医薬品の一斉分析法の開発
Analysis of analgesic and antipyretic drugs and antidepressant drugs by liquid chromatography/mass spectrometry― LC/MS法による解熱鎮痛消炎薬、抗うつ薬の分析 ―慶應義塾大学医学部法医学教室 専任講師

篠塚 達雄

TATSUO SHINOZUKA
Department of Legal Medicine, School of Medicine, keio University

である抗うつ薬による事例の増加も顕著になってきてい

1. はじめにる（図１）。
地下鉄サリン事件、和歌山毒入りカレー事件などにみられるように、犯罪の立件には原因物質（薬毒物）の特定（同定）が大きく関わってくる。最近では使用される薬毒物の種類は多様化しており、法医中毒学領域では中毒原因薬毒物の検索・同定法の開発が大きな課題となっている。中毒事例では極めて多種類の医薬品に基因するものが最も多くみられ、その検索・同定のためには迅速かつ高感度な一斉分析法（スクリーニング法）の確立が必須となってきている1）。
本文では医薬品の一斉分析法として、著者らが検討している液体クロマトグラフィー／質量分析法（LC/MS法）を

図1 日本中毒情報センター受信報告2）
受信件数はすべて一般医薬品と医療用医薬品の合計用いた解熱鎮痛消炎薬と抗うつ薬の分析例を紹介する。
薬毒物分析では、試料からの薬毒物を抽出する方法
2. 法医中毒学領域における医薬品の一斉分析と得られた抽出物を分析する方法との双方について様々な検討が行なわれている。法医中毒学領域におけ

法医中毒学領域では、青酸やヒ素といった今では古る薬毒物分析試料は、一般的な血液や尿だけでなく、典的といえる毒物から覚せい剤などの乱用薬物、医薬時として臓器や硬組織（骨、毛髪等）などが対象となる場品類など、極めて多くの種類の薬毒物が分析対象とな合がある。このような分析対象試料に対しては様々な抽

2）っている 。中毒情報センターでは、家庭用品（たばこ関出法が考案され試みられている。従来では主として液−連品、化粧品、洗浄剤等）、医療用医薬品（解熱鎮痛液法が繁用されてきたが、最近では簡便な固相抽出法消炎薬、抗うつ薬、抗不安薬、抗精神病薬等）、一般が使用されるようになってきている。さらに、固相マイク医薬品（解熱鎮痛薬、催眠鎮静薬）、農業用品（殺虫剤、ロ抽出（SPME）法4）やモノリス型カラム（ミクロLCの分離除草剤等）、自然毒（植物、きのこ等）、工業用品（化学カラムとして開発されたものを固相抽出剤として利用する

3）6薬品等）による中毒事例 が報告されている。これらのもの）による抽出法5）も報告されている。これらの抽出法

事例では医薬品（医療用、一般用）によるものが多くを占の開発目的は、医薬品類の抽出時に夾雑する生体内のめ、なかでも解熱鎮痛薬によるものが年々増加する傾向多数の物質の除去であり、対象薬毒物の簡便・迅速な分にある。また、最近では老齢化に伴い向精神薬の一つ画にある。分析方法としては、分離能力にすぐれたクロTHE CHEMICAL TIMES 2004 No.2（通巻192号）

医薬品の一斉分析法の開発

マトグラフィーと検出感度・同定能力に優れたマススペク

グループに属する薬物はほぼ類似の薬理作用と副作用トロメトリー（質量分析）の2種類の手法をオンラインで結を持っている。本文では表１に太字で示すサリチル酸系、合させた機器分析法として、ガスクロマトグラフィー／質

