厚生省「神経疾患研究委託費」

筋ジストロフィー症の発症楓事に関する臨床的研究

三好：旺

昭和57年度研究報告書

昭和58年3月

研究報告書の作成にあたって
厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」
班として，昭和57年度の研究報告書を作成する運びとなりました．
当研究班としては本年は昨年につづいて2年目であります．研究は，現象論ともいうべき病状，所見の把握，ついで実態論としての病態の解明，そして，これらを通しての本質論である成因の究明の3段階を意識して進めています．本症のように未だ究極の成因のみつかっていない疾患の研究にあっては，それぞれの研究の意味をこのように確認しながら行うことが大切であると思います．
本年度の研究成果はこの報告書に示されていますが，各自の自由の発想の中に総体として上述の意味でのひきしまりとまとまりがみられます．珪月各位の不断の努力に班長として心からの敬意を表します．本報告書は当研究姓の今後の研究に格段の飛躍を期待させるとともに，直ちに内外の本症の研究者や医師達に大きな影響を及ぼすものと思います．
報告書の作成に当っては，本年度はその出来を早めるために論文の提出時期を57
年の12月に繰上げました．私もこの序文を姓会議の終った時点で，緊張の中に，活発であったあの雰囲気を想い起しながら書いています．本年度の研究はなおつづいているところ，班月各位の御協力に謝意を申し述べます．
本研究班に賜った，厚生省当局，国立神経センター，そしてH本筋ジストロフィー協会の深い御理解と多大の御支援に深く感謝致します．
昭和57年12月
く班長〉

三

好

和

夫

目

次

昭和57年度総括研究報告7

昭和57年度総合班会議研究報告抄録

13

分担研究報告25

Ⅰ．実験動物33

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病理

87

伝

89

b）臨 床

97

c）形 態

114

d）培 養

132

a）遺

Ⅲ．筋ジストロフィー症の病態生理

139a）赤血球など

141

b）生 理

153

C）生化・代謝など

171

IV．いわゆるdistal myopathy

225

昭和57年度研究班名簿273

昭仁和57年度

総括研

究報告

総括研究報告

班長

三

好

和

夫

〔はじめに〕
本年（昭和57年）12月4日（軌 5日（日）に当研究班の：旺会議を開催し，予め作られた抄録集に基づいて発表，討議された研究報告を論文にまとめて本報告書が作成された．51編が集録されている．

〔研究班の方針〕
当研究班の目的は筋ジストロフィー症の成因の発見と発症機序の解明であるので，研究はすべて独創的で新しいものでなければならない．
姓では，本年6月，改めて班月各位に研究計画の提出を求めるに際し，班長の意向を次のように伝えた．
「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」を次の3段階に分けてみた．
1）症例の症状，所見の把握と解析からの新しい疾患，症型の発見と確立，2）筋の変性，
崩壊，再生の実態の形態学的，生理学的，そして生化学的特徴の確立，3）本症遺伝子の表
現としての蛋白質，酵素の異常の発見，である．
これらは本症の成因究明に対してそれぞれ1）現象論的，2）実態論的，3）本質論的な研究といえるが，その特徴は，これら3段階の研究が個別に成立するものではなく，現象を通して実態が，実態を通して本質が明らかにされることであると思う．
班月の各位は，本研究姓のテーマからして1），2）の研究を行いながら，少しく意識して3）の研究を施行されるようお願いしたい．
以上のとおりであるが，すでに昨年，昭和56年度の筋ジストロフィー症総合班会議では，
当研究班からは，上述の1），2），3）に概当すると思われる研究テーマを一つずつ選んで代表演者らが発表した．
すなわち，1）いわゆるdistal myopathiesについて（予報的review，文献集を当班56年度報告書に掲載），2）筋ジストロフィー症における筋の変性と再生；a）壊死とCaイオ

ー9−ン，b）再生，サテライト細胞，筋核のDNA合成とCellcycle，筋線経の構造蛋白，3）単一酵素（解糖系酵素）欠姐によるミオバナー，である．
t また，これらのうち，1）と2）は当研究社でこれまでに相当の業績をあげてき，次年度以降の当研究班のテーマとすることを昨年度に決定している．

〔分担研究報告〕
研究報告会譲は，終始して学術的に緊張度の極めて高いものであ▲つた．
報告の内容は，（数字は概括数）1）新しい症例，病型に関するもの15（うち，いわゆるdistal
myopathieslO），2）筋の再生

6，変性・崩壊15，新しい研究手技5，3）本症ならびに類縁ミオパテーの成因に関するもの 5，その他である．
各報告はしかし，常に本症の成因との関係を意識しながら行われた．また，内容的には相互に種々に重複し，それぞれの中に前述の3段階の要素を含んでいる．
いわゆるdistal myopathy：
例えば，distalmyopathyについていえば，古典的Welander型と別に，本姓で発見された狭義の筋ジストロフィー症ともいうべき末梢型が示され，これに対し，筋組織所見で空胞変性を伴ういくつかの症例と家系例が集積された．後者のものでは，空胞変性から筋崩壊の一つの具体的パターンが推定され，また，その中にはdebrancher enzyme defi・
ciencyがその成因であることを思わせるものが発見された．
この部門においては，筋ジストロフィー症としての，遺伝・臨床型の確立，筋崩壊の機序，そして成因論がこの中だけで組み立てられているということができる．本症の末梢型に関するものであるが，筋ジストロフィー症自身の問題を包含し，国外に顆をみないもの
で，本研究班における大きな成果といえる．
筋の崩壌：
また，別の例として筋崩壊に関しても，筋線経の変性（opaquefiberなど）所見，Caの細胞内への異常流入，そしてCANP，カテプシン，セリンプロテアーゼなどの各種の蛋白分解酵素の段階的な蛋白質分解の機序が関連づけられて解明されてきた．幾多の筋凍酵素
や特殊な構造蛋白の血中への流出の機序を併せた筋崩壊の全貌が近く示されることであろう．

報告の概括と見通し：
珪報告を総括的にいえば，新しい症例が家系例とともにそれぞれ遺伝・臨床型として整理され．筋の変性，再生と崩壊が，形態，生理，そして生化学，代謝の面から関連をもっー10−

て解明されてきた．この分野では，モチリレ動物を用いる研究が併せ行われている．そして，本症の成因の探求がいくつかの独特の着想から進められるとともに，すでに成因の決められている解糖系酵素の異常によるミオパテーでは，成因と実態の関連が明らかにされつつある．
これらの研究の中から本症の成因である筈の何らかの蛋白質，酵素の異常が発見されることが期待される．本研究班では，そのような態勢を十分に培ってきたし，その状況は換言すれば，ひとたび本症各型の一次的な成因が確認された時には，現状の研究成果は直ちにそれらに連結して，本症の症状，失態，成因の全体の解明が一挙にもたらされることが予測される．

〔本年度の総合】旺合議への参画〕
本年度（来春1月）の総合班．会議での当研究班の課題は上述の研究成果を踏まえて，次のごとく決められた．
1．序論，2．羅息筋の再生能，3．筋壊死とプロテアーゼ，4．組織対応法による筋構造
蛋白の分解，5．いわゆるdistal myopathies，1）問題点，2）rimmed vacuoleと封入体の特異性，3）distal myopathyとdebrancher enzyme．

〔おわりに〕筋ジストロフィー症の成因と発症機序の発見と解明を目標として，当研究班は目標に限りない770ローチを行うとともにその達成を意図している．そして当研究：虹はまた，そこで毎年，新しい本症の研究者と医師達が育ち，巣立ってゆく場であるということができる．
本研究報告書は筋ジストロフィー症に関する内外の研究者や医師達の今後の研究と臨床に大きく影響するものと思う．

一11−

昭和57年度厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症」総合班会議 ■筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究

研究報告抄録筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究
序

三

論

好

和

夫

（沖中記念成人病研究所）〔筋ジストロフィー症の発症〕
本症では．a）各病型の遺伝子に該当するそれぞれの異常蛋白質，酵素が在り，b）そのために筋細胞の崩壊，筋の萎縮がひき起され，C）結果として各病型の病者が生じる．
現在，a）は全く不明，b）では不明の点が多く，C）でも不明の部分が残されている．
〔本症の研究と当研究班〕
研究は，本症の成因の究明を目的とする意味合いからは，次の3段階，1）現象論的に，病者の症状，所見の把握から新しい症例や病型の発見，2）実態論的に，筋の変性，再生，崩壊の機序の解明，そしてこれらを通して，3）本質論的に，本症の病因の発見，が段階的に積み上げられて成就するものといえる．
筋ジストロフィー症のように，病因不明の疾患にとり組む場合には，各研究者の研究の意味がこのように明確にされながら進められることが大切である．当研究姓ではこのことを意識して行い，
1）と2）の研究で着実に実績をあげ，3）の目的達成をそれらを通して期するとともに，そのための独特のいくつかの研究を進めている．
〔本総合班会議におけるテーマ〕
当班で重点をかけてきたものの内から，「いわゆるdistalmyopathies」と「寝息筋の再生能」，「筋壊死とプロテアーゼ」をとりあげ，そして，「新しい手法」の1，2を加えた．
「distalmyopathies」に関しては，その中に，まさに狭義の筋ジストロフィー症そのものとされる病型があり，別に，VaCuOlesの存在するものでは，筋崩壊の一つの具体的パターンが提示され，また，その中には酵素欠損（debrancherdeficiency）をみるものがあるなど，このテーマには上述の3段階の研究のすべてが含まれている．
「罷患筋の再生能」，「筋壊死とプロテアーゼ」と「新手法」のテーマは，筋線経の変性（opaquefiberなど），Caの筋細胞内流入の異常，膜の透過性異常，筋の酵素，構造蛋白質の血中流出，など，着実に解明されつつある本症の筋崩壊の失態の全過程の中のそれぞれ部分としてとりあげた．

ー15−

罷息筋の再生機能

黒 岩 義五郎（九州大学医学部脳研神経内科）
DMPの羅息筋の再生現象に関して，今年度発表された研究成果についてのべる．
1．脱神経筋の再生現象：
埜中らはラットで坐骨神経切除後，未分化なタイプ2C線経の割合の増加を認め，筋線維分化の遅れを指摘した．又筋衛星細胞は，脱神経でも融合しうることを認めた．小口らはマウスの膵
腹筋で坐骨神経切除後の光顕ラジオオートグラフィーにて，筋衛星細胞の活性化を認めた．
2．実験的筋再生現象：
高瀬らは，ラットへのサポニン，ブビバカイン筋注，筋損傷実験等で，筋肉菜の細胞流出機序の存在で，筋再生過程が生じうると論じた．又中村らは，筋ジス鶏の再生はCOldinjury後の再生実験で，再生筋線維タイプ分化の遅れ，又筋線維径が細いことを述べた．
3．培養実験：宇尾野らは，筋ジス鶏筋で培養後大量のCPK遊敵を認め，筋細胞分化が特定の時期，条件で異常のあることを示した．又塚越らは，筋ジス鶏胸腺内myoid cellsで筋管細胞の横紋形成，自発収縮，Ach R局在に異常を認めないが，筋管細胞の空胞が初期より筋ジス鶏で多く認める．
4．移植実験：若山らが，DMD筋，対照筋をヌードマウスに移殖し，DMD筋で，2週目に再生筋が有意に細い事を報告した．
5．筋衛星細胞のモルフォメトリー
黒岩らは，DMD，多発性筋炎，対照群の生検筋にて，筋衛星細胞の細胞体及び核の面積，核の長さ，ミトコンドリア数が，対照群と比較して，多発性筋炎で有意に増加しているが，DMD筋では，増加傾向のみであることを示した．
以上より，筋ジストロフィー症では，少なくとも筋再生能は存在するが，その発達過程に異常のある可能性が示唆された．今後，筋再生の初期の再生現象に関して詳細な検討が必要と考えられる．

−16−

筋壊死とプロテアーゼ

杉 田 秀 夫
（国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部）
1）筋蛋白分解酵素及びその機構
DMDにおける筋蛋白分解にはCANP，カテプシン，セリンプロテアーゼなどのプロテアーゼが段階的に作用するものと想定される．これらのプロテアーゼがどのような関連をもって筋蛋白を分解するのかを実験モデルを用いて検索した．方法としては，plasmocidを直接ラットのヒラメ筋に注
射し，筋蛋白の分解過程あ時間経過を調べた．注射2〜3時間後にDMDにおいて見られるのと同じopaque線経が出現し，又，GBHAで染出された．罷患筋の構造蛋白の変化を経時的に見ると，Z帯に存在するα−アクチニンは注射2時間後すでに40％に低下し，12時間で殆んど消失しその他の構造蛋白に比し著しく速く消失した．このようなZ帯の消失がCANPによるのか，或いはカテプ
シンによるのかを検索する為，EGTA或いはチオールプロテアーゼ阻害剤であるE−64−Cと共に注射すると，羅息筋のα−アクチニンの減少は部分的ではあるが抑制された．
次にリソゾーム酵素であるカテプシンの時間経過を調べてみると，カテプシンB＆L，Dは注射
3時間後は上昇せず，従ってα一アクチニンの選択的消失はCANPの作用によることが強く示唆される．
カテプシンB＆L，Dは48時間後には数倍に増加し，3日でピークに達する．この時間経過は筋線維崩壊の経過とよく一致している．各種リソゾーム酵素の中では著明な活性上昇のみられる群（カテプシンB＆L，β−グルタロニダーゼ）と弱い活性上昇しかみられない群（酸フオス77ターゼ
等）に分けられる．内因性チオールカテ70シンインヒビターも著明な活性上昇がみられた．
さてこれらカテプシン系及びそのインヒビターの活性上昇が筋細胞自体のリソゾームに由来するのか，それとも組織に浸潤したマクロファージに由来するのか調べる為にカテプシンB抗体を用い，
螢光抗体法で染色してみると活性はマクロファージのみにみられ，筋細胞は染色されなかった．又，ラット腹腔中のマクロファージを集めリソゾーム氷解酵素活性と骨格筋の酵素活性とを比較した．
筋蛋白の崩壊に伴い著しく上昇する酵素群はインヒビターを除きマクロファージにおいても強い活性を示した．以上の事実はマクロファージのカテプシンが重要な役割を果していることを示唆している．又興味あるのは蛋白合成阻害剤であるシクロへキシミッドを腹腔内に投与するとカテプシン
B＆L活性の上昇はみられず，又組織学的にも浸潤細胞の増加は抑制された．
以上の現象を総括してみるとplasmocidによる筋蛋白の分解は少なくとも2段階に分けられると思われる．即ち第1段階は，plasmocidにより恐らく表面膜が障害され，細胞外Caの流入により
CANPは活性化され限定分解を行いその結果，まずZ帯の消化，α−アクチニンの遊離が起り筋原線
経のdisassemblyが生じる．
第2段階は，リソゾームカテプシン群によりdisassemblyされた筋原線経は非限定分解をうけ筋
蛋白分解は更に進行する．この際浸潤したマクロファージ由来のカテプシンが重要な働きをすると考えられる．同時に肥満細胞由来のセリンプロテアーゼも関与すると思われる．このような機構は恐らくDMDの場合の筋蛋白分解の場合にもあてはまるものと想定される．

ー17−2）筋ジストロフィー症の発症と活性酸素
筋ジストロフィー症における筋細胞変性を考える上でSuperOXide radicalやperoxideによる細胞障害を示唆するデータが特に鶏ジストロフィー（Dyチキン）寝息筋で注目されている．Dyチキン（1ine413）及びコントロール（1ine412）の浅胸筋について活性酸素の代謝に関連するSuperOXide
dismutase（Cu−Zn，Mn），Catalase，glutathioneperoxidase，glutathionereductaseの5つの酵素を僻化後経過を追って測定してみると，コントロールでは何れも成長と共にほぼ平行して漸減していくが，Dyチキンでは活性の絶対値の増加のみでなく成長に伴う活性の経時変化のパターンも異常であった．しかも未だ形態学的な変化が軽微である生後1週目より既に酵素系の上昇がみられ，発症初期に活性酸素系の代謝回転の冗進のあることが考えられる．これらの活性酸素は筋細胞膜を構成する脂質の過酸化を通じ筋細胞の機能障害をおこす可能性があり，本症の成因を追究する一つのア70ローチと思われる．

ー18−

組織対応法による筋構造蛋白の分析
荒 木 淑．郎（熊本大学医学部第一内科）【目的】
各種神経筋疾患の生検筋より目的とする筋線維のみを取り出し，生化学的に筋構造蛋白の分析を行う方法は，技術的に困難なこともあって，世界的にも殆んど着手されていなかったが，今回新しい試みとして福原ら，内野らがそれぞれ独自に病的筋線経の筋蛋白の分析を行う方法を開発したので，その分析方法，ならびに実験結果について概説する．
【対象及び方法】（1）福原ら：対象はrimmedvacuoleのみられるdistalmyopathy（3例）とrimmedvacuoleを伴うKearns−Sayre症候群類似疾患（1例），ならびにnemalinemyopathy（4例）．方法の概略は
新鮮凍結生検筋を連続切片でGomori，ATPase染色を行い，続く20〜30JJm厚さの組織片を−20℃
真空吸引下で凍結乾燥し，染色標本との対応のもとに実体顕微鏡下に目的線経を切艶した．同一筋
線経を連続して，あるいはこれらをあわせて取り出し，マイクロ化したSDSゲル電気泳動及び
0′Farrellらの方法をmodifyした2次元電気泳動に供し，銀染色を行った．
（2）内野ら：Duchenne型ジストロフィー症（DMD）（12例）を対象とし，生検筋を水冷の弛緩液中にて，実体顕微鏡及び偏光顕微鏡下に，いわゆるOpaquefiberをSinglefiberとして分放し，Laem・mliの方法によりSDSゲル電気泳動を行った．
【結果】（1）福原ら：（∋Rimmedvacuoleを有する筋線経は凍結乾燥切片で，i）暗色にみえるもの，ii）中心が明
るいもの，iii）周囲と全く変わりないものの3種類であった．SDS電気泳動では対照と比較して分子量5．5万の蛋白が増加しており，筋線椎によって程度は異なっていた．また，周囲のrimmed
VaCuOleを有しない線経でも同様の傾向が認められた．この蛋白は分子量と等電点からdesminと思われた．
②Nemalinemyopathyではrodを認めるtypeI fiber（R（＋）Ⅰ）と，rOdを光顕上認めない
typeIIfiber（R（−）II）とに分類して筋構造蛋白の分析を行ったが，正常筋typeI fiberでは
α−trOpOmyOSin，myOSinlightchain（LC），trOpOnin−CのそれぞれのSlowformに加えて少量のfast form LC2，。が認められ，typeIIでのそれぞれのfast formにSlow LC2が混じるhybrid
patternであった．NemalinemyopathyのR（＋）Ⅰは正常筋typeIと同様パターンであり，rOd
由来の異常スポットは認めなかった．R（−）IIでは2／4例で，LC2のSlow・fastformの量比が逆転していた．また，両タイプとも分子量5．5万のdesminと思われるbandが増強していた．
（2）内野ら：Opaquefiber（OF）9検体，正常横紋構造を有する対照筋線維（NF）19検体について比較検討したが，形態学的にOFとしてとらえられる筋線椎の約70％はNFと比較して筋構造蛋
白の泳動パターン及び各筋構造蛋白の含有量に変化がなかったが，約30％のOFはmyosinlight
Chainをはじめ，aCtinを除く低分子蛋白の全般的な減少傾向が認められた．ただ，trOpOnin−Ⅰ・Cは
NFでも含有量が極めて微量であり，その増減について言及することは困難であった．
−19−

【考案ならびに結論】（1）福原ら：Rimmedvacuoleを有する筋線経でdesminの増加傾向が強いことは，VaCuOle生成に関与している可能性を示唆するものである．Desminが微細構造上のいずれに対応するか検索中であり，desmin増加機序については今後検索が必要である．またnemalinemyopathyでは筋組織化
学的所見からtypeIの分化過程での異常を想定したが，筋構造蛋白上は正常と差がなく，rOd由来の異常スポットも認められなかった．本症ではtypeIIの分布比が減少している例が多いが，今回
typeIIのLCに異常を認めたことは発生のより早期の障害が疑われtypeI変化がtypeII異常に伴う2次的なものである可能性も考えられる．
（2）内野ら：DMDの生検筋にみられるOFの一部は明らかに筋構造蛋白の変化を有しており，しかも泳動パターンの特徴から，その変化にCANPに代表されるある種のproteaSeが関与していることが推定された．このことからOFは筋線維変性過程で生じる病的筋線経である可能性があり，今後2次元電気泳動による微量成分の解析も含めて更に検討する予定である．

−20−

いわゆるdistal myopathiesl） 問 題 点
豊

倉

康

夫

（東京大学医学部脳研神経内科）

いわゆるdistalmyopathyはGowers（1902）の提唱に始まる長い歴史にもかかわらず，未だに統一的な疾患分類上の位置の定まらない一群の筋疾患である．唯一の共通点は，四肢遠位部を主として侵すミオバナーで，既知の神経原性筋萎縮症や，筋緊酸性ジストロフィー，多発性筋炎を除くということに過ぎない．したがって単一疾患単位としてのdistalmyopathyはもはや存在せず，疾患群としての distalmyopathies が問題である．発症年齢，遺伝型または孤発型，初発部位，筋萎縮の分布，進行の程度，筋病理所見には，これまでの報告例の中でも様々な異同があり，多くの論議がなされてきた．
これらのいわゆるdistalmyopathiesの中で，本研究姓ではとくに以下の問題が検討された．
1）常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー（autosomalrecessivedistalmusculardystrophy）：
三好（1974）によって提唱されたもので，他の臨床型と明らかに区別される筋ジストロフィーの一疾患単位として確立された．剖検例の検索により，特徴的な筋病変の分布様式が確認された．本症の臨床特徴は①常染色体劣性遺伝，②筋萎縮は下腿に始まり，もっとも強く，早期に爪先立ちができなくなる，③10歳後半−20歳台に発症，⑥進行性で，筋萎縮は下腿から大腿にも及ぶが上肢では軽い，⑤血清C鱒値が中等度〜高度に上昇，⑥血清CK値が著しい上昇を示すホモ因子型のものと，軽度上昇を示すヘテロ因子型の2種類の生化学的保因者がある，⑦筋病変はジストロフィー変化で，vacuoleはほとんど認めない．これらの特徴は，Welander型の常染色体優性遺伝を示す晩発性遺伝
性distalmyopathyのそれとは明らかに異なる．
2）顕著なrimmedvacuolesあるいは封入体を伴うdistalmyopathies：これらの症例の中には，共通の臨床特徴を有するいくつかの疾患群があると思われる．ただし，この病理変化そのものには疾患特異性はないが，ライソゾーム系のなんらかの異常が示唆される．
3）封入体筋炎，OCulopharyngealdystrophy，OCulopharymgOdistalmyopathy，debrancher
deficiency myopathy，等との関係も注目されている．

−21−

Rimmed vacuoleと封入体の特異性

佐 藤
猛（順天堂大学医学部脳神経内科）
いわゆるdistalmyopathyの筋病変の特徴としてrimmedvacuoleが注目されてから，その特異性や疾患概念について本研究班でいくつかの報告がなされた．さらにrimmed vacuole型distal
myopathyの罷息筋の筋鞘核内に微小細管状ないしフィラメント状封入体が見出されたため（葛原，
1981：藤井，1982），本疾患群と封入体筋炎との異同についても再検討された．
新しく提起された問題点を中心に本研究班の業績を総括して報告する．
1．Rimmed vacuole
Dubowitz＆Brooke（1973）がOCulopharyngealdystrophyの筋病理における特徴的変化としてrimmedvacuoleを記載した．萎縮筋線経の中央ないし筋鞘下に比較的大きな空胞が認められ，縦断像でみると筋線経の全長に亘っていることが多い．空胞の辺縁には小顆粒が集積しており，tri−
Chrome染色では赤染，H・E・では塩基性で，aCidphosphatase陽性である．Rimmedvacuoleの形
成にもかかわらず周辺の筋原線経の構造は比較的よく保たれている．電顕では自家融解空胞と無数のmyoidbody（multimembranousbody，myelin−likefigure）より成る．グリコーゲン顆粒の集積や粗大顆粒なども含まれている．かかる筋線経では同時に結晶状ミトコンドリア，小胞体やT・tubeの蜂嵩状変性，tubulomembranousstructure，Cylindricallaminatedbodyなども認められ易い（福原，中西・葛原，埜中，佐藤・安野）．

Rimmed vacuoleは疾患特異性はなく，すでにPompe病や封入体筋炎でautophagic vacuole（Engel，1968：佐藤，1971），linedvacuole（Carpenter，1978）として記載されているものと同一構造である．しかし，三好型以外のdistalmyopathy，OCulopharyngealdystrophy，封入体筋炎に高率に出現し，debrancherdeficiencymyopathy（約，1981），quadricepsmyopathy（佐藤・安野，1981）にも比較的多く認められている．その他の疾患では多発性筋炎，myOtOnic dystrophy，Kugelberg・Welander病，DMP（L−G，FSH），SPMなどにも少数は見出されている（福凰1980；
田辺，1982）．
2．筋輪核内封入体
慢性多発性筋炎の寝息筋の筋鞘核内に微小細管状の封入体が見出され，はじめmyxovirus様構造として報告された（Chou，1967；佐藤，1969）．その後の検討で既知のparamyXOvirusとは大きさ，配列などが若干異なること，筋炎以外のミオパテ一にも見出されることなどから，核内の特殊な変性産物と推定されている．しかし，封入体筋炎からのウイルス分離例も報告されており（Gamboa，
1969；Mikol，1982），封入体の本態はなお不明である．また封入体筋炎として報告された文献を再検討すると前述のrimmed vacuole型distal myopathy，quadriceps myopathy，debrancher
deficiencyなどが含まれている可能性が指摘されている．また封入体には2種類あることが明らかにされた．
①微小細管状構造：外径130−180Aであり，横断像ではhaloが認められる．核がかかる封入体で充満しているものでは核膜の重積像や断裂がみられ，断裂部を通じ，筋形質内へも流出しているような像がみられることもある．このような封入体はrimmedvacuole型の変性筋線経に見出され易−22−

い．②フィラメント状封入体：直径60Aの繊細な直線状フィラメントが核内に来状に認められる．

q
q
5
8
6

CARRIER OF DucH訓NE
pEBRANCHER】）EFICIENCY−23−

l・q h﹁ ︐︶ 8 6 9 2 2
1u

典型的な急性多発性筋炎や皮膚筋炎に高率に見出される．動物の実験的筋炎にもみられ，非特異的と考えられる（表）．
MICROTUBULAR FTLAMENTOUS
3．DistaImyopathyの筋病理（150−Ⅰ80A）
（60A）
の問題点
‖0．OF CASES（》Angulated fiberが群化傾向を
INCLUSION MYOSITIS帖UROMYOPATHY示す．（診Typel fiberpredomi・
DISTAL MYOPATHY
nancyを示す症例がある．③rim−
QuADRIC【PS MYOPATHY
medvacuole型変性の特異性．④
OCULOPHARYNGEAL DYSTROPHY
PoLYMYOSITIS：CHRONIC
核内封入体の意義．（9筋電図にてACUTE−SUBACUTE
denervatedpattemが認められる
DERMATOMYOSITIS；CHRONIC
のに筋肉内末梢神経の形態変化は
ACUTE−SUBACUTE
OTHERS
軽微である．

Distal myopathyとdebrancher enzyme

納光 弘（鹿児島大学医学部第三内科）
Debrancher enzymeのdeficiencyの認められるmyopathyすなわちdebrancher deficiency
myopathy（DDM）の成人例はBrunbergら（1971）の報告以来すでに10余例を数えるが，発症年齢
も幼児〜52歳と多様で，筋萎縮の分布も遠位優位〜近位優位とまちまちである．我々が報告した
DDMの4例1〜4）も1例は近位優位，他の3例は遠位優位で，この後者の3例は筋病理の主体がrim・
med vacuoleを有すること，かつ筋線維核内外に約20mmの異常フィラメント集塊を有すること，かつ炎症細胞浸潤を認める部位も存在することにより，病理的にはinclusionbodymyositis（IBM）とよびうるものであり，臨床病理的にはいわゆる rimmed vacuoleを伴うdistal myopathy（DMRV） に該当する症例といえる2・3）．しかし，IBMやDMRVの全てがDDMであるかは疑問で，実際我々もdebrancherが正常のIBMをも経験している．しかし，IBMやDMRVの表現型をとる症例の中にDDMが少なくとも存在していることは診断上，また今後の治療への検索上重要と考える．我々の指摘により，現在幾つかの施設でIBMまたはDMRVのdebrancherの検討がなされつつあり，それらのどれぐらいにDDMが混じているかは今後明らかになると期待される．
本年度班会議で埜中班月により，DMRVで同一症例における2個所の生検筋における測定で，障害の強い部位ではdebrancher活性が1／10以下であったが，障害の殆んどない部位では正常活性を示したこと，かつまた，DMRVでdebrancher活性正常例をみたことが追加発言され6），このことも今後DMRVまたは，IBMのDDMとの関連を考えていく上で重要と考える．
〔関連文献〕（1）Osame，M．，et al．：Familiar muscle type amyl0−1，6−glucosidase deficiency，4th
IntemationalCongressonNeuromuscularDiseases，Sept．1978，inMontreal，Abstract207（2）納 光弘，他：Debrancher Deficiency Myopathy−Inclusion Body Myositisとの関連−．
第23回日本神経学会総会抄録ⅠⅠIC−14（258）（1982年5月東京）（3）Osame，M．，etal．：IslnclusionBodyMyositis−The

relationshipbetweenDebrancher■

DebrancherDeficiencyMyopathy

Deficiency

MyopathyandInclusion

7−

Body

Myositis｛−．5thInternationalCongress on Neuromuscular Diseases，Sept．1982，in
Marseilles，Abstract WE63
（4）納 光弘，他：InclusionBodyMyositisの筋病理を呈したDebrancherDeficiencyMyopathyの同胞例．代謝19巻10号：1321，1982（5）納 光弘，他：Debrancher Deficiency Myopathy−inclusion body myositisあるいはrimmed vacuoleを伴ったdistalmyopathyとの関連−．昭和57年度三好蛙，演題番号35（6）埜中：（5）への追加

−24−

担

究

分

研

報

告

目

次

Ⅰ．実験動物

1）筋線維の発育分化に対する神経の関与
国立武蔵療養所神経センター微細構造研究部

35

埜

中

征

哉

中

村

晴

臣

2）筋ジストロフィーチキン骨格筋の修復能
鳥取大学医学部脳研神経病理403）神経切断による筋衛星細胞の活性化について−光顕ラジオオートグラフィーによる検討−
信州大学医学部第三内科

44

小 口 喜三夫

4）実験的再生筋に関する研究48

東北大学医学部脳研脳神経内科

高

瀬

貞

夫

木

下

真

男

5）筋萎縮の発現機序に関する研究
1）ステロイド萎縮筋（2）53東邦大学医学部第四内科

6）不動化による実験的筋萎縮の病態
国立武蔵療養所神経センター

57

高

木

昭

夫

7）胸腺腫自然発症ラット（Buffalo／Mna rat）の下腿筋における組織化学的検討名古屋大学医学部第一内科

飯

田

光

8）正常及び筋ジストロフィー鶏胸腺内myoid cellsの形態学的検討
東京医科歯科大学医学部神経内科

塚

61

男

越

廣

9）ジストロフィー鶏・培養筋細胞からのCPKの遊離
都立神経病院神経内科 字尾野

公 義

68

75

10）ジストロフィー鶏発育早期におけるsuperoxide dismutase，
catalase，glutathione peroxidase，glutathione reductase活性の異常について78

自治医科大学神経内科

水

野

美

邦

裕

夫

11）Dystrophy mouse及びdystrophy hamster組織中のEnkephalin様免疫活性83

京都大学医学部第二内科

井村

Ⅱ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病理

12）筋萎縮性疾患の遺伝分析−Duchenne型ジストロフィー症について−

杏林大学保健学部疫学

89

古

庄

敏

行

13）Duchenne型筋ジストロフィーの遺伝補遺−突然変異率と親の年齢
東京都神経科学総合研究所臨床神経学研究部

92

近藤

喜代太郎
97

14）Emery‑Dreifuss muscular dystrophyの一例

熊本大学医学部第一内科

荒

木

淑

郎

15）筋緊張性ジストロフィー症における脳CT・脳波・WAISを中心とした臨床的研究
虎の門病院神経内科

田

辺

103

等
107

16）Rigid spine syndromeの臨床型について
九州大学医学部脳研神経内科

黒

岩

義五郎

17）軽度かつ持続的な運動により筋硬直を呈する家族性ミオパチー
浜松医科大学第一内科

西

村

嘉

109

郎

18）骨格筋の組織病理学的研究−特に肥大線維，中心核，Fiber splittingについて−

大阪医科大学第一内科

茂

在

敏

114

司

19）Duchenneジストロフィー症生検筋のヌードマウスへの移植実験−再生筋直径の定量的検討−
昭和大学藤が丘病院神経内科

118

若

山

吉

弘

黒

岩

義五郎

20）各種神経筋疾患におけるSatellite cellの検討
九州大学医学部脳研神経内科

12421）Carbonic anhydraseⅢ（CA Ⅲ）の人骨格筋における局在について北海道大学医学部脳神経外科

田代22）生検筋のprimary cultureの確立とその応用について
神戸市立中央市民病院小児科 吉 岡

126

邦

雄
132

三惠子

23）糖脂質の神経筋培養に与える影響
国立療養所字多野病院臨床研究部

135

斎

田

孝

彦

Ⅲ．筋ジストロフィー症の病態生理24）Duchenne型筋ジストロフィー症の赤血球のpolyphosphoinositideの同定
国立武蔵療養所神経センター

141

吉

田

瑞

子

25）Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の赤血球カルシウム含量
信州大学医学部第三内科

庄

司

進

一

26）Myotonic dystrophyにおける赤血球膜脂質構成
国立赤坂療養所神経内科

馬

144

149

渡

志

郎

27）Duchenne型筋ジストロフィーの筋小胞体機能：
スキンドファイバー法による再検討
国立武蔵療養所神経センター

153

高

木

昭

夫

28）筋ジストロフィー症及びその他の神経筋疾患におけるM波の研究
宮崎医科大学第三内科

栗

原

照

158

幸

29）A23187‑induced myopathyにおけるカルモデュリン・プロスタ

グランジンの役割に関する生理学的検討
金沢大学医学部神経内科

164

高

守

正

治

30）筋病変とミオグロビンの局在−酵素抗体法（PAP法）による観察−
熊本大学保健管理センター

171

出

田

透

31）血清ミオグロビンの変動パターンからみた筋・心筋疾患
ならびに運動時の筋崩壊量の推定
徳島大学医学部第一内科

川

井

174

尚

臣

32）筋におけるクレアチン代謝
筋ホモジュネートによる1‑14C標識クレアチンからの
1‑14C標識サルコシンの産生冲中記念成人病研究所

三

好

179

和

夫

33）筋肉酵素の漏出について184

愛媛大学保健管理センター

植

田

啓

嗣

渡

志

郎

34）Duchenne型ジストロフィー症の線維芽細胞および白血球の生化学的研究
国立赤坂療養所神経内科

馬

188

192

35）神経筋疾患における白血球proteolytic enzymesの検討
九州大学医学部脳研神経内科

後

藤

幾

生

36）筋タンパクの崩壊とリソゾームチオール性プロテアーゼ
徳島大学医学部酵素研酵素化学

木

南

195

英

紀

37）Plasmocidによる実験的ミオパチーの筋蛋白分解機構−筋ジストロフィー症との関連−
国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

198

杉

田

秀

夫

38）Duchenne型筋ジストロフィー症にみられるopaque fiberの筋構造蛋白に関する研究

202

熊本大学医学部第一内科

荒

木

淑

郎

39）筋糖原病の病態分析−新しいスクリーニング指標物質について
大阪大学医学部第二内科

206

垂

井

清一郎

40）多発性筋炎における抗ミオシン抗体の診断的意義について
大阪大学医学部第二内科

垂

井

210

清一郎

41）核磁気共鳴による筋ジストロフィー症の研究（1）筋の発育に伴うproton緩和時間ならびにナトリウム量の変化
新潟大学脳研究所神経内科

宮

武

正

42）組織対応法によるnemaline myopathyの生化学的研究

新潟大学脳研究所神経内科

福

原

214

219

信

義

lV．いわゆるdistal myopathy

43）筋線維束からみたrimmed vacuoleを伴うdistal myopathyの筋病変
東京大学医学部脳研神経内科

豊

倉

康

夫

44）筋病変におけるrimmed vacuoleないしはその類似所見について
虎の門病院神経内科

田

辺

225

231

等

45）Filamentous inclusion，Tubulomembranous inclusionとRimmed vacuolar degenerationについて
筑波大学臨床医学系神経内科

237

中

西

孝

雄

46）Autosomal recessive distal muscular dystrophy（常染色体劣性

末梢型筋ジストロフィー症）の特徴と文献的考察（附）1剖検例冲中記念成人病研究所

三

好

和

242

夫

47）特別発言：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症（三好）の1剖検例 248
徳島大学医学部第一病理

檜

澤

一

夫

48) Debrancher Deficiency Myopathy −inclusion body myositis

あるいはrimmed vacuoleを伴ったdistal myopathyとの関連−
鹿児島大学医学部第三内科

納

光

弘

49）Distal および Quadriceps myopathyにおける筋電図ならびに末梢神経の電子顕微鏡所見
順天堂大学医学部脳神経内科

佐

藤

佐

藤

264

猛

51）Rimmed vacuoleを有する筋線維の電気泳動的研究
新潟大学脳研究所神経内科

福

原

259

猛

50）いわゆる「封入体筋炎」における筋鞘核内封入体の特異性
順天堂大学医学部脳神経内科

255

269

信

義

実
Ⅰ．

験

動

物

1）筋線経の発育分化に対する神経の関与

埜

中

研究協力者

征
岡

哉
田

理

美●

骨格筋は大きく赤筋と自筋に分けられる．ATP

渡染するタイ702線経に分け，さらに酸性側前処

ase染色により赤筋はタイ781線経，自筋はタイ

理ATPase染色でタイプ2線経をタイプ2A，2702線推とよばれている．タイプ2線経はさらにB，2C線経に分けた．4種の筋線経の頻度と分布

タイプ2Aと2をしらべ，線維径を測定した．

B線経に分けられる．ヒト正常

成人骨格筋ではこのタイプ1，2A，2Bの3種

2．筋衛星細胞の頻度

類の筋線経がほぼ1／3ずつモザイク状に分布す上の組織化学的検索と同じく，生後24時間以内

る1）．この3種の筋線維タイプの決定は，筋線経をに右坐骨神経の切除を行い，術後5，10，15，20，

支配する神経によって左右される2）．神経支配を30日目に各々5匹ずつ計25匹から，右側ヒラメ筋

受ける以前，すなわち胎児筋は未分化で生化学的と長指伸筋をとり出し，グルタール液国定後，オにも組織化学的にも自筋，赤筋の区別なく両者のスミウム酸にて後固定した．電子顕微鏡写真より，中間的特徴を示す．このような未分化な線経はタ各個体から（今回はヒラメ筋のみ）約500本の筋線

イプ2C線維とよばれている．すなわち未分イヒな経の筋核，筋衛星細胞，筋衛星細胞核数を数えた．

タイプ2C線経がタイプ1運動神経に支配され左側の筋を正常対照として使用した．

ると，次第に分化し，生理学的，生化学的，組織3．pmaマウス5）の萎縮筋

学的にタイ701線椎の特徴を備えるようになる．
同じことが，タイプ2A，2B線経にもいえる．

pmaマウスで捻俳骨神経の完全欠如例から前脛骨筋，長指伸筋をとり出し，各種組織化学的染もし筋線経がタイプ2C反応を示す未分化な時，

色を行いその分化の状態をみた．

神経支配を速断したら筋線経ははたしてどのよう結な態度をとるのかそれをみるため本実験を行った．

果

1．新生児期のラットの骨格筋は未分化で全てタ
対象・方法

イプ2C線椎であったが，脱神経を行わない正常1．新生児期脱神経筋の組織化学的検索

筋は生後3〜5日目よりタイ701線経が出現しはSprague−Dawley系ラットを使用した．生後24

じめ，以後急速に分化していった3）．

時間以内の新生児ラットの右坐骨神経を約5新生児期に神経切除すると筋線椎の分化は著明

mmの長さ切除し，切除後10，15，20，30日目にに遅延した（図1）．脱神経をうけたヒラメ筋は（表各5匹ずつ（計20匹）について，赤筋であるヒラ

1）生後10日目でも全て未分化なタイプ2C線経

メ筋，白筋である長指伸筋をとり出し，凍結固定であり，以後ゆっくりと分化するがタイ702B線

した．凍結切片にhematoxylinandeosin（HE）

維までで，タイプ1や2A線椎には分化しなかっはじめ各種の組織化学的染色を行った．筋線経をた．線維径も細く正常対照と比べて生後30日目でアルカリ前処理ATPase（routine ATPase）染色は1／3以下であった．脱神経した長指伸筋（表2）で活性なく淡染するタイプ1線経と，活性あってもヒラメ筋と同じく，タイ702B線経へは分化し＊国立武蔵療養所神経センター徴如構造研究部

たが，タイ701，2A線経には分化しなかった．
−35−

表1 新生児期脱神経筋の筋線維タイプ分布と筋線維径（ヒラメ筋）
筋 線維 タイ プ分 布

（
％ ）

筋

線

維

径 ± S ．D ．（〃）

日齢
1
10

15

20

30

2 A

2 B

2 C

1

2 A

2 B

1 0 0 ．0
（5 0 ．4 ）（4 9 ．6 ）（5 5 ．9 ）（5 8 ．
3 ）（1 0 ．
8 ）（7 0 ．1 ）（1 9 ．4 ）1 6 ．08 4 ．0（0 ．
4 ）（4 3 ．7 ）2 8 ．47 1 ．6（1 5 ．4 ）（1 5 ．6 ）46．
2（9 ．4 ± 2 ．
3 ）（7 ．3 ± 2 ．6 ）（1 4 ．3 ± 3 ．
6 ）（1 8 ．8 ± 3 ．
2 ）（1 8 ．7 ± 3 ．0 ）（2 1 ．1 土 5 ．
0 ）（1 8 ．1 ± 4 ．8 ）5 3 ．8（1 0 ．5 ）2 C
7 ．0 ± 2 ．5

1 0 ．2 ± 2 ．1

9 ．
4 ±4 ．
5（1 3 ．0 ± 2 ．
2 ）（1 2 ．
0 ±2 ．
4）

7 ．6 ± 1 ．
99 ．
2 ±5 ．
3（1 6 ．1 ± 1 ．
9 ）（1 5 ．
6 ±4 ．
5）

6 ．9 ± 2 ．
3

5 ．7 ± 4 ．
5（1 9 ．
3 ±4 ．
8 ）（）内は正常対照

図1

生後30日目ラットのヒラメ筋（a，b）と長持伸筋（C，d）のroutine ATPase染色．
新生児期に脱神経をうけたヒラメ筋（b）も，長持伸筋（d）も対照（a．C）に比べ細く，ほとんど全てタイ
プ2線経である．脱神経長持伸筋（d）には肥大線維（星印）あり，タイ701（1）と2（2）線経の中間的反応を示す．
a−d：×350−36−

表2 新生児期脱神経筋の筋線維タイプ分布と筋線維径（長指伸筋）
筋 線 維 タイ プ分 布

（％ ）

筋

線

維

径

± S ．D ．（〃 ）

日齢
1
10

2 A

（7 ．4 ）

15

（7 ．
7）

20

30

2 B

2 C

2 2 ．87 7 ．2（4 6 ．4 ）（4 6 ．3 ）6 6 ．7

3 3 ．3（6 4 ．4 ）1

8 6 ．113．
9（2 0 ．5 ）（7 0 ．
3 ）

（1 ．
7 ）

8 6 ．1

13．
9

（6 ．
3）

（1 9 ．1 ）（7 2 ．
5 ）（ 2 ．1 ）2 B

2 C

1 2 ．7 ± 3 ．
5（
1 0 ．9 土 2 ．
8 ）（
2 7 ．9 ）

（7 ．
4）

2 A

8 ．
8 ±2 ．
7（9 ．5 土 1 ．8 ）（6 ．
3 土1 ．
5 ）10 ．
5 ± 4 ．5

11．
0 ± 3 ．2（
1 4 ．4 ± 2 ．
3 ）（1 2 ．8

7 ．5 土 3 ．1

11．
5 ± 6 ．1（
1 6 ．1 ± 2 ．
3）（1 2 ．5 士 1 ．8 ）（1 5 ．4 土 2 ．
9）（1 0 ．
8 ± 1 ．7 ）7 ．0 士 3 ．
412 ．
2 土 10 ．
7（1 8 ．6 土 4 ．
0）（1 5 ．
2 ± 6 ．0 ）（1 7 ．8 ± 3 ．
7）（1 2 ．
8 ± 2 ．3 ）

3．
6 ）

（9 ．
3 土 2 ．6 ）（）内は正常対照

イプ1線経に近いタイプ2C反応を示した．
2．筋衛星細胞は新生児ラットでは非常に多い．
ヒラメ筋では衛星細胞核は全核（筋核＋衛星細胞核）の約30％であったが，年齢とともに減少し，生後1月には15％程度であった．脱神経筋でも，衛星細胞の頻度には差はなかった（図2）．形態学
的には脱神経筋の衛星細胞の方がやや大型で円形−慮0■己−■−○↑＼−慮0−とー000墓○−■のヒラメ筋と異なり，少数の肥大線練の存在をみたが，これらはroutineATPaseでやや淡染し，タに近かった．
3．pmaマウスの萎縮筋は対照の1／10以下と細く，結合織の増加のためか白く，弾力性に乏しかった．切片でみると筋線経は10／J径以下であり，結合織や脂肪織が著明に増加していた．また胞体の

図3

鳩

5

10

15

20

図2 新生児期脱神経筋（ヒラメ筋）の筋衛星細胞の頻度．

生後60日目pmaマウスの前脛骨筋．
筋線経は細くroutineATPase染色（a）でも，pH4．6前処理ATPase染色（b）
でも活性あり，タイプ2C反応を示す．中心部に核のある線経が多く，その線経では中央部に活性がない．a．b：×350
−37−

80

中心に核のある線経が多かった．ほとんどの小径欠如により，その支配下の筋（前脛骨筋，長指伸筋線経はATPase染色で未分化なタイプ2C反筋）などが極めて細く未発達のまま残る動物であ応を示した（図3）．電子顕微鏡的には筋線経は細る5）．総排骨神経は肉眼的にも欠如していて，神経

く，中心にしばしば核をもっていた．myofibrilの形成はあったが帯構造の形成はまだ十分でなかっ筋接合部に存在するアセチルコリンエステラーゼ

た．筋衛星細胞の増加はなかった．

も正常で逆行性の病変もみられないことから，総活性が認められない．坐骨神経では有髄神経の数
俳骨神経へ分岐する時の異常で，総排骨神経はお考

そらく俳腹神経など他の神経へと誤って走りこん察

ヒトやラットの骨格筋はATPase染色でみるでいると考えられている．このように骨格筋が一と未分化なタイプ2C線経からタイ701線経へ，あるいはタイプ2B線経を経てタイプ2A線経

度も神経支配をうけないでいる時は，筋線経は未へと分化する．すなわちタイプ1あるいは2A線

イ702C線経のまま存続する．

熟でほとんどの筋線経は生後1月でも2月でもタ経が最も分化した形である．タイプ2B線経は2以上のような実験結果からみて，Werdnig−

A線経へと分化するが，正常成人には約1／3，またHoffmann病にみられる多くのタイ702C線経

成熟ラットにも多く存在しているので，この線経は多分筋がまだ未分化である時に脱神経をうけたは未分化な線経とはいえない．ヒラメ筋では長持結果であろうと考えられる6）．しかし大半の筋線

伸筋より分化は遅く生後1月をすぎても多くのタ経はタイプ2Bあるいはタイプ1線維トへと分化

イプ2C線経が存在する．これは多分タイプ2Aするので，萎縮筋線経は一度は神経の支配をうけ，線経が脱分化してタイ702C線経へとなり，さら早期に脱神経をうけたものと考えられる．先天性にタイプ1線経へと変換する時のタイ702C線

非進行性ミオバナー（ネマリンミオパチーなど）

経が主であって，胎生期から存続したものとは限にも，その若年者には多くのタイプ2C線経がみられることは，脱神経のような古典的な意味でのらない．
このような筋線経の分化には神経因子が必要で神経原性要因が存在しなくても何らかの神経因子ある．ラットの骨格筋は生下時にまだ未分化で全の関与を推定させる材料である．

てタイ702C線経であり，多くの筋管細胞が存在する3）．この時期に脱神経を行うとタイプ2C反WerdnigTHoffmann病寝息筋には多くの筋衛星細胞が存在するとの報告がある7）．胎児の筋な応が長く続くが緩徐にタイ702B線経へと分化

ど幼君な筋にはこの細月包が多く存在することはよする．しかしタイプ1あるいはタイプ2A線維へ

く知られている．また筋衛星細月包は筋芽細胞とほとは分化しない．ラット骨格筋は生下時に未分化ではあるが，神経支配をすでに受けているのでタぼ同じ意味をもつ．本細胞がWerdnig−Hoffmann病のような神経原性萎縮筋で多いとなると，筋のイ702B線維までは分化すると思われる．脱神経

発育期に筋芽細月包が融合し筋の成熟に協力するたを行った長指伸筋にはやや肥大した線経が存在し，めには何らかの神経因子の関与が必要ということ

これはroutineATPaseでやや淡染しタイプ1線になる．そこで脱神経筋で筋衛星細胞の頻度を経経的であるが，染色性からはやはりタイプ2C線

時的に追求してみた．今回の実験結果からは，筋経に属し，ゲル電気泳動でも赤筋と自筋の両者の衛星細胞の数は正常対照筋と変らず減少した．

myosinlight chainの分布を示し未分化であるこWerdnig−Hoffmann病や先天性ミオバナーの重症例に高頻度にみられる筋衛星細胞の存在は神経とが証明されている4）．
筋線経が全く神経支配をうけないと筋線経はどのようになるのか知るため，pma（perOnealmus−
Cularatrophy）マウスの骨格筋を検索した．このpmaマウスは遺伝性疾患で総俳骨神経の先天的ー38−

因子以外の別の要因が加味している可能性を考えねばならない．

まと3）岡田理美，埜中征哉，石浦章一，ほか：ラット

め筋線経の発育・分化に関する組織化学的研究．

筋線椎の発育分化には神経因子の関与が必要で神経内科，15：363，1981．

あり，筋線経が未分化な時脱神経をうけるとATP
ase染色で未分化なタイプ2C反応を長く続け，

4）Ishiura，S．，Nonaka，Ⅰ．，Sugita，H．，et al．：

赤筋でも白筋でもタイプ2B線維までは分化す

Effect of denervation of neonatal rat sciatic

るが，タイプ1，2A線維へとは分化し難いこと

nerve On the differentiation of myosinin aが分った．もし筋線経が一度も神経支配をうけな

Single muscle fiber．Exp．Neuro1．，73：487，

いとタイプ2C線経の状態がより長期に持続し

1981．

5）江崎孝三郎，安田幸雄，中村昌広，ほか：遺伝

た．筋衛星細胞が筋の成熟に協力するためには神性前・外側下腿筋萎縮マウス．実験動物，30：

経因子の関与は必要でないように思われた．

151，1981．

文6）埜中征哉，Chou，S．M．：Werdnig−Hoffmann

献

病罷息筋の組織化学的検討−実験動物との対1）Brooke，M．H．＆Kaiser，K．K．：Musclefiber
types：How many and what kind？Arch・比を中心として−．臨床神経，18：491．

Neurolリ23：369，1970．

1978．

7）van Haelst，U．：An electron microscopic2）Brooke，M．H．，Williamson，E．＆Kaiser，K・K．：The behavior of four fiber typesin

study of muscle

developing and reinnervated muscle・Arch・

disease．Virchows Arch．A．Pathol．Anat．，

Neuro1．，25：360，1971．

351：291，1970．

ー39−

in

Werdnig，Hoffmann2）筋ジストロフィーチキン骨格筋の修復能

中
研究協力者

金

日

的

藤

大

村

三●

晴

臣●

高

田

邦

安■

田

中

順

一・

randomに250倍写某を作製し，各動物当り500本

発育期の筋ジストロフィーチキン（Dyチキン）
骨格掛こは，筋線経の変性に伴って筋線経の再生の筋線経について，画像解析装置（Summa．
graphics社）を用いて計測した．

が認められるほか，筋線経の分化が遅延している
事実がみられる（Yorita，etal，19801）；Nonaka，

結果etal，19822））．しかしながら，再生された幼弱筋

受傷後1週日の傷害中央部には，壊死組織はみ

線経が，如何なる経過をへて成熟し，あるいは変られず，幼若筋線経，筋芽細胞およびmyotubeが性していくのかは，いまだ充分には判明していな

多数集合してみられ，それらは核小体の明瞭な明い．前年度は筋線経の再生能を検討する目的で，るい核をもった衛星細胞（activatedsatellitecell）

受傷後の筋線維変化を経時的に追究し，受傷後1を伴っている（図1）．これらの所見は，対照と比週以内のDyチキンに，対照と同様の筋再生像を較して明らかな差異をみない．

認めた（中村ほか，19823））．本研究においては，

受傷後2退以後も劫若筋線経，小径線経が多数

受傷1週以後の再生線経の変化を，電顕並びに組みられた．これらの筋線経には，明白な変性像を織化学的に検討することを目的とする．

認められなかった．傷害中央部には，強いfibrosis
もみられなかった．

方

再生筋を組織化学的に検索すると，受傷後1週

法

ふ化後3週目のDyチキンと対照チキン夫々24

目では，Dyチキン，対照チキン共に，すべてαR羽を用い，両側の後広背筋（PLD）を露出し，そ線経から成り立っている．これら再生筋の直径はの筋腹に，ドライアイスーアセトンにて冷却した幅1mmの金属板を2分間庄著してcoldinjuryを

Dyチキン18・1±8・5〝，対照22．7±6．4JJで，両者間に有意の差はみられない．また，筋線維直径の加え，術後1週目より5過日に亘り，経時的に3

histogramにおいても，Dyチキン，対照の間に明羽ずつのPLDを嫡出した．以下の検索は，受傷中らかな差はみられなかった（図2）．

央部の筋腹横断面について行った．

再生筋の分化の状態を知るため，αW線経の出

片側PLDは，10JJクリオスタット切片にH−E，現率をみると（図3），対照チキンでは急速にαW

trichrome，PAS，NADH−TR，ATPase染色を施した．対側PLDは，0．1Mカコジール酸緩衝液加線経が出現し，受像2週目では68％を占め，3退0・5％glutaraldehyde（pH7．3）で国定後，lanta．

た．これに反し，Dyチキンにおいては，受傷後2num染色（Revel−Kamovsky法）を施し，超薄切

週目でも再生筋はすべてαR線経で占められ，3

片に酢酸ウラン・鉛塩の重染色を加え，電顕的検

週日で初めてαW線経が35．7％に認められたが，および5週目では夫々，82．8％，83．2％にみられ索に供した．筋線経の数及び直径の測定にあたっ

5週目でも42．2％に過ぎず，過半数の再生筋はては，NADH−TRおよびPAS染色標本からatαR線経で占められていた（図4）．

●鳥取大学医学部脳研究施投神経病理ー40−

図1受傷後1週目のDyチキンPLD．幼若筋線維（M）の周囲にacti−
vated satellitecell（S），myOblast（B），幼若小径筋線推（m）などが付随している．矢頭印：基底膜．×3，600．

三二∽巳堂山きbLO︼UNu凸一U≡

10

20

刃

40

50

40

6O

1

F18【R Dl仙lFER t一日

図2

2

3

4

5

WF【KS AFTER COLDIMURY

受傷後1週目の再生筋線維（αR線維）の
図3

histogram．

ー41−

再生筋におけるαW線維出現率の推移．

これらのαW線椎の直径を比較すると，受傷3週目ではDyチキン32．2±11．OJ ，対照30．9±10．3〃で両者間に有意の差はない．またその直径分布においても，両者間た明らかな差異をみない（図4）．5週目の筋線維直径は，Dyチキン21．4±
10・7〟，対照35・4±10．4JJであり，DyチキンのαW線維直径にやや小さい傾向がみられたが，対照との間に有意差はない．またその直径分布のpatternにも，Dyチキン，対照間に明確な差はみられなかった（図5）．
考察

PLDの如き小さな筋線経にcoldinjuryを加えると，受傷部では殆ど総ての組織成分が壊死に陥り，再生筋のprecursorとしての衛星細胞も壊死を免れえない．筋線経の再生は受傷周辺部より急速に出現するため，検索部位を一定にて比較検討
10

20

刃

40

50

的

することが，重要である．本研究では筋腹の受傷

70

FlB【R DlA州打【R hH

図4

中央部を選んで検索し，検索部位の一定化に努めた．

受傷後3週日のαW線維直径分布．

受傷後1週目においては，受傷初期にみられる壊死は全くなく，aCtivated satellite cellを伴った幼君筋線維およびその前段階の細胞群で満され，2週以後も再生筋線経の増大がみられた．
対照チキンとして使用したline412の自筋は
αR線経からαW線経への変換が進み，ふ化後4ケ月後のPLDでは，αW線経が約80％を占める．
Dyチキンではその変換が遅れ，4ヶ月目でもな
0S已竺山王bJO︼UVrNuU已dαR線経とαW線維とからなり，ふ化後急速にお70％以下である（Nonaka，etal，19822））．かかるDyチキン白筋における分化の遅延は，再生筋線経にも認められ，受傷後2週目でもαW線経はみられず，3週以後のαW線維出現率も低く，対照に比し，αR線経からαW線経への変換が遅れ，あるいは変換が不充分であった．
しかしながら，受像1週目のαR線維直径およびその分布は，対照と差はなく，3週以後の分化
10

20

30

40

50

68

F柑【R DIA州打【R叫）図570

したαW線経においても，線推直径および分布は，Dyチキンと対照とは殆ど同じであるといいうる．

受備後5週目のαW線維直径分布．
ー42−

総

括

developingdystrophicchicken・Exp・Neurol・，
70：567，1980．

受傷後1週から5週までのDyチキンPLDに2）Nonaka，Ⅰ．＆Nakamura，H．：Musclediffe−

おいては，対照と同様の活発な再生現象がみられ

rentiation and regeneration

るが，再生筋のαR線椎よりαW線経への変換が遅延している．しかし変換したαW線経の直径はmuscular

対照との間に有意の差はない．従って，発育期Dy

trophydystrophy．In

inchicken＝Muscular

Dys−，（ed．byEbashi，S・），Univ・Tokyo

Press，Tokyo，1982，pp・63−77・チキン骨格筋には，明らかに筋再生が存在するが，

3）中村晴臣，金藤大三，高田邦安，田中順一：筋再生筋線経の分化は遅延している．また，受傷後ジストロフィーチキン骨格筋の修復能．厚生省

5退までは，再生筋線経に変性像はみられない．

筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的文研究（三好班），昭和56年度研究報告書，1982，

献1）Yorita，Y．，Nakamura，H．＆Nonaka，Ⅰ・：

pp．20−24．

Satellitecellsandmuscleregenerationintheー43−3）神経切断による筋衛星細胞の活性化について−光廣ラジオオートグラフィーによる検討−
小 口 書三夫＊
研究協力者

羽

生

憲

直＊

柳

沢

信
方

筋線経の再生に重要な役割を果している筋衛星夫＊
法細胞（satellitecell）l）は，筋ジストロフィー症，

生後15日のddy系雄マウス10匹を使用．右坐骨多発筋炎等のミオパテー2）・3）・4）で数が増加してい神経を，エーテル麻酔下で切断．切断24時間後かることが明らかとなって来た．このsatellite cellら，3H−TdRを体重g当り50JLCiを6時間毎に4がmyoblastへ分化してゆく能力を持つかどうか

回腹腔内に注射した．最終注射6時間後，すなわ検討する方法のひとつにラジオオートグラフィー

ち神経切断から48時間後に屠殺し，直ちに神経切が挙げられ，3HLThymidine（3H−TdR）ラジオオ

断側とコントロールとして非神経切断側からートグラフィーによりDNA合成中のsatellite

gastrocnemiusを採取，5％ブルタールアルデヒ

Cellを検索できることを私達は報告した6）．今回

ドで固定した．カコジレート緩衝液中にて24時間

は本法により，Satellite cellの神経切断による脱以上洗准後，1％オスミウム酸で1時間固定．シ

神経の効果を検討したので報告する．

リーズアルコールとプロピレンオキサイドで脱水

図1＊長楕円形のChromatinに畳む3H−TdRを取り込んだ核．×1，000■情州大学医学部第三内科

−44−

図2

＊3HTTdRが取り込まれた比較的chromatinの少ない核．×1，000

図3

A：筋線維内の3H−TdR取り込みの核．
B：Fibroblast．
C：血管の内皮細胞．
×1，000−45−

後epon−aralditeに包埋．厚さlJLmの標本を作の核にも3H−TdRの取り込みが観察された．

製しスライドガラス上に載せ，dipping法によりSAKURA NR−M2を塗布した．4℃の冷蔵庫内

McGeachieら5）は，3H−TdRを用い，神経切断とで30日間露出．SDX−1現像液，20℃，4分間現るが，切断後24時間では，コントロールと差がな

像，定着後トルイジンブルーで淡い染色を施行しく，48時間後から，神経切断側のsatellitecellのた．

核への3H−TdRの取り込みが増加し，結合織の核標本は抽浸レンズで観察し，1資料につき100視野を検索した．次のlabellingindexに従いacti−
Vated satellite cellの出現頻度を算出し，さらに光顕的形態観察を行った．

腱切断によるsatellitecellの活性化を報告していへの取り込みも増加していたとしている．
3H−TdRが取り込まれた核，すなわち，thymi−
dineを取り込みDNAを合成している核は，形態学的に2群に分けられた．長楕円形と楔形でChromatineに豊む核と，大きLabellingindex＝

1視野誓巴ユ莞ごとご▲禦聖慧た棟数×100
1視野中に観察された総ての核数

く，丸い核でChromatinの少ないものである．前者は明らかにSatellite cellと電星削こより形態学的に同定できた（小口ら，1981）が，後者は，Satellitecellが分結果裂した核とmyoblastの核と考えられる．コント

indexは神経切断側のgastroc・

ロールでも同様の核が観察されたが，正常筋線経

nemiusで1・36±0・32，コントロール側のgastroc−

でも一定の再生は行われていることを示すものでnemiusTO．23±0．06であった．形態学的観察である．

Labelling

は，神経切断側の筋線経に変化は認められなかっ脱神経でsatellitecellが活性化されることは明

た．3H−TdRが取り込まれた核は，長楕円形あるらかとなったが，48時間以後のsatellitecellの動いは楔形の形態で，Chromatinに豊むものが大部態に興味が持たれる．McGeachieら5）は神経切断分であったが，一部に大きな核でchromatinの少7日E］でもsatellite cellの核の3H−TdRの取りないものも観察された．神経切断側では，Sch−込みは増加していると報告しているが，筋線経のWann細胞核，fibrocyte，fibroblastの核に3H−

形態学的検索はなされていない．今後脱神経がTdRの取り込みがコントロールよりも多く認め

Satellite cellを一時的に就括するのみか，あるいられた（図1，2，3）．

は再生まで関与するのか形態学的検索を含め，検討する必要がある．

考棄Maurol）によるsatellitecellの存在の報告以来，
この細胞がミオバナーにおいて数の増加がみられ

ま

と

め

1．マウスにおいて，坐骨神経切断により脱神ること，さらにsatellitecellがmyoblastに移行することが，Nonaka2），Wakayama3），Chou4）ら経を行い，48時間後のsatellitecellの活性化を3Hにより明らかにされて来た．しかし筋萎縮性側索labellingindexは1．36±0．32，コントロール側は硬化症では，コントロールと差がなく（石本，1982），malnutritionでは低下している（Hansen−

0．23±0．06であり，神経切断側のsatellitecellがSmith，1979）といわれている．

−TdRを指標にして検討した結果，神経切断側の活性化されていた．
2．Labellingされた核の多くは長楕円形，楔形

今回私達は，Satellite cellの脱神経による影響

でchromatinに望むものであり，一部円形大型のを神経切断により検索したが，コントロールに比Chromatinの少ない核も観察された．神経切断側較し，Satellitecellの核への3HTTdRの取り込みの丘brocyte，fibroblast，Schwann細月包の核に3H−は，神経切断側で明らかに増加していた．さらにTdRの取り込みが認められた．

神経切断側でfibrocyte，fibroblast，Schwann細胞
−46−

文

献

muscle regenerationin diseased human

1）Mauro，A．：Satellite cellofskeletalmuscle

skeletalmuscles．J．Neurol．Sci．，34：131￣

145，1977．

丘bers．J．Biophys．Biochem．Cyto1．，9：493−495，1961．

5）McGeachie，J．＆Allbrook，D・：Cellprolife−
ration2）Nonaka，Ⅰ．，Miike，T．，et al．：An ultra・muscle following dener・

vation or tenotomy．CellTiss．Res．，193：

struCturalobservationofsatellitece11sinthe

258−267．1978．

biopsied musCles of congenital muscular
dystrophy．BrainDevelop．（Japanese），5：

inskeletal

6）小口書三夫，永田曹士：ジストロフィーチキン
におけるactivated satellitece11について−

520−529，1972．

光顕ラジオオートグラフィーによる検討−

3）Wakayama，Y．：ElectronmiCroscopicstudy

筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究

onthesatellitecellsinthemuscleofDuchenne（三好姓），昭和54年度研究報告書，1980，p・37

muscular dystrophy．J．Neuropath．Exp．

−40．

Neuro1．，35：532−540，1976．
4）Chou，S．M，＆Nonaka，Ⅰ．：Satellitecellsand−47−4）実験的再生筋に関する研究
高 瀬 貞 夫■

研究協力者

小

林

和

夫●

小

暮

久

也■

結

は じ め に筋ジストロフィー症（DMP）においては，赤血球膜の異常や筋細胞膜の異常が報告され，細胞膜

果1）サポニン投与群A）500JJg／mlサポニン筋注：30分後では，サポニ

異常説が注目されている．また一方ではDMP筋ン液により筋線維間が関大し，eOSinophilicな過の組織学的所見の特徴には筋再生所見と変性所見

収縮した壌死線経，いわゆるopaque丘berが多数みられた．しかし問質の細胞反応はまだみられなが混在し，本症では筋成熟過程における異常も考えられている．そこで我々は筋細胞膜に満遍なくい（図1−A）．5時間後にはopaque丘berは中心

微細な穴をあけるとされているサポニン1）・2）をラット前脛骨筋肉内に投与し，骨格筋の変性再生過部よりpaleとなり，いわゆるpalestainingfiberがしだいに増加してくる．問質には多核白血球が程を検索し，更に塩酸プビバカイン筋注，homo−

多数出現し，一部壊死線維内にもみられる（図1genizedmuscle筋注，筋線維切断，凍結損傷時に−B）．12時間後には問質の浮腫が最も著明になり，おける筋変性再生過程についても検索し，正常筋

macrophageも問質及び壊死線維内に認められるにおける筋再生の病因病態について検討したので（図1−C．D）．

報告する．

24時間後にはopaquefiberは減少して，ほとん
どがpale stainingfiberとなる．また多核白血球

対象・方法も減少し，maCrOphageに混入してRNA染色で200gのウィスター系雄ラットの前脛骨筋を無軽度陽性所見を示す細胞質のeosinophilicな単核菌的に露出し，①サポニン（50，50叫g／ml，
pH7．4，293mOsm／L）を0．2ml筋注，②0．5％塩細胞が多数出現してくる（図2−A，B）．3日
後では残存する壊死線経をかこんで，胞体が酸プビバカイン0．2mlを筋注，③homogenizedmuscleの筋注（左側前脛骨筋を生食によりbasophilicなmyocyte，myOtubeが出現し，それ

homogenizedして0．2mlを右側に筋注），⑥筋線
維切断（約5mmの横切開を加える），（9凍結規傷められた（図2−C，D）．7日及び10日後には中（ドライアイスで30秒間の規傷を加える），⑥生食

では活性の減少傾向を示した（図3−A，B，図らの細胞では著明なRNA活性がRNA染色で認心核をもつ未熟筋線椎に発達するが，RNA染色0．2ml筋注（対照）を行ない，サポニンについては

4）．

30分，5，12，24時間，3，7，10日後に，その他については1，3，7，10日後に各々3匹からB）50JLg／miサポニン筋注：500JLg／mlサポニン
筋注に比較して変性再生所見は軽度であるが，変病変部の筋肉を採取した．凍結切片を作製し，HE性再生の時期，変性の様式等において差異はみら

染色，RNA染色（methylgreen−pyrOnine）を行ない光顕的に観察した．

れなかった（図3−C，D）．
2）塩酸プビバカイン筋注でも24時間後に，pale
Staining fiberと共にeosinophilicな填死線経が散見され，3日後にRNA活性が著しい筋線経の■東北大学医学部脳研脳神経内科
ー48−

図1サポニン500J g／ml筋注における筋病変
A；筋注30分後（HE染色，×40）
B：筋注5時間後（HE染色，×200）

図2

サポニン50恥g／ml筋注における筋病変
A；筋注24時間後（HE染色，×100）
B：筋注24時間後（RNA染色，×100）−49−

C；筋注12時間後（HE染色，×40）
D；筋注12時間後（HE染色，×400）

C；筋注3日後（HE染色，×100）
D；筋注3日後（RNA染色，×100）図3

サポニン筋注における筋病変
A：500FEg／ml筋注10日後（HE染色，×100）
B：500JLg／ml筋注10日後（RNA染色，×100）

C：50JLg／ml筋注24時間後（HE染色，×40）
D；50JLg／ml筋注10EI後（HE染色，×100）

再生所見が得られる（図5）．7日以後にはRNA活性は低下傾向を示し，サポニン筋注と同様の変性再生過程を示した．
3）凍結損傷では壊死線経はほとんどpalestain−
ingを呈し，eOSinophilic丘berは少なかった．その後の再生過程はサポニン筋注と同じで，7日以後にRNA活性が低下傾向を示した．
4）筋線維切断ではサポニン筋注に比し，再生筋
0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

の出現，成熟過程はいくぶんおくれて，術後7日

10目でもRNA活性は著明にみられ，10日後に低下
してくる．
図4

Pathologicalchange after saponininjection（500JLg／ml）

5）homogenized muscle筋注では1日後に穿刺部位に一致して軽度の細胞浸潤，数個の壊死線経がみられるが，3日以後には異常所見はみられな
い．対照としての生食筋注においても穿刺部に同様の所見あり，homogenized muscle筋注と対照とでは明らかな差異は認められなかった．

−50−

に障害し，形態的にDMPの筋病変と類似している事を指摘している5）．Publicoverらは筋細胞膜でのカルシウムの取り込みを促すA23187を含む音容液で骨格筋を処理し，DMPの筋病理所見との類似性を報告している6）．
そこで我々は細胞膜に微細な穴をあけるとされているサポニンを実験的に使用してみた．サポニ
ンは数分子の糖とステロイド化合物であるサボゲ
ニンよりなり，細胞膜の穿孔作用を有するため，
最近骨格筋，平滑筋，心筋，神経の細胞膜の研究に応用されている1）・7）．また消化管から吸収されず，静注では溶血を引き起こす．したがって筋肉内に直接投与する事により筋病変の観察を試みた．
ム7ひねりの実験としては低濃度であるとされている1）50／ g／mlの筋肉内投与でも変性再生過程がみられ，50叫g／mlでは更に強い再生現象がみられ，今後の再生筋の研究にも役立ちうると思われた．また本実験で（∋変性初期にopaquefiberが多数みとめられ，（診活発な再生筋の出現など，DMPの特徴とされる病理的所見が得られた事は，DMPの細胞膜障害説を考える上で興味ある結果である．
サポニンの細胞膜の穿孔作用は，Endoらの単一筋線経を用いた薬理学的実験によると，10−50〃g／mlのサポニンでは筋細胞膜のみ障害し，150〟g／ml以上では筋小胞体も障害する事を報告している1）．一方DMPにおいては細胞膜の障害か，
図5

横管系，筋小胞体の障害によるものかが問題とさ

塩酸ブビバカイン筋注における筋病変
A；筋注24時間後（HE染色，×100）
B：筋注3El後（HE染色，×40）
C；筋注3日後（RNA染色，×40）れている．そこで50／Jg／ml及び500Jfg／mlサポニ
ンにて病理所見を比較してみた．しかし変性再生
過程での量的な差異はあるが，質的な差異はみい出せなかった．さらに今後種々の選択的膜障害物

考質による実験的研究が必要であろう．

察

近年筋ジストロフィー症（DMP）において，またDMPにおいては多発性筋炎と共に筋肉兼Schotlandらは凍結割断法により筋細胞膜の異常の細胞外流出がさかんで，再生も著しく活発であを3），Mokriらは初期DMPの筋細胞膜からのベる事が明らかになってきた8）．そこで筋再生現象

ルオキンダーゼ漏出を報告しており4），筋細胞膜を賦括するのは細胞外に流出した筋肉菜にあるとの異常がきわめて注目されてきている．さらに実も考えられるため，homogenized muscleの筋注

験的に筋細胞膜に物理的，代謝的障害を加えを試みた．しかし再生筋は得られず，一方筋細胞

DMPとの比較検討もなされつつある．Strunkら

膜の障害をきたすサポニン，ブビバカイン筋注，はtype A clostridium perfringenstoxinをモル

筋線維切断，凍結損傷などでは，すみやかな再生

モットの皮下に授与した場合，筋細胞膜を一次的所見が得られた（表1）．これらの事より筋再生の

−51−

表1

種々の実験的再生筋における変性と再生
d e g e n e r a t io n

r e g e n e r a t io n

5 0 u g／m l

十十

5 0 0 p g／m l

十十＋＋b u p i v a c a i n e i n j e c t io n （0 ．5 冤）

＋＋

十十

十十

＋＋

s a l in e
S a P O n in

i n J e C 亡io n
i n j e c t io n

h om o g e n iz ed m u s c le
C O ldin J e C t io ninJury賦活に筋細月包膜の姐傷が大きく影響していると考の病因の究明に関する研究（沖中姓）昭和52年

えられる．今後さらに再生筋を促す機構について

度研究報告書，1978，p．23．

詳細に研究する事が重要な課題であろう．

3）Schotland，D．L．，Bonilla，Eリetal．：Duchenne

dystrophy：Alteration in muscle plasma
まとめmembrane structure．Science，196：1005，（1）ラット前脛骨筋にサポニン500JJg／mlを筋注した結果，30分後にopaquefiber，12時間後に1977．

4）Mokri，B．＆Engel，A．G．：Duchenne dys−

pale staining丘ber，多核白血球の出現をみた．

trophy．Electron一microscopic

更に12時間後よりmacrophage，24時間後より

ing to a basic or early abnormalityinthe

myoblastもあらわれる．3日後にはmyocyte，

plama membrane of the muscle

myotubeが多数みられ，RNA活性が最も著明となる．その後活性は減弱する過程を示した（図findings

point−

fiber．

Neurology（Minneap．），25：1111，1975．
5）Strunk，S．WりSmith，C．W．，etal．：Ultra−

4）．又50J g／mlと50叫g／mlサポニン筋注での病StruCtural studies on thelesion producedin

理所見からは量的な差異はあるが質的な差異はみ

Skeletal muscle

られなかった．

Clostridiumperfringenstoxinanditspurified

丘bers by crude type A（2）筋肉菜の細胞外流出機序が存在する筋線維切alphafraction．Amer．J．Path．，50：89，1967．

