稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による分析法の開発

152 稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法の開発
齊木 雅一 *，平田 絵理香 *，近藤 勝 *，船水 悦子 *Development of Simultaneous Determination Method of Benfuracarb and Carbosulfanin Rice Straw and Whole-Crop Rice Silage by LC-MS/MS
SAIKI Masakazu *, HIRATA Erika *, KONDO Masaru * and FUNAMIZU Etsuko *( * Sapporo Regional Center, Food and Agricultural Materials Inspection Center)
We have developed a quantitative determination method of the concentration of benfuracarb andcarbosulfan in rice straw and whole-crop rice silage (WCRS) using a liquid-chromatographelectrospray-ionization tandem mass spectrometer (LC-ESI-MS/MS).
Having added silver nitrate solution and phosphate buffer (pH 8.0) to a sample, benfuracarb andcarbosulfan were extracted with acetone, and the extracted solution was filtered. The filtrate wasthen diluted with phosphate buffer. Benfuracarb and carbosulfan were extracted from the dilutedsolution with hexane-ethyl acetate (7:3). The hexane-ethyl acetate layer was purified with a solid
phase extraction column (ENVI-Carb/LC-NH2, Sigma-Aldrich Co. LLC.; St. Louis, MO, USA), andinjected into the LC-MS/MS to determine the levels of benfuracarb and carbosulfan. LC separation
was then carried out on a ODS column (Mightysil RP-18GP, 2.0 mm i.d. × 150 mm, 5 µm, Kanto
Chemical Inc.; Tokyo, Japan) with a gradient of 2 mmol/L ammonium acetate solution andacetonitrile as a mobile phase. In the MS/MS analysis, the positive mode electrospray ionization(ESI+) was used.
Recovery tests were conducted on rice straw and WCRS. Benfuracarb and carbosulfan were addedat the levels of 0.7 mg/kg for rice straw, and 1 mg/kg for WCRS respectively. The resulting mean
recoveries ranged from 86.6 % to 89.3 % for benfuracarb, and 83.1 % to 83.4 % for carbosulfan
respectively. The repeatability in the form of the relative standard deviation (RSDr) was less than
9.9 % for benfuracarb, and less than 7.2 % for carbosulfan.
Key words: benfuracarb; carbosulfan; liquid-chromatograph tandem mass spectrometer (LCMS/MS); electrospray ionization (ESI); rice straw; whole-crop rice silage
キーワード：ベンフラカルブ；カルボスルファン；液体クロマトグラフタンデム型質量分
析計；エレクトロスプレーイオン化法；稲わら；稲発酵粗飼料

1緒言

ベンフラカルブは大塚化学，カルボスルファンは FMC（米国）により開発されたカーバメート系殺虫剤であり，昆虫の神経伝達系に存在するアセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより殺虫活性を示すと考えられている 1)．我が国では，ベンフラカルブは 1986 年に，カルボス
ルファンは 1983 年に初回農薬登録されている．カルボスルファンについては，飼料中の管理基準値 2)として，稲わらで 0.7 mg/kg，稲発酵粗飼料（以下「WCRS」という．）で 1 mg/kg が設定されているが，分析法が飼料分析基準 3) に収載されていない．また，ベンフラカルブについては飼料中*独立行政法人農林水産消費安全技術センター札幌センター

16

飼料研究報告 Vol. 48 (2023)の基準値は設定されていないものの，ベンフラカルブ及びカルボスルファンの共通代謝・分解物であるカルボフラン又は 3-OH カルボフランが検出された場合，その親化合物を確認するため，ベンフラカルブとカルボスルファンは同時に分析できることが望ましいと考えられる．
財団法人日本食品分析センターが平成 21 年度 4)及び平成 23 年度 5)に飼料中の有害物質等分析法
開発委託事業において開発した飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの分析法（以下「JFRL 法」という．）を基に，令和 3 年度，顯谷ら 6)が稲わら及び WCRS を対象として飼料分析基準への収載の可否を検討したところ，JFRL 法で用いられているオクタデシルシリル化シリカゲ
ルミニカラムでは当該農薬の一部が溶出されないことが判明した．
そこで，今回，厚生労働省通知試験法 7) を基に，稲わら及び WCRS 中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計（以下「LC-MS/MS」という．）による同時定量法を開発し，飼料分析基準への収載の可否を検討したので，その概要を報告する．
参考にベンフラカルブ及びカルボスルファンの構造式等を Fig. 1 に示した．

