環境感染誌

Vol. 33 no. 2, 2018

〈短 報〉

黄色ブドウ球菌に対するクロルヘキシジンおよびオラネキシジンの最小殺菌濃度の検討
中澤靖 1,2）・田村卓 1）・堀誠治 2）

The Minimum Killing Concentrations of Chlorhexidine Gluconate andOlanexidine Gluconate on Clinically Isolated S.aureus Strains
Yasushi NAKAZAWA1,2）, Taku TAMURA1）and Seiji HORI2）
1）
Department of Infection Control, Jikei University Hospital,
2）
Department of Infectious Disease and Infection Control, Jikei University School of Medicine（2017 年 5 月 16 日受付・2017 年 10 月 24 日受理）
要旨
血液ならびに創部から検出された黄色ブドウ球菌に対する Chlorhexidinegluconate（CHG）および Olanexidine gluconate（OLN）の最小殺菌濃度（MKC）を測定した．CHG に対する 50% の株を殺菌する濃度（MKC50）は 0.1250%，90% の株を殺菌する濃度（MKC90）は 0.5000% であった．
OLN では MKC50 は 0.0020%，MKC90 は 0.0156% であった．qac A/B 遺伝子を保有株は 18 株（13.7%）
で，qac A/B の保有による MKC の上昇は認めなかった．OLN は CHG に比し臨床分離黄色ブドウ球菌株に対して低濃度での殺菌効果を示した．
Key words：クロルヘキシジン，オラネキシジン，MRSA，MSSA，最小殺菌濃度

黄色ブドウ球菌は院内感染の原因菌として周知されて株に対する CHG と OLN の消毒効果と，qac A/B 遺伝いるが，プラスミド性の qac A/B 遺伝子等の獲得や染子の保有状況ならびに当該遺伝子保有株の CHG，OLN色体上の遺伝子変異にて，薬剤排出機構を獲得し消毒薬の消毒効果を検討した．に耐性化する事が報告されている１）．Noguchi らは 1998

2015〜2016 年に，東京慈恵会医科大学附属病院にて年から 1999 年に日本で分離された 413 株のうち qac A/血液培養または創部培養から検出された黄色ブドウ球菌

B 遺伝子を有している株は 44.3％ であったと報告して

137 株と標準株 S.aureus JCM 2413 を研究に供した．黄

２）

いる ．

色ブドウ球菌株の内訳は MRSA 73 株（創培養分離株 43

近年，CDC のガイドラインなどを参考にして，日本でも手術術野や血管内留置カテーテル挿入部などの皮膚株，血液培養分離株 30 株），MSSA 64 株（創培養分離株 34 株，血液培養分離株 30 株）である．

gluconate（CHG）が汎用

使用消毒薬は CHG として 20% クロロヘキシジングルされているようになってきた．欧米では以前より感染対コン酸溶液Ⓡ（和光純薬工業），OLN としてオラネジン

策に CHG が使用されているが，日本においては 2〜4％消毒液 1.5%Ⓡ（大塚製薬）を使用した．培地はミューラー

CHG 製剤が使用できず，0.5〜1％ 製剤を使用している

ヒントン液体培地（Becton，Deckenson and Company），現状がある．一方，CHG と同じビグアナイド系殺菌消ⓇSCDLP 培地「ダイゴ」（和光純薬工業）を使用した．

消毒において Chlorhexidine

毒薬である Olanexidine gluconate（OLN）が上市され，消毒薬の細菌学的効果の測定法については，日本化学手術術野を中心に使用されるようになった．本研究では，療法学会標準法に定める微量液体希釈法に，一定時間で近年分離された臨床分離株にて黄色ブドウ球菌臨床分離の消毒効果を検討するために辻や Nogichi らの報告している消毒薬の不活化成分（レシチン，ポリソルベート 80）

1）東京慈恵医科大学附属病院感染対策室，2）
東京慈恵医科大学感染制御科を含んだ液体培地での検査法を組み合わせて検討を行った３，４）．まず黄色ブドウ球菌をミューラーヒントン液体培― 52 ―

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100%80%

60%

40%

20%

0%

CHG conc.(%)<0.00195

0.00195

0.00391<0.00390.007810.00780.015630.0156

0.03125
0.03130.06250.06250.125
0.12500.25
0.25

OLN conc. (%)<0.00100.00200.00390.00780.0156

0.03130.06250.1250>0.1250.5
0.5

䠚0.5>0.5

The open cube (Ƒ) represents MKC of CHG against MRSA isolates, the closed cube (Ŷ) CHG on MSSA, theopen circle (ࠐ) OLN on MRSA and closed circle (Ɣ) OLN on MSSA.
MKC : Minimum killing concentration CHG : Chlorhexidine gluconate OLN : Olanexidine gluconate
Figure 1.

