26

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)3

飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグ
ラフ質量分析計による定量法
野崎 友春 *1，山多 利秋 *2
Determination of Ametryn, Cyanazine and Prometryn in Feeds by LC-MS
Tomoharu NOZAKI*1 and Toshiaki YAMATA *2( *1 Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fertilizer and Feed Inspection Department(Now Nagoya Regional Center),*2

Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fertilizer and Feed Inspection Department)
An analytical method for determination of ametryn, cyanazine and prometryn in feeds using

a liquid chromatography-mass spectrometer (LC-MS) was developed.
prometryn were extracted with acetone-water and filtered.

Ametryn, cyanazine and

The filtrates were re-extracted withacetonitrile (saturated with hexane), and purified by graphitized carbon black/ aminopropyl
column chromatography and Florisil column chromatography, and subjected to LC-MS for
determination of ametryn, cyanazine and prometryn.

A recovery test was conducted using

formula feed for starting broiler chicks and sudangrass hay spiked with ametryn, cyanazine andprometryn at 10 and 100 µg/kg.

The mean recoveries of ametryn were in the range of

80.4~93.5% with the relative standard deviation of within 5.9%.

These values were

74.7~95.7% and 5.4% for cyanazine, 73.8~87.3% and 4.0% for prometryn respectively.

A

recovery test to identify the limit of detection and limit of quantification was conducted using
formula feed for starting broiler chicks and sudangrass hay spiked with ametryn, cyanazine andprometryn at 2 µg/kg.

The mean recoveries of ametryn, cyanazine and prometryn were77.2~82.9%, 79.2~89.5% and 87.2~94.5% and the RSD were 1.8~4.4%, 5.4~9.4% and 3.1~6.6%
respectively.

A collaborative study was conducted in nine laboratories using formula feed forstarting broiler chick and sudangrass hay spiked with ametryn, cyanazine and prometryn at 10µg/kg respectively.

The mean recovery of ametryn in formula feed was 98.4%, repeatability

and reproducibility in terms of the relative standard deviations (RSDr and RSDR) were 4.3% and6.2% respectively, and HorRat was 0.28.

The mean recovery of cyanazine was 98.9% with

RSDr of 6.6%, RSDR of 9.4% and HorRat of 0.43 respectively.

The mean recovery ofprometryn was 93.6% with RSDr of 2.7%, RSDR of 6.1% and HorRat of 0.28 respectively.

Forsudangrass hay, these values were 92.2%, 4.2%, 15% and 0.66 for ametryn, 94.4%, 4.1%, 17% and0.76 for cyanazine and 89.6%, 3.2%, 11% and 0.52 for prometryn respectively.
Key words: 残留農薬 pesticide residue ; トリアジン系除草剤 triazine herbicide ; アメトリン ametryn ; シアナジン cyanazine ; プロメトリン prometryn ; 残留農薬 pesticide
residue ; 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ 質 量 分 析 計 liquid chromatography-mass spectrometer(LC-MS) ; 飼料 feed ; 穀類 grain ; 乾牧草 grass hay ; 共同試験 collaborative study*1

独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部，現*2（独）農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部

同名古屋センター

27

飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計による定量法

1

緒

言

食品衛生法に基づく残留農薬のポジティブリスト制度の導入に伴い，飼料及び飼料添加物についても平成 18 年 5 月 29 日付けで飼料及び飼料添加物の成分規格等に関する省令（昭和 51 年農林省
令第 35 号）の一部が改正され，飼料中の残留農薬（60 種類）の基準値が設定された．
シアナジンは，Shell Chemical 社によって開発されたトリアジン系除草剤であり，日本では，ばれいしょ等に使用されている．米国ではとうもろこしに使用されている．先の飼料中の残留農薬の基準において，シアナジンの基準値については，小麦及びとうもろこしで 0.1 mg/kg，大麦で 0.05
mg/kg，ライ麦，えん麦，マイロ及び乾牧草で 0.01 mg/kg と設定されたが，平成 16 年に通知された分析方法 1) では ，乾 牧草中の分析 法につい て検討がなさ れていな いこと及び定 量下限（0.01
mg/kg）が基準値と同レベルであること並びに平成 16 年度に財団法人日本食品分析センターが検討したガスクロマトグラフ質量分析計を用いた飼料中の残留農薬一斉分析 2)ではシアナジンの回収率が低かったことから，今回，平成 18 年度に（財）日本食品分析センターが再度検討した液体ク
ロマトグラフ質量分析計によるアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの残留分析法（以下「センター法」という．） 3) を基に，低濃度での添加回収試験及び定量下限の検討を行った．
なお，アメトリンは ， Ciba Geigy 社（現 Syngenta AG 社）によって開発されたトリアジン系除草剤であり，米国ではサトウキビ，とうもろこし及びパイナップルに使用されている．日本では現在
農薬として登録されていない（2005 年に失効）．日本国内での飼料中の残留基準値は設定されていない．
また，プロメトリンは，Geigy 社（現 Syngenta AG 社）により開発されたメチルチオトリアジン
系除草剤であり，日本では，豆類，麦類及びとうもろこし等を対象として登録されている．また，米国等でも使用されている．日本国内での飼料中の残留基準値は設定されていない．