アントラニル酸系、フェニル酢酸系の一部及びプロピオン量分析法（GC/MS法）、LC/MS法が繁用されている。

酸系の計16種類の解熱鎮痛消炎薬を分析対象とした。

3. 解熱鎮痛消炎薬のLC/MS分析

3.2 OASIS MAX ® 固相カートリッジによる血清からの解熱鎮痛消炎薬の固相抽出10）

著者は、これまでに高速液体クロマトグラフィー（HPLC）、血清（内部標準物質を添加）にリン酸および精製水を加薄層クロマトグラフィー（TLC）、ガスクロマトグラフィー（GC）え、あらかじめメタノール、水で活性化したOASIS MAX ®などを用いた解熱鎮痛消炎薬に関する分析法を確立して

extraction cartridge（1cc用、日本ウォーターズ（株））に6-8）きた。本文では、16種類の解熱鎮痛消炎薬 のLC/MSによる一斉分析法について紹介する9,10）。

適用した。抽出操作はVac-Elut®システムを使用し、吸引圧力は15-20mmHgで行なった。5%メタノール-50mM酢酸ナトリウム溶液でカラムを洗浄後、100mMリン酸-アセト

3.1 解熱鎮痛消炎薬
解熱鎮痛消炎薬は解熱作用、鎮痛作用を有するとともに抗炎症作用も持つことから、一般には消炎鎮痛剤もニトリル（50:50）
で溶出した。溶出液は、窒素気流下で溶媒を留去し、移動相を加えて再溶解した後、LC/MSに注入して分析した。

しくは解熱鎮痛剤と呼ばれている。解熱鎮痛消炎薬は、薬理学上にはステロイド薬と類似の抗炎症作用を有する薬物であり、化学構造上ステロイド骨格を持たないことから非ステロイド性抗炎症薬（Non-Steroidal-Anti-

3.3 解熱鎮痛消炎薬のLC/MS分析例
1）解熱鎮痛消炎薬：表1に示した16種類の解熱鎮痛消炎薬について分析を実施した。

Inflammatory-Drugs（NSAIDs））とも呼ばれている11）。

2）LC/MS分析の条件：装置：日立M-8000形 LC/

従って、ステロイド薬のような強力な抗炎症作用は有さな

3DQ・MSシステム、セミミクロAPCI法（Negative

いが、ステロイド薬のように重篤な副作用も発現しない。

mode）
あるいはSSI法（Negative mode）、ドリフト

NSAIDsは先に述べた抗炎症、鎮痛、解熱作用などが電圧：40V、カラム：Mightysil RP-18（150×2.0mm

主作用であるが、その他に血漿板凝集抑制作用や尿酸

i.d.,粒径5μm, 関東化学（株））、カラム温度：35℃、排泄作用などもあるので、その適応疾患は幅広く臨床各UV波長：238nm、移動相：メタノール-10mM酢酸科におよんでいる。解熱鎮痛消炎薬は大きくは酸性と塩（70:30,v/v）
あるいはメタノール-10mM酢酸（90:基性に分類される（表1）。塩基性のものは鎮痛作用が10,v/v）、流速：0.08mL／min。

酸性薬剤より弱いため今はあまり用いられなくなってい

3）分析例：16種類の解熱鎮痛消炎薬のLC/MS分析る。酸性薬剤は構造上8つのグループに分類され、同じは、Mightysil RP-18カラムで良好な分離分析ができ（表2）、TICおよびマススペクトルでそれぞれ確認・

表1 主な解熱鎮痛消炎薬の種類（化学構造に基づく分類）同定が可能であった。LC/MS（セミミクロAPCI法、negative mode）
による16種類の解熱鎮痛薬の検出限界は、0.1-3.0μg/mL（S/N=3）であった。表3と表4には、セミミクロAPCI法（negative mode）とSSI法（negative mode）
での解熱鎮痛薬のマススペクトルをそれぞれまとめたものを示した。16種の解熱鎮痛薬は、いずれも擬分子イオンピーク（M+H）+を与えた。
また、
OASIS MAX® extraction cartridgeを用いた血清からの16種類の解熱鎮痛薬の抽出は、いずれも良好な回収率を示した（表5）。

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表2 主な解熱鎮痛消炎薬の液体クロマトグラフィー／質量分析計による保持時間と検出限界

