血液中のダイオキシン類測定暫定マニュアル

平成１２年１２月２２日

血液中のダイオキシン類測定暫定マニュアル検討協力者
福岡県保健環境研究所保健科学部長

飯田隆夫

埼玉県衛生研究所ダイオキシン研究ｸﾞﾙｰﾌﾟ専門研究員

斉藤

貢一

工学院大学講師

土屋悦輝

星薬科大学薬品分析化学教室教授

中澤裕之

大阪府立公衆衛生研究所食品衛生部食品化学課長

堀東京都立衛生研究所生活科学部乳肉衛生研究科長

宮崎孝之

摂南大学薬学部教授

宮田秀明

国立環境研究所地域環境研究ｸﾞﾙｰﾌﾟ統括研究官

森田昌敏

東京農業大学応用生物科学部教授

渡邊

昌

伸二郎

目次
１
２
３
４
５
６

はじめに
用語の定義
略語の定義
調査対象物質目標定量下限値分析に必要な施設・試薬・器具等

1
1
2
3
3
4

6.1 試料前処理室
6.2 試薬類

446.3 器具・機材

5

７ 調査計画８ 試料採取及び試料の取り扱い
９ 測定

7
7
7

9.1 測定方法の概要
9.2 前処理9.3 カラムクロマトグラフィー
9.4 測定準備
9.5 測定9.6 計算

7
8
9
10
10
10

9.7 PCDDs，PCDFs及びCo‑PCBsの同定

10１０ 安全管理
10.1
10.2
10.3
10.4
10.5
10.6
10.7
10.8
10.9

試料前処理室及びGC/MS 室の構造
試薬の管理
標準物質の管理分析者
測定分析機関の義務
GC/MS
血液の付着したガラス器具の洗浄
血液の付着した廃棄物の管理
その他の廃棄物の管理

11
11
12
12
12
12
12
12
12
12

１１ 精度管理及び精度保証
11.1
11.2
11.3
11.4
11.5
11.6
11.7
11.8

精度管理にかかわる作業とその記録
測定分析の記録計算
ブランク試験
2 重測定（試料の前処理から）.
2 重測定（GC/MS 測定）
品質管理チェック試料（QCCS）の測定
外部機関とのインターキャリブレーション

12
12
13
14
14
14
14
14
14

図表等
表‑1．定量する化合物の名称等．
表‑2．本マニュアルで規定するPCDDs，PCDFs 及びCo‑PCBs 各化合物の目標定量下限値
表‑3．測定に用いる標準物質．
表‑4．測定に用いる同位体スパイク．
表‑5．測定質量数の例
表‑6．PCDDs，PCDFs 及びCo‑PCBs の塩素同位体の理論天然存在比.
表‑7．TEQ 算出のためのTEF
表‑8．PCDDs，PCDFs 及びCo‑PCBs 測定分析結果の表記例.

15
16
17
18
19
20
21
22

１２ 解説編図‑1．血液中のダイオキシン分析フロー2325

血液中のダイオキシン類測定暫定マニュアル

１ はじめに血液中のダイオキシン類の濃度は低濃度であり，現在の科学技術レベルで考えられる範囲において確からしい値を得るためには，分析実験設備や測定・分析操作等に関わる一定水準以上の技術が要求される．そこ
で，血液中のダイオキシン類及びコプラナーPCBの濃度を測定するための方法として技術的内容をまとめた．
なお，ここで示した以外の方法であっても本方法と同等以上の性能を持つことが認められればその方法を採用しても良い．

２ 用語の定義
本マニュアル中で記載する用語の定義を次のように定める．
2.1 ダイオキシン類
平成11 年7 月16 日に公布されたダイオキシン類対策特別措置法において、ダイオキシン類とは、ポリクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン(PCDDs)とポリクロロジベンゾフラン(PCDFs)及び同様な毒性を示す
コプラナーPCBs で表される化合物の総称である。ただし，本マニュアルではテトラ，ペンタ，ヘキサ，ヘプタ及びオクタクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン（７種）及びテトラ，ペンタ，ヘキサ，ヘプタ及びオクタクロロジベンゾフラン（１０種）及びコプラナーPCBs（１２種）の化合物を示す．
2.2 2,3,7,8-位塩素置換異性体
PCDDs 及びPCDFs 類の内，化学構造上2，3，7 及び8 で表記される位置が塩素で置換されている化合物の総称．PCDDs 7化合物， PCDFs 10 化合物，合計17 化合物が存在する．
2.3 コプラナーPCBs1
ポリクロロビフェニル2 で表される化合物であって，化学構造上2，2’，6 及び6’で表記されるオルト位3の塩素置換数が 1 以下である化合物の総称．ただし，本マニュアルではこの化合物の内，『表-1．定量する化合物の名称等．（p.16）』のCo-PCBs の欄に示す12 種類の化合物を示す．
2.4 ノンオルトコプラナーPCBs
ポリクロロビフェニルで表される化合物であって，化学構造上2，2’，6 及び6’で表記されるオルト位が塩素で置換されていない化合物の総称．ただし，本マニュアルではこの化合物の内，『表-1．定量する化合物の名称等．（p.16）』の中でCo-PCBs のnon-ortho の欄に示す4 種類の化合物を示す．
2.5 モノオルトコプラナーPCBs
ポリクロロビフェニルで表される化合物であって，化学構造上2，2’，6 及び6’で表記されるオルト位が塩素で 1 ヶ所置換されている化合物の総称．ただし，本マニュアルではこの化合物の内，『表-1．定量する化合物の名称等．（p.16）』の中でCo-PCBs のmono-ortho の欄に示す8 種類の化合物を示す．
42.6 異性体
同一の化学式を持ち，塩素の置換位置が異なる化合物を指す．
2.7 同族体5
基本骨格は同じで塩素で置換された数を異にする一群の化合物．
2.8 目標定量下限値
本マニュアルで規定する『定量する下限値』．表-2 に示す．
2.9 検出下限値
2.9.1 装置の検出下限値
分析化学的な見知における検出下限値．標準物質を測定したときのクロマトグラムピーク高さがS/N=3 に相当する標準物質の絶対量を装置（GC/MS）の検出下限値とする6 ．あるいはGC/MS で検出-1-

できる低濃度標準溶液（各化合物の絶対量で10〜50fg 程度）を5 回以上 繰り返し測定し，その標準偏差の3 倍を検出下限値としても良い．
2.9.2 実測定の検出下限値
実際の試料を測定し，そのときの測定試料中の目的化合物クロマトグラムピーク高さを標準物質のピーク高さと比較し，測定試料中のピーク高さがS/N=3 に相当する標準物質濃度と，採取試料量等から計算した値を実測定における検出下限値とする．実試料でピークが出現しない化合物に関しては，
S/N=3 に相当するピーク高さを標準物質を測定したときのピーク高さから推定し，それに等しいピー
ク高さに相当する標準物質濃度と採取試料量等から計算した値を実測定の検出下限値とする．
なお，試料の検出下限値は目標定量下限値を満足していなければならない．

３ 略語の定義
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
3.7
3.8
3.9
3.10
3.11
3.12
3.13
3.14
3.15
3.16
3.17
3.18
3.19
3.20
3.21
3.22
3.23
3.24
3.25
3.26
3.27
3.28
3.29
3.30
3.31

本マニュアル中で記載する用語の定義を次のように定める．
PCDDs：ポリクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン7
PCDFs：ポリクロロジベンゾフラン8
Co-PCBs：コプラナーPCBs
non-ortho Co-PCBs：ノンオルトコプラナーPCBs
mono-ortho Co-PCBs：モノオルトコプラナーPCBs
TeCDDs：テトラクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン9
PeCDDs：ペンタクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン10
HxCDDs：ヘキサクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン11
HpCDDs：ヘプタクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン12
OCDD：オクタクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン13
TeCDFs：テトラクロロジベンゾフラン14
PeCDFs：ペンタクロロジベンゾフラン15
HxCDFs：ヘキサクロロジベンゾフラン16
HpCDFs：ヘプタクロロジベンゾフラン17
OCDF：オクタクロロジベンゾフラン18
TeCBs：テトラクロロビフェニル19
PeCBs：ペンタクロロビフェニル20
HxCBs：ヘキサクロロビフェニル21
HpCBs：ヘプタクロロビフェニル22
2,3,7,8-TeCDD：2,3,7,8-テトラクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン
1,2,3,7,8-PeCDD：1,2,3,7,8-ペンタクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン
1,2,3,4,7,8-HxCDD：1,2,3,4,7,8-ヘキサクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン
1,2,3,6,7,8-HxCDD：1,2,3,6,7,8-ヘキサクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン
1,2,3,7,8,9-HxCDD：1,2,3,7,8,9-ヘキサクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD：1,2,3,4,6,7,8-ヘプタクロロジベンゾ-パラ-ジオキシン
2,3,7,8-TeCDF：2,3,7,8-テトラクロロジベンゾフラン
1,2,3,7,8-PeCDF：1,2,3,7,8-ペンタクロロジベンゾフラン
2,3,4,7,8-PeCDF：2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフラン
1,2,3,4,7,8-HxCDF：1,2,3,4,7,8-ヘキサクロロジベンゾフラン
1,2,3,6,7,8-HxCDF：1,2,3,6,7,8-ヘキサクロロジベンゾフラン
1,2,3,7,8,9-HxCDF：1,2,3,7,8,9-ヘキサクロロジベンゾフラン

