UGrlA1の遺伝子多型を判別する
DNAチップキットの開発
平山幸、・伊藤茜牝・細谷真悠子叩・山野博文M
DeveloP1ηelH of DNA chゆ for Delection of U6TIAl polym0印hisms
Kok・hi HlkAYAMA, AkιⅡ?e ho, A、,ayltko HOSOYA, Hir0π"ni YAMANO

Synopsis The loxicilies or il'inolecan,、vhich is onc of anli cal〕CCI' druas, havc bcen reporlcd lo corl、elale wilh
Ihc ucT/Al polym0Π〕hisms (UCフソAI*28 and U6?ソAI*6).1n ordel' 10 deleC1 1hesc
Polym01'phiS1ηS, wo have developcd a DNA dlip made by lhe GENE S11,1CON which is ToyoKohan' S 0Π且inal subSⅡate.1Π order lo impl'ove the DNA C11il〕 dcteCⅡon accuracy,、vc examined
PCR conditions, hybridizalion condilions and washing condi{i011S.1n addilio",1he thl'eshold lo.iⅡdac lhc a11Clc type 、vas eslal)1ished by using 952 DNA saml)1CS. By 小e usc 01'1his thl'eshold,、VCevalualed 111e con'e1ιltion wilh lhc sanger sequencin号. As a l'esUⅡ, aⅡ a11Clcs wel'c consislcl〕1. vveWere al)1e lo dev010p tho good l)1'ccision DNA chil) to delecl U67'1A I*28 and ι/6フリAI、6.
Keywords : GENE SIUCON; DNA chil〕; gcnc polym01'phisln; U6r/Al gcno

今川,我々はDNAを商密度に仙1定化できる東洋鋼鈑製

1,緒言

ジーンシリコンを1"いて.υ6"A1遺仏 f多川!を判定す近年,ヒトゲノム解析の兆雁により,遺仏f"桜と薬剤用いてUC7'1AI、28及びU67ΥAI、6の遺仏f多坤!(F喰.1)の薬効や削作川などとの1刈述が徐々に1川らかになってきてを判定することで,塩俊イリノテカン投,ナF定忠名に対しおり個人の遺仏f悩轍に基づき治療方針を決定する個別て副作川兆現りスクを↓ι鞁もる'Ⅱが出来ることから,懲打化1ぎ療が身近になっている.遺仏r・情轍と薬効や俐作川との生誘の質(Qualily o「 uk)」の向 1二に貨献するものの倒係竹の研究開発が進み,多くの悩薬品に対する遺仏fと考える

るDNAチップキットを開発した.'DNAチップキットを,マーカーが兆見されることで,多様な遺仏fマーカーの矧ポDNAチップキットの開発にあ九り,まずヒトDNA,i式み介わせを同時に検Ⅱ{できる遺仏f・診断ツールが非常にイi料を用いてU的とするDNA領域のみを増幅するPCR条件川となるその・つの検出・念断ツールとして, DNAチッを検村し,その増喫,舮百物を川いてDNAチッフとハイプリプを川いた遺仏f診断キットが挙げられる.

ダイズ反応させて,各遺伝f剛を刊別するためにハイブリ

抗がん剤イリノテカンは1111iがんや消化器系のがノνに広くダイズ反j心の特熨作が1技も向 1二するハイブリダイズ条什の適川されている抗がん剤の・つであるが,このイリノテカ検肘をした,そして,これらの条件のもとで,遺仏 f・剛がンの代謝酵業UGTIAHこよって強い抗がん作川をイiする既知のDNA試料を川いて,将遺仏f刑を判定するためのSN38となる.UGnA1の発現や酵業活竹1が剥い懲打では,将脇価の股定を行った.最後に,既存のυ6フソA1迫仏f

爪篤な副作用兆現のりスクが 1二"L,この1,111作川りスクと剛判定怯との判別織果を比較し,本DNAチップの竹能を遺仏 f多JW (UCTIAI、28及びU67ΥAI、6)との関連が知確認した,られている 1・2.

