Journal of Fisheries Technology，5（1），21

水産技術，5（1），21

26，2012

26，2012

原著論文

アサリ受精卵ならびに浮遊幼生の成長と生残に与えるグリシンの影響について
兼松正衛 ・村上恵祐 ・内田基晴 ・三好達夫
＊1

＊2

＊3

＊3

Effect of Glycine on the Growth and Survival of Fertilized Eggs and Planktonic
Larvae of the Short-neck Clam Ruditapes philippinarum in Rearing Tanks
Masaei KANEMATSU，Keisuke MURAKAMI，Motoharu UCHIDA and Tatsuo MIYOSHI
The effect of glycine on the growth and survival of fertilized eggs and planktonic larvae of the short-neckclam Ruditapes philippinarum was examined in rearing tanks. Tolerance of the larvae to glycine increased
with the development stage of the clam. The conditions of glycine treatment without any negative effect onmetamorphosis development and feeding activity were 10 min. at 1,000 ppm glycine for the egg fertilizing
stage, 30 min. at 10,000 ppm for the D-shaped and ambo stage, and 60 min. at 10,000 ppm for the full-grownstage. The survival rate of the clam increased when glycine was supplemented within the day when someproblem was observed with the larvae in feeding activity, and a one-day delay of the treatment resulted in lesseffect on the survival. The average survival rate of the clam recorded in mass-scale rearing of spat during 2007–2008 with and without glycine treatment was 37.1%（n = 12）and 14.0%（n = 15）, respectively, and thedifference was statistically signiﬁcant（p ＜ 0.05）. The glycine treatment was demonstrated to be effective forspat rearing of short-neck clam.
2011 年 10 月 3 日受付，2012 年 3 月 22 日受理
我が国において重要な水産資源であるアサリ

大きな減耗が発生するため，安定的な大量生産技術はい

Ruditapes philippinarum の漁獲量は，1970 年代までは比まだに確立しておらず，早期の飼育技術の安定化が望ま

較的高水準であったが，1984 年以降に激減した。これている。アサリを含めた二枚貝類の浮遊幼生期飼育での減少に伴って移植放流に用いる天然種苗の供給量も著は，減耗の要因としてビブリオ病等の細菌症 ，原生動減したため，近年は人工種苗生産により稚貝を生産して物の増殖等が指摘されているが，これらを抑制する抗生利用することにより，資源の回復や生産量の増加を図る物質などの薬剤は食品の安心・安全，薬剤耐性菌出現の方策が求められている。

危惧等の観点から使用の難しい状況にある。

1）

2）

一方，アサリの人工種苗生産に関する研究は，主要なそこで本研究では，イセエビフィロソーマ幼生期にお産地であった東京湾，瀬戸内海を中心に多くの道府県でける飼育環境中の細菌の増殖を抑制する効果があり ，取り組まれてきたが，浮遊幼生期の各ステージで急激なフィロソーマ幼生

遊泳行動の不活発化および摂餌量の低下によりたびたび

水中から上皮組織より体内に摂取することが可能で，さ＊13）およびヨーロッパイガイ

4）

では環境

5）

独立行政法人水産総合研究センター瀬戸内海区水産研究所（海産無脊椎動物研究センター）〒 722-0061

広島県尾道市百島町 1760

Research Center for Marine Invertebrates, National Research Institute of Fisheries and Environment of Inland Sea, FRA, 1760
Momoshima, Onomichi, Hiroshima 722-0061, Japan
kanematu@fra.affrc.go.jp＊2

独立行政法人水産総合研究センター増養殖研究所＊3

独立行政法人水産総合研究センター瀬戸内海区水産研究所― 21 ―

らに食品添加物としても広く利用されているアミノ酸の収容した。

について，アサリ受精卵ならびに浮遊

試験区ごとに設定のグリシン濃度と時間で浸漬処理を幼生の成長と生残に与える影響を検討したので報告す

行った後，受精卵約 300 粒あるいは幼生約 2,000 個体をる 。

取り上げて 100mℓガラスビーカーに移し，0.2 μm の一種グリシン

6）＊1

中空糸ろ過膜で精密ろ過した海水（以下，精密ろ過海水）材料および方法

100 mℓで止水とし，パスツールピペットを通した通気供試幼生

本研究では，アサリ親貝の飼育水温を 15℃

UV 海水での洗浄処理後，各ステージの最長処理時間（48から 28℃へ 30 分で上昇させた後 15℃へ急冷する操作を〜 72 時間）まで同様の飼育管理を行った。餌料にはキー2 回行う処理に加え、雄の軟体部磨砕物を添加すること

