平成18年度〔2006〕No.51
宮崎県工業技術センター・宮崎県食品開発センター研究報告

収穫時期の違いによるヘベズの品質および機能性の変化＊
酒井 美穂＊1・木下 哲次＊2・一政 洋介＊3・奥野 智子＊4
Change in Quality and Functionality of Hebezu in Every Harvest Time
Miho SAKAI,Tetsuji KINOSHITA,Yousuke ICHIMASA and Tomoko OKUNO
当県特産の香酸柑橘であるヘベズについて，収穫時期毎の品質および機能性の変化を調査した。その結果，品質については，収穫前期で果肉酸度が高く，収穫後期で果実に占める果肉の割合や，果肉の糖含量が増加した。よって，収穫前期は酢やドレッシング類，後期はジュースや菓子類の加工に適することが考えられた。また，機能性については，収穫前期で果肉および果皮のフラボノイド含量が高く，後期で果肉および果皮の総ビタミンＣ（V.C）含量が高くなった。さらに果皮の肝がん細胞増殖抑制作用は収穫前期で高くなる傾向にあった。以上の結果より，使用部位や収穫時期を選択することで機能性素材としての利用の可能性が期待された。
キーワード：ヘベズ，香酸柑橘，収穫時期，フラボノイド，がん細胞増殖抑制
１

はじめにッサーで粉砕後，一部はナイロンろ布を使って手筆者らは，これまで当県産農産物の付加価値の向上，機能性食品の開発を目的として農産物の機能性を網羅的に評価してきた。本研究では，

１）２）

先の評価により見出された作物のうち，ヘベズにで絞り果汁を得，残りは凍結保存あるいは凍結乾燥粉末とし，試験に供した。
２−２

収穫時期による品質変化

１）果実重量および果肉，果皮の重量の測定注目し研究を進めている。当県特産の香酸柑橘で収穫時期毎に20個体ずつ果実の重量を測定し平あるヘベズは，カボスやユズ同様，酢として食さ均果実重量を求めた。その後，果肉および果皮にれている。そこで，新規加工品や機能性素材など分け，各部位の重量を測定した。

新たな利用可能性を探るため，品質および機能性

２）果肉の酸度および糖の測定成分の変化を収穫時期毎に調査した。

果肉酸度は，果汁を用い滴定法で測定した。測定値はクエン酸量に換算し重量％で示した。糖含２

実験方法

２−１

使用原料および前処理

ヘベズは，露地栽培物の出荷が始まる８月から量はHPLCにより測定した。凍結した果肉に適量の蒸留水を加え，摩砕後定容した。0.45μmフィルターでろ過し，そのろ液をHPLC分析に供した。

果皮が黄化する11月までの約４ヶ月間，日向市生

HPLCの測定条件は以下のとおりであった。

産者より提供を受けた。指定した木より20個体ず装つ，約２週間ごとに採取し，果皮と果肉に分けた。

検出器：示差屈折率

果皮は凍結乾燥後に粉砕し，果肉はフードプロセ

カラム：COSMSIL Sugar-D（4.6mm×250mm）

置：島津高速液体クロマトグラフ

カラム温度：30℃＊＊１＊２＊３＊４

機能性を活かす加工技術の開発：ヘベズおよびブルーベリーの機能性を活かした食品開発（第１報）
食品開発部
東臼杵南部農業改良普及センター
日向農業協同組合
財団法人 宮崎県産業支援財団（現 宮崎県農村計画課）

移動相：80％アセトニトリル溶液
流量：1ml/min

２−３

収穫時期による機能性成分変化

１）果肉および果皮のV.C測定
73

収穫時期の違いによるヘベズの品質および機能性の変化

V.C含量はHPLC法により測定した ３）。凍結し３時間培養し，650nmの吸光度を参考波長としてた試料を粉砕し秤量後，直ちに５％メタリン酸を450nmの吸光度をマイクロプレートリーダーで測加え摩砕した。定容後0.45μmフィルターでろ過定した。測定は３連で行い，細胞にDMSO1μlをし，①ろ液と，②ろ液を中和しDTT溶液で還元し添加したものをcontrolとし，細胞増殖はcontrolのたものを，HPLC分析に供した。また①を還元型平均吸光度に対する百分率で算出した。また，対V.C（AsA）②を総V.Cとし，②から①を差し引

