試験研究用試薬

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（アシネトバクター属菌用）

Cica GeneusRAcineto POT KIT

アシネトバクター属菌は、医療環境を含め、自然環境中に広く存在する日和見感染菌です。
名古屋大学の荒川宜親先生ならびに藤田医科大学の鈴木匡弘先生によって開発された
PCR-based ORF Typing（POT）法では、マルチプレックスPCRを用い、アシネトバクター属菌の保有する複数の特定遺伝子領域を増幅し、アガロースゲル電気泳動法によって分離されたバンドパターンを数値化することで、菌種の簡易同定およびA. baumanniiの菌株識別と国際流行クローンの識別ができます。
＊1 本試験法は、厚生労働科学研究費補助金 新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進事業（H24- 新興 - 一般 -010）により開発されたものです。

特長■菌種の簡易同定（A. baumannii, A. pittii, A. nosocomialis, A. sp. close to 13 TU）が可能です。
■A. baumannii の菌株識別が可能です。
■A. baumannii の国際流行クローン（International clone Ⅰ/Ⅱ）の識別が可能です。
■Multilocus Sequence Typing（MLST）法とほぼ同等の識別能を有しています。
キットの構成（30回分）
個別名称

操作手順
容量試薬Ａ

AptaTaq DNA Master（5×Conc.）＊1240µL ×1本

試薬Ｂ

PCRサプリメント

240µL ×1本

試薬Ｃ

プライマーミックスα120µL ×1本

試薬Ｄ

プライマーミックスβ120µL ×1本

試薬Ｅ

ポジティブコントロール

240µL ×1本

試薬Ｆ

6× ローディングバッファー

240µL ×1本

*1 AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。

菌株をDNA抽出＊2を行い単離する（培養） テンプレートDNAを調製

2種類のマルチプレックスPCR

アガロースゲルバンドパターンの電気泳動（別途準備）
読み取り

POT値の算出

各検体でのPOT値の比較解析*2 シカジーニアス® DNA抽出試薬は別売です。解析例
表1 検出ORFの種類（ターゲット領域）とPCR増幅産物サイズ

Reaction
mixture 1

図1 下記の11株についてPOT法解析した電気泳動パターンの実例 （各ｎ=2）
50︓50 bpラダー、 PC︓ Positive Control
1,2︓A. baumannii （ST2） 同一事例から得られた臨床分離株
3︓A. baumannii （ST2）
4︓A. baumannii （ST2） 多剤耐性 A. baumannii
5︓A. baumannii （ST1） ATCC® BAA1605
6︓A. baumannii （ST1）
7︓A. baumannii （ST152）
8︓A. baumannii （ST34）
9︓A. pittii
10︓A. nosocomialis
11︓A. sp. close to A. nosocomialis

Reaction
mixture 2

POT No.

増幅サイズ（bp）

PCR PCA. baumannii
A. pittii
A. nosocomialisA. sp. close to 13TU
POT 1-1
POT 1-2
POT 1-3
POT 1-4
POT 1-5
POT 1-6
POT 1-7
PCR PCPOT 2-1
POT 2-2
POT 2-3
POT 2-4
POT 2-5
POT 2-6
POT 3-1
POT 3-2
POT 3-3
POT 3-4
POT 3-5
POT 3-6

553
465
401
362
321
271
231
189
151
122
102
81
565
457
388
329
280
237
209
185
160
139
120
101
81

POT 係数ターゲット領域
atpA
OXA-51
Speciﬁc geneSpeciﬁc geneSpeciﬁc gene
Genomic Islet-1
Genomic Islet-2
Genomic Islet-3
Genomic Islet-4
Genomic Islet-5
Genomic Islet-6
Genomic Islet-7OXA-51
Genomic Island-1
Genomic Island-2
Genomic Island-3
Genomic Island-4
Genomic Island-5
Genomic Island-6
Genomic Island-7
Genomic Island-8
Genomic Island-9
Genomic Island-10
Genomic Island-11
Genomic Island-12

1000
2000
3000
64321684213216842132168421①2 つのマルチプレックス PCR の電気泳動結果（図１）からバンドパターン（表１）を読み取ります。
②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT 値解析用の計算シートに二進法で入力し、３つのカテゴリーの POT 値を算出します。
Ⅰ PCR PC が陽性の場合、その検体はアシネトバクター属菌であることが確認できます。
Ⅱ POT 値 1 が 1000 未満であれば A. baumannii、1000 以上 2000 未満であれば A. pittii、2000 以上 3000 未満であれば A. nosocomialis、
3000 以上 4000 未満であれば A. sp. close to 13TU、4000 以上であればアシネトバクター属菌であるが菌種は不明と判定されます。
Ⅲ POT 値 1 が 69 であれば International cloneⅠ、122 であれば International cloneⅡと推定出来ます。
Ⅳ 検体間の POT 値を比較することで、A. baumannii の菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。
Ⅴ 集団感染から得られた菌体は POT 1 ～ 3 の POT 値が全て同一になります。（例︓図１の 1 と 2）

解析結果
図1におけるサンプル番号

カテゴリー

11225954

POT1POT2
POT3212259543122265441225341● POT値解析用の計算シートは弊社製品ホームページに掲載しております。

5694659669422777208810480911050010210500113105
00

製品情報
製品名

包装保存希望価格（円）

製品番号

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（アシネトバクター属菌用）

30回分

冷凍（-25～-20 ℃）

44,00008062-96

シカジーニアス® DNA抽出試薬

120回分

冷蔵（2 ℃～8 ℃）

24,00008178-96

その他POTキットシリーズ
製品名
シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）

包装 希望価格（円） 製品番号

製品名

包装 希望価格（円） 製品番号

120回分

87,00008180-96

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（C. ディフィシル用） 30回分

47,50008362-97

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（E. クロアカ complex用） 30回分

47,50008376-97

30回分

40,00008180-97

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（緑膿菌用） 50回分

67,00008187-96

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用） 30回分

44,00008362-97★上記の他に必要な機材などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。
●本キットは愛知県と名古屋大学から特許許諾を得て、製造販売しております。他メーカーの商品に関するライセンスについては、各メーカーにご確認ください。

● 本記載の製品は､試薬 ( 試験､研究用として用いる化学薬品 ) としての用途にご利用ください｡ ● 本記載価格に､消費税等は含まれておりません｡● 本記載の製品情報は予告なく変更する場合があります。 最新情報は､弊社ホームページ｢Cica-Web｣をご確認ください。

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東京都中央区日本橋室町2丁目2番1号

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HP：https://www.kanto.co.jp

BGa-10(202303)