O CH3 CH(CH3)2
OC N
NCH2CH2CO2CH2CH3SO CH3CH3Benfuracarb
ethyl N-[2,3-dihydro-2,2-dimethylbenzofuran-7yloxycarbonyl(methyl)-aminothio]-N-isopropyl-β-alaninate
C20H30N2O5SCH3O

MW: 410.53

SN

CAS No.: 82560-54-1

N[(CH2)3CH3]2O
OCH3CH3Carbosulfan
2,3-dihydro-2,2-dimethylbenzofuran-7yl(dibutylaminothio)methylcarbamate
C20H32N2O3SFig. 1

MW: 380.54

Chemical structure of benfuracarb and carbosulfan

22.1

試

CAS No.: 55285-14-8

実験方法

料

稲わらは目開き 1 mm のスクリーンを装着した粉砕機で粉砕し，分析用試料とした．WCRS は

稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による分析法の開発

1760 °C で 10 時間乾燥後，更に室内に静置して風乾した後，同様に粉砕し，分析用試料とした．
2.21)

試薬

アセトン，酢酸エチル及びヘキサンは残留農薬・PCB 試験用を用いた．アセトニトリルは残留農薬・PCB 試験用及び LC-MS 用（関東化学製）を用いた．1 mol/L 酢酸アンモニウム溶液は高速液体クロマトグラフ用（関東化学製）を用いた．硝酸銀，リン酸水素二ナトリウム及びリン酸二水素カリウムは試薬特級を用いた．水は Milli-Q Advantage（Merck Millipore 製）により精製した超純水（JIS K0211 の 5218 に定義された超純水）を用いた．

2)

1/15 mol/L リン酸緩衝液（pH 8.0）
1/15 mol/L リン酸水素二ナトリウム溶液 800 mL に 1/15 mol/L リン酸二水素カリウム溶液 50mL を加え，更に 1/15 mol/L リン酸二水素カリウム溶液で pH 8.0 に調整した．

3)

ベンフラカルブ標準原液
ベンフラカルブ標準品（富士フイルム和光純薬製，純度 99.6 %）25 mg を量って 50 mL の全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてベンフラカルブ標準原液を調製した（この液 1 mL は，ベンフラカルブとして 0.5 mg を含有）．

4)

カルボスルファン標準原液
カルボスルファン標準品（富士フイルム和光純薬製，純度 99.8 %）25 mg を量って 50 mL の全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてカルボスルフ
ァン標準原液を調製した（この液 1 mL は，カルボスルファンとして 0.5 mg を含有）．

5)

混合標準液
各標準原液 1 mL を 50 mL の全量フラスコに入れて混合し，更に標線までアセトンを加えて混合標準原液を調製した（この液 1 mL は，ベンフラカルブ及びカルボスルファンとして各 10µg を含有）．
使用に際して，混合標準原液の一部を，アセトニトリルで正確に希釈し，1 mL 中にベンフラカルブ及びカルボスルファンとして 0.05，0.075，0.1，0.25，0.5，0.75，1，2，3，4 及び 5
ng を含有する混合標準液を調製した．

2.3

装置及び器具1)

粉砕機： SM 100

Retsch 製（1 mm スクリーン，回転数（仕様）1430 rpm）

2)

振り混ぜ機：レシプロシェーカーSR-2W タイテック製（使用時振動数 300 rpm）

3)

グラファイトカーボン／アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム（以下「ミニカラム」という．）：ENVI-Carb/LC-NH2（500 mg/500 mg）

4)

LC-MS/MS：LC 部：ACQUITY UPLC System
MS 部：Quattro Premier XE

2.41)

Sigma-Aldrich 製

Waters 製

Waters 製定量方法
抽出

分析試料 10 g を量って 500 mL の共栓三角フラスコに入れ，0.1 mol/L 硝酸銀溶液 2 mL 及び1/15mol/L リン酸緩衝液 30 mL を加え，30 分間静置後，更にアセトン 120 mL を加え，30 分間振り混ぜて抽出した．200 mL の全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き，抽出液をろ紙（5 種B）で吸引ろ過した後，先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン 40 mL で洗浄し，同様に吸18

飼料研究報告 Vol. 48 (2023)引ろ過した．更に全量フラスコの標線までアセトンを加えた．この液を，液液分配に供する試料溶液とした．
2)

