3

Advances in Cancer Treatment

がん治療のあゆみ
2023/第43回一般研究助成

43

公益財団法人 がん集学的治療研究財団

巻

頭

言
理事長

山

岸

久

一

公益財団法人がん集学的治療研究財団（以下財団）は，一般財団法人として 1980 年（昭和 55 年）に井口

潔 九州大学名誉教授を理事長として設立され，2013 年（平成 25 年）に佐治重豊 岐阜大学名誉教授が理事長の時に公益財団法人となって以来，公益に資することを第一に活動を行ってまいりました。
研究助成は設立当初から継続して行っている事業であり，今年で 44 年になりますが，研究事業 526 件に対しまして総額 6 億 7,600 万円の助成をしてまいりました。助成対象は，臨床応用が可能となり得る「がんの集学的治療」に関する研究であり，一般研究選考委員会（現選考委員長

掛地吉弘 神戸大学大学院

医学研究科 教授）において，公平・厳正に評価を行っております。選考委員会の先生方には，毎年度，
公募一題一題について深い議論の上評価頂いており，敬意を表すとともに感謝申し上げる次第であります。
本日お届けしました「がん治療のあゆみ第 43 巻」は，2022 年度受賞者の研究成果報告であります。応募件数 63 件（がん薬物療法部門 49 件，医療機器部門 14 件）の中から選抜された研究であります。がん
薬物療法部門として 1）免疫チェックポイント阻害剤投与における 1 型糖尿病発症メカニズムの検討，2）慢性骨髄性白血病における無治療寛解維持達成の予測因子の探索，3）肺癌微小環境における IL-36 Familyの役割の検討，4）肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害剤の感受性に関わるバイオマーカーの探索の 4 演題，医療機器部門として 1）インドシアニングリーンによる脳脊髄腫瘍に対する術中蛍光診断法
改良の検討，2）青色 LED の腫瘍関連マクロファージおよび大腸癌細胞に対する効果の検討の 2 演題が掲載されております。それぞれに非常に興味深い成果が得られていますので，ご高覧頂き，ご批判賜れば，幸甚に存じます。
結びに，理事・役員，選考過程でご尽力頂きました選考委員の先生方にもご参加賜りましたことに心より感謝申し上げます。また，優れた研究を推進する受賞者の方々，関係された多くの方々に深謝申し上げます。
今後とも当財団へのご支援・ご指導を賜わります様，何卒宜しくお願い申し上げます。

2024 年 3 月 31 日

選

考

経

過

報

告

一般研究選考委員会

選考委員長

掛

地

吉

弘

選考経過をご報告申し上げます。
対象課題として臨床応用が可能となりうる「がんの集学的治療」に関する研究を募集し，本年度は 63
件の非常に多数の応募をいただきました。
応募内容は，がん薬物療法部門 49 件，医療機器部門 14 件でした。
応募締め切りは毎年 8 月 31 日で，その 63 件全ての応募書類のコピーを事務局で集計し，全ての選考委
員に送付し，事前評価をしていただきました。その事前評価では，絶対評価のほかに評価が偏らないように相対的な評価を行って，採点をお願いしております。その選考結果を事務局で集計し，去る 2022 年 10月 25 日に第 47 回の一般研究選考委員会を開催いたしました。選考委員が上位から一題ずつ議論を充分に行って，そして厳正に評価を行いました。非常に甲乙つけ難いようなレベルの高い申請が集まりました。
この選考委員会の議事録は，公平性及び透明性を考慮し，経緯や理由については記録して保存しております。その結果，6 件の応募課題を助成対象候補として理事会に上申し，承認いただきました。
諸般の事情から 2023 年「一般研究発表会」は開催が見送りとなりましたが，この「がん治療のあゆみ
第 43 巻」にて先生方の成果報告をご報告させていただきます。
助成金を受領された先生方にお願いします。
研究論文を発表される際に，どんどん論文を書いて仕上げていただきたいのですが，「がん集学的治療研究財団助成金」の補助を得たという旨を明記していただくようにお願いします。先生方の業績に加わる
とともに，財団からのこの助成金ががんの治療研究に役立ち，社会に貢献しているものと推察しております。本財団は公益法人ですので，acknowledgement にその旨をしっかりと付記していただくことが，重要な意味を持っております。
最後になりましたが，助成された 6 名の先生方，これを機に，より一層研究に邁進されますようご期待申し上げます。
またこの素晴らしい先生方をご推薦いただきました施設代表者の先生方にも厚くお礼申し上げます。

が ん 治 療 の あ ゆ み 目次

巻頭言 

選考経過報告 

理事長

山

岸

久

一

一般研究選考委員会・選考委員長

掛

地

吉

弘

稲

葉

秀

文

〔がん薬物療法部門〕●がん免疫療法における内分泌腺およびネオアンチゲン交差提示機構の解明●慢 性骨髄性白血病（CML）の無治療寛解維持達成のためのCML
幹細胞制御免疫機構の解明：HLA拘束性T細胞が規定するCML

1

日赤和歌山医療センター
糖尿病内分泌内科

嬉

野

博

志

10

広島大学原爆放射線医科学研究所
共同研究講座関連エピトープの同定及び細胞障害性T細胞の果たす役割の解明●Interleukin（IL）-36 Familyの肺癌微小環境における役割の解明

木

下

郁

彦

15

浩

介

22

九州大学病院
呼吸器外科●全身性炎症と癌免疫微小環境に着目した肝細胞癌に対する免疫
チェックポイント阻害剤の感受性に関わるバイオマーカーの探索

美馬

熊本大学病院
消化器癌先端治療開発学寄附講座〔医療機器部門〕●悪性神経膠腫に対するインドシアニングリーン（ICG）および近赤外線を用いた術中リアルタイム蛍光診断確立と治療法の開発●大腸癌に対する，青色 LED 光を用いた新たな光治療法の開発

武

藤

淳

26

昭

32

藤田医科大学医学部
脳神経外科

良

元

俊

徳島大学
消化器・移植外科

が ん 治 療 の あ ゆ み

がん免疫療法における内分泌腺および
ネオアンチゲン交差提示機構の解明
秀文 ＊

稲葉

要旨 【背景】免疫チェックポイント阻害剤（ICI）による免疫関連有害事象（irAE）の中で内分泌 irAE の頻度は 3-5 割程度と高率である。申請者はこれまで，下垂体 irAE および甲状腺 irAE のバイオマーカーを報告した。今回，ICI による 1 型
糖尿病（ICI-T1DM）のメカニズムにつき検討した。
【方法】ICI-T1DM 患者とコントロールに関して臨床経過および HLA タイピング検査結果と HLA 分子アミノ酸多型を検討した。さらに，ICI-T1DM のプロインスリン抗原と HLA 分子に関して，in silico および in vitro 結合アッセイを行った。
【結果と考察】ICI-T1DM 患者（N=12）において，急激な血糖値増加とインスリン分泌枯渇を認め，免疫学的機序による膵 β 細胞の破壊が示唆されたが，半数以上に抗腫瘍効果を認めた。さらに HLA-DR4 と HLA-DP5 遺伝子頻度の増加と，
HLA-DRB1，DQB1，および DPB1 遺伝子座に ICI-T1DM 感受性アミノ酸多型を認めた。また，in vitro 結合アッセイにて
HLA-DP5 および HLA-DP15 に対して insulin β 鎖および α 鎖に epitope cluster を認め，内分泌抗原とがん抗原の共通の免疫機構が示唆された。

は じ め に免疫チェックポイント阻害剤（ICI）は画期的な癌治療薬であるが，治療効果不十分例がその 7 割を占めるため，効果的な ICI 治療の開発が喫緊の課題である。
また，ICI 治療の際には，免疫関連有害事象（irAE）が高率に起こり得る。内分泌腺（下垂体，甲状腺，副甲状腺，膵臓，副腎等）の免疫関連有害事象（irAE）の発症率は 3-5 割であるが，その発症機序やバ
イオマーカーは不明である。
申請者はまず，バセドウ病の抗原と疾患感受性 HLA-DR3 に関し，in silico および in vitro 抗原結合アッ
セイと，HLA トランスジェニックマウスやバセドウ病患者の検討にて甲状腺エピトープを同定 1）-3），新規
免疫寛容誘導甲状腺ペプチドを発見し 4） 5），甲状腺抗原と HLA-DR3 の結合モチーフを解明した。その手法を応用し，内分泌 irAE の基礎および臨床研究を行ってきた。
申請者はこれまで，甲状腺 irAE 6）-8） および下垂体 irAE 9） についての研究を行った。甲状腺 irAE においては，ICI による治療効果と甲状腺 irAE の発症率が相関することや，甲状腺 irAE における疾患感受性
HLA と，甲状腺自己抗体およびサイトカイン動態を解明し，甲状腺 irAE の疾患感受性 HLA-DP2 を発見した。一方，下垂体 irAE に関しては，下垂体 irAE の疾患感受性 HLA-DP9 を同定し，特発性 ACTH 単
独欠損症と抗 PD-1 抗体による ACTH 単独欠損症の臨経過の相違と危険因子としての HLA を報告した。
さらに，本研究においては，膵臓 irAE としての，ICI による 1 型糖尿病（ICI-T1DM）の臨床および基礎的検討を行った 10）。ICI-T1DM は致死的な場合があり，そのバイオマーカーの探索が急務となっている。なお，日本人 1 型糖尿病のリスク因子として HLA-DRB1＊04 : 05（HLA-DR4）等が報告されているが，
ICI-T1DM のリスク因子は明らかではない。よって，がん抗原と内分泌腺抗原の共通免疫機構である
HLA に着目して，今回は ICI-T1DM のリスク因子につき検討した。
＊日赤和歌山医療センター

糖尿病内分泌内科

1

がん免疫療法における内分泌腺およびネオアンチゲン交差提示機構の解明

申請者は，ICI 治療においてがん抗原および内分泌腺抗原が HLA 分子表面上に提示され，両抗原を T 細胞が認識する結果，がん細胞が治療されるとともに，内分泌腺 irAE が発症すると考えている。本研究の目的は，HLA 分子における内分泌腺抗原およびがん抗原に共通する交差性提示機構を明らかにし，内分泌腺 irAE の発症予測，早期診断につなげ，ICI によるがん免疫療法の最適化を行うことである。
対象

本研究は，罹患率が 0. 8％とごく少数である疾患のため，多施設共同前向き研究として各施設の倫理委
員会の承認を得て実施された。
方法

悪性腫瘍に対して ICI 治療を受けた全例にインフォームドコンセントを行い，ICI-T1DM 患者と ICIT1DM 非発症コントロール患者に分類した。つぎに，
Ⅰ．臨床背景，臨床経過（血糖値，HbA1c，血算，生化学検査，血液ガス分析等）を検討した。
Ⅱ．ICI-T1DM の疾患感受性 HLA およびアミノ酸多型解析のため，11 座の HLA タイピングを行い，その結果と HLA 分子のアミノ酸配列・多型に関して，日本人データベースと合わせて比較検討した。
Ⅲ．ICI-T1DM の抗原検索のため，プロインスリン抗原と HLA 分子に関して，in silico および in vitro 結合アッセイを行った。
Ⅲ-1． コンピューターアルゴリズム（Net-MHC／SYFPEITHI）を用い，ICI-T1DM の危険因子である
HLA-DP5 分子および ICI-T1DM に関する中立的コントロールである HLA-DP15 分子に対し，プロインスリン抗原との結合予測を行った。
Ⅲ-2．英国プロイムン社との共同研究によって，我々の実績 1）-3） を参考にして精製された HLA-DP5 および HLA-DP15 分子と，上述のプロインスリン抗原ペプチドと in vitro 結合アッセイを行い，高結合（REVEAL SCORE）順にエピトープを同定した。

結果および考按・考察
ICI-T1DM 患者（N=12：男性 9 名，女性 3 名）において，日・週単位の速い速度で急激に血糖値が増加していた（図 1 ）。ICI-T1DM 発症時の随時血糖は 1 名が 278mg／dL，他全員が 400mg／dL 以上であり，
患者

年齢

性別

1

70

男性 NSCLC

2

80

癌種

男性 NSCLC

ICI-T1DM
ICI種別 発症時期
(週)
P
P

他のirAE

既往歴

DM家
族歴

DM既往歴

発症時
HbA1c (%)

糖尿病
発症時随時
ケトアシド ー血糖 (mg/dl)
シス

9

発疹

高LDL血
なし
症

なし

口渇

6

564

あり

37

間質性肺炎
G1

高血圧症 なし

なし

口渇、倦怠感

7 .3

420

あり

5 .3

404

あり

8.7

491

あり

3

79

男性 NSCLC

P

12

なし

橋本病

なし

なし

4

71

男性 NSCLC

P

31

なし

高血圧症 なし

T2DM

5

72

男性

D

6

なし

SCLC

症状

なし

なし

口渇、倦怠感
食思不振
口渇、倦怠感
体重減少

なし

口渇

6 .5

502

あり

6

80

女性

MM

N/Ipi

N 60週,
Ipi 3週なし

高血圧症 なし

なし

口渇、倦怠感

7 .7

639

あり

7

78

男性

MM

N

29

なし

高血圧症 なし

なし

口渇、倦怠感

8 .5

940

あり

8

70

女性

RCC

P

40

甲状腺炎

高血圧症 なし

T2DM

口渇、倦怠感

10.6

616

あり

9

75

男性 NSCLC

P

29

なし

心房細動 なし

T2DM

口渇、倦怠感

7 .6

684

あり

10

71

女性

N

21

なし

高血圧症 なし

なし

口渇

6 .3

489

あり

高血圧症 なし

なし

口渇

6 .9

1041

あり

T2DM

夜間頻尿

9.4

278

あり

MM

11

66

男性 NSCLC

N

77

なし

12

55

男性 NSCLC

N

121

なし

なし

なし

MM, 悪性黒色腫; NSCLC, 非小細胞肺癌; SCLC, 小細胞肺癌; RCC, 腎細胞癌; P, pembrolizumab; N, nivolumab; Ipi, ipilimumab; D, durvalumab; HbA1c (正常値: 4.6−6.2 %); 血糖値 (73−109 mg/dl);

図1

ICI-T1DM 患者の入院時検査結果

2

が ん 治 療 の あ ゆ み

HbA1c は 9 名が 8. 7％未満であった。全員が糖尿病性ケトアシドーシスを呈し，インスリン分泌枯渇のため強化インスリン療法が導入となった。すなわち，膵 β 細胞の破壊が示唆された。
ICI-T1DM の発症時にはインスリンや C ペプチド分泌を認めた例もあったが，糖尿病発症 1 か月後には全例が C ペプチドは測定感度以下になりインスリン分泌が枯渇した（図 2 ）。自己抗体に関しては，抗GAD 抗体は全例で陰性で，一例で抗インスリン抗体が陽性であった。抗腫瘍効果は 8 名が PR あるいはCR の抗腫瘍効果を認めて，4 名が PD であった。4 名において ICI 治療が中止された。
G AD 抗 体 /インス リ ン
抗体

糖尿病
既往歴

< 0 .0 2

陰性/陰性

なし

PR

継続

< 0 .0 2< 0 .0 2

陰性/陰性

なし

PR

継続

7.7

2.31

< 0 .0 2

陰性/陰性

なし

PR

中止

491

0 .7

1.33

< 0 .0 2

陰性/陰性 ２型糖尿病

PR

継続

6 .5

502

< 0 .4< 0 .0 2< 0 .0 2

陰性/陰性

なし

PR

継続

7 .7

639

未検

0 .0 1< 0 .0 1

陰性/陽
陽性

なし

CR

継続

8 .5

940

2 .5

0 .1 6< 0 .0 1

陰性/陰性

なし

CR

継続

10.6

616

4 .1

1.59

< 0 .0 1

陰性/陰性 ２型糖尿病

PR

中止

7 .6

684

未検

< 0 .0 1< 0 .0 1

陰性/陰性 ２型糖尿病

PD

中止

女性

6 .3

489

2 .2

1.22

< 0 .0 1

陰性/陰性

なし

PD

継続

66

男性

6 .9

1041

1 .2

1.35

< 0 .0 1

陰性/陰性

なし

PD

継続

55

男性

9.4

278

未検

< 0 .0 1< 0 .0 1

陰性/陰性 ２型糖尿病

PD

中止

発症１か月後発症時随時血糖 発症時インスリン 発症時Cペプチド
空腹時Cペプチド(mg/dl)(μU/ml)(ng/ml)(ng/ml)

患者

年齢

性別

発症時HbA1c (%)

1

70

男性

6

564

0 .8

0 .1 7

2

80

男性

7 .3

420

未検

3

79

男性

5 .3

404

4

71

男性

8.7

5

72

男性

6

80

女性

7

78

男性

8

70

女性

9

75

男性

10

71

11
12

図2

抗腫瘍効果 ICI継続ICI-T1DM 患者の自己抗体と臨床経過

続いて，ICI 使用後にいずれの IRAE も発症しなかったコントロール患者：ICI- コントロールと定義（N=35），および日本人一般人データベースとの比較を行った。HLA-class I，class II の遺伝子 11 座において Fisher の正確検定を行ったところ，ICI-T1DM 患者において ICI- コントロールや一般人コントロー
ルと比較して，HLA-DRB1*04 : 05（HLA-DR4）および HLA-DPB1*05 : 01（HLA-DP5）の遺伝子頻度が増加していた（表 1 - 3 ）（図 3 ）。なお，HLA-DRB1*04 : 05 は HLA-DQB1*04 : 01 と連鎖不均衡であった。
多変量ロジスティクス回帰解析の結果も同様に，ICI- コントロールに比して，ICI-T1DM 患者において HLA-DR4 および HLA-DP5 の遺伝子頻度が有意に増加していた（それぞれ P=0. 023，P=0. 016）
（図 3 ）。

