4.0

実験プロトコールが動画で解る！

※詳細はp.2をご参照ください。

目次

核酸電気泳動核酸の電気泳動とは････････････････････････････････････････････････････････ 6
アガロースゲルとポリアクリルアミドゲルの比較･ ･･･････････････････････････････････････････････････ 6
TAE と TBE･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 6
一本鎖 DNA および RNA、環状 DNA の移動度への影響････････････････････････････････････････････････ 6

アガロースゲルによる泳動･･････････････････････････････････････････････････ 7

アガロースゲルの濃度と分画範囲･ ･････････････････････････････････････････････････････････････････ 7
非変性アガロースゲル･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 8実験プロトコール･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 8
実施例 アガロースゲルにおける核酸と色素の泳動･ ･････････････････････････････････････････････ 11
変性アガロースゲル･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 11
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 11
実施例 1 変性アガロースゲルにおける iPS および心筋細胞抽出 RNA の分離････････････････････････ 13
実施例 2 サンプル変性方法と染色性･･･････････････････････････････････････････････････････････ 13

ポリアクリルアミドゲルによる泳動･････････････････････････････････････････ 14
ポリアクリルアミドゲルの濃度と分画範囲 ･････････････････････････････････････････････････････････ 14
非変性ポリアクリルアミドゲル･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 14
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 14
実施例 ポリアクリルアミドゲルにおける DNA ラダーの分離･････････････････････････････････････ 16
変性ポリアクリルアミドゲル･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････ 17
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 17
実施例 変性ポリアクリルアミドゲルによる RNA の分離･ ････････････････････････････････････････ 19

Bullet PAGE One Precast Gel による高速核酸泳動･ ････････････････････････････ 20
Bullet PAGE One Precast Gel の濃度と分画範囲･･････････････････････････････････････････････････････ 20
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 20
実施例 Bullet PAGE One Precast Gel およびアガロースゲルの核酸電気泳動比較･････････････････････ 22

ゲルの染色･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 23
核酸検出方法の比較･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 23
染色方法の比較･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 23
Ethidium Bromide による染色･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 23
実験プロトコール（ポストステイン） ･ ･･･････････････････････････････････････････････････････ 23
実験プロトコール（プレステイン）･･････････････････････････････････････････････････････････････ 24
実施例 プレステインおよびポストステインの泳動への影響･ ･････････････････････････････････････ 25
Dual Green Nucleic Acid Stain による染色･ ･････････････････････････････････････････････････････････ 26
実験プロトコール（ポストステイン） ･ ･･･････････････････････････････････････････････････････ 26
実験プロトコール（プレステイン）･･････････････････････････････････････････････････････････････ 26
実施例 1 プレステインおよびポストステインの泳動への影響･････････････････････････････････････ 28
実施例 2 アガロースゲルにおける他社製品との比較･････････････････････････････････････････････ 29
GelRed、GelGreen Nucleic Acid Gel Stain による染色･ ･･･････････････････････････････････････････････ 30
実験プロトコール（ポストステイン）････････････････････････････････････････････････････････････ 30
実験プロトコール（プレステイン）･･････････････････････････････････････････････････････････････ 30
実施例 Ethidium Bromide もしくは他社製品との感度比較･ ･･････････････････････････････････････ 31
Sil-Best Stain-Neo による染色･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 32
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 32
実施例 Ethidium Bromide との感度比較･ ･･････････････････････････････････････････････････････ 33

2目次

核酸電気泳動トラブルシューティング･･･････････････････････････････････････････････････ 34
1. バンドがスメアになる / ぼやける･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 35
2. バンドの分離が悪い / おかしい･････････････････････････････････････････････････････････････････ 37
3. シグナルが検出されない / 弱い･････････････････････････････････････････････････････････････････ 38
4. 染色像にムラがある･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 40
5. アプライでサンプルが沈まない･････････････････････････････････････････････････････････････････ 41
6. アプライ時、サンプルがウェルの裏側に流れていく･･･････････････････････････････････････････････ 41
7. 電気泳動中の異常な発熱･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 42

Appendix･････････････････････････････････････････････････････････････････ 43

アガロース ラインアップ･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 43
緩衝液の調製方法･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 44
DNA Ladder One シリーズ････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 48
ヌクレアーゼ / 核酸除去試薬 RNase Quiet･････････････････････････････････････････････････････････ 49
使用方法･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 49
確認試験 1 RNase 汚染カバーガラスにおける RNase 除去効果････････････････････････････････････ 49
確認試験 2 RNase Quiet の RNase および DNase 除去効果････････････････････････････････････････ 49
Dispotray･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 50
Dispotray の製品比較･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 50
使用方法･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 50

3目次

タンパク質電気泳動

タンパク質の電気泳動とは･････････････････････････････････････････････････ 51
タンパク質電気泳動の種類･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 51
タンパク質電気泳動後の実験･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････ 51

SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）････････････････････････････････････ 52
タンパク質サンプルの調製･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 52
ゲル濃度と分離サイズ･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 52
濃縮ゲルと分離ゲル･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 52
グラジエントゲル･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 52
Laemmli 泳動法、および WIDE RANGE Gel と Rapid Running Buffer････････････････････････････････････ 53
Laemmli 泳動法･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 53･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 53
実験プロトコールWIDE RANGE Gel 使用の場合･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 58
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 58
実施例 WIDE RANGE Gel を用いた分析例･･･････････････････････････････････････････････････････ 59
Rapid Running Buffer 使用の場合･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 60
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 60
実施例 Rapid Running Buffer による泳動後の転写･･･････････････････････････････････････････････ 61

SDS-PAGE（Tris-Tricine 泳動法～低分子分離法～）･･････････････････････････････ 62
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 62
実施例 Tris-Tricine 泳動法による分離例････････････････････････････････････････････････････････ 65

SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動）････････････････････････････････ 66
Bullet PAGE One と Extra PAGE One････････････････････････････････････････････････････････････････ 66
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 66
実施例 1 他社製品との比較･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 68
実施例 2 Bullet PAGE One の使用例･ ･･････････････････････････････････････････････････････････ 70
実施例 3 Extra PAGE One の使用例････････････････････････････････････････････････････････････ 72

二次元電気泳動･･･････････････････････････････････････････････････････････ 73
二次元電気泳動の流れ･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 73
等電点電気泳動とは･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 73
プレキャスト IPG ゲル･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 73
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 73
実施例 1 WIDE RANGE Gel を使用した二次元電気泳動･･･････････････････････････････････････････ 75
実施例 2 Rapid Running Buffer を使用した二次元電気泳動･･･････････････････････････････････････ 75

ゲルの染色･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 76
ゲル染色方法の比較･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 76
CBB 染色･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 76
CBB 染色液の比較･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 77
Bullet CBB Stain One
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 78
実施例 Bullet CBB Stain One を用いた植物タンパク質の検出･ ････････････････････････････････････ 78
CBB Stain One Super
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 79
実施例 他社製品との比較･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 80
銀染色･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 81
Sil-Best Stain シリーズの比較･ ･････････････････････････････････････････････････････････････････ 81
Sil-Best Stain One
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 82
実施例 1 他社製品との比較･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 83
実施例 2 二次元電気泳動への適用･････････････････････････････････････････････････････････････ 84
Sil-Best Stain-Neo
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 84
実施例 Sil-Best Stain-Neo と CBB 染色の比較･ ･･････････････････････････････････････････････････ 84

4

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目次タンパク質電気泳動

蛍光染色･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 85
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 85
実施例 1 Lumitein の検出限界････････････････････････････････････････････････････････････････ 86
実施例 2 Lumitein と CBB 染色法の感度比較････････････････････････････････････････････････････ 86
ネガティブ染色･ ････････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 87
ネガティブ染色と他染色法の比較･ ･････････････････････････････････････････････････････････････ 87
実験プロトコール･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 87
実施例 1 ネガティブ染色後のウェスタンブロッティング･････････････････････････････････････････ 90
実施例 2 ネガティブ染色後の MS 解析･････････････････････････････････････････････････････････ 90

トラブルシューティング･･･････････････････････････････････････････････････ 91

1. ゲル全体が湾曲する･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 92
2. レーンがゆがむ / 幅が不均一･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 93
3. レーンに筋が入る････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 94
4. バンドの形がおかしい････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 96
5. バンドがスメアになる / ぼやける･･････････････････････････････････････････････････････････････ 97
6. バンドの分離が悪い / おかしい････････････････････････････････････････････････････････････････ 98
7. シグナルが検出されない / 弱い････････････････････････････････････････････････････････････････ 99
8. バックグラウンドが高い･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 101
9. ゲルが固まらない / 固まるのが遅い･･･････････････････････････････････････････････････････････ 102
10. ゲルにアリの巣のような気泡が入る･･･････････････････････････････････････････････････････････ 102
11. 通電ができない･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 103
12. いつもより泳動時間が速い / 遅い･････････････････････････････････････････････････････････････ 103
13. 電気泳動中の異常な発熱･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 104

Appendix････････････････････････････････････････････････････････････････105
電気泳動パターン･ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 105
自家調製ゲル･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 105
プレキャストゲル･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 106
緩衝液の調製方法･ ･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 107
タンパク質マーカーについて･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 112
タンパク質マーカーの比較･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 112
サンプルの濃縮・妨害物質除去試薬 PAGE Clean Up Kit････････････････････････････････････････････ 113
実験プロトコール･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 113
実施例 1 タンパク質濃縮（SDS-PAGE）･････････････････････････････････････････････････････････ 113
実施例 2 分析妨害物質の除去（SDS-PAGE）･････････････････････････････････････････････････････ 114
実施例 3 二次元電気泳動における実施例･･････････････････････････････････････････････････････ 114
His-tag 融合タンパク質用染色液 His-Detect In-Gel Stain･ ･･････････････････････････････････････････ 115
実験プロトコール･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 115
実施例 His-Detect In-Gel Stain とウェスタンブロッティングの比較･･･････････････････････････････ 115
銀染色時の銀除去キット Sil-Best Destain Kit･･････････････････････････････････････････････････････ 116
実験プロトコール（銀染色後のバンドからの銀の除去）･ ･･････････････････････････････････････････ 116
実施例 Sil-Best Destain Kit を用いた MS 適用例･ ･･･････････････････････････････････････････････ 116
実験プロトコール（過剰な染色像からの最適化）･ ････････････････････････････････････････････････ 117
実施例 過剰な銀染色改善例･ ････････････････････････････････････････････････････････････････ 117
タンパク質抽出試薬 RIPA Buffer･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････ 118
RIPA Buffer の製品比較･･･････････････････････････････････････････････････････････････････････ 118
実施例 1 RIPA Buffer を用いて抽出した細胞懸濁液のウェスタンブロッティング･･･････････････････ 118
実施例 2 RIPA Buffer(10x) を用いて抽出したタンパク質溶液のウェスタンブロッティング･･･････････ 119
実施例 3 RIPA Buffer(10x) を用いて抽出したタンパク質溶液の免疫沈降･･･････････････････････････ 119
プロテインアッセイシリーズ･ ･･･････････････････････････････････････････････････････････････････ 120
プロテインアッセイシリーズの特徴比較･ ･･････････････････････････････････････････････････････ 120
プロテインアッセイセレクションガイド･ ･･････････････････････････････････････････････････････ 121
ゲルの保存 BioDesignGelWrap を用いたゲルの乾燥・保存･････････････････････････････････････････ 122
実験プロトコール･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 122ゲルの保存 アクリルアミドゲル割れ防止液を用いたゲルの保存･ ･･･････････････････････････････････ 123
実験プロトコール･ ･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 123

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5

核酸の電気泳動とは核酸電気泳動核酸の電気泳動とは、核酸を鎖長により分離させる手法です。アガロースゲルやポリアクリルアミドゲルといった網目構造を形成した支持体中で DNA や RNA を電気泳動させることにより、鎖長で分離します。

アガロースゲルとポリアクリルアミドゲルの比較
アガロースゲル由来

ポリアクリルアミドゲル

寒天からアガロペクチンを除去して精製された中性多糖

アクリルアミドとビスアクリルアミドの架橋ポリマー

ゲルの作製方法 溶解と凝固。可逆的化学反応（重合反応）。不可逆的

危険性

毒性はない

重合前のアクリルアミドは毒性が高い

使用濃度

0.5 ～ 4.5%

3.5 ～ 20%

主な分離範囲中分子～高分子（50 bp ～）低分子（6 bp ～ 2,000 bp 程度）

アガロースの基本構造

ポリアクリルアミドゲルの基本構造, '- メチレンビス
アクリルアミド アクリルアミド

アクリルアミド

CH2

CH2OH
O

OH

4

CH2

OH

CH2 CH

C O

O
β O

CH

O

NH2

n

α

CH2

CH

C O

C O

NH

NH2

n

CH2

3

NH

OH
D-Galactose

On3,6-Anhydro-L-Galactose

C O
CH2

CH

CH2 CH

C O
NH2

CH2

CH
C O

n

NH2

n

TAE と TBE
核酸の電気泳動には、TAE（Tris-Acetate-EDTA）緩衝液および TBE（Tris-Borate-EDTA）緩衝液が、ゲル緩衝液や泳動用緩衝液として使用されます。TAE 緩衝液は長い核酸の分離に、TBE 緩衝液は短い核酸の分離に適しています。

一本鎖 DNA および RNA、環状 DNA の移動度への影響
一本鎖 DNA や RNA は立体構造、塩基の組成などが移動度へ影響します。これらファクターをキャンセルし分子の鎖長で分離するため、変性ゲルが使用されます。
また、プラスミドの場合、同じ DNA 配列でも、閉環状（Closed circular; formⅠ）、開環状（Open circular; formⅡ）、
直鎖状（Linear; formⅢ）
で移動度が異なります。

6

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アガロースゲルによる泳動

核酸電気泳動アガロースゲルによる泳動は、支持体であるアガロースの毒性が低く、そのゲル作製過程も溶解 / 凝固と簡便であるため、核酸電気泳動において主流となっています。
一本鎖 DNA や RNA を分離する場合は、ホルマリンを含む変性ゲルが使用されます。

アガロースゲルの濃度と分画範囲
弊社より販売の各種アガロースについて推奨濃度と分画範囲を示します。アガロース製品のラインアップについて
は、p.43 をご参照ください。
製品名

TAE

TBE

Agarose-LM PlaqueAgarose-LM Sieve

Agarose-RE
Agarose（≧1 kbp）（微粉末）
Agarose（≧1 kbp）

Agarose（150 〜 1,500 bp）

Agarose（50 〜 800 bp）

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7

アガロースゲルによる泳動

核酸電気泳動非変性アガロースゲル
実験プロトコール
1. アガロースゲルの作製
簡便なゲル作製法として、電子レンジを利用した方法があります。本プロトコー
ルでは、電子レンジを用いた、1% アガロースゲル（TAE 1 ×）100 mL 分の作製方法を紹介します。
① 使用する緩衝液の 2 ～ 6 倍容量のビーカーにスターラーバーを入れます。
② ビーカーにアガロース 1 g を量り取り、TAE 緩衝液（1 ×）100 mL を注ぎます。
③ プラスチック製ラップフィルムでビーカーの上部を覆います。針などで蒸気抜きの穴を 10 カ所程度開けます。

④ てんびんでスターラーバー、アガロース、緩衝液の入ったビーカーの総重量を測定し記録します。

▶ アガロース ラインアップ→ p.43 参照
トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液
(10 倍濃縮 )（#35430-61）

トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液
(50 倍濃縮 )（#32666-81）

トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(10倍濃縮 )（#35440-31）⑤ ビーカーをスターラーにのせ、アガロース粉末が緩衝液内で、できるだけ均等に懸濁するように攪拌します。

⑥ 電子レンジ（定格高周波出力：400 ～ 500 W）で、50 ～ 55 秒程度温めます。
⑦ 断熱性の手袋などを着用して、電子レンジからビーカーを出し、スターラー
で 3 ～ 5 分程度攪拌します。

トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(5倍濃縮 )（#35432-41）▶ TAE 緩衝液（10 ×）の調製方法→ p.44 参照▶ 電子レンジによる加温時は吹きこぼれにご注意ください。また、加温時間は使用アガロースの種
類、濃度、容量、電子レンジの機種により異なります。液の様子をよく見て判断してください。
▶ 加温後のビーカーは熱くなっています。火傷にご注意ください。

⑧ 再度電子レンジで、15 ～ 20 秒程度温めます。
⑨ ⑦の操作と同様にして、3 ～ 5 分程度攪拌します。
⑩ 緩衝液中のアガロースが完全に溶解するまで、上記⑧と⑨の操作を繰り返します。

8▶ 左記の条件で溶解しない場合
は、加温時間や攪拌回数を増やしてください。

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アガロースゲルによる泳動⑪ プラスチック製ラップフィルムを取り除いて、80 ～ 90℃ の温水で、加温により蒸発した水分を、④の操作で測定した重量まで補います。

⑫ さらに、プラスチック製ラップフィルムでビーカーの上部を覆い、約 65℃になるまで攪拌します。
⑬ ゲル作製用フレームに溶解したアガロースを流し込み、コームをセットします（ゲルの厚さが 3 ～ 4 mm 程度となるように流し込むアガロース量を調節
してください）。
⑭ アガロースが固化するまで、冷やします。

核酸電気泳動▶ 核酸染色液含有のアガロースゲ
ルを作製する場合は、アガロースが溶解し均一になった溶液に核酸染色液を添加してください。
・Ethidium Bromide→ p.24 参照
・Dual Green Nucleic Acid
Stain → p.26 参照
・GelRed、GelGreen→ p.30 参照▶ 溶解したアガロースを熱いままゲル作製用フレームに流し込むと、ゲル作製用フレームがゆがむ可能性がありますのでご注意ください。
▶ 低融点アガロースを溶解する場
合、細かな気泡がゲル作製を妨害することがあります。超音波洗浄機で 2 ～ 3 分処理すること
で、気泡は液面に集まります。
気泡をスパーテルなどで除去してから、ゲル作製用フレームに
アガロースを注いでください。

アガロースゲル作製方法

Loading Dye Brilliant Color(6x)（#11943-91）

2. 泳動用サンプルの調製
核酸サンプルと Loading Dye Brilliant Color(6x) を容量比 5：1 で混合します。
3. 泳動用緩衝液（TAE 1 ×）の作製
TAE 緩衝液（10 ×）と精製水を容量比 1：9 で混合します。
4. 泳動① 作製したアガロースゲルからコームを静かに抜き取り、ゲル作製用フレーム
からアガロースゲルをトレイごと取り出します。

▶ Loading Dye（6 ×）の調製方法→ p.45 参照▶ 泳動用緩衝液はアガロース作製に使用した緩衝液と同一のもの
をご使用ください。
▶ フレームへ少量の精製水もしく
は泳動用緩衝液を添加しコーム
部分をぬらしておくと、スムー
ズに抜くことができます。

② アガロースゲル用電気泳動槽へセットし、泳動用緩衝液をアガロースゲル上面の 1 ～ 3 mm 上まで加えます。

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9アガロースゲルによる泳動

核酸電気泳動③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）

DNA Ladder One(Broad Range)(Ready To Use)（#08362-85）④ 50 もしくは 100 V の電圧で、Loading Dye に含有される色素を目安に泳動してください。
表. アガロースゲルにおける Loading Dye Brilliant Color に含有される色素の移動度と DNA サイズの目安
TAE 緩衝液（1 ×）
アガロース
濃度

TBE 緩衝液（1 ×）

BPB*
（青紫色）
赤色バンド
バンド

アガロース
濃度

BPB*
（青紫色）
赤色バンド
バンド

4%

50 bp

< 25 bp

4%

25 bp< 25 bp2%

250 bp< 50 bp2%

150 bp< 50 bp1%

650 bp< 100 bp

1%

500 bp< 100 bp0.7%

1,200 bp< 100 bp

* Bromophenol Blue

1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)（#08232-85）▶ DNA Ladder One シリーズの分離パターン → p.48 参照▶ 核酸および Loading Dye に含有される色素の移動度はゲルの濃度や緩衝液の種類により異なります。
▶ DNA Ladder One シリーズにはBPB（青紫色）と Orange G（黄色）が含有されています。

アガロースゲル泳動方法

10

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アガロースゲルによる泳動

核酸電気泳動実施例 アガロースゲルにおける核酸と色素の泳動
1%（TAE 1 ×）および 2%（TBE 1 ×）アガロースゲルにて DNA サンプルを泳動、検出しました。レーン①は DNA Ladder One(Broad Range) にプレミックスされている BPB（青紫色）、Orange G（黄色）が目視にて確認されます。一方、レーン②～⑤は、Loading Dye Brilliant Color に含有される BPB（青紫色）および赤色色
素が目視にて確認されます。Loading Dye Brilliant Color に含有される赤色色素
は Orange G よりも視認しやすく、核酸の泳動先端を確認することができます。
1% アガロース（TAE 1 ×）

2% アガロース（TBE 1 ×）
EtBr
（UV 励起）① ② ③ ④ ⑤EtBr（UV 励起）
目視① ② ③ ④ ① ② ③ ④

目視① ② ③ ④ ⑤

3 kb→
1 kb→

3 kb→
1 kb→
0.5 kb→0.5 kb→←BPB←Orange G←赤色色素＜実験条件＞
サンプル：① DNA Ladder One(Broad Range)(Ready To Use)（#08362-85）5 µL② λ/Hind III digest（東洋紡 #DNA-010）0.2 µg③ 1 kb DNA Ladder（ ニ ュ ー・ イ ン グ ラ ン ド・ バ イ オ ラ ボ② ～ ⑤ は Loading Dye Brilliant#N3232S）0.05 µg
Color(6x)（#11943-91）を用いて④ 100bp DNA Ladder（東洋紡 #DNA-035）0.1 µg
サンプル調製⑤ 25 bp DNA Ladder（GIBCO #10597-011）0.5 µg
ゲル：1%（TAE 1 ×）もしくは 2%（TBE 1 ×）アガロースゲル（アガロースは #01163 を使用）
泳動用緩衝液：トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液（#35430）、トリス - ほう酸 -EDTA 緩衝原液（#35440）をそれぞれ 1 ×に調製
泳動：100 V染色：Ethidium Bromide

変性アガロースゲル
実験プロトコール
RNA などの一本鎖核酸は分子内において水素結合による二次構造をとる場合が多くあります。そのため、このような一本鎖核酸を鎖長により分離する場合は、ホルマリンを含有した変性アガロースゲルが使用されます。
1. アガロースゲルの作製
本プロトコールでは、2.2 M ホルムアルデヒド含有 1.5% アガロースゲル 100 mL
分の作製方法を紹介します。本ゲルにより0.5 ～ 8 k bases RNA の分離が可能です。
① 使用する緩衝液の 2 ～ 6 倍容量のビーカーにスターラーバーを入れます。
② ビーカーにアガロース 1.5 g を量り取り、精製水 72 mL を注ぎます。
③ p.8「 アガロースゲルによる泳動 非変性アガロース 実験プロトコール
1. アガロースゲルの作製③～⑪」を参考に、アガロースを精製水へ加温溶解させます。
④ 溶解したアガロース溶液に MOPS 緩衝液（10 ×）10 mL を注ぎ、混合します。
⑤ ④の溶液が 55℃ 程度まで下がったら、ホルムアルデヒド液 18 mL を注ぎ、混合します。
⑥ ゲル作製用フレームに⑤を流し込み、コームをセットします。
⑦ アガロースが固化するまで冷やします。

▶ アガロース ラインアップ→ p.43 参照
MOPS 緩衝原液 (10 倍濃縮 )(pH 7.0), DEPC 処理済（#23442-81）▶ MOPS 緩 衝 液（10 × ）の 調 製 方
法 → p.45 参照▶ ホルムアルデヒド液は揮発性が高く、吸入すると危険です。本
操作は局所排気フード内で実施
してください。
ホルムアルデヒド液（#16223-55）

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11アガロースゲルによる泳動

核酸電気泳動2. 泳動用サンプルの調製① 核酸サンプルと変性ゲル Loading Dye を容量比 1：1 以上で混合します。
② 55 ～ 85℃ で 3 ～ 60 分加温後、氷中にて冷却します。

▶ 変性ゲル Loading Dye の調製方
法 → p.46 参照

3. 泳動用緩衝液（MOPS 緩衝液 1 ×）の作製▶ 本プロトコールではホルムアミドのみでサンプルを変性させる
方法を紹介しています。より強く変性させる場合は、サンプルにさらにホルムアルデヒドを添加してください。ただし、ホルムアルデヒドでサンプルを変性させた場合、核酸の染色性が著し く 低 下 し ま す。p.13「 実 施
例 2 サンプル変性方法と染色性」をご参照ください。

MOPS 緩衝液（10 ×）と精製水を容量比 1：9 で混合します。
4. 泳動① 作製したアガロースゲルからコームを静かに抜き取り、ゲル作製用フレーム
からアガロースゲルをトレイごと取り出します。

MOPS 緩衝原液 (10 倍濃縮 )(pH 7.0), DEPC 処理済（#23442-81）② アガロースゲル用電気泳動槽へセットし、泳動用緩衝液をアガロースゲル上面の 1 ～ 3 mm 上まで加えます。

▶ MOPS 緩 衝 液（10 × ）の 調 製 方
法 → p.45 参照▶ フレームへ少量の精製水もしく
は泳動用緩衝液を添加しコーム
部分をぬらしておくと、スムー
ズに抜くことができます。

③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

④ 50 V の電圧で、サンプルに含まれる色素を目安に泳動します。

▶ 電圧を上げると、バンドがゆがんだり、ゲル内にポツポツとした気泡が発生しやすくなったりします。
▶ 泳動時間や色素の移動度について は、p.13「 実 施 例 1 変 性 ア
ガロースゲルにおける iPS および心筋細胞抽出 RNA の分離」をご参照ください。

12

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アガロースゲルによる泳動

核酸電気泳動実施例 1 変性アガロースゲルにおける iPS および心筋細胞抽出 RNA の分離
変性アガロースを用いて、RNA ラダーと iPS 細胞および心筋細胞抽出 RNA の分離を行い、Dual Green Nucleic Acid Stain で検出を行いました。
(bases)①②③Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）

9,000
7,000
5,000

←XC

3,000
2,000

変性ゲルLoading Dye
含有色素の移動距離

1,000
500

←BPB

＜実験条件＞
サンプル：① ssRNA Ladder（ニュー・イングランド・バイオラボ #N0362S）2 µL、② iPS 細胞抽出 RNA 0.4 µg、③ 心筋細胞抽出 RNA 0.4 µg
ゲル：ホルムアルデヒド含有 1.5% アガロースゲル（MOPS 1 ×）
（アガロースは #01163 を使用）
泳動用緩衝液：MOPS 緩衝原液 (10 倍濃縮 )(pH 7.0), DEPC 処理済（#23442-81）を 1 ×に調製
泳動
：50 V BPB がゲルの 3/4 程度になるまで 80 分泳動
染色：Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）10,000 倍希釈 30 分振とう後、精製水にて 30 分脱色
検出：ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）
UV 励起 SYBR® Green モード（UV 透過、590 / 110 nm スタンダードフィルターで検出）
SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

実施例 2 サンプル変性方法と染色性変性アガロースを用いて RNA ラダーと iPS 細胞および心筋細胞抽出 RNA の分離を行い、SYBR® Green II を用いて検出を行いました。ホルムアルデヒドとホルムアミドで変性させたサンプルは、変性ゲル Loading Dye（ホルムアミド変性）
で変性させたサンプルと比べ移動度が遅くなり、染色性の低下も認められました。
ホルムアミド変性（変性ゲル Loading Dye）
(bases)
9,000
7,000
5,000
3,000

①

②

③

ホルムアルデヒド＋ホルムアミド変性(bases)

①

②

③

9,000
7,000
5,000
3,000
2,000

2,000
1,000
1,000

500

500

＜実験条件＞
サンプル：① ssRNA Ladder（ニュー・イングランド・バイオラボ #N0362S）2 µL、② iPS 細胞抽出 RNA 0.4 µg、③ 心筋細胞抽出 RNA 0.4 µg
ゲル：ホルムアルデヒド含有 1.5% アガロースゲル（MOPS 1 ×）
（アガロースは #01163 を使用）
泳動用緩衝液：MOPS 緩衝原液 (10 倍濃縮 )(pH 7.0), DEPC 処理済（#23442-81）を 1 ×に調製
泳動
：50 V BPB がゲルの 3/4 程度になるまで 80 分泳動
染色：SYBR® Green II（サーモフィッシャーサイエンティフィック #S32717）10,000 倍希釈 30 分振とう
検出：Blue/Green LED イルミネーター（日本ジェネティクス #LB-16BG）にて励起
SYBR® Photographic Filter（サーモフィッシャーサイエンティフィック #S7569）を用いて検出
デジタルカメラ（RICOH #CX4）にて撮影
SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

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13

ポリアクリルアミドゲルによる泳動

核酸電気泳動ポリアクリルアミドゲルによる泳動はアガロースゲルに比べ鎖長が短い核酸の分離に向いています。一本鎖 DNAや RNA を分離する場合は、尿素などを含む変性ゲルが使用されます。

ポリアクリルアミドゲルの濃度と分画範囲 1）p.19 参照
ポリアクリルアミドゲル濃度（（w/v）%）

分離可能な二本鎖 DNA の長さの範囲（bp）

3.5

1,000 ～ 2,000

5.0

80 ～ 500

8.0

60 ～ 400

12.0

40 ～ 200

20.0

6 ～ 100

非変性ポリアクリルアミドゲル
実験プロトコール本プロトコールでは、ポリアクリルアミドゲル（TBE 1 ×）20 mL 分の作製方法を紹介します。
1. ポリアクリルアミドゲルの作製① ゲルフレームを組み立てます。

② 試薬を、下表の割合で混合します。
表. 20 mL のゲルを作製する場合の各試薬の容量（単位：mL）
ポリアクリルアミドゲル濃度（%）

3.5

5

8

12

20

40(w/v)%- アクリルアミド/ ビス混合液(19:1)

1.75

2.5

4

6

10

トリス - ほう酸 -EDTA 緩衝原液（10 倍
濃縮）

2

2

2

2

2

10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニ
ウム溶液（10% APS）

0.12

0.12

0.12

0.12

0.12

精製水

16.12

15.37

13.87

11.87

7.87

③ 吸引できるデシケーターに入れ、5 ～ 10 分減圧し、脱気します。この操作が十分でないと、ゲルの固化に時間を要したり、ウェルが形成しにくかった
りする場合があります（アクリルアミドの重合を妨害する溶存酸素を除去します）。

40(w/v)%- アクリルアミド / ビス
混合液 (19:1)（#06140-45）▶ 40％ アクリルアミド / ビス溶液
（19:1）の調製方法 → p.46 参照
30(w/v)%- アクリルアミド / ビス
混合液 (19:1)（#07175-75）

トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(10倍濃縮 )（#35440-31）▶ TBE 緩衝液（5 ×）の調製方法→ p.44 参照
10(w/v)%-ペルオキソ二硫酸
アンモニウム溶液（#02634-34）▶ 10% APS の調製方法→ p.108 参照

14

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ポリアクリルアミドゲルによる泳動④ N,N,N',N'- テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）を添加し、攪拌します。
攪拌後は、速やかに⑤へ進んでください。

核酸電気泳動▶ TEMED を添加後は、アクリル
アミドのゲル化が加速します。
できるだけ早くゲルフレームに流し込んでください。
N,N,N',N'-テトラメチルエチレン
ジアミン（#33401-72）

表. TEMED 添加量
ゲル容量 20 mL

N,N,N',N' - テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）

12 µL⑤ ゲルフレームへ溶液を流し込みます。

▶ コームの先に気泡が入らないよ
うに斜めから挿入してください。
▶ 余った溶液がゲル化していることをご確認ください。

⑥ コームをガラスプレートの間に挿し込みます。

▶ Loading Dye（6 ×）の調製方法→ p.45 参照⑦ 1 ～ 2 時間程度、静置し固化させます。
2. 泳動用サンプルの調製
核酸サンプルと Loading Dye（6 ×）を容量比 5：1 で混合します。
3. 泳動用緩衝液（TBE 緩衝液（1 ×））の作製
TBE 緩衝液（10 ×）と精製水を容量比 1：9 で混合します。
4. 泳動① 作製したポリアクリルアミドゲルからコームを静かに抜き取り、クリップなどの付属品を外します。

▶ Loading Dye Brilliant Color(6x)もご使用いただけますが、本製品に含有される赤色色素はアガロースゲル泳動時とは異なった
挙 動 を 示します。p.16「 実 施 例
ポリアクリルアミドゲルにおけるDNA ラダーの分離」をご参照く
ださい。
▶ 泳動用緩衝液はポリアクリルア
ミドゲル作製に使用した緩衝液と同一のものをご使用ください。
トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(10倍濃縮 )（#35440-31）

トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(5倍濃縮 )（#35432-41）② ポリアクリルアミドゲル用電気泳動槽へセットし、泳動用緩衝液を加えます。

▶ TBE 緩衝液（5 ×）の調製方法→ p.44 参照▶ ゲルの下端に気泡が入らないようご注意ください。
▶ ウェルを洗浄し、未反応のアク
リルアミドを除去してください。

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15

ポリアクリルアミドゲルによる泳動③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

核酸電気泳動100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）

DNA Ladder One(Broad Range)(Ready To Use)（#08362-85）④ 100 ～ 200 V の電圧で、Loading Dye に含有される色素を目安に泳動します。
表. ポリアクリルアミドゲルにおける BPB* の移動度と DNA サイズの目安 1）p.19 参照
ポリアクリルアミドゲル濃度（（w/v）%）

