馬インフルエンザ
Equine Inﬂuenza

公益社団法人 中央畜産会

第４版

目 次
発刊にあたって …………………………………………………………………… 1
要約 …………………………………………………………………………………… 2
Ⅰ．病原体

3

1. 形態
2. インフルエンザウイルスの分類
1）科・属・種2）亜型および株
3. 馬インフルエンザウイルスの分類
1）H7N72）H3N8

Ⅱ．疫学

4

1. 世界での流行
2. 日本での流行
1）1971 年〜 1972 年の流行
2）2007 年〜 2008 年の流行
(1) 発生概況(2) 防疫対応(3) 疫学(4) 分離ウイルスの性状(5) 馬インフルエンザワクチンの効果

Ⅲ．ウイルスの変異とワクチン株の変更

11

Ⅳ．発症病理

12

Ⅴ．臨床

13

1. 症状
2. 治療

Ⅵ．診断

14

1. 臨床診断2. 病原学的診断
1）ウイルス分離
2）RT-PCR 法
3）簡易検査キット
3. 血清学的診断

主な参考文献 ……………………………………………………………………… 20
おわりに …………………………………………………………………………… 20

発刊にあたって

馬インフルエンザは、インフルエンザウイルス感染によって起こる著しく伝染性の強い急性呼吸器感染症です。我が国では、輸入馬が感染源となり、1971 年に大きな流行が発生した後、36 年間本病の発生は認められませんでしたが、2007
年に競走馬で突発的な大流行が起こり、競馬開催中止を余儀なくされました。その後の調査で、2007 年の流行極期（8 月 15 日〜 9 月 3 日）における発生率（12.8％）は、1971 年の流行極期の発生率（97.0％）と比較すると極めて低く、ワクチン接種が感染防御に有効であり、改めてその重要性が認識されました。また、2007 年の大流行においては、予防接種の徹底、馬の移動前及び到着地の検査等の徹底等
により、発生から最終確認までにわずか 3 か月で発生が見られなくなり、2009 年
7 月 1 日付けで国内清浄化宣言がされました。しかしながら、1971 年の流行より発生割合が低かったとはいえ、全国的に短時間で、発生が拡大したことから、馬
インフルエンザウイルスの急速で強力な伝染力には、十分な注意と対応が必要であり、馬飼育関係者全体が一丸となって本病の防疫対策を構築し、維持していくことが不可欠です。
今後、さらに競走馬の国際交流等、国際化が進展していく中で、ヨーロッパ諸国と米国では本病が地方病として常在化している状況の下では、これらの国から輸出された馬が感染源となり、本病が常在していないアジアやアフリカ諸国でも、これまで一部で見られたような大きな流行を起こすことも懸念されます。特に、我が国のような本病の清浄国においては、輸入検疫により感染馬の侵入を未然に防ぐことに加え、これまでの発生・防疫経験を踏まえながら、本病の早期発見、馬の移動禁
止を含む迅速な防疫措置を講じることが重要です。特に、防疫上の観点から馬に対しては、これまでと同様にワクチン接種を実施することにより免疫力を付与させておくことが最も大切です。
本冊子は、2012 年の改訂版（第 3 版）を基に、新しい知見を加えた内容となっております。本冊子を積極的に御活用いただき、馬インフルエンザの更なる理解と防疫のための一助となれば幸甚です。

令和元年 12 月
公益社団法人 中央畜産会

1

要 約

馬インフルエンザは、A 型インフルエンザウを検出する、あるいは急性期および回復期の組

イルスに分類される馬インフルエンザウイルス

血清間における EIV に対する特異抗体の増加を（EIV）の感染によって起こる馬の急性呼吸器疾

血清学的に確認する必要がある。しかし、EIV患の総称である。その感染様式は、飛沫およびの著しく速い伝染性を考慮すると、後者の血清

エアロゾル感染であり、著しく伝染力が強く、学的試験による方法は、EIV の拡散防止を目的

短時間の内に多数の馬が感染する。そのため、とした隔離などの防疫対応には間に合わない。

集約的に飼養管理されている競走馬のような群

したがって、前者の鼻腔スワブまたは鼻咽頭ス

れに、ウイルスが侵入した場合には、競馬開催

ワブ中の EIV の検出を迅速に行うことが、防疫の中止をも含む極めて大きな被害が発生する。

上求められる。現在では、臨床現場で迅速に実A 型インフルエンザウイルスは、エンベロー

施可能な簡易検査キットが市販されている。まプ表面のスパイク蛋白質であるヘマグルチニ

た、ある程度の時間や特殊機器が必要であるが、ン（HA）およびノイラミニダーゼ（NA）の抗検出感度に優れる遺伝子診断法も有用であり、原性状により、2019 年 8 月現在 HA は 18 亜

発育鶏卵などによるウイルス分離と併用するこ型、NA は 11 亜型に分類される。これまでのとにより、流行ウイルス株の詳細な情報が得らところ、馬から分離された A 型インフルエンザれる。

ウイルス（すなわち、EIV）の亜型は、H7N7

馬インフルエンザの予防の柱は、不活化ワ

あるいは H3N8 に分類されている。H7N7 は、クチンの接種による抗体の賦与である。1 歳時

1956 年にチェコスロバキアで初めてウイルスの 1 月から 3 月に 4 週間以上の間隔を空けてが分離され、以降、世界各地で流行を引き起こ

2 回の基礎接種免疫後、5 月から 6 月に初回補した。しかしながら、最後のウイルス分離の記

強接種、その後半年間隔の補強接種が推奨され録は 1978 年であり、現在では世界の馬群からる。不活化ワクチンの予防効果は、含まれてい消失したと考えられている。一方、H3N8 は、るワクチン株と流行ウイルス株との抗原性の差

1963 年に米国で分離されたのが最初であり、異により影響を受ける。そこで、毎年、主に国わずかな例外（アイスランドおよびニュージー

際獣疫事務局（OIE）のリファレンスラボラト

ランドなど）を除き、世界中の馬群の間で流行リーで構成される Expert Surveillance Panelを引き起こし、現在も流行し続けている。臨床on Equine Inﬂuenza において最新の流行ウイ症状は、両亜型ともに、発熱を伴う咳嗽およびルスの抗原性状を解析し、推奨ワクチン株を公鼻漏などであるが、H3N8 の方が H7N7 より表している。日本からも著者らのグループが参も重篤とされている。

加し、最新の疫学情報を収集し、そのあとに行馬インフルエンザの臨床症状は、他の馬の呼われる農林水産省動物医薬品検査所の「動物用吸器疾病（馬鼻肺炎や馬ウイルス性動脈炎など）

インフルエンザワクチン国内製造用株選定委員と類似している。したがって、確定診断のため会」において、日本製不活化ワクチン株選定のには、ウイルス学的、または分子生物学的手法

議論に参加している。

によって、鼻腔スワブや鼻咽頭スワブから EIV

2

Ⅰ 病原体れる。また、少数ではあるが、マトリクス（M）

1. 形態

2 と呼ばれる蛋白質もエンベロープ表面に存在
A 型インフルエンザウイルスの粒子は、概する。エンベロープの内部は、M1 蛋白質で裏ね球形で直径が約 80 〜 120nm であり、宿主打ちされている。ウイルスの遺伝子は、マイナとなる細胞から獲得したエンベロープを有する

ス鎖の一本鎖 RNA であり、8 つの分節に分か（図 1）。しかし、分離後の継代数が少ない新鮮

れている（図 2）。

な株の場合は、糸状を呈することもある。エン
ベロープの表面には、約 10nm の 2 種類のスパ

2. インフルエンザウイルスの分類

イク蛋白質が存在し、それぞれヘマグルチニン（HA）およびノイラミニダーゼ（NA）と呼ば

1）科・属・種
一般にインフルエンザウイルスとは、オルソ
ミクソウイルス科の A 型、B 型、C 型および D型のことを指す。現在のところ、B 型は人とア
ザラシ、C 型は人と豚に感染するとされる。D型は 2011 年に米国において、呼吸器症状を示した豚から初めて検出された新しいウイルスであり、牛の呼吸器病症候群を引き起こす原因であることも明らかとなってきている。一方、A型インフルエンザウイルスは人、馬、犬、豚、
海獣および鳥類などの様々な動物から分離されており、医学および獣医学共通の病原体として

