TN-0004

ワイエムシィテクニカルノート

親水性化合物の分離に YMC-Triart C18

親水性化合物の分離に

YMC-Triart C18〜YMC-Triart C18は水100％移動相で使用可能です〜

index
水100%移動相での保持時間安定性 ‑ 核酸塩基の分離 ‑〜水100％移動相条件での優れた保持と再現性〜〜連続分析における再現性〜● 水溶性ビタミンの分離〜水100%移動相が使用可能なカラムの分離挙動比較〜● 有機酸の分離〜水100%移動相が使用可能なカラムの分離挙動比較〜〜粒子径の違いによる分離比較 - HPLC⇔UHPLC (超高速LC) への移行 - 〜●

アプリケーション

水溶性ビタミン (食品中の食品添加物分析法準拠、9成分)
水溶性ビタミン (アスコルビン酸等、3成分)● 有機酸 (ぎ酸、酢酸、プロピオン酸)● イソロイシン・ロイシン・バリン顆粒 (第16改正日本薬局方記載条件)● グルタチオンおよび関連化合物● ニコチンおよび関連化合物● フェンホルミンおよびメトホルミン● アシクロビルシロップ・注射液 (第16改正日本薬局方記載条件)● テトラサイクリン系抗生物質のLC/MS分析● ラミブジン (米国薬局方 USP32記載条件)● ビピリジニウム系除草剤 (ジクワット、パラコート) -LC/MS● LC/MSによるハロ酢酸一斉分析●●株式会社 ワイエムシィ
http:// ww w.ymc.co.jp

水100%移動相条件下における保持時間の再現性 - 核酸塩基の分離 (1) 一般的なC18カラムでは水100%移動相条件で使用すると、充填剤表面の疎水基と水との反発により充填剤表面が水和されにくく、本来の分離挙動を示さない場合があります。一方、充填剤の表面に適度な親水性を持たせるなど、水100%移動相が使用できるように設計されたカラムでは、充填剤表面が十分に水和され再現性の良い分離が得られます。しかし、水溶液中で基材シリカゲルや修飾基が加水分解されやすいため、耐久性が劣る傾向があります。

〜充填剤表面イメージ〜

水100%移動相H 2O

H 2O
H 2OH 2O
H 2O

YMC-Triart C18は有機シリカハイブリッド基材にポリメリックな結合様式でC18リガンドを化学結合したカラムで、優れた耐久性を有しています。C18リ
ガンド密度の最適化により適度な疎水性と水素結合性を両立しているため、ファーストチョイスカラムとして様々な分析に適用できるほか、水100%移動相条件においても良好な保持と再現性が得られます。

H 2O

C18充填剤

H 2O
H 2O
H 2O

〜水100％移動相条件での優れた保持と再現性〜〜充填剤表面水和イメージ〜

YMC-Triart C18
32ポンプ

1H2O

H2O

H2O
H2O

54

停止前

O

H2tR 5 = 14

核酸塩基B1112 19E

ほとんど変化なし

H2ポンプ

OH2O
H2O

維持率98.0%

停止後

B1122 0A

051510min

充填剤表面が十分に水和され細孔が移動相で満たされている。親水性化合物の保持が大きく、ポンプ停止後の再現性も良好。

市販シリカ系
親水性化合物向けC18Brand I9

市販ハイブリッド系C18Brand I83ポンプ

3221tR 5 = 754

停止前

1H2O

H2O

H2H2O
H2O

5B1201 10M

保持の減少・大保持の減少・大ポンプ

H2OH2O
H2O

維持率
82.2%

維持率
63.5%

停止後

OtR 5 = 144

保持が小さいB1201 11I

B1201 11A

B1201 12A0〜充填剤表面水和イメージ〜

51015051015

充填剤表面が水和されにくく細孔から移動相が抜け出す。移動相と固定相の間で十分な分配ができないため保持しにく
く、再現性も不良。

Column: 5 µm, 150 X 4.6 mmI.D.
or 5 µm, 150 X 3.0 mmI.D.
Eluent: 20 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.9)
Flow rate: 1.0 mL/min for 4.6 mmI.D.
0.425 mL/min for 3.0 mmI.D.
Temperature : 37℃Detection: UV at 254 nm※ 維持率: ポンプ停止前のtR5を100%とした時の値。

