厚生省「神経疾患研究委託費」

筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究

第二班（三好班）
昭和55年度研究報告書

昭和56年3月

研究報告書の作成にあたって
厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究」
班として昭和55年度の研究報告書を作成する運びとなりました。
本研究班は1昨年度に発足し，筋ジストロフィー症を遺伝，臨床，病態生理，および生化学的見地から追求し，本症の原因を究明し，治療法の開発を目ざして参り，本年が第3年目で最終年度であります。
本報告書に集録された成果は，いずれも水準の高いものでありますが，とくに，これを過去2年の成果につみ重ねてみるとき大きな意味をもちます。この期間に筋ジストロフィー症の臨床と病因究明に関して，新しく核心に迫るいく
つかの問題が明らかにされました。内外研究者の今後の研究に大きく影響する
ところがあるものと思います。本研究班の班員，並びに共同研究者各位の絶大な努力に，班長として心からの敬意を表します。
本研究班は組織の上ではこれで終了致しますが，班月個々の研究は中断する
ことなく続けられることと思います。研究は，この病気に苦しむ人々のために，
社会的並びに学問的に私達に課せられた責務であるからであります。
本研究班を活動の場として，これまで多数の研究者が研究の意欲をかきたてて参りました。来年度も引続いて新しい研究班組織が実現されるよう努力し，また，関係各位の御援助を願うものであります。
本研究の推進に賜った，厚生省当局，国立神経センター，日本筋ジストロフ
ィー協会の御重力，御支援そして御理解に深く感謝致します。
昭和56年3月〈班長〉 三 好 和 夫

目次

分担研究報告Ⅰ．筋ジストロフィーチキンの研究

15a）筋ジストロフィーチキン

17

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

57

a）遺 伝

59

b）臨 床

66

c）形 態

91

d）生 理

151

e）赤血球など

167f）生化・代謝など

200

昭和55年度研究班機構図及名簿

251

究

分

担

研

報

＿月エ

ロ

目

次

Ⅰ．筋ジストロフィーチキンの研究

1）筋ジストロフィーチキンの発達過程における形態学的初期変化
九州大学医学部脳研神経内科 黒 岩 義五郎
2）ジストロフィーチキン後広背筋の計測
鳥取大学医学部脳研神経病理

20

中

村

晴

臣

征

哉

3）筋ジストロフィー鶏骨格筋の組織学的研究−αW線維における横管系の増殖性変化と空胞出現の意義−
国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

17

埜

中

24

4）ジストロフィーチキンにおけるactivated satellite cellについて（Ⅱ）−電顕ラジオオートグラフィーによる観察−
信州大学医学部第三内科

30

小

口

喜三夫

5）ジストロフィーチキン筋細胞膜のフリーズ・フラクチャーによる観察
長崎大学医学部第一内科

高

守

正

34

治

6）正常及び筋ジストロフィーチキン培養骨格筋に対する交感神経の影響（2）−アセチルコリンエステレース及びカテコラミン染色による検討−

38

東京医科歯科大学医学部神経内科

塚

越

廣

7）正常鶏筋，および筋ジストロフィー鶏筋に対する
フィロポディアの運動様式について
筑波大学臨床医学系神経内科

44

中

西

孝

雄

高

木

昭

夫

木

下

真

男

8）筋ジスチキンの骨格筋脂質（第二報）

48

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

9）ジストロフィー鶏骨格筋中の中性脂肪に関する研究
東邦大学医学部第四内科

952

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

10）筋萎縮性疾患の遺伝分析−Duchenne型ジストロフィー症について−
鹿児島大学医学部衛生

59

古

庄

敏

行

11）顔面肩甲上腕型脊髄性筋萎縮症−臨床的，遺伝学的検討−

63

東京医科歯科大学医学部神経内科

古

川

哲

12）Familial oculocranioskeletal neuromuscular disease
with abnormal muscle mitochondria のfollow up study
宮崎医科大学第三内科 荒 木 淑

雄

66

郎
72

13）筋緊張性ジストロフィー症の脳のCT−SCAN所見の検討
京都大学医学部第二内科

井

村

裕

夫

植

田

啓

嗣

14）FSH型筋萎縮症の特殊例の1症例について
愛媛大学保健管理センター

768115）Centronuclear MyopathylO代発症遠位型の1例
神戸大学医学部第三内科

高

橋

桂

一

16）著明な心伝導障害と関節拘縮を呈した非定型ミオパチー
85−Emery−Dreifuss症候群との異同−
東京医科歯科大学医学部神経内科

塚 越

廣
91

17）いわゆるdistal myopathyの筋病変について
東京大学医学部脳研神経内科

豊

倉

康

夫

18）生検筋にrimmed vacuolesを持ち，遠位筋萎縮を示す二症例−電顕的検討−97

国立療養所宇多野病院神経内科
19）Distal myopathy と lysosome
新潟大学脳研究所神経内科

西

谷

裕
103

福

原

信

義
107

20）Tubulomembranous myopathy
新潟大学脳研究所神経内科

福

原

信

義

21）Duchenne Muscular Dystrophy（DMD）培養筋細胞のフリーズフラクチャーによる検討

112

鹿児島大学医学部第三内科

10

納

光

弘

22）Duchenneジストロフィー症生検筋のヌードマウスへの移植実験
昭和大学藤が丘病院神経内科

114

若

山

吉

弘

荒

木

淑

郎

23）実験的ミトコンドリア・ミオパチーの形態学的研究
宮崎医科大学第三内科

11924）ミトコンドリア・ミオパチーの臨床的・電子顕微鏡的研究
順天堂大学医学部脳神経内科

124

佐

藤

猛

25）不動性筋萎縮の病態に関する基礎的研究
東邦大学医学部第四内科

128

木

下

田

辺

真

男

26）筋ジストロフィーの筋病変に関する検討−各病型における筋線維病変と血管間質病変についての知見補遺−
虎の門病院神経内科

132等27）神経筋疾患と骨関節異常との合併・共存病態に関する検討
虎の門病院神経内科

136

田

辺

等

田

辺

等

28）慢性脊髄性筋萎縮症の臨床病理学的研究−筋生検所見の半定量化の試み−

142

虎の門病院神経内科

29）Motor neuron disease の筋生検組織化学的検討−Oil red O 染色所見について−147

大阪医科大学第一内科

茂

在

敏

司

30）筋ジストロフィー症の単一筋線維筋電図（第3報）
国立療養所字多野病院神経内科

151

西

谷

裕

31）ヒトの外肋間筋を用いた実験的ミオトニーの研究
宮崎医科大学第三内科

156

栗

原

照

幸

正

治

32）カルシウム・イオノフォア（A23187）処理筋の収縮弛緩に関する研究−ヒト・ジストロフィー筋との比較検討−
長崎大学医学部第一内科

161

高

守

33）デュシャンヌ型筋ジストロフィー症赤血球膜のフォスファチジル
イノシトール代謝
神戸大学医学部第三内科

高

橋

桂

167

−

34）筋ジストロフィー症患者赤血球膜のレクチン結合
東京都立神経病院神経内科

11

171

宇尾野 公 義35）Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の赤血球
176

カルシウム・フラックス（第2報）
信州大学医学部第三内科

庄

司

進

一

36）筋ジストロフィー症患者の赤血球のATPとカルシュウム含量
国立武蔵療養所神経センター

吉

田

179

瑞

子

37）筋緊張性ジストロフィー症およびDuchenne dystrophy 症の
赤血球膜のATPase，adenylate kinaseなどについて
九州工業大学保健管理センター

馬

渡

183

志

郎

38）緊張性筋ジストロフィー症赤血球膜アセチルコリンエステラーゼについて
九州大学医学部脳研神経内科 黒 岩 義五郎

18739）福山型先天性筋ジストロフィー症の血清と髄液における190

免疫グロブリンとimmune complex
新潟大学脳研究所神経内科

近藤 喜代太郎40）ヒト胎盤からの神経成長促進因子の分離
京都大学薬学部生物化学

193

林

恭

三
200

41）先天性ミオパチーとトリプトファン代謝異常
徳島大学医学部第一内科

八木田

正

聖
205

42）筋クレアチナーゼに関する二，三の問題
徳島大学医学部栄養化学

名

取

靖

郎

43）筋ジストロフィー症骨格筋におけるクレアチン代謝の異常
徳島大学医学部第一内科

三

207

好

和

夫
210

44）Thyrotoxic MyopathyのCreatinuriaの成因について
愛媛大学保健管理センター

植

田

啓

嗣

45）ミオグロビン尿症の病態生化学的研究

215

自治医科大学神経内科

宮

武

正

46）ラジオイムノアッセイによる人ミオグロビンのturnover
徳島大学医学部第一内科

川

220

井

尚

臣

47）筋ジストロフィー鶏における筋ガングリオシドの研究−続報−
自治医科大学神経内科

宮

武

225

正

48）Ophthalmoplegia plus症候群，及び実験的ミトコンドリア
ミオパチーにおける筋肉内GOTアイソザイムについて
大阪大学医学部第二内科 垂 井 清一郎

12

229

49）Duchenne型筋ジストロフィーの単一筋線維：

収縮蛋白の分析233

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

高

木

昭

夫

50）実験的serotonin myopathyにおける病理学的ならびに筋構造蛋白質の検討
名古屋大学医学部第一内科

飯

239

田

光

男

51）Caプロテアーゼによる骨格筋の崩壊−Ca イオノフォア（A23187）の効果−
東京大学医学部脳研神経内科

243

杉

田

秀

夫

52）カテプシンHによる筋原線維構成蛋白質の分解様式
徳島大学医学部附属酵素研究施設酵素化学部門

13

247

真

田

幸

弘

Ⅰ．筋ジストロフィーチキンの研究
a）筋ジストロフィーチキン

1）筋ジストロフィーチキンの発達過程における形態学的初期変化

黒 岩 義五郎＊

研究協力者

石 本 進 士＊

日

後

藤

幾

生＊

大

田

典

也＊＊

に対するCaVeOlar densityの変化を出し，的

前回，dystrophy chickenの形態学的初期

100ノJm2以上では，変動の少ない事を確認し変化として，ふ化後1週間目に白筋であるて，今回は200JLm2をtotalsamplingareaとした．

PLD筋にDPNH diformazan granule数の増加，及びfiber size distributionの広がりが生じはじめ，3週間目で著明となることを結果報告したl）．今回，freeze−fracture EMにて，

図1の如く，ふ化後1日目のCaVeOlar

白筋である浅胸筋の形質膜上のCaVeOlaeの

densityは，COntrOlで11．27／JLm2，dystrophy

ふ化後早期の経時的変化を観察した．

で7．76／jLm2と，dystrophyで低値を認めると共に，CaVeOlaeの形，大きさ，配列に不規則

方法

実験動物は，dystrophychicken（1ine413）

Cト仏NGES OFCAV【OLAR DENSITYとCOntrOIchicken（line412）を使用した．

ttotalsamplingareas：m仰山

ふ化後，1日目，1週間目，3週間目の自筋である浅胸筋（superficialpectoralmuscle）
を2．5％glutaraldehydeで固定後，25％gly・
Cerineで処理し，真空蒸着装置を用い，液体下で割断し，白金パラジウム，カーボンで蒸着し，ブリーチで処理，水洗後，透過型電顕を用いて観察した．検索方法としては，形質
膜上のCaVeOlaeの形，大きさ，分布を観察す
ture replicaの写真に1cm間隔の透明の方

0ると共に，拡大率約2．6万倍のfreeze−frac・■ヽノ︵．1︑N︶苫一宕＞8−OSL眉∈⊃u

窒素で約−1150C，1×10J6Torr以下の真空眼紙を重ね合わせて，計測すべき筋線経の面積を出し，その面積内に含まれるcaveolae数を算出して，CaVeOlardensityを計算した．
集計面積の決定には，ふ化後1日日のCOnt−
rol筋のreplicaにて500JLm2迄の面積の増加

l由y l腫鋏

3we虞S

Stage oI叩Sthatchlng
C：Contr01
D：町itr叩hy＊九州大学医学部脳研神経内科＊：＊九州大学医学部脳研神経病≡哩

匡＝
ー17−

SIZE DISTRIBUTl0N OF MJSCLE FLB【RSNUMBEROF FORMAZAN DEPOSITS（NADH DIAPHORASE）
l week aner hatch

祁0劇

巴雲三m一US⊃∈−○ボ

20

刃

劇

50

的伊

仙er diameter

図3

相S雲邑p u記2J丘−OL眉∈⊃∪10

即が，Tシステムの開口部i又は，pinocytotic
vesicle等の可能性が考えられている2）．今回のCaVeOlaeの観察から，ふ化後，1E］目のdystrophy chicken筋におけるCaVeOlar
densityの低値及び形と分布の変化は，前回報告したふ化後1週間目のPLD筋におけるIib併diamter
c：COntrOl川・5I d：小tr叩hytnt51

DPNHdiformazangranule数の増加（図2）より早期変化で，又3週間目のCaVeOlae数の

図2

増加は，fibersizedistribution（図3）の広性を認めた．又，ふ化後，1週間目ではCOnt−

がりが著明となる時期と対応しており，これrolで10．90／JL2，dystrophyで8．24／JL2と1日

らの早期変化の相互関係及びdystrophic

目と比較すると，COntrOlで軽度減少，dystrophy

processとの因果関係の究明が今後必要であで軽度増加を認めたが，著変はみられなかっる．今回の私達のCaVeOlardensityの平均値た．しかし，分布はdystrophyでより規則性

は，Brian Rら3）の報告と少し異なっており，に乏しかった．ふ化後，3週間目では，dystro−

方法論の比較も必要と考えられる．又1週間

phyで17．01／JLm2，COntrOlで11・68／JLm2と目のCOntrOl筋に於て，CaVeOlar densityがcaveolardensityは，1E］目，1週間目と比2群に分かれる傾向を示した事は，fibertype

較して増加を示すと共に分布の局在性に乏しによる差異4）の可能性もあり，今後，fiber

く又，同時期のCOntrOlと比較しても，増加をtype毎によるCaVeOlar densityの変化を検示した．一方，COntrOlは，ふ化後，その平均討する事も必要と考えられる．

値に著変を認めなかったが，ふ化後，1週間
文

巨＝こおいて，CaVeOlardensityが約14／JLm2の献

1）黒岩義五郎，石本進士，後藤幾生，大田典也：筋ジストロフィーチキンの発達過程にものと，8ルm2のものとの2群に分けられる
傾向を認めた．

おける形態学的初期変化．筋ジストロフィ
考ー症の病因に関する臨床的研究（三好址），

察

Freeze−fracture EMでみられる筋形質膜

昭和54年度研究報告書，1980，p・22．

上のCaVeOlaeは，その本態は明らかではない

2）吉岡三恵子，北条博厚，奥田六郎，西占 貢：ー18−

フリーズ・エッチング法による骨格筋の筋
膜表面構造の観察．小児科紀要，22：1，

Chickens・Muscle＆Nerve，2：191，1979．
4）Shafiq，S・A・，Leung，B．＆ Schutta，H．

1976．

S∴A Freeze−Fracture study of fiber3）Brian，R・，Costello，B．S．＆Shafiq，S．A．：

typesin normal human muscle．

Freeze−Fracture study of muscle plas−
malemmain normal and dystrophic−19−

J．Neurol．Sci．，42：129．1979．

2）ジストロフィーチキン後広背筋の計測

中 村 晴 臣＊研究協力者

小 谷 真 美＊

高

田

邦

安＊

今

岡

健

次■

ジストロフィーチキン（Dyチキン）の後広トを用いて10〟の横断切片を作製した．その背筋（PLD）は良く知られた罷息筋の一つでH・E染色標本の670倍光顕写真を用い，atあり（黒岩ら1），1979：埜中ら2），1980），赤筋

randomに300本の筋線維直径を測定し，統計である前広背筋（ALD）とは一見して著しい的検討を加え，PLDの成績と比較した．

対比を示し，研究材料として種々の利点を有結するので，今後の研究の基礎資料を得ること

果を目的とし，その総線推数，筋線維直径，病Dyチキン3週目のPLD総線維数は約

変筋線推出現頻度を測定し，非罷患筋である
ALDや，明らかな臨床症状を示す浅胸筋，上9，800本で，ALD絶縁維数（約3，700本）の約2．5倍に相当するが，対照との問に有意差をみ

腕二頭筋と比較検討した．

ない（表1）．5週，8週と発育が進むに従い，捻線推数は減少傾向を示すが，個体差が方

法

少なくなく，対照に比し明らかな減少はない．

ふ化後3週，5過，8週目のDyチキン及び

しかし，ふ化後16週目では（約7，100本），対対照（line412）各3羽ずつを用い，深麻酔下照（約12，700本）に対し明らかに総線維数がで左側のPLDとALDを摘出したほか，ふ化少ない（p＜0．005）．DyチキンALDの総線維

後16週日のDyチキン6羽，対照9羽のPLD

数は，ふ化後3，5，8週目で夫々3，772・0±を摘出し，生食水に浸したガーゼの間に約10712．5，3，410．3±506．8，3，356・0±140・6で分間放置して筋収縮を除去したのち，筋腹中あり，ほぼ一定の値を示し，それぞれの対照

央の横断切片を4％paraformaldehydeにて

値4，582．7±640．1，4，276・7±789・8，

固定し，パラフィン切片によるH・E染色及3，478．7±165．4との間に有意差をみない．

びアザン染色標本を作製した．筋線維数の計

筋線維直径に関しては，各時期の平均値は測にあたっては，アザン染色標本の100−250

表2の如くで，発育と共に次第に増大するが，倍写真を組合せて作った筋横断面の合成像に8週目まではDyチキンと対照チキンとの間

ついて，その絵線維数を数えた．筋線推直径に有意差はみられず，16過日でDyチキンはは，atrandomに撮影した200〜500倍写真上

約42JJに達し，対照（約3伽）に比し明らかなにて，各動物とも約500本の筋線経を画像解析

線維直径平均値の増大がみられた（p＜装置を用いて計測し，統計的検討を行った．

0．01）．DyチキンALDの線維直径平均値は，他方，ふ化後5，12，19，26および33日目

表I Number of muscle fibersin PLDに，Dyチキンと対照それぞれ3羽ずつを用い，その浅胸筋，上腕二頭筋並びに排腹筋を摘出し，筋収縮を除いたのちにクリオスタッ．霊， Contro■

P

9．だ5．0士1．9朗．l nⅠ封NS

5

8．糾2．0土日12．4行い封NS

8＊鳥取大学医学部脳研究施設神経病理

Dystr蝉

】 11−797．0士1．098．7血引
10．496．7土

616．9加319．48）．3士2．7光．9佃引

6．194．0士1．18日加引

16 12．742．8土1．％5．4血91 7．1崩．8士2．465．8いい6INS
く0・005

表2 Average diameter ofmuscle fibersin

300本についての分布数を用いてmegahist0−

PLD
仙eeは

gramを作製した．但し16週日のPLDにおい
Cont「01

5

16．03土2．16府31

17．畑土1．9日n13I819．日±1．07tm）I

20．70±2．10加〕I

刃．46士3．691n■91

NSN
〜N〜川
＜

11．23土1．絹tnづI l116±1．79加】I

16ては，実測値を10JJ間隔に区分し，Dyチキン

町Str叫1jc P

342．00土4．27加6I6羽，対照9羽の分布数合計を夫々1／2，1／3に換算して使用した（図2）．これによれば，
DyチキンPLDではふ化後3週目で対照に比較して大径線椎が少なからず認められ，5

PLDと同様，ふ化後8週日までは対照との間に差をみない．

週日，8週日では大径線経の増加のほか，小径線経も多く認められた．更に16週目では60

これに反し，明らかな臨床症状を示すDy〃以上の大径線経も多数みられた．ALDの線

チキン浅胸部では，ふ化後12日日以降，対照

推直径分布は，ふ化後8週目まで対照と大差はなかった．

より線維直径の平均値が大きくなる傾向を示
し，特に12日目及び26日目では有意の高値を認めた．同様に，Dyチキン上腕二頭筋の直径

涜胸筋，上流二頭筋，排腹筋では，各動物につき300本ずつの線維直径を4m間隔にて平均値も，12日日以降33日日まで，いずれの測定し，各群3羽計900本の測定値に基づいて時期においても対照より有意に大であった（図1）．

megahistogramを作製した（Imaoka3），

筋線維直径の分布をみるため，各動物の二頭筋では，ふ化後12日目ですでに対照より

1979）．その結果，Dyチキンの浅胸筋，上腕PLDあるいはALD約500本についての直径

も直径の大きい筋線経が多くみられ，19日日

実測値を4JJ間隔に区分し，これを筋線維

以降では多数の大径線経のほか，小径線経も100本当りの分布数に換算し，各群3羽ずつ計

多く認められた（図3）．

；V Lごり∈空も﹂芸こ

e

こ

O一一一〇

5

12

19

26

33

5

DyStrOPhicchickens
ControIs

12

19

26

33

Day after birth

図I Averagediameterof musclefibersinthepectoralissuberficialis，
biceps brachiiand gastrocnemius muscle．
−21−

幻
48
0
揖
40

SLOqこ ヱUSコ∈−O J山上∈コN

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20

40

以）

楓）

1（氾

fiber diameter叫l

図2

Megahistograms offiber diameterin PLD・Muscle diameters are distributedwidelyin dystrophics（solidline）comparing with controIs（brockenline）・

図3

Megahistograms offiber diametersin thepectoralis superficialis，
biceps brachiiand gastrocnemius muscle．
The muscle diameters ofdystrophics（solidline）aredistributed
widelyfrom the early stagesin the former two muscles・−22−

DyチキンPLDではVaCuOlization，floc−

り，今回はPLDの変性程度を他の罷息筋のCu】ar degeneration，myOphagiaなどの病変それと比較することは出来なかった．今後，が認められるので，その出現頻度を知るべく，

連続切片あるいは縦断面の検索により，節性各動物の筋横断標本上にみられる病変筋線維の状態を明瞭にする必要があろう．

数を数え，これを総線維数に対する百分率で算出した．その結果，3週，5週，8週目の

総病変筋出現率は夫々0．25±0．17％，1．22±

DyチキンPLDを計測した結果

括0．75％，1．33±0．83％であり，16週目におい

1．総線維数はふ化後3週目にて約9，800本でては4．10±1．14％と増加したが，いずれも個あり，ALDのそれの約2．5倍に相当するが，体差が大きい．

対照との間に有意差はない．以後5週，8週目とも減少傾向を示すが，ふ化後16週目にて

考

案

対照に比し有意の減少を示した．

Dyチキンの罷患筋，特に浅胸筋やPLDは

2．筋線維直径の平均値は，ふ化後8週目ま肉眼的肥大が著しいのみならず，個々の筋線では対照との間に差はなく，16週日で有意の推直径が著しく大きくなるものが少なくない．

増大を示した．また線維直径の分布からみれ

この筋線維肥大の成因としては，胞体内mic−

ば，3週目から大径線経がみられ，5週，8roorganellaの増加と，myOblastの付加的癒

週目では小径線経の増加もみられた．これら合による肥大とが考えられるが，Dyチキン
においてactivated satellite cellの著しい増の結果を他の羅患筋と比較すると，発育期に加（Yorita4），1979）が認められる点からすれ頭筋よりも弱いと判断された．

あってはPLDの羅息程度は浅胸筋，上腕二ば，肥大原因としてmyoblastの付加的融合が最も考え易い．PLDの絶縁維数が，変性の文

献著しいふ化後8週日においてもなお，対照と

1）黒岩義五郎，石本進士，後藤幾生，ほか：

差がないことは，活発な筋線経の再生とその筋ジストロフィーチキンの発達過程におけ融合に基づくものと想像される．

る形態学的観察．筋ジストロフィー症の病

DyチキンPLDの線維直径平均値の著し因に関する臨床的研究（第二］旺），昭和53年

い増加は，他の罷息筋である浅胸筋や上腕二度研究報告書，1979，p．21．

頭筋に比較して，はるかに遅延する結果がえ2）埜中征哉，杉田秀夫：筋ジストロフィー鶏られた．PLDで大径線経の出現もまた，上記と人筋ジストロフィー症との対比一形態学の2筋に比べ，遅いようである．従って，発育期の同一時期で比較すれば，PLDの障害程的所見を中心に−．最新医学，35：907，

度は浅胸筋や上腕二頭筋のそれよりも弱いと

3）Imaoka，K．：Morphometric and hist0−

いえよう．ふ化後8週目のDyチキンPLDにchemical observationin developlng

認められた8／J以下の小径線経には，変性筋

musclesofdystrophicchickens．Yonago

線経も再生筋線経も含まれていると想像されActa medica．，23：106，1979．

1980．

るが，今後の研究にまたねばならない．

4）Yorita，T．：Satellite cell and muscle

ジストロフィー筋の変化は，一般に節性のregenerationinchickenmusculardystro−

変性と考えられるため，筋束横断面の変化を

phy．YonagoActamedica．，23：63，1979．

みて，変性の程度を判断することは無理であ−23−31）筋ジストロフィー鶏骨格筋の組織学的研究−αW線椎における横管系の増殖性変化と空胞出現の意義−埜 中 征 哉＊

研究協力者
は

じ

め

岡

田

理

美事

dorsi）をその検索の対象としたが，今回はに筋ジストロフィー鶏の主病理所見はヒト筋

αRとαW線経を明確に区別し易い後広背

ジストロフィーと同じく，筋線経の変性，壊筋につき検討した．電子顕微鏡写真は全て後死，それに続く再生の像である．ただヒト筋

広背筋からのものである．

ジストロフィーと異なり，白筋が選択的に侵鶏骨格筋に存在する3種の筋線維（赤筋でされること，筋線維内にしばしば空胞を認めあるβR，自筋であるαR，αW）の個々の筋ること，過収縮線維（opaque線推）がほとん

線維タイプと電子顕微鏡的特徴を検索するたど存在しないこと，Ca染色陽性線経が存在しめ次の方法で組織化学的所見と電子最頁微鏡的ないことなどより，筋変性壊死の過程がヒト

所見を対比させた．採取した筋は直にrela−と鶏では異なるのではないかと考えられていⅩing solution（5mM EGTA，4mM ATP，4mM MgSO4，130mM K−methansulfonate，

る1）2）．
，されていて，筋ジストロフィー鶏では未分化

20mM Tris，20mM maleate）（pH6．8，イ
オン強度0．21M）内にて1本の筋線経をとき

なαR線経というαW線経へ転換する以前

ほぐし，1本の筋線経はさらに2分割し，片の線経が数多く存在すること2）3）はその一つ

方は鶏肝の小片の上におき凍結し，1恥厚さの実証である．また筋線維内に存在する空胞の横断切片を得た．切片にはhematoxylin

は，ほとんど成熟型のαW線経に限ってみらand eosin，NADH−TR，ATPase，PAS染色れ，この空胞は筋変性に関して何か大きな役を行い筋線維タイプを決定した．2分割した割を果している可能性が示唆されている．

筋線経の残り半分はカコジレートNa後衛

我々は筋ジストロフィー鶏における空胞の意

2．8％グルタール液にて固定，さらにランタナ

義について，筋線推タイプとの関連のもとでム加OsO4液で1時間国定，アルコール脱水

電子顕微鏡的に検討したので報告する．

を行い，電子顕微鏡的に検索した．

さらに白筋では筋線経の分化の遅れが示唆

後広背筋の一部は採取した直後に小切し，対象・方法

ブロックとして，同じくカコジレートNa緩対象としたのは醇化後2−4月の筋ジスト

徳2．8％グルタール液にて固定，さらにランタ

ロフィー鶏（line413）とノその対照鶏（line412）

ナム加S−COllidine緩衝2％Os04で一昼夜後である．白筋である浅胸筋（pectoralissuper−

固定，脱水，エボン包埋，電子昆頁微鏡観察を

ficialis）と後広背筋（posteriorlatissimus

行った．

＊国立武蔵療葦所神経センター疾病研究第一部

−24−

結

より幅広いため両者は電子顕微鏡的に区別で

果（1）筋線推タイプの電子顕微鏡的特徴（図1）

きた．またαR線経のミトコンドリアは大型

a．浅胸筋のものが多く，2／J径を越えるものがしばし

成鶏浅胸筋（正常対照）は98％以上が単一ばであるが，αW線経では小型で2〝を越えのαR線経よりなることは知られている．そるものはみられなかった．

のαW線経はT管がZ線の高さを走ってお赤筋（βR線維）はZ帯の幅がさらに広く，
1000Aを越えた．また横管は非常に不規則にり，Z線の幅は500−600Aと狭かった．
b．後広背筋
成鶏後広背筋（膵化後4月の正常対照）で走っており，自筋のような規則性はないが，
大体A−Ⅰ結合上に存在する傾向にあった．

はαR線経が21．2％でその残りがαW線経（2）筋ジストロフィー鶏にみられる横管の異常であり，βR（赤筋）はごく少数であった2）．

ランタナムを固定の時使用すると，それは組織化学的にαW線経と決定された線経は横管系に入り，横管の異常を見出し易いとい横管がA・Ⅰ結合部にあり，Z帯幅は600−800A

われている．筋ジストロフィー鶏にみられるであった．組織化学的には同じαW線経で大きな変化は，横管の増殖性変化であった．

も，浅胸筋と後広背筋のαW線経は電子顕微

筋膜直下のCaVeOlaeは数を増し，しばし

鏡的に大きく異なった．αR線経も横管がA−ば蜂巣状構造（honeycomb structure）を形

Ⅰ結合上にあるが，Z帯が800−1000AとαW成していた．横管はその走行が不規則のものが増加し，縦走するものが多くみられ，横管そのものも数珠状になるなど形状の変化をみた．このような横管の異常はαW線経に限られており，αR線経はよく保たれていた（図2）．ただαR線経ではミトコンドリアは増加し，巨大化している傾向がみられた．
蜂巣状に増殖したCaVeOlae，横管は次に互に融合し，次第に大きな空胞となっていくと思われた（図3）．すなわち筋細胞内の空胞はこのような横管系の増殖性変化を初期基盤として起っていると考えられた．巨大化した空胞は，少量の膜状のもの，あるいは細い顆粒
ないし線推状のものを入れていることもある
が，完全に何も入れていないことが多かった（多分固定，脱水で内容物が失われたため）．
巨大空胞も筋膜下のCaVeOlaeと互に連結していたことから，それは横管系由来で筋細胞外と連絡していることがわかった（図4）．光
学顕微鏡的に壊死に陥りつつある線経にはしばしば空胞が存在することから，この空胞は筋線経の変性・壊死と大きく関連していると

図l 浅胸筋（Pect．Sup．）のαW線経，後広背筋（PLD）のαW，αR線経の電子顕微鏡的特徴．説明本文．

思われた．電子顕微鏡的にも，空胞の膜の一部欠損，その近縁部のmyofilamentの走行異常，Z帯の消失などmyofibrilの変性所見を
−25−

蜂巣状
図2 αW（W）線椎の膜直下のcaveolae（矢印）はその数を増しとなっている．横管は縦走するものが多く，それも数珠状となっている．．αR（R）線経では横管系の異常はない．×20，000

図3

Caveolaeは蜂巣状となり互に融合して次第に空胞を作りつつある（矢印）．かなり大きな空胞（星印）壁にもランタナムが存在し，これが横管由来であることを示している．×20，000
−26一

図4

筋膜下にある大きな空胞の壁はcaveolaeと明らかに連結（挿入部矢頭）していて，空胞が細胞外と交通していることを裏づけている．
×20，000，×40，000（挿入）図5 空胞の一部は明らかに膜が欠損（矢頭）しており，その近辺のmyo・
fibrilはZ帯の消失や走行の乱れ（矢印）を示す．×6，000−27−得た（図5）．

αW線経にみられる横管系の異常とは主次に電子顕微鏡でみられるのは，完全に壊としてその増殖性変化である．筋膜下に配列死に陥った筋線経でこれには多数の会食細胞

するCaVeOlaeを含め横管は盛んに蜂巣状構を入れていた．このような終末的所見からは造（honeycomb struCture）を作り，新しい空胞と筋変性の関連はもはや推定され得なか横管の形成とともに，蜂巣構造物は融合してった．再生線経の存在も電子顕微鏡的所見よ一つの空胞となる．空胞は単に融合によるだ

り確かめられた．

けでなく，多分何らかの機序により次第にその大きさを増し，数ミクロンあるいは10ミク

考察

ロン径を越えるような巨大なものに到ると考筋ジストロフィー鶏の骨格筋の変性過程はえられる．この空胞は膜でかこまれていて，まだ充分に明らかにされていない．なぜ白筋

筋形質とは自由に交通はしていない．空月包がのみが侵されるのか，またなぜ同じ白筋でも膜直下のCaVeOlaeと連絡している図4はこ浅胸筋，後広背筋，下月支筋では侵され方が異の空胞が細胞外と交通していることを物語っなるのか，そのような問題を解決する試みとている．これら空胞が横管系由来であろうこ

して今回は筋線推タイプと病変の発現の関連とは，traCerを使った研究やfreezefracture

性を追求して実験を行った．

法による研究によっても確かめられてい

組織化学的には鶏の白筋はαRとαWのる5）6）．

2種の筋線経に分けられている2）3）．前者は空胞は筋細胞外脛と交通していることから，

NADH−TRやSDH染色などでやや大型の細胞外液で満たされていると思われる6）．もdiformaZan顆粒をもちPAS陽性物質に乏し空胞の膜の一部が欠壬員でもすれば，外液がしく，phosphorylase活性の低いことで特徴

細月包内に流入することになる．外液にはCa＋＋づけられるが，ATPase染色ではαRとαWが高濃度に含まれているので，細胞内のCa線経は区別できない．αR線経は発育過程に依存性中性プロテアーゼ（CANP）のようなおけるαW線経の前段階の線経といわれ，浅酵素が高Ca濃度下で活性化され，Z帯の消胸筋では膵化当時αR線経であったものが化にはじまるmyofibrilの崩壊をひき起すと2−3週令までにαW線経へと変換する．後考えられる．部分的な筋の崩壊はついで大き広背筋ではその変換は遅れ成鶏でも20％内外

な壊死部を作り，そこには貪食細胞が侵入しのαR線経が存在し，下肢筋では白筋の約半て清掃が行われ，さらに筋再生へとつながる

数はαR線経である．光学顕微鏡では同じ線のであろう．

維タイ70でも，浅胸筋と後広背筋では電子顕微鏡的に構造上かなり異なっていることが明文らかとなった．

献1）Mendell，J．R．，Higgins，R．，Sahenk，Z．，et

筋ジストロフィー鶏では，このαR線経がal．：Relevance ofgenetic animalmodels

αW線雄へと変換してから筋ジストロフィ

Of muscular dystrophy to human mu−

ーとしての筋変性・壊死の所見が出現するのSCulardystrophies．Ann．N．Y．Acad．Sci．，

ではないかといわれている3）4）．今回の実験か

317：409，1979．

らは初期変化として出現する横管系の異常は

2）埜中征哉，春原経彦，杉田秀夫，ほか：筋αW線経に限られていることが電子顕微鏡

ジストロフィー鶏骨格筋の組織学的，組織的にも確かめられた．αR線経はmitochond−

化学的研究，−Duchenne型筋ジストロフ

riaの数の増加と巨大化が目立つ所見であっィー症との対比一．神経内科，3：259，

た．

1979．

一28−

Doerr，L．：Postnatal

dystrophy．The geometry of the tran・

developmentoffibertypesinnormaland

SVerSe tubules．Am．J．Patho1．，84：299，

dystrophicskeletalmuscle ofthechick・

1976．

3）Aslmore，C．R．＆Exp．Neuro1．，30：431，1971．

6）Libelius，R．，JirmanOVa，Ⅰ．，Lundquist，Ⅰ．，

4）Beringer，T．：Sterologic analysis ofetal．：T・tubuleendocytosisindystrophic

normalanddystrophicavianαWfibers．

Chickenmuscleanditsrelationtomuscle

Exp．Neuro1．，61：380，1978．

fiber degeneration．Acta Neuropathol．
（Berl．），48：31，1979．

5）Malouf，N．N．＆Sommer，J・R・：Chicken−29−4）ジストロフィーチキンにおけるactivatedSatellite ce11について（II）−電顕ラジオオートグラフィーによる観察−

小

口

喜三夫＊

研究協力者

永

田

哲

士＊＊

冷蔵庫内で露出した．Gold−latensificationに

昭和54年度の本姓会議で3H−thymidine（3H−TdR）の光顕ラジオオートグラフィー

より増感Lphemidon現像液で現像し定着をの研究から，3H−TdRを取り込む（DNAが合行った後クエン酸鉛（Reynolds）にて染色し成されているS期の細胞であることを示す）

た．日立HS・9型電顕で観察した．

Satellite cell，すなわちactivated satellite
Cellがジストロフィーチキンふ化後21日目の大胸筋の表在筋において正常コントロールよ結果dy−チキンおよびCOnt−チキン共にgold−

り増加していることを報告1）した．今回は電latensification−phenidon現像により顕ラジオオートグラフィーによりactivated

3H−TdRが取り込まれた核には，球形の銀粒

Satellite cellの微細構造を検索することを目子の標識が観察された．鋭粒子の最大飛程は的とした．

約1JLmであった．3H−TdRにより標識された核の形態は，球形のものから楕円形（図1）方法まであり，核膜の凹凸のみられるものもあっ

材料はジストロフィーチキン（dy−チキン），line413とコントロールチキン（cont−た（図2）．核内のheterochromatinの量は多いものから，比較的少ないものまで種々であチキン），line412のふ化後1日目と21日目のり，また染色体に標識された核分裂の状態の各々2羽ずつ合計8羽の大胸筋を用いたものも観察された（図3）．3H−TdR標識核の3H−TdRを6時間毎に4回，50−67JLCi／gbw

細胞質の形態は，細胞質の少ないもの（図1）を腹月空内に注射した．最終注射6時間後に屠から，細胞質が多くpolysomes，粗面小胞殺し，直ちに大胸筋を採取，カコジル酸緩衝体，mitochondriaが認められるものまで観察

3％グルタールアルデヒドで20分間固定，カされた（図2）．Activated satellite cellのコジル酸緩衝液中にて24時間洗盲條後1％オス

細胞質と筋細胞との問の形態は，両者の形質ミウム酸で1時間30分後固定を行い，アルコ

膜で境されているものが殆どであったが（図ールとプロピレンオキサイドで脱水処置後，

1），一部のactivated satellite cellで筋細epon−aralditeに包埋した．厚さ500−800Aの胞の形質膜とSatellite cellの形質膜間隙が超薄切片を作製し，wire・loop法2）により狭まり，格子様構造の形態を示すものが観察

SakuraNR−H2を適用し，60〜90日間40Cのされた（図3，挿入図矢印）．dy一チキンとcont−チキンにおけるactivated satellite
Cellの微細構造上の形態的変化の差は認めら＊信州大学医学部第三内科＊＊信州大学医学部第一解剖

れなかった．
−30−

図I ASC：activated satellite cellの核．
基底膜を共有し，筋細胞とは形質膜で境されている．核上に銀粒子の標識がみられる．

図2

ASC：activated satellite ce11の核．m：ミトコンドリア．
核上に銀粒子の標識がみられる．核膜に凹凸がみられ，細胞内にミトコンドリア（m）が認められる．

−31一

図3 ASC：activatedsatellitece11の核．SC：satellitecellの核・
ASCは核分裂を示している．染色体上に銀粒子の標識がみられる・
挿入図の矢印に示す如く，筋細胞の形質膜とactivatedsatellitec。11の形質膜が接着し格子様構造が認められる．

考は筋細胞に取り込まれ筋核となることを証明

察した．

Mossら4）は生後17E】のラットを使用して，
3H−TdRを25〜60JLCi／gbwを投与し，投与後今回の我々の電顕ラジオオートグラフィー

1時間から72時間後に屠殺し，その排骨筋をの結果は，6時間毎に4回3H−TdRを腹腔内使用して電顕ラジオオートグラフィーを行
い3H−TdR注射後1時間で基底膜内の核の約

一チキンおよびCOnt−チキンの大胸筋を検索に注射し最初の注射から24時間後屠殺し，dy3％が標識され，これらは総てSatellitecell

したが，筋核に3H−TdRが取り込まれたことであったと報告している．彼等は注射後24時は観察し得た限りではなかった．3H−TdRで間では3H−TdRで標識された筋核が小数出現標識されたactivated satellite cellの核のし，48時間では増加，72時間ではSatellitecell

heterochromatinの分布や量には特別な特徴

より多くなっており，Satellitecellはラットは見出されなかった．3H−TdRを取り込んだの成長と共に分裂し，myOblastとしての機能

時期は細胞周期のS期に相当すると考えらを持つと結論した．さらにMossら5）は同様

れるが，小数の核では組織を採取した時期にの実験から，SatellitecellはDNA合成能をM期に移行していたと思われ，核分裂の像持つこと，3H−TdR投与後1時間と24時間の（図3）も観察された．その所見はMossら5）が指摘した分裂を示すものに相当すると考え標識された核数を比較すると24時間後では2られる．
Activated satellite cellの形質膜と筋細胞倍になっていることからSatellite cellが分裂することを確認し，分裂後にSatellitecell
一32−の形質膜の形態に注目すると，多くの場合両文

献者の形質膜に変化を認めず，両者の形質膜間1）小口書三夫，永田哲士：ジストロフィーチ

隙は約300Aであったが，一部に図3に示す

キンにおけるactivated satellite cellにつ如く両者の間隙が接近あるいは接着し格子様いて一光顕ラジオオートグラフィーによる構造が認められたことは，aCtivatedsatellite

検討一．厚生省「筋ジストロフィー症の病

Cellが筋細胞への取り込みを示す所見と考え因に関する臨床的研究」昭和54年度研究報られる．この格子様構造はS期，M期のacti−

告書，1980，p．37．

Vated satellite cellに認められた．又acti−

2）Yoshida，K．，Murata，F．，etal：Amodified

Vatedsatellitecellの細胞質内細胞小器官，

Wire−loop method for quantitative elect−

すなわち，pOlysome，粗面小胞体，Golgi装ronmicroscopicradioautography．Histo・

置，mitochondria等の形態および増減とそのChemistory，57：93，1978．

格子様構造との間に特別の関係は認められな

3）村田長芳，永田曹士：LIGOP法：電買戻ラジかった．

オオートグラフィーの新しい現像法の経験．
医学のあゆみ，113：896，1980．

結語4）Moss F．P．＆Leblond C．P．：Nature of

1）静止状態のSatellite cellとactivate
Satellite cellの鑑別は電顕でも不可能である

dividing neuclei

inskeletal muscle ofgrowing rats．J．Cell Boi1．，44：459，

が，電顕ラジオオートグラフィーによりacti−

1970．

Vated satellite cellの同定は容易にできた．

5）Moss F．P．＆ Leblond C．P．：Satellite2）activated satellite cellが筋細胞に取り

cells as the source of nucleiin muscles

込まれる所見が得られた．

Ofgrowing rats．Anat．Rec．，170：421，
1971．

−33−

5）ジストロフィーチキン筋細胞膜のフリーズ・
7ラクチャーによる観察

高 守 正 治＊
研究協力者

吉

村

俊

朗＊

辻

畑

光

宏＊

定し，酢酸ウラニールで染色後，エボン包埋

近年，筋ジストロフィー症で赤血球1）や筋細胞の膜異常2）が注目されている．そこで，した．超薄切片を作製し，酢酸鉛で染色し観

dystrophy chickenの胎生期から僻卵開始後察した．

30日目までを対象にし，筋細胞膜内の結particleの減少がどの時期に認められるのか果

婿卵開始後10日日の大胸筋では，図1に示を，Freeze−Fracture法で検討してみた．

すように，HE染色で欄包体が染まらない核のDystrophy chickenとCOntrOIchickenのみの細胞と，Eosinに染まる胞体をもつ細胞との2種類の細胞で構成されている．電子顕

僻卵開始後，10日（dystrophy3羽，COntrO1

微鏡でみると，大部分が核でしめられ，胞体

方法3羽），20日（dystrophy3羽，COntrO12の少ない糸田胞と胞体があるものでは，myO−羽），30日（dystrophyl羽，COntrOll羽）の

filamentの出現が認められる．HE染色で核それぞれの大胸筋を用いた．筋線経の横断ののみにみえたものは，myOblast，胞体を有す

凍結切片をつくり，HE染色したものを，光学るものはmyocyteもしくはmyotubeに相当

顕微鏡400倍で，筋線経の直径を測定し，するものである．この時期の筋細胞の直径は，Histogramを作成した．Freeze−Fracture用胞体のあるmyocyteの直径を測った．
表1に示すように，僻卵開始10日目では，

標本は，3％グルタールアルデヒドで，4時間固定後，徐々に30％グリセリンまでに濃度をあげ，40Cで1晩保存後，簡易形フリーズ・ェッテング装置を用いて一1030C，1〜3×
10￣6Torrの条件下で割断し，白金バナジウムで蒸着し，レプリカ膜を作製した．最終倍率
189，000倍で，3cmX3cmのparticleの数を数え，CaVeOlaeは，同じ拡大率で，15cmX
15cmの面積のCaVeOlaeの数を求めた．part−icleとCaVeOlaeは，それぞれ1JLm2当りの密度を計算して求めた．particleはおおよそ，
5〜20／Jm大の数を数えた．将卵開始後10日

図l目の大胸筋は，3％グルタールアルデヒドで，酵卵開始後10日目のdystrophy群の大胸筋のHE染色．胞体が染まらない核のみの細胞（myoblast）と胞体を有する細胞（myocyteもしくはmyotube）が4時間固定ののち，2％オスミウム酸で後圃混在している．（700倍）＊長崎大学医学部第一内科

−34−

表l

dystrophy群で540／JLm2と減少し，P面も同筋細胞の平均直径（／〝m）
10d ays

20 day s

様にCOntrOl群870／JLm2，dystrophy群740／30da ys〟m2と減少を示した．僻卵開始30日目では，E
C o ntrolD y s tr o p h y

9 ．
2±3．
1

5．
0 ± 1．
8 ＊ 5 ．3 ± 1 ．
6＊

n ＝
＝13 5

n ＝ 3179，3 ± 2 ．7
nこ
こ1 4 8

5 ．
9±1．
9ヰ7．
4 ±2 ．
9■
n ＝44 5＊Significantly

n ＝ 10 4

面のparticle密度は，COntrOl群で970／FLm2，
dystrophy群で670／FLm2と減少し，さらにP面でも，COntrOl群1440／jLm2，dystrophy群
1，100／JLm2とdystrophy群でparticle密度の減少が認められた．

n ＝ 228

さらに，particleの密度はP面とE面で比different（p＜0．001）

べてみると，僻卵開始10日，20日，30日でいCOntrOl群とdystrophy群ともに9．2FEmとずれも，P面に多く，E面のparticle密度は，9．3／Jmで有意差は認められなかった．卵字卵開

P面のparticle密度の平均6割に相当する．

始20日員になると，COntrOl群5．OJLmに対し，particleの密度は酵卵開始後，10日，20日，30
日と成長とともに増加していく．

dystrophy群は，5．9JLmと筋直径が大きくなっている．膵卵開始30日目では，COntrOl群
5．3JLmに対し，dystrophy群は，7．4jLmと筋細胞の肥大が認められた．

Caveolaeの密度は，僻卵開始後10日日で，E面ではCOntrOl群で3．0±3．5／JLm2，dystro−
phy群で1・0±1．0／JLm2，P面では，COntrOl群

図2には，酵卵開始30日目のdystrophy群

で3・0±2・0／JLm2，dystrophy群2．0±1．7／のP面とE面を示す．この写真で認められる〟m2と有意差はなく，僻卵開始20日目でもE

ようなparticleとCaVeOlaeの数を数えた．

面は，COntrOl群6．9±6．0／JLm2，dystrophy群

表2にその結果を示す．僻卵開始10日目は，

7．2±5．3／JLm2，P面ではCOntrOl群7．2±

E面のparticleは，COntrOl群200／JLm2，

5・2／JLm2に対し，dystrophy群6．9±4．4／JLm2

dystrophy群160／FEm2，P面ではCOntrOl群
370／FLm2，dystrophy群360／FLm2と，COntrOl

で統計的な有意差は生じなかった．さらに将卵開始30日目では，E面でCOntrOl群21．8±

群とdystrophy群の間に統計的に有意差を11・7／jLm2，dystrophy群15．7±7．0／FLm2，P

認めなかった．将卵開始後20日目になると，面でCOntrO114．9±9．2／JLm2，dystrophy
13・0±7．6／JLm2といずれの時期にも，CaVe−

E面のparticleはCOntrOl群で，650／JLm2，

（a）

（b）

図2 酵卵開始30日目のdystrophy群のE面（a）とP面（b）（36，750倍）
一35−

表2 Particle density（実測値）
E

fa c eC o n t ro l（／ 〟m Z）
D ystroph y

2 0 0 士 13 0
10 d ays

2 0 day s

30

day s

P

fa c e（／ 〝m りC ontrolD ystroph y

16 0 ± 9 0

370 ± 170

36 0 ± 140

n ＝74

n ＝ 62n ＝8 5n ＝ 87650 土25 0

54 0 土 2 8 0 ■87 0 ± 220

74 0 ±30 0日

n ＝83

n ＝ 81n ＝86

n ＝ 106970 ±28 0

67 0 士20 0 日

144 0 ±26 0

1 10 0 ± 3 2 0 日

n ＝49

n ＝4 5n ＝38

n ＝ 51・Significantly different（p＜0．01）‥Significantly different（p＜0．001）

01aeの密度には，有意差は生じなかった．しか示したように，dystrophy群は，COntrOl群にし，卵字卵開始後，成長とともにcaveolaeの密度は増加している．

比べ，筋細胞直径は酵卵開始20日目で1．2倍，30日目で1．4倍になっている．筋線経を幾何図形の円柱にたとえると，筋細胞表面積は筋細考

按

胞の直径に比例することになる．単に筋線経

Freeze−Fracture法は，細胞を凍結割断しが肥大したために，particleの密度が減少して割断面に出現した構造に重金属で陰影をつてみえると考えれば，dystrophy群のparti−

け，薄い炭素の被膜とともに観察し，細胞膜内部構造をみようとする方法である3）．細胞cle密度をその筋直径の比，1．2と1．4で補正

凍結試料中の膜は，自然の状態において最も20日目のE面は，dystrophy群は，630／FLm2と抵抗の弱い連続的な層（脂質二重層）にそっなり，COntrOl群の650／JLm2とその差はなくなてへき開され，細胞膜の内面が割断面上に露る．またP面もdystrophy群は860／JLm2とな

出されることになる4）．そこで，dystrophy
Chickenの大胸筋筋細胞且莫において，particle

りcontrol群870／JLm2と差はなくなる．
30日目のE面においても，dystrophy群は（膜内粒子）とCaVeOlaeの変化をみる方法

910／JLm2となり，COntrOl群970／JLm2と有意差として，Freeze−Fracture法は利用できる．現がなくなり，P面ではdystrophy群が1490／

在までに，この方法によって，particleの密度

JLm2となり，COntrOl群1440／JLm2と有意差がなくなる．

することができる．表3にその補正値を示す．

に差があったとする報告5）がある．ところが，particleの密度は報告書により様々で，dys−

表3 Particle density（純正仙）trophy群が，COntrOl群に比べ増加しているとの報告も減少しているとする報告もある．

．
E

fa ce （／ 〟nf ）

P

fa ce

（／ 〃nf ）その原因として，一つは凍結割断から，重金C o ntro l

D y s tr op Ily

C o n trolD y s tro plly

2 0 da ys

65 0 ± 25 0

63 0 土3 30

87 0 ± 22 0

86 0 ±3 5 0

3 0 da ys

97 0 土 28 0

91 0 ±2 70

14 4 0 土26 0

1 49 0 土4 6 0

属で陰影をつけるまでの間のartifactの関与も考えられる．また，Freeze−Fracture法
は，あくまでも影の観察であり，どのような状態の細胞の細胞膜かも問題となる．表1で−36−

Caveolaeにフいても，同様のことが成立す

2種類のみで，偶然に，数字が一致しただけ

るはずである．僻卵開始20日目のE面は，かもしれず，今後さらに検討を要する問題である．

dystrophy群で8．2±6．3／JLm2となり，COnt−
ro16．9±6．0／〝m2との差は生じないし，P面も同様にdystrophy群8．1±5．2／FEm2，

ま

と

め

COntrOl群7．2±5．2／JLm2となり，有意差は生（1）Dystrophy群の筋細胞膜内particleのじない．膵卵開始30日

dystrophy群22．0±9．9／JLm2，COntrOl群は密度の減少が，卯字卵開始20日で認められた．
（2）筋細胞内particleの密度とCaVeOlaeの21．8±11．7／JLm2，P面はdystrophy群18．7±

密度は，Chickenの発育とともに多くなって

10．0／FLm2，COntrOl群14．9±9．2／JLm2となり，いく．

dystrophy群とCOntrOl群との問にいずれも（3）筋線推直径の差は卵字卵開始20日頃より生

統計的に有意差を生じない．これは，じている．

日ではE面でCaVeOlaeも，189000倍の最終倍率で，15cmX
15cmの面積のCaVeOlaeの数を算出し，しかも，その対象となった数が少ないことが統計

文

献1）Wakayama，Y．，etal：Alterationin

的に有意差が生じなかった原因と考えられ，

erythrocyte membrane struCture in

広い面積で，もっと多くの症例を検討すれば，CaVeOlaeに関しても，particleと同様の結論

Duchenne muscular dystrophy．Ann．

になる可能性も否定できない．

Neuro1．，4：253，1978．
2）Schotland，D．L．，etal：Applicationof the

問題点として，長さも変化する筋線経を円

freezefracturetechniquetothestudyof

柱として仮定したうえでの計算であることがhumanneuromusculardisease．Muscle＆

あげられる．さらに，対象とした大胸筋の筋

Nerve，3：21，1980．

直径は表1に示すように，5〜9／Jmと小さ

3）Koehler，J．K．，：Advanced techniquesin

く400倍の倍率での測定はより多くの誤差がbiologicalelectronmicroscopy．Springer

生じやすいことと，対象となったChickenのVerlag Berlin Heidelberg，New York，

数がそれぞれ1羽から3羽と数が少ない点な

1973，p．67．

どが考えられる．

4）Branton，D．，：Fracture faces of frozen

Particleの密度が筋直径で補正されること

membranes．Proc．N．A．S．，55：1048，

で統計的に有意差がなくなった．このことは，

1966．

筋細胞膜内のparticleの密度の減少が，筋ジ5）Brian，R．，et al．：FreezeTFracture study

ストロフィー症での筋肥大にともなって生じOf muscle plasmalemma dystrophic

た変化である可能性を示唆することになる．

Chickens．Muscle

しかし，対象となった筋細胞は20日と30日の

1979．

−37−

＆

Nerve，2：191，

6）正常及び筋ジストロフィーチキン培養骨格筋に対する交感神経の影響（2）−アセチルコリンエステレース及びカテコラミン染色による検討−

塚 越
研究協力者

虞＊

小 林 高 義＊＊ 栢 沼 勝 彦＊＊
半田康 延＊＊＊ 志 水 義 房＊＊書

昨年の班会議で，骨格筋を単独培養した場
合は，筋ジストロフィー（以下筋ジスと略す）

出し，培養液中で細切し，コラーゲン塗布カ
バースリップにexplant L，2E］後13日目の筋は正常筋に比し早く変性崩壊すること．交正常及び筋ジス鶏胚から頸部交感神経節を同感神経節の単独培養では，筋ジス，正常との様にとり出し，周囲の結合織を充分とり除き，間に差を認めないこと．さらに，筋と交感神併置培養する場合には，大胸筋より約2−3

経節を併置培養した場合は，筋は単独培養よmm放してexplantした．骨格筋及び交感神

り長期間維持されること．しかし，筋ジス筋

経節の単独培養，ならびに相互に併置して培では正常ならび筋ジス交感神経節のいずれの養する組み合わせを以下の如く作成した．A

併置培養でも，正常筋単独培養に比し早く変正常筋のみ，B性崩壊することなどを報告し，交感神経は骨感神経節のみ，D 筋ジス交感神経節のみ，筋ジス筋のみ，C

正常筋＋正常交感神経節，F

正常交格筋に対しtrophic effectをもってはいるが，E

筋ジス筋の変性は筋自身の問題が大きいこと

筋ジス交感神経節，G

正常筋＋を指摘した1）．今回は，筋と交感神経の相互関

神経節，H 筋ジス筋＋筋ジス交感神経節．

係をみるために，筋腹に存在するacetyl−

培養液は，Eagle

cholinesterase（以下AChEと略）活性の微細

salts80％，馬血清15％，Embryojuice（鶏な構造をみる目的で，AChE染色ルベアン酸

胚9日目）5％，penicillinG200u／ml（glucose

増強法を適用すると共に合わせてCateChola−

5g／1含有，NaHC03でpH調整）を使用し，mine（以下CAと略す）染色を行い，CA含週3回培養液を交換した．倒立位相差顕微鏡

有細胞，CA陽性線経との関係を検索した．

で経時的観察を行い，同時にBodian鍍銀染

筋ジス筋＋正常交感

s MEM with Hanks

色，AChE染色として，Karnovsky−Roots変実験方法

法（bufferpH5．0）を用いた．さらにAChE

正常及び筋ジス鶏胚11日目（Line412及び活性の微細な構造をみる目的で，反応産物の413）の大胸筋を実体顕微鏡下に無菌的に取り拡散防止のための寒天による被覆と，COpper
ferrocyanideをルベアン酸により黒化させるルベアン酸増強法（中村，1979）を行った．

＊東京医科歯科大学医学部神経内科＊＊信州大学医学部第三内相

またCA染色として，FGS法及びglyoxylic＊＊＊信州大学医学部第二解剖

acid法（Furness＆Costa，1975）を行った．
−38−

実験結果

併置培養では約4退以降より筋細胞が変性崩

表1に，交感神経の培養骨格筋に対する影壊を示し始め，AChE活性部位の拡散が認め

響に関する実験のまとめを示した．

られたが，正常筋の併置培養では，6週以降でも維持された．

筋単独培養では，eXplantより筋細胞が放〔CA染色〕

射状に伸び出していくのに対し，併置培養では，いずれの組み合わせでも両explant間にFGS法では，正常，筋ジス交感神経節培養

筋細胞が密に走り，その間に神経線経が走るのいずれの場合でも，eXplant内の大型神経

bridgeが形成される．以下主としてこの細胞及び遁走した小型神経細胞の胞体内に

bridge部におけるAChE及びCA染色所見にCA陽性の螢光を発する顆粒を認めたが，交ついて述べる．

感神経線経には，はっきりした螢光を認めな〔AChE染色〕かった．一方glyoxylicacid法では，大型神いかなる組み合わせでも，培養1〜2週頃

経細胞及び1、型神経細胞の胞体内に螢光を認に，Karnovsky−Roots変法によるAChE染める（図2−A，C）と共に，eXplantより色で，bridge部の筋腹に数pm一十数JLmの放射状，網目状に伸び出している交感神経線

点状あるいは線状のAChE活性を認める（図経にCA陽性の螢光を認めた（図2−B）．一1−A）．一方，ルベアン酸増強法では，Karno−

方，筋と交感神経節の併置培養では，両ex−

VSky−Roots変法に比べ，より鮮明にAChE

plantのbridge部で，一部に筋細胞に沿っ活性が抽出される．この方法では，図1−Bて，螢光を発する神経線経が認められる（図〜Eの如く，三日月状あるいは核をとりまい2−D）のみで，Bodian鍍銀染色で，多くのて半円状のAChE活性が認められた．培養3

密に走る神経線経が存在する（図2−E）にも−4週には，このAChE活性部位は，更に筋かかわらずCA染色で螢光を発する線経は極のexplant内及びexplantより放射状に伸びめて少数であった．このような現象は，筋と出している筋細胞の筋腹にもmultipleに認交感神経のいずれの組み合せでも同様であっ

められた．しかし，筋ジス筋と交感神経節のた．

表l 交感神経の培養骨格筋に対する影響
組

み

合

わ

せ

培養 所 見catec holam ine 染 色

A C hE 染 色

交 感 神経 細 胞

交 感神 経 線維

（
」

（
巾

放 射 状 ，網 目状 に（
巾

H

（
巾

A 正 常 大 胸 筋 のみ

5 週 頃 よ り変 性H

B 筋 ジス 大胸 筋の み

3 週 頃 よ り変 性HC 正 常 交 感神 経 節 の み

6 週 以 上 維持

D 筋 ジス交 感 神 経節 のみ

JJ

E 正 常 大胸 筋 ＋正 常 交感 神 経 節JJH

m u ltiple（
巾

F 正常 大 胸 筋 ＋ 筋 ジ ス交 感神 経節

／
／

（り

II

ト）

〃

（り

G 筋 ジ ス大 胸 筋 ＋正 常 交 感神 経 節筋は 4 週 以 降 変 性

（
巾

JJ

（
巾

JJ

（
胡

H 筋 ジス大胸 筋 ＋筋 ジス交感神経節

J／

（
巾

〝

川

〝

（
巾

ー39−

II

川

一 部の 神 経 線経 に（巾図I AChE染色顕微鏡写真
A．正常筋21日目，正常交感神経節19日日併置培養．横紋形成した筋の筋腹にmultipleにAChE活性を認める．AChE染色（Karnovsky−
Roots変法）．×640
B．ジストロフィー筋14日目，ジストロフィー交感神経節12日日併
置培養．
C．ジストロフィー筋14日目，正常交感神経節12日目併置培養．
D，E．正常筋7日目，正常交感神経節5日目併置培養．
B〜E AChE活性が，三日月状あるいは，核をとりまくようにして半円状に筋腹上に認められる（矢印は交感神経線維束を示す）．B，CX640，D，EXl，600
AChE染色（ルベアン酸増強法，中村）

一40−

図2

カテコラミン染色螢光顕微鏡写真

A〜C ジストロフィー交感神経節単独培養13日目． A．explant内の交感神経細胞の胞体にカテコラミン陽性の螢光を認める．×150
B．explantより放射状，網目状に伸び出している交感神経線経に，カテコラミン陽性の螢光を認める．×150
C．explantより遁走した小型神経細胞（矢印J）の胞体内に，カテコラミン陽性の螢光を認める．×300
D．ジストロフィー筋17日臥正常交感神経節15日目併置培養．筋細胞（M）に平行に走っている交感神経線経の一部に，カテコラ
ミン陽性の螢光を認める（矢印）．×340
E．ジストロフィー筋30日目，正常交感神経節28日昌併置培養．Dに比し，鍍銀染色で多数の交感神経線経が，筋細胞に治って併走している．×270
A〜D カテコラミン染色（glyoxylic acid法，FurneS＆Costa） E．Bodian鍍銀染色
−41−

考

した．またCMを加えても交感神経細胞数に察

我々は，正常鶏胚（WhiteLeghorn）を使は変化がなく，神経細胞の蛋白，脂質成分に用し，培養骨格筋が交感神経節の併置培養にも変化が認められないことから，神経細胞のよって，単独培養した場合に比べて長期に維一部（sympathetic cholinergic neuron）が持され，両explant部に交感神経線推及び筋

選択的に残存あるいは分化，成長したのでは細胞からなる太いbridgeが形成され，交感神

なく，個々の神経細胞がCMの影響により

経が骨格筋に対し直接的なtrophicな影響のACh産生細胞へ転換したと考えた．さらに彼あることを示した．更にその筋腹上にはボタ

らは，ラットの血管，心筋，骨格筋，胎児線

ン状あるいは数珠状の膨みをもった神経終末

推芽細胞，ラットL8骨格筋株細胞のCMにが認められ，その部位に相当すると思われる

よって，交感神経細胞培養液中のACh／CA

部位に限局した点状あるいは線状のAChE比が著しく上昇することを認めている5）．ま高活性を認め，組織化学的に交感神経が骨格

た，Furshpanら6）は，ラット交感神経細胞と筋に対しCholinergiCの終末を持つことを示

心筋のmicrocultureで，電気生理学的に抑制

した2）．

性（ACh分泌細胞），興奮性（CA分泌細一方，今回の筋ジス（Line413）及び正常鶏胞），抑制性→興奮性（ACh＋CA分泌細胞）

胚（Line412）の骨格筋と交感神経節の併置培の三種のニューロンのあることを認めた．さ

養では，いずれの組み合わせでもAChE活性らに，Reichardtら7）及びNurse8）は，交感神を筋腹にmultipleに認め，その活性部位の形

経細胞と心筋あるいは骨格筋をmicrocul−

態，数とも組み合わせ間に明らかな相違は認

tureした場合は，80−90％の神経細胞がコリめられなかった．このことは，交感神経は筋ン作動性となるが，交感神経単独培養では，ジス，正常骨格筋に同じ様なCholinergiCのコリン作動性のものは0％であったと報告し終末を形成している可能性を示している．そている．以上の実験結果より考えると，培養れにもかかわらず筋ジス筋が早く崩壊することは，交感神経が筋の維持に何らかの役割を下においては，ある種の非神経性細胞の存在，あるいはそれらによるCMによって，交感神果しているものの，筋ジス筋の変性，崩壊は経細胞における神経伝達物質の生成に，可塑

筋自身の要因が大きいと考えられる．

性（plasticity）が生ずるものと思われる．

ところで，Mainら3）は，交感神経節の培養

我々の実験における筋と交感神経節の併置において，ほぼ完全に非神経性細胞が取り除かれている環境下では，ほとんどの交感神経培養において，両explant間に形成される細胞はアドレナリン作動性ニューロンになる

れCholinergic fiberが多数存在しているこ

bridge部に，多くのAChE活性部位が認めらと報告している．一方Pattersonら4）は，分艶とを示していた．このことは，adultにおいて培養した新生ラット交感神経細胞に，交感神

Sympatheticcholinergicneuronとなる神経

経節より取り出した非神経性細胞（それ自身細胞が，培養骨格筋に対し，CholinergiCな終にACh塵生能はない）を加えると交感神経末を形成した可能性も考えられる．しかし，細胞のCA産生蓄積に対する効果はほとんど

bridge部に多くの神経線経が存在するにも認められないが，ACh産生を著しく冗進させかかわらず，CA陽性線経が極めて少数であることを報告した．更に，培養液中にラットったこと，及び，先に述べた如く，培養下で心筋のCOnditionedmedium（以下CMと略）は幼若な交感神経細胞が，その環境により，を加えると，CholineからAChへの産生が，そtransmitterの塵生にplasticityのある事実のCM濃度に比例して増加し，反対に，nOr−などから，交感神経が骨格筋の影響を受けて，

epinephrineの産生，蓄積は減少することを示

コリン作動性となった可能性が強いことが推−42−察された．

59：329，1973．

4）Patterson，P．H．＆ Chun，L・L・Y・：The結

influence of nonneuronal cells on cate−

語

1．正常及び筋ジス筋と交感神経節の併置

cholamine and acetylcholine synthesis

培養で，いずれの組み合わせでもAChE活性

andaccumulationinculturesof dissoci−部位を筋腹上にmultipleに認めた．

atedsympathetic neurons．Proc．Nat．
Acad．Sci．USA，71：3607，1974．

2．正常，筋ジス交感神経節単独培養では，

5）Patterson，P．H．＆

交感神経細胞，線経ともCA陽性を示した．

Chun，LL・Y・：The

3．筋と交感神経節の併置培養では，いずinduction of acetylcholine synthesisin

れの組み合わせでも，両explant間に形成さprimarycultureofdissociatedratsympa−

れるbridge部では，多数の神経線経が存在す

thetic neurons．I．Effects of conditioned

るにもかかわらずCA陽性を示す線経は極め

medium．Dev．Bio1．，56：263，1977．

て少数であり，交感神経が骨格筋の影響を受

6）Furshpan，E．JリMacleish，P．H．，＆0

Lague，

P．H．，et al：Chemical transmission be−

けコリン作動性に転換したことが推察された．

tween rat sympathetic neurons and文献cardiacmyocytesdevelopinginmicrocul・
ture：eVidence for cholinergic，adrener・

1）塚越贋，小林高義，栢沼勝彦．ほか：正常及び筋ジストロフィーチキン培養骨格筋に

gicanddualfunctionneurons・Proc・Nat・
Acad．Sci．USA，73：4225，1976．

対する交感神経の影響．筋ジストロフィー

7）Reichardt，LF．＆症の病因に関する臨床的研究第二班（三好Patterson，P・H・：班），昭和54年度研究報告書，1980，p・41．

Neurotransmitter synthesis and uptake

2）小林高義：培養鶏胚骨格筋に対する交感神経の影響に関する実験的研究．信州医誌，

byindividual rat sympathetic neurons
developlng

inmicroculture．Nature，

270：147，1977．

28：620，1980．

3）Main，R．E．＆Patterson，P・H・：Primary8）Nurse，C．A．：TheformationofcholinergiC

culture of dissociated sympathetic neu−

synapsesbetweendissociatedratsympa−

rons．Ⅰ．Establishment oflong−termtheticneurons andskeletalmyotubesin

growthincultureandstudiesofdiffer−

ce11culture．PhD thesis Harvard Univ．

entiated properties．J．Cell・Biol・，

Cambridge，1977，p．124．

−43−7）正常鶏筋，および筋ジストロフィー鶏筋に対する
7イロボデイアの運動様式について

中

西

研究協力者

孝

雄＊

荒

崎

圭

介＊

従来，進行性筋ジストロフィー症の場合，

ゲン塗布ディッシュに播種し，2時間上記条

生化学的に血清CPKの上昇があり，電気生

件下にてインキュベーション．さらに上清の理学的に静止膜電位の脱分極化，月莫興奮時のみを別のコラーゲン塗布ディッシュにとり，外向きK＋流持続時間短編などが示され，形

