pCLAMP8マニュアル
AxoPatch偏

株式会社インターメディカル

i

目次
第1章

注意事項

1

第2章

配線

3

Digidata1322A の端子説明 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3

2.1.1

フロントパネル (表面). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3

2.1.2

リアパネル (裏面) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4

AxoPatch200B の端子説明 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5

2.2.1

フロントパネル (表面). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5

2.2.2

リアパネル (裏面) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5

AxoPatch1D の端子説明 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6

2.3.1

フロントパネル (表面). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6

2.3.2

リアパネル (裏面) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

7

配線例 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8

2.4.1

VoltageCLAMP のみ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8

2.4.2

CurrentCLAMP のみ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8

2.4.3

VoltageCLAMP , CurrentCLAMP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

9

2.4.4

ダブルパッチ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

9

2.1

2.2

2.3

2.4

第3章

電源の投入・切断

11

3.1

電源の投入順序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

11

3.2

電源の切断順序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

11

データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

13

4.1

Digidata1322A の認識 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13

4.2

AxoPatch200B に関する設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15

4.2.1

Telegraph . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15

4.2.2

LabBench . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16

4.2.3

刺激 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16

AxoPatch1D に関する設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18

4.3.1

Telegraph . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18

4.3.2

LabBench . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19

4.3.3

刺激 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19

第4章

4.3

ii

目次

4.4

データ取得 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21

4.5

シールテスト機能 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

22

4.5.1

SealTest の設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

22

4.5.2

SealTest の測定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

23

4.5.3

MembraneTest の設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

24

4.5.4

MembraneTest の測定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

25

データ取得の各種設定・保存方法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

26

4.6.1

データ取得モードの設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

27

Gap-free モード . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

28

4.6

4.6.2

4.6.3

第5章

5.1

5.2
第6章

6.1

Fixed-length events モード . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

29

Episodic stimulation モード . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

31

Variable-length events モード . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

33

High-speed oscilloscope モード . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

35

データ取得 (入力) チャンネルの設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

36

刺激 (出力) チャンネルの設定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

37

刺激波形の作成 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

38

刺激波形作成例 (矩形波) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

39

刺激波形作成例 (複数の矩形波) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

42

刺激波形作成例 (複数の矩形波＋矩形波) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

44

刺激波形作成例 (時間幅の変化のある矩形波) . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

46

刺激波形作成例 (ランプ波) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

48

刺激波形作成例 (複数のランプ波) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

50

データ取り込み . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

52

データの保存フォルダー . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

52

画面で確認 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

52

ファイルへデータを書き込む . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

52

繰り返し . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

53

データ解析ソフトウェア：Clampﬁt55

解析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

55

5.1.1

I-V カーブ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

55

5.1.2

Trace vs. Trace

カーブ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

59

5.1.3

Fitting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

63

印刷 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

65

パッチクランプ増幅器：AxoPatch200B

69

6.0.1

フロントパネル (表面). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

69

6.0.2

リアパネル (裏面) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

70

6.0.3

モデルセル . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

70

操作方法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

71

iii

目次

6.2

第7章

7.1

7.2

第8章

8.1

8.2

6.1.1

BATH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

72

6.1.2

PATCH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

74

6.1.3

WHOLE CELL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

75

その他の機能 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

77

6.2.1

MODE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

77

6.2.2

ZAP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

77

6.2.3

OUTPUT GAIN(α),LOWPASS BESSEL FILTER . . . . . . . . . . . . . .

77

パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D

79

7.0.4

フロントパネル (表面). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

79

7.0.5

リアパネル (裏面) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

80

7.0.6

モデルセル . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

81

操作方法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

82

7.1.1

BATH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

83

7.1.2

PATCH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

85

7.1.3

WHOLE CELL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

86

その他の機能 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

88

7.2.1

MODE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

88

7.2.2

ZAP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

88

7.2.3

GAIN(α),-3dB FREQ.(Hz) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

88

7.2.4

STEP COMMAND . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

89

トラブルシューティング・Ｑ＆Ａ

91

トラブルシューティング . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

91

8.1.1

Digidata1322A が動作しない場合は。 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

91

8.1.2

Clampex で Digidata1322A の設定が行えない場合 . . . . . . . . . . . . . . .

92

8.1.3

Clampex で AxoPatch200B の制御が行えない場合 . . . . . . . . . . . . . . .

92

Ｑ＆Ａ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

93

8.2.1

93

pCLAMP 用のコンピュータに MO などの外部記憶装置を増設したい。 . . . .

1

第1章

注意事項
1. コンピュータの電源の入っている時に、Digidata のケーブルを外したり、電源を切ったりしないで下さい。

2. データ測定中は、できる限り Clampex だけを御利用下さい。
3. 増幅器の電源が入っている時に、裏面のヘッドステージ端子を抜き差ししないで下さい

3

第2章

配線

2.1 Digidata1322A の端子説明
2.1.1 フロントパネル (表面)

接続に利用する端子は、次の端子です。

• ANALOG IN 0,1,2,3...,14,15• ANALOG OUT 0,1• DIGITAL OUT 0,1,2,3• TRIGGER IN TAG,START

4

第 2 章 配線

2.1.2 リアパネル (裏面)接続に利用する端子は、次の端子です。

• Telegraph Input 0,1,2,3• DIGITAL OUTPUTS 4,5,6,7

2.2 AxoPatch200B の端子説明

2.2 AxoPatch200B の端子説明
2.2.1 フロントパネル (表面)

接続に利用する端子は、次の端子です。

a

SCALED OUTPUT

2.2.2 リアパネル (裏面)接続に利用する端子は、次の端子です。

b

SCALED OUTPUT

c

10Vm OUTPUT

d

EXT. COMMAND INPUT FRONT SWITCHED

e

EXT. COMMAND INPUT REAR SWITCHEDf

I OUTPUT

g

GAIN

h

FREQUENCYi

CELL CAPACITANCE

5

6

第 2 章 配線

2.3 AxoPatch1D の端子説明
2.3.1 フロントパネル (表面)

接続に利用する端子は、次の端子です。

a

SCALED OUTPUT

b

I

c

10Vm

B

EXT. COMMAND SENSITIVITY

2.3 AxoPatch1D の端子説明

2.3.2 リアパネル (裏面)接続に利用する端子は、次の端子です。

dEXT. COMMANDe

STEP GATEf

I (βmV /pA)

g

10Vm

h

SCALED OUTPUT

i

GAIN SETTINGjFREQUENCY SETTING7

8

第 2 章 配線

2.4 配線例• AxoPatch200B と AxoPatch1D は、端子説明で記載したアルファベットで記載しています。
• この例では、Digidata1322A の DIGITAL OUT や IN、TRIGGER IN は利用しません。これらの端子は、他の機器と同期をとりたい時のために利用します。

• AxoPatch200B の EXT.COMMAND スイッチ (F) を ON(上側) にして下さい。
• AxoPatch1D の EXT.COMMAND SENSITIVITY スイッチ (B) を 20mV/V(標準) または
1mV/V にして下さい。
• オシロスコープで観察したい場合は、T 管などで接続してください。

