博 士 （ 医 学 ） 宮 崎 晶 子

学 位論文題 名The effCtofangiotenSintypelreCeptorantagoniSton； almodelSOfuVeitiS（ぶどう膜炎動物モデルを用いたアンジオテンシンタイプ1受容体拮抗薬の効果に関する研究）

学位論文内容の要旨［背景と目的］
ぶどう膜炎とは、虹彩、毛様体、脈絡膜におきる炎症の総称で、治療にはステロイドや免疫抑制剤が用レゝられているが、現在でも時に失明をもたらす疾患である。ぶどう膜炎の動物モデルとしては、急性前部ぶどう膜炎のモデルとしてエンド卜キシン誘発性ぶどう膜炎(
Endotoxin―induceduveitis:EIU)、比較的慢陸に経過し、網膜等、主に後眼部の炎症 を起こす モデル として、 実験的自 己免疫 性ぶどう膜網膜炎(Experimentalautoimmuneuveoretinitis：EAU)
カゞある。
アンジオテンシンII(AII）は、腎臓の傍糸球体細胞で産生されるレニンにより活性化され、血管収縮作用を持ち、強い昇圧作用をもつことが知られているが、最近、抗炎症反応においても重要な役割を果たすことが注目されている。このレニンーアンジオテンシンシ
ス テムを阻 害する 薬剤として、アンジオテンシンタイプ1受容体拮抗薬が高血圧治療薬として一般に使用されている。しかし、これらが同時に筋炎、腸炎、関節炎といった炎症反応に対して抑制効果を示すことが、幾っか報告されている。本研究では選択的アンジオテン シンタイ プ1
受 容体拮抗薬である口サルタンを用いて、EIU、EAUに対する治療効果を検討した。
［方法］
7週齢の ルイスラッ卜にlipopolysaccharide(LPS)200vg
を皮下注射し、EIUを誘導した 。また 、LPS投与と同 時にロサ ルタン 1mg/kg，又は 10 mg/kgを静脈 内注射し た。LPS
投 与2
4時間後 に前房 水を採取 し、浸 潤細胞数 、夕ン バク濃度 、tumornecr
osi
sfactor(TNF)ーQ濃度、 monoc
yte chemoa
ttractan
tprotein(MCP)−1、transfor
min
ggrow
thfa
ctor(TGF)
ーI3濃度を測定した。またLPS
投与2
4時間後、3時間後に眼球を摘出し、H＆E
染 色、nuclearfactor(NF)―K
Bに対するモノクローナル抗体を用いた免疫染色を行い、これらの組織像を比｜絞検討した。
EAUモデル では、 6―8週齢の C
57BL/6マウスを用い、視細胞間レチノイド結合夕ンバク―333―

（ interphotoreceptor retinoid binding protein： IRBP)由 来ペ プチ ドを 完 全フ ロイ ント
ア ジ ュ パ ン ト に 懸 濁 、 皮 下 投 与し ぶ どう 膜炎 を誘 導し た 。追 加ア ジュ バン ト とし て百 日咳
菌 毒 素 も 投 与 し た 。 ぶ ど う 膜 炎の 臨 床ス コア は3−4日 毎 に観 察し 、比 較検 討 した 。ま た免
疫 10日 後 に 所 属 リ ン バ 節 を 採 取 し 、 抗 原 特 異 的 T細 胞 増 殖 反 応 と サ イ ト カ イ ン 産 生 を 比較検討した。
［結果］
EIUを 誘 導 し た ラ ッ ト の 前 房 水 中 の 炎 症 細 胞 数 は 、 非 治療 群 と比 較し 、ロ サル タ ン投 与群で有意に減 少していた（pくO． 01）。 また、前房水中のタンパク、TNFd、MCP―1，TGFーl31濃度 も 非投 与群 に比 較 し、 口サ ルタ ン 投与 群で 濃度 依存 的 に抑 制が みら れた （ p<0. 01）。 次に LPS投 与 3時 間 後 に 眼 球 を 摘 出 し 、 免 疫 染 色 を 行 い 、 NF‑1〈B陽性 細胞 数を ロサ ル タン 投
与 群 と 非 投 与 群 で 比 較 し た とこ ろ、 口サ ルタ ン 投与 群で 有意 に NF− KB陽 性細 胞数 の 減少 が見られた（p＜0． 01）。
一 方 EAUモ デ ル に お い て は 、 口 サ ル タ ン 投 与 群 と 非 投 与群 で 、臨 床ス コア には ほ とん ど
差 は 見 ら れ ず 、 IRBP特 異 的 T細胞 増 殖反 応、 培養 上清 中 のTNF‑ce,濃 度に も差 は認 め られ なかった。

