No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 16

T

O

Y

O

B

O

L

I

F

E

S

C

I

E

N

C

E

U PLOAD
PLOA
2013 Novem ber

VOL.

ット
（培養細胞用）1 リアルタイムPCR用細胞溶解&cDNA合成キ
TM

SuperPrep

Cell Lysis & RT Kit for qPCR

HOT ITEM
5 高効率リアルタイムPCR用マスターミックス
THUNDERBIRD® qPCR Mix

7 高効率リアルタイムPCR用マスターミックス
KOD SYBR® qPCR Mix

USER’S NOTE
9 製品KOD SYBR qPCR Mixを用いた実施例®

生物農薬糸状菌の特異的検出及び定量

TECHNICAL REVIEW
11 高効率リアルタイムPCR用マスターミックス

を用いたプロモーター領域、「KOD SYBR® qPCR Mix」
CpGアイランドを含む領域の定量的増幅の事例

Ｑ＆A
13 高効率リアルタイムPCR用マスターミックス
KOD SYBR® qPCR Mix

NEW RELEASE
14 ViroStat社抗体・組換え抗原

101

SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR
→本誌p.1〜4に詳細記事がございます。

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 1

リアルタイムPCR用細胞溶解&cDNA合成キット（培養細胞用）

念発売記 ーンペンャキTMSuperPrep Cell Lysis & RT Kit 40%off
for qPCR■期間：2013年10月9日〜2014年3月20日（ご注文分）

培養細胞から簡便・短時間にリアルタイムPCR用の鋳型cDNAの調製が可能です。
SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（Code：SCQ-101）は、
リアルタイムPCRよる遺伝子発現解析のための細胞溶解試薬（Lysis Reagents）と逆転写反応試薬（RT Reagents）からなるキットです。本製品をご使用いただくことで、96ウェル
プレートなどで培養した細胞から、逆転写反応の鋳型として利用可能なRNAを含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。
さらに、本キットに含まれる逆転写反応試薬は、この細胞ライセートからのRT反応に最適化されています。本キットにより、簡便、迅速に培養細胞からリアルタイムPCR用の鋳型cDNAの合成が可能であり、ハイスループットアッセイに適しています。

SuperPrepTM Cell Lysis Kit for qPCR（Code：SCQ-201）は、細胞溶解試薬（Lysis Reagents）の別売品です。1-step
リアルタイムRT-PCRによる簡易アッセイのための細胞ライセートの調製にご使用いただけます。

Cell Lysis（7min.＊1）

Revers Transcription（25min.＊1）

qPCR＊2【Lysis Reagents】

培養細胞

2-step リアルタイムRT-PCR

高精度測定

・Lysis Solution
・Stop Solution
・gDNA Remover
・RNase Inhibitor

PBS洗浄
Lysis Solution
添加5min.、室温

ライセートを
RT Master Mixと混合
37℃、15min. → 50℃、
5min. → 98℃、5min.

Stop Solution
添加2min.、室温

cDNAをリアルタイムPCR試薬と混合〈リアルタイムPCR試薬例〉
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（Code: QPS-101）
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code: QPS-201）※Lysis Reagents の別売り品として、SuperPrepTM
Cell Lysis Kit for qPCR（Code No. SCQ-201）
をご準備しております。

【RT Reagents】
・5×RT Master Mix
・5×RT Master Mix
no-RT control ＊・Nuclease free Water

簡易測定

1-step リアルタイムRT-PCR＊2＊1

SuperPrepTM
Cell Lysis Kit for qPCR
(Code No. SCQ-201)

SuperPrepTM
Cell Lysis & RT Kit for qPCR
(Code No. SCQ-101)

作業時間を含まない時間を表示しています。
＊2 リアルタイムPCR試薬は本
キットには含まれません。
別途ご用意ください。

SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR
（Code No. SCQ-101）
上の2種類の試薬セットを含みます。
＊逆転写酵素を含まないマスターミックスです。コントロール
として使用します。

図1．操作フロー特長1 RNA精製不要
・細胞をPBS（−）で洗浄後、Lysis Solutio n（ gDNA
Remover添加）を細胞に添加、懸濁し、室温で5分間インキ

本製品

ュベートすることによって、細胞溶解とゲノムDNAの分解を同時に行います。反応停止はStop Solutionを添加してA社品処理するのみで、熱処理は必要ありません。

B社品

細胞溶解
RT反応
従来フロー

・逆転写反応は、細胞ライセート（希釈不要）を加え、20分間
0

インキュベートします。

30

60

90

120

所要時間
（min.）
図2．cDNA合成までの所要時間
従来フローの細胞溶解時間はRNA抽出作業時間を示します。

2013

1

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 2

特長2 ライセートから高品質なcDNAを合成
最適化されたバッファー組成により、RNase等の細胞成分によるRNAの分解を効果的に抑えます（調製したRNAは氷上で2時間
安定です）。また、DNaseⅠ処理後にcDNA合成を行うことから、ゲノムDNAのコンタミの少ない高品質なcDNAを合成することができます。逆転写試薬は弊社の高効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」をもとに最適化されたマスターミックス※となっており、
簡便・高効率にcDNA合成を行うことができます。合成したcDNAは長期保存可能です。
本試薬は、幅広い種類の細胞を用いるアッセイに使用可能です。下表の代表的な細胞について適用できることを確認しています。
※マスターミックスにはランダムプライマーとOligo dTプライマーが最適比率で混合されています。
表1. 本製品の適用確認済み細胞

細胞名

接着／浮遊

種

細胞

由来

1

A431

接着

H. sapiens

epidermoid carcinoma cell line

上皮様細胞がん

2

C2C12

接着

M. musculus

myoblast cell line

筋芽細胞

3

Caco-2接着

H. sapiens

colon adenocarcinoma cell line

大腸がん

4

CHO-K1接着

C. griseus

ovary cell line

卵巣

5

COLO205

浮遊

H. sapiens

colon adenocarcinoma cell line

大腸がん

6

DLD-1

接着

H. sapiens

colon adenocarcinoma cell line

大腸がん

7

HCT-15接着

H. sapiens

colon adenocarcinoma cell line

大腸がん

8

HDF

接着

H. sapiens

primary foreskin fibroblasts (primary cell)

