馬のポトマック熱
PotomacHorse Fever

公益社団法人 中央畜産会

目次

発刊にあたって………………………………………………………………………………… １
馬のポトマック熱要約…………………………………………………………………… ２
馬のポトマック熱について……………………………………………………………… ３
Ⅰ．発生の歴史と分布…………………………………………………………………… ３
１．発生の歴史
２．分 布
３．発生要因ならびにベクターの調査
Ⅱ．臨

床……………………………………………………………………………………… 6

１．臨床症状２．血液学的所見
３．類症鑑別
Ⅲ．物理学的所見… ………………………………………………………………………… 8
１．肉眼所見
２．病理組織学的所見
Ⅳ．病原体…………………………………………………………………………………… 10
１．分離と培養
２．形 態
３．血清学的性状
４．病原性
Ⅴ．診断…………………………………………………………………………………… 12

１．病原学的診断
２．血清学的診断
Ⅵ．治療と予防……………………………………………………………………………… 16
１．治
２．予

療
防

おわりに………………………………………………………………………………………… 17

発刊にあたって
馬のポトマック熱（Potomac Horse Fever：PHF）は、アナプラズ
マ科ネオリケッチア属 Neorickettsia risticii（N. risticii）によってひき起
こされる急性の感染症で、2005 年にリケッチア全体の分類が変わるま
では、Ehrlichia risticii（E. risticii）という名前の病原体でした。発熱、疝痛、下痢、蹄葉炎などを主徴とし、死亡率 ( 淘汰も含む ) は 30％に達する疾病です。PHF は、1979 年に初めて報告された馬属特有の疾病であり、当初の発生地域は米国東部のポトマック川流域に限られていました。しかし、その後、1986 年オハイオ州の競馬場とその周辺牧場に発生し、さらに血清疫学的調査において抗体陽性馬が、米国のみならず近隣諸国に広く存在していることが明らかにされました｡
当時、PHF の感染経路は不明であったため、日本中央競馬会は、
PHF の侵入に備え、1987 ～ 1988 年にかけて、米国オハイオ州立大学の獣医学部に和田隆一氏を派遣し、防疫・予防を主とした実地研修と研究を行いました。現地でおこなった実験ならびに調査成績は、軽種馬防疫協議会が監修する馬感染症シリーズの冊子として平成 2 年にまとめられました。
初版から 30 年が経過して、本疾病の実態は明らかになりつつあり、
遺伝子検査法を用いた診断も行われています。
この第 2 版は、日本中央競馬会、競走馬総合研究所の全面的協力を得て近年明らかになってきた本病の概要を追加し、改訂したものです。
御協力に敬意を表するとともに、本冊子をご活用いただき、本病の理解の一助となれば幸いです。
令和 2 年 12 月
公益社団法人 中央畜産会

1

馬のポトマック熱要約
馬のポトマック熱（Potomac Horse Fever：

約 30％である。妊娠馬では、流産の誘因にもPHF）は、アナプラズマ科ネオリケッチア属なることもある。馬のサルモネラ感染症およびNeorickettsia risticii（N. risticii） に よ っ て ひ き

Ⅹ大腸炎など、急性下痢を呈する疾病との鑑別起こされる急性の感染症で、発熱、疝痛、下痢、が重要である。

蹄葉炎などを主徴とする疾病である。N. risticii

病理学的な肉眼的病変は、ほぼ盲腸と大結腸が、主として血液中の単球に感染することかに限られる。粘膜の主な病変は充血および出血

ら 馬 単 球 性 エ リ キ ア 症（Equine monocyticである。病理組織学的には、盲腸および結腸のehrlichiosis）と呼ばれることもある。PHF は、

粘膜上皮細胞の変性・壊死・脱落、腸陰窩にお1979 年に急性下痢症候群として初めて報告さける上皮細胞や炎症細胞塊を含む小壊死巣形成れた馬属特有の病気である｡などが認められる。粘膜固有層には、多数の好

当初、この病気は、米国東部のメリーランド
州モントゴメリー郡において地方病的に発生し

2

中球、マクロファージ、肥満細胞、形質細胞、リンパ球、好酸球の浸潤がみられる。

た。以後、毎年メリーランド州とバージニア州

N. risticii の分離と培養には、マウスのマクロを流れるポトマック川の流域で多くの羅患馬がファージ系腫瘍由来 P388D1 細胞などが用いら認められた。しかし、その後の血清疫学的調査れている。培養細胞中に増殖する N. risticii は、により本病はかならずしもポトマック川流域の光学顕微鏡下で観察され、ライトギムザ染色で風土病ではないことが明らになり、現在までに、青紫色に染まる。電子顕微鏡観察では、2 層の米国の全州とカナダのオンタリオ、ケベックお

