厚生省「神経疾患研究委託費」

筋ジストロフィー症の臨床病態と成因に関する研究

杉田班
昭和59年度研究報告書

昭和60年3月

研究報告書の作成にあたって
厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究」
班は，過去3年間多くの研究成果を挙げ，昭和58年度をもって終了しました．そして昭和59年度より新しく「筋ジストロフィー症の臨床，病態と成因に関する研究」班として発足致しました．当研究班は過去10数年間一貫して筋ジストロフィー症の病因，
発症機序の解明を目指し，現象論，実態論的研究の蓄積を経てようやく本質論的ア
プローチの段階に入りつつあるように思います．
筋ジストロフィー症のように原因不明の疾患の研究にあたっては既成の概念にとらわれない独創的なアイディアが要求されると思います．この報告書の中にも自由な発想に基づいた示唆に富む学問的価値の高い成果が発表されており，今後の研究が大いに期待されます．姓眉各位の不断の御努力に心から敬意を表します．筋ジス
トロフィー症の研究の道は極めて喰しいと思います．しかし病床に横たわる患者さんを思う時，私どもは一時といえども研究を中断することはできません．
本研究班に賜った厚生省当局，国立武蔵療養所神経センター，そして日本筋ジストロフィー協会の深い御理解と多大の御援助に深く感謝し，ひきつづき御支援をお願い致します．
昭和59年12月
〈姓長〉

杉

田

秀

夫

目

昭和59年度総括研究報告

次7

昭和59年度総合班会議研究報告抄録

13

分担研究報告25

Ⅰ．臨床・臨床病理

33

Ⅱ．組織化学・微細形態

85

Ⅲ．膜，カルシウム，Creatine Kinase

127

Ⅳ．エネルギー代謝，他

181

Ⅴ．遺伝子

241

Ⅵ．筋再生

247

Ⅶ．蛋白代謝265

昭和59年度研究班名簿289

昭 和 59 年・度

総 括研 究報告総括研究報告

珪長 杉 田．秀 夫〔はじめに〕
本研究報告書は「筋ジストロフィー症の臨床，病態と成因に関する研究」班の昭和59年度（初年度）の報告書である．
本研究班の目的は筋ジストロフィー症の成因の解明を当面の目標としつつ，終局的には治療法の確立と本症の根絶を願っている．
この報告書には昭和59年12月1日仕），2日（日）の両日に開催された址会議に於て報告された論文が集て録されている．

〔研究成果の要約〕
本年度発表された報告の中から2，3のトピックについて述べる．
A．筋ジストロフィー症

1）新技術の開発
未知の分野の開拓に新しい方法論は必須である．最近注目されている画像解析法を用いた臨床研究が報告されている．即ちCT，超音波，NMR画像などでありこれらの機器を用いた本症の経時的変化が確立されるであろう．
組織化学的にはcarbonic anhydraseIII（CA−III），muSClespecificenolase（MSE）などによる新しいfibertype識別法が発表された．又，本症羅息筋に浸潤するリンパ球の表面マーカーによるsubpopulationの解析とその病因論的意義が論じられている．
その他放射性同位元素を用いたクレアチン代謝の研究，モノクロナール抗体を用いた核内
non−histone蛋白の局在と染色体との関連などの研究が報告された．
2）筋の変性と再生
この間題は本症の病態の中核をなすものである．変性を考える上で形質膜は重要な課題
であるが，この方面の研究は極めて難しい．
形質膜特異的リガンドを用いた新しい形質膜画分分維法が報告され今後の発展が期待される．
−9−3）遺伝子工学的アプローチ
本年より開始されちDMD遺伝子単社の試みは当研究班の柱の一つであり本質論的研究といえる．
DMD遺伝子の単馳又はそれと密接にlinkageしているprobeを見つける事により当面保因者発見及び胎児診断を目標としている．すでにヒトⅩ染色体よりいくつかのprobeが単維されており近い将来linkage研究が行なわれるであろう．
4）モデル動物に関する研究
従来常染色体劣性遺伝形式を持つハムスター，マウス，ニワトリジストロフィーが研究対象となったが今回DMDと同じ遺伝形式をとるmdxマウスが我国に導入され形態，生理，生化学的に検索されるであろう．
B．関連疾患
1）Distalmyopathy（rimmed vacuole型）
Rimmedvacuole型distalmyopathyは本研究班が過去精力的に行って来たプロジェク
ト研究の1つであり，lysosome酵素の病因的意義が研究されてきた．今年度rimmed
vacuoleの周辺にカテ70シンB，Hなどの酵素が酵素坑体法により実際に存在する事が明らかとなりlysosome酵素が筋蛋白分解に直接的に関与している事がより明白となった．
実験的タロロキンミオバナーでも同様の所見が得られ両者は共通の筋蛋白分解機構を有するものと思われる．