HLA遺伝子11座の頻度解析
HLA allele
DRB1*04:05

頻度
33.3%

頻度
7.1%

一般人
コントロール
頻度
13.4%

DPB1*05:01

70.8%

34.3%

38.4%

ICI-T1DM ICI-コントロール

ICI-T1DM vs
一般人コントロール
P
オッズ比
0.03
3.34

ICI-T1DM vs
ICI-コントロール
P
オッズ比
0.003
6.50

0.005

0.004

3.96

4.66

ICI-T1DM患者においてHLA-DRB1*04:05およびDPB1*05:01の遺伝子頻度が増加（2×2表 Fisher‘s exact test)。

多変量ロジスティクス回帰解析
HLA allele

Predicted score

Standard error

P

オッズ比

95%CI

DRB1*04:05

0.755

0.333

0.023

4.53

1.22-16.70

DPB1*05:01

0.647

0.268

0.016

3.65

1.27-10.44

多変量解析においてもHLA-DRB1*04:05およびDPB1*05:01の遺伝子頻度が有意に増加。
なお，HLA-DRB1*04:05はHLA-DQB1*04:01と連鎖不均衡であった。95%CI: 95% 信頼区間
図３

HLA 遺伝子 11 座の頻度解析，多変量ロジスティクス回帰解析3がん免疫療法における内分泌腺およびネオアンチゲン交差提示機構の解明

表1

ICI-T1DM 患者およびコントロールにおける HLA-DRB1 遺伝子のアレル頻度

ICI-T1DM (N =24)
allele
DRB1*01:01
DRB1*04:01
DRB1*04:03
DRB1*04:05
DRB1*04:06
DRB1*04:10
DRB1*08:02
DRB1*08:03
DRB1*09:01
DRB1*10:01
DRB1*11:01
DRB1*11:06
DRB1*12:01
DRB1*12:02
DRB1*13:02
DRB1*14:03
DRB1*14:05
DRB1*14:06
DRB1*14:54
DRB1*15:01
DRB1*15:02
DRB1*16:02
Others
total

n
0
0
0
8
1
0
1
3
4
0
2
0
1
0
1
1
0
0
1
0
1
0
0
24

F (%)
0.0
0.0
0.0
33.3
4.2
0.0
4.2
12.5
16.7
0.0
8.3
0.0
4.2
0.0
4.2
4.2
0.0
0.0
4.2
0.0
4.2
0.0
0.0
100.00

F (%)
7.1
0.0
7.1
7.1
4.3
2.9
5.7
7.1
11.4
1.4
2.9
1.4
4.3
2.9
8.6
1.4
2.9
0.0
0.0
11.4
8.6
1.4
0.0
100.00

n
5
0
5
5
3
2
4
5
8
1
2
1
3
2
6
1
2
0
0
8
6
1
0
70

注釈： F, アレル頻度; OR, オッズ比; NS, 有意差なし

表2

allele
DQB1*03:01
DQB1*03:02
DQB1*03:03
DQB1*04:01
DQB1*04:02
DQB1*05:01
DQB1*05:02
DQB1*05:03
DQB1*06:01
DQB1*06:02
DQB1*06:04
Others
total

P
NS
NS
NS
0.03
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS

OR

95% CI

3.34

1.26--9.20

ICI-T1DM vs ICI-controls
*2

P
NS
NS
NS
0.003
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS

OR

95% CI

6.50

1.95--21.60

ICI-T1DM 患者およびコントロールにおける HLA-DQB1 遺伝子のアレル頻度

ICI-T1DM (N =24)

ICI-Controls (N =70)

n
4
2
4
8
0
0
0
1
4
0
1
0
24

n
6
10
11
5
4
5
1
3
11
8
6
0
70

F (%)
16.7
8.3
16.7
33.3
0.0
0.0
0.0
4.2
16.7
0.0
4.2
0
100.00

表3

ICI-T1DM vs general controls*2

95%CI: 95% 信頼区間

F (%)
8.6
14.3
15.7
7.1
5.7
7.1
1.4
4.3
15.7
11.4
8.6
0.0
100.00

注釈： F, アレル頻度; OR, オッズ比; NS, 有意差なし

alleleDPB1*02:01
DPB1*02:02
DPB1*03:01
DPB1*04:01
DPB1*04:02
DPB1*05:01
DPB1*09:01
DPB1*13:01
DPB1*14:01
DPB1*19:01
Otherstotal*1

Controls(N =618644)
F (%)
5.65
1.03
3.13
13.41
3.28
2.12
4.29
7.93
14.6
0.48
2.49
0.002
3.68
1.69
6.34
1.63
2.14
1.54
3.49
7.88
10.27
0.82
2.11
100.00ICI-Controls (N =70)

*1

Controls(N =1483)
F (%)
11.43
9.59
15.54
12.9
4.21
6.58
2.64
3.94
19.08
7.15
5.18
1.76
100.00ICI-T1DM vs general controls
*2

P
NS
NS
NS
0.03
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS

OR

95% CI

3.34

1.26--9.20

ICI-T1DM vs ICI-controls
*2

P
NS
NS
NS
0.003
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS

OR

95% CI

6.50

1.95--21.60

95%CI: 95% 信頼区間

ICI-T1DM 患者およびコントロールにおける HLA-DPB1 遺伝子のアレル頻度

ICI-T1DM (N =24)

ICI-Controls (N =70)

n
3
0
0
0
1
17
1
0
1
1
0
24

n
17
6
6
6
7
24
2
1
1
0
0
70

F (%)
12.5
0.0
0.0
0.0
4.2
70.8
4.2
0.0
4.2
4.2
0.0
100.00

注釈： F, アレル頻度; OR, オッズ比; NS, 有意差なし

F (%)
24.3
8.6
8.6
8.6
10.0
34.3
2.9
1.4
1.4
0.0
0.0
100.00*1

Controls(N =1483)
F (%)
24.11
3.41
3.98
5.06
9.78
38.4
9.95
1.96
1.48
0.74
1.13
100.00ICI-T1DM vs general controls
*2

p
NS
NS
NS
NS
NS
0.005
NS
NS
NS
NS
NS

OR

95% CI

3.96

1.54--10.18

ICI-T1DM vs ICI-controls
*2

p
NS
NS
NS
NS
NS
0.004
NS
NS
NS
NS
NS

OR

95% CI

4.66

1.73--12.48

95%CI: 95% 信頼区間

また，同様に HLA 遺伝子のアミノ酸配列につき検討したところ，ICI-T1DM 患者において DRB1 遺伝
子座に 4 か所，DQB1 遺伝子座に 12 箇所，および DPB1 遺伝子座に 9 か所の ICI-T1DM 感受性アミノ酸多型を認めた（P<0. 05）（図 4 ）。
アミノ酸多型に関しての多変量解析を行ったところ，HLA-DPB1 の遺伝子多型が最も影響が強い可能性が考えられた（表 4 ）。以上の解析から，HLA-DR，HLA-DQ，および HLA-DP 遺伝子のアミノ酸多型が ICI-T1DM の発症に影響を及ぼすと考えられた。
4

が ん 治 療 の あ ゆ み

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 … … … 227 228 229
R A T P E N Y L F Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F V … … … GSAR A T P E N Y L F Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E L V … … … GSAR A T P E N Y V Y Q L R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F V … … … GSAR A T P E N Y L F Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F A … … … GSAR A T P E N Y L F Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F V … … … GSAR A T P E N Y L F Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E L V … … … GSAR A T P E N Y V H Q L R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F V … … … GSAR A T P E N Y V Y Q L R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E Y A … … … GSAR A T P E N Y V H Q L R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F V … … … GSAR A T P E N Y L F Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R E E F V … … … GSAR A T P E N Y V Y Q G R Q E C Y A F N G T Q R F L E R Y I Y N R Q E Y A … … … GSA

HLA-allele
DPB1*02:01
DPB1*02:02
DPB1*03:01
DPB1*04:01
DPB1*04:02
DPB1*05:01
DPB1*09:01
DPB1*13:01
DPB1*14:01
DPB1*19:01
DPB1*15:01

K, Lysine; E, Glutamic acid; A, Alanine; S, Serine; V, Valine; G, Glycine; Y, Tyrosine; H, Histidine; Q, Glutamine; L, Leucine; R, Arginine; I,
Isoleucine; F, Phenylalanine; D, Aspartic acid; M, Methionine; W, Tryptophan; P, Proline; T, Threonine; N, Asparagine; C, Cysteine

上記は，HLA-DPB1遺伝子を例にとって，アミノ酸35番目の多型を白ヌキで示している。
HLA-DRB1遺伝子座にアミノ酸9, 57, 86, 96 番目の4か所において（PP<0.05），
HLA-DQB1遺伝子座にアミノ酸53, 56, 70, 84, 85, 89, 140, 181, 182, 203, 220, 221番目の12か所において（PP<0.05），
また，DPB1遺伝子座にアミノ酸35, 55, 84, 85, 86, 87, 96, 170, 205 番目の9か所において（PP<0.05），
ICI-T1DMとICI-controlsに有意差を認めた。

図4
表4
Amino acidposition

HLA-DRB1 および DPB1 遺伝子

アミノ酸多型のロジスティクス回帰解析

HLA-class II 分子のアミノ酸多型におけるステップワイズ法および重回帰解析

HLA-chain

0
0
0
0
0
0.556
0.924
0
0

Test statistics
by Wald
method
0.044
0.070
1.369
2.479
0.109
2.499
2.919
1.219
0.485

0

0.213

0.644

0
0
0
0
0
0
0
0

0.415
0.415
0.002
0.445
2.348
0.019
1.440
2.583

0.519
0.519
0.999
0.505
0.125
0.991
0.230
0.275

0

0.709

0.400

0.69

6.001

0.014*

Amino Compared Predictedacid amino acid score

HLA-DRβ1 K and E
W
HLA-DRβ1K
E
HLA-DRβ1 A and S V and D
HLA-DRβ1AS
HLA-DRβ1V
D
HLA-DRβ1GV
HLA-DRβ1 Y and H Q and E
HLA-DRβ1Y
H
HLA-DRβ1
Q
E
L-Q-L-T53-84-85-89-140Q-E-V-GHLA-DQβ1 T-Q-N181-182-220-221
A-Q-S-R-Q
H-H
56
HLA-DQβ1
LP70
HLA-DQβ1
E
R and G70
HLA-DQβ1
R
G
203
HLA-DQβ1
IV
35
HLA-DPβ1
L
F and Y35
HLA-DPβ1
FY
55
HLA-DPβ1
E
D and A
55
HLA-DPβ1DA
84-85-86-87-96D-E-A- G-G-P-MHLA-DPβ1
170
V-K-I
R-T
205
HLA-DPβ1
M
V
注釈：
9
9
57
57
57
86
96
96
96

P-value
0.833
0.965
0.242
0.290
0.947
0.114
0.088
0.270
0.486

Selection

Standard
error

Odds
ratio

95%CI

Selected
Selected

0.352
0.541

3.039
2.519

0.765--12.061
0.873--7.269

Selected

0.282

3.976

1.318--11.998

K, Lysine; E, Glutamic acid; A, Alanine; S, Serine; V, Valine; G, Glycine; Y, Tyrosine; H, Histidine; Q, Glutamine; L, Leucine; R, Arginine;
I, Isoleucine; F, Phenylalanine; D, Aspartic acid; M, Methionine; W, Tryptophan; P, Proline; T, Threonine; N, Asparagine; C, Cysteine
95%CI: 95% 信頼区間

HLA-DR，DQ，および DP 分子の結合溝は，9 個のアミノ酸から成り立ち，その 1，4，6，7，9 番目のアミノ酸が HLA 分子に強く結合する（図 5 ）。このため，本研究においては，HLA 遺伝子のアミノ酸多型がインスリン抗原等の提示に関与し，ICI-T1DM 発症の際の自己免疫反応において重要な役割を有すると考えられた。
プロインスリンはインスリンの前駆体であり，N 末端からシグナルペプチド，インスリン B 鎖，C ペプ
チド，およびインスリン A 鎖から構成される（図 6 ）。その後，C ペプチドが切断されることで，A 鎖と B
鎖によるインスリン分子が生成される。今回我々は，抗インスリン抗体が陽転化した 1 名を確認し，既報からも同様の症例を複数認めたことから，膵 β 細胞から分泌されるインスリン分子を抗原と考えた。ゆえに，その前駆体であるプロインスリンを ICI による 1 型糖尿病の自己抗原と推測し，in silico および invitro における HLA 分子との結合アッセイを行った。本研究において精製された 34 種類のプロインスリ
ンペプチドを（表 5 ）に示した。
5

がん免疫療法における内分泌腺およびネオアンチゲン交差提示機構の解明

HLA-DP5(HLA-DPA1*02:02,
HLA-DPB1*05:01)

1

2 3

4

5 6 7 8

HLA-DRαあるいはDPα鎖

9HLA-DRβあるいはDPβ鎖

HLA-DP5分子を例にとって，HLA-class II分子（HLA-DR, CQ, DP）のペプチド結合溝における9個のアミノ酸配列を示した。
このうち，１，４，６，７，９番目はHLA分子に強く結合する。このため，HLA遺伝子のアミノ酸多型がインスリン抗原等の提示に関与し，ICI-T1DM発症の際の自己免疫反応において重要な役割を有すると考えられる。

図5
表5

HLA-class II 結合溝と HLA 分子

ヒトプロインスリンペプチドと HLA-DP5 および HLA-DP15 との結合アッセイ

Amino acid sequences of synthesized peptides
ID Position
1 *1-15
M A L W M R L L P L L A L L A
2 *7-21
L L P L L A L L A L W G P D P
3 *13-27
L L A L W G P D P A A A F V N
4 *19-33
P D P A A A F V N Q H L C G S
5 *25-39
F V N Q H L C G S H L V E A L
6 *29-43
H L C G S H L V E A L Y L V C
7 *33-47
S H L V E A L Y L V C G E R G
8 *37-51
E A L Y L V C G E R G F F Y T
9 *42-56
V C G E R G F F Y T P K T R R
10 *43-57
C G E R G F F Y T P K T R R E
11 *44-58
G E R G F F Y T P K T R R E A
12 *45-59
E R G F F Y T P K T R R E A E
13 *46-60
R G F F Y T P K T R R E A E D
14 *47-61
G F F Y T P K T R R E A E D L
15 *48-62
F F Y T P K T R R E A E D L Q
16 *49-63
F Y T P K T R R E A E D L Q V
17 *50-64
Y T P K T R R E A E D L Q V G
18 *51-65
T P K T R R E A E D L Q V G Q
19 *52-66
P K T R R E A E D L Q V G Q V
20 *53-67
K T R R E A E D L Q V G Q V E
21 *54-68
T R R E A E D L Q V G Q V E L
22 *59-73
E D L Q V G Q V E L G G G P G
23 *64-78
G Q V E L G G G P G A G S L Q
24 *69-83
G G G P G A G S L Q P L A L E
25 *74-88
A G S L Q P L A L E G S L Q K
26 *75-89
G S L Q P L A L E G S L Q K R
27 *76-90
S L Q P L A L E G S L Q K R G
28 *77-91
L Q P L A L E G S L Q K R G I
29 *78-92
Q P L A L E G S L Q K R G I V
P L A L E G S L Q K R G I V E
30 *79-93
31 *84-98
G S L Q K R G I V E Q C C T S
32 *88-102 K R G I V E Q C C T S I C S L
33 *92-106 V E Q C C T S I C S L Y Q L E
34 *96-110 C T S I C S L Y Q L E N Y C N
注釈：
HLA-DP5との結合予測におけるコアの9アミノ酸を太字で示した。

in silico結合予測

In vitro結合試験結スコア(%RANK)

果(REVEAL score)

DP15
22.17
73.14
44.91
41.54
82.17
63.42
33.96
67.91
32.28
10.81
4.62
3.37
5.96
16.23
50.27
59.35
55.66
42.39
38.06
35.72
55.52
45.97
94.37
77.82
36.67
35.2
24.48
26.62
43.33
65.94
91.03
94.91
95
95

DP15
16.1
0.4
0.1
0
0.3
14.2
9.1
17.3
37.4
17.2
0.4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1.1
16.3
1.5
10.1

DP5
76.22
92.69
62.68
63.13
87.5
95
80.96
75.54
20.09
4.24
1.43
0.71
3.74
15.52
49.79
51.18
26.85
7.81
5.25
4.26
23.95
70.3
95
84.31
29.36
10.52
5.07
5.24
9.38
37.94
86.88
91.7
95
94.28

DP5
6.1
0.4
0.2
0
0.2
4.6
3.6
8.9
26.8
9.5
0.2
0
0
0
0
0
0
0.3
0.1
0
0
0
0
0
0
0.1
0
0
0.1
0
0.5
9.9
0.5
2.6

DP5

Cluster 1

Cluster 2

K, Lysine; E, Glutamic acid; A, Alanine; S, Serine; V, Valine; G, Glycine; Y, Tyrosine; H, Histidine; Q, Glutamine; L, Leucine; R, Arginine;
I, Isoleucine; F, Phenylalanine; D, Aspartic acid; M, Methionine; W, Tryptophan; P, Proline; T, Threonine; N, Asparagine; C, Cysteine6

