ASH2023 報告【全体的な印象】l

臨床に即した話題がすごく多い。⾎液疾患が、「原因を探索する時代」から、「治療する時代」に移ったことを実感した。

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⼥性 PI がすごく多い。半分くらい？⽇本は遅れているのかも。

lscRNA-seq みんなやっている。もはや、やっただけでは意味がなさそう。

【Plenary】
Targeted Degradation of the Wiz Transcription Factor for Gamma Globin De-Repression(Pamela Y Ting, Novartis)
ノバルティスからの演題が Plenary というのが、臨床の時代を象徴している。鎌状⾚⾎球貧⾎症(Sickle cell disease: SCD)はβグロビンの点遺伝⼦変異によって⽣じる先天性疾患で、鎌状の形態を⽰す異常な⾚⾎球が⾎管閉塞を起こし、貧⾎、疼痛、臓器障害などを⽣じる。
SCD の治療については、ウイルスベクターを使って正常なβグロビン遺伝⼦を導⼊する治療や、CRISPR/Cas9 等を使って胎児型のgグロビン遺伝⼦の発現を誘導する遺伝⼦治療が注⽬されているが、遺伝⼦治療は現時点ではできる施設が限られているということで、どこでも使える低分⼦薬を開発しました、という話。
多数の化合物を⽤いた Functional Screening
を⾏い、転写因⼦ WIZ の分解を誘導する molecular glue として働く化合物が、 gグロビン遺伝⼦の発現を誘導する作⽤を持つことを発⾒した。化合物の改良、そしてその薬効チェッ
クなどは流⽯に製薬会社という感じの圧倒的な実験量で、費⽤等効果はともかく確かに良い薬ができたことは間違いなさそう。この薬は⽣涯飲む必要があるのか？という質問には、躊躇なく Yes. このあたりも製薬会社的。
Metabolic Programming of Hematopoietic Stem Cell Function By Prenatal Folate(Brian Krum, University of Utah)
妊娠中のメスマウスに、葉酸⽋乏⾷および葉酸追加⾷を与えて、⽣まれてきた⼦供の造⾎幹細胞を評価。葉酸⽋乏⾷を与えたマウスから⽣まれた⼦供の造⾎幹細胞では、ミトコンドリア機能に異常があり、移植時の⽣着能が低下していた。⼀⽅、葉酸追加⾷を与えたマウスの造⾎幹細胞は、⽣着能が増強していた。
妊娠時の栄養状態の差が、ずっと持続して⽣まれた⼦マウスが⼤⼈になった後の造⾎幹細胞機能にも影響しているのは興味深い。ただ、これらの結果をどこまでヒトに当てはめて良いかは不明。
【E. Donnall Thomas Lecture and Prize】
Katy Rezvani, M D Anderson Cancer Center