液液分配
試料溶液の一部を 1/15 mol/L リン酸緩衝液で正確に 20 倍に希釈した．希釈液 2 mL を 10 mL
共栓遠心沈殿管に正確に入れ，1/15 mol/L リン酸緩衝液 1 mL を加えた後，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）5 mL を正確に加え，栓をしてボルテックスミキサーを用いて 30 秒間激しくかき混ぜた．100×g で 5 秒間遠心分離し，上層（ヘキサン－酢酸エチル層）をカラム処理に供する試料溶液とした．

3)

カラム処理
ミニカラムを酢酸エチル 5 mL 及びヘキサン 5 mL で洗浄した．50 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き，試料溶液 2 mL をミニカラムに正確に入れ，液面が充てん剤の上端に達するまで流下し，ベンフラカルブ及びカルボスルファンを流出させた．更に，ヘキサン－酢酸エチ
ル（7+3）8 mL をミニカラムに加え，同様に流出させた．流出液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固した．アセトニトリル 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし，LC-MS/MS による測定に供する試料溶液とした．

4)

LC-MS/MS による測定
試料溶液及び各混合標準液各 2 µL を LC-MS/MS に注入し，選択反応検出（以下「SRM」という．）クロマトグラムを得た．測定条件を Table 1 及び 2 に示した．
Table 1
Operation conditions of LC-MS/MS
ColumnMightysil RP-18GP (2 mm i.d. × 150 mm, 5 μm), Kanto Chemical
Mobile phase
2 mmol/L ammonium acetate – acetonitrile (1:1) → 3 min→ (1:19) (hold for 15 min)→ (1:1) (hold for 5 min)Flow rate
0.2 mL/min
Column temperature
40 °C
Detector
Quadrupole mass spectrometer
Ionization
Electrospray ionization (ESI) (Positive ion mode)
Ion source temperature
120 °C
Desolvation gas
N2 (800 L/h, 400 °C )Cone gas
N2 (50 L/h)
Capillary voltage
2.5 kV
Collision gas
Ar (0.25 mL/min)
Table 2
Precursor
Targetion(m/z )

Benfuracarb

411

Carbosulfan

381

MS/MS parameters
Product ion
Quantifier
Qualifier(m/z )(m/z )
195
190
118
160

Cone

Collision

volltageenergy(V)(eV)

4631461721272121

稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による分析法の開発

5)

計

19算

得られた SRM クロマトグラムからピーク面積を求めて検量線を作成し，試料中のベンフラカルブ量及びカルボスルファン量を算出した．
なお，定量法の概要を Scheme 1 に示した．
Sample 10.0 g (500 mL Erlenmeyer flask)
added 2 mL of 0.1 mol/L silver nitrate and 30 mL of 1/15 mol/L phosphate buffer (pH 8.0)
allowed to stand for 30 min
added 120 mL of acetone
shook for 30 min
filtered through filter paper (No. 5B of JIS P3801) under reduced pressure
washed with 40 mL of acetone
filled up to 200 mL with acetone
diluted 20-fold with 1/15 mol/L phosphate buffer (pH 8.0)
2 mL of sample solution (10 mL centrifuge tube)
added 1 mL of 1/15 mol/L phosphate buffer (pH 8.0)
added 5 mL of hexane-ethyl acetate (7:3)
agitated for 30 sec
centrifuged at 100×g for 5 sec
ENVI-Carb/LC-NH2 (500 mg/500 mg)(prewashed with 5 mL of ethyl acetate and 5 mL of hexane)
placed a receiver (50 mL evaporator flask)
applied 2 mL of hexane-ethyl acetate layer (upper layer)
eluted with 8 mL of hexane-ethyl acetate (7:3)
evaporated to dryness under 40 °C
dissolved in 2 mL of acetonitrile
LC-MS/MS

Scheme 1

Analytical procedure for benfuracarb and carbosulfan inrice straw and whole-crop silage (WCRS)