*'Ⅱ業雉述室
牝技術研究所*:1.Ⅱ業推迎室*・1,"業挑進宗

バイオチッブ技術グルーフ
11μ叔材料グループ
バイオチッフ技術グループ
バイオチッフ技術グループ

削主,1f

グループリーダー

東i羊鯛鈑 V01.38

Chromo,ⅨT1■ 2

IA9 1A7Tab恰 I DNA PI'obes

E工伽12.5

E削111貞1Polymorphisms A11eletype

Probename̲J1・"叩)9=1のUG丁IA9'10UG丁IA7【・57{TユG)】
1姑7f「ユG)11622{'「,C11tt.蹄【AnA)5TMユAnA)7TAAI

UGrl』1*28
UGrl'1*6

Wild

1*28圦1Vanant

1*28V

Wild

1*6WVanant

1*6V

UG丁1角,'601.327叩コG)】

Fig.1

Schcmatic l'OPI'csenta【ioD of υ6フソ円豊onc and acn0ⅡC1)01γmorphism

HYbridizati0肌 COV酎

nlrn

3mm

2.方法

Hybrld1乏■Uon P1急toDNA chlp

DNAチップを川いた遺伝f刑の検査フローをドi氾にポ

Fig.2 CENE S11,1CON DNA chil)

す.

世士'乞ど^=便亜=ヒゴ^=既劃=鼬ル倹出愆者より杣出したゲノムDNAから,検査に必要な遺伝プを1枚ずつ専川のハイブリダイズ川プレートに叔せた(FiE.2)

f部分を選択的に増幅する(PCR).この増幅産物を定の環嫡ドでDNAチップと接触させて反応させる(ハイプリダイズ反応). DNAチッフには,それぞれの遺伝f刑に2.1.2 DNA試料からのDNA増竜'1及び蛍光櫟識DNA,式'1は匿名化されたヒトDNA,式料を川いた. PCR対応したDNAフロープがヂめ固定化されており,増幅庠

液は, Table 2に水し九紕成でミ1a製した.またこのとき,

物'1・,に該"1するDNAかイr・在すれぱハイブリダイズb【応をフライマーミ y クスはTable 3に水した配列のDNAを用する反応後は太反応DNAを洗浄し,蛍光検出機にて測い,*281でVel'se及び、6 rolwardに蛍光を標識しt:. PCR

定する増噺'1光物には蛍光標識を施しているため,外部か裴1'q (Mastercyclel' PI'OS,エツヘンドルフ株式会村:)にらDNAチッフへ励越光を照射するとハイブリダイズ反応てPCRを行い, DNAを均幅した.

1,Nこ応じて蛍光を発する.以 Fにi譯細な試験力法を尓す
Tab1巳 2

2,1 DNAチップの作製と試験方法
2 1.1 DNAチッフの作製
3ⅢⅢ角のシリコン基板にDLC (DiamoDd Like cal'bon)をイオン化蒸杵法により成膜(約40nm)し,各穐反応溶

V01Ⅱme(μL)

Primer mixlure
dNTp mixture
10XPCR buffer
Ta DNA ol merase

1.00.2

Water

10.8

液中へ泌漬処田!させて,アミノ'及びカルボキシル基を順次導入した後,カルボキシル基をN・ヒドロキシスクシンイミド(NHS (N・Hydroxysuccinimide))でエステル化させて,涌性エステルが表佃修飾された基板「ジーンシリコン」を作製した,活性エステルは, DNAの末端に修飾1)CR CO"1Ponc""

Componont

1.0

貴nal c0訂C.
Variable
200 ιm01 し ea

2.00.5 U μL

Tabl03 P"n〕crsequcnccs
PrimerSe ⅡenceS 5'ー>3'*28 forward*28 『everse*6 forward*6 reverse

TAGTCGTCCTTCTTCCTCTCTCGT
ATGGCGCCTTTGCTCCTCCATGCTGGCAAGATACTGTTGAGATCACACGCTGCAGGAAAG

されたアミノ基とアミド結合を形成するため,ジーンシリ
コンに各郁プローブDNAをDNAスポット装置

2.1.3 ハイブリダイズ及び蛍光検出(SPBI02000,高1Ⅱ]二業株式会社)にてスホット(φ150

得られた増幅産物とハイプリダイズ緩征lii夜(2.25"μmの液滴)し,熊イj結合をさせることで,チップと固定

SSC川,23%SDS)とを2:1で況,;・した.この澀介液を化できる.

