シカジーニアス 牛マイコプラズマプラスキットシリーズ

Cica GeneusRBovine Mycoplasma Plus Kit Series
従来品よりも検出感度が向上しました

PCR 法を用いて、牛マイコプラズマ属の特異的遺伝子を簡便、高感度に検出できます。
採取接種培
被検体スクリーニング( ハイスクリーニングプラスキット )陰性陽性（Row）
M. canadense
M. alkalescens
M. arginini

簡易菌種同定( 各種検出プラスキット )M.bovisDNA
抽出増菌培地（NK 培地）電気泳動

PCR

陽性（High）

PCR

M.bovigenitalium

養M. bovis
M. bovigenitalium
M. californicum
M. bovirhinis

電気泳動

M.californicum

マイコプラズマ属(Mycoplasma spp.)は真正細菌の一種であり、約120種類が報告されております。
本シリーズでは乳などから得られた培養検体を用いてDNA抽出、スクリーニング、PCRを行うことで、マイコプラズマ属の特異的遺伝子を簡便に検出することができます。プラスキットシリーズは、検体によるPCR阻害を抑制する
PCRサプリメントプラスを採用したことで、従来品よりも検出感度が向上しております。
本キットは、酪農学園大学

樋口豪紀博士と岩野英知博士が開発したPCRを用いた迅速簡単測定技術を応用し、開発されたキットシリーズです。

マイコプラズマ（NK）培地●牛マイコプラズマ属検出用としての既調製培地です。

特徴 ●検出に最適な血清（馬）および新鮮酵母を使用し、牛マイコプラズマ属の発育に優れています。
●液体培地には、フェノールレッドを添加しています。

●組成●牛マイコプラズマ属の検査手順（例）
検査材料（乳など）

PPLO Broth w/o CV
H2O
Phenol Red（液体培地のみ）
Horse Serum
Fresh Yeast Extract
選択済※
DNAAgar（寒天培地のみ） （pH 7.6-7.8）

マイコプラズマ（NK）寒天生培地（37℃）2、5日目（5-10% CO2・37℃）
2～7日間●液体培地発育所見
フェノールレッド(pH 7.8±0.2)を含有しているため菌の増殖に伴い液体培地のpH変動(pH 6.8～8.2)を色調で確認できます。
但し、マイコプラズマ属以外の菌属でも色調の変化が起こります。
<色調変化について> 開栓前→ 赤色(アルカリ性)菌の発育等→ 黄色(酸性～中性)

顕微鏡所見（実態顕微鏡）×10 又は50
菌種同定

マイコプラズマ（NK）液体培地

マイコプラズマ（NK）寒天生培地

遺伝子検査（5-10% CO2・37℃）
2～7日間

目玉焼き状コロニー確認

資化性の鑑別他菌種※選択剤としてペニシリン及び酢酸タリウム ( 医薬用外劇物 ) を含みます。
酢酸タリウム ( 医薬用外劇物 ) の含量は以下の通りです。
マイコプラズマ (NK) 液体培地 ︓1.5 mg/ 本
マイコプラズマ (NK) 寒天生培地︓ 9 mg/ 枚

製品情報
製品番号

製品名

包装価格備考主要な牛マイコプラズマ属の増菌

000718

マイコプラズマ（NK）液体培地

50本￥12,500（M.dispar の発育は確認しておりません）

000717

マイコプラズマ（NK）寒天生培地

10枚×2￥12,500（M.dispar の発育は確認しておりません）

製品に関する
お問合せ先

ミヤリサン製薬株式会社
Tel:03-3917-1191 Fax:03-3940-1140

ご注文に関するお問合せ先

主要な牛マイコプラズマ属の選択分離

株式会社共済薬事
Tel:03-3265-2767 Fax:03-3262-5217

シカジーニアスRDNA抽出試薬
シカジーニアス ® DNA 抽出試薬は、細胞からゲノム DNA を効率よく抽出するための試薬です。本試薬と目的試料を混合し、インキュベートするだけの簡単な操作で、PCR テンプレートが調製できます。

