福岡水海技セ研報 第14号 2004年3月
Bull.Fukuoka Fisheries Mar. Technol.Res.Cent.,No14. March 2004

エツの人工授精に関する検討

中本 崇・福永 剛・濱崎 稔洋・恵崎 摂(内水面研究所)
Examination about Artificial insemination of Engraulid Fish( Coilia nasus

Takashi Nakamoto, Takeshi Fukunaga*1, Tosihiro Hamasaki* , Osamu Ezaki(Freshwater Fisheries Laboratory)エツ(Coilia nasus) は,筑後川が流入する有明海湾奥部に生息しているカタクチイワシ科の魚である。親魚は5月から8月にかけ,筑後川の感潮城に遡上し,産卵1.精子の活力と保存する。この時期の遡上群は流しさし網で漁獲され,重要(1)精子の活力な漁業資源となっている。エツの漁獲量は昭和50年代に供試魚には夕方から夜間にかけて筑後川の干潮城で流は100t前後であったが,その後徐々に減少し,近年でしさし網で漁獲されたエツを用いた。漁獲後すぐに生きは数十tで推移している(図1)。下筑後川漁業協同組ている雄3尾を無作為に抽出し, 1尾毎に生きている合ではエツ資源の増殖を図るため、受精卵放流や種苗生時,死後15, 30分にスライドガラス上に少量の精液を取産に取り組んでいる。エツの漁獲は5‑7月の漁期の前り,顕微鏡下で河川水を加えて精子の活力を観察した。

1)半は雄が,逆に後半は雌が多く漁獲される。また,漁抽出した雄について1回目は常温(気温24.8℃)で、 2獲されたエツは非常に弱く,すぐに死亡するため,漁期回目は河川水(水温29℃)を入れたバケツに浸けておい後期に十分に成熟した卵がとれても生きた雄が少なく,た。精子の活力の判定は以下の基準により行った。な

受精卵放流に支障をきたしている。また,十分に成熟しお,判断が難しい場合は中間値を入れた。

た卵と生きた雄の精子を用いて人工授精した場合でもふ1 :動く精子はない。

化率に大きなばらつきがある。そこで,本研究では精子2 :数個の精子が弱く動く。の活力及び保存方法と人工授精方法について検討し,い3 : 1割程度の精子が動く。

くつかの知見を得たので報告する。

4 : 5割程度の精子が活発に動く。
5 :ほとんどすべての精子が活発に動く。
(2)精子の液状保存
精子の保存法については凍結保存と液状保存がある

120

が,前者は液体窒素を用い,研究室等での長期保存に,100

後者はリンゲル液を用い,現場での短期保存に適してい漁80る。エツの受精卵放流は船上で行なわれるため,後者の獲一重J*‑60

液状保存について検討した。供試魚は(1)と同様に漁獲さtれたエツを用いた。 1回目は1尾の雄から精液を搾出40し,メダカ用,海産硬骨魚類用,サケ科魚類用の各リン20