5日から3週間培養を続行した．この際，最態学的にも膜内粒子密度の減少が凍結割断法

終培養細胞密度を1万／ml前後に調整したが，により認められるなど，筋細胞膜の異常を示

これは筋細胞の密集発育を阻止し，フイロボ

唆するデータが多く報告されている．

デイアを観察しやすくするためである．

一方，ニューロン成長端から生じるフイロ

2）脊髄前角運動ニューロン分散培養法

ボデイア（糸状足）は，接触により目的物をMasukoら（1979）3）の方法に従い，正常鶏

識別し得ると考えられているl）2）．そこで本60−66時間胚（stage17）より脊髄腹側半分を研究では，フイロボデイアの運動様式を観察

摘出．これを10JLM cytosine arabinoside

する事により，筋ジストロフィー鶏筋の細胞膜異常が，発育の何時の時点で識別され得る（ara−C）4）を含む神経用液体培地（Eagle′s
MEM：鶏胚extract：子牛血清＝8：0．5：

かを明らかにする事を目的とした．

1．5）の中で24時間偏心旋回培養（37℃，70rpm）．0．25％trypsinにてニューロン浮遊液

方

法

をつく

り，その細胞密度を6−8万／mlに調正常鶏筋を対照とし，培養5日目と2週以整．筋培養ディッシュ中に直接ニューロン浮後の筋ジス鶏筋各々5例に対する，正常鶏脊遊液を播種．筋と同条件下で2時間インキュ髄前角運動ニューロン成長端・フイロボデイ

ベートし，ニューロンのディッシュ底への定アの運動様式を観察した．

着を確認した後，debrisを多く含む培養液を

1）筋分散培養法

新たな培養液と交換した．その後直ちに位相

正常鶏および筋ジス鶏11−12日胚（stage37

差韻微鏡，微速度撮影装置により，筋に対す−38）より浅胸筋を摘出．0．25％trypsinにてるフイロボデイアの運動様式を，1つのニュ

30分処理後，筋用液体培地（Eagle′s MEM：

ーロンあたり3時間，追跡・観察・記録した．

鶏胚extract：子牛血清＝8：1：1）にて解撮影終了後，一部のディッシュは1−2週間

放し，コラーゲン塗布ディッシュに播種．

培養を続けニューロンの形態変化を観察し，37℃，5％CO2，95％air，飽和水蒸気の諸条

一部はFEA液（フォルマリン5％，酢酸5

件下で3時間インキュベーション．Ca，Mg−％，アルコール90％）にて固定し，Bodian染free））ナルデイニ液で洗い，0．05％trypsin

色を施し，運動ニューロンを確認した．

にて15分室温処理した後，浮遊細胞をコラー結＊筑波大学臨床医学系神経内科

果

正常筋，筋ジス筋とも，培養1−3日目にー44−

宇二幸二手﹂は単核・紡錘形の筋原細胞を認め，5−7日

フイロボディアは，ニューロン成長端から目で筋管細胞形成が始まり，1週間前後を経数本ないし十数本出て，絶えず伸長収縮をくて自発性収縮が見られた．

り返した．長さは最大5−10JJであった．この

一方，分散培養されたニューロンは直径10フイロボディア遅効は，ニューロン分散培養
開始後1−2日以内にもっとい頂著に認めら

欝

F与一手

︹

．
閻諷

二

・ ⊥

．．．︒∵

∴∴

∴ ∴

∴

▲ 一

図l

㌦∵予′∵∴−15JJで大部分は双極細胞であった．

培養5日目正常筋に対する運動ニュー

図2

ロン・フイロボディアの形態変化．

培養18日日筋ジス筋に対する運動ニュ

Aは波動膜（矢印）が生じた時，Bーロン・フイロボデイアの形態変化．
Aは波動膜（矢印）が筋表面に接触はフイロボディア先端（矢印）が筋表面に接した時，Cはフイロボディアの印）が筋から艶反していく時の各々16した時，B，Cはフイロボディア（矢固着が認められた時の，各々16ミリフ
ィルムの1コマである．A→Bは約50

ミリフイルムの1コマである．A→B→Cは約1時間の経過であった．Cの分，B→Cは約1時間の経過であった．

横線は1叫を示す．

Cの横線は1叫を示す．
−45−

れた．又，成長端にはフイロボディア以外に，

イロボディアの運動様式では，前者の5例中

扇状に広がった波動膜がしばしば認められた．

4例，後者の5例中3例において，特記すべ

1）正常筋に対するフイロボディアの運動様式

き差違は認められなかった．したがって，培養5日日筋ジス筋の細胞膜異常は，存在する

培養5日目と2週以後の正常鶏筋の場合にとしても，フイロボディアでは認識され得なは，筋表面に接触したニューロン成長端は接いと考えられる．

触後約1時間以内に筋細胞上に固着し，7イ

培養5日目筋ジス筋5例中の残り2例に見ロボデイアの突出が停止する傾向が各々5例られたフイロボディアの運動様式は，正常と中4例に見られた（図1）．しかし，残り各々は異なり，接触後1時間以上経過しても固着

1例では，接触後1時間以内に，フイロボデ
イア・成長端の筋よりの艶反を認めた．

がおきない型であり，正常筋への固着および変性の進行した筋ジス筋からの艶反との中間

2）筋ジス筋に対するフイロボデイアの運動的性格を具えていると考えられる．この事は，

様式2例の筋ジス筋の変性進行度が，形態的に，

培養5日目の場合，5例中3例では正常筋

これを除く培養5日目筋ジス筋3例と培養2と同じ過程を経て成長端は筋表面上に固着し週以後の筋ジス筋との中間程度であった事とた．しかし，残り2例においては，成長端は合致するものである．しかし，両者の相関に筋上に固着することなく，フイロボデイアは

ついては今後なお検討する必要があると考え筋へ接触後1時間以上筋表面を触診し続けた．

ている．

一方，培養2週以後の場合には，5例中4培養2週以後の筋ジス筋に対するフイロボ

例に筋とフイロボデイアの接触がありながらデイアの運動異常は，5例中4例に見られた

一度接触した成長端が離反する現象が観察さが，この様に変性が進行したと考えられる筋

れた（図2）．しかし，残りの1例では2時間

ジス筋において，敵反現象が高頻度にみられの観察において，成長端は筋表面に固定したたことは，離反現象の出現頻度が筋の変性のまま全く敗れず，細胞体のわずかな運動のみ

進行度と平行して増大することを示唆する所が認められた．

見であると考えられる．もしフイロボデイア
が考

察

probing chemicaltouchsystem9）であり，表面構造の認識機構であるとすれば，そStage17の鶏胚脊髄において，分化ニューの運動様式異常である敵反現象の出現確率は，

ロンは運動ニューロン以外にも，後角，およ筋ジス筋表面構造（基底膜十細胞膜）の異常

び前角と後角の境界領域にかなり存在するとを反映するものと考えられる．そして，前述考えられ6）7）8），この部分せ完全に切除する事

した様に筋細胞膜の異常に関して多くの肯定

は技術的に困難であるが，Masukoら3）の方的データが存在する以上，駈反現象の出現頻法を用いて脊髄前角を採取した場合，得られ度は，筋細胞膜の異常を間接的に示している

たニューロンの約90％は運動ニューロンであと考えることも可能である．しかし，この点ると考えられている．さらに，この方法によに関しては今後例数を重ねて検討する必要がり得られたニューロンと骨格筋との間には，あると考えている．

コリン作動性シナプスが形成される事が電気生理学的に確認されている5）．そこで本研究

結論

正常鶏筋を対照とし，培養中の筋ジス鶏筋

では，正常鶏筋を対照とし，数多くの例につに対する脊髄運動ニューロン・フイロボデイ

いて検索するよう試みた．

アの運動様式を解析する事により，筋ジス鶏

培養5日日の正常筋，筋ジス筋に対するフー46−

筋の細胞膜異常が発育の何時の時点で識別さ

the myotome（会）Dev．Growth．I）iffer．，

れ得るかを検索した．

17：309，1975．

1）正常鶏筋の場合，培養5日日と2週以3）Masuko，S．，Kuromi，H．，Shimada，Y．：

後とも各々5例中4例に，ニューロン成長端が筋表面に接触後約1時間以内に固Isolation and culture of motoneurons

着する傾向が見られた．

Proc．Natl．Acad．Sci．USA，76：3537，

from embryonic chicken spinal2）筋ジス鶏筋の場合には，培養5日目のcords．

1979．

5例中3例に正常鶏筋と同様の現象が見

4）増子貞彦，嶋田裕：薬剤による糸田胞分離法．

られた．しかし，培養2週以後のもので組織培養，6：317，1980．

は，5例中4例に一度接触したフイロボ
デイアが艶反する現象が認められた．

5）増子貞彦，嶋田裕：運動神経細胞の分離と以上の所見はフイロボディアに識別され得る

48回研究会プログラム・講演抄録集，1979，

筋細胞との培養（全） 日本組織培養学会第筋ジス筋の細胞膜異常が，培養2週以後に出p．20．

現する事を示唆すると考えられる．しかし結6）Langman，J．，Haden，C．C∴Formationand

論するには今後さらに多数例について観察，

migration of neuroblasts

検討を重ねる必要があると考えている．

COrd of the chick embryo．J．Comp．

inthe spinal

Neurolリ138：419，1970．

稿を終えるにあたり，御懇篤な御指導をい7）Kanemitsu，A．：Cytoarchitecture dela

ただいた中井準之助教授に深く感謝いたしまmoelle epinierechezle pouletenvisagee

す．

aupointdevuedudeveloppement．Proc．
Japan Acad．，46：77，1970．

文献8）Kanemitsu，A．：Etude quantitativedela

1）Nakai，J．，Kawasaki，Y．：Studies on themechanism determining the course ofnerve fibers

inneurogenesedanslamoelleepinierechez
lepouletparl′autoradiographie．Proc．

Japan Acad．，48：758，1972．

tissue culture．I．The

9）Sperry，R．W．：Organogenesis

reaction of the growth cone to various（R．L

Obstractions．Z．Zellforsch．51：108，1959．

DeHaan．and H．Ursprung，ed．），Holt，

2）Nakai，J．：The mechanism determining

RinehartandWinston，NewYork．1965．

the course ofthe spinalmotor nerve to−47−8）筋ジスチキンの骨格筋脂質（第二報）

高木

研究協力者 村昭 夫＊
上は じ め に

我々は筋ジストロフィー鶏を疾患モデルと博彦＊％DEGS−Chromosorb W（60〜80メ

ッシュ），ガラスカラム2mX3mm，N250ml／

して，筋ジストロフィー症における月旨質異常分，カラム温度190℃の条件で行なった．各月旨の本態を追求している．先に，筋ジストロフ

肪酸の同定は，標準試料との比較により行なィー成鶏では，リン脂質，コレステロール，

ったが，一部は相対保持値より同定した．

中性脂肪とも有意な増加を認めた．又，鶏胚結期の筋の月旨質組成では対照と筋ジスの間に差果

異の認められないことから，成鶏での変化は

1．成鶏骨格筋の脂酸構成（図1，2）

二次的現象である可能性が大きいことを報告

成鶏リン脂質の月旨肪酸構成を図1に示した．
筋ジス成鶏では14：0（ミリスナン酸），16：

した1）．
今回はリン月旨質，トリグリセリドの脂酸構

O aldehyde（パルミトアルデヒド），16：0

成の分析を行ない，鶏胚期，幼若鶏及び成鶏（パルミテン酸），18：1（オレイン酸）の低の変化を観察し比較検討を行なった．

下と，18：O aldehyde（ステアロアルデヒド），18：0（ステアリン酸），18：2（リノ方ール酸）の増加を認めた．オレイン酸は対照法

筋ジストロフィー鶏（line413，筋ジス鶏）と鶏19．46±1．68％，筋ジス鶏14．84±1．61％と正常対照鶏（line412，対照鶏）の浅胸筋を分析

著減し，ステアリン酸は対照鶏15．35±1．96に用いた．20日目鶏月も％，筋ジス鶏20．98±2．37％と著増していた．

幼君期（膵化後5日目，7日目，14日目，21日目）及び成鶏期（4これらの変化は危険率1％で統計学的に有意ケ月齢）より浅胸筋を摘出した．

であった．
筋ジス成鶏のトリグリセリドの脂酸構成に

月旨質の分析はFoIchの方法により月旨質を抽出し，薄屑クロマトグラフィーにより，リ関しては（図2），16：0（パルミナン酸），

ン脂質，トリグリセリドの分柾を行なった．

16：1（パルミトレン酸），18：1（オレイン

薄層クロマトの展開i容媒は，石油エーテルー酸）が低下を示し，18：0（ステアリン酸），

エーテルー酢酸（80：20：1）を用い，スポ18：2（リノール酸）が増加を示した．リノットの検出は0．05％ローダミン6Gをスプレール酸は対照鶏16．94±3．39％に対し，筋ジス

ー後，紫外線下で観察する方法で行なった．

鶏24．09±5．36％と著明な増加を認めた．ま次に，各スポットを分画採取し，塩酸・メタ

た，構成比率が少なくグラフには示さなかっノール法にて月旨肪酸メチルエステルを作製し，たが，20：4（アラキドン酸）が筋ジス成鶏

脂酸構成分析に用いた．脂肪酸分析は，島津で増加傾向を示した．
2．幼若鶏骨格筋の脂酸構成（図3，4）

ガスクロマトグラフGC−7A型を用い，10

僻化後21日目までの幼鶏の浅胸筋を分析し，これを「幼若鶏」としてまとめた．

＊国立武蔵療彗所神経センター疾病研究第一部−48−

14：01≡盲3。．16＝016‥11…i3．．18：018＝118：220：422＝6

14：016：016：118：018：118：2

20：1

匡日 成鶏浅胸筋のリン脂質脂酸構成．
筋ジスN＝10，対照N＝10．Mean±

図2 成鶏浅胸筋のトリグリセリド脂酸構成．

S．D．を図示した．＊p＜0．05，＊＊p＜0．01．各々脂酸の省略は文中

筋ジスN＝10，対照N＝10．その他の記号は図1と同じ．

を参照．

14：0−…i3亡．16：016‥11ミi3．．18：018：118：220：422：5

図3 幼若鶏浅胸筋のリン脂質脂酸構成．
筋ジスN＝4，対照N＝4．いずれの脂酸に関しても有意差は認められない．

14：016：016：118：018；118：2

20：4

図4 幼若鶏浅胸筋のトリグリセリド脂酸構成．
筋ジスN＝4，対照N＝4．いずれの脂酸に関しても有意差は認められない．

リン脂質の月旨酸構成では（図3），オレイン酸は対照鶏23．0±5．8％，筋ジス鶏17．5±3．1％と筋ジス鶏で低下する傾向を示したが，統成長に伴う変動を推定した．この変動はほぼ

計学的に有意差は認められなかった．

リン月旨質と中性脂肪に共通しており，増加す

トリグリセリドの月旨酸構成において（図るものとして，14：0，16：0，16：1，18：4），筋ジス鶏でオレイン酸の低下傾向（対照1がある．また，減少するものとして18：0，

鶏40．8±3．8％，筋ジス鶏36．3±3．9％）を認

20：4がある．この成長変化を筋ジスの変化

めたが，統計学的に有意な差はなかった．そと比較した．成長に伴い増加する脂肪酸は，の他の脂酸に関しては両者間で差を認めなか

筋ジス成鶏では減少を示している．また，18：

った．

0や20：4のごとく，成長で減少するものは，

3．脂酸構成の成長に伴う変化（図5）筋ジスでは増加している．しかし，唯一の例

次に，リン月旨質とトリグリセリドの主要を外がトリグリもりドのリノール酸（18：2）

構成脂酸について，成長に伴う変化を検討しの変化にみられる．ここでは，幼若鶏から成た．幼若鶏と対照成鶏のデータの比較から，鶏へ増加してゆくにもかかわらず，筋ジス成
−49−

5

．一u

grOWth aduIt（dysU

1
1
1◆◆＋◆十十12

1 0 1 2 46 8 8 8 〇′′ヽ′′ヽ

1

両＋◆ 十＋十06テン酸の減少を除いて，ヒトDuchenne型筋

a1ール酸の減少を認めている．これらはパルミ

卿′′′ヽ′ヽヽ

一

0
4

図5

PhosphoTipfd Triglycerlde

ジストロフィー症と筋ジストロフィー鶏で1ま逆の変化を示している．また，トリグリセリ
ドの脂酸構成はヒトでは有意な差は見られなかったとされている．しかし，今回の筋ジス
鶏におけるトリグリセリド脂酸構成には明らかな差が認められており，興味ある事実と考えられる．ヒトDuchenne型筋ジストロフィ
ー骨格筋レシチンの脂酸構成では，ミリステ

リン脂質とトリグリセリドの主要な構成

ン酸，パルミテン酸，オレイン酸，アラキド

脂酸につき，成長に伴う変化を比較した．
成長に伴って増加する脂酸は（14：0，
16：0，16：1，18：1），筋ジス成鶏
では減少している．また成長で減少する脂酸は（18：0，20：4），筋ジスで増加している．

ン酸の増加とリノール酸の減少が認められた5）．これも筋ジス鶏のリン脂質月旨酸構成とは逆の傾向を示していた．
幼若鶏の月旨酸構成には，筋ジスと対照の問に有意な差は認められなかった．この事実は筋ジス鶏の病因として，原発的な月旨酸代謝異

鶏では増加を示している．

常の可能性を除外するものであろう．脂酸構成の異常は，筋ジス病変の進行に伴う続発的考

察現象と理解される．

筋ジストロフィー鶏を用いた骨格筋脂質の対照の幼若鶏と成鶏の比較から脂酸構成の脂酸構成に関する報告はほとんど見られない．

成長に伴う変動を推定した．この経時変化

Jordanら2）は，ニューハンプシャー種の筋ジの観点から見ると，筋ジス成鶏での変化の大ス鶏（line413ではない）骨格筋の遊艶脂肪

部分は幼君型として説明できる結果が得られ酸，トリグリセリドの月旨酸構成を調べ，有意た．ヒト骨格筋に関して，Bruceら6）がレシチ

差はなかったが，ミリスナン酸，パルミトレ

ン月旨酸構成を胎生期から成人（16，27，53歳）

ン酸，オレイン酸，リノール酸の増加とパルまでの経年変化を報告した．ヒトのレシチン

ミテン酸の減少傾向を報告している．これは脂酸構成では，パルミテン酸，オレイン酸，

おおむね我々が報告した結果と同様の傾向を

アラキドン酸が経時的に減少し，ステアリン

示している．また，Hsuら3）は筋小胞体を用酸，リノール酸が経時的に増加している．ヒい，ミリスナン酸，パルミテン酸の増加とオトのレシチン月旨酸構成に関する2つの報告をレイン酸の減少を示している．リン脂質の脂酸構成に関しては，調べ得た限りまだ報告が比較すると，．ヒトにおいても経時的に増加す
るものは筋ジスでは減少したままであり，ま見られない．今回の成鶏に関する検討では，たその道の傾向も認められる．

リン月旨質とトリグリセリドのいずれにおいて

この様に，ヒトとニワトリの骨格筋脂酸構

も，その脂酸構成に筋ジス鶏と対照鶏の間に成に関して，筋ジスの際の変化の大部分が幼有意差が認められた．

君型として解釈できるであろう．この事実は一方，ヒトDuchenne型筋ジストロフィー症骨格筋の脂酸構成に関しては，須藤ら4）は，リン脂質ではパルミトレン酸，オレイン酸の増加とパルミテン酸，ステアリン酸及びリノ
ー50−

筋ジストロフィーの病態研究の上で興味深いものである．

結論

muscular dystrophy．Proc．Soc．Exp．

Bioch．Med．，138：733，1971．

1）筋ジス成鶏において，リン脂質及びト3）Hsu，Q．−S．＆Kaldor，G．：Studies on the

リグリセリドの脂酸構成に対照成鶏との間に有意な差が認められた．

lipid composition of the fragmented
sarcoplasmic reticulumOf normal and2）鶏胚期，幼若鶏では筋ジスと対照の問

dystrophic chickens．Proc．Soc・Exp・に有意な差は見られなかった．

Bioch．Med．，116：243，1964．

3）筋ジスにおける変化の大部分は幼君型

4）須藤正克，黒田敏彦，白井朋包：進行性筋として説明できるものであった．

ジストロフィーの分画月旨質の月旨肪酸組成に文ついて．臨床病理，14：535，1966．

献1）高木昭夫，村上博彦，石浦章一：鶏ジスト

5）高木昭夫：進行性筋ジストロフィー症の脂ロフィー筋における糖及び脂質代謝．筋ジ

質化学的研究．臨床神経，7：665，1967．

ストロフィー症の病因に関する臨床的研究

6）Bruce，A．＆ Svennerholm，L・：Skeletal（三好班），昭和54年度研究報告書．1980，

musclelipids．1．Changesin fatty acidcomposition oflecithininman duringp．48．

growth．Biochim．Biophys．Acta．，239：

2）Jordan，J．P．，Kratzer，F．H．＆Zarghami，N．

393，1971．

S．：Lipid composition of pectoral
muscles of chickens with inheritedー51−9）ジストロフィー鶏骨格筋中の中性脂肪に関する研究

木 下 真 男＊
研究協力者

内

野

裕

子＊

荒 木

洋書 若 圧1・宣 雄＊

筋疾患と脂質の関係は古くより知られ，多くの研究がなされてきた．その一つは，膜系の機能に関与する燐月旨質に関してであり，他の一つは，エネルギー源として重要な中性脂肪に関してである．

結果

1．筋中脂肪
（1）中性月旨肪分画TGは，図1，表1に示した様に対照0．24±
0．13mg／100mgwt，ジストロフィー鶏1．94±

疾患としては，最近，月旨質蓄積性ミオバナ

0・93mg／100mgwtで約8倍，p＜0．001で有ーが報告され，いくつかの欠損酵素も証明さ

意な増加が認められた．DGでも図1，表1にれているが，古くから脂質代謝との関連が注示した様に対照0．02±0．01mg／100mgwt，ジ

目されているのは筋ジストロフィー症である．

ストロフィー鶏0．08±0．04mg／100mgwtと今回，我々は厚生省ジストロフィー症研究

約4倍，p＜0．01で有意な増加がみられた．

姓より供与されたNew Hampshirechicken

Monoglycerideは微量のため測定を断念しの浅胸筋及び皮下月旨肪組織について，中性脂た．

肪を分析し，若干の知見を得たので報告する．
Triglyceride

Di91ycer盲de

COnIrol dysIm鴎y

COnIr01dysh鴎y

材料と方法
実験材料：生後16〜18ヶ月の筋ジストロフ
ィー鶏（NewHampshirechicken：1ine413）

8羽，対照鶏（line412）8羽，計16羽を断血
屠殺し，浅胸筋を摂取し，結合織，脂肪組織，筋膜などを除去したのち，−70℃のフリーザーで保有し，また，ジストロフィー鶏4羽及び対照鶏4羽の皮下脂肪組織をj采取し，直ちに実験に供した．
実験方法：浅胸筋は対照鶏で100mg前後，ジストロフィー鶏で40mg前後，皮下脂肪組
織で30mg前後をホモジュネートし，FoIchの方法にて，絵脂質を抽出した1）．中性脂肪の分画は薄層クロマトグラフィーにより行なった．各分画の脂酸構成はガスクロマトグラフ
ィーにより行なった．

図l

浅胸筋のトリグリセライド，ジグリセ
ライドの含有量（単位mg／100mg湿重量）＊東邦大学医学部第四内科

一52−

表l 浅胸筋，皮下脂肪組織のトリグリセライド，ジグリセライド含有量（単位mg／100mg湿重量）

SU Pe rf；c ic．
L pe cto rcJl m usc leq d ipo se tissu e
dy sIm ph yc on †ro l
c o n 什0 1
T G O ．24 土0 ．13 1 ．
94 土0 ．
9 3 14 ．82 土3 ．74
0 8 土0 ．
04
0 ．13 土0 ．0 7
D G O ．0 2 土0 ．
01 0 ．

dy stro ph y
14 ．
7 8 土3 ．5 90 ．1古土0 ．
08（2）各分画の月旨酸構成

成成分をなしていたが，対照とは差がみられ−

TGの脂酸構成は表2に示したが，その主なかった．

要構成成分はC16パルミテン酸，C18ステア

2．皮下脂肪組織

リン酸，C18：1オレイン酸，C18：2リノー（1）中性脂肪分画

ル酸で全体の月旨肪酸の90％近くを占め，ジス

TGは表1に示したが，ジストロフィー鶏トロフィー鶏ではこれらの主要成分にのみ変

14．76±3．59mg／100mgwt，対照鶏14．82±

化が認められた．すなわち，ジストロフィー

3．74mg／100mgwt，DGは，ジストロ7・イー鶏

鶏の月旨酸構成では対照と比べC16パルミテン

0．16±0．08mg／100mgwt，対照鶏0．13±0．08

酸で減少（p＜0．05），C18ステアリン酸で増加

mg／100mgwtと差はみられない．対照鶏骨（p＜0．001），C18：1オレイン酸で減少（p＜格筋と比べるとTGで約60倍，DGで約7倍0．02），C18：2リの含有量であった．

ノール酸で増加（p＜0．05），を示した．DGの脂酸構成は，C16パル（2）各分画の脂酸構成

ミテン酸，C18ステアリン酸，C22：2ドコサ

TGの月旨酸構成は表2に示したが，ジスト

デイエノン酸，C24：2テトラコサデイエノ

ロフィー鶏，対照鶏共に同じ様な構成成分がン酸などで，全体の80〜90％を占め，主要構認められたが，C16パルミテン酸にのみ対照

表2 トリグリセライドの脂酸構成（％）
SU P e rfic io I p モC I o ro l m u sc te

C 14

亡O n h O l

d y s Im由y

1 ．5 土 0 ．3

1 ．1 土 0 ．
2

C 14 ：1
C l6

d冒
p 0 5e 摘 s u e

c on tm ld y s t田 圃 y

1 ．2 土0 ．1

1 ．0 土 0 ．0

0 ．3 土0 ．1

0 ．2 土 0 ．1
17 ．9 土 0 ．4 ★

27 ．
3 土 2 ．3

22 ．
4 土 5 ．1 ★

2 1 ．1 土 3 ．
8

C 1 8 ：1

4 ．
0 士 0 ．6

4 ．2 土 0 ．3

5 ．0 土 2 ．8

4 ．0 士 2 ．9

C 18

8 ．1 土 0 ．9

1 3 ．8 土 0 ．9 ★蜘

10 ．8 土 3 ．
5

10 ．3 土3 ．8

C 1 8 ：1 3 5 ．1 土 4 ．7

2 9 ．0 土 3 ．1 線

3 4 ．1 土 4 ．
7

3 4 ．5 土3 ．3

C 18 ：
2

14 ．2 土 1 ．9

2 0 ．2 土 6 ．9 ★

2 3 ．古土 4 ．2

2 3 ．7 土 3 ．1

C 18 ：
3

1 ．0 土 0 ．2

2 ．3 土 1 ．5

2 ．5 土 1 ．8

2 ．4 土 1 ．3

C 20

4 ．0 土 2 ．2

0 ．4 土 0 ．3

4 ．0 土 0 ．1

4 ．9 土 0 ．1

C 20 ：
2

0 ．2 土 0 ．1

0 ．5 土 0 ．
30 ．
4 土 0 ．4

1 ．1 土 1 ．0

C 20 ；
4

1 ．9 土 1 ．5

0 ．
7 土0 ．
80 ．
4 土 0 ．3

0 ．5 土 0 ．5

1 ．1 土 1 ．3

1 ．4 土 0 ．
2

0 ．2

0 ．5 土 0 ．1
0 ．
4 土 0 ．6

0 ．5 土 0 ．
5

C 22 ：
2

2 ．3

1 ．1 土 0 ．
5

⊂22 ：
4

0 ．4 土 0 ．1

C 24

3 ．2 土 3 ．0

0 ．8 土 0 ．
7

1 ．
4 土 1 ．5

0 ．7 士 0 ．
7

C 24 ：
2

2 ．2 土 1 ．9

4 ．3 土 4 ．
2

0 ．1 土 0 ．1

0 ．4 土 0 ．8

C 20 ：d
C 22
C 2 2 ：1

★P＜0．05

線P＜0．02−53−★織Pく0．001

と比べ低下が認められた．その主要構成成分

る．文献的には膜系の月旨質は家兎Sarcoplas−

は骨格筋と同様であるが，個々の月旨肪酸の含micreticulum（SR）ではphospholipid（PL）

まれる比率は，対照と比べるとC16パルミテ

が90％，残りの10％が中性脂肪であり5），ラッン酸で低下しC18：2リノール酸で増加してトのSarCOlemma（SL）ではPLと中性月旨肪いた．ジストロフィー鶏骨格筋と比べるとはほぼ等量で，SRとミトコンドリアでは

C18：1オレイン酸が増加していた．DGの脂PL80％，中性脂肪20％であり6），筋全体として酸構成は，ジストロフィー鶏，対照鶏共大きはサルでPLに比べ中性月旨肪は3〜10倍多い

な違いはないが，骨格筋のものとは異なり，と言われている7）．これらの事実から考えれ

C18：1オレイン酸，C18：2リノール酸の増加が著明で，C22：2ドコサディエノン酸はば月莫系の中性脂肪は比較的少なく，測定結果
は筋全体の中性脂肪を反映しているように思認められなかった．

われる．
月旨肪蓄積の原因についての報告としては，考

PenningtonらはDuchenne型の進行例で死案

人の筋ジストロフィー症で罷息筋に月旨肪が亡時，3ヶ所の筋肉を摂取し，TGの脂酸構成増加している事実は古くから知られている．
特にDuchenne型では下肢の仮性肥大も認めについて検討した．3ヶ所の筋肉は筋線経のほとんどが脂肪組織に置き換えられてしまっ

られ筋線推自体の肥大と共に脂肪組織の増加ており，その脂酸構成はすでに報告されていを伴っている．これらの事実は，病因に関連る正常人の皮下月旨肪組織のものとほとんど変するのか，障害の結果であるのか，議論のあわりなかったと報告している8）．Mitchellらるところで月旨質の測定は筋の種々の病的状態

は，ジストロフィー鶏lineUCD309で筋中にを理解するうえで有用であり多くの研究がな増加する月旨質の大部分はTGで，筋肉の中央されてきた．

部で長軸に沿って多く存在し，末梢では少な

文献的には人筋ジストロフィー症ではKu−
nze2）が，実験動物ではOwenら3），またJor−

くなり，脂肪の浸潤は筋線経の破壊の指標になるのではないかと考えている．更にこれら

danら4）が報告をしている．すでに人ジストの事実から脂質蓄積の原因として血管性あるロフィー症だけでなく実験的ジストロフィー

いは神経性の因子は考えにくいと考察してい症においても骨格筋の中性月旨肪，特にTGのる9）．
そこで俄々も中性月旨肪のTG，DGについ増加が認められており，我々の実験においてもTG，I）Gで増加がみられた．しかしながて，その鹿酸構成を測定し，TGで対照と比べら，ここで問題となる点が2つある．1つは組織化学的あるいは電子顕微鏡的に中性脂肪変化を認めた．現在までに報告された中性脂の増加が認められる部位は，筋線維内ではなく，須藤らはDuchenne型ジストロフィー症

肪の脂酸構成を測定したデータは比較的少な

く問質脂肪組織及び皮下脂肪組織である．従の大腿四頭筋及び月非腹筋でパルミテン酸，パって我々もできうる限り結合織，脂肪組織をルミトオレイン酸，ステアリン酸，オレイン

除去したが，当然これら筋細胞外の月旨質があ酸，リノール酸を測定し，同年齢の対照と比る程度混入していることは否定できない．もべ有意差を認めていない10）．ジストロフィー

う1点は今回測定した月旨質中にはE莫系の中性

鶏ではJordanらはTGの月旨酸構成で対照鶏脂肪も含まれていることで，もし採取材料中と比べ，変化を認めなかったと報告していの筋線推量がジストロフィー症と対照とで異なるとすれば膜系の相対量も異なり，そのたる3）．我々の結果とJordanらの結果に差が生じた理由は明らかではないが，彼らは15年以め結果に及ぼす影響も異なってくると思われ上前におこなったデータで，我々のジストロ−54−

フィー鶏とはlineが異なったのかも知れなと病的状態の皮下脂肪組織は，同じ様な脂酸いし，彼らは生後36週の鶏を使用したが，我々構成を示した．これはジストロフィー鶏にはは16〜18ヶ月のものを使用した点，あるいは特別な月旨質代謝の異常のないことの一つの証

飼料の差などにあるのかも知れない．

拠と考えることができる．また，骨格筋と皮TGの脂酸構成の変化が如何なる機序によ

下脂肪のTGの主要構成成分を比べてみる

るか不明であるが，ひとつにはジストロフィと，図2に示す様にC16パルミテン酸，C18：

ー鶏でTGが著増を示すことに関係がある

2リノール酸は，ジストロフィー鶏骨格筋でと考えられる．もしPenningtonらが言う様は，対照鶏骨格筋と皮下月旨肪の中間にある．

に筋組織がほとんど脂肪組織に置き換えられ

C18ステアリン酸，C18：1オレイン酸では，てしまっていれば，ジストロフィー鶏骨格筋

対照鶏とジストロフィー鶏骨格筋よりも，ジのTGの月旨酸構成と皮下月旨肪組織のそれがストロフィー鶏骨格筋と皮下月旨肪組織の方が同一であることが推定されるが，少なくともより近似した値を示している．

筋線経が残っている組織では差が出てくるこ以上の点から考えると，対照鶏骨格筋よりとが，当然考えられる．

障害の進んだジストロフィー鶏骨格筋め月旨酸

この点を解明するために，我々はジストロ構成の方が，皮下月旨肪のものに近い値を示し

フィー鶏骨格筋が最も高度に障害された部位ている．従って，今回の実験結果からみれば，のみを取り出すことを試みたが，現在のとこ

ジストロフィー鶏の骨格筋に中性脂肪が増大

ろ良い方法はみつからなかった．そこで，筋するのは，月旨質代謝の異常が関与するもので線経が破壊され脂肪組織に置き換えられた状はなく，むしろ，障害の結果と考える方が妥態と皮下月旨肪組織が全く同じ状態であるとは，

当と思われた．

断定はできないが，一つの方法として，皮下DGについても同様な検索を試みたが，TG月旨肪組織の中性脂肪を検討してみた．

に比べ微量なため，筋の量を増してみたが蒋

皮下脂肪組織のTGは骨格筋と比べ著明層クロマトグラフィー上，TGと重複してしに増加しているものの，対照鶏，ジストロフ

まうため，今後，別な方法を用いて検討することとし，考察はさしひかえる．

ィー鶏には差がみられず，その月旨酸構成でも，著明な差はみられなかった．すなわち，正常文献1）FoIch，J．，Lees．Mリet

Cld
門Imit盲‥Cid A

al．：Asimplemethodfortheisolationandpurificationoftotal
lipidesfromanimaltissues．J．Biol．Chem．，

M

226：497，1957．

C18
5†eoパc oCid A⊂18：loIe7c ocTd2）Kunze，D．＆01thoff，D．：DerLipidgehalt
Menschlicher Skelettmuskulatur bei

MPrimaren und Sekundare myopathien．

A

Clin．Chem．Acta，29：455，1970．
⊂18：2
17noleic ocid

M3）Owens，K．＆A

Hughes，B．P．：Lipids ofdystrophic and normal mouse muscle：
0

10

20

30

40

Whole tissue and particulate frations．J．

禁震霊 雲空言謁、，

Lipid Res．，11：486，1970．

図2 浅胸筋，皮下脂肪組織のトリグリセラ
イドの主要構成脂肪酸（％）4）Jordan．J．P．，Kratzer，F．H．，et al．：Lipid
COmpOSition of the pectoral muscles of−55−

chickens withinl1erited muscular dystr−

8）Pennington，R．J．，Park，D．C．，et al．：The

ophy，Proc．Soc．Exp．Biol．＆ Med．，116：

fattyacidcompositionofinfiltratingfat

243，1964．

in5）Waku，K．，Uda，Y．，etal．：1ipidcomposition

muscle from a case of muscular

dystrophy．Clin．Chem．Acta，13：397，

in rabbit sarcoplasmic reticulum and1966．

9）Mitchell，D．J．＆Julian，M．：Variation of

occurrens ofalkyl etherphospholipids．J．

fat distributionin pectoral muscles ofBiochem．，69：483，1971．
6）Fiehn，W．＆Peter，J．B．：Lipids and fatty

Chickens with hereditary muscular dys−

acidsofsarcolemma，SarCOplasmicreticu−

trophy．Proc．Soc．Exp．Biol．Med．，137：

1um，and mitochondria from rat skeletal

68，1971．

10）須藤正克，黒田敏彦，ほか：進行性筋ジス

muscle．J．Bio1．，Chem．，246：5617，1971．

トロフィーの分画脂質の脂肪酸組成につい7）Masaro，E．J．，Rowell，L．B．，et al．：Skeletalて．臨床病理，14：535，1966．

musclelipids．Biochem．Biophys．Acta．
84：493，1964．

ー56−

ⅠⅠ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病態生理

a）遺

伝

b）臨

床

C）形

態

d）生

理

e）赤血球など
f）生化・代謝など

10）筋萎縮性疾患の遺伝分析
Duchenne型ジストロフィー症について

＊

′イ

一丁

敏

庄

古

島

洋 八

島

■

●

＊

中 中 ⁝

●

●

明＊＊

納

良＊＊＊＊川

井

光

弘＊＊■

尚

臣＊＊＊＊＊

●

■

＊

秀 弘 夫

禎 昭 和

久 形 好

金 井 三

研究協力者

nuchenne型ジストロフィー症（DMD）の％，子供についてはⅩga血液型は32％，色盲

遺伝機構の解明とDMD，Xga血液型，色盲のは32％である．このうち，Ⅹga（＋）は◆80．0±

Ⅹ一連関遺伝の解析を行なうため，鹿児島地

6．3％，Ⅹga（−）は20．0±6．3％，色盲は男女区と徳島地区を対象に調査を計画し，本年度

とも0％である．調査，検査資料が少ないのは鹿児島地区の一部について調査を行なった

でⅩ一連関遺伝の検定は現時点では不可能でのでその結果を報告する．

あり，これらの分析は来年度すべての資料について検査が完了した時に，分析を試みる予

資

料

定である．

DMDを発端者として，鹿児島資料（約50家系），徳島資料（約40家系）を対象に家系調査，家系全員についてⅩga血液型，色盲について検査を行なうが，本年度は鹿児島資料のうち48家系についての家系調査，このうち10
家系についてⅩga血液型，色盲について検査を行なった．未検査の分については来年度検

B．DMD家系の近親婚調査
48家系のうち，いとこ婚4．17％，またいとこ婚2．08％，みいとこ婚2．08％，その他の近親婚4．17％で，合計すると12．5±4．77％となり，一般集団のそれに比べて高い．このことは本症が劣性遺伝型であることを示している．
また，本症が男児のみに出現していることを査を行なう予定である．

考えると伴性劣性型と思われる．
C．DMDの分離比の検定

調査結果
A．X一連関遺伝について

分散比の検定法は，資料の集め方，家系の捕捉法（ascertinment）によって違ってく

鹿児島資料のうちDMD，Ⅹga血液型，色盲について調査・検査を完了したのは図1に示る．本資料はすべて単独確認（singleascertin−ment）である．すなわち，発端者（proband）

した如く10家系である．
尚，鹿児島資料のうち上記の検査を行なった頻度は表1に示す如く，父は19％，母は21が子供で，しかもただ1人の発端者しかない．
したがってどのDMD息児も捕捉される確率は極めて小さく，DMD患児の多い家系ほどつかまりやすいか，同一家系が2人の発端者＊鹿児島大学医学部衛生によって独立に2回見出されることはないと＊＊国立療養所南九州病院神経内科

みなされる．このような場合の分散比（P）と＊＊＊鹿児島大学医学部第三内相＊＊＊＊東京医科歯科大学医学邪法医

その分散（Vp）の推定はFisher（1934）によ＊＊＊＊＊徳島大学医学部第一内相って次の式が与えられている．
−59−

数，Nは同胞群の数，Tは同月包群に含まれる

p＝旦二空

子供総数である．

で一N

Vp（T−R）（R−N）

上式を用いて鹿児島資料の男児の資料を用（T−N）3

いて分析したところ下記の如き結果が得られ

式中，Rは調査された同胞群の中の息児の捻FamilyFamllyl【コ．

＿

Family

○

□

○

◆

◆

◆

◆

「
′十

2

∴「
十

Family

○

．

．

〇
＋

○

［］

○
◆

l

■

○

ロ

メ＋

．

．

0

1

＿

′＿

一

′＝PrOPOSitus：X（a＋）−：Xg（a−）

9

ロ

○

−

⊥l

■
メ．

○

Family

6

◆

1．！，l

■

8

十

□

◆

◆

†⊥l

1
．

Family

3

◆

□

1⊥1

1
メ．

′．

○

＋

■

■

Family

・十

ロ

⊥l

●

5

口

1．！．1

○

I

」⊥l

′＿

■

FalnllylO

7

□

雷

′＿

Family◆0

Family

4

○
l．！，l

［コ

た．

◆

l

□
．

l

l

『
′●

図l 家系別，DMD，Ⅹga血液型および色盲の検査成績
表11980年度におけるDMDの血液型（Xga），色盲検査結果
D M D 数

1

2

3

同胞群数

剛包
総数

D M D 数

Ⅹ
gd血液型
検 査

済
色

X ga 血液型

同胞数
1

父

盲

5

5

5

5

3

3

2

（
60．
0）
2

12

5

17

34

22

17

18

（
50．
0）
3

11

3

14

42

17

17

4

6

2

24

8

3

2

4

X ga 血液型
2

4

3

色

盲
2

（
40．
0）
5

（
23．
5）

（
40．
5）
4

盲

（
40．
0）

（
52 ．
9）
17

母

色

5
（
31．
3）

3

3

（
23．
1）

，

3

（
21．
4）

3
（
12．
5）

5

2

1

3

15

4

2

2
（
13．
3）

6

1

1

2

12

4

2

2
（
16 ．
7）

7

1

1

48
合計

7

1

139

61

44

45

男：
85

61

（
31．
7）

（
32．
4）

9

9

10

（
19 ．
1）

（
−60−

10
（
21．
3）

）：％

61−48

13

P＝

85−48

認と思われる．多重確認の場合の分散比は，＝−＝0．3514

37

Morton（1959）によって考案されているが，（85−61）（61−48）

十二（85−48）3＝0．0785

単純には発端者が2人いる場合にはその家系を2回数えて上式を用いて推定すればよく，

ここに得られた分社比の推定値（0．3514）と強いて確認の確率を推定する必要もない．

その期待値（0．5）との差は誤差（0．0785）のB．DMD遺伝子の淘汰の問題

1．9倍であり，統計的有意水準（5％）に達し

分社比はメンデルの法則に従うと3：1とない．したがって，本症は伴性劣性遺伝イ反説

か1：1に分馳する．これはエンドウ豆やシに適合する．

ョウジョウバエの正常形質を用いた場合であ
る．

考

察

ところが，DMDのような疾患の場合，往々本症がⅩ一連関劣性遺伝であることは，近親にして淘汰の影響をうけやすい．本症の分散婚率が12．5±4．77％で一般集団に比べて著し比の推定値が期待値より低いのはおそらく淘く高いこと，DMD患児が男児のみにみられ，分馳比がⅩ一連関劣性遺伝の仮説に適合する

汰の影響ではないかとも考えられる．

ことからも理解される．しかしながら，すでの淘汰などがある．この点については今後更に述べた如く，推定された分離比と期待値の差は統計的に有意水準に達しなかったとはいに検討する予定である．

え，推定された分離比の方が低い事も事実で淘汰には受精前淘汰，胎児期淘汰，出生後要約ある．これには，調査例数が少ないことも影

Ⅹ一連関遺伝の検討するため，鹿児島資料48響しているかもしれないが，次の事も考慮する必要があろう．

家系64人についてDMD，Ⅹga血液型，色盲にA．確認の問題の資料について検査が完了した時点で行なう

ついて調査したが，資料分析は来年度すべて

本資料ではすでに述べた如く，単独確認でので，本回は調査結果のみを報告する．

ある．一般に疾患の種類が確認の程度に大き

つぎはDMDの伴性劣性遺伝の仮説への適く影響する．一人が受診して治療効果がない

合性について分析したところ，（1）近親婚率がとわかれば同一家系の中の他の息児は来院しない場合があるので単独確認になりやすい．

12．5±4．77％で一般集団のそれに比べ著しく高い．（2）分離比は伴性劣性遺伝の仮説に適合

しかし，DMDの家系がすべて単独確認とはする．このことからDMDは伴性劣性遺伝形

いえない．これはあくまで本資料の場合であ質と思われるが，分艶比が期待値に比べ低い

る．また，確認を左右するのはDMDの捕捉ことの要因として，確認の問題，淘汰の問題

法の手段によっても異なるであろう．例えば，などについて考察を試みた．

外見のみに診断した場合，あるいは特殊な検査も含めて診断した場ノ飢こよって当然確認は文異なってくる．

献

確認には，（1）完全確認（complete ascertin−

1）ALAN，E．H．EMERY：Geneticlinkage
betweenthelociforcolourblindnessandment），（2）打切り確認（truncate ascertin−

Duchenne type muscular dystrophy．

ment），（3）多重確認（multiple ascertinment），（4）単独確認があり，それに応じた分馳比の推定法が考案されている．

J・med．Genet．，3：92，1966．
2）FISHER，R．A．：The effect ofmethodsof
ascertinment upon the estimation of

DMDの確認はおそらく単独確認か多重確

frequencies．Ann．Eugen．，8：255，1938．
−61−3）BLYTH，HELEN，CARTER，C．0．，

4）ZATZ，MAYANA・，ITSKAN，SUELIB．．

DUBOWITZ，Ⅴ．，EMERY，A．E．H．，

SANGER，RUTH．．FROTAPESSOA，0．

GAVIN，JUNE，JOHNSTON，H．A．，

and SALDANHA，P．H．：Newlinkage

McKUSICK，Ⅴ．A．，RACE，R．R．，SAN−

data forthe X・linked types ofmuscular

GER，RUTH and TIPPETT PATRI−

dystrophy and G6PD variants，COlour

CIA：Duchenne

blindness，and Xg blood groups．J．med．

smusculardystrophy

Genet．，11：321，1974．

and Xg blood groups：a SearCh forlinkage．J．med．Genet．，2：157，1965．

−62−11）顔面肩甲上腕型脊髄性筋萎縮症−臨床的，遺伝学t的検討−

古

川

哲

顔面屑甲上腕型（FSH型）筋ジストロフィ雄＊
察時の主要症状，血清CPK値，筋電図，筋生ー症に以た筋萎縮分布を示しながら，神経原検，心電図所見は表1にまとめた．

性変化を呈する疾患については，著者らは

発症年齢は7歳より49歳にわたり，この分

Kugelberg−Welander病の特殊型として報告

布はFSH型筋ジストロフィー症のそれと一し（1966，1969）1）2），同様の疾患はFenichel

致する．筋萎縮分布も同様である．

ら（1967）3）によっても記載された．その後，
本疾患に関しては数家系の報告があるのみで症200例について詳しく検討し，2つの異なっKazakovら5）は，FSH型筋ジストロフィー

ある4）．

た家系があると記載している．1つはfacio−

本研究では，新しく経験した7家系11例にSCapulo−humero−perOneal type（jump

ついて，その臨床的，遺伝的問題点を，FSHtype），他はfacio−SCapulo−lmmero−perOneal−型筋ジストロフィー症と対比して検討した．

femorogluteal type（non−jump type）であ7家系の家系図は図1に示す通りである．

る．この2型は，FSH型脊髄性筋萎縮症でも11症例の年齢，性，発症年齢，初発症状，診認められ，特にP−Familyにみられるように

表t
FAMILY AGE SEX ONSET 工NITIAL SⅥイPTOHS
P−

MAINFEATURES CPK EMG BIOPSY
facloSCaplll0−girdle atrophy 258冊

ⅠⅤ−4

19

It

11

shoulder veakness

IV−2

27

H

9

5houlder veakness

I工エー2

52

F

16

trout）1e runnlngふ

faclosCapulo一glrdle−perOnea1
atrophymllder than her Chlldren

holdlng up arms

Gowers（＋）

III−5

43

H

25

shouldeT■Veakness

50

F

7211＋H75

SCapuloperoneal a亡roptly些rt quad fem，rt RBBB
gastroc汁十N
mBB

N

normal
R￡BB

222H

T−
Ⅰエー1

13

dlfflCultyln
llfting arns

fa⊂ioscapuloperoneal atrophy128N
hip girdle mlldly affected

8houlder veakness

faCe Sllghtly affeCted．

C−
ⅠⅠⅠ−4

29

F

21

SCapulaalata．noinlegs1611十（H）1t delt0ld，1t normdl
veakness

quad

fem

no亡Slgnlflcant

S−
ⅠⅠ−3

66

H

19

42

tl

3l veaknessふa亡rophy

vinglng sCaPula（facio）scapulo−glrdle−
119N＋（H）
peroneal
atTOpbylnco叩1ete
R￡BB

H−
ⅠⅠ−4

fa⊂lal veakness．rt peCtOra1

63N＋H rt delt0ld，lt slnuS bradyCardla

Of rt pec仁OralmuscleVeakness・rt deltold pseudo−
hyper亡rophy
not49

tlrednesSln valklng（facio）scapul0−girdle atrophy163N lt quad fetn sinus bradycardia

31

i cllmblng up stalrs Covers（＋＋）
5houlder veakness（faclo）scapular atropby lO6N

quad fen
speclflC

（57）

W
ー
′

5

F

3

l

b

l

−

▼ ⊥

3

T ▲

8
3

M

■

n

▼ ⊥

n

5

●

7

▲

T エ

T ▲

M

T

− ヽ 一

■

7

faclal veakness

faclosCapul0−glrdle atrophy

gen prox veakness

COmpll⊂ated byl．1COrdleslon

34M

N

（54）

hlgh T vave（）lndlCateS Sllght Or mlnlmalln maln features and mlG．CPK：nOrmal＜100．がmeans neurogenlC．Hmeans myogenlc．

＊東京医科歯科大学医学部神経内科

ー63−

Ⅱ

Ⅱ【
1−9

10−17

18

19

20

21

〝−ねの′ケ1，2 14〟−ねの′●ヶC−ね爪／ケ

1

2

3

5

6

7

∫−ね〝〟レDO NO加AL仙AL【．FFMAL【囚◎A椚⊂T【DMAL【′F【仙ALHノ＝PER50NALLY【XAMINED PATl【NTIgAFFECTEDMALEDIED（AGE LNDlCATEDA80VE SYMBOL）

工E
1

2

3

4

8

同一家系に両型が共存することが少なくない．

berg−Welander病に関する臨床的および典型的な両型が同胞に発症した家系について

遺伝学的考察．臨床神経，6：148，1966．

は，別に報告した6）．この両型は別の疾患では2）Furukawa，T．，Tsukagoshi，H．，Sugita，なく，同一遺伝子の異なった表現型と云うべきであろう．

H・，et al：Neurogenic muscular atrophy
Simulating facioscapulohumeral muscu−

心電図では，多くの例に異常を認めた（表lardystrophy，with particular reference1参照）．FSH型筋ジストロフィー症では心to the heterogeneity of Kugelberg・

電図変化がまれであるとされているが，この点で本症はやや異なる．しかし，Emery−Drei−

Welander disease．J．Neurol．Sci．，9：

fuss病にみられるような高度の変化は認め

3）Fenichel，G．M．．Emery，E．S．＆Hunt，

なかった．

389，1969．

P・：Neurogenic atrophy simulating

遺伝形式は図1の家系図にみるように常染
色体性優性で，Skippingを認めなかった．

facioscapulohumeral dystrophy．Arch．
Neuro1．，17：257，1967．
4）Furukawa，T．＆Toyokura，Y．：Chronic

結論

Spinal

1．FSH型脊髄性筋萎縮症は，常染色体性優性遺伝をし，Kugelberg−Welander病，Eme−muscular atrophy of faciosca・

pulohumeral

type．J．Med．Genetリ

13：285，1976．

ry−Dreifuss病とも異なった独立疾患である．

5）Kazakov，Ⅴ．M．，Bogorodinsky，D．二K．，

2．Kazakovのjumptype，nOn・Jumptype

Znoyko，Z・Ⅴ・，etal＝Thefacioscapul0−は，本症でも認められるが，これは同一遺伝

1imb（orthefacioscapulohumeral）typeof子の表現型の違いであると考えられる．

musculardystrophy．Clinicalandgene・

3．本症では，FSH型筋ジストロフィー症に

tic study of200cases・Eur．Neuro1．，

比べ，心電図変化を認めることが多い．

11：236，1974．

6）古川哲雄：顔面屑甲上腕型筋萎縮症にみら文献れる臨床的異種性．神経内科，11：595，

1）古川哲雄，塚越磨，杉田秀夫，ほか：Kugel−

1979．

ー65−

12）Familial oculocranioskeletalneuromusCular disease
With abnormal musclemitochondriaのfollow up study

研究協力者

矢

荒

木

淑

郎＊

崎

一

雄＊

山 村 善 教書あることが確認されている．また28歳で溺死

は じ め に進行性外眼筋麻痔をはじめとする多彩な神した長姉も病歴及び写真から同じ疾患であっ経筋症状を呈し，ミトコンドリア異常を伴うたことが推定され，第3姉は眼球運動障害の疾患は従来種々の名称で報告されているが，みを有することが確認されている．これらの病因が解明されていないため，相互の異同や所見は既に田村らにより報告されている1）．

疾患概念の位置づけについては不明の点が多

退院後，患者は外来通院を中断したが，上記

い．1974年，田村らl）は，このような疾患が同症状は徐々に進行し，最近では難聴と言語不胞4名に発症した例を，Familial oculocra−

明瞭のため，身近な人以外との会話は困難で

nioskeletal neuromuscular disease with

あった．しかし，自宅では家事や軽度の農作

abnormalmuscle mitochondriaという名称で報告したが，最近我々はそのうちの1名を業を行い，普通食を摂取し，時には1−2km
離れた商店まで自転車で買い物に行くことも7年後に再検査する機会を得たので，この間あったという．1980年8月，難聴を訴えて宮の臨床的経過を明らかにするとともに，文献

崎市の耳鼻科医を受診した際，眼球運動障害上みられる類似症例と比較し，この疾患の位の精査を勧められ，宮崎医大第3内科に紹介

置づけについて再検討したので報告する．

され入院した．
既往歴：特記すべき事はない．

症

例

34歳女性．独身．無職．
主訴：限瞼下垂，眼球運動障害，囁下困難，難聴．
現病歴：イトコ婚の両親の第5子として正常満期産にて出生．小学校の頃から動作が鈍く，学業成績も不良であった．中学校卒業後，1−2年洋裁店に勤務ののち自宅にて洋裁を営んでいたが18歳頃日艮瞼下垂が現れ，20歳頃にはE艮球運動障害が明らかとなり，24歳頃には軽度の囁下困難，鼻声，難聴が出現した．
27歳の時（1973年），以上の症状の精査のため
九大神経内科に入院した．この時，長兄も同時に入院精査をうけて兄妹とも同一の疾患で家族歴：上記の如く，同胞5名のうち長姉，
長兄，第3姉に同様の疾患があったと思われるが，長姉は既に死亡し，長兄も田村らの検索の後，1975年に囁下性肺炎を思わせる症状
で34歳にて死亡している．第3姉は現在36歳
で日常生活に支障なく暮らしており；噴下障
害，構音障害，難聴などはないというが，今回は本人の協力が得られず検索していない．
調査しえた限りでは，父母（イトコ婚），祖父
母の世代には同様の症状を呈した人はいない．
入院時現症：身長147cm，体重29kgと小柄でるいそうが目立つ．12歳，27歳，34歳時の全身像を図1に示す．一般内科的には著変はない．神経学的には，知能低下が認められ，（WAIS，言語性65，動作性68，全IQ65），眼＊宮崎医科大学第三内科

底には異常所見はない．眼瞼下垂があり，眼−66−∴叫 淋 ⁚ ≠ ■ 〜∴′ ・

図112歳，27歳（郎寸らの検索時）及び34歳（今回の入院時）の全身像．
球運動も高度に障害され両眼ともわずかに外等は正常である．髄液検査では，初庄75

転しうる以外は動かない．一方対光反射と近mmH20，水様透明，細胞数1／3（リンパ見反応は保たれている．ミオバナー顔貌を呈球），蛋白50mg／dl，糖48mg／dlである．心電し，側頭筋は萎縮している．咽頭の動きは悪

図は伝導障害なく正常である．脳波では6く囁下困難と微弱鼻声が認められ，発語はき〜7Hzの♂波の混在を認める．テンシロン

わめて不明瞭である．感音性難聴が認められ試験は陰性である．運動神経伝導速度は四肢る．舌の萎縮やfasciculationはない．頸部挙では正常であるが，顔面神経ではlatency3．4

上は不能で，胸鎖乳突筋をはじめ，頸部の筋

msecで軽度の遅延が認められた．反復刺激萎縮が著明である．四肢では筋萎縮と筋力低によるWaningやwaxingはみられなかった．

下は上肢帯筋に最も強い．軽度のGowers徴

針筋電図は，右胸鎖乳突筋，右三角筋，左候がみられるが歩行はほぼ正常である．Fas−

上腕二頭筋では低振幅で持続の短いmotor

Ciculationはなく，myOtOnia現象もみられな

unitと十分な干渉波形が得られ，筋原性変化

い．腱反射は全般に低下している．小脳症状が主体であるが，一部に安静時放電がみられや感覚障害はみとめられない．

た．右上腕三頭筋，右把持球筋ではこれらの検査所見：検血，検尿には異常を認めない．

所見に加えて高振幅のmotorunitが混在し，

血液化学：絵蛋白6．8g／dl，アルブミン4．0g／

motorunitの数も軽度減少していた．右大腿dl，GOT17U／L，GPT4U／L，LDH

四頭筋では，安静時放電はないが，高振幅，

313

U／L，CPK70U／L（正常5−120），アルドラ

多相性で持続の長いmotor unitが主体となーゼ1．OU／L，他肝腎機能，血清脂質，電解質

り，最大振幅5mVのgiantactionpotential−67−

図2 a plasma membraneに囲まれた島状の著明なミトコンド））アの集積を示
す．4000倍．
b

突出したplasmamembraneの内部にミトコンドリアの集積と脂質の増加が認められる．6000倍．

c aでみられる島状のミトコンドリアの集積した部分の拡大像．大部分のミトコンドリアは正常大で，クリステの形態も正常であり，結晶様封入体は見出し得なかった．20，000倍．

一68−

考

が出現，干渉波形も十分でなく，神経原性変化が主体であった．

察

今回の所見を1973年の田村らの所見と比較

筋生検所見：左大腿四頭筋で施行した．光

して表1に示す．本症例の基本的な病像は27

顕では，筋線経の軽度の大小不同が認められ歳の検索時にほぼ完成されており，その後7るが，萎縮線経の多くはangularfiberであっ

年間の進行は比較的軽度であったと思われる

た．顆粒様変化を示す筋線経が散在性にみらが，知能低下と難聴は進行したと思われる．

れ，これらには小空胞や筋鞘下のClearspace

また図1に示した如く，全般的な筋萎縮もわがみられた．中心核が37％の筋線経にみられずかであるが進行している．新たに脳波異常た．結合織は中等度増加し，特にperimysium

がみいだされている．筋電図では，7年前にに著明であった．一部に細胞浸潤も認められ

右上腕二頭筋で筋原性変化のみがみられたのた．Gomori−trichrome変法による染色では，に対し，今回は部位により筋原性変化が主体

H．E．で顆粒様変化をみた筋線経に一致しての筋と神経原性変化主体の筋があり，筋生検

ragged red fiberと思われる線経を認めるが所見にも表1に示すような違いがみられた．

赤染物質は比較的少量であった．DPNH染色

生検所見の違いが時期の違いによるのか部位

ではraggedredfiberと考えられた線経の筋の差によるのかの判断には慎重を要する．新

鞘下に濃染する部位を認め，mOth−eaten

たにCTの異常がみいだされている．
次に，1976年Berenbergら2）がまとめた35

fiberも存在した．
電顕では，特に筋鞘下に著明なミトコンド

例のKearns−Sayre症候群と本例を比較してリアの異常集積像を認め，グリコーゲン，脂みる（表2）．本症例はKearns−Sayre症候群

肪滴の増加も認められた．しかし異常増加しの3主徴とされる症状のうち，網膜色素変性

たミトコンドリアは大きさも形態も正常と思表l 田村らの報告と7年後のfollow upの所見の比較

われるものが多数を占め，明らかな結晶様封入体は認められなかった（図2．a，b，C，）．

1 9 7 3 年 （田 村 ら）

CT（GE社CTTで「施行）では対称性の白年質の広汎なlow density areaを認め，この齢

外 眼 筋 ；高 度
筋 力 低 下

1 9 8 0 年 （著 者 ら）

27

3 4
同

筋 等 掩

塾 讐）
≡
…
度

知 能低下

旦 畢互と

感音 世相‡
監

選一＿
塁＿

小脳 症扶
網膜 色素変性

（− ）
（− ）
′

部のCT numberは25．4で有意の低値であっ及 び

左た（図3）．

E
E

C
E

G
G

髄液 蛋白
C P I（，L D H
N

C

V

E

M．G

t云導 障 害 （− ）正常7 5 汀唱／ d l
正常lq 6 5 （W A I S ）右 2 0 d B ．左 3 0 d B
（− ）
（− ）
伝 導 障 害 （− ）6 〜 6 H z （〉波 三毘入
5 0 m g ／d l正常！己鼓 な し顔 面 神 経 ：遅 延
四
肢
：正 常

rt．b ic e p s
箭原性変 化（持経 の短 い抵 電位
N M U ，正常 干渉 波形 ）r t．d e lto id ，lt．b ic ep s
rt．ste rn o c le ido m a s to id ：L t ．b ic e p s
軽度（一 ）L t ．q u a d ric e p s
軽 度
（＋ ）

石 原性 変化主体
rt．trice p s ．r t．th e n a r
石原性 変化＋高 電位 N M U
干渉 波形やや滅 少
rL

筋

生 検
筋 線托 大小 不 同
中心核増加
穀粒様変化
結 合織増加an g U la r fib e r
ra g g e d re d tb e r
ミトコン ドリア増 加
ク
形史

図3 CT所見，自賛の対称性のlow density
areaを示す．（GE社CT／Tで施行）

C

69−

T

q u a d ric e p s
神経環 性変化 主体

（＋ ）
（＋ ）
（− ）

（＋ ）
（＋ ）
（十 ）

（＋ ）
（＋ ）
異 常

少 ない
（＋ ）
正常

施行 せず

日 貨 の d eitfu
n s stty
e

low

表2

KearnsTSayre症候群との比較

発症年齢
家族発症
外眼筋麻痔
網膜色素異常心伝導障害

Ophthalmoplegia plusという概念を提唱

K ea rn s−S ay re

本家 系

するにあたってDraclmanが指摘した如く8），

出生時〜 2 0 歳

1 8 〜2 0 歳

原因不明で多彩な症状を示す疾患を分類する

上土
（＋）

（＋）
（＋）
吏ゴ＿

場合，何をもって各症例の区別と連関を論ず

亡＝⊥
（＋）

のCriteriaの妥当性や本症例の如き類似症例

上土上
⊥±上

るのかが問題となる．KeamS−Sayre症候群

球 麻 痺
四肢筋萎縮
知能低下

（＋）′
〉 （
−）
（＋）〜 （−）（＋）〜 （−）

（＋）
（＋）

鞋

（＋）〜 （−）（＋）〜 （−）

（＋）
（−）

？
5 9 〜2 3 5 m g／d t（＋）
5 0 〜7 5 m g／d 】

聴小脳症状
C T 異常髄液蛋白
ミトコンドリア異 常（＋）の位置づけを明確にするためには，今後更に病因論的な研究が必要と思われる．
まとめ（》1974年田村潔らの報告したFamilial
OCulocranioskeltal neuromuscular disease（＋）

Withabnormalmusclemitochondriaの1症
例を7年後に再検した．

と心伝導障害を欠いているが，他の症状の②症状の進行は7年間で比較的軽度であり，SpeCtrumは比較的よく似ている．Berenberg

特に主要病変は27歳の時点でほぼ完成していらは，35例の中には3主徴をそろえた例の家たと思われる．今回の検索で新たにみいださ

族性発症はみられなかったと述べている2）が，れた以前と異なる所見をあげると，⑦筋電図

5例には一部の症状の家族内発症を，1例にで部位により筋原性変化主体の筋と神経原性は血族結婚を認めており，3主徴を満たさぬ

変化主体の筋があったこと，㊥筋生検で以前類似例には家族性発症を示す例があることを記載している．

核の増加がみられ，ragged red fiberはむし

本症例の如き病像を呈する疾患の家族性発ろ少なく，電昆頁的にはほぼ正常形態のミトコ症を明確にとらえた報告は田村らの原報告がンドリアの異常集積を認めたこと，OCTで最初であったが，その後川崎ら3），Leshner

白質の広汎なlow density areaを認めたこら4），岡本ら5），Schnitzlerら6），加知ら7），のと，等である．

の所見に加えて，angularfiberの存在，中心

報告が文献上みられる．岡本らと加知らの例③文献上，本症例に類似した疾患が家族性は発端者以外は1症状のみの不全型と思われ，発端者以外の詳細な検討はされていないが，に発症した報告がいくつかみられるが，これらの疾患概念上の位置づけには未だ不明の点

本症例と同様のCT異常を示している点が注が多く，今後の症例集積と病因の解明が必要

目される．川崎らの症例はKearns−Shy症候である．

群として報告されているが，心伝導障害を欠いている．一方Leshnerらの報告例はKea−［謝辞］：本症例の12歳及び27歳時の貴重なrns−Sayre症候群の3主徴を具えた患者が常写真を御提供いただいた，九州労災病院神経

染色体性優性遺伝を思わせる形で家族性に出内科，田村潔先生に感謝いたします．

現している．これら5報告にみられる症例は，症状のSpeCtrum，遺伝形式，浸透率等に微妙文

献な違いがあり，すべてを同一の疾患と断定す

1）Tamura，K．，Santa，T．，＆Kuroiwa，Y．：

ることはできないが，Kearns・Sayre症候群

Familial oculocranioskeletal neuro・

類似の症状が家族性に出現している点で本例とともに興味が持たれる．

muscular disease with abnormalmuscle
mitochondria．Brain，97：665，1974．
−70−

呈し難聴を伴ったOCular myopathy症例．

2）Berenberg，R．A．，Pellock，J．MりDiMauro，

臨床神経，18：557，1978．

S．，et al．：Lumping or splitting？
tOphthalmoplegia−plus6）Schnitzler，E．R．，＆Robertson，W．C．Jr．：

orKearns・Sayre

Syndrome？Ann．Neuro1．，1：37，1977．

Familial Kearns−Sayre syndrome．

3）川崎研一，木下其男，里青首二郎，ほか：

Neurology（Minneap．），29：1172，1979．

KearnS−Shy症候群の2例．日内会誌，64：7）加知輝彦，加藤寿雄，小原博享：CT上広汎な白質のlow densityを呈したOphthal−

19，1975．

moplegiaplusの1例（会）．臨床神経，20：

4）Leshner，R．T．，Spector，R．H．，Seybold，M．，et al．：Progressiveextemalophta1−

54，1980．

moplegia（POE）with ragged red fibers：

8）Drachman，D．A．：Ophthalmoplegia plus．

Anintrafamilial study．Neurology

The neurodegenerative disorders asso−（Minneap．），28：364，1978．

ciatedwithprogressiveexternalophthal・
moplegia．Arch Neuro1．，18：654，1968．

5）岡本俊子，向山昌邦，飯田光男，ほか：広
汎なCT異常像，馬区血運動負荷試験異常をー71−13）筋緊張性ジストロフィー症の脳のCT−SCAN所見の検討

井
研究協力者

大

井

西 谷
は

じ

め

長

村

裕

夫＊

和＊

太

田

光＊

立

岡

良

久＊

裕＊＊ 今 井 輝 国＊＊＊は，スライス幅10mm，MATRIX160×160，に

筋緊張性ジストロフィー症（以下MD）は，

走査時間1分または4分であり，後者の撮影

筋力低下，ミオトニー，白内障や内分泌機能条件は，スライス幅8mm，MATRIX256×障害なども示す．さらに，知能低下，竜骨動性256，走査時間18秒であった．得られたCTの眼球運動異常，脳波異常，視床ニューロン内