Car-NK 細胞開発で有名な MD Anderson の⼥性医師。E. Donnall Thomas 先⽣は造⾎幹細胞移植の開発で有名だが、新しい細胞治療として、Car-T 細胞に続き、Car-NK 細胞も⼤きな注⽬を集めている。Car-T 細胞は基本的に⾃分の T 細胞を使う必要があるため⼤量⽣産ができないが、免疫的なしばりのゆるい NK 細胞であれば、良い臍帯⾎由来 NK 細胞を増やすことで予め準備しておくことができる(コストもだいぶ抑えられる)、というのが NK 細胞の⼤きな利点。
このグループは、まず「良い」臍帯⾎(保存までの期間が短く状態の良い細胞)を使うことが何よりも重要であることを突き⽌め、品質にこだわった臍帯⾎細胞を基にした様々な CarNK 細胞を開発し、治療効果を検証している。本当に様々な Car-NK 細胞を開発しており、圧倒的。私も Car-NK 細胞には⼤いに魅⼒を感じているが、同じようにやっても勝負にならないので、⼀⼯夫が必要であることを実感した。
【Oral presentation】
Single-Cell Characterization of TP53-Mutated AML Patients Treated with Frontline
Azacitidine, Venetoclax, and Magrolimab Reveals Mechanisms of Response and Resistance(Poonam N Desai, MD Anderson Cancer Center)
Magrolimab (anti-CD47 mAb), azacitidine, and venetoclax (AVM)で治療した TP53 変異
AML sample を⽤いて、scRNA-seq と scTCR-seq を施⾏。
→ 腫瘍細胞の erythroid differentiation や oxidative phosphorylation 亢進が治療抵抗性に関与している。また、治療が効かなかった症例では、CD8 T 細胞の活性が低下している傾向もあった。
Primary Acute Myeloid Leukemia Cells Trigger Distinct Activation Patterns in Expanded NKCells (Hanna Duàn, University of Helsinki)
AML 患者から採取した BM 細胞(正常細胞を含む)と NK 細胞を共培養し、scRNA-seq で解析した。
→ 約半数の AML sample は、NK 細胞の活性化を誘導したが、残りの半数はしなかった。
HLA-C の⼀致、不⼀致は、NK 細胞の活性化にはあまり関係なかった。NK 細胞との共培養により、患者 BM 中の T 細胞が活性化する傾向があった。
＊SETDB1 を抑制することで NK 細胞活性化率を上昇させられるのでは？この培養系はうちでもぜひ確⽴したい。
GATA1 Target Gene CSF2RB Is Functionally Coupled to MPL and Marks a TPO-Dependent
Preleukemic TAM Cell Population Sustained By the Fetal Liver but Not Bone Marrow(David Cruz Hernandez, University of Oxford)主に Down 症でみられる、新⽣児期に⽩⾎病様の芽球が⼀時的に増加する(Transientabnormal myelopoiesis: TAM)と呼ばれる疾患がある。TAM 細胞は胎児造⾎の場所であるfetal liver では増殖できるが、成体造⾎の場所である⾻髄内では増殖できないため、新⽣児期を乗り切ると⾃然に軽快する。ただ、なぜ fetal liver 環境のみで TAM 細胞が増殖できるかは不明であった。
→本研究では、TAM 細胞を⽤いた scRNA-seq などから、CSF2RB(北村先⽣が⾒つけた IL3,IL5, GMCSF 受容体に共通する common beta chain) が⾼発現していることを⾒出した。しかし TAM 細胞では、パートナーである alpha chain (IL3, IL5, GMCSF 受容体)のいずれも発現していない。TAM 細胞では、CSF2RB が MPL (TPO レセプター)とヘテロダイマーを形成し、シグナルを伝達していると考えられた。また、fetal liver では TPO の濃度が⾼いた
め、TAM 細胞が増殖できるのではないかと考えられた。
＊CSF2RB-MPL が本当にヘテロダイマーとして働くのであれば興味深い。
Identifying Stress Granules As Determinants of Leukemia Stem Cell Maintenance and Stress
Adaptation (Amanda Tajik, Princess Margaret Cancer Centre)
RNA Binding Protein (RBP)を対象とした In vivo CRISPR/Cas9 library screening で、stressgranule (SG)関連の RBP が多数同定された。Core SG protein である G3BP1 をノックダウンする実験を⾏い、G3BP1 は⽩⾎病細胞の⽣存やコロニー形成に重要であることを証明。
メカニズムとしては、SG に過剰な⾃然免疫経路の活性化を抑制する機能があり、これが⼤事なのではとのこと。
＊ 他 に 、 “m6A Mediated Ribostasis of RNA Stress Granule Assembly Governs BloodDevelopment and Regeneration”という発表もあり、Stress Granule は⾯⽩そう。⼭本先⽣のシステムで何かできないか？
Intra-Leukemic IFNγ Signaling Mediates Cell Cycle Suppression and Chemoresistance inAML (Daiki Karigane, Stanford University School of Medicine)
２種類の PDX 細胞を同時に移植するというユニークな実験系を⽤いて、Cell cycle の速いものと遅いものどちらも⽣着能を持つが、速いものと⼀緒に移植すると遅い⽅の増殖が抑制されること(当たり前)、しかし遅い⽅の細胞も単独で移植するとしっかり⽣着することから、⽩⾎病幹細胞活性は保たれていることを⽰した（ここが重要）。そしてこの遅い⽅の⽩⾎病細胞では IFNγ が活性化しており、化学療法に抵抗性を⽰すことがわかった。
＊IFNγ は⽩⾎病幹細胞の治療抵抗性と関連していそうだが、単なる移植実験ではその重要性が⾒えないかも。治療実験を⾏う必要がありそう。
The Mevalonate Pathway Is a Therapeutic Target in TP53 Mutant Acute Myeloid Leukemia(Sarah Skuli, The University of Pennsylvania)