BPB*（青紫色）バンド（bp）

3.5

100

5.0

65

8.0

45

12.0

20

20.0

12

* Bromophenol Blue

実施例 ポリアクリルアミドゲルにおける DNA ラダーの分離
5% ポリアクリルアミドゲルを用いて、DNA ラダーの分離を行い、Dual Green
Nucleic Acid Stain で検出を行いました。ポリアクリルアミドゲルは短い鎖長のDNA 分離に向いています。
核酸検出
(bp)

①

②

目視（色素移動度）
① ②

③

500→

赤色色素（Loading Dye←←XCBrilliant Color(6x) 含有）

1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)（#08232-85）▶ DNA Ladder One シリーズの分離パターン → p.48 参照▶ 核酸および Loading Dye に含有される色素の移動度はゲルの組
成、濃度および緩衝液の種類により異なります。鎖長が分かっているマーカーなどで色素と核酸の泳動目安をあらかじめ検討
してください。
▶ Loading Dye Brilliant Color(6x)に含有される赤色色素は、アガロースゲル泳動時とは異なった挙動を示します。
▶ Loading Dye Brilliant Color(6x)には BPB（ 青紫色）と赤色色素、
DNA Ladder One シリーズにはBPB（青紫色）と Orange G（黄色）が含有されています。
Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）

100→

←BPB

20→

←Orange G＜実験条件＞
サンプル：① 100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）3 µL② 20 bp DNA Ladder（タカラバイオ #3409A）3 µL③ TE 緩衝液と Loading Dye Brilliant Color(6x)（#11943-91）を容量比 5:1 で混合したサンプル 6 µL
ゲル
：5% ポリアクリルアミドゲル（TBE 1 ×）
泳動用緩衝液：トリス - ほう酸 -EDTA 緩衝原液（#35440）
を 1 ×に調製
泳動：100 V 定電圧 56 分
染色
：Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）10,000 倍希釈 15 分振とう
検出
：ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）
Blue LED 励起 Alexa Fluor® 488 モード（Blue 落射、532 / 28 nm フィルターで検出）
Alexa Fluor® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

16

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ポリアクリルアミドゲルによる泳動

核酸電気泳動変性ポリアクリルアミドゲル
実験プロトコール
RNA などの一本鎖核酸は分子内において水素結合による二次構造をとる場合が多くあります。そのため、このような一本鎖核酸を鎖長により分離する場合は、尿素を含有した変性ポリアクリルアミドゲルが使用されます。
1. ポリアクリルアミドゲルの作製
本プロトコールでは、8 M 尿素含有ポリアクリルアミドゲル（TBE 0.5 ×）20 mL分の作製方法を紹介します。
① ゲルフレームを組み立てます。

40(w/v)%- アクリルアミド / ビス
混合液 (19:1)（#06140-45）▶ 40％アクリルアミド / ビス溶 液（19:1）の調製方法 → p.46 参照
30(w/v)%- アクリルアミド / ビス
混合液 (19:1)（#07175-75）② 下表の割合で試薬を混合後、尿素 9.6 g を添加、溶解させます。その後、精製水を用いて 20 mL にします。
表. 20 mL のゲルを作製する場合の各試薬の容量（単位：mL）
ポリアクリルアミドゲル濃度（%）

3.5

5

8

12

20

40(w/v)%- アクリルアミド/ ビス混合液(19:1)

1.75

2.5

4

6

10

トリス - ほう酸 -EDTA 緩衝原液（10 倍
濃縮）

1

1

1

1

1

10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニ
ウム溶液（10% APS）

0.12

0.12

0.12

0.12

0.12

③ 吸引できるデシケーターに入れ、5 ～ 10 分減圧し、脱気します。この操作が十分でないと、ゲルの固化に時間を要したり、ウェルが形成しにくかった
りする場合があります（アクリルアミドの重合を妨害する溶存酸素を除去します）。

トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(10倍濃縮 )（#35440-31）▶ TBE 緩衝液（5 ×）の調製方法→ p.44 参照
10(w/v)%-ペルオキソ二硫酸
アンモニウム溶液（#02634-34）▶ 10% APS の調製方法→ p.108 参照
尿素（#35940-65）▶ 尿素を添加した場合、ゲル溶液
を 0.45 µm のフィルターで処理することをお薦めします。

④ N,N,N',N'- テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）を添加し、攪拌します。
攪拌後は、速やかに⑤へ進んでください。

▶ TEMED を添加後は、アクリル
アミドのゲル化が加速します。
できるだけ早くゲルフレームに流し込んでください。
N,N,N',N'-テトラメチルエチレン
ジアミン（#33401-72）

表. TEMED 添加量
ゲル容量 20 mL

N,N,N',N' - テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）

12 µL

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17

ポリアクリルアミドゲルによる泳動

核酸電気泳動⑤ ゲルフレームへ、溶液を流し込みます。
▶ コームの先に気泡が入らないよ
うに斜めから挿入してください。
▶ 余った溶液がゲル化していることをご確認ください。

⑥ コームをガラスプレートの間に挿し込みます。

▶ 尿素含有変性ゲルの場合は、ゲル作製後すぐにご使用ください。冷蔵保存などにより尿素が析出し、分離を阻害する場合があります。

⑦ 1 ～ 2 時間程度、静置し固化させます。
2. 泳動用サンプルの調製① 核酸サンプルと変性ゲル Loading Dye を容量比 1：1 以上で混合します。
② 55 ～ 85℃ で 3 ～ 60 分加温後、氷中にて冷却します。
3. 泳動用緩衝液（TBE 緩衝液（0.5 ×））の作製
TBE 緩衝液（10 ×）と精製水を容量比 1：19 で混合します。
4. 泳動① 作製したポリアクリルアミドゲルからコームを静かに抜き取り、クリップなどの付属品を外します。

▶ 変性ゲル Loading Dye の調製方
法 → p.46 参照▶ 尿素を用いた変性方法もあります。8 M となるように尿素をサンプルに添加し、左記のように加温後、氷冷します。
▶ 泳動用緩衝液はポリアクリルアミ
ドゲル作製に使用した緩衝液と同一のものをご使用ください。
トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(10倍濃縮 )（#35440-31）

トリス -ほう酸 -EDTA緩衝原液(5倍濃縮 )（#35432-41）② ポリアクリルアミドゲル用電気泳動槽へセットし、泳動用緩衝液を加えます。
③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

▶ TBE 緩衝液（5 ×）の調製方法→ p.44 参照▶ ゲルの下端に気泡が入らないようご注意ください。
▶ ウェルを洗浄し、未反応のアク
リルアミドや尿素を除去してください。

④ 100 ～ 200 V の電圧で、Loading Dye に含有される色素を目安に泳動します。

▶ 泳動時間や色素の移動度について は p.19「実施例 変性ポリア
クリルアミドゲルによる RNAの分離」をご参照ください。
▶ 核酸および Loading Dye に含有される色素の移動度はゲルの組
成、濃度および緩衝液の種類により異なります。鎖長が分かっているマーカーなどで色素と核酸の泳動目安をあらかじめ検討
してください。

18

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ポリアクリルアミドゲルによる泳動実施例 変性ポリアクリルアミドゲルによる RNA の分離
15% 変性および非変性ポリアクリルアミドゲルを用いて、RNA ラダーおよびMicro RNA（23 bases）の分離を行い、Dual Green Nucleic Acid Stain で検出を行いました。非変性ゲルでは本来の鎖長からずれて分離されている一方、変性ゲ
ルではほぼ本来の鎖長通りに分離されています。
変性 PAGE（15%）(bases)①②

核酸電気泳動Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）

PAGE（15%）(bases)

①

②

26→
22→
18→
26→
22→
18→

Orange G→←Orange G＜実験条件＞
サンプル：① 14-30 ssRNA Ladder Marker（タカラバイオ #3416）2.5 µL② Micro RNA（hsa-miR-145-5p）（合成オリゴ一本鎖 RNA 23 bases）25 pmol
ゲル
：変性および非変性 15% ポリアクリルアミドゲル（TBE 0.5 ×）
泳動用緩衝液：トリス - ほう酸 -EDTA 緩衝原液（#35440）
を 0.5 ×に調製
泳動：150 V 定電圧 変性 PAGE 80 分、PAGE 66 分
染色
：Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）10,000 倍希釈 15 分振とう
検出
：ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）
UV 励起 SYBR® Green モード（UV 透過、590 / 110 nm スタンダードフィルターで検出）
SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

参考文献
1）菅野純夫 , 菅野（水島）純子 . "DNA のアクリルアミドゲル電気泳動 ". 遺伝子工学の基礎技術 . 山本雅編 . 第 3 刷 ,
羊土社 , 1994, p. 110-114.

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19Bullet PAGE One Precast Gel による高速核酸泳動

核酸電気泳動Bullet PAGE One Precast Gel を用いることにより、高速に核酸電気泳動を実施することができます。

Bullet PAGE One Precast Gel の濃度と分画範囲
ゲルグラジエントゲル

均一ゲル

ゲル濃度

5 ～ 11％5 ～ 15％

6％

8％

製品番号
13 ウェル
17 ウェル

13077-04
13078-94

13079-84
13080-4413081-34
13082-24

13083-1413084-04

泳動時間12 分（400 V）(bp)

1,500→

染色像▶ Bullet PAGE One ラインアップ→ https://www.nacalai.co.jp/
products/entry/d004019.html#lineup 参照

500→

① ② ③

(bp)

① ② ③

1,500→

500→

(bp)

① ② ③

(bp)

① ② ③

1,500→
1,500→
500→
500→

100→
100→

100→
100→
20→

Loading Dye Brilliant Color(6x)（#11943-91）20→＜実験条件＞
サンプル：① 100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）2 µL② 20 bp DNA Ladder（タカラバイオ #3409A）2 µL*③ siRNA Ladder Marker（タカラバイオ #3430）2 µL** ②と③は取扱説明書の使用例に従って、6 × Loading Buffer と混合して使用しています。
泳動用緩衝液：泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 （#30340-91）)
を 1 ×に調製
染色：Ethidium Bromide

実験プロトコール
1. 泳動用サンプルの調製
核酸サンプルと Loading Dye Brilliant Color(6x) を容量比 5：1 で混合します。
2. 泳動用緩衝液（Tris-Glycine pH 8.3）の作製

▶ Loading Dye（6 ×）の調製方法→ p.45 参照
泳動用緩衝液 (10倍濃縮 )（#30340-91）

泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 ) と精製水を容量比 1：9 で混合します。
3. 泳動① Bullet PAGE One Precast Gel のコームを取り外し、電気泳動槽 * にセットし、泳動用緩衝液を入れます。

▶ Tris-Glycine pH 8.3（1 ×）の調製
方法 → p.47 参照▶ ゲルの下端に気泡が入らないようご注意ください。
* W100 mm × H80 mm × T3.2 mmのサイズのプレートが使用可
能な泳動装置をご使用ください。推 奨 機 種）WEP-N もしくはWEP-MN バーティカル高速泳動槽（ジェレックスインターナショナ
ル #WEP-N / WEP-MN）

20

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Bullet PAGE One Precast Gel による高速核酸泳動② 各ウェルにサンプルを添加します。
表. 最大ウェル容量（/ ウェル） 最大ウェル容量の半量以下のアプライを推奨します。
13 ウェルタイプ

17 ウェルタイプ *

40 µL

28 µL

* 17 ウェルタイプはマルチチャンネルピペットに対応しています。

③ 400 V 定電圧で、約 12 分泳動してください（300 V 定電圧の場合は約 18 分泳
動してください）。

核酸電気泳動100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）

DNA Ladder One(Broad Range)(Ready To Use)（#08362-85）

参考データ：色素の移動度（Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%）
核酸検出
(bp)

① ②

目視（色素移動度）
③

①

②

③

▶ DNA Ladder One シリーズの分離パターン → p.48 参照

500→

100→

20→

1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)（#08232-85）←XC←
赤色色素（Loading Dye
Brilliant Color(6x) 含有）←BPB
Orange G▶ 泳動用緩衝液が Tris-Glycine のため、Loading Dye に含有される 色 素 は、 ア ガ ロ ー ス ゲ ル や
TAE、TBE 緩衝液で泳動させる
ポリアクリルアミドゲルと比べ異なった挙動を示します。

＜実験条件＞
サンプル：① 100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）② 20 bp DNA Ladder（タカラバイオ #3409A）③ DNA sample（200 bp）と Loading Dye Brilliant Color(6x)（#11943-91）を容量比 5:1 で混合したサンプル
ゲル
：Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 13wells（#13079-84）
泳動用緩衝液：泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 （#30340-91）)
を 1 ×に調製
染色：Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）10,000 倍希釈 15 分染色（脱色なし）
検出：ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）
SYBR® Green モード（UV 透過、590 / 110 nm スタンダードフィルターで検出）
SYBR® はモレキュラー プローブス，
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プレキャストゲル
電気泳動槽へのセット方法

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21

Bullet PAGE One Precast Gel による高速核酸泳動
実施例

核酸電気泳動Bullet PAGE One Precast Gel およびアガロースゲルの核酸電気泳
動比較

Bullet PAGE One Precast Gel はアガロースゲルと比べ、短時間でよりシャープなバンドで検出が可能です。また、Bullet PAGE One Precast Gel は厚さ 1 mmのポリアクリルアミドゲルであるため、厚さ 5 mm 程度のアガロースゲルと比べ、染色時間が短く、かつ脱色を行わなくても低いバックグラウンドで検出することができます。
ゲル

Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%

アガロースゲル 2%

(bp)

① ②

③ ④

(bp)

① ②

③ ④

500→

染色像

500→
100→

100→

20→

電気泳動

12 分（400 V）

40 分（100 V）

染色（EtBr）

15 分

30 分

脱色

10 秒

30 分

Total

約 30 分

約 1 時間半＜実験条件＞
サンプル：100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）① 1 µL ③ 3 µL
20 bp DNA Ladder（タカラバイオ #3409A）② 1 µL* ④ 3 µL** ②と④は取扱説明書の使用例に従って、6 × Loading Buffer と混合して使用
ゲル：Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 17wells（#13078-94）、2% アガロースゲル（TAE 1 ×）
泳動用緩衝液：［Bullet PAGE One Precast Gel］泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 （#30340-91）)
を 1 ×に調製［アガロースゲル］トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液（#35430）を 1 ×に調製
染色
：臭化エチジウム溶液 (10mg/ml)（#14631-94）を水に最終濃度 0.5 µg/mL になるように添加し、表中の時間の通り染色、脱色

22

臭化エチジウム溶液 (10mg/ml)（#14631-94）

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ゲルの染色核酸電気泳動

核酸検出方法および染色方法は、使用しているゲルの種類、簡便性、検出機器を考慮し決定します。

核酸検出方法の比較
Ethidium Bromide（EtBr）

Dual Green Nucleic
Acid Stain

GelRedGelGreen

Sil-Best Stain-Neo

検出方法

蛍光

蛍光

蛍光

蛍光

目視（茶色）

励起波長（励起光源）

302 nm（UV）

270、290 / 490 nm（UV、Blue LED）

300 nm（UV）

250 / 502 nm（UV、Blue LED）－

蛍光波長
605 nm（検出用フィルター） （EtBr フィルター）526 nm（SYBR® フィルター）595 nm（EtBr フィルター）530 nm（SYBR® フィルター）

－

適用ゲル

アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル *ポリアクリルアミド
ゲル

ポストステイン、プレステイン

ポストステイン

適用染色方法
検出感度

普通

普通

高感度

高感度

高感度

* EtBr、GelRed、GelGreen のポリアクリルアミドゲルにおけるプレステイン染色方法は未確認です。
Dual Green Nucleic Acid Stain のポリアクリルアミドゲルにおけるプレステイン染色方法は、染色性が著しく低下するため推奨しません。
SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

染色方法の比較
ゲルの染色方法には、ゲルに核酸染色液をあらかじめ混合しておくプレステイン法、および核酸電気泳動後に染色を行うポストステイン法があります。
プレステインポストステイン染色タイミング・あらかじめゲルに染色液を添加

・電気泳動後に染色長所・染色工程が不要のため、簡便で短時間で済む

・染色工程により、泳動パターンが変わらない

短所

・泳動パターンが変わったり、バンドが乱れたりする・染色液の種類によってはグラデーション様のバックグラ ・染色工程が別途必要
ウンドやゲル上下での感度ムラが生じる

Ethidium Bromide による染色
Ethidium Bromide（EtBr）は DNA の塩基対の間に挿入される性質があり、挿入されることにより紫外線（302 nm）により励起され、蛍光（605 nm）を発します。
この性質を利用し、核酸の検出を行います。*
一方で強い変異原性が報告されており、取り扱い時には注意が必要です。弊社
では使用時のリスクを軽減するために点眼瓶入り溶液タイプの製品をラインアップしています。

* Nathans, D.; Smith, H. O. Annu. Rev.
Biochem. 1975, 44, p. 273-293.

臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml)（#02393-94）

実験プロトコール（ポストステイン）① 精製水もしくは泳動用緩衝液を清潔なトレイ（Dispotray など）に加え、最終濃度が 0.1 ～ 0.5 µg/mL になるように臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml) を滴下します。下表通りに希釈することで濃度を調整することが可能です。
EtBr 濃度

調製液量

本製品滴下量0.1 µg/mL

200 mL1滴

0.2 µg/mL

100 mL1滴

0.5 µg/mL

40 mL

1滴

臭化エチジウム溶液 (10mg/ml)（#14631-94）

本製品 1 滴は約 45 µL です。

② ①で作製した染色液にゲルを入れ、15 ～ 30 分振とうし染色します。
Dispotray-S（#16526-82）

Dispotray-M（#16551-84）▶ Dispotray → p.50 参照
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23

ゲルの染色核酸電気泳動

③ 染色液を捨て、精製水をゲルが浸る程度に加え、30 分振とうし、脱色します（本工程は省略可能です）。
④ トランスイルミネーターもしくは CCD イメージャーなどを用いて、下記波長で観察します。
EtBr
励起波長

302 nm（UV）

蛍光波長▶ 染色が不十分、バックグラウン
ドが高い場合は、EtBr 濃度、染色時間、脱色時間を検討してください。

605 nm

検出フィルター

EtBr フィルター
Ethidium Bromide を用いた
ポストステイン実験プロトコール（プレステイン）① アガロース溶解後に、臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml) を最終濃度 0.1 ～0.5 µg/mL になるように添加します。下表通りに希釈することで濃度を調整することが可能です。
EtBr 濃度

調製液量

本製品滴下量0.1 µg/mL

200 mL1滴

0.2 µg/mL

100 mL1滴

0.5 µg/mL

40 mL

1滴

臭化エチジウム溶液 (0.44mg/ml)（#02393-94）

本製品 1 滴は約 45 µL です。

② EtBr を添加したアガロースをゲル作製用フレームに流し込み、固化させます。
③ その後は、通常通り電気泳動を行ってください。
④ 電気泳動後、トランスイルミネーターもしくは CCD イメージャーなどを用いて、実験プロトコール（ポストステイン）④に記載の波長で観察します。

24▶ 必要に応じて、泳動用緩衝液に
ゲ ル と 同 濃 度 に な る よ う EtBr
を添加してください。

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ゲルの染色核酸電気泳動実施例 プレステインおよびポストステインの泳動への影響
DNA Ladder および DNA サンプルを、EtBr を用いてプレステインおよびポスト
ステインにて検出しました。
プレステインにおいて、EtBr と核酸サンプルとの結合による移動度の低下やバンドのゆがみが観察されます。また、EtBr が泳動中に陰極側へ移動しゲル内に濃度勾配ができることによるゲル下部の染色性低下、グラデーション様のバッ
クグラウンドも観察されています。
これらが問題となる場合はポストステインをお薦めします。また、ゲル下部の染色性低下およびグラデーション様バックグラウンドは泳動用緩衝液に EtBr を添加することで改善する場合があります。
プレステイン
① ② ③ ④① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩

ポストステイン
① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩

泳動用緩衝液に
EtBr 添加

（EtBr 0.5 µg/mL 含有）＜実験条件＞
サンプル：①100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）5µL②～④ DNA sample（200 bp）100、30、10 ng ⑤～⑦ DNA sample（500 bp）100、30、10 ng⑧～⑩ DNA sample（1,200 bp）100、30、10 ng
ゲル：2% アガロースゲル（TAE 1 ×） プレステインは EtBr 0.5 µg/mL になるように添加
泳動用緩衝液 ：トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液（#35430）
を 1 ×に調製
泳動：100 V 定電圧 BPB がゲル 2/3 程度になるまで泳動
ポストステイン：Ethidium Bromide 0.5 µg/mL 30 分染色検出：UV トランスイルミネーター（アトー #DT-35MP）にて励起 デジタルカメラ（RICOH #CX4）にて撮影

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25

ゲルの染色核酸電気泳動Dual Green Nucleic Acid Stain による染色Dual Green Nucleic Acid Stain は、 ア ク リ ジ ン オ レ ン ジ と 4',6-Diamidino-2phenylindole（DAPI）の混合溶液です。UV 励起 / LED 励起共に検出可能で、さまざまなアプリケーションにも対応可能な、自由度の高い染色剤です。

Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）

実験プロトコール（ポストステイン）① 精 製 水 も し く は 泳 動 用 緩 衝 液 を 清 潔 な ト レ イ（Dispotray な ど ）に 加 え、
10,000 倍希釈になるように Dual Green Nucleic Acid Stain を添加します。
② ①で作製した染色液にゲルを入れ、15 ～ 30 分振とうし染色します。

Dispotray-S（#16526-82）③ 染色液を捨て、精製水で軽くすすぎます（必要に応じて、精製水を用いて 30 分
程度の脱色を行ってください）。
④ トランスイルミネーターもしくは CCD イメージャーなどを用いて、下記波長で観察します。
Dual Green Nucleic Acid Stain
励起波長270、290、490 nm（UV、Blue LED）

蛍光波長

526 nm

検出フィルターSYBR® フィルター

SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

Dispotray-M（#16551-84）▶ Dispotray → p.50 参照▶ 染色が不十分、バックグラウン
ド が 高 い 場 合 は、Dual Green
Nucleic Acid Stain の 濃 度、 染
色時間、脱色時間を検討してください。

Dual Green Nucleic Acid Stain を用いたポストステイン

実験プロトコール（プレステイン）① アガロース溶解後に Dual Green Nucleic Acid Stain を 20,000 倍希釈になるよ
うに添加してください。
② Dual Green Nucleic Acid Stain を添加したアガロースをゲル作製用フレームに流し込み、固化させます。
③ その後は、通常通り電気泳動を行ってください。
④ 電気泳動後、トランスイルミネーターもしくは CCD イメージャーなどを用いて、実験プロトコール（ポストステイン）④に記載の波長で観察します。

26▶ 染色性が低下するため、ポリア
クリルアミドゲルにおけるプレ
ステイン染色法はお薦めしません。
▶ 必要に応じて、泳動用緩衝液にゲルと同濃度になるよう DualGreen Nucleic Acid Stain を添加
してください。

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ゲルの染色核酸電気泳動

参考データ：Dual Green Nucleic Acid Stain 含有アガロースゲルの保存方法
Dual Green Nucleic Acid Stain 含有アガロースゲルを保存する場合は、アガロースゲルと同濃度の Dual Green Nucleic Acid Stain を含む、ゲル作製に使用した緩衝液中で冷蔵にて保存してください（例：Dual Green Nucleic Acid Stain（20,000 倍希釈）含有アガロース（TAE 1 ×）の場合、Dual Green Nucleic Acid
Stain（20,000 倍希釈）含有 TAE 1 ×中に保存します）。
Dual Green Nucleic Acid Stain を含有しない緩衝液中に保存すると、保存中に染色剤が拡散するため、染色性が低下します。
★ TIPS ★
下記保存方法で保存することも可能です。緩衝液中に保存する必要がないため、場所も取らず簡単でお薦めです。
① 各ゲルをトレイごと、プラスチック製
ラップフィルムで包みます。

→② 全てのゲルを、アルミホイルで包んで遮光します。

③ さらに二重のチャック付きビニール袋に入れて、4℃ で保存します。

冷蔵にて 3 週間保存用時調製

TAE 1 ×に浸して保存

TAE 1 ×＋ Dual Green Nucleic
Acid Stain（20,000 倍希釈）に浸して保存

上記方法で保存＜実験条件＞
サンプル：1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)（#08232-85） 総核酸量 左から 600 ng、200 ng、67 ng
ゲル：1% アガロースゲル（TAE 1 ×）
アガロース溶解後、各染色剤を 20,000 倍希釈になるように添加し、ゲルを固化
それぞれの方法で 3 週間冷蔵保存した
泳動用緩衝液：トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液（#35430）
を 1 ×に調製
泳動：100 V BPB がゲルの 3/4 程度になるまで泳動
検出：UV トランスイルミネーター（アトー #DT-35MP）
にて励起
デジタルカメラ（RICOH #CX4）
にて撮影

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27

ゲルの染色核酸電気泳動実施例 1 プレステインおよびポストステインの泳動への影響
DNA Ladder を、Dual Green Nucleic Acid Stain を用いてプレステインおよびポストステインにて検出しました。
プレステインにおいて、Dual Green Nucleic Acid Stain が泳動中に陰極側へ移動し、ゲル内に濃度勾配ができることによるゲル下部の染色性低下、グラデー
ション様のバックグラウンドが観察されています。
これらが問題となる場合はポストステインをお薦めします。また、ゲル下部の染色性低下は UV 励起にて観察する、もしくは泳動用緩衝液に Dual Green
Nucleic Acid Stain を添加することで改善する場合があります。

染色像

染色方法

プレステイン

泳動用緩衝液中のDual Green Nucleic
Acid Stain の有無

励起20,000 倍希釈で含有
Blue LED

ポストステイン
不含Blue LED

UVBlue LED＜実験条件＞
サンプル：100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75） 総核酸量 左から 600 ng、200 ng、67 ng
ゲル：2% アガロースゲル（TAE 1 ×）
プレステインは Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）
が 20,000 倍希釈になるように添加
泳動用緩衝液 ：トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液 (#35430) を 1 ×に調製
泳動：100 V 定電圧 BPB がゲル 2/3 程度になるまで泳動
ポストステイン：Dual Green Nucleic Acid Stain（#20599-41）10,000 倍希釈 30 分染色
検出：ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）［UV 励起］SYBR® Green モード（UV 透過、590 / 110 nm スタンダードフィルターで検出）［Blue LED 励起］Alexa Fluor® 488 モード（Blue 落射、532 / 28 nm フィルターで検出）
SYBR®、Alexa Fluor® はモレキュラー プローブス，インコーポレイテッドの登録商標です。

28

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ゲルの染色核酸電気泳動実施例 2 アガロースゲルにおける他社製品との比較
アガロースゲルにおいて、ポストステインおよびプレステインにて DNA の検出を行いました。本製品は他社製品と比較し、同等以上の性能を有しています。
● UV 励起にて検出
染色方法
染色剤

ポストステイン本製品

A社

プレステイン
B社

本製品

B社

本製品

A社

B社

染色像

● Blue LED 励起にて検出
染色方法
染色剤

ポストステイン本製品

A社

プレステイン
A社

B社

染色像＜実験条件＞
サンプル：1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)（#08232-85）
総核酸量 左から 600 ng、200 ng、67 ng、20 ng
ゲル：1% アガロースゲル（TAE 1 ×）
泳動用緩衝液：トリス - 酢酸 -EDTA 緩衝原液（#35430）
を 1 ×に調製（泳動用緩衝液への染色剤添加はなし）
泳動：100 V 定電圧 BPB がゲルの 3/4 程度になるまで泳動
染色：［ポストステイン］TAE（1 ×）に各染色剤を 10,000 倍希釈になるように添加し、泳動後のゲルを入れ 30 分振とう（脱色なし）［プレステイン］アガロース溶解後、各染色剤を 20,000 倍希釈になるように添加し、ゲルを固化
検出：ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）［UV 励起］SYBR® Green モード（UV 透過、590 / 110 nm スタンダードフィルターで検出）［Blue LED 励起］Alexa Fluor® 488 モード（Blue 落射、532 / 28 nm フィルターで検出）
SYBR®、Alexa Fluor® はモレキュラー プローブス，インコーポレイテッドの登録商標です。

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29

ゲルの染色核酸電気泳動GelRed、GelGreen Nucleic Acid Gel Stain による染色
Biotium 社により開発された GelRed、GelGreen は Ethidium Bromide（EtBr）と比較し低変異原性で、かつ高感度に検出が可能です。さらに、二本鎖 DNA の
みならず一本鎖 DNA および RNA の検出も可能です。

実験プロトコール（ポストステイン）① 精製水を清潔なトレイ（Dispotray など）に加え、下表の通りに GelRed もし
くは GelGreen を添加します。
製品濃度

ポストステイン希釈倍率

10,000 ×

約 3,300 倍希釈

3×

原液▶ GelRed、GelGreen Nucleic Acid
Gel Stain ラインアップ→ 別紙「試薬一覧」参照

Dispotray-S（#16526-82）② ①で作製した染色液にゲルを入れ、30 分程度振とうし染色します。

Dispotray-M（#16551-84）③ 染色液を捨て、トランスイルミネーターもしくは CCD イメージャーを用いて、下記波長で観察します。
励起波長
蛍光波長
検出フィルター

GelRedGelGreen

300 nm（UV）

250、502 nm（UV、Blue LED）

595 nm

530 nm

EtBr フィルター

SYBR® フィルター▶ Dispotray → p.50 参照

SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

実験プロトコール（プレステイン）① アガロース溶解後に下表の通りに GelRed もしくは GelGreen を添加し、よく混合します。
製品濃度

プレステイン希釈倍率

10,000 ×

10,000 倍希釈

3×

3 倍希釈

② GelRed もしくは GelGreen を添加したアガロースをゲル作製用フレームに流し込み、固化させます。
③ その後は、通常通り電気泳動を行ってください。
④ 電気泳動後、トランスイルミネーターもしくは CCD イメージャーを用いて、実験プロトコール（ポストステイン）③に記載の波長で観察します。

30▶ 泳動用緩衝液に GelRed もしくは GelGreen を添加する必要はありません。

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ゲルの染色核酸電気泳動実施例 Ethidium Bromide もしくは他社製品との感度比較
GelRed、GelGreen は EtBr や他社製品よりも高感度に検出が可能です。
■ GelRed
ポストステイン
GelRedプレステイン
A 製品

GelRed

EtBr

A 製品は EtBr フィルターによる検出で感度低下 EtBr より高い検出感度＜実験条件＞
サンプル：1 kb DNA ラダー 左から 200 ng、100 ng、50 ng、25 ng
ゲル：1% アガロースゲル
泳動用緩衝液：TBE 1 ×
検出：［ポストステイン］300 nm で励起、EtBr フィルターで検出［プレステイン］312 nm で励起、EtBr フィルターで検出■ GelGreen
ポストステイン
GelGreen

B 製品

B 製品より高い検出感度＜実験条件＞
サンプル：1 kb DNA ラダー 左から 200 ng、100 ng、50 ng、25 ng
ゲル：1% アガロースゲル
泳動用緩衝液：TBE 1 ×
検出：254 nm で励起、SYBR® フィルターで検出（データは白黒写真）
SYBR® はモレキュラー プローブス，
インコーポレイテッドの登録商標です。

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31

ゲルの染色核酸電気泳動

Sil-Best Stain-Neo による染色
Sil-Best Stain-Neo はポリアクリルアミドゲル上の核酸、タンパク質または糖質を高感度に検出するための銀染色キットです。従来の Ethidium Bromide と比べ、
50 ～ 100 倍の感度を有しています。

Sil-Best Stain-Neo for Protein and
Nucleic Acid/PAGE（#05773-11）

実験プロトコール
製品内容
試薬名または器材名

主成分または器材内容

容量

数量

貯法

固定液（10 ×）

トリクロロ酢酸

200 mL

1

冷蔵

銀 A 溶液（5 ×）

炭酸ナトリウム

200 mL1

室温

銀 B1 溶液（5 ×）

硝酸銀、硝酸アンモニウム

200 mL1

冷蔵

銀 B2 溶液（5 ×）ホルマリン

200 mL1

冷蔵

ディスポーザブルトレイ

ポリプロピレン製－

20－

別途必要な試薬、器材
精製水、メタノール、酢酸、50 mL ディスポーザブル遠心チューブ 3 本（試薬グレードは試薬特級もしくは用途に適したものをご使用ください。）
1. 試薬の調製（100 mm × 100 mm × 1 mm ミニゲル基準）
試薬名

メタノール
（#06068-15）

酢酸（#08885-45）

調製内容

固定液

固定液（10 ×） 10 mL 左記を混合して固定液とします。
精製水
40 mL ※必ず転とう攪拌し、均一にしてからご使用ください。
メタノール
50 mL

染色液 染色銀 A 溶液（5 ×） 5 mL 左記を 50 mL ディスポーザブル遠心チューブの目盛り
A 溶液 精製水
20 mL を指標に量り取り、混合して染色 A 溶液とします。
2 本用意します。
※結晶が生じた場合は 30 ～ 40℃ 程度に温め、溶解してからご使用ください。
染色
B 溶液

銀 B1 溶液（5 ×） 10 mL 左記を 50 mL ディスポーザブル遠心チューブの目盛り
銀 B2 溶液（5 ×） 10 mL を指標に量り取り、混合して染色 B 溶液とします。
精製水
30 mL
※染色する直前に調製してください。2 本の染色 A 溶液に染色 B 溶液各 25 mL を、少しずつ加えて混合して染色液とします。

