福岡水技セ研報第12号

2002年3月

Bull. Fukuoka. Fisheries. Mar. Technol. Res. Cent. No12. March

2002

ホルモン処理によるトラフグ天然親魚からの採卵
宮内正幸・濱田 弘之・佐野(研究部)二郎Collection of Fertilized Eggs from the Tiger Puffer,Takifugu ruhripes,
by Hormonal Treatments

Masayuki Miyauchi , Hiroyuki HamadA*and Jiro Sano

(Research Department)

トラフグ種苗生産用の受精卵は,これまで成熟した天採卵試験用の親魚には,福岡県玄海町鐘崎漁協所属の然親魚から搾出することで入手していた。しかし,天然漁業者が,玄界灘において浮延縄漁業で漁獲した天然魚資源の減少に伴い,そうした天然親魚を得ることが難しを用いた。本漁業の漁期終盤にあたる2001年3月25日

くなり,受精卵を安定して入手することが困難になってに雌5尾と雄4尾及び4月5日に雌4尾を水揚直後に購きた。また,未成熟な天然親魚に晴乳類の胎盤性生殖腺入した。なお,選別に当たっては,腹部の膨らみが顕著刺激ホルモン(HCG)を注射し,成熟を促すことで受で活力のある個体を選んだ。また, 1回目の購入時には精卵を入手する方法も開発されてはいるものの,安定しホルモン投与時期の検討を行うため,対照区として明らた採卵技術レベルには至っていない。 1,2)さらに,長期かに腹部の膨らみの小さい個体を1尾購入した。

間養成した親魚(以下単に,養成親魚という)からHC購入後は直ちに200の舌魚タンクに収容し,酸素通気Gを用いて採卵することも試みられたが,酵化率の低さしながら約2時間かけて水産海洋技術センターまで運搬が課題となっていた。 3)その後も採卵技術に係る技術改し,陸上の7t FRP水槽に収容した。試験期間中は給良が進められ,現在では合成生殖腺刺激ホ)レモン放出ホ

餌を行わず、水温を16℃に保った。

LHRH‑a!を含むコレステロールペレット

親魚を収容した翌日,雌に対してタイゴン製カニューを養成親魚の背筋部に埋め込むことにより,計画的かつラ(内径2.0mm)を用いて卵径測定用に卵巣組織の一安定的に良質な卵が得られるようになってきた。 4,5,6,部を採取し,その後, LHRH‑aコレステロールペレ

7)この方法は, HCGの筋肉注射に比べて,ホ)レモンットを背筋部に埋め込んだ。使用したLHRH‑aは,がペレットから徐々に溶出するため,効果の持続性が高des‑GlylO, [D‑Ala6いと言われている。 8'

LHRH‑aの投与量は養成親魚の例を参考に400

ルモン‑LHRH ethylamide(Sigma)で,しかし,養成親魚から採卵する場合では,給餌をはじ〃g/kgとした。 6,7'一方,雄に対しては,雌同様収容翌め日長管理などの飼育管理に多くの労力と費用がかか日にHCGを500IU/kgの割合で背筋部に注射した。以る。 6'また本県の場合,放流用の種苗確保が主な目的で後,雄については性成熟技術が既に確立されているので,あるため,採卵用親魚には,遺伝的な影響を考慮して,今回は,雌のみの検討を行った。
LHRH‑aペレットを投与した2日目から毎日2‑できるだけ放流海域に生息する天然個体を用いることが望ましいと考えている。 2)

3回(9:00, 17:00もしくは9:00, 13:00, 17:00)

そこで,コスト削減,遺伝的多様性の維持を目的に,腹部の触診を行うとともに,体重を測定した。さらに,養成親魚からの採卵技術をもとにして,地元近海で獲れ排卵が近いと思われた個体には,カニュレーションを行た天然魚を用いた採卵試験を行った結果,良好な結果がって卵の成熟状況を確認した。

