はなびらたけ
Cauliflower Mushroom(Sparassis crispa (Wulfen) Fr. )はなびらたけ審査基準
Ⅰ．審査基準の対象(Subject of these Guidelines)
この審査基準は、ヒダナシタケ目（Aphyllophorales）ハナビラタケ科（Sparassidaceae）の、ハナビラタケ属ハナビラタケ種〔Sparassis crispa (Wulfen) Fr. ,（CauliflowerMushroom）〕の全ての品種に適用する。
Ⅱ．提出種苗(Material Required)ⅰ）種苗の形態

寒天培地に生育させた二核菌糸体ⅱ）数量

試験管 ５本ⅲ）提出時期

審査当局が指定する時期ⅳ）提出する種苗は、雑菌に汚染されていないものであること。
ⅴ）提出種苗は審査当局が指示した場合を除き薬剤、その他の処理をしていないものであること。もし、処理が行われている場合はその処理の詳細について記載すること。
Ⅲ．試験の実施(Conduct of Tests)ⅰ）栽培条件

特性の確認が十分にできる正常な生育が可能な条件下で実施する。

ⅱ）最低供試培地数 96 本（32 本(16 本/1 コンテナ)×3 反復）ⅲ）栽培期間１回発生ⅳ）調査方法
調査個体数

特に指示が無い限り、標準的な 10 瓶（発生瓶）から 10 個体を選定し測定する。

調査時期

特に指示がない限り、子実体の状態で最も多くの形質の調査が可能な収穫期に行う。

Ⅳ．判定基準(Standards for decisions)
判定は、登録出願品種審査要領の区別性、均一性及び安定性（DUS）審査のための一般基準に基づくものとする。
供試個体数が 96 の場合、許容される異型個体数は３である。
Ⅴ．グループ分けに使用する形質(Grouping of Varieties)ⅰ）菌糸体の温度別生長速度 (形質 7,8,9）ⅱ）子実体の花弁状片の形 (形質 16）ⅲ）子実体の発生型 (形質 20)ⅳ）発生最盛期までの期間（種菌接種から収穫適期までの期間） (形質 23）ⅴ）収量 (形質 25)ⅵ）嫌触反応 (形質 27)

はなびらたけ－1

Ⅵ．特性表で使用する記号の説明
G：グループ分けに使用する形質
QL：質的形質
QN：量的形質PQ：疑似の質的形質(+)：Ⅷ．に特性表の説明図等を示す
網掛け：種苗法施行規則第５条で定める願書（別紙様式第１号）に出願者が記載する特性及び階級値

はなびらたけ－2

Ⅶ．特性表 (Table of characteristics)
形 Ｕ
形 質質 Ｐ記(Characteristics)
番 Ｏ
号
（日本語）
（English）
号 Ｖ
№

定 義

菌糸密度

QN(+)

気中菌糸の発達状態 Development of aerialhyphae

寒天培地上で成長した気中菌糸の多少3PQ(+)

菌叢の周縁部の形状 Shape of colony periphery

4QL(+)

5QL(+)
QN(+)

2678QN(+)
GQN(+)
G階級状 態(State)
(日本語)

QN
(+)

1

調査
方法

（English）

観察 357
観察 357

粗中密少中多sparsemediumdense
littlemediummuch

寒天培地上で成長した菌叢の周縁部の形状

観察 12整一
不整一

smoothrough

NBRC102492

菌叢の表面の着色の Tinting of colony surface
有無

寒天培地上で成長した菌叢の表面の色

観察 19

無有absent
present

NBRC102492

菌叢の裏面の着色の Tinting of colony reverse
有無
菌糸体の生長最適 Optimum temperature for温度
ｍycelial growth

寒天培地上で成長した菌叢の培地裏面の色
寒天培地上で菌糸が最も良く伸長する温度

観察 19測定 3℃ 57
菌糸体の温度別生長 Mycelial growth rate at 15℃, 15℃における寒天培地 測定 3速度（15℃／30日） 30days
上での菌糸伸長量㎜/30 5日 7
菌糸体の温度別生長 Mycelial growth rate at 20℃, 20℃における寒天培地 測定 3速度（20℃／30日） 30days
上での菌糸伸長量㎜/30 5日 7

