角層バリア機能の最新メカニズム：
バリアー機能に関与するセラミドの種類、ＵＶによるバリアー破壊の新しいメカニズム、洗浄によるバリア破壊の実態

１．角層バリアー機能とその最新メカニズム
角層はエパポリメーターなどで評価できる水分蒸散(不感蒸せつ)に対するバリアー機能を有することが知られている。すなわち皮膚角層をスコッチテープで剥離することにより、剥離回数に比例して皮膚内部からの経表皮水分蒸散
transepidermal water loss(TEWL)が増加し、角層全体が省かれたところでその増加は飽和に達することより【図―１】、角層全体としてバリアー機能を持って図－１：いると考えられている。この水分蒸散に対するバリアー機能は経皮吸収バリアーと相関していることも知られている【o-16】。このバリアー機能は角層の厚さよりもむしろ角層内に存在する角質細胞間脂質の量と良い相関をもっている【o-17,18】。なかでもセラミド量と水分蒸散量はよい相関を示す【図―２】こ
となど

図－２

－ 1 －

から、角質細胞間に存在するセラミドを主体とした脂質の脂質二重層によってバリアー機能が営まれていると考えられる。
角層バリアー機能とセラミドの関係を解析するモデルとして、必須脂肪酸欠乏
essential fatty acid deficiency(EFAD)動物の角層バリアー機能障害があげられる。EFAD 動物の角層内のセラミドは量的にはほとんど異常が無いにもかかわらず、バリアー機能が著しく減少しており、セラミド組成の詳細な解析より Oアシルセラミドのアシル部位におけるリノール酸エステルがほとんどオレイン酸エステルに変化していることが発見された【o-19,20】。このアシル部位におけるリノール酸からオレイン酸への変化は必須脂肪酸を欠如した餌により随時生じるが、その脂肪酸組成の変化と対応して水分蒸散量で示される角層バリア
ー機能も減少し【図―３】【o-20】、またリノール酸をエステル基にもつ合成
アシルセラミド【図―４】の皮膚塗布により EFAD 動物のバリアー機能（Ｔ
図－３：

図－４：

－ 2 －

ＥＷＬ及びサリチル酸の経皮吸収性）がほぼ完全に回復【図―５，６】するのに対し、オレイン酸をエステル基にもつ合成アシルセラミドではまったく回復効果が見ら

経皮水分蒸散量(g/m2.hr)

経皮水分蒸散量(g/m2.hr)

図－５：

図－６：
[14C]-サリチル酸透過性 (x 102 dpm)

アシルセラミドの合成
アシルセラミドの合成
5
4
3
2
1
0

Normal

基剤のみ

10%

1%

セラミド

10%

アシルセラミド

EFAD
O
O

O
N
O

OH
OH

合成セラミド

合成アシルセラミド

－ 3 －

N
O

O
O
OH
OH

れない【図―７】【a-26】ことから、セラミドのなかでもリノール酸エステルを有するアシルセラミドがバリアー機能に重要な役割をになっているものと考えられている。

図－７：

リノール酸エステルを有するアシルセラミドがオレイン酸に変化することによるバリア機能の低下は【図―８】の如く分子の整列を行うことによりオレイン酸のアシルセラミドでは分子の配列に隙間が生じる可能性が推察され、またリ
ノール酸エステルのアシルセラミドはラメラ構造のリベット的役割が報告されている【o-19】。

－ 4 －

図－８：

リノール酸誘導体

オレイン酸誘導体

２．角層成分の変化とバリア機能
角層のバリア機能が角層細胞間脂質から構築される脂質２重層（ラメラ層）によることは前述したが、このラメラ層の主要な成分であるセラミド以外にもそれらの変動によりバリア機能が変化することをわれわれは最近紫外線照射によるバリア能低下の際に見出した【a-50,52】。ヘアレスマウス皮膚に紫外線（ＵＶＢ）を１ＭＥＤ強のエネルギーで照射すると【図―９】の如く照射後４日目をピークとしてバリア機能の低下（ＴＥＷＬ値の増加）

Hairless Mouse

図－９：

1 minimal erythemal dose =70 mJ/cm2

3.0

TEWL(g/m2/hr)

**

**

**

**
**

2.0
*

Lipid analysis

1.0

UVB: 75 mJ/cm2

0.0
0

2

－ 5 －

4

6

8

Time after UVB (Days)

10

が認められる。紫外線照射による同様なバリア機能の低下はヒト前腕皮膚においても【図―１０】の如く認められる。このバリア能低下のピークの４日目に角層の細胞間脂ヒト上腕内側ソーラーシュミレイター1.4MED照射

図－１０：
18.0

p<0.05

16.0
14.0
12.0
ＴＥＷＬ

10.0
8.0
6.0

n=15

4.0
2.0
0.0

0

１

2

3

5

4

6

7

8週

質を角層重量当たりで測定した結果、バリア機能の主成分であるセラミドはむしろ有意に増加し、またコレステロールはほとんど変化が認められないものの、脂肪酸も有意な増加を示し、バリア能の低下は細胞間脂質の量的変化では説明できない結果であった。この紫外線照射による角層内のセラミド量の変化は紫外線量に依存し【図―１１】の如4 days after radiation

図－１１：
50

Ceramide Level(g/mg stratum corneum)

***
*

40

30

20

10

0

0

18

37

75

Dose of UVB (mJ/cm2)

く１８、３７、７５ mJ/cm2 照射では３７ mJ/cm2 から有意な増加を示し、75mJ/cm ２では
セ ラ ミ ド量はさらに増加している。このセラミドの増加に関与するセラミド 種 はCer(EOS), Cer(EOH), Cer(AS), Cer(AP)であることが明らかとなった。したがって、セ－ 6 －ラミド以外の成分が紫外線暴露によるバリア能低下を引き起こしている可能性を考え、グルコシルセラミド量を測定したところ紫外線照射後２日後をピークとした有意な増加を認め【図―１２】、このグルコシルセラミドの増加が初期のバリアー能低下に関与していることが明らかとなった。この２日後のグルコシルセラミドの増加は紫外線照射
図－１２：

3.0
**

UVB: 70 mJ/cm2

Glucosylceramide Level(g/mg Stratum Corneum)

2.5

2.0
*
1.5

1.0

0.5

0.0
0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

Time after UVB (Days)

量に依存して増加し、３５ mJ/cm2 から有意な増加を示し、７０および１５０ mJ/cm2 で暫時有意な増加を示した。角層のセラミドやグルコシルセラミドの量をコントロールしているメカニズムは【図―１ 3】のごとき表皮におけるスフィンゴ脂質代謝に基づいてお図－１３：
Sphingolipid M etabolisms in the Epidermis of H ealthy Skin
palmitoyl-CoA + serine

Basal Layer

3-ketosphinganine

ceramidesynthesis

sphinganine
dihydroceramide

glycolipids
synthesis

sphingomyelin
synthesis

ceramide

Barrier function

OH
O
HN

O

OH
O
HN

O

O
O P O
OH O

OH

glucocerebrosideOH
HN

glucocerebrosidase

+

NMe3

-

sphingomyelin

O
OH
OH

ceramide

sphingomyelinaseglucosephosphorylcholine

ceramidase
ceramidedegradation

fatty acid
H2N

sphingosine

OHOH

sphingosine-1-phosphateethanolamine phosphate－ 7 －Stratum Corneum

り、グルコシルセラミドを分解してセラミドを生成させる酵素であるグルコセレブロシン
ダーゼが関与しており、このグルコシルセラミドの増加はグルコセレブロシダーゼ酵素活性の BrCBE による阻害の際にもバリア障害を伴って認められることから、【図―１４】【a-23】
グルコセレブロシダーゼ阻害によるバリア機能低下
グルコセレブロシダーゼ阻害によるバリア機能低下

図－１４：

120

TEWL(ppm/0.5cm2/hr)

100
BrCBE

80

Recoverycontrol

60
40
20
0
0

2

4
BrCBE塗布

6

8

10

12

14

日

グルコセラブロシダーゼの関与を考え、本酵素の紫外線照射後の活性の変動を調べたとこ
ろ、紫外線照射 1 日後をピークとする有意な低下を示した【図―１５】ことから、グルコ
セレブロシダーゼの紫外線暴露による活性の低下が原因していることが示唆された。本酵
素活性の照射１日後の低下は 35mJ/cm2 から有意に認められ、７０および１５０ mJ/cm2と照射エネルギーが増加するにつれて暫時さらに減少した。紫外線照射後の表皮でNorthern Blotting による測定したベーターグルコセレブロシダーゼの mRNA レベルは９
時間後でむしろ増加していることから、蛋白レベルの減少ではなく、活性レベルの低下が引き起こされていることが明らかとなった。
図－１５：

－ 8 －

一方、このベーターグルコセレブロシダーゼ活性の紫外線照射による低下とそれに伴う角層内のグルコシルセラミドの増加は紫外線暴露の初期に生じており、その後数日で紫外線照射前のレベルに戻っているので、バリア能低下の中期から後期におけるメカニズムへの関与の可能性は低いと考えられた。バリア能低下の中期から後期におけるメカニズムを解析するため、角層細胞膜に結合している結合セラミド量を測定したところ、【図―１６】に示す如くＵＶＢ照射エネルギーに依存した有意な減少が 37mJ/cm2 から誘導され、７５ｍＪ／ｃｍ２ではさらに有意な減少を示した【a-50】。７５ｍＪ／ｃｍ２での照射で引き起こされる結合セラミドの減少の照射後の時間経過を観察したところ３，４日での減少のピークが認められ【図―１７】、紫外線誘導バリア能の低下の原因となっていることが示唆された。

UVB: 75 mJ/cm2

Covalently Bound Ceramide Level(g/mg stratum corneum)

図－１６：

40

30

20

10

0

*

0

2

*

4

6

8

10

Time after UVB (Days)

3 days after radiation

Covalently Bound Ceramide Level(g/mg stratum corneum)

20

図－１７：

18

***

16

*

14
12
10
8
6
4
2
0

0

18

37

－ 9 －
Dose of UVB (mJ/cm2)75

この紫外線照射による結合セラミド量の低下のメカニズムを解析するため、結合セラミドの形成の【図―１８】のごとき最終段階に関与している酵素であるトランスグルタミナー
ゼＩ酵素に紫外線照射がどう影響するかを調べた結果、本酵素の遺伝子発現量は紫外線照射碁２，４日で有意に減少し【図―１９】、結合セラミドの低下の原因として働

図－１８：

OH

-hydroxy fatty acidHOfree fatty acidsphinganine
ceramideOH
HOG

-hydroxyceramide
Glucosyltransferase

Glucosyltransferase

G

PDMP

PDMP

OH
G

G

HO

glucosylceramide

CoA
CoA

Transgutaminase-1

GO

Ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ
ｂｏｕｎｄ ｃｅｒａｍｉｄｅ

CBEG-glucocerebrosidase

Cornified Lipid EnvelopeOacylceramide

A

B
2

Relative Intensity

UVB: 37 mJ/cm2

図－１９：

1

*
0

0

2

*
4

6

8

10

Time after UVB (Days)＊＊

いている可能性が示唆された。このトランスグルタミナーゼ遺伝子発現量の紫外線暴露後の減少の原因としては、照射後に生じる表皮細胞の増殖と表皮の肥厚【図―２０】を－ 10 －

80
***

***

図－２０：

***

70

Thickness(m)

60
50
***

40

*

30

†††

20

UVB: 75 mJ/cm2

10
0
0

2

4

6

8

10

Time after UVB (Days)

推察し、同様に刺激による表皮の肥厚が生じるＳＤＳ洗浄処理や角層ストリッピングを行った皮膚では同様にバリア能が低下するとともに結合セラミドが有意に減少【図―２１】
するがセラミドはむしろ紫外線照射後と同様に増加または変化ない【図―２２】ことから、
トランスグルタミナーゼ発現の低下とともに生じる結合セラミドの減少に、表皮の角化の亢進状態が関与する可能性が考えられた【a-50】。

Measurement on day 5

20
18

Covalently Bound Ceramide Level(g/mg stratum corneum)

図－２１：

16

**

14

**

12
10
8
6
4
2
0

Untreated

TS
2% SDS
until complete
5 mindaily for 4 days removal of s.c.
daily for 2 days

図－２２：
Measurement on day 5

Ceramide Level(g/mg stratum corneum)

50

40

30

20

10

0

Untreated－ 11 －

2% SDS
5 min
daily for 4 daysTS
until complete
removal of s.c.
daily for 2 days

以上の結果をまとめてみると【図―２３】、紫外線照射により生じるＴＥＷＬの上昇として認められるバリア機能の低下の時間経過はグルコシルセラミドの増加が初期に、また結合セラミドの減少が中期に関与し手いる可能性を示唆し、

3.0
2.0

**
**

**

*

1.0

UVB: 75 mJ/cm2

0.0
0Covalently Bound Ceramide Level(g/mg stratum corneum)

**

**

2

4

8

10

*

*

**

6

Glucosylceramide Level(g/mg Stratum Corneum)

図－２３：

TEWL(g/m2/hr)

ＵＶＢ照射によるバリア破壊メカニズムは【図―２４】の如く推察することが
できる。

*

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Time after UVB (Days)

11

12

13

14

15

図－２４：
UVB照射によるバリア破壊メカニズム
UVB照射によるバリア破壊メカニズム
初期：β
初期：βーグルコセレブロシダーゼ活性阻害によるグルコシルセラミドの蓄積
中期：トランスグルタミナーゼ１の酵素蛋白生成抑制
によるヒドロキシセラミドのCornified
によるヒドロキシセラミドのCornified Envelopへの結合阻害への結合阻害後期：種々の因子のcombination
後期：種々の因子のcombination or 不明

３．アトピー性皮膚炎のバリアー機能異常
アトピー性皮膚炎は難治性および再発性の皮膚炎として知られ、近年従来の免疫異常に加えて、皮膚バリアー機能の異常が注目されてきている。このバリアー機能異常は易刺激性、ダニアレルギー、皮膚表面での 黄色ブドウ球菌のcolonization や本菌の感染症であるトビヒなどで見られる易感染性に代表されるアトピー性皮膚炎患者皮膚の特徴に大きく関与している。また我々の研究で、
この皮膚バリアー機能異常がアトピー性皮膚炎患者で認められる皮膚免疫異常の引き金になっている可能性も明らかとなりつつある【a-32,d-29】。本稿ではアトピー性皮膚炎患者皮膚に認められるバリアー機能異常について、経皮吸収－ 12 －

バリアー機能および抗菌バリアー機能の２局面からその異常の状態およびその発症メカニズムについて論述し、さらにこの経皮吸収バリアー機能異常が皮膚免疫異常にも関連している可能性についても最後に述べる。
３－１．経皮吸収バリアー機能異常⚫ 経皮水分蒸散バリアーの発現メカニズム
一般に経皮吸収バリアー機能は経皮水分蒸散量(Trans-Ｅ pidermal Water Loss)で評価されることが多く、エバポリメーターで測定した経皮水分蒸散量は種々ケミカルの
経皮吸収量との相関が高いとされている【o-43】。よく間違えられるのは経皮水分蒸
散量は角層の水分含量（電気抵抗の逆数のコンダクタンス値で表されインピーダンス
メーターなどで測定する）と関連していると思われる場合があるが、両機能とも角層の細胞間脂質であるセラミドの状態や量が関連している【f-11】ものの、この経皮水
分蒸散量はまったく独立した機能で水分含量とは相互に関係はあまり強くない。この
経皮水分蒸散量は角層をスコッチテープで剥離すると剥離回数に応じて増加し、角層が完全に剥離されるとプラトーに達することから、角層全体としてその機能を担っていることがすでに判明している【e-2】。また角層から細胞間脂質(特にセラミドなど)を溶剤で溶出することにより、経皮水分蒸散量は著しく上昇することより角層細胞間に存在する細胞間脂質(セラミドが主体)がその経皮吸収バリアー機能の本体であることも明らかとなっている【d-16】。本バリアー機能は前述した如く必須脂肪酸欠如
ラット皮膚（経皮吸収バリアー機能が低下している)を用いたバリアー誘導実験より、必須脂肪酸（リノール酸）欠如の餌を与え続けることにより、角層細胞間脂質中のア
シルセラミドのアシル基がリノール酸からオレイン酸に変換するのに伴ってバリアー機能が消失したり【o-20】、リノール酸がアシル結合した合成アシルセラミドの皮
膚塗布によりバリアー機能が回復する事実より、セラミドの中でも特にリノール酸をエステル結合で持つアシルセラミドがバリアー機能の発揮に重要な役割を持っていることが判明している【a-26】。これと一致して、アトピー性皮膚炎患者皮膚角層におけるアシルセラミドにおいても、リノール酸エステル型が減少し、オレイン酸エス
テル型が増加しており、これも本症でのバリア異常の原因の一つとして考えられている。
⚫ アトピー性皮膚炎での経皮水分蒸散バリアー機能異常
アトピー性皮膚炎患者皮膚【図―２５、２６】は皮疹部および無疹部皮膚においても【図―２７】の如く皮膚角層の水分保持機能やバリアー機能が健常者にくらべ著しく低下し－ 13 －

図―２５：

アトピー性皮膚炎

図―２６：

Ato pic D ry S kin

Transepidermal Water Loss (g/m2h)

