試験研究用試薬

シカジーニアス® 病原遺伝子検出PCRキット(下痢原性大腸菌用)2

Cica Geneus® Pathogenesis Gene Detection PCR Kit (for Diarrheagenic E.coli) ２

下痢原性大腸菌（Diarrheagenic E. coli）は、ヒトに腹痛・下痢症を引き起こす大腸菌の総称であり、性質や症状の違いにより5種類および他の下痢原性大腸菌に分類されます。1) また、近年、大腸菌と近縁の下痢症起因菌であるEscherichia albertii(E. albertii)を原因とする食中毒や集団感染事例がたびたび発生しております。
本製品は、マルチプレックスPCR 法により、下痢原性大腸菌のうち主な5 種類であるEHEC/VTEC (腸管出血性/ベロ毒素産生性大腸菌)、EPEC(腸管病原性大腸菌)、ETEC(腸管毒素原性大腸菌)、EIEC(腸管侵入性大腸菌)、EAggEC (腸管凝集付着性大腸菌) およびE. albertiiの病原性に関わる遺伝子を同時に検出できます。
1)

国立感染症研究所, IASR 33(1), 2012, 下痢原性大腸菌の分類の見直しについて特長■ 2種類のプライマーミックスを用いて、大腸菌および E. albertii の菌種特異的遺伝子と*17種類の病原性因子 を同時に、かつ区別して検出できます。
*1 病原性因子︓ベロ毒素1, 2 型(VT1, 2)遺伝子(stx1, 2)、 耐熱性エンテロトキシン(ST)遺伝子(est)、易熱性エンテロトキシン(LT)遺伝子(elt)、インチミン遺伝子(eae)、凝集付着性関連因子(aggR)、腸管侵入性関連因子(invE)■ 検出結果を数値化することで、判定結果を明確化できます。
■ ポジティブコントロール等、PCRに必要な試薬が同梱しています。
■ インターナルコントロールの検出結果から、PCR阻害の有無を確認できます。

キットの構成（50回分）
個別名称

操作手順
容量

試薬Ａ

AptaTaq DNA Master（5×Conc.）＊2400 µL ×1本

試薬Ｂ

PCRサプリメント

700 µL ×1本

試薬Ｃ

プライマーミックス1200 µL ×1本

試薬Ｄプライマーミックス2200 µL ×1本

試薬Ｅ

ポジティブコントロール

250 µL ×1本

試薬Ｆ

6× ローディングバッファー

400 µL ×1本*2 AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。

菌株をDNA抽出＊3を行い単離する（培養） テンプレートDNAを調製

2種類のマルチプレックスPCR

アガロースゲルバンドパターンの電気泳動（別途準備）
読み取り

検出・判定

*3 シカジーニアス® DNA抽出試薬は別売です。

解析例
図１

表1 検出遺伝子とPCR増幅産物サイズ

電気泳動パターンの実例
Reaction mixture 2

Reaction mixture 1MP1234567M

8 9 10 NP1234567

8 9 10 N

Reaction
mixture 1

Reaction
mixture 2

M︓100 bp DNA Ladder, P︓ポジティブコントロール , 1︓E. coli ATCC 35150 (EHEC/VTEC),
2︓E. coli ATCC 43887 (EPEC), 3︓E. coli ATCC 35401 (ETEC), 4︓E. coli NCTC 11603 (ETEC),
5︓E. coli 分離株 (EAggEC), 6︓E. coli ATCC 43893 (EIEC), 7︓E. coli ATCC 11775 ( 非病原性 ),8︓E. albertii 分離株 (stx2f 陽性 ), 9︓E. albertii LMG 20976, 10 ︓ Citrobacter freundii ATCC 8090
N︓ネガティブコントロール (TE 緩衝液 )①2 つのマルチプレックス PCR の電気泳動結果 ( 図１) からバンドパターン ( 表１) を読み取ります。
②uidA が検出された場合は、表 1 を参考に、係数と結果 (1 または 0) を乗算したものをポイントとし、ポイントの合計を算出して下さい。合計ポイントを表 2 と照らし合わせ、大腸菌の病原型を判定して下さい。
④uidA、lysP の両方とも検出されなかった場合は、本キットにおいては菌種判定不能となります。
弊社製品 HP から解析用計算シートをダウンロード後、バンドの有無を二進法 (1,0) で入力し、係数の合計値を算出した。

サンプル番号

カテゴリー

増幅サイズ（bp）

ターゲット遺伝子－652

uidA (E. coli 判定領域 )32532

stx164

413

stx2－

252

lysP (E. albertii 判定領域 )1199

eae－120

インターナルコントロール

2499

aggR

4379

invE

8270

elt

16191

est－120

インターナルコントロール

本キットでは、* 志賀赤痢菌が保有する志賀毒素遺伝子も stx1 として検出します。
* E.albertii が保有する stx2f バリアントも stx2 として検出します。
* Citrobactor 属が保有する eae も検出します。
* est のブタ型 (STp) とヒト型 (STh) の両方を検出します。
* 赤痢菌の大半が保有している uidA も検出するため、赤痢菌と大腸菌を区別することができません。

表2 合計ポイントと病原型③lysP が検出された場合は、E. albertii と判定して下さい。

解析結果

係数

合計ポイント判定 ( 大腸菌の場合 )0EHEC/VTEC, EPEC, ETEC, EIEC, EAggEC 以外の大腸菌

1EPEC (eae＋)

2EAggEC (aggR＋)

4～7EIEC (invE＋)

8 ～ 15ETEC (elt＋)

1234567891097

1241624065

1016 ～ 23

ETEC (est＋)

EHEC EPEC ETEC ETEC EAggEC EIEC 大腸菌 E.albertii E.albertii 菌種/VTEC
判定
病原型の判定 (stx1+ (eae+) (est+ (est+) (aggR+) (invE+)(stx2+ (eae+) 不能

24 ～ 31ETEC (est＋,elt＋)

32 ～ 63

EHEC/VTEC (stx1＋)

64 ～ 95

EHEC/VTEC (stx2＋)

96 ～ 127

EHEC/VTEC (stx1＋, stx2＋)

上記以外

生化学的性状等を併用して判断してください

係数の合計値

stx2+eae+)

elt+)

eae+)

製品情報
製品名

包装

保存

希望価格（円）

製品番号

シカジーニアス® 病原遺伝子検出キット(下痢原生大腸菌用) 2

50回分

冷凍（-25 ℃～-20 ℃）

53,00008377-96

シカジーニアス® DNA抽出試薬

120回分

冷蔵（2 ℃～8 ℃）

24,00008178-96★上記の他に必要な機材・試薬などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。

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包装 希望価格（円） 製品番号

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87,00008180-96

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シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）● 本記載の製品は､試薬 ( 試験､研究用として用いる化学薬品 ) としての用途にご利用ください｡ ● 本記載価格に､消費税等は含まれておりません｡● 本記載の製品情報は予告なく変更する場合があります。 最新情報は､弊社ホームページ｢Cica-Web｣をご確認ください。
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●本製品は開発中の為、本リーフレットの内容を変更する場合がございます。あらかじめご了承ください。

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BGa-08(202311)