非臨床 News

第6号

再生医療関連特集号

はじめに 安全性研究部統括部長 和泉 宏幸 ……………………………… 2
薬理研究部長 片山 誠一 ………………………………………… 2
再生医療関連研究紹介◆ 再生医療研究のためのマウスの脊髄損傷モデル ……………………… 3◆ ヌードマウスを用いた肝炎モデルの再生医療研究への有用性 ……… 4◆ In vivo 造腫瘍性試験 …………………………………………………… 5◆ 軟寒天コロニー形成試験 − In vitro 造腫瘍性試験− ………………… 6◆ 免疫組織化学染色によるヒト間葉系幹細胞の検出 …………………… 7
最新研究紹介◆ ミニブタを用いた TEWL 及び紅斑値による皮膚状態の評価 ………… 8◆ ミニブタの皮膚の病理組織学的検討 …………………………………… 9◆ In vitro 皮膚透過性試験………………………………………………… 10
学会発表実績／投稿実績（2014 年 8 月〜 2015 年 8 月）

11

トピックス
1. ナレッジサービス ………………………………………………………… 11
2. 再生医療のためのサル心筋梗塞モデル………………………………… 12
3. 再生医療等製品 GLP 適合性追加調査 ………………………………… 12

はじめに
近年、再生医療分野の発展により再生医療等製品が多数開発され、その品質、有効性及び安全 性の評価が必要とされています。特に、安全 性試験については2014 年に再生医療等製品 GLP が施行され、その確立は急務です。再生医療等製品には、ES/iPS 細胞加工製品、体細胞 / 体性幹細胞加工製品、遺伝子導入ウイル
ス製品等があり、これらの安全性評価には、従来からの単回投与毒性試験及び反復投与毒性試験のほか、生着する微小環境において腫瘍を形成することが無いかを確認する in vivo での造腫瘍性試験、悪性形質転換細胞を検出するための in vitro
での造腫瘍性試験等が必要とされています。
当社では、数年前から熊本研究所薬理研究部にて再生医療等製品の有効性評価を実施しており、昨年からは新たに、同研究所の安全性研究部にて安全性評価試
安全性研究部統括部長

和泉宏幸

験の確立に取り組んできました。そしてこのほど、安全性評価試験を GLP 下で実施できる施設、設備及び試験法を構築し、再生医療等製品の有効性評価から安全性評価まで一貫して提供できるサービス体制を整えました。
再生医療等製品の評価については、今後も変遷していくことが予測されます。当社では、お客様のご要望に応えられるよう、最新の情報を速やかに収集し、最適な評価法を提案できるよう日々努力してまいります。今後とも何卒よろしくお願い申し上げます。

薬理研究部では、近年、再生医療等製品の有効性評価に対するお問い合わせが増加しており、これまで薬効薬理試験で用いてきた多様な病態モデルを応用した受託サービスを提供しております。病態モデルについては新旧を問わず、中枢、疼痛、
抗腫瘍、炎症、泌尿器系、呼吸器系、糖脂質代謝、アレルギー、消化器系、循環器系、血液系、感染症及び in vitro 薬効試験等、幅広い分野の試験を受託しており、特に炎症・線維化・自己免疫疾患に関係した有効性評価の需要が高まってきております。当社は、手術を要する薬効試験を得意としており、コンベンショナル動物、遺伝
子改変動物及びミュータント動物を用いた試験の経験が豊富です。これまで、骨髄・脂肪由来幹細胞又は iPS 細胞由来心筋細胞等を用い、肝炎、脳梗塞、心筋梗塞、
下肢虚血、関節炎又は泌尿器系等に関連した受託・検討実績があり、お客様とご相薬理研究部長片山誠一

談の上、取り組んでいる他の試験種もあります。更に当社では、これまで抗腫瘍試
験を中心とした免疫不全動物の取り扱い実績が豊富であることから、新たに「免疫不全動物を用いた再生医療等製品の有効性評価系の検討（心筋梗塞、肝炎、脳梗塞、等）」も進めております。従来の方法では治療が困難であった疾患に対して、再生医療等製品の開発という新たな取り組みをされるお客様の多様なニーズに今後ともお応

表紙写真紹介

熊本研究所
再生医療研究に携わる薬理研究部メンバー
非臨床 News 2

えしていきたいと考えております。

抗ヒトラミン抗体及び抗ヒトミトコンドリア抗体による二重染色（ラット肺組織、矢印：陽性細胞）

シリウスレッド染色を施した
サル心筋梗塞モデルの心臓。
赤色部分が線維化領域

In vitro 皮膚透過性試験で使用する
静的拡散セル（Franz セル）

再生医療関連研究紹介

再生医療研究のためのマウスの脊髄損傷モデル

薬理製前に21点であった評点が、モデル作製後4日目には3点にまで低下しました。その後は緩やかな回復がみられました（Fig. 2）。HE染色による病理学的検索では脊髄の損傷部位の幅が減少し、出血及び細胞浸潤、神経細胞の減少が認められました。クリューバーバレラ（KB)染色では損傷部位の神経線維束消失、灰白質の神経細胞減少が認められました（Fig. 3）。また、GFAP及びIba-1の免疫強度増加、リン酸化ニューロフィ
ラメントHの血中濃度上昇も認められました。
以上のように、本モデルでは脊髄損傷による運動障害とそれに伴う病理学的変化が観察されたことから、再生医療分野での利用に適したモデルと考えられました。
熊本研究所
後列左から高橋研究員、守住グループリーダー、佐々木、榊原、樋口研究員、
前列左から樋川研究員、今泉グループリーダー、廣中、林田研究員

脊髄損傷は、主に外部から脊柱に強い圧力がかかることによって脊椎が破損し、脊髄が損傷を受けることで発生します。現在、日本には10万人以上の患者がおり、毎年5000人以上増加しています。交通事故、高所からの落下に加え、近年ではスノーボードなどのスポーツによる受傷も増加しています。
脊髄は一度損傷すると修復が難しく、治療方法も確立されておりません。しかし近年では神経幹細胞やiPS細胞を用いた細胞移植療法の有用性が検討されており、再生医療の適用可能分野として注目されています。
当社では再生医療分野での利用を念頭に置いて、マウスを用いた脊髄損傷モデルを作製し、運動機能を評価しました。また、損傷部位の生化学的・病理学的評価を行いました。
動物はモデル作製時に9週齢のC57BL/6J系統雌性マウスを用いました。運動機能の評価にはBBBスケール（Basso, Beattie, and Bresnahan
Locomotor Rating Scale）を用いました1。このスケールは、正常状態を21点、後肢の動きが全くない状態を0点とし、1点刻みでマウスの後肢を中心とした運動機能を評価するものです。モデル作製前日の体重及びBBB
スケールに基づいて、マウスをモデル群とsham群に群分けしました。モ
デル群の動物には、Boullandらの方法に準じて、2%イソフルラン麻酔下で第12胸椎～第1腰椎をクレンメで圧挫する方法を用いました2。Sham
群の動物にはクレンメによる脊髄の圧挫処理を施しませんでした。
その結果、Sham群動物と比較して脊髄損傷群の動物ではモデル作
製後9日目までに一過性の体重減少が見られましたが、その後の体重増加の程度はsham群と同様でした（Fig. 1）。BBBスケールではモデル作

nFig. 2

Sham 群と脊髄損傷群の BBB スケール変化－（原稿執筆／高橋 郁夫 E-mail: Takahashi.Ikuo@ma.medience.co.jp）nFig. 1n

Sham 群と脊髄損傷群の体重変化

データは平均値±標準誤差で表示、＊＊：P＜ 0.01（Student's t-test）
’s

－

n

データは平均値±標準誤差で表示、＊＊：P＜ 0.01（Student's t-test）’s

参考文献＊1:Experimental Neurology 139: 244–256, 1996. Graded histological andlocomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop
device versus transection/ D. Michele Basso et al.
＊ 2: PLoS ONE 8: e71701, 2013. A Neonatal Mouse Spinal Cord Injury
Model for Assessing Post-Injury Adaptive Plasticity and Human Stem Cell
Integration/ Jean-Luc Boulland et al.