図1

馬インフルエンザウイルスの粒子

扱われている。

NA
HA

M1

NP

PB2 PB1 PA

M2

NP
1

2

3

4

5

6

図2

7

8

NS1
and
NS2

1. PB2
2. PB1
3種類のポリメラーゼ
3. PA
4. HA
（血球凝集素）5. NP（核蛋白質）
6. NA（ノイラミニダーゼ）
7. M（マトリクス）→スプライシングを受け、M1とM2の2つの蛋白質が合成される。
8. NS（非構造蛋白質）→スプライシングを受け、NS1とNS2の2つの蛋白質が合成される。

A 型インフルエンザウイルス粒子の模式図

Webster et al. (1992) Evolution and ecology of inﬂuenza A viruses. Microbiol. Rev. から引用した。

32）亜型および株で呼吸器病が流行した際に、馬から分離された

A 型インフルエンザウイルス種は、さらにエも の（A/equine/Prague/1/1956） が 最 初 のンベロープ表面のスパイク蛋白質の抗原性によ分離株である。それ以降、世界中の様々な地域

り、2019 年 8 月 現 在 HA は 18 亜 型、NA は（国）で分離されているが、1960 年代後半から

11 亜型に分類される。HA および NA の全て

1970 年代にかけて、H7N7 の流行は減り、ウの亜型は、野生水禽の腸管内に保存されている

イルス分離の最終報告は 1978 年となっている。

と考えられており、あるとき、家禽類や哺乳動このことから、現在では、H7N7 は馬から消滅

物に伝播し、それ以降、それぞれの動物種内でしたのであろうと考えられている。

流行すると考えられている。
また、A 型インフルエンザウイルス種の場

2）H3N8合、同一の亜型であっても変異が生じているこ

H3N8 は、1963 年に米国で初めて分離されとが多いので、分離されたウイルス株は、A/

た（A/equine/Miami/1/1963）。 そ れ 以 降、equine/Ibaraki/1/2007（H3N8）のように型、

H3N8 は瞬く間に北米大陸や欧州の馬の間に伝分離元の動物、分離場所、分離された順番、分

播し、わずかな例外（アイスランドおよびニュー

離年（亜型）のように表記される。

ジーランド）を除いて、世界中の馬群の間で流行を引き起こし、現在も流行し続けている。

3. 馬インフルエンザウイルスの分類

また、1989 年に中国において、約 30,000
頭の馬が H3N8 に感染し、それらの内、数百馬インフルエンザウイルス（EIV）とは、馬頭が死亡したことが報告されている。その流行から分離されたインフルエンザウイルスという分 離 株（A/equine/Jilin/1/1989） の 抗 原 性意味である。これまでのところ、馬からは、A状および遺伝子学的性状の解析によると、先型インフルエンザウイルス種のうち、H7N7 とに示した A/equine/Miami/1/1963 由来の株

H3N8 の 2 つの亜型が分離されている。これら

ではなく、流行の直近に鳥類から馬に伝播し

2 つの亜型は、古くは馬 1 型および馬 2 型と呼た H3N8 であることが明らかとなっている。

ばれていたが、「型」という表現が「A 型」のさ ら に 興 味 深 い こ と に、 こ の 鳥 類 由 来 の A/型と混同しやすいことから、現在はあまり使用

equine/Jilin/1/1989 の馬での流行時には、呼されない表現になっている。

吸器症状のほかに腸炎を示した馬が報告されている。幸い、本ウイルス株の流行は、1989 年

1）H7N7
H7N7 は 1956 年にチェコスロバキアの馬群以後報告されておらず、馬からは消滅したと考
えられる。

Ⅱ 疫 学
1. 世界での流行由来の H3N8 の歴史および疫学について記述する。図 3 に EIV H3N8 亜型の HA 遺伝子の塩

前 述 の と お り、 現 時 点（2019 年 ） に お い

基配列に基づく系統樹解析の結果を記す。本章て、 馬 の 防 疫 上 注 目 す べ き は、A/equine/を読む際には、図 3 の系統樹を参照しながら読Miami/1/1963 由来の H3N8 ウイルスの流行むと理解しやすいと思われる。

である。このことから、本章では同ウイルス株4

米国フロリダ州において初めて分離されたA/equine/Miami/1/1963 は、 ア ル ゼ ン チ ン

1982 年以降は H3N8 ウイルスの流行が、北米から移動してきた馬により米国に持ち込まれたおよび欧州の馬群で、風土病的に発生するようと考えられている。1964 年および 1965 年にになった。

は、南北アメリカ大陸だけでなく欧州において

1987 年頃になると、北米あるいは欧州で分も、その流行が報告され、パンデミック（世界離されるウイルス株の遺伝子および抗原性状

規模の汎発的な流行）ともいえる流行の拡大がが、変化してきていることが明らかとなってきみられた。1960 年代後半に入ると、不活化ワた。前者はアメリカ系統株、後者はヨーロッパ

クチンが普及したことにより、流行の頻度は減系統株（あるいはユーラシア系統株）と呼ばれ少し、1978 年頃までは散発的なものにとどまっている。これら両系統は、当初は名前の通り、た。この時期に、ワクチン効果についての監視

地理的な住み分けがなされてきた。しかし、国体制が整備されなかったことが、1979 年以降

際的な馬の移動が盛んになるに伴い、アメリカの抗原変異ウイルスの出現と、その後の北米お系統株が欧州でも分離されるようになり、欧州

よび欧州での流行の定着を引き起こしたともい

では両方の系統が混在して流行する時期が続いわれている。A/equine/Fontainebleau/1979

た。一方、ヨーロッパ系統株は南北アメリカ大や A/equine/Kentucky/1981 が、その当時の陸ではほとんど分離されていない。その後、ヨー抗原変異株の代表的なものとして有名である。

ロッパ系統株は、2000 年頃より分離されるこEPI1398819 A/equine/Tipperary/1/2019

㻥㻥 MK501760.1 A/equine/Paris/1/2018

EPI1355455 A/equine/Essex/1/2019
MH346720.1 A/equine/Santiago/TT11A/2018
㻥㻝
EPI1341560 A/equine/Argentina/E200-1/2018
㻤㻢 MH347079.1 A/equine/Concepcion/RO7C/2018

LC269107.1 A/equine/Yokohama/aq100/2017
MF173262.1 A/equine/New York/135857/2016
MH135223.1 A/equine/Malaysia/1/2015
㻤㻞KR351217.1 A/equine/Tennessee/4A/2014
㻥㻥
AB727555.1 A/equine/Yokohama/aq5/2011
㻥㻝AB544410.1 A/equine/Yokohama/aq19/2009
LC369072.1 A/equine/Ibaraki/1/2007
㻤㻡GU447312.1 A/equine/South Africa/4/2003
DQ124192.1 A/equine/Ohio/1/2003
FJ375213.1 A/equine/Newmarket/5/2003
FJ888344.1 A/equine/Katra-Jammu/6/2008
FJ195395.3 A/equine/Richmond/1/2007
㻤㻢MK215821.1 A/equine/China/Hubei/2015㻥㻥 㻥㻤 KF712451.1 A/equine/South Kazakhstan/236/2012
JX549063.1 A/equine/Mongolia/20/2011
㻝㻜㻜
AB761396.1 A/equine/Yokohama/aq6/2012
LC369080.1 A/equine/Yokohama/aq13/2010
KF026389.1 A/equine/Devon/1/2011
㻤㻥KC871546.1 A/equine/Carlow/2011
㻥㻥㻤㻢
MG586804.1 A/equine/Meath/1/2014
㻥㻥 MG586815.1 A/equine/Kilkenny/1/2015
AY855341.1 A/equine/Kentucky/5/2002
AF197249.1 A/equine/Kentucky/1/1997
FN400711.1 A/equine/Newmarket/1/1993
㻥㻥AF197241.1 A/equine/Kentucky/1/1998
㻥㻣 L39914.1 A/equine/Kentucky/1/94
CY030173.1 A/equine/Kentucky/1/1991
㻝㻜㻜
D30686.1 A/equine/LaPlata/1/1993
X68437.1 A/equine/Suffolk/89
L27597.1 A/equine/Hong Kong/1/1992
㻝㻜㻜㻥㻤 Y14057.1 A/equine/Avesta/1993
CY028828.1 A/equine/Kentucky/1/1981
CY032405.1 A/equine/Fontainbleu/1/1979
CY096915.1 A/equine/Tokyo/2/1971
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CY028836.1 A/equine/Miami/1/1963
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図3

