研究フロンティア（平成２
１年度学術奨励賞受賞論文）

ERK１/２の活性化増強システムが，卵子成熟，卵丘細胞の膨潤，顆粒膜細胞の黄体化に必須である
川島 一公１，２），野間 紀孝１），Heng―Yu Fan２），JoAnne S. Richards２），島田 昌之１）
１）広島大学大学院生物圏科学研究科
２）Department of Molecular & Cellular Biology, Baylor College of Medicine

はじめにた．そこで，この ERK１/２の役割を解明するために，顆
粒膜細胞と卵丘細胞特異的に両遺伝子を欠損させたマウ

脳下垂体から一過的に放出された LH（LH サージ）スを作出し，その詳細を解析した［１０］．さらに，ERK１

は，十分発育した排卵前卵胞の顆粒膜細胞に発現する/２の活性化に関わるポジティブフィードバック機構に

LH 受容体（LHCGR）に作用し，顆粒膜細胞の黄体化，

ついても新知見を得たので，本稿で紹介する．

卵丘細胞の膨潤，卵子の成熟を促し，膨化した卵丘細胞と共に卵子は卵管へと排卵される［１，２］．最近のマイ

顆粒膜細胞特異的 ERK１/２欠損マウス

クロアレイを用いた発現遺伝子の網羅的解析や，遺伝子欠損マウスの解析から，この LH により誘起される排卵ERK１と ERK２は，共に成長因子受容体の下流におい現象に関わる生理活性因子，それにより活性化される細て RAS,c―RAF,MEK１系によりリン酸化・活性化され，．
Park
胞内のシグナル伝達系が明らかとなってきた［３―５］その基質特異性も同様の性質を示すことから，両者は補et al．
［６］は，顆粒膜細胞においてEGF like factorで完的に働いていると考えられる．したがって，排卵期に，epiregulin
ある amphireguin（AREG），β―cellulin（BTC）

おける ERK１/２の作用を解明するには，両者を欠損させ（EREG）が，LH 刺激により急激に発現し，それが顆粒た変異型マウスを作出する必要がある．ERK１を欠損し膜細胞と卵丘細胞に発現する EGF 受容体（EGFR）にたマウスは，正常に発育し，妊孕性も有する［１１］，し作用すること，この刺激が，卵丘細胞の膨潤と卵子成熟

かし，ERK２欠損マウスは胎生致死であることから［１２］，に必須であることを示した．さらに，Hsieh et al．
［７］

Cre―LoxP を 用 い て，Erk1‐／‐；Erk2 flox/flox；Cyp19a1

Cre

は，EGFR の機能欠失型変異マウスと Areg 遺伝子欠損

マウスを作出した．これは，ヒト Cyp19a1遺伝子のプ

マウスを交配し，その両変異マウスは，顆粒膜細胞におロモーター領域の転写開始点（０）から１
８
０bp 上流まける ERK１/２のリン酸化が低下し，排卵数の減少が認め８０b）に Cre をつないだものであり，このプロモーで（―１られることを報告した．われわれも EGF like factor にターを用いることで顆粒膜細胞と卵丘細胞でのみ Cre

着目し，プロスタグランジン合成酵素をコードする Ptgsが発現することから［１３］，排卵前卵胞の顆粒膜細胞と2の遺伝子欠損マウスで，Areg, Btc, Ereg の発現が低下

卵丘細胞でのみ ERK１/２が欠損したマウスを作出できすること，これが Ptgs2欠損マウスの排卵現象におけるる．

機能低下の原因となっていることを示した［８］．さら

このマウスにおいては，卵胞発達に異常は認められなに，EGF like factor が細胞膜貫通型タンパク質である

かったが，妊孕性は全くみられなかった．この原因を追こと，それが ADAM１
７により遊離され，標的細胞を刺及するために過剰排卵処理を行ったが，排卵が確認され激すること，その結果，顆粒膜細胞と卵丘細胞で ERK１

ないことから，完全不妊マウスであることが示された/２系が活性化されることも明らかとした［９］
．これら

［１
０］
．そこで，この顆粒膜細胞特異的に ERK１/２が欠損の報告から，LH 刺激によりスタートする排卵現象は，したマウスの排卵刺激後における顆粒膜細胞をサンプル