トセロス・ネオグラシーレを用い，D 型では 10 万細胞によるふ化および飼育管理を行った。対照区については，

により，放卵放精を刺激して受精卵を得た。受精卵より／ mℓ，アンボ期およびフルグロウン期では 20 万細胞

ふ化した幼生に市販の濃縮冷蔵保存キートセロス・ネオ／ mℓとなるよう収容時に 1 回のみ給餌した。

グラシーレ（以下，キートセロス・ネオグラシーレ）を

受精卵は D 型に変態した浸漬処理 72 時間後，各ステー

給餌して飼育し，各ステージの試験幼生を確保した。

ジ幼生は同 48 時間後にルゴール液で固定して光顕観察

また，幼生を田中（1982） に基づいて以下の 3 ステー
7）を行った。外部形態的に歪な殻型あるいは軟体部が殻のジに分類した。すなわち，D 型期：幼殻が左右相称で殻内部に収まりきらない形成不全の殻を有する個体を異常

頂がへこんでいる，アンボ期：殻頂が膨らみ始める，フとし、殻の正常な幼生の割合（正常発生率）を求め、摂ルグロウン期：種固有の生活に移行できるまでに体制の餌個体の割合（摂餌個体率：胃内容物が餌料と同様に茶整った幼生，とした。

色く染色して観察される個体の割合）を計数して試験結果を比較した。

浸漬処理方法グリシンは和光純薬工業（株）製の試試験結果は，対照区に対する正常発生率および摂餌個

薬特級（ロット番号 077-00735）を用いた。受精卵ある

体率についてχ 検定あるいは Fisher の正確確率検定

いは飼育幼生の全数をテトロン製ネット（目合い 24 〜による統計処理を行い，浸漬処理の影響を比較した。

2

8）96 μm）で水槽より回収し，紫外線殺菌処理海水（以下，UV 海水）で 3 分程度の洗浄を行い，設定濃度のグリシ飼育試験 1：連続浸漬試験

ン溶液を入れた 1ℓ（耐性試験）〜 10ℓ（飼育試験 2）

試 験 に は， 千 葉 県 木 更 津 市 産 の 親 貝（ 平 均 殻 長

容量の水槽に収容して強通気しながら水温 20 〜 23℃で35.1mm）より 2007 年 7 月 3 日に採卵して得られた D 型

設定時間の浸漬を行った。浸漬後は再度 UV 海水で 1 〜期幼生を用いた。500 ℓ黒色ポリエチレン水槽を用いて，

2 分間の洗浄を行い，水を切った後に新しい飼育水槽へ

試験区にはグリシンを 10 および 20ppm に設定した各試移動した。

験区とグリシンを添加しない対照区の計 3 区を設け，日
齢 1 の D 型期幼生（殻長 93 〜 106 μm）を 70 万個体

耐性試験

千葉県富津市産の親貝（平均殻長 29.5mm）ずつ収容した。飼育用水には精密ろ過海水を用い，止水，より 2008 年 4 月 25 日に採卵した受精卵（1 〜 2 細胞期）

エアーストーン 1 個による通気を行い，飼育水温は 22.9と，3 日後の D 型期（殻長 105 〜 110 μm），6 日後のア

〜 24.2℃となるようチタン製電気ヒーターを介してサーンボ期（殻長 136 〜 145 μm），16 日後のフルグロウン

モスタットで加温調節した。グリシン添加区には 2 日目

期（殻長 168 〜 201 μm）の各幼生を供試した。試験中に設定濃度となるよう添加し，餌料にはキートセロス・のふ化および飼育管理は，全て 20℃に設定した恒温室

ネオグラシーレを約 2 万細胞／ mℓとなるよう，1 回／

内で実施した。

日給餌した。各試験区とも通気により十分に混合されて

試 験 区 と し て， 浸 漬 濃 度 を 100，1,000 お よ び

いる表層中央部より毎日 100 mℓの飼育水を採集し，そ10,000ppm の 3 段階，浸漬時間を 10，30，60 分およびの中に含まれる生残個体を計数して比容法により生残率

