馬原虫性脊髄脳炎(EPM)
EqulneprotozoalMyeloencepha11tls(第2版補訂版)

ρ◎@社団去人中央畜産会

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発刊にあたって

馬原虫性脊朏畄炎要約
1発生の歴史と疾学
1.発生の歴史
2.疫学
3.分布

Ⅱ病原検索
1.病原体
2.生活環
3咸染・・・・・・・・・
Ⅲ臨床
1.臨床症状2.臨床生イヒ学的検査一ーー・・ーーー・
Ⅳ病理学的所見
1.肉眼所見
2.組織学的所見
叉1Ξつ^i・・・・
1.臨床診断33345567889 001222

馬原虫性脊髄脳炎について

2.免疫学的診断

2‑1脊椎腰仙部からの髄液の採取方法
2・2ウエスタンブロット法

1)電気泳動2)転写3)ブロッキング
4)抗体反応5)発色3.病原体の分離培養
4.PCR法

5.病理学的検索
Ⅵ診療と予防1.冒ク1^
2.予防
おわりに3445556

2‑3ELISA法発刊にあたつて馬の原虫性脊髄脳炎(EquineprotozoalMyeloencepha1誠S)は米国で多くの発生がみられ、EPMと一般的に呼ほれている疾患です。本病は住肉胞子虫のー手重であるSarcocysh谷neurona6neur0刀aノカミ,馬に感染した1爰、脊髄や1商に病変を形成することで運動麻輝を主徴とする中枢神経障害を引き起こす病気です。S
neur伽aの生活環については完全には解明されていませんが、現時点では、終宿主としてはオポッサムが、中間宿主としては、アライグマ、スカンク、アルマジロ、ラッコなどが考えられています。馬は、S口eur伽aに感染したオポッサムの糞便により汚染された飼料を摂取することで感染すると考えられています。本病の診断は脊髄液中の抗体の免疫学的検出、病巣からの原虫の分離培養、PCR法による遺伝子の検出、そして病理組織標本における原虫の証明などによりなされます。本病の発生は世界的には北米が中心で、オポッサムの生息域と一致しています。わが国の自然界にはオポッサムは生息、していませんので、本病の感染サイクルは成立しないと考えられます。しかし、2001年7月には米国から輸入された競走馬において、わが国で最初のEPMが確定診断され、今後さらに本病の発生する可能性が考えられることから、その動向には充分注意する必要があります。本小冊子が海外で問題となっている馬の感染症に対する情報源として、病性鑑定や防疫の一助になれほ幸甚です。
平成24年12月
社団法人中央畜産会
会長小里貞利馬原虫性脊髄脳炎要約
馬の原虫性脊髄脳炎は、海外ではEquineprotozoalMyeloencephalitis(EPM)として知られる疾患である。本病は1970年代、米国で初めて報告されて以来、北米各地で発生が認められている。本病は住肉胞子虫の一種であるSaル0cyS諮
neurona6むeuronaノの感染によって起こる。
一般に、住肉胞子虫は動物の筋肉組織に寄生する原虫で、その病原性はあまり強くないとされているが、sneur伽aが馬に感染し、脳・脊髄に病変を形成すると、運動麻輝を主徴とする中枢神経障害を引き起こす。sneur伽aの生活環は現在まだ完全には明らかにされてはいないが、オポッサム(Opossum、和名:フクロネズミ)を終宿主とし、中間宿主としてアルマジロ、アライグマ、スカンクなどが最も疑われている。すなわち、オポッサムはSneur0始の寄生した中間宿主の死体を食ベることによって感染し、糞便中に原虫を大量に排出する。そして、この糞便中のSneur伽aにアルマジロ、アライグマ、スカンクなどが感染することで本原虫の生活環が成立している。馬は、原虫に感染したオポッサムの糞便で汚染された飼料を摂取することにより感染する異常な宿主と考えられている。本病の発生地域は世界的には北米が中心で、なかでも米国では多数の州で発生報告がある。米国以外では中南米での発生報告や米国から英国ヘ輸入された馬での発生報告がある。本病の疫学調査では、軽種馬における発生が多く、潜伏期は4週間か
ら1年以上と考えられている。症状は、主に進イ予性運動失調、瘻撃および不全麻輝であるが、抑畿、旋回運動、皎筋や腰殿筋の萎縮、腰瘻などを伴うこともある。
病原体が中枢神経系のどの部位に病変を形成するかにより、その程度や症状は異なる。米国では、本病の診断法として免疫学的および分子生物学的手法がほぼ確立されている。JRA競走馬総合研究所栃木支所においてもこれら技術を導入し、本病の診断体制の整備に取り組んできた。わが国ではSneur伽aの終宿主と考えられているオポッサムは、自然界に生息、していないので、本病の感染サイクルは成立しないと考えられる。しかし、2001年7月には、米国からわが国に輸入された競走馬力汀RA競走馬総合研究所栃木支所によって、本病と診断され、わが国で初めての発生が確認された。国際交流が年々盛んになってきた現在、さらに多くのEPM症例がわが国でも発生する可能性がある。