［考察］
口 サ ル タ ン は 、 EIUに お い て 前 房 水 中 の 炎 症 細 胞 数、 夕ン パク 濃度 、 炎症 性サ イト カイ
ン 、 ケ モ カ イ ン 濃 度 を 有 意に 抑制 し 、ま た虹 彩、 毛 様体 にお いて NF― KB経路 を抑 制し 、抗炎 症 作 用 を 示 し た 。 一 方 EAUに お い て 、 ロ サ ル タ ン 投 与 は 、 T細 胞 増 殖 反 応 、サ イト カイン 産 生 の い ず れ に も 影 響 を及 ぼさ な かっ た。 ロサ ル タン は細 胞接 着分 子 の発 現を 抑制 する
こ と が 今 ま で に 報 告 さ れ て お り 、 EIUに お け る 本 実 験の 抗炎 症効 果に は 、炎 症細 胞浸 潤の抑 制 が 関 与 し た と 考 え ら れ た 。 一 方 、 T細 胞 の 抗 原 特異 的増 殖反 応は ロ サル タン 投与 で抑制 さ れ ず 、 T細 胞 を 介 す る 自 己 免 疫 反 応 で あ る EAUに 対 し て は 、 口 サ ル タ ン は影 響を 与えないと考えられた。

［結諭］
レ ニ ン ー ア ン ジ オ テ ン シ ンシ ス テム は目 の急 性炎 症 反応 に深 く関 与し て おり 、こ の阻 害は 急 性 前 部 ぶ ど う 膜 炎 治 療 に有 効 であ るこ とが 示さ れ た。 接着 分子 の抑 制 など これ らの 阻
害 効 果 の 分 子 メ カ ニ ズ ム に つい て は今 後の 研究 が必 要 と考 えら れた 。い ず れに して も本 研
究 に お い て 明 ら か に し た ア ン ジ オ テ ン シ ン タ イ プ 1受 容体 阻害 薬の 抗炎 症 作用 から 、今 後
こ れ ら が 新 た な 治 療 法 の ー っ と し て 応 用 さ れ る こ と が 期 待 され る 。

ー 334―学位論 文審査の要旨
主査 教 授 大野 重昭
副査 教授 小野江和則
副査 教 授 上出 利光

学位論文題 名The e
ffeCtofa
ngiotenS
intypelre
CeptorantagoniStonZ almodelSOfuVeitiS（ぶどう膜炎動物モデルを用いたア ン ジ オ テ ン シ ン タ イ プ 1受 容 体 拮 抗 薬 の 効 果 に 関 す る 研 究 ）ぶどう膜炎とは、虹彩、毛様体、脈絡膜におきる炎症の総称で、治療にはステロイド薬や免疫抑制薬が用いられているが、現在でも時に失明をもたらす疾患である。ぶどう膜炎の動物モデルとしては、急性前部ぶどう膜炎のモデルとしてエンドトキシン誘発ぶどう膜炎(Endotoxin‑induc
ed uveitis:EIU)、比較的慢性に経過し、網膜等、主に後眼部の炎症を起 こす モデ ルと して 、実 験的 自己 免 疫性 ぶどう膜網膜炎(Experimental autoimmuneuveoretinitis: EAU)がある。アンジオテンシンII(AID
は、腎臓の傍糸球体細胞で産生されるレニンにより活性化され、血管収縮作用を持ち、強い昇圧作用をもつことが知られているが、最近、抗炎症反応においても重要な役割を果たすことが注目されている。このレ
ニン ーア ンジ オテ ンシンシステム(RAS)を阻害する薬剤として、アンジオテンシンタ イプ1受容 体 拮抗 薬(ARB)が高 血圧 治療 薬 とし て一般に使用されている。しかし、これ らが同時に筋炎、腸炎、関節炎といった炎症反応に対して抑制効果を示すことが、幾っか報告されている。本研究では選択的アンジオテン シンタイプ1受容体拮抗薬であるロサルタンを用いて、E
IU、EAUに対する治療効果を検討 した。
その結果、ロサルタンは、EIUにおいて前房水中の炎症細胞数、夕ンパク濃度、炎症性サイ トカ イン 、ケ モカイン濃度を有意に抑制し、また虹 彩、毛様体においてNF‑KB
経路を抑 制し 、抗 炎症 作用 を示 した 。一 方 E
AUにおいて、ロ サルタン投与は、T細胞増殖 反応、サイトカイン産生のいずれにも影響を及ぼさなかった。ロサルタンは細胞接着分子の発現を抑制することが今までに報告されており 、EIU
における本実験の抗炎症効果には、炎症細胞浸潤の抑制が関与したと考えられた。 一方、T細胞の抗原特異的増殖反応はロサルタ ン投 与で 抑制 され ず、 T細胞 を介 する 自己免疫反応 であるE
AUに対しては、口サ ルタンは影響を与えないと考えられた。
レニンーアンジオテンシンシステムは目の急性炎症反応に深く関与しており、この阻害は急性前部ぶどう膜炎治療に有効であることが示された。本研究において明らかにしたア―335ー