-2-

3.32
3.33
3.34
3.35
3.36
3.37
3.38
3.39
3.40
3.41
3.42
3.43
3.44
3.45
3.46
3.47
3.48
3.49
3.50
3.51
3.52
3.53
3.54
3.55
3.56
3.57
3.58
3.59
3.60
3.61

2,3,4,6,7,8-HxCDF：2,3,4,6,7,8-ヘキサクロロジベンゾフラン
1,2,3,4,6,7,8-HpCDF：1,2,3,4,6,7,8-ヘプタクロロジベンゾフラン
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF：1,2,3,4,7,8,9-ヘプタクロロジベンゾフラン
3,3',4,4'-TeCB：3,3',4,4'-テトラクロロビフェニル；IUPAC#77
3,4,4',5-TeCB：3,4,4',5-テトラクロロビフェニル；IUPAC#81
3,3',4,4',5-PeCB：3,3',4,4',5-ペンタクロロビフェニル；IUPAC#126
3,3',4,4',5,5'-HxCB：3,3',4,4',5,5'-ヘキサクロロビフェニル；IUPAC#169
2,3,3',4,4'-PeCB：2,3,3',4,4'-ペンタクロロビフェニル；IUPAC#105
2,3,4,4',5-PeCB：2,3,4,4',5-ペンタクロロビフェニル；IUPAC#114
2,3',4,4',5-PeCB：2,3',4,4',5-ペンタクロロビフェニル；IUPAC#118
2',3,4,4',5-PeCB：2',3,4,4',5-ペンタクロロビフェニル；IUPAC#123
2,3,3',4,4',5-HxCB：2,3,3',4,4',5-ヘキサクロロビフェニル；IUPAC#156
2,3,3',4,4',5'-HxCB：2,3,3',4,4',5'-ヘキサクロロビフェニル；IUPAC#157
2,3',4,4',5,5'-HxCB：2,3',4,4',5,5'-ヘキサクロロビフェニル；IUPAC#167
2,3,3',4,4',5,5'-HpCB：2,3,3',4,4',5,5'-ヘプタクロロビフェニル；IUPAC#189
TEF：毒性等価係数23
TEQ：毒性等量24
IDMS：同位体希釈質量分析法25
GC/MS：ガスクロマトグラフィー/質量分析法26 またはガスクロマトグラフ/質量分析計27
HRGC：高分解能ガスクロマトグラフィー28 または高分解能ガスクロマトグラフ29
HRMS：高分解能質量分析法30 または高分解能質量分析計31
HRGC/HRMS：高分解能ガスクロマトグラフィー/高分解能質量分析法32 または高分解能ガスクロ
マトグラフ/高分解能質量分析計33
SIM：選択イオン検出法34 ．
RRF：相対感度係数35
N.D.：目標定量下限値未満36
EI 法：電子イオン化法37
IUPAC：国際純正及び応用化学連合38
WHO：世界保健機関39
QA/QC：品質保証・品質管理40
QCCS： 品質管理チェック試料41

４ 調査対象物質
本マニュアルではPCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の内，『表-1．定量する化合物の名称等．（p.16）』に示す化合物を調査対象とする．また，必要に応じて脂肪含有量を測定する．

５ 目標定量下限値
本マニュアルでは『表-2．本マニュアルで規定するPCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs 各化合物の目標定量下限値．（p.16）』に示す目標定量下限値を設定する．通常，目標定量下限値は分析化学的な検出下限値を満足していなければならない．

-3-

６ 分析に必要な施設・試薬・器具等
ここでは，分析を行うに当たって必要な施設・器具・試薬等に関して必要とされるまたは望ましい要求事項を示す．
6.1 試料前処理室
器具や試薬の準備，抽出・濃縮・精製等の最終試料調製までの各作業を行う試料前処理室は試料の汚染を極力防ぐような構造とする42 ．
6.2 試薬類43
試薬類は高純度のものを使用する。必要に応じて蒸留，加熱処理，洗浄等の精製操作を行うこととして，本方法によって使用する量が，PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の定量に影響を及ぼさないことを確認した後使用する．
6.2.1 アセトン
ダイオキシン分析用，残留農薬試験用等，高純度のものを使用する．必要に応じて蒸留精製する．
6.2.2 エタノール〃
6.2.3 ヘキサン〃
6.2.4 トルエン〃
6.2.5 ジクロロメタン〃
6.2.6 ノナン〃
6.2.7 デカン〃
6.2.8 硫酸アンモニウム〃
6.2.9 精製水
精製水製造器等で得られるもの．必要に応じてヘキサンで洗浄する等して精製する．
6.2.10 硫酸
半導体製造用高純度硫酸等高純度のものを使用する。必要に応じて市販の試薬をヘキサンで洗浄する．
6.2.11 無水硫酸ナトリウム残留農薬試験用等、高純度の試薬を使用する。必要に応じて市販の試薬を450℃で4 時間以上加熱処理する．
6.2.12 2mol/L 水酸化カリウム／エタノール溶液（KOH/EtOH）
市販されているものの中で高純度の水酸化カリウムを用いてエタノールに溶解する．そのままで溶けにくい場合は全量の1/10 程度の精製水に溶かし、エタノールで定容する。
6.2.13 水酸化カリウム水溶液
高純度の水酸化カリウムを精製水適当量に溶かす．必要に応じてヘキサンで洗浄する等して精製する．
6.2.14 ２％水酸化カリウムシリカゲル
水酸化カリウム水溶液をシリカゲルに添加して作製する．水酸化カリウム水溶液をシリカゲルに，
水酸化カリウムがシリカゲルに対して2%(w/w)となるように加え，攪拌混合した後，ロータリーエ
バポレーター等で減圧乾燥させ，密閉可能な容器に入れ，デシケーター内で保存する。ダイオキシ
ン類分析用として市販されているものもある．
6.2.15 40%(w/w)硝酸銀水溶液
高純度の硝酸銀を精製水に溶かす．必要に応じてヘキサンで洗浄する等して精製する．
6.2.16 シリカゲル
カラムクロマトグラフィー用シリカゲルをメタノールにて超音波洗浄を行った後，減圧乾燥し，ガラス製ビーカーに入れ，層の厚さを10mm 以下にして130℃で約18 時間乾燥した後，密閉可能-4-

6.2.17

6.2.186.2.196.2.206.2.21
6.2.22
6.2.236.2.246.2.25な容器に入れ，デシケーター内で保管する．
22%硫酸含有シリカゲル
硫酸をシリカゲルに，硫酸がシリカゲルに対して22%(w/w)となるように加え，撹拌混合し，密閉可能な容器に入れ，デシケーター内で保管する44 ．
44%硫酸含有シリカゲル
硫酸をシリカゲルに，硫酸がシリカゲルに対して44%(w/w)となるように加え，攪拌混合し，密閉可能な容器に入れ，デシケーター内で保管する45 ．
10%硝酸銀含有シリカゲル
硝酸銀溶液を，シリカゲルに硝酸銀がシリカゲルに対して10%(w/w)となるように加え，攪拌混
合した後ロータリーエバポレーター等で減圧乾燥させ，密閉可能な容器に入れ，デシケーター内で保存する．調製及び保管は遮光した状態で行う．
活性炭シリカゲル
活性炭シリカゲルをアセトンで超音波洗浄し濾過した後，トルエンでソックスレー抽出洗浄し46 ，
ロータリーエバポレーターで減圧乾燥させ，密閉可能な容器に入れ，デシケーター内で保存する．
同等のものとして活性炭硫酸ナトリウムを使用することが出来る．この場合，活性炭1g に対し無水硫酸ナトリウム1000g を混合し，乳鉢でよくすって均一に分散させたものを使用する．必要に応じてトルエンでソックスレー抽出洗浄した後，ロータリーエバポレータで減圧乾燥させ，デジケー
ター内で保存する．
アルミナ
カラムクロマトグラフ用塩基性アルミナを開封してそのまま使用する。
標準物質『表-3．測定に用いる標準物質．
（p.18）』を用いる．
標準溶液
市販の標準溶液をノナン又はデカン47 で希釈，混合して調製する．
同位体スパイク『表-4．測定に用いる同位体スパイク．
（p.19）』を用いる．
同位体スパイク溶液
市販の溶液をノナン又はデカン 47 で希釈，混合して調製する．

6.3 器具・機材
6.3.1 分析前処理器具・機材
使用する全ての器具及び装置にはPCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の測定分析に影響を及ぼさないことが要求される 48．分析途中の試料の汚染を防ぐ観点から使用する全ての器具等は可能な限り血液等低レベルダイオキシン分析専用とすること。GC/MS も可能な限り低レベルダイオキシン類専用のものを用いる．
6.3.1.1 乾燥機
ガラス製品及び試薬類を加熱処理するもの．
6.3.1.2 マッフル炉
セラミック製品を加熱処理するもの（1000℃程度で連続使用可能なもの）．
6.3.1.3 ロータリーエバポレーター
大気開放コックの先に活性炭カラム，エアフィルターを装着したり，また，トラップ球を使用する等して汚染を防ぐようにすることが望ましい 49．
6.3.1.4 ロータリーエバポレーター用真空ポンプ
有機溶媒の排気に内部が耐えられるもの．排気側にガス冷却管等を接続し，有機溶媒の回収を

