Journal of Fisheries Technology，12（1），23 − 29，2019

水産技術，12（1），23 − 29，2019

原著論文

LAMP 法を活用したヤコウチュウに摂食された
有害赤潮プランクトンの検出
北辻さほ＊1・紫加田知幸＊1・坂本節子＊1・中山奈津子＊1・永井清仁＊2・
鬼塚 剛＊1・多田邦尚＊3

Detection of harmful algae grazed by Noctiluca scintillans by LAMP method
Saho KITATSUJI, Tomoyuki SHIKATA, Setsuko SAKAMOTO, Natsuko NAKAYAMA,
Kiyohito NAGAI, Goh ONITSUKA and Kuninao TADA

Grazing by heterotrophic dinoflagellates often plays an important role in the termination of harmful algal blooms.
However, there are no simple methods to detect the ingestion of harmful algae by heterotrophic dinoflagellates in thefield. Here, we examined the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method to detect the grazing by Noctiluca
scintillans on Karenia mikimotoi and Chattonella spp. in laboratory and field experiments. In the laboratory, the LAMP
method detected DNA from K. mikimotoi in N. scintillans food vacuoles for no longer than 3 h after their ingestion,
indicating active grazing by N. scintillans in the early diurnal period. In Ago Bay, Japan, we collected N. scintillans atintervals of 2–5 h during August 2015, when K. mikimotoi and Chattonella spp. co-occurred. The LAMP method detected
DNA from K. mikimotoi and Chattonella spp. ingested by N. scintillans with high frequency during the daytime. These
results show that the LAMP method can detect grazing by N. scintillans on harmful algae, and that daytime sampling is
optimal to identify active grazing.
キーワード：ヤコウチュウ，有害赤潮プランクトン，LAMP 法，摂食2019 年 5 月 12 日受付

2019 年 9 月 20 日受理

従属栄養性プランクトンによる摂食は，有害赤潮プラ

1989，Miyaguchi et al. 2006，Harrison et al. 2011）。本種

ンクトンの衰退の一因となることが知られている

は植物プランクトンの高密度化と同時，あるいはその衰（Turner 2006）。現場海域においては，従属栄養性の渦鞭退時に，その細胞密度が急増する現象が観測されており，毛藻類が摂食者として有害赤潮プランクトンの衰退に寄本種の摂食行動が赤潮の衰退に関与する可能性が指摘さ与 し た 事 例 が 多 数 報 告 さ れ て い る（Nakamura et al.

Kitatsuji et al. 2019）
。
従っ
れている
（Dela−Cruz et al. 2002，

1996，Matsuyama et al. 1999）。ヤコウチュウ（夜光虫；て，現場海域で本種と有害赤潮プランクトンの関係を詳

以下，Noctiluca scintillans）は従属栄養性の渦鞭毛藻類

細に明らかにすることは，海域の有害赤潮の動態を理解に分類され，温帯域や亜熱帯域に広く分布し，沿岸域にする上で重要である。

おいて高密度化することが報告されている（Maclean＊１

従属栄養性プランクトンの摂餌物を解析するために，

国立研究開発法人水産研究・教育機構瀬戸内海区水産研究所環境保全研究センター〒 739− 0452

広島県廿日市市丸石 2− 17− 5

National Research Institute of Fisheries and Environment of Inland Sea, Japan Fisheries Research and Education Agency, 2-17-5 Maruishi,
Hatsukaichi-shi, Hiroshima 739-0452, Japan
sahok@affrc.go.jp＊2＊3（株）ミキモト

真珠研究所

国立大学法人香川大学農学部– 23 –

これまで様々な手法が提案されてきた。例えば，糞を電

伯湾から単離した培養株（Km69−9ax）を供した。継代

子顕微鏡観察することによって摂餌物を特定する手法

培 養 は， 改 変 SWM−3 培 地（ 以 降， 培 地， 紫 加 田 ら（Turner 1984），腸管のクロロフィル a 濃度を測定するこ2011），光強度 200 μmol photons m−2 s−1（12 hL：12 hD サと に よ っ て 摂 食 の 有 無 を 判 断 す る 手 法（Bautista andイクル），20°C の条件で行い，実験には対数増殖期の培

