ISSN 2433-5819

研

究

年

令和 5 年度
第7号

ANNUAL REPORTOFOSAKA INSTITUTE OF PUBLIC HEALTH

No.7(2023)

報

目

次

報 文
大阪府における 2022 年の感染症発生動向
山中靖貴，柿本健作，鵜飼友彦，西尾孝之，西田陽子，皐月由香，三山豪士，
入谷展弘，本村和嗣・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

1

大阪府における severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 の系統解析およびスパイクタ
ンパク質の変異解析
若林友騎，河原隆二，柿本健作，山口貴弘，梅川奈央，平井佑治，西嶋駿弥，
森川佐依子，廣井 聡，白井達哉，池森 亮，阪野文哉，岡田和真，前田和穂，
小山芽以，澁谷祐子，徳永佑亮，村野晃一，永吉晴奈，上野 亮，北口大毅，
田上貴臣，安達史恵，阿部仁一郎，森 治代，本村和嗣，川津健太郎・・・・・

11

大阪府内における 2022/2023 シーズンのインフルエンザ流行状況
森川佐依子，廣井 聡，阿部仁一郎，森 治代・・・・・・・・・・・・・・・

25

大阪府におけるエンテロウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2022 年度）
中田恵子，前田和穂，森 治代・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

34

大阪府における蚊媒介ウイルス感染症に対するサーベイランス調査（2022 年度）
青山幾子，池森 亮，横田正春，弓指孝博・・・・・・・・・・・・・・・・・

43

大阪府の食中毒疑い事例で検出されたノロウイルスの遺伝子解析（2022 年度）
白井達哉，牛飼裕美，山崎笑子，左近直美・・・・・・・・・・・・・・・・・

52

大阪健康安全基盤研究所における HTLV-1 確認検査
阪野文哉, 浜 みなみ, 川畑拓也, 森

治代・・・・・・・・・・・・・・・・

62

スイセン類による食中毒事例について
野村千枝，山口瑞香，新矢将尚・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

66

食品中の甘味料分析における荷電化粒子検出器の適用
新矢将尚，山口之彦・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

72

水質検査における外部精度管理（2021 年度）―六価クロム化合物―
安達史恵, 吉田 仁・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

79

大阪府における環境および食品中放射能調査（令和 4 年度報告）小池真生子，小泉義彦，肥塚利江，大山正幸，山口進康・・・・・・・・・・・

86

大阪府内中核市における公衆浴場等浴槽水のレジオネラ属菌および水質状況調査
枝川亜希子，安達史恵，小池真生子，肥塚利江，松島加代，土屋誠・・・・・

94

抄 録2022 年大阪府での異性間性的接触男性及び女性の梅毒報告数増加について（英文）鵜飼友彦，柿本健作，川畑拓也，三山豪士，入谷展弘，本村和嗣・・・・・・・

102

配偶者の健康行動が他方に与える影響（英文）鵜飼友彦，田淵貴大，磯 博康・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

102

大阪府における新型コロナウイルス感染症の発症から届出までの時間に関連する因子（英文）
三山豪士，柿本健作，入谷展弘，本村和嗣・・・・・・・・・・・・・・・・・

103i日本において新型コロナウイルス感染症の二次感染の過分散は時間経過とともに低下した（英文）三山豪士 ，S.M. JUNG，西浦 博

103

日本における RSV 感染症の流行期開始基準値の探索（英文）
三山豪士，柿本健作，入谷展弘，西尾孝之, 鵜飼友彦, 皐月由香, 山中靖貴,
西田陽子, 新谷 歩, 本村和嗣・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

104

逐次抽出法による畜水産物の筋肉および牛乳中の残留動物用医薬品の LC-MS/MS 一斉分析法
上村聖子，先山孝則，浅川大地，山野哲夫・・・・・・・・・・・・・・・・・

104

マルチプレックス・リアルタイム PCR を用いたジフテリア毒素産生性コリネバクテリウム・ウルセ
ランスおよびコリネバクテリウム・シュードツベルクローシスの検出法（英文）川瀬 遵，酒井智健，岩城正昭，梅田 薫，福間藍子，藤沢直輝，川上優太，
林 宏樹，和田美江子・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

105

大阪市で発生した原因不明の B 型乳児ボツリヌス症分離株の全ゲノム比較解析（英文）梅田 薫，平井佑治，中村寛海，天羽清子・・・・・・・・・・・・・・・・・

105

工場で炊飯された米飯による食中毒リスクの調査
梅田 薫，松林雄一，中村寛海，松浦義治，吉岡馨子，奥原潤・・・・・・・

106

大阪府における侵襲性肺炎球菌感染症由来菌株の血清型分布；2018～2021 年
河原隆二，山口貴弘，安楽正輝，河合高生，山地良彦，西森彩音，池条裕希絵，
上野菜美・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

106

Stx1a、Stx1c、Stx1d、Stx2a、Stx2b、Stx2c、Stx2d、Stx2e、Stx2f および Stx2g 遺伝子を検出するためのリアルタイム PCR 法（英文）原田哲也，若林友騎，勢戸和子，李 謙一，伊豫田 淳，川津健太郎・・・・・

107

Ready-to-eat 食品製造環境のリステリア汚染状況と食品の特性に応じた汚染制御についての考察
中村寛海・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

107

日本のゴキブリによるパイナップルリリーへの訪花（英文）山﨑一夫・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

108

室内塵中の皮膚糸状菌や好ケラチンカビと水虫症状
浜田信夫，御厨真幸，永目知広，馬場孝，阿部仁一郎・・・・・・・・・・・

108

麻疹排除後の集団免疫の減衰：大阪府における長期血清疫学調査（2003-2020 年）（英文）倉田貴子，三山豪士，上林大起，改田祐子，青山幾子，池森 亮，阪野文哉，
川畑拓也，森 治代，本村和嗣・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

109

風しん患者におけるウイルス RNA と感染性ウイルスの排出について（英文）上林大起，倉田貴子，改田 厚，久保英幸，山元誠司，江川和孝，平井有紀，
岡田和真，改田祐子，池森 亮，弓指孝博，伊藤文美，齊藤武志，山地良彦，
西野裕香、大森亮介，森 治代，本村和嗣，生田和良・・・・・・・・・・・・

1092011 年から 2021 年に大阪で麻しん又は風しんが疑われた症例におけるパルボウイルス B19 の寄与（英文）
改田祐子，上林大起，倉田貴子，森 治代・・・・・・・・・・・・・・・・・

110

マルチプレックス PCR 検査が有用であった，皮疹を伴わない水痘帯状疱疹ウイルス髄膜炎の 1 例ii

西本凪里，酒井亮太，大梅成崇，植山浩一，柿下優衣，濱 浩隆，若原良平，
西村 章，上林大起，中田恵子，今村卓司・・・・・・・・・・・・・・・・・

110

感染症流行予測調査事業・B 型肝炎感受性調査結果（2018～2021 年）−大阪府
阪野文哉，川畑拓也，浜 みなみ，青山幾子，倉田貴子，上林大起，池森 亮，
改田祐子，森 治代・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

111

COVID-19 対策が小児感染症に与えた影響（英文）左近直美，高橋知子，吉田俊明，白井達哉，駒野淳・・・・・・・・・・・・

111

ノロウイルス感染に対するナノ抗体の乳酸菌 デリバリーベクター（英文）幸 義和，F. Zuo，黒河志保，内田洋平，佐藤慎太郎，左近直美，L. Hammarström
清野 宏，H. Marcotte・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

112

合成樹脂製の器具・容器包装における溶出試験の精度の検証
尾崎麻子，六鹿元雄，岸 映里，阿部智之，阿部 裕，安藤景子，石原絹代，
牛山温子，内田晋作，大坂郁恵，大野浩之，風間貴充，加藤千佳，小林 尚，
佐藤 環，柴田 博，関戸晴子，髙島秀夫，田中 葵，外岡大幸，花澤耕太郎，
山口未来，山田悟志，吉川光英，渡辺一成，佐藤恭子・・・・・・・・・・・・

112

台所用洗浄剤中のメタノール改良分析法の室間共同実験
阿部 裕，阿部智之，大野浩之，大橋公泰，尾崎麻子，風間貴充，片岡洋平，
鈴木公美，永井慎一郎，花澤耕太郎，早川雅人，平林直之，山口未来，渡辺一成，
六鹿元雄，佐藤恭子・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

113

市販魚介加工品の総水銀調査
油谷藍子，仲谷正，尾崎麻子，山口之彦，山野哲夫・・・・・・・・・・・・・

113

物理的再生法により製造された PET ボトルを液状調味料および食用油の容器に適用した場合の安全性評価
近藤康一，小塚莉加，桑垣傳美，髙橋章仁，長野 学，平野尚美，廣澤 憲，
杉山健一，尾崎麻子・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

114

固相カラムを用いた土壌・堆積物中メチル水銀の簡便・迅速な分析法の開発（英文）柿本幸子，吉光真人，清田恭平・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 4

LC-MS/MS を利用した鶏卵酵素加水分解物に含まれるオボアルブミン分解度の測定（英文）清田恭平，吉光真人，松井啓史・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 5

ポリエチレンテレフタレート（PET）ボトルに含まれる揮発性化合物の同定ならびに食品擬似溶媒や清涼飲料水への短期および長期の移行について（英文）尾崎麻子，岸 映里，大嶋智子，角谷直哉，阿部 裕，六鹿元雄，山口之彦，
山野哲夫・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 5

GC-MS を用いた合成樹脂製器具・容器包装に含まれる化学物質の同定
尾崎麻子，水口（深瀬）智晴，岸 映里，山口之彦，山野哲夫・・・・・・・・

11 6

ヒトチトクローム P4501B1 および 2A13 による 3'-メトキシフラボン、4'-メトキシフラボン、および
3'、4'-ジメトキシフラボンおよび 5,7-ジヒドロキシル部分を有する誘導体の酸化（英文）島田 力，永吉晴奈，村山典恵，澤井亜月，V. KIM, D. KIM，山崎浩史，F.P.
GUENGERICH，竹中重雄・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 6

スポンジたわしを介した調理用ボウル間の小麦アレルゲンの二次汚染
iii

橋本博行，池田達哉，吉光真人，清田恭平・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 7

2 次微分可視吸収スペクトルへの Multivariate Curve Resolution 法の適用によるシロップ中の 5 種のトリアリールメタン系着色料の同時定量法（英文）松井啓史，山崎朋美・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 7

エンメイソウについて HPLC によるエンメイン分析法の検討と市場品の分析
田上貴臣，石田晃大，石原理恵，伊藤美千穂，大井逸輝，岡坂 衛，河端昭子，
酒井英二，蔦原稜太，西尾雅世，松田久司，森川敏生，山本 豊，横倉胤夫・・

11 8

ハイスループットシーケンシングによる上水道配水システムにおける細菌多様性と群集構造の解析（英文）小泉義彦，一條知昭，内井喜美子，那須正夫・・・・・・・・・・・・・・・・

11 8

二酸化窒素と喘息症状との関連における亜硝酸の役割：モルモットの特異的気道抵抗に対する亜硝酸曝露の影響（英文）大山正幸, 東 賢一, 峰島知芳, 竹中規訓, 安達修一・・・・・・・・・・・・

11 9

ナノポアシーケンサを用いた 16S rRNA 遺伝子アンプリコンシーケンスによる井戸水の衛生微生物
学的水質評価（英文）味村真弓，小泉義彦，和田匡司，一條知昭，内井喜美子，那須正夫・・・・・・

11 9

子どもにおける住宅内での有機リン系化合物の曝露と室内空気質の寄与（英文）吉田俊明, 味村真弓, 左近直美・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

120

液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析計を用いた水道水中ペルフルオロアルキル酸の一斉分
析法開発と妥当性評価（英文）小林憲弘，高木総吉，木下輝昭，坂田 脩，仲野富美，渡辺直人，野村あづみ，
河相暢幸，平岩俊也，奥村 学，古川浩司，粕谷智浩，岩間紀知，米久保 淳，
髙原玲華，田中誠也，土屋裕子，五十嵐良明・・・・・・・・・・・・・・・・

120

環境中の有機微量汚染物質の迅速的かつ網羅的分析のための液体クロマトグラフィー四重極飛行
時間質量分析法を用いた新規自動同定・定量化データベースについて（英文）門上希和夫，宮脇 崇，高木総吉，岩渕勝己，戸渡寛法，吉野共広，八木正博，
会田祐司，伊藤朋子，竹峰秀祐，中島大介，X. Li・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

121

高速液体クロマトグラフ質量分析計（LC-MS/MS）を用いたアルデヒド前駆体 20 物質の一斉分析法の開発
小池真生子，吉田 仁，山口進康・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

121

大阪府内浄水場におけるフィプロニルおよびフィプロニル分解物 4 種の実態調査
小池真生子，長谷川有紀，高木総吉，吉田 仁，安達史恵，小泉義彦，中島孝江，
竹中凜代，山口進康・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

122

ガスクロマトグラフ－質量分析計（GC/MS）を用いた水道水中イプフェンカルバゾンの分析法検討
吉田 仁，高木総吉・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

122

一般細菌検査における外部精度管理の試み
安達史恵, 吉田 仁, 吉田直志, 谷口直生, 竹中凛代, 上澤行成, 山口進康・・

123

学位論文概要CHERP による選択的 mRNA スプライシング制御
山中靖貴・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

124

iv

上水道配水システムにおけるハイスループットシーケンシングによる細菌の多様性と群集構造解析
小泉義彦・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

126

16S rRNA 遺伝子全長のアンプリコンシーケンスによる浅井戸の衛生微生物学的水質評価
味村真弓・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

128

ANNUAL REPORT OF OSAKA INSTITUTE OF PUBLIC HEALTHCONTENTS
O rig ina l Art ic le s
Surveillance of infectious diseases in Osaka Prefecture in 2022 (in Japanese)
Y. YAMANAKA, K. KAKIMOTO, T. UKAI, T. NISHIO, Y. NISHIDA, Y. SATSUKI, T.
MIYAMA, N. IRITANI and K. MOTOMURA・・・・・・・・・・・・・・・・・

1

Phylogenetic analysis and spike mutation profiles of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 in Osaka(in Japanese)
Y. WAKABAYASHI, R. KAWAHARA, K. KAKIMOTO, T. YAMAGUCHI, N.
UMEKAWA, Y. HIRAI, S. NISHIJIMA, S. MORIKAWA, S. HIROI, T. SHIRAI, R.
IKEMORI, F. BANNO, K. OKADA, K. MAEDA, M. KOYAMA, Y. SHIBUTANI, Y.
TOKUNAGA, K. MURANO, H. NAGAYOSHI, R. UENO, D. KITAGUCHI, T.
TAGAMI, F. ADACHI, N. ABE, H. MORI, K. MOTOMURA and K. KAWATSU・・・

11

Epidemic situation of influenza during the 2022/2023 season in Osaka Prefecture (in Japanese)
S. MORIKAWA, S. HIROI, N. ABE and H. MORI・・・・・・・・・・・・・・・・

25

Epidemic situation and molecular-epidemiological analysis of enterovirus infection in Osaka Prefecture (Fiscal
2022 Report) (in Japanese)
K. NAKATA, K. MAEDA and H. MORI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

34

Mosquito-borne virus surveillance in Osaka Prefecture (Fiscal 2022 Report) (in Japanese)
I. AOYAMA, R. IKEMORI, M. YOKOTA and T. YUMISASHI・・・・・・・・・・

43

Genetic analysis of norovirus outbreaks in case of food poisoning in Osaka Prefecture (Fiscal 2022 report) (inJapanese)
T. SHIRAI, Y. USHIKAI, E. YAMAZAKI and N. SAKON・・・・・・・・・・・・

52

HTLV-1 confirmation tests at Osaka Institute of Public Health (in Japanese)
F. BANNO, M. HAMA, T. KAWAHATA and H. Mori・・・・・・・・・・・・・・

62

Case study on Narcissus-induced foodborne illness (in Japanese)
C. NOMURA, M. YAMAGUCHI and M. SHINYA・・・・・・・・・・・・・・・

66

Simultaneous analysis of sweeteners in foods using HPLC with charged aerosol detector (in Japanese)
M. SHINYA and Y. YAMAGUCHI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

72

External quality control for the analytical method for the measurement of chromium (VI) in tap water,
performed in 2021 in Osaka Prefecture (in Japanese)
F. ADACHI and J. YOSHIDA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
Survey of environmental and food radioactivity in Osaka Prefecture（Fiscal 2022 Report）(in Japanese)v

79

M. KOIKE, Y. KOIZUMI, T. HIZUKA, M. OHYAMA and N. YAMAGUCHI・・・・

86

Survey of Legionella bacteria and water quality of bath water from public bathhouses in core cities,
Osaka Prefecture, Japan (in Japanese)
A. EDAGAWA, F. ADACHI, M. KOIKE, T. HIZUKA, K. MATSUSHIMA and M.
TSUCHIYA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

94

Ab stra ct s
Resurgence of syphilis in 2022 among heterosexual men and women in Osaka, Japan
T. UKAI, K. KAKIMOTO, T. KAWAHATA, T. MIYAMA, N. IRITANI, and K.
MOTOMURA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

102

The impact of spousal behavior changes on smoking, drinking and physical activity: The longitudinal surveyof middle-aged and elderly persons in Japan
T. UKAI, T.TABUCHI and H. ISO・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

102

Factors associated with time lag between symptom onset and reporting in the first epidemic wave of COVID19 in Osaka, Japan
T. MIYAMA, K. KAKIMOTO, N. IRITANI, K. MOTOMURA・・・・・・・・・・

103

Decrease in overdispersed secondary transmission of COVID-19 over time in Japan
T. MIYAMA, SM. JUNG, H. NISHIURA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

103

Exploring the threshold for the start of respiratory syncytial virus infection epidemic season using sentinel
surveillance data in Japan
T. MIYAMA, K. KAKIMOTO, N. IRITANI, T. NISHIO, T. UKAI, Y. SATSUKI, Y.
YAMANAKA, Y. NISHIDA, A. SHINTANI, K. MOTOMURA・・・・・・・・・・

104

LC-MS/MS method for simultaneous determination of veterinary drugs in muscle of animal and fisheryproducts and milk using sequential extraction (in Japanese)
M. UEMURA, T. SAKIYAMA, D. ASAKAWA and T. YAMANO・・・・・・・・・

104

Rapid detection and discrimination of potentially toxigenic Corynebacterium ulcerans and Corynebacterium
pseudotuberculosis by multiplex real-time PCR and amplicon melting curve analysis
J. KAWASE, T. SAKAI, M. IWAKI, K. UMEDA, A. FUKUMA, N. FUJISAWA, Y.
KAWAKAMI, H. HAYASHI and M. WADA・・・・・・・・・・・・・・・・・・

105

Comparative whole-genome sequence analysis of a BoNT/B5-producing Clostridium botulinum isolate froman infant botulism case of unknown source in Osaka, Japan
K. UMEDA, Y. HIRAI, H. NAKAMURA and K. AMO・・・・・・・・・・・・・

105

The risk of food poisoning associated with cooked rice produced in rice cooking factory (in Japanese)
K. UMEDA, Y. MATSUBAYASHI, H. NAKAMURA, Y. MATSUURA, K. YOSHIOKA
and J. OKUHARA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

106

Serotype distribution of isolates from Invasive Pneumococcal infections in Osaka: 2018-2021 (in Japanese)
R. KAWAHARA, T. YAMAGUCHI, M. ANRAKU, T. KAWAI, Y.YAMAJI, A.
NISHIMORI, Y. IKEJO and N. UENO・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

106

Real-time PCR assays to detect 10 Shiga toxin subtype (Stx1a, Stx1c, Stx1d, Stx2a, Stx2b, Stx2c, Stx2d, Stx2e,
Stx2f, and Stx2g) genes
T. HARADA, Y. WAKABAYASHI, K. SETO, K. LEE, S. IYODA and K. KAWATSU

107

Prevalence of Listeria monocytogenes in Ready-To-Eat food processing environments and consideration ofcontamination control according to food characteristics (in Japanese)
H. NAKAMURA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

107

Visitation of African pineapple lily flowers (Eucomis autumnalis (Mill.) Chitt. and Eucomis comosa Houtt. ex.
viWehrh.) by Japanese cockroaches
K. YAMAZAKI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

108

Dermatophytes and other keratinophilic fungi in house dust and human ringworm patients (in Japanese)
N. HAMADA, M. MIKURIYA, T. NAGAME, T. BABA and N. ABE・・・・・・・・

108

Increasing seroprevalence but waning herd immunity against measles after elimination: Longitudinalseroepidemiology of measles in Osaka Prefecture, Japan, 2003-2020
T. KURATA, T. MIYAMA, D. KANBAYASHI, Y. KAIDA, I. AOYAMA, R. IKEMORI,
F. BANNO, T. KAWAHATA, H. MORI, and K. MOTOMURA・・・・・・・・・・

109

Shedding of rubella virus in postsymptomatic individuals; viral RNA load is a potential indicator to estimate
candidate patients excreting infectious rubella virus
D. KANBAYASHI, T. KURATA, A. KAIDA, H. KUBO, SP. YAMAMOTO , K.
EGAWA, Y. HIRAI, K. OKADA, Y. KAIDA, R. IKEMORI, T. YUMISASHI, A. ITO, T.
SAITO, Y. YAMAJI, Y. NISHINO, R. OMORI, H. MORI, K. MOTOMURA, and K.
IKUTA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

109

Contribution of parvovirus B19 in suspected cases of measles/rubella in Osaka, Japan, between 2011 and 2021
Y. KAIDA, D. KANBAYASHI, T. KURATA, and H. MORI・・・・・・・・・・・・

110

A case of varicella-zoster virus meningitis without rash diagnosed by multiplex PCR (in Japanese)
N. NISHIMOTO, R. SAKAI, M. OUME, H. UEYAMA, Y. KAKISHITA, H. HAMA, R.
WAKAHARA, A. NISHIMURA, D. KANBAYASHI, K. NAKATA and T. IMAMURA・110

The results of Hepatitis B Susceptibility Surveillance (2018-2021) in Osaka Prefecture in the National
Epidemiological Surveillance of Vaccine -Preventable Disease (in Japanese)
F. BANNO, T. KAWAHATA, M. HAMA, I. AOYAMA, T. KURATA, D.
KANBAYASHI, R. IKEMORI, Y. KAIDA and H. MORI・・・・・・・・・・・・・

111

Impact of COVID-19 countermeasures on pediatric infections
N. SAKON, T. TAKAHASHI, T. YOSIDA, T. SHIRAI, J. KOMANO・・・・・・・・・

111

Lactobacilli as a Vector for Delivery of Nanobodies against Norovirus Infection
Y. YUKI, F. ZUO, S. KUROKAWA, Y. UCHIDA, S. SATO, N. SAKON, L.
HAMMARSTRÖM, H. KIYONO, and H. MARCOTTE・・・・・・・・・・・・・

112

Validation study on migration test for plastic food utensils, containers, and packaging (in Japanese)
A. OZAKI, M. MUTSUGA, E. KISHI, T. ABE, Y. ABE, K. ANDO, K. ISHIHARA, A.
USHIYAMA, S. UCHIDA, I. OHSAKA, H. OHNO, T. KAZAMA, C. KATO, H.
KOBAYASHI, T. SATO, H. SHIBATA, H. SEKIDO, H. TAKASHIMA, A. TANAKA,
H. TONOOKA, K. HANAZAWA, M. YAMAGUCHI, S. YAMADA, M. YOSHIKAWA,
K. WATANABE and K. SATO・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

112

Inter-laboratory Study on the Modified Method Assessment for the Determining Methanol Content in Kitchen
Detergents (in Japanese)
Y. ABE, T. ABE, H. OHNO, K. OHASHI, A. OZAKI, T. KAZAMA, Y. KATAOKA, K.
SUZUKI, S. NAGAI, K. HANAZAWA, M. HAYAKAWA, N. HIRABAYASHI, M.
YAMAGUCHI, K. WATANABE, M. MUTSUGA and K. SATO・・・・・・・・・・

113

Survey of total mercury content in fishery products (in Japanese)
A. YUTANI, T. NAKATANI, A. OZAKI, Y. YAMAGUCHI, and T. YAMANO・・・・

113

Safety evaluation of PET bottles regenerated through mechanical recycling for use as liquid-seasoning andedible-oil containers (in Japanese)
K. KONDO, R. KOZUKA, D. KUWANAGA, A. TAKAHASHI, M. NAGANO, N.
HIRANO, K. HIROSAWA, K. SUGIYAMA, and A. OZAKI・・・・・・・・・・・

114

Development of a Solid Phase Extraction‑Based Method for the Quantitative Analysis of Methylmercury invii

Soil and Sediment

S. KAKIMOTO, M. YOSHIMITSU and K. KIYOTA・・・・・・・・・・・・・・

11 4

Determination of degradation degree of ovalbumin in hen’s egg enzymatic hydrolysates using liquid
chromatography–tandem mass spectrometry
K. KIYOTA, M. YOSHIMITSU and H. MATSUI・・・・・・・・・・・・・・・・

11 5

Determination of potential volatile compounds in polyethylene terephthalate (PET) bottles and their short- andlong-term migration into food simulants and soft drink
A. OZAKI, E. KISHI, T. OOSHIMA, N. KAKUTANI, Y. ABE, M. MUTSUGA, Y.
YAMAGUCHI and T. YAMANO・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 5

GC-MS analysis for the identification of chemical substances in food utensils, containers and packaging (inJapanese)
A. OZAKI, C. MIZUGUCHI-FUKASE, E. KISHI, Y. YAMAGUCHI and T. YAMANO・

11 6

Oxidation of 3'-methoxyflavone, 4'-methoxyflavone, and 3',4'-dimethoxyflavone and their derivatives having
5,7-dihydroxyl moieties by human cytochromes P450 1B1 and 2A13
T. SHIMADA, H. NAGAYOSHI, N. MURAYAMA, A. SAWAI, V. KIM, D. KIM, H.
YAMAZAKI, F P. GUENGERICH and S. TAKENAKA・・・・・・・・・・・・・

11 6

Secondary contamination by wheat allergens across cooking bowls through the use of sponge scourers (inJapanese)
H. HASHIMOTO, T. M. IKEDA, M. YOSHIMITSU and K. KIYOTA・・・・・・・・

11 7

Simultaneous determination of five triarylmethane colorants in syrup by applying multivariate curve resolution
to second‑derivative visible absorption spectra
H. MATSUI and T. YAMASAKI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

11 7

Studies on ISODONIS HERBA (in Japanese)
T. TAGAMI, A. ISHIDA, R. ISHIHARA, M. ITO, I. OI, M. OKASAKA, A.
KAWABATA, E. SAKAI, R. TSUTAHARA, K. NISHIO, H. MATSUDA, T.
MORIKAWA, Y. YAMAMOTO and T. YOKOKURA・・・・・・・・・・・・・・

11 8

Changes in bacterial diversity and community structure in drinking water distribution system revealed by highthroughput sequencing
Y. KOIZUMI, T. ICHIJO, K. UCHII and M. NASU・・・・・・・・・・・・・・

11 8Role of nitrous acid in the association between nitrogen dioxide and asthma symptoms: effect of nitrous acid
exposure on specific airway resistance in guinea pigs
M. OHYAMA, K. AZUMA, C. MINEJIMA, N. TAKENAKA and S. ADACHI・・・・

11 9

Microbial water quality assessment of private wells using 16S rRNA gene amplicon sequencing with ananopore sequencer
M. MIMURA, Y. KOIZUMI, M. WADA, T. ICHIJO, K. UCHII and M. NASU・・・・

11 9

Exposure to organophosphorus compounds of Japanese children and the indoor air quality in their residences
T. YOSHIDA, M. MIMURA and N. SAKON・・・・・・・・・・・・・・・・・・

120

Development and validation of an analytical method for simultaneous determination of perfluoroalkyl acids indrinking water by liquid chromatography/tandem mass spectrometry
N. KOBAYASHI, S. TAKAGI, T. KINOSHITA, O. SAKATA, F. NAKANO, N.
WATANABE, A. NOMURA, N. KAWAI, T. HIRAIWA, M. OKUMURA, K.
FURUKAWA, T.KASUYA, N. IWAMA, J. YONEKUBO, R. TAKAHARA, S.
TANAKA, Y, TSUCHIYA and Y. IKARASHI・・・・・・・・・・・・・・・・・

120

Novel automated identification and quantification database using liquid chromatography quadrupole time-offlight mass spectrometry for quick, comprehensive, cheap and extendable organic micro-pollutant analysis inenvironmental systems
viii

K. KADOKAMI, T. MIYAWAKI, S. TAKAGI, K. IWABUCHI, H. TOWATARI, T.
YOSHINO, M. YAGI, Y. AITA, T. ITO, S. TAKEMINE, D. NAKAJIMA and X. Li・・

121

Development of an analytical method for simultaneous determination of the 20 aldehyde precursors using ahigh-performance liquid chromatograph-mass spectrometer (LC-MS/MS) (in Japanese)
M. KOIKE, J. YOSHIDA and N. YAMAGUCHI・・・・・・・・・・・・・・・・

121

Presence of fipronil and four fipronil degradation products in raw and drinking water in Osaka, Japan (inJapanese)
M. KOIKE, Y. HASEGAWA, S. TAKAGI, J. YOSHIDA, F. ADACHI, Y. KOIZUMI, T.
NAKAJIMA, T. TAKENAKA and N. YAMAGUCHI・・・・・・・・・・・・・・

122Development of an analytical method for ipfencarbazone in tap water using a gas chromatograph mass
spectrometer (GC/MS) (in Japanese)
J. YOSHIDA and S. TAKAGI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

122

A trial of external quality assessment in standard plate count of tap water (in Japanese)
F. ADACHI, J. YOSHIDA, N. YOSHIDA, T. TANIGUCHI, T. TAKENAKA, Y.
UEZAWA and N. YAMAGUCHI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

123

T he si s s u mma r y
CHERP regulates the alternative splicing of pre-mRNAs in the nucleus
Y. YAMANAKA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

124

Changes in bacterial diversity and community structure in drinking water distribution system revealed by highthroughput sequencing
Y. KOIZUMI・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

126

Microbial water quality assessment of shallow wells using full-length 16S rRNA gene amplicon sequencing
M. MIMURA・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

128

ix

報

文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 1-10 (2023)

大阪府における 2022 年の感染症発生動向

山中靖貴 a，柿本健作 a，鵜飼友彦 a，西尾孝之 a，西田陽子 a，
皐月由香 a, 三山豪士 b, 入谷展弘 a，本村和嗣 c

我が国において、新型コロナウイルス感染症に対するワクチン接種が進んだことや治療薬が使用されていることで、重症化や入院が抑制され、行動制限や感染防止対策が緩和されている。2022 年大阪府における定点把握感染症の発生動向について、2015～2019、2020 及び 2021 年と比較・検討した。定点把握感染症のうち、多くの感染症で 2022 年における報告数が 2021 年と比較して変化がなかったが、RS ウイルス感染症と突発性発しんは少なかった。我が国より早期に、新型コロナウイルス感染症対策を緩和または撤廃した諸外国では、他の感染症で陽性者数が増加または流行時期が例年と異なるものがあった。我が国もコロナ禍前の日常生活に戻りつつある中で、注意する必要がある。

キーワード：感染症発生動向調査、新型コロナウイルス感染症、2022 年、RS ウイルス感染症、突発性発しん

新型コロナウイルス感染症は、2019 年 12 月に中華人民共和国武漢市で感染者が初めて報告され、世した 4)。
我々は、コロナ禍における 2020、2021 年の大阪界中に拡大している。南アフリカ共和国で 2021 年
11 月に初確認されたオミクロン株は、新規陽性者数が以前の従来株や変異株による感染拡大時よりも多いことから、感染力が高いと推察される一方、入院や重症化リスクが低い傾向があり 1-4)、また、予防にワクチン接種が推奨され、治療でモノクローナル

府及び全国の感染症発生動向の情報を収集・解析しており 8,9)、2022 年の大阪府における感染症の発生動向について、新型コロナウイルス感染症流行以前の過去 5 年（2015～2019 年）、2020 年及び 2021 年を比較または検討した。

抗体や抗ウイルス薬が使用され、感染拡大を防止しながら、コロナ禍前の日常生活に戻す取組みが段階的に進められている 4-7)。
2022 年の大阪府における新型コロナウイルス感染症の新規陽性者数について、第 6 波が第 6 週（2月 7 日～2 月 13 日）及び第 7 波が第 30 週（7 月 25

方 法
調査期間は 2015 年から 2022 年までとして、2015～2019 年の過去 5 年間を平年とした。
対象疾患は感染症発生動向調査実施要綱に定める定点把握感染症のうち、小児科定点・インフル日～7 月 31 日）にそれぞれピークに達した（図 1）5,6)。2022 年に大阪府では、まん延防止等重点措置が1 度発令され、大阪府新型コロナ警戒信号（大阪モデル）の赤信号が 3 度点灯した。また、同年 7 月 1日時点で、大阪府のワクチン 3 回接種率は全人口で55.4%、9 月 1 日時点で、4 回接種率は同 20.5%に達

エンザ定点・眼科定点疾患（小児科・インフルエ
ンザ・眼科定点）とした。
感染症サーベイランスシステム (National
Epidemiological Surveillance of Infectious Disease、
NESID) より大阪府における各年の感染症報告数
情報を収集した。NESID の感染症報告数情報にa 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部健康危機管理課
b 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部疫学解析研究課
c 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部-1-

図 1 大阪府における新型コロナウイルス感染症週別新規陽性者数・累積者数、規制状況（大阪府感染症
情報センター 新型コロナウイルス感染症 http://www.iph.pref.osaka.jp/infection/disease/corona.html を改変）
表 1 2020、2021 及び 2022 年の報告数と平年との比較表現
2020、2021 及び 2022 年の累積報告数

平年との比較

平年 Avg* ＋3×平年 SD* 以上

多い（+ + +）平年 Avg＋2×平年 SD 以上
平年 Avg＋3×平年 SD 未満

多い（+ +）

平年 Avg＋平年 SD 以上

多い（+）

1

2

平年 Avg＋2×平年 SD 未満
平年 Avg－平年 SD 以上
平年 Avg＋平年 SD 未満

平年並み

平年 Avg－2×平年 SD 以上

少ない（−）

平年 Avg－平年 SD 未満
平年 Avg－3×平年 SD 以上
平年 Avg－2×平年 SD 未満

少ない（− −）

平年 Avg－3×平年 SD 未満

少ない（− − −）*12015～2019 年までの年別定点あたり累積報告数の平均［average、Avg（本稿では平年 Avg と称す）］
2
* 2015～2019 年までの年別定点あたり累積報告数の標準偏差［standard deviation、SD（本稿では平年 SD と
称す）
］

-2-

は、週別の報告者数と定点あたり報告者数（週別の報告者数を定点医療機関数で除したもの）が含まれる。各年の週別定点あたり報告数の合計を年別の定点あたり報告数とし解析に用いた。
各感染症における平年の年別定点あたり報告数くなった。
RS ウイルス感染症は、定点あたり報告数が 2022
年第 25 週（6 月 20 日～26 日）で大阪府での流行期
入りの目安 0.4 を超え 10-12)、第 29 週（7 月 18 日～
24 日）に、2015 年以降で最も高いピーク（7.30）にの平均［average、Avg（本稿では平年 Avg と称す）］及びその標準偏差［standard deviation、SD（本稿では平年 SD と称す）］を算出した。2020、2021 及び 2022 年の報告数と平年 Avg を比較して、表 1 の通り分類するとともに、定点あたり報告数について、週毎の傾向を確認し、コロナ禍に達したが、ピークの時期が 7 月であった年は 2022
年以外になかった（図 2a）。また 2022 年の定点あたり累積報告数は、過去 10 年で最多の報告数が確認された 2021 年より少ないが 10)、平年と 2020 年より多かった（表 2、図 3a）。0～5 歳児の各年齢別感染者割合について、2022 年は 2021 年と比較して、大おける感染症発生動向について検討した。

2020、2021 及び 2022 年について小児科・インフ
ルエンザ・眼科定点に指定された大阪府の医療機関

きな変化がなかった（図 4）
突発性発しんは、2022 年第 22 週（5 月 30 日～6
月 5 日）がピーク（0.44）で、第 8 週（2 月 21 日～
27 日）が最も低い値（0.09）であった。年間を通して、毎週の定点あたり報告数は一定であった（図 2b）
13)。また 2015 年以降、定点あたり累積報告数が年々からの報告数の総計はそれぞれ 88,662、76,119 及び68,598 例であり、年々減少していた。2020～2022 年の大阪府における定点把握感染症の年別定点あたり累積報告数及び平年との比較を表 2 に示した。
2022 年は 2021 年と比較して、多くの感染症で変化がなく、多くなった感染症はなかった。他方、RS ウ

減少し、2022 年は最も少なかった（表 2、図 3a）。
2007 年以降に大阪府において、0 歳児人口の減少と共に、年別定点あたり累積報告数が年々減少傾向であり（図 5a）14)、0 歳の占める割合が減少した一方で、1～5 歳以上の割合が増加傾向であった（図 5b）。
インフルエンザと手足口病はそれぞれ 2021 年とイルス感染症（2021 年：+ + +、2022 年：+）と突発性発しん（2021 年：－－、2022 年：－－－）は少な

2022 年の間で報告数に変化がないという結果であったが（表 2）
、両疾患とも平年、2020 または 2021

結 果

表 2 2020、2021 及び 2022 年の大阪府における定点把握感染症の年別定点あたり累積報告数及び平年との
比較

小
児
科
・
イ
ン
フ
ル
エ
ン
ザ

平年SD

2020年

インフルエンザ

272.7060.49

143.69

ＲＳウイルス感染症

53.87

7.81

5.76

咽頭結膜熱

25.66

1.31

10.45

Ａ群溶血性レンサ球菌咽頭炎

110.89

3.93

47.89

感染性胃腸炎304.2442.55

120.88

水痘

21.10

4.16

9.06

手足口病

78.84

55.87

3.17

伝染性紅斑

16.57

13.67

3.85

突発性発しん

23.43

2.87

19.43

ヘルパンギーナ

29.87

7.42

7.93

- -

12.84

流行性耳下腺炎

25.39

27.73

2.85

平年並み

2.44

急性出血性結膜炎

0.71

0.19

0.22

流行性角結膜炎

22.57

4.38

7.04

眼科
*

平年と2020年
平年と2021年
平年と2022年
2021年
2022年
の比較
の比較
の比較 *

平年Avg

感染症

平年との比較は、表1に従い分類した。

-3-- - - - - - - - - - -

0.32
81.93
11.41
24.77
190.584.90- - + + +- - - - - - - -

12.16
62.85
11.00
16.79
176.93
3.78

40.06

平年並み

32.83

平年並み

0.57

0.52

-

-

16.87

- - - -

0.29
5.42

- - 平年並み- - - -

13.22
10.14
1.97
0.29
6.29

- - +
- - - - - - - 平年並み

- - - 平年並み

- - - -

年と異なる挙動を示した。
インフルエンザは、2022 年第 51 週（12 月 19 日
～25 日）で流行期入りの目安 1 を超えて流行が始
まり、第 52 週（12 月 26 日～1 月 2 日）には 4.39 に増加し（図 2c）15)、年末にかけてインフルエンザウであった。2022 年の定点あたり累積報告数も、2021
年より増加した（表 2、図 3b）。
手足口病は 2021 年秋～冬に流行が認められたが、2022 年第 34 週（8 月 22 日～28 日）で定点あたり報告数 1 を超え、第 36 週（9 月 5 日～11 日）でピ

イルス A H3 (A/H3) が増加傾向であった（表 2）16)。
インフルエンザの流行は 2019/2020 年シーズン以来

ーク（2.35）に到達した（図 2d）17)。2022 年第 36 週に記録したピークは、
2015 年以降隔年の流行で記録

a

b

c

d

図 2 2015～2021 年大阪府における（a）RS ウイルス感染症、（b）突発性発しん、（c）インフルエンザ及び（d）手足口病の週別定点あたり報告数ab

図 3 2015～2022 年大阪府における RS ウイルス感染症、突発性発しん及び手足口病、（b）インフルエン
ザの年別累積報告数-4-したそれぞれのピークより低かった。また、2022 年
は 2021 年と比べて、定点あたり累積報告数は減少したが（表 2）
、定点あたり報告数が第 34 週に 1 を超えた後（図 2d）、小規模な流行となり、主にコクサッキーウイルス A6 (Coxsackievirus A6、CA6) が突発性発しんは、季節性がほとんどなく、毎週の定点あたり報告数が一定している。
2007 年以降に大阪府のみならず全国でも、0 歳児人口が減少し、年別定点あたり累積報告数は年々減少傾向である 20)。
年別累積報告数が年々減少傾向であるのは、報告例確認された 18)。

新型コロナウイルス感染症に対する感染症防止
対策と社会経済活動の両立が進む中で、大阪府におの年齢が 0 歳と 1 歳で毎年 80%以上を占める中で、0 歳児の減少、つまり出生数の減少に依る影響が大きいと考えられる（図 5）。
2021 年と比較した 2022 年の報告数について、変化がなかった上記以外の感染症の感染経路は飛沫、接触または経口であるため、既報の通り、行動様式

ける定点把握感染症の小児科・インフルエンザ・眼科定点（医療機関）からの報告数は 2020、2021 年に引き続き 2022 年も減少した。
RS ウイルス感染症について、2022 年は 2021 年と比較して報告数が少なかったが、新型コロナウイ
ルス感染症対策により、2021 年に大きく増加した感の変化、感染防止対策、渡航制限による影響を受けたと考えられた 8,9)。またこれらの感染症について、感受性個体数が増加していると考えられるが、流行が起きなかった詳細な原因は不明であった。
インフルエンザについて、2022 年は 6 月にオーストラリアで主に A/H3、12 月に米国や欧州で A/H3、受性個体の一部が 2022 年に先送りされたことで、平年と比べると多くなったと考えられる（表 2）。また、2022 年 1～4、7～9 月は新型コロナウイルス感染症が流行したことに伴い、全国的に保育園・保育所等の休園が増加した 19)。先送りされた感受性個体
が保育園・保育所等が再び開園した 2022 年 5～7 月

A/H1N1pdm09 及び B/Victoria が検出されるなど、
2021 年より陽性者数が増加した国が確認された。
米国では、新型コロナウイルス感染症パンデミックが始まった後、2020 年 4 月以降 2021 年を含めて、陽性者数が例年と比較して少なかった 22-24)。しかしながら、2022 年 3 月に最も厳しい対策を講じたハワにかけて感染し、報告数が急に増加したと推察される（図 2a）。

イ州を最後に全州でマスク着用義務を含む規制が撤廃された。その前後で全米における陽性者数が増

考 察

図 4 2015～2022 年大阪府における RS ウイルス感染症の年別累積報告数と年齢階級別累積報告数の割合

-5-

a

b

図 5 2007～2022 年大阪府における突発性発しんの（a）年別定点あたり累積報告数と 0 歳児人口と（b）0～5 歳児の年別累積報告数と年齢別累積報告数の割合-6-

加しており、2022/2023 年シーズンは、陽性者数が2013～2014 年以降で最も多かった 25)。規制が緩和
または撤廃されたことにより、人流が活発になり、陽性者数が増加したと考えられる。
手足口病については、平年では 2015、2017 及び2019 年の隔年で CA6 が主に検出され、夏に流28)行した 。2021 年は CA6 による流行が確認されたが 20)、秋～冬にかけて流行したことと、報告数が流行年と比較して大きく増加しなかった点が、平年と異なっていた 9)。2021 年から 2 年続けて流行した原因の 1 つとして、2022 年に報告数が主に東日本でが増加または流行時期が例年と異なった。我が国
もコロナ禍以前の日常生活に戻りつつあり、個々の感染症発生動向に注意する必要がある。
謝 辞

26,27)

本稿を執筆するにあたり、大阪府感染症発生動向調査にご協力賜りました自治体、保健所等の関係機
関及び医療機関の皆様に深謝申し上げます。
利 益 相 反増加したことで、その影響が西日本にも及び、小規
模な流行に繋がったと考えられる。
諸外国では我が国より早期に、新型コロナウイル
ス感染症に対する行動制限や感染防止対策に関する規制の緩和や撤廃が実施されている。そのような状況で、2023 年度に報告数が増加する可能性がある

開示すべき利益相反はない。
文 献1) 厚生労働省 新型コロナウイルス感染症の国内
発生動向

感染症の 1 つとして、2022 年に米国、英国、仏国、
オランダ、アイルランドやスウェーデン等の欧米諸国で流行した A 群溶血性レンサ球菌咽頭炎が考えられる 29,30)。特に米国では、重篤な症状を呈する侵襲性 A 群レンサ球菌感染症が、例年の流行時期 11～3 月より早い 9～11 月に発生した 30)。また一部のhttps://www.mhlw.go.jp/content/10906000/0010
94012.pdf

2) 厚生労働省 療養状況等及び入院患者受入病床数等に関する調査について
https://www.mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/newpag
e_00023.html
3) 厚生労働省 データからわかる－新型コロナウ
イルス感染症情報－
https://covid19.mhlw.go.jp/
4) 大阪府 保健・医療分野における第一波から第八波までの新型コロナウイルス感染症への対応
https://www.pref.osaka.lg.jp/attach/37375/0044161
1/03-2_bessatu.pdf5) 大阪府感染症情報センター 新型コロナウイル
ス感染症

州では、陽性者数が例年の水準を上回った 31)。英国
イングランド地方では、2022/2023 年シーズンの2022 年第 28～46 週（第 38、41 週を除く）に報告された侵襲性 A 群レンサ球菌感染症陽性者数が各週いずれにおいても、2017 年第 37 週以降で最も多かった 29,32)。
我が国においても、行動制限や感染防止対策の緩和が段階的に進められており、2023 年以降の大阪府において、A 群溶血性レンサ球菌咽頭炎などの他の感染症発生動向に注意が必要である。

http://www.iph.pref.osaka.jp/infection/disease/corona.html
6) 厚生労働省 水際対策強化に係る新たな措置（34）（外国人の新規入国制限、入国時検査、入国後待機及び入国者総数の管理の見直し）総 括コロナ禍では、報告数及び流行時期が平年と異なる動向を示す感染症が確認されている。2022 年
大阪府における定点把握感染症の発生動向に関して、2021 年と比較して 2022 年における報告数が多くの感染症で変化がなかったが、RS ウイルス感

https://www.mhlw.go.jp/content/000993077.pdf
7) 観光庁 全国旅行支援の実施について
https://www.mlit.go.jp/kankocho/news06_000570.
html
8) 皐月由香、本村和嗣，西田陽子，柿本健作，
西尾孝之，三山豪士，入谷展弘，小林和夫. 大
阪府における 2020 年感染症発生動向. 地方独染症と突発性発しんは少なかった。我が国より早期に、新型コロナウイルス感染症対策を緩和または撤廃した欧米などの諸外国では、インフルエン
ザや A 群溶血性レンサ球菌咽頭炎などで陽性者数

立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報-7-

490t.html
21) 国立感染症研究所 注目すべき感染症 インフ
ルエンザ IDWR 2023 年第 3 号
https://www.niid.go.jp/niid/ja/flu-m/flu-idwrc.html
22) 渡邉真治、長谷川秀樹. 2021/22 シーズンの世
界のインフルエンザの流行状況について IASR
2022; 43: 255-257.

令和 3 年度. 2021; 5, 1-10
9) 山中靖貴、皐月由香、西田陽子、柿本健作、
鵜飼友彦、西尾孝之、三山豪士、入谷展弘、
本村和嗣. 大阪府における 2021 年感染症発生
動向. 地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究

所研究年報 令和 4 年度. 2022; 6, 1-8

https://www.niid.go.jp/niid/ja/typhi-m/iasrreference/2571-related-articles/related-articles513/11630-513r04.html

10) 大阪府感染症情報センター RS ウイルス感染症

http://www.iph.pref.osaka.jp/teiten/20210128105
633.html

23) 世界保健機関 Influenza surveillance reporthttps://www.who.int/teams/global-influenzaprogramme/surveillance-andmonitoring/influenza-surveillance-outputs11) 大阪府感染症情報センター RS ウイルス感染症流行期入りの目安24) 世界保健機関 Influenza laboratory information
virus detections by subtype reported to FluNet
https://app.powerbi.com/view?r=eyJrIjoiZTkyODc
yOTEtZjA5YS00ZmI0LWFkZGUtODIxNGI5OT
E3YjM0IiwidCI6ImY2MTBjMGI3LWJkMjQtNG
IzOS04MTBiLTNkYzI4MGFmYjU5MCIsImMiO
jh925) アメリカ疾病予防管理センター Weekly U.S.
Influenza Surveillance Report National Influenza
and COVID-19 surveillance report Week 23 report(up to week 22 data) 8 June 2023
26) 国立感染症研究所 手足口病 都道府県別主な
エンテロウイルス 2009-2015 年 IASR 2016 年
11 月 1 日現在
https://www.niid.go.jp/niid/images/iasr/rapid/natsu/
teashi/150903/tetizu_161101.gif

http://www.iph.pref.osaka.jp/040/202206161624
24.html12) Miyama T, Kakimoto K, Iritani N, Nishio T, Ukai T,
Satsuki Y, Yamanaka Y, Nishida Y, Shintani A and
Motomura K. Exploring the threshold for the startof respiratory syncytial virus infection epidemic
season using sentinel surveillance data in Japan.
Front Public Health. 2023; 11; 1062726.
13) 大阪府感染症情報センター 突発性発しん

http://www.iph.pref.osaka.jp/teiten/20210128110
059.html
14) 厚生労働省 人口動態調査
https://www.mhlw.go.jp/toukei/list/81-1a.html
15) 大阪府感染症情報センター インフルエンザ

27) 国立感染症研究所 手足口病 都道府県別主な

http://www.iph.pref.osaka.jp/teiten/20210127162
117.html

エンテロウイルス 2016-2019 年 IASR 2019 年
11 月 18 日現在
https://www.niid.go.jp/niid/images/iasr/rapid/natsu/
teashi/150903/tetizu_191118.gif

16) 国立感染症研究所 都道府県別、分離・検出報
告状況 2016/17〜2022/23 シーズン IASR 2023
年 6 月 14 日
https://www.niid.go.jp/niid/images/iasr/rapid/inf3/2
019_36w/2223inftizu_230614.gif17) 大阪府感染症情報センター 手足口病
http://www.iph.pref.osaka.jp/teiten/2021012811001
2.html18) 国立感染症研究所 都道府県別病原体別手足口病由来ウイルス 2022 年 IASR 2022 年 12 月 30
日作成
https://www.niid.go.jp/niid/images/iasr/arc/ot/2022/
data2022116j.pdf
19) 厚生労働省 保育所等における新型コロナウイ
ルスによる休園等の状況
https://www.mhlw.go.jp/content/11920000/001080
493.pdf
20) 突発性発疹 2000～2020 年 IASR 2020; 41: 211212. https://www.niid.go.jp/niid/ja/exanthemsubitum-m/exanthem-subitum-iasrtpc/9350-

28) 大阪府 感染症発生動向調査事業報告書 第 38報［2019 年版］
29) 世界保健機関 Increased incidence of scarlet fever
and invasive Group A Streptococcus infectionmulti-country Disease Outbreak News 15
December 2022
https://www.who.int/emergencies/disease-outbreaknews/item/2022-DON42930) アメリカ疾病予防管理センター Increase inInvasive Group A Strep Infections, 2022-2023
https://www.cdc.gov/groupastrep/igas-infectionsinvestigation.html#print31) Meghan Barnes, Erin Youngkin, Jennifer Zipprich,
Kayla Bilski, Christopher J. Gregory, Samuel R.
Dominguez, Erica Mumm, Melissa McMahon,-8-

Kathryn Como-Sabetti, Ruth Lynfield, Sopio
Chochua, Jennifer Onukwube, Melissa Arvay,
Rachel Herlihy. Notes from the Field: Increase in
Pediatric Invasive Group A Streptococcus
Infections Colorado and Minnesota, October–
December 2022 MMWR, March 10, 2023, 72, 10;
265–267https://www.cdc.gov/mmwr/volumes/72/wr/mm72
10a4.htm32) 英国保健安全保障庁 Group A streptococcal
infections: report on seasonal activity in England,2022 to 2023 15 May 2023

https://www.gov.uk/government/publications/gro
up-a-streptococcal-infections-activity-during-the2022-to-2023-season/group-a-streptococcalinfections-report-on-seasonal-activity-inengland-2022-to-2023
WEB サイトの内容は 2023 年 8 月 4 日に確認した。

-9-

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Surveillance of infectious diseases in Osaka Prefecture in 2022

Yasutaka YAMANAKA, Kensaku KAKIMOTO, Tomohiko UKAI, Takayuki NISHIO, Yoko NISHIDA,
Yuka SATSUKI, Takeshi MIYAMA, Nobuhiro IRITANI and Kazushi MOTOMURAIn Japan, vaccination and therapeutic drug usage for coronavirus disease 2019 (COVID-19) have progressed and therestrictions on COVID-19 have been relieved. In this study, we surveyed infectious diseases other than COVID-19 in the
Osaka Prefecture in 2020, 2021, and 2022. Among sentinel infections, the number of reported infections in 2022 wasunchanged compared to that in 2021 for most infections. However, the number of respiratory virus infections andexanthem subitum cases were low. Conversely, the legal restrictions against COVID-19 in other countries were
deregulated and abolished earlier than those in Japan. In these countries, the number of positive cases for other infectious
diseases increased or the epidemic period showed behavior that was different from usual. As we return to our daily lives
before the COVID-19 pandemic, we must pay attention to trends in other infectious disease outbreaks.