顆粒膜細胞で発現・分泌される EGF like factor を介しとしたマイクロアレイ解析を行い，排卵刺激による ERK

た ERK１/２系により制御されていることが強く示唆され１/２のリン酸化により発現する遺伝子を網羅的に検出した．その結果，３７６遺伝子が ERK１/２依存的に排卵刺激

連絡先：島田昌之，広島大学大学院生物圏科学研究科
〒７
３
９―８
５
２
８ 東広島市鏡山１―４―４
Tel/Fax：０
８
２―４
２
４―７
８
９
９
E-mail : mashimad@hiroshima-u.ac.jp

により発現していた．そのなかには，Ptgs2や Cyp11a1，
Star などのプロスタグランジンやプロジェステロン合成に関わる遺伝子のみでなく，エストロジェンの代謝に

日本生殖内分泌学会雑誌（2010）15 : 35-40

35

川島

一公

図１

他

顆粒膜細胞の体外培養における ERK１/２のリン酸化および遺伝子発現と体内の排卵期におけるそれらとの比較（a）eCG 刺激マウスから回収した顆粒膜細胞を１００ng/ml AREG 添加培地で培養したとき，あるいは eCG
刺激後 hCG を投与したマウスから経時的に回収した顆粒膜細胞における ERK１/２のリン酸化．
（b）体内と体外の顆粒膜細胞における Ptgs 2と Cyp11a
1 の遺伝子発現．

図２

関わる Sult1e1，細胞分裂を停止させる Cdkn1b，制御
系エキソサイトーシスにかかわる Snap25など，これま

卵胞発育，排卵期における ERBB family の発現，局在と活性化の経時的変化（a）eCG 刺激後 hCG を投与し，経時的に回収したマウス卵巣をサンプルとした ERBB family の発現解析．
（b）顆粒膜細胞（GC），卵丘細胞（CC）あるいは卵子（O）における ERBB３の発現．
（c）免疫沈降法による ERBB２と ERBB３のヘテロ二量体形成とリン酸化解析．

で排卵に必須であると報告されている遺伝子が含まれていた［１０］．このマウスの解析結果から，ERK１/２が活性るのかもしれない．しかし，排卵期において ERK１/２の化することが排卵をスタートさせる必至なキーファク

リン酸化を増強し，かつ持続させる因子については全くターであることが明確化された．

報告がない．

EGF like factor による ERK１/２の活性化．体内とERBB family の発現と活性化

体外での相違EGF like factor が作用する EGFR 以外にも，IGF 受
like

容体など，他の成長因子に対する受容体の排卵前卵胞に

factor が ERK１/２をリン酸化し，それにより排卵に関わおける発現が報告されている［１５，１６］．しかし，IGF―

る遺伝子発現が上昇することが明らかとなったが，顆粒

１は排卵刺激によりその発現量が低下すること，IGF―１

膜細胞の初代培養系においては EGF like factor の添加

添加は PI ３―kinase―PKB 系を活性化させるが，ERK１/２

では十分に体内と同様の効果が認められない．図１は，のリン酸化は誘起させないと報告されている［１７］．そ

その結果の一部であるが，ERK１/２のリン酸化は短期間

こで，EGFR は ERBB family に属し，ERBB１（EGFR）

で消失し，かつ最大値においてもそのレベルは低い．ま以外にも ERBB２，ERBB３，ERBB４が存在すること［１８］，た，標的遺伝子の発現において，体外におけるそれは体しかしこれらの卵巣における発現と活性化についての報内と比較して著しく低値である．神経細胞においては，

告はないことから，ERBB family に着目した研究を行っ

ERK１/２の一過的な活性上昇は細胞増殖を促進し，持続た．

これまでの研究から，LH により発現する EGF

的な活性化は細胞の分化を誘導すると報告されている

その結果，ERBB１のみでなく，ERBB２と ERBB３が卵［１
４］．排卵期の顆粒膜細胞でも，この持続的な ERK１/２

胞発育，排卵期に恒常的に発現していた（図２a）．ERBBのリン酸化が排卵現象の誘起に重要な役割を果たしてい２と ERBB３の局在は，顆粒膜細胞，卵丘細胞に発現し，