得られたので報告する。

成熟卵は,排卵が確認された時点で直ちに搾出法で採卵し、さらに卵巣を摘出して卵巣内に残った成熟卵を直方法

接絞り出して回収した。得られた卵は,速やかに1‑2尾の雄を用いて乾導法により受精させた。 8'なお受精卵*1現水産振興課‑105‑

宮内・濱田・佐野の一部は,受精率・縛化率を計算するために1 4のプラた。

スチック容器にそれぞれ200粒ずつ収容し,水温を2回目の試験では,雌4個体の平均体重は3.54kgで,16℃に保った。受精率は,受精4‑5時間後の卵発生

ホルモン投与時の卵径は975‑1,044μm (平均1,018が2‑4分割した時点で,無作為に50粒検鏡して算出μm)であった。受精卵は4個体全てから得ることがでした。また,晒化率は, 1日2回の水換え時に,ふ化仔

き,採卵時の卵径は上171‑1,207μm (平均1,194

魚と死卵を計数して求めた。

μm主 採卵量は499‑1,095g 平均862g） 受精率は72.0‑93.0% (平均82.5%）

結果

ふ化率は44.3‑95.3%(平均69.1%)であった。
また, 1回目の試験では,ホ)レモン投与後5日目に初今回実施した2回の採卵試験結果を表1に示した。 1めて排卵が確認され, 7日目までの3日間に対照区を除回目の試験では,対照区を除く雌5個体の平均体重はく全ての個体で排卵が認められた。 2回目の試験では,2.81kgで,ホルモン投与時の卵径は950‑1,001iim

4日目に初めて排卵が確認され,翌日には全ての個体で(平均974μm)であった。この5個体全てから受精卵排卵が認められた。

を得ることができ,採卵時の卵径は1,117‑1,181μm

ホルモン投与後の各個体の体重変化を図1に示した。

(平均1,156μm主 採卵量は300‑722g (平均568g）
受精率は4.0‑90.0% 平均68.8% ふ化率は0.5‑

今回の試験結果では,排卵が認められなかった対照区の1.9%

A‑6を除く全ての個体(9個体)において,ホルモン平均64.0%)であった。このうち,特に卵質投与後から排卵までの間に2‑14%の体重が増加しての悪かったA‑2を除くと,採卵量は589‑722g (辛いた。しかし,対照区のA‑6だけは,ホ)レモン投与後均636g） 受精率は74.0‑90.0% 平均85.0%）ふ化率は61.8‑88.9% (平均79.9%)であった。一方,の1週間で,体重が約10%減少していた。

対照区のA‑6は,ホルモン投与時の卵径が756μmと考察他個体に比べてかなり小さく,排卵までには至らなかっ

表1
個体番号

魚体重(kg)

LHR什a LHR什a投与時採卵までに採卵時卵径
採卵量
受精率
投与日
卵径(Mm)
要した日数
(〝m)
(g)
(%)

3.47

3/262.40

購化率(%)

970

722

3. 08. 9〝

970

300

4.00.52.70〝

95058990. 0

79. 82.82〝

978591

74. 0

2.67

〝

1,001640

8. 0

2. 81

A‑6

LHRH‑a投与による採卵試験結果

97461.

3. 9

64. 0

2. 28

〝

756

3.78

4/6

1,017

5

1,203

1,095

72. 0

44. 3

1‑2

3.44

〝

1,044

5

1, 207

784

73. 0

53. 8

B‑3

2.73

975

51, 194

499

92.0

82. 9

5‑4

4.20

1,034

4

1,171

1,071

93.0

95. 3

82. 5

69. 1

(対照区)
Bつ

2回目

平均

3.54

〝

〝

1,018

1, 194‑106‑862

ホルモン処理によるトラフグ天然親魚からの採卵

2回の採卵試験の結果では,対照区を除く9個体全ても腹部の変化を掴む前に繁死してしまい,排卵時期を的から採卵ができた。さらに, 9個体中8個体からは受精確に掴む方法が課題として残された。そこで,トラフグ率が70%以上の良質な卵を得ることができた。対照区

