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バイオイメージングと相互作用解析特集
今回は『バイオイメージングと相互作用解析』を特集させていただきます。
近年、生体分子の機能解析手法は格段の進化を遂げ、実に様々な方法が使われ始めています。今号では、表面プラズモン共鳴センサーを用いる低分子化合物と高分子との相互作用イメージングに始まり、新規なYeast two-hybrid system、高効率なタンパク質の蛍光ラベリング法などについてご紹介させていただきます。また今号より、お客様方との技術交流の場といたしまして、『みんなの広場』というコーナーを新設予定です（P.21参照）。皆様、奮ってご参加いただきますよう、宜しくお願いいたします。

Products

MultiSPRinter® フォトリンカーチップ
SPRイメージング解析システムMultiSPRinter®に新しい解析用チップが登場しました。
新開発のフォトリンカーチップにより、低分子化合物を金チップへ簡便に固定化できるようになりました。SPRイメージング解析シス
テムMultiSPRinter®を用いて、低分子固定化チップを解析することでタンパク質の低分子化合物への結合を観察できます。多種類の低分子化合物も効率よくSPR解析できます。
（フォトリンカーチップは（独）理化学研究所との共同研究により開発いたしました。）

1

光親和型固定化チップ

2

96サンプルの同時解析

・光反応性のアリールジアジリン基を利用しており、
紫外線照射によって低分子化合物を金チップ上に固・専用スポッターを用いて96穴プレートに用意したサンプル溶液を1つのチップ上にスポットできます。

定化できます。

・96点までの同時解析が可能であり、ドラッグスク

・化合物の官能基に依存せず結合するため、固定化さリーニングに好適です。

れた化合物の配向性はランダムです。

スポッティング直後の金チップ(18×18mm)
図2．サンプル溶液をスポットしたMultiSPRinter®Auチップ

図1．金表面上の光親和型低分子固定化

1No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 2

SPRイメージングの原理
平行光である偏光光束をチップ全面に照射し、その反射光がSurface Plasmon Resonance Imaging System MultiSPRinter®

は、96種類までの物質をチップ

CCDカメラでSPR像として撮影されます。相互作用により、上にアレイ化することで、ラベルフリーかつリアルタイムに、複数の相互作用を同時に解析

SPR角がシフトし、反射光強度が変化します。SPR像の調べすることができるシステムです。また、専用の自動スポッターを用いることで、96穴プレーたい部分の反射光強度の変化を解析することで、複数の物質のトに用意したサンプル溶液から簡便にアレイを作製できます。

相互作用解析が可能となります。

1

6種類の低分子化合物と抗体との相互作用解析

図3に示す6種類の低分子化合物を紫外線照射によってフォトリンカーチップに固定化し、低分子化合物の抗体との相互作
用を、SPRイメージングシステムMultiSPRinter ®によって観察しました。低分子とその抗体の相互作用が検出でき、低分子化合物が金表面に固定化されていることが確認できただけでなく、シクロスポリンAとシクロフィリンAの相互作用も観察できました(図4)。

※※一般的に、Cyclosporin A（CSA）とタンパク質Cyclophilin Aとの間で相互作用のあることが知られている。

図3．低分子固定化（抗体による検出）に用いた低分子化合物2

図4．6種類の低分子化合物と抗体との相互作用解析

8種類の低分子化合物とエストロゲンレセプターの相互作用解析

エストロゲンレセプター（ER）に結合することが知られている物質（内分泌かく乱化学物質）を含む8種類の低分子化合物（図5）をフォトリンカーチップに固定化
し、ERαおよびERβとの相互作用をSPRイメージン
グシステムMultiSPRinter ®によって観察しました。
その結果、ER結合性として知られている4種の物質（エストラジオール、タモキシフェン、4Hタモキシフ
ェン、ジエチルスチルベストロール）で強い相互作用を観察できました（図6）。

図5．内分泌かく乱化学物質とエストロゲンレセプター（ER）の結合解析に用いた低分子化合物2No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 3

図6．8種類の低分子化合物とERの相互作用解析結果

参考文献

1）Brockman, J. M., Fruto, A. G. and Corn R. M., J. Am. Chem. Soc., 121: 8044-8051 (1999)
2）Nelson, B. P., Frutos, A. G., Brockman, J. M., Corn, R. M., Anal. Chem., 71(18): 3928-3934 (1999)
3）Brockman, J. M., Nelson, B. P. and Corn, R. M., Annu. Rev. Phys. Chem., 51: 41-63 (2000)
4）Kanoh, N., Kyo, M., Inamori, K., Ando, A., Asami, A., Nakao, A., Osada, H., Anal. Chem., in press(2006)

包品 名 及 び 内 容

装

保存温度

Code No.

価格

MultiSPRinter ® フォトリンカーチップ

1個

4℃

SPR-203¥55,000

紫外線照射用治具（12枚用；フィルター3枚付）

1個

室温

SPR-2031¥110,000

装保存温度

Code No.

価

包品 名 及 び 内 容

格Surface Plasmon Resonance Imaging System

MultiSPRinter ® フルシステム(SPRイメージング装置と自動スポッターのセット)

1式−

SPR-101¥16,000,000

MultiSPRinter ® SPRイメージング装置

1台−

SPR-102¥12,000,000

MultiSPRinter ® 自動スポッター装置

1台−

SPR-103¥4,500,000

MultiSPRinter Auチップ

1個

4℃

SPR-200¥6,000MultiSPRinter ® NH2チップ

1個

4℃

SPR-201¥20,000

1個

4℃

SPR-202¥20,000

80回用

室温

SPR-401¥29,000®

MultiSPRinter ® COOHチップ
MultiSPRinter ® 自動スポッター用96穴プレート3

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 4

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Products

SNAP-cellTM 430 / SNAP-vitroTM 732, 747
SNAP-tagTMの蛍光基質に新たな色が追加されました。さらに様々な実験へ用途が広まりました。

SNAP-tagTMはHuman 06-alkylguanine-DNA alkyltransferase（hAGT）を遺伝子工学的手法により改良した酵素タグです。蛍光基質や基質リンカーに共有結合を介して酵素反応で特異的に結合します（図1）。タグは約20kDaで、タンパク質のNおよびC末端に融合させることができます。SNAP-cellTMキット
によってIn vitro イメージング（図2）やパルスチェイス実験、SNAP-vitroTMキットによって蛍光タンパク質の調製（図3）などを行うことができます。

図2．
インビトロイメージング【SNAP-cellTMキット使用】（左）アッセイフロー。動物細胞で発現させ融 合 核 局 在 タン パ ク 質 の S N A P cellTM505kitを用いた検出例（緑色）。
基質を反応させた後、培地交換することにより、未反応基質を除去します。
（右）SNAP-cellTM430kitを用いた検出例。
CHO細胞のアクチンを検出しました（青色）。

図1．蛍光基質との特異的結合
SNAP-tagTM（金色）を融合したタンパ
ク質（青色）と蛍光基質（緑色）との反応

SNAP-tagTM融合タンパク質

図3．
タンパク質の蛍光ラベル【SNAP-vitroTMキット使用】（左）蛍光タンパク質調製フロー。ラベル後、ゲルろ過によりフリーの基質を除去します。
（右）各SNAP-vitroTM基質のEmissionスペクトル比較。本キットを用いることにより様々な波長の蛍光タンパク質を調製することができます。

包装

保存温度

Code No.

SNAP-cellTM 430 Starter Kit

品

Ex 421nm, Em 444, 484 nm（Blue laser filter用）<青>

1kit

-20℃

CVSK072 ¥100,000

危SNAP-cellTM 505 Starter Kit

Ex 504 nm, Em 532 nm（fluorescein filter用）<緑>

1kit

-20℃

CVSK003¥95,000

危

SNAP-cellTM TMR-Star Starter Kit

Ex 554 nm, Em 580 nm（rhodamine filter用）<赤>

1kit

-20℃

CVSK039¥95,000

危

SNAP-vitroTM 488 Starter Kit

Ex 506 nm, Em 526 nm（fluorescein filter用）

1kit

-20℃

CVSK005¥75,000

危

SNAP-vitroTM 532 Starter Kit

Ex 536 nm, Em 554 nm（rhodamine filter用）

1kit

-20℃

CVSK007¥75,000

危

SNAP-vitroTM 547 Starter Kit

Ex 554 nm, Em 568nm（TAMRA or Cy3 filter用）

1kit

-20℃

CVSK041¥75,000

危

SNAP-vitroTM 600 Starter Kit

Ex 606nm, Em 626 nm（Texas red filter用）

1kit

-20℃

CVSK013¥80,000

危

SNAP-vitroTM 632 Starter Kit

Ex 637nm, Em 657 nm（635 nm diode laser用）

1kit

-20℃

CVSK015¥85,000

危

SNAP-vitroTM 647 Starter Kit

Ex 660 nm, Em 673 nm（650 nm diode laser用）

1kit

-20℃

CVSK043¥85,000

危

SNAP-vitroTM 732 Starter Kit

Ex 732 nm, Em 747 nm（Cy7 filter用）

1kit

-20℃

CVSK074¥95,000

危

SNAP-vitroTM 747 Starter Kit

Ex 752 nm, Em 763 nm（Cy7 filter用）

1kit

-20℃

CVSK076¥95,000

危

名

備

考

価

格

危 本キットのパーツには、消防法における第4類第3石油類（等級Ⅲ）であるDMSOが含まれます。可燃性がありますのでご注意ください。
※SNAP-tagTM融合タンパク質の発現ベクター等の詳しい情報に関しましては、
www.covalys.com/をご参照ください。

Products
TM

OmicsLink

SNAP-tagTM

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ORF Expression Clones

GeneCopoeiaのOmicsLinkTM cloneにSNAP-tagTM融合タンパク質発現用が加わりました。
ご好評いただいておりますGeneCopoeiaの発現用cDNAクローンにSNAP-tagTM融合タンパク質発現用が新たに追加されました。16,000以上の完全長ヒトORFをNもしくはC末端SNAPtagTM融合タンパク質として発現させることができます。プロモーターとして、CMVおよびT7を有pReceiver M24

pReceiver M26M

しており、それぞれの系で融合タンパク質を発現させることができます。インビトロイメージングも
しくは蛍光タンパク質の調製に用いることができます。また、SNAP-Capture Resin S（CodeNo.:CVSK048）などを用いることにより、タンパク質をビーズへ固定化することも可能です。
品 名 及 び 内 容

装

保存温度

Code No.

