESrace/山/
ac
EicLt
SnO
V.Sp.
カタラーゼなし
ラセ ミ乳酸を作 る:ParabacillusL
SnO
V.gen.
,nO
V.
Sp.
race/
ルiL
ac
Eic
L

▼
抄

〔
山梨大醗酵研録

59No.1
3,Nov.1966〕
微 生 物 中 の リ ン 脂 質(第 1報 )酵 母 (Cr31PtococcusneoformanSCBS 132) の増 殖 過程 と リン月旨質 組 成

小 松崇 ,金 子

弘 ,田 中健 太 郎 :第 8回 日本月旨質 生 化 学 研 究 会 講 演(1966年 6月 ,於 広 島 ,広 島 大 学 )TakashiKOMATSU ,HiroshiKANEKO andKentaroTANAKA :Studieson thePhosphol
ipi
dsof Yeasts.
Par
t1.A Compar
ison ofthePhospholipidComponent
sint
heCultureAgesofCr
ypt
oc
occuSneOforJ
nanSCBS1132I
微生物の うち細菌の リン脂質についてはに準 じて抽出,洗赦 した｡襲来気流中で減圧氾

phosphati
dylcholine(PC) を欠 くとい う特異

新 し一定容に調製 した脂質試料については的な リン脂質構成を有するものが多 く,坐育条Sl(IDhlORl∃皮 E NTENhIAN らの方法に従 って定盟件やi
E育時期などによってその組成に大きな変的二次元薄層 クロマ トグラフ ィ‑をお こない,動が起 る場合があることも知 られている｡
H ANAI
IAN らの報告によると酵母にはPC が多く,その リン脂質構成が多 くの細菌と興ること

ヨー ド蒸気にさらして着色 した各スポ ッ トをけず りと り,その 32〔P〕を測定することによ り
各 リン脂質の組成を知 った｡

が知 られている｡酵母に関 しては培並条件 によ32では ⅠからⅡへと進〔実験結果〕 CBS1り, リン脂質の組成がどのよ うに変動するかはむにつれて,全脂質に対する 1)ン脂質の割合はほとんど知 られていない｡われわれは酵母中のわずかに低下を示 したが,単位窪昆当 りの全脂リン脂質研究の一環 として 32〔P〕を トレーサ質の割合が著 しく増加 しているので(2倍以上)ーとして利用 し,一定条件下 に培盤 したリン脂質の最も倍近 く増加 している｡各 リン脂Cryptococc
usneoforma
ns CBS132 (以下sO‑PC,
質組成については定性的には PC,LyCBS132と略記)の増殖過程 中菌体内の リン脂

phosp
hati
dylet
ha
nolamine(PE),Lyso‑
PEと質が定性的,定量的にどのよ うに変化するかを未同定のもの 3つ (A,B,C)が存在 し, Ⅰと検討 した｡

Ⅱでの定性的な変化は認められ なか ったが,定〔
実験方法1 CBS132を合成培地 〔組成 :El的には LysO‑PCが特に著 しい増加を示 した｡

ブ ドウ糖 10%;(NH412SO4,0.
5%;KH2PO4,

PC,PEは単位菌体塵‑Eiに対 しては増加 して0.
05%;MgSO4･7H20,0.
05%;CaCO3,0.
001

いるが リン脂質相互間の割合では今のところは%;KCl,0.
028%;NaCl,0.
001%;酵母抽出っき りしたことはわからなか った｡ なお,A,液 0.
1% (W/W)〕に接種 , 30o
C で振辺培蕃

B,Cの うち Aは緩和な条件の7/I/カ リ水脈でし,培整10侍間 (Ⅰ) および19時間 (Ⅱ)の菌水解 され, 相互位際から phosphoinositideと体 を採取 した｡ 薗体中の脂質は F oLCH の方法考えられ るが 目下検討中である｡