Key words: surveillance of infectious diseases, coronavirus disease 2019 (COVID-19), 2022, RS virus infection,
exanthem subitum

Osaka Institute of Public Health- 10 -

報 文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pib. Health, 7, 11-24 (2023)

大阪府における severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 の系統解析
およびスパイクタンパク質の変異解析

若林友騎，河原隆二，柿本健作，山口貴弘，梅川奈央，平井佑治，西嶋駿弥，森川佐依子，廣井 聡，
白井達哉，池森 亮，阪野文哉，岡田和真，前田和穂，小山芽以，澁谷祐子，徳永佑亮，村野晃一，
永吉晴奈，上野 亮，北口大毅，田上貴臣，安達史恵，阿部仁一郎，森 治代，本村和嗣，川津健太郎

2022 年 1 月 1 日から 2022 年 12 月 31 日までに大阪府内で検出され、全ゲノム配列が解読された severe
acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2)について、全ゲノム配列情報に基づく分子系統解析およびスパイク（S）タンパク質の変異解析を実施した。第 1 週～第 10 週までは優勢な遺伝子系統が認められたが、第 11 週以降は同時期に多様な遺伝子系統株が検出された。S タンパク質の変異解析では、特定のアミノ酸残基に置換が集中しており、特に免疫逃避に関与するアミノ酸残基においては、収斂進化が起こっていることが示唆された。今後の SARS-CoV-2 のゲノムサーベイランスにおいては、遺伝子系統解析に加えて、S タンパク質を中心とした変異解析が重要であると考えられた。

キーワード：severe acute respiratory syndrome coronavirus 2、分子疫学解析、全ゲノム配列解析、S タンパク質、receptor binding domain

Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2（SARS-CoV-2 ）は新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の原因ウイルスである。29.9 kb の一
本鎖 RNA ゲノムを有する SARS-CoV-2 は、そのゲノム複製の過程で少しずつゲノム上に変異を蓄積

メイン（Receptor binding domain, RBD）の 2 つの領域に分けられる。このうち RBD は、受容体である
アンギオテンシン変換酵素 2（ACE2）との結合にかかわる領域であることから、RBD 上に生じた変
異は、ACE2 との結合効率に影響を与えると考えらする。2019 年末に中国で初めて検出された SARSCoV-2 は、2023 年 6 月 2 日時点で、複数の懸念される変異株（Variants of concern, VOC）を含む 2,500以上の遺伝子系統に進化している 1)。Nextstrain による初期の分子系統解析では、SARS-CoV-2 の変異蓄積速度は 8×10-4 塩基置換/サイト/年と推定されれている 5)。RBD は、中和抗体の主要な結合部位の1 つでもあることから、RBD 上の変異はウイルスの免疫逃避にも関係すると考えられている 6)。
SARS-CoV-2 の系統分類法としては、2 種類の分類法が主に使用されており、それぞれ異なるアルゴ
リズムに基づいて遺伝子系統が決定される。すなわ

たが 2)、VOC は Stem Branch において高度な変異蓄積が報告されている 3)。特に VOC Omicron では、
それまでの VOC と比較して、スパイク（S）タンパ
ク質領域に高頻度な変異蓄積が認められている 4)。
S タンパク質は、宿主細胞の受容体と結合し、ウイルスの細胞侵入に関与する。S タンパク質は、受ち、Nextstrain チームが提唱した Clade 分類は、ゲノム上の特徴的な塩基置換の有無に基づいて、
SARS-CoV-2 を分類する方法である 7) 。一方、
O'Toole らが提唱した PANGO 系統は、ウイルスの遺伝子系統発生に基づく系統分類法であり、ウイル
ス系統の親子関係が明確になるように一定のルー

容体結合に関与する S1 と膜融合に関与する S2 の2 つに大きく分けられており、S1 はさらに N 末端ドメイン（N-terminal domain, NTD）と受容体結合ド大阪健康安全基盤研究所

ルに則って命名される 8)。
本研究では、大阪府内における SARS-CoV-2 の流
行動態を明らかにする目的で、2022 年 1 月 1 日か

- 11 -

ら 2022 年 12 月 31 日までの 1 年間に大阪府内で検出された SARS-CoV-2 について、全ゲノム配列情報に基づく分子系統解析を実施し、大阪府内の SARSCoV-2 の流行株の推移について調査した。加えて、
S タンパク質 RBD の変異解析を実施し、大阪府内で検出された SARS-CoV-2 の RBD におけるアミノ酸置換検出率を経時的に比較した。

規陽性者数は、医療機関より報告された患者数および大阪府陽性者登録センター登録数の合計を表す。
各疫学週に対応する期間（年月日）を表 1 に示した。
結 果

1. 全ゲノム配列の解読

大阪健康安全基盤研究所において、3,437 検体の良質な全ゲノム配列を新規に解読した。これにGISAID からダウンロードした 22,591 検体のゲノムデータを加え、合計 26,028 検体の全ゲノム配列を解析に使用した。解読した SARS-CoV-2 の Clade

感染症発生動向調査の一環として大阪健康安全基盤研究所に搬入された RNA、あるいは、感染症
発生動向調査の一環として搬入された臨床検体から抽出した RNA を解析に使用した。SARS-CoV-2の全ゲノム配列は、国立感染症研究所が公開するプ
ロトコールに準じて解読した 9)。シーケンスには、

判定結果の推移と大阪府内で報告された新規陽性者数の推移を図 1 に示した。また、ゲノム解読した
SARS-CoV-2 に占める、各 PANGO 系統株の割合を
図 2 に示した。
第 6 波の初期（第 1 週～第 11 週）においては、
Clade 21K に分類されるウイルスが主に検出された。

iSeq 100（Illumina）あるいは MinION Mk1b（Oxford
Nanopore）を使用した。配列の構築には、国立感染症研究所が提供する解析サーバーを使用した。また、
Global Initiative on Sharing All Influenza Data（GISAID）に登録された配列データ（fasta 形式）をダウンロー
ドし解析に加えた 10)。本研究で使用した配列デー

一方、第 6 波の後期（第 12 週～第 25 週）においては、Clade 21L に分類されるウイルスが主に検出された。第 7 波および第 8 波では Clade 22B に分類されるウイルスが主に検出された。
Clade 21K が主であった第 1 週～第 10 週においては、第 2 週を除いて、PANGO 系統の BA.1.1 あるタのアクセッション番号一覧は要望に応じて開示できる（連絡先：wakabayashi@iph.osaka.jp）。
2. PANGO 系統および Clade 判定
SARS-CoV-2 の 系 統 の 判定 に は 、 PANGOLIN（version 4.2）および Nextclade CLI（version 2.13.1）
プログラムを使用し、それぞれ PANGO 系統および

いは BA.1.1.2 に分類されるウイルスがゲノム解読
株の 5 割以上を占めていた。第 11 週以降は、Clade
21L あるいは 22B に分類されるウイルスの中でも、多様な PANGO 系統株が検出されており、特定の優勢な PANGO 系統株は認められなかった。第 7 波（第 26 週～第 39 週）においては、BA.5.2 あるいClade を決定した 7,8)。
3. 分子系統解析および変異解析
分子系統解析には、Nextstrain CLI（version 5.0.0）
および Auspice（version 2.29.1）を使用した 11)。S タ
ンパク質のアミノ酸変異の探索には Nextclade CLIを使用し、Morpheus を使用してヒートマップを描は BA.5.2.1 の検出割合が高かったが、第 8 波（第40 週以降）においては、BA.5.2.1 の下位系統である
BF.5 の検出割合が概ねそれらを上回った。第 40 週
以降には Clade 22F に分類される BQ.1 系統の、第44 週以降には Clade 22D に分類される BA.2.75 系
統（BN 系統等の下位系統を含む）の検出割合が増画した 12) 。武漢株（ Wuhan-Hu-1 、GenBank ID:
MN908947）のアミノ酸残基を野生型として解析した。
4. COVID-19 感染拡大期の定義
本研究では、大阪府における COVID-19 の感染拡大期について、2021 年 12 月 17 日～2022 年 6 月 24

加した。
S タンパク質 RBD（331～531 番目のアミノ酸残基）におけるアミノ酸置換の検出割合の推移を図 3に示した。評価対象とした全 201 残基のうち、125
残基ではアミノ酸置換が認められなかった。一方、解析したゲノム配列の 0.1%以上（26 ゲノム以上）

日を第 6 波、2022 年 6 月 25 日～2022 年 9 月 26 日
を第 7 波、2022 年 9 月 27 日以降を第 8 波とそれぞれ定義した 13)。なお、2022 年 9 月 26 日以降、全数
届出の見直しが行われたため、9 月 27 日以降の新でアミノ酸置換が認められた残基は、28 残基であった。S タンパク質の 339、371、373、375、417、
440、477、478、484、498、501、505 番目のアミノ酸残基については、全調査期間にわたって解析した

実 験 方 法- 12 -

ウイルスの 90%以上がいずれかのアミノ酸置換を有していた。
S タンパク質の 346 番目のアミノ酸残基については、第 1 週～第 11 週までは、アルギニン（R, 野生型）からリシン（K）へのアミノ酸置換を有するウ

た。スレオニン（T）へのアミノ酸置換を有するウ
イルスは単系統を形成せず、複数の遺伝子系統株が独立してアミノ酸置換を獲得していた（図 4B）。
S タンパク質の 446 番目のアミノ酸残基については、第 1 週～第 11 週までは、グリシン（G, 野生型）

イルスが主に検出された（図 4A）。その後、野生型であるアルギニン残基を有するウイルスが主に検出されたが、第 39 週以降、スレオニン（T）へのア
ミノ酸置換を有するウイルスの検出割合が増加しからセリン（S）へのアミノ酸置換を有するウイル
スが、第 12 週目以降は野生型であるグリシン残基（G）を有するウイルスが主に検出されていたが、第 44 週以降では、セリン（S）あるいはアスパラギ

表 1. 各疫学週に対応する年月日一覧
疫学週

始期

終期

疫学週

始期

終期

2022-01

2022 年 1 月 3 日

2022 年 1 月 9 日

2022-272022 年 7 月 4 日

2022 年 7 月 10 日

2022-022022 年 1 月 10 日

2022 年 1 月 16 日

2022-282022 年 7 月 11 日

2022 年 7 月 17 日

2022-032022 年 1 月 17 日

2022 年 1 月 23 日

2022-292022 年 7 月 18 日

2022 年 7 月 24 日

2022-04

2022 年 1 月 24 日

2022 年 1 月 30 日

2022-302022 年 7 月 25 日

2022 年 7 月 31 日

2022-05

2022 年 1 月 31 日

2022 年 2 月 6 日

2022-312022 年 8 月 1 日

2022 年 8 月 7 日

2022-06

2022 年 2 月 7 日

2022 年 2 月 13 日

2022-322022 年 8 月 8 日

2022 年 8 月 14 日

2022-072022 年 2 月 14 日

2022 年 2 月 20 日

2022-33

2022 年 8 月 15 日

2022 年 8 月 21 日

2022-08

2022 年 2 月 21 日

2022 年 2 月 27 日

2022-342022 年 8 月 22 日

2022 年 8 月 28 日

2022-092022 年 2 月 28 日

2022 年 3 月 6 日

2022-352022 年 8 月 29 日

2022 年 9 月 4 日

2022-102022 年 3 月 7 日

2022 年 3 月 13 日

2022-362022 年 9 月 5 日

2022 年 9 月 11 日

2022-112022 年 3 月 14 日

2022 年 3 月 20 日

2022-372022 年 9 月 12 日

2022 年 9 月 18 日

2022-122022 年 3 月 21 日

2022 年 3 月 27 日

2022-382022 年 9 月 19 日

2022 年 9 月 25 日

2022-132022 年 3 月 28 日

2022 年 4 月 3 日

2022-392022 年 9 月 26 日

2022 年 10 月 2 日

2022-142022 年 4 月 4 日

2022 年 4 月 10 日

2022-402022 年 10 月 3 日

2022 年 10 月 9 日

2022-152022 年 4 月 11 日

2022 年 4 月 17 日

2022-412022 年 10 月 10 日

2022 年 10 月 16 日

2022-162022 年 4 月 18 日

2022 年 4 月 24 日

2022-422022 年 10 月 17 日

2022 年 10 月 23 日

2022-172022 年 4 月 25 日

2022 年 5 月 1 日

2022-432022 年 10 月 24 日

2022 年 10 月 30 日

2022-182022 年 5 月 2 日

2022 年 5 月 8 日

2022-442022 年 10 月 31 日

2022 年 11 月 6 日

2022-192022 年 5 月 9 日

2022 年 5 月 15 日

2022-452022 年 11 月 7 日

2022 年 11 月 13 日

2022-202022 年 5 月 16 日

2022 年 5 月 22 日

2022-462022 年 11 月 14 日

2022 年 11 月 20 日

2022-212022 年 5 月 23 日

2022 年 5 月 29 日

2022-472022 年 11 月 21 日

2022 年 11 月 27 日

2022-222022 年 5 月 30 日

2022 年 6 月 5 日

2022-482022 年 11 月 28 日

2022 年 12 月 4 日

2022-232022 年 6 月 6 日

2022 年 6 月 12 日

2022-49

2022 年 12 月 5 日

2022 年 12 月 11 日

2022-242022 年 6 月 13 日

2022 年 6 月 19 日

2022-502022 年 12 月 12 日

2022 年 12 月 18 日

2022-252022 年 6 月 20 日

2022 年 6 月 26 日

2022-512022 年 12 月 19 日

2022 年 12 月 25 日

2022-262022 年 6 月 27 日

2022 年 7 月 3 日

2022-522022 年 12 月 26 日

2023 年 1 月 1 日- 13 -

- 14 -

図 1 2022 年に大阪府内で検出された SARS-CoV-2 の Clade 判定結果（積み上げ棒グラフ、左軸）と各感染拡大期における大阪府内の新規陽性者数の推移（折れ線グラフ、右軸）。第 52 週は、2022 年 12 月 26 日から 12 月 31 日までの総計。また、2022 年 1 月 1 日および 2 日は、2021 年の第 52 週に該当するため、本グラフ中に含まれない。

- 15 -

図 2 解析した SARS-CoV-2 に占める各 PANGO 系統の検出割合の推移。

図 3 2022 年に大阪府内で検出された SARS-CoV-2 の S タンパク質 RBD におけるアミノ酸置換の検出割合の推移。
ン酸（D）に置換したウイルスの検出割合が増加した（図 5A）。セリン（S）へのアミノ酸置換を有す
るウイルスのうち、2022 年の初期に検出されたウ
イルス株は、Clade 21L に分類される遺伝子系統株ン酸（D）へのアミノ酸置換を有する株が、さらに異なるアミノ酸への変異を獲得した株であった（図6B）。
上記以外では、444 番目および 460 番目のアミノが中心であったが、2022 年 8 月頃から Clade 22D に分類される遺伝子系統株が中心になった（図 5B）。
339 番目のアミノ酸残基については、全調査期間にわたって、グリシン（G）からアスパラギン酸（D）へのアミノ酸置換を有する株が主に検出されたが、第 11 週～第 29 週にはアスパラギン（N）へのアミ酸残基に置換を有するウイルスが検出され、主に第43 週以降に検出割合が増加した（図 3）。444 番目
では、スレオニン（T）、アスパラギン（N）
、アルギ
ニン（R）
、メチオニン（M）へのアミノ酸置換が、460 番目ではリシン（K）へのアミノ酸置換が検出されたが、いずれも単系統のウイルスではなく、複ノ酸置換を有するウイルス株が、第 42 週以降にはヒスチジン（H）へのアミノ酸置換を有するウイル
ス株が、それぞれ一定数検出された（図 6A）。これらのウイルス株は、グリシン（G）からアスパラギ数の遺伝子系統のウイルスが独立してアミノ酸置換を獲得していた（図 7A および B）。同様に、356
番目および 490 番目のアミノ酸残基に置換を有する株の検出割合が第 45 週以降に増加したが、これ- 16 -

図 4 S タンパク質 RBD の 346 番目アミノ酸残基における各アミノ酸置換の検出率の経時的推移（A）および各アミノ酸置換を有する株の検出数の推移と時間系統樹上における遺伝子系統関係（B）。
（A）黒破線は野生型のアミノ酸残基を表す。
（B）いずれかのアミノ酸置換を有するウイルス株を色付円で示し、野生型のアミノ酸残基を有するウイルス株は灰色で示した。アミノ酸残基は以下の略号で示した。I, イソロイ
シン; K, リシン; R, アルギニン; S, セリン; T, スレオニン。

- 17 -

図 5 S タンパク質 RBD の 446 番目アミノ酸残基における各アミノ酸置換の検出率の経時的推移（A）および各アミノ酸置換を有する株の検出数の推移と時間系統樹上における遺伝子系統関係（B）。
（A）黒破線は野生型のアミノ酸残基を表す。
（B）いずれかのアミノ酸置換を有するウイルス株を色付円で示し、野生型のアミノ酸残基を有するウイルス株は灰色で示した。また、Clade 21L および Clade 22D に該当する遺伝子系統を括弧で示した。アミノ酸残基は以下の略号で示した。D, アスパラギン酸; G, グリシン; S, セリン;
V, バリン。

- 18 -

図 6 S タンパク質 RBD の 339 番目アミノ酸残基における各アミノ酸置換の検出率の経時的推移（A）および各アミノ酸置換を有する株の検出数の推移と時間系統樹上における遺伝子系統関係（B）。
（A）黒破線は野生型のアミノ酸残基を表す。
（B）いずれかのアミノ酸置換を有するウイルス株を色付円で示し、野生型のアミノ酸残基を有するウイルス株は灰色で示した。アミノ酸残基は以下の略号で示した。D, アスパラ
ギン酸; G, グリシン; H, ヒスチジン; N, アスパラギン; S, セリン; Y, チロシン。

- 19 -

図 7 S タンパク質 RBD の 444 番目（A）および 460 番目（B）アミノ酸残基における各アミノ酸置換を有する株の検出数の推移と時間系統樹上における遺伝子系統関係。いずれかのアミノ酸置換を有するウイル
ス株を色付円で示し、野生型のアミノ酸残基を有するウイルス株は灰色で示した。アミノ酸残基は以下の略号で示した。K, リシン; M, メチオニン; N, アスパラギン; R, アルギニン; T, スレオニン。

- 20 -

らは単系統のウイルス株（Clade 22D に属するウイ
ルス株）の増加に起因していた（図は割愛する）。
考 察

ACE2 との結合能を低下させるアミノ酸置換箇所に合致していた 15)。例えば、431 番目あるいは 488
番目のアミノ酸残基に生じたアミノ酸置換は、ACE2 との結合能を著しく低下させることが実験的に報告されているが、今回検出されたウイルス株

本研究では、2022 年に大阪府で検出された
SARS-CoV-2 の全ゲノム配列情報に基づく系統解析を実施し、各感染拡大期におけるウイルス系統の推移を調査した。第 6 波においては主に Clade 21Kに分類されるウイルスが、第 7 波においては主にClade 22B に分類されるウイルスが、新規陽性者数の中にはこれらの箇所にアミノ酸置換を有する株は存在しなかった。このような ACE2 結合能の低下を引き起こす変異を獲得したウイルスは、宿主細胞への感染効率が低下するために自然淘汰され、検出さなかったと考えられた。
一方で、S タンパク質 RBD におけるアミノ酸置の増加に対応するように検出された。また、主要な流行株が Clade 21L に推移した第 12 週以降にも新規陽性者数の増加が認められており、2021 年と同様に、流行株の変化が新規陽性者数の増加につながった可能性が考えられた 14)。S タンパク質 RBD の
アミノ酸置換についても、流行株の Clade の推移に

換は、201 残基のうちの 28 残基に集中して発生していた。VOC Delta で認められた S タンパク質の452 番目のロイシン（L）からアルギニン（R）への
アミノ酸置換は、ウイルスの細胞膜融合能を向上させることが報告されているが 16)、同じ変異は Clade
22B でも認められている。また、339 番目のアミノともなって、第 10 週～第 13 週、あるいは第 25 週
～第 28 週にかけて検出パターンに変化が認められており、ウイルスの抗原性の変化が新規陽性者数の増加に寄与したことが示唆された。
第 8 波においては、第 7 波と同様に Clade 22B に分類されるウイルスが主に検出されたが、PANGO

酸残基に認められたグリシン（G）からアスパラギン酸（D）、あるいはアスパラギン（N）、ヒスチジ
ン（H）へのアミノ酸置換は、いずれも ACE2 との結合能に大きく影響を与えないが、RBD の発現量を上昇させることが報告されている 15)。ヒトへの感染を繰り返す中で、SARS-CoV-2 はヒトへの感染

系統の BF.5 や BF.7 を始めとする BF 系統の検出割合が増加した。いずれも BA.5.2.1 の子孫系統に該当するが、BF.5 系統は S タンパク質の 1020 番目のアラニン（A）からセリン（S）へのアミノ酸置換を、
BF.7 系統は 346 番目のアルギニン（R）からスレオ
ニン（T）へのアミノ酸置換をそれぞれ獲得していにより適合するように進化している可能性が示唆された。
S タンパク質の 346 番目、444 番目、446 番目、および 460 番目のアミノ酸残基では、アミノ酸置換が複数の遺伝子系統株で認められた。これらは、液性免疫からの逃避や抗体治療薬の効果に影響を及る。また、第 8 波においては、S タンパク質の 444
番目や 460 番目など、RBD にアミノ酸置換を有す
るウイルス株の検出割合が増加していた。加えて、2022 年の後半には、Clade 22D に分類されるウイル
スや、Clade 22B の子孫系統である Clade 22F に分類されるウイルスの検出割合が増加した。このようぼす変異として報告されている 17,18,19)。Cao らは、
ヒトにおける集団免疫の獲得およびワクチンの追加接種が S タンパク質 RBD の収斂進化を引き起こした可能性について述べている 17)。大阪府内で検出された SARS-CoV-2 においても同様に、抗体からの免疫逃避に関与する領域で、収斂進化が発生してに、第 8 波の感染拡大では、Nextclade による系統
分類が異なるほど流行株の大きな変化は認められなかったものの、ウイルス株の抗原性に変化が生じたと予想され、そのことが感染拡大に寄与した可能性が考えられた。
S タンパク質 RBD のアミノ酸置換の検出率を比いる傾向が認められた。
新型コロナウイルス感染症の感染症法上の位置
づけが 5 類感染症に変更された 2023 年 5 月 8 日以
降も、全ゲノム配列解析によるゲノムサーベイラン
スが継続されている。本研究の結果、特に 2022 年
第 12 週以降は、複数の遺伝子系統株が同時に検出

較したところ、解析対象とした全アミノ酸残基のうち、62%にあたる 125 残基ではアミノ酸置換が 1 つも検出されなかった。これらの多くは、Starr らがDeep Mutational Scan 法によって明らかにした、されていたことがわかった。これは、単独の遺伝子
系統株によって感染が拡大した第 4 波や第 5 波とは異なる状況であり、Nextclade や PANGO 分類による系統分類では、流行株の特徴づけが困難になっ- 21 -

ていることを示唆している。一方で、S タンパク質のアミノ酸置換に着目すると、ウイルスの遺伝子系
統とは無関係に、特定のアミノ酸残基に置換が集中して検出されていることが明らかになった。今後のゲノムサーベイランスにおいては、検出された

evolution of SARS-CoV-2. Nat Rev Microbiol 2023;
21: 361-379.
4) Tian D, Sun Y, Xu H, Ye Q. The emergence andepidemic characteristics of the highly mutated SARSCoV-2 Omicron variant. J Med Virol 2022; 94 (6):SARS-CoV-2 ウイルスの遺伝子系統解析に加え、検出されたウイルスがどのようなアミノ酸置換を有しているか、特に S タンパク質 RBD を中心とした変異解析が重要であると考えられた。
謝 辞

2376-2383.
5) Wrapp D, Wang N, Corbett KS, Goldsmith JA, Hsieh
CL, Abiona O, Graham BS, McLellan JS. Cryo-EM
structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion
conformation. Science 2020; 367(6483): 1260-1263.
6) Barnes CO, Jette CA, Abernathy ME, Dam KA,

本研究では、GISAID に登録された配列データを解析に使用しました。
GISAID の配列登録者である、以下の先生方に深くお礼申し上げます（五十音順、
アルファベット順）。大阪大学微生物病研究所（Daisuke Motooka, Hiroya Oki, Kentaro Tanaka, Shota

Esswein SR, Gristick HB, Malyutin AG, Sharaf NG,
Huey-Tubman KE, Lee YE, Robbiani DF,
Nussenzweig MC, West AP Jr, Bjorkman PJ. SARSCoV-2 neutralizing antibody structures informtherapeutic strategies. Nature. 2020; 588(7839): 682687.

Nakamura）、大阪母子医療センター（Itaru Yanagihara,
Satoshi Yanagihara, Yukiko Nakura, Yuya Fujisawa）、関
西医科大学（Masami Kashihara）、国立感染症研究所（Akina Ogamino, Harutaka Katano, Kentaro Itokawa,
Makoto Kuroda, Masanori Hashino, Naobumi V. Sasaki,
Norio Ohmagari, Rina Tanaka, Shinji Saito, Shun Iida,

7) Aksamentov I, Roemer C, Hodcroft EB, Neher RA.
Nextclade: clade assignment, mutation calling andquality control for viral genomes. J Open Source Softw.
2021; 6(67): 3773.
8) O'Toole Á, Scher E, Underwood A, Jackson B, Hill V,
McCrone JT, Colquhoun R, Ruis C, Abu-Dahab K,

Tadaki Suzuki, Tsuyoshi Sekizuka, Yuichiro Hirata）、地
域医療機能推進機構大阪病院（Emi Yoshinaga, Yuichi
Yamashita）
また、大阪健康安全基盤研究所で SARS-CoV-2 の全ゲノム配列を解読するにあたり、技術的な支援をいただきました国立感染症研究所病原体ゲノム解Taylor B, Yeats C, du Plessis L, Maloney D, Medd N,
Attwood SW, Aanensen DM, Holmes EC, Pybus OG,
Rambaut A. Assignment of epidemiological lineages
in an emerging pandemic using the pangolin tool.
Virus Evol. 2021; 7(2): veab064.
9) 国立感染症研究所病原体検出マニュアル 新型

析研究センターの黒田誠先生、関塚剛先生、糸川健
太郎先生に感謝申し上げます。

コロナウイルスゲノム解析マニュアル https://www.niid.go.jp/niid/ja/lab-manual-m/9559-20 20-04-1
4-10-09-54.html
10) Khare S, Gurry C, Freitas L, Schultz MB, Bach G,
Diallo A, Akite N, Ho J, Lee RT, Yeo W, Curation
Team GC, Maurer-Stroh S. GISAID's Role in

利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1) GitHub cov-lineages/pango-designation https://gith
ub.com/cov-lineages/pango-designation/blob/master/lineage_notes.txt2) A. Rambaut, “Phylodynamic Analysis | 176 geno
mes | 6 Mar 2020,” Virological 2020; https://viro

Pandemic Response. China CDC Wkly. 2021; 3(49):1049-1051.
11) Hadfield J, Megill C, Bell SM, Huddleston J, Potter
B, Callender C, Sagulenko P, Bedford T, Neher RA.
Nextstrain: real-time tracking of pathogen evolution.
Bioinformatics. 2018; 34(23): 4121-4123.

logical.org/t/phylodynamic-analysis-176-genomes-6mar-2020/356.
3) Markov PV, Ghafari M, Beer M, Lythgoe K,
Simmonds P, Stilianakis NI, Katzourakis A. The

12) Joshua Gould Morpheus https://software.broadins
titute.org/morpheus
13) 第 88 回大阪府新型コロナウイルス対策本部会
議【資料 3-1】現在の感染・療養状況について- 22 -

https://www.pref.osaka.lg.jp/attach/38215/00453234/
3-1_kansenzyoukyou230428.pdf
14) 若林友騎，河原隆二，柿本健作，山口貴弘，梅川奈央，西嶋駿弥，森川佐依子，廣井 聡，池森亮，白井達哉，阪野文哉，前田和穂，岐部亜子，

7(1): 76.
17) Cao Y, Jian F, Wang J, Yu Y, Song W, Yisimayi A,
Wang J, An R, Chen X, Zhang N, Wang Y, Wang P,
Zhao L, Sun H, Yu L, Yang S, Niu X, Xiao T, Gu Q,
Shao F, Hao X, Xu Y, Jin R, Shen Z, Wang Y, Xie XS.

平井佑治，岡田和真，永吉晴奈，徳永佑亮，上野亮，村野晃一，北口大毅，田上貴臣，安達史恵，
森 治代，本村和嗣，小笠原準．全ゲノム配列情報に基づく大阪府内の severe acute respiratory
syndrome coronavirus 2 の分子疫学解析．地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報．

Imprinted SARS-CoV-2 humoral immunity induces
convergent Omicron RBD evolution. Nature. 2023;
614(7948): 521-529.
18) Laurini E, Marson D, Aulic S, Fermeglia A, Pricl S.
Molecular rationale for SARS-CoV-2 spike
circulating mutations able to escape bamlanivimab

2022;6, 9-19.
15) Starr TN, Greaney AJ, Hilton SK, Ellis D, Crawford
KHD, Dingens AS, Navarro MJ, Bowen JE, Tortorici
MA, Walls AC, King NP, Veesler D, Bloom JD. Deepmutational scanning of SARS-CoV-2 receptor binding
domain reveals constraints on folding and ACE2

and etesevimab monoclonal antibodies. Sci Rep. 2021;
11(1): 20274.
19) 国立感染症研究所 新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）に対する治療薬の効果に影響を及ぼす可能性があるウイルスゲノム変異によるアミノ酸置換について（第 3 版） https://www.niid.go.jp

binding. Cell. 2020; 182(5): 1295-1310.
16) Zhang Y, Zhang T, Fang Y, Liu J, Ye Q, Ding L.
SARS-CoV-2 spike L452R mutation increases
Omicron variant fusogenicity and infectivity as well as
host glycolysis. Signal Transduct Target Ther. 2022;/niid/images/cepr/covid-19/20230405_SARS-CoV-2_mutation_3.pdf
WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 2 日に確認した。

- 23 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Phylogenetic analysis and spike mutation profiles of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 in Osaka

Yuki WAKABAYASHI, Ryuji KAWAHARA, Kensaku KAKIMOTO, Takahiro YAMAGUCHI, Nao UMEKAWA,
Yuji HIRAI, Syunya NISHIJIMA, Saeko MORIKAWA, Satoshi HIROI, Tatsuya SHIRAI, Ryo IKEMORI, Fumiya
BANNO, Kazuma OKADA, Kazuho MAEDA, Mei KOYAMA, Yuko SHIBUTANI, Yusuke TOKUNAGA, Koichi
MURANO, Haruna NAGAYOSHI, Ryo UENO, Daiki KITAGUCHI, Takaomi TAGAMI, Fumie ADACHI, Niichiro
ABE, Haruyo MORI, Kazushi MOTOMURA and Kentaro KAWATSU

We conducted a phylogenetic analysis and spike mutation profiling of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2) genomes sampled in Osaka Prefecture in 2022. At the beginning of 2022, the predominant lineages
accounted for more than half of the sequenced genomes. However, after the eleventh week of 2022, various lineages ofviruses were detected simultaneously. Almost all mutations in the receptor binding domain (RBD) of the spike protein
were found in only 28 of the 201 amino acid residues analyzed. Convergent evolution of the spike RBD was also implied.
These results indicate the importance of analyzing spike mutation profiles as well as genetic lineages for surveillance of
SARS-CoV-2.

Key words: severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, molecular epidemiology, whole-genome sequencing, spike
protein, receptor binding domain

Osaka Institute of Public Health- 24 -

報 ⽂

地⽅独⽴⾏政法⼈⼤阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 25-33 (2023)

大阪府内における 2022/2023 シーズンのインフルエンザ流行状況

森川佐依子, 廣井 聡, 阿部仁一郎, 森 治代

大阪健康安全基盤研究所ウイルス課では、年間を通じインフルエンザウイルスの検出、分離･型別を行い、国立感染症研究所へより詳細な解析用に一部の分離株を提供している。さらに、インフルエンザ以外のウ
イルス性呼吸器疾患の紛れ込みの検出、分離された A 型インフルエンザウイルス HA 遺伝子の系統樹解析によるワクチン株と流行株の差異について解析している。
2022/2023 シーズンの大阪府内におけるインフルエンザの流行は、2022 年第 51 週に定点あたり患者数が1.0 を越え流行期入りし、2023 年第 5 週をピークとしてその後は減少し、第 15 週に定点当たり報告数が 1.0を下回り非流行期となった。今シーズンの流行を形成したタイプは、AH3 亜型インフルエンザウイルスであった。研究期間中に検出された他のインフルエンザウイルス型は、B 型 Victoria 系統が 1 株のみで、A 型の H1pdm09 亜型と B 型の Yamagata 系統は検出されなかった。AH3 亜型インフルエンザウイルス分離株の系統樹解析の結果、全国と同様に複数のクレードに分かれたが、各クレードに属する分離株の割合は全国とは異なっていた。
インフルエンザ指定提出機関にてインフルエンザと診断された患者から採取された検体であったが、当課での検査の結果、季節性インフルエンザウイルスが検出されなかったものが 5 検体(6.2%)あった。その内の 3 検体からは他の呼吸器ウイルスが検出された。2 検体からパレコウイルスが検出され、残り 1 検体はライノウイルスが検出された。

キーワード：インフルエンザウイルス、病原体サーベイランス、呼吸器ウイルス

インフルエンザはインフルエンザウイルスの感染によって引き起こされる急性熱性の呼吸器感染症である。我が国においては沖縄県を除き毎年冬期に流行するため、流行時期に合わせ毎年第 36 週（8月末から 9 月始め）から翌年の第 35 週（8 月末）
までの 1 年間が「インフルエンザシーズン」と定義されている。
インフルエンザに罹患すると多くは1 週間程度で回復するが、高齢者においては肺炎、循環器疾患をはじめとする慢性基礎疾患の悪化による死亡者数の増加（超過死亡）の一因となっており、さらに小児では脳症、肺炎など重症化の主要因となるなど、その対策は我が国の医療施策において重要な課題
である 1)。インフルエンザワクチンは感染や発症そのものを完全には防御できないが、重症化や合併症の発生を予防する効果が証明されている 2)。インフ
ルエンザ株サーベイランスは世界保健機関（World
大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

Health Organization: WHO）の世界インフルエンザ監
視・対応システム（Global Influenza Surveillance andResponse System: GISRS）によって、地球規模で実施されており、このサーベイランスの結果をもとに流行予測とワクチン株選定が行われている 3)。大阪
健康安全基盤研究所ウイルス課では、国および大阪
府の感染症発生動向調査事業の一環として、大阪府内のインフルエンザの流行状況を把握することを目的に、年間を通じインフルエンザウイルスの検出、分離･型別を行っている。さらに国立感染症研究所と共同で実施している「感染症発生動向調査に基づ
くインフルエンザサーベイランス」の一環として、我が国のインフルエンザウイルスの詳細な流行状
況を把握することを目的とし、一部の分離株の提供を行い、それらは遺伝子解析、抗原性解析、薬剤耐性変異株の検索に用いられている。

- 25 -

4. インフルエンザウイルスの分離培養と分離株の解析

ここでは、新型コロナウイルス感染症の流行の影響を受け、3 シーズンぶりの流行となった
2022/2023 シーズン流行期のうち 2022 年第 36 週から 2023 年第 17 週の大阪府内のインフルエンザ流
行状況に加え、分離株の遺伝子系統樹解析、および季節性インフルエンザウイルスの検出が陰性であった検体について他の呼吸器ウイルスの検出を行ったので併せて報告する。
研 究 方 法1. インフルエンザ定点サーベイランス
大阪府内の流行状況の把握には、大阪府感染症発
生動向調査事業に則り、大阪府感染症情報センター
から発出される患者情報、定点あたり患者数を用いた。警報レベル、流行期入りの目安についても同センターの基準値に従った 4)。
2. インフルエンザ病原体サーベイランス
大阪府感染症発生動向調査事業に基づきインフ
ルエンザ指定提出機関にて採取された上気道由来
検体を対象とした。
2022/2023 シーズンのうち、2022
年第 36 週（9 月 5 日〜9 月 11 日）から 2023 年第17 週（4 月 24 日〜4 月 30 日）までに採取され、大阪健康安全基盤研究所ウイルス課に搬入された 81
検体についてインフルエンザウイルスの検出および遺伝子解析を行った。
3. インフルエンザウイルスまたは他の呼吸器ウイルスの遺伝子検出
搬入された上気道由来検体の 200μL を核酸抽出に供した。核酸抽出は MagDEA Viral DNA/RNA200（GC）キット（Precision System Science）を用い、全自動核酸抽出機（Precision System Science）にて行った。抽出した核酸はインフルエンザ診断マニュア
ル 5) に 従 い リ ア ル タ イ ム RT-PCR （ reverse
transcription- polymerase chain reaction）法によるインフルエンザウイルス遺伝子の検出を行った。
インフルエンザウイルスの検出が陰性であった検体については、リアルタイム PCR 法による呼吸器ウイルスの検出を行った 6)。
エンテロウイルス（EV）およびライノウイルス（RV）は共通領域を検出するため、陽性となった場合は、核酸を用いて VP4-2
領域に対する semi-nested RT-PCR 法を行い、増幅産物のダイレクトシーケンスにて遺伝子配列を決定
し、BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）にて型別を行った 7)。
- 26 -

24 ウェルプレートに単層培養した Madin - Darby
Canine Kidney（MDCK）細胞にヒト 2,6-シアル酸転移酵素 cDNA をトランスフェクションし、細胞表面の糖鎖末端をアルファ 2-6 結合のシアル酸が多く占めるよう作製された AX-4 細胞（東京大学医科学研究所 河岡教授より分与）8)に各ウェル 300μLの検体を接種し 34℃、30 分吸着後、分離用培地である 3μg/mL アセチルトリプシン（SIGMA）添加
DMEM（SIGMA）培地に交換し、34℃、5%CO2 存
在下で 1 週間培養し細胞変性効果 cytopathic effect（CPE）を観察した。
CPE が観察された場合、培養上清を回収し、型別に供した。CPE が観察されない場合は盲継代を行い、2 代目で CPE が観察されない場合は分離陰性とした。
CPE が陽性であった培養上清は、3μL を蒸留水にて 50 倍に希釈し、その 5μL を検体として直接リア
ルタイム RT-PCR 法によるウイルス遺伝子の検出を行うことで型別を実施した 5)。
また、A 型分離株については、RNA を抽出後、HA 遺伝子の全長の塩基配列を決定し 5)、インフル
エ ン ザ ウ イ ル ス 遺 伝 子 デ ー タ ベ ー ス GISAID（Global Initiative on Sharing All Influenza Data）9)から入手したワクチン株とともに最尤法による系統樹解析を行った。解析に供した株は流行期において地区、検体採取日が偏らないよう分離株を選択した。
系統樹上のクレード、サブクレードの区別について
は全国データを参考とした。
3 月末までに型別にて AH3 亜型と判定された株については、培養上清の 50 倍希釈液から核酸抽出を実施し、ポリメラーゼ A（PA）遺伝子の部分塩基配列を決定し、キャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤であるバロキサビルマルボキシル（商品名ゾ
フルーザ）の耐性遺伝子変異を検索した。
国立感染症研究所インフルエンザウイルス研究センターは、GISRS の一環として、病原体検出情報システムに登録された全国の分離株情報をもとに、無作為に抽出した株の分与を各地方衛生研究所に依頼し、分与株の詳細な抗原性解析や遺伝子解析を行なっている。これらのデータは WHO および国内のインフルエンザ流行予測、ワクチン株選定の資料となる他、地方衛生研究所へと還元されている。したがって、本報告中のインフルエンザウイルス HA

遺伝子の塩基配列データ 5 株分（A/OSAKA/〇〇/〇〇○○と大阪のアルファベット表記が全て大文字として区別）、詳細な抗原性解析データ 3 株分については、当課からの分与株に関して国立感染症研究所から還元された解析結果である。
本報告の一部は、地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所倫理審査委員会の承認を得て（承認番号1402-02-5）、「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」を順守して実施したものである。
結 果
1. インフルエンザ定点サーベイランス、病原体サーベイランスに基づく大阪府内のインフルエンザ
流行状況とインフルエンザウイルス検出結果
2022/2023 シーズンにおいて、インフルエンザ流
行期入りの目安となる「定点あたりの患者数」が 1を超えたのは、前回流行が見られた 2019/2020 シーズンより 4 週遅い第 51 週（12 月 19 日〜12 月 25日）であった。定点あたり患者数が 30.0 を超えた
警報域の週は認められず、2023 年第 5 週にピークの 29.9 となった後患者数は速やかに減少した。
2019/2020 シーズンの流行と比較すると、ピークに達するまでの患者数の増加傾向、ピーク後の患者数の減少は急速で、ピーク時の患者数は多く、期間中の患者報告数合計も 2019/2020 シーズンの 57285 人
より増加した 59936 人であった 10）（図 1）。
インフルエンザウイルスの検出を、流行期を含む
2022 年第 36 週〜2023 年第 17 週までに採取され、当所に搬入された 81 検体に対して実施した。シーズン最初の検体搬入は第 44 週であり、以降 6 月 14
日現在も少数ではあるが断続的に検体搬入が続いている状態である。研究期間中に検出されたウイル
スは 75 検体が AH3 亜型陽性、1 検体が B 型 Victoria
系統陽性であったことから、今シーズンの流行はAH3 亜型の単独流行であり、地域的に B 型 Victoria
系統が小さく流行したと考えられた。研究期間中にAH1pdm09 亜型、B 型 Yamagata 系統は検出されなかった（図 1）。
また、前シーズンである 2021/2022 シーズンは定点あたり患者数が 1.0 を超えるインフルエンザの流行期は認められなかった。しかし、シーズン終了近くの 2022 年第 27 週から府内で患者数報告が増加
し、第 27 週から週を追うごとに 17、75、104、57- 27 -

例の患者発生が報告され、搬入された検体からはAH3 亜型が検出された（データ示さず）。
2. インフルエンザウイルス分離株の遺伝子系統樹
解析および抗原性解析
国内における AH3 亜型ウイルス分離株の遺伝子
系統樹解析の結果については、国立感染症研究所公表のクレードの記載法に従った 11）。HA 遺伝子系統
樹上の各クレードは、3C.2a1b.2a（K83E, Y94N,
I522M）内に属している（（）内は特徴的なアミノ酸変異）。このクレード内には 3C.2a1b.2a.1（F193S,
Y195F, G186S, S198P）および 3C.2a1b.2a.2（F193S,
Y195F,
Y159N,
T160I,
L164Q,G186D,
D190N）が派生している。3C.2a1b.2a.2 は更に、
3C.2a1b.2a.2a (H156S)( 省 略 名 : 2a 、 代 表 株
A/Darwin/9/2021)、3C.2a1b.2a.2b (E50K, F79V, I140K)、
3C.2a1b.2a.2c (S205F, A212T) 、3C.2a1b.2a.2d (G62R,
H156Q, S199) に 分 岐 し て い る 。 ま た 2a 内 は
2a.1 (D53G, D104G, K276R), 2a.1a (2a.1 + L157I,
S262N), 2a.1b (2a.1 + I140K, R299K), 2a.2 (2a + I25V,
D53G, R201K, S219Y), 2a.3 (2a + D53N, N96S, I192F,
N378S) , 2a.3a (2a.3 + E50K), 2a.3a.1 (2a.3a + I140K,
I223V), 2a.3b (2a.3 + I140M)に細分化される。
大阪府内での 2022 年 7 月からの分離株について解析した結果、全国と同様に 7 月、11 月の分離株である A/OSAKA/1/2022、
A/OSAKA/2/2022 は 2a 内で D53N, P289S, R307K を持つウイルスであったが（図 2 今期ワクチン株 A/Darwin/9/2021 の上部 2株 ）、 流 行 期 に 入 っ て か ら 分 離 さ れ た
A/OSAKA/1/2023 以降の分離株は 2a.3a と 2a.1 に属する株がおおよそ 1：1 であり、2a.1 内では 2a.1bに属する株が多くを占めた（図 2）。
抗原性解析に関する2022/2023 シーズンの還元データでは、解析された 3 株はいずれもワクチン株である A/Darwin/9/2021 に対し抗原類似株と判定された。
キャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤であるバロキサビルマルボキシルの耐性遺伝子変異を検出するため PA 遺伝子の部分塩基配列を決定したが、2023 年 3 月末までの全ての分離株においては、耐性遺伝子変異は見られなかった。
3. インフルエンザウイルス以外の呼吸器ウイルスの検出
2022/2023 シーズン流行期において、臨床症状からインフルエンザと診断されたが、その患者から採取された上気道由来検体からインフルエンザウイ

この 5 検体のうちで、他の呼吸器ウイルスが検出されたのは 3 検体で、全てキット陽性例からであった（表 1）。検出されたウイルスはパレコウイルスが 2 検体、ライノウイルスが 1 検体であり、ライノ
ウイルスは BLAST を用いた型別の結果、C16 型と判定された。

ルスが検出されなかった検体は 5 検体であった。その内、迅速診断キットにて A 型インフルエンザ陽性と診断されていた患者の検体は 2 検体、キットにて B 型が陽性であった検体は 2 検体、他の 1 検体
はキット実施状況が不明であった。

14

35

A H3亜型
1230

B Victoria系統
インフルエンザウイルス検出陰性

10

検体数

8

20

定点あたり患者数（2019/2020）

6

15

4

10

2

5

0

44

45

46

47

48

49

50

51

52

1

2

3

4

5

2022年

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

2023年

検体採取週

図 1. 2022 年第 44 週〜2023 年第 17 週のインフルエンザウイルス検出状況と定点あたり患者数の推移
各週の棒グラフ上のシンボル(◆)は、当該週にインフルエンザウイルス（Flu）陰性であった検体 1 検体につき、イン
フルエンザウイルス以外の呼吸器ウイルスが検出されたことを示す。検出ウイルス種については表 1 に掲載。

表 1 インフルエンザウイルス陰性検体からの他の呼吸器ウイルス検出状況
検体採取週
2023年

検出ウイルス（インフルエンザ迅速診断キットの情報）

第7週

パレコウイルス（A型インフルエンザ陽性）

第7週

C群ライノウイルス16型（B型インフルエンザ陽性）

第10週

パレコウイルス（A型インフルエンザ陽性）- 28 -

0

定点あたり患者数25

定点あたり患者数

D53N, N96S
I192F,N378S+ E50K

A/Osaka/18/2023
A/Osaka/12/2023
A/Osaka/21/2023
T135A

A/Osaka/6/2023
A/Osaka/7/2023

3C.2a1b.2a.2a.3a

A/Osaka/10/2023

3C.2a1b.2a.2a.3a.1

I140K,I223V *3A/Osaka/40/2023 *2

A/OSAKA/15/2023 *1

3C.2a1b.2a.2a

A/OSAKA/1/2023
A/OSAKA/1/2022
A/OSAKA/2/2022

D53N,P289S
R307K

A/Darwin/9/2021(今期ワクチン株)
A/Osaka/35/2023

3C.2a1b.2a.2a.1b

A/Osaka/36/2023
A/Osaka/38/2023
A/Osaka/37/2023
A/Osaka/19/2023
A/Osaka/22/2023
A/Osaka/3/2023

D53G,D104G
K276R
I140K,R299K

A/Osaka/2/2023
E50K,F79V
I140K

3C.2a1b.2a.2a.1

Y159N,T160I
L164Q,V186D
D190N,F193S
Y195F

3C.2a1b.2a.2

K135T,H156S

A/OSAKA/27/2023
A/Osaka/31/2023

3C.2a1b.2a.2b

A/Osaka/32/2023
A/Cambodia/e0826360/2020 IVR-224 (20/320)(2021/22シーズン北半球ワクチン株)
A/Hong Kong/2671/2019 (21/194)(2021年南半球ワクチン株)

K83E,Y94N
T131K,I522M

3C.2a1b.2a.1a

0.01

図2

2022/2023 シーズン AH3 亜型大阪府分離株の HA 全長の遺伝子系統樹解析*1. OSAKA 表記は国立感染症研究所でのシーケンスデータ*2. Osaka 表記は当課でのシーケンスデータ*3. 各クレードの分岐点に、クレードごとに共通の特徴的なアミノ酸変異を青字にて示す

考 察
2022/2023 シーズンの大阪府内におけるインフル
エンザの流行は、前回の流行シーズンより 4 週遅い
2022 年第 51 週に定点あたりの患者数が 1.0 を超え
流行期入りとなった。患者数はその後増加し、2023
年第 5 週に定点あたり患者数が 29.9 となったのをピークに減少に転じ、第 15 週に定点あたり 1.0 を下回り流行期終了となった。前回流行が認められた- 29 -