バリアー機能

図－２７：
40
30
20
10
0
健常人

無診部 皮診部
ア
ト
ピ
ー
性
皮
膚
炎
患
者

ていることが知られており【d-20】、この無疹部皮膚はアトピー性皮膚と呼ばれアトピー性皮膚炎の再発難治化の原因の一つとしてあげられている。すなわち
ステロイド治療などで皮膚炎が消失した状態（無疹部）でも、このバリアー機
能異常は依然として回復していないことから、この無疹部皮膚のケアーを怠ると、【図―２８】の如くバリアー機能が低下しているため種々の刺激物やアレ－ 14 －

図－２８：

悪魔のサイクル(繰り返す)
外部刺激（ダニ、スモッグなど）

アトピックドライスキン
セラミド不足による乾燥バリア機能の低下

悪化

悪循環
改善

アトピー性皮膚炎
湿疹・かゆみ外用薬（ステロイドなど）治療で治っても、ｱﾄﾋﾟｯｸﾄﾞﾗｲｽｷﾝの状態が続いていると、何らかの外部刺激を受け、再び発症する傾向があります

ルゲンさらには自身の汗の成分などの容易な侵入を招き、皮膚炎が再発しやす
く、これがアトピー性皮膚炎の再発性や難治化に結びついているものと考えられている。またこのアトピー皮膚はバリア機能が低下していると同時に水分保持機能も低下しているため、冬季には乾燥しやすく、衣服とのまさつなどでのかゆみが誘発されやすく、走破による皮疹の悪化を招きやすい。アトピー性皮膚炎患者の無疹部皮膚でのＴＥＷＬで評価した皮膚バリアー機能は健常者と比べても有意な低下を認めると同時にその低下の程度は、アトピー性皮膚炎患者の病気重症度と極めて高い相関関係があり、軽症においてもすでに健常者と比べて有意なＴＥＷＬ値の上昇を示し、さらに中等症および重症と重症度が高くなるにつれてＴＥＷＬ値も有意に増加する【図―２９】。このＴＥＷＬ値と重症度（０，１，２，３と点数を与える）の間には非常に高い相関関係 (r=0.915267、
ｐ＜0.0001、n=68）が認められ、また皮膚での落屑などの皮膚所見が認められない軽症のアトピー性皮膚炎患者の無疹部皮膚でも、健常者に比べて有意に高いＴＥＷＬ値を示すこと【図―３０】【a-53】からＴＥＷＬ値はアトピー性皮膚炎の診断や治療経過を観察する上でも便利な指標となっている。
50

図－２９：

**
**

**

45

**

TEWL (g/m2/h)

40
**

35

**

30
25
20

r = 0.834
p < 0.0001
n = 106

15
10
5
0

0
n=34

1

2

3

軽症

中等症

重症

n=28

n=22

n=22

健常者

－ 15 －

アトピー性皮膚炎

図－３０：

アトピー重症****45

アトピー中等症
アトピー軽症
健常**

40

TEWL (g/m2/h)

**

**

50

*

35
**

*

30
25
20
15
10

r = 0.697
p < 0.0001
n = 106

5
0

1
n=34
HC

n=17
AD

2

3

4

5

n=18
AD

n=19
AD

n=14
AD

n=6
AD

落屑スコアー⚫

アトピー性皮膚炎での皮膚バリア機能異常のメカニズム
経皮吸収バリア機能に角層中のセラミドが主体となった脂質 2 重層(ラメラ)が重要であることから、アトピー性皮膚炎患者の皮膚角層中のセラミド量を測定してみた結果、アトピー性皮膚炎患者の皮診部及び無疹部皮膚では健常者に比べ顕著にセラミド量が減少していることが判明し【図―Ａ７０】【a-20】、セラミド種のなかでもバリア機能に関連の深いアシルセラミドが最も減少しており、アトピー性皮膚炎患者皮膚での水分保持やバリアー機能の低下の原因とされている。アトピー性皮膚炎患者前腕無疹部皮膚でのバリアー機能の指標であるＴＥＷＬ値と同じ皮膚部位角層中のセラミド量は【図―２】の如
く明確な相関を示し【f-11】、アトピー性皮膚炎患者皮膚角層でのセラミドの減少がバリアー機能の低下に直接的に関与していることが示されている。
また最近では紫外線（ＵＶＢ）暴露の際に生じるバリア機能障害の原因として示されている角層細胞膜結合セラミドの減少もアトピー性皮膚炎患者皮膚では顕著に観察されていることから【a-50】、この結合セラミドの減少もア
トピー性皮膚炎患者皮膚でのバリアー機能異常の要因として指摘されている。
アトピー性皮膚炎でのせラミドの減少のメカニズムとしては、皮膚表皮におけるセラミドの産生に関与する三つの脂質代謝酵素【図―Ａ６７】の中で、加齢によるセラミダーゼ活性の亢進【a-27】とは異なり、またスフィンゴミ
エリナーゼやベーターグルコセラブロシダーゼ活性も健常者と差がないなど、従来のセラミド代謝酵素活性レベルはなんら変化していないが、セラミドの前駆体であるスフィンゴミエリンやグルコシルセラミドをデアシレーション
する未知の酵素であるスフィンゴミエリングルコシルセラミドデアシラーゼ
酵素活性の異常発現【図―３１、３２】が推察されている【a-38,39,46,47,c-2】。

－ 16 －

pmole x 10-2/mg)
Sphingomyeline Deacylase Activity ((pmole

図－３１：

蛍光スフィンゴミエリン
p<0.0058060

放射標識スフィンゴミエリン
p<0.00560

p<0.00540

p<0.005

40

20

20
0

健常者 無疹部
（n = 20) n = 14
平均年齢 ２３．６

皮疹部0

n = 13アトピー性皮膚炎

健常者 無疹部
（n = 20) n = 14

平均年齢 ２３．６

平均年齢 １９．４

皮疹部 接触性
n = 13 皮膚炎

アトピー性皮膚炎
平均年齢 １９．４

図―３２：
Glucosylceramide deacylase activity
600
p<0.005

FFA FORMED (pmol/g)

500
400

p<0.005

300
200
100
0

Healthy(n=15)

Uninvolved(n=19)

Involved(n=19)

Atopic dermatitis

本酵素が発現すると、【図―３３】で示す如くスフィンゴミエリナーゼと基質であるスフィンゴミエリンをまたはベーターグルコセレブロシダーゼとその基質であるグルコシルセラミドを競走することによりセラミドの替わりにスフィ
ンゴシルフォスフォリルコリンもしくはグルコシルスフィンゴシンを生成する
ことにより、セラミドの減少が引き起こされると推察される。このことを裏付
け－ 17 －

palmitoyl-CoA + serine

図－３３：3-ketosphinganine
sphinganine
dihydroceramide

糖セラミド
生成系

スフィンゴミエリン
生成系

ceramide
ceramide

OH

顆粒層

OH
O

HN

O
HN

O O
OH
OH

グルコシルセラミドO
HN

グルコセレブロシダーゼ
グ ル コ シ ル セラ ミド
グルコース

デアシラーゼ

H 2N

O

スフィンゴ
ミエ リ ナ ーゼ ス フィン ゴミエリ ン
デアシラーゼファスフォリルコリン

脂
脂肪酸

脂肪酸

H2N

分解系

O

OH

H 2N

グルコシル
スフィンゴシン

+

O
O P O
OH O

NMe3

スフィンゴシルフォスフォリルコリン

OHOH

スフィンゴシン

アトピー性皮膚炎

スフィンゴシン-1-リン酸

アトピー性
皮膚炎

NM e 3

スフィンゴミエリン
OH
OH

セラミド

セ ラミダー ゼ
セラミド

脂肪酸

+

O
O P O
OHO

エタノルアミンフォスフェイト

角層るが如く、アトピー性皮膚炎皮膚角層中にはスフィンゴシルホスフォリルコリ
ン【図―３４】【a-46】およびグルコシルスフィンゴシン【図―３５】【a-47】
が無疹

160

p
p

<0.005
<0.05
(

140

****

p

345.6)<0.005

120
100
80
60
40
20
0

Ave. ± SD

図－３５：

*

u n i n v ol ved
i n vo l ved
Atopic D er matitis

A ge- m a t ch ed
C on t r ol
(N=40, ave. 24.3 yo)
13.51 ± 5.16

glucosylsphingosine (ng/mg stratum corneum)

図－３４：

Sphingosylphosphorylcholine (ng/mg stratum corneum)****C h r on i c
E cz em a(N=47, ave. 22.3 yo) (N=44, ave. 21.7 yo) (N=6, ave. 31.5 yo)
20.00 ± 11.60
40.08 ± 56.25
10.28 ± 3.64
****

140
****

p

p

<0.001<0.001

120

100

80

60

40

20

0

healthy
control( n = 81 )mean age: 29.4

mean +- SD

7.74 +- 7.45－ 18 －

uninvolved( n = 105)

involved
Atopic Dermatitis

mean age: 24.5
13.19 +
- 11.51( n = 94 )mean age: 23.0
18.21 +
- 21.54

部および皮疹部皮膚で健常者皮膚に比べて有意に増加しており、他の皮膚炎である接触皮膚炎や慢性湿疹では増加していないこと、またこれらのデアシラー
ゼ活性により産生されたスフィンゴシルホスフォリルコリンおよびグルコシル
スフィンゴシンの増加の程度は同じ角層部位でのセラミドの減少の程度と有意な相関関係を示すこと【図―３６、３７】【a-46,47】より、これらの酵素の

120

He althy control: 20,

R = - 0．44
N = 51 Le s ion: 18,
p < 0.01
N on-Le s ion: 13

100

80

Sphingosylphosphorylcholine(ng/mgstratum

corneum)

図－３６：

60

40

20

0

図－３７：

Glucosylsphingos ine (ng/mg stratum corne um )

0

2.0

4.0

6.0

ceramide( g/mg250

8.0

stratum

10.0

12.0

corneu)He althy control: 13,

Ｒ＝ - 0.41
N= 36 Lesion: 12,
p < 0.05
Non-Lesion: 12

200

150

100

50

0
0

10

20

30

40

50

60

Ceramide (g/mg stratum corneum)

アトピー性皮膚炎患者皮膚表皮での特異的異常発現によりセラミドの減少が生じ、バリア機能が低下している可能性が確認された【図―３３】。

－ 19 －

⚫ アトピー性皮膚炎での抗菌バリアー機能異常
アトピー性皮膚炎患者皮膚表面には黄色ブドウ球菌のコロナイゼイションが頻度高く認められ【図―３８】、皮疹部ではほぼ100％、無疹部でも約30％の患者で認めら
れ、

図－３８：

The numbers of S. aureus colonies

CFU/20cm2
5000

1000

100

10

0

健常者
n=18

無疹部
n=24

皮疹部
n=24

アトピー性皮膚炎

このコロナイゼイションは健常者で認められるのはまれである。アトピー性皮膚炎患
者皮膚で高頻度で認められる黄色ブドウ球菌のコロナイゼイションは、感染症である
トビヒの引き金になる可能性が高い。アトピー性皮膚炎患者皮膚で生じている抗菌バ
リアー機能の障害は、経皮吸収バリアー機能異常が菌などの角層への侵入を招きやすいことや、アトピー性皮膚炎患者皮膚は発汗異常があることから皮膚表面のｐＨが健常者に比べてアルカリ側に偏りやすく、このAcid Mantleの乱れが抗菌バリアーの異常に結びついているとの推測がなされていた。しかし経皮吸収バリアー異常を抗菌バ
リアー機能に結びつける説は少々の無理があり、またｐＨのアルカリ側への傾斜も健常者で平均ｐＨ 5.0からアトピー性皮膚炎患者で平均ｐＨ５．５程度の変化であり、この程度の変化で抗菌バリアー機能異常に至るとの説も充分な説得力を持ち得ないものであった。
⚫

角層細胞間脂質スフィンゴシンと抗菌バリアー機能

我々は健常角層に存在する抗菌脂質として知られる【o-32】であるスフィンゴシンがアトピー性皮膚炎患者皮膚角層では低下しているため、抗菌の最前線である角層の天然の抗菌活性が低下した結果、黄色ブドウ球菌のコロナイゼイションが生じやすくなる可能性を考え解析を行った【a-44】。スフィンゴシンが黄色ブドウ球菌に強い抗菌活性を示すことは 1986 年に Bibel DJ らが報告【o-32,33】したが、その後スフィン－ 20 －

ゴシンがもつ抗菌活性に注目した研究はなされていなかった。アトピー性皮膚炎患者
皮膚角層に存在するスフィンゴシン量を放射化ラベル法で放射化セラミドに変化し、それを Radio-TLC にて分離定量した結果、角層重量当たりのスフィンゴシン量はアト
ピー性皮膚炎患者皮膚で健常者皮膚に比べて有意に無疹部および皮疹部で減少しており、その減少の程度は皮疹部で無疹部に比べより強い傾向がみとめられた【図―３９】。この** p < 0.01

図－３９：

Sphingosine (ng/mg stratum corneum)

1400** p < 0.01

1200

1000

800

600

400

200

0

健常者

皮疹部

無疹部

( n = 17 )( n = 18 )( n = 20 )アトピー性皮膚炎

図－４０：Sphingosine (ng/mg stratum corneum)

スフィンゴシンの減少の程度と同じ皮膚部位における黄色ブドウ球菌のコロナイゼ
イションの程度を比較すると【図―４０】、黄色ブドウ球菌のコロナイゼイションが1400** p<0.01* p<0.05**** p<0.0001

1200
1000
800
600
400
200
0
健常者
(n=18)

無疹部 皮疹部

(Group 0)

無疹部 皮疹部

(n=16) (n=12)(n=2)

Group 0Group <

(n=3)

10 2

無疹部 皮疹部
(n=7)

(n=5)

Group > 10 2

アトピー性皮膚炎

０、100 以下、および 100 以上のグループで、この順にスフィンゴシン量は健常者皮膚に比べ有意に減少していることが判明し、スフィンゴシン量の低下が黄色ブドウ球
菌のコロナイゼイションの増加に関与している可能性が示唆された。またセラミドからスフィンゴシンを生成させる酵素である酸性セラミダーゼ活性も黄色ブドウ球菌のコロニー数の増加に伴って低下していた【図―４１】。このスフィンゴシン量の低－ 21 －

(pml/h/mg)*** p = 0.00341

100

図－４１：

**** p = 0.0001

90
Acid Ceramidase Activity* p = 0.0225

80
70
60
50
40
30
20
10
0

Healthy
Control

NL(n=16) L(n=11)

NL(n=1) L(n=3)

NL(n=2) L(n=3)

Group 0Group < 1022Group > 10

(n=18)

AtopicDermatitis

Group0下の程度は同じ角層部位におけるセラミド量の低下の程度【図―４２】およびセラミ
ドの天然の分解酵素である酸性セラミダーゼ【a-28】活性の低下【図―４３】と有意な相関を示すことから、アトピー性皮膚炎患者皮膚角層におけるスフィンゴシン量の低下は、経皮吸収バリアー機能異常の原因とされるセラミドの減少とセラミドをスフィンゴシンに分解する酸性セラミダーゼの活性の減少の両方の要因により生じていることが示唆された。

図－４２：

Ceramide (g/mg stratum corneum)

9.00
8.00
7.00
6.00
5.00
4.00
3.00
2.00

Ｒ＝0．70p < 0.01

1.00
0.00

0.0

200.0

400.0

600.0

800.0

He althy co ntro l: 19,
N = 58 Le s io n: 20,
N o n -Le s io n: 19
1000.01200.01400.0

図－４３：

Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ(ng/mg stratum corneum)

Sphingosine (ng/mg stratum corneum)
1400
He althy co ntro l: 17,

Ｒ＝０．６５N = 52 Le s io n: 18,
p < 0.01
N o n -Le s io n: 17

1200
1000
800
600
400
200
0

0

100

200

300

400

500

600

Acid ceramidase activity (pmol/mg protein/hr)－ 22 －

700800

⚫ 皮脂成分ヘキサデセノイック酸と抗菌バリアー機能
同様な抗菌脂質に関連して、以前より皮脂腺由来脂質成分も抗菌活性を示すことが報告されてきていたので、アトピー性皮膚炎患者皮膚表面の皮脂組成の健常者皮膚との比較を詳細に行ったところ、脂肪酸の一種である
cis-6-hexadecenoic acid (C16:1Δ6)量がアトピー性皮膚炎患者皮膚では健常者皮膚に比べ極端に減少していることが判明した【図―４４】【o-55】。本脂
肪酸はTotal fatty acid composition

20

10

JO04
JO20
JO21
JO22
JO23
JO24
JO15
JO16
JO17
mean

AD patients

OH

図－４４：

Ratio(%)

30

C O

40

0
12:0

13:0

14:0

14:1

15:0

15:1

16:0

16:1

17:0

17:1

18:0

18:1 others

Chain structure
40

JA02
JA03
JA05
JA06
JA09
JA10
JA11
JA12
JA13
JA14
mean

Ratio(%)

30

20

10

Healthy controls

0
12:0

13:0

14:0

14:1

15:0

15:1

16:0

16:1

17:0

17:1

18:0

18:1 others

Chain structure

皮脂中のトリグリセライドやワックスエステルの構成脂肪酸中でもアトピー性皮膚炎患者で顕著な減少が示され、皮脂組成中の脂肪酸種そのものがアトピー性皮膚炎では変化していることを示した【o-55】。本脂肪酸は黄色ブドウ球菌に強い抗菌活性を示す【図―４５】ことや、この減少の程度は同じ皮膚部位における－ 23 －

