No.82.qx 06.3.27 7:10 PM ページ 13

品名Blend Taq

R○Blend Taq®

包装Code No.

価格

50Units × 1本
250Units × 1本1,000Units × 1本1,000Units × 3本

BTQ-101T
BTQ-101
BTQ-102
BTQ-103￥5,000￥19,000￥62,000￥170,000

50Units × 1本
250Units × 1本

BTQ-201T
BTQ-201￥6,000￥21,000

Blend Taq○ -Plus(Hot Start Version)
R

次世代の改良型Taqポリメラーゼです。幅広いターゲットを効率良く、確実に増幅できます。

PCR酵素の新スタンダード

方法

反応は、取扱説明書に従い、以下のようにPCR mixtureを調®

1 Blend Taq を用いたPCR実施例

製しました。
D.W.

33.5（μl）

10×Buffer for Blend Taq®

52mM dNTPs5Primer F（10μM）

1

Primer R（10μM）

1

Template DNA（5〜200ng） 4
Blend Taq® （2.5units/μl）

0.5Total50μl

PCRサイクルは、基本的に以下の表に従い実施しました。すなわち、6kb未満のターゲットに対しては3ステップで、6kb以はじめ に上のターゲットに対しては2ステップのサイクルを用いました。

今日、各社より様々なPCR用酵素が販売されていますが、そさらに10kb以上のターゲットの場合は、dNTPの終濃度を0.3mMにして実施しました。

れらは主にPolⅠ型、α型、および混合型に大別できます。なかでもTaqに代表されるPolⅠ型酵素は、優れたDNA合成能を持つことから、PCR技術発明当初より幅広く使用されています。しTargetSegment

かしながら、PolⅠ型酵素には3'→5'Exonuclease<1kb（Proofreading）活性がないことから、間違った塩基を取り込んでしまった場合には伸長反応がストップし、その結果として、増幅できるターゲットのサイズや増幅量には限界があることが知られています。一方、KODやPfuに代表されるα型の酵素は、3'→5'Exo活性を有し、間違って取り込んだ塩基を除去・修復することができます。しかし、その強いExo活性故にPCR効率の点では

>6kb

194℃
2min.

2 Denaturation

94℃
30sec.＊1

3 Annealing

Primer Tm-5℃（55〜60℃）
30sec.

4 Extension

一般的にPolⅠ型に劣ると言われています。そこで、PolⅠ型酵

1kb〜6kb

72℃
1min.

72℃
1min./kb PCR target

NumberofCycles
168℃
1min./kb PCR target＊230＊1：ターゲットによっては、98℃、5〜10秒の条件にて良好な結果が得られる場合もあります。
＊2：6kb以上の長いターゲットの場合はプライマーのTmが70℃以上になるように設計します。

素に微量のα型酵素を加えることにより両者の欠点を補い、長所を合わせ持つようにしたのが混合型の酵素です。
Blend Taq®及びBlend Taq® -Plus-は、Taq DNAポリメラーゼをベースにα型酵素を最適な割合でブレンドした混合型酵素です。α型酵素の種類及びそのブレンド比を徹底的に検討すること

結果により、増幅効率、伸長性において非常に優れたものとなってい1. 種々のサイズの遺伝子をターゲットとした伸長性の評価ます。さらに、Blend Taq® -Plus-においては、抗TaqモノクロHuman β-globin遺伝子あるいはhuman myosin heavyーナル抗体により、簡便にホットスタートPCRを行うことがでchain遺伝子をターゲットとして、種々のサイズの増幅を試みき、高い特異性が得られます。

ました。鋳型にはヒトゲノムDNA100ngまたは200ngを使

今回は、本酵素の持つこれらの特長についてご紹介いたします。

用しました。また、同時に、比較のため他社混合型酵素を用いて、その推奨条件にてPCRを行いました。
その結果、Blend Taq® およびBlend Taq® -Plus-では、ターゲット長が23.0kbでも良好な増幅が見られ、他社混合型酵素と比べて優れた伸長性を示すことが確認できました（図1）。
また、Blend Taq®で認められる若干の非特異的増幅バンドがBlend Taq® -Plus-では見られず、ホットスタートの効果も確認できました。