Fig. 3 BBB スケール 1 点の時点（Day4）における脊髄の HE 染色（左）及び KB 染色（右）像
写真提供協力：エーザイ株式会社

3 非臨床 News

200 200
180 180

140 140**	 **	

120 120160 160
140 140120

ヌードマウスを用いた肝炎モデルの再生医療研究への有用性

薬理

100

60

60

40

40

20

20

0

0

2.5

20
80

2.0

2.0

1.5

1.5

1.0

1.0

600

原因による肝障害が慢性化した難治性疾患であり、不可逆性の線維には約25 ～ 40万人の患者がいると推定されています。根治治療法は

20

なく、薬剤による対症療法が行われているのが現状です。このような現0＊1状から再生医療に大きな期待が寄せられ、研究が進められています 。

0.5

0.0

こで，ヌードマウスを用いてCCl4により肝硬変を惹起し、このモデルを

0

9

8

8

7

7

6

6

5

5

4

4

60

3

3

40

2

2

20

1

1

0

0

0

0.0

＊
*	

＊＊
**	
*	
 *	

HYP
(µg/Liver)
HYP(µg/Liver)
HYP(µg/Liver)

*	
 *	

800
1000
600

*	

800 800*	 *	

HYP (µg/Liver)＊*	

600 600

400 400

800
400

0

*	

200 200

600
200

0

200
0

中ハイドロキシプロリン（HYP）量の増加（Fig.1）、肝臓の線維化が起こ**	
肝臓/体重比(%)	(%)	
肝臓/体重比1000 1000 1000

300

300
100

ALT優位の慢性肝炎を示す肝機能の変化、すなわち肝臓重量及び肝臓

ALT (U/L)	

ALT (U/L)	

180
80
160
**	
 **	
 60
140
40
120
20
100
0
80

100 100

Balb/cマウスではCCl4を週に2回、8週間腹腔内投与することによって、

0

0

400
0

Nomal
(n=5)
Nomal
(n=5)
	
 	

100

群と比較してALT優位の慢性肝炎を示す肝機能の変化が起こり（Fig.3）、20

0200 200

用いて市販のヒト脂肪由来間葉系幹細胞（h-MSCs）の効果を評価しましそこでBalb/cを背景系統とするヌードマウスにCCl4を週に2回、8週間

20

160

10

400
200

た。

腹腔内投与したところ、媒体群の動物ではBalb/cマウスと同様に無処置

180

9

HYP
(µg/g liver)
300

500
300

生医療の基礎研究では免疫不全動物が有用であるとされています。そ40

10400 400400

するモデルが広く知られています。また、ヒト由来の細胞を投与する再

40

120

0.5

500 500

当社はマウスを用いた研究でこの課題に取り組みました。
肝硬変の動物モデルとして、マウスに四塩化炭素（CCl4）を反復投与

60

200

HYP (µg/g
liver)
HYP(µg/g
liver)
HYP(µg/g
liver)

500

**	
 **	

140

40

化を伴い，約80％が肝臓がんに進行することが知られています。国内

80

60

肝臓重量
(g)	
 (g)	
 200
＊＊
**	
肝臓重量
100

2.5

60
120
40
100

ることがすでに確認されています（Fig.2）。

**	

AST (U/L)	

80
140

肝硬変は、ウィルス感染、アルコール、自己免疫性などさまざまな

80

AST
80 80(U/L)	

140

ASTAST(U/L)	(U/L)	

100 100

120 120100 100

再生医療関連研究紹介

Vehcle
CCI
Vehcle(n=5)
4 (n=5)
	200	

Fig. 1
AST，ALT，肝臓中ハイドロキシプロリン量(Balb/cマウス) ()%Fig.Fig.
1 1AST，ALT，肝臓重量(%，HYP( µg/gliverliver) 及び
HYP
AST，ALT，肝臓重量g ) ，肝臓/体重比) ，HYP( µg/g) 及びH
Nomal (n=5)
CCl4 (n=5) ( g )( ，肝臓/体重比
Each value represents
mean
liver
) ) ± S.E.M.
liver
	
	
（Balb/cマウス）＊ : p<0.05, 0＊＊ : p<0.01 ; Significant
difference
from normal group（Balb/cマウス）
0Fig. 1t-test)
AST，ALT，肝臓中ハイドロキシプロリン量
Each
value
represents
mean± S.E.M.
Each
value
represents
mean± S.E.M. (Balb/cマウス)(Student's

Each value representsmean± ;S.E.M.
*: p<0.05,**:
p<0.01Significant
difference
fromfrom
normalgroup(Student's
t-test)	
*: p<0.05,**: p<0.01; Significant
difference
normalgroup(Student's
t-test*: p<0.05,
p<0.01 ; Significant
difference from normal group (Student's t-test)
Nomal **:
(n=5)
CCl4 (n=5)
		Fig. 1 AST，ALT，肝臓中ハイドロキシプロリン量 (Balb/cマウス)
Each value represents mean ± S.E.M.
Fig.2 四塩化炭素誘発肝硬変モデルの*: p<0.05, **: p<0.01 ; Significant difference from normal group (Student's t-test)

肝臓重量の増加（Fig.4）、肝臓中HYP量の増加（Fig.5）、及び肝臓の線
維化（Fig.6）とマクロファージ主体の炎症性細胞浸潤が認められ、ヌードマウスでもCCl4投与によって肝硬変が誘発されることが確認できました。

肝臓の病理組織学的検査写真（Balb/c
マウス）マッソントリクローム染色 .
Bar = 100μm.
血管周囲以外にも線維化（青く染まった部分）が認められる

更にヌードマウスを用いたCCl4誘発肝炎モデルにヒト脂肪由来間葉系幹細胞を静脈内投与したところ、病理組織学的には線維化（Fig.6）や炎症の程度に媒体群との差は認められませんでしたが、肝臓中HYP
量は媒体群より低値を示し、肝炎が改善されていることがわかりました（Fig.5）。
以上の結果より、ヌードマウスのCCl4誘発肝硬変モデルでは、Balb/c
マウスと比較して病態の程度は弱いものの、慢性肝炎を示す肝機能障

AST (U/L)	