Log number of survivors(CFU/ml)

図－４５：

Staphylococcus aureus ATCC 12600T

7

C16:1Δ6
Benzalconium chloride
Triclosan
Trichlorocarbanilide

6
5
4
3
2

0

5

10
15
Time（hｒ）

20

25

黄色ブドウ球菌のコロナイゼイションの程度と有意な相関を示す【図―４６】ことから、この皮脂中に存在するcis-6-hexadecenoic acid 減少もアトピー性

2

Numbers of St.aureus (counts/cm )皮膚炎患者皮膚における黄色ブドウ球菌のコロナイゼイショインに見られるごとき抗菌バリアー機能異常の要因として重要な役割を果たしていることが示唆
さ

図－４６：

104

103

102

101
1
0

0.2

0.4

0.6

0.8

Free C16:1Δ6（μg/cm2）－ 24 －

1.0

図－４７：

Colony counts of St.aureus(CFU/stamp)

れた。さらにこのことはcis-6-hexadecenoic acid を黄色ブドウ球菌のコロナ
イゼイショインが生じているアトピー性皮膚炎患者皮膚に数日間塗布すること
により、黄色ブドウ球菌のコロナイゼイショインが減少または消失する【図―４７、４８】ことからも【o-55】、その重要な役割が裏付けられた。
200

Male,32

150
right forehand (control)

100
left forehand(C16:1Δ6)50
0Colony counts of St.aureus(CFU/stamp)0

15

Male,19

200

図－４８：

5
10
Time (Days)

right elbow(control)150
100

left elbow(C16:1Δ6)

50
0
0

5
10
Time (Days)

15⚫ 抗菌ペプチド、ベーターデフェンシンー２と抗菌バリアー機能
一方、最近注目されている抗菌ペプチドであるデフェンシンやカセリシジン量に関しては、アトピー性皮膚炎患者皮膚中で乾癬患者皮膚に比べて減少しているとの報告【o-34】もあるが、健常者皮膚に比べると明確な減少は認められないことから、その黄色ブドウ球菌のコロナイゼイションに対する役割は不明であった。我々は正確にデフェンシン量を免疫沈降を利用して測定する方法を新たに開発し、抗菌バリアーの最前線である角層中のデフェンシン量を角層ケラ
チン量当たりで定量した結果、ベーターデフェンシンー２量はアトピー性皮膚炎患者皮膚角層では無疹部では有意ではないが増加傾向および皮疹部ではむし－ 25 －

ろ健常者皮膚に比べて有意な増加をみとめた【b’-1】。またアトピー性皮膚炎患
者皮膚に存在する黄色ブドウ球菌のコロナイゼンションの程度と同一皮膚角層中のデフェンシン量にはむしろ正の有意な相関が認められ、アトピー性皮膚炎の重症度が強くなるにしたがってデフェンシン量はむしろ増加を示したことより、抗菌ペプチドの抗菌バリアー機能への関与は弱く、むしろ炎症に伴って産生される抗炎症ペプチドの性質を持つことが示唆された。

The Number of Colonies (S. Aureus)（number/20 cm2）

3000
2500
2000
1500
1000
500
0

Healthy
Control
n=18

Non-Lesion Lesion
n=27

n=23

Atopic Dermatitis－ 26 －

Procedure for Quantitation of BD2 in the Stratum Corneum
Healthy・AD・Psoriasis
the stratum corneum（3 strips tapes)

First Extraction of BD2

Subsequent Extraction of protein

With TBS/Tween 20 for overnightppt（the stratum corneum+Tape）
Supernatant

Hexane Treatment

Treated with Anti-BD2 antibody overnightwith Protein G-beads overnightFiltrationof Stratum Corneum Cells

Immunoprecipitation
Centrifuged
and Subjected to PAGE

Extraction with 8M Urea,
50mM Tris,
1% SDS, 100mM 2ME,
1mM DTT

Western Blotting

Immunoblotting
1o Ab: anti-BD22o Ab: anti-Rb IgG-HRP+ ECL Advance visualization

RC DC Protein Assay

Standard Curve using rec -Defensin(BD2) by
Immunoprecipitation /Western Blotting
Blank Tapes

Western Blotting
w/o IP

w/ IP

Overnight extraction
with TBS/T(0.1% Tween20)

recBD2 (ng)00.1 0.2 0.5

1

2

5 10

5

Addition of recBD2
Overnight Incubation with Ant-BD2

Immunoprecipitation

Overnight Treatment with Protein G-DynaBeads

Yeild 56%

Centrifuged

Rec BD2 standard curve
60000

SDS-PAGE
Western Blotting

Detectable level:0.2～0.5 ng

50000

Band Intensity

Immunoblotting
1o Ab anti-BD2 @ 1 : 1.5k /2o Ab anti-Rb IgG-HRP @ 1 : 45k+ ECL Advance Visualization

40000
30000
20000
10000
0

0

2

4
6
8
Rec BD2 content (ng)－ 27 －

10

12

2

3

2

NL

L

5

6

BT

1

NL

L

CD

Healthy Control
4

NL

3
L

recBD2

1

1

Psoriasis
1

2

3

4

recBD2BT

NL: Non-Lesion
L : Lesion

Atopic Dermatitis

Healthy
Control

6.5 kD
3.4 kD

Immunoprecipitation/Western Blotting of BD2 in the Stratum Corneumof Patients with Atopic Dermatitis(AD)/Psoriasis/Contact Dermatitis(CD)ｐ＜０．０１0.6

ｐ＜０．０１ｐ＜０．０５ng -defensin-2 / g protein

ｐ＜０．０５

0.5

0.4

0.3
0.2

0.1

Healthy
Controln = 26

Non-Lesion

Lesionn = 30n = 43

Psoriasisn=4

Atopic Dermatitis

Comparison of beta-defensin-2 levels
among atopic dermatitis, psoriasis and healthy control－ 28 －

Tape stripping (# 16 strips) of thestratumcorneum layers

Immunoprecipitation/Western Blotting of BD2（Atopic Dermatitis/Non-Lesionand Healthy Control）

AD-1

Tape
Blank

1

2

Tape
Blank 1

2

3

AD-2
4

5

1

2

4

5

1

2

1

2

1

2

4

5

rec
BD2

4

5

rec
BD2

4

5

rec
BD2

4

5

rec
BD2

3

AD

【Pooling of Strips】

AD-3
3

AD-4
3

AD

#2, #3, #4 strips: pool １#5, #6, #7 strips : pool ２#8, #9, #10 strips : pool ３#11, #12, #13 : pool ４#14, #15, #16 : pool ５

Tape
Blank

AD-5
1

2

3

AD-6
4

5

3

AD
Tape
Blank 1

Quantitation of BD2
for Each Pool

HC-２

HC-1
2

3

4

5

3

Healthy
ControlComparison of beta-defensin-2 level through the stratum
corneum layers depending on the depth

Healthy Control

Atopic Dermatitis / Non-Lesion

0.14

**

n=10

n=10
0.12

BD2 (ng/g protein)

0.12

BD2 (ng/g protein)** p <0.01 vs healthy control

0.14

0.1
0.08
0.06
0.04

0.1

**

**

**

1

2

3

0.08
0.06
0.04
0.02

0.02

0

0

1

2

3

4

5

Tape Pool Number

4

5

Tape Pool Number

Comparison of beta-defensin-2 level through the stratum corneum layers
depending on the depth－ 29 －

ng -defensin-2 / g protein

0.6
p < 0.01

p < 0.01

0.5
p < 0.05

p < 0.05

0.4
NL: Non-Lesion
L : Lesion

0.3
0.2
0.1
0
(n=28)

ＮＬ

Ｌ

ＮＬ

Ｌ

ＮＬ

Ｌ

(Group 0)

(n=1)

(n=1)

(n=25)(n=27)

(n=2)

(n=9)

Healthy Control

Group <

Group 010 2Group > 10 2

Atopic Dermatitis
b-defensin-2 Content in the Stratum Corneum (3 Strips) of AD
in Relation to S. Aureus Colonization
4.0
r= 0.342440

Colony number (log number)

3.5

p= 0.0046

3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

ng -defensin-2 / g keratin－ 30 －

0.5

0.6

Relationship between b-defensin-2 Content and S. Aureus Colonization in
the Lesional and Non-Lesional Stratum Corneum of AD

３．バリア機能異常と皮膚免疫異常
バリア機能異常の存在はアトピー性皮膚炎の発症に重要な因子と考えられるようになってきたが、一方アトピー性皮膚炎の発症要因に皮膚免疫反応の異常を考える人も多い。アトピー性皮膚炎の皮膚免疫異常の典型的な現象としては、通常の接触ア
レルギー反応がサイトカインバランスでの Th1/Th2 バランスが Th1 優位状態になっているのに対し、アトピー性皮膚炎の特に急性期のアレルギー反応は Th2 優位になり、IgE の増加や炎症皮膚におけるエオジノフィルの浸潤を引き起こすとされている【o-１,２,３】。この血中の IgE の増加や皮膚の免疫担当細胞である表皮ランゲ
ルハンス細胞の Fc 受容体を介した IgE の結合【o-5】、さらにはこのランゲルハ
ンス細胞に結合した IgE を介しての皮膚免疫反応の修飾反応【o-6】が注目されている。これらアトピー性皮膚炎患者では種々免疫サイトカイン(ＩＬ‐４，ＩＬ－１３)や受容体(Fc鎖)遺伝子の家族性変異が見出されているものの【o-7,8,9】、これらの異常とアトピー性皮膚炎患者で実際に認められている皮膚免疫異常との因果関連については、いまだ明快な説明はなされていない。我々は皮膚バリア機能の異常は皮膚炎の発症要因のみならず、皮膚免疫応答の修飾をもたらし、アトピー性皮膚炎に特徴的な皮膚免疫応答を引き起こす可能性を検証するため、バリア破壊がもたらすハプテン及び蛋白抗原での接触アレルギーにおける皮膚免疫応答の変化について解析した【a-32,d-29】。
皮膚のバリア機能と皮膚での免疫応答
１．研究の背景皮膚は外界からの刺激物の浸入を防ぎ、また組織中からの水分の蒸散による水分の損失を防ぐ目的で、皮膚最上層に角層という何層にも重なった角質細胞の層とその細胞間にスフィンゴ脂質を主成分として脂質二重層からなる多重脂質層を形成し、バリア機能を発揮している【a-26】。難治性皮膚炎として知られる、アトピー性皮膚炎における無疹部皮膚では角層中のセラミドの減少【a-20】
によりバリア機能の異常【d-23】が生じており、これがアトピー性皮膚炎の発
生や再発また難治性の要因と考えられている。このバリア異常の存在はアトピ
ー性皮膚炎の発症に重要な因子と考えられるようになってきたが、一方アトピ
ー性皮膚炎の発症要因に皮膚免疫反応の異常を考える人も多い。アトピー性皮膚炎の皮膚免疫異常の典型的な現象としては、通常の接触アレルギー反応がサ
イトカインバランスでの Th1/Th2 バランスが Th1 優位状態になっているのに対－ 31 －

し、アトピー性皮膚炎の特に急性期のアレルギー反応は Th2 優位になり、IgE の増加や炎症皮膚におけるエオジノフィルの浸潤を引き起こすとされている【o-1,2,3】。この血中の IgE の増加や皮膚の免疫担当細胞である表皮ランゲル
ハンス細胞の Fc 受容体を介した IgE の結合【o-4】、さらにはこのランゲル
ハンス細胞に結合した IgE を介しての皮膚免疫反応の修飾反応【0-5】が注目されている。これらアトピー性皮膚炎患者では種々免疫サイトカイン(ＩＬ‐４，
ＩＬ－１３)や受容体(Fc鎖)遺伝子の家族性変異が見出されているものの【o-6,7,8】、これらの異常とアトピー性皮膚炎患者で実際に認められている皮膚免疫異常との因果関連については、いまだ明快な説明はなされていない。我々は皮膚バリア機能の異常は皮膚炎の発症要因のみならず、皮膚免疫応答の修飾をもたらし、アトピー性皮膚炎に特徴的な皮膚免疫応答を引き起こす可能性【図―４９】を検証するため、バリア破壊がもたらすハプテン及び蛋白抗原での接触アレルギーにおける皮膚免疫応答の変化について解析した【o-9】。

バリアー破壊はTh2タイプ優位なアレルギー反応を引き起こすか？

図－４９：

ハプテン

(ピクリルクロライド)蛋白抗原(ダ ニ 抗 原 )バリアー破壊角層
表 皮

T h 2 -優 位 な
サイトカイン反応
IL -4> >IL -2 , IF N - 

Ig E 産 生
好酸球浸潤

２． バリア破壊後のハプテン感作による免疫応答
２－１．ピクリルクロライド感作による所属リンパ節でのサイトカイン応答
Balb/c マウス皮膚でバリアを壊すことなく通常のハプテン（ピクリルクロライ
ド、ＰｉＣｌ）皮膚塗布による感作を行った後、所属リンパ節での、インター
ロイキンー２（ＩＬ－２），インターロイキンー４（ＩＬ‐４），インターフェロンガンマー（IFN-）mRNA の発現を RT-PCR 解析にて観察すると、いずれ－ 32 －

のサイトカインの遺伝子の発現は増強し、Th-1 サイトカインである ＩＬ－２と IFN-  は感作後２日目で発現が最大となるのに対し、Ｔｈ－２サイトカインであるＩＬ－４は感作後４日目でその発現は最大となる【図―５０】。同じピクリルクロライドの皮膚塗付による感作を、テープストリッピングを８回行うことによりバリア破壊後６時間でおこなった場合、所属リンパ節での Th-1 サ
イト

図－５０：

Cytokine mRNA Expression in Draining Lymph Nodeafter PiCl Sensitization through Intact Skindays after sensitization
0
4
2

(bp)
925
421

IL-4

Th2

IFN-γ
Th1

IL-2

β-actin

カインである IL-2 と IFN-  の mRNA の感作２日後の発現は、バリア破壊を行わなかった場合に比べ著しく抑制されることが判明した【図―５１】。一方、Th-2タイプのサイトカインである IL-4 の mRNA の感作４日後の発現はまったく影響
図－５１：

IFN-γ

IL-2

5

2.5

4

2

3

1.5

2

1

1

0.5

0

0
0

2

IL-4

Tape-Strippingnon
８timesG3PD H

0

2

0

2

4

15

3

10

2
5

1
0

0
0

4

Days after PiCl sensitization－ 33 －

4

Days after PiCl sensitization

されることなく、一定の強い発現が認められる。この Th1 タイプのサイトカインの発現抑制率は感作操作をバリアー破壊直後に行うとほぼ１００％までになる【図―５２】。バリア破壊の程度と IFN-  mRNA 発現の抑制の関連を見てみると、感作前におこなったテープストリッピング回数に比例して IFN-  mRNA 発現が顕著に阻害されており、バリア破壊が Th-1 サイトカインの発現の著明な抑制を引き起こすことが明らかとなった【図―５３】。
図―５２：

Timing of PiCl Sensitization after Barrier Disruption
and the Suppressive Effects on Cytokine Response
3

IL-2
2

1

0
3

3

IFN-γ

G 3PDH

2

2

1

1

0

0

no
application

shave
only

immediate

６h laterTiming of PiCl application

図－５３：

no
application

immediate

shave
only

６h laterTiming of PiCl application

800
800

600
600

400
400

200

200

0

6

6

IFN-γ

6

G3PDH

0

6

IFN-γ

G3PDH

5

5

5

5

4

4

4

4

3

3

3

3

2

2

2

2

1

1

1

1

0

0

0

0

＊

0

4

6

8

＊

0

4

テープストリッピング回数＊： PiCl無塗付－ 34 －

6

8＊＊no applicationof PiCl

0

4

6

8

＊

0

Number of Tape-Stripping

4

6

8

2-2. バリア破壊後の脾臓及び血清中の IgE mRNA 発現及び IgE 蛋白量への影響
バリアー破壊を伴った感作による引き起こされる Th1 タイプのサイトカインの発現抑制が、相対的な Th2 タイプのサイトカインの優位状態を作り出し、その結果 IgE 蛋白の発現増強に結びつくのかいなかを調べるため、バリア破壊後に
DNCB で感作し、Ｂａｌｂ/c マウス脾臓における IgE mRNA 発現をバリア破壊しないで感作した場合と RT-PCR 解析で比較検討した。脾臓における IgE mRNA 発
現はバリア破壊後感作した場合、バリア破壊しない場合と比べ有意に増加していた。つまりバリア破壊は脾臓における IgE の産生を増加させる方向に働くことが明らかとなった。さらに血清中の IgE, IgG1, IgG2a 蛋白量を抗原特異的
ELISA で測定した結果、IgG1 及び IgG2a 量には変化が無かったが、IgE 量は有意な増加を認め、バリア破壊後のハプテン感作により IgE 産生がバリア無破壊での感作に比べ有意に増加することが確かめられた。
３。バリア破壊後の惹起皮膚におけるサイトカイン応答
ピクリルクロライドによるバリア破壊後の感作にひきづづき、耳介にてバリア破壊もしくは非破壊後に惹起を行い、皮膚腫脹の程度および皮膚でのサイトカ
イン mRNA の発現強度を見てみると、皮膚の腫脹は惹起時にバリア破壊を行ったほうが強い傾向を示したが、感作時のバリア破壊の有無に関わらず、皮膚の腫脹の強さはほとんど影響されず、感作時のバリア破壊は免疫抑制的には働いていないことが判明した【図―５４】。この惹起皮膚でのサイトカイン mRNA の発
現惹起前テープストリッピング無し
S w el l i n g ( x 1 0 - 2 m m )

