2021年5月吉日
お客様各位
ロシュ･ダイアグノスティックス株式会社
ラボソリューション事業部

抽出用バッファーによるSARS-Co-V-2不活性化検証結果について
拝啓 時下ますますご清栄のこととお喜び申し上げます。また、毎々格別のお引き立てを賜り厚く御礼申し上げます。
さて、弊社 SARS コロナウイルス抗原キット「SARS-CoV-2

ラピッド抗原テスト」の抽出用バッファーによるウイルス不活性化に関する検証結果を下記の通りご案内申し上げます。詳細に関しましては、添付資料をご参照ください。
ご不明な点がございましたら、弊社営業担当者までお気軽にお問い合わせください。
今後ともご支援お引き立てを賜りますよう、よろしくお願い申し上げます。
敬具記
１． 検証内容

韓国疾病予防管理センターから入手したSARS-CoV-2ウイルス株にて検証

SARS-CoV-2ウイルスを抽出用バッファーにスパイクし、室温にて培養時間１～40分経過後のサンプルをそれぞれ顕微鏡で確認



顕微鏡下でウイルスの活性状態を3段階で評価（N/D：判定保留、 Non-CPE：ウイルス活性なし、 CPE：ウイルス活性あり)※添付資料中の製品名「STANDARD Q COVID-19 Ag Test」が、弊社「SARS-CoV-2 ラピッド抗原テスト」に該当します
２． 結果陽性コントロールはウイルス活性有り

陰性コントロール（スパイクなし）はウイルス活性無し

Q COVID-19 Ag抽出用バッファーにおいて、培養時間1分ではウイルス活性有りQ COVID-19 Ag抽出用バッファーにおいて、培養時間2分でウイルスは不活性化
される
以上

PC-PO-P00191

【添付資料】

SARS-CoV-2 in Extraction Buffer
Inactivation Test Report
Product 1 : STANDARD™ Q COVID-19 Ag Test
Product 2 : STANDARD™ F COVID-19 Ag Test
Rev.01

ParticipantsRole in thestudy

Name

Institution

Position

Test

Jeong-Bum
Kawk

BioNote, INC.
R&D

M.S.
Senior staff

Test

Dong-Suk KangBioNote, INC.
R&D

M.S.
Manager

Review

Dong-Hyuk Kim

BioNote, INC.
R&D

M.S.
ManagerConfirm

Jung-Ho Kim

BioNote, INC.
R&D

Ph.D
DirectorSignature

Revision History
NoContents

Date0First establish virus inactivation in extraction buffer study

2020. 06. 10

1

Check the minium required time for inactivation

2020. 09. 14

1. General information
Objective

Test for virus inactivation performance evaluation of STANDARD™ Q COVID-19 Ag Test

Scope

STANDARD™ Q COVID-19 Ag Test Extraction buffer (Cat No. 09COV30D)
STANDARD™ F COVID-19 Ag Test Extraction buffer (Cat No. 10COV30D)

Test date2020. 09. 03 ~ 14

Test site

Site : Bionote, INC. BSL-3 Laboratory
Address : 22, Samseong 1-ro 4-gil, Hwaseong-si, Gyeonggi-do
TEL : +82-31-211-0516
FAX : +82-31-8003-0618
E-mail : bionote@bionote.co.kr

Participants

Name
Jeong-Bum Kawk
Dong-Suk Kang
Dong-Hyuk Kim
Jung-Ho Kim

Position
Senior staff
ManagerManager
Director

Role in the study
Test
Test
ReviewConfirm1) Extraction buffer preparation
STANDARD™ Q
Sort
COVID-19 Ag Test
Extraction buffer

E-mailjbgwak@bionote.co.kr
cann96@bionote.co.kr
coolvy@bionote.co.kr
Jungho@bionote.co.kr

STANDARD™ F
COVID-19 Ag Test
Extraction buffer

Cell culture media(DMEM)

Manufacturer

Biosensor

Biosensor

Gibco

Lot

STEB1020142

FEB2120003

2180189Mfg

2020.08.28

2020.05.26

2020.01.22

Exp

2023.02.27

2022.11.25

2022.10.30

2) Test procedure① Prepare Vero cells with ~80% confluency in 6-well plate.
② SARS-CoV- 2 titer 2.5Ⅹ104.3 TCID50/mL with each buffer and incubation for 1 minutes
interval at room temperature..
Studymethod③ After incubation, the virus-spiked buffer was inoculated into each well in which thevero cells growing at dilution 1000 -fold.
④ Culture Vero cells for 3 days at 37℃ in 5% CO2.
⑤ Check for the occurrence of CPE.
⑦ Cell supertant collected and inoculate the next passage, repeat step 5~63) Virus preparation
Using the SARS-CoV-2 (2019-nCOV) NCCP 43326/2020 / Korea strain cultured virus. Thisvirus was provided by Korean CDC and cultured in Bionote BSL-3. The host cell is Vero celland harvested after confirming 90% CPE (cytopathic effect). The titer of cultured virus
was previously confirmed by TCID50 and value is 1Ⅹ106.3 TCID50/ml.
4) Sample preparation
STANDARD™ Q.Condition
COVID-19 Ag Test
Extraction buffer
Virus spiking
Incubation time○Ⅹ