36

日本生殖内分泌学会雑誌

Vol.15 2010

ERK１/２の活性化増強システムが，卵子成熟，卵丘細胞の膨潤，顆粒膜細胞の黄体化に必須である卵子には認められなかった（図２b）．次に，ERBB２はリガンド結合部位を欠損しているため，他の ERBB family とへテロ二量体を形成すること，ERBB３に高い親和性を示すことから，免疫沈降法により両者の結合とリン酸化の変化を解析した．排卵刺激は，ヘテロ二量体形成を促し，その二量体はチロシン残基がリン酸化されていた（図２c）．このリン酸化は，EGFR のリン酸化と同様に，排卵刺激２時間後に最大値を示したことから，顆粒
膜細胞と卵丘細胞に発現する ERBB２と ERBB３は，排卵刺激により機能していることが明らかとなった．

ERBB３のリガンドの探索とその発現変化

図３

Neuregulin １（ Nrg1 ）の発現解析（a）５ RACE 法による Nrg1 の転写開始点の探索．
（b）Type ¿あるいは Type Áを特異的に認識する primer を用いた顆粒膜細胞における遺伝子発現解析．

ERBB３のリガンドには，Neuregulin １（NRG１），Neuroglycan などが報告されている［１９，２０］．われわれの行っ配列があり［２３］，排卵期の顆粒膜細胞において，Adam

たラット卵丘細胞のマイクロアレイ解析のデータベース

19の発現上昇が認められた．したがって，顆粒膜細胞

から，ERBB３のリガンドの発現を探索した結果，Nrg1で発現する NRG１は，ループ構造は壊れ N 末端側のみの発現が認められた（野間ら，未発表データ）．Nrg1遺が細胞膜を貫通する直線構造となっていると推察され伝子は複数の転写開始点が存在し［２１］，われわれが用る．顆粒膜細胞をサンプルとした Westernblotting によいた Affimetrix のラット発現解析用 DNA チップには８り，発現する NRG１を検出した結果，ループ構造をとる個のプローブがセットされているが，マウスの発現解析

全長型 NRG１と思われる１
１
０kDa のバンドはほとんど検に一般的に用いられている DNA チップには１つのプ

出されず，排卵刺激２時間後において７５kDa 付近に濃ローブしかなく，この認識配列は，共通配列ではないたいバンドが検出された．一方，卵巣全体をサンプルとしめ，マウスの排卵期の顆粒膜細胞や卵丘細胞のマイクロ

た Westernblotting では，７５kDa に加えて，４５kDa 付近

アレイ解析では Nrg1の発現上昇は検出されなかった（野にも濃いバンドが検出されたことから，
７
５kDa が直線・間ら，未発表データ）．

細胞膜貫通型であり，４５kDa は卵胞液中に分泌されたそこで，５ RACE 法により，排卵期のマウス顆粒膜細分泌型 NRG１ type Áであると推察した．しかし，これ胞で発現する Nrg1のタイプの同定を試みた．共通部位

までに N 末端側を切断する酵素に関する情報はないこを認識する reverse primer を作製し，５ RACE を行ったとから，MEROPS the Peptidase Database（http : //結果，２本の産物が得られ，そのシークエンス解析から

merops.sanger.ac.uk）により，切断部位と切断酵素の推Type ¿と Type Áが発現していることが示された（図７番目の Gly から Leu,Gly と定を行った．その結果，１１

３a）．Type ¿と Type Áは，その転写開始点のみでな

並ぶ Gly―Leu―Gly 配列を排卵期に発現上昇することがくスプライシングの違いもあることから，それぞれ特異

報 告 さ れ て い る ADAMTS―４と MMP―２［２
４，２
５］が 切

的に認識するプライマーセットを用いた real time PCR

断しうることがわかった．NRG１は，顆粒膜細胞で主に解析を行った．その結果，Type Áが排卵刺激後２時間発現し，卵丘細胞には排卵期における発現上昇がみられ以内に発現上昇がみられ，４時間後に最大値を示すこと，ないこと，一方その受容体である ERBB３/ERBB２は，一方，Type ¿は発現の変化がみられないことが明らか

卵丘細胞にも発現することから，排卵期の卵胞では，顆となった．

粒膜 細 胞 で 発 現 し た NRG１が ADAM１
９と ADAMTS―４/

NRG１は，C 末端側にシグナル配列，膜貫通ドメイン

MMP―２により切り出され，オートクラインおよびパラをもち， 細胞外部位に EGF 部位を有する． Type Áは，

クライン的に作用することが示唆された．今後，その切他のタイプとは異なり N 末端側に疎水性のシステイン

断部の同定，ならびに ADAMTS―４と MMP―２を中心とに富む配列をもつことから，この配列により細胞膜を貫した切断メカニズムの解析を行う計画である．

通することで，EGF 部位のみが細胞外につきだしたループ構造を取ると考えられている（図３b 参照）
［２
２］
．EGF
部位を中心として C 末端側には，ADAM１
９による切断研究フロンティア