N
H
N

N
N

N
HN

H
N

S

H
N

NH

N
N

N

N
N

S
N

HN

Cl
Ametryn (2-Ethylamino-4Cyanazine (2-Chloro-4-((1-cyano- Prometryn (Bis(isopropylamino)isopropylamino-6-methylthio1-methylethyl)amino)-66-(methylthio)-s-triazines-triazine)(ethylamino)-s-triazine)
CAS No.: 834-12-8
CAS No.: 21725-46-2
CAS No.: 7287-19-6
C9H17N5S, MW: 227.3
C9H13ClN6, MW: 240.7
C10H19N5S, MW: 241.4
Fig. 1
Chemical structures of ametryn, cyanazine and prometryn

28

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)

2
2.1

試

分析方法

料

ブロイラー肥育前期用配合飼料，乾牧草（スーダングラスヘイ）をそれぞれ 1 mm の網ふるいを通過するまで粉砕して用いた．
なお，検討に用いた配合飼料の配合割合を Table 1 に示した．
Table 1

Composition of the formula feed used in this study

Kind ofGroup of ingredients Ratio (%)
formula feed
For starting
broiler chick

2.2
1)

試

GrainsOil meals
Animal by-product
Others5726
107Ingredients
Corn
Soybean meal
Fish meal
Animal fat, Alfalfa meal, Calcium carbonate,
Calcium phosphate, Salt薬

シアナジン標準原液
シアナジン〔C9H13ClN6〕（関東化学製，純度 98.9%）25 mg を正確に量って 50 mL の全量
フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてシアナジン標準原液を調製した（この液 1 mL は，シアナジンとして 0.5 mg を含有する．）．

2)

アメトリン標準原液
アメトリン〔C9H17N5S〕（和光純薬工業製，純度 100.0%）25 mg を正確に量って 50 mL の
全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてアメトリン標
準原液を調製した（この液 1 mL は，アメトリンとして 0.5 mg を含有する．）．

3)

プロメトリン標準原液
プロメトリン〔C10H19N5S〕（和光純薬工業製，純度 98.9%）25 mg を正確に量って 50 mLの全量フラスコに入れ，アセトンを加えて溶かし，更に標線までアセトンを加えてプロメトリ
ン標準原液を調製した（この液 1 mL は，プロメトリンとして 0.5 mg を含有する．）．

4)

農薬混合標準液使用に際して，アメトリン標準原液，シアナジン標準原液及びプロメトリン標準原液の一定量を混合し，アセトンで正確に希釈し，1 mL 中に各農薬としてそれぞれ 0.5，1，2，5，10，
20，50 及び 100 ng を含有する各農薬混合標準液を調製した．

5)

アセトン，ヘキサン，酢酸エチル及びアセトニトリルは残留農薬分析用試薬を用いた．特記している以外の試薬については特級を用いた．

6)ヘキサン飽和アセトニトリル
500 mL の分液漏斗にアセトニトリル 300 mL を入れ，更にヘキサン 50 mL を加えた．5 分間
振り混ぜた後静置し，アセトニトリル層（下層）を分取した．

2.3
1)

装置及び器具液体クロマトグラフ質量分析計：Agilent Technologies 製

1100 Series飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計による定量法

292)

振とう機：タイテック製

3)

エバポレーター：BÜCHI 製

4)

高速遠心分離機：久保田製作所製

5)

多孔性ケイソウ土カラム：Varian 製

6)グラファイトカーボン／アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラム：Supelco 製

レシプロシェーカー

SR-2DW

R-200
KM-15200
Chem Elut（20 mL 容）

Envi-Carb/LC-NH2（500 mg/500 mg）
7)
2.4
1)