DNAチップ上に滴ドし,ハイブリダイズカバーを被せて,UC71AI、Z8及びUCTIAI、6を検出するため,それそれハイプリダイズ反応を行ったハイプリダイズ反応はハイのアレルタイプに対するフローブDNAをジーンシリコンブリダイゼーションインキュベーター(HB・100,タイテッにスホットした(Table l).その後,チップとの岡定化処

ク株式会社)を川いた.

則を行い,固定化されなかったプロープDNAを沈浄によ

ハイプリダイズ反応後に,ハイプリダイゼーションインり除太して, DNAチップを作製した.その後, DNAチッキュベーターから取りN̲1し,業リくハイブリカバーを外しUC7ΥA1の遺伝f多型を判別するDNAチップキットの開発てDNAチップを洗浄液(0.01"SSC川.1 W/V% SDS溶液)イクルのみとした.所定のPCRサイクル終f後,増煽産物に5分闇浸批して洗浄を行った後,りンス液(1"SSC)にを同収し,それぞれをチップとハイプリダイズ反応させて祉漬した.

冬遺伝f刑(、28,、6)の野生剛プロープ及び変異型プロー

ハイプリダイズプレートをりンス液から取り出し,余分プの蛍光強度により詐価を行った.

なりンス液を拭き取り,専用蛍光検出器田10SHOT,東2 2 2 ハイプリダイズ反応条件の検討

洋鋼鈑株式会社)にて蛍光検出画像を得た.

増幅された遺仏f型をDNAチップで検出するために,2.1.4 蛍光強度値及び判定値の算{.Ⅱ

特異性の1斑いハイブリダイゼーションの条件を反応温座に蛍光検出脚像からそれぞれのスポットの卸座の中央値を算出し蛍光強度とした,さらに,遺伝f型を判別する指標

着Πして検,1゛した.具体約には,ハイブリダイゼーション

として,以ドの式を則いて判定値 andex)を算出した.

ぞれN討冏反応させ,蛍光強度と判定値から評価を行った.

インキュベーターを用いて52,54,56,58又は6げCでそれ判定値
2.2.3 洗浄条件の検討

変異剛アレルの蛍光強座

野生刑アレル蛍光強度と変異型アレルの蚤光強座の平均値

沈許,液(0,016SC/0.1 W/V% SDS溶Hめの液温を15,20,25,30又は35゜Cになるよう調整した.ハイプリダイズ
後,各泓座の洗浄液でUGTIA1フレートを5分開洗浄した.
洗浄後,検出するまでUG、nA1フレートをりンス液(1"2.2 実験内容

2 2 1 PCR増幅条件の検,寸ヒトゲノムから検介対象となる遺伝f部分を選択的に増SSC)に没した.また,洗浄しないUGTIA1プレートは,幅するPCR増幅条件について, DNAチップでの検川に効

ハイプリダイズ反応終r後,1nちにりンス液に浸した率が良い増幅条件を選択するために,アニーリングi品塵,れらにつぃて判定値から遺仏f型の判定する特興性の,が仙プライマー濃度,そしてPCRサイクル数を検討した.

を11つた.

こ

1 アニーリング温度の設定
PCR条件(Table 4)のうち,プライマーが鋳型DNAと結介するアニーリング温度を60,62,64,66,68又は2.2.4 遺仏f・型判定のための1剥値設定野乍ナ世ヒトDNA試料,ヘテロ刑ヒトDNA,式料,変宍型

70 Cとして, PCRを行った.得られた増幅産物をDNA

ヒトDNA試料を川いて判定倒仙の設定'貳験を行った.こRNA分析川マイクロチップ電気泳動装羅(MUⅡiNA,株のとき, DNA,貳料は同・のものを複数川仙川した式会社局泳製作阿n にて解析した.