2.4.1 VoltageCLAMP のみ
Digidata1322A

AxoPatch200B

AxoPatch1D

ANALOG OUT 0dd

電圧刺激 (必須)

ANALOG IN 0

b

h(a)

反応した膜電流取得 (必須)

ANALOG IN 1

c

g(c)

実際の電圧刺激取得

Telegraph Input 0gi

ゲインを PC で認識するため

Telegraph Input 1hj

遮断周波数を PC で認識するため

Telegraph Input 2i

用途

膜容量を PC で認識するため

2.4.2 CurrentCLAMP のみ
Digidata1322A

AxoPatch200B

AxoPatch1D

ANALOG OUT 0dd

電流刺激 (必須)

ANALOG IN 0

b

h(a)

反応した膜電位取得 (必須)

ANALOG IN 1

f

f(b)

実際の電流刺激取得

Telegraph Input 0gi

ゲインを PC で認識するため

Telegraph Input 1hj

遮断周波数を PC で認識するため

Telegraph Input 2i

用途

膜容量を PC で認識するため

2.4 配線例

92.4.3 VoltageCLAMP , CurrentCLAMP
Digidata1322A

AxoPatch200B

AxoPatch1D

ANALOG OUT 0dd

刺激 (必須)ANALOG IN 0

b

h(a)

反応した信号取得 (必須)

ANALOG IN 1

c

g(c)

膜電位取得

ANALOG IN 2

f

f(b)

膜電流取得

Telegraph Input 0gi

ゲインを PC で認識するため

Telegraph Input 1hj

遮断周波数を PC で認識するため

Telegraph Input 2i

用途

膜容量を PC で認識するため

2.4.4 ダブルパッチ
Digidata1322A

AxoPatch200B No1

AxoPatch200B No2

用途

ANALOG OUT 0

d

d

刺激

ANALOG IN 0b

反応した信号取得

Telegraph Input 0g

ゲインを PC で認識するため

Telegraph Input 1h

遮断周波数を PC で認識するため

Telegraph Input 2i

膜容量を PC で認識するため

11

第3章

電源の投入・切断

3.1 電源の投入順序
1. Digidata1320 シリーズの電源を入れます。
2. コンピュータ周辺機器の電源を入れます。
3. ディスプレイの電源を入れます。
4. コンピュータの電源を入れます。
5. アンプの電源を入れます。
6. その他必要な電源を入れます。

3.2 電源の切断順序
基本的には、電源投入順序の逆となります。

1. アンプの電源を切ります。
2. コンピュータを終了します。
3. コンピュータの電源を切ります。
4. コンピュータ周辺機器の電源を切ります。
5. ディスプレイの電源を切ります。
6. Digidata1320 シリーズの電源を切ります。

13

第4章

データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex
Clampex は、データ刺激取得用ソフトウェアです。

4.1 Digidata1322A の認識
Conﬁgure/Select Digitizer メニューを選択しますと、次の画面が表示されます。
ここで、画面上に No dongleと表示されている場合は、プリンタポートにきちんとドングル(パラレルポートキー) につけて下さい。

Digitizer を Digidata1320 を選択し、 Conﬁgure... を押して下さい。左のような画面が表示されます。
キャリブレーションを行うため、Digi-

data1322A の Analog OUT 端子に接続されているものを外して下さい。 Detect を押し、 Calibrate を押して下さい。

14

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

次のような画面が表示された場合は、 OK を押して下さい。

問題ないようでしたら、次のような画面になります。

OK が有効になりますので、 OK を押して下さい。

認識しない場合は、次の項目を確認し、コンピュータを再起動して、再度設定し直して下さい。

• Digidata1320 の電源は入っていますか？
• SCSI ボードは認識されていますか？
• SCSI ケーブルが外れていませんか？

4.2 AxoPatch200B に関する設定

4.2 AxoPatch200B に関する設定
Digidata と AxoPatch200B との接続によって設定が違います。ここでは、9 頁の 2.4.3 の接続を例の設定していきます。

4.2.1 Telegraph
AxoPatch200B の OUTPUT GAIN(α)[J]、LOWPASS BESSEL FILTER[K]、WHOLE CELL
CAP.[D] を Clampex で認識する機能です。この設定をしますと、OUTPUT GAIN(α) を変更しても、
Clampex が自動で変換率を変更してくれます。
「Conﬁgure/Telegraphed Instruments...」メニューを選択しますと、右のような画面が表示されます。

Telegraphs をチェックし、Telegraph 機能が有効状態として下さい。もし不要ならば、チェックを外して下さい。

Instrument type
アンプの種類を選択します。
該当する AxoPatch200 を選択して下さい。

• AxoPatch200 CV201• AxoPatch200 CV202• AxoPatch200B
The Analog IN channel ... connected.
Scaled OUTPUT と接続している端子を選択します。
Analog IN 0 を選択します。
Telegraph Connections TELEGRAPH OUTPUTS 端子が Digidata のどこに接続されているかを選択します。

Gain GAIN[g] と接続されている端子を選択します。
Frequency Frequency[h] と接続されている端子を選択します。
Cm Cell Capacitance[i] と接続されている端子を選択します。

15

16

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

Telegraph 機能が有効になっているかの確認方法は、Conﬁgure/LabBench メニューを選択し、Input
タブを選択しますと、次のような画面が一番下に表示されます。

それぞれの意味は、次の通りです。

Output gain OUTPUT GAIN(α)[J] の値
Cm(pF) WHOLE CELL CAP.[D] の値
Frequency(Hz) LOWPASS BESSEL FILTER[K] の値

4.2.2 LabBench
単位の設定と単位変換率の設定を行います。

Conﬁgure/LabBench メニュー () を選択してください。

4.2.3 刺激

LabBench ウインドウの Output Signals タブを選択しますと、右のような画面が表示されます。
ここで、Digidata の出力チャンネルと出力信号名を設定します。
使用したい信号名がなければ、 Add... を押し、新規に信号名を追加して下さい。不要な信号名は、Delete... で削除し、信号名を変更したい場合は、
Rename... を利用し、変更して下さい。
Digitizer Channels
Digidata の Analog OUT チャンネルの設定。
Analog OUT #0 を選択します。
Signals 出力信号名の設定。
Cmd 0 とします。
次に、出力信号名に該当する変換式を設定します。

Signal units 測定単位を設定します。

4.2 AxoPatch200B に関する設定

17

Scale factor 変換率ほ設定します。
計算して、設定を入力しても良いのですが、AxoPatch200B は、 Scale Factor Assistant... を利用する
事により、簡単に設定できます。

Scale Factor Assistant...
を押しますと、左のような画面が表示されます。

AxoPatch200B です から 、
AxoPatch 200 series を選択
し、 Next を押して下さい。

次の設定を行っていきます。

1.Mode Setting モードの設定を行います。
AxoPatch200B と同じ設定にして下さい。
2.Conﬁg Setting アンプの Conﬁg. 設定を行います。
Mode Setting で、CurrentClamp を選択した場合有効になります。