ゲル液20mのこ精液1‑2滴を希釈した。 2回目は3尾0'79 '81 '83 '85 '87'91 '93 '95 '97

9901の雄から精液を搾取し,メダカ用,海産硬骨魚類用のリンゲル液20mのこそれぞれ1個体ずつ希釈した。希釈液

図l 福岡県におけるエツ漁獲量の推移

はクーラーで冷蔵保存し,研究所に持ち帰り,家庭用冷*1現有明海研究所, *2 現福岡県水産林務部漁政課‑21

中本・福永・濱崎・恵崎

蔵庫で4℃保存した。なお,各リンゲル液は表1のとおを計数し,受精率を算出した。

り作製した。精子の活力の判定は(1)と同様にし、 3尾の活力を平均値で比較した。

結果(3)保存精子の受精能
夕方から夜間にかけて筑後川で流しさし網によって漁1.精子の活力と保存

獲された雌から十分に成熟したと思われる卵を少量プラ(1)精子の活力

スチック製の容器に入れ,冷蔵保存した精子を加えた。

精子の活力と時間の推移を図2に示した。 1回目は活採卵直後, 30分, 1時間後に河川水を加えて受精させ魚時ではA及びBが活力4.5でCが活力2.5であった。 15た。保存精子は雄5尾の精子を個別にメダカ用リンゲル分後にはA及びBが活力3でCの活力は1となった。 30液で冷蔵保存し,上記の活力判定で4.5であった2尾の分後にはA, Bともに活力1となった。 2回目は活魚時物を1時間後に使用した。対照区は同じ雌から同様に卵ではa及びbが活力4.5でCが活力3.5であった。 15分後を取り,生きた雄3尾の精子を用いて乾導法で受精させにはすべての活力は1となった。 1回目, 2回目ともにた。それぞれ受精卵は研究所に持ち帰り,翌日に実体顕3個体の内2個体は活力が4以上であった。雄エツの保微鏡下で受精の有無を調べた。

存時の温度が低い方が活力を長く維持した。
(2)精子の液状保存

表1 各リンゲル液の組成
CaCl2

メダカ用(gA)
海産硬骨魚類用(g/1)
サケ科魚類用(g/1)

MgCl2

7.50

0.20

0.20

13.50

0.60

0.25

0.35

7.60

3.00

0.280. 14

1回目のリンゲル液別の精子の活力推移を図3に示し

NaHCO350.20‑くy‑ 'tAi桓]人
ベトー第1回 B‑か第1回 C‑×一第2回 a＼

4

2は 受精方法の検討

＼＼tfj
千の3活力

(1)塩分濃度別受精液
夕方から夜間にかけて筑後川で流しさし網によって漁獲された雌から十分に成熟したと思われる卵を少量プラ＼＼

く＼＼＼+第2回 b‑0‑ ,"S2回。

＼＼＼＼ ＼＼＼＼ ＼＼ ＼2＼＼＼＼スチック製の容器に入れ,雄5尾の精子を加え,両者をヾ、、よくかき混ぜた。これらを河川水及び0.5, 1.0, 1.5,1

活魚

3.0, 6.0, 15.0の濃度に調整した人工海水の中に少量入

死後15分

死後30分

図2 精子の活力と時間れ受精させた後,洗卵し1Lサンプル瓶に収容した。受5精卵は研究所に持ち帰り,翌日にふ化仔魚,生卵及び死卵を計数し,受精率を算出した。

4・・く)‑メダカ用
・‑△一海産硬骨魚類用‑ {ーサケ科魚類用/(2)受精方法の比較

精子の3活力1回目は乾導法と等調法を比較した。十分に成熟したと思われる卵を少量何も入れない容器とメダカ用リンゲ///!
//2△一一一一4

ル液を入れた容器にそれぞれ入れ, 5尾の生きた雄の精子をそれぞれに1滴ずつ入れ十分に撹拝した。撹拝した

1

3時間後 4時間後 2日目

卵を少量ずつ別の容器に取り,採卵直後, 5分, 15分後

3日目

4日目

5日目

6日目

7日目

保存日数に河川水で受精させた。

図3 1回目リンゲル液別の精子活力の推移

2回目は乾導法,等調法及び湿導法を比較した。十分‑・◎‑メダカ用

5に成熟したと思われる卵少量を何も入れない容器,メダ一也・ ・海産硬骨魚類用

カ用リンゲル液を入れた容器及び河川水を入れた容器にA

4′ ヽそれぞれ入れた。乾導法では生きた雄3尾の精子を1滴ずつ直接容器に入れ,等調法,湿導法では同じ雄の精子をリンゲル液で希釈して用いた。それぞれの受精法と精千の3活力ヽヽI′′△△・‑I‑A2も,採卵直後, 15分, 30分後に河川水で受精させた。等△、調法,湿導法では河川水を入れる直前に希釈精子を入れ1当日た。 1回目、 2回目とも受精卵は先卵後に1Lサンプル