反応停止液

酢酸
精製水

▶ 本製品は非常に高感度であり、実験中にタンパク質や糖質などの不純物が混入すると試薬が鋭敏に反応し、銀鏡反応を生じる
場合があります。操作中の不純物の混入には最大の注意を払ってください。
▶ 染色 A 溶液と染色 B 溶液の調製には、ビーカーやスターラー用
マグネットなどの繰り返し使用する器具を用いるより、50 mL
ディスポーザブル遠心チューブの使用を推奨します。

1 mL 左記を混合して反応停止液とします。
99 mL

2. 染色操作① 泳動後、添付のディスポーザブルトレイ中でゲルを固定液に浸し、10 ～ 20 分
振とうします。
② 固定液を捨て、精製水にゲルを浸し、5 分振とうします。
③ 精製水を新しくして、10 分振とうします。
④ 精製水を捨て、染色液にゲルを浸し、5 ～ 30 分振とうします。適当な染色像が得られたところで染色液を捨て、反応停止液にゲルを浸し、15 分程度
振とうします。
⑤ ゲルを精製水ですすぎ、染色像を観察します。

▶ グラジエントゲルの場合、アクリルアミドの濃度に従いグラジ
エント様のバックグラウンドが観察される場合がありますのでご注意ください。
▶ その他注意事項は取扱説明書をご参照ください。

Sil-Best Stain-Neo を用いた
銀染色

32

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ゲルの染色実施例

核酸電気泳動Ethidium Bromide との感度比較
Sil-Best Stain-Neo
(bp)
600→

① ② ③ ④ ⑤

EtBr
(bp)

① ② ③ ④ ⑤

600→

100→
100→

＜実験条件＞
サンプル：DNA 100 bp Ladder 総 DNA 量 ① 10 ng、② 5 ng、③ 2 ng、④ 1 ng、⑤ 500 pg
ゲル：5% ポリアクリルアミドゲル（TBE）

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33

トラブルシューティング

核酸電気泳動

本項目では核酸電気泳動におけるトラブルおよびその原因、解決方法について説明します。

レーンやバンドの形・分離に問題がある
1 バンドがスメアになる / ぼやける

2 バンドの分離が悪い / おかしい

▶ p.35 ～ 36

▶ p.37 ～ 38

検出に問題がある
3 シグナルが検出されない / 弱い4 染色像にムラがある▶ p.38 ～ 39

▶ p.40上記以外で問題がある
5 アプライでサンプルが沈まない▶ p.4134

6 アプライ時、サンプルがウェルの裏側に流れていく▶ p.41

7 電気泳動中の異常な発熱▶ p.42

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トラブルシューティング

核酸電気泳動

1. バンドがスメアになる / ぼやける

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

ゲルが分厚い水平型のアガロースゲルの場合は、ゲルの厚さを 5 mm 以下としてください。

ゲルの種類が不適切目的とするサイズに適切なゲルの種類を選択してください。1,000 bp 以下の場合、ポリアクリ
ルアミドゲルが最適です。
一本鎖核酸の場合は変性ゲルを、また二本鎖核酸の場合は未変性ゲルをご使用ください。

DATA

100 bp DNA Ladder を泳動
(bp)
300
200

(bp)
300
200
100

100

アガロースゲル（2%）

Bullet PAGE One（5-15%）

ウェルの形成不適、破損

ゲルが十分に固化してからコームを抜き取ってください。コームを抜く際は、精製水もしくは泳動用緩衝液でぬらし、ゆっくりとコームを抜くようにしてください。

サンプル調製 サンプルが分解している

試薬類および器具類がヌクレアーゼフリーである
かご確認ください。器具類のヌクレアーゼ除去には RNase Quiet など除去試薬をご使用ください。

サンプルの塩濃度が高い

Loading Dye の塩濃度および希釈率をご確認く
ださい。
核酸サンプルの塩濃度がすでに高い場合は、サンプルを希釈する、もしくはエタノール沈殿などにてバッファー置換を行ってください。

サンプルの処理が不適切

一本鎖核酸の場合は、泳動サンプルに変性剤を添加し、必要に応じて加温してください。二本鎖核酸の場合は、変性剤の添加、加温は行わな
いでください。

サンプルに多量のタンパク質が含まれている

サンプル中のタンパク質が核酸の泳動に影響を及ぼす場合があります。核酸を精製しタンパク質を除去するか、泳動サンプルに SDS を添加してください。

Loading Dye に検出試薬を添加している

Loading Dye に検出試薬が添加されていると、結合された染色剤が泳動に影響を及ぼし、バンドがゆがむ場合があります。

サンプル添加量が多い

サンプル添加量を減らしてください。

アプライ

DATA
添加量を
1/16 に0.583 µg0.036 µgλ/HindⅢ digest
アプライ量

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35

トラブルシューティング

核酸電気泳動

1. バンドがスメアになる / ぼやける
つづき

実験操作
アプライ

原因

解決策

気泡が入っている

ウェルに気泡が残っていないことを確認してからアプライしてください。

アプライ時のウェルの破損

アプライ中にチップなどでウェルを破損させな
いようにご注意ください。

ウェルにアクリルアミドや尿素が残っている

ポリアクリルアミドゲルを使用する場合は、サ
ンプルをアプライする前にウェルを洗浄し、ア
クリルアミドや尿素（変性ゲル）を除去してください。

アプライ後放置した

アプライから電気泳動まで長時間放置しないでください。バンドが拡散したり、ゆがんだりする場合があります。

DATA

アプライ直後に泳動開始

アプライ30分後に
泳動開始

電気泳動

検出

電圧が低い / 高い

適切な電圧をかけてください。

泳動時間が長い泳動時間を短くしてください。泳動時間が長いと、バンドが拡散する場合があります。

泳動用緩衝液が不適切

適切な泳動用緩衝液の種類、濃度をご確認ください。ゲルと泳動用緩衝液は同一、同濃度をご使用ください。

泳動用緩衝液の量が少ない

ゲルの上部が完全に浸るように、泳動用緩衝液を添加してください。

電気泳動後、観察まで放置した

電気泳動の完了から染色、観察までの間にゲルを保存したり、長時間放置したりしないでください。バンドが拡散する場合があります。

染色剤のサンプルへの結合

ゲルにあらかじめ染色剤を含有させていると、泳動中に核酸と染色剤が結合し、バンドがゆがむ場合があります。問題となる場合は、ゲルに染色剤は添加せず、ポストステインにて検出を行ってください。

DATA
染色方法変更プレステイン

カメラのフォーカスがあっていない36

ポストステインカメラのフォーカスをご確認ください。

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トラブルシューティング

核酸電気泳動2. バンドの分離が悪い / おかしい

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

ゲルの濃度が不適切目的とするサイズに適切なゲル濃度にてゲルを作製してください。
アガロースゲルの場合、溶解中に蒸発した水分により意図したゲル濃度よりも高くなる場合があります。蒸発分の水分を補い、正しくゲルを作製してください。

ゲルの種類が不適切目的とするサイズに適切なゲルの種類を選択してください。1,000 bp 以下の場合、ポリアクリ
ルアミドゲルが最適です。
一本鎖核酸の場合は、変性ゲルをご使用ください。また二本鎖核酸の場合は、未変性ゲルをご使用ください。

ウェルの形成不適、破損

ゲルが十分に固化してからコームを抜き取ってください。コームを抜く際は、精製水もしくは泳動用緩衝液でぬらし、ゆっくりとコームを抜くようにしてください。

サンプル調製 泳動サンプルの処理が不適切

一本鎖核酸の場合は、泳動サンプルに変性剤を添加し、必要に応じて加温してください。二本鎖核酸の場合は、変性剤の添加、加温は行わな
いでください。

サンプルに多量のタンパク質が含まれている

サンプル中のタンパク質が核酸の泳動に影響を及ぼす場合があります。核酸を精製しタンパク質を除去するか、泳動サンプルに SDS を添加してください。

コンフォメーションが異なる核酸が混在してい 異なるコンフォメーション（スーパーコイル、直る鎖、開環）のプラスミド DNA は、異なる電気泳動挙動を示します。
Loading Dye に検出試薬を添加している

DATA

Loading Dye に検出試薬が添加されていると、結合された染色剤が泳動に影響を及ぼし、移動
度がシフトする場合があります。

1 kbp DNA Ladder に検出試薬を添加し、泳動
0.2 0.07 0.02 0.01 1 kbp DNA Ladder（µg）

1 kbp

添加した核酸量が少なくなるほど、実際の分子量からずれています。

アプライ

サンプル添加量が多い

サンプル添加量を減らしてください。

気泡が入っている

ウェルに気泡が残っていないことを確認してからアプライしてください。

ウェルが破損している

アプライ中にチップなどでウェルを破損させな
いようにご注意ください。

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37

トラブルシューティング

核酸電気泳動2. バンドの分離が悪い / おかしい
つづき

実験操作

原因

解決策

アプライ

ウェルにアクリルアミドや尿素が残っている

ポリアクリルアミドゲルを使用する場合は、サ
ンプルをアプライする前にウェルを洗浄し、ア
クリルアミドや尿素（変性ゲル）を除去してくだ
さい。

電気泳動

電圧が低い / 高い

適切な電圧をかけてください。

泳動時間が不適切

泳動時間が短いと十分な分離が得られません。
また、泳動時間が長い場合、バンドが拡散する場合があります。

泳動用緩衝液が不適切

適切な泳動用緩衝液の種類、濃度をご確認ください。ゲルと泳動用緩衝液は同一、同濃度をご使用ください。

泳動用緩衝液の量が少ない

ゲルの上部が完全に浸るように、泳動用緩衝液を添加してください。

染色剤のサンプルへの結合

ゲルにあらかじめ染色剤を含有させている場合、泳動中に核酸と染色剤が結合し、移動度がシフトします。問題となる場合は、ゲルに染色剤は添加せず、ポストステインにて検出を行ってく
ださい。

検出

DATA

1 kbp DNA Ladder を 1 µg、0.3 µg、0.1 µg で添加

染色方法変更500 bp500 bp

プレステインポストステイン3. シグナルが検出されない / 弱い

実験操作

原因

解決策

サンプル調製 サンプルが分解している

試薬類および器具類がヌクレアーゼフリーである
かご確認ください。器具類のヌクレアーゼ除去には RNase Quiet など除去試薬をご使用ください。

アプライ

色素が目的のバンドとかぶっている

Loading Dye に含有される色素が、サンプルバ
ンドと重なり、バンドを隠してしまう場合があります。当該色素を含有しない Loading Dye をご使用ください。

サンプル添加量が少ない

ゲルに十分な量のサンプルを添加してください。
貴重なサンプルなど添加できる量に限りがある
場合は、より狭いウェルのコームを使用してゲルを作製してください。

サンプルのオーバーラン

泳動時間と Loading Dye に含有される色素の移動度をご確認ください。色素の移動度はアガロー
ス濃度、緩衝液の種類、泳動条件などにより異なります。色素の移動度を参考に適切な時間で電気泳動を終了してください。

電気泳動

38

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トラブルシューティング

核酸電気泳動

3. シグナルが検出されない / 弱い
つづき

実験操作

原因

解決策

電気泳動

電極が反対

電極が正しく設定もしくは接続されているかご
確認ください。

検出

染色が不十分染色剤が薄い、染色時間が短すぎる可能性があります。染色剤の濃度、染色時間をご確認ください。特にゲルが厚い場合は、染色時間を延長
してください。

検出試薬の感度が低い

より高感度な検出試薬をご使用ください。

DATA

一般感度試薬

高感度試薬
検出試薬（Biotium 社 GelGreen）（ポストステイン）

励起波長、検出波長が不適切
DATA

ご使用の検出試薬に適した励起波長、検出波長にてバンドの可視化を行ってください。

EtBr による検出

誤った検出条件（LED / 518-546 nm）

バックグラウンドが高い

DATA

正しい検出条件（UV / 577-627 nm） （励起 / 検出波長）※露光時間は同一検出したいバンドがバックグラウンドに埋もれている場合があります。ゲルの脱色を行うことで改善する場合があります。

Dual Green Nucleic Acid Stain による検出

精製水で30 分脱色

脱色前

染色剤の枯渇DATA

脱色後ゲルにあらかじめ染色剤を含有させていると、染色剤が陰極方向へ移動し、ゲル下部の染色剤が枯渇し感度が低下する場合があります。この場合は、泳動用緩衝液中にも染色剤を添加し泳動、もしくはポストステインにて染色を行ってください。p.25、p.28 をご参照ください。

EtBr による検出

泳動用緩衝液にも EtBr を添加

プレステイン

電気泳動後、観察まで放置した

染色方法
変更

プレステインポストステイン電気泳動の完了から染色、観察までの間にゲルを保存したり、長時間放置したりしないでくだ
さい。感度が低下する場合があります。

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39

トラブルシューティング

核酸電気泳動4. 染色像にムラがある

実験操作

原因

解決策

サンプル調製 サンプルが分解している

試薬類および器具類がヌクレアーゼフリーである
かご確認ください。器具類のヌクレアーゼ除去には RNase Quiet など除去試薬をご使用ください。

ゲル作製

ゲル濃度が不均一

アガロースゲルの場合、アガロースを十分に溶解させてください。

ゲル不均等、ウェルが傾いている

アガロースゲルの場合、水平な場所でアガロースを固化してください。コームはゲルの表面に対して直角にセットしてください。

泳動用緩衝液が不適切

適切な泳動用緩衝液の種類、濃度をご確認ください。
ゲルにあらかじめ染色剤を含有させていると、染色剤が陰極方向へ移動し、グラデーションのかかったバックグラウンドとなる場合があります。この場合は、泳動用緩衝液中にも染色剤を添加し泳動、もしくはポストステインにて染色を 行 っ て く だ さ い。p.25、p.28 を ご 参 照 く だ
さい。

電気泳動

DATA

EtBr による検出

泳動用緩衝液にも EtBr を添加

プレステイン

検出

染色方法
変更

プレステインポストステイン電圧が低い / 高い

適切な電圧をかけてください。

染色剤の枯渇ゲルにあらかじめ染色剤を含有させていると、染色剤が陰極方向へ移動しゲル下部の染色剤が枯渇し、ゲルの上下で感度ムラが発生する場合があります。この場合は、泳動用緩衝液中にも染色剤を添加し泳動、もしくはポストステインに て 染 色 を 行 っ て く だ さ い。p.25、p.28 を ご
参照ください。

DATA

EtBr による検出

泳動用緩衝液にも EtBr を添加

染色方法
変更

感度低下

プレステイン

染色液が不均一40

プレステインポストステイン染色剤の希釈時は十分に混合してください。希釈時の混合が不十分な場合、染色ムラとなる場
合があります。

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トラブルシューティング

核酸電気泳動5. アプライでサンプルが沈まない

実験操作
アプライ

原因

解決策

サンプル中にエタノールが残存している

エタノール沈殿などで残存したアルコールがサンプル中に含まれると、サンプルが沈殿せず拡散する場合があります。サンプルからアルコー
ルを除去してください。

DATA

エタノールが残存しているサンプルをアプライすると、すぐに泳動用緩衝液中へ拡散してしまいます。

Loading Dye の組成もしくはサンプルとの混合 Loading Dye に含有されるグリセリンやホルム
比が間違っている
アミド量が不十分だとサンプルが沈みません。
組成、サンプルとの混合比を再度ご確認ください。
ゲルウェル中に尿素が残存している

尿素含有変性ゲルの場合、ウェル内に残存している尿素によりサンプルが沈殿しない場合があります。ウェルを洗浄し、尿素を除去してくだ
さい。

DATA

ウェルに尿素が残存している場合、サンプルが沈まない場合があります。

6. アプライ時、サンプルがウェルの裏側に流れていく

実験操作
アプライ

原因
ウェルの形成不適、破損解決策
ゲルが十分に固化してからコームを抜き取ってください。コームを抜く際は、精製水もしくは泳動用緩衝液でぬらし、ゆっくりとコームを抜くようにしてください。

DATA

ウェルが破損していることにより、サンプルがゲル裏側へ拡散してしまっています。

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41

トラブルシューティング

核酸電気泳動7. 電気泳動中の異常な発熱

実験操作
ゲル作製 /
電気泳動

42

原因ゲルおよび泳動用緩衝液が不適切

解決策
適切な泳動用緩衝液の種類、濃度をご確認ください。ゲルと泳動用緩衝液は同一、同濃度をご使用ください。
泳動用緩衝液を使いまわしている場合は、新し
く調製しなおしてください。

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Appendix
アガロース

核酸電気泳動ラインアップ

分画範囲、融点の異なる各種アガロースを用意しています。
目的とサンプルの大きさに応じた最適のアガロースをお選びいただけます。

アガロース LM Plaque( 低融点 )（#01650-02）

1 kbp 以上
アガロース LM Sieve( 低融点 )（#01651-92）

12,000 bp

12,000 bp

12,000 bp

12,000 bp

1,000 bp1,000 bp1,000 bp

500 bp500 bp500 bp1,000 bp
500 bpAgarose-LM PlaqueAgarose-RE

Agarose(≧ 1 kbp)
(微粉末)

分
取
用
Agarose-LM Sieve

Agarose(150 〜 1,500 bp)

2,072 bp
1,500 bp

600 bp200 bp

アガロース -RE( 酵素反応試験済 )（#01149-76）

Agarose(≧ 1 kbp)

分
離用
Agarose(50 〜 800 bp)

2,072 bp
1,500 bp

2,072 bp
1,500 bp1,000 bp
800 bp1,000 bp
800 bp600 bp500 bp400 bp300 bp600 bp500 bp400 bp300 bp200 bp200 bp100 bp100 bp

アガロース( 低電気浸透 , 高ゲル強度 )( 微粉末 （#02468-66）)

1 kbp 以下種類

特長

Agarose-LM Plaque

低融点タイプ

融点：≦ 65.5℃（ゲル濃度 1.5%）

Agarose-LM Sieve

低融点タイプ

融点：≦ 65℃（ゲル濃度 4%）

Agarose-RE

Agarose( ≧ 1 kbp) の酵素反応試験済み製品。制限酵素、ライゲーショ
ン反応阻害物質不含。

アガロース( 低電気浸透 , 高ゲル強度 )（#01163-76）

Agarose( ≧ 1 kbp)( 微粉末 ) Agarose( ≧ 1 kbp) を微粉末化。溶解が容易。秤量時の取り扱いが容易。均一ゲルを作製可能。
Agarose( ≧ 1 kbp)

1 kbp 以上の核酸の分離に適する。

Agarose(150 ～ 1,500 bp)

短い核酸（150 ～ 1,500 bp）の分離に最適。

Agarose(50 ～ 800 bp)

さらに短い核酸（50 ～ 800 bp）の分離に最適。

アガロース (低電気浸透 )（for 150~1,500bp fragment）（#01153-22）

アガロース (低電気浸透 )（for 50~800bp fragment）（#01147-12）

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43

Appendix

核酸電気泳動緩衝液の調製方法
緩衝液を調製する際は、ヌクレアーゼの混入にご注意ください。
器具類：RNase Quiet など除去試薬を用いて処理
試薬類：弊社ではヌクレアーゼを保証した分子生物学グレード試薬を用意しています。特に使用する精製水は、ヌクレアーゼ保証をした滅菌水（#06442-95）の使用を推奨します。

＜TAE 緩衝液（10 ×） 1 L＞
0.4 M Tris、0.2 M 酢酸、10 mM EDTA
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
酢酸（60.05 g/mol）
0.5 M EDTA（pH 8）
精製水48.5 g
12 g
20 mL
－

RNase Quiet（#09147-14）

滅菌水（#06442-95）

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

酢酸（#08885-45）

Tris、酢酸、0.5 M EDTA（pH 8）を精製水に溶解させ、精製水で 1 L にします。
0.5mol/l-EDTA 溶液 (pH 8.0)（#14347-21）▶ pH 調整は必要ありません。

＜TBE 緩衝液（5 ×） 1 L＞
0.445 M Tris、0.445 M ほう酸、10 mM EDTA
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
ほう酸（61.83 g/mol）
0.5 M EDTA（pH 8）
精製水53.9 g27.5 g
20 mL－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

ほう酸（#05241-55）

Tris、ほう酸、0.5 M EDTA（pH 8）を精製水に溶解させ、精製水で 1 L にします。
0.5mol/l-EDTA 溶液 (pH 8.0)（#14347-21）▶ pH 調整は必要ありません。

44

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Appendix

核酸電気泳動＜MOPS 緩衝液
（10 ×） 1 L＞

MOPS（#23438-64）

0.4 M MOPS、100 mM 酢酸ナトリウム、10 mM EDTA、pH 7
MOPS（209.26 g/mol）
酢酸ナトリウム（82.03 g/mol）
0.5 M EDTA（pH 8）
1 mol/L- 水酸化ナトリウム溶液
精製水

83.7 g
8.2 g
20 mL（pH 調整用）－

MOPS、酢酸ナトリウム、0.5 M EDTA（pH 8）を精製水に溶解させ、精製水で900 mL 程度にします。水酸化ナトリウムを用いて pH 7 へ調整し、その後精製
水で 1 L にします。

酢酸ナトリウム（#31137-25）

0.5mol/l-EDTA 溶液 (pH 8.0)（#14347-21）

1mol/l- 水酸化ナトリウム溶液（#11678-65）＜Loading Dye（6 ×） 10 mL＞

ブロモフェノールブルー（#05808-61）30（v/v）% グリセリン、0.12（w/v）% BPB*、0.12（w/v）% XC*、
0.6（w/v）% Orange G*、50 mM EDTA
ブロモフェノールブルー（BPB）*
キシレンシアノール FF（XC）*
オレンジ G*
グリセリン
0.5 M EDTA（pH 8）
精製水

12 mg
12 mg
60 mg
3 mL
1 mL
－

精製水 5 mL 程度に BPB、XC、オレンジ G、0.5 M EDTA（pH 8）、グリセリンを溶解させ、精製水で 10 mL にします。
* 色素は適宜 1 ～ 3 種類を選択し、混合してください。
検出する核酸の鎖長に重なり検出が妨害される場合は、当該色素を抜く、もしくは濃度を減らしてください。

オレンジ G（#25401-22）

キシレンシアノール FF（#36629-64）

グリセリン（#17045-94）

0.5mol/l-EDTA 溶液 (pH 8.0)（#14347-21）

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45

Appendix

核酸電気泳動＜変性ゲル Loading Dye 10 mL＞

ブロモフェノールブルー（#05808-61）

95% ホルムアミド、0.025（w/v）% BPB*、0.025（w/v）% XC*、
0.05（w/v）% Orange G*、0.025（w/v）% SDS、5 mM EDTA
ブロモフェノールブルー（BPB）*
キシレンシアノール FF（XC）*
オレンジ G*
10% SDS
ホルムアミド
0.5 M EDTA（pH 8）
精製水

2.5 mg
2.5 mg5 mg
0.025 mL
9.5 mL
0.1 mL－

精製水以外を混合溶解後、精製水で 10 mL にします。
小分けにし、冷凍保存してください。
* 色素は適宜 1 ～ 3 種類を選択し、混合してください。
検出する核酸の鎖長に重なり検出が妨害される場合は、当該色素を抜く、もしくは濃度を減らしてください。

オレンジ G（#25401-22）

キシレンシアノール FF（#36629-64）

10%-SDS 溶液（#30562-04）

ホルムアミド（#02020-64）

0.5mol/l-EDTA 溶液 (pH 8.0)（#14347-21）＜40% アクリルアミド / ビス溶液（19:1） 500 mL＞
38（w/v）% アクリルアミド、2（w/v）% N,N'- メチレンビスアクリルアミド
アクリルアミド
N,N'- メチレンビスアクリルアミド
精製水

190 g
10 g
－

精製水 300 mL 程度にアクリルアミド、N,N'- メチレンビスアクリルアミドを溶解させ、精製水で 500 mL にします。

アクリルアミド ( モノマー )（#06114-95）

N,N'-メチレンビス
アクリルアミド（#22407-52）▶ アクリルアミドには神経毒があります。取り扱い時には手袋、ゴーグルなどの保護具を装着してください。
▶ ウォーターバスなどを用いて37℃ 程度に加温しながら溶解させると、早く調製することが
できます。

46

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Appendix

核酸電気泳動＜Tris-Glycine pH 8.3（1 ×） 1 L＞
25 mM Tris、192 mM グリシン
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
グリシン（75.07 g/mol）
精製水

3g14.4 g－

精製水 800 mL 程度に Tris、グリシンを溶解させ、精製水で 1 L にします。
※泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 （#30340-91）)
をご使用いただくと便利です。精製水で 10 倍希釈してください。

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

グリシン（#17141-95）

泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 )（#30340-91）▶ pH 調整は必要ありません。

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47

Appendix

核酸電気泳動DNA Ladder One シリーズ
DNA Ladder One シリーズは、BPB および Orange G の 2 種類の色素をプレミックスした ready to use タイプのラダーマーカーです。目安となるバンドが濃く検出されるため、各バンドのサイズを容易に識別できます。ブロードレンジでは 0.1 kbp ～ 10 kbp までの広範囲をカバーしています。
Broad Range

100 bp

DNA Ladder One(Broad Range)(Ready To Use)（#08362-85）

1 kbp

DNA量(ng)(kbp) approx.
10
8
6
5
4
3
2
1.5
1.2
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1

25
30
30
30
30
70
30
35
30
70
30
30
30
30
90
30
40
40
50

(bp)

DNA量(ng)
approx.

1,500
1,200
1,000
900
800
700
600
500
400
300
200
100

30
30
70
30
30
30
30
90
30
40
40
50

2% アガロースゲル / TAE
マーカー使用量 5 µL

2.5% アガロースゲル / TBE
マーカー使用量 5 µL

濃度0.15 µg/µL

濃度0.1 µg/µL

バッファー組成0.03% Bromophenol Blue
0.1% Orange G
6% Glycerol
10 mM EDTA
10 mM Tris-HCl（pH 8.0）

DNA量(ng)(kbp) approx.
10
8
6
5
4
3
2
1.5
1
0.7
0.5
0.3

25
30
35
35
35
80
35
35
85
35
35
35

100bp DNA Ladder One(Ready To Use)（#07908-75）

0.8% アガロースゲル / TAE
マーカー使用量 5 µL
1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)（#08232-85）

赤文字で示したサイズのバンドを増強

48

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Appendix

核酸電気泳動ヌクレアーゼ / 核酸除去試薬

RNase Quiet

RNase Quiet は、実験台やガラス器具、プラスチック製品にスプレーし拭き取
ることにより、RNase、DNase などのヌクレアーゼや RNA、DNA などの核酸を除去します。

RNase Quiet（#09147-14）

使用方法
実験台の洗浄RNase Quiet を直接実験台表面にスプレーし、清潔なペーパータオルで全面に広げます。次に滅菌水（RNase 不含）を実験台の表面に塗布し、新しいペーパータ
オルで拭き取ります。

器具類の洗浄清潔なペーパータオルに十分な RNase Quiet をしみこませ、器具の表面を拭きます。次に滅菌水（RNase 不含）をしみこませたペーパータオルで RNase Quiet
を拭き取った後、新しいペーパータオルで拭き取ります。小さい部品は RNase
Quiet に 2 分程度浸した後、滅菌水（RNase 不含）で洗浄し、新しいペーパータ
オルで拭き取ります。

プラスチック、 十分量の RNase Quiet を容器に注ぎ、攪拌により内側の表面全体になじませます。
ガラス器具類の 次に RNase Quiet を廃棄した後、滅菌水（RNase 不含）にて 2 回攪拌洗浄し、乾洗浄燥させます。

ピペット類の洗浄

RNase Quiet for Replacement（#09477-94）

ピペットの取扱説明書に従って分解した後、シャフト部分を RNase Quiet に 1分程度浸します。滅菌水（RNase 不含）で洗浄した後、新しいペーパータオルで拭き取り、組み立ててください。シャフト部分以外は、清潔なペーパータオルに十分な RNase Quiet をしみこませ、表面を拭きます。次に滅菌水（RNase 不含）
をしみこませたペーパータオルで RNase Quiet を拭き取った後、新しいペーパー
タオルで拭き取ります。なお、内部のピストン部分は洗浄を行わないでください。

※必ず単独でご使用ください。アルミニウムなどの金属や酸性溶液と混ぜると有害ガスが発生し危険です。
また本製品はアルカリ性溶液のため取り扱いにご注意ください。

確認試験 1 RNase 汚染カバーガラスにおける RNase 除去効果
カバーガラスの RNase 汚染を、RNase Quiet により除去できていることが分かります。
DEPC 処理水洗浄

1. RNase A 溶液（1 mg/mL）100 µL をカバーガラスに塗布、乾燥し、RNase 汚染カバーガラスを作製。
2. DEPC 処理水および RNase Quiet でスプレー後 1 分静置し、清潔なペーパータオルで拭き取り、滅菌水（RNase 不含）
で洗浄。
3. RNA 溶液（40 µg/mL）50 µL をカバーガラス上に塗布し、37℃、30 分インキュベート。
4. 臭化エチジウム溶液（20 µg/mL）
1 µL を 3 のカバーガラ
ス上でピペッティング。
5. UV にて観察。

RNase Quiet 洗浄確認試験 2 RNase Quiet の RNase および DNase 除去効果
RNase Quiet により RNase および DNase が除去されているか確認試験を行いました。結果、RNase Quiet により両ヌクレアーゼが除去されていることが確認されました。
【RNase 除去効果】
DEPC 処理水洗浄

RNase

−

＋

【DNase 除去効果】
RNase Quiet 洗浄−＋

DEPC 処理水洗浄

DNase −＋

RNase Quiet 洗浄−＋

1. 1.5 mL マイクロチューブに、【RNase 除去効果】（+）: RNase A 溶液 100 µg/10 µL、（-）: 溶解バッファーのみ 10 µL、【DNase 除去効果】（+）:DNase I 27.3 U/10 µL、（-）:溶解バッファーのみ 10 µL を入れ、乾燥。
2. DEPC 処理水もしくは RNase Quiet を 1 mL 加え、1 分反応。
3. 2 の溶液を捨て、DEPC 処理水を 1 mL 加え洗浄。
4. 3 の DEPC 処理水を捨て、【RNase 除去効果】RNA 溶液 1 µg/25 µL、【DNase 除去効果】DNA 溶液 1 µg/25 µL
および 50 mmol/L 塩化マグネシウム 1 µL をそれぞれ添加し、37℃、1 時間反応。
5. 反応終了後の 4 をアガロースゲルにて電気泳動し、臭化エチジウムを用いて検出。

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49

Appendix

核酸電気泳動Dispotray
弊社では電気泳動ゲルの染色やブロッティングメンブレンの洗浄など、さまざ
まな用途に使用できるディスポーザブルトレイを用意しています。

Dispotray-SS（#19386-74）

Bullet PAGE One Precast Gel（横 80 mm ×縦 70 mm）
における使用例（SS サイズは Bullet PAGE One Precast Gel を半分に切ったもの）
M
S
SS

Dispotray-S（#16526-82）

Dispotray の製品比較
Dispotray-SS

Dispotray-S

Dispotray-M

19386-74

16526-82

16551-84

100 × 70 × 13

150 × 105 × 19

200 × 140 × 25

80 × 50

122 × 80

165 × 105

製品番号
外寸

横×縦×高さ（mm）

底面サイズ
横×縦（mm）

10 mL

20 mL

30 mL

25 mL

80 mL

160 mL

液量の目安*1、*2、*3、*4
Dispotray-M（#16551-84）*1 Bullet CBB Stain One(Ready To Use)（#13542）をそれぞれの容量でトレイに入れた写真となります。
*2 使用可能な液量は、振とうの強さ、液の物性（有機溶媒、界面活性剤などの有無）により異なります。
*3 トレイ内の液量が少ない場合、振とうを少し強くした方がゲル全体を均等に染めることができます。
*4 トレイ内の液量が多い場合は、強く振とうするとトレイからこぼれることがあるので、ご注意ください。

使用方法
1. 本製品の角から、少しずつ液を除去し、本製品内の液量を減らします。
2. ある程度液量が減ったところで、本製品の対角線に沿って角を合わせるように、本製品を折り曲げます（図 1、図 2）。
3. 溶液排出側を図 3 のように手で押さえ、ゲルやメンブレンが落下しないように注意しながら、液を除去します。

図 1. 対角に折り曲げます。

50

図 2. 少し折り曲げ、トレイ内 図 3. さらに折り曲げて、ゲルの液を少量除去します。
が落下しないように、ト
レイ内の液を除去します。

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タンパク質の電気泳動とはタンパク質電気泳動

タンパク質の電気泳動とは、網目構造を形成した支持体中でタンパク質を分子量、電荷、形などにより分離させる手法です。支持体としてセルロースアセテート膜やアガロースなども用いられますが、ポリアクリルアミドゲルを用いたタンパク質電気泳動が主流となっています。

タンパク質電気泳動の種類
種類

分離要因

特徴

SDS-PAGE

分子量タンパク質電気泳動の主流。
SDS 変性および還元剤により電荷、形をキャンセリングし、分子量のみにより分離することができる。
なお、非還元下（SDS 変性のみ）で高次元構造や多量体維持に寄与しているジスルフィド結合（S-S 結合）を保持したまま分離する場合もある。

Native-PAGE

分子量、電荷、形変性をせずに実施するため、分子量、電荷、形全てが反映され分離される。

尿素 -PAGE

分子量、電荷尿素変性により形をキャンセリングし、分子量、電荷が反映され分離される。

BN-PAGE

分子量、形

CBB の結合により電荷がキャンセリングされ、分子量、形が反映され分離される。
BN-PAGE 後に SDS-PAGE を組み合わせることにより、複合体構造をとるタンパク質などの研究に利用されている。