2μg

-20℃

−

包

OmicsLinkTM SNAP-tagTM ORF Expression Clones※クローンの詳しい情報に関しましては、www.genecopoeia.com/をご参照ください。

4

図1．
プラスミドマップ価

格¥180,000

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 5

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Products

AnaTagTM Protein Labeling Kits

高効率かつ簡便なタンパク質ラベル化キットです。抗体の蛍光ラベリング等に最適です。
アミノ基を介したタンパク質のラベル化キットです。様々な蛍光基やビオチンをタンパク質のアミノ基に高効率で結合します。
HiLyte FluorTM 蛍光色素を用いることにより、従来に比べ明るく安定な蛍光タンパク質を調製することが可能です。

抗体のラベリングに最適

1

一口メモ
HiLyte FluorTM色素はAnaSpec社で開発された高性能蛍光色素です。
光耐性、および蛍光強度 に優れるという特長を有しています。
他社高性能蛍光色素との対応は以下のとおりです。

・抗体のラベル等に用いることができます。高効率でラベル可能なプロトコールが添付されています。

様々な蛍光色素やビオチンによるラベルが可能

2

・HiLyte FluorTMシリーズをはじめ様々な蛍光色素やビオチンでタンパク質をラベルすることができます。

HiLyte FluorTMシリーズ

他社高性能色素

HiLyte FluorTM 488

CyTM 2, Alexa FluorTM 488

HiLyte FluorTM 555

CyTM 3, Alexa FluorTM 555

HiLyte FluorTM 647

CyTM 5, Alexa FluorTM 647

HiLyte FluorTM 680

CyTM 5.5, Alexa FluorTM 680

TM

HiLyte Fluor

750

CyTM 7, Alexa FluorTM 750

簡便

3・ラベリングに必要な試薬や器具がすべて含まれており、簡便にタンパク質をラベル化することができます。

図2．HyLite FluorTM 蛍光スペクトル比較
左図：Normalized absorption、右図：Fluorescence
1：488 acid、2：555 acid、3：647 acid、4：680 acid、5：750 acid
［PBS buffer中］

図1．ラベル化原理およびフロー
図3．HyLite FluorTM 488とFITCにおける光耐性の比較

スクシイミドエステル化された色素とタンパク質のアミノ基が高効率反応します。反応後、ゲルろ過を用いて、未反応色素を除去します。

品 名 及 び 内 容

Ex/Em（nm）

包

装

価

格

保存温度

Code No.

危

AnaTagTM AMCA-X Protein Labeling Kit
・Amino reactive dye×5本 ・Reaction buffer: 0.5ml
・Spin column×5個 ・DMSO: 1 ml
・Elution buffer:10 ml ・Wash tube×5個 ・Collect tube×5個

347/447

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71000¥39,000

危

AnaTagTM 5-FAM Protein Labeling Kit

495/520

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71001¥39,000

危

AnaTagTM 5-TAMRA Protein Labeling Kit

555/581

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71002¥39,000

危

AnaTag5-ROX Protein Labeling Kit

573/602

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71005¥39,000

危

AnaTagTM HiLyte FluorTM TR Protein Labeling Kit

591/622

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71006¥39,000

危

AnaTagTM HiLyte FluorTM 555 Protein Labeling Kit

553/568

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71007¥59,000

危

AnaTagTM HiLyte FluorTM 647 Protein Labeling Kit

652/669

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71008¥59,000ー

5回用（5mg protein/回）-20℃

AS71003¥39,000

危TM

TM

AnaTag

Biotin Protein Labeling Kit

危 本キットのパーツには、消防法における第4類第3石油類（等級Ⅲ）であるDMSOが含まれます。可燃性がありますのでご注意ください。

格

Ex/Em（nm）

装保存温度

Code No.

502/5275mg-20℃

AS81161¥59,000

HiLyte FluorTM 555 acid, succinimidyl ester

552/569

1mg-20℃

AS81251¥59,000

TM

包価品 名 及 び 内 容
HiLyte FluorTM 488 acid, succinimidyl ester

647 acid, succinimidyl ester

649/674

1mg-20℃

AS81256¥29,000

HiLyte FluorTM 680 acid, succinimidyl ester

678/699

1mg-20℃

AS81261¥39,000

HiLyte FluorTM 750 acid, succinimidyl ester

754/778

1mg-20℃

AS81266¥39,000

HiLyte Fluor

5

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 6

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Products

Labeled Secondary Antibodies
イメージングに最適なHiLyte FluorTM標識2次抗体です。

様々な1次抗体に対応するラベル化2次抗体です。実験内容に応じて、様々な組み合わせで検討を行うことが可能です。

1

幅広い用途で使用可能

種々のラベル抗体を選択可能

3

・種々のラベル化抗体を揃えています。HyLite FluorTMラ・ウェスタンブロッティング、FACS、ELISA、IHC（免疫組織染色）等に幅広く用いることができます。

ベル化抗体を用いての初期評価にはサンプラーキットが
最適です。

2

様々な1次抗体に対応

・抗マウス、ヤギ、ニワトリ抗体を組み合わせてご使用いただくことで、多色検出等も可能です。

1

他社色素との蛍光強度の比較例

蛍光組織染色例

2

HiLyte FluorTM 647とA社高性能蛍光色素でラベルした抗ヒトアルツハイマー病患者の脳（海馬）の組織切片を、mouse

体を、等モル条件で蛍光強度の比較を行いました。その結果、

monoclonal anti-β-amyloid-1-11 antibody（Code No.:

HiLyte FluorTMが高い蛍光強度を示すことが示されました。

AS29547）とrabbit anti-Tau antibody cocktail（CodeNo.: AS29582）で処理した後、HiLyte FluorTM 555（赤色）c o n j u g a t e d g o a t - a n t i - m o u s e Ⅰg G（ C o d e N o . :AS61057-H555）およびHiLyte Fluor TM

488（緑色）conjugated goat-anti-rabbitⅠgG（Code No.: AS61056H488）と反応させイメージングを行いました。
その結果、鮮明な染色結果を得ることができました。
図1．相対蛍光度比較
図2．アルツハイマー病の脳（海馬）切片の蛍光組織染色例

1：HiLyte FluorTM 647ラベル goat anti-rabbit ⅠgG
2〜4：A社高性能蛍光色素ラベル goat anti-rabbit ⅠgGs
（2：in-house conjugate、3：A社 and 4：B社）（ブリティッシュコロンビア大Patrick L.
NcGeer先生からご提供いただきました。）〈単品〉
Rabbit anti-mouse Rabbit anti-goat
IgG（H+L）
IgG（H+L）
Code No.

Rabbit anti-chichen
IgY
Code No.

保存
温度

1mg

-20℃

AS28172

AS28176¥12,000

AS28164

AS28168¥14,000

AS29709¥14,000500μg -20℃

AS28175

AS28179¥13,000

AS28167

AS28171¥13,000

AS29712¥14,000

Unconjugated
Biotinylated

Goat anti-mouse Goat anti-rabbit
IgG（H+L）
IgG（H+L）
Code No.

包装

品 名

価

格

価

格

価

格

HiLyte FluorTM 488-labeled 500μg -20℃

AS28175-H488 AS28172-H488¥13,000

AS28164-H488 AS28168-H488¥13,000

AS29709-H488¥14,000

HiLyte FluorTM 555-labeled 500μg -20℃

AS28175-H555 AS28172-H555¥13,000

AS28164-H555 AS28168-H555¥13,000

AS29709-H555¥14,000

AS28175-H647 AS28172-H647¥13,000

AS28164-H647 AS28168-H647¥13,000

AS29709-H647¥14,000

Code No.

価TM

HiLyte Fluor 647-labeled 500μg -20℃

※この他にFAM、
TAMRA、
AMCA、
FITC標識抗体がございます。詳しくはお問い合わせください。
〈サンプラーキット〉
品

名HiLyte FluorTM Labeled Secondary Antibody Sampler kit *Goatanti-mouse and Goat anti-rabbit IgG, Highy Cross adsorbed*
TM

HiLyte Fluor Labeled Secondary Antibody Sampler Kit*
Rabbit anti-mouse and Rabit anti-goat IgG*TM

HiLyte Fluor Labeled Secondary Antibody Sampler Kit*
Goat anti-mouse and Goat anti-rabbit IgG*

品 名 及 び 内 容

Can Get Signal ® immunostain Starter Set
Solution A、Solution B

備

考

包

保存温度

装

格

対応する1次抗体 : Mouse, Rabbit
Label: HiLyte FluorTM 488,555,647

6×50μg-20℃

AS72001-50 ¥19,000

対応する1次抗体 : Mouse, Goat
Label: HiLyte FluorTM 488,555,647

6×50μg-20℃

AS72000-50 ¥19,000

対応する1次抗体 : Mouse, Rabbit
Label: HiLyte FluorTM 488,555,647

6×50μg-20℃

AS72002-50 ¥19,000

保存温度

Code No.

