環境感染誌

第 35 巻 Supplement

令和 2 年 5 月 25 日発行（年 6 回）

学術刊行物

一般社団法人 日本環境感染学会

環境消毒薬の評価指針 2020

一般社団法人 日本環境感染学会
消毒薬評価委員会

環境感染誌

Vol. 35 suppl, 2020

環境消毒薬の評価指針 2020
一般社団法人 日本環境感染学会

消毒薬評価委員会

はじめに
医療関連感染は原因となる微生物種の変化とともに変遷しており，環境消毒には多様な消毒薬や除菌剤が使用されているのが現状である．しかし，各微生物種に対応する有効な製品を選択するための標準的な有効性評価基準は，我環境感染（KKY）RGB Pro6N の雛形です 【版面】W：170.57mm（片段 81.23mm） H：238.21mm 【本文】48 行 13Q 20H
が国ではまだない．そこで，医療環境に適した有効な消毒薬を選択できるようにするために，環境消毒薬の評価基準【図】●図番号・タイトル：11Q
太ゴ 15H ●図説明：11Q リュウミン R 15H ●タイトル・説明折り返し：番号のあと ●タイトル 1 行のときはセンタリング ●図説の幅 片段：固定 全段：図幅を作成した（表）．本指針は，環境消毒薬の有効性評価基準の標準化を目的として提案するものである．
【表】●表番号・タイトル・説明：11Q 太ゴ 15H ●タイトル・説明の折り返し：番号のあと 1 行のときはセンタリング ●表説の幅 表幅より左右 1 字下げ●表中：11Q 中ゴ 12H または 15H ●脚注 表幅（字下げなし）【統一事項】●原稿でイタリックのもの→イタリック（リュウミンは Times Std Ita）

表
殺細菌効果

環境消毒薬の評価基準… Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 などの細菌を 4log10 以上減少させる

殺ウイルス効果 … Feline calicivirus F9 などのウイルスを 3log10 以上減少させる
殺芽胞効果… Clostridioides（旧名称 Clostridium）difficile ATCC 9689 などの芽胞を 3log10 以上減少させる

注：小数点は切り捨て

試験法
次に示す 2 種の試験法のうち，サスペンジョン試験は消毒薬自体の殺微生物効果を評価するうえで必須である．一方，サーフェス試験はより実使用に近い試験法であり，実施することが望ましい．
なお，本指針は欧米の評価基準（別表 1 および 2）を参考にして1）～13），本邦の実状に合うように作成した．
1．サスペンジョン試験
清浄条件（消毒薬：0.3％ウシ血清アルブミン：菌液＝8：1：1 など）や汚濁条件（消毒薬：3％羊血球含有 3％ウシ血清アルブミン：菌液＝8：1：1 など）の下（20±1℃など），経時的（1，5 および 10 分間など）に生残微生物を定量する．この際には消毒薬の不活化を確認する．
使用する細菌としては，P. aeruginosa（ATCC 15442，NBRC 3919 など）および Staphylococcus aureus（ATCC6538，209P など）の標準株や，メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）やカルバペネム耐性腸内細菌科細菌（CRE）などの耐性株を用いる．初発菌量は 107 colony forming units（CFU）以上とする．
ウイルスとしては，Feline calicivirus F9 や Adenovirus T5 などを用いる．初発ウイルス量は 3log10 以上の減少率が得られるような量とする．
芽胞としては，C. difficile（ATCC 9689, ATCC 43598 など）の標準株が産生する芽胞を用いる．初発菌量は 106
CFU 以上とする．
2．サーフェス試験
シリコンディスクやステンレス板などに菌液 10～20μL を滴下して乾燥させる．その後に 20℃の消毒薬 20～60μLを滴下して，経時的（1, 5 および 10 分間など）に生残微生物を定量する．この際に用いる微生物はサスペンジョン試験の場合と同一とする．