断，凍結損傷，プビバカイン，サポニン筋注の場

6）Publicover，S．J．，Duncan，C．J．，et al．：The

合には筋再生過程がみられ，一方生食並びにuse of A

homogenized muscleを筋注した場合は筋再生はintracellular carciumin causlng

おこらなかった．

StruCtural damage（3）サポニン，プビバカイン筋注において，変性
初期にopaquefiberが出現した点はDMPの筋病変と類似していた．

Cell

23187to demonstrate the role ofinultra−

mammalian muscle．

Tiss．Resり185：373，1977．

7）Blaustein，M．PりRatzlaff，R．W．，etal．：

Calcium bufferingin presynaptic nerve
terminals．I，EvidenceforinvoIvementofnon

文

献−mitochondrial ATP−dependent sequestra−1）Endo，M．＆Iino，M．：Specificperforationof
muscle cell membranes with preserved SR
functionsbysaponintreatment．J．MuscleRes．
and Cell Motility，1：89，1980．

tion mechanism．J．Gen．Phisio1．，72：15，
1978．

8）高瀬貞夫，小林和夫，ほか：筋ジストワフィー症におけるRNA activityについて．筋ジスト

2）江橋節郎，大枚磐男，ほか：ニワトリ骨格筋培
養細胞のサポニン感受性．筋ジストロフィー症

一52−

ロフィー症の発症機序に関する臨床的研究（三好址）昭和56年度研究報告書，1982，p．214．

5）筋萎縮の発現機序に関する研究
1）ステロイド筋萎縮（2）木 下 真 男書研究協力者

荒若 田 宣 雄■

木

洋書

河

村

裕

子●

法により稔コレステロールを，またFoIchの方ステロイドホルモンによる筋障害は，ステロイ

法3）により総脂質を抽出後，薄層クロマトグラフ

ドミオバナーとしてよく知られている．
我々はこの筋障害が組織学的には筋の変性ではなく，萎縮が主体であることから，この発現機序

ィーで個々の中性脂肪を分散し，定量および脂酸構成を測定した．

を解明することで，広く筋萎縮性疾患の病態を解結明する手がかりが得られる可能性を考え，萎縮の果

まず正常対照家兎群であるが，ヒラメ筋では，ひとつの実験モチリレとしてステロイド筋萎縮を作88％がタイプⅠ線経で，10％がタイプⅠIa線経，製し，これまで検討を加えてきた．
ステロイドによる筋萎縮は，筋の組織化学的タ2％がタイプⅠIb線経であった．排腹筋では，17

イ70分頬と密接な関係があることは以前からよく％がタイプⅠ線経，19％がタイプⅠIa線経，64％

知られていた．従ってステロイド筋萎縮機序解明

がタイプⅠIb線経であった．長址伸筋では，6％には，タイプ別の検討が重要である．最近，我々がタイプⅠ線経，36％がタイ7°ⅠIa線経，58％がタイプⅠIb線経であった（表1）．

は家兎のヒラメ筋，排腹筋，長址伸筋を用いて各
タイ7°における月旨質含量と月旨酸構成の分づ折をおこ

表1 各筋のファイバータイプ

ない，その正常値を決定しえたので1），この手技を利用してステロイド筋萎縮の各タイプの脂質代謝を検討した．
方法

体重3kg前後の雄家兎6羽に，COrtisoneace−

Gastro．＝Gastrocnemius

tate20mg／kg／day，4週間連続して背筋に筋注し

EDL＝Extensor

digitorumlongus

た．終了後エーテル麻酔下に屠殺し，ヒラメ筋，膵腹筋，長址伸筋を4采取し実験に供した．対照群
10羽も同じ音β位を採取した．

生化学的には，筋の総蛋白量は，ヒラメ筋で29．72±0．29mg／gwt，俳腹筋で26．99±1．94mg／

組織化学的には，PAS，Gomori−trichrome，

gwt，長址伸筋で27．00±1．98mg／gwtと有意差

NADH，Phosphorylase，myOSin−ATPase染色をおこない，組織学的に観察するとともに，連続切はなく，Triglycerideは，ヒラメ筋で6．30±0．14
mg／gwt，俳腹筋で1．83±0．88mg／gwt，長址伸

片をDubowitzの方法にしたがってタイ70分頬をおこない2），また各筋線維直径も測定した．生化学

筋で1．50±0．05mg／gwtと，赤筋と後者2筋との間に有意差が認められた（表2，3，4）．

的にはLowry法により総蛋白を，Zak−Henly変Triglycerideの脂酸構成は．いずれの筋においても，主要成分は，C16パルミナン酸，C18：1■東邦大学医学部第四内科−53−

表2 ヒラメ筋 脂質含有量
c o n Iro l

オレイン酸，C18：2リノール酸などであり，ヒラメ筋と長址伸筋を比較すると，C18：1，C18：

sI e r o ；d Ir e ⊂汗e d

T o to I p r o I e in （
m 9／
b w り

9 ．
7 2 土0 ．
29

28 ．
8 7 土0 ．8 2 ★

2，C18：3リノレイン酸などは，ヒラメ筋に多TG

6 ．
3 0 土0 ．14

9 ．
0 9 土1 ．
44 ‡0 ．
2 1 士0 ．
03

0 ．
3 4 土0 ．
0 6 ★★
★

く含まれ，これに対し，C22：4ドコサテトラノ

4 ．3 7 土0 ．
47

5 ．
0 3 土0 ．
35 ★

C h o le ・
／T P （m g ／m g p ro Ie ；n ） 0 ．15 土0 ．
03

0 ．1 9 土0 ．
0 1 ★

（m 9 ／b w り

T G ／ T P （m 9 ル ー
g P rO Ie in ）C h o Ie s te ro l （m 9 ね W り⊂h o le s Ie ro l e d e r （m 9 ／b w り

0 ．
3 5 土0 ．1 80 ．
4 0 土0 ．1 8

C E ／T P レ 9 ル 19 P rO Ie in ）日 ．8 8 土5 ．
39

14 ．
7 5 士8 ．
88．pく0．05：pく0．02

ン酸，C24：2テトラジェノン酸，C24：5テト
ラコサペンタノン酸などは長址伸筋に多く含有され，互いに有意差が認められた．

★★★P＜0．01

これらの結果をもとにタイ70Ⅰ，ⅠⅠの筋線維一TG：Tr；gryCer；de TP：To−cIIpro−ein
Chole．：ChoIesteroI CE：ChoIesIer01esIer

本一本が一応は等しい質量を有していると仮定して，各筋線経のTriglyceride含量を算出してみると，タイプⅠ線経は6．86mg／gwt，タイプIIa線

表3 排腹筋 脂質含有量

経は2．58mg／gwt，タイプIIb線経は，0．26mg／
c o n Iro l
T o h I p ro Ie in （m 9 ／b w りTG（m 9 ね W り

SI e ro Td I re clId

28 ．
99 士 1 ．
94

23 ．
9 2 土4 ．
0 9 ★■

1．
83 土 0 ．
88

3 ．
7古 土 1．
5 9 ★★★

0 ．
07 土 0 ．
03
4 ．
4 1 土0 ．
42

0 ．17 土 0 ．
0 8 書目4 ．
48 土 0 ．
70

C h o le ．
ハ P （m 9 ／m 9 P rO Ie in ）0 ．
15 土 0 ．
O l
C h 0 le s Ie ro l e s le r （m 9 ね W り
0 ．2 4 土 0 ．
08

0 ．19 土 0 ．
03★

C E／T P （ル8 ル 9 P rO Ie in ）8 ．
3 古土 1 ．
58

T G 〃 P （m 9 ．
ん 9 P rO Ie in ）C h 0 le sIe ro l （m 9 ／匂W り★

P＜0．058．
5 5 土2 ．
85★★Pく0．02

g wtと，タイプⅠ線経にTriglycerideが多く含
まれ，タイプⅠIb線経に少ないことが明らかとなった．
次に実験群との比較検討であるが，組織化学的

0 ．
2 1 土0 ．
02に，線維直径は，ヒラメ筋でタイプⅠ線経は★H P＜0．01

68．37±12・12／Jから77・65±11・37／Jと肥大し，タCE：⊂holesIerolesIer TG：Tr短IyceHde

イプⅠⅠ線経は82．44±11．75／Jから72．20±10．98JJと萎縮が認められた．俳腹筋ではタイプⅠ線経は
表4 長足止伸筋 脂質含有量
c o n I ro l
T o Io I p ro I e in （m 9 ゐ W り47．80±7．6毎から55．20±7．81JJと肥大し，タイプⅠⅠ線椎は76．3±17．31JJから58．90±8．06JJと萎縮が認められた．長址伸筋では，タイプⅠ線経は

SIe ro id Ire （
】
Id

27 ．
0 0 土 1 ．9 8 3 0 ．
5 2 土3 ．
87

T G （m g 舟 W り

1．
5 0 土0 ．
05

2 ．
8 7 土1 ．
39

T G ハ P （m g ル 唱 P m I e h ）0 ．0 5 土0 ．
02

0 ．1 0 土0 ．0 5
4 ．
3 7 土0 ．3 0 ★

C h 0 le sIe ro l （m g ね W り

3 ．8 5 土0 ．
30

C h 0 le ・′ P （m 9 ／m g P rO Ie ；n ） 0 ．1 4 土0 ．
02

59．65±10．91／Jから48．45±7．17〟，タイプⅠⅠ線経で67．90±8．13γから51．90±9．51JJと共に萎縮が認められた（表5）．

0 ．14 土0 ．
02

C h 。le 血 r0 l e 如 r （m g ね W り

0 ．
3 4 土0 ．18

0 ．
4 3 土0 ．2 9

C E〃 R 咽 ル ー
g P rO I e Fn ）12 ．
3 7 土4 ．
98

15 ．1 1 土 1 0 ．
38

タイプ分類では実験群と対照群との間には有意差は認められなかった．

■P一二0．02

TG：THglyceride
Chole．：CholesIer。lTP；ToIdpro届nCE：CholeskroleiIer

生化学的には，ヒラメ筋では実験群で26．87±
0．62mg／gwtと総蛋白量は減少し，Triglyceride

表5

c o n け0 】
b Ie u s T y 甲は9．09±1．44mg／g wtと対照群と比較して有意に増加していた（表2）．

各筋の線維直径

1 88．
37 土 12 ．
12sIe ro id 什e q Id

俳腹筋では総蛋白量は23．92±4．09mg／g wtと77 ．
ム5 土 1 1 ．
37

ヒラメ筋と同様に減少し，Triglycerideは3．76±★

44 土 1 1 ．
75
T y p e ll 8 2 ．

72 ．
2 0 土 10 ．
98 ★

80 土 7 ．
84
G q由 O Ty 匹 l 47 ．
T y 匹 ll 7 8 ．
7 3 土 17 ．
3 1

55 ．
20 土 7 ．
81 ★
58 ．
90 土 8 ．
08

★

【D L

48 ．
45 土 7 ．
け

★

Ty 匹

l 59 ．
ム5 土 10 ．
9 1
90 土 8 ．
13
T y p e ll 8 7 ．
★
G。SIro＝
EDL

＝

5 1．
90 土 9 ．
5 1 ★

P＜0．001

Gqかrocnem盲us
ExIensorがg汗orumlongus

1．59mg／g wtと増加していた（表3）．
長址伸筋では総蛋白量に大きな変化なく，Tri−
glycerideも2．87±1．39mg／g wtとやや増加傾向を示すにとどまった（表4）．
Triglycerideの月旨酸構成は，長址伸筋で最も変動が著明で，実験群でC16，C18：1，C18：2
で増加，C22：2，C22：4，C24：2，C24：
ー54−

表6

Triglyceride脂酸構成（G G b Cnem ius ）（50 1e∽ ）（ExIen50rdi9汁orumIonguS）

扉e m id Ire d e d l

c ムn h q lSIeroid treddc o nt m l

sIe ro 言
d Ire d ed

c o n Im l

3 ．
0 7 土0 ．
3 9

3 ．
0 5 土0 ．
63

2 ．
5 8 土0 ．
糾1．
0 1 土0 ．
3 0

0 ．
9 8 主0 ．
0 8

0 ．
朗 ．
土0 ．
49

糾 土1．
89
29 ．
4 9 土2 ．
14 3 0 ．

3 1 ．
8 9 土2 ．
22

38 ．
59土1 ．
45 ★

3 1 ．
14 土 1 ．
90

36．17土2．鎚★★
6．38土1．26

2．13土1．03

3 ．
8 1土 1 ．
0 3 ★★★★ 2 ．
8 4 土0 ．
2 1
0 ．
4 3 土0 ．
23
0 ．
7 6 土0 ．
09

0．48土0．17

9 ．
74 土1 ．
94

7 ．
5 2 土0 ．
55

5 ．
84 土1．
73

4 ．
3 5 土2 ．
08

8 ．
2 3 土2 ．
72

6 ．
0 9 土0 ．
88

5 ．
8 6 土0 ．
40

8 ．
30 土1．
37

8 ．
26土1 ．
02

6 ．
0 3 土0 ．
90

8．72土1．33

28 ．
84 土 1 ．
08

2 占．
87 主 1 ．
3 1

24 ．
3 5 量る．
∞20 ．
0 5 土0 ．
89

18 ．
92 土1．
59

22．47土1．79★

13 ．
34土1 ．
56

40 土1．
22
17 ．
54 土1．
5 2 ★★ 10 ．

13 ．
7 8 土3 ．
22

7 ．
0 0 土2 ．
（氾

11．98土2．77t

4 ．
5 0 土0 ．
45

4 ．
8 9 土0 ．
30

3 ．
2 9 土0 ．
8 1

3 ．
5 2 土0 ．
69

2 ．
3 3 土0 ．
77

3．30土0．98

0 ．
7 8 土0 ．
54

0 ．
4 6 土0 ．
12

0 ．
8 5 土0 ．
4始

0 ．
16 土0 ．
0 1

0 ．
刀 土0 ．
5 1

0．95土0．42

0 ．
2 古土0 ．
19

0 ．
3 8 土0 ．
2 1

1 ．
10 土0 ．
80

1．
0 4 土0 ．
7 1

5 ．
4 8 土0 ．
76

2．28土1．28★

0 ．
3 古土0 ．
420 ．
3 8 土0 ．
2 1

1 ．
16 土 1 ．
12

0 ．
5 3 土0 ．
38

2 ．
66 土1．
45

0．67土0．28H

0 ．
5 3 土0 ．
23

0 ．
15 土0 ．
03

1 ．
2 5 土0 ．
80

2 ．
2 1土1．
48

5 ．
23 土1．
74

l．10土0．74★

0 ．
4 9 土0 ．
2 9

0 ．
4 8 土0 ．
22 ●
★

0 ．
8 0 主0 ．
45

0 ．
3 7 土0 ．
32

1 ．18 土0 ．
75

1．32土0．62

0 ．
6 9 土0 ．
4 4

0 ．
18 土0 ．
0 4 ★＝

5 ．
14 土3 ．
920 ．
83 土0 ．
08

9 ．
5 5 土2 ．
84

3．08土1．73★★

★

PくrO．001…

P＜0．01・…

P＜0．位

・・…

P＜0．05にTriglycerideが増加し，しかもその変動はタイ5の減少が認められた（表6）．
タイプ別のTriglyceride含有量は，タイプⅠ線

70ⅠIa線経よりタイプⅠIb線経に明らかであっ経は6．86mg／g wtから10．02mg／g wtと約1・5倍

た．また，脂肪構成の変動も，ⅠIb線経の割合のの増加を示し，タイプIIa線経は2．58mg／gwtか多い長址伸筋に著明で，C18：3までの脂肪酸のら2．22mg／gwtとやや減少し，タイプⅠIb線経は増加，およびC22：2以上の長鎖脂肪酸の減少が0．26mg／g wtから2．53mg／g wtと約10倍の増加を示した．

認められた．
タイプⅠIa線経とタイプⅠIb線経の生理学的な機能の差異は，いまだ明らかではないが，嫌気考的解糖系がエネルギー産生の主体と考えられてい案

ステロイドによる筋萎縮は周知のごとく，一般

る長址伸筋に中性脂肪，特にTriglycerideの増組織学的には，筋線経の萎縮，大小不同，空耳包変加，および月旨酸構成の変動が著明に認められたこ

性，問質の線維化，脂肪化などがみられ，組織化とは，タイプⅠIb線経における筋収縮の機序の障学的にはタイプⅠⅠ線経の選択的萎縮が報告されて害の結果とも考えることができる．

いる．しかしながらこれらの変化はミオバナーの以上の結果からステロイドによる筋障害は組織代表である進行性筋ジストロフィー症と比べてみ学的にはタイプⅠⅠ線経，および一部では，タイプても，臨床症状の割には変化が軽く，また通常ミⅠ線経にも障害をおよばすが，生化学的，特に脂オパテーではCPKの上昇をきたすものが多いが，質の面からみるとタイプⅠIb線経に異常が強くステロイドによる筋萎縮ではあまり大きな変化は認められたが，前回報告したように末梢神経の障なく，これらの点からも通常のミオバナーとは発害か，タイプHb線経を選択的に障害したかどうかは不明である．

現機序が異なっている可能性が示唆される．
本症の発現機序に関する報告は，タイプⅠⅠ線経の選択的萎縮が認められることから，嫌気的解糖

ま

と

め

ステロイドホルモン投与による筋障害では主に系の代謝障害や，蛋白代謝の異常▲）が報告されてタイプⅠⅠ線経の障害が認められ，生化学的にはタいるが，いまだ明確な結論は得られていない．
今回の我々の結果からはステロイドによる筋障

イプⅠIb線経にTriglycerideが増加し，この線経害では，生化学的には，筋線維中に中性脂肪，特の多い長址伸筋の変動が著しく，筋萎縮の発現機ー55−

序に，好気的燐酸化が何らかの関与のある可能性

2）FoIch．J．＆Lees．Metal．：A simple me−が示唆された．これらの点を更に検討することで，

thod for theisolation and purification of

筋萎縮という疾患の解明に何らかの手がかりが期
待される．

totallipids from animal tissues．J．Biol．
Chem．，226：497．1957．
3）Dubowitz，Ⅴ．＆

文

献

Biopsy：A

1）君田重雄，ほか：家兎赤筋および白筋の組織化
学的および生化学的研究．臨床神経，22：690−

Modem

Brook，M．H．：
Approach

MuscleW．B．Saun−ders，London．1973，p．51．
4）庄司進一：ステロイドミオバナー：成因に関する生化学的解明．神経進歩，20：98−108，1976．

695，1982．

−56−

6）不動化による実験的筋萎縮の病態

高 木 昭 夫＊
研究協力者

富 沢
埜 中

征

寛■
哉■

米 本 恭 三＊石 浦 章 一■

助

川

卓

行事

いにより筋線推タイプを分類した2）．

筋萎縮の病態生理を明らかにする目的で，関節4．電気刺激を不動化することにより実験的萎縮筋を作製し検

足関節の尖足位固定（ヒラメ筋の弛緩位）後よ索を行なった．また，筋萎縮の予防や治療の試みの1つとして，不動化した筋に対して電気刺激をり，1日15分間ずつ2週間にわたって電気刺激を与えその効果について検討した．

行なった．電気刺激は坐骨神経を介する間接刺激によったが，次の2つの方法を採用した．

方1）心臓ペースメーカーを応用した，刺激電極を法

体重約300gのウイスター系成熟雄ラットの一表1Fibertypeanalysisofimmobilizedsoleus

側後肢足関節を，キルシュナー鋼線を用いて尖足（4−8weeks）

位並びに背屈位に固定した．このようにしてヒラRMメ筋を弛緩位あるいは伸展位に固定した後経時的にラットを屠殺し，固定側ヒラメ筋及び対照としP h nta 州●X lo nて非固定側ヒラメ筋を採取して以下の検索に供した．
1．筋湿重量の測定○○相川●X lo n

ラットを断頭，しゃ血した後ヒラメ筋を摘出しT㌦

D b ∬● （
％）

D／
C

1

90 ．
2

60．
5

0．
7

2人

4．
1

2 0．
9

5．
1

28

0．
0

0．
0

−

2C

5．
7

10．
6

3．
8

1

8 1．
5

84 ．
3

1．
0

13．
8

3．
4

0．
3

28

0．
0

0．
0

−

2C

4．
9

12．
3

2．
5

曽byATP的●St手回ng

表2

た．

虞％）

2人

直ちに湿重量を測定した．筋湿重量の変化は，非固定側に対する固定側の割合をパーセントで示しCく
州鵬

Effectofelectricalstimulationonimmobili−
zed soleus

2．組織化学的検索

●
W ●
tW ●
lo h t液体窒素で一160℃に冷却したイソペンタン中F lb ●r Typ ●
C o nt．
いり Im n ．
いりでヒラメ筋を凍結後，クリオスタットで厚さ10

1

7 8．
0

80 ．
0

2人

14．
5

23．
4

28

0．
0

0．
0

2C

7．
5

10 ．
0

した．1つのヒラメ筋ごとに最低200本，通常

1

7 1．
7

80 ．
8

300−400本の筋線経のタイプ分類をしてヒラメ筋

2人

17 ．
3

20 ．
0

28

0．
0

0．
0

2C

l l．
0

10．
0

JLmの切片を作製した・Dubowitzら1）の方法に従ってATPase染色を行ない筋線維タイプを分類

t▲I lm m ．0 111y

HH

5 5．
5 ±0 ．
0lm ln ．
◆
E．
S． 4 8．
0 ±10 ．
1の構成を調べた（表1）．
3．生理学的検索
スキンドファイバー法を用いて単一筋線経が各種濃度のカルシウムイオンやストロンチウムイオ

HH

0 ±0 ．
0
IM m ．
◆E ．
S ． 5 2．

ンに対して発生する張力を測定し，その反応の違りMmJCont．X100■国立武志療養所神経センター
ー57−

1

70 ．
7

7 7．
0

2人

15．
5

13．
2

28

0．
0

0．
0

2C

13．
8

8．
0

持つ小型の受信器をラットの背部皮下に埋め込み，電極を坐骨神経の脇に平行に置いて体外より刺激を無線的に加えた．電気刺激の条件は，10Hz，持続2msec，電圧約14Vの矩形波である（表2の合筋肉によって相違があり，前脛骨筋や長址伸筋などではこの4つのタイプに分類できるが，ヒラB）．

通常タイプ1線経が70〜90％を占め5−15％がタ

メ筋にはタイプ2B線経はない．
成熟ウイスター系ラットの場合，ヒラメ筋では

2）刺激電極を大腿部皮膚上に置き，経皮的に坐イプ2A，5〜10％がタイプ2Cである3）．とこ

骨神経に刺激を加えた．条件は10Hz，持続0．2m

ろが，弛緩位に固定しておくとこの各タイプ別の

sec，電圧約30Vである（表2のC）．

割合に変化が生じ，タイプ2A及びタイプ2Cの以上のようにして電気刺激を行なった結果を，増加とタイプ1の減少が認められた（図2）．すな

関節固定だけをして電気刺激を行なわなかったもわち，タイプ1からタイプ2への転換が推定されの（表2のA）と比較検討した．

る．これは固定後1週では認められず2週より顕著となった．

結果

伸展位固定では，弛緩位固定と同様にタイプ2
C線経は増加したが，タイプ2Aは減少しタイプ

1．筋湿重量の経時的変化（図1）
弛緩位固定（Plantaraexion）と伸展位固定

1はわずかに増加した（図3）．結果は表1にまと（Dorsinexion）との間には著明な相違が見られめて呈示した．

た．弛緩位固定では，湿重量は固定後1週で健側の65．0％にまで急速に減少し，以後は漸減していって4週以降はあまり変わらず8週で45．5％であった．これに対して伸展位固定では，固定後1週から3週までは湿重量はむしろ増加し，その後は減少したが8週でも69．0％と，弛緩位固定と比故し減少率は1％の危険率をもって有意に少ない結果となった．

図1

図2

尖足位固定4週．C：非固定側
ATPase染色pH9・4

D：固定側

図3

背屈位固定4週．C：非固定側
ATPase染色pH9・4

D：固定側筋湿重の経時的変化

2．組織化学的検索
筋線経は，赤筋であるタイプ1線経と白筋であるタイプ2線維とに大別される．タイプ2線経は
更に2A，2B，2Cに分類される．ラットの場−58−弛緩位固定による萎縮筋において，タイプ2線

逆の転換が容易に誘発されることを明らかにした・
転換の途上では筋線経は組織化学的ATPase染維及び中間型の反応を示す線経の増加が認められ色で2Cの反応を呈するものと推定された・このた．

脱分化・再分化の過程では筋細胞内で既有の古い

4．電気刺激（表2）

蛋白が新しい蛋白に連続的に置換されていくもの

3．生理学的検索

弛緩位固定後2週でヒラメ筋の湿重量は55・5％と推定している6）．この可塑性はヒラメ筋のみのに減少した．不動化筋に電気刺激を与えた場合で特徴なのか，あるいは他の骨格筋にも同様に存在も湿重量は同程度に減少した．1日15分間の低頻するのかは興味ある点である．
電気刺激は筋の脱分化の阻止に有効であった．

度電気刺激は，不動化による筋萎縮を阻止しなか

しかし萎縮の進行は阻止しなかった．もし電気刺った．

激を長時間行なえば，あるいは萎縮を阻止したか

筋線維タイプの分化に対する電気刺激の影響を検討した．弛緩位国定によりタイプ1の減少とタも知れない．今回の電気刺激の条件下では，筋重イプ2A，2Cの増加が認められたが，電気刺激量変化と筋タイプ分化とは明瞭に異なった反応をを行なった群ではこのような変化は少ないか，む呈した．このことは両者が異なった因子で調節さしろタイプ1が増加しタイプ2A，2Cが減少すれている可能性をも推定させた．

る傾向が見られた．
結考論

1．ラットの一側後肢不動化による実験的萎縮筋

察を検索した結果，弛緩位固定に比べ伸展位固定の

今回の実験では足関節を尖足位あるいは背屈位に不動化し，ヒラメ筋は弛緩位あるいは伸展位と方が有意に萎縮は少なかった．

両極端の状態に固定された．その結果両者には顕2．筋萎縮と共に，ヒラメ筋の筋線維タイプの転著な相違が見られた．すなわち，伸展位固定の方が弛緩位固定よりも有意に重量減少は少なく，ま換が生じたが，これも弛緩位固定では著しく伸展た筋線推タイプの転換，すなわち，脱分化や再分

3．不動化した筋に対する低頻度電気刺激は・筋化の程度も軽度であった．筋に一定の張力が加わ萎縮を阻止しなかった．しかし筋線維タイプの脱ることが，筋の栄養や分化に重要である事実を再分化や再分化を有意に阻止した．

位固定では少なかった．

確認したわけである4）・5）．重要な問題は，緊張状態
文あるいは張力発生がいかなる機序で作動するかという点であろう．筋細胞自体に直接作用し，内部環境の変化から遺伝子発現を調節しているのかも知れない．あるいは，筋紡錘などの関与する反射
弓を介しての神経栄養因子による調節かも知れな
い．今後のテーマであると思われる．
ただ，固定後一定期間を過ぎると変化は一種の平衡状態となり，それ以上進展することはなかっ

1）Dubowitz，Ⅴ．＆

献
Brooke．M・H・：Muscle

biopsy．A modem approach・Saunders・London Philadelphia Tronto・1973・
2）Takagi，A．＆Endo，M・：Guineapigsoleus
and extensor digitorumlongus：a study ofsingleskinned丘ber・Exp・Neurol・・55：95，101・
1977．

た．この成因は不明であるが，骨格筋長軸方向でサルコメア数の増減による一種の調節が生じ，過3）Mizusawa，H．，Takagi，A．，Sugita，H・＆度の緊張や弛緩状態が修復されるためかも知れな

typesofmyosinlightchainsinasinglefiberい．

。frats。leusmuscle．J．Biochem．，91：423．

今回の実験は，ラットヒラメ掛こおいてタイプ
1線経からタイプ2線経への転換，あるいはその−59−

Toyokura，Y・：Coexistenceoffastandslow

425，1982．

4）Jolesz，F．，Sreter，F．A．，Mabuchi，K・，Pinter・

K．＆Gergely，J．：Effectofvariousformsof

lengthsbyplastercasts．J．Physio1．，224：231

hypo・andinactivityon slow muscle．Adv．

−244，1972．

Physiol．Sci．24：57−68，1980．

6）助川卓行，米本恭三，宮沢 寛，ほか：廃用性

5）Tabary，J．C．，Tabary，C．，Tardieu，C．，

萎縮筋の病態−微細構造と収縮蛋白の変化に

Tardieu，G．＆Goldspink，G．：Physiological

ついて（会）．第23回日本神経学会総会抄録，p．

andstructuralchangesinthecatssoleusmuscle due toimmobilization at different

ー60−

254，1982．

7）胸腺瞳自然発症ラット（Buffal0／Mna rat）の下腿筋における組織化学的検討
飯 田 光 男♯
研究協力者

衣

斐

達■

古

閑

松 山 隆 司■ ■ 佐 橋

要

寛■

祖父江

逸

郎＊

功…■

して純系ACIラット（以下Aラットと略す）を用

約

いた．各ラットは成長段階に応じ，Ⅰ群：6週齢

胸腺隆自然発症ラット（Buffalo／Mna rat）は
他ラットに比べ運動量が低下している．我々は本（Bラット：5匹，Aラット：3匹），ⅠⅠ群：

ラットの下腿筋について経時的に組織化学的定量

12−13週齢（Bラット：6匹，Aラット：6匹），

的検討を行ない，次の結果が明らかになった．

ⅠⅠⅠ群：21−38週齢（Bラット：5匹，Aラット：

1）胸腺艦が発生する以前，さらにrotorload6匹），ⅠⅤ群：70〜81週齢（Bラット：6匹，Aラで運動量が低下するより前に，typeII線経のット：5匹）の4段階に分け，各ラットより下腿

hypotrophyが認められた．
2）本ラットのひらめ筋においてはtypeI線筋を採取した．下腿筋は伸筋として長址伸筋（以経にも病変があることが示唆された．

てひらめ筋（以下Sol．と略す），脾腹筋を採取し下EDLと略す），前脛骨筋，排骨筋を，屈筋とした．なおBラットでは下腿伸筋欠姐のあるものが緒

約4％の頻度で生まれるが，今回欠損ラットは検言索の対象より除いた．

Buffalo／Mna ratは胸腺腫自然発症ラットと採取した各筋は筋重量を測定し，体重差の影響して知られており，継代15代以後の雄ラットにはほとんど100％胸腺旗が発症する1）2）3）4）．また本を無くすため，筋重量／体重比（以下MW／BWとラットは他ラットと比べ体動が減少しており，rO・略す）を算出した．さらに採取筋はイソペンタン

tarloadでのperformancetimeが生後10過より

ドライアイスで凍結し，連続切片を作製し各種組

急激に低下する1）．本ラットの骨格筋病変につい

織化学的染色を行なった．染色はH−E，トリクロては，電気生理学的検討5）および病理学的検討1）6）

ム変法，NADPHTTR，menadionelinkedがいくつかなされているが．明確な結論はまだ出

glycerophosphate dehydrogenase，Cholin este・

されていない．今回我々は本ラットの下腿筋について経時的組織化学的定量的検討をおこなったの

rase，ATPase（pHlO．5，4．5，4・2）である．またEDLとSol．についてはATPase染色標本をで若干の考察を加え報告する．

顕微鏡写真撮影後，最終倍率を125倍および250倍

αとし，ZeissTGAlO粒度分布測定器にてfibertype
対象および方法

別に筋線維径を測定し％ヒストグラムを作成した．

対象として胸腺腫自然発症ラットBu仔alo／

さらに各群別に％メガヒストグラムを作成した．

Mna rat（以下Bラットと略す）を用い，対照とまたtypeI線経の占める比率，平均typeII線
維径／平均typeI線維径比（以下MDRと略＊名古屋大学医学部第一内科■＊愛知県がんセンター研究所超微形態部…愛知医科大学第四内科す），Bbertype別に標準偏差／平均筋線維径比（以下ⅤⅠと略す）を算出した．
−61−

結

果

見られなかった．またEDLにおけるBラットと下腿各筋におけるMW／BWを表1・図1に示す．即ちtypeII線経が大部分を占めるEDLや前AラットのMW／BWの差は各群間でほぼ一定であった．

脛骨筋などはMW／BWはBラットで有意に低下

組織学的には，Bラットのいずれの群においてし・typeI線経が多数を占めるSol・では有意差がも，筋線経の変性，再生所見や，炎症所見，結合表1 筋重畳／体重比（MW／BW）
B u f fa lo ／M n a
ED L（1 0 ● ）TlbaljS ant ．
PeroneusG a s t ro c n e m iu s
So l e u s（1 0 ●
5）（1 0 ●
5）
（10 −
5）
・
（10 ￣ ）

369 ．
6
150 ．
7
100 ．
6
490 ．
7
4 36 ．
2

士 2 8 ．5
士 8 ．5土 5．
4
土 3 7 ．5
士 32 ．
0
★

A C I
★
★
★
★

5 0 6 ．9
2 0 2 ．2
1 1 4 ．6
5 9 3 ．0
4 7 3 ．4

士 2 1 ．5
士 8 ．4士 6 ．0士 4 3 ．8
土 4 3 ．9

p＜0．005

表2 長址伸筋（EDL）およびひらめ筋（Sol・）におけるtype
I線経の比率・平均typeII線維径／平均typeI線維径（MDR），標準偏差／平均線維径（ⅤⅠ）
EDL

Ⅰ

ⅠⅠ

ⅠⅠⅠ

IV

％of typeI fiber
Buffalo

4．92士1．03

10．51士3．58

3．28土1．60

3．88土1．27

ACI

5．73士3．77

8・72土2．06

2．75土1．88

5．02土5．51

日mean djameter／I mean diameter
Buffalo
ACI
SD／mean diarneter
TypeI fiber
BuffaloACI

1．11土0．05★
1．18土0．05（10￣，）TypeII fiber
BuffaloACI＊

1．03土0．09★★★1．38土0．05★★1．17土0．09★★
1．23土0．04
1．47土0．04
1．38土0．11

129．2

土

6．2★

149．3土28．1110．4土21．1132．0土

114．0土2．9

160．0土34．1138．3土14．1139．0土33．2

214．4 土 6．3
200．0土13．1

175・2土 9．1★★195．2土15．4★★193．4土 7．9
206・8士19．9 227．8土 9．4 177．0土24．1

p＜0・1

★★

pく0・05＊＊＊

pく0．005

7．4

Mean士SDSol．
Ⅰ％of typeI fiber
BuffaloACI

H

64．0土3．0★
57．5 土4．7

ⅠⅠⅠ

84．8土2．9★★★

IV

80．8土4．4★★★

64．5土2．4

68．7土3．0

78．0土3．7

77．0土2．4

士

42
23
00

土

★★

46
96
99

pく0・1

7．3
5．1

9．9

★
★

＊

133．5士127．0土5400

153．6士TypeII fiber
Buffalo
ACI

肝2

土・土

82
52
80

79
5
827﹁

．．0
1

II mean diameter／I mean djameter
Buffalo
土．042★★★
．872 士．105★
ACI
士．013
．972 土．034
SD／mean diarneter
TyPeI fjber
Buffalo158．0士11．7
185．0士15．2★★180．8土11．8★★186．8士24．4★
ACI
164．0 士 8．0
155．6士10．0

154．4土13．1

163．2土12．7★★145．8士33．2

206．2士57．2★

137．0土13．4

130．2土21．3

pく0・05★★★

−62−

125．0士pく0．005

3．4

Mean土SDMuscleweightIBodyweightO BuHaloハIna
rU

．⊥

●

ACI

′hV

・
や
・

●

・4疇

●

●l′

●●

0000

︒島

0︹む田

OpOPU O

28。
0

00

0

只；i●
●

●

0

●

●

0

●

一63−

0

●●●

08 0

●●●●●

08

●●

サ

0匂00 0軍銅恕8．

︒8金∞︒8

図1 長足止伸筋（EDL）およびひらめ筋（Sol，）における筋重量／体重比（MW／BW）

0
0
0

図2

A：Bラット第IV群ひらめ筋のNADPH−TR染色（原図，×200）

B：Aラット第II群ひらめ筋のATPase pH4．5染色（原図，×100）
C：Bラット第ⅠⅠ群ひらめ筋のATPase pH4．5染色（原図，×100）−64−

8urratoWna

一・・・．・．・・−

tYP●Illb●r一・・・・・typtIl flbtr

−賞

l●

一日

ゼ川畑

l

191■

l Jl

■▲ll

‖：】IJ▲暮．1

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一・・一一

BUHalol仙na

tyPせI flt

一一・・一lyPeII

図3 長址伸筋（EDL）およびひらめ筋（Sol．）での各群別％メlガヒストグラム．
−65−

r

Hber

織の増生などの病的所見は見られず，筋原性ある

本ラットの骨格筋の病理所見については，外眼

いは神経原性病変を横転的に示唆する所見も見ら筋・大腿四頭筋のパラフィン標本や電顕標本で，れなかった．また運動終板におけるコリンエステ

筋線経の変性所見があることが報告されている1）．

ラーゼ活性も．両者間に差は見られなかった．ししかし下腿筋における組織化学的検索では非特異

かし，BラットⅣ群のSol．では酸化酵素活性のパ的変化しか見られないという報告がなされている6）．

ターンの乱れのある筋線経が増加していた（図2
A）．

今回我々の行なったEDLとSol．についての観

EDLおよびSol．における各群別％メガヒストグ

察では光顕的に明らかな筋原性あるいは神経原性

ラムを両ラット間で比較すると（図3），EDLにお病変は見られなかったが，組織化学的定量的に検いては各ヒストグラムのパターンに明らかな差異

討してみると，1）typeII線経が大部分を占めるは認めなかったが，Sol．ではBラットにおいて，

EDLでは，MW／BWがBラットで6退齢ですで

typeI線経の占める比率が増加しtypeII線経がtypeI線経より小径となり，両typeの線経の分にAラットより小さく，その後もほぼ一定の比率を保つ．一方，typeI線経が多数を占めるS。1．で布帽が広がっていた（図2B，C）．

は有意差が見られない．2）MDRが，BラットでTypeI線経の占める比率を両ラット間で統計

EDLSol．の両筋において有意に小さい．以上の結学的に比較してみると，EDLでは有意差はない

果より，Bラットでは胸腺崖が発生する以前，さが，Sol．のⅠ群，ⅠⅠ群，□Ⅰ群において，Bラットでらにはlotorloadで運動量が低下するより前に，有意に増加していた（表2）．

typeII線経のhypotrophyがあることが明らかに

MDRを検討すると，III群のSol．を除き，EDL，なった．つまり，fasttwitchmuscleであるtype

Sol．ともBラットで有意に低下していたが，このII線経に見られるような変化により，胸腺腫発症

比率はBラットの成長に応じて増減する傾向は見られなかった（表2）．

の影響とは関係なく，Bラットの運動量が低下するものと考えられる．

ⅤⅠを各丘ber type別に比較するとSol．において，Bラッ・トで増加している傾向が見られた（表またBラットのSol．では，typeI線経の占める比率がAラットに比べ増加しており，メガヒスト

2）．

グラムの分布幅が広がっており，酸化酵素活性パ
ターンの乱れのある筋線経が増加していることよ考察り，さらに赤筋線経においても何らかの病変（筋Bラットの胸腺は生涯を通じてWister系ラッ原性？）が存在することが示唆される．

トやACI系ラットより大きく，生後30週齢頃より

なおBラットの約4％に，下腿伸筋群がほとん

胸腺の腫瘍化がおこり，18ヶ月齢の雄ラットではど欠損したものが生まれ，これをbrother sister

ほぼ100％に胸腺塵がみられ，胸腺重量は20gまで

matingさせると5匹中4匹に下腿伸筋ラットがになる．胸腺崖は腫瘍性に増殖した上皮細胞内に生まれた．しかし，第2世代以後は致死となり，非腫瘍性のリンパ球が充実性に存在する形態をと得られていない．胸腺底を引きおこす遺伝子と，

る1）2）3）4）

下腿伸筋欠損を引きおこす遺伝子とは相異なるも本ラットは他ラットと比べ体動が減少しており，
rotorloadによるperformance timeが胸腺底発のと推測され，下腿伸筋欠損ラットの確立と，その病理学的検討は今後の課題である．

症前の生後10週齢頃より急激に低下し，その後はほぼ低い能力でplateauに達する1）．

文下腿筋における電気生理学的検索では高頻度反復刺激で重症筋無力症とは異なった筋の易疲労性，収縮力の低下が見られる5）．

献1）Matsuyama，M．，Amo，H．，et al．：Motordysfunctionandmusclarabnormalitiesinrats

OfthehighthymomaBuffalo／Mnastrain．ed．
ー66−

bySatoyoshi，E．，UniversityofTokyoPress，

StruCtureOrSpOntane？uSandurethan−induced

Tokyo，1981，p．81．

thymomasinBuffalorats．CancerRes．，35：
2771．1975．

2）松山睦司，天羽引行．ほか：Buffalo／Mna系ラ5）Kato，F．＆Watanabe，M．：Motordysfunction

ットにおける自然発生胸腺腹．Exp．Animリ

inspontaneousthymomarats，Buffalo／Mna．

30：67，1981．

J．Pharm．Dyn．，5，727，1982．

3）Matsuyama，M．＆Amo，H．：Hostorigin oflymphoid cellsinthymomasdevelopedfrom

6）佐橋 功，衣斐 達，ほか：自然発生胸腺J窪ラ

subcutaneous thymusgraftsin Buffalo rats．

ットにおける骨格筋の組織化学的研究．厚生省

Gunn，68：293，1977．

特定疾患免疫性神経疾患調査研究班．昭和56年
度研究報告書，1982，p．96．

4）Matsuyama，M．，Suzuki，H．，et al．：Ultra・−67−8）正常及び筋ジストロフィー鶏胸腺内myoid cellsの形態学的検討

塚

研究協力者

越

虞■

小 林 高 義■ 松 本 客 秋■
椎

橋

美智子＝

水

平

敏

知…

筋ジストロフィー症のモデル動物である筋ジス

18，21日日及びふ化1日目及び1年以上の成鶏（老トロフィー鶏（筋ジス鶏）は，浅胸筋などの自筋鶏と略）の胸腺を取り出し，2．5％glutaraldehydeを主体として筋原性変化をおこすことはよく知ら

固定，2％osmium酸で後国定，脱水包理．光顕

れた事実である．一方，最近筋ジス鶏胸腺内の標本はtoluidine blue及びサリー染色を行い，電mastcell，histamineの減少1），T細胞機能異常2）

拐標本は酢酸ウラン，水黒鉛で二重染色後日立Hが報告されているが，胸腺内myoidcellの検討はほとんどなされていない．今回我々は，正常及び−800にて電顕的観察を行った．
（3）正常及び儲ジス鶏胸腺と大胸筋の組織培養

筋ジス鶏胸腺内myoid cellsの形態学的変化を比

鶏胚14，16，18，21日目，ふ化1，3日日及び較検討すると共に，培養下での胸腺及び大胸筋切老鶏の各々の胸腺及び大胸筋を取り出し，周囲の片からの筋の再生及びAcetylcholine receptor（AChR）の局在について検討を加えたので報告

脂肪織，結合織を充分取り去り（胸腺は周囲の組する．

各々約0．5mm3に細切し，コラーゲン塗布カバー

織が付着していないことを電塁頁的にも確認した），ス））ップにexplantした．培養液は，Eagle s
MEM with Hanks，salts 80％，馬血清15％，

実験材料及び方法（1）正常及び■筋ジス鶏の胸腺重量の比較

Embryo Extract

正常（1ine412）及び筋ジス鶏（line413）のふ化直前の鶏胚を各々3羽ずつ取り出し，体重をMet−

u／mi（glucoseとして6g／1）を使用し，退2−3回培養液を交換し，経時的に位相差顕微鏡で観察．

tlerH35ARで測定．実体顕微鏡下で甲状腺を確適宜固定し，Jenner，Giemsa染色を行った．

認し，眼下まで充分周囲の組織を剥艶し脂肪織を完全に取り去り，一層の被膜をかぶった胸腺組織のみを取り出し，胸腺重量を同様に測定し，全胸5％，penicillinpotassium200（4）正常及び筋ジス鶏胸腺と大胸筋由来筋細胞上のAChRの局在の検討
培養3週Hの正常及び筋ジス鶏胸腺及び大胸腺／体重比を比較検討した．

筋のexplant cultureを使用．PBSで洗浄後，2（2）正常及び筋ジス鶏胸腺内myoid cellの形態学的検討％paraformaldehydeで前固定．PBS／BSAでpreincubation．5JLCi／ml125Iα−Bungarotoxin

正常及び筋ジス鶏胚21日日及びふ化8日目の胸（α−BGT）に1時間incubate．PBS／BSA，PBS

腺をとり出し，クリオスタットで切片を作成．H・で各3回充分に洗浄した後，2．5％glutaralde−E，Gomori−trichromeなどの組織学的染色を行いhyde＋tannicacidで後EEI走し，脱水後自然乾燥．
サクラNRM2乳剤をカバースリップ上に均一

両者を比較検討した．更に，各々の鶏胚10，14，に塗布．4℃，5週間暗室に保存．コニドールX■東京医科歯科大学医学部神経内科＊■東京医科歯科大学難治疾患研究所超微構造部門

にて20℃，4分間感光させた．オイキットで包埋ー68−

後，現像銀粒子を光顕的に観察し，AChRの分布は，鶏胚では，24時間以内にmyoblastは融合し．

を比較検討した．対照として，preincubation及びincubation時に，10−2M d−tubocurarine（dTTC）

1〜2日で筋管細胞がexplantより放射状に伸び出し，早いものでは4−6日に横紋を形成した．

を添加した阻害実験及び，α−BGTでincubation

ふ化後の鶏大胸筋のexplantから筋管細胞が伸び出すのは数日かかり，初期の筋管細胞の出現とそしない標本を作成し人工産物の有無を検討した．

の伸びはむしろ筋ジス鶏大胸筋の方が良好である
結が，その後の横紋形成の時期，自発収縮に明らか

果（1）正常及び筋ジス鶏の胸腺重量の比較な差は認められなかった．一方，筋ジス鶏大胸筋

正常，筋ジス鶏ともふ化直前の体重は平均約40は，比較的初期より正常に比し空胞が多い傾向があった．

kg．胸腺は，この時期では左右各々4−6葉に分かれており，6羽中4羽で左葉が右葉より重かった．胸腺の総重量はやや筋ジス鶏の方が重い傾向

正常及び筋ジス鶏胸腺では，eXplant直後よりリンパ球が遊出し，24時間以内に単核細胞が遁走があったが，胸腺重量／体重比では，夫々0．091

し始めた（図2−A）．5−6日には融合した多核％，0．112％と有意差は認めなかった（表1）．

の筋管細胞が出現し始め（図2−B），10日頃には（2）正常及び筋ジス鶏胸腺内myoid cellの形態学的検討

急速に筋管細胞の数は増し，2週目には横紋を形正常，筋ジス鶏胚10−14日では，胸腺組織は疎めた（図2−C，E）．筋細月包の出現の有無，数はにリンパ系，上皮系の細胞が分布し，myOfilament

同一の鶏胸腺のexplant culture間でもかなり差をはっきり有するmyoid cellをみつけるのは困があり，これはmyoidcellの胸腺内の存在に局在難であった．しかし，ふ化前後では，髄質及び皮があるためと考えられた．Explantによっては，上髄境界を中心に，顆円形，長方形あるいは長く帯皮性細胞がsheetしている外側の線維芽細胞との状に伸びたmyoid cellsが認められ（図1−A），

境界から筋相月包が伸び出している像もみられ（図

電顕的にhexagonal structure（図1−B），ある
いはZ帯を有し，明らかな横紋筋構造を認めた．

2−D），これは皮髄境界にmyoidcellが多く存在することと一致する所見と思われた．胸腺より再しかし，myOid cellの数は，同時期のWhite

生された筋細胞は，正常及び筋ジス鶏のいずれのLeghom種に比し少なかった．一方，正常，筋ジ時期でも，その横紋形成，自発収縮に明らかな差成し一部自発収縮のある成熟した骨格筋細胞を認

ス鶏とも老鶏においてもmyoid cellはかなり存は認められなかったが，筋ジス鶏胸腺由来筋細胞在し（図1−C，E），両者ともZ帯を有するは，筋ジス鶏大胸筋由来筋細胞と同様に，比較的

myofilamentが細胞内に錯綜して認められ（図1

初期より著明な空胞を有する細胞が認められた−D，F），myOidcellの数，細胞内の構造に明らかな差は認められなかった．

（図2−F）．
一方，老鶏では，正常鶏大胸筋及び両者の胸腺のexplantから良好な筋細胞の再生を認めたが，筋ジス鶏大胸筋からの再生は極めて少数であった．

（3）正常及び筋ジス鶏胸腺と大胸筋の組織培養
正常及び筋ジス鶏大胸筋のexplant cultureで

表1 正常及び筋ジス鶏の胸腺重量の比較（鶏胚21日日）
体

重
（ g

胸

腺

）

筋 ジ ス

4 0 ．41

3 ．4 64 5

正

4 0 ．3二tl ．1 43 6 ．7

常

．9

重

量

nn g

）

十 9

，9

ト 6 ．3

ー69−

胸

腺

重

量 ／ 体

重

比

× 1 0 −J ％l ．1 2

0 ．9

土 0

．1 6

1 ± 0

．1 6

図1

正常及び筋ジス鶏胸腺内myoid cellの光顕及び電顕写真
A，B．筋ジス鶏ふ化後1日呂の胸腺．A：帯状のmyoidcellを認める（矢印）．Toluidineblue染色．Bar＝10JLm．B：Myoid cell内にmyosin filamentのまわりに6個のactin filamentsが配列するhexagonalstructureを有するmyofilamentsが存在する．Bar＝0・1JJm．酢酸ウラン・水黒鉛二重染色．
C，D．正常鶏ふ化後1年以上経た胸腺．C：長方形で一部に横紋を有するmyoidcellを認める（矢印）．サl）−染色．Bar＝10JLm．D：
myoidcell内にZ帯を有するmyofilamentsが錯綜して存在する．
Bar＝1〝m．酢酸ウラン・水黒鉛二重染色．
E，F．筋ジス鶏ふ化後1年以上経た胸腺．E：類円形のmyoidcellsを認める（矢印）．Toluidine blue染色．Bar＝10JLm．F：myoid
cell内にZ帯を有するmyofilamentsが，正常鶏と同様に存在する．
Bar＝1JLm．酢酸ウラン・水黒鉛二重染色．
−70−

図2

正常及び筋ジス鶏胸腺の組織培養所見
A，B，C．正常及び筋ジス鶏胸腺の組織培養の位相差顕微鏡写真．
A：正常鶏胸腺培養1E］目．Explant（E）より．）ンパ球系の浮遊細胞が遊出し，単核の細胞が遁走し始めている．Bar＝10／ m．
B二筋ジス鶏胸腺培養5E＝∃．多核の筋管細胞が形成され始めている（矢印）．Bar＝10JLm．
C：正常鶏胸腺培養32日目．横紋を形成した成熟した筋細胞が密集し，重層して認められる．
D，E，F．筋ジス鶏胸腺培養13日目．Jenner−Giemsa染色．
D：Explantよりモザイク状に上皮性細胞が遁走し（矢印），上皮性細胞がsheetしている外側の線維芽細胞との境界から筋細胞が勢いよく伸び出している．Bar＝100／ m．
E：F，D．の筋細胞の拡大像．
E：横紋を形成した筋細胞を多数認める．Bar＝10JLm．
F：一部の筋細胞に著明な空胞を認める．Bar＝10FEm．

−71−

図3

正常及び筋ジス鶏胸腺と大胸筋由来筋細胞上のAChRの局在
正常及び筋ジス鶏胸腺と大胸筋培養3週後125Ⅰα一BGTによるオー
トラジオグラフィー．無染色．
A：正常鶏大胸筋由来筋細胞．B：筋ジス鶏大胸筋由来筋細胞．
C：筋ジス鶏胸腺由来筋細胞．
A〜C，いずれも筋細胞上にび慢性にAChRを認め，一部にAChRの集中したhot spotsを認める．Bar＝10JLm．
D：筋ジス鶏胸腺由来筋細胞の中には著しく幅の広い筋細胞を認め，その上にもび慢性にAChRを認める．Bar＝10FEm．
E：正常鶏大胸筋由来筋細胞．Preincubation，α一BGTのincubaTtion時に10．2Md−tubocurarineを添加した阻害実験では，筋細胞上に現像銀粒子は全く認められない．Bar＝10／fm．

−72−

（4）正常及び筋ジス鶏胸腺と大胸筋由来筋細胞上のAChRの局在の検討するもののmyo負lamentは細胞内で錯綜しまだ未熟な段階にあると思われるが，∫乃 われクでは，

培養3週目の正常及び筋ジス鶏胸腺と大胸筋由両者の胸腺からいずれも横紋を形成し，自発収縮来筋細月包上には，いずれの場合にもび慢性にのある成熟した骨格筋が出現し，AChRの分布もAChRが存在し，所々にAChRの集中したhot

全く大胸筋由来筋細胞と同様であり，胸腺内spotsが認められた（図3−A，B，C）．また，筋ジス鶏胸腺由来筋細胞で，9叫m以上の幅の広い

myoidcellは本来骨格筋に分化する能力をもっていると考えられる．また，観察した限り心筋細胞

筋管細胞が存在したが，その細胞上にもび慢性には認められなかった．Masakiら．）は，幼君な鶏骨

AChRが存在した（図3−D）．一万，10￣2Md−TC

格筋には白筋，赤筋，心筋myosinが存在すると報を添加した阻害実験（図3一己）及び．α−BGTを告しており，Sugitaら5）も鶏胸腺myoid cellに添加しない実験で1ま，現像銀粒子はカバースリッ

は，免疫抗体法で，myOSinの白筋，赤筋，心筋型

プ上に存在せず，本実験で筋細胞上のAChRに結heavy chainが存在すると報告している．これらの形態学的，免疫学的事実は，本来胸腺内myoid

合したα−BGTは，特異的結合と考えられた．

cellは骨格筋に分化する能力を有しているものの，
考

生体内では未熟な状態で長期に存在していること察

筋ジス鶏胸腺重量は，正常鶏よりも軽いことがを意味していると思われる．一方，培養下では，今までにE．Cosmosら3），K．Klineら2）によって筋ジス鶏胸腺由来筋細胞は，大胸筋由来筋細胞と報告されている．K．Klineらは，NewHampshire

同様に比較的初期より正常に比し，空月包が多く存

種のN3Strain筋ジス鶏と，WhiteLeghorn種由在することから考えると筋ジス鶏骨格筋の性格を来のHy−lineSCstrainを正常鶏とし，ふ化後25有すると思われる．しかし，胸腺内では長期に未日，100日，365日以上で比較検討し，いずれも筋分化のまま存在しているため，大胸筋が年と共にジス鶏胸腺が正常に比し体重比でも減少している

変性壊死に陥り，1年以上経た筋ジス鶏大胸筋でと報告している．我々のline412及びline413によは，筋細胞が再生し難いのに比し，再生能力のあるふ化直前の測定では，両者に差は認められなかる細月包が正常と同様に存在しているものと考えらった．このことは，今までの報告が種差による相れる．

違なのか，ふ化後ある時期以後差が生じてくるの

結か今後の検討が必要と思われる．

論

正常及び筋ジス鶏胸腺内myoid cellに関して

正常及び筋ジス鶏胸腺内myoid cellは，生体内は，K．Klineらが，ふ化後25，100日目の胸腺ので形態学的に明らかな差を認めなかった．培養下

組織化学的，免疫組織学的検討を行っている．彼

では，両者の胸腺より成熟した骨格筋が出現し，らは，両者のmyoidcellともSDH染色で強く染まり，ATPase染色では弱くしか染まらず，好気その細胞上のAChRは大胸筋由来筋細胞と明ら性代謝であるとし，myOSinを間接螢光法で染め，来筋細胞は筋ジス鶏大胸筋由来筋細月包と同様に，正常及び筋ジス鶏胸腺内のmyoid cellの形，数，分布に明らかな差を認めなかったとしている．今比較的初期より空胞の多い傾向を認めた．また1までに，正常及び筋ジス鶏胸腺内myoidcellの電再生し稚いのに比し，正常鶏大胸筋及び両者の胸顕的検討及び1年以上経た成鶏の比較検討はなさ

腺からは良好な筋細胞の再生を認めた．

かな差を認めなかった．しかし，筋ジス鶏胸腺由年以上経た成鶏では，筋ジス鶏大胸筋からは筋がれていないが，我々の今回の検討においても，組織学的，電顕的に鶏胚，ふ化前後，老鶏において明らかな差は認められなかった．

文献1）Befus，A．DりJohnston，N．，Neilson，L．，etal．：

正常，筋ジス鶏胸腺内myoid cellは，Z帯を有−73−

Thymicmastcelldi負ciencylnavianmuSCulardystrophy．Thymds，3：L369，：1981．

phenotype．DifEerentiation，9：139，1977．

2）Kline，K．＆Sanders，B．G．：・bbmonstration4）Masaki，T．＆Yoshizaki，C．：Differentiation

ofacellulardefectinthethymusofhereditaryofmyosinin chicken embryos．J．Biochem．，

muscular

76：123，1974．

dystrophic

chicken二Thymus，4：5）Sugita，H．，Nonaka，Ⅰ．，Ishiura，S．，et al．：

9，1982．

3）Cosmos，￣E．，Percy，D．Y．，Butler，Jりet

Biochemical andimmunological studies ofal．：

Thymic−muSCle interaction：a nonneural

myoidcellsinchickenthymus．In

innuence on metabolic differentiation ofGravisanaerobic muscle of normal and dystrophicof Tokyo Press，Tokyo，1981，p．321．

−74−

Myasthenia（editedbySatoyoshi，E．），University

9）ジストロフィー鶏・培養筋細胞からのCPKの遊離

字尾野 公 義■
研究協力者
目

黒

田

洋一郎日

高

元

喜代美＊

培養器中で培養した．

的

2．サンプリングと酵素活性の測定

血中CPK量は筋ジストロフィー症診断の重要な指標となっている．また血清中に遊離される

2日に1回ずつ培養液を交換し，古い培地は遠cpKは，Duchenne型筋ジストロフィー症の胎児心管に移しサンプルとし，等量の新しい培地を加腰帯血中でも高値を示し，ジストロフィー症がすでに胎生期に発症していることを示唆している・

えた．サンプルの培養液は3000rpm10分間冷凍遠心し，上清を酵素活性の測定まで−20℃で凍結保

我々は，筋ジストロフィー症は筋の発生分化のど有した．CPK，LDH，GOT，GPT活性はすべてのような時期にどのような形で発症するのか・ま同じサンプルを用いて，自動測定機（ATAC705）

たそれはCPKの遊艶という現象とどのようにかで同時に測定した．細胞非存在のdishに2日間同かわるのかを明らかにする目的で，ジストロフィー鶏胚胸筋と対照正常鶏胚胸筋を同じ条件下で初様にincubateした培地の活性を測定し，これをbasal活性として，サンプルとの差を酵素活性遊

代培養し，培養液中に逢離されるCPK及び他の離量とした．3−5枚の同条件のdishについてそ

関連酵素の活性を測定し，比較検討した・

れぞれ各酵素活性を測定し，平均値と標準偏差を計算し，ピーク値に関してはt検定を行った．

使用したジストロフィー鶏はLine413で・常染色体身性の筋ジストロフィー遺伝子をもつ・対照

結正常鶏はLine412で，両者とも問題の遺伝子に関果

してhomozygoteであり1｝・筋ジストロフィー遺1．筋細胞の培養状態

伝子の発現による筋細胞の変化の差をとらえる目

単級細胞は培養開始1日後頃から融合を始め，3〜4日後までにmyotubeを形成した・7E］後項

的には好適と考えられた．

からfibroblastの増加がみられ，11日目にはdish
方の底にほぼ一面に拡った．光学顕微鏡による観察法

1．筋細胞の培養では，ジストロフィー鶏培養筋細胞と対照正常鶏

ジストロフィー鶏（Line413）および対照正常

培養筋細胞の間で，細胞数，形態とも顕著な差は鶏（Line412）の10日胚胸筋を取り出し，0・2％コ

見出し得なかった．

ラゲナーゼ（Sigma）で5分間37℃で処理後・機械

2．酵素活性の総遊離皇的に単粧し浮遊脚包とした．約6×105cellを35mm

培養19日までに培養液中に遊離した酵素活性の径のコラーゲンを塗布したculturedishにまいた

総量を表lに示した．ジストロフィー鶏由来の培培地はDulbecco，s Modified Eagle Medium

養筋相月包から遊艶されたCPKの総量は対照と比（GIBCO）に5％馬血清（GIBCO）と3・5％Chick較して約1．9倍に達した．これに対し，LDHはジ
ストロフィー鶏からの方がやや多いものの，有意EmbryonicExtract（正常鶏の9〜10日胚から調製）を加えたものを1．5mlずつ使用し，37℃のCO2＊都立神経病院神経内科＝東京都神経科学総合研究所神経生化学研究室

な差は見られなかった．GOT，GPTにも有意な差はみられなかった．GPTは細胞存在下では，遊艶よりも分解が顕著でマイナスの値を示した．

−75−

表l ReleaseofenzymeaCtivitiesfromembryo−nic chicken pectoralis muscle cultures

To【ql ReleqSe（M xlO5
Ho「rml

CPK

LDH

GOT

1到

2595

522

GPT

−28

（line上112）

Dystrophy

255

258D q72

−27

0．90

0．97

（llnelり5）
Dys／Nor l．89

1．08

3

5

7

91113151719

2123

Daysin Culture

InltiQIcellno一36XlO5，19dQySinculture．

3．酵素活性遊離の時間経過
2日毎に測定したCPK活性の遊艶量を図1に示した．ジストロフィー鶏の培養筋細胞では培養

図2 筋ジストロフィー鶏胚胸筋培養細胞からのLDHの遊触（6×105cellで開始したdish当りの活性）開始後からCPK遊離は増加し，7−9日で急増

量はジストロフィー鶏培養筋細胞からのものが正し，それ以後激減した．対照正常鶏でも低量なが常鶏に比べてやや絶対量が多い傾向があるものの，ら遊馳量は培養日数とともに増加し，7〜9日に全く同じような時間経過で変化した．すなわち，最大値に達し，以後は低レベルでの変動を示した．

培養開始後から7−9日まで次第に減少し，7−9日でのCPK遊牡量のジストロフィー鶏と

13−15日で著明に増加し，以後減少した．CPK活正常鶏の差は大きく，0．1％の危険率で有意であっ性の遊艶が最大であった7−9日のサンプルで，た．

LDH活性の遊離量は全く増加しておらず，むしろ最少値を示した．

同じサンプルを用いて同時に測定したLDHの
遊艶量の変化を図2に示した．LDH活性の遊柾

GOT，GPTは特に大きな変化は示さず，7−9日のサンプルでも遊離量の増加はなかった．
考

察

8
0相
も三つこき︐一石く左UPむSdむl山∝

ジストロフィー鶏胸筋の初代培養を用いてCPKの遊敵を測定した報告はWeinstockら2），
Ionasescuら3），宮武ら4）がある．これらはfibro−
blastの増殖をコントロールしていない条件下や，限られた1，2の時点でのサンプリングにより，ジストロフィー鶏からのCPK遊離量が正常鶏と比較し多いことを示したものであるが，fibroblastの増殖を底力押えた条件下で，CPK遊触量の時間的変化を他の酵素も比較しながら綿密に追った本研究でもジストロフィー鶏筋からのCPK遊離は確認できた．
本研究で使用したジストロフィー鶏（Line413）の血中CPKレベルは対照正常鶏（Line412）に比

図1

して約4倍で，またLine413の筋異常はまず胸筋筋ジストロフィー鶏胚胸筋培養細胞からのCPKの遊離に顕著に起こることが知られているl〉5）．本研究で（6×105cellで開始したdish当りの活性）

Line413の胸筋初代培養からのCPK活性の総遊−76−

雄量がLine412の約2倍であったことは・血中できれば，そのメカニズムの解明は「なぜ特定のcpK量の増加の少なくとも一部は胸筋を構成し酵素蛋白質だけが細胞膜を通過するのか」というている細胞群からのCPKの遁艶によるものであ疑問となり，生体膜の基礎研究としても興味あるることを示している．ジストロフィー鶏Line413

課題となるであろう．

の培養筋細胞と正常鶏Line412の培養筋細胞は，さらにジストロフィー鶏胸筋初代培養で特定の形態的にほとんど区別できない5㌧本研究の培養時期にCPKの遊艶が起こるとすれば，それ以前

条件下でも，形態学的に差がない状態でもに生じているジストロフィー発症に関係した変化

Line413においてはCPKの遊敵を引き起こすよをとらえる目安となり，この培養細胞系はジスト

うなジストロフィーの発症に関連すると思われる

ロフィー発症機序の解明に有益な情報をもたらす

異常がすでに起こっていたことを示している・
cpKの遁艶は図1に示したように培養7−9ことが期待できる．
文

日に顕著に見られた．しかし同じ時期に細胞内酵

献素の代表であるLDHをはじめ，GOT，GPT遊艶

1）Wilson，B．W．，Randall，W．R．，Patterson，G．

量の増加は全くみられなかった．これらの事実は，T．＆Entrikin，R．K．：MajorphysiologiC and①CPKの逢隈が細胞の壊死などによる細胞内酵

histochemical characteristics ofinherited

素の非特異的な選出によるものでないこと，②dystrophy ofthe chicken・Ann・N・Y・Acad・

CPKの遊艶が筋細胞の発生分化の特定のステー

Sci．，317：224−246，1979．
2）Weinstock，Ⅰ．M．，Jones，K．B．＆Behrendt，J．

ジか，細胞間の相互作用など特定の生理条件下に

R．：Developmentofnormalanddystrophic

起こったことを示している．

chickmuscleintissueculture．J．Neurol．Sci．，

CPKの遊離は，myOtubeがdish底面に一面に39：71−83，1978．

ひろがっていて，まだfibroblastの増殖がみられない7〜9日までに起こり，それ以後はfibro−

3）Ionasescu，V．，Ionasescu，RりWitte，D．，Feld，

blastの増殖とは無関係にむしろ減少したままなの

R．，Cancilla，PリKaeding，L．，Kraus，L．＆Stern・で，CPKの遊離の源はmyotubeであろうと考え

L．：Altered protein synthesis and creatineられる．しかし現段階ではmyotube以外の細胞から起こっている可能性も否定することはできない．

kinaseinbreast muscle cell culture fromdystrophicchickembryos．J．Neurol．Sciり46：

157−168，1980．

吉武ら4）は56年度の本姓報告において，CPKアイ
ソザイムの検討を行ない，12−13H胚培養筋ジス

4）宮武正，宮谷信行，揚浅龍彦：培養ジストロフ

鶏筋では，CPKのB型からM型への移行に遅れがィーチキン筋細胞のCPKアイソザイム．

あることを示している．Fibroblastのみの培養を調べたり細胞内CPKのアイソザイムごとの量的

厚生省・筋ジストロフィー症の発症機序に関す変化を遊敵されたものと対照しながら，今後検討る臨床的研究，三好姓，昭和56年度研究報告書，
1982，pp．31−33．
5）江橋節郎，ほか：ジストロフィーチキンについする必要がある．
またLine413ジストロフィー鶏血中において正ての予備的観察．厚生省・筋ジストロフィー症

常鶏と比して著しく増加しているPK，Aldolase5）の病因の究明に関する研究，沖中姓，昭和51年などの他の酵素を調べ，CPK遊離の特異性を確認

度報告書，1976，pp．9−14．

−77−10）ジストロフィー鶏発育早期におけるsuperoxidedismutase，
Catalase，glutathioneperoxidase，glutathionereductase

活性の異常について
水 野 美 邦書

は

じ

め

に

taseはMisra＆FridovichS）の方法，Catalaseは筋ジストロフィー症の発症機序はなお不明であるが，活性酸素による細胞障害を考える仮説があり，その根拠として筋ジストロフィー生検筋におけるglutathioneperoxidase活性の上昇や1），動Cohenら6）の方法，glutathione peroxidaseはPaglia＆Valentin7）の方法，glutathionereduc−taseはその応用によった．蛋白はLowryらの方法によった．

物モデルである鶏ジストロフィー羅息筋における結SuperOXide dismutase，glutathione peroxidase

果の活性上昇があげられている．我々はこの仮説がジストロフィー鶏の可溶性蛋白浪度は，対照に正しいなら，発症早期よりこれらの変化が出現し比し有意に低かったので（表1），結果は蛋白当りていなければならないと考え，ジストロフィー鶏の比活性，および，湿重量当りの総活性両方で比を用いて発育早期の活性酸素関連諸酵素の検索を較した．結果は表2，3にまとめてあるが，Super−

行った所，生後1週目より既にこれら諸酵素活性

OXidedismutaseに関しては，シアンにより不括化がジストロフィー鶏で有意に上昇しており，活性されるCu−Znsuperoxidedismutaseと抵抗を示

酸素系の代謝異常を示す所見を得たので報告する．

すMnstlperoxidedismutase2つのisozymeが知られているので，最初に総活性を求め，それか方法

らMn superoxide dismutase活性を引いたもの

対象動物はNew HumpShir系ジストロフィー
鶏（line413）とその対照（line412）で受精卵を後者について見ると，対照では発育と共に，活性

実験動物中央研究所（山梨）より入手，将化後1が比活性でも総活性でも漸減してゆくのに対し，週目，2週目，4週目，4ケ月目に4、羽宛断頭屠

ジストロフィー鶏では対照より有意に活性が高く，を，Cu−Znsuperoxidedismutase活性としたが，殺し，浅胸筋の一部にて酵素活性を測定した．今しかも4週齢にピークを示す特異なコースを示し回測定した酵素並びに方法は，SuperOXidedismu一ている．Mn superoxide dismutaseに関しては，

表110倍量ホモジェネート上清成分の蛋白含量
7 00 g上100，000g上 清

沼

恥 stroph y l C o ntrol

l

t 検定

l 恥 stroph y

第1週

5 ，9 3 ± 0 ．4 4

7 ．4 1 土 0 ．3 4p

＜ 0 ．0 1

4 ．2 8 士 0 ．3 8

5 ．8 6 士 0 ．5 3

p＜0．01

第週

7 ．2 1 土 0 ．3 4

8 ．3 8 士 0 ．3 0p

＜ 0 ．0 1

4 ．9 5 ± 0 ．1 6

6 ．5 7 土 0 ．4 3

p＜0，01

2

第4

週

6 ．9 1 士 0 ．5 1

8 ，6 0 ± 0 ．5 0p

＜ 0 ．0 1

4 ．8 5 土 0 ．2 1

6 ．2 7 ± 0 ．2 1

p＜0．014ケ

月

5 ．8 4 ± 0 ，4 2

8 ．1 8 土 0 ．4 2p

＜ 0 ．0 1

5 ．0 3 ± 0 ．5 6

6 ．4 0 ± 0 ，6 2

p＜0．05

単位：mg／ml．mean土SD（n＝4）＊自治医科大学神経内科
ー78−

表2

表3

ジストロ7，1−鶏におけるsuperoxide

ジストロフィー鶏におけるsuperoxide

dismutase，Catalase，glutathione peroxi−

dismutase，Catalase，glutathione，perOXi−

dase，glutathione reductas，e活性（蛋白1mg当りの比活性で現わした場合，m士SD，n＝4）

dase，glutathione reductase活性（湿重量1g当りの総活性で現わした場合，m土SD，
n＝4）

Dystrophy
Cu−Zn

superoxide

Dystrophy

disrnutase●

第1 週

1
．
1
1
2±
0．
2
4
0

0
．
7
4
7
±
0．
0
3
7

p＜
0
．
0
5

Cu−Zn

第2 週

0．
9
2
7土
0．
1
9
9

0
．
5
6
8
±
0．
0
8
9

p＜
0
，
0
5

第 1 週

4
7．
5土
1
0．
6

43．
9 ±
5．
1

第4 週

1
．
3
5
0±
0．
3
8
4

0
．
5
3
6
±
0．
0
7
6

p＜
0
．
0
2

第 2 退

4
5．
6±
7．
9

37．
5 ±
7．
3

n．
S
．

第
4ケ
月

0
．
9
9
3主
0
．
3
5
5

0
．
4
1
2
土
0．
0
6
2

p＜
0
，
0
5

第 4 週

6
5．
7±
1
9．
6

33．
8 ±
5．
9

pく
0．
05

第
4 ケ
月

50．
6
2±
1
2．
46

26．
8
7±
3．
58

p＜
0．
05

Mn

superoxide

dismutasesuperoxide

dismutase

n．
S
．

第1 週

0．
81
5±
0．
0
76

0．
41
9±
0．
024

p＜
0．
01

第2 遇

0．
70
6±
0．
0
78

0．
38
8土
0，
021

p＜
0．
01

第1 週

3
4
．
6
±
1．
6

2
4
．
6±
2
．
6

p＜
0．
0
1

第4 週

0，
73
8±
0．
1
26

0．
37
2土
0．
0
45

p＜
0．
01

第
2 週

3
4
，
9
±
3．
7

2
5
．
4±
1
．
2

P＜
0．
0
1

第
4ケ
月

0．
55
6±
0．
06
0

0．
34
4±
0．
01
4

p＜
0．
01

第
4 週

3
5
．
7
±
5．
9

2
3
．
2±
2
．
1

P＜
0．
0
5

第
4ケ
月

2
9．
2
4
±
1．
0
2

2
3．
2
9
±
1
．
6
2

p＜
0
．
0
1

第1 週

1．
23 ±
0．
34

0．
20 土
0．
10

p＜
0．
01

第2 週

0．
76 ±
0．
1
4

0．
0
86土
0．
07
8

p＜
0．
01

第1 週

7
1
．
4
土
1
4
．
8

1
5．
1±
7
，
7

p＜
0
．
0
1

第4 週

0．
9
9

±
0．
4
3

0．
05
2±
0．
01
7

p＜
0．
01

第
2 週

5
3
．
8
土
9．
8

6
．
1
4±
2．
0
7

p＜
0
．
0
1

第
4ケ
月

0．
7
3

±
0．
1
9

0．
02
1±
0．
0
25

p＜
0．
01

第4 週

6
5．
1土
2
5．
8

4
．
4
4土
1
．
3
9

p＜
0
．
0
1

第
4ケ
月

4
2．
1
土
9
．
6

1
．
8
2土
2．
1
6 ▼p＜
0
．
0
1

GlutathioneMnperoxidaseH

superoxide

dismutase●

第1 週

1
8
．
7
1±
1
．
6
0

1
0．
8
1土
2
．
2
4

p＜
0．
0
1

Glutathione

第2 週

1
7
．
7
6±
2．
6
5

8．
9
1±
0．
9
0

p＜
0．
0
1

第1 週

79
6±
51．
1

6
24土
87．
3

p＜
0．
05

第4 週

1
6
．
9
4±
4．
2
5

7
．
7
4±
0．
9
3

p＜
0
．
0
2

第2 週

887±
93

58
2土
4
3

p＜
0．
01

第
4ケ
月

2
0
．
2
7±
2．
7
0

6
．
5
3±
1．
5
2
− p＜
0
．
0
1

第4 週

818±
19
3

48
4±
5
0

p＜
0．
05

第4ケ
月

10
07±
82

41
5±
7
3

p＜
0．
01

Glutathione

reductase●peroxidase

第1 週

9．
1
9

±
0．
93

4．
9
3 ±
0．
93

p＜
0．
01

第2 週

7．
11

士
1．
95

3．
29 ±
0．
96

p＜
0．
05

第

1

週

39 0 ± 2 1

2 8 6 ± 37

p ＜ 0 ．01

第4 週

8．
01

±
3，
4
4

1．
99 ±
0．
40

p＜
0．
05

第

2

週

34 9 ± 8 1

2 1 4 土 58

p ＜ 0 ．1

第
4ケ
月

7，
0
4

土
0．
95

2．
13 ±
0．
6
3

p＜
0．
01

第

4

週

38 6 土 158

12 5 土 2 3

p ＜ 0 ．05

第 4 ケ月34 9 土 15

13 3 土 3 2

p ＜ 0 ．0 1・1unit＝epinephrineの酸化を50％抑制する酵素活性．・lunit＝1FLmOle H202Catalyzed／min．

Glutethione reductase．．．

・lunit＝epinephrineの酸化を50％抑制する酵素活性＝■lunit＝ln mole NADPH oxidized／min．

・・lunit＝1JlmOle H202Catalyzed／min．
．．．1unit＝ln mole NADPH oxidized／min．

成長に伴う変化は対照とほぼ平行した漸減パター

tathione peroxidase活性はやはりジストロフィー鶏で有意に上昇しており，対照では成長と共に活性はやはりジストロフィー鶏で有意に高いが，ンを示している．次にcatalase活性については，漸減するのに対し，ジストロフィー鶏では，最初対照浅胸筋では活性がきわめて低く，更に成長に軽度に漸減コースをたどるが，再び増大して4ヶ伴って活性は低下するが，ジストロフィー鶏では月齢で活性が最大となり，対照との差は3倍以上著明に上昇しており平均値では第1週目で既に6となっている．Glutathione reductaseに関して倍の活性増大を示していた．その後の経過も4週もやはりジストロフィー鶏で有意に活性が上昇し目に小さいピークがあり，Cu−Zn superoxideており，成長に伴う活性の低下も，対照に比較す

dismutaseとほぼ平行する経過をたどった．Glu−

ると軽度に見られるのみである．

−79−

units／mg prOtOin

●

●●

20

1．0

1．6

16

0．8

1．2

12

0．6

0．8

8

0．4

0・4

1W 2W

4W

0

2．0

4

0・2

4M

1W

2W

4W

4M

Control

Dystrophy

図1Cu・Znsuperoxidedismutase（●一●），Mnsuperoxidedismutase（P一■），Catalase…，glutathioneperoxidase（Dd），glutathi−
one reductase（〇一〇）活性の成長に伴う変化．＊catalase用スケ
ール，＊＊glutathione peroxidaseおよびglutathione reductase
用スケール，Osuperoxide dismutase用スケール・左ジストロフイ丁鶏，右対照．説明本文並びに表2参月軋