140

Vehicle (n=11～18)120

害が確認され、拒絶反応を起こさないヌードマウスのモデルはヒト由

100

100

来細胞を用いた再生医療研究に有用であると考えられました。

80

80

60

60

40

40

＊ 1： The International Journal of Biochemistry and Cell Biology 68: 109-

20

118, 2015. Mesenchymal stem cells: In vivo therapeutic application

0
4

6

肝臓重量
（g）
肝臓重量(g)	
	

10

肝臓 肝臓/体重比(%)	
/ 体重比（%）
	

**	
＊＊

9

2.0

**	
＊＊

8

HYP (µg/g liver)
Normal40	
(n=5)
Vehicle (n=11)#	#

h-MSCs (n=6)

＊＊
**	
＊＊
**	

＊＊
**	

0
2

4

6

8

四塩化炭素投与後週	

AST，ALT の経時変化（ヌードマウス）

Each value represents mean ± S.E.M.
＊＊ : p<0.01; Significant difference from normal group (Student's t-test)
Fig. 32.58

四塩化炭素投与後週	

Fig. 3et al.

h-MSCs (n=6)
**	
＊＊

20

2

ameliorates carbon tetrachloride induced liver ﬁbrosis in rats/Nermin Raafat（原稿執筆／林田 尚之 E-mail:Hayashida.Yoshiyuki@mv.medience.co.jp）

ALT (U/L)	
 Normal (n=5)

140

120

参考文献

AST，ALTの経時変化（ヌードマウス）

Each value represents
mean± S.E.M.
HYP(µg/Liver)80 	
**: p<0.01;
Significant difference from normal group (Student'stVehicle	
Vehicletest)＊*	h-MSCs	h-MSCs

**	
＊＊

30	

60 	

20	

40 	

7
1.5

##	

6
5

1.0

4
3

10	

0.5
肝臓重量(g)	
	**	
10

重量(g)	

*	

ALTALT(U/L)	(U/L)	

9
8
7
6
5
4

2
1

肝臓/体重比(%)		

20 	

Normal (n=5)

肝臓/体重比(%)	
90Vehicle (n=11)0	Normal (n=5)
0 	**	
肝臓/体重比(%)	
 	
Fig. 6 四塩化炭素誘発肝硬変モデルの
9
Normal (n=5)
h-MSCs(n=6)
Fig. 6 四塩化炭素誘発肝硬変モデルの肝臓の病理組織学的検査写真（ヌードマウス）
Fig. 4 	
肝臓重量および肝臓/体重比（ヌードマウ
Vehicle (n=11)
8
#	
**	
ス）
肝臓の病理組織学的検査写真（ヌードマウ
シリウスレッド染色.
Bar = 100 µm.	
(n=5)
Vehicle (n=11)
H-MSCs (n=6)(n=11) h-MSCs (n=6)Nomal
Fig. 4 8肝臓重量及び肝臓/ Vehicle
体重比（ヌードマウス）
Fig.
5 肝臓中ハイドロキシプロリン量（ヌードマウス）#	**	7ス）シリウスレッド染色 . Bar=100μm.
線維化（赤く染まった部分）の程度に両者の差は認められなかった
h-MSCs (n=6)mean ± S.E.M.
Each#	
value represents
Fig. 5 肝臓中ハイドロキシプロリン量（ヌードマウス）
0.0

10

10

1

7
6

非臨床 News 4
5
4
3

1

6
＊ : p<0.05,＊＊ : p<0.01; Significant difference from normal group (Student's t-test)#: p<0.05; Significant difference fromgroupmean(Student's
Eachvehicle
value represents± S.E.M. t-test)5*: p<0.05, **: p<0.01; Significant difference from normal group (Student's t-test)#: p<0.05; Significant difference from vehicle group (Student's t-test)	

4
3
2

この 凡例 と 標準偏差の表示は，Fig.4 及び Fig.5の共通事項の記載として配置して下さい．
凡例はグラフ表題の上に配置．標準偏差はグラフ表題の下に配置
	

線維化（赤く染まった部分）の程度に両者の差は認められなかった

再生医療関連研究紹介

安全性

In vivo 造腫瘍性試験［まとめ］
ヌード、NOD SCID及びNOGマウスの全ての系統において、陽性対照群の全例に腫瘍形成が認められ、皮下投与したHeLa細胞の造腫瘍性が確認されました。現在は、実施した病理組織学的検査の組織像や転移について更に詳細なデータをとりまとめています。
今回、免疫不全動物の代表的な3系統のマウスについて造腫瘍性試験を実施し、背景データを取得しました。また、in vivo 造腫瘍性試験
はGLP適用での実施が可能です。今後とも様々なニーズに対応できるよ
う努力してまいりますので、再生医療等製品の in vivo 造腫瘍性試験実

熊本研究所
左から飯田、山田、牧野、島津研究員［背景・目的］近年多数の再生医療等製品が開発され、再生医療の今後の発展が大いに期待されています。しかし、一方で再生医療等製品には、培養期間中に製品自体が変質した結果あるいは体内に移植した製品が患者さんの遺伝子に働きかけた結果、腫瘍を形成してしまうリスクがあります。この腫瘍を形成する性質を「造腫瘍性」と呼びます。特に、再生医療の要として期待されているiPS細胞やES細胞は完全な多能性と無限の施をご検討の際は、ご相談ください。
参考文献＊ 1：WHO Technical Report Series 878, Annex 1 2010.WHO Expert
Committee on Biological Standardization. Recommendations for theevaluation of animal cell cultures as substrates for the manufacture of
biological medicinal products and for the characterization of cell banks.
（原稿執筆／飯田 真志 E-mail：iida.masashi@ms.medience.co.jp)
Table1増殖性をもつが故に、造腫瘍性リスクが非常に高いと考えられ、再生腫瘍形成匹数

医療等製品として用いるためには造腫瘍性についての科学的な評価が必要です。造腫瘍性はin vitro 又はin vivo で評価することができます。

a)In vivo の造腫瘍性試験は、再生医療等製品を免疫不全動物に移植b)（投与）し、造腫瘍性の有無が判断できるまで一定期間観察する試験です。被験物質となる再生医療等製品の特性により投与方法や観察期間等は異なるのですが、本稿ではスタンダードな試験として、当社で実施した皮下投与による16週間造腫瘍性試験の検討結果を紹介します。
また、参考としたWHOのガイドライン＊1では、代表的な方法としてヌー
ドマウスの使用が示されていますが、本検討試験ではヌードマウスに加え、再生医療等製品がより生着しやすいと考えられている重度の免疫不全動物であるNOD SCIDマウス及びNOGマウスを用いて評価しまし
た。

mm3
mm3

3,000

［方法］
免疫不全度の異なるヌード、NOD SCID及びNOGの3系統の雄性マウ2,500

スを用い、陽性対照としてHeLa細胞（ヒト子宮頸がん細胞）と、陰性対照としてMRC-5細胞（ヒト線維芽細胞）をそれぞれ背部皮下に投与し

NOD SCID
NOG

2,000

ました。使用動物数は各群雄10匹（2群/系統×3系統）とし、投与は、106 cells/body、投与容量0.1 mLで行い、その後16週間観察しました。
検査項目としては、一般状態観察、体重測定、腫瘍径計測及び剖検1,500を実施しました。
［結果］

