16 動物抗菌会報 24（2002）

健康家畜由来カンピロバクターの薬剤感受性調査
石原加奈子
農林水産省動物医薬品検査所 （〒１８５８- ５１１ 国分寺市戸倉１１- ５１- ）体，産卵鶏 160 検体および肉用鶏 116 検体の糞便

１．はじめにとし，シードスワブ１号（栄研）を用いて検体を輸送後，CEM 培地による増菌培養も併用してカンピロバクターは家畜には症状を示すことなCCDA 培地により，菌分離を行った。分離株につく腸内に定着しているが，人には腸炎を引き起こいて，生化学的性状検査（オキシダーゼ、カタし，欧米では最も発生事件数の多い散発性食中毒

ラーゼ，酢酸インドキシル加水分解能，馬尿酸塩の原因菌である。最近では，人の細菌性腸炎の治加水分解能，温度別発育試験（43，37 および 25療薬であるフルオロキノロンに対する耐性株が人℃），1％グリシン，0.04％ TTC，1.5％ NaCl およ

症例や畜産食品等から分離され，話題となっていび 3.5％ NaCl 添加培地での増殖性，TSI 培地による。

る硫化水素産生能，糖分解能）〔5〕および PCR 法

当所では，昭和 51 年度に初めて全国的な動物〔2〕により菌種同定を行った。分離された菌株は由来細菌（大腸菌，サルモネラ，黄色ブドウ球菌）

1 検体 2 株について，以下の試験に供試した。の薬剤感受性調査を実施した。それ以降，数回に２）血清型別わたり定期的な全国調査が実施されてきている

C. jejuni について Penner の血清型別を，カンピが，最近，「食用動物における抗菌性物質使用のロバクター免疫血清（デンカ生研）および感作血人の健康への影響」について国際的に議論されて球調製試薬（デンカ生研）を用いて，受身血球凝いることから，平成１１年度より，健康家畜糞便集反応により行った。

由来細菌として人獣共通感染症の原因菌であるサ３）薬剤感受性試験

ルモネラおよびカンピロバクターと，薬剤感受性

薬剤感受性試験は，日本化学療法学会標準法に動向の指標菌として腸球菌および大腸菌の薬剤感準拠した寒天平板希釈法により行った 〔4〕。セフ受性調査を実施している。初年度は全国の家畜保チオフル（CTF），ジヒドロストレプトマイシン

健衛生所に家畜糞便の採材を依頼し，当所におい（DSM），ゲンタマイシン（GM），スペクチノマイて菌の分離・同定並びに分離株の薬剤感受性試験

シン（SPCM），エリスロマイシン（EM），スピラを実施したが，平成 12 年度からは一連の試験をマイシン（SPM），タイロシン（TS），オキシテト各都道府県で実施している。今回は，平成 12 年

ラサイクリン（OTC），ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル

度に収集したカンピロバクターの薬剤感受性につ（CP），ナ リ ジ ク ス 酸（NA），オ キ ソ リ ン 酸いて報告する。

（OXA），エンロフロキサシン（ERFX），オフロキサシン（OFLX），ト リ メ ト プ リ ム（TMP），ス ル

２．材料および方法ファジメトキシン（SDMX）を供試した。薬剤感受性測定用の基礎培地には 5％馬脱線維素血液添加１）分離・同定

ミューラーヒントン寒天培地（Oxoid）を用い，検体は，健康な肥育牛 155 検体，肥育豚 148 検

接種菌は 5％馬脱線維素血液添加ミューラーヒン
16

石原加奈子／健康家畜由来カンピロバクターの薬剤感受性調査／24（2004） 17トン寒天培地で 48 時間培養したものをミューラー

株，E 群 1 株，G 群 18 株，I 群 3 株，J 群 2 株，Kヒントンブロス（Difco）に浮遊させ，約 10６CFU/ml

群 2 株，N 群 4 株，O 群 2 株，Y 群 2 株，Z5 群 1に調整し，ミクロプランターを用いて接種した。

株，複合型 7 株および型別不能 26 株であった（表培養条件は 37℃，微好気（O2 5％，CO2 10％，N23）。

85％），48 時間とした。

３）薬剤感受性試験

供試菌株の MIC 分布が二峰性を示した薬剤に分離 302 株の薬剤感受性は供試 16 薬剤中，10ついて，低い MIC を示した群を感受性，高い MIC

薬剤において，MIC 分布に二峰性が認められ，OTCを示した群を耐性とし，その中間値をブレークポ（57.6％），NA および OXA（30.5％），DSM（27.8％）