ンジ オテン シンタイ プ1受容体阻害薬の抗炎症作用から、今後これらが新たな治療法のーつとして応用されることが期待される。
公開発表にあたってはまず副査の上出利光教授から、RA
Sには循環系と組織系があるが、局所 的なRASが関係 しているのかとの質問があり、虹彩毛様体にAT1受容体が存在し、EI
Uの網 膜でも 発現上昇 が報告されており、局所的なRASが関与していると考えていると回答した 。次に 、動脈硬 化にはT細胞 が関与し ており、ARBが動脈硬化の予防に効果があったとの 報告が あるが、 今回のT細胞 を介する 自己免疫疾患であるE
AUにも効果があるのではないか、EA
Uモデルの炎症レベルを弱めると効くのではないか、についての質問があった。
EI
UとEAUのモデル の違い、 また今 回の実験 におけ る投与方 法の違 いについて説明し、T細胞に影響を与えるかどうかについてさらに調べるにあたり必要な実験について回答した。
次い で副査 の小野江 和則教授から、EAUとT
h17の関与についての質問があり、今までの報告を引用し、Th17との関連はあるがそれだけですべて説明できるものではなく、病態の形成 にはTh
17とThlと両 方の関 与が考え られる と回答した。次にE
AUにおいて口サルタンはきちんと投与されているのか、降圧などの作用が実際出ているのかとの質問があり、マウス におい て血圧測 定は行っ ていな いと回答 した。次にE
IUにおいて示されたNF‑KB
陽性細胞 はどん な細胞か との質問に対しては、LPS刺激に対して反応し、流入したマクロファージ の可能 性はある が、それだけではなく、虹彩毛様体に存在するA
T1受容体の存在の報
告か らも、 虹彩毛様 体の細胞自体がN
F‑KB陽性細胞ではないかと考えていると回答した。
また、ロサルタンの効果はinvitroで確認したのかとの質問に対しては、自身でinvitro
で は 確 認 し て い な い が 、 論 文 を 引 用 し て 今 ま での in v
itro
で の 結 果を 回 答 した 。
次いで主査の大野重昭教授から、しゝくっかあるAR
Bのうち口サルタンを選んだ理由を質問され、ARBのうち最も早くに開発され臨床応用が開始されたため、長しゝ問安全に使用されて きた実 績がある ことと、他のARBにはない抗炎症作用機序が報告されている点を述べた。次にロサルタンの投与量はどのように決めたのかという問いがあり、自己免疫疾患動物モ デルに A
RBを投 与し、効果のあった論文について回答した。今後ヒトに対して使用するに当たり局所投与への応用の可能性はあるかという間いに対しては、今回示した実験データからも、内服だけでなく、局所投与で、濃度を上げて使用することが望ましいと考えられ、点眼治療への応用が期待されると回答した。
この 論文は 、EIU、EAUに おけるRASの関与 について明らかにし、EIUにおいてその阻害によ る治療 効果を報 告した点で高く評価され、今後、RASを阻害する薬剤を使用したぶどう膜炎に対する治療応用が期待される。
審査員一同は、これらの成果を高く評価し、申請者が博士（医学）の学位を受けるのに充分な資格を有するものと判定した。

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