-5-

行う．
6.3.1.5 クデルナダニッシュ（KD）濃縮器
試料濃縮に用いる。ロータリーエバポレーターの代わりに用いることが出来る。
6.3.1.6 冷却水循環装置
ソックスレー抽出器，ロータリーエバポレーター及びKD 濃縮器の冷却管（コンデンサー）に使用する．
6.3.1.7 ガス吹き付け装置
抽出精製試料を濃縮する為に使用する．
6.3.1.8 シリカゲルカラムクロマトグラフ管
内径約10mm，長さ約300mm のガラス製カラムクロマトグラフ管にシリカゲル1.5g をヘキサンで充填し、上部に無水硫酸ナトリウム3.0g を積層する．ヘキサン200mL を流速2.5mL/min
で流し，充填物を洗浄する 50．溶出条件等を事前に調べてあれば同等のシリカゲルカラムを使用することは可能である。
6.3.1.9 多層シリカゲルカラムクロマトグラフ管
内径約15mm，長さ約300mm のガラス製カラムクロマトグラフ管にシリカゲル0.9g，2%水
酸化カリウム・シリカゲル3g，シリカゲル0.9g，44％硫酸シリカゲル4.5g，22％硫酸シリカゲ
ル6.0g，シリカゲル0.9g，10％硝酸銀-シリカゲル3.0g を順次ヘキサンで充填する。その上部に無水硫酸ナトリウムを6.0g 積層する．ヘキサン200mL を流速2.5mL/min で流し，充填物を洗浄する。
6.3.1.10 アルミナカラムクロマトグラフ管
内径約10mm，長さ約300mm のガラス製カラムクロマトグラフ管に塩基性アルミナ7.5g をヘキサンで充填し、上部に無水硫酸ナトリウム 3.0g を積層する．ヘキサン 200mL を流速
2.5mL/min で流し，充填物を洗浄する．
6.3.1.11 活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフ管
内径約10mm，長さ約150mm のガラス製カラムクロマトグラフ管に，無水硫酸ナトリウム3.0g，活性炭シリカゲル0.5g，最後に無水硫酸ナトリウム3.0g を乾式充填する．活性炭シリカ
ゲルカラムクロマトグラフ管の代わりに同程度の量の活性炭硫酸ナトリウムを用いることも出来る。
6.3.2 ガスクロマトグラフ/質量分析計（GC/MS）
高分解能ガスクロマトグラフ/高分解能質量分析計（HRGC/HRMS）を用いる．質量分析計の質量分離方式は二重収束型とする．
6.3.2.1 ガスクロマトグラフカラムオーブン
カラムオーブンの温度制御範囲が50〜350℃であり，測定対象物質の最適分離条件を設定・制御できるような昇温プログラムが可能なもの．
6.3.2.2 ガスクロマトグラフキャピラリーカラム
内径0.22〜0.32mm，長さ30〜60mの溶融シリカ製のものであって，内面に液相を塗布又は結合したもの．通常，微極性（5%フェニルメチルシリコン系）のものを用いるが，必要に応じて中極性（25%フェニルメチルシリコン系）,強極性（シアノプロピル系）のものも用いる．
例えばBPX5，DB5-MS，CP-SIL 8 CB-MS，HT-8，SP2331 等の商品がある。
なお，ここで示した製品は参考のために表記したものであってこれら以外でも同等以上の性能を持つものは使用することが出来る．
6.3.2.3 質量分析計（MS）
二重収束型のもので，ロックマス方式 51 により分解能10,000 以上で測定可能なもの．イオン源は，温度を160〜350℃に保つことができ，EI 法が可能で，電子加速電圧を25〜70V 程度に-6-制御可能なもの．検出法としてSIM 法が可能であり，磁場スイッチング使用時の必要な測定質
量数のチャンネル数，感度，安定性の関係からSIM 法における周期を最大でも１sec 以下にできるもの 52．実際に試料を測定するときと同一の条件において，標準物質の2,3,7,8-TeCDD 10fg
でSN>5，OCDD 50fg でSN>5 の検出感度を得られることが望ましい．
6.3.2.4 試料導入部
本マニュアルで要求する定量を満足する方式のもの．高感度を得る目的で大量注入方式やマル
チディメンジョン方式を採用してもよい．
6.3.2.5 キャリアーガス
高純度ヘリウムガス 53．

７ 調査計画採血の実施にあたっては，被験者や協力者に対して十分なインフォームド・コンセントを行う．調査の目的及び背景，実際に協力してもらう内容，実施後のデータの取り扱いなどについて事前に文書で説明し，調査に対する理解を得，文書で同意を得る必要がある．このため調査計画は事前に綿密に作成されなくてはならない．また，採血時の事故を防ぐため，採血現場には医師が立ち会い，必要に応じてアドバイス，
問診，健康診断等を行えるような体制を整備すること．
研究目的によっては倫理指針等が作成されている場合があるので，その際にはそれらに従うこと．

８ 試料採取 55 及び試料の取り扱い
採取は，医師，看護婦（保健婦（夫，士））や助産婦を含む）等採血について専門の技術を有するものが行う．通常の試料採取には一定量の抗凝固剤を添加した，50〜200ml の採血バックあるいはガラス製容器，
フッ素樹脂製容器などを使用する．試料は100ml 程度を採取し，２回分として小分けし（１回分50ml），
また１部は脂肪分析や生化学試験に回せるようにしておくと便利である．
（採取量は重量によって求める）．
試料採取に当たっては試料採取に関わる情報を記録する．容器の選択に当たってはブランク試験を行い，汚染のないことを確認する．採取した試料は，変質を避けるため，採取後すぐによく混和し，分析するまで冷凍し暗所に保存する．
血液検体は，病原菌等の感染の危険性があるので，感染防止に留意すること．

９ 測定
9.1 測定方法の概要
同位体希釈質量分析法（IDMS）による．すなわち，試料（全血）に内部標準物質として定量する目的化合物の 13C 同位体を添加（スパイク）し，有機溶媒によって PCDDs，PCDFs
及び Co-PCBs を抽出し，精製し，GC/MS を用いて同位体比を測定する．分析方法のフローを図-1 に示す．
血液からダイオキシン類を抽出するにあたり、脂肪抽出から入る場合と、アルカリ分解から入る場合があり、どちらを採用してもよい。
なお，PCDDs，PCDFs 及び Co-PCBs 濃度を脂肪あたりで表記する場合は，後述の方法（9.2.3 又は 9.2.4）によって脂肪量を測定する．血清，または血しょうも同様に行うことが出
来る。

-7-

脂肪の抽出には現在いくつかの方法が提案されているが、それぞれの方法によって得られる結果は異なるので単位脂肪重量あたりでダイオキシン類濃度を比較する際は注意が必要である。ここではエタノール：ヘキサン：飽和硫酸アンモニウムを用いる方法を採用する
54。
9.2 前処理9.2.1 試料採取した試料は容器内で十分混合した後，ダイオキシン類測定分析用（Ⅰ），二重測
定用ダイオキシン類測定分析用（必要に応じて），脂肪量測定用（別個に測定する場合）
等 2 つ又は 3 つに分けてフッ素樹脂製容器またはガラス製容器に分注する．分注した
試料は分析を行うまで冷凍保存する．
9.2.2 同位体スパイクの添加
試料を解凍後、約 50 ｇの試料を量り取り, 同位体スパイクを添加し、撹拌する 55．な
お、同位体スパイクの添加量は各化合物 5〜100pg 程度とする。
9.2.3 脂質の抽出及び脂質濃度の測定（脂肪濃度を別個に求める場合）
9.2.1 で分注した脂肪測定用の試料（約 20g）を解凍し，重量を測定後，飽和硫酸アン
モニウム 6mL，25%エタノール／n-ヘキサンを 24mL 添加し，30 分間振とう抽出を行う．ヘキサン層を分画後，水層に n-ヘキサン 20mL を添加し更に 30 分間振とう抽出を行う．この操作をもう一度繰り返す．3 回の抽出による n-ヘキサン分画を混合する．
得られた n-ヘキサン分画を精製水 20mL で 1 回洗浄する．
ガラス製ロート下部にグラスウールを詰め，無水硫酸ナトリウムを積層したもので脱水後，ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を 2mL 程度まで留去する 56．あらかじめ重量を測定し，恒量となったことを確認した秤量瓶に移す．デシケーターもしくは30℃以下に設定した浴温下での窒素ガスパージで乾燥し，重量を測定する．抽出前後の重量比から血液中の脂肪量を算出する．ただし，試料には抗凝固剤としてヘパリン
ナトリウム溶液が含まれているのでその重量を考慮しなければならない．
9.2.4 脂質の抽出及び脂肪濃度の測定（脂肪を抽出し、抽出した脂肪を用いてダイオキシン類の分析を行う場合）
9.2.2 で同位体スパイクを添加した血液試料に飽和硫酸アンモニウム 20mL 及び 25%
エタノール／n-ヘキサンを 40mL 添加し，30 分間振とう抽出を行う．ヘキサン層を分
画後，水層に n-ヘキサン 40mL を添加し更に 30 分間振とう抽出を行う．この操作をもう一度繰り返す．
3 回の抽出による n-ヘキサン分画を混合する．得られた n-ヘキサン分画を精製水 20mL
で 1 回洗浄する．ガラス製ロート下部にグラスウールを詰め，無水硫酸ナトリウムを積層したもので脱水後，あらかじめ 105℃で 3 時間加熱，放冷し，重量を測定して恒量となったことを確認しておいたナス型フラスコに移し、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去する 56．
水及び溶媒が完全にないことを確認し、ナス型フラスコの外側をよくふいた後、重量を測定する．
前後の重量比から血液中の脂肪量を算出する．血中含量に換算するにあたって試料には抗凝固剤としてヘパリンナトリウム溶液が含まれているのでその重量を考慮しなければならない．
9.2.5 アルカリ分解処理（この場合、別途9.2.3 により脂質濃度を求めておく）
試料を解凍後、2mol/L 水酸化カリウム／エタノール溶液30mL と同位体スパイクを添加し，攪拌した後室温にて一夜放置（２時間程度の振とうでも可）する。なお，同位体スパイクの添加量は各化-8-

