試験研究用試薬

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用）

Cica GeneusRE.coli POT KIT

大腸菌（E.coli）は、自然環境中に広く存在する日和見感染菌です。医療環境においては、食中毒や院内感染といった集団感染の原因になることが多く、感染管理が重要となります。
本キットは、大腸菌の菌種同定、クローン同定および菌株識別を行うための遺伝子型別キットです。藤田医科大学の鈴木先生らが開発したPCR-based ORF Typing（POT）法の原理に基づき、マルチプレックスPCRを用いて大腸菌の保有する複数の特定遺伝子領域を増幅し、アガロースゲル電気泳動法によって分離されたバンドパターンを数値化することで、クローン同定および菌株識別を遺伝学的に決定します。
特長■ 解析結果を数値化（POT値）することで、E.coli の菌株識別が可能です。
■ 最適化したマルチプレックスPCRなので、約4時間以内で分子疫学解析が可能です。
■ パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）のように、特別な装置は不要です。
■ 特にESBL産生大腸菌において、PFGEに近い識別能を有しています。
キットの構成（30回分）
個別名称

操作手順
容量試薬Ａ

AptaTaq DNA Master（5×Conc.）＊1240µL ×1本

試薬Ｂ

PCRサプリメント

240µL ×1本

試薬Ｃ

プライマーミックスα120µL ×1本

試薬Ｄ

プライマーミックスβ120µL ×1本

試薬Ｅ

ポジティブコントロール

240µL ×1本

試薬Ｆ

6× ローディングバッファー

240µL ×1本

*1 AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。

大腸菌をDNA抽出＊2を行い単離する（培養） テンプレートDNAを調製

2種類のマルチプレックスPCR

アガロースゲルバンドパターンの電気泳動（別途準備）
読み取り

POT値の算出

各検体でのPOT値の比較解析*2 シカジーニアス® DNA抽出試薬は別売です。

解析例
Reaction mixture 1MP

1Reaction mixture 2MP122334455676788P

表1 検出ORFの種類（ターゲット領域）とPCR増幅産物サイズ

bp
652
511
415363
307
253
222
178
146
123
98
80

P

Reaction
mixture 1652527
436
361311
250
219
17915412210279

図１

電気泳動パターンの実例
M︓ 50 bp ラダーマーカー
P ︓ ポジティブコントロール
1 ︓ ATCC 8739
2 ︓ATCC 11775
3 ︓ ATCC 25922
4 ︓ATCC 27166
5 ︓ ATCC 35218
6 ︓ATCC BAA-2340 (KPC)
7 ︓ ATCC BAA-2469 (NDM-1)
8 ︓ ATCC 35150 (O-157)

Reaction
mixture 2

POT No.

増幅サイズ（bp）

POT 係数PCR PCPOT 1-1
POT 1-2
POT 1-3
POT 1-4
POT 1-5
POT 1-6
POT 2-1
POT 2-2
POT 2-3
POT 2-4
POT 2-5
PCR PCPOT 2-6
POT 2-7
POT 2-8
POT 3-1
POT 3-2
POT 3-3
POT 3-4
POT 3-5
POT 3-6
POT 3-7
POT 3-8

652
511
415
363
307
253
222
178
146
123
98
80
652
527
436
361
311
250
219
179
154
122
102
79

32
16
842
1128
64
32
16
842
1128
64
32
16
842
1

ターゲット領域

E. coli Positive control
Genomic Islet-1
Genomic Islet-2
Genomic Islet-3
Genomic Islet-4
Genomic Islet-5
Genomic Islet-6
bla CTX-M-2
Genomic Island-1
Genomic Island-2
Genomic Island-3
Genomic Island-4
E. coli Positive control
Genomic Islet-7
Genomic Island-5
bla CTX-M-1
Genomic Island-6
Genomic Island-7
Genomic Islet-8
Genomic Island-8
Genomic Island-9
Genomic Islet-9
Genomic Island-10
bla CTX-M-9①2 つのマルチプレックス PCR の電気泳動結果（図１）からバンドパターン（表１）を読み取ります。
②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT 値解析用の計算シートに二進法で入力し、３つのカテゴリーの POT 値を算出します。
Ⅰ PCR PC が陽性の場合、その検体は大腸菌であることが確認できます。
Ⅱ ESBL 産生大腸菌で多く分離される ST131 株は、POT1 の値が 49 になります。
Ⅲ POT２の値が奇数であれば CTX-M-1 group、128 以上であれば CTX-M-2 group、POT３の値が奇数であれば CTX-M-9 group の各 ESBL 遺伝子を保有しています。
Ⅳ 検体間の POT 値を比較することで、E. coli の菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。
Ⅴ 集団感染から得られた菌体は POT 1 ～ 3 の POT 値が全て同一になります。

解析結果
カテゴリー

POT1
POT2
POT3

図1におけるサンプル番号180021716632002521962441004649634

7494348263232● POT値解析用の計算シートは弊社製品ホームページに掲載しております。

製品情報
製品名

包装保存

希望価格（円）

製品番号

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用）

30回分

冷凍（-25～-20 ℃）

44,00008362-97

シカジーニアス® DNA抽出試薬

120回分

冷蔵（2 ℃～8 ℃）

24,00008178-96

その他POTキットシリーズ製品名シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）

包装 希望価格（円） 製品番号

製品名

包装 希望価格（円） 製品番号

120回分

87,00008180-96

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（C. ディフィシル用） 30回分

47,50008106-97

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（E. クロアカ complex用） 30回分

47,50008376-97

30回分

40,00008180-97

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（緑膿菌用） 50回分

67,00008187-96

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（アシネトバクター属菌用） 30回分

44,00008062-96★上記の他に必要な機材などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。
●本キットは愛知県と中部大学から特許許諾を得て、製造販売しております。他メーカーの商品に関するライセンスについては、各メーカーにご確認ください。

● 本記載の製品は､試薬 ( 試験､研究用として用いる化学薬品 ) としての用途にご利用ください｡ ● 本記載価格に､消費税等は含まれておりません｡● 本記載の製品情報は予告なく変更する場合があります。 最新情報は､弊社ホームページ｢Cica-Web｣をご確認ください。

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東京都中央区日本橋室町2丁目2番1号

TEL：03-6214-1090
HP：https://www.kanto.co.jp

BGa-14(202303)