②プライマー濃度及びPCRサイクル数の股定

2.2.5 既存遺伝f川!判定法との村11到竹1試験

蛍光標識したプライマー(*28 rcversC及び、6 forW1Ⅱd)

105例のヒトDNAJ;料を川いて,既存の検俺ガ法との1「とボ標識のプライマー(*28 「01'ward及び*6 1'evel'se)を関竹1を確認するため,本;DNAチッフキットとダイレクト

Table 5に示した濃度で調製し,各プライマー濃皮においシークエンス法で*6及び*28の迫仏f・劉判定を行った.て31,33,35,37,39,41,43または45サイクルのPCR (、1'able4)を行った,ただし,5:1及び10:1は,31,33及び35サ

StcTcm .

"mePre‑denalura110n

95゜C95气)60‑70て72%)フユτ)

5 mindenaturaιionaηηealing
extenslon
nnal extenslon

3.1 PCR増幅条件の検討

PCR cycles

Tきble 4

3.結果及び考察

C clesa)アニーリング淑度の設定
PCRでのアニーリング温度を60 70゜Cまで2Cずつ変30 sec30 SCC

31‑45化させて得られた則帆産物を延気泳動した結果をFig3に,'した.

30 sec30 sec

アニーリング温度力蛤0及び62゜Cのとき,ごくわずかに非特與的な増佃'1産物が生じたが,アニーリング1品座64C以Table 5

F1ⅡorcsC■in、1宜bclcd

Primer
6.0

160ーー

6.0
6.06.01」では消失Lた.この引{特異的な増幅産物が令坤IW,1産物.1.

NonnⅡoresC■in‑1ab■Icdに占める割合を算1.1.1したところ,1%以、トであった.ま大:,Pr11ncr

アニーリング流度が側及び70゜Cでは増蝦産物!1!は波少した.

( m01/止)

00026
43210

(μm01/L)■●5之1動円

PrimerConctntr■虹onratlo

PI'i"1ι.r conCι.ntl'nlio" 1'ntio

1'近接塩基弁"去'"を川いてプライマーのTm (融解温度;Me1Ⅱn琴 TemperaⅡ"'e)を算Ⅱ↓し大:ところ,各プライ
マーのTm仙は66゜C付近であり,アニーリング泓度を68C以上にすると,得られた増幅産物11!は低ドした.これは,東洋鋼鈑 V01絽コ'Σ一●f.宅一1U易●寺コ弔C●老叫梨挑糊窃嚇 伽祁

卓1ざ^^^^^

如脚卿脚脚側C
Annealingtemp.
制 6062646668 70NC

(336 bp).6(256 bp)
Nonspoclfic pro(1Uct写■1竜28W 01*2■V0CYι1●工酎lm●r r=,,0

ユフ■9 '1,15 1

之1

き12 31諦41
3 1

1 3 5 1 35
5 110 1印

Fig.4

斜一.コ殉喜一冒工皇1言に邑

0抑Fig3 EⅡでCI 0「1hc anneali11武 temp01';1ιUrc 01' PCR

御脚脚岡脚

Enecl orlhe number or pcR cyclcs and prim01
Concontralio" rati0 ιo mCιm ⅢK)rescence intensity of *28

産物か減少したと冴えられた.

