Journal of Fisheries Technology，3（1），21–26 ，2010

水産技術，3（1），21–26 ，2010

原著論文

ブリ類交雑家系におけるハダムシ感染試験方法の検討
および家系間のハダムシ感受性比較
長倉義智＊ 1・良永知義＊ 2・坂本崇＊ 3・服部圭太＊ 4・岡本信明＊ 3

Susceptibility of Four Families Derived from Two Seriola Species to the
Monogenean Parasite (Benedenia seriolae) Using a New Challenge Method
Yoshitomo NAGAKURA，Tomoyoshi YOSHINAGA，Takashi SAKAMOTO，
Keita HATTORI and Nobuaki OKAMOTO
Four families of two Seriola species were experimentally challenged with oncomiracidia of Benedenia
seriolae. One family was produced by crossing wild yellowtails (S. quingueradaiata), two families werecrosses between yellowtails of the 4th or 5th generation passaged under laboratory conditions, and one
hybrid family was a cross between a yellowtail and goldstriped amberjack (S. lalandi). Four hundred
juveniles, 100 per each of the four groups and ranging 108–111 mm in mean total length, were exposed toabout 40,000 oncomiracidia of B. seriolae within 30 min after hatching in a 1000l tank in darkness for 4hours. On day 10 post-challenge, the number and size of parasites were estimated on each fish. Infection
intensities significantly differed in any combination of families. A significant difference was also detectedin worm body length in a combination of two families. The results suggest that families of fish resistant toB. seriolae can be produced through breeding. The advantages of the method employed in this study forevaluating fish susceptibility against B. seriolae are also discussed.
2009 年 12 月 24 日受付，2010 年 7 月 13 日受理
ブリ Seriola quinqueradiata は，北海道から台湾に至る上施設での小割式の養殖が広く行われ始めた 1960 年代

日本列島沿岸および朝鮮半島東部に分布する重要な水産に盛んに行われ，その駆除法についても多くの報告があ資源である。また，ブリ類の養殖生産量はわが国の海面

る 2-9）。

養殖魚種の中で最も多く，平成 18 年の生産量は約 16 万

現在は，淡水浴，過酸化水素製剤による薬浴，プラジトンで，総海面養殖魚生産量の 60％を占めている 1）。

カンテルの経口投与による治療が行われているが，そのブリ類の養殖場で最も一般的にみられる外部寄生虫

中でも，淡水浴と薬浴が最も一般的である。しかし，淡Benedenia seriolae は，ハダムシと称されている。本虫の水浴，薬浴は頻繁に繰り返す必要があることから，要す寄生が原因となって，体表に糜爛や潰瘍が形成され，寄る労力，時間は多大となり，養殖業者にとって大きな負生を受けた宿主は多くの場合，摂餌量が低下し，重症の担となっている。一方，長倉ら 10） は，ブリ属のなかで場合は死にいたることもある。本虫に関する研究は，海も魚種により，また同一種内でも個体により本虫に対す*1 独立行政法人水産総合研究センター〒 027-0097

宮古栽培漁業センター

岩手県宮古市崎山 4-9-1

Miyako Station, National Center for Stock Enhancement, FRA 4-9-1 Sakiyama, Miyako，Iwate，027-0097 Japanynaga@fra.affrc.go.jp*2 東京大学大学院農学生命科学研究科*3 東京海洋大学海洋科学部*4 独立行政法人水産総合研究センター五島栽培漁業センター— 21 —

る感受性が違うことを示した。この結果は，本虫に抵抗

代 3 歳魚 263 尾（寄生数 96 ± 37 個体（平均値±標準偏性のあるブリ家系を交雑や選抜によって構築できる可能差））のうち，寄生数が少ない方から 6 番目（寄生数 33性を示すもので，新たな本虫の防除技術として期待でき個体）の個体である。ブリ継代系 A，B の親魚はすべてる。そこで本研究では，この可能性をさらに探るため，別個体で，ブリ継代系 A とブリヒラ継代系の雄親は同ブリ家系およびブリとヒラマサの交雑家系を作出し，そ一個体である（表 1）。

れらの本虫に対する感受性を感染試験によって調べたの大きさによる選別を数回行って，大きさを揃えて（いずれの家系も平均全長約 110 mm）（表 2），感染試験にで報告する。

供した。また，家系を識別できるよう，攻撃 4 日前にブ材料と方法

リ継代系 A は右腹鰭，ブリ継代系 B は左腹鰭，ブリヒ
ラ継代系は尾鰭下部，ブリ天然系は尾鰭上部をそれぞれ供試魚 2006 年に独立行政法人水産総合研究センターカットした。