二次元電気泳動

電荷（1D）→分子量（2D）

一次元目（1D）に等電点電気泳動を行い電荷により分離し、その後二次元目（2D）に SDSPAGE を行い分子量により分離を行う。

本プロトコールでは、SDS-PAGE、二次元電気泳動のプロトコールを紹介しています。

タンパク質電気泳動後の実験
電気泳動後は、総タンパク質（あるいは特殊なタンパク質）の検出、もしくは抗原 - 抗体反応を利用し特異的なタンパク質を検出するウェスタンブロッティングが行われます。
タンパク質
電気泳動 p.52 〜

転写

総タンパク質検出 p.76 〜
特殊タンパク質検出 ; His-tag
結合タンパク質の検出など

特異的
タンパク質検出

転写、特異的タンパク質検出については、よく解る実験プロトコール ウェスタンブロッティング編をご参照ください。

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51

SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動

SDS-PAGE は、SDS と結合してマイナスに荷電したタンパク質が、ポリアクリルアミドゲルの網目中を泳動することで、分子量よりに分離される電気泳動法です。操作が簡単で、一度に多くのサンプルを短時間で分析できること
から、タンパク質の分析によく用いられます。

タンパク質サンプルの調製
SDS-PAGE では、タンパク質サンプルを SDS および還元剤下で加熱することで、タンパク質中のジスルフィド結合（S-S 結合）や水素結合を切断します。これにより、分子量に応じて一律に SDS が結合した直鎖状のタンパク質が泳動されます。なお、イムノグロブリンを軽鎖と重鎖に分けずに泳動する場合など、非還元下でジスルフィド結合を維持したまま泳動する場合もあります。

ゲル濃度と分離サイズ
SDS によりマイナスに荷電させたタンパク質は、電圧をかけることで陽極（＋）方向に移動します。移動中、ポリア
クリルアミドの網目構造を通過することで、タンパク質中の小さな分子は速く、大きな分子はゆっくり移動し、結果、分子量により分離されます（非還元下での泳動の場合、ジスルフィド結合を保持したまま泳動するので、タン
パク質の「形」も一部反映される場合があります）。
このポリアクリルアミドゲルの網目は、アクリルアミド濃度が濃いほど細かくなり分子量の小さなタンパク質の分離に、アクリルアミド濃度が薄いほど大きくなり分子量の大きなタンパク質の分離に向いています。

ゲル濃度
網目サイズ
分離サイズ

低濃度
大
高分子（大）

高濃度小
低分子（小）

濃縮ゲルと分離ゲル
一般的な SDS-PAGE に用いるゲルは 2 段構造となっており、上側を濃縮ゲル（Stacking Gel）、下側を分離ゲル（Separating Gel）といいます。タンパク質サンプルは濃縮ゲルを通過する過程で濃縮され、濃縮ゲルと分離ゲルの境目に一線に並びます。その後、タンパク質サンプルは一斉に分離ゲルに入り、分子量により分離されます。
《濃縮ゲル：アクリルアミド 3% ゲル》
ゲルの網目は大分離せずに濃縮し、スタート位置をそろえる

濃縮ゲル

分離ゲル

濃縮

《分離ゲル：アクリルアミド 6% 〜ゲル》
ゲルの網目は小分子量に応じて分離

分離

グラジエントゲル
アクリルアミド濃度に勾配を有する（上から下に徐々にアクリルアミド濃度が濃くなっていく）ゲルで、広範囲の分子量の分離が可能です。調製には特殊な器具が必要で作製過程が煩雑なため、自家調製はあまりされず、プレキャ
ストゲルが主流となっています。

52

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SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動

Laemmli 泳動法、および WIDE RANGE Gel と Rapid Running Buffer
弊社では、Tris-Glycine をベースとした Laemmli 泳動法* に準拠した試薬とは別に、均一ゲルでもグラジエント様ゲルが作製できる WIDE RANGE Gel Preparation Buffer および、高速電気泳動を可能とする泳動用緩衝液 Rapid
Running Buffer をラインアップしています。
* Laemmli, U. K. Nature 1970, 227(5259), p. 680-685

ゲル
泳動用緩衝液特長

WIDE RANGE Gel

Laemmli 泳動法

Rapid Running Buffer

WIDE RANGE Gel

Laemmli 法組成ゲル

Laemmli 法組成泳動用緩衝液（Tris-Glycine-SDS）
グラジエント様分離

Laemmli 法組成ゲル
Rapid Running Buffer

従来の方法

泳動時間短縮M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200 →

200→

200→

45 →

45→
45→

分離例

22→

22→

6.5→

6.5 →

（ゲル濃度）

10%

ゲル濃度を 2% 低くする

12%

ゲル濃度を 4% 低くする

8%

WIDE RANGE Gel および Rapid Running Buffer 使用の場合、Laemmli 泳動法とは異なった泳動パターンを示します。
WIDE RANGE Gel の場合、Laemmli 法組成ゲル使用時よりも 2% 低いゲル濃度をお試しください。
Rapid Running Buffer の場合、Laemmli 法組成泳動用緩衝液使用時よりも 4％低いゲル濃度をお試しください。
そうすることで Lammli 泳動法に近い泳動パターンとなります。
詳細は p.105「電気泳動パターン」をご参照ください。

Laemmli 泳動法
実験プロトコール
1. ポリアクリルアミドゲルの作製① ゲルフレームを組み立てます。

② 組み立てたゲルフレームに下記のように 1 カ所印を付けます。
濃縮ゲル

コームをセットし、
コーム先から約 5 mm

分離ゲル

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53

SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）③ 分離ゲルを作製するため、ビーカーに試薬を下表の割合で加え、混合します。
ゲル濃度は、サンプルの分子量が大きいほど低くします（電気泳動パターンについては p.105 をご参照ください）。10 mL で 1 枚のミニゲルを作製することができます。
表. 10 mL の分離ゲルを作製する場合の各試薬の容量（単位：mL）
ポリアクリルアミドゲル濃度（%）

6

8

10

12

15

40(w/v)%- アクリルアミド / ビス混合液 (29:1) または (37.5:1)

1.5

2.0

2.5

3.0

3.8

分離ゲル調製用緩衝液 (4 倍濃縮 )

2.5

2.5

2.5

2.5

2.5

10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニ
ウム溶液（10% APS）

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

精製水

5.9

5.4

4.9

4.4

3.6

④ 吸引できるデシケーターに入れ、5 ～ 10 分減圧し、脱気します。この操作が十分でないと、ゲルの固化に時間を要したり、ウェルが形成しにくかった
りする場合があります（アクリルアミドの重合を妨害する溶存酸素を除去します）。

タンパク質電気泳動▶ ゲルフレームは、メーカーによってサイズや形状が異なります。
▶ ゲル溶液量はメーカーによって異なる場合があります。
40(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (29:1)（#06119-45）40(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (37.5:1)（#06121-95）30(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (29:1)（#06141-35）30(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (37.5:1)（#06144-05）⑤ N,N,N',N'- テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）を添加し、攪拌します。
攪拌後は、速やかに⑥へ進んでください。

分離ゲル調製用緩衝液 (4 倍濃縮 )（#30651-05）▶ 分離ゲル用緩衝液の調製方法→ p.107 参照
10(w/v)%-ペルオキソ二硫酸
アンモニウム溶液（#02634-34）▶ 10% APS の調製方法→ p.108 参照

表. 10 mL の分離ゲルを作製する場合の TEMED 添加量（単位：mL）
ポリアクリルアミドゲル濃度（%）

N,N,N',N' - テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）

6

8

10

12

15

0.008

0.006

0.006

0.006

0.006

⑥ ゲルフレームの②で付けた印まで、溶液を流し込みます。

▶ TEMED を添加後は、アクリル
アミドのゲル化が加速します。
できるだけ早くゲルフレームに流し込んでください。
N,N,N',N'-テトラメチルエチレン
ジアミン（#33401-72）⑦ ゲル溶液を流し込んだ後すぐに、精製水または 1- ブタノールを重層し、1 時間以上静置します。

▶ 1- ブタノールを使うことにより、ゲル溶液を流し込む際に発生した気泡を容易に除去することができます。
1- ブタノール（#06016-85）

54

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SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動⑧ 分離ゲルを静置している間に、濃縮ゲル溶液を準備します。濃縮ゲルを作製するため、ビーカーに試薬を下表の割合で加え、混合します。ミニゲル 1 枚
あたり、2 ～ 3 mL の濃縮ゲルを用意します。
表. 濃縮ゲル（3%）を作製する場合の各試薬の容量（単位：mL）
ゲル容量（mL）

2

4

6

8

40(w/v)%- アクリルアミド / ビス混合液 (29:1) または (37.5:1)

0.15

0.30

0.45

0.60

濃縮ゲル調製用緩衝液 (4 倍濃縮 )

0.50

1.00

1.50

2.00

10(w/v)%- ペ ル オ キ ソ 二 硫 酸 ア ン モ ニ ウ ム 溶 液（10% APS）

0.02

0.04

0.06

0.08

精製水

1.33

2.66

3.99

5.32

濃縮ゲル調製用緩衝液 (4 倍濃縮 )（#32158-25）

濃縮ゲル調製用緩衝液 (4倍濃縮 )(色素入り )（#09268-34）

濃縮ゲル調製用緩衝液に、下記の色素入りの製品（濃縮ゲル調製用緩衝液 (4 倍濃縮 )( 色素入り （#09268-34）)）を使用することで、ゲルとウェルの境界がはっきりし、サンプルの添加が容易になります。
色素入りの緩衝液で調製した濃縮ゲルでは、ウェルがはっきり見えています。
色素入り

色素なし

▶ 濃縮ゲル用緩衝液の調製方法→ p.107 参照⑨ 吸引できるデシケーターに入れ、5 ～ 10 分減圧し、脱気します。この操作が十分でないと、ゲルの固化に時間を要したり、ウェルが形成しにくかった
りする場合があります（アクリルアミドの重合を妨害する溶存酸素を除去します）。
⑩ 分離ゲルが固まったら、重層した精製水または 1- ブタノールをペーパータ
オルなどに吸収させて完全に除去します。1- ブタノールを使用した場合、精製水で洗浄することを推奨します。
⑪ N,N,N',N'- テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）を濃縮ゲル溶液に添加し、攪拌します。攪拌後は、速やかに⑫へ進んでください。

表. TEMED 添加量（単位：mL）
ゲル容量（mL）

N,N,N',N' - テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）

2

4

6

8

0.002

0.004

0.006

0.008

▶ 10% APS の調製方法→ p.108 参照▶ 余った溶液がゲル化していることをご確認ください。
ゲルフレーム内のゲル化は、ポリアクリルアミドゲルの上に精製水またはブタノールの層ができていることを確認し、さらにフレームを傾けて確認します。

▶ TEMED を添加後は、アクリル
アミドのゲル化が加速します。
できるだけ早くゲルフレームに流し込んでください。

⑫ ゲルフレーム上部いっぱいまで、濃縮ゲル溶液を流し込みます。

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55

SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動⑬ 直ちにコームをガラスプレートの間に挿し込みます。室温で 1 時間程度放置
するとゲルが固まります。

▶ コームの先に気泡が入らないよ
うに斜めから挿入してください。

ポリアクリルアミドゲル（Laemmli 法）
自家調製方法

2. 泳動用サンプルの調製① タンパク質サンプルと試料緩衝液を混合します。
タンパク質サンプル：試料緩衝液
試料緩衝液（6 ×）の場合

5：1

試料緩衝液（2 ×）の場合

1：1

容量比

② 試料緩衝液と混合した泳動用サンプルを 90℃ 以上で 3 分程度加温し、タン
パク質のジスルフィド結合を切断します。なお、還元剤不含の試料緩衝液を使用し非還元状態で泳動する場合は、加温を行わないでください。

▶ 必要に応じて泳動用サンプル調
製の前に、タンパク質サンプルの濃縮や分析妨害物質の除去を行ってください（p.113 参照）。
▶ 試料緩衝液の調製方法→ p.108 参照▶ 試料緩衝液 6 倍濃縮タイプは、
タンパク質濃度が薄い時もしくはタンパク質量を多く泳動したい時に有用です。
試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,6倍濃縮 , 還元剤含有 )（#09499-14）
毒物非該当

試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,6倍濃縮 , 還元剤不含 )（#09500-64）

3. 泳動用緩衝液の作製
泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 , SDS-PAGE 用 , トリス - グリシン系 ) と精製水を容量
比 1：9 で混合します。
4. 泳動① 作製したポリアクリルアミドゲルからコームを静かに抜き取り、クリップなどの付属品を外します。

▶ 試料緩衝液 2 倍濃縮タイプは、
タンパク質サンプルとの混合比
が等量で分かりやすく、混合ミ
スを軽減できます。
試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,2倍濃縮 , 2-ME含有 )（#30566-22）

試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,2倍濃縮 , 2-ME不含 )（#30567-12）② ポリアクリルアミドゲル用電気泳動槽へセットし、泳動用緩衝液を加えます。

泳動用緩衝液 (10倍濃縮 , SDSPAGE用 , トリス -グリシン系 )（#30329-61）▶ 泳動用緩衝液の調製方法→ p.108 参照▶ ウェルを洗浄し、未反応のアクリ
ルアミドを除去してください。

56

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SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

タンパク質電気泳動▶ 着 色 マ ー カ ー で あ る Protein
Ladder One Plus は、SDS-PAGE
で の 分 離 確 認 やウェスタンブ
ロッティングでの転写確認の目
安となります。分子量の測定には未着色マーカーであるタンパク質マーカーをご使用ください。
タンパク質マーカー (10 倍濃縮 )（#29458-24）④ 100 ～ 200 V（定電圧）にて BPB がゲル下端 5 mm 程度になるまで泳動します。

Protein Ladder One Plus,
Triple-color for SDS-PAGE（#19593-25）

ポリアクリルアミドゲル
泳動方法

ウェスタンブロッティングに最適
Chemi-Lumi One Markers Kit（#06456-70）▶ タンパク質マーカーの詳細と分離パターン → p.112 参照▶ 泳動時間はゲル濃度、泳動用緩
衝液や室内の温度により異なります。

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57

SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動

WIDE RANGE Gel 使用の場合
実験プロトコール
1. ポリアクリルアミドゲル（WIDE RANGE Gel）の作製
下記の割合で、分離ゲル、濃縮ゲルをそれぞれ作製してください。ゲルの作製方法の詳細は、p.53「Laemmli 泳動法 実験プロトコール 1. ポリアクリル
アミドゲルの作製」をご参照ください。
表. 10 mL の分離ゲルを作製する場合の各試薬の容量（単位：mL）
ポリアクリルアミドゲル濃度（%）

6

8

10

12

15

40(w/v)%- ア ク リ ル ア ミ ド / ビ ス 混 合 液(29:1) または (37.5:1)

1.5

2.0

2.5

3.0

3.8

WIDE RANGE Gel Preparation Buffer(4x) for
PAGE

2.5

2.5

2.5

2.5

2.5

10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液（10% APS）

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

精製水

5.9

5.4

4.9

4.4

3.6

N,N,N',N' - テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）

0.008

0.006

0.006

0.006

0.006

表. 濃縮ゲル（3%）を作製する場合の各試薬の容量（単位：mL）
ゲル容量（mL）

2

4

6

8

40(w/v)%- アクリルアミド / ビス混合液 (29:1) または(37.5:1)

0.15

0.30

0.45

0.60

WIDE RANGE Gel Preparation Buffer(4x) for PAGE

0.50

1.00

1.50

2.00

10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液（10% APS）

0.02

0.04

0.06

0.08

精製水

1.33

2.66

3.99

5.32

N,N,N',N' - テトラメチルエチレンジアミン（TEMED）

0.002

0.004

0.006

0.008

WIDE RANGE Gel は Laemmli 法組成ゲルと比べ、分離できる分子量範囲が広く、グラジエント
ゲルのような分離が可能です。
均一ゲル
本製品添加ゲル･
10％ゲル

Laemmli 法
組成ゲル

WIDE RANGE
Gel

12%

10%

WIDE RANGE Gel Preparation
Buffer(4x) for PAGE（#07831-94）▶ WIDE RANGE Gel Preparation
Buffer は SDS 不含ですが、試料
緩衝液および泳動用緩衝液に含まれる SDS により、SDS-PAGEの分離が得られます。基本的には問題とはなりませんが、ゲル中の SDS が実験系に特別に影響する場合は、予備検討の上ご使用ください。
40(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (29:1)（#06119-45）40(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (37.5:1)（#06121-95）

プレキャストグラジエントゲル
Laemmli 法･
12％ゲル

A 社･
5 ～ 20％ゲル

B 社･
8 ～ 16％ゲル

C 社･
5 ～ 20％ゲル

M.W.(kDa)
200→▶ Laemmli 泳動法で使用していた
ゲル濃度より 2% 程度低い濃度のゲルをまずはお試しください。
電気泳動パターン詳細について
は p.105 をご参照ください。
例）

←200

30(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (29:1)（#06141-35）

200→
45→

←45
45→

高分離
14→
6.5→

30(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (37.5:1)（#06144-05）

6.5→＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を 1 ×になるように調製し使用
染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）

WIDE RANGE Gel
自家調製方法10(w/v)%-ペルオキソ二硫酸
アンモニウム溶液（#02634-34）▶ 10% APS の調製方法→ p.108 参照
N,N,N',N'-テトラメチルエチレン
ジアミン（#33401-72）

2. 泳動用サンプルの調製
p.56「Laemmli 泳動法 実験プロトコールに調製してください。
58

2. 泳動用サンプルの調製」と同様▶ 分離ゲルの重層液として、1- ブ
タノールなどアルコールを使用
すると、アルコール中に白濁が生じる場合がありますが、分離や染色には影響しません。

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SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動

3. 泳動用緩衝液の作製
p.56「Laemmli 泳動法
作製してください。

実験プロトコール3. 泳動用緩衝液の作製」と同様に

4. 泳動
p.56
「Laemmli 泳動法
い。

実験プロトコール4. 泳動」と同様に泳動してくださ▶ WIDE RANGE Gel は、冷蔵かつ密封し乾燥を避けた状態で、約3 カ月の保存が可能です。

実施例 WIDE RANGE Gel を用いた分析例■ WIDE RANGE Gel の MS への適用
WIDE RANGE Gel および Laemmli 法組成ゲルにて BSA を泳動し、ゲルネガティ
ブ染色キットにより染色、切り出したタンパク質のバンドを処理し、MS により解析しました。
本製品使用ゲル

Laemmli 法組成ゲル

使用者の評価WIDE RANGE Gel Preparation Buffer を添加したゲルにおいても、Laemmli 法組成ゲルと同様のペプチドピークが同程度のイオン強度で検出された。
Laemmli 法組成ゲルと全く同等の操作・状況で各工程が実施でき、ゲルの切り出し、アルキル化、ペプチド断片の溶出なども全く差がなかった。
また、Laemmli 法組成ゲルと比較し、WIDE RANGE Gel Preparation Buffer を用いたゲルは、ゲル強度が高くなることから、取り扱いが容易であった。
データご提供：近畿大学 農学部 応用生命化学科

森山 達哉 准教授 / 吉村 征浩 博士■ マウス脂肪組織タンパク質の分離▶ WIDE RANGE Gel は 6% ゲルでも 10% Laemmli 法組成ゲルに近い強度を有しており、泳動後のゲルの取り扱いが容易です。

マウス脂肪組織より抽出したタンパク質を WIDE RANGE Gel および Laemmli 法
組成ゲルにより分離し、CBB 染色により検出を行いました。
本製品使用ゲル（10%）

Laemmli法組成ゲル（10%）

White (II)adiposeWhite
adipose (I)Brown
adiposeWhite (II)adiposeWhite
adipose (I)Brown
adipose＜実験条件＞
サンプル：マウス脂肪組織抽出物
ゲル：10% ポリアクリルアミドゲル
染色：CBB 染色使用者の評価均一ゲル作製と同作業で容易にグラジエント様の効果が得られ、SDS-PAGE において良好な結果が得られた。また、ゲル強度も強くて扱いやすかった。
データご提供：京都大学 農学研究科 食品生物科学専攻 食品分子機能学分野

高橋 信之 助教

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59

SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動■ 大豆タンパク質の分離
大豆より抽出したタンパク質を WIDE RANGE Gel および Laemmli 法組成ゲルにより分離し、SYPRO Ruby 染色およびウェスタンブロッティングにより検出を行いました。
SYPRO Ruby 染色
本製品使用ゲル（10%）

ウェスタンブロッティング
本製品使用ゲル
Laemmli 法組成ゲル
（10%）
（15%）
タンパク質 X

Laemmli 法組成ゲル
（10%）

① ②

① ②
タンパク質 Y

①

① ②

②

① ②

① ②

① 大豆品種 1、② 大豆品種 2

使用者の評価SDS-PAGE 後の蛍光染色、ウェスタンブロッティングへの適用も問題はなかった。低分
子量域もほぼ均等に分離し、動植物由来サンプルなど、広範囲の分子量のタンパク質を網羅的に分離するには非常に便利である。また、ゲル強度が従来のものよりも強くて扱いやすく、学生実験などには好都合と思われる。
データご提供：近畿大学 農学部 応用生命化学科

森山 達哉 准教授 / 矢野 えりか様

Rapid Running Buffer 使用の場合
実験プロトコール
1. ポリアクリルアミドゲルの作製
p.53「Laemmli 泳動法 実験プロトコール 1. ポリアクリルアミドゲルの作製」と同様に作製してください。
2. 泳動用サンプルの調製
p.56「Laemmli 泳動法 実験プロトコールに調製してください。

60

2. 泳動用サンプルの調製」と同様▶ Laemmli 泳 動 法 で 使 用 し て い
たゲル濃度より 4％低いゲル濃度で作製することで、従来の分離パターンに近くなります。電気泳動パターン詳細についてはp.105 をご参照ください。
例）
Laemmli 泳動法

Rapid Running
Buffer 使用

12%

8%

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SDS-PAGE（自家調製ゲルによる電気泳動）

タンパク質電気泳動

3. 泳動用緩衝液（Rapid Running Buffer）の作製
Rapid Running Buffer Solution(20x) for SDS-PAGE と精製水を容量比 1：19 で混合します
Rapid Running Buffer を使用することにより、泳動時間を約 60％に短縮することができます。
また、泳動用緩衝液の温度上昇も Laemmli 法組成泳動用緩衝液と遜色ありません。

Rapid Running Buffer
Solution(20x) for SDS-PAGE（#12981-74）

泳動時間と泳動用緩衝液の温度上昇の比較
泳動時間

泳動用緩衝液の上昇温度

本製品
Laemmli 法

200＜実験条件＞

電圧
（V）

250

30
25
20
15
10
5
0

上昇温度
（℃）

泳動時間
（min）

60
50
40
30
20
10
0

本製品
Laemmli 法

200

電圧
（V）

250

Laemmli 法組成のミニゲル 2 枚、泳動用緩衝液 380 mL を使用。

ゲル濃度

泳動用緩衝液

8%

本製品

12%

Laemmli 法組成泳動用緩衝液（0.025 mol/L Tris、0.192 mol/L L-Glycine、0.1% SDS）

4. 泳動
ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル の セ ッ ト か ら ア プ ラ イ は、p.56「Laemmli 泳 動 法
実験プロトコール 4. 泳動①～③」をご参照ください。
サンプルアプライ後、200 ～ 250 V（定電圧）にて BPB がゲル下端 5 mm 程度になるまで泳動します。

▶ 泳動時間はゲル濃度、泳動用緩
衝液や室内の温度により異なります。

実施例 Rapid Running Buffer による泳動後の転写
Rapid Running Buffer お よ び Laemmli 法 組 成 泳 動 用 緩 衝 液 で 泳 動 し た ゲ ルの転写効率を確認しました。Rapid Running Buffer を使用する場合、従来のLaemmli 法組成泳動用緩衝液で使用するゲルよりも 4% 低い濃度でゲルを作製することで、従来の分離パターンに近くなります。また、低濃度のゲルを使用することにより、転写効率も上昇します。
ゲル濃度
泳動用緩衝液

8%

12%

本製品

Laemmli 法組成
泳動用緩衝液

転写時間

メンブレン
染色像

8%

12%

本製品

Laemmli 法組成
泳動用緩衝液

10 分

30 分

M.W.
(kDa) ④ ③ ② ①

M.W.
(kDa)

200→

200→

45→

22→
6.5→

45→

①②③④

M.W.
(kDa)
200→

45→

④③②①

M.W.
(kDa)

①②③④

200→

45→

22→

22→

22→

14+6.5→6.5→

14+6.5→＜実験条件＞
サンプル：① Protein Ladder One, Triple-color（販売終了）5 µL 添加②～④ タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を② 3 ×、③ 1 ×、④ 1/3 ×になるように調製し、各 2 µL 添加
ゲル：Laemmli 法組成ゲル（8% または 12%）
（ミニゲル：75 mm × 90 mm × 1 mm）
泳動：250 V 定電圧
転写：セミドライ ウェスタンブロッティング用転写緩衝液（#30650-31）10 V 定電圧
メンブレン染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）により PVDF メンブレンを染色

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61

SDS-PAGE（Tris-Tricine 泳動法～低分子分離法～） タンパク質電気泳動
低分子を分離する場合、Laemmli 泳動法により分離を行うよりも、Schägger と von Jagow が開発した Tris-Tricine
泳動法* により分離を行う方が、分離が向上し明瞭なバンドを得ることができます。
* Schägger, H.; von Jagow, G. Anal. Biochem. 1987, 166(2), p. 368-379.

実験プロトコール
1. ポリアクリルアミドゲルの作製① ゲルフレームを組み立てます。

② 組み立てたゲルフレームに下記のように 2 カ所印を付けます。
濃縮ゲル（4%）
スペーサーゲル（10%）

2 cm

コームをセットし、
コーム先から約 5 mm

▶ Laemmli 法 組 成 ゲ ル と は 異 なり、分離ゲルと濃縮ゲルの間にスペーサーゲルを作製します。
5 kDa 以下の分離を行わない場
合は省略可能です。

分離ゲル（16.5%）③ 分離ゲルおよびスペーサーゲルを作製するために、ビーカーに試薬を下表の割合で加え、混合します。
表. ミニゲル 1 枚分を作製する場合の各試薬の容量
分離ゲル（16.5%）
10 mL 分スペーサーゲル（10%）
5 mL 分40(w/v)%- ア ク リ ル ア ミ ド / ビ ス 混 合 液(29:1)

4.13 mL

1.25 mL

Tris-Tricine 泳動法ゲル緩衝液

3.33 mL

1.67 mL10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液（10% APS）

0.10 mL

0.05 mL

1.05 mL（1.33 g）－

1.39 mL

2.03 mL

グリセリン
精製水④ 吸引できるデシケーターに入れ、5 ～ 10 分減圧し、脱気します。この操作が十分でないと、ゲルの固化に時間を要したり、ウェルが形成しにくかった
りする場合があります（アクリルアミドの重合を妨害する溶存酸素を除去します）。

40(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (29:1)（#06119-45）30(w/v)%-アクリルアミド /ビス混合液 (29:1)（#06141-35）▶ Tris-Tricine 泳動法ゲル緩衝液はLaemmli 法組成ゲル時の組成とは異なります。
▶ ゲル緩衝液の調製方法→ p.109 参照
グリセリン（#17045-94）

10(w/v)%-ペルオキソ二硫酸
アンモニウム溶液（#02634-34）▶ 10% APS の調製方法→ p.108 参照▶ ゲルフレームは、メーカーによってサイズや形状が異なります。
▶ ゲル溶液量はメーカーによって異なる場合があります。

62

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SDS-PAGE（Tris-Tricine 泳動法～低分子分離法～） タンパク質電気泳動⑤ 分離ゲル溶液に TEMED 6 µL を添加、攪拌し、すぐにゲルフレームの下側の印まで流し込みます。

▶ TEMED を添加後は、アクリル
アミドのゲル化が加速します。
できるだけ早くゲルフレームに流し込んでください。
N,N,N',N'-テトラメチルエチレン
ジアミン（#33401-72）⑥ 続けてスペーサーゲル溶液に TEMED 3 µL を添加、攪拌し、すぐにゲルフレー
ムの上側の印まで流し込みます。

⑦ スペーサーゲル溶液を流し込んだ後すぐに、精製水または 1- ブタノールを重層し、1 時間以上静置します。
⑧ 分離ゲル、スペーサーゲルを静置している間に、濃縮ゲル溶液を準備します。
濃縮ゲルを作製するため、ビーカーに試薬を下表の割合で加え、混合します。

▶ 分離ゲルの固化を待つ必要はありません。分離ゲル添加後、すぐにスペーサーゲルを添加してください。

1- ブタノール（#06016-85）

表. ミニゲル 1 枚分を作製する場合の各試薬の容量
濃縮ゲル（4%）
3 mL 分40(w/v)%- アクリルアミド / ビス混合液 (29:1)

0.3 mL

Tris-Tricine 泳動法ゲル緩衝液

0.75 mL10(w/v)%- ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液（10% APS）

24 µL

精製水

1.93 mL⑨ 吸引できるデシケーターに入れ、5 ～ 10 分減圧し、脱気します。この操作が十分でないと、ゲルの固化に時間を要したり、ウェルが形成しにくかった
りする場合があります（アクリルアミドの重合を妨害する溶存酸素を除去します）。
⑩ 分離ゲル、スペーサーゲルが固まったら、重層した精製水または 1- ブタノー
ルをペーパータオルなどに吸収させて完全に除去します。1- ブタノールを使用した場合、精製水で洗浄することを推奨します。
⑪ 濃縮ゲル溶液に TEMED 2.4 µL を添加、攪拌し、ゲルフレーム上部いっぱいまで流し込みます。
⑫ 直ちにコームをガラスプレートの間に挿し込みます。室温で 1 時間程度放置
するとゲルが固まります。

▶ Tris-Tricine 泳動法ゲル緩衝液はLaemmli 法組成ゲル時の組成とは異なります。
▶ ゲル緩衝液の調製方法→ p.109 参照▶ 余った溶液がゲル化していることをご確認ください。
ゲルフレーム内のゲル化は、ポリアクリルアミドゲルの上に精製水またはブタノールの層ができていることを確認し、さらにフレームを傾けて確認します。

▶ TEMED を添加後は、アクリル
アミドのゲル化が加速します。
できるだけ早くゲルフレームに流し込んでください。
▶ コームの先に気泡が入らないよ
うに斜めから挿入してください。

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63

SDS-PAGE（Tris-Tricine 泳動法～低分子分離法～） タンパク質電気泳動
2. 泳動用サンプルの調製① タンパク質サンプルと Tris-Tricine 泳動法試料緩衝液を容量比 1：1 で混合します。
② 試料緩衝液と混合した泳動用サンプルを 90℃ 以上で 3 分程度加温し、タン
パク質のジスルフィド結合を切断します。なお、還元剤不含の試料緩衝液を使用し非還元状態で泳動する場合は、加温を行わないでください。

▶ 必要に応じて泳動用サンプル調
製の前に、タンパク質サンプルの濃縮や分析妨害物質の除去を行ってください（p.113 参照）。
▶ 低分子分離の場合、泳動先端
マーカーとして使用される BPB
よりも先に泳動されるタンパク質があるため、泳動先端としては CBB を使用します。
▶ 試料緩衝液の調製方法→ p.109 参照

3. Tris-Tricine泳動法泳動用緩衝液の作製
Tris-Tricine 泳動法泳動用緩衝液を準備します（10 倍濃縮液を作製しておくと便利です。使用前に精製水で 10 倍希釈してください）。

▶ 泳動用緩衝液の調製方法→ p.109 参照

4. 泳動① 作製したポリアクリルアミドゲルからコームを静かに抜き取り、クリップなどの付属品を外します。

② ポリアクリルアミドゲル用電気泳動槽へセットし、泳動用緩衝液を加えます。
③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

▶ ウェルを洗浄し、未反応のアクリ
ルアミドを除去してください。

④ 100 V（定電圧）にて CBB がゲル下端 5 mm 程度になるまで泳動します。

▶ 泳動終了までに要する時間は
2.5 ～ 3 時間程度です。

64

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SDS-PAGE（Tris-Tricine 泳動法～低分子分離法～） タンパク質電気泳動
実施例 Tris-Tricine 泳動法による分離例
Tris-Tricine 泳 動 法 は Laemmli 泳 動 法 に 比 べ、 低 分 子 の 分 離 が 改 善 し ま す。
Laemmli 泳動法でも泳動用緩衝液を Tris-Tricine 法組成に変更することでわずかに分離は改善されますが、Tris-Tricine 泳動法には及びません。
ゲル
泳動用緩衝液Tris-Tricine 法組成ゲル

Laemmli 法組成ゲル（20%）

Laemmli 法組成ゲル（20%）

Tris-Tricine 法組成

Laemmli 法組成

Tris-Tricine 法組成(kDa)① ② ③ ④ ⑤

(kDa)

(kDa)

① ② ③ ④ ⑤

(kDa)

(kDa)

① ② ③ ④ ⑤

(kDa)