これら5つの測定した酵素の平均値を縦軸に年taseにより過酸化水素に代謝され，過酸化水素は齢を横軸にとってプロットしてみると図1の如く

catalase，glutathione peroxidaseにより水に代なり，ジストロフィー鶏と対照との差異がはっき謝されるが，一方生体内ではsuperOXide anion

りする．即ち，対照では活性酸素の代謝に関連し（0盲）と過酸化水素から，0盲＋H202＋H＋→

たこれらの酵素活性は何れも，成長と共に，ほぼ

HO・＋102＋H20（Harber−Weissreactionと呼平行して漸減してゆくが，ジストロフィー鶏では活性の絶対値の増加があるのみならず，成長に伴H・0−、CatataSe

う活性の時間経過が全く乱れて特異なパターンを示している事がよくわかる．
考Peroxidodan唱gO察

活性酸素とは，酸素分子が段階的に還元をうけ托roxiむtionてゆく過程で生ずる分子種の事で，全ての酸素呼ROHノ＼GSSGノ＼NADPH

吸を行う細胞内で絶えず発生しており，その非特異的な酸化能力により細胞毒性が強い8）．生体内R∞Hく／GSHvNADP
GSH−P GSSG−R

図2

活性酸素代謝過程模式図SOD＝SuperOXideには，活性酸素系から自己を守る酵素系が存在す

dismutase．GSH−P＝glutathione peroxid−るが，その一部を模式的に示すと図2の如くにな

ase，GSSG・R＝glutathione reductase，説る．即ちsuperOXideanionはsuperoxidedismu−

明本文参照．

ー80−ばれる）の反応で，HO・（hydroxyradical）や確認した事になる．Superoxidedismutase活性上102（singletoxygen）を生ずる反応が知られてい昇の原因をもう少し細く考察してみると，Super−

る．これらのラジカルは細胞毒性が強いが，そのひとつの機序として，細胞内小器官の膜を構成す

0Ⅹideradical（0ぎ）の生成増加に対する反応性の

る月旨質の過酸化があげられており，月旨質の過酸化られる．何故ならば，SuperOXidedismutaseによる生成物である過酸化水素の代謝に関係した活性上昇と考える事が最も妥当ではないかと考えは，膜の機能障害をおこす事が知られている9）．
今回これら活性酸素の代謝に関連する5つの酵

Catalase，glutathione peroxidaseも活性が上昇

素を，ジストロフィー鶏の発育早期に，成長を追って測定したわけであるが，対照鶏ではこれらのしており，酸化されたglutathioneを還元型にも5つの酵素活性は何れも成長と共に漸減するが，SuperOXide radicalの生成増加がないならば，ジストロフィー鶏では蛋白当りの比活性でも，湿SuperOXide dismutase活性が上昇したとしても，過酸化水素の生成はまもなく底をつくであろうし，

どすglutathionereductaseも上昇している．もL

重量当りの捻活性でも有意の上昇を示しており，がわかった．ジストロフィー鶏の測定値の標準偏そうなればcatalaseやglutathione peroxidaseの活性が増加している事は理解し難い．次の課題

差は可成大きいが，対照鶏では，これは大体平均

はsuperoxideradicalの生成増加の有無を直接的

値の10％前後に入っており，測定方法の問題とはに確かめる事である．

発育に伴う変化も対照とは著しく異なっている事考えにくく，実際ジストロフィー鶏においてはこ

次にcatalase活性の上昇にふれると，そのれら酵素活性の変動に可成個体差があるものと思time courseがCu−Zn superoxide dismutase活性のtime courseとほぼ平行している事から，われる．
ジストロフィー鶏におけるsuperoxide dismu−

catalaseの上昇は過酸化水素生成に対する反応

tase活性に関する報告では，Francisら3），Parkと考えるのが最も理解しやすい．Glutathione

ら4）が，4ヶ月齢のConnecticut系ジストロフィ
ー鶏において約3倍の活性上昇を報告しており，

peroxidaseも過酸化水素の代謝に関係はしているが，time courseがcatalaseやCu−Zn super−

又glutathione peroxidaseに関してもParkら一）

0Ⅹide dismutaseとは異なり別の意味を持っていが上昇を報告し，又OmayaandTappe12）も18ヶ
月齢のジストロフィー鶏において活性の上昇を報るのではないかと考えられる．即ち，図2に示し

告して，活性酸素による障害の可能性を述べていoxygen等は膜を構成する脂質の過酸化を通じてるが，発症後日時を経てからの測定では，筋病変細胞の機能障害をおこす機序が考えられているが，の進行と共に，筋組織以外の成分も増加してくる

glutathione peroxidaseは過酸化脂質を普通の酸化脂質に還元する事により膜の機能を保護する方事があり，異常な測定値が筋病変を反映したもの

たsuperoxideradical，hydroxyradical，Singlet

したものだとしても，病変に対する二次的な変化向に働くので，glutathione peroxidaseの活性上昇は，活性酸素の生成上昇→膜の過酸化→膜の可能性も否定できない．もし活性酸素仮説が正の機能障害の仮説を示唆する．この点は今後組老親しいならば，発症早期から異常が出現している筈

中のmalondialdehydeを定量する事により本当

で，我々はこの点にまとを絞って検討したが，まに脂質の過酸化を生じているかどうか検討できる

だ形態学的な変化は軽微である生後1週目より既ので，次のステップとして予定している．

かどうかに関して疑念が残る．又，筋病変を反映に活性酸素の代謝に関連した酵素系の上昇が見ら
まれ，我々の検討したジストロフィー鶏においてはとめ

発症早期に活性酸素系の代謝回転の冗進のある事

1．New Humpshir系ジストロフィー鶏浅胸筋が考えられた．Superoxidedismutaseに関しては
昨年一度検討を行ってあるが，今回その変化を再SuperOXide dismutase，Catalase，glutathione
perOXidase，glutathione reductaseを生後1週，ー81−

2週，4週，4ヶ月目に測定し，対照正常鶏の値と比較した．

35：1652，1976．

4）park，J．H．，Hill，E．J．，Chou，T．H．，et al．：

2．正常対照において，これら諸酵素活性は成長

Mechanism ofaction ofpenicillamineinthe

と共に比活性でも総括性でも漸減するのに対し，treatmentofavianmusculardystrophy．Ann．

ジストロフィー鶏では活性が対照に比し有意の上N．Y．Acad．Sci．，317：356−369，1979．

昇を示すのみならず，成長による経時変化のパタ

5）Misra，H．P．＆Fridovich，I．：The role ofーンも異常であった．

SuperOXide anionin the autoxidation of

3．上記所見は，活性酸素系の代謝回転の冗進を

epinephrineandasimpleassayforsuperoxide

意味すると考えられ，活性酸素系が，ジストロフ

dismutase．J．Biol．Chem．，247：3170−3175，

ィー鶏の発症機序に関与している事を示唆する所

1972．

見と考えられ，今後その機構を更に検討したいと考えている．

6）Cohen，G・・Dembiec，D・＆

M早rCuS，J・：

Measurement of catalase activityin tissue
extracts．Anal．Biochem．，34：30−38，1970．

文献7）paglia，D．E．＆Ⅴalentine，W．N．：Studieson1）Kar，N．C．＆ Pearson，C．M．：Catalase，

the quantitative and qualitative characteri−superoxidedismutase，glutathionereductase

Zationoferythrocytesglutathioneperoxidase．

and thiobarbituric acid−reaCtive productsin
normal and dystrophic human muscle．Clin．
Chim．Acta，94：2777280，1979．

J．Lab．Clin．Med．，70：158−169，1967．
8）浅田浩二：酸素毒性．生化学，48：226−257，
1976．

2）Omaya，S．T．＆Tappel，A．L．：Glutathione9）Tappel，A．L．：Lipidperoxidationdamageto

peroxidase，glutathione reductase，and thio−

Cell components．Fed．Proc．，32：1870−1873，

barbituric acid−reaCtiveproductsinmuscles

1973．

Ofchickens and micewith geneticmuscular10）水野美邦，城下裕，金子仁：筋ジストロフィー

dystrophy．Life Sci．，15：137−145，1974．

症の発症機序に関する研究−ジストロフィー

3）Francis，S．H．，Brandon，S．＆Park，J．H．：

鶏のSuperoxid寧dismutaseの検討−．脳と神Superoxide dismutaselevelsin tissue ofgenetically dystrophic chickens．Fed．Proc．，

ー82−

経，34：667−672，1982．

11）Dystrophy mouse及びdystrophy hamster
組織中のEnkephalin様免疫活性

■

夫

裕

村

井

即封
●

●

孝 昭

政 川

音 古

紆対

敵

●

本 田

坂 池

●

和 明 三

一光恭

尾 田

中須 林

研究協力者

●

●

phyhamsterは12週齢の雄のBIO14．6系を，対照

は じ め に神経成長因子（NGF）は，交感神経細胞と知覚神経細胞の成長と機能維持に必要な栄養因子であるが，我々は既にdystrophymouseにおいて顎下腺及び骨格筋中のNGF含量の低下していること群としては同退齢のFIB hybrid系を用いた．
組織及び抽出Mouseは断頭後直ちに全脳，副腎，心肢，後肢骨格筋，胃，小腸，盲腸，大腸を採取し湿重量を測定した．各組織は0．1N塩酸メタを報告してきた1）2）．一方，最近になり種々の内因ノール（1：1）中でhomogenize L，70℃で10分性モルフィン様ペプチドが分散同定されてきたが，間加温後50，000×gで超遠心し上清を抽出物とし

これらの中でMethionine−Enkephalin（Met−た4）．

Enk）及びLeucine−Enkephalin（Leu−Enk）など

Hamsterは全脳，副腎を採取後凍結保有し，そのPreproenkephalin A（3）に由来するモルフィンの後同じように抽出した．抽出物は−20℃で保有様ペプチドは．副腎髄質交感神経系，中枢神経系，し，ラジオイムノアッセイ（RIA）の直前に0．1N

消化管等に広く分布している．中でも副腎髄質交感神経系はこれらの主要な産生臓器であることが

NaOHを用いて中和した．
RrA Met−Enk及びLeu−EnkのRIAは既に明らかになり，副腎髄質交感神経系における生理

報告した方法に従って行った5）．Met−Enkの的意義が注目されている．以上の成績に着目し，交感神経系の成長及び維持に必要なNGFの減少

RIAはLeuTEnkとモル比で10．3％の交叉反応をした動物モデルであるdystrophy mouseにおけ0．7％の交叉反応しか示さない．両RIA共に5る種々の組織中のMet−Enk及びLeu−Enk様免

pg／tubeの最少検出量を有する．

示すがLeu−EnkのRIAはMet−Enkとモル比で疫活性含量について検討した．また他のdystro・
phyモデル動物であるdystrophyhamsterの副腎，
全脳中の含量についても検討した．
方結

果

Dystrophy mouse及び対照mouseの副腎，骨格筋，心筋抽出物中のMet−Enk様免疫活性（Met−Enk−LI），Leu−Enk様免疫活性（Leu−Enk−LI）

法

Dystrophy mouseは6週齢の雄のC57

は検出感度以下であった．Dystrophymouse及びBL／6J dy／dyを，対照群としては6週齢の対照mouseにおける測定結果を表1と図1に示

dy／＋のheterozygousmouseを用いた．Dystro−

す．

動物＊京都大学医学部第二内科
蝉：＊岐阜薬科大学＊＊＊国立武蔵療養所神経センター

Dystrophymouseの消化管では，Met−Enk−LI
及びLeu−Enk−LI含量が平行した増加傾向を示し，特に胃，小腸，大腸では有意の増加を示した．
−83−

表2

表l Dystrophy mouse各組織中のMet−Enke−
phalin及びLeuTEnkephalin様免疫活性．
B r a jndy ／＋dy ／dyS t om a Chdy ／◆d y ／dyn＝6n＝6M e t −【
nk−
LI

L eu −【nk −L I

1 04 ．
3 ◆ 4．
6
1 18 ．
9 7 4．
1★

20．
2 ◆ 0．
924 ．
7 7 2．
3

Dystrophy hamster全脳，副腎抽出物中のMet−Enkephalin及びLeu−Enkephalin様免
疫活性．

C O n t rO l
d y st ro ph y
n ；6
n 三6

4．
8 ＋ 0．
711 ．
1 7 1．
6 ★★

2．
0 ◆ 0．
1
3．
1 7 0．
2 ★★

6．
2 ◆ 1．
0
24 ．
9 7■4 ．
0★★

1．
0 ◆ 0．
2
4 ．1 7 0 ．
7日

Colon
dy ／◆
dy ／dyn＝6
n＝5

1 06 ．
0 ◆ 4．
7
22 0 ．
0 7 28 ．
8 ★★

3 1．
1 ◆ 2．
8
59 ．
6 7 8．
0★
★

C e cu mdy ／◆dy ／dy

n ＝5
n ＝5

18 ．
8 ◆ 4．
1
32 ．
8 7 9．
0

2．
5 ＋ 0．
4
5．
4 7 1．
6

A d re n al G la n dd y ／◆n ＝10
dy ／d y
n ＝10

ND
ND

ND
ND

S ke l et a l M u sc l e
dy ／＋
n＝10
dy ／d y
n＝川

ND
HO

ND
ND

H ea r t
d y ／◆
dy／
dy

ND
ND

HD
ND

L e u −【n k −L I

n ＝6
n ＝6

9 4 ．5 ＋
10 9 ．4 7

2 5 ．9 ◆3 1 ．9 7

n ＝6
n 三6

2 5 3 ．6 ＋ 2 0 ．9
2 5 9 ．6 7 3 5 ．3

3 ．2
2 ．7 ★★

0 ．9
0 ．6 ★★

Adrenal Gland
COntrOldy s t r o p h y

Sl鳩目 In te s t jn e
dy ／
◆
n＝
6
dy ／
dy
n；
6

M e t −En k −L I
B ra jn★pく0．05

5 4 2 ．3 十 5 7 ．4
5 12 ．9 7 6 8 ．9★★p＜0．01

脳抽出物中のMet−Enk−LI及びLeu−Enk−LI含量は平行した有意の増加を示した．
考察

Dystrophy mouseにおけるNGF減少の及ぼす影響をさぐる目的で，副腎髄質交感神経系，脳，
消化管等に広く分布している5）6）7）Met−Enk，Leu−
Enk含量の変化を検討したが，mOuSeの副腎ではn ≡1 0n ≡10●p＜0．05

予想以上に含量が少なく検出感度以下であり，
NGF減少の副腎におけるMet−Enk，Leu−Enk含日p＜0．01

量への影響についての評価は不可能であった．副腎髄質のモルフィン様ペプチド含量については種
属差の著しいことが報告されており8），我々の測定したヒト，ウシの副腎髄質の含量5）とmouseの副腎含量を比較するとmouseの含量は約103分の一以下であった．今回，同時に交感神経節の採取も試みたが動物が小さく技術上の問題点もあり採取出来なかった．DystrophymouseのNGF減少の及ぼす副腎詭質交感神経系への影響について
は，カテコラミン含量及び関連酵素活性の測定等
今後の検索を予定している．
一方dystrophy mouseの消化管のMet−Enk−
LI及びLeu−Enk−LIの著しい増加が認められた．
この増加がdystrophy mouseの病因に直接ある

図1Dystrophy mouseの消化管，全脳組織中のMet−Enkephalin及びLeu−Enkephalin様免疫活性．

いは間接に関係した特異性の高い変化であるか，運動障害のもたらす結果であるか，合併症によるものかは現時点では不明であるが興味深い成績とDystrophy hamster及び対照hamsterの測定結思われる．消化管のMet−Enk，Leu−EnkはAuer・

果を表2に示す．Dystrophy hamsterの副腎のMet−Enk−LI及びLeu−Enk−LI含量は有意蓋がbach，s myenteric plexusに含まれていることが認められなかった．しかしdystrophyhamster全経系及び副交感神経系の神経支配を受けているこ

明らかにされており，myenteric plexusが交感神ー84−

とはよく知られている．

なかったが全脳抽出物中のそれは有意の増加を示

このような関係を考慮するとdystrophymouse

した．

におけるNGF減少がmyentericplexusのMet−
Enk，Leu−Enk含量の増加に関連している可能性

文

献は否定できない．Dystrophymouseの消化管にお1）Furukawa，S．，Nishitani，H．＆Hayashi，K．：

けるMet−Enk−LI，Leu−Enk−LIの増加は顕著なLevel ofthe Nerve Growth Factor Activity

ものであり，増加の原因に関する今後の検討が期

inthe Submaxillary Glands of Genetically

待される．

Dystrophic Mouse（C57BL／63）．Biochem．

Dystrophymouseの全脳抽出物中のMetTEnk−LI Leu−EnkTLIも増加傾向を示し，特にMet−

2）Furukawa，S．，Hayashi，K．，Ohi，T．＆Imura，

Enk−LIの増加は有意であった．また後述する

H．：Level of Nerve Growth Factor−likedystrophy hamsterの全脳抽出物中でもMet−
Enk−LI及びLeu−Enk−LIが有意の増加を示してImmunoreactivityintheLowerLimbMuscles

おり，2種の動物モチリレ共通の変化と考えられ興Biophys．Res．Commun．，90：130．1979．

味深い成績と思われる．Met−Enk，Leu−Enkは脳

3）Noda，M．，Furutani，T．，Takahashi，H．，

内に広範に分布していることが知られているので，

Toyosato，M．，Hirose，T．，Inayama，S．，

今後脳内のどの部位で増加しているかについて検Nakanishi，S．＆討が必要であろう．

SequenCeanalysisofcDNAforbovineadrenal

Dystrophy hamsterについてはdystrophy
mouse以外のモデル動物として，またhamsterはpreproenkephalin．Nature，295：202，1982．
4）Nakao，K．，Yoshimasa，T．，Oki，S．，Tanaka，

Met−Enk，LeuTEnk含量の高い動物であること

Ⅰ．，Nakai，Y．，Wakimasu，M．，Fujino，M．＆

Biophys．Res．Communリ76：1202，1977．

Of Muscular Dystrophic Mice．Biochem．

Numa，S．：Cloning andを見出していたので合わせて検討した．しかし，Imura，H．：PresenceofdymOrphin，likeimmu−

hamsterのNGF活性はmouse NGFのbioa・

noreactivity

ssay等の測定法では検出されない．そのため

hypothalamus．Regulatorypeptides，2：201，

dystrophy hamsterではdystrophy mouseと同1981．

じようにNGFが減少しているかどうかは不明で

inrat pituitary gland and5）Yoshimasa，T．，Nakao，K．，Ohtsuki，H，，Li，ある．

S．＆Imura，H．：MethionineTenkephalinand

Dystrophy hamsterの測定結果は副腎含量については対照群と有意差は認められず，全脳含量

leucineTenkephalinin human sympathoad−

ではdystrophy mouseと同様にMet−Enk−LI，
Leu−Enk−LI含量の増加を示した．Dystrophy

Invest，69：643，1982．

6）Ikeda，Y．，Nakao，K．，Yoshimasa，T．，

hamsterについては消化管交感神経節等も含め

Yanaihara，N．，Numa，S．＆Imura，H．：て今後の検討が必要であろう．

Existence of Met−enkepahlin−Arg8−Gly7−

renalsystemandpheochromocytoma，J．Clin．

Leu8with Met−enkephalin，Leu−enkephalin

結語and Met−enkephalin−Arg6−Phe7inthebrain

1．Dystrophymouseでは消化管及び全脳抽出物
中のMet−Enk−LI及びLeu−Enk−LI含量が平行Of guinea pig，rat and golden hamster．

して増加していた．副腎抽出物中の含量は測定感

1982．

度以下であった．

Biochem．Biophys．Res．Communリ107：656，

7）Sakamoto，Mr，Nakao，K．，Yoshimasa，T．，

2．Dystrophy hamsterでは副腎抽出物中のMet−Enk−LI及びLeu−EnkTLI含量は変化を認め−85−

lkeda，Y．，Suda，M．，Takasu，KりShimbo，Sr，

Yanaihara，N．＆Imura，H．：Occurrence ofmethionine−enkephalin−ArghGly7−Leu8

Endocrinol，Metab．，56：202，1983．

methionine−enkephalin，leucine−enke−

8）Yang，H．Y．，Hexum，T．＆Costa，E．：Opioid

phalin and methionineTenkephalin．Arg6−

peptidesinadrenalgland．LifeSci．，27：1119，

Phe7in

1980．

with

human gaStric antrum．J．Clin．

ー86−

ⅠⅠ．筋ジストロフィー症の遺伝・臨床と病理
a）遺

伝

b）臨

床

C）形

態

d）培

養

12）筋萎縮性疾患の遺伝分析−Duchenne型ジストロフィー症について一
古 庄 敏 行■
研究協力者

中

里

輿

文＝

光

弘＝■井

ロフィ

ー症

納

1980年来，Duchenne型ジスト

中

島

形

洋

昭

明…金

弘…川

久

平

禎

秀＝■

稔■一日一書た如く，19家系である．

（DMD）の遺伝機構の解明とDMD，Ⅹ量血液型，なお，いままで3年間の調査成績を示すと表1

色盲のⅩ一連関遺伝の解析を行うため，南九州地区の如く，父は72．2％，母は77．8％，その子供は80を対象に，調査を行ったのでその結果を報告する．

％である．
ここで，性別，DMDの有無別にⅩ亘血液型およ資

び㌧色盲の頻度をみると表2の如くである．

料

本年度（1982）は新たにDMDを発端者として

表1および表2からわかるように，調査例数が19家系について，昨年同様検索した（図1参照）．

少ないので，Ⅹ一連閑遺伝の検定およびⅩ量血液型

いままでの調査資料を加えると54家系になる．

および㌧色盲の頻度の比較などは，現時点では不可能に近いので，これらの分析は来年度，すべての検査が完了した時に試みる予定である．

調査結果

B．DMDの分離比の検定

A．X−連関遺伝調査について

表1に示した資料を用いて分離比（P）およびDMD，Ⅹ邑血液型，色盲については，図1に示し

表l DMDを発端者とした家系についての血液型（Ⅹ；），色盲検査結果（1980−1982）
D M

D 数

検
1

同 胞数

2

3

同 胞 群 数

同 胞 総 数

D M

￣

￣ 1

査

Ⅹ ：血 液 型
5

済

父

5

5

5

4

2

17

5

22

44

27

40

3

10

3

13

39

16

32

4

6

1

7

28

8

23

色 盲

Ⅹ；血 液 型

4

4

40

18

32

10

23

5

（
8 0 ．8 ）

5

3

6

3

．
1

母

D 数

3

15

3

10

4

24

6

15

（
9 0 ．9 ）色 盲

Ⅹ ；血 液 型

4

4

18

19

10

11

5

5

（8 0 ．
0）（8 1 ．
8（8 2 ．1 ）（6 6 ．
7 ）

10

2

計

54

15 5

65

男 ：1 0 4

65

12 4

12 4
（8 0 ．0 ）（8 6 ．
4）
11
5（7 1 ．
4）
2

1（6 6 ．7 ）1（3 3 ．
3）2（
6 2 ．5 ）

合

19

86 ．
4

（7 1 ．4 ）15

4（8 0 ．
0）76 ．
98 2 ．1色 盲

2（5 0 ．
0）

39

39（花 ．2 ）

42
（7 7 ．
8）（）：％＊杏林大学保健学部疫学＝国立療養所南九州病院神経内科
書目鹿児島大学医学部第三内科■＊■■国立療養所沖縄病院神経内科
−89−

F＿31

F−32

ロ

F−33

○

ロ

冒

′■

F−35

F−34

ト36

O D O

ヒ己ヒ已ヒ已 巨三 とた土rr，±」

9

イ

F−37

9

号

Jl

○

口

□

＋

F−39

F−38

口

力．

口

O

0号9月lO〔！P

F＿40

□

○

□

十

＿

＋

ヲ

P O

F−41

〇

r±r r±已「 コ二 三已 「二±ユ「

□

■

1

［】

○

■

（十）（−）ト）（＋）＋

ロ

ロ

メ
F−43

F＿42

○

口

＋

●

■

雷

F−44

0

ロ

110′19

＿

F−45

□

0

ロ

て0

F−46
○

□

□

㌃崇古1・ 云 「土「三亡，ヒ已
＋

＋

F−47

P

′＋

○
十

□
＋

〇
＋

ロ■■■■巳．メ

7：PrOPOSitus諾−Lf コ二＋号月l O PJ！！I P

F−49

F−48

□

9．1▼ヲ

＋

＋：Xg（a＋）−：Xg（a−）

図11982年度におけるDMDの家系のⅩ；血液型および色盲検査

表2

DMDを発端者とした家系についての血液が得られた．

ここで得られた分艶比の推定値（0．2200）とそ型（Ⅹ芸）および色盲の頻度
Ⅹ ；血 液 型

色

盲

＋

−

十

一
9 7 ．4の期待値（0．5）との差は，S．E．p（0．0586）の4．8倍で0．3％水準で有意となる．したがってDMDが

親

父

（非

D M D ）

78 ．
9

21 ．
1

2 ．6

母

（
非

D M D ）

77 ．
5

22 ．
5

0

男

（非

D M

D ）

67 ．
3

32 ．
7

0

男

（

）

56 ．
3

43 ．
7

0

完全浸透であれば，伴性劣性遺伝の仮説に適合し
ない．
考

同

胞

女

（非

D M

D

D M

D ）

8 6 ．113 ．
9

察

昨年（1981）の報告書で，分散比の推定および

0

Ⅹ一連関の分析に当って考慮すべき点について論
じたが，なお1980−1982年の資料でも，分析にた
その標準誤差（S．E．p）を推定したところ

えうる調査例数ではないので，分析は来年度試み

p＝芸完＝誌＝0・22

討を試みたい．

ることにし，ここでは，連関分析に当って若干検

S．E．p＝

P（1−PN

0．22×0．78＝0．0586
50

遺伝連関はMorgan（1926）らが，ショウジョウ
バエを用いて，遺伝子座位間の連関値は，その距−90−艶に逆比例することを確かめ，あわせて，各遺伝子が染色体上に一列線状に配列することおよび各

全月調査することが必要であるが，移住や非遺伝子の染色体上に占める位置，すなわち，遺伝がって短期間にすべて，調査を完了することは不子座位を決定することに成功した．周知の如くシ可能に近い．ここでは調査結果の報告と今後の資ョウジョウバエのような実験生物では遺伝子型を料分析に関する方法論などについて考察を試みた．

DMDの者の調査協力が得られにくいこと，した

同定したり，環境を制御することが可能であり，
文したがって得られた推定値も精度が高い．

献人の場合は表現型を用いるので，この点十分考

1）古庄敏行，金久禎秀，中島洋明，ほか：筋萎縮慮しないと，議論がややこしくなる．そこで本研究資料を用いて連関分析するに当りつぎのことを性疾患の遺伝分析一Duchenne型ジストロフィ

考慮する必要があろう．すなわち，（1）対象とする

筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究

形質の浸透度，（2）干渉，（3）連関変動：例えば，第二】荘（三好】丑），昭和55年度研究報告書，性，加齢およびて且度など．

ー症について一．厚生省「神経疾患研究委託費」

1981，pp．59−62．

以上のことを充分考慮して人のⅩ一連関の分析

2）古庄敏行，中里輿文，中島洋明，ほか：筋萎縮法を開発し，その方法によってDMD，Ⅹ喜血液型，性疾患の遺伝分析−Duchenne型ジストロフィ色盲の遺伝子座位を決定する予定である．

ー症について一．厚生省「神経疾患研究委託費」
筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的

まと研究 第二姓（三好姓），昭和56年度研究報告書，

め

本研究は調査資料に限界があり，発端者の家系−91−

1982，pp．45−48．

13）Duchenne型筋ジストロフィーの遺伝補遺−突然変異率と親の年齢−

近藤 喜代太郎■
研究協力者

安

田

徳

一＊■

それが累積してこのモテリレでは精子の突然変ごくわずかの単劣性例を除けば，Duchenne型

異率が高い．

筋ジストロフィー（DMD）では伴性劣性遺伝
わめて高いことが注目されている．本研究の目的

2）非複製モデル． 突然変異が細胞分裂と無関係に生ずる種々の機構をふくむ．このモチリレ

は，DMD息児の尊属の年齢を用いて，突然変異のでは性差はないが，配偶子が接合しないまま，（XR）がよく確立されているが，突然変異率がき機構に関する仮設を検定し，できればなぜ突然変陳旧化する間が長いほど変異の確率が高く，異率が高いかを知ることである．

従って，変異遺伝子を祖先から受けた保因者
よりも，自身の配偶子に生じた変異遺伝子でなお，本研究はDMDの遺伝に関する広い研究

子が発病した親の年齢が高くなる．

の一部で，昨年度は，DMDの95％はXRで，突然変異率に性差はなく6．3×10￣5／世代・座位，新生Barraiら（1968）は，突然変異率JLが年齢Xともに線形増加するとして，

男児での発生率は21．7×10￣5であることを報じた

捗＝〟。＋毎
また，非変異個体の誕生時の親年齢が正規分布す（56年度当姓報告書，pp．41−44）．

るとして，

材料と方法
分析に用いた資料は国立下志津病院，東大病院

∂

ズぎーズ

拘▼♂2−元（鳶さ一元）

神経内科の234例と，国立八雲，西多賀，新潟，下志津，西別府病院（療養所）の433例から重複を除

J2

S（互）＝J斎8・いた514例（うち女性16）を発端者とする家系資料

拘′￣∪

■∩

8

〔J2−

ズ

（斎8−元）〕2である．診断は病歴に従い，家族情報はその記載という関係を導いた．ここに麦は非変異個体（すを戸籍で確認した．息児誕生時の父母年齢，父誕

なわち一般集団）の誕生時の親年齢の平均，言古は変異個体の誕生時の親年齢の平均である．

生時の父方祖父母年齢，母誕生時の母方祖父母年

今回の資料をすべてXRと見倣しても，個々の齢を抽出した．

発端者の遺伝機構，とくに非変異個体（母は保因遺伝子突然変異には種々の分子機構があるが，者）と変異個体（母は非保因者）を100％確実に識それらを2大別すると；
1）複製モデル． 配偶子（精子，卵子）を生成別できないが，同胞群を，DMD発端者だけの一人する細胞分裂に当って，DNA塩基の複製障子Uniplex，他に正常兄弟のあるSimplex，発端

害を生ずる種々の機構をふくむ．幼児期に分．

者以外の兄弟にもDMDのいるMultiplexに分裂を終る卵子と異なり，精子は生涯，分裂をけ，さらに，発端者の母方おじを中心として，同つづけるため，その都度変異の可能性があり，胞群の外でのDMDの有無を調べ，Uniplex＊東京都神経科学総合研究所臨床神経学研究部＊＊国立放射線医学総合研究所遺伝部（士），Simplex（±），Multiplex（±）の6群に分類（（）内の士は同胞群以外の患者の有無を示す）−92−

すると，変異個体はUniplex（−）とSimplex（一）

製モテリレを支持する．そこで，母年齢をみると，だけにふくまれ，他の4群は非変異個体のみをふくむことになる．非変異個体は前2群にも少々ふ

表1のように，Uniplex（−），Simplex（一）で高いことはなく，表2の分散分析の結果をみると，同くまれるが，前2群と他の4群にみられる差は前胞群外の患者の（＋），（−）と関係がない．表3に2群が変異個体をふくむためと見傲してよいこと

平均年齢が示されているが，この両種の母がむしろ若い．従って非複製モテリレで期待される孤発例になる．

の母の高齢は観察されず，逆にむしろ若いが，そ結果の理由は，Multiplexの場合に比べて，これらの母の生殖が充分に終っていないためと思われる．

尊属の年齢の平均と分散を表1に示す．

1950−75年，1977年の我国女性の出産時年齢の1）卵子の突然変異率と母年齢昨年度報告およびYasudaとKondo（1980）が資料を用い，克，∂／拘，ざ（ゐ／拘）を求め，表4

示したように，突然変異率の性差がない点は非複を得たが，拘単位で示した95％限界にみられるよ

表1

Means and standard errors ages of ascendants of probands

価OrFamily
Uniplex Simplex Multiplex
historyofDMD historyofDMD historyofDMD＋＋＋

Ageat Ageat Ageat Ageat Ageat Ageat
birth n birth n birth n birth n birthn birth n

（Ll9）
33．94

gmndhther
Palerna1（1．32）
28．72

gmndmolh打（1．14）

41

35
36

aSlandarderror；n＝Numberofsibships．

表2

FamilyhistoryofDMD
IntemCtionbelweenfamilv

32．07175

37

34．39

82

37

（0．81）
30．33

82

37

（0．78）
33．93

81（0．45）（0．84）
37

29．02

82

（0．67）

Analysis of variance

Sourcesorvariationinageor
motheratbirthofproband SS
TyI光OrSibship3761612828か訂

29．32

grandmother
Patema1

28．59175（0．39）

1〜叫亜印75叩18叩52弼¶叫（1．45）

37

q︵
′3
0︵
23
0︵
て2
一︵
lつ
q一
′︵
l3
ノ︵
0111
2

grandねther
Maternal

36

54叫30叩32叫08叫27喝65卿
折り30031029035028P

35．46

O807位即の03

Maternal

一︵
lつ
一一
つ︵
︼4
7︵
13
−︵
▲3′OtJJ（1．32）

92瑚65叩25明知叩31
〜叫
叩4

41

7︵
03
1︵
0t
1J
−︵
0つ
0ー
0︵
03
t︵
一2
O︵
q′0
2

Falher

（0．77）1
31．22 36

00叩00均71叩00期00喝43瑚

26．41

′︵
03
1︵
0
2

Mother

DF

MS
98．65

197．310．肪

0．（枯hstoryandty匹OrSibshipResidual

7．56

2

3．78

14736．14

623

23．62

TotaI

14941．07

62‡

F
4．17
￣

0．003

0．16

．SS．sumofsquare；DF．degree（S）offrccdom；MS，meanSquare；FIFvaluc；P，prObability；
−93−

P
＜．025
r追

ns

表3

Family history ofDMD

恥or Mcanageormother Numb亡rOr
Sibship atbi血Orproband（yr）
sibships

6

表4

一

27．糾
29．15

t

26．（氾

Simplex
Multiplex

7 9 1．

Unipl亡X

MCanageOrmOlher Numberor
atbi爪horproband（叩）dbships

Effect of age on mutation rateinmother■

95％ぐOnndence
一X

bルo S（bル○）intervd

l一〇ノ
7
3
1 一
U
l
5
3
l
2
l
l

415689脚67郁毀

24鎚0595聞知1528．釘¶㌣加％竺加

0．∝ほ60．0142】6．卯280．15880．2031−0．∞37

0．鵬39（−0．18Jl0．0．（氾恥○）−0．2052

0．3880（−0．97l10．0．56■○）（一0．∝将〝○，0．α裕〝0）（−0．03J10，0．03J10）（−34．0〆0，31．q伽）（−0．47l10．0．15J10）（−0．57Jlo，0．日〝○）l99
0555瑚965m9−59−7
111111一l

ー0．∝X）70．（氾28−1．3492−0．1582−0．1720．i，meanOfdistributionofagesofmolhersatbiTthinJapan，Withvarianceq2（VitalStatistics，Ministryor
Heallh and Welfare，Japan）；￣b／FL。＝（まS一言）／【qZ＋言（文一支5）】wilhlhe standard error s（b／lAo）．

is＝27．73，meanOfdistribu【ionofageofmothersatbirthofDMDmulantprogeny（eithermiplexor

Simplex）withthestandardm0日も＝0・24・

表5

Effect of age on mutation ratein men
刀82

n

ニl■

n

ニ

15y

TheageoronsetorgameterOmationinmeIl
34．39−15

乳礼
乱用

●X

㌔▼町
札．
39
33．封
ニ＝
■X●㌔

Malemalgmndbthersage
MultipkXwithLhmilyhistozY
MullipIxwithoutfamilyhistoⅣー（33．75−15

28．54−（33．75−15日19．39−18．75）＝0．039土0．085（一0．13〝0．0．叫Id

うに，あはゼロと異なるとはいえない．即ち，母弟に軽患者があれば，母方祖父の担Ⅹ精子の変異

年齢とともに，突然変異率が増すとはいえないが，ではあり得ないが，罷患者がなければ，あり得る

本法では年間0．23／匂以下の微弱な増加は検出し得ない．

ので，この2群にみられた差は，後者における担X精子の変異によるものの混入に帰せられる．
表5に示すように，母が生まれたときの両群の2）精子の突然変異率と父年齢させる．そこで息児からみれば，母方祖父の年齢

母方祖父の年齢は，33．75，34．39歳であり，∂／畑
は0．039±0．085でゼロと有意差がない．表6，7が問題になるが，発病は母の卵子での変異や，母に示したように母方祖父の年齢を2分して，家系

方祖母の遺伝子で母が保因者となってもおきるのの特徴との関係をみても相関していない．

担Ⅹ精子の変異は娘を保因者にし，男孫を発病で，これらを区別する必要がある．息児の母の兄
ー94−

表6

Effect of age on mutation ratein men

Ⅰ＋

Maternalgrandralher
under30yr（Å−）
Matemalgrandrather
30yrorolder（A＋）

M＋

22

Ⅰ−

20

：辻

M−

381
8

Sum

54

138

4（氾
28

196

●−．withoutfamilyhistory；＋，withfamilyhistory；Ⅰ，uniplexandsimplex；M，rnultiplex．

表7

Partition of Chi・Square
x2
く

1

＜

2．6357

4

28．2152

一

0．∝〉15l

2．8608（Ty匹OrSib）×（Age）（Typeorsib）×（Histoけ）×（Age）
Total

l

22．7172（History）×（Age）

l（Typ≡OrSib）×（Histoけ）・∬竺＝ふAss∝iation

aDF，degreqS）orrredom．
bp，prObability．

考不明，4）その座位のみが関与するか不明，5）その察

座位の変異はいつもその表現型を生ずるか不明．

本研究はDMDの高い突然変異機構を知るために行われた．本報と前報を合せても，性比がない

近年，動植物で1実験的に得た値に比べて，ヒト

点では第2のモテリレを支持するが，その場合，予の疾患の突然変異率の推定値は一般に高すぎると期される孤発例の母の高齢化がみられないため，の批判がある．DMDでは特に高く，Stevenson＆

前記の両モデルを確実には鑑別できなかった．そKerr（1967）によれば，49種のⅩ連鎖性疾患の突の理由のひとつは性・年齢効果が微小で，統計的然変異率がほとんど0．01−0．1×10￣5付近なのに方法の検出力の範囲内であったことが考えられる．

対し，DMDは群を抜いて高く，文献の11の数値

DNAはきわめて安定であるが，稀に分子構造

は，5〜9×10￣5で，それにつぐのは血友病A2の変異を生じ，点突然変異とよばれる．これは多〜4×10￣5，血友病B（Christmas病）0．5〜1がくの場合有害であり，そのため病者は子がのこりあるにすぎない．
間接法と異なり，突然変異と淘汰の平衡を仮定

難く（淘汰），突然変異による新生との間に平衡がしない，いわば成立する．DMDでは淘汰は男子のもつⅩのみに

半直接法

がGardner−Medwin

及び，それは集団全体のXの％に当るので，この（1970）によって開発された．本法はJを孤発例

状態は精子，卵子の変異率を等しく〃とし，DMDの数，Rをその中で母が保因者でないものの割合，の集団内頻度をⅩとするとつぎのように表される．

Tを同期間の新生男児数とし，〃＝JR／Tとして求めるもので，DMDで得られた結果は10．5×10￣5と，やはり高かった．なお，おなじ資料で間接法〟＝‡mx

DMDではm＝1なので〟＝Ⅹ／3となる．
本法による突然変異率の推定を間接法というが，を用いると10．9×10￣Sであった．

これにはつぎのような問題点がある：1）診断，調つの説明は上記のような推定法に伴う過誤で，た査精度が低く，Ⅹが不正確，2）淘汰値mの算定がとえば本症は実は2疾患以上の混合体なら，各々

不正確，3）淘汰と突然変異が真に平衡しているかのⅩの和がみせかけのⅩとなる．しかし，近年，DMDの高い変異率の理由は不明である．ひと−95−

姉妹染色分体交換の分析で，Ⅹp2．は傷害されやすいことが示されただけでなく，つぎのような興味深い例が知られ，新しい問題が提起された．

文献1）GardnerMedwin，D．：Mutation rateinDuchenne type of muscular dystrophy．J．

すなわち，Ⅹ染色体と常染色体の間で，染色体物質を部分的に交換し合い，DMDを呈する孤発

Med．Genet．，7：334−337，1970．
2）stevenson，A．C．＆Kerr，C．B．：On

the

性女子の平衡転座例が少なくとも4例知られ，こdistribution of frequencies of mutation to

れらでは正常Xは大部分の細胞で不活化しており，

genes determining harmful traits

従って転座Xの当該部分は半接合となっている．

in

man．

Mutation Res．，4：339−347，1967．

きわめて興味深いことに，4例ともXの転座部分

3）Yasuda．N．＆Kondo．K．：Nosexdifferencein

はXp21（短腕の末梢部の近位側）であるのに反mutation rates of Duchenne muscular dys−

し，転座した常染色体は1（Lindenbaumら，

trophy．J．Med．Genet．，17：106−111，1980．

1979），3（Cankiら，1979），5（Jacobsら，
1981），11（Greensteinら，1980）と不定であり，

4）Yasuda，N．＆

Kondo，K．：The effect ofparentalageonrateofmutationforDuchenne

DMDの発現に関係があるのはⅩp21であること

musculardystrophy．Am．J．Med．Genet．，13：が示された．このことは，長腕にある色盲，G6PD

91−99，1982．

とDMDの無連鎖とも合致し，また，この部分が切断や突然変異を生じやすいことと，DMDの突然変異率が異常に高いこととも関連があるかもし
れない．

−96−

14）Emery−Dreifuss musCular dystrophyの一例

荒 木 淑 郎＊
研究協力者

池

川

眞

一＊

内

神経筋疾患に心病変を伴う事は以前よりしばしば報告されている．しかし一般に心病変の程度は

野

誠＊

植

川

和

利＊

で，深部反射は消失していた．知覚系に異常を認めなかった．

神経筋疾患の程度と比し軽いものが多い様である．

検査所見：入院時一般検査は正常．血清CPK

今回我々は徐脈を主訴とした26歳の男性に，早期は1473U／L（正常：62−175U／L）と高値をとりよりの頸，肘関節の拘縮，上腕二，三頭筋及び下Aldorase88U／L（正常：2．2−5．9U／L），LDH312

肢遠位筋の萎縮，高CPK血症，部分的心房停止をU／L（正常：130−250U／L）と上昇していた．CPK認めた．本症は1966年EmeryとDreifussが報告

isozymeはMM型98．5％，MB型1・5％，マイク
ロゾームtestは1600倍と軽度上昇していた．筋電した1）Emery−Dreifussmusculardystrophyと思われるので，若干の文献的考察を加え報告する．
症例：26歳，男性，薬剤師．
主訴：徐脈の精査．
既往歴：特記すべき事はない．

図では干渉波形成が悪く，放電数は減少し，高振家族歴：家系内に神経筋疾患，不整脈，突然死はない．家系調査を行なったが，その範囲では同疾患はなかった．血族結婚はない．
現病歴：出生，成長には特に問題はなかった．
10歳の頃，頸が前屈せず，左肘関節が伸び切らない事に気づいていた．又この頃心電図異常を指摘されているが，詳細は不明である．大学生の頃，徐脈を自覚していたが放置．昭和57年4月，健康診断にて徐脈と心電図異常を指摘され精査目的にて当科入院した．Adams−Stokes様症状はなく，筋脱力は自覚していない．職業は薬剤師で，知能は正常と思われる．
入院時現症：身長172cm，体重52kg．脈拍は毎分40で不整．心音ではⅠⅠ音が克進し，心尖部でLevi−
neII度の収縮期馬区出性経書を聴取する．色覚は正常で外眼筋麻痺，網膜色素変性はない．神経学的には脳神経系には異常ないが，頸部の前屈は全く不能で，胸背部も前屈不良，左肘関節は伸ばし切る事ができない．上腕二，三頭筋，及び下肢遠位筋に軽度の萎縮を認めた（図1）．筋力はほぼ正常＊熊本大学医学部第一内科−97−

図1 患者全身像．上腕二，三頭筋と下肢遠位筋に軽度の筋萎縮を認める．

図2 左上腕二頭筋生検．HE染色．

図3

右，ATPase染色．左，NADH染色．
−98−COrltrOl
1

Ⅱ

Ⅲ

，ん■．

∵

一一1■l一一→．

■・■

■・￣￣
、ノ

脚・7皿

図4 心電図．明らかなP波を認めず，毎分40の結節性調律．運動負荷により結節性調律は増加する．
∴■‥1・′′．、 持上 ㌧、ほて
・■こても

LA

：r一肌一肌九一・・′r・■′一、・Ⅳ人〜′一日−−へ一一㌦一一■…−′′−′′′一・【・¶一一【−r一一一∴て■r′−‥…＝‥′一

一一一一一′■一〜・＿

A

−

慧

＿＿＿＿

＿

−

が−㌍㍉∵句㍉…予言で㌦云十十十γや刷十でA

図5 心内心電図．
−99−

幅，多相性であり神経原性パターンを示した．しThomass8），Cammann9），Water10）らが家系を追かし安静時放電は認めなかった．

加した．また心房停止というまれな心伝導障害に

左上腕二頭筋生検を行なった．HE染色では（図2）正常の大きさの細胞の内に小径の円形の筋線
経が散在性にみられ，所々Smallgroupをなして対して，Cardiologist達が独自に注目し，本症と思われる数例が検討され（Bloomfieldll），

いる．Angularfiberも少数認める．中心核は少な

Caponetto12），Baldwin13〉），paCe maker植込み術の有効性が強調されて来た．1979年，Rowland14）

くendomysiumの増戊はない．主として神経原性らはそれらの諸報告を検討し，本症をEmery−のパターンと考えられる．NADH染色，ルーチン

Dreifuss muscular dystrophyと呼ぶように提案

ATP染色（図3）でヒストグラムをとるとtypeI
fiber：typeII fiberの比は3：5で各々の平均

し以下の5つの特徴をもってこの疾患を定義づけている．即ち，1）伴性劣性遺伝をとり孤発例では直径はtypeIfiberが39JL，typeIIfiberが85′ で男性である事．2）肘と頸の拘縞が早期に出現するあり，typeI fiberが主としてatrophicな事がわかる．電顕上ミトコンドリアの明らかな異常は事．3）上腕二，三頭筋及び下肢遠位筋という特徴

切った範囲では認められなかった．

徐である事．5）心伝導障害を普遍的に伴い，心房心電図（図4）ではP波を認めず，毎分40の結的な筋萎縮の分布をとる事．4）筋疾患の進行は緩停止に至る事，の5点である．本邦に於ても本症

節性調律であり，運動負荷にて結節性調律は70にと思われる報告が，Mawatari15），栗山16），早まで増加した．心内心電図（図5）では低位右心原17），工藤18）らによりなされている．

房（LRA，HBE）にてA波を認めず，低位右心房

また，Rowlandのクライテリアを満たしながらは電気的活動を失なっている事がわかる．又高位

筋生検，筋電図で神経原性変化を示す事が報告さ

右心房及び左心房でみられるA波も幅広く多相性れている．我々の症例も神経原性変化を示した．

低電位で心房内伝導障害が示唆された．又完全房

果してこの疾患は単一なものか，又その本態が室blockも認める．10mAで右心房各部を刺激し

myopathyであるか否かについても問題となってたが心房の活動は得られなかった．右心房内圧測
定ではA波に一致する心房収縮波形を認めず，右いる．Rowland15）やHopkins19）らは2つの剖検報告20）・21）で脊髄に変化がなかった事，慢性的な筋

心房は機械的活動を失なっていると考えられ，以疾患ではEMG上神経原性パターンを示す事もあ

上より本患者の心臓は部分的心房停止というまれな状態にあると考えられる．

ること，1arge grouped atrophyのない事，明ら
かな本症の家系内に1人は神経展性，1人は筋原性の変化を示す兄弟例もある事などより，本疾患

考察

本症例は孤発例ではあるが，早期よりの関節のは単一な疾患でその本態はmyopathyであろうと述べている．一万1982年工藤18）らは急性心不全

拘縮，特徴的な筋萎縮の分布，持続性心房停止へで死亡した本症の孤先例の剖検を行ない詳細に脊の移行段階と考えられる2），部分的心房停止があ髄を検索した所，5−7頸随，4−5腰髄，1仙髄り，本症例はEmeryTDreifussmusculardystro−
phyと考えられる．本症と思われる記載はふるく

内の前角細胞の巣性の変性脱落，gliosisを認め髄はドイツの文献に散見される3）4）5）が心電図，心内内内側先端部にspheroidを多数認めたという興味ある報告をしている．

心電斑等詳しい記載がない為明らかでない．本症

本症は比較的まれな疾患ではあるが，paCeの最初の詳しい記載は1961年DreifussとHogan

maker植込み等により突然死をさけうる点は重が良性の経過をとるDMPの一家系を報告し，要である．また本疾患の本態がdystrophyであるのか，単一の疾患であるか否かについては依然問

1966年EmeryとDreifussl）が同家系に早期よりの関節拘縮，心伝導障害が存在するのに気づいた
事には じま る．その後Rotthauwe7）．

題はあるが，臨床的には明確な症候を呈する1症候群といえよう．

ー100−

要

（Emery−Dreifuss）．psychiatr．Neurol．Med．

旨

徐脈を主訴とした26歳男性に早期よりの頸部，

Psychol．（Leipz），26：431−438，1974．

肘関節の拘縮，上腕二，三頭筋，下肢遠位筋の萎10）Waters DD，Nutter DO，et al：Cardiac

縮，毎分40の徐脈を認めた．筋酵素は上昇し，筋features of an unusual X−1inked humerope−

電図，筋生検ではtypeI fiberの萎縮を呈する
神経原性パターンを示した．心電図，心内心電図

roneal neuromuscular disease．N．Eng．J．

より心臓は部分的心房停止と判明した．以上より11）Bloomfield DA，Sinclair−Smith BC，et al：本症をEmery−Dreifuss muscular dystrophyと診断し本症の病因につき，若干の考察を加えた．

Med．，293：1017−1022，1975．

Persistentatrialparalysis．Am．J．Medリ39：

335−340，1965．

12）capponetto s，PastorinC，etal：Persistent文

atrial standsti11in a patient affected with

献1）Emery AEH，Dreifuss FE：Unusualtypeof
benign X−linked muscular dystrophy．J．
Neurol．Neurosurg．Psychiatry，29：338−342，

facioscapulohumeral muscular dystrophy．
Cardiologia，53：341−350，1968．
13）Baldwin BJ，Talley RC，etal：Permanent
paralysis of the atriumin a patientwith

1966．

2）小野忠弘，堀尾豊，ほか：洞機能不全症候群に

facioscaplohumeralmusculardystrophy．Am．
J．Cardio1．，31：649−653，1973．

みられた部分的心房停止の一例．心電図，2：14）RowlandLP，FetellM，etal：Emery−Dreifuss

2．216，1982．

3）Cestan R＆LeJonne：Unemyopathie avec
retractionsfamiliales．Nouv．Iconogr．Salpet−

musculardystrophy．Ann∴Neuro1．，5：111−
117，1979．

15）MawatariS，KatayamaK，etal：Scapulope−riere，15：38−52，1902．
4）Schenk P＆Mathias E：Zur Kasuistik der
Dystrophia musculorum progressiva retra−

hens．Berl．Klin．Wschr．，57：557−558，1920．

ronealmuscularatrophywithcardiopathy．An
X−1inkedrecessive

trait，Arch

Neurolリ28：

55−59，1973．

5）Trommer E：Dystrophia myosclerotica．

16）栗山勝，ほか：関節拘焔と心障害を伴った眉甲Dtsch．Z．Nervenheilkd．，85：196−226，1925．

下腿型筋萎縮症の1例．臨床神経，17：575−

6）Dreifuss FE，Hogan GR：Survival

inⅩ−

Chromosomalmusculardystrophy．Neurology（Minneap．），11：734−737，1961．
7）RotthauweHW，MortierW，etal：NeuerTypeiner recessive X−Chromosomal verebten
Muskeldystrophie：Scapulo−humerodistale
MuskeldystrophiemitfrahzeitigenKontrak−
turenundHerzrhythmusst rungen．Humange・

580，1977．

17）早原敏之，岡本紫，ほか：脊椎可動性低下と心電図異常を伴なう神経展性屑甲下腿型筋萎縮症の1例．神経内科，1：545−551，1974．
18）工藤英昭，谷野克之，ほか：Emery−Dreifuss型
筋萎縮症における脊髄病変．脳と発達，14：363−369，1982．

19）Hopkins LC，JaksonJA，et al：Emery．
Dreifuss Humeroperoneal Muscular Dystro−

netik，16：181−200，1972．
8）Thomas PK，Calne DB，et al：Ⅹ一1inked
scapuloperonealsyndrome．J．Neurol．Neuro−

phy：An X−linkedMyopathywith Unusual
ContracturesandBradycardia．Ann．Neurol・，
10：230−237，1981．

Surg．Psychiatry，35：208−215，1972，9）CammannR，VehreschildT，etal：Eineneue20）TakahashiK，NakamuraH，etal：Scapulope−

Sippe von X chromosomaler benigner

ronealdystrophyassociatedwithneurogenil

Muskeldystrophie mit FruhkontraktGrenchanges．J．Neurol．Sci．，23：575−583，1974・−101−21）Dubowit2；U，Brooke MH，etal：Muscle

Biopsy：A modernapprOaCh．Philadelphia，
Saunders，1973，p．368−371．

ー102−15）筋緊張性ジストロフィー症における脳CT・脳波・WAISを中心とした臨床的研究
田 辺
研究協力者

緒

小

島

内

潟

等■

雅

進■

松

井

孝

道■

信■

武

田

裕

子＝

定し，1指標とした．

言

筋緊張性ジストロフィー症（以下MD）におい

3）WAlSはCT導入前例22例を含めた計34て，脳室拡大・脳波異常・知能低下等の中枢神経系の異常を示すことは良く知られているがその詳例（男24，女10）につき，主に1人の検者により施行，判定された．

細は必ずしも明らかでない．今回脳CTを施行し結たMD例を中心に，脳波・WAISの所見を合わせ

果1）CT各計測値と年齢の関係；FHIと各年代の間には，図1に示す様に30歳台までは対照群とて検討を加えた．
対象及び方法

有意差を認めないが，40，50歳台では，有意差を対象は1970年以降，当院で入院精査したMD例認める（p＜0．025）．又，年齢とFHIの間にはr＝47例で，年齢は11歳から61歳，男29例女18例であ0．606，p＜0．01と相関を認めた．

る．

Frontal hornindex

1）CTは，MD群16例（男11，女5；年齢37±12歳）に施行，対照群として主に神経学的所見のない頭痛例24例（男13，女11；年齢35±11歳）を

M±SD
F H I

4 ．
00

age−matChedで抽出した・CTの機器は日立CTT
Hと東芝TCT60Aとを用い，CM線に150，スライ
ス帽10mm，MATRIXは前者が256×256，後者が320×320で撮影した．計測部位として，最大前角

㍉
3 ．
00

間距稚くA），同部での最大頭蓋骨内径（F），側脳室Cellamedia部最小幅（E），同部の頭蓋骨内径（H），最大第3脳室幅を各々透明なメジャーで測定した．これらからi）Frontalhornindex（以下FHI）：A／F，ii）Cella mediaindex（以下CMI）：E／H，を計算，iii）最大第3脳室幅（以下Ⅴ。W，単位mm）は測定値を換算し実際の値を求めた．
2）脳波はCT導入前例30例を含めた計45例（男28，女17）につき視認法で基本波周波数を決

Ⅰ

王

●

★
★
r＝
0．
606
2．
00

mニ
16，
p＜
0．
01
y ＝−
0．
017x＋
36

10−
19

図1

＊虎の門病院神経内科＊＊虎の門病院心理社会部

ー103−

20−
29

30−
39

★p ＜
0．
025

40−
49A

50−
59
ge

FHIと年齢
斜線部の範囲は対照群を示す．
40歳台，50歳台で低下を示しFHIと年齢の間に相関を認める．

CMIと各年代との間には，図2に示す如く3例（9％）であった．この2群間でPIQには差

FHIと同様に40歳台以降低下傾向を示すが有意を認めなかったが，ⅤIQ＞PIQ群の方が高齢であでなく，CMIと年齢の間にも相関はなかった．

り，かつFull−SCaleIQが高値であった（各々p＜

V3Wと各年代の間には，図3に示す様に40，50

0・025，p＜0．05）．

歳台では増加傾向を示し特に40歳台では対照群に

4）各計測値間の相関について：FHIと基本比し有意であった（p＜0．025）．又，V3Wと年齢の間にはr＝0．497，p＜0．05と有意の相関を認めた．
2）脳波；基本披周波数が8．9C／S以下と低下

Maximal width of the third ventricleを示したものは，45例中27例（60％）であった．
年齢と共に基本波周波数が低下する傾向を示した

M
／3W

± S D

！

m m ）
14
r ＝ 0 ．
4 97が，r＝0．269と有意ではなかった．

n ＝ 1 6 ， p ＜ 0 ．0 5
123）WAIS（表1）；Full−SCaleIQが89以下と低下を示したものは34例中26例（76％）であった．

7 8
y ＝ 0 ．
0 5 4 Ⅹ＋ 4 ．

★

10

90以上の正常例と89以下の低下例との間に，年齢が各々45±9歳，36±8歳と差を認め，低下例の8方が有意に低年齢であった（p＜0．025）．しかし，
Ful卜scaleIQと年齢の間にはr＝0．303と相関は6／認められなかった．
4 ・

言語性IQ（以下ⅤIQ）と動作性IQ（以下PIQ）

★ p ＜
●

との間に15以上の差を示したものは7例（21％）

／

／

0 ．
0 25

2

であった．
VIQ＞PIQ群が4例（12％）で，PIQ＞VIQ群
10 − 19

2 0 − 2 930 − 39

4 0 − 4 9A g 5 0 − 5 9eCella mediaindex

図3

V3Wと年齢40歳台では有意の増大を示す．V3Wと年齢の間に相関を認める．

．
M I

．
00

Relationship

of−

Basic

activlty

to−

FHI

．
00

Ⅰ

●

．
00

r ＝ 0 ．3 6 0
n ＝ 13

1 0 −・19 ￣n．
S．

20 − 29

3 0 −・
39

4 0 − 4 9A

50 − 5 9

7．0

図2

8．0

9．0

10．Oc／s

Basic activity

ge

CMIと年齢40歳台，50歳台で低下傾向を示すが有意でない．

図4
ー104−

FHIと基本波周波数との間の相関を示す．

厚さがMD群11．4±7．7mm，対照群7．8±1．2mm

表1（説明は本文参照）とMD群に明らかなhyperosteosisを認めること

WAIS（n＝34）

Ful
Lscal
e IQ

N um ber

から内径を用いた．

A ge （M 土SD ）対照群として主に神経学的所見のない頭痛例を

120−
・

2（
5．
9％）

110−
119

0

用いたが，従来の報告1）にある正常値と較べて，内

90−
109

6（
17．
6％）

径を用いたことを考慮するとほぼ同様の値であり

80−
・
89

15（
44．
1％）

対照群として用いるのは妥当と思われた．

70− 79

6（
17．
6％）

〜 69

5（
14．
8％）

MDの脳萎縮に関しては．過去に気脳写を用いた報告が多いが，1969年Lundervoldら2）は，MD

Relationshipofr

Full−SCalelQ

to

ttAge

：r＝0・303（n・S・）

例わ脳波基本波周波数，気脳写を検討し，両者はVIQ＞PIQ（4例，12％）

年齢と共に異常を示す率が高くなる事，基本波の

1

2

3

4

M ±S D

A ge

45

50

61

49

5 1 ± 7−

V IQ

131

104

100

11 2

112 ±1 4−

P IQ

110

88

74

87

90 ±1 5

F tJ l−SCa le IQ

12 1

98

91

10 1

103 ±13−

徐汲化と脳室拡大はある程度の一致を示す事，基本波周波数とIQの間には関連がない事等今回の我々の結果とほぼ同様の報告をしている．彼らは，検査時年齢はほぼ羅病期間と平行するとし脳室拡大・脳波異常は，MDの進行と共に出現率が高くなると結論している．

1

2

3

M ±S D

A ge

28

37

31

32 ± 5 −

V IQ

69

83

65

72 ± 9 −

P IQ

93

99

73

88 士1 4F u l1−
SC a le IQ

79

89

67

78 ±1 1−

★p＜0．025

我々も検査時年齢と推定羅病期間の関係を調べたが，高齢者に羅病期間の長い傾向があるものの両者の相関はみられなかった．
MDのCT所見に関しては，井村ら3）の報告があるが，我々と同様のindexを用い側脳室及び第★★p＜0．05

3脳室の拡大は，30もしくは40歳台以降大となる波周波数との間には図4の様にr＝0．725，p＜ことを示しているが，本報告と同様に罷病期間と0．01と相関を認めたが，CMI，V3W・との間には相年齢の間には明確な関係を認めていない．
羅病期間と年齢の間に相関がみられない理由と関は認められなかった．
Full−SCaleIQ，PIQ，ⅤIQとCT各計測値間にしては，MDにおいて本人もしくは家族からは正確な発症時期を推定することが困難な事があげらはいずれも相関は認められなかった．

れる．このことは，むしろMDの一徹候すなわちIQと基本波周波数の間にも相関はなかった．

中枢神経系の異常を逆に表現している事たなると考思われる．ただし，脳室拡大が真に年齢に依存す

案

CT導入以来，脳萎縮の判定は比較的容易に行ると仮定すると，MDをWerner症候群の類似疾なわれる様になり各種の測定法が考案されている．

患と捉える議論があった様に，脳室拡大は早期老

今回，我々はCTの計測値としてcorticalsulciの化の一徹僕ということになる．これらの点に関し

最大幅，Sylvianfissureの最大幅等の測定も同時に行なったが，計測に用いるスライス面が得られては今後の検討を要すると思われる．

ないものが多かったこと，計測値の再現性に問題

やはり30歳台以降大となることをあわせ，MDでのあること等の理由により本研究からは除外した．

は前頭葉萎縮が30歳台以降にみられると推論して

又，井村らの報告では，前頭部での半球間裂がなおFHI，CMIは本来各々の測定部位の頸圭骨いる．今回の我々の検討でも，FHIはCMI，V3W

外径を用いて計算する様に定義されているが，最より明確に40歳台以降，対照群と較べ有意差がで

大前角間距疲（A）の測定部位延長線上の頭蓋骨のること，FHIと基本汲周波数の間に有意の相関をー105−

認める事より，やはりMDでは脳室拡大の中でも

3）

前角部拡大が特徴的所見と考えられた．

関を示すが他の部位とはなかった．

一方，病理学的には前頭葉萎縮の強い例の報告

基本波周波数と側脳室前角部拡大の間には相

4）脳室拡大とIQの問には相関がなかった．
5）基本波周波数とIQの間には相関がなかった．

は散見されるが一定していない．
1967年，Rosmanら一）は，知能低下を示したMD文

3例に脳重量低下，皮質細胞の構築異常を示した

献が，知能低下を示さない1例では，これらの異常

1）Meese．W．，Kluge，W．，Grumme，T．，et al：CT所見を認めていなかった．更に，1973年にはCule−evaluation of the CSF spaces of healthybraら5）がRosmanらの2例を含むMD例6例

persons．Neuroradiology，19：131−136，1980．

に，thalamusのdorsomedialandanteriornuclei2）Lundervold，AリRefsum，S．＆Jacobsen，W．：の10−30％にcytoplasmiceosinophilicbodyを認The EEGin dystrophia myotonica．Europ．

めMDの特徴的変化とし，thalamicneuronの消失が本症に認められる脳波異常（基本波周波数のNeuro1．，2：279−284，1969．
3）井村裕夫，大井長和，太田光，ほか：筋緊張性徐波化）やdementiaの説明となりうるとしていジストロフィー症の脳のCT−SCan所見の検討．

る．

厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー

しかし，今回の我々の検討では間脳部病変を示
唆すると思われる第3脳室最大幅と基本波周波数，
IQとの間に相関は認められず必ずしも彼らの説を支持するものではなかった．

症の病因に関する臨床的研究」三好班，昭和55
年度研究報告書，1981，pp．72−75．
4）Rosman，N．P．＆

Kakulas，B．A．：Mental

deficiency associatedwith muscular dys・

trophy．Aneuropathologicalstudy．Brain，89：

結論

769−787，1967．

1）MDに認められる脳室拡大は年齢と共に大と

5）Culebras，A．，Feldman，R．G．＆Merk，F．B．：

なり，特に前角部，第3脳室帽と年齢は有意の相Cytoplasmicinclusionbodieswithinneurons

関を示し40歳台以降大となる．

of the thalamusin myotonic dystrophy．

2）基本汲周波数低下は45例中27例（60％）に，

Alight and electron microscope study．J．

IQ低下は34例中26例（76％）に認められたが，いNeurol．Sci．，19：319−329，1973．

ずれも年齢とは相関を示さなかった．

−106−16）Rigid spine syndromeの臨床型について

黒岩
研究協力者

義五郎■

福 井 律 子■ 石 本 進 士● 後 藤 幾 生■

Rigidspinesyndromeは脊柱の屈曲制限と関節の可動制限を特徴とする比較的良性のまれな筋疾可能で，Waddlinggait，Gowers徽候陽性であっ患とされている1）・2）．我々は本症と考えられた3

臨床経過は，症例1では16歳時からの5年間の症例を経験し，臨床的に経過の異なるものの存在

経過観察では症状の進行は全くなかった．症例2する可能性があるように思われたので報告する．

では13歳時の初回入院後の2年間で，比較的急速た．

に筋脱力と萎縮が進行した．症例3でも同様に13歳頃から歩行困難が著明となり，比較的増悪傾向症をたどった．

例

対象症例は3例．すべて男子．年齢は15歳から
21歳．3例とも，生下時，幼年期には特に問題は検査所見で，血清CPKレベルは，症例1では軽度の上昇のみであったが，症例2及び症例3ではなく，発症年齢は6歳前後であった．初発症状は首の前屈制限や軽度の四肢筋力低下などである．

中等度の上昇を示した（表1）．

症例16）と症例3には血族結婚が認められたが，
症例27）には血族結婚はなく，3例とも同胞には神経筋疾患はみられない．
主要な神経学的所見は，3例とも知能正常で，首の前屈制限と脊柱側轡がみられたが，肘関節の拘縞は症例1ではみられなかった．

心電図では伝導障害は認められなかった．

筋脱力と萎縮は，症例1では，胸鎖乳突筋で著
明，上肢帯で軽度で，症例2と症例3では，全身に著明な筋脱力と萎縮があり，歩行がかろうじて

その他，筋電図では3例とも筋原性変化を示し，筋組織学的所見
症例1：上腕二頭筋の組織学的検索では，HE染色で軽度の筋線経の大小不同，中心核の軽度増加，問質結合織の軽度増生を認めたが，炎症所見は認めなかった．ATPase染色で，fiber typeの分布に異常はなかった．

表l Clinical features ofA ge（y e a r s 】．
S ex
A ge o f O n s et（
y ea rs）
C o n s a n g u in ity
u rn ita tio n o f N e c k F le x io n
C o n t ra c tu re o f E lb o w jo in t s
S c o Iio s isM u s c le W e a k n e s s a n d A tr o p h y 、C o u rse
C P K （n ：3 0−7 0m u ／m T）

3

cases

C a se l
2 1 ．m a Ie■
6

C a se 2
15 ．
m a le
6

＋
＋
−
＋
m ild
S ta t io n a ry
7 1−1 0 3−
十＋＋m a rk ed
P rO g r e S S iV e
2 3 0 −6 9 3＊九州大学医学部脳研神経内科−107−

C a seき15．
m a te6＋＋＋＋m ark edP r O g re S S iV e
2 5 5−2 6 2

症例2：上腕二頭筋の組織学的検索では，HE文

献

染色で，筋線経の著明な大小不同と中心核の増加

1）Dubowitz，Ⅴ．：Someunusualneuromuscularを示し，壊死線推，fiber splitting，CytOplasmic

disorders．inWaltonJN，CanalN，Scarlato

body等の変性所見も著明であった．TrichromeG．（eds）Musclediseases．Proceedingofan

染色ではrimmedvacuoleがみられ，電顕でmye−

Intemational Congress（May19−21，1969，

lin figureが確認された．ATPase染色でfiber

Milan）．ExcerptaMedica，Amsterdam，1970，

typeに著明な異常はなかった．
症例3：三角筋の組織学的検索では，HE染色568−573．

2）Dubowitz，Ⅴ．＆Brooke，M．H．：Rigidspine

で，筋線経の著明な大小不同を示し，中心核も増Syndrome．in Muscle biopsy．A modern

加し，fibersplitting，ringfiber，Whorledfiber等

approach．WBSaundersCo，London，1973，368の著しい変性所見がみられた．Trichrome染色で−371．

膿染物質がみられ，電顕でcytoplasmic body及びrod様構造物が確認された．

3）Emery，A．E．H．＆Dreifuss，F．F．：Unusual
typeofbenignX−1inkedmusculardystrophy．
J・Neurol．Neurosurg．Psychiatry，29：338−

考按

342，1966．

Rigidspinesyndromeは1970年のDubowitzの提唱以来1），脊柱の運動制限と肘関節の可動制限，
側轡などの特徴的臨床症状を示し，筋脱力や萎縮

4）Rowland，L．P．，Fetell，M．，01arte，M．，etal：
Emery−Dreifuss muscular dystrophy．Ann．
Neuro1．，5：111−117，1979．

は比較的軽度で，良性筋疾患の1つとされてい5）Goebel，H．H．，Lenard，H．G．，G岩rke，W．＆

る2）5）6）．遺伝歴や心伝導障害のないことで，Emery

Kunze，K．：Fiber type disproportionin the−Dreifuss型ジストロフィー症とは一応区別されrigidspinesyndrome．Neuropadiatrie，8：467ている3）4）．

−477，1977．

我々の経験した3症例もRigidspinesyndrome6）seay，A．R．，Ziten，F．A．＆Petajan，J．H．：としての臨床的特徴を有しているが，症例1はほRigid splne Syndrome．A type l fiber

とんど筋脱力や萎縮が停止性で良性筋疾患のタイプを示し，他の2例は比較的急速に増悪傾向を示した．

myopathy．Arch．Neurolリ34：119−122，1977．
7）Goto，Ⅰ．，Nagasaka，S．，Nagara，H．，etal：

Rigidspinesyndrome．J．Neurol．Neurosurg．

このようにRigid spine syndromeの中にも異Psychiatry，42：276−279，1979．

なった経過をたどるものの存在する可能性が示唆

8）Goto，I．，Muraoka，S．，Fujii，N．，etal：Rigid

された．またその2つのタイプにおいては，血中Spine syndrome：Clinicaland histological

CPKレベルや，筋組織学的所見における筋線経のproblems．J．Neurolり226：143−148，1981．

変化の程度に違いがあるように思われた．

ー108−17）軽度かつ持続的な運動により筋硬直を呈する
家族性ミオパチー
西 村 義 郎＊はじ

めには他に特に支障なく現在に至っている．入院時に随意運動によって誘発される有痛性筋拘編は神経原性にも筋原性にも観察されるが，後者の場合は横紋筋の運動エネルギー産生機構の障害によるものが多いと思われる．骨格筋の運動量は，安静時のものも含めて，運動の最大酸素消費速度（VOmax）によって表現されると考えてよい．
VOmaX90％以上の高度に激しい運動の開始後数現症では一般理学的所見正常．筋萎縮は吊甲冊に極軽度認められるが，むしろ前腕・下腿筋のhypertrophyが顕著であった．腱反射は低下または消失．小脳失調・感覚障害はない（図1）．
家系に近親結婚はなく，患者の同胞4人のうち長兄，次兄に同様の筋症状が認められた．長兄は40歳．四肢近位筋萎縮，筋力低下は3人のうちで分間は，筋組織への酸素供給が不充分な状態（ 02
debtH）であり嫌気性解糖のみによって運動エネル
ギーは与えられる．Phosphorylase，Phosphofruc−tokinase，LDH−M subunit等の酵素欠損症ではこのような条件下に於てのみ発症する．
他方VOmaX50％以下の運動や安静時には筋は
そのエネルギー供給源を主として脂質に求めており，Carnitine−palmitate transferase欠損症やCarnitine欠損症の筋症状は嫌気性解糖を必要とする条件下では通常みられない．
最近われわれは一見正骨な筋力を有しながら軽度の運動を持続するとき，筋の孝を痛と硬直を自覚し，運動継続困難となりかつ血清CPK，LDH値上昇を呈した家族性ミオパテーを経験したので報告
する．

症

例

32歳男性，工具．数年間血清LDH高値が持続す
るため肝疾患の精査を目的として来院した．小学生の頃より徒競争は不得意で，ゆっく り走っても
1，000米程度で下腿に緊張を覚え，さらに筋痛を生じ走行不可能となっている．中学生の頃には30分程度歩いても屑，頸部および下腿に同様の症状がみられ歩行を継続できなかった．しかし日常生活＊浜松医科大学第一内科

−109−

図1

患者全身像．四肢近位筋に極軽度の萎縮が認められるが，むしろ遠位筋のhypertrophyが特徴的である．これは同胞の2人にも認めら
れた．

図2

大腿四頭筋生検組織．SudanblackB染色．月旨肪顆粒の軽度増加が認められる．

最も高度であるが，学童期から現在に至るまでこ上限である．

れらの症状の進行は否定している．次兄は38歳．
筋萎縮，筋力低下は患者とほぼ同程度と考えられ負荷試験とCPK値の変動

るが，下腿筋のhypertrophyは顕著である．現在

1．基礎値：入院後比較的安静時に血清CPK値は

筋症状は自覚しないが，小学生の頃は遠足の際目

90〜140IU／L（正常値120以下）を示した（図的地までは歩行したが，帰途は筋痛のため歩行困

3）．血清LDH値は225〜261WU／L（正常値難となった．この軽度運動時の筋痛，硬直は休息

170〜340）．

によって更に増強した．

2．外来（日常生活）および軽度運動時：CPK値は一般検査（生化学・免疫学）では異常はない．

183〜2617と上昇を示した．これは特に運動負荷の甲状腺機能，耐糖能等正常．髄液検査正常．筋電図は大腿四頭筋に一部神経原性変化を認めたが他少ない生活を行っている時の早朝空腹時の値も含まれる（図3）．

の筋では正常所見が得られた．MCVは正常．筋生

3．前腕虚血試験：右前腕1分間阻血下における検は軽度の筋線経の大小不同と中心核の存在が明

毅大運動負荷では，前値は血清CPKが92，LDH236

らかであった．組織化学及び電顕では筋線維内にであるがCPKは10時間後の最大値でも119とわず空胞等の物質の異常な蓄積を示唆する所見は得ら

かな上昇を示したにすぎず，10分後の値は90と低れなかった．

下していた．LDHは1分後に257と最大値をとっSudanblackB染色（図2），OilredO染色でた．血清myoglobin値は1時間後に最大値4000

はtype I線経に軽度脂肪顆粒を認めたが，正常

ng／miを呈した．血清Iactateは前値1046IU／L，

−110−

LDH

二

二

CPK

−￣￣￣ヰ

叫∫．〜

且r日日＝

一 − − − 一
一 − I I I I I 一

〇
一
・
一
■
｝

1−−−−−−−−−−t

一 I I − 1

1 − − − −

○
一
・
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一
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●／
L
D
H正
常
域●

￣
シ
γ
づ ＼
匪 ￣
す
′

′
t
r

CPK 正常域

直後 40100
しゃがみ立ち（5′）

図3

前

直後10

20

50110複1200mジョギング（7 40り

負荷試験時の血清CPK低LDH値．左端（「外来J）は日常生活を行っている時のもので．入院中，ほぼ同等の運動量を行っている時のものも含まれる．「絶食」は72時間絶食試験を示す．本試験中myoglobin値は軽度上昇を示した．「しゃがみ立ち」は絶食試験終了時の軽度運動負荷を示す（5分間，10秒に1回しゃがみ立ち）．
「Jogging」試験は筋痛と硬直のために走行不能となって終了した・