が ん 治 療 の あ ゆ み

Diabetes. 2008;57:
1034より改変

図6

プロインスリン分子の構造

今回の実験では，ICI-T1DM の危険因子として最も重要であると思われた HLA-DP5 およびコントロールとして HLA-DP15 を用いて，in silico でのプロインスリンとの結合予測および in vitro での結合アッセイを行ったところ，in vitro 結合アッセイにて HLA-DP5 および HLA-DP15 に対して insulin β 鎖（AA2554）および α 鎖（AA90-110）に epitope cluster を認め（図 7 ），プロインスリンが ICI-T1DM の抗原であることが示唆され，がん抗原との共通の免疫機構が示唆された。
DP15% RANK

DP5100

In silico
結合予測

80
60
40
20
0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34

Peptide numbers
REVEAL score

In vitro
結合試験

40
35
30
25
20
15
10
5
0

1

2

3

DP15

Cluster 1 (peptides 6-10)

4

5

6

7

8

9

DP5

Cluster 2 (peptides 31-34)

10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34

Peptide numbers

Signal peptide Insulin B chain(AA 1-24)

C-peptides(AA 25-54)

図7(AA 57-87)

プロインスリン抗原と HLA-DP 分子との結合試験

7

Insulin A chain(AA 90-110)

がん免疫療法における内分泌腺およびネオアンチゲン交差提示機構の解明

本研究のまとめ
1 ．ICI-T1DM 患者全員が短期間における急激な血糖悪化とインスリン分泌枯渇のため強化インスリン療法を導入された。
2 ．患者 8／12 名 =75％に ICI の抗腫瘍効果を認めたことは，通常は ICI の奏効率が 20-30％であることから，ICI-T1DM では抗腫瘍免疫の活性化が示唆された。
3 ．ICI-T1DM 患者において HLA-DR4 および HLA-DP5 の遺伝子頻度が有意に増加し，さらに，HLADR，HLA-DQ，および HLA-DP 遺伝子座アミノ酸多型が ICI-T1DM の発症に影響する可能性が考えられた。
4 ．また，HLA-DP5 との結合試験において insulin β および α 鎖に epitope cluster を認めた。
お わ り に申請者は，がん抗原と内分泌腺抗原の共通免疫機構である HLA を標的とする臨床および基礎研究を行ってきた。本研究の将来的な臨床応用として，内分泌腺 ／ がん抗原の有効性の検討を考えている。すな
わち，ICI 使用患者に内分泌腺 ／ がん抗原を用い，内分泌腺 irAE の発症予測と早期治療を行なうとともに，
ICI 治療における新規バイオマーカーとして活用することを計画している。
謝辞

本研究は，公益財団法人がん集学的治療研究財団 第 43 回一般研究助成によるご支援を頂き，実施することができました。心より御礼申し上げます。
参 考 文 献1 ）Inaba H, Martin W, De Groot AS, et al : Thyrotropin receptor epitopes and their relation tohistocompatibility leukocyte antigen-DR molecules in Graves' disease. J Clin Endocrinol Metab. 91 :
2286-94, 2006.
2 ）Inaba H, Pan D, Shin YH, et al : Immune response of mice transgenic for human histocompatibility
leukocyte Antigen-DR to human thyrotropin receptor-extracellular domain. Thyroid. 19 : 1271-80,
2009.
3 ）Inaba H, Martin W, Ardito M, et al : The role of glutamic or aspartic acid in position four of the
epitope binding motif and TSH receptor-extracellular domain epitope selection in Graves' disease.
J Clin Endocrinol Metab. 95 : 2909-16, 2010.
4 ）Inaba H（責任著者）, Moise L, Martin W, et al : Epitope recognition in HLA-DR3 transgenic mice
immunized to TSH-R protein or peptides. Endocrinology. 154 : 2234-43, 2013.
5 ）Inaba H（責任著者）, De Groot LJ, Akamizu T : Thyrotropin Receptor Epitope and Human
Leukocyte Antigen in Graves’Disease. Front Endocrinol 23 : 7 : 120-8, 2016.
6 ）Inaba H（責任著者）, Ariyasu H, Iwakura H, Kurimoto C, et al : Distinct clinical features andprognosis between persistent and temporary thyroid dysfunctions by immune-checkpoint
inhibitors. Endocr J 68 : 231-41, 2021.
7 ）Kurimoto C, Inaba H（責任著者）, Ariyasu H, et al : Predictive and sensitive biomarkers for thyroid
dysfunctions during treatment with immune-checkpoint inhibitors. Cancer Sci 111 : 1468-77, 2020.
8 ） Inaba H（責任著者）, Ariyasu H, Takeshima K, et al : Comprehensive research on thyroid diseases
associated with autoimmunity : autoimmune thyroid diseases, thyroid diseases during immune8

が ん 治 療 の あ ゆ みcheckpoint inhibitors therapy, and immunoglobulin-G4-associated thyroid diseases. Endocr J 66 :843-52, 2019.
9 ）Inaba H（責任著者）,Ariyasu H, Iwakura H, et al : Comparative analysis of human leucocyte antigen
between idiopathic and anti-PD-1 antibody induced isolated adrenocorticotropic hormone
deficiency : A pilot study. Clin Endocrinol（ Oxf）91 : 786-92, 2019.
10）Inaba H（責任著者）, Morita S, Kosugi D, et al : Amino acid polymorphisms in humanhistocompatibility leukocyte antigen class II and proinsulin epitope have impacts on type 1
diabetes mellitus induced by immune-checkpoint inhibitors. Front Immunol. 14 : 1165004. doi :10.3389／fimmu.2023.1165004. 2023.

9慢性骨髄性白血病の無治療寛解維持成功を免疫細胞の遺伝子解析で予測する

慢性骨髄性白血病（CML）の無治療寛解維持達成のためのCML 幹細胞制御免疫機構の解明：HLA 拘束性 T 細胞が規定する CML 関連エピトープの同定及び細胞障害性 T 細胞の果たす役割の解明
博志 ＊

嬉野

要旨

慢性骨髄性白血病（CML）において無治療寛解維持を達成することが治療目標の一つとなってきた。これを達成するために有効に機能する CML 特異的免疫機構を解明することが本研究の要旨である。

は じ め に
慢性骨髄性白血病（CML）は BCR-ABL による異常なチロシンキナーゼ活性による血液悪性腫瘍である。ABL チロシンキナーゼ阻害剤（TKI）の登場により著明にその予後は改善し，現在ではほぼ健常人に近い長期予後が得られるようになってきた。しかしながら長期的な TKI の投与に伴う晩期毒性や高額な医療費の問題がでてきた。このようなことから良好な寛解が得られた症例の中で，TKI 投与を中止できる可能性について検討がなされ，良好な寛解を得た約半数の症例で無治療寛解維持（TFR）が得られることが分かってきた 1）-3）。一方でその成功予測因子というものははっきりしたものが分かってない。
以前より CML には同種造血幹細胞移植やインターフェロン治療が奏功するように CML の制御に免疫学的な関与が重要とされていた。その中でも特に NK 細胞免疫が重要とされる。我々は NK 細胞活性の制御分子である Killer immunoglobulin-like receptor（KIR）の遺伝子多型と CML の TKI 治療効果に相関性があることを以前報告した 4）。また KIR のリガンドである Human leukocyte antigen（HLA）も多数遺伝
子多型を有しその多型が TFR へ及ぼす意義についても報告した 5）。特に HLA 拘束性 T 細胞において重要とされる HLA-A*24 : 02 などのいくつかの HLA を持つことが重要とこの報告で分かったため，HLA 拘束
性 T 細胞が TFR における免疫調整を担っていると我々は仮説を立てた。
T 細胞，B 細胞はそれぞれの受容体（TCR／BCR）の多様性によりその機能的多様性を獲得している。
次世代シークエンサーを用いた TCR／BCR の解析はそれぞれの多様性と優位クローンの同定について同時に解析が可能である。また HLA と TCR／BCR を組みあわせた解析を行うことで抗原提示された分子（エピトープ）を推定できる可能性がある。CML 特異的なエピトープが分かればそれを認識した T 細胞ク
ローンを惹起する新たな治療戦略構築が可能と考える。
方法

3 つのチロシンキナーゼ阻害剤（TKI）stop study（DOMEST, DADI, First DADI）にエントリーされた CML 患者計 230 例中，同意の得られた 76 例から末梢血を採取し，KIR／HLA のタイピングを行い KIR／HLA の多型が CML の TFR に及ぼす影響について検討を行った。次に HLA-A*24 : 02 を有する患者にお＊広島大学

原爆放射線医科学研究所

共同研究講座10

が ん 治 療 の あ ゆ み

いて T 細胞受容体 ／B 細胞受容体（TCR／BCR）のレパトアについて解析を行い TFR 達成症例と分子遺伝学的再発症例での各レパトアの多様性，有意クローンの違いを解析することとした。最後に TFR 達成症
例において共通かつ優勢に認められる TCR クローン及びそのエピトープを同定し，それらのエピトープ
候補から ELISPOT アッセイで，T 細胞の応答性が高いものを CML 関連エピトープとして同定する。
結果

TKI 治療期間が長い患者でより高率に TFR を達成する。
患者 76 例について患者背景について TFR 成功因子について単変量解析を行うと，長期間の TKI 内服期
間（55ヶ月以上）というものが予後因子として抽出された。これはこれまでの臨床試験で報告のある因子であり，本試験がこれまでの他の臨床試験と比較し偏りなどがないことが示された（表 1 , 2 ）。
表1

患者背景

患者背景（n=76）
年齢
IQR（49-70）

63
性別
男性

41

53. 90%

女性

35

46. 10%

Sokal risk scorelow

50

65. 80%intermediate18

23. 70%high

6

7. 90%

missing2

2. 60%

あり

9

11. 80%なし

67

88. 20%

IFN 治療歴

臨床試験
DADI

15

19. 70%DOMEST28

36. 80%First-line DADI

33

43. 40%imatinib28

36. 80%dasatinib48

63. 20%

中止前 TKIs

表2

TFR 達成の患者背景因子

VariableHR

95% CI

P value

年齢63 歳以上0. 99

0. 967-1. 013

P=0. 389

性別

男性

1. 207

0. 618-2. 359

P=0. 581

IFN 治療歴あり

0. 406

0. 097-1. 691

P=0. 215

DMR 期間28ヶ月以上0. 9840. 507-1. 910

P=0. 962

TKI 期間55ヶ月以上0. 476

0. 239-0. 947

P=0. 034

中止 TKI

Imatinib

0. 8120. 403-1. 633

P=0. 559

KIR3DL1 と強い相互作用のある HLA-Bw4 は分子遺伝学的再発のハイリスクである
KIR3DL1 は多様なアリル多型を持ち，またそのリガンドである HLA-Bw4 についても 80 番目のアミノ酸の違いにより HLA-Bw4-80Ile／HLA-Bw4-80Thr と遺伝子多型を持つ。その組み合わせにより遺伝的に NK 細胞の活性の違いがあり，急性骨髄性白血病 6） や HIV 感染患者 7） の予後に影響を与えるとされる。
まず HLA-Bw の多型による TFR について解析を行うと KIR3DL1 のリガントとならない HLA-Bw6 でTFR が高い傾向にあり，一方で HLA-Bw4-80Thr で再発のリスクが高い傾向にあった。興味深いことに11慢性骨髄性白血病の無治療寛解維持成功を免疫細胞の遺伝子解析で予測する

HLA-Bw4-80Ile を エ ピ ト ー プ と し て 持 つ の は HLA-B 座 の み な ら ず HLA-A*24 : 02 を は じ め と し た
HLA-A 座にもあり，HLA-A 座と HLA-B 座で同じ HLA-Bw4-80Ile としてのエピトープとなるにも関わらず，その予後が異なる可能性が分かった。（図 1 A）このため我々は KIR3DL1 と HLA-Bw の組み合わせを① Non-interaction group ; KIR3DL1 を有さない ／HLA-Bw6 ② Weak interaction group ; KIR3DL1／
HLA-Bw4-80I（HLA-A 座） ③ Strong interaction group ; KIR3DL1／HLA-Bw4（HLA-B 座）と 3 群に分けたところ Strong interaction group で有意に再発リスクの高いことが分かった（図 1 B）。これについては多変量解析においても HR 2. 206（1. 112-4. 376 ; p=0. 024）と有意な因子であった。

図1

HLA-Bw 別の TFR（A），KIR3DL1／HLA-Bw の相互作用別の TFR（B）

再発のハイリスクである Strong interaction group では TKI 中止前の NK 細胞分画が少ない
各 患 者 の TKI 中 止 前 の NK 細 胞 分 画（CD3／CD56, CD16／56） や T 細 胞 分 画（CD3／8） と KIR3DL1／
HLA-Bw 多型について解析を行うと，先ほどの分子遺伝学的再発のハイリスクである Strong interactiongroup では NK 細胞分画が他の Non, weak interaction group と比較し有意に少ないことが分かった。（表3 ）このことから KIR3DL1／HLA-Bw 多型の解析は NK 細胞活性を反映し，CML 患者における TFR を予測することができることが分かった。
表3

KIR3DL1／HLA-Bw 別 T／NK 細胞分画

Median（IQR）

Nonor
Weak interaction

Strong interaction

p-valueCD3+/CD8+（/mL）

444. 08（335. 05-898. 14）389. 03（251. 80-637. 37）

0. 227

CD3-/CD56+（/mL）

679. 93（484. 87-1755. 35）

494. 04（332. 24-680. 76）

0. 048CD3+/CD57+（/mL）

378. 18（216. 79-723. 29）

267. 56（70. 54-406. 70）

0. 142

CD16+/CD56+（/mL）

629. 17（495. 55-1645. 73）

499. 63（324. 16-673. 62）

0. 049CD56+/CD57+（/mL）

615. 71（437. 74-1486. 91）

384. 03（276. 53-618. 24）

0. 052

お わ り にTCR／BCR レパトアの血液腫瘍における治療効果との関連
予後良好とされる KIR3DL1／HLA-Bw Weak interaction group には HLA-A*24 : 02 を持つ患者が含まれ，先に報告していた論文と矛盾ないものであり，HLA-A*24 : 02 を持つ患者について HLA 拘束性 T 細胞の存在について解析を進めることとしたが，現在解析途中であり，十分なデータが出せない。先に同様の解析を進めた多発性骨髄腫患者における免疫調整剤（レナリドミド）使用における TCR／BCR 解析の結果を以下にお示しする。多発性骨髄腫患者 2 症例について解析を行ったが，レナリドミドによる治療が奏功すると BCR レパトアの多様性の回復を認める（Index の上昇 ; 図 2 A）。一方その際に TCR レパトアの多12

が ん 治 療 の あ ゆ み

様性は減少（Index の低下 ; 図 2 B, C）することが分かった。これは TCR におけるクローン性の増強を示
唆し，がんエピトープを認識した特異的 T 細胞の増加を示唆するものと考えられた。CML においても現在，解析中である。
A

C

B

図2

多発性骨髄腫患者における BCR レパトアのレナリドミド治療前後での変化

最

後

に

CML 患者において高率に TFR 達成する症例を予測し安全に TFR 達成すること，分子遺伝学的再発のハイリスク患者においては何らかの TKI に加えた追加治療を行うことで TFR を達成するための治療工夫を行い，より多くの患者さんを TFR に導きたい。DNA メチル化阻害剤を加えた治療は CML 幹細胞枯渇をすることを我々は報告しており，分子遺伝学的再発のハイリスク患者において効果が期待される 8）。本
研究結果は米国血液学会機関誌である BLOOD neoplasia において受理された。（BLOOD neoplasia, inpress）。
13慢性骨髄性白血病の無治療寛解維持成功を免疫細胞の遺伝子解析で予測する

文

献1 ）Mahon F-X, Réa D, Guilhot J, et al. Discontinuation of imatinib in patients with chronic myeloid
leukaemia who have maintained complete molecular remission for at least 2 years : the prospective,
multicentre Stop Imatinib（STIM）trial. Lancet. Oncol. 11（11）: 1029-35, 2010.
2 ）Kimura S, Imagawa J, Murai K, et al. Treatment-free remission after first-line dasatinib
discontinuation in patients with chronic myeloid leukaemia（first-line DADI trial）: a single-arm,
multicentre, phase 2 trial. Lancet. Haematol. （7 3）: e218-25, 2020.
3 ）Saussele S, Richter J, Guilhot J, et al. Discontinuation of tyrosine kinase inhibitor therapy in chronic
myeloid leukaemia（EURO-SKI）: a prespecified interim analysis of a prospective, multicentre,
non-randomised, trial. Lancet Oncol. 19（6）: 747-57, 2018.
4 ）Ureshino H, Shindo T, Kojima H, et al. Allelic Polymorphisms of KIR s and HLA s Predict
Favorable Responses to Tyrosine Kinase Inhibitors in CML. Cancer Immunol. Res. 6（6）: 745-54,
2018.
5 ）Ureshino H, Shindo T, Tanaka H, Saji H, Kimura S. HLA polymorphisms are associated withtreatment-free remission following discontinuation of tyrosine kinase inhibitors in chronic myeloid
leukemia. Mol. Cancer Ther. 20（1）: 2021.
6 ）Boudreau JE, Giglio F, Gooley TA, et al. KIR3DL1／ HLA-B Subtypes Govern Acute Myelogenous
Leukemia Relapse After Hematopoietic Cell Transplantation. J. Clin. Oncol. 35（20）: 2268-78, 2017.
7 ）Martin MP, Qi Y, Gao X, et al. Innate partnership of HLA-B and KIR3DL1 subtypes against HIV1. Nat. Genet. 39（6）: 733-40, 2007.
8 ）Kamachi K, Ureshino H, Watanabe T, et al. Targeting DNMT1 by demethylating agent OR-2100
increases tyrosine kinase inhibitors-sensitivity and depletes leukemic stem cells in chronic myeloid
leukemia. Cancer Lett. 526（December 2021）: 273-83, 2022.
9 ）Ureshino H, Ueda Y, Fujisawa S, et al. KIR3DL1-HLA-Bw status in CML is associated withachievement of TFR : the POKSTIC Trial, a Multicentre Observational Study. BLOOD neoplasia.
2024, in press.