計測部位として，最大前角間距艶（A），最大の封入体の存在やlight−near dissociationは，第三脳室幅（B），最大頭蓋円径（C），最大側中枢神経系病変の存在を示唆している．著者

脳室休部間距敵（E）および半球間裂を選び，らは，昨年の本研究班々会議にてMD患者

透明なメジャーを用いて測定した．これらかは，赤外線電子瞳孔計による検索にて直接対
光反射の最大縮瞳速度の著明な低下とlight−

ら，anteriorhornindex（A／C），Cellamedia
index（E／C）とHIrd ventricleindex（B／near dissociationを認めることを報告した．

C）を計算して，％表示とし天幕上の脳室系のしかし，この責任病巣と想定される中脳は，評価のパラメーターとした．半球間裂は少し

CT−SCANでは異常所見を示さなかった．今でも関大を示すものを陽性とし，陽性の発現回は本症における中枢神経系とりわけ天幕上率を計算した．

の変化をCT−SCANを用いて検討した．
結Anterior hornindexは30〜39歳男MD群

対照と方法対照はMD群11名（30−39歳男

果

4名，

30．9±3．0（p＜0．05），対照群25．5±2．3，

40〜49歳男3名，50〜59歳男3名，40〜49歳

40〜49歳男MD群30．6±4．7，対照群25．9±

女1名）と対照群31名（30−39歳男5名，3．0，40〜49歳女MD28．2，対照群26．6±1．1，

40〜49歳男5名，50〜59歳男6名，30〜39歳

50−59歳男MD群31．4±2．3（p＜0．05），対照

女4名，40−49歳女3名，50−59歳女8名）であった．非器資性疾患患者を対照とした．
使用したCT機器は，EMIlOlOとDELTA50
FSの2機種で，スライス面は原則的にCM−

群26．5±1．2を示した（図1）．値はいずれも％表示で，M±SEを表わし，以下の図でも同様である．30歳台の男と50歳台の男のMD群のanterior homindexは対照群に比較して有意に大きく，前角の萎縮を示唆した．Cellalineに150の角度で行なった．前者の撮影条件

mediaindexは30〜39歳男MD群24．3±3．4，
対照群18．8±3．8，40〜49歳男MD群30．8±＊京都大学医学部第二内科＊＊国立療委所宇多野病院神経内科

4．6（p＜0．05），対照群21．5±2．7，40−49歳＊＊＊大阪北野病院神経内科

女MD25．6，対照群22．6±2．4，50−59歳男ー72−

MD群29．4±3．8（p＜0．05），対照群21．1±
2．2であった（図2）．Cellamediaindexは，比して有意に大であった．IIIrd ventricle

40歳台と50歳台の男のMD群では対照群に0．05），対照群2．5±0．5，40〜49歳男MD群

indexは，30〜39歳男MD群4．8±1．7（p＜5．7±2．4（p＜0．05），対照群2．6±0．5，40〜49〈ANTER10R HORNINDEX〉

歳女M D3．9，対照群2．3±0．9，50〜59歳男
MD群6．6±1．7（p＜0．05），対照群3．1±1．0

壬を示した（図3）．IIIrd ventricleindexは，
30歳台，40歳台，50歳台といずれの年齢層でも対照群に比して大きかった．図4に40歳台●のMD患者の第3脳室を含んだスライス面で撮影したCTと対照者のそれを示した．半球間裂の関大の発現率を表1にかかげた．対
照群に比較してMD群では，半球間裂の関大している症例が多い傾向を認めた．

γ
C （
％
）

くtlrd VENTRICLE INDEX

M ±SE

男

女

30 〜 39男

女

男

40 − 49〉女

50 〜 59
卦P＜0，05

図1陰影をした範囲は対照群の値を示す．
30歳代男と50歳代男で有意差を示す．
くCELLA MEDIA mDEX〉

☆P＜0．05

図3 各年齢層の男のindexは対照群に比して有意に大きい．
表l 半球間裂は，MD群では年齢に比しても関大傾向を示す．
く半
30 − 39
男
・ンP＜0．05

愚

図2 40歳代男と50歳代男で有意に大きいこ
とを示す．

対

−73−

書

照

群

群

間

裂 〉

40 − 49
女

2 ／4

0 ／4

50 − 59

翼

女

男

1 ／3

0 ／t

2 ／3

（3 3 1 ） 1 0 ヽ I（5 0 ％ ）
1 ／5

球

1 ／5

1 ／3

女
／

（67 ％ ）
3 ／6

4 ／8

（2 0 ㌔ ） 1 0 ヽ ） （2 0 X ） （3 3 ヽ ） （5 ）1 ） （5 0 X ）図4考40歳代男の1例のCT−SCANを示す．右が対照者，左がMD患者
で第三脳室の拡大と基底核の石灰化をMD患者で認める．

比して関大傾向にあり，anteriorhornindex

察

従来から，筋緊張性ジストロフィー症患者も有意に大であることは，前頭葉の萎縮がこでは，種々の神経内分泌学的異常1）が報告さの年齢層から発現することを想定させた．まれている．これらの異常のなかで，コルナゾ

た，いずれの年齢層でもIIIrdventricleindex

ールのH内リズムの異常，インシュリン負荷

が対月削こ比して有意に大であり，このことは試験時のコルチゾールの低反応や糖負荷試験

間脳の萎縮を示唆した．本症における神経放における反応性低血糖に対するHGHの無反応は，間脳病変に基因すると考えられてい射線学的異常として，気脳写による検査所見から第三脳室の拡大と側脳室休部の拡大が著る．そこで，CTにより天幕上の変化を検討し明な所見として報告4）されており，著者らのた．著者らが，脳室系の変化のパラメーター

結果とも一致する．このことは，本症におけとして用いたanterior hornindex，Cella

る神経内分泌学的異常の形態的表現とも考え

mediaindex，IJIrdventricleindex2）は，いられるが，第三脳室の拡大はもとより本症にずれも各計測値を最大頭蓋内径で処理をしている．この時に問題となるのは，本症に比較特異的な所見ではない．また，CTの所見のみから脳萎縮の有無を結論することは困難であ的高頻度に認められる頭蓋骨のhyperostotic

るが，第三脳室の拡大は間脳の萎縮を示唆すchange3）である．この変化の要因として，る所見といえよう．CTにおける第三脳室のHGHの分泌異常が想定されている．最大頭拡大の程度と間脳機能異常の対応を検討する

蓋内径は，近似的に最大大脳横径に対応することが必要である．羅患年数と脳室拡大の相と考えられるので，計測に容易な頭蓋内径を関は今回の分析では明確に認められなかった

使用した．

が，従来の報告5）では有意の相関をもつとされている．この点についても，以後の観察に半球間裂は，本症群で30歳台から対照群に
一74一

より検討が必要と思われる．

3）Chiro，G．D．＆Gaughey，J．Eリ

Skull

Changesin eighteen cases ofdystrophia
文

myotonica．Acta．Radio1．，54：22，1960．

献1）高井恒夫，高橋桂一，井村裕夫，ほか：内4）Refsum，S．，Engest，A．＆L6nnum，A．：

分泌学的に精査した筋緊張性ジストロフィ

Pneumoencephalographic changesinー症の一例．最新医学，31：1014，1976．

dystrophia myotonica．Acta Psychiatr．

2）Haug，G．：Ageandsexdependenceofthe

Scand．（Suppl．137），34：98，1959．

size of normal ventricles on computed5）Refsum，S．，L6nnum，AリSjaastad，0．，et．

tomography．Neuroradiology，14：201，

al．：Dystrophia myotonia．Neurology

1977．

（Minneap．），17：345，1967．

−75−14）FSH型筋萎縮症の特殊例の1症例について
桝

研究協力者
は

畑
じ

め

中

良

田

夫＊

啓

嗣＊

野

島

元

雅＊＊

井

上

正

史＊＊

にも障害を釆たし，顔面筋の萎縮も出現したに進行性に筋萎縮を釆たす疾患は，神経原性ため，精査入院となった．

と筋原性に大別され，前者は遠位筋，後者は入院時所見

近位筋の障害が主であるとされながらも，発全身的一般所見：特別の異常を認めない．

症年齢，筋萎縮の分布，進行度，遺伝様式を

神経学的所見：瞳孔，眼球運動は正常である

もとに，それぞれの点で両者の類似性や相違性が議論されながら，そこに統一的見解を作が，左右の目を完全に閉じることは出来ず，るべく努力が積み重ねられてきた1）2）．

とが出来ない．しかし舌挺出は直で，舌の萎

またロはなんとか閉じられるが口笛を吹くこ

顔面・肩甲・上方専部に筋萎縮を釆たす症例

縮，線維束性攣編は認められない．以上脳神に対してもそれは例外ではない．顔面・肩甲・経領域では眼球運動や舌や囁下障害もなく，

大腿型，顔面・肩甲・下腿型，顔面筋確息を顔面筋にのみで障害が認められた．

伴わない肩甲・下腿型などの亜型が指摘され，その成因も一致をみている訳ではない．
私共は，顔面・肩甲・上樽型の一亜型とみなすべき特異な症例を経験したので，ここで報告したい．
症例

症例：30歳の男性，無職．
主訴：上肢挙上困難と歩行障害．
家族歴：血族結婚（」，兄弟3人のうち，兄も肢をひいているとのことであるが，遠方に住んでいるので詳細は明らかではない．
既往歴：特記すべきことなし．
現病歴：15歳頃より，物を高く挙げられなくなり，徐々に上肢の挙上が困難となった．17
歳頃から早く走れなくなり，同時に両側足関節の背屈運動が困難となった．次いで登撃性
起立，動揺性歩行が現われた．29歳頃には，よく転ぶようになり，また右手首の背屈運動＊愛媛大学保健管理センター＊＊愛媛大学医学部整形外科

図l 全身像−76−

上肢挙上は両側とも肩の高さまでしか挙げ

甲状線機能検査ではT46．4／Jg／dl（5−13．

られず，肘関節の屈曲，伸展並びに右手関節7），T3132／ g／dl（90〜170）でいずれも正常域佃を示していた．

の伸展力に低下が認められたが，握力は左右とも30kg以上とほぼ正常であった．

胸部，さ射任，腰椎のⅩ線所見や心電図にも歩行は動揺性で，登琴性起立を行ない，且異常は認められない．

つつま先立ちができない．しかし，踵立ちは

筋電図：右上腕二頗筋と右肺腹筋の筋電図可能であった．

（図2）であるが，前者でShortduration，low

筋の萎縮は顔面，屑甲，上腕部，前腕部伸VOltage傾向の混入を認めるが，minimal

展側，それに腰帯部，前脛骨部に認められた

COntraCtionで，1〜3mvoltの比較的高振（図1）．つまり筋萎縮は前脛骨部を別にする

幅のNMUが主となっている．後者ではと上下肢とも近位筋が著明であった．

giantspikeを混入し，全体に高振幅波型を示

萎縮筋での筋線維束性攣縮は認められない．深部腱反射は上下肢で減弱しているが，表在性並びに深部知覚には異常は認められず，
運動失調，不随意運動，関節拘縮なども認めしたが，unitの減少は認められなかった．全体的として神経原性とみなすべき所見と考える．

なお運動神経伝導速度は右尺骨神経が53ない．
検査成績（表）：末梢血一般及び検尿に異常をm／sec，右脛骨神経が52m／secと，ともに正常域値を示した．

認めない．血沈値は1時間4mm，2時間16筋生検所見：前脛骨筋では萎縮が著明なので，mm．CRP，RA，抗核抗体，梅毒反応などの肉眼的に萎縮の認められない右肺腹筋で筋生

血清学的検査は全て正常で，肝ヰ幾能検査，血検を行ない，ホルマリン固定によるHE染

清電解質にも異常は認められない．

色，新鮮凍結切片によるHE染色，Gomori

血清酵素はCPK値154u（正常＜70u），Ald−trichrome染色，pH9．4でのATPase染色を

01ase値3．1u（正常＜2．2u）で軽度上昇しておそれぞれ行なった．

り，尿化学でもクレアチンが610mg／dayと軽図3は新鮮凍結切片のHE染色，及びAT
Pase染色である．前者では基本構築がよく保度上昇していた．

持され，散在性の変性を認めるのみであった．

表 検査成績

後者でもタイプⅠ，タイプⅠⅠ線経はモザイク

Urinalysis．Hemogram：nOrmal fange
E．S．R．：4m¶／h，16

rm／2h

C11eSt X−ray．E．C．G．：nOrmal
Liverfunctlon‥nOrmalrange

でhyroid hormon‡T46・4u卵．T3132nq／100ml
Bloodcllemistry三

Na141mEq／L．CllO5mEq／L，（4．8mEq／L．pi4・9mg／dl，Uric acid

4．8m9／dl，

Urea−N20m9／dl．Cholestero1143TTtg／dl，Creatine O・9mg／dl．Crea亡inine O．7mg／dl

Serolo9y！C．R．p．卜）．R．A．卜），A．N，A．卜）．Wa−R（−）
Urlne ehemlstry：Creatine610mg／day
Creatinine

620r呵／daySerum enZyme；LD．H．87u．C．p．X．154u．aldola5e

3．1u

C．S．F．：nOrmal
Cervica1−1umbal splne X−ray；nOrmal

図2 筋電図ー77−

図3 排腹臥 新鮮凍結切片 ×100
左：HE染色 右：ATPase染色

図4 俳腹筋．新鮮凍結切片
HE染色 ×400
構造をなし，type grOupingは認められず，

釆たした線経が認められ，一部にphagocyto−

ほぼ正常に近い組織像を示しているものと考Sisを混じていた．

える．
考

図4は図3で散在性に変性を来たしている察と思われる部分の強拡大であるが，正常な筋本症例の特徴をまとめてみると，①発症が線経のなかに，いわゆるfloccularchangeを

15歳であること，②進行が遅いこと，③血清−78一

酵素値が軽度上昇していること，①筋萎縮型

児期から発症するWerdnig−Hoffmann型のが特異的で，上肢では近位筋，下月支では遠位

Ⅰ型，歩行前に発症する中間型のⅠⅠ型，歩行筋の障害が優位であるが，顔面筋の萎縮も伴以後に発症するKugelberg−Welander病型っていること，特にその筋侵聾の過程はまずのⅠⅠⅠ型の3亜型に分類している4）．

上肢で近位部から還位部へ，次いで下肢で遠一方，そこに見出されてくる筋萎縮型も，位部から近位部へと進み，発症10年以後には

筋電図，筋生検で神経原性所見が確認される顔面筋にも及んでいる．そして脳神経領域で症例を整理すると，筋ジストロフィー症の病は，眼球，舌，喋下などの運動は総べて正常型分類と同様，肢帯型，顔面・屑甲・上樽型，で，障害は顔面筋にのみ限局していること，末梢型，眼筋・咽頭筋型の4亜型に分類し得（9筋電図所見でhigh amplitudeが目につく

ると古川らは述べている5）．

ものの，Short duration，low voltageも混

ところで，そのなかの顔面・眉甲・上樽型

入し，また放電数も減少はほとんどみられず，の筋萎縮型であるが，大腿部に萎縮を伴うも

typicalなdenervation patternを示していの伴わないもの，下腿部に萎縮を伴うもの伴ないこと，⑥筋生検所見でfloccularchange

わないもの，顔面筋の繹息を伴うもの伴わなを認めることなどが挙げられる．

いものなどがみられ，さらに細亜型に分類し顔面・屑甲・上1樽型の良性経過をたどる筋萎縮症は，下肢に萎縮を伴わない筋ジストロうる可能性があるだろう．

フィー症，Kugelberg−Welander病，慢性限局

しかし本症例は，発症部位は上肢の近位部であるが，その後筋萎縮は，下肢の遠位部に性多発性筋炎，顔面筋罷恩を伴わず，下肢に現われて近位部へ，そして顔面筋に，さらに萎縮を伴うscapulo−perOnealatrophy，Eme−

前腕伸展筋へと広がりを示した．これからみると，上記の報告例はある時点の筋萎縮型がry−Dreifuss病3）などが報告されている．
このうち，多発性筋炎に関しては，本症例捕えられているにすぎず，その後の時間の経には寛解の認められないこと，皮膚発赤や筋過で，類似の筋萎縮型をとるものとも想定さ痛を一度も認めていないこと，血沈，CRP，れよう．

RA，抗核抗体などが頻回の検査で常に陰性したがって，何故発症がその部位から始まであり，筋生検所見でも炎症所見を伴っていないことなどから否定されよう．

るのかという問題は残るとしても，現在の時
点では，一応類症例として把握しておくのが妥当であるものと考える．

またEmery−Dreifuss病としては，関節拘縮，心伝導系の障害を認めず，且つ顔面筋障
害を伴う点でまた態度を異にしている．

ま

と

め

しかし，筋電図，筋生検では，いずれも神①15歳で，上肢挙上の障害で発症し，筋経原性所見が強いが，筋原性変化も混在させ萎縮が上肢では近位部から遠位部へ，下肢でている．且つその経過は，15歳発症で現在のは遠位部から近位部へと緩徐に進行し，発症

年齢が29歳と極めて長い．血清CPK値にも14年後には顔面筋にも及び，兄も類症者であ

軽度ではあるが上昇がみられる．したがってる可能性のある男子症例を報告した．そして

neuropathyよりのmyopathy，つまり広義の血清酵素は軽度上昇し，神経原性，筋原性変Kugelberg−Welander病（症候群）とみなすべ化を混入した筋電図・筋生検所見を示していき疾患であると考える．

た．

慢性の脊髄性筋萎縮症（SPMA）は，良性② この種の症例は，剖検例の少ない現在，経過をたどるHoffmann病とKugelberg−

更にきめ細かく診ていく必要性があるものとWelander病を結びつけ，Emeryらは，新生

考える．
−79−

文

献

genetic and clinicalentity from typel1）Walton，J．N．：Disorders of Voluntary（Werdnig−Hoffmann disease）and type3

Muscle．3rd Edition，Churchill，London，（Kugelberg・Welanderdisease）・Clinical
Genetics，2：203，1971．

1974，p．870．

2）古川哲雄：脊髄性進行性筋萎縮症の分類と5）Furukawa，T．，Tsukagoshi，H・，Sugita，Kugelberg−Welander病．神経内科，12：H．，etal．：Neurogenicmuscularatrophy

319，1980．

simulating facioscapulohumeral muscu−

3）Rowland，L．P．，Fetell，M．，01arte，M・，etlardystrophy，Withparticularreference

al．：Emery−Dreifussmusculardystrophy．

to the heterogeneity of Kugelberg−

Ann．Neuro1．，5：111，1979．

Welanderdisease．J．Neurol．Sci．，9：4）Fried，K．＆Emery，A．E．H．：Spinal
muscular atrophy type389，1969．

2，a Separate

ー80一15）Centronuclear MyopathylO代発症遠位型の1例

高

研究協力者

桂

一＊

子＊

陣

内

研

二＊

小 嶺 幸 弘＊

藤

田

拓

男＊

後

藤

和

橋

は じ め に

春

藤

文

子＊

CentrOnuClear myopathyとmyotubular

脳神経，協調運動，知覚の異常を認めなかった．

myopathyは，同じカテゴ））一に一応分類さ

検査所見：末梢血，肝機能，血清蛋白及びれているが，個々の症例の臨床像のみをみてその分画，甲状腺機能，血清電解質，血糖はもかなりの拡がりがみられる．ここでは，最いずれも異常なし．免疫反応正常．血清

近我々が経験した10代に発症し眼筋の罷息がCPK43IUで正常．血清クレアチン1．0，クレ

明らかでない遠位型萎縮を示したCentrO−

アチニン1．0mg／dlで前者はやや高値．尿ク

nuclear myopathyの1例を示し，考察を行

レアチンは145mg／日で増加，尿クレアチニン

なう．
症

例

症例：27歳男
主訴：上下肢特に左下肢の筋力低下．
現症歴：12歳で左足関節背屈困難出現．走行は遅かった．16歳で階段昇降困難となり，漸次増強，20歳で懸垂運動不能に気付く．23
歳で全身の筋脱力を訴えた．複視，嚇下困難には気付いていない．
家族歴，既往歴：特記すべきものなし．
現症：意識，知能，見当識いずれも正常．
図1の如く顔貌はややmyopathicな印象を与えるが顔面筋，外且艮筋の脱力はみられなかった．脳神経異常なし．下腿及び前腕の中等度の筋萎縮を認めた．左足関節の軽度の拘編があった．徒手筋力テストで前腕筋群は概ね3，握力右12kg，左15kg，他，前脛骨筋は右4＋，左4−で，遠位筋に優位の筋脱力と萎縮がみられた．他の部位は筋力4十と軽度の脱力がみられたが萎縮は明らかでなかった．
腱反射は下肢で消失し，上肢で減弱していた．
＊神戸大学医学部第三内科

図l 症例の全身像
−81−

図2

Trichrome染色×200は417mg／日と減少していた．前腕阻血運動試
験は正常．
筋電図：左前脛骨筋で安静時にfibrilla−tion voltageがみられた．他の筋萎縮部位ではShortduration，lowvoltageなどの筋原性変化がみられた．運動神経伝達速度は正常（左俳骨神経51．8m／SeC）．Electrooculogram正常．
生検所見：右前脛骨筋で行なった．
図2はtrichrome染色で線経の大小不同がみられ，中心部に赤味を帯びて染る核がみられる．中心核は大径小径の両線経にみられた．他に脂肪変性が明らかである．図3は縦断のHE染色である．線経の中心に連珠状に並ぶ核がみられ，核と核の間は筋原線経が欠如している．この中心核は小径の線経に多い傾向はあるが，最下方にある大径の線経にも中心核はみられる．中央の大径線経にはこの切片では中心核がみられず，断面でも同様の線経がみられた．図4はNADH染色で萎縮

図3

線経が濃く染るもの多い．一部に活性の低い

HE染色

×200

ものもみられる．大径の肥大した線経では周chrome染色ではraggedredfiberの像はみら辺に活性がみられるが，先に示したれなかった．図5に示すようにATPase染色

tri−
一82−

図4

図5

NADH染色×200

ATPase（pH9．4）染色×200（pH9．4）で線経の中心部の活性の欠如がみその構造異常や核周辺の集合はみられなかっられた．pH4．3でのATPase染色（図略）でた．

は小径線経の約半数が活性低下を示した．このことから小径線経はTypeIとTypeIIの考察

性格をもったものが混在していることが判る．

筋線経の中央に核が存在し，管月空構造を示

電顕では（図略）ミトコンドリアの変形以外，

すミオパテーはmyotubularmyopathy，ある−83一

いはCentrOnuClear myopathyとよばれる．

所見であり，胎児型ミオグロビンが証明され類似のものにperi−CentrOnuClear myopathy

ないことなどより筋発生途上の停止説には反とよばれるものや，組織化学的所見を加えて，対してmyotubeとせずcentronuclear

TypeIfiberhypotrophyまたはatrophyを

myopathyなる称び方を優先させている6）．

付した報告がみられる1）．

いずれにしても，はじめに述べたように

臨床症状は，いわゆるfloppyinfantが多く四肢の萎縮，脱力に加えて限険下垂，外眼筋
麻痔，顔面筋脱力を伴うものが多い．若年乃
至成人発症例は稀で，そのうち本症のような眼筋の羅息を欠くものはKarpatiらの症例2），

myotubeあるいはCentralnucleiを示す症例
は臨床的にもvariationにとみ，個々の症例の形態学及び生化学特に構造蛋白の詳細な検討を行い，成因にアプローチすることが重要と考えられる．

Bethlemらの症例3）とMoxleyらの報告4〉の遠位筋萎縮を示し，眼筋罷息の明確でない，みである．Karpatiらの報告例は四肢の近位

しかも電顕所見も従来の報告と異なる稀な症

筋群に萎縮があり本症の如く遠位筋の萎縮を例を報告した．

示し，且つ眼筋罷息の明らかでないMoxleyの症例（20歳男）では電顕所見で核の周辺に

本研究は昭和55年度厚生省神経疾患研究委託

著明な顆粒状物質とミトコンドリアの集合が費No80−02−27によって行なわれた．深謝する．

みられたが，本症例ではみられなかった．
組織化学的所見では選択的なTypeI

文

献

丘berの萎縮はみられず，むしろTypeII

1）石本進士，後藤幾生：Myotubular myo・

丘berの性格を有する小径線経が約半数混在

pathy一文献的解説−．神経内科，8：413，

した．

1978．

Bethlemらも27歳の女性で40％の線経が2）Karpati，．，Carpenter，S．＆Nelson，R

中心核を有し，それらにはTypeI，TypeII

F．：TypeI muscle丘bre atrophy andの性度が認められたが，多くの線経は中等度

Centralnuclei．A

rare

familial

neurom＿の酸化還元酵素活性を示した例を報告していuscular disease．J．Neurol．Sci．，10：

る6）．

489，1970．

筋電図所見では症状の初発した右脛骨筋に

3）Bethlem，J．，Van Wijngaarden，G．K．，

fibrillation voltageがみられたが，他の部位

Mumenthaler，M．，et al．：Centronuclear

ではすべて筋原性所見であった．これ迄の報

myopathywithtypeIfiberatrophyand

告例では大半が筋原性所見を示し，神経原性myotubes

・Arch・Neuro1．，23：70，1970．

所見単独または筋原性所見と神経原性所見の4）Moxley，RT．，ⅠⅠⅠ，Griggs，R．C．，Markes−

混在するもの，あるいは正常のものがみられ

bery，W．R．，＆Vangelfer，Ⅴ．：Metabolicている．

implicationsofdistalatrophy．J．Neurol．

本症の病因に関しては筋発生途上の機能的Sci．，39：247，1978．

神経支配の異常が最も考えられるがmyo−

5）Bethlem，J．，Meijer，A．E．F．H．，Schellens，

tubularな所見は必ずしもmyotubeと同一

J・P・Mリetのものとは言いがたく，LDHのisozyme
patternもmyotubeとは相違することより，
胎生筋の発育停止とは考えにくくal・：Centronuclear

myopathy．

Europ．Neuro1．，1：325，1968．
6）Munsat，T．L．，Thompson，L．R．＆Cole−

Bethlemman，R・F．：Centronuclear（

らはCentronuclear myopathyとよんでい

Myotubular）

myopathy．Arch．Neuro1．，20：120，1969．

る5）．Munsatらもinternalnucleiは非特異的−84−16）著明な心伝導障害と関節拘綿を呈した
非定型ミオパテー−Emery−Dreifuss症候群との異同−

研究協力者

栢

塚

越

沼

勝

虞＊
彦＊＊

小

口

喜三夫＊＊

柳 沢 信 夫＊＊ 関 口 守 衛＊＊＊
圧正常．心胸廓比67％の心拡大があり，心電図は完全右脚ブロックで心室性期外収縮の散発がみられ，負荷心電図で有意なST低下を認め虚血性心疾患と診断．筋萎縮なく筋電図，
CKは正常．母57歳，心胸廓比63％の心拡大，

遺伝性・変性性神経筋疾患に心病変を伴うことは古くから知られているが，その病因，病態は不明で，神経病学者，循環器病学者の各々の視点から注目されてきた1）．著者らは分類不明の非定型ミオパテー（atypicalmyo−
pathy）の女性例で，著明な心拡大と心伝導路障害を呈し，心カテーテル検査で三尖弁閉鎖

高血圧，心電図上左室肥大を認めた．CK27U（正常値0〜25U）．筋萎縮なく筋電図正常．
同胞（兄，弟）2人あり健康．
入院時現症（24歳）：身長150cm，体重38kg，高アーチ口蓋がある．脈は毎分45，不整不全を，心筋生検で心筋疾患を認めた症例を経験したので報告する．
症例：E．M．27歳，女性
主訴：歩行障害，動障，浮月重．
現病歴：歩行開始1歳3ヶ月．3歳頃から
動揺性歩行，登撃性起立がみられ，5歳頃やせに気づかれた．10歳頃腰をつき出す歩行とで，著明な心濁音界の拡大があり，Ⅰ音の減弱とⅠⅠ音の冗進，胸骨左緑に広汎に2〜3度／6度の収縮期雑音及びgalloprhythmを聴取．
頸静脈怒張，肝腫大，下腿浮腫など右心不全症状を認めた．神経学的には肘関節，股関節，
膝関節に筋性屈曲拘縞があり，頸部前屈制限，
胸椎直線化，扁平胸，腰椎前考の増強がみられた．顔面，体幹に軽度ないし中等度，上肢なり，15歳顔面のやせが認められ緩徐に進行性であった．22歳動悼，浮腫が出現し某院入院．著明な心拡大と心電図異常を指摘され24
歳信大第3内科入院．退院後，25歳Adams−
Stokes発作が出現しpermanentpacemaker

は近位優位，下肢はびまん性に中等度から高度の筋萎縮を認め（図1）筋力は四肢近位筋
優位に中等度低下し動揺性歩行，登撃性起立を示した．異状眉甲があり仮性肥大はなかっを挿入．27歳心臓死した．なお詳細は不明だ
が小児期からの関節拘縞が推定される．
既往歴：特記すべきものなし．初潮は17歳
で月経はある．
家族歴：血族結婚はない．父60歳，56歳頃
から労作時呼吸困難，動悼，浮腫が出現．血た．四肢腱反射はすべて消失し病的反射，筋線維束攣縮，感覚障害はなかった．WAISで
IQは言語性60，動作性90，総合70．精神状
態及び脳波は正常であった．
検査所見：CKは22歳時38U（正常値0＊東京医科歯科大学医学部神経内科＊＊信州大学医学部第三内科〜25）と軽度上昇，入院時はCK127IU（30〜230），アルドラーゼ0．8mU／ml＊＊＊東京女子医科大学附属日本心腹血圧研究所内科一85−

（0．5〜3．1），血清クレアチン0．91mg／dl（0．35〜0．93），尿中クレアチン排泄0．14g／
day（0〜0．2），GOT21KU，LDH140IUと正常で，その他の血液，尿化学検査，髄液等
すべて正常だった．
筋電図ではunit数はほぼ正常で上下肢筋
で低振幅，短持続時間のmyogenic patternが認められた．
左上腕二頭筋生検（図2）では筋束の基本構築は比較的保たれているが，筋線維直径の大小不同，円形萎縮，中心核，問質結合織，脂肪織の増加などミオバナー様変化を認めた．
炎症性細胞浸潤はなかった．NADH−TR染
色でinterfibrillar networkの乱れがあり，
ATPase染色ではtypeI predominanceを示した．異常物質沈着，特異な構造異常を示す筋線経はなかった．
胸部Ⅹ線検査（図3）で，心陰影は心胸廓
比67％と球状に拡大．著明な肺血管影の増強
図l 全身像．肘，股，膝関節拘露と顔面，近位優位の上肢，びまん性の下肢筋萎縮を示す．

はなかった．

図2 上腕二頭筋生検．H＆E．×200
筋線経の大小不同．円形萎縮，問質
結合織の増加などミオパテ一様変化を示す．
一86−

心電図（図4）は毎分300の心房粗動，完全
房呈ブロック，完全左脚ブロックのQRS波

図3 胸部Ⅹ線写真

形を呈する毎分43の心室固イ㍍甘律でQRS時間は0．14秒．時に多源性心室件期外収縮の散

心胸廓比67％の球状心拡大を示す．
Ⅱ

鵡

†⊥

図4 心電図，完全房室ブロック，心房粗＿動，左脚ブロック波形を呈する
心室固有調律を示す．
−87−

発がみられた．ベクトル心電図では，心室固有調律のために心室の変化を読むのは困難で三尖弁の明らかな石灰化はなかった．憎巾肘「後退速度88mm／sec，左室拡張期径49．2mm，あったが，そのQRSベクトルは前方，側方，左室収縮期径33．8mm，左重拡張末期容積119

下方成分にかけ，全体に不整とdistorsionが

m1，左室収縮末期容積39ml，一回柏出量81

強く，著しい心室内伝導障害を示した．

ml／回，左室駆出率67．6％で僧帽弁，左心腔の心臓超音波検査では，三尖弁後退速度は56

計測，大動脈弁に明らかな異常は認めなかっ

mm／secとやや低下し，拡張期に心房粗動にた．

よると思われる低調な月utteringを認めた．

図5

心機図は，頼1静脈波でⅤ波の増大を，頸動右重心内膜心筋生検．H＆E．×100
心内膜の線維弾性肥厚，心筋線経の肥大，配列の乱れ，
問質の線維化など，心筋疾患の組織像を呈する．
−88−

を認め，ミオパチ一に伴う続発性心筋疾患

脈波で著明なdicrotic waveを認めた．
右心カテーテル検査では，右房庄曲線でⅤ

SeCOndarymyocardialdiseaseと考えられた．

波の増大（ventricularization）が認められ，

しかし本例では，僧帽弁及び左心系の異常は右心室造影で中等度の右房への造影剤の逆董充撞く軽度で，三尖弁閉鎖不全単独（isolatedと著明な右房，右室の拡大を認めた．また右tricuspidregurgitation：以下TRと略）が前重心尖部に造影剤の遺残があり右室のasyn−

景にたっている点が特異で，文献上，筋疾患

ergyが疑われた．

特にDuchenne型DMPに伴い，僧帽弁閉鎖

心内膜心筋生検は，カテーテル式生検法で不全をみる報告4）は散見されるがTRは極め

右重からま采取．光顕（図5）では心内膜に軽て稀である．そのmechanismは不明である

度の線維弾性肥厚があり，心筋細胞は横径がが，心筋変性による三尖弁支持組毒故の機能不15〜18JJ（正常10．7±2．0〝）と肥大し，配列の全が推定された．

乱れが強く，樹枝状分枝，断裂が目立ち，問以上より，本例は高度の心伝導路障害，TR質に高度の線維化を認めた．筋形質に特異的所見はないが，一般にglycogenの沈着が増を伴う続発性心筋疾患を合併した分野不明の非定型ミオパテーと考えられたが，Emery−

大し，一部の心筋細胞に好塩基性変性物質のDreifuss症候群にその臨床型が類似してお沈着を認め，COntraCtion bandも散見されり，その異同につき検討する．

た．核はChromatinに富み多形性を示し，変1961年，DreifussとHoganは8人の男性形が目立った．電顕では比較的正常構造を保に発症し，Ⅹ染色体性遺伝で良性経過をとる

持したものと変性の強い心筋細胞とが混在しDMPの家系を記載し，1966年，Emeryとていたが，後者では筋原線経の疎しょう化，

DreifussS）は同一の家系を再び記載し，早期か

高電子密度のZ帯の増生を示すところが目らの関節拘縞と心異常所見があり，仮性肥大

立ち，そこにglycogenの沈着増量が認めらがないことをDuchenne型，Becker型とのれた．なお一部の細胞においては高度のmi−鑑別点として強調し，発症者がほぼ同一の臨

tochondriaの変性像やSarCOplasmic re−床像を示すことと合わせ，良性Ⅹ染色体性

ticulumの拡大，増加像を認めた．

DMPの明らかな一型と考えた．文献上では1902年，CestanとLeJonne6）の報告以来本症考察と推定される症例が散見され，我国でも本例は，臨床所見，筋電図，筋生検はミオ
バナーの所見を示し，女性，孤発例で早期からの関節拘縞が目立ち，仮性肥大がなく，
CPKは一時期軽度上昇していた．
従って進行性筋ジストロフィー症（以下DMPと略）との鑑別が問題となったが，他のMawatariら7），栗山ら8）の報告が本症にほぼミオパテーは，ほぼ否定的であった．DMP
中，Duchenne型，Becker型，肢帯型，悪性肢帯型（三好）2），顔面屑甲上腕型，Cardio−

1979年，Rowlandら9）は従来の報告を総括
色体劣性遺伝，2）小児期からの肘関節及び頸

pathic muscular dystrophy（Norris）3）とし部の拘縮，3）上腕下腿型を呈する筋力低下，てはatypicalな点が目立ち分類は不能であ4）非常に緩徐に進行するミオパテ一，5）末期

った．

に恒久的心房停止に至る心伝導路障害をあげ，一致する．さらに心臓病学者により稀な心伝導路障害であるpersistent atrial paralysisと顔面肩甲上腕型DMPとの合併例がいくつか報告され，その中にEmery−Dreifuss症候群と推定される例が散見される．
し，その特徴として5項目，すなわち1）Ⅹ染心異常に関しては，心電図で高度の心伝導筋電図，筋生検所見からはmyopathic，neu−

路障害を，心筋生検で心筋の非特異的変性像

rogenic及び両者の混在がみられるが，臨床−89−2）三好和夫，多田嘉明，中野益弘，ほか：進所見の同一性を強調し明らかなDMPの一型型としている．

行性筋ジストロフィー症の悪性肢帯型

本例ではミオバナー，心異常所見とも

malignantlimb−girdle type．この型のEmery−Dreifuss症候群の臨床的特徴をほ存在と本症分類上における意義．厚生省進としてEmeryrDreifuss

ぼ有するが，atypicalな所見として股関節，膝行性筋ジストロフィー症研究鑑業績集（ⅠⅠ），

関節の拘縞が目立ち，アキレス腱の短縮は目

1979，p．39．

立たない点，下肢筋の萎縮は遠位優位でなく

3）Norris，F．HりMoss，A．J．＆Yu．P．N．：On

びまん性である点，及びTRの合併があげら

the possibility that a type of ht，mn

れる．また本例は女性で，Turner症候群ではmuscular dystrophycommencesin nyo−

ない点が問題で，従来の報告はⅩ染色体家系

cardium．Ann．N．Y．Acad．Sci．，138：

あるいは男性孤発例で，明らかな女性の報告

342，1966．

はなく，この点で本例をEmery−I）reifuss症

4）Perloff，J．K．，Roberts，W．C．，DELeon，A．

候群とするには疑問があり，TRの合併と合C．，et al．：The distinctive electrocardi0−

わせ別の疾患と考えている．

gram

of

Duchennes

progressive

muscu・

1ar dystrophy．Am．J．Med．，42：179，

しかし本例の遺伝に関しては，両親の心拡大が変性性心筋疾患の可能性を否定できず，

1967．

また本症候群の不全型で，心異常所見のみを

5）Emery，A．E．H．＆Dreifuss，F．E．：Unusual

示す例もあり，母はCKが正常上限であるこ

type of benign X−linked muscularとと合わせ，母がCarrierか，または父が不全

dystrophy．J．Neurol．Neurosurg．Psy−

型で本例もcarrierである可能性は残ると思

Chiatry，29：338，1966．

6）Cestan，R．＆LeJonne：Une myopathie

われる．

avec retractions familiales．Nouv．Ico・

まとめ 著明な心伝導路障害と三尖弁閉鎖不全を呈し，心筋生検で心筋疾患を疑わせる

nogr．Salpetriさre，15：38，1902．

病変が得られた非定型ミオバナーの女性，孤7）Mawatari，S．＆Katayama，K．：Scapu1−

発例を報告し，臨床型の類似するEmery−

0perOnealmuscularatrophywithcardio・

Dreifuss症候群との異同を中心にその病態

pathy．An X−1inked recessive trait．
Arch．Neuro1．，28：55，1973．

を考察した．

8）栗山勝，大内模，梅崎博敏，ほか：関節拘文

縞と心障害を伴った肩甲下腿型筋萎縮症の献

1）Perloff，J．K．，DELeon，A．C．＆0

1例．臨床神経，17：575，1977．

Doherty，

D．：The cardiomyopathy of progressive9）Rowland，LP．，Fetell，M．，01arte，M．，etmuscular dystrophy．Circulation，33：

al．：Emery−Dreifuss muscular dystr−625，1966．

Ophy．Ann．Neuro1．，5：111，1979．

−90−17）いわゆるdistalmyopathyの筋病変について

豊 倉 康 夫＊

研究協力者

栗 崎 博

司■＊ 高 津 成 美＊Distal myopathyは，Welanderによって独立した疾患として確立されたものであるが，その後に報告されているものは，遺伝形式やDistaJmyopathy症例
年令性

発症年齢などWelanderの報告1）とは異なっているものも多くみられる．今回検索した対
象もほとんどが孤発例であり，発症年齢も

F M F

J．M．
K．F．

23

F

27

F

M．M．
K．W．

25

F

29

F

B736 M．Bicep．
B737 M．Quad．

M．K．

26

M

B740 M．Bicep．

7
3
4
3

pathyの特徴をもっている．このような臨床

72

筋優位の筋萎縮，筋力低下というdistal myo−
的にdistalmyopathyと診断される症例が筋病変上どのような特徴をもつかを明らかにするため，生検筋の検討を行なった．
対象・方法
対象は表1に示すように，東大神経内科において臨床的にdistalmyopathyと診断された9症例の生検筋13筋である．年齢は23〜37
歳で，男子2例，女子7例である．生検部位

B444 M．Quad．
B445 M．GCM
B446 M．GCM
B457 M，GCM
B500 M．Quad．
B501M．GCM
B537 M．Quad．
B590 M．Quad．
B591M．GCM
B596 M．Quad．

S S Y

K S S

10−20歳代のものであるが，臨床的には違位

生検部位

M．Quad．＝M．quadriceps femori5は，左大腿四頭筋，俳腹筋又は上腕二頭筋でM．GCM＝M．gastrocnemius

ある．1例のみ常染色体劣性遺伝を示す家族

M．Bicep．＝M．biceps brachii

歴がある．
固定後Epon包埋した標本より電顕による観生検筋は，一部で液体窒素で凍結，残りを察を行った．

Susa固定および2．5％glutaraldehyde，2％
formaldehyde，0．1M cacodylate bufferで国定した．凍結切片は，H＆E，mOdified

結果Gomoritrichrome，NADH−TR，PAS，Oil

検索した筋全例で，dystrophy様変化が認

RedOおよびATPase（pH9．6，4．6，4．3）

められた．変化の程度は，軽度のものからほ染色を行い，また，一部（B736，B740）では

とんど脂肪組織に置き換えられている高度のacid phosphatase染色を行った．Susa国定

ものまであるが，大腿四頭筋と排腹筋の2筋を検索した症例では，遠位筋である排腹筋に標本よりparafhn切片を作製，glutaraldehyde

強い変化を認めた．
＊東京大学医学部脳研神経内科

非特異的なdystrophy様変化のうち，全例＊＊国立療養所東京病院神経内科

で認められたものはfiber splittingおよび−91−

fibernecrosisである．また，中心核もほとんされているものもある．空胞の周辺はT−どの症例で認められた．Macrophageによる

tubulusに続いている部分もある．

phagocytosisも多くの症例で認められ，これNADH−TR超浪染線推：仝例で，NADH

らの細胞は，aCidphosphatase染色を行った−TR染色によりtypel

症例ではacid phosphatase活性を有するこ

Small angulated丘bers様の萎縮線経が認めとが示された．PyknoticcellclumpSもほとられた．これらの萎縮線経の中には，空胞をんどで認められ，症例によっては目立つもの

有するものが多数認められる．また，大きなもある．一方，例数は少ないが，ringfiberが筋線経にfiber splittingと思われるように接多数認められたものがあり，細胞浸潤を認めしている萎縮線経も認められる．Distalmyo−

fiberより浪染する，た症例も2例あった．細胞浸潤が認められた

pathyでは，他のdenervationを示す所見が症例ではステロイド療法を試みたが，無効でないこととともに，以上の所見から，NADHあった．

−TRに濃染する萎縮線経はdenervationに

これらのdystrophy様筋変化に対し，他のよるものではなく，distal myopathyにおけdystrophyではみられずdistalmyopathyにる筋の変性の一過程を示すものと考えられる．

特徴的にみられた変化は，筋細胞内vacuole

以上に示したように，distal myopathyでとNADH−TRに超濃染する萎縮線経であはVaCuOleおよびNADH−TR浪染線経とる（図1・A，B）．

いう，他のdystrophyにはみられない特徴的

Vacuole（空胞）：Vacuoleは程度の差はあな所見が認められた．

るが，全例で認められた．Vacuoleは辺縁に考案

あるものも，中心にあるものもあり，大きさも様々である．空胞の辺縁は，H＆E染色ではDistalmyopathyの筋病変に関する検討は，

basophilicに染色され，Gomoritrichrome染

すでに，Welanderの最初の報告1）にもみら色で赤染する．大きな空胞で1ま，中心はむしれるが，主な変化はdystrophy様変化である

ろamorphousでpaleな物質によって満たとしている．また，Welanderの記載した家系されている．NADH−TR活性はもたず，を含むWelander型distalmyopathyの筋病

PAS，Oil Red Oでも陰性である．ATPase

変の組織化学的な検討を行ったEdstr6m2）

染色では，typel，type2は，dystrophy様の変化のほかに，type l

丘ber両方に認fiber atrophyが特徴的であると考えている．

められる．
電顕では（図2・A，B），VaCuOleは一重膜

Welanderの報告の中には，VaCuOleを有すによって囲まれているものもあるが，特に大る症例もあるが，Edstr6mの検索では，Va−

きなものでは首莫を有きない．内容は，myeloid

cuoleは認められていない．また，我が国におbodiesといわれる膜様構造物が6例で認めいて，三好らが報告3）しているautosomal

られた．Myeloidbodiesが認められなかった

recessive distal myopathyでも，筋病変は

1例は，ほとんどが脂肪組織のため電昆削こよdystrophy様変化のみであり，VaCuOleは認る検索が不可能なものであるが，残る2例は，められていない．

vacuoleが少数しか認められなかった症例でこれらに対して，筋病変でVaCuOleが特徴

ある．空胞の内容は，他に，空胞化した的に認められるとする報告もみられるが，こmitochondria，honey−COmb structure，

れらのVaCuOleを有する型のdistal myopa−

丘Iamentousmaterials，SarCOplasmicmate−

thyの，組織化学的および電顕的検索を行ったのはMarkesbery4）である．Markesbery

rialsが認められた．空胞の中心はamor−
Phousで，electronlucentな物質により満たらの報告による筋病変は，丘ber necrosis，−92−

図I A Distalmyopathyにみられるvacuole．辺縁はH＆Eでbasophilicに染色する．筋の大小不同，中心核，fibersplittingもみられる．
（H＆E染色 ×860）

図I B NADHLTR超濃染線経．Vacuoleを有するものが多い．Fiber
Splittingにより分離しているようなものもある．（NADH−TR染色 ×430）ー93−

図2

A Vacuole，myeloidbodies，変性したmitochondria，膜様構造物がみられる．図右には，filamentousbodyがみられる．（電顕 ×12，000）

図2B

図左には，変性したT−tubulusとSR．図右，核の上方には，
granularsarcoplasmicbodyがみられる．（電顕 ×30，000）−94−phagocytosis，Central

nucleiおよびfiber

序としては，変性産物のexocytosisの一種でSplittingなどのdystrophy様変化に加えて，あることが考えられるという．我々の症例に多数のVaCuOleが認められる点である．一方電顕による観察では多数のmyeloid bodies

おいても，このような萎縮線経の中にはが認められ，VaCuOleは，あるものは膜を有Splittingによって分離したような所見が多VaCuOleを含むものが多い点，および，丘ber

し，内容は変性したmitochondriaや他の変くみられる点は，Engelの考えを支持してい性産物であり，これらはautophagicvacuole

るように思われる．このように，VaCuOleを有であると考えている．同様の所見は春原ら5）するdistalmyopathyは，筋変性の機序からによっても示されている．
今回我々が検索した症例は，筋病変上はも他のdystrophyとは異なっている可能性がある．

VaCuOleが比較的少なく，電顕ではmyeloid

今回の検索から，臨床的にdistal myopa−

bodiesを確認できなかった2例を除き，すべthyと診断されるものの中には，筋病変の上ての症例が，dystrophy様変化に加えて，から，VaCuOleと，NADH−TR濃染線経を有VaCuOleおよびNADH−TR潰染萎縮線経する一群が存在することは確かであるが，こを有している（図3）．Distalmyopathyにみの一群が，distal myopathyの中でどのようられるVaCuOleは，我々の症例も含めてacid

な位置を占めるのかは，明らかではない．

phosphatase活性を有し，その内容が変性産我々の症例の中でも，VaCuOleが著明でな物である点から，autOphagicvacuoleであるい症例が2例あり，従来の報告も，全例にと考えられる．一方，NADHTTR濃染線経は他のVaCuOIAr myopathyでもみられ，

VaCuOleを認めるわけではない．先にのべたようにEdstr6mによるWelander型distal

Enge16）によれば，このような線経ができる機

myopathyの筋病変の検索では，VaCuOleは

症

例
（％）

生検筋
（％）

VacuoTe（空砲）9／9（100）13／13（100）NADH−TR濃染繰維

9（100）13（100）

Myeloid body

6（67）

（69）

Fiber splitting

9（100）11（85）Fiber necrosis

9

Phagocytosis
Central nuclei

9く100）10（77）

8（89）10

（77）

7（78）

（69）

9

Pyknotic ceH clumps

8（89）11（85）Ring fiber

3（33）

3

（23）

CelJinfiltration

2（22）

2

（15）

−十十

囲

＋

⊂コ±

［：コ検索不能

図3 Distalmyopathy筋病変−95−

認められておらず，また，三好らによって報141〔Suppl．265〕：1，1951．

告されている劣性遺伝形式のものはVaCuOle

2）Edstr6m，L．：Histochemicalandhistopa・を有しない．しかし，Welanderl）の報告してthologlCalchangesinskeletalmuscleinいる症例の中にはVaCuOleを有するものもlate−OnSet hereditary distal myopathyある．また，同じSwedenで，優性遺伝形式（Welander・）．J．Neurol．Sci．，26：147，のdistal myopathyとしてEdstrOmら7）に

1975．

3）三好和夫：Distalmyopathyの遺伝・臨床

よって報告されている症例は，VaCuOle，
myeloid bodies，SarCOplasmic bodiesおよびintermediate−Sized（Skeletin）filaments

型，自験7家系14症例とわが国文献例についての成績． 臨床神経，14：963，1974．

の増加を認め，我々の症例と同様の筋病変を4）Markesbery，W．R．，Griggs，R．C．＆Herr，示す．Edstr6mらは，この疾患をWelander

B．：Distal myopathy：Electron micro−型とは別の型のdistalmyopathyとしてとらScopic and histochemicalstudies．Neu・

えているが，筋にVaCuOleを有する

rology（Minneap．），27：727，1977．

Welanderの症例との異同が問題となろう．

5）春原経彦，埜中征哉，村上博彦，ほか：

さらに，筋病変上は同様の所見を示し，臨床

Rimmedvacuole，myeloidbodyを伴う家的にも遠位筋優位の症状を示すことのある疾族性還位型ミオバナー（会）．第21回日本神患が，Carpenterら8）により，inclusionbody

経学会プログラム／抄録，1980，京都，p・

myositisとして報告されており，このような

45．

6）Engel，A．G．：Vacuolar myopathies：

疾患との関連も問題となってくる．
以上のべたようにdistal myopathyは，Multiple etiologleS and sequential

Welanderによって臨床的な特徴から確立さstructural studies．In StYiaied muschs，れたものであるが，その中には，筋病変上か（edited by Pearson，C．M．＆Mostofi，F・らも特徴的な一群がある．これらの一群は，

K．），Williams＆Wilkins，Baltimore，1973，
p．301．

遺伝形式や，臨床経過上は，必ずしも同一ではなく，また，従来，発症年齢，経過などか

7）EdstrOm，L．，Thornell，L・−E・＆Eriksson，

ら同一とされている中にも，筋病変上はA．：A new type of hereditary distal

vacuoleを有するものと有していないものとmyopathy with characterstic sarco・があり，VaCuOleを有するdistal myopathy
がどのような位置にあるのかは，明らかでplasmic bodies andintermediate（skele−はない．今後，むしろ，臨床的な特徴と，筋1980．

tin）fi1aments．J．Neurol．Sciり47：171．

病変の関連を明らかにしていくことが必要で8）Carpenter，S．，Karpati，G．，Heller，Ⅰ・，etal．：Inclusion body myositis：A distinct

あろう．

variey ofidiopathicinflammatory myo−

文

pathy．Neurology（Minneap・），28：8，

献1）Welander，L．：Myopathia distalis tarda
hereditaria．Acta Med．Scand．，

1978．

−96−

18）生検筋にrimmed vacuolesを持ち，遠位筋萎縮を示す二症例−電顕的検討−

西

研究協力者

斉

田

恭

裕＊

谷

子♯

小

西

哲

郎＊

久

野

彰

子＊

主として遠位筋群の萎縮を主要所見とする

的には，知能正常，脳神経系は異常なし．触distal myopathyといわれる筋疾患群の中で，診で上下肢末梢筋のVOlumeの減少がみられ

生検筋線経に rimmed vacuoles と呼ばれる

た．筋力は上肢では，近位筋及び末梢筋共に空胞様変性を示す疾患が多数報告されてい中等度に低下し，やや屈筋群が強く侵されてる1ト5），8）．その多くは若年成人発症で家族性いた．下肢では特に下腿筋群の筋力低下が著又は孤発性に発症し，比較的緩徐に進行する．

しかった．筋庄痛，myOtOnic reactionはみ

これらは，遺伝形式，臨床所見，検査成績等られなかった．深部腱反射は減弱又は消失しに多少の相違はあるが，一つの症候群とも考ていたが，知覚は正常であった．歩行は鶏歩えられる．これら報告例の筋線維内に観察さ状で動揺性であったが，小脳性失調症状は認れている空胞又は空胞様変性は，種々の神経められなかった．検査所見では，炎症所見な又は筋原性疾患でも筋の主要病変と併存して散見され，autOphasicvacuolesといわれるもく，血清CPKは正常値を示す事が多いが，時に軽度上昇する事もあった．自己抗体は陰性のと同一の所見を示す8）．故にこの所見そので，筋電図では筋力低下の強い筋群で，Short

ものは非特異的なものではないかと考えられduration，low amplitudeの傾向が強く，筋ている．ただしこの空胞様変性は，前述の原性所見を示した．末梢神経伝導速度は上下

distal myopathyにおいては筋肉の主要病変肢で正常．又検索しえた両親及び姉妹の臨床をなしているという点で大きな違いがみられ的検査，CPK及び協電図は正常であった．筋る．

力低下の軽度な上腕二頭筋で生検を行った．

我々は，遠位筋萎縮を示す二症例の生検筋HE染色では筋一次束の破壊は軽度であるが，において，筋病変の初期像を電子星頁微鏡を用筋線経の大小不同を中等度に認め，中にan−いて観察し，特に空胞様変性の生成過程につgular fibersを散見した．細月包浸潤の像はな

いて検討した．

かったが，小径化した筋線経を中心に約10％の筋線経の中央又は筋且莫下に直径約10ないし症例1は，27歳女性で，19歳頃より下月支筋

30JJmの空胞様変性を認めた．この空胞は力低下を自覚し，足首が動きにく く，階段のHE染色ではその一部のものは塩基性物質で昇降が困難であった．約3年後に上肢筋力のふちどられ，その殆どが内に好塩基性物質を低下を自覚し，特に物をぶら下げる事に困難

含有していた．pH9．4でのATPase染色でを覚えた．以後四肢の筋力低下は徐々に進行

は，生検筋はTypeI predominanceを示ししている．理学的所見としては，中等度の肥た．空胞様変性はNADH染色，ATPase染満の他は特記すべきものはなかった．神経学

色，Oil Red O染色に染まらず，時にPAS染色にその一部が淡染した．エボン包埋1〟mトルイジンブルー染色では，空胞内にan−＊国立療養所宇多野病院神経内科−97−

図l 筋線経の大小不同，angularfibersがみられる．筋核
周辺，筋膜下及び筋線維内に限局して小空胞及び顆
粒状物質が存在している．一見正常にみえる筋線経に散在性に拡大したSRと思われる中空胞が存在している．エボン包埋1〝m標本，トルイジン・ブルー
染色．

図2 小径化した筋線経には，非常に発達し塊状をなす顆
粒及び小空胞物質の混在がみられる．
一98−

tophasic vacuolesを思わせる顆粒状ないし膜状の構造物がみられた（図1，図2）．空胞

た．

変性を持たない筋線経で，初期病変を電顕的症状2は，66歳の男性で，主訴は歩行困難．

に観察すると，筋原線経やミトコンドリア，

家族歴には特記すべきものはなく，血族結婚もみられない．既応歴として，18歳頃に，数サルコメアには異常がみられなかったが，Sa−

回発熱を伴う膝及び足関節痛が反復した．44

rcoplasmicreticulum（SR）と思われるもの

歳頃より高血圧症がある．65歳時に左胸膜炎の拡大が所々に認められた（図3）．小さなに羅思した．現病歴としては，61歳頓より時々

myelin figure様変性を示すいわゆる初期の両側膝関節の脱力と転倒を釆たすようになり，空胞と思われる変化の周辺の筋線経は，病変軽度の囁下困難が出現した．63歳頃より階段の軽い筋束においては，そのmyofibrilsやfilamentsに配列の乱れはなかった．明確なの昇降が困難となり，握力も低下した．65歳

比較的大きな空胞様変性を示す筋線経では，現した．理学的所見では，血圧は160／100，脈ミトコンドリア又はライソゾームであったと

拍80整，皮膚には紅斑を認めず，又関節の変思われる限界膜にかこまれたものの内部に膜形はなかった．神経学的には，眼球運動は正様構造物及びグリコーゲン頼粒の蓄積がみら常であり，軟口蓋の動きが中等度に減少してれた．光顕で高度に発達したmyelin figures
やグリコーゲン顆粒を含む膜状構造物がみらいた．他には特に脳神経系に異常は認められれた．これらの空砲様変性をもつ筋線経のいとした．Gower

くつかは，筋原線経の配列の乱れを伴ってい上，下肢遠位部の筋萎縮は著明で，筋力は両頃より物につまづき易く，上肢挙上困難も出なかった．歩行は鶏歩性，動揺性で杖を必要
s signは陽性．上腕及び両図3 馴莫下原形質内にグリコーゲン頼粒の蓄積と空胞がみられる．空胞内には管状・膜状の構造物が存在している．電子顕微鏡標本．

一99−

手指，前腕筋群及び両下腿，足部筋群にて高とするミオバナー症例において，生検筋を検度に低下又は消失，頸部屈筋群は軽度に低下，索しrimmed vacuolesの初期と思われる病

身匡幹筋は中等度，近位筋群は軽度ないし中等

変を電韻的に追求した．症例1は，孤発性に度に低下していた．四肢の深部腱反射は消失発症した若年成人型distalmyopathyと考えしていた．知覚は正常で，小脳症状もなかっられる．症例2

た．検査成績では，赤沈（2時間値）100，CPK

myopathy6）で，OCularな病変のないものとは，OCulopharyngo−distal

は380から100前後を変動（正常値は80迄）し，も考えられるが，筋生検所見や外且艮筋症状の血清クレアチニンが1．9と高値を示す他は，
CRP，RA，自己抗体等は正常であった．心電ない点等よりdistal dominantなpolymyO−
Sitisと考えた方が良いと思われる症例であ図では左室肥大を示し，胸部Ⅹ線ではCTR

る．この症例はCarpenterらがinclusion

は0．62であった．筋電図は筋原性変化を示し，body myositisとして報告しているものと類

末梢神経伝導速度は正常であった．過去2回

似している7）．症例1では，空胞変性即ちの生検筋パラフィン包埋標本では，常に中等rimmed vacuoles

度の細胞浸潤が認められており，多発性筋炎

った．病例2は，中等度の炎症性変化に空胞の診断の下にステロイド及びメソトレキセー

変性が伴っていた．両者筋共にTypeIpre−

トにて治療が行われ，CPK値の改善がみられ

dominance

たが，副作用が発現して中止されている．第VaCuOlesと考えられ，最近福原らによりlyso−

3回目の筋生検は筋力低下の軟度な僧帽筋か

SOmalenzymesの研究がなされ，lysosomesら行われた．凍結標本HE染色では，筋一次の異常が示唆されている8）．今回我々は筋力

束の軽度の破壊の他，筋束内に組織球を中心低下の少ない飯を生検し，電顕を用いて特にとした細胞浸潤が中等度に認められ，筋問質

空胞変性の初期的生成過程を検索した結果，

小静脈周辺にも単核細胞の浸潤がみられた．

初期的変化と考えられるものとして，1）周辺

筋線経の大小不同が中等度に存在し，中にヒのmyofibrilsの配列は正常であるが，筋線維ア））ン変性，phagocytosis，再生等の所見を示

内のmitochondria及びT−SyStemの配列にす筋線経が軽頻度に見られた．筋線経の約10

乱れがみられる．2）SRと思われるものの軽％に大小様々の空胞を認め，筋膜下，中央部

度の拡大とその内外部へのグリコーゲン顆粒

あるいは筋核の両側に，エボン包埋1ノ m標の蓄積，及び管状・膜状構造物の出現がみら本で，トルイジン・ブルーに浪染する構造物

れた．軽度のSRの拡大そのものは多くの筋疾患でも随伴所見としてしばしばみとめられを認めた．ATPase染色（pH9．4）ではType
Ipredominanceを示した．電顕的には，トルが筋病変の主要変化であを示した．空胞は，antOphagicているが，この異常がdistalmyopathyの筋

イジン・ブル一浪染物質は，myelinfigures

病変のpathogenesisに関係するものかどうであり（図4，図5），未発達の膜状構造物内

か，又ERの延長としてのlysosomesの異常にはグリコーゲン顆粒の沈着がみられた．こと関係があるか不明である．

れらの変性の周辺では，筋原線経の配列の乱

従来よりdistalmyopathyの筋生検においれはみられなかったが，ミトコンドリア及びても，Type predominance，angular fibers

T−SyStemには時に配列の乱れがみられた

等の出現は報告されているが1ト5），これが何（図5）．又初期筋病変としてSRと思われる
ものの拡大と，その内外部へのグリコーゲンの空胞形成と関係があるのか，あるいは筋病

顆粒の蓄積，及び単純な管状，膜状構造物の変が主としてdistalを強く侵すことと関係出現がみられた．

があるのかは今のところ不明である．

らかの末梢神経機能の異常を示唆し，筋内で以上，臨床型の異なる遠位筋萎縮を主症状
−100−

図4

電子密度の濃いmyeloid bodyが筋原線維間にみられる．周囲のmyofibrils等の配列に異常はみられないがミトコンドリアの配列に軽度の異常がある．

図5 更に発達したいわゆる空胞の電顕像で，myelin figures
や内部にグリコーゲン頼粒等をもつ膜状構造物がみられる．全体をつつむような限界陣はない．
−101−

文

献

子，日下香苗，八木田正聖，日浅光春，多1）佐々木清博，森浩郎，高橋和郎，中村晴臣：田嘉明：常染色体劣性末梢型筋ジストロフ

Distal Myopathy−4症例の検討−．臨床

ィー症−わが国にとくに見られる新しい神経，9：627，1969．

末梢型筋ジストロフィー症−．日本臨休，

2）三好正堂，三田哲司，大田典也，荒木淑郎：35：40，1977．

筋線経に著明な空胞変性および梓状体

6）Satoyoshi，E．＆KinDShita，M．：Oculophary・（RodlikeBody）をみとめた孤発性Distal

ngodistal Myopathy．−Report of Four

Myopathyの1例．臨床神経，10：111，

Families−．ArchNeuro1．，34：89，1977．
7）Carpenter，S．，Karpati，G．，Heller，I．＆Eisen，

1970．

3）山田 透，鹿井禎三，内野 誠，岡嶋 透，
赤塚

護：Distal Myopathy−2家系4症例の検討−．臨床神経，13：579，1973．

A．：Inclusion body myositis：A distinct
Variety ofidiopathicinflammatory
myopathy．Neurology（Minneap．），28：8，

4）William，R．M．，Robert，C．G．＆Barbara，H．：

1978．

Distal myopathy−ElectronmiCroscopic8）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．＆Tsubaki，T．：

andhistochemicalstudies−．Neurology

Rimmed vacuoles．Acta Neuropathol．

（Minneap．），27：727，1977．

（Berl．），51：229，1980．

5）三好和夫，岩朝勝，川井尚臣，佐々木尚

ー102−19）Distal myopathyと1ysosome

福 原 信 義＊
研究協力者

熊

本

俊

秀＊

近年，細胞内および細胞外の蛋白質分解や検尿，検便，検血，一般血液生化学に異常は細胞膜の代謝回転に，ライソゾームおよびそのシステムが重要な役割を演じ，さらに，細ない．また，末梢神経伝導速度は正常で，一般筋電図では，いずれも典型的な筋原性変化

胞傷害や変性にも関係が深いことが示唆されを認めたが，J．T．例の被験筋の一部でSligh−ている1）2）．

tlylong duration（12amplitude（8今回，我々は，遠位型ミオパテーを中心にmsec）and highmv）potentialSがみられた．

各種筋ジストロフィー症とライソゾーム・シ

Fibrillationおよびfasciculationvoltage，まステムとの関係を，変性の面から明らかにすた，myOtOnic dischargeはみられない．
方法は，各々の症例の大腿直筋または上腕ることを目的として，形態学的立場から検討

二頭筋より得られた生検筋の一部で凍結標本したので報告する．

を作成し，光顕および一般組織化学的検索を

検索対象および方法

行なうと共に，一部で電顕的観察を行なった．

検索対象は，進行性筋ジストロフィー症15

また，ライソゾームのmarker enzymeであ例，うちDuchenne型7例，Becker型2例，るacidphosphatase（ACPase）染色をBarka

顔面肩甲上腕型3例，遠位型ミオパテー3例，

andAnderson（1962）3）の方法で行ない，ライおよび筋緊張性筋ジストロフィー症2例の計

ソゾームの態度を組織化学的に観察した．

17例である．各々の症例は，いずれも典型的結な臨床像を示した．遠位型ミオバナー3例の

果

うち，2例がfamilialcase（M．T．，32歳，光顕および一般組織化学的検索では，

男：J．T．，25歳，男），1例がSpOradiccase

Duchenne型，Becker型，顔面屑甲上腕型お（S．N．，36歳，女）である．Familial case

よび筋緊張性筋ジストロフィー症で，概ね従は，．両親はいとこ結婚で，全く異常ないが，同胞5人中姉を含め3人が同類疾患である．

来より報告されでいる各々の疾患に特有の筋3例の発症年令は，それぞれM．T．，26歳，

遠位型ミオバナーの3例では，程度の差はJ．T．，23歳，S．N．，30歳である．臨床的に筋あるがほぼ同様の所見で，筋線経の大小不同，

病理像を示した．

力低下および筋萎縮は，いずれも四肢遠位部

一部に散在性のSmallangulatedfiber，とく優位にみられ，下肢遠位筋より発症し，上肢にJ．T．例では，一部のfasciculusにlargeに及んでいる．深部腱反射は，低下ないし消groups ofsmallroundfiber（ofmyogenic

失しているが，知覚障害はなく，また，線維origin suspectively）を認めた．また，中心束攣縮，仮性肥大，ミオトニアを認めない．

核の増加，ghost−1ike appearanceを呈した

CPK，GOT，GPTで軽度上昇を認めた他は，

simple necrosis，fiber−Splittingがしばしば見られた．会食細胞は殆どなく，炎症性反応は見られない．ATPase染色では，typegrOu−＊新潟大学脳研究所神穏内科ー103−

表I Frequency（％）of rimmed vacuoles and acidphosphatase（ACTase）positive fibers
ACPase pos圧jve

RjmlT杷d Vacuoles

fibersmdterjals No．of cases
mean士SD（mln．−maX．）

mean士SD（min．−maX．）

（射

（％）

Progressivemusculardystrophy（except for djstallWOPathy）

12

0．01士0．14（0−0．3）

Duchenne type7

0．13士0．16（0−0．3）

Becker type

20

FSH type

3

0．08！0．15（0−0．3）

5．10！8．05（0．4−14．4）15．60士7．00（8．5−22．5）

Djstal myOpathy
Myotonjc dystrophy

02

4．65士0．49（4．6−5．0）

pingはなく，typeIおよびtypeII線経の分た．筋緊張性筋ジストロフィー症でも，布比率に異常はない．

rimmed vacuoleは認められない．ACPase仝例にみられた最も目立つ特異な所見は，陽性線経は，平均4．65±0．49％に認められた多数のrimmed vacuole4）5）を認めたことでが，いわゆる正常構造を呈した線経にはほとある．このVaCuOleは，Gomoritrichrome染んどみられず，多くは萎縮線経や異常線社内色で赤紫色に，H・E染色ではbasophilicに濃の，とくに中心核の周辺や筋線維内の貪食細染するmaterialsを有し，Smallfiberのみな胞に活性を認めた．遠位型ミオバナーでは，らずnormal sizeの線経の辺縁あるいは深部