合成ケイ酸マグネシウムミニカラム：Waters 製 Sep-Pak Plus Florisil
定量方法
抽

出

分析試料 10.0 g を量って 200 mL の共栓三角フラスコに入れ，水 20 mL（乾牧草は 30 mL）
を加えた後 30 分間静置し，アセトン 100 mL を加え，30 分間振り混ぜて抽出した．200 mL の
全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き，抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後，先の三角フラスコ及び残さをアセトン 50 mL で洗浄し，洗液をろ液に合わせた．更に全量フラスコの標線までアセトンを加えた．試料溶液 10 mL を 50 mL のなす形フラスコに正確に入れ，40°C 以下の水浴で約 2 mL まで減圧濃縮してカラム処理 I に供する試料溶液とした．
2)

カラム処理 I
多孔性ケイソウ土カラムに試料溶液を負荷し，容器を水 5 mL で洗浄し，洗液をあわせて負荷し，5 分間静置した．200 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き，ヘキサン－酢酸エチ
ル（17+3）10 mL で容器を洗浄し，同様に負荷した．更に同様に 2 回繰り返した．ヘキサン－
酢酸エチル（17+3）50 mL をカラムに負荷し，各農薬を溶出させ，液液分配（配合飼料以外
は，液液分配を省略し，カラム処理 II）に供する試料溶液とした．

3)

液液分配
試料溶液を 40°C 以下の水浴でほぼ乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固させた．ヘキサン 30 mL を加えて残さを溶解し，この液を 100 mL の分液漏斗に入れた．ヘキサン 2 mL で容器を洗浄し，洗液を分液漏斗に合わせ，同様に 1 回繰り返した．
分液漏斗にヘキサン飽和アセトニトリル 30 mL を加え，5 分間振とうした．アセトニトリル層（下層）を 200 mL のなす形フラスコに入れ，ヘキサン層にヘキサン飽和アセトニトリル 30
mL を加え，同様に操作した．アセトニトリル層を先のなす形フラスコに合わせ，カラム処理
II に供する試料溶液とした．

4)

カラム処理 II
試料溶液を 40°C 以下の水浴でほぼ乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固させた．ヘキサン 5 mL を加えて残さを溶解した．
グラファイトカーボン／アミノプロピルシリル化シリカゲル積層ミニカラムを酢酸エチル 5
mL 及びヘキサン 10 mL で洗浄した．
試料溶液をミニカラムに負荷し，液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた．ヘキサン
5 mL で容器を洗浄し，同様に負荷した．更に同様に 1 回繰り返した．50 mL のなす形フラス
コをミニカラムの下に置き，ヘキサン－酢酸エチル（1+1）5 mL で容器を洗浄し，洗液をカラムに負荷し，液面が充てん剤の上端に達するまで流下させ各農薬を溶出させた．更に同様に 1

30

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)

回繰り返した．ヘキサン－酢酸エチル（1+1）10 mL をミニカラムに加え，同様に溶出させた．試料溶液を 40°C 以下の水浴でほぼ乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固させた．ヘキサン 3 mL をなす形フラスコに加え，残さを溶解し，カラム処理 III に供する試料溶液とした．
5)

カラム処理 III
合成ケイ酸マグネシウムミニカラムをリザーバーに連結しヘキサン 5 mL で洗浄した．試料溶液をリザーバーに加え，液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた．ヘキサン 3 mL で容器を洗浄し，同様に負荷した．更に同様に 1 回繰り返した．50 mL のなす形フラスコをミニ
カラムの下に置き，ヘキサン－アセトン（17+3）5 mL で容器を洗浄し，洗液をカラムに負荷し，液面が充てん剤の上端に達するまで流下させ各農薬を溶出させた．更に同様に 1 回繰り返した．ヘキサン－アセトン（17+3）10 mL をミニカラムに加え，同様に溶出させた．試料溶液
を 40°C 以下の水浴でほぼ乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固させた．アセ
トニトリル 1 mL をなす形フラスコに加え，残さを溶解し，液体クロマトグラフ質量分析計による測定に供する試料溶液とした．

6)

液体クロマトグラフ質量分析計による測定
試料溶液及び各混合標準液各 4 µL を液体クロマトグラフ質量分析計に注入し，Table 2 の測定条件に従い選択イオン検出（SIM）クロマトグラムを得た．