0

10

20

30

40

図－５４：
感作前テープストリッピング+
無感作

惹起前テープストリッピング有り
S w e ll i n g ( x 1 0 - 2 mm )0

感作前テープストリッピング

10

20

30

40

+
無感作

をバリア破壊の有無での感作及び惹起別に見てみると、バリア破壊後感作を行った場合は、惹起の際のバリア破壊の有無に関わらず、バリア破壊なしの感作－ 35 －

の場合に比べ Th1 サイトカインである IL-2 及び IFN- の mRNA の顕著な抑制が生じ、一方 Th2 サイトカインである IL-4mRNA の発現は、感作時及び惹起時のバリ
ア破壊の有無に関わらず、明瞭で一定の発現を示した【図―５５】。すなわち感作時にリンパ節で認められた Th1 サイトカイン発現の抑制は、惹起皮膚領域に存在する細胞においても同様なパターンで Th1 タイプのサイトカイン発現が抑制されていることが明らかとなった。この Th1 タイプサイトカインである IFN-

図－５５：

Cytokine Response in Challenged Skin after PiCl
Sensitization through Tape-Stripped Skinno sensitization+ no challengesensitization+ challenge
Tape-Stripping
before sensitization
Tape-Stripping
before challenge+- - -＋ -＋no sensitization+ challenge

- ＋

(bp)
925
421

IL-4

IFN-γ

IL-2

β-actin24 hr after challenge

 の発現抑制状態はアトピー性皮膚炎患者で認められている典型的な皮膚免疫異常であることが知られている【o-1,2】。
４．バリアー破壊後のダニ感作による免疫応答
４－１．ダニ抗原感作による所属リンパ節でのサイトカイン応答
アトピー性皮膚炎患者ではハウスダスト、ダニ等の環境抗原に対する感作率が相対的に高いことが知られ、ダニ抗原はアトピー性皮膚炎の発症に重要なアレ
ルゲンと一つとして認知されている【o-9】。ダニ抗原自身はその分子量の大きさから通常は皮膚に侵入できないので、バリア破壊を行った後ダニ抗原を皮膚に塗布することにより初めてダニ抗原による感作を成立させることができる。
KLH などの他の抗原性の強い蛋白抗原を用いても同様にバリア破壊後の感作により、接触アレルギー反応を誘導することができる。テープストリッピング８
回後にダニ抗原を塗付することにより、感作を行い、その後に所属リンパ節でのサイトカインの mRNA の発現を経時的に RT-PCR で解析すると、Th1 タイプのサ
イトカインである Il-2 や IFN- の発現はほとんど認められないのに対し、Th2タイプのサイトカインの IL-4 の mRNA の発現は１日後より増強し、感作後４日目でピークを示し、この増強は７日後でも認められた【図―５６】。バリア破－ 36 －

壊後のダニ感作と PiCl 非バリア破壊感作の所属リンパ節での IL-4, IL-2 及びIFN－の遺伝子発現を感作後１，２，４日後で比較してみると、２日目での IL-2と IFN－の発現低下と４日目での IL-4 の発現増加がダニ感作で認められている【図―５７】。
図－５６：

図―５７：

このバリアー破壊後のダニ抗原感作による所属リンパ節での感作４日目でのIL-4 ｍＲＮＡの発現増強は、テープストリッピングの回数や経皮水分蒸散量に比例して、えきか、及びそけい部リンパ節で生じており【図―５８】、バリアー破壊に依存した皮膚免疫応答ということができる。
RT-PCR analysis
inguinal lymph nodes

80

図－５８：

800
600

IL-4

axillary lymph nodes

20

60

15

40

10

20

5

0

0

IL-4

400

8

200
0

0

2

4

6

8

テープス トリッピ ング回数

β-actin

8

6

6

4

4

2

2

0

0

ストリッピング回数

0 0 2 4 6 8β-actin

0 0 2 4 6 8

ダニ抗原塗布４－２．ダニ抗原感作による所属リンパ節での IgE 遺伝子の発現
バリア破壊後のダニ抗原感作による所属リンパ節での IL-4 ｍＲＮＡの発現増強－ 37 －

が、その後の IL-4 産生増強により、IgE の産生増強に結びついているのかどうかを検証するため、所属リンパ節での IgE, IgG1, IgG2a の mRNA の発現を RT-PCRで解析した。一般に Th1 サイトカインの IFN- はＴリンパ球で産生された後、Ｂリンパ球に作用して IgG2a の産生をうながすのに対し、Th2 サイトカインの Il-4
は IgE やＩｇＧ１の産生をうながすことが知られている。バリアー破壊後のダニ抗原での感作とバリアー破壊をしないでのピクリルクロライドでの通常感作を比較すると、ダニ抗原では感作後７日目で IgE mRNA の強い発現が認められるのに対し、ピクリルクロライドでの通常感作では、IgE の発現はほとんど認められない【図―５９】。一方ピクリルクロライド感作では７日後に IgG2a の mRNA
図－５９：の強い発現が認められるのに対し、ダニ抗原感作では、この発現はほとんど認められず、リンパ節でのダニ抗原感作での IL-4 の発現増強は IgE の発現増強まで連動していることがうらずけられた。この IgE の発現増強と一致して、血清中での総 IgE 及びダニ特異的 IgE レベルも,ダニ感作後有意に増加することも判明している。
４－３．ダニ抗原惹起皮膚でのサイトカイン応答とエオジノフィルの浸潤
バリアー破壊後ダニ抗原で感作したマウスを、耳介皮膚でダニ抗原の皮内注射に惹起し、炎症皮膚でのサイトカイン mRNA の発現を通常のピクリルクロライド
での感作及び惹起での結果と比較してみると、ダニ抗原では通常のピクリルク
ロライドでの惹起皮膚に比べ Th1 サイトカインである IL-2 及び IFN- の mRNAの顕著な抑制が生じ、一方 Th2 サイトカインである IL-4mRNA の発現は、両者ともに明瞭な一定の発現を示した【図―６０】。すなわち感作時にリンパ節で認めら－ 38 －

** (bp)

IL-4

421

IL-2
925

図―６０：

IFN-γ
G3PDH
t
en y etm onl lleng y nge
a
e e
nl le
tr ng han- alle on+c nge o+chalo
N ch ati le on
e/ iz
al ti
mit nsit l/chitiza
e PiC ns
e
e/s
l/s
mit
C
i
P

れた Th ２サイトカイン発現の増強と、Th1 サイトカインの発現抑制は、惹起皮膚領域に存在する細胞においても同様なパターンで生じていることが明らかとなった。同様なＴｈ２タイプのサイトカインの遺伝子発現の抑制はアトピー性皮膚炎患者にダニ抗原をパッチテストして生じる炎症皮膚でも報告されている【o-10】。
Th2 タイプのサイトカイン反応として、IL-4 や IL-5 を介しての好酸球の炎症部位への浸潤の増強作用が知られている【o-11,12】。バリアー破壊後のダニ抗原
感作による一連の Th2 タイプの反応が、この好酸球の浸潤の増強を引き起こす
特徴を有するものかどうかを検討するため、ダニ抗原による皮内惹起を耳介部でおこない、通常のピクリルクロライドによる接触アレルギー反応と比較して好酸球の浸潤の強さを、炎症部へ浸潤した好酸球の数を Birbrich Scarlet 染色により測定した。その結果、耳介皮膚真皮に浸潤してきている好酸球数はバリ
アー破壊後ダニ抗原塗付感作・皮内惹起では、ピクリルクロライド通常塗付感作・塗付惹起にくらべ２倍以上の浸潤細胞数を示し【図―６１】、ダニ抗原による皮膚アレルギー反応が Th2 タイプの反応を増強することが裏付けられた。
一方、同じ炎症部位でのマスト細胞やマクロファージの数には差は認められなかった。

－ 39 －

600

Biebrich-Scarlet 陽性細胞数

図－６１：
ダニ抗原/感作＋惹起400
ダニ抗原/惹起のみ

PiCl/感作＋惹起

200

無処理

0

PiCl/惹起のみ

2

1

3

惹起後の日数５．まとめ【図―６２】に示した如く接触アレルギー反応において、バリアー破壊は抗原がハプテンの場合は、Th1 タイプの反応を抑制し、その結果 Th2 タイプの反応を相対的に優位にするのに対し、抗原がダニ抗原の如き蛋白抗原の場合は、Th2 タイプの反応を促進する方向に働き、バリア破壊はいずれの抗原の場合でも Th2優位に傾斜することが判明した。アトピー性皮膚炎患者の皮膚では無疹部においてもバリアー破壊状態が永続しており、ここで皮膚上で種々のアレルゲンにより引き起こされる免疫反応は、いままでの知見をベースに考えれば、Th2 タイプに傾斜することが容易に推察できる。すなわち、アトピー性皮膚炎患者皮膚で認められている皮膚免疫異常は実は、アトピー乾燥皮膚の特徴であるバリア
ー破壊がもたらした結果とも考えることが出来る。

図－６２：－ 40 －

バリアー機能雑感
バリアー障害は肉眼ではわからない。
皮膚の如何なる皮診とも関係が認められない。
バリアー障害があると、いろいろな環境物質に対する経皮吸収が亢進して一次刺激やアレルギー刺激が誘発されやすくなる。
アトピー性皮膚炎患者の無疹部皮膚ではバリアー機能が顕著に低下していることがわかっているが、この疾患以外ではあまり問題にされたことがない。
しかし最近敏感肌の約３０％はアトピー素因が関与していることが明らかとなり
化粧品使用者の中でも敏感肌認知者が増加し化粧品使用人口の約３０％を占めるにいたり、敏感肌のかなりの部分はアトピー性皮膚炎患者の軽症との考えかたが主流をしめるに至っている。これらの事実と一致して、敏感肌のヒトの皮膚特に顔面では健常者と比べてバリアー機能が有意に減少しているとの報告が相次いでいる。
すなわちバリアー機能を改善することのできる剤は化粧品関係ではアトピー性皮膚炎患者よりも敏感肌対応の化粧品でもっともその意義を発揮できる。
日常の生活活動で皮膚角層バリア機能が障害を受ける２大要因
過度の洗浄
紫外線
敏感肌

3. 角層バリア機能のヒト皮膚評価測定法：⚫ バリア機能の測定法
１．ニコチン酸メチルにより経皮吸収バリアー機能の測定法
ニコチン酸メチルの血管拡張作用による発赤を指標にして角層バリアー機能を測定する方法で、ヒト前腕屈側部に直径８ｍｍの濾紙を置き、ニコチン酸メチ
ルの１ x １０－２ M 濃度の水溶液を２ l を添加する。一分後に濾紙を除去し、ペーパータオルで付着している試料液を拭き取り以下の基準により発赤に程度を０．５単位で評価する。０：反応なし、１：かすかな紅斑(大体の輪郭が認められる)、２：明瞭な紅斑、３：明瞭で強度な紅斑、４：浮腫を伴う紅斑－ 41 －

これらの測定は温度２０ oC,湿度５０％に調整した環境可変室内でおこなう。
【図―６３】は２名の前腕屈側部でニコチン酸メチルを塗布した後に認められた発赤で上下図いずれも a が塗布部、ｂが無塗布部である。【図―６４】はヒト前腕屈側部で３ｃｍ離して２箇所でニコチン酸メチルを塗布し同時に発赤(紅斑)とレーザードップラー装置で血流量を測定した２例の結果で、紅斑強度
と血流量

図－６３：

図－６４：

はほぼ相関して変動することを示している。【図―６５】は３種濃度でのニコチン酸メチル水溶液を塗布した後に認められる紅斑強度と色差計で測定した a値の関係を調べたもので、紅斑と a 値はほぼ比例した形で変動していることがわか－ 42 －

図－６５：

る。すなわちニコチン酸メチル塗布後に認められる紅斑の強度により角層バリ
アー機能が相対的に測定できることが明らかとなったので、バリアー機能をア
セトン・エーテルの３０分処理にて破壊し、その後このニコチン酸メチル法によりバリアー破壊の程度を測定した結果が【図―６６】でアセトン・エーテル

図－６６：

処理をした部位ではニコチン酸メチル塗布による紅斑の強度が高く出現し、バリアー機能の低下が生じていることが明らかである。アニオン洗浄剤の sodium
dodecyl sulfate（SDS）水溶液を cup shaking 法にて１日３０分間洗浄した１，
２，３日後のニコチン酸メチル塗布による紅斑の出現の時間経過を見た場合も、洗浄剤によるバリアー機能低下のため、紅斑のコントロールの蒸留水処理にくらべ早い出現が認められる。【図―６７】はアセトン・エーテルおよび SDS による－ 43 －

図－６７：

バリア障害の程度をまとめたもので、発赤スコアーは健常肌や水処理のみに比べ有意な増加を示し、両処理により角層バリアー機能が明瞭に低下していることがわかる。さらにアセトン・エーテル処理により障害されたバリアー機能は合成擬似セラミドの塗布により、健常肌のレベルまで回復していることがこの
ニコチン酸メチル法により証明されている【図―６８】。

図－６８：

２．リボフラビンを用いた経皮吸収バリア機能の測定法【o-59】
本法では【図―６９】の如く環境可変室【温度２０ oC, 湿度４０％】にて左右
前腕皮膚に 30g/ml 濃度のリボフラビンを含む水溶液の塗布処理を行い、処理－ 44 －

図―６９：

無処理

水溶液（60g/ml
リボフラビンを含む）

閉塞剤＋水溶液（60g/ml
リボフラビンを含む）

前腕皮膚塗布【指で数秒軽く塗る】

前腕皮膚塗布【２０分】

表面についた水分をペーパータオルで軽く押すようにして拭き取る角層テープストリッピング（ニチバン製：２ｘ２ｃｍ）： 同一部位を１０回 角層剥離をおこなう。

試験管に1％SDS溶液２ｍｌと採取テープ【1枚づつ】をいれ超音波処理によりリボフラビンを抽出
０．４５mのメンブランフィルターで濾過し、細胞片などを取り省く
分光蛍光光度計(F-2000型、日立製作所）：励起波長483nm, 測定波長 526 nm
でリボフラビン量を測定
スタンダードカーブ【スタンダードカーブ【1％SDS溶液で所定濃度で調整したリボフラビン標準溶液のSDS溶液で所定濃度で調整したリボフラビン標準溶液の蛍光強度から作成】
蛍光強度から作成】から浸透リボフラビン量を算出

終了後ペイパータオルで軽く残っている液を拭くとる。リボフラビン浸透量の測定は、塗布した皮膚部位に２ｃｍｘ２ｃｍのニチバンスコッチテープを皮膚表面に適度な圧力で押さえつけ、ゆっくりと剥がしす。同じ操作を同じ皮膚部
位で計 10 回行い、剥離角層を 10 枚用意する。剥離回数に応じて番号を 1－10
番まで記載し、剥離テープはスライドグラス上に貼り付け、４ oC にて保存する。
角層からのリボフラビンの抽出法は、試験管に 1％SDS 溶液２ｍｌと採取テープ（1 枚づつ別々に）をいれ超音波処理によりリボフラビンを抽出し、０．４５mm のメンブランフィルターで濾過し（セントリコンで遠心）、細胞片などを取り省く。リボフラビン濃度の測定は分光蛍光光度計(F-2000 型、日立製作所）：
励起波長 483nm, 測定波長 526 nm でリボフラビン量を測定スタンダードカー
ブ（1％SDS 溶液で所定濃度に調整したリボフラビン標準溶液の蛍光強度から作成）から浸透リボフラビン量を算出する。リボフラビン浸透量の測定は一枚ごとの剥離角層中の cm2 辺りのリボフラビン重量（ng/cm2）を算出し、角層の剥離
番号を横軸にとり、プロットし、処理の違いによる浸透量の差を評価する。本法により皮膚閉塞パッチによる経皮吸収量の増加効果を測定した実例を【図―７０】に示した。

－ 45 －

図－７０：

リボフラビン浸透量(g/cm2)

12.0
10.0
閉塞パッチ

P<0.01

開放パッチ

8.0
6.0
4.0
2.0
0.0
１

2

３

４

５

６

７

８

９

1０

角層ストリッピングNo⚫ 経皮水分蒸散量によるバリア機能の測定
１．経皮水分蒸散量の測定法
インテグラル社製の経皮水分蒸散量測定装置 Tewameter (Courage-Khazaaka
electronic GmbH, Cologene, Germany) 【図―７１】ではプローブは筒にな
図－７１：

水分蒸散量測定

手元スイッチで更に便利

水分蒸散量シングルタイプTM300

この図は皮膚の蒸散量（TEWL)を測定する装置とその原理を示しています。
プローブは筒になっていて内部に2対の温湿度センサーがついています。
皮膚から蒸散した水分がこのセンサーを通過する時の温度と湿度の変化を計測することにより、皮膚の蒸散量を測定します。