染色像
6.5→

6.5→
6.5→
←3.9
←1.7

←3.9
←1.7

←3.9
←
1.7

＜実験条件＞
サンプル：① タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を 1 ×になるように調製② 大腸菌懸濁液③ HeLa 細胞懸濁液④ プレシジョン Plus プロテイン 未着色スタンダード（バイオ・ラッド ラボラトリーズ #1610363）⑤ DynaMarker® Protein MultiColor Stable, Low Range（バイオダイナミクス研究所 #DM670）
ゲル：Tris-Tricine 法組成ゲル（16.5%; スペーサーゲルあり）
Laemmli 法組成ゲル（20%）
泳動：［Tris-Tricine 法組成ゲル］100 V 定電圧［Laemmli 法組成ゲル］150 V 定電圧
染色：Bullet CBB Stain One(Ready To Use)(#13542)
DynaMarker® は株式会社バイオダイナミクス研究所の登録商標です。

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65

SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動
本項ではプレキャストゲルを用いた SDS-PAGE の方法を紹介します。
弊社では 2 種類のプレキャストゲルを販売しています。

Bullet PAGE One と Extra PAGE One
Bullet PAGE One

Extra PAGE One

特長

泳動時間が短い（約 10 分）

高い分離能と幅広いゲル濃度のラインアップ

電気泳動時間約 10 分（400 V 定電圧）

約 30 ～ 40 分（300 V 定電圧）

W80 mm × H60 mm × T1.0 mm（W100 mm × H80 mm × T3.2 mm）

W80 mm × H80 mm × T1.0 mm（W100 mm × H100 mm × T3.2 mm）

ゲルサイズ（プレートサイズ）
コーム数
ゲル濃度

13 ウェル（40 µL）、17 ウェル（28 µL）
グラジエント均一

詳細は p.106「電気泳動パターン

5 ～ 11%、5 ～ 15%

5 ～ 10%、5 ～ 15%、5 ～ 20%、7.5 ～ 15%、10 ～ 20%6%、8%7.5%、10%、12.5%、15%

プレキャストゲル」をご参照ください。

実験プロトコール
1. 泳動用サンプルの調製① タンパク質サンプルと試料緩衝液を混合します。
タンパク質サンプル：試料緩衝液
試料緩衝液（6 ×）の場合

5：1

試料緩衝液（2 ×）の場合

1：1

容量比

② 試料緩衝液と混合した泳動用サンプルを 90℃ 以上で 3 分程度加温し、タン
パク質のジスルフィド結合を切断します。なお、還元剤不含の試料緩衝液を使用し非還元状態で泳動する場合は、加温を行わないでください。

▶ 必要に応じて泳動用サンプル調
製の前に、タンパク質サンプルの濃縮や分析妨害物質の除去を行ってください（p.113 参照）。
▶ 試料緩衝液の調製方法→ p.108 参照▶ 試料緩衝液 6 倍濃縮タイプは、
タンパク質濃度が薄い時もしくはタンパク質量を多く泳動したい時に有用です。
試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,6倍濃縮 , 還元剤含有 )（#09499-14）
毒物非該当

2. 泳動用緩衝液（Laemmli 法組成）の作製
泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 , SDS-PAGE 用 , トリス - グリシン系 ) と精製水を容量
比 1：9 で混合します。

試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,6倍濃縮 , 還元剤不含 )（#09500-64）▶ 試料緩衝液 2 倍濃縮タイプは、
タンパク質サンプルとの混合比
が等量で分かりやすく、混合ミ
スを軽減できます。
試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,2倍濃縮 , 2-ME含有 )（#30566-22）

試料緩衝液 (SDS-PAGE用 ,2倍濃縮 , 2-ME不含 )（#30567-12）

泳動用緩衝液 (10倍濃縮 , SDSPAGE用 , トリス -グリシン系 )（#30329-61）▶ 泳動用緩衝液の調製方法→ p.108 参照

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SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動
3. 泳動① プレキャストゲルを袋から取り出し、コームを外します。
② プレキャストゲルを電気泳動槽* へセットし、泳動用緩衝液を加えます。
③ 泳動用サンプルを各ウェルへ静かに添加します。

④ 下記条件設定にて BPB がゲル下端 5 mm 程度になるまで泳動します。
ゲル

設定条件

Bullet PAGE One

400 V（定電圧）約 10 分
300 V（定電圧）約 16 分

Extra PAGE One

300 V（定電圧）30 ～ 40 分
プレキャストゲル

ポリアクリルアミドゲル

電気泳動槽へのセット方法

泳動方法* 推奨機種）WEP-N もしくは WEPMN バ ー ティカ ル 高 速 泳 動 槽（ジェレックスインターナショナ
ル #WEP-N / WEP-MN）▶ 着 色 マ ー カ ー で あ る Protein
Ladder One Plus は、SDS-PAGE
で の 分 離 確 認 やウェスタンブ
ロッティングでの転写確認の目
安となります。分子量の測定には未着色マーカーであるタンパク質マーカーをご使用ください。
タンパク質マーカー (10 倍濃縮 )（#29458-24）

Protein Ladder One Plus,
Triple-color for SDS-PAGE（#19593-25）

ウェスタンブロッティングに最適
Chemi-Lumi One Markers Kit（#06456-70）▶ タンパク質マーカーの詳細と分離パターン → p.112 参照

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67

SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動
実施例 1 他社製品との比較＜Bullet PAGE One＞
■ 分離能の比較
Bullet PAGE One（5 ～ 15% ゲル）の泳動時間は、下記評価ゲルの中で最短で終
了します。
製品名

Bullet PAGE One

Extra PAGE One

A社

B社

ゲル濃度

5 ～ 15％5 ～ 20％4 ～ 15％4 ～ 12％

製品番号13079-8413063-74

－

－

泳動時間

11 分
M.W.(kDa)

40 分

33 分
M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

200→

染色像

45→

200→

45→
45→

45→
22→

22→
6.5→

50 分
M.W.(kDa)

22→

6.5→

6.5→

22→
6.5→

＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を 1 ×になるように調製し、5 µL 添加
泳動：Bullet PAGE One 400 V 定電圧、Extra PAGE One 300 V 定電圧、A 社、B 社製品は推奨条件 200 V 定電圧に準じています。
染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）■ 転写効率の比較
Bullet PAGE One は、転写 20 分で A 社製品より効率良く転写されています。転写初期 10 分の時点でも、A 社製品より転写効率が高いことが示されています。
● 転写 10 V、20 分● 転写初期 10 V、10 分

Bullet PAGE One
A社（5 〜 15％ゲル） （4 〜 15％ゲル）
④ ③ ②
①
①
②③④
M.W.
M.W.
高い転写効率

(kDa)
200→

45→

22→
6.5→

Bullet PAGE One
A社（5 〜 15％ゲル） （4 〜 15％ゲル）
④③②
①
①
②③④
M.W.
M.W.
高い転写効率

(kDa)

(kDa)

←200

200→

←45

←22
←6.5

(kDa)

←200

45→

←45

22→
6.5→

←22
←6.5

＜実験条件＞
サンプル：① Protein Ladder One, Triple-color（販売終了）②～④ タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を② 3 ×、③ 1 ×、④ 1/3 ×になるように調製し、各 2 µL 添加
転写：セミドライ ウェスタンブロッティング用転写緩衝液（#30650-31）でゲルとメンブレンを 15 分平衡化後に、10 V 定電圧で 10 分、20 分転写
メンブレン染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）により PVDF メンブレンを染色

68

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SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動＜Extra PAGE One＞
■ 分離能の比較
他社製品と同等以上の分離能を示します。特に 5 ～ 20% のグラジエントゲル
や 12.5% の均一ゲルでの比較例では、低分子側の分離能に優れることが示され
ています。
ゲル

グラジエントゲル

均一ゲル

製品名

C社

Extra PAGE One

D社

Extra PAGE One

C社

ゲル濃度

4 ～ 20％5 ～ 20％5 ～ 20％

12.5％

12.5％

製品番号

－

13063-74

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

45→

45→

22→

22→
6.5→

－

13073-44

M.W.(kDa)
200→－

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

45→

染色像

6.5→

45→

45→
22→
6.5→

22→

22→

6.5→

6.5+14→＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を 1 ×になるように調製し、5 µL 添加
泳動：Extra PAGE One 300 V 定電圧 約 50 分、C 社、D 社製品は推奨条件に準じています。
染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）■ 転写効率の比較
Extra PAGE One は、他社品と同等以上の転写効率を示します。特に高分子および低分子タンパク質の転写効率が高いことが分かります。
Extra PAGE One
C社（7.5 〜 15％ゲル）（8 〜 16％ゲル）①②③④ ⑤⑤ ④③② ①
M.W.(kDa)
M.W.(kDa)
高い転写効率
200→

←200

45→

←45

14→

←14

高い転写効率＜実験条件＞
サンプル：① Protein Ladder One, Triple-color（販売終了）②～④ タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を② 3 ×、③ 1 ×、④ 1/3 ×になるように調製し、各 2 µL 添加⑤ プレシジョン Plus プロテイン カレイドスコープ（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）10 µL 添加
転写：セミドライ ウェスタンブロッティング用転写緩衝液（#30650-31）でゲルとメンブレンを 15 分平衡化後に、10 V 定電圧で 20 分転写
メンブレン染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）により PVDF メンブレンを染色
Extra PAGE One
D社（5 〜 20％ゲル） （5 〜 20％ゲル）
① ②③
③②①

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

高い転写効率
200→

45→

14→

Extra PAGE One
D社（12.5％ゲル） （12.5％ゲル）③②①①②③
M.W.(kDa)
M.W.(kDa)
高い転写効率
200→

←200

45→

←45

←200

←45

←14

14→

←14

＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を① 3 ×、② 1 ×、③ 1/3 ×になるように調製し、各 2 µL 添加
転写：セミドライ ウェスタンブロッティング用転写緩衝液（#30650-31）でゲルとメンブレンを 15 分平衡化後に、10 V 定電圧で 20 分転写
メンブレン染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）により PVDF メンブレンを染色

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69

SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動
実施例 2 Bullet PAGE One の使用例
■ CBB 染色・ウェスタンブロッティングへの適用（Bullet PAGE One（5 ～ 15% ゲル））● CBB 染色● ウェスタンブロッティング

M.W.
(kDa)
250→

M.W.
(kDa)
250→

150→

150→

100→
75→

100→
75→

50→

50→

37→

37→

25→

25→
20→
15→
10→

20→
15→
10→

αʼ
α 7S グロブリン（露光時間 1 分）
βActin
（露光時間 3 分）

Gly m 4
（露光時間 5 分）

ウェスタンブロッティングの結果は、検出タンパク質によって露光時間を変えた結果を合わせています。

上記結果より、CBB 染色およびウェスタンブロッティングには問題なく使用可能である
ことが示されています。
データご提供：近畿大学 農学部 応用生命化学科

森山 達哉 教授 / 矢野 えりか 研究員■ MS への適用● CBB 染色● タンパク質を含まないゲル断片の MS

Bullet PAGE One
M.W.(kDa)
250→
100→
75→
50→

BSA 由来のバンド（約 4 µL）

25→● BSA 由来バンドのゲル断片の MS

15→

ウシ血清アルブミン（BSA）（#01859）を SDS で変性し、Bullet PAGE One 5 ～ 15% ゲルを用いて SDS-PAGE を実施（400 V、15 分）した。泳動後のゲルを CBB を用いて染色し、BSA 由来のバンドを確認した（左図）。また、BSA を供した Gel-Negative Stain Kit for
SDS-PAGE（#16660-41）で染色し、BSA のバンドを切り出した。洗浄バッファーで洗浄したゲル中のタンパク質を、還元・アルキル化したのち、37℃ にて一晩トリプシン消化した。トリプシン消化産物であるペプチドを C18 ZipTip により脱塩、濃縮後、MALDITOF/MS 解析を行った。その結果、BSA 由来のペプチド断片が検出され、PMF 解析により BSA であることが同定できたことから、MS 解析にも適用可能であることが確認された（右図）。またコントロールとして、タンパク質を含まない部分のゲルからは、夾雑物は検出されなかった（左図）。Bullet PAGE One は、CBB 染色およびネガティブ染色、ゲ
ル内消化物の PMF 解析に適用可能であることが確認できた。

Gel-Negative Stain Kit for SDSPAGE（#16660-41）

データご提供：京都大学 化学研究所 分子微生物科学研究領域
栗原 達夫 教授 / 川本 純 助教 / 河合 総一郎 博士後期課程 1 年 /豊竹 洋佑 修士課程 1 年
ZipTip は Merck KGaA の登録商標です。

70

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SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動■ 高速ウェスタンブロッティングへの適用
Bullet シリーズを用いることで、わずか 2 時間で従来手法と同等の結果を得る
ことができます。
Bullet シリーズ

従来手法

Bullet Semi-dry Transfer One（#15353-01）

ブロッティング像

サンプル

HeLa 細胞タンパク質抽出液 5 µg より 2 倍希釈系列
Bullet PAGE One
Precast Gel, 5-15%,
17wells

電気泳動

400 V 10 分

Bullet Semi-dry
Transfer One

転写
ブロッキング

25 V

200 V 60 分

セミドライウェスタン
10 分 ブロッティング用転写
緩衝液
5分

10 V

45 分

5% スキムミルク

60 分

一次抗体 *1

Bullet ImmunoReaction Buffer
30 分
で抗体を希釈0.1%-tTBS で抗体を希釈

60 分

二次抗体 *2

Bullet ImmunoReaction Buffer
30 分
で抗体を希釈0.1%-tTBS で抗体を希釈

60 分

検出

Bullet Blocking One

Laemmli 法組成ゲル10%, 18 wells

Bullet Blocking One for Western
Blotting（#13779-01）

Chemi-Lumi One Super / LAS-3000（High モード） 露光時間 5 分

計（洗浄時間を含む）

約 2 時間約 5 時間 30 分

*1 一次抗体：GAPDH Antibody（Novus #NB300-322）10,000 倍希釈*2 二次抗体：Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP](Pre-adsorbed)（Novus #NB7187）200,000 倍希釈■ 高速 CBB 染色への適用

Bullet ImmunoReaction Buffer（#18439-85）

Bullet PAGE One Precast Gel および Bullet CBB Stain One を用いることで、電気泳動から染色までを約 30 分で行うことができます。

①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯⑰

M.W.（kDa）
200→

45→

14→

＜実験条件＞
サンプル：① タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を 1 ×になるように調製し、3 µL 添加②～⑰ 大腸菌由来タンパク質を以下の容量で各ウェルに添加②⑥⑩⑭ 1 µL、③⑦⑪⑮ 2 µL、④⑧⑫⑯ 3 µL、⑤⑨⑬⑰ 4 µL
ゲル
：Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells（#13080-44）
染色：Bullet CBB Stain One(Ready To Use)（#13542）20 mL 中で 15 分染色※染色像は染色中の容器内で確認可能

Bullet CBB Stain One(Ready To Use)（#13542-81）

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71

SDS-PAGE（プレキャストゲルによる電気泳動） タンパク質電気泳動
実施例 3 Extra PAGE One の使用例
■ MS への適用
Extra PAGE One は、CBB 染色や銀染色などの染色に問題なく使用できるだけでなく、ゲルから切り出したバンドを MS 解析に利用する際にも問題なく利用可
能です。
● 10% 均一ゲル

Relative intensity (%)

100

切り出した
バンド（BSA）

0800

MALDI-MSmatrix: 2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB)
mode: positive mode
range: m/z 800-4000
Laser energy: 30 µJ

m/z

4000

● Extra PAGE One 7.5 ～ 15% ゲル

切り出した
バンド（BSA）

Relative intensity (%)

100

0
800

MALDI-MSmatrix: 2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB)
mode: positive mode
range: m/z 800-4000
Laser energy: 30 µJ

m/z

4000

ウシ血清アルブミン（#01859）を SDS 化し、10% 均一ゲルもしくは Extra PAGE One 7.5 ～15% ゲルを用いて SDS-PAGE に供した。泳動後のゲルは Gel-Negative Stain Kit for SDSPAGE（#16660-41）を用いて染色しバンドを確認した。切り出したタンパク質のバンドを含んだゲルを染色キットに含まれる洗浄バッファーで洗浄した後、ゲル中のタンパク質を還元、アルキル化したのち、30℃ にて一晩、トリプシンで消化した。トリプシン消化されたペプチ
ドを C18 Tip により脱塩後、MALDI-MS 解析を行った。その結果、いずれのゲルを用いた
場合でも明瞭な BSA 由来のペプチド断片が検出された。
データご提供：近畿大学 農学部 応用生命化学科

Gel-Negative Stain Kit for SDSPAGE（#16660-41）

森山 達哉 教授 / 吉村 征浩 博士研究員▶ Extra PAGE One MS/MS 解析
使用例→ https://www.nacalai.co.jp/
products/entry/d004020.html
参照72

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二次元電気泳動

タンパク質電気泳動

二次元電気泳動とは、異なる二種類の電気泳動法を組み合わせてタンパク質を分離する手法です。一般的に、一次元目では等電点電気泳動によりタンパク質の等電点で分離し、二次元目では SDS-PAGE によりタンパク質の分子量で分離を行います。

二次元電気泳動の流れ
一次元目

等電点電気泳動

タンパク質を等電点で分離します。
等電点（pI）

SDS 平衡化

二次元目の SDS-PAGE に適応できるよう、SDS で平衡化します。
また、ジスルフィド結合（S-S 結合）を切断し、泳動中に再構築しないようチオール基をヨードアセトアミドによりアルキル化
修飾します。

二次元目

タンパク質を分子量で分離します。

SDS-PAGE

分子量等電点電気泳動とは
等電点電気泳動とは、タンパク質の等電点で分離する手法です。等電点ゲルとして両性担体ゲルおよび固定化 pH
勾配ゲル（IPG ゲル）の2 種類があります。
両性担体ゲル

固定化 pH 勾配ゲル（IPG ゲル）

ゲルについて両性担体（アンフォライト）含有アガロースもしくはアクリル
IPG モノマーが組み込まれたアクリルアミドゲル
アミドゲル

分離能

低い

pH 勾配形成方法 通電により形成
ゲル作製

自家調製も可能
プレキャストゲル（乾燥ゲル / ウェットゲル）も入手可能

高い
ゲル作製時に pH 勾配形成
プレキャストゲル（乾燥ゲル）が主流

本プロトコールではプレキャスト IPG ゲルを用いた方法を紹介しています。

プレキャスト IPG ゲル
実験プロトコール
1. 等電点電気泳動
プレキャスト IPG ゲルは乾燥ゲルのため、泳動前に膨潤させる必要があります。
本プロトコールではゲル膨潤液にサンプルをあらかじめ混合しておく方法を紹介しています（ゲル膨潤後にサンプルを添加することも可能です。添加サンプ
ル容量などについては、IPG ゲルもしくは等電点電気泳動装置の取扱説明書をご確認ください）。
① サンプルを PAGE Clean Up Kit などを用いて脱塩します。詳細は p.113 をご参照ください。

PAGE Clean Up Kit（#06441-50）▶ 等電点電気泳動は高電圧下で泳動するため、塩濃度を下げておく必要があります（耐塩濃度は泳動装置により異なります。取扱説明書をご確認ください）。

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73

二次元電気泳動② 脱塩したサンプルを適切な量のゲル膨潤液で希釈します。
③ 等電点電気泳動用装置の IPG ホルダーもしくは専用の膨潤容器に②のサンプ
ル含有ゲル膨潤液を添加します。
④ ゲルの保護フィルムをはがし、ゲル面が下になるように③へ置きます。
⑤ シリコンオイルを重層します。
⑥ 室温で一晩（10 時間以上）静置します。
⑦ ⑥のゲルを等電点電気泳動装置にセットし、通電します。
⑧ 拡散を防ぐため、等電点電気泳動終了後のゲルはすぐに SDS 平衡化に進む、
もしくは -60℃ 以下で保存してください。
2. SDS-PAGE ゲルの準備① SDS-PAGE ゲル（Laemmli 泳動法もしくは WIDE RANGE Gel）を作製します。
p.53「Laemmli 泳動法 実験プロトコール 1. ポリアクリルアミドゲルの作 製 」も し く は、p.58「WIDE RANGE Gel 使 用 の 場 合 実 験 プ ロ ト コ ー ル
1. ポリアクリルアミドゲル（WIDE RANGE Gel）の作製」を参考に準備してくだ
さい。
なお、濃縮ゲル添加後、差し込むコームはくし形ではなく、二次元電気泳動用のフラットコームをご使用ください。

タンパク質電気泳動▶ ゲル膨潤液の調製方法→ p.110 参照▶ ゲル膨潤液の量は使用する IPG
ゲルのメーカー・長さにより異なります。取扱説明書をご確認ください。
▶ ゲル膨潤液とゲルの間に気泡が入らないよう気を付けてください。
▶ 通電条件は使用する IPG ゲルのメーカー・長さ・泳動装置により異なります。取扱説明書をご確認ください。
▶ 7 cm 程度の IPG ゲルであれば15 mL キャップ付き遠心管に、それ以上長いゲルはシャーレなどに丸めて入れ、-60℃ 以下で保存します。
▶ SDS 平 衡 化 後 は、 す み か や に
SDS-PAGE へ進む必要があります。そのため、SDS 平衡化を始める前に SDS-PAGE ゲルを準備しておいてください。
▶ フラットコームが な い 場 合 は、濃縮ゲルを添加後、精製水もし
くは 1- ブタノールを重層することで作製することができます。

② 泳動用緩衝液（Laemmli 泳動法もしくは Rapid Running Buffer）を作製します。
p.56「Laemmli 泳動法 実験プロトコール 3. 泳動用緩衝液の作製」もしくは、p.61「Rapid Running Buffer 使 用 の 場 合 実 験 プ ロ ト コ ー ル 3. 泳 動用緩衝液（Rapid Running Buffer）の作製」を参考に準備してください。
3. SDS 平衡化① 等電点電気泳動終了後のゲルを SDS 平衡化液 A に入れ、15 分振とうします。
SDS 平衡化液 A はゲルが浸る十分な量をご使用ください。
② ①を SDS 平衡化液 B に入れ、15 分振とうします。SDS 平衡化液 B はゲルが浸る十分な量をご使用ください。
4. SDS-PAGE①（オプション）タンパク質マーカーを同時に泳動する場合
タンパク質マーカーを試料緩衝液と混合し、90℃ 以上で 5 分程度加温します。加温処理したタンパク質マーカーを 3 mm 角のろ紙にしみこませておきます。
② SDS 平衡化が終了した IPG ゲルを泳動用緩衝液に数秒浸し、ろ紙などで過剰な緩衝液を除去します。
③ SDS-PAGE ゲルに②とタンパク質マーカーをしみこませたろ紙を置き、アガロース溶液を流し込み、IPG ゲルと SDS-PAGE を密着させます。

WIDE RANGE Gel Preparation
Buffer(4x) for PAGE（#07831-94）

Rapid Running Buffer
Solution(20x) for SDS-PAGE（#12981-74）▶ 平衡化液 A、B の調製方法→ p.110 参照▶ SDS 平 衡 化 後 は、 す み か や に
SDS-PAGE へ進んでください。
タンパク質マーカー (10 倍濃縮 )（#29458-24）

タンパク質マーカーの調製方法
詳細は取扱説明書をご参照ください。
▶ アガロース溶液の調製方法→ p.111 参照④ 100 ～ 200 V（定電圧）にて BPB がゲル下端 5 mm 程度になるまで泳動します。

74▶ 泳動時間はゲル組成や濃度、泳動用緩衝液組成や液温、室内の温度により異なります。

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二次元電気泳動

タンパク質電気泳動

実施例 1 WIDE RANGE Gel を使用した二次元電気泳動
一次元目等電点電気泳動ゲルとして IPG ゲルを用い、二次元目 SDS-PAGE ゲル
として WIDE RANGE Gel を用いた二次元電気泳動を実施しました。HL-60 細胞
由来タンパク質が分離され、銀染色にて検出されていることが分かります。

＜実験条件＞
サンプル：HL-60 細胞由来タンパク質ゲル：［一次元目］Immobiline DryStrip pH 4-7（Cytiva）［二次元目］WIDE RANGE Gel（12%）
染色：Sil-Best Stain One（#06865-81）
Immobiline は、Cytiva として事業を行う Global Life Sciences Solutions USA LLC およびその関連会社の商標です。

実施例 2 Rapid Running Buffer を使用した二次元電気泳動
一次元目等電点電気泳動ゲルとして IPG ゲルを用い、二次元目 SDS-PAGE ゲルとして Laemmli 法組成ゲルを用いた二次元電気泳動を実施しました。二次元目
SDS-PAGE は Rapid Running Buffer によりわずか 25 分で終了しています。

＜実験条件＞
サンプル：HL-60 細胞由来タンパク質ゲル：［一次元目］Immobiline DryStrip pH 4-7（Cytiva）［二次元目］Laemmli 法組成ゲル（10%）
泳動用緩衝液：［二次元目］Rapid Running Buffer Solution(20x) for SDS-PAGE（#12981-74）
泳動：［二次元目］250 V 定電圧 25 分
染色：Sil-Best Stain One（#06865-81）
Immobiline は、Cytiva として事業を行う Global Life Sciences Solutions USA LLC およびその関連会社の商標です。

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75

ゲルの染色タンパク質電気泳動

泳動後のゲルを染色することで、タンパク質を検出します。

ゲル染色方法の比較
総タンパク質を検出するゲル染色方法として下記 4 種類を紹介します。検出感度や簡便性、検出器、染色後のアプ
リケーションなどにより、染色方法を選択します。
CBB 染色
特長

簡便

銀染色
感度が高い

蛍光染色

ネガティブ染色

簡便で感度が高い

染色後に MS やウェスタンブ
ロッティングに適用可能

励起光

染色イメージ（原理） タ ン パ ク 質 と 結 合 す る 色 素 銀イオンがタンパク質と反応、 タンパク質と結合する蛍光色 タンパク質以外を染色するこ
CBB を用いて検出する
還元され析出することで検出 素を用いて検出するとで検出する
する
感度数十 ng ～

簡便性

簡便・Bullet CBB Stain One
・CBB Stain One Super
・CBB Stain One
・Rapid Stain CBB Kit

製品群

数 ng 以下

数 ng

数 ng

煩雑

簡便
（蛍光検出器が必要）

やや煩雑

・Sil-Best Stain One
・Sil-Best Stain-Neo

・Lumitein Protein Gel Stain（Biotium）

・Gel-Negative Stain Kit

弊社では、His-tag 融合タンパク質のみを簡便に検出できる「His-Detect In-Gel Stain(#08500)」もラインアップしています。詳細は p.115 をご参照ください。
また、目的のタンパク質のみを検出するウェスタンブロッティングは、「よく解る実験プロトコール
ブロッティング編」をご参照ください。

ウェスタン

CBB 染色コマジーブリリアントブルー（Coomassie Brilliant Blue; CBB）染色はその簡便性から、電気泳動後のゲル染色として汎用されている方法です。
弊社では、CBB 染色液として以下の 4 種類の製品をラインアップしています。

76

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ゲルの染色タンパク質電気泳動

CBB 染色液の比較
CBB 染色液には、緑がかった G-250 タイプと、視認性に優れた赤みがかった R-250 タイプがあります。また染色前操作、脱色が不要で簡便性に優れた Bullet CBB Stain One も用意しています。目的に応じてご使用ください。
Bullet CBB Stain One（#13542）

CBB Stain One Super（#11642）

CBB Stain One（#04543）

Rapid Stain CBB Kit（#30035-14）

製品イメージ色素
形状

CBB G-250
・1 液タイプ
・酢酸、メタノール不含

CBB R-250

CBB G-250

CBB R-250

・1 液タイプ
・酢酸、メタノール不含

・1 液タイプ
・酢酸、メタノール不含
水洗（5 分× 3 回）調製（2 液の混合）

60 分

20 分

染色前操作

不要

水洗（5 分× 3 回）

染色時間

15 分 *

30 分

脱色時間

不要 *

・2 液タイプ
・酢酸含有、メタノール不含

1 時間以上

検出感度

数十 ng

* ゲルの乾燥保存など脱色後の泳動像を記録する場合は、染色は 1 時間、脱色は 1 時間以上必要です。

参考データ：脱色操作後の染色像比較① ② ③ ④① ② ③ ④

Bullet CBB Stain One（#13542）
水洗：なし
染色：60 分脱色：60 分CBB Stain One Super（#11642）
水洗：5 分× 3 回
染色：30 分脱色：一晩M.W.(kDa)① ② ③ ④① ② ③ ④

200→

45→

22→

CBB Stain One（#04543）
水洗：5 分× 3 回
染色：60 分脱色：一晩

Rapid Stain CBB Kit（#30035-14）
水洗：なし
染色：20 分脱色：一晩

Bullet CBB Stain One は脱色を行わなくても泳動像の確認ができますが、染色 60 分、脱色 60 分を行うことで、より鮮明な泳動像が、他の染色方法よりも短時間で得られます。
本項では短時間で CBB 染色が行える Bullet CBB Stain One、および視認性に優れた R-250 タイプで 1 液製品である
CBB Stain One Super のプロトコールを紹介します。
それ以外の使用方法については各製品の取扱説明書をご参照ください。CBB Stain One の使用方法については、動画もご参照ください。
CBB Stain One を用いた
CBB 染色動画アイコン付きプロトコールの末尾に記載の QR コードをクリック、またはスマートフォンなどで読み取ると、動画をご視聴いただけます。

77

ゲルの染色タンパク質電気泳動

Bullet CBB Stain One
実験プロトコールミニゲルの染色方法を紹介します。

▶ 染色操作は清潔な手袋を着用して行ってください。

① 清潔なトレイ（Dispotray など）に Bullet CBB Stain One を注ぎます（ゲルが完
全に浸る量をご使用ください）。
② 電気泳動後のゲルを①に移し、15 分室温でゆっくりと振とうし染色します。
染色前の水洗や染色後の脱色は不要で、染色液中で泳動像が確認できます。

▶ ご使用前に Bullet CBB Stain One
を 2、3 回穏やかに転倒混和してください。

③ 染色後のゲルは本製品に浸した状態で、蓋をして冷蔵保存できます。精製水中で染色後のゲルを保存する場合は、染色を 1 時間行ってください。

▶ 染色後のゲルを本製品に浸した状態で冷蔵保存すると白濁する場 合 が あ り ま す が、 問 題 は ありません。必要に応じてゲルを
30 分～ 1 時間程度洗浄してください。

Bullet CBB Stain One を用いた
CBB 染色▶ より鮮明な泳動像を得る場合
は、染色時間を 60 分まで延長
し、その後精製水を用いて 60
分脱色を行ってください。

Bullet CBB Stain One(Ready To Use)（#13542-81）

実施例 Bullet CBB Stain One を用いた植物タンパク質の検出
Bullet PAGE One で泳動したゲルを Bullet CBB Stain One にて染色し、植物タン
パク質の検出を行いました。
(kDa)
250
130
95
72
55

Dispotray-M（#16551-84）

43
36
28
17
10

＜実験条件＞
サンプル：植物（シロイヌナズナおよび小松菜）より抽出したタンパク質ゲル：Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%
泳動用緩衝液：泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 , SDS-PAGE 用 , トリス - グリシン系 （#30329）)
泳動：400 V 定電圧 12 分
染色：Bullet CBB Stain One(Ready To Use)（#13542）10 分染色後、脱色使用者の評価
Bullet PAGE One および Bullet CBB Stain One を使用することにより、従来行っている方法と同様の結果を短時間で得ることができた。
データご提供：京都大学理学研究科 生物科学専攻 植物学教室 植物分子遺伝学研究室 様78

Dispotray-S（#16526-82）▶ Dispotray → p.50 参照

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ゲルの染色タンパク質電気泳動

CBB Stain One Super
実験プロトコールミニゲルの染色方法を紹介します。

▶ 染色操作は清潔な手袋を着用して行ってください。

① 清潔なトレイ（Dispotray など）に精製水を入れ、電気泳動後のゲルを浸します。5 分振とうし、トレイから精製水を除去します。
② ①の洗浄操作をさらに 2 回行います。
③ CBB Stain One Super を注ぎます（ゲルが完全に浸る量をご使用ください）。
30 分室温でゆっくりと振とうし染色します。

▶ ご使用前に CBB Stain One Superを 2、3 回穏やかに転倒混和してください。
CBB Stain One Super(Ready To Use)（#11642-31）④ CBB Stain One Super を除去します。
⑤ 精製水を入れ、染色後のゲルを浸し振とうします。精製水を交換しながらバッ
クグランウンドが透明になるまで洗浄を行います。
CBB Stain One Super を用いた
CBB 染色Dispotray-M（#16551-84）

Dispotray-S（#16526-82）▶ Dispotray → p.50 参照

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79

ゲルの染色タンパク質電気泳動

実施例 他社製品との比較
本製品は、他社の R250 色素を採用している製品と比較し、同等以上の感度や視認性が得られています。また、G250 色素を採用している従来の CBB Stain
One と比較し、感度は同等ですが、濃い色調で染色されるため視認性が高くなっ
ています。
本製品

A 社製品

B 社製品

R250 色素 -1 液

R250 色素 -2 液

R250 色素 -2 液

① ② ③ ④① ② ③ ④

200→

200→

M.W.(kDa)
200→

45→

45→

45→

14→

14→

14→

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)① ② ③ ④

C 社製品

Rapid Stain CBB Kit

CBB Stain One

R250 色素 -1 液

R250 色素 -2 液

G250 色素 -1 液

M.W.(kDa)① ② ③ ④

M.W.(kDa)① ② ③ ④

M.W.(kDa)

200→

200→

200→

45→

45→

45→

14→

14→

14→

① ② ③ ④

＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー (10 倍濃縮（#29458-24）)
を① 3 ×、② 1 ×、③ 1/3 ×、④ 1/10 ×になるように調製し、各 2 µL 添加
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（ミニゲル：75 mm × 90 mm × 1 mm）
染色：染色や脱色の操作は、各製品のプロトコールに準じています。