Harris 1992），ボトル実験により餌料プランクトンの減養株を供した。N. scintillans は 2015 年 3 月または 2019 年

少速度から摂食速度を推定する手法（Nakamura 1998）

3 月に広島湾で採集し，光強度 10 μmol photons m−2 s−1などが提案されてきた。しかしながら，電子顕微鏡観察（12 hL：12 hD サイクル），20°C で，Dunaliella tertiolecta

において柔らかい外被を有する生物は化学固定などによ（NIES−2258）を給餌し，1 週間ごとに継代しながら培養り形態が変化しやすく同定が難しいこと，クロロフィル a

した。N. scintillans は実験前に，ガラス繊維ろ紙（GF/C，濃度からは種組成の情報が得られないこと，ボトル実験

Whatman）によりろ過後，オートクレーブ滅菌した海水には時間を要し，操作に熟練を要することなど，いずれ中に移し，24 時間絶食させた。

N . scintillans に摂食された摂餌物由来 DNA の抽出の手法も無殻の有害赤潮プランクトンへ応用する上では2 mL の培地に懸濁した 20 細胞の N. scintillans をパスツー

問題点を有する。
近年，動物プランクトンの摂餌物の検出に PCR 法がルピペットで 6 穴マイクロプレートの 3 穴に単離して合適用されるようになった（Nejstgaard et al. 2003，Olsen

計60細胞準備し，それぞれに5 mLのK. mikimotoi培養液（対

et al. 2014）。定量 PCR 法を用いてカイアシ類の摂餌物を数増殖期，10,000 cells mL−1）を接種して，N. scintillans

定量的に解析した事例も複数報告されている（Troedssonの培養条件と同条件下で 1 時間摂食させた。その後培地

et al. 2009，Nejstgaard et al. 2008，Hu et al. 2014，Haley

で洗浄し，1 mL に定容した N. scintillans 細胞懸濁液に対et al. 2010）。また，Nishitani et al.（2018）は，従属栄養

して 4 mL の 99.5％エタノール（以下，エタノール）を添性渦鞭毛藻 Phalacroma mitra を現場海域から単離して加して固定し，4°C で保存した。N. scintillans により摂食

PCR 法で rDNA を増幅した後，制限酵素を用いて増幅産された餌は食胞中で消化されることが知られており，食物から本種由来の DNA を除去することで，摂餌物由来胞の有無で摂食活動を行った細胞を光学顕微鏡下で識別の DNA を特異的に検出する手法を提案している。

できる（高山 1977）。そこで，エタノール固定試料の中

しかしながら，PCR 法には高価な機器や特別な試薬がから光学顕微鏡下（× 40；IX71，OLYMPUS）で食胞を必要となる。近年，サーマルサイクラーや定量 PCR 装置

有する N. scintillans を，パスツールピペットを用いて分のような高価な機器を必要とせず，迅速かつ簡易に精確

離し，氷上に置かれた 0.5 mL マイクロチューブに移した。

な遺伝子増幅を行う手法として，loop−mediated isothermal
amplification（LAMP）法が医療分野や農業分野などで

リン酸緩衝食塩水（PBS）またはトリス− EDTA 緩衝液（TE，pH 8.0）を 100 μL 添 加後，99.9°C で 15 分 間 加 熱 抽

広く活用されている（Notomi et al. 2000，Fukuta et al.

出することにより DNA 粗抽出液を得た。

2003，Imai et al. 2006，Mori and Notomi 2009）。LAMP 法LAMP 法による K . mikimotoi および Chattonella spp.

は①全ての反応が等温で進行する，②核酸の増幅効率がの検出極めて高く，1 時間以内の反応で大量の増幅産物を得る

Chattonella spp. のプライマーを使用し，反応液は表 2 にことができる，③極めて高い反応特異性を持つ，④夾雑示す組成で調製した。なお，
Chattonella spp.のプライマー

LAMP 法 に は 表 1 に 示 す K. mikimotoi お よ び

物が多く含まれる試料でも良好な核酸増幅反応が得られは C. marina，C. antiqua および C. ovata を検出することる，などの特長を有している。そのため，LAMP 法は有が確認されている（坂本ら 2012）。LAMP の反応は，K.