2日目3日目

4日目

5日目

7日目

8日目

9日目

10日目11日目12日目

保存日数瓶に収容した。研究所に持ち帰り,翌日に生卵及び死卵‑22J

一一△・ ・・△

図4 2回目リンゲル液別の精子活力の推移‑

エツの人工授精に関する検討れ、 11日目に活力1となった。 8日目以降はメダカ用の60方が海産硬骨魚類用より高い活力を示した。また, 10日m目にはメダカ用、海産硬骨魚類用共に細菌の繁殖が見ら受精率0れた。
0(3)保存精子の受精能

0

保存精子の受精能比較試験の結果を図5に示した。対0照区の乾導法の受精率が56.6%と高かったのに対し,保%存精子区は採卵直後が22.5%と低く, 30分, 1時間後も0対照区(採卵直後) 保存精子区(採卵直後) 保存清子区(30分後) 保存清子区(1時間後)

25%前後であった。保存精子区は通常の精子に比べ約

図5 保存精子の受精能比較試験

40%の受精率であった。

表2 塩分濃度別受精液のふ化率

2.受精方法の検討(1)塩分濃度別受精液

受精液
0.5 1.0 1.5 3.0 6.0 15.0
‑00年第1回 67.0 84.8 79.1 85.3 63.5 73.7 79.8
‑00年第2回 67.6 60.5 41.0 33.9
0.0 39.4 93.2
‑99年第1回
0.0 .2 1, 0.4 1.7
2.2 0.3f99

人‑2ロ4.0

9.0

6.0

0.0

4.049.0

各塩分濃度別の受精液におけるふ化率を表2に示した。 '00年第1回のふ化率は63.5‑85.3%で最も高かっ

4.0

たのは1.5,最も低かったのは3.0であった。第2回のふ化率は0‑93.2%で最も高かったのは15.0,最も低かったのは3.0であった。 '99年の第1回のふ化率は0‑50

402.2%で最も高かったのは0.5及び6.0,最も低かったの

受精30率は0であった。第2回のふ化率は0‑49.0%で最も高%20かったのは6.0,最も低かったのは1.5であった。受精液の塩分濃度とふ化率には明確な関係は見られなかった。

10

また,高塩分でも比較的高い受精率を示した。
(2)受精方法の比較

0

採卵直後

5分後受精までの経過時間

1 5分後

受精方法別の受精率を図6, 7に示した。 1回目の乾図6 受精方法別の受精率(1回冒)

導法の採卵直後, 5分及び15分後の受精率はそれぞれ1.4, 15,4及び13.9%,等調法はそれぞれ36.2, 25.0及

国乾導法
口等調法
閤湿導法

60

50び41.0%となった。 2回目の乾導法はそれぞれ0, 0及
び1.7%,等調法は45.7, 48.6及び59.4%,湿導法はそ

受40
精率30

れぞれ37.6, 1.6及び1.3%であった。現在行っている乾'‑.〜導法の受精率は1回目2回目ともに低い債となった。等%
20調法はともに30分後まで高い値となった。湿導法は採卵10直後のみ高い値となった。

0採卵直後

図7

1 5分後
受精までの経過時間

3 0分後

考

察

受精方法別の受精率(2回目)た。メダカ用では4日目まで活力4で5, 6日目は活力

人工授精で重要な要素として卵質,精子の活力,受精2, 7日目には活力1となった。海産硬骨魚類用では研方法が考えられる。エツの受精卵放流は船上で行うこと究所に持ち帰った当日の3及び4時間後の活力が2と弱から卵質の検鏡等は困難であるが,外観からある程度のかったが, 2日目以降はメダカ用と同様の保存傾向が見判断は付く。十分に成熟した卵は網にかかって船に上られた。サケ科魚類用は持ち帰った当日から精子の活力

がってくる状態で触れなくても若しくは腹部を軽く押しはなく保存できなかった。

ただけで流れ出す。色は青緑色で透明,水中に入れると次に2回目のリンゲル液別の活力の推移を図4に示し1粒1粒がばらける。しかし,このような成熟した卵をた。メダカ用では11日目まで活力3以上で推移し、 12日持った個体は少ないこと2)や受精卵放流が資源添加を目目に活力1となった。海産硬骨魚類用では7日目までは的とすることから外観上十分に成熟した卵をすべて用い活力2.5‑4.0で推移したたが,その後活力の低下が見らている。