5到lm●rずot陪

コ00"

アニーリングil,1度を1硲くすると,鋳型DNAとプライマーがハイブリダイズしにくくなったため, PCRで生じ九則幅■胖6W 01卑OV,43Fig5

また,アニーリング肌ι喫が60及び62゜Cのとき,副産物で3!ココフ394143A5コ1 3

15 1

2 1?訟
き35 1143‑531
5 110

EⅡセd 01'thc "umber 01'11CR cydcs and pl'imcl'
ConcclHI'alion n北k) 10 mcan n"orcscencc "1tcnsily 01'*6

ある井特異的増幅産物がごくわずかに乍じた.この非特異的揃幅産物が水DNAチップキットの遺仏 f川!判定に及ぼとして,それぞれ111剖剖ハイプリダイズを行い,蛍光強度寸影粋を'小価する必要があるかもしれないが,アニーリンと判定仙から,,乎仙を行った.行られた蛍光帳度価(2試行

グ流度を64又は66Cにすることで非特典的増柘産物が小じの蛍光強座価の平H川ιD をFi琴.6 (、28)及びFi宮.フ(、6)なくなることから,非特拠的増幅産物が,本DNAチップに小L,判定伽(2'1式11それぞれの仙)をFi今.8 (、28)及キットの遺伝f型判定に影押を及ぼす"1能竹は梅めて低いびF喰.9 (、6)にポした.

ものと紺論付けた.
②プライマー濃度及びPCRサイクル数の設定

蛍光強度仙はハイブリダイズ揣'度力巧2Cのとき鰔も1拓く,ハイプリダイズ1品座の上昇とともに値は低ドした.
,

芥サイクル11寺.'!、iの則帆祺誇物を用いて,本DNAチッフと、28の判定仙についてはハイブリダイズ温座の上昇とと56CでⅡ1寺1川のハイブリダイズ反応を行い,得られた蛍光もに野牛ノWの判定伯は低ドし,変熨川!の判定伯は 1:昇・し,強度仙(2試行の蛍光強喫価の'舮丘川百)をFig.4 (、28)及

56゜Cのときに1'小と11↓大を小した.さらにハイブリダイズ

びFig.5 (、6)にポし大:.

温座を ltHさせると野乍剛の判延偵はヒ舛し,変異型の判プライマー濃皮比について打11すると,フライマー澁度定仙は減少した.また,、6の判定偵については,ハイプリ比力{3:1のときで極人を'認め,5:1及び10:1では蛍光強ダイズ1品度の 1.:男・とともに野牛型の判定仙は茗しく低ド度偵の低ドが認められた.さらに,プライマー濃度比が1.5:し,変熨型の判定値はわずかに 1二外した.56C以 1:では甥

1,2:1及び3:1の条件ドでのPCRサイクル数と蛍光強煙

乍刑及び変異型の判定仙は大きな変動を水さなかったが,値との関係について行目すると,35,37又は39サイクルでヘテロ剋の判定仙は減少した.

蛍光強度値が最大となった.

ハイブリダイズ温庶が低いあるいは1留いと増輔産物と水DNAチッフキットにおいて,より高いii舸i竹を確保

DNAフローブとが特異的にハイプリダイズできず,野,11するには,より多くの増幅産物が得られ,商い蛍光強度価

梨及び変党刑の判定偵が1,0に近づく場介があると勞えらが得られることがqほしい.したがって,ポDNAチッフれる.本.貳験で検肘した結果,ハイプリダイズ1品度が低いキットのプライマー濃座比は 3:1」に, PCRサイクル

能Cの場介,28の変熨刑刊定値及び、6の野中型判定伽が,数は「3フサイクルとした.

温度が商い58C及び60Cの場A・,28の野乍型及び変災1理判定仙が1.0に近づいており,これらの温度では特異的な

3,2 ハイブリダイズ反応条件の検討

ハイプリダイズができないことか明らかとなっ九.

3.1 節にて検討した鱸適なPCR増借,1条件にてPCRをりミ

また,1非党r内にハイブリダイズしている温座は54 C施した後,ハイブリダイズ1品座を記.54,56,認又は60C

56 Cであると冴えられるが,本1)NAチップキットのハイ1i

UCフソAiの遺伝 f多剛を判別するDNAチップキットの開発

01.2舌V

5456

◆●.
¥t

全.

