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杜仲茶の抗酸化性
Antioxidant activity of extracts from Tu-Chung（Eucommia ulmoides, Oliv.）leaves
角橋明美＊，神田知子＊＊，安藤真美＊＊＊，桑守正範＊＊＊＊，人見英里＊＃
Akemi KADOHASHI＊，Tomoko KODA＊＊，Mami ANDO＊＊＊，Masanori KUWAMORI＊＊＊＊，and Eri HITOMI＊＃
Abstract:
To clarify the food functions of Tu-Chung (Eucommia ulmoides, Oliv.) leaves, their antioxidative activity was examined.
The antioxidative activities of hot-water extracts of roasted and unroasted leaves, geniposidic acid and a n-hexane extract ofused leaves were evaluated on the basis of several lipid peroxidation model systems. Hot-water extracts of both roasted andunroasted leaves showed high activities in the AAPH radical-scavenging method, inhibition of methyl linoleate oxidation andinhibition of the rat microsome oxidation. A hot-water extract of roasted leaves effectively scavenged an intracellular reactive
oxygen species induced by 4-hydroxy 2-nonenal. Geniposidic acid showed an antioxidative activity only in a microsome
system and an intracellular reactive oxygen species scavenging system. An n-hexane extract of used leaves showed no activity.
These results suggest that hot-water extracts of Tu-Chung leaves could possibly act as an antioxidant.
キーワード：杜仲茶，抗酸化性
Keywords：Tu-Chung, Eucommia ulmoides，antioxidant activity

杜仲とは，中国四川省原産のトチュウ科トチュウ属

された特定保健用食品も発売されている。また，杜仲

トチュウという 一科一属一種 の落葉喬木（Eucommia

茶水抽出エキスにより，肝臓において蓄積されたコレ

ulmoides, Oliv）であり，葉，根，種子・種子殻，樹皮

ステロール及び中性脂肪を減少させる効果5）について

はトチュウゴムというイソプレン単位が重合した疎水も報告されている。

性の高い物質を含んでいる1）。樹皮の部分は生薬とし本研究では杜仲茶の機能性の一つと考えられる抗酸ての歴史が古く，その薬効は二千年以上も前から長期化能に着目し，
焙煎前および焙煎後の茶葉熱水浸出液，

1）にわたり利用されてきた 。トチュウが日本に導入さ茶葉熱水浸出液を凍結乾燥した茶葉熱水抽出物，固有

れたのは大正時代であるが，現在では国内各地で栽培

成分のゲニポシド酸，熱水抽出後杜仲茶葉のヘキサン

さ れ て お り， そ の葉が健康茶として利用され て い

抽出物を用いて，５種のモデル系において抗酸化能の1）検討を行った。

る 。
杜仲の葉は，樹皮と異なり医薬品ではなく食品に分類されるが，杜仲の樹皮と類似した成分を含むことが報告されている2-3）。杜仲茶は，この杜仲の葉を焙煎し

実

験

方

法

１．試料及び試薬て作られるものであり，健康茶の一種として利用され

焙煎後の茶葉は杜仲茶（小林製薬株式会社）を購入てきた。最近はペットボトル飲料としても販売されてし試料として用いた。焙煎前の茶葉，熱水浸出後の乾いる。この杜仲葉の生理作用として，葉に含まれるイ

燥茶葉（いわゆる茶殻）は，日立造船バイオ株式会社

リドイド配糖体であるゲニポシド酸により利尿作用，（現在は杜仲茶部門は小林製薬に委譲された）より譲

血圧降下作用1,4）が認められ，トチュウ葉配糖体を関渡していただいたものを用いた。浸出液の調製は茶葉与成分とし，「本飲料は，杜仲葉配糖体を含んでおり，３gに対して１Lの蒸留水を用い20分間沸騰させ，茶

血圧が高めの方に適した食品です」などの表示が許可

葉を入れたまま冷却し，濾紙（No.2）を使用して濾過＊＊

山口県立大学大学院健康福祉学研究科＊＊
山口県立大学看護栄養学部栄養学科＊＊＊ 大阪樟蔭女子大学学芸学部食物栄養学科＊＊＊＊美作大学短期大学部栄養学科＃ 連絡先（hitomi@yamaguchi-pu.ac.jp）