無有低中
高遅中速
遅中
速

absentpresentlowmediumhighslow
mediumfast
slow
mediumfast

NBRC102492

Hyphal density

寒天培地上の菌糸の密度

標準品種(Ex.Var.）

はなびらたけ－3

NBRC102492

NBRC102492

備 考

QN(+)
GQN(+)

菌糸体の温度別生長 Mycelial growth rate at 25℃, 25℃における寒天培地 測定速度（25℃／30日） 30days
上での菌糸伸長量㎜/30日
子実体の径Diameter of fruit body
子実体の長径と短径の 測定平均値。
㎝11QN
(+)

子実体の高さHeight of fruit body

ビン口からの高さ

測定
㎝12PQ

菌柄の色

Stem: color

菌柄表面の色観察

91013141516QN(+)

菌柄の厚さ

QN

菌柄の肉質

QN
(+)

子実体の枝の多少

PQ(+)
G

子実体の花弁状片の形

Stem: thickness

Stem: hardness

Branch: number

Petal: shapel

枝分かれの真下の菌柄の厚さ

観察
㎜

菌柄の肉質

観察

基部より5cm以上の枝の多少測定

子実体の先端部の形状

観察3573573571233573573571234

はなびらたけ－4遅中速小中
大低中高白
ｸﾘｰﾑ色淡黄
薄中
厚軟中
硬少中
多針状
カーネーシ
ョン状
ハボタン状
イチョウ葉状slow
mediumfast
small
mediumlarge
low
mediumhighwhite
cream
light yellow
thinmediumthick
soft
mediumhardlittlemediummuchspinecarnation
kale
ginkgoNBRC102492

NBRC102492
NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

1718192021222324

PQ

子実体の枝の色

QN(+)

子実体の枝の厚さ

QN

子実体の枝の肉質

Branch: color

Branch: thickness

Branch: hardness

菌柄の枝の表面の色

花弁の先端から内側に5－10 mm の部分の値
枝を指で触ったときの硬さ

QL
(+)
GQN
(+)

子実体の発生型

原基形成発生最適温度

Optimum temperature forprimordia formation

原基形成の最適温度

QN(+)

子実体の生育最適温度

Optimum temperature forfruit body development

子実体生育の最適温度

QN
(+)
G

発生最盛期までの Period from inoculation to期間（種菌接種から harvest
収穫適期までの期間）発生操作から収穫 Period from treatment forまでの期間
primordia formation toharvest

種菌接種から収穫適期までの期間

QN(+)

Type of fruiting

子実体の発生の状態

発生操作から収穫適期までの期間

はなびらたけ－5

観察 123

白
ｸﾘｰﾑ色
淡黄

white
cream
light yellow

測定 3㎜ 57観察 357観察 357測定 3℃ 57測定 3℃ 57薄中厚軟中
硬中央発生型全面発生型
周辺発生型
低中
高低中
高thin
mediumthicksoft
mediumhardcentralwholeperipherylowmediumhighlowmedium
high

測定 3
週 57短中長

shortmediumlong

NBRC102492

測定 3
週 57短中長

shortmediumlong

NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

NBRC102492

25QN
(+)
G

収量

26
参考

QN(+)

対峙培養（帯線形成）

26
参考

QN
(+)

菌糸同士の帯線形成 Occurrence of zone line ofColony

27
参考

QL(+)
G

菌糸同士の嫌触反応 Dislike-touch reaction ofcolony

Yield:(fresh weight)