害赤潮や貝毒の原因プランクトンを高感度に検出する方

mikimotoi お よ び Chattonella spp. の 検 出 で は そ れ ぞ れ法として，水産研究分野で広く活用されている（Zhang

64°C および 65°C で 30 分間行い，反応の間，等温増幅蛍et al. 2009，坂本ら 2011，坂本ら 2012，Nagai and Itakura

光測定装置（Genie®II，OptiGene 社）を用いて蛍光検出

2012，Nagai et al. 2012，Nagai 2013）。

することにより増幅産物を経時的に観察するとともに，そこで，本研究では，まず室内実験で LAMP 法を活用

その結果をもとに反応終了後に会合曲線解析（Annealing

して N. scintillans が摂食した有害赤潮プランクトンを検

curve analysis）を行うことでその反応特異性を確認した。

N . scintillans 細胞内における K . mikimotoi の DNA 分解

出可能であることを明らかにし，次に現場海域で本手法を試用して，N. scintillans の摂食による有害赤潮プラン

時間の把握

クトンへの影響を把握するための適切な調査方法の適用の細胞内で消化される。そこで，K. mikimotoi について N.

条件を見出すことを目的とした。

scintillans 細胞内における DNA 分解時間の検討を行った。

摂餌物の DNA は時間とともに N. scintillans

前述の方法（N. scintillans に摂食された摂餌物由来 DNA

材料と方法の抽出）で420細胞のN. scintillansを5枚の6穴プレート（合計 21 穴 ） に 分 注 し，K. mikimotoi を 1 時 間 摂 食 さ せ た。

供試生物 Karenia mikimotoi は 2013 年 7 月に広島湾か

摂食後直ちに N. scintillans を培地で洗浄し，5 mL の培地ら単離した培養株（13HBKm2）または 2014 年 6 月に佐を入れた 6 穴マイクロプレートに 20 細胞ずつ単離して，– 24 –

LAMP 法による夜光虫の摂餌物の検出

表 1． Karenia mikimotoi および Chattonella spp. 検出のためのプライマー塩基配列

細胞密度を光学顕微鏡下（IX71，
OLYMPUS）で計数した。

表 2． LAMP 法に用いた反応液の組成
添加量（μL）
Karenia mikimotoi 超純水
2
6
プ ラ イ マ ー（ 表 1 の プ ラ イ マ ー を
1 μL ずつ混合）
反 応 試 薬（Isothermal Master Mix， 15
OptiGene 社）
DNA 抽出液
2
Chattonella spp. 超純水
35
プ ラ イ マ ー（ 表 1 の プ ラ イ マ ー を
1 μL ずつ混合）
反 応 試 薬（Isothermal Master Mix， 15
OptiGene 社）
DNA 抽出液
2
種

反応液

1 時間の摂食実験を，9 時から翌日の 9 時まで 2 時間おきに 13 回繰り返した。
N. scintillans の摂食速度は Nakamura（1998）に従い，K.
mikimotoi 細胞密度の減少量を摂食量として算出した。実験区の K. mikimotoi 細胞密度の平均値 CKm（cells mL−1）は

CKm ＝（Ctg − C0 ）/ln（Ctg /C0 ）で求められ，ここで C0 は

実 験 開 始 時 の，Ctg は 実 験 区 に お け る 実 験 終 了 時 の K.
mikimotoi 細胞密度（cells mL−1）を示す。N. scintillans の濾水速度 FNs（mL grazer−1 h−1；N. scintillans を grazer と表す）は FNs ＝ V/NT（lnCt − lnCtg ）となり，ここで V は培

養量（mL），N は接種した N. scintillans の細胞数（cells），
T は実験時間（h），Ct は対照区における実験終了時の K.

引き続き N. scintillans の培養と同条件下で培養した。N.

mikimotoi 細 胞 密 度（cells mL−1） を そ れ ぞ れ 示 す。N.

scintillans を培地に移してから 0，0.25，0.5，1，2，3，6

scintillans の摂食速度 G（cells grazer−1 h−1）は G ＝ CKm FNs

時間経過後にパスツールピペットで N. scintillans を 50 細により求めた。

天然試料への LAMP 法の適用

胞以上分離して，エタノールを 5 mL 入れた 6 穴マイクロ

LAMP 法を用いた N.

プレートに移して固定した。固定試料より前述の方法（N.

scintillans 細胞内の有害赤潮プランクトン検出法を現場

scintillans に摂食された摂餌物由来 DNA の抽出）に準じに適用し，天然海域における摂食動態の日周性を調べた。

て N. scintillans を 単 離 し，DNA を 抽 出 し た。 得 ら れ た

調査は，2015 年 8 月 10 日 16：00 〜 11 日 16：00 に，三重DNA 抽出液を前述の方法（LAMP 法による K. mikimotoi

県の英虞湾における調査定点（34°17.7´N，136°50.4´E；および Chattonella spp. の検出）に準じて LAMP 法により水深約 8 m）で N. scintillans の採集を 2 〜 5 時間おきに 11分析した。また，光学顕微鏡下（IX71，OLYMPUS）で N.