Yamaguchi Prefectural University Graduate School of
Health and Welfare＊＊
Yamaguchi Prefectural University＊＊＊ Osaka Shoin Wemen’s University＊＊＊＊Mimasaka Junior College＃Corresponding Author

114

山口県立大学

大学院論集第９号

2008年３月した。なお，今回用いた杜仲茶の成分は，茶葉1.5gをン抽出物（10mg/mL），ポジティブコントロールとし0.8Lの水に入れ，沸騰後弱火にて10分煮出した場合，て50μM α‐トコフェロール，コントロールとして0.8Lあたり，たんぱく質0g，脂質０g，炭水化物０g，

溶 媒 で あ る エ タ ノ ー ル， ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ドナトリウム０mg，ゲニポシド酸６mg，カフェイン０（DMSO）を用いた。これらの試料溶液40μLに，リノーmgと報告されている（小林製薬株式会社による分析

ル酸メチル33μLと0.1M Tween20-0.05Mリン酸緩衝結果）。茶葉熱水抽出物は焙煎前および焙煎後の茶葉液（pH 7.4）２mlを加え試験管ミキサーにて２分間，浸出液（30g茶葉/L）それぞれを凍結乾燥して調製し超音洗浄器（IWAKI, USC-6D）にて３分間処理しミた。杜仲茶葉熱水浸出後へキサン抽出物の調製は，熱セル化したのち，0.2M 2,2 -azobis（2-aminopropane）

水浸出後茶葉を用い，メスフラスコに茶葉25gを入れdihydrochloride（AAPH）
水溶液100μLを加え攪拌し，n-ヘキサンで250mlに定容し一昼夜常温で抽出した。

37℃にて３時間振盪した。反応液50μLを取り，メタ抽出後n-へキサンを溜去し乾固物の重量を測定し，ノール950μLを加えて希釈後，フィルター濾過し，10mg/mLに な る よ う に ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ド

その10μLをHPLCに導入し，生じたリノール酸メチ（DMSO）に溶かして用いた。用いた試薬として，α-ルヒドロペルオキシドをカラム；COSMOSIL 5C18

ト コ フ ェ ロ ー ル は 東 京 化 成 工 業（ 株 ），4-Hydroxy（150mm×4.6mm, ナカライテスク株式会社），溶出溶

2-nonenal（HNE）

媒；アセトニトリル：水＝９：１，流速；1.0mL/min，

はCayman chemical社，2 ，7 -dichloroﬂ uorescein diacetate （DCFH-DA）

は検出波長；234nmの条件で検出した。保持時間約４分

Molecular Probes社，その他の試薬は和光純薬（株）

40秒にて検出されるヒドロペルオキシドの３つのピーより購入した。実験に使用する際には，α-トコフェ

クエリア値を合計し比較した。
なお実験は３連で行い，ロールおよびゲニポシド酸はエタノールに溶解して使結果はそれぞれの平均値と標準偏差で示した。

用した。
４．ウサギ赤血球膜ゴースト系を用いた抗酸化試験
２．ケミルミネッセンス法によるAAPHラジカル消去能６）40mM 2,2

ウサギ保存血液は（株）日本バイオテスト研究所よ- azobis（2-amidino-propane）

り購入し,実験に用いた。赤血球ゴーストの調製は津dihydrochloride（AAPH）/0.1Mリン酸緩衝液（pH 7.0）

田ら8）の方法で行った。抗酸化試験は大澤ら9）の方法

200μLに各試料（ゲニポシド酸は10μM，茶葉熱水に従い，タンパク質濃度0.5mg/mlになるように希釈

浸出液は1000倍希釈，茶葉熱水抽出物は100μg/mL，した赤血球膜ゴースト懸濁液0.45mlに，各試料（杜仲

10μg/mLに調製したサンプル溶液）200μLを加え懸茶葉熱水浸出液，杜仲茶葉熱水抽出物は添加濃度１

濁した。37℃に設定したケミルミネッセンス装置（アmg/mL，2.5mg/mL，５mg/mL，ゲニポシド酸は最

ロカ社，BLR-400）内で２分間静置後，ルミノール試

終濃度25μM，50μM，100μM，杜仲茶葉熱水抽出薬（0.1mM

チトクローム

後ヘキサン抽出物10mg/mL）25μLまたは，ポジティ

C 2mL：0.05Mほう酸緩衝液（pH9.3）18mL：メタノー

ブコントロールとして50μM α−トコフェロール，ル

52mL）200μLを加え，ルミノールと化学反応しコントロールとして蒸留水または，各試料の溶媒であて放出される化学エネルギーによる発光を37℃にて３る 蒸 留 水， エ タ ノ ー ル， ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ド