1,000

投与後10週までのデータをTable1及びFig.1に示します。
陽性対照群ではいずれの系統も投与後6週から腫瘍形成が観察され500始め、投与後8週までに全例で腫瘍が認められました。各系統間で比較すると、全例で腫瘍が形成されたのは、ヌードマウスは投与後6週、NOD SCIDマウスは投与後8週、NOGマウスは投与後7週でした。陰性対
照群については、投与後10週までいずれの動物にも腫瘍形成は認められませんでした。

0
Week 6

Week 7

Week 8

Week 9Week 10Weeks

Fig.11 腫瘍体積=1/2=1/2 ×長径×短径×短径
腫瘍体積5 非臨床 News

再生医療関連研究紹介

軟寒天コロニー形成試験－ in vitro 造腫瘍性試験－

安全性

概略図
陽性対照物質	

陰性対照物質	

被験物質	
Cell	
  AgarAgar	
   Layer
Cell

Cell	
Cell

Layer	BaseBase	
   AgarAgar	

培養 （約1週間）	
？	
軟寒天及び細胞を溶解	

熊本研究所
後列左から柿田、入田、飯開研究員、前列左から吉田研究員、山本チームリーダー、財前研究員？	
蛍光強度の測定	
？

無

有

［背景］

足場非依存性増殖能の判定	

悪性形質転換は、遺伝子的・エピジェネティクスな変化によって生じ、内外の成長抑制シグナルとは無関係に増殖する細胞集団の形成を引きおこします。悪性形質転換した細胞の多くは不死化し、細胞外増殖因［結果］
陽性対照であるHeLa細胞の1週間培養後（Day 7）の蛍光強度は、細子をそれほど必要としない、細胞間接触による抑制を受けない、といった性質を示します。軟寒天コロニー形成法は、
in vitro で行う腫瘍形成能

胞数に依存した変化を示しました。また、播種時（Day 0）と比較して明（足場非依存性増殖能）を確認するために用いられ、再生医療に関す

らかな蛍光強度の増加が認められ、足場非依存性増殖能を有することが確認されました。一方、陰性対照であるMRC-5細胞のDay 7の蛍光る安全性試験で必要とされる試験です。

強度は、Day 0と比較しても低値であり、足場非依存性増殖能は認めら

今回、蛍光強度を測定するキットを用いた軟寒天コロニー形成試験を立ち上げましたので紹介します。

れませんでした（Fig. 1）。

［方法］

［まとめ］
CytoSelect 96-Well Cell Transformation Assayを用いてHeLa細胞の足場

陽性対照：HeLa細胞、陰性対照：MRC-5細胞使用キット：CytoSelect 96-Well Cell Transformation Assay（Soft Agar Colony

非依存性増殖能を確認することができました。当該キットを用いた軟Formation）、Cell Biolabs社製

寒天コロニー形成法試験は、GLP適用での実施も可能です。また、従HeLa細胞及びMRC-5細胞を軟寒天培地中に播種し、1週間培養後、来のコロニー数をカウントする方法についてもGLP適用での実施が可

キットを用いて軟寒天及び細胞を溶解し、蛍光強度を測定しました。

能です。今後とも、お客様のご要望に対応できるよう努力してまいりま

播種時と培養後の蛍光強度を比較し、足場非依存性増殖能を評価しますので、再生医療等製品のin vitro 造腫瘍性試験実施をご検討の際は、した。

ご相談ください。
（原稿執筆/山本 健一 E-mail:Yamamoto.Kenichi@mu.medience.co.jp）

600	

Cells/well

Day 0
RFU

95.0%
HeLa	
SD
1.645SD

97.5%

99.0%

600	
99.5%

99.9%

1.960SD

2.326SD

2.576SD

3.090SD

Day ７
RFU

MRC-5	

10000

58

6

9.9

11.8

14.0

500	
15.5

18.5

502

33

5000

27

4

6.6

7.8

9.3
Day
0
Day 0	

10.3

12.4

265

21

HeLa

2500

14

1

1.6

2.0

2.3

2.6

3.1

141

13

RFU	

Sample

300	

1250

8

2

3.3

3.9

5.2
300	

6.2

71

15

625

4

2

3.3

3.9

4.7

5.2

6.2

35

4

200	

10000

37

4

6.6

7.8

9.3

10.3
200	

12.4

11

2

5000

16

1

1.6

2.0

2.3

2.6

3.1

5

1

100	
MRC-5

2500

9

4

6.6

7.8

9.3

100	
10.3

12.4

3

1

3.9

400	

0	

1250

5

2

3.3

625

45000	

2 2500	

3.3 1250	
 3.9

10000	

Day ７	
Day
7

4.7

625	

400	

RFU	

500	

4.7

5.2

6.2

1

4.7

5.2

6.2
10000	

2
5000	

0	

Cells (cells/well)	

Fig. 1 軟寒天コロニー形成法（蛍光強度による評価）

Fig.	
 1	
 軟寒天コロニー形成法（蛍光強度による評価）
非臨床 News 6

Day0
Day 0	
Day ７	
7

1
2500	
 2
Cells (cells/well)	

1250	

625	

再生医療関連研究紹介

病理

免疫組織化学染色によるヒト間葉系幹細胞の検出

熊本研究所
後列左から河上研究員、浜村統括部長、山口研究員、前列左から渡辺、隈部、村田研究員［背景］
再生医療等製品の体内動態試験では、被験物質が細胞・組織であるため、これまで低分子医薬品に使用していた手法を用いることができません。それに代わる手法の1つとして、免疫組織化学染色（免疫染色）があります。当社では、非臨床試験に用いられる種々の動物種を想定した、免疫染色によるヒト細胞検出の検討を行っています。今回、ラットに投与したヒト間葉系幹細胞(Human mesenchymal stem cell、HMSC)の検出を試みた結果を紹介します。
［方法］
HMSCをラットの尾静脈内に投与した後、肺組織を10%リン酸緩衝ホ
ルマリン注入固定し、定法に従いパラフィン包埋切片を作製しました。
2種類のヒト特異的抗体（抗ヒトラミン抗体、抗ヒトミトコンドリア抗体）を用いて、酵素標識抗体法による免疫染色を行いました。
［結果］
Fig. 1A及びFig. 1Bは、それぞれ抗ヒトラミン抗体、抗ヒトミトコンド
リア抗体を用いて免疫染色を行ったラット肺組織です。矢印に示すようFig. 1 ヒト特異的抗体を用いた免疫染色（ラット肺組織、矢印：陽性細胞）
A 抗ヒトラミン抗体
B 抗ヒトミトコンドリア抗体に、抗ヒトラミン抗体では核内に、抗ミトコンドリア抗体では細胞質内に陽性反応が認められ、肺の毛細血管内のHMSCが確認できます。また、Fig. 2は、上記の2種類の抗体を用いて二重染色を行ったものです。
HMSCが2色（茶：ラミン、赤：ミトコンドリア）に染色されています。
［まとめ］
ヒト特異的抗体を用いた免疫染色により、動物体内でヒト細胞を検出することが可能であることが示されました。特に、2種類のヒト特異的抗体を用いた二重染色を行うことで非特異反応と真の陽性細胞との識別が容易となり、より正確なデータを得ることができると考えられます。
近年、ヒト細胞の組織への分布に加えて、免疫染色によるヒト細胞の分化に関する解析も報告されています。お客様の様々なご要望にお応えできるよう、更なる技術向上に努めていきたいと思います。
（原稿執筆／隈部 志野 E-mail：Kumabe.Shino@me.medience.co.jp）