皮膚線維芽細胞9

HEK293接着

H. sapiens

embryonic kidney cell line

胎児腎

10

HeLa S3接着

H. sapiens

cervix carcinoma cell line

子宮頸がん

11

HepG2

接着

H. sapiens

hepatocellular carcinoma cell line

肝がん

12

Jurkat浮遊

H. sapiens

T lymphocyte cell line

白血病T細胞

13

K562

浮遊

H. sapiens

myelogenous leukemia cell line

赤芽球様白血病細胞

14

KUSA-A1

接着

M. musculus

bone marrow stromal stem cell line

骨芽細胞様株

15

L929

接着

M. musculus

aneuploid fibrosarcoma cell line

結合組織

16

MCF7

接着

H. sapiens

breast adenocarcinoma cell line

乳腺がん

17

Neuro2a接着

M. musculus

neuroblastoma cell line

神経芽細胞腫18

NIH-3T3

接着

M. musculus

embryo fibroblast cell line

胎仔由来線維芽細胞

19

PC12

接着

R. norvegicus

adrenal pheochromocytoma cell line

副腎褐色細胞腫

20

rMSC

接着

R. norvegicus

bone marrow stromal stem cells (primary cell)

骨髄間質細胞

21

THP-1

浮遊

H. sapiens

acute monocytic leukemia cell line

単球

22

U937

浮遊

H. sapiens

leukemic monocyte lymphoma cell line

単球

特長3 ハイスループット解析のバラツキ低減
プロトコールから少量の分注工程や希釈工程を減らすことで、ハイスループット解析におけるバラツキを低減しました。また、細胞溶解時のピペッティング操作を無くし、DNaseⅠ処理を並行して行うことで操作性を向上させました。DNaseⅠの反応の停止
はStop Solutionを加えるのみで、RNAを不安定化する加熱工程などは不要です。

特長4 様々なリアルタイムPCR試薬に使用可能
様々なリアルタイムPCR試薬（SYBR® GreenⅠ、TaqMan®アッセイ両方に対応可能）と組み合わせて使用可能です。
また、弊社THUNDERBIRD® qPCR Mix（Code No. QPS-101、QPS-201）等と組み合わせて用いることによって、培養細胞から簡便かつ高精度の遺伝子発現解析が可能であることを確認しています。
（p.5〜p.6をご参照ください）さらに、弊社RNA-

directTM Realtime PCR Master Mix（Code No. QRT-101、QRT-201）等の1-stepリアルタイムPCR試薬と組み合わせる簡易アッセイも可能です。

2

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 3

実施例1 データのバラツキを考慮したアッセイ系の質の評価
HeLa S3細胞を96ウェルプレートに2×10 4cells/wellずつ播種し、100nM phorbol 12-myristate 13-acetate（PMA）を加えて 24 時間インキュベートしました。その後、PMA処理した12ウェル、未処理の12ウェルについてPBS（−）で細胞を洗浄し、SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCRで処理してcDNA合成を行いました。このcDNAを鋳型にTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（Code No.QPS-101）を用いてIL-6、IL-1β、β-actin遺伝子についてTaqMan®プローブアッセイを行いました（n＝12にて実施 ）。 同様にA社同等品を用いてリアルタイムPCR解析を行いました（逆転写反応試薬とリアルタイムPCR試薬もA社キット付属品を使用）。IL-6、IL-1β遺伝子のCt値をβ-actin遺伝子で補正し（ΔCt）、PMA処理の有無の差（ΔΔCt）を算出しました。続いてZ -factorを算出し、比較を行いました。
〈SuperPrepTM Ct値〉

Ct

35
33
31
29
27
25
23
21
19
17
15

SuperPrepTM

0

5

10

15

IL-6
IL-1β
β-actin20

well no.
IL-1β

IL-6

β-actin

PMAの添加+-++ - -〈A社同等品Ct値〉

Ct

35
33
31
29
27
25
23
21
19
17
15

A社同等品

0

5

10

15

IL-6
IL-1β
β-actin20

well no.
IL-1β

IL-6

β-actin

PMAの添加図3．Ct値の比較+ - ++ - -

図4．増殖曲線の比較

表2. 解析結果からのZ の算出〈 IL-6 〉

SuperPrepTM

A社同等品

Δ Ct (IL-6 -β-actin)

PMA

Ct (IL-6)
平均

(+)

26.96

6.27

0.14

(-)

30.24

10.12

0.35

(+)

26.50

4.30

0.34

(-)

29.44

8.18

0.19

PMA

Ct (IL-1β)
平均

(+)

28.62

7.93

0.15

(-)

33.99

13.87

0.38

(+)

28.00

5.80

0.47

(-)

33.26

11.99

0.34

平均

標準偏差

ΔΔ Ct

Z'

-3.85

0.62

-3.88

0.59

ΔΔ Ct

Z'

-5.94

0.74

-6.19

0.61

〈 IL-1β 〉

SuperPrepTM

A社同等品

Δ Ct (IL-1β -β-actin)
平均

標準偏差

＊Z -factor：
データのバラツキを考慮した、ハイスループットアッセ
イ系の質の目安となる数値です。
一般に0.5以上で良好と考えられます。今回は下記の式で算出しました。
Z -factor=
1−3×(ΔCt(＋)標準偏差+ΔCt(−)標準偏差)/ ΔΔCt

この結果、いずれもZ -factorとしてはアッセイ系の質の目安となる0.5をクリアしましたが、SuperPrepTM Cell Lysis & RT
Kit for qPCR、THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（Code No. QPS-101）を用いた実験において、A社同等品と比較して高い Z -factorを示し、アッセイ系としてよりバラツキが少なく良好であることが分かりました。

2013

3

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 4

実施例2 精製RNAと細胞ライセートでのCtの相関の検証
30
精製したTotal RNA(Ct)

SuperPrep™ Cell Lysis & RT Kit for qPCRを用いて、HEK293 細胞2.5×
104cells からcDNAを合成しました（40μl反応系）。また、HEK293細胞から抽出したTotal RNA 66.6ngからReverTra Ace® qPCR RT Master Mix（CodeNo. FSQ-201）を用いてcDNA合成（40μl 反応系）を行いました。
その後、それぞれのcDNAを鋳型にTHUNDERBIRD ® SYBR ® qPCR Mix（Code No. QPS-201）を用いて15種類のHouse Keeping Geneについてリア
ルタイムPCRを行い、得られたCt値の相関性を検証しました。この結果、今回解析しR2=0.983