全例に多数のrimmed vacuoleおよびに認められた．また，typeI線維優位に両型

ACPase陽性線経を認めた．その出現頻度は，の線経にみられ，VaCuOleを有する線経はしそれぞれ平均5．10±8．05％および15．60±

ばしば萎縮し，DPNHに膿染した．Vacuole

7．00％と他疾患に比べ明らかに高率であった．

は電顕的にはlimited membraneをもった

また，ACPase活性は，筋線維内に顆粒状に認

membranouslamellar structureおよび

められ，異常線推のみならず正常構造を呈し

heterogenous materialsよた線経にも多数みられた．

り

成

り

autophageと思われた．VacuoleはACPase考

染色で，大多数は陰性だが稀に辺緑で活性を察

1950年代初期，deDuveらにより発見され示すものがみられ，以上のことから，このはautophagic

たライソゾームは，細胞内・外物質の消化・

VaCuOleで，一部がSeCOndarylysosomeであ分解に重要な役割を演じ，その機能は，現在ると考えられた．

では図1に示すようなライソゾーム・システ

rimmed vacuoleの多く

次に，各疾患別のrimmedvacuoleおよびムとして理解されている1）．こと細胞内蛋白

ACPase陽性線経の出現頻度を表1に示した．

や細胞g莫の代謝回転については，老化あるい

各筋とも約400本の筋線経について，その出現は何らかのpathological stressによりfocal率を求めた．

CytOplasmic degradationがおこると，変性

Duchenne型，Becker型，顔面屑甲上腕型

した細胞膜あるいは細胞内小器官などの細胞の進行性筋ジストロフィー症では，いずれも成分を入れたautophagic vacuoleが形成さ

rimmed vacuoleを全く認めず，ACPase活れ，同時にGolgi体由来のprimarylysosome

性は，多数の会食細胞にみられたが，筋線推が多数誘導され，これらが癒合LSeCOndary

内には平均0．1％と，ほとんどみられなかっlysosomeを形成する．これによりautopha・一104−

phy等にもみられ，決して還位型ミオパテ一に特異的な所見ではないが，変性プロセスという点では，1つのパターンを成し得，多数の会食細胞を認め，rimmed vacuoleおよびACPase陽性線経をほとんど認めない他の進行性筋ジストロフィー症とは異なる変性プロ
セスをとるものと思われた．
筋ジストロフィー症をはじめ各種ミオバナ
ーの変性過程におけるライソゾーム・システ
ムの動態とその意義を明らかにすることは，区＝ ライソゾーム・システムの動態と機能（文献1）より）種々の70ロテアーゼの研究とともに，変性プ
ロセス，さらにpathogenesisを考える上で極めて重要なことと思われる．

gic vacuole内の変性した細胞成分がpri−
marylysosome内のhydrolase（protease）

ま

と

め

このシステムに何らかの異常がおこると，消1）違位型ミオパテーでは，多数のrimmed
vacuoleと共にACPase陽性線経の増加を認化・分解機構障害によるautophagicvacuole

めた．

により消化・分解され，処理される．従って，の過剰形成，未分解産物のライソゾーム内蓄2）筋緊張性筋ジストロフィー症では，rim−

積，また，ライソゾーム膜の破壊あるいは透

medvacuoleはみられないが，主に変性した

過性克進によるlysosomalhydrolaseの細胞線経でACPase活性を認めた．

質内への漏出などにより，種々の細胞傷害を

3）他の進行性筋ジストロフィー症では，
rimmed vacuoleおよびACPase陽性線経を起こすと言われている1）2川）
遠位型ミオパテーでは，貪食細胞はほとん共に認めない．

どなく，他の疾患と異なり，多数のrimmed

4）以上より，遠位型ミオパテ一におけるvacuoleおよびACPase陽性線経を認めた．

変性プロセスがライソゾーム・システム中心

このことは，とりもなおきずautophagicに行なわれ，且つ，その系に何らかの異常がvacuoleおよびprimarylysosomeの異常なあることが推定された．また，ライソゾーム・

増加を意味し，本症における変性プロセスがシステムの態度でみる限り，他め進行性筋ジ主にライソゾーム・システム中心に行なわれストロフィー症とはその変性プロセスにおいることを示唆する．さらに，こうした事実かて異なる疾患であると思われた．

らは，本症において，autOphagicvacuoleの文形成を増加させる何らかの細胞傷害機構が著献冗進していることや，autOphagic

1）de Duve，C．＆Wattiaux，R・：Functions

vacuoleとprimarylysosomeとの癒合の障

oflysosomes・Ann・Rev・Physiol・・28：

害やライソゾーム内のhydrolase活性の低下

435，1966．

しく2）Pitt，D．：Lysosomes and Cell Function・などによる消化・分解機能の障害など−ライLongman，London，1975．

ソゾーム・システムの何らかの異常がある可

3）Barka，T．＆Anderson，P・J・：Histoch・能性が推定される．

emical勿論，rimmed vacuoleはKugelberg−

methods for acid phosphataseusing hexazonium pararosanilin

Welander病5）やoculopharyngeal dystro一−105・−as5）Fukuhara，N．，KumamOtO，T．，et al．：

COupler．J．Histochem．Cytochem．，10：

Rimmed vacuoles．Acta Neuropathol．

741，1962．

4）Dubowitz，Ⅴ．＆Brooke，M．H．：Muscle
Biopsy−AModernApproach．Saunders，（Berl．），51：229，1980．
6）岩政輝男，濱田哲夫：ライソゾームー生理
機能と病理．学際企画，東京，1980，p．5．

London，1973，p．233．

ー106−20）Tubulomembranous myopathy

福 原 信 義＊

研究協力者

熊 本 俊 秀＊

平

原

弘

雄＊

椿

忠

雄書，…

萎縮がみられた．深部反射はアキレス腱反射

は じ め に筋肉の組織化学，電顕的研究の進歩により，以外すべて低下．共同運動と感覚の障害はな

種々の先天性ミオバナーの存在が明らかにされてきたが，我々は今までに全く報告のない

検査所見：一般検査はほとんど正常であっ特異な構造物を有する筋疾患1）を経験したのたが，CPK47−1236と軽度上昇．

で，その封入体の微細構造を中心として述べ，運動および感覚神経伝導速度（右尺骨神経，

その病態生理について論じてみたい．

正中神経，腰骨神経，月非腹神経）は正常，ただ，運動神経刺戟による誘発筋電位は，それ症

例

ぞれ1．7mV，3．3mV，0．33mVと低下してい症例：19歳男性た．

家族歴：両親は従兄妹半結婚であり，父親

筋電図：左大腿四頭筋で，活動電位の数がの兄弟に乳幼児死亡者が数名いるが，類似のやや少なくなり，低電位のものにまじり，や疾患はみられない．

や高電位のものがみられるが，他の筋はすべ

既往歴：幼児期に麻疹，水痘，耳下腺炎にてShort duration，low voltage（300−500

かかったが，後遺症なく治癒している．

JLV），pOlyphasicpotentialsであり，ミオバ

現病歴：妊娠・出産は正常．Floppyではなナーと考えられた．

かった．生来，運動能力は劣っており，学校後に述べるように，筋生検所見から，1yso−

でも走るのが一番遅かったが，両親も運動がSOmal enzymeの障害が疑われたため，末梢苦手であったので，あまり気にかけられなか

血リンパ球や皮膚の電顕的検索がなされたが，ったという．15歳より，走るのが特に遅くな

特に異常はみられなかった．白血球のaryl−

り，歩行も疲れやすく，よたよたするように

SulfataseA，B，α一＆ β−galactosidase，α一なった．16歳時，新潟大学神経内科に入院しglucosidase，N−aCetyl−β−D・glucosaminidase

た．

なども正常であった．

入院時現症：一般理学的所見は正常．知能

臨床経過：Prednisolone（60mg／day）が試は正常．眼底，視力，視野は正常．Convergence

みられたが全く効果なく，顔面・四肢の筋萎

Strabismusがみられるが，眼球運動に制限は

縮はその後も進行し，特に大腿・下腿筋にはない．顔面は軽いミオバナー横顔貌で，頸部っきりしてき，深部反射は全く消失した．

の筋力は軽度低下していたが，構語障害，囁

Gowers徽候も陽性で，歩行に枚を必要とす

下障害はみられない．軽度の腰椎前轡があり，四肢は近位筋と下腿のふくらはぎに軽度の筋るようになっている．
筋生検所見＊新潟大学脳研究所神経内科＊＊東京都立神経病院

筋生検は16歳の入院時に，左大腿四頭筋で行い，凍結切片は，通常の染色，組織化学のー107−

電顕所見：光顕のrimmed vacuol作り・日ほか，aCid phosphatase染色（Barka ＆Anderson，1963）やalcian blue（pH2・6）

当する電顕所見3）のautOphagic vacuoIL■トiJ，

染色も行った．電顕標本は，2・5％glutaralde−所見がみられたが，最も特徴的な変化は・−′

hydeと1％osmium tetroxideで固定し，ラルデイト包理でみられた封入体に一致してaralditeに包埋した．超薄切片は，uranyl
acetateとleadcitrateの二重染色を行った．

みられるtubulomembranous structures

光顕所見：筋線経の大小不同が著明で，中心核が増加し，fiber−Splitting，多数のた．TMSは，8．5〜9nmの周期のやや攣曲

（TMS）（図1）とも言うべき構造物であっした層状構造をなしており，切片の方向によ

rimmedvacuoles2）3）がみられたが，細胞浸潤

り管状構造をなして観察された（Ⅰ型封入やperifascicular atrophyはみられなかった・体）．TMSの中心部の電子密度はしばしば低Nemaline−rOd，ragged−red丘berなどの異常

下し，あたかも染色液がぬぐい去られたごとくに見えた．多くのTMSは密につまっていもみられなかった．PAS染色でもグリコーゲンの異常蓄積はなく，OilredO，Sudanblack
B染色でも異常はなかったが，多くの線経でalcian blueに陽性に染まる1〜2個の顆粒ることが多かったが，ときにまばらでグリコーゲン顆粒と混在しており，周囲を膜により囲まれているものもあったが，その膜はしばがみられた．Acidphosphataseは62・1％の線しば断裂していた．このTMSのほか，出現頻経で陽性に染まった．Adenosine triphos−

度は少ないが，3〜6nm径のfi1amentsよphatase染色で38．6％がtypeI線経で，そのatrophyfactorは162と萎縮していた．アラル
ダイト包埋標本のtoluidine blue染色では，体）（図2），単一膜で囲まれた微細顆粒状物

40−50％の線経に，淡青色に染まる2・5×10

封入体のまわりには不規則にカーブした管状〟mまでの大きさの封入体が筋線経の中にみられた．

構造物がみられることが多く，またnI型封入

りなるCurVOBlamentousな物質（ⅠⅠ型封入
質（III型封入体）などがみられた．このHI型

体よりⅠ型封入体へあたかも移行しているか

図I T。b。1。membranousstruCtureS（TMS，Ⅰ型封入体）・×29，000−108−のように見えるところ（図3・）があった．まられなかった．このような構造物の出現のほた・膜につつまれたglycogen顆粒の集積がか，それらの筋線維自体にはほとんど変化は

まれにみられたが，lipofuscinはほとんどみ

なかった．

図2

まばらなtubulomembranousstructuresに近接してcurvifilamentous
masses（II型封入体がみられる）．×39，000

図3 一部，Ⅰ型封入体（TMS）より移行しつつあるⅠⅠⅠ型封入体．×43，000
−109−

考

察

形態からt．tubulomembranousmyopathyとして，今後，症例を集め，その原因を追求す

本症例の筋障害の型は，CPK，筋電図，末べきものと思われる．

梢神経伝導速度などより，ミオバナーと考えられ，肢体型筋ジストロフィー症に類似しているが，肢体型筋ジストロフィー症では，顔

ま

と

め

面筋の障害は通常なく，病気の進行が本症例

筋生検において，今まで全く報告のないほど早くない点が異なっていた．Acidphosp−

tubulomembranous structuresともいうべ

hataseの活性が著明に克進している点，膜にき周期8．5〜9mmのやや攣曲した層状構造

囲まれたglycogen顆粒の出現は，II型糖原物のみられるミオバナーについて報告した．

病（acidmaltasedeficiency）4）5）に類似して

Lysosomalenzymeの障害で生じてきている

いた．しかし，glycogenの異常蓄積は，組織と推定されたが，詳しい原因は不明であり，化学的にも，電顕的にもみられず，今までのtttubulomembranous myopathy

糖原病の報告例でも本症のようなTMSを伴い疾患単位として症例を集め，原因を追求すったものはない．

べきであると思われた．

という新し

易疲労性という点は，本症例の臨床的特徴の1つであり，ミトコンドリア性筋疾患でし文

ばしばみられるものであるが，ミトコンドリ

献1）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．，Hirahara，アの異常はみられなかった．

H．，et al．：Anewmyopathywithtubulo・

TMSを今まで報告されている構造物のどれかに強いて頬似をもとめるとすれば，

membranousinclusions．J．Neurol．Sci．，
50：98，1981．

Fabry病の封入体にやや似ているが，Fabry2）Dubowitz，Ⅴ．＆Brooke，M．H．：Muscle

病の封入体の層構造の周期性は4．5〜5．5nm6）

biopsy−A modem approach．Saun−

であり，また，白血球のα−galactosidaseは正ders，London，1973．

常であり，Fabry病としての臨床症状は全く

3）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．＆Tsubaki，

みられておらず，Fabry病とは考えられな

T．：Rimmed vacuoles．Acta Neuropa・
thol．（Berl．），51：229，1980．

本症のII型封入体は，CerOid−lipofuscinosis4）Engel，A．G．，Gomez，M．E．，Seybold，M．

のときのCurvilineal profile7）にやや似るがE．，etal．：Thespectrumanddiagnosisof

臨床症状は全く異なる．また，通常の型のacid maltase deficiency．Neurology（Minneap．），23：95，1973．

lipofuscinもみられていない．III型封入体類
似の構造物としては，Fardeauら8）が1978年

5）Schotland，D．L．：Ultrastructure ofに，優性遺伝のミオバナーでdensegranulo−

muscleinglycogen storage disease．In

filamentous massesと記載しているものにThe

striated

muscle，（editedby

やや似ている．しかし，彼らの症例には，我々

Pearson，C．M．＆の症例の中心的所見であるTMSはみられてWilliams＆Wilkins，Baltimore，1973，p．

いない．

Mostofi，F．K．），

410．

以上のように，この症例でみられた異常構
造物は，lysosomal enzymeのブロックによ6）Fukuhara，N．，Suzuki，MリFujita，N．，etal．：Fabry

り生じてきたと推定されるが，その形態，層sdisease．Onthemechanism

Of the peripheral nerveinvoIvement．

状構造の周期において，今まで報告されたど

Acta Neuropathol．（Berl．），33：9，1975．

の疾患の封入体とも全く異なっており，その7）Goebel，H．H．，Zeman，W．＆Pilz，H．：
ー110−

Significance of muscle biopsleSin neu−

musculairefamiliale，definieparl

accumu−ronal ceroidlipofuscinosis．J．Neurol．

lationintra−SarCO−plasmique

Neurosurg．Psychiat．，38：985，1975．

rielgranulo−filamentairedenseenmicro−

8）Fardeau，M．，Godet−Guillain，J．，Tome，

SCOple electronique．Rev．Neurol．

F．M．S．，etal：Une nouvelle affection（Paris），134：411，1978．

ー111−

d

un

mate−

21）Duchenne Muscular Dystrophy（DM二D）培養筋細胞のフリーズフラクチャーによる検討

研究協力者

中

員

里

輿

納

光

弘＊

文＊

井

形

的

昭

弘＊

Andrew G．Engel＊＊Pauli法7）によりフリーズフラクチャーを行

DMDにおいてはnon−neCrOtic muscle

った．Myotube或いはmononuclear cellを

fiberにおいても筋鞘膜に断裂が認められる

選択的に電顕で観察するために光顕と電顕ことより，この膜病変がDMDの病因として（レプリカ）の完全な対比を行うための方法

一次的な役割をもつ可能性が指摘されていを案出した．計202のmyotubeと220のmono−

る1）2）．又，DMD筋線経の膜の外表面の電顕組

nuclear cellのPF及び計133のmyotubeと織化学的検索により，COnCanaValinAに対す146のmononuclear cellのEFがblind法でるreceptor siteの局所的な減少も報告され分析された．又，正常対照及びDMDの両資

た3）．さらに最近，DMDにおいて筋鞘膜と赤料を同時にフラクチャーしたレプリカに関し

血球膜のIntramembranousparticles（IMP）てmyotubeのPFにおけるIMP各1000個の値の減少が報告された4）5）．このIMP値の変直径のヒストグラムを作成した．

化が病因にとって一次的なものであるかを幼結君細胞である培養筋細胞により検討することを目的として本研究を行った．

果

IMP値は表1に示す．DMDにおいても正常対月別こおいてもmyotubeはmononuclear

方法

Cellに比L PFのIMP値は有意に高値を示

DMD6例と正常対照6例の生検筋をした．このことより，我々の行った光顕と電Witkowski法6）によりprimaryculture L，顕の対比の必要性が改めて確認された．しか表I Numericaldensityofintramembranousparticlespersquaremicrometer
Fracture

Group

1
2

Mononuclear Duchenne
Control1

Duchenne
ControI

7 7 7 7

Myotube

4 2
1

face

＋■＋■＋−士＋−士 士 士Duchenne
ControI

1

MyotubeMononuclear Duchenne
ControIE

Mean士SD＊
仁 U
6
1
1
1

face

Source61 69 ⊂U 82 0
43894384

P

Cell

Type

46 77 8 42 5
2 02 3 4847

Face

＊Group means are based on mean values observedin6subjects・＊鹿児島大学医学部第三内科＊＊Mayo CEinic．Department of Neurology

−112−

文

しながら，DMD及び正常対照の両者の間に献■は，myOtubeのPF，mOnOnuClearcellのPF，

1）Mokri，B．，Engel，A．G．：Duchenne

myotubeのEF，あるいはmononuclearの
EFのいずれにおいても有意の差を認めなか

dystrophy：electronmicroscopicfindings

った．又，DMDと正常対照myotubeのPFのIMPのヒストグラムはidenticalであっin the plasma membrane of the muscle

た．Caveole，gap junction，tight junction，

1975．

pointingtoabasicorearlyabnormality

fiber．Neurology（Minneap．），25：1111，

2）Sclmallbruch，H．：Segmentalbreakdown

nude spot，及びhot spotもDMDと正常対照の間で量的質的差異を認めなかった．

and defects of the plasmalemmain
diseasedhumanmuscle．Acta Neuropat・結語

hol（Berl．），33：129，1975．

本研究は，DMDの培養筋細胞においては3）Bonilla，EリSchotland，D．L．，＆Waka・

フリーズフラクチャーされた筋革宵膜に形態学

yama，Y．：Duchenne dystrophy：focal

的異常のなかったことを示している．従って，

alterationsinthedistributionofconcana−

筋生検に認められたIMP倍の異常4）は筋分

Valin A bindingsites at the muscle cell化のもっと後の段階でおこってきたものであsurface．Ann．Neuro1．，4：117，1978．

るのか，或いは培養細胞にはおこってこない

4）Schotland，D．L．，Bonilla，E．，＆Waka−

様な二次的な機序によるものかのどちらかにyama，Y．：Application of the freeze−よるものと考えられる．

fracturetechniquetothestudyofhumanもしも，我々がこの研究の結果IMP値の減少をみることが出来たのなら，これはneuromuscular disease．Muscle＆

Nerve，3：21，1980．

DMDの病因にとって一次的なものと結論し

5）Wakayama，Y．，Hodson，A．，Pleasure，D．，

たであろう．残念ながら，我々のデーターは

Bonilla，E．，＆Schotland，D．L．：Altera・

negative dataとなった．しかし，このこと

tionin erythrocyte membrane structure

は，Mokriらl）の提唱したDMDの病因におinDuchennemuscular dystrophy．Ann．

ける膜の異常の重要性を減じさせることを意

Neuro1．，4：253，1978．

味するもので1まない．これら，DMD生検筋に6）Witkowski，J．A．，Durbridge，M．，＆

認められた膜異常に関しては，IMP値の減少

Dubowitz，Ⅴ．：Growth ofhumanmuscle

やOrthogonal particle arraysの減少がどの

in tissue culture．Animproved techT

段階でどの様な原因で発生してきたかというnique．In Vitro，12：98，1976．

ことも含めて，今後追求されねばならない問

7）Pauli，B．U．，Weinstein，R．SりSoble，L・

題である．

W．，＆

Alroy，J．：Freeze−fracture ofmonolayercultures．J．CellBio1．，72：
763，1977．

ー113−22）Duchenmeジストロフィー症生検筋のヌードマウスへの移植実験

若

山

膏

弘＊

筋ジストロフィー症における筋再生の問題

Duchenneジストロフィー患者7例からの生は本症の治療，予後に関して重要な課題であ検筋を小さく細切（約2×5mm）したもの

りながらまだ解決されてはいない．従来の筋を挿入し縫合した．

再生の研究は方法論的に大別して3つに分類

移植片は移植後1，2，3，4週目でそれされる．1つは生検筋を光顕，電荻的に検討

ぞれ正常対照筋とジストロフィー筋からの再するもの，この方法では再生筋と萎縮筋との生筋の形態学的比較をした．まずヌードマウ

鑑別が電顕レベルでは，しばしば困難なこと

スをエーテル麻酔後屠殺し背部の皮膚を切開がある．もう1つは生検筋を組織培養し，こした．移植片は通常線維組織で被覆されていれを組織細胞学的に検討するもの，3つ目はるので，容易に同定可能であった．

先天的に胸腺を欠除するヌードマウスを用いて生検筋の異種移植後の再生筋を検討するも移植片のついた皮膚をピンでイ申ばし，2．5％
グルタールアルデヒドをここへ注ぎ約10分間のである．このうち生検筋の組織培養法によ固定した．これは移植片における再生筋線経って再生筋を得ることはむつかしく，特に正のCOntraCtion artifactを避けるために行っ常対照筋より再生筋を得ることは非常にむつた．その後移植片をヌードマウスの皮膚からかしい．この原因として種々のfactorが考え除去し，まわりに付着している結合組織を除られようが，その1つにmyogenicstemcell

去し，小さなblockに締切した．この標本をといわれるmuscle satellite cellが正常対照

2．5％グルタールアルデヒドにて更に1時間

筋にて数が少なく，しかもinactiveであることが考えられる1）2）．これに対してヌードマウ

固定後，0．1Mリン酸緩衝液で洗浄後2％オ

スは先天的に胸腺を欠き，リンパ球のうちTとプロピレンオキサイドにて脱水後プラスチ細胞が少なく，従って異種動物よりの組織をックに包埋した．thicksectionはトルイジン

移植されても拒絶反応がない．本実験の目的

青にて染色後光昆削こて検索した．また超薄切は正常対照筋とジストロフィー症生検筋のヌ片をウラニールと鉛で2重染色後電顕にて観ードマウスへの異種移植により，その再生筋察した．

スミウム酸にて1時間後固定し，アルコールの形態学的差異を検索することにより本症の結筋再生の問題を検討することにある．

果

裸眼的には正常筋及びジストロフィー筋の材料と方法

移植筋組織はヌードマウスの皮下組織の中でヌードマウスをネンブタールにて麻酔し，1〜2週間後には移植片のなかの血管新生の2つの小さな切開を左右の背部に加えた．こために赤くはっきりと識別できた．時に神経

こへ組織学的に正常な整形外科手術患者5例，線経もこのなかへ入っているのが認められた．
このような移植片は時とともに小さくなって＊昭和大学藤が丘病院神経内科

いくように思われた．移植片の割面は周辺部
一114−

がより赤く密で中央部はやや白っぽく疎であがみられ，またその一部は発生途上のmyo−った．

filamentsに沿って存在していた．2週後に光顕的には正常筋の移植片にて1週間後にはmyotubeには部分的に横紋形成がみられ，は移植片の周辺部で核小体をもち明るい核のそのうちのいくらかには1eptomereがみらあるmyotubeを認めた．他方移植片の中央部れた．すなわち約50nmの太さのZlinemate−は核が消失し硝子様筋原線経をもつ変性筋線

rialに似たelectron densityをもつ物質が約経が存在し，その周辺部にはいくつかの紡錘150nm間隔で周期的に並び非常に細いfila−形細胞が随伴していた．2，3週後にはmyo−mentsがこれらを垂直に結びつける様に走tubeの生育があり，それらのいくらかには胞
体内に空胞を有するものもみられた．4週後る構造物である．このIeptomereは通常sub−Sarcolemmalareaにみられた．またmyotubeには周辺核と横紋をもつ筋線経や，横紋形成にはdyadsやtriadsが多くなり，グリコーゲと中心核をもつもの，更に横紋のみられないン顆粒や月旨肪滴の問にmitochondriaの集族

myotubeなどが認められた．これに対しジス
トロフィー筋の移植では，光顕的に移植後1がみられ，またグリコーゲン顆粒の集族にはmembrane materialが存在するものも・みら

週目にmyoblast，myOtubeの形成がみられ，れた．3週後にはmyofilamentsは更に密に

2週目にはその生長がみられた．

存在し，dyadsやtriadsも更にしばしば観察

電顕的には正常筋の移植片にて1週後にはされた．peripheralcouplingはSubsarcolem−

筋核や筋細胞膜がなく，筋原線経が硝子様化しZlineがなく，mitochondriaは膨化し，そmalregionに位置し，他のSubsarcolemmal
vesicleとはその内部に微細な顆粒状物質をのmatrixにはamorphousな電子密度の高有し，細胞膜との間にjunctionalfeetがみらい物質の存在する変性筋線経がみられた．しかしこのような変性筋線経にも基底膜はしっれることから鑑別された．この形態はSarCO−
plasmic reticulumとtransverse tubulesとかりと保有され，その内側には単核ないし多の間でみられるinterior couplingと同じで核の細胞が存在した．単核細胞は細胞の形態などからpseudopodiaや粗面小胞体をもちあった．この段階ではleptomereはmyotubeのSubsarcolemmal regionと同様に胞体の著明な会食空胞をもつものと，著明なfree

内部にも存在した．4週後には周辺核とribosome，pOlysome，粗面小胞体，滑面小胞

AIHM帯をもつ横紋などを有する再生筋線

体やグリコーゲン顆粒の集族をもつものに大経が観察されたがtransversetubulesは縦走別され，後者はmyoblastに変化していく細する部分もみられた．まれにmyotubeに嚢状胞と考えられた．また両者の混合型とも考えに拡大したそのなかに微細顆粒状物質をもつられる細胞が存在した．この段階でmyoblast

sarcoplasmic reticulumがみられ，これがやmyotubeは何層かの基底膜により被われtransverse tubulesとjunctional contactをており，また最外層の基底膜はひだの形成を作っていたりもしていた3）．

みることが多い．最内層の基底膜の内側には

これに対しジストロフィー筋の移植片では，複数のmyoblast，myOtubeがCOmpaCtに存

myoblast，myOtubeにおいて1週後2週後と在し，その細胞突起は互いに絡み合っているところがしばしば観察された．一方これらの的に正常筋の移植片におけるそれらとの間にも定性的にはその細胞小器官などを含め形態

Zline materialS，microtubules，inter−

大きな差異は認められず（図1−3）lepto一
mereも2週後のmyOtubeには認められたmediate sized filamentsなどがいろいろなが（図3A，3B），ただ2週後のmyotubeの方向に走り，豊富なribosomeやpolysome

なかにはまれにtransversetubules由来と思細胞の月包体内にはactin，myOSin filaments，−115−

以下の写真はすべてDuchenneジストロフィー症生検筋のヌードマウスへの移植片にみられた所見で，図l，2A，2Bは移植1週後，図3A，3B，4は移植2週後にみられたものである．

図日

光顕写真上万にはregeneratingmyotube（矢印）がみられ下方にはdegeneratingmusclefiberがみられる．トルイジン青染色×750

図2A電顕写真には大きなグリコーゲン顆粒の集族がみられるmyotubeが存在し，その矢印の部分を拡大すると図2Bとなり，ここには筋原線維（MF），グリコーゲン顆粒，脂肪滴などがみられる．
図2AX4，400 図2BX13，700
ー116−ロフィー筋の移植片にみられるmyoblast，．ト葺き i∴√

われるtangleが密なmyofilamentsの間に存在するのが観察された（図4）．またジスト

myotubeなどmyogenic cellの細胞膜は透図3A電顕写真はmyotubeの一部で，その胞体内にはsubsar colemmal
areaにleptomere（矢印）や，部分的に横紋形成のある筋原線経，
それにグリコーゲン顆粒の集族などがみられる．×31，200
図3B Leptomereを高倍率で示す．×64，000

図4Myotubeと思われる細胞の胞体内にtrtubule由来と思われる多数の
tangleが見られる．×64，000−117−過電顕的には正常であった．以上より

初期変化として重要であることが指摘されてDuchenneジストロフィー症生検筋のヌード

おり6）7），本研究を通じ，今後本症生検筋の移マウスへの移植実験では移植後2週間迄には植後3−4週目の移植片における再生筋を中正常対照との間に定性的には大きな形態学的心として，その細胞8莫の構築をも含めた詳細差異を認めることは困難であった．

な形態学的検討が必要であろうと思われた．

考

察

文

献

筋ジストロフィー症生検筋にみられる活発

1）Wakayama，Y．：Electron microscopic

な筋再生現象が正常か否かは重要な課題であStudy on the satellite cellin the muscle

りながら，現在まだ一定の結論には至ってい

Of Duchenne muscular dystrophy．J．

ない．Mastagliaらは本症患者とpoly−

Neuropathol．Exp．Neurolリ

35：532，

myositis患者の生検筋及び臨床症状との対比のもとに後者では臨床的に筋力がほぼ完全

2）Wakayama，Y．，Schotland，D．L．，Bonilla，

なまでに回復した後，生検された筋細胞が完

E．＆Orecchio，E．：Quantitative ultra・

全に正常な細胞構築を示したことより筋再生

StruCturalstudy ofmuscle sate11ite cells

はCOmpleteであり4），本症では生検筋に活発in Duchenne dystrophy．Neurology

な筋再生がみられるにもかかわらず臨床的に筋力が回復しないことから本症での筋再生は

1976．

（Minneap．），29：401，1979．
3）Wakayama，Y．，Schotland，D．L．＆abortiveであると結論づけた5）．そしてこのBonilla，E．：Transplantation of human

原因として本症再生筋では組織化学的にSu一

skeletal muscle to nude mice：A

ccinicdehydrogenase活性が低く，電顕的にSequentialmorphologicstudy．Neurology

はmitochondriaの数が少ないためであろう（Minneap．），30：740，1980．

と推測した．また筆者も本症生検筋では電顕的に4）Mastaglia，F．L．＆Kakulas，B．A．：A

筋再生のstemcellと考えられるstellite cell

histological and histochemical study ofが定量的に増加しており1），この増加は本症患者の臨床症状が急速に悪化するintermediate

Skeletalmuscle regenerationinpolymy・OSitis．J．Neurol．Sci．，10：471，1970．

stageに最も著しく，また細胞形態もactivate5）Mastaglia，F．L．＆

Kakulas，B．A．：

されていることから2），本症におけるこのような活

Regenerationin Duchenne muscular

発な筋再生活動が臨床的な筋力回復に結びつかず，

dystrophy：A histologiCal and hist0−

本症の筋再生はineffectiveであろうと推測

Chemicalstudy．Brain，92：809，1969．

した．しかしここにみられる様にSatellite6）Mokri，B．＆Engel，A．G．：Duchenne−

Cellから形成された本症再生筋には透過電顕

dystrophy：Electron microscopic fin−

的に，移植2週間後迄には正常対照筋のそれ

dings pointing to a basic or earlyと比べ有意な変化がみられなかったことより，

abnormalityintheplasmamembrane of

本症の筋再生が不完全な原因として，筋線維

themusclefiber．Neurology（Minneap．），

壊死と筋再生との問には何らかのnegative

25：1111，1975．

balanceが存在するのか，あるいはmyotube

7）Schotland，D．L．．Bonilla，E．＆Waka−の更に分化した時点（移植3，4過後あるいyama，Y．：Application of the freeze−はそれ以後）から変性が始まるためなのかな

fracturetechniquetothestudyofhuman

ど種々の要因が考えられた．筋線維壊死に関neuromuscular diseases．Muscle

してはmuscle plasma membraneの変性がNerve，3：21，1980．

一118−

＆

23）実験的ミトコンドリア・ミオパテーの形態学的研究荒 木 淑 郎＊
研究協力者
目

山

村

善

教書

加

藤

栄

一■

30分，45分，60分後に両側大腿筋の生検を行的った．腸骨動脈を結紫していない側の生検筋

ミトコンドリア・ミオバナーとは「ミトコンドリアの異常（集積像，巨大化，Cristaeのを動注群とし，結紫した側の筋肉を第2群（対配列異常，結晶様封入体の存在など）が筋病

照群）とした．第3群（筋注群）ではネンブ

変の主要所見であるミオパテー」として理解

タール麻酔下に，大腿筋にDNP15mgを筋注されているが，成因については充分明らかにし15分，45分，60分後に注射部位を避けて大されていない．しかし，ミトコンドリア・ミ腿筋を生検もしくはnecropsyを行った．生

オパチーを呈する若干の症例で生化学的にミ検筋は2分割し，それぞれ組織化学的並びにトコンド））アの酸化的燐酸化のloose coup−

電顕的検索の為に処理した．組織化学的検索

lingが証明されている．

では生検筋を直ちに凍結し厚さ約10JJの切片

実験的には筋肉を阻血状態にすること1）や，を作製LHE染色，Gomori tricrome変法，

酸化的燐酸化のuncouplerである2，4−dini−

NADH染色を行って光昆引こて観察した．電trophenol（以下DNP）を動注すること2）3）に顕的検索の目的には生検筋を2．5％グルター

より形態学的にミトコンドリア・ミオパテ一ルアルデヒドで固定後，1％Os04で固定しにみられるものと類似のミトコンドリアの異型の如くエボン包理を行い超薄切片を作製し常が確認されている．

観察した．

我々は，DNPを動注することにより実験

結的にミトコンドリア・ミオバナーと類似の形

果

態学的変化が出現することを確認した上で，HE染色標本ではいずれにも著変を認めな従来試みられていないDNPの筋注法を試み，本法によっても動注法と同様の形態学的変化

かった．Gomori trichrome変法染色ではDNP動注群において，動注後15分よりrag−が出現することを確かめたので報告する．

ged red fiber（以下RRF）の出現を認め，動往復30分の生検筋に最も著明なRRFがみ方られた（図1b）．筋注群では筋注後45〜60分法

体重250〜300gのSprague−Dawley系雄

間位で全身の筋肉が硬直し死亡したが，そのラット12匹をもちい，次の3群にわけて比較

直後のneCrOpSyにて採取した筋肉に著明な検討した．第1群はネンブタール麻酔下に開RRFを認めた（図l c）．対照群では1例に明腹し，1側の腸骨動脈を結紫し腹大動脈へカ

らかなRRFを認めたがそれ以外では明らか

ニュレーションを行い，pH6．5のDNP15mg

なRRFはみられず，一部の筋線経に軽度のを3−5分かけて動注し，注入開始後15分，赤染物質の増加がみられたのみであった（図1a）．

RRFの出現率を経時的に観察すると図2＊宮崎医科大学医学部第三内科

ー119−

図I Gomoritrichrome変法

a．対照群

150×

b．動注群150×

C．筋注群150×

他は0〜10％（平均4．4％）と低値であった．

O D N P動注群
X D N P筋注群
●D N P非注入群（対照群）

NADH染色では動注群・筋注群共にGor
moritrichrome変法染色にてRRFを呈した

X

筋線経に一致して強染色性を示し，これは特に筋翰下において顕著であった（図3b，〇〇C）．これらのNADHに強染する筋線経はtypel fiberと考えられた．対照群ではRRF○を著明に認めた1例を除き強染色性は呈きなかった（図3a）．

〇
〇
〇

○囁司●．

10

●

電顕による観察では対照群にはミトコンド○

リアの異常は認めなかった（図4）．動注群の○●筋肉では筋鞘下並びに筋線維間に著明なミトコンドリアの集積像がみられ，巨大化，Cris−0●taeの配列異常などもみられたが結晶様封入0

体は見出せなかった（図5）．筋注群でも動注
●■

15

図2

30

群と同様の変化がみられた．

45

Raggedredfiber出現率の経時的変化

考＊DNP：2，4−dinitrophenol

案

1959年Ernsterら4）が代謝元進症候を呈す

DNP動注群では，動注後15分でる患者の生検筋にミトコンドリアの異常集積

10〜17％（平均12．1％），30分では8−45％（平や巨大化，結晶様封入体などを見出して以来，

均26．9％），45分では18〜35％（27．0％），60

骨格筋のミトコンドリアの異常を伴なう疾患に示す如く

分では21％であった．筋注群では15分後29％，

について数多くの臨床報告がOCulocranio−

45分後54％，60分後27％であった．対照群では明らかなRRFがみられた1例のみが15分

SOmatic neuromuscular disease with rag−

9％，30分19％，45分16％と高値を示したが，Shy症候群，Ophthalmoplegia plus，

ged red fiber，OCular myopathy，Kearns−

−120−

図3

NADH染色a．対照群150×

図4

b．動注群150×

C．筋注群150×

対照群18，000×

mitochondriaTlipid−glycogendisease，その他

ミトコンドリア・ミオパテーの病因の解明

種々の名称の下になされているが，それらのを目的に実験モデルを作成する試みがいくつ

病因については充分明らかにされておらず，

かなされている．1974年にはKarpatiら1）が現在までの報告のいく

つかにNADH−

ラットの腹大動脈を結繋することにより阻血

CoQ reductaseやcytochrome b，Cなどの活状態にした筋肉において，1975年にはMel・性低下・消失が証明されているに過ぎない．

medら2）がDNPをラットの腹大動脈に
−121−

図5

動注群18，000×60−180分かけて持続動注することによって群が阻血状態におかれていること，対照筋へミトコンドリア・ミオパテーと光顕的・電顕のDNPの混入の可能性が原因として考えら的に類似の病変の作成に成功している．そのれる．

後，1979年Heffnerら5）が直接大腿部をゴム

次に我々は，DNPの動注が技術的に困難

バンドで結紫することにより，また，Sahgal

であり，しかも，長期間同一実験対象を生存

ら3）はDNPの腹大動脈へのOneShot動注にさせることが困難な為にDNPの反復投与がよりミトコンドリア・ミオパテー類似の病変

不可能に近く，慢性の投与効果が観察できなを作成している．更に1979年佐藤ら6）は阻血

いこと，DNP腹腔内投与では筋肉にミトコ状態におく前に筋肉の支配神経を切断するこ

ンドリアの変化がみられないと報告されていとにより阻血の影響が増強されることを観察

る2）3）ことなどから，より簡便な方法としてしている．

筋注法を試み，動注法と同じく ミトコンドリ

我々は，まずMelmedら，Sahgalらの方法

アの異常が出現することを確認した．

に従ってDNPをOne Shotで動注を行いミ現在までに報告されているミトコンドリ

トコンドリア・ミオバナーの作成を試みたが，ア・ミオバナーの実験モデルは形態学的には

光顕上，動往復15分でRRFが出現し，動注後臨床報告例の筋所見に近似しているが，臨床30分には平均26．9％の出現率を示した．電顕
的にも動注群の生検筋に従来の報告に一致す

症状の上からはいわゆるミオパテーといえる
ものではなく，より臨床例に近い実験モデル

るミトコンドリアの異常所見が得られ，形態の作成が望まれる．その点でミトコンドリ

学的にはミトコンドリア・ミオバナーと呼べア・ミオパテーが全て単一の病態で説明できるものが作成されることを確認した．対照群

るとは思えないが，ミトコンドリアの酸化的の1例にRRFがみられた点については対照

燐酸化のloose couplingが若干の臨床例で一122一

証明され，CytOChrome系の異常等が明らか

文

献にされつつあることから，DNPの様なun−1）Karpati，G．，Carpenter，S．，Melmed，C．＆

COuplerを実験動物に投与することにより臨

Eisen，A．A．：Experimentalischemic

床症状の上からもミトコンドリア・ミオノヾチ

myopathy．J．Neurol．Sci．，23：129，1974．

ーと類似の所見が得られる可能性があると考

2）Melmed，C．，Karpati，G．＆Carpenter，S．：

える．しかし，DNPは効果が一過性であり恒Experimental mitochondrial

久的な形態学的変化は1回のみの投与では得

produced byin

られていない2）3）．そこで我々は先に述べた

OXidative phosphorylation．J．Neurol．

理由から筋注法を試み，形態学的には動注法

Sci．，26：305，1975．

と同様の変化が出現することを確認したが，

myopathyvivo uncoupling of3）Sahgal，Ⅴ．，Subramani，V．，Hughes，R．，

今後，DNPの少量反復投与を筋注法で行い

Shah，A．＆Singh，H．：On the path0−

臨床的にも形態学的にもよりミトコンドリ

genesisofmitochondrialmyopathies．An

ア・ミオバナーの臨床例に近い実験モデルのexperimental study．Acta Neuropathol．

作成を試み，その成因につき検討したいと考える．

（Berl．），46：177，1979．
4）Ernster，L．，Ikkos，D．＆

Luft，R．：

Enzymatic activities of human skeletal

結語muscle mitochondria．A toolin clinical

DNP動注並びに筋注により形態学的にミ

metabolicresearch．Nature，184：1851，

トコンドリア・ミオパテ一に類似する光顕並

1959．

びに電顕所見が得られたが，筋注でもミトコ

5）Heffner，R．R．＆Barron，S．A．：Theearly

ンドリアの異常を来たすことはDNPの慢性effect ofischemia upon skeletal muscle

投与実験を可能にすると考える．

mitochondria．J．Neurol．Sci．，38：295，
1978．

謝辞：電顕技術につきご助言を頂いた宮崎医

6）佐藤 猛，西 克典：虚血による実験的ミ

科大学第1解剖学教室・年森清隆先生に感謝致します．

トコンドリア・ミオパチー：神経切断の影
響．筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究（三好］旺），昭和54年度研究報告
書，1980，p．143．

−123−24）ミトコンドリア・ミオパテーの臨床的・電子顕微鏡的研究
佐 藤
研究協力者

安

野

猛＊

みどり＊

西

克

典＊

骨格筋のミトコンドリア（Mt）異常を有すで甲状腺艦の摘出術うけるも症状漸次進行性．

る症例は，Luftらによる代謝瓦進症状を示す

現症：両側眼瞼下垂と日艮球運動制限，顔症例で，巨大Mtの報告がなされて以来，面・頸部・上肢帯に軽い筋力低下．眼底正常．

ocularmyopathyをはじめとして，種々の臨検査：脳波はSlowαに4−7C／se混入し，床例がある．臨床像が多彩であるのと同様に，

基礎律動はdysrhythmic．筋電図は上肢帯にMt異常の程度も，主病変と思われるものか

軽度筋原性変化．CPK30〜170IU（正常30以ら随伴的と思われるものまで種々で，更に筋下）と変動，Creatinel．4mg／dl，GOT14U，

病変のみでなく，他臓器にも同様のMt異常GPT12U，Al−P5．5U，LDH540U，TTTl1．3，の見出される症例もある．Mt異常のみられ

ZTT16．1，ccF（±）で慢性肝炎の所見を認めた自験例5例を中心に，その臨床的特徴と，た．甲状腺機能・BMRには異常なし．

Mt結晶様封入体の微細構造を解析し，さら症例3（Kearns・Sayre症候群）
39歳，男に検討中であるMtの呼吸活性測定法につき

M．N．，

家族歴・既往歴：特記すべきことなし．

報告する．

現病歴：幼少時より軽い眼瞼下垂あり，思症

春期頃より増強．運動は元来不得手で，30歳例

症例1（眼筋型） J．Mリ48歳，女
家族歴・既往歴：特記すべきことなし．
現病歴：33歳頃より右眼瞼下垂，46歳頃には左側にも出現．
現症：両側眼瞼下垂と眼球運動制限のみで，頃より前額部禿・軽度視力低下出現（眼鏡で矯正不可）．31歳東邦大で」二記診断受ける．
現症：両側巨艮瞼下垂と巨艮球運動制限．頸部・四肢遠位部の軽度筋萎縮と筋力低下．指鼻試験のterminalに軽い動揺．
検査：脳波はlow voltageでα波出現悪頸部・四肢には異常を認めない．
検査：CPK29IU．，Creatine1．2mg／dl，テンシロン試験は陰性，筋電図は上限瞼挙筋に
軽度筋原性変化．
症例2（眼筋型＋軽度全身型） M．0・，46

く，基礎律動はdysrhytlmic．髄液蛋白101
mg／dlと上昇．CTで基底核の石灰化と，大脳・小脳の軽度萎縮，眼底にChoreoretinaldegeneration，軽度知能低下（WAIS75）．軽度難聴，筋電図では筋原性変化．ECGは正常，

歳，女
家族歴：第1及び第2児は生後数日で死亡したが，詳細不明．
既往歴：30歳で第3児出産後，両側眼瞼浮腫状となり，徐々に眼瞼下垂も加わる．33歳

CPK45IU，Creatine1．3mg／dl，GOT43U，
GPT50U，ChoITT337mg／dl，Chol−E264
mg／dl，Beta−L4．1mm，総脂質1065mg／dl，リン月旨質312mg／dl，中性月旨肪234mg／dl，と月旨質
系の軽度上昇を認めた．肝生検では小葉構造
は比較的よく保たれているが，肝細胞は脂肪＊順天堂大学医学部脳神経内科

ー124−

変性を示していた．

症例4ははじめに施行した上腕二頭筋生検

症例4（HumerOperOnealmuscularatro−
phy）S．E．，48歳，男では，筋線経が萎縮・消失しており，問質の膠原線推だけだったため，Pacemaker装着

家族歴：養子のため不明．

手術時に採取した大胸筋を検索した．散在性

既往歴：37歳頃より胃潰瘍あり48歳で手術．

にragged−redfiberを認めたが極めて軽度で，現病歴：幼少時よりやせ型で，走るの遅く，萎縮線維はややTypeIIに目立ち，筋原性変懸垂は1〜2回程度．27歳ECGでA−V化が主体であった．

block指摘され，37歳頃より動惇・呼吸困難出

症例5は大腿四頭筋を検索し，大小不同を現し，四肢の筋力低下も進行．41歳心拡大み示す筋線経の間に，著明に萎縮変性した筋線

られ，48歳Pacemaker装着さる．意識消失発

経が散在性にみられ，同部では問質の膠原線

作（−）．

経の増加が目立った．萎縮線経は軽度Type現症：全身のやせが目立つが，上腕・下肢Iに目立ち，ragged・red fiberも散見された．

遠位部に優位な筋力低下・筋萎縮あり，頸部・炎症所見なく，月旨肪染色も異常を認めなかっ脊椎の前屈制限を認める．眼症状（−）．

た．

検査：ECGでCOmpleteA−Vblock，筋電5例全てに後述のように，ragged−redfiber

図では筋原性変化に軽度神経原性変化のき昆入．

に，巨大・変形したMtや結晶様封入体を認め

CPK54IU．，Creatinel．1mg／dl．

たが，その程度は症例1，2，3で著明であ

症例5（Quadricepsmyopathy）

T．N．，

31歳，男

った．症例1，2，3では眼筋型ミオバナーが共通した基本病像であり，四肢筋障害から，家族歴・既往歴：特記すべきことなし．
現病歴：幼少時より走るのが遅く，18歳頃

さらに中枢神経系異骨，網膜色素変性などを伴う，いわゆるKearns−Sayre症候群へと連階段昇降やジャンプが困難となり，19歳頃よ続した症候群と考えられた．症例2，3ではり大腿部のやせに気づく．

軽度の肝機能障害を伴っており，症例3の肝現症：Quadricepsに限局した筋萎縮・筋力

生検電顕所見（図1）で筋病変と同様の結晶低下のみで，他の筋肉は正常．眼症状（−）．

様封入体が認められ，従来の報告でも指摘さ

検査：筋電図は筋尿性変化で，CPK490IU，とれているように，骨格筋だけでなく全身の代

高値，GOT45U，GPT61U，LDH720U，Cre−

謝障害があり，Mt異常が重要な役割をして

atinel．1mg／dlと軽度上昇，ESRll／26，CRPいると考えた．

（−），RAtest（−），LEtest（−）．

症例4

はいわゆる

Humeroperoneal

muscularatrophyにA−V block，あるいは

結果・考察

Cardiomyopathyを伴う症例として報告され筋組織化学所見
症例2，3の三角筋，および症例1，2では眼瞼挙上形成術時に採たものと同一であり，報告者によりEmery−
Dreifuss症候群，Scapulo−perOnealdystro−

取した外日艮筋と前頭筋を検索した．三角筋でphy等と名付けられ，またMt異常を伴う症は2例ともに散在性にragged−red例も報告されている．10数例の報告例では，

fiberが20〜30％に認められ，TypeIIatrophyを伴筋原性変化と神経原性変化のき昆在が指摘され，っていた．外眼筋・前頭筋は筋線経の萎縮が常染色体劣性の遺伝形式をとるものが多く，高度で，問質の膠原線経と月旨肪が著増してい最近注目されてきた症候群である．

た．PASではragged−red丘berに一致して軽症例5はいわゆる大腿四頭筋ミオバナーで，度陽性所見あり，SudanInでも散在性に陽性

本疾患群には筋ジストロフィー症，多発性筋所見を認めた．

炎，神経原性萎縮症等が含まれている．症例−125−

図l 症例3の肝内ミトコンドリアの結晶様封入体（×50，000）

5は炎症所見は見出されなかったが，念のたの線状のものが1Unitをなし，1−数Unit

めステロイドで治療中である．

が平行配列している．

症例4，5共に，Mt異常は随伴的なものか

垂直断面をさらによくみると，4層は第1もしれないが，未だ報告が少ないので，今後と2，第3と4の2つのSubunitにわけられ，症例を重ねて検討する必要がある．

各2層の間には40〜60Aのdensityの高い物

電子顕微鏡所見

異常Mtは，巨大化しが，150〜200A毎に配列し，その間に細い線複雑に発達したCristaeが充満したもの，渦状の物がみられ，これらでSubunitが諸費成さ

巻状のもの，帯状に変形したもの等多彩であれている．
他の垂直断面では第2と3，第1と4とのる．
結晶様封入体はCristae内部で膜に平行に4層配列をなすもの，円柱状のもの，粗大顆層が同方向に，前者と後者は反対方向にジグザグ状に屈曲してみえ，前述のdensityが高粒状のもの等いろいろで，円柱状のものは，

く，Karpatiがblockと呼んだものは，互いに細長く伸展したMtの内腔をほぼ満たし，長逆方向に屈曲をくり返した2層の突出部の重軸方向に伸び，長さは一定しない．

なりに相当すると思われた．垂直断面と類似

4層配列をなす封入体は最もよくみられ，の構造が長軸方向でもみられ，各subunitの

この立体構造につき詳細に検討してみた．

間には連絡もみられることから，この直方体

ChouやKarpatiの報告1）2）にみられるようは，3次元方向に組み合わさったフィラメンに，この封入体は3つの面をもち，軽いカー

トで構成されていると考えた．
Mt異常は種々な状況で出現し，Mt異常がブを有した直方体をなすと考えた．長軸・側面・垂直断面よりみた写真を提示する（図2・1次的なものでも，他の原因より生ずる随伴

A・B・C）．長軸・垂直断面をみると，4層的異常に相当する2次的なものでも，Mtの
−126−

図2

4層配列よりなる結晶様封入体
A：長軸方向（×160，000），B：側面像（×120，000）
C：垂直断面（×150，000）

反応は同じ態度をとると考えられる．

Sitis・Acta Neuropathol．（Berl．），12：68，

Mt異常を生ずる背景には代謝異常の存在

1969．

が考えられ，その手がかりとして，Mtの機能

2）Karpati，G．，Carpenter，S．，Larbrisseau，

異常を検索し，NADH oxidase減少，CytOT

A．＆Lafontaine，R：TheKearns−Shy

Chrome系の異常，phosphorylationの異常等

Syndrome．J．Neurol．Sci．，19：133，1973．

が報告されている．Mt異常出現の機序解明

3）Makinen，M．W．＆Lee，C．P．：Biochemical

を目的に，RatmuscleからMtを分画し，そStudies ofskeletalmusclemitochondria：の呼吸活性につき測定法の検討を開始した．

Ⅰ．Microanalysis of cytochrome content，Makinen

Leeの方法3）に基づきMtを分

0Xidative and phosphorylative activities

画し，SuccinateやPyruvateやMalateを基

Ofmammalianskeletalmusclemitochon・質とし，ADP添加による呼吸調節を中心に検dria．Arch．Biochem．Biophysio1．，126：＆討中であるが，正常Mt分画方法に多くの問題があり，今後さらに検討を重ねる予定であ

75，1968．

4）Land，J．M．＆Clark，J．B．：Mitochondrialる．

myopathies．Biochem．Trans．，7：231，
1979．

文

献

1）Chou，S．M．：

ObservedinaMegaconial

case

of

5）三田哲司：Mitochondrialmyopathy．神経内科，8：320，1978．

mitochondria

chronic

polymyo一

一127−25）不動性筋萎縮の病態に関する基礎的研究

木 下 真 男＊研究協力者
日

水 谷 一 裕＊＊ 横 田 昌 幸＊＊ 茂手木 三 男＊＊
染色との相互関係でTypeIとTypeIIB線

的

骨格筋の不動性筋萎縮の病態を明らかにすべく動物実験を行ない，組織学的並びに組織化学的に検索を行なった．

経とは染色上reciprocalであるが，両染色にともに染色性がみられるTypeIIA線経が存在することが確認された．更にType別筋線
経の筋径のHistogramを作成すると前脛骨方筋1），排腹筋2）に明らかな相違はなくほぼ一峰

法成熟雄家兎の未処置群を対照とし，全身麻性であった．次にATPase染色pH9．4と酔下にギプス包帯固定を行ない，膝及び足関

phosphorylase染色との関係についてみると，

節の最大固定肢位が屈曲一背屈のものをⅠ群，

原則と屈曲一底屈のものをⅠⅠ群，伸展一昔屈のもの

rylase染色ではTypeII線経のSubtype別をⅢⅠ群とした．標本は前脛骨筋及び排腹筋よ識別は困難であった2）．一方，SDH染色とLDH染り採取し凍結切片を作製し，ATPase染色

色，更にNADH．TR染色との染色関係に明してparallelであるが，phospho−

pH9．4を中心に種々の組織化学的検索を行な

らかな相違はみられなかった．尚，酸phos−った．尚，筋の緊張状態は三栄測器のひずみ

phatase染色ではperimysiaの小血管周囲に歪み計を用いて計測し，Type別筋線椎の筋

わずかに染色性がみられ，筋線経には明らか

径のHistogramはATPase染色pH9．4標

でなかった．以上を前提として成熟家兎の片本により作成した．

側下月支に全身麻酔下にギプス包帯固定を施し，追週的に組織化学的に検索したところ，Ⅰ群

結国定肢位での前脛骨筋は固定後4週でSDH

果ATPase染色pH9．4にて対照の前月里骨筋l），染色にて染色性を有する筋線経に大小不同が排腹筋2）ではともに三種類の筋線練が認めらみられ，ATPase染色pH9．4（図1）にて中れ，TypeII線維数が優位であった．SDH染

等度に染まる筋線経に筋径の径小化が著明で色との比較にてATPase染色pH9．4で淡染あり，つまりTypeIIA線経の径小化が確認する線椎はSDH染色で禰i蔓性に微小顆粒状された．国定後8週に到り，ATPase染色に染色性がみられ，ATPasQ染色pH9．4にて中等度に染まる線経はSDH染色でSubsar−

pH9．44）によるTypeII線経のSubtype別識
別は困難となり，H．E．4）染色にて中心核，筋鞘COlemmalに粗大顆粒状に染色性がみられ，

核はともに増加し，散在性に径小化する筋線

更にATPase染色pH9．4にて浪染する線経経がみられた．更にlysosome系の酸phos−

はSDH染色で明らかな染色性がみられなか

phatase染色での染色性は固定後3週頃でendomysiaにもみられ，固定後6週頃でった3）．従ってATPase染色pH9．4とSDH＊東邦大学医学部第四内科

perimysiaにも増強し，固定後9週頃では著明となることが知られた．同様にⅠ群固定肢＊＊東邦大学医学部整形外科

位での月非腹筋について検索すると，固定後3
一128一

図l

図2

週でSDH染色に染色性を有する筋線経は全2週でTypeIIA及びTypeI線経の径小化て径小化し，ATPase染色pH9．4（図2）にが認められたが2），強緊張のHI群固定肢位でよりTypeI及びTypeIIA線経の径小化がは固定後3週でTypeIIA線経の径小化が認確認された．尚，SDH染色では固定後4〜6

められ，TypeI線経は円形を呈し，径小化は週より全般的に染色性が低下した．次にⅠ群

著明でなかった2）．以上のⅠⅠ群及びHI群固定

固定肢位におけるType別筋線経の筋径の肢位における俳腹筋でのType別筋線経のHistogramを作成すると前脛骨筋では固定

Histogramを作成すると，弱緊張肢位固定群

後4週頃でTypeIIA線経の径小化が認めら

では固定後2週でTypeIIA及びTypeI線れたが（図3），排腹筋では固定後3週頃で経の径小化がみられたが2），強緊張肢位固定

TypeIIA及びTypeI線経の径小化が確認

群では固定後4週でTypeIIA線経の径小化された（図4）．更に各骨格筋におけるTypeが確認された2）．同様に強緊張肢位固定にお別筋線経の選択的変化の相違と固定肢位における前脛骨筋について検索すると，固定後2ける筋緊張状態との関係を明らかにすべくⅠⅠ

週で筋腹部遠位端は白色を呈し，弾力性に乏群及びIII群肢位での筋緊張状態について，排しく月重癌状に腫脹していた．組織学的には多腹筋を中心に三栄測器のひずみ歪み計を用い数の筋鞘核及びヰ心核がみられ，組織化学的て比較検討したところ，俳腹筋の緊張状態はには表層にてType別筋線経の識別が困難なⅠⅠ群ではⅠ群より弱く，ⅠⅠⅠ群ではⅠ群より強径小化する筋線経がみられ，深層との境界部

いことが知られた．以上を踏まえてATPaseにはATPase染色pH9．42）及びSDH2）染色

染色pH9．4を中心に組織化学的検索を行っにて筋線経の中央部に円形で異常な染色性をたところ，弱緊張のⅠⅠ群固定肢位では固定後示す筋線経が多数認められた．連続切片を両

主体をなすものと推察される．次に固定時に表l 成熟家兎Type別筋線維数（％）

おける筋緊張状態との関係について，加藤5）T yp e5例

l

II A

は家兎でギプス包帯固定後の排腹筋及びヒラII B

メ筋について検索し，筋を緊張位に固定した

前脛骨筋

場合は弛緩位の固定より萎縮の発生が軽度で，
対

照

7 ．9

3 4 ．7

その進展は緩慢であることを認め，更に緊張

5 7 ．4位に国定した際には固定後7El目に筋線経は肥大し，円形を呈し，その間に細小な筋線経2− 4 週間
ギ プス 包帯 固 定 群

9 ．l

3 4 ．35 6 ．6を認めたと報告している．更にEngel W．K．，
etal．7）は猫にアキレス腱切腱術を施し，排腹筋，ヒラメ筋を検索したところ，術後1−2染色で比較すると筋線推中央部における染色

週でTypeI線経の萎縮と時に肥大せる性の異常なる部位は必ずしも一致しなかった．

TypeII線経を認めたと報告している．我々

尚，対照群でのType別筋線維数％は前月至骨の家兎，排腹筋を用いた実験で，弱緊張肢位筋でみるとTypeI7．9，IIA34．7，IIB57．4

固定群では固定後2週でTypeIIA及び％であり，処置群におけるこれらの割合の変

TypeI線経の径小化が明らかであったが，化は固定後4週までは明らかでなかった（表強緊張月支位固定群では固定後4週でTypeII

1）．

A線経の選択的径小化がみられ，TypeI線
経の径小化は著明でなく，円形を呈していた．
考按

従ってTypeI線経の変化は少なからず筋緊Fiber type別筋線維数の割合について

張状態と関係があり，固定による不動性筋萎

Herbison G．J．，et al．6）はratにギプス包帯国

縮は桔抗筋を適度の緊張状態におくことによ定を施し，足底筋では変化がなかったが，ヒりある程度予防されるものと考えられる．し

ラメ筋ではTypeII線維数が増加する一方，かし各骨格筋について，Ferguson A．B．，et

TypeI線維数が減少するをみたと報告してal．8）は家兎の下肢に種々の肢位でギプス包帯いる．著者の実験では2〜4週間ギプス包帯国定を施し，追週的に湿重量を前脛骨筋と排固定後の前脛骨筋でType別筋線維数％は対腹筋とで比較し，前脛骨筋の緊張肢位固定群

照群との間に明らかな差がみられなかった．

では初期に著しい増加をみたが，同様の結果

不動性筋萎縮におけるfibertypeの選択性について加藤5）は家兎にギプス包帯固定を施し，を排腹筋では得られなかったと報告している．
我々も前脛骨筋と排腹筋が緊張肢位固定後にSudan Black B染色を施し，白筋線経に早各々異なった結果を示したことより，家兄の期に著明な萎縮をみたと報告している．Her−

前腰骨筋と排腹筋は基本的に異なった特性をbison G．J．，et al．6）はratにギプス包帯国定を有しているものと考えられる．

施し，myOSin ATPase染色にて足底筋では文

TypeII線経の，又ヒラメ筋ではTypeI，ⅠⅠ

献1）水谷一裕，ほか：家兎骨格筋の組織化学的

線経に選択的萎縮を認めたと報告している．
我々の実験では伸筋と屈筋により，又種々の検索．日整会誌，54−10：236，1980．

固定肢位により筋萎縮の様態に相違がみられ

2）水谷一裕，ほか：ギプス包帯固定による筋たが，TypeIIA線経の選択的径小化が共通萎縮に関する実験的研究．中部整災誌，23

してみられたことより，家兎でのギプス包帯−1：201，1980．

固定による不動性筋萎縮はTypeIIA線経が3）水谷一裕，ほか：ギプス包帯固定による筋ー130−

の実験的研究．日整会誌，52−10：1455，

Arch．Phys．Med．Rehabil．，59：301，

1978．

1978．

4）水谷一裕，ほか：最近経験したMyotonic7）EngelW．K．，etal：Histochemicalstudies

Dystrophyの一症例．中部整災誌，23−3：

ofdenervatedortenotomizedcatmuscle．

794，1980．

Ann．N．Y．Acad．Sci．，138：160，1966．

5）加藤延幸：実験的筋萎縮の組級学的研究．

8）FergusonA．B．et al：Astudy ofdisuse

中部整災誌，6−3：738，1963．

atrophyofskeletalmuscle．J．Boneand
Joint Surg．，39−A−3：583，1957．

6）HerbisonG．Jリetal：Musclefiberatrophy

after castimmobilizationin the rat．

−131−26）筋ジストロフィーの筋病変に関する検討−各病型における筋線維病変と血管問質病変についての知見補遺−

研究協力者

日

田

辺

内

潟

雅

野

沢

胤 美＊＊ 原

等＊

信＝

松

原

四

郎＊＊
満目＊

amyotrophylO，正常所見を呈した4例につ的

我々は本姓研究の形態学分担の立場から，

いても同様に検索した．

筋ジストロフィーの筋病変そのものを，各臨筋生検部位は全例四肢近位筋で，組織学床病型問の差異に着目して検討している1ト4）．

的・組織化学的検討を主とし，一部電顕所見

その一部はすでに本姓会議に発表したが1）・2），

とも対比した．筋病変は，パラフィン切片に

今回は最近の知見補遺を加え，また前回まで

よる一般病理組織学的染色法，クリオスタッの所見を総合的に再検討した結果をまとめてト切片による一般染色及び組織化学的方法

報告する．

（HE，trichrome変法，PAS反応：myosin
ATPase，DPNH−TR，phosphorylase，

対象および方法

Cholinesteraseなどの活性像），グルタールア

前回までの対象について検討標本数を増し，ルデヒド・オスミウム酸二重固走法による電定量的操作を工夫して再検索した．対象は虎顕的検索を結合して解析した．

の門病院における自験例（1970年以降，368例）

問質および血管病変に関する検索についてのうち，適応を考慮した筋生検施行例で，病も上記の方法によったが，それらの計測につ型が確定されたものから本検討に通する標本

いては，種々の方法を検討した結果，共通に，の得られた50例（年齢3〜51歳；男36，女14）で，内訳は，Duchenne型13（男），Becker型

クリオスタット切片（厚さ8JJ）HE染色像を中心に施行した．計測法については前報に示

3（男），肢帯型17（男11，女6），顔面眉甲上した方法をそのまま用いた1）．

腕型6（男4，女2），先天（福山）型11（男5，女6）であった．なお筋緊張性（筋強直性）ジストロフィー31例（男18，女13）についても同様に検討対比した．また血管・問質病変についての対照として，諸種先天性ミ
オバナー8，筋萎縮性側索硬化症20，多発性筋炎20，糖尿病性neuropathyおよび＊虎の門病院神経内利L；中中記念成人病研究所＊＊虎の門病院神経内科＊＊＊虎の門病院病理学科，；中中記念成人病研究所

結果1）全体像（組綴学的・組織化学的所見）
前記各病型ごとの筋病変につき，組織学
的・組織化学的・電顕的所見とともに全体的に検討・提示し，共通点（筋原性変化−散在性萎縮・肥大線経，横断面円形化，中心核，
endomysiumの関大など−及び諸種構築異常），および各病型における特徴（以下の項に示す）について考察した．
2）Megahistogramについて−132一

前報以後も標本数を重ねて検討した結果，

半定量的に（前回報告した写真・トレース・各病型間に比較的特徴的な差異を認めた．す面積計算法により）検索した1）．標本数を増し

なわち，各病型とも，baseの広いミオバナーて再検討した結果でも，ほぼ同様の結果とな

型を示しながらも，①Duchenne型は55JLをった．このうち，筋線維部分と膠原線維部分

peakとしたほぼ典型的なSpeCtrum pattern（血管・神経・筋紡錘部分を除く）全体に対を示し，②肢帯型では肥大線経が相対比率上する筋線維部分の比率は，正常約94％；Duc−

目立ち，③顔面肩甲上腕型では萎縮線経が相henne型約52％，Becker型約72％，肢帯型約対比率上目立ち，①先天型では左方推移がと64％，顔面屑甲上腕型約73％，先天型約46％；

くに著明であった．またfiber type別hist0−

筋緊張性ジストロフィー約65％；先天性ミオ

gTamでは，一部にtypeI，typeIIatrophy

パテー約77％，筋萎縮性側索硬化症約68％，を示す症例も認められたが全体としてはme一

多発性筋炎約70％，糖尿病性neuropathy・

gahistgram上のdifferentness propertyを示すには至らなかった．

amyotrophy約78％であった．以上の3，5筋

3）筋線維構築異常の種々相

ジストロフィー群では先天型とDuchenne型
において膠原線維部分の比率が特に高いが，各病型とも，筋線維構築の上では共通点が前者では，筋線維部分・膠原線維部分と脂肪多いが，1）肢帯型・顔面肩甲上腕型には，線維部分とを併せたものに対する筋線維部分

反応性変化（小円形細胞浸潤・phogocytosis，の比率は約34％，後者のそれは約40％と，そ

局所的溶出・浮腫，中心核・nuClear budなれぞれ著しく低下した数字となる．なお月旨組ど），Splitting，mOth−eaten様変化，mitochon−