3.Ext. Command Input 接続端子を設定します。
Ext Command Input Front Switched
20mV/VExt Command InputRear Switched
100mV/V(AxoPatch200B only)
設定が終わりましたら、 Finish を押して下さい。
これで、• Signal units• Scale factorが設定されます。
ちなみに、Scale factor の計算方法は、
コンピュータへの入力電圧 [V ] ÷ アンプからの刺激電圧 [Signalunits] = Scalef actorとなります。

18

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

4.3 AxoPatch1D に関する設定
Digidata と AxoPatch1D との接続によって設定が違います。ここでは、9 頁の 2.4.3 の接続を例の設定していきます。

4.3.1 Telegraph
AxoPatch1D の OUTPUT GAIN(α)[C]、LOWPASS BESSEL FILTER[D] を Clampex で認識する機能です。この設定をしますと、OUTPUT GAIN(α) を変更しても、Clampex が自動で変換率を変更してくれます。
「Conﬁgure/Telegraphed Instruments...」メニューを選択しますと、右のような画面が表示されます。

Telegraphs をチェックし、Telegraph 機能が有効状態として下さい。もし不要ならば、チェックを外して下さい。

Instrument type
アンプの種類を選択します。
該当する AxoPatch1 の選択して下さい。

• AxoPatch-1 CV4-0.1/100• AxoPatch-1 CV4-1/100• AxoPatch-1B CV4-0.1/100(inv)• AxoPatch-1B CV4-1/100(inv)
The Analog IN channel ... connected.
Scaled OUTPUT と接続している端子を選択します。
Analog IN 0 を選択します。
Telegraph Connections TELEGRAPH OUTPUTS 端子が Digidata のどこに接続されているかを選択します。

Gain GAIN[i] と接続されている端子を選択します。
Frequency Frequency[j] と接続されている端子を選択します。

4.3 AxoPatch1D に関する設定

19

Telegraph 機能が有効になっているかの確認方法は、Conﬁgure/LabBench メニューを選択し、Input
タブを選択しますと、次のような画面が一番下に表示されます。

それぞれの意味は、次の通りです。

Output gain GAIN(α)[C] の値
Frequency(Hz) -3dB FREQUENCY(Hz)[D] の値

4.3.2 LabBench
単位の設定と単位変換率の設定を行います。

Conﬁgure/LabBench メニュー () を選択してください。

4.3.3 刺激

LabBench ウインドウの Output Signals タブを選択しますと、右のような画面が表示されます。
ここで、Digidata の出力チャンネルと出力信号名を設定します。
使用したい信号名がなければ、 Add... を押し、新規に信号名を追加して下さい。不要な信号名は、Delete... で削除し、信号名を変更したい場合は、
Rename... を利用し、変更して下さい。
Digitizer Channels
Digidata の Analog OUT チャンネルの設定。
Analog OUT #0 を選択します。
Signals 出力信号名の設定。
Cmd 0 とします。
次に、出力信号名に該当する変換式を設定します。

Signal units 測定単位を設定します。
Scale factor 変換率ほ設定します。

20

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex
計算して、設定を入力しても良いのですが、AxoPatch1D は、 Scale Factor Assistant... を利用する事
により、簡単に設定できます。

Scale Factor Assistant...
を押しますと、左のような画面が表示されます。

AxoPatch1D で す か ら 、
AxoPatch 1 series を選択し、Next を押して下さい。

次の設定を行っていきます。

1.Mode Setting モードの設定を行います。
AxoPatch1D と同じ設定にして下さい。
2.Conﬁg Setting アンプの Conﬁg. 設定を行います。
Mode Setting で、CurrentClamp を選択した場合有効になります。

3.Ext. Command Input EXT.COMMAND SENSITIVITY の設定
設定が終わりましたら、 Finish を押して下さい。
これで、• Signal units• Scale factorが設定されます。
ちなみに、Scale factor の計算方法は、
コンピュータへの入力電圧 [V ] ÷ アンプからの刺激電圧 [Signalunits] = Scalef actorとなります。

4.4 データ取得

21

4.4 データ取得
Conﬁgure/LabBench メニュー () を選択し、

Input Signals タブを選択しますと、右のような画面となります。
まずは、Digidata の入力チャンネルと入力信号名を設定します。
使用したい信号名がなければ、 Add... を押し、新規に信号名を追加して下さい。不要な信号名は、Delete... で削除し、信号名を変更したい場合は、
Rename... を利用し、変更して下さい。
Digitizer Channels
Digidata の Analog IN チャンネルの設定
Analog IN #0 を選択します。
Signals 入力信号名の設定
Imemb とします。
次に、入力信号名に該当する変換式を設定します。

Signal units 測定単位を設定します。
Scale factor 変換率を設定します。
計算して、設定を入力しても良いのですが、AxoPatch200B は、 Scale Factor Assistant... を利用する事により、簡単に設定できます。

1.Mode Setting モードの設定を行います。
AxoPatch200B と同じ設定にして下さい。
2.Conﬁg Setting アンプの Conﬁg. 設定を行います。
AxoPatch200B と同じ設定にして下さい。
3.Preferred Signal Units
利用したい単位を選択します。

4.Gain テレグラフの GAIN の表示
設定が終わりましたら、 OK を押して下さい。これで、• Signal units• Scale factorが設定されます。

22

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

4.5 シールテスト機能
VoltageCLAMP でのみ利用できます。
矩形波の刺激電圧を出力し、その反応電流を測定し、膜抵抗や電極抵抗を測定します。

4.5.1 SealTest の設定
Conﬁgure/SealTestSetup メニューを選択しますと、次の画面が表示されます。
次の項目を設定してください。

Input signal
膜電流の信号名。

Imemb を選択します。
Seal Test sognal
刺激波形の信号名。

Cmd0 を選択します。
Intial Pulse Amplitude
矩形波の振幅を設定します。

5mV とします。
設定を終えましたら、OK を押して下さい。

4.5 シールテスト機能

23

4.5.2 SealTest の測定
Tools/SealTest... メニュー () を選択しますと、次の画面が表示されます。

Seal Resistance と書かれた所に、計算された抵抗が表示されます。

24

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

4.5.3 MembraneTest の設定
Conﬁgure/MembraneTestSetup メニューを選択しますと、次の画面が表示されます。
次の項目を設定してください。

Input signal
膜電流の信号名。

Imemb を選択します。
Membrane Test sognal
刺激波形の信号名。

Cmd0 を選択します。
Intial Pulse Amplitude
矩形波の振幅を設定します。

5mV とします。
設定を終えましたら、OK を押して下さい。

4.5 シールテスト機能

25

4.5.4 MembraneTest の測定
Tools/MembraneTest... メニュー (次の項目を計算されます。

Cm 膜容量 (membrane capacitance)
Rm 膜抵抗 (membrane resistance)
Ra 電極抵抗
Tau 時定数) を選択しますと、次の画面が表示されます。

26

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

4.6 データ取得の各種設定・保存方法
ここで設定する項目は、Acquire/Save Protocol メニュー (メニュー () や Acquire/Save Protocol As...