TP53 変異固形腫瘍では、mevalonate 経路が腫瘍の増殖や転移に重要な役割を果たしている(知らなかった).そこで、TP53 変異 AML における mevalonate 経路の役割を調べた、という研究。TP53 変異腫瘍では、AraC 治療時に mevalonate 経路が活性化し、それによってミトコンドリアの OXPHOS(酸化的リン酸化)が亢進し、治療抵抗性が増す。Statin+AraC併⽤療法が、TP53 変異 AML に効く。
＊薮下君の論⽂で、Decitabine が TP53 変異 AML に効きやすいこと、Statin と相乗的治療効果を⽰すことを明らかにしているが、何か関係あるのか？
Targeting Super-Enhancers Driving EVI1 Expression in Leukemia By Inhibition ofp300/CBP (Dorien Pastoors, Oncode Institute)t(3;8)転座を持つ AML では、Myc Enhancer が EVI1 遺伝⼦に近接することで EVI1 が⾼発現することが以前に⽰されていた。本研究では、t(3;8) K562 model (Ottema et al. 2021)を⽤いて EVI1 が⾼発現するメカニズムを解析し、CBP/p300 が重要な役割を果たしていることを⾒出した。Inv(3;3)など他の転座でも同様のメカニズムが働いているかどうか、興味深い。
Label-Free Cell Detection of Acute Leukemia Using High-Content Morphological Profilingin Flow (Yoko Kawamura, ThinkCyte)
Ghost cytometry を使って、染⾊なしで細胞を AML と ALL に分類する⽅法を開発した。適切なトレーニングを⾏えば、より細かい分類(monocytic, erythroid など)もできそう。
【Poster presentation】
The Effect of SCD-1 Inhibition on Human Hematopoietic Stem Cell Mitochondrial
Metabolism, Cell Proliferation, and Differentiation Potential(Olivia Perrone, Cincinnati Children's Hospital Medical Center)
SCD-1 inhibitor が造⾎幹細胞の造⾎再構築能や分化に及ぼす影響を検証。SCD-1 阻害剤は造⾎再構築能には影響を及ぼさなかったが、リンパ球系細胞、特に T 細胞の割合を増加させた。
＊SCD が APL に⼤事という薮下仮説と関係あるか？
Nuclear Condensates Are a Therapeutic Vulnerability in NPM1-Mutant Acute Myeloid
Leukemia (Gandhar Datar, Baylor College of Medicine)
NPM1c が liquid-liquid phase separation (LLPS)によって核内で⾮膜型の構造体を形成し、XPO1, NUP98, KMT2A などとともに HOX 遺伝⼦の発現を⾏っている、と主張。
＊なぜ NPM1c のみが LLPS によって構造体を形成できるのか不明。配列的には WT をあまり変わらないはずだが…. NPM1-WT に NES をつけて核外移動を強制的に誘導しても、HOX 遺伝⼦の発現等の変化はなかったとのこと。
RUNX1Isoforms

Regulate

RUNX1andTarget-Genes

DifferentiallyinPlatelets/Megakaryocytes: Association with Clinical Cardiovascular Events（Liying Guan Temple University）
RUNX1 は、⾃分⾃⾝や他の RUNX family(RUNX2 や RUNX3)のプロモーターに結合し、発現を制御していることは以前から知られているが、RUNX1b と RUNX1c で逆の性質を持つらしい。HEL 細胞で、RUNX1B overexpression は、RUNX1C と RUNX1A mRNA/protein
expression を 抑 制 す る 。 ⼀ ⽅ 、 RUNX1C overexpression は 、 RUNX1B と RUNX1AmRNA/protein 発現を増強する。
＊RUNX1A のタンパク発現を Western でみることは可能。ただ、RUNX1b/c と⽐べるとかなり低いので、相当 long exposure する必要があるらしい。
＊RUNX1b, RUNX1c それぞれを knockdown してみても良いかも。
RNA-Binding Protein RBM5 Plays an Essential Role in Acute Myeloid Leukemia By
Activating the Oncogenic Protein HOXA9(Mengli Zhang, Soochow University)
HOXA9-endogenous reporter を⽤いて Genome-wide CRISPR/Cas9 screen を⾏い、RNAbindig protein RBM5 を HOXA9 活性化因⼦として同定した。また、RBM5 が AML 細胞の増殖に重要であることも⽰した。
Phase Separation Mediates RUNX1- Mutation Leukemic Transformation(Xiuhua Su, Shandong University)
RUNX1 も phase separation するとのこと。確かに、Immunostaining で dot 状にみえることはあった気がする。ほとんどの分⼦が、多かれ少なかれ特定の状況では LLPS している？
Non-Viral RNA-Lipid Nanoparticles for High Efficiency Genome Editing of CD34+
Hematopoietic Stem and Progenitor Cells for Advanced Cell and Gene Therapies(Reka Geczy, Precision NanoSystems ULC, Vancouver, BC, Canada)
うちとやっていることはほぼ同じ。Cas9 RNA + CD45-sgRNA 2 種類をモル⽐ 1:0.5:0.5 で混合して LNP に封⼊し、80%程度の Knockout 効率を達成。LNP に封⼊する場合は、Proteinより RNA の⽅が良い。RNA Modification はあまり追求していない、とのこと。In vitro のみで、in vivo ではやっていない。