Fig. 2 抗ヒトラミン抗体及び抗ヒトミトコンドリア抗体による二重染色（ラット肺組織、矢印：陽性細胞、茶：ラミン、赤：ミトコンドリア）

7 非臨床 News

最新研究紹介

pre	
5回	
10回	
20回	
30回	
直後	
1h	
2h	
4h	
8h	
24h	
2	
3	
4	
5	
6	
7	
8	
9	
10	

0	

0 	

Day	
ストリッピング回数	

安全性

ミニブタを用いた TEWL 及び紅斑値による皮膚状態の評価（図2）TEWL回復時点での角質層（図3）紅斑値回復時点での角質層

正常な角質層	図2

鹿島研究所
安全性研究部の大動物試験に携わる研究員

TEWL 回復時点での角質層

図3

紅斑値回復時点での角質層

ミニブタの皮膚は、構造及び生理機能がヒトの皮膚に類似しているにまで回復した時点では正常な角質層は組織学的に確認できませんでことが報告されており、非臨床試験における経皮投与試験に適した動。一方、紅斑値はTEWLが回復した時点ではまだ高値を示しした（図2）

物種であると考えられています。ただし、ミニブタの皮膚吸収性や刺ており、紅斑値が損傷前の値に回復した時点では正常な角質層（図3）

激反応性は個体差によるばらつきが大きいため、各個体の皮膚の状態が認められました。

を正確に把握することは、経皮投与試験における薬物の安全性及び皮実験②

薬物の吸収性は、損傷直後＞TEWL回復時点＞紅斑回復時

膚刺激性を評価する上で極めて重要です。そこで皮膚バリア機能の指点≒損傷前（健常皮膚）でした（図4）。紅斑値回復時点での薬物吸収性標であるTEWL（trans epidermal water loss）と皮膚の赤味を示す紅斑値

は概ね損傷前の健常皮膚と同等であったのに対し、TEWL回復時点での有用性について確認しました。

は損傷前と比較して高い吸収性を示しました。

［方法］

［まとめ］

実験① テープストリッピングにより損傷を惹起したミニブタの皮膚®

のTEWL及 び 紅 斑 値 を、Tewameter TM300MP、Courage+Khazaka社 製

一定の損傷を受けた皮膚では、TEWLが回復したにも関わらず角質層の再生が不完全な状態にあり、バリア機能が低い、すなわち薬物のを用いて経時的に測定し、損傷の回復に伴う各測定値の変化を確認し吸収性が高い状態であることが確認されました。一方紅斑値についてました。また、TEWL及び紅斑値それぞれが損傷前の値にまで回復しは、角質層の再生に伴い回復がみられ、薬物吸収性も紅斑値の回復

た時点で皮膚の一部をバイオプシーパンチにて採取し、病理組織検査とともに健常皮膚と同等となりました。したがって、TEWLに紅斑値をを実施してバリア機能を有する角質層の状態を観察しました。
実験②加えることにより、より正確に皮膚の状態を把握することが可能と考え

皮膚の損傷前（健常皮膚）、損傷直後、及びTEWLや紅斑られました。

値が回復した時点（計4時点）における皮膚の薬物吸収性を確認するた

以上のように、当社ではTEWLや紅斑値を用いて薬物の安全性や刺め、各時点に薬物を経皮投与し、経時的に採血して血漿中薬物濃度

激性をより正確に評価することが可能です。また、バイオプシーパン

を比較しました。

チは、動物を死亡させることなく標本を採取することが可能であり、皮膚の病理標本を経時的に採取することも可能ですのでご用命いただけ［結果］

れば幸いです。

実験① TEWLは損傷直後から上昇するのに対し、紅斑値はTEWLと比較して損傷後、遅延して上昇しました（図1）。また、TEWLが損傷前（図1）皮膚損傷後のTEWLと紅斑値の推移（原稿執筆／遠藤 和守 E-mail:Endou.Kazumori@mh.medience.co.jp）（図4）薬物吸収性の比較

50	

6	

200 	

損傷前(健常皮膚)	

TEWL	
160 	

損傷直後	

紅斑	
4	

30	

120 	

20	

80 	

ng/mL	

mg/cm2/hr	

40	

5	

TEWL回復時点	

3	

紅斑回復時点	

2	

0	

40 	

pre	
5回	
10回	
20回	
30回	
直後	
1h	
2h	
4h	
8h	
24h	
2	
3	
4	
5	
6	
7	
8	
9	
10	

10	

ストリッピング回数

0 	
（day）

1	
0	
1 h	

2 h	

4 h	

8 h	

12 h	

24 h	

図4

薬物吸収性の比較

Day	
損
傷後経過時間ストリッピング回数	

図1

皮膚損傷後の TEWL と紅斑値の推移（図2）TEWL回復時点での角質層非臨床 News 8（図3）紅斑値回復時点での角質層

正常な角質層	最新研究紹介病理

ミニブタの皮膚の病理組織学的検討

鹿島研究所
左から菅野グループリーダー、石井、山田研究員

ミニブタは、イヌ・サルと同様に非げっ歯類動物として安全性試験

Fig. 2に用いられています。近年、JeppesenらがGöttingen Minipigの病理組織学的検査における背景病変についての論文を発表するなど＊1、病理組
織学的な基礎データも徐々に報告されてきており、ミニブタを用いた

耳翼尾側の皮膚［ストリッピングの影響］
損傷皮膚モデルとして、テープストリッピングによって表皮を損傷さ試験は更に増えるものと考えられます。特に、ミニブタは皮膚の特徴

せ、病理組織学的検査を行いました。Fig. 3は、テープストリッピング

が他の実験動物と比較してヒトと類似していると言われていることからを行った皮膚を、バイオプシーパンチで採材した表皮の組織写真です。

経皮投与の試験に用いられることが多く、当社では、全身臓器の背景

左のAから順にそれぞれ0、5、10、15、20回のストリッピングを行い病変と共に、皮膚に関する病理学的な基礎データ収集も行っています。

ました。ストリッピングにより角質層が減少し、15回、20回（D、E）でそこで今回は、投与部位として用いる皮膚の各部位の特徴とストリッピ

は角質層は完全に除去され、表面に扁平化した核が認められると共にング処置における皮膚の変化について紹介します。

有棘層（Fig. 3矢印）の厚さが減少しています。このように、病理組織学［投与部位として用いる皮膚の各部位の特徴］

す。

的な表皮の損傷・剥離の程度は、ストリッピングの回数とよく相関しま
当社の経皮試験で用いられる投与部位は、主に胸部から腹部にかけての体幹部左右両側の皮膚です。Fig. 1は胸部と腹部の境界付近の体幹部皮膚をバイオプシーパンチで採材した皮膚の組織写真です。AからEの順番に、背側から腹側にかけて採材しています。体幹部皮膚では、背側と腹側で真皮の膠原線維層の厚さが異なり、背側の方が真皮の膠原線維層（Fig. 1矢印）が厚いことがわかります。表皮の厚さに明らかな違いはみられません。また、いずれの部位でもイヌやサルと比べて毛包などの皮膚付属器が少ないことがわかります。このほか、耳翼尾側の皮膚（Fig. 2）や乳頭周囲の皮膚は体幹部皮膚よりも脂肪組織が多く、これらの部位は皮下投与に用いる部位として検討し、背景データを収集しています。

