J. Inst. Electrostat. Jpn.

静電気学会誌，35, 3 (2011)139-144

誘電泳動インピーダンス計測法による細菌誘電特性と細胞膜活性状態及び流量依存性の相関検証
圓城寺 隆 治*,1, 内 田諭*, 杤久保 文 嘉*（2010 年 9 月 14 日受付；2011 年 5 月 9 日受理）

Investigation of Relationship among Dielectric Characteristic ofMicroorganisms, Active Status of Cell Membrane and Flow Rate
Dependence Using Dielectrophoretic Impedance Measurement Method
Takaharu ENJOJI,*,1 Satoshi UCHIDA* and Fumiyoshi TOCHIKUBO*(Received September 14, 2010; Accepted May 9, 2011)

Rapid and high sensitivity methods for microorganism detection and constant monitoring system have been required
for advanced quality preservation in food and beverage industries. In the present work, the metabolic states ofheat-injured Escherichia.coli (E. coli) in a micro-cell were investigated using dielectrophoretic impedance
measurement (DEPIM) method and various biological methods. Temporal change in the conductance between
micro-gap (ΔG) was measured for various heat treatment temperatures (HTT). As a result, there is an obvious
correlation among active status of cell membrane, ΔG and HTT. These results suggest that DEPIM method should beavailable for an effective monitoring method for complex change in various biological states of microorganisms.
1.

活性を即時に把握することが品質保持の観点から重要とされはじめに平成21年に日本で発生した細菌由来の食中毒事件数は，7781)ている．しかしながら，大多数の工程は経験的知見に基づい件，患者数10,331人，死者1人であり ，食中毒は依然としてた定時管理を前提としており，異常発生時の瞬時制御に対応深刻な社会問題である．このような実情を踏まえ，食品の衛していないことから，発酵菌の活性状態を工程内で連続的に生 管 理 に 関 し て ， 危 害 分 析 及 び 重 要 管 理 点 （ Hazard

計測し，フィードバック制御できる新システムの開発が望ま

Analysis-Critical Control Point Inspection System : HACCP）方式

れている．上記の細菌計測に関する諸課題に対し，電気計測が注目されている．HACCP とは，食品製造ラインにおける法の一つである誘電泳動法3,4)は，原理的に高速性と簡易性を各工程及び各製品に対して衛生検査を要求する食品安全管理兼ね備えた有力な手法であり，誘電特性の違いによる菌種分手法である．本手法における細菌検査には，主に公定法であ離や生死菌判定に利用されている．細菌群橋絡による電極間る培養法が用いられている．培養法は安価である半面，判定のインピーダンス変化を利用した誘電泳動インピーダンス計に時間を有するため，本方式で要求される膨大な検査数に即測（Dielectrophoretic Impedance Measurement: DEPIM）法5)では，時対応することは困難である．このことから，より迅速な分菌密度計測 6,7)が可能となる．一方の活性状態については，細析法の開発導入が必須とされる2)．有力な迅速・高感度検出

菌懸濁液の誘電率変化8,9) や細菌の成長過程における誘電特法として，ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）法，アデノシン三性の変動10)から間接的に評価した事例が報告されているが，リン酸（ATP）法，酵素免疫測定法（ELISA）法などが既に細菌の生理状態と誘電泳動時における電極間インピーダンス採用されているが，これらは生死菌の判別が困難であるうえ，変化との相関については十分な知見が得られていない．

高度な専門知識が必要である．
また，食中毒菌検査以外では，これらを踏まえ著者らは，検体菌の生理活性評価を行う基醸造業や乳加工業において発酵に関わる酵母や乳酸菌の代謝礎段階として，加温処理を施した大腸菌を用いて，周波数に対する DEPIM の処理温度依存性を精査した11)．電極間コンダ

キーワード：誘電泳動，インピーダンス計測法，マイクロセ
ル，微生物，細胞膜活性* 首都大学東京 理工学研究科（192-0397 東京都八王子市
南大沢 1-1）
Tokyo Metropolitan Univ., 1-1 Minami-Osawa, Hachioji-shi,
Tokyo 192-0397, Japan1
enjoji-takaharu@ed.tmu.ac.jp