13

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 14M12345678M

M

1

Blend Taq®

2345678M

M

12

Blend Taq® -Plus-

345678M

A社混合型酵素
Lane M : 1kb DNAラダーマーカー
Lane 1 : β-globin
1.3kb
Lane 5 : Myosin h.c. 6.2kb
Lane 2 : β-globin
2.7kb
Lane 6 : β-globin
8.5kb
Lane 3 : β-globin
3.6kb
Lane 7 : β-globin 17.5kb
Lane 4 : Myosin h.c. 5.2kb
Lane 8 : β-globin 23.0kb

図1．種々のサイズの遺伝子をターゲットとした伸長性の評価

2. 微量サンプルを鋳型とした増幅効率の評価
Blend Taq®

ヒトゲノムDNAを段階希釈したものを鋳型として、
1

Human β-globin遺伝子3.6kbの増幅を試みました。

234

Blend Taq® -Plus5

M

12345

A社混合型酵素M12345

その結果、Blend Taq® 及びBlend Taq® -Plus-では、ゲノムDNA 5ngを鋳型とした場合でも明瞭な増幅を確認でき、他社混合型酵素と比べて優れた増幅効率を示すことが確認できました（図2）。

まとめ以上、本コーナーでは、Blend Taq® の優れた伸長性および増幅効率についてお示ししました。また、本酵素は、TaqベースのPCR酵素であるため、Taqと同じサイクル条件を

図2．微量サンプルを鋳型とした増幅効率の評価適用でき、PCR産物のTAクローニングが可能なことも特長

Lane M : 1kb DNAラダーマーカー
Lane 1 : Templateなし
Lane 2 : ゲノムDNA 5ng
Lane 3 : ゲノムDNA 10ng
Lane 4 : ゲノムDNA 20ng
Lane 5 : ゲノムDNA 40ngです。なお、Blend Taq® は、Taqの3〜4倍の正確性を持っていますが、さらに正確性を要する用途には、弊社のHigh Fidelity酵素KOD、KOD -Plus-もしくはKOD -PlusVer.2を用いられることをお奨めします。
最後に、Blend Taq® を使用された先生方からいただいたPCR実施例をご紹介させていただきます。紙面の都合上、一部しかご紹介できませんが、多くの先生方にご好評いただ

参考文献

いています。反応条件等の詳細は、http://www.toyobo.

Barns,W.M.,Proc.Natl.Acad.Sci. USA,91:2216-2220（1994）

co.jp/bioをご覧ください。

ユーザーの先生方からご提供いただいたBlend Taq®使用例
マガキのミトコンドリア領域のPCR

PC12細胞からの細胞分化因子のRT-PCR
M

M12345671238
Lane M : 100bpラダーマーカー
Lane 1 : Blend Taq®
Lane 2 : Blend Taq® -PlusLane 3 : A社混合型酵素

1,000bp→

資料ご提供：
大阪府立大学大学院
農学生命科学研究科 獣医学専攻
細胞分子生物学研究室
竹中 重雄先生

500→500bp→

ES細胞からのRT-PCR
M
マガキ（Crassostres gigas ）ミトコンドリア領域A 1−4
マガキ（Crassostres gigas ）ミトコンドリア領域B 5−6

Lane
M : 100bpラダーマーカー
0.050U/10μl
Lane 1、5 : Blend Taq®
0.125U/10μl
Lane 2、6 : A社混合型酵素
0.050U/10μl
Lane 3、7 : A社混合型酵素
0.025U/10μl
Lane 4、8 : A社混合型酵素

123
Lane 1 : Blend Taq® -PlusLane 2 : Blend Taq®
Lane 3 : A社混合型酵素

資料ご提供：
長崎大学大学院生産科学研究科
博士後期課程 沖本 宜音先生
宮崎大学大学院農学研究科
水族生理学分野 荒西 太士先生

14

資料ご提供：
大阪大学微生物病研究所
遺伝子動態研究分野

No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 15®

®

2 Blend Taq およびKOD Dash を用いるコロニーダイレクトPCR
はじめ に®

®

Blend Taq およびKOD Dash は混合型PCR用酵素であり、優れたパフォーマンスが必要なPCRに幅広く応用することができます。
今回、一般的な研究室において最も頻繁に行われていると予想される、大腸菌コロニーを直接鋳型とするインサートチェックPCRへ本酵素を応用した例をご紹介いたします。それぞれの酵素には、以下のような特性があり、それぞれの用途に応じて使い分けることで、最適な結果を得ることが可能です。

