稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

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6 稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法
桑原 正良 *
Determination of Chlorothalonil in Whole-crop Rice Silage and Paddy Rice for Feed by GC-MS
Masayoshi KUWABARA *( * Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fukuoka Regional Center(Now Kobe Regional Center))
An analytical method was developed to determine level of chlorothalonil in whole-crop rice silageand paddy rice for feed using gas chromatograph-mass spectrometer (GC-MS).
After adding phosphoric acid solution (1:11) to the samples, chlorothalonil was extracted withacetone. The extract was purified with InertSep K-solute (GL Sciences Inc.; Tokyo, Japan) andgel permeation chromatography. Resulting solution of whole-crop rice silage was further
purified with Sep-Pak Plus Florisil (Waters; Milford, MA, USA). The resulting solution was
injected into the GC-MS for determination of chlorothalonil level. The GC separation wascarried out on fused silica capillary column (HP-5MS; 0.25 mm i.d. × 30 m, film thickness 0.25
µm from Agilent Technologies Inc.; Santa Clara, CA, USA). The mass spectrometer wasoperated in electron ionization (EI) mode.
Spike tests were conducted on whole-crop rice silage spiked with 0.089 and 0.0044 mg/kg andpaddy rice spiked with 0.2 and 0.01 mg/kg of chlorothalonil respectively. The resulting mean
recoveries ranged from 88.5 % to 110 %, and the relative standard deviations (RSDr) were notmore than 8.0 %.
A collaborative study was conducted in nine laboratories using whole-crop rice silage and paddy
rice spiked with 0.089 mg/kg and 0.1 mg/kg of chlorothalonil respectively. The mean recovery,
the repeatability and reproducibility in terms of relative standard deviations (RSDr and RSDR) andHorRat, respectively, were 85.3 %, 4.9 %, 8.7 % and 0.40 for whole-crop rice silage, 93.0 %,8.6 %, 8.5 % and 0.39 for paddy rice.
This method was validated and established for use in the inspection of chlorothalonil in wholecrop rice silage and paddy rice for feed.
Key words: whole-crop rice silage; paddy rice; chlorothalonil; gas chromatograph-mass
spectrometer (GC-MS); electron ionization (EI); collaborative study
キーワード：稲発酵粗飼料；籾米；クロロタロニル；ガスクロマトグラフ質量分析計；電子イオン化法；共同試験

1緒

言

クロロタロニルはアメリカのダイアモンド・アルカリ社によって開発された殺菌剤であり，1965年に登録された．園芸作物のほか稲などにも適用があり，有機硫黄殺菌剤や銅殺菌剤に似た効果がある．
飼料の有害物質の指導基準値 1)は稲わらで 0.2 mg/kg，稲発酵粗飼料（以下「WCS」という．）*

独立行政法人農林水産消費安全技術センター福岡センター，現神戸センター

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飼料研究報告 Vol. 40 (2015)

で 0.1 mg/kg，食品，添加物等の規格基準における残留農薬基準値 2)は米（玄米），小麦，大麦及びライ麦で 0.1 ppm，とうもろこし及び綿実で 0.01 ppm と定められている．厚生労働省通知試験法 3)としてクロロタロニルの個別試験法が定められている．
飼料中の分析法は，一般財団法人日本食品分析センターが平成 21 年度飼料中の有害物質等分析法開発委託事業において開発した方法 4)（以下「JFRL 法」という．）がある．この JFRL 法を基に飼料分析基準 5)への適用の可否について検討したのでその概要を報告する．
参考に，クロロタロニルの構造式等を Fig. 1 に示した．

CNClClClCNCl

2,4,5,6-tetrachrolo-1,3-benzenedicarbonitrile
C8Cl4N2

MW: 265.9

CAS No.: 1897-45-6Fig. 1

Chemical structure of chlorothalonil

22.1

試

実験方法

料

稲わら及び籾米は，1 mm の網ふるいを通過するまで粉砕した．WCS は，60 °C で 10 時間乾燥し，更に室内に静置して風乾した後，1 mm の網ふるいを通過するまで粉砕した．
2.2

試1)