分間検出した。３分間の発光強度の積算値の平均をコ（DMSO）25μLを 加 え， さ ら に 反 応 開 始 剤 と し てントロールと比較することで，各種サンプルの抗酸化24mM t-buthylhydroperoxide 25μLを加え,37℃で20能の強さを測定した。コントロールはサンプル溶液の分間振盪させながらインキュベートし，終了後直ちに代わりに0.1Mリン酸緩衝液（pH 7.0）あるいはエタ

氷冷し反応を停止させた。脂質過酸化度の測定はチオ

ノール 200μLを用いて測定を行った。

バルビツール酸（TBA）法10）にて行った。

ルミノール8mL：4μM

３．リノール酸メチル酸化抑制活性7）５．ラット肝ミクロソーム系を用いた抗酸化試験
7）

ウィスター系雄ラット（Kud:Wistar）は九動株式を一部改変して行った。各試料溶液としては，茶葉熱会社より購入し実験に用いた。なお，動物実験は「実水 浸 出 液， 茶 葉 熱 水 抽 出 物（ 添 加 濃 度 １mg/mL，

験動物の飼育及び保管等に関する基準（昭和55年３月，

2.5mg/mL，５mg/mL），ゲニポシド酸（最終濃度25

総理府告示第６号）」に則って実施した。

リノール酸メチル酸化抑制活性は，増田らの方法

μM，50μM，100μM），杜仲茶葉熱水抽出後ヘキサラットより得られた肝臓を氷冷した0.9％塩化カリ

角橋明美，神田知子，安藤真美，桑守正範，人見英里：杜仲茶の抗酸化性

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ウム水溶液で洗浄後細断し，4倍容の0.25Mマンニトー

dichloroﬂuorescein（DCF）を検出器 FL1 で検出し，

ル-0.1Mトリス塩酸緩衝液（pH7.4）を加えてガラス-

杜仲茶の細胞内活性酸素種生成抑制能を測定した。実テフロンホモジナイザーを用いてホモジナイズした。

験は２回以上繰り返して行い，代表的なヒストグラム

得られたホモジネートを4℃，6,000×ｇで10分間遠心を結果として示した。

分離して核や未破壊細胞を除去した。得られた上清を
4℃ ,100,000×ｇで超遠心分離し得られたペレット部

実

験

結

果

分をミクロソーム画分11） とした。これに0.1Mトリス

１．ケミルミネッセンス法によるAAPHラジカル消去能

塩酸緩衝液（pH7.4）：0.15M塩化カリウム溶液＝１：

杜仲茶のAAPHラジカル消去活性を図１に示した。

２を加えてホモジナイズしたものをミクロソーム懸濁

図はコントロールの化学発光強度を100％として表し液とした。ミクロソーム懸濁液（1.5mg タンパク質ており，グラフのバーが短いほど，ラジカル消去活性/mL）0.25mLに対して，各試料（杜仲茶葉熱水浸出液，が高いことを示す。本研究では，ケミルミネッセンス

茶葉熱水抽出物は添加濃度１mg/mL，2.5mg/mL，法は従来法に比べ高感度に測定が可能であるという利

５mg/mL，ゲニポシド酸は最終濃度が100，50，25μ点が有るため用いた。焙煎の有無に関わらず杜仲茶のM）25μl，または，ポジティブコントロールとして浸出液および熱水抽出物凍結乾燥品は，高い活性を示

α−トコフェロールを用いた。
コントロールとしては，した。さらに熱水抽出物ではその効果は濃度依存的で試料と同様の蒸留水または，エタノールを用いた。試あった。しかし，杜仲茶の固有成分であるゲニポシド

料 に0.1Mト リ ス‐ 塩 酸 緩 衝 液（pH7.4） で 溶 解 し た酸（10μM）および熱水浸出後茶葉のヘキサン抽出物

2mM ADP 0.25mL，0.1mM-0.2mM EDTA-FeCl 3（10㎎/ml）はラジカル消去活性をほとんど持たなかっ0.25mL，2mM NADPH 0.25mL を加え，混合して反た。化学構造からもゲニポシド酸はほぼラジカル消去