‑23‑

中本・福永・濱崎・恵崎

精子の活力試験で精子の活力は親魚の個体差や親魚の要

約

死亡後に急速に失われることから受精率を高めるためには生きた雄数尾を用いる必要があると考えられる。精子1 )精子の活力及び液状保存の方法と乾導法、等調法、の保存についてはメダカ用リンゲル液での冷蔵保存で数湿導法の人工受精方法について検討した。

日間の活力維持が可能であることが分かった。さらに保2)精子の活力は死後急速に失われ,温度が高いほど早存日数を延ばすには塩類組成の詳細な検討と抗生物質等い。また,活力は個体差があるため,人工授精にはの薬品を添加し,細菌の繁殖を抑える必要があると考え数尾の雄を用いる必要がある。

られた。保存精子の受精能が通常の精子より低かった原

3)精子の液状保存についてはメダカ用リンゲル液の方因については少量の卵に冷蔵した保存精子がかかったこが海産魚用リンゲル液よりも長く,冷蔵保存で数日とによる急激な温度差の影響が考えられたが,これにつ間の保存は可能であることが示唆された。

いては等調法を用いることにより等調液が緩衝液となり

4)保存精子の受精率は通常の精子より低かったが,坐ふ化率が改善されると考えられた。雄の漁獲が少なく,きた雄の精子が入手不可能なときには十分使用が可

生きた雄の精子が十分に手に入らない時には精子の液状能であると思われた。

保存が有効であると考えられた。

5)受精液の塩分濃度とふ化率には明確な関係は見られ受精液についてはエツの産卵が感潮城で行われる3)こなかった。また,高塩分でも比較的高い受精率を示した。とからエツの受精に最も適した塩分濃度を検討したが,一定の傾向は得られなかった。しかし, 6, 15の高塩分

6)受精方法は乾導法では受精率に大きく差があり安定の受精液で比較的高い受精率となったことは受精液が,していないが,等調法では安定して高い受精率が得

メダカ用及び海産硬骨魚類用リンゲル液と同様の役目をられ,エツの受精卵放流には最も適していると思われた

し,精子の活力を押さえ,河川水での先卵作業中に精子が運動し,受精したと推察された。これは後述する等調法と同様の効果があったと考えられた。また, '00年と文献'99年のふ化率の差は卵質によるものと考えられた。
受精方法については乾導法は広く魚類の人工授精に用1 )松井誠一:エツColilia nasus Temminck et Schlegel

いられている方法である。湿導法は天然域と同様の受精生態的研究.九大農学芸誌,第40巻, 221‑228

方法となり,環境水中での卵の受精能は急速に失われ(1986)

る4'。等調法は等調液洗卵法としてサケ・マス類に用い

2)田北徹:有明海産エツについて.長崎大学水研報,第22巻, 45‑56(1967)られている。ニジマスでは潰卵由来の卵蛋白が精子の活動を阻害するため,等調液で卵を洗浄し,受精させるこ

3)田北徹:エツColilia nasusの産卵域.長崎大学水研報,第46巻, 7‑10(1979)とでふ化率を向上させている5)。受精方法の比較試験ではエツの卵は乾導法で受精させると受精率は低いが,同様に乾導法で行った受精液の試験や保存精子の受精能の4)長浜嘉孝:魚類生理学(板沢靖男,羽生功編),檀星社厚生閣,東京, 1991. pp. 278‑279

試験では高い受精率を示すこともあり,大きな差が出て5)田代文男:養鱒の研究(全国湖沼河川養殖研究会いる。これがこジマスのように潰卵由来の卵蛋白による養鱒部会編)緑書房,東京, 1978. pp. 14

ものなのかは今後,詳細に検討する必要がある。湿導法
は採卵直後では受精率は高いが, 15, 30分後の受精率は低く,これは卵の受精能が環境水中で失われたためと思われた。このため湿導法を用いる場合は素早く受精させる必要がある。等調法は30分後でも安定して高い受精率が得られるため,実際の船上の作業では最も適していると思われた。

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