馬インフルエンザウイルス H3N8 の HA 遺伝子の系統樹
最尤法にて作成し、ブートストラップ 1000 回を行ったものである。
●は 2019 年現在の日本のワクチン株（クレード 1 の A/equine/Ibaraki/1/2007 とクレード 2 の A/equine/Yokohama/aq13/2010）。
〇は 2019 年の OIE 推奨株（クレード 1 の A/equine/South Africa/4/2003 もしくは A/equine/Ohio/1/2003 と、クレード 2 の A/equine/
Richmond/1/2007）。
A/equine/Tipperary/1/2019（EPI1398819）, A/equine/Essex/1/2019（EPI1355455） お よ び A/equine/Argentina/E200-1/2018（EPI1341560）は GISAID（https://www.gisaid.org/）から、他のウイルス株については NCBI Nucleotide（https://www.ncbi.nlm.
nih.gov/nucleotide/）から遺伝子情報を取得した。

5

とが少なくなり、2007 年のスイスでの分離が

2. 日本での流行最後の記録となっている。
一方、アメリカ系統株は 1990 年代後半から、さらに 3 つの亜系統（ケンタッキー、アルゼン

1971 年 11 月 19 日、ニュージーランドから

チンおよびフロリダ）へ分岐・進化しているこ

乗用馬 4 頭と重種馬 1 頭が輸入され、動物検疫とが報告されるようになった。この中でも特に、所（横浜）での 14 日間の輸入検疫終了後、12フロリダ亜系統の分布拡大の勢いは強く、数株

月 3 日に東京都（2 頭）、青森県（2 頭）、福島を除き、2000 年頃からは北米では主にこの亜県（1 頭）にそれぞれ導入された。これら 5 頭系統のみが分離されるようになった。

はそれぞれの導入先で、導入直後から発熱、激2003 年 3 月から 5 月にかけて、
英国のニューしい咳、鼻汁漏出を伴う感冒様症状を呈しておマーケットで、大規模な流行が発生した。分離

り、これらが感染源と推察されている。しかし、ウイルス株（A/equine/Newmarket/5/2003）

当時ニュージーランドは馬インフルエンザの清の遺伝子解析から、前年（2002 年）に米国で浄国とみなされていたことや、検疫期間中に他分離されたフロリダ亜系統株である A/equine/

国から輸入された 22 頭の馬が同一施設内に係

Kentucky/5/2002 と非常に近縁であることが留されていたことから、ウイルスはニュージー

判明し、米国から移動してきた馬によってウイランド以外の国から侵入した可能性が指摘されルスが侵入したと考えられた。この流行が、欧ている。

州における最初のフロリダ亜系統株によるもの

その後、感染馬の移動により、初発の 12 月

で あ る と さ れ て い る。 こ れ 以 降、A/equine/

4 日から僅か 39 日の間に、青森県、福島県、Newmarket/5/2003 由来のウイルス株は、す

新潟県、埼玉県、千葉県、東京都、神奈川県、

ぐさま欧州大陸に渡り、その後、イタリアやク

大阪府、広島県の 1 都 1 府 7 県 26 ヶ所の競馬

ロアチアなどでの流行を経て、約 5 年後には中場あるいは乗馬クラブにおいて、合計 6,782 頭国やインドにまで達した。一方、2003 年以降が感染し、そのほとんどが発症した（図 4）。最の北米大陸においても、フロリダ亜系統株は分

終発生は翌年 1 月 11 日であった。この流行に離され続け、2007 年には、日本（詳細は後述）

より、中央競馬では 1971 年 12 月の 6 回中山

や豪州にも伝播・流行した。この主に北米大陸

競馬第 7・8 日から 1972 年の 1・ 2 回東京競で流行しているフロリダ亜系統株はクレード 1

馬の全日程の延べ 9 週にわたり、関東地方でのと呼ばれている。一方、欧州からユーラシア大

開催中止という事態に陥った。

陸で流行しているフロリダ亜系統株はクレード
2 と呼ばれている。

図 5 に馬事公苑、東京競馬場、中山競馬場
における発生状況を示した。馬事公苑の初発は

しかし 2019 年、クレード 1 が欧州各地で大12 月 15 日であり、12 月 20 日までの 6 日間

流行（A/equine/Essex/1/2019 等）し、
クレーに 171 頭中 168 頭が発症した。東京競馬場の

ド 2 が検出されなくなった。イギリスでは EIV

初発は 12 月 17 日であり、12 月 21 日〜 22 日の流行によって、2019 年 2 月、6 日間競馬開をピークとして、12 月 26 日までの 10 日間に催が中止された。欧州で検出されたウイルスと963 頭中 957 頭が発症した。中山競馬場の初発

近 縁 な ク レ ー ド 1 は、 南 米 チ リ（A/equine/は 12 月 21 日であり、12 月 24 日をピークとConcepcion/RO7C/2018） や ア ル ゼ ン チ ン

して、翌年 1 月 1 日までの 12 日間に 721 頭中（A/equine/Argentina/E200-1/2018）でも流671 頭が発症した。当時はワクチン接種が行わ行しており、クレード 1 が世界的に流行していれていなかったため、いずれの馬群においてもる。今後の流行状況を引き続き注視していく必

ほとんどの馬が感染し、発症した。

要がある。

6

1）1971 年〜 1972 年の流行

競馬場間あるいは競馬場と生産地間などの人

馬の移動禁止措置、徹底した消毒、非発生地域

関西地区の競馬場、生産地の牧場などへの感染における緊急のワクチン接種などを主体とした拡大は阻止された。

防疫対策により、栗東トレーニング・センター、

36

580

50

9都府県 6,372頭
523
2,027
1,221
642

667
626

図4

（頭数は発症馬頭数である。）

1971 年〜 1972 年における馬インフルエンザの発生状況

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ᝈ㤿䛾᭱ึ䛾Ⓨ⏕䛛䜙䛾⤒㐣
図51971 年 12 月に発生した中山競馬場、東京競馬場および馬事公苑における馬インフルエンザの流行＊：分母は在厩馬頭数、分子は発症馬頭数、（ ）は感染率を示す。
（秋山ら 日本中央競馬会競走馬保健研究所報告 1972, 9:10-28 より引用し、改変した。
）

7

2）2007 年〜 2008 年の流行

日の中央競馬（札幌・新潟・小倉）は開催中止（1）発生概況となった。

2007 年 8 月 1 日〜 15 日の間、JRA 美浦トレー

全国の地方競馬場においては、8 月 16 日のニング・センター在厩馬 1,700 頭のうち、例年

旭川競馬場における発生の確認から 11 月 26

より多い 36 頭に発熱・発咳・鼻漏の症状が認日の佐賀競馬場における最終確認まで、およそめられた。このため、8 月 15 日に発熱した競3 ヶ月にわたり発生が継続した。最終的に 15

走馬 1 頭に対し、後述する人用インフルエンザ

主催者中 11 主催者で陽性馬が確認され、このウイルス診断キット（エスプライン ® インフルうち 7 主催者において延べ 25 日間の開催中止

エンザ A&B-N, 富士レビオ）による簡易検査を余儀なくされた。発生が認められなかったのを試みたところ、陽性反応を示した。また、こは、帯広（ばんえい）、福山、高知および荒尾の材料を用いて、JRA 競走馬総合研究所栃木支の 4 競馬場のみであった。

所（当時）において実施した遺伝子検査でも陽10 月 5 日〜 9 日の日程で秋田県仙北市にお性が確認された。同日中に栗東トレーニング・

いて開催予定であった「秋田わか杉国体」の馬センターでも陽性馬が確認され、翌日（8 月 16

術競技会では、移動前および到着後の簡易検査日）には両トレーニング・センター、札幌・函館・で全ての参加馬の陰性を確認していた。しかし、新潟および小倉競馬場において、計 68 頭の競