回 実 施 し た。 当 時， 英 虞 湾 で は K. mikimotoi お よ び

scintillans を 50 細胞以上観察し，食胞が形成されている

Chattonella spp. が混合赤潮を形成していた（三重県ホー細胞の割合を算出した。

ム ペ ー ジ，http://www.pref.mie.lg.jp/suigi/hp/78550017262.

N . scintillans の摂食リズムの把握 従属栄養性プランhtm）。N. scintillans は小型のプランクトンネット（口径クトンの摂食には日周リズムがあることが知られている

45 cm，目合い 100 μm）による海底直上 1 m から表層まで（Mackas and Bohrer 1976）。そこで，N. scintillans の摂食の鉛直曳きにより採集した。得られた N. scintillans は目

速度の日周性を把握し，現場における適切なサンプリン

合い 330 μm のプランクトンネット上で，滅菌ろ過海水

グ時刻を設定することを目的として，本実験を実施した。

を用いて洗浄し，エタノール（最終濃度約 80％）で固実験区には 1 mL の培地に懸濁させた N. scintillans 10 細胞

定 し て 4°C で 保 存 し た。 ま た， 光 学 顕 微 鏡（ × 40；

を，対照区には 1 mL の培地のみを 12 穴マイクロプレー

IX71，OLYMPUS）で食胞を有する N. scintillans 細胞のトに分注し，3 mL の K. mikimotoi 培養液（対数増殖期，割合を 300 細胞以上計数して求めた。食胞が認められる

1,000 cells mL−1）を接種して，1 時間培養した。実験区

細胞を，パスツールピペットを用いてエタノールで洗浄および対照区は 3 連とし，培養条件は，温度 20°C，光強しながら単離し，0.5 mL 容のマイクロチューブに 1 cell ず

度 約 100 μmol photons m−2 s−1，6：00 〜 18：00 を 明 期，

つ入れて，14 検体作製した。11 回の調査で得られた固定

18：00 〜 6：00 を暗期とした。培養前後の K. mikimotoi

サンプルについて 14 検体ずつ作製し，これを前述の– 25 –

LAMP 法（LAMP 法による K. mikimotoi および Chattonella

50％の範囲で推移した（図 4 b）。また，全体のうち K.

spp. の検出）により K. mikimotoi および Chattonella spp. を

mikimotoi を摂食していた N. scintillans の割合は 1 〜 30％検出した。また，食胞が認められる細胞の割合と LAMPの範囲で推移し，10：00 に最大となった（図 4 b）。一方，

法で陽性となった細胞の割合を乗じることによって，各N. scintillans に 摂 食 さ れ た Chattonella spp. は 12：00 〜

時刻において K. mikimotoi および Chattonella spp. を摂食

16：00 の間のみで検出され，全体のうち Chattonella spp.

した細胞の割合を算出した。

を摂食していた N. scintillans の割合は 7.1 〜 21.4％の範囲
で 推 移 し た（ 図 4 c）。Chattonella spp. を 摂 食 し た N.

結果scintillans の割合は，0.5 〜 3.2％と調査期間中一貫して低かった（図 4 c）。

N . scintillans 細胞内における K . mikimotoi の DNA 分
解時間の把握K. mikimotoi を摂食した N. scintillans は食考察

胞内に摂餌物が認められた（図 1）。図 2 に N. scintillansの食胞保有率および LAMP 法による K. mikimotoi の検出

本研究により，LAMP 法を用いることで，N. scintillans率を示す。N. scintillans の食胞保有率は，1 時間後までは細胞内の有害赤潮プランクトンの簡易検出が可能である

70 〜 72％だったが，2 時間後に 56％に減少し，その後 6ことが示された。従属栄養性プランクトンの食胞および時間後まで変化しなかった（図 2）。一方で，摂食直後の N. scintillans からの K. mikimotoi 検出率は 100％だった
が，15 分後には 40％，2 時間後には 10％に低下し，3 時
間後以降は検出されなくなった。