薬

アセトン，酢酸エチル，ジエチルエーテル，シクロヘキサン，ヘキサンは残留農薬試験用を用いた．水は液体クロマトグラフ用を，ポリエチレングリコール（以下「PEG」という．）は平均分子量 300 のものを，リン酸は特級を用いた．

2)

希釈溶媒
PEG 1 mL にアセトンを加えて 100 mL とし，更にこの溶液 1 mL にヘキサンを加えて 200mL とし，希釈溶媒を調製した．

3)クロロタロニル標準原液
クロロタロニル標準品（関東化学製，純度 99.6 %） 25 mg を正確に量って 50 mL の全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線まで同溶媒を加えてクロロタロニル標準原液を調製した（この液 1 mL は，クロロタロニルとして 0.5 mg（f =0.996）を含有する．）．
4)クロロタロニル標準液使用に際して，クロロタロニル標準原液の一定量を，希釈溶媒で正確に希釈し，1 mL 中にクロロタロニルとして 0.002，0.005，0.01，0.02，0.05，0.1 及び 0.2 µg を含有する各クロロタロ

稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

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ニル標準液を調製した．
2.3

装置及び器具1)

粉砕機：ZM-100

Retsch 製（1 mm スクリーン，回転数 14000 rpm）

2)

乾牧草用粉砕機：SM-100

3)多孔性ケイソウ土カラム：InertSep K-solute（10 mL 保持用)

4)

メンブランフィルター：DISMIC-25HP（孔径 0.45 µm，直径 25 mm，PTFE）

5)

ゲル浸透クロマトグラフ（以下「GPC」という．）：GPC システム6)

合成ケイ酸マグネシウムミニカラム： Sep-Pak Plus Florisil Cartridge（充てん剤量 910 mL）

Retsch 製（1mm スクリーン，回転数 1690 rpm)
ジーエルサイエンス製
東洋濾紙製

島津製作所製Waters 製にリザーバー（20 mL）を連結したもの
7)

ガスクロマトグラフ質量分析計（以下「GC-MS」という．）
ガスクロマトグラフ部：7890A
質量分析計部：5975C

2.41)

Agilent Technologies 製

Agilent Technologies 製

定量方法
抽出

分析試料 10.0 g を量って 300 mL の共栓三角フラスコに入れ，リン酸（1+11）30 mL（籾米は 20 mL）を加え，30 分間静置した後，更にアセトン 120 mL（籾米は 100 mL）を加え，30分間振り混ぜて（250 rpm）抽出した．200 mL の全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き，抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後，先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン 50 mL で洗浄し，同様に吸引ろ過した．更に全量フラスコの標線までアセトンを加えた．この液 40 mLを 200 mL のなす形フラスコに正確に入れ，40 °C 以下の水浴で約 5 mL まで減圧濃縮し，カラム処理 I に供する試料溶液とした．
2)

カラム処理 I
試料溶液にリン酸（1+11）5 mL を加えた後，多孔性ケイソウ土カラムに入れ，10 分間静置した．200 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き，先のなす形フラスコをヘキサン 5 mLずつで 2 回洗浄し，洗液を順次カラムに加え，液面が充てん剤の上端に達するまで流下させてクロロタロニルを溶出させた．更にヘキサン 70 mL をカラムに加えて同様に溶出させ，溶出液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固した．
シクロヘキサン－アセトン（4+1）10 mL を正確に加えて残留物を溶かし，メンブランフィルターでろ過し，ゲル浸透クロマトグラフィーに供する試料溶液とした．

3)

ゲル浸透クロマトグラフィー
試料溶液 5.0 mL を GPC に注入し，クロロタロニルが溶出する画分を 100 mL のなす形フラスコに分取し，40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固した．なお，GPC の条件を Table 1 に示した．
WCS については，ヘキサン－ジエチルエーテル（4+1）6 mL を加えて残留物を溶かし，カラム処理 II に供する試料溶液とした．
籾米については，希釈溶媒 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし，GC-MS による測定に供する試料溶液とした．

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飼料研究報告 Vol. 40 (2015)

ColumnGuard column
EluentFlow rate
Fraction Volume4)