14

が ん 治 療 の あ ゆ みInterleukin（IL）-36 Family の肺癌微小環境における役割の解明
郁彦 ＊

木下

要旨

炎症性サイトカインの Interleukin（IL）-36 Family に属する IL-38 に関して，我々はこれまでに IL-38 が悪性腫瘍への CD8 陽性リンパ球浸潤を抑制することを報告した。一方で，IL-38 と腫瘍関連好中球（TANs）や腫瘍随伴マクロファージ（TAMs）との関係は明らかではない。肺腺癌切除症例 209 例を対象に免疫組織化学染色にて IL-38 発現と TANs，
TAMs を評価した。また，動物実験では IL-38 強制発現肺癌細胞株を用いてマウス皮下腫瘍モデルを作成し，腫瘍内のTANs，TAMs を評価した。肺腺癌切除症例において IL-38 高発現は有意に TANs 及び TAMs 高浸潤と関連していた。動
物実験においても，IL-38 強制発現によって TANs と TAMs の浸潤が増加していた。IL-38 によって TANs，TAMs の浸潤が誘導され，腫瘍形成に関わっている可能性が示された。

は じ め にInterleukin（IL）-36 Family は IL-36 Receptor（IL-36R）を介して，マクロファージ，T 細胞，ケラチ
ノサイト，上皮細胞などの幅広い免疫・非免疫細胞を活性化し，皮膚，肺，腎臓，肝臓，腸などの様々な炎症，発癌を制御することが知られている 1）。IL-36 には，IL-36α，IL-36β，IL-36γ の 3 つのサブフォー
ムがある。また，2001 年に新たに発見された IL-38 も IL-36 Family に属する 2）。
我々の過去の研究では，動物実験を用いて IL-38 が腫瘍への CD8 陽性リンパ球浸潤を抑制することで，腫瘍の形成を促進することを報告した 3）。また，肺腺癌切除検体を用いて腫瘍細胞の IL-38 高発現が予後不良因子であることや，免疫チェックポイント分子である Programed cell death ligand 1（PD-L1）の発現と相関することを報告した 4）。
一方で，IL-36 Family は好中球やマクロファージなどの自然免疫系の誘導や活性化に関与することが報告されているが 5） 6），IL-38 と好中球やマクロファージなどの自然免疫系との関係に関する報告はほとんどない。腫瘍関連好中球（TANs）や腫瘍随伴マクロファージ（TAMs）は抗腫瘍免疫応答を抑制し，腫瘍形成を促進することが知られており 7） 8），本研究によって IL-38 と TANs や TAMs の関連が明らかになれば，IL-38 の治療応用への可能性をさらに探究できると考えられる。
対象と方法
臨床検体を用いた実験
2003 年から 2012 年 12 月に九州大学病院 消化器・総合外科にて手術を行った肺腺癌 209 症例を対象とした。免疫組織化学染色によって腫瘍細胞の IL-38 発現と TANs 及び TAMs の評価を行った。
IL-38 の免疫組織化学染色には Mouse Monoclonal 抗 IL-38 抗体（0. 5 μg／ml，#H127C ; 久留米大学星野先生よりご提供）を使用し，IL-38 発現の評価は腫瘍細胞の細胞質と細胞膜に弱く染色した症例を低発現，中等度から強く染色した症例を高発現と判断した。TANs 及び TAMs の免疫組織化学染色はそれぞれ
Rabbit Polyclonal 抗 CD66b 抗 体（Abcam, ab197678），Mouse Monoclonal 抗 CD163 抗 体（Leica, NCL＊国立病院機構九州がんセンター

呼吸器腫瘍科

九州大学病院

15

呼吸器外科

Interleukin（IL）-36 Family の肺癌微小環境における役割の解明

L-CD163）を用いて行った。TANs 及び TAMs の評価は腫瘍内の部位の 5 カ所にて高倍率で陽性細胞をカウントし，中央値をカットオフとして高浸潤と低浸潤に分類を行った。
TANs 低浸潤と高浸潤，TAMs 低浸潤と高浸潤の症例で臨床病理学的因子及び IL-38 発現との関連を解
析した。
動物実験
ルイス肺癌細胞株（LLC ; LL／2, RRCID : CVCL_4358）に IL-38 プラスミド（NM_153077 ; Origene）
を jetPRIME kit（Polyplus Transfection） を 用 い て 導 入 し た。 コ ン ト ロ ー ル と し て， 空 の ベ ク タ ー（pCMV6-Entry Vector ; Origene）も同様に LLC 細胞へ導入した（LLC-vector 細胞）。遺伝子導入から
48 時間後，遺伝子導入細胞を G418（500μg／ml）にてセレクションした。限界希釈法を用いて，遺伝子導入細胞からシングルセルクローンを分離した。セレクションを行った遺伝子導入細胞を各ウェルに 1 細胞となるように蒔き，単一細胞から形成されたクローン集団を培養し，回収した。2 種類のクローンのIL-38 強制発現 LLC 細胞株（LLC-IL38 細胞）を作成した。
6 週齢の C57BL／6J マウス（CLEA Japan）に充分な麻酔の後，5x106 個の LLC-IL38 細胞または LLCvector 細胞を 100 μl の PBS に希釈し，マウス背部の皮下へ投与した。皮下投与 21 日後に腫瘍を回収し，腫瘍組織の免疫組織化学染色によって TANs と TAMs の評価を行った。
TANs 及び TAMs の免疫組織化学染色はそれぞれ Rabbit Monoclonal 抗 Ly6g 抗体（Abcam, ab238132），
Rabbit Monoclonal 抗 F4／80 抗体（Abcam, ab111101）を用いて行った。TANs 及び TAMs の評価は腫瘍内の部位の 5 カ所にて高倍率で陽性細胞をカウントし，平均値をカットオフとして高浸潤と低浸潤に分類を行った。
LLC-IL38 由来腫瘍と LLC-vector 由来腫瘍での TANs 及び TAMs の比較を行った。
結果

臨床検体を用いた実験
CD66b の免疫組織化学染色の典型画像を図 1 に示す。CD66b 陽性 TANs の中央値は 2. 2 個 ／ 視野であり，
TANs 高浸潤は 106 例，低浸潤は 103 例であった。CD66b 陽性 TANs と臨床病理学的因子，IL-38 発現との関係を表 1 に示す。TANs 高浸潤の症例では有意に pT2 以上，pN1 以上，pStage II 以上，胸膜浸潤陽性，
Micropapillary／Solid predominant の症例が多く，IL-38 高発現の症例も多かった。

図1

肺腺癌切除検体における CD66b 陽性 TANs の免疫組織化学染色の典型画像

16

が ん 治 療 の あ ゆ み

表1

CD66b 陽性 TANs と臨床病理学的因子，IL-38 発現との関係
CD66b+TANs

Characteristics

p valueLow（n=103）

High（n=106）<70

61 （59. 20%）55 （51. 90%）

≥ 70

42 （40. 80%）

51 （48. 10%）Male

43 （41. 70%）

53 （50. 00%）

Female60 （58. 30%）

53 （50. 00%）

Never smoker

55 （53. 40%）58 （54. 70%）

Smoker48 （46. 60%）

48 （45. 30%）

Pack Year Index

mean and range

16. 5 （0-150）

23. 9 （0-165）

0. 0744

BMI

mean and ±SD

22. 3 （±3. 0）

22. 6 （±3. 0）

0. 481775 （72. 80%）

50 （47. 20%）

0. 0002≥ T2

28 （27. 20%）56 （52. 80%）N099 （96. 10%）91 （85. 90%）

Age
Sex
Smoking

T1

pT
pN
pStagePleural invasion
Vascular invasion
Lymphatic invasion
Histological subtype
EGFR mutation*
IL-38 expression

≥ N1

4

（3. 90%）15 （14. 10%）I

94 （91. 30%）

72 （67. 90%）

≥ II

9

（8. 70%）34 （32. 10%）

Negative

91 （88. 40%）76 （71. 70%）

Positive

12 （11. 60%）

30 （28. 30%）

Negative

80 （77. 70%）

72 （67. 90%）

Positive23 （22. 30%）

34 （32. 10%）

Negative

91 （88. 40%）91 （85. 90%）

Positive

12 （11. 60%）

15 （14. 10%）Micropapillary／Solid1（1. 00%）10 （9. 40%）

Others102 （99. 00%）

96 （90. 60%）

Wild type

25 （43. 10%）37 （57. 80%）

Mutant33 （56. 90%）

27 （42. 20%）Low

60 （58. 30%）

32 （30. 20%）High

43 （41. 70%）

74 （69. 80%）

0. 3304
0. 2674
0. 89

0. 0144<0. 001
0. 0032
0. 1229
0. 68160. 0098
0. 1466<0. 001

CD163 の免疫組織化学染色の典型画像を図 2 に示す。CD163 陽性 TAMs の中央値は 14. 6 個 ／ 視野であり，TAMs 高浸潤は 104 例，低浸潤は 105 例であった。CD163 陽性 TAMs と臨床病理学的因子，IL-38
発現との関係を表 2 に示す。TAMs 高浸潤の症例では有意に高齢者，pT2 以上，pStage II 以上，胸膜浸潤陽性，血管侵襲陽性，Micropapillary／Solid predominant の症例が多く，IL-38 高発現の症例も多かった。

図2

肺腺癌切除検体における CD163 陽性 TAMs の免疫組織化学染色の典型画像

17

Interleukin（IL）-36 Family の肺癌微小環境における役割の解明

表2

CD163 陽性 TAMs と臨床病理学的因子，IL-38 発現との関係
CD163+TAMs

Characteristics

p valueLow（n=105）

High（n=104）<70

66 （62. 90%）

50 （48. 10%）≥ 70

39 （37. 10%）54 （51. 90%）Male

48 （45. 70%）

48 （46. 10%）

Female57 （54. 30%）

56 （53. 90%）

Never smoker

57 （54. 30%）

56 （53. 90%）

Smoker48 （45. 70%）

48 （46. 10%）mean and range

17. 3 （0-150）

23. 3 （0-165）

0. 1470

BMI

mean and ±SD

22. 3 （±3. 0）

22. 6 （±3. 0）

0. 4817pT

T1

70 （66. 70%）

55 （52. 90%）

0. 0478≥ T2

35 （33. 30%）

49 （47. 10%）N097 （92. 40%）

93 （89. 40%）

≥ N1

8

（7. 60%）11 （10. 60%）I

91 （86. 70%）

75 （72. 10%）≥ II

14 （13. 30%）29 （17. 90%）

Negative

92 （87. 60%）

75 （72. 10%）

Positive

13 （12. 40%）29 （17. 90%）

Negative

89 （84. 80%）

63 （60. 60%）

Positive

16 （15. 20%）41 （39. 40%）

Negative

93 （88. 60%）

89 （85. 60%）

Positive

12 （11. 40%）

15 （14. 40%）

Age
Sex
Smoking
Pack Year Index

pN
pStagePleural invasion
Vascular invasion
Lymphatic invasion
Histological subtype
EGFR mutation*
IL-38 expression（1. 90%）9（8. 60%）Micropapillary／Solid

2

Others99 （98. 10%）95 （91. 40%）

Wild type

38 （56. 70%）

24 （43. 60%）

Mutant29 （43. 30%）

31 （54. 40%）Low

56 （53. 30%）

36 （34. 60%）High

49 （46. 70%）

68 （65. 40%）

0. 0371
1. 0000
1. 0000

0. 4815
0. 0104
0. 0058<0. 001
0. 5432
0. 0333
0. 2026
0. 0081

動物実験
Ly6g 陽性 TANs の免疫組織化学染色の典型画像を図 3 に示す。LLC-IL38 由来腫瘍と LLC-vector 由来腫瘍で比較を行うと，LLC-IL38 由来腫瘍で Ly6g 陽性 TANs の浸潤が多い傾向であった（11. 0 個 ／ 視野
対 6. 0 個 ／ 視野，p=0. 0719，図 4 ）。

図3マウス腫瘍組織における Ly6g 陽性 TANs の免疫組織化学染色の典型画像

18

が ん 治 療 の あ ゆ み

図4IL-38 強制発現による腫瘍組織への Ly6g 陽性 TANs 浸潤数の違い

F4／80 陽性 TAMs の免疫組織化学染色の典型画像を図 5 に示す。LLC-IL38 由来腫瘍と LLC-vector 由
来腫瘍で比較を行うと，LLC-IL38 由来腫瘍で有意に F4／80 陽性 TAMs の浸潤が多かった（14. 6 個 ／ 視野
対 9. 7 個 ／ 視野，p=0. 0148，図 6 ）。

図5マウス腫瘍組織における F4／80 陽性 TAMs の免疫組織化学染色の典型画像

図6

IL-38 強制発現による腫瘍組織への F4／80 陽性 TAMs 浸潤数の違い

19

Interleukin（IL）-36 Family の肺癌微小環境における役割の解明

考按

本研究によって，肺腺癌切除症例において IL-38 高発現が TANs 及び TAMs の高浸潤と関連している
こと，マウス皮下腫瘍モデルにおいて IL-38 強制発現 TANs 及び TAMs の浸潤を誘導することが明らかとなった。
IL-38 の受容体である IL-36R をノックアウトしたマウス（IL-36R KO マウス）を用いた創傷治癒モデ
ルを用いた研究で，IL-36R KO マウスでは創傷治癒の際に好中球やマクロファージの浸潤が増加し，創傷治癒が遅延することが報告された。また，IL-36R KO マウスでは IL-36γ，C-X-C モチーフケモカイン
リガンド 1（CXCL1），トランスフォーミング増殖因子（TGF）-β などのサイトカインの発現の増加が認められたほか，Toll 様受容体 4（TLR4）阻害剤である TAK-242 を投与によって IL-36R KO マウスの創傷治癒が正常化し，創傷治癒の遅延が改善したことから，TLR4 を介したシグナルやサイトカイン産生がIL-36R KO マウスにおける好中球やマクロファージの浸潤増加に関与したものと報告された 5）。これは，IL-36R のアンタゴニストとして作用する IL-38 も好中球やマクロファージの浸潤を誘導する機序になりうると考えられる。
一方で，慢性閉塞性肺疾患（COPD）の動物実験において，IL-36R シグナル刺激によって CXCL1 やCXCL8，溶出性マトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）が放出されることで好中球による炎症反応が増幅されることが報告されている 6）。IL-36R シグナルを阻害することで好中球性の炎症が抑制されることや，IL-36 シグナルが GM-CSF やウイルス模倣物質 poly（I : C）を介して好中球やマクロファージの活性化を促進することが報告されており 6），IL-36 シグナルの好中球やマクロファージに対する作用はコンセンサスが得られていない。
我々は今後，LLC-IL38 由来腫瘍内のケモカインやサイトカイン，TLR4 シグナルなどの解析をさらに行い，IL-38 と好中球，マクロファージとの関係をさらに明らかにしていく方針である。
お わ り に
本研究はがん集学的治療研究財団から頂いた第 43 回一般研究助成によるご支援を頂き，実施することができました。この場をお借りして深謝いたします。
参 考 文 献1 ）Byrne J, Baker K, Houston A, et al. IL-36 cytokines in inflammatory and malignant diseases : notthe new kid on the block anymore. Cell Mol Life Sci. 78 : 6215-27, 2021.
2 ）Bensen JT, Dawson PA, Mychaleckyj JC, et al. Identification of a novel human cytokine gene in
the interleukin gene cluster on chromosome 2q12-14. J Interferon Cytokine Res. 21 : 899-904, 2001.
3 ）Kinoshita F, Tagawa T, Akamine T, et al. Interleukin-38 promotes tumor growth throughregulation of CD8+ tumor-infiltrating lymphocytes in lung cancer tumor microenvironment. Cancer
Immunol Immunother. 70 : 123-35, 2021.
4 ）Takada K, Okamoto T, Tominaga M, et al. Clinical implications of the novel cytokine IL-38
expressed in lung adenocarcinoma : Possible association with PD-L1 expression. PLoS One. 12 :1-15, 2017.
5 ）Saito K, Iwata Y, Fukushima H, et al. IL-36 receptor antagonist deficiency resulted in delayed
wound healing due to excessive recruitment of immune cells. Sci Rep. 10 : 1-12, 2020.
6 ）Baker JR, Fenwick PS, Koss CK, Owles HB, Elkin SL, Fine J, Thomas M, El Kasmi KC, Barnes PJ,
Donnelly LE. IL-36 receptor agonist and antagonist imbalance drives neutrophilic inflammation in20

が ん 治 療 の あ ゆ み

COPD. JCI Insight. 7 : e155581, 2022.
7 ）Shaul ME, Fridlender ZG. Tumour-associated neutrophils in patients with cancer. Nat Rev Clin
Oncol. 16 : 601-20, 2019.
8 ）Cassetta L, Fragkogianni S, Sims AH, et al. Human Tumor-Associated Macrophage and Monocyte
Transcriptional Landscapes Reveal Cancer-Specific Reprogramming, Biomarkers, and Therapeutic
Targets. Cancer Cell. 35 : 588-602, 2019.

21肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害剤の感受性に関わるバイオマーカーの探索

全身性炎症と癌免疫微小環境に着目した肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害剤の感受性に関わる
バイオマーカーの探索
浩介 ＊

美馬

要旨 【背景】肝細胞癌においても切除不能例に対する薬物療法の一次治療として，抗 PD-L1 抗体アテゾリズマブと抗VEGF 抗体ベバシズマブによる併用療法における全生存期間と無増悪生存期間の有意な延長が報告された。しかし，肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害剤の効果と全身性炎症や癌免疫微小環境の関係は不明である。今回，肝細胞癌の腫瘍微小環境における PDCD1（PD-1），CD274（PD-L1）の発現と臨床病理学的因子や予後の関連を検討した。
【方法】肝細胞癌組織中の，CD8，PDCD1，CD274 発現を免疫組織化学染色とデジタルイメージング解析装置（BZ-X700 ;Keyence）により測定した。腫瘍微小環境における CD274 の発現と PDCD1 陽性 CD8 陽性 T 細胞数，臨床病理学的因子や予後の関連を解析した。
【結果】現在までに解析した肝細胞癌 120 例中，26 例（22%）の腫瘍微小環境に CD274 の発現を認めた。腫瘍微小環境に CD274 を発現する症例は，PDCD1 陽性 CD8 陽性 T 細胞数が有意に少なかった（P<0. 001）。多変量解析で，術前フレイルあり（odds ratio［OR］, 5. 24），好中球 ／ リンパ球比≥ 2（OR, 4. 31），DCP>100 mAU／mL（OR, 5. 35），PDCD1 陽性 CD8+ T 細胞の腫瘍内低浸潤（OR, 11. 95）が，腫瘍微小環境における CD274 発現に関連する因子として同定された。肝細胞癌
腫瘍微小環境に CD274 発現を認めた症例は切除後の無再発生存率が有意に不良であった（log-rank P<0. 001）。
【結語】肝細胞癌において患者脆弱性，腫瘍悪性度，全身性炎症が癌免疫微小環境に関与していることが示唆され，免疫チェックポイント阻害剤を含めた補助化学療法による切除後の再発抑制や予後向上が期待される。今後，免疫チェックポ
イント阻害剤の効果と全身性炎症や癌免疫微小環境の関係を検討していく予定である。

は じ め に
近年，PD-1／PD-L1 分子や CTLA-4 分子を標的として，癌反応性 T 細胞への抑制シグナルを解除する
免疫チェックポイント阻害薬が様々ながん腫に実用化され，がん集学的治療の新たな柱として用いられるようになってきた。肝細胞癌においても切除不能例に対する薬物療法の一次治療として，抗 PD-L1 抗体
アテゾリズマブと抗 VEGF 抗体ベバシズマブによる併用療法とソラフェニブを比較した第Ⅲ相試験（IMbrave150）が行われ，アテゾリズマブとベバシズマブによる併用療法における全生存期間と無増悪生存期間の有意な延長，高い奏効割合，高い忍容性が報告された（Finn RS et al. N Engl J Med 2020）。本邦においても 2020 年 9 月に承認され，切除不能肝細胞癌に対する薬物療法の一次治療として実臨床で使用されている。約 3 分の 1 の症例で腫瘍縮小効果が得られる一方で，約 20％の症例は無効で，さらに約10％に Hyperprogressive disease と呼ばれる急速悪化を認めることから，肝細胞癌に対する免疫チェック
ポイント阻害剤の効果予測のためのバイオマーカーの開発が望まれている。
悪性黒色腫や肺癌に対する免疫チェックポイント阻害薬の有効例と無効例を比較したリバーストランス
レーショナル研究によって，制御性 T 細胞，骨髄由来抑制細胞，マクロファージによる癌反応性 T 細胞の腫瘍内浸潤の抑制や腫瘍内に浸潤した T 細胞の疲弊状態など複雑な癌免疫微小環境が明らかとなってきた。しかし，肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害剤の効果と全身性炎症や癌免疫微小環境の関係＊熊本大学病院

消化器癌先端治療開発学寄附講座

22

が ん 治 療 の あ ゆ み

は不明である。
以上の背景から，肝細胞癌患者における癌組織内の T 細胞や免疫チェックポイント分子の発現を解析し，免疫チェックポイント阻害剤の治療効果と癌免疫微小環境との関連を明らかにすることを目的とした。
対象と方法
当院において切除した肝細胞癌組織中の，CD8，CD274 発現を免疫組織化学染色とデジタルイメージ
ング解析装置（BZ-X700 ; Keyence）により測定し，CD274 発現に関しては腫瘍細胞の細胞膜染色陽性率
1% 以上を陽性とした（図 1 ）。

図1

肝細胞癌組織における CD274 発現

術前における Frail の有無を 7 段階の Clinical Frailty Scale を用いて評価し，4 以上をフレイルとした（図 2 ）。

図2

Clinical Frailty Scale

腫瘍微小環境における CD274 の発現と PDCD1 陽性 CD8 陽性 T 細胞数，臨床病理学的因子，フレイルの有無や予後の関連を解析した。
結果

現在までに解析した肝細胞癌 120 例中，26 例（22%）の腫瘍微小環境に CD274 の発現を認め，CD274
発現陽性症例は，CFS4 以上のフレイル，炎症指標の NLR 高値，栄養指標の PNI 低下と有意な関連を認めた。さらに腫瘍因子では PIVKA-II 高値，PD1 陽性 CD8 陽性 T 細胞の浸潤低下と関連を認めた（表 1 ）。
23

肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害剤の感受性に関わるバイオマーカーの探索

表1

CD274 発現と臨床病理学的因子の関連

多 変 量 解 析 で， 術 前 フ レ イ ル あ り（odds ratio［OR］, 5. 24 ; 95% confidence interval［CI］, 1. 09 to
28. 36），好中球 ／ リンパ球比≥ 2（OR, 4. 31 ; 95% CI, 1. 33 to 15. 92），DCP>100 mAU／mL（OR, 5. 35 ; 95%
CI, 1. 63 to 19. 69），PDCD1 陽性 CD8 + T 細胞の腫瘍内低浸潤（OR, 11. 95 ; 95% CI, 3. 38 to 58. 92）が，腫瘍微小環境における CD274 発現に関連する因子として同定された（表 2 ）。
表2CD274 発現に関する多変量解析

肝細胞癌腫瘍微小環境に CD274 発現を認めた症例は切除後の無再発生存率が有意に不良であった（log-rank P<0. 001 : 図 3 ）。

図3CD274 発現と肝細胞癌切除後の予後

24

が ん 治 療 の あ ゆ み

考察

本研究により，肝細胞癌において CD274（PD-L1）発現陽性症例は切除後の再発リスクが有意に高く，
CD274（PD-L1）の発現に患者脆弱性，腫瘍悪性度，全身性炎症が関与していることが示唆された。
肝細胞癌における CD274（PD-L1）発現のメカニズムは不明である。フレイルの発症進行には慢性炎症，低栄養，サルコペニアなどの要因が複合的に関与することが示唆されている 1）。また TNF-α, TGF-β,
IL-6 などの炎症性サイトカインが腫瘍細胞における PD-L1 の発現を誘導することが報告されている 2）。
肝細胞癌において，慢性炎症に伴う炎症性サイトカインが癌微小環境における CD274（PD-L1）発現に関与している可能性がある。消化器癌，非小細胞肺癌，悪性黒色腫など進行固形癌において，パフォーマン
スステータスが不良な患者では免疫チェックポイント阻害剤の抗腫瘍効果が減弱することが報告されている 3）。今後免疫チェックポイント阻害剤の効果と全身性炎症や癌免疫微小環境中の CD274（PD-L1）発現の関連を検討する予定としている。また肝細胞癌患者における癌組織内の詳細な T 細胞サブセット（CD3，CD4，CD8，CD45RO，FOXP3），NK 細胞，マクロファージ，骨髄由来抑制細胞，免疫チェック
ポイント分子の発現を解析し，免疫チェックポイント阻害剤の治療効果と癌免疫微小環境との関連を明らかにし，さらに血清サンプルを用いたサイトカインアレイを行い，免疫チェックポイント阻害剤の治療効
果と関連する炎症性シグナルの同定を試みる予定である。
お わ り に肝細胞癌において患者脆弱性，腫瘍悪性度，全身性炎症が癌免疫微小環境に関与していることが示唆さ
れ，免疫チェックポイント阻害剤を含めた補助化学療法による切除後の再発抑制や予後向上が期待される。今後，免疫チェックポイント阻害剤の効果と全身性炎症や癌免疫微小環境の関係を検討していく予定である。本研究から得られた知見を基盤として，全身性炎症や癌免疫微小環境に基づくがん免疫療法の効果予測法の開発につながることが期待される。
文

献1 ）Xue QL, Bandeen-Roche K, Varadhan R et al. Initial Manifestations of Frailty Criteria and theDevelopment of Frailty Phenotype in the Women's Health and Aging Study II. J Gerontol A Biol Sci
Med Sci 63 : 984-90, 2008.
2 ）Cha JH, Chan LC, Li CW et al. Mechanisms Controlling PD-L1 Expression in Cancer. Mol Cell 76 :359-70, 2019.
3 ）Krishnan M, Kasinath P, High R et al. Impact of Performance Status on Response and Survival
Among Patients Receiving Checkpoint Inhibitors for Advanced Solid Tumors. JCO Oncol Pract 18 :e175-82, 2022.

25

悪性神経膠腫に対するインドシアニングリーンを用いた術中蛍光診断の確立

悪性神経膠腫に対するインドシアニングリーン（ICG）
および近赤外線を用いた術中リアルタイム蛍光診断確立と治療法の開発武藤

淳 ＊，佐谷秀行 ＊＊，樺山

一哉 ＊＊＊，廣瀬雄一 ＊

要旨 【目的】インドシアニングリーン（ICG）による脳脊髄腫瘍に対する術中蛍光診断法のプロトコールをそれぞれの病
理型に応じて確立した。
【方法】手術 24 時間前に 5. 0mg／kg を静脈注射投与し，腫瘍に残存する ICG を近赤線照射下で観察する Second Window
ICG テクニック（SWIG）で悪性神経膠腫 15 人，転移性脳腫瘍 15 人を行った。SWIG を改良し，観察 1 時間以上前に 0. 51. 5mg／kg を投与する Delayed Window ICG テクニック（DWIG）に開発した。悪性神経膠腫 14 人，転移性脳腫瘍 14 人，
下垂体腺腫 16 人，髄膜腫 15 人，頭蓋内神経鞘腫 11 人を行った。
【結果】転移性脳腫瘍と悪性神経膠腫にておいて SWIG と DWIG で有意差は示されなかった。つまり，改良した簡便な観察 1 時間前に 0. 5-1. 5mg／kg 投与する DWIG が，手術 24 時間前に 5. 0mg／kg の大量投与する方法に蛍光値に差がないことが示され，DWIG で十分であることが示された。また，MRI のガドリニウムの造影強度により ICG の蛍光発光が予想可能であることが示され，MRI でガドリニウムで造影される脳脊髄腫瘍では，ICG 術中蛍光造影が有用である可能性が示された。さらに，Dynamic Contrast Enhanced Perfusion MRI 解析によって，ICG が貯留する機構として，脳血管門の透過性（Permeability）は，MRI の Gd 増強，ICG の保持，近赤外線による腫瘍蛍光に寄与する可能性を示した。
【結論】腫瘍型に応じた ICG 術中蛍光造影法を，転移性脳腫瘍，悪性神経膠腫，髄膜腫，神経鞘腫，下垂体腺腫などについて確立した。ICG が脳脊髄腫瘍に貯留する原因として，permeability が寄与している可能性が示唆された。

は じ め に脳腫瘍は腫瘍組織と正常脳組織との境界が不明瞭なことがしばしばある。悪性脳腫瘍は外科手術により可能な限り摘出し，化学療法，放射線療法を行うことにより，生命予後を延長することが示されている。
摘出すればするほど生命予後（全生存期間）は延長するが，手術による正常部分の損傷で機能障害をきたす可能性が高くなる。患者の生命予後と機能予後の両者を高めるため，脳腫瘍と正常組織を術中に判別し得る新しい手技や技術の開発は急務である。
近年ジアグノグリーン ®（Indocyanine green

以下 ICG

第一三共株式会社）を使用した，脳腫瘍手術

3）における術中蛍光造影の方法が報告された 。不明瞭な腫瘍の診断と摘出を補助する方法の一つに「術中蛍光診断（photodynamic diagnosis, PDD）」がある。腫瘍細胞に取り込まれた試薬を術中の近赤外線照射により励起して，蛍光発光する腫瘍組織を摘出する方法である。悪性脳腫瘍であるグリオーマに対しては
5- アミノレブリン酸（5-aminolvulinic acid, 5-ALA）が用いられるが，費用，管理，必要機器などの実用的問題がある。
脳神経外科領域では，脳血管手術中の血流観察方法として ICG を用いた術中蛍光診断が日常的に行われ＊藤田医科大学 医学部 脳神経外科＊＊藤田医科大学 医学部 がん医療研究センター＊＊＊大阪大学大学院 理学研究科

26

が ん 治 療 の あ ゆ みている。市中病院の脳神経外科で扱う疾患は圧倒的に血管障害と外傷疾患が多く，手術用顕微鏡には脳血流観察目的で ICG 用の蛍光装置が導入されている。ゆえに，ICG 蛍光造影を脳腫瘍に使用することができ
れば汎用性が高く実用的である。
ICG は分子量 775 の水溶性色素でそれ自体は発光しないが，静脈投与すると生体内で血漿蛋白（BetaLipoprotein）と結合し，近赤外線照射により励起され発光する 1）。760nm-780nm の近赤外線を照射すると，血管内の ICG 試薬が励起され，800nm-850nm の波長の近赤外域蛍光を放出する。表面より約 10 mm
深部の病変，血管，リンパ管など生体深部構造を励起，発光させ可視化が可能である。
上述した脳腫瘍に対する術中蛍光診断は，現在保険適用である 1 回 25mg の静注投与に対して，手術
24 時間前に 5. 0mg／kg を静脈注射投与し，腫瘍に残存する ICG を近赤外線照射下で観察する方法である。
“Second Window ICG technique（SWIG）”と呼ばれ，腫瘍細胞の存在を術中に確認可能である 5）。ICGの second window 効果は，EPR 効果（Enhanced permeability and retention effect）を利用したもので，ガン特有の血管構造を利用した高分子の drug delivery system を応用したものである。そのメカニズム
は，EPR 効果により腫瘍による血管構造の破綻やリンパドレナージシステムの損傷などによって血管透過性が増大し，静脈投与 24 時間後にがん組織に ICG が集積するというものである 5）。動物実験では，
Madajewski らが 7. 5mg／kg を手術 24 時間前に投与することで様々な悪性腫瘍に集積し，残存腫瘍を摘出できることをマウスの脇腹モデルで報告した 4）。肝臓癌，肺癌，頭頸部癌でも腫瘍の取り込みが報告されている。一方，脳腫瘍細胞の ICG 取込みに関する基礎研究は Hugland らによりラットと脳腫瘍患者で報告されている 2）。しかし，脳腫瘍に関する報告は University of Pennsylvania の Lee らのチームからのみであり，再現性は未だ示されていない。また Visionsense 社の外視鏡のみを使用した経験で，ごく一般的な顕微鏡による近赤外線照射使用の報告はされていない。また，報告はアメリカ人患者の data であるために，日本人に至適な投与量，投与のタイミングなどの検討が必要である。正常脳組織と腫瘍組織をリアル
タイムかつ肉眼的に識別可能な術中蛍光診断はより一層注目されており，安価かつ簡便で，確実に腫瘍細胞を標識する蛍光発光物質が求められている。本研究では，至適な投与量，観察時期を脳脊髄腫瘍型別に，
特に悪性神経膠腫に対する protocol を決定することを目的とした。
対象−方法−成績＜対象方法＞
脳脊髄腫瘍を対象に 2019 年 11 月より特定臨床研究として研究を行っている（jRCTs041190064）。藤田
医科大学 IRB（CRB4180003）と社会福祉法人 恩賜財団

済生会支部

済生会横浜市東部病院の IRB の承認（2020056）を得て研究を開始している。2023 年 8 月までに 240 症例に行った。その中で，Dynamic
Contrast Enhanced Perfusion MRI 解析を行った 100 人を対象に解析を行った。詳細は，悪性神経膠腫 29
人，転移性脳腫瘍 29 人，下垂体腺腫 16 人，髄膜腫 15 人，頭蓋内神経鞘腫 11 人の合計 100 人である。手術 24 時間前に 5. 0mg／kg を静脈注射投与し，腫瘍に残存する ICG を近赤線照射下で観察する Second
Window ICG テクニック（SWIG）で悪性神経膠腫 15 人，転移性脳腫瘍 15 人を行った。SWIG を改良し，
観察 1 時間以上前に 0. 5-1. 5mg／kg を投与する Delayed Window ICG テクニック（DWIG）に開発した。
悪性神経膠腫 14 人，転移性脳腫瘍 14 人，下垂体腺腫 16 人，髄膜腫 15 人，頭蓋内神経鞘腫 11 人を行った。
使用した近赤外線装置は，顕微鏡は KINEVO microscope（KINEVO 900, Carl Zeiss Meditec AG, Jena
Germany） Iridium camera system（VisionSense, Philadelphia, Pennsylvania USA）， 内 視 鏡 は CLVS200IR（infrared light source） CH-S200-XZ-EA（3 CMOS camera head）（Olympus, Carl Zeiss Co.,
Ltd., Japan）を使用した。励起光には，805nm の近赤外線光源を用い，カメラには，820-860 nm のフィ
ルターを使用した。MRI 検査は 32 チャンネルヘッドコイル付き 3T MRI 装置（Vantage Titan 3T ; キヤノンメディカルシステムズ株式会社）を用いて実施した。造影剤静脈内投与後，脳腫瘍全体をカバーする27

