環境感染誌

Vol. 34 no. 6, 2019

〈短 報〉

Clostridioides （旧名 Clostridium ）difficile の芽胞に対する殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液の消毒効果
尾家重治・松本翔太

Sporicidal Effects of Excess Liquid from Sporicidal Wipes against Clostridioides Difficile Spores
Shigeharu OIE and Shota MATSUMOTO
Faculty of Pharmaceutical Sciences, Sanyo-onoda City University（2019 年 4 月 3 日受付・2019 年 7 月 19 日受理）
要旨

Clostridioides difficile の芽胞に対する殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液の消毒効果について，汚濁条件（0.3％ 羊血球含有 0.3％ ウシ血清アルブミン存在下）で検討した．このワイプ 1 枚に注射用蒸留水 20mL を含浸させて 4 分間放置後にそのしぼり液を実験に供した．C. difficile の計 3 株の芽胞に対して，対照薬剤として用いた 0.1％（1,000ppm）次亜塩素酸ナトリウムでは 10 分間接触であっても十分な殺芽胞効果を示さなかったが，殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液では 5 分間接触で十分な殺芽胞効果を示した．C. difficile の芽胞で汚染された環境の消毒に殺芽胞性環境清拭
ワイプは有用と考えられる．
Key words：Clostridioides difficile ，芽胞，消毒，殺芽胞性環境清拭ワイプ

Clostridioides difficile 感染症（CDI）患者の周辺環境が本邦にも導入されたが，本ワイプの殺芽胞効果に関す

１，２）には，本菌の芽胞が存在することが報告されている ．

る in vitro データは乏しい．そこで，C. difficile の芽胞また本菌の芽胞は環境で長期間生存できるうえに１），そに対する本ワイプのしぼり液の汚濁条件下での効果につの経口感染菌量は動物実験で 1〜2 個と非常に少ないこいて調べた．なお，本ワイプは過酢酸製剤であるものの，とが判明している３）．さらに，CDI 患者の周辺環境の消内視鏡消毒に汎用されている過酢酸製剤とは異なり，清毒を行うことにより CDI が減少したとの報告があるこ拭使用であっても過酢酸が大気中に検出されないこととなどから４，５），CDI 発症のおもな原因として環境の C.

（検出限界 2 ppm w/v）や，ステンレスやプラスチックdifficile 汚染が推定されている．したがって，CDI 患者材質を傷めにくいことが判明している７）．
殺芽胞性環境清拭ワイプとしてスポリサイダルⓇ（過の周辺環境の消毒は重要である．

C. difficile に対する環境消毒剤としては，強力な殺芽酢酸および過酸化水素含有，（株）モレーンコーポレー

胞効果を示す次亜塩素酸ナトリウムが汎用されている．

ション，東京），対照薬として次亜塩素酸ナトリウム（ミしかし，本剤は汚れ（有機物）の存在下で急激な効力低ルトンⓇ，杏林製薬（株），東京）を用いた．ここで，殺下を示す欠点がある６）．また，本剤は金属腐食性を示す

芽胞性環境清拭ワイプの試験では，実験の再現性のためのみならず，その塩素臭が眼や呼吸器系の粘膜を刺激すにそのしぼり液を実際の使用方法とは異なる方法で調製るなどの欠点もある．このため次亜塩素酸ナトリウムにした．すなわち，ワイプ 1 枚に注射用蒸留水 20mL を含代わる殺芽胞性の環境消毒剤が本邦で求められているの浸させて 4 分間放置後にそのしぼり液を実験に供した．

が現状である．英国では殺芽胞性環境清拭ワイプの使用

また，汚濁条件の作成には，羊脱繊維血液（日本バイオにより CDI を有意に減少できたとの報告があり，本ワ

テ ス ト 研 究 所，東 京）お よ び ウ シ 血 清 ア ル ブ ミ ン５）

イプは英国において汎用されている ．最近，本ワイプ（SIGMA-ALDRICH，USA）を用いた．一方，殺芽胞性環境清拭ワイプおよび次亜塩素酸ナトリウムの不活剤と山陽小野田市立山口東京理科大学薬学部薬学科

して 0.5％ チオ硫酸ナトリウム（和光純薬（株），大阪）― 302 ―

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汚濁条件下＊1 での Clostridioides difficile に対する殺芽胞性環境清拭ワイプ＊2 および次亜塩素酸ナトリウムの殺芽胞効果（20±2℃）

