博

士

学

位

論

文

内容の要旨および審査結果の要旨

第

23

集

（平成 19 年度）

金

沢

医

科

大

学

は し が き
本集は、学位規則（昭和 28 年 4 月 1 日文部省令第 9 号）第 8 条
による公表を目的として、本学において博士（医学）の学位を授与した者の論文内容の要旨および審査の結果の要旨を収録したものである。

− 第23集 目
学位授与
番
号

氏

名

次 （平成19年度） −
論

文

題

名

頁

森

Venous resistance increases during rat
anaphylactic shock

・・・・・・

1

智基

ミトコンドリア機能抑制下での初代培養ラット肝細胞に及ぼすエタノール負荷の影響―細胞骨格と膜系細胞小器官の関連障害についての検討―

・・・・・・

4

俊興

シェーグレン症候群培養唾液腺上皮細胞におけるケモカ
イン発現の解析・・・・・・

7

瑋Detection of Bacterial DNA in Synovial Fluids ofPatients with Temporomandibular Joint Disorder by
Sequencing Analysis

・・・・・・

10

一発達期歯牙の大脳皮質口腔感覚野における細胞構築形成への役割・・・・・・

13

浦聡一郎

敗血症ラットの微小腸間膜動脈におけるアドレナリン
α受容体刺激による収縮および内皮由来過分極因子依存性律動運動の変化

・・・・・・

16所

潤セメント固定人工股関節ステムの表面加工の差によるセメントの微小運動

・・・・・・

19

和

3DSRT解析による99ｍTc‐ECD SPECTを用いた未投薬および未服薬の統合失調症患者における非定型抗精神病薬
quetiapineの局所脳血流に及ぼす影響に関する研究・・・・・・

23

隆

脂肪肝ラットを用いた非アルコール性脂肪肝炎モデルの作製と肝でのアディポネクチンの発現について・・・・・・

26

甲 第355号

崔甲 第356号

福山

甲 第357号

澤木

甲 第358号

孫

甲 第359号

増山

有

甲 第360号

杉

甲 第361号

富甲 第362号

紋川明

甲 第363号

齊藤

乙 第263号

山

口

善

央

Role of a Novel Conduction Pattern Around theCoronary Sinus in Cavotricuspid Isthmus Dependent
Right Atrial Flutter

・・・・・・

29

乙 第264号

山

川

淳

一

A Kampo Medicine, Boi‑ogi‑to, Inhibits Obesity in
Ovariectomized Rats

・・・・・・

31

乙 第265号

伊

藤

順

庸

甲状腺ホルモン輸送体 MCT8 変異体（235 dup Val）の一
過性発現実験による機能解析

・・・・・・

34

乙 第266号

柳

田

康

博

四塩化炭素投与ラット肝に及ぼすinterleukin‑6誘導物
質(ME3738)の抗肝線維化効果・・・・・・

37

さい

しん

氏名（生年月日）崔本

中華人民共和国籍

森（1965 年 3 月 15 日）

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３５５号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

Venous resistance increases during rat anaphylactic
shock（ラットのアナフィラキシーショックでは静脈抵抗が増加する）

論 文 審 査 委 員

主

査

芝

本

利

重

副

査

西

尾

眞

友

佐久間

勉

松

忍

井

学位論文内容の要旨
研究目的
アナフィラキシーショックによる血圧低下の機序については不明な点がある。イヌのアナフィラキシーショックモデルでは静脈還流に対する循環抵抗の増大が重要であることが報告されている。しかしながら，他の種，たとえばラットではアナフィラキシーショック時の静脈抵抗の変動は知られていない。そこで今回, アナフィラキシーショックの血圧低下機序を解明する目的でラットのアナフィラキシーショックモデルにおいて動脈圧, 中心静脈圧, 心拍出量ならびに静脈還流の駆動圧である平均循環充満圧を測定して静脈抵抗を算出
し, 同程度の血圧低下を示す出血性ショックと比較検討した。
実験方法
雄性SDラットを完全アジュバントと共に抗原として卵白アルブミン1 mgを皮下投与して感作し,2週間後に実験を行った（アナフィラキシー群；n=6）。一方, 対照群（n=6）では完全アジュバン
トだけを皮下投与した。ペントバルビタール麻酔下に門脈, 総頚動脈, 外頚静脈にカテーテルを挿入し, 門脈圧（Ppv）, 体血圧（Psa）, 中心静脈圧（Pcv）, 心拍数を測定した。心拍出量（CO）
を熱希釈法により測定した。すなわち, 大動脈弁直上にサーミスターを留置し, 右房内への0℃生
理食塩水0.15mlを急速投与により測定した。また静脈抵抗を求めるために平均循環充満圧（meancirculatory filling pressure; Pmcf）を測定した。Pmcfは右房入口部に留置したバルーンを室内
気0.35mlで7秒間膨張させて血流を停止させたときのPcvのプラトー圧（venous plateau pressure;
VPP）とPsaのプラトー圧（final arterial pressure; FAP）から次式により算出した。
Pmcf = VPP + K・（FAP‑VPP）

‑ 1 ‑

（1）

なお, 定数Kはラットの動脈と静脈のコンプライアンス比である（K=1/60）。
全末梢抵抗（Rt）と静脈抵抗（Rv）を下記の式から算出した。
Rt = (Psa‑Pcv)/CO(2)

Rv = (Pmcf‑Pcv)/CO(3)

アナフィラキシーショックは抗原0.6 mgを静脈内に投与して惹起した。さらに, 別のラットで大腿動脈カテーテルを介して脱血し, アナフィラキシーショックと同程度に体血圧を低下させ（出血群；n=6）, 血管抵抗と各循環パラメーターの変動をアナフィラキシー群と比較検討した。また,
アナフィラキシーによる門脈圧上昇により腹腔血管床のうっ血から血管外への体液喪失が予想されるため別のラットでヘマトクリットを経時的に測定した。
結果は平均±標準誤差で示した。統計学的検討は時系列データについてはrepeated‑measure
ANOVAを行い, P<0.05を有意とし, Post‑hoc testとしてBonferroni法を用いた。各群間の統計は
ANOVAとBonferroni法を用いた。
実験成績
１．アナフィラキシー群では抗原投与により体血圧は投与前値 119 mmHg から投与後 0.5分から低下し, 8 分には 43 mmHg に達した。門脈圧は投与前値 5.6 mmHg から投与後 2
分には 21.5 mmHg に上昇した。平均循環充満圧は投与前値 6.0 mmHg から投与後 15 分には 5.2 mmHg に有意に低下した。心拍出量は投与前値 85 ml/min から投与後 15 分には38 ml/min に低下した。中心静脈圧は静脈還流量低下により 0.8mmHg 低下した。全末梢抵抗は有意に変化しなかったが, 静脈抵抗は血圧低下とともに投与前の 0.06±0.01
mmHg/mL・min から投与後 15 分には 2.5 倍の増加を示した。心拍数は変化しなかった。
２．脱血によりアナフィラキシー群と同様に体血圧を低下させた出血群では心拍出量と中心静脈圧はアナフィラキシー群と同様に低下した。また, 門脈圧も低下した。平均循環充満圧はアナフィラキシー群よりも低下した。その結果, 出血群では全末梢抵抗と静脈抵抗には有意な変化は見られなかった。また, 血圧低下に伴い心拍数は有意に低下した。
なお, 対照群ではこれらの数値に有意な変化はみられなかった。
３．ヘマトクリットはアナフィラキシーショックでは 43％から抗原投与後 15 分には 55％に上昇し, 血液濃縮がみられた。
総括および結論
卵白アルブミンで感作した麻酔下ラットのアナフィラキシーショック時には門脈圧の上昇とともに顕著な静脈抵抗の増加と平均循環充満圧の低下が見られた。一方, 脱血により血圧を同程度に低下させた出血性ショックでは, 静脈抵抗は増加しなかった。また, 細動脈のトーヌスを反映する全末梢抵抗は変化せず, 両群間で差異はみられなかった。ラット
アナフィラキシーショックでは門脈圧上昇と静脈抵抗の増加が循環動態の特徴である。静脈系である門脈の圧上昇は 静脈抵抗の増大を裏付けるものと推察される。また, 血液濃縮は門脈圧上昇による腹腔血管床のうっ血による体液の血管外漏出によるものと推察される。ラットアナフィラキシーショックでは静脈還流の駆動圧である平均循環充満圧の低下と静脈抵抗の増大が静脈還流を減少させ血圧低下に関与していることが示唆された。

‑ 2 ‑論文審査結果の要旨
本研究は, 麻酔下ラットで体血圧, 中心静脈圧, 門脈圧, 平均循環充満圧ならびに心拍出量を測定して，全末梢抵抗と静脈抵抗を求め, アナフィラキシーショックと同程度の血圧低下を示す出血性ショックとで比較検討した。その結果, 静脈抵抗の増加と門脈圧の上昇がラットのアナフィラキシーショックの特徴であることが示された。静脈抵抗の増加ならびに静脈還流の駆動圧である平均循環充満圧の低下があいまって静脈還流, すなわち心拍出量が減少し, アナフィラキシーショックに関与することが示唆された。その静脈抵抗の増加には静脈系である肝臓の血管収縮が大きく関わっていると考えられる。さらに, 肝血管収縮により腹腔血管床のうっ血が生じ, 血管外へ体液が漏出し, ヘマトクリットが上昇したと推察される。本研究はラットのアナフィラキシーショックモデルではじめて静脈抵抗を測定し, その上昇を示したものであり, イヌのアナフィラキシーショックと同様の結果となり, アナフィラキシーショックの病態生理を解明する上で重要な知見を提供している。
静脈抵抗の算出には平均循環充満圧と心拍出量の測定が必要である。本実験では平均循環充満圧は右房入口部のバルーン膨張による血流停止時の体血圧と中心静脈圧の平衡圧から算出
し, 本法はラットにおいて確立されたものである。また, 心拍出量は熱希釈法を用いて右房内に冷水を注入し, 上行大動脈内に留置したプローブで血液の温度差を検出して測定した。肺血管を通過する際に誤差が生じる可能が危惧されるが, 無視できるとの実験報告がある。また, 血圧低下の前後の同一条件で測定していることから許容できると考えられる。また，実験条件としてペントバル
ビタール麻酔を使用しており，交感神経系が抑制されて心拍数の反応や血圧の回復の時間経過などに影響を与えている可能性が指摘される。今後, 無麻酔条件化でのこれらの循環パラメーターを測定できるシステム開発が望まれる。さらに, 出血性ショックでは血圧低下に対して圧受容器反射が作動し, 心拍数の増加が予想されたが, 本実験では心拍数は有意に低下した。この理由として, 本
研究ではアナフィラキシー群と同様に血圧が低下するように出血させ, 脱血が急速であったことが考えられた。そのために, 急激に静脈還流が減少して, 心臓が空打ちのような状態となり, 心室壁にある迷走神経C‑線維を活性化したために遠心性迷走神経が興奮して心拍数の減少をきたしたものと推察された。
アナフィラキシーショックは致死的となる場合もあるが, その治療法は十分ではない。そのためには免疫学的な検討のみならず, 血圧低下の血行動態的な機序解明が必要である。本研究はラットのアナフィラキシーショックモデルでイヌのモデルと同様に静脈抵抗が増加していることを示したもので, ヒトのアナフィラキシーショックの機序解明ならびに治療法の確立に寄与するものと認められる。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。
（主論文公表誌）
Shock

Vol.29, No.6, 2008

‑ 3 ‑

ふく

やま

山

とも

福

本

籍

福

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３５６号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

ミトコンドリア機能抑制下での初代培養ラット肝細胞に

井

智

き

氏名（生年月日）

基 （昭和 49 年 3 月 13 日）
県及ぼすエタノール負荷の影響―細胞骨格と膜系細胞小器官の関連障害についての検討―
論 文 審 査 委 員

主

査

髙

瀬

修二郎

副

査

高

島

茂

樹

田 中 卓 二野 島 孝 之学位論文内容の要旨
研究目的摂取されたアルコールは肝臓での代謝に伴って酸化ストレス亢進を招き，さらにミトコ
ンドリアの電子伝達障害を引き起こす悪循環を形成すると考えられている。従来から，ア
ルコールによってミトコンドリア膜の電位差減少と透過性亢進が起こり，アポトーシスが誘導されることや，Golgi 装置における glycosylation の障害によって，シアル酸基の少ない糖蛋白が蓄積することが知られている。しかし，培養肝細胞を用いたエタノール負荷
実験では，その代謝に伴う酸化ストレスの発生を十分に得られないことが問題点であった。
そこで，申請者は初代培養ラット肝細胞をあらかじめミトコンドリア複合体 I を阻害する
rotenone で処理し，ミトコンドリア機能抑制状態でのエタノール負荷が細胞骨格と膜系
細胞小器官にいかなる影響を及ぼすかについて検討することを企図した。
実験方法
１．ラット肝細胞の分離・培養：生後 3〜5 週の Wistar 系雄ラットから肝細胞を分離，カ
バーグラス上に撒布して Williams