緩衝液100%の移動相によって核酸塩基を分離する場合の保持時間の安定性を示しています。
Triart C18では、ポンプの停止前後で保持時間の変化はほどんどなく、安定した分離が得られます。
これに対して、Brand I8は親水性化合物である核酸塩基の保持が小さく、ポンプの停止前後で分離が大きく変化しています。また、Brand I9は水100％移動相条件でも安定した保持が得られるとされているカラムですが、大きな保持時間の変化が認められます。

水100%移動相条件下における保持時間の再現性 - 核酸塩基の分離 (2) 〜連続分析における再現性〜
123(%)
12054500 th

保持時間維持率
アデニン

10080400 th6040300 th20200 th0100 th

J121101A02681012141618100

核酸塩基20 min

200300
分析回数

400500Column: YMC-Triart C18
5 µm, 150 X 3.0 mmI.D.
Eluent: 20 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.9)
Flow rate: 0.425 mL/min
Temperature : 37℃
Detection: UV at 254 nm

1. Cytosine
2. Uracil
3. Guanine
4. Thymine
5. Adenine

1 st40Triart C18を用いて水100%移動相条件で核酸塩基の連続分析を行いました。500回繰り返しても保持時間などの分離挙動の変化は認められず、安定した分析が可能です。

水溶性ビタミンの分離〜水100％移動相が使用可能なカラムの分離挙動比較〜
2mAU80YMC-Triart C1860

53104

140

1198761213

20U120222A3002.5mAU80

Hydrosphere C18512.5

15104

140

105

2360

7.5

678

17.5min

11912 13

20U120224A30mAU

YMC-Pack ODS-AQ

0

2.55

7.5

2380
60

1012.517.5min

9, 10541156407118

12 13200

水溶性ビタミンU120224C30

1. L-Ascorbic acid 2-glucoside
2. L-Ascorbic acid
3. D-Isoascorbic acid
4. Nicotinic acid
5. Nicotinamide
6. D-(+)-Pantothenic acid calcium salt
7. Pyridoxal hydrochloride
8. Pyridoxine hydrochloride
9. Foric acid
10. Thiamine hydrochloride
11. Cyanocobalamin
12. D-Biotin
13. Riboflavin2.557.5

10

12.5

15

17.5minColumnEluent: 3 µm, 150 X 3.0 mmI.D.
: A) 20 mM KH2PO4-H3PO4 (pH 2.8) containing 5 mM CH3(CH2)5SO3NaB) 20 mM KH2PO4-H3PO4 (pH 2.8)/acetonitrile (80/20) containing 5 mM CH3(CH2)5SO3Na
0%B (0-3 min), 0-75%B (3-13 min), 75%B (13-20 min)FLow rate: 0.425 mL/min
Temperature : 40℃
Detection: 210 nm

イオンペア法による水溶性ビタミンの分離について水100%移動相が使用可能な3種類のカラムで分離挙動を比較しています。これらの水溶性ビタミンのうち比較的保持が大きい葉酸 (ピーク9) 、チアミン (ピーク10)、シアノコバラミン (ピーク11) の溶出順や保持時間が3種類のカラムで大きく異なっています。これは、3種類のカラムで充填剤の疎水性と水素結合性のバランスが異なっているためと考えられます。

有機酸の分離〜水100％移動相が使用可能なカラムの分離挙動比較〜
2, 3mAU
4015 6308910

1. Oxalic acid
2. Tartaric acid
3. Glycolic acid
4. Formic acid
5. L-Malic acid
6. Malonic acid
7. Lactic acid8. Acetic acid
9. Maleic acid
10. Citric acid
11. Succinic acid
12. Fumaric acid
13. Acrylic acid14. Propionic acid1311720

有機酸

YMC-Triart C183 µm, 150 x 3.0 mmI.D.