60抄

銀No.1
3,Nov.1
966〕〔山梨大醗酵研

トリメチ レン グ リコール 系脂 質 の研 究

(第 7報 ) ホ ス ホ リパ ーゼ Aの作 用
金 子

弘 ,原一 郎 , :日本化学会第19年会講演(
1966年 4月 ,於 東 京 ,慶 応 大 学 )HiroshiKANEKO andlchiroHARA:
Tr
imethyl
enegl
ycol
‑phos
pholipi
des.
Part7.Substr
ateSpecificitiesofTrimethylene
glycoトphos
pholipidesonthePhospholipaseA Activities･
前報で報告 した トリメチレング リコール

チ ン (LL) に変わったが Ⅰは全 く作用を受け(TMG)を有する合成 リン脂質の うち TMG ビず , 〔Ⅰ+L〕の系では LLの生成が見 られな

スホス フ7チ ジン酸 (TMG‑bis‑PhA),TMGか った｡そこで Lに対する Ⅰの量をいろいろにホスフ7チ ジルエタノールア ミン(TMG‑PhE)変えて反応 を行 った｡L2.
07ng に対 し I2.
3,に対するホスホ リパ ーゼAの作用について調べ

1.
15,0.
92,0.
69,0.
46,0.
23,0.
115/ngとした｡

たところ ,0.
115mgでは10分以内にLLの生成CH20COC15H31CH2COC15H31dH29CL2dH2̲0̲p‑4̲Jh2M

T G‑bis‑PhA (Ⅰ)

H
2C 0COC15H3iI用されないことがわか った｡ この結果 Ⅰはホス
ホ リパ ーゼAの Lに対する作用を阻害 し,Lに/5‑1/10 の量 (〟 比で) でその作用が対し 1あらわれることがわかった｡｡

2‑0‑苧 ‑0HdH

では少量の LLの生成は見 られたが,それ以上に反応は進まず, 0.
92〝1g以上では全 くLが作｡LiH2が見 られたが ,0.
23/ngでは25分でや っと0.
1151ngと同 じよ うになった｡一万 0.
46, 0.
697ルg次にⅡについて,これ も Ⅰと同 じように 〔LH2CH2NH2+酵素〕で Lが完全にLLに水解されるのに対(し 〔Ⅱ+酵素〕ではⅡはホスホ リパ ーゼAの作TMG‑PhE Ⅱ)

L+Ⅱ+酵素〕では,用を受けない｡ ざらに 〔

反応方法は上記両 リン脂質をエーテル クロロ

等M でもLLが L単独の場合 と同じよ うに起 っホル ム(19:1)の溶版にとか し Ⅰは 2.
3mg/ml,たo この限 りにおいてⅡはホスホ リパ ‑ゼAのⅡは 2.
0mg/mlの粒度にした｡ 蛇毒 (Naja

Lに対する作用を阻害 しないとい う結 果 を 得naja) の 1mg/0.
1m10.
005M 酢酸カル シウム

たO

溶液 を作 り, リン脂質 :蛇毒を 40:1になるよホスホ リパ ーゼAの リン脂質に対する作用をうに配合 した｡反応は両溶液をまぜ 30oC で擾阻害する基質としては RosENTHAL&GAYER の拝 しなが らおこなった｡一万酵素作用の標準とDL‑3‑ジメチルア ミノ‑ 1, 2‑プロパ ンジオ