2019/2020 シーズンと同様に定点あたり患者数が30.0 を超えた警報域の週はなく小規模な流行となった。これは、新型コロナウイルス感染症（COVID19）の感染拡大防止策として、一般的な飛沫感染防止策（手洗い実施、マスク着用）が継続して徹底されていることが影響していると考えられる。
当課にインフルエンザ指定提出機関から搬入される検体は、迅速診断キットでインフルエンザ陽性であった患者由来のものが多く、迅速診断結果が表記されていない検体も含めた 81 検体に対するイン
フルエンザウイルスの検出率は 93.8%と高値であった。
2022/2023 シーズンの病原体サーベイランスに基づく検査による検出ウイルスは、全国データでもAH3 亜型がほとんどを占めており 12）、大阪府においても同様であった。前回流行が認められた
2019/2020 シーズンは AH1pdm09 亜型と B 型
Victoria 系統の検出が主であり、全国的に AH3 亜型の検出が少なかったこと、さらにその後 2 シーズン
は新型コロナウイルスの流行の影響を受けインフ
ルエンザの流行が見られなかったことから、地域のAH3 亜型に対する感染抗体の保有率は低下しており、感染防止策が徹底されていた中でも流行が見られたと考えられた。
国内における AH3 亜型ウイルス分離株の遺伝子
系統樹解析の結果については、国立感染症研究所から、HA 遺伝子系統樹上のクレード 3C.2a1b.2a 内の
3C.2a1b.2a.1 および 3C.2a1b.2a.2 について、「流行の中 心 は 3C.2a1b.2a.2 で あ り 、 更 に こ れ ら が
3C.2a1b.2a.2a 、 3C.2a1b.2a.2b 、 3C.2a1b.2a.2c 、
3C.2a1b.2a.2d に分岐し、また 2a 内には 2a.1 、2a.1b 、
2a.3、 2a.3a、2a.3a.1、2a.3b が出現しており遺伝子的に多様化が進んでいる。国内流行株では、2022 年
7〜8 月は 2a 内で D53N, P289S, R307K を持つウイルスが主流であったが、2022 年 9 月以降は
2a.3a(39.7%)、2a.3a.1 (16.4%)、3C.2a1b.2a.2b (26.0%)に属するウイルスが主流となっている。
」と公表さ
11)
れている 。
大阪府内では前回流行が見られた2019/2020 シー
ズンに当課で分離された 2 株は 3C.2a1b.1 に属した。
2019/2020 シーズンにおいては、2019 年 9 月以降の全国の分離株の 56.0%がこのクレードに属していたが、現在はこのクレードから派生した株は報告されていない。大阪府内での 2022 年 7 月からの分離株について解析した結果、全国と同様に 7 月、11 月の 分 離 株 で あ る A/OSAKA/1/2022 、
A/OSAKA/2/2022 は 2a 内で D53N, P289S, R307K を持つウイルスであったが、流行期に入ってから分離された A/OSAKA/1/2023 以降の分離株は 2a.3a と2a.1 に属する株がおおよそ 1：1 であり、2a.1 内では 2a.1b に属する株が多くを占めた（図 2）。また、
3C.2a1b.2a.2b に属する分離株の割合は全国とは異なりやや少なく、2a.3a や 2a.1 に属する株の 3 分の1 程度であった。一方、2a.3a.1 に属する分離株は解- 30 -

析した中では 1 株のみであった。府内においては、
初夏になっても継続してウイルスが検出されており、今後どのクレードに属するウイルスが増加してくるのか注目される。
抗原性解析結果においては、国立感染症研究所から還元された 2022 年 7 月の AH3 亜型分離株の解析結果では、2021/2022 シーズンの WHO のワクチン推奨株である A/Cambodia/e0826360/2020（細胞分離株）に対するフェレット感染血清と反応性の低下が認められたが、2022/2023 シーズンのワクチン推奨株である A/Darwin/9/2021（細胞分離株）とは類似の抗原性であったことが報告されており、また、
2022/23 シーズン流行期の分離株 2 株の解析結果も同様であった。全国データでも、抗原変異株と判定された株は解析株のうちの 1.0%であり 11）、
WHO の次シーズン 2023/2024 のワクチン推奨株も AH3 亜型は変更なく A/Darwin/9/20213)となっている。一方、2022/2023 シーズンに流行しなかった AH1pdm09 亜型、B 型については、世界各国での流行株の抗原性解析結果を受けて、それぞれ推奨株がA/Victoria/4897/2022、B/Austria/1359417/2021 と変更されており、さらに我が国では 3 シーズン流行が見られていないことから、次シーズン流行前のワクチン接種が重要である。
2023 年 5 月 8 日以降、新型コロナウイルス感染症の類型が 5 類へと移行となり、それに先立って 3
月 13 日よりマスク着用が個人の判断に委ねられることとなった 13）。これまでは新型コロナウイルス
感染症対策として飛沫感染防止策が徹底されていたことで、飛沫感染を主な感染ルートとする呼吸器
ウイルス感染症の流行は総じて抑えられてきた。インフルエンザの地域での流行は学校内へのウイル
スの持ち込みによる集団感染によって拡大していくことが多く、校内でのマスク着用が個々の判断となった後、集団での感染リスクは増加すると考えられる。このことより、2023/2024 シーズンは、ワク
チン接種のみならず、冬期の本格的な流行期までの夏から初秋にかけて、地域流行の探知と流行株の解析による早期のインフルエンザ対策が重要と考えられる。
PA 遺伝子の部分塩基配列を決定し、キャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤であるバロキサビ
ルマルボキシルの耐性遺伝子変異の有無を調査した。大阪府内における 3 月末までのインフルエンザ
ウイルス分離株では耐性遺伝子変異は検出されな

かったが、6 月 14 日に更新された全国データを見ると、全国から報告があった AH3 亜型 317 株のうち 4 株（1.3％）で耐性変異が検出されており、3 株
は薬剤未投与例からの検出例であったと報告されている 14）。抗インフルエンザウイルス薬の使用状
況に影響されるが、今後耐性変異を有する株が広がってくるのか、引き続きのモニタリングが必要である。
2022/2023 シーズンのインフルエンザの流行は小規模であったため、当課に搬入されたインフルエン
ザ疑いの検体数は少なく、それに応じてインフルエ
ンザウイルスが検出されなかった検体も 5 検体と少なかった。他の呼吸器ウイルスが陽性となった検体も 3 検体と少なく、うち 2 検体からパレコウイ
ルス、1 検体からは C 群ライノウイルス 16 型が検出された。全国的には 2022 年夏期にパレコウイル
ス 3 型、その後秋期に 1 型の検出が増加していたが、2023 年に入ってからはほとんど検出されておらず 15）、今回検出された 2 検体においては散発例であったと考えられた。
謝 辞本研究の一部は、厚生労働行政推進調査事業費補助金「ワクチンの有効性・安全性の臨床評価と VPDの疾病負荷に関する疫学研究」の一環として行われた。
本研究において、検体採取、情報提供、諸連絡等に携わって頂きました、全ての皆様に深謝致します。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1） 国立感染症研究所．IDWR 感染症の話「インフルエンザとは」．
https://www.niid.go.jp/niid/ja/kansennohanashi/21
9-about-flu.html
2） 福島若葉．6 歳未満児におけるインフルエンザ
ワクチンの有効性:2013/14 および 2014/15 シーズン（厚生労働省班研究報告として）．
IASR 2016; 37: 230-231.
3） WHO. Recommendations announced for influenza
vaccine composition for the 2023-2024 northern- 31 -

hemisphere influenza season.
https://www.who.int/news/item/24-02-2023recommendations-announced-for-influenzavaccine-composition-for-the-2023-2024-northernhemisphere-influenza-season4） 大阪府感染症情報センター．インフルエンザ
関連情報．
http://www.iph.pref.osaka.jp/infection/influ/shingat
a.html5） 国立感染症研究所． インフルエンザ診断マニ
ュアル（第 3 版）リアルタイム RT-PCR(TaqMan
Probe 法)による同定．平成 26 年．24-28.
6） Morikawa S, Hiroi S, Kase T. Detection of
respiratory viruses in gargle specimens of healthy
children. J Clin Virol 2015; 64: 59-63.
7） Ishiko H, Shimada Y, Yonaha M, Hashimoto O,
Hayashi A, Sakae K, Takeda N. Moleculardiagnosis of human enteroviruses by phylogenybased classification by use of the VP4 sequence. J
Infect Dis 2002; 185: 744-754.
8） Hatakeyama S, Sakai-Tagawa Y, Kiso M, Goto H,
Kawakami C, Mitamura K, Sugaya N, Suzuki Y,
Kawaoka Y. Enhanced expression of an α2,6-linked
sialic acid on MDCK cells improves isolation ofhuman influenza viruses and evaluation of their
sensitivity to a neuraminidase inhibitor. J Clin
Microbiol 2005; 43: 4139-4146.

9） GISAID (The Global Initiative on Sharing All
Influeza Data). Epi Flu TM.
http://platform.gisaid.org/epi3/frontend#1832a9
10） 森川佐依子，廣井聡，本村和嗣. 大阪府内における 2019/2020 シーズンのインフルエンザ流
行状況．大阪健康安全基盤研究所 研究年報
2020; 4: 9-17.
11） 国立感染症研究所．
「インフルエンザウイルス
流行株抗原性解析と遺伝子系統樹（2023 年 3月 30 日）」． https://www.niid.go.jp/niid/ja/fluantigen-phylogeny.html
12） 国立感染症研究所．IASR インフルエンザウイ
ルス分離・検出速報（自動更新 2023 年 6 月 14日作成）
https://kansen-levelmap.mhlw.go.jp/Byogentai/
Pdf/data2j.pdf
13） 厚生労働省．感染症対策・健康や医療相談の情報「新型コロナウイルス感染予防のために」https://www.mhlw.go.jp/stf/covid-19/kenkouiryousoudan.html#h2_1
14） 国立感染症研究所．抗インフルエンザ薬耐性株サーベイランス 2022/2023 シーズン エン
ドヌクレアーゼ阻害薬耐性変異株検出情報
最終更新日 2023/6/14
https://www.niid.go.jp/niid/images/flu/resistance/2
0230613/dr22-23j20230613-5.pdf
15） 国立感染症研究所．
IASR Topics グラフ (RS ウ- 32 -

イルス/ムンプスウイルス/EV68/パレコウイル
ス/A 型肝炎ウイルス) パレコウイルス月別
分離・検出報告数
https://www.niid.go.jp/niid/ja/typhi-m/iasrreference/510-graphs/4563-iasrgtopics.html
WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 14 日に確認した。

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Epidemic situation of influenza during the 2022/2023 season in Osaka prefecture

Saeko MORIKAWA, Satoshi HIROI, Niichiro ABE and Haruyo MORI

Influenza virus isolation and viral genome detection from clinical specimens was performed throughout theyear to understand the epidemic situation of influenza in Osaka Prefecture. Furthermore, influenza viruses wereisolated and the antigenic and genetic properties of the circulating strains were analyzed every winter influenza
season.
During the 2022/2023 influenza season in Osaka prefecture, influenza activity increased in the 51st week in
2022, peaked in the 5th week in 2023 and decreased. During this season, influenza AH3 subtype virus
predominated. Influenza B Victoria lineage virus was detected in the 7th week 2023. We tested specimens
delivered by the end of April 2023. As a result, influenza AH1pdm09 subtype and influenza B Yamagata lineage
viruses were not detected. The phylogenetic tree of the hemagglutinin (HA) gene of influenza viruses isolated
nationwide was divided into multiple clades. HA genes of isolates from Osaka Prefecture were also divided into
multiple clades; however, the ratio of isolates belonging to each clade differed from that of isolates from Japan.
We also tested five influenza virus-negative specimens for other respiratory viruses. Respiratory viruses otherthan influenza virus were detected in three samples, two of which were positive for parechovirus. Rhinovirus was
detected in one other sample.

Key words：influenza virus, infectious agents surveillance, respiratory virus

Osaka Institute of Public Health- 33 -

報 文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 34-42 (2023)

大阪府におけるエンテロウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2022 年度）

中田恵子，前田和穂，森 治代

2022 年度の手足口病（16 名）またはヘルパンギーナ（6 名）の患者から検出されたエンテロウイルスはそ
れぞれ、コクサッキーウイルス A6 型（CV-A6）（7 名）、コクサッキーウイルス A16 型（CV-A16）（4 名）とCV-A6（5 名）、CV-A16（1 名）であった。無菌性髄膜炎患者からはエンテロウイルスは検出されなかった。
CV-A6 および CV-A16 の分離株の Viral Protein 1 領域を用いた系統樹解析の結果、2022 年度の CV-A6 の 6
株、CV-A16 の 3 株はそれぞれ同じクラスターに分類され、遺伝子型はそれぞれ D と B であった。また、2022 年度の CV-A6 の 6 株は、2019、2021 年度の大阪健康安全基盤研究所（当所）分離株および 2017 年、2018 年、2019 年の中国株と同じクラスターを形成した。一方、2022 年度の CV-A16 の 3 株は 2019 年度の当所分離株および 2017 年の中国株と同じクラスターを形成した。2022 年度シーズンに検出された CV-A6 お
よび CV-A16 はともに 2019 年度シーズン以前に国内に流入した後、国内で循環していた可能性が考えられた。エンテロウイルス感染症では、各疾患の原因ウイルスの遺伝子型および系統が毎年異なることから、今後も引き続きその動向を調査する必要がある。

キーワード：手足口病、ヘルパンギーナ、無菌性髄膜炎、エンテロウイルス

毎年夏季に小児の患者数が増加するエンテロウ
イルス（Enterovirus; EV）感染症の中で、手足口病、ヘルパンギーナ、無菌性髄膜炎は「感染症の予防及び感染症の患者に対する医療に関する法律」
（以下、

報告する。

感染症法）において 5 類感染症の定点把握疾患に指定されている。各疾患の原因となるウイルスの型は年毎に変動があり、患者から検出されるウイルスは疾患ごとに特徴がある 1）。また、ウイルス型によっては中枢神経症状を引き起こす等、重症化との関連が疑われる 2）ことや、流行するウイルス型が一定の

1. 検体及び情報収集
2022 年 4 月 1 日から 2023 年 3 月 31 日の期間に、大阪府内（ただし、堺市、2023 年 2 月までは大阪市を除く）の定点医療機関から当所に搬入された手足口病、ヘルパンギーナまたは無菌性髄膜炎と診断された 32 名から採取された 41 検体を対周期で繰り返される傾向が認められるため 3）、流行を予測する観点から毎年の流行解析は重要である。
本稿では、2022 年 4 月 1 日から 2023 年 3 月 31 日の期間に手足口病、ヘルパンギーナまたは無菌性髄膜炎と診断された患者検体から検出されたウイル
スと患者の疫学情報を集約し、EV 遺伝子の分子疫象とした。検体種別の内訳は髄液が 9 検体、咽頭ぬぐい液（鼻腔ぬぐい、鼻汁含む）が 26 検体、便
（直腸ぬぐい含む）が 6 検体であった。患者情報（患者の年齢、性別、診断名、発症日）は感染症法に基づく感染症発生動向調査事業によって得られた調査票より収集した。

調 査 方 法学的解析を実施し、EV の流行状況を検討したので
大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課- 34 -

2. 検体からのウイルス遺伝子検出および遺伝子型
別
便乳剤の遠心分離後の上清およびその他の全ての検体からそれぞれ 200 μL を採取し、ウイルスRNA 抽出用検体とした。ウイルス RNA の抽出は、出した。
抽出したウイルス RNA を用いて EV の VP1
領域に対する RT-PCR5)を実施後、増幅産物のダイ
レクトシークエンスを行ない、近隣結合法を用いた系統樹解析を実施した。なお、検体を接種した哺乳マウスが麻痺を起こさなかった場合、ウイルス分離

Magtration®-MagaZorb RNA Common Kit（PSS 社）
を用いて、全自動核酸抽出装置 Magtration® System
6GC または 12GC（PSS 社）で行った。抽出したウ
イルス RNA を用いて EV の Viral Protein （VP） 4–
2 領域に対する seminested RT-PCR4)を実施後、増幅産物のダイレクトシークエンスを行ない、BLAST

陰性とした。
動物実験は、地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所動物実験委員会により承認された動物実験
計画書に沿って、適切に実施した（承認番号 DH30-2-5）。

解析にて遺伝子型を決定した。

本研究は、地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究
所倫理審査委員会の承認を得て実施したものである（承認番号 1310-05-6）。

3. 培養細胞によるウイルス分離
培養細胞によるウイルス分離には、ウシ胎児血
清を 10％の濃度で添加したアディキュアイーグ
ルＭEM 培地（島津ダイアグノスティクス）を用

結 果

いて、48 ウェルプレートで培養した RD-A、VeroE6、
FL、Caco-2 細胞を使用した。咽頭ぬぐい液は、綿棒で咽頭を擦過後、検体輸送用培地に浸漬した溶液（検体溶液）を、髄液は無処理でそれぞれ 100
μL ずつを各細胞に接種した。便は、緩衝液（ラクトアルブミン水解物溶解液）で 10% 懸濁液（便乳1. 患者情報のまとめ検体が採取された患者のうち、手足口病と診断された患者は 16 名で、年齢の中央値が 1 歳 5 か月（1歳-4 歳 3 か月）、性別は男性 9 名、女性 7 名であった。ヘルパンギーナと診断された患者は 6 名で、年齢の中央値は 1 歳 11 か月（0 歳 7 か月-3 歳 4 か月）、剤）を作製し、15,000 rpm で 5 分間遠心分離後、その上清を同緩衝液で 10 倍希釈し、0.45 μm シリ
ンジフィルターでろ過した溶液を 100 μL ずつを各細胞に接種した。各細胞への検体接種後、CO2 濃
度 5％、37℃のインキュベーターで 1 週間培養し、細胞変性効果（cytopathic effect; CPE）を観察した。

性別は男性 3 名、女性 3 名であった。無菌性髄膜炎と診断されたのは 10 名で、年齢の中央値は 1 歳（範囲：0 か月-3 歳 11 か月）、性別は男性 3 名、女性 7名であった。

CPE が出現した場合にウイルス分離陽性と判定し、培養上清を回収した。なお、3 代盲継代を繰り返し、CPE が出現しなかった場合をウイルス分離陰性と判定した。
4. 哺乳マウスによるウイルス分離および系統樹解の遺伝子型
手足口病、ヘルパンギーナあるいは無菌性髄膜炎と診断された合計 32 名分、
41 検体のうち 17 名分、
17 検体で EV 遺伝子検出が陽性となった。手足口病患者では 16 名中 7 名からコクサッキーウイルス
A6 型（Coxsackievirus A6 ; CV-A6）、4 名から CV-A16

析
手足口病およびヘルパンギーナの患者由来検体については哺乳マウスを用いてウイルス分離を実施した。生後 72 時間以内の哺乳マウス 3 匹を 1 群とし、ウイルス分離用に上述のように処理した検体を頸部皮下に 5-10μL 接種した。その後、1 週間観の遺伝子が検出された（表 1）。ヘルパンギーナ患者では 6 名中 5 名から CV-A6、1 名から CV-A16 の遺伝子が検出された（表 2）。無菌性髄膜炎患者の10 名からは EV 遺伝子は検出されなかった（表 3）。
手足口病またはヘルパンギーナ患者で CV-A6 または CV-A16 遺伝子が陽性であった（表 1、2）
。手足察し、麻痺を呈した個体から筋肉部分を回収した。
回収した筋肉を緩衝液と混和後、ホモジナイズし、
15,000 rpm で 5 分間遠心分離した。その上清から200 μL を採取し、上述の方法でウイルス RNA を抽

口病の患者検体において、CV-A6 は 7 月から 9 月と 11 月に検出された。また、CV-A16 は 8 月と 9 月に検出された（図 1）。ヘルパンギーナ患者からはCV-A6 が 8 月から 12 月まで、CV-A16 が 9 月に検2. 検体からの EV 検出状況と疾患別月別の検出 EV- 35 -

出された（図 2）。

基と 593 塩基）を用いた系統樹解析を実施した。
その結果、2022 年度の CV-A6 の 6 株は全てクレード D（サブクレード D3）に分類された。また、2019 年度以降の当所分離株および 2021 年、2023
年の国内株、2014 年、2017 年、2018 年の中国株

3. 培養細胞および哺乳マウスによるウイルス分離
全ての検体において、培養細胞によるウイルス分離は陰性であった。一方、哺乳マウスによるウイル
ス分離では、CV-A6 または CV-A16 遺伝子が検出された手足口病またはヘルパンギーナ患者検体、それぞれ 6 検体と 3 検体から分離できた（表 1、2）。

と同じクラスターを形成した（図 3）。また、CVA16 については、2022 年度の 3 株は全て、クレード B（サブクレード B1a）に分類され、単一のクラスターを形成したが、2019 年度の当所分離株と最も近縁であった。2022 年度の CV-A16 分離株は2018 年度以前の当所分離株よりも 2017 年の中国

4. CV-A6 および CV-A16 の VP1 領域を用いた系統樹解析
CV-A6 および CV-A16 の哺乳マウス分離株（それぞれ 6 株と 3 株）について、ウイルス抗原決定領域である VP1 領域（解析が可能であった 656 塩

株、2013 年，2014 年のフランス株、2008 年の中国株とより近縁であった（図 4）。

表 1．手足口病患者由来検体におけるウイルス検出結果
咽頭ぬぐい液（n=14)
遺伝子検査

鼻汁（n=1）

分離培養

分離培養

（細胞）

（哺乳マウス）

遺伝子検査

分離培養

糞便（n=1)
分離培養（細胞） （哺乳マウス）

遺伝子検査

分離培養

分離培養

（細胞） （哺乳マウス）

CV-A6

7

0

3

0

0

0

0

0

0

CV-A16

3

0

2

1

0

0

0

0

0

0

5（36）

1（100）

0

0

0

0

0

合計（％） 10（71）表 2. ヘルパンギーナ患者由来検体におけるウイルス検出結果
咽頭ぬぐい液（n=6）
遺伝子検査

分離培養

分離培養

（細胞）

（哺乳マウス）
3

CV-A6

5

0

CV-A16

1

0

1

0

4（67）

合計（％） 6（100）

表 3. 無菌性髄膜炎患者由来検体におけるウイルス検出結果
髄液（n=9)
遺伝子検査
合計（％）

0

咽頭ぬぐい液・鼻汁（n=5）

分離培養
（細胞）
0

遺伝子検査
0

分離培養
（細胞）
0

糞便・直腸ぬぐい（n=5)

遺伝子検査
0

- 36 -

分離培養
（細胞）
0

5
4
CV-A6

CV-A16

3

患
者
数 2
（
人 1
）
0
4月

5月

6月

7月

8月

9月

10月 11月 12月

1月

2022年

2月

3月

2023年

図 1. 手足口病患者からの月別ウイルス検出状況

3
CV-A6

CV-A16

2

患
者
数
（
人
）

1

0
4月

5月

6月

7月

8月

9月 10月 11月 12月 1月

2022年

2月
2023年

図 2. ヘルパンギーナ患者からの月別ウイルス検出状況- 37 -

3月

橙：2011年度
緑：2013年度
桃：2015年度
紫：2017年度
黄：2019年度
青：2021年度
赤：2022年度

100

100

0.05
20211022
20210069
OL840674 China 201920210097
20220062
20210070
20211026
20211023
20211015
20211021
20210074
LC743960 Hyogo 2023
20211024
20210093
LC715248 Kanagawa 2021
20220063
20190059
CMW178710 China 201420190080
20220071
20220064
MN864919 China 2018
20220054
100
20220059
99.9
OL839948 China 2018
LC481403 China2018
MN233767 China2017
20190075
29102599.8
290128
KJ577275 China2010 D3
JQ946050 Taiwan 2009 D3
230158100 270128
270106
KX212389 Thailand 2014
27103329001999.9 290252
290217290071
98.6
KX212388 Thailand 2015
KJ541375 China 2013
270115270192270114270162100 270135
270147
MF596128 China 2015
27021898.2
250229
KM114057 Finland 2008 D3
AB649286 Sizuoka 2011 D3
FR797984 Spain 2008 D3100
JQ364888 China 2008D2
KP143077 China 2006 D2
HE572917 France 2010 D1
AB779614 Kyoto 1999 D1
98.7
JN203517 India 2008 C2
JQ364887 China 1996 C1
98.5
KP143074 China 2004 B2
99.4
KP143078 China 2007 B2
JQ364886 China 1992 B1
99
CV-A6_Gdula A
CA10_Kowalik

図 3. VP1 領域を用いた CV-A6 の系統樹解析（656 塩基）- 38 -

D3

D2
D1
C2
B2
B1
A

0.05
EU812514 China 2008 A

99.9

G-10 CV-A16

A

230720230710230721
AB772007 Yamagata 2011 B1c

100

B1c

LT577776 France 2013 B1c
KY792578 India B1c300142橙：2011年度
桃：2015年度
紫：2018年度
黄：2019年度
赤：2022年度

300062300071
MH004034 China 2017
MH004028 China B1aLC412339 China 2016
30101099.6
270101270067

KM675925 Thai 2014 B1a
AB634446 Yamagata 2010 B1a_100

2019104
20190111

99.5
99.6

B1a

2019013098.620220061
100

20220072
20220055

MH644619 China 2017
LT577780 France 2013 B1a
LT577789 France 2014

KM235752 China2008
270068
FJ868280 Australia 2005 B1a
LT577841 Hungary 2008 B1a
MH010205 China 2017 B310027008499.6

270079B3270092270097
AB634422 Yamagata 2008 B3
27008095.2

MH004046 China 2017 B1b

98.4

B1b

MH003956 China 2015 B1b100
97270083270072

AB771987 Yamagata 2011 B1b
LT577709 France 2005 B2

B2

AM292455 Malasia 1998 B2
Gdula CV-A6

図 4. VP1 領域を用いた CV-A16 の系統樹解析（593 塩基）2022 年度、大阪府では手足口病およびヘルパン

ったが 6-16）、2022 年度は 2021 年度に引き続いて夏季に CV-A6 の検出増加が認められた。大阪府では、CV-A6 が流行した 2015 年度、2017 年度および 2019 年度は、手足口病の定点医療機関当たりのギーナの患者から CV-A6 および CV-A16 が検出された。その検出状況から手足口病は CV-A6 と CVA16 の混合流行、ヘルパンギーナは CV-A6 が主な
流行ウイルスであったと考えられた。2011 年の手足口病の大流行を契機に、それまでヘルパンギー
ナの病原ウイルスとして知られていた CV-A6 は、患者数が 10（警報レベルは定点医療機関当たり患者数が 5）を超える大きな流行となった 18)。そのため、手足口病の好発年齢（1 歳から 2 歳程度）の者の多くが流行時に CV-A6 による手足口病に罹患したと考えられる。CV-A6 による手足口病の流行が隔年であったのは、流行年に好発年齢の者の手足口病とヘルパンギーナの両疾患の原因として認識されるようになり 17)、2022 年度はいずれの疾患においても主原因ウイルスとなった。2011 年度
以降、大阪府では CV-A6 の検出の増加は隔年であ多くが CV-A6 に対する抗体を獲得し、その集団免疫状態が翌年まで維持されることが原因の一つとして推測できる。しかし、2021 年度の手足口病
は、警報レベルには達さない程度の患者数であ

考 察- 39 -

り、特に流行が小さかったため、手足口病の好発
年齢の感受性者が多数残存する状態で 2022 年度を迎えた。そのため、2022 年度は、2011 年度以降では初めて、前年度に引き続き手足口病の患者でCV-A6 が主な原因となったと考えられる。CV-A6

変化したことが影響していると考えられる。ポスト COVID-19 下ではさらに大きな変化があるかもしれない。
EV 感染症は、流行するウイルスの型によって症状や疫学的動向も異なり、抗体保有状況によっの系統樹解析では、2019 年度の分離株の一部と2021 年度、2022 年度の分離株が同じクラスターに分類された。2019 年から同じ系統の CV-A6 が国内で循環し、2022 年度の流行に影響したことが示唆されるが、これは、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の感染防御策として国外からの人流ては大規模な流行も懸念される。今後も引き続き、国内の流行解析に加えて世界的な EV 感染症の動向を注視する必要があると考えられた。また、流行状況に合わせた検査情報を発信し、流行予測および流行拡大防止のための啓発に役立てる必要があると考えられた。

が抑制されていたため、国外からの EV の流入が阻止されたことが原因と考えられる。CV-A16 についても、2022 年度分離株は全て 2019 年度分離
株と同じクラスターに分類された。こちらも、
CV-A6 と同様に 2019 年度以降、国外から流入す
る EV の影響が少なかったことによると考えられた。さらに、2022 年度、無菌性髄膜炎患者からEV が検出されなかったことについても、患者数や検査数の減少のみならず、手足口病やヘルパン
ギーナと同様に COVID-19 の流行が無菌性髄膜炎の流行動態に影響を与えたと考えられる。
CV-A6 は培養細胞では比較的分離が困難なウイ

謝 辞
感染症発生動向調査事業に基づき、患者検体採取にご協力いただいた医療機関の先生方に深謝いたします。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。

ルスであるが、CV-A16 は通常、RD-A 細胞でよく増殖する。しかし、2022 年度は培養細胞によるウイルス分離が両ウイルス共にできなかった。遺伝子検査で陽性となった検体が CV-A6 が 12 検体、CV-A16 が 6 検体と多くないとはいえ、培養細胞のみならずこれらのウイルスの分離効率が高いと

1) Heinz Z, Hans-Peter G. Clinical virology manual third
edition-Enteroviruses.
AmericanSocietyforMicrobiology, Wasington, D. C 2000; 252-69.
2) Jones E, Pillay TD, Liu F, Luo L, Bazo-Alvarez JC,

言われている哺乳マウスによる分離培養においても両ウイルスともに半数程度しか分離ができなかった。本稿で、系統樹解析に用いた抗原決定領域である VP1 領域は、細胞への感染時にも重要な役割を果たすと考えられている。しかし、両ウイル
スにおけるこの領域の系統樹解析の結果からは、

Yuan C, Zhao S, Chen Q, Li Y, Liao Q, Yu H, Rogier
van Doorn H, Sabanathan S. Outcomes following
severe hand foot and mouth disease: A systematic
review and meta-analysis. Eur J Paediatr Neurol 2018
doi: 10.1016/j.ejpn.2018.04.007.
3) Abedi GR, Watson JT, Nix WA, Oberste MS, Gerber2019 年以降の分離株と大きな遺伝学的差異が認められていない。分離が困難になった原因にはウイルスの遺伝学的変化が考えられるため、VP1 領域
以外の領域の塩基配列についても解析を行う必要があると考えられた。
2022 年度の大阪府における EV 感染症は、流行

SI. Enterovirus and Parechovirus Surveillance - UnitedStates, 2014-2016. MMWR Morb Mortal Wkly Rep

サイクルやウイルス分離状況等において近年のEV 感染症の傾向とは異なっていた。これは、COVID-19 の流行による感染防止対策の徹底により、COVID-19 以外の感染症の流行状況が大きく

文 献2018; 67(18): 515-518.
4) 石古博昭，島田康司，輿那覇麻理，栄賢司. 遺伝
子系統解析によるエンテロウイルスの同定. 臨床とウイルス 1999; 27(4): 283-93.
5) Oberste MS, Maher K, Kilpatrick DR, Pallansch MA.
Molecular evolution of the human enteroviruses:
correlation of serotype with VP1 sequence andapplication to picornavirus classification. J Virol 1999;- 40 -

73(3): 1941-8.
6) 中田恵子，山崎謙治，左近直美, 加瀬哲男. 大阪
府におけるエンテロウイルスの検出状況と分子疫学的解析（2011 年度）. 大阪府立公衆衛生研究所
研究報告 平成 24 年.2012; 8-13.
7) 中田恵子，山崎謙治，左近直美, 加瀬哲男. 大阪
府におけるエンテロウイルスの検出状況と分子疫学的解析（2012 年度）. 大阪府立公衆衛生研究所
研究報告 平成 25 年.2013; 7-13.
8) 中田恵子，山崎謙治，左近直美，駒野淳，加瀬哲
男. 大阪府におけるエンテロウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2013 年度）. 大阪府立
公衆衛生研究所研究報告 平成 26 年.2014; 7-14.
9) 中田恵子，山崎謙治，左近直美，駒野淳，加瀬哲
男. 大阪府におけるエンテロウイルスおよびヒト
パレコウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2014 年度）. 大阪府立公衆衛生研究所研究報

年度）. 大阪健康安全基盤研究所研究年報（令和 4年度）. 2022; 20-26.
17) IDWR 2021 年第 43 号＜注目すべき感染症＞
手足口病・ヘルパンギーナ
https://www.niid.go.jp/niid/ja/hfmd-m/hfmdidwrc/10767-idwrc-2143h.html
18)大阪府感染症情報センターホームページ 感染症発生動向調査 週報 定点把握疾患 手足口病
http://www.iph.pref.osaka.jp/teiten/20210128110012.ht
ml
WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 15 日に確認した。

告 平成 27 年.2015; 7-14.
10) 中田恵子，左近直美, 弓指孝博，加瀬哲男. 大阪
府におけるエンテロウイルス感染症の流行状況と
分子疫学的解析（2015 年度）. 大阪府立公衆衛生研究所研究報告 平成 28 年. 2016; 9-16.
11) 中田恵子，弓指孝博，久米田裕子. 大阪府におけるエンテロウイルスおよびヒトパレコウイルス
感染症の流行状況と分子疫学的解析（2016 年度）.
大阪健康安全基盤研究所研究年報（平成 29 年度).
2017; 1-8.
12) 中田恵子，弓指孝博. 大阪府におけるエンテロ
ウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2017 年度）. 大阪健康安全基盤研究所研究年報（平成 30 年度）. 2018; 1-8.
13) 中田恵子，本村和嗣. 大阪府におけるエンテロ
ウイルスおよびパレコウイルス A 感染症の流行
状況と分子疫学的解析 （2018 年度）大阪健康安
全基盤研究所研究年報（令和元年度） 2019; 9-16.
14) 中田恵子，本村和嗣. 大阪府におけるエンテロ
ウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2019 年度）. 大阪健康安全基盤研究所研究年報（令和 2 年度）. 2020; 1-8.
15) 中田恵子，山中靖貴, 本村和嗣. 大阪府におけるエンテロウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2020 年度）. 大阪健康安全基盤研究所研
究年報（令和 3 年度）. 2021; 11-17.
16) 中田恵子，森治代. 大阪府におけるエンテロウ
イルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2021- 41 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Epidemic situation and molecular-epidemiological analysis of enterovirus infection in Osaka Prefecture(Fiscal 2022 Report)

Keiko NAKATA, Kazuho MAEDA and Haruyo MORI

From April 2022 to March 2023, two types of enteroviruses were detected in specimens obtained from patientswith hand-foot-and-mouth disease and those with herpangina. Coxsackievirus (CV)-A6 and CV-A16 were isolated
from seven and four patients with hand-foot-and-mouth disease, respectively; CV-A6 and CV-A16 were isolated
from five and one patient with herpangina, respectively. Phylogenetic trees constructed using partial sequences ofthe viral protein 1 region showed that CV-A6 and CV-A16 isolates from the 2022 epidemic formed a single cluster
and all isolates were classified as genotypes D and B, respectively. The 2022 epidemic strains of CV-A6 wereclosely related to the 2019 and 2021 Osaka strains and 2017, 2018, and 2019 Chinese strains. In addition, the 2022
epidemic strains of CV-A16 were closely related to the 2019 Osaka and 2017 Chinese strains. CV-A6 and CV-A16
isolates from the 2022 epidemic may have been imported before 2019 and then circulated domestically. Becausechanges in the dynamics of epidemic viruses can be elucidated via analyzing viral genomes, continuing pathogen
surveillance is necessary.

Key words：Hand-foot-and-mouth disease, Herpangina, Aseptic meningitis, Enterovirus

Osaka Institute of Public Health- 42 -

報

文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 43-51 (2023)

大阪府における蚊媒介ウイルス感染症に対するサーベイランス調査（2022 年度）

青山幾子，池森 亮，横田正春，弓指孝博

大阪府では 2003 年度より蚊媒介ウイルス感染症の発生を監視する目的で、媒介蚊と死亡カラスに対する
サーベイランス事業を実施している。
2022 年度は 6 月から 10 月にかけて 2 週に 1 度、府内 29 カ所で蚊の捕集を行った。捕集された雌の蚊（8種 4800 匹、424 プール）について蚊媒介ウイルス（ウエストナイルウイルス、デングウイルス、日本脳炎
ウイルス、チクングニアウイルス、ジカウイルス）の検出を試みたところ、ウイルス遺伝子は検出されなかった。また、死亡カラス 3 羽についてウエストナイルウイルスの検出を試みたが、ウイルス遺伝子は検出されなかった。

キーワード：蚊媒介感染症、媒介蚊、サーベイランス
セクション区切り
ような過去の事例からも、国内にウイルスが侵入し主な蚊媒介感染症には、ウイルス性疾患である日
た場合、わが国には国内流行が起きる素地があると
本脳炎、デング熱、チクングニア熱、ジカウイルス
感染症、ウエストナイル熱および黄熱や、原虫感染症であるマラリアなどがある。現在、日本に常在する蚊媒介感染症は日本脳炎のみであるが、それ以外の感染症に対しても海外から持ち込まれることの警戒が必要になってきている。わが国では古くから土着マラリアが存在し、太平洋戦争以前は年間約 2考えられる。
2019 年、デング熱やチクングニア熱が世界的に大流行し、日本での患者数もそれぞれ過去最高の461 人と 49 人が報告された 4,5)。その後も海外での流行は続いていたが、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の流行に伴う渡航制限のため、輸入万人のマラリア患者が報告されていた 1)。1946 年には海外の戦地で感染した人達の帰国に伴い 3 万人に近い患者が見られたが、そののち収束し 1960 年頃には土着マラリアは消滅したと考えられている。
また、デング熱も 1942～1945 年にかけて西日本を中心に 20 万人規模の患者が発生し、1944 年には症例がほぼなくなり、国内における蚊媒介感染症の患者数は激減した。しかし、渡航制限の緩和後、蚊
媒介感染症の輸入症例が再び報告されるようになり、2023 年 5 月の世界保健機関（WHO）による
COVID-19 に対する「国際的に懸念される公衆衛生上の緊急事態（PHEIC）」の解除により、今後再び大阪、神戸においても患者数 10 万人規模の発生が見られた 2)。当時、11 月頃には流行が収束し、翌夏にはまた患者が発生するという、蚊の活動期に合った流行パターンが繰り返されていたが、終戦後デン
グ熱の流行は減少し、やがて国内発生は見られなくなった。しかし、1999 年の感染症法施行後、デング増加することが予想されている 4,6)。
大阪府では蚊媒介ウイルス感染症の浸淫状況を監視するため、2003 年度に蚊のサーベイランス調査を開始した 7-9)。2004 年にはウエストナイル熱対応指針が策定され、蚊のサーベイランス調査や、侵入後の対応を速やかに実施するための体制が整え

熱の輸入症例は毎年増加傾向を示し、2014 年には東京を中心とした国内流行が発生している 3)。このられた 10)。サーベイランス調査開始当初はウエストナイル熱、デング熱および日本脳炎を対象として

大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課- 43 -

いたが、その後海外でのチクングニア熱、ジカウイ
ルス感染症の流行に鑑み、これらの病原ウイルスも検出可能にするよう検査法を改定した 11)。また、カラスはウエストナイルウイルス（Orthoflavivirus
nilense : WNV）への感受性が高く、WNV 感染によ第 5 週から 10 月第 2 週までの期間、隔週に 1 回、計 8 回捕集調査を実施した。中核市の捕集地点における実施回数は各自治体での実施要領に従い、東大阪市と高槻市は 9 月 4 週までの計 7 回、東大阪市（中）地点は月に 1 回、豊中市（c、d、e）地点はる致死率が高いため、モニタリング調査に利用されている。大阪府においても厚生労働省の通知に従い
12)、死因が不明であるカラスの死骸が同地点で 2 羽
以上確認された場合、そのカラスについて WNV 検査を実施している。ここでは 2022 年度の大阪府内
における媒介蚊と死亡カラスに対するサーベイラ

毎回１地点ずつとし、順に設置地点を変更して実施した。

ンス調査結果について報告する。

1. 蚊の捕集地点および調査実施期間
大阪府管内、東大阪市内、高槻市内、豊中市内、

イアイス（1～2kg）を併用した。トラップは調査実
施日の夕刻 16～17 時から翌朝 9～10 時までの約 17時間設置した。調査日（回収日）の気象状況は、気象庁大阪地点における天候、最高気温、最低気温を参照した 13)。トラップを設置する高さは地上 1.5～2ｍに設定した。また枚方市の 4 地点と東大阪市（中）枚方市内、八尾市内、寝屋川市内および吹田市内に
計 29 カ所の捕集地点を設定し（図 1）、2022 年 6 月

地点では調査日に 8 分間ヒト囮法にて蚊を捕集した。捕集終了時、いずれの方法でも捕集網から蚊が

2. 蚊の捕集方法
蚊の捕集には CDC ミニライトトラップ（John.
W.Hock Company）を使用し、蚊の誘引のためドラ

調 査 方 法

北摂

4
1
8
5
7

6 9

14

3

13

2
10

担当保健所
池田

2

吹田市

吹田市

3

茨木市

茨木

4

高槻市

高槻市

5

豊中市(a)

6

豊中市(b)

7

豊中市(c)8

豊中市(d)

9

豊中市(e)

豊中市

守口市

守口

寝屋川市

寝屋川市

12

大東市

四條畷

13

枚方市(西)1914

枚方市(北)

15

枚方市(東)2116

枚方市(南)

17

東大阪市(西)18

東大阪市(中)19

東大阪市(東)20

八尾市(西)21

八尾市(東)

22

藤井寺市

藤井寺

23

富田林市

富田林

24

和泉市

25

泉大津市

26

岸和田市

27

貝塚市

28

泉佐野市

29

阪南市

12

北河内

22

25

中南河内

23

28

池田市

11

17
18

26

設置市

1

10

16

11

20

15

番号

24

27

29

泉州

図１

蚊の捕集地点- 44 -

枚方市

東大阪市

八尾市

和泉
岸和田
泉佐野

逃げないように注意し、蚊を捕集網ごと凍結した後に、蚊を取り出して実体顕微鏡下で形態学的に雌雄の鑑別および種の同定を行った 14,15)。なお Culex
pipiens pallens（アカイエカ）と Culex pipiens molestus（チカイエカ）については形態学的な同定が困難で各 0.2µL、
リボヌクレアーゼ阻害剤（40U/µL、
TaKaRa）
0.1µL を加え、蒸留水を加えて最終液量 25µL に調製した。これをサーマルサイクラー（DICE Touch、
TaKaRa）を用いて、53°C10 分間の逆転写反応後、92°C 1 分、53°C 1 分、72°C 1 分の PCR 反応を 40あるため、それらをまとめて Culex pipiens complex（アカイエカ群）とした。蚊は調査日、調査地点、
蚊の種類ごとにプールし、ウイルスを媒介する雌の蚊のみウイルス検査に供した。1 地点 1 種類あたりの検体数が 50 匹を超えた場合は、50 匹ごとに複数のプールに分割した。その後、各検体は遺伝子検査

回繰り返した。
反応産物 10µL を 1.5%アガロース、
1×TAE 液で電気泳動し、エチジウムブロマイド染
色により増幅バンドを確認した。
RT-PCR のプライマーには、フラビウイルス共通
プライマー（FU1/cFD2）16)を用いた。WNV 並びに
DENV は FU1/cFD2 で検出可能であるが、さらに検実施まで－30℃で冷凍保存した。
3. 蚊からのウイルス検出
蚊からのウイルス検出は、蚊媒介ウイルスのうち、フラビウイルス科オルソフラビウイルス属の
WNV 、 日 本 脳 炎 ウ イ ル ス （ Orthoflavivirus

出感度の良い WNV 特異的検出プライマー（WNNY
514/904）17)、及び DENV 特異的検出プライマー（Dus/Duc）18)も併用した。
CHIKV の遺伝子検査はリアルタイム RT-PCR 法で実施した 19)。反応には QuantiTect Probe RT-PCR
Kit（QIAGEN）を用い、RNA 抽 出 液 5µL にキッjaponicum :JEV）、デングウイルス（Orthoflavivirus
denguei :DENV）およびジカウイルス（Orthoflavivirus
zikaense :ZIKV）、並びにトガウイルス科アルファウ
イルス属のチクングニアウイルス（Chikungunya
virus:CHIKV）を対象として実施した。WNV は多種類の蚊が媒介種となるため、捕集された全ての種類

ト 付 属 の 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master
Mix12.5µL、QuantiTect RT Mix 0.25µL と、100µM
Forward プライマー（Taq-Chik607F）及び Reverse プ
ライマー（Taq-Chik638P）各 0.25µL、10µM probe（Taq-Chik672R）0.5µL、リボヌクレアーゼ阻害剤（40U/µL、TaKaRa）0.05µL を加え、蒸留水にて最の雌蚊について遺伝子検査を実施し、DENV、CHIKV は媒介種となるヒトスジシマカについて実施した。
蚊の破砕は、2mL のマイクロチューブに検体と滅菌したステンレス製クラッシャーを入れ、0.2%
ウシ血清アルブミン（BSA）加ハンクス液を 250µL

終液量 25µL に調製した。
これをリアルタイム PCR
装置（StepOnePlus、Thermo Fisher Scientific）にて、48°C 30 分間の逆転写反応、92°C 10 分反応の後、95°C 15 秒、57°C 1 分の反応を 45 回繰り返し、Threshold 0.5、Ct 値 38 未満で増幅が見られた場合に陽性とした。

加えた後、ビーズ式破砕装置（シェイクマスターオ
ート、バイオメディカルサイエンス）で約 40 秒間
振とうして行った。破砕後、マイクロチューブをス
ピンダウンしてからクラッシャーを除去し、0.2%
BSA 加ハンクス液を 1 プール 30 匹未満の場合は500µL、30 匹～50 匹の場合は 750µL 追加して攪拌

4. カラスからのウイルス検出
死因が不明なカラスの死骸が同地点で 2 羽以上確認され、死骸の回収時に腐乱やウジの発生がなく
新鮮な状態であった場合、WNV 検査を実施した。
死亡カラスは、解剖して採脳した後、0.2%BSA 加

した。それを 4℃、13,000×g で 15 分間遠心し、その上清を 0.22μm または 0.45μm Millex フィルター（ミリポア）で濾過したものを蚊乳剤とした。このうち 140µL を QIAamp Viral RNA Mini Kit（QIAGEN）
を使用して RNA 60µL を抽出した。
WNV、JEV、DENV、ZIKV の遺伝子検査は One

ハンクス液を用いてカラスごとに 10%脳乳剤を作製し、蚊と同様に RNA 抽出並びに RT-PCR 法を実施し、WNV 遺伝子の検出を試みた。

step RT-PCR 法で実施した。
RNA 抽 出 液 2.5µL に®
EmeraldAmp PCR Master Mix（TaKaRa）12.5µL、逆転写酵素（Super Script IV、Thermo Fisher）0.15µL、25μM Forward プライマー及び Reverse プライマー

1. 蚊の捕集結果について
本年度捕集された雌の蚊は 8 種 4,800 匹であった。もっとも多く捕集された蚊は Aedes（Stegomyia
albopictus（ヒトスジシマカ）3,377 匹（70.35%）、次結 果- 45 -

にアカイエカ群 1,321（27.52%）で、この 2 種で捕集蚊全体の 97.9%を占めた（図 2）。次いで Culex
tritaeniorhynchus （ コ ガ タ ア カ イ エ カ ） 75 匹 、Anopheles sinensis（シナハマダラカ）
9 匹、
Tripteroides
bambusa （ キ ン パ ラ ナ ガ ハ シ カ ） 8 匹 、 Culex

シナハマダラカ
キンパラナガハシカ
カラツイエカ
オオクロヤブカ
ヤマトクシヒゲカ

コガタアカイエカ
1.56%

bitaeniorhynchus（カラツイエカ）4 匹、Armigeres
subalbatus（オオクロヤブカ）3 匹、Culex sasai（ヤマトクシヒゲカ）3 匹が捕集された。
調査期間を通じた捕集数の推移をみると（図 3）、
ヒトスジシマカは常に捕集され、捕集数は 8 月下旬にピークを示した。アカイエカ群も常に捕集され７

0.19％
0.17％
0.08％
0.06％
0.06％

アカイエカ群27.52%

ヒトスジシマカ
70.35%

月にピークを示した。コガタアカイエカは 6 月から9 月に捕集され、捕集数は少ないが、7 月に小さなピークを示した。
また、捕集数や捕集される種類には地点によって大きな差がみられた（図 4、5）。すなわち、29 調査地点のうち、ヒトスジシマカは全地点、アカイエカ

図2 捕集された蚊の比率 (29地点)
ではヒトスジシマカが多く捕集され、8 月に大きなピークが見られた。またこのうち豊中市 a と和泉市、泉大津市などでは調査終了期の 10 月にもヒト
スジシマカが多数捕集され、これらの地点での増減

群は 26 地点で捕集された。コガタアカイエカは全体としての捕集数は少ないものの 15 地点（池田市、大東市、豊中市 a、b、c、d、e、東大阪市東、八尾
市西・東、富田林市、和泉市、岸和田市、貝塚市、阪南市）で捕集された。しかし、シナハマダラカは4 地点（富田林市、和泉市、岸和田市、阪南市）、キ

が全体のヒトスジシマカの捕集数にも影響したと考えられた。また、多くの地点でヒトスジシマカが優占したが、阪南市ではアカイエカ群が最も多く捕集され、この傾向は昨年度と同様であった。
2. 蚊のウイルス遺伝子検査結果

800

40

700

35

600

30

500

25

400

20

300

15

200

10

100

5

0

0

20
15
10
5
0

10

7/27

コガタアカイエカ

カラツイエカ6
7/13

アカイエカ群
ヒトスジシマカ

キンパラナガハシカ

12

10

6
6/29

最高気温
最低気温

シナハマダラカ

20
11

(℃）

各地点で捕集された蚊を種類別に分け 424 プールの乳剤を作製して RT-PCR 法による遺伝子検査を実施したところ、すべての検体において WNV、
JEV、DENV、ZIKV 遺伝子は検出されなかった。ま捕集数(匹）

ンパラナガハシカは 1 地点（和泉市）、カラツイエカは 4 地点（豊中市 b、東大阪市東、八尾市東、和泉市）、オオクロヤブカは 2 地点（枚方市東、和泉市）と捕集地点が限られていた。吹田市、豊中市（a）、
寝屋川市、東大阪市（西・東）、和泉市、泉大津市

8/10

8/24

9/8

図3 蚊の捕集数の推移- 46 -

9/21

0
10/5

オオクロヤブカ
ヤマトクシヒゲカ

たヒトスジシマカの 206 プールについても、
CHIKV
遺伝子は検出されなかった。
3. 死亡カラスのウイルス遺伝子検査結果
今年度回収されたカラス 3 羽から、WNV の遺COVID-19 の流行により、2020 年度、2021 年度
は保健所業務が逼迫状態であった。そのため 20202019 年度（のべ 209 回、9 種 4,648 匹）とほぼ同等の捕集数が得られ、我々を取りまく蚊の生息状況に大きな変化はないと考えられた。捕集した蚊の種構
成割合（図 6）についても主要な蚊に大きな変化はみられておらず、府内で蚊媒介感染症が発生した場
合は、捕集数の多いヒトスジマカ、アカイエカ群、