ColumnMobile phase
Flow rate
Column temp.
Ionization
Mode
Fragmentor
Nebulizer
Drying gas
Capillary voltage
Monitor ion

7)

計

Table 2
Operating conditions for LC-MS
GL Sciences Intersil ODS-SP (2.1 mm i.d.×150 mm, 5 µm)
A: 0.01% formic acid solution B: acetonitrile
B(%) 25% (5 min)→2 min→60% (3 min)→2 min→90% (8 min)
0.2 mL/min
40°C
Electrospray ionization (ESI)
Positive
120 V
N2 (340 kPa)
N2 (10 L/min, 350°C)
4,000 Vm/z 228 (ametryn), 241 (cyanazine), 242 (prometryn)

算得られた SIM クロマトグラムからピーク面積又は高さを求めて検量線を作成し，試料中のシアナジン量，アメトリン量及びプロメトリン量を算出した．
なお，定量法の概要を Scheme 1 に示した．

飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計による定量法

Sample 10.0 g
add water (grass hay; 30 mL, others 20 mL)
stand for 30 min
add 100 mL of acetone and shake for 30 min
filtrate through the saction filter (No.5B)
wash with acetone
fill up to 200 mL with acetone
10 mL of sample solution
evaporate to the volume of 2 mL under 40°C
Chem Elut cartridge
apply sample solution, and wash with 5 mL of water (stand for 5 min)wash and elute with 80 mL of hexane-ethyl acetate (17:3)
evaporate to dryness under 40°C
* for formula feed go to (*1), else go to (*2)(*1)
dissolve in 30 mL of hexane
100 mL separating funnel
wash with 4 mL of hexane
add 30 mL of acetonitrile saturated hexane
shake for 5 min
Upper (hexane) layer
add 30 mL of acetonitrile saturated hexane
shake for 5 min
Upper (hexane) layer (waste)

Lower (acetonitrile) layer

Lower (acetonitrile) layer

evaporate to dryness under 40°C(*2)
dissolve in 5 mL of hexane
Envi-Carb/NH2 Cartridge (prewash with 5 mL of ethyl acetate and 10 mL of hexane)
apply sample solution
wash with 10 mL of hexane
elute with 20 mL of hexane-ethyl acetate (1:1)
evaporate to dryness under 40°C
dissolve in 3 mL of hexane
Sep-Pak Plus Florisil Cartridge (prewash with 5 mL of hexane)
apply sample solution
wash with 6 mL of hexane
elute with 20 mL of hexane-acetone (17:3)
evaporate to dryness under 40°C
dissolve in 1 mL of acetonitrile
LC-MS

Scheme 1

Analytical procedure for ametryn, cyanazine and prometryn

31

32

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)

3
3.1

結果及び考察液体クロマトグラフ条件の検討
100 ng/mL の農薬混合標準液 4 µL をセンター法のとおり液体クロマトグラフ質量分析計で測定したところ，ピークが検出されなかった．溶離液のうち，アセトニトリルの割合を増やしたと
ころ，ピークが検出されたので，最適な溶出条件となるようグラジェントの設定をした．また，目的の農薬が溶出した後にも妨害物質のピークが見られたことから，アセトニトリルの割合が多い部分での洗浄時間を取った．
3.2

検量線
農薬混合標準液を使用して各農薬の検量線を作成した．すべての農薬で 0.5~100 ng/mL の濃度（絶対量として 2~400 pg）で直線性を示した．各農薬の検量線例を Fig. 2-1 から Fig. 2-3 に示した．

area
面積 height
高さIntensity/ arbitrary units

ピーク強度

ピーク強度

Intensity/ arbitrary unitsarea
面積 height
高さ

0.00
0

2020
.00

40.
00
40

6 0.00
60

80.00
80

100.0
1000

12
0.00
120

00
.00

20.00
20

Fig. 2-1

4040
.00

60.0
600

80.00
80

100.0
1000

120.00120

濃度of/ng/mL
Concentration
Ametryn/ ng/mL

濃度Concentrationof /ng/mL
Cyanazine/ ng/mL

Calibration curve of ametryn

Fig. 2-2

Calibration curve of cyanazine

ピーク強度Intensity/ arbitrary units

面積 height
高さ
area

0.00
0

20.00
20

Fig. 2-3
3.3

40.00
60.00
80.00
100.00
40
60
80
100
濃度
/n g/mL
Concentrationof Prometryn/
ng/mL