しては精製 した卵光 Vシチン (L) を用いた｡

ーJt/ジステ7Vr トのみが知 られてお り, Ⅰの反応生成物 の検出は常法によるシ リカゲル薄層

阻害作用はホスホ リパ ーゼAの性質を調べる上

クロマ トグ ラフ ィー (TLC)で行 った｡に非常に興味あるものと思われ る｡

ます Ⅰでは Lは酵素の作用で完全に リゾレシ

lllllllllll■ ■抄‑1‑‑L‑‑ーーートーーー̲

〔
山梨大醗酵研録

6T

No.13,Nov.1966〕
ベ ン ジ リデ ン グ 1)セ リンの 4異 性 体 に 関 す る研 究(第 1報 ) 4 異 性 体 の 分 離 精 製
金 子弘 ,安 藤進 ,原一 郎 : 日本 化学 会 第 19年 会 講 演(1966年 4月 ,於 東 京 ,慶 応 大 学 )HiroshiKANEKO,SusumuANDO andlchiroHARA:
Studieson Fourls
omersofBen2;
ylideneGlycerols.
Part1.Isol
ati
onoft
heFourls
omers.
ベ ンジ リデ ング リセ リン (BG)には 6種 の上で分れないが,ベ ンジJt/化,ベ ンゾイル化,異性体の存在が予想 されているが,これまでに

パ ラニ トロベ ンゾイル化およびパル ミトイル化

p.83o
Cの1.
3‑ BG (transまたは cisはm.

するとわずかに分離することがわか った (△Rf壁) と1.2‑BG (cisおよび trans型)につ0.
07‑0.
09)
O ⅢとⅣは Ⅰ.
R.でもほとんど区

いては,それ らの純品が得 られてお らず,立体別 されないが,NMR スペ ク トノレ(TMS を内構造は不明のま ゝである｡われわれは脂質の化部基準 とし,無水 クロロホル ム中にて測定の 4学合成の中間体 として種 々のグ リセ リン誘導体‑ 5タPm 領域で 各異性体 のメテンの 吸収位田を合成 し,それ らの物理化学的性質を明らかにが異 ることが見出されたのでそれ らの純皮検定して来たが,更にグ リセ リン誘導体に関する立に用いた｡

体化学上の手掛 りを得 るために上述の 4異性体を単離 しその諸性質を調べた｡

グ リセ リンとベ ンズアルデ ヒドをパ ラ トルエ
ンスル フォン酸の存在下に反応 させると各異性Fi
g.1に図示する方法によ って 2体のほぼ等fii混合物が得 られるが,中性下に縮つの 1,3‑BG (Ⅰ, Ⅱ) と 2つの 1, 2‑合 させると 1,2‑BGの収量が著 しく高 くな

BG (Ⅲ,Ⅳ共に光学不活性) とを得た｡

ることがわか った｡ Ⅰは Ⅱ, Ⅲ,Ⅳを異性化さ〔結果〕〔実験〕 各異性体 の分析手段 としては主にせ結晶化させ ることによ って多虫に得 られた｡

TLCを用いた (展開溶媒 :エーテル ー石油エ‑テル系).TLC上の Ⅰと ⅡはⅢおよびⅣかによって単離ざれた｡ ⅢとⅣはそれ ら混合物を

nespotを示すが, ⅢとⅣはら区別 され夫々 o

ベ ン/イル化 し,カラムクロマ ト法によ って各Ⅱは粗製品から分別結晶法とカラムクロマ ト法

全 く等 しい Rf値 を有 し区別 されなか った｡Ⅲ

レカ リ水々の安息香酸塩 (Aと B) を分離後 ア/とⅣはアセチル化あるいはメチル化 してもTLC

解によ って再生 して得 られた｡

62

抄

録

Glycerol｣00
H+inbenzenea
t9mol,compd〟 ration1crude Ⅱo]rmat
ographed
onS102chi
nxylenea
t1
500
Mixt
ur
eofⅢ,

& traceof I,ⅡⅢ,IVm.
p.
66‑
670m.
p.
830

l

Ⅵ‑

Ⅱ,
Ⅲ,ⅠVl:

Mixtureof I,Benzaldehyde｣

土 m.
｡.
63.
50

dist.at0.
5mm(127‑128 0)benzoylationlchromatographedonSi
O2oBenzoate (n芳 :1.5568Be
nzate(A)
n;
5:1.
557
8NB)

aOH n 0% MeOHi

7

Ⅲ ni
5:1.5342

i n

Fig･1･ Prepar
ati
onof1,3‑
BG (I,Ⅱ)and1,2‑
BG (Ⅲ,Ⅳ)i5:

1.5333