E medium で 24 時間培養した。実験群は，未処理のコントロール（Cont）群，250ｍM エタノール添加の Et 群，500nM rotenone 処理の Rot
群，およびエタノールと rotenone を同時添加の Et+Rot 群の 4 群とした。微小管の重合阻害剤である colchicine と，過重合剤である paclitaxel で処理した培養肝細胞についても観察した。
２．酸化ストレスと蓄積脂肪量の評価：酸化ストレスは 2 ，7 ‑dichlorofluorescein diacetate（DCHFDA）溶液で処理後，それぞれの条件で培養して蛍光顕微鏡で観察し，また肝細胞内の脂肪は Oil red O 染色を行い，画像解析ソフトによって定量的に分析した。

‑ 4 ‑３．蛍光染色：ミトコンドリアの vital stain として MitoFluor™ Green で処理後，蛍光顕微鏡で観察した。細胞骨格として，微小管はαtubulin 抗体，中間径フィラメントは
cytokeratin18 抗体で染色し，アクチンフィラメントは rhodamine 標識 phalloidin で処理した。また，細胞小器官として，ミトコンドリアは cytochrome c，Mn‑SOD 抗体，
Golgi 装置は mannosidase Ⅱ抗体，小胞体は GRP78 抗体を用いて染色した。
４．培養肝細胞の Mn‑SOD，Cu/Zn‑SOD，catalase 蛋白量：Western blot により測定し，アクチンの染色強度に対する比率として算定した。
実験成績
１．酸化ストレスと蓄積脂肪量：DCHFDA 蛍光強度を比較すると，Et 群と Rot 群は Cont 群
より有意に高く，Et+Rot 群は他の 3 群より有意に高かった。肝細胞内の蓄積脂肪量では，Et+Rot 群は他の 3 群に比較し有意に高値であった。Cu/Zn‑SOD の蛍光染色は，Cont群では細胞質と核にやや強く認められたが，Et+Rot 群では核での染色性が消失し，細胞質で顆粒状に局在した。Cu/Zn‑SOD の分布はミトコンドリアに局在する Mn‑SOD とほぼ一致した。Mn‑SOD，Cu/Zn‑SOD，catalase の発現蛋白量は 4 群間で差はなかった。
２．ミトコンドリアと細胞骨格：１）MitoFluor™ Green によりミトコンドリアの細胞内局在を明瞭に観察できた。Cytochrome c と Mn‑SOD はいずれもミトコンドリアに網目状に分布したので，Mn‑SOD 染色によってミトコンドリアの観察とした。２）Cont 群では微小管は細胞中心部から辺縁に向かって放射状に分布し，ミトコンドリアと類似していた。Et+Rot 群でのミトコンドリアは網目状の分布を失って核周辺にドット状となり，微小管は線維構造を消失した。中間径フィラメントは，Cont 群では細胞内で密なネッ
トワークを形成し，Et+Rot 群では線維構造に変化はみられなかった。アクチンは Cont
群ではストレスファイバーとして辺縁まで比較的密に存在しており，Et+Rot 群ではCont 群と比較して変化はみられなかった。３）Colchicine 処理後では微小管の線維構造が失われ，ミトコンドリアは核周囲にドット状となった。一方，paclitaxel 処理では微小管は密となり細胞辺縁にまで分布していたが，ミトコンドリアのドット状変化が観察された。
３．Golgi 装置と小胞体の変化：Golgi 装置は，Cont 群では核の周囲で網状構造を呈し，小胞体は細胞質全体に分布していた。Et+Rot 群では Golgi 装置が核近傍で点状となったが，小胞体の分布に大きな変化はなかった。Colchicine 処理によって Golgi 装置はEt+Rot 群と同様に点状となったが，小胞体の変化はなかった。一方，paclitaxel 処理
では Golgi 装置は Cont 群と同様に網状に染色され，小胞体の分布にも変化はなかった。
総括および結論
１．酸化ストレスとミトコンドリア機能の評価：初代培養肝細胞に rotenone 処理後エタ
ノールを負荷すると，著しい酸化ストレスの亢進と脂肪蓄積の増加を認めたことから，
本実験ではヒトにおけるアルコール性肝細胞障害と類似した変化を細胞培養系で再現できたと考えられた。Cu/Zn‑SOD は Et+Rot 群では核での染色性はほとんど認められなくなり，ドット状に凝集したミトコンドリアと一致していたことから，Cu/Zn‑SOD が活性酸素増加に対する防御機能を果たしていることが示唆された。
‑ 5 ‑２．ミトコンドリアと細胞骨格の変化：Et+Rot 処理では微小管の脱重合に伴ってミトコ
ンドリアはドット状に変化し，中間径フィラメントとアクチンフラメントにはまったく変化がみられなかった。このように，エタノール負荷に伴うミトコンドリアと細胞骨格との関連が明らかとなり，微小管がミトコンドリアを輸送し，細胞内の分布機能も担っている可能性が考えられた。
３．Golgi 装置と小胞体の変化：Et+Rot および colchicine 処理により，微小管の脱重合とともに Golgi 装置は点状に分散したが，paclitaxel による微小管の過重合では Golgi
装置の変化はみられなかった。
以上のごとく，ミトコンドリア機能抑制下でのエタノール負荷が酸化ストレスを増大させ，ミトコンドリアおよび Golgi 装置の細胞内分布を変化させることが明らかとなった。
このような膜系細胞小器官の変化は colchicine 処理による変化と酷似しており，酸化ス
トレスによる微小管の重合障害が密接に関連していると考えられた。
論文審査結果の要旨
初代培養ラット肝細胞に対してミトコンドリア複合体 I を阻害する rotenone で処理し，さらなるエタノール負荷が細胞骨格と膜系細胞小器官の関係に対していかなる影響を及ぼすかについて検討した論文である。実験の結果，以下の成績が得られたとしている。
培養肝細胞を未処理（Cont），Et，Rot，および Et+Rot で 24 時間処理すると，Et+Rot 群では有意に高い酸化ストレスの発生と脂肪量の増加を認めた。各種免疫染色によると，
Cont 群のミトコンドリアは細胞内で網目状に，微小管は細胞中心部から辺縁に向かって放射状に，小胞体は細胞質全体に密に，Golgi 装置は核を取り囲む網状構造として分布していた。Et+Rot 群では，ミトコンドリアは核周辺にドット状となり，微小管は線維構造を失って細胞質全体に染色された。小胞体は変化しなかったが，Golgi 装置は点状となった。微小管の重合阻害剤である colchicine 処理では微小管は消失し，Golgi 装置は点状となった。一方，微小管の過重合を引き起こす paclitaxel 処理では微小管は密になったが，Golgi 装置は変化しなかった。いずれの抗微小管剤によってもミトコンドリアはドット状になったが，小胞体には変化がなかった。
以上より，ミトコンドリア機能抑制下でのエタノール負荷が酸化ストレスを増大させ，ミトコンドリアおよび Golgi 装置の細胞内分布を変化させることが明らかとなり，これらの変化には，酸化ストレスによる微小管の重合障害が密接に関連していると考えられたとしている。本研究の論旨は，アルコールによる肝細胞障害の発生機序を解明するうえにおいて，きわめて示唆に富むものと評価された。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第3号‑ 6 ‑平成 19 年

さわ

き

木

とし

澤

本

籍

静

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３５７号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

シェーグレン症候群培養唾液腺上皮細胞における

岡

俊

おき

氏名（生年月日）

興 （昭和 50 年 10 月 1 日）
県

ケモカイン発現の解析
論 文 審 査 委 員

主

査

梅

原

久

範

副

査

伊

達

孝

保

古

家

大

祐

竹

上

勉

学位論文内容の要旨
研究目的
シェーグレン症候群（以下 SS）は唾液腺，涙腺などの外分泌腺が傷害され，その結果，
口腔乾燥，眼乾燥を来たす原因不明の自己免疫疾患である。また，腎臓や肺など全身の様々な臓器に病変が及ぶこともある。現時点においては，根治的治療法が無く，その確立が望まれている。SS 患者由来の口唇小唾液腺組織では，導管周囲に多数のリンパ球浸潤を認め，浸潤リンパ球の多くが CD4 陽性 T 細胞である。本疾患における慢性炎症の継続には，Th1 細胞や唾液腺上皮細胞から分泌される IFN‑γがその病態の中心的役割を果たしており，IFN‑γに誘導される様々なサイトカイン，ケモカイン，接着分子の関与も報告されている。また SS の病態持続に CD40 分子が深く関与していることを示す幾つかの報告がある。本研究は，SS 患者と非シェーグレン症候群（以下 non‑SS）患者各々から得た口唇小唾液腺由来の培養上皮細胞（以下それぞれを SS 細胞，non‑SS 細胞と記載する）を用い，
SS における唾液腺導管周囲の細胞浸潤に深く関わっている CD40 分子とケモカインの動態を解明することを目的とした。
実験方法
SS の診断のため口唇小唾液腺生検を行なった SS 患者 10 名，non‑SS 患者 5 名の口唇小唾液腺組織から唾液腺導管上皮細胞を培養した。それらの細胞を１）培養液のみ 96 時間，２）培養液のみで 72 時間前培養し，その後抗 CD40 抗体で 24 時間刺激，３）IFN‑γ500
U/ml で 96 時間刺激，４）IFN‑γ500 U/ml で 72 時間刺激した後，抗 CD40 抗体で 24 時間
刺激，の 4 グループに分けた。各々につき Flow cytometry，RT‑PCR，Real‑time PCR 等の手法で，各種サイトカイン，ケモカイン，接着分子の発現を調べた。

‑ 7 ‑

実験成績
唾液腺上皮細胞の IFN‑γ刺激による CD40 発現をフローサイトメトリーで測定したところ，IFN‑γの 50 U/ml から濃度依存性に，また 48 時間以降から時間依存性に CD40 発現が亢進していた。SS 細胞及び non‑SS 細胞における各種ケモカイン及び接着分子の mRNA 発
現を RT‑PCR 法を用いて測定したところ，non‑SS 細胞で IFN‑γ刺激に対し ICAM‑1，Mig，
IP‑10 の発現が増強する傾向にあった。一方，SS 細胞では抗 CD40 抗体刺激による ICAM‑1，
Mig，IP‑10 の発現が増強する傾向にあった。これを Real time PCR で確認したところ，
Mig の mRNA 発現は，SS に比し non‑SS で有意差をもって亢進していた。抗 CD40 抗体刺激に対する Mig，IP‑10 の発現は，有意差は認めないものの SS 細胞，non‑SS 細胞双方で，亢進傾向が同程度認められた。IFN‑γ刺激後に抗 CD40 抗体刺激を加え，Mig，IP‑10 のmRNA 発現の前値に対する比を Real time‑PCR で検討した結果，SS 細胞が non‑SS 細胞に比し有意差は認めなかったものの高い増加比を示していた。
総括および結論Real Time‑PCR で検討した結果，non‑SS 細胞では IFN‑γ刺激前後の ICAM‑1，Mig，IP‑
10 の発現が著明に亢進していた。しかし，SS 細胞では IFN‑γ刺激に対する ICAM‑1，Mig，
IP‑10 の発現亢進は non‑SS 程顕著ではなかった。この結果は，non‑SS では IFN‑γ刺激でケモカイン発現が亢進するという，健常組織における正常な免疫反応性を表しているといえる。これに対し，SS 患者では IFN‑γに対する反応性が低下していた。Kawasaki らは SSの結膜組織で DNA マイクロアレイを行い，IFN‑γに誘導される様々な分子の遺伝子が発現
亢進している中で，IFN‑γ受容体の遺伝子発現が低下していたと報告している。SS 患者
唾液腺は生体内で持続的な高レベルの IFN‑γに曝露されており，IFN‑γ受容体の唾液腺
局所における発現が低下し，結果として IFN‑γに対する反応性が低下していると考えられた。IFN‑γ刺激後に抗 CD40 抗体刺激を行った結果，Mig，IP‑10 の発現増加比は，non‑
SS に比べ SS 患者で高かった。これは，SS 患者においては IFN‑γで誘導される CD40 の発現が亢進しており，抗 CD40 抗体に対する反応性が増強したと考えられる。SS 患者ではCD40 を介した刺激により Mig，IP‑10 の発現増強が起こり，唾液腺での炎症の遷延化が起こっていると考えられた。
論文審査結果の要旨
本論文は，口腔乾燥および眼乾燥を主症状とする原因不明の自己免疫疾患であるシェー
グレン症候群の唾液腺破壊機序に関するものである。組織破壊は慢性炎症の結果と捉えられるが，その過程には，組織への細胞浸潤を制御するサイトカイン，ケモカインおよび接着分子が深く関わっている。
本申請者は，診断のために実施した正常者およびシューグレン患者の口唇小唾液腺生検
組織より上皮細胞を継代培養した。培養細胞を炎症性サイトカインである IFN‑・刺激を加え，種々のサイトカイン，Mig や IP10 などのケモカインおよび接着分子である ICAM‑1の発現を Real time PCR 法で解析している。その結果，両群の細胞は IFN‑・の刺激に応じて，Mig，IP10 および ICAM‑1 の発現亢進を示したが，むしろ SS 患者において低反応性‑ 8 ‑であることを示した。SS 患者唾液腺組織における IFN‑・の産生亢進がすでに報告されていること，および IFN‑・暴露により IFN‑・レセプターがダウンレギュレーションされるころが報告されており，SS 患者の唾液腺上皮細胞がすでに生体内で IFN‑・に刺激を受けていた結果である可能性を考察している。
自己免疫疾患の病態確立には炎症反応の遷延化が必須である。CD40 分子は，IFN‑・刺激により唾液腺上皮細胞上に発現し，活性化レセプターとして機能することが知られている。申請者らは，IFN‑・刺激による CD40 分子の発現亢進を確認した後，CD40 架橋刺激を加え，上皮細胞から産生される Mig，IP10 および ICAM‑1 の発現を Real time PCR 法により定量解析した。その結果，SS 患者における Mig，IP10 の有意な産生亢進を明らかにしている。このことは，SS 患者の唾液腺組織では，Mig，IP10 により遊走してきたリンパ球が上皮細胞上の CD40 分子を刺激し，さらなる Mig，IP10 産生亢進を誘導し，炎症の継続を可能にしていることを強く示唆される。このように申請者の「シェーグレン症候群培養
唾液腺上皮細胞におけるケモカイン発現の解析」の試みは，唾液腺病巣における炎症の遷延化のメカニズムを CD40 分子に対する過剰反応に伴うケモカインの産生亢進という観点から明らかにした。このことは，シェーグレン症候群にとどまらず自己免疫疾患全般の病因に迫る新しい発見であり，今後の自己免疫疾患の病態病因解明に有益な研究となるである。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第4号‑ 9 ‑平成 19 年