25
20
15
10
10

た15種類の遺伝子において、精製RNAと細胞ライセートを用いた解析に良好な相関が認められました。

15

20

30

25

細胞ライセート(Ct)〈SuperPrepTM 〉
図5．精製RNAとの定量性の比較

実施例3 RNase活性が強い細胞における解析効率の検証
単球由来の細胞株U937は比較的RNaseの活性が高く、細胞溶解液を用

45

いるアッセイは困難であるとされてきました。

35

本実験では、U937細胞1×104、1×103、1×102、1×10cellsから調製
Ct

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.QPS-201）を用いて、検量線からの逸脱

30した細胞ライセート8μl を用いて cDNA合成（40μl 反応系）を行った後、
β-actin遺伝子についてリアルタイム PCR を行いました。
同様に、A社同等品を用いて同様のアッセイを行いました（逆転写反応試薬

25

15
0

とリアルタイムPCR試薬もA社キット付属品を使用）。
また、同じサンプルから精製したTotal RNAの相当量を用いて解析を行

増幅効率の
低下

20

0

1

いました（ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix［Code No.FSQ-201］、

2
3
4Log (Cell Number)SuperPrepTM

5

A社同等品

精製RNA

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix［Code No.QPS-201］使用）。
この結果、弊社品での解析においてのみ、精製RNAを用いた場合同様に

図6．U937細胞におけるβ-actin遺伝子の検出

高い直線性を示しました。

品名および内容包装

保存温度

Code No.

通常価格

キャンペーン価格-20℃

SCQ-101¥76,000¥45,600-20℃

SCQ-101X5￥325,000

対象外

SuperPrep
Cell Lysis & RT Kit for qPCR
100回用＊1〈Lysis Reagents〉〈RT Reagents〉
・Lysis Solution
・5 x RT Master Mix
・Stop Solution
・5 x RT Master Mix no-RT control
・gDNA Remover ・Nuclease free Water 評価用サンプル 100回用×5
ございます
・RNase Inhibitor
TM

SuperPrep TM/THUNDERBIRD ® Probe qPCR set＊3
・SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（SCQ-101）とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（QPS-101）＊2とのセット

1セット

-20℃

SCQ101/
QPS101￥99,750￥59,850

SuperPrep TM/THUNDERBIRD ® SYBR® qPCR set＊4・SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（SCQ-101）とTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（QPS-201）＊2とのセット

1セット

-20℃

SCQ101/
QPS201￥99,750￥59,850

SuperPrep TM Cell Lysis Kit for qPCR＊5
・Lysis Solution ・gDNA Remover
・Stop Solution ・RNase Inhibitor

100 回用-20℃

SCQ-201￥39,000

対象外

評価用サンプルございます＊1 40μlで逆転写反応をした場合に100回用としてご使用いただけます。
＊2 50μl反応で 200回用、20μl反応で 500回用としてご使用いただけます。
＊3 SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（100回用）［￥76,000 → ￥72,450］とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（Code No.
QPS-101：200回用 ）［￥29,000 → ￥27,300] とのセット販売品です。
＊4 SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（100回用）［￥76,000 → ￥72,450］とTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.
QPS-201：200回用 ）［￥29,000 → ￥27,300] とのセット販売品です。
＊5 SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR に含まれる Lysis Reagents の別売り品です。

高効率1-step用リアルタイムPCR試薬
品

包装＊

保存温度

Code No.

0.5ml×5本-20℃

QRT-101¥33,000

0.5ml×5本-20℃

QRT-201¥33,000

名

価

格

®

（TaqMan アッセイ用）

RNA-direct TM Realtime PCR Master Mix
®

（SYBR

GreenⅠアッセイ用）

RNA-direct TM SYBR® Green Realtime PCR Master Mix＊ 50μl反応で100回用、20μl反応で250回用としてご使用いただけます。
＊ SYBR® は Molecular Probe Inc.の登録商標です。TaqMan® は Roche Molecular Systems Inc.の登録商標です。

4

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 5

高効率リアルタイムPCR用マスターミックス
サンダーバード

THUNDERBIRD® qPCR Mix
特異性、ダイナミックレンジ、コストパフォーマンスに優れたリアルタイムPCR試薬です。
THUNDERBIRD® qPCR Mixは、Taq DNA polymeraseをベースとして開発された、高効率リアルタイムPCR用マスターミックス（2×濃度）です。本製品は、新規
エンハンサーの採用を含め、組成を根本的に見直すことによって、反応特異性とPCR
効率が飛躍的に向上しています。これらの改良によって、幅広い定量可能域（ダイナミックレンジ）を実現しました。また、実験のランニングコストを大幅におさえることが可能になりました。

特長1 高い特異性（プライマーダイマーの低減）
・組成の最適化により、PCRの特異性が向上。非特異反応の低減によって、
SYBR® GreenⅠ、およびTaqMan®アッセイにおいて、低コピー数のターゲットの検出感度が向上しました。

特長2 様々なターゲットを高効率に精度良く検出・新規エンハンサー＊を採用し、高効率かつ高精度での増幅が可能となり、ターゲットごとのPCR効率のばらつきも低減されています。

＊特許出願中特長3 広いレンジで検出可能
・特異的（特長1）、かつ高効率（特長2）な増幅により、広い測定レンジでの解析が可能になりました。

広いレンジでPCR効率（等間隔）をキープ

THUNDERBIRD®
qPCR Mix
B社試薬
C社試薬

100希釈
100希釈
10-4

図1．SYBR ® GreenⅠ検出系によるノロウイルスGI
cDNAの検出 (縮合プライマー使用）（Roche Diagnostics LightCycler® 1.1使用）

10-4
図2．TaqMan® 検出系によるGAPDH cDNAの定量（Roche Diagnostics LightCycler® 1.1使用）

特長4 様々な機器に対応
・一般的なブロックタイプの機器（Fast Modeにも対応）のほか、ガラスキャピラリーを用いる高速サイクラーにも対応しています。
また、50× ROX reference dyeが別添付されているため、パッシブリファレンスを使用する機器（Applied Biosystems社製
機器、Agilent Technologies社製機器など）においても、各機種の特性に応じた最適なROX濃度でご使用いただけます。
表 代表的な対応機器

Applied
Biosystems

Roche
Diagnostics

2013

ABI PRISM® 7000
ABI PRISM® 7700
Applied Biosystems® 7300
Applied Biosystems® 7500
Applied Biosystems® 7500 Fast
Applied Biosystems® 7900HT
Applied Biosystems® StepOneTM
Applied Biosystems® StepOnePlusTM
LightCycler ® 1.x / 2.0
LightCycler ® Nano
LightCycler ® 480