control%が50%の時の試料濃度をIC50として増殖いた値を酸化型V.C（DAsA）とした。HPLCの抑制活性を示した。

測定条件は以下のとおりであった。

４）カタラーゼ添加によるがん細胞増殖抑制試験

PU980

最終濃度が50U/mlになるようにカタラーゼを検出器：紫外（242nm）添加した培地を用いて，３）と同様に肝がん細胞

カラム：Inertsil ODS-3（4.6mm×250mm）

増殖抑制試験を実施した。

装置：JASCO

カラム温度：30℃
移動相：１％メタリン酸溶液

３

流３−１

量：1ml/min

２）果肉及び果皮のフラボノイド測定

結果および考察
収穫時期による品質変化

果実重量は収穫後期になるほど増大した。果実

フラボノイド含量はHPLC分析により測定しに占める果肉の重量割合は10月上旬から11月上

た 4 ）。 凍 結 乾 燥 粉 末 1 0 0 m g を メ タ ノ ー ル ：旬にかけ相対的に高く，果皮の重量割合は８月上dimethyl sulfoxide（DMSO）（１：１）にて３回

旬から９月中旬にかけて高くなった（図１，２）。

抽出し，抽出液を併せて定容後，0.45μmフィル
ターでろ過しHPLC分析に供した。HPLCの測定条件は以下のとおりであった。
装置：島津高速液体クロマトグラフ

検出器：フォトダイオードアレイ
カラム：Mightsil RP-18（4.6mm×250mm）
カラム温度：40℃
移動相：Ａ液；10mMリン酸溶液
Ｂ液；メタノール
流量：0.75ml/min

グラジエント：Ｂ液20％（２分）→45%（43分）→50%（５分）→20％（５分）−20％（５分）

図１

収穫時期毎の果実重量３）果皮の肝がん細胞増殖抑制活性の測定
凍結乾燥粉末1gに30mlの80％エタノールを加えてボルテックスで30秒かくはんし，NO.5Aのろ紙で吸引ろ過した。そのろ液をエバポレーターで濃縮し，凍結乾燥後抽出物を得た。抽出物はDMSOに再溶解し供試した。細胞はHLE，HLF，Huh-7の３種の肝がん細胞を用いた。細胞懸濁液（1×104cells/ml）を96穴プレートに50μl添加し，24時間接着させた。DMSOで希釈した試料を培地に懸濁させ，あらかじめ細胞を接着させてある96穴プレートに50μｌずつ分注した。48時間培養後，テトラカラーワン試薬10μlを加えてさらに74

図２

収穫時期毎の各部位重量割合

収穫時期の違いによるヘベズの品質および機能性の変化

果肉中の糖は，ショ糖，ブドウ糖，果糖で構成されており，その総量は10月上旬から11月上旬

シュウミカンの果肉および果皮でも同様であるとの報告がある５）６）（図５−１，５−２）。

にかけ高くなった。果肉酸度は，８月上旬から９次に収穫時期毎のフラボノイド含量を測定し月下旬にかけて高く，それ以降は低下する傾向にた。果肉および果皮からはナリルチン，ナリンギあった（図３，４）。

ン，ヘスペリジン，ネオヘスペリジンの４種のフ以上の結果より，果肉は，収穫前期で酸が高いラボノイドを検出した。果肉及び果皮ともに収穫ため，酢やドレッシングなどの加工に適すること，前期に検出したフラボノイドの総量が高い傾向が収穫後期で果実に占める果肉の割合が高く，糖含認められた（図６−１，６−２）。