価

4℃

NKB-401¥12,000

包装

各5ml×1本®

格※Can Get Signal immunostainは、免疫組織染色における抗体反応を促進するよう至適化された抗体用バッファーです。Starter Setには、
反応促進効果の異なるSolution AとSolution Bの2種類の試薬がセットになっています。
お持ちの抗体に対して、より適した試薬を選択することができます。それぞれ単品販売もあります。お問い合わせください。

6

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Products

Dualsystems社 Yeast two-hybrid system
DUALmembrane Yeast two-hybrid system
膜タンパク質間相互作用を高感度で検出。画期的な Yeast two-hybridシステムです。
スプリットユビキチン法を用いたYeast two-hybridシステムです。膜タンパク質（膜関連タンパク質）間の相互作用を高感度で検出することができます。薬剤の主要ターゲットである膜タンパク質の相互作用研究にご使用いただけます。

1

STE2などのリーダーシーケンスをN末端に付加可膜タンパク質間の相互作用を検出可能

能なベクターなどを多数揃えています。また、コン・スプリットユビキチン法を用いることにより、今ま

トロール実験により、Baitに用いる膜タンパク質ので困難だった膜タンパク質間の相互作用を検出する

向きの妥当性等の検討を行いながら実験を進めることができます。すべてのベクターはユニークな SfiⅠ

ことができます。

2

サイトを有しており、効率的に遺伝子をサブクロー

高感度ニングすることができます。

・人工転写因子（LexA-VP16）、および高感度な3種

・Baitの発現は、抗LexA抗体を用い、ウェスタンブ

のレポーター遺伝子（HIS3, ADE2, lacZ）を有す

ロッティング等で確認することができます。Preyのる酵母株（NMY51）を用いることにより、高感度

発現はHAタグを指標にして確認可能です。

かつ特異性の高い相互作用の検出が可能です。

4

3

確実

簡便

・N末端側およびC末端側にNubG配列を有するPrey

・Bait作製用ベクターが充実しており、酵母で膜タン用のライブラリーを多種揃えています。受託によるパク質がER膜へ確実に移行できるようにSUC2やライブラリー構築サービスも行っております。

図1．スプリットユビキチンシステム原理
a：C（Cub）およびN側ドメイン（Nub）に分割されたユビキチンドメインは接近することにより相補し合いタンパク質を再構築します。一方、ユビキチンへ接合したタンパク質は酵母内で発現している脱ユビキチン化酵素で切断を受けることが知られています。左図のように、切断された
LexA-VP16は核へ移行しレポーター遺伝子を活性化します。本アッセイではCubに対するアフィニティーを改変されたNubG変異体が使用されます。
b：N末端およびC末端融合Baitにおける、切断部位。
（Preyは省略して記載）

図1b

参考文献

図2．検出例
Pex11タンパク質間での相互作用の検出。His選
択培地による増殖試験。

図1a

図2

1）Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102（20）: 7121-7126（2005）2）J. Biol. Chem., 280（24）: 22917-22924（2005）
装保存温度

Code No.

pBT3-N bait vector for typeⅡ baits

5μg

-20℃

DSP03230¥109,000

pBT3-C bait vector

5μg

-20℃

DSP03231¥109,000

pBT3-SUC bait vector for typeⅠ baits

5μg

-20℃

DSP03232¥109,000

pBT3-STE bait vector for typeⅠ baits without signal sequence

5μg

-20℃

DSP03233¥109,000

pPR3-N prey vector

5μg

-20℃

DSP03234¥109,000

pPR3-C prey vector

5μg

-20℃

DSP03235¥109,000

pPR3-SUC prey vector for typeⅠ preys

5μg

-20℃

DSP03236¥109,000

pPR3-STE prey vector for typeⅠ preys without signal sequence

5μg

-20℃

DSP03237¥109,0001set（各5μg）-20℃

DSP03238¥109,000

品 名 及 び 内 容

包Vector control set
・pCCW-Alg5, pAI-Alg5, pDL2-Alg5

7

価

格

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 8

保存温度

Code No.

1本

室温

DSP04005¥115,000DUALmembrane kit 3
・pBT3-N, pBT3-C, pBT3-SUC, pBT3-STE, pPR3-N, pPR3-C, pPR3-SUC,
pPR3-STE, pCCW-Alg5, pAI-Alg5, pDL2-Alg5, NMY5

1 kit

-20℃

DSP01001¥572,500

DUALmembrane starter package
・DUALmembrane kit 3, HTX beta-galactosidase assay kit, DS Yeast transformation kit

1 kit

-20℃

DSP09901¥641,500

DUAL membrane Western blotting control extracts（bait extract, prey extract）

50μl×2本-20℃

DSP06002¥26,000

Lex A（2-12）<抗LexA モノクローナル抗体 IgG1>【Santa Cruz製】

200μg/ml-20℃

SASC7544¥54,000

品 名 及 び 内 容

包NMY5 yeast reporter strain[MATa his3Δ200trip-901leu2-3,112 ade2LYS2::（lexAop）4-HIS3ura::（lexAop）8-lacZ ade2::（lexAop）8-ADE2 GAL4] <凍結乾燥品>

装

価

格

※営利団体・企業にご所属の方は、DUALmembrane kit 3、およびDUALmembrane starter packageをご購入いただく前に、Dualsystems Biotech社からライセンスを受ける必要があります。また、本システムを営利目的で使用される場合、別途ライセンス交渉が必要な場合があります。お問い合わせください。

DUALhybrid Yeast two-hybrid system
高効率なYeast two-hybridシステムです。Three-hybrid解析へも応用可能です。
古典的なY2Hシステムに様々な改良を加えた効率的なシステムです。可溶性タンパク質間の相互作用を高感度に検出します。

1

確実

3

柔軟

・LexA DNA binding domain（DBD）のC末端側・Gal4アクティベーティングドメイン（AD）を連結

およびN末端側にBait配列を連結することができましたpreyを発現する市販ライブラリーも用いることす。より確実に相互作用を確認することが可能です。

ができます。

・Baitの発現は、抗LexA抗体を用い、ウェスタンブ

4

ロッティング等で確認することができます。Preyの発現はHAタグを指標にして確認可能です。

2

Three-hybrid解析可能

・pY3H bridgeベクターを用いることにより、BaitとPreyの相互作用を仲介する分子のスクリーニング

高感度も可能です。

・高感度な3種のレポーター遺伝子（HIS3, ADE2,
lacZ）を有する酵母株（NMY51）を用いることにより、高感度かつ特異性の高い相互作用の検出が可能です。

図2．Bait発現例
BaitのN末端側が相互作用に必要なタンパク質の場合、
LexA DBDのN末端側にBaitを融合する。

図1．DUALhybrid system原理

参考文献

1）J. Biol. Chem., 279（16）: 16503-16510（2004）
品 名 及 び 内 容

包

装

保存温度

Code No.

価

格

pLexA-N bait vector

5μg

-20℃

DSP03105¥70,000

pLexA-C bait vector

5μg

-20℃

DSP03106¥70,000

pGAD-HA prey vector

5μg

-20℃

DSP03103¥70,000

pY3H bridging vector

5μg

-20℃

DSP03104¥70,000

DUALhybrid control plasmid set
1set（各5μg）
・pLexA-p53 control bait, pLexA-lamin C control bail, pACT-large T control prey

-20℃

DSP03107¥70,000

NMY5 yeast reporter strain[MATa his3Δ200trip-901leu2-3,112 ade2LYS2::（lexAop）4-HIS3ura::（lexAop）8-lacZ ade2::（lexAop）8-ADE2 GAL4] <凍結乾燥品>

1本

室温

DSP04005¥115,000DUALhybrid kit
・pLexA-N, pLexA-C, pGAD-HA, pLexA-p53, pLexA-lamin C, pACT-large T, NMY5

1 kit

-20℃

DSP01004¥168,000※DUALhybrid systemを用いるY2H解析はニューヨーク州立大の特許〈US5,283,173、US5,468,614〉によってカバーされております。営利目的での使用の場合、ライセンス交渉が必要な場合がありますので、ご注意ください。

8

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 9

DUAL Libraries〈DUALmembrane Yeast two-hybrid system用preyライブラリー〉
保存温度

Code No.

Human adult brain cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02203¥455,000

Human embryonal brain cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02213¥455,000

Human adult colon cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02215¥455,000

Human adult liver cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02216¥455,000

Jurkat T cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02205¥455,000

HeLa cell line cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02212¥455,000

Mouse adult heart cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02207¥455,000

Mouse adult brain cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02201¥455,000

S. cerevisiae cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02202¥455,000

Drosophila melanogaster whole adult cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02214¥455,000

Arabidopsis thaliana cDNA library / NubG-x

100μg×2本＊-20℃

DSP02210¥455,000

Human adult kidney cDNA library / x-NubG

100μg×2本＊-20℃

DSP02208¥455,000

Human adult liver cDNA library / x-NubG

100μg×2本＊-20℃

DSP02209¥455,000

Mouse adult heart cDNA library / x-NubG

100μg×2本＊-20℃

DSP02206¥455,000

Saccharomyces cerevisiae cDNA library / x-NubG

100μg×2本＊-20℃

DSP02211¥455,000

品

名

包

装

価

格

お問い合わせください

ライブラリー構築サービス＊：約7回分のスクリーニングに対応します。
※NubG-xで示されたライブラリーはPreyのN末端側にNubG配列を、x-NubGのものはPreyのC末端側にNubG配列を有しています。
〈DUALhybrid Yeast two-hybrid system用preyライブラリー〉
保存温度

Code No.

Mouse embryo cDNA library

100μg×2本＊-20℃

DSP02101¥300,000

Human adult colon cDNA library

100μg×2本＊-20℃

DSP02102¥300,000-20℃

DSP02103¥300,000

品

名包

HeLa cell line cDNA library

装100μg×2本＊

価

格

お問い合わせください

ライブラリー構築サービス＊：約7回分のスクリーニングに対応します。
※ライブラリーはすべて、PreyのN末端側にGal4 AD配列を有しています。
※市販のGal4 AD融合タンパク質を発現するpreyライブラリー（Clontech社 MatchmakerTM libraryなど）もご利用いただけます。

HTX beta-galactosidase assay kit
Y2H解析のβ-ガラクトシダーゼアッセイを定量化する簡便なシステムです。
Y2H解析におけるβ-ガラクトシダーゼ活性を簡便に定量化するためのキットです。
DUALmembrane やDUALhybrid systemでの検出に最適です。

1

簡便・ 一般的に広く行われているフィルターリフト法に比べ、簡便にアッセイすることができます。

2

正確・安定・正確な定量データを得ることができます。半定量プロトコールと定量プロトコー
ルを用いることができます。

図1．定量プロトコールでのアッセイフロー

品 名 及 び 内 容

包HTX beta-galactosidase assay kit

装

96×2ウェル分9

危図2．定量例

保存温度

Code No.