馬原虫性脊髄脳炎1こついて発生の歴史と疫
1発生の歴史馬原虫性脊髄脳炎(Equineprotozal
Myeloencephalitis:EPM)は、1964年に米国の獣医病理学者JRRooneyによる馬の巣状脊髄炎の報告が最初と考えられている。この症例は北東部

る馬の脳脊髄炎としてはTO×oplasma症やNeospora症が知られているが、通常、sneur0口aによるもの
を馬原虫性脊髄脳炎と呼んでいる。

2疫学の競馬場からケンタッキー州に帰ってきたスタン

最初に行われた大規模なEPMの疫学調査は、ダードブレツドであった。その後、この様な病変

1990年R.Fayerらによって行われ報告されてぃの症例は米国の多くの地域の馬で発生が確認される。それは、北米の10力所の異なる機関から病た。1974年になって、この病変内にトキソプラズ

理組織学的に本症と診断された364例につぃてのマに類似した原虫が病理組織学的検索により確認解析である。品種別の発生率はサラブレッド、ス

されたことから、本症はEPMとして認知されるよ

タンダードブレツド、クォーターホースの順に高うになった。1991年、J.P.DubeyとS.W'.DaviSは、かったが、ポニーやその他の品種にもいくらかのこれら病変の認められた馬の脊髄から原虫を分離・発生が認められている。通常はつの馬群で1頭培養することに成功し、本病の原因がSaル0cyS縮程度の発生であるが、まれに、ーつの牧場で数頭属の原虫であることが明らかにされた。この原の馬が発症することもある。発症馬の年齢は2力

虫は神経系の組織で成長することから、彼らは月齢から19歳までで、4歳以下の馬が61.8%を占Sω'cocyS力谷neuronaιSneuronaノと命名しためていた。発症馬に性別、地理的または季節的

1993年、D.E.Granstormらは生前診断法として脳な偏りはないようであるが、アメリカ西部の乾脊髄液中の原虫に対する抗体をウエスタンブロッ

燥した地域ではほとんど発生がない。血清中のト法で検出する手法を開発した。そして1995年に

S刀euronaに対する抗体の保有率については、オC.K.FengerらによりSneuronaの終宿主がオポッ

レゴン、オハイオ、コロラドおよびペンシルベ

サム(Opossum、和名:フクロネズミ)であるこ

ニア州で1990年代に行われた大規模な調査があり、とが明らかにされた。このオポッサムはまた鳥類をオレゴン州とペンシルベニア州では45%、オハイ

中間宿主とする別の住肉胞子虫であるSarωCyS岱
血ノCatu/a6別Ca加会ノの終宿主でもあり、それが、オ州では53.6%、コロラド州では33.6%が抗体を保有し、加齢とともにその保有率は上昇する傾向がSneur伽aの遺伝子配列と類似していたことから、みられた。またケンタッキー州では、各牧場にお一時、鳥類がS.neuronaの中間宿主と疑われたしいて10 30%の抗体陽性率であった。米国以外

かし、その後の詳細な検索により、S別Ca加ノaとS

ではブラジルおよびアルゼンチンの馬の抗体保有

neur勿aは異なる種であることが明らかになった

率はいずれも約35%であったと報告されている。

そしてアライグマ、スカンク、アルマジロなどがS

S刀eur伽aの経口摂取により感染して抗体陽性と刀eur伽aの中間宿主となる可能性の報告がなされなった馬うちのどれだけかが、何らかの要因でるようになったS口eur伽aの他に原虫によって起EPMを発症すると老えられている。このEPMの発症率についての報告は極めて少ないが、ケンタツ

キー大学の家畜疾病診断センターの調ベによれ

3分布ば、1988.1995年までの期間に神経系疾患、と診断さ世界的にみた本病の発生地域は北米が中心で、れた馬のうち、本症の占める割合は8 9%であっなかでも米国ではカリフォルニア州や東部諸州(ケた。またD.E.Granstromは全米の馬全体の0.5