表1

用いた株

接触後の芽胞数（生存率）

消毒剤

01分

2分

5分

10 分

4.1×10（66.1%）

213（0.34%）＜5（＜0.01%）＜5（＜0.01%）

6.6×104（106.5%）

6.1×104（98.4%）

7.1×104（114.5%）

5.5×104（88.7%）

1.2×104（12.8%）15（0.16%）＜5（＜0.01%）＜5（＜0.01%）

7.5×104（79.8%）

7.9×104（84.0%）

7.7×104（81.9%）

8.4×104（89.4%）

6.8×104（30.9%）

787（0.36%）＜5（＜0.01%）＜5（＜0.01%）

2.3×105（104.5%）2.2×105（100%）

1.9×105（86.4%）

1.9×105（86.4%）

4

殺芽胞性環境清拭ワイプ
ATCC9689

臨床分離株（Y-S 株）

臨床分離株（Y-T 株）＊1＊2

0.1%（1,000ppm）
次亜塩素酸ナトリウム

6.2×104

殺芽胞性環境清拭ワイプ
0.1%（1,000ppm）
次亜塩素酸ナトリウム

9.4×104

殺芽胞性環境清拭ワイプ
0.1%（1,000ppm）
次亜塩素酸ナトリウム

2.2×105

0.3% 羊血球および 0.3% ウシ血清アルブミンを含有
ワイプ 1 枚に注射用蒸留水 20mL を含浸させて 4 分間放置後のしぼり液を用いたᾘẘ๣⤒㐣᫬㛫㸦ศ㸧
012510ẅⱆ⬊ᛶ⎔ቃΎᣔ࣡࢖ࣉ

0.1㸣㸦1,000ppm㸧
ḟளሷ⣲㓟ࢼࢺ࣒ࣜ࢘

図1

汚濁条件下での Clostridioides difficile の臨床分離株（Y-S 株）に対する殺芽胞性環境清拭ワイプおよび次亜塩素酸ナトリウムの殺芽胞効果（培地上の生残菌）含有ブイヨン液（栄研化学（株），東京）を用いた８）．

羊血球含有 3％ ウシ血清アルブミン 1mL を加えて，そ試験に供した株は，標準株の 1 株（C. difficile ATCCの後に芽胞液 1mL を注加し，5 秒間攪拌後に経時的に 19689）および山口大学病院での臨床分離の 2 株（Y-S 株，mL ずつを採取して，ただちに 0.5％ チオ硫酸ナトリウ

Y-T 株）の計 3 株である．C. difficile の芽胞の調製は次ム含有ブイヨン液 9mL に加えた．そして 5 秒間撹拌しのように行った．すなわち，0.2％Na2HPO4 添加のブレて 10 分間放置後に生菌数の測定を行った．生菌数測定

インハートインフュージョン寒天培地で 37℃・5 日間嫌は，滅菌生理食塩水を用いる 10 倍段階希釈法により，気培養した菌体を白金耳でかき取って生理食塩水に懸濁chrom IDⓇ C. difficile 培地（ビオメリュー・ジャパンし，この懸濁液を遠心沈殿法により生理食塩水で 2 回洗（株），東京）で 37℃・72 時間嫌気培養して行った．な浄 後 に，70℃・10 分 間 の 加 温 処 理 を し て mL 当 た り

お，殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液および次亜塩素

105〜106 colony forming units（cfu）オーダーの芽胞液

酸ナトリウムは，0.5％ チオ硫酸ナトリウム含有ブイヨ９）ン液での 10 倍希釈で不活化されることを確認した．まを得た ．
殺芽胞効果の検討は，室温（20±2℃）下でサスペンた，実験は 2 回くり返して，それらの平均値を算出した．

ジョン試験により行った．すなわち，試験液 8mL に 3％

表 1 に，汚濁条件下での C. difficile 計 3 株に対する― 303 ―環境感染誌

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利益相反自己申告：本研究は（株）モレーンコーポレーション

殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液および次亜塩素酸ナトリウムの殺芽胞効果を示した．C. difficile の計 3 株にの資金提供を受けた．利益相反はない．

対して，0.1％ 次亜塩素酸ナトリウムでは 10 分間接触であっても芽胞生残率が 86.4−89.4％ であったが，殺芽胞文性環境清拭ワイプのしぼり液では 5 分間接触で芽胞生残率が 0.01％ 以下となった．また，図 1 には臨床分離 1株（Y―S 株）に対する殺芽胞性環境清拭ワイプおよび次亜塩素酸ナトリウムの殺芽胞効果を培地上の生残菌で示した．C.