（E−64−d）

又，・タロロキンミオパテーはチオールプロテアーゼ阻害剤で発症が阻止される事がわか
りこの事はrimmedvacuole型distalmyopathyの治療に結びつく可能性を示している．
2）Mitochondrial myopathy
本症も当研究班の研究プロジェクトの1つである．
．本邦に於けるmitochondrialmyopathyの臨床像の特徴，診断法，CoenzymeQl。などによる治療など多方面の発表があり本年8月1日当研究姓に於いて基礎専門家を交えてworkshopを行なう予定である．

〔研究の将来の見通し〕
当研究班は筋ジストロフィー症の臨症，病態の解明に着実な成果をあげた．筋ジストロ
フィー症に関する今後解決すべき問題点として2つの事が挙げられよう．
①筋の再生
本症の罷息筋では活発な再生が行なわれているが再生に関しては未解決な点が多い．例
一10−

えば再生のポテンシーは正常であるが内部環境が悪い為に変性を上回るに充分な再生ができないのか，再生筋自身正常と異なると理解すべきであろうか，再生を促進するにはどうしたらよいかなど解明すべき多くの課題を有している．
（∋遺伝子工学的アプローチ
我国は欧米に比しこの問題はやや立遅れてはいるが今後発展すべき重要課題である．最近0mithine transcarbamylaseの遺伝子がDMD遺伝子と隣接している事が明らかとなったのでIinkage研究は急速に進歩するであろう．Linkage研究を実施する際重要なのは
DMDの正確な家系図である．臨床にたずさわっている班眉各自がもう一度患者の家族歴を調査し正確な家系図を作成し保持しておくことが当面極めて重要であると思われる．

−11−

昭和59年度厚生省神経疾患研究委託費「筋ジストロフィー症」総合班会議

筋ジストロフィー症の臨床，病態と成因に関する研究

研究報告抄録Rimmed Vacuole型DistalMyopathyと］）ソゾーム

木 南 英 紀（徳島大学医学部酵素研酵素化学）【目的】
Rimmedvacuole型Distalmyopathyは，常染色体劣性遺伝で，本邦において詳細に検討されてきた．近年，この特異なミオパテ一におけるリソゾームの異常が示唆され，筋線経の変性とリソゾームの70ロテアーゼとの関連が着目されつつある．
リソゾームに含まれるプロテアーゼの中でも，いわゆるチオール性カテプシン群（カテプシンB，
H及びL）は強いタンパク分解活性（筋構造タンパクの分解も含め）を有し，細胞内タンパク質の分解において主要な役割を担っていることが明らかになっている．Muscular dystrophyと異なりDistalmyopathyはphagocytesの浸潤を伴わないのが特徴であり，Rifnmed vacuoleそのものがチオール性カテ70シン群を含むかどうかの検査は本症において，リソゾームの異常を伴うか否か，又，筋萎縮との関連を調べる上でも基本的な課題と思われる．
我々はこのようなDistalmyopathyの病態を明らかにするため，カテプシンB，Hの筋組織における局在を免疫学的に検討した．合わせてチオール性カテプシン群に対する内在性阻害タンパクの局在についても調べた．
【材料と方法】
国立神経センターで保有されているDistal myopathyl例の筋生検標本について組織学的検査（HE，Gomori−Trichrome染色）並びに免疫組織学的検査を行った．ヒトカテプシンB及びHの精製は唐渡ら及びKirschkeらのラットカテプシンB及びHの精製法を修飾して行った．凍結肝を用いるため，リソゾーム膜が破れ，細胞質に存在する内在性インヒビターと複合休を形成している．
そこで肝ホモジネートをpH4．5で37℃，防腐剤の存在下でincubateL，インヒビターを破壊後，その遠心上清を出発材料として精製した．DEAE−CelluloseでカテプシンB，Hを分社し，その後カテ
プシンBはCM一セルローズ，77イゲル501を，カテプシンHはConA−セ7ァローズ，ハイドロキ
シアパタイトを行い，それぞれ均一な標本を得た。一方，カテプシンB，H，Lなどのチオールプロテ
アーゼに対する細胞内チオールプロテアーゼインヒビター（TPI）3種の中，皮膚，消化管上皮などの上皮性起源の細胞に多量に存在するTPトαをヒト皮膚上皮を出発材料としてラットTPトαと全く同じ方法で精製し均一なタンパタ標品を得た．10叫gのプロテアーゼ及びTPトαを家兎皮内に2週間毎に3回注射し，最終注射3−4週間後に採血した．いずれの抗体もそれぞれの抗原に特異的であることは免疫拡散二重法及びWestem blottingで確認した．硫安分画，DEAE一セルロー
スクロマトグラフィーのステップを経て得たIgGをペプシン消化し，F（ab′）を得た．ベルオキシタ
ーゼ標識Fab′の調整は石川らの方法に従った．免疫組織化学方法は今川らの方法を若干修飾して行った．
ホルマリン固定凍結切片の内在性ベルオキシターゼをH202でブロックし，対照血清で処理後切片を先に調製したベルオキシターゼ標識抗体と反応させ，3，3′−diaminobenzidinetetrahydrochlo−
rideで染色した．後染色はへマトキシリンで行った．