) を選択しますと、次の画面が表示されます。ファイル名を指定し OK を押すと、プ

ロトコルファイルとして保存する事が出来ます。
また、保存しておいたプロトコルファイルは、Acquire/Open Protocol... メニュー (出す事が出来ます。

) で読み4.6 データ取得の各種設定・保存方法

27

4.6.1 データ取得モードの設定
Acquire/Edit Protocol メニュー () を選択し、Mode/Rate タブを選択します。

ここで、データ取得モード・サンプリングレートなどを設定します。

Acquisition Mode では、データの取得方法を選択 (チェック) します。
Gap-free チャートレコーダのような全データ取り込みモード
Variable-length events , Fixed-length events 一定レベルの前後のみのデータ取り込みモード
High-speed oscilloscope オシロスコープモード
Episodic stimulation 刺激を加えながら、データを取得するモード
データを取得しながら、解析する場合は、Allow automatic analysis in other programs. をチェックして下さい。

28

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

Gap-free モード
データ取得モードを Gap-free に設定しますと、次のような設定画面となります。

データ測定時間、サンプリングインターバルの設定を行います。

Trial Length データ測定時間の設定
Use available disk space ディスク容量の許す限りデータを取得します。
2 行下に Space available is xx:xx:xx(hh:mm:ss)=yyMB と測定可能時間とディスク容量が表示されます。

Duration(hh:mm:ss) データを測定する時間を入力します。
Sampling
Sampling Interval per Signal(µs) サンプリングレートを設定します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Fixed-length events モード
データ取得モードを Fixed-length events モードに設定しますと、次のような設定画面となります。

データの測定は、次のように行われます。

図 4.1: Fixed-length events モードのデータ取得例

データ測定時間、サンプリングインターバルの設定を行います。

Trial Length データ測定時間の設定
Use available disk space ディスク容量の許す限りデータを取得します。
2 行下に Space available is xx:xx:xx(hh:mm:ss)=yyMB と測定可能時間とディスク容量が表示されます。

29

30

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

Duration(hh:mm:ss) データを測定する時間を入力します。
Sampling
Sampling Interval per Signal(µs) サンプリングレートを設定します。
Sweep length per event per signal(samples) 図 4.1 を参照の事
Trigger タブを選択すると、次の画面が表示されます。

トリガー、データの測定時間の設定のために、Trigger Setting 項目の次の設定を行います。

Pre-trigger length (samples) 図 4.1 を参照の事
Trigger threshold 図 4.1 を参照の事
Polarity トリガーの動作するタイミングを指定します。
Rising 立ち上がり
Falling 立ち下がり

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Episodic stimulation モード
データ取得モードを Episodic stimulation に設定しますと、次のような設定画面となります。

刺激波形の回数設定や待ち時間設定、サンプリングインターバルの設定を行います。

Trial Hierarchy sweep , run , trial 数の設定を行います。
Runs/trial 1trial 中の run 数を設定します。
Sweeps/run 1run 中の sweep 数を設定します。
Samples/sweep/signal 一回の sweep のサンプル数を設定します。
Start-to-Start Intervals(s)Run 複数の Run を測定する時、Run の始まりから次の Run の始まりまでの時間を設定します
Sweep 複数の Sweep を測定する時、Sweep の始まりから次の Sweep の始まりまでの時間を設定しますSampling Interval per Signal
First interval(µs) サンプリングレートを設定します。
実際の刺激波形は、Waveform0 タブや Waveform1 タブで設定します。

31

32

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex
刺激波形を加える場合は、通常、刺激波形例のように、複数の刺激を加えていきます。

図 4.2: 刺激波形例

ここで、Clampex8 では、この中の一つの波形を Sweep と呼びます。刺激波形例のように sweep が

図 4.3: 1sweep

集団となっているものを Run と呼びます。
また、Run を複数個集めたグループを Trial と呼びます。(sweep < run < trial といった関係となります)4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Variable-length events モード
データ取得モードを Variable-length events モードに設定しますと、次のような設定画面となります。

データの測定は、次のように行われます。

図 4.4: Variable-length events モードのデータ取得例

データ測定時間、サンプリングインターバルの設定を行います。

Trial Length データ測定時間の設定
Use available disk space ディスク容量の許す限りデータを取得します。

33

34

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

2 行下に Space available is xx:xx:xx(hh:mm:ss)=yyMB と測定可能時間とディスク容量が表示されます。

Duration(hh:mm:ss) データを測定する時間を入力します。
Sampling
Sampling Interval per Signal(µs) サンプリングレートを設定します。
Trigger タブを選択すると、次の画面が表示されます。

トリガー、データの測定時間の設定のために、Trigger Setting 項目の次の設定を行います。

Pre-trigger length (samples) 図 4.4 を参照の事
Trigger threshold 図 4.4 を参照の事
Polarity トリガーの動作するタイミングを指定します。
Rising 立ち上がり
Falling 立ち下がり

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

High-speed oscilloscope モード
データ取得モードを High-speed oscilloscope に設定しますと、次のような設定画面となります。

データ測定時間、サンプリングインターバルの設定を行います。

Trial Length データ測定時間の設定
Use available disk space ディスク容量の許す限りデータを取得します。
2 行下に Space available is xx:xx:xx(hh:mm:ss)=yyMB と測定可能時間とディスク容量が表示されます。

Duration(hh:mm:ss) 何画面分データを取り込むか設定します。
。
Sampling
Sampling Interval per Signal(µs) サンプリングレートを設定します。
Sweep length per event signal(samples) 一画面で表示するサンプル数を設定します。

35

36

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

データ取得 (入力) チャンネルの設定

Acquire/Edit Protocol メニュー () を選択し、Inputs タブを選択しますと、次のような画面となります。

次の設定を行って下さい。

• 取り込みを行いたいアナログチャンネルをチェックします。
AnalogIN 0 をチェックします。
• LabBench で設定した入力信号名を選択します。
Imemb を選択します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

37

刺激 (出力) チャンネルの設定

Acquire/Edit Protocol メニュー () を選択し、Outputs タブを選択します。

次の設定を行って下さい。

Analog OUT Channels 刺激チャンネルの設定。
Channel #0 Analog OUT#0 で刺激を行う LabBench で設定した出力信号名を選択します。
Cmd0 を選択します。
Channel #1 Analog OUT#1 で刺激を行う LabBench で設定した出力信号名を選択します。
Analog OUT Holding Levels 刺激チャンネルへ通常出力する値の設定。
Cmd 0 Holding Level Analog OUT#0 へ通常出力する値を設定します。
Cmd 1 Holding Level Analog OUT#1 へ通常出力する値を設定します。

38

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

4.6.2 刺激波形の作成
Acquire/Edit Protocol メニュー () を選択し、Wave 0 タブを選択します。刺激チャンネルがAnalog OUT#1 の場合は、Wave 1 タブを選択します。