10 月 5 日に 2 頭で 陽性が確認されたため、改走馬が発熱し、そのうち 37 頭が簡易検査で陽めて参加馬全頭に対して簡易検査を実施したと性となった。発熱馬頭数は 17 日には 75 頭にころ、さらに 4 頭で陽性が確認された。その後増加し、18 日に 96 頭のピークに達したが、そも発生が継続したため、10 月 8 日以降の競技の後は急速に減少し、9 月以降は例年と同程度は全て中止された。最終的には参加馬 170 頭中に落ち着いた。発熱馬のうち簡易検査で陽性と37 頭で陽性が確認された。

なった頭数も、18 日の 38 頭をピークに、そのその後も、生産地、JRA、地方競馬、乗馬関後は急速に減少し、8 月 27 日には一旦沈静化

連施設において散発的な発生を繰り返しながらした（図 6）。この流行により 8 月 18 日・19

徐々に沈静化し、2008 年 7 月 1 日の北海道で

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

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図682007 年 8 月における新規発熱馬頭数の推移および簡易検査結果の内訳

の発生が国内における最終発生となった。最終

その後は陽性馬を隔離厩舎に収容し、調教時間

的に、農林水産省消費・安全局動物衛生課には、を分けるなどの防疫措置を講じたことで、流行

33 都道府県 2,512 頭（疑症も含む）の発生がは徐々に沈静化した。

届 け 出 ら れ た（ 図 7）。1971 年 〜 1972 年 の9 月 4 日より JRA 施設内外への入退厩を限定

流行当時と比較すると、輸送競馬が主体となる的に再開し、全ての入退厩馬に対して簡易検査など馬の輸送頻度が激増しており、このようなを実施した。しかし、トレーニング・センター

移動形態によって短期間内に国内全域に感染がで は、 そ の 後 も 2007 年 11 月、2008 年 1 月

拡大したものと考えられた。最終発生後も全国

および 3 月に小流行が確認された。感染馬の完規模の疫学調査を継続した結果、最終発生から全な摘発が困難であった理由としては、①感染

1 年間にわたり発生が確認されなかったことか

直後の潜伏期には感染馬からウイルスが排泄さら、農林水産省は OIE に対し、2009 年 7 月 1

れないこと、②感染初期などのウイルス排泄量

日付で国内清浄化を宣言した。

が少ない場合には、簡易検査のウイルス検出感度に限界があることなどが挙げられる。このよ
うな限界があるものの、2007 年の流行では、（2）防疫対応JRA で は 発 生 確 認 直 後 の 8 月 16 日 よ り、

簡易検査の導入により、現場における迅速な診JRA 施設外へのまん延防止のため、施設外への断が可能となった。この結果、早い段階で適切馬の移動を全面的に禁止した。また、施設内にな防疫措置を講じることが可能となり、競馬開おける消毒作業を強化すると同時に、入退場門

催への影響を最小限に留めることができた。

における車両などの消毒を徹底した。発生直後（3）疫学

は、厩舎地区全域で同時多発的に感染馬が摘発され、隔離施設の収容能力を超過したため、一流行極期（8 月 15 日〜 9 月 3 日）における時的に隔離措置が困難な状況となった。しかし、

JRA 施設内での発症率（在厩馬頭数 4,142 頭

303

37
150

6
3

13

127

2

13
3
133

2

4

23
125

16
6

102
3

50
246

1
90

22

17

201

301
170

174
125

33都道府県 2,512頭（届出頭数には疑症を含む。）

2

40
2

図7

2007 年〜 2008 年における馬インフルエンザの発生届出状況
9に対する発熱馬頭数 531 頭の割合）は、12.8%に国内で分離された12株については、HA遺伝であった。この発症率は、1971 年の流行極期

子の塩基配列は全て一致しており、A/equine/の発症率（97.0%）と比較すると極めて低く、

Ibaraki/1/2007株から変異した兆候は認めら

不活化ワクチンが感染防御に有効であることがれなかった。

改めて示された。また、発症馬の治癒までの平均期間も 1.6 ± 0.9 日と、1971 年の流行時の平均 5 日から大幅に短縮され、症状の軽減にも効果的であった。

（5）馬インフルエンザワクチンの効果
2007 年〜 2008 年の流行前に国内で流通していた馬インフルエンザ不活化ワクチンには、ア

一方、JRA 施設内の流行状況を把握するた

メ リ カ 系 統 株（A/equine/La Plata/1993） とめ の 疫 学 調 査 と し て、8 月 16 日・17 日 に 臨

ヨ ー ロ ッ パ 系 統 株（A/equine/Avesta/1993）

床的に健康な馬に対して実施した簡易検査でが含まれていたが、今回の流行の原因となったは、967 頭 中 188 頭（19.4%） が 陽 性 で あ っフロリダ亜系統株は含まれていなかった。流た。この疫学調査から、すでにこの時点で施設行前に接種していたワクチンの流行ウイルスに全体にウイルスがまん延していることが明らか

対する効果を評価するため、年 2 回定期的にとなった。ワクチン接種馬群では、このようにワクチンを接種している 4 歳馬の 2006 年秋

感染しても典型的な症状を示さない不顕性感染の 保 存 血 清 を 用 い、 ワ ク チ ン 株（A/equine/

馬が存在することから、感染を制御するには簡

La Plata/1993） と 今 回 分 離 さ れ た 株（A/易検査などのウイルス検査が必須となる。今回

equine/Ibaraki/1/2007） に 対 す る 血 球 凝の流行の感染源は特定されていないが、不顕性

集 抑 制（HI） 抗 体 価 を 測 定 し た。 こ の 結 果、感染馬が検疫網をくぐり抜けた可能性も指摘さ

A/equine/La Plata/1993 株 に 対 す る 抗 体

れている。

価 は 1:93.2 で あ っ た の に 対 し、A/equine/
Ibaraki/1/07 に対しても 1:63.5 と高い交差性（4）分離ウイルスの性状10が認められた。このことから、流行前に接種し2007年8月および9月に採取された競走ていたワクチンでも、今回流行したフロリダ亜

馬の鼻腔スワブから、4株（A/equine/

系統ウイルスに対して、一定の防御効果が発揮

Ibaraki/1/2007, A/equine/Ibaraki/2/2007,

され、このことが低い発症率（12.8%）に留まっ

A/equine/Shiga/1/2007, A/equine/

た要因と推察された。

Kitakyushu/1/2007）が分離された。分

1992 年 に 香 港 の シ ャ テ ィ ン 競 馬 場 に お い

離された4株のHA遺伝子は、フロリダ亜ても、ワクチン接種馬群での大規模な流行が系統クレード1に分類されるA/equine/

あった。しかし、当時の香港で接種されていWisconsin/1/2003（H3N8）と最も高い相た ワ ク チ ン に 含 ま れ て い た 株（A/equine/

同性（99.3%）を示した。また、NA遺伝子のMiami/1963・A/equine/Kentucky/1981）

塩基配列も、A/equine/Wisconsin/1/2003

は、実際の流行ウイルス株（A/equine/Hongの配列と最も高い相同性（99.0%）を示した。

Kong/1992）との交差性が低く、結果として

さらに、HA1遺伝子の塩基配列について系統

在厩馬の 37% が発症した。当時の調査では、樹解析を実施したところ、分離された4株は全流行株に対する HI 抗体価が＜ 1:20 であればてフロリダ亜系統クレード1に分類されている

66.7%、1:20 〜 1:40 であれば 38.5%、＞ 1:40

株と同じクラスターに含まれていた。これらの〜 1:80 であれば 10.7% がそれぞれ発症し、＞ことから、2007年に日本で流行を引き起こし

1:80 では発症馬はいなかったと報告されていたウイルスは、フロリダ亜系統クレード1株でる。2007 年の日本における流行でも、概ね同あることが明らかとなった。2007年〜2008年