細胞膜と波状の外膜を有し、グラム陰性菌の形

よびアルバータ州で抗体陽性馬が検出されてい態を示す｡ 大きさは、0.4-0.75㎛× 0.5-1.2㎛でる。PHF は、馬の品種、性別を問わず感染するある｡ PHF の確定診断には、病原学的または血が、幼若令馬では発生がきわめて少ない。本病

清学的診断が用いられる。病原学的診断は細胞は、5 月から 11 月にかけて発生し、夏期とく培養法、マウス接種法もしくは PCR 検査によに 7 月と 8 月に多発する｡ おもな発生は、ポトって行われる。細胞培養法やマウス接種法では、

マック川やオハイオ川など河川流域の原野にみ分離された病原体の同定に間接蛍光抗体法によられる｡ 流行形態は散発的で、馬から馬への直る免疫学的診断が必要である。野外例の血清学

接的な伝播は報告されていない。近年、PHF の的診断には、間接蛍光抗体法が用いられている。

伝播に N. risticii が感染した吸虫の関連が判明

治療の基本は、テトラサイクリン系抗生物質

しており、吸虫が寄生した水生昆虫の誤摂取（水の投与と対症療法としての補液、鎮痛 ･ 解熱剤桶あるいは飼葉桶への混入、等）が主原因とさの投与である。予防は、海外では不活化ワクチ

れている。

ンが市販されているが、効果は高いとは言えな

臨床症状は、沈鬱、食欲廃絶、発熱、下痢、疝痛、い。夜間の馬房内消灯など水生昆虫の摂取を最脱水症、蹄葉炎などである。適切な処置が施さ小限にする厩舎衛生害虫の防除対策が行われてれないと予後は悪く、死亡率（淘汰も含む）はいる。

馬のポトマック熱について
Ⅰ

発生の歴史と分布

１．発生の歴史

いた。その後の血清疫学的調査により、本病は、

PHF は、1979 年に急性下痢症候群として初

米国の他の州や、カナダのオンタリオ州にも存めて報告された馬属特有の病気である。当初、在することが証明され、かならずしもポトマッ

この病気は、米国東部のメリーランド州モント

ク川流域の風土病ではないことが明らかになっゴメリー郡において地方病的に発生した。そのた｡ オハイオ州シンシナティー市にあるリバー・後、毎年メリーランド州とバージニア州を流れダウンズ競馬場では、1986 年の調査においてるポトマック川の流域で多くの罹患馬が認めら1500 頭の在厩競走馬のうち約 60％が抗体を保れたことから、馬のポトマック熱と呼ばれるよ有していた。また、さかのぼって調査してみるうになった。メリーランド州における本病の発と、毎年、約 75 頭の馬が罹患し、これまでに生状況をみてみると、1979 ～ 1987 年までの12 ～ 20 頭が本病によって死亡したと推定され間に 873 頭が罹患しそのうちの 147 頭が死亡る。抗体陽性馬は米国のほぼ全域、カナダ諸州している（表１）｡

で存在しており、メキシコ、パラグアイ等の近表1

 国メリーランド州における…
米
馬のポトマック熱の発生例数と死亡率＊

隣諸国でも本病の存在が疑われた〈なお、最近の研究では血清学的診断（間接蛍光抗体試験）において高率に偽陽性が確認されており、真の年

症例数

死亡例数（％）

1979

8

2（25.0）1980

205（25.0）細胞培養による菌分離や PCR 法などの病原学

1981

36

12（33.3）

1982

113

28（24.8）

的な手法を用いて確認された臨床例は、米国で

1983

116

42（36.2）

1984

109

18（16.5）

1985

116

8（6.9）

1986

262

21（8.0）

ペンシルバニア、テキサス、ミネソタ、ニューハ

1987

93

11（11.8）

ンプシャーおよびバージニアで報告されている。

＊：ラテックス凝集反応による診断が行われた。
非特異反応による陽性例が多数含まれていると考えられる。

地理的分布範囲は不明である〉。

は、カリフォルニア、イリノイ、インディアナ、ケンタッキー、メリーランド、ミシガン、ニューヨーク、ニュージャージー、オハイオ、オレゴン、

米国以外では、カナダのオンタリオ州で数多く認められ、欧州（フランス、オランダ）、南米（ウルグアイ、ベネズエラ）インド、オーストラリア
でも単球性エリキア症の散発的な報告がある。

2．分

布Equine Disease Quarterly による最近の動当初の発生地域は、ポトマック川流域に限ら向では、2018 年にケンタッキー州だけで 26れていたため、未知の疾病と考えられた。一方、例（内、死亡例 6 例）
、2019 年に 25 例（ケンカナダのオンタリオ州では同様の症状を示す症