クタンスの経時変化（ΔG）は，低周波数において処理温度の影響を受けることがわかり，その解析結果から加温負荷菌の誘電特性変化は，導電率の変動が支配的であると推察した．
さらに各蛍光染色法を用いて，膜損傷および代謝活性度の処理温度依存性を解析し，DEPIM 法による ΔG との相関を検討

140(46)

静電気学会誌

第 35 巻した結果，単に細菌の生育活性状態だけでなく，菌の生死，第3号式で与えられる．

膜損傷および呼吸活性の複合的要因が ΔG 変動に反映していN  N1  N 2ることが判明した12,13)．本報では，さらに新たな DEP 条件，

 k 2 S E t 

処理温度条件及び菌染色法分析手法を導入し，ΔG の変動要因を精査した．その結果，加温処理条件及び流量条件を変動させることにより，DEPIM 計測時の菌体内状態，細胞膜活性SE  k 2    t 
1   1  exp   k3 k 1 
  

(4)

ここで，k3 は定数，τ は次式で表わされる時定数である．

状態及び生死菌の混合状態は，ΔG 変動に対して複雑な影響

τ =を及ぼしていることが明確になった．さらに蛍光分光法を用いることにより，ΔG と大腸菌の生物学的変化との相関性を(2011)(5)

1k 3 k1 ρ

細胞膜活性及び菌体内状態は，菌体内の誘電率及び導電率に強く依存することが分かっている9)．結局，細菌の生物学定量的に評価することができた．
本研究成果は，DEPIM 法を導入することによって，細菌に対する実用的な計測システムの構築が可能であることを示唆的特徴は，DEPIM 法によって得られる GT（ΔG）変化量を計測することによって間接的に評価できる．

している．
3.
2.

3.1

誘電泳動インピーダンス計測法

誘電泳動（dielectrophoresis: DEP）とは，不平等電界中に置実験装置及び実験方法
誘電泳動マイクロフィルタ電極

本実験において使用した DEP マイクロフィルタ電極（以下，かれた誘電微粒子において，粒子の対極に形成される電界強電極）セルの電極構造及び製造方法は既報 11-13)のとおりであ

度の差に応じて，双極子モーメントが作用する現象である

るが，本実験では電極材質として酸化インジウムスズ（ITO）

14-16)を採用した．電極捕集部パターンを図 1 に示す．

．媒質中に存在する細菌を DEP 力（Fdep）により電極近傍に捕捉すると，電極間において細菌は電界に沿って整列し，3.2細菌鎖（pearl chain）を形成する．pearl chain による電極間短実験菌種は Escherichia coli ATCC 11775（E. coli）を用いた．

絡の結果，電極間のインピーダンスが変化する．この電気変菌の培養手順及び洗浄方法は既報 11-13)に従った．洗浄済み E.

化量から細菌密度を計測する手法を誘電泳動インピーダンス

coli を，滅菌済み 0.15 M D-マンニトール（DM）溶液に混和計測（DEPIM）法と呼ぶ

17)

菌種及び調製方法．DEPIM では，捕捉された細菌したものを懸濁原液とした．分光光度計（U-2810, 日立ハイ群を等価的に電気回路として扱う等価回路モデルと細菌が電テック）で懸濁原液の菌濃度を計測した．吸収波長は 600 nm

極間に捕捉される過程をモデル化した菌捕捉モデルを併用すとした．懸濁原液濃度は 6.2 × 108 CFU/mL であった．

る．等価回路モデルにおいて，捕捉細菌数 N は次式で与えら3.3れる．

本実験では，膜活性能力及び損傷度合いの異なる E. coli を

N = mn = m 2

GT
GB

(1)

加温処理工程作成する手段として，既報 11-13)と同様，ウォーターバスによる熱ストレス負荷法を用いた．394 K は，オートクレーブにここで，m は pearl chain 1 本を形成する細菌数，n は pearl

よる高圧蒸気滅菌条件（20 min, 2 atom）を採用した．DEPIM

chain 総数，GB は細菌単体のコンダクタンス，GT は捕捉細菌計測直前の最終希釈として，上記加温負荷試料 1 mL を 288 K群のコンダクタンスである．

Flow

電極における細菌捕捉面積及び未捕捉面積の総和 SE は，2種類の領域からなる．すなわち，

SE = S1 + S(2)ここで，S1 は細菌捕捉可能領域，S2 は既に細菌が捕捉された領域である．また，dt の間，各領域での細菌捕捉数 Ni の増(a)(a)(a) 110 μm(b) 10 μm

加量は次式で与えられる．

dN1 = k1S1ρdt,

dN2 = k2S2ρdt(3)

ここで，k1 及び k2 は，それぞれの捕捉領域に関する係数，
ρ は初期溶液中細菌濃度である．
Fdep による細菌捕捉モデルにおいて，総捕捉細菌数 N は次(b)(b)

図 1 誘電泳動マイクロフィルタ電極捕集部概略図
Fig. 1 Schematic diagram of the interdigitated microelectrode array.
(a) ITO Electrode, (b) Gap.

