原著

非アルコール性脂肪肝炎発症モデルラットの肝組織所見に及ぼす食餌性コレステロールの影響
大曲

勝久 1 ）・服部
鳥居

美紀 1 ）・後藤

紫方 1 ）・坂元

春菜 1 ）・市村真祐子 2 ）・田辺

藍 1 ）・

賢一 1 ）

Dietary Cholesterol Affecting Liver Histology in Rat Modelfor Nonalcoholic Steatohepatitis
Katsuhisa OMAGARI 1 ）, Miki HATTORI 1 ）, Shiho GOTO 1 ）, Ai SAKAMOTO 1 ）,Haruna TORII 1 ）, Mayuko ICHIMURA 2 ）and Kenichi TANABE 1 ）要旨2007年度から2014年度に長崎県立大学栄養健康学科臨床栄養学研究室で行ったラットを用いた飼育実験において、どの飼育条件が非アルコール性脂肪肝炎（NASH）の病理組織学的所見に関連しているかを検討した。対象ラット129匹において、SHR/NDmcr-cpラットはSDラットに比べて、また、コレステロールおよびコール酸を添加した餌および脂質の由来がパーム油あるいはsoybeans
oilである餌を与えた場合に、NASHが進行していた。さらに、飼育開始週齢が若いほど、餌の組成のうちタンパク質や炭水化物の割合が低いほど、脂質の割合やF/C比が高いほど、NASHが進行していた。重回帰分析の結果、餌へのコレステロールの添加は肝組織学的進行度と関連しており、その程度も強かった。このことより、食餌性コレステロールの摂取は肝線維化を伴うNASHの発症・進展に関与していることが示唆された。今後は、食餌性コレステロールのNASHの発症・進展に及ぼす作用機序および、同時に添加したコール酸の関与を検討する必要がある。
キーワード：非アルコール性脂肪肝炎、ラット、肝組織像、食餌性コレステロール、飼育条件

1 ．緒

れない非アルコール性脂肪肝（nonalcoholic fatty

言liver : NAFL）に大別される。NAFLD患者の多

非 ア ル コ ー ル 性 脂 肪 性 肝 疾 患（nonalcoholic

くは、肥満や糖尿病、高インスリン血症、脂質異fatty liver disease : NAFLD）は、飲酒歴がなく常症などを合併しており、食生活の欧米化や運動（ エ タ ノ ー ル 換 算 で 男 性30g/日、 女 性20g/日 未

不足、肥満人口の増加に伴いわが国でもNAFLD満）、ウィルス性肝炎などの原因が明らかなものやNASH患者が増加してきている。わが国におけを除外した脂肪沈着を伴う肝疾患の総称であり、るNAFLD患者の有病率は報告によりばらつきは

病理組織学的に大滴性の肝脂肪変性を基本としあるものの（ 6 ～ 35%）、20 ～ 30%程度と推測さて、肝細胞障害（風船様腫大）や肝線維化がみられており、NAFLDの約10%はNASHに進展する

れ る 非 ア ル コ ー ル 性 脂 肪 肝 炎（nonalcoholicとされている1 , 2 ）。NASHへの進展機序について

steatohepatitis : NASH）と、病態の進行がみら

は、肝脂肪変性をfirst hitとして、酸化ストレス

所



属：
長崎県立大学看護栄養学部栄養健康学科
2）
長崎県立大学大学院人間健康科学研究科栄養科学専攻
1）
Department of Nutrition, Faculty of Nursing and Nutrition, University of  Nagasaki
2）
Division of Nutritional Sciences, Graduate School of Human Health  Sciences, University of Nagasaki
1）― 23 ―