表5 固相カラムを用いた血漿からの主な解熱鎮痛消炎薬の回収率

4. 抗うつ薬のLC/MS分析
抗うつ薬の分析法としては、高速液体クロマトグラフィー、表3 主な解熱鎮痛消炎薬の液体クロマトグラフィー／質量分析法によるマススペクトル（セミミクロAPCI：negative mode）ガスクロマトグラフィーなどの報告がみられる12,13）。本文では、18種類の抗うつ薬のLC/MSによる一斉分析法について紹介する14）。
4.1 抗うつ薬
気分障害には気分の抑制を主症状とするうつ状態、気分の高揚を主症状とする躁状態がある。
うつ病やうつ状態の治療に用いられる薬を抗うつ薬と呼んでいる。表6には、代表的な抗うつ薬をまとめてある。三環系、四環系抗うつ薬の主たる作用機序としては、アミン再取込み阻害とモノアミンオキシダーゼ阻害が説明されている15）。最近ではSSRI（選択的セロトニン再取込み阻害薬）
やSNRI（選択的ノルアドレナリン再取込み阻害薬）が開発され用いられている。

表4 主な解熱鎮痛消炎薬の液体クロマトグラフィー／質量分析法によるマススペクトル（SSI法：negative mode）

4.2 OASIS ® HLB固相カートリッジによる血清からの三環系抗うつ薬の抽出14）
血清（内部標準物質を添加）にリン酸および精製水を加え、あらかじめメタノール、水で活性化したOASIS ® HLB
extraction cartridge（1cc用）に適用した。抽出操作はVac-Elut®システムを使用し、吸引圧力は15-20mmHgで行なった。2%アンモニア-5%メタノール水溶液、2%アンモ
ニア-65％メタノール水溶液、2%酢酸-5%メタノール水溶液の順に注入しカラムを洗浄した。次いで65%メタノール水溶液で薬物を溶出した。溶出液は、窒素気流下で溶媒を留去し、移動相を加えて再溶解した後、LC/MSに注入して分析した。

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4.3 抗うつ薬のLC/MS分析例
1）抗うつ薬：表6に太字で示した18種類の抗うつ薬について分析を実施した。
2）LC/MSの分析条件：日立M-8000 LC/3DQMS
system、カラム：①Inertsil ODS-3 ②Inertsil C8（150×2.0mm i.d.,粒径5μm,ＧＬサイエンス（株））、
移動相：メタノール-10mM酢酸アンモニウム（pH5.0）-アセトニトリル（70:20:10,v/v/v）、流速：0.08mL/min、検出波長：254nm、イオン源：SSI（positivemode）、ネプライザー温度；180℃、カラムオーブン
温度：35℃、ドリフト電圧：50V、シールド温度：250℃、第一細孔温度：150℃。
3）分 析 例：1 8 種 類の 抗うつ 薬の L C / M S 分 析は 、
Inertsil C8およびInertsil ODS-3カラムで良好な分離分析ができTICおよびマススペクトルでそれぞれ確認・同定が可能であった（図2、表7）。 LC/MSによる18種類の解熱鎮痛薬の検出限界は、0.050.63μg/mL（S/N=3）であった。抗うつ薬のマススペクトル（SSI法、Positive mode）は、いずれも擬分子イオンピーク(M+H)+を与えた（表８）。

図2 主な抗うつ薬の液体クロマトグラフィー／質量分析法によるクロマトグラム
1：デシプラミン
4：ドスレピン7：
トリミプラミン
10：スルピリド
13：パロキセチン
16：セチプチリン

2：ノルトリプチリン
5：イミプラミン
8：クロミプラミン
11：ミルナシプラン
14：マプロチリン
17：メリトラセン

3：アモキサピン
6：アミトリプチリン
9：ロフェプラミン
12：メチルフェニデート
15：
トラゾドン
18：ミアンセリン

表6 主な抗うつ薬の種類
表7 主な抗うつ薬の液体クロマトグラフィー／質量分析計による保持時間と検出限界

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表8 主な抗うつ薬の液体クロマトグラフィー／質量分析法によるマススペク
トル（SSI：negative mode）