年度の蚊サーベイランスは中止、2021 年度は調査
回数と捕集地点数を減らしての調査となり、捕集数

ついでコガタアカイエカに注意が必要と考えられる。

伝子は検出されなかった。
考 察

池田市

茨木市

吹田市

高槻市

守口市

100

100

100

100

100

80

80

80

80

80

60

60

60

60

60

40

40

40

40

40

20

20

20

20

20

0

0

0

0

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

豊中市(b)

豊中市(a)

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

0

100

100

100

100

80

80

80

80

60

60

60

60

60

40

40

40

40

40

20

20

20

20

20

0

0

0

0

9/7

9/21 10/5

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

0
6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

枚方市(西)

大東市

9/7

9/21 10/5

（ ）

100

100

100

100

80

80

80

80

60

60

60

60

60

40

40

40

40

40

20

20

20

20

20

0

0

0

0

100

9/7

9/21 10/5

枚方市(南)

100

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

東大阪市(中)6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

八尾市(西)

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

0

100

100

80

80

120

60

60

60

60

100

40

40

40

40

20

20

20

20

100

0
9/7

9/21 10/5

藤井寺市

100

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

富田林市

0

100

80

80

80

60

60

60

40

40

40

20

20

20

0

100

0
6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5岸和田市

06/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

貝塚市

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

9/7

9/21 10/5

200

60

180
160

20

140
6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

阪南市

120
100

100

100

80

80

80

80

60

60

60

60

60
40
20

40

40

20

20

20

20

9/7

9/21 10/5

0

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

0

100
80
60

40

40

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

東大阪市(西)80

09/21 10/5

20
0

泉大津市

80

0

9/7

40
6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

40

9/21 10/5

9/21 10/5

60

100

9/7

9/7

80

120

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/21 10/5

140

140

和泉市

泉佐野市

100

0

9/7

東大阪市(東)80

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

八尾市(東)

80

09/21 10/5

枚方市(東)

80

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

枚方市(北)

100

匹

9/7

豊中市(e)

80

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

豊中市(d)

豊中市(c)

100

寝屋川市

捕
集
数

は非常に少ない結果であった（のべ 96 回、
6 種 1,559匹）。2022 年度は COVID-19 への対応が落ち着いてきたため、以前と同様の回数を実施することが可能となり、29 地点のべ 209 回での実施となった。その結果、2018 年度（のべ 209 回、7 種 4,939 匹）や

40
20
0

0
6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

9/7

9/21 10/5

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

図4 各捕集地点における捕集状況- 47 -

9/7

9/21 10/5

0

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24 9/7 9/21 10/5

6/29 7/13 7/27 8/10 8/24

アカイエカ群
ヒトスジシマカ
オオクロヤブカキンパラナガハシカ

9/7

9/21 10/5

コガタアカイエカ
シナハマダラカ
カラツイエカ
ヤマトクシヒゲカ

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
2012

2013

2014

ヒトスジシマカ

2015

2016

アカイエカ群

2017

2018

2019

コガタアカイエカ

2021

2022

その他

図6 捕集された蚊の種構成割合（10年間）
捕集数の推移から、アカイエカ群は、秋季の 9 月、10 月に比べて初夏の 6 月に捕集数が多い傾向にあ

これは、過去の捕集結果と同様の傾向を示していた。
この理由の１つとして、ヒトスジシマカの幼虫は、ると考えられた。それに対し、ヒトスジシマカはア
カイエカ群よりも遅れて、初夏の 6 月よりも盛夏の
7、8 月に捕集数が多い傾向にあると考えられた。

たまり水のような小さな水域でも落ち葉等有機物の栄養があれば発生源となりうるため、6 月の梅雨以降にこのような水域が増え、蚊の発生数が増加し- 48 -

たと考えられる。また今回 10 月にヒトスジシマカの捕集数が顕著に増加した地点が多数見られ、捕集数の推移も 9 月初めと同程度まで増加した状態で調査期間が終了となった。過去の調査では、10 月にヒトスジシマカの捕集数が微増する地点は多少

防疫対策にとって、非常に有効な要素となっている。
今年に入り、海外からの旅行者の数が増加し始めたため 21)、蚊媒介感染症が国内に侵入する危険性は高まってきたと考えられる。デング熱やチク
ングニア熱、ジカウイルス感染症を媒介するヒトあったが、全体として 10 月の捕集数は 9 月に比較して顕著に減少しており、今回のような推移が見られたのは初めてであった。2022 年は世界各地で記録的な高温や大雨などの極端な気象現象が見られた年で、日本でも 6 月下旬から 7 月初めに記録的な高温がみられ、その後の 9 月から 12 月にかけ

スジシマカは、大阪府内の都市環境でも多くの地点で多数捕集された。この蚊はヒトとの接触・吸血頻度が高い種類であるため、大阪府内にこれらの感染症が浸淫した場合に病原体を媒介する可能性が高く、府内のどの地域でもアウトブレイクが起こる可能性がある。今後アウトブレイクが発生ても海面水温が例年より高かったことなど 10 月以降まで夏の高温の影響が長引いていた 20)。そのため、10 月に捕集数が増加した理由については、夏から秋の台風などの降雨により発生源が確保されたことと、
9 月末から 10 月にかけて気温が上昇し、再び蚊の発育条件が揃ったことなどが考えられた。

した場合、迅速に対応するためには、本調査で実施しているような地方衛生研究所（大阪健康安全基盤研究所）、保健所および行政間の連携が必要不可欠であることから、本サーベイランス事業は危機管理対策の一環としても重要と考えられる。

地球温暖化に伴って全球的な気温の上昇傾向が続いているが、今後秋になってもこのような環境条件が続くと、蚊媒介感染症に対しても長期間警戒する必要が生じる可能性があると考えられる。
また、個々の調査地点のうち、アカイエカ群が捕集されなかった枚方市（北・南）、東大阪市（中）謝 辞
本調査は、大阪健康安全基盤研究所、大阪府健康医療部環境衛生課および各保健所の協力のもとに
大阪府健康医療部保健医療室医療対策課の事業として実施されたものであり、調査に関係した多くのではいずれも人囮法にて蚊の捕集を実施した。人囮法を用いた地点の捕集蚊は 98～100％がヒトスジシマカであった。デング熱、チクングニア熱、ジカ
ウイルス感染症は、国内ではヒトスジシマカが媒介蚊となるものと考えられる。一方、ウエストナイル
熱はヒトスジシマカ以外にも、アカイエカ群など

方々に深謝致します。また、データの提供にご協力頂いた東大阪市保健所、高槻市保健所、豊中市保健所、枚方市保健所、八尾市保健所、寝屋川市保健所、
吹田市保健所の関係者の方々に深くお礼申し上げます。

Culex 属の蚊が主な媒介種となる 14）。そのため、ウ
エストナイル熱の侵入を想定した対策を考える場
合、人囮法のみではなく、ライトトラップなどを併用した蚊の捕集調査の実施が必要であると考えられる。
大阪府では、2025 年に大阪・関西万博の開催が利 益 相 反予定されており、海外からの渡航者の増加に伴う蚊
媒介感染症のアウトブレイクが危惧される。本サー
ベイランスにおいて平常時における府内の蚊の生息状況を把握しておくことにより、感染症発生時における蚊の防除対策の際に重要な資料を提供することが可能となる。また、本サーベイランスにおい開示すべき利益相反はない。
文 献1) 国立感染症研究所. 日本におけるマラリア
IASR 1997; 18（11）http://idsc.nih.go.jp/iasr/18/213/tpc213-j.html
2) 高崎智彦. デング熱研究の歴史とデング熱流行2014 ,J. Vet. Epidemiol. 2015; 19（1）:1-3.
3) 東京都福祉保健局. 東京都蚊媒介感染症対策会て定期的に蚊の同定検査が実施されるため、我々のような研究員だけでなく、環境衛生監視員の蚊の同定技術の維持にも寄与しており、各保健所に蚊の同定ができる担当者を配置していることは大阪府の- 49 -

議報告書 2014
https://www.mhlw.go.jp/file/05-Shingikai10601000-DaijinkanboukouseikagakukaKouseikagakuka/0000071097.pdf

4) 国立感染症研究所. 感染症発生動向調査週報.
https://www.niid.go.jp/niid/ja/idwr.html
5) Geographical distribution of chikungunya virus
disease cases reported worldwide, 2019, European
Centre for Disease Prevention and Control.

15) ウエストナイル熱媒介蚊対策研究会. ウエスト
ナイル熱媒介蚊対策ガイドライン. 日本環境衛生センター. 2003.
16) Kuno G, Chang GJ, Tsuchiya KR, Karabatsos N,
Cropp CB. Phylogeny of the Genus Flavivirus. J

https://www.ecdc.europa.eu/en/publicationsdata/geographical-distribution-chikungunya-virusdisease-cases-reported-worldwide-2019
6) 外務省. 新型コロナウイルスにかかる感染症危
険情報の解除
https://www.mofa.go.jp/mofaj/press/release/press6_

Virol 1998; 72(1): 73-83
17) 国立感染症研究所. ウエストナイルウイルス
病原体検査マニュアル Ver.4.
https://www.niid.go.jp/niid/images/vir1/div2/WNV
Lbotest.pdf
18) 国立感染症研究所. デングウイルス感染症診断

001492.html
7) 弓指孝博，瀧幾子，齋藤浩一，伊藤房子，石田誠良，倉持隆，大竹徹，奥野良信. 大阪府におけるウエストナイル熱に関する蚊のサーベイ
ランス調査（平成 16 年度報告）. 大阪府立公衆衛生研究所所報 2004; 42: 57-63.

マニュアル.
https://www.niid.go.jp/niid/images/labmanual/Dengue2014.pdf
19) 国立感染症研究所. チクングニアウイルス検査
マニュアル Ver1.1.
https://www.niid.go.jp/niid/images/lab-8) 瀧幾子，弓指孝博，吉田永祥，田中智之，大竹徹，奥野良信. 大阪府の住宅地域における蚊の分布調査．大阪府立公衆衛生研究所所報 2004;
42: 65-70.
9) 青山幾子，山元誠司，山口敬冶，石川温子，弓指孝博. 大阪府における蚊媒介性ウイルス感染

manual/CHIKV.v1.1.pdf20) 気象庁. 気候変動監視レポート 2022
https://www.data.jma.go.jp/cpdinfo/monitor/2022/p
df/ccmr2022_all.pdf
21) 総務省統計局. 出入国管理統計
https://www.e-stat.go.jp/stat-症に対するサーベイランス調査（2016 年度）.
大阪健康安全基盤研究所研究年報 2017; 1: 2935.
10) 大阪府健康福祉部．ウエストナイル熱対応指針
2004.
11) 青山幾子，弓指孝博，中田恵子，佐藤功，佐藤search?page=1&query=%E5%87%BA%E5%85%
A5%E5%9B%BD%E7%AE%A1%E7%90%86

良江，倉持隆，上澤行成，加瀬哲男，高橋和郎．
大阪府におけるウエストナイルウイルスに対するサーベイランス調査（2008 年度）. 大阪府立公衆衛生研究所所報 2009; 47: 1-7.
12) 厚生労働省健康局結核感染症課長通知（2003 年
12 月 13 日）. ウエストナイル熱の流行予測のWEB サイトの内容は 2023 年 6 月 18 日に確認した。

ための死亡カラス情報の収集等について.
https://www.mhlw.go.jp/web/t_doc?dataId=00tb85
83&dataType=1&pageNo=113) 気象庁.過去のデータ検索
https://www.data.jma.go.jp/obd/stats/etrn/index.php
14) 弓指孝博，青山幾子. ウエストナイル熱（脳炎）.
大阪府立公衆衛生研究所感染症プロジェクト
委員会編 感染症検査マニュアル第Ⅲ集 2004;
1-13.

- 50 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Mosquito-borne virus surveillance in Osaka Prefecture (Fiscal 2022 Report)

Ikuko AOYAMA, Ryo IKEMORI, Masaharu YOKOTA and Takahiro YUMISASHI

In Osaka Prefecture, mosquito-borne arbovirus surveillance has been conducted since 2003 to monitor the invasion ofimported infectious diseases caused by arboviruses, such as West Nile virus (WNV), dengue virus (DENV), anddomestic Japanese encephalitis virus (JEV). Monitoring of chikungunya virus (CHIKV) and zika virus (ZIKV) has
been included in mosquito-based surveillance since 2008 and 2015, respectively.
In 2022, we performed RT-PCR examinations for arboviruses in 424 mosquito pools from 4,800 female mosquitoes(eight species) collected at 29 points in Osaka Prefecture from June to October, and for WNV on three dead wild
crows. No positive cases were detected in the mosquito’s pools for WNV, DENV, JEV, CHIKV, and ZIKV, and in thecrows for WNV.

Key words：mosquito-borne infection, vector mosquitoes, surveillance.

Osaka Institute of Public Health- 51 -

報 文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 52-61 (2023)

大阪府の食中毒疑い事例で検出されたノロウイルスの遺伝子解析（2022 年度）

白井達哉，牛飼裕美，山崎笑子，左近直美

2022 年度、当課で検査したノロウイルス陽性の食中毒疑い事例 23 事例について、ORF1 の RdRp コード
領域と ORF2 の VP1 コード領域の部分遺伝子解析（Dual typing）を行い、遺伝子型を決定した。2022 年度には 5 種類が検出され、GII.2[P16]（9 事例、39.1%）が最も多く、次いで GII.4[P16]（6 事例、26.1%）であった。Dual typing により全事例を解析している 2019 年度以降で、GII.4[P16]の検出事例数は本年度が最も多かった。そこで、検出数の多い GII.2[P16]及び GII.4[P16]における RdRp GII.P16 に注目し、RdRp コード領域（1530 塩基）の全長を解析した。2016 年以降の GII.P16 は特徴的な 5 アミノ酸置換があるとされるが、当所検出株ではいずれもこの置換が保存されており、系統樹解析においても 2016 年以降の流行株と同じクラスターに分類された。一方で RdRp は複数のアミノ酸置換が存在し、その特徴は GII.2[P16]と GII.4[P16]で異なっていた。今後、これらの変異と流行との関連について調査するとともに、RdRp 領域における変異率について検討が必要である。Dual typing による遺伝子型調査の必要性が改めて確認でき、点変異によるウイルスの変化を見逃さないためのゲノム全体の遺伝子解析の重要性が示唆された。

キーワード：ノロウイルス、食中毒、RdRp、GII.P16

ノロウイルスは冬季を中心に流行し嘔吐や下痢などを引き起こす、すべての年齢層における感染性胃腸炎の起因ウイルスである 1)。例年世界中の 5
歳以下の小児の約 7 万人が死亡し、社会経済的損
失は 6 兆円に達すると推計される 2)。日本国内で食中毒の原因として患者数が最も多い病原体の一つであり 3)、
流行状況の把握は食品衛生管理において重要である。
ノロウイルスはカリシウイルス科に分類され、エンベロープはなく、約 7.5kb のプラス一本鎖
RNA ゲノムを持つ。
ゲノムは 3 つの Open-ReadingFrame（ORF）で構成されており、ORF1 は RNAdependent-RNA-polymerase（RdRp）などの非構造タ
ンパク、ORF2 及び ORF3 はそれぞれ構造タンパク
Viral protein（VP）1 及び VP2 をコードする。ノロウイルスは VP1 のアミノ酸配列により大きく 10種（GI-GX）の遺伝子群（Genogroup）に分類され（VP1 typing）、さらに 48 以上の Genotype に分類
4)
さ れ る 。 人 に 感 染 す る 主 な Genogroup は
大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

Genogroup I（GI）と Genogroup II（GII）である。
また、ORF1 の 3’端に位置する RdRp のアミノ酸配列に基づき、P-group に分けられ（RdRp typing）、
60 以上の P-type に分類される。ORF1 と ORF2 の間では遺伝子組換えが起こることが知られており、これが大きな流行につながる要因と考えられているため 5, 6)、 Genotype と P-type 両方の解析（Dualtyping）による遺伝子型別が推奨されており 4)、例
、P-type
えば Genotype だけの解析であれば「GII.2」
だけの解析であれば「GII.P16」と表現するが、両方を解析した場合は GII.2[P16]と表現する。
GII.2[P16]は 2009 年に日本で出現し 7)、2016 年に日本を含むアジア諸国で大規模な流行を起こして以降 8, 9)、GII.4 と共に検出数で上位を占める主要な遺伝子型となった 10)。この流行株の VP1 領域については、2016 年前後に流行した GII.2 と比較して特徴的なアミノ酸置換がなく、免疫逃避や組織血液型抗原に対する親和性の変化（宿主感受性）は流行に関与していないことが示唆されているが 11, 12)、

- 52 -

RdRp領域には、2016年以降に検出されたGII.2[P16]に特徴的な5つのアミノ酸置換（D173E、S293T、
V332I、K357Q、T360A）が存在しており、流行との関連が示唆されている11, 13)。当所でも2021年度の食中毒疑い及び有症苦情事例について、GII.2[P16]のRdRpコード領域の塩基配列解析を行い、5つのアミノ酸置換を確認した14)。一方GII.4は、日本では2012
年から2022年までGII.P31が主流であったが14, 15, 16)、
世界では2017年以降、GII.P16が北米やオセアニアなどで主要な流行株となっている17, 18)。
本研究では 2022 年度の食中毒疑い事例において検出されたノロウイルスの Dual typing による遺伝子型別結果、及び GII.2[P16]に加え GII.4[P16]の
RdRp に注目し、その塩基配列解析結果を報告する。

Tool Version 2（http://www.rivm.nl./mpf/typingtool/norovirus/）もしくは HUMAN CALICIVIRUS TYPINGTOOL（https://calicivirustypingtool.cdc.gov/）により遺伝子型を決定した。

実 験 方 法3. ノロウイルス GII.2[P16]及び GII.4[P16]の RdRp
コード領域の解析
2022 年度にノロウイルス GII.2[P16]もしくはGII.4[P16]が検出された検体の一部について、RdRp
コ ー ド 領 域 は そ れ ぞ れ GII.2_P16_3530F/
GII.2_P16_5132R のプライマーセット（GII.2_P16_3530F：ATCTGTGCCACACAGGGAAG、GII.2_P16_
5132R：GGCTGCACCATCAGTAGATG）、GII.2_P16_3530F/ GII.4_P31_5132R のプライマーセット（GII.4_P31_5132R：GGCTGCAGA19ATCAGATG）を用いて RT-PCR を行い、前述と同様にダイレクトシーク
エンス法により塩基配列を決定した（図 1）。RdRp
コード領域は全長 1530 塩基を解析対象とした（終止コドンを除く）。解析には事例ごとに代表株 1 株
以上を用いて配列を決定し、検出年度の下 2 桁を株
名 の 前 に 付 け た 。 MEGA X を 用 い 、 最 尤 法（Maximum-Likelihood 法）
により系統樹解析を実施した 20)。比較対象とした配列は NCBI のデータベースに登録されている塩基配列に RdRp と VP1 のコード領域がすべて含まれているものを抽出し、各塩基配列が完全に一致している場合はそのうちの一つを代表とする計 65 株を用いた。内訳は、日本で検出された GII.2[P16] 21 株（ACN: LC122834、
LC122835 、 LC122836 、 LC122838 、 LC122839 、LC122840、LC209441、LC209442 、LC209443、
LC209446 、 LC209450 、 LC209451 、 LC209454 、LC209458、LC209467、LC209476、LC213890 、LC646333、LC726080、LC726086、LC726087）、海外で検出された GII.2[P16] 13 株（Accession Number

1. 検査材料
2022 年度に当課で検査した食中毒疑い事例（他府県依頼分を含む）41 事例のうちノロウイルス遺伝子が検出された 23 事例を対象とした。検体は全てふん便で、PBS により 10%ふん便懸濁液を作製後、その遠心上清を試料とし、magLEAD 12gC（プレシジョン・サイエンス・システム社、試薬：
MagDEA Dx SV）により試料 200μL から核酸抽出液 50μL を得た。遺伝子の検出は、国立感染症研究
所の病原体検出マニュアル 19)に準拠したリアルタ
イム PCR により実施した。また、2019～2021 年度
にかけて発生した事例について当所で検査し、ノロウイルスが検出された計 34 事例の遺伝子型を比較対象として使用した 14）。
2. ノロウイルスの遺伝子解析
各ノロウイルス陽性事例から数検体を選択し、遺伝子解析を行った。RdRp コード領域及び VP1 コー
ド領域に対し、
ノロウイルス GI は Mon432/G1-SKR、
GII は Mon431/G2-SKR のプライマーを用いて Dualtyping 領域を増幅した 19)（図 1）。目的とする PCR
増幅産物は電気泳動で確認した後、ゲルを切り出して遠心しその上清を精製水で希釈して用いた。
BigDye Terminator v1.1 Cycle Sequencing Kit もしくは BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit（Applied Biosystems）を用いたダイレクトシークエ
ンス法により塩基配列を決定し、Norovirus Typing

図 1 ノロウイルスゲノム構造及び解析領域と増幅に使用したプライマー- 53 -

（ACN ）: KY421121 、KY865306 、MG745986 、MG745987、MG745988、MG745990、MK752949、MK753035、MK762625、MN493873、MW305649、
OK012404 、 OL826943 ）、 日 本 で 検 出 さ れ た
GII.4[P16] 1 株（ACN: LC175468）、海外で検出された GII.4[P16] 28 株（ACN: KX907727、KY887602、KY887605、KY947549、MG002630、MG892929、MK073885、MK073890、MK073894、MK483909、MK629457、MK754446、MK756035、MK762624、
MK762724、MK762746、MK775032、MN525276、MN782359、MT029316、MT238667、MW305548、MW305560、MW305632、MW305634、MW305637、
MW661261、OL336385）、P-type 分類に使用されている GII.P16 参照配列（ACN: AY772730）4)、外群として使用した GII.2[P30]（ACN: AY134748）であった。2016 年以降に日本で検出された GII.2[P16]の 5
株 （ ACN: LC213890 、 LC646333 、 LC726080 、LC726086、LC726087）と GII.4 の 1 株（ACN:LC175468）をアミノ酸置換の比較に用いた。
本研究は、地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所倫理審査委員会の承認を得て（承認番号0710-03-6）、「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」を遵守して実施したものである。
結 果
1. ノロウイルスの検出状況解析した 23 事例から検出されたノロウイルスの遺伝子型別月別の状況を表 1 に示す。2022 年度に確認された遺伝子型は 5 種類あり、GII.2[P16]が 9事例（39.1%）、GII.4[P16]が 6 事例（26.1%）、
GII.4[P31]が 4 事例（17.4%）、GII.17[P17] が 3 事例
（13.0%）で検出され、1 事例（4.3%）では GI.3[P3]及び GII（コピー数が少なく、型別不可）が 1 検体から重複して検出された。
2023 年 1 月から 3 月にかけて各月 4 事例以上が発生し、この 3 か月で 2022 年度の陽性事例の 73.9%を占めた。
内訳をみると GII.2[P16]は 2022 年 5 月、
6 月、10 月、2023 年 1 月、2 月、3 月に検出されたのに対し、2 番目に多く検出された GII.4[P16]は2023 年 1 月から 3 月にかけてのみ検出された。
2. ノロウイルス Dual typing の結果（2019～2022 年度）
2019～2022 年度別のノロウイルス陽性事例数と、検出ウイルスの Dual typing の結果について表 2 に示した 14)。対象期間の陽性事例総数は 57 事例で、最も多く検出された遺伝子型は GII.2[P16]で 21 事例（36.8%）、次いで GII.4[P31]が 14 事例（24.6%）、
GII.4[P16]が 7 事例（12.3%）であった。Genotype としては GI.2、GI.3、GI.4、GI.7、GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.17 の 9 種類、P-type としては GI.P3、GI.P4、GII.P7、GII.P16、GII.P17、GII.P25、GII.P31 の 7 種類が検出された。GII.4[P16]は 2019～2021 年度では
1 事例のみの検出であったが、2022 年度には 6 事例に増加した。対象期間で最も主要な遺伝子型である
GII.2[P16]は 2020 年度、2021 年度に引き続き 3 年
連続で最も多い遺伝子型となり、GII.4[P16]が次いで多かったため、2022 年度に GII.P16 を持つノロウ

表 1 月別ノロウイルス遺伝子型検出状況（2022 年度）- 54 -

表 2 ノロウイルス陽性事例数と検出された遺伝子型（2019～2022 年度）14)

イルスが検出された事例の割合は 65.2%（23 事例
中 15 事例）となった。発生事例数が 2022 年度と同等程度の 21 事例であった 2019 年度の 28.5%（21 事
例中 6 事例）と比較して、大きい割合を占めた。
3. ノロウイルス GII.P16 の RdRp 塩基配列及びアミノ酸配列の一致率
2022 年度に GII. P16 が検出された 15 事例（GII.2
が 9 事例、GII.4 が 6 事例）のうち、RdRp コード領域（1530 塩基）の遺伝子配列を確定できた 14 事例
14 株について解析した。以降、本文中で P-type を明記しない場合は、GII.P16 RdRp を持つものとする。
GII.2 は 8 事例 8 株（22-025、22-063、22-094、22133、22-150、22-167、22-202、22-233）、GII.4 は 6
事例 6 株（22-161、22-164、22-169、22-187、22-195、22-221）を用いた。これらの RdRp 塩基配列（1530
塩基）及びアミノ酸配列（510 アミノ酸残基）の一
致率を表 3 に示した。
GII.2 同士の一致率は塩基配列で 97.9～99.9%、ア
ミノ酸配列で 98.6～100%となった。GII.4 同士の一致率は塩基配列で 96.1～99.5%、アミノ酸配列で98.8～100%となった。GII.2 と GII.4 との間の一致率は塩基配列で 94.8～95.8%、アミノ酸配列で 97.8
～99.0%となり、塩基配列では総じて GII.2 もしくは GII.4 同士と比較して低い傾向にあったが、アミノ酸配列では GII.2 の 22-025、
22-094 のように GII.4との間でも、各遺伝子型内と同程度の高い一致率を持つ株も認められた。
4. ノロウイルス GII.P16 の RdRp 系統樹解析
系統樹解析結果を図 2 に示す。2016 年以降に世界に拡大した GII.2 は 1 つのクラスター（GII.2[P16]2016-Lineage）を形成し、当課で検出された GII.2 の8 株は、全てこのクラスターに属し、特に 2020 年
から 2022 年にかけて日本で検出された株と近縁であると考えられた。GII.4 も 2016 年以降に世界に拡大したクラスター（GII.4[P16] 2016-Lineage）を形成した。当所検出の GII.4 の 6 株のうち、22-161、164、187、195、221 は非常に近縁であり、22-169 を含めてこちらも GII.4[P16] 2016-Lineage に属していた。
5. ノロウイルス GII. P16 のアミノ酸配列の置換部位2022 年度に当課で検出された GII. P16 の 14 株のRdRp アミノ酸配列について、参照配列（図 2 に▲で示す）と比較して置換が認められた部位をまとめた（表 4）。参照配列には、GII.2、GII.4 でそれぞれ同じクラスターに分類されたものの中から日本国
内で検出された株を用い、2016 年に検出された株を比較の基準とした。
GII.2 の 8 株について、LC213890 と比較した場合の置換は 2～6 か所となり、最も多かった 22-233 では、本株だけが持つ置換が 4 か所（D4V、V53I、
V125A、S409N）存在した。解析した 8 株間の比較
では 510 個のアミノ酸に対して 13 か所（2.5%；第4、53、85、111、121、123、125、130、257、274、351、405、409 番目）で差異が認められた（表 4）。
GII.4 の 6 株について、LC175468 と比較した場合の置換は 5～8 か所となった。解析した 6 株間の比
較では 510 個のアミノ酸に対して 6 か所（1.2%；第132、208、382、386、479、502 番目）で差異が認められた（表 4）
。K54R 及び K457R の置換は GII.2 には認められなかったが、GII.4 では今年度検出された全ての株で認められた。
22-169 は塩基配列一致率
や系統樹解析では他の株と差異が見られたものの、アミノ酸配列解析では差異が少なく、塩基配列で- 55 -

表 3 2022 年度に検出されたノロウイルスの RdRp 塩基配列及びアミノ酸配列の一致率

22-169 のみが他の 5 株と差異があった 54 箇所中 50
箇所（1530 塩基）が同義置換であった。
GII.4、GII.2 いずれも 2016 年度以降の GII.2[P16]の特徴とされる D173E、S293T、V332I、K357Q、T360A の 5 つのアミノ酸置換は保存されていた。
考 察
2022 年度の食中毒疑い事例から検出されたノロウイルスの遺伝子型を解析した。検査した 41 事例
中 23 事例からノロウイルスが検出された（表 2）。
過去 10 年で、本年度は 2020 年度、2021 年度、2019年度に次ぐ低い水準であった 14, 16)。2022 年度の 10
月以降は大阪府市を合わせた集計となっているた
め、前年度との単純な比較は難しいが事例数としては増加している。2022 年度以降は新型コロナウイ
ルスに対する社会的な行動制限等の対策が緩和されているため、来年度以降のノロウイルスの流行に注意する必要がある。
2022 年度は、GII.2[P16]が 9 事例で検出され、2020

年度、2021 年度に引き続き検出事例数が最も多い
遺伝子型となったが、一方で、過去 3 年間で 1 事例であった GII.4[P16]が 6 事例と急増した（表 2）。
GII.4[P16]検出時期が全て 1~3 月であったこともGII.2[P16]との違いとして見受けられた（表 1）。本
研究では、これら 2 つの遺伝子型が共通して持つ
GII.P16 の RdRp 全長の塩基配列及びアミノ酸配列について詳細な解析を行った。世界で報告された配列を用いた系統樹解析では 2016 年以降の流行に関わる GII.2 と GII.4 は明確に異なるクラスター（GII.2[P16] 2016-Lineage もしくは GII.4[P16] 2016Lineage）に分かれており、相互の組換えは起こっていないことが示唆された。当所検出の GII.2、GII.4
もそれぞれのクラスターに属し、GII.2 は 2020 年以降日本で検出されている株と近縁であった。
2022 年度の GII.2 と GII.4 の RdRp アミノ酸配列の置換部位を確認した。GII.4 は 6 株中 4 株のアミノ酸配列が完全に一致しているなど株間の差異が少なかったのに対し、GII.2 は株間で差異のある部
位が多かった。この点は塩基配列一致率でも同様の- 56 -

図 2 ノロウイルス GII.P16 の RdRp 塩基配列による分子系統樹（最尤法、1530 塩基）●は当課で検出された株を、▲は表 4 で使用した参照配列を示す。外群として、GII.2[P30]の配列を使用した。
配列名の表記は、「Genotype(スペース)P-type(スペース)ACN/株名/検出年/検出国」とした。

- 57 -

- 58 -

傾向であり、近年の大阪で感染伝播に伴う変異の機会の多かった GII.2 に対し、GII.4 は検出があまり見られず変異の機会が少なかったからではないかと考えられる 14， 16）。GII.2 について、株間で差異のあった部位は 13 か所のうち 8 か所が 130 番目までに存在し、GII.4 と比べて前半に集中している傾向にあった。このことから、同じ GII.P16 の RdRp でもGenotype が異なると変異の起こりやすい部位に違いがあり、性質の異なる RdRp に進化していく可能性が示唆された。
2016 年以降に日本で検出された株と比較したとき、GII.2、GII.4 共に 2016 年以降の流行株に特徴的な 5 つのアミノ酸置換部位（D173E、S293T、
V332I、
K357Q、T360A）は保存されていた。一方で、GII.4
では今年度検出された全ての株で K54R 及びK457R の置換があり、これは GII.2 に存在しなかった。1 か所の変異が RdRp の性質に影響することも報告されており 21)、これらの変異が 2022 年度の顕著な GII.4[P16]の増加（表 2）に関わっているのかどうか、引き続き解析していきたい。アミノ酸配列の比較では Genotype 間を超えて高い相同性を示していたが、RdRp 系統樹解析においては GII.2 とGII.4 に明確に分かれ、GII.4 に特有のアミノ酸変異が認められた。2016 年以降の解析であることを考慮しても、ノロウイルスゲノム複製において RdRp
そのものも Genotype と連動して変異していく可能性を示唆するものと考えられた。
GII.2[P16] は 便 中 の ウ イ ル ス コ ピ ー 数 がGII.4[P31]やGII.17[P17]に比して多く22)、感染の確率が高いことが示唆される。これがGII.P16 RdRpの特徴であればGII.4[P16]にも同様の可能性があり、更なる流行に注意が必要である。また、2022年度には中国では初めてGII.12[P16]のアウトブレイクも報
告されており23)、GII.2、GII.4以外との組合せで流行することも考えられる。今後、RdRpの複製効率や変異率の違いが各遺伝子型のノロウイルスに与える影響も明らかにする必要がある。
本研究を通じて Dual typing による遺伝子型調査の必要性が改めて確認でき、点変異によるウイルスの変化を見逃さないようにゲノム全体の遺伝子解析を行うことの重要性が示唆された。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。

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22) Cheung SKC, Kwok K, Zhang LY, Mohammad
KN, Lui GCY, Lee N, Nelson EAS, Lai RWM,
Leung TF, Chan PKS, Chan MC. Higher viral loadof emerging norovirus GII.P16-GII.2 than pandemic
GII.4 and epidemic GII.17, Hong Kong, China.
Emerg Infect Dis 2019; 25(1): 119-122.
23) Xiong Q, Jiang H, Liu Z, Peng J, Sun J, Fang L, Li
C, Qiu M, Zhang X, Lu J. Untangling an AGS
outbreak caused by the recombinant GII.12[P16]norovirus with Nanopore Sequencing. Front Cell
Infect Microbiol 2022 ;12:911563. doi:
10.3389/fcimb.2022.911563. eCollection 2022.
WEBサイトの内容は2023年6月21日に確認した。

- 60 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Genetic analysis of norovirus outbreaks in case of food poisoning in Osaka Prefecture (Fiscal 2022 report)

Tatsuya SHIRAI, Yumi USHIKAI, Emiko YAMAZAKI and Naomi SAKON

In the 2022/2023 season (April 2022–March 2023), norovirus was detected in 23 suspected foodborne outbreaks in
Osaka. A dual-typing (Genotype and P-type) system for GI and GII noroviruses was performed using partial regions of
the ORF1 RdRp and ORF2 VP1 encoding regions. Five genotypes were detected in the 2022/2023 season, with GII.2[P16] (nine cases, 39%) being the most frequently detected, followed by GII.4 [P16] (six cases, 26%). Of the past four
seasons, GII.4 [P16] had the highest number of cases in this season. We studied the nucleotide sequences of GII.P16
RdRp (1530 bases) in the top two genotypes. The results of the phylogenetic tree indicated that each of the GII.2 [P16]and GII.4 [P16] strains detected after 2016 formed a single cluster. GII.P16 RdRp was reported to contain five uniqueamino acid sequences since 2016. We performed an amino acid sequence analysis of RdRp (510aa) and showed thatthese amino acid substitution sites were conserved in all strains detected during this season. Differences were found in
the sites and frequencies of amino acid substitutions between GII.2 [P16] and GII.4 [P16]. Henceforth, we must
elucidate the relationship between these mutations and the spread of infection and study the mutation rate in the RdRp
region. The necessity of dual typing was reconfirmed, and the whole genome sequence is suggested to be important to
not overlook the point mutations of norovirus.

Key words：norovirus, foodborne outbreak, RdRp, GII.P16

Osaka Institute of Public Health- 61 -

報 文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 62-65 (2023)

大阪健康安全基盤研究所における HTLV-1 確認検査

阪野文哉, 浜みなみ, 川畑拓也, 森 治代

大阪府では平成 22 年に国の HTLV-1 特命チームが策定した「HTLV-1 総合対策」を受け、平成 25 年に特定感染症検査等事業実施要綱に従い、妊婦以外を対象とした HTLV-1 検査及び相談事業を開始した。相談時に、保健師が HTLV-1 に感染している可能性が高いと判断した人に対しては、HTLV-1 抗体のスクリーニン
グ検査の受検を勧奨している。大阪健康安全基盤研究所では、平成 25 年度から令和 3 年度までに、大阪府と、政令指定都市（政令市）、中核市の各保健所からの依頼を受け、合計 20 件の HTLV-1 確認検査を行ってきたが、この間に各保健所が実施した相談件数及びスクリーニング検査数の集計と確認検査の陽性数をもとに、これまでの大阪府内における HTLV-1 相談・検査事業について検討した。各年度の HTLV-1 スクリー
ニング検査数に対する HTLV-1 確認検査陽性率が 9％～50％、全体として 18％であることから、スクリーニ
ング検査を勧奨する保健師の判断や対象者の設定が適切であることが示唆された。また、HTLV-1 と HTLV2 の鑑別を試みたところ、確認検査で HTLV 抗体陽性となった 18 検体全てが、HTLV-1 抗体陽性であった。
HTLV-1 の水平感染が 16 歳～34 歳の世代で増加しているが、受検機会が妊婦検診など限定的であるため、府民への啓発と受検勧奨が必要である。

キーワード：HTLV-1、ヒト T 細胞白血病ウイルス 1 型、確認検査、スクリーニング検査

ヒト T 細胞白血病ウイルス 1 型（HTLV-1）の感染者数は約 72 万～82 万人と推定されており 1）、成人 T 細胞白血病（ATL）や HTLV-1 関連脊髄症（HAM）といった重篤な疾病をまれに発症するが、これらの疾病の有効な治療法は未だ確立されていない。日本「キャリねっと」でのアンケート結果から新規で
HTLV-1 キャリアであると判明した人のうち 36.5%
が妊婦検診、33.6%が献血時の検査で判明していた2）。大阪府では特定感染症検査等事業実施要綱に従い、
平成 25 年5 月から妊婦以外を対象とした HTLV-

は先進国の中で唯一の HTLV-1 侵淫国である。そこで平成 22 年 9 月に政府の方針によって組織された
HTLV-1 特命チームが、政治主導のもと患者や専門家を交え検討を行い、妊婦を対象とした HTLV-1 抗体検査実施体制の確立、保健所における HTLV-1 抗体検査の導入、HTLV-1 キャリアや ATL 患者、HAM

1 相談・検査事業を開始した。同事業では、相談時に保健師が HTLV-1 に感染している可能性が高いと判断した人、すなわち、両親、配偶者、血縁のある祖父母、兄弟姉妹などが HTLV-1 のキャリアである者、1986 年 11 月以前に輸血を受けたことがある
者、保健所長が検査の必要を認めた者に対し、患者への相談体制の構築を決定した「HTLV-1 総合対策」を同年 12 月にとりまとめた。この決定により厚生労働省において行政、専門家、患者等による「HTLV-1 対策推進協議会」が開催され、各都道府
県に「HTLV-1 母子感染対策協議会」を設置することとなった。HTLV-1 は感染症法において指定され

HTLV-1 抗体のスクリーニング検査の受検を勧奨している 3）。大阪健康安全基盤研究所では、平成 25
年度から令和 3 年度までに、大阪府と政令市、中核市の各保健所からの依頼を受け、合計 20 件のHTLV-1 確認検査を行った。
本研究では、この間に各保健所が実施した相談件ている病原体ではないため、現時点で国が新規に診断された HTLV-1 キャリア数を把握する方法はな
い。厚生労働省の研究班が中心となって運営する
大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

数及びスクリーニング検査数を集計し、確認検査の陽性数をもとに、これまでの大阪府内におけるHTLV-1 相談・検査事業について検討した。また保- 62 -

存血清を用い、過去の確認検査にて実施していたウ
エスタンブロット法（WB 法）では鑑別できなかった HTLV-1 と HTLV-2 の鑑別を、近年導入したラインブロット法によって試みた。

は 1 年あたり平均 46.7 件実施されており、平成 26
年度と令和元年度が 65 件と最も多く、令和 2 年度
が 28 件と最も少なかった。
（図 1）

方 法
1.

大阪府内保健所の HTLV-1 相談・検査事業におけるスクリーニング検査実施数と陽性率の検討
平成 25 年から令和 3 年までの、大阪府と政令市、中核市の各保健所が実施した相談件数及びスクリーニング検査数を各保健所に問い合わせ、集計を行った。また、大阪健康安全基盤研究所で実施した確認検査結果と合わせて、保健所におけるスクリーニ
ング検査実施数に対する陽性率を算出した。

図 1 大阪府内の保健所における HTLV-1 相談件数

2. ラインブロット法による HTLV-1/2 の鑑別
これまでに実施した HTLV-1 確認検査のうち、WB 法で陽性を確認したが HTLV-1 抗体またはHTLV-2 抗体が未鑑別な 12 件の保存血清を用い、ラインブロット法（イノリア HTLV・富士レビオ）
にてその鑑別を行った。

平成 25 年度から令和 3 年度までの各保健所で実施されたスクリーニング検査数を集計したところ、スクリーニング検査は 1 年あたり平均 11 件実施されており、令和 3 年が 17 件と最も多く、平成 25 年
が 5 件と最も少なかった。各年度のスクリーニング
検査数に対する確認検査陽性率を算出したところ、本研究は、地方独立行政法人大阪健康安全基盤研
究所倫理審査委員会の承認を得て（申請番号：081004-5）「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」を遵守して実施したものである。
結 果
平成 25 年度から令和 3 年度までの大阪府と政令市、中核市の各保健所で実施した HTLV-1 の相談件
数を年度ごとに集計したところ、HTLV-1 相談件数

平成 26 年が 50％と最も高く、平成 30 年が 9％と最も低く、全体の陽性率は 18％であった。
（表 1）
HTLV-1 抗体と HTLV-2 抗体が鑑別可能なライブ
ロット法を導入した令和元年以前に、WB 法により確認検査で HTLV 陽性となった検体 12 件について
ラインブロット法にて HTLV-1/2 の鑑別を行ったと
ころ、12 件全ての陽性検体が HTLV-1 抗体陽性となり、国内で未確認の HTLV-2 抗体陽性例は検出されなかった。なお、ラインブロット法導入後の 6 件も、すべて HTLV-1 抗体陽性であることを確認して

表 1 大阪府と政令市・中核市保健所における HTLV-1 スクリーニング検査数と、
大阪健康安全基盤研究所における確認検査陽性数、スクリーニング検査数に対する確認検査陽性率
平成
25
年度

平成
26
年度

平成
27
年度

平成
28
年度

平成
29
年度

平成
30
年度

令和
元
年度

令和
2
年度

令和
3
年度

合計

スクリーニング検査数

5

10

9

11

11

11

10

15

17

99

スクリーニング検査陽性数
確認検査陽性数
陽性率

1
1
20%

5
5
50%

1
1
11%

2
2
18%

2
2
18%

2
1
9%

2
2
20%

2
2
13%

2
2
12%

19
18
18%

- 63 -

いる。
考 察
平成 25 年 5 月に大阪府で HTLV-1 の相談・検査事業が開始されて以降、令和元年度までは 1 年あたりの相談件数が 40～50 件ほどで推移していたが、令和 2 年度では大きく相談件数が減少しており、新型コロナウイルス感染症の流行による影響と考えられた。
大阪府の HTLV-1 相談・検査事業においては、両1 型）感染症について
https://www.pref.osaka.lg.jp/attach/23711/0016393
6/2HTLV1.pdf
4) Sagara Y, Nakamura H, Satake M, Watanabe T,
Hamaguchi I. J Clin Virol 2022 157 105324
https://doi.org/10.1016/j.jcv.2022.105324
WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 16 日に確認した。

親、配偶者、血縁のある祖父母・兄弟姉妹等が HTLV1 のキャリアである者等を HTLV-1 スクリーニング
検査の対象者として受検を勧奨している。調査期間中の各年度における HTLV-1 スクリーニング検査数に対する HTLV-1 確認検査の陽性率が 9％～50％、全体として 18％であることから、保健師の判断や対象者の設定が適切であることが示唆された。
一方で、近年、献血者の情報と採血した血液の検査結果を用いた調査において、HTLV-1 の水平感染
が 16 歳～34 歳の若い世代において増加していることが報告された 4）。現時点では、HTLV のキャリアであることを知る手段が妊婦検診など限定的であることから、府民への啓発と受検勧奨も必要である
ことを示していると考えられた。
謝 辞
本研究を実施するにあたり情報提供いただきま
した、大阪府、政令市、中核市の担当部署の皆様に感謝申し上げます。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1) 国立研究開発法人日本医療研究開発機構
AMED 研究開発課題データベース HTLV-1
疫学研究及び検査法の標準化に関する研究
https://amedfind.amed.go.jp/amed/search/task_sear
ch_details.html
2) 厚生労働省 第 13 回 HTLV-1 対策推進協議会
https://www.mhlw.go.jp/content/10901000/000509
846.pdf
3) 大阪府 HTLV-1（ヒト T 細胞白血病ウイルス- 64 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

HTLV-1 confirmation tests at Osaka Institute of Public HealthFumiya BANNO, Minami HAMA, Takuya KAWAHATA and Haruyo MORI

As “Comprehensive HTLV-1 Countermeasures” was launched by the Japanese government’s Human T-lymphotropic
virus 1 (HTLV-1) Special Mission Team in December 2010, Osaka Prefecture began HTLV-1 testing and consultation
services for non-pregnant women in 2013 under the Guidelines for the Implementation of Testing Services for Specified
Infectious Diseases. At the time of consultation, public health nurses recommended that those judged highly likely to be
infected with HTLV-1 undergo a screening test for antibody detection. The Osaka Institute of Public Health conducted
20 HTLV-1 confirmation tests at the request of public health centers in Osaka Prefecture, government ordinance cities,
and core cities from FY 2013 to FY 2021. The HTLV-1 positivity rate ranged from 9 to 50% in the total number of
HTLV-1 screening tests, suggesting that public health nurses selected these subjects appropriately for screening. In
addition, a line blotting assay was performed to differentiate HTLV-1 from HTLV-2 in all 18 positive specimens and all
specimens were HTLV-1. Although the number of HTLV-1 carriers with horizontal infection has increased among theyounger generation (16–34 years old), opportunities for HTLV-1 testing are limited at prenatal check-ups. Therefore, ourstudy indicates the need to conduct educational campaigns for individuals to undergo HTLV-1 screening tests.