72 時間（受精卵）あるいは 48 時間（幼生）の 4 段階で，を推定した。同時に採取した幼生を光顕観察し，発育ス

各濃度と時間を組み合わせた 12 試験区およびグリシン

テージと摂餌個体率を求めた。

処理しない対照区（UV 海水洗浄のみ）の合計 13 区を設定した。浸漬容器には 1ℓガラスビーカーを用い，受飼育試験 2：浸漬処理のタイミング

精卵では 10 万粒（収容密度 100 粒／ mℓ），D 型期では

大分県宇佐市産親貝（平均殻長 37.3mm）より 2007

2 万個体（同 20 個体／ mℓ），アンボ期およびフルグロ

年 10 月 15 日に採卵し，同 18 日に摂餌個体率の低下（前ウン期では 1 万個体（同 10 個体／ mℓ）を，UV 海水

日の 92％から 18％に低下）が観察された D 型期の幼生で洗浄後に試験濃度に調整した 1ℓのグリシン溶液中に（日齢 3，殻長 99 〜 112 μm）2,070 万個体を供試した。

＊1

兼松・村上，平成 21 年度日本水産学会春季大会講演要旨集，2009― 22 ―

幼生群を 2 群に分けて，即時に（日齢 3 浸漬区）および

ア ン ボ 期 で は，10,000ppm で 60 分 以 上，100 お よ び

一日経過後（日齢 4 浸漬区）にグリシン濃度 1,000ppm

1,000ppm では 48 時間後に低下した（p ＜ 0.05）。フルグ

で 10 分の浸漬処理を行い，5kℓ容量 FRP 水槽に各々収

ロウン期では，全ての浸漬処理区で正常発生率の低下は容した。その後は両試験区とも日齢 12，18 および 24 の認められなかった（図 1）。

3 回，同設定での浸漬処理を水槽替えと合わせて行った。

摂 餌 個 体 率 で は，1,000ppm で 48 時 間，100 お よ び

飼育用水には 10 μm フィルターろ過した UV 海水を

10,000ppm で 60 分以上の浸漬により低下（p ＜ 0.05）が使用し，止水，直径 13mm 塩ビ管に 1mm の穴を 1cm 間認められ，48 時間処理ではほとんど摂餌がみられなかっ隔で開けた 3m の通気管（通称エアーブロック）を用いた。フルグロウン期では，各濃度とも 60 分までの浸漬て通気を行い，飼育水温は 21.5 〜 22.5℃となるようチ区で摂餌の低下はみられなかったが，48 時間後には急タン製熱交換器を介した温水ボイラーで加温調節した。

激に低下した（p ＜ 0.05）。しかし，アンボ期では，対餌料は，キートセロス・ネオグラシーレを約 1 〜 2 万

照区で 48 時間後にほとんどの個体が摂餌していなかっ細胞／ mℓとなるよう 1 回／日給餌した。飼育水槽のたが，各濃度区では 30 〜 60 分にかけて摂餌する個体が上面を厚さ 0.2mm の農業用黒色ビニールシートで覆い，増え，再び 48 時間後には激減する結果となった（図 2）。

遮光および飼育水の飛沫防止を図った。
幼生の成長（殻長），遊泳行動，摂餌量および生残数

飼育試験 1：連続浸漬試験

グリシン添加による生残への経過を観察し，収容時の D 型期幼生数から着底完了（11の影響は，対照区では日齢 9 までの生残率がほぼ 100％

月 17 日，日齢 33）までの生残率および平均殻長を t 検定であったの対し，20ppm 添加区では日齢 3，10ppm 添加8）により比較した。

区では日齢 6 から減耗がみられ，日齢 8 には全て死亡した（図 3）。各区とも試験開始 2 日後の日齢 3 より摂餌

結

果

耐性試験

を開始（最初の摂餌個体率 75.0 〜 90.9％）したが，グ
リシン添加区では開始 3 日後で摂餌する個体が著しく減
各ステージのグリシン耐性を正常発生率で 比 較 す る と， 受 精 卵 で は，1,000ppm、30 分 以 上 の少した（図 4）。一方，対照区では，試験期間中の摂餌
個体率 63.6 〜 90.9％と高い値を示していた（図 4）。