悪性神経膠腫に対するインドシアニングリーンを用いた術中蛍光診断の確立

3D Fast Field Echo Quick シーケンスを用いて行った。造影剤ガドブトロール（Gadovist ; Bayer, Osaka,
Japan, 0. 05 mL／kg 体重）は，駆動式自動注入器（ソニックショット GX；ネモト，日本）により 1 mL／sの速度でボーラス静注し，その後，生理食塩水 30mL を 1 mL／s の速度でボーラス静注した。
画像解析は，Image J（NIH Image, Bethesda, MD, USA）を用いて行った。蛍光発光や造影 MRI の輝度を測定は，region of interest（ROI）を 5 箇所設定し，輝度の測定値の平均値を使用した。蛍光発光値
は相対値である，正常脳の発光値を基準として，腫瘍の発光値を Signal to Background Ratio（SBR）と定義した。また MRI もガドリニウム（Gd）造影にて，正常脳白質の値を基準として，Gd 造影の輝度値をRatio of Gadolinium-enhanced T1 Tumor Signal to Normal Brain（T1BR）と定義して，解析を行った。
また，Tofts らによって導入された薬物動態モデルを用いて，血管内から血管外への体積移動定数
Ktrans（／min），血管外から血管内への Kep（=Ktrans／Ve）（／min），血管外細胞外空間の容積 Ve（mL／
100mL of tissue）および分画血漿量 Vp（mL／100mL of tissue）を算出できる。Tofts ら拡張モデル 6） で提案された 2 コンパートメント薬物動態モデルは，血管と組織を独立したコンパートメントと見なすことを主張している。この 2 コンパートメントモデルに基づき，造影剤の組織移行速度定数（Ktrans），血管外の細胞外空間の体積比（Ve），血管内成分の体積比（Vp）をパラメータとして，目的部位と参照部位での造影剤濃度の関係から各パラメータを算出した。この DCE perfusion-MRI の 2 コンパートメント薬物
動態モデルに基づいて，perfusion analysis 法を用いて，Permeability parameter 7） を算出することにした。
統計解析は JMP 14. 1. 0（SAS Institute Inc., Cary, NC, USA）を用いて行った。一変量解析はカテゴリ
カル変数の比較にはカイ二乗またはフィッシャーの正確検定を，連続変数には unpaired t 検定またはMann-Whitney 順位和検定および単回帰分析を適用した。統計的有意性は p<0. 05 とした。
＜結果＞
転移性脳腫瘍は SWIG で正常脳実質よりも 3. 5±1. 5 倍の蛍光であった。一方，DWIG では 3. 3±2. 0 倍の蛍光であり，有意差は示せなかった。
（P=0. 13）また，悪性神経膠腫では，SWIG では 2. 7±1. 5 倍の蛍光であった一方，DWIG では 4. 0±1. 7 倍の蛍光で，有意差は示せなかった。（P=0. 84）DWIG で行った，髄膜腫 3. 3±2. 6 倍，神経鞘腫 4. 1±0. 9 倍と腫瘍蛍光発光効果を確認した。さらには，100 例の腫瘍の蛍光発
光 SBR は，3. 5±1. 8，MRI T1 強調画像のガドリニウム増強腫瘍信号比 T1BR は 2. 0±1. 0 にて比例関係にあることが示された。
（図 1 ）（P=0. 0009）つまり MRI のガドリニウムの造影強度により ICG の蛍光発光が予想可能であることが示された。具体的として悪性神経膠腫の症例を示す。（図 2 ）術前の造影 MRI で右前頭葉に ring-enhanced を示す腫瘍を認めた。後端は一次運動野に接していた。（図 A）水平断，B）矢状断，C）冠状断）。硬膜を翻転すると，腫瘍は脳表に露出されておらず，正常の脳表が確認できた。（図D）画像上，腫瘍は，脳表より 5mm 以深にあるため，5ALA にてうっすらと脳内の腫瘍を確認でき（図 E），
ICG にはしっかり蛍光を確認できた。
（図 F）ICG の 820nm の波長は，水やヘモグロビンの波長とずれており，干渉されにくいため，正常脳や脊髄を透過するという特徴がある。腫瘍を摘出中に，明視野では，（図 G），5ALA と，
（図 H 白矢印）ICG でも（図 I 白矢印）蛍光発光をしっかり確認できた。腫瘍摘出後に，肉眼的には全摘出をできたように見えたが，（図 J）蛍光で確認すると 5ALA ではわずかに発光が見られた。
（図 K）腫瘍は脳室周囲まで浸潤しており，摘出により側脳室が開放されている。脳室周囲壁も5ALA で蛍光発光するために，脳室壁からの発光か，残存腫瘍の発光か分別がつかない。ICG での蛍光発光を確認しわずかに残存が見られた。
（図 L）しかし，神経刺激で，運動線維の反応が出たために，これ以上の摘出は，麻痺の悪化を来すために，ここで摘出を終了した。術後 MRI にて後端部に一部造影領域を認め，腫瘍の残存を確認した。（図 M）水平断（白矢印），N）矢状断（白矢印），O）冠状断）28

が ん 治 療 の あ ゆ み

図1

SBR（正常脳に対する腫瘍の ICG の蛍光比）と T1BR（正常脳に対する腫瘍の MRI ガドリニウムの比）

図2

具体的症例：悪性神経膠腫

29

悪性神経膠腫に対するインドシアニングリーンを用いた術中蛍光診断の確立

考按Dynamic Contrast Enhanced Perfusion MRI 解析によって，いくつかのパラメーターを解析したところ，permeability を 示 す Ktrans と の 相 関 関 係 が，SBR と Ktrans（P=0. 03）（図 3 ），T1BR と Ktrans（P=0. 012）
（図 4 ）で示された。つまり，ICG が貯留する機構として，脳血管門の透過性（Permeability）
は，MRI の Gd 増強，ICG の保持，近赤外線による腫瘍蛍光に寄与する可能性を示した。

図3

図4

SBR（正常脳に対する腫瘍の ICG の蛍光比）と Ktrans （Permeability）の相関図

T1BR（正常脳に対する腫瘍の MRI ガドリニウムの比）と Ktrans（Permeability）の相関図

お わ り に
本研究によって，悪性神経膠腫を含む，悪性腫瘍のみならず良性腫瘍も含む，様々な脳腫瘍において，
インドシアニングリーンを用いた術中蛍光造影が有用であることを示した。MRI のガドリニウム 造影剤が貯留する脳腫瘍に有用であった。そのメカニズムとして，血管からの造影剤の漏れ出し，permeabilityが関与している可能性があることを Dynamic Contrast Enhanced Perfusion MRI の解析によって明らかにすることができた。この技術は特殊な装置も特殊な薬も不要である。この技術が汎用化され手術における腫瘍の摘出率が改善向上し，脳腫瘍患者さん達の生命予後と機能予後改善に寄与することを心から願っている。
30

が ん 治 療 の あ ゆ み

謝

辞本研究にご支援を賜りました公益財団法人がん集学的治療研究財団には，心より感謝申し上げます。また，本研究の遂行にあたり，多大なるご指導，ご支援をいただきました独立行政法人国立病院機構 東京
医療センター脳神経外科

峯裕先生，藤田医科大学 脳神経外科

安達一英先生，大場茂生先生，井上辰

志先生，上甲眞宏先生，西山悠也先生，藤田医科大学 岡崎医療センター脳神経外科
射線診断科

村山和宏先生，病理診断科

早川基治先生，放山田勢至先生，NP 齋藤史明様に心より感謝申し上げます。
文献1 ）Benson RC, Kues HA, et al. Fluorescence properties of indocyanine green as related toangiography. Phys Med Biol 23 : 159-63, 1978.
2 ）Haglund MM, Hochman DW, Spence AM, Berger MS, et al. Enhanced optical imaging of rat
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3 ）Lee JYK, Thawani JP, Pierce J, Zeh R, Martinez-Lage M, Chanin M, Venegas O, Nims S, Learned
K, Keating J, Singhal S, et al. Intraoperative Near-Infrared Optical Imaging Can Localize
Gadolinium-Enhancing Gliomas During Surgery. Neurosurgery 79 : 856-71, 2016.
4 ）Madajewski B, Judy BF, Mouchli A, Kapoor V, Holt D, Wang MD, Nie S, Singhal S, et al.
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disease. Clin Cancer Res 18 : 5741-51, 2012.
5 ）Maeda H, Wu J, Sawa T, Matsumura Y, Hori K, et al. Tumor vascular permeability and the EPR
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6.

Tofts PS, Brix G, Buckley DL, Evelhoch JL, Henderson E, Knopp MV, Larsson HB, Lee TY, Mayr
NA, Parker GJ, Port RE, Taylor J, Weisskoff RM, et al. Estimating kinetic parameters fromdynamic contrast-enhanced T（1）-weighted MRI of a diffusable tracer : standardized quantities
and symbols. J Magn Reson Imaging 10 : 223-32, 1999.

7 ）Tofts PS, Kermode AG, et al. Measurement of the blood-brain barrier permeability and leakage
space using dynamic MR imaging. 1. Fundamental concepts. Magn Reson Med 17 : 357-67, 1991.

31

大腸癌に対する，青色 LED 光を用いた新たな光治療法の開発

大腸癌に対する，青色 LED 光を用いた
新たな光治療法の開発
良元

要旨俊昭 ＊，西正暁 ＊，島田光生 ＊近年，青色発光ダイオード（light emitting diode: LED）光による種々の腫瘍細胞に対する抑制効果が示され，可視光によるがん治療の可能性が示唆されている。我々もこれまでに青色 LED 光が大腸癌細胞に発現している青色光受容体オ
プシン 3（opsin3: Opn3）を介してオートファジーを誘導し，増殖を抑制することを報告した。しかし腫瘍関連マクロファー
ジ（tumor-associated macrophage: TAM）を含む腫瘍微小環境に対する青色光照射の影響は不明である。今回 HCT-116
細胞の conditioned medium（CM）を用いて TAM を作成し，青色 LED 光照射が TAM に及ぼす影響を調べた。結果として
M2 マクロファージマーカーの CD163 および CD206 発現レベルは LED 光照射により有意に低下した。TAM-CM は HCT116 細胞の遊走能を促進したが，LED 光照射 TAM の CM ではその効果が打ち消された。また LED 光照射 TAM で血管内皮細胞増殖因子（vascular endothelial growth factor: VEGF）の分泌やプログラム細胞死リガンド 1（programmed deathligand 1: PD-L1）発現が抑制された。In vivo モデルでも CD163 の発現は LED 光照射群で低下した。これらの結果から，
青色 LED 光は TAM に対する抑制効果を示した。

は じ め にLED を用いて特定の波長の光を細胞や生体に照射することで，様々な効果が得られることが報告されてきている。光線と光増感剤を組み合わせた光線力学的療法（photodynamic therapy : PDT）は，化学
放射線療法に代わる新たな低侵襲療法として注目され，食道癌，肺癌，脳腫瘍，その他の癌の治療に臨床応用されている。いくつかの in vitro および in vivo の報告では，大腸癌に対する PDT の有効性も示されている 1） 2）。一方で最近の研究では，青色光を単独で使用することが，ある種のがん細胞の増殖抑制に有効であることが示されている。青色光の光毒性および増殖抑制作用の具体的なメカニズムとしては，オートファジーの誘導 3），ネクロトーシス 4），アポトーシス 5），細胞周期の停止 6） などが報告されている。また，
青色光照射は，大腸がん細胞における活性酸素種の産生や DNA 損傷を引き起こす 7）。我々のこれまでの報告では，465nm の青色 LED 光照射（30mW／cm2，30 分）が，オートファジー誘導を介して大腸癌細胞の増殖を抑制することを示し，大腸癌細胞に発現する青色光受容体 Opn3 が，青色 LED 光の細胞毒性作用を促進することを明らかにした 8）。
オプシンファミリーのタンパク質は，網膜の視細胞などに発現する G タンパク質共役型受容体（Gprotein-coupled receptor : GPCR）で構成されている。Opn3 は波長 460～470nm の青色光の受容体として働き，G タンパク質の Gi／o サブタイプを活性化し，アデニル酸シクラーゼを阻害し，環状アデノシン一リン酸（cAMP）を減少させるという GPCR シグナル伝達を制御している 9） 10）。最近の研究では，Opn3
は呼吸器上皮，肝臓，腎臓，心臓など，視覚とは関係のない器官にも広く発現していることが示されており，非視覚型オプシンとも呼ばれている 11） 12）。また Opn3 が悪性黒色腫において光受容体として働き，光線療法に寄与していることが示され 13），我々の知見は Opn3 が大腸癌細胞の光受容体として光線療法の標的となりうることを示している 8）。
＊徳島大学

消化器・移植外科

32

が ん 治 療 の あ ゆ み

がん治療において，線維芽細胞，免疫細胞，腫瘍細胞など様々な細胞から構成される腫瘍微小環境（tumor microenvironment : TME）の制御が極めて重要であることが明らかとなってきた。われわれは最近，がん関連線維芽細胞（cancer-associated fibroblast : CAF）に青色 LED 光を照射すると，CAF 活性と CAF からのインターロイキン（IL）-6 の分泌が低下し，大腸癌細胞の腫瘍悪性度を低下させることを報告した 14）。しかしながら，TAM に対する青色光の影響は不明である。
本研究では，PD-L1 などを介して腫瘍増殖や転移に関与する，M2 マクロファージを中心とした TAMに着目した。青色 LED 光照射が TAM に与える影響を検討し，TME への影響を検討した。
方

法

細胞培養
ヒト大腸癌細胞株 HCT-116 及びマウス大腸癌細胞株 CT-26 を用いた。これらの細胞株はマイコプラズ
マ陰性であることが確認され，適切な細胞培養のための国際的ガイドラインに従って培養した。細胞は，10％ウシ胎児血清（fetal bovine serum : FBS），100U／mL ペニシリン，100μg／mL ストレプトマイシンを添加した RPMI1640 培地で，5％ CO2，37℃の加湿インキュベーターで培養した。
LED 照射装置
光源には波長 465nm の青色 LED（NCSB119，日亜化学工業株式会社）を用いた。照射実験には LED 光照射装置（徳島大学工学部電気電子工学科作成）を用いた。
CM と TAM の調製
癌細胞の CM を得るために，HCT-116 細胞を 100mm デッシュで 80％コンフルエントになるまで培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（phosphate-buffered saline : PBS）で 2 回洗浄し，FBS を含まない
新しい培地で培養した。37℃で 48 時間培養後，上清を回収し，800xg，22℃で 5 分間遠心分離し，0. 2 μmの滅菌フィルターで濾過した。
TAM を誘導するために，M0 マクロファージを HCT-116 細胞由来の CM で処理した。CM を培養液に1：1 の割合で添加し，細胞を 37℃で 48 時間培養した。
TAM を青色 LED 光（465nm，30mW／cm2，30 分）で処理した照射群と，照射しなかったコントロール群を作成し，培地を一度交換し上清（TAM-CM）を回収した。これらのプロセスの概略図を図 1 に示す。

図1

腫瘍関連マクロファージ（TAM），コンディションドメディウム（CM）および光照射プロトコール

直腸癌同所性モデル
4 週齢の雌性 BALB／c マウスを用い，少なくとも 7 日前から水と標準的な実験用飼料が与えられた。手術の前後，マウスは水と餌を自由に摂取できた。CT-26 細胞を PBS 中 1mM エチレンジアミン四酢酸で採33

大腸癌に対する，青色 LED 光を用いた新たな光治療法の開発

取し，PBS で 3 回洗浄した後，マトリゲル（Becton Dickinson Labware, Bedford, MA, USA）500mg／
mL を含む PBS に 1 × 107／mL の密度で再懸濁した。マウス（n=8）はイソフルランで麻酔された（導入には 3％～4％，維持には 1％～2％）。直腸腫瘍の進行による腸閉塞を防ぐため，直腸前壁を 7mm 切開した。CT-26 細胞（1 × 106）を 29 ゲージの注射針を用いて直腸後壁の粘膜下層に注入した。
細胞移植 7 日後に，担癌状態となったマウスを 2 群（各群 n=4）に無作為に割り付け，以下の治療を行った：（i）LED 光照射群（465nm，30mW／cm2，30 分，1 回），（ii）対照群（無処置）。マウスは，大腸癌細胞移植後 2 週目に頸髄脱臼により犠死させた。人道的エンドポイントは，腫瘍の大きさがマウスの体重の10％以上増加した段階としたが，これはどのマウスにも当てはまらなかった。本研究における実験および手順は，徳島大学動物福祉利用委員会の承認を得た（承認番号 T2021-42）。すべての動物実験は，U.K.
Animals（Scientific Procedures）Act 1986 および関連ガイドライン，動物実験に関する EU 指令 2010／63／EU，および実験動物の飼育と使用に関する米国国立衛生研究所ガイド（National Institutes of Health
Guide for the Care and Use of Laboratory Animals（NIH Publications No. 8023, revised 1978））に従って行われた。
遊走およびスクラッチアッセイ
遊走アッセイには，孔径 8 μm のトランスウェルインサート（Corning, Corning, NY, USA）を用いた。
HCT-116 細胞（2x104）を上部チャンバーに播種した。細胞接着後，培地を捨て，1％ FBS を含む新鮮な培地を上部チャンバーに加えた。下部チャンバーには 10％ FBS を含む CM を加えた。24 時間培養後，トランスウェルインサートの底の細胞を 4％パラホルムアルデヒドで固定し，0. 2％クリスタルバイオレッ
トで染色した。ランダムに 3 顕微鏡野（100x）で染色した細胞をカウントした。
スクラッチアッセイのために，HCT-116 細胞を 6 ウェルプレートに 2x104／ ウェルの密度で播種した。
細胞が 100％コンフルエントになった後，プラスチックのピペットチップでウェルの中央を擦過し 1mm
幅の創傷ギャップを作成した。培地を捨て，1％ FBS を含む DMEM を加え，続いて CM を 1 : 1 の割合で加えた。最終的な FBS 濃度は 0. 5% であった。その後，細胞を 37℃で 24 時間培養し，0 時間後と 24 時間
後に位相差顕微鏡（倍率 40 倍）を用いて創傷ギャップの画像を撮影した。
結果