ンタッキー、フロリダ、イリノイ、ニューヨーク、1%が臨床的にEPMであると見積もっている。いっオハイオ、オクラホマ、オンタリオ、ペンシルベ

ぽう、終宿主と考えられているオポツサムにおけ

ニア、オレゴン、テキサスなど)およびカナダのるSarcocystiS属の寄生率に関しては、J.PDubey

東部地方に多く発生がみられ(図・1)、これは終宿(2000)らによる道路上で諜死していたオポツサ

主であるオポッサムの分布域にほぼ一致する。さム44頭についての調査報告があり、S命rcatu/a

らに、中南米(パナマ、ブラジル、アルゼンチン

は47フ%、sneuronaは18.1%、そしてSspeeriはなど)でも発生報告がある。

いっぽう、わが国では、2001年7月にJRAのトレー

18.1%であったと報告されている。
二

ングセンターで米国からの輸入馬において最初のEPMが確認された。

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ど・EPMの発生が確認された地域

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クリル下微ノ」、管(subpeⅡicularmicrotubule)など

1病厚体を保有している。ロプトリー(rhoptry)は観察さ馬に寄生するSarcocyS岱属の原虫は、これまでれないといわれている本属は、roxop/asma属、

Sher々'am厶S1力yeri、seqU1ヒan6およひSaslhus

βesn0元疲属、Z夕Ospora属およびah?enh属と近縁のが知られていたこれらはもっぱら筋肉内にサル原虫であるオポッサム(図、3)の糞便中に排出

コシスト(図、2)を形成するのみで、その病原性はされるスポロシストは97 11.4×62 8.4μmでほとんどないと考えられていた。ところが、1964

内部にスポロゾイトが観察される(図、4)。また典年JRRooneyにより示された巣状脊髄炎病巣から、型的なメロゾイトは42 45×12 1.8μm、シゾ

1974年に原虫様の病原体の存在が確認され、1991

ントは11 12×5 7μmである(D.DBowmanら

年J.PDubeyらはこの原虫をSarcocyS力谷neur0刀a

1992)。本原虫の分離培養はウシ単球株化細胞と命名した本原虫はアピコンプレックス門のやウマ皮膚株化細胞などを用いて行われており、＼SarωScyS岱属の住肉胞子虫の一種で、その特徴

それら細胞の内外に紡錘形から三日月状のメロとしてメロゾイトには極環(polarring)、円錐体

ゾイトがロゼット状ないし単独で観察される(conoid)、ミクロネーム(microneme)およびぺ(図、5)。

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一八.︑'゛︑︑,ヘ︑:・・一,.﹂︑︼.︑︑︑ー︑.︑︑,゛︑一、図筋肉内にみられる住肉胞子虫のサルコシスト:内部には多数のブラディゾイトが存在している。

図
北米に生息するオボッサム(P/deωhysVノン召'カフ冶na)
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図

オポッサムの糞便中のSneumnaのスボロシスト

2生舌環

図

Sneutonaのメロゾイト:M617細胞
化細胞)による組織培養

単球株

皮細胞ですぐにガメトサイトとなり、雌雄のガメートが生じ、これらが合体してザイゴート(接合子)住肉胞子虫は一般的に、中間宿主の体内で無性となり、さらにオーシストに変わり、中にスポロ生殖を行い、終宿主の体内では有性生殖を営む。

シスト(胞子)を形成する。現時点ではSneur伽aすなわち、オーシスト(胞子)の形成は、終宿主の終宿主としてはオポッサム、が、中間宿主としての体内で行われ、胞子形成オーシストは終宿主かは、アライグマ、スカンク、アルマジロ、ラッコ、ら排出されるこのオーシスト(あるいはスポロ

ネコが考えられている。すなわち、本原虫の感染シスト)は中問宿主だけに感染し、中間宿主に摂により筋肉内にサルコシストが形成されたアライ

取されると、宿主の組織内の小血管内皮細胞で夕

グマ、スカンク、アルマジロ、ラッコなどの中間

キゾイトの分裂が行われる。その後、これらの虫宿主の死骸を終宿主であるオポッサムが食ベ、消体は筋肉組織内のサルコシスト(sarcocyst)内で化管での有性生殖の後、その糞便中にスポロシス

プラディゾイトが増殖する。このサルコシストはトを排紲し、中間宿主が経口摂取する生活環が考

終宿主だけに感染する。終宿主に食ベられたサル

えられている。馬はSneuronaに感染したオポッ

コシスト内のブラディゾイトは宿主の腸の粘膜上

サムの糞便により汚染された飼料を摂取すること*オポツサム(Opossum、和名フクロネズミ、学名Pjdeφhysw)誓7hノ互17a):大きなドプネズミに似た有袋類で、フクロネズミ科に属する米国で唯の有袋類で体長45Cm、尾37Cmくらい、尾は裸出してがあり、物を巻くことができる綿毛は白色で、密生し、上毛は長く、黒と白が混在する足の第一指はよく発達して、他の指と向き合い、育児嚢は完全である米国各地で普通にみられ、都会にも住み、夜出歩いて果実、根、鳥、卵、トカゲなどを捕食するが、ときに二ワトリをもとる尾を使ってたくみに木に登る春に6 22仔産み、仔はハツカネズミ大になるまで袋の中で育つ毛皮はビーバーやヌートリアの代用になるなおオーストラリアでオポッサムと呼ぱれるものは全く別のフクロギッネ類である