ー15−

【結果】
患者疾患筋片をHematoxylin−Eosin染色及びGomori−Trichrome法で染色したところ，筋線経の大小不同，問質の増加，中心核の増加などの筋病変と共に，内容に塩基好性物質をもついわゆるRimmedvacuoleが観察された．そこで抗力テプシンB−Fab −ベルオキシターゼ複合体を用いて，切片を直接法で免疫組織学染色を行った．筋肉にみられるRimmedvacuoleが強く濃染されており
筋細胞そのものはbackgroundレベルの染色しかみられない．低倍率で見ると小さなものから大きなvacuoleまでほとんどすべてのRimmedvacuoleはカテ70シンB陽性であった．抗力テプシンー
Fab′−ベルオキシターゼ複合体を用いた検査結果も同様でありRimmed vacuoleが強く染色されている．一方TPI−a−Fab，−ベルオキシターゼ複合体を用いての染色結果では筋細胞Rimmedvacuole
いずれも陰性であった．
【考察】
ラットの各種組織におけるカテプシンB，H及びTPトα，βのレベルをベルオキシターゼ標識抗体を用いてサンドイッチ法で測定した結果では，骨格筋におけるカテプシンB及びHの含量は極めて弱く，腎臓の約10分の1及び27分の1であった．又，正常な骨格筋細胞は抗力テプシンBあるいはH抗体で殆ど染色されず，わずかな浸潤細胞が染色されるのみであった．ヒトにおける本症例においてもカテプシン，TPIいずれも骨格筋のサイトプラズムはbackgroundレベルの染色であり，Rimmed vacuoleのみが抗力テプシンB抗体及び抗力テプシンH抗体によって濃染された．
この結果はRimmedvacuoleが，リソゾーム由来であることを強く示唆している．塚越らは，Distal
myopathyでカテプシンB＆L活性を含む多くのリソゾーム酵素活性の上昇を認めており，Rim−
medvacuoleがactiveなlysosomeであり，本淀の筋変性がvacuole内で進行している可能性も考えられる．しかし，活性なプロテアーゼをもつ非常に大きなRimmedvacuoleの成因は何であろうか．肝臓では，autOphagicvacuoleの形成と退縞は極めて速く，約10分の半減期で代謝回転しており，そのことは活発なタンパク分解を反映している．従ってリソゾームのチオール性カテプシンを阻害するとvacuoles中のタンパク分解が抑制され，非常に多数の又，互いに癒合した大きな
vacuolesが形成される．しかし，本症ではカテプシン活性が抑制されているという証拠はない．
Rimmedvacuoleの成因とチオール性カテプシンとの関係は興味ある今後の課題と思われる．今回の報告は一症例のみの検討であり，今後，多くの症例について検索を重ねると共に，Rimmed
vacuole中の内容物及びカテプシン群を電子顕微鏡及び免疫電子顕微鏡的に追求して，Rimmed
vacuoleと筋線推変性との関連を追求する必要があると思われる．