まず、刺激の方法を設定します。

Analog Waveform 刺激波形を行う場合はチェックして下さい。
Epochs 刺激波形に、Epoch Description で作成したものを利用します。(通常設定)
Stimulus ﬁle 刺激波形に、取り込んだデータを利用します。
Inter-sweep Holding Level Sweep と Sweep との間の刺激値をいくつにするかを設定します。
Use holding Analog OUT Holding Levels の値を設定します。(通常設定)
Use last epoch 最後の epoch で指定した値を設定します。
Digital Outputs デジタル出力を利用したい場合はチェックして下さい。
Waveform 0 デジタル出力パターンを Wave 0 タブで設定します。(通常設定)
Waveform 1 デジタル出力パターンを Wave 1 タブで設定します。
Inter-sweep bit pattern Sweep と Sweep との間のデジタル出力パターンを設定します。
Use holding Digital OUT Holding Levels の値を設定します。(通常設定)
Use last epoch 最後の epoch で指定したデジタル出力パターンを設定します。
次に、刺激波形の設定を行います。Epoch Description に Epoch A〜Epoch J まで設定する事が出来ます。基本的には、Epoch A〜Epoch J の順に刺激波形として出力していきます。

Type 刺激波形の形を選択します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

39

Oﬀ 「刺激波形設定なし」の設定です。
Step ステップ波形 (矩形波) の設定です。

Ramp ランプ波形の設定です。
First LeveFirst level
Type が Step の場合 刺激電圧を設定します。
Type が Ramp の場合 ランプ波形の最終値を設定します。
Delta level 次の sweep で、First level と異なったデータを出力したい場合に設定します。相対値で記入して下さい。

Fianl level 自動的に計算されます。
First duration (samples) 各刺激波形を加えている時間をサンプル数で設定します。
First duration (ms) 自動的に計算されます。
Delta duration (samples) 次の sweep で、First duration と異なるサンプル数にしたい場合設定します。

Delta duration (ms) 自動的に計算されます。
Final duration (samples) 自動的に計算されます。
Final duration (ms) 自動的に計算されます。
Digital bit pattern (#3-0) デジタル出力パターンを設定します。

設定した刺激波形は、Update preview ボタン (刺激波形作成例 (矩形波)
下のような波形を出力する場合の設定例を示します。

) を押すと、画面上で見る事が出来ます。

40

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

Acquire/Edit Protocol メニュー () の ModeRate タブは、次のように設定します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Acquire/Edit Protocol メニュー (Update preview ボタン (41) の Wave0 タブは、次のように設定します。

) を押すとは、下のような刺激波形が確認できます。

42

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

刺激波形作成例 (複数の矩形波)
下のような波形を出力する場合の設定例を示します。

120mV

10mV step

-60mV
10ms

400ms

10ms

A

B

C

Acquire/Edit Protocol メニュー (Epoch) の ModeRate タブは、次のように設定します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Acquire/Edit Protocol メニュー (Update preview ボタン (43) の Wave0 タブは、次のように設定します。

) を押すとは、下のような刺激波形が確認できます。

44

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

刺激波形作成例 (複数の矩形波＋矩形波)
下のような波形を出力する場合の設定例を示します。

120mV

10mV step
-60mV

10ms

400ms

A

B

Acquire/Edit Protocol メニュー (

5ms
C

50ms
D

) の ModeRate タブは、次のように設定します。

10ms
Epoc
E

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Acquire/Edit Protocol メニュー (Update preview ボタン (45) の Wave0 タブは、次のように設定します。

) を押すとは、下のような刺激波形が確認できます。

46

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

刺激波形作成例 (時間幅の変化のある矩形波)
下のような波形を出力する場合の設定例を示します。

50ms step

120mV

50ms

10ms

50ms

250ms

A

B

C

Acquire/Edit Protocol メニュー (50ms
D) の ModeRate タブは、次のように設定します。

10ms
Epoch
E

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Acquire/Edit Protocol メニュー (Update preview ボタン (47) の Wave0 タブは、次のように設定します。

) を押すとは、下のような刺激波形が確認できます。

48

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

刺激波形作成例 (ランプ波)
下のような波形を出力する場合の設定例を示します。

120mV

-60mV

10ms
A
Acquire/Edit Protocol メニュー (

400ms
B

5ms
C

Epoch

) の ModeRate タブは、次のように設定します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Acquire/Edit Protocol メニュー (Update preview ボタン (49) の Wave0 タブは、次のように設定します。

) を押すとは、下のような刺激波形が確認できます。

50

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

刺激波形作成例 (複数のランプ波)
下のような波形を出力する場合の設定例を示します。

120mV

10mV step

-60mV

10ms
A
Acquire/Edit Protocol メニュー (

400ms
B

5ms
C

Epoch

) の ModeRate タブは、次のように設定します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

Acquire/Edit Protocol メニュー (Update preview ボタン (51) の Wave0 タブは、次のように設定します。

) を押すとは、下のような刺激波形が確認できます。

52

第 4 章 データ刺激・取得ソフトウェア：Clampex

4.6.3 データ取り込み
すべての設定が終わりましたら、測定を行います。

データの保存フォルダー

File/Set Data File Names... メニューを選択しますと、次の画面が表示されます。

ファイルの場所 データファイルを保存するフォルダを選択します。
ファイル名

1. ファイル名の先頭に自動で付く文字
2. 連番
Data preﬁx 自動でファイル名に日付けをつける場合
Allow long ﬁle names. MS-DOS のファイル名の 8+3 ではなく、Windows で扱えるロングファイル
名を利用する場合

画面で確認

Acquire/View メニューか、を選択すると、データを測定しはじめます。このモードでは、画面上に測定データが表示されるだけで、ファイルとして保存されません。

ファイルへデータを書き込む

Acquire/Record メニューか、を選択すると、データを測定しはじめます。このモードでは、画面上に測定データを表示し、ファイルへも保存します。

4.6 データ取得の各種設定・保存方法

53

ファイルの保存先は、File/Set Data File Names... メニューで設定する事が出来ます。

繰り返し

Acquire/Repeat メニューか、
り返し測定する事が出来ます。

を有効にし、取り込み () を行うと、データを繰

55

第5章

データ解析ソフトウェア：Clampﬁt
pCLAMP8 をインストールすると、デモデータも用意されます。このデモデータを利用し、簡単な解析例を紹介します。

5.1 解析
5.1.1 I-V カーブ
デモデータの av1.dat を利用し、I-V カーブを描いてみます。
「File/OpenData」メニューを選択し、av1.dat のデータを開くと、次のような波形が表示されます。

この波形では、取得したデータだけで、刺激波形がわかりませんので、刺激波形を表示します。

56

第 5 章 データ解析ソフトウェア：Clampﬁt「Edit/Create Stimulus Waveform Signal...」メニューを選択すると、次の画面が表示されます。刺激波形をどのチャンネルで加えたのかを指定します。ここでは、Analog OUT #0 を選択し、OK を選択して下さい。
これで、どのような刺激波形を加えたのかもわかるようになります。