Bio-Rad/MJ

Agilent
Technologies
TaKaRaBioFluxiCycler iQ®
MiniOpticonTM
CFX96 TouchTM
Mx3000P
Mx3005P
Mx4000
Thermal Cycler Dice®
Line Gene※リスト中Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, Agilent Technologies Mx3000P,
Mx3005P, Mx4000をご使用の場合のROX reference dyeの最適濃度は、最終濃度
0.1×（1/500量添加）となります。その他は1×（1/50）濃度を推奨します。

5

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 6

特長5 高速ホットスタート

特長6 高いコストパフォーマンス

・抗Taq DNA polymerase抗体を用いるホットスタートシステ

・実験のランニングコストを大幅におさえるこムを採用しています。抗体は加熱により速やかに失活するため、とが可能になりました。

最初の変性時間を短時間に設定できます。

SuperPrepTMで調製したcDNAを用いた解析

実施例

SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（Code No. SCQ-101）を用いて、HeLa S3細胞7.5×104、5×104、1×
104、1×103、1×102、1×10cellsから細胞ライセートを調製し、続いてcDNA合成（40μl反応系）を行いました。それぞれのcDNAを鋳型にTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（Code No. QPS-１01）、C社及びD社製リアルタイムPCR試薬を用いて、β-actin遺伝子についてTaqMan®アッセイを行いました。
35

この結果、いずれのリアルタイムPCR試薬においても良好な増幅を認めることができました。特にTHUNDERBIRD

30®

Probe qPCR Mixとの組み合わせで最も良好なCtと直線性Ctを示しました。
25

20

15
0

1

2

3

4

5

Log (Cell Number)
ᘚ♣ムⷾ

C♣ムⷾ

THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix

D♣ムⷾ

㻦♣ムⷾ

㻧♣ムⷾ

1×10 1 cells
1×10 2 cells
3
1×10 cells
1×10 4 cells

1×10 1 cells

1×10 1 cells
1×10 2 cells
1×10 3 cells

1×10 2 cells
1×10 3 cells

1×10 4 cells

1×10 4 cells

5×10 4 cells

5×10 4 cells

7.5×10 4 cells

5×10 4 cells

7.5×10 4 cells

7.5×10 4 cells

包品名および内容®

THUNDERBIRD Probe qPCR Mix
・THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix
・50× ROX reference dye
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix
・THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix
・50× ROX reference dye

装

保存温度

Code No.

価

格

-20℃

QPS-101T¥8,5001.67ml×3本〔200回用〕-20℃

QPS-101¥29,000（1.67ml×3本）
×5〔1000回用〕-20℃

QPS-101X5¥133,000

1ml×1本〔40回用〕

1ml×1本〔40回用〕-20℃

QPS-201T¥8,5001.67ml×3本〔200回用〕-20℃

QPS-201¥29,000（1.67ml×3本）
×5〔1000回用〕-20℃

QPS-201X5¥133,000

SuperPrep TM/THUNDERBIRD® Probe qPCR set＊1
SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（SCQ-101）とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（QPS-101）とのセット

1セット

-20℃

SCQ101/
QPS101¥99,750

SuperPrep TM/THUNDERBIRD® SYBR® qPCR set＊2
SuperPrepTM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（SCQ-101）とTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（QPS-201）とのセット

1セット

-20℃

SCQ101/
QPS201¥99,750※50× ROX reference dyeがマスターミックスとは別容器で供給されます。
※包装の欄に記載の反応回数は、50μl反応時のものです。容量はqPCR Mixのみ示しています。
※大包装品（QPS-101X5およびQPS-201X5）は、QPS-101もしくはQPS-201の5セット組です。
※TaqMan®は、Roche Molecular Systems Inc.の登録商標です。 ※SYBR®は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。
＊1 SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（100回用）［￥76,000 → ￥72,450］とTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix（Code No.
QPS-101：200回用 ）［￥29,000 → ￥27,300] とのセット販売品です。
＊2 SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR（100回用）［￥76,000 → ￥72,450］とTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（Code No.
QPS-201：200回用 ）［￥29,000 → ￥27,300] とのセット販売品です。

6

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:47 ページ 7

高効率リアルタイムPCR用マスターミックス

KOD SYBR® qPCR Mix
GCリッチ等の難配列の増幅に最適。今まで設計したプライマーを使用可能。
KOD SYBR® qPCR Mixは、KOD DNA polymerase（KOD）を使用したSYBR® GreenⅠ検出系
によるリアルタイムPCR用マスターミックスです。3 →5 エキソヌクレアーゼ活性（校正活性）を除去したKOD exo（−）DNA polymeraseと最適化されたバッファー条件を組み合わせることで、KODの『優れた合成能』や『クルード成分の阻害を受けにくい』という性質を最大限に発揮し、安定したリアルタイム
PCR解析が可能になりました。

特長1 長鎖ターゲットの増幅が可能（〜2kb）
KOD DNA Polymeraseの特長を活かして長鎖ターゲット増幅での定量性に優れます。プライマーの選択幅が格段に広がり、2kbまでのターゲットであれば、多くの場合今まで設計したプライマーをそのまま用いることも可能です。

M

1

2

KOD SYBR® qPCR Mix

3

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（弊社従来品：Taq使用）

増幅曲線解析

104 103 102101100コピー

1.9kb

同一の
プライマーを使用

融解曲線解析
電気泳動解析

1： KOD FX Neo
2： KOD FX
3： KOD -Plus- Ver.2

鋳型：ヒトゲノムDNA
ターゲット：TGFβ（1918bp）

図1．長鎖ターゲットに対するリアルタイムPCR（ABI StepOnePlusTM使用）
KOD FXシリーズやKOD-Plus-シリーズで増幅可能なプライマーを用い、約2kbのターゲットの増幅を実施しました。その結果、Taq DNA polymeraseを用いる従来品では増幅困難な約2kbのターゲットでも本製品では定量的な増幅が認められました。

また、2kbまでの様々なターゲット長を選択できるため、幅広い融解曲線解析が可能です。プライマーダイマーの発生領域（短鎖領域）を外して増幅領域を選べるため、エンドポイントアッセイを用いる多型解析、マルチプレックスPCR解析などに有利です。

特長2 GCリッチターゲットに対応
KOD DNA polymeraseを使用することで、Taq DNA polymeraseを用いる従来品では困難であったGC含量が70%を超えるようなターゲットにおいても、定量的な増幅が認められます。
IGF2R（GC含量：83％、鋳型：ヒトcDNA）