Key words：HTLV-1, human T-cell lymphotropic virus, confirmation test, screening test

Osaka Institute of Public Health, Division of Microbiology, Virology Section- 65 -

報

文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 66-71 (2023)

スイセン類による食中毒事例について

野村千枝 a，山口瑞香 b，新矢将尚 a

スイセンは地中海沿岸を起源とする観賞用植物である。日本では、地上部はニラの葉、地下部は食用の里
芋に似ていることから、散発的に誤食され食中毒事例が発生している。2022 年 8 月、大阪府でスイセンの根の誤食による食中毒事例が発生した。形態学的鑑別によりスイセンと同定され、LCMS 分析により原因物質のリコリン、ガランタミンが検出された。スイセン属の同定はその後遺伝子鑑別により確認された。

キーワード：スイセン類、リコリン、高速液体クロマトグラフ／質量分析計、遺伝子解析

スイセン類（ニホンスイセンやラッパスイセン

実 験 方 法など）はヒガンバナ科スイセン属 Narcissus に分類される。地中海沿岸からアフリカ北部の原産で、園芸用として色や形の異なる種類がある。多年草
で、冬から春にかけて白や黄の花を咲かせるものが多い。スイセン類には、植物性自然毒の一種であるリコリンやガランタミンなどのアルカロイド

1. 事例の概要 8）
令和 4 年 8 月 16 日、大阪府内の消防から保健所に「球根様の物を調理して食べたところ、嘔吐等の症状を呈した家族 3 人から救急要請があり対応中である」との連絡があった。翌日、保健所が、患者が含まれている。これらのアルカロイドはスイセ
ン類に多く含まれ、喫食したときの症状は悪心、嘔吐、下痢、流涎、発汗、頭痛などがある。スイ
セン類は全草が有毒であり、その地上部が食用のニラ、鱗茎が玉ねぎとよく似ている 1）, 2）。厚生労働省の発表では、2013 年から 2022 年にかけて、らへの聞き取り調査を実施し、里芋に混じった球根様の物等を回収した。調査の結果、患者の発症状況が類似していること、患者の症状がスイセン類の喫食による中毒症状と一致することおよび球根様の物がスイセン類の鱗茎であったことから、保健所はスイセン類の鱗茎を原因食品とする食中毒

日本国内で 216 人のスイセン類による食中毒患者が報告されている 1）。
食中毒の原因究明の方法としては、植物の形態観察および遺伝子解析による植物種の鑑別法が報告されている 3）, 4）。また高速液体クロマトグラフ／質量分析法によるアルカロイド類の分析も報告と断定した。
2. 発生状況(1) 喫食日時：8 月 16 日 20 時 45 分〜21 時 00 分
(2) 発症日時：8 月 16 日 21 時 09 分〜21 時 30 分
(3) 発生場所：患者の自宅されている 5）- 7）。
食中毒が発生した際には、迅速に原因食品の特定と原因物質の確認を行う必要がある。今回、令和 4 年 8 月に大阪府内で発生したスイセン類の誤食による食中毒への対応について報告する 8）。

(4) 喫食者数：3 名(5) 患者数：3 名（60〜80 歳代までの男女）(6) 主症状：悪心、嘔吐等(7) 原因食品：スイセン類の球根(8) 病因物質：植物性自然毒（彼岸花毒成分）（推定）a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品安全課
b 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学課- 66-

3. 試料
里芋に混じった球根様の物は大阪市立自然史博
物館に持ち込まれ、形態観察およびニホンスイセンの標本との光学顕微鏡による外皮とデンプン粒の比較により、ニホンスイセンの鱗茎と同定された。

（KINEMATICA 製）、遠心分離機は、himac CF5RE（eppendorf 製）、LC-MS/MS は Acquity UPLC および Xevo TQ-S micro（Waters 製）を使用した。
（3）測定条件
分析カラム：GL Science Inertsil ODS-4（2.1x100 mm、

その後、当研究所に搬入された中毒検体を図 1（A：
調理残品（筑前煮）、B：対照品（里芋に混じった球根様の物、未調理品））に示す。アルカロイド類の添加回収試験には市販の里芋を用いた。遺伝子解析の陽性検体（PC）として市販のニホンスイセンの鱗茎
を用いた。

3 μm）
、カラム温度：40℃、流速：0.2 mL/min、注入
量：5μL、移動相：A 液；5 mmol/L 酢酸アンモニウ
ム水溶液 B 液；アセトニトリル、グラジエント条
件：B 液 5 %（0 min）→25 %（6 min）→90 %（11min）
イオン化法：ESI（+）
、測定モード：MRM
測定 m/z：リコリン；288 > 147（RT 6.8 min）
、ガ
ランタミン；288 > 213（RT 7.5 min）
（4）試験溶液の調製① 抽出
細切均一化した試料 2 g を量りとり、メタノール
10 mL を加えてホモジナイズ後、毎分 3,000 回転で
5 分間遠心分離を行い、上清を採取した。残留物にメタノール 9 mL を加えてホモジナイズ後、同様に遠心分離して先の上清と合わせてメタノールで 20
mL で定容し、抽出液とした。
② 精製
抽出液 1 mL を NDL カラムに負荷し、メタノール

図 1 当所に搬入された中毒検体
調 査 方 法1. アルカロイド類の分析
山口らの方法を元に以下に記載する方法で中毒
検体中のアルカロイド類の分析を行った 9）。
（1）試薬等① 標準品

1 mL で溶出し、メタノールで 2 mL に定容した。これをさらに水で 2.5 倍希釈して試験溶液とした。この試験溶液をフィルターでろ過後、LC-MS/MS で測定した。試験溶液は必要に応じて希釈した。
（5）添加回収試験
細切均一化した里芋 2 g に試料中濃度が 1 mg/kg

リコリンは、メルク社製、ガランタミンは東京化成工業（株）製を用いた。
② 標準溶液等標準品約 5 mg をメタノールおよび 70％でメタノール溶解して全量を 5 mL とし標準原液とした（1,000 μg/mL）とした。標準原液をメタノール等でとなるように標準溶液を添加し、上記の方法で試験溶液を調製した。

希釈し、0.005〜0.1 μg/mL の標準溶液を作成した。
③ 試薬等
メタノール、アセトニトリルは富士フィルム和光
純薬（株）製 LC/MS 用、酢酸アンモニウムは富士
フィルム和光純薬 （株）製高速液体クロマトグラ
フ用を用いた。固相抽出カラムは Agilent 社製

mM、EDTA 5 mM、NaCl 400 mM、SDS 0.3 %になるよう調製した。Proteinase K は QIAGEN 社製 20
mg/mL を用いた。精製は QIAGEN 社 DNeasy Plant
mini kit を用いた。PCR 酵素は（株）島津製作所製
Ampdirect Plus 酵素セットを用いた。Ampdirect Plusは PCR 阻害物質の影響を抑える作用をもつ緩衝液

Captiva ND Lipids （以下 NDL）、フィルターは
ADVANTEC DISMIC-13HP 0.2 μm を使用した。
（2）装置
高 速 ホ モ ジ ナ イ ザ ー は ポ リ ト ロ ン PT3100である。プライマーは MatK-1RKIM-f/MatK-3KIMr、rbcLa-F/rbcLa-R、ITS2-S2F/ITS4 を用いた 10）。プ
ライマーの合成は Thermofisher 社に依頼した。
（2）装置

2. 植物種の遺伝子解析（1）試薬等組織溶解液は最終濃度が Tris-HCl （pH8.0） 20- 67-

粉砕器 BioMashier II （nippi 社）、遠心分離機
KUBOTA5922（KUBOTA 社）、微量分光光度計
NanoPhotometer Pearl（IMPLEN 社）、サーマルサイクラー Veriti 200（Applied Biosystems 社）、DNA シー ケ ン サ ー ABI PRISM3130 Genetic Analyzer

登録されている遺伝子配列との相同性の検索を行った。

（Thermofisher 社）（3）試験溶液の調製① 抽出（精製なし）
試料 50 mg（約 5 mm 角）を量りとり、組織溶解
液 200 μL および Proteinase K 10 μL（200 μg）を加え、BioMashier II で粉砕し、ボルテックスミキサー

1. アルカロイド類の分析（1）検量線
0.005〜0.1 μg/mL の標準溶液を調製し、絶対検量線を作成した。決定係数（r2）=0.999 以上の良好な直線性が得られた。定量下限は 0.5 mg/kg とした。

で撹拌した。55℃で 60 分間加温し、Proteinase K を失活させるため 95℃で 5 分間加温したものを DNA
試料原液とした。
② 抽出・精製（精製あり）11, 12）
試料 50 mg（約 5 mm 角）を量りとり、DNeasy Plant
Mini Kit（QIAGEN 社）を用いて DNA 抽出・精製を（2）分析結果
A 調理残品（筑前煮）、B 対照品（里芋に混じった球根様の物、未調理品）からリコリンが検出された（表 1、図 2）。過去の例 2）と比較しても同程度の検出結果であった。

行った。操作はキット付属の使用方法に従った。調製した DNA 溶液は微量分光光度計で波長 260 nmにおける吸光度の値 1 を 50 ng/μL として DNA 濃度
を 10 ng/μL に調製して DNA 試料原液とした。
（4）遺伝子塩基配列の解析による植物種の確認
植物種の確認は既報 7）を参考に、rbcL 領域および

表 1 中毒検体の分析結果

結 果 お よ び 考 察

試料中濃度（mg/kg）

matK 領域の遺伝子を増幅して、ダイレクトシーケ
ンス法による塩基配列の解析を行った。
PCR に供する溶液は、2×Ampdirect Plus 10 μL、
BIOTAQ HS DNA Polymerase（5U/μL）0.1 μL、8 μMのフォワードプライマーとリバースプライマー
各々プライマー1 μL、10 ng/μL に調製した DNA 溶

リコリン

ガランタミン

A: 調理残品

279

5.7

B: 対照品

2825.5（3）添加回収試験結果
上記の方法にて 5 併行で添加回収試験を実施した。その結果、平均回収率および相対標準偏差はリコリンで 103 %、2.2 %、ガランタミンで 91 %、液を 1 μL 加えた後、滅菌水で 20 μL になるよう調製した。PCR は 95℃10 分間の後、94℃30 秒間、55℃
60 秒間、72℃60 秒間を 1 サイクルとして 30 サイクルで行った。その後、72℃7 分間を行った。PCR 後の 溶 液 か ら 余 剰 の プ ラ イ マ ー を ExoSAP-IT（Affymetrix 社）を用いて除去後、PCR 産物を

5.3 %と良好であった。
2. 植物種の遺伝子解析（1）操作時間
既報 11, 12）に従い DNeasy Plant Mini Kit を用いて精製を行った場合、約 3 時間を要するが、精製なBigDye Terminator v.3.1 Cycle Sequencing Kit（Thermofisher 社）を用いて蛍光ラベル化した。未反応の試薬を除去するためエタノール沈殿により精製した。その後、脱イオン化ホルムアルデヒド（Thermofisher 社）を等量加えた後、DNA シーケンサーにより塩基配列の解析を行った。解析した配列

しでは約 1.5 時間と、操作時間が半分に短縮可能であった。
（2）遺伝子解析結果
陽性検体、A 調理残品（筑前煮）および B 対照
品（里芋に混じった球根様の物、未調理品）の遺伝子解析の結果、すべての試料で、rbcL, matK のは DNA 配列解析ソフトウェア CLC Sequencing
Viewer version 7（CLC 社）によって波形を確認して塩基を決定した。決定した塩基配列は日本 DNA データバンク（DDBJ）のデータベース（Genbank）に両領域において、99 %以上の高い一致率でスイセン属 Narcissus が検出されたことから、食中毒にも迅速に対応できると考えられる（表 2）。

-68-

galanthamine
100

213

288

100

%

%

288

213
270

270

0

100

150

200

m/z
300

250

lycorine
100

288

0

100

150

200

m/z
300

250
288

100
147

147

%

%
270
270

0

100

150

200

250

m/z
300

100

0

100

150

200

250

m/z
300

100
lycorinelycorinegalanthamine%%

galanthamine
0
5.00

6.00

7.00
std 0.1ppm

8.00

Time
9.00

0
5.00

6.00

7.00
sample8.00

図 2 標準と中毒検体のクロマトグラムおよび MS/MS スペクトル
表 2 中毒検体の遺伝子解析結果
Sample

精製あり

精製なし

Score, Identitiy, %,Score, Identitiy, %Species,Accession number

Species,Accession number

rbcL

1075bits, 598/601, 99.67 %,Narcissus tazetta, MW322827.1

1076bits, 599/601, 99.67 %,Narcissus tazetta, MW322827.1

matK

1285bits, 714/716, 99.721 %,Narcissus tazetta, KC704516.1

1019bits, 571/574*, 99.48 %,Narcissus tazetta, KC704516.1

Targetregion

PC

- 69-

Time
9.00

rbcL

1068bits, 579/580, 99.83 %,Narcissus tazetta, MW322827.1

1076bits, 599/601, 99.67 %,Narcissus tazetta, MW322827.1

matK

1214bits, 673/673, 100 %,Narcissus tazetta, KC704516.1

1254bits, 697/699, 99.71 %,Narcissus tazetta, KC704516.1

rbcL

1070bits, 596/598, 99.67 %,Narcissus tazetta, MW322827.1

1076bits, 599/601, 99.67 %,Narcissus tazetta, MW322827.1

matK

1269bits, 704/705, 99.86 %,Narcissus tazetta, KC704516.1

1223bits, 683/688, 99.27 %,Narcissus tazetta, KC704516.1

A: 調理残品

B: 対照品

7) 赤星千絵，江原庸，佐藤英子，淀谷雄亮，牛山温子，栗田史子，吉田裕一，浅井威一郎，橋口成喜. LC-TOF/MS 及び DNA シーケンサーを併用した自然毒食中毒の検査体制の構築. 川崎市健康安全研究所年報 2020; 56(8): 82-87.
8) 健康医療部生活衛生室食の安全推進課監視指導グループ. 大阪府報道発表資料（2022 年 8 月 22

利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1) 厚生労働省 HP. 自然毒のリスクプロファイル高等植物スイセン.
https://www.mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/000
0075843.html
2) 山本敬男，泉美樹，小林浩，山梨県内で採取されたスイセンとその調理品に含まれるリコリン及日）有毒植物による食中毒の発生について.
https://www.pref.osaka.lg.jp/hodo/index.php?site=fu
min&pageId=45470
9) 山口瑞香，新矢将尚，植物性自然毒一斉分析法の検討. 第 57 回全国衛生化学技術協議会年会講演集 2020; 180-181.

びガランタミン測定法の検討と含有量の特徴.
山梨県衛生環境研究所年報 2019; 63: 31-35.
3) 山元梨律子，大坂郁恵，吉田栄充，石井里枝，植
物性自然毒による食中毒原因究明への DNA 塩基
配列解析の応用. 埼玉県衛生研究所所報 2018;
52: 61-65.

10) CCDB. Canadian Centre for DNA Barcording:Primer Sets for Plants and Fungi.
https://ccdb.ca/site/wpcontent/uploads/2016/09/CCDB_PrimerSetsPlants.pdf11) 村上太郎，昌山敦，大島詔，仲谷正，山口之彦.

4) 篠崎淳一，数馬恒平，佐竹元吉，近藤一成，紺野勝弘. 食中毒事例の多い有毒植物の PCR-RELP
法による鑑別. 食品衛生学雑誌 2018; 59(3): 134140.
5) 上田泰人，伊藤光男，田中敏嗣，スイセンのLC/MS/MS 分析について. 神戸市環境保健研究

大阪市で発生したクワズイモによる食中毒事例について. 大阪健康安全基盤研究所年報 2018;
2: 63-67.
12) 野村千枝，昌山敦，村上太郎，梶村計志，リア
ルタイム PCR 法によるクワズイモの同定. 大阪
健康全基盤研究所年報 2018; 2: 68-73.

所報 2008; 60-61.

WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 9 日に確認した。

6) 牛山温子，赤星千絵，大澤伸彦，清水智美，松島勇紀，清水英明，橋口成喜，LC-MS/MS および
DNA バーコーディングを用いた食中毒事例におけるチョウセンアサガオ類の鑑別. 食品衛生学
雑誌 2017; 58(2): 86-95.

-70-

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Case study on Narcissus-induced foodborne illness

Chie NOMURA, Mizuka YAMAGUCHI and Masanao SHINYA

Narcissus is a non-consumable flora that originated along the Mediterranean coastline. They are mistakenly ingested
sporadically, leading to instances of foodborne illness in Japan, as they resemble edible tubers, such as satoimo(Colocasea esculenta). In August 2022, a food poisoning incident occurred in Osaka Prefecture due to the consumptionof Narcissus roots. Using liquid chromatography-mass spectrometry analysis, the culpable compound that caused
poisoning, lycorine and galantamine, were detected in the sample. Narcissus species identification was subsequently
confirmed via DNA sequencing.

Key words：narcissus, lycorine, LC-MS, sequencing

Osaka Institute of Public Health

- 71-

報 ⽂

地⽅独⽴⾏政法⼈⼤阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 72-78 (2023)

食品中の甘味料分析における荷電化粒子検出器の適用

新矢将尚，山口之彦

食品中の甘味料 10 成分について、荷電化粒子検出器を接続した HPLC により一斉分析する方法を開発した。本法において、紫外吸収をもたないスクラロースやサイクラミン酸は、誘導体化等の前処理操作を行わなくても他成分と同等の感度で分析できた。さらに、固相抽出を併用することで、全成分について UV 検
出器を用いる通知法と同レベルの分析が可能であった。
市販の 3 種類の食品へ添加回収試験を行った結果、各成分の平均回収率は 76～119%、変動係数は 0.2～8.6%であった。本法における定量下限は、スクラロー
スなど 8 成分で 0.005 g/kg、アドバンテームとネオテームが 0.001 g/kg であった。

キーワード：甘味料、HPLC、荷電化粒子検出器、固相抽出

甘味料とは、食品に甘みをつけるために使用される食品添加物である。ほぼノンカロリーで砂糖の数百～数万倍の甘味を呈する高甘味度甘味料
は、近年多くの食品に使用されており、また砂糖の甘味に近づけるために複数の甘味料を併用している場合が多い。
厚生労働省通知では、食品中の甘味料分析法はほぼ個別に定められており、甘味料分析の効率化を図るためには簡便な一斉分析法の開発が求められる。著者らは LC-MS/MS を使用した甘味料の一斉分析法 1)を開発したが、スクラロースの感度は他の甘味料に比べて低く、一斉分析には濃縮または希釈による多段階の濃度設定が必要となり、その改善が課題となっている。
スクラロースは紫外吸収をもたないため、HPLC
分析ではダイオードアレイ検出器（DAD）が使用できず、分析種の化学的性質によらずに検出可能な示差屈折率検出器（RID）が用いられる 2)。RID
は一般に糖類の分析に使用されている 3)が、他の検出器に比べて感度が低いことや、グラジエント
分析を適用できないことが欠点である。その短所が改善された検出器に蒸発光散乱検出器（ELSD）があり、糖類・甘味料分析に適用される 4)一方で、近年はさらに感度の高い荷電化粒子検出器（CAD）5)が開発されている。CAD は、HPLC カラムからの溶出物質を噴霧した後、液相を蒸発さ
大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品安全課

せて形成する中性粒子を荷電化し、その電荷量を計測するものである 6)。そのため分析種の化学構造に依存せず、不揮発性・半揮発性の物質をもれなく検出でき、RID よりおおむね 100 倍感度が高いという利点があり、糖類など食品成分分析への適用が期待される。しかし国内での報告例は少な
く、食品中の糖類 7,8)、17β エストラジオール試薬
中の微量成分 9)や、フタル酸エステル類の分析 10)などに限られている。
本稿では、前報 1)と同じく指定甘味料のアセス
ルファムカリウム（AK）、サッカリンおよびその塩類（SA）、スクラロース（SU）、アスパルテーム（APM）、ネオテーム（NEM）、アドバンテーム（ADM）、指定外甘味料のサイクラミン酸およびその塩類（CY）、アリテーム（AL）
、ズルチン
（DU）
、およびアスパルテームの分解物であるジケトピペラジン（DKP）の併せて 10 成分を対象とし、CAD を用いた HPLC による食品中甘味料の一斉分析法について検討したので報告する。
実 験 方 法1. 試料
大阪市内で市販された清涼飲料水、キャンデーお
よび漬物（酢漬）を使用した。

- 72 -

2. 試薬・器材
試薬・器材は前報 1)と同じものを用いた。固相抽
出カートリッジはジーエルサイエンス( 株) 製InertSep HLB FF（500 mg / 6 mL）を使用した。
3. 装置および測定条件
HPLC：Agilent 1290
検出器：Thermo Fisher Scientific, Corona Veo RS
窒素ガス圧: 60.9 psi (= 420 kPa), エバポ
レーションチューブ温度: 35℃
カラム：L-Column2 ODS, 4.6×150 mm (3 µm)
移動相：A: 0.01 mol/L-ギ酸緩衝液(pH 4.0) /B: アセトニトリル
A/B: 90/10 (0 min) → 80/20 (15 min) →50/50 (22-28 min)→ 90/10 (28-35 min)
カラム温度：40℃
流速：0.5 mL/min
注入量：20 µL（水 30 µL ずつで挟み込む共注入法）
4. 試験操作
操作の概要を図１に示す。すなわち、粉砕して均一化した食品試料 10 g を秤り採り、透析内液 50 mLとともに 30 cm の長さに切った透析膜内へ封入したものを、メスシリンダーに入れ透析外液で全量が200 mL になるよう定容した。メスシリンダーの上端をシリコン栓等で蓋をし、振り混ぜながら 24 時
間透析した。次に、透析終了後の外液 20 mL を、予めメタノール 5 mL と精製水 5 mL でコンディショ
ニングした HLB 固相カートリッジに負荷させ、精製水 5 mL で洗浄ののち、85%メタノール（メタノール：精製水＝85：15 の比率で混合したもの）5 mLで溶出した。溶出液を 0.45 µm メンブレンフィルタ
でろ過したのち、分析に供した。
5. 添加回収試験
清涼飲料水、キャンデーおよび酢漬について、定量下限の 2 倍（低濃度）および使用基準の半分量（高濃度）になるように添加した。使用基準が定められていない甘味料については、高濃度添加量は低濃度の 10 倍とした。いずれの甘味料も試料ごとに5 回試験して回収率を求めた。
結 果 お よ び 考 察
1. 定量下限と検量線
CAD の検出感度は ng オーダーである 6)が、今回検討した測定条件において変動係数が 10%未満と試料 10 g│
透析 (室温，24 h)
内液：2.5%NaCl in 0.01 mol/L HCl (50 mL)
外液：0.01 mol/L HCl で 200 mL に定容│
透析外液 20 mL を HLB 固相カラムへ負荷│
洗浄 精製水 5 mL│
溶出 85% MeOH 5 mL│
HPLC-CAD 測定
図 1 分析方法の概要
なったのは、ADM と NEM を除いた 8 成分では 1µg/mL 以上の濃度であった。紫外吸収をもたない
SU と CY は、他成分と同等の感度で測定できた。
ADM と NEM はグラジエント分析でアセトニトリ
ルの比率が高い状態で溶出し、エアロゾルの表面張力が小さく感度が高くなる 6)ため、0.2 µg/mL 以上の濃度で精度良く測定できた。CAD の検量線は図2 に示すように曲線を示すが、CAD の応答曲線は原理的にべき関数で表される 5)ため、両対数で検量線を引くと、
ADM と NEM を除いて 1～70 µg/mL、
ADM と NEM は 0.2～14 µg/mL の範囲で相関係数0.999 以上の良好な直線性が得られた。定量下限は、固相抽出による濃縮を含む図 1 の操作により ADMと NEM を除いて 0.005 g/kg、
ADM と NEM は 0.001
g/kg と算出され、HPLC による通知法や文献 11)の定量下限を満足していた。
2. HPLC 条件の検討
CAD の特性として、化学構造を問わず不揮発性・
半揮発性物質をもれなく検出できることが挙げられるが、移動相には揮発性の塩類を用いる必要があり、ギ酸または酢酸とそのアンモニウム塩が推奨されている 6)。本法では分析カラムに汎用的な逆相のODS カラムを使用し、分離条件を検討して移動相にはギ酸緩衝液とアセトニトリルを選択した。
グラジエント条件を検討するにあたり、加工食品
で甘味料と同時に使用されることの多い保存料と保持時間が重ならないよう、DAD を併用して条件設定を行った。
実験方法の 3. で示した LC 条件で、
図 3 に示すように甘味料と保存料の安息香酸、ソル- 73 -

400

Peak area

Peak area

300
200

100

100
10

0

0

20

40

[µg/mL]

60

80

1

10

100

[µg/mL]図 2 スクラロースの検量線（左：線形，右：両対数）わることに注意する必要がある。
前処理条件の検討内容については前報 1)で詳述
しているが、HLB カラムから甘味料を溶出させる
際に、85%メタノール溶液を使用している。HLB カ
ラムのメーカーや種類によっては、溶出時にブリードが起こってクロマトグラムの広範囲にわたって
妨害する場合があったので、注意が必要である。また、測定液を HPLC へそのまま注入すると、測定液の溶媒比率（85%）は移動相の初期有機溶媒比率（10%）よりはるかに高いことから、注入後に測定液が移動相に拡散して理論段数が低下 12)し、ピー
クが崩れてブロードになることが確認された。これに対しては、試料を水で挟み込んで共注入 13)する
ことで、ピーク形状は改善された。

ビン酸、デヒドロ酢酸は良好に分離できていること
を DAD では確認されたが、これらの保存料はいずれも揮発性を有するために、CAD では検出されなかった。つまり、CAD による甘味料分析時には保存料の影響は無視できるが、保存料の分析にはCAD を適用できないことが分かった。
CAD の定性情報は保持時間しかないので、DADを併用して紫外吸収スペクトルも確認することが望ましい。しかし、一般に紫外吸収スペクトルは紫外透過性の高いリン酸緩衝液のものが参照される
が、CAD では不揮発性のリン酸塩を移動相に使用できず、ギ酸緩衝液（酢酸でも同様）では常にカルボン酸の吸収が起こるため、その影響で図 4 に示すように 200～210 nm の吸収スペクトルが著しく変
(a)
1

(b) 1

3

2

2

5

4

4

7

8

7

8

9

10

6

6

11

12

9
13 10

7.5

10

12.5

15

17.5

20

22.5

25

[ min ]

図 3 標準溶液のクロマトグラム（検出器：(a) CAD，(b) DAD (210 nm)）．
1：AK，2：SA，3：CY，4：DKP，5：SU，6：APM，7：AL，8：DU，9：ADM，10：NEM，
11：安息香酸，12：ソルビン酸，13：デヒドロ酢酸．

- 74 -

200

250

AK (P)SA (P)APM (P)AK (F)SA (F)APM (F)

300

350

200

250

[ nm ]

300

200

350

250

[ nm ]

300

350[ nm ]

図 4 リン酸緩衝液(P)およびギ酸緩衝液(F)を移動相に用いたときのAK，SA，APM の紫外吸収スペクトル
グラムを図 5 に示す。低濃度、高濃度とも分離は良好であり、夾雑成分の影響も確認されなかった。キャンデー試料の場合も同様の結果であった。
漬物（酢漬）に甘味料を添加したときのクロマト
グラムを図 6 に示す。低濃度では随所に夾雑成分のピークが検出され、特に AL と DU への影響は大きく見受けられたが、回収率は許容範囲内にあった。
高濃度では夾雑成分の影響は小さく、分析には問題なかったと考えられた。CAD においては、不揮発性・半揮発性のほかに分析成分による選択性はない
ため、特に低濃度分析時の夾雑成分の影響を確認しておく必要がある。

3. 添加回収試験
各甘味料について、低濃度添加条件ではそれぞれの食品に定量下限の 2 倍となるよう添加した。高濃度添加条件においては、
清涼飲料水、
キャンデー（菓子）、漬物（酢漬）の使用基準は、AK がそれぞれ0.50、2.5、1.0 g/kg、SA がそれぞれ 0.30、0.10、2.0
g/kg、SU がそれぞれ 0.40、1.8、0.58 g/kg であり、それらの半分量になるよう添加した。その他の甘味料は低濃度条件の 10 倍、すなわち ADM と NEM を除いた 8 成分で 0.10 g/kg、ADM と NEM は 0.02
g/kg になるよう添加した。これら二段階の濃度条件で添加回収試験を行った。
清涼飲料水に甘味料を添加したときのクロマト

(a)

3
1

(b)

7
4

5

8

6

2

1

2

5

3

7.5

10

7

8

6

4

12.5

15

17.5
[ min ]

10
9

9

20

22.5

10

25

図 5 清涼飲料水試料のクロマトグラム（(a) 低濃度添加，(b) 高濃度添加）．
1：AK，2：SA，3：CY，4：DKP，5：SU，6：APM，7：AL，8：DU，9：ADM，10：NEM．

- 75 -

(a)
3

2

1

(b)

8

7
4

6

5

9

10

2

1

5
3

7.5

10

7

6

4

12.5

15

17.5
[ min ]

20

8
9

22.5

10

25

図 6 漬物試料のクロマトグラム（(a) 低濃度添加，(b) 高濃度添加）．
1：AK，2：SA，3：CY，4：DKP，5：SU，6：APM，7：AL，8：DU，9：ADM，10：NEM．
表 1 添加回収試験結果
Softdrink
Sweetener

Candy

Pickles

Spiked level(g/kg)

Recovery
(%)

CV
(%)

Spiked level(g/kg)

Recovery
(%)

CV
(%)

Spiked level(g/kg)

Recovery
(%)

CV
(%)

AK

0.01
0.25

91 ± 1.6
97 ± 2.1

1.8
2.2

0.01
1.25

81 ± 1.7
93 ± 0.7

2.1
0.7

0.01
0.50

82 ± 2.6
99 ± 1.8

3.2
1.8

SA

0.01
0.15

79 ± 6.8
102 ± 1.5

8.6
1.5

0.01
0.05

76 ± 4.984 ± 1.5

6.5
1.8

0.01
1.0

82 ± 2.7
102 ± 1.7

3.4
1.6

SU

0.01
0.20

97 ± 1.2
110 ± 1.8

1.2
1.7

0.01
0.90

97 ± 1.3
108 ± 1.9

1.3
1.8

0.01
0.29

88 ± 1.2
118 ± 1.7

1.3
1.5

APM

0.01
0.10

107 ± 2.6
111 ± 1.2

2.4
1.1

0.01
0.10

107 ± 1.1
117 ± 1.7

1.0
1.5

0.01
0.10

97 ± 1.5
119 ± 2.5

1.5
2.1

NEM

0.002
0.02

104 ± 2.888 ± 1.8

2.7
2.0

0.002
0.02

100 ± 1.6
100 ± 4.1

1.6
4.1

0.002
0.02

87 ± 1.5
98 ± 1.9

1.8
1.9

ADM

0.002
0.02

97 ± 2.995 ± 2.4

3.0
2.5

0.002
0.02

97 ± 1.6
104 ± 3.6

1.6
3.4

0.002
0.02

105 ± 2.2
107 ± 2.7

2.1
2.5

CY

0.01
0.10

96 ± 1.7
98 ± 2.2

1.8
2.3

0.01
0.10

92 ± 1.2
98 ± 1.5

1.3
1.5

0.01
0.10

90 ± 2.3
100 ± 1.6

2.6
1.6

AL

0.01
0.10

100 ± 1.1
101 ± 2.1

1.1
2.1

0.01
0.10

99 ± 2.0
106 ± 1.8

2.0
1.7

0.01
0.10

118 ± 2.9
107 ± 2.2

2.4
2.1

DU

0.01
0.10

102 ± 1.7
98 ± 0.9

1.7
1.0

0.01
0.10

102 ± 0.7
101 ± 0.2

0.7
0.2

0.01
0.10

88 ± 0.6
102 ± 2.5

0.7
2.4

DKP

0.01
0.10

97 ± 1.579 ± 1.0

1.6
1.3

0.01
0.10

94 ± 1.677 ± 1.2

1.7
1.6

0.01
0.10

98 ± 3.580 ± 1.3

3.6
1.6

Recovery: Mean ± S.D. (n=5), CV: Coefficient of Variation

添加回収試験の結果一覧を表１に示す。全ての食品において、いずれの成分も回収率は低濃度で 76～118%、高濃度で 77～119%の間にあり、変動係数は低濃度で 0.7～8.6%、高濃度で 0.2～4.1%であった。本結果は精度管理の一般ガイドライン（回収率70～120%）を満たしており、ばらつきも小さかった（変動係数<10%）ため、本法の有効性が示された。なお、本法では固相抽出による濃縮操作を行っているため、高濃度条件では検量線の範囲に入るよう適宜希釈して HPLC 測定を行ったが、固相抽出- 76 -

を用いずに透析外液を測定しても上記の分析精度を満たしていた。AK、SA、SU、APM の陽性試料
では一般に高濃度で含まれるため、その場合は固相抽出による濃縮操作を行わずに測定しても、一斉分析が可能であると考える。
ま と め
食品中の甘味料分析において、CAD を用いた
HPLC により、紫外吸収をもたないスクラロースやサイクラミン酸を含めた 10 成分の一斉分析法を開発した。市販の 3 種類の食品への添加回収試験の結果は、10 成分いずれも平均回収率が 70～120%の範囲内にあり、変動係数は 10%未満であった。本法における定量下限は、AK、SA、SU、APM、CY、AL、
DU、DKP が 0.005 g/kg、ADM と NEM が 0.001 g/kgであった。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1) 新矢将尚, 寺谷清香, 山口之彦. 透析−固相抽出−
LC-MS/MS 法による食品中の人工甘味料の一斉分析. 大阪健康安全基盤研究所研究年報 2020;
4: 61-69.
2) 厚生労働省医薬・生活衛生局食品基準審査課長・
食品監視安全課長通知. 「食品中の食品添加物分析法」の改正について（別添 1）. 令和 5 年 5 月
29 日薬生食基発 0529 第 1 号・薬生食監発 0529
第 1 号.
3) 消費者庁ホームページ. 食品表示基準 別添 栄
養成分等の分析方法等.
https://www.caa.go.jp/policies/policy/food_labeling/f
ood_labeling_act/assets/food_labeling_cms201_220
830_03.pdf.

4) 寺田英敏, 山部恵子, 山口忠行, 三上元重, 三上博久. HPLC 蒸発光散乱検出器の食品分析への応用. 島津評論 2008; 65: 83-92.
5) 松沼孝行. 荷電化粒子検出器. ぶんせき 2018;
2018(8): 317-323.
6) 福島景子,橋口九州男, 鈴木隆弘, 大河原正光,
関口陽子. 荷電化粒子検出器 CoronaCAD の技
術と応用. CHROMATOGRAPHY 2011; 32: 161170.
7) 田村昌義, 高橋亜友巳, 宇山敦生, 望月直樹. 荷
電化粒子検出器を用いた高速液体クロマトグラ
フィーによる飲料中の糖類一斉分析法の開発.
分析化学 2010; 59: 239-245.
8) 三好美玖, 藤井玲子, 木村功. 食品に含まれる希少糖類の分析. 香川県産業技術センター研究報
告 2018; 18: 4-5.
9) 山﨑太一, 井原俊英, 中村哲枝, 加藤健次. 荷電化粒子検出器を用いた高速液体クロマトグラフ
ィーによる 17β-エストラジオール試薬中の微量成分の定量. 分析化学 2010; 59: 219-224.
10) 松山重倫, 衣笠晋一, 大谷肇. 荷電化粒子検出器を用いるフタル酸エステル類の HPLC 分析.
分析化学 2014; 63: 817-823.
11) 北野文理, 冨岡華代, 北田善三. HPLC および
LC/MS による食品中のジペプチド型甘味料の同時分析. 日本食品化学学会誌 2014; 21: 115-

120.
12) 中村洋監修. 液クロを上手に使うコツ. 丸善;
2004. 27.
13) 島津製作所ホームページ. 試料溶媒がピーク形状に与える影響.
https://www.an.shimadzu.co.jp/servicesupport/technical-support/analysisbasics/hplc/faq/tips2/lctalk-39intro/index.html
WEB サイトの内容は 2023 年 7 月 19 日に確認した。

- 77 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Simultaneous analysis of sweeteners in foods using HPLC with charged aerosol detector

Masanao SHINYA and Yukihiko YAMAGUCHI

A method for the simultaneous determination of 10 sweeteners (acesulfame K, AK; saccharin Na, SA; sucralose, SU;
aspartame, APM; neotame, NEM; advantame, ADM; sodium cyclamate, CY; alitame, AL; dulcin, DU; diketopiperazine,
DKP) in various foods by liquid chromatography with a charged aerosol detector (CAD) was developed. In the method
using CAD, SU and CY, which have no ultraviolet (UV) absorption, could be analyzed with the same sensitivity as othersweeteners without pretreatment such as derivatization. Furthermore, combined application of the solid-phase extraction
enabled analysis of all target components at the same level as the official method using a UV detector in HPLC. The
mean recoveries from three types of foods were 76–119%, and their relative standard deviations were 0.2–8.6%.
Quantification limits of AK, SA, SU, APM, CY, AL, DU and DKP were 0.005 g/kg, and the limits of NEM and ADM
were 0.001 g/kg.

Key words：sweetener, HPLC, charged aerosol detector, solid-phase extraction

Osaka Institute of Public Health- 78 -

報 文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 79-85 (2023)

水質検査における外部精度管理（2021 年度）―六価クロム化合物―

安達史恵，吉田 仁

水道水質検査精度の向上を図ることを目的に、水質検査を実施している大阪府水道事業者、保健所及び公的研究機関を対象に、六価クロム化合物を添加した精度管理用試料を配付し、各機関が水道水質検査法
に従って測定した検査結果を回収した。各機関の検査値を解析した結果、24 検査値中 1 検査値が真値に対する誤差率及び z スコアの許容範囲を超過した。この機関を対象に定量精度に関するフォローアップ調査を行ったところ、分析機器の安定化前に測定を開始したことが定量値に影響を及ぼしたことが示唆された。

キーワード：水道水、六価クロム化合物、水道水質検査、定量精度、外部精度管理（地独）大阪健康安全基盤研究所では、大阪府健康医療部生活衛生室環境衛生課と協力して、水道水
質検査精度の向上を図ることを目的に、水質検査を実施している大阪府内水道事業者、保健所及び公的

す）に分類されている 6)。
水道においてこれまでに大きな事故はないが、過去に地下水水源や家庭用井戸等が六価クロムに汚染された事例が報告されている 6)。

研究機関（以下、水道事業者等）を対象に外部精度管理を実施している 1-5)。
2021 年度の対象項目は、無機項目として「六価クロム化合物」を選定した。クロムは耐食性に富み、耐熱性、耐摩耗性が高く、ニクロムやステンレス等の合金の原料として利用されるほか、クロムめっき、クロムの水質基準は 1950 年に六価クロム化合物
として、0.05 mg/L と定められ、水道法施行後は総クロムとして評価されていたが、その後六価クロム
化合物となり、
基準は0.05 mg/L であった。
しかし、2020 年に食品健康影響評価に基づき、基準値が強化され「0.02 mg/L 以下であること」となった 7)。こ電池、顔料、皮なめし、窯業製品の釉薬、木材の防腐剤等に用いられている 6)。環境中に存在するクロムは低濃度であり、その原子価はほとんど三価に限られ、六価クロムが存在している場合は人為起源と考えられる 6)。
ヒトにおいて、クロムは微量必須元素であり、不れに伴い、六価クロム化合物の検査方法として、「フ
レーム－原子吸光光度計による一斉分析法」が廃止された。水質基準が改正されたこと及び前回の大阪
府の外部精度管理から 10 年以上経過したため、今回の対象項目とした。

足するとグルコース、脂質、タンパク質代謝系に障害が生じる 6)。一方、六価クロムは強い酸化力を持
つ不安定な物質であり、有機物を容易に酸化し、自身は三価クロムとなる。その強い酸化力により、皮膚に付着した状態で放置すると、皮膚炎や腫瘍の原因となる。また、DNA への損傷作用を持つため、方 法
1. 参加機関
本研究に参加した水道事業者等は 24 機関であった。その内訳は水道事業者 22 機関、保健所 1 機関
及び公的研究機関 1 機関であった。

六価クロムの発がん性は IARC（国際がん研究機関）
において、グループ 1（ヒトに対して発がん性を示
大阪健康安全基盤研究所生活環境課- 79 -

2. 実施方法(1) 精度管理用試料の調製方法
2021 年 9 月 24 日に精製水約 50 L をポリタンクに採水した。硝酸（1.42）（関東化学、UltrapurTM-100）
を濃度が 1%となるよう添加後、クロム標準液（富

誤差率(%) =(各機関の検査値－「真値」)
「真値」

× 100

（1）

変動係数及び誤差率の許容範囲を 10％とした根
拠は、水質基準項目の測定精度における六価クロム

士 フ イ ル ム 和 光 純 薬 1000 mg/L 、 ロ ッ ト 番 号
KCN1033）を 1000 倍希釈した溶液を 400 mL 添加
し、よく撹拌した。1L のポリエチレン製容器に分注して冷蔵保存し、9 月 29 日に（地独）大阪健康安全基盤研究所上水試験室において各検査実施機
関に配付した。なお、精製水中の六価クロム化合物

化合物の変動係数の目標が 10％であるためである
11)。また z スコアの評価基準として絶対値 3 以上が「不満足」であることから 12)、3 未満を許容範囲とした。なお、変動係数、誤差率及び z スコアについては、検査値を計算過程で丸めずに算出した。

は 0.001 mg/L 未満であった。
(2) 検査方法及び報告方法
検査方法は「水質基準に関する省令の規定に基づき厚生労働大臣が定める方法」（以下、告示法）のフレームレス－原子吸光光度計による一斉分析法（以下、FLAA 法）、誘導結合プラズマ発光分光分

結 果 お よ び 考 察
1. 試料の均一性及び安定性
試料の均一性を確認するため、試料を分注順に等間隔で 5 本抜き取り、試料 1 本につき 2 回測定した。得られた測定結果を基に一元配置分散分析を行析装置による一斉分析法（以下、ICP-AES 法）、誘導結合プラズマ－質量分析装置による一斉分析法（以下、ICP-MS 法）とした 8)。精度管理用試料（以下、試料）については前処理を含めて 5 回の測定を行い、測定結果を有効数字 3 桁で「外部精度管理結果報告書」に記入し、5 つの測定結果の平均値を検った。その結果、p 値は 0.11 で試料間の変動は有意とならず、均一性に問題がないことが確認された。
また、配付日、配付後 1、5、7、15 日目に、試料 1本につき 5 回測定した結果を図 1 に示した。測定
日ごとの平均値の変動係数は 0.45%となり、試料の安定性に問題はないと判断した。

査値とした。また、各検査機関が実施した分析法の分析条件等を「外部精度管理結果報告書」に記入し、検査に使用した機器のデータやチャート等と合わせて提出することとした。各検査実施機関から送付された「外部精度管理結果報告書」を取りまとめた
後、検査結果及び検査方法等に関する評価を実施した。そして、「外れ値」に該当した機関に対してフォローアップ調査を実施した。
(3) 評価の検証方法
はじめに、各機関内で測定された試料の 5 つの測定値の変動係数が 10％を超過した機関は評価対象外とした。
検査結果は「真値」に対する誤差率及び z スコア
で評価を行い、両方の評価方法において許容範囲を超過した検査値を「外れ値」とした。
「真値」は、各機関からの検査値を用いて、有意水準を 5％として Grubbs の棄却検定 9)を行い、棄却された検査値を除いた検査値から平均を求め、これを「真値」とした。誤差率は、（1）の式から算出し、±10％以内を許容範囲とした。z スコアは四分位数
法 10)で算出し、z スコアの絶対値 3 未満を許容範囲とした。

図 1 試料の安定性（n=5、平均±標準偏差）2. 分析方法
FLAA 法、ICP-AES 法及び ICP-MS 法を用いた機関はそれぞれ 1 機関、
1 機関及び 22 機関であった。
3. 検査結果の検証(1) 誤差率、z スコア及び「外れ値」
水道事業者等 24 機関から報告された各検査値、変動係数、誤差率及び z スコアを表 1 に、検査値のヒストグラムを図 2 に示した。

- 80 -

表1

検査値の概要

機関番号

検査方法

A‐1＊

ICP-MS

検査値（平均値）(mg/L)
0.00724

変動係数(%)

真値に対する
誤差率
(%)

z スコア

A‐2

ICP-AES0.00800

3.92-13.20

-5.53

0.79

-4.08

A‐3

ICP-MS-1.57

0.00803

1.33

-3.75

A‐4

-1.43

ICP-MS

0.00804

0.87

-3.53

-1.33

A‐5

ICP-MS

0.00807

1.59

-3.22

-1.20

A‐6

ICP-MS

0.00813

0.66

-2.48

-0.88

A‐7

ICP-MS

0.00815

1.84

-2.24

-0.77

A‐8

ICP-MS

0.00817

1.30

-2.00

-0.67

A‐9

ICP-MS

0.00825

0.69

-1.06

-0.26

A‐10

FLAA

0.00825

1.33

-1.01

-0.24

A‐11

ICP-MS

0.00827

0.30

-0.80

-0.15

A‐12

ICP-MS

0.00827

0.36

-0.77

-0.14

A‐13

ICP-MS

0.00833

0.18

-0.15

0.14

A‐14

ICP-MS

0.00833

1.09

-0.10

0.16

A‐15

ICP-MS

0.00833

1.15

-0.10

0.16

A‐16

ICP-MS

0.00833

0.37

-0.06

0.18

A‐17

ICP-MS

0.00835

1.35

0.11

0.25

A‐18

ICP-MS

0.00837

0.65

0.35

0.35

A‐19

ICP-MS

0.00852

1.02

2.18

1.15

A‐20

ICP-MS

0.00853

1.44

2.34

1.22

A‐21

ICP-MS

0.00863

0.66

3.45

1.70

A‐22

ICP-MS

0.00876

0.75

5.08

2.41

A‐23

ICP-MS

0.00881

0.59

5.68

2.67

A‐24

ICP-MS

0.00885

0.96

6.18

2.89

平均値

0.00829

最大値

0.00885

最小値

0.00724

標準偏差0.00033

変動係数(%)

4.0

n

24

真値：0.00834 mg/L＊：真値に対する誤差率が±10%を超え、 z スコアの絶対値が3以上の機関（外れ値）*

図2

検査値の度数分布図（*外れ値）- 81 -

機関内変動係数が 10％を超過した検査値は存在しなかったため（表 1）、すべての検査値を評価対象とした。検査値を有意水準 5%で Grubbs の棄却検定を行った結果、1 機関（A-1）が棄却されたた値となった。また、ガリウムのカウント数は標準溶液においては平均値 33969、変動係数 2.1%、試料においては、平均値 33763、変動係数 0.5%と安定した値であった。

め、23 検査値を平均した 0.00834 mg/L を「真値」とした。
「真値」に対する誤差率の許容範囲を越えたのは 1 機関（A-1）であった。次に、z スコアを求めた結果、z スコアの範囲は-5.53～2.89 となり、許容範囲を超えたのは 1 機関（A-1）であった。
したがって、誤差率及び z スコアの両方の許容範

以上により、機関 A-1 における外れ値の原因として、標準溶液の測定時において、内部標準物質であるガリウムの質量電荷比 71 でのカウント数が何らかの原因により安定しておらず、その値を用いて検量線を作成し、定量したことによるものと考えられた。分析機器については、自らあるいはメーカー囲を超えた「外れ値」に該当する機関は 1 機関で、全体の 4.2％（1/24）となった。
(2) フォローアップ調査「外れ値」となった 1 機関（A-1）に対して原因究
明のフォローアップを行った。機関 A-1 は、検査値
は 0.00724 mg/L、「真値」に対する誤差率は-13.20%、

による保守点検等を行い、その性能が維持されていることを定期的に確認することが必要である。また、測定前及び測定時に内部標準物質のカウント数が安定しているかを確認する、試料測定後に任意の標準溶液を測定し、変動していないか確認する等も、今回のような異常を検出するには有用であると考z スコアは-5.53 であった。提出された資料から、内部標準物質であるガリウムのカウント数が検量線
用標準溶液の測定順に徐々に大きくなり（最小値11316、最大値 18070、変動係数 16.9%）、その後、試料測定時には安定していたことが判明した（最小値 20012、最大値 22100、変動係数 4.2%）
。当該機

えられた。
(3) 全体的な留意点① 検量線及び空試験
告示法では別表に記載された濃度範囲内でブランク試料を含めない 4 段階以上の標準液を用いて検量線を作成するように記載されている 8)。今回参関の ICP-MS における測定では、内部標準物質は複数の元素を混合溶液として、ペリスタリックポンプ
で導入している。前述の現象は、内部標準物質であるインジウムでも見られたが、その他の元素（コバルト、イットリウム、タリウム）は安定していた（変動係数 0.2〜2.2%）。したがって、ガリウムのカウン加したすべての機関は検量点を 4 点以上用いて検量線を作成していた。告示及び妥当性評価ガイドラ
インにおいては原則、検量線の点に 0 mg/L を用いないこととなっているが 8,13)、機関 A-7 では検量線の点に 0 mg/L を用いていた。また、すべての機関は 1 次式を用いて検量線を算出しており、原点強制

ト数の変動は内部標準溶液の導入部の異常によるものとは考えにくかった。次に、ICP-MS の測定においては、内部標準物質は分析元素と質量数が近く、プラズマ中で同様の挙動を示す元素を選択する。そこで、測定元素であるクロムのカウント数を確認したが、ガリウムと同様の挙動は示していなかった。

通過を行った機関は存在せず、決定係数（R2）の範囲は 0.9980～1.0000 であった。
告示法では金属類の一斉分析においては、元素ごとの濃度範囲が提示され、検量線はその範囲を超えてはならないとしている。FLAA 法、ICP-AES 法及び ICP-MS 法の六価クロム化合物の濃度範囲はそ

また絶対検量線を作成し、再計算したところ、0.00767 mg/L となり、外れ値に該当しなかった。したがって、クロムのカウント数は問題ないと考えられた。検査担当者への聞き取りにおいて、外部精度管理以降のメーカーによるメンテナンス実施後は、
上記のような一部の内部標準物質のみ変動する現

れぞれ 0.001〜0.1 mg/L、0.001〜0.1 mg/L 及び 0.0002〜0.1 mg/L で、いずれの方法も上限は 0.1 mg/L であり、この値を超過している機関が 1 機関（A-1）
あった。機関 A-1 においては検量線の濃度範囲が0.0002〜0.2 mg/L で、最低濃度と最高濃度の濃度差
が 1000 倍であった。また、公比も 5～10 倍と妥当

象は確認されていないとのことであった。
そこで、試料を再測定したところ、検査値は0.00822 mg/L（n=5）で、精度管理実施時の真値（0.00834 mg/L）に対する誤差率は-1.44％と良好な性評価ガイドライン 13)が推奨する原則 4 倍以内を超過していた。このような場合、重みづけをしなけ
れば、検量線は高濃度側に引き寄せられ、低濃度側の定量精度が悪くなる恐れがある。したがって、検- 82 -

量線は前述の濃度範囲内で、最低濃度と最高濃度が概ね 100 倍程度までで作成し、広範囲の検量線が必要である場合は、低濃度と高濃度に分けて検量線を作成するのが望ましい。その他の機関では、適切な濃度範囲で検量線の濃度設定が行われていた。また、ては、添加を行う水の種類として、原則として検査を行う水道水等とし、検査対象物質を含まない水道水等を得ることが困難な場合は精製水等を用いてよいとされている。今回の対象物質は、水道水中の常在成分には該当しないため、可能な限り水道水で参加したすべての機関が空試験を実施しており、検量線の下限値以下であることを確認していた。
② 前処理及び標準液告示法では、FLAA 法、ICP-AES 法、ICP-MS 法のいずれの方法でも酸添加後、加熱をすると規定されているが、加熱を実施していない機関が 1 機関行うことが望ましい。

（A-7、ICP-MS 法）あった。A-7 においては、SOPが未整備の状態であり、加熱に関する記載もなかった。金属類の分析においては、対象とする金属によって、酸による加熱分解を行わないと正確に測定できないため、告示法通りに酸添加後の加熱が必要である。A-7 においては SOP を早急に整備する必要

る誤差率±10％以内と z スコア±3 未満を許容範囲とする 2 つの方法で評価を行った。報告された 24 機関の検査値のうち、変動係数が 10％を超えた機関は存在しなかった。
「真値」に対する誤差率±10％を超えたのは 1 機関であった。また、z スコア±3 以上となったのは 1 機関であった。両方法で許容範囲をがある。
告示法では、標準原液、標準液または混合標準液
は原体から自己調製したもの、もしくは計量法（平成 4 年法律第 51 号）第 136 条若しくは第 144 条の規定に基づく証明書又はこれらに相当する証明書が添付され、かつ、告示法の標準原液と同濃度のも超えた検査値を「外れ値」と評価したが、この「外れ値」に該当したのは 1 機関であった。｢外れ値｣の存在率は、4.2%（1/24）であった。
検証の結果、検査精度を向上するためには、以下の留意点が考えられた。
(1) 測定時に、データの確認をすること。

の又は告示法の標準液若しくは混合標準液と同濃度のものの使用が認められている。なお、告示法の標準液若しくは混合標準液と同濃度のものは開封後速やかに使用することとし、開封後保存したものを使用してはならないとされている 8)。
ただし、
ICPAES 法及び ICP-MS 法においては、標準溶液等は冷(2) 告示法に基づいた SOP を作成すること。
(3) 妥当性評価を実施し、SOP の検査精度を確認しておくこと。
(4) 分析機器については、保守点検等を行いその性能を維持すること。
(5) 内部精度管理等を定期的に行い、精度の確認を暗所に保存可能である。今回、すべての機関で認証付きの市販標準原液もしくは混合標準液を使用しており、その開封時期については、すべての機関が1 年未満であり、検量線作成用標準液は 1 機関を除き、用時調製していた。
③ 妥当性評価
水道水質検査における妥当性評価ガイドライン
は、2017 年 10 月に改正され、検量線及び添加試料の評価を行うことが求められている 13)。本調査では機関 A-1 を除くすべての機関で妥当性評価を実施していた。妥当性評価は、検査精度を客観的に評価できる方法であり、検査結果の信頼性に繋がるものであるため、未実施の機関は早急に実施すべきである。
添加試料の評価方法として、4 機関において精製水を用いて評価を行っていた。ガイドラインにおいま と め
2021 年度大阪府水道水質検査外部精度管理として、六価クロム化合物の検査結果を「真値」に対す

行うこと。
謝 辞
本研究は「令和 3 年度大阪府水道水質検査外部精度管理事業」により実施された。研究実施にあたり協力していただいた大阪府健康医療部生活衛生室
環境衛生課の各位に感謝いたします。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1）小泉義彦. 水質検査における外部精度管理- 83 -

https://www.mhlw.go.jp/content/10900000/00107703
5.pdf（2018 年度）－テトラクロロエチレンおよびトリクロロエチレン－. 大阪健康安全基盤研究
所研究年報 2020; 4: 82-92.
2）吉田仁, 中島孝江. 水質検査における外部精度管理（2018 年度）－鉄及びその化合物－. 大阪

12) JIS Q 17043:2011（ISO/IEC 17043:2010）適合性評価−技能試験に対する一般要求事項. 日本規格協会; 2011. 28-33

健康安全基盤研究所研究年報 2020; 4: 93-99.

13）厚生労働省. 「水道水質検査方法の妥当性評
価ガイドラインについて」（平成 24 年 9 月 6 日
付け健水発 0906 第 1~4 号〔最終改正 平成 29
年 10 月 18 日付け薬生水発 1018 第 1~4 号〕）.
https://www.mhlw.go.jp/file/06-Seisakujouhou10900000-Kenkoukyoku/0000181618_2.pdf

3）吉田仁, 安達史恵. 水質検査における外部精度管理（2019 年度）－ナトリウム及びその化合物－. 大阪健康安全基盤研究所研究年報 2021; 5:
59-65.
4）安達史恵, 中島孝江. 水質検査における外部精度管理（2020 年度）－セレン及びその化合物－.
大阪健康安全基盤研究所研究年報 2022; 6: 112118.

WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 12 日に確認した。

5）安達史恵, 中島孝江. 水質検査における外部精度管理（2020 年度）－陰イオン界面活性剤－.
大阪健康安全基盤研究所研究年報 2022; 6: 119128.
6）上水試験方法 解説編 2001 年版. 日本水道協会; 2001. 381-385.
7）厚生労働省. 「厚生労働省大臣官房生活衛生・
食品安全審議官通知、水質基準に関する省令の一部改正等について」（令和 2 年 3 月 30 日付け
生食発 0330 第 1 号）
https://www.mhlw.go.jp/content/10900000/00061568
8.pdf8）厚生労働省. 「水質基準に関する省令の規定に基づき厚生労働大臣が定める方法」（平成 15 年
7 月 22 日付け厚生労働省告示第 261 号〔最終改正 令和 5 年 3 月 24 日厚生労働省告示 85号〕）.
https://www.mhlw.go.jp/content/10900000/00107708
4.pdf9) JIS Z8402-2. 測定方法及び測定結果の精確さ（真度及び精度）-第 2 部: 標準測定方法の併行
精度及び再現精度を求めるための基本的方法.
日本規格協会; 1999. 7-27.
10)藤井賢三. 試験所認定制度における技能試験（1）. 環境と測定技術 2000; 27(2): 51-56.
11)厚生労働省. 「水質基準に関する省令の制定及び水道法施行規則の一部改正等並びに水道水質管理における留意事項について」 水質基準項
目の測定精度（平成 15 年 10 月 10 日健水発第1010001 号〔最終改正 令和 5 年 3 月 31 日〕）
厚生労働省健康局水道課長通知 別添 5.

- 84 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

External quality control for the analytical method for the measurement of chromium (VI) in tap water,

performed in 2021 in Osaka Prefecture

Fumie ADACHI and Jin YOSHIDA

To improve the accuracy of water quality measurements, we implemented an external quality control for analyticalmethods for the measurement of chromium (VI) in tap water with water supply utilities, public health centers, andpublic research institutes in Osaka Prefecture. As a result, one out of 24 examination values was evaluated as an
outlier. Therefore, we executed follow-up surveys for this utility. The results showed that the measured values wereaffected because the measurements were started before the equipment was stabilized.

Key words：tap water, chromium(VI), tap water quality test, quantitative accuracy, external quality control

Osaka Institute of Public Health- 85 -

報

文

地方独立行政法人大阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 86-93 (2023)

大阪府における環境および食品中放射能調査（令和 4 年度報告）小池真生子，小泉義彦，肥塚利江，大山正幸，山口進康

令和 4 年度の原子力規制庁委託により実施した、大阪府における環境および各種食品中放射能調査結果を報告する。調査は、降水中の全ベータ放射能測定、環境試料（降下物、大気浮遊じん、上水、海水、土壌、
海底土）および食品試料（タマネギ、キャベツ）中のガンマ線核種分析および空間放射線量率（モニタリン
グポスト）について実施した。その結果、令和 4 年度の環境および各種食品中の放射能および放射線のレベルは、過去の値と同様であり、人工放射性物質の環境への新たな放出はなかったことが確認された。

キーワード：環境放射能、全ベータ放射能、ガンマ線核種分析、空間放射線量率

大阪健康安全基盤研究所（当所）では、昭和 35 年
（1960 年）度より大阪府における環境および食品中の放射能測定調査を実施している。この調査は、
人工放射性降下物および原子力施設等からの放射性物質の漏洩による環境汚染の有無およびそのレベルを明らかにする目的で行っており、原子力規制庁の委託によるものである。
降水については全ベータ放射能測定、その他の環
境試料および食品試料についてはガンマ線核種分設された。モニタリングポストの移設（地上 1 m から地上 39 m の場所）に伴い、原子力規制庁の指示により毎月第 2 週の水曜日にサーベイメータによる地上 1 m の高さにおける空間放射線量率調査を開始した。

析［セシウム 134（134Cs）、セシウム 137（137Cs）、
131
40
ヨウ素 131（ I）、カリウム 40（ K）等］を行い、モニタリングポストによる空間放射線量率の調査を行った。
ガンマ線核種分析に関しては、測定値の信頼性確保のため、（公財）日本分析センターとの間で、既知量の放射性核種を添加した試料 5 検体について、精度管理（標準試料法による分析比較）を行った。
本報告では、令和 4 年度に実施した上記の放射能調査結果を、過去の測定結果との比較も含め報告する。なお、当所は令和 4 年 12 月に北隣に移転した（以下、移転前を旧研究所、移転後を新研究所と表記）。
移転により、定時降水（11/25 までは旧研究所、
12/9 以降は新研究所、2 回欠測）
、大気浮遊じん（11月までは旧研究所、12 月以降は新研究所）、降下物（11 月分は 11/25 までは旧研究所で採取、12 月分
は 12/9 より新研究所で採取）の採取用具および大阪市モニタリングポストの設備は、表 1 の場所に移
大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

準調査委託実施計画書（令和 4 年度）」1)に基づいて行った。表 1 に調査項目および試料等を示す。

実 験 方 法
試料の採取、処理および測定は、「環境放射能水1. 全ベータ放射能測定(1) 降水試料
旧研究所本館南側屋上（地上約 15 m）（移転後：
新研究所南館屋上（地上約 39 m））に設置したデポ
ジットゲージ（表面積 1000 cm2）で降水を集めた。
毎朝 9 時 30 分に採取し、100 mL（1 mm）以上の降水があった場合には 100 mL を測定試料とした。
(2) 測定方法
蒸発皿に試料 100 mL とヨウ素担体（1 mg I-/mL）
1 mL、0.1 mol/L 硝酸銀 1 mL および 10%硝酸 1 mLを加えて加熱濃縮させた。濃縮物を直径 25 mm のステンレス製試料皿に移して蒸発乾固させ、測定用試料とした。測定は低バックグラウンド放射能自動測定装置（日立製作所製 LBC450）で行った。比較
試料は、酸化ウラン（U3O8：日本アイソトープ協会- 86 -

表 1 放射能調査項目および試料等
調査項目
全ベータ放射能
ガンマ線核種分析

試 料 名
定時降水

採 取 場 所

採取回数等

件数

降 水

大阪市東成区 旧研究所本館南側屋上（移転後：新研究所南館屋上）

降水毎

81*

大阪市東成区 旧研究所本館北側駐車場（移転後：新研究所南館屋上）

3ヶ月毎

4

大気浮遊じん
降下物

雨水・ちり

上 水

原 水
蛇口水
表面水
表 層
0～5cm
5～20cm

海 水
海底土
土 壌
野 菜
分析比較試料（標準試料法）

空間線量率

種 別

大阪市東成区 旧研究所本館南側屋上（移転後：新研究所南館屋上）

毎月12

年1回(令和4年6月)
年1回(令和4年6月)
年1回(令和4年7月)
年1回(令和4年7月)
年1回(令和4年7月)
年1回(令和4年7月)
年1回(令和4年6月)
年1回(令和4年12月)
年1回(令和4年7月)
年1回(令和4年8月)
年1回(令和4年8月)

1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
2

大阪市東成区 旧研究所本館北側駐車場（移転後：新研究所南館屋上）

毎日／年間

365

茨木市大住町 茨木保健所
寝屋川市八坂町 寝屋川保健所

毎日／年間
毎日／年間

365
365

東大阪市西岩田東大阪市環境衛生検査センター

毎日／年間

365

毎日／年間
毎日／年間

365
365

毎月（令和5年1月～）

3守口市大庭町 大阪府庭窪浄水場
大阪市東成区 旧研究所本館1Ｆ

タマネギ(生産地)
キャベツ(生産地)
模擬牛乳
模擬土壌
粉末試料

モニタリングポスト

大阪港入口
大阪港入口
大阪市中央区 大阪城公園内
大阪市中央区 大阪城公園内
大阪府泉南郡熊取町
大阪府泉南郡熊取町（公財）日本分析センターで調製（公財）日本分析センターで調製（公財）日本分析センターで調製

富田林市寿町 富田林保健所
泉佐野市羽倉崎 市立佐野中学校
大阪市東成区 新研究所南館東北側
アスファルトモニタリング強化
サーベイメータ（福島第1原発事故）* 移転により、2回欠測

製、35.3 dps）を用いた。測定は試料採取から 6 時
間後に行った。測定時間は、比較試料 5 分、降水試
料 30 分とした。
2. ガンマ線核種分析(1) 測定試料① 大気浮遊じん：旧研究所本館北側駐車場（11 月まで）（移転後：新研究所南館屋上（12 月以降））に設置したハイボリウム・エアサンプラー（柴田科学
株式会社製、HV-1000R）を用いて、ろ紙（東洋濾紙、
HE-40T）上に大気浮遊じんを捕集した。毎月 3 回、午前 10 時から翌日の午前 10 時までの 24 時間捕集を行った。3 ヶ月分のろ紙試料（測定に供した吸引
量：約 10000 m3）をカッターで円形（直径 50 mm）③ 上水：原水（淀川河川水）は大阪広域水道企業団 庭窪浄水場（守口市）原水取水口から、蛇口水は旧研究所本館 1 階の実験室内蛇口から採取した。
採取試料各 100 L を、ステンレスビーカーと電磁調理器を用いて蒸発濃縮させた。濃縮物を蒸発皿に移して蒸発乾固させた後、残留物をそれぞれ U-8 容器に移し、測定用試料とした（時期および測定数は
表 1 を参照）。
④ 食品：野菜類（タマネギおよびキャベツ）の食用部約 4 kg を 65℃の乾燥器（Panasonic 社製、MOV212-PJ）で乾燥させた後に、石英製容器に移して電気マッフル炉（ADVANTEC 社製、FUW263PA）で450℃、24 時間灰化した。それぞれの灰試料を 0.35mm メッシュのふるいに通し、U-8 容器に移して測に切り取り、ポリプロピレン製容器（U-8 容器）に詰め、測定用試料とした。
② 降下物（雨水・ちり）：旧研究所本館南側屋上（地上約 15 m）
（移転後：新研究所南館屋上（地上約 39m））に設置した水盤（表面積 5000 cm2）に降下した雨水およびちりを 1 ヶ月間採取し、採取した試料を、ポンプを用いてステンレスビーカー（EBM 製
モリブデンジⅡ）に入れ、電磁調理器（Panasonic 社
製 KZ-PH5P）で加熱しながら全量を蒸発濃縮させた。濃縮物を蒸発皿に移して蒸発乾固させた後、残留物を U-8 容器に移し、測定用試料とした。

定用試料とした（試料採取場所、時期および測定数
は表 1 を参照）。
⑤ 海水、土壌、海底土：海水は 2 L をマリネリ容器（2 L 容）に入れ、測定用試料とした。土壌および海底土は、採取後に 105℃の乾燥器で乾燥させた後、2 mm メッシュのふるいに通して得られた乾燥
細土約 100 g を U-8 容器に入れ、測定用試料とした（試料採取場所、時期および測定数は表 1 を参照）。
⑥精度管理用分析比較試料：（公財）日本分析セン
ターが調製した分析比較試料である「模擬牛乳」（131I、137Cs および 40K を添加したイオン交換水）、- 87 -

「模擬土壌」（ガンマ線放出核種を添加したアルミナ）および「粉末試料」（環境試料をもとに調製した固体試料）について、「模擬牛乳」（1 試料）はマ
リネリ容器（2 L 容）に容器の標線まで入れ、模擬土壌（U-8 容器：2 試料）は U-8 容器のまま、「粉末
試料」（2 試料）は U-8 容器に入れ測定を行った。
測定結果については、（公財）日本分析センター
において付与値と比較し評価を行った。評価は、当所（分析機関）の分析値と付与値およびそれらの拡
張不確かさ（U）から En 数を算出し、|En|≦1 を満足とした。なお、En 数は下記の式により求められる。
（分析値分析機関－付与値）
En 数＝
U 2 分析機関＋U 2 付与値(2) 測定方法
あらかじめエネルギーの異なる核種を含んだ標準線源を用いてエネルギー校正および検出効率校正を行ったゲルマニウム半導体検出器（キャンベラ
製、GC2018）を用い、試料中の核種より放出されるガンマ線量を測定した。測定時間は 80000 秒とした。得られた計測結果をバックグラウンド補正した
後、エネルギー補正および検出効率補正を行い、測定試料中の核種（134Cs、137Cs、131I および 40K 等）の定性定量分析を行った。

定が原子力規制庁の指示により開始された。旧研究所は当時地上 20 m の場所にモニタリングポストが設置されていたが、平成 31 年に地上 1 m の場所に移設したことにより、サーベイメータによる測定値の原子力規制庁への報告義務がなくなったため、平成 31 年 2 月をもって終了していた（平成 23 年 6 月
13 日～12 月 17 日：毎日、平成 24 年 1 月～平成 31
年 2 月：毎月第 2 週の水曜日）。しかし、この度の移転により、モニタリングポストが新研究所の屋上（地上 39 m）に移設されたため、原子力規制庁の指示によりサーベイメータによる 1 m 高さでの測定を今年の 1 月より再開した。毎月第 2 週の水曜
日の午前 10 時に新研究所南館東北側地上 1 m の高さにおいてサーベイメータ（NaI シンチレ－ション
式、アロカ製 TCS-171B 型）で空間放射線量率を測定した。測定は、「環境放射能水準調査委託実施計
画書（平成 20 年 7 月）
」3)に準じて行った。測定器の時定数を 30 秒とし、地表 1 m の高さにおけるサーベイメータの指示値を 30 秒間隔で 5 回以上読み取り、平均値を算出した。但し、原子力規制庁の指示により上記計画書で加えることとなっている宇宙線による線量率 30 nGy/h は、加えていない。
結 果 お よ び 考 察
1. 全ベータ放射能

3. 空間放射線量率測定
モニタリングポスト（NaI シンチレーション式、
エネルギー補償型、アロカ製 MAR-22 型）による空間放射線量率の測定は、大阪市（当所）、茨木市、寝屋川市、東大阪市、富田林市、泉佐野市に設置した 6 基（地上 1m、但し、大阪市（当所）は 2022/12/13～地上 39 m）で連続測定を行った（設置場所は表 1
を参照）。結果は 1 時間平均値による 1 日の変動をメモリーカードから読み取った。
モニタリングポスト 6 基の測定結果は、自動測定・配信システムにより 10 分間の平均値が原子力規制委員会のホームページにリアルタイムで公表されている 2)。

表 2 に降水中の全ベータ放射能測定結果を示す。
降水中の全ベータ放射能は、81 試料中 24 例から検出されたが、異常値は検出されなかった。

4. 福島第 1 原子力発電所の事故によるモニタリン
グ強化
平成 23 年 3 月の福島第 1 原子力発電所の事故を受け、モニタリングポストが地上 1 m 以内の場合、サーベイメータによる地上 1 m の空間放射線量測- 88 -

表 2 降水中全ベータ放射能測定結課
年 月

降水量

件数

濃度

月間降下量

mm

（検出数）

Bq/L

MBq/km2

令和4年

4月

85

6 (1)

ND～0.35

2.4

令和4年

5月

117

7 (2)

ND～1.54

11.51

令和4年

6月

100

7 (0)

ND

ND

令和4年

7月

141

11 (2)

ND～0.32

9.2

令和4年

8月

90

10 (3)

ND～0.62

4.2

令和4年

9月

191

9 (2)

ND～0.44

6.0

令和4年

10月

103

7 (5)

ND～0.55

11.8
ND

令和4年

11月

81

5 (0)

ND

令和4年

12月＊

20

3 (0)

ND

ND

令和5年

1月

41

4 (2)

ND～0.95

3.23

令和5年

2月

31

5 (3)

ND～0.72

6.94

令和5年

3月

68

7 (4)

ND～1.229.3

1068

81 (24)ND～1.5464.6

平成31年度

1270

78 (18)ND～0.9169.3

令和 2年度

1581

76 (17)ND～1.2676.6

令和 3年度1872

84 (15)ND～1.01

63.1

令和4年度
過去3年間の値

ND：計数値がその計数誤差の3倍を下回るもの* 移転により、2回欠測

表 3 環境および食品試料中の 134Cs、137Cs、131I および 40K 濃度
試料

採取年月日

単位

134

Cs

137

Cs

131

I

40

K

大気浮遊じん
4月～6月 R4.4.4～R4.6.21

mBq/m3

ND

ND

ND

ND

7月～9月 R4.7.6～R4.9.21

〃

ND

ND

ND

ND

10月～12月 R4.10.3～R4.12.24

〃

ND

ND

ND

ND

1月～3月 R5.1.5～R5.3.16

〃

ND

ND

ND

0.14±0.033

mBq/m3ND

ND

ND

ND～0.14

3

ND

ND

ND

ND～0.13

令和4年

令和5年
令和4年度

mBq/m

過去3年間の値
降下物
令和4年

令和5年

4月

R4.3.31～R4.4.28

MBq/km2

ND

ND

ND

0.57±0.19

5月

R4.4.28～R4.6.1

〃

ND

ND

ND

0.99±0.20

6月

R4.6.1～R4.7.1

〃

ND

ND

ND

ND

7月

R4.7.1～R4.8.1

〃

ND

ND

ND

0.60±0.19

8月

R4.8.1～R4.8.31

〃

ND

ND

ND

ND
0.94±0.19

9月

R4.8.31～R4.9.30

〃

ND

ND

ND

10月

R4.9.30～R4.10.28

〃

ND

ND

ND

1.5±0.22

11月

R4.10.28～R4.11.25

〃

ND

ND

ND

0.72±0.17

12月

R4.12.9～R5.1.4

〃

ND

ND

ND

0.79±0.17

1月

R5.1.4～R5.1.31

〃

ND

ND

ND

ND

ND

ND

ND

0.60±0.17

2月

R5.1.31～R5.3.1〃

3月

R5.3.1～R5.3.31

〃

令和4年度

ND

ND

ND

0.57±0.16

MBq/km

2

ND

ND

ND

ND～1.5MBq/km2

ND～1.4

ND

ND

ND

mBq/L

ND

ND

4.0±0.1779±2.5

mBq/L

ND

ND

0.77～2.2

63～79

mBq/L

ND

ND

0.76±0.17

86±2.6

mBq/L

ND

ND

ND～0.68

82～94

Bq/L

ND

ND

ND

6.0±0.40

Bq/L

ND

ND

ND

4.1～6.0

Bq/kg dry

ND

1.4±0.21ND

610±11

Bq/kg dryND

1.5～2.5

ND

610～650

Bq/kg dry

ND

1.2±0.22ND

670±110～5cm層2(MBq/km )(ND)(59±11)(ND)(32000±510)

過去3年間の値

Bq/kg dryND

ND～1.1ND

610～680

2(ND)(ND～58)(ND)(27000～35000)

Bq/kg dry

ND

0.64±0.15

ND

720±112(ND)(100±24)(ND)(120000±1700)

過去3年間の値
上水・原水

R4.6.6

過去3年間の値
上水・蛇口水R4.6.15

過去3年間の値
海水R4.7.6

過去3年間の値
海底土R4.7.6

過去3年間の値
R4.7.13土壌(MBq/km )R4.7.13土壌
5～20cm層(MBq/km )過去3年間の値
農産物

タマネギ

R4.6.8

過去3年間の値
農産物

キャベツ

R4.12.9

過去3年間の値

Bq/kg dryND

ND～0.9ND

660～703(MBq/km2)(ND)(ND～150)(ND)(96000～120000）

Bq/kg生ND

ND

ND

54±0.38

Bq/kg生

ND

ND

ND

42～53

Bq/kg生ND

ND

ND

68±0.45

Bq/kg生

ND

ND

ND

63～68

ND : 計数値がその計数誤差の3倍を下回るもの- 89 -

表 4 モニタリングポストによる空間放射線量率
表4-2 茨木市 茨木保健所：地上1 m

表4-1 大阪市 大阪健康安全基盤研究所： 地上 1 m（～12/12）
地上39 m（12/13～）

測 定 年 月
令和 4年

4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月

12月(移設前)12月(移設後)
1月
令和 5年
2月
3月
令和 4年度

移設前(地上 1m)
移設後(地上 39m)

過去3年間の値
平成31年度
令和 2年度
令和 3年度

測定回
数

30
31
30
31
31
30
31
30
12
19
31
28
31
256
109
366
355*
365

モニタリングポスト(nGy/h)（所在地：大阪市）
最高値 最低値 平均値
76
62
64
83
62
64
79
62
64
81
62
64
85
63
65
87
63
65
92
63
66
80
62
66
72
61
65
70
61
62
70
61
62
79
61
62
74
61
62
92
61
65
79
61
62
104
105
100

62
61
61

71
66
64

測 定 年 月
4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月
12月
1月
令和 5年
2月
3月
令和 4年度
過去3年間の値
平成31年度
令和 2年度
令和 3年度

令和 4年

測定回
数

30
31
30
31
31
30
31
30
31
31
28
31
365
366
363*
365

モニタリングポスト(nGy/h)（所在地：茨木市）
最高値 最低値 平均値
70
53
56
67
53
56
68
53
56
76
53
55
78
53
56
71
54
56
73
54
57
72
54
57
64
53
55
65
54
55
72
53
55
71
53
55
78
53
56
77
84
82

52
52
52

57
56
55

* :令和 3年 1月機器更新のため欠測* :令和 3年 1月機器更新のため欠測

表4-3 寝屋川市 寝屋川市保健所：地上1 m
測 定 年 月
4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月
12月
1月
令和 5年
2月
3月
令和 4年度
過去3年間の値
平成31年度
令和 2年度
令和 3年度

令和 4年

表4-4 東大阪市 東大阪市環境衛生検査センター：地上1 m

モニタリングポスト(nGy/h)
測定回（所在地：寝屋川市）
数
最高値 最低値 平均値
30
79
63
65
31
85
64
65
30
78
63
65
31
91
63
65
31
76
63
65
30
95
63
65
31
90
64
66
30
83
63
66
31
77
64
65
31
74
64
65
28
84
64
65
31
80
63
65
365
95
63
65
366
361*
365

90
102
94

62
63
63

67
66
65

* :令和 3年 1月機器更新のため欠測

測 定 年 月
4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月
12月
1月
令和 5年
2月
3月
令和 4年度
過去3年間の値
平成31年度
令和 2年度
令和 3年度

令和 4年

4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月
12月
1月
令和 5年
2月
3月
令和 4年度
過去3年間の値
平成31年度
令和 2年度
令和 3年度

令和 4年

85
91
83

366
356*
365

105
115
112

73
73
73

77
77
77

表4-6 泉佐野市 佐野中学校：地上1 m

モニタリングポスト(nGy/h)
測定回（所在地：富田林市）
数
最高値 最低値 平均値
30
67
58
60
31
70
58
60
30
66
58
60
31
65
58
60
31
71
58
60
30
79
58
59
31
77
58
60
30
70
58
60
31
73
58
60
31
68
59
60
28
74
59
60
31
71
58
60
365
79
58
60
366
359*
365

30
31
30
31
31
30
31
30
31
31
28
31
365

モニタリングポスト(nGy/h)（所在地：東大阪市）
最高値 最低値 平均値
87
74
77
95
74
77
90
74
77
94
74
76
108
75
77
109
75
77
105
75
77
93
75
77
91
75
77
85
75
77
94
74
77
93
75
77
109
74
77

* :令和 3年 1月機器更新のため欠測

表4-5 富田林市 富田林保健所：地上1 m
測 定 年 月

測定回
数

60
59
58

62
62
60

* :令和 3年 1月機器更新のため欠測

測 定 年 月
4月
5月
6月
7月
8月
9月
10月
11月
12月
1月
令和 5年
2月
3月
令和 4年度
過去3年間の値
平成31年度
令和 2年度
令和 3年度

令和 4年

測定回
数

30
31
30
31
31
30
31
30
31
31
28
31
365
366
362*
365

モニタリングポスト(nGy/h)（所在地：泉佐野市）
最高値 最低値 平均値
64
48
50
74
48
50
68
47
49
65
48
50
75
49
51
89
48
50
78
48
50
71
48
51
71
48
50
80
48
50
71
48
50
73
48
50
89
47
50
77
98
96

* :令和 3年 1月機器更新のため欠測- 90 -

48
48
47

51
51
50

2. 核種分析
環境試料および食品試料中の 134Cs、137Cs、131I お
よび 40K の分析結果を表 3 に示す。
(1) 134Cs および 137Cs：今年度も例年同様、137Cs が土壌および海底土の各試料から検出されたが、そのレベルは過去の値と同程度であった。その他の試料では例年同様 137Cs の検出はなかった。134Cs は、例
年同様どの試料からも検出されなかった。
(2) 131Ｉ：131Ｉは、上水原水および蛇口水試料から微量（4.0 および 0.76 mBq/L）検出された。他の環
境試料および食品試料からは検出されなかった。上水中の 131Ｉについては、原水が平成元年度から、蛇口水が平成 2 年度から検出されており、そのレベルも過去の値（原水：ND ～ 4.9、蛇口水：ND ～ 1.4

3）が 63～95 nGy/h、東大阪市（表 4-4）が 74～109
nGy/h、富田林市（表 4-5）が 58～79 nGy/h、泉佐野
市（表 4-6）が 47～89 nGy/h の範囲であった。すべての地点で、最高値および平均値は、過去 3 年間に観測した値の範囲内もしくは範囲に近い値であった。

mBq/L）4)と同程度であることや他の環境試料等から検出されていないこと、半減期が 8 日と短いことなどから、既報 5)に述べたように、その起源は医学利用によるものであろうと推定される。
上水中に存在する 131Iによる府民への健康影響については、既報 5)でも論じたように、そのレベルは飲食物摂取制限の基準 6)（飲料水中の放射性ヨウ素：300 Bq/kg）の 10 万分の 1 程度の低値であり、問題はないと考えられる。
(3) 40K：天然放射性核種である 40K は多くの試料で検出されたが、そのレベルは過去の値と同程度であり、特に異常値は認められなかった。

である 61～92 nGy/h の範囲内であった。

(4) 環境試料の放射能測定における精度管理：（公7)財）日本分析センターの報告書 によると、当所の分析結果は付与値とよく一致しており、かつ、En 数の絶対値も「1」以下であることから、ガンマ線核種分析の精度は確保されていることが認められた。
3. 空間放射線量率
モニタリングポストによる空間放射線量率調査
結果（1 時間平均値に基づく変動範囲を 1 月毎にまとめたもの）を表 4-1 から表 4-6 に示す。
令和 4 年度の大阪市の空間放射線量率値（表 41）の 1 時間平均値は、移転前が 61～92 nGy/h、移転後が 61～79 nGy/h の範囲であった。移転によりモニタリングポストの設置場所が当所敷地内の地
上 1 m の場所から地上 39 m の場所に変更になり、月平均値が 64～66 nGy/h から 62 nGy/h となった。
また、表 4-2 から表 4-6 に示したその他の地上 1m に設置されている5ヶ所の空間放射線量率値は、
茨木市（表 4-2）が 53～78 nGy/h、寝屋川市（表 4-

4. 福島第 1 原子力発電所の事故によるモニタリン
グ強化
新研究所南館東北側地上 1 m の高さで行ったサーベイメータによる空間放射線量率の測定結果を
表 5 に示す。新研究所南館東北側アスファルトでの値は、測定期間中 68～77 nGy/h の範囲であり、今年の地上 1 m におけるモニタリングポストの値

表 5 サーベイメータによる空間放射線量率
測定年月

サーベイメータ（nGy/h）

測定回数
令和5年
1月
1
2月
1
3月
1
令和4年度
3

測定値
74
77
68
68～ 77（平均：73）（地上 1 m、新研究所南館東北側アスファルト）

ま と め
ガンマ線核種分析により人工放射性核種である
I および 137Cs が検出された。医学利用等に由来すると考えられる 131I は上水（原水および蛇口水）に極低レベルで検出された。137Cs は土壌や海底土から例年同様検出されたが、そのレベルは低値であった。また、他の人工放射性核種はいずれの試料からも検出されなかった。空間放射線量率は、大阪市のモニタリングポストにおいて、移設に伴い、僅かに測定値の低下が継続して認められた。また、すべてのモニタリングポストで、観測値は過去 3 年間に観測した値の範囲内であった。福島第 1 原子力発電所事故によるモニタリング強化で実施されたサーベイメータによる空間放射線量率調査結果は、地上
1 m におけるモニタリングポストの値と同様であった。
131- 91 -

謝 辞
本調査の遂行にあたり、調査試料の採取にご協
力いただきました大阪城パークセンター、熊取町
役場、大阪広域水道企業団庭窪浄水場の各機関に感謝致します。また調査実施にあたり、ご指導をいただきました原子力規制庁監視情報課放射線環
境対策室、日本分析センターの皆様に謝意を表します。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。

3) 文部科学省科学技術・学術政策局原子力安全課
防災環境対策室. 環境放射能水準調査委託実施
計画書. 平成 20 年 7 月
4) 肥塚利江, 東恵美子, 足立伸一. 大阪府における環境および食品中放射能調査（平成 25 年度報
告）. 大阪府立公衛研所報 2014; 52: 67-74.
5) 田村幸子, 渡辺功, 布浦雅子. 大阪府における環境および食品中放射能調査 ―平成元年 4 月～
平成 2 年 3 月―. 大阪府立公衛研所報 公衆衛生編 1990; 28: 165-170.
6) 原子力規制委員会. 原子力災害対策指針（平成24 年 10 月 31 日制定, 令和 4 年 7 月 6 日一部改正）7) 公益財団法人日本分析センター. 令和 4 年度原

文 献1) 原子力規制庁. 監視情報課放射線環境対策室.
環境放射能水準調査委託実施計画書. 令和 4 年
度.
2) 原子力規制委員会. 放射線モニタリング情報共有・公表システム.
https://www.erms.nsr.go.jp/nra-ramis-webg/

子力施設等防災対策等委託費（環境放射能水準
調査（放射能分析））環境試料の放射能測定における精度管理評価結果
WEB サイトの内容は 2023 年 5 月 12 日に確認した。

- 92 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Survey of environmental and food radioactivity in Osaka Prefecture (Fiscal 2022 Report)

Maoko KOIKE, Yoshihiko KOIZUMI, Toshie HIZUKA, Masayuki OHYAMA and Nobuyasu YAMAGUCHI

We investigated the radioactivity of environmental and food samples in Osaka Prefecture with a commission from the
Nuclear Regulatory Agency in the 2022 program year. The gross beta radioactivity in precipitation, air radiation, andgamma ray radiation nuclides in food and environmental samples (e.g., fallout, airborne dust, tap water, sea water, soil,
and sea sediment) were measured. The obtained results suggest that radioactivity levels of the environment and foods inthe 2022 program year were similar to those in the past and no new artificial radionuclides were radiated.

Key words：environmental radioactivity, gross beta activity, radionuclide analysis, environmental gamma activity

Osaka Institute of Public Health- 93 -

報⽂

地⽅独⽴⾏政法⼈⼤阪健康安全基盤研究所研究年報 Ann. Rep. Osaka. Inst. Pub. Health, 7, 94-101 (2023)

大阪府内中核市における公衆浴場等浴槽水のレジオネラ属菌および水質状況調査

枝川亜希子 a，安達史恵 a，小池真生子 a，肥塚利江 a，松島加代 b，土屋 誠 c

大阪府内中核市の公衆浴場等の浴槽水（採暖槽水を含む）102 試料を対象に、レジオネラと宿主アメーバ
等の微生物生息実態と水質状況について調査を行った。また、公衆浴場浴槽水の有機物の指標が令和元年に「KMnO4 消費量」から「TOC または KMnO4 消費量」に変更されたことを受け、KMnO4 消費量と TOCの関係性について検討した。
レジオネラは全試料の 24.5%から検出され、検出菌種は L.pneumophila が優占種であった。
アメーバは 6.9 %から検出され、アメーバ陽性試料からは高率（85.7 %）でレジオネラが検出された。KMnO4 消費量と TOCの結果を比較したところ、遊離塩素濃度 2.0 mg/L 以上は除外した試料で強い相関が見られた。しかし、現在の公衆浴場における浴槽水の KMnO4 消費量の基準値である 25 mg/L に相当する TOC を本研究で得られた回帰式から算出すると 16 mg/L となり、基準値である 8 mg/L と大きく乖離していた。そのため、有機物の基準として TOC を用いると、基準値を超過する試料が増加することが予想された。

キーワード：レジオネラ属菌、自由生活性アメーバ、浴槽水、過マンガン酸カリウム消費量、TOC

日本国内におけるレジオネラ症の患者報告数が摘されていた。そのため、令和元年 9 月 19 日生食
年々増加し、2019 年には過去最多の 2316 例が報告
発 0919 第 8 号生労働省通知により、「公衆浴場におされた 1)。レジオネラ症は感染症法の 4 類に分類さける水質基準等に関する指針」が改正され、有機物
れる呼吸器疾患で、原因菌であるレジオネラ属菌の指標は「有機物（全有機炭素（TOC）の量）（以（以下、レジオネラ）をエアロゾル（水の微粒子）
下、TOC）または KMnO4 消費量」に変更された 3)。
と共に肺に取り込むことにより感染する。レジオネ
大阪府においては、公衆浴場における水質基準にラ症の主な感染源は、浴槽、冷却塔、加湿器などのTOC が導入されたことを受け、大阪府公衆浴場法
人工的に造られた水環境であるが、日本国内では感施行細則を一部改正し、有機物の指標として染源が特定された事例の大部分を浴槽水が占めてKMnO4 消費量を TOC に変更し、令和 2 年 4 月 1いる。近年は大規模な集団感染は起きていないもの
日から施行されている 4)。また大阪府内中核市におの、全国的に浴槽水からのレジオネラ検出報告が続いても、同様の対応がされている 5)。
いている 2)。
本研究では、大阪府内中核市の公衆浴場等の浴槽
水等（採暖槽含む）を対象に、レジオネラと宿主ア
公衆浴場の浴槽水における有機物濃度の指標は、メーバ等の微生物生息実態と水質状況について調長らく過マンガン酸カリウム消費量（以下、KMnO4査を行った。また、有機物の指標が「KMnO4 消費消費量）が用いられてきた。しかし、水中に存在する還元性のある無機物質の影響や、有機物質の形態量」から「TOC または KMnO4 消費量」に変更さ
により消費量が異なること、また、分析者の手技にれたことを受け、新たに基準が導入された TOC のより誤差が生じやすい分析法であることなどが指データを蓄積すると共に、
KMnO4 消費量と TOC のa 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課
b 元寝屋川市保健所保健衛生課（現大阪府富田林保健所衛生課）
c 元枚方市保健所保健衛生課（現大阪府泉佐野保健所生活衛生室）- 94 -

結 果 お よ び 考 察

関係性について検討したので報告する。
調 査 方 法1. 対象施設および試料
大阪府内の 5 中核市（豊中市、枚方市、八尾市、寝屋川市、東大阪市）の公衆浴場等から浴槽水（採暖槽水を含む）102 試料を採取した。調査期間は、
令和元年 10 月～令和 2 年 12 月であった。
2. 検査項目
検査項目は、レジオネラ（培養法）、自由生活性ア
メーバ（以下、アメーバ）、一般細菌、従属栄養細菌、大腸菌群、大腸菌、KMnO4 消費量、TOC、外観、pH、色度、濁度、水温、遊離残留塩素濃度、ATPとした。
3. 検査方法
レジオネラは、レジオネラ症防止指針に記載されているろ過濃縮法を用いた培養法により行った 5)。
レジオネラと判定した分離株は、ラテックス凝集反応（OXID，Legionella Latex Test Kit）
、免疫血清反応（デンカ生研，レジオネラ免疫血清「生研」）により菌種と血清群を決定した。アメーバは、レジオネ
ラ症防止指針に記載されている培養法により行った 6)。試料 50 mL を遠心法により 1 mL に濃縮後、アメーバ用寒天培地 2 枚に塗抹し、培養温度はそれ
ぞれ 30 ℃、
42 ℃で 5～7 日程度培養した。
培養後、プラーク形成を確認したものを陽性と判定し、プラークから分離したアメーバについて顕微鏡観察に
より形態学的同定を行った。アメーバ種名は、Acanthamoeba、Naegleria、Vannella、Hartmannella に
ついてはそれぞれの種名を、これら以外はUnidentified とした。KMnO4 消費量の測定は水道水の水質管理目標設定項目の検査方法、目標 22 の滴定法により行った 7)。TOC の測定は告示法の別表第 30 の全有機炭素計測定法により行った 7)。一般
細菌、従属栄養細菌、大腸菌、大腸菌群、外観、pH、
色度、濁度の検査は、告示法および上水試験方法に記載されている方法により行った 7-9)。水温、遊離残留塩素濃度、ATP は、
採水時に測定した。
ATP は、
ルシパック Pen-AQUA（Kikkoman Biochemifa）を用い、ルミテスター PD-30（Kikkoman Biochemifa）により測定した。

1. レジオネラとアメーバの検出
浴槽水（採暖槽水を含む）102 試料のうち、25 試料（24.5%）からレジオネラを検出した。菌数は 10～520 CFU/100mL であった。菌種は、22 試料がL.pneumophila で、血清群は、SG1、SG6、SG5 の順で多く、2 試料は複数の血清群（SG1、
3 および SG1、5、6）を検出した。3 試料は Legionella spp.であった。アメーバは、7 試料（6.9 %）から検出し、1 試料から Acanthamoeba spp.を検出した（写真 1）。ア
メーバ陽性 7 試料のうち、6 試料（85.7 %）からレ
ジオネラを検出した。レジオネラとアメーバを検出した試料の概要について、表 1 に示す。これまでの浴槽水調査報告では、行政検査では 26.5 %、温泉浴槽を対象とした調査では 28.7 %からレジオネラを検出しており 10, 11)、本調査結果は同等の検出率であった。菌種は、L. pneumophila が優占種として検出された。レジオネラ属菌は 60 菌種以上が正式に命名されているが 12)、レジオネラ症患者の 90%以上
は L. pneumophila によるものである 13)。また、L.
pneumophila の血清群（SG）1～15 のうち、日本における臨床株の多く（80%）は SG 1 に属している
14)。本調査でも L. pneumophila SG1 を多数検出しており、十分な衛生管理や塩素消毒を行わなければ、調査対象施設が感染源となる可能性があると考えられた。浴槽水から検出された Acanthamoeba spp.
は、環境中に広く生息し、レジオネラの主な宿主アメーバとして知られる。しかし、培養至適温度が30 ℃のため、水温が 40 ℃前後の浴槽水からの検出
事例は少ない。本調査で Acanthamoeba spp. が検出された試料の水温は 39 ℃であり、培養至適温度より高温域でも生息していることが示された。その他のアメーバは、顕微鏡観察では形態学的な種の特定には至らなかったが、浴槽水から主に検出されるア
メ ー バ 種 で あ る Naegleria sp. 、 Vannella sp. 、Hartmannella sp. ではないことを確認した。
2. KMnO4 消費量と TOC
浴槽水（採暖槽水を含む）102 試料のうち、KMnO4
消費量が測定不能となった試料が 8 試料あった。
KMnO4 消費量の測定において、硫酸酸性下で過マ
ンガン酸カリウム溶液を加え 5 分煮沸後、当量のシュウ酸ナトリウムを加えた後も脱色しなかった試料を測定不能とした。KMnO4 消費量および TOC- 95 -

写真１ 検出された Acanthamoeba spp.（微分干渉顕微鏡像）
左：栄養体、右：シスト

表 1 レジオネラおよびアメーバを検出した試料
試料
No.

試料種別

レジオネラ菌数(CFU/100mL)

23

レジオネラ菌種

アメーバ

浴槽水

520

L. pneumophila SG3

+

60

浴槽水

250

L. pneumophila SG6

−

90

浴槽水

240

L. pneumophila SG5

−

85

浴槽水

90

L. pneumophila SG1, 3

−

57

採暖槽水

80

L. pneumophila SG5

−

95

浴槽水

50

L. pneumophila SG1, 5, 6+

22

浴槽水・薬湯30

L. pneumophila SG5

−

63

浴槽水

30

L. pneumophila SG2-14

+

72

浴槽水

30

Legionella spp.

−

2

採暖槽水

20

L. pneumophila SG6

−

5

採暖槽水

20

L. pneumophila SG5

−

15

浴槽水

20

L. pneumophila SG1

−

19

浴槽水

20

L. pneumophila SG1

+

31

浴槽水

20

L. pneumophila SG3

−

40

浴槽水

20

L. pneumophila SG6

−

88

採暖槽水

20

L. pneumophila SG6

−

94

浴槽水

20

L. pneumophila SG1

+

27

採暖槽水

10

L. pneumophila SG1

−

28

浴槽水

10

L. pneumophila SG1

−

34

浴槽水

10

L. pneumophila SG6

−

41

採暖槽水

10

L. pneumophila SG5

−

59

浴槽水

10

L. pneumophila SG1

+

86

浴槽水

10

L. pneumophila SG6

−

96

浴槽水

10

Legionella spp.

−

97

浴槽水

10

Legionella spp.

−

20

浴槽水・薬湯<10+

アメーバ種*

Unidentified

Unidentified
Unidentified

Acanthamoeba spp.

Unidentified

Unidentified

Unidentified*Unidentified：Acanthamoeba sp.、Naegleria sp.、 Vannella sp.、Hartmannella sp.以外のアメーバ種の測定に影響を与える物質を含んでいた 13 試料（消毒剤としてイソシアヌル酸等を使用、薬湯など）、さらにいずれかの値が定量下限値未満あるいは測定不能であったデータを除いた 78 試料について、KMnO4 消費量と TOC の関係を図 1 a に示す。
また、先行研究において KMnO4 消費量に及ぼす物- 96 -

質について検討した結果、高濃度の遊離残留塩素が影響を与えている知見を得た 15)。そのため、さらに遊離塩素濃度 2.0 mg/L 以上は除外した 59 試料（図1 b）について、KMnO4 消費量と TOC の関係について示す。これらの相関係数は、図 1 a は 0.59、図 1
b は 0.83 となり、遊離塩素濃度 2.0 mg/L 以上は除外した試料で KMnO4 消費量および TOC に強い相関がみられた。本調査で対象とした浴槽水試料（消毒剤がイソシアヌル酸、薬湯の試料を除く）のうち
KMnO4 消費量の基準である 25 mg/L を超過したものは 1 試料であったのに対し、TOC の基準である
8 mg/L を超過したものは 11 試料であった。本調査で得られた回帰式（図 1b）を用いて、KMnO4 消費量の基準である 25 mg/L に対し TOC を算出した
ところ 16 mg/L となり、現在の基準である 8 mg/Lと大きな差が見られた。また、TOC の値が 16 mg/Lを超過したものは、3 試料であった。公衆浴場の浴槽水等の TOC および KMnO4 消費量の基準超過件数の比較がこれまでに行われ、KMnO4 消費量と比較し、TOC の超過件数が多くなっていることが報告されている 16, 17)。本調査でも同様の結果が得られており、現在の TOC の基準である 8 mg/L は、
KMnO4 消費量の基準値と比較し、やや厳しい基準であると考えられた。そのため、TOC の基準に関しては KMnO4 消費量における基準と乖離を小さくするよう再考の余地があると考えられた。

図 1a KMnO4 消費量および TOC の関係 (n=78)

図 1b KMnO4 消費量および TOC の関係（遊離塩素濃度 2.0 mg/L 以上は除外）(n=59)- 97 -

3. 水質検査結果
採水時の水温は 16～42.5 ℃（平均 37.8℃）、pH 値
は 5.2～10.1（平均 7.7）
、濁度は 0.1 未満～7.2（平均 1.0）、色度は 0.5 未満～39.4（平均 2.5）であった。
浴槽水または採暖槽水で水質基準が定められている項目については、概ね基準値範囲内であった（薬湯は除く）。ATP は 0～7039 RLU （平均 258 RLU）
で、25 RLU 未満は 65 試料、25-80 RLU は 18 試料、80 RLU 以上は 19 試料であった。ATP 値の管理指標として 25 RLU 未満を管理目標値、25-80 RLU
を要注意、80 RLU 以上を要改善と区分している 18)。
これまでの報告 18, 19)では、ATP 値が 25 RLU 未満の検体からのレジオネラ属菌の検出はほとんどな
く、ATP 値がこの範囲内であれば施設の管理が良好と判断することを可能としていたが、本調査でのそれぞれの区分でのレジオネラ陽性率は、25 RLU
未満は 16.9 %（11/65 試料）、25-80 RLU は 33.3 %（6/18 試料）
、80 RLU 以上は 42.1 %（8/19 試料）であった。
ATP は現場で簡便に測定できるため衛生管理での活用を考えていたが、本調査では管理良好と判断される RLU 区分の施設からもレジオネラが検出されたことから、
ATP の値からレジオネラ汚染を予測することは難しいと考えられた。
4. 遊離残留塩素濃度と微生物の関係
レジオネラ、アメーバ、一般細菌、従属栄養細菌、
大腸菌、大腸菌群の検出状況について、遊離残留塩
素濃度別に表 2 に示す。浴槽水の消毒にあたっては、「塩素系薬剤を使用し、浴槽水中の遊離残留塩
素濃度を頻繁に測定して、通常 0.4 mg/L 程度を保ち、かつ、遊離残留塩素濃度は最大 1 mg/L を超えないよう努めること」と定められている。本調査では、遊離残留塩素濃度が 0.4 mg/L 以上確保された試料で、大腸菌、大腸菌群は検出されなかった。また、浴槽水および採暖槽水に従属栄養細菌の水質基準はないが、水道水の水質管理目標設定項目で定められた「2,000 CFU/mL 以下」を参考にしたところ、遊離残留塩素濃度が 0.4 mg/L 以上確保された試料でこの値を超過した試料はなかった。一方、レジオ
ネラは遊離残留塩素濃度が 0.4 mg/L 以上のからも検出された。レジオネラは、実験的には遊離塩素濃度 0.4 mg/L を確保できれば 15 分以内に死滅する
20)。しかし、実際の浴槽や採暖槽では生物膜やアメーバの影響により、十分な消毒効果が得られないことが多い。また、塩素との接触時間が十分でない場
合も消毒効果が得られない。本調査において、遊離残留塩素濃度が 0.4 mg/L 以上の試料で一般細菌 200
CFU/ml を超過した試料があったことから、塩素濃度は確保されているものの、塩素が投入されてからの接触時間が十分ではなく、塩素消毒効果が得られていなかった可能性が考えられた。浴槽や採暖槽では、ヒトが入浴することにより塩素濃度が低下する。
遊離残留塩素濃度を頻繁に測定して常に 0.4 mg/L
程度を保ち、レジオネラやその他の微生物類を抑制することが重要である。
ま と め
大阪府内中核市の浴槽水および採暖槽水を対象にレジオネラ調査を行った結果、24.5 %の試料から検出し、検出菌種は L. pneumophila が優占種であった。また、アメーバは 6.9 %の試料から検出し、Acanthamoeba spp.等を検出した。アメーバ陽性試料
からは高率（85.7 %）でレジオネラが検出された。
KMnO4 消費量と TOC の結果を比較したところ、強い相関が見られた。しかし、現在の公衆浴場における浴槽水の KMnO4 消費量の基準値である 25
mg/L に相当する TOC を回帰式から算出すると 16となり、基準である 8 mg/L と大きく乖離していた。
現在の有機物の基準値である TOC 8 mg/L は、

表 2 遊離残留塩素濃度と微生物の検出状況
遊離残留塩素濃度（mg/L）

陽性試料数
試料数

～ < 0.4
0.4 ～ 1.0
1.0 < ～ 2.0
2.0 < ～
計
1)

2)

10
28
37
27
102

1)

レジオネラ

アメーバ

一般細菌

6
13
5
1
25

4
1
2
0
7

7
1
3
0
11

200 CFU/mL以上、 2000 CFU/mL以上- 98 -

従属栄養
細菌
1
0
0
0
1

2)

大腸菌群

大腸菌

2
0
0
0
2

1
0
0
0
1

KMnO4 消費量の基準値と比較してやや厳しい基準であったと考えられたことから、TOC の基準に関しては KMnO4 消費量における基準と乖離を小さくするよう再考の余地があると考えられた。
遊離残留塩素濃度が 0.4 mg/L 以上確保された試料で、大腸菌、大腸菌群は検出されなかったが、レジオネラは検出された。これらの試料では、一般細菌が 200 CFU/ml を超過した試料があったことから、遊離残留塩素濃度は確保されているものの、塩素が投入されてからの接触時間が十分ではなく、塩素消
毒効果が得られていなかった可能性が考えられた。
謝 辞
本調査は「大阪府内中核市における公衆浴場浴槽
水、遊泳場採暖槽水レジオネラ属菌調査」において実施されたものである。調査にご協力いただいた豊
中市、枚方市、八尾市、寝屋川市、東大阪市の各保健所ならびに関係各位に感謝いたします。
利 益 相 反開示すべき利益相反はない。
文 献1) 国立感染症研究所感染症情報センター. レジ
オネラ症の届出状況 2011 年第 1 週～2021 年
第 35 週. https://www.niid.go.jp/niid/ja/legionellam/legionella-idwrs/10791-legionella20211201.html
2) 枝川亜希子. レジオネラ症の発生事例. 空気調
和・衛生工学誌 2023; 97(9), 625-630.
3) 厚生労働省. 令和元年 9 月 19 日付け生食発
0919 第 8 号公衆浴場における衛生等管理要領
等の改正について.
https://www.mhlw.go.jp/content/11130500/000555
445.pdf
4) 大阪府. 大阪府公衆浴場法施行細則及び大阪
府旅館業法施行細則の一部を改正する規則.
https://www.pref.osaka.lg.jp/attach/1611/00355259/
yokusousui-kensa.pdf.
5) 枚方市. 枚方市公衆浴場法施行細則及び枚方市旅館業法施行細則の一部を改正する規則.
https://www.city.hirakata.osaka.jp/cmsfiles/contents/0000029/29230/022020.pdf
6) 館田一博. 第 4 版レジオネラ症防止指針. 公益財団法人日本建築物衛生管理教育センター;
2017. 32-134.
7) 厚生労働省. 平成 15 年 10 月 10 日健水発第1010001 号（最終改正令和 5 年 3 月 24 日薬生
水発 0324 第 1 号）水質基準に関する省令の制定及び水道法施行規則の一部改正等並びに水道水質管理における留意事項について別添 4
水質管理目標設定項目の検査方法.
https://www.mhlw.go.jp/file/06-Seisakujouhou10900000-Kenkoukyoku/0000055189.pdf
8) 厚生労働省. 平成 15 年告示第 261 号（最終改正令和 5 年 3 月 24 日厚生労働省告示第 85号）水質基準に関する省令の規定に基づき厚生労働大臣が定める方法.
https://www.mhlw.go.jp/content/10900000/001077
084.pdf9) 日本水道協会. 上水試験方法, 2020.
10) 厚生労働省. 入浴施設におけるレジオネラ症防止対策の調査結果.
https://www.mhlw.go.jp/topics/bukyoku/kenkou/leg
ionella/030331-1.html
11) 古畑勝則, 原元宣, 吉田真一, 福山正文. 温泉
水からのレジオネラ属菌の分離状況. 感染症
学雑誌 2004; 78(8): 710-716.
12) Euzeby JP. List of prokaryotic names with standing
in nomenclature—genus Legionella.
https://lpsn.dsmz.de/genus/legionella
13) Yu VL, Plouffe JF, Pastoris MC, Stout JE,
Schousboe M, Widmer A, Summersgill J, File T,
Heath CM, Paterson DL, Chereshsky A.
Distribution of Legionella species and serogroups
isolated by culture in patients with sporadic
community-acquired legionellosis: an international
collaborative survey. J Infect Dis 2002; 186(1):
127–128.
14) Amemura-Maekawa J, Kura F, Helbig JH, Chang
B, Kaneko A, Watanabe Y, Isobe J, Nukina M,
Nakajima H, Kawano K, Tada Y, Watanabe H, theWorking Group for Legionella in Japan.
Characterization of Legionella pneumophila
isolates from patients in Japan according toserogroups, monoclonal antibody subgroups andsequence types. J Med Microbiol 2010; 59(6): 653–

- 99 -

659.
15) 安達史恵，小池真生子，枝川亜希子，足立伸
一. 公衆浴場の浴槽水等における過マンガン
酸カリウム消費量および TOC の関係. 大阪健康安全基盤研究所研究年報 2022; 6: 104-111.
16) 福田彩香, 八木正博, 向井健悟. 公衆浴場水における基準項目の変更及びその影響. 神戸市
環境保健研究所報 2020; 48: 69-70.
17) 大島詔. 公衆浴場等の浴槽水における過マン
ガン酸カリウム消費量と全有機炭素量の関係について. 水環境学会誌 2021; 44(6): 175-178.
18) キッコーマンバイオケミファ. レジオネラ対策でのルミテスターを用いた報告事例.
https://biochemifa.kikkoman.co.jp/kit/atp/article/art
icle_detail_224/
19) 富田隆弘，岸田一則. ジオネラ対策における浴槽水の簡易迅速な検査法（ATP 測定法）の有用性に関する検討. 千葉県衛生研究所年報
2011; 60: 69-74.
20) 藪内英子, 王笠, 矢野郁也, 山吉孝雄, 荒川迪
生. Legionella 属菌に対する塩素の殺菌効果.
感染症学雑誌 1995; 69(2): 151-157.
WEB サイトの内容は 2023 年 6 月 12 日に確認した。

- 100 -

Annual Report of Osaka Institute of Public Health, 7, 2023

Survey of Legionella bacteria and water quality of bath water from public bathhouses in core cities,
Osaka Prefecture, Japan

Akiko EDAGAWAa, Fumie ADACHIa, Maoko KOIKEa, Toshie HIZUKAa, Kayo MATSUSHIMAb
and Makoto TSUCHIYAc

We investigated Legionella and the relation between microbial contamination and water quality in 102 bath water
samples (including warming tank water) from public bathhouses and other facilities in a core city in Osaka
Prefecture. In addition, in the water quality standards for public bathhouses, the “Guidelines for Water Quality
Standards in Public Bathhouses” were revised by the Ministry of Health, Labor and Welfare; the indicator oforganic substances was changed to “total organic carbons (TOC) or potassium permanganate consumption(KMnO4 consumption).” Therefore, we measured both the KMnO4 consumption and TOC in bath water frompublic bathhouses in Osaka and analyzed their relationship.
Legionella was detected in 24.5% of the bath water samples, with L. pneumophila being the predominant species.
Free amoebae were detected in 6.9% of the bath water samples and a high percentage of amoeba-positive samples
was found to be Legionella. The relationship between KMnO4 consumption and TOC in bath water was analyzed
and compared, showing a high correlation. From the equation obtained, the TOC corresponding to 25 mg/L, thecurrent standard value for KMnO4 consumption in public bathhouses, and the experimental value that was foundto be 16 mg/L, was calculated and found to deviate significantly from the standard value of 8 mg/L. Thus, when
TOC is applied as a standard for organic substances, more facilities are expected to exceed this standard. Legionella
was detected in samples with free residual chlorine concentrations of 0.4 mg/L or higher. These samples may nothave had sufficient contact time after chlorine was added because of which the chlorine disinfection effect was notachieved.