浸 漬 区 に お い て 有 意（p ＜ 0.05） な 低 下 が 認 め ら れ，また，成長については，対照区では順調な成長がみ

10,000ppm の全ての区で正常な発生が認められない結果

られて日齢 5 でアンボ期幼生（殻長 140 μm 以上）のとなった。一方，100ppm では 72 時間後にも 87.1％と対割合が 68％となったのに対し，グリシン添加区では照区と変わらない高い値を示していた。D 型期では，各両区ともほとんど殻長の成長がみられず（殻長 100 〜

濃度区とも浸漬 48 時間後に急激に低下し（p ＜ 0.05），

106 μm），D 型期からアンボ期に移行する幼生は全く

���
b

40
20
0
���

���

���

����

100ppm

1,000ppm

10,000ppm

����

100
��������

b

60

���

60
b

20

b

0
���
���

���

���

����

100ppm

1,000ppm

10,000ppm

b

80

b

60
40

c

20
0

100

80

a

b

���
���

a

40

������

100��������

80a��������

��������

100

���
100ppm���
1,000ppm

����10,000ppm

���������

80
60
40
20
0
���
���

���

���

100ppm

1,000ppm

����10,000ppm

図 1. アサリ受精卵および浮遊幼生の正常発生率に与えるグリシン濃度と浸漬時間の影響（図中のアルファベットは，無処理（対照区）に対して有意差（p ＜ 0.05）が検出された試験区を示す。）― 23 ―

b

80

80

60
40

c

20

c

0
���
���

���

���

����

100ppm

1,000ppm

10,000ppm

60������
���2�

40

20

������

100��������

a������

��������

100

0

80

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

��

60

図 3. グリシン添加飼育時の生残率の変化
対照区
10ppm 添加区
20ppm 添加区

40
20
0
���
���

100

��������

100

����

���
100ppm�������

1,000ppm

10,000ppm

���������
a

80

b

60

b

40
20

c

0
���
���

���

���

100ppm

1,000ppm

����10,000ppm

図 2. アサリ浮遊幼生の摂餌に与えるグリシンの濃度および浸漬時間の影響（図中のアルファベットは無処理（対照区）に対して有意差（p ＜ 0.05）が検出された試験区を示す。）

図 4. グリシン添加飼育時の摂餌個体率の推移
対照区
10ppm 添加区
20ppm 添加区

出現していなかった。
飼育試験 2：浸漬処理のタイミング

摂餌個体率が 18％に低下した供試群は，日齢 3 浸漬区では速やかに翌日

考察の摂餌個体率 80％，日齢 5 に同 96％と回復して順調な正常発生率ならびに摂餌個体率からみたアサリ受精卵成長がみられたのに対し，日齢 4 浸漬区では翌日に同および浮遊幼生のグリシン耐性は受精卵で最も低く，発55％，日齢 6 に同 80％と回復が約 2 日遅れ，日齢 11 ま育が進むにしたがって高まることが示された。すなわ

で有意に成長の停滞が観察された（t 検定，p ＜ 0.05）。

ち，正常発生率と摂餌個体率に悪影響を与えない濃度としかしながら日齢 4 浸漬区ではその後に急成長がみら

浸漬時間は，受精卵では 100ppm 濃度で 72 時間あるいれ，両試験区とも日齢 14 にはフルグロウン期幼生の割は 1,000ppm 濃度で 10 分以内，D 型期およびアンボ期幼合が 74 〜 79％に達し，以降はほぼ同様の成長がみられ

生では 10,000ppm 濃度で 30 分以内，フルグロウン期幼た。

生では 10,000ppm 濃度で 60 分以内であった。

日齢 3 浸漬区では緩やかな減耗で推移し，着底完了し今回の耐性試験に供試したアンボ期幼生では，対照区た日齢 33 における生残率は 50.5％であったが，日齢 4で 48 時間後の摂餌個体率が著しく低率であったことか