3分後最大値が5676を示した．患者は充分に運動を行ない筋痛を自覚しなかった．血清lactateの反応は本患者の前腕筋に於て嫌気性解糖によるエネルギー産生が正常に行われていることを意味する．しかしmyoglobin値の上昇はCPK値との解離とあわせて何らかの膜の変化を示唆すると考えられる（図4）．
4．絶食試験（72時間）：本試験は患者の脂肪代謝についての検索である．血清遊艶脂肪酸をはじめ
入院時血液生化学検査では異常を示さなかったが，本試験ではtriglycerideは前借が117ng／dlから6時間後に172と上昇したが，その後は下降し77迄

0・5・10・15・50′1・2・

5●

10●

1回のしゃがみ立ちを5分間行った結果が図3に

図4 前腕虚血運動負荷試験．臨床的に運動筋の硬直は誘発されず，血清中のIactate値も数分後に最大値をとる正常反応を示した．血清
cpK値はわずかな上昇を示すのに対し，血清示す血清CPK値の上昇である．この上昇は日常生

myoglobin値は著増し両者の解艶を示した・

低下を示した．尿中ketone体も出現した．これらの反応はほぼ正常と考えられる．終了時に10秒に一111−

活における運動量とCPK借の変動量の関係と比較して有意の変化と考えられる．

前借ですでに1400と高値を示した．Joggingも下肢のだるさを当初から訴え，速度も第1回，第25．Jogging試験：典型的な有痛性筋硬直を示す

回よりは遅かったが，運動量は上回り，有痛性筋運動として患者があげた一つにマラソンがある．

硬直の程度は前回より更に軽度であった．CPK値
は運動の影響を示していない（図5）．

筋力テストで正常な筋力を有すると判断される本患者に於て，また工月として労働を職業としている人間で，この症状は理解しがたいものである．

考

走行速度は1500米を完走を条件に患者に判断させ案

た．第1回は秒速平均2．60米である．約1，000米よ筋細胞壊死の表現の一つであるmyoglobin尿症の原因については様々なものが知られているが，り両側大腿前面の硬直を自覚し始め，1，200米で全遺伝性疾患としては，解糖系代謝異常によるもの

く走行不能となって中止した．中止後も筋痛は増でPhosphorylase欠損症に代表されるものがあ

強し歩行も不能となり，筋硬直は高度となったがり，他に月旨質系のものとしてCPT欠姐症，Carni−

筋電図では不完全ながら干渉波形が認められた．

tine欠損症がある．前者は過激な運動によって発血清CPK値は12時間後に最大値7018を示した．第症するが，後者はむしろ軽い運動や安静時に間欠2回はlTCamitine600mg（1日量）を経口負荷後的に発症する特徴があり，この差違は筋のエネルに行った．本剤投与数週間後より日常労働にも自ギー源としての糖質と月旨質の差による決定的な問覚的に改善をみているが，Jogging能力の改善は題である．また運動後の筋硬直を呈する例が多く明らかで，1，600米走行後も独歩可能であり，筋硬みられるAdenylate deaminase欠損症もこの筋

直も大腿に軽度自覚するのみであった．血清CPK
値は12時間迄しか検索できなかったが，最大値はエネルギー代謝の面から考えて考慮されねばならない．

1380に止まった．第3回はlTCarnitineを1日量本症の発症条件，検査所見からみて，解糖系代800mgに増量して行った．検査日は勤務上疲労の

謝異常は全く考えられないことは先に述べた通り

なるべく少ない日時を選んだが，実施日は数日間である．本症は筋生検月旨肪染色標本に脂肪沈着が残業の続いた後となってしまった．血清CPK値は軽度であることからCPT，Carnitine欠損症と即断できないが，一応両者について比較してみると，

CPK

CPT欠損症はくり返すmyoglobin尿があり，空腹のみでCPK値の上昇をみる点で本症と異なるが，本症で絶食試験後の運動負荷で有意にCPK値が上昇することはやはりCPT欠姐症でも特徴的である．検査でtriglycerideその他の月旨肪酸等の高値は本症では認められなかった．CPT欠損症は最初絶食試験で血清ketone体の上昇がみられないと言われたがその後ketone体の遅延反応を示すもの，正常に近い上昇を示すものがあり，診断は筋組織中のCPTその他mitochondria膜における†JOGGlNGTEST

12h，S

24h，S

図5Jogging試顔時の血清CPK値の変軌Ⅰは入院時1・Carnitine投与前．ⅠⅠは1日600mg経口投
与後，Ⅲは1日800mg投与後のもの．ⅠⅠ，ⅢⅠでは軽い筋硬直を自覚し走行困杜となったが独歩は充分可能であった．

長鎖脂肪酸輸送に関係する酵素の測定によらねばならない．
Camitine欠損症は，幼少時からの進行性ある
いは非進行性筋萎縮を主症状とするもので本症患者の様に筋萎縮の強くないものを考えることは問題がある．勿論肝不全または心筋障害のないこと−112−

る可能性が充分考えられる．また好気的条件下

等，全身性Carnitine欠損症は否定されるが，Carnitine欠規症は様々な随伴する臨床症状の差ということからmitochondriaに於ける糖質・脂異を示すものが報告されていることや，Camitine

質の代謝，さらにATP／AMPの調整をしているが膜における脂肪酸担当体であることが筋のエネと考えられているdeaminaseも含めて，今後幅広

ルギー代謝に持つ意味は大きく，本症の原因精査

い検索が必要であろうと考える．

には充分考慮されねばならない．症状の多様性は
Deaminase欠規症でも問題であるが，本症の報告

ま

と

め

例は臨床の記載の不充分なものが多く，運動後の1．軽度かつ持続的な運動により有痛性筋硬直を筋硬直は記載が多いがその内容は不明である．

示し，CPKイ軋ヒ昇を呈する家族性ミオパテーを報告した．

本症患者は安静時にCPK値が正常であるにも関らず，軽度かつ持続的な運動（日常生活も含め）で
CPK値の上昇，運動継続困難がみられ，このCPK

2．本症患者について絶食試験，Jogging試験，前腕虚血試験等を行い，その結果について病態を考倍の変動が絶食によって増強されること，トcarni−

察した．

tine投与によって改善をみること等の特徴がある．
このことは本症の問題点が筋エネルギー代謝にあて症状の改尊をみたことも併せて報告する．

3．走行能力について1−Carnitine経口投与によっ−113−18）骨格筋の組織病理学的研究
特に肥大線経，中心核，Fiber splittingについて
茂 在 敏 司書
研究協力者

竹

中

正

純●

河

村

増 井 義 一●

小

西

宏●
慎

篠＿田

表1

症例総括
Clini⊂al⊂CUrSe ryr．

をみることも重要であるが，一万億常に残存した線維および時に観察される，あたかも萎縮した線経の働きを補うかのごとく肥大化した線経についての観察を行うこともまた重要である．
る種のものには，時に肥大化した筋線経を高頻度にみる例があり，またこれらの筋生検像では，中心核，Fibersplittingなどの変化が同時に多く観

日
11
日
M

Kennedy−s djsedSe
5
40
日
6
50
日
CMT disease
719
M

察される．今回は，これらの変化，即ち，肥大線
経，中心核．Fibersplittingなどの所見を中心に，各種神経筋疾患の筋生検像を検討した．

l廿OtOnjc Dystrophy
l
19
F
2
37
F
3
21
M
4
40
F

対象および方法

1555● 3JOO．
Sj5
7−3つ一1−−211一U125︑J2208q一lて集中される傾向があるように思われる．筋生検
像を検討する時，このような崩壊過程にある線経

HusclepoIJer H肘丁CPK一認諾37霊霊諾45 7︒ 崇 崇 州923 ∽ 闇266諜

各種神経筋疾患における筋組織像を検討する際，多くの場合，興味は変性，萎縮した筋線椎に対しSPト仏
DjstjIl form
1
55
2
27
Proximal form
3
41
4
49

一●

吾●

は じ め に運動ニューロン疾患（以下MNDと略す）のあ

恵

Poly町OSjtjs

対象は，MNDおよび，筋展性疾患として，筋強直性ジストロフィー症，多発性筋炎について検討

1
2
3
4

33
25
48
37

5

63

F
F
F
F

日

3
3
4−

3

4−

0．8

4

393
37
176
393
1563

した（表1）．MNDでは，血清CPK値により，2つのグループに分類した．CPK値正常群は，ALS12例，SPMAl例である．ALS12例のうち，範囲にある．SPMAl例は，近位型筋萎縮をみた例である．

CaSe12が家族内発症をみた例で，臨床経過は約20

一方血清CPK値上昇を示したMND7例の内年と長期にわたっているが，他の11例は経過3年

訳は，SPMA4例，Kennedy病2例に，CMT病以内である．なおここに示した臨床経過は，初発1例について検討した．SPMA4例のうち2例

症状より筋生検施行までの期間を示している．筋は遠位部に，他の2例は近位部につよく筋萎縮を生検を行なった部位の筋力は，CaSe7を除いて，認めている．経過は半年より20年の長期に及ぶもMMT4程度の筋力が保たれている．血清CPKのまであり，筋力は4程度に保たれている．血清値は，入院安静時に採血されたもので，ほぼ正常

CPK値は162より923の範囲にある．以上の7例＊大阪医科大学第一内科

は，全例男性である．
ー114−

観察を通して，一般に肥大線経，Fiber splitting，

筋強直性ジストロフィー症は，3例が女性，1例が男性．多発性筋炎は，4例が女性，1例が男中心核などの諸変化は，群集萎縮などが強くみら性であり，男性例のみが癌に合併したものである．

れる部位の近傍により多く観察される傾向があっ

以上の各症例の生検大腿四頭筋より凍結切片をた．連続切片の観察では，中心核に連続して，Split−

作製し，H．E．染色を行った．さらに100×の写其tingが出現する所見がみられる．他の多くの撮影より，atrandamに200個の筋線経を観察し，splittingについても同様の所見が得られた．図2
はSPMAのDistalformのものであるが，中心核ヒストグラムを作製するとともに，個々の線経において，中心核，Fibersplittingの観察を行った．

と関連して，Splittingが出現している像が観察される．電顕的にはFibersplittingは，SarCOlemma

結が筋原線維間に陥入し，陥大した先端部にほぼ連

果

CPK正常を示したMND13例のtotalのヒス

続するように中心核が筋形質内において観察されトグラム，中心核，Fibersplittingを図1左に示る（図3）．

し，中心核，Fibersplittingは線経の何％にみら

多発性筋炎では，90J 以上の肥大線経は少数でれるかを示したものである．ヒストグラムでは，あり，中心核は肥大化傾向の線経に中等度観察さ90／ 以上の肥大線経はごく少数であり，また中心れる．一方，Fibersplittingはほとんどみられな

核．Fiber splittingをみる頻度も極めて低い．
一方CPKが上昇した，MNDのグループではい（図4左）．

（図1右）90JJ以上の肥大線経が多く認められた．
中心核は，正常径の線椎にも認められるが，肥大上の肥大線経は少数で，中心核は正常径ならびに線経により高頻度に観察された．また，Fibersplit−

splittingをみる頻度は極めて低いものであった

筋強直性ジストロフィー症においても，9叫以肥大線経に中等度観察されるのに反し，Fibertingも同様の傾向が認められる．40JL以下の小径（図4右）．また縦断面切片の観察では中心核の連の線経にはsplittingはみられなかった．これらの珠状配列が特徴的であった．

M．N．D．13cases（ALS12． SPMAl）

0

図1

M．N．D．（CPK令）7 GaSeS

30

運動ニューロン疾患における，ヒストグラム，中心核，Fiber
Splitting．

−115−

図2 中心核に向って，Fiber splittingが形成される．

考案

脱神経にみられる筋の組織学的所見において，肥大線経の存在に注目した報告は少ない．Staト
bergら1）は，経過の速いMNDにおいて，筋線経の肥大化の起こり難い説明として，前角細胞の機能障害が急速に起こり，脱神経化により萎縮した
筋線経へのcollateral sproutingによる神経再支
配が十分に行なわれない，即ち運動単位の再構築が障害されるとするのに反し，一方Wohlfart−
Kugelberg−Welander病のように経過のおそい疾患では，この再構築化が十分に行なわれる結果，
図3

Splitting部の電頭像
Splitting部はsarcolemmaが筋原線維間に陥大したかたちで観察され，さらにsplittingに連続するかたちで筋形質内に中心核（←）が認められる．
Splitting部の艦内にはfibroblastと思われる細胞の一部が観察される（■）．

筋の代償的肥大化がみられるとしている．
我々のMNDのうち高CPK値をとったグルー
プも，疾患の経過は比較的緩徐であり，また経
過も長く，これらの点を考慮すれば，筋の肥大化のためには，時間的な経過が重要な因子であることが考えられる．しかし代償的なreinnervation
を受けた線経が，いかに肥大化してゆくかのメカ−116−

Myotonicdystro叶一y4cases

PoJymyositis5cases
竺 F伽t■叫itU噌

0

図4

30

90

多発性筋炎，筋強直性ジストロフィー症におけるヒストグラム，中心核，Fiber splitting．

は関連して観察されず，これの諸変化は，神経原

ニズムについては，明らかで1まない．
また高CPK血症と肥大線経の関連には注目しなければならない．この線経の肥大といった現象

性疾患と筋疾患との問に大きな違いとして，指摘される．
肥大線推，中心核，Fibersplittingの成り立ち

が単に代償的なものかどうか，そのメカニズムにについては，今後なお十分な検討が必要である．

ついては，今後さらに検討が必要である．
我々の検討では，MNDにおける筋の肥大化は，
中心核およびFibersplittingと相まって起こっているように思われる．Schwartzら2）も，同様の報
告をしており，Fibersplittingの成り立ちは，不十分な神経支配を受けた肥大線経へのoverloadによるものとしている．

文献1）stalberg，EリSchwartz，M．S．＆Trontelj，J・
V．：Singlefiberelectromyographyinvarious
processesaffectingtheanteriorhorncell・J・

脱神経による筋の筋原性変化に関しては，従来より議論の多いところである．Drachmanら3）は，Neurol．Sci．，24：403−415，1975．
2）Schwartz，M．S．，Sargeant，M．＆Swash，M．：

これらの筋原性変化は，脱神経とは異なった病的Longitudinal fibre splitting

過程すなわち原発性の筋原性病変が加わったといmuscular disorders−its relation to the

うよりも，むしろ偶発的あるいは，脱神経に付随してみられるといった立場をとっている．今回

pathogenesis of myopathic change・Brain・

我々の検討した結果では，中心核，Fibersplitting3）Drachman，D．B．，Murphy，S．R．，Nigam，M．

などの従来筋原性疾患にみられる変化は，筋の肥P．＆Hills，J．R．：Myopathic changesin

大化と関連してみられるものであり，一方筋疾患

chronicallydenervatedmuscle．Arch・Neurol・，においては，中心核は観察されるものの，Splitting

16：14−24，1967．

ー117−

in

neurogenic

99：617−636，1976．

19）Duchenmeジストロフィー症生検筋のヌードマウスへの移植実験−再生筋直径の定量的検討−

若 山 吉 弘＊
研究協力著

大

生

定

義■

熊

谷

俊

幸＝

筋ジストロフィー症における筋再生が正常であ細切した．この標本を固定脱水後プラスチックにるかどうかは本症の病因，治療，予後に関して重要な課題でありながらまだ一定の結論は得られて包埋した．％〃の厚切り切片はトルイジンブルー
にて染色後光顕にて検索した．また超薄切片をウいない．本年度も昨年度にひき続き，先天的に胸ラニールと鉛で2重染色後電長引こて観察した．

腺のないヌードマウスの皮下に本症生検筋を移植

再生筋細胞直径の定量的検討はそれぞれの症例

し，その再生筋を正常対照生検筋の移植片のそれと形態学的に比較し，とくにその直径について定で20個以上のプラスチックに包埋した標本の％〟の厚切り切片をトルイジンブルー染色し，その再量的に検討したので報告する．

生筋線経の横断標本をat randomに最終倍率400倍で光顕写真にとり測定した．また整形外科手術

材料と方法

患者の年齢をDMD患者の年齢とmatchさせる

ヌードマウスをネンプタールにて麻酔し，2つため，新たに整形外科手術例4例からの組織化学の小さな切開を左右の背部に加え，ここへ組織化

的に正常な生検筋を同様な方法でヌードマウスに学的に正常な整形外科手術患者9例，Duchenne

移植後標本を作製し形態学的に検討した．

筋ジストロフィー症（以下DMD）患者8例からの生検筋を小さく細切（約2×5cm）したものを周結囲の筋に直接触れない様に挿入し縫合した．

果

裸且艮的には正常筋およびDMD筋の移植組織片

移植片は移植後1，2，3，4週目でそれぞれ

はヌードマウスの皮下組織のなかで，1週後には正常対照筋とDMD筋からの再生筋の形態学的比

移植片のなかの血管新生のために赤くはっきりと較をした．まずヌードマウスをエーテル麻酔後屠

周囲の結合織からは識別できた．そして移植片は殺し背部の皮膚を切開した．移植片は通常血管新その周囲の結合織の被膜により被包され，周囲の生により赤く，線維組織の被膜により覆われ周囲味な結合織のなかに浮いている状態で移植片の採の組織からは容易に識別可能であった．

取は容易であった．そして移植片は時とともに小移植片のついた皮膚をピンで伸ばし，2．5％グルさくなってゆくように思われた．移植片の割面はタールアルデヒドをここへ注ぎ，約10分間固定し周辺部がより赤く密で，中央部はやや白っぽく疎た．これは移植片における再生筋線経のcontrac＿

であった．光顕的には正常筋，DMD筋の移植片にtionartifactを避けるためにおこなった．その後て1過後には移植片の周辺部で核小体と明るい核

移植片をヌードマウスの皮膚から除去し，まわりに付着している結合織を除去し，小さなblockにをもち繊細な細胞質のあるmyoblast，myOtubeを認めた．他方移植片の中央部には核が消失し硝＊昭和大学藤が丘病院神経内科＝愛知県コロニー中央病院小児神経科

辺部にはいくつかの紡錘形細胞が随伴していた．

子様筋原線経をもつ変性筋線経が存在し，その周ー118−2，3週後にはmyotubeの生育があり，それらのいくらかには胞体内に空胞を有するものもみられ標本において形態的には対照筋移植片と明らかなた．また移植後2週以降には正常筋移植片にも問の細月包膜にはDMD生検筋線経にみられるような質結合線の著しい増加が認められ，DMD筋移植

細胞膜の消失は認められなかった．

差はなく，またDMD筋移植片からの再生筋細胞

片の問質結合織の増加の程度と区別が困難なほど

さてDMD筋移植片の再生筋細胞は正常対照筋であった．このような状況のなかで最も興味ある

移植片の再生筋細胞より細い傾向がみられた（文所見としてDMD再生筋は移植2週以後には正常

献2，図1A〜lD）ので，再生筋細胞の直径を測

筋移植片の再生筋より直径が細い傾向がみられた．

定した結果をそれぞれの症例につきmean dia−

そして移植4退後までには周辺核と横紋をもつ筋

meter±standard deviation（JLm）で表示すると

線経や，横紋形成と中心核をもつもの，さらに横表1のようになる．大部分の症例で移植3週後ま紋のみられないmyotubeなどが正常筋，DMD筋

では再生筋紳月包の直径は増加しその後減少する傾の移植片に認められた．

向がみられた．また再生筋細胞の直径の年齢によ正常筋，DMD筋の移植片の電顕所見の詳細にる差異は表でみる限り明らかでなかった．

関してはすでに昨年度までの報告書の記載1）−2）を次に正常対照群とDMD群の移植後1，2，3，

参照されたい．電顕的には移植後1〜4週までの

4週目の標本の再生筋細胞の直径分布のヒストグ［＝］Myotubesandmyoblastsinmusclegraftsfrom9normalcases（D：8nomlalcases）
E≡ヨ Myotubesandmyoblastsinmu父legraftsfrom6DMDcases（D：7DMDca父S）
0
6
0
5
0
．4−
0
3
0
2−
0
1

︵訳︶ごり等訂上亡0ココq雲S己

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Diameter of myotube and myoblast（〟m）

0
0
0
0
0

︵訳︶むu当訂七uO叫︺nqて︼S己

0

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

0

5

図1

1015

20

25

30

35

40

45

50

55

Diameter of myotube and myoblast（JLm）

Diameter of myotube and myoblast（ym）

A Distribution frequency of myotube and myoblast diameter
afterl week of transplantation
B Distribution frequency of myotube and myoblast diameter
after2weeks of transplantation
C Distribution frequency of myotube and myoblast diameter
after3Weeks of transplantation
D Distribution frequency of myotube and myoblast diameter
after4weeks of transplantation

−119−

60

表1Meandiameters（JLm）ofcrosssectionedmyotubesandmyoblasts
after1−4weeks of transplantation

CaseAge Sex謂息JWeek 2Weeks 3Weeks 4Weeks
115

M Normal18．3±7．6a

22．6±8．6a（n＝101）b2

18

M Normal14．0±7．4

19．5±7．2（∩＝119）3

16

F Normal

21

F NormaI

5

14

F NormaI

12．5±5．4（n＝71）

6

16

M Norma1

8

12

F Norma1

16

F Normal

8

M DMD

3

15．6±6．0 19．1±6．2

14．4±4．2

M DMD

13．1±4．7（n＝64）

13

4

M DMD

11．6±4．6（∩＝55）

14

5

M DMD

76．8±5．2（n＝50）

15

2

M DMD

12．6±4．0（∩＝345）16

7（n＝235）（n＝108）22．5±7．Oa（n＝83）b18．3±7．3（nニ50）

20．7±7．3（∩＝73）

20．7±6．5（∩＝56）

17．6±5．3（n＝71）

22．6±7．523．2±7．4（n＝150）（n＝124）21．1±6．0

20．5±6．4

M DMD ll．9±4．67（∩＝103）（∩＝109）（∩＝46）

1221．2±7．7 18．8±5．9（n＝54）

21．0±6．5（n＝112）11（n＝77）（∩＝76）

M Normal14．0±3．9622．2±6．4（n＝53）（n＝70）（n＝207）

10（∩＝115）13．6±4．4（n＝103）921．6±7．9（n＝8日

16．2±6．1 19．6±8．3（n＝87）

7（n＝50）

16．7±6．1 17．6±5．9（∩＝63）（n＝122）b23．0±7．8（∩＝73）

13．4±4．9 19．0±6．0（n＝87）

424．3±9．5a（n＝60）b20．8±7．3（n＝124）（n＝64）

21．7±7．0（∩＝57）

相．9±7．0 17．5±4．2（∩＝115）（∩＝53）

15．8±5．0 17．0±6．1

14．6±4．6（n＝187）（n＝114）（∩＝96）

12．8±3．5 14．7±4．0

13．4±3．9（n＝121）（∩＝63）

16．5±6．8（n＝51）（∩＝226）20．8±7．5（∩＝54）

19．は8．1（n＝62）

16．0±5．3 14．7±5．4

15．7±5．5（∩＝45）（n＝72）（n＝50）

15．2±5．6 18．0±6．0

20．3±7．9（n＝75）（n＝73）（∩＝77）

17．5±5．1 111±6．3（n＝360）（∩＝115）M DMD

15．5±6．1（∩＝144）

17

13

M DMD

14．5±5．5（n＝141）

M：MaJe

F：FemaJe

DMD‥DuchennemuscuIardystrophy

a：Meandiameter（pm）±standarddeviationb：Numberofmyotubesandmyoblastsexamined

−120−

表2

Group mean diameters（FLm）of cross seFtioned myotubes andmyoblastsinboth normal and DMD muscle grafts at different
StageS Of transplantation

1Week

Normal14．9±0．6a＊

2Weeks3Weeks4Weeks

19．9±0．5a＊＊

21．3±0．7a…

20．7±0．7a■＊竃＊（n＝9）b（n＝9）b（n＝8）b（n＝9）b

13．4±0．8a■（n＝6）b

15．6±0．7a＊＊（n＝6）b

17．1±0．9a…16．2±1．Oa…■（n＝6）b（n＝7）b

DMD：Duchennemusculardystrophya：Groupmeandiameter（pm）±standarderrorofthemean b：Numberofcases＊P＞0．1＊＊P＜0．001＊＊＊P＜0．005

ラムを作製すると図1A，lB，lC，lDのようになり，移植1週後では特に両者の差は明らかでないが，2週以降DMD再生筋細胞の直径分布は明らかに対照に比し太い側で低くなっている．
またDMD群と正常対照群につき再生筋細胞直径のgroupmeandiameter±standarderrorof
themean（FLm）を求めると移植後1，2，3，
4週日では対照筋移植片でそれぞれ14．9±…＊P＜0．005

人，7歳2人，8歳1人，10歳1人，12歳1人）のいずれも大腿四頭筋をヌードマウスの皮下に移植し，現在までに移植後1，2週の再生筋細胞の直径を測定した．それぞれの症例からの移植片の移植1，2週後の再生筋細胞直径のmean dia−meter±Standarddeviation（JLm）は表3に示す通りである．2歳の症例の再生筋細月包の直径は他の症例よりも直径が細い傾向がみられる．また

0．6（〝m），19．9±0．5，21．3±0．7，20．7±0．7であり，DMD筋移植片ではそれぞれ13．4±0．8（JJn），

正常対照群6例，DMD群6例の移植1，2週後の15．6±0．7，17．1±0．9，16．2±1．0で移植後2，

mean（JLm）は1過後で正常対照群13・7±

groupmeandiameter±standarderrorofthe

3，4週日ではそれぞれP＜0．001，P＜0．005，P＜

1．4（〟m），DMD群13．4±0．8，2週後で正常対照

0．005で有意にDMD生検筋からの再生筋細胞の群18．7±2．8，DMD群15．6±0．7で2週後には直径は細かった（表2）．以上の所見はすでに雑P＜0．05で統計的に有意にDMD群にて再生筋細誌3〉などで発表した．この研究では対照として用胞の直径が細かった．

いた整形外科手術患者の年齢をできるだけagematchとなるよう努めたが，若年者の生検筋を当考察院で得ることはむつかしく，結果的に10歳代がほ本症の病因として筋細胞膜異常が唱えられ▲），とんどをしめた．従って年齢による再生筋細胞の本症生検筋線経の初期変化を示す部分では電顕的直径の違いを調べることもかね，より若年者からに筋細胞膜の部分的消失がみられているが，このの生検筋を用いて再生筋細胞直径の問題を現在再ような筋細胞膜の変化は昨年度までの我々のこの検討中であり，ここでは現在までに得られた結果モデルを利用して得られた再生筋紳月包には認めらを里示したい．DMD6例とほぼagematchした
組織化学的に正常な整形外科手術例6例（2歳1れなかった．むしろ横管よりなるhoneycomb構造などが再生早期より認められ，DMD再生筋で

一121−

表3

Meandiameters（ym）ofcrosssectionedmyotubesandmyoblasts
afterl，2weeks of transplantation．

Case

Age
（yr）

1

2

3

7

7

2

Sex

Normal
or

1week

2

F

F

F

Normal13．8 ± 4．6

21．4

NormalNormal8

M

Normal

6

7

8

9

10

11

12

12

10

6

3

7

4

5

2

F

M

M

M

M

M

M

M

NormalNormal

D

D

D

D

D

D

M

M

M

M

M

M

D

D

D

D

11．3 ± 3．3

16．1±5．5（∩＝81）（∩＝244）13．9 ±4．1

14 5 ± 4．1（n＝233）14．0 ± 3．9

19．9 ± 7．0（n＝115）

13．6 ±4．421．0 ± 6．5（∩＝70）（∩＝76）

15．7 ± 5．3

19．7 ±6．6（n＝120）（∩＝172）14．4 士 4．2

15．8 ±5．0（∩＝112）（∩＝187）

11．9 ± 4．6

12．8 ± 3．5（∩＝46）（∩＝121）13．1± 4．7

16．5 ± 6．8（∩二64）（∩＝51）

11．6 ±4．6

D

D

16．0

（n＝45）

16．8 ±5．2

15．2 ± 5．6（∩＝50）（∩＝75）

12．6 ± 4．0

17．5 ±5．1（∩＝360）

F＝Female．DMD＝Duchenne

musculardystrophy．

a Mean diameter（FLm）±standard deviation．
b Number of myotubes and myoblasts examined．

ー122−

土5．3

（∩＝55）（∩＝345）

M＝Male′7．1（n＝224）（∩＝207）

5＝ヒ（∩＝117）（∩＝201）

4

weeks

DMD

も活発なmembrane biogenesisが存在することが確かめられた．
次に再生筋細胞の直径が統計的に有意にDMDのヌードマウスへの移植実験．筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研究（三好】狂），昭和
55年度研究報告書，1981，p．114．

で細いという事実は興味ある所見である．これは

2） 若山舌弘：ヌードマウスへ移植されたDuche−

再生筋の周囲の結合織がDMD移植片に多いこと

nneジストロフィー症生検筋の形態学的検討．

による二次的な変化によるとも考えられるが，正筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的

常対照筋の移植片も移植後2週以降にはDMD筋研究（三好珪），昭和56年度研究報告書，1982，

移植片と同程度の線維芽細胞などの結合織細胞のp．87．

増生をみるので，この変化は再生筋細月包自体の特3）Wakayama，Y．＆

Ohbu，S．：Light−and性による一次的な変化と考えたい．その原因につelectronmicroscopic studies of transplanted

いては不明であるが，細胞の種々の代謝の中心的human dystrophic muscles to nude mice．J．

な場と考えられているGolgi装置の密度や機能が正常再生筋とDMD再生筋とでは異なる可能性や，

4）Mokri，B．＆Engel，A．G．：Duchenne dys−

Neurol．Sci．，55：59，1982．

Mastagliaら5）が言うようにDMD再生筋では
mitochondriaが少なく，その産生エネルギーが少

trophy−Electron microscopic findings

ないとか，杉田らにより提唱されているnonlyso−

the plasma membrane of the muscle fiber．

somalな蛋白分解酵素（CANP）活性6）やlyso・

Neurology（Minneap．），25：1111，1975．

somalenzyIT℃，例えばpointing to a basic or early abnormalityin

acidphosphatase活性な5）Mastaglia，F．L．，Papadimitrion，J．M．＆

ど細胞の代謝と密接な関係のある諸酵素の正常対

Kakulas，B．A．：Regeneration of musclein

照筋，DMD筋よりの再生筋細胞内における活性

Duchenne muscular dystrophy−An elect−の異同を検討する必要があろう．また再生筋の直ronTmicroscopic

径も移植片を採取した整形外科手術患者の年齢が著しく若いと細い傾向がみられるので，この点も考慮して更に検討を進めてゆきたい．

study．J．Neurol．Sciり11：

425，1970．

6）杉田秀夫，中瀬予告史，石浦章一：Plasmocidによる実験的ミオパチーの筋蛋白分解機構一筋ジ
ストロフィー症との関連−．筋ジストロフィー

文

献症の発症機序に関する臨床的研究（三好珪），昭1）若山舌弘：Duchenneジストロフィー症生検筋−123−

和57年度抄録集，1982，p．46．

20）各種神経筋疾患におけるsatellite cellの検討

個汀ヲもー執刀看

目

黒

岩

ノ臼

ノト

義五郎＊
力量

コ＝†

イ麦

勝

男梵

∃三一

ー症では，各項目に於て，対照群との間に有意差的

私達は前回，進行性筋ジストロフィー症，多発を認めなかった．

性筋炎において，筋再生のStem Cellと考えられているsatellitecellの数が正常対照群と比較して考察有意に増加しており，進行性筋ジストロフィー症

前回，私達は多発性筋炎，Duchenne型筋ジスト

でも，筋再生能は保たれている事を報告した．しロフィー症に於ては，Satellite cell数と共に，細かしこれら両疾患群に於て，その臨床経過は非常に異なっている．今回，これら増加したsatellite

胞の機能の活性化を示すと考えられるsatellite
cell核内のeuchromatinの割合は有意に増加しcell自体の機能の異常の有無について検討した．

ている事を報告した1）．さらに今回の検索より，多発性筋炎に於ては，Satellite cellの細胞体の面積，

対象

核の面積，mitochondria数も対照群と比較して有Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）5意に増加していた．

例，多発性筋炎（PM）5例，及び正常対照群（control）7例について検討した．

Watkinsらは．nuclearsizeの増大は，細胞機能冗進の結果と考えられると論じている2）．以上
より，多発性筋炎に於て増加したsatellitecellは，

方法

蛋白合成，代謝機能等に於ても非常に活発な状態

各症例毎に，10個以上のsatellite cellの電顕写と考えられた．

真を撮り，NEC−PCT8001画像解析装置にて，Sate−

一方，Duchenne型筋ジストロフィー症に於てllite cellのcytoplasm，nuCleus，mitochondria

は，対照群と比較してsatellitecellのcytoplasm

各々の面積，CytOplasmの全細胞体（cytoplasm＋の面積，nuCleusの面積，mitochondria数に於てnucleus）に対する面積比，mitochondriaのcyto−
plasmに対する面積比，mitochondria数につい増加傾向を認めるものの有意の増加を得るには至て，mOrphometricalanalysisを行なった．

フィー症では，これら増加したsatellitecell自体らなかった．この事より，Duchenne型筋ジストロの機能は多発性筋炎と比較して，その活性化の程結果度が少ないものと推察される．若山らは，Duche−

別表の如く，多発性筋炎は対照群と比較して，nne型筋ジストロフィー症の生検筋をnude mice

CytOplasm，nuCleusの面積，mitochondriaの数及に移植実験を試み，対照筋と比較して，その再生

び核の短径に於て，有意の増加を認めたが，CytO−
plasmの全細胞体に対する面積比，mitochondria

筋径は細い事を報告している3）．今後，Duchenne

合計のCytOplasmに対する面積比には有意差を認めなかった．一方，Duchenne型筋ジストロフイ

たり，Satellitecellからmyoblast，myOtubeへの発達過程を詳細に検討する必要がある．

型筋ジストロフィー症の筋再生能を研究するにあ＊九州大学医学部脳研神経内科
ー124−

表
（
；慧 冒

Summaryofsatellitecellmorphometry（p 慧2 ，叢

話

（
完，

m lt0

蒜

；

崇

≡（
Z） （
慧

）ぶ

）

5 ．78
Con tro l
土・
1．
44
（
n ＝7）

6．
82
土1 ．
27

46 ．
34
士5 ．30

2．
57
±0 ．
85

0．
1 88
土0 ．
10 1

3．
28
土1 ．
59

4 ．67
土0 ．
85

1．
77
±0 ．
28

DMD
（
n ＝5）

6．
85
土0 ．
85

8．
08
土1 ．
82

46 ．
33
±2 ．67

3 ．15
±1 ．
00

0．
1 62
土0 ．
0 62

2．
44
土1 ．
01

5．
14
土0 ．
73

1．
99
土0 ．
12

PH
（
n ＝5 ）

8．
2 1大火 8 ．
2 5大 4 8 ．82
土1 ．78±1 ．
24 土6 ．12

4 ．77東
0．
257
土2 ．
38
±0 ．
0 90

2．
73
±0 ．
50

4 ．63
土0 ．
62

2．
2 9柚 女土0 ．
33

亡−Test火pく0．05火中

pく0．02

cyto：Cy亡Oplasm mean士S・D・N：nuCleus
mit0：mitochondria
LS

大火火pく0．01

結：diameter oflong axis
：diameter of short axis

論班），昭和56年度研究報告書．1982，p．95．

Duchenne型筋ジストロフィー症では，再生筋

2）WatkinS，S．D．：The number，Size andのstem cellと考えられるsatellite cellの数は著

morphology of satellite cellsin neuro−

明に増加しているにもかかわらず，これらsate−muscular disorders．5thInternationalCong−llitecell自体の機能に関しては，多発性筋炎と比

ressonNeuromuscularDisorders．Marseilles，

べると，その活性化の程度は少なく，何らかの機France，Sep．12−18．1982．platform session

能の低下のある可能性が示唆された．

n40．

3）Wakayama，Y．＆

文

献

Ohbu，S．：Light andelectron−miCroscopic studies of transplanted

1）黒岩義五郎，石本進士，後藤幾生：筋疾患におけるsatellitecellの検討．厚生省「筋ジストロ
フィー症の発症機序に関する臨床的研究」（三好ー125−

human dystrophic muscles to nude mice．J．
Neurol．Sci．，55：59−77，1982．

21）Carbonic anhydraseIII（CAIII）の人骨格筋における局在について
田

研究協力者

島
塚

代

功

邦

雄●

二■J●

裕H

田

平

日

比

井

望＝

秀

松川

は じ め にphadexG−75（2．5×80cm），ついでカラム等電点

最近，ヒト骨格筋よりcarbonicanhydraseアイ
ソザイムの1つであるⅠⅠⅠ型（CA一m）が分散精製

電気泳動法（pH5−8）にて精製した．なおCA−ⅠⅠⅠはそのS−S結合によりdimerを生成することされたが1），本酵素は赤血球中のⅠ型，ⅠⅠ型アイソが知られているので，各ステップの緩衝液中には

ザイムとは酵素化学的および免疫化学的性状が異0．5mMdithiothreitolを加えた．Carbonicanhyd・なり，種々の組織と比較し骨格筋に特に多く存在

raseの酵素活性はWilbur−Andersonの原法5）をすると言われている．さらにその含量が1mg／

一部改変して測定した．精製蛋白の純度検定は，

gm wet proteinと多量のため，筋疾患のマーカ
ーエンザイムとしての可能性が示唆されている．

SDS−PAGE（polyacrylamide gel electro・

骨格筋中のCarbonic anhydraseは既に生化学的抗体の作製−精製CA−IIIl mgをFreund，s手法により，白筋にくらペ赤筋に多く含まれるとcomplete adjuvantとともに家兎背部に1週毎，報告されているが2），我々の知る限り組織学的に計3回免疫し，最終免疫後7−10日に十分抗体価

それを直接証明した報告はない．そこで，この点の上昇を確認してから耳静脈より採血した．また

phoresis）にて行った．−CA−IIIに対する特異を明らかにすべく，CA一江Ⅰに対する特異抗体を作

筋肉粗抽出液（crude muscle extract）に対する製し，酵素抗体間接法にて3），さらに今回は，酵素抗体も同様の方法で作製した．抗血清の特異性は，抗体直接法にてCA−ⅡⅠの筋肉内分布について検ゲル内沈降反応および免疫電気泳動法にて確認し討を加えたので報告する．

た．
−ベルオキシダーゼ（HRP）標識抗CA−ⅠⅠⅠ抗体

材料と方法の作製−CA−IlIに対する抗血清をCA−III結合−CA一mの精製−剖検時に摘出した正常
ヒト腸腰筋よりNishitaらの方法4）を改変し以下

Sepharose4B免疫吸着カラムにかけ非結合蛋白を十分洗った後，3MKSCNで特異抗体を音容出しの如く CA一口Ⅰを分・牡精製した．正常ヒト腸腰筋

た．このようにして得た抗CA−IlI抗体のHRP標

100gmに2倍量の0．01Mリン酸カリ緩衝液

識は，Wilson−Nakaneの方法6）にて行い，また対（pH6．6）を加えpolytron homogenizerでホモ照実験のため正常家兎IgGのHRP標識も同時

ジネートした．遠心上清（10，000g，15分）をあらに行った．−酵素抗体直接法−ヒト生検筋（上かじめ同緩衝液で平衡化したCMTSephadex，C−

腕二頭筋，各種組織化学的染色による検討で正常50カラム（2．5×50cm）にかけ，非結合蛋白を十分範囲と診断されたもの）の未固定凍結切片（8JJ）を30分風乾後，冷アセトン，95％エタノール，

洗った後，NaClの0−0．2Mlinear gradientで溶出した．CA活性フラクションを集め浪縮後Se−＊北海道大学医学部脳神経外科＊＊北海道大学医学部第一生化学

periodate−lysine−paraforrnaldehyde固定液（PLP）の各々で別個に固定した標本を，以下同様に処理し結果を比較検討した（図1）．内因性ペー126−

性からCA−ⅠⅠと判明した．SDS−PAGEにより，

DIRECTI川1UNOPEROXIDASE METHOD

A

一

■ l

F

l V 八

− ■ l

F ■ l R日 日

USephadexG−75ケリレま戸過の段階でかなり純化されていることがわかったが，さらに確実に精製する

XEDCRYOSTATCUTFROZEN SECTION（8p）DRY−50M川ためカラム等電点電気泳動を行った．CA−HIは

TN COLD ACETON（oR95Z ETOH，PLP soLN．）J15MIN

WA畠H川PBS，20M川pH7．4に単一ピークとして泳動されCarterらの

0・冤1202−MET肌5M川データと一致していた．SDS−PAGEでCA一mは

WASHIN

1本のバンドとして認められ分子量は約28000でPBS，15M］NllOZ NORMAL SWINE SERA，50MZNあった（図3）．なお筋肉粗抽出液の泳動パターン

I

WASH tN COLD PBS，10MIN
HRP−RbANTICA−ⅢIg60RHRP−Rb NORMALIgG，570C，2HRI

WASHIN COLD PBS，20MIN

から，CA−IIIは骨格筋中のmajor bandとして存在することがわかった．−抗CA一m抗体（a−CA−ⅠⅠⅠ）の特異性の検定−図4にゲル内沈降反D讐￣H202SOLN・5M川応および免疫電気泳動の結果を示した．図左上の

WASHIN COLD PBS，10MIN

如く a−CA−ⅠⅠⅠと筋肉粗抽出液は1本の，しかも精I

DEHYDRATEJ CLEAR AND MOUNT

製蛋白と完全に融合する沈降線を形成した．また
図右上の如く CA−HIはa−CA−IIIとのみ沈降線を

図1Flow chart of directimmuno−perOXidase
method形成し抗CA−I，抗CA−II抗体とは反応を認めな

ETOH；ethyl alcohol，PLP SOLN；perio−

かった．また免疫電気泳動でもa−CA一mと筋肉粗date・lysine・paraformaldehyde solution，

抽出液は精製蛋白と同一の移動度をもつ1本の沈

METOH；methylalcohol，PBS；phosphate

降線のみを示し，a−CA−1ⅠⅠの特異性が確認された．

buffered saline，HRP；horseradish peroxi・−HRP標識抗CA−ⅠⅠⅠ抗体の力価−ケリレ内

dase，Rb；rabbit．

ルオキシターゼは0．3％H202−メタノール溶液で沈降反応（オクタロニー法）で1JJgのCA−ⅠⅠⅠに対して2倍希釈で最適比を示したので，この希釈ブロックし，またFcreceptorは10％正常豚血清でブロック後，HRP標識特異抗体と37℃，2時間倍数を以下の直接法の実験に使用した．−酵素

インキュぺ−トした．コントロールとしてはの局在を示した．ベルオキンダーゼ反応産物は，

HRP標識正常家兎IgGを使用した．またblock
testとして組織標本を抗CA−III抗体でインキュ

主に筋線維内に存在し，しかも浪染する筋線維群

ベート後にHRP標識抗CA」II抗体を上述の如されない筋線維群の2種で構成され弱拡にてモザく反応させた．ついでDAB（diaminObenzidine）

イク状を示した．筋鞘膜も筋線維内と同様，一線−H202i容液でHRP活性を染色し検鏡した．なお

維群のみが濃く染色された．筋線維内における反各ステップの洗練には0．01M PBS（phosphate

応産物は光量頁でみるかぎり，均一な染色性の背景

抗体直接法による染色結果−区15aにCA−HIと，コントロールに較べてごくわずかにしか染色に点もしくは線状の，筋線維内に均等に分布する

buffered saline）pH7．2を用いた．

濃染部を認めたが，微細構造の判定は不可能であ結果った．また筋鞘核は全筋線経にわたってほぼ均等−CA一ⅡⅠの精製−各ステップの溶出パターに中等度に染色された．血管壁はごくわずかの染ンを図2に示した．CM−Sephadexカラムクロマ
トグラフィーにおける2つの活性ピークのうち前色を示したが，結合織は染まらなかった．なお筋半のピークが抗CA−Ⅰ，CA−ⅠⅠ抗体と反応しない

深く思われた．図5bはHRP標識正常家兎IgG

線維内神経終末の軸索が浪染していることは興味ことからCA−ⅠⅠⅠと考えられ，以下Sephadex G−

を用いた対照実験であるが，非特異的染色は認め

75，カラム等電点電気泳動にて酵素蛋白の精製をなかった．Blocktestにても同様の結果を示した．

進めた．なお後半の活性ピークは抗血清との反応

また，fibertypeの同定のため連続切片をmyosin−127−

︵●雪−︑つ；一； ○■YO

50

1∝I

150

謝

250

CM−Sephadex Column Chromatography．﹂㌣．畑．謝︵●一三；；一；；○■く0＿＿」．・．・．・．＿

冥）Sephadex G−75CoIumn Chrornatography

図2

0

刀

刃

！0

∝l

ColurnnlsoeIectric FocusIng

Elutionpatternsofeachpurificationsteps

ー128−

18

ATPase（pH9．4）およびNADHTTR（nicotina−

SDS−PAGE

mide−adenine−dinucleotide−tetraZOlium−reduc・tase）で染色し比較検討した．図5C，dは，本直接法（C）とNADH・TR（d）で染めた結果である
が，ベルオキンダーゼ反応で濃染する筋線維群はTypeI fiberであることが示された．また図5dにみられるintermediate fiberに対応する筋線
経には，lightlystainedfiber（TypeII）と同様に染色の程度はわずかであった．なお凍結切片を
風乾後の固定はPLP固定液によるものが冷アセ
鷹■■■−■■■■■■■■■】

三二霊。CM
図3

間

「

∴

島慧了EF

SDS−pOlyacrylamide gel electrophoresis，
CM；CM−Sephadex，G75；SephadexG・75，

トン，95％エタノールによるものよりすぐれていた．また，本直接法と以前検討した間接法は3），ほぼ同じCA−ⅠⅠⅠの局在パターンを示したが，直接法

IEF；Columnisoelectric focusing，BSA；
Bovine serum albumin，HGG；Humanの方が，多少非特異的染色は少なかった．

gamma−globulin（H：heavychain，L：lightchain），0VA：ovalbumin，Myoglob・：考

Myoglobin，Cytoc；Cytochromec察

Carbonic anhydraseは骨格筋には存在しないと考えられていたが7））Zborowska−Sluisll）や
Moynihan2）らはextravascularcarbonicanhyd・rase活性の存在を犬やラットにおいて生化学的に証明した．またMoynihanはラットのred s0−
1eusmuscleがwhitemuscle（extensordigitorum
longus）よりもかなり高い活性を示したと報告している．Ridderstrale8）は，この点を組織化学的に直接証明するためHanssonのcobalt phosphate
Ouchter10ny Te＄t

法9）を改良してラット骨格筋を染色したが，赤筋，白筋の間に有意な染色性の差を認めなかった．これに反しLOnnerholmlO）は，レジン包埋したウサ
ギ骨格筋を用い，同じ方法で染色し筋線維間に明
らかな染色性の差を認めたが，浪染されるfiber
がどのfiber typeかは検索していない．ただacetazolamideによる抑制実験により，筋線維内の染色性が，血管壁のそれと比較し，1000倍も抑制抵抗を示したことを報告している．Carterl）ら

ImnunoeLectrophoresisl

図4によると，CA−IlIはCO2

hydratase活性が低く，Specificity of anti−human CA・III serum，

他のアイソザイムと比較してacetazolamideの

CAI，CAII and CAIII stand for carbonic阻害に強い抵抗性を示すとしている．従って

anhydrase・I，IIandIII，reSpeCtively，a−I，aT

L仁nnerholmの報告した濃染する筋線経はCAr

II and a・III stand for anti−CA・Ⅰ，CA−II and
CA−ⅠⅠI antibodies，reSpeCtively．Mu−Ext；

HIの存在にもとづくものであろうと考えられる，

humanmuscleextract，anti−Mu；anti−muSCle

今回の報告で，我々は，この浪染する筋線維群はextract antibody．

CArlIlの存在によるものであり，これらがType
−129−

図5

Pairsofserialfrozensectionsfromhumanskeletalmusclewith。ut
pathology（0riginalmagnification，a−b，×40，C−d，×100，reSpeC−

tively．）．，a−C；immuno−perOXidase staining，b；COntrOlincubatedwith HRP−labelled anti・nOrmalrabbitIgG，d；NADH−TR．Notethat peroxidase reaction products seenincertain fibers only
producingmosaicappearance（a）・Thesefibersarecorresponding
Wellto type−l fibers when compared with the fibersin NADH
LTR stain（C，d）・ControIshowed no specific staining（b）．

ー130−

skeletal muscle．ActaNeuropath．（Berl．），

I fiberであることを明らかにした．しかし筋線

in press，1983．

維内の詳細な局在は，電顕レベルの検討が必要であり，目下検討中である．なお本酵素の生理学的4）Nishita，T．，etal．：Isolationofequinemuscle

役割としてCO2tranSpOrtを促進することが推論

carbonic anhydrasein crystalline form・

されているが，なぜTypeI fiberに特に多く存

Biochem．Biophys．Res・Commun・，103：573，

在するのかということは不明である．何れにしろ

1981．

5）Wilbur，K．M．，et al．：Electrometric and

CA−1ⅠⅠがTypeIfiberに主として局在すること，ならびに筋ジストロフィー症にてCA−uIが血中

colorimetricdeterminationofcarbonicanhyd−に増加するという報告12）があることから，CA一mrase．J．Biol．Chem．，176：147，1948．

が神経筋疾患におけるTypeI fiber異常のマー6）Wilson，M．B．，etal．：Recentdevelopmentin

カーになりうるのではという期待がもたれる．現

the periodatemethod ofconjugating horse・

在，臨床的に筋疾患の診断に重要なCPKは主に

radish peroxidase（HRPO）to antibodies・

TypeII fiberに存在するとされ13），それとの関Immunofluorescence and Related Staining

連に於て，CA−ⅠⅠⅠを今後検討していく意味が十分Techniques，Knapp，W．，etal．，Ed．，EIsevier／あると思われた．

NorthHo11andBiomedicalPress，1978，p．215．
7）Maren，T．H．：Carbonicanhydrase：Chemi−

結stry，Physiology，andInhibition・Phys・Rev・，論

1．正常ヒト骨格筋よりCA−ⅠⅠⅠを単一蛋白まで分

47：674，1967．

‡牲精製した．2．CA−ⅠⅠⅠに対する特異抗体を家兎

8）Ridderstrale．Y．：Observationsonthelocali・にて作製し，免疫組織化学的にCA−ⅠⅠⅠの筋肉におzationofcarbonicanhydraseinmuscle．Acta

ける分布を調べた．3．酵素抗体直接法にてCA−

Physiol．Scand・，106：239・1979・

ⅠⅠⅠはヒト正常筋において，主としてTypeI fiber9）Hansson，H．P．：Histochemical demonstra−に局在することが明らかとなった．これは，間接tion of carbonic anhydrase activity．Histo・法における結果と一致した．4．CA−ⅠⅠⅠが，各種

chemie．，11：112，1967．

神経筋疾患において，特にTypeI fiber異常の10）L6nnerholm，G．：Carbonicanhydraseinrat
liver and rabbit skeretal muscle：Further

マーカーとなる可能性が示唆された．

evidence for the specificity of the histo−謝

chemical Cobalt−Phosphate method of辞

CA−ⅠⅠⅠ精製の指導及び抗CA−Ⅰ，CA−II抗体を提供いただきました米国Wisconsin大学Deu−
tsch教授に感謝致します．

Hansson．J．Histochem．Cytochem．，28：427，
1980．
11）Zborowska−Sluis，D．Tりetal．：Evidenceofcarbonic anhydrase activityin skeletal

文muscle：Aroleforfacilitativecarbondioxide

献1）Carter，N．，etal．：CharacterizationofhumancarbonicanhydraselIIfrom skeletalmuscle．

transport．Resp・Physiol・，21：341・1974・
12）Heath．H．，et al．：Radioimmunoassay ofhuman muscle carbonic anhydraseIIIin

Biochem．Genet．，17：837，1979．
2）Moynihan，J．B．：Carbonicanhydraseactivity
in mammalian skeletal and cardiac muscle．

dystrophicstates．Clin．Chim．Acta，119：299，
1982．

13）sherwin，A．L．．etal．：Immunohistochemical

Biochem．Jり168：567，1977．

3）shima，K．，et al．：Carbonic anhydrase−lIIlocalization of creatine phosphokinasein

irrmunohistochemicallocalizationin humanskeletal muscle．Proc．Nat．Acad．Sci．．64：
171，1969．

−131−22）生検筋のprimary cultureの確立とその応用について
吉 岡 三恵子＊緒を目的に，以下の実験を行った．（むについては，

言

人骨格筋を組織培養によって研究する場合，これまでは主として胎児の筋が使われてきた．この筋細片を0・1％collagenase＋0．24％trypsinの混合液に入れ，25分間37℃で振とうする方法と，際，筋芽細胞の発育は良好であるが，胎児筋の利COllagenase200u／ml of mediumの2つの方法用にはおのずから限界がある．最近成人の骨格筋を比較した．次に，②については，rattailcollagenの培養が試みられているが，ラットやマウスの場

で培養皿をcoatingした場合としない場合での筋合のように確立されたcelllineは人の場合にはま芽細胞の発育状況を調べた．③についてはDulbe−

だ存在していない．

CCO′smodifiedEagle′smedium（DMEM）に馬生後の人筋線経では増殖可能な筋芽細胞は基底
月莫と成熟した筋線経の細胞膜の間に位置する比較

血清，胎児牛血清又はchick embryo extractを加えたものについて検討した．

的少数の衛星細胞であり，培養に際してはこれら

今回，最も大きな問題であったのは，いかにしの衛星細胞がcloneを生ずるといわれている1）．

て線維芽細胞の発育を抑え，純粋の筋芽細胞の培

この培養細胞の生存期間は胎児筋の培養に比較し養を確立するかということであった．これには，て短く，これまでの報告2）でも胎生80日の胎児の筋が60〜70のdoublingを行うのに対して，生後の（a）Yaffe等3）のserial passage（線維芽細胞と筋芽細胞の培養皿への付着に要する時間の差を利用

人培養細胞では約45に過ぎない．しかし，各々のして筋芽細胞を選り出す方法），（b）serum−free

衛星細胞は少なくとも1×107個の細胞を生じ得

medium（J．R．Florini等4），1979）の使用，（C）るといわれており，これによると少量の生検組織片からでも，培養によって生化学的分析を行うに

Cloning ringを使って1つのcolonyを選び出す
等の方法を検討した．

十分な蛋白量を得ることが可能である．又，生後以上の方法をもとにdystrophymouse（129ReJの筋線経に存する衛星糸田胞は加∽偏りにおいて証

dy／dy）とcontrol（129ReJ＋／＋）の筋芽細胞の明されているような種々の筋線経の特質を玩：扉−培養を行い，筋の分化状況を比較した．更に，得相においても示すに至り，筋肉として十分成熟すられた数種の神経筋疾患の患者の生検筋の培養をるだろうと推測されている．我々は以上の根拠を試み，筋芽細胞の生育状況と発達について若干のもとに生検筋のprimary cultureの確立とその生
化学的応用を目的に，まず本年度は筋芽細胞の培検討を加えた．

養条件の検討を行った．

結果

ラット新生児大腿筋を使って，筋芽細胞の培養
実験方法

条件を検討した所では，（D使用する蛋白分解酵素

ラット新生児大腿筋を用いて，筋芽細胞の培養として2種試してみたが，特に両者の間に差はな

条件を検討した．

く，共に必要量の筋芽細胞を得ることができた．

生検筋を細切後，（訃使用する蛋白分解酵素の種

次に②培養皿のcoatingの必要性であるが，COat・瓶，②培養皿のcoatingの必要性，③培養液の選定

ingをした培養皿では確かに筋芽細胞の発育は良＊神戸市立中央市民病院小児科

好であったが，COatingなしでも発育は可能であー132−

ったので以後は特にCOatingせずに培養している．
③培養液についてはDMEM＋10％馬血清＋50r
10％胎児牛血清を主体に，その組成については現
在も尚，検討中である．
次に線維芽細胞を除去するためにとった3つの方法の内，（a）Yaffe等の方法は，筋芽細胞の損失が大きく，採取量の少ない生検筋への応用はむづ
かしいと思われた．（b）serumrfree mediumを用いる方法では，初期の培養皿への付着が悪く，筋芽細胞自体の生育も良くなかった．現在（C）clon−
ingringを用いる方法での培養の確立を進めている．

図2
図1の培養14日目．多核のmyotubeがみられ，筋収縮が著明である．（×100）

次に培養したラット新生児の大腿筋筋芽細胞の動態を示す．図1は培養当Hのもので，図2は培
養14日目の筋収縮の著明になった時のものである．
dystrophymouse129ReJdy／dyの培養では，図3に示すようにmyotubeの形成がみられ，COnt−rolとの間に形態学的には大差を認めなかった．
現在までに，数種の神経筋疾患の患者の生検筋の培養を上記の方法で行った．筋芽細胞の生育状況は良好であるが，線維芽細胞の混入を除くには，更に検討が必要である．図4は生後1カ月男児のWerdnig−Hoffmann病の大腿四頭筋を培養したものである．単核の筋芽細胞が，図5に示すような多核のmyotubeへ発達していくことが確かめられた．

図3
生後9日目のdystrophy mouse129ReJdy／dyの大腿筋の培養．培養10日目．多核のmyotubeがみられ，筋収縮も認められている．（×100）

図1
ラット新生児大腿筋筋芽細胞．培養1日目．Rat tailcollagenでcoatingした培養皿を用い，培養液はDMEM十10％馬血清＋10％胎児牛血清．（撮影時倍率

図4
生後1カ月男児のWerdnig−Hoffmann病の大腿四頭筋の培養．培養8日目．培養液はDMEM＋10％馬血清＋5％胎児牛血清で，培養皿のcoatingは行っていない．

×100）（×100）−133−

はみられるが，COntrOlに比べると短いと報告している．dystrophy mouseについても今後は形態学的な問題だけでなく，更に詳細な検討が必要と考えられる．一方，生後の人骨格筋のprimarycultureについては種々の培養条件の検討により，生検筋の培養はできたが，線維芽細胞の混入という基本的な問題が解決されておらず，今後の大きな課題として残されている．Florini等は，彼等の開発したserum−free mediumでラットのpri−marycultureを行うと，線維芽細胞よりも筋芽細胞が早く増殖すると述べているが，我々がこの培

図5
図4の培養14日目．多核のmyotubeが認められる．

養液を用いた所では，初期の培養皿への付着がき（×100）

わめて悪く，筋芽細胞自体の発育も良いとはいえなかった．最近はcloningringを用いる方法を試みているが，低密度での筋芽細胞の培養を成功さ考察せるには，尚種々の条件の検討が必要であろう．

筋肉の分化を種々の側面から研究するため組織

今後，この間題を解決した上，培養生検筋につい培養の方法を用いることは，近年ますます盛んにて，生化学的分析を行っていきたいと考えている．

なってきている．これらの研究においては多くの
場合，酵素による分解で十分量の筋芽細胞を得，

文

献primary surface cultureを確立するという方法がとられている．このような方法では，筋肉の分1）Konigsberg，U．R．，Lipton，B．H．＆Konigs・化に伴うあらゆる細胞学的状況を観察し，定量化

Singlematuremusclefibersisolatedinvitro．

しうるという長所がある．従って，生後の人骨格筋においてもこのようなprimary surface cul−
tureが確立されると，今後，神経筋疾患の患者の筋肉をより細胞学的に又は定量的に研究できるよ
うになると考えられる．いくつかの研究室においberg，I．R．：The regenerative response of
Dev．Bio1．，45：260−275，1975．
2）Hayflick，L．：Thelimitedinvitrolifetimeof
humandiploidcellstrains．Exp．CellRes．，37：
614−636，1965．

3）Richler，C．＆

Yaffe，D．：Thein vitroてすでに正常人及びジストロフィー症の患者の骨Cultivation and differentiation capacities of格筋の培養が行われているが，得られた所見は現

myogenic celllines．Dev．Bio1．，23：1−22，

在の所必ずしも一致しているとはいえない．

1970．

我々は今回，まずラット新生児の大腿筋で基本

4）Florini，J．R．＆Roberts，S．B∴Aserum−free

的な培養条件の選定を行い，得られた結果に基づ

medium for the growth of muscle cellsin

いて，dystrophymouse129ReJdy／dyの生後9Culture．In Vitro，15：983−992，1979．

I＝∃の骨格筋の培養を試みた．myotubeの形成に要する日数には多少の差異はあったが，得られた
nly。tubeには形態学的にcontrolとの間に大差

5）parsons，R．：Expression of the dystrophia
muscularis（dy）recessive gene

in

mice．

Nature，251：621−622，1974．

uなかった．R．Parsons5）はdystrophymouseで6）Yaffe，D．＆Saxel，0．：Serialpassaging andu多柁ノ）myotubeの形成がみられず，pSeudo−

differentiationofmyogeniccellsisolatedfrom

紬刷世と呼ばれる細胞の集合のみが認められたと

dystrophic mouse muscle．Nature，270：725−

述べている．一一一一万，Yaffe等6）はmyotubeの形成

727，1977．

ー134−23）糖脂質の神経筋培養に与える影響
斎 田 孝 彦●
研究協力者

大

石

京

子事

松

田

修

一●

松 田 享 子■ 清 田 寛 子■

骨格筋の分化発育の様々な段階において，種々の筋外由来の物質が栄養物質として要求される．

発性e．p．p．Sを発する筋管細胞の割合がglobo−sideの培養液への添加により高まるのを観察し運動神経より放出され，筋に対し trophic な物
質の存在は，除神経により生じる著明な筋萎縮が，た．

筋肉の単なる運動の麻痔のみでは出現しないこと置していると考えられ，細胞の認識や相互作用にが知られて以来想定されてきた．

重大な役割を果している事が想定されている．例

スフィンゴ糖脂質は，一般に細胞膜の表面に位Oh，Markelonis等は中枢及び末梢神経より抽えばglobosideはヒトP血液型抗原であり，いく

出した84，000の分子量を持つ酸性蛋白を ｝scia．

つかのgangliosideはbacterialtoxinに対する受tin と命名し，それが神経支配のない培養条件下容体である事が知られていたが，最近ではリンパの胎仔筋のアセチルコリン・エステラーゼ活性を球サブセットのマーカーやmelanoma，COlon

高める事，また成熟した横紋を有する培養筋線経

cancerその他の腫瘍特異抗原でもある等の新しを．神経支配なしで数ヶ月にわたり維持しうる事

い知見が報告されている．

を報告している．彼等によれば，このsciatinはこ本研究で我々は鶏胚の脊髄・筋培養を用い，筋れまで玩㍑新和での筋の分化を促すのに不可欠で細月包上のアセチルコリンエステラーゼ活性の分布

あった鶏胚抽出液にも存在し，またsciatinに対が，神経筋接合の形成・分化成熟の進行に伴ってする抗血清を鶏胚抽出液に添加する事により，筋限局化する事を指標として，玩＝血相における神の初期の分化が抑制される事が示されている1）．

経筋接合形成に対する糖脂質の与える影響を組織

一方Ozawa，Hagiwara，Hasegawa，Kimura等
はsciatinと同様の分子量をもつtransferrinが化学的に検索した．

鶏胚抽出液やニワトリ血清中に存在する
trophicfactor
る2）．

muscle

材料と方法とidenticalであると報告してい11−12日目のWhiteLegh0m鶏胚大胸筋を0．2

しかしながら神経の筋に及ぼす影響は，その発％collagenaseで処理して得た筋芽細胞を，予め自家抽出にて得たラット尾コラージェンをcoat

生・分化段階に応じ，また現象により，必ずしもした70ラスチック皿上に5×104cell／cm2撒布し単一の物質のみで規定されるものでなく，より複た．プラスチック皿はAclar filmを用い直径1．5

雑である事が想定される．例えばKuromi等3）はcmの円型のもので自家製作したものを用いた．

脊髄由来の分子量10，000以下の塩基性ペプチドが，このプラスチック皿を通常のファルコンプラスチ

マウスの器官培養した除神経骨格筋の活動電位のック皿の中に入れ，37℃，95％加湿，CO25％の条

tetrodotoxin感受性が除神経により減弱するの件下で培養した．2日後に7−8日目の鶏胚脊髄を阻止すると報告している．一方Obata，Oide等の横断切片を1個ずつ加え培養を続けた．培養液

は神経筋接合形成に対しglobosideが促進的に作用する事を報告している．彼等は神経筋培養の自はヒト臍胎血清20％，鶏胚抽出液10％，Earleの＊国立療養所宇多野病院臨床研究部

MEM70％，glucose6mg／ml組成のものを用い
た．

一135−

糖脂質はgalactocerebroside，glucocerebro−

おけるACh−E陽性染色最大径が平均14．4JLの長side，Sulfatide，Ceramide，Sphingomyelinを50JLMさであったが，galactocerebroside，glucocerebro−

および50叫Mとなる様に脊髄切片培養開始時より培養液中に添加した．gangliosideは牛脳より抽Side，Ceramide，Sphingomyelin，添加群での染色の長さの平均は有意の変化を示さなかった．混合出したものを5，50，125，500，2000JJM浪度で用いた．その組成は図1のごとくで，GMI，GDla，GDlb，

牛脳ganglioside添加群では陽性染色が18．6JLとかえって長く，より未分化であることを示した．

GTl。で99％をしめるが，minorのものが0．9％加わっている．

一方sulfatideはこの濃度では非特異的な毒性を

ACh−E染色は糖月旨質添加後5，8，10，15，20

示した．

日目にKarnovskyの変法により行なった．脊髄次に5叫M濃度での種々糖脂質添加の影響を，同じく脊髄培養開始後8日目で見てみた．この浪培養開始後5日E］より筋管細胞上にKarnovsky

度ではsulfatideも毒性は示さず，galactocereb−

染色陽性部分の拡がりがみられ，次第にそれら

roside，glucocerebroside，Ceramide，Sphingo−

は限局化していくが個々の筋管細胞により，また脊随培養前角ないしは前根部分よりの距柾によmyelinと共に特に陽性染色の有意な変化は示さ

り，また個々の培養により，陽性染色の限局化はかなりのバラツキを示す．今回の実験ではこうしたバラツキによる影響を少しでも減ずるために，顕微鏡下の観察で脊髄前角に近く，陽性染色限局ない．一方混合牛脳ganglioside添加群では10．2JLと有意な短小化を示し，神経筋接合形成の促進がうかがわれた（表2）．
混合gangliosideの神経筋培養に対する影響を，
さらに種々濃度によって見るための実験を次に行化の進んでいるものより，1培養当り10ケずつ選った（表3）．5JLMのgangliosideでは陽性染色

んで，陽性染色の最大径を測定した．

短小化の傾向がみられるが有意の変化ではない．
5叫Mでは有意の短小化が見られる．125〝Mでは再びあまり変化を示さず，50叫Mでは逆に陽性染

29％

色の延長化がみられる．200叫Mでは神経細胞に

GM一口一〇一㌣Cerqmide
41％

表l EffectsofO．5mMglycolipidsincor・d・muSCle

D■0冒TCercmide
Ceromide

CulturesH

14．7％

ids

D■bM一㌢GT芋rCer（】mide

14．4％

0．9％

Gq

図1

Composition of beef brain ganglioside結

Length（p）of
ACh−E Activit

None（control）

14．4

士1．6・

Galactocerebroside

14．7士

2．6

Glucocerebroside

15．1士

2．7

Sulfatide

toxjc

Ceramide15．2士2．6

Sphingopyelin

14．5士2．4

Gangliosides

18．6 士 3．1★

果（Mean士SEM）

先ず0．5mM濃度で種々糖脂質を添加した場合の影響をみた．表1のごとく，無添加コントロー

★

P

く

0．05

＊＊Cultured for8daysin the presence

ル群では脊髄培養開始後8日目で，筋細胞表面に−136−

Of glycolipids

さらに培養日数によってどの様な変化をみせるのかを，50JLM混合gangliosideを添加して検討した．脊髄培養を開始し，同時にganglioside50〟Mを添加して5日，10日目では対照群に比し有icontrol丁・101●T−▲T▲

き； UV−05ぎ至も顆粒変性が出現し限局化した陽性染色は出現しない．

壬50〃里anglやdesも．勺

意の差がみられたが，15日，20日日では有意の差はなかった（図2）．
5

表2Effectsof50JLMglycolipidsincord・muSCle

10

15

20

Daysin vitro

CulturesH

図2 Effects of gangliosides on thelength of ACh−E activity

Length（p）of
ids ACh−E activit

考察None（control）

14．4

Galactocerebroside

14．8士

Glucocerebroside

14．4 士 2．6

その筋表面におけるACh−E活性分布の限局化を

Sulfatide

14．7

促進する事が明らかとなった．しかしより高濃度

Ceramide

15．1士

3．0

のganglioside添加は逆にその限局化に対し抑制

Sphjngonveljn

14．9 士 2．9

的に働く事も示された．こうした結果はACh−E

Gangliosides

10．2 士 2．4★

活性分布が神経筋接合の新形成とその成熟に伴っ

士1．6

種々の糖脂質のうち牛脳由来の混合ganglio−

2．8

Sideは50JLMの濃度で鶏胚脊髄筋培養において，

士2．5て，接合部近くへと急速に限局されるというこれ（Mean士SEM）★

Pまでの知見と併せ考えると，gangliosideが50JLM
濃度では神経筋接合の新形成に対し促進的に作用

く0．01＊＊Cultured for8daysin the presence

している事を示唆している．この結果はまたOf91ycoljpjds
表3

Effectsofgangliosidesondifferentiati。n。f
COrd・muSCle

cultures●●●

Concentration

Obata等が先に発表した生理学的実験結果とも，種々の浪度による促進・抑制効果の出現がかなり良く一致している．50／JMganglioside添加5日，Length（Jj）of
ACh−E Activit

8日．10日目では有意の陽性染色限局作用を示したことは，この神経接合新形成に対する促進効果
がかなり早い時期に働いている事を示唆している

0

5

0

■5

0

0

14．4

士1．6

といえる．今後さらに神経筋接合形成のどの時期

13．6 士 2．75に作用しているのかを調べる事が必要である．ま10．2士2．4★
21

たどのgangliosideが有効であるのかを知るため，

05

14．9士2．9
18．6士

より純粋な標晶を用いた研究が必要であり，また

3．1★★

0
0
2

抗ganglioside抗血清等を用いての研究や，gang・liosideの代謝や受容体の分布等の検討も必要であろう．

toxic？

（Mean士SEM）
★★Pく

S
VJ
da

・
■

S
e
d

0．05

in the presence

文献1）Markelonis，G．＆Oh，T．H．：Asciaticnerve1

Of gan91jlCultured

u

＊＊★

0．01

8

Pく

0 S
f O

★

−137−

proteinhasatrophiceffectondevelopment3）Kuromi，H．，Gonoi，T．＆Hasegawa，S・：and maintenance of skeletal muscle cellin

Partialpurification and characterization ofculture．Proc．Natl．Acad．Sci．，76：2470−2474，

neurotrophicsubstanceaffectingtetrodotoxin

1979．

sensitivityoforgan−Culturedmousemuscle・Brain Res．，175：109−118，1979．

2）Ozawa，E．＆Hagiwara，Y．：Degenerationof
large myotubes followingremovaloftrans−4）Obata，K．＆Oide，M．：Effectsofglycolipids

ferrin from culture medium．Biomed．Res．，

oninvitro development of neuromuscular

3：16−23，1982．

junction．Nature，266：369−371●1977・

一138−

ⅠⅠⅠ．筋ジストロフィー症の病態生理
a）赤血球などb）生理C）生化・代謝など

24）Duchenne型筋ジストロフィー症の赤血球のpolyphosphoinositideの同定

吉 田 相 子■
研究協力者

林

文

夫目

安

藤

は じ め に

一

也●

方

法

試料：DMD患者3名（20歳）と健康男子対照者

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の筋細胞には，カルシュウムが蓄積しているのがある．

4名（20歳）のヘパリン血液より，赤血球を分馳

これは筋細胞膜が異常でカルシュウムが細月包外かした．その赤血球を0．9mMCa2十と5mMのブドら細胞内に入り蓄積していると考えられている．

ウ糖を含むリン酸緩衝食塩溶液（pH7．4，0℃）

私達はこの仮説に基づき，筋糸朋包膜のカルシュウ

で3回洗i燻した．その後42〜45％ヘマトクリット

ム調節機構が異常になっているのではないかと考に調整し，浮遊液のlml（×2）を赤血球の0℃えている．この異常を究明するための試料として，でのリン脂質抽出試料とした．残りの浮遊液は患者の赤血球が使用出来るかどうか昨年まで調べ

0℃で1ml（×2）ずつ容器に入れ，37℃で3時て来た．その結果，DMDの赤血球にも異常が有間incubateした後，赤血球の37℃でのリン脂質抽り，特に外液にカルシュウムが存在した時に，そ出試料とした．

の異常現象が現れ易いことが明らかとなったl）．

リン脂質抽出：1）1ml浮遊液を30mM CaC12

そのひとつに，カルシュウムを含む緩衝液中に浮を含む2m1−MeOHに入れ，祝辞後2m1−CHC13

遊したDMD赤血球膜には，対照者のものより多を加えて，室温に30分放置した．2）遠心分離で上くのカルシュウムが結合していることがあげられ清を取り，残査に20m1−CHC13：MeOH＝2：1

る．またDMD赤血球のCa2＋−Mg2＋ATPase活性が高いことが報告されている2）．

の残査に0．25％の浪塩酸を含むC：M＝2：1をを加えてPPI以外の脂質抽出を行なった．3）2）

一方細胞の刺激，受容，応答そして機能発現に，25ml加えてPPIの抽出を行った．4）3）の抽出液

イノシトール・リン脂質が関与していることが注を，その0．2容のl N−塩酸で洗源後，下層をその目をあぴている．またイノシトール・リン脂質の2／3容のC：M：1N−HCl＝3：48：47で1回分解産物のホスファチジン酸（PA）は，Ca・チャ

洗濯した．5）下層をNH▲OHでpH8−8．5に調ンネルとして働いていることが認められつつある．

整した．6）5）の溶液を等容量の2M−KClで放と1972年に，BuckleyとHawthorneは赤血球膜にうし，さらに下層をその2／3容のC：M：1・5M−
KCl＝3：48：47で2回洗推した．7）下層をN2

poly−phosphoinositide（PPI）が増加すると膜のカ
ルシュウム結合量が増加し，Ca2＋−Mg2＋ATPase
活性が高くなることを報告している3）．
私達は今回DMD赤血球の0℃と37℃でのPPI（Diphosphoinositide：DPI，Triphos・
phoinositide：TPI）の含量を測定した．
■国立武蔵療養所神経センタ一書■神戸大学教養部生物学教室

で乾燥した．
D円，TPlの分離：試料−乾燥したPPIを50〟1のC：M：H20＝65：25：2で洛解した．方法−蒋屑クロマトグラフィー2次展開法を用いた．
シリカゲル60薄屑板（Merck−HPTLC）にしゅう
酸カリウムを含ませ（1％−K2C20．水：メタノー
ル（3：2）溶液中で），110℃で10分間乾燥した．

−141−

その薄層板に10JJlの試料をplot（写真のSの位置）して，1次展開液（C：M：NH40H＝65：
25：5）で展開した．展開後35℃で20分間，N2気
流中で乾燥後，DPI（0．3mg／ml）とTPI（0．6mg／ml）
2／Jl，3／Jlと4J′1の4点（写真の1，2，3と4の位置）をplotした．次に2次展開液（C：A：
M：Ac：H20＝40：17：14：12：8）で展開し

0

SニOU 盲＼mUEの標準物質（牛脳から抽出，精製した）を1J 1，

た．その後30％硫酸水素アンモニュウムをスプレ
ーし，160℃で17分間で発色させた．DPIとTPIの含量はツァイスーデンシトメーター（PMQ3）で検出した．試料の含量は各薄層板の標準物質の検量線より得た．最終的にヘマトクリット値で補正し，赤血球1ml当りの含量とした．

0

37

DMD

0

37

CONT

0

DMD

0

37

0c

CONT
TPt

DPl

図

37

赤血球のPPI含量
DMD（3名，20歳）と健康対照者（4名，20歳）の赤血球（0℃と37℃）のDPIとTPI
含量

於けるDPI含量は，0℃の含量に比べ減少する傾向であった．
0℃に於けるDMD赤血球のTPI含量も対照者のそれに比べて大きな差はなかった．しかし赤血球を0℃から37℃で3時間incubateした後の，DMD赤血球のTPI含量は減少し，対照者のそれは増加した．対照者のTPIが増加することは，すでに報告されている豚赤血球の結果と一致する4）．
写真