−16−

タロロキンミオパテーとリソゾーム酵素

杉 田 秀 夫，佐 野 元 親，石 浦 章 一（国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部）

リソゾームには，細胞内蛋白質をアミノ酸にまで非限定分解するカテプシンと総称される一群の酸性プロテアーゼが存在し，その中でもチオールプロテアーゼが蛋白分解の主役とされている．リソゾームは細胞内蛋白質の主要な分解の場と考えられているが，筋細胞においては正常状態ではリソゾームの発達が乏しいとされている．
病的な場合，例えばデュシャンヌ型筋ジストロフィー及び塩酸ブビバカインによる実験的ミオバ
ナーにおいては，筋細胞それ自身よりも浸潤してくるマクロファージのリソゾームが主役となり筋蛋白分解が完了することが想定されている．一方Rimmedvacuole（RV）を伴うdistalmyopathy
においてはマクロファージの浸潤は例外的で，筋細胞内に多数のautophagic vacuole（auto−
phagosomeとautolysosomeの総称）の出現があり，autOphagyの冗進状態が想定されている．
細胞質や細胞小器官が膜によって包み込まれ形成されたautophagosomeはリソゾームと融合してautolysosomeに変換され，この中で取り込まれた物質の分解が行なわれている．これら一連の生物学的現象はautophagyと呼ばれている．autophagyの制御機構あるいは生理的意義については，
従来不明な点が多く，最近になってようやく，細胞内蛋白分解に関する生化学的研究が活発になり
autophagyの誘起に関する知見が集積されるようになった．アミノ酸欠乏やグルカゴンによって誘起される細胞内蛋白質の分解冗進はautophagyによることが明らかになってきた．RVを伴うdis−
talmyopathyは，筋細胞におけるautophagyの冗進状態と理解するこ．とが可能であろう．
我々はRVを伴うdistalmyopathyのモデルとして，タロロキンをラット腹腔内に連E］長期間投与することによりRVを伴うミオパテーを作成し，autOphagyの冗進状態をつくり出し生化学的に検討を加えたので報告する．
タロロキンを長期間投与すると筋細胞及び肝細胞にautophagosomeの出現が多数観察され，筋肉のホモジェネートでは正常コントロールに比較してカテプシンB及びカテプシンB＆Lが著明に上昇していた．肝細胞をsubcellularfractionationして各分画のリソゾーム・チオールプロテアーゼ活性を測定するとりソゾームーミトコンドリア分画（LMfr）で正常コントロールと比較して著明な上昇があり，中でもカテプシンBの上昇が著明であった．LMfrからPercollによる密度勾配法でリソゾームを分離すると正常のリソゾームよりも比重の軽いところにカテプシンB＆Lの活性のpeakがあり，しかも正常よりも上昇していた．このfractionは電顕的にautophagosomeよりなる事が確認された．すなわちautophagosomeは酸性加水分解酵素をもちautolysosomeであると判定された．
次に大熊らの方法によりfluorescein−isothiocyan左tedextran（FITC−dextran）を用いてリソゾーム内のpHを測定した．FITC−dextranの螢光強度がpHにより大幅に変化することを利用してあらかじめFITC−dextranを取り込ませたリソゾーム内のpHを測定した．
タロロキン長期投与によりpHには上昇が見られず，正常コントロールと差がなかった．
タロロキンは細胞内での作用部位として，リソゾーム内で塩基（base）として働きpHを上昇さ−17−

せるといわれてきた．しかし長期投与の結果ではpHには変化がなく，タロロキン長期投与により出現するautolysosomeはタロロキンのpH上昇効果に抵抗性であるといえよう．
従って筋細胞内でも，多数のautolysosome内で活性が上昇したカテプシンBをはじめとするチ
オールプロテアーゼにより蛋白分解が充分行なわれているものと考えられる．Autolysosomeがどのような機序でinductionされてくるかは不明であるが，RVを伴うdistal myopathyにおいてもautophagicvacuoleは筋萎縮に関与しているものと考えられる．
現在我々はチオールプロテアーゼインヒビターであるE−64−dによりタロロキンミオバナーの発症及び進行が抑えられるか否かを検討中である．