応液とし，37℃の湯浴中で30分間振とうさせながらイ活性を持たないと考えられ，ラジカル消去活性に対し

8）

ンキュベートし 反応後直ちに氷冷し，反応を停止さて杜仲茶葉中のゲニポシド酸の寄与はほとんど無いとせた。脂質過酸化度の定量はTBA法10） にて行った。

考えられた。

なお，実験は2連で行なった。
６．細胞内活性酸素種の生成抑制
細胞内活性酸素種の生成抑制は，Fengらの方法12）
を一部改変して行った。ラット正常肝由来RL34細胞
を10％ FBS-DMEM培地を用い6穴プレート（0.5×106
cells /well）で4日培養し，培地を１wellあたり１mL添加した後に試料（茶葉熱水浸出液は20μL/well，ゲ
ニポシド酸は最終濃度25μM）を投与し37℃，５％培地を交換し，CO2条件下で24h培養を行った。処理後，2 ,7 -dichloroﬂuorescein diacetate（DCFH-DA）を最
終濃度50μMになるように投与し，30分間37℃，５％CO2条件下でインキュベーションした。その後PBSで2回 洗 浄 し， 新 た に １mLの 培 地 を 加 え，4-Hydroxy
2-nonenal（HNE）を最終濃度50μM になるように投

図１

ケミルミネッセンス法によるAAPHラジカル消去活性（n=3）

与し，さらに30分37℃，５％ CO2条件下でインキュベー
ションした。その後PBSで2回洗浄後トリプシン処理

２．リノール酸メチル酸化抑制活性を行い，剥離した細胞を2mLのPBSに懸濁し，2回洗

杜仲茶のリノール酸メチル酸化抑制活性を図2に示浄を行った。洗浄後のRL34細胞を10mM EDTA-PBS

した。コントロールの過酸化度を100％として表して2mLに 懸 濁 し， セ ル ス ト レ ー ナ ー（FALCON,

おり，グラフのバーが短いほど，抗酸化活性が強いこ＃352235） を 通 し た 後， フ ロ ー サ イ ト メ ー タ ーとを示す。この方法は，酸素存在下でラジカル発生剤（Becton-Dickinson, FACSCalibur HG）を用い，細胞

AAPHにより定常的にペルオキシラジカルを発生さ内の活性酸素種と反応して生じた蛍光物質

せ，リノール酸メチルを酸化させる系である。前項の116

山口県立大学

大学院論集第９号

2008年３月

ケミルミネッセンス法によるラジカル消去の測定法に

焙煎後が70.7％であり，焙煎前茶葉浸出液がより強く

比べ，より食品に近いモデルと考えられる。杜仲茶葉

ゴーストの酸化を抑制した。
茶葉熱水抽出物は焙煎前，

熱水浸出液は焙煎前，焙煎後ともに高い酸化抑制活性焙煎後ともにほぼ濃度依存的に過酸化を抑制した。ゲを示した。茶葉熱水抽出物は焙煎前，焙煎後ともに濃ニポシド酸は，濃度に関係なく過酸化を抑制する効果

度依存的に抑制活性を示し，５mg/mlでは，ほぼ浸はみられなかった。熱水抽出後茶葉のヘキサン抽出物

出液と同等であった。前項のラジカル消去能と同じく，においても過酸化を抑制する効果は見られなかった。

ゲニポシド酸の50μM，100μM，熱水抽出後茶葉のヘキサン抽出物において，酸化抑制活性はほとんど見られなかった。

４．ラット肝ミクロソーム系を用いた抗酸化試験
ラット肝ミクロソーム系は，生体モデル系の一つであるが，前項のゴースト系とは異なる機構で脂質過酸化を引き起こすものである。この系は，ラットの肝ミ
クロソーム画分に含まれる酵素系によりNADPHを電子供与体として鉄を還元し，生じた２価鉄により脂質の過酸化を引き起こす11）。ラット肝ミクロソーム系を用いた抗酸化試験の結果を図4に示した。図はコント
ロールの過酸化度を100％として表しており，グラフのバーが短いほど，抗酸化活性が高いことを示す。焙
煎前及び焙煎後ともに茶葉浸出液，抽出物は強くミク
ロソームの脂質過酸化を抑制した。ゲニポシド酸では25μMで51.8％，50μMで37.0％，100μMで65.1％と，いずれの濃度でも過酸化を抑制する効果は茶葉浸出液，抽出物に比べて低かった。また杜仲茶葉熱水抽出