Cumulative MKCs of CHG and OLN against MRSA and MSSA isolates.

地で 24 時間培養し，生理食塩水に懸濁して約 107 CFU/に MKC の差は認めなかった（Fig. 1）．CHG は MRSA

mL の菌を調整した．96 穴のマイクロプレート上に蒸留と MSSA の消毒効果は変わらないという報告があるが６），

水にて CHG 1.0000％〜0.0078%，OLN 0.2500%〜0.0020%

OLN においても同様の結果であった．に 8 段階の濃度希釈系列（50 μL/ウェル）を作成した．

日本においては 0.5%〜1% 濃度の成分の CHG が臨床各ウェルに菌液 50 μL を添加し，室温中に 3 分放置し現場で使用されている．本研究の結果で臨床効果との相た．別途，96 穴のマイクロプレートに消毒薬不活化成

関性を議論することは難しいが，近年分離された創部感分を含んだ SCDLP 液体培地（100 μL/ウェル）を作成

染，菌血症の原因であった黄色ブドウ球菌株に対しては，し，消毒薬と混合した菌液を手動式イノキュレーター
（長CHG は一部の株をのぞき臨床適応濃度以下の MKC を瀬産業）にて約 5 μL 接種した．36℃18〜24 時間培養後示し，OLN についてはすべての株が臨床適応濃度以下

菌の発育を判定し，菌の発育を阻止した薬剤の最小濃度の MKC を示した．
供試した 137 株のうち qac A/B 遺伝子を保有する株（％）をその菌株に対する最小殺菌濃度（Minimum killing４）

concentration：MKC）と定義した ．この方法で測定しは 18 株（13.7%）であった．qac A/B 遺伝子保有株は，た 標 準 株 S. aureus

MRSA において 13 株（17.8%）であったが，MSSA でJCM

2413 の MKC は CHG では 5 株（7.8%）であり，MRSA において保有率は高い

0.2500%，OLN で 0.0020% であった．
また薬剤感受性検査に供した臨床分離株の qac A/B傾向にあった（p=0.084，χ2 検定）．日本では MRSA に遺伝子の保有状況については PCR 法にて確認した．黄

おいて qac A/B 遺伝子の保有率は高い２）．Ho らは MSSA

色ブドウ球菌をミューラーヒントン液体培地にて 36℃に比べて MRSA が qac A 遺伝子を多く保有していたこ

18〜24 時間培養後，95℃ で 5 分間保温した後，その上とを報告している５）．今後も臨床分離株の qac A/B をは

清 1 μL を PCR に供した．プライマーは Ho らのを用いじめとする様々な耐性遺伝子の保有率の監視が必要であた５）．95℃1 分 間，55℃1 分 間，72℃1 分 間 で 30 サ イ クると考えられた．

qac A/B 保有株の CHG および OLN に対する MKC50

ル増幅し，電気泳動し，特異的 DNA の増幅産物の有無をエチジウムブロマイド染色し，確認した．

および MKC90 は非保有株のそれと比べて大差なかった供試した黄色ブドウ球菌株の 50% を殺菌する CHG 濃（Table 1）．qac A/B 遺伝子の保有によって CHG およ度（MKC50）は 0.1250%，90% の 株 を 殺 菌 す る 濃 度

び OLN の MKC が高くなる傾向は認めず，薬剤排出ポ（MKC90）は 0.5000% であった．OLN の MKC50 は 0.0020%，ンプ機構が存在したとしてもその細菌学的なインパクト

MKC90 は 0.0156% であった．MRSA，MSSA 株共に CHGは大きくないと考えられた．に比べ OLN は低い MKC であったが，MRSA と MSSA
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今回使用した黄色ブドウ球菌株は創部感染や菌血症由環境感染誌

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Table 1.