合物 5〜100pg 程度とする。翌日エタノール 10mL，精製水 20mL 及びヘキサン 30mL を添加し，更に30 分間振とう抽出を行う。2 回の抽出によるヘキサン分画を混合する。
9.2.6 硫酸処理
秤量した脂肪全量をヘキサン100mL に溶解し、或いはアルカリ分解後のヘキサン層を合わせたもの（約60mL）を分液ロートに移す。濃硫酸約20mL を加え, 静置後硫酸層を除去する。新たに濃硫
酸約20mL を加え、2 回目以降は穏やかに振とうし, 静置後硫酸層を除去する。この操作を硫酸層がほとんど無色になるまで繰り返す。
9.2.7 水洗・濃縮
硫酸処理が終了したヘキサン分画を精製水30mL で2 回洗浄する。無水硫酸ナトリウムを用いて脱水後, ロータリーエバポレーターを用いて約2mL まで濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供する。
9.3 カラムクロマトグラフィー
硫酸処理の終了した試料をカラムクロマトグラフィーによって更に精製する．尚ここではシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー，アルミナカラムクロマトグラフィー，活性炭カラムクロマトグラフィーが示されている。必要に応じてこれらを組み合わせるが，シリカゲルカラム, 活性炭カラムの2 段のクロマトグ
ラフィーが一般的である．ここで示すカラムクロマトグラフィーの展開溶媒の量は参考の為示したものであり，分画試験を行って決定する．
9.3.1. シリカゲルカラムクロマトグラフィー及びアルミナカラムクロマトグラフィー（オプション）
次に示すシリカゲルカラムクロマトグラフィーあるいは多層シリカゲルカラムクロマトグラフィーのどちらかを行う。シリカゲルカラムクロマトグラフィーの後、アルミナカラムクロマトグラフィー
を省くことも可能である。
9.3.1.1 シリカゲルカラムクロマトグラフィー
シリカゲルカラムクロマトグラフ管（シリカゲル1.5g, 130℃, 3 時間活性化したもの）の液面
を無水硫酸ナトリウム層まで下げ、調製した試料を静かに移し入れ, 少量のヘキサンで洗い込み,
液面を無水硫酸ナトリウム層まで下げる。ヘキサン80mL を流速1mL/min で流し展開溶出させる。得られた溶出液をロータリーエバポレーターにて約2mL まで濃縮し、活性炭シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーまたはアルミナカラムクロマトグラフィーに供する。
9.3.1.2 多層シリカゲルカラムクロマトグラフィー
多層シリカゲルカラムクロマトグラフ管の液面を無水硫酸ナトリウム層まで下げ, 調製した試
験溶液を静かに移し入れ, 少量のヘキサンで洗い込み、液面を無水硫酸ナトリウム層まで下げる。
ヘキサン200mL を流速2.5mL/min で流し展開溶出させる。得られた溶出液をロータリーエバ
ポレーターにて約2mL まで濃縮し、活性炭シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供する。
9.3.1.3 アルミナカラムクロマトグラフィー
アルミナカラムクロマトグラフ管の液面を無水硫酸ナトリウム層まで下げ, シリカゲルカラム
クロマトグラフィーで溶出した画分を, クロマトグラフ管に流し込み, ジクロロメタン含有ヘキ
サン溶液で分画する。最初に2%ジクロロメタン含有ヘキサン65mL で溶出させ（第１画分：
mono-ortho Co-PCB 画分）次いで60%ジクロロメタン含有ヘキサン100mL で溶出する（第２画分：PCDDs, PCDFs 及びnon-ortho Co-PCBs）。第2 画分を濃縮した後、活性炭カラムにかける。
9.3.2 活性炭カラムクロマトグラフィー
9.3.2.1 活性炭シリカゲルクロマトグラフィー
活性炭シリカゲルクロマトグラフ管に調製した試験溶液を静かに移し入れ，少量のヘキサンで洗い込み，液面を無水硫酸ナトリウム層まで下げる．これに25%ジクロロメタン含有ヘキサン溶液100mL を流速2.5mL/min で流し展開溶出させる．この画分にはmono-ortho Co-PCBs が含-9-

まれる．次いで，トルエン100mL で溶出する．この画分にはPCDDs，PCDFs 及びnon-ortho
Co-PCBs が含まれる．25%ジクロロメタン含有ヘキサン画分及びトルエン画分をロータリーエバ
ポレーターで濃縮し，更にゆるやかに窒素を吹き付け 57，濃縮した後，各画分に測定に必要なシリンジスパイク 58 を添加して10μL に定容し，GC/MS 分析用溶液とする．カラムクロマトグ
ラフィーとして、活性炭／無水硫酸ナトリウムを充填して用いることもできる。市販の活性炭シリカゲルによっては、mono-ortho Co-PCBs もトルエン画分にくるので、この場合は、トルエン
画分のみをGC/MS 分析すればよい。
9.4 ガスクロマトグラフ/質量分析計の状態確認
9.4.1 GC/MS 測定条件の設定及び状態の確認
GC/MS を目的成分が測定できる条件に設定する。GC/MS が本法に対して適切な状態であることを確認する（QA/QC 参照(P.12)）．
9.4.2 検量線の作成
標準溶液中のPCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs 各化合物に対して0.01〜50pg/μL 程度の濃度範囲
で0 を含めて5 段階程度の標準濃度系列を調製する．この標準濃度系列には同位体スパイクを添加しておく 59．
9.5 測定標準溶液及び試料の適当量をGC/MS に注入 59 し，各同族体につき『表-5．測定質量数の例．（p.20）』
から任意の2 つ以上の質量数のクロマトグラムを記録する．
9.6 計算次式によって濃度を算出する．
CSample = ((ASample x CSample-IS) / (ASample-IS x RRF)) x (1 / V)
CSample ： 分析対象物質の濃度 (pg/mL または pg/g)
ASample ： 分析試料中の各化合物のクロマトグラムピーク面積値
A Sample-IS ： 分析試料中の各同位体スパイクのクロマトグラムピーク面積値
CSample-IS ： 分析試料への同位体スパイクの量（pg）
V ： 試料採取量（mL またはg）
RRF = (ASTD x CSTD-IS) / (ASTD-IS x CSTD)
ASTD ： 標準溶液中の分析対象物質のクロマトグラムピーク面積値
ASTD-IS ： 標準溶液中の同位体スパイクのクロマトグラムピーク面積値
CSTD ： 標準溶液中の各化合物の量（pg）
CSTD-IS ： 標準溶液中の各同位体スパイクの量（pg）
PCDDs及びPCDFs 2,3,7,8-位塩素置換異性体はそれぞれ対応する17 種類の2,3,7,8-位塩素置換異性体の標準物質及び同位体スパイクの濃度，添加量及びレスポンスを用いて濃度を算出する．Co-PCBs に関してはそれぞれ対応する12 種類のCo-PCBs の標準物質及び同位体スパイクの濃度，添加量及びレスポンス
を用いて濃度を算出する．
9.7 PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の同定
PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs 各異性体は，モニターした2 つ以上のイオンにおけるクロマトグラム
上のピーク面積比が標準物質のものとほぼ同じであり，『表-6．PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の塩素同位体の理論天然存在比．
』に示す塩素原子の同位体存在比から推定されるイオン強度比に対して±30%以内であり，更にピークの相対保持時間が標準物質及び対応する内標準物質と一致することで同定する。
9.7.1 実測濃度の表記
・2,3,7,8-位塩素置換異性体（17 化合物）及びCo-PCBs（12 化合物）の各実測濃度が目標定量下限- 10 -