この刺激波形 (電圧) と測定データ [反応](電流) で I-V カーブ (電流-電圧曲線) を書きます。

5.1 解析「Analyze/Quick Graph/I-V」メニューを選択すると、次の画面が表示されます。

ここで、X 軸と Y 軸をどのような設定にするかを選択します。括弧内が設定例です。

X-Axis(Voltage) X 軸に関する設定です。
Waveform X 軸に利用する信号名を設定します。[AO #0(millivol)]Waveform at cursor 1 カーソル 1 の刺激波形値を設定します。[チェック]
Y-Axis(Current) Y 軸に関する設定します。
Waveform Y 軸に利用する信号名を設定します。[AI #0(picoamps)]
Value at cursor 1 カーソル 1 の測定データ値を設定します。[チェック]
Graph グラフの描画方法を設定します。
Replase 現在描画されているグラフを消して、今回のグラフを描画します。[チェック]
Append 現在描画されているグラフを残して、今回のグラフを描画します。

57

58

第 5 章 データ解析ソフトウェア：Clampﬁt
前ページのような設定をすると、下のような I-V カーブが得られます。

5.1 解析5.1.2 Trace vs. Trace

59

カーブ

デモデータの rampchan.dat を利用し、Trace vs. Trace

カーブを描いてみます。

「File/OpenData」メニューを選択し、av1.dat のデータを開くと、次のような波形が表示されます。

この波形では、取得したデータだけで、刺激波形がわかりませんので、刺激波形を表示します。
「Edit/Create Stimulus Waveform Signal...」メニューを選択し、刺激波形をどのチャンネルで加えたのかを指定します。ここでは、Analog OUT #0 を選択し、OK を選択してみて下さい。

60

第 5 章 データ解析ソフトウェア：Clampﬁt
これで、どのような刺激波形を加えたのかもわかるようになります。

この刺激波形 (電圧) と測定データ [反応](電流) で電圧・電流カーブを描きます。

5.1 解析「Analyze/Quick Graph/Trace vs. Trace」メニューを選択すると、次の画面が表示されます。

ここで、X 軸と Y 軸をどのような設定にするかを選択します。カッコ内が設定例です。

X-Axis(Voltage) X 軸に関する設定です。
Trace どの sweep を利用するかを選択します。[Sweep #1]
Waveform 刺激波形の信号名を選択します。[OUT #0(mV)]Y-Axis(Current) Y 軸に関する設定です。
Trace どの sweep を利用するかを選択します。[Sweep#1]
Signal 測定データの信号名を選択します。[IN #15(pA)]
Region Trace vs. Trace 曲線を描画する範囲を選択します [Cursors 1..2]
Graph グラフの描画方法を設定します。
Replase 現在描画されているグラフを消して、今回のグラフを描画します。[チェック]
Append 現在描画されているグラフを残して、今回のグラフを描画します。

61

62

第 5 章 データ解析ソフトウェア：Clampﬁt
前ページのような設定をすると、このようなランプ刺激によるカーブが得られます。

5.1 解析5.1.3 Fitting
デモデータの av1.dat を利用し、フィティングを行ってみます。
「File/OpenData」メニューを選択し、av1.dat のデータを開くと、次のような波形が表示されます。

Fitting を行う区間を、カーソル１とカーソル２を動かして選択して下さい。

63

64

第 5 章 データ解析ソフトウェア：Clampﬁt「Analyze/Fit...」メニューを選択しますと、右の画面が表示されます。
用意されている Fitting 関数は、

Predeﬁned Function の項目で関数を選択し、Number of term(n)でその関数の次元数を選択して下さい。
この時、選択した Fitting 関数
は、下の方に式が表示されます。
用意していない関数を利用した
い場合は、Custom Function をクリックして、関数を記入して下さい。
その他、様々な設定を行う事ができますので、詳細は、英語マニュアルを参考にして下さい。

OK を押しますと、次のように Fitting が行えます。

5.2 印刷

65

5.2 印刷
データファイルを開いているウインドウや、グラフを描画しているウインドウのアイコン
すと、下のような画面が表示されます。

次の項目を設定し、 OK を押して下さい。

Column 横方向の位置を選択して下さい (最大 2)。
Row 縦方向の位置を選択して下さい (最大 3)。
Comment コメントを入力して下さい。

を押

66

第 5 章 データ解析ソフトウェア：Clampﬁt
次のように表示されます。

5.2 印刷
グラフを選択し、拡大する事により、２つの領域に、表示する事もできます。

これを、印刷したいデータ分だけ繰り返してください
印刷する場合は、「File/Print...」を選択すれば、行えます。

67

69

第6章

パッチクランプ増幅器：AxoPatch200B
このマニュアルでは、AxoPatch200B の使い方を、モデルセルを使って、説明します。

6.0.1 フロントパネル (表面)ダイアルの設定を次のように設定して下さい。

PIPETTE OFFSET 50
ZAP MANUALPIPETTE CAPACITANCE COMPENSATION FAST MAG,τ
SLOW MAG,τ

0(反時計まわりに全て)0(反時計まわりに全て)

SERIES RESISTANCE COMP. %COMPENSATION PREDICTION 0(反時計まわりに全て)
CORRECTION 0(反時計まわりに全て)
LAG(µs) 1(反時計まわりに全て)
WHOLCE-CELL PARAMETERS WHOLCE CELL CAP. 0,OFF
SERIES RESISTANCE 0
COMMANDS HOLDING COMMAND 0,times1
EXT.COMMAND OFF
METER I
MODE V-CLAMPCONFIG. WHOLE CELL β = 1
SCALED OUTPUT OUTPUT GAIN(α) ×10
LOWPASS BESSEL FILTER 5kHz

70

第 6 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch200B

LEAK SUBTRACTION inf

6.0.2 リアパネル (裏面)

スイッチを次のように設定して下さい。

SPEED TEST INPUT OFF
EXT. COMMAND INPUT REAR SWITCHED OFF
I OUTPUT(10KHz) βmV/pA
HEADSTAGE COOLING ON

6.0.3 モデルセル
モデルセルは、次の等価回路となっています。

6.1 操作方法

71

6.1 操作方法
簡単な測定時の流れを示します。

✏


✒

スタート

✑

❄
電源を入れ、電極フォルダー、ガラス電極を装着し、ダイアルを 6.0.1 項,6.0.2 項のように設定します。

❄
BATH につけて、6.1.1 項の操作を行って下さい。
電極抵抗の測定を行って下さい❄
SealTest を行ったまま、セルアタッチの状態に持っていき、続いて、ギガシール状態にします。
6.1.2 項を参考にして下さい。
❄
❍❍
✟✟✟
❍
✟

❍
✟
❍❍
✟✟
✟PATCH , WHOLE CELL の❍ PATCH Conﬁg. を PATCH にし、❍✟✲❍❍どちらの実験を行いますか？✟✟
データ取得して下さい。
✟
❍
✟
❍
✟
❍
❍❍
✟✟
❍✟✟ WHOLECELL❄
陰圧をかけ、細胞膜をやぶり、WHOLE CELL 状態にします。
6.1.3 項の操作を行って下さい。