Table 1
Operating conditions of GPC
Shodex CLNpak EV-2000 AC (20 mm i.d.×300 mm, 15 µm), Showa Denko
Shodex CLNpak EV-G AC (20 mm i.d.×100 mm, 15 µm), Showa Denko
Cyclohexane - acetone (4:1)
5 mL/min110~140 mL

カラム処理 II（WCS）
合成ケイ酸マグネシウムミニカラムをヘキサン 5 mL で洗浄した（吸引マニホールドを使用し，流速 1~2 mL/min とした．以下同じ．）．試料溶液をミニカラムに入れ，液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた．
試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン－ジエチルエーテル（4+1）2 mL ずつで 2回洗浄し，洗液を順次ミニカラムに加え，液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた．50
mL のなす形フラスコをミニカラムの下に置き，ヘキサン－酢酸エチル（9+1）20 mL をミニカラムに加え，液面が充てん剤の上端に達するまで流下してクロロタロニルを溶出させた．溶出液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固した．
希釈溶媒 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし，GC-MS による測定に供する試料溶液とした．

5)

GC-MS による測定
試料溶液及び各クロロタロニル標準液各 2 µL を GC-MS に注入し，選択イオン検出（SIM）クロマトグラムを得た．
GC-MS の測定条件を Table 2 に示した．
Table 2
Operating conditions of GC-MS
HP-5MS (0.25 mm i.d.×30 m, 0.25 µm film thickness),
Agilent Technologies
Column temperature
80 °C (hold for 1 min) → 20 °C/min → 280 °C (hold for 10 min)Injection mode
Splitless (60 s)
Injection port temperature 250 °C
Carrier gas
He 1.0 mL/min
Transferline temperature
280 °CIon source temperature
230 °C
Ionization
Electron ionization
Ionization energy
70 eV
Monitor ionm /z 264 (for quantification), 266 (for confirmation)
Column6)計算得られた SIM クロマトグラムからピーク面積及び高さを求めて検量線を作成し，試料中のクロロタロニル量を算出した．
定量法の概要を Scheme 1 に示した．

稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

95Sample 10 g
add 30 mL of phosphoric acid (1:11) (paddy rice: 20 mL) and allow to stand for 30 min
add 120 mL of acetone (paddy rice: 100 mL) and shake for 30 min
filtrate through No. 5B under reduced pressure
wash with 50 mL of acetone
fill up to 200 mL with acetone
evaporate 40 mL of sample solution to about 5 mL under 40 °C
add 5 mL of phosphoric acid (1:11)
InertSep K-solute
apply sample solution and allow to stand for 10 min
wash flask with 5 mL of hexane(twice)elute with 70 mL of hexane
evaporate to dryness under 40 °C
dissolve in 10 mL of cyclohexane-acetone (4:1)
filtrate with membrane filter (<0.5 µm)
GPC
apply 5 mL of sample solution
collect the fraction of 110~140 mL
evaporate to dryness under 40 °C(whole-crop rice silage)(paddy rice)
dissolve in 2 mL of PEG-added hexane
GC-MS
dissolve in 6 mL of hexane-diethylether (4:1)
Sep-Pak Plus Florisil cartridge
prewash with 5 mL of hexane
apply sample solution
wash flask with 2 mL of hexane-diethylether (4:1) (twice)elute with 20 mL of hexane-ethyl acetate (9:1)
evaporate to dryness under 40 °C
dissolve in 2 mL of PEG-added hexane
GC-MS

Scheme 1

Analytical procedure for chlorothalonil inwhole-crop rice silage and paddy rice for feed

33.1

結果及び考察検量線
JFRL 法に従い，アセトンを用いて調製したクロロタロニル標準液（0.1 µg/mL）を GC-MS に注入し，注入再現性を確認したところ，注入毎にレスポンスの著しい減衰がみられた．また，希釈溶媒としてヘキサンを用いて調製した標準液（0.1 µg/mL）を GC-MS に注入し，注入再現性を求めたところ，相対標準偏差が 10 %（n=10）とピーク高さ及び面積にばらつきが認められた．
このばらつきを解消するためにヘキサンに PEG を 0.005 v/v%添加したところ，相対標準偏差が4 %（n=10）に改善が認められた．よって，以後は，GC-MS による測定に供する標準液及び試料溶液の調製には，PEG を 0.005 v/v%添加したヘキサンを用いることとした．