浸漬区では飼育初期の D 型期からアンボ期の日齢 12（生ら，供試幼生に問題があったか，試験時間中に何らかの

残率 51％）までに大きな減耗がみられ，日齢 33 におけ要因で摂餌低下を招いたものと考えられる。一方，30

る生残率は 31.6％であった（図 5）。

〜 60 分の浸漬処理区では逆に摂餌個体率が大幅に向上― 24 ―

300

100
90
����11������������
�����p<0.05�

80
70
60

200

50
40
30

150
��3����3����1��2��������
��4����4����1��2��������

100������

������m�

250

20
10
0

1

3

5

7

9

11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35
��

図 5. アサリ浮遊幼生に対するグリシン浸漬処理の効果
日齢 3 浸漬区の成長
日齢 3 浸漬区の生残

日齢 4 浸漬区の成長
日齢 4 浸漬区の生残していたことから，グリシンが摂餌行動を回復させるこ験されているが，本試験では速やかにグリシン浸漬処理とが出来たものと推測される。

を実施することにより比較的高い生残率（50.5％）で稚D 型幼生をグリシンに連続浸漬した場合には，耐性試貝を生産することが可能であった（図 5）。

験より低い 10 〜 20ppm 濃度に設定したにもかかわらず以上のことから，グリシンは短時間の浸漬処理で利用

D 型期幼生の摂餌および成長に悪影響を及ぼし，全く発することにより，アサリ浮遊幼生の発育を正常に維持し，育しないまま添加後 6 日目の日齢 8 で全滅した。このこ

着底までの生残率を安定的に向上する効果のあることがとから，グリシンは 10 〜 20ppm の低濃度でも，常在し明らかになった。これらの試験結果は，グリシン浸漬処た環境では飼育に適用出来ないことが明らかとなった。

理の開始時期や濃度を決める際に有用なデータになると飼育水へのグリシン添加により，アサリ幼生の摂餌が低思われる。

下し，成長がみられなくなった理由については，飼育水

グリシンは自然界に多く存在しているアミノ酸の一種

中における細菌の生育による水質の劣化が考えられる

で，抗菌性を有することから様々な静菌剤や食品添加物

が，グリシン添加後 1 〜 2 日以内に摂餌がみられなくなっとして広く産業的に利用されている 。ヨーロッパイガていることから，細菌が関与しない機序による可能性もイでは，上皮組織から溶存態アミノ酸のグリシン，チロ

否定できない。

シンやタウリンを体内に吸収すること ，アサリでは，

6）5）イセエビのふ化から稚エビまでの浮遊幼生期飼育で海水中に貯蔵糖系の 3 糖以下の低分子の糖質を適当な濃は，定期的にグリシンの浸漬処理を行うことで，抗生度で添加することで，アサリの成長が促進されることを物質（アンピシリン）と同等の高い生残率と成長を得見出しており，この理由として二枚貝類が低分子有機物

ることができる一方，フィロソーマが脱皮する時刻にはを直接栄養源として吸収する能力によるものと推察してグリシンの脱皮への悪影響を避けるため，飼育水中にグいる 。これらの知見から，アサリ浮遊幼生は，溶存態

リシンが残存しないように流水飼育を行う方法が有効とのグリシンを浸漬処理中に体内へ吸収し栄養源として利報告されている 。アサリ浮遊幼生においても，グリシ用することで，衰弱した活性を回復した可能性が考えら

ンの連続浸漬では成長と生残に悪影響がみられたことか

れる。

3）

9）

ら，使用には同様の注意が必要である。また，グリシン

一方，二枚貝類を含む水生無脊椎動物では，開放血管10ppm 以下の低濃度におけるアサリ幼生への影響につい系であるため高浸透圧環境下では浸透圧調節物質（オスては，今後の検討が必要である。

モライト）を蓄積して細胞内浸透圧を上昇させ，細胞容浸漬処理のタイミングについては，摂餌個体率の低下

積を保つよう進化しており，このようなメカニズムは「細が観察された場合は，一日でも早くグリシンの浸漬処理

胞内等浸透調節」と呼ばれ，容易に生合成の可能な非必を行うことが重要であると考えられた。日齢 3 という D

須アミノ酸であるグリシンやアラニンは，多くの無脊椎型初期のステージで摂餌個体率の低下が観察された場合動物種で最も有効なオスモライトとされているは，通常であればその後の成長・生残が悪く，飼育継続

リの種苗生産過程では，飼育環境下で起こり得る浸透スの困難であることが伯方島庁舎における飼育事例から経トレス等に対して，グリシンが，これらを軽減する何ら― 25 ―

