平成30年１月１日発行［毎月１回１日発行］第24巻第１号

通巻第268号

平成８年６月27日第三種郵便物認可

月刊

食の安全と品質保証のための特集

ISSN 1342-1573

2018 Vol.24

1

HACCP制度化における微生物検査の意義と体制構築
シリーズ：PRPの底力！

企画特集 ペストコントロールを中心とした現場の異物対策とデータ活用
妥協のない内部監査と教育活動の強化・充実に尽力、Challenge the Futureと「従事者の意識改革」に劇的な効果！
～未来への架け橋～ 「現場の衛生レベル向上」●株式会社サプリメントジャパン（東京都）

特別企画

今、注目の食品微生物の検査を追う！

公定法の大腸菌・大腸菌群の新しい迅速・簡便な検査法～浮上するダーラム管と全自動検出装置～
株式会社協和医療器
技術開発部 部長

宮下光良

腸菌群・大腸菌が存在している場合には、菌より浮上するダーラム管産生されたガスがダーラム管に溜まり、気泡が生じ、大腸菌群の存在を確認することが可能となり食品会社で製造された製品について、公定法でます。ガラス製のダーラム管は安価に製造するこ定められた大腸菌群検査や糞便系大腸菌群検査のとは難しく、検査を行う事業者はダーラム管を洗推定試験では、BGLB 培地、EC 培地などの液体浄し再利用することで検査コストの上昇を抑えて培地にφ 6 〜 7 ㎜のガラス製ダーラム管（発酵管）います。

を入れて、ガス産生の有無を目視判定する方法が用いられています（写真 1）。
培地の入った試験管に検体液を接種し、35 ±1℃のインキュベーターまたは 44.5 ± 0.2℃の恒温水槽で 24 〜 48 ± 3 時間培養します。検体中に大しかし、ガラス製のダーラム管は、牛乳などの濁った検体の場合は、ガス産生の有無を目視判定することが難しくなり、誤判定をしてしまうリスクが考えられます。
今回開発した「浮上するダーラム管（PS ダーラム管）」は、合成樹脂の中で液体培地に沈む最も軽いポリスチレン樹脂（比重 1.06）で作られており、微少のガスでダーラム管が浮き上がる（写真 2）ので、ガス産生菌の存在を判定するシグナルを 2 つ提示することができることで、誤判定のリスクがなくなります。

自動検出装置「バイオプティ」の測定原理
微生物の存在を検出する方法として、液体培地の濁度を測定することは、信頼性の高い方法として広く採用されています。
写真1 ガラス製のダーラム管 写真2 ポリスチレン製のダーラム管

本 PS ダーラム管の自動検出装置「バイオプ月刊HACCP2018年月号

37

ティ」では、この濁度とダーラム管の浮上を検出要素としており、培養
近赤外線光試験管に液体培地とPS ダーラム管を一緒センサーに封入した滅菌済みの使い捨て検査キットに試料を添加し、キャップを締めてインキュベーターで培養するだ
けで、高感度で確実な大腸菌群・大腸菌検査

透明検体の検査5.00ができます。
乳糖分解菌

Klebsiella
Escherichia
Enterobacter
Citrobacter

ダーラム管の浮上を検知

4.00濁度電圧 Ｖりを検知

乳糖分解菌は乳糖非分解菌に比べ、激しく濁り、ダーラム管の浮3.00上を検出するので、濁2.00

乳糖非分解菌培地の濁りを検知

1.00

HafniaSerratia
Salmonella
Proteus

度の波形を確認するこ

陰性検体

き ま す（ 図 1）。 使 用とで、乳糖分解菌と乳糖非分解菌の分類がでされている近赤外線光

0.00036912151821

は、生体透過性が高い

24

ことから、牛乳などの培養時間 hr

濁った検体でも測定が

図１

可 能 と な り ま す（ 図2）。

牛乳1ml 検体の検査

5.00

乳糖分解菌および乳乳糖分解菌

ダーラム管の浮上を検知

4.00

Escherichiaa

糖非分解菌の汚染がある場合、コブ状の濁り

濁度電圧 Ｖが発生し、乳糖分解菌3.00のみがダーラム管の浮上を検出しますので、培地の濁りを検知

2.00

濁度の波形を確認する

乳糖非分解菌Serratia

1.00

陰性検体

ことで、乳糖分解菌と乳糖非分解菌の分類もできます。
牛乳中の大腸菌群検

0.00
036912

培養時間 hr図238

月刊HACCP2018年月号

15182124

査は、BGLB 培地またはデソキシコレート寒天培地のいずれかが使

特別企画

EC培地

108

今、注目の食品微生物の検査を追う！

E.coli［35℃培養］

濁り判定時間107

ダーラム管浮上時間

106
105

菌数

104
103
102
101
100
0:00

3:00

6:00

9:00

12:00

15:00

18:00

21:00

検出時間
図３

用されますが、ガラス製ダーラム管では気泡を目すことができます。

視で判定することは困難なため、デソキシコレート寒天培地で検査することが多いです。一方、デ大腸菌群の検出時間

ソキシコレート寒天培地は、加温溶解での培地作成、シャーレへの牛乳検体接種、混釈作業、寒天固化と、多くの作業工程（時間）を要します。

大腸菌を 107、106……101 と希釈液を作成し、PS ダーラム管に 1 ml 接種、自動今回の PS ダーラム管を使用した自動検査シス検出装置（バイオプティ）にて 35℃培養すると、テムを使用すれば、試験管内に検体を接種し、装菌濃度に応じて直線的な反応時間となります。大置に差し込むだけでなので、大幅な作業軽減と正腸菌の世代時間を 20 分とすると、65 〜 70 分で確で迅速な検査ができます。