長崎県立大学

看護栄養学部紀要やアディポサイトカイン、インスリン抵抗性、小第14巻 （2015）

2 ．対象と方法

胞体ストレス、腸内細菌叢、鉄などのsecond hit

1 ）対象が加わって壊死炎症性変化をきたしNASHとなる
3）が、最

長崎県立大学看護栄養学部栄養健康学科臨床栄

近では複数の因子が並行してNASHの発症・進展

養学研究室において2007年度から2014年度に行っに関与するというmultiple parallel hits hypothesis

たラットを用いた飼育実験のうち、普通食や高脂というtwo hits theoryが提唱されてきた4）が注目されている 。このように、肝硬変や肝癌

肪食、高脂肪・高コレステロール食を摂取させ、に進展しうるNASHの病態にはまだ不明な点も多肝臓の組織学的検討を行ったラット129匹（全てく、その病態の解明や治療法の確立が急がれてい雄性）を対象とした。なお、全ての実験は「実験る。

動物の飼育および保管並びに苦痛の軽減に関する

NASHの発症・進展のメカニズム解明のために、基準」（平成18年環境省告示第88号）に則り、「県遺伝子変異を伴うものやコリン・メチオニン欠乏

立長崎シーボルト大学動物実験委員会」あるいは

食のような特別に調製した餌を与えたものなど、「長崎県立大学動物実験委員会」の承認を得て、これまで多くの動物モデルが作成されている。し「県立長崎シーボルト大学動物実験規程」あるい

かし、肝硬変や肝癌の発症に大きく関与する高度は「長崎県立大学動物実験規程」および「県立長

5, 6）

。わ

崎シーボルト大学動物実験室利用細則」あるいは

れわれの研究室（長崎県立大学看護栄養学部栄養「長崎県立大学動物実験室利用細則」に即して行

健康学科臨床栄養学研究室）でも2007年度よりわれた。

な肝線維化を伴うNASHモデルは少ない

NASHに対する病態解明のためにラットを用いて2 ）方法検討を続けているが、レプチン受容体遺伝子にナンセンス変異を持ち、高体重、高血圧、高血糖、飼育したラットの種類、飼育開始時期（週齢）、