文献
1）篠塚達雄、中島理加, 薬毒物分析実践ハンドブック 鈴木修、屋敷幹雄（編）, じほう, (2002)
2）松井秀和、篠塚達雄、杉江秀明、永井智紀、栗原克由,

北里医学, 30,276,(2000).
3）（財）日本中毒情報センター, 1992-2001年度受信報告
中毒研究, vol.6-15, (1993-2002).
4） 奈女良昭、屋敷幹雄、小嶋亨、福永徳人,

法中毒,16,1,(1998).
5）中本晃弘、倉本孝子、奈女良昭、西田まなみ、屋敷幹雄、
武井義之、 古野正浩、木村恒二郎, 鑑識科学,
8,76,(2003).
6）T.Shinozuka, M.Terada, A.Ogamo, R.Nakajima, S.Takei,
T. Murai, C.Wakasugi, J.Yanagida,Toxicol.,5. まとめJpn J Forensic

14,246,(1996).

7）T.Shinozuka, S.Takei, N.Kuroda, A.Ogamo, M.Terada,
C.Wakasugi, J.Yanagida, Jpn J Forensic Toxicol.,薬毒物の一斉分析法の開発は、救急領域では患者の迅速な治療処置につながるとともに、
法医中毒学領域では時8）T.Shinozuka, R.Nakajima, S.Takei, A.Ogamo, M.Terada,

として裁判上の有力な証拠となる薬物の迅速な同定というT. Murai, J.Yanagida, Jpn J Forensic Toxicol.,点で重要なものとなる。本文では医薬品の一斉分析法（スク17,51,(1999).

リーニング法）として、解熱鎮痛消炎薬と抗うつ薬のLC/MS

9）篠塚達雄、中島理加、馬塲美年子、呂彩子、久康成、大上を用いた分析法について述べてきた。今回は紹介出来な

治、武井節子、村井達哉、寺田賢,

かったが、法医中毒学領域では覚せい剤を代表とする乱用

55,54,(2001).

薬物16）の分析（摂取証明）法の開発も大きな課題としてあ日法医誌,10）篠塚達雄、中島理加、大上治、武井節子、村井達哉、寺田る。規制薬物の乱用は、幻覚薬にみられる種々のデザイナ

賢, 法中毒, 19,172,(2001).

ーズドラッグや医療現場で使用されている多くの向精神薬に

11）柏崎禎夫, 非ステロイド抗炎症薬まで広がってきている。そのため様々な規制薬物や医薬品

12）E.Tanaka, M.Terada, T.Nakamura, S.Misawa,の非合法な乱用に対して、迅速・正確な分析法の開発の必要性がせまられている。
この事に関しては、機器分析法とは別に迅速スクリーニング法として尿中の規制薬物に対する簡易キットが種々考案され、市販されるようになってきている。

日本医学出版, 1997.

C.Wakasugi, J.Chromatogr. B., 692,405,(1997).
13） R.de laTorre, J.Ortuno, JA.Pascual, S.Gonales, Ballesta,

Ther Drug Monit., 20,340,(1998).
14）篠塚達雄、上野由貴、鈴木祐子、中島理加、寺田賢、田中

これまでに医薬品類や乱用薬物の分析には、主として栄之介, 日本薬学会第124年会 口演要旨集, 2004.

GC/MS法が繁用されてきた。生体試料からの薬毒物分

15） 田中千賀子、加藤隆一（編）, NEW 薬理学（改訂第2版

析に対する簡便さを考えると今後LC/MSによる分析法の開発がより活発になってくるものと想定される。
また、LCカラムの開発も盛んに行なわれており、それに伴い従来では分離分析不可能な薬毒物に対する分析も可能となってきている。L C / M S 法による薬 毒 物 分 析に関 する報 告はGC/MS法と比較してまだ少なく、分析データの集積はこれからの課題となる。

1014,43,(1996).

THE CHEMICAL TIMES 2004 No.2（通巻192号）

権）, 南江堂, 1994.
16） 篠塚達雄,

日本医師会雑誌, 122,1601,(1999).