DPI（D）とTPI（T）の2次展開薄層クロマトグラフィー
S：赤血球より抽出した試料
1，2，3と4：牛脳より抽出精製したPPI
標準物質患者3名と対照者4名の結果からまだ結論出来ないが，DMD患者赤血球のイノシトール・リン脂質の代謝回転に異常が有る結果を得た．
結論

0℃と37℃に於けるDMD（3名）赤血球のDPI
結果と考察とTPI含量は対照者（4名）のそれに比べて大きI＿）PIとTPIは1次展開で原点に止り，2次展開な差は認められなかった．しかし赤血球を0℃かで一Jj：在のように展開される．この薄層クロマトグ

ら37℃で3時間incubateした時のDMDのTPI′ソ†い一喝で得た結果を図に示す．0℃と37℃にお含量は減少し，対照者のそれは増加した．

ける上）Ml）赤血球のDPIの含量は対照者のそれと比べて差は認められなかった．両者共，37℃に
ー142−

文

献

3）Buckley，J．T．＆Hawthorne，J．N．：Erythro・

1）Yoshida，M．，Ando，K．＆Satoyoshi，E．：

Cyte Membrane Polyphosphoinositide Meta・Abnormalities of ErythrocytesinDuchenne

bolismandtheRegulationofCalciumBinding．

MuscularDystrophy．Ann．Neurol．，inpress．

J．Biol．Chem．，247：7218−7223，1972．

2）Dunn，M．J．，Burghes，A．H．M．＆Dubowitz，

4）Peterson，S．C．＆Kirschner，L．B．：Di−and

V．：Erythrocyte−ghostCa2十一StimulatedMg2＋

Triphosphoinositide MetabolisminIntact−dependent adenosine triphosphatase in

Swine Erythrocytes．Biochim．Biophys．Acta．

Duchenne muscular dystrophy．Biochem．J．，

202：295−304，1970．

201：445−453，1982．

一143−25）Duchenne型進行性筋ジストロフィー症の
赤血球カルシウム含量
庄 司 進 一■
研究協力者

野

要
約
本研究の目的は赤血球カルシウム測定の最適条件を見出す事とDuchenne型進行性筋ジストロフ

本

昭

三川

のため，我々は赤血球カルシウム測定の最適条件とDuchenne型進行性筋ジストロフィー症息児での測定結果を本論文で報告する．

ィー症の赤血球カルシウムを測定する事である．

対象及び方法

赤血球カルシウム測定の最適条件としては，ビDuchenne型進行性筋ジストロフィー症の息児

ロコーティング・グラファイトを用い，原子化温及び年齢・性対応対照児は8歳から17歳までであ度は1800℃である．
赤血球カルシウムを原子吸光法で測定した．こる．健常対照者は7歳から76歳までである．年齢・れはDuchenne型進行性筋ジストロフィー症でわ がねβの赤血球カルシウム含量の増加がない

性対応対照児は血液疾患を含まぬ各種疾患息児である．
採血は早朝空腹時に静脈採血により行ない，ヘか？という疑問に答えるためであった．
25例のDuchenne型進行性筋ジストロフィー症

パリンと直ちに混和し室温で保存し，1時間以内

息児，24例の年齢・性対応対照児及び16例の健常に血兼と分散し，洗浄に移った．

対照者の赤血球カルシウム測定の結果は，それらの群の間に有意な差を認めなかった．

前者のヘマトクリットの測定から赤血球カルシウ

赤血球層と洗浄上清のカルシウムの測定，及びム含量を算出した．

はじ

め

水は脱イオン後2回蒸留水を用いた．試薬は最にDuchenne型進行性筋ジストロフィー症患者及び胎児の筋細胞で組織化学的にカルシウムの増加

も純度の高いものを用いた．特にNaClは99．99％以上の純度のものを用いた．

を示唆する報告や，本症保因者の筋核でⅩ線ミク

ガラス器具からのカルシウム遊敵によるコンタ

ロ分析からカルシウムの増加が示唆されている．

ミを避けるため，ポリエチレン製のチューブやカ

これは筋の変性の原因である可能性があり，直接ップを用いた．これらは塩酸による洗浄を行なっ

筋細月包カルシウム含量を測定することが重要であた．

る．しかし現段階では数オーダー高いカルシウム

Parkin−Elmer原子吸光光度計4000，オートサを含む細胞外液を完全に除くことが困難で，筋細ンプラーAS−40，プログラマーHGA−500を用い

胞カルシウム測定は将来の課題である．

た．

一方赤血球において報告されているいくつかの異常は，本症における赤血球でもカルシウムの異結果常増加を示唆しているものであり，この方は細月包〔カルシウム測定条件の検討〕

外液の完全な除去が比較的容易である．この目的

最初に炎光原子吸光法による測定を試みたが，これでは感度が不充分であることが判明し，グラ＊信州大学医学部第三内科＊＊信州大学医療技術短大部

ファイトを用いる原子吸光法を追求した．グラフ
ー144−

ビロコーティングの無いグラファイトを用いる

ァイト法では従来の標準原子化温度2600℃で行な
うと，しばしば吸光シグナルに第二のピークが現と，感度が1オーダー低く，キャリーオーバーがわれた．このピークは一度グラファイトの分子眉高く，ストロンチウム処理によっても10％と高か間に吸着したカルシウム原子が原子化段階で再び遊離してくるためと考えられる．キャリーオーバ

った．
原子化温度を1800℃にするとストロンチウム未ーや再現性が悪いことはこの現象によると考えら処理でも，第二のピークは消失し，キャリーオー

れ，測定を困難にしている．

バーは低かった（3．3％）（図3）．直線性の範囲を考え合せると，ストロンチウム未処理のグラファ

この現象を防ぐため，グラファイト分子層間をイトをこの温度で用いると良い事が判明した．

あらかじめストロンチウム原子で飽和しておくことを試みた．これにより第二のピークは消失した．

赤血球カルシウム測定の最適条件を表1にまと

次にこのストロンチウム処理による効果をキャめた．炭素のチューブ内での沈着を防ぐため，

リーオーバーの程度，感度，直線性の範囲から検500℃で空気を100ml／min流すと良い．この原子討した．方法はブランクを測定後カルシウムのスに減少し，感度が上昇した（図2）．

021︵∈2︶小月叫⁝遥 ぷ謡hで比較すると，キャリーオーバーが10％から3％

Sr untreated
tube

80

Gryツ0〝er1α泌2

T−−−−−−−−II⊥061

した（図1）．
2500℃の原子化温度でストロンチウム処理前後

T−−−1−−−−−⊥

タンダード溶液系列を測定し再びブランクを測定

Sr treatedtube

Gけり1−汀rJL；

3

1

2

3

Concentration of cilcium（JJnOl／1）

図2

Comparisonofstandardcurveand carry・
overratebetween strontium・treated and−
untreated tube

（pyro−COated tube，atOmization temp．
2500℃）

G〃71日・ ・rユ∫ J
1

2

3

Sr treatedtube

G〃7りn・rご1．，1

TI−1−−−−−−−−上021︵∈E︶小名芯上月忠d

Sr untreatedtube

T − − − − − 1 − − − − − 1 人

0
6
1

80

2

Concentration of calcium（JLmOl／l）

図3

Comparisonofstandardcurveand carry−
overratebetween strontium・treated and−

図1

Recorder tracing of a typical standard

untreated tube

CurVe，Showing alinearity and carryover（pyro−COated tube，atOmization temp．

phenomenon

1800℃）−145−

化温度が比較的低い条件下では，サーモ・フォ ト

第一は感度で，グラファイト法のみで充分な感度センサーの調整は重要である．
〔洗浄条件の検討〕

器具からのコンタミを防ぐためポリエチレン製器があった．第二は周囲からのコンタミで，ガラス

赤血球の洗浄は10容の等張リン酸緩衝食塩水具に換えた．又水は脱イオン後の2回蒸留水を用（pH7．4）で混和1100g3分の遠心を躁返えして行なった．これで1回から4回洗浄を行ない検討いた．洗浄用の緩衝液には，赤血球からカルシウ
ムを遁杜させにくいものを選んだ．

し，3回の洗浄で良いことが判明した．

原子吸光のシグナルに第二のピークが出現する【Duchenne型進行性筋ジストロフィー症赤血球現象は，ストロンチウム処理と原子化温度を低温

カルシウム含量の測定〕化することで消失することから，グラファイト分

表2に結果を示した．本症息児，対照息児，健子眉間に吸着後遂敵してくるカルシウム原子によ

常者の間に有意差は認められなかった．

ると考えられる．感度，キャリーオーバーの程度，
直線性の範囲から，ビロコーティング・グラファ

考案

イトにストロンチウム処理を行なわずに，原子化

赤血球カルシウム測定には多くの困難があった．

温度を1800℃で用いる条件を選んだ．

表l Recommended conditions for calcium
analysisinerythrocytes
Diluent：I）eionized redistilled wa亡er

Tube Type：Pyrocoated
S亡ep lつ345Tempera亡ure（Oc）

80

130

500

1000

Ramp Time（sec）

3

25

2

15

Hold Time（sec）

0

5

Air（ml／min）

1800
0

15

3

300

300

0

300

50

300

Calcium contentinerythrocytes

6．7±1・8

Age−ma亡Ched ControIs（24）

6．1＋

3．6

Duchenne Muscular Dystrophy（25）

6．1＋

4．4

＋

1

4

Heal亡hy ControIs（16）

mean

2200

100

Argon（ml／min）

表2

5

6

umoles／1cel1

S．d．

Numberin parenthesis represents number of subjectS−146−

この条件下では，赤血球カルシウム含量は従来

文

献の報告3）・7）より低いことが判明した．赤血球の洗1）Brown，S．S．，S．Nomoto，M．Stoeppler＆F．

浄は室温で行ない，カルシウム・ボン7 を阻害しW．Suderman：IUPACreference method forない条件であるので，この価はf乃 びわ0の赤血球

analysis of nickelin serum

カルシウム含量に近いと考えられる．

electrothermal atomic absorption spectr0−

4グルーフセ）心5〉・8）が本症に於て赤血球膜のCa−
ATPaseの活性上昇を報告しており，1グルーand urine by

metry．PureAppl，Chem．，53：773−781，1981．
2）Dunn，M．Jリ

A，H．M．Burghes＆

V．

プ10）が正常との報告をしている．この酵素は赤血

Dubowitz：ErythrocyteghostCa2十一Stimulat−

球のカルシウム・ポンプであると考えられている．

edMg2＋−dependentadenosinetriphosphatase

Mollmanら6）はinside−Out VeSicleを用いてカル

inDuchennemusculardystrophy．J．Biochem．，

シウムのtransportを測定し，本症ではカルシウ

201：445−453，1982．

ムの汲み出しでVmaxとKmが高いと報告した．

3）HarTison，D．G．＆C．Long：The calcium

一方Shoji9）はright−Side−Outの赤血球を用い，COntent Of human erythrocytes．J．Physiol．，

radio−aCtiveカルシウムの流入と汲み出しで対照

199：367−381，1968．

と差が無いことを報告した．これらの論争は，赤4）Hodson，A．＆D．Pleasure：Erythrocyte

血球のカルシウムtransport系の異常の有無に関するJ乃びJJγPの実験である．今回の研究は新鮮赤Cation−aCtivatedadenosinetriphosphatasein

血球のカルシウム含量の異常の有無をみたもので，

32：36ト369，1977．

生体内で赤血球カルシウム含量（流入一汲み出し）

Duchennemusculardystrophy．J．Neurol．Sci．，
5）Luthra，M．G．，L Z．Stern＆H．D．Kim：に異常がないことを示している．

（Ca＋＋＋Mg＋＋）−ATPase of red cellsin

今回の測定はカルシウムの総量であるので，結Duchenneandmyotonicdystrophy：Effectof

合カルシウムと遊乾カルシウムの合計で，それぞsolublecytoplasmicactivator．Neurology（N．

れの比率の異常の有無は言えない．

Y．），29：835−841，1979．

Duchenne型進行性筋ジストロフィー症に於て6）Mollman，J．EりJ．C．Cardenas

赤血球カルシウムの異常蓄積はないようだ．

＆

D．E．

Pleasure：Alterationofcalciumtransportin
Duchenneerythrocytes．Neurology（N．Y．），

追記30：1236−1239，1980．

前年度本症の赤血球含量が4℃72時間のincu・

7）0′Rear，Ed．AリM．M．Udden，L．Ⅴ．Mcintire＆bation後に有意に上昇するとのデータは，対照群

E．C．Lynch：Problemsin measurement ofでも同様に上昇することから有意差は無いと訂正

erythrocyte

する．これは洗浄時にわずかでも温度上昇がある

283−292，1981．

calcium．Am，J．Hematolり11：と，洗浄中にカルシウム・ポンプが働いてカルシ

8）Ruitenbeek，W．：Membrane−bound enzymeS

ウムを汲み出すためで，厳重な温度コントロール

OferythrocytesinhumanmuSCulardystrophy．

のもとでは差はなく同様に上昇した．又新鮮赤血（Na＋＋K＋卜ATPase，Ca2＋−ATPase，K十一and

球のカルシウム含量の測定は，測定方法の改良とCa2十一p−nitrophenyphosphatase．J．Neurol．

症例数の増加で有意差無しになった．前年度の測定ではパイロ・コーティングの無いグラフナイト
を用い，経時的感度変化を頻回にモニターしなか

Sci，41：71−80，1979．
9）Shoji，S．：Calcium flux of erythrocytesin
Duchennemusculardystrophy．J．Neurol．Sci．，

ったため，バイアスがかかったものと考えられる．

51：427−435，1981．

10）Tsuchiya，Y．，H．Sugita，S．Ishiura＆K．

lmahori：Spectrinextractabilityfromeryth−ー147一r・OCyteinDuchennemusculardystrophiesand
the effect of proteinases on erythrocyte

ghosts．Clin．Chim．Acta，109：285−293．1981．

−148−26）Myotonic dystrophyにおける赤血球膜脂質構成
馬 渡 志 郎■
研究協力者

安

徳

恭

清書

したメタノールを加え，室温にて1時間以上放置は じ め にMyotonic dystrophyでは種々の赤血球隈の異した．その後は高速液クロマトグラフィー（島津常が報告されているが，必ずしも確立されたものではないように思われる．昨年度3），私共はmyo−

LC−4A，自動試料注入器装備，Zorbax C8カラ

tonic dystrophy患者の赤血球膜では総脂肪酸構
成に異常を認めたことを報告した．今回は赤血球

水，流量1．6ml／分，Ex．365nm，Em．412nm）に

膜リン脂質を4つの分画に分けて脂肪酸を分析し，タ処理装置（島津C−RIA）によりおこなった．溶対照群と比較した．

媒は液タロ用の有機溶媒と水を使用した．有機溶

ム，カラム温度60℃，移動相：アセトニトリル＋より分析した．ピーク面積計算はクロマト用デー

媒にはすべて酸化防止剤butylated hydroxy−
tolueneを入れた（5mg／dl）．

対象および方法
Myotonicdystrophy患者（13人，平均年齢41・7
歳，16−60歳），健康対照群（15人，平均年齢42・9

結果歳，21−60歳）を対象とし，同時刻ごろヘパリン

赤血球膜のPEの脂肪酸構成ではmyotonic

採血し，血柴分艶後，buffycoatを除去し，赤血球は0．85％生食水で3回洗浄し，10mMTris−HCl

dystrophyでは対照群にくらベ16：0（p＜0・005）
が多く，18：0（p＜0．005）が少なかった（表（pH7．4）で溶血後，同液で4回膜を洗い，白色の

1）．PCの脂肪酸構成では18：1（p＜0．01）が多赤血球膜を得た．赤血球膜は分析まで−80℃に保く，18：0（p＜0．05）が少なかった（表2）．PSとSMの月旨肪酸構成には対照群と有意の差を認存した．
赤血球膜からFoIchらの方法により脂質を抽一めなかった（表3，4）．

出し，クロロホルム層の月旨質を分析した．薄層ク

考

ロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール：

案

28％アンモニア＝70：30：5，Merck Kieselge1

私共は昨年赤血球膜の稔グリセロリン脂質の月旨60）によりホスファチデルユタノーラミン

肪酸構成を分析しmyotonic dystrophyでは肺結（PE），ホスフアナデルコリン（PC），ホスファチ

核患者を対照群とした場合，16：0と18：1の増ヂルセリン（PS），スフィンゴミエリン（SM）を

加と18：0の減少を認め，対照群を変えた分析で分画分取した．PE，PC，PSは5％KOH・50％メ

も16：0の増加と18：0の減少を認めた3）．今回

タノール溶液に溶解し，98℃．20分でけん化した．

の分析ではPEで16：0の増加と18：0の減少，

12N塩酸添加後クロロホルム塩酸・メタノール液

pcでは18：1の増加と18：0の減少を認め，昨で98℃，5時間加水分解後クロロホルムで抽出し．

年の結果と矛盾はなかった．

さらにアルカリ加水分解後，クロロホルムで脂肪酸を抽出した．クロロホルムを窒素ガスで乾国後，

Myotonic dystrophyの赤血球院脂質分析は
Ruitenbeekの報告l）では赤血球膜の中性月旨肪の螢光ラベル剤9一アンスリルヂアゾメタンを溶解

16：1の低下を認めているが，症例数が4例と少＊国立赤坂療糞所神経内科

ない．McLaughlinら2）の報告では総脂肪酸構成ー149−

表l Fattyacidconipositionofphosphatidylethanolamine
Myotonicdystrophy（n＝13）

control（n：15）significance★

62
2

18．79＋1．02（pく0．005）

18．31＋1．29

17．38＋1．39（pく0．1）

5．46＋0．66

6．28＋0．61（pく0．005）

08
120．28＋1．13
18
1

9．68＋1．14

06
119．10＋2．04

9．68＋0．67

28
115．85＋1．68

18．91＋2．00

40
2

14．90＋2．40

Values；area PerCentage（means土SD）．Minorpeakswereomittedfr。mthis table．
＊t−teSt

表2

Fattyacidcompositionofphosphatidylcholine

Myotonicdystrophy（n：12）

control（n＝15）significance・

6

2

2

4．42＋1．25
4

2

0

3．99＋1．33

41．15＋2．43（pく0．5）18．77＋1．49

17．01＋1．59（pく0．01）

10．33＋1．51

11．86＋1．90（pく0．05）01

841．78＋2．68
1

1

8

18．31＋2．11

0

1

6

4．66＋0．90

17．05＋2．04

2

1

8

4．56＋0．53■

Values；areaPerCentage（means土SD）．Minorpeakswe，e。mittedf，。mthis table．

表3

Fattyacidcompositionofphosphatidylserine
Myotonic

dystrophy（n：10）

control（n＝12）

62
2

6．97＋1．07

5．61＋1．．11

4．96＋1．06

43．28＋7．72

46．02＋6．00

S
n
S
n
S
n

0

8
1

7．58＋1．78
18
1

4．89＋1．15

06
115．64＋2．75

5．49＋1．74

28
1

13．23＋3．38

15．80＋2．89

4

02

14．61＋4．17

Values；areaPerCentage（means土SD）．Minorpeakswereomitted
from this table．
ns；Differencewas statisticallynot significant．
−150−

表4

Fatty acid composition ofsphingomyelin
Myotonic dystrophy（n：10）

control（n：12）

0

6
1

0

0
2

0

2
2

1

2
4
4
2
2
2

0

3．62

38．64＋3．45

ns

11．42＋

2．56

11．28＋1．39

ns

2．03＋

0．22

1．92＋0．21

0．81＋

0．35

0．79＋0．18

5．60＋

0．62

6．01＋0．88

4．45

23．64＋2．89＋1．55

12．81＋2．96

1

8
1

37．20＋

23．86＋
0

13．26

Values；area PerCentage（means土SD）．Minorpeaks were omitted
from this table．
ns；Difference was statistically not significant．

表5

Erythrocytelipidsinmyotonic dystrophy

Phospholipid／Cholesterolns

Phospholipid

nsclasses

l

ハ

P

L

P
S
M

S

nS▲−S
nnS

−▼← nS▲→ nS nS nS

E

P

nS

★
︶

鋸▲l nS

1

total

鋸■▼．1

1

total

む▲■▲1

fatty acid composition

ns；Difference was statistically not significant．

†；increased I；decreased＊compared to tubercu10uS COntrOl

McLaughlinらも脂肪酸分析にはガスクロマトグ

私共のmyotonic dystrophyの赤血球膜月旨質の分析ではコレステロールとリン脂質の比，各リンで対照群と差を認めていない．Ruitenbeekもラフィーを用いており．私共の方法とは異なる．

脂質の分画の構成比には異常を認めず，リン月旨質

ガスクロマトグラフィーの場合は脂肪酸のメチル

分画中のPEとPCの主要な脂肪酸である16：0，

エステル化が必要であり，私共の経験からすべて

18：1，18：0に相対的異常を認めた（表5）．この脂肪酸がエステル化されてはいないように思わ

れらの脂肪酸構成の異常とmyotonic dystrophy

れ，蛍光試薬9−アンスリルヂアゾメタンのラベルにおける赤血球膜の種々の異常の報告との関連性にくらべると脂肪酸の回収が不完全であるようにについては当面明らかでない．

思われる．
−151−

結

語

With

Myotonic dystrophyの赤血球膜の4つのリン脂質（PE，PC，PS，SM）一の脂肪酸構成を高速液
クロマトグラフィーを用い分析した．
PEでは16：0が多く，Duchenne and congenital myotonic

musculardystrophy．Clin．Chim．Acta，89：99，
1978．

2）McLaughlin，J．，etal：LipidCompositionof

18：0が少なかった．

Erythrocytes：Findingsin

Duchenne′s

Mus・

PCでは18：1が多く，18：0が少なかった．PS，

CularDystrophyandMyotonicAtrophy．Arch．

SMの月旨肪酸構成には対照群とくらべ有意の差はNeuro1．，36：351，1979．

認めなかった．

3）馬渡志郎，安徳恭演：筋緊張性ジストロフィー症における赤血球膜および血梁の脂質分析．厚文

献

生省「筋ジストロフィー症の発症機序に関する

1）Ruitenbeek，W．＝Th占fattyacidcompositionOfvariouslipid

fractions

isolatedfromerythrocytes and blood plasma of patients−152−

臨床的研究」（三好姓）昭和56年度研究報告書，
1982，p．171．

27）DuchennC型筋ジストロフィーの筋小胞体機能：
スキンドファイバー法による再検討
高 木 昭 夫書

研究協力者

宮

沢

寛■

安

部

和

子■

1967年Duchenne型筋ジストロフィー（DMD）

を摂取させた．次いで0．1mMEGTAを含む弛緩

からの分離筋小胞体においてカルシウム（Ca）摂溶液中でカフェイン拘縞を発生させ，その頂点張取機能の低下が指摘された1）．その後ヒト筋ジス力（Pcaf）を測定した．またその筋線経の発生しトロフィーやその動物モデルにおいて類似の報告

うる貴大張力（Po）を3×10￣5MCaイオンを含が相次いでいる．これらの結果を総合すると，Ca

む溶液中で測定した．Pcaf／Poの比をCa摂取指

摂取能の低下，Ca，Mg−ATPase活性の変化，Ca−ATPase蛋白量の減少，あるいは膜燐月旨質組成数とした（図1）．

の変化などである2）．しかしこれらの知見の

Sは○

DMD病因上の意義に関してはまだ不明な点が多○t C■Il●ln●Contl■CtU一〇

V書・

Amount oI C81n SR

い．DMDの骨格筋よりの分社小胞体の純度の問
題，筋線維タイプ分布の相違などが考慮されるべきであろう．また従来同年齢対照との比較がなさ−71xlO M C■

れていない点にも留意すべきであろう．今回我々はDMDの生検筋から単一筋線維スキンドファイ

」

45m0

20●●￠

バーを作製し，筋小胞体機能につき再検討を行った．
2xld−MIC■

方法

9名のDMD息児（平均年齢4．9歳）および13名の神経筋症状を呈した小児（平均年齢5．0歳）を対ー▼
3xlO M C■照とした．なお結果の一部は成人対照とも比較した．DMD以外の疾病の内訳は筋低緊張，非特異的先天性ミオバナー，脊柱側野，尖足，神経原性筋
萎縮，悪性高熱の同胞である．主として上腕二頭

図1筋より筋肉を採取した．資料の処理，スキンドフ
ァイバー実験，筋線維タイプの識別は既報の通り
である3）．筋小胞体のCa摂取は以下の3つのパラメーターを使用して検討した．
Ca摂取指数

スキンドファイバーを各種のCa

浪度の溶液中に保持して，筋小胞体にCaイオン＊国立武蔵療養所神経センター−153−

3種のCa濃度（10−7，2×10−7，3×10￣7M）の溶液中でスキンドファイバーの筋小胞体にCa摂取させた後で，カフェイン拘縞を発生させた．外液のCa濃度が高くなるにしたがい，
Ca摂取量は増え，したがってカフェイン拘縞の大きさも増加する．カフェイン拘絹の長大張力をその筋線経の発生する最大張力（Po）と比較してCa摂取指数を計算した．Poは右下段のように3×10−5Mにより直接収縮系を活性化して発生する張力である．

CaIf●ln●

EGTA溶液中でのカフェイン拘縮

CorItrACtur●Ill EQTA

筋小胞体に一定条件下でCa負荷後に，各種のEGTA法度下でカフェイン拘絹を発生させた（図2）．EGTA濃度の増加にともない，発生する張力は漸減し遂に消失する．カフェイン拘縮消失直前のEGTA渡度を筋小胞体中Ca量の指標とした．比較する両群
0．41廿日で筋直径の分布が等しいならば，このEGTA浪
度は小胞体Ca量を反映すると推定される．筋直径平均は38±1FEm（DMD）および28±1JLm（小児対照）であった．
カフェイン間借筋小胞体にpCa6．5の溶液中でCa摂取を行なわせた後で，筋拘縞を誘発するカフ

0．8mMェイン閥濃度を決定した．モデル実験として筋小

図2†胞体に負荷するCa量とカフェイン間借の関係を

40C■I t7叫m）

図3に呈示した．このカフェイン間値は小胞体中

スキンドファイバーに一定条件下でCaイオンを負荷した後で，各種のEGTA浪度の弛捜溶
液中でカフェイン拘縞を誘発した．EGTA濃度が増加するにしたがって，発生する拘緬の大きさは減少し次いで消失する．明瞭な張力発生が観察される最大のEGTA浪度（図では0，4mM）を決定した．

のCa量あるいは小胞体膜の性質を反映するものである（未発表）．

Thr●●h01dI01C■ll●】n●ContltetUr●▼●・

Amoullt Ot C■ln＄R−73xlO M C■

J一拍
l．●

0．■

■○

t■H t●tt●l■●I一丁

2xlOll C■

0．0

1．0

2．4￣￣￣￣￣「i．04す￣ri■G●‖罰盲▲I一T

IxlO M C且．

0．さ

1．0

2．さ

i二〇

￣fこ■

10

1●
t■■￠…●l■●I区Ⅰ3筋小胞体にCaイオンを負荷後，拘縞を誘発するカフェイン閤浪度を測定した．筋小胞体中Ca量は負荷する際の溶液中のCa浪度（図では3×10−7，2×10−7，10−7Mの3種）で調整した．3×10−7Mの場合には2．5mMカフ
ェインで拘緬が発生した．10−7Mの場合には15mM以下
では拘縞は発生しない．カフェイン開催は1つには筋小胞体中のCa宜を反映している．また筋小胞体膜の性質などの因子によっても影響をうける．
−154−

結

果

mM（小児対照）であった．DMDの間借は有意に

1）DMDおよび対照のタイ701線経において，低下していた（p＝0．005）（表1）．このような間Ca摂取はpCa7．5で開始し，pCa6で最大となった（図4）．タイプ2線経ではCa摂取はpCa7．0で借の低下は悪性高熱，無症候性高CPK血症

開始し，pCa6で最大となった．いずれの筋線維
タイ7Pにおいても，DMDと小児対照例の間でCa（asymptOmatichyperCPKemia）や悪性症候群の症例で観察された．

摂取指数に有意差はみとめられなかった．しかし成人対照と比較する時，Ca摂取指数は有意に低値であった．
pCa6．5の溶液中で，Ca摂取速度をCa摂取指表1

拘縞を誘発したカフェイン閉濃度（mM）を比較した．DMDでは小児対照より有意に低下していた．しかし悪性高熱，無症候性高CPK血症，悪性症候群においても同値の低下があった．

数の時間経過から比較した．DMDと小児対照のMean

S．D．（N）◆

間に有意差はみとめなかった．

Adult⊂0ntrOIs

12．0

4．4

2）

Child controIs

10．4

5．4

（49）

Malignant hyperthermia

5．8

3．5

（27）★

Duchenne dystrophy

6．9

4．3

（29）…

Asymptomatjc hyperCPKemja

7．7

3．2

Heuroleptjc malj卯ant

9．2

4．9

カフェイン拘縞が観察される外液のEGTA

最大濃度は，0．51±0．33mM（DMD，n＝22，平均±
標準偏差）および0．59±0．28mM（小児対照，n＝22）である．両者間に有意差はみとめられない（図

（42）

（47）t
（39）●★●

Syndrome5）．

3）拘縞を発生させるカフェイン同濃度は6．9±4．3mM（DMD，平均±標準偏差）および10．4±5．4

・Number of skinned fibers analyZedtPless than O．001，…P＝0．005，★★★P＝0．02

Type2Flb●r8

Typ●1Flb●r●Ca UPtak●Ca uPtlIk●′′′ヽ、、ad州
r

、、、

PC■

8

7

図4

8

5

pC■

8

7

0

DMDのタイ701およびタイプ2線経におけるCa摂取指数を対照と比較した．縦軸：Ca摂取指数，横軸：Ca負荷を行った溶液のCa浪度（pCa＝−log〔Ca2＋〕）．各値
は平均と標準偏差を呈示した．N＝10（DMD），6（小児対照），10（成人対照）．各種のpCaにおいて，DMDと小児対照の問には有意差はない．成人対照との比較では，小児のCa摂取指数は有意に低値である．

−155−

5

Caffelne Contracture
EGTA

In EGTA

●

tyPe1

0

tyP●2

㊥lntormodLate▲xbundle

l
●

0

0

貞

t

暮
∫

よ

（lO P

0．4

0

■

0

0

0

0

■

1

●

●

考

◎

〇一｛＞−1

0

0

0

0

DMD
図5

O G
よ

0

CON

図2にしたがって測定したEGTA浪皮をDMDと小児対照で比較した．両群間に有意差はみとめられない．

を示した．この事実はDMDの筋小胞体にはある案

DMDの筋小胞体機能をスキンドファイバー法

程度以上のCa摂取能が保持されていることを示を応用して分析した．この場合最終的にはCaイしている．また筋小胞体の性質としてCa−in・

オンに対する収縮系の反応（張力発生）を利用しduced Ca−releaseの機序が作勤しやすい可能性ている．したがって比較する両群において（1）Caを示唆している．DMD症例に時として悪性高熱

浪度と張力発生の相互関係が同一である．（2）カフ類似の麻酔副作用が発生する事実と矛盾しない結ェインは収縮蛋白にも作用して張力発生を修飾す果である．このカフェイン間値の低下は，悪性高るが，この作用が両者で同一である．などの前提

熱の回復者，aSymptOmatic hyperCPKemia．そが必要である．我々は（2）に関しては問題のないこの他で観察されており非特異的な現象である．カ

とを確認した．（1）に関してDMDはpCa6より低濃度の範囲にて若干感受性が増加している可能性

フェイン間借低下で表現されるカフェイン感受性
冗進は筋細胞変性あるいは再生に伴って出現するがあり，厳密にはまだ問題が残っている．

現象と推定している．

今回の検討において，Ca摂取指数やEGTA濃筋小胞体機能に関してDMDに特異的異常は証度を指標とした場合のいずれにおいても，DMD明されなかった．遺伝病としてのDMDにおいて，と小児対照との間に有意差をみいだせなかった．

異常遺伝子の発現が筋小胞体に関係する可能性は

この結果は従来の報告と相違している一）．この理少ないと推定される．今回とり上げなかったが，由として，同年齢を対照として使用している．筋筋小月包体のもう1つの重要な機能はCa遊敵であ線維タイプ別で比較していることなどが考えられる．しかしCa遊敵の生理的機序に関する知見はる．しかし単一筋線維法では比較的正常なものだ

まだ不充分である．DMDの骨格筋におけるCa遊

けをサンプリングしているとの議論もあろう．

敵の問題は今後に残されている．

拘縞を誘発するカフェイン関値はDMDで低値
ー156−

結

論

thesarcoplasmiCreticulum．In

スキンドファイバー法を応用してDMDの筋小Exploratory

COnCeptSin musculardystrophy and related

胞体機能を再検討した．Ca摂取能はCa摂取指数

disordersやカフェイン拘縮の際の外液EGTA濃度を指標

Medica，Amsterdam，1967，pp．321−326．

として評価した．DMDと小児対照の問に有意差2）高木昭夫，石浦章一：筋ジストロフィー．膜，6：はなかった．小児のCa摂取指数は成人対照より．，（ed．byA．T．Milhorat），Exerpta

487−493，1981．

低値であった．DMDではカフェイン感受性が冗

3）Takagi，A．＆Nonaka，Ⅰ．：Duchenne mus−進していた．しかしこの現象は悪性高熱や高CPK

Culardystrophy：unusualactivationofsingle

血症の症例でも観察され非特異的と推定された．

fibersinvitro．Muscle Ner・Ve，4：10−15，

このようにDMDの筋小胞体に特異的異常はみと

1981．

められなかった．

4）Wood，D．S．，Sorenson，M．M．，Eastwood，A．
B．，et al：Duchenne dystrophy：Abnormal

文献

generationoftensionandCa＋＋regulationin

1）Sugita，H．，Okimoto，K．＆ Ebashi，S．：
Biochemicalalterations in progressive

musculardystrophywithspecialreferenceto

ー157−

Singleskinnedfibers．Neurology（Minneap．），
28：447−457，1978．

28）筋ジストロフィー症及びその他の神経筋疾患
におけるM波の研究
栗 原 照 幸暮
研究協力者

目

田

中

政

幸●

年

森

啓

隆＝

山

中

信

和書

井

上

鼓次郎＝

が開発して行った3）．

的

末梢神経に閥上刺激をして表面電極で導出される誘発筋電位（M波）は，多数の神経筋単位放電の合成波であり，M汲発現には下位運動ニューロン，運動神経線推，神経筋接合部，筋肉の各要素が関与している1），2）．
昨年度はDuchenne型DMPについてM波を検討したが，今回は更に他のDMP及び，神経筋接合部，軸索，馳鞘に障害を来す種々の神経筋疾患についてM波の記づ録を行い，これら￣の疾患における診断，経過観察，及び7台療効果判定についてM
波の有用性を検討したので報告する．

皮膚温はサーミスターで計測した．M波を導出した筋肉は上肢ではdeltoid，thenar muscle，下肢ではtibialis anterior muscle，eXt．digitorum
breviS（EDB）muscleであるが，MGではこの他
orbicularis oculimuscleからもM波を記録した．
結果

正常者16名のM波をdeltoid，thenar，tib．
anterior，EDB，Orbicularis oculimuscleより導出すると，M波の振幅（横軸）と面積（縦軸）はよく相関し，各々の筋肉で両者の関係は方程式で示され，筋肉が大きいほど図1の様に勾配も大である傾向を示した．各々の筋肉のM波の振幅と面

対象と方法
正常者16名（平均年齢27．4歳），Duchenne型
DMP12例（平均年齢11．9歳），Becker型DMP2
例（5歳と16歳），肢帯型DMP2例（13歳と18積の正常値を国中四角形で示す．

歳），K−W病2例（9歳と19歳），重症筋無力症（MG）6例（平均年齢47．7歳），水俣病認定患者
6例（平均年齢52．8歳），糖尿病患者32例（平均年
齢52．8歳）の合計78例を対象とした．
M波の記録はMedelecMS6−1型筋電計と表面電極E／RE−K2個を用いて行い，電気刺激は0．2msの持続で，閏上となる電圧を用いて行った．M波はデーターレコーダーに記録した後，三栄7TO8型シグナルプロセッサーを用いてM波

CPK，皮膚温等を示す．Duchenne型DMPでは下を5回平均加算した後，M波の潜時，振幅，持続，面積の4項目をコンピューターにより計測し
Ⅹ−Y70ロッタ一に記載するプログラムを著者ら下するためと考えられた．

＊宮崎医科大学第三内科＊＊匡l立療養所宮崎兼病院

表1はDuchenne型12例とBecker型DMP2
例，LG型2例，K−W病2例の年齢，有病期間，
腿の皮膚温が著明に低い例が12例中7例あり，平均でも正常値33．5℃に比してDuchenne型では28．0℃と約5℃も低い．これに対してBecker型
では32．2℃と正常値より1℃低いのみで，L−G型
では有病期間が15．4年と長い1例で26．4℃と低く，
K−W病ではやはり有病期間が17．4年と長い1症
例で26．0℃と低下を認めた．これは病気の進行と共に筋力低下，筋萎縮が進んで筋肉の熟産生が低
M波の面積を有病期間を横軸にとって図2に示すと，Duchenne型で1ま遠位筋の短指伸筋では有病期間との負の相関はみられないが，前脛骨筋や上肢近位筋の三角筋で1ま有病期間が長くなると−158−

表l M波の記録を行ったDMP及びK−W病の症例（合計18名）
各症例の性，年齢，有病期間，血清CPK，M披記銀時の皮膚温を示す．NR：noresponseの略
Duch●nn●聖鳥ジストロフィー虎（12桝）性11d

年令 雷｛年数 足『節拘轟 歩行 CPK（IU′Ilり
18義16．0年

2

1−

3
■

（＋）

不可

○○さ

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度 ′ ▲
HCV（…）雷（●C） T■（●0
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17

18．6

（＋）

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1006

37．1

20．0

M

17

14．0

32．6

23．8

8．0

不可
不可

■0．1

14

（＋）
（＋）

1100

M

233■

60．2

32．0

27．2

6

H

13

11．6

（＋）

不可

235さ

80．6

34．3

31．4

8

M

12

10．0

40．4

20．6

M

不可
不可

10●1

7

（＋）
（＋）

1070

62．7

8

M

11

9．0

11

3．0
7

日

M

7

12

1−

8

20．3
20＿0

2328

∞．2

3〇・8

20．2

（−）
可
3．0
（−）
可

3672
3872

63．1
50．6

33．1
32．0

32．■
30．0

2．0

（−）

可

17603

61．2

33．8

31．2

2．0

（−）

可

63．2

き3．1

31．0

8．0

9 H lO
10 M

30．1

2■．3

（＋）

不可

平均
11・9y 8・4
±S．D． ±4．1 ±6．Oy

0127

37681∪／h160．21巾 さ0．2●C 20．0・C
±4373
土0．3
±1．8 ±3．3

正…

1∞●l誓琵ミγ芸写

芸ミ

Becker．し−G．K−W病のM濾性 年令 有病年数

抄島名

C P K

皮｛■（
●
C）

lIU／
mlI

貫 上肢 下肢 【08 m ．
¶b．
a爪．
M ．〇
〇
m 細れ くわ．
叫 IM s m

H 濃の古儀 （
Mは・
mV ）

1．
日 10▼

10．
3▼

8鵬 引
■

15

】
1．
5 か．
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2．
2

の．
1

11．
8

，
1．
0

〟．
，

2．
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〜

1．
3

8鵬 打

1！
苫

】
）
．
8 】
2．
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2

．
2

的．
1

119．
†

1，
．
0

）
．F

ll

9．
4

LlmトGlr（
伽

Iu

34．
0 割．
0 刀．
1

符．
】

5！
．
2

乱 1

的．
さ

1．
M

lさ

15．
1

Llm b・
Glrdl
l

116

32．
8 四．
1 26．
1

の．
5

《Ll

1，
．
‡

仇．
1

，
．
M

19

17．
1

K ・
W

1！
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7 割．
6 払．
0

NR

Nl
l

NR

19．
3

l．F

9

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1

K −
W

8a） 封．
0 】
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．
5 割．
1

lI．
）

−

92．
0 ° ．
＿ 鵬．
I

正鷺儀

封．
0 32．
丁乃．
！ 4！
．
1
土
0．
7土
0．
門土
0． 士
訂．
1

共にM波の面積が低下し，Becker，L−G，K−W
病ではDuchenne型DMPと正常値の間の値をとりながら有病期間が長くなると低下して来るという経過をとっている．これは進行する疾患においては当然のことであり，M波の面積は検査した時点において残存するNMUの総和的指標となる．
MG6例，Osserman TypeIIA，II。型の患者
で胸腺摘除術をした前後で抗Achreceptor抗体，
徒手筋力テスト，M波の振幅，面積を表2に示

鯵．
8
土
訂．
0

2糾．
9
土
78．
！

恥．
）
重
々．
丁

す．胸腺摘除術によって臨床症状が改善した症例
2，4，5ではM波の振幅及び面積が平行して改善しており，M波の分析は治療効果をよく示す客観的指標として有用である．
胸腺摘除後も十分臨床症状が改善しなかった！牲
治例の3症例にはTotal bodyirradiation（TBI）一），捻量100Radを5週間に渡って行うと臨床症状としては，噴下困難の改善，鼻声の消失．
首重り現象の改善，呼吸困難の改善，肺活量の増ー159−Area and AmpLItude of N−WaYe
正常のAmpljtudeとAreaの関係
1．D eltoid

AI08d M・VVaVO
m8・mV

m uscleY・−12．
朋59 ＋8．
8539 X

2．Tib．ant．m u scle

Y ・11．
4289 ＋6．
0593 X

3．Thenarm u scIe

Y・こ9．
的83 1 4．
8293 X

4 ．E D B

m uscleY 暮 4．
7407 ＋3．
089 X

5 ．O rbicu l訂is ∝U li

Y 暮 1．
％58 ＋2．
7948 X

Ddtoid102030

Orb．0仇浦muscle

図1

40

mV

Amがitl鵬

正常者16名のM波の振幅（横軸）とM波の面積（縦軸）三角筋，母指球筋，前月至骨筋，短指伸筋，且艮輪筋よりM波を導出した．M波の振幅と面積はよく相関し，両者の関係は方程式で示される．各筋肉のM波の振幅と面積の正常値を四角形で示す．

加，臥床状態から独歩可能となる等，3症例とも退院できるようになったが，本療法前後でのM波の面積はやはり臨床症状の改善と平行して，眼輪筋，三角筋，母指球筋，前脛骨筋，短指伸筋の5筋で改善し，比較的新しい治療法の効果を判定する際には，客観的指標として有用であった．

末梢神経障害では，主に軸索変性を主体とする
ニューロバナーとして水俣病認定患者のM波をMCVと共に検索した．表3の様に左肺骨神経のMCVは6例中2例で夫々no responseと，41・1
m／Sで異常であるのに比し，M波の振幅及び面積

一160一

は6例中5例で異常を認め，M波の異常を認めな

図2

DMPとK−W病におけるM波の面積と有病期間
左から短指伸筋，前脛骨筋，三角筋よりM波を導出した結果を正常値と共にグラフに示した．

−161−

表2

胸腺摘除術により臨床症状の改善をみた症例2，4，5では，下線のように徒手筋力テストの改善と平行してM波も改善している．抗Achreceptor 抗体は必ずしも臨床症状の改善と平行しないが．M波は平行し．客観的指標として有用である．

Ag e
1

S ex

3 1y

O sse rm an
C las sifica tion

抗 A c h R ec ep to r抗体 （正 常＜〇・
6 ） M an u aJM us cle T e s t M 波の 変 化（術 前l00 鴨）術前2 週

術後 4 週D e lto ld M ．
D elto ld M ．
術 前 1 ヶ月 術 後 2 ヶ月 a m p litude
a rea

F

Ⅱ8

1 2 ．6 →

4 ．6

−2 →

−3

41 ％

37％

6 ．4

） 7 ．3−2 →−1

1 25 ％

13 3 ％

2

69

M

Ⅱ8

3

70

F

m

1 1 ．6 →

4 ．3

−1 →

−3

38 ％

28 ％

4

27

F

Ⅱ8

6 ．9

事6．
8

−1 →

0

131 ％

13 3 ％

5

51

F

Ⅱ8

8 ．6

）2．
0

−1 →

○

4 60 ％

4 67 ％

6

38

F

ⅡA

39 ．
6

2 6 ．6

−1 →

−1．
6

6 2．
6％

9 1．
2％

表3

→

軸索変性を主体とするニューロバナーではMCVは正常でもM波の振幅や面積の低下がみられることがある．水俣病認定患者6症例では，下線のようにMCVの遅延は2例，M波の異常は5例に認めた．症例6はMCVもM波も正常で，臨床的にも末梢神経障害は認めなかった．
検査項 目

水 俣病
認定 患 者

左肺骨神経
M C V
（
正常：
4 3 −5 7 m ／S）

下 腿の皮 膚温E D B よ り記 録 し た M 波 の 分 析

振
幅
（
正 常：
33 ．
先 0．
6℃ ）
正常平均 値の％面積
正 常平均値 の％

1

73 才

女

44．
3 m／
S

32 ．
5 0C

8．
的

15 ．
0％

2

69 才

女

n O re SP O n S e

刃．
3

n O re SP O n S e

n O reS P O n S e

3

異 才

男

49．
1

31 ．
4

68 ．
6％

70 ．
0％

4

29 才

男

朝．
4

31 ．
5

11．
4％

16 ．
3％

5

49 才

男

41．
1

32 ．
0

17 ．
9％

18．
8％

6

63 才

男

43．
5

31．
2

14 1 ．
0％

16 1 ．
6％

平 均 52．
8士16．
9才

劇．
5 士2 ．
6 m ／S

31．
5 士0 ．
7℃（5 例 の 平 均 ）4 9．
5 士50 ．
7％56 ．
3 士56 ．
5％（5 例 の 平 均 ）（5 例 の 平 均 ）（下線は異常に低値の場合）

かった1例は臨床的にも末梢神経障害を示す所見

が末梢では起こっていることが形態学的にも示さはなく，中枢神経系の異常を示す症例であった．
糖尿病患者32名では，俳骨神経MCVが正常範
囲でも，M波の面積が低下している症例が32名中8名認められた．糖尿病性ニューロバナーでは節性脱髄が主体と言われているのでMCVがよい指れている5）ことから，M波の面積低下は電気生理学的にも本疾患に軸索変性が伴っている可能性を示唆する所見と考えられる6〉・7）．

標となるはずであるが，近年本疾患でも軸索変性
ー162−

考

察

M波発現に関係する下位運動ニューロンから筋肉に至る一連の経路の中で，今回は末梢神経，有用である．

神経筋接合部，筋肉の各疾患について検討したと
ころM波分析が有用な場合は以下の通りである．

文

￣

献

1）DMP（Duchenne，Becker，L−G型），及び1）満留昭久：小児末梢運動神経伝導速度および誘K−W病では，経過観察の客観的指標としてM波の発筋電位の発達に関する研究．福岡医誌，68：

分析は有用であり，検査した時点において残存す

449−458，1977．

るNMUの総和的指標を複合筋電位という形で

2）栗原照幸，鶴田和仁，荒木淑郎：末梢神経伝導表現する．治療法が開発されれば効果判定の指標

速度とM波の検討：家族性アミロイドポリニ

として用い得る．

ューロバナーと糖尿病性ニューロノヾチーへの適2）重症筋無力症

応．臨床神経，20：241−247，1980．

胸腺摘除術や全身放射線照射療法（100Rad／5

3）栗原照幸，田中政幸：筋ジストロフィー症にお退）等の治療効果判定に客観的指標として役立つ．

ける誘発筋電位（M汲）の研究．厚生省「神経3） ニューロパテー

疾患研究委託費」筋ジストロフィー壷の発症機

臨床的にはニューロパテーがあると考えられる症例でも，末梢神経伝導速度は正常のこともあり，序に関する臨床的研究（三好姓），昭和56年度研究報告書，1982，pp．129−134．

特に軸索変性を主体とするニューロパテーではこ4）Engel，W．K．，Lichter，A．S．，etal：Splenicandの傾向がある．M波の検索はニューロパテーの補

total bodyirradiation treatment of myas−

助診断法として，特にaxonal neuropathyでは，

thenia graviS．Ann．N．Y．Acad．Sci．．377：

MCVより鋭敏な指標となる．

744−754，1981．

筋疾患の主症状は筋力低下と筋萎縮であるが，

5）八木橋操六：糖尿病患者および糖尿病ラットの特に筋力低下の検査法としては徒手筋力テスト，末梢神経病変−病理組織学的変化およびその握力計等があるが，その他には数量的に表現する

関連性について−．糖尿病性神経障害（後藤

手段が乏しい．M波はNCVのように特異的な指

由夫，堀内光・嗣），文光堂，東京，1979，p．

標ではなく，運動ニューロン，末梢神経，神経筋

51．

接合部，筋肉のどこかに障害があればM波の振幅

6）Hansen，S．＆Ballantyne，J．P．：Axonal

や面積の低下が起こり得るが，又反面臨床診断とdysfunctioninthe neuropathy of diabetes

共にM波を応用すれば，ニューロパテー以外にも

mellitus：aquantitativeelectrophysiological

種々の神経筋疾患に応用することが可能である．

study．J．Neurol．Neurosurg．Psychiatry，40：

そしてM波の振幅や面積が表現するものは検査

555−564，1977．

した時点において疾病により障害されながらも，

7）Kuribayashi，T．，Kurihara，T．，Tanaka，M．，

運動機能として残存している能力を複合筋電位とetal：Diabeticneuropathyandelectrophysi0−

いう形で数量的に示すことである．

10giCalstudies：Evokedmuscleactionpoten−
tials，nerVeCOnduction，andshortlatencySEP．

結

語

In

正常者，筋ジストロフィー症及びその他の神経

ProceedingsoftheIntemationalSympo・

Sium

on

Diabetic

Neuropathy

筋疾患合計78例を対象にM波の検討を行った．M

Treatment

波は末梢神経障害におけるNCVの様に特異的なA．＆検査法ではないが，臨床所見及び診断と合わせてAmsterdam，1981，pp．120−124．

M波を記録すれば，筋疾患及び神経筋接合部，軸索，髄革削こ障害を来す種々の神経筋疾患の経過観察及び治療効果判定のために，定量的指標として
−163−

and

its

，（editedbyGoto，．YりHoriuchi，Kogure，K．），Ekcerpta Medica，29）A23187−induced myopathyにおけるカルモデュリン・
プロスタグランジンの役割に関する生理学的検討
ヽ V J t

●

ムロ

正

守

高

断﹂

清 誠

●

井 村

駒奥

■

薫郎

四

氏 原

●

糸 松

●

俊 一 子

●

田

永 俊 厚

戸

目

田

新坂安

研究協力者

除去）し，単収縮張力，166Hz反復刺激による強的

筋表面膜異常により細胞内へ流入したCa＋＋に縮張力を記録した．リンケリレ液の構成は，122mM

よって，Ca十十TSenSitive proteases賦括1），ATP

NaCl，4．7mMKCl，15．5mMNaHCO3，1．2mM

depletion2）などを介し招来される筋細胞壊死のMgC12，1．2mMKH2P0．，2．6mMCaC12，11・5

機序3）が，筋ジストロフィー症病因の一つとして提唱されて久しく，カルシウム・イオノフォア

mM glucoseである．A23187は1mg／mlの割合
でエタノールで溶解，リンケリレ液で最終浪度を10A23187はその特徴的な薬理作用4）から，本病実験〟g／mlとした．

モデル検討のための有用な因子として知られてい薬理学的処理（図1）は，Aspirin（5×10．．

る．われわれは，本薬剤でウ処理したラット横隔月莫M），Indomethacin（2．8×10￣6M），Leupeptin筋について，膜特性の変化5），収縮弛緩機構異常6）（3×10−5M）で15分周処理にひき続き，各薬剤そを解析し，ヒト・ジストロフィー筋との異同を論じて来た．近年，アラキドン酸からのプロスタグ

れぞれとA23187（1毎g／ml）との混合液で30分間
処理後，単収縮，強縮張力を記録し，各処理前記

ランジン（PG）E2，E2α産生が骨格筋内でも起り録の張力（100％）からの変化を％で算出した．まうることが明らかにされ7），この間には，細月包内過た同様の方法で，まずLeupeptin（3×10￣SM）で剰Ca＋＋，Calmodulin，phospholipase A2，memb−

15分間処理後，これにPGE2（2．8×10￣6M）を加rane phospholipidsの介在が示唆されている8）．11）

えた液内で30分間処理して，張力曲線を記録し，ことから，本研究では，A23187による筋細胞内機構変化におけるこのPG系の役割の評価，検討を処理前のそれとの変化を％で示した．次に，それ試みた．

ぞれの変化の％を，A23187（10JLg／ml），PGE2（2．8×10−6M）単独で30分間処理した前後の単収
縮，強縮張力の変化の％と対比した．Arachidonic

方法

acid（5×10−6M）単独およびAspirin、（5×10−4

ウイスター系雄ラット（220−280g）から横隔膜筋をとり出し，その切除片（乾燥重量19−28mg）

M）前処置（15分）にひきつづくこれとArachi・
donicacidとの混合液による処理（30分）についをガス負荷（02＋CO2＝95：5）中のリンケリレ液ても同様である．Calmodulininhibitor，Trifluo−（37℃）で濯流しつつ等尺性筋弓長力計にセット（最大単収縮張力が得られる静止時張力にセット），白perazine（50JLM）によるA23187（10JLg／ml）処理変化に対する修飾の定量的評価についても同様

金板電極によるmassive stimulation（0．5msecの観察法を行った．

duration）にて筋直接刺激（DTTubocurarine
Chloride

6JLg／ml添加で筋内神経刺激の可能性

結果

図2に示す通り，A23187単独処理後の単収縮＊金沢大学医学部神経内科
ー164−

（Pt），強縮張力（Po）は，処理前（100％）に比

収縮，強縮張力の著明な低下が，Aspirinの前・添

べてPt，37±9．1％，io，34±8．8％（n＝6）七加処理ゼ有意な阻止を受けることを示している．

著明な低下を示すのに対して，Aspirinによ￣る前

図6では，Calmodulin阻害剤であるTrifluo−

および添加処理（n＝8）後Pt，66±6．6％】（p＜perazine（50JLM）単独およtFA23187との相互作

0．001），Po，65±5．3％（p＜0．001），Indomethacin

用を，単収縮，強縮張力を指標としてみたものでによる前および添加処理（n＝6）後Pt，65±8・6ある．両処置による著明な張力低下がみとめられ％（p＜0．001），Po，57±9・8％（0・001＜p＜た．

0．005），Leupeptinによる前および添加処理（n＝考6）後Pt，78±7．7％（p＜0．001），Po，73±7・7察カルシウム・イオノフォアA23187による外液％（p＜0．001）と有意の差がみられた．PGE2単独
処理（n＝4）後のPt，63±9．4％，Po，52±11・3からのCa＋＋influx4）によってもたらされた筋張％という著明低下も，Leupeptinによる前および力の著明な低下（図2，3）は，細胞内過剰Ca＋＋添加処理（n＝4）を行うと，Pt，85±6．4％による筋細胞崩壊12）・13）を反映するものとして解（0．005＜p＜0．01），Po，85±8・9％（0・001＜p＜

釈される．既報8）のわれわれのA23187を用いた生

0．005）と有意の改善をみとめた．Ⅰnl1ibitorsとし理実験では，強縮力の著明低下に比べ単収縮力低て用いたAspirin，Indomethacin，Leupeptin単独（前処理）では，Pt，Poに有意な変化は見出さな

下は軽度に止まったのに対して，本研究では両弓長かった．図3にA23187単独処理およびAspirin，

薬理学的処理期間中，披検筋はストレンゲージにIndomethacin，Leupeptinそれぞれの前・添加処

掛け経過観察を行ったためtensionが加わったの理後の単収縮，強縮張力の変化の実例を示す．図

が原因の一つとして推定される14）▲．

力とも著明低下を示した．これは，本研究の場合，4ではPGE2単独処理およびこれをLeupeptinでA23187によるこの張力の低下は，lysosomal

前・添加処理した場合の張力の変化の実例を示す．

thiol proteasesのinhibitorであるLeupeptinlS）
で部分的ながら阻止されるとともに，Aspirin，

図5には，Arachidonicacid単独処理による単Ind。methacinなどPGinhibitorsによっても有

1H．．−？

？

甲・．・卑mh

も筋張力の低下を惹起し，これが上述のlyso−
S。mal inhibitorで有意な阻止を受けうることもA23187（10用／鵬）＿

意な阻止を受けた（図2，3）．また，PGE2処理−

明らかにした（図2，4）．これらの事実は，A23187
A印帥血A23187＆a印細く5xlOイ仰による張力低下から推察される筋細胞内過剰
Ca＋＋から筋細胞崩壊に至る機序の中に，PGE2が1ndomothacin A23187＆hdo㈹鵬Cht2・8xlO・i㈹介在することを示唆する．事実，PGprecursor▲であるArachidonic acidにも骨格筋張力低下作用があり，これがPGinhibitorで阻止を受けること・

101叩ePtin

A23187＆kl騨ptht3xlO￣JM）も証明した（図5）．近年，Arachidonic acidからのPGE2，F2α産生が骨格筋内で起こりうるこ

印正2（2月xlO￣さ哺■toupoptin￣

PGE2＆如郎伽侍xlO−ぎ仰図1 薬理学的実験プログラム．

とが明らかにされるとともに7），membranephos−
pholipidsからArachidonicacidを含む脂肪酸の遊離には，Calmodulinを介し，細胞内過剰Ca＋＋によって賦括されたPhospholipase A2が関与するといわれる8）．Phospholipase A216）およびArachidonic acid17）は一方で筋小胞体のCa＋＋
ー165−

50

100％

before treatment
●

●

‡●

●

A23187

X X X

ス

X X

A23187＆aspirin

！●●●

●●●

x x‥象

x

●

A23187＆indomethacin

ズ

●

●

●

●

XKX X

●

￥

●

A23187＆leupeptin

X

●

PGE2
X

X

●【

‡

i

x麒

● ●●
I∝

●

PGE2＆leupeptin

X

●
X

●
X

●
X

●tWjtch Xtetanus
図2

A23187，PGE2単独処理およびこれらとPGinhibitors，
lysosomalinl1ibitorとの組み合せ処理による単収縮（●），強縮張力（×）の低下を，各処理前の張力を100として％で示す．

transportに対して抑制作用があり，細胞内free

でも筋張力を低下せしめ，A23187の添加はこれをCa＋＋濃度はこの機序によって一層高められるこ

一層悪化せしめた．これは，Trifluoperazineの諸
薬理作用のうち，筋小胞体19），ミトコンドリア20）とになる．かくてその合成が促進されたPGE2，
F24はlysosomalenzyme release18）に関与し筋細胞崩壊へ至ることが推察されており，PGE2の筋のCa＋＋−uptake阻止作用，Ca＋＋−Mg十十ATPase

張力低下作用がLeupeptinで部分的ながら阻止

活性阻害作用などで，細胞内free Ca＋＋浪皮を高め，この点でA23187と共通の働きをなす結果とされる事実（図2，4）からも，PGE2の標的が推察される．

lysosomal apparatusにあることが推定されるも近年，除神経筋のPGE2含量の増加とその病態のの，細川包壊死に至る機序の詳細はなお明確ではない．

ストロフィー筋についても，その病因にかかわる

上述したCalmodulinのこの系における役割を，

膜異常・Ca＋＋論の一面が，少なくとも玩川東和実

われわれの生理学的方法で確認するため行った結験によってプロスタグランジン系からも示唆され果は図6に示す通りで，Calmodulininl1ibitorとうることを報告した．なお，Horrobinら22）によっして知られるTrifluoperaZineは，それ単独処理て提唱されているDuchenne dystrophyのPGsとの関連に関する報告21）もあるが，本研究は，ジ−166−

botOrebeIoro A23187＆aspirin

A23187

before A23187＆indomethacin before A23187＆leupeptin

図3

A23187（10JLg／ml）単独処理による単収縮（Pt），強縮張力（Po）の著明な低下が，Aspirin（5×10一一M），Inome−
thacin（2．8×10￣6M），Leupeptill（3×10−5M）による

前・添加処理により，部分的ながら阻止されることを示す（ラット横隔膜筋，37℃）．
beforebefore PGE2＆leupeptin

pGE2

図4 PGE2（2．8×10−6M）単独処理による単収縮（Pt），強縮張力（Po）の低下が，Leupeptin（3×10￣5M）による前・添加処理により部分的ながら阻止されることを示す（ラット横隔膜筋，37℃）．

ー167−

a代er

aftor

心血kac瑚5xlJiM）′．kforebeIoro旭伽ka鵬はilO−＆ASP瑚5xlOIMI

図5 Arachidonicacid30分間処理による単収縮（Pt），強縮張力（Po）の著明な低下（左）は，これにAspirinによる前処理15分間，添加処理30分間を加えることにより部分
・的ながら阻止を受ける（ラット横隔膜筋，37℃）．

beforeTrifruoperazine

A23187＆輌IhOPeraZine

図6 ノラット横隔膜筋の単収縮（Pt），強縮張力（Po）は，Trifluo−
perazine（50JLM）単独処理15分間にて低下し，さらに．
これにA23187（10ノg／ml）を加えて30分間処理すると一層の低下を示した（37℃）．

ー168−

M）

andcardiacmuscle．J．Biol．Chem．，257：1632

theoryは．細胞内過剰freeCa＋十をつくる原因についての仮説であって，われわれがここで述べてきたものとは異なるものである．

−1638，1982．

8）Wong，Y．−K．＆Cheung，W．Y．：Calmodulin
StimulateshumanplateletphospholipaseA2．

結語

Biochem．Biophys．Res．Comm．，90：473−480，

カルシウム・イオノフォアA23187による骨格
筋単収縮，強縮張力の低下は，lysosomal thiol

1979．

9）Lapetina，E．G．＆Cuatrecasas，P．：Rapid

proteasesのinhibitorであるLeupeptin同様，

inactivationofcyclooxygeneseactivityafter

PGinl1ibitorであるAspirin，Indomethacinによstimulation ofintact platelets．Proc．Natl．

って阻止され，PGE2による筋張力低下は，Leu−

Acad．Sci．U．S．A．，76：121−125，1979．−

peptinで阻止された．筋細胞内過剰Ca＋＋から細胞壊死に至る機序に介在するプロスタグランジン

10）Billah，M．MりLapetina，E．G．＆Cuatrecasasの役割につき考察を加えた．

P．：Phospholipase A2and phospholipase C
activities ofplatelets．Differentialsubstratespecificity，C2＋requirement，pHdependence，

文1）Kar，N．C．＆

献

andcellularlocalization．J．Biol．Chem．，255：

Pearson，C．M．：Muscular

dystrophy and activation of proteinases．

drial calcium overload−A general mecha−in11）Kunze H．＆Vogt M．：Significance ofphospholipase A2for prostaglandin forma−

Muscle Nerve，1：308−313，1978．
2）Wrogemann，K．＆Pena，．S．D．J．：Mitochon・nism for cell necrosis10227−10231，1980．

muscle diseases．

tion．Ann．N．Y．Acad．Sci．，180：123−125，
1970．

12）UchinoM，＆ChouS．M．：Effectsofcalcium
ionophore，A231870n murine muscle・Proc・

Lancet，i：672−673，1976．
3）Schanne，F．A．X．，Kane，A．B．，Young，E．E．＆Jap．Acadり56（B）：4807485，1980．

Farber，J．L．：Calcium dependence of toxic

13）Pestronk，A．，Parhad，Ⅰ．M．，Drachman，D．B．＆

celldeath：Afinalcommonpathway．Science，

Price，D．L．：membrane myopathy：Morpho−

206：700−702，1977．

logical similarities to Duchenne muscular4）Grinstein，S．＆Erlij，D．：Actionofinsulinanddystrophy．MuscleNerve，5：209−214・1982・

cell death−Effect ofionophore A23187．J

14）Kameyama，T．＆Etlinger，J．D．：Calcium−
dependentregulationofproteinsymthesisand

Membr．Bio1．，29：313−328．1976．
5）Takamori，M，，Ide，Y．＆Tsujihata，M．：

Pharrnacophysiological study on muscle
treated with calciumionophore A23187．J．

degradationinmuscle．Nature（Lond．），279：
344−346，1979．
15）Libby，P．＆

Goldberg A．L．：Leupeptin，aproteaseinhibitor，decreasesproteindegrada−

Neurol．Sciリ50：89−94，1981．

6）Takamori，M．，Mori，K．，Ide，Y．＆Tsujihata，
M．：Contractile and chemosensitive pro−
perties of muscle treated with calcium

tioninnormalanddiseasedmuscles．Science，
199：534−536，1978．

16）Howard，B．D．：Perodateincreases

theionophore A23187．J．Neurol．Sci．，51：2077

sensitivity of sarcoplasmic reticulum

215，1981．

phospholipase A2．Biochem．Biophys・Res・

7）Rodemann，H．P．＆

Goldberg，A．L．：

tO

Comm．，104：1175−1181，1982．

and F217）Cheak，A．M．：Effect oflong chainunsatu−

influencesratesofproteinturnoverinskeleta1

ratedfattyacidsonthecalciumtransportof

Arachidonic acid，prOStaglandin E2−169−

SarCOplasmic r：eticulum．Biochem．Biophys．

21）Larson，F．L．，Katz，S．＆Roufogalis，B．D．：

Acta．，648：113−119，1981．
18）Nakanishi，M．＆Goto，K．：Ⅰnl1ibitoryeffects
by anti−inflammatory drugS On enZyme
releasefromrabbitpolymorphonuclearleuko−
Cytelysosomes．Biochem．Pharmac．，24：421

19）Chiesi，M．＆Carafoli，E．：Theregulationof
transport

by

fast

skeletalmuscleSarCOplasmic reticulum．Role of calmodulin
and of the

Calmodulin

human

regulationofCa2＋transportin

erythrocytes．Biochem．J．，200：185￣

191，1981．

22）Jaweed，M．M，，Alam，I．，Herbison，G．J．＆
Ditunno，Jr．J．F．：Prostaglandins−424，1975．

Ca十十74，1980．

indener−

vated skeletalmuscle of the rat：Effect of
direct electrical stimulation．Neuroscience，
6：2787−2792，1981．
23）Horrobin，D．F．，Morgan，R．D．，Karmali，R．A．，

53，000−dalton glycoprotein．

Ally，A．Ⅰ．，Manku，M．S．，Karmyn，M．＆Biol．Chem．，257：984−991，1982．
20）Reinl1art，P．H．，Taylor，W．M．＆Bygrave，F．

Cunnane，S．C．：Thymic changeSinmuscular

L，：Trifluoperazine，aninhibitor of calcium

dystrophy and evidences of abnormality

action，antagOnises phenylephrine−induced

related to prostaglandinsynthesisoraction．

metabolic responses and mitochondrialCal・

Ann．N．Y．Acad．Sci．，317：534−547，1979．

Cium fluexesinliver．FEBS Lett．，120：717−170−30）筋病変とミオグロピンの局在−酵素抗体法（PAP法）による観察−

出

研究協力者

植 川
青

は

じ

め

透●

田

和

利＝

上

理●●

田

野

内

洋＝

野

誠H

l），128倍稀釈液で最も鮮明な染色がおこなわれに

これまで，各種神経筋疾患における血中ミオグ
ロビン（Mb）の測定，家兎によるMbの代謝，排たので，以下，この稀釈液でMb染色を施行した．

による筋線維内のMb染色を試み，筋線維内Mb2）組織化学的観察
連続凍結切片について，HE染色，Gomori tri・の局在や筋病変に伴うMbの動態について，HEchrome染色変法，ATPase，NADH−TRを施行

染色，Gomori trichrome染色変法，ATPase，
NADH−TRなどの組織化学的観察と比較検討をし比較検討を加えた．

泄について検討してきた1）2）．今回は，酵素抗体法3）

結

加えた．

果

が漏出Mbの全体的な把握に供するのに対し，酵

1）Mb染色法について
抗ヒトミオグロビン抗体（ヘキスト社製）と素抗体法3）による筋線維内のMb染色による観察

DAKO PAP kitを組み合わせることにより，筋は，筋肉の破壊壊死による高Mb血症の病態を肉

線維内のMb染色が可能となった．この染色の際眼的に観察できるものと考えられる．

の抗Mb血清濃度はback groundの染色性，3−

これまでの放射能活性による血清中Mb測定

方

凍 結 切 片法

l1）染色法について

固定（H202，メタノール）

酵素抗体法としては，DAKO社製のPAP kitとへキスト社製の抗ヒトミオグロビン血清（家兎）l

ブタ正常血清Iを組み合せてMb染色を施行した．
生検筋より凍結切片標本を作製し，過酸化水素
H202水で，組織中の内因性パーオキシターゼを破一次抗体（抗ヒトMb抗体）
l

二次抗体（抗家兎免疫グロブリン抗体）

壊するとともにメタノールで組織周定をおこなった．その後，図1に示す手順によりMb染色を施行した．施行に先がけて，まず，抗ヒトミオグロ
ビン血清（家兎）とDAKO PAP kitとの至連な

lperoxi由Se a鵬ihr9伊adish
peroxidase（PAP）eOmPIexl

基質緩衝液（AEC，H202）

反応条件を得るために，抗ヒトミオグロビン抗体の％倍稀釈液を作製し，それぞれ濃度別の染色性についてチェックをおこなった．その結果（表＊熊本大学保健管理センター＊＊熊本大学医学部第一内科

−171−

l

Mayerへマトキシリン染色
l

包

埋

図1

酵素抗体法によるMb染色の手順

表1

抗Mb抗体濃度と染色性の関係

抗Mb抗体
稀 釈 度

筋原性筋萎縮症の代表的なものとして，進行性
筋ジストロフィー症Duchenne型（5名），肢帯型

baCk ground． AECの
の染色性
発色度

（L−G型）（1名），筋緊張性ジストロフィー症（2CPK5950IU／1，HBD1128U／1，Aldolase61．5U／

く

l

︵

l

︶ ︶ ︶ I

く

l

く

l

1と著明な血清酵素学的な異常が認められた．この例の筋生検像では，筋線経の大小不同，問質の増加に加えて，HE染色に浪染するいわゆるopa−

−

く

6

l

︵
︵

l

︵

l

8
6
▲7 2 5lquefiberも散見され典型的な筋病理所見がみられた．この症例のMb染色では，全般にMbの染︶ ︶ ︶ ︶︵

2l

ハバハバパパパパパ＋＋十十≠≠≠≠≠名）について観察した．8歳Duchenne型では，色性が低下し，連続切片による検討でもMayer
へマトキシリンに濃染する筋線経でのMb染色性の低下がみられた．また，HE染色やGomoriamino9−ethylcarbazole（AEC）の発色度について検討した結果，128倍稀釈で最も鮮明に染色されtrichrome染色変法に浪染するopaquefiberでのた．筋肉内の内因性パーオキシターゼ活性の非活や筋緊張性ジストロフィー症でも認められた（図

性化は，3％H202にて施行した．非活性化のche−2．C）．

Mb染色性は低下していた．同様な傾向は，L−G型

ckとして，正常家兎血清を抗Mb血清のかわりに

多発性筋炎（5名）では，発症時の状態，経過

使用し；以下PAP法と同じ過程でおこなった．そ

年数などの臨床所見に対応する筋生検像がみられの結果，筋線維内にはAECの発色は全くみられたが，Mb染色でも，細胞浸潤が高度な部位でのず，組織内パーオキンダーゼ活性の阻止は十分お

Mb染色性の低下がみられ，また，HE染色，

こなわれているものと判断した．

Gomori trichrome染色変法に浪染する筋線椎で2）正常筋線維内のMb局在について

はMbの染色性が乏しい傾向にあった．全般に，正常人（3名）の骨格筋によるMb染色では，Mb染色の際のMayerへマトキシリンに浪染す横断像で，筋線維内にぴまん性に赤褐色に，赤褐る筋線経でのMb染色性低下がみられた．

色の細顆粒として染色され，縦断像でも，同様に
考ぴまん性に染色された．筋線経のtype別にMb

案

Mbは骨格筋に重要な酸素の貯蔵能を有し，筋の染色性を観察すると，typeI fiberにおいて，Mb染色性が強い傾向にあった（図2．a）．

肉の湿重量当り3−9mg／dlとされている▲）．神経

3）疾患別のMb染色について

筋疾患の診断に際しては，CPK，LDHなどの血清

筋ジストロフィー症（7名），多発性筋炎（5酵素活性や筋電図，筋生検などが臨床的に用いら名），Motorneuron disease（3名）について比れている．しかるに，最近，血中Mbの微量測定較検討した．

が可能となり，筋肉の破壊性疾患では，筋肉内の神経原性筋萎縮例としてI筋萎縮性側索硬化症
ALS（2名）では，Mb染色とATPase，NADH

Mbを指標として，その破壊壊死部の程度を算出−TRとの比較の結果，筋線維内Mbは萎縮線経で出Mbの動態を知るため，家兎による実験結果よする読みがなされている．我々も，筋肉からの漏も，typeI fiberでは長期にわたりMbは染色さり，腎臓の役割を強調してきた．しかし，血中Mb

れるのに対し，typeII fiberの萎縮では，Mb染
色性は低下していた．このように，Mbの筋線維内浪度と血清酵素との間には正の相関関係はあるもでの保持能には，type別の差異が示唆された（図には日内変動や運動量の影響などが問題とされて

2．b）．

いる1）・2）．

のの，必ずしも平行したものではなく，また，Mb−172−筋線維内からのMbとCPKなどの筋境酵素の

筋線維内のMb染色で，神経原性筋萎縮症の筋線

漏出のメカニズムは不明であるが，今回施行した

経ではMbの染色性が保たれるのに反し，筋ジス
トロフィー症の筋線経では，全般にMb染色性の低下がみられた．また，特にMayerへマトキシリ
ンに濃染する筋線経でのMb染色性が低下していた．
神経原性萎縮線経では長期にわたり，Mbの染色性が保たれる点を考慮すると，筋粕膜はほぼ正常な機能を有しながら，神経からのtrophic fac−
torの欠如などのメカニズムが筋萎縮の進展に主な役割を演じていることも可能性として考えられる．
多発性筋炎では，細胞浸潤が高度で筋線経の破壊壊死が高度な部位で染色性が低下していた．染色性の低下の原因としては，筋線経に（細胞浸潤など）外的な因子の関与により，局所的な筋線経の破壊壊死が生じ，その部位のMb喪失がおこるためと考えられる．
酵素抗体法による筋線経のMb染色はこれを
従来の組織学的あるいは組織化学的手法と組み合せ，対比検討することにより筋病変の多面的な観察を可能ならしめるものと期待される．我々は今後主として筋ジストロフィー症や多発性筋炎について筋線経の変性，再生過程におけるMbの動態をより詳細に観察していく予定である．
昭和57年度厚生省神経疾患研究委託費Nn82−04
によって行なわれた．
文1）植川和札献ほか：Myoglobin（Mb）の代謝回

転，尿中排泄の機序について．日本神経学会給金，1982年5月，東京．
図2a・b・C 酵素抗体法によるMb染色（Mayerへマト
キシリン核染色）（a）健常人筋線維内のMbはびまん性に細顆粒状に観察される．
（b）ALS2）植川和利：神経筋疾患におけるミオグロビン測定の臨床的評価．熊本医会誌（印刷中）．
3）sternberger，L．A．：lmmunocytochemistry（2nded．）JohnWileyandSons，NewYork，1979．

Smallgroup atrophyがみられるが，Mb染色性が保たれている．（矢印）（C）Duchenne型筋ジストロフィー症
Mb染色では全般に著しく染色性が低下し，とくにMayerへマトキシリンに洩染する筋線経で低下している．（矢印）−173−4）三好和夫，ほか：ミオグロビンと筋疾患並びに心筋疾患．筋の構造と機能．酒井敏夫，遠藤実，杉田秀夫編集，医学書院，東京，1977，p．581−594．

31）血清ミオグロビンの変動パターンからみた筋・心筋疾患ならびに運動時の筋崩壊量の推定
川 井 尚 臣事
研究協力者

足

立

克

仁●

今

井

幸

三■

乾

増

田

健二郎■

藤

本

浩

史●

三

著者らの教室ではさきに人ミオグロビン（Mb）のラジオイムノアッセイ（RIA）を開発し，これを

好

俊

夫■

和

夫い■

れるものについてはその値から推定筋崩壊量（1日（24時間））を同様の方法で推定した．

用いて各種の筋疾患，心筋疾患などにおける血中，総流出Mb量ならびに筋崩壊量の算出法は，および尿中Mbの上昇や変動パターンを明らか

Robertsら6）の計算式を用いて行った．この方法にしてきたlト5）・7）は急性心筋梗塞時に増加する血清クレアチンキナ

中への総流出Mb量を算出し，推定筋崩壊量を推ーゼ（CK）の変動パターンより梗塞心筋量を算出するのに用いられた計算法である．

定した．これによって各種疾患ないし病態の筋のすなわち，急性心筋梗塞時の血清酵素の動態は，今回は，これらの成績を用いて各種の場合の血崩壊機序を明らかにしたい．

莞㌢＝f（t）−kd・E（t）・・・・・・（1）と表わされる．そして梗塞量（IS）は，対象と方法
対象は悪性高熱と亜悪性高熱5例（6歳−40歳），筋ジストロフィー症Duchenne型（DMD）18