タッキー州で 7 例）の流行が報告されており、例の報告があったものの、原因は不明となって2018、19 年ともに 2 例の流産が確認されてい3

る（表 2）。2019 年には、ブラジルのリオデジ

PCR 法で 33 例の陽性例が確認されている。一ャネイロで発生報告がある。力久博士によると、

方、日本では、JRA が 12 例の重度の下痢症に2020 年にはオハイオ州立大学で 36 例の陽性

Real-time PCR 法を実施したが、N. risticii は例があり、カナダのオンタリオ州では nested

現在のところ確認されていない。

表2

近年の PHF 発生情報（Equine Disease Quaterry 調べ）
年

症例数

概

要

2019

27 ～

3 州で発生。ケンタッキー州は 7、8 月が最多。
2 例はケンタッキー州の流産例

2018

28 ～

5 州で発生。ケンタッキー州で最も多く 26 例（6 例死亡）
。2 例は流産例

2017

27 ～

ケンタッキー州で 27 例

2016

６～

メリーランド州およびウエストバージニア州で 3 例＊第 3、4 四半期に報告されているもののみを記載。実際はもっと多い。

3．発生要因ならびにベクターの調査

皮下または静脈内に接種して発症させることがPHF は、馬の品種、性別を問わず感染するできることや、ヒトや動物のリケッチア病の大が、幼若令馬では発生がきわめて少ない｡ 本病

部分が節足動物を介して哺乳類や鳥類に感染すは、5 月から 11 月にかけて発生し、夏期とくることなどから、ベクターを介して伝播されるに 7 月と 8 月に多発する（図 1）｡ おもな発生は、疾病である可能性が指摘されていた。当初は、ポトマック川やオハイオ川など河川流域の原野

マダニがベクターとして考えられていたが、現にみられる｡ 流行形態は散発的で、馬から馬へ

在は、水生昆虫等の介在により、N. risticii が感の直接的な伝播はない。このような事実に加え、染した吸虫からの伝搬が、PHF の主な発症要因

本病は、感染発症馬の急性期の血液を実験馬のとして明らかになっている。

図1

図1 ⾺のポトマック熱の⽉別発⽣頭数

⾺のポトマック熱の⽉別発⽣頭数

Maryland
Maryland 州、1982〜 州、1982〜1985年
1985 年

80

82年

70

頭
数

83年

60

84年

50

85年

40
30
20
10
0

4

4

5

6

7

8

9

10

11

12 （⽉）

● N. risticii の感染環と感染経路常発生した地域で行われた乗馬大会で、PHF が吸虫と哺乳類に感染する N. risticii の複雑な感染環を図 2 に示す。N. risticii の感染した吸集団発生したという事例もある。淡水からの暴露の可能性はまだ否定されていない。

虫卵は、水中で孵化しミラシジウムとなり、淡一方、水生昆虫を捕食するコウモリやツバメ

水巻貝に寄生する。ミラシジウムは、貝内でスか ら も N. risticii の DNA が 検 出 さ れ て お り、

ポロシストに発育し、温暖期に巻貝からセルカ

N. risticii のリザーバーと運び屋の役目を果たし

リアとして放出される。セルカリアは、水生昆ている。巻貝の調査では、近縁の Neorickettsia

虫の幼虫に寄生し、虫体内でメタセルカリアへ

sp. が、アジア、ヨーロッパ、南アメリカ等世と発育する。羽化した水生昆虫は、コウモリや界各地で検出されており、韓国の巻貝からは、鳥が捕食して吸虫の終宿主となり、それらの糞N. risticii が確認されたという報告もある。

から吸虫卵が水辺に排出される。N. risticii のN. risticii は、馬の糞便中にも多数排泄される

DNA は、巻貝の吸虫、あるいはトビケラ（トが、馬房汚染による経口感染については不明でビケラ目）、カゲロウ（カゲロウ目）、イトトンある。臨床的には罹患馬からの伝播はないと言ボ（トンボ目、均翅亜目）、トンボ（トンボ目、われている。

不均翅亜目）、カワゲラ（カワゲラ目）など 13

また、実験的に感染させた妊娠馬の胎児から種類の幼虫あるいは成虫から検出されており、

N. risticii が分離されたことから、本病の垂直伝

N. risticii が感染したトビゲラを用いた馬への伝播の可能性が指摘されており、近年、流産も確

播検証では、臨床症状が再現されている。馬へ認されている。

の暴露ルートは、水生昆虫の偶発的な摂取（桶2020 年 に は、 新 種 の Neorickettsia に よ っ てあるいは敷料への混入、水辺で草を食む際の誤PHF の症状を示すことが報告されており、PHF