図２

リノール酸メチル酸化抑制活性（n=3）

後ヘキサン抽出物においては，162.4%とむしろ酸化を促進する結果となった。この理由については，明らかでない。

３．ウサギ赤血球膜ゴースト系を用いた抗酸化試験
生体膜モデルとして，ウサギ赤血球膜ゴーストを用いて行なった抗酸化試験の結果を図3に示した。コントロール（蒸留水）の過酸化度を100％として表しており，グラフのバーが短いほど，抗酸化性が強いことを示す。茶葉熱水浸出液の活性は，焙煎前が49.1％，

図４

ラット肝ミクロソーム酸化抑制活性（n=2）

５．細胞内活性酸素種の生成抑制
フローサイトメトリーとは，蛍光色素や蛍光標識した抗体を用いて細胞を標識し，細胞を浮遊液に乗せて
図３

ウサギ赤血球膜ゴーストの酸化抑制活性（n=2）

流し，レーザー励起光を照射して細胞の発する蛍光や角橋明美，神田知子，安藤真美，桑守正範，人見英里：杜仲茶の抗酸化性

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散乱光を測定する方法である。本法はペルオキシド感

in vitro系とは異なる結果となったが，培地中での抽出

受 性 の プ ロ ー ブ2 ,7 ‐dichloroﬂuorescin diacetate

物の溶解性や細胞への杜仲茶成分の透過性などの点か（DCFH-DA）を用いて，細胞内の活性酸素種の量をらこのような差が生じたのではないかと推測していフローサイトメトリーによって測定するものである。

る。

DCFH‐DAは膜を通過して細胞内に拡散し, 細胞内のエステラーゼによって加水分解され，蛍光を持たない2 ,7

考察‐dichloroﬂuorescin（DCFH）を生じる。DCFHは細胞

杜仲茶の原料である「杜仲」は，中国では古くから内の過酸化水素や脂質過酸化物（活性酸素種）と速や

漢方薬の中でも不老長寿の仙薬として珍重されてきか に 反 応 し 強 い 蛍 光 を 持 つ2 ,7 ‐ dichloroﬂuorecein

た。また，漢方薬の中でも最も高貴なものとされ，五（DCF） が生成する。DCFは細胞内の活性酸素種の量

大漢方薬のひとつとされている。漢方では薬草の効能に比例して生成することから，この蛍光強度をフローなどにより，上薬・中薬・下薬に分類されているが，サイトメーターを用いて測定し，杜仲茶処理による細杜仲は不老長寿として「上薬」に分類されている。

13）胞内の活性酸素量を検討した 。本研究では，細胞を本研究では，杜仲茶の抗酸化能を，in vitroの系とし24時間焙煎後茶葉浸出液またはゲニポシド酸で処理ては，ケミルミネッセンス法によるAAPHラジカル捕し，その後洗浄した細胞をリノール酸の過酸化によっ

捉能，リノール酸メチル酸化の抑制活性，ウサギ赤血て 生 じ る 毒 性 低 分 子 ア ル デ ヒ ド で あ る4-hydroxy

球膜ゴースト系，ラット肝ミクロソーム系で，より生

2-nonenal（HNE）処理を行なって細胞を過酸化状態

体に近い細胞を用いた系として，フローサイトメトにし，細胞内活性酸素種の生成抑制作用を検討した（図

リー法により細胞内活性酸素種生成抑制活性の測定を５）。横軸に蛍光強度を，縦軸に細胞数を表す。HNE行った。

処理をしないコントロールでは細胞集団は最も左側に先に結果の項で述べた通り，杜仲茶の茶葉熱水浸出

位置しており，蛍光強度の低い（つまり過酸化状態で液，茶葉熱水抽出物，ゲニポシド酸はそれぞれの系でない）細胞集団であることを表している（図中の紫の強弱が見られるが抗酸化能を示した。