により感染するとされ、異常な宿主あるいはDead

おいて胎子ヘ垂直感染したとの報告も見当たらな

EndHostと考えられている(図、6)。したがって、い。しかし、牧場内で頭でもEPMの発生があれば、本病は感染馬ないしEPM発症馬から他の馬ヘ直接同一環境下で飼育されている馬における感染率は感染することはないとされている。また妊娠馬に高いと考えられる。

終

主:オポッサム
消化管での有性生猿(小腸の上皮糎胞)

中間主
アルマジロ
スカンク
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汚染した料の摂取

図

Sneuronaの生シ舌環旧ayerホームページを一部改変)

3.感染

宿主になる可能性がある。馬はオポッサムの糞便とともに排池されたスポロシストを経口的に摂取

本病は米国ではサラブレッドおよび中半血種のすることにより感染し、EPMの発症は原虫が中枢若い成馬で多く発生しており、とくに競走馬で頻神経系に侵入して病変を形成した場合に認められ繁にみられる。重種馬や野生馬ではあまり発生がる。なおSneur0むaに感染した馬が、EPMを発症ないようである。潜伏期は、4週間程度の短い期間する機序については全く不明である。しかし、γから15年位の長期間にわたるかもしれないと考えインターフェロンノックアウトマウスにSneurona

られている。この病原体の自然界における終宿主のスポロシストを投与するとEPMと類似の脳脊髄はオポッサムであることが知られているが、自然炎を再現できることが報告されていることから、界における中間宿主はアライグマ、スカンク、ア

何らかの感染防御機能の低下が関係しているのか

ルマジロ、ラッコなどであるまた、ネコも中間もしれない。

臨
ないような軽度な玻行から、蹄を引きずるような

臨床症状

重度な玻行まで認められる(図・フ)。運動失調がひ一般的な住肉胞子虫はヒトや動物の筋肉内にどくなると、起立不能に陥る場合もある。また、寄生し、ほとんど障害を起こさない。しかしS体表の変化として、左右に同じく存在する筋肉のneur伽aは何らかの機序あるいは侵入経路により馬片方のみ(非対称性)に筋肉の萎縮がしほUま見の中枢神経系に病変を形成し、その障害に起因しられる。これは、脊髄における病巣はかなり限局た臨床症状を示す。EPMの神経症状は、原虫によした領域に形成される傾向があるため、その部位

る中枢神経の直接的な破壊に起因するものと、原から出発した末梢神経が分布する体幹や四肢の筋虫に対する生体側の炎症反応によるものとがあり、肉に萎縮(神経原性筋萎縮)を起こすためと考え

EPM発症馬の臨床症状の種類やその程度はさまざられている(図、8、、9)。この他の症状として、ロまである。これは、中枢神経系の障害の程度・領域・唇の弛緩、耳介の麻瘻、眼球の異常な動き、視覚範囲が馬によって異なっていることによる。最も異常、岨嘱・臓下困難、部分的な発汗、斜頸、瘻

般的な症状は、後躯の非対称性の運動失調症で撃、挙動の変化、運動許容量の減退などが報告さある。運動失調の程度はよく観察しないとわかられている。EPM発症馬の流産も報告されているが、

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図

EPM発症馬にみられた後肢の鍍行S刀eur伽aが直接の原因となっているのかは明白ではない。EPMと似たような症状を引き起こす病気として、中枢神経に影響を与えるような外傷、カ
ビの生えたトウモロコシによる中毒、脳脊髄線虫症(セタリア症、ハブロネーマ症など)、狂犬病、
細菌性ないしウイルス性脳脊髄炎(日本脳炎、ウエストナイル脳炎、ウマヘルペスウイルス1型による馬鼻肺炎の神経型など)、破傷風、ポツリヌス中

毒、頸椎の先天異常(wobblersyndrome)、腫傷、多発性筋炎などがあり、これらの病気との類症鑑別が必要である2臨床生化学的検査
EPM発症馬の血液の血球成分および生化学検査
値は正常範囲である。しかし、脊髄液中のアルブ

ミン濃度およびlgG濃度は上昇する場合がある。

図EPM発症馬にみられた腰・腎筋の非対称性の萎縮(米国務省研究所J.P.Dubey博士提供)

図

EPM発症馬にみられた皎筋の萎縮(米国務省研究所J.P.Dubey博士提供)