IS＝（K）（BW）（LTf（t）dt）…‥・（2）例（2歳〜25歳），Becker型と表わされる．ここで，4例（20歳〜45歳），肢帯型（LG）5例（24歳〜41歳），顔面・屑甲・上腕型（FSH）4例（23歳〜45歳），先天性筋ジストロフィー症（CMD）3例（5歳〜8歳），筋
緊弓長性ジストロフィー症5例（36歳〜58歳），多発性筋炎4例（23歳〜49歳）ならびに急性心筋梗塞
6例（46歳〜74歳），そして健常人の各種スポーツ
21例（20歳〜45歳）すなわち，長距馳走（14km）
5例，野球5例，サッカー4例，ゴルフ7例などである．
検索例のうち悪性高熱，急性心筋梗塞，運動負荷（各種スポーツなど）については，発症後ある
いは運動後上昇する血清Mbの変動パターンを用いて総流出Mb量を算出し，この量より筋崩壊量を推定した．また筋ジストロフィー症各型，多発性筋炎などの安静時に血清Mbの上昇がみら＊徳島大学医学部第一内科＊＊沖中吉己念成人病研究所

K

DV

PcpK（CPKN−CPK．）……（3）

なお，E（t）：梗塞発症後の血清CPK（CK）値か
ら発症前値を減じた値，f（t）：時間当たりの流出
CPK量，Jf（t）dt：単位容積当たりの捻流出CPK
量，kd：CPKの血中減衰率，BW：体重（kg），
DV：体重1kg当たりのCPKの拡散分布相（ml／kg），P。，K：流出CPKが血中に出現する割合，
CPKN：正常心筋1g中の含有CPK量（I．U．／
g），CPK．：梗塞心筋1g中の含有CPK量（Ⅰ．U．／
g），T：血清CPK値が正常値に復するまでの時
間．
今回私達は．これら式のCPKをMbに置き換え用いた．
心筋梗塞時の総流出Mb量（∑Mb）は，∑Mb＝（IS）（MbN−MbI）と表わすことができる．
一174−

結

∑Mb（mg）＝藍）（BW）（E（T）・kd E（t，dt）
J：TE（t）dt

果

1．悪性高熱，急性心筋梗塞，ならびに各種ス
ポーツなどにおける推定筋崩壊量……（4）

悪性高熱・亜悪性高熱：稔流出Mb量はとなる．本論文ではこの計算式を心筋梗塞以外の3241−485mgと算出され，これを筋量に換算する

ものにも用いた．

と，648−97gと極めて大量であった．また症例によってかなりの帽がみられた．

筋崩壊量∑Mb（mg）

筋1g中の含有Mb量（mg／g）

急性心筋梗塞：総流出Mb量221−56mg，これと表わすことができる．

らが全て心筋から流出したとして計算すると

ただし，筋1g中のMb量として心筋梗塞のときは2．25mgを，DMDで13歳までは5mgXl／3，14

98−25gとなり，相当の大量であった．
各種スポーツ：推定筋崩壊量は長距艶走15−2

歳以後は5mgXl／5を用い，これら以外は5mgを用

g，野球12〜1g，サッカー2〜0．3g，ゴルフ1

いた．

−0gであり，運動の激しいと思われるものほど（4）の式で，∑Mb（mg）を算出するための定数大きかった．
図2に以上の成績を7 ロットで示した．

kd，賢には，健常人における負荷Mbの血中消失曲線（既発表）7）（図1）を用いた．すなわち，kd

2．筋ジストロフィー症の安静時の推定筋崩壊

は，図の曲線の第2相の勾配として求められ，0．20
h−1であった・また，賢はkdを（4）式に代入して0．46と計算された．

量筋ジストロフィー症では持続して筋の崩壊があり，Mbは持続的に血中㌣流出しているので，安静時の血清Mbをもとにして，一日の筋崩壊量を推定した．
DMDでは26−2gであり，年齢によってかな
り幅がみられた．Becker型では3〜2g，LG型
6−1g，FSH型2−0．5g，CMD5〜1g．筋緊張性ジストロフィー症4〜1gであり，これらの病型では6gまでであった．多発性筋炎では
70−4gと多かった．これらの成績を図3にプロットで示した．
DMDの年齢と筋崩壊量との関係：年齢の低いもの（幼児）では多く，10歳前後まで急速に減少
し，それ以後は少なく，ほぼ横ばいであった（図4）．
3．DMDの運動負荷による推定筋崩壊量
独歩可能のDMD患者（9−11歳）に運動を負荷すると血清Mb値ははじめの93−190mg／mlから運動終了直後660−1200mg／mlと上昇し，その後安静によって，次第に減少し，12時間後にはほぼ
前借近くまで下降した．
このときの増加Mb値から血中への増加Mb

図1

健常人の負荷Mb消失曲線（人MblOmg／60kg静注）量を算出し，これを運動負荷によって増加した筋の崩壊量として計算した．結果は多いもので9g，少ないものでも4gであった．これらの値は健常ー175−

人の激しいスポーツなみであった．成績はプロッ
トで図3中に示した．
4．血清Mbの最高値と推定筋崩：壊量との関係
血清Mbの上昇と変動を示した疾患のMb値の最高値と推定筋崩壊量との関係を図5に示した．
縦に推定筋崩壊量（g）を，横に最高値（ng／ml）
を対数目盛でとり，それぞれの症例の成績をプロットしてある．体重の少ない小児例を除いてほぼ直線関係がみられる．この直線によって，各種の筋崩壊時において，血清Mb値の最高値から崩壊
筋量の大凡を知ることができる．
考察

本文では，当科ですでに血清Mb値，ないしその変動パターンを明らかにしている症例l）−5）および各種スポーツ7）などの運動負荷例（DMDの運
動負荷については今回改めて検索した）について
ゴルフ

サ′カー

野球

長距離走4

急性心筋梗塞

亜悪性高熱

悪性高熱

血清への流出Mb量をRobertsら6）の計算式を用いて計算し，筋崩壊量を推定した．
彼らの計算式のCKに関する定数をMbのそれに置き換え用いたのであるが，Mbの定数は，さ

図2 筋・心筋疾患並びに運動時の推定筋崩壊量きに著者らが得ている健常人の負荷Mbの消失
曲線7）から求めた．
推定筋崩壊量は悪性高熱，亜悪性高熱例では
648〜97gと著しく大量であった．これら疾患には著明なMb尿が認められ，尿中捻排準Mb量からも筋の崩壊量を推定できる．試みに尿中Mb量からの成績（既発表5））と今回血清Mbの総流出量より求めた推定筋崩壊量と比較すると，前者の4例の成績，それぞれ507g，158g，77g，29gに対して後者は648g，457g，268g，97gであった．
これらの値は今後Mbの体内代謝や尿中Mb測定の精度を考慮に入れ検討する要があると思われる．
急性心筋梗塞例での98−25gは健常日本人の心の重さ約300gから考慮すると相当の大量である．

晋・芸

事九触義貞

ジストロ■句−丘ホヤt性

上辱ソストロークrE
先天性

書

上上里
■■・■■

丘

申什Crmr里Duch雪⊃○更図3

筋ジストロフィー症の安静時推定筋崩壊皇（1日）

ただし，この成績はMbが心筋のみから流出したとして算出したものである．著者らは，急性心筋梗塞時には随伴するショックによってMbは骨格筋からも流出すると考えており，・このMb量を差し引くと心筋における実際の崩壊筋量ははるかに少ないことが推測される．
−176−

各種のスポーツでは，運動量の多いと思われるもので儲崩壊量の多いことが示された．

はDMDで最も多いが，とくに若年者（幼児）で多く，年齢が高いものでは少なかった．若年者で筋ジストロフィー症では安静時筋崩壊量（1日）

は，筋がなお多く残存しておりこ その後筋量が次第に減少して行く有様が示されていると考えられ
る．
多発性筋炎（急性期）では，DMDよりもむしろ多い．これは急激に筋力低下の発症する本症の病態をよく反映していると思われる．
DMD症例では運動負荷において血清Mbの上昇がみられるが，この際の増加Mb量より算出した1日筋崩壊量は9〜4gであり，健常人の激しい運動（長距離走）なみに多く，本症では運動負荷によってMbが血中に流出し易いことが考えられる．

●

血清Mbの最高値と筋崩壊量の関係では，前者

●
●●
●
●

●
●

●

5

を横軸に，後者を縦軸にそれぞれ対数目盛でとり，

●
●

10

15

各症例の成績をプロットしてほぼ直線の基準曲線
20

25

を作った．

年 令

図4

この直線上で各種疾患ないし病態の占める位置

Duchenne型の年齢と安静時推定筋崩壊量から，今後それぞれにおけるMbの生成，董充出，

（1日）

●
○
■
○
▲
ム

1×102

1×103

1×104

血清Mbの最高仕（岬／傷J）
区は

血清Mbの最高値と推定筋崩壊量−177−

悪 性高 熱 ，重 悪 性高 熱
急 性心 筋 梗 塞
長 距 離走野球
サ ッ カーD M D の運 勤 負荷

1×105

分解など代謝過程の特徴を追究したい．また，こRadioimmunoassay for human myOglobin：の直線によって，各種の筋崩壊時における崩壊筋

methodsandresultsinpatientswithskeletal

量の大凡を血清Mbの最高値から求めることがmuscleormyocardialdisorders．J．Lab．Clin．

できる．

Medリ92：341，1978．

3）林結

正：急性心筋梗塞における血清ミオグロビ

ンの経時的変動パターン．四国医誌，37：240，

論

RIAでj則定した血清Mbの変動パターンから，

1981．

筋ジストロフィー症各型，悪性高熱，亜悪性高熱4）今井幸三：筋ジストロフィー症を中心とする各などの各種ミオパチ一，心筋梗塞，ならびに健常

種ミオバナーにおける血中ミオグロビン量．四人とDMD運動負荷時などにおける総流出Mb
量と筋崩壊量をRobertsらの計算式を用いて算国医誌，37：448，1981．
5）末広

正：悪性高熱，亜悪性高熱の血清ならび出した．また，血清Mbの最高値から筋崩壊量をに尿中ミオグロビンの変動パターンと血清ミオ求めるための直線を作製した．

グロビンを指標とする事前チェックの試み．四

各種の疾患，病態における推定筋崩壊量は，そ
れぞれについてMbの塵生，流出，処理機序の考案に有意義と思われる．

国医誌，37：511，1981．
6）Roberts，R．，Henry，P．D．＆Sobel，B．E．：An
improved basis for enzymatic estimation of
infarct size．Circulation，52：743，1975．

文

7日り井尚臣，岩朝

献勝，三好和夫，ほか：ラジオ

勝，ほか：血液化

イムノアッセイによる人ミオグロビンの学検査−その数値をどう読むか．ミオグロビ

tumOVer．厚生省・筋ジストロフィー症の病因

1）三好和夫，川井尚巨，岩朝に関する臨床的研究第二班（三好珪），昭和55年

ン（含・尿中）．日本臨林，38：524，1980．
2）Miyoshi，KりSaito，SリKawai，H．，et

al．：

ー178−

度研究報告書，1981，p．220．

32）筋におけるクレアチン代謝
筋ホモジュネートによる1−14C標識クレアチンからの1−14C標識サルコシンの産生
●

夫

口

好

三

●

子 仕 次

■
●

●

紀 元 信

脇村橋

日

⁝

門 北 三

・ ・

・

子 正 子
つ
ち
な 年 ま

槻 山松

大 中 小

・

克

昌 明 也

良

芝 岡 村

紫 松 田

研究協力者

さきに私達（三好ら）1）2）5）は人骨格筋中にcrea−

extract）を用いた．
Muscle extractの0．2−0．4mlに1．C−1−クレアtine代謝経路としてcreatine−glycine pathway

チン（NEN社製）を加え，液量を前述の緩衝液でのあることを提唱し，筋ジストロフィー症ではこ1．Omlとし，37℃60分インキュベートした．インキの経路のCreatinaseのkineticsが異常であるとュベート終了後，65℃15分の加熱で反応を停止しは じ め にの成績を発表した．しかし，それらの成績は筋のた．また，コントロール実験としてあらかじめcrudematerialを用いて，基質や生成物の測定を

65℃15分加熟したmuscle extractを同様にイン呈色反応によってえたもので，改めて基質としてキュベートした．

1−14C標識クレアチンを用いてこれまでの成績を確認する研究を進めている．

インキュベート終了後，上清の20／Jlをシリカゲ
ル薄層板につけ，フェノール：水，75：25の溶媒

昨年度の本研究班においては，1−14C標識クレ系で3時間展開した（薄層クロマトグラフイ）．さアチンを基質として，これにpseudomonasからえた精製creatinase3）（pseudomonascreatinase）

らに一部の検体は2恥1を濾紙につけ，ブタノー
ル：酢酸：水，120：30：50の展開系で濾紙上で24を反応させ，1−14Cサルコシンの塵生きれる成績

時間展開した（濾紙クロマトグラフイ）．

を示した■）．今回は，酵素試料として人骨格筋なら展開終了後の薄層板及び濾紙は乾燥した後，原びにラット骨格筋ホモジュネートを用いてえた成点からフロントまで2．5−5．0mm間隔で細切してそ績を述べる．

れぞれ試験管に移し，水を加えて14C−放射活性を抽出し，ACS−ⅠⅠシンテレーターを加え，14C一放射

試料と方法
人骨格筋とラット骨格筋を試料とした．人骨格

活性をPackerdLiquidScintilationcounterで計測した．クロマトグラフイにおけるサルコシンの筋は剖検時にえた筋を実験まで−50℃に凍結，保位置は非放射性サルコシンを加えて，ニンヒドリ

有して用い，また，外科的肢触断時にえられた筋を直ちに用いた．ラット筋は麻酔し，屠殺後の下ン反応で同定した．また，同様の実験をpseud0−monas creatinaseを用いて行い，その成績を肢筋を直ちに実験に供した．実験には筋から月旨肪

reference standardとした．

や結合織をできる限り除去し，ハサミで細切した
後，3客の50mM燐酸緩衝液pH7．2を加え，pOly−

実験成績tron PTlO homogenizerでホモジナイズし，600×gで10分間冷凍遠沈してえた上清（muscle

人骨格筋（薄層クロマトグラフイ）：
図1に剖検筋ホモジュネート遠沈上清による成績を示した．縦軸に放射活性を，横軸に原点からの距敵を示す．図の実線はmuscleextractをその＊沖中電己念成人病研究所＊＊徳島大学医学部第一内科

ー179−

【cm）

図1

人剖検筋ホモジュネートによる1−C−クレア
チンからの14C−サルコシンの産生．
矢印にかこまれた部分に，ニンヒドリン反応
でサルコシンの呈色がみとめられる．

inactivated

図2は外科的肢敵断時にえられた新鮮な人下肢

muscle extractを用いたコントロール群であ筋について行った実験の成績（表現は図1と同じ．

る．HC一放射活性の薄層板上の分布を1−C−クレア

以下の図も同様）である．

まま用いた実験群，破線．はheat

チンのピークで合わせてsuperimposeしてある．

図2において，14C−クレアチンは全体の87．1

図左は放射活性の全体のactivityをみるために％，RfO．38付近でサルコシンと同定される部位に放射活性をlogで表わし，図右は通常の1inear

2．7％の放射活性が認められる．
新鮮な筋を用いた場合には原点付近に明らかな

scaleで表わしたものである．
図にみるごとく14C一クレアチンはRf O．50に主放射活性のピーク（約8．2％）が認められ，これは要など−クとしてみられ，RfO．38に相当して小さ対照のheatinactivatedmuscleextractでは認めなピークが認められる．RfO．38のピークはサル才、られない．この放射活性はRfから考えるとフオシンによるニンヒドリン反応の位置と同じであり，

スフォクレアチンであることが推定され，筋mus−cle extract中のクレアチンキナーゼによって生かつpseudomonas creatinaseとインキュベート
した14C−クレアチンにおいてもこの位置にピークじたものと思われる．剖検筋の場合にはこのピーを認めることからサルコシンであると考えられる．

クがみられないのはATPその他の基質が減少し放射活性としては，全体の92．6％が1■C−クレアてしまっているためであると思われる．1−C−クレチンであり，これに対してHC−サルコシンは2．6％

アチニンと推定される活性については実験群とコであった．なお，Rf O．7付近に一つの14C一放射活

ントロール群で大きな差は認められず，前の実験性のピークが認められるが，これはクレアチニンと同様である．

である可能性が強い．この部分の活性は実線と破ラット筋（薄層クロマトグラフイ）：線でほとんど差がないので，muSClehomogenate

図3にラットの下肢筋を用いた実験の成績を示の生物学的活性に依存するものではないと考えらす．ラット筋で用いたhomogenateの上清は0．2
mlであり，人筋での0．4mlに対して少ない．

れる．

−180−

︵亡Ⅶ∈三悪∪⊃OU︶
ゝ一；＝リ3−P2−Uゴ

0

図2

図3

5
（⊂mI

外科的肢離断時にえられた人下肢筋ホモジュ
ネートによる1−C−クレアチンからの14C−サ
ルコシンの塵生．
矢印は前図説明参照．

ラット下肢筋ホモジュネートによる14C−ク
レアチンからの14C−サルコシンの産生．
矢印の説明は図1参照．

この実験においても1−C−クレアチン放射活性部分に特別なピークはみられない．なお，この実

はRfO．55付近にあり（95．6％），サルコシンと思験においてはRf O．5以上のアミノ酸に関する分

われる放射活性は0．38付近にあり，2．6％であっ

離がよくなく，クレアチニンのピークはクレアチ

た．Heatinactivatedのコントロール筋ではこのンのピークの中に含まれていることが考えられる．

ー181−

と，14C−クレアチンからサルコシンの位置に放射活性が移行することをフェノール：水，シリカゲ∃

ル薄層クロマトグラフイで確かめた．これがサルコシンであることは，非放射性サルコシンのニン
ヒドリン反応，pSeudomonas creatinaseとイン仙C−クレアチンからの放射活性のこの部分への移行という2つのことで判断される．
クレアチンから生じるサルコシンの量は60分間
・のインキュベーションで最初の基質1C−クレアチン放射活性の2−3％であった．この％は用い−たホモジュネート量が人筋0．4ml，ラット筋0．2ml

1であるので，ラットでは活性がより高いことも推
定される．

−

︵Uでここ悪u⊃OUV言︐ U3葛lYUごキュベートした場合の1人筋を用いて同様に行った別の実験においてブ品

タノール：酢酸：水溶媒系による濾紙クロマトグ
ラフイ分析を行い，やはりサルコシンと思われ
10

20

30

る14C一放射活性が14C−クレアチンから移行することを認めた．

（Crn）

区14

人剖検筋ホモジュネートによる1−C一クレア
チンからの1−C−サルコシンの産生（濾紙クロ
マトグラフイ（展開系BAW）による）．

本実験でえた以上の成績は，人ならびにラット
骨格筋中にクレアチンからサルコシンを生成する酵素が存在することを示す証左といえる．この酵
素はおそらくCreatinaseであると思われるが，厳密にはamidinotransferaseを除外することはで

また，ラットの筋は新鮮な筋でありながら，外科
手術時にえた人下肢筋と異なり，1−C一フォスフォ

きず，現在行っている尿素測定法の工夫によって確認したい．

クレアチンと思われるピークがみられない．その理由は現在のところ明らかではない．

本実験における反応系の基質クレアチン量はmuscle extract中の本来のクレアチンのみであ

濾紙クロマトグラフイによる成績：

り，これにごく微量の14C−クレアチンを加えたも

図4に人剖検筋のホモジュネートを用いたこののである．生じた14C−サルコシンのstoichio●

方法による成績を示した．

metryはpseudomonas creatinaseを対照として

濾紙クロマトグラフイでは24時間に33cmまで泳計測中である．しかし，この条件での上述の成績動を行ったがクレアチンとサルコシンの分離は良は酵素活性の存在を十分に示すものであると思われる．

好でない．しかし，HC−クレアチンの眉の部分に相当してサルコシンと思われる14C−放射活性のピークが認められた．放射活性はHC一クレアチン

人など哺乳類の骨格筋中にCreatinase活性をみたとする文献は内外に見られない．

96・1％，HC−サルコシン1．9％であった．

結
考

案

論

成績の項で示したように，人のmuscleextract

剖検時ならびに肢馳断時にえられた人骨格筋およびラット骨格筋についてホモジュネートの600を1−C−クレアチンと60分間インキュベートする

g，遠沈上清を作り，1−C一クレアチンとインキュー182−

ベートし，14C−クレアチンから1−C−サルコシンがp．207．

生ずることを確かめた．この成績は，私達が述べ

3）Tsuru，D．，et al：Creatinine decomposingてきた骨格筋中にクレアチン分解代謝経路が存在

enzymeSinpseudomonasputida・Agr・BioL

することを示すものといえる．

Chemり40：1011，1976．

4）三好和夫，紫芝良昌，ほか：筋におけるクレア

文

チン代謝−1−1−C標識クレアチンを用いる方

献1）Miyoshi，K．，Taira，A．，et al：Presence of

法の検討−．厚生省「筋ジストロフィー症のcreatinase and sarcosine dehydrogenase

発症機序に関する臨床的研究」（三好旺）昭和56

in

年度研究報告書，1982，p．182．

humanskeletalmuscle．Proposalforcreatine−ureapathway．Proc．JapanAcad・，56B：95，

5）Miyoshi，K．，Taira，A・，et al：Altered

1980．Abnormalitiesofcreatinaseinskeletal

characteristicsofcreatinase−1ike activityinmuscle of patientswith Duchenne muscularskeletal muscles of muscular dystrophies・

dystrophy・Ibid，56B：99，1980・

MuscularDystrophy，（editedbyEbashi，S・），章，ほか：筋ジストロフィー

JapanMedicalResearchFoundationPublica−症骨格筋におけるクレアチン代謝の異常．厚生省

tionNo．18，UniversityofTokyoPress・1982・

2）三好和夫，平良「筋ジストロフィー症の病因に関する臨床的研

p．199．

究」（三好班）昭和55年度研究報告書，1981，

ー183−33）筋肉酵素の漏出について
植 田 啓 嗣◆
研究協力者

畑

中

良

夫■

宮

内

由美子＊

阿 部 千 史● 久保田 道 子＊
は じ め に

表1

血清CPK値は，筋肉疾患，心筋梗塞，著占液水腫，その他各種の神経疾患でも上昇がみられる．

A g es

また平素は健康体である悪性過高熱症でも高値がSerum CPK activities
M ale

Increa se

A verage

S tu den ts 10／85（11．
8％） 129 ±176

みられる．

F em ale
Increase
A verage1／17（5．
9％ ） 97±225

Staffs

私共は，昨年，大学生のあいだに高率に高血清

−29
30−39
40−49
50−59
60−

CPK値の保持者がみられること，そしてそれが女
子よりも男子に，安静時よりも運動時に，またβ−blockerの投与によってもより昆頁著となることを

0／2 （
0 ％）
0／
16 （
0 ％）
2／
45 （
4．
4％）
0／
45 （
0 ％）
0／8 （
0 ％）

56土 4
68 ±21
84 ±4974 ±36
59±21

0／
3
0／
1
0／
5
0／
6

（
0 ％） 65土 9（0 ％ ） 55（
0 ％ ） 40± 9（0 ％ ） 62±30

報告し，合せてDuchenne型血清CPK値の動向

129U，〜29歳：56U，30−39歳：68U，40−49歳：

に対しても検討を加えると共に，両者を対比しな

84U，50〜59歳：74U，60歳〜：59U，一方，女

がら，筋肉組織からの酵素漏出の機構に考察を加性においては，それぞれ97U，65U，55U，40U，62Uを示した．

えた1）．
ここでは，引き続き，正常人の血清CPK値の動きを追跡し，高血清CPK値を示す

健康者｛

と

Duchenne型との異同を検討してみることとした．

したがって酵素値は，学生群に加えて，40−49
歳の男性と50〜59歳の女性に高値をとる傾向がみられた．
2．運動後の男子大学生の血清酵素値

方法

駅伝マラソン参加を前提に健康診断書を求めに

血清酵素値の測定であるが，CPK，LDH，来た男子大学生70名について，まず600mを走ら

GOT，GPTについてはモノテストを，aldolaseにせ，その後10分して採血し，CPK，aldolase，

ついてはUVテスト（いずれもベーリンガ一・マ

LDH，GOT，そしてGPTの5種の酵素値を求めた（表2）．

ンハイム社製）を用い，Chemtek式自動分析器を使用して測定した．

血清CPKでは，最低値37U，最高値873U，平均191U，正常上限値94U以上を上回る者は46例，
結果

1．加齢と血清CPK値（表1）
学生・教職月を含めた233名についての安静時の血清CPK値を，年齢別に整理してみた．
200U以上を示した者の％は，男性では，学生群：11．8％，40−49歳群：4．4％，女性では，学生群：5．9％であった．
また，その平均値をみると，男性では，学生群：

65・7％，また200U以上の値を示した者は26例，37．1％であった．
血清aldolaseでは，最低値2．3U，最高値14．3
U，平均値6．3Uで，正常上限値7．6Uを上回る者
は19例，27．1％であった．
血清LDHでは，最低値229U，最高値729U，平均値410Uで，正常上限値500Uを上回る者は11例，15．7％であった．

＊愛媛大学保健管理センター

血清GOTでは，最低値13U，最高値56U，平均
一184−

値27Uで，正常上限値42Uを上回る者は1例，1・4％であった．
血清GPTでは，最低値10U，最高値68U，平均

LDHでは，本酵素のみが正常値の上限を上回っている者が3例，4．3％，CPKのみが上昇を釆している者が38例，54．3％，両者が上昇している者

値18Uで，正常上限値36Uを上回る者は1例，1・4％であった．
3．運動直後の男子大学生高血清CPK借保持者

が8例，11．4％であった．

の血清酵素パターン（a）運動直後の血清CPK債と他の血清酵素値ている者は46例，65．7％，両者が上昇している者

GOTでは，本酵素のみが正常値の上限を上回っている者が1例，1．4％，CPKのみが上昇を釆しは1例も認められなかった．

2．と同じ条件下の男子大学生70名で，その血清CPK値と他の血清酵素活性値との関係を求めてみた．
Aldolaseでは，本酵素のみが正常値の上限を上回っている者が2名，2．9％，CPKのみが上昇を釆している者が29例，41．4％，両者が上昇している者が17例，24．3％であった（図1）．

GPTでは，本酵素のみが正常値の上限を上回っている者は1例，1．4％，CPKのみが上昇を釆している者は46例，65．7％，両者が上昇を釆している者は1例も認められなかった（図2）．
（b）運動直後の高血清CPK任保持者の血清酵
素パターン（表3）2．と同じ条件下の男子大学生で，血清CPK値が200U以上示した者を15名無差別に抽出し，その同一試料について，aldolase，GOT，GPTの3酵素値を測定した．
その結果は，aldolaseで，正常上限値7．6Uを越▲ l 彗 雲 出 d U

えた者が12例，80％，GOTでは，正常上限値42Uを越えた者が2例，13％，GPTでは，正常上限値
36Uを越えた者は1例も認められなかった．
考

私共は，昨年度の報告1）で，就職または駅伝マラ

10
Aldolase活性案

ソン参加を前提に健康診断書を求めに来た大学生

二

図1CPK活性とAldolase活性（male students）の間に，高血清CPK値を示す者が相当数存在す
ることを指摘した．その場合，正常上限値を94U
とおいた場合には，就職時男子学生で48．0％，600
m疾走10分後の男子学生で77．9％の高率に昇った

●
1

46例
0例
（
65．
7％） （
0 ％）
23例
1例
（
32．
9％） （
1．
4％）

●

−
割丁璧出dU●●t●ので，一応200U以上を異常値ととり，就職時が8％，駅伝検診時が20．8％として，その成績をまとめた．
表2 SerumenZyme aCtivities after exercise（male students）

t

漉∴

●n

夢−● ． ▼

E n z y m es

C a ses

N om a l
V a lu es

50

GPT活性

図2

二

CPK活性とGPT活性（male students）

ー185−

R a n g es

A v e rag e （S ．D ．）

37 − 8 73

19 1（15 5 ）

C P K

70

A ld o la se

70

94
7 ．6

2 ．3 − 1 4 ．3

L D H

70

2 50 − 50 0

2 2 9 − 7 29

4 10

（8 9 ）

G O T

70

42

1 3 −5 6

27

（ 7）

G P T

70

36

1 0 −6 8

18

（ 8）

6 ．3

（ 2 ．4 ）しかしその後，岡山大の男子学生でも40．2％2），

表3

香川大の男子学生では75．6％3）に異常者がみられSerum enZyITe aCtivities after exercise（male students）

たと報告された．
C PK

そのため，対象者の年齢層を拡げ，教職月を加（94）

A ldo lase

GOT

G PT

（
7，
6）

（
42）

（
36）

T ．
K ． 逆

旦連

37

30

別に区分けして整理してみたが，その結果は表1

U ．
T ． 卓
些

些＿

21

が示す通りで，10代ごとの平均値は，男性では

Y ．
H ． 些

主
を卓
6．
0

20

12

K ．
U ． 生蔓 −

壬
生旦

31

20

T ．
T ． 星
型

旦透

38

21

えた233名について，安静時の血清CPK値を年齢

129，56，68，84，74，59Uの値を示し，また，女性でも97，65，55，40，62Uとなって，男女両性

U ．
M ．些型
塑遥
些
21
M ．
K ． 星
型
6．
2
24
12
N ．
M ． 三
軍 （
15／
15） 塾長 （12／15） 28 （2／15） 15 （
0／
15）
W ．
K ． 塁
些 100％旦
j80％
32
13％ 160％

とも学生群を除けば，いずれも正常上限値94U以下の値を示していた．
そしてこの場合，ホルモン環境が変動している

M ．
H ． 呈
塾

3．
9

29

12

K ．
H ． 些塁嬰』

34

18が女性値より高値となる点が注目された．なお，

S ．
H ． ⊇
型

旦
4

27

17

H ．
T ． 星
型

36

19

女子学生の1例に967Uの高値を示している者が

Ⅰ．
R ． 三
匹

主
星
j
迎連

33

12

K ．
Y ． 墜蔓里遥

32

18とみなされる学生群，40−49歳の男性群，50〜59
歳の女性群に高値をとる傾向があり，また男性値

いたが，家族歴からはDuchenne型のcarrierは否定された．
では何故，学生群で高値を示して来るかである

とも，自律中枢刺激家兎ともかなり異なっている

が，ホルモン環境が変動期にあることに加え，前ように思われる．しかし平素は健康体である悪性回にも指摘している通り1），疾走後に異常者が増過高熱症では，血清CPK値のみに重点が置かれえ，自律神経性因子もまた無視出来ない．

て報告されているので，その間の異同は明らかで

しかし・CPKを始めとしたSarcoplasrnic
enzymeの漏出の仕方はDuchenne型とはかなりはない．加えてDuchenne発症の初期にもこのよ

異なっているように思われる．つまりDuchenneい．

うな酵素パターンを示す時期があるのかもしれな

型ではpreclinicalstageでも，CPK，aldolase，
LDHの3酵素の活性値はほぼ平行して上昇がみ

おわ り にられる ）．また視床下部のb交感帯を電気刺激し1．対象年齢層を拡げて，血清CPK値を測定してた家兎でもこの点は同様であった5）．これに対し，600m疾走後の学生のうち，CPKが上昇を来した

みると，学生層と更年期層に高値をとる傾向が窺者65．7％に対して，aldolaseが上昇した者は27．2

いずれも正常上限値94Uを下回った．

えた．しかし学生層を除いた各年齢層の平均値は，％（図1），LDHは15．7％，GOTは1．4％，GPT

2．その際，CPK，aldolase，LDH，GOT，GPT

は1．4％と低く（図2），CPKと共に上昇を来したの5つの酵素の血清活性値を測定することによっ者の％としてみても，aldolaseが17％（図1），
LDH8％，GOT0％，GPT O％（図2）となっ

律神経中枢刺激家兎とも異なっていた．

て得られる酵素パターンは，Duchenne型とも自ていた．更に，高血清CPK値を保持する学生を無3．高血清CPK値を示す者を総べて差別に抽出し，その酵素値を調べたが，aldolase
は80％，GOT13％，GPT0％に上昇がみられた

見倣すべきか否かは，その機構がなお不明であるに過ぎなかった（表3）．

混入を想定しておくべきではなかろうか．

だけに，現在の時点ではそこにしたがってこの結果からみると，学生にみられる高血清CPK値をもたらす機構は，Duchenne型
−186−

異常者

と

読み過ぎ者Iの文の高値に関する検討．第12回中国・四国大学保

献健管理研究集会発表．昭和57年7月，高知．

1）植田啓嗣，畑中良夫，野田温子，久保田道子，

4）植田啓嗣，伊藤友昭，大原俊樹，岸野文一郎，

谷垣朋子：筋肉酵素の漏出機構について．厚生省「筋ジストロフィー症の発症横序に関する臨

中田俊士，松本謙二，西川光夫：筋ジストロフ

床的研究」（三好班）昭和56年度研究報告書，ィー症にみられる筋LDHIsozyme組成異常の1982，p．191−195．

意味．医化学シンポジウム，7：161−166，2）辻孝夫，山吹隆寛：大学生の肝疾患集団検診と1967．

事後指導・管理のあり方一戦月の検診成績と比5）植田啓嗣，大原俊樹．畑中良夫，西川光夫．塩較して一．日本医事新報，3024：45−50，1982．

谷弼兵衛：視床下部の電気刺激後の血清酵素．
臨床神経学，17：506−512．1977．

3）武田和久，市川えり子，友国寿美子，本田照代：
学生にみられる血清クレアチン・キナーゼ活性ー187−34）Duchenne型ジストロフィー症の線推芽細胞および白血球の生化学的研究

馬 渡 志 郎■研こ究協力者はじめ

下 岩 男＝竹

顆粒球のCKとPKおよびATP＋AMP享±2にDuchenne型筋ジストロフィー症（DMD）におADPの反応を媒介するadenylate kinase（AK）

いては，血清のcreatine kinase（CK）が増加しの活性を測定して対照群と比較した．

ていることが特徴的であるが，同一血清よりCKとpyruvate kinase（PK）をともに測定すると相対象および方法

関して増加している1）2）．この両者の相関的な増加

線維芽細胞はDMD患者（5人）および対照群

はDMDの保因者でも認められるl）．DMD患者で（胞腫瘍3人，てんかん1人，いずれも成人男子）

は病初期ほどこれらの酵素は血清で高い傾向があり，保因者では両酵素が血清で高いにもかかわらより生検した皮膚より培養によって得た．分析に用いた線維芽細胞はすべて3回日のsubculture

ず臨床的に筋の異常を来す例は少ない．これらのでfullsheetsになったもので，培養液交換後4日ことはDMDにおいては，両酵素の血清における目のものを用いた．生食水で3回洗浄後に剥祉し増加は筋の変性や萎縮に先行して起こっているこて遠沈によって採取した．リンパ球および頼粒球とを示唆するものとも考えられ，保因者のことをはDMD患者（6人）および同一年齢層男子で同考えると，これらの酵素の血中増加はDMDにお一施設に入院中のDMD以外の神経筋疾患患者6

ける筋の変性や萎縮とは必ずしも直接的に関係した現象ではないとも考えられる．すなわち，筋の人（表1）の末梢血より，リンパ球をFicoll−Paque
法で採取した後，さらに3％Dextran法で顆粒球病変に先行したDMDの原発的異常に関連した現を採取した．末梢血はDMD群および対照群より象であるかも知れない．

すべて同日，同時刻にj采血し．その後の操作や測

一方，遺伝性の疾患であるDMDにおいては臨定も同時に（交互に）行った．各細胞群は採取後床的な標的で1まない組織あるいは細胞にも潜在的

酵素測定まで−80℃に保有した．測定時に25mMな異常がある可能性は十分考えられる．事実，

TriS−HCl（pH7．5）の中で10秒間3回超音波処理

DMDの赤血球，白血球あるいは線維芽細胞におした．蛋白濃度はLowry法で測定した．測定した

いても異常の報告があるが，異論も少なくなく，諸酵素はcoupled enzyme法によ当面確定された異常とは言えないように思われる．

NADHあるいはNADPの変化を340nmで記録

しかし，これらの細胞は，DMDの場合すでに病的計で記録した．反応液の組成と最終浪度は下記の変化のある骨格筋と比べて，材料の得やすさだけ
でなく，材料の純度の上でも対照との生化学的な如くであった．PK：74mMTris−HCl（pH7．4），
7・4mMMgC12，0．74mMEGTA−Na，0．74mM

比較検討には適している．

phosphoenolpyruvate，1．56mMADP，0．16mM

り37℃で以上のことから，私共はDMD患者の培養皮膚NADH，LDH≧1．2U／ml，Cellhomogenate（30

線推芽細胞，末梢血のリンパ球（単核球）および−60JLg蛋白）．AKの2ADP→ATP十AMPの＊国立赤坂療養所神経内科＊＊九州大学医学部脳研脳神経外科方向の測定は100mMTris−HCl（pH7．5），10mM
Mg−aCetate，20mMglucose，2．5mMADP，0．7
ー188−

表l Patients used toleukocyte studies

n

↑ し

1
0

0
C

Age

Sex

Clinicaldiagnosis

Serum

CK＊
9
q ノ

Spinal mu早Cular atrophy

U

8

●

▲ u ノ

3

6

●
4

Congenital myopathy
Spinal muscular atrophy

′

8

1

●

0

Congenital myopathy

0

5

●

5

1．1 3 2 9 4

2

7

●

M∴m Um Mm Mu M

31

Dys仁Onia

1

Congeni亡al myopathy
●
1

550
261

9

MH

352

12

MH

333

13
10

M＝H

2

MH

10

MH

I）uchenne dys亡rophy

14
3
4
5
′

231

0

1176

＊Normal range of serum creatine kinase；0−25U

mM NADP，hexokinase≧1．2U／ml，G−6

DMDで高値を示した（いずれもp＜0．05）．リン

PDH≧2．5U／ml，AKのATP＋AMP→2ADP

パ球と顆粒球のPKの活性もDMDで高い傾向をの方向の測定では，67mMTriS−HCl（pH7．4），

示した（p＜0．1）．線維芽細胞においてもAKお

6．7mM MgCl2，0．67mM EGTA−Na，0．7mM

よびPKいずれもDMDで高い傾向を認めた

ATP，0・7mM phosphoenolpyruvate，0．15mM（p＜0．1）．CKはいずれの細胞群においてもNADH，PK≧1．2U／ml，LDH≧1．2U／mlでの活DMDと対照群との間で差はなかった．Mg−ATP性（Mg−ATPase）を記録し，この反応液に0．7mM

aseの活性も線維芽細胞とリンパ球で測定した

AMPを加えて活性を記録し，これよりMg−ATP

がDMDと対照群との間に差を認めなかった．

aseの活性を差引いた．CKの測定にはBoehrin−
ger社のCK−NAC法のキットを用いた．この測考察定キットには十分なAKの阻害剤が入っていて，
本実験の資料におけるAKは完全にブロックさ血清ではCKとPKは相関して増加しているl）2）．

れることを確かめた．

AKはDMDの血清で高い例があったが，同一血既述したように，DMDおよびその保因者でも清でCKとAKは相関していなかった2）．ところ
結果

上記方法で測定した諸酵素の活性値は表2，3および4に示した．線維芽細胞，リンパ球および
頗粒球ともにPKの活性が最も高く，CKの活性でCKはphosphocreatineとADP，PKはphos−
phoenolpyruvateとADPを基質とした酵素であり，両酵素ともにATPより高エネルギーのリン酸複合体を基質としていて，ともにATPの産生はいずれの細胞群でもPKの2−4％に過ぎなか（あるいは供給）に直接関連した酵素である点はった．AKの活性はいずれの細胞群においてもあらためて注目して良い点ではないかと思われる．

PKの約15％程度であった．

この両酵素が相関してDMDの病初期より，あるDMDと対照群とを比較した場合，リンパ球といは保因者でも増加していることは，骨格筋にお

顆粒球におけるAKの活性は正，逆反応ともにけるATPの産生（あるいは需要）に直接関係した

−189−

表2

Enzyme activitiesin fibroblasts from patients with Duchenne
dystrophy and controIs

DMD（n＝5）

Creatine kinase
Pyruva亡e kinase

controIs（n＝4）

21．5士 21．5
726．9士231．8
上

′
q

b

土

9．4

3

33．9土

9

Mg−ATPase

′

24．1

0

174．2士92．8士19．1（pく0．1）大7

Adenylate kinase
2 ADP→ATP ＋ AMP
ATP ＋ A虻P−→2 ADP

0

鼻

′

I
3

・

Enzyme aCtivities；mrnOles／min／mg・prOteinat370C
大仁一test表3

EnzymeactivitiesinlymphocytesfrompatientswithDuchenne
dystrophy and controIs

DMD（n＝6）

2

士

3
2

9

土

5

士

4．9

︶

●

5

Enzyme activities；mrmOles／min／mg・PrOteina亡37．dc
朱t一test

表4

EnzymeactivitiesingranulocytesfrompatientswithDuchenne
dystrophy and controIs

DMD（n＝6）

controIs（n＝5）

Creatine、kinase

29．9

土

3．1

Pyruvate kinase1015．9土

228．9

644．9土360．4（pく0．1）大Adenylate kinase
2 ADPl＞ATP ＋ AMP

152．2

士

14．7

127．8上

29．6

土

1．8

20．4（pく0．05）央Enzyme aC亡ivi亡ies；mrmOles／min／mg・PrOteinat37Oc
衰亡一tes亡

−190−

▲女

0

55．9士10．4

史り

︶

●

︵

●

1

q

′ L U

︻ ヽ ﹂

0
く

0

0
く

p

●

p

︵

9

士

2

′ h U

＋■

●

⊂J O

9

′

●

3

4．8

q

●

52．2士

′

1

2

6

7

士

●

11 8
1 1

士

1

●

Mg−ATPase

22．4

1059・5士152．6（p＜0．1）藷
2

AMP
ADP

●

＋

AW一一2

4

＋

●

ADP一事ATP

5
7
3

2
ATP

2
8
1

Adenylate kinase4

Pyruvate kinase

Jq 6
2 0
2

Creatine kinase

controIs（n＝6）

異常がDMDの原発的な異常と関係があることは否定は出来ないと思われる．

DMDで筋肉の酵にとどまるので，さらに症例を重ねて結論を出す必要があると思われる．

素が血清に増加している機転や枚樺は良くわかっていないが，骨格筋だけでなく白血球でも細片包内の酵素の放出には細胞内のATPが関係があるこ

文献1）Percy，M．E．，Chang，LS．，Murphy，E．G．，etとは示唆されている3）4）．

al．：Serum Creatine kinase and pymvate

私共の結果では，リンパ球，顆粒球および線推
芽細胞のいずれにおいてもCKの活性はPKの活

kinasein Duchenne muscular dystrophy

性の2−4％にすぎなかった．このことはこれら

Carrierdetection．Muscle＆Nerve．，2：329，
1979．

の細月包ではCKは生理的にも重要な働きはしていないことを示しているとも考えられる．CKはい2）馬渡志郎，安徳恭演．ほか：筋緊張性ジストロ

ずれの細胞群においてもDMDと対照との間に差の赤血球膜のATPase，adenylatekinaseなどを認めなかったが，活性値の高かったPKとAKについて．厚生省「筋ジストロフィー症の病因の活性は，いずれの細胞群においてもDMDで高に関する臨床的研究」（三好】旺），昭和55年度研い傾向を示した．このことはDMDにおいては骨格筋以外のこれらの細胞においてもATPめ産生（供給）あるいは需要に何んらかの異常があり，CKが少ないこれらの細胞ではPKとAKの活性に現われているとも考えられる．

フィー症およびDuchenne型ジストロフィー症

究報告書，1980，p．183−186．
3）Thompson，W．H．SりSweetin，J．C．＆

Hamilton，Ⅰ．J．D．：ATPandmuscleenzyme

efflux after physicalexcertion．Clin．Chim．
Acta．，59：241，1975．

しかし私共の今回の結果はリンパ球と顆粒球の4）wilkinsdn，J．H．＆Robinson，J．M．：Effect

AKの活性は統計学的に有意差であったが，これ

OfATP onrelease ofintracellularenzymes

らの細胞群のPKおよび線維芽細月包のAKとPK

fromdamagedcells．Nature，249：662，1974．

についてはDMDで高い傾向（p＜0．1）を示した−191−

35）神経筋疾患における白血球proteolytic enzymesの検討

後 藤 幾 生■

研究協力者

小 林

卓

郎暮

黒

岩

義五郎■

は じ め にbin，40JLmOles，pH3．2のNaCl−Citrate−HCl緩衝

白血球の中性および酸性プロテアーゼについて

液によって行った．Incubationは37℃，60分行の研究は多発性硬化症において行われているが，い，5％トリタロル酢酸を2ml加えることに神経筋疾患においては殆んど行われていなより反応を停止させ，1，000g，20分遠沈後，そい5）・6）・9），12）の上清に0．5M Carbonate−bicarbonate緩ノ衝液（pH：10．5）を2ml加え，10分放置後，0．5ml

対象および方法

Folin−Ciocalteau液を加え，1時間後にL−tyrO−

対象は正常人20例，Duchenne型筋ジストロフ

Sineを標準とし，750nmの波長で測定した．蛋白ィー症7例，緊張性筋ジストロフィー症9例，多量はLowry法8）により測定した．

発筋炎5例，非炎症性ミオパテー7例，GuillainT
Barr6症候群3例，ポリニューロバナー5例，重症結筋無力症15例であった．

果（表1）

正常人の単核細胞および顆粒球の中性プロテア

血液はEDTAを含んだチューブで行い，単核ーゼ活性は0．226±0．055および2．118±0．379，酸細胞および頼粒球の分敵はB仁iyum2）・3）の変法に性プロテアーゼ活性は，それぞれ1．556±0．293おより行った．

よび1．447±0．349であった．

EDTAを含んだ血液を0．85％食塩水（1：2Duchenne型筋ジストロフィー症では頼粒球のV／V）で稀釈し，その5mlを3mlのFicol卜中性および酸性プロテアーゼ活性が1．323±0．179

Conray液に重層，400g，30分間遠沈し，単核細および0．863±0．151と低下がみられた．緊張性筋胞を採取，0．85％食塩水で2回洗浄した．顆粒球は5％dextran液と混合し，400g，10分間遠沈，

ジストロフィー症は単核細胞の酸性プロテアーゼ

0．85％食塩水で稀釈，遠沈，洗浄などを行い，顆活性が1．254±0．348と低下していた．多発筋炎では単核細胞の中性プロテアーゼが0．475±0．204と粒球を採取した．これら単核細月包および頼粒球は上昇，単核細胞および顆粒球の酸性70ロテアーゼ

0．01％Triton−Ⅹ 0．5mlに浮遊させ，SOnication

活性が1．246±0．160および1．094±0．167と低下をを行い，酵素液を作製した．

示していた．重症筋無力症では，ばらつきが多かった．ミオバナー，Guillain−Barrさ症候群および中性および酸性プロテアーゼ活性測定はSe汀a

ポリニュ「ロバナーでは異常がみられなかった．

ら11）の変法によって行った．
中性プロテアーゼ活性は0．1ml酵素液，2．5mg

考のdenaturedhemoglobin，31JLmOlesのpH7・6の察

Tris，HCl緩衝液で行い，酸性プロテアーゼ活性

一般に，中性および酸性プロテアーゼはanti−

は0．1ml酵素液，5mgのdenatured hemoglo−

gen−antibody complexesが白血球によって食食される時に分泌されるとか，組織の破壊のみなら＊九州大学医学部脳研神経内科

ず，リンパ系の刺激において重要な役割を果すこー192−

表l Neutral and acid protease activities
N eu tr a ］ p ro te a s e
No
C o n tro I
D u c h e n n e ty p e
M y o to n ic d Y StrO P h y
P o Iy m y o s itisM y o p a th y
G u 川a in −B a r r占P o Iy n e u ro p a t h Y
M y a sth e n ia g ra v is

20
7
9
5
7
3
5
15

A c idp ro te a s e

M o n o n u c l c e Tl

G ra n u To c y te s

M on on u cJ ce

C ra n u lo cy te s

0 ．2 2 6 土 0 ．0 55
0 ．18 8 土 0 ．0 5 3
0 ．2 12 土 0 ．0 72
0 ．叫7 5 土 0 ．20 上I
0 ．2 2上l 土 0 ．0 63
0 ．2 0 6 土 0 ．08 3
0 ．2 3 5 土 0 ．06 1
0 ．2 117 土 0 ．0 99

2 ．1 18 土 0 ．37 9
1 ．32 3 土 0 ．17 9
2 ．0 19 土 0 ．2 6 0
1 ．83 9 土 0 ．2 9 年
1 ．77 2 士 0 ．3 17
2 ．的 0 土 0 ．2 9 6
1 ．7 6 1 土 0 ．q 5 6
1 ．82 0 土 0 ．q O O

1 ．5 5 6 土 0 ．2 9 3
1 ．3 3 3 土 0 ．1 83
1 ．2 5 叫士 0 ．3 上
I8
1 ．2 上16 土 0 ．1 60
1 ．q 2 3 土 0 ．3 12
1．3 1 0 土 0 ．1 8 1
1 ．6 1 3 土 0 ．2 86
1 ．q 2 1 土 0 ．2 5 9

1．的 7 土 0 ．3上I9
0 ．8 6 3 ま 0 ．15 1
1．2 5 6 土 0 ．16 9
1 ．0 9 ト主 0 ．16 7
1 ．2 7 1 土 0 ．39 0
1 ．7 9 5 土 0 ．50 5
1．2 1 5 土 0 ．2 15
1．1 6 6 土 0 ．2 6 q

LJmOIesofaminogroupreTeasedJmgofproteinJhとが推定されている．

3）B6yum，A．：Isolation of mononuclear cells

単核細胞のプロテアーゼに関してはDuchenne

andgranulocytesfromhumanbloodJsolation型筋ジストロフィー症やミオパテ一においては異Of mononuclear cells by one centrifugation，

常がみられず，緊張性筋ジストロフィー症およびand of granulocytes by combining centrifu−

多発筋炎において異常がみられた．従来より，緊gation and sedimentation atl g．Scand．J．

張性筋ジストロフィー症や多発筋炎における免疫

Clin．Lab．Invest．，21（Supp197）：77，89，

学的異常について報告があり7）10）川，これら疾患

1968b．

における単核細胞のプロテアーゼ活性の異常は免4）Cohn，Z．A．＆J．G．Hirsch：Thein月uenceof

疫学的な問題との関連において興味があり，更にphagocytosisontheintracellulardistribution

検討する必要があると考える．

Of

他方，顆粒球のlysosomalenzymesに関してはgranule￣aSSOCiatedcomponents

of

poly−

morphonuclearleukocytes．J．Exp．Med．，

細菌やimmune complexesの貪食と関係があるとの報告があるl）心13）

5）Cuzner，M．L．，A．N．Davison＆P．Rudge：

Duchenne型筋ジストロフィー症および多発筋

Proteolytic enzyme activity of bloodleuko−

炎の果頁粒球プロテアーゼ活性の異常がみられたこ

CyteS and cerebrosplna18uidin multiple

112：1015−1022，1960．

とは，これら疾患の感染に対する抵抗性の問題な

SClerosis．Ann．Neuro1．，4：337−344，1978．

ども免疫学的な問題と共に検討する必要があると

6）Cuzner，M．L．，W．I．McDonald，P．Rudge，M．

考える．

Smith，N．Borshell＆

A．N．Davison：

Leucocyte proteinase activity and acute文

献multiple sclerosis．J．Neurol．Sci．，26：107−

1）Baehner，R．L．，M．J．Karnovsky＆M．L．
Karnovsky：Degranulation ofleukocytesin

111，1975．
7）Grove，D．I．，S．J．0

Callaghan，T．0．Burston＆Chronic granulomatous disease．J．Clin．

I．J．Forbes：ImmunologiCal

Invest．，48：187−192，1969．

dystrophiamyotonica．Brit．Med．J．，3：81−

2）Bt5yum，A．：Isolation ofleucocytes fromhumanblood．Furtherobservations．Methylce・

functionin

83，1973．

8）Lowry，0．H．，N．J．Rosebrough，A．L．Farr＆ficoll as erythocyte−

R．J．Randall：Proteinmeasurementwiththeaggregating agents．Scand．J．Clin．Lab．

Folinphenolreagent．J．Biol．Chem．，193：265

Invest．，21（Supp197）：31−50，1968a．

−275，1951．

llulose，dextran，and−193−9）Riekkinen，P．，J．Palo＆I．Asikainen：

multiple sclerosis and some other central

Lysosomalenzymesinthelymphocytesand

nervoussystemchronicdiseases．Eur．Neuro1．，

granulocytes of patients with multiple scle・

14：386−396，1976．

rosis．Acta Neurol．Scandinav．，56：83786，
1977．

13）weissmann，G．，R．B．Zurier，P．J．Spieler＆
Ⅰ．M．Goldstein：Mechanisms oflysosomal10）Roberts，D．F．＆W．G，Bradley：Immuno・

enzyme release fromleukocytes exposed to

globulinlevelsin dystrophia myotonica．J．

immunecomplexesandotherparticles．J．Exp．

Med．，134：149S−165S，1971．

Med．Genet．，14：16719，1977．
11）岳erra，S．，A．Grynbaum，A．Lajtha＆N．

14）wochner，R．D．，G．Drews，W．Strober＆T．

Cord

A．Waldmann：Accelerated breakdown ofand brain ofthe rabbit．Brain Res．，44：579

immunOglobulin G（IgG）in myotonic dys−−592，1972．

trophy：A hereditary error ofimmuno・Marks：Peptide hydrolasesin spinal12）Tch6rzewski，H．，J．C2：emicki＆Z．Macie−
jek：Polymorphonuclearleukocytelysosome
activities andlymphocyte transformationin

ー194−

globulin catabolism．J，Clin．Invest．，45：321−329．1966．

36）筋タンパクの崩壊とリソゾームチオール性
プロテアーゼ

木

南

研究協力者

芙 皐己●

勝 沼 信 彦■結は じ め に

果筋ジストロフィー症における筋タンパクの崩壊

筋ジストロフィーハムスター18週齢の大腿2頭には各種のプロテアーゼが協同的に働いていると筋における各種リソゾームの酵素活性とTPI活考えられる1）．本研究は細胞内タンパク質の分解性が表1に示されている．筋ジストロフィー動物

で中心的な役割を果しているリソゾームのチオー
ル性カテプシン群と，それらに対する内在性チオでは対照動物に比し，カテプシンB＆L，β−グル
タロニダーゼの数倍の活性上昇が認められるが，ールプロテアーゼインヒビター（TPI）の筋タンパ

同じリソゾームの酵素であるカテプシンC及び酸ク崩壊への関与の仕方，程度を明らかにすること

フオスファターゼの活性増加はない．内在性TPIを目的としている．今回は，ジストロフィーハム

はカテプシン活性の上昇と平行して増加していた．

スター骨格筋におけるリソゾーム酵素活性とジストロフィー筋におけるリソゾームの特定酵素

TPIを測定した．さらに，カテプシンとTPI活性の活性増加，TPIの増加がどのような機作に基づの上昇の機作をPlasmocid myopathyを用いてくかを調べるために，Plasmocidによる実験的ミ

検索した．

オバナーを使用した．Plasmocid注射後，羅息筋の構造蛋白の速やかな崩壊とそれに続く筋再生が方法

みられ，筋タンパクの崩壊とプロテアーゼとの関筋ジストロフィーハムスター（BIO14．6）とその係を調べるのに良いモデルである7）．Plasmocid

対照動物（FIB）は18週齢のものを使用した．Plas−

投与後の罷息筋のリソゾームの各種の酵素活性とmocidは国立神経センターの杉田先生より供し

TPIの変動を追った結果が図1に示されている．

て頂いた．0．5％生食液を直接ラットのひらめ筋に

カテプシンB＆L活性は約半日のi替伏期の後，急注射した．シクロへキンミドは生食にi容解させ，速に上昇し，3日巨＝こ約7倍の活性上昇が認めら

100／Jg／100g体重を1日2回腹腔内投与した．
TPIは筋ホモジネートの10000×g，20分遠心上れ，その後は減少していく．この時間経過は筋タ

清を用いて800，1分の熟処理後，木南らの方法2）

トロフィー症と同様，β−グルタロニダーゼは活性て瑚q定した．カテプシンB＆L，カテプシンC，が強く増えるが，酸フオス7アターゼ，カテ70シ

β−グルタロニダーゼ，酸フオス77ターゼ活性はンCの活性増加は著明でない．TPIは約2〜3倍筋ホモジネートを用い，Suc−Tyr−Met−β−の活性増加が認められる．リソゾームの特定酵素

naphtylamideを用いた勝沼らの方法3），GlyTArgの活性増加の機序には3つの可能性が考えられる．

ンパクの崩壊の進行とよく一致している7）．ジス−P−naphthylamideを用いてBarrett方法4），

第1は，筋タンパタ量の減少により，相対的に酵

Koldovsky5）及びIgarashi6）らの方法によってそれぞれ測定した．

素活性が増加することである．表1，図1の活性＊徳島大学医学部酵素研酵素化学

従って第1の可能性は除去できる．第2は，リソの表現はU／gtissueであり，ジストロフィーハム
スターでは筋タンパク量の減少は極めて少ない．

一195−

表l ActivitiesoflysosomalhydrolasesandTPI

性はMdの方が骨格筋より圧倒的に高い．β−ブ

inbiceps femolismuscle from normaland

ルタロニダーゼ，カテプシンCの順にM￠／骨格

dystrophic hamsters

筋の活性比は減少し，酸フオスファターゼはMd

EnzymeS Normal（A）

Dystrophy（B）（B）／（A）

pathyでは，問質へのM卓の浸潤は早期より認められるが，3日目にピークに達する．筋組織の酵

mU／g tiSSue
2

34．0土6．8

9Cathepsin B G L

97．6±30．24

9．1±4．2

49±9．9

素活性を測定する際，M卓の酵素の活性を含めて■8−GIucuronidaseと骨格筋で数倍の差しかない．Plasmocid myo−．
⊃1

274±34

304土37

Acid phosphatase758土68743土60144土39539±57

測定しており，Plasmocid確息筋で］）ソゾームのlCathepsin C

0

酵素活性の変動が2群に分れるのは，浸潤してき

1

7
3

TPI

たM≠中のリソゾーム酵素活性の差を反映しているとも考えられる．これらの結果は，勿論，Plas−
mocidによる骨格筋中のカテ70シン活性の上昇を否定するものではない．次に，第2の可能性を調べるため，Plasmocidの注射と同時に，タンパ
ク質合成阻害剤であるシクロへキシミドを投与して，リソゾームの酵素活性とTPIの増加が抑制されるかどうかを調べた．Plasmocid投与後2E］目の寝息筋の活性が表3に示されている．Plas−
mocidの投与により著明に上昇したカテプシン
B＆L活性及びTPIはシクロへキンミドの同時投与により，その上昇が完全に抑制されている．
従って，Plasmocidによる筋リソゾームの酵素活性，TPIの上昇はタンパク合成を介する反応であ
0

1

2

3

4

ることが示唆される．しかし，同時に行った組織

5

Day

図1

Changesinactivities oflysosomalhydr0−
1ases and TPI

inSoleus muscle after

学的検査では，罷息筋への細胞浸潤もシクロへキ
シミドの投与より抑制されていた．シクロへキン
ミドはカテ70シン活性の上昇と筋タンパクの崩壊

injection of plasmocid．

との関連を調べるのには好都合な手段であるので，ゾーム酵素の合成の増加に基づく可能性であり，実際にPlasmocidで誘起される筋タンパクの崩第3はマクロファージ（M￠）の外からの浸潤の結果としてリソゾーム量が増える可能性である．そ壊が，シクロへキシミドの同時投与で抑制される

れ以外に，リソゾームの酵素量の増加を伴わない

LCl，LC2及びTN−Tの分解の阻害が認められ活性上昇の可能性もあるが，TPIも平行して増えた（図2）．

かどうかSDS−PAGEで検討した．Myosin HC，ていること，活性増加に潜伏期があることはこの可能性が低いことを示唆している．さて，第3の考察可能性を検索する1つの方法として分維した

Plasmocid羅息筋におけるリソゾームチオー

M≠中の各種リソゾーム酵素活性．TPIを測定

ル性カテ70シンの活性上昇は蛋白合成を伴う遅いし，骨格筋中のそれと比較した（表2）．M卓は0．1反応であり，カテプシン群の筋タンパク崩壊初期％グリコーゲンを毎日1回3日間投与し，腹腔よ変化への関与は少ないと思われる．しかも，このり集めたもので，約60％が顕微鏡的にはMdとみなせた．比活性の比較では，カテプシンB＆L活が，どの程度の活性がM卓に依存しているのか今

活性増加は外からM卓に由来する可能性が高い

−196−

表2

ActivitiesoflysosomalhydrolasesandTPI

回の結果では判然としない．浸潤細胞（とくにinmacrophages

M少とマスト細胞）のプロテアーゼ群の筋線維崩壊の機序の解明と共に筋肉のタンパク質分解系即Enzymes Macrophages（＾）

Muscle（B）（A）／（B）
mU／mg

Cathepsin B

も

l

L

C

I

どのような関係があるか興味深い課題である．カ

O．60

9．7

β−Glucuronidase
Cathepsin

ち自己食食一リソゾーム系が筋タンパクの崩壊とテプシン活性と平行して上昇するTPIが筋タン

0．17

5

パクの崩壊の場で重要な役割を演じているかどう

42

Acid phosphatase

9

8．6

TPI

1

1．6

かも今後の問題である．
文

献1）Katunuma，N．＆Noda，T．：Cathepsin B，H
表3

Effect of cycloheximide oninduction ofandLandintramuscularproteindegradation

cathepsinB＆LandTPIinsoleusmuscle

inatrophicmuscleofmusculardystrophy．Inof plasmocid−induced rats

MuscularDystrophy（editedbyEbashi，S．），
Treatment

Cathepsin

B

Gl・

TPI

47±6

120±11295±76240±62

University of Tokyo Press，Tokyo，1982，
p．225．

Control（6）Plasmocid（5）Plasmocid・Cycloheximide（S）

2）Kominami，E．，Wakamatsu，N．＆Katunuma，
N．：Purificationandcharacterizationofthiol

46±14

103±7

proteinaseinhibitor from ratliver．J．Biol・Chem．，257：14648，1982．
3）Katunuma，N．，Towatari，T．，Tamai，M．＆Hanada，K．：Synthetic substrates forassays
ofcathepsinLandcathepsinB・J．Biochem．，
1983，in press．
4）Barrett，A．J．：AnewassayforcathepsinBl
and other thiol proteinases．Anal．Biochem．，
47：280，1971．

5）Koldovsky，0．＆Palmieri，M．：Cortisone−

evDked decrease of acidβ一galactosidase，βr
glucuronidase，1トacetylLβ−glucosamidase
and arylsulphatasein theileum of suckling

図2rats．Biochem．J．，125：697，1971．

SDSgelelectrophoreticpatternofmyofibri・

6）Igarashi，H．＆llar proteins prepared fromsoleusmuscle
treated with plasmocid and／or cyclo−

Hollander，V．P．：Acid

phosphatase from ratliver．J．Biol．Chem．，

heximide for36h．C；nOn−treated control，

243：6084，1968．

P；plasmocidinjected muscle，PH；plasT

7）杉田秀夫，中瀬浩史：Plasmocidによる実験的

mocid＋cycloheximide treated muscle，H；

ミオパチーの生化学的研究．厚生省「筋ジストcycloheximideinjected muscle・

ロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」（三好址），昭和56年度研究報告書，1982，p．227．

−197−37）plasmocidによる実験的ミオパテーの筋蛋白分解機構−筋ジストロフィー症との関連一
杉 田 秀 夫■

研究協力者

中

瀬

浩

史◆

石

浦

章

一■

とした．カテプシンDはBarretの方法に従い，酸は じ め に骨格筋，心筋には2種類の70ロテアーゼが存在する．一つは非リソゾーム系プロテアーゼであり性フォスファターゼはp−nitrophenyl phosphateを基質として測定した．クレアチンキナーゼはCa依存性中性プロテアーゼ（CANP）はこれに属

Boehringerのキットを用いて測定した．

し，もう一つはリソゾーム系プロテアーゼでありカテプシン群が含まれる．前者は蛋白質を限定分

結解し，後者は非限定分解を行う．本研究の目的は

果

1）形態学的所見

この両プロテアーゼが筋蛋白の分解に際しどの様

Plasmocidを直接ヒラメ筋内に投与すると2な関連を持って作用するのかを解明する事にある．

−3時間後には昨年観察されたと同様に所謂Wildenthalらによると心筋の筋蛋白の分解のOpaque線経の出現，またGBHAで陽性に染まる

場合，まず非リソゾーム系プロテアーゼにより限Capositive線経が認められた．電顕的にはほぼ選定分解をうけ，ついでリソゾーム系70ロテアーゼ

択的にZ帯が消失し，他の筋原線経の構造は比較的良く残存Lでいた．

により蛋白分解が完成する系と，直接リソゾーム
系プロテアーゼにより蛋白分解が完成する系が機

2）生化学的所見

構上想定されるが実証に乏しい．そこで我々は昨a）筋構造蛋白の経時的変化

年同様plasmocidによる実験的筋壊死をモデルとしてこの問題を検討した．

図1に示される様に筋構造蛋白の中でも特にα−アクチニンの低下は著明であり，注射2時間後にすでにコントロールの40％に低下し12時間で完方法

全に消失した．他の構造蛋白例えばα−トロポミ

ウイスター系ラットの一側ヒラメ筋内に0．5％

オシン，ミオシンH鎖は徐々に減少し12時間で1／

plasmocid生食溶解液0．4ml，即ち2mgを直接2に低下し，注射72時間でほぼ完全に消失した2）．
b）E−64−C及びEGTAの効果

注射し，その経時的変化を組織化学，電顕及び生
化学的にしらべた．

図2はplasmocid単独及びplasmocidと共に1

プロテアーゼの測定には組織に10倍量のPBS−

mME−64−C，又は5mMEGTAを一緒に注射3

0．1％TritonX−100を加え，グラスホモゲナイザ

時間後の筋構造蛋白のSDSケリレ電気泳動パター

ー中でホモゲナイズし，10，000×g，20分の上清ンであるが，E−64−C及びEGTA存在下でα−アを粗酵素液とし，カテプシンB＆LはSuc−Tyr−
Met−Naphthylamide（徳島大勝沼教授の御好意

タチニンの羅息筋からの遊離は部分的に抑制された3）．

による）を基質とし，1mg蛋白あたり1時間で遊C）罷息筋のクレアチンキナーゼ，リソゾーム酵

離する1n Mol naphthylamineをもって1単位

素活性の経時変化
図3は羅息筋のクレアチンキナーゼ（CK），カ

＊国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

テプシンB＆L，D及び酸性フォスファターゼのー198−

○●tl…●InMyOtlb川l■l PlOt●h●In

る事により形態学的に昨年と同様の結果を再現すM■●nOdd−lndU￠●d巾●OrO●1●

る事が出来た．
即ち注射3時間後にopaque線経の出現，且つGBHAで染色される事，また電顕的に選択的にZ帯が消失する事等の所見は埜中らが塩酸プビバカ
インをヒラメ筋に直接注射した時の所見によく似＼ており，plasmocidの作用点の一つは形質膜であ＼る事を示唆している1）．

＼ヾ

＼ヾ●

＼

さて注射3時間後のZ帯の消失及びα−アクチニンの遊離が非リソゾーム系酵素であるCANP︑︑l

によるのか，リソゾームのカテプシンの作用によ「■、るかを検討した．

＼、、こ、、

本来CANP及びカテプシンBはJ乃

、−．、●
ヽ、

○；■−●三−■；虚●→ ■ −▲Ct●−｝■

Hyo HC

●・・−．

眞一TH

γめりでは

速やかにZ帯を消失させ，α一アクチニンを遁触さ、●せる作用を持っている■〉・5）．Plasmocidと一緒にチオールプロテアーゼ阻害剤であるE−64−Cl
mMを注射するとα−アクチニンの遊離は部分的に阻害された．つまりZ帯の消化はチオールプロ
テアーゼに由来すると思われる．
次にEGTAとplasmocidを一緒に注射しCaイオンをキレートするとやはりα−アクチニンの

0

2

4

遊離は部分的に阻害された．この事実はEGTA

120

Myo HC：ミオシンH鎖
α−TM；α−トロポミオシン

各蛋白量はアクチンに対する比率で示してい

↓

る．

4
P
n
H

；α−アタチニン

2P日日一

t
C
絹
⁚
．

α−Act

3
P
粥
﹁

によりCaイオンがキレートされCANPが作用

H0111●■tt●l叫●￠tl011

図1 筋構造蛋白の経時的変化

カテ70シンB＆L，及びDは注射3時間後はむ

冨雷

二▼■

した事を示している．

・●■

下し，48時間後には殆んど消失し，筋壊死が完成●●l
曾●

経時的変化である．CKは注射3時間後約1／4に低しろ低下の傾向を示したが48時間後は著明に増加
し，カテプシンDはコントロールの約3倍，カテ
プシンB＆Lは9倍に増加した．しかし同じリソ
ゾーム酵素である酸フオス77ターゼは増加しな
かった3）．
考

1■■
図2

『■●

一一←
一■■■
EGTA E−64−C

筋構造蛋白のSDSゲル電気泳動パターン
C；未処置
P：plasmocid投与
1；control，2；plasmocid単独

察

3：plasmocid＋EGTA，

Plasmocidを直接ラットのヒラメ筋に注射す−199−

4；plasmocid＋E−64rc

タロファージに由来するものかが問題となる．

Ly●○●01巾■IEn王yl¶●▲￠tl州l●●lnPl■■m061dJTr●▲t●d S0l●u■

我々は注射48時間後の筋肉について抗力テプシ
ンB抗体（徳島大学勝沼教授，木南講師の御好意による）による螢光抗体法を用いてその局在を調べてみると，カテプシンBは殆んどマクロファー
ジ内に局在する事が明らかになった．この事から
plasmocid注射による筋壊死の場合マクロファー
ジ由来のカテプシンが筋蛋白分解にかなり関与しているものと想像される．
筋蛋白分解の二段階方式（two step mecha−nism）

図3h・・t n両●C仙圏48h州●−叫 t加
図3⊂コtontro■

Plasmocidの作用点はなお明らかではないが，塩酸ブビバカインの場合との類似性から考えるとれ■5羅息筋のカテプシン活性

少なくても作用点の一つは筋形質膜と考えられる．
その結果，細胞外のCaイオンの過剰のin8ux

Schenna

01possibk

PathwaysofproteolysIS■

によりCANPが活性化されZ帯は選択的に消失
HyoHbrlll●r PlOt●ln■

し（限定分解），筋原線経のdisassemblyが起る．
これが第一段階である．

On￣lyt○■〇mtl●n王yln●■

C▲脚卓．xt柑C。仙1．．C〜◆

Cllm飢帽●d
叩t●〇回一、、、・・・▲
Pl■■mOCld−lndlJt●d

ついでdisassemblyした筋原線経はリソゾー

P●ltl▲Iprot●01y●t●lnto

ム系プロテアーゼ即ち各種のカテプシンにより，

D●9−●d▲tl01101Z−b●nd暮

非限定分解をうけ蛋白分解は完成する．これが第PrOt●01y●I■一・−・一事二段階である．この際浸潤するマクロファージ由alkalln●．ごご㌫7㍍●ntylれ●■来のカテプシン群が重要な役割をはたしていると思われる．

PlOt●■■●■●tC？

C●th●P●ln■

また浸潤するマクロファージと共に肥満細胞も（：：：：ニ震L

inductionをうけ，肥満細胞由来のセリン性プロ
テアーゼなどのアルカリ性プロテアーゼも第二段

Compl●t●plOt●01y●i●

階に関与すると思われる（図4），デュシャンヌ型

図4 筋蛋白分解機構周筋ジストロフィー症における筋蛋白の分解の場合出来なくなった為と想定され，plasmocid注射初期に現われるZ帯の消失は非リソゾーム系

機構はplasmocidの場合とは異なるが，膜異常によるCaイオンの過剰のinfluxとその結果生じる

CANPによる事が想定される．

CANPの活性化は現象的に類似性があり，従ってにあてはめて考えてみると，形質膜の異常を起す

リソゾーム系プロテアーゼ即ちカテプシンB＆L，及びDは注射3時間は増加せず，むしろ低下

この場合もplasmocidの時と同様に二段階方式
による筋蛋白分解機構が想定されよう．

した事はZ帯の消失がカテ70シンによらない事を側面から支持するものであろう．しかし注射48時

ま

間後は著明に増加し筋壊死の進行とよく平行している様に思われる．

とめ

Plasmocidの直接注射による骨格筋の蛋白分
解は第一段階は非リソゾーム系，第二段階はリソ

さてカテ70シン群の増加は本来骨格筋に存在すゾーム系の二段階方式に従っており，第一段階はるリソゾーム自身なのか，筋細胞外の浸潤したマ細胞外からの過剰のCainfluxによるCANPの−200−

活性化とそれに伴うZ帯の選択的消失，及びα−muscle protein degradationin muscular

アクチニンの造出である．第二段階では第一段階

dystrophy．MolecularAspectsofNeurologicalによりdisassemblyした筋原線経がリソゾーム
系カテプシンによる非限定分解によって蛋白分解

Disorders（Austin，L．，edited），Academicは完成する．これと共通の機構がデュシャンヌ型

4）Busch，W．A．，Stromer，M．H．，Goll，D．E．＆Press，Australia，in press．

Suzuki，A．：Ca2＋−aCtivated removal of Z−筋ジストロフィー症の場合も想定される．

linesfromrabbitskeletalmuscle，J．CellBio1．，

文

52：367，1972．

献1）埜中征哉，小林栄一，岡田理芙：骨格筋の再生

5）Noda，T．，Isogai，KリHayashi，H．＆Katu−

に関する組織学的研究．厚生省「筋ジストロフ

numa，N．：Susceptibilities of various

ィー症の発症機序に関する研究」（三好姓），昭myo丘brillar proteins to cathepsin B and和56年度研究報告書，1982，p．15．

morphological alteration of isolated2）中瀬浩史，石浦章一，埜中征哉，杉田秀夫：未発表テ −タ．
3）Ishiura，S．＆

myofibrilsbythisenzyme．J．Biochemり90：

371，1981．

Sugita，H，：Mechanisrn ofー201−38）Duchenne型筋ジストロフィー症にみられる
Opaque fiberの筋構造蛋白に関する研究

荒 木 淑 郎●
研究協力者

内

野

誠■

士
口

田

理● 植 川 和 利●
対象と方法

は じ め に

4−25歳のDMD患者12例について筋生検を行

I）uchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の生検筋には変性・壊死筋線経に混じて，いわゆるなった．生検部位は筋萎縮の高度な部位はさけて，

opaquefiber と呼ばれるHE染色，Gomori染
色，あるいはPAS染色などで浪染する円形のや

上腕二頭筋，月井腹筋，あるいは前脛骨筋で∵実施しや月巴大した筋線経が高率に認められ，DMDにおをopaquefiberの分離に用いた．すなわち検体はける組織所見の特徴の一つとなっている1）．この小さな筋束に分けて水冷のrelaxingsolution（4Opaquefiberの病的意義については種々論議され

mM ATP，4mM EGTA，4mM MgC12，0．12てきたが，DMDのみならず各種神経筋疾患，さらMKCl，20mMtrisaminomethane，20mMmaleic

