142

飼料研究報告 Vol. 37 (2012)

技術レポート

1 飼料中のメラミンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による定量法の共同試験
大島 慎司 *
Collaborative Study of Melamine in Feeds by LC-MS/MSShinji OSHIMA *( *Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fertilizer and Feed Inspection Department(Now Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries of Japan))1緒

言

食品及び飼料中のメラミンの基準値については，コーデックス規格として 2.5 mg/kg が採択されている．また国内における飼料中の基準値は，「尿素を除く飼料（飼料原料を含む．）」について 2.5mg/kg となっている 2)．
そのため，当センターにおいて，飼料中のメラミンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による定量法 1)を開発したところであるが，更に今回，共通試料を用いた共同試験を行ったので，その結果を報告する．

22.1

実験方法分析試料
市販の成鶏飼育用配合飼料，魚粉及び脱脂粉乳をそれぞれ 1 mm の網ふるいを通過するまで粉砕し，供試試料とした．なお，試験に用いた成鶏飼育用配合飼料の配合割合を Table 1 に示した．
Table 1Formula feedtypeFor layer*Composition of the formula feed

Proportion(%)
Grains61
Oil seed meal
22Brans
3
Animal by-products
2Others
12
Ingredient types

Ingredients
Corn, Milo, Polished rice
Soybean meal, Corn gluten meal, Rapeseed meal
Corn gluten feed
Fish meal
Calcium carbonate, Animal fat, Calcium phosphate, Salt,Paprika extract, Enzyme processed copra meal, Silicic acid,Feed additives

独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部，現
水産安全管理課

農林水産省消費・安全局畜

飼料中のメラミンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による定量法の共同試験

2.2143

定量方法
2.1 で調製した各試料について飼料分析基準 3) 第 7 章 7 により 2 点併行分析を行った．
なお，メラミンの定量値は，mg/kg 単位で有効数字 4 桁目を四捨五入し，有効数字 3 桁とした．

3

結果及び考察成鶏飼育用配合飼料にメラミンとして 0.4 mg/kg 相当量（1 mL 中に 4 µg を含有する標準液 0.1 mL添加），魚粉及び脱脂粉乳にメラミンとして 1 mg/kg 相当量（1 mL 中に 10 µg を含有する標準液 0.1mL 添加）を添加した試料を用い，財団法人日本食品分析センター彩都研究所，協同飼料株式会社
研究所，日本ハム株式会社中央研究所，日本ウォーターズ株式会社，独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部，同仙台センター，同名古屋センター，同神戸センター及び同福岡センターの 9 試験室において共同試験を実施した．結果の解析については，IUPAC のプロトコー
ル 4)に従い，Cochran 検定，外れ値 1 個の Grubbs 検定及び外れ値 2 個の Grubbs 検定を行い，平均回収率，繰返し精度（RSDr）及び室間再現精度（RSDR）を算出した．得られた RSDR から，修正 Horwitz
式を用いて HorRat を求めた．
その結果を Table 2 に示した．成鶏飼育用配合飼料の平均回収率は 97.1 %，その繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 4.2 %及び 6.3 %であり，HorRatは 0.34 であった．魚粉では平均回収率は 97.8 %，その繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr及び RSDR として 3.9 %及び 7.0 %であり，HorRat は 0.44 であった．脱脂粉乳では平均回収率は 99.3 %，その繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 4.7 %及び 6.4 %であり，HorRatは 0.40 であった．
参考のため，各試験室で使用した液体クロマトグラフタンデム型質量分析計の機種等を Table 3に示した．

144

飼料研究報告 Vol. 37 (2012)

Table 2Lab. No.