KOD SYBR® qPCR Mix

Ａ社製リアルタイムPCR試薬（GC70％以上対応）

5-1希釈

5-1希釈

5-1希釈
5-5希釈

5-5希釈

THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix（弊社従来品）

5-5
希釈

図2．GCリッチなターゲットに対するリアルタイムPCR（ABI StepOnePlusTM使用）
GC含量が70％を超えるターゲットに対し、各リアルタイムPCR試薬による反応性の比較を行いました。鋳型には、弊社の高性能逆転写反応用試薬「ReverTra Ace® qPCR RT kit（CodeNo. FSQ-101）」により合成したHeLa細胞total RNA由来のcDNAを用い、cDNAの5倍希釈（5段階）について、反応を実施しました。その結果、弊社従来品では、増幅困難であったGC
リッチなターゲットに対しても、定量的な増幅が認められました。また、反応特異性が高く、プライマーダイマーが生じにくいため、低コピーまでの幅広い定量可能域を得ることができました。

2013

7

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 8

特長3 クルードサンプルを用いる解析が可能
クルード成分による阻害を受けにくいため、血液やマウステール、植物ライセート等を用いるアッセイが可能です。長鎖増幅やTail配列を付加したプライマーを用いる増幅によるジェノタイピング解析等に応用することができます。

マウステールライセートを用いるジェノタイピング例
アルカリ溶解法
100bp/予測Tm値：79℃
マウステール（約3mm）

Wild type
（WT）

マイクロ
チューブへ

WT用 primer
共通 primer

1

2

CreER knock-in（KI）

CreER
Cre用 primer

50mM NaOH 180μl添加

341bp/予測Tm値：84℃

Vortexにて良く攪拌

3
KI/KI

95℃・10min.
1M Tris-HCl（pH8.0） 20μl添加

WT/WT

Vortexにて良く攪拌
遠心（12,000rpm, 10min.）4※本実験で使用したトランスジェ
ニックマウスのマウステールは、
東京大学 分子細胞生物学研究所 情報伝達研究分野
平林祐介先生よりご供与いた
だきました。

WT/KI

20μl反応系に上清0.5〜2μlを添加（マウステールは完全には溶解しません）
60

65

70

75

80

85

90

95

Temperature（℃）

5

図3．融解曲線解析を用いるワンチューブマウスジェノタイピング（ABI 7500使用）
マウステールアルカリ熱抽出液を用い、ワンチューブでジェノタイピング解析を実施しました。WT特異的増幅産物とknock-in特異的増幅産物の増幅長を変えることで、計算上、増幅産物のTm値に差異が生じるように設計しました。WT特異的プライマーは、CreER knock-inに対しては、増幅長が長いため、伸長時間を30秒と短くすることで増幅できないようにしています。また、ヘテロ検出におけるピーク比のバランスをとるために、WT特異的プライマー：knock-in特異的プライマー=1:3として検出の結果、すべてのタイプで増幅が認められジェノタイピングを実施することができました。

特長4 高い特異性
プライマーダイマーなどの非特異的反応を抑えることで、低コピー域までの幅広い定量を可能とします。また、弊社リアルタイ
ムPCR用cDNA合成キット「ReverTra Ace® qPCR RTシリーズ」を併用することで安定した検出が得られます。

特長5 様々な機器に対応
ブロックタイプの機器（Fast Modeにも対応）のほか、ガラスキャピラリーを用いる高速サイクラーにも対応しています。また、
50×ROX reference dyeが別添付されているため、パッシブリファレンスを必要とする機器においても、各機器に適したROX濃度でご使用頂けます。
保存温度

Code No.

価

1ml×1本〔40回用〕

包

-20℃

QKD-201T¥9,8001.67ml×3本〔200回用〕-20℃

QKD-201¥32,000（1.67ml×3本）
×5〔1,000回用〕-20℃

QKD-201X5¥147,000

品名および内容
KOD SYBR® qPCR Mix
・KOD SYBR® qPCR Mix
・50×ROX reference dye

装格※50×ROX reference dyeがマスターミックスとは、別添付されています。
※包装欄に記載の反応回数は、50μl反応時のものです。容量は、KOD SYBR® qPCR Mixのみ示しています。
※SYBR®は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。

装

保存温度

Code No.

ReverTra Ace® qPCR RT Kit

200回用

-20℃

FSQ-101¥38,000

リアルタイムPCR用cDNA合成キット
完全プレミックスタイプ

200回用

-20℃

FSQ-201¥38,000

200回用

-20℃

FSQ-301¥40,000

品

包

名

価

格

リアルタイムPCR用cDNA合成キット

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
リアルタイムPCR用cDNA合成キット
完全プレミックスタイプ（ゲノムDNA除去試薬付き）

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover※包装欄に記載の反応回数は、10μl反応時のものです。

8

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 9®

製品 KOD SYBRqPCR Mix を用いた実施例

生物農薬糸状菌の特異的検出及び定量
データご提供神戸大学大学院 農学研究科 生命機能化学専攻 細胞機能構造学研究室
池田 健一 先生、宿南 良 様

糸状菌ゲノムDNAの抽出は、異なる種によって生成される糖類の影響によって精製度合いが異なってきます。本実験で使用した糸状菌も多糖を生成することによって、PCR増幅効率が低下していることが予想されました。
本実験では、研究室において従来使用していたA社のqPCRキット（RNA発現解析では十分満足な結果が得られています）とKOD SYBR® qPCR Mixを使用して増幅効率を比較しました。
実験方法
サ ン プ ル 糸状菌ゲノムDNA
サンプルの処理 VIOGENE社のPlant Genomic DNA Extraction Miniprep Systemキットを用いて液体培養した菌体より糸状菌ゲノムDNAを精製した。
遺 伝 子 名 rDNA ITS領域
ターゲット長 105bp
プライマー配列

F: 塩基数19

Tm値53.9

R: 塩基数20 Tm値58.4

反 応 液 組 成 KOD SYBR® qPCR Mix、A社リアルタイムPCR試薬は、共に以下の組成で実験を行った。
qPCR酵素mix 10μl
Primer F

2μl

Primer R

2μl

Template

1μl

DDW

5μl

反応液

20μl

サ イ ク ル 〈KOD SYBR® qPCR Mix〉
98℃ 2min.
↓(98℃ 10sec., 60℃ 10sec., 68℃ 30sec.)×45↓
融解曲線解析 60℃ to 99℃〈A社qPCRキット〉
95℃ 10min.
↓(95℃ 15sec., 60℃ 1min.)×40↓
融解曲線解析 60℃ to 95℃
測 定 機 器 TaKaRa