た．生検筋の一部は組織化学的検索に用い，残りに健常人の生検筋にも稀にみられるところから，

acid，pH6．8）に浸したものを，暗視野実体顕微鏡

一つには筋生検過程や標本作製の過程で生じた人及び偏光顕微鏡下に電顕用ピンセットを用いて工産物とみなす意見2）と，もう一つには単なる人

Opaquefiber並びに正常横紋構造を有する対照筋工産物ではなく

DMDの筋変性過程における初期

線経を分赦した（図1）．分証した単一筋線経は約変化像としてとらえる意見3〉−6）が相対立しており，

10JLlのprotein solution（1％SDS，10mMβT

一定の結論がでるまでには至っていない．特に後mercaptoethanol，40％glycerine，0．03％brom・者の考えは最近のDMDの成因に関する膜異常

phenolblue，40mM tris−0．24Mglycin，pH8．5）

説7卜10）に結びつくものであり，膜異常に伴う細胞中にて溶解し，ミニスラブ型電気泳動装置を用い

外Ca十十のmassiveinfluxが筋原線経のhyper−

Laemmliの方法11）に従ってSDSポリアクリル

COntraCtion並びにCANPに代表されるCa十十

アミドゲル電気泳動を行なった．泳動したゲルはdependent proteaseの活性化をきたすことによ

Coomassiebrilliantblueで染色後，densitometer

り，これに感受性を有する筋構造蛋白の分解を惹にて比色定量した．

起し，筋線経が変性・壊死に陥る一連の過程で比結果較的早期に出現する変化としてopaque fiberをとらえている5），6）．

DMD12症例の生検筋より分散したopaque fi・

今回我々はopaque fiberの病理発生的意義に

ber及び対照筋線経の中からtypeI fiberの泳動

ついて生化学的に検討するために，DMD生検筋からopaquefiberを単一筋線経として分散し，筋パターンを呈するopaquefiber9検体，対照筋線
維19検体を選んで比較検討を行なった．偏光顕微

構造蛋白の分析を行ない興味ある結果を得たので鏡下で正常横紋構造を失ない，特有の光輝性を有報告する．

するopaque fiberとしてとらえられる筋線経の約70％は対照筋線経との間に筋構造蛋白の変化が＊熊本大学医学部第一内科

Opaquefiber（opaquefiberb）ではmyosinheavy

みられなかった（opaque fiber a）が，約30％のー202−

引ectrophoretic Pattern of

N

図1

N

N

N

O

O

O

N

A group ofteased，unfixed fibers asseen
throughapolarizedmicroscope．Noticethe
single opaque fiber（arrow），Whichlacks

図2aIn this electrophoretogram．thereis no

the normal banding pattem With peculiar

ascomparedwiththecontroIs．0：opaquebrightness．

fiber，N：Nomal control fiber．

Obvious changeinany cornponent of themyofibrillar proteins of the opaque fibers

chainの減少を始め，aCtinを除く低分子蛋白の全般的な減少を示した（図2a，b，図3，表1）．α−aCtininについてはopaquefibera，b共有意の変化は認めなかった．TroponinI，Cについては対照筋でも含量が橿めて微量であり，一次元の泳動のみではbandの同定並びに含有量の増減について言及することは困難であった．
考案

ヒト骨格筋線経は組織化学的にmyosinATP

ase染色によりtypeI fiber（赤筋）と，type
IHiber（白筋）に分けられるが，生理学的な特性

図2b Another electrophoretogram of the opa−
que and control fibers．The myosin
heavychainandlowmolecularproteinsof

も，また筋構造蛋白の組成も異なっている12）．

theopaquefiberisclearlyreduced，butthe

DMD生検筋を用いた筋構造蛋白の変化の分析は

actin bandis wel1−preServed（arrow）．

Sugitaら13）・14）により行なわれてきたが，いずれもtypeI，IIfiberが混在し，また正常横紋構造を有する筋線維及び種々の変性段階にある筋線経がした．Type Xの由来については未分化の再生筋線経であろうと推定している．ただ高木らの用い混在したmassとしての変化の分析であり，個々

た単一筋線経は無作為に選んだいずれも正常横紋の病的筋線経についての検索はなされておらず，構造を有する筋線経であり，横紋構造の変化を有

また文献的にも殆んど報告がない．Takagi

する病的筋線経についての検索は行なわれていない．

ら15）〜17）はDMD生検筋から単一筋線経を分散し，一万0paque fiberの電顕的観察ではChouら5）ストロンチウムイオンに対する感受性の違いからは早期よりのZ−band及びthin filamentの消失

電気生理学的にfibertypeを区別し，二次元の電気泳動による筋構造蛋白の分析を行ない，DMDを述べており，埜中ら6）もZ−bandの崩壊を報告

においてはtypeI，IIの中間的性質を有するty−とopaque fiberの筋構造蛋白の分析ではZ−band

pe xと呼ぶ筋線経が高率にみられることを報告の構成蛋白であるα−aCtininが減少していることしている．従って電顕的観察と結びつけて考える−203−

表l Percentageofmyofibrillarproteinsinopaqueandnormalfibers。霊霊ニs H霊 a−Actinin Actin Troponin−T ニ器 よ禁t．C慧Et2
0？訂Ue 6 32・2土2・4 8・6士1・428・9±4・3 7・9土0・9＆9土日7・5土2・06．1±1．6

0闇Ue 3 16・6±1・2a）12・3土3・441・8±6・610・2±4・06・1±2・98・5±3・84．5±2．1
Norma11934．0±4．4b）7．3±1．4 27．7±3．2 8．8土1．17．8土2．0 8．3±2．3 6．0土1．4＊＊P＜0．01（a）versusb））
The

myosinheavy

chain

of

opaqueMean±S．D．

fiber…bissignificantly

decreased．

On the contrary，the percentage of actinis relativelyincreased．
ContentofMyofibr

ない線経と，明らかに差がある線経がみられたの

EarProteinsinOpaqueandNormalFibers（Actin＝りは興味ある事実であり，Opaque fiberの中には筋T ・ ⊥ ■ lT・千一

変性過程にある筋線経としてとらえられるものがか。rmalF・ber（M土SD）埜中らは詳細な組織化学的及び電顕的検索から

妻opaqUeF・berHM土S▲D〉

opaquefiberには人工産物的に出現するものの他に，変性過程にある線経としてとらえられるもの

王opaqueF叱噌rb【M土SD）があることを述べているが，我々の生化学的分析
でもopaque fiberとしてとらえられる筋線経には対照筋線経と比較して泳動パターン上特に差が河
図3

童棋王壬恒Ⅰ

含まれている可能性が示唆された．今後更に症例数を増し，二次元の電気泳動による微量成分の検Since the actin bands of the opaque andCOntrOlfibersexaminedinthisstudywereallwell￣preSerVed，WeCOmpared

索も含めて，詳細に検討していく必要があると思
われる．
要

the

COntentSOfeachmyofibri1larproteinSofthe
Opaque fibers with those of the control
fibersonthebasisoftheactincontents．The

約

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）における

opaque fiberの病的意義について生化学

Ordinateofthisdiagramrepresentstheratio

的に検討するために，Opaquefiberを生検筋からOfthecontentofeachmyofibrillarproteins

単一筋線経として分散し，筋構造蛋白の分析を行

tothatofactin．OpaquefiberNa

displaysthe elettrophoretogram ofalmostnormal，
andopaquefiber￣b【showsthe

なった．4−25歳のDMD12症例から9検体のopaquefiber並びに19検体の正常横紋構造を有す

generalreductionofmyosinheavychainandotherlow molecular proteins．

る対照筋線経について比較検討を行なったが，形が予想されたが，我々の今回の研究結果ではα−

態学的にopaque fiberとしてとらえられるものには対照筋との間に電気泳動パターン上特に変化

actininに関しては明らかな変化がみられなかっがないもの（opaquefibera）と，myOSinheavy

た．このことは今回我々が用いた方法では分触しChainその他の成分の減少を示すもの（opaque

た筋線経を直接SDSi容液中に溶解するために，Z−bandから筋形質中に遊離した状態で存在するαfiberb）がみられた．今回の実験からopaquefiberとしてとらえられる筋線経の一部は実際に筋構造−aCtininもそのまま泳動され，みかけ上は変化が蛋白の変化を有する変性過程にある筋線椎が含まあらわれない可能性も考えられた．

れている可能性が示唆された．
−204−

文

献

alterationoftroponinsubunitsinDMD．Proc．

1）Boxler，K．＆Jerusalem，F．：HyperTeaCtive（hyaline，Opaque，dark）muscle fibers

inDuchenne dystrophy．A biopsy study of16
dystrophy and205

0ther neuromuscular

Japan．Acad．，52：260−263，1976．
9）schotland，D．L．，Bonilla，E．＆Van Meter，
M．：Duchenne dystrophy：Alteration inplasma membrane struCture．Science，196：
1005−1007，1977．

diseasecasesandcontroIs．J．Neuro1．，219：
63−72，1978．

10）carpenter．S．＆

Karpati，G．：Duchenne2）Karpati，G．：A review of the morphologiC

muscular dystrophy．Plasmamembranelossfeatures and consequences of muscle cell

initiates muscle cell necrosis unlessitis

necrosisinDuchenne disease：Clues to therepaired．Brain，102：147−161，1979．

pathogenesis．InInternationalCongressSeries11）Laemmli，U．K．：Cleavage of structural

434，Neurology，ed．byJargerW．A．H，，Bruyn

PrOteinsduringtheassemblyoftheheadof

G・W．，Heijstee

A．PJ．，

Excerpta

Medica，

Amsterdam，1978，p．117−131．

bacteriophageT4．Nature，227：680−685，
1970．

3）schmalbruch，H．：Segmental fiber break−down and defects of the plasmalemmain
diseased human muscles．Acta Neuropathol．
（Berl．），33：129−141，1975．

12）杉田秀夫，米本恭三：神経支配と筋蛋白．神経進歩，19：805−815，1975．
13）杉田秀夫：ミオパテーと収縮蛋白．第18回日本医学会総会会誌：1411−1415，1971．

4）Cullen，M，J．＆Fulthorpe，J．J．：Stagesinfiber14）sugita，H．，Katagiri，T．，Shimizu，T．＆breakdowninDuchennemusculardystrophy．

Toyokura，Y．：Studies on the structural

An electron−microscopic study．J．Neurol．

proteinsin various neuromusculardiseases．

Sciり24：179−200．1975．

In5）chou，S．M．，Miike，T．，Crosby，T．W．＆Amato，
S・：UltrastruCtureOf

opaquefibers

Basicresearchin

myology，（ed．by

KakulasB．A．），ExcerptaMedica，Amster−dam，1973，pp．291−297．

（OFs）

in Duchenne muscular dystrophy（DMD）．

15）Takagi，A．，Yonemoto，K．＆Sugita，H．：

Neurology（Minneap．）．29：594，1979．

Singlehumanmusclefibers：Activationby6）埜中征哉，杉田秀夫‥進行性筋ジ．ストロフィー症の筋病理−Opaque線経を中心として−．神Calcium and strontium．Neurology

経進歩，24：718−728，1980．

（Minneap．），28：497−499，1978．
16）Takagi，A．＆

Nonaka，I．：Duchenne

7）Mokri，B・＆Engel，A・G・‥Duchennedystro−

musculardystrophy：Unusualactivationof

phy：Electronmicroscopicfindingstoabasic

Singlefibersinvitro．Muscle Nerve，4：10

Orearlyabnormalityintheplasmamembrane−15，1981．

17）高木昭夫：シンポジウムⅠⅠ：進行性筋ジスト

Ofthemusclefiber．Neurology（Minneap．），
25：1111−1120，1975．

ロフィー症の成因をめぐって（2）再生現象より

8）Sugita，H．＆Toyokura，Y．：Alterati。n。ftroponin subunitsinのア70ローチ一生理生化学的立場より−．臨床
神経，21：1088−1091，1981．

progressive muscular

dystrophy（DMD）．ⅠⅠ．Mechanism of the

一205−39）筋糖原病の病態分析−新しいスクリーニング
指標物質について
垂
研究協力者

日

井

清一郎■

嶺

尾

郁

夫■

清

水

孝

郎■

鷲

見

誠

一●

河

野

典

夫■

おける運動筋の病態代謝の分析を試みた．

的

骨格筋において糖原分解から解糖系を経て乳酸にまで代謝される過程は，筋運動時のエネルギー方法

産生糸として極めて重要である．本代謝過程が障

対象：糖原病Ⅴ型2症例（2家系），Ⅵl型2症例

害される疾患として，糖原病Ⅴ型（筋ホスホリラ（2家系），H型1症例及びその他のミオバナー症

ーゼ欠損症）とⅥ1型（ホスホフルクトキナーゼ欠例（対照群）について検索した．糖原病各型は，損症）が，既によく知られている．
Ⅴ型は，1951年McArdleによって報告1）されて全て生検筋について，当科で酵素学的に診断確定

以来，約30年を経た今日，世界で少なくとも60例を越える症例が見出されている．我国においては，

部分的阻血下前腕運動試験（Semi−ischemic
ForearmExercise Test）；

1975年に初めて報告されて以来，7例が診断され血下で行わせる従来の方法では，運動継続の可能している．
前晩運動を完全阻な時間が，特に筋糖原病患者で短く，激烈な筋症ている．
ⅥⅠ型は，1965年私共の報告2）以来，アメリカ・フ状を呈することさえある．そこで，私共は平均動

ランス・イギリス・カナダ・イタリア・スペインからの報告が相つぎ，現在20症例（16家系）を数

厩（最高血圧言最低血圧）で上腕部を緊縛する

える．これには，最近私共が確定診断した本邦第部分的阻血下Semi−ischemicで，2分間で120回2家系目に相当する横須賀共済病院の2症例（兄妹）3）が含まれる．
一一万，Ⅴ型やⅥⅠ型の他に，類似した筋症状を呈するミオパテーとして筋解糖系の2−3の酵素欠損症も最近新たに見出されている4）・5）．したがって，これらの酵素欠損症をミオパテ一群の中から適切にスクリーニングしていく必要性が，従来にも増して高くなっている．

几
．爪

611
G
N

濾

r−
V

図1

11N 0

血中指標物質を見出すことを目的に，筋糖原病に

0■ ノ ー 1 1

ー2

本研究では，迅速に且つ簡便に測定し得る新しい

4．−洲

そのスクリーニング方法として，今Hまで前腕運動による乳酸産生の有無が専ら検索されてきた．

部分的阻血下前腕運動試験
Semi・ischemic forearm exercise test

＊大阪大学医学部第二内科−206−

ゴム球を握る運動を行わせる方法を考案した（図の上昇反応を認める．Ⅴ型・Ⅶ型では，いずれの

1）．これにより筋症二状は軽減し，且つ運動量も症例においても，乳酸上昇を認めない．なお，糖増加できた．そこで，以下の検索に本法を採用し，原病であっても，運動エネルギー源としてのグリ得られた運動筋の還流静脈血中の代謝物質を分析

コケン代謝に障害のないⅠⅠ型では，対照群に匹敵する上昇反応を認める．

した．
乳酸・ビルビン酸の測定は，6％週塩素酸で抽（2）ビルビン酸（図3）
対照群では，乳酸と同様にビルビン酸の上昇反出した全血について，酵素法で行った．静脈血pHは，自動血液ガス分析装置を用いて測定した．ア

応を認める（頂値34±21JLM，mean±SD）．一

ンモニアの測定は，EDTA加血環について，酵素法（glutamate dehydrogenase）で行った．

方，Ⅴ型・Ⅵl型群では上昇を認めず，運動負荷2

成分後に得られるビルビン酸値は，むしろ前借より低下する（−19±7／JM）．

績（1）乳酸（図2）
対照群では，頂値2810±1230JLM（mean±SD）

0
2
0
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買一一j■土手bj

POO一q S⊃Ouぎー○エd0
3〇︑7tt︼
亡○■︸■盲︼●︸■︼‖一一

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6

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7．2

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『『h，，．
ー2

図2

nPeV（TM・）

−2

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t㈹（mM）

4

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t■′■Ⅶ（【≠）⊂＝＝コEx

部分的阻血下前腕運動試験における糖原病各型の乳酸の変化

−2

0

2

4

6

time（min）

図4

部分的阻血下前腕運動試験における静脈血
pHの変化

0
0
6
0
0
1 一
0
0
0
0
一
0
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3
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︵モ︳5■b▲l●竜Pbq■′与たこ︳∫

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⁝●しぎ

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t一∩¶■（W）

図3

書6分的阻血下前腕運動試験におけるビルビン
酸の変化

図5

−207−

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6

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I

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6

t■∩Ⅶ（m爪）

部分的阻血下前腕運動試験におけるアンモニ
アの変化

（3）静脈血pH（図4）

Chargeの安定化を図ると説明している7）．一方．

対照群では，静脈血pHは低下する（0．14±0．05高いAdenylate Deaminase活性が認められる骨格筋においても，本代謝系は同様に筋運動のエネ低下）．Ⅴ型・ⅥⅠ型では，pHの減少を認めない．
（4）アンモニア（図5）ルギー代謝に関与していることが示唆される．運対照群では，頂値56±38〟g／dlの上昇反応を認

動筋での本代謝系の重要性は，近年見出された骨めた．ⅠⅠ型でも，対照と同程度の上昇を認めた．
ところが，Ⅴ型・ⅥⅠ型では，いずれの症例におい

格筋Adenylate Deaminase欠損症における知見8）からも明らかである．

ても対照に比し著しく過剰な上昇（352±142JJg／

さて，Ⅴ型・ⅥⅠ型におけるアンモニアの過剰反dl）を認めた．

応の1つの機作として，解糖代謝障害に基づきATP産生が欠如している筋内で，ADP・AMPが考案

私共は改良した部分的阻血下前腕運動試験Semi−

過剰に増加する結果，AdenylateDeaminaseが強く活性化されることがあげられる．つまり，運動

ischemic Forearm Exercise Testによって，被筋のAdenine Nucleotideの変化にひきつづいて験者の負担が軽減され，且つ対照者では採血初期おこるenergy chargeに頂値の現れる明瞭な乳酸上昇反応が得られるのATP（エネルギー）産生の欠如する筋糖原病におで，上昇反応が欠如するⅤ型・Ⅵ1型を選別するのいてより誇張した形をとって発現したと考えられは容易である．

る．またAdenylateDeaminaseによってAMPが除去される結果，一方，ビルビン酸の増加度は少なく，本物質の測定上の問題も考慮すると，結果判定は乳酸ほど2ADP容易でない．但し， ■ビルビン酸の低下反応が観らを保持する反応機構が，Myokinase＝

ATP＋AMPれたなら，Ⅴ型やⅥⅠ型が強く疑われる．それは，の反応が促され，ATP欠乏を補うと考えられる．

阻血による低酸素状態のため，ピルビン酸＋機作につし＿、了は，一さらに検討を要する問題であるが，本所見は筋糖原病に共通する特徴的所見とNADH＝＝＝三乳酸＋NADの平衡が右方へ傾く

して，スクリーニングへの応用が期待される．

時，解糖系からの供給がないⅤ型やⅥⅠ型ではピルビン酸の低下反応として観察されるからである．

前腕運動試験における結果の判定は慎重に行う

対照群では，乳酸やビルビン酸産生を反映して必要がある．たとえば，正常者であっても，運動明らかな静脈血pHの低下（酸性化）が認められ量が少ないために乳酸上昇が少ない場合や，筋糖

る．乳酸・ピルビン酸産生のないⅤ型・ⅥⅠ型では，原病患者であっても，運動筋による乳酸産生以外

pHの低下は認められない．ベッドサイドで結果を迅速に知り得る簡易法として，pHの測定が有の要因（肝一・赤血球における乳酸産生など）によ用である．

ある．したがって，前腕運動負荷試験において，って軽度ではあるが乳酸増加反応を認める場合がⅤ型・Ⅵ1型の両型において，アンモニアの過剰上昇反応が認められることは注目すべき点である．

乳酸の他，pHあるいはアンモニアとい？た複数の物質を測定することによって，いっそう確実な運動筋ではスクリーニングが可能になると思われる．
Adenylate Deaminase

IMP＋NH3

結の反応によって，アンモ土アが産生されることが語

栃原病Ⅴ型・ⅥⅠ型のスクリーニングには部分的明らかにされ七いる6）．但し，本代謝系の生理的意

阻血下前腕運動試験において，乳酸・ビルビン酸

義については依然不明な点が多い．Chapmanとの測定以外に，静脈血pHやアンモニアの測定がAtkinsonらは，肝において本代謝系がATP：有用である．

ADP比を保持することにより，細胞のenergy
−208−

文

献

edmetabolicmyopathy・Science，212＝1277，

1）McArdle，B．：Myopathydue to a defectin
muscle glycogen breakdown．Clin．Sci．，10：

6）Lowerstein，J．M．，etal．：Thepurinenucleo＿

13，1951．

tide cyclein skeletal muscle．Federation

2）Tarui，S．，et al．：Phosphofructokinase defi−
Ciency1981．

Proceedings，37（9）2308，1978．

inskeletal muscle．A new ty匹Of7）chapman，A．G．，et al．：Stabilizati。n。fglycogenosis．Biochem．Biophys．Res．Com−

adenylate energy charge by the adenylatemun．，19：517，1965．

deaminasereaction．J．Biol．Chem．，248：8309，

3）Koyama，H．，et al．：inpreparation．

1973．

4）Kanno，T．，et al．：Hereditarydeficiency of8）Sabina，R．L．，etal．：Disruptionofthepurine

lactatedehydrogenaseM−Subunit．Clin．Chim．

nucleotidecycle：apotentialexplanationfor

Acta，108：267，1980．

muscledysfunctioninmyoadenylate deami−

5）DiMauro，S．，etal．：Humanmusclephosph0−
glyceratemutasedeficiency：newlydiscover−−209−

nase deficiency．J．Clin．Invest．，66：1419，
1980．

40）多発性筋炎における抗ミオシン抗体の診断的意義について
垂

井

清一郎●

田

圭

司●

上

小笠原

三

郎●

蓑

多発性筋炎の診断検査法としては血清酵素活性

抗

研究協力者

和

野

聡■

狭

間

敬

意●

進●

高

橋

光

雄●

原

の測定，筋電図，筋生検が最も頻繁に用いられてミオシンは死後4時間以内の正常ヒト骨格筋よいるが，これらの検査法はいずれも多発性筋炎にりPerryら1），Richardsら2），Samahaら3）の方法

特異的でなく．ために多発性筋炎と他の筋神経疾に従って精製した．精製されたミオシンをタロラ

患，特に筋ジストロフィー症との鑑別が困難な場

ミンT法4〉により125Ⅰで標識し抗原とした．125ト

合も必ずしも少なくない．一方．多発性筋炎は自己免疫疾患の範疇に属すると考えられているが，ミオシンのSpeCific activityは1．0×1018cpm／
moleであった．

自己免疫疾患においては特定の自己抗体の測定が抗体価測定

その診断に役立つことが多い．今回我々は筋の主抗体価測定は二抗体法によった．抗原2×10￣10

要成分たるミオシンに対する血中自己抗体のラジMと各濃度の血清をincubate後第二抗体を追加，

オイムノアッセイ法を開発し，同法で測定した血上清を遠沈除去した後沈殿のradioactivityをγ
カウンターにて計測した．

中抗体価が多発性筋炎を含む各種筋神経疾患にお患者血清値より正常血清値を差し引いた値をプ

いてどの様な分布をとり得るかを検索した．

ロットし，titrationcurveの直線部分より抗体価

対象および方法を計算した．抗体価はmoles of myosin pre−

患 者
多発性筋炎20名，筋ジストロフィー症15名（Duchenne型2名，Becker型3名，肢帯型1cipitated perliterofserum（M）として表わし

名，遠位型2名，眼筋・咽頭筋型2名，筋緊張性ジストロフィー5名），重症筋無力症10名．運動ニ

抗体特異性の検討

ューロン疾患8名（Kugelberg−Welander病2
名，ALS6名），末梢神経疾患6名（中毒性多発神経炎3名，Charcot−Marie−Tooth病2名，急性間軟性ポルフィリン症1名），自己免疫疾患7名（SLE4名，PSS3名），その他神経疾患30名（脊McDonaldら5）の方法に従った．血清と非標識ミた．患者血清値が正常血清値のmean＋2SD以内の時は抗体陰性とした．
抗ミオシン抗体のミオシン特異性の検討はオシンをincubate後precipitateを遠沈除去，上清における抗体の有無を先に述べた二抗体法により検索した．
結果

髄小脳変性症6名，Shy−Drager症候群3名，Par・
kinson病4名，Huntington病1名，脳性麻痺2名，てんかん1名，神経ベーチェット病3名，多発性硬化症3名，脳血管障害2名，脊髄症5名）．

アミドゲル電気泳動図を示す．1本のheavy＊大阪大学医学部第二内科

Chain（分子量20万）と2本のlight chain（分子量2．5万，2万）が認められた．

ミオシン
図1は精製したミオシンのSDSポリアクリル

一210−

表l Absorption of autoantibodies to skeletal
musclemyosinwithpurifiedhumanSkeletal
muscle myosin．

Radioactivlty precIpitated by
8eruln absorbed vith

HyoSinPatient

Norma1●
H●H

Buffer★■943±292856±62914±34907±58NS

p＜0・001

All values are mean±SD and expressed a8C．P．m

0・05初pbosphate buffer（pf17．0）
not

S1gnificant

抗体価測定
図2は抗ミオシン抗体陽性例のtitrationcurveを示す．図より抗体価は4．00×10￣10Mと計算される．
抗体特異性
表1に抗ミオシン抗体のミオシン特異性を検討した結果の1例を示した．非標識ミオシンとあらかじめincubateした患者血清では対照に比べ有意な抗体価が得られなかった．
抗ミオシン抗体
表2に各種筋神経疾患における抗ミオシン抗体の出現率と抗体価の平均値を示した．多発性筋炎における抗ミオシン抗体の出現率は90％で筋ジストロフィー症（20％），重症筋無力症（20％），運動ニューロン疾患（12．5％）等における出現率に比べ有意に高率であった（p＜0．001）．また平均抗体価も多発性筋炎においては4．24×10−10Mで筋ジストロフィー症（0．37×10￣10M），重症筋無力症（0．20×10−10M），運動ニューロン疾患（0．12×
10￣10M）等における平均抗体価に比べ有意に高値であった（p＜0．04）．
考案

抗ヒト筋ミオシン抗体が他疾患に比べ多発性筋

2

4

6

8

Serum uLJ）
図2

10

炎において有意に高率，高値に出現したことより
抗ヒト筋ミオシン抗体測定は多発性筋炎の鑑別診
断上有用な検査であると考えられる．しかし筋ジストロフィー症，重症筋無力症，運動ニューロン

−211−

表2

Anti・myOSinantibodyinpatientswithandwithoutpolymyositis

Diagnosis

N0．teSted

No．positive

Percent

positiveMean

titre＊（Xl0−10H）

8⊥

Polymyositis

90．0
3

Muscular dystrophy

2

Myasthenia gravis⊥

Motor neuron disease

20．0

0．37±0．21

20．0

0．20±0．1412．5

0．12±0．12

0

0

0

0

0

Peripheral neuropathy

0

Hiscellaneous neurological4．24土1．13

diseases
Presumed autoimmune diseases
Without polymyositis

●Mean

土

●Mean土SD疾患においても低率ながら出現することより，抗ヒト筋ミオシン抗体は多発性筋炎に特異的なもの

文献1）perry，S・Ⅴ・：Myosin adenosinetriphosp・でなく，従ってその病態においては一次的な役割

hatase・In Methodsin Enzymology

を果している可能性は少ないと考えられる．これ（Colowick，S．P．＆Kaplan，N．0．，Eds．）

まで多発性筋炎患者における抗ミオシン抗体につAcademic Press，NewYork．1955，pp．582−

2．

いてはCasparyら6）の報告があるだけだが，出現率については正常群と患者群とで有意差が見出さ

2）Richards，E．G．，Chung，C．S．，Menzel，D．B．＆

れなかった．しかし用いた方法が粗ミオシン分画

01cott，H．S．：Chromatographyofmyosinonを用いた赤血球凝集反応である等の問題があり，

diethylaminoethyl−Sephadex A−50．Bioche−588．

このために我々の結果と差異を生じた可能性があmistry，6：528，1967．

る．最近．多発性筋炎の鑑別診断上有用な検査と3）samaha，F．J．＆Gergely，J．：BiochemiStryof

して抗ミオグロビン抗体7），抗ウシ胸腺抗体軋9〉・10〉

normal and myotonic dystrophic human測定が提唱されているが，本法と合わせ用いるこ

myosin．Arch．Neuro1．，21：200，1969．

とにより多発性筋炎は今後より的確に診断される

4）Greenwood，F．C．，Hunter，W．M．＆Glover，

ものと思われる．また多発性筋炎の再分類も将来

J．S．：Thepreparationof131トIabelledhuman

可能になると思われる．

growthhormoneofhighspecificradioactivity．
Biochem．J．，89：114，1963．

まと5）McDonald，B．L．，Dawkins．R．L．＆Robinson，

め

多発性筋炎の患者血清において抗ヒト筋ミオシ

J．：Myosin autoantibodies reacting with

ン抗体が他の疾患に比し高率，高値に検出された．

Selective muscle fiber types．Muscle Nerve，

したがって抗ヒト筋ミオシン抗体測定は多発性筋炎鑑別診断上有用であると考えられる．

2：37．1979．

6）caspary，E．A．，Gubbay，S．S．＆Stern，G．M．：
Circulating antibodiesin polymyositis andOthermuscle−WaStingdisorders．Lancet，ii：
ー212−9）Wolfe，J．F．，Adelstein，E．＆Sharp，G．C・：

941，1964．

Homma，M．：Circulating

Antinuclearantibodywithdistinctspecificity

autoantibody against human myoglobinin

for polymyositis．J．Clin．Invest・，59：176，

polymyOSitis・J・Am・Med・Ass・・237：1842・

1977．

7）Nishikai，M．＆

10）Nishikai，M．＆Reichlin，M．：Heterogeneity

1977．

ofprecipitatingantibodiesinpolymyOSitisand8）Reichlin，M．＆Mattioli，M．：Descriptionof
reaction characteristic ofdermatomyositis．Characterization oftheJ0

polymyOSitis・Clin・Immunol・Immunopath01・・−1antibodysystem・Arthritis＆Rheum・，23：

5：12，1976．

881，1980．

a serologiCal−213−41）核磁気共鳴による筋ジストロフィー症の研究（1）筋の発育に伴うproton緩和時間ならびにナトリウム量の変化

宮 武
研究協力者

桑

原

武

夫■

正＊

揚

浅

は じ め に

龍

彦…

大

野

享

男…

れ変化し，その変化を捕えることはその病変の診

核磁気共鳴〔Nuclear Magnetic Resonance（NMR）〕を利用して物質の分子構造を決定する

断，治療の指標となり得るものと思われ，また，
現在NMRはprotonの映像法が発達し更に23Na

方法は化学の分野では確立された方法であるが，も同様に有望な核種の一つである．

近年，本法の医学・生物系への応用が進展しつつある．

そこで我々はlH−NMRおよび23Na−NMRを利用し骨格筋の発育に伴って水のproton緩和時

NMRの医学への応用は現在2つの方向で検討

間（以下protonT．時間），およびNa含量（以下されている．一つはⅩ線CTにかわる人体映像法

BNa−NMR）がどのように変化するかを観察したとしてであり，もう一つはchemicalshiftによるので，その意義について若干の考察を加え報告する．

化学的情報を含んだスペクトルを得ることを目的としたもので，主に，ん乙 乙坑形でのエネルギー代
謝・生体計測法としてである．

目

後者，すなわちNMRの生体計測法への応用は
1971年Damadianら4）による腫瘍組織でのpro−
tonTl時間の研究，Singer13）らによる血流計へのらびに23Na−NMRの変化を観察することである．

応用等が行なわれ，以来，水素のみならず燐や炭素を対象核種とした如的今回の目的は筋の発育に伴うproton Tl時間な

対象と方法〝わβでの代謝の研対象はWhite Leghorn系鶏の胸筋で胎生12日

究1）5）6）7）10）11）12）14）といった新たな局面をむかえつ
つある．

および19日，貯化後6日および20日のもので，prO−

NMRを生物試料に応用するということは，その試料をある原子の集団としてとらえることであDystrophic hamsterとしてはBIO14．6系で体り，例えば水素原子ならば組織中のprotonの存在様式，すなわち，prOtOnの結合状態あるいは動きやすさ等を反映するものである．
また，骨格筋の発育，筋疾患の病理過程に伴っ

tonTl時間では更に聯化後15日のものも測定した．
重100−140g・生後100日のもののM・Quadriceps
femorisを使用し，COntrOlとしてBIO FIB系のものを使用した．
使用機種は磁場強度90MHzのJEOL FX90Q
FT−NMR spectrometerである．

て当然protonあるいはNaの存在様式はそれぞ＊新潟大学脳研究所神経内科＊＊国立小千谷額糞所＊＊＊新潟大学分】折センター

生検筋は直ちに測定するか，あるいは，一旦湿潤箱内で密封容器におさめ0℃で保存したのち測定を行なった．
試料管はprotonの測定では5mm4．のもの，23Naの測定では10mm￠のものを使用し，これら−214−

の試料管はそれぞれ密栓し，NMRspectrometerの計測筒に静置し，無回転で測定を行なった．
計測時の温度はprotonでは29℃，23Naは室温であった．
Proton Tl時間の測定は共鳴周波数として89・6
MHzを用い1800−1−900パルス系列によるin・
versionrecoverymethod2）を用いた．1800パルスの幅は試料毎にシグナル強度を見て決めたが約60〝秒であった．時間を0・1枚0・2秒・0・3秒，0・6
秒，1秒，2秒，3秒，20秒と変化させた8本のェコーを検出し，得られた縦緩和曲線より非線型
最小2乗法によりTl時間を算定した（図1）．
Proton Tl時間の測定に用いた生検筋は更に80℃6時間の乾燥を行ない前後の重量から含水量を算定した．
23Na−NMRの測定は共鳴周波数として15・8
MHzを用い，定量は1200回加算による吸収スペ
クトルの面積を基準の希釈生理食塩水の吸収スペ

図11nversion recovery method
Eightsignalswereobtainedbychangingthe
intervalsofthetwopulses（T）asO・1，Ot2
0．3，0．6，1．0，2．0，3．0，and20sec．．

クトルの面積と比較して行なった．
23Na−NMRに用いた生検筋は更に80℃6時間の乾燥後30％硝酸による抽出を行ない，炎光比色法により再度Na量の測定を行なった．
結果（1）筋の発育に伴うproton Tl時間の変化（図2）．Proton Tl時間は筋の発育に伴って短縮し

3﹁U董卓Yl−弼

た．すなわち12日鶏胚では2．082±0．091，19日鶏胚で1．605±0．106，6日雛で1．320±0．107，15日
雛で1．108±0．038，20日雛で1．087±
0．053（mean±SD秒）であった．
（2）筋の発育の各stageにおける含水量とproton Tl時間を対比させたのが図3であるが，含水量が発育に伴い93％，86％．83％，78％，76

12−day Chick e鵬ryo
2．000％と減少するにしたがってproton Tl時間もex−ponentialに短縮して来た．

lヽ

、†19−d吋Ch†ck embryo（3）筋の発育に伴う23Na−NMRの変化（図4
Closed circle）．23Naは発育に伴って低下が認め

i、6−ddyChick、15−day chjck

られた．すなわち，12日鶏胚では59．5±3．51，19●㌧20−daychick

1．000

日鶏胚で49．0±4．95，6日雛で47．5±3．87，20日
雛で18・8±1・61（mean±SDJLEq／g）であった．
（4）炎光比色法によるNa測定値の変化（図40penCircle）．12日鶏胚では72．6±1．26，19日鶏
胚で68・3±4・22，6日雛で71．0±3．63，20日雛で18・8±1・61（mean±SDJLEq／g）でNMRによるNaの検出率は73％から55％と成熟の各stageで

90

図3

80

Exponential curve repreSenting the rela・
tionsbetweenprotonT．timeandhumidity
in pectral muscles．

︵Eでbuミ︶︸uU雲OU∈⊃岩OS

差が見られた．

の水分含量，Cellular proteinのconformational（5）Dystrophic hamsterのproton Tl時間はC。ntrOll．004±0．015秒に対し1．049±0．018秒とchange，Cellularproteincompositionが考えられ，

延長していた（図5）．

あるとされ3），我々のcaseでも水分含量との関係

中でもwater−prOtein

interactionが主なものでが深いものと考えられた．また，この分野では
Changら3）が生後1年のdystrophic chickenでproton Tl時間が延長していることを報告しているが，我々も生後100日のdystrophichamsterで同様の結果を得ている．今後こういった変化が何時から起って来るのかを調べることが重要であると思われる．
今回我々はproton Tl時間の他に組織内水分動
態に関連深いNaの測定も行ない，筋発育に伴って組織のNa量が変化することをNMRおよび炎光比色法で認めた．このことの理由については
今回の実験からは未だ不明であるが，prOtOn Tl
時間の変化とともに23Na−NMRでの観察が筋組織の発育段階の指標になると思われた．
NMRで観測できないNaの存在は，細胞内の種々な高分子に結合したNaイオンの吸収強度がfreeな状態のNaイオンよりも小さくなるためであるとされている9）．23Na−NMRにおいて今回示した事実は，Naが筋細胞内の高分子と結合しCONTROL

図5ているためと考えれば理解でき，これにより23Na

DYSTROPHY

ValuesoftheprotonT．timeofquadriceps−NMRもまた骨格筋の成熟を示す1指標として

muscle from normal and dystrophic

重要であると思われた．

hamsters．

以上骨格筋の発育に伴ってproton Tl時間ならびに23Na−NMRが変化することを報告し，さら考に生後100日のdystrophichamsterにおいてpro−察

骨格筋の発育には形態的・機能的そして生化学

ton Tl時間が延長することを示した．

的な諸相が包括されている．既に述べた如く，
NMRを生物試料に応用するということはその試

文

献料をある核種（本報告ではlHおよび23Naである

1）Ackerman，J．，etal．：Mappingofmetabolites

が）の集団としてとらえることを意味しており・

inwholeanimalsby3lPNMRusingsurface

今回，筋の発育に伴ってprotonTl時間が変化した事実も発育の各stage毎にprotonの存在様式

coils．Nature，283：167，1980．
2）Boden，N．：DetectionoforganicstruCtureSby（すなわち水の存在様式）が異なることを意味す

physicalmethods Chapter

るものと理解される8）．ProtonTl時間に変化をも

methods，4：51，1971．Academicpress，New
York and London．

たらす要因としてはまず1800パルスの幅や，用い2．Pulsed NMR

られた共鳴周波数，そして，測定温度などを考慮

3）Chang，Dりetal．：Nuclearmagneticresonanceする必要があるが，更に重要なものとして，試料

study of muscle water protonsin muscular−217−

dystrophyofchickens．J．Cell．Physio1．，107：
139，1981．

10）Newman，R．，et al．：Nuclear magnetic
resonance studies of forearm musclein4）Damadian，R．：Tumordetectionbynuclear
magneticresonance．Science，171：1151，1971．
5）Edwards，R．，etal．：Clinicaluse ofnuclear

Duchenne dystrophy．Brit．Med．J．，
284（6322）：1072，1982．

11）Ross，B．，etal．：Examination of a casemagnetic resonanceintheinvestigation of

SuSpeCtedMcArdle′ssyndromeby3lPnuclear

myopathy．Lancet，8274：725，1982．

magneticresonance．New．Engl．J．Med．，304：

6）Gadian，D．，et al．：Examination of a myo・
pathy by phosphorus nuclear magnetic
resonance．Lancet，8250：774，1981．

31p and13C nuclear magnetic resonance．

7）Gordon，R．，etal．：Locali2：ationofmetabolites
inanimals uslng

31P topical1338，1981．
12）Shulman，R．，etal．：Cellularapplicationsof

magnetic

resonance．Nature，287：736，1980．

Science，205：160，．1979．
13）Singer，J．：Biological flow and process
tracingusingnuclearandelectronparamag・

8）Ha2：lewood，C．，et al．：Nuclear magnetic
resonance transverse relaxation times ofWaterprOtOnSinskeletalmuscle．Biophys．J．，
14：583，1974．

netic resonanCe．IRE Trans．Med．Electron．，
ME−7：23，1960．
14）Ugrubil，K．，etal．：3lPNMRstudiesofintact
anchourage−dependentmouseembryofibrob−

9）Monoi，H．：Nuclear magnetic resonance oftissue23Na．1）23NasignalandNa＋activity

inhomogenate．Biophys．J．，14：645，1971．

−218−

lasts．Proc．Natl．Acad．Sci．USA．，78：4843，
1981．

42）組織対応法によるnemalinemyopathyの生化学的研究
福
研究協力者

田

原

信

義●

中

恵

子●

は じ め にNemaline myopathyは，乳幼児期に発症し，良性経過をとり，運動発達遅延，四肢近位筋優位の全身筋力低下，骨格変形などを伴う先天性ミオ
バナーで，筋線維内に梓状構造物（rod）を認めることが特徴である．このrodは，電顕形態学的にZ帯と類似しており，螢光抗体法の成績では，α−

豊

島

至■

を作製した5）．連続する6／ m厚の切片は，Gomori，STrichrome，NADH−TR，ATPase染色を行なった．次いで，染色標本と対応させながら，
実体顕微鏡下で，正常筋の凍結乾燥切片からtype
I・typeII線経を，nemaline筋からrodに富む
typeI線経，光顕上rodを認めないtypeII線維
それぞれを切離した．
3）電気泳動法

actinin，desminなどのZ帯に関係した蛋白を含i）SDSポリアクリルアミドケリレ電気泳動

むとされている1）．また，本症では，typeI線経（SDS）の分布比率が著しく高い例が多く，typeI線経のLaemmliらの方法6）に従ったが，ポ萎縮傾向，rOdの集積など，異常なtypeI線経がリアクリルアミドは8．75−17．5％の1ineargradi・

過剰に形成されている可能性が推測されている2）．

entとし，泳動yJレの高さを3cmとした．
ii）二次元電気泳動（2−D）

我々は，染色標本との対応が可能で，随時検索

0′Farrellらができ，蛋白崩壊の危険性が少ない，生検筋凍結の方法7）をmodifyして行なった．SDS，2−Dと乾燥切片を用いる筋蛋白分析法を開発したので，も，ケリレは銀染色を施した．

本症のtypeI・typeII線維それぞれにつき，構
造蛋白上の特異性の有無を明らかにする目的で以結果

正常筋の2−Dを図1に示す．図l aは切片全下の検討を行なった．

体，図l b，CはtypeI線経，typeII線維各60

正常筋蛋白の電気泳個をそれぞれ泳動したものである．typeI・ⅠⅠ線
経の主要構造蛋白の差違は次の点である．1）TM−動パターンを得るため，剖検時に得られたヒト嘘

a鎖は分子量3．4万のSlow formがtypeI線経

腰筋を用いて，myOSin，aCtin，trOpOnin（TN），に，3．3万のfastformがtypeII線経に認められtropomyosin（TM）の4主要構造蛋白を精製しる．2）Myosinlightchain（LC）は，typeⅠ線経

対象と方法
1）主要筋蛋白の精製

た3）．また，phosphorylase，enOlase，Creatin

でLCl，SlowformLC2のmainspotに加えて，

kinase，aldolase，glyceraldehyde−3−Pdehydr0−

少量のfast form LC2・LC3が混じるhybrid

genase，phosphoglycerate mutase，triose−P
isomeraseの7肉兼蛋白を分離した4）．

patternを呈した．TypeII線経では，LCl，fast
formLC2・LC，が主体で，少量のslowformLC22）凍結乾燥切片の作製

Nemaline myo−pathy4例，正常筋2例の新鮮凍結生検筋を20JLmの厚さに切り，一20℃，真空吸引下で凍結乾燥切片＊新潟大学脳研究所神経内科

を混じていた．3）TN−Cにslow・fast formが区別される．
Nemalinemyopathyの生検筋では，typeⅠ線経に萎縮，rOdの集積が認められた（図2）．正常

−219−

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図1 正常筋の二次元電気泳動像．
左（a）：組織切片全体，CBB染色．右上（b）：typeI線経．右下（C）：typeII線絶銀染色．MHC：Myosinheavychain，Alb．：Albumin，Des．：Desmin，Ac：Actin，TM：
Tropomyosin（S：slowfrom，f：fastform，α−Chain，β−Chain），LC：Myosinlightchain（S：slowform，f：fastform），TN−C：TroponinC，CK：Creatinekinase，
Enol：Enolase，Ald：Aldolase，G3PDH：Glyceraldeh−
yde￣3Lphosphate

図2

dehydrogenase．

Nemaline myopathy生検筋．
左：GomoriTrichrome（×200） 右：ATPase（pH4．
6）（×200）．Nemalinerodは萎縮したtypeI線経に集横していた．

筋とnemaline筋それぞれのtypeI線維2−Dをの所見はnemaline筋4例中2例で認められた．

図3に示すが，主要構造蛋白上，両者に差違は認

4主要構造蛋白以外についてみると，nemaline

めなかった．TypeII線経を同様に比較すると（図筋では分子量5．5万のbandが増量しており（図4），正常ではminorspotであるSlowformLC25），特にtypeI線経で顕著であった．このbandが，nemaline筋ではfast formより大きなspotとして認められ，LC2のみ量比が逆転していた．こは分子量からdesminである可能性が高い．

ー220−

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図3
TypeI線経の二次元電気泳動像．
上：正常筋，下：nemaline筋．正常筋とnemaline筋の間でAc，TM，LC，TN−Cに明らかな差違は認めない．

考

察

図4
TypeII線経の二次元電気泳動像．
上：正常筋，下：nemaline筋．正常ではminorspotであるslow fom LC2が増量している．

と考えられる．BilleterらはATPaseの染色性はNemalinemyopathyでは，typeI線経に分布

myosinheavychainに規定されると述べており，

比率増加，萎縮，rOdの集積などの所見が認められることが多い．我々はtypeI線経の蛋白異常を本症のtypeII線経が，lightchainにIIC線経の特徴を残したまま不完全なtransformをとげた想定して，本症のtypeI・typeII線推それぞれとの推測も可能である．しかしながら，Billeterら

を正常筋のそれと比較検討した．その結果typeI
線経では，分子量5．5万のdesminと思われるの報告は，1本のみのⅠIC線経での成績であり，bandが増強している以外，構造蛋白上の異常は認検討の必要がある．また，近年単一筋線経の電気めなかった．TypeII線経では4例中2例でslow

泳動パターンに各種のheterogenityが報告されている．

form LC之の増量が認められた．これはBilleter

ⅠIC線経の電気泳動パターンについては，さらにら8）が報告したtypeIIC線経の泳動パターンと今回の我々の検討はtype I・II線維それぞれ同様である．我々のnemaline筋ATPase染色のの筋線維片60個を平均したパターンであり，これ検討では，4例ともtypeII線維200個中IIC線経は全く認められず，本症でのⅠIC線維増加はない

では正常のtypeI・typeII線経は一定のパターンをとる．すなわち，正常のtype I線経に混じ−221−

るLC2，3などのfast form，また，typeII線経に混じるslowformはminorcomponentであり，本症でのLC2のパターンは特異である．
文

献1）Sugita，H．，Ishiura，S．，Nonaka，Ⅰ．，etal．：Gelelectrophoretic study of nemaline muscle．
Proc．Jap．Acad．，57，Ser．B：86，1981．
2）福原信義，湯浅龍彦：ネマリン・ミオバナー．
神経内科，8：305，1978．
3）八木康一，丸山工作，平林民雄，ほか：生化学
実験講座15．筋肉（日本生化学会・踊），東京化
学同人，東京，1975．
4）Petell，J．K．，Sardo，M．J．＆Lebherz，H．G．：
Asimpleprocedurefortheisolationofsevenabundant muscle enzymes．Preparative
Biochem．，11：69，1981．
5）Lowry，0．H．＆Passonneau，J．Ⅴ．：Aflej（ible
SyStemOfenzymaticanalysis．Academic，New
York，1972．
6）Laemmli，■U．K．：Cleavage

ofstructuralproteinsduringtheassembly ofthehead ofbacteriophage T4．Nature，227：680，1970．

さ．Nemal油日即か日照即

7）0′Farrell，P．H．：Highresolutiontwo−dimen・b．、始「．aljrle t／レe ミミト。ご・−sional electrophoresis of proteinS．J．Biol．
C．Contr01
Chemリ250：4007，1975．

図5SDSポ））アクリルアミドゲル電気泳動像．Nemaline筋
で，分子量5．5万のbandが増量しており，特にtypeI
線経に顕著である．

8）Billeter，R．，Heizmann，C．W．，Howald，H．，etal．：Analysisofmyosinlightandheavychain
typesinsinglehumanSkeletalmusclefibers．
Eur．J．Biochem．，116：389，1981．

ー222−

Ⅳ．いわゆるdistalmyopathy43）筋線維束からみたrimmed vacuoleを伴う
distal myopathyの筋病変
豊 倉 康 夫●
研究協力者

井

上

聖

啓■

水

沢

英

洋■

栗

崎

博

司＝

筋線推束（fasciculus）は筋周膜（perimysium）

頸部・体幹の筋力は正常，四肢の脱力は遠位部で囲まれた筋線維集団であり，筋構築上の解剖学に強く筋萎縮を伴う．屈筋群伸筋群間の筋力の差ははっきりしない．深部腱反射は下顎反射・膝蓋腱反射は正常であるが，その他はすべて著しい低下をみる．知覚は異常なし．前轡傾向を示しwad−

的単位をなしている．しかし，筋病変を筋線維束から観察し筋疾患の特異性を論じた報告は皮膚筋炎におけるperifascicular atrophyぐらいにすぎない1）．
本報告の目的は，rimmedvacuoleを伴うdistaldling gaitである．
検査所見：尿および血液一般生化学は正常．CK

myopathyの生検筋において筋線維束に注目してその病変の特徴を他の筋疾患との比較の中で指摘は418（正常値〜150）と軽度上昇をみた．
筋電図では上下肢遠位筋について持続の短Lも低することにある．

振幅の筋J京性変化を認めた．大腿四頭筋では持続の長い，高振幅，多相性の神経原性所見が筋原性生検筋における観察

変化に混在していた．また前脛骨筋，俳腹筋では

生検筋は多発性筋炎例を除いてすべて俳腹筋で主体は持続時間の短い低振幅であるが，その中にあり，SuSa液で国定後のparaffin切片について2mV程度の振幅の持続のやや長い多相性電位

H＆E染色またはMassonを観察した（図1）．

S trichrome染色をほどこして観察した．

排骨神経のMCVは37・9m／secであった．
筋生検所見（＃1003）：右肺腹筋で行った．凍結

まずrimmedvacuole型distalmyopathyの1

切片でみると筋線推径の大小不同は著しく，その症例について記載する．
症例 K．S．26歳男（012−9394−3）

30％以上にrimmed vacuoleを認める．NADH−

主訴：下肢筋力低下

既往歴・家族歴：特記すべき事なし

TRでangulated fiberの小群集を示す箇所もみられる．Rimmedvacuoleは小径化した線経の殆

現病歴：1981年11月走り方がおかしいと指摘さんどにみられ，小径化した線経は全体にbaso・れた．階段の昇降も不自由となった．1982年2月

philicに染まる．一部にphagocytosisがみられ
る．

歩行障害

坐位からの立ちあがりが困難となり，7月まで家業である農業を手伝っていたが以後在宅生活となった．下肢筋力低下は徐々に進行し，ゆっく りとParaffin切片でみるとperimysium，endomy−siumは増生し筋線麺束ははっきりと区画される

した歩行しか出来なくなったため1982年10月7日

傾向がある．各々の筋線維束は筋線推径の比較的入院した．

良く保たれているもの，VaCuOleを多数もつ萎縮

入院時現症：心肺腹部に異常なし
神経学的には脳神経領域異常なし＊東京大学医学部脳研神経内科＊＊国立療養所東京病院

した線維集団，さらに結合織にほぼ置換されている筋線維束とさまざまなstageが1枚の標本の中で観察された．炎症所見はないものと判断した（図
2）．

−225−

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図1

症例の筋電図．排腹筋では持続時間の短い低振幅電位が主体であるが，針電極の位置を変えることにより比較的容易に持続のやや長い高振幅波形を得ることが出来る．

電顕では光頭上のrimmedvacuoleに対応して散在しているのがわかる．

多数のmyelin figure，dense body，tubular

図5はDuchenne型の筋ジストロフィーである

aggregateが変性した筋原線経に摸して混在しており，これまでの報告に一致する所見である．筋が，高度の脂肪浸潤があり，その中に島状に筋線維集団がみられるが，各々の線維束は，それぞれ核内のfilamentousinclusionはみられなかった．

ほぼ同様の変性過程にありdistalmyopathyでみさて，ここにみたごとく，筋線推束に注目して，たような各線維未聞の変性像の差は明確でない．

他のrimmedvacuoleを伴うdistalmyopathyの

図6は34歳女性の多発性筋炎の大腿四頭筋での自験例3例について（このうち2例はすでに水沢ら2）により報告されている）筋病変を観察したが，筋生検の所見である．Perifascicularに萎縮が強すべてに同様の所見すなわち筋病変が筋線維束のいが，よくみると各々の線結束の変性過程が決して一様でない傾向にある．

単位で変性している所見が得られた．図3は27歳
考

女性の症例（A23128）であるが，筋線維束性に変察

Rimmedvacuoleを伴うdistalmyopathyにお性がみられることがわかる．
次に，他のいくつかの筋疾患について同様の立いて一見，神経原性萎縮を示唆するような小群集

場から観察してみる．
図4はCharcotTMarie−Tooth病の例であるが，萎縮線経がみられることはこれまでいくつかの報

筋線維萎縮がいくつかの線維束にまたがりみられ目した報告はない．ここにみてきたようにrim−

いわゆる大群集萎縮と呼ばれる状態を示している．

medvacuole型distalmyopathyでは筋線維束が一方よく残存している線維束の中に小群集萎縮がひとつの単位となったさまざまな過程の変性像が告がある2ト4）．しかしより弱拡大で筋線推束に注−226−

図2 症例（012−9394−3） の俳腹筋生検像．H＆E染色．
1枚の標本の中に観察され，このような筋病変は低振幅，持続時間の短い筋原性所見に加えて高振他のいくつかの筋疾患との比較の中でみると本疾患の特徴とも云えよう．

幅，多相性の記録が混入することが知られている．

神経原性萎縮はこのような筋線維集団の把握の

針筋電図の記錦は針電極周辺2mm前後の活動

中でつけられる診断であるが，いくつかの筋線維

電位をとらえていると云われているが，このよう束が集団となって萎縮したり，一般に問質の増生

な筋電図所見は筋病理所見の不均一性に由来する

ここに報告した症例でも同様の所見を得ている．

はそれ程目立たなかったり，またよく線維径が保ものと考えられる．このことは多発性筋炎の筋電たれている筋線維束内にも小群集萎縮が必ずみら図所見でも同様であり，上に述べたような多発性れるのが常であり，これらの点はここで論じた

筋炎における筋病変の多様性の電気生理学的表現とは云えないであろうか．

distalmyopathyの所見とは一致しない．
多発性筋炎はperifascicular atrophyあるいは巣状の変化といった表現で筋線維束・筋線維集団の単位で病変が指摘されているものであるが1），
よく観察すると各々の筋線維束の病的状態が多様である点がdistalmyopathyの所見と似ており興
味がある．

ま

と

め

1Rimmedvacuoleを伴うdistalmyopathyでは筋線維東単位に病変がみられ，さまざまな程度の障害が1枚の標本の中に観察される．
2

次に筋電図所見についてrimmed vacuole型
distal myopathyでは，報告の殆んどに確息筋で−227−

種々の筋疾患について筋線維束に注目して筋病変を観察したところ，多発性筋炎の例に同様の所見を示す傾向がみられた．

図3

図4

症例（A23128）の排腹筋生検像．H＆E染色．

CharcotAMarierTooth病の排腹筋生検像．Masson−228−

S trichrome染色．

図5

Duchenne型筋ジストロフィーの俳腹筋生検像．H＆E染色．

図6

多発性筋炎の大腿四頭筋生検像．H＆E染色．
一229−

3

Rimmedvacuole型distalmyopathyにお・ける筋線維束性の病変を強調し，筋電図所見に関40．1980．

3） 中西孝雄，葛原茂樹：遠位型ミオバナーの5例，筋萎縮の分布とその筋病変について．厚生省「筋して若干の考察を加えた．

ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研文

献究」（三好姓），昭和56年度研究報告書，1982，

1）Banker，B．Q．：DermatOmyOSitisinchildhood．
Trans．Am．Neurol，Assoc．，87；11，1962．

pp．97−103．

4）Kumamoto，T．，Fukuhara，N．，Nagashima，M．，

2）水沢英洋，中野今治，井上聖啓．高木昭夫，萬Kanda，T．＆Wakabayashi，M，：Distal

年徹，豊倉康夫：筋線経に高度の空胞変性を伴myopathy．Histochemicalandultrastructural

ったdistalmyopathyの一病型．神経内科，12：Studies．Arch．Neuro1．，39：367，1982．

−230−44）筋病変におけるrimmed vacuoleないしはその類似所見について
田
研究協力者

辺

等■

内

潟

雅

信書

小

島

野

沢

胤

美事

松

原

進●
四

松

井

孝

道■

郎も†

的
（RV）という筋病変所見的方法を全例に，またグルタールアルデヒド・オの表現は，1973年Dubowitz＆Brookeのocul0−

施行した．組織化学的方法は筋病理regularbatt−pharyngealdystrophyについての記載1）以来，広

eryによった．また，これらの所見を臨床診断，病型・症候・経過・他検査所見と対比考察した．

日
Rimmed vacuole

く用いられている．然しそれ以前にもこの病変は，スミウム酸二重固定法による電顕的検索を32例に我々の諸報告中の記載を含め，「myelin様物質集結積と空耳包を伴う限局性変性像」など，色々な表現

果で数種の疾患について記載されている2）．最近，い

RVを認めた症例の内訳

わゆるないしはoculopha−

42例の疾患別内訳は表のごとくで，疾患別例数

ryngodistalmyopathy（Satoyoshi）と呼称されておよびそれぞれの群の母集団総症例数を示す（最いる症例の中で，RVが多数含まれる筋病変を認

初のdistalmyopathyの1例の内容は後述）．まためたものが相次いで報告され，その症例蓄積とと特記すべき点は，RVが，Kugelberg−Welander病

distal myopathy

もに臨床症候や遺伝形式をもふまえた病型特異性（KW）や，遠位型・屑甲下腿型などを含む 緩徐についても活発に論議されるに至っている．また進行性神経原性筋萎縮症

RV実体にせまる検討も進められ，本邦でも福原たことである4）．以下筋緊張性ジストロフィー4，

らの報告をはじめ多くの症例報告がみられる2）・3）筋ジストロフィー肢帯型・顔面屑甲上腕型各1，

今回の報告の目的の1つは，広く神経筋疾患全多発性筋炎5，諸種ニューロパテー4，その他11体におけるRVの出現状況とその位置づけ，他のであった．

1つはいわゆるdistalmyopathyないしその近縁疾患における病型特異性およびRVとの関連に

表に特に高率に認められRimmed vacuoleを認めた症例の内訳

ついての考察である．

疾

患

群

1 （ 1）

D istal m yopathy

対象および方法∵†∴例数（
母集団例数）

一一∵∵ ∵諸種神経筋疾患自験例（虎の門病院，1970−）
筋ジス トロフィー（芸≡芸甲上腕型

4 （39 ）
1 （17 ）

認めた42例（46検体）を抽出した．筋病理学的検

多発性筋炎

1 （ 6）
5 （180）

索方法としては，paraffin切片による一般組織学

諸捜ニューロバナー

4 （46）

その他

11 （
871）

のうち，適応を吟味して筋生検をおこなった1200
例（1524検体）の筋病変を検討し，確実なRVを的染色，CryOStat切片による組織学的・組織化学

筋緊張性ジス トロフィー

15 （40 ）計＊虎の門病院神経内科†現・金沢大学医学部神経内科

42（
1200）

検体数ン46（1524）

l

一231−

Distalmyopathy例の要約
上記distalmyopathyの症例5）は25歳男（図1）で同胞発症の姉と共に他院で加療中，主治医の紹介で弟のみ当院で＼入院精査を行った．家族歴では父方曾祖父と母方祖母がいとこであるが，父母は健常，他の家族にも同症を認めない．初発は弟22
歳，姉24歳で，共に緩徐進行性．筋萎縮・筋力低下は下腿遠位から次第に上肢遠位に及んでいるが，屈筋・伸筋群の差は明らかでない．血清CK値（Rosalki変法：100未満正常，100−150境界域，

めて軽微であった．RVは筋線維全体の約10％に認められるが，部分的に密集している（図2・a〜C）．電顕像ではこれに一致してmyelin figure，
mitochondria・glycogenの集積，筋原線経の変性像を認め，さらにその間にfilamentousinclusion（太さ15−20nm）も観察された（図2・d）．一方
上腕三頭筋の変化は軽微であるが，やはりRVが小数ながら認められた．
本例は常染色体性劣性遺伝と考えられ，若年（20歳代前半）発症，下肢遠位部初発などの点で，dis・

150以上異常）は弟690U／ml（MB29％），姉447U／
ml（MB O％）と正常上界の4倍前後に上昇，筋talmyopathyのうち，三好らの報告した病型に類似しているが，一方屈筋群の障害の優位性がさほ

電図所見は共に筋原性変化を示した．弟のみに施行した筋生検では，俳骨筋において，横断面円形化を含む大小不同像・中心核など筋原性変化を

ど顕著でをく，血清CPK上昇も特に高度でなく，示したがendomysiumの線維化や月旨肪浸潤は極基準に厳密には合致し得ない病態と考えた．した

また俳骨筋病変の程度も含め全体として筋ジスト
ロフィーとは断定できない点などより，その診断がってRVを認めた常染色体性劣性遺伝型dis−tal myopathyと表現しておくのが適当であろう．

RVの一般的特徴
次にRVを認めた42例全体を通じて，いくつかの特徴を要約する．
a） その出現は，46検体中下肢遠位部とくに俳骨筋に32検体と高率であった（俳腹筋7，その他
7）．尚，総検体母集団1524筋の近位・速位比，上肢・下肢比は，いずれもほぼ1：1であった．
b）空胞にはかなりのvariationが認められ，周辺部のmass構造にも光量頁レベルで種々相が認められた．典型的な所見では，中央部に比較的大型の空胞を有し，空胞部から放射状に周辺部に広がるfilament構造を認め，多くは周辺にdensな
mitochondria酵素活性，PAS陽性物質を認める．
しかし一部には空胞構造より，むしろmass構造の目立つ場合，また 多数の空胞 ， 染色体の欠如などの所見と共存する場合もある（図3・a〜d）．

C）RVは中等度の萎縮線経に目立ち，typeI
線経に出現し易い．また筋束毎に（境界はあまり明瞭でなく）RVの分布に相違をみることがあり，
図1 DistalIllyOPathy同胞例の弟（25歳），全身像〔本史参照〕

とくに大群集萎縮を示す神経原性変化の際にこの傾向は著明である（図3・e〜f）．
ー232−

図2

図1に示したdistalmyopathy例の筋生検（排骨筋）所見．（a）trichrome変法，100×，（b）HE染色，400×，（C）
trichrome変法，400×．（aXbXc）いずれもmyopathy性変化中に認められたrimmedvacuoleを示す．（d）電頭像でのmyelinfigureとfilamentousinclusion（太さ15−20nm），bar＝1JLm．〔本文参照〕

ー233−

三三

や幣譲■∵！l ﹁≡−■ ∵ぎ∴．言了．一∴十−−︑＝こ琶

図3 Rimmedvacuoleの光顕所見種々相．（a）典型的な所見，
trichrome変法，400×，（bXc）空胞構造よりmass構造の目立つ場合，HE染色，400×，（d）多数の境界鮮明な空胞を有Lmass構造に乏しい場合，HE染色，400×，（eXf）
群集萎縮を示す神経原性筋萎縮症（遠位型）排骨筋にみられた多数のrimmed vacuole，（e）はHE染色，（f）はDPNH−TR，typeI線経に高率に出現．〔本文参照〕（I）RVの出現している筋病変にはこれと類似塊をなし，またfilamentousinclusionが共存する

rJ二mitochondriarlipid−glycogen（MLG）comp一場合，粗嶺化した筋原線推間にmyelin figureが11・X・t三しての諸病変が共存することが多い・

配列されている場合，CytOplasmicbodyと共存すど）堀顕的には，典型的なmyelin figureが集る場合，蜂巣構造と共存する場合などの種々相を−234−

distal myopathyと表現するのが適当な病型も存認めた（図4・a〜d）．

在すると思われる．
考2）

棄1）RVは，多数の文献報告症例2）や本報告例5）

しかし，いわゆるdistalmyopathyに含まれる臨床遺伝学的あるいは臨床症候上の病型提示とを含め，distal myopathyの一部および近縁疾患に特徴的な所見となっている場合がある．したがして，たとえば，って，distal myopathyを一つの疾患群と考えたとも表現されるいくつかの種類があり2），これら

場合に，その一部に，臨床病態を含めてとRVとの関係は従来特に指摘されてはいない．

巨富

RV型

Welander型，

oculopharyngodistalmyopathy

図4 電顕像種々相．（a）典型的myelin figure集塊，（b）粗繋化
した筋原線維間に配列されたmyelin figure，（C）cytop−
1asmic bodyとの共存，（d）蜂巣構造との共存，いずれも4000×．〔本文参照〕

−235−

三好型

，

（里書）などとしての文報告例も遺伝性・単発性両者の場合があり，OCulo−

1）Dubowitz，V．＆

一方，上述のRV型distalmyopathy

献
Brooke，M．H．：Muscle

pharyngodistal typeを示す場合もあることが知られている．いずれにしても，RVという筋病理組

biopsy：A modem apprOaCh．Saunders，

織学的所見と，遺伝・臨床型とがその分類上の基2）豊倉康夫，三好和夫（桶）：Distalmyopathy．外盤を異にしているため，その組合せの上での特異国における文献（1902−1981．12），日本におけ性の抽出は必ずしも容易ではないと思われる．然る症例報告，その他（1951−1981．12）．厚生省

し筋ジストロフィーとしてのdistal myopathy（ 三好型 など）の場合にはRVが出現しにく「神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究，三好鑑，昭和56

く，非ジストロフィー性（遺伝性・早発性を問わ

年度研究報告書，1982，p．243−249．

ず）のdistalmyopathyの症例に出現し易い可能性も想定される2）．

London，1973，p．23ト241．

3）Fukuhara．N．，Kumamoto，T．＆Tsubaki，T．：
Rimmed vacuoles．Acta Neuropathol．
（Berl．），51：229−235，1980．

3）むしろRVは，これらdistalmyopathy及び近縁疾患以外にもKWないし遠位型緩徐進行4）a）田辺等（班月），松原四郎，内潟雅信，野沢胤

性神経原性筋萎縮症などにも高率且つ著明に認め

美：知覚障害を伴わない緩徐進行性遠位型

られること（本報告内容の一部）4〉からも，必ずし筋萎縮症について−神経原性病態を主ともdistalmyopathyのみに特有な所見ではなく，する5症例の検討を中心として．厚生省「神これら他の一部の疾患群にも共通する病態を示唆

経疾患研究委託費」筋ジストロフィー症の病していると考えられる．さらにRVの出現は，原因に関する臨床的研究，三好班，昭和54年度

疾患の種類を問わず下肢遠位筋に高率である点も特記される．

b）松原四郎．金坂明美，内潟雅信，野沢胤美．

4）RVはautophagic vacuoleの一種であると考えられるが，その成因と好発疾患の本態との性遠位型神経原性筋萎縮症について，−5

関連づけについても，今後とも総合的な比較検討

症例の検討を中心として−．神経内科，が重要と考えられる．

13：222−227，1980．

研究報告書，1980，p．81−84．
田辺等，原満：知覚障害を伴わない緩徐進行

C）松原四郎：慢性青亀性筋萎縮症の臨床病理
結論学的研究．金沢大十全医学会雑誌，90：

RVはいわゆるdistalmyopathyの一部の症例に著明に認められるが，他疾患とくに緩徐進行性

676−695，1981．

5）Matsubara，S．＆

Tanabe，H．：Hereditary

神経原性筋萎縮症（KWおよび遠位型，屑甲下腿

distalmyopathywithfilamentousinclusions，型など）にも同様に高率・著明に検出され，且つActaNeurol．Scandinav．，65：363−368，1982．

下肢遠位筋に優位であった．さらにRVの特性に関する他の知見補遺およびRVと類縁の他所見について報告し，考察を加えた．

−236−45）Filamentousinclusion，Tubulomembranous
inclusionとRimmed vacuolar degenerationについて
中 西 孝 雄■
研究協力者

葛

原

茂

樹●

生検筋の筋核内および細月包質内封入体である

縮していて集合像を示し，一見神経原性萎縮のよfilamentousinclusion（FI）と細胞質内封入体でうに見える部分があった．筋線維壊死や会食像はあるtubulomembranousinclusion（TMI）は，

CPKの高い症例のみに著明で，一般にRVを有き

それぞれ非定型的慢性多発性筋炎（いわゆる封入ない筋線椎はよく保たれていた．炎症像は凍結切体筋炎）1）8），福原ら3）によりtubulomembranous

片標本，パラフィン切片標本ともに認められなか

myopathy（TMM）と命名された特異な先天性ミオバナーに疾患特異的と考えられてきたものであった．

る．昨年度の本研究班の研究報告において，われ2．電顕所見
光顕的に見られたRVに対応して，多数の

われは，いわゆる「Rimmedvacuole（RV）を伴myeloidbody，densebody，freeandmembrane−

う遠位型ミオパチー」の症例の中にも，これらの封入体が認められるものがあることに言及した6）．

bound glycogenを内包するautophagicvacuo・lesが多数認められた．この他に，直径15−25mm

本年度は，これらの封入体は，RVが出現するよう径のFIが全例の核内（図1）か細胞質内（図な筋の変性過程で，かなり非特異的に出現するの

2），あるいはその両方に認められた（表1）．こではないかという仮定のもとに，RVが認められれらの大部分の症例では，断面が管状構造を示した生検筋の電昆酎オ料を多数検索した．

ていた．細胞質内FIはautophagicvacuoleの周囲に高頻度に見られ，この中には変性したthick

検索対象と方法
対象とした5症例の臨床所見と生検筋について

myofilament由来であることを示唆するような，空胞周囲の変性初期のmyofibrilとの連続性を示

は，表に要約した通りである．このうち，症例5

唆するような所見も認められた（図2）．TMIは，

のみは肢帯型DMPに類似した近位部優位の筋萎

症例5を除く全例（全て遠位型ミオバナー）に認縮を示し，他の4症例は全て遠位部優位の筋萎縮を示した遠位型ミオバナー症例である．生検筋は，められた．症例3では極めて多数，様々の大きさ

1症例で複数回実施したものを含めて8検体であく形も小さかった．この封入体は，福原ら31が詳細のものが見られたが（図3），他の症例は数が少な

り，1検体について5個以上の電顕材料を電貢頁的に記載しているように，8−9nmの周期のややに検索した．

攣曲した層状構造をなしており，切片の方向により管状構造を示す部分がある．この構造物は電子

結

果

密度が一様でなく，非常に濃い部分と薄い部分が1．光量戻所見あるだけでなく，注目すべきことには，電子密度

全例に共通した所見として，RVと種々の変性像が認められた．RVを有する筋線経は一般に萎の濃い部分の一部が，月旨肪滴様あるいはリ ポフス
テンに類似した構造に移行する像が見られた（図4）．

＊筑波大学臨床医学系神経内科
ー237−

表

5症例のまとめ

1

2

3

4

5

女

男

女

女

女

年 齢 （初発 ）

4 4 （
3 4 ）

3 8 （
3 3 ）

2 1 （1 8 ）

4 7 （
4 1）

4 2 （
3 8 ）

筋萎縮

遠位優位

遠 位優位

遠 位優位

遠 位優位

近位優位

家族歴

常 ・劣性

なし

従兄妹婚

なし

なし

7 0

5 3 0

9 0

6 0

1 6 0

上腕二 頭筋

脚腹筋

大腿四頭筋

前頚骨筋

上腕二頭筋

症

例

性

C P K （く5 0 ）生検部位

大腿 四頭筋
脚

腹

上腕二頭筋

筋

炎症所見
R V

＋

t

＋

＋

＋

＋

F l ：細胞質 内

＋

I
I
l

＋

＋

−

＋

＋

−

＋

．

t
l
き

＋

＋

＋

核

内

TM l

l

考

察

るとされている．筋生検では炎症所見のあるもの

1967年，Chou2）は慢性筋炎の患者の生検筋の電とないものがあり，筋原性変化に加えて凍結切片

顕的検索で，筋核内と細胞質内に管状構造を有す標本でRVが認められるのがその特徴であるとしている．

るfilament様構造物を見出し，形態学的にmyxo−
Virusとの類似性を指摘した．類似の報告はそのこのような臨床的，筋病理学的特徴は，古典的後，Satoら7），Carpenterら1）によって追加され，な意味での多発性筋炎の病像とは非常に異なって1971年Yunisら8）はこのような筋疾患を封入体筋いるだけでなく，多くの点で，近年わが国で注目

炎inclusionbodymyositisと命名した．1978年，されている「RVを伴う遠位型ミオバナー」と共通

Carpenterら1）は彼らの6症例と従来の報告例のしていることが指摘されてきた4）6㌧事実，「RVを所見に基づいて，封入体筋炎を皮膚筋炎，多発性伴う遠位型ミオバナー」の孤発例，家族例の生検筋炎から区別される筋炎の疾患単位とすることを筋の電顕的検索でFIが認められた症例の報告が提唱した．彼らによれば，その臨床的特徴は他の増加している5）6）．本研究では，RVが認められた筋炎とは非常に異なっており，膠原病としての一遠位型および近位型ミオバナー5例全例にFIが般特徴や血清学的炎症所見を欠き，しばしば遠位認められたので，これは疾患特異的というよりも筋優位の筋萎縮の分布を示し，CPKは軽度上昇に

むしろ，RVを伴う筋変性過程に高頻度に出現す

とどまり，ステロイドに反応せず，慢性経過をとる封入体であろうと考えられる．細胞質内FIにー238−

図1萎縮筋の核内に認められたfilamentousinclusion・
横断面では管状構造が認められる．症例4．原図，×14，000・

図2

空胞近傍に認められた細胞質内filamentousinclusion・
横断面では管状構造を認める・所々に，より細いfilament（thinmyofilament？）やdensearea（Z帯由来？）が散見される．症例5．原図，×34，000・
−239−

図3

図4

Tubulomembranousinclusion．症例1．原図，×85，000．

Tubulomembranousstructureに連続して月旨肪滴とリボフ
スナン類似構造が認められる．症例2．原図，×34，000．
−240−

ついては，Yunisら8）も指摘している所であるが，変性したthickmyofilamentが含まれている可能文

献1）Carpenter，SリKarpati，G．，etal：Inclusion

性が高い．このような点から，封入体筋炎という

body myositis：a distinct variety ofidio−

疾患概念について再検討すべきではないかと思わ

pathicinflammatory myopathy・Neurology

れる．

（Minneap．），28：8，1978．

次に，TMIは，顔面筋と四肢筋が障害された先2）Chou，S．M．：Myxovirus−likestructuresina

天性ミオパテーの症例において初めて記載された

CaSeOfhumanchronicpolymyositis．Science，

封入体であり，福原ら3）はこれが疾患特異的なも

158：1453，1967．

のである可能性を示唆した．しかし，本研究で明3）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．，et al：Anew

らかになったように，類似の構造物は遠位型ミオ

myopathywithtubulomembranousinclusions．

バナー4例全例に見出されたので，少なくともそ

J．Neurol．Sciり50：95，1981．

れ自体は疾患特異的とは言い難い．しかし，1例

4）福原信義，熊本俊秀，ほか：Oculopharyngeal（症例1）で非常に多数認められたほかは，他のmuscular dystrophyとdistalmyopathyをつ

症例では量は少なく，ミトコンドリア異常症におなぐもの．厚生省「神経疾患研究委託費」筋ジ

ける「ミトコンドリアミオバナー」と「種々の筋ストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究，疾患に認められる異常ミトコンドリア」のような

三好班，昭和56年度研究報告書，1982，p，104．

関係にある可能性は否定できない．福原ら3）の記

5），Nonaka，Ⅰ．，Sunohara，N．，et al：Familial

載した症例の生検筋にも，光顕的に多数のRVがdistal myopathy with rimmed vacuole and

認められているので，TMIもRVを伴う筋変性とlamellar（myeloid）bodyformation．J．Neurol．

密接な関連がある封入体と思われる．また，自験例でTMIの一部にリボ7ステン類似構造への移行が認められたことは，TMIがautophagiaに関連したlysosome由来のものである可能性を示唆する．

Sci．，51：141，1981．

6） 中西孝雄，葛原茂樹：遠位型ミオバナーの5例．
筋萎縮の分布とその筋病変について．厚生省「神経疾患研究委託費」筋ジストロフイ丁症の発症機序に関する臨床的研究，三好姓，昭和56年度
研究報告書，1982，p．97．