誘電泳動インピーダンス計測法による細菌誘電特性と細胞膜活性状態及び流量依存性の相関検証（圓城寺隆治ら）141(47)に保温した DM 14 mL に分注した．最終懸濁液濃度は，4.1 ×
7

10 CFU/mL とした．
3.4時 ΔG 計測結果を図 2 に示す．ΔG は 278 K で最大となった．
それ以降は減少傾向を示し，高圧蒸気処理により著しい菌体損傷が生じたと推測される 394 K において ΔG の上昇は計測

誘電泳動特性計測

各加温処理試料に対する DEP 実験を行い，菌の捕集特性をされなかった．これら ΔG 変動は，既報 11-13)と同様，主に Fdep

電極間インピーダンスの変化から定量的に測定した．分析装による電極間での菌捕捉量及び捕捉速度に依存することが11-13)

置，電気回路，電極上における捕捉菌の観察方法は既報

DEPIM 計測時の顕微鏡観察により確認された．さらに本研究と同様であるが，本実験では，菌液の通流は無循環方式としでは，前報より詳細に加温処理温度を設定した結果，320 Kた．さらに流速依存性を検証するため，送液流量を15, 30及び時に一時的な ΔG 低下が出現した（図 2†部参照）．333 K で60 mL/h とした．正弦波電圧設定値の電圧幅及び駆動周波数再度増加に転じた後，処理温度上昇に従い ΔG は再び減少しを10 V pp 及び100 kHz に固定した．各 DM 希釈試料に対し，た．加温処理により細胞膜に損傷あるいは破壊が生じると，実験中は恒温スターラー（CSB-900N, AS ONE）を用いて温度膜を介した菌体内外物質の流入出が活性化されるため，菌体制御（288 K）及び攪拌を行った．ペリスタルティックポンプ

内の及びは，それぞれ菌体外の媒質のそれらに近似する．

（PSM050DA, Advantec）による送液開始後，溶液が電極捕集

既報 11-13)において，Fdep は Clausius-Mosotti 因子により，媒質部上を通過したことを確認したうえで電圧を印加した．計測及び細菌の複素誘電率に依存することを言及したが，加温負時間は最大900 s とした．
また，電極上に捕捉されている E. coli

荷処理による膜損傷は，菌に作用する Fdep 低下を惹起させるの膜状態を調査するため，LIVE/DEAD 染色剤（L13152,要因となりうる．

Invitrogen）によって染色した E. coli に対し，DEP による捕捉次に，各流量における 600 s 時の ΔG（ΔG600）変動比較を状況を蛍光顕微鏡で観察した．本試薬は，SYTO9 及び図 3 に示す．ここでは，処理温度間における ΔG 変動を比較

Propidium Iodide（PI）からなる生死菌判別用の二重核酸染色するため，各流量とも 278 K の ΔG600 を基準とした相対値剤である．膜正常菌に対しては，膜透過性のある SYTO9のみ（ΔG/G278）で示した．60 mL/h 時における ΔG/ΔG278 は，処理14合，非膜透過性の PI も浸透し，核が赤色染色されるのと同時12に，SYTO9由来の緑色発光は褪色する18)．DEP 実験条件及び10流量は DEPIM 計測と同様とした．負荷温度は309-353 K の範囲とした．観察時間は通気開始60 s 後とした．
3.5

ΔG [μS]内部に浸透し核が緑色に染色される．一方，膜損傷がある場

生物学的検証†864

加温処理による E．coli の生育活性に対する影響を調査す2るために，寒天培地法によるコロニーカウント計測を行った．

‡0

実験手順は前報 11)と同様とした．また，加温処理 E. coli に対260280液と各 LIVE/DEAD 染色剤を同量混和したのち，加温負荷処

300320340360380

図 2 ΔG における加温処理温度依存性
Fig. 2 Dependence of ΔG on heat treatment temperature.