2013

Thermal Cycler Dice® Real Time System Single

9No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 10

結果

1. A社qPCRキットでの結果
a. 増幅曲線b. 融解曲線

2. KOD SYBR® qPCR Mixでの結果
a. 増幅曲線b. 融解曲線：5×10−13g/μl：5×10−12g/μl：5×10−11g/μl：5×10−10g/μl：5×10−9g/μl

先生からのコメント
増幅曲線解析においては同一テンプレート濃度でおおむねKOD SYBR® qPCR Mixの方がCt値が低く、検出能力を改善することができました。また、テンプレートが高濃度になるといずれも増幅効率が低下してしまう傾向が認められましたが、その中でも
KOD SYBR® qPCR Mixはより高濃度テンプレート（赤＝5×10-10g/μl）まで増幅することができました。融解曲線解析においても結果の改善が見られました。KOD SYBR® qPCR MixではA社のものよりもサンプルごとのばらつきが小さく、増幅曲線のピー
クもほとんど一致しています。このことから、より正確に目標産物を増幅できていると考えています。
KODシリーズについては、本研究室において、KOD FX Neoを糸状菌形質転換体スクリーニング用として使用しています。形質転換体のスクリーニングは、よりスモールスケールで迅速に行う必要があります。一次スクリーニングにより得られたコロニーの菌糸片より簡易的にゲノムDNAを抽出し、PCRにより目的遺伝子の挿入を確認する必要がありますが、KOD FX Neoは少量かつクルードなサンプル（菌糸片を30秒3回の電子レンジ照射処理した上清を使用）を用いても陽性バンドを安定して拾うことが可能であるので重宝しています。
これら使用実績より、KOD SYBR® qPCR MixおよびKOD FX Neoのバッファー系統一式は、糸状菌抽出サンプルとの相性が良いのではないかと考えています。

10

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 11

高効率リアルタイムPCR用マスターミックス「KODSYBR® qPCR Mix」を用いたプロモーター領域、
CpGアイランドを含む領域の定量的増幅の事例
東洋紡（株）

敦賀バイオ研究所 松本 弘嵩
はじめ にPCRではGCリッチな配列、例えばCpGアイランドを含む領域の増幅が困難であることが知られています。CpGアイランドは、哺乳類遺伝子のプロモーター領域の約50％以上を占めており、エピジェネティック解析の対象となる領域の一つです。このプロモー
ター領域の解析には、クロマチン沈降（ChIP）法を用いる方法が知られており、
リアルタ
イムPCRによる定量が行われています。しかしながら、従来のTaq DNA polymeraseを用いたリアルタイムPCR試薬では、GC含量に偏りがあるGCリッチなターゲットを定量的に増幅ができない場合があるため、CpGアイランドを含むプロモーター領域のリ
アルタイムPCRでは、プライマー設計が著しく困難になることがあります。
KOD SYBR® qPCR Mixは、KOD DNA polymerase（KOD）を使用したSYBR® GreenⅠ検出系によるリアルタイムPCR用
マスターミックスです。3 →5 エキソヌクレアーゼ活性（校正活性）を除去したKOD exo（−）DNA polymeraseと最適化されたバッファー条件を組み合わせることで、KODの優れた合成能を最大限に発揮し、70%を超えるようなGCリッチなターゲットにおいても安定したリアルタイムPCR測定が可能になっております。
今回は、本キットを用いて、GC含量に偏りのあるプロモーター領域と、CpGアイランドを含む領域の定量的な増幅を行った例をご紹介いたします。

方法【増幅ターゲットとプライマー設計】
ターゲット1：Homo sapiens telomerase RNA（TR）gene のプロモーター領域（GC含量：64％、増幅長：219bp）
CCCGCCCGAGAGAGTGACTCTCACGAGAGCCGCGAGAGTCAGCTTGGCCAATCCGTGCGGTCGGCGGCCGCTCCCT
TTATAAGCCGACTCGCCCGGCAGCGCACCGGGTTGCGGAGGGTGGGCCTGGGAGGGGTGGTGGCCATTTTTTGTCTAACCCTAACTGAGAAGGGCGTAGGCGCCGTGCTTTTGCTCCCCGCGCGCTGTTTTTCTCGCTGACTT

Primer ＃1：CCCGCCCGAGAGAGTGAC（18bp、Tm：68.6℃）

Primer ＃2：AAGTCAGCGAGAAAAACAGC（20bp、Tm：61.1℃）
ターゲット2：Human β-actin のCpGアイランド（GC含量：73％, 増幅長：131bp）
GCTTCCTTTGTCCCCAATCTGGGCGCGCGCCGGCGCCCCCTGGCGGCCTAAGGACTCGGCGCGCCGGAAGTGGCCA
GGGCGGGGGCGACTTCGGCTCACAGCGCGCCCGGCTATTCTCGCAGCTCACCATG

Primer ＃1：GCTTCCTTTGTCCCCAATCT （20bp、Tm：64.1℃）
Primer ＃2：CATGGTGAGCTGCGAGAATA（20bp、Tm：63.9℃）【PCRサイクル】【反応組成】

98℃, 2 min.

KOD SYBR® qPCR Mix

10μl

50×ROX

0.4μl

10pmol/μl Primer ＃1

0.4μl

98℃, 10 sec.

10pmol/μl Primer ＃2

0.4μl

60℃, 10 sec.

Human genomic DNA

Xμl

68℃, 30 sec.

↓

DW

Yμl

↓

total

20μl

Melting

40 cycles＊Data collectionは伸長ステップに設定しました。

【使用機器】
Applied Biosystems StepOnePlusTM※比較のため、TaqベースのリアルタイムPCR試薬でも、取扱説明書推奨の条件にてリアルタイムPCRを実施し、比較を行いました。

2013

11

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 12

結果及び考察ターゲット1：Homo sapiens telomerase RNA（TR）geneのプロモーター領域（GC含量：64％、増幅長：219bp）
KOD SYBR® qPCR Mix

従来型リアルタイムPCR試薬（Taq使用）

従来型リアルタイムPCR試薬（Taq使用）〔A社リアルタイムPCR試薬〕〔B社リアルタイムPCR試薬〕

104

35
30

104

104

Ct値

25

101 copy

20
15
10
0

2
4
Log
（鋳型量）

101 copy

6

101 copy

NTC no-template control)