❄
MODE を I=0(Current CLAMP) にし、モニター表示を Vm にして、静止膜電位を測定します。
測定し終えたら、MODE を V-CLAMP に戻して下さい。
❄
ホールディングポテンシャルを設定します。
pCLAMP を利用している場合は、
Clampex で、ホールディングポテンシャルを設定します。

❄
EXT.COMMAND(F) を ON にし、外部から制御できるようにします。
✒❄pCLAMP でデータ刺激・取得・解析を行います。

✏
✑

72

第 6 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch200B

6.1.1 BATH
ヘッドステージに、モデルセルを BATH 位置∗1 で接続して下さい。
右のメーターに電流値が表示されていますので、Pipet-

teOﬀset(A) を利用し、この値をゼロにします。

オシロスコープで、SCALED OUTPUT 端子 (a) を観測していると、PipetteOﬀset(A) を調整し、下の波形のよ
うに、波形が 0 に近付けます。

次に電極抵抗を測定します。EXT.COMMAND(F) を SEAL TEST にし、電極へ 5mV の矩形波を出力します。

∗1 培養液にガラス電極を入れた状態をシミュレートします。

6.1 操作方法

73

オシロスコープで、SCALED OUTPUT 端子 (a) を観測すると、左のような波形が観測されるはずです。
この時の矩形波の振幅 (Im[mV]) を測定しますと、電極抵抗を測定できます。
電極抵抗 [MΩ] = 5[mV ] ÷

Im[mV ]
÷ 10−3α × β[mV/pA]

Clampex8 で利用する場合は、EXT.COMMAND(F) をON にして、SealTest を実行してください。左上の Seal
Resistance に電極抵抗が表示されます。

矩形波の前後で出ているトランジェント波形は、PIPETTE CAPACITANCE COMPENSATIONの FAST MAG,τ や SLOW MAG,τ でキャンセルできます。

74

第 6 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch200B

6.1.2 PATCH
ヘッドステージに、モデルセルを PATCH 位置∗2 で接続して下さい。

SealTest をおこなったまま、細胞にガラス電極を当てていくと、電極抵抗がギガオームに近付いてきますと、次のような波形となり、Seal Resistance が大きくなってきます。ギガオーム表示される場合もあります。

オシロスコープでは、α = 1, β = 10 の場合に、50mV より小さい振幅となります。
矩形波の前後で出ているトランジェント波形は、PIPETTE CAPACITANCE COMPENSATIONの FAST MAG,τ や SLOW MAG,τ でキャンセルできます。
シングルチャンネルの測定の場合は、CONFIG.(I) を PATCH β = 1 にして、測定をし始めます。

∗2 ガラス電極を細胞に当てたシングルチャンネルモードをシミュレートします。

6.1 操作方法

75

6.1.3 WHOLE CELL
ヘッドステージに、モデルセルを WHOLE CELL 位置∗3 で接続して下さい。

PATCH 状態から、陰圧をかけたり、ZAP を行う事により、細胞膜をやぶる事ができ、WHOLE-CELL状態になります。
この時の抵抗値は、細胞の抵抗と電極の抵抗の合成抵抗となります。

この時の、矩形波の前後の波形をキャンセルし、矩形波のみの反応を見ていきます。

WHOLE-CELL PARAMETERS(E) を ON にし、WHOLCE
CELL CAP. と SERIES RESISTANCE を調整していきます。
SERIES RESISTANCE に先程計算した電極抵抗にダイアルをセットして下さい。その後 WHOLCE CELL CAP. を調整し、次のように波形にします。

∗3 PATCH 状態から細胞をやぶって、ホールセルモードをシミュレートします。

76

第 6 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch200B
電極抵抗の影響が大きな場合には、SERIES RESISTANCE

COMP. %CORRECTION と LAG や%PREDICTION を利用し、キャンセルしていきます。

これでは、まだ、トランジェント波形が残っていますので、PIPETTE CAPACITANCE COMPEN-

SATION の FAST MAG,τ や SLOW MAG,τ でキャンセルします。
拡大すると、下の波形となり、きれいに矩形波が表示されます。
今回は、モデルセルを利用し、実験したので、このようにキャンセルできま
すが、実際の細胞では、モデルセルの等価回路とは違いますので、このように簡単に調整できない場合が多いです。

6.2 その他の機能

6.2 その他の機能
6.2.1 MODE

ここで、V-CLAMP,I-CLAMP の選択を行います。

6.2.2 ZAP

細胞に電気刺激を加えます。
ダイアルで刺激を加えている時間を調整します。
ボタンを押すと、ダイアルの時間だけ、刺激を加えます。

6.2.3 OUTPUT GAIN(α),LOWPASS BESSEL FILTERSCALED OUTPUT から出力される信号の増幅率を変更します。

ローパスベッセルフィルタの遮断周波数を変更します。

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79

第7章

パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D
このマニュアルでは、AxoPatch1D の使い方を、モデルセルを使って、説明します。

7.0.4 フロントパネル (表面)ダイアルの設定を次のように設定して下さい。

Manual Junction Null 5 回転Auto Junction NULL OFF
Series Resistance Comp. % Compensation OFF
Step Command 000.0 , OFF
Speed Test OFF
Oscillator Freq. 100HzRSEAL T EST

OFFExt. Command Sensitivity OFF
Holding Potential OFF(反時計まわりに全て)
Zap 0.1ms

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第 7 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D

Main Meter I
Capacitance Compensation 反時計回りに全てAudio Monitor OFF
Output Cal. OFF
Mode V-CLAMPHeadStage gain β 1/0.1
RMS Noise Display I(pA,nA)
Gain(α) 1
Output Select I
Leak Subtract inf-3dB Freq. 2kHz
Active/Bypass Active
Auto Output Zero OFF

7.0.5 リアパネル (裏面)

スイッチを特にありません。

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7.0.6 モデルセル
モデルセルは、次の等価回路となっています。

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第 7 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D

7.1 操作方法
簡単な測定時の流れを示します。

✏


✒

スタート

✑

❄
電源を入れ、電極フォルダー、ガラス電極を装着し、ダイアルを 7.0.4 項,7.0.5 項のように設定します。

❄
BATH につけて、7.1.1 項の操作を行って下さい。
電極抵抗の測定を行って下さい❄
SealTest を行ったまま、セルアタッチの状態に持っていき、続いて、ギガシール状態にします。
7.1.2 項を参考にして下さい。
❄
❍❍
✟✟✟
❍
✟

❍
✟
❍❍
✟✟
✟PATCH , WHOLE CELL の❍ PATCH HEADSTAGE GAIN(F) を❍✟✲100 にし、❍❍どちらの実験を行いますか？✟✟✟❍
データ取得して下さい。
✟
❍
✟
❍
✟
❍❍
✟
❍✟✟ WHOLECELL❄
陰圧をかけ、細胞膜をやぶり、WHOLE CELL 状態にします。
7.1.3 項の操作を行って下さい。