。アサ

10）

謝

70

�����������

60

辞

飼育実験を行うにあたりご協力いただいた瀬戸内海区
水産研究所増養殖部資源増殖グループ長・島50

はじめ伯方島庁舎職員の皆さまに感謝する。また研究推

�

40

康洋氏を

進にあたりアサリ資源全国協議会を構成する道県及び（独）水産総合研究センター等の関係各位に厚くお礼申30し上げる。本研究は，（独）水産総合研究センターの一20

般交付金小課題「アサリの資源培養技術の開発」（課題番号 1BB108，2006 〜 2010 年）で行われた。

10
0

���
n=15

文

�������
n=12

図 6. アサリ浮遊幼生期飼育におけるグリシン浸漬処理の効果（＊：マン・ホイットニーの U 検定，p ＜ 0.05）
バーは標準偏差を示す

献1） 松川康夫，張成年，片山知史，神尾光一郎（2008）我が国のアサリ漁獲量激減の要因について．日本水産学会誌，74（2），137-143．
2） 鳥羽光晴（2001）アサリ幼生のビブリオ属細菌による大量死亡と紫外線照射海水による簡易防除．栽培技研，28（2），かの効果を発揮した可能性も考えられる。今後は，その作用機序も含めて，より高い種苗生産効率を得るための81-91．
3） 村上恵祐（2011）イセエビ幼生の成長特性と飼育技術の向グリシン浸漬方法について試験する予定である。

上に関する研究．東京海洋大学，博士学位論文，1-270.
4） Söylemez, S. C., K. MURAKAMI, C. A. Strüssmann, M.

参考：技術データ「事業ベースでのグリシン使用結果」

YOKOTA, and S. WATANABE（2010）Uptake of dissolved free2007 〜 2008 年に瀬戸内海区水産研究所・伯方島栽培

amino acids by spiny lobster Panulirus japonicas phyllosoma

技術開発センター（現・伯方島庁舎）で実施した種苗生産試験全 27 事例について，グリシン浸漬処理を行った

larvae. Fish Sci, 76, 437-444．
5） Jǿrgensen, C. B.（1983）Patterns of Uptake of dissolved amino

12 事例（グリシン使用区）と行わなかった 15 事例（対acids in Mussels（Mytilus edulis）. Marine Biology, 73, 177-182.

照区）の 2 群に区分し，着底までの生残率についてマン・

6） 宮尾茂雄（2000）第 2 編第 5 章第 7 節．食品および天然成による統計処理を行い，飼育分中の抗菌性物質による微生物制御．7-3 グリシン．有害

ホイットニーの U 検定

8）

成績を比較した。

微生物管理技術，第Ⅰ巻（芝崎勲監修），フジ・テクノシ

飼育方法は全て止水とし，対照区では，定期的に UV
海水で 2 〜 3 分洗浄して新しい水槽へ移動した。グリシ

ステム，東京，802-811．
7） 田中彌太郎（1982）二枚貝幼生の同定−⑯．海洋と生物，ン使用区では，原則として飼育幼生の遊泳行動の不活発18，23-26．

化および摂餌量の低下がみられた際即日に浸漬処理を実

8） 石居進（1985）生物統計学入門．培風館，東京，290 pp.

施し，1,000ppm 濃度で 10 〜 30 分の処理を行った。

9） U CHIDA, M., M.K ANEMATSU and T.M IYOSHI（2010）Growth

その結果，全く着底稚貝が得られなかった生残率 0％

promotion of the juvenile clam, Ruditapes philippinarum, onの試験事例の数は，対照区で 8 事例（53.3％）であっ

sugars supplemented to the rearing water. Aquaculture, 302,

た の に 対 し， グ リ シ ン 使 用 区 で は 1 事 例（8.3 ％） で243-247．

あった。対照区の着底完了までの平均生残率 14.0％（010）阿部宏喜（2008）水生動物における遊離 D- アミノ酸の存在，〜 55.0％）であったのに対し，グリシン使用区では同

生合成および生理的意義．生化学，80（4），308-315．

37.1％（0 〜 76.6％）となり，対照区と比べて約 3 倍の生残率向上効果が確認された（p ＜ 0.05，図 6）。

― 26 ―