10 倍になりますが、その時間と反応時間には一さらに、検査結果も自動ファイリングしますので、培地の目視検査時間と結果の入力作業もなく致が見られます（図 3）。
ダーラム管の浮上は、培地の濁り判定時間より特徴
・専用のPSダーラム試験管培地を使用します。
・オイルバスによる温度制御で、±0.2℃の安定したインキュベーションが可能。
・最大60検体を測定でき、検体ごとに個別の時間設定が可能。
・微少ガスを捕集したPSダーラム管が浮上、光センサが検知し、陽性を自動判定する。
・検査結果は画面上で確認でき、陽性判定の場合は携帯電話に警報通知も可能。
写真3

ダーラム管自動検出装置「Biopti S-60」

月刊HACCP2018年月号

39テストした 8 菌は、いずれの菌も濁り判定ではも 5 時間遅れで浮上することがわかります。

13.5 時間以内に検出し、乳糖分解菌は 19 時間以テストに使用した腸内細菌
・ 乳 糖 分 解菌：、、内にダーラム管の浮上を検知します。一方、乳糖非分解菌は 24 時間以上の培養でもダーラム管の、・乳糖非分解菌：、、、浮上はありません。大腸菌群の 20 ± 2 時間判定に何ら問題なく検出されます。
当該システムを用いることで、微生物や微生物検査に関する専門的な知試験管を装置に差し込み培養を開始

識や経験がなくても、公定法に沿った大腸菌群・糞便系大腸菌の検査を、ヒューマンエラーの可能性を排除して行うことができます。
今回は開発したシステ

図440

月刊HACCP2018年月号

システムフロームは、光センサー技術と特別企画

今、注目の食品微生物の検査を追う！

検査用具に使用される材質変更を組み合わせるこ検査への応用も期待できます。本検査システムとで、大腸菌・大腸菌群の公定法検査を自動化すは、公定法検査の迅速かつ確実な自動検出装置とることができました。

して、今後、広く利用されることが期待されます。

この装置で得られた菌の増殖データを解析することで、従来、目視検査ではできなかった乳糖分解菌・非分解菌の分類もできるようになり、他の測定中
異常なし

図5

測定中
濁度検出

測定中
ダーラム管浮上

測定終了
異常なし合格表示パネルは、検査状況や結果が直感的に一目でわかるようにデザインされている。
作成日：2017/10/22 19:14:33
試験管アドレス：A-6
検体名：牛乳171021-5
検査時間：20時間0分
設定温度：35.0℃（最低温度：34.9℃、最高温度：35.1℃）
検査開始時刻：2017/10/21
23:14:33
検査終了時刻：2017/10/22
19:14:33
検査結果：不合格
濁り検出時間：2017/10/22
08:54:03
ダーラム管浮上時刻：2017/10/22
11:51:15

図6

判定結果の自動保存が可能。すべての検査結果がPDFで保存されるので、面倒な入力作業がなくせる。

月刊HACCP2018年月号

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加温方式

オイルバスヒーティング方式

培養温度範囲 室温＋5℃～50℃
温度調節精度 ±0.2℃（マイコンPID制御）
培養

培養

BGLB培地EC培地

培養センサー

RTD：測温抵抗対CA

電源

AC100Ｖ 50/60Hz

消費電力

200VA

外形寸法

約W470×D420×H276mm

重量30kg

LB培地

図7

品番

品名

LM003
200本
（糞便系大腸菌用）
BGLB培地LM004（大腸菌群用）

200本

BTB加LB培地
LM005（大腸菌群用）

200本

LST培地
LM006
（大腸菌群用）200本装置の仕様と用具

1
23648

メールアドレス
送信有無

図84257

項目
サーバ 送信
ポート番号
メールアドレス
ユーザ
パスワード
濁り発生時の警告メールを送信する

説明
サーバのホスト名を設定します。
サーバのポート番号を設定します。
送信元メールアドレスを設定します。
送信元ユーザ を設定します。
送信元パスワードを設定します。
濁り発生時に警告メールを送信するかどうか設定します。チェックを付けると警告メールを送信します。
送信先メールアドレスを設定します。
対象のメールアドレスに対して警告メールの送信有無を設定します。

警告メールは最大10個のメールアドレスに送信できる。判定だけのために夜勤勤務や休日出勤することをなくすことができる（警報通知があった時だけ）。

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品番EC培地