1 ．M0 マクロファージと TAM における Opn3 発現
HCT-116 結腸癌細胞の CM で M0 マクロファージを培養し，M0 マクロファージと TAM との Opn3mRNA 発現量を調べた。M0 マクロファージにおいても Opn3mRNA の発現を認めたが，TAM はさらに高い Opn3 発現レベルを示した（P<0. 05；図 2 ）。

図2

M0 マクロファージと TAM における Opn3 発現

34

が ん 治 療 の あ ゆ み

2 ．青色 LED 照射によるマクロファージの極性変化への影響
M2 マクロファージマーカーである CD163 および CD206 の mRNA 発現レベルは，M0 マクロファージと比較して，TAM で有意に上昇した（P<0. 05；図 3 ）。一方，青色 LED 光を照射した TAM では，CD163と CD206 の mRNA 発現量が低下したことから，青色 LED 光は M2 マクロファージへの極性変化を抑制することが示唆された（P<0. 05；図 3 ）。

図3青色 LED 光照射によるマクロファージの極性変化への影響

3 ．TAM-CM で培養した HCT-116 細胞の遊走およびスクラッチアッセイ
HCT-116 細胞を TAM-CM で培養し，遊走（図 4 A）およびスクラッチアッセイ（図 4 B）を行った。

図4

TAM-CM で培養した HCT-116 細胞の遊走およびスクラッチアッセイ35

大腸癌に対する，青色 LED 光を用いた新たな光治療法の開発

TAM-CM での培養は HCT-116 細胞の遊走を有意に促進した（P<0. 05）。しかし，青色光を照射した
TAM 由来の TAM-CM は HCT-116 細胞の遊走を促進しなかった（P<0. 05）。
4 ．青色 LED 照射が TAM からの VEGF 分泌に与える影響
図 5 に示すように，VEGF の分泌濃度は M0 マクロファージと比較して TAM で有意に上昇していた（P<0. 05）
。しかし，LED 光を照射した TAM では，VEGF の分泌は有意に抑制された（P<0. 05）。

図5

青色 LED 光照射が TAM の VEGF 分泌に与える影響

5 ．TAM-CM で培養した HCT-116 細胞における PD-L1 発現
TAM-CM で培養した HCT-116 細胞では，コントロールの HCT-116 細胞と比較して PD-L1 の mRNA
発現レベルが上昇した（P<0. 05；図 6 ）。しかし，青色 LED 光を照射した TAM の CM で培養した HCT116 細胞では，LED 照射なしの TAM-CM で培養した HCT-116 細胞と比較して PD-L1 mRNA 発現上昇の程度は有意に抑制された（P<0. 05；図 6 ）。

図6

TAM-CM で培養した HCT-116 細胞における PD-L1 発現

6 ．in vivo モデルにおける青色 LED 照射の効果
マウスモデルにおける大腸癌の腫瘍増殖は，青色 LED 光照射によって有意に抑制されることが腫瘍サ
イズの縮小によって示された（P<0. 05；図 7 A）
。免疫組織化学染色を行ったところ，青色 LED 光照射を受けた腫瘍では，PD-L1 の発現レベルが抑制された（図 7 B）。さらに，青色 LED 光を照射した腫瘍では，
F4／80 および CD163 陽性細胞がコントロール群に比べて減少していた（図 8 ）。無作為 5 視野の CD163 陽性細胞領域を比較したところ，対照群と比較して照射群で有意な減少が観察された（P<0. 05）。
36

が ん 治 療 の あ ゆ み

図7

図8

in vivo モデルにおける青色 LED 光照射の効果

LED 光照射による F4／80 および CD163 陽性細胞の変化

考察

最近の研究で，線維芽細胞や免疫細胞を含む TME が，がん治療において極めて重要であることが示されている。我々は以前，青色 LED 光が腫瘍細胞だけでなく CAF にも抑制的に作用し，腫瘍の悪性度を低下させることを報告した 14）。本研究では，青色 LED 光が TAM に及ぼす影響とさらに TME に及ぼす影響について検討した。
その結果，青色 LED 光照射は M2 マクロファージマーカーCD163 と CD206 の発現を低下させ，マクロ
ファージの M2 表現型への分極を抑制しうることが示された。さらに遊走アッセイにより，HCT-116 細胞の遊走は，非 LED 光照射 TAM 由来の CM の存在下では促進されたが，LED 光照射 TAM 由来の CM の存在下では有意に減少した。
37

大腸癌に対する，青色 LED 光を用いた新たな光治療法の開発

我々は以前，TAM による VEGF 分泌が肝細胞癌の腫瘍悪性度上昇に重要な役割を果たしていることを報告した 16）。本研究では，LED 光を照射していない TAM では VEGF の分泌が観察されたが，LED 光を照射した TAM では有意に抑制された。さらに，TAM-CM で培養した HCT-116 細胞は PD-L1 の発現レ
ベルの上昇を示したが，LED 光を照射した TAM-CM で培養した細胞は PD-L1 の発現誘導が抑制されていた。そのメカニズムとして，シグナル伝達兼転写活性化因子 3（signal transducer and activator oftranscription 3 : STAT3）は，M2 マクロファージマーカーCD163 と CD206 の発現を制御することが報告されている 17）。さらに STAT3 は，腫瘍細胞における VEGF を介した腫瘍の悪性度上昇と PD-L1 発現に関与している 18）。したがって，STAT3 は，青色光が TAM と腫瘍細胞の両方に影響を与えるメカニズムにおいて重要な役割を果たしている可能性がある。
青色光を用いた治療の利点として，PDT や化学放射線療法と異なり光増感剤や抗体，抗癌剤の投与を必要とせず，放射線被爆もないことが挙げられる。また，がん治療において TME の制御が非常に重要であるが，最近 TAM をターゲットとした PDT についても報告されている 19）。我々は，腫瘍のみならず
CAF に対する青色 LED 光の効果も報告しており，TME を標的とした青色光による光線療法の可能性を示唆している。さらに，Opn3 は TAM にも発現しており，青色 LED 光が光受容体を介して TAM を抑制する可能性が示唆された。
腫瘍および TME に対する青色 LED 光照射の作用機序を完全に解明するには，今後マクロファージにおける Opn3 ノックダウンや Opn3 ノックアウトマウスを用いた研究が必要であるが，本研究により青色
LED 光照射が TAM の分極化や VEGF 分泌を抑制し，さらに腫瘍悪性度を低下させることが示された（図 9 ）。

図9

青色 LED 光照射による TAM 制御のメカニズム

お わ り に
本研究によって，増え続ける大腸癌に対する新たな低侵襲治療として，青色 LED 光による腫瘍及び腫瘍微小環境制御の可能性が示された。今後も研究を進め，光治療の臨床応用を目指したい。
本研究においてご指導いただきました島田教授をはじめ，教室の皆様に心より感謝申し上げます。
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39

研究経過報告書執筆要項⑴

研究記録集出版のため，下記の基準で論文（日本文）を作成して下さい。
要

旨

400字

×

1枚

本

文

400字

×

10枚

写真・図表

10枚以内（写真はモノクロ，図表は Microsoft

引用文献

10位

PowerPoint，Excel）⑵ 標準形式（Microsoft Word，CSV，テキスト）または PDF 形式（文字の取り出しが可能な形式）で保存し，電子メール（soumu@jfmc.or.jp）に添付，または，メモリーカード等の外部メディアに記録してご提出ください。
⑶

薬品の商品名（欧文）は大文字，学名，一般名は小文字で記載下さい。

⑷ 数字は算用数字を用い，度量衡単位は CGS 単位で m，cm，mm，cm2，ml，l，dl，kg，g，mg など
として下さい。
⑸ 写真は手札型以上の大きさで鮮明であること，文字や矢印を記号する場合はトレーシングペーパーをかけた上に明記して下さい。
⑹

原稿は原則として返却いたしません。写真，図などで返却を要するものにはその旨明記して下さい。

⑺

文献は本文中に引用されたもののみをあげて下さい。本文中の引用個所には肩番号を付して下さい。

⑻

文献の書き方は次のように統一して下さい。
引用文献，著者名は 3 人まで記し，それ以上は「他」「et al」として下さい。
外国文献の記載形式は Index Medicus 所載に準じて下さい。
雑誌の場合→引用番号）著者名：論文題名，雑誌名，巻数，頁数（西暦年号）
単行本の場合→引用番号）著者名：論文題名，書名（編者名），版，頁，発行所名，発行地，（西暦年号）
例１ ）田口鐵男，古江尚，塚越茂，他：胃癌の化学療法．癌と化学療法 7（12）: 109-14, 1980.

２ ）幕
 内雅敏，長谷川博，山崎晋：肝細胞癌の早期診断法．ウィルス肝炎から肝細胞癌へ（服部信編），第 2 版，309-28，癌と化学療法社，東京，1982．

３ ）U mezawa H, Aoyagi T, Suda H, et al : Bestatin, an inhibitor of aminopepitidase B,
produced by Actinomycetes. J. Antibiotics 29 : 97-9, 1976.
イタリック

⑼

文頭は，はじめにではじまり，おわりにで結ぶ。

⑽ 論文は要旨－はじめに－（対象－方法－成績）－考按－おわりに－文献－表－図の説明－図の順に原稿を構成して下さい。図および表には文中に出る順番に番号を付して下さい。
⑾