織比率は他疾患（筋ジストロフィー他病型及dria異常，ring fiberなど多彩な病変が他型

び対照群）のそれに比し約2倍程度となってに比し高率に認められ，また，2）先天型でいる．

5）血管肥厚病及び内腔面積の半定量的検は，myOtubeやCentralcoreなどの筋線維中討

心部性病変は見出し得なかったが，粗なnet−

前報で，筋組織標本における血管の肥厚度

workなど胎生期所見の一部残存，fibertypeの分別困難な部分の多いことなど，未分化性を1／R（1＝血管壁の厚さ，R＝外縁の半径）でがみられた．

示し1㌧ 各病型・対照群を比較し，且つ同一母

4）筋線経と問質との半定量的検討

集団の年齢別分布を対比した．前述のfibro−

筋組織標本における筋線維部分と問質部分

sisの強いDuchenne型・肢帯型・先天型など（膠原線維部分および脂肪部分）との比率を，

では，年齢分布上低年齢層にあるにも拘わら〔29個の例（mchenne型筋ジストロフィー）〕
総面積計：27955〃2
平

均： 945
図日 筋組織内血管内腔横断面積（短径により計算）の1標本内分布−単位症例における算出根拠・例示−

一133−

正常t筋ジストロフィー・対照疾患（4種）
における筋組織内血管の外径・壁比、■事…

く同症例全令別分布との対比〔閉ワ巧塑■J／R（％）〕
正常

筋組織内血管内陸横断面積

儲至宝蒜讐警払］（斜切れについては短径）0

1000

2000β

（4）

●

Duchenne（13）●

Becker

（3）

●

LG

（用

●

FSH

（6）

●

cong・

（11）

●

MD

（31）

先天性ミオバナー（8）
ALS

銅

多発性筋炎

鋤

糖尿病性神経・筋症（10）図2 血管肥厚度（左）および内腔横断面積（右）についての検討ず壁の肥厚傾向を示した．

変に関して，①総合所見，②histogram，③筋

然し筋内の血流の問題は，このような血管壁の相対的肥厚度のみからでは判断しにくい

線維構築，④問質，⑤血管などに着目すると，単一所見個々には非特異的要素を有しながらので，今回は全標本につき，血管内月空の広さも総合的にはかなりの特徴的差異が認められそのものの測定を平行して検討した．図1はる5）．また一方では，臨床型としての筋ジスト

Duchenne型の1枚の標本中の血管の内腔横ロフィー各病型，とくにDuchennC型6）や先断面積（短径により補正計算）の分布を例示

天（福山）型など疾患単位に近い位置づけのしたものである（写真撮影・方眼紙法）．かななされ得る病型や，肢帯型のように尚その点

りのばらつきはあるが便宜上その平均値（こに問題を残す病型について，上記の着目点のこでは945メイ2）を求め，同様の操作を重ねた各上で何らかの相違を示すか否かについても，病型対照疾患の平均値を図2・右に示し，肥

所見解析上重要な点である5）．本検討の結果で厚度（図2・左）と対比した．その結果，肥は，DuchennC型・先天（福山）型については厚度の差に比し，内腔面積の平均値自体にはそれぞれ他型とかなりの相異点が示されてい明らかな病型・疾患上の差異を認めなかった．
この点は，肥厚度の高い病型では，Ducherme

ることは注目に値する．しかしながら，これらの差異を以て直ちに本症の成因そのものと型のように内脛の大きさのパラツキが他型に関連づけて論議するには尚慎重を要する．

比して多いことや，外縁までの血管全体の太本症の筋病変において，各病型ごとに示ささが増加しているものが多いことなども含めれた若干の特徴は，二次的な病変であるにせて説明すべき内容と考えられる．

よ，また本質的な病態と二次的な病態との循環によって生じたものであるにせよ，次のい

考察・結語

くつかの点は病態検討・成因追究上示唆に富以上より，筋ジストロフィーの病型別筋病

む知見と考える5）6）．すなわち，反応性所見・−134−

再生現象，虚血性病態，筋線維構築異常の種々研究委託費」筋ジストロフィー症の病因に相の中での選択性，神経原性因子の関与を示関する臨床的研究，第二班（三好班）昭和53年度研究報告書，p．97，1979．

唆する所見などがその例であり，臨床症状，

3）田辺等：筋ジストロフィー症における筋生

経過，遺伝学的なgenotype・phenotypeの対検．神経内科，3：209，1975．

比など臨床的検討とも併せて今後さらに吟味

4）田辺等：筋生検．総合臨林，24：845，

を重ねてゆくべき問題と考えられる．

1975．

文

献

5）Dubowitz，Ⅴ．＆

1）田辺等，内潟雅信，松原四郎，野沢胤美，

Brooke，M．H・：Muscle

biopsy：A modem apprOaCh．Saunders，

原満：筋ジストロフィーの筋病変に関する

London，Philadelphia，Toronto，p．168，

検討（続報）−各病型における筋線維病

1973．

変と血管・問質病変との対比−．厚生省

6）Engel，W．K．：Duchenne muscular「神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー

dystrophy．A histochemically based症の病因に関する臨床的研究，第二披く三ischemia hypothesis and comparison

好姓）昭和54年度研究報号書，p・111，

with experimentalischemia myopathy．

1980．

In HThe striated muscleT（edited by
Pearson，C．M．＆ Mostofi，F．K．），Willi−2）田辺等，野沢胤美，内潟雅信，塩沢瞭一，

ams＆Wilkins，Baltimore，1973，p．453．

原満：筋ジストロフィーの諸病型における筋病変の特徴について．厚生省「神経疾患−135−27）神経筋疾患と骨関節異常との合併・共存病態に関する検討

研究協力者

内
野

日

田

辺

渇

雅

沢

等■

信＊＊

松

原

胤 美事＊ 熊 野

的

四

郎＊＊
潔＊＊＊

％）に高率に認められた．異常前後轡はDMP

神経筋疾患（NMD）には，筋強直性ジストの諸型（約80％）および先天性ミオパテー（66

ロフィー症やKearns−Shy症候群の如く多％）によく認められた．高口蓋もこれらの病

系統性障害を示す場合が稀ではない．そのう型に多く，凹足・内反足は当然のことながらち，骨関節異常特に脊柱側攣（SC）はNMD

Charcot−Marie−Tooth病に多く，その75％の二次的病態として強調されることが多いが，に観察された．

共存病態として位置づける面も考慮する必要がある．今回，SCを中心にこれらの点につい型DMP（50％），先天型I）MP（38％），WHて検討を加えたので報告する．

B集団・居宅検診例

SCはDuchenne（60％）に多かった．異常前後腎も前記の病型に多く，DuchennC型DMPの46％，先天型

対象・方法

DMPの40％，WHの40％に認めた．高口蓋は諸種NMDのうち，入院精査例中の900例

Duchenne型DMP（29％），先天型DMP（38および集団・居宅検診例中の350例を対象とし％）に比較的多く認められた．

て，神経学的診察のほか，SC，脊柱の異常前後替，高口蓋，唆合不全，凹足・内反足など

NMDとSCの共存例（表1） 入院精査
例の中で，NMDとSCが共存すると考えらの骨関節異常に着目し，必要に応じL線検査

れる31例について検討した．いわゆる特発性を施行し，入院精査例については適応を考慮

SCで，筋萎縮・筋力低下を呈した21例のうした筋生検とも対比した．

ち，筋生検その他の検索より，表の如く Cent−ral core病3例，multicore病1例および特結果異的変化に乏しいミオバナー16例が手由出され症例の概要
A入院精査例

た．残る1例はCentralcore病例の妹で，臨SCは進行性筋ジストロ

床的に軽度のミオバナーが疑われたにも拘わフィー症（DMP）の中ではFSH型（83％）

らず，筋生検では明らかな変化が認められなや先天型（73％）に多く，そのほかではCentral

かった．症候性SC中，Marfan症候群（3COre病（100％：3／3例），他の先天性ミオバナ例），Ehlers−Danlos症候群（1例），VOn

ー（66％），Werdnig−Hoffmann病（WH）（80

Recklinghausen病（1例）および脊髄空洞症（1例）例は，特異的変化に乏しいミオバナ＊虎の門病院神経内科．沖中記念成人病研究所＊＊虎の門病院神経内科

ー性所見を示した．なお，特発性SCの全例および症候性SCの6例はいずれも整形外科入＊＊＊東京大学医学部整形外科（元虎の門病院整形外科）

院例もしくはその紹介例である．
一136−

表l 神経筋疾患と脊柱側撃の共存する症例（31例）
Central core病（3）■特発性側攣症el〉＞

Multicore病（1）
非特異的先天性ミオバナー（16）
組織学的正常（1）＊■●Ehlers−Danlos症候群

1●

vou Recklinghausen病

1

●

脊髄空洞症
AMC顆似

1

●

Rigid spine症候群
CMT2

非特異的先天性ミオバナーを伴う

1

3■症候性側撃症（川）Marfan症候群

1＊整形外科入院例またはその紹介例
・・Central core病例の妹行の要因とはならないことを意味し，Central

神経筋病態とSCとの関連に関する作業仮以上の検討から，作業仮設とcore病の遺伝要因とSCの遺伝要因が互いして表の如き模式図を想定した．即ち，（∋神に独立していること（多系統性の共存病態）

経筋病態が一次的で，SCが二次的と考えらを示唆する症例である．

設（表2）れる例，（さ多系統性障害による共存病態と考症例2（図2）：34歳女2）．骨関節異常（SCえられる両者および③SCとこれに続発するを含む），筋萎縮のほか，先天性白内障，Adie

神経筋病態の3群である．以下，②の共有関症候群，筋強直症状など種々の異常を伴って係にあると推定される実例の一部を例示する．

いたため，ミオパテーの位置づけに苦慮したが，多彩な合併症状の成因として，先天性要代表的症例の小括症例1（図1）：14歳女（central core病

因が推定されることから，これらに共存した

例）1）．本例の妹（13歳）は姉よりも強度のSC

特異な先天性ミオバナーと考えられた症例でを有していたが，明らかな筋病変は認められある．
症例3（図3）：16歳男．Rigidspine症候

なかった．即ち，ミオパテーは必ずしもSC進

表2 側攣症（SC）と神経筋病態 （NM）との関係（模式図）（Ⅹ：原因・中間病態）
Ⅹ1N

Ⅹ
1
S

共存
（多系統性）■発症時期に先天性・後天性の別■遺伝性・孤発性の別
一137−

症候性S C

それぞれ考慮M

C

siNM SaM S。㌔M
特発性SC

群と考えられる症例で，特有な脊柱の前屈制

オバナー性変化が示された．本例も骨関節異隈に加え，SCも認められた．さらに，軽度の常と筋病変は互いに共存関係にあると考えら

近位筋優位の筋萎縮・筋力低下も認められ，れる．

筋生検にて，一部に小角化線経の混在するミ図l 症例l a：姉妹の全身像（姉：左，妹：右）b：Centralcoreを示す（姉）．上腕三頭臥 DPNH−TR XlO0−138−

図2 症例2 a：全身像，b：月井骨筋生検像．Ringedfiberを示す．
DPNH−TR X400

考Sis）3）と進行したDuchenne型DMPなどで察

NMDと骨関節異常の合併・共存はここにしばしば認められるように躯幹筋の左右対称示したように決して少なくはない．本シリー性の弱化が原因と考えられる場合（Collapse

ズで，骨関節異常の頻度が集団・居宅検診例

Spine）4）とが知られている．そのほか，本研より入院精査例に高いのは後者に重症の症例究で強調した共存病態としてのSC（作業仮が多かったためと推測される．

設の②）の存在も注目される．このタイプはこれまで簡発性SCとして位置づけられるこ

SCについては，NMDを伴う場合neu−
romuscularscoliosisと一般に呼ばれ3），なかとが多く，筋病変の存在に着目されることはでもNMDが原因でSCを呈する場合は症候少なかったといえる．また，SCが筋病変を伴性SC（作業仮設の（∋）と表現される3）．このうか否か（逆もしかり）は，その予後判定・症候性SCの成因については，麻痺の為身体治療の上で極めて重要なことであり，この点の左右の筋トーヌスにアンバランスを生じ，からも共存病態とその結果SCを呈する場合（paralyticscolio−

NMD）の十分な認識が要求される．

一139−

してのSC（あるいは

図3

症例3

a

側攣と近位型筋萎縮を示す．
特有な前屈制限を示す．

b

なお，SCに続発する神経筋病態（作業仮設の（卦）群については，典型的なケースは少なる作業仮設を提示した．
4）

神経筋疾患の病態解明・治療（リハビ

いが，前述の2群の場合でも，その要素（例

リを含む）には骨関節異常の面からのアプロ

えば廃田性萎縮）の関与が推定される．

ーチも重要である．

ま

と

文

め

1） 骨関節異常は神経筋疾患と合併・共有

献1）田辺等，伊藤喜一，山根清美，田淵保則，することが少なくない．

野沢胤美，熊野潔：Centralcoredisease：2） 脊柱側攣特に特発性側攣症はしばしば
ミオバナー性病変（central core病など）を脊柱側．攣を伴った2例における臨床的・組織化学的・電顕的検討−本邦第1・2例

伴い，また症候性側攣症の一部にも共存とみ−．神経進歩，20：458，1976．

なされる神経筋病態が存在する．

2）竹内和男，川田博，大石英俊，内潟雅信，

3）神経筋病態と脊柱側攣との関連に関す

田辺等：多彩な骨関節異音・先天性自内一140−

障・Adie症候群・筋強直症状等を伴った先天性ミオバナーの1例（全）．臨床神経，18：

78．

4）山本博司：学童期，思春期側攣症の病態と443，1978．

3）服部孝道：神経内科からみた井上駿一編），医学書院，東京，1977，p．

成因．脊柱変形（山田憲吾，井上駿一編），

neuro・

医学書院，東京，1977，p．43．

muscularscoliosis．脊柱変形（山田憲吾，

ー141−28）慢性脊髄性筋萎縮症の臨床病理学的研究
一筋生検所見の半定量化の試み−

田

研究協力者

松

等■

辺

原

四

郎＊＊

内

渇

雅

信‥

は じ め にることを指摘してきたが，今回この点につき

慢性脊髄性筋萎縮症（CSMA）は緩徐進行性の神経原性筋萎縮を呈し，錐体路症状や知覚障害を伴わず，しばしば遺伝性を示す種々の病態を含む．CSMAの中核をなすのはCh−

半定量的方法を加えて再検討し，この結果を

ronic proximal（pseudomyopathic）spinal

検索の対象となったCSMA32例は，近位型

基礎に若干の考察を加えた．
症例と方法

muscular atrophyl），すなわちKugelberg

筋萎縮を示した20例（P），顔面肩甲上腕型筋⊥Welander syndrome（KW）であるが，そ萎縮を示した3例（FSH），近位部筋萎縮に加の他に主として遺伝形式や筋萎縮の分布の差

えて球症状を示したいわゆる球脊髄型10）の2例

異に基づき多くの病型が報告されている．

（BS），遠位型筋萎縮を示した5例11）（Dユおよび

CSMAの定義および分類に関してRearce

神経原性要素を有する肩甲下腿症候群2例

andHarriman2），Emery3），Furukawaand（SP）を含んだ．Pは男12例，女8例，年齢は10

Toyokura4），古川5）など多くの研究がある〜47歳，FSHは男1例，女2例で年齢は26〜29

が，未だ意見の不一致がある現状である．ま

歳，BSは男2例で41歳と42歳，Dは男2例と女た近年Marsden6）はCSMAを含む更に広い

3例で22〜43歳，SPは男2例で40歳と48歳で概念であるhereditarymotorneuropathyを提唱し，新たな分類を示した．このように未あった．比較例として，筋萎縮性側索硬化症（ALS）5例，筋萎縮を呈した頸椎症（CS）

だ充分に解明されていない病態解明の一助と

4例，およびCharcot−Marie−Tooth病

して，病理学的アプローチは不可欠で，中でもCSMAのように長い経過を辿る疾患では，（CMT）4例の筋生検像をCSMAと同様の方法で解析した．なおALSは男5例，女1例

筋生検を主とする臨床病理学的解析にたよるで26〜54歳，CSは男4例で45−73歳，CMTは

ところが大きい．KWにおける筋病変につい

男4例で16−49歳であった．
種々の算定の対象となったのは凍結切片よてはすでに近藤2）とMastagliaandWalton8）の詳細な研究があり，いわゆる筋原性変化が，り作製した筋線維横断像のHE染色標本お神経原性変化に加わっていることが，一一部定よびpH9．4でpreincubateしたmyosin

量的分析の結果も加味して報告されている．

ATPase活性像で，標本上の距離の測定には

著者らは9）従来，KWを中心にCSMAの筋

OCularmicrometerを主に使用し，一部の例

生検所見を検討し，いわゆる筋展性変化の強で写真撮影を併用した．先ず各例でHE染色

さや群集萎縮の規模に症例間で大きな差のあ

標本上で500線維以上につき，そのうち短径（長軸と直角に交わる線上で最も大きな巾を＊虎の門病院神経内科．ニ中中記念成人病研究所＊＊虎の門病院神経内科

有する部位で測定）4伽m以下の線経を便宜
上萎縮線経と判定し，その数と全体に占める一142−

割合（萎縮率）を算出した．次に，種々のい平均をあらわす）はCSMAでは0・7から53・8

わゆる筋原性変化の頻度を推定する目的で，％，平均16．0％，ALSでは平均2・3％，CSで

中心核，nuClearclump，空胞の各々を有するは3．4％，CMTでは22．4％であった．CSMA

線維およびSplitfibreを数え，それらが全線とALSおよびCSMAとCSを比較すると維中に占める割合を算出した．中心核はそのいずれもCSMAが有意に高かった（F検定，多寡に拘らず，それを有する線経を1と数え危険率0．05以下）．またCSMAとALSの両

た．Nuclearclumpは同一線維内で3個以上群の分散を比較するとCSMAの分散はの核が隣接して存在したとき1と数えた．

ALSのそれに比して有意に大きかった（F検Splitfibreは分離途上の線維のみを1と数え，定，危険率0．05以下）．CSMAの各病型で比較

すでに分艶しているがSplit fibreと推定されるものは数えなかった．次に群集萎縮の規すると，各群の平均値は，SP，BS，D，P，FSHの順で高いが，Pを除き披検患者数が少模を推定するため，1群集を形成する萎縮線

なく，大体の傾向を知るにとどまった．Nu−

維数の平均を群集規模として算出した．即ちClear clumpの発生頻度はCSMAで2・9％，

前記の基準に従って萎縮線経を数えるのと並ALSでは0．1％，CSで1．3％，CMTでは2・5

行して，萎縮線維間の距離が40〟m以下の場
合に，それらの線経が同一の群集に属すると％とCSMAとCMTで高かった．CSMAは
ALSよりも有意に高かった．CSMAの5病判定する方法で，群集数を数えた．この際，

型問でめだった差はなかった．空胞は（図孤立した萎縮線経も1群とした．群集規模は萎縮線維数で計算した．更に，各筋の萎縮の2），CSMAでは平均2．8％の線経に存在した

群

集

数

程度の差が群集規模に与える影響を補正する
群集規模一1
試みとして大群集化指数すなわち 萎縮率（％）

を各例で算出した．Fibre typeについてはのに対し，ALSとCSでは各々0・3％，0・4％と低く，CMTでは2．4％で，CSMAとCMTで高い傾向を示した．CSMAの病型間ではバラつきが大きく，BSが0％であったのに比typeI，II線経のそれぞれの割合を全体で算し，Dは12．9％と高かった．Split fibreは定するとともに，前述の基準で選別された萎CSMAでは平均1．0％に存在した一方，ALS

縮線経についても，正常のtypeI fibreにとCSでは各々0．2％，0．1％と低頻度で，相当するATPase活性を示すものとtypeII

CMTでは2．2％と高い頻度を示した．CSMA

相当の活性のものが区別できる場合に各々のの各病型間ではFSHで0％であった以外，割合を算定した．

他の群ではめだった特徴はみられなかった．
以上のようにいわゆる筋原性変化はいずれも結果

萎縮率はCSMAで3．9〜89．5％で，単純平均では31％，Fisherの逆正弦変換を用いた百CSMAとALSで高く，ALSとCSで低かった．また一部の所見はCSMAで大きな分散分率の平均値では29％であった．ALSでは単純平均で28％，逆正弦変換を行うと32％，CS
では単純平均56％，変換を行うと57％，CMT
では単純平均で34％，変換を行うと33％であった．以下便宜上単純平均のみを記する．すなわち萎縮率はCSでやや高いが他は近似した倍を示し，各群のデータの比較に大きな支障はないものと考えられた．
中心核の出現頻度（図1白抜きの円は単純

区＝ 中心核の頻度（白抜き円は各群の平均）
−143−

≠2
220柑16付目1086420
PrOx

PrOx▲

FSH

buLb＿dist．scap

SPれ

ALS

Per・

⊂erV

FSH

buLb

djst．sCaP

ALS

CerV．CMT

CMT

SPOn・

SPh

Per・

SPOn▲

図3 群集規模

図2 空胞変性の頻度を示す傾向を有した．

線経のfibretypeの比率ではほぼ均等なバラ

群集規模を疾患毎に比較すると（図3），

つきがみられ，一部にtypeIまたはIIのpre−CSMAでは平均4．7，ALSでは2．8，CSでdominance

25．3，CMTで7．1であった．大群集化指数に

線経のうち区別可能なmyosinATPase活性変換して，各例の萎縮率の差異の補正を試みを示すものは限られており，全線経のデータが存在することを示した．萎縮

ると（図4），群集規模であらわれた傾向は一層著しくなった．即ち，CSMAでは0．099，
ALSで0．055，CSで0．408，CMTで0．153
で，ALSではCSに比して有意に低く，またCSMAに比しても有意に低かった．CSMA
はALSに比して有意に大きな分散を有した．
Fibretypeの比率に関しては疾患別，病型
別に明らかな特徴は見出せなかった．最も症例数の多いCSMAのPについて，全線経と萎縮線経について図示してみると（図5），全

全線維

萎縮線推

prOX．
PrOx FSH buIb．distL S⊂aP ALS CerV．CMT
SPin．
per・
SPOn．

図5

図4 大群集化指数−144−

TypeI fibreの比較（CSMAのP群の各例）

と比較することにはやや無理があるが，やは較を試みた．その結果，同症では神経原性変り全線経と同様の大きなバラつきを示し，ty−

化に加えていわゆる筋原性変化が加味されてpeIないしtypeII atrophyを示す症例も一いること，厳原性変化の程度や群集萎縮の規部にあることをあらわした．個々の症例につ模に症例間の差がめだつことが指摘された．

き全線経と萎縮線経のfibretypeの割合を直これらをもとに同症の病態につき若干の考察

線で結ぶと，その線の方向は無秩序で一定の傾向を示さなかった．

を加えた．
文

考

察

献

1）Kugelberg，E．：Chronicproximal（pseudo一

CSMAではALSやCSに比して中心核等

myopathic）spinal muscular atrophy．

のいわゆる筋原性変化が高頻度であった．こKugelberg−Welander syndrome．In

れは近藤7）やMastaglia and Walton8）の報

Handbookofclinicalneurology，（edi−

告と基本的に一致する．例えば中心核の雲頃度

ted by Vinken，P．J．＆ Bruyn，G．W．），

は近藤7）によればKWで12．49％であり，本North・Holland，Amsterdam，1975，・Vol．

シリーズのCSMAのPでは12．8％とよく一

22，p．67．

致する．この筋原性変化の機序は不明である

2）PearCe，J．＆Harriman，D．G．F．：Chronic

が，可能性の1つには長期の経過による二次

Spinalmuscularatrophy，J．Neurol．Neu・的変化が考えられる．著者ら9）はKWの25例

rosurg．Psychiatry，29：509，1966．

を筋生検上の筋原性変化の多寡により，少な3）Emery，A．E．H．：The nosology of the

いものから多いものの順にⅠ，ⅠⅠ，ⅠⅠⅠ群にわ

Spinal muscular atrophies．J．Med．

けた．これらにつき平均羅病期間を算出する

Genetics，8：481，1971．

とⅠ，ⅠⅠ，Ⅰll群それぞれ8．6，15．5，13．3年で4）Furukawa，T．＆

Toyokura，Y．：Chronic

必ずしも明瞭な関係はみられなかった．著者

spinalmuscularatrophyoffacioscapulo−ら10）はMotor unit内の病変の局在の違いに

humeraltype．J．Med．Genetics，13：285，より，末梢神経障害で筋原性変化がみられる

1976．

など，筋生検像に差があることを観察してい5）古川哲雄：脊髄性進行性筋萎縮症の分類とる．CSMAで筋原性変化の出現頻度や大群集

Kugelberg・Welander病．神経内科，12：

化指数に大きなバラつきが存在することは，

319，1980．

症例あるいは病型により病態が異なる可能性

6）Marsden，C．D．：Inherited neuronalatro−を示唆している．病型を比較するとDとSP

phy and degeneration predominantly of

では筋原性変化が強い傾向があり，臨床像をlower

勘案するとDとSPは比較的CMTに近い

neuropathy，

病態であることが考えられる．このような所

mas，P．K．＆ Lambert，E．H．），Saunders，

見より，CSMAが脊髄前角細胞，前根およびPhiladelphia，1975，Vol．2，p．771．

末梢神経障害を種々の程度に持つ，全体とし7）近藤喜代太郎：神経筋疾患における筋病変て1つのSpeCtrumをなす疾患群からなる可の臨床病理学的研究．第2報 Kugelberg−

酸性が考えられよう．

Welander病とその近縁疾患の筋組織像．

motor

neurons．In（editedby

Peripheral

Dyck，P．JりTh0−

臨床神経，5：695，1965．
要旨8）Mastaglia，F．L．＆Walton，J．N．：Histologi−

慢性脊髄性筋萎縮症の32例を5群に分け，筋生検像を半定量的に解析し，他疾患との比

calandhistochemicalchangesinskeletal
muscle from cases of chronic juvenile−145−

and early adultsplnalmuscularatrophy（the Kugelberg−Welander syndrome）．J．
Neurol．Sci．，12：15，1971．

ついて）．（全）．第21回H本神経学会総会，
京都，1980．
10）田辺等：筋生検による神経筋疾患の診断．
神経学的診断法，永井書店，大阪・東京，

9）松原四郎，内潟雅信，野沢胤美，ほか：
Kugelberg−Welander病の臨床病理学的検討．（非定型例を含む主として成人の30例に−146−

1979，p．260．

29）Motorneuron diseaseの筋生検組織化学的検討−Oil red O染色所見について−

茂
研究協力者

在

敏

司書

竹

中

正

純＊

小

西

慎

吾■

増

井

義

一＊

篠

田

恵

一■

今回はこの点について更に検討するため，特は じ め に萎縮症と考えられた，特異な下位運動ニューに骨格筋のOil red O染色像に注目し，Lu−casl）により報告されたline intercept me−

ロン疾患の2家系2症例について報告した．

thodを用い，筋線維内脂肪頗粒を数量的に評この2例において，心筋，骨格筋，肝の生検価検討した．

前回我々は，Kennedy病の脊髄および球性筋を行い，骨格筋，心筋においては筋線維内の対脂肪顆粒の沈着の過剰がOilred O染色ある象

症例の経過ならびに臨床症状は表1に示し

いは電顕像により認められ，肝においては脂肪変性がみられ，また血清脂質分析では第ⅠⅤ

た．Case1，2はKennedy病の筋萎縮症で，型高脂血症の型がみられたことを報告し，遺伝歴を有し，比較的若年に発症し，20年以Kennedy病においては，月旨質代謝に関連した

上の緩徐進行性の経過をしめし，球性および何らかの代謝異常の存在の可能性を推測した．

近位性の脊髄性筋萎縮，女性化乳房，脂肪肝表l 臨床所見のまとめ
C as e N o
A ge

S ex

1
39 yr

2
M

5 1y r M

F a m ilia l h is t o r y

＋

＋

A ge

19

17

fin g e r t r e m o r

fin g e r t r e m o r

20（y e a r s ）P r o g r e s s io n
S e v e r it yat ons et（v e a r s ）ln it la l S y m p t O m
K n o w n d u r a t io n

7 0yr

−

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S eVere±p r o x im a l

22

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74 1

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113

K （＜ 8 0 IU ）57

s lo w

F a tt yP−

d y s ar tllr ia

d a l s ig n s

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34

G y n e co m a s tia

C

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M u s c u la r a tr o p h y
P y r a mi

4
59yr

69
w e skne ss of
hand
1 ．5

D e a th s
B u lb a r

3＊大阪医科大学第一内科

ー147−

48

＿

などの特徴がみられている．CPKは両例とも軽度より中等度の上昇がみられた．Case3，

C＝÷摘芸芸4は，ALSで，Case3は手の脱力で発症，以ここでLlは，一本の筋線経の長径，Lsは筋線

来1年6ヶ月が経過している．理学的には球経の短径，ml，mSはそれぞれ，長径短径の症状，遠位部筋萎縮，錐体路症状がみられた．

lineによって切られた脂肪顆粒の数，Wは，Case4は死亡例で構音障害にて発症し，約2長径および短径によって切られる月旨肪頼粒の年で死亡し，剖検によりALSと診断された症例である．

平均直径を示している．以上の式を用い，個々の筋線経における，単位面積当たりの脂肪顆
粒の占める割合を求めた．

方法
Kennedy病2例，ALS2例に，いずれも大結果

腿四頭筋生検を行い，連続凍結切片を作製し，ATPaseおよびOilredO染色を施行，対比観察した．Oil red O染色標本について，
ATPase染色標本所見を参考に相当した

Type2fiberとに短径100JL以上の，著明なTypeI fiber，TypeIIfiberごとにat ran−

肥大筋線経の増加がみられた．

domに各40本，計80本の筋線経を撮影し，2）図2は症例1で，縦軸は一筋線維内の脂肪1120倍のphotographicprintを作製した．これをLucasらにより報告された1ineinter−

横軸は筋線経の短径をとったものである．

Cept methodを利用したMcKeranの式2）をTypel fiberでは，多くの線経は5から15％用いて計測した．すなわち筋線推photogra−

前後の値を示した．Type2では5％前後がphic printに細線をひき，その線により切ら多く，Typelに比較してより低値を示した．

れる月旨肪顆粒の数と直径およびその長さにより，筋線維内単位面積当たりの脂肪顆粒の面

また，perCentlipid coverageは，肥大線経と非肥大線経の間で差はなかった．図3は症積C（1ipid coverage per unit）は，以下の例2で，Typel fiberでは，一部10％の高値

式により求められる．

を示すものもみられるが，多くは3−5％に1）ATPase染色により作製した，Fibertype
ヒストグラム（図1）では，症例1および2のKennedy病においては，Typel fiber，

頼粒の占める割合percentlipidcoverageを，｛●●● ユ〃′t

01▲ulTtll tlI

●●

●●

●●

●●

01▲utTl轟tlI

図．Histogramoffibersizesin amusclebiopsy（Quadricepsfemorismuscle）．

症例1，2において短径100／ 以上の肥大筋線経の増加が注目される．
−148−

CH0

CH●1・TYP●1tib●lL Typ0

2

tib●l

●

︼〇一鑑︼＞00 0−1

●

● ●
● − ●

ト王︼U■︼lI、・・■．∫・・ヽ：・
●●
ヽ

●

●●

Dl▲〟ET亡R Or HUOCLE f‖○【‖川I Ol▲METER OF uUtCL■

日■印日日

図2 症例1個々の筋線経のpercentlipid coverageを示す．
C●●●

CH●

2．T叩●1Iib●l

2．TYp●2lib●l−〇一tl OU O■■＝ ↑王−リ■︼l

1；●

●●
●●
●

●

●

●●

●

●

図3 症例2 個々の筋線経のpercentlipidcoverageを示す．
分布している．Type2もほぼ同様の所見でのperCentlipid coverageは1Kennedy病のあった．症例2においても，症例1と同様に，例に比し，明らかに低値を示した．以上の所肥大線経と非肥大線経のあいだにはpercent

見を平均値で示すと表2となる．

lipid coverageに差はみられなかった．症例
考3および4のALS例でも，同様の方法によ

従来より筋線推内の脂肪は，筋活動のエネり検討したが，両例共に，Typel，Type2
表24症例のMeanPercentLipid Coverage
症例1，2のKennedy病では，症例3・4のALS例に比しあきらかに高値を示して
いる．
l

T ype

C a seT yp e1

1 0 ．7 6

5 ．1 2

2

3 ．9 94 ．6 43

1 ．3 5

0 ．6 74

2 ．0 4

1 ．6 92

案

ルギー源となる性格上，ミトコンドリアの近傍に局在することが知られ，また筋線維内では，ミトコンドリアの豊富な線維すなわちTypel fiberにより多く含有されているとされている3）．しかし病的状態における，筋線
維内の月旨肪についての状況についての報告はあまりないようである．Harriman4）は，種々の病的状態における筋線維内の脂肪顆粒の沈着について検討しているが，そのうちMotorneurondiseaseについては13例について検討ー149−している．その成績によれば，13例のうち10

文

献例においてTypelおよびType2線経のど

1）Lucas，H．A．＆ Seber，G．A．F．：Estimating

ちらかに，ある程度の月旨肪顆粒の沈着を認め

COVerage and particle density using theたという．これに対し，我々の報告したKe−

lineinterceptmethod．Biometrika，64：

nnedy病では，Typel，2両線経に著明な脂618，1977．

肪顆粒の沈着を認めた．またHarrimanは量2）McKeran，R．0．，Royston，J．P．，Ward，P．，et

的計測を行っていない．我々は，ALSにおい

al．：Two populations oftypel fibersinても，Type1，2のほぼ両線経に軽度の沈着

striated muscle from a case of neutralを認めたが，Kennedy例に比すれば，その量lipid storage disease．J．Neurol．Sci．，

は明らかに少なかった．

43：1，1979．

Kennedy病ではMcKeranが示した中性

3）Price，H．M．：t．Disorders of voluntary

月旨肪蓄積症に比すれば軽度ではあるが，対照muscle．

としたMotor neuron diseaseに比しはるか

London，1974，p．52．

に多量の沈着のあることは，この疾患の根底

4）Harriman，D．G．F．＆

3rded．，edited

byJ．N．Walton，

Reed，R．：Theに中性月旨肪沈着によって表現される代謝障害

incidence oflipid dropletsの存在するとする我々の推測を支持する所見

skeletal muscle

である．

order：A histochemical，electron−micro・

なお筋線社内の月旨肪沈着については，年齢，
性，食事の状態などより，Variationに富むこ

scopicandfreeze・etChstudy．J．Patho1．，とが知られており，今後筋線維内の脂肪沈着の生理学的な境界をも含めて，より多くの症例について検討する必要があろう．

−150−

106：1，1972．

in

in

Human

neuromuscular dis−

30）筋ジストロフィー症の単一筋線維筋電図

（第3報）
西

研究協力者
目

裕＊

谷

小

西

哲

郎＊

Method的

随意的に筋収縮の強弱を変化させた時に観察されるジッターは，筋線維伝導速度回復機
能（velocity recovery function：VRF）と密接に開通していることが知られている．今
年度はミニコンピューターによる解析方法を確立し，昨年度まで用手的に検索した各種筋Ⅰ。Ⅰ＿4⊥・原性疾患の他に各種神経原性疾患においてもIDI一一」←一一b一一二二ゴ

担・検討を加えた．
lDI（mseC）

方法と対象
単極型単一筋線維筋電図針（Medelec SF−25）を各種神経筋疾患患者の随意的弱収縮下の一側総指伸筋に穿入し，同一神経支配下のpotentialpairをtrigger回路及びdelayunit＼一一一、′一・一一ノを用いて観察する．被験者に随意的にゆっく

a

りと第3指を中心に指の伸展の強さを変えて

図l

不均一な筋収縮を行なわせ，同一pairの波形しながらdatarecorder（TEACR410）に同る．作図は下段のように横軸にIPIをとり，そのIPIの直前の同一pOtential pairからの一pairの活動電位を記録した．解析には他のIDIを縦軸にとって連続して出現する

神経支配下の筋線経の活動電位がtrigger

100〜300個をプロットした．同時にシグナルlevelを越えて混入しない良好な記録部位をプロセッサーでmean COnSeCutive diffe−

再生して解析した．解析方法は，シグナルプ

rence値としてジッタ一倍の算出を行った．

が変化しないように電極の位置を保って捕捉

ロセッサー（三栄7TO8）を用いて図1の如結

く同一pOtentialpairの互いの活動電位の立果

ち上りの一定レベル（可変）を横切るポイン

正常者より得られた正常ジッタ一倍を示す

トをトリッガーポイントにして，活動電位間隔（interpotentialinterval：IPI）と筋発射

potential pairではIDIが短くなってもIPIがわずかに短縮又は延長の傾向を示すが明ら間隔（interdischargeinterval：IDI）を求め

かではなかった（図2）．筋発射間隔が40msec
以下（同一pOtential pairの筋収縮が一秒間25回以上）では他の神経支配下の筋活動電位＊国立療養所宇多野病院神経内科−151−

が混入し，同一pairが同定不可能となるためと頻回に認められた（図3）．同一pOtential

解析不能であった．

pairの活動電位の捕捉が充分強い筋収縮ま筋原性疾患（Duchenne型ジストロフィー

で可能であったpotentialpairではIDIが非症，多発性筋炎）では指の伸展を強くし（筋常に短くなる（10−20msec以内）とIPIはそ

収縮を強める）IDIが短くなるとIPIが短縮

れまでとは逆に延長傾向を示した．筋収縮を傾向を示すpotential pairが正常者に比べる強めるとIPIが延長傾向を示すpotential

M

9
3

C

U

〃

〃 −
0
1 0
0

0
1
0

L NO K N

1

L mい∴2

F

0
2

軋 仙二代 NL mいりr∴ト一八旺サ凍盤ポ誉㌦・・丁．㌧ヰ㌣√日展喜茄責・
1msec IPl

図2
IDI
（meC）
246

H．丁．14H．
Duth即ne D．
忙D t60JJ〜亡〔＝＝ 300

．鳥吉．
V嘉＼軋
■1

1ト∴、

川m Z

．い
︻い叩凹
も
5
．〇−
山P
王H一
−

≠

＿一一7軌・

1州」

A

B∴

∴

図4
（MSeり

T．S．32M．

8

11巾SeC

153

川Ⅰ

pairが時に観察されるが，短縮傾向を示す

ったりすることが知られている1）．この筋線

pairに比べると明らかに頻度は少なかった．

維伝導速度の変動は直前の興奮からの間隔が3つの互いに活動電位間隔の異なるpoten−

短いと伝導速度が早くなる現象でStalberg

tial pairの間では活動電位間隔の長いpairによで筋収縮が強くなるとIPIの短縮傾向がより（筋線維伝導速度回復機能）と名付けられて顕著であった（図4）．

りVelocity recovery

function：VRF

いる．筋線経の膜の特性を表わすパラメータ

ジッターの異常の強い重症筋無力症では，ーと考えられており，興奮直後では筋線経の神経筋接合部由来のジッターが大きいため筋

refractoryphaseにはいるため刺激がきても収縮の強さを変えても作図上明らかな関係が活動電位は発生せず，直後は逆に伝導速度がみられないことが多かった．同時に神経原性遅い時期がありその後速くなる現象である．

疾患でジッターの異常が強いpotential pair

このVRFの程度は個々の筋線経で異なり，

ではIDIとIPIの明らかな関係は見出し難か

正常筋線経の約16％に顕著なVRFを示すもった．慢性に経過する神経原性疾患で，ジッのがあり，筋ジストロフィー症の筋線経ではターの異常がそれ程強くないpotential pair

約50％に増加する2）．随意的に筋収縮の強弱

では筋展性疾患でみられると同様に筋収縮がを変化させ筋発射間隔が不均一な条件下での強くなるとIPIが短縮傾向を示すpairが観

IPIの変動には互いの筋線経のVRFが反映察された．特に初期の棟抜群から約5msec

されることになる．筋収縮を強くしてIDIが以上の遅れを持って孤立的に出現するlate

短くなった時にIPIが短縮することは，遅れCOmpOnentにおいて著明であった（図5）．又て活動電位が出現する筋線経のVRFが活動筋疾患と同様に長い活動電位間隔のpairで電位が先行する筋線経より顕著であるためとIPIの短縮傾向が強かった．

理解される．逆に活動電位が先行する筋線経のVRFが遅れて活動電位が出現する筋線経

考察より大きければ筋収縮が強くなるとIPIは延同一神経支配下の異なる2つの筋線維由来

長する．

の活動電位間隔（IPI）の変動（ジッター）に長いIPIを持つpOtential pairでは筋収縮は同一神経より分枝した後の互いの神経細枝が強くなるとIPIはすべて短縮傾向を示し，の伝導時間，神経筋接合部でのインパルスの

IPIが延長傾向を示すpotential pairはIPI

伝達時間，筋線経の伝導時間の3つのfactorが短いものでしかみられなかった．一方，昨のVariabilityが関与している．正常者や重症年度我々が報告したように3），遅れて活動電筋無力症患者では主に互いの神経筋接合部で位が出現する筋線経の伝導速度は先行する筋のインパルスの伝達時間のVariabilityがジ線経と比べて遅い傾向にあることより2），伝ッタ一に反映される．末梢神経疾患や筋疾患

導速度の遅い筋線経のVRFが伝導速度の速においては神経筋接合部由来のジッター以外

い筋線経より著明であることを示唆する．

に神経細枝や筋線経の伝導時間のVaria−

神経原性疾患においても筋原性疾患と同様

bilityに由来するジッターの関与が想定されに長いIPIを持つpOtential pairでは，筋収るが，単一筋線維筋電図ではそれらを厳密に縮が強くなるとIPIが短縮傾向を示し，また，区別することは不可能である．

同一神経支配下の複数の活動電位のおのおの

一方，筋線維伝導速度が筋線経の電気刺激
間隔を不均一にしたり，随意的に筋収縮の強の筋線経で遅い傾向を示すこと3）≠り，筋疾
患と同様に，伝導速度の遅い筋線経のVRF

弱を変化させると伝導速度が直前の興奮からが伝導速度の速い筋線経より著明であると推の時間に密接に関連して速くなったり遅くな論される．即ち，primaryな筋病変がなく，−154−

2次的に筋線維伝導速度が遅くなる（2次的な筋萎縮？）とVRFが著しくなると考えら
れる．

文

献

1）Stalberg，E．：Propagation velocityin
human muscle fibres in situ．Acta

以上より筋収縮と関連したIPIの変動は，

Physiol．Scand．，70〔Supp1．，287〕：1，1966．

筋原性疾患でよく観察されるが，筋原性に特2）StaIberg，E．：Electrogenesis

異的な現象ではなく，2次的な筋病変（筋萎dystrophic

縮？）を示す神経原性疾患においても認めら

Humanmuscle．In

Muscular

in

human

Pathogenesis

Dystrophiesof，（editedれる現象である．その両者に共通する点は，筋線維伝導速度の遅い筋線経のVRFが速い

by Rowland，L P．），Excepta Medica，

筋線経のVRFより著しいと考えられること

3）西谷裕，小西哲郎，野口貞子：筋ジストロである．

Amsterdam−0Xford，1977，p．570．
フィー症の単一筋線維筋電図（第2報）．筋問題点としては，筋収縮の変動でみられる

ジストロフィー症の病因に関する臨床的研

IPIの変化はVRFの特徴と似てはいるが，同究，第二班（三好班），昭和54年度研究報告

一神経から分岐した後の互いの神経紐枝の病書，1980，p．157．

態生理が解明されていない点である．特に神4）Sta1berg，EリSchwartz，M．S．，＆Troutelj，

経原性疾患において障害されたり再生した未J．Ⅴ．：Single fibre electromyographyin

熟な神経組枝の伝導時問にインパルスの間隔

Various processes affecting the anteriorの不均一さがどの程度影響するかが全く不明

hornCell．J．Neurol．Sci．，24：403，1975．

であり，今後の解明されるべき問題と考えら
れる．

−155−

31）ヒトの外肋間筋を用いた実験的ミオトニーの研究

栗 原 照 幸＊

研究協力者

は

じ

め

田

中

政

富

田

正 雄＝＊ 柴 田 紘一郎＊＊＊

幸＊

年

森

清

隆＊＊

なく採取した外肋間筋標本を用いた．ヒトのに骨格筋の活動時において微小電極法により

外肋間筋が採取されるとすぐ95％02，5％筋細胞内記録をする際には筋活動電位に伴っC02の混合ガスをTyrode液中に通じて酸素て起る筋肉の収縮を阻止することが必要とな化を続けた．筋細胞内記録はガラス管微小電る．生理学の領域ではEisenbergら1）2）がカ極を自作し，3MKCli容液を管内に充たしエルの骨格筋についてExcitation−Contrac−て，抵抗5−15megohmのものを選んで用い

tion（E−C）Uncouplingを開発し，更に著者た．E−CUncouplingには400mMグl）セロー

ら3）4）が，高張グリセロール液，dantrolene溶

ル溶液，WashingSolution，5mg／Lのdant−

液を用いて哺乳動物へのE」：Uncouplingを

rolene溶液を用いた3）．ミオトニーは10−4M／適応できる方法に工夫を加えて釆たが，今回Lの濃度で，アントラセンー9−カルボン酸は更にヒトの骨格筋標本へ本法を応用して，をTyrode液に加えて作成した．

種々の筋病変を微小電極を用いて電気生理学的に研究する基盤をつくるため，開胸術時に結果得られたヒトの外肋間筋標本を用いて検討をヒトの外肋間筋標本の膜電位は，各標本よ加えた．今回の実験の主な目的は，（1）ヒトのり夫々30個の筋細胞内へ微小電極を挿入して正常な外肋間筋標本の膜電位を計測すること，記録したところ表1のように，平均値とし（2）ヒトの筋肉標本でE」：Uncouplingを実現させ，微小電極法で記録すると共に，E−C
Uncouplingに伴う形態学的変化を電寂的に観察すること，（3）ヒトの外肋間筋標本にアントラセンー9−カルボン酸5）6）を用いてミオ
トニーを作成することである．
対象と方法
対象は全麻下で開胸術を行った筋病変のな

表l ヒト外肋間筋標本の膜電位
対照筋標本及びアントラセンー9−カル
ポン酸によって作成したミオトニー標
本から記録した膜電位の平均値と標準偏差を示す．夫々の外肋間筋標本より30個ずつの筋細胞から膜電位を計測した．
Co nt r0 1

S p e c l n℃ n S

い2人の患者より，腱から腱まで筋腹に障害

ー156−

H o ．o f c e l l
e x o m ln e d

RM P

警 部

。吉昌 l l s

1 ． 62 yMmV−8 句 ．q
土2 ．9

50

mV
−8 5 ．1
土L 6

さ0

2 ． 56 yFmV−8 1 ．2
土 2 ．950mV−8 1 ．5
土 2 ．2

さ0＊宮崎医科大学第三内村＊＊宮崎医科大学第一解剖＊＊＊宮崎医科大学第二夕日科

In du ced My o ton lo

R MP

て−84．4±2．9（S．n）mV，及び−81．2±2．9（S．

を来さずにミオトニーをヒトの外肋間筋標本

D・）mVという安定した値を得ることができに作成することができた．

た．次に，E−C Uncouplingをせずにミオト

図1AはE−C Uncouplingせずにmyoto−

ニーをアントラセンー9−カルボン酸を用い

nicburstを記録したものである．1，2，3て作成した時の膜電位を，夫々の外肋間筋標は夫々異なる筋細胞からの記録であるが，本より30個ずつの筋細胞より記録すると表1

各々の筋活動電位の発火が起る前に1の細胞のよ うに，−83．1±1．6（S．D．）mV，−81．5±

では平均9．OmVの脱分極が認められ，2の細2．2（S．D．）mVとCOntrOlに比し膜電位の低下

胞では平均11．1mV，3の細胞では9．OmVの図l

ヒト外肋間筋標本より記録したmyotonicburst
Aは，E−CUncouplingせずにアントラセンー9−カルボン酸でミオトニーを作成して記録したもので，1，2，3は夫々異なる筋細胞からの記録．
Bは，E−CUncouplingした後にアントラセン9一カルボン酸でミオト
ニーを作成して記録したものである．

一157一

脱分極が認められた．3では数個の筋活動電

次にヒトの外肋間筋標本において本f上 ∴L

位がburstとして認められた後に膜電位の低るE−CUncouplingがいかなる彬恕，17：的今日二下を来しながらabortive spikeが連続してを釆すか検討するため，まずE−ClH1ぐ川りト

出現した後にmyotonic burstが終了していlingをする以前のCOntrOlの電鏡像を′JtJ．

る．このような際には，myOtOnicburstに伴

図2は0．2JLのSemithinsectionの電顕作1∴

う筋収縮によってinjurycurrentが流れ膜電位の低下をみた可能性もあるので，次にE−C

myofibril，myOfilament，Z−band等がよくl認められる．Myofibrilとmyofibrilとの間蜘・土Uncouplingをした後にmyotonicburstを細他の骨格筋より広い傾向が認められた．次に胞内記録すると図1Bの様に1ではやはり平ヒトの外肋間筋に高張グリセロール溶液，

均10．OmVの脱分極の後に各々の筋活動電位

Washing Solution，5mg／Lのdantrolene

が出現していることが明らかになった．ここ溶液でE」：Uncouplingをした後の電顕像をでは筋収縮を阻止してあるので，ここに認め図3に示す．Myofibril，myOfilament，Zられる脱分極は微小電極が単一筋細胞内に入

rband等には変化を来さないで，triadの附近っている時にmyotonic burstが起ることににVeSicleを形成してT−SyStemに変化を来

よって生じたinjury currentによるものではして筋収縮を阻止するものと考えられる．図ないと考えられる．この状況を明らかにする

4はZ．band附近のVeSicleを強拡大で＼示しため2のa，bに夫々高増幅，低増幅記録を同たものであるが，VeSicleとT−tubulesへの連時に行って示すと，2のaで明らかなように，続性を示唆する．しかしこのVeSicleがtriad

myotonic burstが連続して起っている時に附近にできて，T−SyStemの内のterminal

は，一つの活動電位が生じた後の膜電位は安cistern又は，T−tubules等のどの部分を選択定して留らずに，次第に脱分極をしてある間的に破壊するかについては更にtracerを用

倍以上になると又次の活動電位を生じている

いて検討する余地が残っている．
以上のようにE−CUncouplingを行った後様子が高増幅記録で明らかになった．

図2

これはE−CUncouplingをする以前の

図3

E−CUncouplingをした後のヒト外肋間筋標本の電顕像

COntrOlで，0．2JLのsemithinsectionのMyofibril，myOfilament，Z−band等には電顕像．×12，000．

変化を来さないで，triadの附近にvesicle

ヒト外肋間筋標本の電顕像を形成して，T−SyStemに変化を来している．×12，000．

一158−

図4

図3の強拡大Triad附近のvesicleを強拡大で示した電顕像であるが，VeSicleとT−
tubulesへの連続性を示唆する．×72，000．

にヒトの外肋間筋にミオトニーを誘発させ，

アントラセンー9−カルボン酸を用いて誘発15個の筋細胞から膜電位を記∃録すると，平均させたものであるから，ヒトの疾患にみられ−78．5±6．9（S．D．）mVとなり，myOtOnicbu−

るミオトニーといかなる点において類似し，

rstが起る前の膜電位は比較的安定したもの

いかなる点で異なるかを更に今後明らかにすであることが明らかとなった．

る余地が残されている．本研究で明らかになったことは，ヒトの骨格筋に著者らの方法に

考

察よるE−CUncouplingが応用できることであ現在までにEisenbergl）2）及び著者ら3）にり，種々の筋病変を微小電極を用いて電気生

よって活動中の骨格筋より単一筋細胞内記録

理学的に研究する際に有用であると考える．

を実現するためにE−CUncouplingが開発されて釆たが，初めはカエルの骨格筋，更に哺結語

乳動物の骨格筋へと段階を追って実現させ，

1）正常なヒトの外肋間筋標本の膜電位は，

今回ヒトの骨格筋にE−CUncouplingを行っ

30個の筋細胞より測定すると，2人の異なるてミオトニーの細胞内記雲録を行うことに成功

標本で夫々平均−84．4±2．9（S．D．）mV，した．又ヒトの外肋間筋標本につき電践的に−81．2±2．9mVであった．

本法によるEl二Uncouplingがいかなる変化を釆すかについて検討し，これがmyofibril，

2）ヒトの外肋間筋標本にミオトニーをアン
トラセンー9−カルボン酸を用いてg符 がグわ竹myofilament，Z−band等には電顔的に変化をで㌧作成することに成功し，ミオトニーを生じ生じることなく，triadの附近でVeSicleを形ても膜電位は正常であるが，myOtOnicburst

成してT−SyStemに変化を来して筋収縮をが起ると各々の筋活動電位が生じる前に9阻止することを明らかにした．今回のミオト〜11mVの脱分極が認められた．

ニー作成はヒトの外肋間筋標本にねZ∽切りで

3）電顕的にE」＝Uncoupling前後で比較検−159−

討すると，本法ではtriad附近にVeSicleを形

Physio1．，215：95，1971．

成することによってT−SyStemに変化を来3）Kurihara，T．＆Brooks，J．E．：Excitation−

し筋収縮を阻止するが，myOfibril，myOfila−

contraction uncoupling：The effect ofment，Z−band等には影響を与えないことがhyperosmolar glyceroI solution and

明らかになった．

dantrolene sodium on mammalian

4）本法によるE．CUncouplingはヒトの骨

musclein vitro．Arch．Neuro1．，32：92，

格筋に応用でき，筋活動時に細胞内記∃録を連1975．

続して行う際に有用である．

4）Kurihara，T．，Araki，S．＆Shirabe，T．：Elect−ronmicroscopicstudiesofthet・SyStem：謝辞

Theeffectsofhyperosmolarglyceroland
dantrolene sodium on mammalian

御校閲をいただいた宮崎医科大学第三内科・荒木淑郎教授に感謝致します．

muscles．Folia Psychiatr．Neurol．Jpn．，
30：179，1976．

文献5）Bryant，S．H．＆Morales−Aguilera，A．：Chlo−

1）Eisenberg，B．＆Eisenberg，R．S．：Transverse

rideconductanceinnormalandmyotonic

tubularsysteminglycerol・treatedskele−

fibers and the action ofmonocarboxylic

tal muscle．Science，160：1243，1968．

aromatic acids．J．Physio1．，219：367．1971．

2）Eisenberg，R．S．，Howell，J．N．＆ Vaughan，

6）Kurihara，T．：Experimental myotonia．

P．C．：Themaintenanceofrestingpoten−

Folia Psychiatr．Neurol．Jpn．，31：653，

tialsinglycerol−treated muscle fibers．J．

1977．

ー160−

32）カルシウム・イオノフォア（A23187）
処理筋の収縮弛緩に関する研究−ヒトジストロフィー筋との比較検討−

高 守 正 治＊
研究協力者
目

井

手

芳

彦＊

的

辻

畑

光

宏＊

に，A23187処理筋の膜性質を調べ，静止膜電筋ジストロフィー症の病因として膜異常説

位脱分梅，ウアパイン反応性正常，Na＋能動輸が提唱され，Ca＋＋の病因的役割が問題とさ送系異常など，ジストロフィー筋膜類似の所れている．外液からの異常なCa＋＋influxに見を得た3）．本報は，この処理筋の収縮弛緩機よる細胞内Ca十十

構を，生理，薬理学的に調べ，ジストロフィ濃度の増加は，Ca＋＋−aCtivated neutral proteases活性上昇やー筋と対比検討することを目的とする．

ATP depletionから筋細胞壊死を起しうる1）．

方

これを人工的に招来しうる因子としてカルシ

法

ウム・イオノフォアA23187があり2）．これを用ウイスター系雄ラット（260−290g）から横いた薬理学的実験モデルの検討は，筋ジスト

隔膜筋をとり出し，その切除片（湿重量63．7−

ロフィー症の病態成立研究の上に有意な情報

70．8mg）を，対照群ではエタノール（10〟1／を提供するものと考えられる．われわれは先ml）を含むリンゲル液中に37℃，60分（02＋表I Active state properties
Abbreviations

Measurements

Functions

Haximum tvitch force

Force generated by contractile component
Plus series−elastic component

Time from onset to point

Duration of active state

Of maximlユm Velocity of
tvitch development

Tl／2R

Time from onset to the

Decay of active statehalf−relaxation level
Of twitch
d2pt／dt2

Maximum acceleration of

Active stateintensitY Of shortening

tvitch development
Po

Maximum tetanic force

Active stateintensity ofload−bearing

dpo／dtMaximum Velocity ofForce−Velocity relatlonF rate Of formation

tetanl｝S development

Of cross−brid9eS；Series−elastic cornponent

pt／PoTwitch／tetanus ratio＊長崎大学医学部第一内科−161−

CO2：95／5）処理した．被検群では，エタノー

A23187n痛感
Control

ルで溶解したA23187（1mg／ml）を含む））ン
ゲル液（A23187の最終濃度は1伽g／ml）で同様に処理した．次いで，それぞれの筋を，ガと9401ItieC

丁使R

ス負荷（02＋CO2：95／5）中のリンケリレ液内（30℃）で等尺性筋張力計にセット（最大単収縮張力が得られるように静止時張力をセッ

Ⅰα1恥部
こ

：

90mSeCト）し，白金板電極でmassivestimulationを行った．液中クラーレ添加（d−TC，6FLg／ml）
して筋直接刺激とした．筋張力曲線は陰極管

d2p附2ん−一一

オシロスコープ上に記録し，また同時に，一Ⅰ以畝坤ns∝2
一〜一・一・一・一・㌧一90汀憾eC

眉引璽 吾

次，二次微分回路を通して，それぞれの曲線をペン書きオシロスコープ上に記録した．最400mseC

大強縮張力は250Hz反復刺激で誘発した．
筋収縮性は，aCtivestateの概念4）5）6）にも職人一灯山V一一よ㌘とづき， 時間要素〟と つよさ要素〝に分けて解析，測定法と意義付けの詳細を表1に示

図1コントロールおよびA23187処理筋の等尺性単収縮．強縮張力とその微分分している．強縮負荷（50Hz，5秒間）30秒後誘発の単収縮張力および，isoproterenoIHCl析（2J g／ml）5分間浸潤後に誘発する単収縮
張力も，それぞれの負荷前誘発のものと対比に示した（実例を図1左に）．7筋で，強縮負して分析した．

propertiesは，単収縮力（Pt；Tl／2R），強縮力

荷後誘発の単収縮力変化（post−tetanicchange）をみると，負荷前に比べ，張力発生
最大加速度（d2Pt／dt2）の増大と，時間要素（TdPt／dt；Tl′2R）の延長を伴って増大がみられた（表3上）．また7筋について，5分
間isoproterenol浸潤後に誘発した単収縮力（Po）およびそれぞれの微分曲線（TdPt／dt；は，この薬理学的負荷前に比べ，時間要素

dZpt／dt2；dPo／dt）を測定分析して表2（TdPt／dt；Tl／2R）の延長を伴って増大し

結

果

対照群
14筋について検討し，そのactive state

表2 Activestatepropertiesofcontrol，andmuscletreatedwichA23187
pt

Tdpt／dt（g）contro1

5．7（n＝141土0．96

A23187−

5．1

trea亡ed土1．19（爪SeC）

16

Tl′2R

70

土1・3

19
士2．0

d2pt／dヒ2｛msec）

土3・8

76
土4．1

9／msec2）po
19）

dPo／dt0・015733・10・38

土0・00427

士4・44

士0・0350・0132±0・00305

9・0
±1・97

muscle（n…14）

Means土SD values areindicated；n denctes number of muSeles tested・

−162−

pt／Po

（9／msec）

0・21
士〇・0440・18
土0・0490・59▲0・198

表3 Post−tetanic change oftwitch（％）
pt

Control

Tdp亡／dt

l17
±

4．8

士

A23187−treated l17
±

＋

9．7

±

125

4．0

土

115

118

9．1

d2pt／dt2

109

117

（n＝7）

muscle

Tl／2R

士

8．0

5．8

123

5．9

土

4．5

（n＝7）

Effectsofisoproterenolontwitch（％）
Pt

Control

131

（n＝7）

士10．4

A23187−treatedmuscleTdPt／dt

Tl／2R

126
土

8．9

114
土

5．7

±

3．4

124

130

士

士13．1

0．9

111

（n＝7）

Means

土

SD values are indicated；n denotes number ofmuscles tested．

た（表3下）．
A23187処理筋群

飾されない真の収縮要素を表現するにあり，本報では，単収縮，強縮張力の微分々折を行

14筋について同様の解析を行った．対照群に比べ，aCtivestateの時間要素（TdPt／dt；
Tl／2R）の延長（p＜0．001）がみられたが，単収縮張力発生加速度（d2Pt／dt2），単収縮力（Pt）は正常であった（表2）．強縮力（Po）とその発生速度（dPo／dt）は著明に低下し

い，表1のごとくに解釈を加えた6）7）8）
A23187処理筋は，この時間要素（TdPt／dt；
Tl′2R）の延長を示した（表2）．TdPt／dt は筋小胞体からのCa＋＋遊離，および，このCa＋＋とtroponinのreaction rateを反映5）（方法上massive stimulationによって刺激の膜伝（p＜0．001），従ってPt／Poは増加値を示した（表2）．強縮負荷では，その後誘発の単収
縮力は，その発生加速度（d2Pt／dt2）の正常な上昇を伴って正常な増大を示したが，弛緩時

達時間の修飾を出来るだけ消去した），Tl／2R間（Tl／2R）は異常に延長した（0．025＜p＜0．05）（表3上）．Isoproterenolの影響は，対照群の場合と同様であった（表3下）．

−bindingの関係が関与しているactive state

はtroponinからのCa＋＋removalと筋小胞体によるCa＋＋uptake，および，trOpOninによるCa十十」）indingとmyosinによるATP
decayを表現するものとした4）5）9）．この細胞内機構を表現する指標の異常は，ヒト・ジス
トロフィー筋でも見出している（表4）7）．

考

単収縮張力発生の最大加速度（d2Pt／dt2）

按Activestateの概念は，直列弾性要素に修は，興奮収縮連関が始まるに当り，筋小胞体一163−

表4 Comparisonof contractile almormalities betweenA23187−treatedmuscle amd human dystrophic muscle

A23187−treated Human dYStrOPhic

Active state properties

musclemuscle★

＋pr010ngationofTdPt／dt

prolongationofで1／2R

＋

＋

＋

十

Decrease of d2pt／dt2

十Decrease of Po＋

十Decrease of dPo／dt＋

十Alte工■ationofincreased

pt／Po

decreased

Abnormal post−tetanic
prOlongatlonofTl／2R
Abnormal sensitivity to
CateCholamines

＊Data

were

obtained

from

the

adductor

pollicismuscleof29human

dystrophic patients vith no alteration of electrical activity andno overt weakness（Takamori1975）．

から遊匪されるCa＋＋量を反映する指標

低下していた．したがって，Pt／Poはactive（active stateの≠っよさ要素〝の一つ）とStateの

時間要素〟の延長とPoで表現されして測定したものである10）．この指標は，る

A23187処理筋では正常範囲内にあった（衰

値を示し（表2），ヒトジストロフィー筋が2）が，ヒト・ジストロフィー筋では比較的低下値を示す（表4）のと対照的である．

病初期からこの指標の異常が見出された（表4）7）．

察も，Ca＋＋が関与する細胞内収縮弛緩過程

ActinTmyOSin crossbridges形成の数と力を知る上に，色々の情報を提供するものであの表現指標（active stateのつよさ要素〝の著明な低下によって増加

強縮負荷後誘発の単収縮張力曲線変化の観

つよさ要素〟

る12日3）．本検査で，A23187処理筋（表3上）の一つ）として，最大強縮力（Po）を測定しは，ヒト・ジストロフィー筋（表4）同様，たが），これは，A23187処理筋（表2），ヒト

負荷後に，弛緩過程（Tl／2R）の異常延長をジストロフィー筋（表4）両者で低下がみら示した．

れた．また，その発生最大速度（dPo／dt）

骨格筋収縮性のカテコールアミンに対する反は，直列弾性要素による修飾がなければ，収応性測定も，Ca十十が関与する細胞膜／細胞膜

縮要素の カー速度関係〟 を表現するものと下要素の状態を知る上に有意であり，われわ

して測定したが11），これも両者（表2，4）でれは，ヒトジストロフィー筋7），実験的除神−164−経筋8）でこの異常を見出している．一般に，エの延長はみとめたものの，一般にジストロフ

ビネフリンはfast muscleではその時間要素

ィー筋の病初期からみられる張力発生加速度を延長して単収縮力を増大せしめ，Slowmuscleでは逆に短縮して低下せしめる14）．こ低下，対カテコールアミン反応異常は見出せの作用はβ受容体を介し7），一部はCAMP

るものであった．本処理筋は，筋ジストロフ

Jependent15），一部はCAMP−independent16）

ィーの完全な疾患モデルとはなり得ない結果の過程があると思われ，われわれは，neurO−を得た．

なかった．Pt／Po変化の態度は，両者相反す

trophicfactor（S）もこの面に−つの影響力をも文っていることを証明している8）．ジストロフ

献

ィー筋でみられたようなβ−Stimulantに対1）Duncan，C．J．：Roleofintracellularcalcium

する反応性異常（表4）7）は，A23187処理筋

inpromotingmusclechange−Astrategy
for controllingthedystrophiccondition．

では見出されなかった（表3下）．
A23187処理筋と，ジストロフィー筋の収縮

Experientia（Basel），34：1531，1978．

性を比較すると（表4），強縮張力の解析で見

2）Grinstein，S．＆Erlij，D．：ActionofiflSulin

出される収縮蛋白およびactivation過程のand cell calcium−Effect ofionophore

少なくとも一部の異常は，両者に共通してみA23187．J．Membr．Bio1．，29：313，1976．

られる所見であった．しかし，単収縮張力解

3）Takamori，M．．Ide，Y．＆ Tsujihata，M・：

析で得られる諸指標のうち，aCtive stateのPhamacophysiologicalstudy onmuscle≠時間要素〟 の異常は両者にみられたものの，

treatedwithcalciumionophoreA23187．

ジストロフィー筋の比較的病初期から見出さ

J．Neurol．Sci．，1981（in press）．
4）Sandow，A．：Skeletal muscle・Ann・Rev・れる張力発生加速度低下，対カテコールアミ

Physio1．，32：87，1970．

ン反応異常は，A23187処理筋では見出すことが出来なかった．Pt／Poの変化は，両筋群間5）Close，R．Ⅰ．：．Dynamic properties ofで相反する態度であった．カルシウム・イオ

mammalian skeletal muscles．Physiol．
Rev．，52：129，1972．

ノフォア（A23187）では，ヒト・ジストロフ

6）Takamori，M．，Gutmann，L．＆ShaneS・R・：ィー筋の完全な疾患モデルをつくることは出Contractile propertiesofhumanskeletal

来なかった．

muscle−Nomal and thyroid disease．

結Arch．Neur01．（Chicago），25：535，1971．

語

筋ジストロフィー症病因としてのCa＋＋関

7）Takamori，M．：Contractility and super−

与，膜異常説にかんがみ，人工的に細胞外か

sensitivity to adrenalineindystrophic

ら内へのCa＋＋influxをもたらし，筋変性をmuscle．J．Neurol．Neurosurg．Psychi−

招来しう るカルシウム・イオノフォア（A23187）で，ラット横隔膜筋を処理し，そatry，38：483，1975．
8）Takamori，M．，Hazama，R．＆Tsujihata，M・：の収縮弛緩機構を分析（玩J新和），ヒト・ジ

Activestatepropertiesofdenervatedand

ストロフィー筋と比較検討した．解析は，

immobilized muscle−Comparison withactive stateの概念による等尺性単収縮，強dystrophicmuscle．Neurology（Minneap・），

縮弓長力およびこれらの微分分析にもとづいた．

28：603，1978．

9）Taylor，S．R．，Preiser，H．＆ Sandow，A・：

最大強縮力およびその発生速度は，ジストロMechanical

フィー筋同様低下をみとめた．しかし，単収
縮張力分析では，aCtivestateの

時間要素〟

threshold as a factorin

excitation一tOntraCtion

ー165−

coupling．J．Gen．

Physio1．，54：352，1969．

C．：A comparison between the effects of10）Hainaut，K．＆Desmedt，J．E∴Calcium

a tetanus and the effects of sympat−

ionophoreA23187potentiatestwitchandhomimetic amines on fastLand slow

intracellular calcium releasein slngle−COntraCting mammalian muscles．Brit．

musclefibers．Nature（London），252：407，

J．Pharmaco1．．19：464，1962．

1974．

15）Bowman，W．C．＆

11）Buller，AJ．＆Lewis，D．M．：Furtherobser−

Nott，M．W．：Effects of

CateCholamines，CyClic nucleotides andVations on thedifferentiation ofskeletal

phosphodiesteraseinl1ibitors on contra−

musclesinthekittenhindlimb．J．Physiol．

Ctions ofskeletalmusclein anesthetized（Lomdon），176：355，1965．

CatS・Clin．Exp．Pharmacol．Physio1．，1：

12）Close，R．＆ Hoh，J．F．Y．：The after−effects
Ofrepetitivestimulationontheisometric
twitch contraction of rat fast skeletal

309，1974．
16）Reddy，N．B．，Oliver，K．L．＆Engel，W．K．：Dif・
ferencesin

catecholamine−SenSitiveade＿

muscle・J．Physiol．（London），197：461，

nylatecyclaseandβ−adrenergicreceptor

1968．

binding between fasトtwitch and slow

13）Hoh，J．F．Y．：Neural reguJation of muscle
activation．Exp．Neuro1．，45：241，1974．

−tWitch skeletal

muscle membranes．

Lif．Sci．，24：1765，1979．

14）Bowman，W．C．，Goldberg，A．A．J．＆Raper，ー166−33）デュシャンヌ型筋ジストロフィー症赤血球膜の7オス7アチジルイノシトール代謝