一般に皮膚のバリア機能が損なわれると、TEWLは増加します。

っていて(つまり開放系で)内部に 2 対の温湿度センサーがついていて、皮膚から蒸散した水分がこのセンサーを通過する時の温度と湿度の変化を計測することにより皮膚の蒸散量を測定する。同様な測定原理で経皮水分蒸散量を閉塞系で測定する機器としては他に Evaporimeter (ServoMed, Stockholm,
Sweden)がある。閉塞系としては水晶発振器により空気気流中で水分蒸散を測るフロースルーセル型経皮水分蒸散量測定装置（花王株式会社製）【b-5】や
Ｎ２気流中で経皮水分蒸散量を測定する機器（Warrington, PA, USA）もある。
ま た キャ リア ーガ スを 必要 とし ない タ イ プ の経 皮水 分 蒸 散量測定装 置－ 46 －

（VapoMeter, Keystone Scientific K.K. Tokyo, Japan）も販売されている。
1－１．アニオン性界面活性剤での洗浄による角層バリアー機能の変化
皮膚刺激性に最も結びつく皮膚バリアー機能への影響は、【図―７２】の如く
ヒト

経皮水分蒸散量

図－７２：

処理日数

皮膚での３％洗浄剤１日２回洗浄処理で、ＳＤＳがエパポリメーターで評価した水分蒸散量の測定により、洗浄２日目より最も強いバリアー破壊作用を示したが、それに対し同様な洗浄処理条件では石鹸や MAP 等のバリア―機能に対する影響は軽微なものであった【75】。皮膚バリアー機能の本体は脂質２重層を形成して角質細胞間に存在する細胞間脂質によることがほぼ確立されており、やはりこの細胞間脂質の溶出能の最も高い SDS【o-17,f-4】が試験した洗浄剤中で最も高いバリアー破壊能を示した．
２.光音響法を用いた経皮吸収バリアー機能の測定
経皮吸収バリアー機能の評価に頻度高く使われるエバポリメーターによる経皮水分蒸散
量は、水分の蒸散量を測定していることから、必ずしも経皮吸収バリアー機能と同じではなく、この両因子がまったく関連していないとの論文【o-30】も存在する。実際にin vivo
での経皮吸収バリアー機能が種々の皮膚でどの程度異常になっているのは充分には解析されていなかった。これは皮膚角層を通した物質の経皮吸収量を正確に測定するためには
アイソトープの塗布による血中や尿中への移行量の測定や、生検皮膚でのチャンバー法での実験が必要であり、いずれの方法も現状ではかなり困難であることが、種々皮膚における経皮吸収バリアー機能の異常を定量化することを妨げていた。我々は無浸襲で短時間で正確に物質の経皮吸収量を測定できる光音響分光法(ＰＡＳ)を開発し、脂溶性と水溶性の2種類の色素の経皮吸収量やその皮膚部位での差を健常者で比較してみた【a-45】。
本ＰＡＳ装置の外観とブロック図を【図―７３】に示した。また開放型光音響セルの構造－ 47 －

と実際にヒト皮膚で測定している時の写真を【図―７４】に示した。この方法の原理は【図―７５】に示す如く、角層上層から約15 mの間に存在する物質の量を測定するために、PAS装置外観
PAS装置外観

図－７３：
PC

in vivo UV/Vis-PAS装置ブロック図
Lens

Chopper

Monochromator
Optical Fiber

Xe-Hg Lamp(～200Watt)

Power
SupplyLock-in
AMP

Controler

Mic
PreAMP

GP-IB

PAS
Cell
SamplePC

図－７４：

Optocal Fiber
PreAMP

(a)

(b)
Mic

Window(SiO2)．
(b)

開放型光音響セル (a) in vivo 測定用開放型光音響セルのブロック図
開放型光音響セルにより、人皮膚を測定している時の写真）－ 48 －

光音響分光法（ＰＡＳ）によるバリア機能の測定方法
音響信号

断続光

図－７５：
光ファイバ
マイク

開放型セル

皮膚
角質層
表面～15μm

検出物質の光吸収ピークを含む光を断続的に皮膚に照射し、物質が光を吸収し励起状態になりその後基底状態に変化する際に放出した断続的な熱による周辺空気の断続的な膨張から生じる音を検出することにより、その物質量を測定するものである。【図―７６】には黄色色素塗布前後の豚皮膚の光音響スペクトルの差スペクトルと黄色色素エタノール
溶液の吸収スペクトルを示した。

図－７６：
0.3

2

PA signal / a.u.

1
0.1

0

250

Intensity / a.u.

0.2

0

350

450

550

650

750

Wavelength / nm

２－３－１．健常皮膚での光音響法を用いた経皮吸収速度の測定【図―７７】はベーターカロチンの経皮吸収を図に示す条件にて測定した結果で、前腕と頬では角層からベーターカロチンが消失する速度(経皮吸収速度)は頬の方か明瞭に早く、－ 49 －

前腕に比べ頬で経皮吸収が高いという一般的な概念と一致している。
0Forearmln ( PA-Signal / PA-Signal t = 0 )図－７７：Tape Stripped Forearm

Cheek
－1
0

20

40

60

100

80

Time / min.
． 人前腕 (a)とテープで角層を剥離した人前腕(b)および人頬部(c)それぞれに
βカロチンアセトン溶液を塗布した場合の光音響信号強度の時間変化）

次に前腕皮膚で水溶性色素であるリボフラビンと脂溶性色素であるベーターカロチンの経皮吸収速度を比較してみた結果を【図―７8】に示す。水溶性色素のリボフラビンはこの条件ではほとんど経皮吸収されていないのに対し、脂溶性色素のベータカロチンはある程度の経皮吸収を示し、一般的には脂溶性物質が水溶性物質より皮膚に入りやすい概念と一致している。
図－７８：β-carotene,リボフラビンの浸透挙動(波長 450nm / 切断周波数 420Hz)

規格化信号強度*

1.0

リボフラビンβ-carotene

0.1
0

10

20

時間

30
（分）

40

50

60

規格化信号強度＝（観測信号強度－塗布前信号強度）／（初期信号強度－塗布前信号強度）

１－３．アトピー性皮膚炎での経皮吸収バリアー機能異常
前項でも触れたが、経皮吸収バリアー機能の評価に頻度高く使われるエバポリメータ
ーによる経皮水分蒸散量は、水分の蒸散量を測定していることから、必ずしも経皮吸収バリア機能と同じではなく、この両因子がまったく関連していないとの論文【o-30】も存在する。実際にin vivo での経皮吸収バリアー機能がアトピー性皮膚炎皮膚でどの程度異常になっているのは充分には解析されていなかった【図―７9】。これは皮－ 50 －

アトピー皮膚へはどのぐらい物質が入り易いのか？

図－７９：

ダニ抗原は本当には入っていくのか？
界面活性剤

蛋白抗原

湿度

発汗

刺激物

ダニ抗原
汗成分
マラセチア

角層の厚さ

血行

ハプ
ハプテン

経皮水分蒸散量(TEWL)
角層

水分蒸散に対するバリアー

バリアー破壊経皮吸収量

表皮物質吸収に対するバリアー

かゆみ、炎症膚角層を通した物質の経皮吸収量を正確に測定するためにはアイソトープの塗布による血中や尿中への移行量の測定や、生検皮膚でのチャンバー法での実験が必要であり、いずれの方法も現状ではかなり困難であることが、アトピー性皮膚炎患者皮膚における経皮吸収バリアー機能の異常を定量化することを妨げていた。我々は無浸襲で短時間で正確に物質の経皮吸収量を測定できる光音響スペクトロメーターを開発し、アトピー性皮膚炎患者皮膚における【図―８０、８１】の如き脂溶性と水溶性の2種類の色素の経皮吸収量を健常者と比較してみた(13)【a-45】。この方法の原理は角層上層から約15mの間
Yellow 4

Red 215N(C2H5)2O

N(C2H5)2
C18 H35O2

OH
SO3Na

N

C

N

C

N

C

N

SO3Na

C

COOH

NaOOC

図－８０：
Molecular Weight
Solubility

４２３

Molecular Weight
Solubility

0.2 % (ethanol）
0.2 % (water）

５２４

0.08 % (ethanol）
0.5 % (water）

PASによる同時定量

図－８１：
15

黄色色素
吸光係数

10

赤色色素

5
0
400

500
入射波長（nm）－ 51 －

600

に存在する物質の量を測定するために、検出物質の光吸収ピークを含む光を断続的に皮膚に照射し、物質が光を吸収し励起状態になりその後基底状態に変化する際に放出した断続的な熱による周辺空気の断続的な膨張から生じる音を検出することにより、その物質量を測定するものである。【図―８２】はアトピー性皮膚炎患者前腕皮膚の無疹部と健常者の前腕皮膚であらかじめ塗布した水溶性色素と脂溶性色素の角層からの表皮への移行量を経過時間とともに測定したもので、いずれの色素もアトピー性皮膚炎患者皮膚の方で健常者に比較してより早く角層から表皮へ移行し、経皮吸収がより高いことを示した。
Healthy control

10.8Standerized Signal intensity

図－８２：Standerized Signal intensity

Atopic dermatitis

lipophilic dye

0.6
lipophilic dye

0.4
0.2
0

hydrophilic dyehydrophilic dye

0

60

1
lipophilic dye

0.8
0.6

hydrophilic dye

0.4hydrophilic dye

0.2
0

120

lipophilic dye

0

60

120

Time ( min)Time ( min)さらに短時間で経皮吸収量を評価するため、【図―８３】の如き方法により2－5分の色素のパッチテスト後の角層中への吸収量を測定したところ、【図―８４】に示す如くアトピー性皮膚炎患者皮膚角層は健常者に比べて約2倍以上の経皮吸収の有意な上
昇を水溶性色素および脂溶性色素のいずれでも示し、経皮吸収性の亢進が確認された。
またこの無疹部皮膚での経皮吸収性の亢進は、アトピー性皮膚炎の重症度にほぼ比例

角層内(14 m)への浸透量測定の実際

図－８３：

パッチチャンバー(20μL)

2分

色素
混合溶液

PASによる浸透量の測定－ 52 －

×103V
2.5

2 min dye application** P<0.001

Signal Intensity

Signal Intensity

1.5
1

1.5
1
0.5

0.5
0

** P<0.001

2

2

図－８４：

5 min dye application

×103V
2.5

0
Atopic dermatitis Healthy controls
uninvolved skin(n=10, ave. 35 y.o. )(n=26, ave. 26 y.o.)Atopic dermatitis Healthy controls
uninvolved skin(n=10, ave. 35 y.o. )(n=23, ave. 27 y.o.)

して強くなることも判明した【図―８５】。さらに興味深いことに、重症のアトピー性皮膚炎患者群では水溶性色素の角層への吸収量と患者血中のIgE量が強い相関を示し【図―８６】、重症のアトピー性皮膚炎患者で、水溶性の物質、おそらくダニ抗原などに高い経皮吸収性を示す患者は、これにより感作が成立しやすく、その結果とし
図－８５：

NS

0.8

(B) 5 min dye application

×103V(A) 2 min dye application

×103V

NS

0.8

NS

NS

Signal Intensity

Signal Intensity* P<0.05* P<0.05

0.4

NS* P<0.05
0.4

00Healthymildcontrols
n=6
n=10
ave. 25 y.o.
ave. 35 y.o.

moderaten= 5ave. 27 y.o.

Healthy
controls
n=10
ave. 35 y.o.

severen= 10
ave. 28 y.o.

Severity of atopic dermatitis

mild
n=6
ave. 25 y.o.

severemoderaten= 10
n= 5
ave. 27 y.o. ave. 28 y.o.

Severity of atopic dermatitis

Severe group of atopic dermatitis
N=7 Ave.27 y.o.
IU /ml(A) 2 min dye application

IU /ml(B) 5 min dye application

60000

60000

50000

50000

40000

40000

serum IgE

serum IgE

図－８６：

30000

20000

R=0.787
R=0.787
P<0.05
P<0.05

10000

30000

20000

R=0.915
P<0.001

10000

0

0
0.2

0.4

0.6

0.8

Signal Intensity

1

×103VPA signal amp./ x 103 V－ 53 －

0.2

0.4

0.6

0.8

Signal Intensity

1

1.2

×103VPA signal amp./ x 103 V

てIgEの産生も高まる可能性が示唆された。また無疹部皮膚での両色素の経皮吸収性は同じ患者皮膚でのＴＥＷＬ値とは良い相関関係を示さず【図―８７】、両者が独立した異なる物理化学的性質であることを示した。

80

80

40

20

0
0

1

R=0.073
P=0.475(g/m2/h)R=0.309
P=0.002

60

Transepidermal water loss

図－８７：Transepidermal water loss

(g/m2/h)

40

20

0

×103V2

60

0

R=0.224
P=0.026

Transepidermal water loss

60

40

20

Transepidermal water loss

(g/m2/h)80(g/m2/h)0.4

0.8

Lipophilic dye
2 min dye application

Hydrophilic dye
2 min dye application

×103V80

R=0.086
P=0.401

60

40

20

0

0
0

1

0

2

Hydrophilic dye
5 min dye application

×103V

0.4

Lipophilic dye
5 min dye application

0.8

×103V

4. バリア機能の破壊法とバリア補強剤評価プロトコール
背景
皮膚のバリア機能は最上層の角層に存在し、体内からの水分蒸散を防ぎ、また外界からの刺激物の容易な侵入を防ぐ重要な機能である。またこのバリアー機能は日常生活では特に洗浄剤の過剰な使用により障害を受けることが知られており、また紫外線による紫外線皮膚炎の結果としても障害を受ける。またこの異常は敏感肌の顔面皮膚にも認められ、さらにアトピー性皮膚炎ではこのバリアー機能の極端な低下が生じており、皮膚炎発症の主要な原因となっている。すなわちバリアー補強剤は洗浄や紫外線暴露により生じるバリアー
障害の予防や修復に使用されると同時に敏感肌皮膚へのケアー剤さらにはアトピー性皮膚炎のスキンケアー剤としても有用であることが証明されている。したがってバリア補強剤の評価は一般に健常皮膚にバリア破壊を誘導し、その前後で使用し、バリア破壊の予防や回復効果を、エバポリメーターを用いて経皮水分蒸散量を測定することにより、評価するのが一般的である。またバリア異常の認められる敏感肌のヒトや明瞭な継続的なバリア障害の認められるアトピー性皮膚炎患者皮膚の無疹部でのバリアー能回復効果を調べるのもよい評価法となる。
１。バリアー機能の破壊法
a) テープストリッピング－ 54 －

スコッチテープを使い、前腕皮膚に数秒押し当てて、剥がす操作を 20 回ほど繰り返すことにより角層全層を剥がす事によりバリアー機能のほぼ完全な破壊を引き起こすことができる。角層全層が図れた際にはきらきら光る光沢の層が現れればそれは角層の下の顆粒層が出てきているわけで、角層が完全に剥がされていることを意味する。またシアノ
アクリレート（瞬間接着剤）液体をガラスプレパラートに数滴たらし、それを前腕皮膚に押し当て、樹脂が重合するのを待って静かに剥がすことにより、角層全層の約半分（14層程度）を一度に剥がすことができる【図―８８，８９，９０】【a-20】。角層全層

図－８８：

図－８９：

図－９０：

－ 55 －

を剥がし、バリアー機能を完全に破壊するためにはこの操作を 2 回行う必要がある。本法ではバリア補強剤がテープストリッピングにより剥がされた角層の再構築およびそれに伴うバリアー機能の回復をいかに促進するかを評価できる。すなわちバリア改善効果というよりはバリアー回復促進効果ということができる。
b) ＳＤＳ処理
より日常の状態に近いバリアー破壊法としては５－１０％ＳＤＳでの洗浄法がある。前腕皮膚にガラスカップを設置し 20 分ほど腕を揺らすことにより洗浄状態を作り出すことによりバリアー能を破壊することができる【図―９１】。
同じ操作を一日 1 回数日間繰り返すことにより、より強いバリアー破壊を誘導することができる。またＳＤＳでの洗浄はサーキュレーション法【図―９２】【a-1】により行ってもほぼ同じ程度のバリアー破壊を誘導することができる。
より長く続くバリアー破壊状態を作るためにはＳＤＳ洗浄前に後で述べるアセトン/エーテル処理を設置したガラスカップを用いて約 30 分行うと、容易に比較的長く（5 日間程度）永続するバリアー破壊を誘導することができる。

カップシェーク試験評価法
１．予備洗浄５．環境可変室（２０℃、４０％ＲＨ）

２．環境可変室（２０℃、４０％ＲＨ） ６．評価

図－９０：

３．初期評価目視判定（紅斑、落屑）
TEWL
ｽｷﾝｺﾝﾀﾞｸﾀﾝｽ（ＳＫＩＣＯＮ－２００）

４．ガラスカップ装着（ヒト前腕部）
洗浄液注入
振盪
すすぎ

図－９３：

－ 56 －

ＳＤＳ処理よりバリア破壊を引き起こす試験でのバリア補強剤の評価系は【図－９４】の如く洗浄直前もしくは直後にバリア補強剤を塗付し、この操作を数日間継続して、試験終了日に TEWL 値その他を測定する方法がある【a-51】。