12414100U111212Q5244303208126, 72mAU

61581310minHydrosphere C183 µm, 150 x 3.0 mmI.D.

10 11914Eluent: 20 mM H3PO4FLow rate
: 0.425 mL/min
Temperature : 37℃Detection: 220 nm

100U111207Q42mAU

4682, 34013041256 82010

YMC-Pack ODS-AQ
3 µm, 150 x 3.0 mmI.D.

1310 9 , 117min

14100U111209Q72468min10有機酸の分離について水100%移動相が使用可能な3種類のカラムで分離挙動を比較しています。これらの有機酸のうち比較的酸性度が強いシュウ酸 (ピーク1) とマレイン酸 (ピーク9) の保持挙動は3種類のカラムで大きく異なっています。これは、Hydrosphere C18やODS-AQでは弱いイオン交換作用によってシュウ酸やマレイン酸の保持が大きくなっていると考えられます。

〜粒子径の違いによる分離比較 - HPLC⇔UHPLC (超高速LC) への移行 - 〜
YMC-Triart C185 µm, 250 x 3.0 mmI.D.

2, 3mAU35304125125 6201578910131114

N(14)=22900
N(14)22900
P=8 MPa

1050U111220B01

2.53 µm, 150 x 3.0 mmI.D.

57.51012.51517.5mAU20 min403020N(14)=18100
P=11 MPa

1001.9 µm, 100 x 3.0 mmI.D.

U111221B012mAU
6046812 min

10504030N(14)=14400
P=28 MPa

20100U111216B02

1mAU

流速 ×20.85 mL/min

234567508 min

4030N(14)=15000
P=54 MPa

20100U111221D20.5※ 分析化合物および分析条件は上記と同一

11.5

22.5

33.5

4 min

Triart C18は粒子サイズによらずピーク形状や分離選択性が同一です。このため、ダウンサイジングによる分離の高速化や、UHPLCでメソッド設定した条件の汎用HPLC条件への移行が容易です。

アプリケーション
下記のアプリケーションデータは、データ名の下に記載のURLリンクからご覧ください。
リンクに不都合がある場合は、アプリケーション検索のページから検索条件の「data No.」の欄に<>内の青字の番号を入力ください。該当データがヒットします。
アプリケーション検索のページ http://www.ymc.co.jp/columns/application/（トップページ http://www.ymc.co.jp の右側「アプリケーション検索」をクリック）〜アプリケーション〜● 水溶性ビタミン (食品中の食品添加物分析法準拠、9成分) <data No. R100315D>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/R100315D.pdf
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水溶性ビタミン (アスコルビン酸等、3成分) <data No. A121102A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/A121102A.pdf
有機酸 (ぎ酸、酢酸、プロピオン酸) <data No. Q091022D>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/Q091022D.pdf
イソロイシン・ロイシン・バリン顆粒 (第16改正日本薬局方記載条件) <data No. U120210A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/U120210A.pdf
グルタチオンおよび関連化合物 <data No. U120218A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/U120218A.pdf
ニコチンおよび関連化合物 <data No. U120409C>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/U120409C.pdf
フェンホルミンおよびメトホルミン <data No. U120420A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/U120420A.pdf
アシクロビルシロップ・注射液 (第16改正日本薬局方記載条件) <data No. R100715Q>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/R100715Q.pdf
テトラサイクリン系抗生物質のLC/MS分析 <data No. F100128B>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/F100128B.pdf
ラミブジン (米国薬局方 USP32記載条件) <data No. U110416A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/U110416A.pdf
ビピリジニウム系除草剤 (ジクワット、パラコート) -LC/MS <data No. R100323A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/R100323A.pdf
LC/MSによるハロ酢酸一斉分析 <data No. P120126A>
http://www.ymc.co.jp/data/appli/P120126A.pdf