高

研究協力者

は

じ

橋

桂

一■

難

波

紀久子＊

後

藤

和

子＊

春

藤

文

子＊

陣

内

研

小

嶺

幸

弘＊

藤

田

拓

男＊

め

二＊

に

分の検討を行ない最終的に次の条件を採用しデュシャンヌ型筋ジストロフィー症

た．

（DMD）の赤血球膜の異常は，ATPaseをはじめ他の生化学及び形態学的異常が報告され

トリス塩酸緩筒音夜

20mM pH7．5

ATP

0．5mM

ているが，未だそれが一次的なものか，二次CTP

O．25mM的なものか解決されていない．

MgC12

20mM

Diseらは，DMDの赤血球にCaionophore

3H−inositol

O．05mM

A23187を作用させるとKのeffluxが対照よ

赤血球甘莫

lOO／ 1（蛋白量約0．1mg）

り増加すると報告した1）．FisherらのDMD

添加物 ▼全容量200／Jlで37℃，30分間インキュベーの赤血球の脆弱性の報告2）と合せ興味がもたれる．DMDの赤血球でechinocyteが生じやトし，5％トリクロール酢酸で反応を止め，すいとする報告がある．これと関連して赤血球のmicrovesiculationにphosphatidylino−

遠沈し，FoIch液（クロロホルム：メタノー
ル：濃塩酸＝200：100：1，Ⅴ／V）で抽出しsitolphosphate（DPI）とphosphatidylin0−0．1規定塩酸で分配して，底の屑の一部を直接

sitoldiphosphate（TPI）の分解がCaによりBrayのシンチレーションカクテルに加える

促進されるMichell一派の報告があり3），

か，あるいはSilica Gel Hの薄層クロマト

DMDの赤血球膜のphosphatidylinositol

グラフィーで分析した．用いた溶媒は図2に（PI）代謝の検索が必要と考えた．

示す．

方

結

法

果

DMDと同年令の正常者及びSPMAを対インキュベーションの条件を，MgC12と照として同時操作にて，早朝空腹時にヘパリ

NaClを含む上記の緩衝液で調製した赤血球

ン採血をし，デキストラン法で赤血球を分離を用い検討した結果を図1に示す．イノシト

し，0．9％NaClで2回洗渡した後10mMトールは3Hの比活性の関係上反応の立ち上っ

リス塩酸緩衝液pH7．4，1mMMgC12，1mM

た0．05mMを採用した．CTPは当然反応にNaClを含む溶液や1mM EDTAを含む溶液
で溶血を行ない，あと洗涯を5回行ない膜標

必要で0．25mMで最大の取込みがみられた．
ATPは0．25mMのCTPの存在下で0．5mM品とした．インキュベーションの条件は各成で最大の取込みを示し，濃度が増すと抑制がみられた．Mgは5mMで反応はプラトーに達した．Mnは20mMMgC12の存在下ではむし＊神戸大学医学部第三内科−167−Ete∝tSOfComponents

2（佃戸

4

10（mM）刀

レ

TEUO
O00
2●−

1

ProteinMn◆◆

モ20mM唯12200
100

吋Ⅳ

nl

図2

▲八

a

ば

叫︑鵬

O

Time Course

20

三dU∞

∑dU

10（mM）

3Hrinositolの赤血球膜リン脂質分画への取込みのSilicaGelH薄層クロマ
トグラフィーによる分析．

0
5

た．図2でみるように殆どがdiphosphoinosi−
tideに取り込まれていることが判る．従って
Bray液に直接混じて放射能を測定する方法
1

2

3

4

bCl2（mM）

でphosphatidyl inositolのturnoverを知ることが出来る．以下この方法を用いた．

図l 3H−inositolの赤血球膜への取込みに及ぼす各組成の影響（pHニ7．5，37°C）

図3には，DMDと脊髄性筋萎縮症患者（SPMA）の赤血球膜への3H−inositolの取ろ抑制的であり反応に加えなかった．蛋白は込みと，それに及ぼすCaの影響を示した．Ca

反応tube当り0．1mg迄直線関係がみられた．

無添加の場合，SPMAの方が高い取込みがみ

反応時間は30分迄，略直線的に取込みの増加られた．しかしこの際SPMAの膜標品はよがみられた．Caの影響をみると，反応はCa

り白く，溶血及び洗i條条件が関与すると推測により抑制され（−），EGTAの存在でされた．そのため溶血及び洗濯に用いるi容液（〇一・〇）抑制は解除され，Ca特異性が推定の検討を行った．図4にトリス塩酸緩衝液のされた．

みの場合と，前述のMgCl2及びNaClを含む

3H−inositolがphosphoinositidesのどの緩衝液の比較と更にEGTA（2mMの反応分画に取込まれたかを知るためSilicaGelH

液中の最終浪度）の影響を示す．黒点は膜標を図2に示すA，Bの二種の溶媒で展開し品の蛋白量をLowry法で測った値を示す．

−168−

≡山卜旨︑夏U

3日−tnOStOL tncorporationin
Duchenne ＆ Normal（10yrs）

M

図4

赤血球隈調製に用いる緩衝液組成の3H−inositol取込に及ぼす影響．斜線で示したEGTAはインキュベーション中に加えた．

図3 Caの3H−inositolの赤血球膜への取込みに及ぼす影響．
図に示さないがl mM EDTAを含む10mM
トリス塩酸緩衝液pH7．4で溶血及び洗i快を
qqコミロ∈〇．

行った場合が最も高い3H−inositolの取込みを示した．従って以下の実験にはこの溶液を用いた．図5にSPMA及び正常男児の赤血球膜とDMDの赤血球膜への3H−inositolの取込みを比較した結果を示す．DMDと対照との間に有意の差を認めなかった．
ちなみに，この実験に用いた同一膜標品で赤血球膜のadenylate cyclase活性を測定したがDMDと対照群の間で，基礎値，エビネ
7リン存在下，NaF存在下での活性のいずれにおいても差がみられず，エビネフリンによる活性化もみられなかった．これはWach0−1tzらの報告4）と相違した．
結図5 デュシャンヌ型筋ジストロフィー症の
赤血球膜phosphatidylinositol代謝
tumoverは膜調製やインキュベーションの論

以上の実験から，phosphatidylinositolの−169−

条件で極めて敏感に変動することが示された．

従って赤血球膜を扱う場合，年令をそろえ，採血や膜調製の条件を対照群と全く同一にして検討することが極めて重要である．

Biophys．Res．Commun．，79：1288，1977．
2）Fisher，E．R．，Silvestri，E．，Vester，J．W．，et al．：
Increased erythrocyte osmotic fragility

以上の方法では，DMDの赤血球膜のphos−
phatidylinositol代謝は対照群と差がなく，
adenylate cyclaseにも差がみられず，DMD

inpseudohypertrophic muscular dystro−
phy．JAMA，236：955，1976．
3）Allan，D．＆Michell，R．H．：Therelationshipが赤血球を含む系統的疾患であることを支持

betweenCa2＋−mediatedpolyphospho−

出来なかった．赤血球膜の調節因子（Calcium

inositide phosphodiesterase activity，

dependent regulator proteinなど）や血梁

1，2→liacylglycerol accumulation，and

因子を検討することが，従来報告されたデー

microvesiculation

タの解釈と今後の研究に残された問題と考え

Progressin clinical and biologicalられる．

research，（editedinbyerythrocytes．In−

Lux，S．E．，Marchesi，

V．T．＆R）X，C，F．），Alan，R．Liss，Inc．

本研究は昭和55年度厚生省神経疾患研究委託費
No80−02−27によって行なわれた．深謝する．

New York1979，Vol．30．p．523．
4）Wacholtz，M．C．，Raible，D．G．，Jachowski，S．，et al．：Adenylate cyclase and ATPase文

献activities

in

red cell membranes of1）Dise，C．A．，Goodman，D．B．P．，Lake，W．C．，etpatientsandgeneticcarriersofDuchenneal．：Enhanced sensitivity to calciumin

muscular dystrophy．Clin．Chim．Acta，

Duchenne muscular dystrophy．Biochem．

96：255，1979．

−170−34）筋ジストロフィー症患者赤血球膜のレクチン結合

字尾野 公 義＊

研究協力者

別

府

宏

西

山

文 朗＊＊＊ 平 野

閏＊

中

島

元

夫＊＊
寛＊＊＊

予め支持膜を張ったグリッド上に拾い，2．5％筋ジストロフィー症（Dy）の赤血球膜に関して，これを全身的な膜異常としてとらえよ

グルタルアルデヒドにて国定し，蒸溜水で洗うとする観点から，さまざまな検討が行われi條したのち，透過型電昆引こて観察した．

て来た．我々もまた，昨年度迄の研究によっ結果て，ジストロフィー鶏（Dy鶏）の赤血球膜と正常対照のそれとを比較し，Dy鶏において二次元展開し，Fer・ConAと反応させた赤は，（1）コンカナバリンA（Con A）凝集活性の

血球膜の電顕写真を図1に示す．左が正常者，低下があり，（2）フェ））テン標識ConA（Fer−

右がDMD患者である．正常者ではConA結Con．A）を用いた電顕的観察で，Con A結合合部位を示すフェリナン粒子がクラスターをが減少しており，（3）125Ⅰ標識ConAによる結なし，細胞表面全域に亘って密に結合分布し合実験で，ConAの主結合部位数が減少してているが，DMD患者ではこれよりも明らかいることを示し，その意義について考察を行に疎な分布を示し，クラスター形成の程度もった1）．今回は，これを更にヒトDuchenne型

少ないように見える．

筋ジストロフィー症の赤血球に応用し，Fer−
Con Aを用い二次元展開膜標本による電顕

両者の差を定量的にとらえるため，無作為に選んだ視野を100nmXlOOnmを単位とす

的観察を行った．

る正方形（unit square）で区画し，400個の対象と方法

unit square中に含まれるフェリナン粒子を6例のDMD患者（18歳〜23歳，平均16歳）

数え，そのヒストグラムを作製した．1unit

および6例の健康者（17歳〜19歳，平均18歳）

square中に含まれるフェリテン粒子の密度から，予めクエン酸ソーダを添加した注射器を横軸にとり，縦軸にその出現頻度をとってにて採血したのち，赤血球を分散し，燐酸緩

表示したものが図2であり，正常者及びDM

衝生理食塩水（PBS，pH7．2）にて3回洗i條

D患者の各1例を示している．正常者では1し，これをFer・Con A（30−60JLg Con A／

区画あたり1〜3個の密度を示すunit squ−ml）と37℃，30分間反応させた．これを再びareが多いのに対し，DMDではフェリテン粒

PBSで洗i條したのち6×108／mlの赤血球浮子を全く含まないunit squareが半数近くを違液を作製し，その一滴を蒸溜水表面に滴下占めて最も多い．1unit squareあたりに結した．水面上で破裂，伸展された赤血球月莫を，合するフェリテン粒子の平均値を各例について求めて表示したものが図3である．正常者＊東京都立手中経病院神経内手斗では1．48−4．15，2．18±1．18であるのに対し，＊＊東京大学薬学部生体異物

DMD患者では1．07〜1．63，1．32±0．20であ＊＊＊杏林大学医学部解剖
−171−

図1

Electron

mlCrOSCOplC

photographs of erythrocyte membrane

1abeled with ferritin−ConA．（×70，000）（A）normal，（B）Duchenne muscular dystrophy

り，両者の差はp＜0．01で有意と認められた．

（ただしkは1から5迄の整数とする）の分布密度のみならず，分布様式に関してもunit square中に含まれる粒子数の標準偏差正常者とDMD患者との間には差があるようを意味する．また，♂（ゑ）は検討すべき標本におに見えるところから，Dy鶏の場合に用いたける粒子の分布から算出した値であり，同じと同じ手法2）を用いて分布様式の違いを検討

く一辺250×kÅのunit square中に含まれるしてみた．即ち，クラスター形成の程度を示

粒子数の標準偏差である．図4に，正常者及す指標として，Irimuraら2）によって提唱さ

びDMD患者各例について算出したJ（4）／す，and。m（4）を示す．正常対象では12．5〜

れたJ（烏）／Jr。nd。m（ゑ）を各例について算出し，これをDMDと対照とで比較してみた．

14．6，13．7±0．8，DMDでは10．1〜13．2，11．3

ここで げ．a。d。m（ゑ）とは乱数表により作製±1．1であり，後者においてクラスター形成がした完全にランダムな分布パターンをもとに少ないことを示している（p＜0．01）．

算出した標準偏差値であり，一辺250×烏Å
一172一

％

L
A
M
R
O
N

0

5

10

15

20

0
4
0
2
0
1
0

NUM8円

図2

10

15

20

OF F［RRmN PARTICL【S P【R UN汀

25

5

5

0

0
3

0

ここ∈︒Pu巴b＼︵ごb％DYSTROPHY

・
三
・
T

十二・

0
1

QuトZ⊃OU SuZく虻山王︼≡ V王Sく一l L0 UUくトZ︼U∝︼d0

SQUAR【Distributionfrequency of ferritin
particle density per unit squarein
dystrophic versus normal eryth・rocyte plasma membrane．

4
図4

D

0・（4）／01and。m（4）in normal（N）and
dystrophic（D）erythrocyte plasma3

membrane．

2

考察

ヒト赤血球と鶏赤血球とはSDSゲル電気泳動のパターンからも，その膜組成が互いに1

酷似していることが知られている3）．また，赤血球膜の膜内粒子については，Dy鶏，ヒトDMDともに，正常対照と比較して，その数が0山∝＜⊃dS ヒZ⊃ ∝ud SuJU−↑∝＜d

Z一ヒ∝∝uL LO∝山瓜≡⊃Z 山口＜∝山＞＜

N

減少していることが指摘されている4）5）．これ
迄の我々の実験から，Con A結合部位もま

N
図3

D

た，ヒト，鶏両者に共通してジストロフィー

Averagenumberofferritinparticles

赤血球膜で減少していることが確認された．

per unit squareinnormal（N）and

ヒト赤血球の場合，ConA結合部位の主な構

dystrophic（D）erythrocyte plasma

成要素はband3蛋白であり，また，band3

membrane．

蛋白を含む内在性蛋白分子（integral pro−tein）は凍結割断法により観察される膜内粒−173−子に対応するものである6）ことを考慮するな疾患の発現にもまた重要な役割をはたしていらば，以上の結果はすべて矛盾なく了解し得ることが考えられる．

る．
DMD赤血球膜において，ConA結合部位

結論の分布が，正常対照群よりもクラスター形成

ヒトDuchenne型筋ジストロフィー症の乏しい点は，Wakayamaら5）の観察した所（DMD）患者および，これとほぼ年齢を対応

見と一見矛盾するようにみえる．即ち，彼らさせた健康正常者各6例を用い，その赤血球は膜内粒子の分布が，DMD患者においてむ

膜のConA結合に関して検討を行った．DM

しろ不均一であると述べている．このようなD患者赤血球ではCon A結合部位が有意に差異の生じた理由としては，我々の実験の場減少しており，その意義について考察した．

合，未固定標本にFer−ConAを作用させていることを考慮すべきであろう．ジストロフィ

文

献

ー赤血球膜は正常対照に比し膜流動性が乏し

1）宇尾野公義，別府宏囲，中島元夫，西山文いとする報告がある7）．Con A結合が，膜の朗，平野寛：ジストロフィー鶏赤血球月美の流動性を高め，ConA結合部位の分布をより

レクチン結合．厚生省「神経疾患研究委託

一層クラスター化するとすれば，Fer−ConA費」筋ジストロフィー症の病因に関する臨を反応させた赤血球では正常者の方がDMD

床的研究，第二淀（三好班），昭和54年度研究

患者に比Lより顕著なクラスター化を示した

報告書，1980，p．200．

としても当然であろう．従って，たとえ本来

2）Irimura，T．，Nakajima，M．，Hirano，H．＆の膜内粒子（前段に述べた理由からこれはOsawa，T．：DistributionofferritinTCOnju・

ConA結合部位に対応する）の分布がDMD

gatedlectinsonsialidase・treatedmemb−

患者においてより不均一であったとしても，

ranes ofhuman erythrocytes．Biochim．

ConAと反応させたのちは，正常対照の赤血Biophys．Acta，413：192，1975．

球膜の方が逆に著明な不均一化（即ちクラス

3）Jackson，R．C．：The exterior surface ofター化）を示すことになろう．この点に関し

the chickenerythrocyte．J．Biol．Chem．，ては前回走して予め膜の流動性を阻止した月莫

250：617，1975．

標本にFer−Con Aを反応させて検討するこ4）Shafiq，S．A．，Leung，B．＆Schutta，H．S．：とが必要と考える．

Reduced density ofintramembrane

更にまた，Nakajimaらは鶏赤血球を用い

particlesin erythrocytes of dystrophicて，ConAが膜燐脂質のメチル化を促すこと

Chickens．J．Neurol．Sci．，30：299，

を示し，ConA結合によってもたらされる膜1976．

の流動性増加がメチルトランスフェラーゼ阻5）Wakayama，Y．，Hodson，A．，Pleasure，D．，

害剤によって阻止されることを報告していBonilla，E．＆ Schotland，D．L．：Altera・る8）．これらの事実は，Con A受容体が膜流tionin erythrocyte membrane structure

動性の変化に関与し，その結果膜酵素活性のinDuchennemusculardystrophy．Ann．

調節にも寄与している可能性を示唆する．

Neurolリ14：253，1978．

Con A結合部位の減少を直ちに筋ジスト

6）Pintodasilva，P．，Branton，D．＆Douglas，

ロフィー症の直接的原因乃至結果と見倣す根S．A．：Localization of Con A antigen

拠は未だ欠くが，以上の点を総合して考える

Sites on human erythrocytes ghosts．

ならば，本疾患において指摘されて来た様々

Nature，232：194，1971．

な細胞膜レベルの異常にこれが関連しており，

7）Sha

−174−

afi，R．I．，Rodan，S．B．，Hintz，R．L，

Fernandez，S．M．＆Rodan，G．A．：AbT

Toyoshima，S．，Hirano，H．＆Osawa，T．：

normalitiesin membrane microviscosity

Mechanism of the concanavalin Aindu−

andion transportin genetic muscular

ced changes of membrane fluidity ofdystrophy．Nature，254：525，1975．

chicken erythrocytes．J．Biochem．（To−kyo），88：665，1981．

8）Nakajima，M．，Tamura，E・，Irimura，T・，−175−

35）Duchenme型進行性筋ジストロフィー症の
赤血球カルシウム・7ラックス（第2報）

庄

司

進 一＊

Duchenne型進行性筋ジストロフィー症

分画間のカルシウムの動きをアイソトープを（DMD）の病因は未だ未明であるが，最近のラベルしたカルシウムを用いて測定した．

研究では筋ばかりではなく赤血球も含め広く第1報ではトリ・タロル酢酸（TCA）上清

膜の異常があることを示唆するものがある．

を用い45Caの細胞液と細胞膜への流入をCa

形態的，血液学的，生化学的にDMDの赤−ATPaseの特異的阻害剤であるランタナム

血球の異常が報告されている．それらの中での有無で測定した．今回はTCAを用いず，蛋も異常形態の増加，変形能の低下，ウアパイ

白と結合したカルシウムも測定した．

ンによる〔Na＋，K＋〕一ATPaseの活性抑制の低下，K＋イフラックスの増加等の報告は，赤

材料及び方法

血球にカルシウムが蓄積した場合と同様な変患者の年齢は8歳から19歳である．診断は化であることからDMDの赤血球にカルシウ

普通用いられている診断基準で行われた．同

ムが蓄積している可能性を示唆していると考

年齢の男児で神経・筋疾患や血液疾患のないえられる．

者を対照として用いた．息児又は両親より研究への協力の同意を得た．

DMDの赤血球に関しての報告のほとんどが異説が報告されていたり，1施設のみの報

実験は，対になる試料を朝食前の同日，ほ告だったりであるが，ただ1つの例外として

ぼ同時刻に同一人が同一な手技で採取した．

〔Ca2＋，Mg2＋〕−ATPase又はCa−ATPase

ヘパリン加静脈血は直ちに0℃で保有され実がDMDの赤血球膜で活性増加しているとい

験に移された．

う報告は3施設からあり全て一致している．

赤血球は5i容以上の氷冷した0．16MNaCl

この酵素は赤血球内からカルシウムを汲み出で3回洗浄し，各遠心毎に白血球層を取り除すポンプ作用があると考えられている．

いた．全ての操作は4℃で行った．

さらに，DMDの筋線経でカルシウム濃度
アイソトープが上昇しているとの報告もあり，これが膜異常と筋壊死の間の重要なステップである可能性が考えられている．

45CaC12（17．6mCi／mgCa）は日本アイソトーフ協会より得た．99％の純度で，保存は−もし細胞内カルシウム濃度が異常に増加し20℃で行った．

ているとすれば，これはインフラックス（流新鮮赤血球のカルシウム・インフラックス入）の増加又はイフラックス（汲み出し）の洗浄した赤血球を2から5i容のインキュベ

減少又はその組合せで来ると考えられる．困ーション・メディウムに入れ37℃，3時間の難な紳月包内カルシウム濃度の測定のかわりに，

インキュベーションを振盟下で行った．メデ

本研究では細胞外，赤血球膜，赤血球内の各ィ

ウムは2．5mM CaC12，45CaC12，250

JLMLaC13，0．16MNaClである．LaC13はCa＊信州大学医学部第三内科−ATPaseの特異的阻害剤として加えた．こ−176−

のインキュベーション時間が直線性の保たれ結果る最長の時間であった．LaCl。の濃度はイン

結果は表1に示した．LaC13を用いない場

フラックスが最大になる濃度で，これ以上は合の新鮮赤血球のインフラックスは細胞液及

i容血や凝結が生じた．

び膜分画でDMD及び対照共にnegligibleでアリコートを取り10，000g1分の遠心をあった．ATP欠乏赤血球では新鮮赤血球でmicrofugeで行い，赤血球とメディウムを分

LaC13を用いた場合に比べて，膜分画へのカ馳した．赤血球は1mM EGTAを含む0．16
MNaClで1回洗浄後2回0．16MNaClで洗ルシウム・インフラックスが増加していた．

浄した．この条件は赤血球膜外面に吸着して欠乏赤血球の方が減少していた．どの実験にいるカルシウムを取り除くのに充分であった．

おいてもDMDと対照との問に有意差は認められなかった．

しかし細胞液分画ではこの関係が逆で，ATP洗浄後の赤血球は0．1％サポニン溶液を1ml加えて溶血させ，17，000g30分の遠心で細胞液と膜を分散した．膜分画はさらに20mM

表I DMDと同年齢男児対照の赤血球
カルシウム・インフラックス

リン酸バッファー（pH7．5）で2回洗浄を繰返し膜分画とした．

CalCiuTnlnrlux or FresIl ErytllrOCyteS

カルシウム・インフラックスの測定には，

In the Cy【OSOl rra⊂tloTI
Dさ口（12）

細胞液分画のアリコートの放射活性を内部標

CoT−trOl

準法を用いてヘモグロビンの色によるクエン67±71⊥mOleS／l Cell

（12）

69±10

In【11e membrnne frdC【iollナングを克服して行った．膜分画はソルエン
350を0．4ml用い完全に可溶化して放射活性を測定して行った．

DさD（12）12．2±l・6JmOles／噂dry vei帥t Of Wmbrane

Control

12．も

（12）

＋1．2

CaldunlTlflux or Ellergy一〇epleted Ery【hr。CyteS

放射活性の測定にはトルエン1，000ml，ト
リトンⅩ−100500ml，POP4g，POPOP
O．1g：のシンチレーション溶液を用い液体シン
チレーションカウンターで行った．

In

いIe CytOSDl rraC【lorlD）TD（12）8．1±0．8いmles／l Cell

Con【rOl

7．9（12）

Dm（12）

インキュベーション後にヘマトクリットを測定し溶血前の赤血球の容積を求めた．膜分
画の乾燥重量は膜分画のreference baseに
用いた．

＋0．8

工n【h（！membralle frこlCtiotl

Control（12）

172！27lJmOles／mg dry Vel㌫】−t Or−肥mbrane
1糾

＋

25

（）内患者数を示す．
データは平均±標準偏差を示す．
DMDと対照で有意差は認められない．

全ての測定はtriplicateで行った．
ATP欠乏赤血球のカルシウム・インフラ考案本研究でDMDの赤血球のカルシウム・イックス
ATP欠乏赤血球は洗浄赤血球を4℃7日

ンフラックスは37℃3時間のインキュベーシ

間保有して得た．この実験ではLaC13はインョンで対照と差がないことが示された．Plis−

キュベーション・メディウムより除いた．他

kerら1）はDMDのカルシウム・ア70テイク
を原子吸光法で測定し正常であったと報告しの操作は新鮮赤血球の場合と同じに行った．
統計ている．彼らと本研究では色々と異なる条件がある．例えばカルシウム浪度は40mMとStudent tテストを用いた．

2．5mMで，彼らはCa−ATPaseの阻害剤は用いていない．彼らのデータは34．2JJmOles／
Iiter／hrであったが，これは本研究の細胞液ー177−

分画へのインフラックスのデータ67〝mOles／

められなかった．しかしATP欠乏の場合はliter／3hrと同じオーダーである．

新鮮な場合と比べ，膜分画へのインフラック
スが増加し，細胞液分画へのインフラックス

結論は減少していた．

Duchemme型進行性筋ジストロフィー症
文（DMD）の赤血球のカルシウム・フラックス

献を測定した．インフラックスはランタナムを

1）Plishker，G．A．＆Appel，S．H．：Redblood

Ca−ATPaseの特異的阻害剤として用い測Ce11alterationsinmuscular dystrophy：

定した．DMDと同年齢男児の対照との間にThe role oflipids．Muscle＆Nerve，

細胞液と膜分画へのインフラックスで有意な3：70，1980．

差は認められなかった．カルシウム・インフ2）Shoji，S．：Calciumfluxoferythrocytesin

ラックスをATP欠乏赤血球を用い，Ca−

Duchennemusculardystrophy．J NeuroI

ATPaseの特異的阻害剤を用いずに測定しSci，in press．

た．再びDMDと対照との間に有意な差は認−178−36）筋ジストロフィー症患者の赤血球のATPとカルシュウム含量

吉

田

研究協力者
目

精

子＊

安

藤

一

也＊

洗i條した．この赤血球をPBSD（＋）中でHe−的matocrit10−15％にして，4℃で3日間保有

筋ジストロフィー症患者の筋細胞内には，Caが多く存在することが知られている．本研した．この赤血球浮遊液を約45％のHemato−

究はその原因を究明することを究極の目的とCritに戻し，赤血球の全Ca量およびATP量する．昨年度，DuchenneMuscularDystro−を測定した．なおATP量の測定は，同一試料

phy（DMD）の赤血球形態は，血環中およびCitric acidとdextroseが入っている緩衝液

で赤血球洗i條直後およびCa2＋−freeのPB
SD（−）で処理した場合も行った．

中に，赤血球が浮遊している場合は，正常対Caの測定方法；永木等1）およびVetter2）

照者との差がなかったが，Caが存在しかつ等に従い，TrappedPlasmaを測定して，赤ATP合成が不可能な緩徳液（PhosphateBuf−

血球のCa量に対し外液のCaの影響を除去

fered Saline：PBS（＋）pH7．4）中に浮遊しする方法を用いた．TrappedPlasmaはindo−

た場合には，異常形態（echinocyte）が多く存

cyaninegreen（ICG）を用いて，血柴とPBSD在した．ただその原因は不明であった．
赤血球がechinocyteに変形する原因は

表l Phosphate buffered saline

色々あるが，そのうちCaが赤血球内に蓄積

COntaining dextrose

する場合と，赤血球内のATPが枯渇する場（pH7．4合がある．

281mOsm／1）

今回はCa2＋が存在する緩衝液に，赤血球内のATPが枯渇しないようにdextroseを

mM

加えて，DMD患者の赤血球をincubate L，

Na2HPO■・12H20

8．09

XH2pOヽ

1．47

その赤血球のCa含量およびATP含量を調べ変形の原因を究明した．

134．4

実験方法

NaCl

Ca2十とMg2＋が存在するPBS（＋）にdex−troseを5mM加えたものを緩衝液（PBSD

XCI

2．68

（＋）pH7．4）として使用した．組成は表1に示

CaC12

0．90

す．DMD患者と同年齢の健康男子よりヘパリン採血した．採血後0℃に保有し，3時間

MgC12●6H20

後に血菜を分敵，赤血球を上記緩衝液で3回DextTOSe＊国立武蔵療養所神経七．ンター

−179−

0．49
5．00

（＋）に浮遊した赤血球のPacked Cells中の差はなく，また患者と対照者の間にも差がな

値を測定した．

かった．いずれの場合も正常形態を示していCa量は原子吸光法（島津原子吸光光度計た．そこでPBSD（＋）で∵洗i條した赤血球表面AA−640−13）を用いて測定した．その試料に対してICGの影響が変ったと考えられ，はTrapped Plasma（PBSD（＋）中の）を測

我々は赤血球のCa含量を算出するために，定した試料と同時に遠心（半径19cmの遠心血菜中で測定したTrapped Plasma値を使機で4℃，3500rpm，10分うして得た外液（上用した．

清）およびpackedcellsを，湿式法（硝酸一赤血球のCa含量；図1はDMD患者7名

硫酸）で処理して得た．使用した試薬は金属（平均19．3歳）と正常健康男子（平均19．7歳）

分析用，溶媒はパイレックス再蒸溜水，器具の赤血球を5mM dextroseと0．9mMのCa

はテフロン，ポリエチレン，パイレックス製が入っているPBSD（＋）で3回洗濯後，同じを用い，使用前に酸で処理した．

緩衝液に浮遊し，4℃で3日間保有した赤血

ATPの測定：酵素法3）を利用したATP−

球のCa含量を示す．この結果による．と患者

test（BoehringerCo）を用いて測定した．0．6

赤血球の全Ca量は対照者の約2．5倍と高い

N過塩素酸で除蛋白を行い，10分後遠心し，値を示した．この時の赤血球のATP含量は，上清を0〜4℃に保ち，24時間以内にATP後に示すように枯渇していなかった．

測定を完了した．

赤血球のATP含量；図2はDMD患者10

Hemoglobin（Hb）の測定：赤血球のATP

名（平均16．4歳）と正常健康男子14名（平均含量をHbに対して表わすために，aZide−me−

16．8歳）の赤血球ATP含量を示す．左側が緩themoglobin法4）を利用したへモキットーS

衝液（PBSD（＋）とPBSD（−））で洗i條した直（日本商事）により測定した．

後，右側が洗i條後，同じ緩衝液に浮遊し，4℃

総ての測定に使用した緩徳液，測定用試薬で3日間保有した赤血球ATP含量である．

は使用直前に調製した．試料は特に記さない

赤血球をPBSD（＋）で∵洗浄した直後のDMD

限り0−4℃で処理した．
X

果

戎0
1

結

5

Trapped Plasma；赤血球のCa含量を測定するために，赤血球のPackedCellsの間隙

球の間に差は認められなかった．しかし血菓中にある赤血球のPacked CellsのTrapped
たのに対して，PBSD（＋）中の赤血球Pac−
kedCellsは患者が約8．8％，対照者が約9．4％

2

Plasmaは，患者と対照者共に約5．6％であっ

3

pped PlasmaはDMD患者と対照者の赤血

4外液のCa2＋量の影響を除去した．このTra−

旦＝︒︒︼■ま苫u 帽Uに入ったTrapped Plasmaの量を測定して，と血簗中に比較して高い値を示した．PBSD（＋）でのTrappedPlasmaが高い値を示したのは，洗i條直後の場合も，3日間incubate
した後も同じであった．赤血球の大きさは，

図l Cacontentsoferythrocytesafter

ICGが含まれている血環とPBSD（＋）中で3days preservationinPBSD（＋）−180−

［：：コDMD日0）

X

㌔ 4

−

ControIs日4）

また4℃で保有された赤血鱒は（Ca2＋＋
Mg2＋）−ATPase activityが低下している状態である．その状態で患者の赤血球にCaが蓄積され易いということは，対照者の赤血球q ゞ言∈d↑くに比べ，Caが外液より内部に入り易い状態になっているのではないかと考えられる．DMD
患者赤血球の（Ca2＋＋Mg2＋）rATPaseacti−
vityが対照者に比べ高いという報告5）は，上の結果を支持するものである．
DMD患者赤血球のATP含量は，赤血球をPBSD（＋）で洗准直後に測定した場合，対照者のそれに比べて約15％高く，同じ緩衝液
Ca

＋

一

十

Day O

一

中に浮遊し，4℃で3日間保有した場合，Ca−freeのPBSD（−）に浮進させた場合も

3

10−12％高かった．これ等の結果はDanon

図2L Effect of Ca on the ATP−1evel of等6）の結果と一致する．ATP含量が高いとい

erythrocytes

うひとつの理由は，DMD患者赤血球のCaが患者赤血球のATP含量は，対照者のそれに対照者のそれに比べて高いためであろう．そ比べて約15％高かった．4℃で3日間保有しれは赤血球内ATPが細胞内Caの綬徳効果た後と約12％と高い値を示した．Ca−freeのを持っているためである．

PBSD（−）で赤血球を洗i條した直後と4℃で昨年度と今年度の結果より，DMD患者赤3日間保有した場合でも，ATP含量は患者血球にも異常が存在すると考えられる．今回の赤血球の方が高い傾向（約10％）を示した．

の結果で患者の赤血球は，4℃で処理した場
合，赤血球にCaが蓄積され易いことが明ら考察かになった．今後患者の赤血球にCaが何故赤血球をCa2十を含み，ATP合成が不可能に蓄積され易いのか原因を究明して行く予定（dextroseTfree）なPBS（＋）中に4℃で，120である．

時間浮遊した場合，DMD患者の赤血球の形
ま態は，対照者のそれに比べて約25％も多くと− め

かしその原因が患者の赤血球にCaが蓄積し1）4℃中で3日間，PBSD（＋）中でincubate
したDMD患者赤血球のCa含量は，対照者

易くてechinocyteに変形したのか，赤血球内のそれに比べ約2．5倍高かった．

echinocyteに変形したことを先に触れた．しのATPが枯渇し易くてechinocyteになり

2）DMD患者赤血球のATP含量は，対照易かったのか不明であった．そこで今回の実者のそれに比べ4℃においてPBSD（＋）で

験結果から明らかなように，赤血球のATP洗推した直後は約15％高く，4℃で3日間，が枯渇しない状態で（図2），4℃で3日間保PBSD（＋）中でincubateした場合約12％高有された患者赤血球に，対照者のそれに比べかった．

Caが約2．5倍も多く蓄積されていたこと（図1）3）PBS（＋）中の患者赤血球の形態がechi−

から，その原因はPBS（＋）中で赤血球にCa

nocyteになり易かった原因は，1）によりCaが蓄積し易く，赤血球内のATPが枯渇するの蓄積によることが明らかになった．

と共にechinocyte形になったと考えられる．
−181−

患者の血液を提供下さった，国立療養所東埼玉病院

石原伝幸先生，正常対照者の血液

trapped plasma．Clinica．Chimica
Acta．，55：345，1974．

金子行3）Jaworek，D．，Gruber，W．，etal：Methods

子先生そして八王子血液センターに感謝する．

Ofenzymaticanalysis．AcademicPress，

また懇切な意見を賜りました，京都薬科大学

New York Vol．41974．

を提供下さった，東京女子医科大学

藤井達三先生に感謝する．

4）Vanzetti，G．：An azide−methemoglobin
methodforhemoglobindeterminationin

文献blood．J．Lab．Clin．Med．，67：116，1966．

1）永木譲治：赤血球内ナトリウム，カリウム測定の基礎的検討とその臨床的意義．臨床
病理，24：89，1976．

5）Ruitenbeek，W．：Membrane−boundenzy一

mes oferythrocytesinhumanmuscular
dystrophy．J．Neurol．Sci．，41：71，1979．

2）Vettore，L，Falezza，G．，et al：A new

6）Danon，M．J．，Marshall，W．E．，et al：

method for the determination ofsodium

Erythrocyte metabolism

andpotassiuminhumanredbloodcells，

dystrophy．Arch．Neuro1．，35：592；1978．

usingindocyaninegreenasamarkerfor

ー182−

in

muscular37）筋緊張性ジストロフィー症．およびDuchenne dystrophy症の赤血球膜のATPase，adenylate kinaseなどについて

馬

研究協力者

は

じ

め

渡

志

郎＊

安 徳

恭 盲寅＊＊＊ 伊規須 英 輝＊＊

後

幾

藤

生＝

黒

岩

義五郎＊＊

は8．5％NaCl液で3回洗浄し，10mM TriSに

Myotonic dystrophy症においてもDuch−−HCl（pH7．4）でi容血後，同液で4回膜を洗

enne dystrophy と同じように，赤血球あるいは赤血球膜の異常の報告がある．特にい白色の赤血球膜を得た．血簗および赤血球
膜は−35℃に保有した．
TotalATPaseの測定は50mMTris−HCl

ATPasel）〜5），prOtein kinase6）7），adenineのATPやADPへの取り込み8）9）などATPや（pH7．4），5mMMgC12，100mMNaCl，15

ADPと直接関連した異常の報告も少なくな

mM KCl，1mM ATP，1mM PEP，0，25

い．したがって，私共はmyotonicdystrophy

mMNADH，pyruVatekinase，LDH，赤血球症患者の赤血球膜のATPase，adenylate

膜（300〜400／Jg）を含んだ反応液を37℃で反kinaseなどを測定した．さらに血楽のade−

応させ，NADHの変化を340nmで記録計でnylatekinaseやCreatinekinaseも測定した．

記録した．Ouabainに反応するATPase

同じ方法でDuchennedystrophy患者につい（Na＋＋K＋−ATPaseとする）は，上記の反ても検討した．

応液に0．1mM ouabainを加えて測定した．

対象および方法

Adenylate kinase（ATP＋ AMP→2
ADP）は，上記のOuabainを含んだ反応液

同一施設に入院中のmyotOnic dystrophyに，さらに1mM AMPを加えて活性を測定

患者（5人）と，同年齢層の肺結核患者（6し，この活性値よりOuabain存在下のAT人）を対象として，同日の同時刻ごろ採血し，Pase活性倍を差引いた．Adenylate klnaSe

赤血球膜の調製，酵素の測定などすべて同時の上記と逆反応（2ADP一→ATP＋AMP）のに行った．Duchenne dystrophy症患者（5活性値は，100mM Tris，aCetate（pH7．0），

人）についても同様にして同年齢男子群（脳10mMMg−aCetate，20mMglucose，l mM性麻痺患者）と比較した．ヘパリン採血し，ADP，0．6mM NADP，hexokinase，glu−

血環およびcose−6−phosphate dehydrogenase，およbuffy coatを除いた後，赤血球

び赤血球膜（300〜400／Jg）を含んだ反応液を37℃でNADPの変化を340nmで記く録した．

＊九州工業大学保健管理センター＊＊九州大学医学部脳研神経内科

Adenylatekinaseの反応は，この酵素のSpe−＊＊：＊国立赤坂療養所神経内科

cificinl1ibitorであるPl，P5，−Di（adeno−
一183−加えると完全にblockされ，反応がadeny−

Duchenne dystrophy症の赤血球膜では，
ATPaseの活性に対照群と差はなく，0．1mM

1ate kinaseであることを確かめた．血環のOuabainによっても対照群と等しく抑制されadenylatekinaseも同様にして測定した．血ていた（表3）．Duchennedystrophy症の血菜のCreatine kinase（CPK）はadenylate

菜のadenylate kinaseは対照群より高値を

kinase（2ADP一→ATP＋AMP）の反応液に示す症例もあったが，平均値として統計学的30mM phosphocreatine（pH7．0），5mM

有意差（t−teSt）は認めなかった．またcrea−

AMP，10JLMAp5Aおよび20mMN−aCety−

tine kinaseの活性値とadenylate kinaseの

1cysteineを加えて37℃で反応させ340nmで活性値との間に全く相関関係は認められなか記録した．血栄のpyruVate kinaseはベーリった（表4）．血菜のCreatinekinaseとpyru−

ンガ一・マンハイム社の測定キット（PK−uV

Vate kinaseは密接な相関を示した．

Sine−5）pentaphosphate，（Ap5A）を10JLMテスト）を使用した．
結

表3 Duchenne dystrophy症および対照の赤血
球膜の酵素活性値

果

Myotonicdystrophy症の赤血球膜のtotal
ATPase，0．1mMouabainによって抑制されC o n t r o J（n ＝ 5 ）D u c h e n n e （n ＝ 5 ）T ota l A T P as e

1 0 ．9 ± 2 ．
3

11 ．
2 ±

るATPase，およびadenylatekinaseの活性（N a ＋ K ）A T P a s e

2 ．0 ±

0 ．
52 ．
3 ± 0 ．
7

はいずれも対照群と有意差は認められなかっA d e n y la t e k in a s e

た（表1）．血柴中のadenylate kinaseは（2 A D P → A T P ＋ A M P ）

2 7 ，7 ± 4 ．9

2 5 ．7 ± 6 ．
2

Creatinekinaseと同じようにmyotonicdys−

1 ．2

酵素活性：mFLmOles／min／mgprotein（at37℃）

trophyで軽度に増加している症例があったが，増加していない症例の方が多かった（表表4

Duchenne dystrophy症および対照の血莱2）．またCreatine kinaseの値とadenylate

中のadenylate kinaseとcreatine kinasekinaseの値に相関はなかった．

の活性値

表I Myotonic dystrophy症および対照の赤血
球膜の酵素活性値

C P K

A K

D uche nne
1 8 71 ．
6

7 0．
0

c ase 2 ）

68 ．
6

22 7．
6

ca se 3 ）1166 ．
770 ．
1

ca se 4 ）2722 ．
4

11 5 ．
0case l ）cas e 5 ）C o n t r o l（n ＝ 6 ）酵素活性：mjL mOles／min／mgprotein（at37℃）

425 ．
4

98 ．
0

12 50 ．
7 ± 10 7 6 ．
3116．
2 ±65 ．
2※

31 ．
4± 7．
3

64 ．
5 ±3 6 ．
0

酵素活性：mpmoles／min／mlofplasma（at37℃）
表2

Myotonic dystrophy症および対照の血集の酵素活性値※not significantIy different from control
values．

C o ntro l（n ＝6 ） M y oton ic （n＝5）
C re a tin e k in a s e

11．
6± 5．
4

37 ．
0 ±27 ．
5

A de ny late k i
n a se

42 ．
5± 9．
1

89 ．
8 ±29 ．
2※

考案

Myotonic dystrophy症の赤血球膜の酵素活性：mFLmOles／min／mlofplasma（at37℃）

Na＋K−ATPaseに関して，Brownら1）の結※p＜0．05

一184−

果では0．1mM ouabainによって活性が増加

れる．

している．Dobosz2）は正常対照と比べて0．1

Duchenne dystrophy症の赤血球膜のAT

mM ouabainによる抑制が少ないと報告し

Paseについても異論が多いが，今回のCOupl−ている．さらに最近，Mishraら3）はMg−
ATPaseには差はないが1mM ouabainにedenzyme aSSayによるADPの生成の測定

よって抑制されるATPase（すなわちNa＋

mMouabainによって等しく抑制された．￣こK−ATPase）は対照群より高いと報告してれ1ま遊離した無機燐（Pi）の測定法による私法においても対照群と差は認められず，0．1

いる．私共の結果は，Mg−ATPaseにも，0．1

共の結果10）と一致していた．Duchenne dys−mM ouabainによって抑制されるATPase

trophyの血菜中のadenylate kinaseのイ直は，にも対照群と差を認めなかった．このような，それぞれ異なった結果の原因は不明である．

対照群よりやや高いと思われる症例もあった

Mishraら3）は1mM ouabainを用いている．

CPKの倍とadenylate kinaseの値の間に全

私共の経験からは，赤血球膜の酵素活性の比

く相関は認められず，血菜のCPKとpyru−

較の上では，膜の調製法の差異よりも，膜のvate kinaseの値が密接に相関していたのと調製や酵素活性の測定を対照群と同時に行う

対照的であった．これらのことは，Duchenne

ことの方が重要ではないかと考えられる．私

dystrophy症における病態を考える上で考慮

共は，myOtOnicdystrophy患者群と同一施設に価するものではないかと思われる．

が，平均値として有意差はなかった．さらにに入院中の同年齢対照群から，同日の同時刻ごろ採血し，赤血球膜の調製や酵素活性の測

文

献

定もすべて同時に行った．他の報告が，この

1）Brown，H．D．，Chattopadhyay，S・K・，etal・：ような条件を整えて行われたか否かは明記さErythrocyte abnormalityin human

れていない．赤血球膜の，adenylate kinase

myopathy．Science，157：1577，1967．

は私共の結果ではNa＋K−ATPaseよりも

2）Dobosz，I．N．，：Erythrocyteghost（Na＋K）

10倍以上高い活性が得られた．赤血球においATPaseてadenylate kinaseは膜結合性（memb−

phyandmyotonia．J・Neurol・，214：61，

rane−bound）の酵素とは必ずしも考えられ

activityin

Duchennes

dystro−1976．

ていない．しかし，私共の使用した膜は白色

3）Mishra，S．K．，Hobson，M・＆Desaih，D・：であり，少なくともヘモグロビンは完全に除Erythrocytemembraneabnormalitiesin

かれた膜である．この赤血球膜を0．1mM

human myotonic dystrophy．J．Neurol．

EDTAでさらに洗浄すると（spectrinは著減

Sci．，46：333，1980．

し，aCtinは殆ど除かれるが）adenylatekina−

4）Ruitenbeek，W．：Membrane−bound en−

Seの活性も約2分の1になった．したがって

zymeoferythrocytesinhumanmuscularadenylate kinaseは比較的looseに膜結合しdystrophy．J．Neurol．Sci．，41：71，1979．

ていることは事実であると思われ，膜n調製 ■5）Luthra，M．G．，Stern，LZ・，＆Kim，D・H・：法によってSpeCific activityは異なって来る（Ca＋＋＋Mg＋＋）−ATPase of red cellsinと考えられる．しかし，myOtOnicdystrophy

Duchenne and myotonic dystrophy．

症と対照との間には有意差はなかった．Myo−

Neurology（Minneap．），29：835，1979．

tonic dystrophy症の血菜ではadenylate6）Roses，A．D．，＆Appel，S・H・：Protein

kinaseの活性が対照と比べて，やや高いと思kinase activityinerythrocyteghostsof

われる症例があったが，対照群と差がない症

patients

例の方が多く，診断的価値はないように思わ

Proc．Nat．Acad．Sci．（U．S．A．），70：1855，−185−

with myotonic dystrophy・rocytes

1973．

in

Duchenne and myotonic

dystrophy．Nature，268：55，1977．

7）Vickers，J．D．，McComas，A．J．＆Rathbone，
M．P．：Myotonic muscual dystrophy：9）Muller，M．M．，Kuzmits，R．，etal．：Purine

Abnormal temperature response of

metabolism oferythrocytesinmyotonic

membrane phosphorylationin eryth−dystrophy．J．Neuro1．，223：59，1980．

rocyte membranes．Neurology（Min・10）Mawatari，S．，Igisu，H．，Kuroiwa，Y．，etal．：Na and K ATPase of erythrocyte

neap．），29：791，1979．
al．：

membranesin Duchenne muscular dys−

Abnormal adenine metabolism oferyth−trophy．Neurology（Minneap．），inpress．

8）Solomons，C．C．，Ringel，S．Pリ

et

−186−

38）緊張性筋ジストロフィー症赤血球膜アセチル
コリンエステラーゼについて

研究協力者

は

じ

め

黒

岩

義五郎＊

伊規須

英

輝＊

馬

志

郎＊＊

渡

安

徳
後

恭
藤

演＊＊＊
幾

生＊

った．血液は採血後ただちに水中に置き，2に緊張性筋ジストロフィー症（MyD）におい

時間後より処理を開始した．実験1では，血ては，種々の赤血球膜の異常が報告されてい糞とbuffycoatを除いた後，赤血球を生理食る．しかし，膜のどこに異常があるのか必ず塩水で2回，0．1Mリン酸緩衝液，pH7．4で1

しも明らかでなく，又，報告された異常のほ回洗い，ヘモグロビン濃度が4g／dlとなるよとんどすべてに対して反論がある．

う同緩衝液中に赤血球を浮遊させ，−80℃に

今回，我々はアセチルコリンエステラーゼ保有した．なお，この検体は使用に際し解凍（AchE）を指標として，MyDにおける赤血

すると完全な溶血が認められた．実験2では，球膜の性質を検討した．AchEを指標として

血梁とbuffycoatを除いた後，赤血球を生理用いたのは本酵素が次のような特徴をもつた

食塩水で3回洗い，10答の10mM tris−HCl，めである．すなわち，（1）AchEは赤血球におpH7．4でi容血させ，20，000gで20分間遠心し，いて膜のみに存在する．このためghostだけ膜を得た．この膜をさらに同緩衝液で5回洗でなく，hemolysateのままでも活性測定が可

い，ghostを得，一30℃に保有し，1週間以内能である．（2）しかも，膜の外側に局在するこに使用した．使用前E］に解凍し，10mM trisとが確立されている．（3）特にヒト赤血球にお−HCl，pH7．4で蛋白濃度を2mg／mlとなる

いて活性が高い．

ように調整し，水中に一晩おいた．
AchE活性は既報1）のように，Ellmanら2）
対象と方法の方法にほぼ従って行った．ただし，今回はMyD患者および対照は全例同一施設に6

ghostの使用量は10JLlとした．AchE活性測カ月以上入院中で，MyD患者と年齢，性を一定においても，MyDと対照を同時に測定し致させた軽症の肺結核患者を対照とした．実た．Arrhenius plot，NaFによる活性抑制に

験1（hemolysateに関する検討）と実験2

ついてのHillplotは既報1）の如く行い，各例（ghostに関する検討）はそれぞれ別日に行のグラフより，tranSitiontemperature，活性ったが，各実験においては，MyD患者と対照化エネルギー，Hill係数，K。．5（活性の50％抑から同一日のほぼ同一時刻に採血し，同時に制に要するNaF量）を求めた．

検体処理を行った．
採血はヘパリン入り真空採血管を用いて行

結果

実験1（hemolysate）においては7から＊九州大学医学部脳研神経内科

41℃，実験2（ghost）においては25から41℃＊＊九州工業大学保健管理センターの範囲でAchE活性を測定したが，この温度＊＊＊国立赤坂療葦所神経内科

範囲で，実験1，2いずれにおいても，MyD
−187−

表l

表2

赤血球AchEのtransition temperature（Tc）と活性化エネルギー（平均±SD）
患

者

対

照

患

実験 1 （h e m o ly s a t e ）N

6 （男 4 ， 女 2 ） 6 （男 4 ， 女 2 ）

年令

4 7 ．0 ± 1 1 ．
4

者

対

照

N

6 （男 4 ， 女 2 ）

6 （男 4 ， 女 2 ）年 令

4 7 ．0 ± 1 1 ．4

4 7 ．5 ± 1 0 ．5

H ill 係 数

0 ．9 3 ± 0 ．0 8

1 ．0 4 ± 0 ．1 5

K o．
50 ．2 8 ± 0 ．0 3

0 ．2 9 ± 0 ．0 5

H ill 係 数

0 ．9 8 ± 0 ．0 6

1 ．0 2 ± 0 ．0 5

K o．
5

0 ．8 1 ± 0 ．0 7

0 ．8 1 ± 0 ．0 7

H ill 係 数

0 ．96 ± 0 ．1 1

1 ．0 4 ± 0 ．0 7

K o．
5

2 ．1 5 ± 0 ．2 5

2 ．0 9 ± 0 ．1 5

4 7 ．5 ± 1 0 ．
5
1 3℃

T c （C ）赤血球AchEに及ぼすNaFの影響（平均±SD）

2 3 ．0 ± 2 ．
2

2 4 ．4 ± 1 ．5

T c 以下5 ．02 ± 0 ．47

4 ．7 0 ± 0 ．2 3

T c 以上2 ．4 3 ± 0 ．26

2 ．3 4 ± 0 ．2 0

活 性 化エ ネ ル ギー
（c a l／m o l ）

25℃

37℃

実験2 （
gh os t）
N

5 （男 4 ， 女 1 ）

5 （男 4 ， 女 1 ）年 令

4 0 ．0 ± 9 ．7

4 0 ．8 ± 12 ．1

活性 化エ ネ ル ギー

2 ．19 ± 0 ．22

2 ．2 4 ± 0 ．4 4て膜の性質が大きく異なること3），年齢4），食餌5）などが赤血球の性質に影響を及ぼすことなどが示されており，これらが上記の矛盾を（2 5 − 4 lOc ）もたらした可能性も考えられる．

と対照の間に活性値の有意な差を認めなかっ

そこで，我々は，同一施設に長期間入院した．実験1において，ArrheniusplotにおけているMyD患者と，性・年齢をマッチさせた

るtransition temperature（Tc）およびTc対照患者から同一日のほぼ同一時刻に検体をの上又は下の温度域における活性化エネルギ採取し，同時に検体の処理を行った．さらに，

ーについてMyDと対照の間に差を認めなか

ghostだけでなくhemolysateについても検った．実験2でも，MyDと対照間に活性化エ討した（hemolysateはghostに比較すると，ネルギーに有意差を見出し得なかった（表はるかに簡単な操作で得ることができ，従っ1）．13，25，37℃におけるNaFの影響につて，標品作製操作に起因する膜の性質の差が小さいと考えられる）．

いてみると，いずれの温度においても，MyD，対照共にdose−reSpOnSe CurVeはその結果，かなり広い温度範囲における

hyperbolicで，Hill係数はほぼ1であった．

AchE活性について，ghost，hemolysateいず

ただし，K。．5は各温度間で明らかに異なった．

れにおいても，MyDと対照の間に有意差をしかし，MyDと対照の間に差を認めなかっ

認めなかった．また，tranSitiontemperature

た（表2）．

（Tc），活性化エネルギー，更にNaFに対す
る反応についてもMyDと対照間に差を見出考し得なかった．Arrhenius plotにおけるTc

案

MyDの赤血球膜に関しては，流動性，脂質の意義は必ずしも明確ではないが，酵素周囲構成，ATPase，prOtein kinaseなどについの月旨質の相転移に影響されると考えられていての異常が報告されている．しかし，その「異る．また，活性化エネルギー，AchEのNaF常」の内容は必ずしも一致しておらず，異常に対する反応（特にHill係数）も膜の性質をそのものを認めなかったとの報告もある．こ

反映するものと考えられている．

れらの成績の不一致の原因は明らかでない．

これらのことから，今回の我々の成績は，

しかし，赤血球膜標品作製法のちがいによっ

MyDの赤血球膜において，少なくともAchE−188−

又はその環境に著しい異常はないことを示すものと考えられる．

3）Hanahan，D．J．＆Ekholm，J．E．：Theexpre−
SSion of optimum ATPase activitiesin
human erythrocytes：A comparison of

文

献differentlytic procedures．Arch．Bioc−1）Ⅰgisu，H．，Mawatari，S．，Kuroiwa，Y．，etal．：Erythrocyte acetylcholinesterasein

hem．Biophys．，187：170，1978．
4）Igisu，H．，Mawatari，S．＆Kuroiwa，Y．：

Duchenne muscular dystrophy．Clin．

Erythrocyte ATPin Duchenne dystro−

Chim．Acta，105：241，1980．

phy：Effectsofouabainandpropranolol．

2）Ellman，G．L．，Courtney，K．D．，Anders，Ⅴ．，

Neurology（Minneap．），29：992，1979．

et al．：A new and rapid colorimetric

5）Farquhar，J．W．＆Ahrens，E．H．：Effects

determination of acetylcholinesterase

Of dietary fats on human erythrocyte

activity．Biochem．Pharmaco1．，7：88，

fattyacidpatternS．J．Clin．Invest．，42：

1961．

675，1963．

−189−39）福山型先天性筋ジストロフィー症の血清と髄液における免疫グロブリンとimmune complex

近藤 喜代太郎＊
研究協力者

は

じ

め

文

田

明

石

川

和 弘＊

に

福山型先天性筋ジストロフィー症は，単劣

仙＊

豊

島

至＊

原 口 道比古＊＊ルを支持体とした等電点電気泳動を行い，銀染色で蛋白染色した．

性の遺伝性疾患と考えられているが，髄膜炎や脳回の形成異常がほぼ全例に見られること

結

果から，胎内感染が成因に関与する可能性が示

1）血清の免疫グロブリン量：各免疫グロ

唆されている．また，本症の血清で免疫グロブリンの量を表に示tL，健康小児における正ブリンが高値を示す成績もある．そこで我々

常値2）の2S．d．を超えた異常な高値に・印は，本症における胎内感染の可能性について，を付した．IgGは15歳の1例で，やや高い値を臨床免疫学の立場から，血清，髄液の免疫グ

示すのみで，他の全例は正常範囲内であった．

ロブリンと免疫複合体に関する検討を行った

IgAは，4歳の例でやや高値，14歳と16歳のので報告する．

各1例で明らかな高値を示したが，乳幼児例
では正常であった．IgMは全例で正常範囲に含まれていた．

対象及び方法
6カ月から16歳までの本症14例を対象として，つぎの点を検索した．

2）血清の免疫複合体：測定結果を表に示し，20JLg AHG Eq／ml（AHG：aggregated1）血清の免疫グロブリン量：免疫拡散法

humanIgG）以下の正常値を超える値に・印を付した．14例中5例で軽度高値を示した．

で14例のIgG，IgA，IgMを定量した．
2）血清の免疫複合体：水谷らl）のRaji細3）髄液の単クローン性の免疫グロブリ

胞のC3receptorを利用したenzymeimmu−

ン：図に示す如く，多発性硬化症の髄液では，

noassay法によって測定した．本反応は，患者単クローン性の免疫グロブリンが認められた

血清内の補体が反応に用いられるので，血清が，本症及び正常対照者の髄液では陰性であは−70℃に保有し，採取後3カ月以内に使用

った．

した．
3）髄液の単クローン性免疫グロブリン：考案

本症2例，多発性硬化症1例，正常対照者1

福山型先天性筋ジストロフィー症の成因に例の髄液を検索した．髄液をAmicon B−15

ついては，福山の原著3）で，常染色体劣性遺伝

で5倍に濃縮し，6％ポリアクリルアミドゲ

であろうと指摘されている．また瀬川4）によると，34％の家系に血族結婚がみられ，さら＊新潟大学脳研究所神経内科に，大澤5）は，患者の近交係数が，一般人口の＊＊新潟大学医学部第二内科

それに比べて10倍以上であること，及び，近
ー190−

表

福山型先天性筋ジストロフィー症の血⑳

清免疫グロブリンとimmune complex
Ig G

Ig A

Ig M

m 9／dl m g／dl m g／dl

Ⅰ・
P・
g AHG Eq／
m

6M

4 90

27

94

31キ

10M

3 10

28

56

5

15M

520

28

95

17

2Y

860

113

18

4Y

760

50
弟
270

56

7

5Y

800

210

56

10

6Y

660

180

72

11

13Y

230

133

10

14Y

1230
2260来

2 10

95

24 巣

14Y

800

560

95

16

14Y

1545

280

179

22 1

15Y

1545

39q

113

16Y

920

1100

95

1
27 巣

16Y

1700

450

120

28 巣

MS CMD CMD

正常

図 髄液の等電点電気泳動
MS：多発性硬化症

Ⅰ．C：mmUne Complex

親婚群と非近親婚群との間に分離比に差はな

CMD：福山型先天性筋ジストロフィー症
矢印は単クローン性免疫グロブリンを示す．

く，いずれも常染色劣性遺伝の場合の分離比25％に近いことを証明している．これらの事

抗体価は上昇しておらず5）8），特定のagentに実は，本症が単劣性の遺伝性疾患である事を示す，かなり明確な遺伝分析であると思われよる感染の証拠は未だ見出されてはいないが，血清IgMが高値とする成績8）9）が報告されてる．

いる．しかし，今回の成績によれば，一部のしかし，鴨下6）は本症の中枢神経病理所見で，本症の脳回の形成異常が，先天性Cyt0−

例でIgG，IgAが高値を示したにすぎず，また，若年例に異常が著しいという成績ではな

megaloviruSやtoxoplasma感染による小多かった．血清中の免疫複合体に関しても，14脳回に近いこと，及び，脳軟膜の肥厚あるいは細胞浸潤など慢性髄膜炎を思わせる所見が例中5例で軽度の高値を示すのみであり，髄液の電気泳動の所見を含めて，これらの方法

みられることから，本症の成因として，胎内及び成績からは，本症における慢性持続性感感染の可能性を挙げている．また，三宅ら7）

染を示唆する明確な証拠は得られなかった．

は，本症の重症例で，中枢神経系と骨格筋にしかし，胎児期における急性の病原消滅型感

強い炎症性の病理所見を認め，血清IgM，IgG

染は否定されておらず，本症の成因を胎内感が上昇していたことから，胎内感染の可能性染に求めた場合，新生児及び乳児の早期における免疫学的検索が，今後の課題になると思を強調している．
本症では，風疹，herpes simplex，CytOT

われる．

megaloviruS，tOXOplasma，myCOplasmaの−191−

試料採取に御助力戴いた，瀬川小児神経クリー症（福山型）の遺伝学的ならびに疫学的ニックの瀬川昌也先生，東京女子医大小児科の研究．東京女子医科大学雑誌，48：112，

大澤真木子先生に感謝致します．

1978．

6）鴨下重彦：先天型筋ジストロフィー（福山文型）の成因．日本臨床，35：3929，1977．

献7）三宅捷太，後藤彰子，土田昌宏，ほか：水1）水谷修紀，八森 啓，山田秀雄，ほか：Rajicell EIA法による頭症と後頭部皮膚洞を伴った先天性筋ジス

circulatingimmune

complex の測定法．医学のあゆみ，109：

トロフィー症の1剖検例．脳と発達，9：

189，1979．

212，1977．

2）藤井 輩，白井朋包：小児期の免疫グロブリ8）文田明仙，登木口進：福山型congenital

ンの動態とその臨床．小児科，15：263，

muscular dystrophyにおけるCTとmy−

1974．

COplasma感染の可能性について．神経内3）福山幸夫：小児科領域の筋疾患．臨床神経，科，9：49，1978．
9）林

1：409，1961．

栄治，北野正二郎，鬼塚黎子：DMP息4）瀬川昌也：先天型筋ジストロフィー（知能児における血清免疫グロ7 リン（IgGJgA，障害，顔面筋信忠を伴う関節拘縮型・先天IgM，IgE）のレベルについて．筋ジストロ性筋ジストロフィー症）の臨床的研究．脳フィー症の臨床病態および疫学的研究．昭と発達，2：439，1970．

和53年度研究成果報告書・祖父江姓々会議

5）大澤真木子：先天型進行性筋ジストロ7イ

抄録，1979，p．210．

−192−

40）ヒト胎盤からの神経成長促進因子の分離
林

恭 三＊

研究協力者
緒

古

川

言

昭

栄■＊

30，000gで5分間遠心したのち水に対して一神経成長促進因子（nerve grOWth factor，

夜透析する．透析後の上清を20，000gで10分

以下NGFと略す）は交感神経節および知覚

間遠心し，順次1）CM52celluloseカラム，

神経節神経細胞の分化，成長に必須の因子であり，特に交感神経系神経細胞は胎生期以後

2）CM52celluloseカラム（再クロマト），3）SephacrylS−300カラムによるクロマトグラ

も栄養因子としてNGFを必要とする．生理

フィーを行った．Sephacryl S−300カラムク

的意義はいまだ不明であるが培養骨格筋細胞

ロマトグラフィーで得られたNGF活性画分

がNGF分子を産生するという報告1）が成さは酸性条件下でのポリアクリルアミドゲル電れている．
著者らはすでに筋ジストロフィー症マウス

気泳動で解放するサブユニット構造が存在することが判明したのでさらにpH2．3での調の顎下腹2）3），後肢筋肉中4）5）のNGF活性およ

製用ディスクゲル電気泳動によりNGF活性

びNGF様免疫交叉活性（NGF−likeimmu−をもつサブユニットの分艶を行った．

noreactivity，NGF−LI）レベルが正常マウ

NGF活性の測定法：8日ニワトリ胚知覚

スより低下していることを明らかにした．今神経節（dorsalroot ganglia）をニワトリ血回，ヒトの筋ジストロフィー症とNGFの関染，ト連性を検討するためヒトNGFの微量定量法

medium，NGF試料の等容量medium中での確立を目的として，1）ヒト胎盤よりNGF

37℃，24時間〜72時間培養した．神経節周囲の分誰精製，2）ヒト血清中のNGF分子の存から伸びる神経線経の主として密度を判定基

在形態の検討を試みた．

準としてNGF活性を評価した．

ロンビンを含むEagle

S MEM

マウスβNGF固相ラジオイムノアッセイ
方法（RIA）：ウサギに対して免疫し，調製したマ

ヒト胎盤NGFの分離精製：凍結保有した

ウス顎下腹βNGF抗血清をマウス

7S NGF

ヒト胎盤を冷生理食塩水でよく洗音争し，充分−Sepharose

脱血したのち細断し，さらに冷生理食塩水での方法6）に従ってマウスβNGF特異抗体を洗浄する．冷水中でWaring blenderにより精製した．抗体をポリスチレンチューブに披

破砕（20％W／V）し，10NNaOHでpH13に覆し，順次1）NGFを含む試料（24時間インキ調整したのち再破砕する．30，000gで10分間ュベート），2）試料を除き洗浄，3）125ⅠβNGF

遠心し，上清を酢酸でpH3．8とする．生じるを加える（18時間インキュべ−ト），4）125Ⅰ

沈でん物を30，000gで30分間遠心して除く．

βNGF液を除き洗浄後チューブに残った
125Ⅰ放射活性を測定した．

次に上清を4N NaOHでpH5．0に調整し，4Bカラムに通し，Stoeckelら＊京都大学薬学部生物化学講座

結果と考察＊＊国立武蔵療養所神経センター

ヒト胎盤NGFの分離精製：方法で述べた−193−

ごとく胎盤からNGFの抽出操作を行ったのムクロマトグラフィーによって得られた標品

ち，透析後の遠心上清を0．05M sodiumace−

は分子量約160，000のタンパク質であり，tate buffer，pH5．0で緩衝化したCM52cell−pH7．5でのポリアクリルアミドゲル電気泳動

uloseカラムに通し，同じbufferでよくカラでほぼ単一なバンドを示したがpH2．3でのムを洗浄したのち0．25M，1．OMNaClを含む

同電気泳動ではいくつかのバンドに解散した．

同じbufferで順次StepWiseに溶出した．ほそこでpH2．3での電気泳動後ケリレをスライ

とんどのNGF活性は0．25M NaCl溶出画分

スし，タンパク質を抽出したのちマウスに見出されたのでこの画分を圧力透析で濃縮

βNGF特異抗体を用いた固相RIA法によりし，0．05M sodium acetatebufferに対して

マウスβNGFとの免疫学的交叉活性を調べ透析した．同じbufferで緩衝化した新たなCM52celluloseカラムに透析試料を通し，は上がマウスβNGF，下がヒト胎盤Sepha−

た．図2にその結果を示すがゲル電気泳動像

同bufferでカラムを洗浄後，同緩衝液と1．O

Cryl S−300画分である．免疫学的交叉活性

MNaClを含む同緩徳液とによる塩濃度勾配

はゲル上端とケリレ内のバンドとにみられ，ゲi容出を行った．その結果を図1Aに示す．斜ル内へ泳動された免疫交叉活性をもつバンド

線部の画分が最も高い希釈度でNGF活性陽はマウスβNGF様のサブユニットと考えら性を示したので集めて濃縮し，Sephacryl S

れた．そこでpH2．3での調製用ディスクケリレ−300カラムによるケリレ濾過を行った（図1

電気泳動によりサブユニットの分艶を行った．

B）．溶出は0．1MNaClを含む0．05Msodium

i容出パターンは図1Cに示す．斜線部を圧力

phosphatebufferpH7．2で行い，斜線部に最透析により濃縮した．この調製用ディスク画も強いNGF活性を認めた．以上3種のカラ分はpH2．3でのポリアクリルアミドゲル電

3

弼
M

2

EU Oの〜 ︼巾 むUU勺一LOS一く

M

匡＝

A：Rechromatography of the fractionwith NGF activity
ObtainedbyCM52ccllulosechromatographyonacolum
OfCM52cellulose．Asolutionof650mgofthefraction
With NGF activity obtained by CM

52

cellulose

Chromatography was applied to a column（2．0×20cm）

of CM52cellulose equilibrated with O．05M sodium
acetatebuffer pH5．0．The columnwaselutedbythe
gradient（一一一）．FractionsoflOmleachwerecollected

at aflow rate of50ml／hr．Thefractionsindicatedby
the shaded area were pooledand concentrated，