80

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ゲルの染色タンパク質電気泳動

銀染色
銀染色は CBB 染色に比べ高感度にタンパク質を検出できる染色方法です。弊社では以下の 2 種類の製品をラインアップしています。

Sil-Best Stain シリーズの比較
Sil-Best Stain One は従来の銀染色法に基づいたキットです。一方、Sil-Best Stain-Neo は銀染色の改良版であり、タンパク質のみならず核酸や糖質を検出することが可能です。両キット共に質量分析を妨げるグルタルアルデヒドを使用していません。
Sil-Best Stain One

Sil-Best Stain-Neo

06865-8105773-11

製品番号

製品画像

検出対象
タンパク質
核酸

タンパク質のみタンパク質・核酸・糖類

SDS-PAGE◎○

二次元電気泳動

○

×

PAGE

×

○

染色時間

80 分

60 分

12 ステップ

6 ステップM.W.(kDa) ① ② ③ ④ ⑤ ⑥M.W.(kDa) ① ② ③ ④ ⑤ ⑥

染色ステップ数
200→

200→

45→

45→

22→

22→

染色像

＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
総タンパク質量① 255 ng、② 130 ng、③ 50 ng、④ 26 ng、⑤ 13 ng、⑥ 5 ng
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）

工程比較● Sil-Best Stain One の染色ステップ
固定液 1

前処理液

固定液 2

洗浄

×2

染色液

洗浄

×3

現像液

停止液

洗浄

停止液

洗浄

● Sil-Best Stain-Neo の染色ステップ
固定液

洗浄

×2

染色液

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81

ゲルの染色タンパク質電気泳動

Sil-Best Stain One
実験プロトコール
製品内容
試薬名

容量

数量

前処理原液（100 ×）

20 mL

1

銀 A 溶液（20 ×）

100 mL1

銀 B 溶液（20 ×）

100 mL

1

現像原液（20 ×）

100 mL1

Sil-Best Stain One（#06865-81）

別途必要な試薬
精 製 水、 エ タ ノ ー ル、 酢 酸（試薬グレードは試薬特級もしくは用途に適したものをご使用ください。）
1. 試薬の調製
試薬の調製方法（ミニゲルの場合）
ゲルサイズによって、試薬の調製量は変わります。ゲルが十分に浸るように、調製量を調節してください。ラージゲル（200 mm × 160 mm × 1 mm）では、300 mL の液量で染色を行ってください。
試薬名

調製内容

固定液Ⅰ

酢酸
エタノール
精製水

5 mL 左記を混合して固定液Ⅰとします。
45 mL
50 mL

固定液Ⅱ

エタノール
精製水

10 mL 左記を混合して固定液Ⅱとします。
90 mL

前処理液

前処理原液（100 ×） 1 mL 左記を混合して前処理液とします。
精製水
99 mL

銀染色液

銀 A 溶液（20 ×）
銀 B 溶液（20 ×）
精製水

5 mL 左記を混合して銀染色液とします。
5 mL
90 mL

現像液

現像原液（20 ×）
精製水

5 mL 左記を混合して現像液とします。
95 mL

反応停止液

酢酸
精製水

5 mL 左記を混合して反応停止液とします。
95 mL

染色操作の流れとゲル厚による反応時間
ゲル厚 1 mm 以外の場合は、ゲル厚 1 mm の各工程時間×ゲル厚（mm）を目安に染色時間を調整してください。
ゲル厚（1 mm）
20 分

30 分

固定液Ⅱ

10 分

15 分

前処理液

10 分

15 分

洗浄

精製水

5 分× 2 回

8 分× 2 回

染色

銀染色液

15 分

23 分

洗浄

精製水

2 分× 3 回

3 分× 3 回

現像

現像液

2 ～ 15 分

2 ～ 15 分

反応停止

反応停止液

15 分

15 分

前処理

▶ 染色液は用時調製してください。

ゲル厚（1.5 mm）

固定液Ⅰ

固定

82

使用液

酢酸
（#08885-45）▶ 銀染色液を調製の際は、必ず銀A 溶液に銀 B 溶液を加えてください。この時、茶色い沈殿が生じますが問題ありません。攪拌
混合することで透明な溶液になります。また、順序が異なると白い沈殿を生じることがあります。もし白く濁った場合は器具を洗浄後新しい溶液を再度調製してください。

2. 染色操作操作

エタノール（#08948-25）

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ゲルの染色タンパク質電気泳動

ゲル厚 1 mm の場合▶ 染色操作はディスポーザブル手袋などを着用し、ゲルに手を触れないでください。

① 泳動後、ゲルを固定液Ⅰに浸し、20 分振とうします。
② 固定液Ⅰを捨て、固定液Ⅱにゲルを浸し、10 分振とうします。
③ 固定液Ⅱを捨て、前処理液にゲルを浸し、10 分振とうします。
④ 前処理液を捨て、精製水にゲルを浸し、5 分振とうします。この洗浄操作を
もう一度行います。
⑤ 精製水を捨て、銀染色液にゲルを浸し、15 分振とうします。
⑥ 銀染色液を捨て、精製水にゲルを浸し、2 分振とうします。この洗浄操作をあと 2 回行います。
⑦ 精製水を捨て、現像液にゲルを浸し、振とうします。
⑧ 適当な染色像が得られたところで現像液を捨て、反応停止液にゲルを浸し、15 分振とうします。
⑨ ゲルを精製水ですすぎ、泳動像を観察します。

▶ トレイは清潔なものをご使用く
ださい。
Dispotray-M（#16551-84）

Sil-Best Stain One を用いた
銀染色

Dispotray-S（#16526-82）▶ Dispotray → p.50 参照

実施例 1 他社製品との比較
SDS-PAGE 後、Sil-Best Stain One、Sil-Best Stain-Neo および他社銀染色キットを用いて、タンパク質マーカーを検出しました。Sil-Best Stain One は他のキットと比べ同等以上の感度を示しています。
Sil-Best Stain One

Sil-Best Stain-Neo

A 社銀染色キット

M.W.(kDa) ① ② ③ ④ ⑤ ⑥200→

M.W.(kDa) ① ② ③ ④ ⑤ ⑥200→

M.W.(kDa) ① ② ③ ④ ⑤ ⑥200→

B 社銀染色キット
M.W.(kDa)
200→

45→

45→

45→

45→

22→

22→

22→

22→

＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー(10 倍濃縮)（#29458-24）
総タンパク質量 ① 255 ng、② 130 ng、③ 50 ng、④ 26 ng、⑤ 13 ng、⑥ 5 ng
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）①②③④⑤⑥▶ 染色液からゲルが浮いた状態での染色は、染色ムラの原因となります。染色操作はゲルを完全に溶液に浸した状態で行ってください。
▶ サンプル中のタンパク質濃度が高いと、バンドが白く抜ける場
合があります。サンプル濃度を薄めてご使用ください。
▶ 過剰な銀染色によりバックグラ
ウンドが高くなってしまった場
合 や、 質 量 分 析 へ の 適 用 の 際に便利な銀除去キット Sil-Best
Destain Kit も用意しています。
▶ Sil-Best Destain Kit → p.116 参照
Sil-Best Destain Kit（#07983-30）

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83

ゲルの染色タンパク質電気泳動

実施例 2 二次元電気泳動への適用
二 次 元 電 気 泳 動 後、Sil-Best Stain One お よ び A 社 銀 染 色 キ ッ ト を 用 い て、
HL-60 細胞からの抽出タンパク質を検出しました。Sil-Best Stain One は A 社銀染色キットに比べ、感度良く検出できていることが分かります。
Sil-Best Stain One

A 社銀染色キット▶ Sil-Best Stain One 染色後の質量分 析 へ の 適 用 デ ー タ は p.116「 実 施 例 Sil-Best Destain Kit を用いた MS 適用例」ご参照ください。

＜実験条件＞
サンプル： HL-60 細胞由来タンパク質
ゲル：［一次元目］Immobiline DryStrip pH 3-10
（Cytiva）［二次元目］12% ゲル（ラージゲル）
Immobiline は、Cytiva として事業を行う Global Life Sciences Solutions USA LLC およびその関連会社の商標です。

Sil-Best Stain-Neo
実験プロトコールp.32「 核酸電気泳動
ださい。

ゲルの染色

Sil-Best Stain-Neo による染色」をご参照く

実施例 Sil-Best Stain-Neo と CBB 染色の比較
SDS-PAGE 後、Sil-Best Stain-Neo および Rapid Stain CBB Kit を用いて、タンパ
ク質マーカーを検出しました。Sil-Best Stain-Neo は Rapid Stain CBB Kit に比べ、感度良く検出できていることが分かります。
Sil-Best Stain-Neo
M.W.(kDa)
116→

45→

22→

②

③

④

⑤

▶ 糖、糖タンパク質を検出する場
合は、取扱説明書をご参照ください。
Sil-Best Stain-Neo for Protein and
Nucleic Acid/PAGE（#05773-11）

Rapid Stain CBB Kit⑥⑦

M.W.(kDa)

①

②

③

④

⑤

⑥

⑦

116→

45→

▶ Sil-Best Stain-Neo は核酸の検出も可能です。検出例は p.33
「核酸電気泳動 ゲルの染色 実施
例 Ethidium Bromide と の 感度比較」をご参照ください。

22→＜実験条件＞
サンプル： タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
総タンパク質量 ① 510 ng、② 260 ng、③ 130 ng、④ 51 ng、⑤ 26 ng、⑥ 13 ng、⑦ 5 ng
ゲル
： 12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）

84

動画アイコン付きプロトコールの末尾に記載の QR コードをクリック、またはスマートフォンなどで読み取ると、動画をご視聴いただけます。

ゲルの染色タンパク質電気泳動

蛍光染色
タンパク質検出用の蛍光ゲル染色剤は各社からさまざまな製品が販売されています。本プロトコールでは Biotium
社 Lumitein Protein Gel Stain を用いた染色方法を紹介します。
Biotium 社 Lumitein は、他の蛍光染色試薬、一般的な CBB 染色法や銀染色法よりも簡単な操作で高感度に検出することができます。
蛍光染色試薬固定・洗浄・脱色の
操作
総操作時間
感度

Lumitein

A 社製品

B 社製品

一般的な
銀染色法

一般的な
CBB 染色法

不要

不要

必要

必要

必要

基本法：約 90 分
迅速法：約 30 分

約 90 分

オーバーナイト以上

約 2 時間数時間

1 ng 以下

ng オーダー

0.25 ～ 1 ng

数 ng ～ 1 ng 以下

数十 ng※ 脱色・洗浄操作は不要ですがお好みで行うことができます。操作は脱色 5 分、洗浄 5 分です。
※ Lumitein の染色時間は、迅速法 30 分でも染色像は確認できますが、最高感度の検出は基本法の 90 分を推奨しています。

実験プロトコール1. 試薬の調製
Lumitein 1 ×染色液の調製（Lumitein Protein Gel Stain, 100 ×を使用の場合）① 清潔な容器に、Lumitein 100 ×を移します。
② 下表の割合で、試薬を加え、混合します。
Lumitein

精製水

メタノール

2 mL（#21002）

116 mL

56 mL

26 mL

10 mL（#21002-1）

580 mL280 mL

130 mL

50 mL（#21002-2）

2,900 mL

1,400 mL

650 mL▶ Lumitein Protein Gel Stain ライ
ンアップ→ 別紙「試薬一覧」参照

酢酸③ ②の溶液で、100 ×の容器中の Lumitein をリンスし、②の容器に移します。
脱色液の調製（必要に応じて）▶ 調 製 し た Lumitein 1 × は 遮 光
して室温もしくは冷蔵にて保存
してください。

下表の割合で試薬を混合し、脱色液とします。
メタノール

酢酸

精製水

30 mL

15 mL

55 mL

2. ゲルの染色（80 mm × 80 mm × 1 mm ミニゲル基準）① ゲル 1 枚あたり 80 mL の Lumitein 1 ×染色液をトレイに入れ、SDS-PAGE
後のゲルを浸します。
② 90 分振とうします。

▶ よりサイズの大きなゲルを染色する場合は、次の計算により、染色液の量を求めてください。
染色液の容量＝ 80 mL ×ゲルの面積（cm2）÷ 64

3. ゲルの脱色（必要に応じて）① 染色液を除去し、脱色液を 100 mL 加え 5 分振とうします。
② 脱色液を除去し、精製水を 100 mL 以上加え、5 分振とうします。
4. 観察
下表を参照し、適切な励起光源・検出フィルターを用いて検出します。
適切な
励起光源・
フィルター

300 nm UV, 365 nm UV, 450 ± 15（filter）, 470 nm blue LED, 473 nm laser, 480 nm
excitation interference filter（epi-illumination）, 485 ± 4.5 nm（monochromator）,
488 nm laser, 532 nm laser.

適切な蛍光
フィルター

490nm longpass（best）, 515 nm longpass, 520 nm longpass, 580 nm longpass,
590 nm longpass, 595 ± 4.5 nm（monochromator, Molecular Devices）, ethidium
bromide filter, 600 nm bandpass, 600 ± 20 nm, 600 ± 35 nm, 610 nm longpass,
610 ± 35 nm, 618 nm bandpass, 620 nm bandpass, 625 ± 15 nm, 625 ± T15 nm,
Texas Red filter（～ 630 nm bandpass）, 640 ± 35 nm▶ 脱色液を使用せず、精製水のみ
でワンステップで脱色することも可能ですが、バックグラウン
ドは高くなります。
ワンステップ法
100 mL 以上の精製水に染色後のゲルを浸し 20 分振とうします。

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85

ゲルの染色タンパク質電気泳動

参考データ：Lumitein の励起・蛍光スペクトル

Lumitein の UV 最大励起波長は 280 nm 付近で、可視励起波長は 450 nm を中心に広範囲に及んでいます。蛍光波長は 610 nm 付近で明るい赤色の蛍光を発します。

実施例 1 Lumitein の検出限界
タンパク質マーカーを 2 倍希釈系列で泳動後、Lumitein（ 脱色・洗浄ステップあり）で染色したところ、0.2 ng 以下のタンパク質も検出できました。

＜実験条件＞
検出：Typhoon Trio（Cytiva）532 nm で励起、610BP30 フィルターで検出実施例 2 Lumitein と CBB 染色法の感度比較
タンパク質マーカーを 2 倍希釈系列で泳動後、Lumitein（データ左）、CBB（データ右）で染色しました。Lumitein で染色したデータは、EtBr フィルター（UVP 社）を装着した UV ボックスにより検出しました。CBB 染色したデータは、白色光コンバーター（UVP 社）を用いて検出しました。その結果、一般的な CBB 染色法
よりも簡単な操作で、高感度に検出できることが示されています。

86

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ゲルの染色タンパク質電気泳動

ネガティブ染色
Gel-Negative Stain Kit を用いたネガティブ染色は、泳動ゲルのバックグラウンドが白濁し、タンパク質の泳動像が透明に抜ける染色法です。20 分程度の操作で銀染色に近い感度（1 ～ 10 ng 程度）で泳動像を確認できます。染色
後のゲルは脱色後、ウェスタンブロッティングにも使用できるので、1 枚のゲルでサンプルの泳動像の確認とウェスタンブロッティング検出が可能です。染色後のタンパク質は質量分析への適用が可能です。

ネガティブ染色と他染色法の比較
ネガティブ染色（Gel-Negative Stain Kit）

CBB 染色（CBB Stain One）

銀染色
（Sil-Best Stain One）

染色時間

約 20 分

約 75 分（染色後の洗浄含まず）

約 80 分検出感度1 ～ 10 ng

20 ng 程度

数 ng 程度

操作数

94（染色後の洗浄含まず）

M.W.(kDa)

染色像

①

②

③

④

M.W.(kDa)

①

②

③

12

④

M.W.(kDa)

①

②

③

④

200→

200→

200→

45→

45→

45→

21.5→

21.5→

21.5→

＜実験条件＞
サンプル：タンパク質マーカー(10 倍濃縮)（#29458-24） 総タンパク質量 ① 3.4 µg、② 1.1 µg、③ 340 ng、④ 113 ng
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）

実験プロトコール
製品内容
試薬名

主な成分

容量

数量

A 液原液（5×） ラウリル硫酸ナトリウム220 mL1

B 液原液（5×） 硫酸亜鉛

200 mL1

C 液原液（5×） エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム200 mL1

Gel-Negative Stain Kit for SDSPAGE（#16660-41）1. 試薬の調製（ミニゲルの場合）
試薬名

調製内容

A液

A 液原液（5×） 10 mL 左記を混合して A 液とします。
精製水
40 mL

B液

B 液原液（5×） 10 mL 左記を混合して B 液とします。
精製水
40 mL

C液

C 液原液（5×） 10 mL 左記を混合して C 液とします。
精製水
40 mL

保存液

A 液原液（5×） 200 µL 左記を混合して保存液とします。
精製水
50 mL

▶ ゲルサイズによって試薬の調製
量は変わります。ゲルが十分浸るように、調製量を調節してください。

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87

ゲルの染色タンパク質電気泳動

2. ゲルの染色通常法と簡易法「簡易法」は、「通常法」より約 1/2 に感度低下しますが、バックグラウンドがより白く染色され、バンドの判別が容易になります。
操作

使用液

通常法

簡易法

洗浄

精製水

10 分

前処理

A液

5分

10 分

洗浄

精製水

10 秒× 3 回

10 秒× 3 回

染色

B液

30 ～ 90 秒

30 ～ 90 秒

洗浄

精製水

30 秒× 3 回

30 秒× 3 回－

通常法
① SDS-PAGE 後のゲルを、精製水 50 mL の入ったトレイに浸して 10 分振とうします。
② 精製水を捨て、A 液 50 mL を加えて 5 分振とうします。
③ A 液を捨て、精製水 50 mL で 3 回水洗（約 10 秒振とう）し、ゲル表面の A 液を洗い落とします。水洗時間を長くすると、染色が弱まることがあるのでご注意ください。
④ 先とは別のトレイに B 液 50 mL を加え、③まで処理したゲルを浸して 30 ～90 秒振とうします（この時点で泳動像の確認ができます）。B 液に 90 秒以上長く浸しておくと、泳動像が不鮮明になる可能性がありますのでご注意ください。
⑤ 泳動像が確認できたら直ちに水洗します。水洗は③で使用したトレイに精製
水 50 mL を入れ、3 回（30 ～ 60 秒振とう）以上行ってください。
⑥ 染色したゲルはタンパク質以外の部分が白く濁ります。泳動像の確認は、光にかざす、もしくは黒色を背景として観察してください（泳動像を記録する
場合は、この時点で行うことを推奨します）。
⑦ 泳動像を保存する場合は、密閉された清潔な容器内で保存液に浸して保存してください。
参考データ：泳動像の保存

染色直後▶ 染色法は厚さ 1 mm ゲルを基準としています。ゲル厚が異なる
場合は、必要に応じて予備検討を行ってください。

▶ ゲルの取り扱い操作は、ディスポーザブル手袋を着用して行ってください。

▶ B 液処理後は直ちに精製水で十分に水洗してください。水洗が不十分な場合、泳動像が経時的に不鮮明となったり、保存液に浸すと白色の析出物が多く確認されることがあります。

▶ 本 製 品 で 染 色 し た 泳 動 像 は、
BioDesignGelWrap な ど の ラ ップによる乾燥保存ができません。

染色後 21 日保存

簡易法
SDS-PAGE 後のゲルを、A 液 50 mL の入ったトレイに浸して 10 分振とうします。
次に「通常法」③の操作を行い、以降は「通常法」と同様に行ってください。

88

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ゲルの染色タンパク質電気泳動

3. ゲルの観察・記録
泳動像の記録方法には、研究用画像解析装置、カラーコピーや市販のスキャナー
による簡易な画像取り込みなどがあります。市販のスキャナーで記録する場合
は、透明なバンドと白色のバックグラウンドが鮮明に見分けられるように、黒色プラスチック製シートをゲルの背後に置くと、鮮明に画像を記録できます。
（参考文献）Bricker, Terry M.; Green-Church, Kari B.; Limbaugh, Patrick A.; Frankel, Laurie K. Anal. Biochem. 2000, 278,
p. 237-239.

参考データ：ゲルの記録
スキャナー使用

研究用画像解析装置使用

黒色プラスチック板を背後に置いて記録

ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）で記録① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨① ② ③④ ⑤⑥ ⑦⑧ ⑨

＜実験条件＞
サンプル：①⑤⑨ タンパク質マーカー (10 倍濃縮 （#29458-24）)
を 1/10 ×になるように調製し 10 µL 添加②～④、⑥～⑧ CHO 細胞懸濁液 ②⑧ 4 µg、③⑦ 2 µg、④⑥ 1 µg
ゲル：Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 13wells（#13079-84）
泳動：400 V 定電圧
染色：Gel-Negative Stain Kit for SDS-PAGE（#16660-41）
観察：［スキャナー使用］
スキャナー（セイコーエプソン）にて黒色プラスチックをゲルの背後において画像を取得［研究用画像解析装置使用］
ChemiDoc Touch MP（バイオ・ラッド ラボラトリーズ）（露光時間は AUTO にて検出）（白色透過、590 / 110 nm スタンダードフィルターで検出）

4. ゲルの脱色（同ゲルでウェスタンブロッティングなど他のアプリケーション実施の場合）①「通常法」⑤の精製水を捨て、C 液 50 mL を加えて 6 分ほど振とうし、ゲルが透明になることをご確認ください。
② C 液を捨て、精製水 50 mL で 3 回（30 秒振とう）以上水洗します。
③ 以後はウェスタンブロッティング法の操作に従い、転写緩衝液に浸すなどの操作に移ってください。

▶ C 液処理後は、十分に水洗してください。不十分な場合、ウェスタンブロッティングのタンパ
ク質転写効率が悪くなる可能性があります。

ネガティブ染色

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89

ゲルの染色タンパク質電気泳動

実施例 1 ネガティブ染色後のウェスタンブロッティング
SDS-PAGE 後、ウェスタンブロッティングを行う前に泳動ゲルをネガティブ染
色すると、一時的にサンプルの泳動像を確認することができます。染色後のゲルはキット添付の脱色液（C 液）で、約 8 分の脱色操作を行った後、ウェスタン
ブロッティングを行うことができます。以下に、ヒト血清を SDS-PAGE 後ネガ
ティブ染色した泳動像と、その泳動ゲルからウェスタンブロッティングによりヒト血清 IgG を検出した染色像を示します。
ネガティブ染色（ウェスタンブロッティング前の染色像確認）M.W.
(kDa) ①②③④
200→

M.W.
(kDa) ① ② ③ ④
200→
65→
48→

ネガティブ染色後のウェスタンブロッティング像← IgG(Heavy Chain)

65→
48→

← IgG
(Light Chain)← IgG(Light Chain)
28→

28→

← IgG
(Heavy Chain)＜実験条件＞SDS-PAGE：12% ゲル
サンプル ：① Pre-stained Protein Markers(Broad Range)（販売終了）5 µL② ヒト血清（1/60）2 µL③ ヒト血清（1/200）2 µL④ ヒト血清（1/600）2 µL↓
Gel-Negative Stain Kit による染色（泳動像の記録）↓
キット添付の C 液による脱色・水洗↓
転写（PVDF メンブレン）↓
一次抗体 ：Anti-Human IgG（Goat）
25,000 倍希釈
二次抗体 ：POD 標識 Anti-Goat IgG
10,000 倍希釈
メンブレン
染色：ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 染 色 キ ッ ト（#26652-70）

実施例 2 ネガティブ染色後の MS 解析
ネガティブ染色で泳動ゲルを確認、ゲルを切り出し、脱色後 MS 解析が可能です。
ネガティブ染色（MS 解析前の染色像確認）
M.W.
(kDa)
102→
52→
31→
24→
17→

12→

①

②

③

④

⑤

＜実験条件＞SDS-PAGE：15% ゲル
サンプル ：各 10 µL アプライ
① 分子量マーカー、② Cytochrome C 1.0 µg③ Carbonic Anhydrase 2 1.0 µg、④ Cytochrome C⑤ Carbonic Anhydrase 2 0.1 µg↓
Gel-Negative Stain Kit による染色↓
ゲル切り出し（約 1 mm 四方 3 分割）↓
キット添付の C 液による脱色・水洗C 液 500 µL 6 分振とう → 液除去 →（イオン交換水 500 µL 30 秒振とう → 液除去）×3 回↓
脱水 → 還元アルキル化 → トリプシン消化 → ペプチド抽出 →ZipTip（メルク株式会社メルクミリポア事業本部）精製 → ESI-MS

0.1 µg

ZipTip は Merck KGaA の登録商標です。

レーン②の MS 解析データ

データご提供：京都大学大学院 農学研究科 応用生命科学専攻

90

レーン③の MS 解析データ

植田 充美 教授 / 小林 謙吾 様

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

本項目ではタンパク質電気泳動におけるトラブルおよびその原因、解決方法について説明します。

レーンやバンドの形・分離に問題がある
1 ゲル全体が湾曲する

2 レーンがゆがむ / 幅が不均一

3 レーンに筋が入る▶ p.92▶ p.93▶ p.94 ～ 95

4 バンドの形がおかしい

5 バンドがスメアになる / ぼやける

6 バンドの分離が悪い / おかしい

▶ p.96▶ p.97▶ p.98

検出に問題がある
7 シグナルが検出されない / 弱い

8 バックグラウンドが高い▶ p.99 ～ 100▶ p.101

上記以外で問題がある
9 ゲルが固まらない / 固まるのが遅い

10 ゲルにアリの巣のような気泡が入る

11 通電ができない▶ p.102▶ p.102▶ p.103

12 いつもより泳動時間が速い / 遅い

13 電気泳動中の異常な発熱▶ p.103▶ p.104

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91トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

1. ゲル全体が湾曲する

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

電流の漏れ

外側に向かって広がっている場合、両端から電流が漏れている可能性があります。ゲル作製時にガラスプレートをはさむクリップが弱かった
り、ずれていたりしないかご確認ください。

ゲルの凍結

冷気が直接あたってしまうなど冷蔵庫の空調によっては、ゲルが部分的に凍ってしまう場合があります。ゲルの保存環境を再度ご確認ください。

長期間保存したアクリルアミドゲルを使用した

乾燥してしまっているなどアクリルアミドゲルの保存が不適切だと、ゲルが湾曲する場合があります。新しいゲルをご使用ください。

アプライ

高塩濃度や界面活性剤を多量に含むサンプルを 隣のレーンとの間に塩濃度差があると起こりやアプライしている
すくなります。両端のレーンやダミーレーンに
試料緩衝液（精製水で 1 × にしたもの）を添加することで改善する場合があります。

電気泳動

通電時の発熱ムラ

DATA

92

通電時に発生したジュール熱の放熱ムラにより、ゲル中央と両端で温度差が生じ起こります。
低い通電条件で泳動を行い、泳動中の発熱量を抑えることで改善する場合があります。また、泳動槽を適したものに変更することで改善する場合もあります。

Laemmli 法組成ゲル（12％） 400 V にて泳動

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

2. レーンがゆがむ / 幅が不均一

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

ゲルの凍結

冷気が直接あたってしまうなど冷蔵庫の空調によっては、ゲルが部分的に凍ってしまう場合があります。ゲルの保存環境を再度ご確認ください。

サンプル調製 サ ン プ ル に 非 イ オ ン 性 界 面 活 性 剤（Triton X、 非イオン性界面活性剤がサンプルに含まれる
Tween 20、NP-40 など）を含んでいると、 泳 動 中 に SDS と ミ セ ル を 形 成 し、SDS とタンパク質の結合が崩れてしまいます。PAGE
Clean Up Kit でサンプルを精製する、もしくは
非イオン性界面活性剤を SDS の 1/10 量となる
ように希釈してください。
アプライ

サンプル間の組成に差がある

サンプル間で還元剤含有 / 不含、塩濃度、タン
パク質濃度およびアプライ量に差があると、レーンがゆがんだり、幅が不均一になったりする場
合があります。
PAGE Clean Up Kit で精製する、もしくはレーンを一つ空けるなどアプライ順を工夫してください。また、レーンを空ける場合は、試料緩衝液（精製水で 1 × にしたもの）を空白レーンに添加することをお薦めします。

DATA
B 1 2 B

Bʼ 1

Bʼ 2

Bʼ

アプライ順を変更

塩濃度が異なるサンプルを隣り合わせにアプライ

塩濃度が異なるサンプルを
レーンを空けてアプライ

1. 塩濃度が低いサンプル
2. 塩濃度が高いサンプル
B 空白レーンBʼ 空白レーン（試料緩衝液をアプライ）

Triton はユニオン・カーバイド・コーポレーション、Tween はクローダ インターナショナル ピーエルシーの登録商標です。

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93トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

3. レーンに筋が入る

実験操作

原因

解決策

サンプル調製 サンプルが十分に溶解されていない

サンプルが十分に溶解されていないと、縦筋が入る場合があります。アプライ前に遠心を行い上清のみをアプライするなど、サンプル調製条
件を見直してください。

サンプルが変性剤などを含み高塩濃度である、 PAGE Clean Up Kit などを用いてサンプルを精製
もしくは界面活性剤を多量に含んでいる
してください。
DATA

飽和硫酸アンモニウム中のサンプルを泳動

PAGE Clean Up Kit で精製（銀染色で検出する場合）･
銀染色の場合、2- メルカプトエタノール含有試
サンプルに 2- メルカプトエタノールが含まれて 料緩衝液の使用により筋が観察される場合があいるります。ゲルへのサンプル添加量を減らす、還元剤として DTT を使用することで改善します。
DATA

赤矢印：
2- メルカプトエタノール由来の筋ゲル作製 /
アプライ

94

隣のレーンのサンプルがコンタミしている

ガラスプレートがゲルから剥離していたり、サンプル量が多かったりすると、隣のレーンにサンプルがコンタミし筋のようなものが観察される場合があります。ゲルが正しく作製されてい
るか、ゲルへのサンプル添加量が適切かご確認ください。

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

3. レーンに筋が入る
つづき

実験操作
ゲル作製

原因
ガラスプレート、コームが汚れている

解決策
ガラスプレートやコームが汚れていると、筋やドットが観察される場合があります。精製水やエタノールで拭き取り、清潔なものを使用するようにしてください。器具類を素手で触ることによりケラチンなどのタンパク質混入の可能性があるため、必ず作業中は手袋を着用してくだ
さい。

DATA

全体的に筋が入っています。
これらはガラスプレートやコームの汚れに起因します。

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95トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

4. バンドの形がおかしい

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

ゲルの凍結

冷気が直接あたってしまうなど冷蔵庫の空調によっては、ゲルが部分的に凍ってしまう場合があります。ゲルの保存環境を再度ご確認くださ
い。

DATA

一度凍結してしまったゲル

正常なゲル

サンプル調製 サンプルが変性剤などを含み高塩濃度である、 PAGE Clean Up Kit などを用いてサンプルを精製
もしくは界面活性剤を多量に含んでいる
してください。
DATA

6M グアニジン塩酸塩溶液中のサンプルを泳動

PAGE Clean Up Kit で
精製

アプライ

ウェルに未重合のアクリルアミドやゲル片が アプライ前にウェルの洗浄を行い、未重合のア
残っている
クリルアミドやゲル片を除去してください。

電気泳動

ゲルの下端に気泡が残っている

96

ゲルを泳動槽へセットした際に、ゲルの下端に気泡が残っていると、気泡部分のみ通電が妨害され、バンドがゆがむ場合があります。ゲルの下端に気泡がないかご確認ください。

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

5. バンドがスメアになる / ぼやける

実験操作

原因

サンプル調製 タンパク質の還元が不十分

DATA

解決策
試料緩衝液に含まれている還元剤が劣化または不足していると、タンパク質の還元が不十分となりバンドがスメアになる場合があります。試
料緩衝液を新しいものに調製しなおしてください。

2- メルカプトエタノールによる還元サンプルを泳動

試料緩衝液を再調製

タンパク質量が多い

泳動するタンパク質量を減らしてください。

サンプルが分解している

サンプル調製時にプロテアーゼ阻害剤カクテ
ル、ホスファターゼ阻害剤カクテルをご使用ください。

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97トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

6. バンドの分離が悪い / おかしい

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

アクリルアミド濃度が間違っている

サンプルに適切なアクリルアミド濃度のゲルをご使用ください。

長期間保存したアクリルアミドゲルを使用した

乾燥してしまっているなどアクリルアミドゲルの保存が不適切であったり、保存期間が長期となることにより、分離パターンが乱れる場合があります。また、Laemmli 法組成ゲルの場合、分離ゲルがアルカリ性のため、保存中に加水分解が起こり分離パターンが乱れることがありま
す。

ゲルの凍結

冷気が直接あたってしまうなど冷蔵庫の空調によっては、ゲルが部分的に凍ってしまう場合があります。ゲルの保存環境を再度ご確認くださ
い。

アプライ

還元剤含有サンプルと不含サンプルを同時に泳 還元剤含有サンプルと還元剤不含サンプルを同動している
時に泳動すると、泳動中に還元剤不含サンプルが還元されてしまう場合があります。必ず、数レーン空けてアプライしてください。