高インスリン血症、脂質異常症および脂肪肝を自飼 育 期間（ 週 ）、餌 の製 品、餌 の 組 成（ エネル

然 発 症 す る spontaneously-hypertensive/NIHギー比）（P : タンパク質の割合、F : 脂質の割合、

corpulent（SHR/NDmcr-cp） ラ ッ ト や 通 常 の

C : 炭水化物の割合、F/C比、コレステロール添加

Splague-Dawley（SD）ラットに高脂肪食（脂肪の有無、コール酸添加の有無）、餌の脂質の由来、

エネルギー比45 ～ 60%）を比較的長期間（15 ～

餌の総摂取量（g）、総摂取エネルギー量（kcal）、

43週間）与えても、軽度な肝線維化が認められる

1 日あたりの平均摂取エネルギー量（kcal/日）、

7-12）。しかし、これらのラットに飼育期間中の体重増加量（g）、1 日あたりの平均

高脂肪・高コレステロール食を与えると、比較的体重増加量（g/日）、肝組織検討時期（週齢）の短期間（ 9 ～ 18週間）で高度な肝線維化を伴う

データを集計し、これらが肝組織所見に及ぼす影に過ぎなかった

13, 14）。このことから、コレステ

響 に つ い て 検 討 を 加 え た。 肝 組 織 所 見 は、

ロールの摂取はNASHにおける肝線維化の進展に

Kleinerら が 提 唱 し たNASH Clinical Research

関与している可能性が示唆されたが、ラットの種

Network Scoring Systemに従ってスコア化した15）。

類や飼育開始週齢、飼育期間、餌の種類や組成がこ れ は、NASHに 特 徴 的 な 組 織 所 見 で あ る

各実験系で異なるため、これだけでは結論づける

steatosis（脂肪沈着：0 ～ 3 の 4 段階）、lobular

ことはできない。

inflammation（ 小 葉 内 炎 症：0 ～ 3 の 4 段 階 ）、

NASHを発症した

そ こ で、 本 研 究 で は、 ラ ッ ト の 飼 育 条 件 がhepatocytes ballooning（肝細胞の風船様腫大：0

NASHの発症・進展に及ぼす影響を明らかにする～ 2 の 3 段階）を表 1 に示す分類に従ってスコア

た め、 こ れ ま で に 臨 床 栄 養 学 研 究 室 で 行 っ た化し、NASHの程度を評価する方法である。さらNASHモデルを含むラットを用いた実験においに、 こ れ ら 3 カ テ ゴ リ ー を 合 わ せ てNAFLDて、どの飼育条件がNASHの病理組織学的所見にactivity score（NAS）とした。また、fibrosis（線関連しているかを検討した。

維化：0 ～ 4 の 5 段階）の評価も行った。なお、
組織標本の作成、染色および組織学的評価は富山― 24 ―

非アルコール性脂肪肝炎発症モデルラットの肝組織所見に及ぼす食餌性コレステロールの影響

表１

NASH Clinical Research Network Scoring System15）

Item
Steatosis

Lobular inflammation

Hepatocyte ballooning

Definition
Low- to medium-power evaluation of parenchymal involvement by steatosis<5%5% -33%>33% -66%>66%
Overall assessment of all inflammatory foci
No foci<2 foci per 200X field
2-4 foci per 200X field
4> foci per 200X fieldNone
Few balloon cells
Many cells/prominent ballooning
NAFLD activity score（NAS） Unweighted sum of the scores for the above three items
Fibrosis

None
Perisinusoidal or periportal
Mild, zone 3, perisinusoidal
Moderate, zone 3, perisinusoidal
Portal/periportal
Perisinusoidal and portal/periportal
Bridging fibrosis
Cirrhosis

Score/Code
0
1
2
3
0
1
2
3
0
1
2
Full score: 8
0
1
1A
1B
1C
2
3
4

大学大学院医学薬学研究部病理診断学講座 常山

ラットであり、他の22匹（17.1%）はSHR/NDmcr-

幸一准教授に依頼し、組織学的評価にあたって

cpラットであった。飼育開始時期（週齢）の平は、飼育条件を伏せた上で判定していただいた。

均値は6.6±0.2（ 3 ～ 13）週であり、飼育期間の平均値は19.6±1.0（ 9 ～ 43）週であった。摂取3 ）統計処理した餌の種類ごとのラットの個体数は、普通食が各項目の集計結果は平均値±標準誤差SE（最53匹（41.1%）（Resesarch diets D12450Bが21匹、小値～最大値）で示した。統計学的検討は統計解

AIN93Gが10匹、オリエンタル酵母工業MF飼料

析 ソ フ ト SPSS statistical package、version 22が22匹 ）、 高 脂 肪 食 が40匹（31.0 %）（Research（SPSS Inc、Chicago、IL、USA） を 使 用 し、 平

diets D12451が23匹、Research diets D12492

均値の差の検定には一元配置分散分析および多重が 7 匹、オリエンタル酵母工業MF飼料に脂肪と比較検定（Bonferroni法）を、相関関係の検定にコール酸を添加した餌が10匹）、高脂肪・高コレ

はSpearmanの順位相関係数を用いた。さらに、ステロール食が36匹（27.9%）（オリエンタル酵母

有意差がみられた項目については重回帰分析を行工 業MF飼 料 に 脂 肪 と コ レ ス テ ロ ー ル1.25 % とい、NAS、脂肪沈着、小葉内炎症、肝細胞の風コール酸を添加した餌が11匹、オリエンタル酵母