収穫時の生重量

測定 3g/瓶 57少中多light
mediumheavy

観察 19無有absent
present

対峙培養による帯線形成

観察 19無有absent
present

対峙培養による嫌触反応

観察 19無有absent
present

はなびらたけ－6

Ⅷ．特性表の説明(Explanations on the Table of Characteristics)○説明１：菌糸体の性状形質１ 菌糸密度 Char.1 Hyphal density
形質２ 気中菌糸の発達状態 Char.2 Development of aerial hyphae
形質３ 菌叢の周縁部の形状 Char.3 Shape of colony periphery
形質４ 菌叢の表面の着色の有無 Char.4 Tinting of colony surface
形質５ 菌叢の裏面の着色の有無 Char.5 Tinting of colony reverse「菌糸密度」「気中菌糸の発達状態」「菌叢の周縁部の形状」「菌叢の表面の着色の有無」「菌叢の裏面の着色の有無」については、PDA 培地（Difco Laboratories,Detroit,Michigan,USA）を常法(121℃,15 分)により滅菌し、シャーレ（内径９㎝,高さ２㎝）に 20 ml 分注して作成した平面培地の中央部付近に、別に供試培地で前培養(25±1℃,20-30 日間)した２核菌糸体の小片（直径５±１㎜）をシャーレ中央部に接種し、25±2℃で培養し、菌糸がシャーレ上に 70％程度伸長した時に観察する。
供試数は 1 区 2 から 3 枚とする。
○説明２：菌糸体の生長最適温度、菌糸体の温度別生長速度
形質６ 菌糸体の生長最適温度 Char.6 Optimum temperature for ｍycelial growth
形質７ 菌糸体の温度別生長速度（15℃／30日）
Char.7 Mycelial growth rate at 15℃,30days
形質８ 菌糸体の温度別生長速度（20℃／30日）
Char.8 Mycelial growth rate at 20℃,30days
形質９ 菌糸体の温度別生長速度（25℃／30日）
Char.9 Mycelial growth rate at 25℃,30days
供試培地は PDA 培地を使用する。常法(121℃,15 分)により滅菌した培地をシャーレ（内径 9 ㎝、高さ 2 ㎝）に 20 ml 分注する。このあと、別に前培養（20-30℃、30-45 日間）した二核菌糸体の小片（径 5 ㎜程度）をシャーレ中央部付近に接種し、25±1℃で予備培養して菌糸の再生（径 10 ㎜程度）を揃える。
a) 菌糸体の成長最適温度は、16 ℃から 32℃の範囲内の連続する 5 温度区以上の菌糸体の成長量を測定し、成長曲線を描いて、成長最適温度を判定する。供試数は 1 区 5-10 枚とする。
b) 菌糸体の温度別成長速度については、予備培養の影響を除くため、各測定温度において3 日間培養を行った後、設定温度で 28 日間(4 週間)培養し、一方向（半径）の菌糸伸長量を測定したものを評価項目とする。供試数は 1 区 5-10 枚とする。
(註)以下の説明における「数値 - 数値」で示す数値範囲の両端は「以上 - 未満」である。

はなびらたけ－7

形質６ 菌糸体の生長最適温度 Char.6 Optimum temperature for ｍycelial growth
形質７ 菌糸体の温度別生長速度（15℃／30日）
Char.7 Mycelial growth rate at 15℃,30days
形質８ 菌糸体の温度別生長速度（20℃／30日）
Char.8 Mycelial growth rate at 20℃,30days
形質９ 菌糸体の温度別生長速度（25℃／30日）
Char.9 Mycelial growth rate at 25℃,30days（参考）本試験では下記の値となる。〔註：（対照）＝NBRC102492〕
階

菌糸体の成長最級

適温度値

菌糸体の温度別成長速度
15℃, 4 週間

20℃,4 週間

116℃

-11 ㎜

-10 ㎜

218℃

11-14 ㎜10-15 ㎜

320℃

14-17 ㎜15-20 ㎜

422℃

17-20 ㎜20-25 ㎜

524℃

20-23 ㎜25-30 ㎜

626℃

23-26 ㎜

728℃

26-29 ㎜35-40 ㎜

830℃

29-32 ㎜

40-45 ㎜

932℃

32 ㎜-45 ㎜-

(対照)

(対照)

25℃, 4 週間

20-25 ㎜(対照)