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飼料研究報告 Vol. 40 (2015)

2.2 の 4)に従って調製した各クロロタロニル標準液各 2 µL を GC-MS に注入し，得られた SIMクロマトグラムからピーク面積及び高さを求めて検量線を作成した．その結果，Fig. 2 のとおり，検量線はクロロタロニルとして，それぞれ 0.002~0.2 µg/mL（注入量として 0.004~0.4 ng 相当量）の範囲で直線性を示した．

AB

Fig. 2
3.2

Calibration curves of chlorothalonil (A: peak area, B: peak height)

多孔性ケイソウ土カラムの溶出画分の確認
籾米を用い，2.4 の 1)に従って調製した試料溶液にクロロタロニルとして 0.2 mg/kg 相当量を添加し，多孔性ケイソウ土カラムからの溶出画分を確認した．多孔性ケイソウ土カラムからの溶出液はいずれも 2.4 の 2)及び 3)の操作を行った．その結果は，Table 3 のとおり，クロロタロニ
ルは 0~80 mL の画分に溶出し，80~120 mL の画分には溶出しなかった．以上の結果から，本カラムによる溶出液量はヘキサン 80 mL とした．
Table 3Elution pattern of chlorothalonil from InertSep K-solute
HexaneSpiked level(mg/kg)
0.2

0-60 mL

60-80 mL

80-100 mL

100-120 mL

Total096a)

951

Recovery (%)0a) Mean (n=3)
3.3

ゲル浸透クロマトグラフィーの溶出画分の確認
籾米を用い，2.4 の 1)及び 2)に従って調製した試料溶液にクロロタロニルとして 0.2 mg/kg 相当量を添加し，GPC の溶出画分を確認した．その結果は，Table 4 のとおり，クロロタロニルは110~140 mL の画分に溶出し，100~110 mL 及び 140~150 mL の画分には溶出しなかった．以上の結果から，GPC の分取画分は 110~140 mL とした．
なお，GPC として日本分光製ポンプ：PU-2080，日本分光製オートサンプラー：AS-2058，東洋製作所製フラクションコネクター：CHF122SC を用いた場合の分取画分は 100~130 mL であり，飼料分析基準にはこの値が掲載された．

稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

Table 497

Elution pattern of chlorothalonil from GPC
Cyclohexane-acetone (4:1)

Spiked level 100-110 mL 110-120 mL 120-130 mL 130-140 mL 140-150 mL(mg/kg)
Recoverya) (%)
0.201680
40Total100a) Mean (n=3)
3.4

合成ケイ酸マグネシウムミニカラムの溶出画分の確認
予備試験として WCS を用い，クロロタロニルとして原物換算して 0.089 mg/kg 相当量（最終試料溶液中に 0.1 mg/mL 相当量）を添加し，2.4 の 1)~3)に従って定量したところ，回収率は123 %と高くなった．この原因は夾雑成分によるものと推定し，JFRL 法と同様 4)，合成ケイ酸マグネシウムミニカラムによる精製を追加検討したところ，回収率の改善がみられた．
そこで，WCS を用い，2.4 の 1)~3)に従って調製した試料溶液にクロロタロニルとして原物換算して 0.089 mg/kg 相当量を添加し，合成ケイ酸マグネシウムミニカラムからの溶出画分を確認した．その結果は，Table 5 のとおり，クロロタロニルはヘキサン－ジエチルエーテル（4+1）
0~20 mL の画分では溶出せず，ヘキサン－酢酸エチル（9+1）0~20 mL の画分に溶出し，20~30mL の画分には溶出しなかった．以上の結果から，本ミニカラムによる溶出液量をヘキサン－酢酸エチル（9+1）20 mL とした．
Table 5

Elution pattern of chlorothalonil from Sep-Pak Plus Florisil cartridge
Hexane-ethyl acetate (9:1)
Hexane-diethylether (4:1)