病理的所見
織に限局性ないし片側性に病変が多くの場合形成1肉眼所見されている(神経原性筋萎縮)。

本病に櫂患し中枢神経障害を示す馬では、病変EPMの中枢神経系における病変の好発部位は不は脊髄および脳にみられる(図10)。肉眼的に病変定であるが、臨床症状からある程度推測できるこは、脳や脊髄の断面において、急性例では限局性ともある。またEPMの病巣の大きさや範囲、色調の出血巣が散在性に認められ、慢性例では限局性も症例により様々で、肉眼的に中枢神経組織に形の小さな帯黄褐色病巣が認められる。また、脳脊成された病巣の存在を識別・判断することが極め

髄液はしほしほ混濁し、増量している。肉眼的にて困難な場合も少なくない。従って、本病が疑わ

萎縮した骨格筋は、ほとんど皮下の結合組織のみれる症例の解剖では、全ての中枢神経組織姻畄おを残すだけの顕著な萎縮を示す場合があり、同部

よび脊髄全長)を採取して、検索を行わなけれほに分布する末梢神経の出発部位である中枢神経組

ならないこともある。

凹EPM発症馬の頚髄にみられた出血

は細胞外に集合あるいは単独で観察される。また、

2組織学的所見

これら細胞質内でロゼットを形成することもある

中枢神経系にみられるEPMの病変は、通常の場(図Ⅱ)。壊死巣やその周辺部では、単核球を主体と合、散在性の非化膿性脊髄脳炎で、出血と巨細胞おする囲管性細胞浸潤もみられる(図12)。sneurona

よび好酸球を伴った肉芽腫性ないし壊死性脊髄脳炎

以外の原虫による脳脊髄炎としてはroxoPιヨSmaである。様々なステージの原虫がマクロファージ、

gond11や<re0箪)ora力Ughesiによるものも知られてお多核巨細胞、時には神経細胞などの細胞質内あるいリ、それらとの類症鑑別が重要である。

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神経細胞内でのSneumnaのメロゾイト:ロゼットの形成がみられる(HE染色(米国農務省研究所J.P.Dubey博士提供)

血管周囲ヘの細胞浸潤とシゾント(矢印

断

一=ロ

体はEPMの症状と深い関係にあることが証明され臨床診断
臨床的には中枢神経系の障害を原因とするさま
ざまな神経症状を呈するしかし、この臨床症状はSneur勿aによる脳や脊髄の障害の音Ⅲ立と程度によりさまざまである。さらに、ウイルス性脳炎やウマヘルペスウイルス感染症、狂犬病、脳脊髄線虫症、
その他細菌性の脳脊髄炎、破傷風、中枢神経系の腫傷や膿傷などでも類似の症状を示すことがある
また、感染しても症状を示さない(不顕性感染)例も存在するために、臨床症状のみからEPMと診断することは困難な場合が多い。

ている。したがって、ウエスタンブロット法を用いて脳脊髄液中の抗体を検出する方法は、EPMの診断法として必須であるなお、通常では血清中の抗体は脳脊髄液中には存在しないが、血液一脳関門に何らかの障害がある場合は、脳脊髄液中に血清中の抗体が流入し、本病とは拘わりなく陽性の結果を尓すことがある
EPMにおいて診断的価値の高い脳脊髄液の病馬からの採取は、頚部あるいは腰仙部から実施可能である。頚部からの精髄液採取は全身麻酔が必要であるが、腰仙部からの採取では鎮静と局所麻酔により立位で実施される(図13)。脊髄硬膜下腔ヘ2免疫学的診断

長い脊髄穿刺針を刺入することは、馬にとって脊血清および脳脊髄液中の、sneur伽aに特異的な髄損傷の大きなりスクを伴うと考えられがちであ蛋白質に対する抗体をウエスタンブロット法で検るが、実際には経験を積んだ術者が手順を踏んで出する免疫学的診断法が一般的に用いられる。し正しく実施すれぱ問題なく安全に実施できる。JRAかし、アメリカの中西部では約半数近い馬がEPM

競走馬総合研究所ではこれまで多くの実験馬で腰に感染しており、血清中におけるこれら抗体の存仙部からの脊髄液採取を実施してきているが、脊在は、その馬がこれまでにSneur伽aに感染したこ