― S1 ―

― S2 ―
≧4 log10

≦5min

≦5min
≧5 log10

4℃～ 30℃

1.5 ～ 5×106

4℃～ 30℃

1.5 ～ 5×107

Enterococcus faecium ＊5ATCC6057

Enterococcus hirae
ATCC10541≧4 log10≦5min

4℃～ 30℃

0.03% ウシ血清アルブミン（BSA）（c）
0.3%BSA＋0.3% 羊血球（d）

≧107

8：1：1

硬水（硬度 375ppm）≧4 log10≦60min20℃

1.5 ～ 5×108

Mycobacterium avium
ATCC 15769

Poliovirus type1
LSc 2abMurine norovirus
strain S99 Berlin

prEN14348：2004
Mycobacterium terrae
ATCC 15755

EN14476：2013

殺抗酸菌効果Adenovirus type 5strain Adenoid 75，ATCC VR-5

殺ウイルス効果EN17126：2018

殺芽胞効果≧4 log10≦15min4℃～ 30℃

1.5 ～ 5×106

Bacillus cereus
CIP 105151

Bacillus subtilis
ATCC 6633

Clostridium difficile
NCTC13366

注）＊1：作用時に供試濃度となるよう，消毒薬の濃度は供試の 1.25 倍に調製する．希釈しない消毒剤の場合は，97：2：1 の作用比率が容認されている．
＊
2：清浄条件（c；clean），汚染条件（d；dirty）の代表的な各負荷物質を例示した．
＊
3：メーカーの推奨に従うが記述の範囲内とし，設定±1℃にて行う．
＊
4：状況によって，最長 60 分間まで容認されている．
＊
5：E. faecium は器材消毒の供試菌

要求基準

＊4

作用時間

作用温度＊3

添加負荷物質＊2（作用液中濃度）作用時（初発）微生物量
CFU/mL or TCID50/mL

＊1

作用比率
消毒薬：負荷物：菌液

消毒薬調製水対象微生物Candida albicans
ATCC10231

Pseudomonas aeruginosa
ATCC15442

EN13624：2013
Aspergillus brasiliensis
ATCC16404

EN13727：2012
Staphylococcus aureus
ATCC6538

殺真菌効果

欧州の消毒薬の効力評価に用いられているサスペンジョン試験

殺細菌効果

別表 1

環境感染（KKY）RGB Pro6N の雛形です 【版面】W：170.57mm（片段 81.23mm） H：238.21mm 【本文】48 行 13Q 20H【図】●図番号・タイトル：11Q 太ゴ 15H ●図説明：11Q リュウミン R 15H ●タイトル・説明折り返し：番号のあと ●タイトル 1 行のときはセンタリング ●図説の幅 片段：固定 全段：図幅【表】●表番号・タイトル・説明：11Q 太ゴ 15H ●タイトル・説明の折り返し：番号のあと 1 行のときはセンタリング ●表説の幅 表幅より左右 1 字下げ●表中：11Q 中ゴ 12H または 15H ●脚注 表幅（字下げなし）
環境感染誌
Vol. 35 suppl, 2020
【統一事項】●原稿でイタリックのもの→イタリック（リュウミンは Times Std Ita）

殺細菌効果― S3 ―

微生物
滴下量

50μL

10μL

殺真菌効果

10μL

Trichophyton
T. mentagromentagrophytes phytes
ATCC9533
ATCC9533

Aspergillus
Aspergillus
brasiliensis
niger
ATCC16404 ATCC64958

10μL

10μL

0.03%BSA 0.35% トリプ 5% 血清＊b（c）
トン or Yeast
0.3%BSA（d）extract，0.25%BSA,0.08% 牛ムチン
50μL

殺ウイルス効果

Hepatitis Avirus HM-175（VR-1402）
Canineparvovirus
cornell780916-80（VR-2017）

Hepatitis Avirus
CanineparvovirusHumanrhinovirus 37（VR-1147）or14（VR-264）
Humanrotavirus
Wa（VR-2018）