37

川島

一公

他

Nrg1 の Type 別発現制御機構

から day１０ときわめて短い期間であり，その後は，脳においても Type Áが主となると報告されている［３１］．

排卵刺激により Type Áが発現上昇するのに対して，

この結果は，構造的な発現に関わる SP１/３サイトが Nrg1

Type ¿は恒常的に発現するメカニズムを解明するためのプロモーター領域ではメチル化されていることと，に，両 Type の転写開始点か ら１，０００bp 上 流 ま で を クType I の発現制御との関係を強く示唆するものと考え

ローニングし，転写因子の結合サイトを推定した．Typeている．

Áには，cAMP responsible element，CCAAT/enhancing
binding

protein（C/EBP）結合サイトがみられ，Type¿には STAT や NFκB,

NRG１ Type Áの機能解析

SP１/３の結合サイトがみつかった．そこで，両者のプロモーター領域を Luciferase 遺伝

Nrg1の EGF 部位をコードする部位を欠損させた変異子の上流に組み込んだベクターを作製し，レポーター

マウス（total NRG１ KO mice），type Áを特異的に欠アッセイを行 っ た．そ の 結 果，Type Áで は，C/EBP

損させたマウス（NRG１ type Á KO mice），あるいは

結合サイトが，Type ¿で は SP１/３結 合 サ イ ト が プ ロ

受容体である Erbb３欠損マウス（ErbB３ null mice）でモーター活性の上昇に必須であった．実際に，排卵過程

は，胎生期あるいは出生直後に致死となるため，性成熟の顆粒膜細胞における Nrg１ type Áの発現上昇に果たした卵巣における NRG１の機能はこれまで全く解明されす C/EBP の役割を明らかとするために，顆粒膜細胞特３］．そこで，われわれは，まず顆粒膜ていない ［３１―３；Cyp19a1細胞と卵丘細胞卵子複合体（COC）の体外培養系にお異的 C/EBPβ 遺伝子欠損マウス（Cebpb

flox/flox

Cre）［１０］における発現解析を行った結果，この遺伝

ける添加実験を行った．

子欠損マウスでは，排卵刺激４時間後における発現量がNRG１の添加は，顆粒膜細胞と卵丘細胞において PKB

半減していた．これは，顆粒膜細胞には C/EBPα も発をリン酸化したが，ERK１/２に影響はなかった．しかし，現するために，完全な発現低下が認められないものと推NRG１と EGFR に作用する AREG の複合処理を行ったと察し，C/EBPα および β を活性化する ERK１/２の顆粒膜

き，AREG により誘導される ERK１/２のリン酸化が，複細胞特異的欠損マウスでも Nrg1の発現解析を行った．

合処理により増強され，かつ持続することがわかった．

その結果，その発現は完全に抑制されていた．以上の結

この複合処理によるポジティブな効果は，NRG１が Src

果から，Nrg1

tyrosinetype Áは，排卵刺激により活性化する

kinase を活性化し，この活性化された Src がERK１/２―C/EBP 系により発現が正に制御されているこ

ERK１/２のリン酸化を増強し，かつ持続させていることとが明らかとなった．

が，Src tyrosine kinase 抑制剤を用いた実験から示され一方，Type ¿のプロモーター活性の上昇に必至な SPた．以上の結果とプロモーター解析の結果を併せて考え