量が高くなることから，ジュースや菓子類の加工

さらに，これまでの研究２）で活性を認めているに適することが考えられた。

ヘベズ果皮肝がん細胞増殖抑制活性を，収穫時期３−２毎に評価した。既報２）で，ポリフェノールを培地

収穫時期による機能性変化

収穫時期毎のV.C含量を測定した。結果，果肉に添加すると過酸化水素が発生し，がん細胞の増および果皮の総V.C含量は収穫後期に増加した。

殖を抑制することを報告している７）８）９）10）。ヘベ

また，増加した総V.Cは，抗酸化作用を有する

ズ果皮も前述よりポリフェノールを含んでいるこAsAがほとんどであった。これらの傾向は，ウンとから，カタラーゼ添加試験を実施し，その増殖

図３

図５−１

収穫時期毎の果肉糖含量

収穫時期毎の果肉V.C含量

図４

図５−２収穫時期毎の果肉酸度

収穫時期毎の果皮V.C含量
75

収穫時期の違いによるヘベズの品質および機能性の変化

図６−１

収穫時期毎の果肉 フラボノイド含量

図７−１

ヘベズ果皮HLE増殖抑制活性

図７−３

ヘベズ果皮Huh-7増殖抑制活性

図６−２

収穫時期毎の果皮 フラボノイド含量

図７−２

ヘベズ果皮HLF増殖抑制活性

図８ 収穫時期毎のヘベズ果皮肝がん細胞増殖抑制活性（IC50）

抑制要因を検討した。その結果，HLE，HLF，くなる傾向が認められた（図８）。収穫後期に減Huh-7，いずれの細胞の増殖抑制作用も阻害され少する成分としてフラボノイドが考えられたた

なかったことから，ヘベズ果皮のがん細胞増殖抑め，今回検出された4成分の肝がん増殖抑制活性

制作用は過酸化水素に起因しないことが推測されを確認した。しかし，いずれの成分にも濃度依存た（図７−１，７−２，７−３）。次に収穫時期的な増殖抑制作用は認められなかった（図９−１，毎の肝がん細胞増殖抑制活性を検討した。すると

９−２，９−３，９−４）。

収穫前期から中期にかけて活性が高く，後期に低76

収穫時期の違いによるヘベズの品質および機能性の変化

４まとめ
ヘベズの収穫時期毎の品質および機能性を検討した結果は以下のとおりであった。
１）果肉は，収穫前期は酸度が高いため酢やドレッシングなどの加工に適し，収穫後期は糖含量が高く果実に占める果肉の割合が高くなるためジュースや菓子類の加工に適することが考えられた。

図９−１

ナリルチン肝がん細胞増殖抑制活性

図９−２

ナリンギン肝がん細胞増殖抑制活性

図９−３

ヘスペリジン肝がん細胞増殖抑制活性２）果肉および果皮の総V.C含量は収穫後期に増加した。増加した総V.CはAsAがほとんどであった。
３）果肉および果皮からナリルチン，ナリンギン，ヘスペリジン，ネオヘスペリジンの4種のフラボノイドを検出した。果肉及び果皮ともに収穫前期に各フラボノイドの総量が高い傾向が認められた。
４）カタラーゼ添加試験より，ヘベズ果皮の肝がん細胞増殖抑制作用は，過酸化水素に起因しないことが分かった。
５）ヘベズの肝がん細胞増殖抑制活性は収穫前期から中期で高く，後期になるほど低下する傾向が認められた。
６）今回検出したフラボノイド４成分に濃度依存的な肝がん細胞増殖抑制作用は認められなかった。
５

参考文献

１）柚木崎千鶴子，小村美穂，アショク・クマル
・サーカー，岡部玲二，宮崎県工業技術セン
ター・食品開発センター研究報告，48，p.91-98 (2003)．
２）酒井美穂，柚木崎千鶴子，岡部玲二，宮崎県
工業技術センター・品開発センター研究報告，50，p.87-93(2005)．
３）池ヶ谷賢次郎，高柳博次，阿南豊正，茶業研究報告，71．
４）市ノ木山浩道，園芸学会雑誌別冊，第73巻，２号，p.109
５）伊藤三郎ら，果実の科学，朝倉書店，p.5253（1991）．

図９−４

ネオヘスペリジン
肝がん細胞増殖抑制活性77収穫時期の違いによるヘベズの品質および機能性の変化

６）松尾友明，伊藤三郎，化学と生物，15，p.732-736
７）Lee Hua Long，Marie Veronique Clement，Barry Halliwell，BBRC，273，1，p.50-53（2000）
８）Phing Chian Chai，Lee Hua Long，BarryHalliwell BBRC，304，4，p.650-654（2003）
９）久保田芳美，湯浅（小島）明子，湯浅勲，生活科学研究誌，Vol.2（2003）
10）Hiroshi Nakagawa, Keiji Hasumi, Je-Tae
Woo,

Kazuo

Nagai,

MasaakiWachi,

Carcinogenesis Vol25, 9, p.1567-1574（2004）

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