Humanrotavirus

殺芽胞効果
ASTM E2197：2011

Clostridium
difficile
ATCC43598 ＊c

Clostridium
spologenes
ATCC7955

200μL

0.35% トリプトン or Yeast
extract，
0.25%BSA,
0.08% 牛ムチ
ン

10μL

10μL

0.35% トリプ 5% 血清 ＊b
トン or Yeast
extract，
0.25%BSA,
0.08% 牛ムチン

10μL

0.35% トリプトン or Yeast
extract，
0.25%BSA,
0.08% 牛ムチン

10μL

0.35% トリプト
ン or Yeast
extract，
0.25%BSA,
0.08% 牛ムチン

ガラス製ペト ステンレスス 顕微鏡用スライ ステンレスス ステンレスス
リ皿チールディス ドガラス
チールディス チールディスク
クク（AISI type 430
直径 10cm25×25mm
磨き，磁性体）（AISI type 430 18×36mm（AISI type
深さ 1cm430 磨き，磁 直径 10mm磨き，磁性体）
25×75mm性体）
直径 10mm
厚さ 0.7mm
厚さ 0.7mm
直径 10mm
厚さ 0.7mm

Murine noroviMurine
norovirus...and rus S99 or
MNV-1
more ＊4

ASTM E2197：2011

殺抗酸菌効果AOAC961.02：2013

Mycobacterium
Mycobacterium Bacillus subtilis
bovis（BCG）＊b terrae
ATCC 19659
ATCC15755

Humanrhinovirus 37

Feline calicivi- Feline calicivirus F9rus F9（VR782）

Humanadenovirus 5（VR-1516）

Adenovirus
T4 or T5

ASTM E2197 AOAC961.02 ASTM E1053 ASTM E2197
：2011
：2013
：2011
：2011

C. albicans
Candidaalbicans
ATCC10231
ATCC10231

EN13697：2013 ＊1

欧米の消毒薬の効力評価に用いられているサーフェス試験

顕微鏡用スライド ステンレスス ステンレスス 顕微鏡用スラガラス
チールディク チールディス イドガラス
25×25mm（304 2b 両面 ク25×25mm18×36mm磨き）（AISI type
18×36mm25×75mm
直径 20mm 430 磨き，磁 25×75mm性体）
直径 10mm
厚さ 0.7mm

0.35% トリプト 5% 血清＊b
添加負荷 0.03%BSA
ン or Yeast（c）＊2
物質
0.3%BSA（d）extract，（接種菌液0.25%BSA,中の濃度）
0.08% 牛ムチン

ステンレスス ステンレスス
チールディス チールディスク
ク（AISI type 430（304 2b 両面 磨き，磁性体）
キャリアー 磨き）
直径 10mm
直径 20mm 厚さ 0.7mm

ATCC10536

Escherichia
対象微生物 coli

Salmonella enterica
Enterococcus E. hirae
hirae
ATCC10541 ＊a ATCC10708
ATCC10541

P. aeruginosa
ATCC15442

Pseudomonas P. aeruginosa
aeruginosa
ATCC15442
ATCC15442

AOAC961.02：2013
S. aureus
ATCC6538

ASTM E2197：2011

Staphylococcus S. aureus
aureus
ATCC6538
ATCC6538

EN13697：2013 ＊1

別表 2

環境感染（KKY）RGB Pro6N の雛形です 【版面】W：170.57mm（片段 81.23mm） H：238.21mm 【本文】48 行 13Q 20H【図】●図番号・タイトル：11Q 太ゴ 15H ●図説明：11Q リュウミン R 15H ●タイトル・説明折り返し：番号のあと ●タイトル 1 行のときはセンタリング
説の幅 片段：固定 全段：図幅【表】●表番号・タイトル・説明：11Q 太ゴ 15H ●タイトル・説明の折り返し：番号のあと 1 行のときはセンタリング ●表説の幅 表幅より左右 1 字下げ●表中：11Q
または●脚注
環境感染誌中ゴ 12HVol.
35 15Hsuppl,
2020表幅（字下げなし）【統一事項】●原稿でイタリックのもの→イタリック（リュウミンは Times Std Ita）
●図殺細菌効果

