福岡水海技セ研報 第10号 2000年3月
Bull.Fukuoka Fisheries Mar.Technol.Res.Cent.,No.10March2000

アユの各生産段階における冷水病病原菌の保菌状況
福永 剛・浜崎 稔洋(内水面研究所)

Detection of Cold‑Water Disease Pathogen(Flauobacteriumpsychrophuum)in Ayu at Each Culture Stage

Takeshi FUKUNAGA,Toshihiro HAMASAKI(Fresh Water Labolatory)

冷水病はFlavobacterium psychrophilumを病原体とする細菌性の疾病で,1948年アメリカ合衆国のギンザケ

表1PCR検査に供したアユ親魚から初めて原因菌が分離された。その後,本疾病の発生

試料採取日

は,アメリカ,ヨーロッパおよび日本におけるニジマス,ギ継代数

平均体重(g)検査尾数 魔病歴

1996/9/10 研究所継代魚Fg

15

2代前

35

5代前

ンザケなどの多くのサケ科魚類で認められている。さら1999/8/25に1988年に日本の養殖アユから本菌が分離されて以来,研究所継代魚F12133.1

多くの県からアユ養殖場での本疾病による被害が報告されるようになった*1。また,1993年以降,河川に生息する(2)発眼卵アユについても本疾病の発病ならびに保菌が認められ,'96年10月および'97年10月に養成親魚(研究所養成親

全国的に大きな問題となっている。本県では1994年に初魚F9およびF10)から採卵し,受精後1週間経過した卵をめて養殖アユに発病がみられて以来,散発的な被害が生用いた。サンプリングまでの間,1日おきに3回のマラじている。また,1999年6月に筑後川で漁獲されたアユカイトグリーン消毒を行った。発眼卵はサランロックにから本菌が分離され,養殖業のみならず河川漁業に対し付着した状態で検査まで‑80℃で保存しておき,検査時ても,健全な種苗の供給など,本疾病への対応が必要とに1粒ずつ年モジナイズして試料とし,由来親魚別に22粒ずつの検査を行った。

なっている。

(3)海水飼育中の仔魚

本疾病の対策として,まず感染経路の特定が重要と考えられるが,未だ明らかにされていない。本研究では,ア表2に示したように,矢部川漁業協同組合養殖場およユの各生産段階においてPCR検査による冷水病菌の保び内水面研究所で採卵され,その後,福岡県栽培漁業公社

菌検査を行ったところ,垂直(経卵)感染を強く示唆すにおいて海水中で飼育されていた,これら2群の仔魚にる結果が得られたので報告する。

ついて検査した。前者は3代前に,後者は5代前にそれ方ぞれ,冷水病罹病歴がある。同時期にS県産卵およびO法

県産卵由来の種苗についても検査を行った。検査に際し

1.検査に用いた試料

表2

(1)親魚
親魚には表1に示したように'96年9月および'99年8

PCR検査に供した海水飼育中のアユ稚魚

試料採取日

系 統

平均体重(g)検査尾数 羅病歴

月にサンプリングした魚体を用いた。両者は同一系統で,継代車の'94年に冷水病の罷病歴がある。試料摘出箇所
は'96年の検査では体表,'99年の検査では鯉および腎臓である。