そんい

氏名（生年月日）孫本

中華人民共和国

籍瑋 （1970 年 10 月 5 日）

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３５８号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当
Detection of Bacterial DNA in Synovial Fluids

学 位 論 文 題 目of Patients with Temporomandibular Joint Disorderby Sequencing Analysis（顎関節症患者の滑液における細菌の存在に関する
遺伝子解析）
論 文 審 査 委 員

主

査

瀬

上

夏

樹

副

査

大

原

義

朗

松

本

忠

美

竹

上

勉

学位論文内容の要旨
研究目的
これまで顎関節症は関節疼痛，運動障害，雑音を主徴とし基本的に非感染性疾患と考えられてきたが，その原因はいまだ解明されていない。ところが近年，関節円板の位置異常を伴う顎関節内障の関節滑液中で細菌を同定したとの報告が散見されている。そこで今回，顎関節症における細菌存在の有無をより明確化し，その役割を明らかにする目的で以下の遺伝子解析を施行した。
実験方法
対象は 37 例 38 関節の顎関節症患者（非復位性円板前方転位を示す IIIb 型：29 関節，
骨軟骨の退行変性を示す IV 型：9 関節）から上腔穿刺により無菌的に採取した希釈滑液を用いた。なお習慣性顎関節脱臼患者７例７関節の滑液をコントロールとした。方法は，滑液からの抽出 DNA を行い，16S rRNA gene の PCR 増幅およびクローニングなどの遺伝子解析法により細菌の塩基配列を同定した。この際には既に報告されている Universal
bacterial primer を用いた。また細菌検出度を臨床症状，MR 画像所見，滑液中蛋白濃度と比較検討した。
実験成績
解析の結果，患者群では 25 関節（65.8%）で細菌 DNA を検出した。検出菌種について
は，以下の 11 種の細菌の DNA が検出された。Granulicatella adiacen（８ 検体），Pseudomonas‑ 10 ‑

sp.（８ 検体），Methylobacterium sp.（７ 検体），Beta proteobacterium（４ 検体），Streptococcus（４検体），ならびにAcidovorax sp.， Bradyrhizobium sp.， Sphingomonas， Leptothrix sp. oral clone（各２ 検体）， Thiobacillus denitrificans， Comamonadaceae bacterium（各1 検体）で，コントロール
群では細菌は検出されなかった。なお複数菌種検出群 10 例（56±8 歳）は，単一菌種検出群 15 例（36±14 歳）よりも有意に高齢であり（P< .05），Granulicatella abiacen は 45
歳以上の高齢患者で認められる傾向であった。なお滑液採取前の T2 強調 MR 画像における関節腔の高信号陽性像（Joint effusion 像:JE）との関連については，細菌陽性群（13/25 関節）では細菌陰性群（1/13 関節）より有意に JE 陽性像を呈する傾向を示した（P= .01）。また滑液中の平均蛋白濃度は，細菌陽性群（2.75±1.40μg/dl）が陰性群（1.34±1.41μg/dl），コントロール群（0.83±0.29μg/dl）よりも有意に高値を示した（P< .01）。一方，細菌検出の有無と関節疼痛の程度，開口度，MR 画像における円板変形
度，骨変形度との関連はみられなかった。
総括および結論
以上の結果により，顎関節症では高い頻度で関節腔内に細菌が存在することがより明確となり，病態形成に関与する可能性が示された。すなわち細菌の存在は，関節内の炎症反応を増幅させることにより滑液中蛋白濃度の上昇，MR 画像における JE 陰影の成立に関与する可能性が示唆された。しかしながら本研究では部分的 DNA 増幅を検討したものであることから細菌種の詳細は同定できず断定には至っていない。一方，本研究で検出された菌種のうち，Granulicatella adiacen，Pseudomonas sp.，Methylobacterium sp.，Streptococcus などは，以前に顎関節症あるいは他の関節炎で報告されているが，その他の菌種は新たに同定されたものである。以上の結果により，顎関節症など炎症性関節疾患における細菌の存在は，自己免疫機構の活性化，炎症性蛋白物質の生成による本症の病態増悪に関わる可能性が示された。
今後，さらに詳細な検討を加えることにより，顎関節症における細菌の存在の有無と菌種の確定を深めるとともに，顎関節症における細菌が病態形成に関与する役割の詳細を明らかとすることが必要と考えられる。
論文審査結果の要旨
本研究は，病因や詳細な病態がいまだ解明されていない顎関節症について，関節内の細菌の存在と病態への関与を明らかにする目的で，遺伝子解析手法を応用して行われたものである。対象は，37 例 38 関節の顎関節症患者の上関節腔滑液を用い，習慣性顎関節脱臼患者７例７関節の滑液をコントロールとしている。方法は，滑液からの抽出 DNA を行い，16S rRNA gene の PCR 増幅およびクローニングなどの遺伝子解析法により Universal
bacterial primer を用いて細菌の塩基配列を同定している。さらに細菌検出度を臨床症状，画像所見，得られた滑液中の蛋白濃度分析結果と比較検討している。
この結果，疾患群の 65.8%で細菌 DNA を同定し 11 種の細菌を明らかにしている。なおコントロール群では細菌検出しなかったことから，顎関節症では特異的に細菌感染が惹起されている可能性が示された。また，２から３種類の複数菌が検出された患者群ある‑ 11 ‑

いは Granulicatella adiacen を認めた患者群は有意に高齢であったとしている。さらに滑液
中蛋白濃度が細菌陽性群で有意に高く，MR 画像における高信号像（Joint Effusion 像）の発現と密接な相関を認めたことなどから，細菌の存在が顎関節症の病態形成に関与する可能性が示した。
これらの成果は，顎関節症の病因あるいは病態形成への新たな示唆を与える有意義な研究内容と考えられる。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第3号‑ 12 ‑

平成 19 年

まし

やま

山

ゆう

増

本

籍

栃

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３５９号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

発達期歯牙の大脳皮質口腔感覚野における細胞構築形成

木

有

いち

氏名（生年月日）

一 （昭和 51 年 10 月 26 日）
県への役割
論 文 審 査 委 員

主

査

瀬

上

夏

樹

副

査

加

藤

伸

郎

松

井

飯

塚

真
秀

明

学位論文内容の要旨
研究目的
成長期における外部からの感覚情報は脳機能の発達に必要であると言われている。顎口腔領域に注目すると，成長期の歯牙の萌出は顎口腔機能の上昇を促し，より多くの口腔感
覚情報を脳に送り，脳機能の発達に貢献していると考えられる。発達期に多数の歯牙を喪失した場合，口腔機能低下に伴って脳への顎口腔からの情報量が低下し，口腔感覚情報処
理機能の発達に影響が現れることが予想される。一般的に，外部感覚情報は視床で中継された後，大脳皮質一次感覚野に送られ，感覚情報処理が開始される。本研究では，歯牙を含む口腔領域からの感覚情報が入力する大脳皮質口腔体性感覚野に焦点を当て，発達期歯
牙喪失が及ぼす形態学的な発育への影響を調べた。
実験方法
Wistar 系ラットを用いて実験を行った。生後 2〜3 週に上下顎切歯および上顎臼歯を抜歯して流動食で飼育した群（6 匹），生後 5 週に同様に抜歯を行い流動食で飼育した群（4匹），抜歯を行わずに固形飼料による通常飼育を行った群（6 匹）の 3 群に分けて飼育した。生後 7 週の時点で，これら 3 群から口腔体性感覚野および視覚野を含む脳スライス標本（厚さ 40μm）を作製し，クレシルバイオレットを用いて染色を行った。大脳皮質口腔
体性感覚野Ⅱ〜Ⅵ層の各層における細胞の形態，細胞密度，層構築を光学顕微鏡下で観察した。細胞密度については，口腔体性感覚野Ⅱ〜Ⅵ層のそれぞれの面積 100μm×100μmあたりの細胞体数の平均値を算出した。また，大脳皮質視覚野をコントロールとして，口腔体性感覚野および視覚野における神経細胞の形状，層構造ついても比較検討を行った。

‑ 13 ‑

実験成績
口腔体性感覚野におけるⅡ・Ⅲ・Ⅳ・Ⅴ・Ⅵ層の単位面積（100μm×100μm）あたりの細胞体の形状と細胞体数を 3 群間で比較したが，有意な差はみられなかった。大脳皮質口腔体性感覚野の層構造の違いについては，3 群すべてにおいて 6 層構造をとっており，歯牙喪失の影響を認めなかった。しかし，口腔体性感覚野Ⅱ〜Ⅵ層の厚みに対するⅡ〜Ⅳ層の厚みの比率（％）を比較したところ，生後 5 週抜歯群と非抜歯群に比べて，生後 2〜3
週抜歯群の口腔体性感覚野Ⅱ〜Ⅳ層の厚みの縮小傾向がみられた。3 群間のⅡ〜Ⅳ層比率
について，分散分析（ＡＮＯＶＡ）および多重比較（Scheffes test）を行ったところ，