船様腫大および肝線維化の各項目に関与する因子

工業MF飼料に脂肪とコレステロール2.5%とコー（飼育条件）の検討をした。

ル酸を添加した餌が20匹、オリエンタル酵母工業

すべての検定において危険率 5 %未満（p<0.05）
をもって統計学的に有意差があるとみなした。

MF飼料に脂肪とコレステロール 5 %とコール酸を添加した餌が 5 匹）であった。F/C比の平均値
は1.1±0.1（0.1 ～ 3.0）であった。餌の脂質の由3 ．結来は、soybeans oilが10匹（7.8%）、lard soybeans

果oil が51匹（39.5 %）、 パ ー ム 油 が46 匹（35.7 %）1 ）対象ラットの特徴であった。

対象ラット129匹の種類、飼育開始週齢、飼育飼育期間中の餌の総摂取量の平均値は2928.5±

期間、餌の種類および餌の組成を表 2 に示す。

176.8（726.1 ～ 7243.4）gであり、摂取エネルギー

ラ ッ ト の 種 類 は、129匹 中107匹（82.9 %） はSD

量 の 平 均 値 は12729.5±723.7（3572.1 ～ 30946.6）― 25 ―

長崎県立大学

表２

看護栄養学部紀要

第14巻 （2015）

対象ラットの背景

実験年度

ラットの種類

2007
2007
2007
2008
2009
2009
2009
2009
2011
2012
2012
2012
2013
2013
2013
2013
2013
2013
2013
2013
2013
2014
2014

Splague-Dawley
Splague-Dawley
SHR/NDmcr-cp
SHR/NDmcr-cp
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
SHR/NDmcr-cp
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
Splague-Dawley
SHR/NDmcr-cp
Splague-Dawley
Splague-Dawley

ラット匹数 飼育開始週齢 飼育期間
（匹）
（週）
（週）
5
7
5
5
5
5
5
5
7
6
6
7
5
5
5
5
5
5
6
6
5
5
9

3
3
13
9
3
3
3
3
9
5
5
5
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9

43
43
15
25
22
38
22
38
25
17
17
17
9
9
9
9
18
18
18
18
9
9
9

餌の製品
Research diets D12450B
Research diets D12451
AIN93G
AIN93G
Research diets D12450B
Research diets D12450B
Research diets D12451
Research diets D12451
オリエンタル酵母工業 MF
Research diets D12450B
Research diets D12451
Research diets D12492
オリエンタル酵母工業 MF
オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪＋コレステロール
オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪＋コレステロール
オリエンタル酵母工業 MF
オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪＋コレステロール
オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪＋コレステロール
オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪＋コレステロール
オリエンタル酵母工業 MF
オリエンタル酵母工業 MF＋脂肪＋コレステロール

餌の組成（%）P*F*

C* コレステロール コール酸

20 10 70
20 45 35
20 16 64
20 16 64
20 10 70
20 10 70
20 45 35
20 45 35
26 13 61
20 10 70
20 45 35
20 60 20
26 13 61
12 59 29
12 58 30
12 57 31
26 13 61
12 59 29
12 58 30
12 57 3114.7 28.6 42.9
26 13 61
12 57 31

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1.25
2.5
0
0
1.25
2.5
5
0
2.5

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
2
2
0
2
2
2
2
0
2

*P: タンパク質、F: 脂質、C: 炭水化物

kcal、1 日の平均摂取エネルギー量の平均値は点以下でNASHではないと判定されたのは45匹

90.0±1.3（56.7 ～ 133.5）kcalであった。飼育期間（34.9%）であった。fibrosis（線維化）スコアの中のラットの体重増加量の平均値は331.2±18.2

平均値は0.8±0.1（スコア0が88匹、スコア1Aが（−92.5 ～ 815.6）g、1 日の平均体重増加量の平10匹、スコア 2 が10匹、スコア 3 が 9 匹、スコ