五島栽培漁業センター（以下，五島センター）でブリ３家系とブリとヒラマサの１交雑家系を人工授精により作供試ハダムシ

攻撃試験へのハダムシ供試までのタイム出した。すなわち，ブリについては，ブリ天然魚（雌１尾，スケジュールを図１に示した。攻撃開始 14 日前に，五雄数尾）から作出したブリを同家系内で 4，5 回継代し島センターの海上小割生け簀で養成していたハダムシがた 3 歳魚（東京大学附属水産実験所より譲渡，以下，ブ寄生しているブリ 4 尾（全長 40 cm サイズ）を 500 l 黒リ継代系）同士を交配させてブリ 2 家系（以下、ブリ継色ポリエチレン水槽に収容し，砂濾過海水を掛け流し，代系 A，B）を作出した。また，天然モジャコから海上配合飼料を給餌して飼育した。この水槽内に，ブリ収容

小割生け簀で養成したブリ 3 歳魚同士を交配させて 1 家

日に垂下したモジ網（20 cm × 20 cm，目合 3.0 mm，以系（以下，ブリ天然系）を作出した。ブリとヒラマサの下，モジ網）を垂下 3 日後（攻撃開始 11 日前）に検鏡し，交雑家系（以下，ブリヒラ継代系）は，天然由来のブリハダムシの卵が付着していることを確認した。さらに，（雌）とヒラマサ（雄）より得た雑種第 2 代 3 歳魚（雌）

水槽内で別種の Neobenedenia girellae の感染環ができてとブリ継代系（雄）を交配させて得た。なお，ブリヒラいないことを確かめるため，Kinami et al．11）に基づいて，継代系の雌親は海上小割生け簀での個体毎の Benedenia

攻撃開始 4 日前に水槽内のブリ 1 尾を淡水浴して得られseriolae（以下，ハダムシ）寄生数調査を行い，雑種第 2た虫体 108 個体を分類し，N．girellae が寄生していないことを確認した。これらにより，この水槽内に垂下した⴫㩷 䋮

モジ網を回収することで，N．girellae の混入がないハダ

表 1．各家系の作出に使用した雌親と雄親ኅ♽ࡉ࡝⛮ઍ♽Aࡉ࡝⛮ઍ♽Bࡉ࡝ᄤὼ♽㓽ⷫ㓶ⷫ㧔ࡇ࠶࠻࠲ࠣ⇟ภ㧕 㧔ࡇ࠶࠻࠲ࠣ⇟ภ㧕
ࡉ࡝⛮ઍ♽
ࡉ࡝⛮ઍ♽
㧔4574025354㧕
㧔457463243F㧕
ࡉ࡝⛮ઍ♽
ࡉ࡝⛮ઍ♽
㧔4574522169㧕
㧔45753B4B30㧕ᄤὼ㝼↱᧪㩖㩨㩢㩕㩡F2に，攻撃開始 7 日前に新たにモジ網 4 枚を垂下し，攻撃開始前日にこれらのモジ網にハダムシの卵が付着していることを確認した後，モジ網を新たに準備した遮光した
100 l 黒色ポリエチレン水槽中の海水に沈め，濾過海水を掛け流し，エアーストーンによる弱い通気を施した状態ᄤὼ㝼↱᧪で静置した。攻撃直前にモジ網を 100 l 水槽から取り出ࡉ࡝⛮ઍ♽㧔457463243F㧕
㧖ࡉ࡝ߣࡅ࡜ࡑࠨߩ㔀⒳╙2ઍߢ㧘ࡂ࠳ࡓࠪᗵᨴ⺞ᩏߢࡂ࠳ࡓࠪ߇ߟ߈ߦߊ޿ߣ್ቯߐࠇߚ୘૕ࡉ࡝ࡅ࡜⛮ઍ♽

ムシの卵を確保できるということを確認した。この水槽

㧖し，海水を入れた 1 l 透明容器 2 個にこのモジ網を 2 枚ずつ入れ，蛍光灯で照明された室内に 15 分間静置して光をあて，ハダムシ幼生のふ化を促した。容器中にふ化したハダムシの幼生数は，採水した 1ml 中の幼生を実体顕微鏡下で 5 回計数し，その平均値を水量に合わせて