Fig. 3 ストリッピングの影響

以上、当社で行っているミニブタの皮膚についての基礎的な検討結果を紹介しました。今後も皮膚を含め、ミニブタに関する基礎データの収集を実施していきますので、ご意見、ご要望などがありましたら、ご連絡いただければ幸いです。
参考文献＊ 1:Toxicologic Pathology 43:257-266, 2015. Spontaneous background
pathology in Göttingen minipigs ／ Jeppesen G et al.
（原稿執筆／山田 直明 E-mail:yamada.naoaki@mn.medience.co.jp）

Fig. 1 体幹部皮膚9 非臨床 News

最新研究紹介

分析代謝 In vitro 皮膚透過性試験
なお、ここで用いる皮膚のintegrityを保証することが、各種ガイドラ
インに示されています。当社では比較的厳格な結果が得られる、トリチウム水浸透率に基づく方法を使用しており、トリチウム水の透過係数が一定の基準値未満のものを正常皮膚とみなして（integrityの完全性）、
試験に使用しております。
［結果］
ここでは、皮膚の角層バリアをテープストリッピングにより障害を起こした皮膚（損傷皮膚）と正常皮膚での薬剤の透過の相違の例を図2に示します。正常皮膚と比較して、損傷皮膚ではトリチウム水の透過係数が著しく高く、このとき、化合物Xの透過速度も大きくなっています。
一方、正常皮膚における化合物Xの透過では、適用後4時間までは濃度は横ばいとなっており、一定のタイムラグが生じています。

鹿島研究所
後列左から間舘、金子（哲）、田﨑研究員、鳥居チームリーダー、庵、斎藤、那須、橋田研究員、
前列左から越川、金子（健）、津村、山口、木村研究員

In vitro 皮膚透過性試験は、経皮による吸収速度の評価、暴露量の推定、経皮吸収剤の同等性評価など、種々の評価において有用性の高いツールとして活用されています。
当社は、OECD、SCCSなどの試験法ガイドラインに準拠し、実験動物
だけでなくヒト皮膚においても in vitro 皮膚透過性試験を実施することが可能です。また、標識体を用いる場合には、マスバランス評価の実施はもちろんのこと、非標識体の場合でも、測定方法の検討・確立から対応します。
［方法］
第一選択とされている試験用の皮膚は、非営利特定団体エイチ・
エー・ビー研究機構を通じて米国National Disease Research Interchange（NDRI）から供給されたヒト皮膚組織を入手するか、若しくは、海外で採取された皮膚組織片を国内代理店を介して供給を受けています。ヒ
ト皮膚の場合、ダーマトームを用いて適度な厚さに調整しています（若しくは処理済の皮膚を入手）。このときのsplit-thickness skinは、表皮層と真皮層を含みます。また、試験の目的に応じ、実験動物（マウス、ラット、ブタ）を用いることができ、ヘアレスマウスやブタ耳の皮膚が汎用されています。これら動物の皮膚の場合には、脂肪層を除去したfullthickness skinを用いています。
皮膚は適当な大きさにカットし、図1に示すように透過セルにセットします。レセプターチャンバーにはレセプター液を入れ、ドナーチャン
バー側に薬剤を適用し、経時的にレセプター液の濃度を測定すること
で、化合物の皮膚透過速度を評価することが可能となります。

［まとめ］
当社では、さまざまな投与経路での薬物の動態、薬効、安全性評価を行っており、経皮投与、吸入投与などの特殊な投与経路についても長年にわたり取り組んできました。今回紹介した in vitro 皮膚透過性試験についても、新規化合物の安全性評価や、動物実験代替法の1つとして、新薬開発などの様々な場面で、ニーズに即応した試験デザインにて信頼性の高いデータを提供することで、お客様のお力になればと考えています。測定法につきましても、放射能測定、HPLC（UV、蛍光）、LC/MS/MS、原子吸光など化合物に応じて対応が可能ですので、お声をかけていただければ幸いです。
参考文献
・OECD, 2003. OECD Guideline for Testing of Chemicals, No. 428: Skin
Absorption: In vitro Method. Organization for Economic Co-operation andDevelopment, Paris.
・SCCS, 2012. The SCCS's Notes of Guidance for the Testing of Cosmetic
Ingredients and Their Safety Evaluation, 8th Revision. ScientificCommittee on Consumer Safety
・厚生労働省，局所皮膚適用製剤（半固形製剤及び貼付剤）の処方変
更のための生物学的同等性試験ガイドラインについて，平成22年11月1日 薬食審査発1101第1号(原稿執筆／田﨑 健二 E-mail:Tasaki.Kenji@md.medience.co.jp)

40.0

35.0

NormalDamaged250

NormalDamaged
200

30.0
25.0

150

20.0
15.0

100

10.0

50
5.0

図1

静的拡散セル（Franz セル）

0.0

0
0

4

8

12

16

図 2 正常皮膚と損傷皮膚での薬物透過の比較（左）トリチウム水の透過係数（Kp，× 10-3 ㎝ /h）（右）化合物 X の累積透過量（µg/㎝2）の時間推移
非臨床 News 10