ヒストグラム）。HNE処理によって，細胞内の過酸化これらの系はそれぞれ原理が異なり，ケミルミネッ

状態が亢進するため，細胞集団は右にシフトする（図センス法は，酸素存在下においてラジカルが発生する

中の水色のヒストグラム）。杜仲茶の茶葉浸出液（焙とスーパーオキシドアニオンが生成し，ルミノールと煎後），25μMゲニポシド酸をあらかじめ細胞に投与

化学反応して放出される化学エネルギーによる発光を（24時間処理）しておくことで，その後HNE処理をし検出するものである。この方法は操作が簡便で応答がても細胞内の過酸化は完全ではないが抑えられ，ピー

速く，さらに，ラジカルを発生させる基質に対して非クが左にシフトした（図中の白抜きのヒストグラム）。

常に敏感であり，また，試料が懸濁していても測定可

しかし，焙煎前茶葉浸出液では，ほとんど細胞内の過能というのが特徴である。この系において，焙煎前後

酸化状態は改善されなかった（結果は示していない）。

の茶葉浸出液および抽出物の抗酸化性が確認されたこ

細胞内の活性酸素種生成抑制では，前項で示した各種とから，その他の系においても検討を行った。
リノール酸メチル酸化の抑制活性は，食品に近いモ
デル系として考えられ，リノール酸メチルをミセル化させラジカル発生剤であるAAPHにより酸化を促進させ，生成した過酸化物をHPLC法にて測定した。ラジカル発生剤としてAAPHを用いている点においても，図１で示したケミルミネッセンス法によるラジカ
ル消去活性と同様であり，結果からもラジカル消去活性の強かった焙煎前後の茶葉浸出液および抽出物で，抗酸化性を示した。
赤血球膜ゴースト系は，赤血球膜を用い，過酸化の誘導剤t-ブチルヒドロペルオキシドによって膜脂質の過酸化を引き起こし，抗酸化物質が酸化防御が可能か

図５

細胞内活性酸素種の生成抑制活性否かを評価する系である。杜仲茶の浸出液または抽出

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大学院論集第９号

2008年３月

物はあまり高い活性を示さなかったが，この理由とし

上記の結果を総合して考えると，それぞれの系で強て熱水による浸出液や抽出物という親水性物質を用い

弱はあるものの，大部分の系で焙煎の有無に関わらずていることから，膜脂質への親和性が低く，膜脂質の杜仲茶葉熱水浸出液および熱水抽出物は比較的強い抗過酸化を抑制するのがかったためと考えられる。

酸化性を示すことが確認された。しかし，熱水抽出後

ラット肝ミクロソーム系は，赤血球膜ゴースト系と茶葉（茶殻）のへキサン抽出物ではまったく活性を示は異なり，ミクロソーム中に存在する薬物代謝酵素にさなかったことから，抗酸化性の本体は熱水中に抽出よる酵素的な過酸化を引き起こす系であり，生体内でされる成分であり，固有成分のゲニポシド酸の抗酸化の酵素的脂質過酸化の抑制を評価できると考えられ性がほぼ見られなかったことよりゲニポシド酸以外のる。NADPHの存在下でミクロソームの酵素（NADPH-成分であることが考えられる。
さらに細胞系以外では，

３＋シトクロムP-450レダクターゼ）によってADP-Fe

焙煎前，焙煎後の杜仲茶の抗酸化性それほど大きな差のキレートから，反応性の高い〔ADP-Fe3+-O2-〕複合が見られなかったことから，焙煎によって生じる褐変

2+体または〔ADP-Fe -O2〕複合体がつくられ，過酸化物質は杜仲茶の抗酸化性にそれほど大きく関与してい脂質の生成が促進される第一段階（ペルフィリルイオ

ないことが考えられる。

ン依存開始反応）と，それに続く過酸化物の分解反応

杜仲茶に含まれる成分については，中村らによってを，NADPHを基質として還元されてできたEDTA-

報告がなされている14）。それによると，イリドイドとFe2+のキレートが促進すると考えられる第二段階（脂して，ゲニポシド酸（geniposidic acid）, ゲニポシド