値未満であった場合、2,3,7,8-置換位置異性体（17 化合物）及びCo-PCBs（12 化合物）の各実測
濃度が検出下限未満であったのか検出しなかったのかがわかるように表記しておくことが望ましい。
これらは実測値に加算する必要はないが最大見積TEQ 計算の際に参考とする必要がある。
・2,3,7,8-位塩素置換異性体（17 化合物）及びCo-PCBs（12 化合物）の各実測濃度は有効数字2 桁にまるめて表記する．
・2,3,7,8-位塩素置換異性体（17 化合物）の濃度の総和をTotal(PCDDs+PCDFs)として有効数字2桁で表記する 60．
・PCDDsに含まれる全ての化合物が目標定量下限値未満であった場合，PCDDsの実測濃度はN.D.
と表記する．
・PCDFs に含まれる全ての化合物が目標定量下限値未満であった場合，PCDFs の実測濃度はN.D.
と表記する．
・PCDDsとPCDFs が共にN.D.であった場合，Total (PCDDs+PCDFs)の実測濃度はN.D.と表記する．
・IUPAC #77，# 81，#126，#169 の実測濃度を積算し，non-ortho Co-PCBs 実測濃度として有効数
字2 桁で表す．
・IUPAC#105，#114，#118，#123，#156，#157，#167，#189 の実測濃度を積算し，mono-ortho
Co-PCBs 実測濃度として有効数字2 桁で表す．
・IUPAC #77，# 81，#126，#169，#105，#114，#118，#123，#156，#157，#167，#189 の濃度を積算し，Total Co-PCBs 実測濃度として有効数字2 桁で表す 61．
・N.D.表記となっている異性体に関しては，定量下限値の半数も計算しておく．
9.7.2 TEQ の算出
・有効数字2 桁でまるめた2,3,7,8-位塩素置換異性体（17 化合物）及びCo-PCBs（12 化合物）の各実測濃度に TEF を乗じ，TEQ を算出する．一例として WHO-1998 による TEF を『表-7．TEQ 算出のためのTEF．（p.22）』に示す．各2,3,7,8-位塩素置換異性体及びCo-PCBs のTEQ
は2 桁表記とする．
・2,3,7,8-位塩素置換異性体及びCo-PCBs 濃度が目標定量下限値未満であった場合，毒性等量は0（ゼロ）として表記し，その右横にカッコ書きで最大見積TEQ を記載する．最大見積TEQ は各化合物の目標定量下限値の1/2 にTEF を乗じたものとする 62．
・実測濃度にN.D.が表記された場合（最大見積TEQ が表記された場合），Total PCDDs，Total
PCDFs，Total(PCDDs+PCDFs)，non-ortho Co-PCBs，mono-ortho Co-PCBs，Total Co-PCBs，Total (PCDDs+PCDFs+Co-PCBs)にもカッコ書きで最大見積TEQ を記載する．この最大見積
TEQ は各化合物のTEQ と最大見積TEQ との積算で表す．
・Total PCDDs(TEQ)及びTotal PCDFs(TEQ)は2 桁表記とする．
・Total PCDDs(TEQ)+Total PCDFs(TEQ)は2 桁表記とする．
・non-ortho Co-PCBs のTEQ は2 桁表記とする．
・mono-ortho Co-PCBs のTEQ は2 桁表記とする．
・Co-PCBs のTotal TEQ は2 桁表記とする．
・PCDDs，PCDFs，Co-PCBs のTotal TEQ は2 桁表記とする．
・各実測濃度からPCDDs，PCDFs，Co-PCBs のTotal TEQ を算出するまでの過程で数値のまるめは行わない．
9.7.3 測定結果の表記方法
測定結果の表記方法の例を『表-8．PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs 測定分析結果の表記例．（p.23）』に示す．

- 11 -

１０ 安全管理

10.1

10.2

10.3
10.4

10.5

10.6

10.7
10.8

10.9

ここでは，測定分析に関係する者の安全や，区域外への化学物質の漏洩防御の観点から留意すべき事
柄をまとめた．
試料前処理室及びGC/MS 室の構造
試料前処理室及びGC/MS 室内の空気は活性炭フィルターとHEPA フィルター等を通じた後屋外へ排気する構造とすることが望ましい．
試薬の管理
測定分析に使用する有機溶媒の管理を行うこと．各有機溶媒毎に購入量と廃棄量の記録を取ること．
有機溶媒が揮散することを可能な限り防御するように工夫し，さらに試料前処理室内の換気を十分とれるようにすること．
標準物質の管理標準物質は施錠可能な冷蔵庫に保管し，購入及び使用の記録を取ること．
分析者
区域内では専用の実験衣及び靴を着用すること．試料前処理室内では常に耐溶剤製の不浸透手袋等及び安全眼鏡を装着すること．
測定分析機関の義務試料前処理室に立ち入る許可を持っている者に関しては労働安全衛生法に定められた特定化学物質に関わる定期的健康診断を年2 回実施すること．
GC/MS
GC/MS ロータリーポンプの排気，GC のパージガスは，活性炭フィルターを通じた後，排気されるようにすること．
血液の付着したガラス器具の洗浄
滅菌した後洗浄する．
血液の付着した廃棄物の管理
血液採取及び搬入時に用いられた血液バッグや作業中に血液の付着した布等はオートクレーブバッグに入れた後高圧蒸気滅菌し，廃棄する．
その他の廃棄物の管理
上記以外に試料前処理室験室及びGC/MS 測定室内で生じた各種廃棄物は種別に分類し，廃棄物処理業者までトレース可能なように管理すること．ダイオキシン類を含む廃棄物は高温で分解処理する必要があるので，別途とりまとめて管理すること。

１１ 精度管理及び精度保証
PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の測定データに関して，最終測定値のみでは結果の確からしさを確認することは困難である場合が多い．そこで，品質保証（QA）/品質管理（QC）
・精度管理 63 について記述した．本記述はPCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs に係る調査を行う機関が，一定水準以上の測定分
析結果を報告することが可能となるように，調査に直接的に関わる事項に対して，記録として要求される項目について記述したものである．PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs に係る調査を行う全機関は，少なくともここで述べる項目に関する情報を記録・保管しなければならない．なお，本マニュアルでは
PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の測定分析結果の報告までを対象としており，得られたデータを用いた考察や解析等の部分に関しては含まない．

- 12 -なお，ここで示した各項目が満足されていない場合，その原因を明らかにし，取り除いた後，再分析，再測定等適切な処置をおこなう。
11.1 精度管理にかかわる作業とその記録
11.1.1 試料採取の記録
試料の採取方法（例えばどの様な採血方法であったか）を記録する．
11.1.2 試料確認の記録
試料採取後，試験機関に試料が入る段階（試料の受付）における試料の確認を記録する．試料確認の日時，確認した人の所属・氏名，試料の試料前処理室まで搬送された手段・状態，試料の入っていた容器の種類・サイズ，保管する場合その保管場所，保管方法，試料の管理番号を記録する．
運送業者を利用した場合，その配送伝票の複製を保管する．
11.2 測定分析の記録
11.2.1 使用器具・機材・装置
使用した器具に関して，メーカー，準備方法（必要であれば洗浄方法）を記録する．
11.2.2 使用試薬
分析に用いた試薬のメーカー名，製品名，等級，精製方法等を記録する．
11.2.3 標準物質・標準溶液分析に用いた試薬のメーカー名，製品名等を記録する．
11.2.4 標準溶液調製記録
標準溶液を調製した状況を記録する．
11.2.5 試料前処理室等の清浄度の記録
測定分析が行われた雰囲気を客観的に判断可能なような記録（例えば試料前処理室及びGC/MS
室の温度・清浄度の記録等）を取る．
11.2.6 分析前処理記録
分析者の所属，氏名，試料の状態，分析の各段階における操作日時，試料量（分析に供した量），
各試薬使用量，試料前処理室雰囲気等一連の前処理において，必要な情報を記録する．
11.2.7 GC/MS の記録
11.2.7.1 GC/MS 日常点検記録
GC/MS の日常点検結果（冷却水，真空ポンプ，真空度等の基本的な事項）を記録する．
11.2.7.2 GC/MS メインテナンス記録
GC/MS に関して日常点検の範疇を超える点検・調整事項（修理．磁場調整等日常的には発生しない事柄）があれば記録する．
11.2.7.3 GC/MS 使用状況記録
GC/MS の使用状態（各種消耗品の交換，イオン源の交換，GC カラムの交換，GC カラムエー
ジング，フライトチューブベーキング，イオン源ベーキング，測定検体数等，どのような状況で使用されたか）を記録する．
11.2.7.4 MS 調整の記録
GC/MS 測定分析条件を記録する．
11.2.7.5 透過率の記録
設定分解能時のイオン透過率の記録．
11.2.7.6 GC カラム分離能の記録
測定時に必要なGC カラム分離能が得られていることを確認できるクロマトグラムの記録．
11.2.7.7 感度の記録- 13 -