イントとした。

が高い耐性率を示した（表 4）。また，分離株の主要菌種である C. jejuni および C. coli の薬剤感受性

３．結果について比較すると，C. coli の MIC 値は C. jejuniと比べ高い傾向にあり，また耐性率もいずれの薬剤においても有意に高かった（表 5）。特にマクロ１）分離・同定
肥育牛 155 検体中 38 検体（24.5％），肥育豚 148 検

ライド系においては，C. coli が 46.7％と高い耐性体中 61 検体（41.2％），産卵鶏 160 検体中 48 検体率を示したのに対し，C. jejuni には耐性株は認め（30.0％）および肉用鶏 116 検体中 30 検体（25.9％）

られなかった。また，分離された由来ごとに耐性から計 302 株のカンピロバクターが分離された率を見てみると，オールドキノロンを除くいずれ（表 1）。同定された菌種の内訳は C. jejuni 174 株，の薬剤についても肥育豚由来が最も高い値を示

C. coli 107 株，C. fetus 13 株，C. hyointestinalis 6

し，マクロライド系の EM では肥育牛 5.0％，肥（表 2）。
株，C. lari 1 株および その他 1 株であった

育豚 43.4％，産卵鶏 2.4％および肉用鶏 1.9％で，フルオロキノロン（ERFX および OFLX）では肥２）血清型別
C. jejuni 174 株の血清型は，肥育牛由来株は，A群 1 株，B 群 6 株，D 群 22 株，R 群 4 株，Z6 群

育牛 15.0％，肥育豚 22.6％，産卵鶏 4.9％および肉用鶏 7.4％であった。

2 株，複数の血清と反応を示した複合型 3 株および型別不能 5 株に分類され，産卵鶏および肉用鶏由４．考察

来株は A 群 24 株，B 群 18 株，C 群 3 株，D 群 17
平成 12 年度の調査結果では，前年度同様に肥表 1 カンピロバクター分離率

育牛，産卵鶏および肉用鶏からは主に C. jejuni

畜種

分離検体数／検体数

分離率（％）

が，肥育豚からは主に C. coli が分離された〔6〕。

肥育牛
肥育豚
産卵鶏
肉用鶏

38 ／ 155
61 ／ 14848 ／ 160
30 ／ 116

24.5
41.2
30.0
25.9

C. jejuni の血清型は肥育牛由来が 5 群以上であったのに対し，産卵鶏および肉用鶏由来では，13 群以上であった。人のカンピロバクタ−症の感染源として重視されている鶏においてはより多様な株

表 2 カンピロバクター分離株数
菌種
hyointestinalis

lari

6161

由来動物

jejuni

coli

fetus

肥育牛
肥育豚
産卵鶏
肉用鶏

43
177
53

398
5113計

174

107

13spp.

計

160
106
82
54

1302

6241225

肉用鶏

計

3163
2

1
10.1

33C

18

6432772463994321508615897
1373
620.7833I

371100153G

120.39

11E1790.23971022D* : non tested
a : TMP については 100 ≦を示す
b : SDMX を除く薬剤については 100< を示す

CTF
DSM
GM
SPCM
EM
SPM
TSOTC
CP
NAOXA
ERFX
OFLX
SDMX
TMP

抗菌剤 ≦ 0.05

126112B

A

産卵鶏

肥育豚

肥育牛

由来動物

538
616291
42360
363

1.56

22J

22K

22O

44R

7247
4482
25
15130
95
65243172539130
1060
84

6.25

76
32357
91051
311812.5

MIC (μg/ml)
3.1322Y

11Z511115251571312414225複合型22111163112301

5324541452
202212114100

117150a11*548515246
15740

16067200b11************
*
37
*

400

11**
*
**
*
*
****
*
*
238
*

400<

1

1111155252
57174
626241
41

50
12.5
1.56
3.1384

株数(30.5)(30.5)(13.6)(13.6)(1.7)(17.2)(17.2)(18.9)(57.6)(27.8)

(%)

耐性菌

150
25
25
100
6.2525

ブレークポイント1113112174

53

77

143計100<0.780.39
6.25
1.56
3.136.2525
3.136.25
0.78
0.10.39
100<100 ≦100<100<0.7812.5100<100<100<100<25100<100<6.2512.5100<100 ≦MIC50 MIC9022145型別
Z6 A/B A/Y A/Z B/D B/U C/D C/G D/N D/S I/S 不能

表 4 Campylobacter 302 株の MIC 分布

44N

表 3 C. jejuni 血清型

18 動物抗菌会報 24（2002）

石原加奈子／健康家畜由来カンピロバクターの薬剤感受性調査／24（2004） 19

表 5 Campylobacter jejuni/coli の MIC 分布MIC (μg/ml)
抗菌剤

菌種Range

MIC50MIC90CTFjejuni
colijejuni
coli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli
jejunicoli