一194−

Tuk恥．

図日B：Gelfiltrationofthe NGFfractionobtainedbyCM52
cellulose re・Chromatography on a Sephacryl S−300
column．A solution of the concentrated fraction withNGFactivityobtainedbyCM52cellulosewasapplied
toacolumn（2．5×110cm）ofSephacrylS−300equilibrated

WithO．05Msodiumphosphatebuffer，pH7．2containing
O．1M NaCl and eluted with the same buffer at20ml／
hr．Fractionsof2mleachwerecollectedandtheeluate
monitoredat280nm．Thefractionsrepresentedbytheshaded area were pooled and concentrated．

EU OQN一巾 qUU巾ムLOぷく

区＝C：Preparativepolyacrylamidediscgelelectrophoresisof
thefractionwithNGFactivityobtainedbySephacryl
S・300gelfiltration．A solution of the concentrated
fractionwithNGFactivityobtainedbySephacrylS・300
gelfiltrationwasappliedtothediscgel・Electrophoresis
wasperformedusingtriS−glycinebuffersystemat20mA・
Fractions oflOml each were collected at aflow rate
oflOOml／hr．Thefractionsindicatedbytheshadedarea
were pooled and concentrated．

一195−

気泳動で単一バンドを示した．以降この画分めたのが表1である．

をヒト胎盤NGFと呼ぶ．以上の精製をまと以上のような方法で著者らが得たヒト胎鮒

Mouse

β

NCF

［A］

Human Placen【aドCF Fracti（，n0亡○叫︼叫q一二ul

B

JuUUhコd

0

10

図2

20

30

DistributionoftheNGF−likeimmunoreactivity ofthe
fractionobtained bySephacrylS−300gel filtration
inthegelafterpolyacrylamidediscgelelectrophoresis
at pH2．3．

表1Summary ofthepurification ofhumanplacenta NGF
Yield（mg protejn ）血10Unt requjred formaxjmum response（〃
g PrOtein／ml ）Supernatant
at 30，
000g
at pH 5．
0

2，
500

1，
000−
3，
000

First CM52
Ce11ulose
fractjon

713

60＿
600

Second CM52
ceH ulosd
fractjon

49．
6

0．
05−
0．
5

Sephacryl S−300
fractjon

0．01−0．3

Preparative
disc gelfractjon

0．005−0．01−196−

NGFはいくつかの点でマウス顎下腹βNGF

Cpn

やGoldsteinら7）が報告したヒト胎盤βNGFとは異なっている．分子量はSDSポリアク
リルアミドゲル電気泳動法で約70，000であり，

lOOO

800

マウスβNGFの13，500，およびヒト胎盤
βNGFの15，000よりはかなり分子量が大き600

い．また等電点は約pH5．0でありマウス
βNGFが塩基性タンパクであることと著しい相違がある．一方，著者らが得た胎盤NGFの生物活性は約10mg／mlで最大の神経線維増生活性を示しマウスβNGFと同程度であったが神経線経の増生密度はマウスβNGF
0より低かった．

20

40

60
Tube No．

以上の結果より著者らが得た胎盤NGFは

図3

ElutionpatternS Of［125Ⅰ］βNGF（ヨマウスβNGF抗体と部分的に免疫交叉性を示す．（診知覚神経節に対し神経線維増生活

inthepresenceorabsenceofhuman性が認められる．これらの点でマウスβNGF−6B．Normalhumanserum（320JLl）

類似の構造を分子内にもつものと推定してい

WaSmixedwith［125I］βNGF

るが，最大の神経線維増生密度がマウス（12，000cpm）andincubated forseve−βNGFより低いこと，分子量が大きいことな

ral hr at room temperature．The

sera on a column of Sepharose CL

incubationmixturewasthenapplied

どから活性型NGFの前駆体である可能性も

toa column of Sepharose CL−6Bあると考えている．現在，さらにタンパク化（0．5×105cm）equilibratedwithO．05M

学的検討を加えるとともにウサギに対して免phosphatebuffer，pH6．8，andeluted

疫し，特異抗体を調製中である．RIA系が確

by the same buffer．In a separate

立すればヒト筋ジストロフィー症患者血清中

experiment，400JLl of O．05M phos・のNGFレベルを測定し，本症とNGFとの

phatebuffer，pH6．8，COntainingO．5％

関連性を調べる予定である．

bovineserumalbuminand［125I］βNGF（10，000cpm）wasappliedtothe

ヒト血清中のNGF分子の存在形態：ヒト

Same COlumn equilibrated with

血清中にはNGF様物質が存在することはす

O．05M phosphate buffer，pH6．8．

でに神経節培養法で確認されているが微量であるためいまだ正確な濃度，分子量等は不明

Fractions of l．2

ml each werecollected．Solidline

indicates theである．RIA系を開発し，ヒトNGFの定量

distribution of radioactivityin the

法を確立するためには血清中のNGF分子のpresence ofserum anddashedline

性質を知る必要がある．著者らはマウス

indicatesin the absence of serum．

βNGFとヒトNGFが部分的に免疫学的交叉性を示すことを利用し，すでに開発したマすることである．図3に示すようにヒト血清

ウスβNGFの国相RIA系を用い，ヒト血清と125ⅠマウスβNGFをあらかじめインキュ

中のNGFがどのような存在形態をもつかをベートしてゲル濾過すると高分子量領域調べた．

に125ⅠβNGFとは異なる放射活性が溶出さ最も重要な問題は血清中にa2maCr0−

れる．著者らは125ⅠβNGFを結合する物質

globulinと推定されるNGF結合物質が存在が内因性のヒト血中NGF分子を結合してい一197−

るかどうかが重要と考え，いくつかの条件をにのみ単一ピークがみられたが，図4Bに示検討した結果，pHlO近傍条件下では125Ⅰ

すアルカリ条件下ではこのピークの他に分子βNGFと高分子量結合物の相互作用が低い

量10，000−20，000の新たなピークが出現した．

ことを見出した．そこでヒト血清10mlを0．05

この新たなピークは鶴maCrOglobulinと思M Tris−HCl buffer pH7．4で緩衝化した

われるNGF結合物質に結合されていた内因Sephadex G−150にてゲル濾過し溶出液を25

性NGFがアルカリ条件下で解散したものとmlずつ集めて濃縮し，各画分ごとに固相考えられる．以上のごとくヒト血清NGFはRIAを行った（図4A）．次に同量のヒト血清

かなりの割合で高分子量結合物質と結合したを0．05MTrispHlOに対して透析し，同条件状態で存在することが強く示唆された．しかに平衡化したSephadexG−150でゲル濾過しも結合状態のNGFは抗体との反応が低下すた．同様に25mlずつ溶出液を濃縮し，固相ることも示唆された．これらの事実はヒト

RIAを行った（図4B）．図4Aで示すよう

NGFのRIA系を確立する上できわめて重に中性条件では分子量30，000〜50，000の領J或要な知見と考えられる．
図4A：Gelfiltration ofhumanSerum On
a column of Sephadex G−150at
neutralcondition．NormalhumanSerum（10ml）was applied to a0︵喜コ冨︼とぎ︶ lJ・hU乙COlumn of Sephadex G−150（3．2×40 cm）equilibrated with O．05M
Tris−HClbuffer，pH7．4，and moni−
tored at 280 nm（solidline）．
Fractions of 5 ml each wereCOllected．Eluates（25ml each）
Were pOOled andconcentrated to

20

40

60

l．O ml by pressure dialysis．The
COnCentrateS Were meaSured for80

Tl止e No．

the NGF−LIbysolid−phaseradio−
immunoassaysystem（dashedline）．
B：Gelfiltration ofhumanserumOn
a column of Sephadex G−150at
alkaline condition．

NormalhumanSerum（10ml）wasapplied︵喜 U己とぎ︶コ・誌名

toacolumnofSephadexG−150（3．
2×40cm）equilibratedwithO．05M
Tris，pHlO．3，and monitored at
280nm（solidline）．Fractionsof
5mleachwerecollected．Eluates（25

ml each）was pooled and

COnCentratedtol．Omlbypressure
20

40

60

dialysis．Each concentrate was80

Tube Ho．

measuredfortheNGF−LIbysolid
phase radioimmunoassay system（dashedline）．
−198−

文

献

DystrophicMice．Biochem．Biophys．Res・
Commun．，90：130，1979．

1）Murphy，R．AリSaide，J．D．，Blanchard，

M．H．＆

5）古川昭栄，大井長和，井村裕夫，林恭三：Young，M．：Molecular Pro・

perties of the Nerve Growth Factor

ヒト胎盤中の神経成長促進因子（Nerve

Secreted

GrowthFactor）様物質の存在．医学のあinMouse Saliva．Proc．Natl．

ゆみ，110：594，1979．

Acad．Sci．USA，74：2672，1977．
2）Furukawa，S．，Nishitani，H．＆Hayashi，

6）Stoekel，K．，Gagnon，C．，Groff，G．＆K．：Level of the Nerve Growth Factor

Thoenen，H．：PurifiCation of Nerve

Activityin the Submaxillary Glands ofGrowth Factor Antibodies by A氏nity

Genetically Dystrophic Mouse（C57BL／

Chromatography．J．Neurochem．，26：

63）．Biochem．Biophys．Res．Commun．，

1207，1976．

7）Goldstein，L．D．，Reynolds，C．P．＆Perez

76：1202，1977．

3）古川昭栄，西谷裕，林恭三：筋ジストロフ−Polo，J．R．：Isolation ofHumanNerveィーマウス顎下腹中の神経成長促進因子

GrOWth Factor from Placental Tissue．
Neurochem．Res．，3：175，1978．

（Nerve Growth Factor）の活性レベル．
医学のあゆみ，109：143，1979．

8）Ronne，H．，Anundi，H．，Rask，L．＆4）Furukawa，S．，Ohi，T．，Imura，H．＆Peterson，P．A．：Nerve Growth Factor

Hayashi，K．：Level of Nerve Growth

Binds to Serum Alpha−2−MacroglobuT

Factor−1ikeImmunoreactivity

lin．Biochem．Biophys．Res．Commun．．

in

the

Lower Limb Muscles of Muscular

87：330．1979．

−199−41）先天性ミオパテーとトリプトファン
代謝異常

＊

幸 三 苗

＊
＊

健 香

日

＊

も同経路上のそれぞれ異なった代謝障害所見

下

吉

＊

類縁のいくつかの特殊な先天性ミオバナーに

田

平

＊

和

＊

トリプトファンーキヌレニン経路の代謝異常
所見のあることを見出した1）．その後，これと

良

＊

＊

央 学 也 夫

克

三

通

田

臣

＊

好

吉

子

尚

村

詫

人

束

井

川

仁

和

山

川

間

晴

山

片

＊

平

亀

症例1．M．T．17歳

私たちは，さきに，ネマリンミオバナーに

男性

主要所見は，多発性関節拘縮，脊柱側攣，
四肢躯幹の筋萎縮と筋力低下．
両親に近親婚なく，家系内に類似症状を呈するものはない．胎生期母親に異常はなかったが，胎動は第36週と遅く，甜子分娩．生下時，右斜頸，両側股関節脱臼と両膝・両手指関節の拘縞を認めた．処女歩行，3歳．以後，脊柱側攣が出現し，次第に高度となった．

のあることを知った2）3）．本文では，さらに新たに加えた，いわゆるArthrogryposismulti−
plexcongenita（AMC）と思われる2家系2症例に認めた同代謝異常所見についてのべ，

17歳入院時，身長147．5cm，体重33kg．知能正常．高口蓋，異状指，胸椎部の高度の側攣（Cobb法で120つ，両側膝関節，手指関節の関節拘絹を認めた．全身性びまん性の筋萎縮と筋力低下を認めた．筋緊張は正常．上肢挙上，起立可能．歩行は披行を行う．腱反射正常，病的反射なし．知覚障害なし．
CK活性値9．6単位．筋電図異常所見なし．
筋組織像は右排腹筋生検組織で筋線経の軽度の萎縮と著明なタイプⅠⅠ線維優位を認めた．
症例2 Y．U．14歳 女性

併せて，これまでにえてきた成績を総括して
のべる．
対象と方法
対象はいわゆるAMC2家系2症例とその家系月である．また，種々の神経・筋疾患についても検索した．
トリプトファン代謝の検索法は，L−トリ
70トファン100mg／kg（ただし，体重50kg以上は5g）を経口負荷し，その後の24時間尿中のkynurenicacid（KA）とⅩanthumicacid

主要所見は脊柱側攣，多発性関節拘縮，四肢・躯幹筋の筋萎縮と筋力低下．
両親に近親婚なく，家系内に類似疾患なし．
胎動正常．満期正常分娩．生後3カ月時，両側股関節脱臼に気付かれた．処女歩行は1歳（XA）をSatoh−Price法によって測定し
た．
成

野

正

冒

木
八

中

研究協力者

績

1．AMCに認めたトリプトファン代謝異常1）症 例

2カ月．以後，脊柱側撃が出現，増強した．
14歳入院時，身長133．6cm，体重28kg．知能は正常．高口蓋，高度の胸椎右側攣（Cobb＊徳島大学医学部第一内科−200−

法70つ，両側肘関節，両側股関節の拘縮，両側とやはりKAの排出増加とⅩAの軽度排出に尖足を認め，躯幹，四肢還位に強い筋萎縮増加を認めた．母（一見健常）は未検索であを認めた．上肢挙上は屑の高さまで可能．歩るが，母方祖母（一見健骨）はKA7．4，ⅩA0．9とKAの排出増加を認めた．父（健常）は行は肢行を行う．

KA4．5，ⅩAl．3FLmOles／kg／dayと正常イ直で筋電図は筋原性変化を示した．筋組織像では，広背筋の生検組織像で筋線経の大小不同，あった．

問質の増殖，高度の脂肪浸潤を認め，タイプ
0

Ⅰ線維優位とCOre様の構築異常を認めた．

5

10（八mOleytg／day）
15
20

Normal2）トリプトファン代謝
両例は尿中アミノ酸パターン正常．

AMC

図1，図2に，両例およびそれぞれの家系

T家発端者

月のL−トリプトファン経口負荷後の，同代父

謝産物であるKA，XAの1日尿中排出量を

母

示す．

U家発端者

健常対照におけるKA，ⅩAの排出量は

父

KA2．0〜5．0，XAO．7−2．OFLmOles／kg／day

母方祖母

であった．
症例1，T家では，病者はKA18．7，ⅩA2．4

DMDとKAの著明な排出増加とXAの軽度の排出増加を認めた．このⅩAの排出増加はビタ
ミンB6の投与によっても正常化しなかった．

SPMA
CMT

また，一見健常なその母にKAlO．8，XA1．3と回I AMCにおけるキヌレン酸（KA）・キサ
ンツレン酸（XA）尿中排出量

KAの排出増加を認めた，父はKA4・5，
XA1．0と正常値であった．

（L−トリプトファン100mg／kg負荷）

症例2，U家では，病者はKA11．7，XA2．7

U．家 家 系 図

T．家 家 系 図

⊂1 0
宙
図2

AMCの2家系
一201−

○

一見閏蕾
＋ トリプトファン代㍑異常
A M C＋ トリプトファン代濾1異常

のみの著明な増加を認めた．また，5家系と3）AMCの総括
いわゆるAMCの症例の中に，L−トリプ

もにそれぞれの母，そして1例では母方祖母

トファン負荷後，KAの著明な排出増加とにおいても，同様のKAの排出増加を認め

ⅩAの軽度増加を認める症例のあることを明た．父はともに正常値であった．

らかにした．このKAとⅩAの排出パターン（2）先天性筋線維タイプ不釣合2）3）から，本症では同経路上の3−HAオキシゲ

本症の1家系2症例（息子とその父）におナーゼの欠損ないし活性低下が推定される．

いて，KAlO．0，9．3，ⅩA3．7，2．2とKAの著明な増加とXAの軽度増加を認めた．この2．神経・筋疾患に認めたトリプトファン
代謝異常の総括（図3）

ⅩAの増加はビタミンB6の投与によっても（1）ネマリンミオパテー1）2）3）

正常化しなかった．
（3）AMC5）

本症の5家系の5病者では，トリプトファ
ン負荷後，KA8．0〜17．1，ⅩAl．3〜2．1とKA0

前述の如くであるが，本症におけるKA，

10

5（〟mOles／kg／da．y）
15
20

NormaI

Nemalinemyopathy

Congenitalfibertype
dysproportion
A M C

Hartnup−HkediseaseUnclassified
myOPathyD M D

Myotonic
dystrophy
C M T

S P M AW−H disease
Lipid storage
myopathy

図3 神経・筋疾患におけるKA，XA尿中排出量（L−トリプトファン100mg／kg負荷）−202−

ⅩAの排出パターンは，上記の先天性筋線維タイプ不釣合の場合とほぼ同じ所見であった．

レンド棚l←一二＝フlトリブト77り一一→柏臣≡壷ン／■■‥ノノ■￣′′′一トト。プ トフアンビロラーゼ（4）所属不詳のミオパテー（typeI筋線維萎縮）2）3）（Hartnup訝仙丘）
キヌレ二ナーゼ（VB6）

幼少よりの全身性筋萎縮，筋のこわばり感，lキヌレン駐（KA）TTキヌレニン（KYN）−⊥→アントラニ臓

頭部挙上障害，高口蓋を認めた56歳男性例．
本例では，KAlO．7，ⅩA22．8ととくにXAの著しい排出増加をみ，このⅩAはPALPの大量（300mg／day）投与により減少した．まキヌレニン・トランスアミナーせ（VB6）

匡サンツレンた（XA）区

キ又レニン

3一ヒドロキシラーゼ（ネマリン三才パテ一・）3−ヒドロキシ手ヌレニン（3H K）

一一一

幸ヌレニナーゼr V86）

た，同様所見が娘にも認められた．

（所属不詳のミオパチー）
3−ヒド口車シアントラこル臼（3−HA）（5）Hartnup類似症2）3）4）

3−HAオ車シゲナーぜ

知能障害，増悪と寛解を繰り返す小脳失調（先天性筋は糟不釣合．AMC）症，下肢筋萎縮，側攣症および尖足を認めた

lコンパウンド11／＼

兄弟例．本症では，トリプトファン負荷後のKAO．1−1．0，ⅩAO．2−0．7とKA，ⅩA両者の排出が異常低値であった．なお，両例とも，
L−トリプトファンの吸収と尿中排泄は正常であった．また，近親の両親にも同様所見を［主∃図4 トリプトファン代謝経路

認めた．
（6）その他の神経・筋疾患

現在までに検索した神経・筋疾患のうち，DMD，myOtOnicdystrophy，CMT，W−H

トリプトファンーキヌレニン経路の異常所見

病，SPMAなどの諸疾患には代謝異常所見をを認めたのはAMCを加え以下の5疾患に限認めなかった．

られており，同経路上の障害部位を各疾患それぞれのKA，ⅩAの排出パターンより，1．

総括と結論

ネマ1）ンミオバナーはKynurenine−3−Hy−

著者らは，さきに，ネマリンミオバナーにトリ70トファンーキヌレニン経路の代謝異常

droxylase異常，Ⅹ染色体優性遺伝．2．先天性筋線維タイプ不釣合とAMCは3−HA−

所見のあることをはじめて明らかにし，発表

0ⅩygenaSe異常，常染色体優性．3．所属不した1）．この成績より出発して，本症と類縁の詳のミオパテーはキヌレニナーゼのビタミン

いくつかの先天性ミオバナーにも，それぞれ

B6依存症．4．Hartnup類似の症例はfor一

若干異なる同経路の代謝異常所見のあること

mamidase欠損ないし活性低下症，常染色体を見出し，発表した1ト9．

劣性，と推定した（図4）．

本文では，まず，いわゆるAMC2家系2
病者に，L−トリプトファン経口負荷後24時

これらに対してDMD，CMT，W，H病，SPMAなどの諸疾患ではこの経路の代謝異

間尿中にKAの著明な排出増加とⅩAの軽常を思わせる所見は認められなかった．

度増加があることを明らかにした．そして，

すなわち，各種の神経・筋疾患のうち，ト

この排出パターンは，すでに発表したCOn一

リプトファンーキヌレニン経路の代謝異常のgenitalfibertypedysproportionにおける排存在が推定されるのは，現時点では，上記の出パターンと同じであることをのべた．また，

いわゆる特殊な先天性ミオパテ一に限られて両親では，1例では母に，他の1例では母（未おり，この経路の代謝異常はこれら疾患の本

検索）の母にKAの著明な排出増加を認めた．

態と何らかの関連があると思われる．

−203−

著者らの成績は，これらの先天性ミオバナ

仁，ほか：トリプトファン代謝異常からみーに特異な代謝異常の存在が，他に知られてるネマリンミオパテーと類縁ミオバナー．

いるところがない点で貴重である．

第76回日本内科学会講演会，昭和54年4月，
東京．

文

献

4）八木田正聖，平良章，中平晴仁，吉田健

1）三好和夫，八木田正聖，詫間通央，中平晴

三，三好和夫，ほか：トリ70トフアン代謝

仁，ほか：ネマリン・ミオパチーのトリプ異常を認めた小脳失調症−キヌレニンフォ

トファン代謝．文部省特定研究「難病」班，

ルムアミダーゼ欠損症と思われる1家系．

難病の発症機構に関する基礎的研究，昭和筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的52年度研究業績，1978，p．241−245．

研究（三好班）昭和54年度研究報告書，

2）八木田正聖，平良 章，中平晴仁，詫間通

1980，p．218−221．

央，三好和夫，ほか：ネマリンミオバナー

5）八木田正聖，中平晴仁，平良 章，三好和とその類縁疾患に認めたトリ70トファン代夫，ほか：Arthrogryposismultiplexcon−

謝異常．筋ジストロフィー症の病因に関す

genitaに認めたトリプトファン代謝異常．

る臨床的研究（三好］旺），昭和53年度研究報第25回H本人類遺伝学会総会，昭和55年11告書，1979，p．196−200．

月，仙台．

3）三好和夫，八木田正聖，平良 章，中平晴

ー204−42）筋クレアチナーゼに関する二，三の問題
名 取 靖 郎＊
研究協力者

韓

竣 杓＊

最近，三好らはヒト筋肉中にクレアチンをザルコシンと尿素に分解するクレアテナーゼ

し，遠心上清のクレアチン含量を測定したとが存在することを報告しl），さらにDuchenne

分子画分には見出されず，低分子画分のみに型筋ジストロフィーにおいては，このクレア見出された．

ころ，クレアチンはクレアテナーゼを含む高テナーゼの反応速度論的性質に変化が起っていることを示唆した2）．

考察

本研究は三好らの報告を追試し，クレアテ

本実験では三好らの方法に従い，ヒト筋肉ナーゼの性質について二，三の検討を加えた

中にクレアテナーゼ活性の存在を認めた．しものである．

かしながらクレアテナーゼの分子量に関しては三好らの言う50，000のピークの他に分子量実験材料と実験方法

25，000のピークが見出された．分子量50，000

Non−myOpathy患者より剖検時に骨格筋のピークが25，000の二量体であるか否かは今を採取し，5倍量の生理食塩水でポリトロン後の検討が必要である．

を用いホモジナイズしたものを18，000×g，
30分遠心した上清を生理食塩水で平衡化した
Sephadex G−150カラム（2．5×50cm）でゲル濾過した．
クレアテナーゼ活性は基質であるクレアチ
ンの減少で測定した．すなわち酵素液と基質とを0．1Mリン酸ナトリウム緩衝液中，37℃で反応させ，30分後に残存するクレアチンの量をdiacetylα−naphthol法で測定した．
実験成績
図1にSephadexG−150カラムによるクレアテナーゼ活性の溶出パターンを示した．2つの活性ピークが認められ，ひとつは分子量10約50，000，もうひとつは分子量約25，000の位
置に溶出した．

20

30

40

図1Elution profile of A28。−absorbing
material（proteins andlow・mOle−

各フラクション（8ml）に最終濃度5％にCular−Weight substances），Creatinase

なるようにトリタロロ酢酸を加えた後に遠心

activityandcreatineonSephadexGT
150

colurrn（2．5×50cm）filtration．

Eight ml fractions were collected．

＊徳島大学医学部栄養化学ー205−

また筋肉中に存在するクレアチンはケリレ濾

inhumanskeletalmuscle−Proposalfor

過の結果，低分子画分のみに見出され，筋組

creatinerurea pathway．Proc．Japan

織中でたん白質と結合することなく遊艶の状

Acad．，56B：95，1980．

態で存在するものと考えられる．

2）Miyoshi，K．，Taira，A．，Yoshida，K．，
Tamura，K．＆Uga，S．：Abnormalitiesof

文creatinaseinskeletalmuscleofpatients

献1）Miyoshi，K．，Taira，A．，Yoshida，K．，
Tamura，K．＆

with Duchenne muscular dystrophy．

Uga，S．：Presence ofCreatinase and sarcosine dehydrogenase

ー206−

Proc．JapanAcad．，56B：99，1980．

43）筋ジストロフィー症骨格筋におけるクレアチン代謝の異常

好 和 夫＊
＊

也 洋 浩

克

＊
＊

村 野 勢

伊

＊

＊

臣

川

八木田

西

井

田

今

＊

賀

＊

字

＊

＊

子

田

三 敏 三 聖＊次富健 茂 幸 正

＊

章

片

信 京 尚

三

良 橋 山 井平

研究協力者

私たちは，筋ジストロフィー症の病因究明

ついては頭部を除外した残りの部分のh0−のために，本症におけるクレアチン代謝の異mogenateを作成し，骨格筋homogenateと常に着目し，とくに，クレアチン分解経路のみなした．

研究を行ってきた．

実験には，一60℃で凍結保有した筋から

昭和53年度，昭和54年度において私たちは，

homogenateを作り，これを遠心分艶した上成人骨格筋中に，Creatinase活性とSarCO−

清を用いてgel濾過してえたfractionを資

Sine dehydrogenase活性のあるとの所見か料として使用した．

ら，Creatine−glycine（urea）pathwayのあ

方法はCreatinase活性を想定L Creatine

ることを提唱した．そしてDuchenne型筋ジの減少でみる方法によった．すなわち，資料

ストロフィー症（DMD）では，この代謝経路とCreatineの反応系で反応前後のCreatineの中のCreatinase活性の態度が健常成人骨量をdiacetyl

格筋中のそれと異なっているとして報告した．

の差を求めた．

αLnaphthol法で測定してそ本年度の報告では，その後の成績として人胎児とPMDの別の型，常染色体劣性末梢型

結筋ジストロフィー症（ARDMD）（三好ら，

果

1．人胎児および新生児筋における成績

1974）における成績をのべた．なお，本文で図1，32週胎児筋の成績を示した．ゲル濾はこれまでのCreatinaseの解釈に実験方法

過fractionの活性のピークは健常成人と同を考慮した若干の巾をもたせた．

じ位置に認められ，分子量は，健常成人のそれと同じく約50，000であった．

対象と方法

図2に，これらのfraction collectを用い

対象は，（1）健常成人（非筋疾患患者，22〜69て，反応速度に対する基質creatineの濃度効

歳，男性，女性），（2）人胎児（19，32過）およ果を示した．

び生後5ヶ月乳児，（3）ARDMD患者（31歳女

図のごとく，健常成人，胎児，乳児筋のいずれもhyperbolic curveを示した．

性，61歳男性）である．（1）〜（2）では剖検でえた骨格筋を，（3）では生検筋を資料として実験用いた筋資料中の蛋白量は健常成人0．8mg，に用いた．なお，19週胎児筋homogenateに19週胎児筋1．2mg，32週胎児筋1．6mgおよび＊徳島大学医学部第一内科

値は19週，32週胎児筋，生後5ヶ月乳児筋と，5ヶ月乳児筋1．5mgである．すなわち，活性−207−

低値から次第に増加して成人骨格筋の値に近すなわち，この活性の態度には成人骨格筋

づいている．

型のものに対して胎児型ともいうべきものが

図2右下方には，健常成人筋と19週胎児筋

存在することを思わせる．生後5ヶ月の乳児について，基質クレアチンに対する飽和曲線の両逆数プロット（Lineweaver−Burkプロ

では成人型と胎児型が混在しているがごとくである．

ット）を示してある．結果はいずれも直線を

2．筋ジストロフィー症ARDMDにおけ呈している．しかし，健常成人骨格筋ではKmる成績値が8．0×10￣5、Mであるのに対して，19過，32

ARDMD骨格筋では活性は，健常成人，

週胎児および号L児筋のKm値はそれぞれ，DMDのそれと同じく分子量は約50，000の3．8×10−4M，3．6×10￣4M，1．8×10￣4Mであfractionにみられた．

った．

図3に，その活性に対する基質creatinCのT三・〇＼p中日コ∽亡000uごdEU SだOEl

濃度効果の成績を示した．図では健常成人，DMD，ARDMDの成績を併せて示してある．
蛋白量は健常対照筋で0．8mg，DMD鹿で0．6
0．100

mg，ARDMD筋0．5mgである．

0．075

8．0×10−5Mのhyperboliccurveを示すのに対し，DMD筋，ARDMD筋ではCreatine浪図において，活性は健常成人筋ではKm値

度に対LSigmoidalcurveを示し，Vmaxの1／2の反応速度を与えるCreatine濃度は，0．050

DMD3．6×10￣4M，ARDMDで1．0×1073M

であった．
0．025

DMD皿SC−e／一一一●一一一一一一一一日一一1

40

80

160

240

ヽケ

．一一▲

′

／

／
／

Effluent YQlume（mi）／▲／ヽ／／ ARDMD muscle／／▲

normal controll

OC；dOLV︵ぎ■︼空だ︶

u一百〇の＼pO日n20V∪盲OM＼PU∈⊃SuOU山王；冨LO Sヱ0∈斗

図I Homogenate gelfiltrateの活性（胎児
骨格筋）

J
J

ご一・J

二、
′′DldD muscle

芸︻Odヽ

5

10

上州−】
8．S l．O l．5

2．0

Creatine concentrat10n（mM）

図2 胎児骨格筋中活性に対するcreatineの
濃度効果

図3

−208−

DMD，ARDMD骨格筋中活性に対する
creatineの濃度効果なお，同じ蛋白量でみると，DMDのVmax

異常ひいては本症の一次的pathogenesisには健常筋のそれの2．7倍，ARDMDでは健常筋の4倍以上であった．

関連することが考えられ興味深い．
本症の原因究明に対して，従来知られていなかった新しい分野に研究の道を開いたもの

考察と結論

と思う．

著者らははじめにのべたように，これまで，
人骨格筋中にCreatine一glycine（urea）path−文

献

wayのあることを提唱し，この代謝経路の中でCreatinase活性の態度がDMD筋では異1）三好和夫，平良 章，吉田健三，ほか：筋常であることをのべてきた．そして，さきの厚生省「神経疾患研究委託費」筋ジストロ

ジストロフィー症におけるクレアチン代謝．

報告では，このCreatinase活性の態度が人胎フィー症の病因に関する臨床的研究（三好児では胎児型ともいうべき性格を有し，また，
筋ジストロフィー症の別の型であるARD］旺），昭和53年度研究報告書，1979，p．

MDにおいては，さらに異なっていることについてのべた．

175．

2）三好和夫，平良章，吉田健三，ほか：

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）

ただし，筋ジストロフィー症において真ににおけるクレアチン代謝異常．厚生省「神Creatinaseの異常があるとすることは，本症

経疾患研究委託費」筋ジストロフィー症のの成因に関して極めて重要な意味を有するの病因に関する臨床的研究（三好珪），昭和54で，これらの成績の解釈には慎重を期したい．

年度研究報告書，1980，p．210．

すなわち，著者らの実験が精製酵素ではな

3）Miyoshi，K．，Taira，A．，Yoshida，K．，etal：

く Crudeな資料によっていること，また，Cre−

Abnormalities of creatinasein skeletal

atineの測定その他に呈色反応を用いている

muscle of patients with Duchenne

ことなどから，これまでCreatinaseとしてきたものはCreatinaseを含む類縁酵素ないし

musculardystrophy．Proc．JapanAcad．，
56B：99，1980．

蛋白質と幅をもたせておきたい．今後さらに実験を重ねて確認した上で詳細をのべたい．

4）三好和夫，岩朝勝，川井尚臣，ほか：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症Au−

本文では，骨格筋中におけるこの酵素ない

tosomalrecessivedistalmusculardystro−

し蛋白質について，健常筋では成人型の他にphy．わが国に特にみられる新しい末梢型

胎児型というべきものがあること，また，筋筋ジストロフィー症．日本臨床，35：3922，

ジストロフィー症の2つの型でそれぞれ異な1977．

っていることをのべた．本症のCreatine代謝−209−44）TIlyrOtOXic MyopathyのCreatihuriaの成因について植 田 啓 嗣＊
研究協力者

畑

中

良

野

島

元 雄＊＊ 中 田 俊 士＊＊春

甲状腺機能冗進症とともに，特に顕著に筋肉症状を示すものがthyrotoxic myopathyと呼ばれている．

夫＊

浜

口

知

昭＊＊

水を加えたものを基本食とし，これに該当濃度のCreatineを添加した．
3．Triiodothyronine（T3）の注射

甲状腺機能冗進の各種の徽候とともに，四T。（Sigma製）は，0．02％NaOHを含む生肢近位部に筋弱力を訴え，男性の中高年者に理食塩水でアルカリ性にした溶液に溶解させ，多く，通常著明なCreatinuriaを伴うが，血清

更に生理食塩水を附加して，50γ／mlの溶液

CPK値には上昇はみられない．

を作った．そして白鼠の皮下に50γ／100g体重

ここでそのCreatinuriaの発症機構に検討を加えてみた．

の割に注入した．また対照群には同浪度のNaOHを含む生理食塩水を同量皮下注射し
た．

方

法

4．測定喜式料の作製

1．被験動物

Creatinekinase（CPK）活性の測定には10

白鼠では体重110−130gのWister系の雄

倍容のTrisrHClbuffer50mM（pH7．4）

性白鼠を，家兎では体重3kgの雄性白兎をを，glycineamidinotransferase（GAT）活用いた．またマウスにはC57BL／6Jの雌雄マ
ウスを，更にヒトでは死後10時間目の骨肉腫性の測定には10倍容の1mMEDTA，0．15％
deoxycholateを含む100mMpotassiumphos−

患者の剖検試料を用いた．抜放動物はいずれ

phate buffer（pHも断頭屠殺して脱血させ，該当試料を求めた．
2．動物の飼育飼料の測定には20倍答の蒸留水を，またCreatine

上記動物の発育期には，市販の白鼠用並び組織をpotter homogenizerを用いて磨砕し7．4）を，arginase活性の定量には10倍答の蒸留水をそれぞれ加えてに家兎用の固形食（オリエンタル酵母株式会た．そしてその1×104rpm（8000×g），10分

社製）を用いた．

の遠沈上清を酵素源に使用した．

また被験動物の条件付けには，CaSein20．0

なお臓器摘出後，酵素活性測定までの操作％，dextrin55．9％，SuCrOSe15．0％，Cellulose

は総べて4℃に保持した．

1．0％，Vitaminmixturel．0％，Saltmixture

5．各種物質の測定

4．0％，Choline chloride O．1％，Oi12．0％にCPK活性は江橋法1）で，GAT活性はWal−
ker法2）で，そしてCreatine量はFolin法3）＊愛媛大学保健管理センターによった．またarginase活性はassay時の＊＊愛媛大学医学部整形外科

bufferをglycine−NaOH（1／80M．pH9．4）としたほかは，Schimke法4）を用いて測定した．

＊＊＊大手前病院（大阪）−210−

表l Therelationship between the contents ofcreatine andthe activities ofglycine amidinotransferasein tissues
TissuesCreatine＊

GlycineamidinotransferaseH（rat）（rabbit）（mouse）（human）

0
1
3
1

5

4

4
2

2

0

2

1

1

4

0

4

7

4

0

1

0

0

0

4

0

0

5

4

0

0

4
1

0．9

6

409

brain
6

3

2

6

9

0

6

7

skeletalmuscle11kidney2

patlCreaS

2

liver

1

heart

＊U：mg／100W．W．g．
＊＊U：umoles／hr／W．W．g．
Each valueis the average of three animals except human
being

結

果

Ⅰ各腋器中のCreatine濃度とGAT活性（表1）
白鼠の臓器を，脳，心臓，肝臓，膵臓，腎S聖一；こ∪＜架Uをuu1

臓，骨格筋と並べ，そのCreatine含量を測定したところ，Creatineは骨格筋，心臓，脳の順に多く含まれていた．そしてこのCreatine
含量とCPK活性とは臓器間分布の上で正の相関をとっていた5）．
しかし，GAT活性を測定してみると，Crea−

1

3

つ

7

9

tine含量やCPK活性の豊富な臓器では活性が低く，逆に乏しい膵臓や腎臓で高い活性が

図1Effectsofcreatineinthedietonthe
activities of glyclne amidino・検出された．
このような3着の各臓器への折り込まれ方

transferase ofkidneyの上で認められた特徴は，また家兎，マウス，

Male

rats

were

fed

−rat−
on

the

com一

ヒトなどでも認められ，そこには種属差は見mercialsolidfoodsincludingmeats，

出せなかった．

afterward，foods were replacedin

ⅠⅠ腎GAT活性にみられる生理的変動

tum from the solid foods to basal（1）腎GAT活性に及ぼす食餌中のCrea−tineの影響（図1）diet，frombasaldiettothebasaldiet

includingO．5％ofcreatine，andagain
to basal diet．Each valueis the

市販の固形食で飼育している白鼠を，基本

average ofthree animalS．
U：u mOles／hr／W．W．g．

食に変えると，腎臓のGAT活性は急増した．
しかし基本食に0．5％の濃度にCreatineを加えると，活性は逆に減少した．そしてまた基時点で順次3匹ずつ屠殺して測定している．

本食に転換すると増加した．
この実験には都合33匹の白鼠を使用し，各0印（図1）の値は総べて3匹の平均値であ

ー211−

る．

（2）絶食時のGAT活性とarginase活性

長させ，次いで水のみを与えて絶食期間を2（表2）日，4日と置くと，絶食4日目の体重は70g

白鼠を基本食で飼育して体重110gまで成（64％）に減少した．そしてその間の腎臓のGAT活性と，肝臓並びに腎臓のarginase活性を測定した．

表2 Effects of fasting on the activities。fglycine amidinotransferase and arginase

その結果は，腎のGAT活性は著明に減少￣rat−

Daysof Glycine
fasting amidino−

したが，arginase活性では肝臓，腎臓とも大ArginaseH

きな変化は認められなかった．また同時に筋蛋白の消耗に由来するであろうcreatinuria

transferase事（kidney）（kidney）（liver）

0．26

5
5

4

ⅡI T3投与白鼠の骨格筋CPK活性と腎GAT活性（図2）53．1が，さしたる増量は見出せなかった．

7

0．15

を期待し，尿中のCreatine量を測定してみた

0

11．9

2

0．18

6

0

22．9

＊U：umoles／hr／W．W．g．

白鼠を固形食で3−7日間飼育し，次いで＊＊U：Ⅹ102umoles／hr／W．W．g．
Each valueis the average ofthree animals

基本食群，0・25％creatine含有食群，0．5％

Creatine（−）inthe diet

椚曇5．エリくむ∈ゝ2日→

2

4

6

2

4

6

Creatine（＋）in the diet

Glycineamidino・transferase（kidney）
2

4

Days aftertheinJeCtion

図2 Effects ofT30n the activities of both the creatine kinase of
Skeletalmuscleandtheglycine amidinotransferase of kidney．
Maleratsweredividedintothreegroups・TheratsofAgroup
Werefedonbasaldiet，BgrouponbasaldietincludingO．25％
Ofcreatine，andCgrouponbasaldietincludingO．5％ofcreatine
foraboutoneweek・AfterwardFiftygammaofT3perlOOgof
body weightwere subcutaneuoslyinjectedto theratsofeachgroup every day．Withthediet described aboveineach．The
levelsbeforetheinjectionwereplacedasthevalueoflOO．Each
Circle shows the average of3・6animals．
−212−

creatine含有食群の3群に分けて，更に1週したがって関係臓器の臓器相関に乱れが起間飼育した．このようにして体重が120〜150gとなった白鼠に，T3（50γ／100g体重）を連れば，Creatinuriaがもたらされてくるものと想定される．

日注射し，その0日目，2日目，4日日，6

ところでCreatine（肉類）が経口摂取され日目に，それぞれ断頭屠殺した．そして腎た場合には，Creatineの生合成はどうなるの

GATと排腹筋CPK活性を測定した．

かであるが，いま白鼠を市販の固形食で飼育のCreatineの有無に関係なく，T3投与2日目

し，次いで基本食に転換すると，腎のGAT活性は漸次増量した．次いで食餌にCreatineをで約87％，4日目で約85％，そして6日目で添加すると減少し，またCreatineを除去する

その結果は，排腹筋のCPK活性は食餌中と増加した．市販の固形食で低値を示したの約60％と減少した．
しかし腎臓のGAT活性は，勿論食餌中のは，固形食の蛋白源に肉類が用いられている

creatineの濃度如何で活性値には大きな差異為である．creatineはin vitYVでは活性に何が現われた．この場合，T3注射開始時点の活らの影響も与えない．したがってこの成績は，性値を100と置いてみると，Creatineを含まな最終生成物であるCreatineが生合成系の初

い基本食投与下ではT。投与2日目で78％，4期の段階のGATにfeed backinhibitionを

日日で58％，6日目で26％と漸減したが，Cre−

かけて，生合成系を抑制するものと理解され

atine添加食投与群では，0．25％のCreatine

る．

添加群の2日目で112％，4日目で143％，6

次いで絶食の状態に置き，腎のGAT活性日目で120％と増加し，また0．5％のCreatineの動向を探ってみた．その結果は，絶食4日の添加群でも，その2日目で150％，4【】目で目で体重は64％に減少し，腎のGAT活性値

約200％，6日目で160％と増量が認められた・にも著明な低下が惹起された．絶食による筋肉の消耗により，筋肉組織より漏出したCre−考案

通常，成人男子の尿中にはCreatineは認め

atineが腎のGATにfeed backinhibition
をかけたものと想定される．

られない．たとえCreatineの摂取量が増え

しかしこの場合，GATの基質であるargi−

る，つまり多量の肉類を摂取してもCreati−
nuriaは起らないものである．しかしthyro−nineと生成物であるOrnithineは，また共に

toxic myopathyでは肉食を禁じても，尚そなっている（図3）ので，肝と腎のarginase

こに著明なCreatinuriaがみられる．そのた活性を同時測定してみたが，その値では両臓め，ここでその機構に検討を加えてみること器とも殆ど変化は認められなかった．つまりとした．

この成績は飢餓下においては直接生命維持に

urea cycle中のarginaseの基質や生成物にすなわち，まず白鼠の各臓器について，Cre−

必要なureacycle系は保持されているが，必atineの濃度とGAT活性を測定してみた．そ

要のないCreatineの合成系は簡単に抹殺さの結果は，Creatineを多く含む臓器ではれることを示している．

GAT活性が低く，Creatine含量の低い肢器

ここで白鼠にT3を投与して実験的なacu−

でGAT活性が高かった．またCreatine含量

te thyrotoxic myopathyを作り，筋肉中のとCPK活性値には正に相関がみられる5）．そCPK活性と腎のGAT活性を追跡してみた．

してこのような関係は家兎やマウスやヒトでその結果は，筋肉中のCPK活性は経目的もまた認められた．creatineを貯蔵する臓器に減少し，腎のGAT活性もまた低下した．そとそれを生合成する臓器とはいずれの動物での様相はさきの絶食白鼠と同様で，筋内のCPKが減少し，筋肉内に貯蔵されていたCre−も一致していない．

一213−

結

語

①白鼠，家鬼，マウス，ヒトの臓器でみた
ところ，Creatineの合成に与えるGAT活性の高い臓器程，Creatineを貯蔵するCPK活性は低く，逆にGAT活性の低い臓器程CPKS叫S聖七0分03

活性が高かった．このようにCreatineの合成
臓器と貯蔵臓器とは異なっているため，これらの関係臓器の臓器相関に乱れが起これば，そこにCreatinuriaがもたらされるものと想
定される．
l

G11

L・ne

am】d・nOlransfPraSe②食餌中にCreatineを添加したり，飢餓状l

態で筋量が減少すると，腎のGAT活性にはl Gu。n．d．。。a。eta．e
l l保th〉llra。如．a麗
し＿＿＿

＿＿

「￣■￣￣￣＿＿−＿＿￣￣￣■￣￣l■
一U瑚巴OJS−

Creatln〜pht，Sphat〜

●
一
■
■

l

﹂

L＿＿＿＿＿

図3 Metabolism of creatine

容易に低下が認められ，Creatineの生合成系に抑制がかかった．
しかしthyroid myopathyでは，筋の貯蔵能が低下しているにもかかわらず，腎のGAT活性は非合目的に反応しており，したがってそのCreatinuriaは，筋肉中のCreati−
neの貯蔵能の低下と相侯って，合成系の適応障害が一役を担っているものと想定される．

atineが漏出して，腎の合成系に抑制をかけたものと想定される．類似の見解は，乾燥甲状末を用いて，Fitchらもまた示している6）．

文献1）江橋節郎：Creatinephosphokinase．臨床

ところが，前以って食餌中にCreatineを混入

酵素学，朝倉書店，東京，1964，p．356．

させて，腎のGAT活性を低値においた白鼠

2）Walker，J．B．：Studiesonthemechanism

では，T3の投与により，腎のGAT活性には

Of action of kidney transamidinase．J．

逆に上昇がもたらされた．特に食餌内のCre−

Biol．Chem．，224：57，1957．

atine含量が高く，T3投与前のGAT活性が3）Folin，0．：Beitrag zur Chemie des

低値を示したもの程，上昇傾向は顕著であっKreatins und Kreatininsim Harne．Z．

た．この場合，筋肉中のCPK活性は，Creatine

Physiol．Chem．，41：223，1904．

を食餌内に混入させなかった白鼠と同程度の4）Schimke，R．T．：AdaptiveCharacteristics

減少を示しており，したがって腎のGAT活

Ofureacycleenzymesintherat．J．Biol．

性には当然抑制がかけられて然るべきであろ

Chem．，237：459，1962．

う．

5）植田啓嗣：ミオバナーとその遺伝，ミオバ

thyrotoxicmyopathyでは，腎のGATにナーの酵素化学的研究．第17回日本医学会

は非合目的な現象が起っている．すなわち肉

総会学術誌漬菜，Ⅳ：1044，1967．

食してもそこに含まれるCreatineは，吸収された後貯蔵もされず，生合成系に対しては抑6）Fitch，C．D．，Cecilia，H．：Some factors

制もかけず，そのまま尿中に排泄されるもの

inrats．J．Biol．Chem．，235：2362，1960．

と想定される．

−214−

affectingkidneytransamidinaseactivity45）ミオグロピン尿症の病態生化学的研究

宮

研究協力者

西

澤

正

正＊

武

矢

！tIl●
jll．

作

友

作＊

渥

美

哲

至＊

現象がみられる，などが挙げられる．

筋エネルギー代謝機構の障害によるミオグ
ロビン尿症でその病態が生化学的に明らかに体格は中等度で一般身体所見に異常はない．

されているものとしては，筋解糖系に異常の皮膚の創傷がケロイドになりやすい．神経学ある糖原病V型，VIl型，Lactic dehydr0−的所見には異常なく，筋の萎縮，肥大，脱力，

genase（LDH）M型サブユニット欠損症，長自発痛，庄痛を認めない．

銀脂肪酸のミトコンドリアへの転送機構に異検査所見では安静時においてもCPK

常のあるCarnitine palmityltransferase

356（MM型76％，正常＜80IU／1），アルドラ（CPT）欠壬員症が知られている．

ーゼ5．1と軽度高値を示したが，血算，電解最近，我々はこれらのいずれとも異なる新
しいタイプのミオグロビン尿症の一例を経験

質，肝，腎機能検査は正常で，糖負荷テスト，
甲状腺機能も正常であった．血菜トリグリセ

したので，その病態を解明すべく施行した生リド（TG），遊離脂肪酸（NEFA）も正常で化学的検討の結果を合わせて報告する．

あった．筋電図も正常所見を示した．
階段の昇降を限界まで継続させる運動負荷症

を加えるとCPK15420（MM型94％），アルド例

症例は20歳の男性で，家族歴，既往歴に特ラーゼ49．1，LDH1986（LDH19．4，LDH2

記すべきものはない．5歳頃から強い運動を

18．9，LDH。12．6，LDH45．0，LDH554．1％）

行なうとその部位の筋肉に腫脹，疫病，脱力と著しい高値を示し，同時に出現した色素尿を生じて運動を続けることができなくなり，中にミオグロビンが証明されて，本例がミオ

約1時間の休息によりすみやかに回復する．

グロビン尿症であることが確認された．階段

いわゆるCrampはおきていない．13歳の時，を一階昇る程度の運動でも筋の腫脹，う峯痛，運動後にはじめて脱力は生じないが，CPKは900前後の値まで

コーラ様の色素尿が出上昇した．

現した．その後も同様の色素尿が数回みられ

大腿四頭筋の筋生検像では筋線経の大小不たが，急性腎不全に至ったことはない．
上記の症状が誘発される場合の特徴として

同，少数の填死線経の散在など，軽度ながらは，（1）中程度の強さの運動を長時間続けるよ筋原性変化を認めるが，丘ber typeとの関連

りも短時間でも強い運動を行なう方が誘発さはなく，またグリコーゲン，脂肪顆粒の増加

れやすい，（2）季節，気温，湿度によらない，は認められなかった．電顕では正常組織中に（3）絶食など，食事の状態，内容に関連はない，

少数ながら筋原線経の崩壊像，小胞体の拡大（4）初回には症状が誘発される程度の強さの運がみられた．

動でもくり返しているうちに出現しにく くな

本ミオグロビン尿症の成因は発熱，阻血，る，（5）マラソンでいわゆるSeCOndwind様の

薬物，炎症等ではなく，筋エネルギー代謝機構の障害によるものと考えられたので，以下の生化学的検索を行なった．

＊自治医科大学神経内科

ー215−

方

法

筋解糖系の障害の有無を検討するため，まをみるisotope exchange法の2つの方法でず前腕阻血運動試験を施行して静脈乳酸倍を測定した．筋camitine含量はCarnitineace−

測定し，次いで生検筋homogenateのtyltransferaseを用いる酵素法により定量し10，000×g遠心の上清分画を用いて骨法によた．披検筋は先述したのと同様に採取後直ちり，解糖系の諸酵素活性を測定した．対照にに液体窒素中に入れ，測定まで−80℃に保有

は手術時に採取した腹直筋を用い，被検筋はした．

いずれも採取後直ちに液体窒素中に入れ，測定まで−80℃に保有した．

結

果

脂肪酸の代謝障害の可能性を検討するため

前腕阻血運動試験により筋強直は誘発されにはまず72時間の絶食試験を行ない，血奨ず，静脈の乳酸値は図1に示す通り，運動後

NEFA，TG，尿ケトン体を時間経過を追ってすみやかに前値の4倍となり，正常の上昇を測定し，5名の20歳男子正常者を正常群とし示した．

て比較検討した．

解糖系の酵素活性は表1に示す通りで，本血栄NEFAの脂肪酸組成の分析は以下の例のphosphorylase，phosphoglucomutase

ように行なった．血菜2mlを凍結乾燥した活性は正常イ直，phosphohexoseisomerase，

後クロロホルムーメタノール（2：1，答比）
にて仝月旨質を抽出し，得られた仝脂質からnLACTATE−ヘキサンーエチルエーテルー酢酸（90：10：

myd11，容比）を展開系とする薄層クロマトグラ

40

フィーにてNEFAを分証し，ついで2．5％塩
酸メタノールにて80℃で10時間メタノリシス

30を行ない脂肪酸メチルエステルを得た．これを15％DEGS on Gaschrome Q（100−12020mesh）1．0m，200℃のカラムに導入し，ガス
クロマトグラフィーにより分析した．

10

CPT活性は生検筋homogenateを酵素源
としてpalmitylcarnitineよりpalmitylCoA00の生成をみるHydroxamate法と，［3H］−
Carnitineのpalmitylcarnitineへの取り込み

510

図l 前腕阻血運動試験

表l 解糖系酵素活性
ENZYMES CoNTROLS（No．oF SUBJECTS）

PATIENT00

O．09±0．Oq（5）0（10000xg supernatantofmuscle homogenate）

−216−

l

Gjveninmjcromoles／min／叩Of protein！S・D・2

PHOSPHOFRUCTOKINASE O．77±0．13（5）

1

︐ ︑ ノ

2．51±0．L17（5）︐ ヽ ノPHOSPHOHEXOSElSOMERASE

8

PHOSPHOGLUCOMUTASE︹ ノ0

O．55±0．06（q）

2

PHOSPHORYLASE

phosphofructokinase活性は正常対照よりもの上昇は正常群よりもやや低値であった．
NEFAの脂肪酸組成の絶食による変動を，主軽度高値を示した．
72時間の絶食試験では図2に示す通り，本

要な脂肪酸のみについて正常群と比較して図例のCPKは更に上昇はせず，ミオグロビン

3に示した．本例では正常群に比べて飽和の尿も誘発されなかった．尿中ケトン体，血菜C16：0，C18：0の構成比がやや高い傾向に

TGは正常に上昇した．しかし，血渠NEFA
●／●

40

30

20

10

0
●

50

JO

X）

か

CPK

10

URIMRY任丁釧E
つ
0

24

ん8

72

1℃URS OF FASTIMG

図3

図2 絶食試験
表2

NEFA脂肪酸組成の絶食による変動

CPT活性とcarnitine含量

ACTIVITYOF coNTROLS（No．oF
CARNITINE PALMITOYL TRANSFERASESUBJECTS）PATIENT

MuscLE HOMOGENATEHYDROXAMATE ASSAY．）

1．10±0．88（5）1．09±0．17］soTOPE EXCHANGE ASSAY．−）

5866±1277（5）5755

IsoTOPE EXCH州G【ASSAY MI

6979±1888（5）11067

CARNITINE CONTENTIN MUSこしE．．＊＊）

5．08±0．叫（う）

2．88

VBC HOMOGEMATE■）mmOmle50†productfor眠d／mjn／叩Of proteln！S・D・…）叩Ofp州toyH3H】carn…ne／抽1叫叩扉prote−n！S・0・…）叩Ofp州toyl【3日】…rn−…e／3伽叫叩Ofprotejn！S・D・●一日■◆）m†cromole〜／90fm■〜⊂1et S・D・

−217−

あり，またC18：1の上昇は正常群よりも明らかに低かった．
CPT活性は表2に示す通りで，2つの方法

されず，CPK，TGの著しい上昇もみられなかった．尿中ケトン体も正常に産生されたが，血渠NEFAの動月は正常群よりも低値であともに正常の活性を示した．また本例の白血った．そこでNEFAの脂肪酸組成を分析し球CPT活性はやや高値を示した．筋carni−

たが，CPTの基質となるC16：0，C18：0

tine含量は正常であった．

の組成比は正常群よりもむしろ高値の傾向にあり，C18：1の絶食による増加が本例では考案

対照よりも少なかった．C18：1の筋エネル

運動時の筋のエネルギー源としては丘ber
typeにもよるが，まず貯蔵されたATP，クレ

ギー代謝における役割は明らかでなく，この結果の意味は明らかにできなかった．

アチンリン酸が消費された後，グリコーゲン

取り込まれたNEFAがエネルギー源としの分解により，ついで肝より動月されたグルて用いられるためには，まずCoAと結合しコースから嫌気的解糖系により産生されたた後，このアシル化CoAがミトコンドリア

ATPが用いられる．更に運動を継続すると内膜の内外側に位置するCPT−Carnitine系

血中のNEFAを取り込み，ミトコンドリアの働きによりミトコンドリア内へ転送されなに転送してβ酸化によりアセテルCoAをつければならない．筋carnitine欠損症はそのくり，これよりTCA回路，電子伝達系を経て病態は明らかでないが，筋力低下を主徴とし産生されるATPが用いられるようになる．
今回経験した症例は，臨床症状は短時間のてミオグロビン尿を生ずることはなく，実際強い運動で誘発されること，矛色食によっては常であった．CPTは脂肪酸の鎖長により基質誘発されないこと，SeCOnd windがみられる

特異性を異にするCarnitine acyltransferase

ことなど，解糖系の代謝障害によるミオグロのうちで長鎖の脂肪酸を基質とする酵素で，ビン尿症にみられる特徴を多く備えてはいる

NEFAをエネルギー源として用いる場合にが，生検筋の組織像にてグリコーゲンの貯留は最も重要な役割を演ずる酵素であるが，こを認めず，また阻血運動試験により乳酸の産のCPTの活性も測定の結果本例では正常で生がすみやかに認められることから，解糖系あった．

の測定結果でも本例の筋camitine含量は正の大きな流れには障害はないものと考えられ以上の結果より，本症例は従来生化学的にた．更にKeyenzymeであるphosphorylase，

酵素異常が明らかにされているミオグロビン

phosphofructokinaseを含めて酵素活性を測尿症のいずれの病型とも異なる新しいタイプ

定した結果でも欠壬員はなく，ミオグロビン尿のミオグロビン尿症であると結論される．し症の原因疾患として知られている筋phosph−

かしながら，その病態を生化学的に解明する

Orylase欠損症（糖原病Ⅴ型）1），筋phosph−

までには至らなかった．

OfruCtOkinase欠損症（糖原病ⅥI型）2），また最近，西村らにより見出されたLDHM型サブ
ユニット欠損症はいずれも否定された．

文

献1）McArdle，B．：Myopathy due to a defect

次に脂肪酸代謝障害の可能性を考えて，まin muscle glycogen breakdown．Clin．

ず絶食によって筋がエネルギー源をNEFAのみに依存する状態をつくり，エネルギー代

Sci．，10：13，1951．
2）Tarui，S．，Okuno，G．，Ikura，Yりetal．：

謝を検討した．本例では72時間もの絶食を行

Phosphofructokinasedeficiencyinskele・

なってもDiMauroの報告するCPT欠損

talmuscle．A newtypeofglycogenosis．

症3）4）の症例と異なり，ミオグロビン尿は誘発

Biochem．Biophys．Res．Commun．，19：−218−4）DiMauro，S．：Metabolic myopathies．In

517，1965．

3）DiMauro，S．＆DiMauro，P．M．：Muscle

Handbookofclinicalneurology，

Carnitine palmityltransferase denciency（editedbyVinken，P．J．＆Bruyn，G．W．），

andmyoglobinuria．Science，182：929，

North−Holland，Amsterdam，1979，Vol．

1973．

41，p．175．

一219−46）ラジオイムノアッセイによる人ミオグロビンの
turnover

＊

臣

尚

井

1・・〃

幸

＊

井 野

今 西

＊

下

日

＊

郎 百
二
健 香

田

＊

増

勝 彰 夫

＊

一・不・

口

朝 藤 好

岩 近 三

研究協力者

私達は，さきに人ミオグロビン（Mb）のラ

また，同じく尿中Mbも測定した．なお，Mb

ジオイムノアッセイ（RIA）を開発し，これをの測定は当科開発のRIA（感度1ng／ml）を用いて各種筋，心筋疾患ならびに各種スポー用いた．

ツ時の血中ないし尿中Mb量や，その経時的成変動を明らかにしてきた1）2）．

績1）臨床例における血中MbのTl／2

今回は，高Mb血症を伴う各種臨床例の血図1に各種疾患の代表例の血中Mb消失

中Mbの半減期についてのべ，加えて，健常
人VOlunteerならびに腎，肝，筋疾患患者などにMbを負荷し血中の半減期（Tl／2）を研究した成績をのべる．これによって人体におけるMbの代謝分解過程を明らかにしたい．
対象と方法
対象は当科にて経時的に血中Mbの検索を行った悪性高熱5例，急性心筋梗塞5例，
LDH−M型欠損症1例，スポーツ（野球，長距馳競走）11例の高Mb血症を伴う臨床例であり，これら症例の血中MbのTl／2を求めた．また，別に健常人VOlunteer2例，腎機能不全4例，肝硬変2例，Duchenne型筋ジスト
ロフィー症（DMD）2例，筋緊張性ジストロ
フィー症2例，神経原性筋萎縮症2例などに自製の人Mbを静注（10mg／60kg）し，経時的（Mb静注後5，10，20，30，40，60分と2，4，6，12，24時間）に採血し，血中Mbの測定を行い，血中MbのTl／2を算出した．

0回l＊徳島大学医学部第一内科

−220−

5

tO

15

20

25

30

著明なMb血症を伴う各種疾患およびスポーツにおける血中Mbの消失曲線

表l 臨床例ならびにスポーツにおける血中Mbの半減期（Tl／2）
検 索例

悪 性 高熱心 筋梗 塞症 例 N o．

T l ／2

1

9 時 間 0 0分

1

13 時 間 3 0 分

2

8 時 間 30 分

2

13

／
／ 30 ／／

3

7 時 間 00 分

3

13

7／ 3 0 JJ

4

6

7／ 0 0 ／
／

4

13

／
J O O J／55

〝 00 〝

5

13〝 00 〝

4／／ 20 〝

検 索例

野症 例 N o．

球

T l／2

1

9

JJ

30 〝

6

2

8

JJ

50 ／
／

1

5

〝 30 〝

3

6

J／ 0 0 ／／2

5

7／ 3 0 ／／4

5〝 00 ／／

3

5〝 20 ／／

5

4〝 0 0 J／

4

5

〝 lO 〝

4

J／ 1 0 ／／5

4〝 40 〝

L D H −M 型 欠損症

長 距離競 走曲線と，それぞれのTl／2を示した．Mb量はの関係は明らかでなかった．すなわち，悪性

対数目盛で示してある．

高熱のごとくMbの著しく高い（1×104

LDH−M型欠損症（浜松医大，西村らの症−1×105ng／ml）ものもスポーツなどの比較

例で依頼を受けてMbを測定した．）はische−micforearmexercisetestを行ったときの成的低い（5×10−1×103ng／ml）ものもT

績であるが，本例では血清Mb倍は初め球あるいは心筋梗塞例でMb値が比較的低
く，Tl／2の長い例もみられた．

2，4×104ng／mlと著しく高値を示した．Tl／2

l／2に大差がみられなかった．しかし中には野は4時間10分である．悪性高熱例でも，血中

3）Mb負荷による健常人ならびに臨床例のMbは初め2．4×104ng／mlと高値であり，T

Tl／2

l／2は9時間となっている．心筋梗塞例は6時（1）健常人VOlunteerのTl／2間，さらに，野球，長足巨艶競走ではそれぞれ

億常人2例のTl／2はそれぞれ3時間30分，4時間20分，5時間20分であった．

3時間20分であった．

表1に臨床例ならびにスポーツにおける健常人1例の血中Mb消失曲線を図2にTl／2の成績をまとめて示した．すなわち，悪示した．図に示すようにMbの消失曲線は二性高熱では，5時間〜9時間であり（平均7つのカーフ●からなり，第1相のTl／2は15分，時間10分），心筋梗塞では4時間〜9時間30分

第2相は3時間20分である．

（平均6時間40分）であり，LDH−M型欠損症では4時間10分，野球では4時間20分〜13（2）特殊疾患例のTl／2
腎機能不全4例では3時間30分〜5時間で時間30分（平均11時間50分），また，長足巨雛競あり，2例に延長がみられた．肝硬変2例で走（14km）では4時間40分〜5時間30分（平は5時間，3時間50分と1例に延長がみられ

均5時間10分）であった．このように疾患なた．DMD2例では8時間20分，6時間10分といし症例によってTl／2にかなりの幅がみら

共に著明に延長していた．筋緊張性ジストロ

れた．

フィー症2例では3時間55分，3時間10分であり，さらに神経原性筋萎縮症2例では3時2）臨床例におけるMbの初期濃度（最高値）とTl／2の相関
臨床例ならびに各種スポーツの血中Mbの初期浪度と半減期との関係をみたが，両者間40分，3時間50分であった．
表2に検索例の血中MbのTl／2を一括し
て示した．
−221−

ニー上＼du︶↓q三鞭8
56

図2 健常人の血中Mb消失曲線（M．Ⅰ．）

図3

表2 血中M他の半減期（Tl／2）
検

健

索

常

例

人

（v o lu n te e r ）腎機 能不 全肝硬変T l ／2

症 例

筋萎縮症
神柱原性

4
間くh）

トロフィー症
薪緊張性ジス

3
時

D M D

2

肝硬変

】

不全
腎機能

健常人

0

Mb負荷後の尿中排泄Mb量（24時間尿）線は健常人の1日Mb排泄量の上限である．

N O

第 1 相

第 2 相

図に示すごとく腎機能不全の1例を除いて

112分

3 時 間 30 分

MblOmg／60kg程度の負荷では尿中Mbの増

2

15 ／
／

3

〝 2 0 7／加は殆どみられなかった．

1

15 〝

5

〝 00 〝

2

20 ／
／

4

JJ

3

16 JJ

3

〝 55 〝

近年，本邦1）・2）ならびに欧米において人Mb

4

12 〝

3

〝 30 ／／のRIAが開発され，微量のMb測定が可能と

1

15 〝

5

〝 00 〝なり，これを用いて各種心筋疾患，神経・筋

2

15 〝

3

JJ

疾患，腎疾患などの血中，尿中Mbに関する

考

25 〝

50 〝

察

報告が多数みられるようになってきた．

1

14 〝

8

／
／ 2 0 7／

2

11 〝

6

〝 10 〝

MbのturnOVerに関する論文としては，

筋緊 張性 ジ ス

1

15 ／
／

3

／
／ 55 ／J

Amakoら3）の犬におけるものや，Koskelo

トロ フ ィー 症

2

14 ／
J

3

／
／ 10 ／／

ら4）のクジラのMbを健常人に静注した報告があるが，人Mbを用いた人についての成績

D uch enne 型

神 経 阻性■筋 萎 縮 症

1

16 ／
J

3

／
／ 40 ／
／

2

15 ／
／

3

JJ

はSylven（1978）5）の報告があるのみである．彼は125Ⅰ−Mbを人体に静注し，Tl／2を検50 ／／4）Mb負荷後の尿中排泄Mb量
図3にMb負荷後e）1日尿中排泄Mb量

索し，第2相は3時間20分であり，また，Mbを棒グラフで示した．なお6．6×103mgの横点の結論は尿中に標識Mbがみられないといは腎で分解されると述べている．しかし，彼ー222−

うことに基づくもので腎以外の臓器での分解

また，筋緊張性ジストロフィー症では，免は不明である．

疫グロブリンのturnoverが短縮しているが，今回の検索例ではMbのturnOVerの短縮は

私達は，まず，高Mb血症を伴う各種臨床例の血中MbのTl／2を検索し，ついで人に明らかでなかった．

おけるMbの代謝分解臓器をつきとめるた

Mb負荷例の尿中Mb排泄量（1日量）も検め各種疾患症例にMbを負荷（静注）Lturn−

索したが，殆ど増加をみなかった．すなわち，0Verを検索した．

人体では，今回用いた10mg／60kg程度の量の高Mb血症を伴う臨床例では，血中MbのMbは殆ど腎，肝，などで㌧代謝分解されるもの

Tl／2は短いものでは健常人のTl／2，3時間と考えられるが，加えて筋でも分解されてい30分前後に近く，これらの例はMbの筋からることも否定できない．Koskeloら4），Syl−の流出期間が短いと考えられる．しかし，多Ⅴen5）は尿中には放射能活性のみ認められ，くの例では延長がみられ，これは主として筋Mbとしては殆ど捉えられなかったと述べてからのMbの流出が持続的であることや，その他の要因によるものと考えられる．

いる．今回はまだ検索症例も少なく，今後症例を追加検索し，これら臓器の機能障害度とすなわち，野球の場合はMbの筋からのMbのturnoverとの関係，さらに人体におけleakの時間が著しく長いことが考えられ，まるMbの代謝分解過程をより詳細に検索した，心筋梗塞例では随伴性ショックが長いためかも知れない．

たい．
結なお，臨床例においてMbの初期濃度（最高値）とTl／2との相関をみたが明らかでなかった．

論

1）高Mb血症を伴った臨床例の血中MbのTl／2は短いものでは健常人のそれ（3時Mbを負荷した場合，健常人2例のTl／2は間30分前後）に近い値がえられた．しかし，それぞれ3時間20分，3時間30分であり，こ多くの例で延長しており，これは筋からのれらの値はSylvさnが12Ⅰ−Mbを静注してMbの童充出期間の持続や，その他の要因のた

えた成績，3時間20分に近似している．

めと考えられる．

Mbの分解臓器としては血菜アルブミンな

2）Mb負荷（10mg／60kg）時には腎不全，肝どにおける当教室の成績6〉などより腎，肝な障害ではTl／2が延長している例があり，Mb

どが考えられ，また，筋も考えられるので，これらの臓器の機能不全例のTl／2を検索しは腎，肝などで分解されることが推定される．

た．

leakによると思われるTl／2の著しい延長が腎機能不全では，4例中2例に延長例（5時間，4時間25分）がみられたが，これらはなお，DMDでは，主としてMbの筋からのあり，神経原性筋萎縮症では延長は明らかではなかった．