60

5862Fig.8

The relali01】5hil) bct、vccn hyl)rid稔alio" 1emperalul'C
日11d ゛Z8 i口dcx

11■1*6W

2.0

口胖6V

1.80

含1.6

●Ⅷr抑nt1.4' h●t是10●聞ld茸 1.?
.
^に゛◆

1.0''0、8''58

600、60.4
25島"Mloro島舶

1舶

1冊

1聞

11
馳斜

綴一加御血

一.0●¥一一゛三宅一00言冨EO.■0●t52 54

舌割如1● tYP●52

● WildhYbridizati0訂 t6叩.(゜C)

The rclation5hil〕 bclwcen hyb"dizaⅡon lemperaⅡ11'C
and mean nuorcsce口Ce i"1ensity or*28

hybrudi1■tlon t0州P.

50

亀.

''..

●印.

65念釦 5ι郭御525血"叩朋,1●k■ro11謡

Fig,6目北抑m0101¥00

之5

●帥

︑舶

5

之0で

1郭州

5^

f駄

1^

X書C‑15^◆ν.ri.nt'ι峰t引0◆◆会^

1制︹コ●Σ一mに0ぎ一0宅ミ言コ早盲●E■ 1.2目剖

25^

08642086420

3^

.

0.?

0.

0‑0

5● 56 5B ●050

52

54

56

62

リ0゛i.nt

hybrldizauon ternp.(゜CFig.フ

The rC1111ion9hip bcl、vccn hybridizalio" 1CmP引'ι11111'C
n1Ⅱ11nC11n 11110resC引Icc i11{cnsi【y 01'*6Fig.9Thc re1ιltionship bcl、νOC" hybndi之alion lcml,er111駐1'e
川ld *6 i"dcx

2.0

プリダイズ淵'度設定にあ九っては,ハイプリダイズil'麿の冥●,に一ブリダイズ反応を行う恒温槽などの俳1削に伴う流麼低トリ

15.

ゆ価低ドが製品の備頼性低下を紹くことが1明らかとなり,ハイ.

,

゛.

.

.

◆.

.

,
●U市田Π竜''4

棚ld''

スクを1"1避するため,ハイブリダイズi品痩を56Cに設苅:す0ムム'

゜゜'・""0「宗.0 闘'・,."0 齢帥 Mることとし大:.

Wa3hin丘 50lutio" t.rnp.{'C} wa5hln" olutlon te「如.(て)■1,

゛6

3.3 洗浄条件の検討
洗浄液の胤度を15 35Cとしたとき,及び洗浄液に没汝Fig.10 賊ⅡでCI 01'、vashin武 S01Ⅱli0Ⅱ lempcl'a111rc lo '28 ι111d *6
i11dex

しなかっ九とき(ー)の弁条件における、28および、6の判定偵をFi3.10に水した.

く変わらなかったことから,ほとんど井特坐的なハイブリ

判定仙は洗浄液の液11'の上界に伴い,特拠十11が向 1:した.

ダイズ反応を除ム・することができず,本DNAチップキッ

しかしながら,波11'が15 20Cては洗浄しなかったものとトのfΠ慰i竹をより高いものにするためには,20゜C以ド及び判定偵が近い値を尓し,35Cでは、28の野中型の判定偵が35 C以 1二はq!ましくないと結論付けた.

1.0に近、づき,特yι州1を小さなかった.

使川した洗浄i夜ての芥プローブDNAの推定'1、m仙は約したがって,洗浄液の液温は25 30Cに設定することとし大:.

30゜Cであり,本'式験ても:川C付近で最も,拓い特妥竹が得られる結巣となった,液i品が35Cのとき,、28劉乍型の判3,4 遺伝子型判定のための聞値般定定価が1.0に近・づき特異性を水さなかったものの,、6野乍

判定仙1剃飾算1.1.1に"たって火施L大:試験数をTeble 6に剛の判定位は人きく変動せず,特拠"{を小し九ままだった.

水した.得られた芥過仏f型の判定価の平均飾及び標凖偏

この原囚としては,、28はTAの繰り返し配列てあるのに対差をもとに避伝 f川1を判定するための樹伸を定め, Fig.11し,、6は・塩基多剛であり,この迩いによるものと"えらにポした.