１/３サ イ ト は，排 卵 期 に 発 現 が 上 昇 す る Pgr, Snap25,

ると，ERK１/２依存的に発現上昇した NRG１が ERK１/２

Ereg, Adamts1のプロモーター活性も正に制御することの活性をさらに増強・持続させるという，NRG１による

０］．しかし，Nrg1 type ¿におが報告されている［２６―３

ERK１/２のポジティブフィードバック作用の存在がはじいては排卵期に発現上昇がみられなかった．そこで，SPめて明らかとなった（図４）．

１/３サイトが CG に富む配列であることから，そのメチ

この NRG１による ERK１/２の増強作用は，顆粒膜細胞

ル化修飾に着目し，顆粒膜細胞から抽出した DNA を bi-の初代培養系において，AREG 単独区に比較して AREG

sulfite modification を 行 っ た．Bisulfite modification は＋NRG１複合処理区でプロジェステロン合成に関わる

メチル化されていないシトシン（C）をウラシル（U）

Star の発現が上昇し，プロジェステロンの分泌量も有へと変換し，メチル化されている C は修飾を受けない意に増加することから，黄体化促進に関わることがわ

ことを利用したメチル化解析法である．この処理後，シーかった．また，卵丘細胞におけるヒアルロン酸結合タン

クエンス解析を行った結果，顆粒膜細胞では bisulfite

パク質である Tnfaip6の発現も複合処理により上昇し，

modification による U への変換は全く認められなかっ卵丘細胞の膨潤も促進された．さらに，体外成熟培養した．つまり，メチル化修飾により SP１／３サイトが機能した卵子の受精後の発生能が，複合処理により向上したこていないため（SP１がこのサイトに結合できないため），とから，卵丘細胞を介して NRG１は卵子成熟にも関与すNrg1 type ¿は排卵刺激後の急激な発現上昇が起きないる因子であることが明らかとなった．この卵子成熟制御（起こせない）と推察された．Nrg1 type ¿の発現が高機構として，NRG１が卵丘細胞における sphingosine １

値である組織は胎児期の脳であるが，その発現は day５

phosphate（S１P）の産生が関与している可能性が示さ

38

日本生殖内分泌学会雑誌

Vol.15 2010

ERK１/２の活性化増強システムが，卵子成熟，卵丘細胞の膨潤，顆粒膜細胞の黄体化に必須である

また，ヒトの高度生殖医療において，卵巣刺激周期の採卵時における顆粒膜細胞にも Nrg1が発現していることから，ヒト IVM にも NRG１添加が卵成熟を向上させうると推察し，検討を行っている．
謝

辞

本稿は２
０
０
９年度日本生殖内分泌学会学術奨励賞を受賞した
研究内容をまとめたものである．本稿の執筆の機会を与えてくださいました日本生殖内分泌学会理事長 峰岸 敬先生，第１４回同学会大会長 倉智博久先生，並びに広報理事 筒井和義
先生に感謝いたします．なお本研究の一部は，日本学術振興会 科 学 研 究 費 補 助 金（No．２
１
６
８
８
０
１
９，No．２
１
０
２
８
０
１
４，
No．２
１
２
４
８
０
３
２）と特別研究員奨励費（No．０
９J０
４
１
１
８）によ
り実施しています．

引用文献

図４

排卵期の顆粒膜細胞における Nrg１の発現メカニズムとその卵子成熟，黄体化，卵丘細胞の膨潤に果たす役割

れたが，この S１P が卵子に及ぼす影響については，今後の検討が必要である．
以上の結果から，NRG１が ERK１/２活性増強システムの中核を担い，排卵期に起こる顆粒膜細胞の黄体化，卵丘細胞の膨潤，卵子の成熟を制御するという，きわめて重要な役割を有する新規因子であることが示された（図４）．現在，この in vitro で明らかとなった NRG１の役
割について，顆粒膜細胞特異的な Nrg1遺伝子欠損マウス（Nrg1 flox/flox；Cyp19a1 Cre）を用いて，体内の排卵卵胞における重要性を検証しているところである．

まとめ
排卵卵胞では，ERK１/２―C/EBP により Nrg1 type Áが発現し，それが ADAM１
９と ADAMTS―４/MMP により切り出され，卵胞液中に放出されること，その EGF 部
位が顆粒膜細胞と卵丘細胞に発現する ERBB３/ERBB２にオートクライン，パラクライン的に作用し，ERK１/２のリン酸化による活性化を増強，かつ持続させ，黄体化，卵丘細胞の膨潤および卵子成熟を誘起し，完結させる因子であることが示された（図４）．われわれは，ブタ COCを用いた体外成熟培養（IVM）において，培養２４時間以降に NRG１を添加することが，卵成熟時の培養４８時間後における卵丘細胞の生存率を上昇させ，卵子の体外受精後の発生能も向上させるという結果を得ている［３４］．