食等）が主因と考えられている。カゲロウが異の病態解明にはさらなる研究が必要である。

図2 N.risticiiの⽣活環
図 2 N.risticii
の⽣活環

終宿主

偶発的な摂取吸⾍卵

第２中間宿主（メタセルカリア）

セルカリア
第２中間宿主（メタセルカリア）

ミラシジウム

第1中間宿主（スポロシスト）N.risticii

5

Ⅱ

臨

床

１．臨床症状写真１

自然感染馬に認められる臨床症状は、沈鬱、食欲廃
絶、発熱、下痢、疝痛、脱水 症、 蹄 葉 炎 な ど で あ る（表 3、写真 1 ～ 3）
。実験
感 染 馬 で は、 接 種 後 3 ～11 日の潜伏期 間 を 経 て まず沈鬱となり、食欲が減退する。前後して、38.9℃～
41.6℃の範囲の発熱が認められ、3 ～ 8 日間稽留する

写真 1

（図 3）
｡ 下痢は、初期症状

疝痛症状を呈する自然感染馬が認められてから 24 時間～ 48 時間後に始まは、胎盤炎や胎盤停滞を発症して流産の誘因とることが多く、1 日～ 10 日間（通常 3 ～ 5 日なる。流産胎仔には、腸間膜リンパ節および脾間）持続する。下痢は、本病の特徴的所見の一

臓のリンパ過形成や門脈周囲性肝炎、大腸炎がつではあるがすべての症例で認められるわけでみられることもある。

はない。軟便程度のこともあるが、多くの場合は黄土色で水様性の激しい下痢であり、末期に

写真2は脱水症状をきたす。もう一つの特徴的所見である蹄葉炎は、20-30％の馬で見られ、下痢が起きてから 3 日以内に発症することが多い。また、疝痛は、しばしば急性で激しく、腸の蠕動は減退あるいは停止するが、下痢の発症時には亢進することもある｡ 時折、一過性の発熱と元気消失のみで耐過する症例や、発熱を示さない
不顕性感染も認められる。適切な処置が施されないと予後は悪く、死亡率（淘汰も含む）は、
約 30％である。妊娠馬の胎仔に感染した場合
表3

6

馬のポトマック熱の臨床所見
所見

おおよその割合（％）

沈鬱
食欲廃絶
発熱
下痢（軽度）
下痢（水様性）
疝痛
蹄葉炎

90
80
70
30
50
30
20

写真 2

実験感染馬に見られた下痢

写真3

写真 3

図３

蹄葉炎を発症した自然感染馬 (REED 博士提供）

実験感染⾺における臨床⾎液学的所⾒および免疫応答

図３

実験感染⾺における臨床⾎液学的所⾒および免疫応答

40
39.5

体
温

39

：沈鬱

38.5

：軟便

（℃）

38

：下痢

37.5
37
36.5
14000
⽩ 13000
⾎ 12000
球 11000
数 10000（/mm3）
9000
8000
7000

間 1280
接
640
蛍
320
光
160
抗
80
体
40
価
20
（倍） 10＊：N. risticii 分離

**
0

** *
10

20

30

40

50

60 接種後⽇数72．臨床血液学的所見                                                             3．類症鑑別血液検査では、PCV が 40 ～ 65％に上昇す

PHF と 類 似 し た 馬 の 下 痢 症 に は、 サ ルるが、一部の症例では貧血も認められる。また、モネラ感染症、Ⅹ大腸炎、抗生物質誘発性下白血球は初期には減少するが、その後増加する

痢、エンドトキシンショック、腹膜炎および（図 3）｡ 血清総蛋白濃度は、初期に上昇するが、Clostridioides difficile 感染症などがあり、類症鑑その後 3 ～ 5ℊ /㎗の範囲に下降する。