N . scintillans の摂食リズムの把握 N. scintillans による
K. mikimotoi の摂食速度は 49 〜 560 cells grazer−1 h−1 の範囲で推移した（図 3）。摂食速度は明期の 11：00 〜 17：00に減少し，暗期の 19：00 〜 1：00 までは低いレベルで推移 し た が， 暗 期 の 終 わ り か ら 明 期 の 初 め の 3：00 〜
5：00 に上昇し，7：00 〜 9：00 まで高いレベルを維持した（図 3）。また，N. scintillans は暗期の 21：00 〜 3：00 に，
全体の 1 〜 3 割の細胞が分裂中であった。
天 然 試 料 へ の LAMP 法 の 適 用

食 胞 を 有 す る N.

scintillans は全ての時間帯で認められ，5 〜 38％で推移した（図 4 a）。LAMP 法によって得られた，食胞を保有する N. scintillans が K. mikimotoi を 摂 食 し て い た 割 合 は
10：00 に最高値（79％）を示し，他の時間帯では 21 〜

図 2． Karenia mikimotoi を 摂 食 さ せ た Noctiluca scintillans（n ＞ 50）の食胞保有率（a）および食胞が認められた N.
scintillans（n ＝ 10） の LAMP 法 に よ る K. mikimotoi 検 出率（b），摂食させた後，ろ過海水に移してから 0 〜 6 時
間経過した時点で固定し，分析した図 1． Karenia mikimotoi を 摂 食 し た Noctiluca scintillans， 矢 印
は食胞を示す図 3． Karenia mikimotoi に対する Noctiluca scintillans の摂食速
度の日変化，上部の白色部分は明期，黒色部分は暗期を示す– 26 –

LAMP 法による夜光虫の摂餌物の検出

図 4． 2015 年 8 月 10 〜 11 日の英虞湾における Noctiluca scintillans の食胞保有率（a），食胞を保有している N. scintillans（各時刻において n ＝ 14）が Karenia mikimotoi を摂食していた割合（白）および全体のうち K. mikimotoi を摂食していた割合（黒）（b），
食胞を保有している N. scintillans（各時刻において n ＝ 14）が Chattonella spp. を摂食していた割合（白）および全体のうちChattonella spp. を摂食していた割合（黒）（c）* は検出されず。全体のうち K. mikimotoi あるいは Chattonella spp. を摂食していた割合（黒）は N. scintillans の食胞保有率（a）に N.
scintillans（n ＝ 14）が K. mikimotoi あるいは Chattonella spp. を摂食していた割合（b，c の白）を乗じて算出した
上部の白色部分は昼間，黒色部分は夜間を示す

腸管内から摂餌物の遺伝子を検出する場合，DNA の消出時間が長くなる可能性はある。検出精度を上げるため化分解を止めるために，液体窒素による瞬間凍結やには，この点が今後の技術的な検討課題と考える。

（Nejstgaard et al. 2008，Wang et al. 2016），現場海水から動物プランクトンの摂食リズムは様々な生物種で観察単離した従属栄養性プランクトンを直接 DNA 抽出バッされている。
カイアシ類は夜間活発に摂餌するが（Mackas

ファーに投入する（Nishitani et al. 2018）といった方法

and Bohrer 1976），従属栄養性渦鞭毛藻Gyrodinium dominans

が 利 用 さ れ て い る。 一 方 で， 本 研 究 で は Durbin et

および Oxyrrhis marina の摂食速度は夜間よりも昼間のほal.（2011） が 用 い た エ タ ノ ー ル 固 定 法 を 採 用 し，K.

うが圧倒的に高い（Arias et al. 2017）。本研究では，N.

mikimotoi や Chattonella spp. の 検 出 に 成 功 し た。 ま た，

scintillans の摂食速度は明期開始直前から明期中盤にかLAMP 法は DNA 抽出物中に含まれる夾雑物に反応が影けて高くなることを室内実験で明らかにした（図 3）。

響されにくく，反応の種特異性が高い（吉野ら 2006）。

さらに，英虞湾において N. scintillans の K. mikimotoi お

この特徴は N. scintillans の粗抽出物から標的とする有害よび Chattonella spp. の摂食率は夜間よりも昼間に上昇す

赤潮プランクトンの検出に貢献した可能性がある。

ることを確認した（図 4）。これらのことを踏まえると，

ただし，カイアシ類において，摂食後 2 〜 4 時間以上

野外において N. scintillans の摂食動態を LAMP 法により経過すると摂食物（Alexandrium fundyense）を PCR 法で

経日的に追跡する場合，本種の摂食を確実に捕らえるこ

検出することが困難となることが報告されているようにとができる午前中に実施することが推奨される。

（Haley et al. 2010），捕食者の DNA 消化は検出結果に大N. scintillans は昼間表層に多く分布し，深度が深くな

きな影響を与えることは念頭におく必要がある。LAMP

るにつれて指数関数的に減少する傾向がある（Kimor法による N. scintillans 細胞内の有害赤潮プランクトン K.

