2005 年第 2 回知的財産翻訳検定
化学分野＜生化学＞試験問題
問題：
下記明細書の【特許請求の範囲】の【請求項１】のうち（C）、（D)および（E)を除いた部分（翻訳はセミコロンで終わってください）と、パラグラフ【０００７】及び【００３４】（見出しを除く）を出願用に翻訳してください。翻訳にあたっては、必要に応じて明細書の他の部分を参照してください。
解答にはパラグラフ番号を忘れずに付記してください。
解答中、℃は degree C とし、μl はスペルアウトしてください。ギリシャ文字の使用は不可とします。HNO3の 3 は下付き文字と見なします。解答も HNO3 のままで結構です。
【特許請求の範囲】
Claim:【請求項１】

A boron transporter gene comprising any

以下の（Ａ）～（Ｅ）の何れかの塩基配列からなるホウ素トランスポーター遺伝子。

one of the following base sequences (A) - (E):（Ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる(A) a base sequence coding for a protein whose

タンパク質をコードする塩基配列；

amino acid sequence is represented by SEQ ID（Ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において、 NO:2;
１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付(B) a base sequence coding for a protein derived

加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素トラン

from the protein of (A) by deletion, substitution or

スポーター活性を有するタンパク質をコードする塩

addition of one or several amino acids in the基配列；

amino acid sequence represented by SEQ ID NO:2（Ｃ）配列番号１に示される塩基配列；

and having boron transporter activity;（Ｄ）配列番号１に示される塩基配列において、１若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素トランスポーター活性を有するタンパク質をコードする塩基配列；（Ｅ）配列番号１に示される塩基配列とストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズし、かつホウ素トランスポーター活性を有するタンパク質をコードする塩基配列；-1-【０００７】[0007]

本発明者らは上記課題を解決するため鋭意研究し、In order to attain the stated object, the present

シロイヌナズナゲノムに存在する６つのＢＯＲ１相

inventors

conducted

同遺伝子のうち、シロイヌナズナにおいて発現してobtaineda

いるＡｔ３ｇ６２２７０、Ａｔ３ｇ０６４５０、ＡAt3g62270, At3g06450, Atlg15460, At1g74810 and

ｔ１ｇ１５４６０、Ａｔ１ｇ７４８１０、Ａｔ５ｇAt5g25430, which are among the six BOR1

２５４３０の５遺伝子の完全長ｃＤＮＡを取得しhomologous genes in the Arabidopsis thaliana

intensivefull-lengthcDNA

studies
foreachandof

た。Ａｔ３ｇ６２２７０、Ａｔ３ｇ０６４５０、Ａ genome and which are expressed in A. thaliana.
ｔ１ｇ１５４６０について、ＧＡＬ１プロモーター

For each of At3g62270, At3g06450 and Atlg15460,

下流に５'と３'側双方の非翻訳領域を含む完全長ｃ the inventors made a construct in which a
ＤＮＡをつないだコンストラクトを構築し、酵母の full-length cDNA containing both the 5' and 3'
ＢＯＲ１相同遺伝子であるＹＮＬ２７５ｗの破壊株

untranslated regions was connected downstreamに導入した。酵母の菌体内水溶性ホウ素濃度を測定 of the GAL1 promoter, and the construct wasしたが、ベクターコントロールと遺伝子を導入した introduced into a yeast strain in which YNL275w,
酵母において有意な差は見られなかった。また、ホ or the BOR1 homologous gene of yeast, had been
ウ酸を含む培地における耐性も見られなかった。そ disrupted.

Theinventors

measured

theこで、５'と３'側双方の非翻訳領域を除いたＯＲＦ部 concentration of water-soluble boron within the分のｃＤＮＡをＧＡＬ１プロモーター下流につないyeast cells, but no significant difference was foundだコンストラクトを構築し、酵母に導入した。ホウ between the vector control and the yeast into
素を含む培地で６０分間培養したところ、いずれも