様の傾向がみられた。

Ⅲ ウイルスの変異とワクチン株の変更
ワクチン接種による予防は、EIV の防疫対応について調査し、必要に応じてワクチンに含めの中心である。日本製ワクチンは、ホルマリンるウイルス株を変更する必要がある。日本では、により不活化した全粒子ワクチンである。この1972 年の使用開始からこれまでに 5 回、株の不活化されたウイルス粒子を皮下（筋肉内）に組成が変更されてきた（表 2）。日本の場合、注射することにより、馬体内でウイルスに対す

1971 年 〜 1972 年 お よ び 2007 年 〜 2008 年

る中和抗体を産生させる。1 歳時の 1 月から 3の 2 回、EIV の流行を経験してきたが、現在は月に 4 週間以上の間隔を空けて 2 回の基礎接種

清浄国の一つである（2019 年時点）。清浄国の免疫後、5 月から 6 月に初回補強接種、その後中には、豪州やニュージーランドのように、ワ

半年間隔の補強接種が推奨される（表 1）。中

クチンを接種しない国も存在する。しかしなが和抗体の多くを占めるものは、ウイルスの血球

ら、日本は、毎年 3,000 〜 5,000 頭もの馬を、凝集（HA）反応を阻害する抗体であり HI 抗体

EIV が毎年流行している欧州や北米大陸より輸と呼ばれる。欧米では、全粒子だけでなくウイ入している。事実、2007 〜 2008 年の日本でルスの HA と NA のみを抽出精製して含んでいの流行以降にも、毎年のように欧州および北米

る馬インフルエンザワクチンも存在する。EIVからの輸入馬から EIV が検疫中に動物検疫所にの感染防御や症状の程度は、ウイルスへの暴露

より摘発されており、日本の馬群への EIV の侵時に保有している中和抗体の有無により変化す

入リスクは常に存在していると考えざるを得なる。したがって、あらかじめワクチン接種で中い。したがって、常に日本のワクチンの抗原性

和抗体を賦与させておくことにより、EIV の暴が、欧州や北米大陸などの最新の流行株に対応露を受けた際の馬体への影響を減少させることしているか否かをチェックし、EIV が日本の馬が可能となる。

群に侵入した場合に備える必要がある。

インフルエンザウイルスの遺伝子（RNA）の

海外では、毎年、国際獣疫事務局（OIE）の複製に必要な RNA ポリメラーゼは、RNA のリファレンスラボラトリーが中心となってデー

塩基配列の複製エラーの頻度が高いことで知らタを持ち寄って、その年のワクチン推奨株の選9

れ、通常の DNA ポリメラーゼが 10 塩基に 1

定について議論している（Expert Surveillance

塩基であるのに対し、インフルエンザウイルス

Panel on Equine Inﬂuenza: ESP）
。筆者らも

4

の RNA ポリメラーゼは 10 塩基に 1 塩基の割

この ESP に参加し、帰国後、ESP で議論され合でエラーを起こすとされている。このことにた内容や独自のデータをもとに、農林水産省動より、同じ H3N8 の亜型の EIV の中でも、遺物医薬品検査所の「動物用インフルエンザワク

伝子が少しずつ変化し、そのことが積み重なっ

チン国内製造用株選定委員会」において、日本

た結果、抗原性の変化が生じる。このことを抗製不活化ワクチン株の選定の議論に参加してい原変異という。したがって、欧米のような EIVる。2003 年に変更されたワクチンまで、馬用が風土病的に発生している国・地域では、常にを含む動物用インフルエンザワクチンは、動物

遺伝子が変化した EIV 株が出現している。そこ

用生物学的製剤基準に基づく煩雑かつ長期間にに、ワクチンが使用されることによって、馬体わたる試験および手続きを要することから、迅内で産生される抗体の圧力から逃れる変異株が速な株変更が困難であった。しかし、迅速にワ選択されて、流行の中心に置き換わる。

クチン株を変更できるシステムの確立は、EIV以上のことから、ワクチンの効果を維持するの特性を鑑みると極めて重要であることから、ためには、常に流行株とワクチン株との抗原性

その仕組みづくりが進められてきた。その結果、11

2011 年には「動物用インフルエンザワクチン

発から供給までの期間が大幅に短縮され、迅速国内製造用株選定委員会」（事務局：動物医薬なワクチン供給体制が整備された。

品検査所）が正式に立ち上げられたことで、開表 1. 軽種馬防疫協議会が推奨するワクチンプログラム
1歳
1-3 月
基礎

基礎

2歳

3 歳以降

5-6 月

11 月頃

5-6 月

11 月頃

5-6 月

11 月頃

補強

補強

補強

補強

補強

補強

＊基礎免疫（2 回接種）
：4 週間以上の間隔を空けて 2 回接種する。

表2

日本の不活化ワクチン株の変遷
年

1972

1985

1996

2003

2009

2016

株

亜型

（亜）系統

A/equine/Prague/1956

H7N7

A/equine/Miami/1963

H3N8

系統分岐前

A/equine/Tokyo/2/1971

H3N8

系統分岐前

A/equine/Newmarket/1977

H7N7

A/equine/Tokyo/2/1971

H3N8

系統分岐前

A/equine/Kentucky/1/1981

H3N8

系統分岐前

A/equine/Newmarket/1977

H7N7

A/equine/Kentucky/1/1981

H3N8

系統分岐前

A/equine/La Plata/1993

H3N8

アメリカ

A/equine/Newmarket/1977

H7N7

A/equine/La Plata/1993

H3N8

アメリカ

A/equine/Avesta/1993

H3N8

ユーラシア

A/equine/La Plata/1993

H3N8

アメリカ

A/equine/Avesta/1993

H3N8

ユーラシア

A/equine/Ibaraki/1/2007

H3N8

フロリダ亜系統クレード 1

A/equine/Ibaraki/1/2007

H3N8

フロリダ亜系統クレード 1

A/equine/Yokohama/aq13/2010

H3N8

フロリダ亜系統クレード 2

Ⅳ 発症病理12

感染馬が咳嗽などにより、EIV をエアロゾル

レセプターに結合させ、その後、宿主細胞側の状に空気中へ排泄し、それを他の馬が吸い込む。

エンドサイトーシスによって受動的に細胞質内

この際、馬の痰に含まれるムコ多糖類や糖蛋白に取り込まれる。その後、エンドソーム膜とエ質に、EIV の HA が結合した場合は、その EIV

ンベロープは融合し、ウイルスの遺伝子が細胞は痰とともに再び外部に排出される。このこと

質内に放出され、宿主細胞の核内に移動し、ウに対して、EIV は自身の NA により痰中のムコ

イルスの蛋白質合成に必要な遺伝子（mRNA）

多糖類や糖蛋白質を分解し、痰から逃れること

およびウイルス自身の RNA が合成される。合が可能である。逃れられた EIV は、HA を上皮成された蛋白質およびウイルスの RNA は宿主細胞膜上に存在する糖鎖（シアル酸）からなるの細胞膜の近傍へ移動し、ウイルスの構造を組み立てて、細胞膜をエンベロープとして出芽し、呼吸器上皮細胞は、変性壊死を起こし、気道や他の感染可能な宿主細胞へと向かうか、咳嗽に肺胞における蛋白質に富む滲出液が増えるととより外気中へ排泄される。この際、ウイルスのもに線毛の凝集が見られるようになる。このよNA は、子ウイルスと細胞膜上のシアル酸レセ

うな線毛構造の破壊は、気道表面のクリアラン

プターとの結合を外すことによって、出芽を容ス能を減じさせ、上部気道の日和見常在菌の下易にする働きを担う。ウイルスの複製・出芽サ

部気道への侵入を引き起こす。下部気道に侵入

イクルは感染後 1 〜 3 日以内に行われるとされ、した細菌は、気管炎から肺炎などへ症状を増悪

鼻腔スワブからウイルスが分離されるのは、感させる。多くの場合、Streptococcus equi subsp.