１．Richards JS （１９９４） Hormonal control of gene expression
in the ovary. Endocr Rev １
５, ７
２
５７
-５
１．
２．Richard, JS, Russell DL, Robker RL, Dajee M, Alliston TN（１９９８） Molecular mechanisms of ovulation and luteinization. Mol Cell Endocrinol １
４５, ４７５- ４．
３．Richards JS（２００１）New signaling pathways for hormonesand cyclic adenosine ３，５-monophosphate action in endocrine cells. Mol Endocrinol １
５, ２
０
９２
-１
８．
４．Conti M, Hsieh M, Park JY, Su YQ （２００６） Role of theepidermal growth factor network in ovarian follicles. Mol
Endocrinol ２
０, ７１
５７
-２
３．
５．Dekel N （２００９） Master regulators of female fertility. N
Engl J Med ３
６１, ７
１
８７
-１
９．
６．Park JY, Su YQ, Ariga M, Law E, Jin SL, Conti M（２００４）EGF-like growth factors as mediators of LH actionin the ovulatory follicle. Science ３
０３, ６８２６-８
４．
７．Hsieh M, Lee D, Panigone S, Horner K, Chen R, Theologis A, Lee DC, Threadgill DW, Conti M（２００７）Luteinizing hormone-dependent activation of the epidermal growth
factor network is essential for ovulation. Mol Cell Biol ２７,
１
９１
４１
-９
２
４．
８．Shimada M, Hernandez-Gonzalez I, Gonzalez-Robayna I,
Richards JS （２００６） Paracrine and autocrine regulation of
epidermal growth factor-like factors in cumulus oocyte
complexes and granulosa cells : key roles for prostaglandin
synthase ２ and progesterone receptor. Mol Endocrinol ２０,
１
３
５２１
- ３６
５．
９．Yamashita Y, Kawashima I, Yanai Y, Nishibori M, Richards JS, Shimada M （２００７） Hormone-induced expressionof tumor necrosis factor alpha-converting enzyme/A disintegrin and metalloprotease-１
７ impacts porcine cumulus cell
oocyte complex expansion and meiotic maturation via
ligand activation of the epidermal growth factor receptor.
Endocrinology １
４
８, ６
１６
４６
-１
７
５．
１
０．Fan HY, Liu Z, Shimada M, Sterneck E, Johnson PF,
Hedrick SM, Richards JS （２００９） MAPK３/１（ERK１/２） inovarian granulosa cells are essential for female fertility.
Science ３
２
４, ９
３
８９
-４
１．

研究フロンティア

39

川島

一公

他

１
１．Page G, Guerin S, Grall D, Bonino F, Smith A, Anjuere
F, Auberger P, Pouyssegur J（１９９９）Defective thymocyte
maturation in p４
４ MAP kinase（Erk１）knockout mice. Science ２８６, １３
７４１- ３７７．
１２．Aouadi M, Binetruy B, Caron L, Le Marchand-Brustel Y,
Bost F（２００６）Role of MAPKs in development and differentiation : lessons from knockout mice. Biochmie ８８, １０９
１１０９８．
１３．Fan HY, Shimada M, Liu Z, Cahill N, Noma N, Wu Y,
Gossen J, Richards JS （２００８） Selective expression of
KrasG１２D in granulosa cells of the mouse ovary causes
defects in follicle development and ovulation. Development
１３５, ２１２７２- １３７．
１
４．York RD, Yao H, Dillon T, Ellig CL, Eckert SP,
McCleskey EW, Stork PJ（１９９８）Rap１ mediates sustained
MAP kinase activation induced by nerve growth factor.
Nature ３
９２, ６２２６- ２６．
１
５．Oliver JE, Aitman TJ, Powell JF, Wilson CA, Clayton RN（１９８９）Insulin-like growth factor I gene expression in the
rat ovary is confined to the granulosa cells of developing
follicles. Endocrinology １２
４, ２
６７１２
- ６７
９．
１
６．Zhou J, Chin E, Bondy C （１９９１） Cellular pattern ofinsulin-like growth factor-I （IGF-I） and IGF-I receptor
gene expression in the developing and mature ovarian follicle. Endocrinology １２９, ３２
８１３- ２８８．
１
７．Alam H, Weck J, Maizels E, Park Y, Lee EJ, Ashcroft M,
Hunzicker-Dunn M（２００９）Role of the phosphatidylinositol
３- -kinase and extracellular regulated kinase pathways in
the induction of hypoxia-inducible factor （HIF）-１ activity
and the HIF-１ target vascular endothelial growth factor in
ovarian granulosa cells in response to follicle-stimulating
hormone. Endocrinology １５
０, ９１
５９
- ２８．
１
８．Citri A, Yarden Y （２００６） EGF-ERBB signalling : towards
the systems level. Nat Rev Mol Cell Biol ７, ５
０５５
-１
６．
１
９．Kita YA, Barff J, Luo Y, Wen D, Brankow D, Hu S, Liu
N, Prigent SA, Gullick WJ, Nicolson M （１９９４） NDF/
heregulin stimulates the phosphorylation of Her３/erbB３．
FEBS Lett ３
４９, １
３９１
- ４３．
２０．Rahmatullah M, Schroering A, Rothblum K, Stahl R C,
Urban B, Carey D J （１９９８） Synergistic regulation of
Schwann cell proliferation by heregulin and forskolin. Mol
Cell Biol １
８, ６２４５６-２
５２．
２
１．Meyer D, Yamaai T, Garratt A, Riethmacher-Sonnenberg
E, Kane D, Theill LE, Birchmeier C （１９９７） Isoformspecific expression and function of neuregulin. Development １２４, ３５
７５３
-５
８６．
２
２．Falls DL （２００３） Neuregulins : functions, forms, and signaling strategies. Exp Cell Res ２８
４, １
４３
- ０．