一18−

1

表面膜

若

山

吉

弘

（昭和大学藤が丘病院神経内科）

江橋・杉田ら（JBiochem46：103，1959）により発見された進行性筋ジストロフィー症患者血清CK値の高値，SibleyとLelminger（JNatlCancerInst9：303，1949）により偶然発見され，Dreyfusら（JClinInvest33：794，1954）により確立された本症における血清aldolase値の上昇などより本症では何らかのleakymuscleplasmamembraneが存在する可能性が示唆され，馬渡・高木ら（ArchNeuro130：96，1974）によりDuchennemusculardystrophy（DMD）の筋細胞膜のadenylcyclase活性のepinephrineやsodiumfluorideに対する反応も正常筋とは異なることが報告されていたが，形態学的に筋表面膜の異常を証明したのはMokriとEngel（Neurology25：
1111，1975）のDMD生検筋細胞膜についての報告が最初である．彼等はDMD生検筋のglutar
aldehyde，OsO42重国定epon包埋標本の厚切り切片を位相差顕微鏡で観察すると筋線経の表面に底辺を置き多くは楔状をした筋原繊維の疎しょう化した部分がみられ，これを6−1esionと呼んだ．
この部の電顕的観察では筋線椎の基底膜は保たれているものの筋細胞膜の部分的消失とその内部の微細構造の変化を見出しこのような変化は本症生検筋線維変性の初期変化であろうと考えた．彼
等は同時に電顕細胞化学的研究にて筋細胞膜の欠損部分を通じて6−lesionへのperoxidaseの流入を証明した．BradleyとFulthorpe（Neurology28：670，1978）はperoxidaseより拡散しやすい
染色剤Procion yellowがDMD生検筋では対照筋に比し明らかに多くの筋線経に入ったことから
DMDではsarc。lemmaに何らかの異常のあることを示唆した．DMD生検筋細胞膜の部分的消失
はCarpenterとKarpati（BrainlO2：147，1979）や埜中・杉田（神経進歩24：718，1980）も報告しており，またこのような変化はpreclinicalDMD生検筋でも認められている（WakayamaYet
al，Neurology33：1368，1983）．次にDMD生検筋細胞膜の残存部分ないし透過電顕的に正常と思われる部分のStruCturalintegrityが正常かどうかが問題となる．Bonillaら（Ann Neuro14：
117，1978）は筋細胞膜表面にSugar reSidueとして出ているconcanavalinAのreceptorの分布を電顕細胞化学的に検討しDMDでは対照筋に比しこの分布が不規則であることを示した．これはDubowitz一派のCapaldiら（JNeuroISci63：129，1984）により確認された．さてBranton（ProcNatlAcadSciUSA55：1048，1966）により開発されたfreezefracture法は細胞膜内部の分子構築を観察するのに最適の手技である．細胞膜は−110℃，真空度4〜6×10￣7Torrの条件で割るとその疎水性の内面で裂け細胞質側（P面）と細胞外腔側（E面）の2葉の断面が出来る．Schotland
ら（Science196：1005，1977）は8例のDMD生検筋で6例の対照筋に比し筋細胞膜内粒子の明ら
かな減少を報告したが，Ketelsen（RecentAdvancesinMyology，ExcerptaMedica，1975，pp446−454）は1例の筋ジストロフィー症で膜内粒子の増加を報告し，富岡ら（JElectronMicrosc26：
103，1977）も1例のDMDで対照より膜内粒子の増加を報告したので，Schotlandら（ActaNeur0−
patho154：189，1981）は更に詳しくDMD7例，myOtOnicdystrophy5例，facioscapulohumeral（FSH）dystrophy5例の生検筋細胞膜構築を研究した．DMDではP面，E面とも有意の膜内粒子及びorthogonal arrayの減少を認め，FSHではorthogonal arrayの減少のみ認め，myOtOnic−19−dystrophyでは異常はみられなかった．Ketelsen（MuscularDystrophyResearchAdvancesand
NewTrends，ExcerptaMedica，1980，pp79−87）は2例のDMDで追試LSchotlandらの所見を確認し加えてcaveolae密度の増加を報告した．
Bonillaら（AmJPathollO4：167，1981）も6例のDMDと5例の対照でCaVeOlae密度の有意の増加を認めFischbeckら（AnnNeurol13：532，1983）はDMD生検筋細胞膜のCholesterol含量の増加を，また若山ら（Neurology35：1313，1984）はDMD生検筋でorthogonalarray密度の減少とそのSubunitparticle密度の減少を報告した．納ら（Neurology31：972，1981）はDMD
培養再生筋で対照との間に膜内粒子の有意の差を認めておらず，今後は1）DMD生検筋のどの筋線
維成熟段階で異常が出現するか2）DMD生検筋にみられる所見はDMDに特異的かどうか3）実験的にDMD生検筋にみられる所見が作製可能かどうかなどを検討することにより，この筋細胞膜異常の本症の病態に及ぼす影響のより正確な把握が可能となるものと考えられる．