染 2 〜 3 日後からである。

zooepidemicus や Actinobacillus 属が原因である。

以上に示したウイルスの感染・増殖を受けたⅤ 臨床してから、症状が顕在化するまでの期間）は、

1. 症状

2 〜 3 日間とされている。鼻汁へのウイルス排本症の最も顕著な特徴として、急速な有症状

泄を認め始める時期も、症状の顕在時期と概ね馬の増加が挙げられる。迅速な病原検出法が開一致している。発熱が 4 日間以上継続した場合発される以前は、この急速な有症状馬の増加が、や、粘ちょう性を帯びた鼻汁を認めた場合には、暫定的な診断の根拠とされてきた。典型的症状

二次的な細菌感染を疑う必要がある。また、発は、急な発熱（39 〜 40℃）を伴う鼻漏や咳嗽

熱中には食欲低下や元気消失がみられる。食欲などの呼吸器症状である（図 8）。重篤度や有症低下の原因には、発熱以外にも咽喉頭部の疼痛状期間は、ウイルスの暴露量、飼養管理およびも関与している。下顎リンパ節の腫脹は稀であワクチンや感染による中和抗体の有無により大る。咳嗽は、特に摂食中に発作的に認められるきく影響される。最初に認められる症状は、通ことが多く、また、咽頭部を刺激することによっ

常、発熱であり、本症の潜伏期間（EIV に感染ても容易に誘発できる。

図8

馬インフルエンザ発症時における咳嗽（写真左）および粘ちょう性鼻漏（写真右）13

中和抗体を保有している馬が感染した場合

よく換気された塵埃の少ない環境が望ましい。

は、症状が軽減するか、あるいは無症状に耐過

乾草などは、埃を減らすために水で湿らせてかする。しかし、無症状の馬でも鼻汁中にウイルら与えるのがよい。

スを排泄する可能性があることに注意が必要である。

NA 阻害薬であるオセルタミビル（タミフル ,中外）やペラミビル（ラピアクタ , 塩野義製薬）、
およびキャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害

2. 治療薬であるマルボキシル・バロキサビル（ゾフルー
ザ , 塩野義製薬）の投与による治療効果が報告

専ら、対症療法が中心に行われる。長期間されている。オセルタミビルおよびマルボキシの発熱や粘ちょう性を帯びた鼻汁を認めた場合

ル・バロキサビルは経口投与、ペラミビルは静は、細菌感染を疑って抗生物質を投与するべき

脈内投与される。両薬物ともに、現在のところである。鎮咳薬の投与は、滲出液の気道からの人体用としてのみ認可されている薬物である。

クリアランスを低下させるおそれがあるので、しかし、症状の有意な軽減およびウイルス排泄避けるべきである。

期間の短縮が認められることから、今後、治療

また、休養させることが非常に重要であり、の選択肢として一考に値すると思われる。

Ⅵ 診断
1. 臨床診断

EIV の場合、鼻腔スワブまたは鼻咽頭スワブから抽出した鼻汁を 9 〜 11 日齢の発育鶏卵の上述したとおり、発熱、鼻漏および咳嗽など

尿膜腔中に接種して分離する。また、MDCKの症状を示す馬が、急速に増加することが本症

細胞に接種しても、ウイルス分離は可能であるの大きな特徴である。しかし、伝染性の強さでが、発育鶏卵に比較して EIV の増殖性は低い。

は劣るものの、馬ウイルス性動脈炎や馬鼻肺炎

発育鶏卵および MDCK 細胞のいずれを使用などのウイルス性呼吸器疾患の典型的症状と類する場合でも、鼻腔スワブまたは鼻咽頭スワブ

似する症状も多いので、確定診断のためには、の採材とその後の処理が、結果に大きな影響を以下に示す病原学的あるいは血清学的診断が必

与える。

須である。

鼻腔スワブを採取する際は（図 9）、大き目の綿棒（JMS 綿棒 , JI-APL1, ジェイ・エム・エス ,2. 病原学的診断

図 10）を用いて、鼻粘膜に数十秒間押し当てて鼻汁を採取する。鼻咽頭スワブの場合は、鼻

1）ウイルス分離他の感染症の診断同様、ウイルス分離がゴー

mm/ 綿球径 12 mm/ 綿球長 23 mm/ 軸の直径

ルデンスタンダードである。特殊な施設や技術

3.2 mm, 日本綿棒 , 図 10）を用いて喉の奥かが必要であり、一般に数日から数週間を要するら採取する。EIV は、乾燥により迅速に不活化が、分離されたウイルスの性状を解析することしてしまうことから、直ちに輸送用培地に浸す。

は、その後のワクチン株の選定などに重要な輸送用培地の例として、JRA 競走馬総合研究所

データを提供することに繋がる。以下には、筆で使用しているものの組成を下表に示す。

者らが行っている方法を示す。

14

腔スワブ採取用綿棒よりも長い綿棒（全長 504

図9

鼻腔スワブ採取の様子

䐟
䐠
図 10

鼻腔スワブ（①）および鼻咽頭スワブ（②）採取用綿棒

者らは鼻腔スワブの場合には輸送用培地 2.5ml、■ 輸送用培地の組成
PBS (pH 7.2 〜 7.4)

100 mlトリプトースリン酸ブロス(29.5g/l, シグマ )2 mlAntibiotic-Antimycotic, 100 ×( サーモフィッシャー )5 ml

鼻咽頭スワブの場合は 5ml 入ったねじ込み型のチューブに軸棒を折って浸漬している（図11）。また、馬の鼻腔内は非常に細菌や真菌に富んだ環境であることから、いかに細菌などの生育を防ぐかが、分離結果の成否に直結する。

使用した綿棒のサイズにより、浸漬する輸送

したがって、通常の細胞培養時に使用する場合

用培地の量は、適宜増減する必要があるが、筆よりも、輸送培地中の抗生物質−抗真菌薬濃度15を高く設定することが必要である。ちなみに、

ションによるものか、真に EIV が分離されたのセルロースアセテート膜からなるフィルターでかは慎重に判断しなければならない。したがっのろ過滅菌は、EIV をも除去してしまうので行て、HA 反応陽性を示す尿膜腔液が得られた場わない。さらに、輸送用培地に浸した後は、た合には、後述の RT-PCR 法や陽性血清によるだちに氷冷することも重要である。EIV は人のHI 試験により同定する必要がある。

季節性インフルエンザウイルスとは異なり、季節を問わず流行する。特に夏場の採材時には、クラッシュアイスが必需品である。

2）RT-PCR 法
ウイルス分離は数日から数週間もの時間を要するため、適切な防疫対応をとるためには、さらに迅速な診断法が求められてきた。分子生物学の発達により、EIV の特異遺伝子を検出する
RT-PCR（Reverse transcription polymerase
chain reaction）法が、近年では頻繁に行われるようになっている。実験系により異なるが、最短で検体採取から約半日で結果が得られる。
JRA 競走馬総合研究所では、下記のプライマーを用いて RT-PCR 法を実施している。

図 11

鼻腔スワブまたは鼻咽頭スワブを採取後、綿棒の柄を折って、輸送培地に浸漬したもの。

プライマー

配列

ForwardAGCAAAAGCAGGGGATAT
TTCTG

ReverseGCTATTGCTCCAAAGATTC
Newton et al., Vet Rec. 2006. 158:185-92.