ASTM E2197：2011

AOAC961.02
：2013

50μL

適宜

≧4 log10 ＊a

100μL

18±1℃～25±1℃
5min±10sec≧4 log10

薬液量等

作用温度，
時間

要求基準

― S4 ―

殺真菌効果

適宜

18±1℃～
25±1℃
15min±10sec≧3 log10

適宜≦10min ＊b≧59/60 死滅
×3 batch＊b≧4 log10 ＊a

50μL

100μL

距離，回数，適宜設定

滴下1×104.5-5.5 ＊a

滴下≧105.27

中央部滴下（塗り広げなし）

領域全体

中央部滴下（塗り広げなし）

ASTM E2197：2011

殺抗酸菌効果AOAC961.02
：2013

殺芽胞効果

中央部滴下（塗り広げなし）

ASTM E2197
：2011

22±2℃
適宜

2mL

滴下

≧104

≧3 log10 ＊a

適宜

50μL

滴下

1×103.5-4.5 ＊a

10/10 死滅×2 batch ＊b

適宜≦10min ＊b

距離，回数，適宜設定

水平散布≧1×104 ＊b≧4 log10＊a

適宜

50μL

滴下

1×104.5-5.5 ＊a≧6 log10＊c

適宜50μL滴下106-7 ＊c

層 流 な い し 適 室温，減圧デシ 36±1℃，培養器 室温，減圧デシ 室温，減圧デシ
当 な チ ャ ン ケーター，2hr 30-40min
ケーター，2hr ケーター，2hr
バー

領域全体

10/10 死滅 完全不活性化
×2 batch ＊b ×2 batch ＊b

適宜≦10min ＊b

距離，回数，適宜設定

水平散布

1×104-5＊b

30-40min

領域全体

37℃，乾燥す 室温，減圧デシ 36±1℃，るまでケーター，2hr 培養器

水平散布

0.1 ～ 3.2×106 ＊3殺ウイルス効果ASTM E2197 AOAC961.02 ASTM E1053 ASTM E2197
：2011
：2013
：2011
：2011

中央部滴下
中央部滴下（塗り広げな （塗り広げなし）し）

EN13697：2013 ＊1注）＊
1；EN13697；食品，工業，公共及び一般施設等を対象とした試験法 ＊2；P. aeruginosa の場合，clean 条件の負荷物質は 0.85% スキムミルク ＊3；S. enterica の場合，0.1 ～ 3.2×105＊4；ASTM E1053 において規定されている Virus 種及び株
Adenovirus,Type4（VR-4），Type5（VR-5）；Canine parvovirus，cornell-780916-80（VR-2017）；Cytomegalovirus, AD-169（VR-538）；Feline calicivirus，（VR-782）；Hepatitis A virus，HM-175（VR-2093）
Herpes simplex virus，Type1，F（1）（VR-733）；Influenza A，A/Hong Kong/8/68（VR-544），PR-8（VR-95）；Murine norovirus；Respiratory syncytial virus，Long strain（VR-26）
Rhinovirus，Type37,151-1（VR-1147），Type14（VR-284）；Rotavirus，Wa strain（VR-2018）；Vaccinia，WR strain（VR-119）＊ ＊ ＊a, b, c は各以下のドキュメント内に記載されている条件，規定であることを示す．
a：OECD No.187 guidelines, b：EPA Efficacy Testing Standards および EPA Product Performance Test Guidlines, c：EPA-MB31-03 Standard Operating Procedure