120.00120

Calibration curve of prometryn

添加回収試験
ブロイラー肥育前期用配合飼料及び乾牧草（スーダングラスヘイ）にアメトリン，シアナジン

及びプロメトリンとして 10 µg/kg 及び 100 µg/kg 相当量を添加した試料を用いて回収率及び繰返し精度を検討した．その結果，Table 3 のとおりシアナジンで平均回収率 74.7~95.7%，繰返し精度は相対標準偏差（RSD）として 5.4%以下，アメトリンで平均回収率 80.4~93.5%，繰返し精度
は RSD として 5.9%以下，プロメトリンで平均回収率 73.8~87.3%，繰返し精度は RSD として4.0%以下であった．

飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計による定量法

33

なお，添加回収試験で得られたクロマトグラムの一例を Fig. 3 に示した．
Table 3

Recovery test of ametryn, cyanazine and prometryn(%)

Pesticide name

Ametryn
Cyanazine
Prometryn

Spikedlevel(µg/kg)
10
100
10
100
10
100

Formula feed forstarting broiler chick
Recovery a)
81.1
93.5
95.7
93.6
85.5
87.3

RSD b)( 4.7 )
( 0.76)( 2.9 )
( 0.72)( 2.9 )
( 1.2 )

Sudangrass hay
Recovery a)
80.4
80.6
74.7
85.7
73.8
77.1

RSD b)( 5.9 )
( 0.53)( 5.4 )
( 2.4 )
( 4.0 )
( 1.0 )

←Cyanazine

Intensity/ arbitrary units←Ametryn←Prometryna) Mean recovery (n=3)b) Relative standard deviation (RSD)

12
Fig. 313

14
15
Retention Time/ min

16

17

SIM chromatogram of ametryn, cyanazine and prometryn

Sample solution of formula feed for starting broiler chick spiked each pesticide at 10 µg/kg
3.4

定量下限及び検出下限
本法の定量下限を確認するために，ブロイラー肥育前期用配合飼料及び乾牧草（スーダングラスヘイ）にアメトリン，シアナジン及びプロメトリンをそれぞれ 2 µg/kg 相当量添加した試料について，本法に従って分析し，得られたピークの SN 比を求めた．
その結果，いずれの試料においても，アメトリン，シアナジン及びプロメトリンの 3 成分すべてについて SN 比が 10 となる濃度はそれぞれ 2 µg/kg 相当量であった．
定量下限を確認するために，ブロイラー前期肥育用配合飼料及び乾牧草（スーダングラス

34

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)

ヘイ）にシアナジン，アメトリン及びプロメトリンとして 2 µg/kg 相当量を添加した試料を用いて回収率及び分析精度を検討した．その結果，Table 4 のとおり平均回収率 77.2~94.5%，
繰返し精度は相対標準偏差（RSD）として 9.4%以下であった．
このため，本法の定量下限は 2 µg/kg と見積もられた．また，検出下限は，SN 比が 3 となる濃度から各成分について 0.7 µg/kg と見積もられた．
なお，定量下限の確認は，ピーク面積及びピーク高さの両方で計算を行ったが，ピーク面積では良好な結果が得られなかった．
Table 4

Recovery test of ametryn, cyanazine and prometryn (low concentration)(%)
Pesticide name
Ametryn
Cyanazine
Prometryn

Spikedlevel(µg/kg)2
2
2

Formula feed forstarting broiler chick
Recovery a)
82.9
89.5
94.5

RSD b)( 1.8 )
( 9.4 )
( 6.6 )

Sudangrass hay
Recovery a)
77.2
79.2
87.2

RSD b)( 4.4 )
( 5.4 )
( 3.1 )a) Mean recovery (n=3)b) Relative standard deviation (RSD)
3.5