肪酸ヒドロペルオキシド依存開始反応），および第三（geniposide）, asperulosidic acid, deacetyl

段階として脂質の自動酸化を経て，その最終過酸化生

asperulosidic acid, aucubin, asperuloside, eucommiol成物であるTBA反応物質が生成するという，大きくの7種の化合物，フラボノイドとして，ケルセチン

分けて３つの段階を経てミクロソームの膜脂質の過酸（quercetin）, quercetin 3-O-β-D-glc・pyrな ど の ケ ル18）化反応が進むと考えられている 。先のウサギ赤血球

セチン配糖体，及びケンフェロール（kaempferol）の膜ゴースト系と比較したところ，杜仲茶または茶成分

配 糖 体 が フ ェ ノ ー ル と し て， プ ロ ト カ テ キ ュ 酸はラット肝ミクロソーム系でより強く活性を示してい（protocatechuic acid）, ピロガロール（pyrogallol）,

るところから，主にミクロソームの酵素が関与していp-trans-coumaric acid, ク ロ ロ ゲ ン 酸（chlorogenic

る第１段階の反応を抑制していることが推測される。

acid）, syringaresinol di-O-β-D-glc・pyrが報告されてさらに，上記の結果とは異なりゲニポシド酸が活性をいる。これらのうち，ケルセチンやその配糖体はその示したことは，ゲニポシド酸が酵素反応になんらかの構造から高い抗酸化性を発揮することが考えられ，こ作用を及ぼした可能性が考えられる。

れらが相加的あるいは相乗的に杜仲茶の抗酸化性に寄フローサイトメトリー法による細胞内過酸化物の生与しているのではないかと考えられる。

成抑制評価系は，前述の複数の系に比べて，細胞その杜仲茶葉熱水抽出物の抗酸化性については，これまものを用いていることから，より生体に近い系と考えでにもモルモットに胃粘膜傷害を引き起こす系15），られる。焙煎後茶葉の熱水浸出液とゲニポシド酸の24

DPPHラジカル捕捉活性16），コメットアッセイ17）など

時間細胞処理によって細胞内過酸化物の生成を抑制すが報告されている。これらの結果はいずれも杜仲茶のる効果が示されたことから，生体内において茶成分が水溶性成分がラジカルを強く捕捉する活性を持ち，そ十分に吸収されるならば，生体内の酸化ストレスを軽れによって抗酸化性を発揮するとしており，本研究の減する働きを持つ可能性が考えられる。しかし，焙煎

結果とも一致するものである。

前茶葉は他の系では抗酸化性を示しているものの，ここれらの結果を踏まえ，今後，杜仲茶に含まれる抗の系においては抑制効果がなかったことから，茶葉に酸化物質が杜仲茶の飲用の結果どの程度生体内に吸収

含まれる後述のポリフェノールそのものでなく，むしされ，代謝されていくのか，
さらに他の茶飲料に比べ，ろ焙煎により生成した反応物（メイラード反応によっ杜仲茶特有の効果とは何か，その詳細を明らかにしてて生成した物質など）にその効果があることが考えらいく必要性があると考えられる。

れる。またゲニポシド酸に付いても，その構造からポリフェノール類にみられる抗酸化性の発揮とは異なる本研究を遂行するにあたり，杜仲茶研究に関してさ

メカニズムでその作用を発現していることが推測され

まざまなご助言をいただきました小林製薬株式会社中る。

央研究所，焙煎前茶葉および熱水抽出後杜仲茶葉サン角橋明美，神田知子，安藤真美，桑守正範，人見英里：杜仲茶の抗酸化性

119

プルをご提供いただきました日立造船バイオ株式会

Microbial Systems. Vol LIIl, Academic Press,

社，フローサイトメトリー法についてご指導をいただ

New York, p.306（1978）．

きました名古屋大学生命農学研究科内田浩二博士，岡11）川岸舜朗:生物化学実験法38食品中の生態機能調

山大学大学院自然科学研究科中村宜督博士，山口県立

節 物 質 研 究 法, 学 会 出 版 セ ン タ ー , 東 京, p.18

大学看護栄養学部故森口覚教授に心より感謝申し上げ（1996）．

ます。

12）Feng, Q., Kumagai, T., Torii, Y., Nakamura, Y.,
Osawa, T., Uchida, K.: Anticarcinogenic

参

考

文

献

１）難波恒雄，疲れたら杜仲でいっぷく，ハート出版（1994）．
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