項目は次のような記号を用います。
Ⅰ．

⑿…… 1 ．

…… 1 ）…… a

原稿には表紙を付し，表題，著者名，所属，機関名，原稿枚数，図表点数を明記して下さい。

一般研究助成者一覧（発刊年度）
１９８１

浅野長一郎（九州大学理学部）

東市郎（北海道大学免疫科学研究所）（ １ 巻）天木一太（日本大学医学部）

太田和雄（愛知県がんセンター）

加藤哲郎（秋田大学医学部）

須賀昭二（国立名古屋病院）

関口

守正（東京大学医科学研究所）

高見沢裕吉（千葉大学医学部）

寺尾榮夫（東京都立駒込病院）

西満正（鹿児島大学医学部）

野本亀久雄（九州大学医学部）

棟久

龍夫（長崎大学医学部）

母里知之（東海大学医学部）

森

武貞（大阪大学医学部）

吉田修（京都大学医学部）

涌井

浅野長一郎（九州大学理学部）

井村裕夫（京都大学医学部）（ ２ 巻）海老名卓三郎（東北大学医学部）

古賀成昌（鳥取大学医学部）

志田圭三（群馬大学医学部）

中西

昌美（北海道大学医学部）
恒男（九州大学生体防御医学研究所）

１９８２

小山
友田

博記（大阪府立成人病センター）
豊（名古屋大学医学部）

昭（東北大学抗酸菌病研究所）

新島

端夫（東京大学医学部）

馬場

藤本

孟男（愛知医科大学）

細川真澄男（北海道大学医学部）

松澤

大樹（東北大学抗酸菌病研究所）

松田忠義（東京都立駒込病院）

三好

勇夫（高知医科大学）

池田恵一（九州大学医学部）

石引久弥（慶應義塾大学医学部）（ ３ 巻）木村郁郎（岡山大学医学部）

桑野信彦（大分医科大学）

菅原克彦（山梨医科大学）

高久史麿（東京大学医学部）

橘

武彦（東北大学抗酸菌病研究所）

螺良英郎（徳島大学医学部）

西平

哲郎（東北大学医学部）

野村雍夫（国立病院九州がんセンター）藤原

大美（大阪大学医学部）

前田浩（熊本大学医学部）

三橋

重信（久留米大学医学部）

谷内昭（札幌医科大学）

１９８３

山本三毅夫（九州大学生体防御医学研究所）
１９８４

大西

克尚（九州大学医学部）

小野寺時夫（東京都立駒込病院）（ ４ 巻）折田薫三（岡山大学医学部）

藏本

小磯謙吉（筑波大学臨床医学系）

杉町圭蔵（九州大学医学部）

関根暉彬（国立がんセンター研究所）

高月清（熊本大学医学部）

鶴尾隆（癌研・癌化学療法センター）

福西亮（愛媛大学医学部）

塚田
原

１９８５

裕（北海道大学医学部）
泰寛（国立病院九州がんセンター）

前山

巌（鳥取大学医学部）

山田

一正（名古屋大学医学部）

犬山（ ５ 巻）小玉淳（広島大学原爆放射能医学研究所）

水落

次男（東京大学医科学研究所）

征夫（慶應義塾大学医学部）

北村

幸彦（大阪大学医学部附属癌研究施設）

正智（滋賀医科大学）

小林

利次（産業医科大学）

１９８５

佐々木琢磨（国立がんセンター）（ ５ 巻）田中正夫（国立名古屋病院血液病センター）

仙道富士郎（山形大学医学部）
鳥巣

要道（九州大学医学部）

中村徹（福井医科大学）

新本

原耕平（長崎大学医学部）

原田

実根（金沢大学医学部）

藤田昌英（大阪大学微生物病研究所）

穂積

本男（埼玉県立がんセンター研究所）

松谷雅生（東京都立駒込病院）

御厨

修一（国立病院医療センター）

吉田孝人（浜松医科大学）

内野治人（京都大学医学部）

大野

竜三（名古屋大学医学部）（ ６ 巻）岡部哲郎（東京大学医学部）

片野建之（癌研・癌化学療法センター）

恭一（東京大学医科学研究所）

木村元喜（九州大学生体防御医学研究所）

久保田哲朗（慶應義塾大学医学部）

熊本

悦明（札幌医科大学）

坂井保信（東京都立駒込病院）

珠玖

曽根三郎（徳島大学医学部）

田中信男（東京大学応用微生物研究所）

田中

敬正（関西医科大学）

西田輝夫（近畿大学医学部）

橋本

省三（慶應義塾大学医学部）

羽生富士夫（東京女子医科大学消化器病センター）

浜岡

利之（大阪大学医学部附属癌研究施設）

前田

迪郎（鳥取大学医学部）

市橋

秀仁（藤田学園保健衛生大学医学部）

大森弘之（岡山大学医学部）

小黒昌夫（千葉県がんセンター）

１９８６

狩野

１９８７

（ ７ 巻）奥村

１９８８

洋（長崎大学医学部）

勝沼

信彦（徳島大学酵素科学研究センター）

加藤四郎（大阪大学微生物病研究所）

金沢

浩二（新潟大学医学部）

坂本

純一（愛知県がんセンター）佐藤周子（愛知県がんセンター）

鈴木磨郎（東北大学抗酸菌病研究所）

高本滋（東京都立駒込病院）

峠

哲哉（広島大学原爆放射能医学研究所）

中村

仁信（大阪大学微生物病研究所）

正岡

徹（大阪府立成人病センター）

松本

圭史（大阪大学医学部）

宮﨑保（北海道大学医学部）

山口豊（千葉大学医学部肺癌研究施設）

吉田奎介（新潟大学医学部）

秋山

伸一（鹿児島大学医学部附属腫瘍研究施設）

浅野茂隆（東京大学医科学研究所）

達生（京都府立医科大学）

今岡

真義（大阪府立成人病センター）上田政和（慶應義塾大学医学部）

江藤澄哉（産業医科大学）

小川恭弘（高知医科大学）

鎌田

七男（広島大学原爆放射能医学研究所）

神奈木玲児（京都大学医学部）

小山

研二（秋田大学医学部）

今斎藤

正男（東京大学医学部）

谷川允彦（福井医科大学）（ ８ 巻）阿部

笹月
徳永
１９８９

康（順天堂大学医学部）

稔（広島大学原爆放射能医学研究所）

充（弘前大学医学部）
健彦（九州大学生体防御医学研究所）
徹（国立予防衛生研究所）

冨永

健（東京都立駒込病院）

馬場

正三（浜松医科大学）

平野

阿曽佳郎（東京大学医学部）

石川哮（熊本大学医学部）

浩三（札幌医科大学）

岩永

剛（大阪府立成人病センター）（ ９ 巻）今井正美（藤田学園保健衛生大学医学部）

１９８９

上田

龍三（愛知県がんセンター研究所）

太田康幸（愛媛大学医学部）

秀親（名古屋市立大学医学部分子医学研究所）

小川道雄（大阪大学医学部）

掛川暉夫（久留米大学医学部）

加藤

知行（愛知県がんセンター）

金子明博（国立がんセンター病院）斉藤澤木修二（横浜市立大学医学部）

高上

洋一（徳島大学医学部）

中村治（東京都立駒込病院）

藤本

重義（高知医科大学）

町田喜久雄（埼玉医科大学総合医療センター）

松野正紀（東北大学医学部）

荒井保明（愛知県がんセンター）宮本幸男（群馬大学医学部）

昭三（香川医科大学）

遠藤

光夫（東京医科歯科大学医学部附属病院）

菅典道（京都大学医学部附属病院）（ ９ 巻）岡田

１９９０（１０巻）入野小倉

１９９１

剛（徳島大学医学部）

博（埼玉医科大学総合医療センター）

木谷照夫（大阪大学微生物病研究所）

池田昌弘（順天堂大学医学部）

島津

久明（鹿児島大学医学部）

田中隆一（新潟大学脳研究所）

土橋一慶（帝京大学医学部）

中島泉（名古屋大学医学部）

新津洋司郎（札幌医科大学）

西村

泰治（九州大学生体防御医学研究所）

垣生

園子（東海大学医学部）

原信之（国立病院九州がんセンター）藤本孟男（愛知医科大学）

前原喜彦（九州大学医学部）

水谷

修紀（国立小児医療研究センター）
安藤俊夫（愛知県がんセンター研究所）

秋實（信州大学医学部）

小熊信夫（広島大学原爆放射能医学研究所）

章平（高知医科大学）

加藤

木村幸三郎（東京医科大学）

河野佐治

重豊（岐阜大学医学部）

鈴木敞（山口大学医学部）

田中良明（東京都立駒込病院）

平井久丸（東京大学医学部）

真崎規江（大阪府立成人病センター）秋吉（１１巻）小川小越藤永

毅（九州大学生体防御医学研究所）

蕙（札幌医科大学附属がん研究所）

洋（癌研・癌研究所）
公俊（大分医科大学）

麦島秀雄（日本大学医学部）

山内

晶司（名古屋大学医学部）

山口

俊晴（京都府立医科大学）

由良二郎（名古屋市立大学医学部）

赤沢修吾（埼玉県立がんセンター）

秋根

康之（国立がんセンター中央病院）（１２巻）貝原信明（鳥取大学医学部）

兼松

隆之（長崎大学医学部）

河村

栄二（北里研究所病院）

菊池

潔（㈶慶應がんセンター）

木本安彦（大阪大学微生物病研究所附属病院）

葛巻暹（北海道大学医学部附属癌研究施設）

琴浦良彦（京都大学医学部）

斎藤

貴生（大分医科大学）

澤武

紀雄（金沢大学がん研究所）

設楽信行（東京都立駒込病院）

柴田昭（新潟大学医学部）

土井

１９９２

１９９３

修（大阪府立成人病センター）

奈良信雄（東京医科歯科大学医学部）

西村

孝司（東海大学医学部）

山下純宏（金沢大学医学部）

吉開

泰信（名古屋大学医学部病態制御研究施設）

阿部

力哉（福島県立医科大学）

大熨

泰亮（岡山大学医学部）

１９９３

片山

憲恃（聖マリアンナ医科大学）

北島

政樹（慶應義塾大学医学部）（１３巻）栗原稔（昭和大学附属豊洲病院）

小池克郎（癌研・癌研究所）

薗田精昭（京都府立医科大学）

高見博（帝京大学医学部）

武市

紀年（北海道大学医学部附属癌研究施設）

谷村

弘（和歌山県立医科大学）

土田嘉昭（東京大学医学部）

戸井雅和（東京都立駒込病院）

冨田

幹夫（埼玉県立がんセンター研究所）

中村恭一（東京医科歯科大学医学部）

濱田

洋文（癌研・癌化学療法センター）平岡諦（大阪府立成人病センター）平岡

真寛（京都大学医学部）

堀勝義（東北大学加齢医学研究所）

吉田松年（名古屋大学医学部病態制御研究施設）

相羽恵介（癌研・癌化学療法センター）池田恢（国立がんセンター中央病院）（１４巻）今村正之（京都大学医学部）

岡田全司（九州大学生体防御医学研究所）

折笠

精一（東北大学医学部）

菊地浩吉（札幌医科大学医学部）

小柳知彦（北海道大学医学部）

杉本徹（宮崎医科大学）

清木

元治（金沢大学がん研究所）

田中憲一（新潟大学医学部）

直江

知樹（名古屋大学医学部附属病院）

新田泰三（順天堂大学医学部）

浜口

道成（名古屋大学医学部）

松崎

靖司（筑波大学臨床医学系）

藤本

修一（千葉県がんセンター）

柳澤昭夫（癌研・癌研究所）

山崎俊樹（島根医科大学）

吉田

１９９４

１９９５

岡本

尚（名古屋市立大学医学部分子医学研究所）（１５巻）佐藤忠比古（国立郡山病院）
嶋田
田中
花井

１９９６

公夫（広島大学原爆放射能医学研究所）
彩（大阪府立成人病センター）後藤重則（帝京大学生物工学研究センター）佐藤宏（帝京大学医学部）

田崎寛（慶應義塾大学医学部）

中村剛（長崎大学医療技術短期大学部）

藤田潤（京都大学大学院医学研究科）

磨伊正義（金沢大学がん研究所）

間野森茂郎（東京大学医科学研究所）

柳川堯（九州大学大学院数理学研究科）

和氣

徳夫（九州大学生体防御医学研究所）

有井滋樹（京都大学医学研究科）

石川治（大阪府立成人病センター）

恭悟（久留米大学医学部）

大川治夫（筑波大学臨床医学系）

小澤敬也（自治医科大学血液医学研究部門）

酒井

正彦（関西電力病院）

佐藤

靖史（東北大学加齢医学研究所）

執印

太郎（高知医科大学）

杉本

芳一（癌研・癌化学療法センター）谷（１６巻）伊東

１９９７

紘（横浜市立大学医学部）

操（東京都立駒込病院）

博行（自治医科大学医学部）

憲三朗（東京大学医科学研究所）

多羅尾和郎（神奈川県立がんセンター）

松村

保広（国立がんセンター中央病院）

三角

順一（大分医科大学医学部）

宮崎澄雄（佐賀医科大学医学部）

山脇

成人（広島大学医学部）

吉村

昭彦（久留米大学生命科学研究所）

西條

長宏（国立がんセンター研究所）

神保孝一（札幌医科大学）

加大（愛知県がんセンター研究所）

田中

雅夫（九州大学医学部）（１７巻）瀬戸

１９９７

丹後俊郎（国立公衆衛生院疫学部）（１７巻）中川原
堀井
１９９８

小山

（１８巻）高後

１９９９

手島昭樹（大阪大学医学部）

章（千葉県がんセンター）

野田哲生（癌研・癌研究所）

明（東北大学大学院医学系研究科）

松山博史（国立がんセンター中央病院）
裕（旭川医科大学）

裕（東京大学大学院医学系研究科）

烏野隆博（大阪府立成人病センター）佐藤昇志（札幌医科大学医学部）
秀彰（国立病院九州がんセンター）巽典之（大阪市立大学医学部）

中島

名川弘一（東京大学医学部）

登萩原

正敏（東京医科歯科大学難治疾患研究所）

畠清彦（自治医科大学）

不破信和（愛知県がんセンター）

前谷俊三（天理よろず相談所医学研究所）

村井勝（慶應義塾大学医学部）

安元

公正（産業医科大学医学部）

大上研二（東海大学医学部）

矢守隆夫（癌研・癌化学療法センター）

井上俊彦（大阪大学大学院）

勉（三重大学医学部）（１９巻）大瀧慈（広島大学原爆放射能医学研究所）

加賀谷有行（広島大学医学部）

河上裕（慶應義塾大学医学部先端医科学研究所）

真貝

洋一（京都大学ウイルス研究所）

高山哲治（札幌医科大学）

田中

淳司（北海道大学医学部）

土田正則（新潟大学医学部）

野田政樹（東京医科歯科大学難治疾患研究所）

万代

昌紀（京都大学医学部）

向田直史（金沢大学がん研究所）

森脇久隆（岐阜大学医学部）

吉貴

達寛（滋賀医科大学）

正樹（金沢大学医学部）

奥野清隆（近畿大学医学部）

文夫（国立熊本病院）

神奈木真理（東京医科歯科大学医歯学総合研究科）

久保敦司（慶應義塾大学医学部）

小西

文雄（自治医科大学大宮医療センター）

佐藤博（金沢大学がん研究所）

田中紘一（京都大学大学院）

樋野興夫（癌研・癌研究所）

渡邊
２０００

井上

（２０巻）河野

中野
福本

２００１

武（九州大学生体防御医学研究所）

修治（九州大学大学院）
学（東北大学加齢医学研究所）

山口佳之（広島大学原爆放射能医学研究所）

吉田知之（東京医科大学）

松村明（筑波大学臨床医学系）

吉川

秀樹（大阪大学大学院）

秋山太（癌研・癌研究所）

東俊文（慶應義塾大学医学部）（２１巻）片野光男（九州大学大学院）

小林国彦（埼玉県立がんセンター）

澤津橋基広（佐賀医科大学）

高橋

宗春（東京大学医学部附属病院）

田原秀晃（東京大学医科学研究所）

玉木

長良（北海道大学大学院）

辻晃仁（高知県立中央病院）

中島格（久留米大学医学部）

野島
村垣
若杉
２００２

秋田

博（大阪大学微生物病研究所）
善浩（東京女子医科大学脳神経センター）松崎彰信（九州大学医療技術短期大学部）

山本博幸（札幌医科大学）

遠藤

善裕（滋賀医科大学）

尋（国立がんセンター研究所）
弘俊（北海道大学大学院）

２００２

鎌野

（２２巻）黄俊紀（順天堂大学医学部）

小泉和三郎（北里大学東病院）

政龍（香川医科大学）

高橋慶一（東京都立駒込病院）

戸田

正博（慶應義塾大学医学部）

高橋豊（金沢大学がん研究所）

平塚正弘（大阪府立成人病センター）

上本伸二（三重大学医学部）

小野寺雅史（筑波大学臨床医学系）（２３巻）神田善伸（東京大学医学部）

弦間河野

浩二（山梨大学医学部）

杉山

楢原啓之（大阪府立成人病センター）平井康夫（癌研・癌研究所）

堀口裕（慶應義塾大学医学部）
公治（鹿児島大学病院）

河野嘉文（鹿児島大学大学院医歯学総合研究科）

啓之（癌研・癌化学療法センター）高山浩一（九州大学病院）

田中

文啓（京都大学医学部）

中島

古谷和久（愛知県がんセンター）

星森

正樹（九州大学生体防御医学研究所）

山本熊谷昌明（国立成育医療センター）

甲能直幸（杏林大学医学部）（２５巻）國土典宏（東京大学医学部附属病院）

土屋弘行（金沢大学大学院）

並木幹夫（金沢大学医学部附属病院）

萩原弘一（埼玉医科大学）

長谷川好規（名古屋大学医学部附属病院）

羽生大記（大阪市立大学大学院）

林慎一（東北大学医学部）

日野雅之（大阪市立大学大学院）

泉本

修一（大阪大学大学院）

井上啓史（高知大学医学部）

三徳（近畿中央胸部疾患センター）

大東弘明（大阪府立成人病センター）佐治

重衡（東京都立駒込病院）

２００３

２００４

魚住

（２４巻）清宮

２００５

２００６

（２６巻）太田小林

２００７

浩（奈良県立医科大学）

淳（慶應義塾大学医学部）
宣次（山形県立中央病院）
昇（国立がんセンター中央病院）

明久（大阪府立母子保健総合医療センター）竹内聡（神戸医療センター）

福岡

和也（兵庫医科大学）

藤井正人（東京医療センター）上野

清伸（大阪府立成人病センター）

一（長崎大学医学部・歯学部附属病院）

磯本

椎名秀一朗（東京大学医学部附属病院）

篠浦

伸禎（東京都立駒込病院）

新地

洋之（鹿児島大学医学部・歯学部附属病院）

高見昭良（金沢大学医学部附属病院）

細野亜古（国立がんセンター中央病院）

掛地

吉弘（九州大学大学院）

粕谷英樹（名古屋大学医学部）

洋之（鹿児島大学大学院）

竹島

信宏（癌研・有明病院）

松村

保広（国立がんセンター東病院）

元雄

良治（金沢医科大学）

吉崎

智一（金沢大学大学院）

渡邊昌彦（北里大学医学部）

高野晋吾（筑波大学大学院）

中森

正二（大阪医療センター）（２８巻）新地

２００９

徹（岩手医科大学医学部）

澤田（２７巻）馬屋原健司（癌研・有明病院）

２００８

昭彦（日本医科大学）

出水みいる（九州大学病院）（２９巻）塚田長谷川

敬義（岐阜大学大学院）

本田潔（東京大学大学院）

服部五郎（東京都立駒込病院）

宮田

豊（慶應義塾大学薬学部）
博志（大阪大学大学院）

２０１０

東

治人（大阪医科大学）

石川雅之（奈良県立医科大学）

楯真一（千葉大学大学院）

谷眞至（和歌山県立医科大学）

津田浩史（慶應義塾大学医学部）

藤原義之（大阪大学大学院）

山口

和也（岐阜大学医学部）

江口

英利（大阪大学大学院医学系研究科）

菊地栄次（慶應義塾大学医学部）

荘一（群馬大学大学院医学系研究科）

藤谷

和正（国立病院機構大阪医療センター）

本告

正明（大阪府立成人病センター）宮田

康好（長崎大学病院）

宮田

義浩（広島大学原爆放射線医科学研究所）

元井冬彦（東北大学病院）

山下継史（北里大学医学部）

浦本

秀隆（産業医科大学）

葛西

和博（岩手医科大学医学部）

佐藤康史（札幌医科大学）（３０巻）庄２０１１（３１巻）堤

２０１２（３２巻）小西毅（がん研究会有明病院）

剛（京都府立医科大学）

澤木正孝（愛知県がんセンター中央病院）

高橋秀典（大阪府立成人病センター）

谷岡

真樹（兵庫県立がんセンター）

本間尚子（東京都健康長寿医療センター研究所）

松木絵里（慶應義塾大学病院）

村上英樹（金沢大学整形外科）

井上啓史（高知大学教育研究部）

沖

英次（九州大学病院）（３３巻）河合憲康（名古屋市立大学大学院医学研究科）

北郷

黒川

幸典（大阪大学大学院医学系研究科）

笹田哲朗（久留米大学医学部）

島崎猛夫（金沢医科大学総合医学研究所）

種村匡弘（呉医療センター・中国がんセンター）

野尻

俊輔（名古屋市立大学病院）

丸橋

２０１３

２０１４

木下

（３４巻）小西高橋

２０１５

学（大阪府立成人病センター）

小坂威雄（慶應義塾大学医学部）

毅（がん研究会有明病院）

末原義之（順天堂大学医学部）

信（東北大学加齢医学研究所）

谷内

恵介（高知大学医学部附属病院）
博久（大阪市立大学大学院医学研究科）

直人（横浜市立大学大学院医学研究科）

中前

南谷

泰仁（東京大学医学部附属病院）

長谷川大一郎（兵庫県立こども病院）

石山博條（北里大学医学部）

板野理（慶應義塾大学医学部）

壯平（関西医科大学）

白石治（近畿大学医学部）

高張

大亮（がん研究会有明病院）

内藤

立暁（静岡県立静岡がんセンター）

西田

純幸（大阪大学医学部附属病院）

林

洋光（熊本大学大学院生命科学研究部）

水島

恒和（大阪大学大学院医学系研究科）
小沼貴晶（東京大学医科学研究所附属病院）

伊佐山浩通（東京大学大学院医学系研究科）（３６巻）佐伯２０１７

繁（大阪府立成人病センター）富田（３５巻）里井２０１６実（慶應義塾大学医学部）

浩司（九州大学大学院）

杉村啓二郎（大阪府立成人病センター）

瀧口修司（大阪大学医学系研究科）

藤阪

保仁（大阪医科大学附属病院）

前田亮（藤田保健衛生大学）

若槻尊（がん研究会有明病院）

秋田

裕史（大阪国際がんセンター）泉

浩二（金沢大学大学院医薬保健学総合研究科）

光郎（名古屋大学医学部附属病院）

野見武男（奈良県立医科大学）（３７巻）神田馬場

祥史（熊本大学大学院生命科学研究部）

２０１８

池上

谷口

浩二（慶応義塾大学医学部）

達夫（東北大学大学院医学系研究科）

増田隆明（九州大学病院別府病院）

佐藤和秀（名古屋大学高等研究院・名古屋大学大学院医学系研究科）

圭史（九州がんセンター）高野重紹（千葉大学大学院医学研究院）

田辺真彦（東京大学医学部附属病院）

宮本裕士（熊本大学病院）

岩槻政晃（熊本大学大学院）

庄司

文裕（九州医療センター）

信吉（九州がんセンター）

廣野

誠子（和歌山県立医科大学）

畠
北郷（39巻）杉町
2020（40巻）髙森
2021

実（慶應義塾大学医学部）

森根裕二（徳島大学大学院医歯薬学研究部）

今井克憲（熊本大学大学院）〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔医療機器部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔がん薬物療法部門〕〔医療機器部門〕（41巻）冨樫庸介（岡山大学学術研究院医歯薬学域）

吉見昭秀（国立がん研究センター 研究所）

熊谷尚悟（国立がん研究センター 先端医療開発センター）2022

後藤太一郎（山梨県立中央病院）

健祐（横浜市立大学大学院医学研究科）（３８巻）立石2019

徹（九州大学病院）（42巻）林山本

洋光（熊本大学病院）
美穂（東海大学医学部）

北沢

将人（信州大学医学部附属病院）

間野洋平（九州がんセンター）

豊川

剛二（福岡病院）

髙見浩数（東京大学医学部附属病院）

春木孝一郎（東京慈恵会医科大学）
橋本浩平（がん研究会有明病院）

がん治療のあゆみ
2024年 ３ 月３１日

第43巻
非

発行

売

品

発行人 公益財団法人

がん集学的治療研究財団
山 岸 久 一
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