共同試験
本法の再現精度を調査するため，共通試料による共同試験を実施した．
配合飼料（ブロイラー肥育前期用）及び乾牧草（スーダングラスヘイ）にアメトリン，シアナ

ジン及びプロメトリンとしてそれぞれ 10 µg/kg 相当量を添加した共通試料を用いて，アジレン
ト・テクノロジー株式会社アプリケーションセンター，株式会社島津製作所東京アプリケーショ
ン開発センター，財団法人日本食品分析センター多摩研究所，社団法人日本科学飼料協会科学飼料研究センター，全国酪農業協同組合連合会分析センター，独立行政法人農林水産消費安全技術センター規格検査部，同肥飼料安全検査部，同神戸センター消費技術部及び同神戸センター大阪
事務所（9 試験室）において本法に従って共同試験を実施した．
アメトリンの結果は Table 5 のとおり，配合飼料中のアメトリンの平均回収率は 98.4%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 4.3%及び6.2%であり，HorRat は 0.28 であった．
また，乾牧草中のアメトリンの平均回収率は 92.2%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 4.2%及び 15%であり，HorRat は 0.66 であった．
シアナジンの結果は Table 6 のとおり，配合飼料中のシアナジンの平均回収率は 98.9%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 6.6%及び9.4%であり，HorRat は 0.43 であった．
また，乾牧草中のシアナジンの平均回収率は 94.4%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 4.1%及び 17%であり，HorRat は 0.76 であった．
プロメトリンの結果は Table 7 のとおり，配合飼料中のプロメトリンの平均回収率は 93.6%，
その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 2.7%

飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計による定量法

35及び 6.1%であり，HorRat は 0.28 であった．
また，乾牧草中のプロメトリンの平均回収率は 89.6%，その室内繰返し精度及び室間再現精度
はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 3.2%及び 11%であり，HorRat は 0.52 であった．
いずれの試料及び分析成分においても HorRat が比較的低く，特に配合飼料では 0.5 を下回っていたが，特に本分析法の手順及び共同試験の要領に異常があったとは考えられなかった．
参考のため，各試験室で使用した液体クロマトグラフ質量分析計の機種等を Table 8 に示した．
Table 5Collaborative study results of ametryn(µg/kg)SampleLab. No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Spiked levela)

Determined value
Recovery (%)b)

RSDr (%)c)
RSDR (%)
HorRatFormula feed
9.70
9.59
9.00
9.44
9.89
9.58
10.7
10.3
10.4
10.4
10.6
9.51
9.82
9.57
8.78
9.15
9.70
10.9
10.0
9.84
98.4
4.3
6.2
0.28

Sudangrass hay
8.79
8.01
9.16
9.72
8.94
9.13
9.54
9.84
9.89
9.73
7.24
8.51
9.17
9.35
7.46
7.52
12.0
12.0
10.0
9.22
92.2
4.2
15
0.66

a) Mean value (n=18)b) Repeatability relative standard deviation within same laboratoryc) Reproducibility relative standard deviation

36

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)

Table 6

Collaborative study results of cyanazine(µg/kg)SampleLab. No.

Formula feed
10.1
9.09
8.60
9.28
9.45
9.06
10.8
10.7
9.46
9.84
9.57
8.56
10.9
10.3
10.5
9.22
10.4
12.1
10.0
9.89
98.9
6.6
9.4
0.43

1
2
3
4
5
6
7
8
9
Spiked levela)

Determined value
Recovery (%)b)

RSDr (%)c)
RSDR (%)
HorRatSudangrass hay
8.30
7.57
7.60
7.56
8.50
8.04
9.67
10.1
8.31
7.83
9.66
9.12
10.7
11.0
11.9
11.2
11.8
11.0
10.0
9.44
94.4
4.1
17
0.76

a) Mean value (n=18)b) Repeatability relative standard deviation within same laboratoryc) Reproducibility relative standard deviation
Table 7

Collaborative study results of prometryn(µg/kg)SampleLab. No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Spiked levela)

Determined value
Recovery (%)b)

RSDr (%)c)
RSDR (%)
HorRatFormula feed
9.43
9.31
9.00
9.52
10.2
9.64
10.1
10.2
9.58
9.32
8.84
8.30
9.37
9.36
8.73
8.35
9.49
9.77
10.0
9.36
93.6
2.7
6.1
0.28

Sudangrass hay
8.97
8.17
8.80
9.16
8.73
9.15
10.1
10.2
9.08
9.11
7.52
7.36
9.20
9.26
7.38
8.02
10.4
10.7
10.0
8.96
89.6
3.2
11
0.52

a) Mean value (n=18)b) Repeatability relative standard deviation within same laboratoryc) Reproducibility relative standard deviation

飼料中のアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計による定量法

Table 8Lab. No.
1
2

Instruments used in the collaborative study
LC-MS

Agilent Technologies
Agilent 1100 Series LC MSD
LC: Agilent Technologies Agilent 1200 Series
MS: Agilent Technologies Agilent 6410 QQQ

