2024 年 麒麟塾まとめ（session2 は座⻑を務めていたためメモを取れず）
Becker
造⾎幹細胞にゲノム編集をする際、上⼿く編集できたものと、出来ていないものができる。
これを、single cell cloning することで良いものを選ぶ、という研究。
SCID mouse の Prkdc 変異を HDR で修正
狙い通りに修正されたのは 2 割くらい
Single cell cloning: PVA システムを⽤いても流⽯に single HSC の expansion は難しいが、PVA+Soluvus なら scHSC の expansion が可能。
植畑Regnase-1：RNA decay enzyme
Pyrimidine-purine-pyrimidine loop を認識する免疫細胞で⾼発現Reg1, Reg3: LPS に反応
Reg3 KO：mild phenotype, Reg1/Reg3 dKO 早期死亡→fetal liver transplantation
DKO: lymphoid ↓、myeloid ↑IL7-Cre で CLP stage で Reg1/3 KO してもリンパ球障害なし→HSC レベルで障害
WT/DKO scRNAseq: myeloid biased HSC↑、lymphoid biased HSC↓
DKO: Nfkbiz, Ehd3 up DKO によって Nfkbiz が安定化し、タンパク発現上昇
Nfkbiz KO で、Reg1/3 DKO の phenotype を rescue できる。
Nfkbiz-ASO で myeloid differentiation 促進中島
PRC1.1
Canonical PRC1: PRC1.4 Bmi1(Pcgf4)
noncanonical PRC1.1: Pcgf1, PRC1.3/1.5 Pcgf3/5 など
造⾎における non-canonical PRC1.1 の役割を Pcgf1 cKO マウスの解析で調べた。
Pcgf1 cKO: HSC↓、Myeloid Progenitor ↓移植：Myeloid cell↑、B cell↓、T cell: no change
H2AK119ub：変化しない遺伝⼦群と、減少する遺伝⼦群がある。
H2Ak119ub down → Hoxa9 up
Hoxa9 promotes myelopoiesis in Pcgf1 ko mice
LPS challenge: BM cellurality↓ 炎症刺激に弱い？
ASXL1 KI マウスと共通点多く、興味深い。

綿貫
増殖期 HSC はエネルギー源として主に解糖系を⽤いる。
TCR cycle はあまり使っていない。
解糖系上流の代謝が活性化している→PFK 活性に注⽬
ATP-biosenser GO-Ateam2 を使った解析：
増殖期 HSC で ATP↓PFKFB3 inhibitor ATP↓HSC はミトコンドリアが利⽤できなくても、Glucose があれば ATP を産⽣できる
HSC では、PRMT1 が PFKFB3 のメチル化を介して活性化。
PFKFB3 KO、過剰発現実験：移植後早期の engraftment に PFKFB3 活性が重要。
＊解糖系阻害時：加齢造⾎幹細胞はミトコンドリア由来の ATP 産⽣を加速して ATP 濃度を維持可能、これは若年造⾎幹細胞にはない能⼒。(Cell Stem Cell Accept)
⽊暮Relapsed/Refractory MM 患者における Circulating tumor DNA (ctDNA)解析。
Mutation: DNMT3A/TET2/ASXL1/PPM1D clonal hematopoiesis などの CH gene が多い。
TP53 mutation：ctDNA で多い、KRAS, NRAS mutation：BMDNA で多い
TP53/KRAS mutation は予後不良と関連。
KRAS mutation:は ctDNA で検出された時のみ予後不良と関連している。
ctDNA 解析は MM の予後解析に有効である。
⼩⻄
多発性⾻髄腫に対する Bridging BiTE(B-BiTE)の効果検証.
B-BiTE: モノクローナル抗体と T 細胞とに結合できる新たな⼆重特異性抗体.