-20℃、室温

DSP01002

価

格¥39,500

QTL L
・No
・Po

危 本キット※詳しい情No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 10

DS Yeast transformation kit
高効率で酵母をトランスフォーメーション。Y2Hシステム用の遺伝子導入に最適です。
高効率かつ簡便な酵母形質転換用キットです。DUALmembrane やDUALhybrid systemでの形質転換に最適です。

1

高効率

・キャリアーDNAの純度を高めることによって、形質転換の効率を高めています。
（5×105〜2×106clones/μg DNA）

2

簡便・便利
Lane 1：DNAマーカー
Lane 2：2μg carrier DNA（本キット）
Lane 3：〃（5日間室温放置）
Lane 4：2μg carrier DNA（A社品）

・小スケールプロトコールと高効率プロトコール（ライブラリ
ー調製用）の2種類のプロトコールが準備されており、必要に応じた簡便な形質転換が可能です。

図1．Carrier DNAのサイズ・純度比較

保存温度

Code No.

DS Yeast transformation kit

1 kit＊-20℃、室温

DSP01003¥39,500

Single-stranded carrier DNA

1ml×3本-20℃

DSP06001¥27,000

品 名 及 び 内 容

包

装

価

格

＊：ライブラリー形質転換5回分に対応します。
※各製品の詳細に関しましては、http://www.dualsystems.com/をご参照ください。

Products

QTL LightSpeed ® Universal Assay Development Kit

本製品はすでに販売を中止して抗体・プロテアーゼ等を使用しない高性能なホモジニアスプロテインキナーゼ、ホスファターゼ活性測定システムです。
おります。

任意のTAMRAラベル基質ペプチドを準備いただくことで（図1）、任意のプロテインキナーゼ、ホスファターゼのハイスループ
ットアッセイシステムを簡便に構築することができます。阻害剤アッセイ、基質スクリーニング等に最適です。

1

抗体不要・洗浄不要

1 PKCαの阻害剤（84種）アッセイ

・スーパークエンチング法（図１）を用いるため洗浄工程が不要です。

384プレートを用いて84種類の化合物のPKAαに対す

2 一般的な蛍光プレートリーダーを用いて解析が可能

る阻 害 活 性を 調 べました。結 果 、R 0 3 1 8 2 2 0およびGF109203Xの2化合物に阻害活性を認めました。

＊

図1．スーパークエンチングを用いたアッセイ原理
QTLセンサー粒子表面のリン酸基結合担体（MⅢ）にリン酸化されたペプチドのリン酸基が結合する
ことにより、ペプチド末端のクエンチャー（TAMRA等）がQTLセンサー表面の蛍光ポリマーに接近するため、蛍光が消光します。
〈490nm〉（キナーゼアッセイ）。同時に、600nmの蛍光が放出され（エンハンスドエミッション）、2波長を測定することにより、より正確な阻害剤測定を行うことができます。（＊：アミド化末端ペプチドの方が良好な結果を示すことがあります。）

参考文献

1）Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(43): 15295-15300 (2004)
品 名 及 び 内 容危図2．490/600nm比から算出したPKCα活性値（n＝3）
励起：450nm、測定：490nm（クエンチング）、600nm（エンハンスドエミッション）
緑：N.C、青：P.C（Staurosporine）、赤：着色・蛍光物質
基質ペプチド配列：5-TAMRA-RFARKGSLRQKNV-NH2

包®

QTL LightSpeed Universal Assay Development Kit
・Non-phosphorylated peptide control ・Phosphorylated peptide control
・Post-reaction buffer ・10×Sensor ・Sensor Dilution Buffer

装400回用(30μl)
800回用(30μl)〈384ウェル用〉

保存温度
4℃

Code No.

格

QTK025K004 ¥180,000
QTK025K008 ¥287,000

危 本キットのパーツには、消防法における第4類第3石油類（等級Ⅲ）であるDMSOが含まれます。可燃性がありますのでご注意ください。
※詳しい情報に関しましては、www.qtlbio.comをご参照ください。他にも様々なタイプのアッセイキットがございます。

10

価

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 11

Products

Labeled protein kinase substrates

本製品はすでに販売を中止しております。

プロテインキナーゼの活性測定に最適な高純度N末端ビオチン化ペプチドとTAMRA標識ペプチドです。
TAMRA標識ペプチドはQTL LightSpeed® Universal Assay Development Kitの検討用としてもご使用いただけます。
Product Name（Biotin- or 5-TAMRA-）

容量

CREBtide

1mg

Kemptide

配列

Biotin-5-TAMRA格

関連する

Code No.

価

KRREILSRRPSYR

AS23986¥29,000

AS60511-1* ¥59,000

PKA

1mg

LRRASLG

AS60527¥25,000

AS29934-1* ¥53,000

PKA

PKA/PKC/MAPKAP-K1 Substrate

1mg

RRRLSSLRA-NH2**

AS60028-1*¥28,000

AS29984-1* ¥47,000 PKA/C

PKCμ Substrate

1mg

AALVRQMSVAFFFK

AS29927-1*¥24,000

AS29926-1* ¥60,000

PKC

PKC Substrate 51mg

RRGRTGRGRRGIFR

AS60545-1*¥29,000

AS60544-1* ¥59,000

PKC

PKCδ Substrate

1mg

RFAVRDMRQTVAVGVIKAVDKK

AS60534-1*¥29,000

AS60562-1* ¥59,000

PKC

Protein Kinase Cε Substrate

1mg

ERMRPRKRQGSVRRRV

AS60532-1*¥29,000

AS60531-1* ¥59,000

PKC

MARCKS Protein (154-165)

1mg

KKRFSFKKSFKL

AS29918-1*¥20,000

AS29916-1* ¥56,000

PKC

Glycogen Synthase (1-8)

1mg

PLSRTLSVAAKK-NH2**

AS29915-1*¥20,000

AS29914-1* ¥56,000

PKC

Neurogranin (28-43)

1mg

AAKIQASFRGHMARKK

AS29991-1*¥24,000

AS29992-1* ¥60,000

PKC

PKG Substrate 11mg

QKRPRRKDTP

AS29996-1*¥33,000

AS29995-1* ¥52,000

PKG

PKG Substrate 2

1mg

RKRSRAE

AS60301-1*¥16,000

AS60300-1* ¥65,000

PKG

BPDEtide

1mg

RKISASEFDRPLR

AS60509-1*¥29,000

AS60508-1* ¥59,000

PKG

Autocamtide-2

1mg

KKALRRQETVDAL

AS29930-1*¥21,000

AS29932-1* ¥57,000 CaMK

Autocamtide-3

1mg

KKALHRQETVDAL

AS29975-1*¥20,000

AS29976-1* ¥56,000 CaMK

Syntide 2

1mg

PLARTLSVAGLPGKK

AS29986-1*¥24,000

AS29987-1* ¥59,000 CaMK

Glycogen Synthase (1-10)

1mg

PLSRTLSVSS-NH2**

AS60517-1*¥29,000

AS60516-1* ¥59,000 CaMKCaM KinaseⅡ Substrate (281-291)

1mg

MHRQETVDCLK-NH2**

AS29957-1*¥18,000

AS29955-1* ¥53,000 CaMKAKT Substrate

1mg

ARKRERTYSFGHHA

AS29945-1*¥23,000

AS60505-1* ¥59,000

AKT

Crosstide

1mg

GRPRTSSFAEG

AS60513-1*¥29,000

AS60262-1* ¥59,000

AKT

CDK1 Substrate

1mg

HATPPKKKRK

AS60525-1*¥29,000

AS60524-1* ¥59,000

CDK

CDK5 Substrate

1mg

PKTPKKAKKLAS60027-1*¥18,000

AS29981-1* ¥52,000

CDK

Protein Kinase p34 (cd2) Substrate

1mg

ADAQHATPPKKKRKVEDPKDF

AS29919-1*¥36,000

AS29920-1* ¥77,000

CDK

MAP Kinase Substrate 3

1mg

KQAEAVTSPR

AS60297-1*¥17,000

AS60296-1* ¥66,000 MAPKEGF Receptor (661-681)

1mg

KRELVEPLTPSGEAPNQALLR-NH2**

AS29966-1*¥38,000

AS29967-1* ¥70,000 MAPK

GSK-3β Peptide

1mg

GPHRSTPESRAAV

AS60521-1*¥29,000

AS60520-1* ¥59,000

GSK

Casein KinaseⅠSubstrate1mg

RRKDLHDDEEDEAMSITA

AS60550-1*¥29,000

AS60549-1* ¥59,000

CK

Casein KinaseⅡ Substrate 2

1mg

RRADDSDDDDD

AS60540-1*¥29,000

AS60539-1* ¥59,000

CK

Tyrosine Kinase Peptide 1

1mg

KVEKIGEGTYGVVYK

AS60286-1*¥29,000

AS29935-1* ¥68,000

Tyrosine Kinase Peptide 1, amide

1mg

KVEKIGEGTYGVVYK-NH2**

AS23988¥22,000

EGFR Protein Tyrosine Kinase Substrate

1mg

ADEYLIPQQ

AS29936-1*¥30,000

Tyrosine Kinase Peptide 3

1mg

RRLIEDAEYAARG

AS22979¥16,000

Tyrosine Kinase Peptide 3, amide1mg

RRLIEDAEYAARG-NH2**

AS29990-1*¥12,000

AS29989-1* ¥58,000

p60c-src Substrate Ⅰ

1mg

YIYGSFK

AS60536-1*¥20,000

AS60529-1* ¥59,000

Insulin Receptor (1142-1153)

1mg

TRDIYETDYYRKAS24629¥24,000--

Insulin Receptor (1142-1153), amide

1mg

TRDIYETDYYRK-NH2**

AS23998¥30,000--

Code No.