3Shimadzu LCMS-2010EV

4

LC: Waters alliance 2695
MS: Waters micromass Quattro micro

5

Shimadzu LCMS-2010EV

6

Agilent Technologies Agilent 6410

7

Shimadzu LCMS-2010EV

8
9

37

Agilent Technologies
1100 Series MSD VL
LC: Waters 2795
MS: Waters Quattro Premier XE

4

LC column(i.d.×length, particle size)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
Shimadzu Shim-pack XR-ODS(2.0 mm×100 mm, 2.2 µm)
Kanto Chemical Mightysil RP-18GP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)
GL Sciences Inertsil ODS-SP(2.1 mm×150 mm, 5 µm)

まとめ

財団法人日本食品分析センターが開発した液体クロマトグラフ質量分析計によるアメトリン，シアナジン及びプロメトリンの残留分析法を検討した．
1)

センター法での液体クロマトグラフのグラジェント条件では，ピークが認められなかったことから，グラジェントの設定を変更した．

2)

各農薬の検量線を作成したところ，すべての農薬で 0.5~100 ng/mL の濃度（絶対量として2~400 pg）で直線性を示した．

3)シアナジン，アメトリン及びプロメトリンをブロイラー肥育前期用配合飼料及び乾牧草（スーダングラス）に 10 µg/kg 相当量及び 100 µg/kg 相当量添加し，添加回収試験を実施した結果，ア
メトリンで平均回収率 80.4~93.5%，繰返し精度は相対標準偏差（RSD）として 5.9%以下，シ
アナジンで平均回収率 74.7~95.7%，繰返し精度は RSD として 5.4%以下，プロメトリンで平均回収率 73.8~87.3%，繰返し精度は RSD として 4.0%以下の成績が得られた．

4)

本法の定量下限等を確認するため，シアナジン，アメトリン及びプロメトリンをブロイラー肥
育前期用配合飼料及び乾牧草（スーダングラスヘイ）にそれぞれ 2 µg/kg 相当量添加し，添加回収試験を実施した結果，平均回収率は 77.2~94.5%，繰返し精度は相対標準偏差（RSD）として9.4%以下の成績が得られた．本法の定量下限は各農薬として 2 µg/kg，検出下限は各農薬として 0.7 µg/kg と見積もられた．

5)

配合飼料（ブロイラー肥育前期用）及び乾牧草（スーダングラスヘイ）にアメトリン，シアナジン及びプロメトリンとしてそれぞれ 10 µg/kg 相当量を添加した共通試料を用いて，9 試
験室において本法に従って共同試験を実施した．

38

飼料研究報告 Vol. 33 (2008)

その結果，配合飼料中のアメトリンの平均回収率は 98.4%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 4.3%及び 6.2%であり，HorRat は 0.28であった．また，乾牧草中のアメトリンの平均回収率は 92.2%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 4.2%及び 15%であり，HorRat は 0.66 であった．
配合飼料中のシアナジンの平均回収率は 98.9%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれ
ぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 6.6%及び 9.4%であり，HorRat は 0.43 であった．
また，乾牧草中のシアナジンの平均回収率は 94.4%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそ
れぞれ RSDr 及び RSDR として 4.1%及び 17%であり，HorRat は 0.76 であった．
配合飼料中のプロメトリンの平均回収率は 93.6%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（RSDr 及び RSDR）として 2.7%及び 6.1%であり，HorRat は 0.28 であった．
また，乾牧草中のプロメトリンの平均回収率は 89.6%，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSDr 及び RSDR として 3.2%及び 11%であり，HorRat は 0.52 であった．
謝

辞共同試験に参加していただいたアジレント・テクノロジー株式会社アプリケーションセンター，
株式会社島津製作所東京アプリケーション開発センター，財団法人日本食品分析センター多摩研究所，社団法人日本科学飼料協会科学飼料研究センター，全国酪農業協同組合連合会分析センターの試験室の各位に感謝の意を表します．
文1)

献農林水産省消費・安全局長通知：“飼料分析法の一部改正について”，平成 16 年 11 月 26 日，
16 消安第 5298 号 (2004).

2)

財団法人日本食品分析センター：平成 16 年度 飼料の有害物質等残留基準設定等委託事業（分析法の開発）

3)

飼料中の有害物質等の分析法の開発 (2005).

財団法人日本食品分析センター：平成 18 年度 飼料の有害物質等残留基準設定等委託事業（分析法の開発）

飼料中の有害物質等の分析法の開発 (2007).