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全 フェノールの 自動定量〔J.Inst.Enol.Vit
ic.Yamanas
hiUniv.1
8 37‑42 1983〕

テクニカルノー ト
フラクションコレクターを利用 した簡易型オー トサ ン
プラーの試作 と全フェノール自動定量装置への組込み
横塚

弘毅 ･丹沢 恒正 ･萩原

隆徳 ･二木弘 ･加藤

泉 ･櫛田 息衝

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manashiUniversity,Kofu400ぶ どうマス トや ワイ ン中の フェノールの定量 には ,その柴外部の吸収を測定するかあるいは適当な試薬で発色 させる比色法が用い られ ,最 も一般的な方法 と してはフェノールの還元性を利用 してアルカ リ性で リン
タングステ ン,モ リブデ ン酸を還元 して生 じる青色 を
比色 す る Folin 法 が あ げ られ る. Folin 法 は対象 とする試料によ って多 くの改良法が あ り､我 々はSi
ngkton,Rossiの報告 した改良法 1) を用 いて ワ
イ ンやマス ト中の フェノール量を測定 しているが ,分inkard,析時間が長 く,また定量精度 も十分でない.SlSingleton2)は Folin 法 を用 いた フ ェ ノール定 量omated法の自動化を試み ,manual法に比べて aut
は,分析時間 ,定量精度 ,労力 ,試薬消費量等の点で秀れていることを見出 した.この装置はテクニコ ン社
製のオ ー トアナ ライザ ーに Folln 反応 用の フロー

本装置は ,サ ンプ リング,試薬送液 ,反応 ,検出 ,記録の 5つのユニ ッ トよ り成 る.
サ ンプ リングユニ ッ トは大き く分 けると,サ ンプ リ
ング針上 下移動機構 (Flg.1),コ ン トロール機 構(FIE.2),試験管送 り機構の 3つか らで きて い る･
試験管送 り機構は,東洋科学製 フラクションコレクター(SF‑160K型)か ら天秤装置 の スイ ッチに通 じて い
た線 とコン トロール機構が結ばれている.
サ ンプ リング針 はモ ー ター に よ り上 下 に移 動 し(Fig･1),サ ンプ リング流路系は針の先端部分 を除いて常時水で洗われている.モーターは コントロール機構 (Fig.2) に あ る ON Re
lay (OMRONWY2 DC12V) と UP Re
lay (OMRON WY
2DC12V,回転方向すなわち針 の上下移動方 向を決める)とによって作動す る.

そこで ,ここでは既 に他の研究 目的で購入 し,使用

コ ン トロール機 構 には St
artSW,ResetSW ,サ ンプ リングタイム設定用デ ィジタルスイ ッチ (S･中の機器 ,フラクションコレクター,分光光度計 ,ペリスタポ ンプ,循環 熱風乾燥器 ,記録計 を利用 し,SW,OMRON A 7M‑2), リテ ンシ ョ ンタ イ ム
設 定 用 デ ィ ジタル ス イ ッチ (R ･SW,OMRON

sllnkard,Slngleton の報告2) を参 考 と して ,安価で定量誤差の少ない全 フェノール自動定量装置を組立てたので報告する.

A 7M‑2)がある. Dr
iv
eRelay が 1秒 間 は い ると試験管が 1本ずれる.
この回路の作動 を説明すれ ば ,ResetSW を押す とサ ンプ リング針 は上‑動 き UP ･SW に達 し*DepartmentorMechani
calEngi
neeringて 停 止 す る . St
artSW を 押 す と ON Relayが入りモーターが回転す る.回転方向 (上下移動方向)
は UP ･SW が 押 され て い たか D ･SW が 押 さダイアグラムを組込んだ もので非常に高価である.