測定時に必要な感度が得られていることを確認できる記録（クロマトグラム等）．
11.2.7.8 標準物質の同位体比の確認
測定した標準物質中の各化合物に関して，2 つのモニターイオンのレスポンス比が理論値とずれていないことを確認できる記録．理論塩素同位体存在比と実測同位体比の採用範囲は30%以内とする．
『参照：表-6．PCDDs，PCDFs 及びCo-PCBs の塩素同位体の理論天然存在比．
（p.21）』
11.2.7.9 相対感度係数（RRF）
RRF の変動は前回の測定時と比較して±20％以内であることとする。
11.2.7.10 測定順の記録
GC/MS による測定の順番の記録．標準溶液，最終溶媒ブランク，全操作ブランク，試料，2重測定（同一測定バイアルからのGC/MS 測定），2 重測定（試料採取からの2 重測定）等試料の測定順番の記録．
11.2.7.11 クロマトグラムの記録
標準溶液，最終溶媒ブランク，全操作ブランク，試料に関する各測定質量数のクロマトグラ
ムの記録．
11.3 計算
11.3.1 計算工程の記録
標準溶液の濃度，内部標準の添加量，GC/MS 測定面積値，試料採取量から最終濃度までの計算過程がトレース可能である記録．
11.3.2 同位体比の確認記録測定に用いた同位体の理論比との差が判明する記録．上記計算の工程に含まれていれば良い．
11.3.3 回収率の確認記録
シリンジスパイクを用いて計算した回収率の記録．上記計算の工程に含まれていれば良い．回収率
は，17 種類のPCDDs及びPCDFs 各2,3,7,8-位塩素置換異性体及び12 種類のCo-PCBs において，各々50-120%の範囲であることが望ましい．25-150％の範囲の外にあるときは再測定を実施する。
11.4 ブランク試験
11.4.1 採血バッグブランク
採血バッグのブランク試験を行い，その結果を記録する．製品の製造ロットが変わる毎に行う．
11.4.2 全操作ブランク
試料に対して行う分析方法と同一の方法で操作を行う，全操作ブランクの試験の記録．全操作ブラ
ンクは分析検体数10 に対して1 以上の頻度で行う．
11.4.3 同位体スパイクの検査
同位体スパイク中に存在する 12C 化合物が，用いる添加量で定量に影響を与えないことを確認した
記録．
11.5 2 重測定（試料の前処理から）64
可能であれば試料採取の段階で2 つの試料を採取し個々に測定分析を行うことが望ましい．この操作は分析検体数10 に対して1 以上の頻度で行う．この2 重測定の結果は各2,3,7,8-位塩素置換異性体の実
測濃度と実測濃度の平均値との差で50%以内であることが要求される（実測濃度が目標定量下限値の10 倍以下の化合物に関しては規定しない）．試料採取日時が異なっていても同一のプロジェクト内で発生する分析検体数10 に対して1 以上の頻度で行えば良い．
11.6 2 重測定（GC/MS 測定）
GC/MS による2 重測定を測定試料に対し，分析検体数10 に対して1 以上の頻度で行う．この2 重測定の結果は各2,3,7,8-位塩素置換異性体の実測濃度の差で30%以内であることが要求される（実測濃度が目標定量下限値の10 倍以下の化合物に関しては規定しない）．同一のプロジェクト内における総検体数が10 未満の場合，あるいはGC/MS 測定のバッチが同一プロジェクトで10 試料未満であるような- 14 -

場合，2 重測定（GC/MS 測定）の結果は他のプロジェクトの結果と共用でもよい．
11.7 品質管理チェック試料（QCCS）の測定
定期的にでQCCS を測定し，その結果を記録する 65．
11.8 外部機関とのインターキャリブレーション
定期的に外部機関とのインターキャリブレーションを実施し，その結果を記録する．

- 15 -

表-1．定量する化合物の名称等．

2,3,7,8-TeCDDCAS Registry
Number1746-01-6

1,2,3,7,8-PeCDD

40321-76-4-

1,2,3,4,7,8-HxCDD

39227-28-6-

1,2,3,6,7,8-HxCDD

57653-85-7-

1,2,3,7,8,9-HxCDD

19408-74-3-

1,2,3,4,6,7,8-HpCDD

35822-39-4

-

OCDD

3268-87-9-

2,3,7,8-TeCDF

51207-31-9-

1,2,3,7,8-PeCDF

57117-41-6-

2,3,4,7,8-PeCDF

57117-31-4-

1,2,3,4,7,8-HxCDF

70648-26-9-

1,2,3,6,7,8-HxCDF

57117-44-9-

1,2,3,7,8,9-HxCDF

72918-21-9-

2,3,4,6,7,8-HxCDF

60851-34-5-

1,2,3,4,6,7,8-HpCDF

67562-39-4-

1,2,3,4,7,8,9-HpCDF

55673-89-7

-

OCDF

39001-02-0-

3,3',4,4'-TeCB

32598-13-3# 77

3,4,4',5-TeCB

70362-50-4# 81

3,3'4,4',5-PeCB

57465-28-8#126

3,3',4,4',5,5'-HxCB

32774-16-6#169

2,3,3',4,4'-PeCB

32598-14-4#105

2,3,4,4',5-PeCB

74472-37-0#114

2,3',4,4',5-PeCB

31508-00-6#118

2',3,4,4',5-PeCB

65510-44-3#123

2,3,3',4,4',5-HxCB

38380-08-4#156

2,3,3',4,4',5'-HxCB

69782-90-7#157

2,3',4,4',5,5'-HxCB

52663-72-6#167

2,3,3',4,4',5,5'-HpCB

39635-31-9#189

化合物の名称等
PCDDs

PCDFs

Co-PCBs

non-orthomono-ortho

IUPAC
Number-

表-2．本マニュアルで規定するPCDDs，PCDFs及びCo-PCBs各化合物の目標定量下限値．
化合物の名称等

IUPAC- 16 -

目標定量下限値PCDDs

PCDFs

Co-PCBs

non-orthomono-ortho

Number（pg/g-fat）

2,3,7,8-TeCDD-

1（pg/gまたは
mL）
0.003

1,2,3,7,8-PeCDD

-

1

0.003

1,2,3,4,7,8-HxCDD

-

2

0.006

1,2,3,6,7,8-HxCDD

-

2

0.006

1,2,3,7,8,9-HxCDD

-

2

0.006

1,2,3,4,6,7,8-HpCDD

-

2

0.006

OCDD

-

4

0.01

2,3,7,8-TeCDF

-

1

0.003

1,2,3,7,8-PeCDF

-

1

0.003

2,3,4,7,8-PeCDF

-

1

0.003

1,2,3,4,7,8-HxCDF

-

2

0.005

1,2,3,6,7,8-HxCDF

-

2

0.005

1,2,3,7,8,9-HxCDF

-

2

0.005

2,3,4,6,7,8-HxCDF

-

2

0.005

1,2,3,4,6,7,8-HpCDF

-

2

0.005

1,2,3,4,7,8,9-HpCDF

-

2

0.005

OCDF

-

4

0.01

3,3',4,4'-TeCB

# 77

10

0.03

3,4,4',5-TeCB

# 81

10

0.03

3,3'4,4',5-PeCB

#126

10

0.03

3,3',4,4',5,5'-HxCB

#169

10

0.03

2,3,3',4,4'-PeCB

#105

10

0.03

2,3,4,4',5-PeCB

#114

10

0.03

2,3',4,4',5-PeCB

#118

10

0.03

2',3,4,4',5-PeCB

#123

10

0.03

2,3,3',4,4',5-HxCB

#156

10

0.03

2,3,3',4,4',5'-HxCB

#157

10

0.03

2,3',4,4',5,5'-HxCB

#167

10

0.03

2,3,3',4,4',5,5'-HpCB

#189

10

0.03

pg/g-fat ：脂肪重量あたりの濃度
pg/gまたはmL ：試料全量あたりの濃度（血液中の脂質濃度を0.3%として計算している．血液中の脂質濃度はかな
り変動することに留意する必要がある。）- 17 -