均値は2.4±0.1（−1.3 ～ 4.4）gであった。なお、

ア 4 が12匹）であった。

飼育期間中に体重減少をきたしたラットは、コレ
2 ）肝組織学的スコアと各飼育条件との関連

ステロール 5 %とコール酸を添加した高脂肪・高コレステロール食を与えたSHR/NDmcr-cp ラッ

肝組織学的スコアと各飼育条件との関連についト 2 匹であり、慢性的な下痢と摂食不良によるもての検討結果を表 3 に示す。なお、連続変数であのであった。

らわされる項目については相関係数も合わせて表屠殺後に肝臓を摘出し肝組織を検討した週齢の記した。

平 均 値 は 26.8±0.8（18 ～ 46） 週 で あ っ た。

SHR/NDmcr-cpラ ッ ト はSDラ ッ ト に 比 べ てKleiner ら のNASH Clinical Research Network

steatosis（ 脂 肪 沈 着 ）、hepatocytes ballooning

15）に基づく判定では、steatosis（脂（肝細胞の風船様腫大）やNASスコアが有意に高肪沈着）スコアの平均値は1.5±0.1（スコア 0 が値であった。また、飼育開始週齢が若いほど、餌34匹、スコア 1 が35匹、スコア 2 が19匹、スコアの組成のうちタンパク質や炭水化物の割合が低い

3 が41匹）、lobular inflammation（小葉内炎症）

ほど、脂質の割合やF/C比が高いほど、飼育期間

スコアの平均値は1.1±0.1（スコア 0 が53匹、ス中および 1 日の平均摂取エネルギー量が少ないほ

コア 1 が37匹、スコア 2 が18匹、スコア 3 が21

ど、NASをはじめとする組織学的各スコアが有匹）、hepatocytes ballooning（肝細胞の風船様腫意に高かった。AIN93G飼料とオリエンタル酵母大）スコアの平均値は0.8±0.1（スコア0が53匹、

工業MF飼料は他の製品よりも組織学的各スコア

スコア 1 が49匹、スコア 2 が27匹）であり、このが有意に高かった。コレステロールおよびコール

3 カテゴリーを合計したNASスコアの平均値は酸を添加した餌を与えた場合は、添加していない

3.3±0.3（ 0 ～ 8 ）であった。NASスコアが 5 点

餌を与えた場合に比べて全ての組織学的スコアで以上でNASHと判定されたのは63匹（48.8%）、3

有意に高値であった。脂質の由来がパーム油であ～ 4 点で判定保留となったのは21匹（16.3%）、2

る餌では全ての組織学的スコアが、soybeans oil

Scoring System― 26 ―

非アルコール性脂肪肝炎発症モデルラットの肝組織所見に及ぼす食餌性コレステロールの影響

表３

肝組織学的スコアと各飼育条件との関連項目

steatosis（脂肪沈着）

lobular inflammation hepatocytes ballooning（小葉内炎症）（肝細胞の風船様腫大）NAS スコア

fibrosis（線維化）

飼育したラットの種類<0.002<0.218<0.006<0.010<0.877

飼育開始時期（週齢）<0.001（-0.351）<0.001（-0.340）<0.001（-0.304）<0.001（-0.325）<0.001（-0.324）

飼育期間（週）<0.052（-0.172）<0.003（-0.263）<0.310（-0.090）<0.181（-0.119）<0.001（-0.309）

餌の製品<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

P: タンパク質の割合<0.001（-0.599）<0.001（-0.610）<0.001（-0.492）<0.001（-0.652）<0.001（-0.693）

F: 脂質の割合<0.001（-0.348）<0.001（-0.444）<0.001（-0.363）<0.001（-0.464）<0.001（-0.413）

C: 炭水化物の割合<0.001（-0.279）<0.001（-0.411）<0.001（-0.312）<0.001（-0.425）<0.001（-0.397）

F/C 比<0.001（-0.360）<0.001（-0.454）<0.001（-0.374）<0.001（-0.370）<0.001（-0.412）

コレステロール添加の有無<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

コール酸添加の有無<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

餌の脂質の由来<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

餌の総摂取量（g）<0.015（-0.230）<0.001（-0.383）<0.064（-0.176）<0.035（-0.199）<0.001（-0.441）

総摂取エネルギー量（kcal）<0.370（-0.086）<0.016（-0.228）<0.851（-0.018）<0.001（-0.334）<0.754（-0.030）