表 2．試験開始時および終了時における各家系の全長⴫ 䋮ኅ♽⹜㛎㐿ᆎᤨో㐳㧔mm㧕

倍数して求めた。なお，活力ができるだけ良好なふ化幼⹜㛎⚳ੌᤨో㐳㧔mm㧕ࡉ࡝⛮ઍ♽A

110.6±5.7㧖aࡉ࡝⛮ઍ♽B

110.4±5.4㧖a123.5±6.8㧖bࡉ࡝ᄤὼ♽

110.6±5.7㧖a122.3±5.9㧖bࡉ࡝ࡅ࡜⛮ઍ♽108.0±3.1㧖a119.0±5.0㧖c122.6±4.7

生を供するため，100 l 水槽からモジ網を取り出し，攻撃に供するまでの時間を 30 分以内とし，ふ化した幼生

㧖bは攻撃に供するまで容器を遮光して保持した。
攻撃試験

攻撃前日にブリ類 4 家系各 100 尾の合計 400尾を，1kl 黒色ポリエチレン水槽 1 面に収容した。収容時にハダムシの寄生は肉眼では認められなかったもの㩷ᢙ୯ߪ㧘ᐔဋ୯rᮡḰ஍Ꮕ㧔⹜㛎㐿ᆎᤨో㐳㧦n 㧩30㧘⹜㛎⚳ੌᤨో㐳㧦n 㧩100㧕の，肉眼では確認ができない寄生を想定し，収容時に本㩷หߓᢥሼߩ୯ߪ㧘᦭ᗧᏅήߒ㧔p 㧪0.05㧕

を収容した水槽に約 4 万個体のハダムシふ化幼虫を添加

虫を駆除するため 3 分間の淡水浴を行った。この 4 家系— 22 —

14

海面飼育ブリにおけるハダムシ寄生の確認

ブリの陸上水槽への収容

モジ網の垂下12
ハダムシ卵の付着確認

10

攻撃試
験開始
までの日数

8
モジ網の垂下6ブリに寄生している虫体の同定

42
ハダムシ卵の付着確認

遮光水槽への収容
ふ化幼生の確保0

攻撃試験への供試

図 1．攻撃試験へのハダムシ供試までのタイムスケジュール

し，遮光した後，通気を施して 4 時間止水状態で攻撃を求め，各家系間の攻撃時と試験終了時の全長，ハダした。止水状態における水温は 25.3 〜 25.6℃であった。

ムシの寄生数，ハダムシの寄生数指数（寄生数（個体）

その後，濾過海水を掛け流しにし，配合飼料を給餌して/ 体表面積指数）および寄生したハダムシの体長の差を飼育した。飼育期間における水温は 25.4 〜 26.2℃であっ

Kruskal-Wallis 検定で比較し，有意差が認められた場合た。攻撃 10 日後に魚を取り上げ，以下の手順により個は Scheffe s F 検定による多重比較を行った。また，ハ体毎に魚の大きさを測定し，寄生したハダムシを計数しダムシの寄生数指数と寄生ハダムシの平均体長の相関関た。①供試魚の頭後部を切り即殺後，血液を除くため魚係を，Spearman の順位相関係数を用いて検定した。い体を海水で洗った。②洗った魚体を，個体別に 0.5 l 容ずれの検定においても，有意水準は 5％とした。

器内の淡水に 10 〜 15 分間浸し，魚体から離れた虫体と，ピペッティングにより魚体から離した虫体を集め，5％結果

ホルマリン中に保存した。③魚体の全長，体長および体重を測定後，鰭カット部位により家系を判別した。なお，攻撃時における供試魚の平均全長は，すべての家系に取り上げ時には，鰭のカット部位が再生していたが，鰭おいて 108.0 〜 110.6 mm であり，家系間に有意な差は条の乱れにより鰭カット部位を容易に特定できた。④保認められなかった（表 2）。また，試験終了時の平均全存した虫体の計数は，実体顕微鏡下で行った。また，虫長は，ブリヒラ継代系では 119.0 mm と，他の家系（122.3

体は固着盤の一部が変形した個体があったため，体長（体〜 123.5 mm）と比較し小さく，有意差が認められた（表 2）。

前端から固着盤基部までの長さ）を測定した。

ハダムシの平均寄生数は，いずれの家系間でも有意差が認められ，ブリ継代系 B ＞ブリ天然系＞ブリ継代系

統計処理

魚の体表面積は体長の 2 乗に比例すると仮定

し，２/ 10,000
体表面積指数＝試験終了時体長（mm）

A ＞ブリヒラ継代系の順で多かった（図 2）。標準偏差は，ブリ継代系Ａおよびブリ継代系Ｂがブリヒラ継代系およびブリ天然系よりも小さかった。ハダムシ寄生数— 23 —