試料 10 μL
試薬 100μL

僅か 10 分で PCR テンプレートの調整ができます。
a 液 10 μL
b 液 100 μL

使用直前に 2 液を混合してお使いください。

インキュベート
72 ℃ - 6 分
94 ℃ - 3 分
1) 試薬 a、試薬 b を 1:10 の比率で混合し、DNA 抽出試薬混合液を調製します。
2) 調製した DNA 抽出試薬混合液を100μL マイクロチューブに入れます。
3) コロニーもしくは培養液を上記マイクロチューブに入れ、軽く混合します。

上清を回収

4) 72 ℃で 6 分間、94 ℃で 3 分間インキュベートします。
5) この反応液の上清をテンプレート DNA とします。

■サンプル
Staphylococcus aureus ATCCR6538TM（2.8×10 8 cfu/mL相当）■検出遺伝子
16S rDNA（リボソームDNA）■培養条件
LB 液体培地（30℃で18時間培養）

M
1
2

1 kbラダーマーカー
ネガティブコントロール
ポジティブコントロール
5 NG/μLの精製DNA）
3～8 DNA抽出液の10倍段階希釈液

製品情報
製品番号08178-96

製品名シカジーニアスRDNA抽出試薬

包装

1キット（120回分）

価

格￥24,000

シカジーニアスR牛マイコプラズマプラスキットシリーズ
牛マイコプラズマ● 品名マイコプラズマ

マイコプラズマ

マイコプラズマ

ハイスクリーニングプラスキット ボビス検出プラスキット

カリフォルニカム検出プラスキット ボビゲニタリウム検出プラスキット● 製品番号08079-96

08093-9608094-9608095-96● 容量

100 回分

30 回分

30 回分

30 回分

400 bp 付近

150 bp 付近

150 bp 付近

High 400 bp 付近● PCR 産物Low

300 bp 付近※ M. dispar 等は 700 bp 付近

94 ℃ 30 秒● PCR 条件

40回

61 ℃ 30 秒
72 ℃ 30 秒● キット構成

94 ℃ 30 秒

40回

62 ℃ 20 秒
72 ℃ 60 秒

94 ℃ 30 秒

40回

60 ℃ 20 秒72 ℃ 60 秒

94 ℃ 30 秒
61 ℃ 20 秒
72 ℃ 60 秒

40回
400 μL×1
1000 μL×1200 μL×1
100 μL×1100 μL×1500 μL×1

牛マイコプラズマ ハイスクリーニングプラスキット

試薬A（ラベル白）AptaTaq DNA Master（５×Conc.）※1
試薬B（ラベル赤）PCRサプリメントプラス
試薬C（ラベル紫）マイコエース（プライマー溶液）
試薬D（ラベル緑）ポジティブコントロール1（High）
試薬E（ラベル黃）ポジティブコントロール2（Low）
試薬F（ラベル青）6×ローディングバッファー

マイコプラズマ ボビス検出プラスキット

150 μL×1
試薬A（ラベル白）AptaTaq DNA Master（５×Conc.）※1400 μL×1
試薬B（ラベル赤）PCRサプリメントプラス
200 μL×1
試薬C（ラベル紫）マイコエース（プライマー溶液）
試薬D（ラベル緑）ポジティブコントロール（各対象菌のDNA） 50 μL×150 μL×1
試薬E（ラベル黃）ポジティブコントロール（M.bovirhinis）
200 μL×1試薬F（ラベル青）6×ローディングバッファー

マイコプラズマ カリフォルニカム検出プラスキット
マイコプラズマ ボビゲニタリウム検出プラスキット※1 AptaTaq DNA Master は、Roche Diagnostics K.K. の商品です。
酪農学園大学 樋口豪紀博士と岩野英知博士のご厚意により、技術指導を頂きました。本キットは、試験・研究用試薬です。

PCR 実施例①■ 牛マイコプラズマ
M

123ハイスクリーニングプラスキット
4567891011操作

サンプル

乳
乳 0.1 mL をマイコプラズマ用液体培地増菌培養 (NK 培地 )3.0 mL に混合し培養する
3 日後の培養液 10 μL を 100 μL のDNA抽出 シカジーニアス® DNA 抽出試薬 ( 別売 )■ マイコプラズマM

12と混合し、処理する

ボビス検出プラスキット
34567891011PCR電気泳動■ マイコプラズマ ボビゲニタリウム検出プラスキット
M123456789 10■ マイコプラズマ
M