Key words：Legionella, Free-living amoebae, bath water samples, KMnO4 consumption, total organic carbons

a Osaka Institute of Public Healthb Osaka Tondabayashi Public Health Center (Formerly of Neyagawa City Public Health Center)c Osaka Izumisano Public Health Center (Formerly of Hirakata City Public Health Center)- 101 -

抄

録

Resurgence of syphilis in 2022 among heterosexual men
and women in Osaka, Japan

The impact of spousal behavior changes on smoking,drinking and physical activity: The longitudinal survey of
middle-aged and elderly persons in Japan

T. UKAIa, K. KAKIMOTOa, T. KAWAHATAb, T.
MIYAMAc, N. IRITANIa, and K. MOTOMURAa

T. UKAIa, T TABUCHIb and H. ISOc

Clinical Microbiology and Infection, 29(3), 396–
397(2023)

Preventive Medicine.164 (2022)
https://doi.org/10.1016/j.ypmed.2022.107293

日本では、
新型コロナウイルスの発生した 2020 年
以降、同じ性感染症であるクラミジア感染症や淋菌目的：配偶者の喫煙・飲酒習慣の変化がその後の本
人の健康行動に与える影響を明らかにする。

感染症報告数は増加した一方、梅毒報告数は減少がみられた。大阪府においては、梅毒は 2020 年の減少の後、2021 年後半から報告数の増加が認められており、2022 年の大阪府の梅毒発生状況と、その詳細を記述し、詳細を解析した。2018 年 1 月から 2022
年 6 月までの大阪府の感染症サーベイランスシステ

研究デザイン：コホート研究（厚生労働省中高年者
縦断調査の第 1 から第 10 回調査データを用いた）
対象： 50-59 歳の同居する夫婦 9714 組
主たる要因：喫煙・飲酒について、前年からの配偶者の健康行動の変化、すなわち不健康習慣の維持(A)、健康習慣維持(B)、健康習慣獲得(C)、不健康習ム（NESID）から情報を抽出した。
大阪府での梅毒報告数は、2019 年 1101 件、2020
年 902 件、2021 年 865 件であったが、2022 年は前半だけで 730 件と著しく増加した。男性（56%）は
25 歳から 60 歳まで幅広く分布し、女性（44％）は大多数が 20 代であった。性的接触歴については、

慣獲得(D) アウトカム指標は 1 年後の本人の健康行動の獲得（禁煙の達成、適量飲酒習慣の獲得）
統計解析方法：ロジスティック回帰分析を用いて配偶者の健康行動の変化を暴露要因として本人が健康行動を獲得する多変量調整オッズ比を算出した。
結果：配偶者が喫煙者のままであった場合(A)を基

男性同性間性的接触歴のある者の報告数は 2022 年も含めこの 3 年間変化がなかったが、男性の異性間性的接触者、および女性異性間性的接触者では、2021 年の第二四半期から 2022 年にかけて著しく梅
毒報告数が増加していた。
この現象から、COVID-19 に対する対策が、異性準として、配偶者が非喫煙者のままであった場合(B)、配偶者が禁煙した場合(C)、配偶者が喫煙を開始した場合(D)の、その後に喫煙者が禁煙を達成す
るオッズ比(95%信頼区間)は、それぞれ男性で1.5(1.2-1.9)、2.1(1.3-3.4)、1.4 (0.7-2.6)、女性で 1.5(1.21.9)、2.9(1.7-4.9)、0.8(0.3-2.0)であった。また配偶者

間性的接触者の性行動には影響を与えたが、同性間性的接触者の性行動には影響がなかった可能性があると考えられた。2021 年からの異性間性的接触者における急な梅毒症例数の増加の原因ははっきりしないが、その前の減少期間に検査をうけていなかった患者のリバウンドや、また、性風俗従事者がコが過剰飲酒を継続した場合(A)を基準として、配偶者が適量飲酒を継続した場合(B)、適量飲酒を獲得した場合(C)、過剰飲酒を開始した場合(D)の、その後に過剰飲酒者が適量飲酒習慣を獲得するオッズ比は、それぞれ男性で 1.6(1.3-1.9)、1.5(1.1-2.0)、
1.3(1.0-1.8)、女性で 1.5(1.2-1.8)、1.5(1.2-1.9)、1.2(1.0-

ロナ禍で店舗にて働くことができなくなり、その結果ソーシャルメディア等を利用して、管理されない
危険な性交渉を行った、といったことが考えられた。

a 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部健康危機管理課

1.6)であった。
結論：生活を共にする夫婦の健康行動は互いに影響する。配偶者が健康的な生活習慣を維持する、もしくは健康的な生活習慣に変えると、配偶者が不健康な生活習慣をもつ場合と比較して、男女とも健康的
な生活習慣を獲得する傾向がみられた。

b 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

a 大阪健康安全基盤研究所健康危機管理課

c 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部疫学解析研究課

b 大阪国際がんセンター

2022 年大阪府での異性間性的接触男性及び女性の梅毒報

c 大阪大学大学院公衆衛生学教室

告数増加について配偶者の健康行動が他方に与える影響- 102 -

抄録

Factors associated with time lag between symptom onset
and reporting in the first epidemic wave of COVID-19 in
Osaka, Japan

Decrease in overdispersed secondary transmission of
COVID-19 over time in Japan
T. MIYAMAa,b, SM. JUNGb,c, and H. NISHIURAb

T. MIYAMA , K. KAKIMOTO , N. IRITANI ,abb

and K. MOTOMURAa,b

Epidemiology and infection, 150, e197 (2022)
https://doi.org/10.1017/S0950268822001789

IJID regions, 4, 53–58 (2022)
新型コロナウイルス感染症の発症から届出までの時間（発症–届出時間）の短縮は、感染拡大抑制に寄与すると考えられている。本解析は、積極的疫学調査により収集された情報を用いて、発症–届出時間に影響する因子を定量的に評価することを目的に実施した。30歳代の報告例の発症–届出時間は、80歳以上に比べ1.13（95％信頼区間1.02、1.25）倍長く、感染経路判明症例の発症–届出時間は経路不明症例に比べ有意に0.84倍（0.81、0.90）短く、重度発生率
地域に居住する報告例は低発生率地域例に比べ発症–届出時間が1.12倍（1.01、1.24）長く、歓楽街滞在歴のある報告例は滞在歴のない報告例に比べ発症–届出時間が1.18倍（1.09、1.29）長かった。医療従事者、免疫不全疾患を有する者は、他と比べ発症–届出時間がそれぞれ0.79倍（0.73、0.85）、0.70倍（0.55、
0.90）短かった。以上より、発症–届出時間の短縮には、積極的疫学調査により新たな感染者をできる限り早期に把握すること（感染経路：時・場所・人の把握）、30歳代の人や歓楽街滞在歴のある人の検査機会を充実させること、発生率の高い地域における新型コロナウイルス感染症（COVID-19）症例は多くの二次感染者を生みだすスーパースプレッダーがいる一方で、誰にも感染させない症例も存在する（つまり、COVID-19の2次感染者数分布のばらつきは大きい）。この性質により、第1・2波において、感染伝播ハイリスク群への集中的な対策と接触者
調査は、COVID-19を効率的に制御できた。しかし、感染伝播性の高い変異株の出現により、これらの対策によるCOVID-19の制御が困難となった。二次感
染者数分布のばらつきは、感染対策の効果に影響するため、これを経時的にモニターすることは重要である。本研究では、日本においてSARS-CoV-2の野生株が流行していた第2波（2020年夏）とAlpha変異株が流行した第4波（2021年春）における二次感染者数
分布のばらつきを解析した。長野県の接触者調査情報を用いて、二次感染者数分布を負の二項分布に適合させ、ばらつきパラメータkを推定した。第4波(k=0.55; 95%CI:0.40–0.79)は、第2波(k=0.36; 95%CI:
0.22–0.65)に比べ二次感染者数分布のばらつきが小さかった。6人以上の二次感染者を生んだ症例の割合は、両期間で変わらなかったが、第4波では、家族

濃厚接触者調査等の疫学調査や検査機会を拡充させ、感染者の早期発見に努めることが重要であることが疫学的に示された。また、医療従事者や死亡リスクの高い基礎疾患保有者は早期に新型コロナウ
イルスの検査を受けられていたことが示唆された。

内感染の割合が高かった。二次感染者数分布のばらつきが小さくなると、ハイリスク群に集中した対策の効果が減弱するため、より幅広い対象への対策が必要であることを示唆した。

a 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部疫学解析研究課

a 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部疫学解析研究課

b 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部健康危機管理課

b 京都大学大学院医学研究科

大阪府における新型コロナウイルス感染症の発症から届

c 北海道大学大学院医学研究院

出までの時間に関連する因子

日本において新型コロナウイルス感染症の二次感染の過分散は時間経過とともに低下した- 103 -

抄

録

Exploring the threshold for the start of respiratorysyncytial virus infection epidemic season using sentinel
surveillance data in Japan

逐次抽出法による畜水産物の筋肉および牛乳中の残留動物用医薬品の LC-MS/MS 一斉分析法
上村聖子 a，先山孝則 b，浅川大地 b，山野哲夫 c

T. MIYAMA , K. KAKIMOTO , N. IRITANI , T.
abb

NISHIOb, T. UKAIa,b, Y. SATSUKIb, Y.
YAMANAKAb, Y. NISHIDAb, A. SHINTANIc,
and K. MOTOMURAa,b

日本食品化学学会誌, 29(3), 146-155 (2022)
畜水産物の生育・飼育現場では、疾病の予防や治療、生産効率の向上を目的として、各種の動物用医薬品（動薬）が用いられている。また、輸入食品の残留動薬にかかる違反事例では、抗生物質や合成抗Frontiers in public health, 3 (11), 1062726 (2023)
https://doi.org/10.3389/fpubh.2023.1062726
RSウイルス感染症流行の季節性には変動が認められ、流行への計画的な備えが困難となっている。
これまでRSウイルス感染症は秋から冬に流行していたが、2017–2019には夏から秋に流行し、2020年は流行が見られず、また2021年は例年に比べ早期に大規模な流行が認められた。流行を早期に探知するため、定点あたり報告数を用いた流行開始の基準値をROC解析により探索した。東京、神奈川、大阪、愛知における基準値は0.41、0.39、0.42、0.24であった。
RSウイルス感染症流行開始の基準値は、RSウイル
ス感染症の治療薬であるモノクローナル抗体の適切な投与計画に貢献するものであるため、重要な指標であると考えられた。

菌剤の検出頻度が高い｡食品衛生法に基づく行政検査においては、使用量や違反事例の多い動薬の重点的な監視と併せて、ポジティブリスト制度への対応
として、より多くの動薬を測定可能な一斉分析法が求められている。
本研究では、効率的な検査体制の構築を目的として、逆相カラムを用いた LC-MS/MS で分析可能な動薬（テトラサイクリン系、ペニシリン系、マクロライド系等の抗生物質およびニューキノロン系、サ
ルファ剤等の合成抗菌剤等）65 物質を対象とし、既存分析法の利点を統合した、有機溶媒系抽出液と水系抽出液を用いた逐次抽出による残留動薬一斉分析法を開発し、妥当性確認を行った。
サケ、エビ、牛の筋肉および牛乳の 4 種類の畜水産物試料を対象とし、有機溶媒系抽出液（アセトニ
トリル-メタノール（1：1））および水系抽出液（0.01
M-EDTA / 0.1 M-クエン酸 / 0.2 M-リン酸水素二ナト
リウム水溶液、pH4.0）を用いて逐次抽出し、得られた抽出液を SPE カラムおよびアセトニトリル/ヘキ
サン分配を用いて精製し、LC-MS/MS で測定した。
その結果、分析対象とした 65 物質のうち、サケでは 58 物質、エビでは 51 物質、牛の筋肉では 63
物質、牛乳では 63 物質について本分析法の妥当性が確認された。本分析法により、テトラサイクリン
系、ペニシリン系およびマクロライド系抗生物質を含む幅広い動薬の効率的な一斉分析が可能となった。

a 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部疫学解析研究課

a 大阪健康安全基盤研究所企画部信頼性保証室b 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部健康危機管理課

b 大阪市立環境科学研究センター

c 大阪公立大学大学院医学研究科

c 大阪健康安全基盤研究所総務部

日本における RSV 感染症の流行期開始基準値の探索

LC-MS/MS method for simultaneous determination ofveterinary drugs in muscle of animal and fishery products andmilk using sequential extraction- 104 -

抄録

Rapid detection and discrimination of potentiallytoxigenic Corynebacterium ulcerans andCorynebacterium pseudotuberculosis by multiplex
real-time PCR and amplicon melting curve analysis

Comparative whole-genome sequence analysis of a
BoNT/B5-producing Clostridium botulinum isolate
from an infant botulism case of unknown source inOsaka, Japan

J. KAWASEa, T. SAKAIb, M. IWAKIc, K. UMEDAd,
A. FUKUMAa, N. FUJISAWAa, Y. KAWAKAMIa,
H. HAYASHIa and M. WADAa

K. UMEDAa, Y. HIRAIa, H. NAKAMURAa
and K. AMOb
FEMS Microbiology Letters, 369(1), fnac069 (2022)
https://doi.org/10.1093/femsle/fnac069

Journal of Microbiological Methods, 195, 106454 (2022)
https://doi.org/10.1016/j.mimet.2022.106454
ジ フ テ リ ア 毒 素 を 産 生 す る Corynebacterium
ulcerans による感染症は、主に犬や猫との接触によって感染し、重篤な呼吸器症状や皮膚病変を引き起こす。過去には国内でも死亡症例が報告され、近年注目されている動物由来感染症である。また、一部

乳児ボツリヌス症は 1 歳未満の乳児がボツリヌス
芽胞を経口的に摂取後、腸管内で発芽増殖し、産生された神経毒素を吸収することにより発症する麻痺性疾患である。大阪市で発生した、ハチミツの摂取歴がなく、感染源が特定されなかった B 型乳児ボツリヌス症例分離菌の全ゲノム解析結果についての Corynebacterium pseudotuberculosis もジフテリア
毒素を産生し、類似した症状を引き起こす。
C. ulcerans 感染患者の治療や原因究明を行うため、菌種同定と毒素遺伝子の検出は重要である。本研究で は 、 DT 遺 伝 子 の 検 出と 、 C. ulcerans と C.
pseudotuberculosis の識別が可能な Multiplex リアル

報告する。
全ゲノム配列から、MLST 型は新規の ST(ST133)であり、毒素サブタイプは B5 であった。毒素遺伝子は約 274 kbp のプラスミド上にコードされ、水平伝播によりプラスミドを獲得したと考えられた。
全ゲノム SNP 解析を用いて、GenBank に登録され

タイム PCR 法を開発した。多種類の菌株を用いた検証の結果、本法は目的としている菌種、遺伝子のみを正確に検出できることが明らかになった。
本法は、電気泳動をする必要がなく、2～2.5 時間程度で培養菌体から正確に菌種同定と DT 遺伝子の検出が可能である。C. ulcerans 感染患者の治療や感ている国内外の B 型ボツリヌス菌の配列と相互比較した結果、分離菌は 2011 年に愛媛県で発生した感染源不明のB 型乳児ボツリヌス症分離株と最も近縁であることが分かった。
両事例は発生年も地理的にも離れており、疫学的な関連性は不明であるが、環境物等の共通する感染染源の究明、効率的な検査の実施に繋がる有用な方法であると考えられた。

源が介在した可能性も考えられた。

a 島根県保健環境科学研究所

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部微生物課

b 島根県浜田保健所

b 大阪市立総合医療センター小児救急科

c 国立感染症研究所

大阪市で発生した原因不明の B 型乳児ボツリヌス症分離d 大阪健康安全基盤研究所微生物部微生物課

株の全ゲノム比較解析

マルチプレックス・リアルタイム PCR を用いたジフテリ
ア毒素産生性コリネバクテリウム・ウルセランスおよびコリネバクテリウム・シュードツベルクローシスの検出法- 105 -

抄録

工場で炊飯された米飯による食中毒リスクの調査

大阪府における侵襲性肺炎球菌感染症由来菌株の血清型分布；2018～2021 年

梅田 薫 a，松林雄一 b，中村寛海 a，松浦義治 c，
吉岡馨子 d，奥原 潤 c

河原隆二 a，山口貴弘 a，安楽正輝 a，河合高生 a，
山地良彦 b，西森彩音 b，池条裕希絵 b，上野菜美 b

日本食品微生物学会雑誌, 39(2) , 70-76 (2022)
病原微生物検出情報（IASR）, 44, 7-8 (2023)
中食、外食産業では、調理作業効率化のため米飯製造施設から米飯を仕入れて提供するスタイルが増加している。これらの米飯は提供されるまでに再加熱等の殺菌工程がない場合が多く、喫食までに微2018～2021 年に大阪府内で発生した侵襲性肺炎
球菌感染症（IPD）由来株の血清型別について解析した。大阪府内の IPD 届出件数は 2014 年より増加傾

生物汚染を受け、不適切な温度管理等の増殖要因があれば食中毒に発展する可能性がある。過去には大阪市内で米飯を原因とする大規模なブドウ球菌食中毒事例が発生した。
本調査では米飯製造施設における細菌汚染実態、
米飯中の菌数挙動および、米飯に接種した黄色ブド

向にあったが、2020 年以降著しく減少し、2021 年の届出件数は最も多かった 2018 年の 33%となった。
菌株を収集して解析できたのは 395 件（51%）であった。全世代を通じて多かった血清型は、12F、10A、
15A、35B、15B 型の順で、高齢者では 3 型と 12F 型、児童〜成人では 12F 型、小児では 24F 型が最も多か

ウ球菌の挙動とエンテロトキシン産生について検討した。
調査の結果、製造中の汚染は少なかったが、35℃での保存試験に伴って生菌数が著しく増加した。黄
色ブドウ球菌の接種試験より、経時的な菌の増殖と米飯中のエンテロトキシン産生が見られ、食中毒のった。上位 5 種類の血清型の年次推移では、2017 年に引き続き 12F 型が 2018 年も最多となったが、その後減少に転じて 2020 年以降ほとんど検出されなかった。新型コロナウイルス感染症のパンデミック
がさまざまな感染症の発生状況に影響しており、世界的な IPD の減少、大阪における A 群溶血性レンサ

発生につながる可能性が示唆された。今回の保存試
験の条件下では、米飯に添加された pH 調整剤の明
確な静菌作用は認められなかった。
米飯による食中毒予防には、製造から出荷先までの各段階における二次汚染防止や温度管理、時間管理の徹底等の一般衛生管理に係る部分の重要性が球菌感染症を含む小児感染症の減少が報告されており、大阪府内の IPD も同様の影響が認められた。
パンデミックの影響によって手洗いやマスク着用などの生活様式に変化が生じたため、発生が抑制されたと推測された。2017 年から確認されてきた 12F型の増加は終息し、今後もこのようなワクチン非対

再認識された。

応血清型による IPD 増加に注意が必要であることが示唆された。

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部微生物課

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部微生物課

b 大阪市健康局健康推進部生活衛生課

b 大阪府健康医療部保健医療室感染症対策企画課

c 大阪市保健所北部生活衛生監視事務所

Serotype distribution of isolates from Invasive Pneumococcal

d 大阪市保健所食品衛生監視課

infections in Osaka: 2018-2021

The risk of food poisoning associated with cooked rice produced
in rice cooking factory- 106 -

抄録

Real-time PCR assays to detect 10 Shiga toxin subtype(Stx1a, Stx1c, Stx1d, Stx2a, Stx2b, Stx2c, Stx2d, Stx2e,
Stx2f, and Stx2g) genes

Ready-to-eat 食品製造環境のリステリア汚染状況と食品の特性に応じた汚染制御についての考察
中村寛海

T. HARADAa, Y. WAKABAYASHIa, K. SETOb, K.
LEEb, S. IYODAb and K. KAWATSUc

月刊 HACCP, 10, 20-25 (2022)

Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 105(3),115874 (2023)
https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2022.115874

Listeria monocytogenes (LM)は、食品を介してヒトにリステリア症を引き起こす。食品媒介リステリア症の原因食品として最もリスクの高い Ready-To-Eat(RTE)食品（生食用の食品の他、リステリア属菌の殺3 つの志賀毒素 1 サブタイプ（Stx1a、Stx1c、
Stx1d）
遺伝子と 7 つの志賀毒素 2 サブタイプ（Stx2a、Stx2b、Stx2c、Stx2d、Stx2e、Stx2f、Stx2g）遺伝子を検出するため、284 の Stx 遺伝子配列を参照してリアルタイム PCR 法を構築した。さらに、3 組のMultiplex リアルタイム PCR 法（Multiplex-Stx1；

菌処理を行うことなく飲食可能な形へと調理された全ての食品）において、Codex（国際食品規格）の基準では、LM の増殖がおきる RTE 食品には「25gあたり 0」とし、増殖がおきない食品は「100 cfu /g」としている。近年、野菜や果物、アイスクリームや大豆加工品など多岐にわたる食品が原因として報Stx1a、Stx1c および Stx1d 遺伝子、MultiplexStx2abe；Stx2a、Stx2b および Stx2e 遺伝子、
Multiplex-Stx2dfg；Stx2d、Stx2f および Stx2g 遺伝子）も構築した。
志賀毒素産生性大腸菌（STEC）保存株および STEC
以外の菌株を用いて特異度を評価したところ、いく

告されるようになった。本稿では、RTE 食品として
アイスクリーム類、冷凍果実および大豆製品に着目し、これらを原因として比較的近年に発生したリス
テリア症事例の紹介と、これらの製造施設におけるLM の汚染状況および食品の特性や食品中での LMの動態を調べた。製造施設で取り扱う食品の pH やつかの例外はあったものの、従来法とほぼ同程度の特異度であった。また、組換えプラスミドにより、高い定量性と感度が認められた。これらの結果から、今回確立した方法は STEC による食中毒や感染症の疫学調査に有用であると考えられた。

水分活性等は当該食品中での細菌の挙動を知るために不可欠である。同じ種類の食品であっても、原
材料の質や製造工程によって違った製品となっている可能性もあるため、最終的には食品に添加し、培養によって LM が増殖するのかどうか、冷凍された食品であれば、冷凍保管中に LM が減少するのかどうかを調べる必要がある。また、今回調査を実施
した豆腐製造施設と冷凍ブルーベリー小分け施設
は、成分規格のあるアイスクリームを製造する施設に比べて、施設内に生菌数や大腸菌群の高い箇所があったり、LM が検出された。成分規格がなく、また、冷凍などによって長期に流通することが予想される RTE 食品を製造する施設は、食品への添加試
験を実施するとともに、製造ラインおよび製品をLM に汚染させないよう細心の注意を払う必要がある。

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部細菌課
b 国立感染症研究所

大阪健康安全基盤研究所微生物部微生物課

c 大阪健康安全基盤研究所微生物部

Prevalence of Listeria monocytogenes in Ready-To-Eat foodStx1a、Stx1c、Stx1d、Stx2a、Stx2b、Stx2c、Stx2d、

processing environments and consideration of contamination

Stx2e、Stx2f および Stx2g 遺伝子を検出するためのリア

control according to food characteristics

ルタイム PCR 法- 107 -

抄

録

Visitation of African pineapple lily flowers (Eucomis
autumnalis (Mill.) Chitt. and Eucomis comosa Houtt. ex.
Wehrh.) by Japanese cockroaches

室内塵中の皮膚糸状菌や好ケラチンカビと水虫症状
浜田信夫 a, 御厨真幸 b, 永目知広 b, 馬場 孝 c,
阿部仁一郎 cK. YAMAZAKI
Entomological Communications, 4, ec04027 (2022)
https://doi.org/10.37486/2675-1305.ec04027

日本防菌防黴学会誌, 51(1), 3-12 (2023)

パイナップルリリー（Eucomis 属）は花序の頂にパイナップルのような葉の束をもつユニークな南ア

一般住宅の室内塵中のカビ汚染について、夏と冬に好乾性カビや一般カビが検出できる DG18 培地と、
皮膚糸状菌を含む好ケラチンカビが検出できるマ

フリカ固有の草本植物である。パイナップルリリーの一種である Eucomis autumnalis と Eucomis comosa
は、世界中で鑑賞用の球根植物として栽培されている。原産地では主にクモバチの仲間が花粉を運ぶことが知られている。今回、大阪市内の緑地に植栽されたこれら 2 種のパイナップルリリーについて、訪イコセル（MYC）培地を用いて調査した。MYC 培
地で検出されたカビ数は、DG18 培地でのカビ数の約 1/10 で、皮膚糸状菌以外に 6 属の好ケラチンカ
ビ が 検 出 さ れ 、 と り わ け 、 Chrysosporium とScopulariopsis が多かった。好ケラチンカビは日和見
皮膚感染症の原因菌と考えられる。室内塵のカビの花する昆虫類を 3 シーズン観察した。モリチャバネ
ゴキブリの成虫、若虫が花を訪れ、花蜜を摂食し、背中などに花粉を付着させていた。また、花序の頂にある葉束を隠れ場所として利用していた。アリ、
ハエ、コウチュウ類も訪花したが花粉の付着は見られなかった。観察していた株は正常に種子を生産し季節変化を見ると、一般カビとは反対に，皮膚糸状菌や好ケラチンカビは、冬に増加する傾向があった。
水虫の患者宅では、非患者宅に比較して，皮膚糸状菌が有意に多く検出されたが、患者宅の室内塵の約22％で検出されただけだった。理由として、床に脱落した皮膚糸状菌の優占種の 1 つの Trichophyton

たので、モリチャバネゴキブリが送粉した可能性がある。パイナップルリリーは草丈が数十 cm と比較的低く、特殊な花の構造をもたないため、地表性のゴキブリが送粉者として働いたものと考えられる。

rubrum は乾燥で死滅しやすいためと思われる。水虫患者が通院することは少ないが、治療すると、室内
塵からの皮膚糸状菌の検出率が、未治療の場合の約1/4 に減少することもわかった。

大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

a 大阪市立自然史博物館

日本のゴキブリによるパイナップルリリーへの訪花

b ダスキン・開発研究所
c 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課
Dermatophytes and other keratinophilic fungi in house dust andhuman ringworm patients- 108 -

抄

録

Increasing seroprevalence but waning herd immunity
against measles after elimination: Longitudinalseroepidemiology of measles in Osaka Prefecture, Japan,
2003-2020

Shedding of rubella virus in postsymptomatic
individuals; viral RNA load is a potential indicator toestimate candidate patients excreting infectious rubella
virus

T. KURATAa, T. MIYAMAb, D. KANBAYASHIa,
Y. KAIDAa, I. AOYAMAa, R. IKEMORIa, F. BANNOa,
T. KAWAHATAa, H. MORIa,
and K. MOTOMURAb

D. KANBAYASHI a, T. KURATA a, A. KAIDA b,
H. KUBO b, SP. YAMAMOTO b, K. EGAWA b,
Y. HIRAI b, K. OKADA b, Y. KAIDA a, R. IKEMORI a,
T. YUMISASHI a, A. ITO c, T. SAITO c, Y. YAMAJI d,
Y. NISHINO d, R. OMORI e, H. MORI a,
K. MOTOMURA a, and K. IKUTA a, f

Vaccine, 40(46), 6581 - 6588 (2022)

Journal of Clinical Virology, 160, 105377 (2023)

本研究では、厚生労働省感染症流行予測調査事業の一環で、大阪府が 2003 年以降参加している麻疹抗体価調査のデータから抗体保有率および抗体価、実行再生産数（Re）を算出し、大阪府内の健常人集団における麻疹抗体の推移を検討した。

背景：1962 年に風しんウイルス（RuV）が初めて分離されて以来、風しん患者からの RuV の排出を定量的に評価した包括的なデータは無い。本研究では、調査では 2003 年−2020 年まで毎年、0 歳−40 歳以上まで、年齢層別にグループ化した健常人ボラン
ティア約 250 名の血清を採取し、ゼラチン粒子凝集法（PA 法）を用いて麻疹 PA 抗体価を測定した。解析は対象期間を、2003–2006 年（第 1 期）
、2007–2010
年（第 2 期）、2011–2014 年（第 3 期）
、2015–2020 年

風しん患者におけるウイルス RNA および感染性ウ
イルスの排出を評価した。
方法：251 名の風しん患者から得られた 767 検体の血清/血漿、末梢血単核細胞（PBMC）、咽頭拭い液、尿の分析を行った。ウイルス RNA 量および感染性
RuV の有無は、逆転写定量ポリメラーゼ連鎖反応（第 4 期）の 4 つの期間に区切って行い、抗体陽性
率と PA 抗体価を比較した。Re は、各期の年齢区分毎の抗体保有率と接触マトリックスを用いて算出した。調査参加者は、第 1 期 886 人、第 2 期 1,217
人、第 3 期 1,069 人、第 4 期は 1,544 人であった。
PA 抗体価 16 以上を陽性と判定した場合、麻疹抗体（RT-qPCR）およびウイルス分離により評価した。
結果：咽頭拭い液中のウイルス RNA 量、ウイルス
RNA と感染性ウイルスの検出割合は、他の検体より有意に高かった。発しん出現後、血清/血漿では 2
日目、PBMC では 0 日目、咽頭拭い液では 8～9 日
目、尿では 3 日目にウイルス RNA 量の中央値が検保有率は第 1 期（88.3％ CI 86.0–90.3）から第 4 期（95.7％ CI 94.6–96.7）で増加し、第 1 期の抗体保有率は他の期に比べ有意に低かった。一方 PA 抗体
価は第 1 期
（中央値 1,024）
から第 4 期
（中央値 256）
にかけて有意に低下した。麻疹ウイルスの基本再生
産数を 10 とし、感染防御に必要とされるレベル（PA

出下限値を下回った。ウイルス RNA 量が多くなると、感染性ウイルスが存在する可能性が高かった。
解釈：今回の結果は、風しんの診断、サーベイラン
スに重要な情報を提供するものである。RT-qPCR の結果から、感染性ウイルスを排出している患者を推定することで、より効率的な風しん対策が可能とな

抗体価 128 以上,256 以上）を麻疹抗体陽性とした場
合、Re は第 1 期（1.8, 2.3）から第 4 期（2.5, 4.8）へと徐々に増加した．これらの知見から、大阪府内の健常人では、2003 年以降、麻疹抗体保有率は上昇、維持されているが、ワクチンで獲得した免疫自体は減衰し始めている可能性が示唆された。

り、早期の感染伝播防止に役立つと思われる。

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

e 北海道大学人獣共通感染症国際共同研究所

b 大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部疫学解析研究課

f 大阪大学微生物病研究所

麻疹排除後の集団免疫の減衰：大阪府における長期血清

風しん患者におけるウイルス RNA と感染性ウイルスの疫学調査（2003-2020 年）

排出についてa 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課
b 大阪健康安全基盤研究所微生物部微生物課
c 大阪市健康局大阪市保健所感染症対策課
d 大阪府健康医療部保健医療室感染症対策企画課- 109 -

抄録Contribution of parvovirus B19 in suspected cases ofmeasles/rubella in Osaka, Japan, between 2011 and 2021

マルチプレックス PCR 検査が有用であった，皮疹を伴わない水痘帯状疱疹ウイルス髄膜炎の 1 例

Y. KAIDA a, D. KANBAYASHI a, T. KURATA a,and H. MORI a

西本凪里 a, 酒井亮太 a, 大梅成崇 a, 植山浩一 a,
柿下優衣 a, 濱 浩隆 a, 若原良平 a, 西村 章 a,
上林大起 b, 中田恵子 b, 今村卓司 a

Journal of Medical Virology, 95(3), e28593 (2023)
https://doi.org/10.1002/jmv.28593

感染症学雑誌, 97(2), 47-51 (2023)

ヒトパルボウイルス B19（B19V）による伝染性紅斑は、臨床症状による診断が難しく、麻しんや風し

患者は 15 歳の女児。頭痛、発熱、嘔吐後の意識障害で当院に入院した。嘔吐と意識障害は特に治療んと誤診されることが多い。臨床検査によって麻しん・風しんまたは他のウイルス性疾患を適時に鑑別することは、適切な感染対策を可能にする。本研究の目的は、2011 年から 2021 年までに大阪府内で報告された麻しんと風しん疑い症例における B19V の寄与を明らかにすることである。2011 年から 2021

することなく速やかに改善した。髄膜刺激徴候は認められなかったが、頭痛と発熱が持続したため入院
4 日目に髄液検査を行ったところ、リンパ球増多がみられ、Multiplex PCR 法により水痘・帯状疱しんウ
イルス（VZV）DNA が検出された。患者は 4 歳時に水痘に罹患した既往があった。アシクロビルの静

年までに大阪府内の医療機関で風しん又は麻しんが疑われた 1356 症例のウイルス核酸検査を実施した。その中で、風しんウイルス、麻しんウイルスが検出されたのは、それぞれ 166 症例（12.2%）、167
症例（12.3%）で、残りの 1023 症例（75.4%）の病
原因子は不明だった。1023 症例の中で、血液検体が脈内投与を 14 日間受けた後、バラシクロビルの経口投与に切り替え、さらに 3 日間投与した。後遺症なく治癒した。小児における VZV 髄膜炎の頻度は低く、皮しんを伴わない症例も数例報告されている。
無菌性髄膜炎と診断された症例の中に、皮しんがな
くても VZV 髄膜炎症例が存在する可能性があるこ得られた 970 症例についてリアルタイム PCR 法による B19V のスクリーニング検査を行ったところ、
136 例（14％）で B19V が検出された。B19V が検出された症例の 21％は幼児（9 歳以下）であり、64％
は成人（20 歳以上）であった。系統樹解析の結果、93 株が遺伝子型 1a に属していた。本研究により、とが明らかになった。マルチプレックス PCR 検査
は、早期診断と適切な治療のための重要な手段であると考えられた。

発熱発しん性疾患における B19V の重要性が明らかになった。麻しん排除の現状維持と風しん排除のために検査診断の重要性が再確認された。

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

a 医療法人宝生会 PL 病院小児科

2011 年から 2021 年に大阪で麻しん又は風しんが疑われb 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

た症例におけるパルボウイルス B19 の寄与

A case of varicella-zoster virus meningitis without rashdiagnosed by multiplex PCR- 110 -

抄録

感染症流行予測調査事業・B 型肝炎感受性調査結果（2018～2021 年）−大阪府

Impact of COVID-19 countermeasures on pediatricinfections

阪野文哉 a，川畑拓也 a，浜みなみ a，青山幾子 a，
倉田貴子 a，上林大起 a，池森 亮 a，改田祐子 a b，

N. SAKONa, T. TAKAHASHIb, T. YOSHIDAc,
T. SHIRAIa, and J KOMANOd

森 治代 a
病原微生物検出情報（IASR）, 44(3), 6-7(2023)

Microorganisms (2022)
https://doi.org/10.3390/microorganisms10101947

流行予測調査事業は、予防接種法に基づき定期予
防接種の対象疾病について集団免疫の現状把握（感ワクチンが導入される以前、COVID-19 に対しては手指衛生、ユニバーサルマスキング、社会的距離

受性調査）および病原体検索（感染源調査）を行っている。これらの調査結果と疫学情報をあわせて検討することで、予防接種が効果的に行われていることを確認し、長期的な視野で予防接種の対象である感染症の流行を予測することを目的としており、日本の予防接種の基礎資料として活用されている。

の取り方といった一般的な感染対策が社会レベルで実施された。一般的な感染対策の社会的実施が小児感染症に及ぼす抑制効果については体系的に評価することを目的とした。大阪府と岩手県における感染症発生動向調査に基づく小児感染症のうち 7 疾患を対象とした。週報の 2015 年から 2019 年の 5 年

2016 年 10 月 1 日より B 型肝炎の定期予防接種が開始され、大阪府は 2018 年より本事業の B 型肝炎感
受性調査に参加しており、2018 年から 2021 年まで
合わせて 983 人の B 型肝炎の抗体価に関する結果を得た。
B 型肝炎の HBs 抗体の測定には、2018～2020 年は平均と、2020 年から 2021 年の週報と比較した。両地域の COVID-19 の流行の大小にかかわらず、6 感染症の割合は 2020-2021 年に有意に減少した。しかし、6 つの感染症の 1 つである RSV 感染症のみが2021 年に流行した。感染症対策の社会的実施は，対策遵守率が高くないはずの低年齢層における特定エンザイグノスト”Anti-HBsⅡ”（シーメンス）を、
2021 年 は HEPATITIS B-anti HBs Quantitative(ExpressBio )を、試薬の添付文書に従い使用した。
B 型肝炎ワクチンの定期接種の一般的なスケジュールは、生後 2 か月、3 か月、7～8 か月での三回接種となるため、0 歳で 3 回接種を終えていない者、の感染症の抑制に有効であった。

特に 5 か月齢以下のグループでは調査年によっては抗体化が検出限界以下のグループが多く認められた。定期接種開始以降に生まれた年齢階級 2～5 歳までの抗体保有率は他の年齢階級と比較して高い傾向がみられる一方で、3 回接種済みでも検出限界以下の抗体価であった者も 8.7％みられた。
B 型肝炎の感受性調査に今後も参加することで、大阪府内における B 型肝炎ワクチンの定期接種の効果を評価できると考える。

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

a 大阪健康安全基盤研究所微生物部

b 大阪府藤井寺保健所生活衛生室検査課（現所属）b 岩手県環境保健研究センター

The results of hepatitis B susceptibility surveillance (2018-c 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部

2021) in Osaka Prefecture in the national epidemiologicald 大阪医科薬科大学薬学部

surveillance of vaccine -preventable disease

COVID-19 対策が小児感染症に与えた影響- 111 -

抄

録

Lactobacilli as a vector for delivery of nanobodies
against norovirus infection

合成樹脂製の器具・容器包装における溶出試験の精度の検証

Y. YUKIa,b,c, F ZUOd, S. KUROKAWAa,c, Y.
UCHIDAa,c, S. SATOe,f, N SAKONg,

尾崎麻子 a，六鹿元雄 b，岸 映里 a，
佐藤恭子 b（他 22 名）

L HAMMARSTRÖMd, .H KIYONOa,b,h,i,and H. MARCOTTEd.

食品衛生学雑誌, 63 (2), 51-61 (2022)

Pharmaceutics (2023)
https://doi.org/10.3390/pharmaceutics15010063

溶出試験は器具・容器包装の規格適合性や安全性を確認するうえで重要な試験法であるが、溶出操作
から定量までを含めた溶出試験全体の試験室間共

消化管感染症を制御するための経口投与中和抗体は消化管の過酷な環境下で十分な量安定化させる必要がある。そこで消化管感染症であるノロウイ
ルスに対する単一ドメインの Ab（VHH、ナノ抗体）
を、有益な腸内常在菌である乳酸菌の細胞表面に発現させた。ヒト人工多能性幹細胞から作製した腸管

同試験はほとんど実施されていない。そこで，22 機関が参加し、広範なオクタノール/水分配係数を有す
る 10 物質を添加した 8 種類の合成樹脂製モデル試料を用いて試験室間共同試験を行い溶出試験全体の精度を検証した。その結果、HorRat （r）は大部分が基準を満たしたが，HorRat （R）は基準を超過

上皮細胞を用いて、VHH 1E4 が GII.17 ノロウイル
スに対して中和活性を示すことを確認した。次に、VHH 1E4 をラクトバチルス・パラカゼイ BL23 で細胞壁固定型として発現させた。VHH 1E4 を発現した乳酸菌は in vitro で GII.17 ノロウイルスの複製を阻害した。さらに無菌 BALB/c マウスに経口投与したしたものが多かった。そのため、単一試験室で行うには精度は概ね確保されるが、試験室間の精度には問題があった。この主な原因としては、試験機関間における溶出操作時の温度や時間管理等の試験溶液の調製操作の差異によるものと考えられた。

ところ、投与後少なくとも 10 日間、中和活性を有する乳酸菌が腸内に存在することが確認された。このように、細胞壁アンカー型 VHH 発現乳酸菌は、
ノロウイルスに対する受動免疫のための魅力的な
経口ナノ抗体デリバリーベクターである。

a 東京大学医科学研究所粘膜免疫学部門

a 大阪健康安全基盤研究所

b 株式会社 Hana Vax

b 国立医薬品食品衛生研究所

c 千葉大学医学部病院ヒト粘膜ワクチン学部門

Validation study on migration test for plastic food utensils,d カロリンスカ大学・スエーデン

containers, and packaginge 和歌山県立医科大学薬学部
f 大阪大学微生物病研究所
g 大阪健康安全基盤研究所微生物部
h 千葉大学大学院医学研究院粘膜免疫・アレルギー治療
学i 千葉大学—カリフォルニア大学粘膜免疫・アレルギー・ワクチン サンディエゴセンター・USA
ノロウイルス感染に対するナノ抗体の乳酸菌デリバリー
ベクター- 112 -

抄録

台所用洗浄剤中のメタノール改良分析法の室間共同実験
ab

市販魚介加工品の総水銀調査
油谷藍子，仲谷 正，尾崎麻子，
山口之彦，山野哲夫

a阿部 裕 ，尾崎麻子 ，六鹿元雄 ，
佐藤恭子 a（他 12 名）

食品衛生学雑誌, 63(2), 85-91 (2022)
食品衛生学雑誌, 63 (2), 97-103 (2022)
台所用洗浄剤中のメタノール（MeOH）分析法について、汎用性の高いキャピラリーカラムを用いた改良分析法を考案し、10 試験所が参加する室間共同2013 年から 2018 年に大阪市内で購入した魚介加
工品 112 検体について、加熱気化水銀計を用いて総水銀を測定した。その結果、マグロ加工品の総水銀濃度は平均 0.115 µg/g （中央値 0.070 µg/g）であっ実験を行った。
濃度非明示で2 濃度の試料を配付し、プロトコールに従い試料中の MeOH を定量した。
得られた試験所の分析結果を基に、国際的なハーモ
ナイズドガイドラインに沿って統計的に解析した。
共同実験の結果として推定された室間再現相対標
準偏差（RSDR）と Horwitz/Thompson 式を用いて計た。中でもビンナガマグロを原材料とした加工品の総水銀濃度は高く、平均 0.301 µg/g （中央値 0.296µg/g）であった。今回調査した魚介加工品の総水銀
濃度はマグロ類を原材料とした加工品および混合
削り節（サバ、イワシおよびアジの削り節）を除いて概ね低く、0.1 µg/g 未満であった。

算した予測室間相対標準偏差（PRSDR）から HorRat
値を算出した。その結果、2 試料の HorRat 値は 0.8
および 1.8 となり，Codex 委員会が分析法承認のために設定している性能規準の指標である2 未満を満たした。したがって、本分析法は規格の判定を行う
分析法として期待できる性能を有していると判断

今回の調査結果と日本人の平均的な食生活での魚介加工品摂取量から推定した体重 50 kg の人の総水銀摂取量は 0.13 µg/kg 体重/週であり、 FAO/WHO
合同食品添加物専門家会議が評価した総水銀の暫定的耐容週間摂取量 4.0 µg/kg 体重/週の 3.3％に相当する量であった。

した。

以上より魚介加工品の摂取は通常の摂食では問題ないが、妊婦が総水銀濃度の比較的高いビンナガ
マグロを原材料としたツナ缶を日常的に摂食した
場合には食品安全委員会が評価した妊婦に対するメチル水銀の耐容週間摂取量（2 µg/kg 体重/週）を超過する可能性が示唆された。

a 国立医薬品食品衛生研究所

大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学 2 課

b 大阪健康安全基盤研究所

Survey of total mercury content in fishery productsInter-laboratory study on the modified method assessment forthe determining methanol content in kitchen detergents- 113 -

抄録

物理的再生法により製造された PET ボトルを液状
調味料および食用油の容器に適用した場合の安全性評価

Development of a solid phase extraction‑based method
for the quantitative analysis of methylmercury in soil andsediment

近藤康一 a，小塚莉加 b，桑垣傳美 c，髙橋章仁 d，

S. KAKIMOTOa, M. YOSHIMITSUb and K. KIYOTAa

e

f

b

a

長野 学 ，平野尚美 ，廣澤 憲 ，杉山健一 ，
尾崎麻子 gBulletin of Environmental Contamination and
Toxicology, 109 (2), 332–337 (2022)

日本食品化学学会誌, 29 (1), 19-27 (2022)
物理的再生（MR）法により製造された PET ボト

水銀は、環境汚染の拡大が懸念されており、海洋や土壌中の微生物により毒性の強いメチル水銀とルを、液状調味料および食用油容器へ適用した場合の安全性を評価した。溶出試験に使用した MR-PET
ボトルは、8 種類の代理汚染物質により意図的に汚染させた PET フレークを、実際の MR 工程を通過させて汚染物質残存量を低減させた MR-PET ペレットから作製した。溶出条件は、調味料等の最長のなる。その含有量を把握するためには、高い信頼性と汎用性を備えた分析法が必要である。環境省により定められている分析法では、有害な試薬、管理が特殊な分析機器を使用するという問題点がある。そこで、汎用な固相カラムを使用し、有害な試薬を使用しない、GC/MS で分析する簡便・迅速な土壌・堆

賞味期限である 25℃ -2 年に相当する 40℃ -5 ヶ月とし、調味料や食用油の特性を考慮して食品擬似溶媒を選択した。その結果、ボトルから食品擬似溶媒へ溶出した代理汚染物質の濃度は、いずれも厚生労
働省が食品用器具及び容器包装における再生プラ
スチック材料の使用に関する指針にて提示してい積物中のメチル水銀分析法を構築した。3 種類の試料を用いて分析法の妥当性を確認したところ、真度は 96.2〜102.6%、室内精度および併行精度は 3.4〜
7.1%、定量下限は 7.5 ng/mL であり、土壌・堆積物
中のメチル水銀分析法として信頼性の高い分析法であることが示された。今後、手順を最適化し、定る推奨溶出限度値である 10 ng/mL を下回っていた。
シミュレーションソフトを用いて、食品擬似溶媒への代理汚染物質の溶出量を推定した結果、
25℃ -2 年
および 40℃ -5 ヶ月の溶出条件において、限度値 10ng/mL に対して十分に低い濃度であることが示唆された。また、アンチモンの水系食品擬似溶媒への量下限をより低濃度にすることにより、土壌・堆積物に含まれる低濃度メチル水銀の実態調査に用いることができると考えられた。

溶出量も食品衛生法の規格値（50 ng/mL）を下回っていた。以上の結果から、MR-PET ボトルは、厚生
労働省の指針を十分に満足しており、液状調味料および食用油の容器として問題なく使用できることを確認した。
a 株式会社 Mizkan Partners

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品安全課

b 株式会社 Mizkanb 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学課

c キッコーマンビジネスサービス株式会社

固相カラムを用いた土壌・堆積物中メチル水銀の簡便・d キッコーマン食品株式会社

迅速な分析法の開発

e キユーピー株式会社
f 日清オイリオグループ株式会社
g 大阪健康安全基盤研究所
Safety evaluation of PET bottles regenerated throughmechanical recycling for use as liquid-seasoning and edible-oil
containers- 114 -

抄

録

Determination of degradation degree of ovalbumin in
hen’s egg enzymatic hydrolysates using liquid
chromatography–tandem mass spectrometry

Determination of potential volatile compounds inpolyethylene terephthalate (PET) bottles and theirshort- and long-term migration into food simulants andsoft drink