1979，Kiørboe and Titelman 1998，Miyaguchi et al. 2006）。

mikimotoi の検出率は，摂食 15 分後以降急速に減少し，3

一方で，K. mikimotoi や Chattonella spp. などの有害赤潮

時間後には検出されなくなった（図 2）。従って，本手

プランクトンは夜明け前に海面へと上昇し，夕方から夜法による検出結果は，採集時から 3 時間程度前までの摂間にかけて底層へと下降する日周鉛直移動を示すこと

食状況を示していると考えられる。DNA の抽出溶媒量が 知 ら れ て い る（Koizumi et al. 1996，Amano et al.

は 本 研 究 で は 100 μL と し た が， 溶 媒 量 を 減 少 さ せ て

1998，Shikata et al. 2017）。 よ っ て，N. scintillans は K.

DNA 抽出濃度を増加させることにより K. mikimotoi の検mikimotoi や Chattonella spp. などの有害赤潮プランクトン– 27 –

と昼間に遭遇しやすくなることが推察される。Shikata etAlexandrium fundyense using PCR identification of ingested prey. J.

al.（未発表）によると，英虞湾における本調査と同日にPlankton Res., 33, 927−936.

K. mikimotoi および Chattonella spp. の鉛直分布調査を実Harrison PJ, Furuya K, Glibert PM, Xu J, Liui HB, Yin K, Lee JHW,

施したところ，両種とも終日 5 m 以深に分布し，夜間はAnderson DM, Gowen R, Al-azri AR, Ho AYT (2011) Geographical

海底付近に集積し，昼間は上昇していた。実際，本研究

distribution of red and green Noctiluca scintillans. Chin. J. Oceanol.

の 野 外 調 査 に お い て も K. mikimotoi お よ び Chattonella

Limn., 29, 807−831.

spp. の摂食率は昼間に上昇した（図 4，5）。このことから，

Hu S, Guo Z, Li T, Carpenter EJ, Liu S, Lin S (2014) Detecting in situ

N. scintillans による有害赤潮プランクトンの摂食状況を

copepod diet diversity using molecular technique: development of a

正確に解析するためには，有害赤潮プランクトンの鉛直

copepod/symbiotic ciliate-excluding eukaryote-inclusive PCR

分布を考慮することが重要な要件であると考えられる。

protocol. PloS one, 9, e103528.

以上のように，本研究では LAMP 法を活用することで，Imai M, Ninomiya A, Minekawa H, Notomi T, Ishizaki T, Tashiro M,

有害赤潮プランクトンに対する N. scintillans の摂食状況

Odagiri T (2006) Development of H5-RT-LAMP (loop-mediatedを確認可能であることが明らかにされた。また，本手法

isothermal amplification) system for rapid diagnosis of H5 avian

は化学固定などにより形態が変化しやすい無殻の有害赤

influenza virus infection. Vaccine, 24, 6679−6682.

潮プランクトンに対する摂食の有無の確認にも有効な手

Kimor B (1979) Predation by Noctiluca miliaris Souriray on Acartia

段であることが示された。今後，本手法を用いて，深度

tonsa Dana eggs in the inshore waters of southern California.

別，時間別における N. scintillans の摂食状況のデータ等が蓄積されれば，有害赤潮プランクトンの消長におけるLimnol. Oceanogr., 24, 568−572.
Kiørboe T, J Titelman (1998) Feeding, prey selection and prey encounterN. scintillans の役割がより明らかになると期待される。

mechanisms in the heterotrophic dinoflagellate Noctiluca scintillans.
J. Plankton Res., 20, 1615−1636.

謝辞Kitatsuji S, Yamaguchi H, Asahi T, Ichimi K, Onitsuka G, Tada K (2019)

英虞湾での調査にご協力くださったミキモト真珠研究

Does Noctiluca scintillans end the diatom bloom in coastal water? J.

