チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞
セルバンク安全性試験と特性解析

チャイニーズハムスター
卵巣（CHO）細胞セルバンク
安全性試験と特性解析

マスターセルバンク（MCB）
テストとエンドオブプロダクションセルバンク（EoPC）
テスト

20年以上にわたって確立されてきています。CHO生産細胞株の安全性と特性解析に関れ、細胞株の最初の拡大培養を担い広範囲に及ぶ特性解析を

CHO細胞は製薬業界で最も広く使用されている生産細胞株で、安全性プロファイルもするガイドラインは、医薬品規制調和国際会議（ICH）Q5（R1）「ヒト又は動物細胞株を用いて製造されるバイオテクノロジー応用医薬品のウイルス安全性評価」と、ICH Q5D「生物薬品（バイオテクノロジー応用医薬品 | 生物起源由来医薬品）製造用細胞基剤の由来、調製及び特性解析」に調和されました。

2007年以降、ザルトリウスは200件以上のチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞セGMP適合製品の製造には、まずマスターセルバンク（MCB）

MCBテストは1回実施します。エンドオブプロダクションセルバ

均一に増殖された細胞株で、凍結用チューブに均質に分注さ断し、MCBに存在はしていても検出されない可能性のある低を作製しなければなりません。MCBはクローン細胞集団から必要とします。すべてのワーキングセルバンク（WCB）は完成したMCBから作製されます。外因性ウイルス、内在性ウイルスによる汚染の有無を問う広範なスクリーニングに加え、微生物汚染の有無を調べるテストも実施する必要があります。

ルバンクの安全性及び特性解析試験を実施してきました。当社研究者は豊富な知識と経験を有しており、化学や規制上の要件に適合する最適かつ費用対効果の高い試験戦略についてのアドバイスを提供していきます。バンク製造時に使用される細胞株と原材料の履歴も考慮し、テストパッケージをご提案いたします。

ザルトリウスはMHRAライセンスを取得したFDA査察完了施設において、ICH Q5（R1）及びICH Q5Dに対応したGMP製造用CHO生産セルバンクのリリースをサポートするための、包括的なGMP、GLP適合アッセイ一式を提供しています。

MCB

WCP

EoPC

同一性+++

マイコプラズマ+++

無菌性+++In vitroアッセイ+++In vivoアッセイ+-+抗体試験+--

レトロウイルス感染性+-+

逆転写酵素---

電子顕微鏡+-+

種特異的試験

+表1：GMP、GLP試験要件概要

詳細は www.sartorius.com を--レベルの汚染を検出するため、ほぼ同様で若干種類の少ないテストパッケージが繰り返されます。また、EoPCを検査することで、潜伏感染や製造工程で混入した汚染物質も検出することができます。生産に使用されたEoPCテストは製品許可申請（PLA）の提出前に実施する必要があります。MCBとEoPCに要求されるテスト概要を表2に示します。

アッセイ内容アッセイ期間（週）サンプルの要件

EP | USP | JPに従う直接摂取による無菌性試験、

4テスト用にセルバンクの1%（最低２バイアル）

EP | USPに従うマイコプラズマテスト（寒天培地と指標細胞）

61バイアル31バイアル

微生物汚染（テクニカルノートT1）
バリデーションおよび試験基盤
同一性細胞株同一性に関するDNAバーコーディングアッセイ試験

ンク（EoPC）では、細胞が原細胞から変化していないかを判

外来ウイルス因子微生物汚染

外来ウイルス因子検出のための28日間のin vitroアッセイ（Vero細胞、MRC-5及びCHO検出細胞株）

In vivo外来ウイルス因子アッセイ：成体マウス、乳のみマウス、及び発育鶏卵を使用したICHトピックQ5A(R1)に従うバイオテクノロジー医薬品のウイルス安
全性評価

レトロウイルス（テクニカルノートT2）とクオリフィケーション用に1.5%6細胞を増殖させ調製

8細胞を増殖させ調製（又は3バイアル + 70 mL 上澄液使用）（又は 1 × 10 7 cells/mLの23 mL上澄液使用）

Mus dunni 細胞との共培養とその後のMiCl S+L-アッセイによる

6細胞を増殖させて得た生細胞透過型電子顕微鏡（TEM）による200細胞プロファイル試験

4細胞を増殖させて得た生細胞

5ウイルスとマウス抗体作製テスト(MAP)、

10リアルタイムPCRによるウシ、ブタウイルススクリーニング

2リアルタイムPCRによるベシウイルスの検出

2

異種指向性マウスのレトロウイルス検出
種特異的ウイルス

16ウイルス（EoPCには不要）

リアルタイムPCRによるMVM検出

2

細胞を増殖させ調製（又は、1 x 10 7 cells/mLの8 mLの培養上清）

1バイアル
1バイアル
1バイアル

表2：MCBとEoPCテスト。テクニカルノート1 – 6を参照のこと。

ご覧ください。
23

ワーキングセルバンク
（WCB）
テスト

遺伝的特性アッセイ

MCBに関する特性解析が広範囲に行われているため、WCBには限定的に試験を実施すべきです。

ICHガイドラインでは、適正なタンパク質の安定生産のためにザルトリウスは以下の遺伝的安定性アッセイを提供しており、必要であると記載されています。

することができます。

は挿入配列の安定性と完全性について特性解析を行うことが一方で、MCBの代替として、WCBに対して包括的な試験を実施する場合もあります。WCBに推奨されるテストの概要を図3