電気泳動 /
ゲル作製

ゲル、泳動用緩衝液の組成が異なる
DATA

Protein Ladder One, Multi Color（販売終了）を Laemmli 法組成ゲル（12％）にて泳動

ゲル緩衝液濃度が通常の
1/10

98

ゲルの組成や pH、および泳動用緩衝液の組成、pH が間違っていないかご確認ください。

ゲル緩衝液濃度が正しい

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

7. シグナルが検出されない / 弱い

実験操作

原因

解決策

電気泳動 /
検出

アプライしたタンパク質量と検出方法の感度が 検出する方法により感度が異なります。泳動す
適切でない
るタンパク質量に適した検出方法を選択してください。総タンパク質量として、CBB 染色では
5 ～ 10 µg、 銀 染 色 で は 0.5 ～ 1 µg、Lumiteinを用いた蛍光染色では 1 ～ 2 µg、ネガティブ染
色では 1 ～ 2 µg を目安に泳動してください。

検出（CBB 染色）CBB 染色前の洗浄が不十分

DATA

CBB 染色前の洗浄が不十分だと、ゲルから SDS
が 除 去 さ れ ず、CBB 染 色 を 阻 害 し ま す。CBB
染色前の洗浄は十分に行ってください。なお、
Bullet CBB Stain One および Rapid Stain CBB Kitの場合は本工程は不要です。

A 社 CBB 染色液（CBB-G250）
で染色

前洗浄なし

（CBB 染色）CBB 染色後の脱色が不十分

DATA

前洗浄あり

CBB 染色後の脱色が不十分だと、バックグラウ
ンドに埋もれて、シグナルが観察できない場合があります。脱色時間を延長してください。脱色液の交換頻度を上げるとより効率的に脱色を行うことができます。

CBB Stain One Super で染色

脱色

脱色なし

脱色あり（一晩）（銀染色）･
染色工程、試薬の調製が間違っている

銀染色は工程数が多く、必要な試薬の種類も多くなります。工程、試薬を間違えていないかご
確認ください。

（銀染色）
ゲルが厚い

ゲル厚により各工程の反応時間を調整する必要
が あ り ま す。Sil-Best Stain One お よ び Sil-Best
Stain-Neo の場合は各取扱説明書をご確認ください。

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99トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

7. シグナルが検出されない / 弱い
つづき

実験操作
検出

原因

解決策

（蛍光染色）
励起波長、蛍光波長が間違っている
DATA

ご使用の蛍光染色剤に適した励起波長、蛍光波長で観察してください。

Lumitein Protein Gel Stain による検出

蛍光フィルターを正しいものに変更

誤った検出条件（LED / 518 〜 546 nm）（ネガティブ染色）
タンパク質が SDS と結合していない

正しい検出条件（LED / 535 〜 645 nm）（励起 / 蛍光波長）※露光時間 AUTO

前処理後の洗浄を過剰に行うと、感度が低下する場合があります。洗浄が正しく行われている
かご確認ください。

（ネガティブ染色）
ゲルや泳動用緩衝液にキレート剤が含有されるゲルや泳動用緩衝液にキレート剤が含まれてい と、感度が低下する可能性があります。キレー
る
ト剤を含まないゲルや泳動用緩衝液へ変更す
る、もしくは前処理前の洗浄回数を増やしてください。
（ネガティブ染色）
観察方法が不適切

本染色方法ではシグナル（バンド）以外が白く濁ることで検出するため、ゲルの背景が白色だと観察しづらくなります。光にかざすか、黒色を背景として観察してください。

DATA

白色トレイ
（Dispotray）

100

透明トレイ
実験台（黒色）の上において観察

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

8. バックグラウンドが高い

実験操作
検出

原因
（CBB染色）CBB 染色後の脱色が不十分

DATA

解決策
染色後の脱色が不十分だとバックグラウンドが高くなります。脱色時間を延長してください。
脱色液の交換頻度を上げるとより効率的に脱色を行うことができます。

CBB Stain One Super で染色

脱色時間
延長

脱色

30 分

（銀染色）
現像時間が過剰、現像液の温度が高い

脱色

一晩

現像液の温度が高い、もしくは現像時間が長いとバックグラウンドが高くなります。現像中は目を離さず、適切なシグナルが得られたらすぐに反応停止液へ交換してください（少しシグナルが弱い程度で反応を止めることがコツです）。
バ ッ ク グ ラ ウ ン ド が 高 い 場 合 は、Sil-Best
Destain Kit（p.116）をお試しください。

DATA

Sil-Best Destain Kit を用いて脱色（銀染色；Sil-Best Stain-Neo の場合）
グラジエントゲルを染色した

Sil-Best Stain-Neo の場合、グラジエントゲルを染色するとアクリルアミドの濃度に従いグラジ
エント様のバックグラウンドが観察される場合があります。Sil-Best Stain One をご使用ください。

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101トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

9. ゲルが固まらない / 固まるのが遅い

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

APS および TEMED の添加忘れ、添加量の間違 APS および TEMED を正しい量で添加したかごい
確認ください。また、APS 溶液が古くなっていないか、凍結融解を繰り返していないかご確認ください。
ガラスプレートが汚れている

ガラスプレートやコームの汚れがアクリルアミドの重合化を妨げている場合があります。エタ
ノールや精製水で拭き取り、清潔なものをご使用ください。

温度が低い

ゲルの重合は温度の影響を受けます。冷蔵庫に保存していた試薬は室温に戻してからご使用ください。

脱気をしていない

ゲルの重合は溶存酸素の影響を受けます。脱気を行うことで、ゲルの固化を早めることができます。

アクリルアミド濃度が低い

一般的にアクリルアミド濃度が低いほど、固化はしづらくなります。APS や TEMED 添加量を適当量（10％程度）増やすことで改善される場合があります。

10. ゲルにアリの巣のような気泡が入る

実験操作
ゲル作製

原因

解決策

ゲルがガラスプレートから部分的に剥離してい アクリルアミド濃度が高い場合に起こりやすくるなります。APS や TEMED 添加量を適当量（10％程度）減らすことで改善する場合があります。
DATA

Laemmli 法組成ゲル（15％）

APS、TEMED
添加量 10％減

102

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トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

11. 通電ができない

実験操作
電気泳動

原因

解決策

ゲル下部のシーリングが付いたままゲルを自家調製する際に使用するシリコンガス
ケットや、プレキャストゲルの一部に使用されているシーリングテープをゲル下部から外してください。なお、Bullet PAGE One および Extra
PAGE One にはシーリングテープは付いていません。コームを抜いた後、すぐに泳動槽へセットすることができます。

陰極と陽極の泳動用緩衝液が触れている

陰極と陽極の泳動用緩衝液が触れていると電気の逃げ道となってしまい、ゲルへ通電されません。必ず、陰極と陽極の泳動用緩衝液が触れないように、それぞれの緩衝液量が適切かご確認ください。

陰極側（内部側）の緩衝液が漏れている

泳動槽のセットをやり直してください。

電気泳動 /
ゲル作製

ゲル組成、泳動用緩衝液の組成が異なるゲルの組成や pH および泳動用緩衝液の組成やpH が間違っていないかご確認ください。

電気泳動

電極が正しくセットされていない

陰極と陽極が正しくセットされているかご確認ください。また、お使いの泳動槽とパワーサプ
ライにより変換パーツが必要となる場合もあります。お使いの泳動槽とパワーサプライの取扱説明書などでご確認ください。

12. いつもより泳動時間が速い / 遅い
（10 分（5%）程度のずれならば問題ありません）
実験操作

原因

解決策

電気泳動

泳動条件が間違っている

泳動条件が適切かご確認ください。定電流で設定している場合、ゲル 1 枚および 2 枚では設定する電流値が異なります（例えばゲル 1 枚
20 mA 定電流の場合は、ゲル 2 枚では 40 mA 定
電流で設定します）。また、パワーサプライの仕様によっては、制限がかかり設定している条件
で泳動できていない場合もあります。パワーサ
プライの仕様を再度ご確認ください。

電気泳動 /
ゲル作製

ゲル組成、泳動用緩衝液の組成が異なるゲルの組成や pH および泳動用緩衝液の組成やpH が間違っていないかご確認ください。

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103トラブルシューティング

タンパク質電気泳動

13. 電気泳動中の異常な発熱（Extra PAGE One や Bullet PAGE One では高電圧で泳動を行うため、20℃ 程度の温度上昇が起こりますが、異常ではありません）
実験操作
電気泳動 /
ゲル作製

104

原因
ゲル組成、泳動用緩衝液の組成が異なる

解決策
ゲルの組成や pH および泳動用緩衝液の組成やpH が間違っていないかご確認ください。

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Appendix

タンパク質電気泳動

電気泳動パターン
自家調製ゲルゲル

Laemmli 法組成ゲル

泳動用緩衝液ゲル濃度

WIDE RANGE Gel Preparation
Buffer(4x) for PAGE（#07831-94）

Laemmli 法組成泳動用緩衝液
6%M.W.(kDa)

8%

10%

12%

15%

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)
200→

M.W.(kDa)
200→

200→

200→

45→

200→
45→

泳動像

22→

45→
45→
22→
45→

Rapid Running Buffer
Solution(20x) for SDS-PAGE（#12981-74）

22→

ゲル

WIDE RANGE Gel

泳動用緩衝液ゲル濃度6.5→

Laemmli 法組成泳動用緩衝液
6%

8%

10%

12%

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)
200 →

200 →

200 →

200 →

45 →
45 →

泳動像

45 →
6.5 →

45 →
6.5 →

ゲル

Laemmli 法組成ゲル

泳動用緩衝液Rapid Running Buffer

ゲル濃度

6%

8%

10%

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)
200→

M.W.(kDa)
200→

200→

4 ～ 10%M.W.(kDa)

200→
45→
45→

泳動像

22→

45→
22→
22→

ゲル

22→
6.5→

WIDE RANGE Gel

泳動用緩衝液
ゲル濃度

6.5→

6.5→

45→

Rapid Running Buffer
4%

6%

8%

10%

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)
200→

200→

200→

45→

200→

泳動像

45→
22→

45→
22→

6.5→

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105

Appendix

タンパク質電気泳動

プレキャストゲル
ゲル

Extra PAGE One Precast Gel

泳動用緩衝液Laemmli 法組成泳動用緩衝液
グラジエントゲル

ゲル濃度
製品番号13 ウェル
17 ウェル5 ～ 10％5 ～ 15％5 ～ 20％

7.5 ～ 15％10 ～ 20％13059-44
13060-04

13061-94
13062-8413063-7413064-64

13065-54
13066-4413067-34
13068-24

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

200→

▶ Extra PAGE One ラインアップ→ https://www.nacalai.co.jp/
products/entry/d004020.html#lineup 参照

45→

泳動像

45→

45→

22→

22→

45→

45→

22→

6.5→

6.5→

22→

6.5→

6.5→

均一ゲル

ゲル濃度
製品番号
13 ウェル
17 ウェル

7.5％

10％

12.5％

15％

13069-14
13070-74

13071-64
13072-5413073-4413074-34

13075-24
13076-14

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

200→

200→
45→
45→

泳動像
45→

45→

製品番号
13 ウェル
17 ウェル

6.5→

Bullet PAGE One Precast Gel

泳動用緩衝液
ゲル濃度

6.5→

22→
22→

ゲル

22→

Laemmli 法組成泳動用緩衝液
グラジエントゲル

均一ゲル

5 ～ 11％5 ～ 15％6％8％13077-04
13078-94

13079-84
13080-4413081-34
13082-24

13083-1413084-04

M.W.(kDa)

M.W.(kDa)

200→

200→

M.W.(kDa)▶ Bullet PAGE One ラインアップ→ https://www.nacalai.co.jp/
products/entry/d004019.html#lineup 参照

M.W.(kDa)

200→
200→

泳動像

45→

45→

45→
22→
6.5→
22→

106

45→
22→

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Appendix

タンパク質電気泳動

緩衝液の調製方法＜40% アクリルアミド / ビス溶液（29:1） 500 mL＞＜40% アクリルアミド / ビス溶液（37.5:1） 500 mL＞
アクリルアミドとビスアクリルアミドの割合が、核酸電気泳動では 19:1、タン
パク質電気泳動では 29:1、37.5:1 が汎用されています。

● 40% アクリルアミド / ビス溶液（29:1）
38.7（w/v）% アクリルアミド、1.3（w/v）% N,N'- メチレンビスアクリルアミド
アクリルアミド
N,N'- メチレンビスアクリルアミド
精製水193.3 g6.7 g－

● 40% アクリルアミド / ビス溶液（37.5:1）
39（w/v）% アクリルアミド、1（w/v）% N,N'- メチレンビスアクリルアミド
アクリルアミド
N,N'- メチレンビスアクリルアミド
精製水

194.8 g5.2 g－

アクリルアミド ( モノマー )（#06114-95）

N,N'-メチレンビス
アクリルアミド（#22407-52）▶ アクリルアミドには神経毒があります。取り扱い時には手袋、ゴーグルなどの保護具を装着してください。
▶ ウォーターバスなどを用いて37℃ 程度に加温しながら溶解させると、早く調製することができます。

精製水 300 mL 程度にアクリルアミド、N,N'- メチレンビスアクリルアミドを溶解させ、精製水で 500 mL にします。

＜Laemmli 泳動法

分離ゲル用緩衝液（4 ×） 500 mL＞

0.4（w/v）% SDS、1.5 M Tris-HCl、pH 8.8
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
1 mol/L- 塩酸
精製水90.9 g2g（pH 調整用）－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）

Tris、SDS を精製水に溶解させ、精製水で 400 mL 程度にします。塩酸を用いてpH 8.8 へ調整し、その後精製水で 500 mL にします。
1mol/l-塩酸（#11677-75）＜Laemmli 泳動法

濃縮ゲル用緩衝液（4 ×） 100 mL＞

0.4（w/v）% SDS、0.5 M Tris-HCl、pH 6.8
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
1 mol/L- 塩酸
精製水

6.1 g
0.4 g
（pH 調整用）－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）

Tris、SDS を精製水に溶解させ、精製水で 60 mL 程度にします。塩酸を用いてpH 6.8 へ調整し、その後精製水で 100 mL にします。
1mol/l-塩酸（#11677-75）

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107

Appendix＜10% APS

タンパク質電気泳動

10 mL＞

ペルオキソ二硫酸アンモニウム（#06284-04）

10% APS
ペルオキソ二硫酸アンモニウム（APS）
精製水

1g
－

APS を精製水に溶解させ、精製水で 10 mL にします。
-20℃ で保存してください。

＜Laemmli 泳動法

試料緩衝液（2 ×） 50 mL＞

4（w/v）% SDS、20（v/v）% グリセリン、0.01（w/v）% BPB、10（v/v）%-2ME*、
0.125 M Tris-HCl、pH 6.8
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
グリセリン
ブロモフェノールブルー（BPB）
2- メルカプトエタノール（2-ME）
1 mol/L- 塩酸
精製水0.76 g
2g
10 mL
5 mg
5 mL
（pH 調整用）－

Tris、SDS、グリセリン、BPB、2-ME を精製水に溶解させ、精製水で 40 mL 程
度にします。塩酸を用いて pH 6.8 へ調整し、その後精製水で 50 mL にします。
* 還元剤を含まない試料緩衝液（2 ×）の場合は、上記調製方法から 2-ME を抜いて作製してください。

▶ 凍結融解を何度も行わないように、1 mL 程度ずつ小分けにしておくことをお薦めします。

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）

グリセリン（#17045-94）

ブロモフェノールブルー（#05808-61）

2-メルカプトエタノール（#21438-82）＜Laemmli 泳動法

泳動用緩衝液（1 ×） 1 L＞

25 mM Tris、192 mM グリシン、0.1（w/v）% SDS
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
グリシン（75.07 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
精製水

3g
14.4 g
1g－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

グリシン（#17141-95）

精製水 800 mL 程度に Tris、グリシン、SDS を溶解させ、精製水で 1 L にします。
※泳動用緩衝液 (10 倍濃縮 , SDS-PAGE 用 , トリス - グリシン系 （#30329）)
をご使用いただくと便利です。精製水で 10 倍希釈してください。

▶ pH 調整は必要ありません。
泳動用緩衝液 (10倍濃縮 , SDSPAGE用 , トリス -グリシン系 )（#30329-61）

108

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Appendix＜Tris-Tricine 泳動法

タンパク質電気泳動
ゲル緩衝液

500 mL＞

0.3（w/v）% SDS、3 M Tris-HCl、pH 8.45
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
6 mol/L- 塩酸
精製水

181.7 g
1.5 g
（pH 調整用）－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）

Tris、SDS を精製水に溶解させ、精製水で 380 mL 程度にします。塩酸を用いてpH 8.45 へ調整し、その後精製水で 500 mL にします。
6mol/l- 塩酸 (6N)（#37313-25）＜Tris-Tricine 泳動法

試料緩衝液（2 ×） 50 mL＞

8（w/v）% SDS、24（v/v）% グリセリン、0.02（w/v）% CBB、4（v/v）%-2ME*、
0.1 M Tris-HCl、pH 6.8
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
グリセリン
コマジーブリリアントブルー G-250（CBB）
2- メルカプトエタノール（2-ME）
1 mol/L- 塩酸
精製水0.61 g
4g
12 mL
10 mg
2 mL
（pH 調整用）－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）

グリセリン（#17045-94）

Tris、SDS、グリセリン、CBB、2-ME を精製水に溶解させ、精製水で 40 mL 程
度にします。塩酸を用いて pH 6.8 へ調整し、その後精製水で 50 mL にします。
* 還元剤を含まない試料緩衝液（2 ×）の場合は、上記調製方法から 2-ME を抜いて作製してください。

コマジーブリリアントブルー
G-250（#09409-42）

2-メルカプトエタノール（#21438-82）＜Tris-Tricine 泳動法

泳動用緩衝液（1 ×） 1 L＞

0.1 M Tris、0.1 M Tricine、0.1
（w/v）
% SDS
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
トリシン（Tricine）（179.17 g/mol）
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
精製水

12.1 g17.9 g
1g－

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

トリシン（#02437-24）

Tris、Tricine、SDS を精製水に溶解させ、精製水で 1 L にします。
※10 倍濃縮液を作製しておくと便利です。使用前に精製水で 10 倍希釈してください。

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）▶ pH 調整は必要ありません。

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109

Appendix＜ゲル膨潤液タンパク質電気泳動

25 mL＞

尿素（#35940-65）

8 M 尿素、2% CHAPS、Ampholyte*、0.002% BPB、
18.2 mM DTT（使用直前に溶解）
尿素（60.06 g/mol）
CHAPS
アンフォライト（Ampholyte）*
ブロモフェノールブルー（BPB）
精製水

12 g
0.5 g
－
0.5 mg－

尿素、CHAPS、Ampholyte、BPB を精製水に溶解させ、精製水で 25 mL にしま
す。小分けにして、-20℃ で保存してください。
使用前に上記溶液 2.5 mL あたり、ジチオスレイトール（DTT）（154.25 g/mol）
7 mg を溶解させご使用ください。
* ご使用になる IPG ゲルの pH レンジに応じて選択してください。使用濃度はご使用になる IPG ゲルの取扱説明書をご確認ください。

＜1 M Tris-HCl（pH 8.8） 50 mL＞（平衡化液作製に使用）
1 M Tris-HCl、pH 8.8
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）（121.14 g/mol）
1 mol/L- 塩酸

6.06 g（pH 調整用）

CHAPS（#07957-64）

ブロモフェノールブルー（#05808-61）

ジチオスレイトール（#14128-91）

トリス (ヒドロキシメチル )アミノメタン（#35434-05）

Tris を精製水に溶解させ、精製水で 40 mL 程度にします。塩酸を用いて pH 8.8へ調整し、その後精製水で 50 mL にします。

＜平衡化液

200 mL＞

6 M 尿素、30（v/v）% グリセリン、2（w/v）% SDS、0.002% BPB、
75 mM Tris HCl（pH 8.8）、1（w/v）% DTT（A 液：使用直前に溶解）
2.5（w/v）% ヨードアセトアミド（B 液：使用直前に溶解）
1 M Tris-HCl（pH 8.8）
尿素（60.06 g/mol）
グリセリン
ラウリル硫酸ナトリウム（SDS）
ブロモフェノールブルー（BPB）
精製水

15 mL
72.1 g
60 mL
4g
4 mg
－

1 M Tris-HCl（pH 8.8）、尿素、グリセリン、SDS、BPB を精製水に溶解させ、精製水で 200 mL にします。小分けにして、-20℃ で保存してください。
使用前に DTT（A 液）、ヨードアセトアミド（B 液）を溶解させてください。
A 液：上記溶液 10 mL あたり、ジチオスレイトール（DTT）0.1 g を溶解
B 液：上記溶液 10 mL あたり、ヨードアセトアミド 0.25 g を溶解

尿素（#09593-35）

グリセリン（#17045-94）

ラウリル硫酸ナトリウム（#08933-92）

ブロモフェノールブルー（#05808-61）

ジチオスレイトール（#14128-91）

ヨードアセトアミド（#19302-54）

110

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Appendix＜アガロース溶液

タンパク質電気泳動
20 mL＞

アガロース LM Sieve( 低融点 )（#01651-92）

0.5（w/v）% アガロース、泳動用緩衝液
アガロース LM Sieve（低融点）
泳動用緩衝液（1×）*

0.1 g
20 mL

アガロースに泳動用緩衝液（1 ×）を加え 、電子レンジなどを用いて加温溶解させます。1 mL 程度ずつ小分けにし、冷蔵保存してください。
使用時には 70℃ 程度に温め、再溶解してご使用ください。
* 二次元目 SDS-PAGE でご使用になる泳動用緩衝液（1 ×）を用いてください。

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111

Appendix

タンパク質電気泳動

タンパク質マーカーについて
弊社では下記 3 種類のタンパク質マーカーをラインアップしています。使用目
的・用途に合わせてご使用ください。

タンパク質マーカーの比較
プレステインドマーカー

未着色マーカーウェスタンブロッティング
用マーカー

製品名

Protein Ladder One Plus,
Triple-color for SDS-PAGE

タンパク質マーカー(10 倍濃縮 )Chemi-Lumi One Markers
Kit

製品番号

19593-25

29458-24

06456-70

Protein Ladder One Plus, Triplecolor for SDS-PAGE（#19593-25）構成
色素標識 14 種類のタンパ
ビオチン標識 8 種類のタン
8 種類のタンパク質（天然）
タンパク質 ク質（リコンビナント）
パク質（天然）用途説明

電 気 泳 動 中 の 分 離 状 況 や CBB 染色や銀染色による目 ウェスタンブロッティング
ウェスタンブロッティング 的タンパク質の分子量測定 における目的タンパク質のでの転写効率の確認、目的
分子量推定
タンパク質の分子量推定
着 色 済 み の ready to use
マーカーです。
目視だけでなく、蛍光検出も可能です *。

未着色のため、使用時には 使用時には試料緩衝液を用
試料緩衝液を用いた調製が いた調製が必要です。付属必要です。未着色のため、 の HRP 標 識 ス ト レ プ ト ア
正確な分子量測定に使用で ビジン使用により、HRP 検* 添加量を 1/10 程度に減らし きます。
出試薬で検出可能です。

タンパク質マーカー (10 倍濃縮 )（#29458-24）てください。

分子量範囲

10 ～ 245 kDa
kDa

6.5 ～ 200 kDa
kDa

245→
180→
140→

210→

116→

75→

66→

60→

45→

50→
40→
35→
30→

120→

66→
45→

Chemi-Lumi One Markers Kit（#06456-70）

31→
31→

25→
20→

22→

15→

14→
6.5→

10→

kDa

200→

100→

泳動像

6.5 ～ 210 kDa

22→
14→
6.5 →

（条件） Extra PAGE One Precast Extra PAGE One Precast 4-20% グラジエントゲル
Gel, 5-20%（5 µL 添加）Gel, 12.5%（5 µL 添加）（5 µL 添加）目視により観察CBB 染色により検出
Chemi-Lumi One L により検出

112

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Appendix

タンパク質電気泳動

サンプルの濃縮・妨害物質除去試薬

PAGE Clean Up Kit

SDS-PAGE や二次元電気泳動時において、分析するタンパク質サンプルの濃縮や分析妨害物質の除去に使用します。アセトン、トリクロロ酢酸、共沈剤をベースとしており、本製品により沈殿させたタンパク質を使用目的に応じたサンプ
ル溶液に再懸濁することで、タンパク質サンプルの濃縮や分析妨害物質の除去を行います。透析では難しい µL レベルの少量処理が可能です。

PAGE Clean Up Kit（#06441-50）

実験プロトコール
製品内容
試薬名

主成分

容量

数量

貯法

Solution A

トリクロロ酢酸

10 mL

1

冷蔵

Solution B

共沈剤

5 mL

1

冷蔵

Solution C

アセトン

100 mL

1

室温① 100 µL のサンプルに Solution A を 100 µL 添加、混合後、さらに Solution B
を 30 µL 添加し混合します。
② 4℃ で 12,000 × g、5 分、遠心分離した後、沈殿物を吸い取らないように上清液を除去します。十分に液を除去するために、さらに 4℃ で 12,000 × g、
10 秒、遠心分離し、沈殿物を吸い取らないように上清液を除去します。
③ Solution B を 20 µL 添加し、沈殿物を十分に攪拌混合します（この時沈殿物は完全に溶解しません）。
④ 4℃ で 12,000 × g、5 分、遠心分離した後、沈殿物を吸い取らないように上清液を除去します。
⑤ 冷凍庫であらかじめ冷やしておいた Solution C を 1 mL 添加し、沈殿物を十分に攪拌混合します。
⑥ 冷凍庫で 30 分、静置してください。
⑦ 4℃ で 12,000 × g、5 分、遠心分離した後、沈殿物を吸い取らないように上清液を除去します。十分に液を除去するために、さらに 4℃ で 12,000 × g、
10 秒、遠心分離し、沈殿物を吸い取らないように上清液を除去します。
⑧ 室温で 5 分程度、風乾します。
⑨ 電気泳動の試料緩衝液など、使用目的に応じたサンプル溶解液を添加し、十分に溶解してください。

実施例 1 タンパク質濃縮（SDS-PAGE）
本製品を用いて、タンパク質抽出に汎用される高濃度の尿素、グアニジン塩酸、
SDS を含有する BSA 溶液を濃縮しました。従来の TCA 法やアセトン法では回収率が悪い一方、本製品による沈殿法では高い収率で回収できています。
6 M 尿素溶液

6 M グアニジン塩酸塩溶液

① ② ③

BSA→

2％ SDS 溶液

① ②③

BSA→

① ②

BSA→

＜実験条件＞
サンプル：BSA（100 ng）100 µL
沈殿処理：① 本製品使用、② TCA 沈殿法を使用、③ 10 倍量アセトン沈殿法を使用
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）
染色：Sil-Best Stain One（#06865-81）

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113

Appendix

タンパク質電気泳動

実施例 2 分析妨害物質の除去（SDS-PAGE）
硫酸アンモニウムおよびグアニジン塩酸塩を含有するタンパク質溶液を、そのままもしくは本製品による処理後、SDS-PAGE を行いました。本製品処理により妨害物質が除去され、泳動像が改善されています。
A）飽和硫酸
アンモニウムM.W.(kDa) ①

B）6 M グアニジン
塩酸塩溶液
①

②

②

200→

BSA→

45→

＜実験条件＞
サンプル：A）タンパク質マーカー（10 倍濃縮）（#29458-24）、
B）BSA（100 ng：非還元）
沈殿処理：① 本製品未使用、② 本製品使用
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）
染色：A）CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）、
B）Sil-Best Stain One（#06865-81）

22→※収率はサンプル溶解液の組成やタンパク質濃度などにより異なる場合があります。予備検討の上、ご使用ください。

実施例 3 二次元電気泳動における実施例
本製品もしくは A 社類似製品により精製したサンプルを二次元電気泳動により分離しました。本製品および A 社類似製品で同等の泳動像が得られました。本
製品は二次元電気泳動の前処理としてもご使用いただけます。
● CBB 染色結果
PAGE Clean Up Kit

A 社製品

PAGE Clean Up Kit

A 社製品● 銀染色結果＜実験条件＞
サンプル：HL-60 細胞由来タンパク質（RIPA Buffer（#08714-04）
抽出）
ゲル：［一次元目］Immobiline DryStrip pH 4-7（Cytiva）［二次元目］12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）
染色：［CBB 染色］CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）［銀染色］Sil-Best Stain One（#06865-81）
Immobiline は、Cytiva として事業を行う Global Life Sciences Solutions USA LLC およびその関連会社の商標です。

114

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Appendix

タンパク質電気泳動

His-tag 融合タンパク質用染色液

His-Detect In-Gel Stain

His-Detect In-Gel Stain は、電気泳動後のゲル中の His-tag 融合タンパク質を短時間、簡便な操作で目視により確認できる染色液です。His-tag にコバルトが配位することを利用し、His-tag 融合タンパク質を色素により染色します。
約 30 pmol（30 kDa のタンパク質では 900 ng に相当）の His-tag 融合タンパク質を検出することができます。

実験プロトコール（100 mm × 100 mm × 1 mm ミニゲル基準）① 電気泳動後のゲルを清潔なトレイ（Dispotray）に移し、本製品を 50 mL 加え
30 分振とうします。

▶ 2- メルカプトエタノール以外の還元剤（特に DTT や TCEP）を使用して電気泳動用サンプルを還元した場合、ゲルが一部変色することがあります。本製品による染色操作を行う前に、精製水でゲルを 10 分（× 2 回）洗浄することでゲルの変色が改善されます。
▶ 本製品は、金属結合性のタンパ
ク質を染色する色素を用いているため、サンプルによっては非特異的なバンドが検出される場
合があります。

② トレイから本製品を除去し、精製水 100 mL で 10 分ゲルを洗浄します。さらにこの操作を 2 回行います。

実施例 His-Detect In-Gel Stain とウェスタンブロッティングの比較
DHFR-His を発現させた大腸菌ライセートを段階希釈し SDS-PAGE を行った後、本製品で His-tag 融合タンパク質の染色を行いました（図 1）。
染色後、同一ゲルからウェスタンブロッティングを行い、化学発光法および発色法で His-tag 融合タンパク質を検出しました（図 2、図 3）。
本製品での染色結果はウェスタンブロッティングでの検出結果と一致している
ことが分かります。

▶ 染色を行うゲルの面積および厚さに応じて染色液を増減して く だ さ い（ 例：180 mm ×
180 mm × 1 mm の ラ ー ジ ゲルでは 250 mL の本製品使用をお薦めします）。染色液が少ない場合、検出感度が低下しますのでご注意ください。
His-Detect In-Gel Stain（#08500-94）

図 1. His-Detect In-Gel Stain による染色← DHFR-His

M1：Chemi-Lumi One Markers Kit（#06456-70）
M2：プレステインドマーカー

×16 ×8 ×4 ×2 M1 M2 M2 M1 ×2 ×4 ×8 ×16

図 2.
化学発光による検出

Dispotray-M（#16551-84）

図 3.
発色法による検出← DHFR-His

Dispotray-S（#16526-82）＜ウェスタンブロッティング条件＞
一次抗体：抗 6xHis( マウス IgG1-κ), モノクローナル (HI192), AS（#04428）
二次抗体：goat anti-mouse IgG-HRP（Santa Cruz #sc-2005）
検出：［化学発光］Chemi-Lumi One L（#07880）［発色］ペルオキシダーゼ染色キット（#26652-70）▶ Dispotray → p.50 参照

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115

Appendix

タンパク質電気泳動

銀染色時の銀除去キット

Sil-Best Destain Kit

Sil-Best Destain Kit を用いると、タンパク質の SDS-PAGE などにおいて、銀染
色後のゲルから銀を除去できます。銀染色後のタンパク質を質量分析に用いる際の前処理に使用したり、過剰な銀染色によりバックグラウンドが高くなったゲルを脱色することで最適な染色像に改善したりできるため、貴重なサンプルを有効に活用できます。

Sil-Best Destain Kit（#07983-30）

実験プロトコール（銀染色後のバンドからの銀の除去）
1. 試薬の調製
下表に従い脱色液 -1 を調製してください。
試薬名

調製内容

脱色液 -1A液
10 µL 左記を混合して脱色液 -1 とします。
B液
10 µL
精製水 180 µL

2. 脱色操作① ゲルの切り出し
銀染色によりタンパク質が検出されたゲルを切り出し、マイクロチューブなどに移します。
② 脱色
ゲルの入ったチューブに 100 ～ 200 µL の脱色液 -1 を加え、脱色されるまで（10 分程度）振とうします。
③ 洗浄
チューブから脱色液 -1 を除去し、精製水を 500 µL 加えます。15 分振とう後、チューブから精製水を除去してください。この操作をさらに 2 回行います。
脱色操作後は、必要に応じて処理（例：プロテアーゼ消化）を行い、質量分析などにご使用ください。

▶ 本製品で脱色したサンプルを質量分析する場合、予備実験など
により解析結果への影響を確認の上ご使用ください。

実施例 Sil-Best Destain Kit を用いた MS 適用例
Sil-Best Stain One で染色したバンドを切り出し、本製品で脱色後、MS 解析を行いました。銀が除去され、問題なく解析できていることが分かります。
電気泳動像（Sil-Best Stain One 染色）
kDa
105
75
50
35
30

①

②

バンド A のMS スペクトルデータ

バンド B のMS スペクトルデータ

③

B

25
15

A

10

＜実験条件＞
サンプル：① 分子量マーカー、② Cytochrome C（分子量 12,000）、③ Albumin（分子量 67,000）
1 µg/µL 各 10 µL 添加
ゲル：15% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）
染色：Sil-Best Stain One（#06865-81）

プロトコール概要
1. SDS-PAGE↓
2. 銀染色（Sil-Best Stain One（#06865-81））↓
3. ゲルの切り出し↓
4. 脱色（Sil-Best Destain Kit（#07983-30）
）
↓
5. 脱水
↓