生後 5 週抜歯群と生後 2〜3 週抜歯群間，および非抜歯群と生後 2〜3 週抜歯群間について有意差を認めた（p<0.005）。しかし，生後 5 週抜歯群と非抜歯群間では有意差を認めなかった。大脳皮質視覚野の細胞体の形状については，3 群間で違いは認められなかった。
層構造について，視覚野Ⅱ〜Ⅵ層の厚みに対するⅡ〜Ⅳ層の厚みの比率（％）を比較したが，3 群間で有意差はみられず，口腔体性感覚野で認められた歯牙喪失の影響を確認できなかった。
総括および結論
本研究では，人為的に抜歯を施行し，大脳皮質口腔体性感覚野における歯牙喪失の影響を観察することで，大脳皮質における口腔感覚情報処理機構の発達に対する顎口腔領域からの神経性入力の役割を調べるという手法を用いた。ラットの場合，生後 2 週前後より歯牙の萌出が始まり，歯牙の萌出とともに授乳期から自力で餌を摂取する時期に移行する。
今回，歯牙萌出が完了する生後 2 週から 3 週の間で上顎歯牙を抜歯したところ，その影響が大脳皮質口腔体性感覚野における層構造の形成に影響のあることが判明した。ところが
生後 5 週の抜歯では，層構造の形成に影響はなかった。体性感覚野Ⅱ〜Ⅳ層は外部感覚入力を直接受ける領域であるので，生後 2 週から 3 週の間で歯牙を喪失したことによって，顎口腔からの情報量が低下した状態で成長し，その結果，口腔体性感覚野の入力系神経細胞群で構成されるⅡ〜Ⅳ層の発育が抑制されたことが予想される。一方で，生後 5 週以降の歯牙喪失では，正常飼育群と違いが見られなかったことから，生後 3 週から 5 週の間で層構造は完成し，層構造が完成した後，歯牙喪失により口腔感覚情報の入力が低下したとしても，もはや層構造の形成に影響はなかったと解釈される。また，コントロールとして調べた大脳皮質視覚野で歯牙喪失の影響がみられなかったことは，歯牙喪失の影響は大脳皮質全体に及んでいないということを示している。以上の結果より，大脳皮質口腔感覚野の形態学的正常発育には適切な時期に適切な歯牙由来の入力を必要とすることが判明した。
このことは，口腔感覚の発達に感受期が存在することを強く示唆する。
人の場合，生後約 6 ヶ月頃から乳歯の萌出が始まり，6 歳から 12 歳頃までの間で乳歯から永久歯への歯列交換が行なわれ，18 歳頃に永久歯列が完成する。本研究結果を考慮
すると，このような発育期の歯牙は口腔感覚情報処理機構の発達に重要な役割を担っていると考えられる。この時期にう蝕や外傷などの要因により多数の歯牙を喪失した場合，口腔機能は低下し，その影響は大脳皮質口腔体性感覚野に留まらず，さらに大脳辺縁系などに及んで情動発達などに影響を与える可能性が十分考えられる。今後，口腔機能と脳の発達について，形態と機能の両面からさらに研究をすすめて行く必要がある。
‑ 14 ‑

論文審査結果の要旨
顎顔面口腔に関わる運動・感覚の情報処理をおこなう神経細胞が占める大脳皮質領域は比較的広範囲である。このことは成長過程において，顎顔面口腔からの神経性の入力や運動性出力が脳機能の発達に重要であることを示唆している。本研究は，発達過程で口腔からの感覚情報が低下した場合，大脳皮質の発達にどのように影響が現れるのかということについて，大脳皮質口腔体性感覚野の細胞構築を視点として調べたものである。
一般的に，大脳皮質は 6 層構造を形成している。大脳皮質感覚野においては外界の感覚
情報は視床で中継された後，大脳皮質Ⅳ層に入力する。Ⅳ層の神経細胞は，それらの情報をさらにⅡ/Ⅲ層へと送り，Ⅱ/Ⅲ層の神経細胞は，入力のパターンに応じて，可塑的に形態や機能を変化させることが知られている。
本研究では，生後 2〜3 週の間に抜歯を施行することにより口腔機能を低下させ，そのことによる感覚情報入力の低下の影響を大脳皮質口腔体性感覚野で観察した。注目すべき
結果は，Ⅱ〜Ⅳ層に対するⅡ〜Ⅳ層の厚みが，成長期の抜歯群において著明な低下を認めたことである。上記のごとく，Ⅱ〜Ⅳ層は外界からの入力を受けて可塑的な変化を引き起こしやすい領域であるが，本研究で影響を受けた領域は，まさにこれらの可塑的変化の場と一致した。したがって本研究は，口腔感覚についても感覚性入力が脳の発達に寄与していることを示すものとして位置づけられる。
さらに，生後 5 週以降の抜歯では，上記のような層形成への影響が見られなかったことは，感覚性入力を受けて層が正常に形成されるためには，限られた期間に入力を受ける必要のあることを示している。このことは，口腔感覚情報処理の生後発達に感受期の存在することを強く示唆し，臨床的意義も非常に大きいと考えられる。
本研究では，口腔体性感覚に関わる大脳皮質領域に注目したものであったが，同じ口腔感覚であるところの味覚に関わる皮質領域への影響，さらに次の段階として，咀嚼運動など運動機能への影響を調べることにより，「口腔機能と脳の発達」に関する研究は発展していくと思われる。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第3号‑ 15 ‑

平成 19 年

すぎ

うら

浦

そういちろう氏名（生年月日）

杉

本

籍

石

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３６０号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

敗血症ラットの微小腸間膜動脈におけるアドレナリン

川聡一郎（昭和 50 年 11 月 10 日）

県

α受容体刺激による収縮および内皮由来過分極因子依存性
律動運動の変化論 文 審 査 委 員

主

査

土

田

英

昭

副

査

芝

本

利

重

秋

田

利

明

西

尾

眞

友

学位論文内容の要旨
研究目的
血管拡張にかかわる内皮細胞由来の因子には，内皮由来弛緩因子（EDRF: endothelium‑
derived relaxing factor），プロスタサイクリン（PGI2 ），内皮由来過分極因子（EDHF:
endothelium‑derived hyperpolarizing factor）の 3 つがあるとされる。EDRF の本体は一酸化窒素であることがほぼ確定したが，EDHF の特定はいまだになされていない。これまでに EDHF に関する様々な生理学，薬理学的研究がなされてきた。しかし，敗血症のよ
うな病的状態で微小血管系の内皮機能，特に EDHF がどのように変化するかはいまだ明らかにされていない。
そこで本研究は，α1 アドレナリン受容体作動薬であるフェニレフリン（PE）と内皮依存性血管拡張物質であるアセチルコリン（ACh）とを用い，病的状態の一モデルである敗血症の際に，微小血管内皮機能がどのように変化するかを明らかにすることを目的とした。
実験方法
１．血管標本の作成
実験には雄性 SD ラット（6〜10 週齢）を用いた。敗血症ラットの作成は全身麻酔下に開腹して盲腸を結紮し，18G 針で盲腸に 2 箇所の穿孔を開けた後，閉腹した（CLP 法）。
敗血症作成 6 時間後，再度ラットを全身麻酔下に開腹し，直径 200μm 以下の腸間膜動脈を摘出した。生理学的塩類溶液（PSS）内で慎重に脂肪組織などを除去後，全長約 10mm の血管標本を作成した。対照には敗血症作成を行わないラット腸間膜動脈を用い，一部の対照血管では内皮細胞を剥離した。作成した標本の両端に微小ガラスピペットを挿入し，PSS で満たした微小血管チャンバー内に固定した。血管内圧は灌流圧・流量制‑ 16 ‑

御ポンプを用いて 45±2 mmHg となるよう PSS で定圧灌流した。血管径の観察は，顕微鏡に装着した収縮計測用 CCD カメラで行った。
２．血管反応性の観察
血管径が安定するのを待って実験を開始した。まず，高カリウム溶液（60 mM）で血管を収縮させ，このときの血管内径の変化を 100%とした。
【実験 1】微小血管の収縮弛緩に及ぼす血管内皮の影響
内皮温存対照血管，内皮剥離対照血管，内皮温存敗血症血管（それぞれ n=5）に対して PE を 3×10‑8 M から 3×10‑5 M まで累積投与し，血管収縮ならびに律動運動を観察した。最大収縮が得られた時点で ACh 10‑6 M を投与し，内皮依存性拡張を観察した。
【実験 2】血管拡張と律動運動に影響する内皮由来拡張因子の同定
ACh 依存性血管拡張と律動運動を引き起こす因子を同定するため，内皮温存対照血管で一酸化窒素合成酵素阻害薬の L‑NAME（10‑4 M），シクロオキシゲナーゼ阻害薬のイン
ドメタシン（INDO：3×10‑5 M），KCa 阻害薬のカリブドトキシン（ChTx：10‑7 M）およびアパミン（AP：5×10‑7 M）の影響を観察した（それぞれ n=5）。
【実験 3】敗血症血管において傷害された内皮由来拡張因子の同定
敗血症血管で傷害された内皮由来拡張因子を同定するため，実験 2 と同様の処置を内皮温存敗血症血管でも施行した（それぞれ n=5）。
実験成績
１．PE 投与により，内皮温存対照血管では濃度依存性の血管収縮とともに律動運動が観察された。内皮剥離対照血管でも PE により濃度依存性の収縮を起こすが，律動運動は消失していた。内皮剥離対照血管では内皮温存対照血管よりも低濃度の PE で血管収縮が起こり，PE の濃度反応曲線が有意に左方移動していた。一方，内皮温存敗血症血管でも PE 濃度依存性の収縮が起きたが，律動運動は消失していた。内皮温存敗血症血管の PE 濃度反応曲線は，内皮温存対照血管と比較して有意に左方移動していた。最大収縮後に ACh を投与すると，内皮温存対照血管では 102%の拡張を起こしたのに対し，内皮剥離対照血管では 0%，内皮温存敗血症血管では 35%の血管拡張を起こした。
２．内皮温存対照血管に L‑NAME 単独，INDO 単独，または L‑NAME＋INDO の前投与を行っても，PE 濃度反応曲線に有意な変化はなかった。L‑NAME と INDO に加えて ChTx と AP を前投与すると，PE 濃度反応曲線は有意に左方移動した。一方，L‑NAME または INDO の前投与によって律動運動は減少し，両者の前投与により律動運動は相加的に減少した。さらに，L‑NAME と INDO に加えて ChTx と AP を前投与すると，律動運動は完全に消失した。
PE 最大収縮後に ACh を投与すると，L‑NAME＋INDO 前投与群では血管拡張が 72%に減少
したのに対し，L‑NAME＋INDO に加えて ChTx＋AP を前投与した群では血管拡張が完全に消失した。
３．内皮温存敗血症血管に L‑NAME または INDO を前処置しても，PE 濃度反応曲線に有意な変化はなかった。しかし，L‑NAME＋INDO を前処置すると PE 濃度反応曲線は有意に左方移動した。L‑NAME＋INDO に加えて ChTx と AP を内皮温存敗血症血管に前処置しても，
L‑NAME＋INDO 群と比較して PE 濃度反応曲線の更なる左方移動はなかった。PE 最大収縮
後に ACh を投与すると，L‑NAME＋INDO 群では 5%の血管拡張が起きたのに対し，L‑NAME‑ 17 ‑

＋INDO に加えて ChTx＋AP を前処置すると血管拡張は全く起こらなかった。
総括および結論
CLP 法でラット敗血症モデルを作成し，6 時間後に微小腸間膜動脈を採取して血管径を測定し，これを正常血管と比較することにより以下のことが明らかとなった。
１．ラット腸間膜動脈の収縮弛緩反応は内皮細胞によって修飾され，一酸化窒素，PGI2，
および EDHF の 3 者が関与している。
２．腸間膜動脈の律動運動の発生には一酸化窒素，PGI2，EDHF のいずれもが関与するが，EDHF が最も重要な役割を果たしていることが示唆された。
３．敗血症作成 6 時間後のラット腸間膜動脈では，内皮細胞傷害による血管拡張障害と律動運動の消失とが起こる。
４．敗血症血管での内皮機能障害の本体は EDHF の機能障害であり，内皮細胞由来の一酸化窒素や PGI2 の作用は，絶対的もしくは相対的に亢進していると推察される。
論文審査結果の要旨
敗血症性ショックは集中治療室における最も頻度の高い死亡原因の一つとされており，その死亡率はいまだに 40〜60%であるとされている。その病態は不明なことが多いが，末梢循環不全による重要臓器の血流障害が大きな役割を果たしていることに間違いはない。
申請者は本研究において臓器血流障害の原因の一端を解明すべく，敗血症作成 6 時間後のモデルを用いて薬理学的な実験を行った。その結果，敗血症作成 6 時間後の腸間膜動脈では PE に対する濃度反応曲線が左方移動，すなわち血管収縮性が亢進していること，正常血管で認められた律動運動が消失していること，ACh による内皮依存性血管拡張が抑制されていること，正常血管で内皮依存性拡張に占める EDHF の割合は 72%であったのに対し敗血症血管では 5%に減少し，敗血症血管における内皮傷害の本体は EDHF の機能障害であること，などを明らかにした。
以上の結果より，敗血症初期には内臓の微小血管の血管収縮性が亢進するとともに，内皮依存性の血管拡張，律動運動が抑制されていることが明らかとなった。一般的に敗血症では，誘導型一酸化窒素合成酵素の働きにより一酸化窒素産生が亢進し，強い血管拡張と低血圧が起こるとされている。しかし本研究では，その前に血管収縮性が軽度亢進していることを明らかに，その本体が EDHF の機能障害であることを示した。敗血症モデルを用いた微小血管実験はこれまで全く報告されておらず，本研究は敗血症性ショックの病態を解明する上で大きく貢献するだけでなく，今後の研究発展にも寄与するものと考えられた。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第3号‑ 18 ‑