40

日本生殖内分泌学会雑誌

Vol.15 2010２
３．Shirakabe K, Wakatsuki S, Kurisaki T, Fujisawa-Sehara A（２００１）Roles of Meltrin beta /ADAM１
９ in the processingof neuregulin. J Biol Chem ２
７
６, ９３
５
２９
-３
５
８．
２
４．Curry TE Jr, Osteen KG（２００３）The matrix metalloproteinase system : changes, regulation, and impact throughout
the ovarian and uterine reproductive cycle. Endocr Rev
２
４, ４
２
８４
-６
５．
２
５．Richards JS （２００５） Ovulation : new factors that prepare
the oocyte for fertilization. Mol Cell Endocrinol ２
３４, ７５７
９．
２６．Sekiguchi T, Mizutani T, Yamada K, Yazawa T, Kawata H,
Yoshino M, Kajitani T, Kameda T, Minegishi T, Miyamoto
K（２００２）Transcriptional regulation of the epiregulin genein the rat ovary. Endocrinology １
４
３, ４
７
１８４
- ７２
９．
２
７．Sriraman V, Sharma SC, Richards JS （２００３） Transactivation of the progesterone receptor gene in granulosa cells :evidence that Sp１/Sp３ binding sites in the proximal promoter play a key role in luteinizing hormone inducibility.
Mol Endocrinol １
７, ４３
６４
-４
９．
２
８．Sriraman V, Richards JS（２００４）Cathepsin L gene expression and promoter activation in rodent granulosa cells. Endocrinology １
４５, ５８２５-９１．
２
９．Doyle KM, Russell DL, Sriraman V, Richards JS （２００４）
Coordinate transcription of the ADAMTS-１ gene by luteinizing hormone and progesterone receptor. Mol Endocrinol １
８, ２
４６
３２
-４
７
８．
３０．Shimada M, Yanai Y, Okazaki T, Yamashita Y, Sriraman
V, Wilson MC, Richards JS（２００７）Synaptosomal-associatedprotein ２５ gene expression is hormonally regulated during
ovulation and is involved in cytokine/chemokine exocytosis from granulosa cells. Mol Endocrinol ２１, ２４
８
７２
-５
０２．
３１．Meyer D, Birchmeier C（１９９５）Multiple essential functionsof neuregulin in development. Nature ３
７
８, ３
８
６３
-９
０．
３２．Erickson SL, O’Shea KS, Ghaboosi N, Loverro L, Frantz
G, Bauer M, Lu LH, Moore MW （１９９７） ErbB３ is required for normal cerebellar and cardiac development : acomparison with ErbB２-and heregulin-deficient mice. Development １
２
４, ４
９９
９５
-０
１１．
３
３．Wolpowitz D, Mason TB, Dietrich P, Mendelsohn M, Talmage DA, Role LW（２０００）Cysteine-rich domain isoformsof the neuregulin-１ gene are required for maintenance of
peripheral synapses. Neuron ２
５, ７
９９
- １．
３
４．Kawashima I, Tabata K, Okazaki T, Shimada M （２００９）
The cumulus cell-secreted factor Neuregulin １ maintains
the cumulus cell function in ovulated COCs to enhancefertilization and developmental competence porcine oocytes. Biol Reprod（Supplement）１６４．