宿主の個体毎に寄生したハダムシの平均体長の平均ᐔဋࡂ࠳ࡓࠪነ↢ᢙ㧔୘૕㧕（n=20）は，ブリ継代系 B ＞ブリ継代系 A ＞ブリ天然系＞ブリヒラ継代系の順に大きく（図 3），ブリ継代系

B とブリヒラ継代系の間に有意な差があったが，他の家系の組み合わせでは家系間に有意な差はなかった。また，ハダムシの寄生数指数と寄生ハダムシの平均体長には，各家系とも有意な相関はなかった（p > 0.05，n=20）。

各家系において，魚体の表面積指数と寄生数の相関は，ブリ天然系では有意な相関はなかったが（Peason の相関係数の検定，p > 0.05），ブリ継代系 A，ブリ継代系 Bおよびブリヒラ継代系では有意な相関があった（Peasonの相関係数の検定，p < 0.05）（図 4）。

ࡉ࡝ࡉ࡝⛮ઍ♽㧭 ⛮ઍ♽㧮ࡉ࡝ᄤὼ♽ࡉ࡝ࡅ࡜⛮ઍ♽

図 2．ハダムシ（Benedenia seriolae）の各家系に
࿑ おける平均寄生数
䋮㩷
データは，平均値±標準偏差（n=100）
いずれの家系間でも有意差有り（p ＜ 0.05）ࡉ࡝⛮ઍ♽㧭

R 㧨

CDC

CD

ࡉ࡝⛮ઍ♽$

ࡉ࡝ᄤὼ♽ࡉ࡝⛮ઍ♽㧮R 㧨ࡉ࡝⛮ઍ♽#

Dࡂ࠳ࡓࠪነ↢ᢙ㧔୘૕㧕ነ↢ࡂ࠳ࡓࠪߩᐔဋ૕㐳㧔OO㧕

ࡉ࡝ࡅ࡜
⛮ઍ♽










䊑䊥ᄤὼ♽

R 㧪図࿑㩷
3．各家系における寄生ハダムシの平均体長
䋮㩷
データは，平均値±標準偏差（n=20）
同じ文字の値は，有意差無し（p ＞ 0.05）

の 4 家系の合計は 4.1 万個体であり，攻撃時に使用した




ハダムシふ化幼生数は約 4 万個体であったことから，本試験では，攻撃に使用したハダムシ幼生のほぼ全てが試験終了まで寄生していたことになる。また，ハダムシの寄生数を体表面積で補正した寄生数指数は，ブリ継代系
A で 84.9 ± 24.1（平均値±標準偏差，以下同様）（n=100），


ブリ継代系 B で 119.7 ± 20.7（n=100），ブリ天然系で

107.0 ± 29.1（n=100）， ブ リ ヒ ラ 継 代 系 で 74.4 ± 28.3（n=100）であり，寄生数と同様に，ブリ継代系 B ＞ブリ天然系＞ブリ継代系 A ＞ブリヒラ継代系の順で多く，いずれの家系間でも有意な差があった。標準偏差は
ブリ継代系 A およびブリ継代系 B がブリヒラ継代系およびブリ天然系よりも小さかった。

— 24 —ࡉ࡝ࡅ࡜⛮ઍ♽R 㧨૕⴫㕙Ⓧᜰᢙ
図 4．各家系における体表面積指数とハダムシ寄生数の関係

考

察

虫体の魚体への着定が安定し，虫体が成虫になる前で，さらに肉眼で十分に虫体が確認できることから攻撃 10

魚体の表面積指数と寄生数の間に，ブリ天然系では日後に寄生数を計数した。しかし，攻撃後の試験期間を相関はみられなかったが，ブリ継代系 A，ブリ継代系 B検討することで，より短い期間で寄生数の比較ができれおよびブリヒラ継代系では相関が認められた。これは，

ば，試験に要する時間や供試魚を育成するコストをさら天然では遺伝的要素の個体差が大きいことから，寄生数に下げることができる。
ブリヒラ継代系は，試験終了時の魚体サイズおよび寄は遺伝的要素の違いの影響を受け，魚体の表面積指数と寄生数で相関がなかったのに対し，継代系では遺伝的要生したハダムシの平均体長が 4 家系中で最小であり，ヒ素の個体差が小さいことから，魚体の表面積指数と寄生ラマサの形質が発現したとも考えられるが，現時点では数で相関があった可能性が考えられる。このことは，遺不明である。寄生していた虫体のサイズは，密度効果が伝的要素を排除した場合，魚のサイズと寄生数の間に相あったとすれば寄生数が多い個体は小さくなり，本虫に関がある可能性を示唆している。本試験では，魚のサイ対する抵抗性が影響したとすると寄生数が多い個体は抵ズの違いが寄生数に及ぼす影響を小さくするため，家系抗性が低いことから，大きくなる可能性が考えられる。