平成 19 年

とみ

どころ

所

じゅん

氏名（生年月日）

富

本

籍

新

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３６１号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

セメント固定人工股関節ステムの表面加工の差による潟潤（昭和 51 年 7 月 21 日）

県セメントの微小運動論 文 審 査 委 員

主

査

松

本

忠

美

副

査

瀬

上

夏

樹

勝

田

省

吾

八

田

稔

久

学位論文内容の要旨
研究目的
人工股関節全置換術（Total

Hip

Arthroplasty （以下，THA））は疼痛を除去し，股関節機能を再建する最も有用な方法である。THA に使用するセメント固定式ステムには表面を研磨仕上げした polished stem と，粗面加工した rough stem が存在する。臨床的に同形状のステムにおいて，polished stem が rough stem より長期耐用性が良いと報告されている。しかし，現在まで実験的に成績良好の理由とされるセメント内へのステムのかみ込み（taper lock 現象），もしくはセメントのクリープ現象を捉えた報告はなかった。
また，polished，rough stem においてステム沈下が骨セメント界面に及ぼす影響を検討した報告はなかった。さらに，セメントの三次元的な移動とその方向は不明であり，またステムがセメント内をスリップして沈下したのか，ゆるみのようにセメントと一体となって沈下したのか明らかではなかった。
そこで本研究の目的は，THA 実験モデルを用いて polished stem の長期成績良好の原因とされるセメントクリープおよび taper lock 現象を直接捉えることである。
実験方法
臨床で使用されている polished stem 及び同ステムの表面を凹凸加工した rough stem
を模擬大腿骨に固定し，37 度に保温した人工股関節モデルを作製した。セメント移動を解析する為タンタルボールを近位内側のセメント内に埋入した。このモデルに 3000 ニュートン（1N≒0.102kg）の正弦波負荷を周波数 1Hz で 200 万回かけた（試験期間 38 日，2年間分に相当）。また，セメント層による力学差を検討するため，それぞれ 2 サイズ（small，large）のステムを用いた。以上，合計 4 パターンの組み合わせで実験を行った。
睡眠を模擬するため，16 時間の負荷ごとに 8 時間無負荷とした。検討項目はステム沈下‑ 19 ‑

（沈下量，沈下率），およびセメント・骨界面に水平方向に発生する作用力，骨頭移動量であった。作用力はロードセルを用いて，ステム沈下量はデジタル式変位計を用いて計測し，骨頭移動量はビデオ撮影によって計測した。作用力とセメント移動は，模擬骨の近位，
遠位の内，外，前，後方から近位後方を除いた計 7 箇所で経時的に測定した。また，セメントの三次元的な移動方向とその移動量に関しては，セメント内のタンタルボールの移動をマイクロＣＴ装置を用いて解析した。ステムに対し，内側−外側方向を X 軸，前−後方
向を Y 軸,鉛直方向を Z 軸とし，試験前の座標（x，y，z）＝（0,0,0）から移動した点を座標として表した。また，歪みゲージを用いてセメントの沈下を観察した。
実験結果
１. ステム沈下量
Polished stem では small，large 共に初日に大きく沈下した後は緩やかな沈下となり，最終沈下量は small：1.233±0.004mm，large：0.685±0.006mm であった。一方，
rough stem は初日の大きな沈下は polished stem と同様な傾向であったが，その後は直線的に沈下し続け，最終沈下量は small：2.721±0.007mm，large：1.990±0.027mmであった。
２. 作用力Polished stem では，small，large 共にセメント骨界面における作用力は時間経過と共に増大したが，両ステムとも徐々に値が収束し，最終的な作用力は small：437.6±
1.05N，large：109.5±3.03N であった。Rough では作用力の値が上下し，polishedstem が示したような値が収束する傾向を認めなかった。最終作用力は small：252.58±
4.24N，large：753.2±1.60N であった。
３. ステム沈下量と近位内側における作用力との関係
Polished stem では，small，large 共に 19 日目頃までは，ステム沈下が進むにつれて作用力も大きくなり，回帰分析において，2 次近似曲線を引くと強い正の相関を示した。しかし，その後は沈下も作用力も大きな変動は見せず，収束する傾向にあった。一方 rough stem は，polished stem と同様な挙動は見せず，また small，large に共通点は認められなかった。
４. ステムの微小運動の評価
Polished stem では 2 日目と比較し，37 日目では微小運動が有意に小さくなっていた。
一方，rough stem では small，large とも 2 日目と 37 日目の動きに有意差がなかった。
５. レントゲン及び歪みゲージの評価
Polished stem では初期からステム沈下しているのに対し，rough stem では，荷重開始直後からステム沈下と共に歪みゲージが大きく歪みほぼ同期するように歪んで行った。
６. マイクロ CT による解析
試験終了後の座標は，polished small，large それぞれ（x，y，z）＝（‑0.100，‑
0.002，‑0.680），（‑0.051，‑0.040，‑0.085）であった(単位:mm)。セメントクリープ量はそれぞれ 0.69mm，0.094mm であった。rough は small，large 共に，ステムとセメントが一体となって模擬骨内を大きく移動した。
また，セメント内でステムがスリップしたのかを，Z 方向へのセメント移動，ステム‑ 20 ‑

沈下から検討したところ， polished small は，セメント内へのスリップ率が 55.7％，
large は 12.5％，rough small は 87.0％，large は 79.9％であった。
総括および結論
Polished stem はステム沈下によってセメント内のタンタルボールが髄外方向に押し出されることが明らかとなった。またステムがセメントと一体となって沈下したのではなく，
セメント内で slip を生じ，セメントがクリープを起こしたことが明らかとなった。そして taper lock 現象を捉えることができた。
一方今回の rough stem では，初日に大きな沈下を来たし，その後の沈下も直線的に続き，polished stem のように沈下が止まる傾向を認めなかった。またステムとセメントがほぼ一体となって沈下したことが明らかとなり，loosening 至る過程を観察することができた。
論文審査結果の要旨
近年，セメント固定式人工股関節置換術において polished stem が rough stem より長期耐用性が良いことが分かってきた。その理由としてセメント・骨海面，ステム・セメン
ト界面における力学差が原因と推察されている。本研究は人工股関節の力学的特性を評価できる実験システムを確立し，休息期間を作ることで生体内と同様の環境を作製し，polished stem のクリープ現象や，セメント内でのステムのスリップを確認すること，そして polished stem と rough stem の表面加工差によるセメント・骨界面の力学動態の差の検討をしたものである。
本研究において申請者は以下の結論を得ている。
１．ステム沈下量は，Polished stem では初日に大きく沈下した後は緩やかな沈下となった。一方，rough stem は初日の大きな沈下は polished stem と同様な傾向であったが，その後は直線的に沈下し続ける結果となった。
２．Polished stem では，セメント骨界面における作用力は時間経過と共に増大したが，その後徐々に値が収束した。一方 Rough stem では，値が収束する傾向を認めなかった。
３．Polished stem では，ステム沈下が進むにつれて作用力も大きくなり，強い正の相関を示した。しかし，その後は収束する傾向にあった。一方 rough stem は，polishedstem と同様な挙動は見せなかった。
４. Polished stem では 2 日目に比べ 37 日目にステムの微小運動が有意に小さくなって
いたが，rough stem ではその動きに有意差がなかった。
５. Polished stem ではステム沈下に対し歪みゲージがほとんど歪まず，骨・セメント界面が温存され，ステムのスリップを確認することができたのに対し，rough stem では，
ステム沈下と共に歪みゲージが大きく歪み，骨・セメント界面での結合性の破綻を来し，ステムのスリップを認めない結果となった。
６. マイクロ CT の結果より，polished stem においてセメントクリープを確認することができた。一方 rough stem は，ステムとセメントが一体となって模擬骨内を大きく移動し，loosening を起こしたことが確認された。
‑ 21 ‑

以上の結果より，polished stem におけるセメントクリープやステムのスリップを直接捉えることができ，この結果が臨床における長期成績良好の理由と考えられた。また，
rough stem は loosening モデルと考えられ，この結果の差が臨床的な長期成績の差であると考えられた。このため本研究法は人工股関節ステム破綻機序解明に大きく寄与する方法になると考えられ，更なる長期耐用性を持ったステムやセメントの開発につながる重要な知見をもたらしたものと判定された。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第4号‑ 22 ‑

平成 19 年

もん

かわ

川

あき

紋

本

籍

富

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３６２号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

3DSRT 解析による 99ｍTc‐ECD SPECT を用いた未投薬および

山

明

かず

氏名（生年月日）

和 （昭和 49 年 2 月 4 日）
県

未服薬の統合失調症患者における非定型抗精神病薬
quetiapine の局所脳血流に及ぼす影響に関する研究
論 文 審 査 委 員

主

査

地

引

逸

亀

副

査

飯

塚

秀

明

森

本

茂

人

加

藤

伸

郎

学位論文内容の要旨
研究目的
非定型抗精神病薬のうち MARTA に分類される quetiapine の脳内作用機序を探る目的で,急性期の統合失調症患者を対象として，quetiapine が大脳皮質や皮質下の局所脳血流（regional cerebral blood flow，rCBF）に及ぼす影響を 99mTc‑ECD

SPECT を用いた

3DSRT により解析し検討した。
研究方法
急性期の幻覚妄想状態にあり，未投薬（drug−naive）つまり過去に全く抗精神病薬を服用したことない統合失調症患者 10 例，未治療（unmedicated）つまり過去に抗精神病薬を服用した経験はあるが研究時点では未服薬の統合失調症患者 2 例の合計 12 例を対象とした。quetiapine の通常の臨床用量である一日あたり 300mg の約 2 週間に渡る慢性経口投与の前後で, 99m technetium‑ethyl cysteinate dimer（ 99mTc‑ECD）をトレーサーとする SPECT による rCBF の絶対値測定と，positive and negative syndrome scale （PANSS）による精神測定を施行し, 個々の脳部位の rCBF に及ぼす quetiapine の影響や，rCBF と精神症状との相関の有無を検討した。さらにその後引き続いて同一患者に QTP の高用量（一日あたり 600ｍｇ）を投与して同様の検討を行い，300mg の低用量投与と比較して用量依存的な違いがあるかどうかを調べた。
研究成績
Quetiapine 投与前の状態と quetiapine の低用量投与後の PANSS による精神病症状評価
スコアの比較で，スコアの減少すなわち精神病症状の有意な改善がみられた。ただし，‑ 23 ‑

quetiapine 投与前の未投薬あるいは未治療の状態の対照群，quetiapine の低用量投与群，高用量投与群の 3 群間の比較で，どの脳部位においても rCBF の有意な差はみられなかった。また，その低用量投与前後の精神病症状評価スコアと個々の脳部位における rCBF の間でも有意な相関はみられなかった。
総括および結論
Quetiapine の投与により，その投与量にかかわらず大脳皮質や皮質下の各脳部位における rCBF には有意な変化はみられなかった。Quetiapine は従来の抗精神病薬に比べて D2受容体遮断作用が弱く，さらに受容体からの解離速度が速い。それゆえ線条体における D2受容体遮断作用による視床を介した大脳皮質への二次的な興奮性の低下が弱く，結果として rCBF に有意な影響を及ぼさなかったと考えられる。しかしながら，quetiapine 投与により陽性症状および陰性症状に対し充分な臨床効果を発揮したことは，従来の抗精神病薬の臨床効果が主に D2 受容体遮断作用によるのに対して，quetiapine は MARTA として複数の受容体を介して複雑な臨床効果を発揮する薬剤であることを示唆する。
論文審査結果の要旨
本研究は統合失調症患者に対する抗精神病薬の作用機序を，その薬物投与の前後における SPECT による rCBF すなわち局所脳血流の変化を指標として検討したものである。過去にこのような研は極めて少なく，とくに申請者が今回対象とした非定型抗精神病薬 MARTAの代表的な薬物 quetiapine に関する研究は本邦はもとより諸外国でも過去にみられない。
また本研究は対象の統合失調症患者を，過去に全く抗精神病薬を服用したことない未投薬（drug−naive）の症例や，過去に抗精神病薬を服用した経験はあるが研究時点では長期間に渡って未服薬の症例に限って検討している。本研究のような薬物の作用機序に関する臨床研究にこのような症例が望ましいことは言うまでもないが，症例の蒐集が難しいために過去にこのような研究は至って少ない。また本研究は rCBF に及ぼす影響を薬物の用量依存性の観点からも検討している。これは方法論上重要ではあるが，臨床研究では実際上難しいために，やはり過去にこのような検討は少ない。以上のように本研究の目的や方法
は originality も高く合理的ということができる。
本結果は quetiapine は十分な臨床効果を呈しながらも rCBF に及ぼす影響としては有意な変化はなく，用量依存性もみられないというものであった。過去の同じく MARTA に属する olanzapine の SPECT 研究で同様な結果が得られており，本結果の妥当性は十分高いと思われる。申請者は他の定型あるいは非定型抗精神病薬との比較の下，本結果をquetiapine の線条体における D2 受容体遮断作用の弱さや，D2 受容体からの解離速度の急速さによると考察し，これらのために線条体―視床を介した大脳皮質への二次的な興奮性の低下が弱く，結果として rCBF に有意な影響を及ぼさなかったと結論している。また従来の抗精神病薬の臨床効果が主に D2 受容体遮断作用によるのに対して，quetiapine は D2受容体遮断作用だけでなく，むしろ複数の受容体を介して臨床効果を発揮する薬剤であると結論している。
目的，方法や結果に関する記述，図表の呈示は適切で，考察の構成や内容も論理的で，‑ 24 ‑