価

格

主な酵素
cAMP
PKAに

MAPK

ヒト40
PKCμ
PKCに
組織や
PKCδ
基質認
PKCε

Myrist由来の
Glyco
CaMK PKCのPKCのMAPK （Km=
PKG特
PKG特
ウシ肺
に対す
Ca2＋/c
CaMK
由来し
CaMK
くいこと
CaMK
活性は
CaMK
の優れ
AKT/P
リン酸
Glyco
性を示
CDK1
HistonSimian
Ⅰ/Ⅱ、
Tyros
MAP
ます。
GSK-3
には認
Casei
よるリン
Casei
ティクス
CDCの

EGFR
-

-

AS29940-1* ¥56,000 EGFR
-

SRC
INSR

11

EGFR
pp60s

EGFR

* Code No.の末尾が -1 となっているものは、5mgの品揃えがございます。
**配列の末尾が-NH2となっているペプチドはC末端のカルボシル基がアミド化されています。
※非ラベルペプチド、FAM（緑色蛍光）ラベルペプチドも扱っております。お問い合わせください。

SRC
SRC

Src-fa[cdc2
InsulinNo.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 12

一口メモ
ホモジニアス酵素活性測定キット

QTL LightSpeed ®
Assay Kit

する

主な酵素

QTL LightSpeed® Assay Kitシリーズは、「スーパークエンチング技術」を用いるホモジニアス
酵素活性測定キットです。各キットにはそれぞれ基質がセットになっておりますが、基質を含まない『QTL LightSpeed® Universal Assay Development Kit』を購入いただくことで、各自オリジ
ナルのプロテインキナーゼ／ホスファターゼアッセイ系を構築することができます。蛍光標識ペプチド基質を別途ご準備していただく必要がありますが、AnaSpec社の蛍光ラベル化ペプチドを用いて検討いただくことも可能です。詳しくは本誌、P.10をご参照ください。

説明（Non-labeled peptideに対する知見です）

参考文献
Nucleic Acids Res., 20: 6106 (1992)

cAMP response element binding（CREB）proteinに由来する基質です。

Insect Biochem., Mol. Biol., 32: 505 (2002)
Eur. J. Biochem., 252: 245 (1998)
ヒト40S ribosome S6の231-239に相当する基質です。PKA、PKC、およびp90rsk kinase（MAPKAP-K1）の基質となります。 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 83: 5968 (1986),
MAPK
FEBS Lett., 175: 219 (1984), J. Biochemistry, 42: 849 (2003)
J. B. C., 278: 319 (2003), J. B. C., 277: 45451 (2002),
PKCμ特異的基質です。
J. B. C., 272: 952 (1997)
J. B. C., 381: 19-27 (2000), J. B. C., 274: 30722-8 (1999)
PKCに高度に特異的な基質の一つです。Hepatitis C virus（HCV）の非構造タンパク質3の1487-1500に相当します。
組織や細胞のクルードエキストラクト中のPKCの活性を測定するのに有用です。
J. B. C., 277: 41850 (2002), J. B. C., 270: 6156 (1995),
PKCδ特異的な基質です（Km=22.9μM）。431にThrを有するマウスeEF-1aの422-443に由来します。Arg429がPKCδのJ. B. C., 266: 14390 (1991)
基質認識（特異性）に重要な役割を果します。
J. B. C., 265: 7301 (1990), FEBS Lett., 243: 351 (1989)
PKCεに対して高い特異性を示す人工基質です（Km=68μM）。
PKAに対する優れた基質です（Km=16μM）。PKA以外にも様々なキナーゼの基質になります。

Myristoylated alanine-rich C-kinase substrate（MARCKS）に由来します。本基質は、protein kinase C（PKCα、β、天然由来のPKCδ、ε、
θやatypical PKCξ）の幅広い基質となることが調べられています。
2+
Glycogen synthaseに由来するCa /calmodulin-dependent protein kinaseⅡ（CaMKⅡ）およびPKCの優れた基質です。
CaMK PKCのKmは約4.1μMです。
PKCの天然基質であるneurograninに由来するPKCの合成基質です。特にPKCに特異性が高いことが調べられています
MAPK （Km=150nM）。PKAやCaMKⅡ等にはあまりリン酸化を受けないことが報告されています。
PKG特異的基質です。PKG Ia（Km=226μM）に比べ、PKGⅡ（Km=84μM）への反応性に優れます。
PKG特異的基質です。PKGⅡ（Km=305μM）に比べ、PKG Ia（Km=59μM）への反応性に優れます。

Pharmacol. Ther., 93: 271 (2002), J. B. C., 272: 4072 (1997),,
J. B. C., 268: 1501(1993)
Biochem. J., 268: 303 (1990), J. B. C., 262: 772 (1987),
J. B. C., 260: 14471 (1985)
Biophys. J., 72: 554 (1997),
Biochemistry, 32: 1032 (1993)
Cell, 112: 77 (2003), J. B. C., 274: 3485 (1999)

J. B. C., 274: 3485-95 (1999), J. B. C., 221: 581-93 (1994)

ウシ肺cGMP-specific phosphodiesterase（cG-BPDE）に由来する基質です。PKA（Km=320μM）に比べPKG（Km=68μM）J. Pharmacol. Exp. Ther, 283: 885 (1997),
J. B. C., 258: 11391 (1983)
に対する選択性が高く、PKCやCaM kinaseⅡによってはリン酸化を受けません。
Brain Res., 962: 41 (2003), Brain Res., 851: 54 (1999),
Ca2＋/calmodulin-dependent protein kinase（CaMK）特異的な基質です。
J. Am. J. Physiol., 274: E708 (1998)
J. Appl. Physiol., 88: 352 (2000),CaMKⅡに特異的な合成基質です。配列は、autoinhibitory domainとして知られているCaMKⅡ pseudosubstrate coreに
J. B. C., 274: 26199 (1999)
由来します。
CaMKⅡおよびPKC特異的な基質です。ホスホリラーゼキナーゼおよびmyosin light chain kinaseによってリン酸化を受けに Neurosci. Lett., 336: 121-5 (2003), B. B. R. C., 215: 861-7 (1995);
Arch. Biochem. Biophys., 252: 418-25 (1987)
くいことが知られています。
CaMKⅡ（Km=7.5μM）に対する合成基質です。本ペプチドに対する最大活性を得るには、Ca2＋とcalmodulinが必要であり、 Brain Res., 962: 41 (2003),
2＋
J. B. C., 265: 17613 (1990)
活性はCa 濃度に依存します。
CaMKⅡの自己リン酸化部位を含む合成基質です。Native CaMKⅡ（Km= 136μM）および活性型フラグメント（Km= 54.3μM）Neurosci. Lett., 336: 121 ( 2003),
J. B. C., 266: 15391 (1991)の優れた基質となることが知られています。
AKT/PKB/Rac-protein kinaseに対する合成基質です（Km=3.9μM）。このペプチドの存在によりAKTによるHistone H2Bの J. B. C., 275: 36108 (2000),
Annu. Rev. Biochem., 68: 965 (1999)
リン酸化は競合阻害を受けます（Ki=12μM）。
Glycogen synthase kinase-3 に由来する合成基質です。AKT1/PKBa、AKT2/PKBb、およびAKT3/PKBgにほぼ同等の特異 B. B. R. C., 293: 1191 (2002), J. B. C., 272: 30491 (1997),
性を示します。MAPKAP kinase-1およびp70S6Kによってもリン酸化されます。AKT以外にも様々なキナーゼの基質となります。Annu. Rev. Biochem., 68: 965 (1999)

J. Biochemistry, 42: 849-56 (2003), Cell, 112: 243-56 (2003)

CDK1の基質です。

J. Biochemistry, 42: 849-56 (2003), J. B. C., 274:
9600-6 (1999)
Simian virus 40 large T antigen配列に由来する基質であり、p34cdc2 の特異的な基質である（Km=74μM）。CaM kinaseⅡ、Casein kinase J. B. C., 278: 5062 (2003),
Ⅰ/Ⅱ、Glycogen synthase kinase-3、Phosphorylase b kinase、PKA、およびPKCなどのプロテインキナーゼによってはリン酸化を受けません。 J. Cell. Biochem., 45: 391 (1991)
Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 89: 2365-9 (1992), Ann. N. Y. Acad.
Tyrosine hydroxylaseの24-33に対応します。Ser31はMAP kinaseの共通リン酸化サイトです。
Sci., 973: 265-7 (2002), Int. J. Impot. Res., 14: 217-25 (2002)
MAP kinase（ERK1/ERK2およびp44/p42 MAPK）に対する優れた基質です。ERKタンパク質はスレオニン残基をリン酸化し Int. J. Impot. Res., 14: 217, J. B. C., 268: 7646 (1993),
J. B. C., 266: 15277 (1991)
ます。
GSK-3βによって認識されるPresenilin 1の親水ループドメインに由来する基質です。p38α、p38β、PKC、およびCasein kinaseⅡ Mol. Biol. Cell, 14: 302 (2003),
J. B. C., 276: 7366 (2001)には認識されません。
Casein kinaseⅠ特異的基質です（Km:172μM）。Vmaxはカゼインを基質とした場合に比べ約6倍高く、Casein kinaseⅡに B. B. R. C., 198: 898 (1994),
Cell Mol. Biol. Res., 40: 383 (1994)
よるリン酸化は無視できるレベルです。
Casein kinaseⅡ特異的基質です。Casein kinaseⅠによってはリン酸化を受けません。150mM NaClの存在下で良好なキネ J. B. C., 278: 4474 (2003), Arch. Biochem. Biophys., 325: 289(1994); B. B. R. C., 198: 898 (1994)
ティクスを示し、その時のKmは約60μMです。
J. Cell Physiol., 194: 13 (2003),
CDCの26-20に由来する基質です。様々なチロシンキナーゼの幅広い基質となります。
Clin. Cancer Res., 9: 516S (2003),
Int. J. Pept. Protein Res., 45: 587 (1995)
Histone H1 peptide に由来する基質です。CDK5の効果的な基質として働きます（Km=40μM）。

SRC

EGFR protein tyrosine kinaseの基質です。CaMKの基質としても使用されることがあります。

Cell, 80: 225 (1995), Nature, 373: 573 (1995)

pp60srcに由来する基質であり、様々なチロシンキナーゼの基質として使用されます。

J. Cell Physiol., 194: 13 (2003),
Clin. Cancer Res., 9: 516S (2003),
Int. J. Pept. Protein Res., 45: 587 (1995)

Src-family チロシンキナーゼ特異的基質です。p60c-srcに対するKmは55μMである。これは、p34cdc2に由来する基質[cdc2（6-20）, KVEKIGEGTYGVVYK]に比べ約6.4倍低い値です。
Insulin receptorチロシンキナーゼ（INSR）の基質です。

Int J. Pept. Protein Res., 45: 587-92 (1995),
Harvey Lect., 94: 81-119 (1998)
Eur. J. Biochem., 226: 525 (1994)

SRC

12

No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 13

品名Blend TaqR○

Blend Taq®

包装

Code No.