6. 還元アルキル化↓
7. トリプシン消化↓8. ペプチド抽出↓
9. ZipTip（メルク株式会社メルクミリポア事業本部）精製↓
10. ESI-MS
ZipTip は Merck KGaA の登録商標です。

データご提供：京都大学大学院 農学研究科 応用生命科学専攻 植田 充美 教授 / 森坂 裕信 研究員

116

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Appendix

タンパク質電気泳動

実験プロトコール（過剰な染色像からの最適化）
1. 試薬の調製（100 mm × 100 mm × 1 mm ミニゲルの場合）別途必要な試薬
酢酸（試薬グレードは試薬特級もしくは用途に適したものをご使用ください。）
下表に従い脱色液 -2 および停止液を調製してください。
試薬名

調製内容

脱色液 -2

A液
200 µL 左記を混合して脱色液 -2 とします。
B液
200 µL
精製水 50 mL

停止液

酢酸
10 mL 左記を混合して停止液とします。
精製水 90 mL

酢酸（#08885-45）

2. 脱色操作① 洗浄
トレイに精製水を 100 mL 加え、過剰に染色されたゲルを破損しないように浸します。穏やかに振とうさせて 5 分洗浄し、トレイ中の精製水を除去します。この洗浄をもう一度行います。
② 脱色
トレイに脱色液 -2 をゲルが十分浸る程度加え、振とうさせて 5 ～ 60 分程度
脱色します。
③ 脱色停止トレイから脱色液 -2 を除去し、停止液に 15 分浸します。
④ 洗浄
トレイから停止液を除去し、100 mL 以上の精製水で 10 分程度洗浄してください。

実施例 過剰な銀染色改善例
本製品を用いて過剰な銀染色を脱色しました。最適な染色像に改善できるため、実験のやり直しを行う必要がなく、貴重なサンプルを有効に活用できます。
適正な銀染色像

過剰な銀染色像

脱色した像

脱色操作
（トータル時間 55 分）▶ 脱色時間や脱色の程度は、A 液と B 液の添加量を調節すること
により変更できます。少しだけバックグラウンドを下げたい場
合は、A 液と B 液の添加量を減らしてご使用ください。
▶ 過剰な脱色を防ぐために、脱色の停止は、得られる染色像が最適と思われる状態より少し手前で行ってください。また必要に応じてあらかじめ脱色前にスキャナーなどで染色像を保存しておいてください。
▶ 極端にバックグラウンドが高い
過剰染色ゲルでは、バックグラ
ウンドの脱色に要する時間が長
くなり、タンパク質バンドも必
要以上に脱色される場合があります。
▶ グラジエントゲル使用の際、銀染色後のバックグラウンドが不均一な場合は、均一に脱色されないことがあります。

＜実験条件＞
サンプル：大腸菌抽出タンパク質
ゲル：12% ポリアクリルアミドゲル（SDS-PAGE）
染色：Sil-Best Stain One（#06865-81）

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117

Appendix

タンパク質電気泳動

タンパク質抽出試薬

RIPA Buffer

RIPA Buffer は界面活性剤を含んだタンパク質抽出用の緩衝液で、タンパク質の可溶化・抽出に使用されます。抽出されたタンパク質は、ウェスタンブロッティ
ングや免疫沈降などのアプリケーションに使用できます。

RIPA Buffer の製品比較
RIPA Buffer の基本組成で構成される 1 ×調製済み（ready to use タイプ）の製品と、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有し、免疫沈降時に悪影響を与える可能性のある SDS を別添付した 10 倍濃縮タイプの 2 製品を販売しています。
製品名

RIPA Buffer

RIPA Buffer(10x)製品番号16488-34

08714-04

1×（ready to use）

10×

プロテアーゼ阻害剤カクテル

不含

含有

SDS

含有

不含（1% SDS 溶液を添付）

保存

冷蔵

冷凍

・50 mmol/L Tris-HCl Buffer（pH 7.6）
・150 mmol/L NaCl
・1% Nonidet P40 Substitute
・0.5% Sodium Deoxycholate
・0.1％ SDS

1×溶液調製後（SDS 添加）
・50 mmol/L Tris-HCl Buffer（pH 7.6）
・150 mmol/L NaCl
・1% Nonidet P40 Substitute
・0.5% Sodium Deoxycholate・Protease Inhibitor Cocktail（1×）
・（0.1％ SDS）

100 mL・RIPA Buffer（10x）：2 mL × 5 本・SDS Solution（1% SDS）：2 mL × 5 本

組成

容量 /
セット内容

RIPA Buffer(10x)（#08714-04）

プロテアーゼ阻害剤カクテル( 動物細胞抽出物用 )（#25955-11）

プロテアーゼ阻害剤カクテル( 一般用 )(100 倍濃縮 )（#04080-11）

製品イメージ

濃縮

RIPA Buffer（#16488-34）

プロテアーゼ阻害剤カクテル(EDTA フリー )(100 倍濃縮 )（#03969-21）

ホスファターゼ阻害剤カクテル（#07574-61）

Nonidet は、シェル ブランズ インターナショナル アクチェンゲゼルシャフトの登録商標です。

実施例 1 RIPA Buffer を用いて抽出した細胞懸濁液のウェスタンブロッティング
RIPA Buffer（#16488-34）にホスファターゼ阻害剤カクテル（#07574-61）を添加することにより、HL-60 細胞由来のリン酸化タンパク質は、ホスファターゼによる影響を回避することができました。
①②

118

ホスファターゼ阻害剤カクテル(EDTA フリー )（#07575-51）＜実験条件＞
サンプル：① 1% ホスファターゼ阻害剤を添加した RIPA Buffer を用いてタンパク質抽出を行った
HL-60 細胞懸濁液② RIPA Buffer を用いてタンパク質抽出を行った HL-60 細胞懸濁液
ゲル：Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells（#13080-44）
泳動：400 V 10 分
転写：Bullet Semi-dry Transfer One（#15353-01）25 V 10 分
ブロッキング：Blocking One-P（#05999-84）20 分
抗体：p-Tyr 抗体 (PY20) HRP（Santa Cruz #sc-508 HRP）2,000 倍希釈 60 分
検出
：Chemi-Lumi One Super（#02230）

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Appendix
実施例 2

タンパク質電気泳動

RIPA Buffer(10x) を用いて抽出したタンパク質溶液のウェスタン
ブロッティング

RIPA Buffer(10x) により細胞質や核などさまざまなタンパク質を抽出後、転写因子 SREBP-1、ChREBP について Chemi-Lumi One L により検出しました。
CBB 染色M.W.(kDa)
25015010075-①

ウェスタンブロッティング②

活性化型 SREBP-1（転写因子：核タンパク質）
① ② ③

③

ChREBP（転写因子）① ② ③
リン酸化型
脱リン酸化型→

50372520-① SDS（+）、② SDS（-）
、③ A 社（SDS 入り）＜実験条件＞
染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）-- 以下ウェスタンブロッティング -ブロッキング：Blocking One（#03953）
検出：Chemi-Lumi One L（#07880）

細胞質や核などに存在している抽出しにくいタンパク質が、効率良く抽出できました。
データご提供：近畿大学 農学部 応用生命化学科 応用細胞生物学研究室

森山 達哉 准教授

実施例 3 RIPA Buffer(10x) を用いて抽出したタンパク質溶液の免疫沈降
細胞や組織溶解用の弊社 RIPA Buffer(10x) を用いて抽出したサンプルを免疫沈降後、Chemi-Lumi One L により検出した例を示します。弊社 RIPA Buffer(10x) は、免疫沈降に悪影響を与える可能性のある SDS を別添付した製品です。
抽出時の細胞溶解性は SDS（+）の方が高く、どのような組織でも問題なく抽出できています。一方、免疫沈降は、SDS（-）の方が効率良く行えています。このように、本製品では SDS を含まない条件でもご使用いただけます。
● 抽出
①②③④

①②③④⑤⑥⑦＜実験条件＞
抽出：冷 PBS で 洗 浄 し た 組 織 切 片 100 mg に 対 し て、RIPA
Buffer 300 µL を氷上で 30 分処理
サンプル：
［左図］
①タンパク質マーカー (10倍濃縮 （#29458-24）)
マウスの胃から各 RIPA を用いてタンパク質を抽出した溶液② SDS（-）RIPA、③ SDS（+）RIPA、④ B 社 RIPA
（SDS 入り）［右図］① Pre-stained Protein Markers（Broad Range）（販売終了）②タンパク質マーカー (10倍濃縮 （#29458-24）)
各組織から SDS（+）RIPA を用いてタンパク質を抽出した溶液③ Mouse Liver④ Mouse Kidney⑤ Mouse Stomach⑥ Mouse Brain⑦ Mouse Heart
染色：CBB Stain One(Ready To Use)（#04543）● 免疫沈降①②③④⑤⑥①② ③ ④ ⑤ ⑥＜実験条件＞
抽出：Jurkat Cell 1.0 × 107 個に対して、RIPA Buffer 1 mLを氷上で 15 分処理
サンプル：① SDS（-）RIPA を用いてタンパク質を抽出した溶液② SDS（+）RIPA を用いてタンパク質を抽出した溶液③ タンパク質マーカー (10倍濃縮 （#29458-24）)←β-Actin④ SDS（-）RIPA を用いてタンパク質を抽出した溶液から免疫沈降した溶液⑤ SDS（+）RIPA を用いてタンパク質を抽出した溶液から免疫沈降した溶液⑥ アガロースコントロール
一次抗体：β-Actin抗体 (C4)（Santa Cruz #sc-47778）
二次抗体：goat anti-mouse IgG-HRP（Santa Cruz #sc-2005）
左図染色：Sil-Best Stain One（#06865-81）
右図検出：Chemi-Lumi One L（#07880）

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119

Appendix

タンパク質電気泳動

プロテインアッセイシリーズ
タンパク質実験において、タンパク質の濃度を常に把握しておくことはとても重要です。タンパク質の定量法は数多くありますが、弊社では、その中でも汎用性の高い CBB 法（Bradford 法）、ビシンコニン酸（BCA）法、Lowry 法に対応した試薬および検量線用標準液である BSA 溶液（アルブミン ( ウシ血清 ) 溶液 (2mg/ml)（#00653-31））をラ
インアップしています。

プロテインアッセイシリーズの特徴比較
CBB 法（Bradford 法）
製品番号

CBB 法 前処理

BCA 法

BCA 法 前処理

11617-71

29449

11611-60

06385-00

21014-80

29470-60

CBB 溶液(Ready To Use)

CBB 溶液(5 倍濃縮 )CBB クリーン
アップキットBCA キット

BCA 還元剤
アダプト試薬

Lowry キット

妨害物質除去
キット

製品名

還元剤適応
試薬

CBB 溶液と一緒にご使用くださいBCA キットと一緒にご使用ください595 nm

測定波長562 nm（580 ～ 610 nm*）

◎

迅速性

△

△

△

△

界面活性剤

×

還元剤

（650 ～ 750 nm*）

×

◎

△

タンパク質の種類による反応差

750 nm（540 ～ 590 nm*）〇

直線性・測定範囲

夾雑物の影響Lowry 法

〇

〇

×
〇

〇

◎

〇

〇

△

〇

×

◎

×

* 記載している範囲で測定は可能です。ただし、吸収極大波長からずれるため、感度が低下します。

夾雑物の共存可能濃度表を各製品の取扱説明書に記載しています。

各プロテインアッセイの BSA 測定例の比較
BCA 法

2

2

2

1.5
1

0

Abs 750 nm

2.5

1.5
1
0.5

0.5

0

0.5

1

1.5

2

BSA 濃度（mg/mL）

スタンダード法（マイクロプレート）にて測定

120

Lowry 法2.5

Abs 562 nm

Abs 595 nm

CBB 法（Bradford 法）
2.5

0

1.5
1
0.5

0

0.5

1

1.5

2

BSA 濃度（mg/mL）

0

0

0.5

1

1.5

2

BSA 濃度（mg/mL）

標準法（マイクロプレート）にて測定

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Appendix

タンパク質電気泳動

プロテインアッセイセレクションガイド
サンプルに含まれる
夾雑物は？

還元剤

界面活性剤

還元剤 + 界面活性剤

CBB 法（Bradford 法）を行う場合

BCA 法を行う場合

前処理

前処理

#11611-60
CBB クリーンアップキット#21014-80
BCA 還元剤アダプト試薬

妨害物質除去キット

還元剤適応試薬

CBB 法（Bradford 法）#11617-71
CBB 溶液(Ready To Use)#29449CBB 溶液(5 倍濃縮 )測定操作が簡単・迅速

BCA 法

Lowry 法#06385-00
BCA キット#29470-60
Lowry キット

測定範囲が広く、直線性◎

圧倒的論文数

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121

Appendix
ゲルの保存

タンパク質電気泳動

BioDesignGelWrap を用いたゲルの乾燥・保存

BioDesign Inc. of New York 社の BioDesignGelWrap は、電気泳動後の各種ポリアクリルアミドゲルやアガロースゲルを、短時間で簡単に乾燥させ、長期保存させるためのメンブレンです。ゲル中の水分は、BioDesignGelWrap の膜の細孔を通して容易に蒸発します。BioDesignGelFrame で固定することによって、ゲルは曲がったり、ひび割れたりすることなく、乾燥したゲルは 2 枚のBioDesignGelWrap に密封されます。

BioDesignGelWrap（#G101）

実験プロトコール① BioDesignGelFrame と同じ大きさに切った BioDesignGelWrap を 2 枚用意します。
② BioDesignGelWrap を精製水に浸し、湿らせます。BioDesignGelWrap は数秒で湿気をおび半透明になります。
③ 湿らせた BioDesignGelWrap を BioDesignGelFrame（下部パーツ）の上に 1 枚
のせ、気泡を除去します。

▶ BioDesignGelWrap は 1 分 以 上
水に浸さないでください。ねじ
れて取り出しが困難になることがあります。
▶ 気泡は完全に除去してください。
BioDesignGelFrame
15.3 cm × 17.8 cm（#04854-81）④ 乾燥させたいゲルをその上に置きます。

BioDesignGelFrame
20 cm × 20 cm（#G103）

BioDesignGelFrame
30.5 cm × 30.5 cm（#G105）⑤ さらにその上から、湿らせたもう 1 枚の BioDesignGelWrap を重ね、もう一度気泡を除去します。

⑥ 最後に BioDesignGelFrame（上部パーツ）を上から重ね合わせ、付属のクリップで 4 カ所を固定し、そのまま自然乾燥させます。

▶ 厚 さ 1 mm 以 上 の ゲ ル、 ア ガ
ロースゲル、10% 濃度以上のア
クリルアミドゲルなどは乾燥に時間を要することがあります。

⑦ ゲ ル が 乾 く と、 ゲ ル と BioDesignGelWrap は 完 全 に 透 明 に な り ま す。
BioDesignGelFrame のクリップを外し、取り出します。フレームにはさまれた未乾燥部分の BioDesignGelWrap を切り取れば完了です。

▶ ゲルが完全に乾燥するまで、フレ ー ム か ら BioDesignGelWrap
を外したり、動かしたりしないでください。ゲルのひび割れ、曲がり、しわの原因となります。

122

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Appendix
ゲルの保存

タンパク質電気泳動

アクリルアミドゲル割れ防止液を用いたゲルの保存

アクリルアミドゲル割れ防止液 は、電気泳動、染色後の SDS-PAGE ゲルや
PAGE ゲルの乾燥保存に使用します。
別途必要なもの▶ 本製品はエタノールを含んでいます。火気を避けて換気の良い場所で操作してください。

乾燥用フィルム、器材など

実験プロトコール（100 mm × 100 mm × 1 mm ミニゲルの場合）① 清潔なトレイに本液 50 mL を注ぎ込み、ゲルを浸して 20 ～ 25 分振とうします。本製品はゲルが完全に浸る量をご使用ください。
② 乾燥用フィルムの準備は、ゲル処理の終了 5 ～ 10 分前に行います。
③ 乾燥用フィルムを精製水に浸して湿らせた後、下部フレームに気泡が入らないように装着します（気泡が入る場合は、下部フレーム上に精製水約 10 mLをのせてフィルムを端から密着させる要領で装着してください）。
④ 精製水 50 mL を入れた別のトレイにゲルを浸し、約 5 秒水洗します。水洗時間を長くするとゲル割れ防止効果が失われますのでご注意ください。
⑤ 下部フレームに装着した乾燥用フィルム上に水洗したゲルを気泡が入らない
ように重ねます。そして、精製水 10 ～ 20 mL をゲル上にのせます。
⑥ ゲルの上に重ねる乾燥用フィルムを精製水に浸して湿らせた後、気泡が入らないようにフィルムの端から密着させる要領でゲル上に重ねます。そして、指でなでる要領で、フィルム間の余分な水分をフィルム外へ十分除去します。
⑦ 上部フレームを装着し、上部と下部のフレームをクリップなどの固定器具でしっかりと固定します。組み立てたフレームは、そのまま立てかけ 1 ～ 2 日
室温放置します（立てかけたフレームの下にペーパータオルなどを置き、たれ落ちる水分を吸収させることを推奨します）。
⑧ 1 ～ 2 日放置後、ゲルが完全に乾燥してからフレームの固定器具を取り外し、端からはがす要領でフレームからフィルムにはさまれたゲルを取り外します。不要部分のフィルムをハサミなどで切り取り、ゲルを保存してください。
台紙などに固定して保存することを推奨します。

▶ CBB 染色は通常の使用方法でも少々脱色される場合があります。
▶ ゲルの厚さにより、本製品に浸す 時 間 は 異 な り ま す。 過 剰 時
間の処理は CBB 染色像の脱色、ゲルの過剰収縮、乾燥後のゲル
白濁の原因になりますので避けてください。
▶ ④～⑥は、約 2 分で終了する要領で素早く操作してください。
アクリルアミドゲル割れ防止液（#00860-11）（参考文献）Juang, R. H.; Chang, Y. D.; Sung, H. Y.; Su, J. C. Anal. Biochem. 1984, 141, p. 348-350.

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123

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TEL:075-211-2703
2204P

電気泳動
製品名

ver. 4.0

試薬一覧
製品番号08885-45
06114-24
06114-95
06114-11

容量
500 mL
100 g
500 g
1 kg

価格
3,250
3,200
9,900
16,200SP（電気泳動用）

07175-75

500 mL

10,500劇

SP（電気泳動用）

06140-45

500 mL

13,500

劇
劇
劇
劇－

SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）

Agarose for ≧ 1kbp fragment－

SP（核酸電気泳動用）

Agarose for ≧ 1kbp fragment(Fine Powder)－SP（核酸電気泳動用）

Agarose-RE for ≧ 1kbp fragment, for Restriction and
Ligation－SP（核酸電気泳動用）

Agarose for 150~1,500bp fragment－

SP（核酸電気泳動用）

Agarose for 50~800bp fragment－

SP（核酸電気泳動用）

Agarose -LM Plaque for ≧ 1kbp fragment－

SP（核酸電気泳動用）

Agarose -LM Sieve for ≦ 1kbp fragment－

SP（核酸電気泳動用）

06141-35
06119-4506144-05
06121-95
00860-1101163-92
01163-7601163-05
02468-2402468-6602468-95
01149-92
01149-7601149-05
01153-2201153-64
01147-1201147-96
01650-02
01650-86
01651-92
01651-76

500 mL
500 mL
500 mL
500 mL
1L
25 g
100 g
500 g
10 g
100 g
500 g
25 g
100 g
500 g
25 g
100 g
25 g
100 g
25 g
100 g
25 g
100 g

10,50013,50010,50013,5009,000
5,900
16,20069,5002,100
16,50075,500
10,20028,000101,500
18,40046,10020,60057,60023,55063,50015,10038,500－SP（生化学研究用）

00653-31 10 X 1 mL

8,600

－
－

SP（分子生物学用）
SP（電気泳動用）

06284-04
02634-34

10 g
10 mL

2,050
4,000

－

BioDesign Inc. of New York

04854-81

1 set

9,000

－

BioDesign Inc. of New York

G103

1 set

15,000－

BioDesign Inc. of New York

G105

1 set

20,000－

BioDesign Inc. of New York

G101

1 rol

16,000－SP（分子生物学用）

Bromophenol Blue－JIS 試薬特級

Bullet Blocking One for Western Blotting－

SP（免疫化学用）

Bullet CBB Stain One(Ready To Use)－

SP（電気泳動用）

Bullet ImmunoReaction Buffer－SP（免疫化学用）

05241-55
05808-61
05808-32
13779-56
13779-14
13779-01
13542-94
13542-6513542-81
18439-85

500 g
1g
25 g
50 mL
200 mL
1L
50 mL
500 mL1L
500 mL

3,700
2,500
7,000
2,000
4,800
19,7005,500
27,00044,00018,000Acetic Acid
Acrylamide(monomer)
30(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(19:1),
Nuclease tested
40(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(19:1),
Nuclease tested30(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(29:1)
40(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(29:1)
30(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(37.5:1)
40(w/v)%-Acrylamide/Bis Mixed Solution(37.5:1)
Acrylamide Gel Crack-proof Solution

Albumin, Bovine Serum, Solution(2mg/ml) for Protein
Assay
Ammonium Peroxodisulfate10(w/v)%-Ammonium Peroxodisulfate Solution
BioDesignGelFrame, outer dimension 6 x 7 inches(15.3 cm x 17.8 cm)
BioDesignGelFrame, outer dimension 8 x 8 inches(20 cm)
BioDesignGelFrame, outer dimension 12 x 12 inches(30.5 cm)
BioDesignGelWrap 12 inch x 75 foot roll
(30.5 cm x 23 m)
Boric Acid

毒劇物－

規格・メーカー名
SP（分子生物学用）

劇

SP（分子生物学用）

劇

1

製品名
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 13wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 17wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 13wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 6%, 13wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 6%, 17wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 8%, 13wells
Bullet PAGE One Precast Gel, 8%, 17wells
Bullet Semi-dry Transfer One
1-Butanol

毒劇物
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－

CBB Stain One(Ready To Use)－

CBB Stain One Super(Ready To Use)

－

CHAPS

－

Chemi-Lumi One Markers Kit
Coomassie Brilliant Blue G-250
Dispotray-M
Dispotray-S
Dispotray-SS

－
－
－
－
－

Dithiothreitol－

DNA Ladder One(Broad Range)(Ready To Use)
100bp DNA Ladder One(Ready To Use)
1kbp DNA Ladder One(Ready To Use)－－－

Dual Green Nucleic Acid Stain－

0.5mol/l-EDTA Solution(pH 8.0)－

Ethanol(99.5)－

Ethidium Bromide Solution(10mg/ml)
Ethidium Bromide Solution(0.44mg/ml)
Extra PAGE One Precast Gel, 5-10%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 5-10%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 5-15%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 5-20%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 5-20%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 7.5-15%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 7.5-15%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 10-20%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 10-20%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 7.5%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 7.5%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 10%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 10%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 12.5%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 12.5%, 17wells
Extra PAGE One Precast Gel, 15%, 13wells
Extra PAGE One Precast Gel, 15%, 17wells
Formaldehyde Solution

－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
－
劇

2

規格・メーカー名
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（免疫化学用）
JIS 試薬特級

製品番号13077-04
13078-94
13079-84
13080-4413081-34
13082-24
13083-1413084-04
15353-01
06016-8504543-51
SP（電気泳動用）
04543-64
11642-44
SP（電気泳動用）
11642-31
07957-51
SP（難溶性タンパク質研究用） 07957-64
07957-22
SP（免疫化学用）
06456-70
SP（電気泳動用）
09409-42－
16551-84－
16526-82－
19386-74
14128-4614128-91
SP（分子生物学用）
14128-04
14128-62
SP（核酸電気泳動用）
08362-85
SP（核酸電気泳動用）
07908-75
SP（核酸電気泳動用）
08232-85
20599-54
SP（核酸電気泳動用）
20599-41
SP（分子生物学用）
14347-2108948-54
SP（分子生物学用）
08948-25
SP（核酸電気泳動用）
14631-94
SP（核酸電気泳動用）
02393-94
SP（電気泳動用）
13059-44
SP（電気泳動用）
13060-04
SP（電気泳動用）
13061-94
SP（電気泳動用）
13062-84
SP（電気泳動用）
13063-74
SP（電気泳動用）
13064-64
SP（電気泳動用）
13065-54
SP（電気泳動用）
13066-44
SP（電気泳動用）
13067-34
SP（電気泳動用）
13068-24
SP（電気泳動用）
13069-14
SP（電気泳動用）
13070-74
SP（電気泳動用）
13071-64
SP（電気泳動用）
13072-54
SP（電気泳動用）
13073-44
SP（電気泳動用）
13074-34
SP（電気泳動用）
13075-24
SP（電気泳動用）
13076-14
JIS 試薬特級
16223-55

容量10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
1L
500 mL
1L
5L
100 mL
1L
1g
5g
25 g
1 kit
25 g
20 pieces
25 pieces
40 pieces
100 mg
1g
5g
25 g
500 µL500 µL500 µL100 µL
1 mL
1L
100 mL
500 mL
10 mL
10 mL
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
10 sheets
500 g

価格
21,00021,00021,00021,00021,00021,00021,00021,0009,000
1,270
13,00055,0002,500
14,5002,800
11,00038,00027,000
6,800
2,000
2,000
2,000
2,600
8,400
24,40036,60015,00014,00012,0003,000
20,000
7,000
2,100
5,200
8,300
5,400
19,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,50019,500900

製品名Formamide
GelGreen Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO

毒劇物
－
－

GelGreen Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in Water－

Gel-Negative Stain Kit for SDS-PAGE－

GelRed Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO－

GelRed Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in Water－

GelRed Nucleic Acid Gel Stain, 3X in Water－

Glycerol－

Glycine－His-Detect In-Gel Stain－

6mol/l-Hydrochloric Acid
1mol/l-Hydrochloric Acid
Iodoacetamide
Loading Dye Brilliant Color(6x)

劇
－
－
－

Lumitein Protein Gel Stain 1X－

Lumitein Protein Gel Stain 100X－

2-Mercaptoethanol

毒Methanol

劇

N,N'-Methylenebisacrylamide

－

MOPS

－

MOPS Buffer Stock Solution(10x)(pH 7.0)
Orange G
PAGE Clean Up Kit
Phosphatase Inhibitor Cocktail
Phosphatase Inhibitor Cocktail(EDTA free)

－
－
－
－
－

Protease Inhibitor Cocktail(EDTA free)(100x)－

Protease Inhibitor Cocktail for General Use(100x)－

Protease Inhibitor Cocktail for Use with Mammalian Celland Tissue Extracts－

Protein Assay BCA Kit
Protein Assay BCA Reductant Adaptable Reagent
Protein Assay CBB Clean Up Kit
Protein Assay CBB Solution(Ready To Use)

－
－
－
－

Protein Assay CBB Solution(5x)－Protein Assay Lowry Kit
Protein Ladder One Plus, Triple-color for SDS-PAGE
Protein Markers(M.W. 6,500~200,000)(10x) for SDSPAGE－－－

規格・メーカー名
SP（分子生物学用）
Biotium, Inc.

製品番号
容量02020-64
100 mL
41004
0.5 mL
41005-T
0.1 mL
Biotium, Inc.
41005
0.5 mL
41005-1
10 mL
SP（電気泳動用）
16660-41
1 kit
41002
0.5 mL
Biotium, Inc.
41002-1
10 mL
41003-T
0.1 mL
Biotium, Inc.
41003
0.5 mL
41003-1
10 mL
Biotium, Inc.
41001
4L
17045-94
100 mL
SP（分子生物学用）
17045-65
500 mL
17141-24
100 g
SP（分子生物学用）
17141-95
500 g
08500-94
100 mL
SP（電気泳動用）
08500-65
500 mL
容量分析用
37313-25
500 mL
SP（バイオテクノロジーグレード） 11677-75
500 mL
SP（SH 基タンパク質研究用） 19302-54
5g
SP（電気泳動用）
11943-91
1 mL
21001
200 mL
Biotium, Inc.
21001-1
1L
21001-2
5L
21002
2 mL
Biotium, Inc.
21002-1
10 mL
21002-2
50 mL
SP（分子生物学用）
21438-82
25 g06068-44
100 mL
SP（分子生物学用）
06068-15
500 mL
SP（分子生物学用）
22407-52
25 g23438-64
100 g
SP（分子生物学用）
23438-35500 g
SP（分子生物学用）
23442-81
1L
EP
25401-22
25 g
SP（電気泳動用）
06441-50
1 kit
SP（生化学研究用）
07574-61
1 mL
SP（生化学研究用）
07575-51
1 mL
03969-21 5 X 1 mL
SP（生化学研究用）
03969-34 15 X 1 mL
04080-24
1 mL
SP（生化学研究用）
04080-11 5 X 1 mL
25955-24
1 mL
SP（生化学研究用）
25955-11 5 X 1 mL
SP（生化学研究用）
06385-00
1 kit
SP（生化学研究用）
21014-80
1 kit
SP（生化学研究用）
11611-60
1 kit
SP（生化学研究用）
11617-71
1L
29449-44
100 mL
SP（生化学研究用）
29449-15
500 mL
SP（生化学研究用）
29470-60
1 kit
SP（電気泳動用）
19593-25
500 µL
SP（電気泳動用）

29458-24

200 µL

価格
4,600
22,0005,000
24,000366,000
14,00024,000392,000
6,000
25,000412,000
50,000
3,150
6,400
2,150
4,550
4,800
16,800
1,550
3,450
8,700
1,000
16,00046,000198,000
12,00034,000154,000
2,650
2,150
2,700
5,000
10,80035,90014,0005,400
39,00016,00016,00025,50072,0007,000
25,5008,500
31,00015,00015,0009,700
13,5005,800
23,00012,00019,50028,0003

製品名
Rapid Running Buffer Solution(20x) for SDS-PAGE
Rapid Stain CBB Kit
RIPA Buffer(10x)RIPA Buffer
RNase Quiet
RNase Quiet for Replacement
Running Buffer Solution(10x) for PAGE

毒劇物
－
－
－
－
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規格・メーカー名
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（タンパク質研究用）
SP（タンパク質研究用）
SP（分子生物学用）
SP（分子生物学用）
SP（電気泳動用）

Running Buffer Solution(10x) for SDS-PAGE, Tris-Glycine－

SP（電気泳動用）

Sample Buffer Solution with 2-ME(2x) for SDS-PAGE
Sample Buffer Solution without 2-ME(2x) for SDS-PAGE
Sample Buffer Solution with Reducing Reagent(6x) for
SDS-PAGE
Sample Buffer Solution without Reducing Reagent(6x)for SDS-PAGE
10%-SDS Solution
Separating Gel Buffer Solution(4x) for SDS-PAGE
Sil-Best Destain Kit
Sil-Best Stain-Neo for Protein and Nucleic Acid/PAGE
Sil-Best Stain One

毒－

Sodium Acetate－

1mol/l-Sodium Hydroxide Solution－

Sodium Lauryl Sulfate－

Stacking Gel Buffer Solution(4x) for SDS-PAGE
Stacking Gel Buffer Solution(4x) with Dye for SDS-PAGE
N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine
Tricine－－－－Tris-Acetate-EDTA Buffer(10x)－Tris-Acetate-EDTA Buffer(50x)
Tris-Borate-EDTA Buffer(5x)－－Tris-Borate-EDTA Buffer(10x)－Tris(hydroxymethyl)aminomethane－

Urea
Water deionized & sterilized
WIDE RANGE Gel Preparation Buffer(4x) for PAGE
Xylene Cyanol FF

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ご注意

試験・研究用以外には使用しないでください。

SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）

製品番号12981-74
30035-14
08714-04
16488-34
09147-14
09477-94
30340-91
30329-61
30329-74
30566-2230567-12

容量250 mL
1 set
1 set
100 mL475 mL475 mL
1L
1L
5L
25 mL
25 mL

価格
5,200
9,500
14,50010,500
3,900
3,600
5,500
5,700
24,000
5,700
5,600

－

SP（電気泳動用）

09499-14

5 mL

6,200

－

SP（電気泳動用）

09500-64

5 mL

5,600

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SP（生化学研究用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）
SP（電気泳動用）

30562-04
30651-05
07983-30
05773-1106865-81
31137-12SP（分子生物学用）
31137-25
SP（バイオテクノロジーグレード） 11678-65
08933-92
SP（分子生物学用）
08933-3408933-05
SP（電気泳動用）
32158-25
SP（電気泳動用）
09268-34
SP（電気泳動用）
33401-72
SP（バイオテクノロジーグレード） 02437-24
35430-61
SP（核酸電気泳動用）
35430-74
SP（核酸電気泳動用）
32666-81
SP（核酸電気泳動用）
35432-41
35440-31
SP（核酸電気泳動用）
35440-4435434-76
SP（分子生物学用）
35434-0535434-21
SP（分子生物学用）
35940-65
SP（バイオテクノロジーグレード） 06442-95
SP（電気泳動用）
07831-94
JIS 試薬特級
36629-64

100 mL
500 mL
1 kit
1 set
1 set
25 g
500 g
500 mL
25 g
100 g
500 g
500 mL
100 mL
25 g
100 g
1L
5L
1L
1L
1L
5L
100 g
500 g
1 kg
500 g
500 mL
250 mL
5g

6,300
8,000
7,500
14,50011,500
1,900
3,600
3,850
3,050
5,750
16,900
8,600
3,600
2,000
9,900
5,800
18,00012,0005,800
7,000
19,0004,250
10,50016,4006,350
2,200
11,50010,500※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。
※掲載価格は 2023 年 4 月現在のものです（消費税は含まれていません）。

URL

TEL:075-211-2703
2304