髄損傷による運動機能障害を発症した馬はいない。

とを示す証拠でしかない方、脳脊髄液中の抗以下に我々が行っている手法を記述する

腰仙部からの脊髄液採取

2‑1脊椎腰仙部からの髄夜の採取方去.洗浄(PBS・T;0.05%Tween20加PBS)5分X2①馬を枠場に入れる.ミニブロッター装置(28SL型)にニトロセル②剃毛:左右の寛結節後端を結ぶ線と脊椎との交点、つまり最後位腰椎軌突起と仙骨韓突起の間を中心、として、約15×10cmの領域。
③消毒:ヒビスクラブとヒビテンで充分洗浄し、イソジンとアルコールで3回消毒する④鎮静:500蚫の馬でスタドール4アンプル、キシ
ラジン8m1の混合液を静注。
⑤局所麻酔:2%キシロカインを21Gカテラン針で②の中心(最後位腰椎較突起と仙骨韓突起の中間)の皮下Icmにlm1および深部に4m1注射
6手術用手袋、18G注射針(切皮用)、脊髄穿刺針(18G、長さ18Cm)、無菌ガーゼ3枚、5m1シリン
ジなどを無菌的に準備する⑦鼻ネジ保定し、②の中心に脊髄穿刺針の刺入部を18G注射針で切皮する⑧脊髄穿刺針の先端を深さ14Cm位まで(皮膚の上部に穿刺針が4Cm位残るまで)一気に刺入し、さらにゆっくりと1 2Cm進めると硬膜を貫通し、脊髄硬膜下腔に針先が入る(硬膜貫通時に馬がロース膜をセット
4)抗体反応.10%ブロックエース加PBSで血清を10倍に希釈(脊髄液は2倍希釈).ミニブロッター装置のサンプル注入穴に血清あるいは脊髄液80μ1入れ、90分間反応。
.アスピレーターで各穴からサンプルを吸引・廃棄後、PBS、Tでフィルターを洗浄.ミニブロッター装置からフィルターを取り出
し、PBS、Tで洗浄5分X3。

.ビオチン標識抗ウマ1gG(2次抗体)と30分反応.PBS、Tで洗浄5分X3。
.アビジン、ビオチン標識ペルオキシダーセ複合体(VECTASTAINElite、ABCキット)を30分反応。
.PBS、Tで洗浄5分X35)発色.HRP発色基質(HRpconjugatesubstrateキツ
ト、BI0、RAD)を入れ発色。

動揺することがある)。
Q内套を抜き、5m1シリンジでゆっくり吸引。数本採取する(血液が全く混入していない脊髄液が.蒸留水で発色停止.特異バンド(145kDa、13kDa、7kDa)の確認(図14)。

必要)。
⑩穿刺針を抜いて終了。

*メロゾイト抗原の作製法はGranstromら(1993)⑪脊髄液中に血球が混在してないことを血球計算盤の文献参照:J.vetDiagn.1nvest.5,8890

を用いて確認し、ウエスタンブロットに用いる

23ELISA去

22ウエスタンブロッ法

米国ではメロゾイトの表面抗原としてSnsAG、1が2003年にE11isonらによってクローニングされ、

1)電気泳動.SDSポリアクリルアミドゲルのサンプルウエ

血清や脊髄液におけるELISAに応用されている

ルに、それぞれメロゾイト抗原、あるいはマーさらに近年ではSnsAG2、snsAG3、snsAG4に対カーを入れる

するELISAも開発されている。

.電気泳動
2)転写
二

.電気泳動が終了したゲルをとりだして、3病厚体の分離培養
卜ロセルロース膜に転写
3)ブロッキング.ニトロセルロース膜をブロックエースでブ
ロッキング(1時間)

病理解剖により脊髄あるいは脳組織を無菌的に採取し、少量のRPM11640中で細切
M617細胞(ウシの単球株化細胞)を8000コンフル
エントに培養し、培養液を除去したのちに細切した組織液を均一に広げ、37でで1時間静置する

.10%ウシ胎仔血清加RPM11640を静かに加え場合は、脳脊髄液中の抗体は消失し、PCR法によっ

37で、5%C02で培養する。

ても病原体の遺伝子は検出されなくなる.2 3日おきに培養液を交換し、虫体の有無を倒

5病理学的検索

立顕微鏡およびスメアー標本のギムザ染色で観察する(図15)。

病理学的診断は、櫂患馬の死後、病理解剖を行い、脳や脊髄など中枢神経系を組織学的に検索し、病4PCR去原体そのもの、あるいはEPMに特徴的な所見を検

近年、PCR法も診断に利用されるようになってい索するまたこの脊髄あるいは脳組織の組織切片るこの方法は、脳脊髄液やその他の組織中に存在を用いて、他の病原体との区別をする目的で免疫するSneur伽aの遺伝子を検出する方法である。症

組織化学染色を行う(図15)。Sむeuronaのポリク状が典型的ではない場合や、治療の効果を検討する

ローナル抗体を用いた場合は、他の住肉胞子虫と場合に使われている。治療によって症状が回復したの交差反応に注意する必要がある。

血清

脊髄液

発症5日8力月前発症2日

発症5日

対照
(ー)

(+)