2.5

液液分配に用いる抽出溶媒及び抽出回数の確認
稲わら及び WCRS を 2.4 の 1)に従って抽出，ろ過及び定容した液 2.5 mL を 50 mL の全量フラスコに分取した．これにベンフラカルブ及びカルボスルファンとして稲わらに 0.7 mg/kg 相当量，WCRS に 2 mg/kg 相当量を添加し標線まで 1/15 mol/L リン酸緩衝液を加えた．この液 2 mL を 10mL 共栓遠心沈殿管に正確に入れ，1/15 mol/L リン酸緩衝液 1 mL を加えた後，ヘキサン，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）又はヘキサン－酢酸エチル（1+1）5 mL をそれぞれ正確に加え，ボルテックスミキサーを用いて 30 秒間激しくかき混ぜた．100×g で 5 秒間遠心分離し，ヘキサン－酢酸エチル層 2 mL を 50 mL なす形フラスコに正確に入れ，40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固した．アセトニトリル 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし，2.4 の 4)及び 5)に従い定量し，回収率を求めた．先の共栓遠心沈殿管の下層（水層）全量を別の 10 mL 共栓遠心沈殿管に入れ，ヘキサン，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）又はヘキサン－酢酸エチル（1+1）5 mL をそれぞれ正確に加え，同様に回収率を求めた．

20

飼料研究報告 Vol. 48 (2023)

2.6

添加回収試験
2.2 の 3)及び 4)のベンフラカルブ標準原液及びカルボスルファン標準原液をアセトニトリルで正確に希釈し添加に用いた．
ベンフラカルブ及びカルボスルファンとしてそれぞれ，稲わらに 0.7 mg/kg 相当量（最終試料溶液中で 0.7 ng/mL），WCRS に原物換算して 1 mg/kg 相当量（同 2.25 ng/mL）になるようにそれぞれ添加後よく混合し，一夜静置した後に 2.4 に従って定量し，平均回収率及び繰返し精度を求めた．
なお，WCRS への添加は風乾物試料に対してベンフラカルブ及びカルボスルファンとして 2.25mg/kg 相当量になるよう行い，原物中濃度への換算は，原物中及び風乾物中の水分含有量を 60 %及び 10 %と想定して，原物（水分含有量 60 %）中濃度＝風乾物（水分含有量 10 %）中濃度／2.25 の式により行った．

33.1

結果及び考察

液液分配に用いる抽出溶媒及び抽出回数の検討
令和 3 年度，ベンフラカルブ及びカルボスルファンの添加回収試験において飼料分析基準別表3 の試験法の妥当性確認法ガイドライン（以下「妥当性確認法ガイドライン」という．）に定められた目標値を満たす結果が得られなかった．その原因を調査したところ，スチレンジビニルベ
ンゼン共重合体ミニカラム等の高い保持能力を持つ逆相のミニカラムからはヘキサンなどの無極性溶媒を用いても十分に溶出しないこと，多孔性ケイソウ土カラムからは酢酸エチルを用いても十分に溶出しないことが判明した．そこで，厚生労働省通知試験法を参考に，液液分配による精製を検討することとした．
厚生労働省通知試験法では，抽出液に 10 w/v%塩化ナトリウム溶液を加えヘキサン－酢酸エチル（1+1）100 mL 及び 50 mL で 2 回振り混ぜ抽出を行っている．操作の簡略化及び溶媒等の試薬の使用量削減のために遠心沈殿管を用いる方法として，2.5 に従って検討を行った．その結果はTable 3 のとおりであり，ヘキサンを用いた場合は，1 回目の抽出で 70 %以上回収され，2 回目も一部が回収されたが，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）及びヘキサン－酢酸エチル（1+1）では 1 回目の抽出で 80 %以上回収され，2 回目は検出されなかった．そこで，次のカラム処理操作への水の混入を最小限にするため，酢酸エチルの割合が少ないヘキサン－酢酸エチル（7+3）5 mL で 1回抽出を行うこととした．

稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による分析法の開発

21

Table 3

Recoveries on extraction solvents and extraction numbers of the liquid-liquid partition
Recovery (%)
Pesticides
SamplesSolvents
First time Second timeTotalHexane
89089
Rice straw Hexane-ethyl acetate (7:3)
85
085
Hexane-ethyl acetate (1:1)
86086
Benfuracarb
Hexane98
198
WCRS Hexane-ethyl acetate (7:3)
97
097
Hexane-ethyl acetate (1:1)
96096
Hexane73
174
Rice straw Hexane-ethyl acetate (7:3)
84
084
Hexane-ethyl acetate (1:1)
81081
Carbosulfan
Hexane70
1484
WCRS Hexane-ethyl acetate (7:3)
96096
Hexane-ethyl acetate (1:1)
101
0101