30-35 ㎜30-35 ㎜ (対照)40-45 ㎜

○説明３：栽培方法
菌床（瓶）施設栽培によるものとする。
（容器）容器は口径 58 mm、850 ml のポリプロピレン製栽培瓶を用いる。

（培地組成）
培地基材：コーンコブ、広葉樹おが屑、スギおが屑、アカマツおが屑、カラマツおが屑等
培地栄養分：ふすま、小麦粉、微量栄養分（ビール酵母等）
配合比：おが屑：栄養分：微量栄養分は乾燥重量比で 100：(16-32)：(2-4)程度
水分：65±5％（培地充填重量）510±30ｇ（正味重量）／瓶 （培地中央部に約直径 15 mm の接種孔をあけておく）（殺菌・接種・培養）
高圧蒸気滅菌する。培地を十分冷却させた後、10‐15g、上記方法と同様培地で培養したものを種菌として接種する。培養温度は 22℃±3℃、湿度約 65±5％、暗黒下で実施する。
（発生処理）
原基形成が始まったのち、22±3℃、湿度 95±3％、100‐500 lux の条件下に移動し、子実体の生育を促す。この時点で、「子実体の発生型」を計測する。なお、「菌かき」及び「注水」等の発生処理は必要に応じて実施する。

はなびらたけ－8（収穫方法）
収穫時期は、子実体組織（花弁）が胞子形成する前の段階で実施し、子実体の菌柄の基部に付着する培地を除去したのちに計量する。栽培試験は 1 試験区 32 本(16 本/1 コンテナ)×3 回繰り返しとする。収穫した子実体は、形態的形質の調査に供する。色の判定については、RHS カラーチャートの色票番号を参照する。
（調査方法）
形態的特性の調査は、標準的な 10 瓶から子実体を選択し、10 個体を測定する。瓶から発生している子実体全体の形態を観察後、収穫した子実体を房ごとに縦径と横径、ならびに高さの最大値を測定し、各区分・階級を決定する。また、子実体の表面中心部の色、子実体全体の色を観察する。収量性の調査は各栽培試験ごとに 32 瓶の生子実体の重量を測定し、平均して１瓶あたりの収穫量を求める。なお、文章中における子実体の各部位の表現については、図‐1．を参照とし、花びら形状の表現型は図‐2、子実体の発生型については、図‐3 を参照とする。
(註)以下の説明における「数値 - 数値」で示す数値範囲の両端は「以上 - 未満」である。
図‐1 子実体の部分の名称と測定部位
Name of parts of the fruit body for measurement and observation
形質10 子実体の径 Char.10 Diameter of fruit body
形質 11 子実体の高さ Char.11 Height of fruit body
形質 13 菌柄の厚さ Char.13

Stem: thickness

形質 15 子実体の枝の多少 Char.15 Branch: number
形質 18 子実体の枝の厚さ Char.18 Branch: thickness

A 花弁 petal（左図点線内、先端から10±2 mm 程度）

AB 枝

B
5-10 mmbranchC 菌柄 stem

C枝の厚さ測定部位
the measured region of the thicknessof a branch
菌柄の厚さ測定部位
the measured region of the thickness of a branch

はなびらたけ－9321
１．子実体の長径３．子実体の高さLong diameter of fruit body
２．子実体の短径

Height of fruit bodyShort diameter of fruit body
形質10 子実体の径 Char.10 Diameter of fruit body
形質 11 子実体の高さ Char.11 Height of fruit body
形質 13 菌柄の厚さ Char.13

Stem: thickness（参考）本試験では下記の値となる。〔註：（対照）＝NBRC102492〕
階級値

子実体の径子実体の高さ

1-1 ㎝

-2 ㎝

21-4 ㎝

2-4 ㎝

34-7 ㎝

4-6 ㎝（対照）47-10 ㎝

6-8 ㎝

510-13 ㎝（対照）8-10 ㎝

613-16 ㎝

10-12 ㎝

716-19 ㎝

12-14 ㎝

819-22 ㎝

14-16 ㎝

922 ㎝-

16 ㎝-

はなびらたけ－10

菌柄の厚さ-1 ㎜
2-3 ㎜（対照）4-5 ㎜

形質 15 子実体の枝の多少 Char.15 Branch: number形質 18 子実体の枝の厚さ Char.18 Branch: thickness（参考）本試験では下記の値となる。
〔註：（対照）＝NBRC102492〕
階級値