❄
MODE を I=0(Current CLAMP) にし、モニター表示を Vm にして、静止膜電位を測定します。
測定し終えたら、MODE を V-CLAMP に戻して下さい。
❄
ホールディングポテンシャルを設定します。
pCLAMP を利用している場合は、Clampex で、ホールディングポテンシャルを設定します。

❄
EXT.COMMAND SENSITIVITY(B) を 20mV/V にし、外部から制御できるようにします。
✒❄pCLAMP でデータ刺激・取得・解析を行います。

✏✑

7.1 操作方法

7.1.1 BATH
ヘッドステージに、モデルセルを BATH 位置∗1 で接続して下さい。
右のメーターに電流値が表示されていますので、Junction NULL Manual(A) を利用し、この値をゼロにします。

オシロスコープで、SCALED OUTPUT 端子 (a) を観測していると、Junction NULL Manual(A)を調整し、下の波形のように、波形が 0 に近付けます。

次に電極抵抗を測定します。RSEAL T EST (H) を 20mV OSC. にし、電極へ 20mV の矩形波を出力します。

∗1 培養液にガラス電極を入れた状態をシミュレートします。

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第 7 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D

オシロスコープで、SCALED OUTPUT 端子 (a) を観測すると、左のような波形が観測されるはずです。
この時の矩形波の振幅 (Im[mV]) を測定しますと、電極抵抗を測定できます。
電極抵抗 [MΩ] = 5[mV ] ÷

Im[mV ]
÷ 10−3α × β[mV/pA]

Clampex8 で 利 用 す る 場 合 は 、RSEAL T EST (H) をOFF、EXT.COMMAND SENSITIVITY(B) を 20mV/Vにし、SealTest を実行してください。左上の Seal Resis-

tance に電極抵抗が表示されます。

矩形波の前後で出ているトランジェント波形は、CAPACITANCE COMP.(G) の FAST τ ,FAST

MAG,SLOW τ ,SLOW MAG でキャンセルできます。

7.1 操作方法

7.1.2 PATCH
ヘッドステージに、モデルセルを PATCH 位置∗2 で接続して下さい。

SealTest をおこなったまま、細胞にガラス電極を当てていくと、電極抵抗がギガオームに近付いてきますと、次のような波形となり、Seal Resistance が大きくなってきます。ギガオーム表示される場合もあります。

オシロスコープでは、α = 1, β = 10 の場合に、50mV より小さい振幅となります。
矩形波の前後で出ているトランジェント波形は、CAPACITANCE COMP.(G) の FAST τ ,FAST

MAG,SLOW τ ,SLOW MAG でキャンセルできます。
シングルチャンネルの測定の場合は、HEADSTAGE GAIN(β)[F] を 100 にし、測定をし始めます。

∗2 ガラス電極を細胞に当てたシングルチャンネルモードをシミュレートします。

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第 7 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D

7.1.3 WHOLE CELL
ヘッドステージに、モデルセルを WHOLE CELL 位置∗3 で接続して下さい。

PATCH 状態から、陰圧をかけたり、ZAP を行う事により、細胞膜をやぶる事ができ、WHOLE-CELL状態になります。この時の抵抗値は、細胞の抵抗と電極の抵抗の合成抵抗となります。

この時の、矩形波の前後の波形をキャンセルし、矩形波のみの反応を見ていきます。CAPACITANCE

COMP.(G) の SERIES RESISTANCE と WHOLCE CELL CAP. を調整していきます。SERIESRESISTANCE に先程計算した電極抵抗にダイアルをセットして下さい。その後 WHOLCE CELL
CAP. を調整し、次のように波形にします。

∗3 PATCH 状態から細胞をやぶって、ホールセルモードをシミュレートします。

7.1 操作方法
電極抵抗の影響が大きな場合には、SERIES RESISTANCE COMP. の%COMPENSATION のPREDICTION や CORRECTION 利用し、キャンセルしていきます。

これでは、まだ、トランジェント波形が残っていますので、CAPACITANCE COMP.(G) の FAST

τ ,FAST MAG,SLOW τ,SLOW MAG でキャンセルします。

拡大すると、の波形となり、きれいに矩形波が表示されます。今回は、モデルセルを利用し、実験したので、このようにキャンセルできますが、実際の細胞では、モデルセルの等価回路とは違いますので、このように簡単に調整できない場合が多いです。

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第 7 章 パッチクランプ増幅器：AxoPatch1D

7.2 その他の機能
7.2.1 MODE

ここで、V-CLAMP,I-CLAMP,I=0 の選択を行います。

7.2.2 ZAP

細胞に電気刺激を加えます。
ダイアルで刺激を加えている時間を調整します。
ボタンを押すと、ダイアルの時間だけ、刺激を加えます。

7.2.3 GAIN(α),-3dB FREQ.(Hz)SCALED OUTPUT から出力される信号の増幅率を変更したり、ローパスベッセルフィル
タの遮断周波数を変更します。

7.2 その他の機能

7.2.4 STEP COMMAND

STEP COMMAND に設定した電圧を刺激として加える事ができます。
スイッチにより、次のような刺激波形を加える事ができます。

OFF 刺激を行いません。
GATE STEP GATE(e) に入力された周波数
CONT. 定常出力
OSC. OSCILLATOR FREQ.(Hz) の周波数

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第8章

トラブルシューティング・Ｑ＆Ａ

8.1 トラブルシューティング
8.1.1 Digidata1322A が動作しない場合は。
次の項目を確認して下さい。

1. 電源ケーブルが外れていませんか。
2. 電源が入っていますか。
3. SCSI ケーブルが繋がっていますか。
4. コンピュータ起動時に、次のように Digidata1322A のメッセージが表示されますか。表示されていない場合は、ケーブル類がうまく繋がっていない可能性がありますので、御確認下さい。

5. Clampex で Digidata1322A が認識されていますか。
Clampex の Conﬁgure/Select Digitizer メニューを選択して、次のように表示されていますか。
以上の確認で問題がなく、しかも動作しない場合は、販売店へ御連絡ください。

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第 8 章 トラブルシューティング・Ｑ＆Ａ

8.1.2 Clampex で Digidata1322A の設定が行えない場合
プリンタポートにドングル (パラレルポートキー) がついているか確認して下さい。

Clampex の Conﬁgure/Select Digitizer メニューを選択して下さい。No dongle と表示されている場合は、ドングル (パラレルポートキー) が付いていないと判断されています。
一度プリンタポートから外し、つけなおして、再度試して下さい。
以上の確認でも不明な場合は、販売店へ御連絡ください。

8.1.3 Clampex で AxoPatch200B の制御が行えない場合
Digidata1322A は、認識されていますか。
EXT. COMMAND スイッチ (F) を ON(上側) にして、外部制御をできるようにして下さい。
以上の確認でも不明な場合は、販売店へ御連絡ください。

8.2 Ｑ＆Ａ

8.2 Ｑ＆Ａ
8.2.1 pCLAMP 用のコンピュータに MO などの外部記憶装置を増設したい。
増設は可能ですが、できる限りデータ取得専用のコンピュータとして御利用ください。増設する場合
は、SCSI ID が一緒にならないように気をつけて下さい。

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