Blend Taq®

説特明

長KOD Dash®

高度に精製されたTaq DNAポリメラーゼに3'→5' Exonuclease

3'→5' Exonuclease活性を欠損させたKOD DNAポリメラーゼ

活性を有するDNAポリメラーゼを最適な混合比でブレンドするをベースとして、KOD DNAポリメラーゼを混合した高効率DNAことにより、優れたパフォーマンスを実現した高効率DNAポリポリメラーゼ。合成速度に優れ、かつ安定なKOD DNAポリメラメラーゼ。

ーゼの利点を継承している。

①確実

①確実

②Taq DNAポリメラーゼ感覚で条件を設定可能②短時間増幅（伸長時間30sec. / 1kb）

③安価（¥19,000 / 250U）③PCR溶液とした後、そのまま凍結保存し、何度も凍結融解し④場合によっては、ホットスタート可能なBlend Taq® -Plus- をながら使用することが可能。

使用することも可能。

方法

コロニーダイレクトPCRの推奨反応条件を図1に、操作フローを図2に示しました。
今回は、弊社TAクローニングキット:TArget CloneTMを用いて、pTA2 Vectorに4.5kbのPCRプロダクトをクローニングした後、コロニーダイレクトPCRを行って、インサートの有無を確認しました。比較のため、同一コロニー（宿主はJM109使用）について
Blend Taq®およびKOD Dash®を用いて増幅を実施し、5μlを1%アガロースゲルにて解析しています。プライマーおよびPCRサイクルは図1および下記に示した条件を用いました。

〈Primer配列〉〈アニーリング温度および伸長時間〉

F primer：TCGAGGTCGACGGTATCGAT（20mer GC＝55%）

Blend Taq® アニーリング：55℃、伸長時間：4.5min.

R primer：CGCTCTAGAACTAGTGGATC（20mer GC＝50%）

KOD Dash® アニーリング：60℃、伸長時間：2.5min.

※プライマーはベクター上に設計

図1．それぞれの酵素におけるコロニーダイレクトPCRの反応条件

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No.82.qx 06.3.27 7:11 PM ページ 16Lane

M：1kbラダーマーカー

Lane 1〜4：各コロニー
図3．PCR結果

TM

結果及び考察
4つのコロニーにおいて、いずれも良好な結果を得ることができました。3コロニーにインサートが挿入されていたことが確認できます。プライマーダイマーの生成はほとんど確認できませんでした。またデータは示しませんが、精製後の図2．コロニーダイレクトPCRの操作フロー

シーケンス解析結果も良好でした。

品 名 及 び 内 容®

KOD DashTArget CloneTM
MagExtractor

TM

Magical Trapper-PCR & Gel Clean up【磁性スタンド】

保存温度

Code No.

価

250U×1本-20℃

LDP-101¥25,000

10回用

-20℃

TAK-101¥12,000

200回用

室温

NPK-601¥25,000

1個

室温

MGS-101¥38,000

包装格

本製品はすでに販売を中止しております。

世界各地の提携先より提供された様々な病理組織を、厳密な品質管理の下、詳細な臨床データを添えてお届けいたします。

充実のラインナップ
世界各国40ヶ所以上の提供先から提供された病理組織を臨床データを添えて約10万サンプル（2004年末現在）保有しております。お客様のご要望にマッチしたサンプルを検索し、ご提供いたします。事前に各検体のHE画像、RNAの品質、既住歴、投薬歴などの臨床データをご覧いただけます。

豊富な保存形態・関連試料
凍結切片、パラフィン包埋切片（FFPE）の他、血清、血漿、RNA、DNAもお届け可能です。

倫理面での厳格な対応
これらの検体は、研究、臨床開発用途での使用を目的とした試料、関連情報の提供、保有に適応されるすべての法律、規則、ガイドラインに従って入手、提供されています。
1）すべてのサンプルでインフォームドコンセントが得られています。
2）すべてのサンプルで2度にわたる匿名化が行われています。
3）サンプルの分譲にあたっては、弊社とのMTA（Material Transfer Agreement）の締結及び、御使用される施設の生命倫理委員会での承認が必要になります。

※詳細につきましては右記ホームページにてご覧いただくことができます。http://www.asterand.com

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