ー20−

Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）生検筋における膜異常の問題点一表面膜とNK細胞

佐藤猛書，荒 畑 喜 一書，A．G．Engel＊＊（順天堂大学脳神経内科轟，Mayo ClinicH）【日的】
MokriB，EngelAGら（1975，Neurol，25：1111）は，DMDの初期病変としてnonTneCrOtic
muscle fiberに筋形質膜欠損のあることを見出し，その重要性を報告した．その後Carpenter S，KarpatiGら（1979，Brain，102：147）は，筋形質膜の微小欠損が修復されずに放置された場合，
当該筋は壊死に陥ることを指摘している．これらDMDにおける膜異常説の生化学的側面は，杉田・石浦（1980，神経進歩，24：821）などにより明らかにされて来た．
一方，Natural Killer（NK）細胞は，何らかの異常細胞，たとえば腫瘍細胞，ウイルス感染細胞，血液幹細胞や胎児線維芽細胞の一部に対して，これを早期に認識し破壊する能力を持つことで知られている．最近このNK細胞による標的細胞破壊機序として，Tubularcomplexによる微小孔（5−16nm）の形成が注目されている（PodackERら：1983，Nature，302：442）．Fidzianska
Aら（1984，Neurol，34：295）は，ヒト胎児DMDと考えられた症例を電顕的に観察したところ，
Killercellの浸潤による筋障害過程の存在する可能性を示唆する，興味深い所見を得て報告している．さらにジストロフィー・マウス（C57BL／6J）による動物実験では，ジストロフィー・マウスの各種リンパ組織NK活性が，対照群に比較して明らかに高いことが報告されており（SempleJW
ら：1984，ClinicalImmunolImmunopath，33：144），とくに生後8−10週目で胸腺萎縮と強い筋崩壊のあらわれる時期に一致して，最も高いNK活性が見られたことは注目される．
われわれは，これまでヒト・リンパ球に対する各種のモノクローナル抗体を用いて，各種のミオ
バナー骨格筋中に出現する浸潤単核細胞の解析を行なって来た（ArahataK，EngelAG：1984，Ann
Neurol，16：193）．そして58年度の本研究班において，DMD筋（non−neCrOtic）中に出現する浸潤単核細胞は主としてT8＋T細胞（cytotoxic／Supressor）及びマクロファージからなること，さらに少数ながらNK細胞マーカーとされるLeu7抗原陽性細胞の混在することを報告した．実験的には，NK細胞が一つの標的を破壊するには一個で十分であるし，NK細胞はリサイクリングして，次なる標的細胞破壊に関与することが知られているのでたとえ量的に少なくとも，その病因的な意義は看過し難いと考えられる．その意味からも，DMDにおけるNK細胞の役割を解明してゆくことは，本疾患の発症機構の一端を知るうえで，きわめて重要であると思われる．今回われわれは，その第一歩として，DMD筋内に出現するNK細胞の定量的解析を進めて来たのでここに報告する．