*1平成6〜11年 アユ冷水病研究部全会議資料
ー57‑

1999/1/7 矢部川魚協継代魚F。

0.24453代前

1999/1/7

0.21

46

5代前

研究所継代魚F12福

表3永・浜崎PCR検査に供した淡水飼育中のアユ稚魚

試料採取日

由来

平均体重(g)検査尾数

罷病歴1998/2/23 研究所継代群Fll

2.58

44

4代前

1998/2/23 S県産種苗2.6422不明

1998/2/23 0県産種苗

3.64

22不明

1999/2/23 矢部川漁協継代魚F。

2.39

22

3代前

1999/2/23 研究所継代群F12

1.33

33

5代前て,魚体が小さいため魚体前半部を切り取り,その1尾ずつ分をホモジナイズして試料とした。

表4

アユ親魚におけるPCR検査結果

系 統

検査尾数 検査部位 陽性尾数 陽性率㈲研究所継代魚F915

研究所継代群F12体表35鯉腎臓衷5親16.7514.3

25.78.63

発眼卵におけるPCR検査結果
検査個数

陽性個数

研究所継代群F92214.5

研究所継代群Fl。

2214.5(4)淡水飼育中の稚魚

表6魚

陽性率㈲

海水飼育中のアユ仔魚におけるPCR検査結果

淡水飼育中の稚魚については,表3に示した5群につ由来

検査尾数

陽性尾数

中間育成施設で飼育されていたもので,外見上健全と思

矢部川漁協継代群F。

4524.4

われる魚をサンプリングした。検査は1尾ずつについて研究所継代群F124624.3いて検査を行った。これらの供試魚は,立花町のアユ等

陽性率伽)行い,摘出箇所は組および腎臓とした。

表72.PCR検査法

淡水飼育中のアユ稚魚におけるPCR検査結果
系 統

テンプレートDNAの抽出法およびPCR法は泉,若林1)

研究所継代群Fl1

検査尾数 検査部位 陽性尾数 陽性率㈲442の方法を用いて行った。TaqポリメラーゼはTakara社

鯉1のものを用い,プライマーについてはグライナージャパ

腎臓

1ン社に依頼作成した20F,1500R(1stPCR),PSY‑1,S県産種苗

122PSY‑2(2ndPCR)を用いた。DNAの増幅にはPCR

鯉1System2400(PERKIN ELMER社)を使用した。

腎臓0結

0県産種苗

果22(1)親魚
矢部川漁協継代群F。

親魚における検査結果を表4に示した。
6.7%),'99年親魚(研究所継代群F12)では35尾中5尾

研究所継代群F12

鯉0

腎臓022

'96年親魚(研究所継代群F9)では15尾中1尾(陽性率,(14.3%)から冷水病菌が検出された。また,'99年の陽性00

鯉0腎臓0鯉0腎臓033の内訳は鯉から2尾(5.7%),腎臓から3尾(8.6%)で04.54.5000あった。
(2)発眼卵(4)淡水飼育中の稚魚発眼卵における検査結果を表5に示した。

淡水飼育中の稚魚における検査結果を表7に示した。

96年および97年の発眼卵で両者とも22個中1個(4.5%)

研究所産継代群Fllで44尾中,鯉と腎臓から,それぞれ1から冷水病菌が検出された。

尾ずっ計2尾で検出された(4.5%)。S県産種苗では22尾(3)海水飼育中の仔魚中1尾の組から検出(4.5%)され,腎臓からは検出され海水飼育中の仔魚における検査結果を表6に示した。

なかった。さらに,0県産種苗,矢部川漁協継代群F3お矢部川漁協継代群F。で45尾中2尾(4.4%),内水面研

よび研究所継代群F12からは,冷水病菌は検出されなかっ究所継代群F12で46尾中2尾(4.3%)から冷水病菌が検た。

出された。

ー58‑

アユ冷水病病原菌の保菌状況'98'99などは不明である。また,飯田,溝上5)は冷水病原因菌

FlO‑Fll

F12

F.psychrophilumは試験管内の実験では,1.5%以上のNaF7で雁病 匝堅][重症回 国仔魚Cl濃度では発育しないとしている。しかし,今回海水飼

稚魚

育中の仔魚から検出されたことは,魚体内保菌である可親魚能性を示しており,海水飼育中における魚体内での原因'96

研究所継代群'97

F9‑

先眼卵菌の動態について検討する必要があろう。また,今回の矢部川漁協継代群

親魚‑

雁病

FI F2

F3

検査で陽性となった群においても発病はみられておらず,囲匝司仮に保菌していたとしても,飼育方法の如何によって発病を未然に防ぐこともできると考えられた。

稚魚匡1 県内継代群における冷水病菌検出状況[=コは陽性考

要約1)冷水病の垂直感染の可能性をみるために,アユの各察生産段階においてPCR検査による冷水病菌の保菌今回行った親魚,卵,仔稚魚(海水飼育,淡水飼育中)検査を行った。