表-3．測定に用いる標準物質．

2,3,7,8-TeCDD

IUPAC
Number-

1,2,3,7,8-PeCDD-

1,2,3,4,7,8-HxCDD-

1,2,3,6,7,8-HxCDD-

1,2,3,7,8,9-HxCDD-

1,2,3,4,6,7,8-HpCDD

-

OCDD

-

2,3,7,8-TeCDF-

1,2,3,7,8-PeCDF-

2,3,4,7,8-PeCDF-

1,2,3,4,7,8-HxCDF-

1,2,3,6,7,8-HxCDF-

1,2,3,7,8,9-HxCDF-

2,3,4,6,7,8-HxCDF-

1,2,3,4,6,7,8-HpCDF-

1,2,3,4,7,8,9-HpCDF

-

OCDF

-

化合物の名称等
PCDDs

PCDFs

Co-PCBs

non-orthomono-ortho

3,3',4,4'-TeCB# 77

3,4,4',5-TeCB# 81

3,3'4,4',5-PeCB#126

3,3',4,4',5,5'-HxCB#169

2,3,3',4,4'-PeCB#105

2,3,4,4',5-PeCB#114

2,3',4,4',5-PeCB#118

2',3,4,4',5-PeCB#123

2,3,3',4,4',5-HxCB#156

2,3,3',4,4',5'-HxCB#157

2,3',4,4',5,5'-HxCB#167

2,3,3',4,4',5,5'-HpCB#189- 18 -

表-4．測定に用いる同位体スパイク．
化合物の名称等13

PCDDs

C12-2,3,7,8-TeCDD

13

C12-1,2,3,7,8-PeCDD

13

C12-1,2,3,4,7,8-HxCDD

13

C12-1,2,3,6,7,8-HxCDD

13

C12-1,2,3,7,8,9-HxCDD

13

C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDD

13

C12-OCDD

13

PCDFs

C12-2,3,7,8-TeCDF

13

C12-1,2,3,7,8-PeCDF

13

C12-2,3,4,7,8-PeCDF

13

C12-1,2,3,4,7,8-HxCDF

13

C12-1,2,3,6,7,8-HxCDF

13

C12-1,2,3,7,8,9-HxCDF

13

C12-2,3,4,6,7,8-HxCDF

13

C12-1,2,3,4,6,7,8-HpCDF

13

C12-1,2,3,4,7,8,9-HpCDF

13

C12-OCDF

Co-PCBs

non-ortho

13

C12-3,3',4,4'-TeCB

13

C12-3,4,4',5-TeCB

13

C12-3,3',4,4',5-PeCB

13

C12-3,3',4,4',5,5'-HxCB

mono-ortho

13

C12-2,3,3',4,4'-PeCB

13

C12-2,3,4,4',5-PeCB

13

C12-2,3',4,4',5-PeCB

13

C12-2',3,4,4',5-PeCB

13

C12-2,3,3',4,4',5-HxCB

13

C12-2,3,3',4,4',5'-HxCB

13

C12-2,3',4,4',5,5'-HxCB

13

C12-2,3,3',4,4',5,5'-HpCB- 19 -

表-5．測定質量数の例．
測定質量数

化合物の名称等
PCDDs

12

C12

M

M+2

12

319.8965**

321.8936*

323.890612353.8576

355.8546*

357.8516**(1)12

387.8186

389.8157*

391.8127**(2)12421.7796

423.7766*

425.7737**12

455.7407

457.7377**

459.7348*13

331.9368**

333.9339*

335.930913

365.8978367.8949*

369.8919**13

399.8589

401.8559*

403.8530**13

433.8199

435.8169*

437.8140**13467.7809

469.7779

471.7750*12

303.9016**

305.8987*

307.895712

337.8627

339.8597*

341.8567**12

371.8237

373.8208*

375.8178**12405.7847

407.7818*

409.7789**12

439.7457

441.7428**

443.7399*13

315.9419**

317.9389*

319.936013

349.9029

351.9000*

353.8970**

13

383.8639

385.8610*

387.8580**

13417.8250

419.8220*421.8191**

13

451.7860

453.7830**12289.9224**

291.9194*293.9165

12

323.8834

325.8804*

327.8775**

12

357.8444

359.8415*

361.8385**

12

391.8054

393.8025*

395.7995**

13

301.9626**

303.9597*

305.956713

335.9236

337.9207*

339.9177**13

369.8847

371.8817*

373.8788**

13

403.8457

405.8428*

407.8398**

C12-TeCDDs
C12-PeCDDs
C12-HxCDDs
C12-HpCDDs
C12-OCDD

13

C12

C12-TeCDDs
C12-PeCDDs
C12-HxCDDs
C12-HpCDDs
C12-OCDD

PCDFs

12

C12

C12-TeCDFs
C12-PeCDFs
C12-HxCDFs
C12-HpCDFs
C12-OCDF

13

C12

C12-TeCDFs
C12-PeCDFs
C12-HxCDFs
C12-HpCDFs
C12-OCDF

Co-PCBs

12

C12

C12-TeCBs
C12-PeCBs
C12-HxCBs
C12-HpCBs

13

C12

C12-TeCBs
C12-PeCBs
C12-HxCBs
C12-HpCBs*: 親イオン群の中で存在比が最も高い塩素同位体の質量数** : 親イオン群の中で存在比が2番目に高い塩素同位体の質量数(1)及び(2)：試料中のPCB濃度が高い場合，この質量数は妨害を受ける可能性がある．

- 20 -

M+4

表-6．PCDDs，PCDFs及びCo-PCBsの塩素同位体の理論天然存在比．

TeCDDs

M
77.43

M+2
100.00

理論天然存在比
M+4
48.74

M+6
10.72

M+8
0.94

PeCDDs

62.06

100.00

64.69

21.08

3.50

HxCDDs

51.79

100.00

80.66

34.85

8.54

HpCDDs44.43

100.00

96.64

52.03

16.89

OCDD

34.54

88.80

100.00

64.48

26.07

TeCDDs77.55

100.00

48.61

10.64

0.92

PeCDDs62.14

100.00

64.57

20.98

3.46

HxCDDs

51.84

100.00

80.54

34.72

8.48

HpCDDs44.47

100.00

96.52

51.88

16.80

OCDD

34.61

88.89

100.00

64.39

25.98

TeCBs

76.67

100.00

49.11

10.83

0.93

化合物の名称等
PCDDs

PCDFs

Co-PCBs

PeCBs

61.42

100.00

65.29

21.43

3.56

HxCBs

51.22

100.00

81.48

35.51

8.75

HpCBs

43.93

100.00

97.67

53.09

17.38

各塩素数毎に存在比が最も高い質量数の存在比を100として示してある．

- 21 -

表-7．TEQ算出のためのTEF．

2,3,7,8-TeCDD

IUPAC
Number-

1,2,3,7,8-PeCDD-

1

1,2,3,4,7,8-HxCDD-

0.1

1,2,3,6,7,8-HxCDD-

0.1

1,2,3,7,8,9-HxCDD-

0.1

1,2,3,4,6,7,8-HpCDD

-

0.01

OCDD

-

0.0001

2,3,7,8-TeCDF-

0.1

1,2,3,7,8-PeCDF

-

0.05

2,3,4,7,8-PeCDF-

0.5

1,2,3,4,7,8-HxCDF-

0.1

1,2,3,6,7,8-HxCDF-

0.1

1,2,3,7,8,9-HxCDF-

0.1

2,3,4,6,7,8-HxCDF-

0.1

1,2,3,4,6,7,8-HpCDF

-

0.01

1,2,3,4,7,8,9-HpCDF

-

0.01

OCDF

-

0.0001

3,3',4,4'-TeCB# 77

0.0001

3,4,4',5-TeCB# 81

0.0001

3,3',4,4',5-PeCB

#126

0.1

3,3',4,4',5,5'-HxCB

#169

0.01

mono-ortho 2,3,3',4,4'-PeCB#105

0.0001

2,3,4,4',5-PeCB#114

0.00052,3',4,4',5-PeCB#118

0.00012',3,4,4',5-PeCB#123

0.0001

2,3,3',4,4',5-HxCB#156

0.0005

2,3,3',4,4',5'-HxCB#157

0.00052,3',4,4',5,5'-HxCB#167

0.00001

2,3,3',4,4',5,5'-HpCB#189

0.0001化合物の名称等
PCDDs

PCDFs

Co-PCBs

non-ortho- 22 -

WHO,1998-TEF
1

表-8．PCDDs，PCDFs及びCo-PCBs測定分析結果の表記例．
化合物の名称等

IUPAC
Number

実測濃度(pg/g-fat)

毒性係数
TEF

WHO,1998-TEF
毒性等量
TEQ(pg-TEQ/g-fat)

2,3,7,8-TeCDD
1
1,2,3,7,8-PeCDD
1P
1,2,3,4,7,8-HxCDD
0.1
C
1,2,3,6,7,8-HxCDD
0.1
D
1,2,3,7,8,9-HxCDD
0.1
D
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD
0.01
s
OCDD
0.0001
Total PCDDs
2,3,7,8-TeCDF
0.1
1,2,3,7,8-PeCDF
0.05
2,3,4,7,8-PeCDF
0.5
0.1
P 1,2,3,4,7,8-HxCDF
C 1,2,3,6,7,8-HxCDF
0.1
D 1,2,3,7,8,9-HxCDF
0.1
F 2,3,4,6,7,8-HxCDF
0.1
s 1,2,3,4,6,7,8-HpCDF
0.01
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF
0.01
OCDF
0.0001
Total PCDFs
Total (PCDDs+PCDFs)
3,3',4,4'-TeCB# 77
0.0001
3,4,4',5-TeCB# 81
0.0001
3,3',4,4'5-PeCB#126
0.1
3,3',4,4',5,5'-HxCB
#169
0.01
Co Total non-ortho Co-PCBs#105
0.0001｜ 2,3,3',4,4'-PeCB
P 2,3,4,4',5-PeCB#114
0.0005
C 2,3',4,4',5-PeCB#118
0.0001B 2',3,4,4',5-PeCB#123
0.0001s 2,3,3',4,4',5-HxCB#156
0.0005
2,3,3',4,4',5'-HxCB#157
0.00052,3',4,4',5,5'-HxCB#167
0.00001
2,3,3',4,4',5,5'-HpCB#189
0.0001
Total mono-ortho Co-PCBs
Total Co-PCBs
Total (PCDDs+PCDFs+Co-PCBs)[注]
1.実測濃度 ： ダイオキシン類及びコプラナーPCB 濃度（pg/g-fat）
2.毒性等量 ： 2,3,7,8-TeCDD 毒性等量（pg-TEQ/g-fat）
カッコ内の数値は実測濃度が目標定量下限値未満であった場合，
目標定量下限値の 1/2 を用いて算出した最大見積
もり濃度を表す．
3.表中『N.D.』は目標定量下限値未満を表す．
4.Total PCDDs 及び Total PCDFs は PCDDs 及び PCDFs それぞれにおける各 2,3,7,8-位塩素置換異性体の合計を表す（その他の化合物は含んでいない）．
5.Total（PCDDs+PCDFs）は各 2,3,7,8-位塩素置換異性体の合計を表す（その他の化合物は含んでいない）．
6.Total non-ortho Co-PCBs 及び Total mono-ortho Co-PCBs はそれぞれ各 non-ortho Co-PCB 及び mono-ortho Co-PCB の合計を表
す．
7.Total Co-PCBsはCo-PCBs各化合物の合計を表す．