所の郷譲治研究員，岡野翔研究員に感謝する。また，本Exp. Mar. Biol. Ecol., 510, 10−14.

研究を遂行するにあってご指導頂いた香川大学瀬戸内圏

Koizumi Y, Uchida T, Honjo T (1996) Diurnal vertical migration of

研究センターの本城凡夫教授および一見和彦教授，香川Gymnodinium mikimotoi during a red tide in Hoketsu Bay, Japan. J.

大学農学部の山口一岩准教授に感謝の意を表する。

Plankton Res., 18, 289−294.
Mackas D, Bohrer R (1976) Fluorescence analysis of zooplankton gut

文献contents and an investigation of diel feeding patterns. J. Exp. Mar.

Amano K, Watanabe M, Kohata K, Harada S (1998) Conditions necessary
for Chattonella antiqua red tide outbreaks. Limnol. Oceanogr., 43,

Biol. Ecol., 25, 77−85.
Maclean JL (1989) Indo-Pacific Red Tides, 1985−1988. Mar. Poll. Bull.,20, 304−310.

117−128.
Arias A, Saiz E, Calbet A (2017) Diel feeding rhythms in marine

Matsuyama Y, Miyamoto M, Kotani Y (1999) Grazing impacts of the

microzooplankton: effects of prey concentration, prey condition, andheterotrophic dinoflagellate Polykrikos kofoidii on a bloom ofgrazer nutritional history. Mar. biol., 164, 205.

Gymnodinium catenatum. Aquat. Microb. Ecol., 17, 91−98.

Bautista B, Harris RP (1992) Copepod gut contents, ingestion rates andMiyaguchi H, Fujiki T, Kikuchi T, Kuwahara VS, Toda T (2006)

grazing impact on phytoplankton in relation to size structure ofRelationship between the bloom of Noctiluca scintillans andzooplankton and phytoplankton during a spring bloom. Mar. Ecol.

environmental factors in the coastal waters of Sagami Bay, Japan. J.

Prog. Ser., 82, 41−50.

Plankton Res., 28, 313−324.

Dela-Cruz J, Ajani P, Lee R, Pritchard T, Suthers I (2002) TemporalMori Y, Notomi T (2009) Loop-mediated isothermal amplification (LAMP)

abundance patterns of the red tide dinoflagellate Noctiluca: a rapid, accurate, and cost-effective diagnostic method for
infectious diseases. J. Infect. Chemother., 15, 62−69.

scintillans along the southeast coast of Australia. Mar. Ecol. Prog.

Nagai S, Itakura S (2012) Specific detection of the toxic dinoflagellates

Ser., 236, 75−88.
Durbin EG, Casas MC, Rynearson TA (2011) Copepod feeding andAlexandrium tamarense and Alexandrium catenella from single

digestion rates using prey DNA and qPCR. J. Plankton Res., 34,vegetative cells by a loop-mediated isothermal amplification method.
Marine Genomics, 7, 43−49.

72−82.
Fukuta S, Iida T, Mizukami Y, Ishida A, Ueda J, Kanbe M, Ishimoto Y

Nagai S, Yamamoto K, Hata N, Itakura S (2012) Study of DNA extraction(2003) Detection of Japanese yam mosaic virus by RT-LAMP. Arch.

methods for use in loop-mediated isothermal amplification detection

Virol., 148, 1713−1720.

of single resting cysts in the toxic dinoflagellates Alexandrium

Haley ST, Juhl AR, Keafer BA, Anderson DM, Dyhrman ST (2010)
Detecting copepod grazing on low-concentration populations oftamarense and A. catenella. Marine Genomics, 7, 51−56.
Nagai S (2013) Species-Specific detection of six Alexandrium species– 28 –

LAMP 法による夜光虫の摂餌物の検出

from single vegetative cells by a loop-mediated isothermal

関する研究」, 独立行政法人水産総合研究センター , 長崎大学 ,amplification method. DNA Testing, 5, 33−46.

広島大学 , 高知大学 , pp. 4−11.

Nakamura Y (1998) Biomass, feeding and production of Noctiluca

紫加田知幸・櫻田清成・城本祐助・小山長久・生地

暢・吉田

誠・

大 和 田 紘 一（2011） 八 代 海 に お け る ラ フ ィ ド 藻 Chattonella

scintillans in the Seto Inland Sea, Japan. J. Plankton Res., 20,

antiqua の増殖および栄養塩との関係 . 日水誌 , 77, 40−52.