辛*FacultyMachlneShop･* * *De
partme
ntofComputerScience･38

横塚 ･丹沢 ･萩原 ･二木 ･加藤 ･櫛田

ポリビニルクロライ ドフローチューブ (
内径 0.
50mm

3.
20mm,Table 1)を用いた.デバ ブラー,ガ ラ製 ミキシングコイル,コネクター,マニホール ドチュ
プ(内径1.
7mm)はテクニコン社製 ,加熱反応槽 とて八島製作所製恒温槽 Mi
nltemPMT‑1型 を用 し
反応 コイルはテフロンチューブ (内径 2mm ,長さ10Tを使用 した.反応 によって生 じた青色 は協和精密製〟1‑フローセル (光路長10mm)を島津製作所製分光度計 (UV140型)に取付 け , リファ レンスセルをいないで ,760nmの吸収で測定 した .反応試薬 は和製 Folln 試薬 を 5倍 に水で希釈 した もの (FCfと10%Na2CO3溶液を用いた.
この全 フェノール 自動定量装置を用いて ,いろいな濃度の没食子酸溶液及び数種の ワイ ンの全 フェノ

g･4はチャー トス ピー ド8cm/ル定量を行 った･Fl

で措いた分析結果 ,Fig.5は没食子酸の ピーク高 一
チャー ト上の目盛で読み とり作成 した標準曲線であそワイ ンは全て水で 5倍 に希釈 して分析 した.以上の果.没食子酸300ppmまでは±2%の誤差で定量できことが分 った.

Fig. 1･ Sampllng unlt

れて いたかで決 ま り,この場 合 に は UP ･SW がはいっていたので針が下方 に動 くような回転方向 となる.針 が下方 に移 動 L D ･SW が入 った とこ ろでモーターが止 まる.この時 ,針先は試験管の試料液中にあり試料を吸っている.時計部 (コン トロール機構 )が働 き始め ,設定 された時間が くるとモーターが再び動 き始め,針 は上方 に移動 しサ ンプル吸入は止 まる.
次 に針 が UP･SW を押 した と ころで モ ー ター は
止 ま り,試験 管 送 り機 構 を動 か す Drl
Ve Relay
が 1秒間入 り試験管が 1本送 られ る.同時に時計が働き設定 された時間,針は最上部 に止 まったままとなる.
時間が くると再 び モ ー ターの ON Rel
ay を動 かし針 は下 が る.全 体 を停 止 す る に は Re
setSWを押す .このような繰 り返 しによってサ ンプ リングユ
ニ ッ トは作動する.

Flg.3は全 フェノール自動定量装置の フローダイアグラムを示 している.送液 ポ ンプは東京理化製 マイクロチューブポ ンプ (MP‑32型 ),フローチ ューブ
はM & S I
nstruments Tradlng lnc.の分析 スピー ドは反応 コイル容量 ,反応試薬及び謡の送液速度等によって決 まるが ,ここでは分析誤差各ユニットの部品入手の し易 さ,装置の保守の容易 ;分析を必要 とする試料数等を考慮 して 1時間につき試料 (1試料を 2.
5分 で分 析)を分析 で き るよ う組立てた.

Slinkard, Slngleton2)は FcR 送液 ,Na2C(
試 薬 送 液及び分 光光 度 計の フローセルか ら廃液にる 3つ の 流 路 に各 2本 の ポンプチューブを使用 しブより径 の大 きい 1本 の チューブを用 いた 時には,ヤー ト上 の記 録 され つつ ある ピークは数 mmの単で後戻 り した り,また Slngleton の研究室で の者の経験では ,主 ピークの他 に小 さな ピークが重なて現われたり,更に 2本づつのチューブを用いて もどクの頂点近 くで 2つの山に割れた りす る現象が しはば見 られた.この原因を彼 らはポンプの ローラーかンプのプレー トからチューブを離す時に生ず る "snaback"効果とした.しか し我 々の装置では全ての流系に 1本づつのポンプチューブを用いても "snap‑bac効果はチャー ト上の ピークの形 に影響を与えなか っブ
すなわち非対称の ピークや ピークの山が頂点近 くでつに割れる原因はフローセルの形と容量にあり,"snaback"効果は青色の反応生成物 を測定す るするまで長い流路系の間で吸収 されていることが分 った .30.

以上の容量 を持つ数種の フローセルを用いた時には記のような非対称の ピークが認 め られた .

■‑

40

横塚 ･丹沢 ･萩原 ･二木 ･加藤 ･櫛田Fl
g･3･Flowdi
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e 1. Pumpt
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U1 1 1Tubec
olorcoder)
teDel

Flul
dbelngpumpedI･2 m｡

Tubeno*Thesevalueswerefoundbytheuseofthepumptubesobtalnedfrom M &SInstrument
sTr
adl
ngl
nc.andaperl
Stalticpump(TokyoRikaklkal,Model
MP‑32).