図－９４：

ＳＤＳ処理バリア誘導試験におけるバリアー改善剤の評価プロトコール

SDS + BRS

０

１

２

３

４

５

６
TEWL

バリアー補強剤
５－１０% SDS
10 min 洗浄
10s 水洗SDS +Vehicle
５－１０% SDS
10 min 洗浄
10s 水洗Control

Stratum
Corneum
Lipids

前腕皮膚
０

１

day

７

２

３

４

５

基材コントロール

６

７

TEWL
Stratum
Corneum
Lipids

前腕皮膚
０

１

day

２

３

４

５

６

７

day

TEWL

基材コントロール

前腕皮膚

Stratum
Corneum
Lipidsc) アセトン/エーテル処理
被験者の前腕内側に、特製のガラスカップ（直径３ｃｍ）を装着し 、そこにアセトン/エーテル（１/１）の溶液を、皮膚が十分に浸る量（約１０ ml)を注入する。約３０分わずかにガラスカップを揺らしながら放置し皮膚を処理する。この処理では皮膚角層から皮脂及び細胞間脂質を抽出除去し、数日間持続するバリアー破壊が誘導される。しかしＳＤＳ洗浄に比べるとバリアー破壊の程度は弱い傾向がある。バリアー破壊の程度が弱い場合はこの操作を一日一回数日間繰り返し、アセトン/エーテル処理の後に温水処理を 20 分行うとより明瞭なバリアー破壊を誘導できる。アセトン・エーテル処理によるバリア破壊法を用いたバリア補強剤の評価法は最後の最適プロトコールで詳述する。

⚫ バリア破壊がすでに生じている皮膚症状によるバリア補強剤の評価法
1. 敏感肌の使用
敏感肌を有する顔面皮膚でバリアー機能の低下が認められる被験者【図－９５】－ 57 －

を使用してもバリアー補強剤の評価が可能である。敏感肌の中でもバリアー障
害が相対的に強い場合でも、その程度はアトピー性皮膚炎に比べるとはるかに弱いので、被験者の数を多くし、使用期間も長めに（2 ヶ月程度）設定する必要がある。使用部位が顔面に限られるため左右の塗りわけは難しく、同様なレベ
ルでのバリアー障害が認められる被験者の 2 群で試験を行う必要がある。2 ヶ月程度のバリア補強剤の顔面への使用によりバリア機能の変化をエバポリメータ
ーで測定すると同時に敏感肌の特徴である感覚刺激閾値に関連するパラメーターも測定することにより、より正しいバリア補強効果の評価および化粧品的効能を得ることができる。
セラミド減少が関連

図―９５：

バリアレス

知覚過敏症

ニキビ肌
アトピー性
皮膚炎
敏感肌

乾燥肌

皮膚疲労性疾患（洗いすぎ、
ケアーのし過ぎ）化粧品アレルギー

敏感肌の使用のポイント
バリアー補強剤配合の化粧料を少なくとも一ヶ月以上使用した後の使用前と同じ条件でのバリアー機能の改善を評価すると同時にＣＰＴなどによる感覚閾値
の改善も解析する。
1-1．敏感肌とバリア機能【o’-1】
敏感肌の原因はいまだ不明であるが、化粧品の顔面塗布による感覚刺激の閾値【図―９６，９７，９８】を指標にして分類選択した敏感肌群では、顔面の水敏感肌の選択図－９６：

首都圏在住２０～５９才女性 Ｎ＝８１８

１次選択：問診
敏感肌意識

及び

Ｎ＝818

化粧品による肌トラブル経験

意識／経験あり意識／経験なし

２次選択：化粧品（モデル化粧水）に対する感覚刺激

Ｎ＝235

頸側部への貼付試験（φ１６ｍｍ、５分）／全顔への使用試験（３０分）

感覚刺激を感じる群

感覚刺激をほとんど感じない群

敏 感 肌 群

非敏感肌群

Ｎ＝５１

Ｎ＝３７

－ 58 －

Ｎ＝88

図－９７：

モデル化粧水処方
精製水

バランス

保湿剤 ＊

26.0 wt％

ｐH調整剤

0.7

PEO型活性剤

0.5

極性油剤

0.25

防腐剤（パラベン） 0.2
0.01

香料

＊（ポリオール、その他）

図－９８：
化粧品に対する感覚刺激（痒みやヒリヒリ感等）の評点基準
ｰ頸側部への貼付試験（5分）及び30分の全顔使用試験に於いてｰ
評点
スコア

感覚刺激評点の基準

6

我慢できない強い感覚刺激を感じる。

5

強い感覚刺激を感じる。

4

はっきりした感覚刺激を感じる。

3

一瞬、感覚刺激を感じる。

2

何となくムズムズする、気のせいかもしれないなど形容詞が付く感覚刺激を感じる。

1

スーとする冷感、温かな感じ、つっぱり感など何となく違和感を感じる。

0

刺激感、違和感を感じない。

あ
る
程
感度
覚は
刺っ
激き
をり
認し
知た

分蒸散量で測定したバリア能が非敏感肌群と比べて有意に低下していることが報告されている。この低下傾向は顔面以外の皮膚でも認められるが、有意な差までには至っていない。一方角層水分量も敏感肌群で低下傾向を示すが、有意な差は認められない。この敏感肌群の顔面皮膚におけるバリア能低下と一致して、ＰＡＳ法による色素の角層侵入量で評価した経皮吸収速度は敏感肌群に有意に増加しており、ニューロメーターで評価したヒト皮膚末梢神経機能（知覚
過敏～知覚鈍磨）の指標であるＣＰＴ値の有意な減少も認められ、経皮吸収バ
リア能の低下に基づく感覚刺激の閾値の低下が、本敏感肌の原因の一つになっていることが示唆されている。また重症のアトピー性皮膚炎患者皮膚でのＰＡ
Ｓ法による経皮吸収バリア能の低下の程度と血中 IgE レベルが強い相関関係を持っていたことと同様に、敏感肌群では非敏感肌群に比べ血中 IgE レベルが高い傾向にあることも明らかとなり、アトピー性皮膚炎の場合と同様なメカニズ
ムでバリア能の低下がこの血中 IgE レベルの変化に影響している可能性を示唆している。軽症のアトピー性皮膚炎の無疹部でのバリア能低下は合成セラミドの塗布により健常者のレベルまでバリア能を回復させることが可能であるので【a-54】、バリア能の低下をともなう敏感肌に対して、バリア能の補強が可能－ 59 －

な化粧品基材によるスキンケアーによる敏感肌改善の試みが期待される。
2. アトピー性皮膚炎患者の使用
アトピー性皮膚炎患者の前腕無疹部皮膚は軽症群においても健常者皮膚に比べて有意な永続的なバリアー機能の低下が認められ、通常の保湿剤の塗布ではバリアー機能の改善はほとんど認められない。したがってバリア補強剤の効
果の評価にはもっとも優れた条件を提供できる。少なくとも 4 週間以上バリア
補強剤を含有したクリームおよびコントロールクリームとの左右前腕無疹部皮膚での比較を行う。
２-１．アトピー性皮膚炎患者無疹部皮膚への合成セラミドの効果
アトピー性皮膚炎患者は健常者に比べて皮膚角質層の水分保持機能およびバリア機能が低下しており、このため皮膚表面の乾燥落屑性変化が起こりやすく、これが衣服との摩擦などを通してかゆみひいては掻破による皮膚炎の原因になる。またバリア能の低下は、抗原を含む外来物質の容易な侵入を招き一次刺激性皮膚炎やアレルギー性皮膚炎の誘因となっている【d-33,o-51】。これらの特徴スキームを【図―９９】に示した。
アトピックドライスキンと皮膚炎
物理的な刺激

図－９９：

低湿度
寒冷
石鹸の使い過ぎ衣類の刺激
体温上昇 等抗原、刺激物

軽度な刺激に対して敏感

バリア能の低下

ダニ
アレルゲン
界面活性剤

等

刺激物の容易な侵入バリア能の低下
セラミドの減少角層
表皮

強いかゆみ、刺激、アレルギー性炎症
アレルギー性炎症、湿疹

すなわちアトピー性皮膚炎の本体は皮膚炎というよりはむしろ、もともと基盤として存在する皮膚角層内のセラミドの減少により生じているアトピー性乾燥皮膚３，４がその本体である可能性があり、したがってこのアトピー性乾燥皮膚をいかにケアし、角層の機能を長期間健常レベルに保つことができるかが、皮膚炎の再発を防ぎ、カユミ等を防止する意味でも大切と考えられるようになってきている。
従来アトピー性皮膚炎の治療は皮膚炎に対してはステロイドなどの抗炎症剤による治療が、炎症の消退後やアトピー性乾燥皮膚に対しては白色ワセリン、尿素軟膏、ヘパリノイド軟膏を中心としたいわゆる保湿剤を使用する治療が行われてきた５，６。

－ 60 －

近年これらアトピー性皮膚炎患者の皮膚角層において、角層細胞間に存在する細胞間
脂質、とりわけセラミドが健常皮膚と比較して有意に減少しており、このことが皮膚
バリア機能異常の要因の１つであることが報告されている【a-20,f-11】。さらに、
表皮内セラミド生合成の過程において健常皮膚ではスフィンゴミエリンがスフィン
ゴミエリナーゼによりセラミドに加水分解されるが、アトピー性皮膚炎ではスフィン
ゴミエリンデアシラーゼの異常発現によりスフィンゴシルホスホリルコリンが生成され、その結果、表皮内のセラミド総量が減少する可能性が明らかとなってきている【a-29,38,39】。またセラミドの代わりに産生するスフィンゴシルホスホリルコリン
はアトピー性皮膚炎患者皮疹部および無疹部皮膚角層で健常者角層に比べて有意に増加していることも報告されている【a-46】。このほかにもセラミドが減少するメカニズムとしては角層に生息する細菌由来のセラミダーゼによる分解の促進や【o-52】、
スフィンゴミエリナーゼ酵素活性そのものが減少していることが要因であるとの報
告【o-53】も存在する。いずれのメカニズムが正しいにしても、セラミドの角層での有意な減少がバリアー機能の異常の主要因である以上、アトピー性皮膚炎患者の皮膚のセラミド量を健常者皮膚レベルに長期間補充することがアトピー性皮膚炎の合理的で有効な治療の１つとなることが類推される。
すでにアトピー性皮膚炎患者の無疹部皮膚への保湿剤クリームの使用試験は数多く為されているが【o-54-58】、アトピー性皮膚炎患者皮膚のバリアー損傷を直接的に改善できる化粧品基材はそれほど多くないため、バリアー機能の補強が無疹部皮膚
の乾燥落屑性変化の改善にどう関与しているのか、またアトピー性皮膚炎の重症度への低減効果やバリア補強の程度はどこまで必要なのかなどの不明な点が多々存在した。そこで我々は上述の不明点を明らかとするために、天然セラミドのタイプ２と類似の合成セラミド類似脂質（８ wt％）【a-18,1998】の使用をアトピー性皮膚炎患者
皮膚において行った【a-54】。尚、この試験には０．３％のヘパリン類似物質を含む
ヘパリノイド軟膏(マルホ社製)を比較対照として用いた。
合成セラミドクリームの４週間の前腕無疹部皮膚への塗布により乾燥・落屑スコア
ーは有意に減少したのに対し、ヒルドイドクリームの４週間の塗布も乾燥・落屑スコ
アーのわずかに弱いが有意な減少を示し、この減少効果は合成セラミドクリームがヒ
ルドイドクリームよりも有意に強い結果であった【図―Ａ１１６】。また皮膚乾燥性
皮膚所見による皮疹改善度は合成セラミドクリームが著明改善５０％、中程度改善３
５．７％、わずかに改善１４．３％に対し、ヒルドイドクリームではそれぞれ 0％、
１５．４％、８０．８％であり【図―Ａ１１７】、また有用性の比較では【図―Ａ１１８】、合成セラミド＞＞ヒルドイドクリーム３８．５％、合成セラミド＞ヒルドイ
ドクリーム５３．９％、合成セラミド＝ヒルドイドクリーム７．７％、いずれの比較においても合成セラミド
クリーム がヒル ドイド クリーム に対 しても皮膚乾燥性皮膚所見への顕著に高い低減－ 61 －

効果を示している。平行して測定した TEWL 値【図－１００】は合成セラミドクリー
ムおよびヘパリノイドクリームともに 2 および 4 週間塗布で有意な減少を示したが、これらの程度も合成セラミドクリームが ヒル ドイド クリー ムに比べ有意に強い結果
であった。
160

図―１００：

p=0.0171p=0.0032**140

p=0.0003% Decrease in TEWL

**

120
**

**

**

n=24 n=24
CER HIRn=13 n=13
CER HIRn=5 n=5
CER HIRn= 17 n=17
CER HIR0

2

3

4 Week

100
80
60
40
20
0

CER
HIRU

すなわち 2 種類のバリアー補強効果の異なるクリームを用いて、4 週間にわたりアトピー性皮膚炎患者前腕皮膚に処理した結果、バリアー補強効果を有する合成セラ
ミドクリームで、バリア補強効果をほとんど有しないヒルドイドクリームに比べて乾燥や落屑スコアーのより有意で強い低減効果が得られた。この乾燥皮膚所見での低減効果と一致して、無疹部皮膚でのバリアー機能はいずれのクリームでも有意な改善効
果が認められたが、合成セラミドクリームがヒルドイドクリームに比べて有意なより強い効果を示した。これらの結果は合成セラミドクリームがヒルドイドクリームに比べより高いバリアー機能の改善効果を有し、総合的に見て皮膚角層機能をアトピー性皮膚炎のレベルから健常者のレベルまで回復させていることが明瞭に示された。つまりアトピ ー性皮 膚炎患 者無疹部 皮膚 の処置に おいて バリア 機能の補 強効 果を持つク
リームの使用の優位性が強く示唆されているものと考えられる。
。ここでヒルドイドクリームの如く通常の保湿クリームでもアトピー性皮膚炎患者無疹部皮膚である程度のバリアー改善効果を示す能力が明らかとなった。通常の保湿ク
リームによるこのような弱いバリアー機能改善効果はアトピー性皮膚炎【o-５４，５６】や非アトピー性の乾皮症【o-６０】でも報告があるものの、これらのバリアー機能改善効果のメカニズムは今のところ不明である。
我々はす でにア トピー 性皮膚炎 患者 無疹部皮 膚での ＴＥＷ Ｌ値がア トピ ー性皮膚炎の、Hanifin & Rajika の基準【o-49】に基づく重症度と相関係数０．８３４を持つ
強い相関を示し【図－１０１】、無疹部皮膚でのバリアー機能の低下の程度が明瞭に－ 62 －

重症度を反映していることを報告した【a-53】。すなわち、種々の保湿クリームの処理により変化す50

図―１０１：

**
**

**

45

**

TEWL (g/m2/h)

40
**

35

**

30
25
20

r = 0.834
p < 0.0001
n = 106

15
10
5
0

1

2

3

軽症

中等症

重症

n=28

n=22

n=22

0
n=34

健常者

アトピー性皮膚炎

るＴＥＷＬ値を測定することにより、クリームの臨床効果の程度をより客観的に知ることができ、同時に Capacitance 値の測定も併用することにより正確な臨床効果の判
断材料になることが推察された。さらにＴＥＷＬ値と Capacitance 値の相関プロット
図にアトピー性皮膚炎の重症度分布を当てはめるために、重症、中等症、軽症および健常者群のＴＥＷＬおよび Capacitance 値をその平均値±標準偏差で表示された四角枠であらわすと【図－１０２】、この四角枠はＴＥＷＬおよび Capacitance 両値の50

r = -0.135
p = 0.448
n = 34 (健常)

健常
アトピー

45

r = -0.268
p = 0.0277
n = 72 (アトピー)

アトピー重症
アトピー中等症
アトピー軽症
健常

TEWL (g/m2/h)40

図－１０２：

r = -0.525
p < 0.0001
n = 106 (健常+アトピー)

35
30
25
20
15
10
5
00

10

20

30

40

Capacitance (AU)－ 63 －

50

60

増加および低下の方向に配列しており、この両角層機能の値により、アトピー性皮膚炎の重症度分布がより明瞭に示された【a-53】。また重症度群の両値の平均値±標準偏差幅をあらわした四角枠の縦および横の幅を比較すると、ＴＥＷＬ値の方がCapacitance 値に比べて重症度群間の重なりがはるかに少ない、すなわち標準偏差値が小さいことが明瞭に示され、無疹部皮膚でのバリアー機能の程度により重症度の推定や治療の際の改善度の程度を推察することが可能であることを示し、水分含量との併用により、より正確な推測が可能であることをすでに明らかとした【a-53】。 この方式に従って、両クリーム処理４週間目での TEWL 値と Capacitance 値の両値の相関プロット図を作成し【図－１０３】、それぞれの平均値±標準偏差であらわされる
四角枠を解析すると、両クリームの重症度分類に関連した臨床効果が以下のごとく明らかと成った。すなわちヒルドイドクリーム 4 週処理皮膚では両値の四角枠は、無処理皮膚50

r = -0.330
y=-0.256+27.399(a)p =0.0218
n = 50(Week 0)4540TEWL (g/m2/h)

図－１０３：

r = -0.502
r = -0.390
y=-0.215x + 21.143 (h) y=-0.161+17.152(c)p =0.0018
p =0.0188
n = 36n = 36(HIRU: week 2-4)
(CER: week 2-4)

35
30
25
20
15

Before Treatment
HIRU 2-4 Weeks
CER 2-4 Weeksxa

Atopy Severe
Atopy ModeratehcAtopy MildyHealthy Control

z

10
5
00

10

20

30

40

Capacitance (AU)