n=33.2

グラファイトカーボン／アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラムからの流出画分の確認
厚生労働省通知試験法では，液液分配の抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水，ろ過，濃縮乾固後にグラファイトカーボンミニカラム及びアミノプロピルシリル化シリカゲルミニカラムの 2 種類のミニカラムを用いて精製している．そこで，操作の簡略化のために，液液分配のヘキサン－酢酸エチル層の一部を直接グラファイトカーボン／アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラムに負荷して精製する方法の検討を行った．
稲わらを 2.4 の 1)から 2)により調製し，得られた試料溶液にベンフラカルブ及びカルボスルファンとして 0.7 mg/kg 相当量（最終試料溶液中で 0.7 ng/mL 相当量）を添加した後，2.4 3)に準じてミニカラムからの流出画分を確認した．その結果は Table 4 のとおりであり，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）0~10 mL の画分でベンフラカルブ及びカルボスルファンが流出し，10~20 mL の画分に溶出は認められなかった．このことから，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）10 mL（試料溶液 2 mL 及び流出溶媒 8 mL）で流出させることとした．
Table 4

Elution pattern of benfuracarb and carbosulfan from ENVI-Carb/LC-NH2
Recovery (%)
Pesticides
Hexane-ethyl acetate (7:3)
Total
0~10 mL
10~20 mL
Benfuracarb
97097
Carbosulfan
99099
n=33.3

妨害物質の検討
稲わら 3 検体及び WCRS 3 検体を用い，本法により調製した試料溶液を LC-MS/MS に注入し，得られた SRM クロマトグラムを確認したところ，いずれの試料においてもベンフラカルブ及び

22

飼料研究報告 Vol. 48 (2023)

カルボスルファンの選択性を妨げるピークは認められなかった．
なお，得られた SRM クロマトグラムの一例を Fig. 2 に示した．

B 80000

21Intensity/ arb. units

Intensity/ arb. units

A 80000
60000
40000
20000
06000040000
20000

210456Retention time/min

7878456Retention time/min

78Intensity/ arb. units

C 80000
60000
40000
20000

2104Fig. 256Retention time/min

Typical selected reaction monitoring (SRM) chromatograms of benfuracarb andcarbosulfan in standard and blank sample solutions(LC-MS/MS conditions are shown in Table 1 and 2.
1: benfuracarb and 2: carbosulfan.

Arrows indicate the retention times ofThe baselines are shifted for display.)

A: Standard solution (0.1 ng/mL: 0.2 pg as each pesticide)
B: Sample solution of rice straw
C: Sample solution of WCRS
3.4

マトリックス効果の確認
2.4 の 1)から 3)により調製した稲わらのブランク試料溶液にベンフラカルブ及びカルボスルファンとしてそれぞれ 0.7 mg/kg 相当量（最終試料溶液中でそれぞれ 0.7 ng/mL 相当量），WCRS のブランク試料溶液に同 2.25 mg/kg 相当量（同 2.25 ng/mL 相当量）をそれぞれ添加した各マトリックス標準液について，2.2 の 5)に従って調製した同濃度のベンフラカルブ及びカルボスルファン標準液に対するピーク面積比を確認したところ，Table 5 のとおりであり，試料マトリックスの測定値への顕著な影響は認められなかった．

稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による分析法の開発

Table 5Pesticides

Samples

Matrix effect study
Concentration of pesticides
Sample(mg/kg air-dry matter)solution (ng/mL)
Benfuracarb
Carbosulfanb)

Matrix effect(%)a)

Matrix standard

23

Rice straw

0.7

0.789

WCRS

2.25

2.2594

Rice straw

0.70.791

WCRS

2.25

2.2592n=3a) Converted from the concentration in matrix standard solutionb) Ratio of peak area of pesticides in the presence of matrix to that in the absence of matrix
3.5

添加回収試験2.6 により添加回収試験を実施した．その結果は Table 6 のとおり，ベンフラカルブについては平均回収率は 86.6~89.3 %，その繰返し精度は相対標準偏差（RSDr）としては 9.9 %以下，カルボスルファンについては平均回収率は 83.1~83.4 %，RSDr は 7.2 %以下の成績が得られ，妥当性確認法ガイドラインに定められた目標値（真度：70 %以上 120 %以下，精度：0.7 mg/kg では 17 %以下，2.25 mg/kg では 14 %以下）を満たしていた．
なお，得られた SRM クロマトグラムの一例を Fig. 3 に示した．
Table 6
Pesticides

Benfuracarb
Carbosulfan

Recoveries for benfuracarb and carbosulfan
Rice Straw

Spiked level(mg/kg original matter)a)b)

Recovery(%)c)
RSDrWCRS(%)

Recovery(%)b)c)

RSDr(%)

0.7

86.6

9.9－

－

1－－

89.3

8.5

0.7

83.4

7.2－－

1－－

83.1

5.2

－: Not testeda) The benfuracarb and carbosulfan were spiked to air-dried WCRS samples one nightprior to extraction.