綿棒の入ったチューブは、十分に撹拌するこ

16とによって、鼻汁を輸送用培地側に抽出し、ツ陽性であれば、電気泳動によって約 1040bp

ベルクリン用注射器を使用して、発育鶏卵の尿のバンドが確認される。本反応系のプライマー

膜腔中に接種する。具体的には、サンプル抽出

セットは、HA タンパクをコードしている遺伝液を輸送用培地で 1:10 および 1:100 に希釈す

子配列に基づいている。陽性と思われるサイズる。各希釈濃度につき 4 個の 10 日齢の発育鶏のバンドが確認された場合には、増幅産物を精卵に 200μl ずつ接種し、34℃で 3 晩程度静置製し、塩基配列を決定することが望ましい。こする。鶏卵培養において重要なことは、適切なのことにより、DDBJ や GenBank などの公的

換気と湿度下で行うことである。通常の密閉型

データベース上に公開されている EIV の塩基配

インキュベーターでは、発育鶏卵が窒息・死滅

列との間で、相同性解析や系統樹解析などが可する。また、湿度が低いと尿膜腔液が著しく減能となり示唆に富むデータを得ることが出来る。

少する。JRA 競走馬総合研究所では、孵卵器内近年の分子生物学的診断法の進歩は著しく、の相対湿度を 60 〜 70％に保っている。培養後

RT-PCR 法のほかにも、real time RT-PCR 法

は尿膜腔液を採取して、0.5% 鶏血球液を使用

や RT-LAMP（Loop-mediated isothermal

した HA 反応によりウイルス増殖の有無を判定

ampliﬁcation）法などの新しい方法も開発さする。盲継代を 4 回繰り返しても、ウイルスがれている。いずれの方法においても、平常時に、分離されない場合は、ウイルス分離陰性とする。

個々の診断施設において、技術に習熟しておく

多くの細菌は HA 反応を示すので、コンタミネー

ことが重要である。

3）簡易検査キット
現在、人のインフルエンザ診断用として多くに、検体をウイルス分離や RT-PCR 法が実施可能な検査施設に送付すべきである。

の簡易検査キットが認可・市販されている。これらのキットのほとんどは、ウイルスの内部蛋

3. 血清学的診断

白質である Nucleoprotein を検出するものであり、A 型と B 型を区別して判定できるもので血清学的診断とは、患馬の急性期と回復期にある。EIV は A 型インフルエンザウイルスの 1

おける組血清を採取し、血清中の抗体価の上昇つであるので、原則としてそれらのキットで検をもって感染の証拠とするものである。また、出できるはずである。しかしながら、使用して上述した分離ウイルスの同定にも応用される。

いる抗体の認識部位によっては、著しく EIV に

本診断による組血清間での抗体価の上昇は、感対する感度が低い、あるいはないといった製品

染の強い証拠となるものであるが、最短でも 2もあることから、注意が必要である。本稿執筆

週間は空けて組血清を採取する必要があるの時点（2019 年）において、JRA ではクイックチェ

で、EIV の流行拡大に間に合わないことが欠点

イサー Flu A, B（図 12）、またはクイックチェである。EIV の血清学的診断法としては、赤血

イサー Auto Flu A, B（ともにミズホメディー）

球凝集抑制試験（HI）試験、一元放射溶血（SRH）

を用いている。2007 年流行時にはエスプライ

試験、または中和試験が知られている。HI 試

ン ® インフルエンザ A&B-N（富士レビオ）が

験および SRH 試験ともに、中和抗体との相関用いられていたが、検出感度はクイックチェイ

性が知られている。

サーの方がよいことが明らかとなっている。簡HI 試験は、最も普及している方法である。

易検査キットは RT-PCR 法に比較して検出感

通常、96 ウェルの V 底プレートを用いて、2度がやや劣るものの、その一方、操作が非常に倍階段希釈した血清（25μl）に、4 単位 /25

簡単であり、最短で鼻腔スワブ採取 20 分後にμl に 調 整 し た HA 抗 原（25μl） を 加 え、30は結果が得られるという利点がある。しかし、分間室温でインキュベーションする（抗原抗体得られる結果が単に陽性か陰性のみであること反応）。次に、0.5% 鶏血球液（50μl）を加えから、陽性結果が得られた場合には、速やかにて、1 時間室温でインキュベーションする。も該当馬の隔離などの防疫措置を講じるとともし、抗体が存在すれば、EIV の HA に結合し、

図 12

クイック チェイサー ® Flu A,B（ミズホメディー）による馬インフルエンザの診断。赤矢印で示すように、
A 型インフルエンザウイルス診断の判定部に線を認めた場合、陽性と診断する。本写真では、上の検体は陽性、下の検体は陰性と判定される。

17

HA は鶏血球上の糖鎖に結合できなくなり、結和試験では MDCK 細胞を用いて中和試験を実果として、血球はウェルの底に沈む。抗体がな施しているが、EIV は一般的に MDCK 細胞でければ、血球はウイルスの HA により架橋され、増殖しにくいため用いていない。2 倍階段希釈

ウェルの底に均一に張り付く（これを血球凝集した血清に、104.0 ± 0.5 EID50/200μl に調整しという）。判定は、プレートを傾け、ウェルのたウイルス液を血清と等量加え、60 分間 34℃底に沈んだ血球が涙目状に垂れてくるか否かででインキュベーションする（中和反応）。そし

血球凝集の有無を判定する。HI 抗体価は、通常、て血清希釈列ごとに、5 個の 10 日齢の発育鶏

血球凝集を阻害した血清の最高希釈倍率の逆数

卵のしょう尿膜腔に 200μl ずつ血清・ウイル

で表す（HI 試験の 1 例 , 図 13）。

ス混合液を接種する。その後 34℃で 3 日間イ

SRH 試験は、EIV を感作させた血球（羊あンキュベートする。インキュベート後、鶏卵をるいは鶏）と補体（モルモット血清）とを含ん4℃で冷やしてから、しょう尿液を回収し、赤だアガロースゲルを作製し、3mm 程度の穴を血球凝集能を確認する。5 個中 3 個以上の発育

空けた寒天プレートを用いて行う。空けた穴に、鶏卵で、ウイルス増殖を抑制した血清の最高希適当量（5 〜 10μl）の被検血清を入れ、34 〜

釈倍率を中和抗体価とする。

37℃で 1 晩インキュベーションする（変法としHI 試験は、馬血清の場合、非特異的なインヒて、4℃で一晩の間、抗原抗体反応をさせてから、ビターの干渉を非常に受けやすいことから、試37℃で 2 時間溶血反応させる方法もある）。血験前にトリプシン−熱−過ヨウ素酸カリウム処

清中に抗体が存在していれば、穴の周りに溶血理を行わなければならない。人血清で汎用され輪が出現し、その直径をノギスで測定する。抗ている RDE（ビブリオ菌由来の NA）は、馬血

体価は、溶血輪の直径あるいは面積で評価する

清特有のγインヒビターを除去できないので使（SRH の 1 例 , 図 14）。

用しない。著者らは、中和試験で用いる血清も筆者らは中和試験法を、発育鶏卵を用いて実HI 試験と同様のトリプシン−熱−過ヨウ素酸カ施している。人インフルエンザウイルス等の中リウム処理を実施している。以下に JRA 競走馬

HAᢠཎ䠉
640
320
160
80
40
20
10
図 13

18

HI 試験の 1 例（12 検体）。実際には、このプレートを約 70°に傾けて、HA 反応が阻害されて底に沈んだ血球が涙目状に垂れてくるウェルの血清の最高希釈倍数の逆数を HI 抗体価とする。例えば、1 番の HI 抗体価は 160 で、4 番や 8 番は <10 である。

総合研究所で行っている血清処理方法を示す。

一方、SRH 試験は、非特異的なインヒビター

血 清 1 容 に 0.5 容 の 0.8 ％ ト リ プ シ ン 液 をの干渉を受けないこと、および血清の階段希釈

加えて、10 分間室温で反応させたのち、熱処列の作製が不要なことなどが利点である。しか理（56 ℃ 30 分 間 ） を 行 う。 次 に 0.011M 過し、使用する抗原の力価が、最低でも 512 〜

ヨウ素酸カリウム液 3 容を加えて、60 分間室

1,024HA 単位 /50μl はないと、鮮明な溶血輪温で反応させたのち、3 容の 1% グリセリン液を得られないことから、新鮮分離株のような力を加えて過ヨウ素酸カリウムの作用を中和さ価の低い抗原の場合には、超遠心処理などによせる。処理は以上であるが、この時点で血清はりウイルスを濃縮させる必要がある。また、抗7.5 倍に希釈されている。通常は、さらに 0.5

原性の差異に対する感受性は低く、抗体の交差

容 あ る い は 2.5 容 の PBS（pH 7.2 〜 7.4） を反応性の比較には不向きである。主に欧州で、加えて、血清の初希釈を 1:8 あるいは 1:10 とワクチン接種馬の血清中抗体を定量し、ワクチ

して 2 倍階段希釈列を作製する。また馬血清

ンの免疫原性の評価に使用されることが多い。

によっては、非特異的な血球凝集性を示す場合

HI 試 験 は HA に 対 す る 抗 体（HI 抗 体 ） だがあるので、このような血清に対しては、インけを測定する方法であるが、中和試験では HI

ヒビター除去後の処理血清の 1/20 容の鶏血球抗体を含むウイルス全体の増殖を抑制（中和）（HA, HI 試験に使用するもの）を加えて転倒混する抗体を検出する方法であることから、中和