１日あたりの平均摂取エネルギー量（kcal/ 日） <0.371（-0.085）<0.442（-0.073）<0.173（-0.130）<0.449（-0.072）<0.064（-0.176）

飼育期間中の体重増加量（g）<0.001（-0.326）<0.001（-0.431）<0.003（-0.257）<0.001（-0.392）<0.001（-0.584）

１日あたりの平均体重増加量（g/ 日）<0.001（-0.363）<0.001（-0.370）<0.001（-0.290）<0.001（-0.437）<0.001（-0.617）

肝組織検討時期（週齢）<0.355（-0.082）<0.017（-0.210）<0.620（-0.044）<0.042（-0.179）<0.002（-0.276）

餌の組成（エネルギー比）

数字は有意確率（p）で、カッコ内は相関係数（r）を表す。

である餌はfibrosis（線維化）を除く各組織学的法で行い共線性の診断の結果、共線性の可能性がスコアで他の由来の餌よりも有意に高かった。餌あるものを除外して、再び解析を行った。

の総摂取量が少ないほどhepatocytes ballooning

その結果、餌へのコレステロールの添加は、（肝細胞の風船様腫大）を除く各組織学的スコア

steatosis（脂肪沈着）、lobular inflammation（小が有意に高かった。総摂取エネルギー量が少ない葉内炎症）、hepatocytes ballooning（肝細胞の風ほどlobular inflammation（小葉内炎症）やNAS

船様腫大）、NASスコア、およびfibrosis（線維化）

スコアが高かった。飼育期間が短いほど、また、の全てのスコアの高値に関与していた。また、

肝組織検討時期が若いほど、lobular inflammation

SHR/NDmcr-cpラットはsteatosis（脂肪沈着）お（小葉内炎症）やfibrosis（線維化）スコアが高よびNASスコアの高値に関与しており、脂質のかった。 1 日の平均摂取エネルギー量は全ての組

由来がsoybeans oilの餌はhepatocytes ballooning

織学的スコアで有意な相関はみられなかった。

（肝細胞の風船様腫大）スコアの高値に関与してい た。steatosis（ 脂 肪 沈 着 ）、NASス コ ア、3 ）各組織学的スコアに関与する飼育条件の検討

hepatocytes ballooning（ 肝 細 胞 の 風 船 様 腫 大 ）上記の検討より有意差が認められた項目についの各項目においては、標準偏回帰係数（β）の結て重回帰分析を行い、各組織学的スコアに関与す

果より、餌へのコレステロールの添加が最も強くる因子（飼育条件）を検討した。方法は強制投入関与していた（表４）。

表４

重回帰分析による各組織学的スコアに関与する飼育条件

項目
餌の組成：コレステロール添加の有無
飼育したラットの種類

steatosis（脂肪沈着）

lobular inflammation hepatocytes ballooning（小葉内炎症）（肝細胞の風船様腫大）NAS スコア

fibrosis（線維化）

p<0.001p<0.001p<0.001p<0.001p<0.001

β=0.960

β=0.986

β=0.813β=0.996β=0.937p<0.001p=0.007β=0.406

β=0.213

餌の脂質の由来

p=0.014β=0.384

有意差のある項目のみを示す。各項目の上段 p は有意確率、下段βは標準偏回帰係数を表す。

― 27 ―

長崎県立大学

4 ．考

看護栄養学部紀要

第14巻 （2015）を促進することが報告されている19）。今回の結果

察はこれらの報告に符合していた。われわれのこれ

NASHの発症・進展のメカニズムを検討するたまでの検討では、高脂肪・高コレステロール食のめには適切な動物モデルの確立が重要であるが、投与により線維化を伴うNASHを発症したラット