理を行った．処理温度は，309, 320, 328, 333, 338, 343 及び 353

1.0K とした．遮光状態で 15 min 加温した後，蛍光分光光度計

0.915 ml/h

0.830 ml/h

0.760 ml/h

波長 510-540 nm におけるスペクトル領域から，また PI は蛍
光波長 620-650 nm におけるスペクトル領域から，それぞれΔG /ΔG 278（FP-6600, 日本分光）を用いて蛍光スペクトル強度を計測した．励起波長は 470 nm とした．SYTO9 の蛍光強度は，蛍光400

Heat Treatment Temp. [K]して，上記 3.4 と同様の生死菌染色法を用いて，生死菌染色及び膜損傷検証の定量的な相関検証を行った．E. coli 懸濁原

30 s
100 s
300 s
600 s
900 s

0.60.50.40.3DM 試料で計測したブランクのスペクトル領域を差分して算0.2出した．

0.1
0.0
260

4.
4.1

実験結果及び考察
DEPIM における ΔG と処理温度との相関

電圧印加開始後からの ΔG を計測し，加温処理温度に対する特性を評価した．流量 30 mL/h における印加開始からの適280

300

320340360

380400Heat Treatment Temp. [K]

図 3 ΔG /ΔG278 における流量依存性
Fig. 3 Flow rate dependence of ΔG /ΔG278 on heat treatment
temperature.

142(48)

静電気学会誌

第 35 巻第3号

320 K

309 K

(2011)
353 K

333 K

[d]

[g]

[j]

[b]

[e]

[h]

[k]

[c]

[f]

[i]

[l]

[a]
15 mL/hFlow30 mL/h

←Sliding E. coli

60 mL/h[m]Flow320 K, 30 mL/h[n]333 K, 30 mL/h[o]353 K, 30 mL/h

図 4 染色 E.coli に対する DEP 捕集蛍光画像
Fig. 4 Microscope images of heat treated and dying E. coli.
温度上昇に伴い減少した．高速流量の場合，Fdep と比較しDEPIM 計測時に ΔG 低下が確認された 320 K 処理試料て，流速の作用が細菌の挙動に対して支配的になるため，[d]-[f]では，損傷菌と正常菌が混在した状態で電極間に捕高温処理 E. coli に対する電極上での保持力が低下したと捉された．
ただし，
30 mL/h 以上の流量において，捕捉 E. coli推測される．一方，流量 15 mL/h の場合，ΔG/ΔG278 変動の一部が，液体の流れに従い電極折り返し部まで滑走し集に対する処理温度依存性は比較的低いことが分かった．低積する現象が見られた．この現象は，正常細胞膜に対して速流量では，E. coli に作用する Fdep が支配的であるため，不透過性である DM が細胞膜損傷によって菌体内へ流入流速の影響による ΔG/ΔG278 変動要因は小さいといえる．

した結果，Fdep 低下を引き起こしたことに基因すると推測

ただし，30 mL/h 時と同様，320 K 時の ΔG/ΔG278 低下現象される．また，これらの結果は，Fdep による保持力が大きは当該流量でも発現した．

く作用する常菌と，Fdep による保持作用の小さい損傷菌が4.2

染色 E. coli に対する DEP 捕集特性

混在した状態で pearl chain を形成した場合，ギャップ間に捕捉菌に対する生理活性状態を検証するため，おける総合的な菌保持力を低下させる事を示唆している．

LIVE/DEAD 染色した加温負荷 E. coli に対する DEP 捕捉結

333 K 処理試料[g]-[i]では膜損傷菌の含有率が増加した．

果を図 4 に示す．309 K 処理試料[a]-[c]では，膜損傷・破それと同時に滑走現象は大きくなる傾向を示し，電極上に壊を示す橙色または赤色蛍光 E. coli は殆ど確認されなかおける菌保持力は低下した．さらに 353 K 処理試料[j]-[l]った．前項 4.1 と同様，E. coli は DEP 実験開始後から電極では，多数の損傷菌が観察され，15 mL/h の低速流量にお近傍に捕捉され，ギャップ間に pearl chain を形成した．

いても，滑走現象が確認された[j]．320 K 以降で発生した

誘電泳動インピーダンス計測法による細菌誘電特性と細胞膜活性状態及び流量依存性の相関検証（圓城寺隆治ら）143(49)1.23001.0309 K

25309 K

250(B)

320 K
328 K

200.8343 K

200
150.6

Δ Int.