別が必要である（表 4）｡ とくに成馬のサルモ

なお、感染馬の末梢血液から白血球を収集し、ネラ感染症は、PHF ときわめて酷似した下痢と塗抹標本を作製しても、N. risticii が光学顕微鏡

蹄葉炎を併発し、急性経過をとることから、サ下で確認されることはほとんどない。

ルモネラ感染症が疑われる場合には、糞便材料からの菌分離を行って鑑別する必要がある。

表4

馬の急性下痢症の類症鑑別
病気

（馬）年齢

季節

経過

ストレスの関与

ポトマック熱成馬

6 ～ 10 月

急性～亜急性無サルモネラ感染症

全馬とくに
幼若令馬、
まれに成馬

通年とくに
暑い時期

急性

可能性有

X 大腸炎

成馬

通年

甚急性

有

抗生物質誘発性下痢

成馬

通年

緩徐～亜急性

可能性有エンドトキシンショック

成馬

通年

甚急性

無

腹膜炎・動脈閉塞症

全馬

通年

緩徐

無

C.difficile 感染症

全馬

通年

甚急性

有

Ⅲ

病理学的所見１．肉眼所見

8

2．病理組織学的所見

肉眼的病変は、ほぼ盲腸と大結腸に限られる。

病理組織学的には、盲腸および結腸の粘膜

盲腸と結腸の内容物は、非常に水分に富んでお上皮細胞の変性 ･ 壊死 ･ 脱落、腸陰窩におけり（写真 4）、暗褐色ないし緑色を示すが、重る上皮細胞や炎症細胞塊を含む小壊死巣など

症例では赤褐色となり、悪臭を伴う｡ 粘膜の主が認められる（写真６）。粘膜固有層には、多な病変は、充血および出血（写真 5）で、重症数の好中球、マクロファージ、肥満細胞、形

例や長びいた症例では潰瘍が認められる。小腸質細胞、リンパ球、好酸球の浸潤がみられる。

は、水様性ないし粘稠性内容物を含有し、粘膜鍍銀染色によって、上皮細胞や粘膜下織のマ面に充血部位や班状出血巣が認められるが、盲クロファージおよび肥満細胞の細胞質内に菌

腸や大結腸と比較して軽度である｡ 小結腸には、体が観察される。電子顕微鏡観察では、これ粘膜の軽度～中等度の充血以外に病変はみられ

らの感染細胞の細胞内に多数の N. risticii が認

ない。

められる。

写真4

写真 4

結腸は水様性内容物で充満している

写真5

写真 5

結腸粘膜の顕著な出血

写真6

写真 6 結 腸における粘膜上皮細胞の変性・壊死。 腸陰窩には脱落上皮細胞や好中球などを主体とする炎症性細胞が充塡している。
9

Ⅳ

病原体

1984 年 の ほ ぼ 同 時 期 に、 イ リ ノ イ 大 学 ののに対し、N. risticii は、単球に感染する。このHolland らのグループとバージニア・メリーラ

こ と か ら、Ristic は、A. phagocytophilium に よンド州立大学の Rikihisa らが、感染馬の単球かってひき起こされる馬のエレキア症を Equine

ら病原体の分離に成功した｡ その病原体は、エgranulocytic ehrlichiosis（馬顆粒球性エレキ

レキア属のまったく新しいリケッチアで、現在ア症）と呼び、N. risticii によって起こる PHF

は、分離および同定に功績のあった Ristic の名を Equine

前 を と り、Ehrlichia risticii（ 後 の Neorickettsia

性エレキア症）と呼ぶことを提唱している。

risticii）と命名された｡

monocytic

ehrlichiosis（馬単球

ま た、 人 の 腺 熱 は、 魚 の 吸 虫（ セ ル カ リ

N. risticii の分類学的位置を図 4 に示す｡ 馬ア）を誤飲して発症するが、その原因となるに病原性を有するアナプラズマ科のリケッチア

Neorickettsia sennetsu は、N. risticii に 近 縁 でには、N. risticii 以外に、馬のエレキア症の病原あり、N. sennetsu を実験的に馬へ投与した場

体として以前から知られていた Ehrlichia Equi

合、N. risticii に対する抗体価は上昇するものの（ 現 在 は Anaplasma phagocytophilum） が あ り、PHF の発症はしないという報告がある。また、

黄疸と四肢の浮腫が主徴である。これら 2 種

カナダのオンタリオ州では、PHF と同様の症状の病原体は、末梢血中における感染細胞が異なを示した原因は近縁の Neorickettsia sp. であっり、A. phagocytophilum は、顆粒球に感染するたという報告もある。

図410

リケッチアの分類

ある細胞変性効果は認められない｡ ライトギム●遺伝子情報N. risticii のゲノムは、2009 年に公表され、ザ染色標本では、感染細胞の細胞質に数個～約

サ イ ズ は 879kbp、GC は 41.3 ％、 遺 伝 子 の百個の病原体からなる封入体が認められる（写長さの平均は 841bp、Coding 領域は 86.9％、

真 7 矢頭）｡ORF 数は 898、機能の決定した ORF は 554

2．形

である。

態                                                                         N. risticii は、グラム染色で陰性に、ライトギ

１．分離と培養                                                                       ムザ染色で青紫色に（写真 7）、ギムザ染色で