50

60

70

で測定された、軽症もしくは中等症の四角枠のレベルにとどまっているのに対し、合成セラミドクリームのそれはほぼ健常者レベルまで改善していることが判明した。すなわちヒルドイドクリームの処理では TEWL 値と Capacitance 値の両値の改善効果で示されたその程度は有意な効果ではあるものの、いまだ健常者レベルまで到達していないのに対し、合成セラミドクリームの処理ではほぼＡＤレベルを乗り越えて健常者レベルまで角層機能が改善していることが明らかと成った。
以上の証 左は角 層機能 を測らず に乾 燥落屑ス コアー の如き 皮膚所見 のみ で評価した
場合は、これほど明確にはならないものと推察され、これは皮膚所見がほとんど健常
者と差が無い場合でも、アトピー性皮膚炎患者皮膚では角層機能が有意に低下している症例が多数存在すること【a-53】から考えても、臨床効果の判定にも角層機能の測－ 64 －

定が重要であることを示唆している。以上の結果は、両クリーム 4 週間塗布過程において、皮膚所見の改善が同じ程度に認められる場合においても、合成セラミドクリー
ムはヒル ドイド クリー ムよりも バリ アー機能 および 角層水 分含量を より 強く改善していた事実とも一致する。
以上の結 果より バリア ー機能の 回復 は臨床的 に認め られる 乾燥落屑 性の 改善を水分回復効果よりより強く反映しており、バリアー回復効果は水分回復効果に比べてアト
ピックドライスキンのケアーとしてより重要な因子であることが示唆され、保湿作用と同時にバリアー改善効果を有する機能性化粧品が、アトピー性皮膚炎患者無疹部皮膚への明瞭な治療効果を発揮することが証明され、バリアー補強剤の評価にはアトピ
ー性皮膚炎患者皮膚無疹部皮膚が最適であることが明らかとなった。。

２-３．角層バリアー補強剤開発の最適プロトコール：
バリア補強剤開発に向けての最適実験評価計画⚫

ユーカリエキスのバリアー改善効果

健常者前腕皮膚にアセトン/エーテル処理バリア低下肌
での 4 日間塗布後のバリアー補強効果で評価する。
健常皮膚ではバリアー機能は充分に維持されているので、バリア補強剤の評価には適さない。したがって、何らかの手段により、いづれかの皮膚部位においてバリア機能の低下を誘導する必要がある。またバリア能の測定にも簡便な方法が求められる。試験期間もバリア補強効果が確実に評価でき、かつできるだ
け短期であることが求められる。このような条件を考慮して、バリア補強剤の評価のための最適実験プロトコールを作成してみた。バリア機能の変化を検証するために最終判定日においてセラミド定量を行うプロトコールにした。
後で記載するプロトコールにしたがってセラミダーゼ阻害活性を持つユウカリ
エキスのバリア補強効果を測定した結果、４日後のおける総セラミド量とアシ
ルセラミド量の有意な増加と【図－１０４】それに伴った水分量及びＴＥＷＬ
値の低下が観察された【図－１０５】。

－ 65 －

アセトン･エーテル処理誘導乾燥肌に対する
アセトン･エーテル処理誘導乾燥肌に対するユーカリエキスのセラミド回復促進効果
ユーカリエキスのセラミド回復促進効果

図－１０４：
総セラミド量

アシルセラミド量162.0

p<0.0514

1.8

g／mg 角層重量
（0days=0）

g／mg 角層重量
（0days=0）

12
10
8
6
4
2

p<0.05

1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2

0

プラセボ 1％ユーカリエキス

0.0

プラセボ 1％ユーカリエキス

4日後 (n=20, 基剤: EtOH/PG=7/3)

図－１０５：

アセトン･エーテル処理誘導乾燥肌に対する
アセトン･エーテル処理誘導乾燥肌に対するユーカリエキスの回復促進効果
ユーカリエキスの回復促進効果
TEWL

コンダクタンス0.8
p<0.05

S （day 0=0）

14
12
10
8
6
4
2
0

mg/hr（day 0=0）

16

0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
-0.4
-0.6
-0.8

プラセボ

ユーカリエキス－ 66 －-1.0

プラセボ ユーカリエキス

バリア補強剤の前腕での評価のための短期使用試験プロトコール－ 67 －

試験名

Ｉ．バリア補強剤の前腕での短期使用試験
バリア補強剤のバリア能改善作用に関する有用性を、左右前腕皮膚にア

試験目的

対象

除外基準

セトン･エーテル処理で誘導したバリア損傷状態に対して５日間使用し、評価する。
健常な前腕皮膚を有する方ａ）本試験の評価に影響を与える皮膚症状を前腕有する方ｂ）その他、担当医師が不適当と判断した方

デザイン

アーム

被験部位

左右前腕

試験試料

コンペアー

テスト

Ａ群
①バリア補強剤配合クリーム②コントロールクリーム
Ｂ群③バリア補強剤配合美容液④ コントロール美容液

試験方法

左右前腕皮膚にアセトン・エーテル処理 30 分を行った直後に、試験試料を、被験部位に原則として直後と１日１回、５日間使用し、試験開始時と開始１時間後及びその後連日５日間の肌状態を観察し、バリアー機能を測定す
る。

試験期間

２００ｘ
日
の５日間

実施施設
および
目標例数

㈱ｘｘｘｘ
０例

年

ｘ

月

ｘｘ

日

ラボ

～

２００ｘ

２０例

－ 68 －

年

ｘ

ｘ月

２群

ｘｘ

＝

４

１． 目的
バリア補強剤のバリア改善作用に関する有用性を、左右前腕皮膚にアセトン･エーテルで誘導したバリア損傷状態に対し、５日間連続使用により検討する。
２． 対象
左右前腕にアセトン・エーテル処理 30 分でバリア損傷皮膚を誘導した皮膚部位。１群２０例で２群 計 ４０例
除外基準ａ）本試験の評価に影響を与える皮膚症状を有する方ｂ）その他、担当医師が不適当と判断した方
３． 被験者の同意
試験開始前に、担当医は文書または口頭にて被験者から承諾を得る。
４． 試験方法（１） 被験試料
１．バリア補強剤配合クリーム
２．バリア補強剤配合美容液
３．コントロールクリーム
4．コントロール美容液
（２）

試験部位
左右前腕皮膚。

（３） 方法
＜使用方法および試料の割り振り＞
１）試験開始日に左右前腕皮膚にアセトン・エーテル処理を３０分行い誘導されたバリア損傷皮膚に試験品をアセトン・エーテル処理直後およびその後連日４日
間一日一回使用し、被験部位の乾燥性変化およびバリアー機能を開始日、３日目及び５日目に測定する。被験部位を明瞭にするため、アセトン・エーテル処理部皮膚の周辺２点に黒マジックにてマークする。
２）試験期間中では被験者は試験部前腕皮膚への一切の外用を不可とする。
３）左右前腕への試料の割り付けは別紙にて割り付け表を作成し、皮膚観察者には提示せずし、単盲験試験とする、＜試験開始日＞1)
被験者のイニシャル、性別、生年月日、カルテ No.、職業、実施施－ 69 －

設、担当医師名、被験者の同意年月日とその種類、左右前腕皮膚の乾燥の程度、既往症、合併症について所定の欄に記録する。
2)
アセトン・エーテル部位を処理前および処理後２０分、試料塗布直前および処理後１時間、開始日、３、５日目観察し、乾燥、落屑についてその症状を、１：なし、２：軽微、３：軽度、４：中等度、５：重度の５段階で判定し、所定の欄に記入する
3)
症状観察部位と同一部位を皮膚測定部位として定め、皮膚測定を以下の評価項目で行う。なお皮膚症状の観察および皮膚測定は湿度４０％以下、
温度２０度前後の環境可変室にて３０分以上皮膚を馴化した後に、同環境条件にて行う。
項目＼実施時期診察

A/E 処理 A/E 処理後 開始日 ３、５日目 ３、５日目
直前
２０分試
試料
塗布直前
塗布後
料塗布直 塗布後
１時間
前
１時間
○
○
○
○
○

被験者への説明と同意取得○

観察・問診項目 被験者背景

○

皮膚所見

○

○

○

○

○

皮膚測定（※）

○

○

○

○

○

皮膚所見

○

○

○

○

○

経表皮水分蒸散量

○

○

○

○

○

有害事象
評価項目
（※）

角層セラミド量○※評価項目の凡例 ○：1 部位のみで評価を行う
１．経表皮水分蒸散量：VAPO METER（or TEWA METER）：アセトン・
エーテル処理後試料塗布部内で計３回異なる部位で測定した平均を測定値とする。
2．角層セラミド量：試験塗布皮膚部位を 3 回特殊溶媒抵抗性テープでストリッ
ピングし、剥離角層中に含まれるセラミド量/角層重量を測定する。
ーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーー
4) 必要に応じて写真撮影を行う。撮影の有無については、所定の欄に記入する。
＜３日、５日目＞
1) ３日および５日目は可能な限り試験開始日と同様な時刻にに皮膚観察および皮膚測定を行う。
－ 70 －

2) 症状観察部位と同一部位を皮膚測定部位として定め、皮膚測定を以下の評価項目で行う。なお皮膚症状の観察および皮膚測定は湿度４０％以下、温度２０度前後の環境可変室にて３０分以上皮膚を馴化した後に、同環境条件にて行う。
3)
症状観察部位を観察し、上述のように各症状について判定し、所定の欄に記入する。５：重度より悪化した場合は、数字を◎で囲む。
4)
試験開始時からの各症状の改善度を総合的に判断し、++：著しく改善、＋：改善、±：やや改善、－：不変、×：悪化の５段階で判定し、所定の欄に記入する。
5)
有害事象について、その発現の有無を所定の欄に記入する。有害事象が発生した場合、その程度と試験品使用との因果関係について下表に従い判定し、その発現日、症状、程度、因果関係を所定の欄に記入する。

試験品と
の
因果関係

程度
Ａ：即座に中止し、症状が重い
重篤な皮膚炎(紅斑、浮腫、丘疹、水疱などを伴う)、ざ傷などが生じて使用を中止
し、皮膚科で治療を行った、あるいは行う必要があった場合など。

1. 明 ら か に 関
連あり
軽度な皮膚炎(軽い紅斑、刺激感など)、ざ傷などが生じ、治療の必要はないが使Ｂ：中止はしたが、症状は軽度
用を中止した場合など。

Ｃ：中止はしたが、症状は軽微
軽微な発赤、乾燥、痒み、痛みなどにより使用を中止した場合など。

2. お そ ら く 関
連あり

Ｄ：中止はしたが、症状は軽度または軽微で再使用可能
軽度あるいは軽微な皮膚症状が生じ一時使用を中止したが、再使用が可能であ 3. 関 連 を 否 定
った場合。
できない

Ｅ：中止はなく、症状は軽度または軽微で継続可能
軽度あるいは軽微な皮膚症状が生じたが、継続使用が可能であった場合。

4. 関連なし

Ｆ：中止はなく、感覚的症状であり継続可能
症状がなく、継続使用が可能であった場合。

6)
有害事象について、その発現の有無を所定の欄に記入する。有害事象が発生した必要に応じて写真撮影を行う。撮影の有無については、所定の欄に記入する。
7)
担当医師にコメントがあれば、所定の欄に記入する。

－ 71 －

＜試験２，４日目＞
１．被験者は自宅にて就寝前に１５分間試料を左右前腕の決められた部位に決められた試験試料を塗布する。
＜最終判定日：５日目＞
1) 試験開始時からの乾燥状態の改善度を総合的に判断し、それぞれの質の改善度
として、++：著しく改善、＋：改善、±：やや改善、－：不変、×：悪化の５段階で判定し、所定の欄に記入する。
2) 左右前腕の改善度の比較を行う。
3) 皮膚測定で改善効果が認められた項目を所定の欄に記入する。
4) 皮膚状態及び乾燥状態の最終改善度および皮膚測定結果を総合的に判断し、
１：きわめて有用、２：有用、３：やや有用、４：無用、５：有害の５段階で有用性を判定し、所定の欄に記入する。
5) 担当医師にコメントがあれば、所定の欄に記入する。
＜中止・脱落時、その他＞
1) 中止・脱落が発生した場合、中止日を記入し、その分類、理由について、下表の選択肢より選び記入する。

2)
分類

理由
1. 試験品による有害事象（副作用）2. 試験品以外が原因による皮膚異常

1.
2.
3.

中止（担当医師の判断）中止（被験者の判断）
脱落（被験者の判断）(1)合併症の悪化(2)アトピー性皮膚炎の悪化

(3)その

他
3. アトピー性皮膚炎の改善
4. 来院せず
5. その他

3)
中止の場合は中止時点で改善度・安全性などの評価を行い有効症例とする。脱落の場合は評価対象外とし、有効症例とはしない。
4)
本来不適格な例が後で判明した場合や、被験者の試験参加同意の撤回などによる除外例、医師側または被験者側の試験計画違反による逸脱例は、有効症例としない。

５． 実施施設および施設別目標例数－ 72 －

実施施設

目標例数

A 群
例

２０

Ｂ群
０ 例

２

--------------------------------------------------------------合計
4 ０例
６． 試験期間
２００ x 年

x 月

xx 日

～

２００ x 年

７． 連絡先
ｘｘｘｘ
株式会社ｘｘｘｘｘ
住所：〒xxx-x30 東京都 xxxxxxxxxxxx
電話：
xx-xxxxx-xxxxx
Fax： 03-xxxx5-xxxx04
E-mail： ｘｘｘｘｘｘ＠ｘｘｘｘｘｘ－ 73 －

x月

xx 日

試験工程図ー１
試験開始日
環境
可変室

環境可変室
の外で

環境可変室
の中で

アセトン
エーテル
処理
２０分

温水
処理
１０分

馴化
＞３０分

処理
３０分

皮膚観察
皮膚測定

前腕５日間試験（A試験）

試料塗布
１５分

＞２０分

試料塗布
１５分
＞６０分

皮膚観察
皮膚測定

終了

皮膚観察
皮膚測定

試料塗布
１５分
就寝前

試料塗布
１５分

就寝前

試料塗布
１５分

試験２日目
試験４日目

－ 74 －

＜試験行程図―２＞

前腕５日間試験（A試験）

試験３日目
試料塗布
１５分

環境
可変室
馴化
＞３０分

試料塗布
１５分

＞６０分

終了

皮膚測定

皮膚測定

試験５日目(最終日）

環境
可変室

試料塗布
１５分

馴化
＞３０分

試料塗布
１５分

＞６０分

終了

皮膚観察
皮膚測定

皮膚観察
皮膚測定

－ 75 －

【CASE CARD】

氏名(ｲﾆｼｬﾙ)
生年月
日
年齢

性
別
㍼・㍻

男

年

月

・

番号

女

日

施設名

歳

担当医
印

師
被験者の
同意年月日と種

平成

年

月

日

１．文書

２．口頭

類
対象

健常人の前腕のアセトン・エーテル３０分処理により誘導した乾燥皮膚
１．なし

２．気管支喘息

５．接触皮膚炎

既往症（

３．アレルギー性鼻炎※原因に○（１）化粧品

４

不

）

明

４．蕁麻疹

（２）外用剤
６（３）その他

．

そ

の

他

（
）
１．なし

２．気管支喘息

３．アレルギー性鼻炎

４．蕁麻疹

５．ざ瘡
６．接触皮膚炎

合併症

※原因に○

（１）化粧品（２）外用剤（３）その他

（４）

不明
７

．

そ

（
）

－ 76 －の他

【乾燥皮膚誘導】a) アセトン/エーテル処理法
被験者の前腕内側に、特製のガラスカップ（直径３ｃｍ）を装着し（図ー１参照）、そこにアセトン/エーテル（１/１）の溶液を、皮膚が十分に浸る量（約１０ ml)を注入する。約
３０分わずかにガラスカップを揺らしながら放置し皮膚を処理する。この処理では皮膚
角層から皮脂及び細胞間脂質を抽出除去し、４日間持続する乾燥落屑性変化が誘導
される。

図－１

－ 77 －

１）処理２０分
A/E 処理直前

後

月

塗布直前

観察日
日

２）試料塗布３）３日目塗布

１時間後

直前

月
月

乾
燥
皮
膚
状
態
の
観
察

（
前
腕
）

皮
膚
所
見

落
屑

改 全
善 般
度 的
写真撮影

右
左
右
左

１

２

３

４

１

２

３

５
１

３

４

１

３

３

４

１

２

３

４

１

３

４

１

５

４

１

２

３ ４
５

２

３

３

４

１

４

１

２

３ ４
５

２

３

５

２

日

５

２

５
１

１

５

２

月

５

２

５
１

４

５

２

日

日

４

１

２

２

５

３ ４

３

４

１

２

５

５

３

４

１

２

５

３ ４
５

右

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

左

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

1 )

に対して

１）

有

・

無

有

・

コメント

－ 78 －

無

有

に対し

・

無

有

・

無

１：なし

皮膚所見

度

２：軽微

４：中等

５：重度

判
定

＜５：重度より悪化した場合は、数字を◎で囲む＞

基
準

改善

++：著しく改善

全般的改善度

３：軽度(乾燥、落屑スコアーの合計が 3 ポイント以上改善)、(乾燥、落屑スコアーの合計が 2 ポイント改善)