滴下

滴下

消毒薬作用
方法

1×104.5-5.5 ＊a≧106.2730-40min

37℃，乾燥す 室 温， 減 圧 デ シ 36±1℃，るまでケーター，2hr 培養器

乾燥後キャリアー
あたり
微生物量

乾燥方法
（温度，時間）

中央部滴下
中央部滴下
領域全体
塗布方法 （塗り広げな （塗り広げなし）し）

EN13697：2013 ＊1

別表 2 欧米の消毒薬の効力評価に用いられているサーフェス試験

環境感染（KKY）RGB Pro6N の雛形です 【版面】W：170.57mm（片段 81.23mm） H：238.21mm 【本文】48 行 13Q 20H【図】●図番号・タイトル：11Q 太ゴ 15H ●図説明：11Q リュウミン R 15H ●タイトル・説明折り返し：番号のあと ●タイトル 1 行のときはセンタリング ●図説の幅 片段：固定 全段：図幅【表】●表番号・タイトル・説明：11Q 太ゴ 15H ●タイトル・説明の折り返し：番号のあと 1 行のときはセンタリング ●表説の幅 表幅より左右 1 字下げ●表中：11Q 中ゴ 12H または 15H ●脚注 表幅（字下げなし）
環境感染誌
Vol. 35 suppl, 2020
【統一事項】●原稿でイタリックのもの→イタリック（リュウミンは Times Std Ita）

環境感染誌

Vol. 35 suppl, 2020

参考文献1．‌EN 13727: 2012; Chemical disinfectants and antiseptics. Quantitative suspension test for the evaluation of bactericidal activity in the medical area. Test method and requirements（phase 2, step 1）
2．‌EN 13624: 2013; Chemical disinfectants and antiseptics. Quantitative suspension test for the evaluation of fungicidal or yeasticidal activity in the medical area. Test method and requirements（phase 2, step 1）
3．‌EN 14476: 2013+A1: 2015; Chemical disinfectants and antiseptics. Quantitative suspension test for the evaluationof virucidal activity in the medical area. Test method and requirements（Phase 2/Step 1）4．‌prEN 14348：2004；Chemical disinfectants and antiseptics. Quantitative suspension test for the evaluation of
mycobactericidal activity of chemical disinfectants in the medical area including instrument disinfectants. Test
methods and requirements（phase 2, step 1）
5．‌EN 17126: 2018; Chemical disinfectants and antiseptics-Quantitative suspension test for the evaluation of sporicidal activity of chemical disinfectants in the medical area-Test method and requirements（phase 2, step 1）
6．‌EN13697: 2013; Chemical disinfectants and antiseptics. Quantitative non-porous surface test for the evaluationof bactericidal and/or fungicidal activity of chemical disinfectants used in food, industrial, domestic and institutional areas. Test method and requirements without mechanical action（phase 2, step 2）
7．‌ASTM E2197：2011；Standard Quantitative Disk Carrier Test Method for Determining Bactericidal, Virucidal,Fungicidal, Mycobactericidal, and Sporicidal Activities of Chemicals
8．‌AOAC 961.02-1964（2013）; Germicidal spray products as disinfectant
9．‌ASTM E1053：2011；Standard Test Method to Assess Virucidal Activity of Chemicals Intended for Disinfectionof Inanimate, Nonporous Environmental Surfaces
10．‌OECD No.187 guidelines; OECD No.187 GUIDANCE DOCUMENT ON QUANTITATIVE METHODS FOREVALUATING THE ACTIVITY OF MICROBICIDES USED ON HARD NON-POROUS SURFACES Series
on Testing and Assessment No. 187 Series on Biocides No. 6
11．‌EPA Efficacy Testing Standards; EPA Efficacy Testing Standards for Product Data Call-In Responses
12．‌EPA guidelines 810.2200 Product Performance; EPA Product Performance OCSPP 810.2200: Disinfectants forUse on Hard Surfaces—Efficacy Data Recommendations
13．‌EPA-MB31-03 Standard Operating Procedure; Standard Operating Procedure for Quantitative Disk Carrier TestMethod（QCT-2）Modified for Testing Antimicrobial Products Against Spores of Clostridium difficile（ATCC43598）on Inanimate, Hard, Non-porous Surfaces― S5 ―