では体重の変化が,ホルモン投与効果の指標の一つとしとして設定したA‑6は,明らかに腹部の膨らみが小さて利用できるとの指摘もあったことから10)今回の試

く,卵径も756μmと小型であった。この個体が成熟途

験では腹部の触診と併せて体重の測定も行った。その結中か退行過程にあったものかは未確認であるが, LHR

栄,採卵できた全ての個体において体重の増加が認めら

冒‑aを投与するタイミングを失したものと考えられれ,ホルモン投与の効果が体重の増加として確認できるた。 4,5'これらのことから,採卵用親魚には腹部の十分ことが分かった。また,より正確な採卵のタイミングを膨らんだ雌を選ぶことを前提としてLHRH‑aコレス把握するため,体重測定に加えて適宜カニュレーション

テロール,ペレットを投与すれば,天然魚からであってもを実施し,卵の成熟度の目安となる透明度や分離度を視安定した採卵は可能であると考えられた。

認した。今回の試験では,対照区を除く9個体中8個体

また, 1 ・ 2回目の試験結果を比較すると,試験の間からは高い受精率の卵を入手することができたことか隔は10日ほどしか開いていないが, 2回目の方がホルら,これら体重測定とカニュレーションの実施は熟度判

モン処理前の卵径が大きく,採卵までに要した目数も短別のための1つの手段として利用できることが示唆されかった。しかも,体重当たりの採卵量も多く,採卵時のた。

卵径も大きいなど,卵質面においても良好であった。こ

養成親魚においては,ホルモン投与時の卵径が900μのことから,天然親魚を採卵用親魚として用いる場合は,m以上であれば400μ g/kgの投与量で排卵は同調すると延縄漁業の漁期終盤の天然魚本来の産卵期に近いほど,の報告があるが 6,7)今回の天然親魚を用いた試験でも,より良質な卵を入手できる可能性が高いと考えられた。

採卵までに要する日数が, 1回目の試験で5‑70, 2

受精率は,排卵後の時間経過に伴って,急速に低下す回目の試験で4‑5日とほぼ同調していた。今回の採卵ることが分かっており, 7)受精率の高い卵を安定して得方法を用いれば,親魚の飼育期間も1週間程度で済み,るためには,排卵時期を的確に掴むことが重要となる。

養成親魚を使用する場合と比べて,かなりの労力削減に昨年実施したホルモン処理による養成親魚からの採卵試つながると考えられた。 5,6)また,今回の試験結果から

験では, 9個体中6個体から採卵できたものの,うち1受精卵のkg単価を計算すると約8万円となり,近年の個体は受精率が極端に低かった。 9'これは,腹部の触診受精卵購入費が約20万円であることから,受精卵入手による熟度の診断技術が未熟で,採卵のタイミングを失にかかる費用はおおよそ半減されると試算された。

したためと考えられた。また,採卵できなかった3個体

また,卵質については,採卵のタイミングを失した120864竺2上コ遍噌
蟹o‑2ぜ!
‑一鉢‑A‑1 ( 970)
一一△一一A‑2970)‑A‑3950)‑A‑4978)‑A‑5U, 001)
‑J〇‑A‑601756)

23456780123

経過日数

経過日数

図1

LHRH‑a投与後の魚体重変化‑107‑45宮内・濱田・佐野

できた。

尾を除く8尾からは受精率が70%以上の良質な卵が得られたこと,また一部を実際に80mmサイズまで飼育し5)親魚の購入から採卵までに要した期間は1週間程度てみたが,奇形魚等も出現しなかったことから,特に問で,養成親魚を用いた場合に比べて飼育に要する労題ないと思われた。

力が削減され,受精卵入手に要する費用も従来に比

これまでにも天然親魚を用いたLHRH‑aコレステ

べ半減されると試算された。
6)ホルモン投与前に受けるストレスが,採卵に悪影響

ロールペレットの投与による採卵試験が行われてきたが11,12)養成親魚を用いた方が採卵量は多く,卵質もを及ぼすことが示唆された。

良好で効率的であると言われてきた。しかし,今回の試

文

験では,近海で漁獲された天然親魚を短時間の内にホル献モン処理することで良好な結果が得られた。その理由の一つとして,魚の輸送やハンドリングによるストレス,1)宮木廉夫・立原一意・蛭子亮制・塚島康生・松村靖

特に,漁獲されてからホルモンを投与されるまでの間に治・藤田失郎・林田豪介・多部田修:ホルモン処理受けるストレスが大きく関与しているのではないかと考によるトラフグ天然親魚の成熟促進.水産増殖,えられた。これまでの試験結果を見ると,採卵できなか

40(4, 439‑442 1992.