difficile の芽胞に対して，0.1％ 次亜塩素酸ナトリウムは 10 分間接触であっても殺芽胞効果を示さなかったものの，殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液は5 分間接触で殺芽胞効果を示した（表 1，図 1）．
医療関連施設内での環境消毒では，汚れ（有機物）を除去後に消毒を行うのが原則ではある．しかし，汚れが存在するか否かについて判断をしかねる場面も少なくな
く，汚れの存在下で著しい効力低下を示す次亜塩素酸ナトリウムでは十分な消毒効果が得られていない可能性があった．今回の実験では，殺芽胞性環境清拭ワイプのしぼり液はすぐれた殺芽胞効果を示すことが判明した．わが国で内視鏡消毒剤として汎用されている過酢酸（エタンペルオキソ酸）は pH が酸性で過酢酸が遊離の状態で存在するため粘膜刺激性を示す．一方，今回の実験に供した殺芽胞性環境清拭ワイプは pH が中性付近で，過酢酸が過酢酸塩として存在するため，ヘッドスペース GCMS 分析でも過酢酸は検出されなかったことが報告されている１０）．すなわち，本ワイプは刺激臭がほとんどないのみならず金属腐食性が小さいので，C. difficile 汚染の環境消毒に有用と考えられる．

献1）Gerding DN, Muto CA, Owens RC Jr: Measures to controland prevent Clostridium difficile infection. Clin Infect Dis
2008; 46(Suppl 1): S43-9.
2）Blakney R, Gudnadottir U, Warrack S, OʼHoro JC, Anderson M, Sethi A, et al.: The relationship between patientfunctional status and environmental contamination byClostridium difficile : a pilot study. Infection 2015; 43: 483-7.
3）Kaatz GW, Gitlin SD, Schaberg DR, Wilson KH, Kauffman
CA, Seo SM, et al.: Acquisition of Clostridium difficile fromthe hospital environment. Am J Epidemiol 1988; 127: 128994.
4）Donskey CJ: Does improving surface cleaning and disinfection reduce health care-associated infections? Am J Infect Control 2013; 41(Suppl 5): S12-9.
5）Carter Y, Barry D: Tacking C. difficile with environmental
cleaning. Nursing Times 2011; 107(36): 22-5.
6）Coates D: Comparison of sodium hypochlorite and sodium
dichloroisocyanurate disinfectants: neutralization by serum. J Hosp Infect 1988; 11: 60-7.
7）社内資料：Testing of medical wipes on a variety of materials. GAMA Healthcare Ltd., 23 April 2009.
8）Russell AD, Ahonkhai I, Rogers DT: Microbiological applications of the inactivation of antibiotics and other antimicrobial agents. J Appl Bacteriol 1979; 46: 207-45.
9）Nakamura S, Yamakawa K, Izumi J, Nakashio S, Nishida S:
Germinability and heat resistance of spores of Clostridium
difficile strains . Microbiol Immunol 1985; 29: 113-8.
10）社内資料：Atmospheric tests on Sporicidal Wipes. Report
number: M433a, Dharmit Mistry-Gama Healthcare Ltd., 5thOctober 2016.
〔連絡先：〒756-0884 山口県山陽小野田市大学通 1-1-1
山陽小野田市立山口東京理科大学薬学部薬学科
治E-mail: oie@rs.socu.ac.jp〕

尾家重

Sporicidal Effects of Excess Liquid from Sporicidal Wipes against Clostridioides Difficile Spores
Shigeharu OIE and Shota MATSUMOTO
Faculty of Pharmaceutical Sciences, Sanyo-onoda City UniversityAbstract
The sporicidal effect of excess liquid from sporicidal wipes was evaluated in comparison to sodium hypochlorite against the spores of three strains of Clostridioides difficile under dirty (3.0 g/L albumin plus 3.0mL/L sheep erythrocytes) conditions. The wipes were soaked in 20 mL distilled water for 4 min. The excess liquid from the soaked wipes was subsequently used in the experiment. Sodium hypochlorite of 0.1% (1,000 ppm) did not exhibit adequate sporicidal activity
even after 10 min of contact, whereas sporicidal wipes killed the spores within 5 min. Our results
suggest that using sporicidal wipes is effective for disinfecting environments contaminated withC. difficile spores.
Key words: Clostridioides difficile , spore, disinfection, sporicidal wipes― 304 ―