文 献 比 較 も 十 分 に し て 適 切 で あ る 。 本 研 究 で rCBF に 及 ぼ す 影 響 と い う 側 面 か ら
quetiapine の特徴を明らかにしたことは，その作用機序を明らかにする上に有用な示唆を与えるものと思われる。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第4号‑ 25 ‑

平成 19 年

さい

とう

藤

たかし

氏名（生年月日）

齊

本

籍

静

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

甲

第３６３号

学位授与の日付

平成２０年３月２１日

学位授与の要件

学位規則第４条第１項該当

学 位 論 文 題 目

脂肪肝ラットを用いた非アルコール性脂肪肝炎モデルの岡隆（昭和 48 年 1 月 22 日）

県作製と肝でのアディポネクチンの発現について
論 文 審 査 委 員

主

査

髙

瀬

修二郎

副

査

高

島

茂

樹

田 中 卓 二米 倉 秀 人

学位論文内容の要旨
研究目的
近年，メタボリックシンドロームを背景とする非アルコール性脂肪肝炎（nonalcoholicsteatohepatitis：NASH）は，肝硬変さらには肝細胞癌へと進行しうる病態として，その重要性が認識されつつある。単純性脂肪肝から NASH に至る過程において多くのアディポ
カインが促進的に作用するのに対して，アディポネクチンはこれらに拮抗する抗炎症作用，インスリン抵抗性改善作用，抗肝脂肪化作用などを発揮する。従来，アディポネクチンは脂肪細胞のみが分泌するとされていたが，最近心筋炎の危機適応現象として心筋から発現するとの報告や，コンカナバリン A 投与による急性肝障害マウスにおいて，肝星細胞および類洞内皮細胞から発現するとの報告がみられる。しかし，NASH は脂肪肝を基盤とした
慢性肝障害であり，肝臓におけるアディポネクチン分泌を認めるか否かは未だ検討されていない。そこで，申請者は自然飼育下で脂肪肝をきたすモデルラットに，長期に高脂肪食を投与することによって NASH を発症させ，肝臓におけるアディポネクチン発現について検討することを企図した。
実験方法
１．実験動物と飼育方法：脂肪肝，２型糖尿病，高脂血症ならびに高血圧を自然発症する
4 週 齢 の 雄 性 Otsuka Long‑Evans Tokushima Fatty （ OLETF ） ラ ッ ト と ， そ の leancontrol でこれらの病態を認めない Long‑Evans Tokushima Otsuka（LETO）ラットを，それぞれ高脂肪食と普通食にわけ，56 週間飼育した。高脂肪食の組成は，粗脂肪 16.6
g/100g 飼料，脂肪カロリー比 34.8％とし，普通食の組成は，粗脂肪 4.1 g/100g 飼料，
脂肪カロリー比 14.2％とした。
２．測定項目：飼育 56 週目の体重，肝重量，肝重量/体重 100g，血清 AST・ALT，FBS・‑ 26 ‑

IRI，TG・T‑Chol，アディポネクチン値を測定した。
３．肝組織所見の検討：H‑E 染色で観察し，Azan 染色によって肝線維化を確認した。また，
α‑smooth muscle actin（SMA）の免疫染色により活性化肝星細胞の動態を観察した。
４．Real Time PCR によるアディポネクチン mRNA 量の測定：各群ラット肝から抽出した
RNA について，アディポネクチンに対する primer を用いた RT‑PCR で PCR 産物を確認後，
TaqMan プローブ法により定量的に測定した。
５．肝アディポネクチンの免疫組織化学染色：肝アディポネクチン mRNA の発現を認めた
高脂肪食 OLETF 群と LETO 群ラット肝のパラフィン包埋切片について，Rabbit Anti‑
adiponectin 抗体を用い，LSAB 法により染色した。
実験成績
１．ラットの飼育状況：飼育 56 週目の体重，肝重量ならびに体重 100g 当たりの肝重量は，
OLETF 群では LETO 群より重く，また，高脂肪食群では普通食群よりそれぞれ重かった。
２．血液生化学的所見：AST・ALT 値は４群間で明らかな差はなかった。FBS・IRI および
TG 値は 高脂肪食 OLETF 群では有意に高値で，T‑Chol 値は高い傾向がみられた。一方，血清アディポネクチン値は高脂肪食 OLETF 群で有意に低値であった。
３．肝組織所見：LETO 群では脂肪肝や線維化は認められず，普通食 OLETF 群では軽度の脂肪沈着を認めるのみであった。一方，高脂肪食 OLETF 群においては，中心静脈周囲に約 50%の大滴性脂肪沈着を認め，肝細胞の ballooning 変性を認めた。Azan 染色によって perivenular と pericellular fibrosis を認め，α‑SMA 染色では類洞に沿って増生した線維に一致して陽性細胞が認められた。
４．肝アディポネクチン mRNA 量：肝のアディポネクチン mRNA の発現は普通食群では認められなかった。一方，高脂肪食群ではその発現を認め，高脂肪食 OLETF 肝の mRNA 発現
は高脂肪食 LETO 肝の 1.8 倍と有意に高かった。
５．肝アディポネクチン免疫染色所見：高脂肪食群では OLETF，LETO ともに肝でのアディ
ポネクチン陽性所見が認められた。発現細胞についてみると，陽性所見は高脂肪食
LETO では肝類洞壁細胞に，高脂肪食 OLETF では中心静脈周囲を中心とした肝細胞に認められた。
総括および結論
本研究で使用した OLETF ラットは，メタボリックシンドロームを背景とする種々の病態の作製に適しており，長期の高脂肪食投与によって，ヒトの NASH 病態に近似するきわめて良好なモデルになり得ると考えられた。
血清アディポネクチンは肥満度や内臓脂肪量と有意な逆相関を示し，NASH の進行に伴い低下するとされている。本研究においても，肝組織所見で NASH の肝病理像に一致した
高脂肪食 OLETF において，血清アディポネクチンは他の群と比較して有意に低値であった。
一方，肝局所におけるアディポネクチン mRNA 量は高脂肪食 OLETF で高脂肪食 LETO より有意に高値であったが，このことは心筋でのアディポネクチンの発現と類似しており，一般に諸臓器でのアディポネクチン発現は組織侵襲時に保護的に作用する可能性が考えられた。
さらに，メタボリックシンドロームおよび NASH を認めない高脂肪食 LETO では肝類洞壁細‑ 27 ‑

胞でのアディポネクチンの発現を認めたのに対し，これらの病態を有する高脂肪食 OLETF
ラットでは肝細胞での発現を認めたが，このようなアディポネクチン発現細胞の相違がNASH 発症と関連している可能性が推測された。
以上のごとく，ヒトの NASH 発症病態と類似した長期高脂肪食投与という生理的条件下
で，肝細胞でのアディポネクチン発現を確認し得たのは本研究が初めてである。NASH では病態の進展や長期予後，さらには治療法などいまだ不明な点が多いが，肝からもアディ
ポネクチンが分泌されるという新知見は，これらの解明に資するものと期待される。
論文審査結果の要旨
脂肪肝を自然発症する OLETF ラットに高脂肪食を投与して NASH の病態を作製し，肝におけるアディポネクチン発現について検討した論文である。
方法は OLETF ラットとその lean control である LETO ラットを，高脂肪食と普通食にて56 週間飼育し，これら 4 群の血液生化学データ，および摘出肝組織の病理組織所見，アディポネクチンの mRNA 発現ならびに免疫染色所見について比較検討している。
実験の結果，以下の成績が得られたとしている。
高脂肪食 OLETF 群では他の 3 群に比較して FBS および IRI は有意に高値で，血清アディ
ポネクチン値は有意に低値であった。肝組織所見では高脂肪食 OLETF において，中心静脈
周 囲 に 大 滴 性 脂 肪 沈 着 ， 肝 細 胞 の ballooning 変 性 に 加 え て ， perivenular とpericellular fibrosis を認めた。肝のアディポネクチン mRNA は普通食では発現がみられなかったが，高脂肪食では OLETF，LETO ともに発現が認められ，OLETF 肝のそれは LETO
肝の 1.8 倍と有意に高値であった。免疫染色でのアディポネクチン陽性所見は，高脂肪食
LETO では類洞壁細胞にみられ，高脂肪食 OLETF では中心静脈周囲の肝細胞に認められた。
以上のごとく，OLETF ラットに高脂肪食を長期間投与すると，NASH 病態を惹起することが可能で，肝臓でのアディポネクチン発現を認めた。また，肝アディポネクチン発現細胞の相違が NASH 発症と関連している可能性が示唆されたとしている。
本研究の論旨は，NASH の発症，病態，進展の要因を理解するうえにおいて，きわめて示唆に富むものと評価された。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第4号‑ 28 ‑

平成 19 年

やま

ぐち

本

籍

福

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

乙

第２６３号

学位授与の日付

平成１９年１０月１１日

学位授与の要件

学位規則第４条第２項該当
Role of a Novel Conduction

井

善

お

山

学 位 論 文 題 目

口よし

氏名（生年月日）

央 （昭和 42 年 12 月 18 日）
県Pattern

AroundtheCoronary Sinus in Cavotricuspid Isthmus Dependent
Right Atrial Flutter（三尖弁輪−下大静脈間峡部依存性心房粗動における冠状静脈洞周囲伝導の役割）
論 文 審 査 委 員

主

査

梶

波

康

二

副

査

芝

本

利

重

松

井

西

尾

忍
眞

友

学位論文内容の要旨
研究目的
三尖弁輪‑下大静脈間峡部依存性心房粗動（CTI‑dependent AFL）において, 以前より三尖弁周囲を旋回する macro‑reentry の存在が報告されていた。しかし，近年通常型心房粗動例の約半数に於いて，三尖弁輪周囲を旋回する macro‑reentry 回路の他に， 右心房後壁を旋回する回路が同時に存在し，dual loop reentry（DLR）が形成される可能性が報告された。しかし，右心房後壁側の reentry 回路の詳細は検討されておらず，しかも， 冠状静脈洞（CS）後壁の興奮波の伝導は洞調律時の検討が報告されているだけである。そこで，今回 CTI‑ dependent AFL においては，通常型心房粗動（CCW‑AFL）だけでなく，非通常型心房粗動（CW‑FL）においても CS 後壁を伝播する旋回路が存在し，それが Lowerloop reentry（LLR）を形成，それによって DLR が形成されるのではないかと仮定した。
研究方法
対象:慢性心房粗動患者連続 25 例，内訳は CCW‑AFL 患者 16 例，CW‑AFL 患者 9 例である。
頻拍発作中に CS 周囲で entrainment pace mapping を施行し，post pacing interval（ PPI ） と tachycardia cycle length （ TCL ） を 計 測 し ， 旋 回 路 が CS の 三 尖 弁 輪 側（anterior）か下大静脈側（posterior）のどちらを旋回するのかを検討した。また，併せて 3D‑electroanatomical mapping system（CARTO system）を用いて，解剖学的旋回路の位置関係も検討した。