Collaborative study for melamine

Formula feed for layer(mg/kg)123456789
Spiked level (mg/kg)a)Mean value (mg/kg)
Recovery a) (%)
RSDr b) (%)
RSDR c) (%)
PRSDR d) (%)
HorRat

0.346
0.366
0.399
0.385
0.362
0.410
0.376
0.398
0.372

0.346
0.399
0.405
0.395
0.404
0.432
0.375
0.422
0.401
0.4
0.389
97.14.2
6.3
18
0.34

Feed types
Fish meal(mg/kg)
0.851
0.944
0.992
1.05
0.957
1.13
0.905
1.06
0.969

0.909
0.955
0.982
0.937
0.980
1.04
0.932
1.05
0.956
1.0
0.978
97.8
3.9
7.0
16
0.44

Dried skim milk
(mg/kg)
0.915
0.948
0.987
1.03
1.01
0.998
1.04
1.07
1.01

0.830
1.04
1.01
0.926
1.06
1.02
1.01
1.05
0.915
1.0
0.993
99.3
4.7
6.4
160.40a)n=18b)

Relative standard deviations of repeatability within laboratoryc)

Relative standard deviations of reproducibility between laboratoriesd)

Predicted relative standard deviations of reproducibility between laboratories calculated from themodified Horwitz equation

飼料中のメラミンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による定量法の共同試験

145

Table 3Instruments used in the collaborative study
LC column
Lab. No.
LCMS/MS
(i.d.×length, particle size)
WatersWatersMERCK SeQuant ZIC-HILIC
1Alliance 2695
Micromass Quattro micro API (2.1×100 mm, 3.5 µm)
Agilent Technologies
Agilent Technologies
MERCK SeQuant ZIC-HILIC
21200 series
6410 Triple Quad LC/MS(2.1×150 mm, 5 µm)
WatersWatersMERCK SeQuant ZIC-HILIC
3ACQUITY UPLC System ACQUITY TQ Detector(2.1×100 mm, 3.5 µm)
WatersWatersMERCK SeQuant ZIC-HILIC
4ACQUITY UPLC System ACQUITY TQ Detector(2.1×150 mm, 5 µm)
WatersWatersMERCK SeQuant ZIC-HILIC
5ACQUITY UPLC System ACQUITY TQ Detector(2.1×150 mm, 5 µm)
WatersWatersMERCK SeQuant ZIC-HILIC
6Alliance 2695
Quattro Premier XE(2.1×150 mm, 5 µm)
Agilent Technologies
Agilent Technologies
Agilent Technologies ZORBAX RX-SIL
71200 series
6410 Triple Quad LC/MS(2.1×150 mm, 5 µm)
WatersWatersMERCK SeQuant ZIC-HILIC
8ACQUITY UPLC System ACQUITY TQ Detector(2.1×150 mm, 5 µm)
Agilent Technologies
Applied Biosystems
Waters Atlantis HILIC Silica
91200 series
API 3000(2.1×150 mm, 3 µm)

4まとめ

飼料中のメラミンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による定量法の繰返し精度及び室間再現精度を確認するため，成鶏飼育用配合飼料，魚粉及び脱脂粉乳を用いて，9 試験室において，共同試験を実施した．その結果，成鶏飼育用配合飼料の平均回収率は 97.1 %，その繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 4.2 %及び 6.3 %であり，HorRatは 0.34 であった．魚粉では平均回収率は 97.8 %，その繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr及び RSDR として 3.9 %及び 7.0 %であり，HorRat は 0.44 であった．脱脂粉乳では平均回収率は 99.3 %，その繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 4.7 %及び 6.4 %であり，HorRatは 0.40 であった．

謝辞

共同試験に参加していただいた財団法人日本食品分析センター彩都研究所，協同飼料株式会社研究所，日本ハム株式会社中央研究所，日本ウォーターズ株式会社における関係者各位に感謝の意を表します．

文1)

献大島慎司：飼料中のメラミンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による定量法，飼料研究報告，36，1-12 (2011)．

2)

農林水産省消費・安全局長通知：「飼料の有害物質の指導基準」の一部改正について，平成 24
年 4 月 9 日，23 消安 6540 号 (2012)．

146

飼料研究報告 Vol. 37 (2012)3)農林水産省消費・安全局長通知：飼料分析基準の制定について，平成 20 年 4 月 1 日，19 消安
第 14729 号 (2008)．

4)Horwitz, W., Protocol for Design, Conduct and Interpretation of Method - Performance Studies, Pure &appl. Chem., 67(2), 331-343 (1995).