^

^14.5kD司^BkD

図
本邦初発のEPM症例のウエス
司^7kD

タンブロット:血清および脊髄液にSneuronaに特異的なバンド(145kD,13kD,7kD)がみられる

図
抗Sneumnaの抗体を用いた免疫組織化学染色:シゾントが陽性

口

︑︑す

台療
米国で行われている治療法を以下に記載する
原則的かつ安価な治療法として、SUHonamideとPyrimethamineが用いられる治療プログラムは大学や診療所によって若干異なっているが、ミズー
リー大学の治療プログラムは以下のようである.Trimethoprim・sulfadiazine(またはSulfamethoxazole)の配合剤を15 25mg/
kgBWで12時間おきに少なくとも12週間経口投与する。ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤とスルホンアミド系抗菌剤からなる配合剤は、微生物による葉酸の合成・利用における2つの連続的なステップを阻害する。sulfamethoxazoleのほうが、sulfadiazineよりいくらか安価である。
.pyrime血amineは葉酸括抗薬で、有効な抗マラリア薬であるが、これを1.omg/kgBWで24
時間毎に12週間以上経口投与する。
.ビタミンE5,000単位を12時間おきに経口投与する。

症状によっては、DimethylsulfoxideやFlunixinmegulmineなどの抗炎症例を用いてもよい。特に急、性期には抗炎症療法を行う。しかし、また、他種動物のコクシジウム症に使用されてきたDiclazuril(clinacox)やToltrazuril(Baycox)なども治療に用いられている。しかしこれらはEPMの治療薬として米国では認可されてはいない。

.Diclazuril(clinacox):5 10mg/kgBW/dayを21日間から28日間混飼経口投与.Toltrazuril(Baycox):10mg/kgBW/dayを28
日間あるいは5mg/kgBW/dayを少なくとも45
日間、経口投与。
米国食品医薬品局(FDA)に認可されているEPM治療薬としては、細菌、原虫および腸内嬬虫などに効果のあるNitazoxanide(NTZ)がある

25mg/kgBW/dayを5日間とその後50mg/kgBW'/
dayを23日間以上、経口投与する。
さらにToltrazuri1の改良により開発された

Ponazuril(Marquis)は米国で最も使用されているEPM治療薬で、より安全で効果的な作用を有し、FDAの認可も受けている。本薬剤はぺースト状で専用のシリンジに充填され、正確な量を馬に経口投与できる。5mg/kgBW/dayを28日間投与する。

2予防どうしても必要でない限りステロイドは用いては

わが国には、sneuronaの終宿主であるオポッサ

ならない。また、妊娠馬には葉酸(20 40mg/

ムは生息、しておらず、また馬から馬ヘの感染も起day)を併用してもよい。治療は少なくとも12週間

らないことから、わが国でのEPMの発生は、もっは続けなくてはならない。理想的には、脳脊髄液

ぱら海外で感染した輸入馬である。米国では以下中の抗体がウエスタンプロット法で陰性になるまのような予防策が推奨されている。第一の予防策

で投与しなくてはならない。神経症状が消失してとして、EPM終宿主であるオポッサムの糞便内のも、さらに4週間の治療が望まれる。約60%の馬がSneuronaのオーシスト(スポロシスト)が馬に感治療により良い反応を示すが、ほとんど正常な状染することで引き起こされることから、原虫に汚態に回復することは無い。治療開始後4 6週間経っ染された飼料や飲料水を馬に与えないことである。

ても効果が現れない時には、もはや回復は望めな

そのため、S口eur伽aの生活環に関連する野生動物

い。櫂患,馬に対しては休息やストレスの軽減をは

は、牧場の厩舎や放牧地に近づけないことが重要かる必要がある。治療薬による副作用としては貧である。オポッサムは、北米の山岳地帯や寒冷地

血、白血球減少症、大腸炎などの発生が報告され帯を除いてほぼ全域に棲息、し、牧場の周辺や牧場ている。

内に10 50工ーカーの縄張りを持っている。従って、多くの牧場で馬はオポッサムと接触する機会

放牧地のフェンスの外側に電気フェンスを設けるが頻繁にあることから馬の飼い葉桶や水桶を常にことによってオポッサムを締め出すことが出来る

清潔に保ち、オポッサムの糞便が混入しないよう

ただし、広大な牧場を囲むフェンスを設けるためにする。また、飼料置場の管理を厳重にして、オポッには、多額の資金が必要であるまた、イヌやネサムが飼料置場を荒らさないようにすることが重コを飼うことで、オポッサムが牧場に侵入するこ要であるさらに、オポッサムはヒトの食ベ残しとをある程度は防止出来る。第二の予防策として、S

たフルーツ類や残飯も餌にするため、牧場内で屋neur伽aに対するワクチンの接種が考えられ、現在、外に残飯を無造作に放置したり、食料となるよう

米国の一部で使用されているようであるが、そのな植物を牧場内に栽培してはならない第二の予効果については疑問視されているまた、ワクチ

防策として、牧場からオポッサムを隔離すること

ン抗体の上昇は診断や治療効果判定のよりどころである。オポッサムはねずみ取りなどの生け捕りとしている特異抗体との区別が困難となる場合も用の昆で簡単に捕まえることが出来るさらに、あることから、その使用に際しては注意を要する