2213−2222.
Nakamura Y, Suzuki S, Hiromi J (1996) Development and collapse of a

Shikata T, Onitsuka G, Abe K, Kitatsuji S, Yufu K, Yoshikawa Y, Honjo T,

Gymnodinium mikimotoi red tide in the Seto Inland Sea. Aquat.

Miyamura K (2017) Relationships between light environment andMicrob. Ecol., 10, 131−137.

subsurface accumulation during the daytime in the red-tide
dinoflagellate Karenia mikimotoi. Mar. Biol., 164, 18.

Nejstgaard JC, Frischer ME, Raule CL, Gruebel R, Kohlberg KE, Verity
PG (2003) Molecular detection of algal prey in copepod guts and高山晴義（1977）ヤコウチュウ Noctiluca scintillans（Macartney）の培養とその観察 . 日本プランクトン学会報 , 24, 159−162.

fecal pellets. Limnol. Oceanogr-Meth., 1, 29−38.
Nejstgaard JC, Frischer ME, Simonelli P, Troedsson C, Brakel M,

Troedsson C, Simonelli P, Nägele V, Nejstgaard JC, Frischer ME (2009)

Adiyaman F, Sazhin AF, Artigas L F (2008) Quantitative PCR to

Quantification of copepod gut content by differential length

estimate copepod feeding. Mar. Biol., 153, 565−577.

amplification quantitative PCR (dla-qPCR) . Mar. Biol., 156,

Nishitani G, Kosaka Y, Nagai S, Takano Y, Kim YO, Ishikawa A (2018)
An effective method for detecting prey DNA from marine

253−259.
Turner JT (1984) Zooplankton feeding ecology: contents of fecal pellets

dinoflagellates belonging to the genera Dinophysis and Phalacromaof the copepods Temora turbinata and T. stylifera from continental

using a combination of PCR and restriction digestion techniques.

shelf and slope waters near the mouth of the Mississippi River. Mar.
Biol., 82, 73−83.

Plankton and Benthos Research, 13, 90−94.
Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, Yonekawa T, Watanabe K, Amino

Turner JT (2006) 20 Harmful Algae Interactions with Marine Planktonic

N, Hase T (2000) Loop-mediated isothermal amplification of DNA.

Grazers. Ecology of Harmful Algae, Graneli E, Turner JT (Eds.),

Nucleic Acids Res., 28, e63−e63.

Springer-Verlag, Berlin, 259−270.

Olsen BR, Troedsson C, Hadziavdic K, Pedersen RB, Rapp HT (2014) A吉野

molecular gut content study of Themisto abyssorum (Amphipoda)

学・渡

一・小島

禎・池戸正成（2006）LAMP（Loop-Mediated

Isothermal Amplification）法によるコイヘルペスウイルスの高感度迅速検出 . 魚病研究 , 41, 19−27.

from Arctic hydrothermal vent and cold seep systems. Mol. Ecol.,Zhang F, Ma L, Xu Z, Zheng J, Shi Y, Lu Y, Miao Y (2009) Sensitive

23, 3877−3889.

and rapid detection of Karenia mikimotoi (Dinophyceae) by loop-

坂本節子・山口峰生・紫加田知幸（2011）平成 22 年度漁場環境・
生物多様性保全総合対策委託事業報告書「新奇有害プランクト

mediated isothermal amplification. Harmful Algae, 8, 839−842.

ンに係る発生・増殖機構の解明 , モニタリング及び予察技術に

Wang L, Lin X, Goes JI, Lin S (2016) Phylogenetic analyses of three

関する研究」, 独立行政法人水産総合研究センター , 長崎大学 ,genes of Pedinomonas noctilucae, the green endosymbiont of the広島大学 , 高知大学 , 新潟県 , pp. 4−12.

marine dinoflagellate Noctiluca scintillans, reveal its affiliation to

坂本節子・山口峰生・紫加田知幸（2012）平成 23 年度漁場環境・

the order Marsupiomonadales (Chlorophyta, Pedinophyceae) under

生物多様性保全総合対策委託事業報告書「新奇有害プランクト

the reinstated name Protoeuglena noctilucae. Protist, 167, 205−216.

ンに係る発生・増殖機構の解明 , モニタリング及び予察技術に– 29 –