結語7）Sato，T．，Walker，D．Lりet

al：Chomic

RVが認められた遠位型ミオバナー4例，近位polymyositis and myxoviruS・likeinclusions．

型ミオバナー1例の生検筋の電量頁的検索で，高頻Electronmicroscopicandviralstudies．Arch，度にFIとTMIを認めた．いわゆる封入体筋炎やNeuro1．，24：409，1971．

TMMの生検筋の光顕所見の特徴はRVの出現

8）Yunis，E．J．＆Samaha，F．J．：Inclusionbody

であることを考慮すると，FIやTMIは疾患特異myositis．Lab．Invest．，25：240，1971．

的というよりもRVを伴う筋の変性過程に出現する独特の封入体であると考えられ，これらの疾患には共通の変性過程が存在している可能性を示
唆する．

−241−

46）Autosomal recessive distal muscular dystrophy（常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症）の特徴と文献的考察（附）1部検例
三
研究協力者

好

和

夫い■

朝

勝●

日

下

香

苗●

西 野

洋■

川

井

尚

臣事

岩

吉

成

は じ め に

田

恭

典■

績

ARDMDの特徴の要約：

Autosomalrecessive distalmuscular dystro−

本病型の特徴は次のごとく要約することができ

phy（ARDMD）（常染色体劣性末梢型ジストロフィー症）は，著者らがさき（1974年1〉）に7家系14る．1）遺伝型はautosomal recessive，男，女両症例を示して，新しい末梢型筋ジストロフィー症

性にほぼ同様に発病，2）筋萎縮は筋原性．筋電図として発表したもので，その後家系例を追加しては筋原性，筋組織所見はジストロフィー性で，空きた2）3）4）．いわゆるdistalmyopathyとしては，胞変性などを認めない．3）筋萎縮は下肢末梢にはWelander（1951）のMyopathia distalis tarda
hereditariaが代表的にあり，その後いくつかの家

じまり，下腿にもっとも強く，とくに屈筋がおか系例や症例が報告されている．近年は，筋の組織

4）多くは10歳台後半から20歳台で発病．5）症状はで多数のrimmedvacuoleのみられるものが注目

進行性であり，筋萎縮は下腿筋から，次いで大腿され，報告例はとくにわが国において多い．

筋にもおよび，発病後数年で起坐，歩行に支障をされる．ために早期に爪先立ちができなくなる．

本文では，著者らのARDMDの特徴を示し，さきたす．しかし，それらが不能になってbed pa・

きのWelander型，その他，そして，近年のvacu0−

tientとなることは少い．上肢の手，前腕の筋萎縮

1ar distal myopathyともいうべき症例との関係を明らかにしておきたい．

も加わるが程度は軽い．6）血清CK活性値が中等度〜高度に上昇する．7）血清CK活性値に関し，なお，著者ら観察中のARDMD家系例の1例

著しい上昇を示すホモ因子型preclinicalstageのが昨年死亡し，剖検することができたので，臨床ものと，軽度の上昇を示すヘテロ因子型の2種類

経過の要点を剖検組織所見の要約を附してのべる．

の生化学的保因者がある．
遺伝・臨床型としてのARDMD：

方図1に本症の8家系17症例（男8，女9）を示

法

ARDMDを中心として，その他のいわゆるdis−

した．これらの家系の中には，病者の他に，血清CK

talmyopathyについて，1）まず，遺伝・臨床型のに関する生化学的保因者，ホモ型2例（女2，16

観点からのべ，また2）臨床的には筋萎縮の強さの歳，19歳），ヘテロ型4例（男2，女2，14−19歳）

伸筋，屈筋における差異，3）血清CK（クレアチンがみられる．なお，Ak．家ⅠⅤ−2（男性22歳，病者）

キナーゼ）活性値上昇の差異，そして，4）筋組織は，14歳から18歳発症時までホモ型保因者であっ所見として，とくにrimmed vacuoleの有無につた．
ホモ型保因者は家系図，年齢，CK活性値，そしいてのべる．
＊徳島大学医学部第一内科＊＊沖中三己念成人病研究所て臨床経過からpreclinicalstageにあるものと判断されるし，ヘテロ型保因者は発症していない．
−242−

≠⁚∴︑恥

Ok．家

1■

（250）

20

An．家

Ay．家

Ak．家

18

（8）（48）ノ■25 23 22 16（272）（804）（1570）（1116）

25

21′18 2（254日446）（724）（605I（2）（507）

図1 常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症の家系

これらの家系例は常染色体劣性の遺伝型を示し，症状，所見（前項，また，詳細は著者らの論文参照）からして疾患単位としての一遺伝・臨床型であることがわかる．
なお，図1中のAn．家（中村家）のⅢト1（男性56歳）は昨年68歳で死亡し，剖検を行なった（後章参照）．
ARDMDにおける下腿屈筋の障害：
ARDMDでは下腿筋の萎縮で屈筋が強く侵さ大野筋

縫工筋大腿四頭筋俳腹筋 長拇址伸筋1前旺骨筋
ヒラメ筋

れることが特徴である．そのため早期に爪先立ち

H

菅 染 色 体 劣 性 末 梢 刑 筋 ジ ス ト ロ フ ィー 症

ストロフィー症冬型のそれと比較して示した．

が不能になる．図2にその筋力低下の有様を筋ジ本症では下腿の排腹筋，ヒラメ筋の筋力低下が顕著であることが特徴であり，同じ下腿筋でも前脛骨筋，長拇址伸筋は比較的よく保たれている．

図2筋ジストロフィー症各型の下肢筋力（徒手筋力テストによる）

屈筋がより強く侵されるということは大腿筋にもその傾向がみとめられる．
下腿屈筋の萎縮が強いことは，視診，触診，ま

ー243−

0

10

20

30

40

50

60

70

年 令（歳）

図3

常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症の病者および生化学的保因者の血清CK活性値

た筋電図，筋組織所見でもみとめられる．
ARDMDにおける血清CK活性値の上昇：
図3に，本病型の病者および生化学的保因者の血清CK活性値と年齢による経過を示した．
本病型の血清CK活性値は高齢者の1例（65U／

図4 筋生検組織像（Si．家ⅠⅤ−1例）
a：大骨筋 b：俳腹筋 HE染色（×100）ml）を除いて，221−1，570U／mlと中等度ないし高られていない．

度に上昇している．血清CK活性値の著しい上昇

組織化学染色では，全体的にtype predomi−nanceの所見はみられず，また，nemalinerodなは年齢の若い発症後まもない症例にみられ，年齢の増加とともに低値となっている．ホモ因子型の2例の血清CK活性値は1，116，507U／血の著しい上昇であり，ヘテロ因子型保因者の4例の値は40−55U／mlの軽度上昇である（健常値25U／ml
以￣日．

どもみられなかった．また，電顕では，Z−bandのstreaming，筋線経の粗繋化，断裂などの変性所見であり，特異的なものはみられなかった（日下ら7））．
本病型の筋組織所見は，ジストロフィー性とい

生検筋組織所見：ってよく，空胞変性など特殊な所見のないところ

本病型の6家系9症例における生検筋の組織所に特徴があるといえる．

見では各症例ともよく似た所見がみられた．

剖検例．An．家Ilト1．男性．56−68歳：著しい変化のみられた俳腹筋では，筋線経の大家系図を図1（An．家）に示した．娘2人に本症

小不同．筋線経の減少，変性，壊死，中心核の増加，そして，脂肪織と結合織の増加があり，著し病者がある（剖検所見は指沢ら5）の報告参照）．
20歳歩行障害ではじまり，下腿筋萎縮，その後い筋原性の変化がみられた．しかし，空砲変性は上腕の筋萎縮が徐々に進行．56歳初診時には，爪みられない．そして同一症例でも大骨筋では散在先立ち不能，登はん性起立，動揺性歩行．筋萎縮性に変性壌死線経をみとめる程度の軽い変化であが下腿に著明に，下肢の大腿部および前腕に軽度った（図4）．なお，筋束中の末梢神経に異常はみにみられた．握力は軽度に低下．血清CK活性値−244−

は，56歳65U／ml，66歳35U／ml．68歳死亡，剖検．

て，組織所見でvacuoleを伴うdistal myopathy

66歳の筋生検で，本症の他の症例と同様所見をとされている報告例7）の中から2−3を取りあげえた．すなわち．HE染色，組織化学，電顕で，排腹筋に前述の強い筋原性変化をみとめ，しかし，て表1に示した．Distalmyopathyの文献に関しては豊倉ら7）の文献集がある．表1に従って，以筋線維型優位の明らかなものをみとめず，また，下，次の論点に絞って述べる．

rod，VaCuOleなどもみられなかった．
本例は本病型の1例で家族発症例である．ただ遺伝・臨床型：Welander型とARDMDはそれぞれ異なった

本例では，血清CK活性値の上昇が，高年期のた遺伝・臨床型としてみられる．

めと考えられるが軽度であり，また，娘2人の発

高橋ら7）の2家系とKuhnら6）の1家系は明ら

病期がやや早く（12歳），病状の進行も少し速い．

かにARDMDといえる．とくに，これらの家系の

本例の剖検所見の要約（檜沢ら5）による）：本例

中では，著者らが本病型の特徴として述べてきたの特徴は，下月支遠位筋の強い萎縮，筋核の増加，

CK活性値上昇による保因者の内，前者でヘテロ集塊化，少数の壊死，再生筋の存在，一部筋にみ因子型，後者でホモ因子型のものがとらえられてられる変性に伴うネマリン小体の形成などである．

いる．ARDMDに属すると思われる文献例として部分的に神経原性の変化を思わせる像も混在する

は，表中のものの他に，いずれも本邦例であるが，が，全体としては筋原性変性と考える．

家系例が1，2家系あり，また，単発例が数例み

娘2人（本家系の発端者およびその姉）の筋生られる．

検所見は父親と同様，下腿筋の高度な月旨肪織享受潤，
残存筋線経の散在性壊死を伴う筋原性変性であっMarkesberyらの論文7）は，症例が同種類でない例として取り上げた．3症例がvacuoleの存在た．

を特徴とするものとして発表されているが，単発の2例（血清CK活性値が高度に上昇，VaCuOleは

考察少ない）はむしろ著者らのARDMDに近いこと

著者らのARDMDと文献例でこの型に属するを思わせ．1例の家族発症例はvacuoleが多く，と思われるものに対比して，Welander型，そし

表1
発 表

者

W elander

病

名M yo pathia
dista lis tarda
hereditaria

発 表

年

（
1951）

家系（
例）
数

72 （
249）

ARDMDとdistalmyopathy報告例の若干

三好ら

高橋 ら

A RDM DAR DM D（
1967−74 ）8

特殊の家系例といえる．

（
17 ）htarkesb ry ら

K ulln ら
芸器 ItZS㌶thy

水汎

D istal m yo pathy

（
1981）
1 （
2 ）

2 （2 ）

1 （7 ）（4 ）熊本．福原らD stal m yopatlly
v acuolar
Y ariety

D istal m yopa thy

（
1980）

（
1982）

2

1 （3 ）（
1977 ）

（
1979）
2

豊倉ら

（2 ）

AD

AR

A R

A R

単発

A D

単発

A R

40・
−60

10台後半−20台

18 −27

17，19

20．19

44

26，26

23 −26

筋

手指

下肢末梢

下肢末梢

下月
王末梢

下肢末梢

下肥末梢

下肢末梢

下肢末梢

過

slow
progTeSSive

progTeSSive

progressive

p rogressive

p rOgreSSIY eslow
p rogressiv e

slow
progTeSSiveslow
progressive

機 能障 害

踵立ち

爪先立 ち

爪先立ち

爪先立ち

爪先立ち

屈筋＜伸筋

屈筋＞伸筋

屈筋＞伸筋

屈筋＞伸筋

屈筋≧伸 筋m y ogenic

IJ

〝

〝

JJ

Jl

lI

中一高度

〝

lJ

中一高度

軽度

軽度

軽度

（
一）
，（
＋）

（＋）
．（
−）

〃

〝

m yopath ic

m yopathic

m yopath ic

m y opath ic

（
−）

（
−）

霊

悪 さ
寵

（
≠）

（
≠）

】
丑 伝

禦

発症年 齢
初

発

絶

筋

萎

縮

筋

電

図

m yogenic

血清C K 値上井C K 上昇保因者（
hom o ）．
（
hetero ）

…

便 t

（＋）
．（
＋）
m yopa thic嵩 霊 裟vacu oles
SOm etlm eS

（
−）

）

−245−

㌃ a ll

踊立ち屈筋＜伸筋 ￣

e

j連立ち

踵立ち

屈筋≒伸筋

屈筋＜伸筋

水沢，豊倉ら7）の例は類似の単発例を集めてvacuoleの蹟著な新しい遺伝・臨床型として報じて，ARDMDではみられていない．Welander型ている．熊本・福原らの例はvacuoleを認める3

るvacuoleを伴うものでは，それが高度ないし顕例の同胞発症の例としてかかげた．これら，いわ著にみられている．

ではsometimes observedとされている．いわゆ

ゆるvacuoleを伴うdistalmyopathyは，文献上，単発例，家系例としてこれまでにすでにいくつか

おわ り にの発表7）があるが，今後，各々の特徴によって整理

著者らのいうARDMDの特徴を遺伝・臨床型

されて，遺伝・臨床型として確立されてゆくもの

としての観点から述べ，また，とくに下腿筋萎縮と思われる．

の屈筋，伸筋の優位性，血清CK活性値上昇，そ筋萎縮の伸筋，屈筋価位：
ARDMDでは下腿筋萎縮は明らかに屈筋優位

して筋組織におけるvacuoleの存在をとりあげて明らかにした．

（屈筋＞伸筋）である．このため病者は爪先立ち

本病型は他のdistalmyopathyに対して，いわができなくなる．これに対して，Welander型では

ゆるpuremusculardystrophyのカテゴリーに入るとの著者らの考えから，autOSOmal recessive（下腿の萎縮はホモ因子型であるatypical caseで著明）伸筋優位（屈筋＜伸筋）で，踵立ちが不能となり，爪先立ちは可能としるされている．

distalmusculardystrophy，すなわちmyopathyとせずにmuscular dystrophyとしてある．

Markesberyらの例では，単発の2例では下腿

本文ではまた，最近死亡して剖検をすることが筋萎縮は，屈筋＞伸筋であり，家族発症の1例は屈筋できた本病型の1例（68歳男性，家族発症例，著＜伸筋である．また，内外のいわゆるvacuoleを伴者ら12年間観察）の臨床の要点を，剖検所見の要約を附して示した．

うdistalmyopathyでは，屈筋＜伸筋ないし屈筋≒伸筋で，やはり踵立ちができなくなっている．
血清CK活性債の上昇：

文

献

ARDMDの血清CK活性値の上昇は，著者らは

1）三好和夫，岩朝 勝，川井尚臣，ほか：Distal

中等度一高度としてきたが，健常値の10倍〜20倍

myopathyの遺伝・臨床型，自験7家系14症例とあるいはそれ以上であり，Welander型では記載

わが国文献例についての成績．臨床神経，14：はないが明らかな上昇はないと思われる．血清963−963，1974．

CK活性値についてもMarkesberyの例は2つに2）Miyoshi，K．，Iwasa，M．，Kawai，H．，etal．：

分かれており，単発の2例で高く，家族発症の1Autosomalrecessivedistalmyopathyobserv−

例では上昇していない．いわゆるvacuoleのあるedcharacteristicallyinJapan．Jap．J．Human

distal myopathyでは上昇は軽度ないし，殆どみられていない．血清CK活性値上昇による保因者
はARDMD以外にはない．

Genet．，20：62−63，1975．
3）

三好和夫，岩朝勝，川井尚臣，ほか：常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症Autosomal

筋組織所見，とくにvacuoleの存在：

recessivedistalmusculardystrophy−わが

筋組織所見は，表にみるようにすべてmyopa−

国にとくにみられる新しい末梢型筋ジストロフ

thicと表現されている．ARDMDに著者らはdys・ィー症−．日本臨林，41：3922−3928，1977．

trophicの表現を用いたが，それは，DMDの組織

4）Miyoshi，K．，Iwasa，M．＆

Kawai，H．，：

像を頭に描いて，myOpathicの所見に，特別にAutosomalrecessivedistalmusculardystro−

VaCuOle，異常mitochondria，また筋線維型の異常

phy：A new geneticoTClinicalなどが顕著でないということを特徴とする，こと

progressivemusculardystrophy．Inを指している．

Dystrophy

Vacuoleないしrimmedvacuoleの存在についー246−

entity ofMuscular，ProceedingsoftheInternational

SymposiumonMuscularDystrophy，Nov．，25

6）Kuhn，E．＆Schr8der，J．M．：Anewtype of−27，1980，Tokyo．（ed．Setsuro Ebashi），

distalmyopathyintwobrothers．Neurology

1982，Univ．Tokyo Press．pp．471−483．

5）相沢一夫，布村進作，森住 啓：常染色体劣性（N．Y．），226：181−185，1981．

末梢型筋ジストロフィー症（三好）の1剖検例．

7）豊倉康夫，三好和夫：DistalMyopathy文献集．

厚生省「神経疾患研究委託費」「筋ジストロフィ

厚生省「神経疾患研究委託費」「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」（三好ー症の発症機序に関する臨床的研究」（三好重圧）

姓），昭和57年度研究報告書．1983，pp．248−254．

昭和56年度研究報告書，1982，pp．241−249．

−247−47）常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症（三好）
の1剖検例
特別発言

檜

澤

一

夫●

布

遠位筋障害を主徴とする筋原性疾患distal
Myopathyは，Welanderl）の常染色体優性型（Myopathiadistalistardahereditaria），Magee
ら2），Bautistaら3）の乳幼児型，Biemondの若年型11），三好ら●）の常染色体劣性型，rimmedvacu0−leを組織学的特徴とするもの5）胤7）など，遺伝，臨床的にも病理組織像の上からも多種類の疾患を含んでいる．三好らが報告したdistalmyopathyは
本邦の8家系の綿密な遺伝・臨床的検索に基づき，筋生検による組織像も併せて，進行性筋ジストロ
フィー症に属する一病型として分類されたものである．本病型の剖検検索はまだなされていなかったが，今回初めて1患者（An家）を剖検し得た．
その所見は本病型の性格を明らかにし，他の病型との異同を論ずる上にも甚だ貴重であるので，筋病変を中心に報告する．
症

例

68歳，男．漁師．
主訴：下肢の脱力．下腿の筋萎縮．
既往および現病歴：小児，青年期には異常なし．
20歳頃歩き方がおかしいといわれたことがあるが，仕事に支障はなかった．31歳腸チフス，45歳頃肺結核，48歳頃から胃潰瘍の治療を受けている．下肢の筋力低下は徐々に自覚されるようになり，37
歳頃階段昇降に困難を覚え，下腿の筋萎縮に気付いた．45歳頃には手にも脱力感を覚えるようになった．56歳，初診時，下腿が細く，爪先立ち不能，
登はん性起立，動揺性歩行が認められた．握力は軽度低下していた．血清CK活性値は65単位と軽度上昇を示した．昭和54年11月（66歳）徳島療養所に入院．この時は立ち上り極めて困難，歩行は＊徳島大学医学部第一病理

村

進

作●

森

住

啓●

平地のみ可の状態であった．知覚障害，病的反射はなく，血清CK活性値は48単位．昭和56年11月（68歳）より咳，ロ客疾，発熱が現われ，肺野陰影が拡大，昭和57年3月死亡した．
家族歴：患者は近親結婚をしており，娘2人が同病患者である．
剖検所見：るい痩著明．全身筋肉の萎縮がみられるが，とくに下腿に強く俳腹筋のふくらみは消失している．排腹筋，ひらめ筋は月旨肪織にほぼ完全に置換され黄色である．前，後脛骨筋は萎縮し少量の月旨肪織浸潤，線維化を示す．大腿，上肢，肢帯，躯幹の諸筋にも萎縮はあるが，月旨肪，線維化はほとんどなく，正常の色調硬度であった．剖検
時に切り出したこれらの骨格筋について，組織化学，電子顕微鏡観察も併せ行った．
脳（1240g），脊髄，心筋には異常を認めなかった．肺には陳旧な結核病巣，気管支拡張症と，死因となった気管支肺炎が見出された．
組織学的所見：俳腹筋は剖検時ほぼ月旨肪織のみと化していたので，死亡2年前の生検標本を示す（図l a，b）．すでに筋実質の脱落と大量の月旨肪織がみられる．残存筋線経は核集塊を持つ強度の萎縮から200／Jmをこえる腫大が混在し，硝子様変性（opaquefiber）（図1a），分節状壊死（segmental
necrosis），食細胞侵入，再生（図1b）が散見された．前後脛骨筋（図2a），大腿二頭筋，拇指球筋（図2b）には軽度の筋線経の脱落とperi−，endomysiumの線維化を認めたが，筋束構造はよく保たれていた．筋線経は大小不同を示し，円形の太い線維問に小径線経が混在し，所々に小径線
経の小さな集団が認められた．筋線経のsplittingも多く観察された．筋核は増加し，中心核が多い．
稀に孤在性の融解壊死筋線経が見出された（図2−248−図1a，b

生検俳腹筋
ba 線維径の不同，横断面の円形化がみられる．
渡染性の硝子様変性が散在．右中央部から下は，実質脱落の著しい筋束で，脂肪，線維化を伴っている．
HE X80b）．躯幹，四肢帯，上腕の諸筋には筋線維脱落や中央に食細胞浸潤を伴う分節状融解壊死と，それに平行して再生筋線経が並んでいる．
HE X320

組織化学的所見：各筋肉とも同型線経の大小の集

問質増生はほとんどなかったが，横径の不同，中団，typepredominanceなど線線型の分布異常が心核，核増加があり，壊死が散見された（図3

部分的に観察された（図4a）．各筋のヒストグラa）．再生現象は少なく稀にしか遭遇されなかっムは一様ではないがtypel優位，typel，2萎縮

た．

（栂指球筋，三角筋，腸腰筋）の傾向がみられた

本例の筋肉には以上の変性，壊死に加えて，ネ（図4b）．後脛骨筋ではtype1線経の萎縮と減少

マリン梓状体が主に近位四肢筋，躯幹筋，横隔膜などに観察された．ネマリン梓状体は細胞膜下のがあり，type2線経は萎縮がなく2峰性パターンを示した（図4b）．

小集塊あるいは細胞質の変性部に多量の集塊をな

電子顕微鏡所見：横隔膜筋をみると，中心コアにしており（図3b），10／ mをこえる針状構造も認相当する中心部の筋原線維変性（サルコメア配列められた．ネマリン棒状体集塊に接してリボフスの乱れ，Z線streaming）と，これに連続してネマ

テン頼粒がしばしば共存していた．横隔膜には中リン梓状体形成が（図5），また種々の大きさの電心コア変性もみられた．空胞変性は少数認められ

子密なりゾソーム（リボフステン頼粒）もしばしたがrimmedvacuoleはなく，炎症性細胞浸潤もば観察された．異常なフィラメント，封入体など

見出されなかった．

は見出されない．
−249−

図2

a

後脛骨筋

腫大円形化した筋線経．中央に核集塊化した萎縮筋，上に小径線維群，下にsplittingがみられる．HE x320−250−

筋核の増加，線雄株径の不同，小径線維群
および中央やや左寄りに融解壊死筋を示す．
HE x160

図4a

組織化学所見のまとめ
腸腰筋，myOSin ATPase反応（pH4・55）上の筋束はtypel，下はtype2が優位を占める．さらに下の筋束ではtypel萎縮もある．

HIST00■▲HS Or■USCu Fl■t■Sb 栂指球筋（左上），腸腰筋（右上），後脛骨筋（左下），三角筋（右下）のヒストグラム

−251−

図5

横隔膜筋．サルコメア配列は不明瞭となり，筋原線経に連続してネ
マリン梓状体が多数みられる．

脳・脊髄の組織学的所見：脳，脊髄各部とも萎縮，るが，本例ではむしろしばしばみられる変化であ運動ニューロンの変性，消失は認められず，前後ったので，これらについて考察を加える．

根神経の髄革削こも変化は見出されない．ただし頸髄後根に1コの神経腫小結節を認めた．

ネマリン梓状体は，ネマリンミオバナーのみならず，種々の筋疾患に際して筋原線推とくにZ線
構成蛋白質（α−アクチニン）の変性に附随して生考察じることが知られており，進行性筋ジストロフィ

本例の筋肉の病変は全身にわたってみられるが，■17i度な荒廃は下腿とくに屈側の筋に限局していた．

ー症にも稀ながら出現し得る．Distal myopathy
ではMarkesberyら9）（第3例），内野ら7）の報告

病′変の性状は壊死（piecemeal necrosis）を混じ／二井特異的変性が基本であり，進行性筋ジストロ

線経の変性に随伴して起った非特異的変化と考え■ノト▼−症に共通な変化である8）．本例ではこのよられる．なおEdstr6mら10）が最近Welander型にみられる．本例にみられたネマリン変性は筋原

うな構本的変化に加えて，筋ジストロフィー症とと考えられるdistalmyopathyに見出した中間型

しては押倒な筋線維型分布の異常，ネマリン梓状
休か．ん⊥−，れた．また筋ジストロフィー症では再生フィラメント（skeletin）は本例には認められなかった．

によ一ノて苦い筋線経の比率が高いので，リボフス

一方最近になって筋線経のrimmedvacuole変ナン顆粒が多姐に出現することは少ないと思われ性を組織学上の特徴とするdistalmyopathyが多

−252−

文

数報告，注目されている．空胞変性はWelander型

献1）welander，L．：Myopathia distalis tardaのdistal myopathyにも時々みられるという．
Rimmedvacuoleはミエリン様構造を有し，酸フ

hereditaria，249

オスファターゼ活性陽性といわれているが，このpedigrees．Acta Med．Scand．，141（Suppl．

ことはrimmedvacuoleが小器官とくに膜要素の265）：1，1951．

崩壊に由来するautophagicvacuoleであり，細胞質崩壊過程の一様式を反映する非特異的構造であexamined cases in722）Magee，K．R．＆DeJong，R．N．：Hereditary
distalmyopathywithonsetininfancy．Arch．

ることを示している．事実本空胞は封入体筋炎やNeuro1．，13：387，1965．

糖原病など本態の異なる疾患にも出現することが3）Bautista，J．，Rafel，Eリ

Castilla，J．M．＆

指摘された．われわれの報告例では空胞変性は少Alberca，R．：Hereditary distal myopathy

数観察されただけであり，とくにrimmedvacu0−

withonsetinearlyinfancy．J．Neurol．Sci．，

leは見出されなかったが，autOphagic vacuoleな

37：149，1978．

いしリゾソームの集塊であるリボフステン顆粒が4）三好和夫，岩朝 勝．川井尚臣，佐々木尚子，

みられたことは，本例においてもリゾソームが関与する変性ないし修復過程が起っていることを示

常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症．わが唆するものと思われる．とくにこれがネマリン梓国にとくにみられる新しい末梢型筋ジストロフ状体と共有し，変化の軽い躯幹，近位四肢筋に多く認められたことは興味がある．

日下香苗，八木田正聖，日浅光春，多田嘉明：

ィー症．日本臨妹，35：3922，1977．
5）水沢英洋，中野今治，井上聖啓，高木昭夫，萬本例のような末梢型の筋萎縮の分布を示す疾患

年 徹，豊倉康夫：筋線経に高度の空胞変性をでは神経原性筋疾患を鑑別しなければならないが，伴ったdistalmyopathyの一病型．神経内科，

脳，脊髄には神経原性筋萎縮の基礎となる病変は12：40，1980．

なく，筋肉の病変も上述のごとく筋原性変化であ6）Fukuhara，N．，Kumamoto，T．＆Tsubaki，T．：

った．筋線維型の分布異常，不均衡，同型線維集

Rimmedvacuoles．ActaNeuropath．，51：229，

団がなんらかの神経原性因子の関与を意味するの1980．

かは今後の検索にまたなければならないが，これ

7）内野誠，山村善教，川崎渉一郎，橋川和利．

は長期の経過中にくり返されたfiber splittingや

徳臣晴比古：筋線経に著明な空胞変性とミエリ再生に起因するmyogenic type groupingとしてン様構造物（myelin

も理解し得る像である．

OCulo−pharyngo−distaltypemyopathyの1例．

負gure）の増加を認めた

臨床神経，19：602，1979．
むすび8）Cullen，M．J．＆Mastaglia，F．L．：Morpho−

常染色体劣性末梢型筋ジストロフィー症（三好）の1例の剖検所見を報告した．筋肉の萎縮は下腿

logical changesin dystrophic muscle．Brit．

Med．．Bull．36：145，1980．

とくに屈側の膵腹筋，ひらめ筋に最も強かったが，

9）Markesbery，W．RりGriggs，R．C．＆Herr B．：

筋線経の変性は全身の骨格筋にひろくおよんでいDistal myopathy．Electron microscopic andた．病変の性状は非特異的な変性・壊死（piece−
meal necrosis）が基本であり，筋ジストロフィー

histochemical

studies．Neurology（Minneap．），27：727，1977．

症の病変と同様である．本例ではしかし，これ以10）Edstr8m，L．，Thomell，L，−E．＆Eriksson，A．：

外にネマリン棒状体形成，リボフステン集積をき

Anewtypeofhereditarydistalmyopathywith

たすような修飾が変性過程に加わっている可能性

Characteristicsarcoplasmicbodiesandinter−が示唆された．

mediate（skeletin）maments．J．Neur．Sci，，
47：171，1980．

ー253−11）Biemond，A．：Myopathia distalis juvenilis
hereditaria．Acta Psychiat．Neurol．Scand．，
30：25，1955．

ー254−48）Debrancher Deficiency Myopathy−inclusion
body myositisあるいはrimmed vacuoleを伴ったdistal myopathyとの関連−
納

史酎

山

興

中

●

里 野

●

法 一 弘

●

正 陽 昭

′1

レし

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川 図 形

■

中法井

●

■

男敏 明

輝 秀洋

目

政永島

岩福中

研究協力者

生検筋病理所見的rimmed vacuoleを伴った

症例1−3は共通の所見を呈し，光量頁病変の主

distalmyopathy が話題となり，その病理像から｝inclusionbodymyositis との関連が注目されている．しかし，これまでその生化学的側面（欠姐酵素）に関しては明らかにされていなかった．

体は空月包変性で，H．E．染色ではこれらの空胞は今回，rimmed vacuoleを有するmyopathy患者
5症例に関し，グリコーゲン代謝の側面からの検討を行なった．

部位にPAS陽性物質の異常な蓄積を随所に認め

最近，本研究姓でbasophilicな顆粒で縁どられていて，いわゆるrimmedvacuoleの像を呈している．PAS染色では空月包部，空胞周辺部，あるいはそれと無関係のた．電顕像ではrimmed vacuoleは，glyco・
genosomeの集積よりな■り，所々にグリコーゲンの異常な集積を認めた．また筋線経の核内，或い症 ・例
症例1（39歳女性）と症例2（32歳男性 図1）
は同月包で，詳細は文献1）と4）に報告．症例3（32歳女性）は孤発例で，その概要は文献2）と3）に報は核外に20nmのフィラメント様構造物の集積を認めた．これらのフィラメント様構造物は管状構造を呈していた．症例4に於ては，ほとんど全ての筋線経にPAS陽性物質で満たされた直径約数

告．いずれも20歳頃の発症で，四肢末梢優位の萎縮（大腿内転筋と胸鎖乳突筋も萎縮）が緩徐に進行．血清CK値は軽度一中等度上昇．24時間絶食
後の前腕阻血負荷試験で乳酸は正常の上昇反応を示さず（症例2）．症例4（34歳男性，概要は文献
2）〜3））は幼少期より筋脱力あり．一過性の肝〟〜40JJの大小種々の空胞を認めた．一部の線椎はrimmed vacuoleを伴っていた．電顕像では腫大も認めている．臨床像は，近位筋優位の筋脱力並びに筋萎縮と手袋くつ下状感覚低下を認めた．
肝機能障害あり，肝生検では肝細胞にグリコーゲンの貯留著明．CK値は中等度上昇．血糖は著明にかった．症例5の病変の主体は空胞変性で，それPAS陽性物質はグリコーゲン顆粒であることが確認された．Rimmedvacuoleに相当する部分は，glycogenosomeの集積より成っていた．本例では，フィラメント様構造物の集積像は認められなら空胞はrimmedvacuoleの特徴を有していた．
電顕で核内，核外に直径20nmのフィラメント様構造物を認めた．

低下（空腹時42mg／dl）．前腕阻血負荷試験で乳酸上昇せず．症例5（56歳男性）は幼少時より近位筋優位の脱力存在．血清CK値は中等度上昇．
＊鹿児島大学医学部第三内科＊＊熊本大学附1病院臨床検査部

グリコーゲン代謝
生検筋のグリコーゲン代謝分析の結果，表1の様に症例1，2，4でグリコーゲン含量が増加していた．症例1，2ではβ−amylolysisの結果，％

ー255−

図1

症例2の全身像

表l Glycogen andglycogenolytic enzymesin muscle

concentrationl）

controIs5）

8．09＋3．q8

Case1

phosphory●ase3）

sis2）

β−am

i；i；「MH
78．0

31．2＋2．5

211．0

＋

21．1

′

q7．7

17．O

70．1

30．0

Case

2

23．9

11．O

60．8

16．2

Case

3

川．7

ND

92．2

32．1

Case

4

66．2

ND

68．0

Case

5

12．7

ND

13q．9

1）Clyco9en

日、NeutralqI￣￣￣A A。idM。Itaseq）㍍蒜；品◆13．2

2．61＋1．78
3．70
2．13

2．91＋1．51
2．75
3．76

1．86

3．55

19．8

5．03

叫．26

120．1

2．77

2．66

COnCentration＝mg／g・W・W・Ofmusc）e・2）β−amyIo】ysis＝亀dig由tion3）Phosphorylase
q■

Acld

and

S）Control
ND＝

activities＝U

neutralmaltasevalues＋SD（NmOles／min／g

activities＝nproteinmOles

umbelliferoneliberated／h／mg

protein＝6）．

nOl determined．

digestionが減少し，グリコーゲンの外側枝が短い〜3で著明に低下していた．症例5はいずれの方という構造異常が確認された．Phosphorylase，法でもdebrancheractivityは正常であった．症例

acidmaltase，neutralmaltaseは5例ともに特に2では肝生検を行なったが，debrancheractivityは異常を認めなかった．生検筋のdebrancher acti・

対照の1／2〜1／3であった（表3）．赤血球のdeb・vityに関しては表2に示すように，radioactive

rancher activityは症例4で0，症例2で著減，症例3では正常であった（表4）．

assayではglycogenへのL4C−glucoseのincorpo−

rationは症例4で0であり，症例1，2で著明な減少を示した．Limit dextrinの消化能は症例1
−256−

表2

controIs2）

Debrancher activityin muscle

RadioactiveAssayl）

Limit dextrin as substrate（units／（〟mOles

1q3．6

Casel

＋

rotein）

31．5

1．82

＋

7．6

0．13

Case

2

13．1

0．08

Case

3

ND

0．05

o

ND

228．8

1．71

Case
Case

q

5

rucose／min／m

rotein）

0．q6

一日ncorporationoflqc−ghcose into glycogen．
2）ControIvalues＋SD（N＝6）．

表3

Glycogenconcentrationanddebrancheractivityintheliver

ClyC09enContr0I1

RadioaCtiveAssayl

Limit dextrin as substrate【units／fnmolesluCOSe／min／m

30．6

Contro12

31．7

Case2

33．5

1日ncorporationoflqc一g■ucoseinto glycogen．

表4

Glycogenconcentrationanddebrancheractivityinerythrocytes
Debrancher

GlycogenSubect（tlg／rnl packed RBC）

controIs2）（unitsl）／gHgb）

叫．3

133

＋

Case

2

ND

22

Case

3

ND

137

Casel1362601）Units of debrancher activity cariculated as described by Van Hoof．
2）Control

values＋SD（N＝1for

glYCOgen，6fordebrancher）．

考案並びにまとめに低下している．症例3は赤血球でdebrancher

筋病理像からみると，症例1，2，3並びに5activityが正常であったが，これは症例1，2がはinclusionbodymyositis

症例4は，部分的にはの条件を満足する．

rimmedvacuole

amyl0−1，6−glucosidase欠規であるのに対し，症を有す

例3は01ig0−1，4−glucantranSferase欠規である

るが，これを主体とせずかつ，フィラメント様構

ことが想定される．以上のことより，症例1，2，造物も認めないことから．．inclusion body myo−
Sitis とは呼べないが，幾つかの類似点は有してい

的には｝inclusionbodymyositis

3は臨床的にはdistalmyopathyであり，病理学
で，両者を合る．臨床像からみると，症例1，2，3はdistal

わせるといわゆるmyopathyであり，症例4，5はproximaldomi−
nantである．グリコーゲン代謝の面からは，症例

myopathy であり，生化学的にはdebranChing
enzyme活性の著明な低下をみる．このde−

1，2，3はdebrancheractivityが特に筋で著明

brancher deficiencyがprimaryなものであるか−257−

rimmedvacuoleを伴うdistal

文

どうかに関しては，症例2の肝と赤血球でde−献brancheractivityの低下をみていること，並びに

1）Osame，M．etal．：Familiarmuscletypeamyl0

前腕阻血負荷試験で乳酸の上昇をみないことより−1，6−glucosidase deficiency．4th Inter−primaryなものと考える．症例4は臨床的には近位優位の萎縮を呈し，生化学的には筋と肝の両者

nationalCongress on NeuromuscularDisea・を障害する全身型debrancher deficiency myo−pathyと診断された．症例5はinclusion body

myositis の病理像を呈したが，debrancher活性は正常であった．
以上のことより

ses，Sept．1978，in Montreal，Abstract207．
2）納pathy−InclusionBodyMyositisとの関連一
一．第23回日本神経学会総会抄録ⅠⅠIC−14（258）3）Osame，M．etal．：Is

rimmed vacuoleを伴った

distalmyopathy 或いは inclusionbodymyo−sitis の少なくとも一部の症例はdebrancher活

光弘，ほか：DebrancherDeficiencyMyo−−Debrancher

The

InclusionBodyMyositis

De負ciency

relationship

Myopathy

between？一一一

Debrancher

Dificiency

Myopathy−and￣Inclusion

Body

性の著明な減少を認めること，そして，これが病Myositis−5thInternationalCongresson

因にprimaryな役割をになっている可能性が強Neuromuscular Diseases，Sept．1982，in
Marseilles，Abstract WE63．

いことを指摘した．

4）納光弘，ほか：Ⅰnclusion Body Myositisの筋病理を呈したDebrancher Deficiency Myo−pathyの同胞例．代謝，19：1321，1982．

一258−49）DistalおよびQuadriceps myopathyにおける筋電図ならびに末梢神経の電子顕微鏡所見

佐 藤
研究協力者

猛●

長 岡 正 範◆ 安 野 みどり■

封入体筋炎は，慢性進行性で副腎皮質ステロイ

認めた症例計5例（表1）．内訳はDistal myo−

ド剤は無効，組織学的には炎症所見に乏しく，rim−

pathy3例（症例1，2，3），Quadricepsmyo−

medvacuoles，筋草宵核内封入体を有し典型的多発

pathy2例（症例4，5）．他に，今回の筋電図検性筋炎とは異なる特徴を持つ疾患群である．本疾査の対象からは外れるが，Distalmyopathyの1
例．

患群の一部ではfibertype predominancyが認められ，又，筋電図上，神経原性変化や，分類困難

方な多相性波が目立つなどの指摘1）があり，その病法

筋電区ⅠはMCV測定ならびに一芯同心電極によ因が筋線維自体にあるのか，あるいは，末梢神経にも障害が存在するのかなど，なお不明な部分がる通常針筋電図を施行．第1・2例については，多い．

Desmedtら2）の方法に従ってcoherent EMGを

今回，筋電図により神経原性変化混入の頻度，
その機序について考察を加え，1例では末梢神経施行した．これはNMUの波形の一部をtrigger
としてその前後の波形を記録分析するものである．
針筋電図評価のため，図1の様な規準を設け た．

の電顕による検索もあわせて施行し検討した．

Short duration，low amplitudeの筋原性変化
対象（Myogenic：My），NMUの減少，高振幅電位（4筋生検によりrimmedvacuoles，核内封入体を
表1mV以上），自発放電（丘brillation，pOSitivesharp
対象症例

Cq se

ClinicolCOU「Se

D istribut ion
Of omyotrophy

Serum CPK

1．6 ．
日．句6y ．M ．

5 yrS

D istol

87−295

2 ．S ．
M ．5qy ．F ．

g yrs

D istol

157−207
（
P「
d．
10mg）

De lto ld

5 ．K ．
N ．25y ．F ．

6 yrS

Gene 「O l，d ist（コ1 dom inont

92 −qO
（
P「
d．
60mg）

BIcepsC lin ．
Improve ．
by stero lds

BlopsyF lex ．
CQ rP ．
U l．

句．T ．
N ．52y ．M ． 26 y 「S

7上
15 −92Quc］
d riceps，
B lt ． （Prd ．
qOmg ）

Quod riceps

5 ．K ．
U ．59y ．M ．

228 −75
Qucldriceps，
B lt ． （P「d．
50mg ）Quc）
d rlceps

5 y rS＊順天堂大学医学部脳神経内科−259一

WeaktXn廿actbn

Max．

NoedleEMQC相知■b＋トニケと二一一一⊥」‥・・山・l・th中嶋Jl

J醐≠騨榊州加榊拭

洲NNがNNNが抽油W小W抽M≠≠

Myogenjcpattern（My）

十両両頭I叫坤叫畑一
冊ⅣN小≠≠≠汎≠W〟がNMN汎Wm≠≠Y

Neurq酢汀kpanOm（叫）≠nu酬酬沖＋vl叫伸畔輝一・照輝榊轍一
八m≠WNnⅥWN八mWWNMWNN山肌Wル

1≠＼Ⅵ州JN＼Ⅵ≠≠ヾ

atre●tLニー11（XわV、＼≠＼＼＼＼≠≠＼≠＼＼＼＼＼＼＼ヽ＼＼＼≠＼＼≠＼＼＼≠＼＼＼＼＼、、＼＼＼＼＼＼＼

騨〜巾戚
川併m∝ぬte匹n伊仙叫〉

十一日−…一日一一一一叩一一一・＋・トト一・l十・十月叶11mV
州相即がeNNM≠WベWN帥

5加減
図1 筋電図所見評価のための規準wave）などの神経原性変化（Neurogenic：ているが，典型的多発性筋炎でも報告されている．

Ng），さらに，1mV・10msec前後で分敵の容易な多相性波（5相以上）を中間型（Intermediate：

封入体筋炎にみられるこれらの出現頻度は，祖父InM）と分類した．

江3）らが多発性筋炎で報告した頻度より高い傾向を示した．
3．Coherent EMG所見

結果中間型の多相性波は26％に認められ，この頻度

1．MCV（運動神経伝導速度）
上肢は正中・尺骨神経，下月支は深排骨神経について肘・膝以下のMCVを測定し，検査を行った4例（第1・2・4・5例）で正常であった．
2．針筋電図所見
表2に針筋電図所見のまとめを示した．封入体

も多発性筋炎より高頻度であった．これら多相性
波をcoherentEMGにより分析した．図2は第1例の記録である．上段は10個の重ね記録，下段は個々のトレースを示す．A・Bそれぞれ最下段の下線で示す範囲が1つのNMUに属する電位である．その結果，約2msecのjitter，構成com−

筋炎ではshortduration，lowamplitudeの筋原性変化を被験筋の84％に認めた．4mVを越す高振幅電位を25％に，denervationを示す丘brillation，ponentsのsplitting，25msecに達するlatecom・

positive sharp waveを19％にそれぞれ認めた．
高振幅電位・自発放電は神経原性変化と考えられたが，本法で検索した2例（第1・2例）とも同

ponent，blockingを認めた．Desmedtら2）は，これらの所見をreinnervationを反映すると説明し様の所見を示した．

ー260−

l一帖l
￣、一￣■＼ノ

￣￣、J

葦拡＝≡

箋臣≡
レ′＼一一一一一

2msec
図2

5msec

Coherent EMG所見
A・Bはそれぞれ症例1の上腕二頭筋から得られた多相性波．上段
は10個の重ね記録．下段は個々の波形を示す．最下段の下線が1つのNMUの活動電位の幅を示す．
IIはsplitting，★は▲blocking，＊・Oは別のunitの混入を示す．
上段の下線はjitterの範囲を示す．

考は，従来考えられていたより強いことが示唆され

察

筋生検により封入体筋炎と診断されたDistal

た．
次に，本疾患群で指摘されている神経原性変化

myopathy3例・Quadricepsmyopathy2例の筋電図検査により，いわゆる筋原性変化の他に，神の起源について検討した．いわゆる筋疾患でみら経原性変化を比較的高頻度に認めた．それは，従れる筋電図上の神経原性変化について，多発性筋

来から多発性筋炎で指摘される神経原性変化より炎では筋肉内末梢神経への炎症の波及が一因と考若干高い頻度であった．この結果は，Lacyら1）のえられている．しかし，封入体筋炎では，初期は報告を支持するものである．さらに筋原性，神経

別として筋電図・筋生検が実施される時点では炎原性のいずれとも分類の困雉である多相性汲（中症所見は乏しく，従って．炎症波及の可能性は考間型）を26％に認め，COherentEMGの結果から，
これらがreinnervationの結果であることが予想えにくい．次に，筋dystrophyでも除神経・神経
再支配の所見が筋電図上指摘されている．Des−された．この点は，今回我々が初めて明らかにしmedtら4）は，筋線推上にfocal necrosisが生じ，た所であり，封入体筋炎における神経要因の関与

endplateを含まないdistal部分が除神経に陥り，

−261−

表2

針筋電図所見
左端は，針筋電図所見を，右端はそれに対応する今回我々が設けた規準を示した．各数字は仝被験筋の中で各所見を呈した筋の割合を示す．

EMGfindinqs polymyositis

語呂主瑠冒nLow omplitude potenticll

80冤

Short dur〔】tion

q7

FibrillcItion potenticl1

16

15

Reduced NMU

12

0Complex oction potentic）l

q

511

High

5

0

25（Ng＋Ⅴ′＋＋）500（Ng＋R）

58冤

omplitude

potentic］l

FcISCiculotion potenti〔】1

8嶋（My＋，＋＋）

19（Ng＋R）
0（Ng＋＋．My＋＋）
26（Sobue）（Our L〔】b，）（5図3

神経筋接合部の電鉄所見−262−（InM＋）

ccISeS）

fibrillation，pOSitivesharpwaveなどの自発放電

結論を生じ，その後，隣接する神経終末からの側枝が1．封入体筋炎5例の筋電図において，筋原性電のびdistal部分が再神経支配を受けると，jitter・

位のほか，比較的高頻度に神経凰性電位の混入

blockingを示すlate componentsを有する多相性波が出現することを実験的に示した．このこと

2．筋生検で，従来からのrimmedvacuoles，筋から，封入体筋炎ではrimmedvacuolesとしてみ

鞘核内微小細管状封入体の他，軽度ながら筋肉られる部分的な筋の変性像が，筋dystrophyでのfocal necrosisと同様な機序として働らき，本報

内末梢神経の軸索および神経筋接合部の神経終末の変性像と再生を示唆する像を認めた．

告で認めた様なdenervation potential，reinner−

3．本症の病態には，筋原性変化に加えて神経原性

Vationpotentialを生じさせる可能性が考え得る．

要素も関与している．その機序について考察を
行なった．

を認めた．

次に，Distalmyopathyの他の1例について末
梢神経を電顕により検索した．図3は，筋肉内末
梢神経終末を示す．Presynapticterminalの変性

文

献（矢印），Synaptic cleftの艶聞，神経終末がse−1）Lacy，J．R．，Simon，D．B．，Neville，H．E．＆

COndary synaptic cleftのない部分に再接合する

Ringel，S．P．：Inclusion body myositis：

reinnervationとみられる所見が認められた．他

Electrodiagnostic and nerve biopsy丘ndings．

に，筋紡錘内末梢神経では，ミトコンドリアや
neurofi1amentが蓄積し軽度のaxonal swellingやSchwann細胞体内に空胞を有する変性像も認

Neurology（N．Y．），32：A202，1982．
2）Borenstein，S．＆Desmedt，J．E．：Electromyo一graphical signs of collateral reinnervation．

められた．これらは，末梢神経終末の変性と再生

NewDevelopmentsinElectromyographyandを示唆するものと考えられ，上述の筋電図上のClinicalreinnervationを裏付ける所見と思われる．所で，Desmedt，Vol．1，Karger，Basel，1973，pp．130

これらの神経原性要素が本疾患群にとって本質的

Neurophysiology，ed．by J．E．

−140．

なものか否かの疑問が残る．上記の電顕所見が軽3）祖父江逸郎：多発性筋炎．筋肉病学（里青栄二度であること，筋電図上MCVは正常であること，郎・豊倉康夫編），南江堂，1973，p．455．

神経再支配もある程度正常な再生機能の存在を前

4）Desmedt，J．E．＆Borenstein，S．：Relationship

提としていることなどを考え合わせると，現時点

Of spontaneous

では，長い経過を反映した二次的変化であると思muscle丘berseBmentationinhumanmusclar

われる．

dystrophy．Nature，258：5317534，1975．

本疾患群で強調される核内封入体は，いわゆる

5）安野みどり，佐藤fibrillation potentials to

猛：いわゆる「封入体筋炎」

封入体筋炎，Distal myopathy，Quadriceps

における筋革宵核内封入体の特異性．厚生省「神myopathy，Oculopharyngealdystrophyや，さら経疾患研究委託費」筋ジストロフィー症の発症に多発性筋炎などでも報告され，疾患特異性に関して疑問が投じられている．しかし，最近，安野機序に関する臨床的研究，三好珪虹会議，昭和ら5）は封入体の電顕形態上の検討から，多発性筋炎とは異なる特異性を指摘している．今後，本疾患群の臨床的・組織学的特徴に加え，電顕による微細構造上，及び，今回報告した筋電図による病態生理学的特徴をふまえて，本疾患群を考えてい
く必要があろう．

−263−

57年度抄錦集，1982，p．37．

50）いわゆる「封入体筋炎」における
筋鞘核内封入体の特異性
佐

藤

研究協力者

猛■

安

野

みどり■

Distal myopathyの中には筋線維内に多数のrimmed vacuoleがみられる症例があり，その疾Quadriceps myopathyと診断を改めた．
く症例4〉他院にて筋生検施行され，筋ジストロ

患概念が最近問題となっている．かかる症例ではフィー症の診断を受けていたが，筋萎縮，筋力低

同時に微小細管状の筋鞘核内封入体が見出されて下は大腿部に限局し症二状は緩徐進行性．

いる．筋鞘核内封入体はChou（1967）l），および〈症例6・7・8・9〉Acuteないしsubacuteのわれわれ2）・3）が慢性多発性筋炎で報告して以来，現在までに50例以上の種々の筋疾患で報告されて典型的なpolymyositisで，筋肉痛，近位筋優位の筋力低下があり，CPKの著明な冗進，血沈冗進，いる．封入体を有する筋炎は炎症所見が乏しく，

CRP陽性の炎症所見を伴っていた．

慢性進行性であることから封入体筋炎（Yunis＆〈症例10〉 皮膚硬化は2年前より出現．

Samaha）4）との名称も提唱されている．しかし，

く症例11〉全身倦怠感，関節腫脹は8カ月前より．

封入体筋炎の報告例を再検討すると，上記のDis−

皮膚硬化は筋症状とほぼ同じく1カ月前より出現．

talmyopathyと類似の症例が多い．一方Quadri−〈症例12〉15年前よりレイノー現象，関節痛があ

CepSmyOpathyやOculopharyngealdystrophy5）

ったが，皮膚症状一 筋症状は6ヵ月前より出現．

にも封入体が認められることから，封入体筋炎の〈症例13〉1年前に皮膚症状ありステロイドで改概念を再検討する必要がある．一方，封入体の形

善，ステロイド中止した6カ月前頃より筋症状出態にも微小細管状あるいはフィラメント状などさ現．

まざまなものが存在する．本研究では，封入体を治療に対する反応：症例1−5はステロイドで有する自験例13例を記し，封入体の形態的特徴と，それを有する疾患の特徴を整理し，文献例とあわCPKの正常化はみられたが，臨床症状の改善はみせ封入体の特異性につき検討した．

ロイド，あるいは免疫抑制剤の併用によりCPKられなかった．症例6〜13（除く症例9）はステ
臨床症状の改善がみられた．症例9はステロイド，症

免疫抑制剤の投与でCPKの改善はみられたが，例

臨床症状は増悪し，感染症，糖尿病を併発して死（表1・症例1−13の注として）〈症例1〉1971年に封入体を有するChronicpoly・

亡した．

myositisとして報告した症例だが，その後の検索でDistalmyopathyと診断を改めた．

一筋電図所見−：症例2・3・4・5はshort

く症例2〉他院にて筋生検施行され，pOlymyositis

duration．lowamplitudeの筋原性変化とあわせ，の診断でステロイドを長期間投与されていた．

highamplitude，fibrillation，pOlyphasic wave等

く症例3〉1969年に封入体を有するChronicpoly一

神経原性変化がみられた．

myositisとして報告した症例だが，その後13年経過しても筋萎縮，筋力低下は両側大腿部に限局し，の筋原性変化が主体で，少数にfibrillationがみら

症状は緩徐進行性ないし停止性と考えられ，れた．

症例6−13ではshortduration，lowamplitude＊順天堂大学医学部脳神経内科
ー264−

表l Myopathywithintranuclearinclusionbody

一組織化学所見−：症例1は発症4カ月での第1一電顕所見−：光顕でみられた封入体を電顕で観回筋生検では問質に細胞浸潤と萎縮線経がみられ察すると，微小細管状のものと，フィラメント状

たが，2年後の第2回目では細胞浸潤はみられず，のものとに大別することができた．

萎縮線経，問質の膠原線経の増加とともに，rim・
med vacuoleがみられた．

微小細管状封入体（図1）・症例1−5，13では，太い線維状のものがひとつの核内で一定方向

症例2は発症後約10年目の筋生検で，筋線経の大小不同，萎縮線経，rimmed vacuoleがみられ，に束状をなして配列したり，あるいはatrandam

更にgroup atrophy，type grOuping，angulated
fibers等神経原性を思わせる所見も混在していた．

ると，横断面では中央部にhaloを有するものがあな方向に散在性にみられた．これらを拡大してみり，直径130〜180Åの管状構造からなると考えた．
また縦断面で周期的な紋理がみられ，double he−

細胞浸潤はみられなかった．
症例3・4・5では，著明に萎縮，変性した筋

lixからなる可能性も考えられた．この微小細管状線維群と，比較的正常に近い筋線推群が混在し，封入体を有する核は腫大し，クロマチンは不明瞭

萎縮線経の多い部位ではrimmed vacuoleや，となり，核膜の一部が重複したり，断裂し封入体

typepredominanCy，問質の膠原線経の増加が目立った．

が筋形質内に流出している像のみられるものもあ

症例6〜13例では全例に壊死線経，phagocytosis，すものから，強度の変性に陥ったものmemb−

時にhypercontractionに陥った線経がみられ，症例7・12以外では問質または血管周囲に細胞浸潤

ranousbody，CytOplasmicbodyを有するものもをみとめ，典型的なpolymyOSitisの所見であった．

membranous body周辺の筋形質内にみられ，そまた，軽度ではあるがrimmedvacuoleがみられの一部は変性した筋フィラメントやcytoplasmic

た症例もあった．
症例1−13の全例に，Toluidineblue染色で，bodyの構成成分と連続しているようにみえる部分もあった．

筋鞍下の核に明るい均質無構造で，円形または楕

症例13で微小細管状封入体がみられているが，円形に近い形をした封入体がみられた．

った．封入体を有する筋線経は，軽度の変性を示あった．封入体と同一の構造を有するものがひとつの核にのみみられており，他の5症例に比ー265−

図1Microtubularinclusion body．症例2・Distal myopathy（×16，200）（挿入図は強拡大

ベて程度は軽度の変化であった．

×57，000）

Dermatomyositisl例で，フィラメント状封入体

フィラメント状封入体（図2）・症例6〜12では，aCuteまたはsubacute polymyositis4例，は，細い線推状のものが束状に軽く波状を呈しな

PSSに伴うpolymyositis2例，Dermat。＿

がら一定方向に整然と配列していた．拡大像をみ

myositisl例である．Dermatomyositisの1例でると．60Å前後の細いフィラメント状の集合から微小細管状封入体がみつかっているが，封入体はなっていた．封入体は核内の一部にみられるもの

1個のみであり，臨床像・筋電図・組織化学的にから，核内全体を占めるものまでみられたが，核みて例外的な症例と考えた．

の腫大・変形は目立たず，クロマチンも核膜周辺筋鞠核内封入体は，1967年Choul）がChr。nicに圧迫されてはいるが，構造上の異常はみられな

polymyositisで報告して以来，現在までに50例を超す症例が知られている．1971年Yunis＆Sama．

かった．フィラメント状封入体を有する筋線経の変性は比較的軽度で，Z−Streaming，筋線経の配列の乱れ等がみられる程度であった．

ha3）らが筋鞘核内に封入体を有し，慢性進行性の症例を封入体筋炎とよぶことを提唱して以降，この診断名でよばれている症例が多い．その他にも

考察

微小細管状とフィラメント状封入体を有する症
例13例を報告した．微小細管状封入体は，Distal
myopathy2例，Quadriceps myopathy3例，Neuromyopathy，Distalmyopathy，Quadriceps
myopathy，OculopharyngealdystrophyDuchen・neのcarrier・Debranchingenzymedeficiencyの症例等の報告もみられている（表2）．

ー266−

図2

Filamentousinclusion body．症例6・Polymyositis（×12，600）（挿入図は強拡大×45，000）

文献的に封入体筋炎11例，Chronic poly−

る．他の症例でも記載では筋電図でhigh ampli−

myositis6例の報告があるが，症例を再検討する

tudeや，pOlyphasic wave，組織化学でsmallと，封入体筋炎の名で報告されたCarpenter6）のgroupatrophy，typepredominancy等神経展性変

6症例のうち，Distal myopathy，Quadriceps化の関与を記したものが多い．Carpenterは，封入

myopathyの臨床像を呈しているものがあった．

体筋炎の名で報告した症例の筋肉内末梢神経は，細胞浸潤は6例中3例に著明，2例に軽度，1例

正常または非特異的な変化を認めたのみであるとは認めなかった．他の報告でも細胞浸潤はあるもしている．

のもないものもある．一方Chronicpolymyositis
で報告されている症例でも細胞浸潤のあるものもわれわれの症例3のQuadriceps myopathyの
神経筋接合部，筋紡錘の電顕で，末梢神経末端部ないものもあり，報告者の中には，Clinicopath0−の変性を示す像がみられている．これが一次的か

10giCalにはChronic polymyositisだが，封入体二次的変性かは断定できないが，別報のごとく変を認めたので，封入体筋炎と呼んでよいであろう

性した筋線経の神経筋接合部における再生像の可とするものもあり，両者の明瞭な区別が困難と思能性もある．
微小細管状封入体を有する症例の臨床像・細胞

われ，封入体筋炎の疾患概念の再検討が必要と考えた．

浸潤の有無・神経原性の関与に関しては必ずしも

微小細管状封入体を有する報告例の中で，Jeru−

一定の傾向がみられないが，共通した所見として

salem7）や中野らは，神経原性の要素を強調していはrimmed vacuoleがあげられる．Rimmed−267−

らの症例の多くはステロイドあるいは免疫抑制剤

表2Intranuclearinclusionsin neuromyopathy
MICROTUBUuR FILAMENTOUS（Ⅰ30−Ⅰ80A）

により臨床症状の改善がみられた．

（60A）

以上のことから，微小細管状封入体と，フィラ‖0．OF CASES︒

QuADRlCEPS MYOPATHY■ 58

PoLYMYOSZTIS：CHRONIC

ものと考えた．

6

文

8

OcuLOPHARYNGEAL DYSTROPHY

メント状封入体は異なった成因により生じてきた山 一 ︐ ︶DISTAL MYOPATHY

h ﹁貼りROMYOPATHYl1¶ 一 山 ﹁IHCLUSION MYOSlTIS

69ACUTE−SUBAC】TE

1）chou，S．M．：Myxovirus−likestructuresina
CaSeOfhumanchronicpolymyositis．Science，

2

DER ATOMYOSITIS；CHROMC

献2

ACUTE−SUBACUTE
OTHERS

158：1453，1967．

2）sato，T．，Walker，D．L．，et al．：MyxoviruS，

CARRIER OF DucHENHE

likeinclusionbodiesinchronicpolymyositis：

鮎BRANCHERI）EFICIENCYElectronmicroscopicandviralstudies．Trans．
Amer．Neurol．Assoc．，94：339，1969．

3）sato，T．，Walker，D．L．，et al．：Chronic
VaCuOleは近年Distalmyopathyで強調されていpolymyositis and myxoviruSTlikeinclusions．

るが，Oculopharyngealdystrophy，Quadriceps

Arch．Neurol．，24：409，1971，

myopathyでも認められ，疾患特異性はないと考える．しかしmembranousbodyを多数伴った変性像を示し，筋ジストロフィー症やpolymyositisの炎症性変化に伴う筋の変性過程とは異なった変4）Yunis，E．J．＆Samaha，F．J．：Inclusionbody
myositis．Lab．Invest．，25：240，1971．
5）Tome，F．M．S．＆Fardeau，M．：Nuclear

inclusionsin Oculopharyngeal dystrophy．
Acta Neuropathol．（Berl．），49：85，1980．

性を反映するものと考えた．

6）carpenter，S．，Karpati，G．，etal．：Inclusion

結論

bodymyositis：Adistinctvarietyofidiopathic

微小細管状封入体は，rimmed vacuoleを多数有する慢性進行性の症例にみられた．これらの症例ではステロイド療法で臨床症状の改善がみられなかった．

inflammatory myopathy．Neurology（Min−neap．），28：8，1978．

7）Jerusalem，F．，Baumgartner，G．，etal．：ViruS−ahnliche

einschltlsse

beichronischen

一方，フィラメント状封入体は典型的なacutemuskularen Prozessen．

ないしsubacuteのpolymyositisにみられ，これ

Nervenkr．，215：148，1972．

一268−

neuro●

Arch．Psychiat．

51）Rimmed vacuoleを有する筋線経の電気泳動的研究福 原 信 義●
研究協力者

豊

島

至●

熊

本

田 中 恵 子● 宮 武

俊

秀●
正●

Rimmedvacuoleは種々の病態で観察されることが知られているが1），今回は，その生成機序を探ることを目的として，rimmed vacuoleを有する
筋線維のみを取り出して，その蛋白質について分析を試みた．また，この研究で生検筋より目的とする筋線経を同定して取り出し，分析する方法を開発し用いたので，紹介したい．
対象と方法
対象は，rimmed vacuoleのみられるdistal
myopathyの患者3名（32歳男，26歳男，25歳男）と，rimmed vacuoleを伴うKearns−SayTe症候
群類似疾患として既に田中らが報告した1名（22歳男）2），正常対照の2名（45歳男，25歳女）の生図1 方法概略

検筋で，イソペンタン・ドライアイスで迅速凍結
後，−80℃で密栓保有した．
方法の概略を図1に示す．

NADH−TR，ATPase染色などの標本を得た．

1）連続凍結乾燥切片の作製：主として，

3）目的線経の同定と切り出し：凍結乾燥切片をLowry＆Passonneau3）に準じた．タライオスタ

容器とともに室温と平衡にし，乾燥した室内にとットで厚さ20−30／〟nの連続切片を10〜20枚程度
切り，適当な容器内に順番に入れた．通常の太さ

べて目的とする線経を選択し，乾燥切片で同定しの線経を扱う場合は3叫m，萎縮線経を主にとりた．手製のミクロナイフを用いてendomysiumとあつかう場合は20JLmの厚さとした．Lowryの考案した真空噂に入れ，タライオスタット内，ある

筋線経の間を剥離して，筋線維のみを取り出した．

いはドライアイスジャーにうつし，一晩吸引した

気泳動（以下SDS）と，等電点・SDS二次元電気

のち，さらに3時間室温で吸引乾燥した．使用ま泳動（以下2−D）を行った．SDSではlowergel

での間真空のままで−20℃に保有した．

り出して実体顕微鏡下で観察した．染色標本を並4）電気泳動：SDSポリアクリルアミドゲル電を7．5％〜15％あるいは8．75％〜17．5％のlinear

2）染色標本の作製：通常，連続凍結乾燥切片の中間で厚さ8−10JJmの5〜10枚の連続切片をとり，必要な染色を行った．Gomori trichrome，

gradientポリアクリルアミドとした．2−Dでは4×3mあるいは4×6cmの大きさとした．

＊新潟大学脳研究所神経内科
ー269−5）銀染色法は既報4）の如くとした．

結果えるもの，ii）中心が明るいもの，iii）周囲とほと

1）凍結乾燥切片での所見：Rimmedvacuoleをんどかわらないものの3種としてみられた（図2

もっている筋線経は，凍結乾燥切片でi）暗色にみ

図2b，d）．萎縮筋線経は暗色にみえる傾向を示し

Rimmed vacuoleの凍結乾燥切片での所見．a，C：Gomori tri−
chrome染色，b，d：凍結乾燥切片．aとb，Cとdは対応している．×100倍．

ー270−

た．Gomori trichrome染色でvacuoleとしてみられるところは，乾燥切片では抜けていないことの方が多かった．
2）単一筋線経のSDS健（図3）：4症例のrim−
med vacuoleをもっている線経を，30JLm厚の切片より単一筋線経として取り出し対照と比較した．
両者でmyosin heavy chain，

C prOtein，α−actinin，phosphorylase，pyruVate kinase，en0−
1ase，aCtin，Creatine kinase，aldolase，G−3rPdehydrogenase，trOpOmyOSin，phosphoglyceratemutase，myOSinlightchainsに相当するbandを分別することが可能であった．Rimmed vacuoleを有する筋線椎では，図中矢印で示す分子量
55，000（55K）のbandが濃くなっていた．この所
見は検索した4症例のrimmedvacuoleを有する
すべての筋線経に共通してみられたが，相対比は異なっており，萎縮線経でより増加する傾向を示した．また，rimmed vacuoleをもっていない筋
線経でも同様の傾向が認められた．
3）55K蛋白質の同定（図4）：症例ではどの筋線
経でも55K蛋白質が増加していることから，症例と対照の切片全体を2−Dで比較することにより，55K蛋白質の同定を試みた．二次元目を6cm長とし，分子量での分誰をよくした．また，二次元目
を同一gel上で行い，さらに同一サンプルのSDSヽ

1＿■■二■二

才

磯静
増欝静

滅

祝靖増酵鯵
態

図5 Rimmedvacuoleを有する筋線経の2−D（a），
vacuoleをもたない筋線経の2−D（b）．矢印：
説明，本文．
を同時に流すことによって，正確な同定を行うことができた．分子量が55Kに相当するspotはいく

Mr。0−1−r扉
図3

CdSel C∂Se2

単一筋線経のSDS像．M，：分子量マーカ
ー．上から200K，94K，67K，60K，45K，
30K，21K，12K．

つかみられるが，α−aCtinよりややbasicな2個とややacidicな1個が並んで増加しており，等電点から考えてdesminと思われた．また，切片全体を添加したためかなりの量のalbuminの混入が−271−

みられた．

るdesminの増加機序の異同についても今後の検非平衡等電点・SDS二次元電気泳動で55Kに相索が必要であろう．

当する塩基性蛋白を検討したが，対照と症例の間に差は認められなかった．

文献4）Rimmed vacuoleを有する筋線経の2−D（図1）Fukuhara，N．，KumamOtO，T．＆Tsubaki，T．：

5）：Rimmed vacuoleをもっている筋線経を2

Rimmed vacuoles．Acta Neuropath．，51：

枚の切片全体から50本集め，その周囲の正常にみ229−235，1980．

える筋線維40本と2−Dで此較した．両者は細かい

2）田中恵子，揚浅龍彦，熊本俊秀，福原信義，近SpOtまでよく一致したが．vacuoleをもつ筋線経

藤喜代太郎：KeamS−Sayre症候群に類似し骨でgel中央に淡いspotがみられた（矢印）．しか格筋に多数のrimmedvacuoleを認めた1例．

し，他の症例で同様に行ってみたが，このspotは確認されなかった．

臨床神経，22：1015−1020，1982．
3）Lowry，0．H．＆Passonneau，J．V．：Aflexible
SyStemOfenzymeanalysis．AcademicPress，

考按New York，1972，

Rimmedvacuoleを有する筋線経の蛋白質を分

4）豊島重：髄液蛋白質の二次元電気泳動−髄液

析し，分子量55Kのdesminと考えられる蛋白質

特異蛋白質について．脳神経，34：973−979，の増加を見出したが，VaCuOleをもたない筋線経

1982．

でもこの増加は見られ，VaCuOleを構成する蛋白

5）KumamOtO，T．，Fukuhara，N．，Nagashima，M，，

質とは思われなかった．しかし，VaCuOleをもつ線

Kanda，T．＆

椎でdesminの増加傾向の強いことは，VaCuOle

myopathy−histochemical and ultrastructural生成に関与している可能性を示唆するように思われる．

Wakabayashi，M．：Distal

Studies．Arch．Neurolリ39：367−371，1981．

6）Edstr8m，LThornell，L．−E．＆Eriksson，A．：

これらの症例の電顕的観察の一部は既に報告さAnewtypeofhereditarydistalmyopathywith

れているが1）2）5），desminがどの構造に対応していCharacteristicsarcoplasmicbodiesandinter一

るか再度検索中である．

mediate（skeletin）filaments．J．Neurol．Sci．，

Desminの増加は，優性遺伝型のdistal myo−pathyでみられることがEdstr8mら6）により，劣47：171−190，1980．
7）Nonaka，Ⅰ．，Sunohara，N．，Ishiura，S．＆

性遺伝型のrimmed vacuoleを伴うdistal myo−

Satoyoshi，E・：Fami1ialdistalmyopathywith

pathyでみられることがNonakaら7）によって報告されている．Edstr8mらのdesminの証明は抗rimmedvacuoleandlamellar（myeloid）body

体による組織染色のみで，desminのみが増加して

8）Mikawa，T．，Takeda，S．，Shimizu，T．＆

いるとする根拠はやや不確実である．Nonakaら

Kitaura，T・：Geneexpressionofmyofibrillarの電気泳動の結果の図ではalbuminの混入が疑proteinsin single muscle fibers of adult

われる．

Chicken：Microtwodimensionalgelelectro−

また，desminは筋ジストロフィー鶏のSingle
fiberでvimentinとともに増加していること8），

phoretic analysis．J．Biochem．，89：1951−

nemaline myopathyでa−aCtininとともに増加していること9）が報告されている．これらのこと

9）sugita，H．，Ishiura，S．，Nonaka，Ⅰ．，Ohashi，K．＆

はdesminの増加が非特異的な現象であるという

nemalinemuscle．Proc．Jap．Acad．，57，SerB：

ことを示すことになるが，それぞれの病態におけ

86−90，1981．

ー272−

Eormation．J．Neurol．Sci．，51：141−155，1981．

1962，1981．

Maruyama，K・：Gelelectrophoreticstudyof

昭和57年度研究班名簿

昭和57年度 三好班 名簿
区

分

氏

名

三 好

和 夫

l
班

長

所
所

属

施
在

設

名
地

】
虎の門病院沖中記念成人病研究所

所属にお
ける地位

連絡の際の電話l所

長03−583−6871．

教授

092−641−115 1

教授

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助 教 授

03−813−3 111

教

授

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教授

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部

長0423−41−27 11

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教

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教

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教

授0726−83−1221

副 院 長

09425−2−2195

教授0252−23 −6161

講師

0886−31−3111〒105 東京都 港区赤坂虎の門2−
2−2
幹

事

黒 岩 義五郎

九州大学医学部脳神経病研究施設神経 内科〒812 福岡市東区馬出 3 −
1−1

豊

倉 康

夫

東京大学医学部脳研究施設神経内科佐藤猛 順天堂大学医学部脳神経内科〒113 東京都文京区本郷 7−3−1〒113 東京都 文京区本郷 2−1−1
垂井清−郎 大阪大学医学部第二内科〒553 大阪市福 島区福 島 トト50

荒

木

淑 郎

熊本大学医学部 第−内科
〒8 60 熊本市本荘 1−ト1

運 営 幹 事 杉田秀 夫

国立武蔵療養所神経セ ンタ−疾病研究第−部〒18 7 東京都小平市小 川東町 ●2620

監

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東京都 立神経病 院神経内科
〒182

鑑

月 塚

越

康

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東京医科歯科大学医学部神経内科〒113東京都文京区湯島 1−5−
45

井

村 裕

夫 京都大学 医学部 内科第二講座

木下 其男 東邦大学医学部 第四内科

〒6 06
〒153
埜

中 征 哉
守 正

木 昭 夫

茨城県新治郡桜村天王台 ト1−1

司 大阪医科大学第−内科〒569

馬

東京都小平市小川東町 2620

筑波大学臨床医学系神経内科
〒305

在 敬

金沢市宝町 13−1

国立武蔵療養所神経センタ−疾病研究第−部〒187

中 西 孝 雄茂

東京都小平市小川東町 2620

治 金沢大学医学部神経内科〒920

高東京都 目黒区大橋 2−17−6

国立武蔵培養所神経セ ンタ−微細構造研究部〒187

高

京都市左京区聖議院川原町 54

渡 志 郎

高槻市大学町 2−7

国立赤坂療養所神経内科〒833 福 岡県筑後市大字蔵敷 515

宮

武

正

新潟大学脳研究所神経内科〒95 1 新潟市旭町通−番町 754

川 井

尚 臣 徳島大学医学部 第−内科
〒770 徳島市蔵本町 3−18−15

−275−

区
：
旺

分

氏
月

所
所

名

属

施
在

設

名
地

鳥取大学医学部脳幹性疾患研究施設
晴 臣 ．

中 村

所属 にお
ける地位

連結の際の電話

教授0859 −33−1111

教授0899 −24−7111〒790 松 山市道後樋又 10 −13
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長

0423−25−388 1

師

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国立武蔵療養所神経センター疾病研究第四部 研 究 月

0423−41−27 11

神経病理部 門
〒68 3
植

田 啓 嗣

近藤

喜代太郎

米子市西町86番地

愛媛大学保健管理センター〒182 東京都府中市武蔵台 2−6
飯

田 光

男

吉

田 稲 子

名古屋大学 医学部第一 内科

講〒187 東京都小平市小川東町 2620
田 辺

等

虎の門病院神経内科部長03−583−68 71

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助 教 授

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教

授0426−91−00 11

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講師

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助 教 授

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講師0263 −35−46 00

講師

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講師0534 −35−2261

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的光弘

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鹿児島市宇宿町 1208−1

若

山 書 弘

昭和大学藤 が丘病院神経内科

小

口 喜三夫

信州大学医学部第三内科

青

田 孝 彦

国立療養所字 多野病院臨床研究部〒227 横浜市緑区藤が丘 ト30〒390 松本市旭 3−1−1
〒616
古 庄

敏 ・
行

杏林大学保健学部疫学
〒192

木 南

英 紀

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酵素化学部 門〒770 徳 島市議本町 3−18 −15

福 原

信 義

新潟大学脳研究所神経内科

栗 原

庶 事

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新潟市旭町通一番町 754〒889−16 宮崎県宮崎郡清武町木床 5200
庄

司 進 一

信州大学医学部第三内科〒390 松本市旭 3−ト1

田 代

邦 雄

北海道大学医学部脳神経外科

水 野

芙 邦

自治医科大学神経内科〒060

札幌市北区北14条西 5 丁 目〒329−04 栃木県河内郡南河内町大字
薬師寺 3311−1
西 村

嘉 郎

浜松医科大学第一内科

後 藤

幾 生

九州大学医学部脳神経病研究施設神経内科〒43ト31浜松市半田町 3600

〒812 福 岡市来区馬出 3−1−1

−276−

区
斑

分

氏
月 出

田

名

所
所

透

熊本大学保健管理セ ンター
〒860

高

瀬

貞 夫

岡 。
三恵子

施
在

設

名
地

所属 にお
ける地位
教

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東北大学医学部脳疾患研 究施設脳神経内科
〒980

曹

属

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神戸市立中央病院小児科〒650 神 戸市 中央区港島中町 4−
6

経理事務担当者 小

川 秀 雄

H 本筋 ジス トロフィー協会〒162 東京都新宿区西早稲田 2−2−8ー277−