N. risticii は、他のリケッチアと同様に人工

赤紫色に染まる。多形性で、円形、卵形、ソー培地では発育しない。したがって、その分離

セージ様の形態を示し、莢膜や鞭毛は無い。電と培養には、マウスのマクロファージ系腫瘍

子顕微鏡観察では、2 層の細胞膜と波状の外膜由来 P388D1 細胞、ヒトの組織球系腫瘍由来を有し、グラム陰性菌の形態を示す。内部は高U-937 細胞、あるいはイヌの単球培養細胞など

い電子密度を有し、DNA やリボゾームに富んが用いられている｡ 培養液としては、通常 10でいる。大きさは 0.4-0.75㎛× 0.5-1.2㎛であ％牛胎児血清加 RPMI-1640 培地が用いられ、る（写真 8）｡

これに N. risticii の増殖に必須である L- グルタミンを培養液中に 1.0 ～ 2.0％の割合で添加する。なお、抗生物質は、N. risticii の増殖を抑3．血清学的性状
N. risticii の 血 清 型 に つ い て 詳 細 に 検 討 し制するので通常は使用しない｡ したがって、N.

た報告はないが、現在までのところ、血清学

risticii の分離、増殖を行うには、完全な無菌操的には一つの型と考えられている。N. risticii

作のできる設備が不可欠である。培養は、5％は、 間 接 蛍 光 抗 体 法（Indirect

CO2 存在下、35 ～ 37℃で行う｡

fluorescent

感染発症馬の白血球（単球）を P388D1 細胞や U-937 細写真8

胞の浮遊液に加えて培養すると、5 ～ 10 日目には 80 ～ 100％の感染細胞が得られる。感染細胞は細形化したり、壊死を起こすが、特徴の

写真 7

P388D，細胞の細胞質内で増殖する E. risticii 。 … 写真 8 P
 388D，細胞質内に認められる多数の E.risticii 。
（ライトギムザ染色）(RIKIHISA 博士提供）11antibody test:IFA 法）で、E. equi（現在は A.

マ ウ ス（CF-1 系 ） が 高 い 感 受 性 を 示 し、N.

phagocytophia）とは全く交差反応を示さないがristicii を腹腔内接種されたマウスは昏睡、粗毛、N. sennetsu とは比較的強く、E. canis とは弱い

やぶにらみ、背中を丸めるなどの症状を示し、ながら交差反応を示す。

末期には下痢を呈する。その他の実験動物では、
N. risticii を実験的に接種されたネコの一部が下4．病原性                                                                         N. risticii は、あらゆる品種の馬に対して病原性を有するものと考えられている（臨床症状お痢を発症したと報告されている。また、イヌは、
臨床的には異常を示さないが、病原体は血液中で増殖することが明らかにされている。

よび病理学的所見参照）。 実験動物としては、

Ⅴ

診

断

PHF の確定診断は、病原学的または血清学的－ 1640）すると、単球が底に付着し、単層培に診断する。AAEP ガイドラインを参考に診断

養の状態となる。培養後 2 日目に、P388D1 細サンプルおよび検査方法、取扱を表 5 に示す。

胞などを加えて分離培養を続け、5 ～ 10 日目に形態学的に検査する｡ 形態学的検査は、通常、

１．病原学的診断
病原学的診断は、細胞培養法およびマウス接微鏡下で菌体の増殖を確認する（写真 9）。N.

種法によって行われていた。近年は、遺伝子検

risticii の同定には、IFA 法による免疫学的診断

査が迅速診断法として用いられている。

が必要である｡

1）細胞培養法

2）マウス接種法  

細胞培養法による N. risticii の分離は、つぎマウス接種法は、感染発症馬の全血または白のようにして行う｡ 感染発症馬の急性期の血血球を成熟したマウス（CF-1 系）の腹腔内に液は抗擬固剤を用いて採取し、1 ～ 2 時間放接種し、その臨床経過や病理所見から、PHF の

置 し た 後 に 白 血 球 層（buffycoat） を 取 る可能性を検査する｡ 本病の可能性が疑われた場

か、あるいは密度勾配法を用いて単球層を分離

合には、病理解剖によって摘出したマウス脾臓

する。この白血球を培養用フラスコにて１日培等の乳剤を用いて、病原体を分離するか、ある養（培養液は前述の 10％牛胎児血清加 RPMI

いは IFA 法（二次反応には抗マウス IgG 血清

表512培養細胞の塗抹標本をギムザ染色し、光学顕診断用サンプルおよび検査、取扱 （AAEP ガイドライン参照）
サンプル

検査

輸送形態

新鮮便

PCR

防漏型容器

全血

細胞培養法
マウス接種法PCREDTA 管

血清

IFA

プレーン管、防漏型容器

大腸組織；盲腸

PCR

防漏型容器

流産胎仔

PCR

防漏型容器

取扱

すべて冷蔵
1 日以内が望ましい

写真9

⬅️

Diff-Quik strain TM

写真 9 培 養細胞（P388D1) の塗抹標本…
Diff-Quik strain TM
細胞質内に N. Risticii のギムザ陽性像が確認できるを使用）によってマウス血清中に抗体を証明す