50-100<25-100<
0.39-100<
0.78-100<0.2-0.78
0.2-3.13
1.56-12.5
3.13-25
0.1-12.5
0.78-100<
0.39-6.25
0.1-100<
1.56-25
1.56-100<
0.2-100<
0.2-100<
1.56-12.5
0.78-100<
1.56-100<
3.13-100<
0.39-100<
0.39-100<≦ 0.05-12.5≦ 0.05-12.5
0.2-25
0.1-50100<
100<
0.39100
0.39
0.39
6.25
12.5
0.78
3.13
1.56
12.5
6.25
25
1.56
100
3.13
6.25
3.13
12.5
0.39
1.56
0.1
0.2
0.39
0.39

100<
100<
0.78
100<
0.39
0.78
6.25
12.5
1.56
100<
3.13
100<12.5
100<
100
100<
6.25
50
12.5
100
1.56
100<
0.39
6.25
0.78
25

DSM
GM
SPCM
EM
SPM
TSOTC
CP
NA
OXA
ERFX
OFLX

ブレークポイント

耐性菌株数 (％)

2525

6 ( 3.4)
66 (61.7)50

4 ( 3.7)2550 (46.7)

2550 (46.7)

100
6.25
6.25

50 (46.7)
73 (42.0)
94 (87.9)

50
50
6.25
6.25
1.56
1.56
3.13
3.13

13 ( 7.5)
28 (26.2)
13 ( 7.5)
28 (26.2)
12 ( 6.9)
28 (26.2)
12 ( 6.9)
28 (26.2)

供試菌株数：C. jejuni 174 株，C. coli 107 株
ブレークポイントの設定されたすべての薬剤に関して，菌種間の耐性率に有意差が認められた (p<0.05)が定着していることが示された。また，薬剤感受レース遺伝子の 1 塩基が変異することにより容易性については，C. coli は C. jejuni よりいずれの薬に耐性を獲得するため〔1, 3, 7〕，経口投与剤によ剤においても高い耐性率を示し，特に人のカンピる群治療が行われる肉用鶏でのフルオロキノロンロバクター症の治療における第一次選択薬である耐性株の出現・増加が懸念されている。しかし，

EM では C. jejuni には耐性株が認められなかった

今回の調査では，肉用鶏由来株のフルオロキノロのに対し，C. coli では 46.7％と高い耐性率が認め

ン耐性率は肥育牛と比べても低く，推測される畜られた。しかし，現在国際的に議論されているフ産現場での抗菌剤の使用実態を反映する結果ではルオロキノロンについては，C. coli の方が 26.2％なかった。と高い耐性率を示したものの，C. jejuni においても 6.9％の耐性率が認められた。なお，抗菌剤の５．おわりに使用が制限されている産卵鶏と広範に抗菌剤が使用されている肉用鶏の薬剤耐性率には大きな差は近年，世界保健機関（WHO）において，食用動認められなかった。一般に，カンピロバクターの物における抗菌性物質の使用を制限する必要性がフルオロキノロンに対する感受性は，多くのグラ議論されており，薬剤耐性モニタリングおよびリム陰性菌と比較すると低く，また DNA ジャイ

スク分析の実施に併せて慎重使用（プルーデント

20 動物抗菌会報 24（2002）ユース）の励行が勧告されている。特にカンピロ

Soussyバクターについては，その農場内や市場などにおmutational alterations of gyrA associated with

ける疫学情報および家畜由来や人症例由来株の薬

fluoroquinolone resistance in Campylobacter jejuni

剤感受性調査についてもリスク分析を実施するたand Campylobacter coli. Microb Drug Resist, 7,めの十分なデータが集積されていない。その基礎

257-61 (2001)

CJ,Tankovic

J:Singleordouble

データを得るためにも，今後ともこのような家畜

２）Lintond D, Lawson A J, Owen R J, Stanley J: PCR

由来細菌の薬剤感受性調査を実施していくと同時

detection, identification to species level, andに，畜産現場においても抗菌剤の慎重使用の徹底

fingerprintingが望まれる。

Campylobacter coli direct from diarrheic samples.

ofCampylobacter

jejuniandJ Clin Microbiol, 35, 2568-2572 (1997)

謝辞３）Gerald Z, Yu L, Bala S, Frederick A: Ciprofloxacin
resistance in Campylobacter jejuni isolates. Detection

本調査を実施するに当たり，ご協力いただきまof gyrA resistance mutations by Mismatch

した全国の家畜保健衛生所の職員各位に深謝いたAmplification Mutation Assay PCR and DNAします。

sequence analysis. J Clin Microbiol, 37, 3276-3280(1999)