延長のない例に比べ腎機能障害が強い例であ文った．また，肝硬変でも延長例がみられた．
すなわち，人体で，Mbは腎，肝などで分解

献1）Miyoshi，K．，Saito，SリKawai，H．，Kondo，されることが推定される．

A．，Iwasa，M．，Hayashi，T，and Yagita，なお，DMD2例では，両例とも，8時間20

M．：Radioimmunoassay for human

分，6時間10分と健常人に比べ著明な延長がmyoglobin：methods and resultsin

みられ，これは筋からのMbのleakの増加

patientswithskeletalmuscleormyocar−

によるものと考えられるが，なお筋でも分解

dial disorders．J．Lab．Clin．Med．，92：

されることは否定できない．

341−352，1978．

−223−2）三好和夫，川井尚臣，岩朝 勝，近藤 彰，

Kinetic behavior of131I−labelled my0−

今井幸三，虫本光徳，八木田正聖：血液・globininhuman beings．Clin．Chim．

尿化学検査−その数値をどう読むか．ミActa，17：339−347，1967．

オグロビン（含・尿中）．日本臨林（春季増刊号），38：524−534，1980．

01dvolunteersandinpatientswithacute3）Amako，T．，Koga，J．，Kobayashi，A．，
Urakado，S．and

5）Sylven，C．：Thekineticsofmyoglobinin

Tokunaga，J．：Experi一

mentalinvestigation of the metabolism

myocardial

infarction．Scand．J．Clin．

Lab．Invest．，38：561−568，1978．
6）藤野

旭：血菜アルブミンの分解と腎．腎Ofmyoglobin．KyushuJ．Med．Sci．，14：

疾患臨床例についての研究成績．四国医誌，

277−287，1963．

22：150−167，1966．

4）Koskelo，P．，Kekki，M．and Wager，0．：一224−47）筋ジストロフィー鶏における筋ガングリオシド

の研究

−続報

首

研究協力者

正＊

武

渥 美 哲 至＊

有

賀

敏

夫＊＊

中

村

京

イ・＝

ウサギ脱神経筋1），ジストロフィー マウス

イーで個々のガングリオシドに分離し，ガス

筋2），ビタミンE欠乏による実験的ジストロ

クロマトグラフィーにより，おのおのの糖組

フィーウサギ筋3）などで，筋組織ガングリオ成を同定した．

シドに変化のあることが報告されている．又2

最近，細胞融合に際してガングリオシドに変筋ジス鶏筋組織のガングリオシド分析

材料は，筋ジス鶏（line413）10羽および対化のあることも報告されている．

照鶏（line412）10羽の前胸筋各々3gを用い著者らは，昨年まで，鶏筋ガングリオシド

た．筋をホモゲナイズし，Andoら6）の方法ににはGM3，GD3および未知のガング1）オン

従って粗カ∵／グリオシドを得，薄層クロマト

ドが存在し，筋ジストロフィー鶏では，総ガグラフィーを行ない，個々のガングリオシド

ングリオシドの増加，特にGM3ガングリオ

を分艶し，島津2波長クロマトスキャナーをシドの増加のあることを報告してきた4）．又用いて定量した．

最近，Chien and Hoganにより鶏筋ガング
リオシドについて報告がなされた5）．著者ら

結は前回明らかにし得なかった鶏筋における未1

果白色レグホン鶏筋30kgより抽出し単知のガングリオシドの構造をさらに詳細に解離した5ヶのpure gangliocide A，B，C，

析し，筋ジス鶏ガングリオシドと対照の差について再検討を行なった．

DおよびEの薄層クロマトグラムは図1の如くである．左は中性溶媒，右はアルカリ溶媒の薄層所見である．各々のガングリオシド

材料と方法
1

鶏筋組織ガングリオシドの構造解析

白色レグホン筋30kgを用いて，クロロホル
ムメタノール（1：1答比）および（1：2
容比）により絵脂質を抽出し，DEAE Se−
phadex column chromatographyを行ない，
neutrallipidとacidiclipidに分け，aCidic
lipid分画をアルカリ水解によりガングリオシドを得た．さらにDEAE Sephadex

COlumn chromatographyを行なって精製ガン
グリオシドを得たのち，薄層クロマトグラフ

ぎ

2

3

∫t

￡

C D E j3Å

はブC主ミCエ3消色OH三0．22号CaC12・2日20

業

も：

1こ

い＝■

▲■

こ

る0：奄D：如上：4￣㍉∴∴、三＼−∴トて￣三

詩も芋、ミ

上．N￣、一∴nlt、：L L†tlL￣・hLl二・二r〜l二、こltt

tsく71歳乞edく：還れgiまQSまd竜18

g又−0泊ehまCken muだde

図l Isolated gangliosides
一225一

盲三

∴−！こiI∴1、トー」と→、，こ1【−■lm・−t−1rt・し・＼「レ1−−！ll蔓

A，顎，Cナ＊＊都立臨床医学総合研究所中間代謝部門

盲〉

55：45：10

ほ；ciiC13；拘eOを呈：SH廿が昆薫OH：⊇亀CaCユヨ：壬…20）こ：■・、こ．11∴・＿llり∴二・￣く、JL、ト＊自治医科大学神経内科

2

表l Sugarcompositionofisolated gangliosides
A

B

C

D

Glucose

1．00

1．00

1．00

1．00

Galactose

1．03

0．88

1．13

3．06

N−aCety191ucosamine

0

0

0

1．93

N−aCetylneuraminic acid

1．06

1．87

2．96

1．21

（Holar ratlo）の移動度をみると，AおよびBは，GM3およ

グラフイーの所見は図2に示すごとくであっびGD。ガングリオシドのRfと一致する．C，た．
アルカリ溶媒と中性溶媒の両者の薄層の結DおよびEガングリオシドは，いずれも既知
ガスクロマトグラフィーによる各々のカ∵／グ

果，前述のA，B，C，DおよびEの5つのガ
ングリオシドの他にさらにFおよびGの2のガングリオシドとは一致しないRfを示す．
リオシドの糖組成は，表1の如くであった．

ヶのガングリオシドを認めた．Fガングリオ

Eガングリオシドは微量のため解析できなか

シドのRfは，ヒト赤血球に含まれるシアリった．A，BおよびCガングリオシドのシア

ルパラグロポンドのRfと一致していた．G

リダーゼ処理および，GC−CI−Massによるガングリオシドはアルカリ溶媒では，C，Dとシァル酸のpermethylationstudyの結果，A重なるが，中性溶媒では分線している．このおよびBガングリオシドの構造はそれぞれ，

FとGガング））オシドの構造は，Chien andGM3およびGD3ガングリオシドであり既報

Hoganにより報告されている構造のうち，Fと同じであった．CガングリオシドははSialylparaglobosideであり，Gは表の如きNANA−α（2−8）NANAα（2−8）NANA

構造に対応するものと考えられた（表2）．
これらの各bandを島津2波長クロマトス−Gal−GIc−Cer（GT。）であることが明らかキャナーで定量し，異なった溶媒による蒋屑となった．
Dガングリオシドは，その糖組成および薄上の各々のbandを計算することにより，A，層の所見より，Chien，Hoganらにより報告さ

B，C，D，EおよびFガング））オシドの分画

れた，鶏筋におけるガングリオシドの一つと定量を行なった．結果は表3に示す如くであ一致すると考えられた（表2）．

った．

2

ジストロフィーおよび対照鶏の前胸筋

表3￣より抽出したガングリオシドの薄層クロマト

Gangliosides

Ga爪91105ide Contr01（Nt10〉

表2

Proposedstructureofchicken

NANA−Ga1−GIc−Cer

B（GD3）：

NANA−NANA−Gal−GIc−Cer

Total

C（GT3）：

NZu7A−NANA−NANA−Gal−GIc−Cer

D

NANA−Gal−GIcNA−Gal−GIcNA−Gal−GIc−Cer

F

G

三

；

NANA−Gal−GIcNA−Gal−GIc−Cer

NANA−Gal−GalNA−Gal−Gal−GIc−Cer

ー226−

lコ．5土4．2

PrO亡eirl48．7±22．5

A GH日．5±1．223，1土8．1

8（GDI）

2．0土1．1

5，3±3．0

CIGTII

0．3土0．2●

0．6±0．4●】．7士2，3

16．8土1二l．6

D：

dystrophic

DystrophytN−10）

レ91AⅧA／9

muscle gangliosides
A（GH3）；

inchicken and controI chicken

E

O．うま0．4

0．古土0．1

r

O．5土0．2

1．7土0，9G

l．1量0．6

0．7±0．8

Dys亡rophy／Contr01

CHC13：MeOH：5NNH40H：2％CaC12：H20

cHCl。：MeOH：0．22％CaC12・2H20（60：40：4：1：4）

図2（55：45：10）

Gangliosidespattern ofdystrophic chicken and controIchicken考

鶏筋ガングリオシド分画には，少なくとも案

鶏筋ガングリオシド含量は，ヒト7），ラッ

7つのガングリオシドが含まれることが明ら

ト1），ウサギ8），ネコ1）などの筋ガングリオシドかとなった．ヒト筋では，GM3，GM2，

含量とほぼ一致していた．

GDl，およびGMlガング］）オンドが主であ

鶏筋ガングリオシド分画については，前回り7），ウサギ筋ではGM3その他2種の構造未までGM3およびGD。ガングリオシドの存決定のガングリオシドよりなる8）．またネコ

在を報告してきたが，今回の検索により，こおよびラットではGM3ガングリオシドが主

れらを含め，少なくとも表2の如く7つのガ分画である1）と報告されており，現在までの

ングリオシド分画の存在を認めた．これらの報告では，いずれの種においてもGM3ガン

うちA（GM3），B（GD。），D，FおよびG

グリオシドが主分画の一つであることは共通

ガング1）オンドはChien and Hoganによるするが，その他の分画については，種により

報告5）と一致するものであった．Cガングリ

異なっている可能性がある．

オシドは，Yu9）らによりタラの脳において新病的状態の筋組織ガングリオシドについてしく見出されGT。と命名されたガングリオ

は，ウサギ脱神経筋においてGM3を主とすシドであり，筋における存在を初めて明らかるガ∵／グリオシドの増加1），および筋ジストにした．又，DおよびGガングリオシドは今ロフィーマウス筋では，逆にGM3ガングリのところ鶏筋においてのみその存在が知られオシドの減少2），さらにビタミンE欠乏によているガングリオシドであり，興味がもたれるウサギの実験的ジストロフィー症の筋におる．

けるガングリオシドの増加3）などが報告され

−227一

ている．

With experimental dystrophy．J．Lipid

今回の筋ジストロフィー鶏筋では総ガング

Res．，15：89−93，1974．

リオシド含量が明らかに増加し，特にA

4）富武正，渥美哲至，有賀敏夫，ほか：筋ジ（GM3），DおよびFガングリオシドが最もストロフィー症における筋膜脂質に関する増し，次にB（GD3），C（GT3）ガングリオ

研究一続報一．筋ジストロフィー症の病因

シドが増加し，EおよびGカ㌧／グリオンドにに関する臨床的研究（三好珪），昭和54年度

は差を認めなかった．これらガングリオシド

研究報告書，1980，p．206．

の変化の由来は，現在まで筋におけるガング

5）Chien，J．L．＆ Hogan，E．L．：Characteri−

リオシドの代謝が明らかにされておらず不明

Zationoftwogangliosidesoftheparaglo・であるが，次の2つの可能性が考えられる．

boside series from chicken skeletal

第1は筋ジストロフィー鶏の筋組織変化におmuscle．Biochim．Biophys．Acta，620：

いてSarCOtubularstructureの増加が指摘さ454−461，1980．

れており，これらを含めた膜成分の増加を反6）Ando，S．，Chang，N．C．and Yu，R，：High

映する可能性であり，第2は筋ジストロフィ

performancethin−layerchromatography

ー鶏筋におけるガングリオシド合成の冗進なand densitometric determination ofいし，崩壊の低下の可能性である．病態解明

brain ganglioside compositions ofのまたれる筋ジストロフィー症の筋線維壊死

SeVeral発現機構解明の一つのモデルとして，今後さ437−450．1978．

らに研究の進展が必要である．

species．Anal

Biochemり89：7）Svennerholm，L．，Brace，A．，Mansson，J．，
etal．：Sphingolipids of human Skeletal

文

献muscle．Biochem．Biophys．Acta，280：

1）Max，S・R．，Nelson，P．G．＆Brady，R．

626−636，1972．

0．：The effect of denervation on the8）Lassaga，F．E．，Ⅰ．Albarracinde Lassaga

COmpOSition of muscle gangliosides．J．

and Caputto，R．：Rabbit muscle gan−

Neurochem．，17：1517−1520，1970．

gliosides．J．Lipid

2）Max，S．R．＆Brady，R．0．：Alterationof

Resリ13：810−815，1972．

the ganglioside composition of skeletal

9）Yu，R．K．＆Ando，S．：Structuresofsome

musclein murine muscular dystrophy．

newcomplexgangliosidesoffishbrainin

Nature，233：55−56，1971．

StruCture and function of gangliosides・

3）Albarracin，Ⅰ．，Lassaga，F．E．＆Caputto，R．：Changes of gangliosides and otherlipidsin skeletal muscle from rabbits

一228−（editedbySvennerholm．etal．），Plenum
Press，1979，p．33r46．

48）Ophthalmoplegiaplus症候群，及び実験的
ミトコンドリアミオパテ一における筋肉内
GOTアイソザイムについて

垂
研究協力者

姜
上

野

井

清一郎＊

進＊

小笠原

三

郎＊

依

藤

史

朗＊

聡＊

渡

浩

男＊

高

橋

光

雄＊

辺

外眼筋マヒを主症状とし，これに種々の症及び複視で発症し，以後徐々に顔面，咽頭，状を合併した患者は，これまでKearns−Shy

頸部，四肢近位に筋力低下が進行した．網膜症候群1），Ophthalmoplegia plus症候群2）等，変性症，神経性難聴が認められ，ECGでは種々の名称の下に報告されてきた．これらのSTの低下，心房性期外収縮が認められた．筋

症例は筋肉において形態学的にミトコンドリ

生検では，Gomori染色でragged red fiber

アの増加，封入体を有するミトコンドリアのが多数見られ，電顕で結晶状封入体を有する出現などが見出されており，ミトコンドリア

巨大ミトコンドリアが認められた．脳波はβの異常が本症候群の発症に関係している可能

波が軽度混入する異常波であった．極く軽度性が示唆されている3）．しかし本症候群の筋の甲状腺機能克進症が合併していた．
症例2

肉のミトコンドリアの生化学的検索は少なく，24歳女性，19歳時に眼瞼下垂で1977年Berenberg等により3例について呼発症し，顔面，咽頭，四肢遠位の各筋に筋萎吸活性が測定されている程度で，組織学的に縮が進行した．網膜変性が見られ，血清CPK

はSDH，LDH等の脱水素酵素活性の増加が活性は196U／Lと軽度上昇（正常値50U／L以想定されているが，本症候群に特徴的な生化
学的変化は明確にされていない．今回われわ下）．脳波はβ波の軽度混入が見られた．筋生検ではraggedredfiberや異常ミトコンドリ

れは細胞質とミトコンドリアマトソクスに異アは認められなかった．ECG，聴覚検査ではなるアイソザイム（S・GOT，m，GOTと略）が異常が見られなかった．

存在するGOTに着目し，本症候群の2例にコントロールとして，各種神経・筋疾患7おいて生検筋中のGOTアイソザイムを分別例（多発性筋炎4例，ALS，FSH型及びLG

測定し，その変化を検討した．又，DNP（ジ型筋ジストロフィー各1例）から得た筋生検

ニトロフェノール）の動脈注射，あるいは虚標本を用いた．

血等の処理により，ラットに実験的ミトコン

実験的ミトコンドリアミオパテーの作製

ドリアミオバナーを作製し，その筋肉中のDNP法4）：体重150g程度のWistar系雄性

GOTアイソザイムについても検討を加えた．

ラットを用い，ネンプタール麻酔下に開腹し，右腸骨動脈にカニュレーションして，水酸化ナトリウムでpHを7．4に調製したDNP溶対象及び方法症例1液（3mg／ml）5mlを5分間で痙入し，30

24歳女性，13歳時に限瞼下垂，分後に右gastrocnemiusを摘出した．
虚血法5）：ラットの一側後肢の大腿部をゴ＊大阪大学医学部第二内科−229−

ムバンドで駆血して虚血状態にし，24時間後

測定，別に測定した全GOT活性からS−GOTにgastrocnemiusを摘出したものを用いた．

活性を算出した。

対象としては30分間虚血状態にしたgast−rocnemiusを用いた。
GOTアイソザイムの分別定量法6）

結果1）Ophthalmoplegiaplus症候群の2例と，コ

筋肉を20倍量のphosphatebufferedsaline

ントロール群のm及びS・GOT活性，及びm−中で凍結，融解をくりかえしたのちホモジナ

GOTの占める比率（％m・GOT）を図1に示イズし，両GOTアイソザイムを抽出した．酵した．GOTアイソザイムの絶対活性は他の素活性は10mM Asp，3．3mMαケトグルター

神経・筋疾患と比較して有意な差が見られな

ル酸，0・1mM NADH，3JLgMDHを含む

かったが，％m−GOTはOphthalmoplegia

1mlの0．1MTrisbuffer（pH7．4）中で37℃

plus症候群の2例ではともに35％で，他の神で反応させ，NADHの340nmの吸収の減少速度で測定した（1U＝lJLmOle／min）．m−

経・筋疾患7例の46±7（％）（mean±2SD）と比較して有意に低下していた．

GOTとS・GOTの分別定量は，抗S・GOT抗2）実験的ミトコンドリアミオパテ一における体でS−GOTを除去し，残存したm，GOTを筋肉内GOTアイソザイムの変化を図2に示

t
l
l
l

0

l
l

0

l
l

300

（mU／mgpr．）

喪
ヽ

＼
＼

X
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mean

l

◎

l
t

。一一二十ヤヽヽ

±2S．D．

0

ゝ

＼ミ

O PM
● ●

X DMP

OPM

≧；ヨ

X DMP
OALS
●OPM

sGOT
図1仏）Ophthalmoplegia plus症候群（OPM）の2例，及びコントロールの生検筋におけるGOTアイソザイムの絶対活性，及びC）全GOTに占めるm−GOTの比率（％m−GOT）を示す・（PM：多発性筋炎，ALS：筋萎縮性側索硬化症，DMP：FSH型，及びLG型筋ジストロフィー症）
−230−

O ALS
●

OPM

A
0
0

︵訳︶↑○じ・∈0

ControI DNP Ischemia ControI DNP Ischemia ControI DNPIschemia
図2 仏）実験的ミトコンドリアミオバナーにおけるGOTアイソザイム活性の変化，及び（B）％m−GOTの変化を示す．各々のヒストグラムは5例の平均±SDを表わす．（※p＜0．05，※※p＜0．01）の神経・筋疾患に比較して，m−GOT，S・GOTした。DNP群ではm−GOT活性はコントロール群に比較して75％と有意に低下していたともに絶対活性で比較するかぎり，有意な変が，S・GOTの減少はそれほど著明ではなかっ化は見られなかったが，m・GOTの仝GOTた。虚血群ではm−GOT，STGOTともに著明に占める比率は減少していた．この変化がミに減少したが，％m−GOTはコントロール群

トコンドリアの異常を生じているのか，ミトよりも有意に減少していた．

コンドリアの何らかの障害がm−GOTの変化をもたらすのかを検討するため，ミトコンド考

リアに形態的異常を生ずることの知られてい案

Ophthalmoplegia plus症候群の筋肉につる2つの実験的ミオパテ一，すなわちDNP

いての生化学的検索はBerenberg等によって報告されている3）．彼らは，Ophthalm−の動注，及び虚血によるミオバナーにおけるGOTアイソザイムについて検討を加えた．

Oplegia plus症候群の患者3例の筋肉から得DNP群で1まm−GOTのみが有意に減少し，S−たミトコンド））アの呼吸機能，ATPase活性GOTの減少程度はわずかであった．虚血群を調べ，うち1例で呼吸活性の低下，DNPににおいてはm−GOTのみならずS−GOTも著よるATPase活性の増加率の減少などを見明に減少したが，その減少率はm−GOTの方出している．しかし，残る2例では異常が見が著明であった．又，両実験的ミトコンドリ

られず，現在までOphthalmoplegia plus症

アミオバナーでともに％m−GOTの有意な減候群の筋肉に共通した生化学的変化は知られ少が認められた．これらの結果は％m−GOTていない．GOTは細胞質とミトコンドリアの減少がミトコンドリアに対する何らかの侵

マトリックスに2種のアイソザイムが存在し襲により生ずることを示唆するものである．

ており，ミトコンドリアの障害により，GOT

形態的にミトコンドリア異常が証明されなアイソザイムのパターンに何らかの変化の生かった第2例においても同じ変化が認められずる可能性が考えられる．図1に示すように，たことは興味深いが，今後さらに症例を追加

Ophthalmoplegiaplus症候群の2例では，他して検討する予定である．

−231−

結

論

OCiatedwithprogressiveextemalophth−

1）Ophthalmoplegia plus症候群の2例におalmoplegia．Arch．Neuro1．，18：654，

いて筋肉内のGOTアイソザイムを分析した

1968．

所，m−GOTの全GOTに占める比率（％m−3）Berenberg，R．A．，Pellock，J．MりDimauro，S．，etGOT）に低下が見られた．

al．：Lumping2）ラットを用いて実験的に作製したミトコン

halmoplegia

ドリアミオバナーでも同じ変化が見られた．

or

plus

splitting？

or

Opht−

KearnS−Shy

syndT

rome？．Ann．Neuro1．，1：37，1977．

このことはOphthalmoplegia plus症候群に

4）Melmed，C．，Karpati，G．＆

Carpenter，S．：Ex−

おける％m−GOTの減少がミトコンドリアのperimental mitochondrial myopathy

障害により2次的に生じたものであることをproduced byin uiuo uncoupling of

示唆するものである．

OXidative phosphorylationJ．Neurol．Sci．，
26：305，1974．

文献5）Karpati，G．，Carpenter，S．，Melmed，C．，et al．：

1）Karpati，G．，Carpenter，S．，Larbrisseau，A．et
al．：The Kearns−Shy syndrome．A

Experimentalischemic myopathy．J．
Neurol．Sci．，23：129，1974．

multisystem disease with mitochondrial

6）Wada，H．，Teranishi，H．，Kagamiyama，H．，etabnormality demonstratedin skeletal

al．：Asimpleimmunologicalmethod formuscle and skin．J．Neurol．Sci．，19：133，

differential determination of serum

1973．

glutamic−0Xaloacetic transaminaseiso−2）Drackman，D．A．：Ophthalmoplegia plus．
The neurodegenerative disorders ass−

ー232−

ZymeS．MedicalJ．Osaka Univ．，29：181，
1978．

49）Duchenne型筋ジストロフィーの単一筋線維：
収縮蛋白の分析高 木 昭 夫＊
研究協力者

石

浦

安

章

一一一＊

水

澤

英

洋＊

部

和

小

川

敬

子＊

子＊

助

川

卓

行＊

昨年度の報告では各種の神経筋疾患の生検

骨格筋収縮系のストロンチウム（Sr）感受筋から単一筋線経を作製し，その機能を分析

性から単一線雄の筋ファイバータイプを分類した．Duchenne型筋ジストロフィー（DMD）

した1）．タイプⅩ型の反応はDMDの34％のの骨格筋には未分化な筋線維（タイプⅩ）がファイバーに観察された．小児期の神経筋疾多数存在することを明らかにした．本年は幼患（筋炎，脊髄性筋萎縮症やネマリンミオバ

君ラットの骨格筋を使用して同様な分析を行ナー）では認められない．成人では筋緊張性

い，タイプⅩ型反応の生理学的意義を考察しジストロフィーや脊髄性筋萎縮症などの約7た．またヒトの単一筋線経の収縮蛋白組成を％の筋線経に認められた．

分析して，DMDにおける筋分化の問題を検（2）ラット幼若筋のSr感受性（図1）
生後1日日ラットのひらめ筋（SOL）と長討した．

址伸筋（EDL）より小筋束（径約100FLm）を対象と方法作製した．EGTAによるChemical skinned

神経筋疾患として，10名のDMD，約20名のfiberを作製して4），Sr感受性を分析した．そ各種神経筋疾患を対象とした．幼君ラットとの結果を成熟ラットのタイプ1およびタイプ

して生後1日目のラットの下肢筋（ひらめ筋

2線経と比較した．幼君SOLのSr感受性はと長足止伸筋）を使用した．スキンドファイバ

タイプ1およびタイプ2筋線椎の中間的反応

ー法は既報に従った1）．剖検時に採取した骨を呈した．幼君EDLでは，pSr5やpSr4．5の格筋よりミオシンと活性トロポミオシンを調低濃度城ではタイプ2より感受性が高い．し製し，ケリレ電気泳動の際の蛋白同定に供した．

かしpSr4以下ではタイプ2と同一であっ

単一筋線経のケリレ電気泳動は三川ら，およびた．このように幼若SOLの反応はタイプ1

石浦らの方法によった2〉3）．

とタイプ2の中間にあり，この点ではDMDのタイプXのものに類似していた．

結果（3）ヒト単一筋線経の収縮蛋白の分析（1）タイプⅩ線経の出現頻度（表1）

ヒト単一筋線経の筋ファイバータイプをス
キンドファイバー法で同定した後で，その収表l タイプⅩ（未分化）筋線経の出現頻度

縮蛋白組成を1次元（1D）あるいは2次元（2D）ポリアクリルアミドケリレ電気泳動で分析した．1D・SDSケリレ電気泳動（図2）によると，タイ701とタイプ2筋線経では，蛋白組成は明瞭に異なっている．高分子量の方からミオシンH鎖，α−アクチニン，55，000蛋＊国立武蔵療葦所神経センター

−233−

P／Po

吋Pel type2／●●一一一一艇†▲′／／／／′

矧／／印

Ty■●1／／

／
／

6

図1

■−

／ ／

▼＋

−

myOStn

2
●
Or
y
T

J

／／

白け＝⁚＝わー〜−・8グJー¶鵬鵬輝｝『−AC

磯
■＋

￣￣ヽ′

5

Tた1．TN一丁

14ラット骨格筋のストロンチウム感受性．

磯醜針緋 闊瑠

TypelおよびType2：成熟ラットのタイ701あるいはタイ702筋線経．
SOL：生後1日目ラットのひらめ筋．

．‥▲′

MLC一・望TN−C

EDL：生後1日目ラットの長址伸筋．
pSr＝rlog［Sr2＋］．P／Po：相対張力

だLC−3（Poは最大収縮力）．生後1日目のひらめ筋のストロンチウム感受性はタイ
プ1とタイ702の中間にあった．

図2

ヒト単一筋線経の1次元ポリアクリル
アミドゲル電気泳動．typel：slow

白やアクチンは同定できる．しかしトロポミ

twitch fiber，type2＝fast twitch

オシン（TM）とトロポニンTT（TN−T），ミfiber．CBB染色による．myosin：ミオ

オシンL鎖一1（MLC−1）とTN−I，MLC−

2，TN−CやMLC−3などの確認は1D−ゲ

シンL鎖，alpha：α−アクチニン，55：
55，000蛋白，AC：アクチン，TM，TN−T：トロポミオシンとトロポニンT．

ルではできない．タイプ2筋線経にのみML
C−3の存在すること，MLC−1やMLC−2の分子量がタイプ1とタイプ2の間で相違する

MLC−1：ミオシンL鎖Ll（2本のうちいずれも上方のものがMLC−1と考えている．分子量はMLC−1S27，000，

ことは，他の輔乳類の骨格筋における知見と

MLCLlf26，000），MLC−2S（m．W．

同一であった5）．

19，000），MLC−2f（m．W．18，500），MLC

2D−ゲル電気泳動により，TM，MLC・L3（m．W．16，000）．TN−C：トロポニ
ンCと推定されるもの．

1，−2，−3の同定が可能であった（図3）．
TMにはα鎖やβ鎖と推定されるスポット
がタイプ1およびタイプ2の両者に認められ

ち1ヶはMLC−1fとた．タイプ1のMLC−1Sには3つの亜成分が同一の移動性を示した．MLC−

みとめられた（MLC−1sa，一1sb，−1sc）．う

2fは等電点電気泳動（IEF）により，2−3の一234−

2D−ゲル上において2SとMLC−

2
AC

山都
ご

TM

MLCl

MLC2
Ml．C3

図3

ヒト単一筋線経の2次元ゲル電気泳動．1：タイ7bl筋線経，2：タイプ2筋線経，AC：アクチン，TM：トロポミオシン，MLC：ミオシンL鎖．銀染色による．MLC−3はタイプ2にのみ認められる．
タイプ1のMLC−1は3のスポットよりなっている．MLC−2は同
分子量の複数のスポットに分かれている．これは燐酸化された分子と考えられる．

スポットに分離することがある．これは燐酸に重点をおいて比較した．pSr4．5の溶液中に化されたミオシンL鎖と推定している．

おけるP／Poが0．3−0．5に分布するもの（タイMLC−3fはタイプ2線経に多量に存在した．

プⅩ2）のミオシンL鎖は対照のタイプ2とTN−Cと推定されるスポットがこの2D−ゲ同一であった．同様にP／Poが0．5−0．7に分布

ル電気泳動の系により認められる．この同定するもの（タイプⅩ1）では，ミオシンL鎖はと筋ファイバータイプによる差違は検討中である．

対照のタイプ1と同一であった．このように（4）DMD単一筋線経の蛋白組成（図4と図であった．

タイプⅩ線椎のミオシンL鎖の分化は完全

5）DMDの生検筋から単一筋細胞を分離した

考案

後で，スキンドファイバー法により筋線推タ

生後1日日ラットのひらめ筋のストロンチ

イプを決定した．その後，1Dあるいは2D・ウム感受性は分化したタイプ1およびタイプ

ゲル電気泳動により収縮蛋白組成を分析した．

2筋線経の中間に位置した（図1）．幼若ラッ

DMDのタイプ1あるいはタイプ2筋線経にトの場ノ飢こは，筋線維束（約100ノJm径）を使おいて，ミオシンH鎖，アクチン，TM，KLC−

用して実験を行った．この時期には筋細胞は1，MLC−2やMLC−3のいずれも対照のタイ

組織化学的にタイプ2Cの反応を呈し，筋線

プ1あるいはタイプ2のそれと同一であった．

維タイプの組成に関しては均一であるといわタイプⅩ線経に関して，ミオシンL鎖の構成

れる6）．したがって線維束を使用しての実験−235−

‥叫パ・ ′

不rここi宗二°∴・／

it

DMD
図4

DMDの単一筋線経の2次元ゲル電気泳動．1：タイ761筋線経，2：タイ782筋線椎．それぞれのスポットの同定は図3に示したものと同じである．DMDにおいてはミオシンL鎖の構成は対照のそれと同一であった．

▲

●

1・′
■7

謹 彗 重 苦 皇 軍

善

図5

DMDタイプⅩ筋線椎の2次元ゲル電気泳動．Xl：タイ7CX筋線経，
ただしP／Po（pSr4．5における）が0．6のもの．X2：タイプⅩ筋線経，
ただしP／Po（pSr4．5における）が0．4のもの．各々のスポットの同定は図3と同じである．タイプx筋線経のミオシンL鎖の構成は対照のタイプ1あるいはタイ702と同一である．
−236−

は可能であると判断した．この幼君ひらめ筋の筋線経に分化の異常は証明されなかった．

のストロンチウムに対する反応はヒトのタイ

この所見は1−2の実験的ミオバナーの場合

プⅩ線経のものに類似している．それ故タイとは著明な対比をなしている．不動性萎縮の

プⅩ線経が未分化であるとの推論の傍証と際に，ラットひらめ筋では脱分化と再分化がした．しかしタイプⅩと分類されたものの全発現する．この際には，同一筋細胞内にタイ部あるいは一部が変性した筋細胞である可能

701型とタイプ2型のミオシンL鎖が共存

性は完全には除外できないだろう．生検筋をしている10）．また長期に亘る持続刺激の際にグリセリンを含む弛緩溶液（−20℃）に7−は筋線維タイプは転換し，その際にも単一筋

10日以上保存すると，一部の筋線経において線維内に両タイプのミオシンが共存するといカルシウムやストロンチウムの感受性が変化

う11）．

することが知られている10）．

骨格筋収縮系のカルシウムやストロンチウ

タイプⅩ筋線経の出現頻度はDMDにおムに対する感受性は，トロポニンの性質によいてのみ高いといえる．これは本症においてり決定される．したがってタイプⅩ型の反応

筋細胞壊死と再生のサイクルが旺盛であることの反映であろう．しかし再生現象が旺盛とに関連して，トロポニンの分析を行う必要があろう．

推定される他種の神経筋疾患では，タイプⅩの出現は少ない．このことはDMDでは筋再生が正常に進展しない可能性を示唆するのかもしれない．

結論

DMDなどの神経筋疾患の生検筋から単一筋線経を分散し，その生理的機能と蛋白組成

鶏や家兎では筋線推タイプによる収縮蛋白の対比を行った．収縮系のストロンチウム感の分化の相違がよく知られている5）7）．ヒトの受性を検討すると，DMDでは対照には存在

場ノ飢二は骨格筋はタイ701やタイプ2線経のしないタイプⅩと仮称される筋線経が34％混合したものであるため，筋蛋白分化の知見存在した．タイプⅩの反応は未分化筋線経のはまだ乏しい．近年数ヶ所より報告が散見さものに近似している．DMDにのみ多量のタれるが，一定の結論には到達していない8）9）

イプⅩ線経が存在する事実は，本症において我々はスキンドファイバー法により筋線維タ

筋線経の分化の遅滞を推定させるものである．

イプを確認した単一筋線経の蛋白組成を分析

ヒトの単一筋細胞の蛋白組成は1Dおよびした．ミオシンL鎖の構成に関して，ヒトの2D・ゲル電気泳動で分析した．タイプ1とタ

タイ701線経はMLC−1SとMLC−2Sより成イ702線経ではミオシンL鎖の構成の相違

る．タイプ2にはMLC−1f，MLC−2f，MLC−3fが確認された．MLC−1Sはヒトでは3ヶの亜が存在した．MLC−1Sは更に1sa，1sb，1scの亜成分に分かれるのが従来の哺乳類の知見とち成分に分かれた．MLC−1saとMLC−1fは分がう点であった．DMDのタイプ1あるいは子量が違い，MLC−2SとMLC−2fも相違して

タイプ2線経は対照のそれと同一のミオシン

いる．MLC−lsbとMLC−1fは2D−ゲル上，移L鎖を呈した．タイプⅩ線経では，対照のタ動度は一致している．しかしキモトリプシン

イプ1あるいはタイプ2のどちらかのミオシ

消化によるぺブタイド分析からは，MLC−1sb

ンL鎖の構成を示した．

とMLC−1fは同一組成ではなかった10）．
文

DMDにおいて未分化と推定されているタ
イプⅩ線経のミオシンL鎖は対照のタイプ

献1）Takagi，A．，Yonemoto，K．，Sugita，H．：

1あるいはタイ702と同一の構成であった．

Single skinned human muscle fibers．

このようにミオシンL鎖の分析からはDMD

Neurology（Minneap．），28：497，1978．

−237−

pesofmyosinlightchainspresentduring

2）Mikawa，T．：J．Biochem（Tokyo）．to be

the development of fast skeletalmuscle

published．

3）Ishiura．S．：Exper．Neurology．to be pub・inchickembryo．J．Biochem．，87：81，1980．
8）Libera，LD．，Margreth，D．A．，Mussini，I．et

lished．

al．：Myosin poly−mOrphismin human4）Wood，D．S．，Sorenson，M．M．，Eastwood，A．
B．，et al．：Duchennedystrophy：abnormal

Skeletal

generation oftensionandCaregulation

280，1978．

muscles．Muscle＆Nerve，1：9）Pette，D．Henriksson，J．Emmerich，M．：

in single skinned fibers・Neurology

Myofibrillar proteinpattemS Of single（Minneap．），28：447，1978

fibers from human muscle．Febs．

5）Sarkar，S．，Sreter，F．A．，Gergely，J．：Light
Chains of myosins from white，red andLett．，

103：152，1979．

cardiac muscles．Proc．Nat．Acad．Sci．

10）高木昭夫，ほか：未発表．

USAリ68：946，1971．

11）Pette，D．，Sclmer，U．：Coexistence of fast6）埜中征哉，Chou．S．M．：Werdnig−Hoff・and slow type myosinlight chainsin

mann病罷息筋の組織化学的検討．・臨床神経学，18：491，1978．

mationasinducedbylongtermstimula−

Single muscle fibers during transfor−tion．Febs．Lett．，83：128，1977．

7）Obinata，T．，Masaki，T．，Takano，H．：Ty一−238−

50）実験的serotonin．myopathyにおける病理学的ならびに筋構造蛋白質の検討

飯 田 光 男＊
研究協力者

足

立

暗

卑＊＊

高

柳

哲

也＊

水

野

恵

介＊

祖父江

逸

郎＊

種々のmyopathyにおける筋肉組織の崩（1）試料−タンパク質可溶化は1％SDS＋

壊塊横については末だ不明な点が多い．前回，

10％sucrose＋10mMTris−HCl pH8．0＋1

我々はVaSOaCtive agentであるSerOtOnin

mMEDTA＋1％P−メルカプトエタノー

をratに授与する事によってmyopathyを生ずる事を形態学的および生化学的に確認し報

ル＋8M ureaからなる溶液にて1mgpro−
tein／mlの割合で80℃，20分間加熱にて行っ告したが，今回，SerOtOninmyopathyにおけた．（2）ゲル濃度5．6％のディスクゲルに試料タる筋崩壊機構の解析を目的にSDS−ゲル電ンパク質を1ゲル当り30Jfg添加し，1ゲル当

気泳動による検索を行った．

り4mAで約4時間通電して泳動した．（3）泳動したゲルをクーマジーブルー，イソプロピ

材料および方法

ルアルコール，酢酸からなる染色液にて染色

Myopathyの作製は体重100g前後の雄し，10％酢酸にて脱色した．（4）次にデンシト

Wistar ratに生食水に溶解したセロトニン

メーターにてケリレのバンドの相対比率を計測した．

を体重1kg当り10mg腹腔内投与した．投与は週1回，連続24週間投与した．コントロールとして同年齢の無投与雄Wistar ratを使
用した．

結

果

（1）コントロールにおける泳動パターンの結断頭後，氷冷したratの後肢筋の結合織，脂果は写真1の如く明瞭なバンドは13本認めら肪組織を除去して得た筋組織を，0．1M Naれた．それらのバンドのうち推定分子量1万Cl＋5mM NaHC03からなる音容液にてホモ5千以上のバンドは9本で，写真1の左からそゲナイズし，1万gx20分遠心分証した．得た沈き歪を同液にて洗浄し同様に遠心分散する操れぞれ18万5千，15万5千，12万，9万5千，
6万8千，5万，3万8千，2万5千，1万

作を3回繰り返した．以上の操作によって得5千であった．（2）コントロールにおける分子られた沈盲査のタンパク質濃度をLowry法に

量1万5千以上のバンドの拡大は写真2の如て測定後，SDS−ポリアクリルアミドケリレ電

くで，それぞれのバンドの相対比率は22．96

気泳動を行った．

％，4．44％，14．07％，2．96％，1．48％，2．96

電気泳動の条件は池原1）らの方法に従い概略は以下のようである．

％，10．37％，13．33％，7．4％であった（表1）．（3）serotoninmyopathyにおける泳動パ
ターンはコントロールと比べ推定分子量1万5千以上のバンドにおいて明らかな差異が認＊名古屋大学医学部第一内科＊＊愛知医科大学第四内相

められた（写真3）．（4）コントロールとの差異
ー239−

は（i）分子量18万5千のバンドにみられたバ
ンド幅の拡大と分裂および相対量の増加，の融合がみられたが両バンドの合計比率は■な（ii）分子量15万5千，12万，9万5千のバン増量がみられたが，3万8千と1万5千のバらなかった．（わ）分子量2万5千のバンドのドの量的減少，特に9万5千のバンドの著明

ンドは減少傾向を示した．（Ⅴ）分子量1万5な減少，（iii）分子量5万と3万8千のバンド

千以下のバンドについては量的差異は明らか

写真3

表I

筋膜成分，筋小胞体成分などを含む種々の成分が含まれているものと推定される．

ResultS（Den6i亡OmetOr）

ControlBand

S e ro to n i nmyopathy

抑トト I Ol
1 1

1

I

l

Ⅰ

185

22 ．
96

26．
54

2

Ⅰ
55

4 ．
44

2．
56

】

Ⅰ
20

Ⅰ
4 ．
07

Ⅰ
Ⅰ
．
Ⅰ
3

4

95

2 ．
96

0 ．
0 5

5

6 8

Ⅰ．
48

しかし我々の条件にて作製したSerOtOnin
myopathyにおける筋崩壊の内容として，α−I

actininの減少とmyosinのheavy chainの変化が強く推測される．
ゲル電気泳動分析によるとDuchennedys−
trophyの初期変化として，α−aCtininの減少とTroponinの変化，即ちTroponinⅠ，Cの減少とTroponinTの保存が指摘されており，

4 ．
96
6

50

2 ．
96

7

38

10，
37

8 ．
9 3

○

25

13．
33

18 ．
83

9

Ⅰ
5

7．
4

6 ．
33

実験的にはこれら一連の変化はCalcium−
activated neutral proteaseの作用に類以していると報告されている2）3）．しかしmyosinのheavy chainの変化についてはDuchenne

10

dystrophyにおいては病期の後半に認められ

Ⅰ
Ⅰ
Ⅰ
2

20．
03

20 ．
87

るとされているが，Calcium−aCtivated neu−エ
3tral proteaseの作用については問題があるではなかった（表1）．

とされている3）．
我々の大まかな分析結果から推測された

考察

SerOtOnin myopathyにおけるα−aCtininの

今回の我々がSDS−ゲル電気泳動に使用減少とmyosinのheavy chainの変化はmy−

した試料は，バンドの数，各々の推定分子量

Opathyにおける筋崩壊機構の解析に対し興から判断して，筋構造タンパク質のみならず味ある所見と云える．今後，更にCOmpOnent−241

fromisolated myofibrils by a calcium−

別にみた分析が必要と考える．

activated neutral protease．J．Biol．Chem．，

文

250：4278，1975．

献1）池原征夫．加藤敬太郎，中尾真，ほか：生3）Sugita，H．，Ishiura，S．，Suzuki，K．，etal．：Ca−

化学実験講座14 生体膜，東京化学同人，

activated neutral protease and its

p．119，東京，1977．

inhibitors：in2）Reddy，M．K．，Etlinger，J・D・，Rabinowitz，M・，
et al．：RemovalofZ−1ines andα−aCtinin−242−

vitro effect on intact

myofibrils．Muscle＆1980．

Nerve，3：335，

51）Caプロテアーゼによる骨格筋の崩壊−Caイオノフォア（A23187）の効果−

杉 田 秀 夫＊・＊＊

研究協力者
は

じ

め

石 浦 章

に

進行性筋ジストロフィー症は筋萎縮が進行する疾患である．骨格筋の萎縮は即ち筋蛋白

一日

堕

中

cloheximide

征哉H

0．5mMを加え，アミノ酸の再利用をおさえ，更にCaイオノフォア（A23187）25J Mを加えた．

特に筋構造蛋白の分解を意味するが，この際反応時間と遊艶蛋白との関係は3時間迄ほ各種の蛋白分解酵素が系統的に関与すること

ぼ直線的であるので，実際の反応時間を3時が想定されている．最近デュシャンヌ型筋ジストロフィー症において注目されている

間，37℃で行った．95％02，5％C02は3時間の反応時間内では特に結果に影響しないので

opaque線経，Ca染色陽性線経，或いは電顕用いなかった．なお，E−64−C（N−〔N−（L的に認められるplasma膜の部分的欠損など

3−ethoxy・Carboxyoxirane−2−Carbonyl）−L−の所見から筋蛋白分解の初期段階においては，

leucyi〕・isoamylamine）は，30FLMをCaを膜系の障害の為に細胞外より過剰に竜充入した含む溶液に加え実験に用いた．遊離蛋白はCaイオンにより，筋細胞内に存在するCa依

Lowry法で測定し，溶液中のCPKはRosal−

存性中性プロテアーゼ（CANP）が活性化さki変法で測定した．SDSケリレ電気泳動はれ作用することが考えられている1）．この様

Laemmli法に従った．

な仮説の傍証を得る為に我々はわ川どれに於結てintact muscleにCaイオノフォア（A果

1．遊離蛋白23187）を用い，過剰のCaを流入させた時ど骨格筋を玩㍑融和で反応させると，Caの存の様な変化が筋蛋白に出現し，又同時にこの作用がCANPの特異的inhibitorであるE−

在に無関係に可溶性蛋白が遊艶してくるが，64−Cにより抑制されるか否かを検索した．

量的にはEDLの方がSOLより多い．又Ca
イオン存在下では，遊離蛋白量は増しSOL

方で63％，EDLで23％増加した（表1）．この法

ウイスター系含ラットを用い，ヒラメ筋

表l A23187存在下で遊維する蛋白量（SOL）及び長址伸筋（EDL）を両端に腱をEffect of calcium on protein release from

つけたまま筋膜を障害しない様に採取した．

intact

そしてCaを含まないKrebs−Ringer液にmuscleinthepresence

毛Ca＋＋l mMを含む溶液とその代りにEG

of

A23187（n三4）Of vet vei9ht／h

SoleusTAl mMを加えた溶液を作成し，採取した＋EGTA O．175±

各筋肉をひたし実験を行った．両溶液にCy一

0・033＋Ca O・285！0・023

＋63亀

EDL

＋EGTA

＊東京大学医学部脳研神経内科＋＊＊国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

ー243−

O．223！0・046

Ca O．274

＋

0．029

＋23も

際，Ca存在下，EGTA存在下に遊離した

Decrease of

Creatine phosphokinase活性を測定してみionophore−treatedintact muscle

α・aCtinin contentin

イオンは直接あまり関係はなく，又Caイオン存在下で増加した蛋白は構造蛋白に由来することを示唆している．

96Kオq亭睾鼻ヨ
A 「・「▼『ト▼雷＝J．0

2．構造蛋白のゲル電気泳動

＋星
■鶉1﹁一

ると殆ど差がないことがわかった．このことは，この実験系では可溶性蛋白の遊離にはCa

03時間の反応終了後，骨格筋より従来の方法に従って，α−アクチニンを抽出しその電気泳動パターンをみると，図1に示すように96Kのα−アクチニンのバンドはEDLに於てもSOLに於ても（L）即ちEGTA存在下に比較して（＋）即ちCaイオン存在下の方が明らかに減少していることがわかる．しかもそ％K…α−アクチニン
A…アクチン
−…EGTA存在下の程度は，EDLに於てSOLよりより明瞭で

図2

EDL

SOL

図1反応後骨格筋に残存するα−アクチニン

A：EGTA存在下−244−＋‥・Ca存在下

B：Ca存在下

EDL：長址伸筋
SOL：ヒラメ筋

CANPの強力なインヒビターである．今回Eあった．
この現象はCaイオノフォアの作用により−64類似化合物であるE−64−Cを用い，Caを溶液中のCaイオンが筋細胞内に浸入し，そ加えた溶液中に入れて反応を行い，溶液中にの為Z帯よりα−アクチニンが遊離し，筋肉遊離してくるα−アクチニンの量を比較して中に残存するα−アクチニンが減少した為とみると，図3が示す様にE（EDL）に於ては理解できよう．
3．電顕的観察（図2A，B）

Ca溶液ではα−アクチニンは遊離してくるが，
E−64−Cを添加することにより著しく抑制さ

3時間反応させた後，骨格筋を電子顕微鏡

れた．

で観察してみると，EGTA存在下に反応させれ，Z帯も何ら異常を認めなかった（図2

考察
in vitroでintact muscleを1mMCaイA）．しかし，Ca存在下で反応させた場合，オン存在下で一定時間反応させると，溶液中Z帯は殆ど消失していた．しかしA帯の中央にα−アクチニンが遊隠し，筋肉中では減少すにあるM線はほぼ正常であった．筋小胞体，

ることが明らかとなった．又この際形態的にた場合は筋原線経の走行，形共に正常に保たミトコンドリアの膨化が認められた（図2はZ帯のかなり選択的な消失が確認された．

B）．

Z帯を構成する蛋白に関しては，なお未解決

4．E−64−Cの効果の点もあるが，α−アクチニンが存在することはすでに確立されている．α−アクチニン自身

E−64はepoxysuccinateの誘導体であり，は蛋白分解酵素に比較的resistantであるが，α−アクチニンをZ帯に固定している蛋白分
Effect of proteaseinhibitor

解酵素に感受性の強い蛋白がまず消化され，on ca2＋−induced release ofcL−aCtinin from muscle fiber

E S

【糾

その結果α−アクチニンが遊艶するものと想像される．
今回の我々の実験はCaイオノフォアを用E糾いることにより，筋細胞内のCaイオン濃度

目撃言∴
一は増加し，筋肉中に存在するCANPは活性

一

t■一●

−

一一

■一一一

一一■

％K

化され，その結果Z帯に存在する感受性の高い蛋白質は消化され，α一アクチニンは遊碓しAt■1−・一一・壬・壬

TM l■

冨冨．

たと理解できよう．この結果は本質的に
−

＿

●■

Uchino，Chou2）の論文と同じである．
′■■

我々は筋原線経にCANPを位相差顕微鏡

『■F
l

￣

￣

一

で直接観察しながら作用させると，急速にZ

一帯は消失しα−アクチニンが遊離することを
【

図3

S

α・てクチニン遊離に対する蛋白分解酵

免疫学的に確認しており，この結果と良く一致する．
以上の結果が高Caイオンの直接作用では素抑制剤E−64の効果
E：長址伸筋，M：ミオシンH鎖
S：ヒラメ筋，A：アクチン
TM：トロポミオシン

ない事は，CANPインヒピタ，即ちEr64−Cを添加することにより，細胞内に入ったE−
64−Cは非可逆的にCANPに結合し，α−アクチニンの遊艶が抑制されるという今回の実験

96K：α−アクチニン
E64…E−64−C

結果から明らかと思われる．筋原線経を用い
一245−

た同様な実験結果を我々はすでに報告しておヤンヌ型DMPにおける筋蛋白分解機構を解り，又Kameyama，Etlinger3），のleupeptin

明するにあたってモデルとしても重要な意義を持つものと考える．

を用いたデータと本質的に同じである．
生検筋ホモジェネートを酵素源とし，CANP活性を測定する試みは幾つかなされ

今後所謂内因性インヒビターが生体においてCANPの活性調節にどの様に関与していているが，感度をあげても殆ど測定できず，
この理由は内在する所謂内因性インヒビター

るか議論の余地がある様に思われる．

が存在する為であると説明されている．従っ文てこのインヒビターが実際insituに存在す

ると例え，Caイオン濃度が増してもCANP
はその蛋白分解作用を発揮できないことになる．しかし，今回のinvitYVのintactmuscle

献1）杉田秀夫，石浦章一：筋ジストロフィー症とプロテアーゼ．神経進歩，24：821，
1980．
2）Uchin0，M．＆Chou，S．M．：Effect of Cal＿についての実験結果から，筋肉内に存在する

CiumIonophore，A23187

CANPはCaイオン濃度が増すと活性化さ

Muscle．Proc．JapanAcad．．56：480，1980．

れ，蛋白分解作用を示すことが明らかとなり

3）Kameyama，T．＆Etlinger，J．D．：Calcium−

且つこの作用はE−64−Cで抑制されること

dependentregulationofproteinsynthesisが確認された．即ちintactな筋肉に於て

anddegenerationinmuscle．Nature，279：

CANP活性のあることが間接的に検出可能

344，1979．

なことがわかった．以上の実験結果はデュシ−246−

0n Murine52）カテプシンⅡによる筋原線維構成蛋白質
の分解様式

真

研究協力者
は

じ

め

勝

田

沼

幸 弘＊
信

彦＊

野

田

隆＊

HもしくはカテプシンBは10￣7Mとなるよに筋ジストロフィー症の主要症状である筋萎

うに調製し，pH6．0酢酸緩衝液，5mMメル

縮という現象について考える際，蛋白分解酵

カプトエタノール，1mM EDTA存在下で素の異常による筋蛋白崩壊を抜きにしては考370Cにおいて反応させ，PCA上清に遊艶すえられない．また筋蛋白崩壊の過程には，分解される側の問題（易水解性・修飾等），分解

るアミノ酸・ペプチドの量を螢光測定した。
分解様式の検討する側の問題（活性化・遅出等）ならびに形

10％SDS一ゲル電気泳動上で分解像を解態変化等に関する構造上の問題が，複雑に絡析した．蛋白量は20JJgとした．反応液組成

みあっている．我々はまず蛋白分解酵素の側は，上記と同様で，反応の停止にはE−64を用いた．

から，この筋蛋白崩壊現象を追求してみた．
既に我々は筋組織中のマストセル・セリンプ
ロテアーゼならびにカテプシンBによる筋蛋白に対する分解様式を報告してきた1）6）．今

酵素阻害様式の検討
基質は，BANA BAPAを用い，阻害剤としてE−64を使用した．

回は，従来exopeptidaseと考えられてきた
カテ70シンHによる筋蛋白分解様式とカテ
プシンBとの協調作用についても検討した．

結果及び考察カテプシンB・H・Lの性質の比較
表1に，従来報告されているカテプシン

実験材料及び方法

B・H・Lの性質をまとめたが3）4）5），カテプシ

カテプシンH及びカテプシンB精製法

ンHは他の2つのライソゾーム・チオールプ

ラット肝より唐渡らの方法2）で精製し，比ロテアーゼに比し，基質特異性，阻害剤に対活性が結晶酵素と同じものを用いた．

する態度ともendopeptidaseというよりも

筋原線維構成蛋白質の調製

むしろ，ロイシンアミノペプチダーゼ（LAP）

家鬼骨格筋を用い，ミオシンはperryらのとよく似たexopeptidaseの性質をもってい方法で抽出し，Richardsらの方法で精製した

る．例えば合成基質をよく切るが，高分子蛋ものを用いた．アクチンはMommaertの方

白を殆ど切らない．LAPの基質であるLeu−

法で精製した．トロポニンは江橋ら，トロポ
ミオシンはMueller，α−アクチニンはMa−

βNAをよく切る．E−64であまり阻害がかか

Saki and Takaichiの方法で精製した．

カテ70シンHは我々の予備的実験ではチキ

らずLeu−CH2Clでよく阻害される．しかし，易水解性の測定

ン筋中にカテプシンBのほぼ1／4量存在し，各筋原線維構成蛋白は10￣5M，カテプシン

他のaminopeptidaseとの比較の意味で，筋原線維構成蛋白質の分解像を検討してみた．

＊徳島大学医学部附属酵素研究施設酵素化学部門−247−

表l Comparisonofpropertiesofcathep−

カテプシンHによるトロポニンの分解
ミオシン・アクチン・α一アクチニン・トロ

SinB，L and H
Cathepsin B CathepsinL CathepsinH

AzocaSein
Histone6−6−PD（yeaStI
Aldolase（muscleI十十十

Leupeptin＋＋＋った．図1に示すようにトロポニンTのみ分
解され，トロポニンⅠ・トロポニンCは分解されなかった．トロポニンTはカテプシンHによって限定的に分解され，分子量約30，000と13，000の分解産物を生じた．これは，カテ
プシンBと殆ど同じ分解形式で，トロポニン
Tのほぼ同じような部位を切断すると考えられる．全く同じ部位を切断するのかどうかを調べるため，以下の実験を行なった．
カテプシンBとの協調作用＋

Anti卵ln
Leu−CHZCl

0．5両

十
十
十

E−64

7．2lLeu−印Ai
D．ZM
0．15M

8㈱6J6．
LO． ∵
−L
舛∵
二h
．l
＋．H

Leu−即Aか，∝旧28．∝氾
5．さ−6．1
6．5−7．5
5．0（Azocasein1 6．5柑ANA）

．10
07
．誹689
40000仙釦6．5．
日0Separation（CM）（DEAEI
Substrate specncity
BAA
8APA
BANA
BAEE

四，∝旧
4．9−5．3
6．0柑APA）
6．2f BANA）
0．05日
0．25M

12朋−5鋸05．6HHH＋
2．0．2．
3L
0O
1鋸
14
＋＋＋

Pl
0ppH

lnhibitors

ポミオシン・トロポニンについて，検討したが，分解像を呈するのはトロポニンのみであSHdependency
M．W．

カテプシンHは図2に示すように，E−64

Towabri etaL Eur．J．Bi∝hem．1叱279−289（1978）：J．Biochem．糾一659−67日1979）
Singh．H．andKalnitsky＝」．Biol．Chem．む3．4封9−4326（1978）：J．Biol．Chem．255，％9−374119都）
KirSChkeetaL：【ur．J．Bbchem．74，293一知日1977I

によって非桔抗的，不可逆（厳密には，pSeudo−
irreversible）的に阻害され，表2にカテプシ＝Acta b血l．med．germ．35．285一四9（1976I

0−

5−

15−

図l

30−

トロポニン分解像
−248−

45t

60−

プシンHを加えても，トロポニンは著明に分

表2Inhibitionof cathepsinBand cathep→
SinHbyE−640rnativeinhibitor

解冗進を示すわけではなく，カテプシンH単独で加えたものとほぼ同じ傾きをもっている．

Native mhtbitorl00．【煩】xg SUp

このことはカテプシンBとカテ70シンHの

lDsot叩／囲PrOteaSeI ID50tu＝CathepsinB

34

CathepsinH

4，1〔旧

m）

トロポニンT切断部位が同一でなく，またカ

1∞

テプシンBによって切断されたフラグメン
トをカテプシンHがnativeなトロポニンよりよく切断するわけではないと思われる．またカテプシンBとHを共存させたものが，カテプシンH及びカテプシンB単独を加えたものより，トロポニンをよく分解することから，カテプシンHによるトロポニンの修飾は否定できない．
筋原線維構成蛋白質の易水解性の比較
最後に我々が今まで報告してきたマストセ
ル・セリンプロテアーゼ，カテプシンH，カテプシンBに対する筋蛋白の易水解性を定性的に表3に示す．各プロテアーゼ間では，セリンプロテアーゼが最もよく筋蛋白を分解し，カテフ○シンBがこれに次ぎ，カテプシン
HはトロポニンTのみを分解する．筋蛋白の側からみると，トロポニンTは分解され易
く，ミオシン重鎖，トロポニンⅠ，トロポミオ
シンは2つのプロテアーゼによって分解され，α−アクチニン，トロポニンCはいずれのプ
ロテアーゼによっても分解されない．高分子

O a）

40

60

80

蛋白の易水解性は，立体構造に大きく左右さ1∝）れるため，これら分解しにくい蛋白質の代謝

Enzyme Dose（いり図2InhibitionmodeofE，640nCathepsinH

回転については，アミノペプチダーゼ系を含ンBと並べて，その活性を50％阻害するのに

表3 Susceptibilities of myofibri11ar

必要な量を示した．カテプシンHは，カテプ

proteins to proteases

シンBの約100倍阻害剤に対する感度が鈍い．

CathepstnB Cathep；in日

Myosh HH

この性質を利用して，トロポニンを分解する

一
◆

H

L

−

後にE−64で反応停止した後カテプシンH

TroPnln TNイ

H

−
一
＋

＋
−

■

一249−

＋

州−Protein

十

−

TN−C
TrOPOmyOSin

−

十
＋

■

3に示すように，カテ70シンB処理後にカテ＋TNJを加えたものの4通りの条件で，カテプシン
Hとカテ70シンBの協調作用を検討した．図＋O−Actinin

一H

カテプシンB単独でまず反応を進行させて

■

Actin

ー

−

速度を指標として，カテプシンH・カテプシンB単独・両者を最初から共存させる場合，

柄St CellSerine Protease

Chem．，253：4319−4326

めた修飾の問題も含めて考えねばならない．

4）Singh，H．and Kalnitsky（1980）J．Biol．
文

献Chem．，255：369−374

1）Sanada，Y．，Yasogawa，N．andKatunuma，N．（1978）J．Biochem．，83：27−33

5）Kirschke，H．，Langner，J．，Weideranders，B．，Ansorge，S．andBohley，P．（1977）Eur．

2）Towatari，T．，Kawabata，Y．and Katu−
numa，N．（1979）Eur．J．Biochem．，102：

J．Biochem．，74：293−301
6）Noda，T．，Isogai，Kリ

Hayashi，H．and

Katunuma，N．J．Biochem．，90：inpress．

279−2893）Singh，H．and Kalnitsky（1978）J．Biol．

一250−

昭和55年度研究班機構図及名簿厚生省神経疾患研究委託費

筋ジストロフィー研究班
王
圧

名

研

究

課

題

班

長

第 一 姓

筋ジス トロフィー症の基礎的研究

江 橋

節 郎

第 二 姓

筋ジス トロフィー症の病因に関する臨床的研究

三 好

和 夫

第 三 珪

筋ジス トロフィー症の臨床病態および疫学的研究

祖父江

逸 郎

第

筋ジス トロフィー症の療護に関する臨床社会学的研究

井

上

満

筋 ジス トロフィー症動物の生産 ・開発に関する研究

野 村 達

次

四 班

第 五

珪

昭和55年度第二班（三好班）機構図
プロジェクトプロジェクトリーダー

1）遺伝・臨床黒2）病態・生理
a．形態
b．生理
C．生化

豊 西 杉

岩

（iii）膜系など
3）治療法の開発

好a．プロテアーゼインヒビター
b．ホルモン

C．筋成長因子d．神経成長因子など

ー253−

藤

（ii）プロテアーゼ

佐

倉 谷 田

（i）代謝・酵素・その他

昭和55年度第二堆（三好班）名簿
区

氏

分

所
所

名

班

長

三

好

和

夫

幹

事

黒

岩

義五 郎

属

施
在

設

名
地

虎 の門 病院 沖 中記念 成人病 研究 所

所属 にお
け る地位

連絡 の際 の電 話

所

長

0 3 −583 −68 71〒105 東京都港区赤坂虎の門2−2 −2
九州大学医学部脳神経病研究施設神経内科 教

授092 −641 − 1151

授

03 −815 −54 11

助 教 授

03 −813 −3 111

副 院 長

07 5 −461 −51 21

助 教 授

0 3 −815 −54 11

助 教 授

09 92 −64 −22 11

助 教 授

02 52 −23 −616 1

助 教 授

0 3 −8 13 −61 11

教

授

03 −813 −6 111

教

授

0 3 −468 −125 1

長

04 23 −41 −27 11

手

02 52 −23 −616 1

助 教 授

02 63 −35 −4600

教

授

08 59 −33 −11 11

助 教 授

0 958 −47 −21 11〒8 12 福 岡 市来 区馬 出3 −1 − 1
豊

倉

康

夫

東京大学医学部脳研究施設神経 内科

教〒1 13 東京都文京区本界汀一3 −1
佐藤猛

順 天堂 大学 医学部 脳神 経 内科

西

谷

裕

国 立療 養所 宇 多野病 院神経 内科〒1 13 東京都文京区本郷2 −1 −1〒6 16 京都市右京区鳴滝音戸山町8
運 営 幹 事

杉

田

秀

夫

東京大学医学部脳研究施設神経内科〒 1 13 東京都文京区本界汀−3 −1

班

員

古

庄

敏

行

鹿 児島 大学 医学部 衛生 学
〒 89 0 鹿 児島 市宇宿 町12 08 −1

近 藤 喜代 太郎

新 潟大学 脳研 究所 神経 内科

古東 京医 科 歯科 大学 医学部 神 経内科〒 95 1 新 潟市旭 町通 一番 町75 4
川哲

雄〒113 東京都文 京区湯島1 −5 −4 5塚越廣

東 京医 科歯科 大学 医学 部神 経 内科
〒1 13 東京都文京区i易島1 −5 −45

木

下

真

男

東邦大 学 医学 部 第四内科
〒153 東京都 目黒区大橋2 −17−6

埜

中

征

哉

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部 室

福

原

信

義

新 潟 大学 脳研 究所 神経 内科・〒187 東京都小平市小川東町26 20
助〒 95 1 新 潟市旭 町通 一番 町75 4
小

口 書 三夫

信 州 大学 医学 部 第三 内科〒 39 0 松 本市旭 3 − 1 − 1

中

村

晴

臣

鳥取大学医学部脳幹性疾患研究施設神経病理部門

高

守

正

治

長崎 大 学医 学部 第一 内科〒 68 3 米 子市 西町8 6番地〒85 2 長 崎市坂 本町 7 − 1
高

木

昭

夫

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部 室長

04 23 −41 −27 11

授

0 298 −53 −3500

助 教 授

09 858 −5 −15 10

教

07 26 −83 −122 1〒1 87 東京者M 、
平市小川東町2620
中

西

孝

雄

筑 波大 学臨床 医学 系神 経 内科

栗

原

照

幸

宮崎 医科 大学 第三 内科

茂

在

敏

司

大 阪 医科 大学 第 一 内手
斗
〒5 69 高 槻市 大学 町 2 − 7

教〒3∝ト31 茨城県新治郡桜村大字妻本字天久保〒889−16 宮崎県宮崎郡清武町木原5200

−254−

授

区
班

分

氏
月

垂

所
所

名
井

清一郎

属

施
在

設

名
地

大 阪大 学 医学 部 第二 内科

所属 にお
け る地 位連絡 の際 の電 話

教

授

06 −45 1 −00 51

教

授

0899 −2 4 −7 111

副 院 長

042 3 −2 3−5 111

講師

026 3 −35 −4600

講師0886 −3 1−3 111

講師

0 886 −31 −3111

助 教 授

0 93 −87 1−19 31

講師

0 78 −34 1−74 51

講師

0 52 −74 1−2 111

教

授

0 985 8−5 −15 10

助 教 授

0 285 4−4 −21 11

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第四部 研 究 月

0 423 −4 1−27 11〒553 大阪市福島区福島1 −1 −50
植

田

啓

嗣

愛 媛大 学保健 管理 セ ン ター
〒790 松 山市道後 樋 又10 −13

字尾野

公

義

東 京都 立神 経病 院神 経 内科
〒18 2 東京都肝中市武蔵台2−9−2

庄

司

進

一

信 州大学 医学 部 第三 内科〒 39 0 松本 市旭 3 − 1 − 1

八木 田

正

聖

徳 島大学 医学 部 第一 内科〒 770 徳 島市蔵 本町3 −18 −1 5

川

井

尚

臣

徳 島大学 医学 部 第一 内科〒 770 徳 島市蔵 本町3 − 18 −15

馬

渡

志

郎

九州 工 業大学 保健管 理 セ ン ター

高

橋

桂

一

神戸 大学 医学 部 第三 内科〒804 北九州市戸畑区仙水町1 −1〒650 神戸市生田区楕町13 ・14合併地
飯

田

光

男

名古 屋大 学医 学部 第一 内科

荒

木

淑

郎

宮崎 医科 大学 第三 内科

宮

武

正

自治医科 大学神 経 内科

〒 466 名古屋 市 昭和 区鶴舞 町6 5〒889−16 宮崎県宮崎郡清武町木原5200〒329−04 栃木県河内郡南河内町大字薬師寺3m −1
吉

田

端

子

〒187 東京都小平市小川東町2 620
井

村

裕

夫

京都 大学 医学 部 内科 第二 講座

数

授

0 75 −75 1−3 111

助 教 授

075 −75 1−2 111

講師

0886 −3 1−3 111

部

長

03 −58 3−68 71

講師

0992 −64 −22 11

教手
受

088 6 −3 1 −3111

助 教 授

045 −97 1 −1151

理

03 −20 3− 12 11〒606 京都市左京区聖護院川原町54
林恭三

京都 大学 薬学 部生物 化学〒 606 京都市左京区吉 田下阿達町

真

田

幸

弘

徳島大学医学部附属酵素研 究施 設
酵素 化学 部 門
〒 770 徳 島市蔵 本町3 − 18 −1 5

田

辺

等

虎 の門病 院神 経 内科
〒107 東京都港区赤坂虎の門2−2−2

納

光

弘

鹿 児島大 学医 学部 第三 内科〒 890 鹿児 島市宇 宿町 1208 − 1

名

取

靖

郎

徳 島大 学 医学部 栄養 化学〒 770 徳 島市 蔵本 町 3 −18 −15

班

員

若

山

吉

弘

昭和 大学 藤が丘 病 院神経 内科〒22 7 横 浜市 緑 区藤が 丘 1 − 30

経理事務担当者

小

川

秀

雄

日本 筋 ジス トロ フ ィー協 会〒162 東京都新宿区西早稲田2 −2−8
ー255一事