価格

50Units × 1本
250Units × 1本
1,000Units × 1本
1,000Units × 3本

BTQ-101T
BTQ-101
BTQ-102
BTQ-103￥5,000￥19,000￥62,000￥170,000

50Units × 1本
250Units × 1本

BTQ-201T
BTQ-201￥6,000￥21,000

Blend Taq○ -Plus(Hot Start Version)
R

次世代の改良型Taqポリメラーゼです。幅広いターゲットを効率良く、確実に増幅できます。

PCR酵素の新スタンダード

方法

反応は、取扱説明書に従い、以下のようにPCR mixtureを調®

1 Blend Taq を用いたPCR実施例

製しました。
D.W.

33.5（μl）

10×Buffer for Blend Taq®

52mM dNTPs

5

Primer F（10μM）

1

Primer R（10μM）

1

Template DNA（5〜200ng） 4
Blend Taq® （2.5units/μl）

0.5

Total

50μl

PCRサイクルは、基本的に以下の表に従い実施しました。すなわち、6kb未満のターゲットに対しては3ステップで、6kb以

はじめ に上のターゲットに対しては2ステップのサイクルを用いました。

今日、各社より様々なPCR用酵素が販売されていますが、そさらに10kb以上のターゲットの場合は、dNTPの終濃度を0.3mMにして実施しました。

れらは主にPolⅠ型、α型、および混合型に大別できます。なかでもTaqに代表されるPolⅠ型酵素は、優れたDNA合成能を持つことから、PCR技術発明当初より幅広く使用されています。しTargetSegment

かしながら、PolⅠ型酵素には3'→5'Exonuclease<1kb（Proofreading）活性がないことから、間違った塩基を取り込んでしまった場合には伸長反応がストップし、その結果として、増幅できるターゲットのサイズや増幅量には限界があることが知られています。一方、KODやPfuに代表されるα型の酵素は、3'→
5'Exo活性を有し、間違って取り込んだ塩基を除去・修復することができます。しかし、その強いExo活性故にPCR効率の点では

>6kb

1

94℃
2min.

2 Denaturation

94℃
30sec.＊1

3 Annealing

Primer Tm-5℃（55〜60℃）
30sec.

4 Extension

一般的にPolⅠ型に劣ると言われています。そこで、PolⅠ型酵

1kb〜6kb

72℃
1min.

72℃
1min./kb PCR target

Numberof
Cycles168℃
1min./kb PCR target＊230＊1：ターゲットによっては、98℃、5〜10秒の条件にて良好な結果が得られる場合もあります。
＊2：6kb以上の長いターゲットの場合はプライマーのTmが70℃以上になるように設計します。

素に微量のα型酵素を加えることにより両者の欠点を補い、長所を合わせ持つようにしたのが混合型の酵素です。
Blend Taq®及びBlend Taq® -Plus-は、Taq DNAポリメラー
ゼをベースにα型酵素を最適な割合でブレンドした混合型酵素です。α型酵素の種類及びそのブレンド比を徹底的に検討すること

結果により、増幅効率、伸長性において非常に優れたものとなってい

1. 種々のサイズの遺伝子をターゲットとした伸長性の評価ます。さらに、Blend Taq® -Plus-においては、抗Taqモノクロ

Human β-globin遺伝子あるいはhuman myosin heavyーナル抗体により、簡便にホットスタートPCRを行うことがで

chain遺伝子をターゲットとして、種々のサイズの増幅を試み

き、高い特異性が得られます。

ました。鋳型にはヒトゲノムDNA100ngまたは200ngを使

今回は、本酵素の持つこれらの特長についてご紹介いたします。

用しました。また、同時に、比較のため他社混合型酵素を用いて、その推奨条件にてPCRを行いました。
その結果、Blend Taq® およびBlend Taq® -Plus-では、ターゲット長が23.0kbでも良好な増幅が見られ、他社混合型酵
素と比べて優れた伸長性を示すことが確認できました（図1）。
また、Blend Taq®で認められる若干の非特異的増幅バンドがBlend Taq® -Plus-では見られず、ホットスタートの効果も確認できました。

13

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 14

M

1

2

3

4

5

6

7

8

M

M

1

Blend Taq®

2

3

4

5

6

7

8

M

M

1

2

Blend Taq® -Plus-

3

4

5

6

7

8

M

A社混合型酵素
Lane M : 1kb DNAラダーマーカー
Lane 1 : β-globin
1.3kb
Lane 5 : Myosin h.c. 6.2kb
Lane 2 : β-globin
2.7kb
Lane 6 : β-globin
8.5kb
Lane 3 : β-globin
3.6kb
Lane 7 : β-globin 17.5kb
Lane 4 : Myosin h.c. 5.2kb
Lane 8 : β-globin 23.0kb

図1．種々のサイズの遺伝子をターゲットとした伸長性の評価

2. 微量サンプルを鋳型とした増幅効率の評価
Blend Taq®

ヒトゲノムDNAを段階希釈したものを鋳型として、
1

Human β-globin遺伝子3.6kbの増幅を試みました。

2

3

4

Blend Taq® -Plus5

M

1

2

3

4

5

A社混合型酵素
M

1

2

3

4

5

その結果、Blend Taq® 及びBlend Taq® -Plus-では、ゲノムDNA 5ngを鋳型とした場合でも明瞭な増幅を確認でき、他社混合型酵素と比べて優れた増幅効率を示すことが確認できました（図2）。

まとめ
以上、本コーナーでは、Blend Taq® の優れた伸長性および増幅効率についてお示ししました。また、本酵素は、Taq
ベースのPCR酵素であるため、Taqと同じサイクル条件を

図2．微量サンプルを鋳型とした
増幅効率の評価

適用でき、PCR産物のTAクローニングが可能なことも特長

Lane M : 1kb DNAラダーマーカー
Lane 1 : Templateなし
Lane 2 : ゲノムDNA 5ng
Lane 3 : ゲノムDNA 10ng
Lane 4 : ゲノムDNA 20ng
Lane 5 : ゲノムDNA 40ngです。なお、Blend Taq® は、Taqの3〜4倍の正確性を持っていますが、さらに正確性を要する用途には、弊社のHigh Fidelity酵素KOD、KOD -Plus-もしくはKOD -PlusVer.2を用いられることをお奨めします。
最後に、Blend Taq® を使用された先生方からいただいた
PCR実施例をご紹介させていただきます。紙面の都合上、一部しかご紹介できませんが、多くの先生方にご好評いただ

参考文献

いています。反応条件等の詳細は、http://www.toyobo.

Barns,W.M.,Proc.Natl.Acad.Sci. USA,91:2216-2220（1994）

co.jp/bioをご覧ください。

ユーザーの先生方からご提供いただいたBlend Taq®使用例
マガキのミトコンドリア領域のPCR

PC12細胞からの細胞分化因子のRT-PCR
M

M

1

2

3

4

5

6

7

1

2

3

8
Lane M : 100bpラダーマーカー
Lane 1 : Blend Taq®
Lane 2 : Blend Taq® -PlusLane 3 : A社混合型酵素

1,000bp→

資料ご提供：
大阪府立大学大学院
農学生命科学研究科 獣医学専攻
細胞分子生物学研究室
竹中 重雄先生500→
500bp→

ES細胞からのRT-PCR
M
マガキ（Crassostres gigas ）ミトコンドリア領域A 1−4
マガキ（Crassostres gigas ）ミトコンドリア領域B 5−6

Lane
M : 100bpラダーマーカー
0.050U/10μl
Lane 1、5 : Blend Taq®
0.125U/10μl
Lane 2、6 : A社混合型酵素
0.050U/10μl
Lane 3、7 : A社混合型酵素
0.025U/10μl
Lane 4、8 : A社混合型酵素

1

2

3
Lane 1 : Blend Taq® -PlusLane 2 : Blend Taq®
Lane 3 : A社混合型酵素

資料ご提供：
長崎大学大学院生産科学研究科
博士後期課程 沖本 宜音先生
宮崎大学大学院農学研究科
水族生理学分野 荒西 太士先生

14

資料ご提供：
大阪大学微生物病研究所
遺伝子動態研究分野

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 15®

®

2 Blend Taq およびKOD Dash を用いるコロニーダイレクトPCR
はじめ に
®

®

Blend Taq およびKOD Dash は混合型PCR用酵素であり、優れたパフォーマンスが必要なPCRに幅広く応用することができます。
今回、一般的な研究室において最も頻繁に行われていると予想される、大腸菌コロニーを直接鋳型とするインサートチェックPCRへ本酵素を応用した例をご紹介いたします。それぞれの酵素には、以下のような特性があり、それぞれの用途に応じて使い分けることで、最適な結果を得ることが可能です。

Blend Taq®

説

特

明

長

KOD Dash®

高度に精製されたTaq DNAポリメラーゼに3'→5' Exonuclease

3'→5' Exonuclease活性を欠損させたKOD DNAポリメラーゼ

活性を有するDNAポリメラーゼを最適な混合比でブレンドするをベースとして、KOD DNAポリメラーゼを混合した高効率DNA

ことにより、優れたパフォーマンスを実現した高効率DNAポリ

ポリメラーゼ。合成速度に優れ、かつ安定なKOD DNAポリメラ

メラーゼ。

ーゼの利点を継承している。

①確実

①確実

②Taq DNAポリメラーゼ感覚で条件を設定可能②短時間増幅（伸長時間30sec. / 1kb）

③安価（¥19,000 / 250U）③PCR溶液とした後、そのまま凍結保存し、何度も凍結融解し④場合によっては、ホットスタート可能なBlend Taq® -Plus- をながら使用することが可能。

使用することも可能。

方法

コロニーダイレクトPCRの推奨反応条件を図1に、操作フローを図2に示しました。
今回は、弊社TAクローニングキット:TArget CloneTMを用いて、pTA2 Vectorに4.5kbのPCRプロダクトをクローニングした後、コロニーダイレクトPCRを行って、インサートの有無を確認しました。比較のため、同一コロニー（宿主はJM109使用）について
Blend Taq®およびKOD Dash®を用いて増幅を実施し、5μlを1%アガロースゲルにて解析しています。プライマーおよびPCRサイク
ルは図1および下記に示した条件を用いました。

〈Primer配列〉〈アニーリング温度および伸長時間〉

F primer：TCGAGGTCGACGGTATCGAT（20mer GC＝55%）

Blend Taq® アニーリング：55℃、伸長時間：4.5min.