和し、室温で 1 時間吸収する。途中、適宜、転試験では感染を抑制する抗体を直接的に測定倒混和し、血球が沈殿しないように保つ。そのしている。さらに、中和試験はウイルスの抗原後、2,000rpm 10 分程度遠心し、上清を分離し、の変化を HI 試験よりも鋭敏に検出できること

HI 試験または中和試験に使用する。HI 試験時から、手間や時間はかかるものの、ワクチンのには、必ず HA 抗原フリーのウェルを設定し、評価のためには中和試験を実施することが望

血清中の凝集物質が完全に吸収されているかを

ましい。

確認する。

1

4

図 14

2

5

3

6

SRH 試験の 1 例 1 と 6 番の血清は、SRH 抗体陰性。2，3，4 および 5 番の血清では溶血輪が認められるため、それぞれノギスを用いて直径を測定し、面積を求めて SRH 抗体価とする。

19

主な参考文献
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おわりに日本において、2007 年から 2008 年の流行異を続けていきますので、我々はそれに合わせ以来、馬インフルエンザウイルスは検出されててワクチン株を変更する必要が出てくることでいませんが、海外では常に流行しており、侵入しょう。

のリスクは常にあります。その証拠に、動物検

今回の第 4 版では、山中隆史博士および太田

疫所においては毎年のように海外からの輸入馬

稔博士が執筆した第 3 版発行後の新知見、特にから馬インフルエンザウイルスが検出されてい疫学、診断法、そしてワクチンの項目を中心にます。馬インフルエンザの最も重要な防疫対策

改訂しました。さらに詳しく馬インフルエンザ

は、動物検疫等の水際防疫に加えて、ワクチン

ウイルスについて知りたい方は、参考文献をご接種です。しかし、馬インフルエンザウイルス

覧ください。

は他の動物同様に変異が激しいため、ワクチン

最後に、本冊子を読んでいただいた方の馬イ

効果を得るためには必要に応じてワクチンに使

ンフルエンザに対する理解が深まりましたら、用するウイルス株を変更する必要があります。

著者としてこれ以上の喜びはありません。

実際に、2012 年の第 3 版から本改訂版までの間に、2016 年にワクチン株が 1 回変更されています。今後も馬インフルエンザウイルスは変20

日本中央競馬会

競走馬総合研究所
根本学

刊行の馬感染症シリーズ
１．馬伝染性貧血診断のための

37．
馬の感染症
（第３版）……………………… 平成17年

寒天ゲル内沈降反応の術式 ……………… 昭和51年

38．
馬インフルエンザ（第２版）……………… 平成17年

２．馬伝染性子宮炎 …………………………… 昭和55年

39．
馬鼻肺炎
（第３版）………………………… 平成19年

３．馬ウイルス性動脈炎 ……………………… 昭和56年

40．
馬パラチフス（第２版）…………………… 平成20年

４．馬のサルモネラ症 ………………………… 昭和56年

41．
消毒法Ｑ＆Ａ
（第１版・補訂版） ………… 平成20年

５．ベネズエラ馬脳炎 ………………………… 昭和57年

42．
馬ウイルス性動脈炎（第３版）…………… 平成21年

６．アフリカ馬疫 ……………………………… 昭和58年

43．
馬伝染性貧血の診断術式

７．馬鼻肺炎 …………………………………… 昭和59年
８．馬鼻肺炎ウイルス感染症のための寒天ゲル内沈降反応の術式と応用 ………… 昭和59年
９．馬伝染性貧血診断のための（第３版・補訂版） ………………………… 平成22年
44．
馬の寄生虫病（第１版・補訂版） ………… 平成22年
45．
アフリカ馬疫（第２版）…………………… 平成23年
46．
馬のゲタウイルス感染症

寒天ゲル内沈降反応の術式（第２版）…… 昭和59年（第１版・補訂版） ………………………… 平成23年

10．
馬のピロプラズマ病 ……………………… 昭和61年

47．
腺疫（第３版）……………………………… 平成23年

11．
馬の水胞性口炎 …………………………… 昭和62年

48．
馬ピロプラズマ病（第３版）……………… 平成24年

12．
馬の寄生虫病 ……………………………… 昭和63年

49．
馬インフルエンザ（第３版）……………… 平成24年

13．
馬ウイルス性動脈炎（第２版）…………… 平成元年

50．
消毒法Q&A ……………………………… 平成24年

14．
馬のポトマック熱 ………………………… 平成 2 年

51．
馬原虫性脊髄脳炎（第２版・補訂版） …… 平成24年

15．
消毒法Ｑ＆Ａ ……………………………… 平成 3 年

52．
馬伝染性子宮炎（第３版）………………… 平成25年

16．
馬トリパノゾーマ病 ……………………… 平成 5 年

53．
馬の感染症
（第４版）……………………… 平成25年

17．
馬インフルエンザ ………………………… 平成 6 年

54．
馬のゲタウイルス感染症

18．
馬の感染症 ………………………………… 平成 6 年（第１版・補訂版） ………………………… 平成26年

19．
腺疫 ………………………………………… 平成 8 年

55．
ウマロタウイルス病（第２版）…………… 平成26年

20．
子馬のロドコッカス感染症 ……………… 平成 8 年

56．
馬の寄生虫病（第１版・補訂版） ………… 平成26年

21．
馬鼻肺炎
（第２版）………………………… 平成 9 年

57．
馬の日本脳炎（第２版）…………………… 平成26年

22．
馬伝染性子宮炎（第２版）………………… 平成 9 年

58．
馬パラチフス（第３版）…………………… 平成27年

23．
馬原虫性脊髄脳炎 ………………………… 平成10年

59．
子馬のロドコッカス感染症（第２版）…… 平成28年

24．
馬パラチフス ……………………………… 平成10年

60．
馬脳炎（東部馬脳炎・西部馬脳炎・ベネズエラ馬脳炎）

25．
馬の日本脳炎 ……………………………… 平成10年（第１版）…………………………………… 平成28年

26．
馬ピロプラズマ病（第２版）……………… 平成11年

61．
馬の真菌症
（第２版）……………………… 平成28年

27．
馬のゲタウイルス感染症 ………………… 平成11年

62．
馬のウエストナイルウイルス感染症

28．
馬ロタウイルス感染症 …………………… 平成12年（第２版）…………………………………… 平成29年

29．
馬ウイルス性動脈炎（第２版・補訂版） … 平成12年

63．
馬パラチフス
（第３版・補訂版） ………… 平成29年

30．
馬伝染性貧血の診断術式（第３版）……… 平成13年

64．
馬のゲタウイルス感染症（第２版）……… 平成29年

31．
馬の水胞性口炎（第２版）………………… 平成13年

65．
馬伝染性子宮炎（第３版・補訂版） ……… 平成29年

32．
馬の感染症
（第２版）……………………… 平成13年

66．
馬パラチフス
（第３版・補訂版第２刷） … 平成30年

33．
腺疫（第２版）……………………………… 平成14年

67．
馬鼻肺炎
（第４版）………………………… 平成31年

34．
馬原虫性脊髄脳炎（第２版）……………… 平成15年

68．
馬ピロプラズマ病（第４版）……………… 令和元年

35．
馬のウエストナイルウイルス感染症 …… 平成15年

69．
馬インフルエンザ（第４版）……………… 令和元年

36．
馬の真菌症 ………………………………… 平成16年

21日本中央競馬会助成事業
地方競馬益金補助事業

平成 6 年 3 月

第 1 版第 1 刷発行

平成 17 年 3 月

第 2 版第 1 刷発行

平成 20 年 3 月

第 2 版第 2 刷発行

平成 24 年 11 月

第 3 版第 1 刷発行

令 和 元 年 12 月

第 4 版第 1 刷発行

公益社団法人 中央畜産会〒101-0021 東京都千代田区外神田2丁目16番2号
第2ディーアイシービル 9 階TEL. 03（6206）0832