The spiked level was 2.25 mg/kg as air-dry basis for benfuracarb

and carbosulfan.

The levels of pesticides as fed basis were calculated with following

equation on the assumption that the moisture content of WCRS samples was 60 % for fedbasis and 10 % for air-dry basis.
The levels of pesticides as fed basis (moisture 60 %)= the levels of pesticides as air-dry basis (moisture 10 %) / 2.25b) Mean (n = 5)c) Relative standard deviation of repeatability

24

飼料研究報告 Vol. 48 (2023)
AB

211200000

Intensity/ arb. units

Intensity/ arb. units

1200000
9000006000003000006000003000000451200000

Intensity/ arb. units

2900000

0C

16Retention time/min

78784

56
Retention time/min

782

1900000
60000030000004

56Retention time/min

Fig. 3

Typical SRM chromatograms of benfuracarb and carbosulfan
in standard and spiked sample solutions(LC-MS/MS conditions are shown in Table 1 and 2.
2: carbosulfan.

Arrows indicate the peaks of 1: benfuracarb andThe baselines are shifted for display.)

A: Standard solution (1 ng/mL: 2 pg as benfuracarb and carbosulfan)
B: Sample solution of rice straw (spiked at 0.7 mg/kg of benfuracarb and carbosulfan (as 0.7 ng/mLin sample solution))
C: Sample solution of WCRS (spiked at 2.25 mg/kg fed basis of benfuracarb and carbosulfan (as2.25 ng/mL in sample solution))4

まとめ稲わら及び WCRS 中に残留するベンフラカルブ及びカルボスルファンについて，厚生労働省通知試験法を基に，LC-MS/MS による定量法の飼料分析基準への収載の可否を検討したところ，以下の結果が得られた．
1)

操作の簡略化及び試薬の使用量削減のため厚生労働省通知試験法から，ヘキサン－酢酸エチル（7+3）で 1 回液液分配を行い，ヘキサン－酢酸エチル層をグラファイトカーボン／アミノプロ
ピルシリル化シリカゲル積層ミニカラムに直接負荷し精製する方法に変更した．

2)

稲わら及び WCRS について，本法に従って得られたクロマトグラムには，選択性を妨げるピークは認められなかった．

3)

本法に従い得られた試料溶液についてマトリックス効果を確認した結果，試料マトリックスの測定値への顕著な影響は認められなかった．

稲わら及び稲発酵粗飼料中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による分析法の開発

4)

25

稲わらにベンフラカルブ及びカルボスルファンとして各 0.7 mg/kg 相当量，WCRS に原物中に換算して各 1 mg/kg 相当量を添加し，本法に従って 5 点併行分析を実施し，回収率及び繰返し精度を求めたところ，妥当性確認法ガイドラインに定められた真度及び併行精度の目標値を満たしていた．

文1)

献

環境省中央環境審議会土壌農薬部会農薬小委員会（第 78 回）：水質汚濁に係る農薬登録基準
として環境大臣の定める基準の設定に関する資料，令和 2 年 11 月 17 日 (2020).

2)

農林水産省畜産局長通知：飼料の有害物質の指導基準及び管理基準について，昭和 63 年 10 月
14 日，63 畜 B 第 2050 号 (1988).

3)農林水産省消費・安全局長通知：飼料分析基準の制定について，平成 20 年 4 月 1 日，19 消安
第 14729 号 (2008).

4)

財団法人日本食品分析センター：平成 21 年度飼料中の有害物質等分析法開発委託事業

飼料中の有害物質等の分析法の開発 (2009).
5)

財団法人日本食品分析センター：平成 23 年度飼料中の有害物質等分析法開発委託事業

飼料中の有害物質等の分析法の開発 (2011).
6)

顯谷 久典，近藤 勝，船水 悦子，荒木 愛，青山 幸二：稲わら中のベンフラカルブ及びカルボスルファンの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法の開発，飼料研究報
告，47，62-72 (2022).

7)

厚生労働省医薬食品局食品安全部長通知：食品に残留する農薬，飼料添加物又は動物用医薬品の成分である物質の試験法，平成 17 年 1 月 24 日，食安発第 0124001 号 (2005).