内および家系間における供試魚のサイズを可能な限り揃ハダムシの寄生数指数と寄生したハダムシの平均体長にえた。特にブリのように成長の早い魚種では供試直前には，各家系とも有意な相関はなかったことから，本試験厳密に選別をしない場合には，家系間の魚のサイズに有では両者の影響は確認されなかった。

意な差が生ずる可能性が高くなる。本試験では，攻撃開本試験では，天然魚由来の家系よりハダムシに対する始までに大きさによる選別を数回行ったところ，攻撃時抵抗性が高い家系（継代系 A）と低い家系（継代系 B）の各家系間における魚のサイズに有意な差はなく，サイを作出した。ただし，長倉ら 10） は，ブリにおいて，個ズの揃った魚を供試したことから，攻撃試験における家体により本虫に対する感受性が違うことを示しており，系間での魚のサイズの違いによる寄生数への影響を排除

本試験で用いたブリ天然系の本虫に対する抵抗性が，天できた。

然魚の中でどのレベルにあるのかは，今後検討する必要

これまで，五島センターでは，ブリのハダムシに対すがある。また，本試験では，本虫に対する抵抗性の情報る感受性を調べるために，海上小割生け簀内で自然にハがあることからブリヒラ雑種第 2 代を用いたが，このブダムシが寄生する尾叉長 25 〜 50 cm まで飼育した魚でリヒラ雑種第 2 代の中で本虫に抵抗性が確認されている

10）。しかし，本研究の手法を用いることで，雌と継代系 A の雄親と同一個体を交配したところ，継全長 11 cm 前後で調査できることから，供試魚の飼育期

代系 A よりも抵抗性の高い家系（ブリヒラ継代系）を間がこれまでより著しく短縮でき，餌代・人件費等のコ得た。さらに，継代系 A および継代系 B が，他の家系ストが削減できる。また，交配によって家系を作出してより寄生数の最大寄生数と最小寄生数の差および標準偏から本虫に対する感受性の調査結果を得るまでに要する差が小さかったことから，限られた親魚の中で継代を重時間が短縮される。ただし，魚体サイズにより免疫機能ねることで寄生数の個体差を小さくできることが示されが変化するなどの可能性があることから，魚体サイズにた。一方，大原ら 13）はブリ類における遺伝子連鎖地図より本虫に対する感受性の発現様式が異なることも考えを作製し，これを用いてハダムシに対するブリ類の宿主られ，本試験の手法で判定された抵抗性の度合いが，よ抵抗性に関する遺伝子座（QTL）を見いだしている ＊。

り大きいサイズでの抵抗性の度合いと一致するかは検討

これらのことより，家系選抜や交雑によって本虫に対しする必要があろう。また，本試験では，攻撃時間（本虫て抵抗性をもつ家系を作出することの有効性が認められのふ化幼生を水槽に入れた後の止水状態の時間）を４時た。

調査していた間とし，攻撃時と飼育水温は自然水温と同じにしたが，攻撃時間，攻撃時の水温および飼育水温などが寄生数へ

謝

辞及ぼす影響は不明である。今後，これらの影響を検討し，感染試験方法の標準化を図る必要があろう。さらに，夏継代系ブリを提供していただいた東京大学大学院古川季（水温 22 〜 26℃）において本虫はふ化後 15 日で体清博士に深謝申し上げる。また，飼育，サンプルの処理

長約 4.7 mm になり，体長 5 mm 以上で成虫となり産卵にご助力いただいた宿輪することから 12），試験期間中に，これらの仔虫が再び口聡子氏に感謝する。

寄生することを防ぐため，攻撃後 15 日までに試験を終了する必要があると考えられた。また，ヒラメ，マダイにおける本虫の感染試験により攻撃時に寄生した虫体は数日の間に脱落する（良永ら，未発表）。本試験では，* 大原ら，平成 17 年度日本水産学会大会口頭発表— 25 —仁氏，久保藤子氏ならびに出文9） 笠原正五郎（1971）ハマチの外部寄生吸虫に対する過酸化献

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