20

24

cardiomyocytes by ﬁeld potential ／北村哲生、 他●Göttingen系ミニブタを用いたホルター心電図検査の基礎【45th Annual Meeting on Environmental Mutagenesis and検討／細田秀勝、 他
Genomics Society (EMGS)】● Analysis of the epicardial ECG in a dog model of drug● Evaluation of Repeated Dose Liver and Gastrointestinal
induced heart failure ／今泉真和、 他
Tract Micronucleus Assay Using Young Adult Rats (IV):●安全性薬理試験における行動評価-トランスレーショナル
Summary of Collaborative Study by CSGMT/JEMS.MMS. ／濵 リサーチへの試み- ／廣中直行
田修一、 他【第34回 実験動物病理標本交見会】【16th International Society of Addiction Medicine Annual●ラットの下垂体腫瘍／黒滝哲郎
Meeting】●ラットの空腸腫瘤／川迫一史● Behavioral pharmacological effects of nicotine; its 【第88回 日本薬理学会年会】
relevance to smoking habit ／廣中直行●Eﬀects of drugs on cardiac function in a dog model of drug【BioJapan 2014】
induced cardiac hypofunction ／佐々木一暁、 他●iPS細胞等幹細胞産業応用促進基盤技術開発／ヒトiPS細●Study of anticancer drug sensitivity to tumor cells using a
胞等幹細胞を用いた創薬スクリーニングシステムの開発／
3-dimensional culture method ／森川崇、 他
長田智治● Evaluation of lactate-induced panic-like responses in rats
【19th NORTH AMERICAN ISSX MEETING, 29th JSSX
／田代貴士、 他
MEETING】●A Study of Evaluation System for Angiogenesis in a Rabbit●VALIDATION OF UPTAKE ASSAY FOR ASSESSING LONGModel of Hindlimb Ischemia ／林田尚之、 他
LASTING INHIBITORY EFFECTS IN OATP1B1-AND OATP1B3- 【公益社団法人 日本農芸化学会】
EXPRESSING CELLS ／金子健一、 他●マウスNK活性低下モデルにおける各種食品成分の効果【2014年大会 情報計算化学生物学会】
検討／山澤拓実、 他●Comparison of in vitro system to evaluate arrhythomogenic 【第55回 獣医病理学研修会（第2回日本獣医病理学専門
potentials of compounds using human iPS-cell derived
家協会学術集会内で開催）】
cardiomyocytes with ﬁeld potential measurement and clinical●ラットの小腸腫瘤／山田直明
report ／北村哲生、 他【実験病理組織技術研究会 第22回総会・学術集会】【第281回 液体クロマトグラフィー研究懇談会】●好酸球の簡易染色法追加報告／山口浩美、 他●非臨床試験におけるLC技術の活用／常深慎●免疫染色トラブル事例報告／渡辺秀幸、 他【2014年 液体クロマトグラフィー研修会】●走査電子顕微鏡標本の作製工程における洗浄時間がウ●HPLC分析・LC/MS分析の基礎とノウハウ−酸による除タ サギ角膜内皮の形態に及ぼす影響／四郎丸千恵、 他
ンパク−／常深慎【2015年（第5回） 薬物毒理学年会】【第5回 スクリーニング学研究会】●Comparison of in vitro system to evaluate arrhythmogenic●細胞外電位によるヒトiPS細胞由来心筋細胞を用いたin
potentials of compounds using human iPS-cell derived
vitro 催不整脈作用評価法と臨床報告の比較／北村哲生、他
cardiomyocytes with ﬁeld potential measurement and clinical【2014 National Workshop on Non-clinical Safety Evalution
report ／北村哲生、 他
and Quality Management】● Species diﬀerences of eﬀects of morphine on respiratory●Eﬀectiveness of liver micronucleus assaystudies ／濵田修一、他
functions in Sprague-Dawley rats, beagle dogs and●Standard procedures of in vivo alkaline comet assay ／高cynomolgus monkeys ／馬成俊、 他
沢博修、 他【第42回 日本毒性学会学術年会】【日本環境変異原学会 第43回大会】●Göttingen系ミニブタを用いたTEWL及び紅斑値による皮膚●ホルマリン固定組織を用いた肝臓小核標本作製〜コラゲ
状態評価法の検討／遠藤和守、 他
ナーゼ処理法との比較検討〜／志賀野美幸、 他●Göttingen系ミニブタにおける基礎的な免疫反応の特徴／※ベストプレゼンテーション賞を受賞しました
赤川唯、 他●Pig-a/PIGRETアッセイに関する短 期 試 験 への有 用 性： ●3軸加速度センサー内蔵携帯歩行計を用いたMPTP誘発
MMS共同研究報告／堀端克良（国立薬品食品衛生研究
パーキンソン病モデルサルの行動異常および振戦の定量解所）、 高島理恵、 他
析／平嶋昂、 他【安全性評価研究会（谷学） 12月セミナー】●カニクイザルにおける腎障害バイオマーカーの検討／小●医薬品開発における行動薬理評価および依存性評価に 林大礎、 他
ついて／廣中直行●ヒトiPS細胞由来心筋細胞を用いたhERGチャネルタンパク【4th Asian conference on Environmental Mutagens（4th質の細胞内輸送阻害の評価／吉川公人、 他
ACEM）】●実験動物のホルモン測定試薬の定量性能の比較検討／●Genotoxicity evaluation as part of general toxicity studies:
橋田祐樹
potentials and challenges of integration studies ／濵田修一●動物の行動評価の基礎と応用 − LSIM の挑戦 −／廣中2015 年 学会発表実績 （1 月～ 8 月） 直行

2014 年

学会発表実績 （8 月～ 12 月）【第21回日本毒性病理学会スライドカンファランス（教育講演）】●呼吸器系（肺）／増殖性病変／涌生ゆみ【第31回 日本毒性病理学会総会及び学術集会】●SDラットの腎臓Fornixにおける加齢性病変／友成由紀、他●シスプラチン投与によりカニクイザルでは遠位尿細管が傷害される／小林亮介、 他●ウサギの網膜におけるニューロフィラメントの蓄積に関する病理組織学的検索／川迫一史、 他【日本安全性薬理研究会 第6回学術年会】● A n in vitro m e t h o d t o e v a l u a t e s o d i u m c h a n n e lblock potentials of drugs using human iPS-cell derived

Topics1

2014 年

投稿実績 （8 ～ 12 月）【The Journal of Veterinary Medical Science 76 : 11611164, 2014】
Follicular thyroid carcinoma characterized by abundant
stromal components with chondroid and osseous metaplasia
in a dog ／小林亮介、 他

2015 年

投稿実績 （1 月～ 8 月）

【Journal of Toxicologic Pathology 28 (1) : 1-9, 2015】
Histological Dermal Changes Caused by Preparative andApplying Procedure in Percutaneous Dose Toxicity Studies ofDogs, Rabbits, and Rats ／満石三喜男、 他【Journal of Toxicologic Pathology 28（2）: 73-78, 2015】
Morphometric analysis of progressive changes in hereditary
rabbit cerebellar cortical abiotrophy caused by abnormal
synaptogenesis ／佐藤順子、 他【Journal of Toxicologic Pathology 28（2）: 121-124, 2015】
Spontaneous and bilateral necrosis of the femoral head in ayoung experimental beagle dog ／小林亮介、 他【Journal of Comparative Pathology】
Neuroﬁlament Accumulation in Rabbit Retinas ／川迫一史、他【American Journal of Physiology - Renal Physiology, 308 :F1128-F1134, 2015】
Functional roles of TRPV1 and TRPV4 in control of lower
urinary tract activity: dual analysis of behavior and reflex
during the micturition cycle ／芳山充晴(山梨大学大学院医学工学総合研究部泌尿器科学)、 水町涼治、 他【日本薬物動態学会ニュースレター 30（2）: 30, 2015】
19th North American ISSX Meeting, 29th JSSX Meeting，
2014年10月19日〜 10月23日／金子健一【Fundamental Toxicological Sciences 2（3）: 101-110,
2015】
Positive and negative ions by air puriﬁer have no eﬀects on
reproductive function or postnatal growth and developmentin rats ／山本大、 他【The Journal of Toxicological Sciences 40（3）: 295-307, 2015】
General Considerations in Ocular Toxicity Risk Assessment
from the Toxicologists' Viewpoints ／大竹誠司、 他【Mutation Research 780-781: 2-17, 2015】
Evaluation of the repeated-dose liver and gastrointestinal tract
micronucleus assays with 22 chemicals using young adultrats: Summary of the collaborative study by the Collaborative
Study Group for the Micronucleus Test (CSGMT)/TheJapanese Environmental Mutagen Society (JEMS) ‒ Mammalian
Mutagenicity Study Group (MMS) ／濵田修一、他【Mutation Research 780-781 : 18-24, 2015】
Evaluation of a repeated dose liver micronucleus assay
in rats treated with two genotoxic hepatocarcinogens,dimethylnitrosamine and 2-acetylaminoﬂuorene: The possibilityof integrating micronucleus tests with multiple tissues into a
repeated dose general toxicity study ／高島理恵、他【Mutation Research 780-781 : 64-70, 2015】
Micronucleus induction in rat liver and bone marrow by
acute vs.repeat dose of the genotoxic hepatocarcinogenmonocrotaline ／高島理恵、 他【Mutation Research 783 : 13-18, 2015】
Recommended protocols for the liver micronucleus test:
report of the IWGT working group ／宇野芳文（田辺三菱製薬安全性研究所）、 濵田修一、 他【Mutation Research 783 : 19-22, 2015】
Micronucleus test in rodent tissues other liver or
erythrocytes: Report of the IWGT working group ／宇野芳文（田辺三菱製薬安全性研究所）、 濵田修一、 他【Mutation Research 786-788: 144-150, 2015】
Results of the international validation of the in vivo rodent
alkaline comet assay for the detection of genotoxic carcinogens:individual data for 1,2-dibromoethane, p-anisidine, ando-anthranilic acid in the 2nd step of the 4th phase validation
study under the JaCVAM initiative ／高沢博修、他【Mutation Research 786-788 : 45-76, 2015】
JaCVAM-organized international validation study of the in vivo
rodent alkaline comet assay for the detection of genotoxic
carcinogens: II. Summary of deﬁnitive validaiton study results ／宇野芳文（田辺三菱製薬安全性研究所）、高沢博修、他【毒性質問箱 17 : 62-70, 2015】
一般毒性試験における遺伝毒性評価：組込み試験の可能性と課題／濵田修一