要約４）三橋進，五島瑳智子，徐慶一郎，河喜多龍祥，小酒井望，西野武志，大沢伸孝，田波

近年の薬剤耐性菌に関する国際的議論を背景に，国内において健康家畜糞便由来カンピロバク

洋：最小発育阻止濃度（MIC）測定法再改訂について．日
本化学療法学会雑誌，29，76-79 (1981)

ターの薬剤感受性調査を実施した。健康な肥育５）Nachamkin I: Campylobacter and Arcobacter. In:牛，肥育豚，産卵鶏および肉用鶏の糞便 579 検体

Manual of clinical microbiology, 7th ed. (Murrayから計 302 株のカンピロバクターが分離された。

PR, Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC, Yolken RH

これらの耐性率はオキシテトラサイクリン 57.6ed), USA, 716-726 (1999)％，キノロン 30.5％，ジヒドロストレプトマイシ

６）高橋敏雄，守岡綾子，石原加奈子，木島まゆみ，ン 27.8％，マクロライド 17.1 〜 18.9％，フルオロ小島明美，大園智子，船橋かおり，田村

キノロン 13.6％であった。いずれの薬剤について内における家畜由来耐性菌について．動物用抗菌も C. coli が C. jejuni と比べて高い耐性率を示し，剤研究会報，23，9-16 (2001)

特にマクロライドに対して，C. jejuni は耐性を示さなかった。

豊：国７）Wang Y, Huang WM, Taylor DE: Cloning andnucleotide sequence of the Campylobacter jejuni
gyrA gene and characterization of quinolone

引用文献

resistance mutations. Antimicrob Agents Chemother,37, 457-63 (1993)

１） Bachoual R, Ouabdesselam S, Mory F, Lascols C,石原加奈子／健康家畜由来カンピロバクターの薬剤感受性調査／24（2004） 21

Nationwide Monitoring of Antimicrobial Resistance in Campylobacter Isolated
from Healthy Food-Producing Animals in Japan
Kanako ISHIHARA
National Veterinary Assay Laboratory, 1-15-1, Tokura, Kokubunji, Tokyo 185-8511, Japan
Based on the international discussion about antimicrobial resistance, nationwide monitoring of antimicrobial
resistance in Campylobacter isolated from healthy food-producing animals has been carried out in Japan. A total of
302 Campylobacter strains (1 or 2 strains from each sample) were isolated from 579 feces of bovine, porcine, layers
and broilers during the period of September 2000 to March 2001. The frequencies of Campylobacter strains resistantto each drugs were as follows: oxytetracycline 57.6%, quinolones 30.5%, dihydrostreptomycine 27.8%, macrolide 17.1〜 18.9% and fluoroquinolones 13.6%. In the C. coli strains, the frequencies of resistance to all antimicrobials werehigher than those in the C. jejuni strains. It was noted that all of C. jejuni strains were susceptible to macrolide.

討論（座長：五十君靜信 国立医薬食衛研， 阪野哲也 全農家畜衛研）

質問（小川益男，日本食品分析センター）
各家保に対して，共通した検体の取り方を行うために，どのような依頼をしているか。
答（石原加奈子）
この耐性菌調査は，農林水産省の生産振興総合対策事業の一環として実施しており，事業実施要綱の中特に決まっていませんが，カンピロバクターについては過去のデータが少なく，続けたいと思います。
質問（佐藤夫，全農家畜衛研）

C. coli と C. jejuni の分布が動物により異なるので，C. coli のデータは豚での抗菌剤使用を反映していると考えて良いか。

で，各都道府県内の一部の地域に偏ることのないよ

答（石原加奈子）

う，調査対象家畜（肥育牛，肥育豚，産卵鶏，肉用

C. coli は，豚以外の検体からは，ほとんど分離され鶏）の各畜種ごとに 6 以上の畜産経営（農家）を選定ていないため，耐性率の差が豚に対する抗菌剤使用し，健康な対象家畜の糞便を採取するように規定しを反映しているのか，菌種による耐性獲得能の差を反ている。

映しているのかは現在のデータだけではわからない。

また，各都道府県の担当者を集めた研修会におい人のカンピロバクター症の治療に用いられるマクロて，その詳細を説明し，カンピロバクターについてはライド系抗生物質およびフルオロキノロン剤の耐性

シードスワブを用いた冷蔵での材料の輸送をお願いについては特に注目されているが，腸球菌のマクロラしている。

イド耐性および大腸菌のフルオロキノロン耐性はブ

質問（五十君靜信，国立医薬食品衛研）

ロイラーにおいて多く認められている。このことからどのくらいの期間，調査が必要なのですか。

考えると，豚由来株の耐性率が高いのは，その構成菌答（石原加奈子）

種による影響が大きいのではないかと考える。