STANDARD™ F
COVID-19 Ag Test
Extraction buffer○

Cell culture media

Ⅹ

1 ~ 40 min (1 minute interval)○

Ⅹ1) Observation by microscope
3 grade score : N/D, Non-CPE , CPE

判定保留

N/D (cell lysed by ingrediendts from extraction)

ウイルス活性なし（ウイルスが不活性化されたことを示す）

AcceptanceCriteria

Non CPE (Non-Cyopathic effect)

ウイルス活性あり

CPE (Cytopathic effect, can be detected many suspended cells)2) Criteria
ResultInterpretation

N/D

Not determine

CPE

Virus activatedNon CPE

Virus inactivated2. Result

SARS-CoV-2 in Extraction Buffer Inactivation Test Result (live virus)
Microscope Observation Results

Sample information

Extraction buffer

Virus spiking

Q Rapid
COVID-19 Ag
Extraction bufferO* CPE : Cyto-Pathic EffectIncubation time

Passage 1Passage 2Passage 31

CPE 30%

CPE 90%

CPE 100%

2

No CPENo CPENo CPE

3No CPENo CPENo CPE

4No CPENo CPENo CPE

5No CPENo CPENo CPE

6No CPENo CPENo CPE

7No CPENo CPENo CPE

8No CPENo CPENo CPE

9No CPENo CPENo CPE

10No CPENo CPENo CPE

11No CPE

No CPENo CPE

12No CPE

No CPENo CPE

13No CPENo CPENo CPE

14No CPENo CPENo CPE

15No CPENo CPENo CPE(minute)

Ⅹ

16

No CPENo CPENo CPE

17

No CPENo CPENo CPE

18

No CPENo CPENo CPE

19

No CPENo CPENo CPE

20No CPENo CPENo CPE

21

No CPENo CPENo CPE

22

No CPENo CPENo CPE

23

No CPENo CPENo CPE24

No CPENo CPENo CPE

25No CPE

No CPENo CPE

26

No CPENo CPENo CPE

27

No CPENo CPENo CPE28

No CPENo CPENo CPE

29

No CPENo CPENo CPE30

No CPENo CPENo CPE

31

No CPENo CPENo CPE32

No CPENo CPENo CPE33

No CPENo CPENo CPE34

No CPENo CPENo CPE35

No CPENo CPENo CPE36

No CPENo CPENo CPE37

No CPENo CPENo CPE38

No CPENo CPENo CPE39

No CPENo CPENo CPE40

No CPENo CPENo CPE40

No CPENo CPENo CPE

F FIA
COVID-19 Ag
Extraction bufferO1

CPE 10%CPE 80%

CPE 100%

2

No CPENo CPENo CPE

3No CPENo CPENo CPE

4No CPENo CPENo CPE

5No CPENo CPENo CPE

6No CPENo CPENo CPE

7No CPENo CPENo CPE

8No CPENo CPENo CPE

9No CPENo CPENo CPE

10No CPENo CPENo CPE

11No CPENo CPENo CPE

12No CPENo CPENo CPE

13No CPENo CPENo CPE

14No CPENo CPENo CPE

15No CPENo CPENo CPE

16

No CPENo CPENo CPE

17No CPE

No CPENo CPE

18

No CPENo CPENo CPE

19

No CPENo CPENo CPE20No CPE

No CPENo CPE

21

No CPENo CPENo CPE

22

No CPENo CPENo CPE

23

No CPENo CPENo CPE24

No CPENo CPENo CPE

25

No CPENo CPENo CPE

26

No CPENo CPENo CPE

27

No CPENo CPENo CPE28

No CPENo CPENo CPE

29

No CPENo CPENo CPE30

No CPENo CPENo CPE

31

No CPENo CPENo CPE32

No CPENo CPENo CPE33

No CPENo CPENo CPE34

No CPENo CPENo CPE35

No CPENo CPENo CPE36

No CPENo CPENo CPE37

No CPENo CPENo CPE38

No CPENo CPENo CPE

39No CPE

No CPENo CPE40

No CPENo CPENo CPEⅩ

40No CPE

No CPENo CPEDMEMO40

CPE 30%

CPE 100%

CPE 100%(Cell culture media)

Ⅹ

40

No CPENo CPENo CPE3. Summary
Extaction buffer

STANDARD™ Q COVID-19
Extraction Buffer

STANDARD™ F COVID-19
Extraction Buffer

DMEM media(cell culutre media)

Virus spiking

Result○1 minute incubation : CPE

Virus Activated○

2 ~ 40 minutes incubation : No CPE

Virus inactivatedⅩ

No CPE

Negative control○

1 minute incubation : CPE

Virus Activated○

2 ~ 40 minutes incubation : No CPEVirus inactivatedⅩ

No CPE

Negative control○CPE

Positive control

Ⅹ

No CPE

Negative control

4. Conclusion
1) Positive control (DMEM media) show general virus infected CPE.
2) All Negative control (Without virus spiking) did not show any CPE.
3) In case of 1 minute incubation, virus is still activated for both Q COVID-19 Ag extraction buffer and F
COVID-19 Ag extraction buffer4) It’s enough to inacivate the virus at least 2 minutes incubation time. The virus in extraction buffer isenough to inactivated in 2 minutes.
Hereby, I confirm that the above is true.
September , 14, 2020
Principal Investigator

Jung-Ho Kim
Signature