Minimum killing concentrations of chlorhexidine gluconate and olanexidine gluconate
against S. aureus isolates.
CHG

nS. aureus
MRSA

MSSA

total
total
qac A/B positive
qac A/B negative
total
qac A/B positive
qac A/B negative

137
73
1360
64
559

OLN

MKC50

MKC90

MKC50

MKC900.1250
0.03130.03130.03130.25000.25000.25000.50000.25000.2500
0.25000.50000.25001.00000.00200.00390.00390.00200.00200.00200.00200.01560.01560.00390.01560.00390.00310.0039

MKC: Minimum killing concentration
CHG: Chlorhexidine gluconate
OLN: Olanexidine gluconate

during 1998 and 1999. J Med MKCrobiol 2005; 54: 557-65.
3）成井浩二，野口雅久，笹津備規：中和剤を用いた改良最小発育阻止濃度測定法による消毒薬耐性黄色ブドウ球菌の消毒薬感受性の評価．医療薬学 2003; 29: 279-86.
4）辻 明良：感染制御のための消毒の基礎知識，ヴァンメディ
カル，東京，2009. p. 81-5.
5）Ho CM, Li CY, Ho MW, Lin CY, Liu SH, Lu JJ: High rateof qac A- and qac B-positive methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates from chlorhexidine-impregnatedcatheter-related bloodstream infections. AntiMKCrob
Agents Chemother 2012; 56: 5693-7.
6）国定孝夫，山田恵子，織田志保美，原修：MRSA に対する各種消毒剤の殺菌効果．環境感染 1999; 14: 142-7.
7）Inoue Y, Hagi A, Nii T, Tsubotani Y, Nakata H, Iwata K:
Novel antiseptic compound OPB-2045G shows potent bactericidal activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus and vancomycin-resistant Enterococcus both invitro and in vivo: a pilot study in animals. J Med
MKCrobiol 2015; 64: 32-6.
8）Hagi A, Iwata K, Nii T, Nakata H, Tsubotani Y, Inoue Y:Bactericidal Effects and Mechanism of Action of Olanexidine Gluconate, a New Antiseptic. AntiMKCrob Agents
Chemother 2015; 59: 4551-9.

来であり，比較的病原性が高いと考えられる．それらの株に対して OLN は CHG に比し高い消毒効果を示し，有効性が期待できる．Inoue らの報告でも OLN は MRSAにおいて 1〜3 分の接触時間で CHG に比べ高い消毒効果を認めている７）．Hagi らは CHG とは違う作用メカニズムの存在を示唆している８）．OLN は現在アルコール無添加製剤として実臨床に供されているが，アルコールア
レルギーや手術室での引火事故の防止につながる消毒薬としても期待される．今後，多施設で分離された菌株を使用した更なる研究が必要である．
本研究は東京慈恵会医科大学倫理委員会の承認（28-1508393）を得て実施した．
利益相反自己申告：申告すべきものなし．

文献1）笹津備規：黄色ブドウ球菌の消毒剤耐性．日本細菌学雑誌
1996; 51: 755-65.
2）Noguchi N, Suwa J, Narui K, Sasatsu M, Ito T, Hiramatsu
K, et al.: Susceptibilities to antiseptic agents and distribution of antiseptic-resistance genes qac A/B and smr ofmethicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated in Asia

〔連絡先：〒105-8461 東京都港区西新橋 3-25-8
東京慈恵医科大学附属病院感染対策室
E-mail: ynakazawa@jikei.ac.jp〕― 54 ―中澤靖環境感染誌

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The Minimum Killing Concentrations of Chlorhexidine Gluconate andOlanexidine Gluconate on Clinically Isolated S.aureus Strains
Yasushi NAKAZAWA1,2）, Taku TAMURA1）and Seiji HORI2）
1）
Department of Infection Control, Jikei University Hospital,
2）Department of Infectious Disease and Infection Control, Jikei University School of Medicine

Abstract
We investigated the minimum killing concentrations of chlorhexidine gluconate (CHG) andolanexidine gluconate (OLN) on clinically isolated Staphylococcus aureus strains. The concentration of CHG that inhibited growth of 50% of S. aureus strains (MKC50) was 0.1250%; the concentration that inhibited growth of 90% strain (MKC90) was 0.5000%. For OLN, MKC50 was 0.0020%
and MKC90 was 0.0156%. Of the 137 strains, 18 strains (13.7%) had the qacA /B gene, the increase
in MKC by holdings qacA /B was not observed. OLN showed bactericidal effect at low concentration compared with CHG.
Key words: chlorhexidine, olanexidine, MRSA, MSSA

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