ターゲット2：Human β-actin のCpGアイランド（GC含量：73％、増幅長：131bp）
KOD SYBR® qPCR Mix

35

従来型リアルタイムPCR試薬（Taq使用）

従来型リアルタイムPCR試薬（Taq使用）〔A社リアルタイムPCR試薬〕〔C社リアルタイムPCR試薬〕

104

30

104

Ct値

25

104

20

1

10 copy

15
10
0

2
4
Log
（鋳型量）

101 copy

6

101 copy

NTC

GC含量が偏ったプロモーター領域をターゲットとした場合、従来のTaq DNA polymeraseをベースとしたリアルタイムPCR
試薬では定量的な増幅が認められませんでしたが、KOD SYBR® qPCR Mixを使用することで、特異性が高く、定量的な増幅が認められるようになりました。また、no-template control（NTC）においてもプライマーダイマーが検出されませんでした。
通常のPCRと同様に、GC含量が偏ったターゲットのリアルタイムPCRによる増幅は、KOD DNA polymeraseを使用したリアル
タイムPCR試薬の方が、Taq DNA polymeraseを使用したリアルタイムPCR試薬よりも適していると考えられます。

まとめ
本事例でお示ししたように、Taq DNA polymeraseを用いたリアルタイムPCR試薬で定量的な増幅が困難であった場合でも、
KOD SYBR® qPCR Mixを使用することで、定量的増幅が可能となります。GC含量が高いターゲットでも増幅可能であるため、従来困難であったプロモーター領域の定量も、KOD SYBR® qPCR Mixをご使用いただくことで、容易に行うことができると考えられます。
また、本キットはGCリッチなターゲットに限らず、Taq DNA polymeraseを用いたリアルタイムPCR試薬では困難な、長鎖ター
ゲット（〜2kb）の定量的な増幅、クルードサンプル（マウステール、植物、血液等）からの増幅が可能です。そのため、Taq DNA
polymeraseをベースとしたリアルタイムPCR試薬を用いた解析でお困りのターゲットをお持ちの方は、是非一度、KOD SYBR®
qPCR Mixをお試しください。
品名および内容
KOD SYBR® qPCR Mix
・KOD SYBR® qPCR Mix
・50×ROX reference dye

保存温度Code No.

価

1ml×1本〔40回用〕

包

装

-20℃

QKD-201T¥9,8001.67ml×3本〔200回用〕-20℃

QKD-201¥32,000（1.67ml×3本）
×5〔1,000回用〕-20℃

QKD-201X5¥147,000

格※50×ROX reference dyeがマスターミックスとは、別添付されています。
※包装欄に記載の反応回数は、50μl反応時のものです。容量は、KOD SYBR® qPCR Mixのみ示しています。

12

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 13

高効率リアルタイムPCR用マスターミックス

KOD SYBR® qPCR Mix
1

KOD SYBR® qPCR Mixと従来品（Taq使用）にはどのような違いがありますか?

1

KOD SYBR® qPCR MixはKOD DNA Polymeraseの酵素【従来品との特性比較】

特性（ 高効率、クル ード成分の阻害を受けにくい ）を活かし、®

従来品（Taq使用）

KOD SYBR qPCR Mix

酵素

Taq DNA Polymerase

KOD DNA Polymerase[exo（-）mutant]
70 〜 2000 bp®

SYBR GreenⅠアッセイの利便性と汎用性を高めた製品です。
右表のような特性の違いがございます。

増幅長70 〜 300 bp

GCリッチなターゲット

増幅しにくい増幅しやすい阻害物質の影響受けやすい（DNAの精製が必要）

受けにくい（クルードサンプル
から直接増幅可能）2

どのくらいのGC含量のサンプルが使用できますか？

2

GC含量83% のIGF2R遺伝子（cDNA）を検出した事例があります。※

3

融解曲線による増幅長多型解析は可能ですか？

3

2kb以下の増幅長で、増幅産物間のTm値の差が3℃以上（機器によっては5℃以上）あれば、ワンチューブ反応でマルチプレックスPCRや増幅長多型解析などを行うことができます。※

4

PCR反応液に生体組織などのクルードサンプルをどのくらいまで添加できますか？

4

エンドポイント検出において以下のサンプル量（20μl反応の場合）が添加可能です。
全

5
5

血

1/10に希釈し、2μl添加

爪

米粒1/3程度を直接添加

髪毛根から1〜2cmを直接添加

口腔粘膜

綿棒などで採取後、200μlの水で懸濁、反応液に5μl添加

培養細胞〜103cells

動物組織

アルカリ熱抽出液の上清を0.5〜2μl添加

植物組織

ワンステップ法による植物ライセートの10倍希釈液の上清を0.5〜2μl添加

一般的なPCR用のプライマーは使用できますか？
KOD シリーズ等を用いる一般的なPCRにおいて設計した、増幅長が2kbまでの特異性の高いプライマーは、基本的にはそのまま使用
可能です。

6
6

精製が脱塩のみのプライマーは使用できますか？
プライマーの精製純度は反応特異性に大きな影響を与えます。可能であればHPLC精製、少なくともカートリッジ（OPC）精製のグレードのプライマーをご使用ください。

7

プライマーや増幅産物のTm値の計算はどのように行えば良いですか？

7

最近接塩基対法によるプライマーのTm値および増幅産物のTm値計算表（EXCEL）は、製品ページをご覧ください。※

8

どのような機器に使用できますか？

8

以下のような機器に使用可能です。
【対応機器例】

メーカー

機

Applied Biosystems

7000、7300、7500、7500Fast、7700、7900HT、StepOneTM、StepOnePlusTM

Bio-Rad/MJ

MiniOpticonTM、CFX96 TouchTM、iCycler iQ®

Roche Diagnostics

LightCycler ® 1.x/2.0、Nano、480

Agilent Technologies

Mx3000P、3005P、4000

TaKaRaThermal Cycler Dice® Real Time System

BioFlux

LineGene

種・ROXが別添となっているため、補正のためのパッシブリファレンスを用いる機器においても特性に応じた最適なROX濃度でご使用いただけます。

※実施例、Tm値計算表などの詳細に関しましては、弊社のウェブサイト（www.toyobo.co.jp/bio）のKOD SYBR® qPCR Mixのページをご覧ください。

2013

13

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 14

ViroStat 社抗体・組換え抗原
診断薬原料用の感染症関連抗体および組換え抗原です。
ViroStat社は、感染症に関連する抗体および抗原を提供するため、1985年 Dr. Douglas
McAllisterによって設立された米国の製造メーカーです。
MONOTOPETM、OMNITOPETM、RABMAB®および 組換え抗原を含む、500以上のウィルスや細菌関連の試薬を提供しており、確かな実績がございます。
これらの製品は主に診断薬原料用として製造されており、バルク品などの特注も対応可能です。