おわり1、
馬原虫性脊髄脳炎(EPM)は、わが国には本来存在しない感染性疾患ですが、近年の競走馬の輸入増加に伴い、発生国からの輸入馬における発症が危倶され、一刻も早い本病の診断体制の確立が望まれていました。日本中央競馬会競走馬総合研究所では、本小冊子の作成に際しても多数の貴重な写真を提供していただいた米国農務省研究所のJ.PDubey博士やNeogenco.のC.K.Fenger博士の協力により、ウエスタンブロット法の導入と免疫組織化学に必須の抗S刀eur伽a抗体の作製に取り組み、米国と同等の診断技術を確立しました。そして、2001年7月にはわが国で最初のEPM症例を、これら検査手法により確定診断しました。EPMは馬から馬ヘは伝染しないとされ、またわが国の自然界には終宿主であるオポッサムも生息していないことから、わが国では本病の感染環は形成されないものと考えられますが、S刀eur伽aの終宿主や中問宿主となりうる野生動物種については未だ研究途上にあり、本病の発生には細心の注意を払う必要があるものと思われます。
また、日本中央競馬会競走馬総合研究所栃木支所におけるEPMの診断体制は、招聰研究として

J.P.Dubey博士やC.K.F印ger博士の多大な協力と指導により確立されました両氏に心より御礼申し上げますなお、この招聰研究は馬事部関係諸氏に多大な配慮をいただき、栃木支所の多くの方々の協力のもとでなされたものです。
日本中央競馬会
競走馬総合研究所
片山芳也
和田隆一
吉原豊彦

.
刊行の馬感染症シリーズ

789︒12345161フ.18192︒21222321252622823︒33333333344444444455

馬伝染性貧血診断のための寒天ゲル内沈降反応の術式
馬伝染性子宮炎

昭和51年
昭和55年

馬ウイルス性動脈炎

昭和56年

馬のサルモネラ症

昭和56年

ベネズエラ馬脳炎

昭和57年

アフり力馬疫

昭和58年
昭和59年

馬鼻肺炎
馬鼻肺炎ウイルス感染症のための寒天ゲル内沈降反応の術式と応用
馬伝染性貧血診断のための寒天ゲル内沈降反応の術式(第2版)
馬のビロプラズマ病

昭和59年
昭和59年

馬の水胞性口炎

昭和61年
昭和62年

馬の寄生虫病

昭和63年

馬ウイルス性動脈炎(第2版)

平成兀年

馬のポトマック熱

消毒法Q&A

平成2年
平成3年

馬トリパノゾーマ病

平成5年

馬インフルエンザ

平成6年

馬の感染症

平成6年
平成8年

腺疫

子馬のロドコッカス感染症
馬鼻肺炎(第2版)
馬伝染性子宮炎(第2版)

平成8年
平成9年

馬原虫性脊髄脳炎

平成9年
平成10年

馬パラチフス

平成10年

馬の日本脳炎平成10年

馬ピロプラズマ病(第2版)

平成Ⅱ年

馬のゲタウイルス感染症

平成H年

馬ロタウイルス感染症

平成12年

馬ウイルス性動脈炎(第2版・補訂版)
馬伝染性貧血の診断術式(第3版)
馬の水胞性口炎(第2版)

平成12年

馬の感染症(第2版)

腺疫(第2版)
馬原虫性脊髄脳炎(第2版)

平成13年

平成13年
平成13年
平成H年
平成15年

馬のウエストナイルウイルス感染症

平成15年

馬の真菌症

平成16年

馬の感染症(第3版)
馬インフルエンザ(第2版)
馬鼻肺炎(第3版)
馬パラチフス(第2版)
消毒法Q&A(第1版・補訂版)
馬ウイルス性動脈炎(第3版)
馬伝染性貧血の診断術式(第3版・補訂版)
馬の寄生虫病(第1版・補訂版)
アフり力馬疫(第2版)
馬のゲタウイルス感染症(第1版・補訂版)
腺疫(第3版)
馬ビロプラズマ病(第3版)
馬インフルエンザ(第3版)
消毒法Q&A

平成17年

馬原虫性脊髄脳炎(第2版・補訂版)

平成24年

平成17年
平成19年

平成20年
平成20年
平成21年

平成22年
平成22年

平成23年
平成23年
平成23年
平成24年
平成24年
平成24年

平成10年3月

第1版第1刷発行

平成15年3月

第2版第1刷発行

平成24年12月

第2版第2刷発行

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