齧歯類に対する高脂肪食の負荷は肝脂肪化や炎症

肝臓ではコレステロールおよびトリグリセリドなを数週間で発症させるものの、肝線維化を発症す

どの脂肪酸代謝物が顕著に蓄積しており、ミトコ

るまでには 3 ～ 6 か月程の期間を要し、しかもそ

ンドリアにおけるコレステロールの蓄積もみられ

5, 6）。しかし、最近にた。肝臓での脂肪酸β酸化能の低下やトリグリセ

なって従来の高脂肪食にコレステロールを加えた

リドおよびコレステロール排出能の低下、胆汁酸

餌を与えることによってより明らかなNASHの組

合成の亢進および胆汁酸抱合・排出の低下、肝臓織像を示す動物モデルが報告されるようになっての線維化に関連するコラーゲンタンパク質をコーの線維化は軽度に留まる

16）

きた 。われわれの研究室でも、ラットに高脂ドする遺伝子の発現量の増加を確認している14）。

肪・高コレステロール食を与えると、9 ～ 18週間

今回実験に用いたラットは、ウマやシカなどとという比較的短期間で高度な肝線維化を伴う同様に胆嚢を持たないため、肝臓で生成された肝NASHを発症することを見出した

13, 14）。しかし、胆汁（コール酸とケノデオキシコール酸）は直接これがコレステロールを加えたことによる効果な

十二指腸に分泌される。胆汁酸は脂質だけでなくのか、ラットの種類や飼育開始時期、餌の製品、コレステロールの吸収にも必要であり、コール酸

餌の組成（エネルギー比）、餌の脂質の由来、餌が増加すればコレステロールの吸収が促進されるの総摂取量、摂取エネルギー量、体重増加量、肝ことが分かっている20）。今回、食餌に含まれる高組織検討時期などの影響を伴った結果なのかを検

濃度コレステロールをはじめとした脂溶性物質の討する必要があると考えた。そのためには飼育条

小腸における吸収を促進するために食餌中にコー

件毎に実験系を組みその影響を 1 つ 1 つ確かめて

ル酸を添加したが21）、コール酸自体に細胞障害性いく必要があるが、われわれがこれまで行ってきがあることが報告されており22）、さらに、コールた動物実験のうち、介入目的の食物あるいは栄養

酸は線維化関連遺伝子であるコラーゲンファミ

素を混餌していないコントロール群および高脂肪リーの発現を特異的に増強させることが報告されあるいは高脂肪・高コレステロール食を与えたている23）。今回の重回帰分析の結果ではコール酸

ラットの実験結果をretrospectiveに検証することの肝組織学的スコアへの明らかな関連はみられなも、飼育条件によるNASH発症の程度の検討に値かったが、コール酸の添加はNASH発症におけるするのではないかと考え、本研究を行った。当然

食事性コレステロールの直接的な関与の判断を困のことながら、各飼育条件を均等に配置していな難にすると考えられるため、今後コール酸の添加

いため、統計学的に十分な意義があるかどうかは量の違いによる肝組織学的スコアへの影響を検討不明と言わざるを得ない。

する予定である。

その結果、肝組織学的スコアと各飼育条件とのヒトにおいては、コレステロールは体内で合成

あいだに様々な関連がみられたが、重回帰分析のできる脂質であり、12 ～ 13mg/kg体重/日ほど産結果、餌へのコレステロールの添加は全ての肝組

生されている。また、食事により摂取されたコレ

織学的スコアと関連しており、ラットの種類や餌

ステロールはその40 ～ 60%が吸収されるが、個の脂質の由来と比較してその程度も強かった。ヒ

人差が大きく、遺伝的背景や代謝状態に影響されトにおいても、NAFLD患者の栄養素摂取量の調る。食事により摂取されるコレステロール（食事査結果より、食事性コレステロールの過剰摂取が性コレステロール）は体内で作られるコレステ