R primer：CGCTCTAGAACTAGTGGATC（20mer GC＝50%）

KOD Dash® アニーリング：60℃、伸長時間：2.5min.

※プライマーはベクター上に設計

図1．それぞれの酵素におけるコロニーダイレクトPCRの反応条件

15

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 16Lane

M：1kbラダーマーカー

Lane 1〜4：各コロニー
図3．PCR結果

TM

結果及び考察
4つのコロニーにおいて、いずれも良好な結果を得ることができました。3コロニーにインサートが挿入されていたことが確認できます。プライマーダイマーの生成はほとんど確認できませんでした。またデータは示しませんが、精製後の図2．コロニーダイレクトPCRの操作フロー

シーケンス解析結果も良好でした。

品 名 及 び 内 容®

KOD DashTArget CloneTM
MagExtractor

TM

Magical Trapper-PCR & Gel Clean up【磁性スタンド】

保存温度

Code No.

価

250U×1本-20℃

LDP-101¥25,000

10回用

-20℃

TAK-101¥12,000

200回用

室温

NPK-601¥25,000

1個

室温

MGS-101¥38,000

包装格

本製品はすでに販売を中止しております。

世界各地の提携先より提供された様々な病理組織を、厳密な品質管理の下、詳細な臨床データを添えてお届けいたします。

充実のラインナップ
世界各国40ヶ所以上の提供先から提供された病理組織を臨床データを添えて約10万サンプル（2004年末現在）保有しております。お客様のご要望にマッチしたサンプルを検索し、ご提供いたします。事前に各検体のHE画像、RNAの品質、既住歴、投薬歴などの臨床データをご覧
いただけます。

豊富な保存形態・関連試料
凍結切片、パラフィン包埋切片（FFPE）の他、血清、血漿、RNA、
DNAもお届け可能です。

倫理面での厳格な対応
これらの検体は、研究、臨床開発用途での使用を目的とした試料、関連情報の提供、保有に適応されるすべての法律、規則、ガイドラインに従って入手、提供されています。
1）すべてのサンプルでインフォームドコンセントが得られています。
2）すべてのサンプルで2度にわたる匿名化が行
われています。
3）サンプルの分譲にあたっては、弊社とのMTA（Material Transfer Agreement）の締結及び、御使用される施設の生命倫理委員会での承認が必要になります。

※詳細につきましては右記ホームページにてご覧いただくことができます。http://www.asterand.com

16

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 17

ン ペ ーン
上市キャ

Toxi-BlockerTM Transfection Supplement 40%off
トランスフェクション時に生ずる細胞毒性を低減するための試薬の登場です。
Toxi-BlockerTMは、核酸を動物細胞にトランスフェクションする際に生ずる細胞毒性（Toxi）をブロック（Block）し、生存率を向上させる添加剤（Supplement）です。

1

本製品はすでに販売を中止しております。

簡便・実 験 方 法 は 、 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 後 に 、 T o x i BlockerTMを添加するだけです（図1）。
トランスフェクション条件は変更の必要がありません。
・多くの場合において、遺伝子導入効率を低下させることなく、生存率を高めることができます。
※本品は、トランスフェクションの補助的な働きはしますが、遺伝子導入効率を高める効果はありません。

図1．Toxi-BlockerTMを用いた実験フロー

1

Neuro 2a細胞での検討結果

Neuro 2a細胞を対象に、LipofectamineTM 2000（Invitrogen社製）を用い、β-gal発現plasmidをトランスフェクシ
ョンしました。トランスフェクションの6時間後にToxi-BlockerTMを添加し、更に2日間培養後、β-gal染色を行いました（図2）。
従来法（Toxi-BlockerTM未添加）では、効率のよい遺伝子導入が見られましたが、強い細胞毒性が現れていました。一方、
Toxi-BlockerTMを添加することにより、従来法で見られた細胞毒性を大幅に低減することが可能でした（図3）。また、遺伝子導入効率は、従来法とほぼ同等であったことを確認しています。

Toxi-BlockerTM

従来法

TM

図2．遺伝子導入結果

品名及び内容Toxi-Blocker

TM

Transfection Supplement［β-gal染色］

包

装

1ml

保存温度

Code No.

通常価格

キャンペーン価格

4℃

TFP-101¥22,000¥13,200＊ 本製品は、2006年4月20日〜2006年5月19日（御注文分）の間、40％offにてご購入頂けます。

17

図3．生存率と遺伝子導入効率＊

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 18

本コーナーでは、この実験をするためにはどの試薬を用意し、どの様に実験を進めればよいかをご案内いたします。
皆さまの日々の実験にご参考ください。

MultiReporter Assay System -Tripluc®を用いるマルチ遺伝子発現制御解析
多色同時測定可能な新時代のマルチレポーターアッセイシステムです。
はじめ にレポーター遺伝子を用いる遺伝子発現制御解析は、レポーター遺伝子にシス作用性エレメント（プロモーター、エンハンサー、サイレンサーなど）を連結して細胞に導入し、ある条件下で発現されるレポーター酵素の活性を指標に遺伝子発現制御を評価する手法です。この方法で問題となるのは、
遺伝子導入効率、細胞数、生育状態など遺伝子発現の変動に起因しない、
サンプル間のバラツキが生じてしまうことです。そのため、被験対象となるレポーターの他に、内部標準となるレポーターが必要です。さらに、生命現象の発現において、様々な遺伝子が関与していることからも、複数のレポーターを用いた解析は有効なツールと考えられます。
弊社では、緑色発光ルシフェラーゼ（SLG、最大発光波長550nm）、
橙色発光ルシフェラーゼ(SLO、580nm)、赤色発光ルシフェラーゼ（SLR、630nm）の3色のルシフェラーゼ遺伝子を用いたマルチ遺伝子
転写活性測定システムMultiReporter Assay System -Tripluc®-を販売
し、ご好評をいただいております。本
TM稿では、あらためて本システムを用いた遺伝子発現制御解析について、実験のフローに沿ってご紹介させていただ
きます。
図1．緑色・橙色・赤色発光ルシフェラーゼの発光スペクトル

被験配列のクローニング

図2．MultiReporter Assay System -Tripluc®-を用いた遺伝子発現制御解析のフロー

イプの他にTAクローニングタイプもあります。
TAクローニング法は制限酵素処理等を必要としないため、PCR(1) ルシフェラーゼの選択
MultiReporter Assay System -Tripluc®-では、3色の発光産物を効率的にクローニングすることが可能です。弊社では、こルシフェラーゼをご用意しております。勿論、同時に調べたい被のTAクローニング技術をプロモーター解析にもご利用いただく験配列（シス作用性エレメント）の数などによって、1色あるい

べく、SLO/SLR TA Cloning Kitとしてご提供しております。

は様々な組合せで2色のルシフェラーゼだけでもご使用いただけ

また、SLO/SLR TA Cloning Kit for KODは、高フィデリテ

ます。表1に選択の目安をまとめていますのでご参照ください。

ィー酵素の特性上平滑末端産物を生じやすく、TAクローニング

1色でご使用いただく場合は、SLGないしSLOルシフェラーゼを苦手とするKODシリーズのPCR産物においても、簡便にTAク
ローニングが行えるように工夫されたキットです。

をご使用ください。酵素及び測定機に用いられる光電子増倍管のプロモータースクリーニングなどを目的として、多くの種類の特性上、SLRに比べ強いシグナルを取得することが可能です。
2色でご使用いただく場合は、発光波長域の重なりの少なく、遺伝子プロモーターを同時にクローニングしたい場合、あるいはより精度の高い計測を行うことのできる、SLG、SLRの組合せ

転写活性機能部位の特定のために特定プロモーターデリーションをお薦めします。シグナル強度などによりSLRでは解析が難しいシリーズなどを作製されたい場合など、効率的なクローニングに場合には、SLGと被験配列・内部標準の組合せを入れ替えて使用

ご利用いただけます。

するか、SLOを用いることも可能です。
3色でご使用いただく場合には、被験配列をSLO、SLRに、内遺伝子導入部標準をSLGとして用いることをお薦めします。シグナルの強い

通常よく用いられる1色系のアッセイでは、単に被験配列をク

SLGを内部標準として用いることによって、内部標準プラスミド

ローニングしたベクターを用いて比較を行いますが、本システムの添加量を低く抑えることができます。

ではサンプル間のバラツキを補正するため、内部標準となる一定

また、サーカディアンリズムや刺激応答など、ダイナミックな発現プロモーターに連結されたルシフェラーゼ遺伝子を有する、

遺伝子変動を解析する場合には、近日発売予定の不安定化ルシフ

内部標準ベクターを同時トランスフェクションするアッセイをおェラーゼ（-short lifeタイプ-）をご利用ください。

奨めしています（2色系や3色系による同時解析）。MultiReporter
Assay System -Tripluc®-では構成発現プロモーターベクター(2) TAクローニング