１２ 解説編- 23 -

1

coplaner-PCBs
polychlorobiphenylまたは polychlorinated biphenyl
3 ortho-position
4 isomer
5 congenerまたは homologue
6 検出器の信号をスムージング等の処理によって取り込んでいる装置の場合，S/Nの取り扱いに注意する．
7 polychlorinated dibenzo-p-dioxins
8 polychlorinated dibenzofurans
9 tetrachlorodibenzo-p-dioxins
10 pentachlorodibenzo-p-dioxins
11 hexachlorodibenzo-p-dioxins
12 heptachlorodibenzo-p-dioxins
13 octachlorodibenzo-p-dioxin
14 tetrachlorodibenzofurans
15 pentachlorodibenzofurans
16 hexachlorodibenzofurans
17 heptachlorodibenzofurans
18 octachlorodibenzofuran
19 tetrachlorobiphenyls
20 pentachlorobiphenyls
21 hexachlorobiphenyls
22 heptachlorobiphenyls
23 2,3,7,8-TeCDD toxicity equivalency factor
24 2,3,7,8-TeCDD toxicity equivalency quantity
25 isotope dilution mass spectrometry．定量する目的物質と同一の化学構造を持ち，特定の元素が天然の元素同位体組成と異なっている濃縮同位体スパイクを試料に添加し，最終的に試料中の同位体組成のずれから目的物質の濃度を定量する方法．PCDDs，PCDFs，Co-PCBs の場合，構成する炭素あるいは塩素の一部あるいは全部を 13C または 37Cl に置き換えた安定同位体スパイクを用いる．13C の天然存在比は無視できるほど小さいので定量計算は簡単である．
この方法は分析途中に同位体分離が起こらないことが条件となる．定量結果が回収率によらないという利点がある．
26 gas chromatography/mass spectrometry
27 gas chromatograph/mass spectrometer
28 high resolution gas chromatography
29 high resolution gas chromatograph
30 high resolution mass spectrometry
31 high resolution mass spectrometer
32 high resolution gas chromatography/high resolution mass spectrometry
33 high resolution gas chromatograph/high resolution mass spectrometer
34 selected ion monitoring．磁場を固定し，加速電圧を変化させることによって指定した質量数のイオンをモニターする
方法．機器によっては SIR（selected ion recording），あるいは SID（selected ion detection）という呼称が用いられることがある．
35 relative response factor
36 not determined
37 electron ionization
38 International Union of Pure and Applied Chemistry
39 World Health Organization
40 Quality Assurance / Quality Control
41 Quality Control Check Sample
42 試料前処理室は前室を含む 2 重扉構造としたり，試料前処理室内への給気・排気はプレフィルター，活性炭フィルター，HEPA フィルターを通じた後行う構造とする等して試料前処理室雰囲気由来の汚染を防ぐよう留意することが望ましい．試料前処理室の給気側に活性炭フィルター及び HEPA フィルターを設置し，目安としては米国
連邦規格（Federal Standard）FS209E クラス 1,000〜10,000，あるいは JIS B 9920 クラス 6〜7 程度するとブランク値低減に有効であると考えられる．試料前処理室は加圧型，陰圧型どちらでも良いが，クリーン度の観点から考えれば加圧型の試料前処理室の方が有利である．加圧型，陰圧型共に試料前処理室外に空気が漏洩しないような構造が必要であり，また，試料前処理室内作業者の安全の観点から十分な空気供給量を確保することも必要である．この
試料前処理室内では極力排ガス，灰，排水，土壌，堆積物等の試料を扱わないようにする．GC/MSは可能であれ2- 24 -

ば血液専用のものを用意する等し試料の二次汚染に十分留意する．GC/MSを設置する部屋は試料前処理室とは別にする．GC/MS室内空気の屋外への排気はプレフィルター，活性炭フィルター，HEPA フィルターを通じた後行う構造とする．試料前処理室の清浄度や温度をモニターする等して試料前処理室及び GC/MS室の室内空気が正常に管理されていることを確認することが望ましい．
43 試薬類の管理を行うこと．例えば有機溶媒に関しては購入した量と廃棄した量の記録を取り収支を把握すること．試料前処理室内では有機溶媒を回収するような装置，例えばロータリーエバポレーターの減圧用ポンプの排気先にはガス冷却管等の回収装置を設けること．
44 ロータリーエバポレーター等で減圧乾燥させてはならない．
45 ロータリーエバポレーター等で減圧乾燥させてはならない．
46 活性炭シリカゲルは十分洗浄しないと測定に影響を与えるような妨害が出る場合が多い．
47 デカンやノナンのかわりにイソオクタン等でも良い．溶媒の種類によって GC 注入可能量が異なるので注意すること．
48 ガラス器具等について、合成洗剤を用いた洗浄、水洗浄、有機溶媒洗浄等により汚染がないようにする。
49 トラップ球を使用することによりロータリーエバポレーター内での還流による接続部からの汚染を防ぐことができる．
50 カラムクロマトグラフィーにおいて使用する充てん剤や溶媒の種類及び量は標準物質や実試料を用いた分画試験を行って決めること．
51 ロックマス，質量校正に使用する化合物は規定しない．
52 例えば同位体スパイク，ロックマスモニターの測定質量数のデータ取込時間を短くする等し，極力 1 ピークあたりのデータポイント数が多くなるようにする．
53 集中配管等でキャリアーガスのボンベが GC と離れている場合，GC 入口にガス精製装置を装着すると良い．

54 他にアセトン:ヘキサン，メタノール:クロロホルム，エタノール:ジエチルエーテルを用いる方法もある。
55 分析装置の高感度化により超微量の検出が可能のときは試料採取量を少なくすることが出来る。
56 内部標準をデカン溶液として添加した時は、デカンが留去されにくいので、バス温度を高めに設定してデカンを十分に除くことが必要である。またバス温度を高くしすぎると回収率が低下するので注意する必要がある。
57 窒素吹きつけ操作に関しては窒素流量が多い, あるいは温度が高すぎると回収率が低下する場合があるので注意する．また, 試料を完全に蒸発乾固させてしまうと回収率が低下する場合があるので注意する．
58 シリンジスパイクには、試料に添加した同位体スパイク以外のものを用いる．シリンジスパイクは GC/MS 測定における各測定ごとに（1 injection に付）１種類以上使用する．
59 検量線用標準溶液の測定は毎回行う必要はない。検量線に使用する濃度範囲で１種類の標準溶液を試料とともに測定する。
60 Total(PCDDs+PCDFs) 実測濃度を有効数字 2 桁でまるめた Total PCDDs 実測濃度と Total PCDFs 実測濃度の和で表してはならない．
61 Total Co-PCBs 実測濃度を有効数字2桁でまるめたnon-ortho PCBs 実測濃度と mono-ortho PCBs 実測濃度の和で表してはならない．
62 1/2 以外にも 0 あるいは 1 を用いて計算する場合もある．
63 精度管理には内部精度管理と外部精度管理がある．
ここではこの内，内部精度管理について示したものである．

内部精度管理は調査から分析値の結果作成までの QA/QC に直接あるいは間接的に関係する事項に関して，調査機関が機関内で自主的に行う管理事項であり，基本的には，
『いつ』
・
『誰が』
・
『どこで』
・
『何のために』・『何を』・『どのように』行ったかが判明し，保管した記録から関係する全ての情報をトレースできることが条件となる．
64 調査計画によって頻度等については変更することが出来る。
65 血液 QCCSを準備し，用いる．

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図−１．血液中のダイオキシン類分析フロー
血液試料（全血約50g，ヘパリンナトリウムを含んで約60g）←13C-IS スパイク(クリーンアップスパイク)

脂肪抽出
アルカリ分解 （脂肪量は別途測定）←飽和硫酸ｱﾝﾓﾆｳﾑ20mL←2mol/L 水酸化ｶﾘｳﾑ/ｴﾀﾉｰﾙ 30mL
←25%ｴﾀﾉｰﾙ/ﾍｷｻﾝ40mL,振とう30 分間
室温一夜放置または２時間程度振とう←さらにﾍｷｻﾝ40mL ｘ２←水20mL，ｴﾀﾉｰﾙ10mL を添加
振とう30 分間液々抽出
ﾍｷｻﾝ30mL ｘ２，振とう30 分間

ﾍｷｻﾝ層
水洗
20mL ｘ １
硫酸処理
20mL ｘ2〜3
水洗30mL ｘ ２
脱水(Na2SO4)
減圧濃縮(ﾛｰﾀﾘｰｴﾊﾞﾎﾟﾚｰﾀｰ)
多層ｼﾘｶｹﾞﾙｶﾗﾑ

ﾍｷｻﾝ200mL

活性炭ｼﾘｶｹﾞﾙｶﾗﾑ

25%ｼﾞｸﾛﾛﾒﾀﾝ/ﾍｷｻﾝ100mL
ﾄﾙｴﾝ100mL

減圧濃縮(ﾛｰﾀﾘｰｴﾊﾞﾎﾟﾚｰﾀｰ)
10μL←13C-IS スパイク(シリンジスパイク)

GC/MS 測定25