C/C27830(A)0.4320 K

15010353 K
333 K51000.2338 K0500.0270280290300310320330340350360

滑走現象は，ギャップ間の各所で局在的に発生し，流速増6507000Heat Treatment Temp. [K]
図 5 処理温度と E. coli の生育活性の関係
Fig. 5 Relationship between relative E. coli colony counts
and heat treatment temperature.

600490540590640

690

Wavelength [nm]図 6 LIVE/DEAD 染色法による各加温処理 E. coli の蛍光スペクトル解析
Fig. 6 Fluorescence spectra of membrane viability of various
heat treatment E. coli by LIVE/DEAD test.

加に従い顕著になることが観察結果から判明した[m]-[o]．

280

低温処理（278-309 K）試料と比較して，333 K 以降の高温れる（図 2 ‡部参照）．このことから，顕著な菌滑走現象は電極間への保持力低下を誘発させる一方で，電極各所（特に電極折り返し部）において菌集積状態を発生させる

ΔG900 [μS]

処理試料における ΔG 挙動の特徴として，初期段階で ΔGは上昇する一方で，最終的な ΔG は低下する現象が挙げら

30032034036038012108る．
前報において，ΔG 増加は電極間に捕捉される菌数に相関することが判明したが，捕捉菌の活性状態については不明であった．今回，染色菌を用いることにより，100 kHzという印加条件において，生死菌は混在状態で捕捉され，その割合は処理温度に相関することが明確になった．
4.3

細菌生育能力と処理温度の相関

処理温度間の生育能力を比較するため，278 K 時のコロニー生育数を基準とした相対コロニー生育数（C/C278）を
図 5 に示す．278-298 K の範囲では生育数に大きな差異は見られず生育能力は保持された．その後 320 K におけるFluorescence Emission Area [×103 ]ことにより，瞬発的な ΔG 増加を助長していると推測され

610.0○ : Live E. coli
◆ : Dead(Injured)E. coli
1.0

EX = 470 nm
0.1280300320340360

380Heat Treatment Temp. [K]C/C278 は 0.55 となり，333 K 以上の温度では完全に失活し図 7 蛍光強度と DEPIM における ΔG900 との相関生育不能となった．培養法は単純な菌の生育活性を評価しFig. 7 Relationship between ΔG900 and fluorescence intensityof LIVE/DEAD on heat treatment temperature.ているといえる．
4.4

蛍光分光法による膜損傷の定量解析

加温処理 E. coli に対する LIVE/DEAD 染色法による蛍方で，図7の結果は，膜正常菌については細胞膜を介した光強度スペクトル計測結果を図6に，各スペクトルから得物質の流入出が活性化されていたことを示唆している．

られた各蛍光強度領域面積と30 mL/h における ΔG900の関320 K 処理時における膜浸透性の増加傾向は，過去に実施係を図7に示す．
ΔG 低下が発現した320 K において，SYTO9した CTC 染色法による呼吸活性計測でも同様の結果を得蛍光（○）及び PI 蛍光（◆）は，ともに高強度を示した．ている12)．前項4.1において，生死菌の混在状態が Fdep によ

上述の培養法による生育活性実験から，生育不可となったる電極間の保持力低下を引き起こす可能性を示したが，多数の損傷菌が発生していることが分かる（図3）．その一320 K 処理における ΔG 低下現象は，これに加えて正常菌144(50)

静電気学会誌

第 35 巻第3号(2011)の呼吸活性化による Fdep 低下も複合要因として影響していい，菌株の相違が ΔG に与える影響を調査する．
更に，E. coliると推測される．333 K 処理では SYTO9， PI ともに蛍光のほか，実際の発酵工程を想定し，麦酒酵母（Saccharomyces強度が低下した．3.4で示した通り，SYTO9は膜活性によcerevisiae JCM 7255）に対する DEP 特性検証を実施していって菌体内に流入し，PI は膜損傷が発生した際に菌体内へる 19) ．各実験結果を検証することによって，将来的には取り込まれる．上記の分析結果は，当該加温処理工程の初DEPIM 計測を基礎とした，細菌の代謝活性状態をリアル期段階で膜活性能力が急激に低下したため，両染色剤が菌タイムでモニタリングできるものと期待される．