12検

11カリフォルニカム検出プラスキット
34567891011出

各キット毎に総量 20 μL の PCR 溶液を調液する
ミニゲルで 100 V で約 35 分間泳動する(1×TBE 緩衝液、3 % アガロース KANTO HC)

臭化エチジウムで 30 分間染色

培養検体
M Maker
1M. bovis
2M. bovigenitalium
3M. californicum
4M. bovirhinis( 試薬 E: ネガティブコントロール )5M. canadense
6M. alkalescens
7M. arginini
8M. dispar
9Acholeplasma laidlawii
10 Staphylococcus aureus
11 陰性対照（滅菌水）

NDTS 株式会社のご厚意により、電気泳動パターンのデータをご提供いただきました。

PCR 実施例②
乳検体を NK 培地で培養し、菌の発育が確認された 31 検体を用いて、牛マイコプラズマ

操

ハイスクリーニングプラスキットで遺伝子を検出した。

作

サンプル 乳乳由来の培養検体 (31 検体 ) の検出結果

増菌培養 乳 0.1 mL をマイコプラズマ用液体培地(NK 培地 )3.0 mL に混合し培養する

3 日後の培養液 10 μL を 100 μL のDNA 抽出試薬 ( 別売 )と混合し、処理する

DNA抽出 シカジーニアス ®

各キット毎に総量 20 μL の PCR 溶液を調液する

PCR

電気泳動 ミニゲルで 100 V で約 35 分間泳動する(1×TBE 緩衝液、3 % アガロース KANTO HC)

検出臭化エチジウムで 30 分間染色

包装

製品情報
製品番号08079-9608093-9608094-9608095-9608178-96

製品名
シカジーニアスR牛マイコプラズマ

ハイスクリーニングプラスキット

シカジーニアスR マイコプラズマ

価格保存

1 キット
（100 回分）￥86,000

冷凍（-20 ℃ ～ -25 ℃）

ボビス検出プラスキット

1 キット（30 回分）￥50,000

冷凍（-20 ℃ ～ -25 ℃）

シカジーニアスR マイコプラズマ

カリフォルニカム検出プラスキット

1 キット（30 回分）￥50,000

冷凍（-20 ℃ ～ -25 ℃）

シカジーニアスR マイコプラズマ

ボビゲニタリウム検出プラスキット

1 キット（30 回分）￥50,000

冷凍（-20 ℃ ～ -25 ℃）

1 キット（120 回分）￥24,000

冷蔵（2 ～ 8℃）

Cica Geneus® Bovine Mycoplasma HI Screening Plus Kit
Cica GeneusRMycoplasma bovis Detection Plus Kit

Cica GeneusRMycoplasma californicum Detection Plus Kit

Cica GeneusRMycoplasma bovigenitalium Detection Plus Kit

シカジーニアスR DNA 抽出試薬

Cica GeneusRDNA extraction reagent

関連製品（培地）
製品番号000718

製品名
マイコプラズマ（NK）液体培地

包装50本格

製品番号

製品名￥12,500

価000717

マイコプラズマ（NK）寒天生培地（20枚）

包装10枚×2価

格￥12,500

製造元 関東化学（株）、販売元 ミヤリサン製薬（株）の商品になります。この培地の購入に関しては、販売代理店の（株）共済薬事にお問合せ下さい。
（TEL:03-3265-2767）

関連製品（電気泳動用試薬）
製品番号

製品名01095-23

アガロース KANTO S

包装価

格100g

￥13,00014575-43

臭化エチジウム溶液 (2 mg/mL)

01089-23 アガロース KNTO HC（短フラグメント用）

100g￥29,50049899-45

Quick - Load Purple 100 bp DNA Ladder 125 geL Lanes

46510-79

1L￥5,30024080-96

6 倍濃縮ローディングバッファー

10×TBE緩衝液

10 mL
2mL × 6

￥5,400￥14,400￥9,000● 本記載の製品は､試薬 ( 試験､研究用として用いる化学薬品 ) としての用途にご利用ください｡ ● 本記載価格に､消費税等は含まれておりません｡● 本記載の製品情報は予告なく変更する場合があります。 最新情報は､弊社ホームページ｢Cica-Web｣をご確認ください。
【販売元】

試薬事業本部〒103-0022

東京都中央区日本橋室町2丁目2番1号

TEL：03-6214-1090
HP：https://www.kanto.co.jp

BGa-04(202301)