れる.、1'mを超える洗河哨齡品度では, TA繰返し配列をイjす

また,各遺仏f・川!の判定幽値Ⅲ1はいずれの遺伝f川!としる、28増幅籬物とプロープDNAとのハイプリダイズ反1心がても判定することができないと岳えられる九め,'訂'不不安定となり,特兇竹1が椚失した口能性が冴えられる.

能と'役ンどした.

方,20C以卜では洗浄しなかったものと判定偵が人き東洋鋼鈑T皐ble 6t十150

eeHetero t
Variant tee、¥ild t

2.00

組み令わせて検査することで,抗がん剤イリノテカンを用The 11Umbcl' of 井Cnolyl)cd S印η1)1eenot

兜28

史6

いた抗がん剤治療の副作用りスクを高精度に予測すること

373

597ができる知見が得られている田.今後はこれらの6郁の遺352

215

伝f多剛を1枚のDNAチップヒで判別できるキットの開発

227

140をすすめる.

.

DNAサンプルのご提供とダイレクトシークエンス解析

においては,山口大学大学院睡学系研究科消化器・腫傷

冥Φでε◆Varlarlt■hetero1.00' W11d0.50

外科学岡正朗前教授(現山Π人学字長),硲彰 1作教授,
任r扇亮・助教,山「1大学医学部附属病院儒床検査部
岡山廸f先生のご協力をいただきました.感謝とともに御'0.00*1βFi9.11

ν01.38

礼f11L 上げます.

*6

引用文献

Ⅱ10 dclcrminc(11hrc゛10lds or 、28 a"d '6 ilKlex

D Y. Ando, H. S11ka, M. Ando, T. sawa, K. Muro,11.
3.5 既存遺伝子型判定試薬との相関性試験
DNA試料105例を川いて,本DNAチップキット及びダUcoka, A. Yokoyama, S. sailoh, K. shimokata, and

Y. HascgそIwa:canccl' Res.,60 (2(川の,6921.

イレクトシークエンス法とて遺仏f川!判定を行った.での2 ) H. Mil〕ιltni, K. sai, M. saeki, Y. sailo, S. ozawa, K.

結果,すべての,式料において遺仏f川!が・致した.このこSuzuki, N. Kani、va,」. sawada, T. Hamaguchi, N.とから,本DNAチッフキットは既存の遺伝f型判定法とYamam010, K, shil'ao, Y、 Yanlada, H. ohlnalsu, K.

詞等の判別竹能を右し,良好な相関性を有することが明ら

Kubola, T. Yoshida, A. ohlsu and N. saijo:

かとなった.

4.結言

PhlH'mac(唱enet GeⅡomics,17 (2007),497.
3)岡村浩, 111野"文: New Diamond,29‑2 (2013),
17.

4 ) VV. RyC111ik, VV..1. spencer and R. E. Rhoads:
本DNAチップキットにおいてDNAの増幅条件とDNAチッフとのハイブリダイズ反1心条件の検討を行い,最適な条件を得ることができた.また,遺仏f・jWの判定を決定するための倒偵の設定をtj'つた.そして,璃存の遺仏f剛判定キットと判定結リιを比較し,良好な村̲1関性が得られ大:.
さらに,本DNAチッフキットは2純類の遺仏 r・多剛を判Nudeic Acids RCS,18‑21 (1990),6409,5 ),1, Mci打kolh and G. vvahl: Anal Biochem.,38‑2(1984),267.
6 ) S. 11aιa1Πa, H . Mishh11a, R.「9Uncdomi, Y.

OkⅡy田ηa, T. Kalo, K. Takahashi, H. Nozawa,11.
Ando, M. KobayaS111, H.'nlkemoto, N. Nι1号ala, S.

別するものであるが,それに加え, U07ΥAI、60,Kanekiyo, Y.1nouc, Y, Hamaln010, Y, Fujila and Y.

UGTIA7*12 (・57), U6rlA7*2,ιノC7ΥA9、1bのSNPとHinoda: canccl' sci.,104‑12 (2013,1662.