肝細胞内における脂肪酸合成に影響を与えている

ロールの1/3 ～ 1/7を占めるに過ぎず、コレステ可能性が指摘されている

17, 18）。また、マウスでのロールを多く摂取すると肝臓でのコレステロール検討においても、食餌性コレステロールは肝星細合成は減少し、逆に少なく摂取するとコレステ胞での遊離コレステロール蓄積を介して肝線維化

ロール合成は増加し、末梢への補給が一定に保た― 28 ―

非アルコール性脂肪肝炎発症モデルラットの肝組織所見に及ぼす食餌性コレステロールの影響れるようにフィードバック機構が働く。したがっ1648, 2008.
7 ）Omagari K, Kato S, Tsuneyama K, Inohara C,
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8 ）Kato S, Omagari K, Tsuneyama K, Fukazawa E,
Tsukuda H, Inohara C, Kuroda Y, Shiraishi K and  
Mune M: A possible rat model for nonalcoholic steatohepatitis: histological findings in SHR/Dmcr-cp
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9 ）Omagari K, Kato S, Tsuneyama K, Hatta H, Sato
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Olive leaf extract prevents spontaneous occurrenceof non-alcoholic steatohepatitis in SHR/NDmcr-cp
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10）Omagari K, Kato S, Tsuneyama K, Hatta H,
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11）Ichimura M, Kato S, Tsuneyama K, Matsutake S,
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12）Omagari K, Yoshikawa C, Inoue S, Tanaka Y,
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13）Ichimura M, Hatanaka M, Tsuneyama K, Kato S
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14）Ichimura M, Kawase M, Masuzumi M, Sakaki M,
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15）Kleiner DE, Brunt EM, Van Natta M, Behling C,
Contos MJ, Cummings OW, Ferrell LD, Liu Y-C,
Torbenson MS, Unalp-Arida A, Yeh M, McCulloughて、食事性コレステロール摂取量が直接血中総コ
レステロール値に反映されるわけではない 。このため、厚生労働省は2015年 4 月改訂の「日本人の食事摂取基準（2015年版）」で、これまで成人
は男750mg、女600mgを上限としていた食事からのコレステロールの目標量を撤廃し、日本動脈硬化学会もこれを追認した24, 25）。このように、食事性コレステロールの摂取量がヒトの健康に及ぼす影響については限定的であるとする考え方が主流を占めつつあるが、NASHへの影響についてはまだ十分に検討されていない。ラットでの結果がそのままヒトのNASH発症・進展に当てはまるかど
うかを、今後十分に検討していく必要がある。

謝

辞

本研究に際し、肝臓の組織学的評価を行ってい
ただき、終始懇切丁寧なアドバイスをいただきました常山幸一先生（前・富山大学大学院医学薬学研究部病理診断学講座准教授、現・徳島大学大学
院医歯薬学研究部疾患病理学分野教授）に心より感謝申し上げます。

引用文献1 ）林 紀夫，考藤達哉：非アルコール性脂肪性肝疾
患，小川 聡総編集，内科学書（改訂第 8 版），Vol
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イドラインを中心に～，平成27年度日本肝臓学会前期教育講演会テキスト，7-15，2015．
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5 ）Ito M, Suzuki J, Tsujioka S, Sasaki M, Gomori A,
Shirakura T, Hirose H, Ito M, Ishihara A, Iwaasa H
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24）厚生労働省：日本人の食事摂取基準（2015年版）の概要，http://www.mhlw.go.jp/file/04-Houdouhappyou-10904750-Kenkoukyoku-Gantaisakukenkouzoushinka/0000041955.pdf（2015年 7 月 7 日閲覧）
25）日本動脈硬化学会：コレステロール摂取量に関する 声 明，http://www.jathero.org/outline/cholesterol_150501.html（2015年 7 月 7 日閲覧）