におけるPCR検査の結果をまとめて図1に示した。今

2)'96年親魚では15尾中1尾(陽性率,6.7%),'99年親回の研究では各年における検査対象が異なっており,す魚では35尾中5尾(14.3%)で冷水病菌が検出されべてのステージで検査できていない。また,対照としてた。

雁病歴の全くない群での検査を行っていないなどの不備

3)96年および97年の発眼卵では両者とも22個中1個(4.5%)で冷水病菌が検出された。

な点もあるが,過去に罷病歴のある群では陽性となる場合が多く,アユにおいて冷水病菌が垂直感染している可謝能性が強く示唆された。また,陰性となる場合も2例あっ

辞たが,これは検査尾数が少なかったため検出できなかっ本研究を行うにあたり,PCR検査による冷水病菌のたのか,何らかの原因で群として冷水病菌フリーとなっ検出方法をご指導いただいた東京大学大学院農学生命科ていたことが考えられるが,不明である。

学研究科の若林久嗣教授ならびに泉庄太郎氏に深謝の意を表します。

アユ冷水病はここ10年で急速に全国に広まった。その感染経路として,隣接の水槽に感染するいわゆる水平感

文

染は,病魚を用いた同居感染の成立や,病魚の飼育排水で献飼育することによって健康魚が発病するなど,よく知らD ShotaroIzumi and Hisatsugu Wakabayashi:Use

れており,また,実際に多くの養殖場で水平感染が起こっ

Of PCR to Detect CytQPhaga psychrQPhua fromている*1。しかし,卵を介して次代に冷水病が伝播する,

Apparently Healthy Juvenole Ayu and Coho

いわゆる垂直感染(経卵感染)については,その可能性

SalmonEggs,FishPathology,32,169‑173(1997).

は指摘されているものの,実験的に証明されたという報2)R.A.Holt,J.S.Rohovec andJ.L.Flyer:Bacterial

告は未だ見あたらない。しかし,ギンザケ,ニジマスなど

cold‑water disease.,BacterialDisease ofFish(ed.byのサケ科魚類では経卵感染が指摘されており,Holt2)はV.Inglis,R.J.RobertandN.R.Bromage),Blackwell

成熟したギンザケおよびマスノスケ親魚の卵巣液およびSci.Publ.London,1993,PP.3‑22.

精液から冷水病菌が検出されたとしている。さらに,熊3)熊谷明,佐藤靖,高橋清孝:冷水病の防疫に関する研谷ら3)はギンザケ輸入卵および輸入卵由来の稚魚から冷究。魚病対策技術開発研究報告書,平成7年度,168‑

水病菌が検出されたことから輸入卵が主な感染源として174(1995).

4)熊谷明,佐藤靖,高橋清孝:冷水病の防疫に関する研究。魚病対策技術開発研究報告書,平成8年度,いる。また,熊谷ら4)はギンザケ卵を実験的に感染させたところ,冷水病菌は卵内に侵入し増殖したとしている。
本研究においても発眼卵に原因菌が認められたことから,

108‑117(1996).

アユについても経卵感染の可能性があるが,今回の実験

5)YoshisukeIida and Akio Mizokami:Outbreakes

ではホモジナイズしたものを試料としているため,原因

OfColdwaterDiseaseinWildAyuandPaleChub,Fish

菌が卵の表面に存在するのか,内部に侵入しているのか

Pathology,31,157‑164(1996).

‑59‑