として、SV40プロモーターまたはHSVtkプロモーターをレポ

被験配列挿入用ベクターには、各レポーター（ルシフェラーゼ）遺伝子の上流にマルチクローニングサイトを含むスタンダードタ

ーターの上流に組み込んだ、2種類の内部標準用ベクターをご用意しております。

18

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 19

表1．レポーターの選択の目安(1) SV40プロモーター
発現活性が高いため、トランスフェクション効率の低い細胞株

溶液を用いる場合など、シグナルのレベルに問題がある場合に特に有効です。
(2) HSVtkプロモーター
図3．in vivo 計測

発現活性が低い一方、SV40プロモーターに比べ薬剤などの実
験処理により変動する可能性が低く、より安定した内部標準として有用です。

計

測(1) in vivo計測（非破壊計測）
ルシフェラーゼ遺伝子が導入された細胞の培養液中にDluciferinを添加して細胞内へ浸透させ、細胞を破壊することなく、
ルシフェラーゼ活性を計測する方法です。In vitro計測と比較してシグナル強度は低くなりますが、同一サンプルで転写活性の経時変化を調べたい場合に有効です。インキュベーター機能付ルミ
ノメーター（ATTO社「クロノス」など）を用いることによって、TM

さらにリアルタイムな変動を解析することが可能です。
図4．in vitro 計測（チューブ測定）(2) in vitro 計測（破壊計測）
MultiReporter Assay System -Tripluc ®- Detection
Reagentを用いて検出します。
ルシフェラーゼ遺伝子が導入された細胞を必要に応じて薬剤刺激処理した後、培地を除去し、溶解剤Lysis Solutionで細胞を溶解し、このライセートに発光基質Assay Reagentを加え、発光を測定します。サンプル数が少ない場合にはライセートの一部をとり、発光基質を加え、カラフルックアナライザーTMのような色分離機能つきチューブタイプのルミノメーターで測定を行うことができます。一方、サンプル数が多い場合には、白色不透明タ
イプの96ウェルプレートに細胞を培養し、このプレートのまま、
Lysis Solutionによる細胞の溶解、Assay Reagentによる検出・測定を行います。この96ウェルプレートの使用例については、次号のUploadにてご紹介する予定です。
図5．in vitro 計測（プレートリーダー測定）

最後に、次項に2色系および3色系において、in vitro 計測によって遺伝子発現制御解析を行った例をご紹介いたします。是非、一度
MultiReporter Assay System -Tripluc®- をお試しください。

19

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 20

使 用 例
1. 2色系での使用例

2. 3色系での使用例

ハウスキーピング遺伝子として知られる10種類の遺伝子について、転写開始（予測）点より上流1.4kbまたは0.5 kbから下流0.1kbをKOD
plusでPCR増幅し、SLR TA Cloning Kit for KODを用いてSLR遺伝
子上流にクローニングし、pSLG-SV40 controlとJurkat細胞にコトラ
ンスフェクションした。細胞を遠心操作で回収後、Detection
Reagentsで検出し、内部標準であるSLGに対する相対活性として各遺伝子プロモーターの転写活性を評価しました（詳細は、Upload80号、P.13、14に掲載されておりますので、合わせてご参照ください）。

pSLO-test、pSLR-testの上流にSV40プロモーター、さらに上流にAP1またはNFκB応答エレメントを挿入した。これら2つを内部標準
HSVtk-SLGとともにHeLa S3細胞にトランスフェクションした。
24時間後、下記の薬剤を添加し、3時間インキュベートした。
Detection Reagentsで検出し、未処理条件のルシフェラーゼの活性を１として、各条件でのルシフェラーゼの活性をプロットしました

参考文献
1. バイオテクノロジージャーナル, 7-8: 453-455 (2005)
2. Biotechniques, 38: 891-894 (2005)

装

保存温度

Code No.

価

プロモーター挿入用ベクター

品 名 及 び 内 容
pSLG-test

20μg

包

-20℃

MRV-101¥80,000

格

プロモーター挿入用ベクター

pSLO-test

20μg

-20℃

MRV-102¥80,000

プロモーター挿入用ベクター

pSLR-test

20μg

-20℃

MRV-103¥80,000

SV40コントロールベクター

pSLG-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-201¥80,000

SV40コントロールベクター

pSLO-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-202¥80,000

SV40コントロールベクター

pSLR-SV40 control

20μg

-20℃

MRV-203¥80,000

HSVtkコントロールベクター

pSLG-HSVtk control

20μg

-20℃

MRV-301¥80,000

SLO TA Cloning Kit

20回用

-20℃

MRT-101¥65,000

SLR TA Cloning Kit

20回用

-20℃

MRT-102¥65,000

SLO TA Cloning Kit for KOD

20回用

-20℃

MRT-201¥69,000

SLR TA Cloning Kit for KOD

20回用

-20℃

MRT-202¥69,000

100回用
500回用
10,000回用-80℃

MRA-101
MRA-102
MRA-103¥30,000¥99,000¥1,350,000

D-luciferin（カリウム塩）

20 mg
100 mg-20℃

MRL-101
MRL-102¥24,000¥92,000

カラフルックアナライザーTM

1式−

CLX-101¥1,350,000

MultiReporter Assay System -Tripluc®- in vitro アッセイ用試薬

Detection Reagents・Lysis Solution ・Assay Reagent
MultiReporter Assay System -Tripluc®- in vivo アッセイ用試薬※特許の関係上、ご購入の際には別途申込書を提出していただきます。企業の方のご購入に関しては、別途ライセンスが必要です。詳しくは弊社までお問い合わせください。
※ベクターに関しては別途セット販売をしております。詳しくは、弊社までお問い合わせください。

20

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 21;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;
皆様から実験のコツ、成功・失敗談を募集いたします！

今回、新企画として『みんなの広場』というコーナーを始めさせていただくことになりました。皆様の日々の研究の中で、「こうやったら実験がうまくいった。皆この方法を使えばいいのに・・・」とか、逆に「あの方法には、実は○○○○○○という欠点が潜んでいる。他の人が失敗しないように、伝えたいのだけれど・・・」といった潜在的な要望をお持ちの方はいらっしゃいませんか？このような事例は論文として発表されることはほとんどありませんが、皆様の研究に大きな影響を及ぼしていることも多々あると予想されます。
このコーナーは、そのような皆様の事例を掲載させていただくことで、今まで共有できなかった種類の情報を共有することを目的とします。
多くの皆様のご投稿をお待ちしております。

募集要項
投稿方法
Web上から受け付けております。弊社ホームページ（URL：http://www.toyobo.co.jp/bio）へアクセス願います。

原稿内容・文字数の目安：100〜400文字程度（あまり文字数が多い場合には、ご相談させていただくこともございます。）
・画像やグラフなどの添付も可能（PowerpointもしくはWordのファイルにてお願いいたします。また、使用されました写真等につきましてはできればJPGやTIFの原画も添付ください。
）※「このキットを使ったらうまくいった」というような事例ではなく、個人的な工夫や一般性の高い事例に限らさせていただきます。
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~※ 記事掲載は出版行為とみなされますので、特許出願などが絡む可能性のある案件は一度確認してからご投稿ください。
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

賞品

受付は終了
しております毎号＊、採用された方にもれなく図書カード¥10,000分を進呈いたします。
今回は、オープニング記念として応募していただいた方の中から抽選にて10名様に図書カード¥5,000分を進呈いたします。
この機会に是非ご応募ください。
＊：掲載は編集の関係で、投稿いただいた順番が前後することがございます。
予めご了承ください。

Report of research〈掲載例〉

SDS-PAGE時のスマイリング対策△△△大学・○○学部・学生

××××さんからのご投稿（匿名でも結構です）
SDS-PAGEでタンパク質を解析するときにスマイリングが問題になっていたのですが、処理したサンプルに△△mMの○○を××%添加してアプライすることで、非常にシャープなバンドが得られるようになりました。ちなみに、○○は□□でも代用可能です。注意点は、サンプルをSDS-Dye中で加熱した後に加えることです。
論文に投稿する時など、やはりシャープなバンドが欲しいですよね。
是非一度試してみてください。成功例を載せておきます。
図１．SDS-PAGE解析例

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下記３点の発刊をお知らせいたします。資料をご希望の方はお近くの弊社代理店へお問い合わせください。
また、弊社ホームページ（http://www.toyobo.co.jp/bio）からもご請求いただくことができます。
是非、ご利用ください。

●TOYOBO 2006〜2007バイオ総合カタログ
弊社総合カタログ 2006/2007を4月17日に発刊いたしました。

●バイオ機器カタログ 春号
弊社機器カタログ 春号を4月3日に発刊いたしました。

●私にもできたシリーズ
ご好評の私にもできたシリーズですが、新号 ｢遺伝子発現解析編（前編）」を4月20日に発刊いたしました。また、Vol.1の ｢遺伝子クローニング編｣もリニュー
アルし、同時発刊しております。

●Santa Cruz社
2006カタログ発刊のお知らせ
Santa Cruz社 2006カタログを3月13日に発刊いたしました。ご希望の方はお近くの弊社代理店へ
お問い合わせください。また、弊社ホームページ（http://www.toyobo.co.jp/bio）からもご請求
いただけます。是非、ご利用ください。

●本ページ掲載の試薬類は全て一般研究用の目的にのみ販売しており、医薬品、診断用医薬品、化粧品、食品用等には使用できませんので、十分ご注意ください。誤用による事故については、当社は一切の責任を負いません。
●本ページ掲載商品にには消費税は含まれておりません。実際のご購入価格については弊社代理店へお問い合わせください。
●本ページ中の略号：毒 印は毒物および劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
劇 印は毒物および劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
危 印は消防法に基づく危険物です。

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