Spiked level(mg/kg)0.089

0-20 mL

0-10 mL

10-20 mL

20-30 mL

Total

0108a)

0Recovery (%)
1071a) Mean (n=3)
3.5

妨害物質の検討
WCS（2 検体）及び籾米（3 検体）を用い，本法により調製した試料溶液を GC-MS に注入し，定量を妨げるピークの有無を確認したところ，WCS についてはクロロタロニルの定量を妨害するピークは認められなかった．籾米についてはクロロタロニルのリテンションタイム付近に微小のピークが確認されたが，そのピークは定量下限相当のピークの 1/3 以下であったため，定量には影響しないと考えられた．
なお，妨害物質の検討で得られた SIM クロマトグラムの一例を Fig. 3 に示した．

98

飼料研究報告 Vol. 40 (2015)

AB

Fig. 3SIM chromatograms of paddy rice (blank) and standard solution(Arrows indicate the retention time or peak of chlorothalonil.)
A: Paddy rice
B: Standard solution (0.002 µg/mL: 4 pg)

3.6

稲わらにおける検討
稲わら（4 検体）にクロロタロニルを 0.2 mg/kg 相当量（最終試料溶液中に 0.1 mg/mL 相当量）を添加した試料を用い，本法（2.4 の 4)は行わず）により 3 点併行で定量し，回収率及び繰返し精度を検討した．
その結果は，Table 6 のとおり，試料により回収率にばらつきがみられ，稲わらに対して更なる検討が必要であると考えられたため，本法の適用範囲から除外することとした．
Table 6
Spiked level(mg/kg)
0.2

Sample A

Recoveries of chlorothalonil in rice straw
Sample Bb)

Recoverya) RSDr(%)
(%)
99.4
5.7

Recoverya) RSDr(%)
(%)
125
2.5

Sample Cb)

Recoverya) RSDr
(%)
(%)
90.7
2.7

Sample Db)

Recoverya) RSDr(%)(%)
68.51.5b)a) Mean (n=3)b) Relative standard deviation of repeatability
3.7

添加回収試験
2.1 により調製した試料について，クロロタロニルとして WCS に原物換算して 0.089 及び0.0044 mg/kg 相当量（最終試料溶液中に 0.1 及び 0.005 mg/mL 相当量），籾米に 0.2 及び 0.01mg/kg 相当量（最終試料溶液中に 0.1 及び 0.005 mg/mL 相当量）を添加し，本法に従って添加回収試験を実施し，平均回収率及び繰返し精度を求めた．
なお，WCS については原物の水分含有量を 60 %と想定し，原物中濃度への換算は，原物（水分含有量 60 %）中濃度＝風乾物（水分含有量 10 %）中濃度／2.25 の式から求めた．

稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

99

その結果は，Table 7 のとおり，WCS では，クロロタロニルの平均回収率は 103~110 %，その繰返し精度は相対標準偏差（RSDr）として 8.0 %以下，同様に籾米では，88.5~104 %及び 4.3 %以下の成績が得られた．
なお，得られた SIM クロマトグラムの一例を Fig. 4 に示した．
Table 7
Spiked level(mg/kg)

Recoveries of chlorothalonilWhole-crop ricesilageb)
Recoverya) RSDr(%)(%)

Paddy riceb)
Recoverya) RSDr(%)
(%)
104
4.3

0.2－－
0.089
110
6.5－
0.01
88.5－
－
0.0044103
8.0－a) Mean (n=3)b) Relative standard deviation of repeatability

A－
4.0－

B

Fig. 4SIM chromatograms(Arrows indicate the peaks of chlorothalonil.)
A: Standard solution (The concentration is 0.1 mg/kg as chlorothalonil.)
B: Sample solution of whole-crop silage (spiked at 0.089 mg/kg of chlorothalonil)
3.8

定量下限及び検出下限
本法の定量下限及び検出下限を確認するため，WCS 及び籾米にクロロタロニルを添加した添加回収試験により得られたピークの SN 比が 10 及び 3 となる濃度を求めた．
その結果，SN 比が 10 及び 3 となる濃度は，0.01 mg/kg 相当量（WCS は風乾物）及び 0.003mg/kg（WCS は風乾物）であったことから，本法の WCS（風乾物）及び籾米中の定量下限は0.01 mg/kg，検出下限は 0.003 mg/kg であった．
なお，Table 7 に示したとおり，当該濃度付近における添加回収試験の結果は良好であった．