ヒト免疫グロブリン Fc 領域に結合する⼀本鎖抗体 (scFv) とヒト CD3 に結合する scFv とを連結して作製。いろいろな抗体と併⽤することで効果を発揮する。
Daratubumab+B-BiTe → Elotubumab+B-BiTE を交互に投与する⽅法が MM に対して有効。
中尾
Venetoclax 有り無しで CRISPR/Cas9 screening を⾏った。
March5、Ube2j2/2k KO で venetoclax への感受性が増強した。
March5 の ubiquitin ligase 活性が⼤事
March5 KO 細胞で再度 CRISPR screening: Noxa が抵抗性

March5 KO → Noxa protein UP
Noxa-MCL1 結合が上昇し、MCL1 が働かなくなる分 BCL2 が重要となり、Venetoclax 感受性になる。
Noxa は特に MCL1 との関連が強いのか？
⼩俣MLL-AF10, CALM-AF10: AF10 fusion gene ⽩⾎病の発症メカニズムを調べた。
AF10-fusion の leukemogenicity には DOT1 活性と ENL が必要
MOZ, ENL, DOT1L は HOXA promoter 領域に局在
MOZ/MORF+DOT1L inhibitor が CALM-AF10 ⽩⾎病に有効。
MLL 転座型⽩⾎病共通のメカニズムか？
久保⽥
Hmga2 はストレス条件下で⾻髄再⽣を促進する
Lin28b-Hmga2 highly expressed in fetal HSCs.
Hmga2 は⾻髄再⽣および造⾎幹細胞⾃⼰複製を促進する＊⽩⾎化はせず、⾃⼰複製のみ促進。固形腫瘍でも HMGA2 ⾼発現は良性腫瘍でよくみられるとのこと。→単独ではがん遺伝⼦ではない。ただ他の driver oncogene と組み合わせると悪性化するおそれあり。
Hmga2 ⽋損や⾻髄再⽣、⾎⼩板↓
Hmga2 KI 炎症応答シグナルを抑制、TNFa への応答性を制御
CK2 が Hmga2 リン酸化を誘導し、活性化する。
RFX ファミリー Rfx5, Rfx3 を抑制することで、HSC expansion を抑制している。
桝⾕Aggressive NK leukemia: ANKL (EB virus 関連疾患)
ANKL-PDX 樹⽴ 肝臓に集積
Trasferin 受容体 sgTFRC 肝臓集積↓
TfR1 阻害抗体は ANKL へ著明な治療効果
scRNA-seq: LAT1 highKasumi1 など肝臓に集積する AML 細胞株でも重要？
劉Nkx2-5 依存的な⼼内膜造⾎は⼼内膜床形成と時空間的に⼀致しておきる。
Muli-potent Cardiac precursor →Cardiomyocyte, Smooth muscle, Endocardial cell
Nkx2-5 KO：Notch シグナル ↓Notch 過剰発現 → ⼼内膜造⾎を誘導
Dhrs3: 造⾎性⼼内膜細胞のシグネチャー因⼦でレチノインシグナル抑制作⽤を持つ。
レチノインシグナルの抑制→マクロファージ→⼼臓弁形成三宅
好塩基球：0.5%ほどしか存在しないが、慢性アレルギーや寄⽣⾍感染防御に重要
好塩基球は IgE 依存性遅延性アレルギー反応に重要：炎症終息マクロファージが来て抑制
Ccr2 KO マクロファージが来なくなり、炎症遷延
⾦⼭(1) CD11b+B 細胞(Myeloid-like B cell と命名)：５FU 投与後に出現し、IL-10 産⽣
CD19Cre-IL10 f/f マウスで IL-10 産⽣を抑制すると、 Emergency myelopoiesis↓
HSPC↓、GMP↓
Myeloid-like B 細胞が産⽣する IL-10 はアポトーシスを防⽌し、Myeloid Skew を誘導。
(2) 敗⾎症誘導刺激後、単球はアポトーシスで減少
強い敗⾎症：単球死亡 弱い敗⾎症：単球の抹消誘導
TLR4 活性化は、単球の細胞死には無関係
TNF, IFNr 投与 → 単球死亡(なぜ単球特異的に細胞死を誘導できるかは不明)