‑ 29 ‑

研究の結果ならびに総括
心房粗動頻拍中の PPI‑TCL の測定結果からは，CCW‑AFL 16 例中 13 例と CW‑AFL 9 例中 6
例が，CS anterior 側（三尖弁輪側）を興奮波は通過した。また，CCW‑AFL 5 例と CW‑AFL
5 例が CS anterior 側と同時に posterior 側（下大静脈側）も興奮波が通過した。3D‑
electroanatomical mapping の結果からは，それらは DLR を形成している可能性が示唆された。
結論
CS posterior 側を伝播する心房粗動の興奮波は，CTI‑ dependent AFL の成立・維持に関連しているものと推察された。今回の結果からは，今後の不整脈カテーテル治療に於いて，CTI‑ dependent AFL では，三尖弁輪側の焼灼だけでなく，下大静脈側までの間断のない線状焼灼の施行が，長期治療成績の向上に繋がる可能性も併せて示唆された。
論文審査結果の要旨
心房粗動は，日常臨床においてしばしば遭遇し，しかも薬物治療抵抗性である。これは，心房粗動が右心房の解剖学的特殊性や長大な周回長を有する macro‑reentry を形成するためと推測されていたが，人においての解剖学的・心臓電気生理学的検討は報告も少なく，原因不明であった。本論文の様に単なる三尖弁輪周囲を周回する macro‑reentry のみならず，右心房後壁にも macro‑reentry が存在するのであれば，難治性不整脈で有る事を説明するに十分な証拠となり得ると考えられた。また，カテーテル治療においても，三尖弁輪
のみならず，下大静脈までの完全な線状焼灼による block line の作成が治療上有効である事の必要十分条件を人において，解剖学的・心臓電気生理学的に始めて言及した内容は,意義深いものと考えられた。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
Journal of Cardiology

Vol.50 No.1 2007

‑ 30 ‑

やま

かわ

いち

山

本

籍

石

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

乙

第２６４号

学位授与の日付

平成２０年２月２８日

学位授与の要件

学位規則第４条第２項該当
A Kampo Medicine, Boi‑ogi‑to, Inhibits Obesity in

学 位 論 文 題 目

川じゅん

氏名（生年月日）

川淳

一 （昭和 39 年 1 月 7 日）県Ovariectomized Rats
（防已黄耆湯による卵巣摘出後ラットの肥満予防効果
解析）
論 文 審 査 委 員

主

査

神

田

副

査

松

井

西

尾

享

勉
忍

眞

牧野田

友
知

学位論文内容の要旨
研究目的
肥満症は糖尿病，高脂血症，高血圧症，さらには冠動脈疾患を高率に発症することから
メタボリックシンドロームの重要な危険因子である。古来より漢方薬は肥満症に対して効果があるが作用機序が不明のため臨床の現場では敬遠されていた。最近，防風通聖散の作用機序が明らかにされたことにより漢方薬の有用性が注目されている。本研究では水太りタイプの肥満症に効果を認める防已黄耆湯を使用した。肥満症モデルに対する防已黄耆湯の肥満予防効果，血中サイトカインの変動および脂肪細胞への作用を検討することを目的
とする。
実験方法
実験動物は７週齢 SD 系雌性ラットに卵巣摘出手術を施行し肥満を誘導した。漢方治療
群は 3 群とし，防已黄耆湯エキスを１％混入群，0.5％混入群，0.25％混入群とした。実験開始 3 ヵ月後（26 週齢）に採血し，体重および各臓器の重量を測定した。また摘出した傍子宮脂肪組織像を観察した。血清ﾏｰｶｰには T‑chol，TG，Glu，血中インスリン（IRI），
アディポネクチン，TNF‑α，INF‑γ，IL‑10，IL‑6，IL‑4，IL‑2，IL‑1α，IL‑1β，GM‑CSF を測定した。日本バイオ・ラッド社の Bio‑Plex サスペンションアレイシステム（ラットサイトカインアッセイ）を用いプロトコールに従い測定した。子宮傍脂肪組織よりリ
アルタイム RT‐PCR にてｍRNA の発現量を測定した。測定項目は①アディポネクチン②
PPAR‑γ③レジスチン④TNF‑αの 4 項目とした。遺伝子発現変動解析はタカラバイオ株式会社に依頼した。各測定値は，平均値土標準誤差で表した。有意差検定には ANOVA ソフト
を用い，Fisher

sprotected LSD test を用いて検定し P＜0.05 で有意とした。

‑ 31 ‑

実験成績
摂食量に関しては各群で有意な変化を認めない。体重変化は 1％治療群で有意な体重増加抑制を 6 週後（20 週令）で認めた。各臓器の重量では肝臓重量，心臓重量，脾臓重量においては有意な変化は認めなかった。子宮傍脂肪組織重量において有意差を認めた。脂肪組織の染色像においてコントロール群と比較し 1％治療群で脂肪細胞の肥大が抑制されていることを認めた。血清マーカーでは TNF‑α以外では有意差を認めなかった。血清 TNF‑α
は 3 ヵ月後において対照群と比較し濃度依存的に有意な上昇を認めた。脂肪組織のｍRNA
発現量は TNF‑α以外では有意差を認めなかった。TNF‑αはコントロール群に比べて濃度依存的に有意な上昇を認めた。
総括および結論
防已黄耆湯はエストロゲン（卵胞ホルモン）の消退による肥満症モデルラットに対して体重増加抑制作用と脂肪細胞の肥大化抑制を認めた。その作用機序として変動を示した
TNF‑α産生増加が関与していることが推察される。防已黄耆湯を投与すると，脂肪細胞の肥大化が抑制されているにもかかわらず脂肪細胞中のｍRNA 発現量および血清 TNF‑α産生
量が亢進していた。脂肪細胞がトリグリセリドを蓄積し大型化する前に TNF‑αは分泌されていることを確認した。通常増加した血清 TNF‑αによりアポトーシスが誘発されるが今回の実験ではこのことは確認していない。作用機序として TNF‑αのインスリンに対する効果について考察するとインスリンは分子生物学の立場より考えると細胞分裂促進因子であり TNF‑αは細胞分裂抑制因子である。防已黄耆湯は脂肪細胞の肥大を抑制するために細胞分裂抑制因子の TNF‑αを分泌させ肥満を予防したことが推察される。しかしこの作用機序を証明するには脂質代謝すべての解析が必要でありこの研究からは結論付けれない。TNF‑αは，脂肪細胞がトリグリセリドを蓄積し大型化すると，血中への分泌量が増加
し，血中の TNF‑α濃度が上昇することによりインスリン受容体のチロシンキナーゼの活性を低下させ，さらに糖輸送能も低下させることにより，インスリン抵抗性を招くことが報告されている。また，肥満者の脂肪細胞は，非肥満者の脂肪細胞に比べて，ＴＮＦ‑αの mRNA 量は約２．５倍よび予防の可能性が示唆される。遺伝子ネットワークの解明や発現蛋白の確認が必要と考える。また細胞レベルでの作用機序の検討および類似漢方薬および西洋薬の検討が必要である。防已黄耆湯はすべての肥満症に対して有効ではないため漢方薬の使用条件である『証』の明確化が今後の課題となる。今回の報告から，直ちに臨床現場で応用することは危険であり十分な安全性と有効性の検討が必要である。
論文審査結果の要旨
本論文は，肥満症に対する漢方薬である防已黄耆湯の予防効果に関するものである。その作用機序を明らかにするべく，雌性ラットに卵巣摘出手術を施行し肥満を誘導し，防已黄耆湯を３ヶ月間経口投与した。防已黄耆湯は，0.25％，0.5％，および１％治療群とし，体重変化や，傍子宮脂肪組織内アディポネクチン，PPAR‑γ，レジスチン，TNF‑αｍRNAの発現量を測定した。血清マーカーとしては，T‑chol，TG，Glu，血中インスリン（IRI），
アディポネクチン，TNF‑α，IFN‑γ，IL‑1α，IL‑1β，IL‑2，IL‑4，IL‑6，IL‑10，GM‑
CSF を測定している。結果として，防已黄耆湯 1％治療群で，未治療群に比し有意な体重‑ 32 ‑

減少を 6 週後より３ヶ月目まで認めている。子宮傍脂肪組織の有意差な減少も認めた。脂肪組織像においては，1％治療群で脂肪細胞の肥大が抑制された。血清 TNF‑αが治療群において有意な上昇を認め，脂肪組織内ｍRNA 発現も有意に亢進していた。以上から，防已
黄耆湯は卵巣摘除による肥満症ラットに対し，体重増加抑制作用と脂肪細胞の肥大化抑制効果を認め，その作用機序として TNF‑α産生増加が関与しているとした。
本研究に関し，質問がなされた。牧野田教授からの質問は，１）卵巣機能の低下によるエストロゲンの減少によって更年期女性は肥満すると論じているが，人においては実験動物と違って更年期女性が肥満するとの統計的結果は得られていないと考えられる。したがって，更年期女性における肥満と言うことを強調せず，単に肥満に関して論じる事が望ましい。これに対し，本モデルを肥満症のモデルとした。２）子宮傍脂肪組織の位置に関し，
図などで明らかにしてほしい。これに関し写真により示した。３）他のサイトカインの作用も解析では有意な差はなかったが，意味につき議論を行うべきと考える。他のサイトカ
インの作用も関連する可能性はある。TNF‑α産生増加による免疫系作用で他のサイトカインへの作用が考慮される。
西尾教授からの質問は，１）本研究で用いた『エストロゲン消退によるラット肥満モデル』が人間におけるどのような肥満モデルとなりえるかを，慎重に提示する必要がある。
今回は単に肥満モデルとした。２）証の客観評価とマーカー検索について論じているが，必要であるか。これに対し，将来の研究テーマとするとした。３）子宮傍脂肪組織重量増
加の防已黄耆湯による抑制に，用量依存性が見られなかったことについて何らかの説明が必要とした。ＴＮＦ‑αが濃度依存的なのに比し，脂肪組織重量が濃度依存になっていな
い点は，確かにある。水分の排出を防已黄耆湯が促し，体重減少させた可能性もある。
松井教授より１）防已黄耆湯のＴＮＦ‐α増加作用とその結果としての抗肥満作用が生体にとってよいことになるがどうかを明らかにすべきである。生体にとってよくない効果をもたらす可能性がある事を明記すべきである。これに対し，ＴＮＦ‐αはインスリン抵抗性を招くことが報告されている。また，ｃAMP を上昇させ脂肪組織のエネルギー消費を活性化させ，肥大抑制させて可能性がある。また，免疫系を介して他のサイトカインを活性化させ肥満抑制に誘導した可能性もあり，結果的に肥満が抑制されたと考える。２）卵巣摘出ラットが肥満モデルか否かを説明するためには擬手術モデルのコントロールをおくべきである。今回はやっていない。やるべきであった。３）ラットの脂肪以外の体成分（水分，筋肉など）の変化を観察した方がよい。体成分（水分，筋肉など）の変化は重要なポイントであるが，今回は検討しなかった。
漢方による抗肥満作用を肥満モデルで作用機序を解明しようとした試みは，新しいものであり，今後の肥満治療に有益な研究である。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
Evidence‑based Complementary and Alternative Medicine, 2007

‑ 33 ‑

い

とう

本

籍

群

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

乙

第２６５号

学位授与の日付

平成２０年３月１３日

学位授与の要件

学位規則第４条第２項該当
甲状腺ホルモン輸送体 MCT8 変異体（235 dup Val）の

馬

順

つね

伊

学 位 論文 題 目

藤まさ

氏名（生年月日）

庸 （昭和 46 年 7 月 9 日）
県

一過性発現実験による機能解析
論 文 審査 委 員

主

査

高

橋

弘

副

査

松

井

真

竹

上

勉

伊

達

孝

昭

保

学位論文内容の要旨
研究目的
現在，新しい先天性甲状腺機能低下症の一病型として，甲状腺ホルモン輸送体（Monocarboxylatetransporter 8，以下 MCT8）障害による甲状腺ホルモン不応症が注目されている。MCT8 遺伝子
は Xq13.2 に座位し，伴性劣性遺伝の遺伝形式をとる。MCT8 は 12 回膜貫通型の膜蛋白で，脳や肝臓などユビキタスに発現しており，特に海馬や歯状回，脈絡叢などに多く発現している。このため中枢神経系を中心とした難治性の甲状腺機能低下症状が認められ，現在までに世界で 10 例以上の遺伝子変異の報告がなされているが，それらの遺伝子変異には輸送体としての活性が消失しており，十分な甲状腺ホルモン補充療法を行っても，治療効果が得られたという報告はない。しかし今回我々が発見した遺伝子変異症例では甲状腺ホルモン補充療法により嘔吐や活気不良といった症状の軽減をみた。このことから MCT8 遺伝
子異常に対する甲状腺ホルモン補充治療効果の予測のために分子基盤的研究が必要となっ
た。
実験方法
対象：
症例を含む家族４名と健常者 101 人を対象とした。
遺伝子変異解析：

MCT8 遺伝子異常が疑われる症例より末梢血リンパ球から DNA を抽出し，これを鋳型として exon‑intron 境界を含めて PCR 増幅し，ダイレクトシークエンス法によって変異を解析した。健常者と他の家族について，この変異は制限酵素多型により解析した。