K. KIYOTAa, M. YOSHIMITSUb, and H. MATSUIb
Journal of Food Measurement and Characterization,
17(1), 46–53 (2023)

A. OZAKIa, E. KISHIa, T. OOSHIMAa,
N. KAKUTANIa, Y. ABEb, M. MUTSUGAb,
Y. YAMAGUCHIa and T. YAMANOa

鶏卵タンパクは、酵素加水分解により、保湿性等の優れた機能性が引き出され、一方でそのアレルゲ

Food Chemistry (2022)
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2022.133758

ン性は減弱される。鶏卵酵素加水分解物の品質とア
レルゲン摂取リスクを管理するためには、加水分解の進行を制御することが必要である。
そこで本研究では、液体クロマトグラフ質量分析計を利用した分析法（MS 法）を適用して、鶏卵卵
白の主要なタンパクかつアレルゲンであるオボア

清涼飲料用ポリエチレンテレフタレート（PET）ボ
トルから溶出する可能性のある揮発性化合物についてヘッドスペース（HS）-GC-MS を用いて分析し、6 化合物を同定した。次に、パージ＆トラップ（PT）-GC-MS を用いて、PET ボトルにおいて液体を短期

ルブミン（OVA）を指標に、鶏卵酵素加水分解物の分解度を測定することを目的とした。汎用的なタン
パク分解酵素の反応により得られた OVA 加水分解物において、MS 法とサイズ排除クロマトグラフィ
ー法で分解度をそれぞれ測定したところ、両法の分解度には高い相関性があった（r > 0.96、p < 0.001）。

および長期間保存した後の溶出量を定量するために、迅速、簡便、正確な同時分析法を確立した。未使用のペットボトルを用いて 25℃で 2 年間保存した際の水および 50 %エタノールへの 2-メチル-1,3ジオキソランの最大移行量は、それぞれ 2.3 および
19 ng/mL であった。国内外で販売されている市販のまた、鶏卵卵白の酵素加水分解物において、OVA の添加回収率は 81.1–114.8%で良好であった。
以上より、MS 法を適用することで、従来の免疫学的手法では分析困難とされていた鶏卵酵素加水
分解物中の正確な OVA 定量が可能となり、その定量値を利用して分解度の測定が可能であることがボトル入りミネラルウォーターからも同様に 2-メ
チル-1,3-ジオキソランが検出された。一部の製品ではノナナールも検出されたが、2-メチル-1,3-ジオキ
ソランが主な揮発性化合物であることが確認された。最後に、2-メチル-1,3-ジオキソランのヒトへのばく露量を、日本における清涼飲料水の一人当たり示唆された。今後、MS 法は、鶏卵酵素加水分解物を使用した食品、栄養補助食品、医薬品、化粧品等の製品の品質向上に役立つことが期待される。

の摂取量と本研究での移行量に基づいて推定した。

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品安全課

a 大阪健康安全基盤研究所

b 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学課

b 国立医薬品食品衛生研究所

LC-MS/MS を利用した鶏卵酵素加水分解物に含まれるオ

ポリエチレンテレフタレート（PET）ボトルに含まれる

ボアルブミン分解度の測定

揮発性化合物の同定ならびに食品擬似溶媒や清涼飲料水
への短期および長期の移行について- 115 -

抄録

Oxidation of 3'-methoxyflavone, 4'-methoxyflavone, and3',4'-dimethoxyflavone and their derivatives having 5,7dihydroxyl moieties by human cytochromes P450 1B1
and 2A13

GC-MS を用いた合成樹脂製器具・容器包装に含まれる化学物質の同定
尾崎麻子，水口（深瀬）智晴，岸 映里，
山口之彦，山野哲夫
日本食品化学学会誌, 29 (3), 164-178 (2022)

T. SHIMADAa, H. NAGAYOSHIb, N. MURAYAMAc,
A. SAWAIa, V. KIMd, D. KIMd, H. YAMAZAKIc,
F P. GUENGERICHe and S. TAKENAKAa

ポジティブリスト（PL）制度への適合性判定に資する基礎データの蓄積のため、合成樹脂製器具・容器包装に含まれる化学物質を GC-MS を用いて網羅

Xenobiotica, 52(2), 134-145 (2022)

的に分析した。PL に収載されている添加剤等約 130
物質の標準品を分析し、マススぺクトルを確認するとともに保持指標（RI）を算出しライブラリー登録値と比較した。その結果、比較できたほとんどの物
質の RI 実測値とライブラリー登録値の比率は 1.0であり非常によく一致した。これより、合成樹脂製

3'-メトキシフラボン、4'-メトキシフラボン、および 3',4'-ジメトキシフラボンとそれらの 5,7-ヒドロキ
シ ル 基 を 有 す る 誘 導 体 の ヒ ト CYPB1 お よ び
CYP2A13 酸化について LC-MS/MS で探索した。
3'-メトキシフラボンと 4'-メトキシフラボンは主にO-脱メチル化されて 3'-ヒドロキシフラボンと 4'-ヒ品から未知ピークが検出された際にはマススペク
トルだけでなく RI をライブラリーと比較すること
でより確実な物質同定が可能であることが示された。汎用樹脂であるポリプロピレン、ポリエチレン、
ポリスチレンおよびポリエチレンテレフタレート
製の合成樹脂製器具・容器包装を対象とし、含有さドロキシフラボン、さらに酸化して 3',4'-ジヒドロキ
シフラボンへと変化した。またいずれの誘導体に対しても CYP2A13 より CYP1B1 の方が高い反応性を示した。
4'-メトキシ-5,7-ジヒドロキシフラボン（アカセチン）は CYP1B1 および 2A13 によって脱メチル化される化学物質を同定・推定した。その結果、合成樹
脂製品から検出された 104 物質のうち 61 物質が同定・推定され、その約半分は PL 収載物質であった。
しかしながら、残り半分は非収載物質であり、その多くが合成樹脂や添加剤等の分解物、不純物、副生成物等である非意図的添加物質（NIAS）であると考れ、4'-5,7-トリヒドロキシフラボン（アピゲニン）を形成することがわかった。また、3'-メトキシ-5,7-ジヒドロキシフラボンもどちらの P450 によっても脱メチル化されたが、この場合は CYP2A13 のほうが高 活 性 で あ っ た 。 3',4'- ジ メ ト キ シ フ ラ ボ ン は
CYP1B1 と反応したが CYP2A13 の基質とはならなえられた。

かった。in vitro 実験によって得られた結果は PC を用いた分子ドッキング分析によっても十分支持される結果であった。

大阪健康安全基盤研究所

a 大阪府立大学大学院総合リハビリテーション学研究科

GC-MS analysis for the identification of chemical substances inb 大阪健康安全基盤研究所

food utensils, containers and packaging

c 昭和薬科大学
d 建国大学校e ヴァンダービルト大学医学部
ヒトチトクローム P4501B1 および 2A13 による 3'-メトキ
シフラボン、4'-メトキシフラボン、および 3'、4'-ジメト
キシフラボンおよび 5,7-ジヒドロキシル部分を有する誘導体の酸化- 116 -

抄

録

Simultaneous determination of five triarylmethane
colorants in syrup by applying multivariate curve
resolution to second‑derivative visible absorption spectra

スポンジたわしを介した調理用ボウル間の小麦アレルゲンの二次汚染
橋本博行 a，池田達哉 b，吉光真人 c，清田恭平 d

H. MATSUIa and T. YAMASAKIb
食品衛生学雑誌, 63(2), 70-78 (2022)
Analytical Sciences, 39(1), 77-85 (2023)
小麦粉バッター液を調製後、その調理器具の洗浄に使用したスポンジたわしには、小麦粉が残留する場合がある。このようなスポンジたわしを洗浄に継続して使用すれば、調理器具間で小麦アレルゲンの本研究ではケモメトリックスの手法の1 つである
Multivariate Curve Resolution 法を 2 次微分可視吸収
スペクトルに適用することで、シロップ中に含まれ二次汚染の発生が考えられる。
そこで本研究では、小麦粉の二次汚染の発生可能性、およびスポンジたわしにおける小麦粉成分の残留実態を明らかにするために、モデル実験を基に調査を実施した。その結果、スポンジたわしを介した調理器具間の小麦粉の二次汚染は、陽性率約 80％でる、化学的に類似した構造・性質を有する 5 種類のトリアリールメタン系着色料（ブリリアントブルー
FCF、パテントブルーV、パテントブルーVF、ファストグリーン FCF、グリーン S）を同時に定量する分析手法を開発した。
無色のシロップに対して行った添加回収試験に発生した。洗浄とすすぎ操作後のスポンジたわしにはバッター液の残留が確認され、その残留率は 20％程度であった。さらに、スポンジたわしにおける残留状態を詳細に観察したところ、グルテン等のタン
パク質がスポンジたわしのセル骨格や骨格間に付着し、そのタンパク質にデンプン粒が付着していた。

おいて、本手法は 5 成分全てについて決定係数 0.90
以上、予測最小二乗誤差 0.20 mg /L 未満、検出限界
0.50 mg/L 未満と良好な性能を達成した。また検討の結果、クエン酸緩衝液と炭酸緩衝液の 2 種類の緩衝液での測定データを統合すること、ならびに 2 次
微分スペクトルへ適用することによって、分析対象

このようなスポンジたわしに対して、すすぎ操作を追加したものの、小麦アレルゲンの完全除去は困難であった。
以上より、アレルゲン混入リスクを回避すべきア
レルギー対応食等の調理施設において、小麦を使用した調理器具の洗浄には、専用化したスポンジたわ

物質への特異性が向上することを明らかにした。
さらに、ガウス関数の 2 次導関数を基底とした基底関数展開を利用して妨害物質のスペクトルを推定する手法を新たに開発した。開発した手法は検証のために意図的に添加した妨害物質のスペクトルを精度良く推定することに成功した。

しの使用が望ましいと考えられる。

これらの成果をふまえて、実際の市販品に開発した分析手法を適用したところ、液体クロマトグラフ
ィーを用いた従来の手法によるものとよく整合した結果が得られた。
開発した手法により、従来の手法に比べて試料の精製手順を大きく簡略化することに成功した。また、データ解析の手法も他の物質へと応用可能である
ことから、本研究は着色料のみならず他の様々な物
質に対する新たな迅速分析手法の開発に資することが期待される。

a 三重短期大学
b 農研機構西日本農業研究センター

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学課

c 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学課

b 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品安全課

d 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品安全課

2 次微分可視吸収スペクトルへの Multivariate Curve

Secondary contamination by wheat allergens across cooking

Resolution 法の適用によるシロップ中の 5 種のトリアリ

bowls through the use of sponge scourers

ールメタン系着色料の同時定量法- 117 -

抄録

エンメイソウについて
HPLC によるエンメイン分析法の検討と市場品の分析

Changes in bacterial diversity and community structure
in drinking water distribution system revealed by highthroughput sequencing

田上貴臣 a, b，石田晃大 b，石原理恵 b，
伊藤美千穂 b，大井逸輝 b，岡坂 衛 b，
河端昭子 b，酒井英二 b，蔦原稜太 b，西尾雅世 b，
松田久司 b，森川敏生 b，山本 豊 b，横倉胤夫 b

Y. KOIZUMIa,b, T. ICHIJOc,d, K. UCHIIe

生薬学雑誌, 76(2), 37-44 (2022)
エンメイソウは日本薬局方外生薬規格 2018 に収載されており、その基原はヒキオコシ又はクロバナ
ヒキオコシの地上部であると規定されている。エンメイソウは胃腸薬等に配合されている他、健康食品
や化粧品にも配合されている。
本研究ではエンメインを品質評価の指標とし、HPLC によるエンメイソウ中のエンメイン分析法の検討を行った。その結果を以下に示す。
（1）エンメイソウ中のエンメインについて、分析バ
リデーションを実施し，HPLC による定量法を確立した。
（2）確立した分析法を用いてエンメイン含量を測定したところ、以下の結果が得られた。
a）細かく刻んだ葉に対する粉砕した葉のエン
メイン含量は、51.9～184.0％となり、有意差は認められなかった（p < 0.05）。
b）茎の含量は、葉のエンメイン含量に対して 0～4.0％であり、茎には葉に比べてわずかなエンメインしか含まれていなかった。
c）市場品 7 検体について、葉及び茎のエンメ
イン含量と葉及び茎の質量から、当該市場品 の 含 量 を 算 出 し た と こ ろ 、 0.010 ～0.181％であった。
（3）採取品について、自然乾燥及び機械乾燥の影響を調べたところ、自然乾燥では約 40％の含量低下が認められた。また、機械乾燥においても約30％の含量低下が認められたが、温度による差はほとんど認められなかった。

and M. NASUb,fJournal of Microorganism Control, 28(1), 27-34 (2023)
上水道配水システム（DWDS: Drinking Water
Distribution System）における細菌群集構造と多様性の変化をポータブルシーケンサー MinION（Oxford Nanopore Technologies, Oxford, UK）を用いた 16S rRNA 遺伝子アンプリコンシーケンス法で解析した。対象設備としては、他の浄水施設の水が混入しない緩速砂ろ過を採用した DWDS を選んだ。試料は 2021 年 4 月から 8 月にかけて、原水である渓流水、浄水処理施設の着水、砂ろ過水、塩素処理水および配水過程の配水池、末端の給水栓で採取した。
細菌群集の多様性についてシャノンインデック
スを用いて評価した結果、門、綱、属のすべてのレベルにおいて、塩素処理により多様性が減少していた。属レベルの群集構造を非計量多次元尺度法（NMDS）により解析したところ、緩速砂ろ過と塩素消毒により細菌群集構造が大きく変化していることが示唆された。
ポータブルシーケンサーによる DWDS 中の細菌の定期的なモニタリングにより、指標となる細菌の存在量や、属・種レベルでの群集構造の変化を短時間のうちに把握することができる。このような情報は処理プロセスの微生物学的制御に直接的に貢献するものであり、DWDS 中の細菌の変化を理解することにより異常事態が発生する前に迅速な行動が可能となる。

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部医薬品課

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

b 生薬品質集談会

b 大阪大谷大学大学院薬学研究科

Studies on ISODONIS HERBA

c 大阪樟蔭女子大学健康栄養学部
d 大阪樟蔭女子大学大学院人間科学研究科
e 大阪大谷大学薬学部
f 大阪大学
ハイスループットシーケンシングによる上水道配水シス
テムにおける細菌多様性と群集構造の解析- 118 -

抄

録

Role of nitrous acid in the association between nitrogendioxide and asthma symptoms: effect of nitrous acid
exposure on specific airway resistance in guinea pigs

Microbial water quality assessment of private wells using
16S rRNA gene amplicon sequencing witha nanopore sequencer

M. OHYAMAa, K. AZUMAb, C. MINEJIMAc,

M. MIMURAa,b, Y. KOIZUMIa,b, M. WADAc,

N. TAKENAKA and S. ADACHIT. ICHIJOd,e, K. UCHIIf and M. NASUb

Environmental Sciences Europe, 34, 112 (2022)
https://doi.org/10.1186/s12302-022-00693-1

Biological and Pharmaceutical Bulletin,
46, 263–271 (2023)

二酸化窒素（NO2）が喘息と関連することは疫学

井戸水は、身近な家庭用水源として世界中で日常調査で示唆されている。しかし、NO2 測定は亜硝酸（HONO）も NO2 として検出するため、疫学調査での関連が NO2 と HONO のどちらに起因するかは不明である。動物実験における喘息への影響指標には肺抵抗や気道抵抗が用いられる。ラット曝露実験において、肺抵抗を HONO は亢進するが、NO2 は亢進的に利用されている。水道の普及率が高い日本では、
非飲用水として利用されていることが多い｡散水などに利用される場合、バイオエアロゾルが発生しエ
アロゾル感染の原因となる可能性がある｡
現在、井戸水の微生物学的水質検査は、糞便汚染の指標となる大腸菌の検出と、標準寒天培地や R2A

できず、NO2 より HONO の方が喘息への影響が強いことが示唆されている。但し、NO2 のモルモット
曝露実験では 2 ppm 以上の 12 週間曝露で特異的気道抵抗（sRaw）の亢進が観察されている。本研究の目的は、HONO のモルモット曝露実験で sRaw への影響を調べ、NO2 の知見と比較をすることである。

寒天培地などを用いた培養法でコロニーを形成する細菌の検出である。しかし、例えばレジオネラ属菌などのエアロゾル感染症起因菌は、一般的な培地を用いた培養法では検出が困難なものが多い｡そこ
で、井戸水の微生物学的水質を確保するために、より包括的な評価法の採用が望ましい。

モルモットを 3 群に分け 7 週間 HONO 曝露を行い（各群の HONO 濃度：0.02、0.66、3.43 ppm）毎週
sRaw 測定した結果、曝露 4 週目以降で 0.02 ppm 群（対照群）と比較して HONO 濃度に依存して有意に sRaw が亢進した。今回の結果は、sRaw において、HONO の最小毒性濃度が 0.66 ppm 未満であること、

今回、MinION シーケンサを用いて、異なる環境にある 5 本の井戸の井戸水中の細菌群集構造を解析した。16S rRNA 遺伝子の全長配列に基づいて細菌を種レベルまで特定することができた。その結果、
5 本の井戸の井戸水中の細菌群集構造の違いが明らかとなった。また、従来法では検出が困難であった

HONO は NO2 より短期間・低濃度で sRaw を亢進す
ること、さらに、疫学調査における NO2 と喘息症状の関連は HONO に起因する可能性を示唆する。

日和見感染症の起因菌の検出に成功し、新たな指標
細菌候補として Legionella pneumophila と Aeromonas
hydrophila を検出した。
本研究で用いた網羅的な解析手法は、井戸水の衛生微生物学的水質を高精度に評価する手法として、
今後日常的に適用されることが期待される。

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

b 近畿大学医学部

b 大阪大谷大学大学院薬学研究科

c 国際基督教大学リベラルアーツ

c 大阪府立環境農林水産総合研究所

d 大阪公立大学現代システム科学研究科

d 大阪樟蔭女子大学健康栄養学部

e 相模女子大公衆衛生

e 大阪樟蔭女子大学大学院人間栄養学専攻

二酸化窒素と喘息症状との関連における亜硝酸の役割：

f 大阪大谷大学薬学部

モルモットの特異的気道抵抗に対する亜硝酸曝露の影響

ナノポアシーケンサを用いた 16S rRNA 遺伝子アンプリ

de

コンシーケンスによる井戸水の衛生微生物学的水質評価- 119 -

抄

録

Exposure to organophosphorus compounds of Japanesechildren and the indoor air quality in their residences

Development and validation of an analytical method for
simultaneous determination of perfluoroalkyl acids indrinking water by liquid chromatography/tandem mass
spectrometry

T. YOSHIDAa, M. MIMURAa and N. SAKONb
Science of the Total Environment, 850, 158020 (2022)
https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2022.158020

N. KOBAYASHIa, S. TAKAGIb, T. KINOSHITAc,
O. SAKATAd, F. NAKANOe, N. WATANABEf,
A. NOMURAg, N. KAWAIh, T. HIRAIWAi,
M. OKUMURAj, K. FURUKAWAk, T. KASUYAl,
N. IWAMAm, J. YONEKUBOn, R. TAKAHARAo,
S. TANAKAp, Y. TSUCHIYAa and Y. IKARASHIa

住居内で主に殺虫剤や難燃剤として使用される有機リン系化合物の中には、発がん性や内分泌系への影響が疑われるものが存在する。本研究では、子どもにおける有機リン系化合物の一日の総摂取量とそれに及ぼす彼らの自宅室内空気質の影
響について解明することを目的とした。
大阪府内在住の子ども 132 名を対象とし、彼らの寝室内空気中の有機リン系化合物の濃度および起床直後の尿中のこれらの代謝物量を調べた。

液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析計を用いた水道水中の 21 種類のパーフルオロアルキル

殺虫剤の空気試料からの検出率は難燃剤 (リン酸
トリエチル、リン酸トリ-n-ブチル) よりも低かった。主な化合物の一日の総摂取量 (µg/kg/day, 中央値) は、クロルピリホス 0.042、ダイアジノン
0.067、リン酸トリ-n-ブチル 0.094 であり、これらの一日総摂取量の 95 パーセンタイル値は、いずれ酸（PFAA）の一斉分析法を開発するため、16 機関による分析法のバリデーション試験を実施した。多くの PFAA の回収率は、対応する 13C-PFAA をサロゲートとして補正した場合、真度、併行精度および室間精度は満足できるものであった。したがって、
対象PFAA と同様の回収特性を持つサロゲートを用も WHO などの示す一日摂取許容量を超過しなかった。しかし、リン酸トリ-n-ブチルの一日総摂取量の最高値は許容量の約 2 倍であり、調査対象者
におけるその尿中代謝物の検出頻度と濃度レベル
は、ともに他の多くの国の子どもよりも高い傾向であった。在宅中におけるリン酸トリ-n-ブチルのいて回収率を補正する必要があることがわかった。

曝露に関し、総摂取量に対する吸入による摂取量の割合は、中央値としてわずかに 2.3%であった。
吸入は有機リン系化合物の曝露経路として大きく寄与せず、それらの一日総摂取量に対する室内
空気質の影響は比較的小さいことが示唆された。
また、有機リン系殺虫剤の曝露量は、通常我国のd 埼玉県衛生研究所

子どもの健康に悪影響を及ぼすレベルではないと推定された。

j 名古屋市上下水道局

Journal of Water and Environment Technology, 20(6),219-237 (2022)

a 国立医薬品食品衛生研究所生活衛生部第三室
b 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課
c 東京都健康安全研究センター薬事環境科学部
e 神奈川県衛生研究所f 広島市水道局
g 川崎市上下水道局
h 福山市上下水道局
i 神奈川県企業局
k 一般社団法人三重県環境保全事業団
l 一般社団法人千葉県薬剤師会

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

m 一般財団法人岐阜県公衆衛生検査センター

b 大阪健康安全基盤研究所微生物部ウイルス課

n 日本ウォーターズ株式会社

子どもにおける住宅内での有機リン系化合物の曝露と室

o ジーエルサイエンス株式会社

内空気質の寄与p アジレント・テクノロジー株式会社
液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析計を用いた水道水中ペルフルオロアルキル酸の一斉分析法開発と妥当性評価- 120 -

抄

録

Novel automated identification and quantification
database using liquid chromatography quadrupole timeof-flight mass spectrometry for quick, comprehensive,
cheap and extendable organic micro-pollutant analysis inenvironmental systems

高速液体クロマトグラフ質量分析計（LC-MS/MS）を用いたアルデヒド前駆体 20 物質の一斉分析法の開発

K. KADOKAMIa, T. MIYAWAKIa, S. TAKAGIb,
K. IWABUCHIc, H. TOWATARId, T. YOSHINOe,
M. YAGIe, Y. AITAf, T. ITOc, S. TAKEMINEg,
D. NAKAJIMAh and X. LIi

水道協会雑誌, 91(5), 2-11 (2022)

小池真生子，吉田 仁，山口進康

浄水処理によりホルムアルデヒド等を生成する「アルデヒド前駆体」のうち 23 物質について一斉
分析法を検討し、その分析精度の評価を行った。

Analytica Chimica Acta, 1238, 340656 (2023)
https://doi.org/10.1016/j.aca.2022.340656
人の健康や環境を守るために有害化学物質の高効率・低コスト・省力化・グリーン分析が急務となっている。これを達成するために我々は、LC-QTOF-

分析条件の検討の結果、アルデヒド前駆体 23 物
質のうち 20 物質が LC-MS/MS で分離することができた。これら 20 物質について、分析法の妥当性評価を行ったところ、19 物質が厚生労働省の示す妥当性評価ガイドラインの目標を満たし、精度の高い分析法を開発することができた。開発した一斉分析法

MS を用いたデータベースを用いた自動同定・定量システム（AIQS）を新たに開発し、この AIQS の精度を検証した。208 種類の農薬標準物質について 2
濃度で 7 台の装置を用いて測定した。真度は平均でそれぞれ 106 および 95％、農薬類の 90％が相対標
準偏差 30％以下であった。5 機関で河川水試料を用を用いて、大阪府内の河川を対象に、アルデヒド前駆体の実態調査を行った結果、全ての地点において定量下限値（0.0005～0.01 mg/L）未満であった。今回開発した方法は迅速に分析が可能なことから、水質汚染事故等の緊急時にも有用な方法であると考えられた。

いて 200 種類の農薬の回収テストをした。平均回収率は 72％となり、精製水を用いた場合よりも 15％低くなった。平均相対標準偏差は、標準物質の測定値よりも 30％悪化した。しかし、回収率および再現性は、厚生労働省の示す目標を満たした。AIQS は、
新規物質の追加や追加後の遡及分析が容易である。
実試料に適用した結果、AIQS は環境試料中の多数の物質に対するターゲットスクリーニング法として十分な同定・定量性能を有することが示された。
a 北九州市立大学

大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

b 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

Development of an analytical method for simultaneousc 岩手県環境保健研究センター

determination of the 20 aldehyde precursors using a high-d 福岡市保健環境研究所

performance liquid chromatograph-mass spectrometer (LC-e 神戸市健康科学研究所

MS/MS)

f 株式会社エービー・サイエックス
g 埼玉県環境科学国際センター
h 国立環境研究所
i 大連理工大学
環境中の有機微量汚染物質の迅速的かつ網羅的分析のための液体クロマトグラフィー四重極飛行時間質量分析法を用いた新規自動同定・定量化データベースについて- 121 -

抄録

大阪府内浄水場におけるフィプロニルおよびフィプロニル分解物 4 種の実態調査

ガスクロマトグラフ－質量分析計（GC/MS）を用いた水道水中イプフェンカルバゾンの分析法検討

小池真生子 a，長谷川有紀 a，高木総吉 a，
吉田 仁 a，安達史恵 a，小泉義彦 a，中島孝江 a，b竹中凜代 ，山口進康

吉田 仁，高木総吉a

水道協会雑誌, 91(7), 9-12 (2022)
水道協会雑誌, 91(11), 2-9 (2022)
水環境中におけるフィプロニル（FIP）および分解物 4 種（FIP-SFI、FIP-DSF、FIP-SFO および FIP-

水道水中のイプフェンカルバゾンの検査法として、
固相抽出-ガスクロマトグラフ-質量分析計による一斉分析法（別添方法 5 の 2）が適用可能か判定する

DTFMS）の検出状況を明らかにすることを目的として、大阪府内の浄水場において夏季（6 月）および冬季（1 月）に実態調査を行った。その結果、夏季原水において、FIP は 5 地点（濃度：0.00058～
0.0025 µg/L）、FIP-SFI は 5 地点（濃度：0.00089～
0.0041 µg/L）、FIP-DSF は 3 地点（濃度：0.00097～

ために妥当性評価を実施した。検量線の妥当性評価を実施した結果、真度 92～105%、精度 1～3%となった。また、イプフェンカルバゾンの目標値の 1/100である 0.000020 mg/L を水道水に添加して添加試料の妥当性評価を実施したところ、真度 114%、併行
精度 4%となった。検量線、添加試料のいずれもガ0.0027）、FIP-SFO は 6 地点（濃度：0.00057～0.0018）
からそれぞれ検出された。冬季原水において、FIP は2 地点（0.00055 または 0.00057 µg/L）、FIP-SFI は 2地点（濃度：0.00098 または 0.0010 µg/L）、FIP-SFO
は 3 地点（濃度：0.00057～0.00098 µg/L）からそれぞれ検出された。一方、夏季浄水では FIP-DSF がイドラインの目標を満たす結果を得たため、本法はイプフェンカルバゾンの検査法として適用可能であることが明らかになった。

0.00052 µg/L、冬季浄水では FIP-SFI が 0.00081 µg/L
検出された。検出濃度は FIP 分解物を合算した最大検出濃度を原体である FIP の目標値（0.5 µg/）と比較しても十分に低い濃度であった。さらに原体である FIP を合算した最大検出濃度においても、同様に低い濃度であった。しかし、原体である FIP よりも分解物が占める割合が多かったことから、原体だけでなく分解物もモニタリングする必要があると考えられた。

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

b 大阪府健康医療部生活衛生室環境衛生課

Development of an analytical method for ipfencarbazone in tap

Presence of fipronil and four fipronil degradation products inwater using a gas chromatograph mass spectrometer (GC/MS)

raw and drinking water in Osaka, Japan- 122 -

抄録

一般細菌検査における外部精度管理の試み
安達史恵 a, 吉田 仁 a, 吉田直志 b, 谷口直生 b,
竹中凛代 b, 上澤行成 b, 山口進康 c，
水道協会雑誌, 91(10), 16-24 (2022)
大阪府では水道水質検査精度の向上を図ることを目的に、水道事業体等を対象とし、外部精度管理を実施しているが、細菌の検査項目である一般細菌については、精度管理の手法が明示・確立されていないことから、今まで実施してこなかった。本研究では、統一試料を用いた一般細菌の外部精度管理の実現に向けて、その手法等を検討のうえ、試料を配付し実証実験を試みた。またその評価方法について検討を行った。
その結果、当手法を用いて、統一試料の調製が可能であることが明らかとなった。評価方法としては、
Xbar-R 管理図および Z スコアの併用が有用であり、Z スコアの算出方法については、今後データを蓄積し、決定する必要があると考えられた。

a 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課
b 大阪府健康医療部生活衛生室環境衛生課
c 大阪健康安全基盤研究所衛生化学部食品化学課
A trial of external quality assessment in standard plate count of
tap water- 123 -

学位論文概要

CHERP による選択的 mRNA スプライシング制御

山中靖貴

CHERP regulates the alternative splicing of pre-mRNAs in the nucleus

Yasutaka Yamanaka

Ⅰ 緒言高等真核生物の遺伝子発現過程において、その遺伝情報はゲノム DNA から未成熟な mRNA 前駆

ハイブリダイゼーションを用いて示すことで、
CHERP が mRNA プロセシングまたは核外輸送に関わることを見出した。
さらに、CHERP を過剰発現させたヒト胎児腎細体 (premature-mRNA: pre-mRNA) へと転写された
後、5’キャッピング、スプライシング、および 3’
ポリアデニル化を受けて成熟 mRNA へと伝達される。成熟 mRNA は核膜を通過し細胞質に輸送され、タンパク質へと翻訳される。スプライシング
は mRNA プロセシング過程の一つで、イントロン

胞由来細胞株 HEK293 細胞における生化学解析やイメージング解析により、
CHERP が U2 small nuclear
ribonucleoprotein (snRNP) や U2 snRNP 関連タンパ
ク質との相互作用を通して選択的スプライシングに関与する可能性を示した。
次に、RNA シークエンス解析を通して、CHERPが除去されエキソン同士を繋ぎ合わせる反応であり、構成的または選択的スプライシングに分けられる。
Calcium homeostasis endoplasmic reticulum protein(CHERP) は、小胞体や核周辺部における 1,4,5trisphosphate receptor と共局在し、細胞内カルシウ

がカセットエキソン型、相互排他的エキソン型、選
択的 5’スプライス部位選択型、選択的 3’スプライス部位選択型およびイントロン保持型といった様々な選択的スプライシングを制御することを明らかとした。

ムシグナル伝達において役割を担う。加えて、核内に局在することやスプライソソームと相互作用することが報告されている。しかしながら、その核内における役割は十分に解明されていない。
本研究では、CHERP が核内で選択的スプライシ
ングの制御に関わるかを解析した。

Ⅲ CHERP によるイントロン保持の標的イントロ
ン同定、その性質・特徴と標的 pre-mRNA の制御

Ⅱ CHERP の局在とスプライシングへの関与
本研究では、先ずヒト骨肉腫由来細胞株 U2OS 細胞を用いて、CHERP が核内で局在することをWestern blot により確認した。
次に CHERP 減少下の U2OS 細胞においてポリ(A)+ RNA が核内で蓄積することを RNA 蛍光 in situ

5 種類の選択的スプライシングの中でイントロン
保持型が最も頻度よく観察されたため、その標的
pre-mRNA について gene ontology (GO) 解析を行ったところ、RNA 代謝に関わる細胞機能が多く検出された。標的 pre-mRNA の性質を対照として用いた参照イントロンと比較したところ、スプライシングの生じやすさを表す指標である 5’および 3’スプラ
イス部位スコア（値）が低いこと、GC 含量が高い
こと、およびイントロンの長さが短いといった特徴を見出した。

大阪健康安全基盤研究所公衆衛生部健康危機管理課- 124 -

Ⅳ CHERP によるカセットエキソンの標的イントロン同定、その性質・特徴と標的 pre-mRNA の制
御CHERP による制御を受ける選択的スプライシン

生命科学研究科 分子応答機構学分野 教授 片山高
嶺博士、同助教 加藤紀彦博士に謹んで深謝申し上げます。またご指導、ご助言を賜りました京都大学
大学院 生命科学研究科 生体情報応答学分野 教授
永尾雅哉博士、同准教授 神戸大朋博士、同助教 西グとしてイベント数が最も多かったカセットエキ
ソン型について GO 解析を行ったところ、細胞周期や細胞分裂に関係する遺伝子が多く同定された。また、カセットエキソン型の標的 pre-mRNA では参照
イントロンと比較して、3’スプライス部位やスプラ
イシングの生じやすさを表す指標の 1 つであるブ

野勝俊博士に謹んで深謝申し上げます。研究を遂行するにあたり、多大なるご協力を賜りかつ終始温かく支えて頂きました京都大学大学院 生命科学研究
科 分子応答機構学分野および生体情報応答機構学
分野の皆様に深謝申し上げます。本研究を遂行するにあたり多大なるご指導、ご配慮を賜りました地方

ランチポイント部位のスコアが低いこと、GC 含量は低く、イントロンの長さが長いという特徴が見出された。

独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所 公衆衛生
部および微生物部の皆様方に謹んで深謝申し上げ
ます。

Ⅴ まとめ

（本稿は、著者が京都大学大学院生命科学研究科において令和 4 年 9 月 26 日に博士（生命科学）の学

本研究により、CHERP が核にも局在し、mRNA代謝に関与することを示した。CHERP と相互作用するタンパク質の多くはプロセシングやスプライ
シングに関連することが分かった。そして、CHERPが制御する選択的スプライシング機構について、カ
セットエキソン、相互排他的エキソン、選択的 5’ス

位を授与された際の論文の概要であり、その詳細は以下に掲載されている。）

プライス部位選択、選択的 3’スプライス部位選択およびイントロン保持のうち、カセットエキソンの個数が最も多く、イントロン保持が最も頻度よく検出された。イントロン保持とカセットエキソンに関わる標的 pre-mRNA について、5’、3’スプライス部位、
ブランチポイント部位、イントロンの長さと GC 含

https://doi.org/10.3390/ijms23052555.

Yamanaka Y, Ishizuka T, Fujita K, Fujiwara N, Kurata M,
Masuda S. CHERP regulates the alternative splicing of
pre-mRNAs in the nucleus. Int. J. Mol. Sci. 2022; 5: 2555,

量を解析すると、変化を有するものがあった。以上から、CHERP は核内で選択的スプライシングの制御に関わることが明らかとなった。今後、CHERP による選択的スプライシングの分子機構を解析する
ことで、選択的スプライシングの全体像解明に近づ
くのみならず、癌や神経疾患等の病気への理解が深まると考えられる。
謝辞
本研究について、終始ご懇篤なるご指導、ご鞭撻を賜りました京都大学大学院 生命科学研究科 分子応答機構学分野 准教授（現近畿大学 農学部 食品栄養学科 教授）増田誠司博士に心より深甚なる謝意を表します。研究を遂行するに当たりに、多大なるご指導、ご鞭撻を賜りました京都大学大学院- 125 -

学位論文概要

上水道配水システムにおけるハイスループットシーケンシングによる細菌の多様性と群集構造解析

小泉義彦

Changes in bacterial diversity and community structure in drinking water distribution system
revealed by high throughput sequencing

Yoshihiko Koizumi

Ⅰ 概要

微生物生態学的項目として、細菌現存量と細菌群

水中の微生物に起因する感染症は水道の普及により激減し、水道は生活基盤の一つとなっている。近年、水道システムの各処理段階で、それぞれに特有の細菌群集構造が存在することが明らかになりつつある。水道システム中に存在する細菌

集構造を測定した。細菌現存量は培養法による一
般細菌数及び従属栄養細菌数を測定し、直接計数
法では、SYBR Green I 染色による全菌数、エステ
ラーゼ活性を利用した 6-CFDA 染色による生菌数を測定した。細菌の多様性と群集構造解析はポー
タブルシーケンサーMinION による 16S rRNA 遺伝の群集構造についての理解を深めることは、水質異常の早期検出と早期対応に大きく寄与するものと期待される。水道水中の細菌に関するより詳細な情報が必要になっている。
本研究では、上水道配水システム（DWDS:
Drinking Water Distribution System）における細菌群

子アンプリコンシーケンス法を用いた。

集構造とその多様性の変化をハイスループットシ
ーケンサーである MinION で得た配列情報をもとに解析した。

から末端給水栓に至る配水過程において、全菌数に占めるエステラーゼ活性を有する CFDA 生菌数の割合が増加傾向にあることを認めた。配水過程においては残留塩素に耐性のある細菌が選択されていることが示唆された。

Ⅱ 対象と方法

Ⅲ 結果と考察1. 細菌現存量
直接計数法で計数した細菌現存量は、浄水場出口

1. 対象
山間部にある緩速砂ろ過方式の水道施設及びその配水システムを対象に原水の渓流水、処理施設の着水、緩速砂ろ過水、塩素処理水、3 か所の配水施設水及び末端給水栓水を採取した。

2. 細菌群集構造
試料は 2021 年 4 月から 8 月にかけて、原水である渓流水、浄水処理施設の着水、砂ろ過水、塩素処
理水及び配水過程の配水池、末端の給水栓で採取した。細菌群集構造は、MinION を用いた 16S rRNA
遺伝子アンプリコンシーケンス法で解析した。門レ

2. 方法
理化学的水質指標として、水温、残留塩素、濁度、色度、pH、全有機炭素（TOC）を測定した。
大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

ベルでは、着水及び砂ろ過水では Bacteroidetes、
Acidobacteria、Cyanobacteria、Proteobacteria など多くの門が確認され、多様性は高かったが、塩素処理- 126 -

により Proteobacteria が優占した。Proteobacteria についてさらに綱レベルで解析を行った。渓流水と着水では、Betaproteobacteria 、 Alphaproteobacteria 、Gammaproteobacteria で構成されていたのに対し、砂ろ過水では、Alphaproteobacteria、により多様性が減少した。門及び綱レベルの多様性
は塩素処理後いったん増加したが、末端の給水栓水に至る間に減少したのに対し、属レベルの多様性は
塩素処理後の配水過程で増加し、末端給水栓まで高い状態が維持された。MinION は 16S rRNA 遺伝子

Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Deltaproteobacteria がほぼ同じ割合であった。塩素
処理後は、Alphaproteobacteria の割合が大きく増加
し、末端給水栓水ではほとんどの細菌がAlphaproteobacteria であった。属レベルで解析した
ところ、着水では Yersinia 及び Aeromonas が優占種の全長配列を解析するので、種レベルまで同定することが可能となる。着水では Aeromonas hydrophila（average accuracy 86.7%）と Yersinia enterocolitica（average accuracy 85.7%）が存在した。また、砂ろ過水では Legionella pneumophila（accuracy 84.2%）が存在したが、末端給水栓水では、これらの菌種はであった。Yersinia は哺乳類の腸内に生息しており、野生動物の排泄物が原水に影響を与えた可能性があった。Aeromonas は自然の水環境に分布し、魚類や甲殻類などの動物にも生息することから、原水に存在したと考えられた。砂ろ過水では Legionella が優占種であった。緩速砂ろ過の表面にはバイオフィ

検出限界以下であった。
ハイスループットシーケンシングにより DWDSにおける細菌群集構造を属や種レベルで短時間のうちに把握することができるようになった。原水、各処理段階及び配水過程における細菌群集構造の変化と指標細菌に関わる基礎的知見は、水質異常をルムがあり、複雑な生態系が形成される。バイオフ
ィルムに生息するアメーバ体内で増殖したレジオ
ネラ属細菌が水中に放出されたことも考えられた。
塩素処理により、Yersinia、Aeromonas 及び Legionellaの相対量が大幅に減少した。これらの細菌を制御するためには、DWDS 内の残留塩素の維持が重要で早期に検出し、異常事態が発生する前に迅速に対応することを可能にするものである。

あることが再確認された。塩素処理後の水中では、Sphingomonas、Methylobacterium、 Starkeya が優占種であった。Sphingomonas はバイオフィルム形成
能力が高く、バイオフィルムの内部は殺菌のための塩素が届きにくいため、残留塩素の存在下で優占種になると考えられている。Methylobacterium は、塩大谷大学大学院薬学研究科 那須正夫教授に厚く御礼申し上げます。本研究を進めるにあたり、ご協
力いただきました共著研究者の大阪樟蔭女子大学
健康栄養学部 一條知昭先生、大阪大谷大学薬学部
内井喜美子先生、技術指導いただきました姫路獨協
大学薬学部 川井眞子先生、大阪樟蔭女子大学健康

素消毒に耐性を持つことが知られている。Starkeya
はコンクリートを腐食させることが報告されている。DWDS に用いられる鋼管は塩素による鉄の腐食を防ぐ目的でモルタルライニングされており、Starkeya はモルタルを腐食することにより、その表面に生息しているものと考えられた。これらの細菌

栄養学部 灰尾真結子先生に深く感謝します。

は、緩速砂ろ過や塩素消毒の効率を示す重要な指標として利用できるものと考えられた。
各サンプリング地点の 4 月と 8 月の属レベルの群集構造を非計量多次元尺度法（NMDS）により解析したところ、渓流水、着水及び砂ろ過水、塩素処
理水のクラスターが確認され、緩速砂ろ過と塩素消謝 辞
本論文作成にあたり、ご指導いただきました大阪(本稿は、著者が大阪大谷大学大学院薬学研究科において令和 5 年 3 月 17 日に博士（薬学）の学位を授与された際の論文の概要であり、その詳細は以下に掲載されている。)
1）Koizumi Y, Ichijo T, Uchii K, Nasu M. Changes inbacterial diversity and community structure in
drinking water distribution system revealed by highthroughput sequencing. J Microorg Control 2023;
28(1): 27-34.

毒により細菌群集構造が大きく変化していることが示唆された。また、門、綱、属の各レベルでの細菌群集の多様性をシャノンインデックスを用いて評価した結果、すべてのレベルにおいて、塩素処理-127 -

学位論文概要

16S rRNA 遺伝子全長のアンプリコンシーケンスによる浅井戸の衛生微生物学的水質評価

味村真弓

Microbial water quality assessment of shallow wells using full-length 16S rRNA gene amplicon sequencing

Mayumi Mimura

索を目指した。

Ⅰ 緒言
身近で重要な水資源であった井戸水は、水道網が全国的に充実するにつれ、日本ではその存在意
義が大きく変化した。人口比 98 %以上の水道普及率となった現在は、個人が所有する井戸は使用される機会が少なくなった。そして、その主な用途
は農業用の灌漑や庭木の水やり、入浴、トイレのⅡ 浅井戸の衛生微生物学的及び理化学的
水質評価
浅井戸の水質評価のため、衛生微生物学的項目として培養法及び直接計数法による細菌数の測定と理化学的項目として TOC、pH、濁度、色度を調査

洗浄などの非飲用に変化した。一方、世界に目を向けると、井戸水は、家庭における身近な水源として日常的に利用され、先進国でも農村部での飲用を含めた重要な水資源となっている。井戸水は流域の地質や地形、土壌、植生をはじめ様々な周
辺環境の影響を受けて水質が変化する。ところが､した。
日常的に使用されている井戸の井戸水は、特殊な環境要因がない条件下では、理化学的項目については飲料水基準値を満たしていた。しかし、下水道管埋設工事後にサンプリングした試料水では、濁度の上昇と pH のアルカリ化が観察され、周辺環境の影

その微生物学的検査は、目的に応じた培地による細菌数の測定や、糞便汚染指標となる細菌種の検出が主である。自然環境中で検出される細菌の多くは、従来の培養法では検出が困難であることから、井戸水の衛生微生物学的水質を確保するためには、培養に依存しない迅速かつ包括的な評価法

響による水質の変化が確認できた。一方、長期間放置されている井戸では、濁度や色度が高かった。これらの井戸について、換水（井戸内部の水をポンプで排水し、その後水位を自然に回復させた）を実施したところ、濁度や色度は改善された。細菌数については、飲料水の基準である「標準寒天培地を用いが望まれる。また、井戸水を農作物や庭木への散水のような用途に用いる際にはエアロゾルが発生する。微生物粒子よりなるエアロゾルは「バイオエアロゾル」と呼ばれ、エアロゾル感染を引き起こす可能性がある。そのため、消化器感染症起因菌だけでなく呼吸器感染症起因菌にも留意が必要て検出される CFU/mL が 100 以下」を満たしたのは、気温の低い時期にサンプリングした日常的に使用されている井戸の試料水のみであった。一方、長期間放置されている井戸では、直接計数法及び培養法ともに検出される細菌数が高値だった。換水後の試料水でも基準を満たすものはなかったが、培養法である。本研究では、大阪近隣に所在する浅層地下水を利用した 5 本の浅井戸を対象として、井戸水中の細菌群集構造の理解と新しい指標細菌の探大阪健康安全基盤研究所衛生化学部生活環境課

で検出される細菌数は 1 桁以上低くなった。すなわ
ち、井戸水の使用や換水による水質改善が確認できた。

- 128 -

Ⅲ ポータブルシーケンサを用いた浅井戸水中の細菌群集構造解析
ナノポアシーケンサ MinION を用いた 16S rRNA遺伝子の全長配列を対象とするアンプリコンシー

た。
長時間環境中に滞留しつづける 5 μm 以下の微小粒子について、単位体積当たりの空気中の数を減らすためには、換気と気流制御が重要であることがわかった。

ケンスにより井戸水中の細菌群集構造を解析する
方法が、新しい水質評価法として適用可能であるか検討した。更に、網羅的解析により検出された細菌の中から糞便性大腸菌や代表的な消化器感染症起因菌以外でヒトへの健康影響が考えられる新しい指標細菌の探索を行った。

本研究により、浅井戸は周辺環境の影響を受けやすく、理化学的及び衛生微生物学的水質や細菌群集
構造が変化することが確認された。ポータブルシー

5 本の浅井戸からサンプリングした井戸水について細菌群集構造を解析したところ、迅速かつ簡便に網羅的な解析ができた。そして、井戸が所在する
周辺環境の違いによると考えられる、特徴的な細菌の検出が種レベルで可能であった。また、井戸の近隣で実施された下水道管埋設工事が原因と考えら

ケンサによる 16S rRNA 遺伝子全長配列を対象とした網羅的解析手法を用いることで、日和見感染の起因菌など、従来の手法では検出が困難な細菌種レベルの解析が、迅速かつ簡便に行うことができた。解析結果から新たな指標細菌候補となりうる
Legionella pneumophila と Aeromonas hydrophila が検れる、pH 変化に伴う細菌群集構造の変化を確認することができた。今回得られた細菌種レベルの解析
結 果 か ら 、 Legionella pneumophila と Aeromonas
hydrophila が新たな指標細菌候補として考えられた。
井戸水の衛生微生物学的水質を確保するためには、迅速かつ包括的な評価が望まれる。今回用いた出された。
安全で安定した井戸水の衛生微生物学的水質を確保するためには、定期的な細菌数と細菌群集構造の情報や、細菌の生息に影響を及ぼす理化学的な水質のモニタリングが必要であると考えられる。また、ヒトへの健康影響を評価するためには、細菌種に関

16S rRNA 遺伝子の全長配列を対象とした網羅的解析手法では、日和見感染の起因菌など、従来の手法では検出が困難な細菌の種レベルの解析が迅速に行えることがわかった。ヒトへの健康影響を評価するために重要な種レベルの情報も得られる点で優れた手法であることが確認できた。当該手法は、井する情報とその現存量の情報が重要である。すなわ
ち、水質の衛生微生物学的評価には、従来の培養法と遺伝子をターゲットとした方法の組み合わせが有効である。今後、井戸水の衛生微生物学的水質を高精度に評価する新しい手法として 16S rRNA 遺伝
子全長配列を対象とした網羅的解析手法が日常的

戸水中の細菌群集構造を解析可能で、新しい衛生微
生物学的水質評価手法として適用可能であることがわかった。

に適用されることが期待される。

Ⅴ 結論

謝 辞

Ⅳ 微小粒子の拡散と沈降に関する検討

本論文作成にあたり、ご指導いただきました大阪
大谷大学大学院薬学研究科教授那須正夫先生に篤

環境中のバイオエアロゾル微小粒子の拡散と沈降、及び換気による除去について、土壌粒子を用いて検討した。発じんにより空気中に拡散した微小粒子を、パーティクルカウンターを用いて粒径別に解析した。その結果、空間中に拡散した 5 μm 以下の微小粒子は、気流の無い状態では空気中で滞留し、く御礼申し上げます。また、研究実施にあたり様々なご助言や技術的なサポートを頂きました大阪樟蔭女子大学准教授一條知昭先生、大阪大谷大学薬学部准教授内井喜美子先生、金沢大学教授古内正美先生、エーイーエスラボ馬場貴志先生と大阪大谷大学
薬学部教授谷佳津治先生、准教授見坂武彦先生（研長時間高い粒子数を維持した。滞留時に計測された微小粒子は粒径が 5 μm 以下のものが全微小粒子数の 99 %以上で、そのうち粒径 0.5～2 μm の微小粒子が 95 %以上を占め、換気によりその数は減少し究当時）はじめ衛生・微生物学研究室の皆様、姫路
獨協大学薬学部准教授川井眞好先生、大阪府立環境農林水産技術総合研究所和田匡司主任研究員に心から感謝いたします。最後に研究に供する井戸水及- 129 -

び関連情報を提供して下さいました皆様に御礼申し上げます。
（本稿は、著者が大阪大谷大学大学院 薬学研究科において令和 5 年 3 月 17 日に博士（薬学）の学位を授与された際の論文の概要であり、その詳細は以下に掲載されている。
）
1） Mimura M, Koizumi Y, Wada M, Ichijo T, Uchii K,
Nasu M. Microbial water quality assessment ofprivate wells using 16S rRNA gene ampliconsequencing with a nanopore sequencer. Biol Pharm
Bull 2023; 46: 263-271.
2） 味村真弓，馬場貴志，和田匡司，古内正美，那須正夫. 医薬品製造施設を想定した室内環境
における微小粒子の滞留と換気による除去.

医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス
2021; 52 (8): 657-661.

- 130 -

編集委員

査読者

井原 隆
○入 谷 展 弘
高橋佑介
中村暁彦
西田陽子
馬場 孝
山口瑞香
油谷藍子
吉田俊明
（〇 編 集 委 員 長 ）

入谷展弘
上村聖子
小笠原 準
川畑拓也
神吉政史
倉田貴子
新矢将尚
永吉晴奈
平井佑治
廣井 聡
村上太郎
本村和嗣

地方独立行政法人
研究年報

大阪健康安全基盤研究所

第7号

令和 5 年度

ISSN 2433-5819（無断転載禁止）
令和 6 年 1 月

編集・発行 地方独立行政法人

大阪健康安全基盤研究所

大阪市東成区中道 1 丁目 3 番 3 号
電話 06-6972-1321