1003.9

飼料研究報告 Vol. 40 (2015)

共同試験
本法の室間再現精度を確認するため，濃度非通知，かつ非明示の 2 点反復で共通試料による共同試験を実施した．
共通試料としては，WCS にクロロタロニルとして原物換算して 0.089 mg/kg 相当量（分析用試料 10 g に対し 1 mL 中に 2 µg を含有するクロロタロニル標準液 1 mL 添加）及び籾米にクロロタロニルとして 0.1 mg/kg 相当量（分析用試料 10 g に対し 1 mL 中に 1 µg を含有するクロロタロニル標準液 1 mL 添加）を，各試験室にて分析開始の前日に添加して調製した試料を用いた．
参加試験室は，一般財団法人日本食品分析センター多摩研究所，一般財団法人食品環境検査協会東京事業所，JA 東日本くみあい飼料株式会社本社品質安全部，独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部，同札幌センター，同仙台センター，同名古屋センター，同神戸センター及び同福岡センター（計 9 試験室）であった．結果の解析については国際的にハーモナイズされた共同試験に関する手順 6), 7)を参考に，Cochran 検定，外れ値 1 個の Grubbs 検定及び外れ値 2 個の Grubbs 検定を行い，外れ値の有無を確認した上で平均回収率，繰返し精度（RSDr）及び室間再現精度（RSDR）を算出し，得られた RSDR から，修正 Horwitz 式 8)を用いて HorRatを求めた．
結果は Table 8 のとおりであった．
WCS 及び籾米について，平均回収率は 85.3 及び 93.0 %，RSDr は 4.9 及び 8.6 %，RSDR は 8.7及び 8.5 %，HorRat は 0.40 及び 0.39 であった．なお，いずれも HorRat の値が 0.5 を下回ったが，原因の 1 つとして，本分析法が既存の農薬の GC-MS による一斉分析法 5)を更に簡略にしたものであり，各試験室が分析操作に習熟していたことが考えられた．
参考のため，各試験室で使用した GC-MS の機種等を Table 9 に示した．

稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

Table 8Collaborative study results of chlorothalonil
Feed types

Lab. No.

Whole-crop rice silage(mg/kg)Paddy rice(mg/kg)10.0756

0.0827

0.09600.105

20.08090.08530.08030.105

30.08090.07380.09060.082840.08310.0853

0.09680.0976

50.07510.0747

0.09880.103

60.08000.07510.08890.097870.06670.07070.08750.084980.07020.06270.08250.098190.07470.06930.08550.0924

Spiked level (mg/kg)a)Mean value (mg/kg)b)

Recovery
RSDr

(%)

0.089

0.1

0.07590.093085.393.0b)

(%)

4.9

8.6c)

(%)

8.7

8.5d)

(%)

22

220.400.39

RSDRPRSDRHorRata)

n=18b)

Relative standard deviation of repeatability within laboratoryc)

Relative standard deviation of reproducibility between laboratoriesd)

Predicted relative standard deviation of reproducibility between
laboratories calculated from the modified Horwitz equation

101

102

飼料研究報告 Vol. 40 (2015)

Table 9Lab. No.
123456789Instruments used in the collaborative study
GC columeGC-MS(i.d.×length, film thickness)

GCMS-QP2010 Plus, Shimadzu

Rtx-5MS, Restek(0.25 mm×30 m, 0.25 µm)

FOCUS GC/POLARIS Q, Thermo Electron

DB-5MS＋DG, Agilent Technologies(0.25 mm×30 m, 0.25 µm, Duraguard 10 m)

GCMS-QP2010, Shimadzu

Rtx-5MS, Restek(0.25 mm×30 m, 0.25 µm)

FOCUS GC/POLARIS Q, Thermo Electron

TR-5MS, Thermo Scientific(0.25 mm×30 m, 0.25 µm)