ックス凝集反応などがある｡ 現在のところ、一ることによって確定診断する。

般的には、IFA 法が使用されており、一部の実験室では ELISA 法も実用化されている。ラテックス凝集反応は、特異性のないことが指摘さ

3）PCR 検査迅 速 か つ 高 感 度 で PHF を 診 断 で き る 方 法

れ、今では使用されていない。IFA 法は、発症と し て、 い く つ か の 遺 伝 子 検 査 法（PCR 法、初期の診断法としてはあまり有効ではないが、Real-time PCR 法）が報告されている。一般

発症後期から回復期にかけては確実な診断が可に米国では nested PCR 法が感度の良い方法と能である。IFA 法抗原は、N. risticii を感 染 さして実施されている。より新しい方法として、せた P388D1 細胞の濃厚浮遊液をスライドグ

N. risticii の 16SrRNA 遺 伝 子 の 85bp を 標 的ラス（12 穴のホール・スライドグラス）上にとした表 6 のプライマーセットを用いた Real-

滴下して、37℃、1 時間乾燥後、アセトン固定

time PCR 法も実施されている。

した固着標的抗原である。この抗原に対し、被表 6 N.risticii 特異的 real-time PCR 法

検血清（一次反応）、ついで蛍光抗体液（蛍光標識抗ウマ IgG 山羊血清 : 二次反応）という配列順序で反応させ、蛍光顕微鏡で観察する（写真ForwardGTTATTCCCTACTACCAGGCAAGTTC10）｡ IFA 価の陽性限界は 80 倍以上であるが、ReverseAACGGAATCAGGGCTGCTT

Prepzman らは、80 倍以下でも PHF と考えら

Probe

ACGCACCCGTCTGCCACGGGAれる例が少数検出されることから、陽性限界を64 倍とすることを提案している。実験感染馬
では、IFA 価の上昇は接種後 9 ～ 20 日目に認

2．血清学的診断                                                                        血清学的診断には、IFA 法、ELISA 法、ラテ

められ、ピークが接種後 4 週間前後で、80 倍以上の値が１年以上にわたって維持される。

13

間接蛍光抗体法の術式

  Ａ．準備するもの
１）固着標的抗原（12 穴スライドグラス）
２）被検血清２）抗原①～⑩の穴に、各濃度に希釈された
被 検 血 清 の 10μl を 滴 下 す る（ 下 図 ）。
第 10 列の穴からスタートする。

３）標準陽性血清

1

2

3

4

5

４）蛍光標識抗ウマ IgG 山羊血清

6

7

8

9

10

５）96 穴マイクロタイター・プレート（血清希釈に用いるもので、小試験管等

３）10μl の標準陽性血清を○○に入れる。

で代用できる）４）37℃で 30 分間反応させる。

６）血清分注器（10μl、100μl）
７）リン酸緩衝液（PBS）：150ml × 4 個
８）〔1％ Evans Blue〕※蛍光顕微鏡を使用する場合は省略可能。

５）洗浄。
① PBS（150ml に Tween20 を 2 滴添加）……………………………… 10 回すすぐ
② PBS（150ml に Tween20 を 2 滴添加）９）反応箱……………………………… 10 回すすぐ

10）孵卵器〔PBS
（150ml ＋ Evans Blue2 ～ 3 滴）11）蛍光顕微鏡

直ちに除去〕③ PBS（150ml）

Ｂ．被検血清の希釈
被検血清の段階希釈液を得る。ここでは 96
穴マイクロタイター・プレートを利用した 20
倍～ 12,400 倍までの希釈方法を述べる。
１）96 穴マイクロタイター・プレートの縦第 1 列に 190μl のリン酸緩衝液（PBS）を入れる。

……………………………………… 5 分
６）余分の水分を濾紙で吸い取る。乾燥させてはならない。
７） 蛍 光 標 識Anti-Horse

IgG の 10μl

による二次反応。37℃、30 分。
８）洗浄
① PBS
（150ml にＴ ween20 を 2 滴添加）

２）96 穴マイクロタイター・プレートの縦……………………………… 10 回すすぐ

第 2 ～ 10 列に 100μl の PBS を入れる。

② PBS（150ml にＴ ween20 を 2 滴添加）３）10μl の被検血清を第１列に入れてよく……………………………… 10 回すすぐ混和する（20 倍希釈血清）｡４）第 1 列から 100μl をとり、第 2 列に入れてよく混和する。以下、第 10 列（12,400
倍希釈）まで同様に繰り返し、段階希釈する。
５）第 10 列では 100μl をすてる。