‑ 34 ‑

一過性発現解析：
甲状腺ホルモン輸送能
ヒト脳 Total RNA を用いて random primer により MCT8 遺伝子の RT‑PCR を行い，得られた PCR 産物に 2nd PCR を行い，wild type（以下，wt）の cDNA を得た。この
PCR 産物を鋳型とし，Inverse PCR 法を用いて患児と同じ変異塩基を挿入した。
（以下，mt）さらに各々の PCR 産物を，CHO‑K1 細胞にトランスフェクションし，125I‑T3の細胞内取り込みによる甲状腺ホルモンの輸送機能の解析を行った。また再現性を確認するため，同様の手技を 3 回繰り返した。
MCT8 タンパクの細胞内局在Wt，mt の C 末端側に FLAG を Inverse PCR 法を用いて挿入し，FTC‑238 細胞にト
ランスフェクションさせた後，蛍光免疫染色行い，MCT8 蛋白の細胞内の局在性について検討した。
実験成績
PCR ダイレクトシークエンスにおいて 705 dup GTG の遺伝子変異を確認した。この変異部位は 12 回膜貫通蛋白の内，第 2 膜貫通部位に相当する。制限酵素による DNA 切断の結果，症例の遺伝子変異と同一の変異を示した健常者はおらず，変異遺伝子の多型としての頻度は 1%以下だった。また家族からも同様の変異遺伝子は認められず，症例の遺伝子変
異は de novo と考えられた。
125

I‑T3 の細胞内取り込みでは，各々wt が 290615±16348.4cpm，mｔが 221282±15934.2cpm，Control が152034±7174.8cpm だった。mt は wt に比して有意に取込が低下しており（p<0.001），
逆に mt は Control に比して有意に取込が上昇していた。
（p<0.001）wt の活性を 100 とし，Control の活性を 0 とした場合，mt の活性は wt の約 50%程度の活性に低下していると考えられた。
蛍光免疫染色による MCT8 タンパクの細胞内局在性については wt，mt ともに細胞膜表面での発現が認めら，発現の局在性については，差はみられなかった。
総括および結論
本実験で行われた症例は，MCT8 遺伝子異常が確認され，遺伝子変異が de novo と考えられた。125I‑T3 の細胞内取り込みでは変異遺伝子は有意な活性の低下を認め，このことより本症例における多様な中枢神経症状が MCT8 遺伝子異常によるものと証明できた。また変異遺伝子は Control と比して，活性が有意に高いことを含めて考慮すると，mt は wt に比して約 50%の活性を保っており，十分な甲状腺ホルモン補充療法によって一定の治療効果が得られることが予測された。また変異遺伝子による活性の低下は，変異 MCT8 タンパ
ク自体は膜表面での発現が可能であることから，輸送能の機能的障害ではないかと考えられた。今後，MCT8 遺伝子異常症例において，対症療法的治療としての甲状腺ホルモン補充療法の適応については同様の発現実験が必要となることが予想される。

‑ 35 ‑

論文審査結果の要旨
甲状腺ホルモン輸送体である MCT8 遺伝子異常症は稀な疾患で，遺伝子解析や機能解析の報告は少ない。
本研究では MCT8 遺伝子変異体の機能解析を行い，変異体の残存活性の有無やタンパク発現について検討した。705 dup GTG の遺伝子変異は残存活性が野生型の約 50％であること，膜表面に MCT8 タンパクが発現しており，輸送能の低下が膜タンパクの構造に由来することを説明した。705 dup GTG の遺伝子変異の報告はなく，このため 705 dup GTG が臨
床的に MCT8 遺伝子欠損症であることを説明した。
また残存活性と臨床表現型との関係を論じ，比較的高い残存活性を有する遺伝子変異体
であっても，既報告の残存活性が無い遺伝子変異体と比較し，臨床表現形型での差異は少ないことを明らかにした。

MCT8 遺伝子異常では変異の hot spot は報告されておらず，タンパク機能の異常の有無については，遺伝子異常毎に機能解析が必要となる。現在までに MCT8 遺伝子異常症の機能解析は国際的に２施設からの報告があるのみで，本邦では初の報告となる。今後，本邦での MCT8 遺伝子異常症の臨床的検討を進めるにあたって有意義な実験結果といえる。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第3号‑ 36 ‑

平成 19 年

やなぎ

だ

やす

康

ひろ

氏名（生年月日）柳田博 （昭和 33 年 2 月 16 日）

本

籍

北

海

学 位 の 種 類

博士（医 学）

学 位 記 番 号

乙

第２６６号

学位授与の日付

平成２０年３月１３日

学位授与の要件

学位規則第４条第２項該当

学 位 論 文 題 目

四塩化炭素投与ラット肝に及ぼす interleukin‑6 誘導物質

道

(ME3738)の抗肝線維化効果論 文 審 査 委 員

主

査

髙

瀬

修二郎

副

査

高

島

茂

樹

田

中

卓

二

湊

宏

学位論文内容の要旨
研究目的
肝障害発生時には種々のサイトカインが誘導されるが，なかでも TNF‑αの作用が重要視され，interleukin‑6（IL‑6）も肝障害の進展に関与すると考えられてきた。しかし，
IL‑6 に肝細胞再生作用が見出され，IL‑6 誘導は肝障害に対してむしろ防御的に作用することが示唆されてきている。最近，IL‑6 の誘導物質として，soyasapogenol A の誘導体である ME3738（22β‑ methoxyolean‑12‑ene‑3β,24（4β）‑diol，分子量 472.74）が開発され，concanavalin A 誘発肝不全マウスモデルに対する有効性や，慢性アルコール飼育
ラットの脂肪肝抑制効果などが報告されてきている。そこで申請者は，肝障害の進展を左右する肝線維化に対する ME3738 の効果を明らかにするために，四塩化炭素投与肝線維化ラットモデルを用いて検討することを企図した。
実験方法
１．実験動物および飼育方法：Wistar 系雄性ラット（６週齢，体重 177〜193g）に四塩化炭素を週２回，８週間皮下注射を行って，線維化肝を作製した。四塩化炭素投与後 22
日目からは，1.5mg/g の ME3738（明治製菓提供）を添加した固形飼料を用いた CCl4+ME群（n=8）と，非添加固形飼料を用いた CCl4 群（n=8）の２群に分けて飼育を継続した。
２．血液生化学データの検討：飼育開始後８週目に屠殺して採取した血液について，血漿AST，ALT および ALP 値を測定した。
３．病理組織学的検討：摘出肝の HE 染色標本について，肝細胞壊死，脂肪変性および肝細胞風船化の程度を−，±（散発的），＋（中心静脈周囲および線維化の周囲），2＋（小葉全体）の４段階に，また，肝線維化の観察は Azan 染色標本で行い，その程度を−，±（中心静脈あるいは門脈域周囲にのみ），＋（中心静脈と中心静脈あるいは門脈‑ 37 ‑

域との bridging 形成），2＋（偽小葉形成）の４段階に評価した。
４．肝線維化の定量的検討：Azan 染色標本について画像解析装置を用い，無作為に抽出した 20 視野（視野面積 2.5mm2）を測定し，肝線維化率を算定した。
５．肝組織の免疫組織化学的検討：活性化肝星細胞のマーカーであるα‑smooth muscle
actin（α‑SMA）と過酸化脂質のマーカーである 4‑hydroxy‑2‑nonenal（HNE）の発現状
況を各々に対する monoclonal 抗体で免疫染色し，肝細胞 100 個当たりの陽性細胞数を算定した。
６．IL‑6 および TNF‑α mRNA の測定：凍結保存したラット肝から RNA を抽出し，Real‑
time PCR によって，それぞれの mRNA 量を算定した。
実験成績
１．ラット飼育８週目における血漿 AST，ALT および ALP 値は，CCl4+ME 群では CCl4 群に比べ，いずれも有意（P<0.001）に低下した。
２．肝細胞壊死の程度は CCl4 群に比べ CCl4+ME 群で軽い傾向がみられたが，脂肪変性と風船化の程度には両群間で明らかな差はなかった。一方，肝線維化の程度は，CCl4 群では８匹中６匹に偽小葉形成が認められたが，CCl4+ME 群では全ラットが bridging 形成にと
どまっており，CCl4+ME 群での線維化の程度は有意（P=0.003）に減少していた。また，
画像解析による肝線維化率も，CCl4+ME 群では有意（P=0.009）に低下していた。
３．免疫染色によるα‑SMA は，CCl4 群では線維化の部位に一致して強く染色され，CCl4+ME 群では中心静脈周囲の類洞に陽性細胞が認められた。α‑SMA 陽性細胞数は，CCl4+ME 群では CCl4 群より有意（P<0.001）に少なかった。
４．HNE 陽性細胞は，主に線維化近傍の肝細胞に認められ，その数は CCl4+ME 群では有意（P<0.001）に減少していた。
５．TNF‑α mRNA 量は，CCl4+ME 群では CCl4 群より低下したものの，推計学的な有意差（P=0.055）はなかった。一方，IL‑6 mRNA 量は，CCl4+ME 群では有意（P=0.025）に増加していた。
総括および結論
ME3738 は IL‑6 の誘導物質として開発され，経口および皮下投与により血中 IL‑6 の増加が確認されている。ME3738 は肝細胞障害に対する抑制効果が実験的に確認されたことに加えて，最近では C 型慢性肝炎患者に対しても，その有用性が期待されている。しかし，肝の線維化に対する本剤の効果は未だ不明なため，四塩化炭素誘発肝線維化ラットモデルを用いて検討した。その結果，ME3738 投与ラットでは bridging 形成が認められたものの，
偽小葉の形成はみられず，画像解析装置による線維化率は有意に減少した。
ME3738 の肝線維化抑制機序に関して，肝組織中の IL‑6 mRNA 量の増加を介して，活性化された signal transducer and activator‑3（Stat3）が antioxidant protein を増加させ，活性酸素を減少させたことが想定され，本実験では過酸化脂質のマーカーである
HNE の陽性肝細胞数が有意に減少していた。また，ME3738 の投与によって肝組織中のTNF‑α mRNA 量の減少傾向がみられ，α‑SMA 陽性細胞数が有意に減少していたことから，
肝星細胞の活性化抑制を介して肝の線維化を軽減した可能性が示唆された。
‑ 38 ‑

以上のごとく，四塩化炭素投与肝線維化ラットモデルを用いて，IL‑6 誘導物質 ME3738の効果について検討したところ，ME3738 は抗炎症効果だけでなく，抗肝線維化効果も有していることが明らかとなり，その経口投与が肝障害の進展予防に有用と考えられた。
論文審査結果の要旨
IL‑6 誘導物質として開発された ME3738 の肝線維化に対する抑制効果を明らかにするために，四塩化炭素投与肝線維化ラットモデルを用いて検討した論文である。
方法は固形飼料飼育ラットに四塩化炭素を投与し，22 日目から ME3738 を添加（CCl4+ME群）あるいは非添加（CCl4 群）飼料を継続している。飼育開始８週目に屠殺し，血漿 AST，
ALT および ALP を測定，肝組織を HE 染色および Azan 染色で観察し，画像解析装置により肝線維化率を算定している。さらに，α‑SMA と HNE を免疫組織化学的に染色し，凍結ラット肝より IL‑6 と TNF‑αの mRNA 量を測定している。
実験の結果，以下の成績が得られたとしている。
１．血漿 AST・ALT・ALP 値は，CCl4 群に比べ CCl4+ME 群で有意に低下した。
２．病理組織学的検討では，肝細胞壊死，脂肪変性および肝細胞風船化の程度は，両群間で差はみられなかった。肝線維化については，偽小葉形成が CCl4 群のほとんどに認められたが，CCl4+ME 群ではみられず，線維化の程度は有意に減少し，画像解析による肝線維化率も CCl4+ME 群で有意に低かった。
３．α‑SMA および HNE の陽性細胞数は，CCl4 群に比べ CCl4+ME 群で有意に少なかった。
４．4TNF‑α mRNA 量は CCl4+ME 群で低下したが，推計学的に有意とはいえなかった。IL‑
6 mRNA 量は CCl4 群に比べ CCl4+ME 群で有意に増加した。
以上より，四塩化炭素投与肝線維化モデルラットに対する ME3738 投与が肝内 IL‑6 を誘導し，抗肝線維化効果を発揮することが明らかになったとしている。その機序として，誘導された IL‑6 を介して活性化された Stat3 が活性酸素減少に寄与したことが想定され，ひいては肝星細胞の活性化抑制によって肝線維化を軽減したことが示唆されたとしている。
本研究は，四塩化炭素投与肝線維化ラットモデルを用いて IL‑6 の抗線維化作用を明らかにするとともにその機序を考察したものであり，肝線維化の進展予防に道を拓くものと評価された。
以上により，本論文は博士（医学）の学位を授与するに値するものと認められる。

（主論文公表誌）
金沢医科大学雑誌

第 32 巻第3号‑ 39 ‑

平成 19 年