GC: 7890A, Agilent Technologies

Rtx-5MS, Restek

MS: 5975C, Agilent Technologies(0.25 mm×30 m, 0.25 µm)

GC: 6890N, Agilent Technologies

DB-5MS＋DG, Agilent Technologies

MS: 5973N, Agilent Technologies(0.25 mm×30 m, 0.25 µm, Duraguard 10 m)

GC: 6890A, Agilent Technologies

HP-5MS, Agilent Technologies

MS: 5973, Agilent Technologies(0.25 mm×30 m, 0.25 µm)

GC: 6890A, Agilent Technologies

HP-5MS, Agilent Technologies

MS: 5973 inertMSD, Agilent Technologies(0.25 mm×30 m, 0.25 µm)

GCMS-QP2010 Plus, Shimadzu

DB-5MS＋DG, Agilent Technologies(0.25 mm×30 m, 0.25 µm, Duraguard 10 m)

4

まとめWCS 及び籾米中に残留するクロロタロニルについて，JFRL 法を基に GC-MS を用いた定量法の飼料分析基準への適用の可否について検討したところ，GC-MS 測定時の希釈溶媒をアセトンからPEG を 0.005 v/v%添加したヘキサンとし，WCS には GPC による精製の後に合成ケイ酸マグネシウ
ムミニカラムによる精製を追加することで，以下の結果が得られ，適用が可能であると考えられた．
1)

検量線は 0.002~0.2 µg/mL 相当量（注入量として 0.004~0.4 ng 相当量）の範囲で直線性を示した．なお，当該検量線における各マトリックスの添加回収試験の設定濃度は，0.1 及び 0.005µg/mL 相当濃度とした．

2)

今回，検討に用いた WCS 及び籾米において定量を妨げるピークは認められなかった．

3)クロロタロニルとして WCS に原物換算して 0.089 及び 0.0044 mg/kg 相当量並びに籾米に 0.2及び 0.01 mg/kg 相当量を添加した試料を用い，本法による回収率及び繰返し精度を求めたところ，良好な結果が得られた．

4)

本法による定量下限は試料（WCS は風乾物）中で 0.01 mg/kg，検出下限は 0.003 mg/kg であった．

5)クロロタロニルとして WCS に原物換算して 0.089 mg/kg 相当量及び籾米に 0.1 mg/kg 相当量を添加した試料を用いて，9 試験室において本法に従い共同試験を実施したところ良好な結果を得た．

稲発酵粗飼料及び籾米中のクロロタロニルのガスクロマトグラフ質量分析計による定量法

謝103

辞

共同試験に参加していただいた一般財団法人日本食品分析センター 多摩研究所，一般財団法人
食品環境検査協会東京事業所，ＪＡ東日本くみあい飼料株式会社本社品質安全部における関係者各位に感謝の意を表します．

文1)

献農林水産省畜産局長通知：飼料の有害物質の指導基準の制定について，昭和 63 年 10 月 14 日，
63 畜 B 第 2050 号 (1988).

2)

厚生省告示：食品，添加物等の基準規格，昭和 34 年 12 月 28 日，告示第 370 号(1959).

3)

厚生労働省医薬食品局食品安全部長通知：食品に残留する農薬，飼料添加物又は動物用医薬品の成分である物質の試験法について，平成 17 年 1 月 24 日，食安発第 0124001 号 (2005).

4)

財団法人日本食品分析センター：平成 21 年度飼料中の有害物質等分析法開発事業 (2009).

5)

農林 水産省 消費・ 安全局長通 知：飼料 分 析基準の制 定につい て ，平成 20 年 4 月 1 日 ，19
消安第 14729 号 (2008).

6)

Horwitz, W., Protocol for Design, Conduct and Interpretation of Method - Performance Studies, Pure &Appl. Chem., 67(2), 331-343 (1995).

7)

AOAC Int. (2012) Appendix D: Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate
Characteristics of a Method of Analysis. In Official Methods of Analysis of AOAC Int. 19 ed. volume II,
Gaithersburg, MD, USA.

8)

Thompson, M., Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation
to fitness for purpose criteria proficiency testing, Analyst, 125, 385-386 (2000).