【MONOTOPETM】【OMNITOPETM】

腹水または培養上清からProtein Aを

ViroStat社が開発した精製法にて、純用いて、純度＞90%に精製された、モノ

度＞95%まで精製されたポリクローナ

クローナル抗体です。各種ウィルス、細ル抗体です。各種ウィルス、細菌などに菌などに対する非標識及びFITC標識抗

対する非 標 識 及び B i o t i n 、 F I T C 、

体をご用意しています。

HRP標識抗体をご用意しています。

【RABMAB®】【Recombinant Protein】

RABMAB®はEpitomics, Inc.の登録

大腸菌、酵母などで生産され、高純度に商標で、ウサギのモノクローナル抗体で精製された組換え抗原です。肝炎、HIVす。レジオネラ菌、レンサ球菌がございなどがございます。

ます。

代表的な品目
Adenovirus
Astrovirus
Bovine Papillomavirus
Canine Distemper virus
Chlamydia
Cytomegalovirus
EnolaseEpstein-Barr virus
Francisella tularensis
Herpes Simplex virus
Klebsiella
Listeria
Metapneumovirus
Norovirus
Pichia pastoris
Pseudomonas
Rotavirus
SARS coronavirus
Streptococcus
Treponema pallidum
Varicella-Zoster virus

Aflatoxin
Bacillus anthracis
Brucella abortus
Canine Heartworm
Cholera toxin
Dengue virus
Entamoeba histolytica
Feline Immunodef. virus
GiardiaHIV
Legionella
Lyme (B. burgdorferi)
Mumps virus
Papillomavirus
Plasmodium
Rabies virus
Rubella virus
Shiga toxins
TetanusTrichomonas
West Nile Virus

Alphavirus
Bordetella pertussis
Campylobacter jejuni
Canine Parvovirus
Clostridia
Diphtheria toxin
Enterococcus
Feline Leukemia virus
Helicobacter pylori
Human Papilloma virus
LeptospiraM. tuberculosis
Mycoplasma
Parainfluenza virus
Poliovirus
Respiratory Syncytial virus
S. cerevisiae
Shigella
Toxic Shock toxin
Ureaplasma parvum
Yellow Fever virus

Aspergillus
Borrelia burgdorferi
Candida albicans
Chikungunya virus
Cryptosporidium parvum
E. coliEnterovirus
Flavivirus
Hepatitis A, B, C virus
Influenza virus
Lipid A
Marburg virus
Neisseria
Parvovirus
Prion Protein
Rhinovirus
Salmonella
Staphylococcus
Toxoplasma gondii
Vaccinia virus
Yersinia pestis

製品リストは、弊社ウェブサイト〈 www.toyobo.co.jp/bio 〉の新着製品情報より、ViroStatのページに入っていただ
き、製品リストをクリックしてください。また、データシートはリストの品名をクリックしていただければご覧いただけます。
製品の内容や価格はサイト下方のお問い合わせフォームよりお問い合わせください。

14

2013

No.101_'13.qx 13.10.15 14:48 ページ 15

40%offf キャンペーン

売
新発

リアルタイムPCR用細胞溶解&cDNA合成キット（培養細胞用）【期間：2013年10月9日〜2014年3月20日（ご注文分）】

SuperPrep TM Cell Lysis & RT Kit for qPCR
培養細胞

精製したTotal RNA(Ct)

96ウェルプレートなどで培養した細胞から逆転写反応の鋳型として利用可能なRNAを含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。さらに、本キットに含まれる逆転写反応試薬は、
この細胞ライセートからのRT反応に最適化されています。本キットにより、簡便、迅速に培養細胞からリアル
タイムPCR用の鋳型cDNAの合成が可能であり、ハイスループットアッセイに向いています。
30
R2=0.983

cDNA

ライセート
ト

HEK293細胞2.5×104cellsを本製品を用いて処理し、cDNA合成を行いました。
また、HEK293細胞から抽出したTotal RNA からReverTra Ace® qPCR RT
Master Mix (Code No.FSQ-201)を用いてcDNA合成（40μl反応系）を行いました。それぞれのcDNAを鋳型にTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix (Code No.
QPS-201)を用いて15種類のHouse Keeping GeneについてリアルタイムPCRを行いました。
いずれの遺伝子についても精製RNAを鋳型とした場合と良好な相関が認められま
した。

25
20
15
10
10

15

20

25

図. 精製RNAとの定量性の比較⇒本誌p.1〜4に詳細記事がございます

プレゼン
ト
付き

バイオ・クロスワードパズル 〜バイオ実験手法編〜
6
1h

a

g

7b

2

ヨ
コ
の
カ
ギ

30

細胞ライセート(Ct)〈SuperPrepTM 〉

1. RACE法は、転写配列の部分配列の情報を使って、転写産物の全長のシーケンスを明らかにする方法です。
Amplification of cDNA Endsの略です。
2. 電気泳動と抗体を使ってタンパク質を解析する手法の一つです。

Blot法。

3. 制限酵素を使って遺伝子を切断することをこのようにも言います。
4. 入れ子 という意味です。PCR産物を、更に内側に設定したプライマーを用いてもう一度
PCRを行う手法です。感度と特異性が格段に向上します。
PCR。

5f
i

タ
テ
の
カ
ギ

5. ELISAは、Enzyme-linked Immuno

Assayの略です。

6. 遺伝子導入しやすく処理した大腸菌をこのように呼びます。

cell.。

7.リンカーなどをリン酸化することを英語でこのように言います。
【以下の選択肢の中から選んでください】

3

e

c

RECORD PROPER RANDOM NESTED WESTERN INVERSE SOLVENT
LIGATION KINATION COMPETENT DIGESTION HYDRATION FORMATIONCHROMATIN SUSPEND

4d

a

b

c

d

e

f

g

h

i

バイオクロスワードパズルの解答に加え、UPLOADのアンケート（下記クイズコーナーに記載）にご回答いただいた方から抽選で、5名様に2,000円分の図書カードまたはアマゾンギフト券をご進呈いたします。

ご応募はこちらから※ご応募期間 2013年11月6日〜2014年1月31日

弊社ウェブページ
1 （www.toyobo.co.jp/bio）

2

読者のコーナー3

クイズコーナー

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