which the gene had been introduced. Nor was

ベクターコントロールと比較して菌体内水溶性ホウ found resistance in a medium containing boric
素濃度の低下が見られた。また、２０～８０ｍＭの acid. In view of this, the inventors made
ホウ酸を含む固形培地で生育させたところ、Ａｔ３ constructs in which cDNA in the ORF portion
ｇ０６４５０、Ａｔ１ｇ１５４６０を発現させた酵 having neither the 5' nor 3' untranslated region
母ではベクターコントロールと比べてホウ酸耐性を was connected downstream of the GAL1 promoter
示した。Ａｔ１ｇ１５４６０を発現させた酵母では and introduced the constructs into yeast. Upon
ＢＯＲ１を発現させた酵母よりも強い耐性を示し culturing in a boron-containing medium for 60た。本発明は上記知見に基づいて完成するに至った minutes, each sample was found to have a lower
ものである。

concentration of intracellular water-soluble boron
than the vector control. Upon cultivating on solid
media containing 20-80 mM of boric acid, theyeast in which At3g06450 and Atlg15460 had been
expressed showed greater boric acid resistancethan the vector control.

The yeast in which

Atlg15460 had been expressed showed greater
resistance than the yeast in which BOR1 had been
expressed. The

present invention

has beenaccomplished on the basis of these findings.

-2-【００３４】[0034]［酵母のホウ素濃度の測定］

The concentration of boron in yeast was measured

酵母のホウ素濃度の測定には、ＳＤ培地のグルコー

using a minimal medium (SG), which was theスをガラクトースに代えた最小培地（ＳＧ）を用い、 same as the SD medium except that glucose was
培養は３０℃で行った。２日間培養した酵母１１６replaced by galactose; yeast cultivation was９株の培養液５ｍｌを２００ｍｌの培地に加え、対effected at 30 degrees C.

数増殖期になるまで１６時間培養した。５０ｍｌのcultivation, a culture solution (5 ml) of the yeast

培養培養液を５０ｍｌプラスチックチューブに移しstrain 1169 was added to 200 ml of the medium

Following 2-dayて３０００×ｇで５分間遠心した。上清を除いた後、 and cultivation was continued for 16 hours until a
２０ｍｌの０．１、０．５、１、１０ｍＭのホウ酸

logarithmic growth phase was reached. A portion

を含むＳＧ培地（Ｔｒｉｓを用いてｐＨ５．５に調(50 ml) of the cultivated culture solution was整）を菌体に加えて６０分間培養した。培養した酵transferred

母を遠心し、菌体を氷上で冷やした蒸留水で２回洗

centrifuged for 5 minutes at 3000xg. After

浄した。菌体を１ｍｌの蒸留水に懸濁し、チューブ

removing the supernatant, 20 ml of an SGに移して３０分煮沸した。これを３０００×ｇで２medium (adjusted to pH 5.5 with Tris) containing

０分間遠心し、上清を水溶性ホウ素画分として集め0.1, 0.5, 1 or 10 mM boric acid was added to theintoa50-ml

plastic

tubeandた。菌体に２５０μｌの蒸留水を加え、上清を水溶 cell pellet, which was cultivated for 60 minutes.
性ホウ素画分と合わせた。菌体を８０℃で４８時間 The cultivated yeast was centrifuged and the cell
乾燥させ、乾燥重量を測定した。水溶性ホウ素画分

pellet was washed twice with distilled water

サンプルは蒸留水で２．７ｇに合わせ、０．３ｍｌ cooled on ice. The pellet was suspended in 1 ml ofの５０ｐｐｂ Ｂｅを含む０．８ＮのＨＮＯ3.溶液を distilled water, transferred into a tube, and boiled加えた。サンプルのホウ素濃度は Inductively Coupledfor 30 minutes. The cells were then centrifuged for

Plasma - Mass Spectrometery（ＩＣＰ－ＭＳ）（SEIKO,

20 minutes at 3000xg and the supernatant wasChiba, Japan）で測定した。実験は３つの独立した形 collected as a water-soluble boron fraction. To the質転換体を用いて行った。

cell pellet, 250 microliters of distilled water wasadded, and the supernatant was combined withthe water-soluble boron fraction. The cells weredried at 80 degrees C for 48 hours and their dry
weight was measured. The water-soluble boron
fraction sample was combined with distilled water
to make a total of 2.7 g, and 0.3 ml of 0.8N HNO3
solution containing 50 ppb of Be was added. Theboron concentration in the sample was measured
by inductively coupled plasma-mass spectrometry(ICP-MS) (SEIKO, Chiba, Japan). The experimentwasperformed

transformants.

-3-

using

three

independent