体内に十分取り込まれなかったことを意味し，333 K 処理
では多数の E. coli において菌体内物質が初期段階から保持された可能性を示唆する．その結果，320 K 時と比較し参考文献
1)

生労働省 (2010)て ΔG 低下が抑制されたと推測される．ただし，培養実験結果から，菌自体は不活されていることが分かる．一方，

2)
3)

結局 ΔG は再度減少傾向を示している．
以上より，DEPIM 計測における複雑な ΔG 変動は，単に細菌の生死状態を示すものではなく，計測時の膜浸透性作用を反映していると考えられる．さらに，電極上での流速を変動させることにより，培養法と同等の細菌の活性・不活（生死）状態をリアルタイムで解析することができると考えられる．

箱田優, 脇坂嘉一, 三井信一, 北島信義：静電気学会誌，
29 (2005) 8

初期の段階で急激な膜活性低下が発生した一方で，膜損傷を惹起された E. coli も多数発生したことを示唆しており，

L. Vanne, M. Karwoski, S. Karppinen and A.-M. Sjobeg :Food Control, 7 (1996) 263

353 K 処理では，333 K 処理時と比較して，僅かに SYTO9，PI ともに蛍光強度は上昇した．本結果は，同様に加温処理

厚生労働省食中毒統計, 平成 20 年食中毒発生状況，厚4)

鈴木雅登, 安川智之, 珠玖仁, 末永智一：分析化学，54(2005) 11895) J. Suehiro, R. Yatsunami, R. Hamada and M. Hara : J. Phys.
D: Appl. Phys., 32 (1999) 28146)

J. Suehiro, R. Hamada, D. Noutomi, M. Shutou and M.
Hara : J. Electrostat., 57 (2003) 157

7)

D. W. E. Allsopp, K. R. Milner, A. P. Brown and W. B.
Betts : J. Phys. D: Appl. Phys., 32 (1999) 1066

8) 米澤岳志：生物工学, 78 (2000) 152
9) K. Asami and T. Yonezawa : Biochim. Biophys. Acta, 1245

5.

まとめ

筆者らは前報において，DEPIM 法を応用した細菌の代謝活性評価システム構築を目的として，加温処理 E. coliに対する DEPIM 計測を行い，周波数特性及び処理温度依存性を調査した．その結果，処理温度の増加に伴い DEPIMにおける ΔG は低下する傾向を示した．これは，ΔG がE .coli の生育活性状態と相関することを示すものである．
本報では，DEPIM における ΔG 変動要因を更に精査するため，新たに加温処理条件，DEPIM 計測条件，流量条件及び各種生物学的実験条件を加え，加温負荷が E. coli に与える影響を調査した．その結果，320 K 処理試料において，一時的な ΔG 低下を見出した．ただし，この現象は高速流量では見られなかった．このことは，ΔG 変動が Fdep 及び流速要因の複合的な影響を受けることを意味している．
以上より，E．coli の生死のみならず，計測時における菌体内状態及び細胞膜を介した物質輸送活性等の複合的変化が DEPIM 計測結果に反映されている事が明確になった．今後，菌株の異なる E. coli を用いて同様の実験を行(1995) 9910) K. Asami, T. Hanai and N. Koizumi : J. Membrane Biol.,
28 (1976) 169
11) 円城寺隆治, 尼子恵里, 内田 諭, 杤久保文嘉：静電気学会誌, 31 (2007) 812) 尼子恵里, 圓城寺隆治, 内田 諭, 杤久保文嘉：電会誌
E, 128 (2008) 499
13) 圓城寺隆治, 内田 諭, 杤久保文嘉：平成 21 年電気学会全国大会講演論文集, 3 (2009) 188
14) H. A. Pohl: Dielectrophoresis, Cambridge Univ. Press, NewYork (1978)15) 静電気学会：静電気ハンドブック, オーム社 (1998)16) H. A. Pohl: J. Appl. Phys., 22 (1951) 869
17) 末廣純也：電学誌, 121 (2001) 547
18) F. Joux, P. Lebaron: Microbes and Infection, 2 (2000)152319) 圓城寺隆治, 内田 諭, 杤久保文嘉：第 22 回バイオエ
ンジニアリング講演会講演集, p.286 (2010)