お使いの製品に最もふさわしいアプローチについてアドバイス

お客様の製品ライフサイクルの適切な時点で、MCB、WCB、に示しています。

EoPCの同等性評価を遺伝子特性評価アッセイと並行して行うことが推奨されています。

アッセイ内容微生物汚染（テクニカルノートT1）

アッセイ期間（週）サンプルの要件

アッセイ内容アッセイ期間（週）サンプルの要件

直接接種による無菌性試験（欧州薬局方最新版2.6.1無菌性、米国薬局方<71>）

4mRNAシーケンシングによる導入遺伝子配列（コード領域）確認

61バイアル

マイコプラズマテスト（欧州薬局方最新版2.6.7. マイコプラズマ及び（最低2バイアル）*USP – NFマイコプラズマテスト、USP<63>最新版）

61バイアルDNAシーケンシングによる導入遺伝子近接領域確認

61バイアル

同一性

細胞株同一性に関するDNAバーコーディングアッセイ

2

最低 1 × 10 7 細胞を含む 1バイアル

テスト – リアルタイムPCRによる挿入遺伝子コピー数測定

外来ウイルス因子

外来ウイルス因子検出のため28日間のin vitroアッセイ（Vero細胞、MRC-5及びCHO検出細胞株）

6

セルバンクの1%細胞を増殖させ調製（又は3バイアル＋70 mLの培養上清）

遺伝子解析

設計とバリデーション – リアルタイムPCRによる挿入遺伝子コピー数測定

5-2

サザンブロットによる制限酵素解析

61バイアル1バイアル

表4：遺伝的特性アッセイ

テクニカルノートT7を参照。

表3：WCBテスト*又はMCBに適格性認証されている最小量45

統合型サービスの提供

包括的ソリューションのための統合型サービスの一環として、----

以下に関する総合的なソリューションを提供しています。

詳細情報は各サービスのカタログをご覧ください。

細胞株開発

詳細は www.sartorius.com を

CHO GMPセルバンキング
CHO製品のテストと特性解析ご覧ください。

バイオシミラーと新規のバイオ医薬品(NBE)の分析と特性解析
カスタムアッセイ設計

テクニカルノート
T1.

Glasgow, UKGöttingen, Germany
Ulm, Germany
Cambridge, USA
Pangyo, South Korea

T4.

マイコプラズマと無菌性の検査におけるセルバンクサンプルのクオリ

MAPテストは以下のウイルスを検出します。エクトロメリアウイルス、は、最終的な凍結製剤に抗生物質が含まれている場合は別の膜ろ過（PVM）、レオウイルス3型、マウス脳脊髄炎ウイルス、乳酸脱水素酵フィケーションが、MCBでは1度要求されます。無菌性試験について法を行うことができます。

T2.

CHO細胞株には、内在性かつ欠損性の非感染性レトロウイルスが含まれています。レトロウイルステストを行う際は多くのアプローチを取り得ることができますが、すべての手順を実施する必要はありません。

リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、ハンタウイルス、
マウス肺炎ウイルス
素ウイルス、センダイウイルス、
マウス微小ウイルス（MVM）、
マウスア

デノウイルス、
マウスサイトメガロウイルス、
マウス肝炎ウイルス、マウ
スロタウイルス、ポリオーマウイルス、胸腺ウイルス、Kウイルス。

T5.

作製又は開発時のいずれかの時期において親細胞がウシの血清又はブタのトリプシンに触れた場合、様々なウシおよびブタ特異的ウイル■

a. 電子顕微鏡はレトロウイルス性粒子（出芽C型粒子、R型粒子、及■b. PERTアッセイは酵素活性を検出するのに使用されています（ハT6.

んでいるため、結果は陽性となるはずです）。

標準条件で培養可能であるという前提のもと、実施することが可能■

び嚢内A型粒子等）を視覚化する強力なツールです。

ムスター細胞が内在性かつ欠損性の非感染性レトロウイルスを含c. 検出用の細胞ベースの感染性アッセイは、検出されたウイルスがスの網羅的な試験を実施する必要があります。

細胞増殖は、BioOutsourceで利用可能な手順および機器を用いたです。特殊な要件がある場合はザルトリウスまでご相談ください。

感染性であるかどうかを判断します。感染性のウイルスが検出さT7.

性を判断します。標準的にTEMと感染性アッセイはCHOテストいるのか、あるいは複数のインサート（抗体の重鎖と軽鎖等）から構れると、細胞はヒト細胞株と共培養を行いヒト細胞への感染可能で実施されるものです。TEMでは結果が陽性となり感染性アッセ
イでは陰性となることが予想されます。この場合はPERTは要求されません。TEMでレトロウイルス様粒子が観察されなかった場合、PERTテストを行うこともできます。内在性ウイルスが存在するため、PERTテストでは結果が陽性となる可能性が高くなります。

T3.

世界に広がる施設

アッセイ法の設計はその医薬品が単一の導入遺伝子から構成されて成されているかによって異なります。
参考(1) ICH Q5A(R1)「ヒト又は動物株を用いて製造されるバイオテクノロジー応用医薬品のウイルス安全性評価」(2) ICH Q5D「生物薬品（バイオテクノロジー応用医薬品｜生物起源由来医薬品）製造用基剤の由来、調製及び特性解析」

HAPテストは以下のウイルスを検出します。リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（LCMV）、マウス肺炎ウイルス（PVM）、レオウイルス3型、センダイウイルス、シミアンウイルス5型（SV5）。
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お問い合わせ先

詳細については、www.sartorius.comをご覧ください。

ザルトリウス・ステディム・ジャパン株式会社
営業部

Phone : 03 6478 5201 | Fax : 03 6478 5495
www.sartorius.com〒140-0001 東京都品川区北品川1-8-11 Daiwa品川Northビル4階※製品仕様は予告なく変更される場合があります。

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Status: 06 | 22 | 2021