③ PBS〔150ml に Evans Blue

2～3

滴添加〕
………………………………… 3 分間おく
④ PBS（150ml）………………………………………… 5 分
９）余分な水分を濾紙で吸い取る。乾燥させてはならない。

Ｃ．反応法
１）あらかじめ作製された固着標的抗原を冷1410）カバーグラスでマウント（緩衝グリセリンを用いて封入）

蔵庫（4℃）から取り出す｡ このとき抗11）鏡検（写真 10，11）〔Evans Blue を使

原表面の結露を防ぐため、乾燥剤を入れ用した場合は対比染色によって細胞質がた小箱の中で室温にもどす。

橙色に染まる（写真 12）
〕

写真10

写真11

蛍光顕微鏡像

FITC
蛍光顕微鏡像写真 10
単球の細胞質内に認められる陽性像（矢印：発光部）【蛍光顕微鏡像】

Differential Interference Contrast image
微分干渉像

Merged image
共焦点イメージ

写真 11 N. risticii は単球の細胞内に局在【共焦点レーザー顕微鏡像】

写真12

写真 12
Evans Blue 対 比 染 色 による陽性所見。細胞質が橙色に染まり、N. Risticii
は蛍光色（緑）に発色

15

Ⅵ

治療と予防

１．治

療

2．予

PHF の特効薬は、テトラサイクリン系抗生物

米国では、予防にワクチンが実用化されて質である。オキシテトラサイクリンの静注やミい る。 市 販 さ れ て い る ワ ク チ ン は 不 活 化 ワノサイクリンあるいはドキシサイクリンの経口

ク チ ン（Equine Potomavac.：Boehringer

投与が行われている。その効果は劇的で、多くIngelheim）で、頸部の筋肉内に 1mL を 2 ～の罹患馬は投与開始後 2 日目には症状が改善さ

4 週間隔で 2 回接種する。ただし、自然発生例

れる。対症療法として、下痢による衰弱を軽減の株間の抗原性に多様性があることから、このすることと蹄葉炎の発生を防止するため、乳酸ワクチンの感染防御効果は、あまり良好ではな

リンゲルや重曹水などの補液や各種の消炎剤がいとも言われている。流行地域では馬房内は夜投与される（表 7）｡ 症状が改善されない場合

間消灯するなど水生昆虫の摂取を最小限にするには、サルモネラ感染症など他の原因が疑われ

厩舎衛生害虫の防除対策、感染馬の隔離などがるので抗生物質の変更など、迅速な対応が必要

行われている。

である｡
表7

治療

抗生物質
Oxtetracycline

7mg・kg（24時間毎IV

3～5日間）

解熱・鎮痛・消炎剤
DiproneBanamine

7.5g

IV

250～500mg

IV

3.8ℓ以上IV

補液
Ringer液、等
胃洗浄
Mineral Oil
Water

16

防                                                                            

2.8ℓ

経鼻投与

2ℓ

経鼻投与

おわりに
馬のポトマック熱は、1979 年に初めて報告された馬属特有の疾病であり、この初版刊行時は感染経路をはじめとして不明な点が多い病気でした。和田氏は、初版で『IFA 法は急性期の診断には役立たない。感染経路、ベクターの役割と特定、病理発生、保菌馬の存否、感染防御抗体の持続期間、細胞性免疫と液性免疫の役割などの事項が未解決であり、このような問題に対する研究が推進されることを期待したい。
』と記していました。
30 年が経過した現在、PCR 法により急性期の診断が可能となり、感染経路に水生動物や吸虫が関連していることなど、多くの進展がありました。また、新たな国での発生報告や新種の病原体発見など、近年でも新事実が判明しています。幸い、わが国では本病の報告はありませんが、鳥が N. risticii の運び屋になっていることから、今後本病が発生する可能性は否定できません。
最後に、馬ポトマック熱に関する研修において、和田氏に種々の実験と貴重な体験の機会を与えていただき、さらにはこの改訂版においてもご助言ご指導して下さいました米国オハイオ州立大学、力久泰子先生に厚くお礼申し上げます。
令和 2 年 12 月
日本中央競馬会
競走馬総合研究所

微生物研究室17

日本中央競馬会畜産振興事業
地方競馬全国協会畜産振興事業

平成 2 年 3 月 第1版第1刷発行
平成13年 3 月 第1版第2刷発行
令和 2 年12月 第2版第1刷発行

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