落屑スコアーのいづれかが 1 ポイント改善)±：やや改善(乾燥，－：不変

皮膚所見より、試験開始前からの変化について担当医師が総合的に判断する。

皮
膚
状
態
の
観
察

皮
膚
測
定
（
前
腕
）

Ｔ
Ｅ
Ｗ

左

Ｌ

角
層
セ
ラ
ミ
ド
量

改善効果
の認めら
れた

右

右

左

測定項目
－ 79 －＋：

×：悪化

－ 80 －

４）３日目塗布

５）５日目塗布

６）５日目塗布

１時間後

直前

１時間後

観察日

月

乾
燥
皮
膚
状
態
の
観
察

（
前
腕
）

皮
膚
所
見

落
屑

改 全
善 般
度 的

右
左
右
左

１

２

日
３

４

月
１

２

３

５
１

３

４

１

３

皮
膚
測
定
（
前
腕
）

角
層
セ
ラ
ミ

２

３

４

１

３

４

３

５

１

３

４

１

２

３ ４

３

４

１

２

３ ４

４

１

２

５
３

４

１

２

３ ４

５

２

５

１

５

２

５

２

４

日

５

２

３

４

１

５

２

５

３

４

１

２

５

３ ４
５

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

左

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

1)

に対して

有

・

１）

有

に対して

・

１）

無

有

に対して

・

右
左
右

左

ド
量

改善効果
の認めら
れた

２

５

コメント

皮
膚
状
態
の
観
察

１

月

右

写真撮影

Ｔ
Ｅ
Ｗ
Ｌ

４

日

５

２

５

１

月

５

２

１

日

測定項目

－ 81 －

無

有

・

無

無

１：なし

皮膚所見
判
定
基
準

度

２：軽微

３：軽度

４：中等

５：重度

＜５：重度より悪化した場合は、数字を◎で囲む＞++：著しく改善
改善

全般的改善度(乾燥、落屑スコアーの合計が 3 ポイント以上改善)、(乾燥、落屑スコアーの合計が 2 ポイント改善)

落屑スコアーのいづれかが 1 ポイント改善)±：やや改善(乾燥，－：不変

皮膚所見より、試験開始前からの変化について担当医師が総合的に判断する。

－ 82 －＋：

×：悪化

【Ｂ GROUP:CASE CARD－１】
１）処理２０分
A/E 処理直前

後

月

塗布直前

観察日
日

２）試料塗布３）３日目塗布

１時間後

直前

月
月

乾
燥
皮
膚
状
態
の
観
察

（
前
腕
）

皮
膚
所
見

落
屑

改 全
善 般
度 的
写真撮影

右
左
右
左

１

２

３

４

１

２

３

５
１

３

４

１

３

２

３

４

１

２

３

４

１

３

４

１

５

４

３

１

４

１

日

２ ３

４

２ ３

２

５
３

４

１

３

４

１

２ ３

５

２

３

４

１

４

５

２

５

４

５

２

５

２

月

５

２

５

５
１

１

５

２

５
１

４

５

２

日

日

３

４

１

２ ３

５

４

５

右

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

左

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

１）

有

・

無

有

・

コメント

－ 83 －

無有1 )に対して

に対し

・

無

有

・

無

１．
水
分
量

皮
膚
状
態
の
観
察

３．
Ｔ
Ｅ
Ｗ
Ｌ

皮
膚
測
定
（
前
腕
）

４．
弾
力
性
角
層
セ
ラ
ミ
ド
量

改善効果
の認めら

右
左
右

左

右
左
右

左

測定項目

れた
１：なし

皮膚所見
判
定
基
準

度

２：軽微

３：軽度

４：中等

５：重度

＜５：重度より悪化した場合は、数字を◎で囲む＞++：著しく改善
改善

全般的改善度(乾燥、落屑スコアーの合計が 3 ポイント以上改善)、(乾燥、落屑スコアーの合計が 2 ポイント改善)

落屑スコアーのいづれかが 1 ポイント改善)±：やや改善(乾燥，－：不変

皮膚所見より、試験開始前からの変化について担当医師が総合的に判断する。

【Ｂ GROUP:CASE CARD－２ 】－ 84 －＋：

×：悪化

４）３日目塗布

５）５日目塗布

６）５日目塗布

１時間後

直前

１時間後

観察日

月

乾
燥
皮
膚
状
態
の
観
察

（
前
腕
）

皮
膚
所
見

落
屑

改 全
善 般
度 的

右
左
右
左

１

２

日
３

４

月
１

２

３

５
１

３

４

１

３

皮
膚
測
定
（
前
腕
）

３．
Ｔ
Ｅ
Ｗ
Ｌ
４．
弾
力
性
角

２

３

４

１

２

３

４

１

３

３

４

１

３

４

１

５

４

１

３

４

１

３

４

４

１

２ ３

４

５

２

５

４

２ ３

５

２

２ ３

５

２

５

２

１

５

２

５

４

日

５

２

５

３

４

１

２ ３

５

４

５

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

左

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

++

＋

±

－

×

1)

に対して

有

・

１）

有

に対して

・

１）

無

有

に対して

・

コメント

皮
膚
状
態
の
観
察

１

月

右

写真撮影

１．
水
分
量

４

日

５

２

５

１

月

５

２

１

日

右
左
右

左

右
左
右

－ 85 －

無

有

・

無

無

層
セ
ラ
ミ
ド
量
改善効果
の認めら
れた

左

測定項目

１：なし

皮膚所見
判
定
基
準

度

２：軽微

３：軽度

４：中等

５：重度

＜５：重度より悪化した場合は、数字を◎で囲む＞++：著しく改善
改善

全般的改善度(乾燥、落屑スコアーの合計が 3 ポイント以上改善)、(乾燥、落屑スコアーの合計が 2 ポイント改善)

落屑スコアーのいづれかが 1 ポイント改善)＋：±：やや改善(乾燥，
－：不変

×：悪化

皮膚所見より、試験開始前からの変化について担当医師が総合的に判断する。

程度

試験品との因果関係

重篤な皮膚炎(紅斑、浮腫、丘疹、水疱などを伴う)、ざ傷などが生じて使用を中止し、皮膚科で治療を行った、あるいは行う必要があった場合など。

１：明らかに関連あり

Ａ：即座に中止し、症状が重い

判
定
基
準

Ｂ：中止はしたが、症状は軽度
軽度な皮膚炎(軽い紅斑、刺激感など)、ざ傷などが生じ、治療の必要はないが使用を有害中止した場合など。
Ｃ：中止はしたが、症状は軽微
事象

２：おそらく関連あり

軽微な発赤、乾燥、痒み、痛みなどにより使用を中止した場合など。

Ｄ：中止はしたが、症状は軽度または軽微で再使用可能
軽度あるいは軽微な皮膚症状が生じ一時使用を中止したが、再使用が可能であった
場合。

３：関連を否定できな
いＥ：中止はなく、症状は軽度または軽微で継続可能
軽度あるいは軽微な皮膚症状が生じたが、継続使用が可能であった場合。

Ｆ：中止はなく、感覚的症状であり継続可能
症状がなく、継続使用が可能であった場合。

－ 86 －

４：関連なし

試験品と

発現日

症状

程度

担当医師コメント

の
因果関係

月

日

月

日

Ａ

Ｄ

Ｂ

Ｅ

Ｃ

Ｆ

Ａ

Ｄ

Ｂ

Ｅ

Ｃ

Ｆ

１
２
３
４
１
２
３
４

＜有害事象＞

中止日

月

分類

日

1. 中止（担当医師の判断）
2. 中止（被験者の判断）
3. 脱落（被験者の判断）

理由
1. 試験品による有害事象（副作用）2. 試験品以外が原因による皮膚異常3. (1)合併症の悪化(２)その他(
4. その（）＜中止・脱落＞＜総合評価＞－ 87 －)
他

最終判定日

平成
平成

使用期間

皮膚

年

月

日

年

月

月

日

～

平成

年

日

右
腕

++：著しく改善 ＋：改善±：やや改善

－：不変

×：悪化

左
腕

++：著しく改善 ＋：改善±：やや改善

－：不変

×：悪化

乾燥

最終
改善度

状態

左右の改
善度の

右＞＞左、

右＞左、

右＝左、

右＜左、

右＜＜左

比較

右
皮膚所見
と皮膚機
左
器測定結 左右の有果を含め 用性の比
た有用性較

１：きわめて有用

２：有用

３：やや有用

４：無用

５：有害

１：きわめて有用

２：有用

３：やや有用

４：無用

５：有害

右＞＞左、

右＞左、

右＝左、

コメント

－ 88 －

右＜左、右＜＜左【不完全実施例と改善度・安全性評価の有無】
分類

定義
医師側の医
学的判断に
よる中止

中止例

被験者の判
断による中
止
（ただし、中
止後連絡・
確認がとれ
たもの）

脱落例

被験者の判
断による中

理由
1. 試験品による有害事象（副作用）2. 試験品以外による皮膚異常(1) 合併症の悪化(2) アトピー性皮膚炎の悪化(3) その他
3. その他
1. 試験品による有害事象（副作用）2. 試験品以外による皮膚異常(1) 合併症の悪化(2) アトピー性皮膚炎の悪化(3) その他
3. アトピー性皮膚炎の改善
4. その他

改善度・安全度

中止時点で評価を行う

中止時点、または連絡時点で評価を行う

1. 来院せず（連絡とれず）
2. その他

評価対象外

除外例

試験計画の選択基準に対する不合致、除外基準の対する抵
触（本来不適格な例）、参加同意の撤回

評価対象外

逸脱例

医師側の試験計画違反および被験者側の試験計画違反

評価対象外（追跡不能）

止－ 89 －

A【原著欧文】―
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3. Imokawa G., Tsutsumi H., Kurosaki T.: Surface activity and cutaneous
effects of monoalkylphosphate surfactants. J. Amer. Oil Chem. Soc. 55:
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4. Imokawa G.: Study on skin-irritating and biological properties of
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J. Amer. Oil. Chem. Soc. 56:
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horny layers: Lysosome labilizing action.
Contact Dermatitis 5:151-162, 1979.
6. Imokawa G., Mishima Y.: Adsorption of surfactants onto human keratin
layer in vivo. Contact Dermatitis 5: 357-366, 1979.
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8. Imokawa G., Mishima Y.: Cumulative effect of surfactants on cutaneous
horny layers: Lysosomal activity of human keratin layer in vivo.
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24- 30, 1976
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4. 出口勝彦, 有沢正俊, 石田篤郎, 岡本暉公彦, 芋川玄爾:
アニオン性界面活性剤の評価、皮膚洗浄剤としてのモノアルキルフォスフェートの有用性.
日本化粧品技術者会誌
15: 121- 127, 1981
5. 吉塚直伸, 菅沼剛, 芋川玄爾, 今村哲也、岡本暉公彦, 三角寿: 皮表脂質および角層水分測定のための簡便な方法.
西日本皮膚科会誌
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日本香粧品科学会誌
10: 147-155,
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9. 赤碕秀一, 峰松義博, 吉塚直伸, 芋川玄爾:
角層水分保持機能における角質細胞間 脂質の役割.
日本皮膚科学会誌 98: 40-51, 1988
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皮膚科
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13. 吉村政哲, 城倉洋二、 花沢英行、 野崎利雄、 奥田峰広, 芋川玄爾: アミノ酸誘導体型界面活性剤ラウロイルベーターアラニンの皮膚に及ぼす影響.
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20. 秦 まき、戸倉新樹、瀧川雅浩、田村辰仙、芋川玄爾。アトピー性皮膚炎に対する合成疑似セラミド含有クリームの有用性の検討――尿素含有クリー
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21. 高島 巌、長谷部恵子、奥田峰広、芋川玄爾。アトピー性皮膚炎および乾燥性湿疹患者に対する均一分散合成擬似セラミド配合身体洗浄剤の有用性の検討。
西日本皮膚科 第６４巻第５号 ６１２－６２０、２００２22. 船坂陽子、尾藤利憲、山本麻由、錦織千佳子、市橋正光、中村正、石田耕一、
佐藤広隆、芋川玄爾。「キュレルＵＶミルク」および「キュレルＵＶクリーム」の低バリア機能皮膚に対する使用経験。皮膚の科学 第３巻、第１号 ６
２－７２、２００４－ 95 －

B’(学会発表)－
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12. 芋川玄爾: 角質細胞間脂質の機能とその応用. 皮膚と美容 23: 3806-3818,
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13. 芋川玄爾: 角質細胞間脂質. 香粧品科学会誌 15: 250-253, 1991.
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20. 芋川玄爾: アトピーおよび老人性乾燥皮膚に関与する酵素. 酵素工学 33:
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21. 芋川玄爾: 皮膚角質細胞間脂質の構造と機能. 油化学 44: 51-66, 1995.
22. 芋 川 玄 爾 : ド ラ イ ス キ ン と 角 質 細 胞 間 脂 質 . や さ い し 眼 科 学 13:
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27. 芋川玄爾: Sphingomyelin deacylase とアトピー性皮膚炎, 皮膚疾患と酵 素 up date, Monthly Book: Derma デ ル マ , 全 日 本 病 院 出 版 会
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28. 芋川玄爾: 皮膚角層の保湿機能と角層成分の役割. Fragrance J. No 17:
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29. 芋川玄爾：皮膚のバリア機能と皮膚での免疫応答。臨床免疫 35: No.6,
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30. 芋川玄爾：洗浄剤と皮膚〔洗浄剤の皮膚に与える影響〕、日皮協ジャーナル
3:43-48、2003
31. 芋川玄爾：皮膚の乾燥メカニズムと洗浄・スキンケアーのあり方。皮膚と美容 36：22－40、２００４
32. 石田耕一、芋川玄爾；手に接触する洗浄剤について知っておくべきことMonthly Book Derma デルマ（MB Derma）、全日本病院出版会 107:
45-53, 2005:
33. 芋川玄爾： アトピー性皮膚炎とバリア機能異常。治療学、ライフサイエン
ス出版社 2005：39：２２－３１
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でのメイクアップ化粧品の効用。日本香粧品学会誌
０５

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VITRO AND IN VIVO MODELS. ed. By Elsner, P, Berardesca, E and
Maibach, H.I. BIOENGINEERING OF SKIN, CRC Press, 1994: 23-47
3. Imokawa G.: Chapter Surfactant Mildness ed. by Rhein and Luger,
Surfactants in Cosmetic, Marcel Dekker, Inc. 1995：123-145
4. Imokawa G.: Skin Moisturizers: Development and Clinical Use
Ceramides. ed. By M. Loden, Dry Skin and Moisturizers, CRC Press,
1999: 269-299
5. Imokawa G: Ceramides as natural moisturizing factors and their efficacy
in dry skin. ed. By Leyden JJ and Rawlings AV, Skin Moisturization,
Marcel Dekker INC., 2002 pp267-302
F (著書邦文)―
1. 芋川玄爾, 手島亨. 紫外線による皮膚障害とサンスクリーン.編者 沼田稔.
最近の製剤技術とその応用 IV, 医薬ジャーナル社,1986: 902- 906
2. 芋川玄爾: 角質細胞間脂質. 現代皮膚科学大系, 中山書店, 1990: 43-53
3. 芋川玄爾, 溝口昌子:
皮膚と界面活性剤. I 基礎編: バイオサーファクタ
ント. サイエンスフォーラム, 1990: 287-302
4. 芋川玄爾: 第３章 界面活性剤との相互作用 １.２. 皮膚. 機能性界面活性剤の開発と最新技術, シーエムシー社
1994: 120-147
5. 芋川玄爾: ドライスキンと保湿のメカニズム、乳液、クリーム、保湿剤、化粧品．臨床医のためのスキンケアー入門、 先端医学社, 1997：114-138
6. 芋川玄爾：皮膚
機能性界面活性剤の開発技術.
発行者：島 健太郎,
発行所：株式会社 シーエムシー 1998 pp 120－147
7. 芋川玄爾:セラミド. 皮膚疾患, KEY WORD 1999-2000 先端医学社,
1999: 86-87
8. 芋川玄爾: スキンケア剤ー保湿剤（含むハンドケア）. 美容皮膚科 プラ
クテイス 南山堂, 1999: 176-190
9. 芋川玄爾：表皮角層水分保持機能. 水と生命‐熱力学から生理学へー 担
当編集委員:永山国昭
編者:日本生物物理学会/シリーズ・ニューバイオ
フィジックス刊行委員会、発行者：南條光章、発行所：共立出版株式会社、
２０００: pp 152-164
10. 芋川玄爾: 角質細胞間脂質. 機能性化粧品の開発 監修：高橋雅夫, 発行
者：島 健太郎, 発行所：株式会社 シーエムシー ２０００ pp ２３－ 98 －

５－２５２
11. 芋川玄爾: セラミド. 新皮膚科学大系, 第７巻 ｢角化異常性疾患｣中山書店, ２００１:
ｐ ３４－４２
12. 芋川玄爾： ドライスキン
乾燥するカラダ 坪田一男 編著 ５３－
６５、２００２
13. 芋川玄爾: セラミドとはなにか？ Topics in Atopy vol 2 no. 3 49-61,
2003
Ｏ（他文献）－
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Ｏ‘（他学会発表）－
１．桐井 範治：化粧品で感覚刺激を感じやすい肌の皮膚生理的特徴について
２００４年 香粧品学会セミナー 発表－ 103 －