ナレッジサービス

当社では、GLP施行当初から、GLP適合受託研究施設として in vivo
及び in vitro の毒性試験、遺伝毒性試験、安全性薬理試験、薬効薬
理試験、TK/PK分析試験及び薬物動態試験を実施しています。また、ご要望に応じて報告書の作成支援（翻訳等）や各種実験手技教育等も行ってきました。
この度、多種多様なご要望にすぐにお応えできるように準備を整え「ナレッジサービス」と名付けて受託メニューに加えましたので、その内容を紹介します。長年の研究から培われた高い技術を有する研究者や専門技能認定を有する研究者が、お客様のご要望に応じて適切なサービスをご提案、ご提供します。右記以外の内容についてもお客様のニーズに柔軟に対応しますので、お気軽にお問い合わせください。

教育／研修

ヒト iPS 心筋を用いた実験

Ⅰ 病理

Ⅰ 試験受託・試験報告書作成

Ⅱ 動物実験手技

Ⅱ 実験インキュベータ、評価システムの販売

Ⅲ 眼科学的検査

Ⅲ オープンラボ： 試験計画から測定、

Ⅳ 遺伝毒性試験

データ解析までサポート

Ⅴ 生殖発生毒性試験
Ⅵ GLP 及び信頼性に関するサービス

レンタルラボサービス
・ 動物種：ミニブタ・ 技術サポート：飼育・観察、採血、

メディカルライティング
Ⅰ CTD 第 2 部の翻訳、QC、作成支援
Ⅱ 治験薬概要書の翻訳、QC、作成支援

各種検査等（原稿執筆／高橋 要 E-mail:Takahashi.Kaname@mm.medience.co.jp）

11 非臨床 News

Topics

2

再生医療のためのサル心筋梗塞モデル

心不全の治療には、様々な治療薬が用いられているものの、病態の進行を完全に抑制したり、あるいは完全治癒させる治療法は心移植術以外に存在せず、より有用な心不全治療薬の開発が望まれています。また、心筋梗塞の治療は、急性期におけるカテーテ
ル法や、再狭窄予防の薬物治療がこれまで主な役割を果たしていました。現在では、これらに加えてES細胞、iPS細胞などを用いた再生医療も盛んに研究が行われています。心不全、心筋梗塞といった病態の治療薬のスクリーニング、治療方法の確立などのためには、心筋梗塞の病態に陥った非ヒト動物モデルが有用であり、当社でもこれまでラットやウサギの心筋梗塞モデルを用いた評価を実【シリウスレッド染色】
赤色部が線維化領域

施してきました。今回、更に人により近いモデルでの評価を実施で【HE 染色（高倍率）】
白点線より上位部分が線維化領域

きるよう新たにカニクイザルを用いた虚血再灌流モデルを立ち上げました。また、マイクロミニピッグを用いた心筋梗塞モデルも検討を予定しており、引き続きお客様の様々な要望にお応えできるよう
受託メニューを充実させていきたいと考えております。
（原稿執筆／佐々木 一暁 E-mail:Sasaki.Kazuaki@mr. medience.co.jp）

Topics3

再生医療等製品 GLP 適合性追加調査

再生医療等製品GLP適合性追加調査
熊本研究所では、2016年2月25-26日に再生医療等製品GLPの適合性調査を受け、現在認可待ちです。
当社は、新区分での1) in vitro 毒性試験、2) in vivo 毒性試験(一般
毒性試験、動物を用いた造腫瘍性試験)、3)その他の試験である動物を用いない造腫瘍性試験(軟寒天コロニー形成試験)の全てをGLP適用で実施可能です。今後もお客様のニーズにお応えすべく、実施
体制の整備に努めてまいります。
（原稿執筆／張 文 E-mail:cho.fumi@ma.medience.co.jp）

信頼性保証部門責任者の交代
2015年12月11日に、鹿島研究所と熊本研究所の信頼性保証部門
責任者が交代しました。

熊本信頼性保証グループのメンバー
左から竹下、戌亥、松村、溝口（現、鹿島研）研究員、右端が張グループリーダー

両責任者ともに米国におけるQA専門家団体のRQAP-GLP資格取得者であり、QAUは新体制で2016年をスタートしました。女性ならではの細やかさとグローバルな視点で両場所の品質保証をサポート

鹿島信頼性保証部門責任者

し、お客様に安心して試験をご依頼いただける品質と信頼性を確保するように努力していく所存です。今後とも、ご指導ご鞭撻のほど宜

熊本信頼性保証部門責任者

いしまる

てるみ

石丸 照美
（右写真）
ちょう

張

ふみ

文

しくお願い申し上げます。
（原稿執筆／石丸照美 E-mail:ishimaru.terumi@mh.medience.co.jp）

創薬支援事業本部◆試験研究センター 鹿島研究所〒314-0255 茨城県神栖市砂山 14 番地１☎ 0479-46-2871 ＦＡＸ 0479-46-2874◆試験研究センター 熊本研究所〒869-0425 熊本県宇土市栗崎町 1285 番地☎ 0964-23-5111 ＦＡＸ 0964-23-5122【関東】創薬第１営業部 第１グループ 〒101-8517 東京都千代田区内神田一丁目13番4号 THE KAITEKI ビル ☎ 03-5577-0807 ＦＡＸ 03-5577-0857【関西】創薬第１営業部 第２グループ 〒541-0044 大阪市中央区伏見町四丁目 1 番 1 号

http://www.medience.co.jp/
非臨床 News 12株式会社 L S I メディエンス☎ 06-6204-8411 ＦＡＸ 06-6204-8716
非臨床 News 第 6 号 2016 年 3 月発行