枝の多少枝の厚さ

1231-2 枝

0.1-0.4 ㎜

3-4 枝（対照）0.7-1.0 ㎜（対照）5-6 枝

1.3-1.6 ㎜

456789図‐2 子実体の花弁状片の形
形質 16 子実体の花弁状片の形 Char.16 Petal: shapel

１針状spine

２
カーネーション状carnation

３
ハボタン状
kale

図‐3 子実体の発生型
形質 20 子実体の発生型 Char.20 Type of fruiting

３中央発生型
central５全面発生型
whole

はなびらたけ－11７周辺発生型
periphery

４
イチョウ葉状ginkgo tree

形質21 原基形成発生最適温度 Char.21 Optimum temperature for primordia formation
形質22 子実体の生育最適温度 Char.22 Optimum temperature for fruit body development
形質 23 発生最盛期までの期間（種菌接種から収穫適期までの期間）
Char.23 Period from inoculation to harvest
形質24 発生操作から収穫までの期間
Char.24 Period from treatment forprimordia formation to harvest（参考）本試験では下記の値となる。〔註：（対照）＝NBRC102492〕
階

原基形成発生最子実体の生育最発生最盛期までの発生操作から収級適温度適温度

期間（種菌接種から穫までの期間値

収穫適期までの期間）

313-16 ℃

13-16 ℃

6-8 週

2-3 週

519-22 ℃

19-22 ℃

10-12 週

4-5 週

725-28 ℃

25-28 ℃

14-16 週（対照）6-7 週（対照）形質25 収量 Char.25 Yield:(fresh weight)（参考）本試験では下記の値となる。〔註：（対照）＝NBRC102492〕
階級値

収量 g/瓶1-30 g230-50 g

350-70 g

470-90 g

590-110 g

6110-130 g（対照）7130-150 g

8150-170 g

9170 g-○説明４：対峙培養
形質 26 対峙培養（帯線形成）
PDA 培地（Difco Laboratories,Detroit,Michigan,USA）を常法(121℃,15 分)により滅菌し、シャーレ（内径９㎝,高さ２㎝）に 20 ml 分注して作成した平面培地の中央部付近に、別に供試培地で前培養(25±1℃,20-30 日間)した２核菌糸体の小片（直径 5±1 ㎜）を 30±5 ㎜間隔に対峙させるように接種し、25±2℃で培養する。
両菌叢が接触したら、シャーレを 100-300 lux 以上の光照射下におき、25±1℃を保ち、帯線形成の有無と嫌触反応の有無を判定する。供試枚数は 5 枚とする。

はなびらたけ－12

Ⅸ. （参考）遺伝的解析（RAPD 法）（参考：ユニチカ㈱中央研究所実施例）
具体的な方法について以下に示す。
① 無菌的に回収したはなびらたけの子実体を海砂に加えて液体窒素中で破砕する。
② 破砕物に 2%サルコシルを含むクエン酸リン酸緩衝液（pH 6.0）500 μl を加え、65℃、30 分間処理する。
③ 遠心後、上清を回収し、フェノール-クロロホルム抽出する。
④ エタノール沈殿法により DNA を回収する。
⑤ 500 μl TES 溶液(30 mM Tris/HCl, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH8.0)に沈殿を溶解する。
⑥ RNase（5 mg/ml, bovine panceas 由来 Sigma 社製）及びα-アミラーゼ（10mg/ml,Bacillus subtilis 由来 Sigma 社製）を 10 μl 加え、37℃、1 時間処理する。
⑦ 再び、フェノール-クロロホルム抽出し、エタノール沈殿により DNA を回収する。
⑧ 風乾後、DNA を TE バッファー(10 mM Tris/HCl,1 mM EDTA, pH7.5)に溶解する。
⑨ 得られた DNA 5ng をサンプルとし、PCR を行う。PCR 条件は変性温度 94℃、30 秒、アニーリ
ング温度 42℃、2 分間、伸長温度 72℃、3 分間、行う。Tap ポリメラーゼはタカラ社製 Taq EX
HT を用いる。
⑩ PCR 後、１％アガロースゲルで 100V、27 分間電位泳動を行い、エチジウムブロマイドでゲルを染色し、DNA 断片のパターンを確認する。

図‐4 PCR の条件とプライマー配列 The conditions of PCR and primer sequences

はなびらたけ－13