った個体は遠方から購入した場合が多いのに対し,今回

2)岩本昭雄・藤本宏:種苗生産技術の現状, 「トラフの試験では県内の延縄船から帰港直後に親魚を購入した

グの漁業と資源管理」 (多都田修編主恒星社厚生閣,

ため,ホルモンを投与するまでに受けたストレスは遠方

東京1997, pp.97‑109.
3)松田宗之・山内達也・上目茂則・平田八郎:トラフで購入した場合に比べて少ないと思われる。また,ホルモン投与後のストレスについては,ホルモンの繰り返し

グ, Takifugu rubripesの完全養殖化の試み.水産投与や度重なる熟度判定等が親魚に大きなストレスを与増殖, 41(3), 367‑371 1993).

4,13)今回の試験では,ホ)レ

4)松山倫也・中田久・池田義弘e田中宏之・松浦修

モン投与後に腹部の触診や体重測定並びにカニュレーシ

平:各種ホルモン投与法により誘起された養成トラ

ョンを適宜行ったが,良質な卵を効率的に得ることがでフグの成熟,排卵過程.水産増殖, 45(1 , 67‑

きたことから,活力のある個体であれば,ホルモン投与

73 1997.

えるという指摘もあるが

5)中田久e松山倫也・池田義弘・松浦修平:トラフグ

後はある程度のストレスを受けてもその影響は小さいと考えられた。

養成親魚からの採卵技法の開発.日水誌, 63(5.

今後は,今回用いた方法で天然親魚から良質卵を安定

728‑733(1997.

して得るために,ホルモン処理のタイミングを再検討す

6)中田久.原洋一・宮木康夫・松山倫也: LHRHa

るとともに,漁獲からホルモン処理までに受けるストレコレステロールペレットを用いた養成トラフグからスが採卵に及ぼす影響についても検討する必要がある。の採卵について,長崎県水産試験場研究報告,罪24^, 15‑25(1998.

要7)中田久・松山倫也・原洋一・矢田武義・松浦修平:

約

トラフグの人工受精における排卵後経過時間と受精率との関係.日水誌, 64(6), 993‑998(1998).

1) 3月26日と4月6日に玄界灘で漁獲された天然魚2を用いて採卵試験を行った。

8)陸島史夫,羽生功:水族繁殖学,第1版,緑書房,

LHRH‑aコレステロールペレットの投与により対照区を除く計9尾中8尾から受精率が70%以上東京, 1989, pp.166‑193.
9)福岡県他:平成12年度資源増大技術開発事業報告の良質卵を得ることができ,天然魚からの安定した

書回帰型回遊性種(トラフグ).福岡主10(2001).

採卵の可能性が示唆された。

10)鈴木康仁・竹村明:トラフグ天然親魚における成熟促進のためのホルモン投与方法の比較.水産増殖,

3)より天然の産卵期に近い延縄漁期終盤に漁獲された個体を親魚として用いた方が,採卵時の卵径が大き44(1), 85‑90(1996).

いなど卵質的に優れ,しかも採卵量も多かった。

ll)中田久・原洋一:養成トラフグの成熟促進と採卵技

4)腹部の触診に加えて体重測定やカニュレーションを術の開発.平成6年度長崎県水産試験場事業報告,実施することで,排卵時期を的確に把握することが87‑89 1995 .

‑108‑ホルモン処理によるトラフグ天然親魚からの採卵

12)金子敏行:親魚の養成と管理.平成10年度長崎県

トラフグ養成親魚からの採卵.栽培技研. 23(1),

漁業公社事業報告書, 182‑184(2000).
13)長尾成人・大沢博: LH‑RHアナログを使用した

31‑35(1994).

‑109‑