−21−

【対照】
DMD8例の生検骨格筋．
【方法】
各々の生検筋に含まれる筋線維総数，浸潤細胞総数と，そのサブセット別，部位別出現頻度を定量した．Leu 7，Leull（NK細胞マーカー）及びLeu4（T細胞マーカー）による免疫染色は，直接又は間接螢光抗体法にて実施．壊死筋線経はトリクローム染色及びC5b−9complementmem・
braneattack complex（MAC）にて同定．マクロファージは酸性フオスフアターゼ強陽性，M0−1抗原陽性細胞として同定した．いずれも2JJ連続凍結切片を用いた．
【結果】
8例の筋線維総数は34，151本（1714〜7357：妄＝4269）．壊死筋線維比率は1．55％（0．25−3．
46）．非壊死筋線経のうち直接細胞浸潤を受けているものは0．28％（0．05−0．80）であった．En−
domysiumに出現したLeu4＋，Leu7＋，Leu7＋4￣，Leull＋及びLeull＋4．細胞数は，それぞれ筋
線推1000本あたり73±25，15±10，2±1，0．7±1．0，1．0±1．0（SD）であった．
【考察】
われわれの結果からは，最も強力なNK活性を有するとされるLeull＋7￣4．phenotypeは少なかったこと．逆に弱いNK活性を示すLeu7＋11￣4＋phenotypeが，より優位であることが示された．
このことはDMD筋障害過程におけるNK細胞の関与が，多発性筋炎における抗原特異的T細胞のそれとは異なることを示唆する．今後これらのpreliminaryなデータをさらに整理する必要性が残されているとともに，質的な解析の手段として，免疫電顕的検索を考えており，現在準備中である．

ー22−

筋小胞体機能高木昭夫（国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部，虎の門病院神経内科）

筋小胞体（SR）はミクロゾームに相当する筋細胞内部膜である．カルシウムイオン（Ca）をSR
内脛に摂取し，筋を弛緩状態にする．また表面膜興奮にともなってCaを放出し筋収縮の引金となる．このようにSRは興奮・収縮連関の中心的役割を担っている．デュシェンヌ型筋ジストロフィー（DMD）の膜異常仮説あるいはCaによる筋障害説の立場から，1967年から本症のSR機能が注目されだした．しかしDMDのSR異常に関してまだ定説には到達していない．近年骨格筋SRのCa
遊離異常として，悪性高熱症（MH）が注目されている．MHではCa誘発性Ca遊艶が活性化されやすいといわれる．DMI）にも悪性高熱の併発が報告された．この視点からもDMDのSR機能を検討した．
1．分離筋小胞体（FSR）
筋ホモジェネートから超遠心法を応用してSR分画が調製される．FSR標本を使用してDMDにおけるCa摂取能の低下が相次いで報告された．SR膜組成の分析では，定性的異常はか−．量的にはレシチン含量の低下やCa−ATPase蛋白の減少が指摘された．病的筋材料から得られるFSRの純度が問題となろう．上述の変化はSR膜以外の膜成分の混入により説明可能であろう．事実筋ジス
動物モデルを使用して，比較的高純度のFSRで分析が行なわれた．この場合にはSR機能障害は少ないとされた．
2．スキンドファイバー法
DMDの生検筋より単一筋線経を分散してその機能が分析された．まず収縮系に関してCa濃度と発生張力の関係を調べた．低濃度のCaによる張力発生はDMDで有意に増加していた．SRのCa
摂取能はカフェイン拘縞の大きさを指標にして比較した．この指標は同年齢対照との比較で差をみとめなかった．このように収縮力の保持された筋線経においてSRのCa摂取能は正常と考えられた．

3．Ca遊離の問題
正常筋の興奮・収縮連関においてCa遊離がどのように調節されているかはまだ知られていない．
実験的にはCa遊艶をきたす数種の機序が知られている．我々はカフェインによるCa遊姓あるいはCa誘発性Ca遊柾をDMDスキンドファイバーを使用して分析した．カフェインによるCa遊離はDMDで克進していると推定された．しかしATPを除去した条件下ではCa誘発性Ca遊離の冗進は認められなかった．カフェイン拘縞の異常冗進はMH回復者で観察される現象である．DMD患者にときとしてMHが併発する事実を支持している．DMDでもCa誘発性Ca遊離の異常を推定しているがまだ確実ではない．
1つの問題はCa遊艶異常のDMD病因上の意義であろう．30％のDMD症例にはカフェイン拘−23−

露の異常は観察されない．疾患特異性の低いことを考慮すると，筋変性に伴う2次的現象と考えられる．ただ変性早期に出現する可能性が大きく，その発生機序は興味深い．筋変性の進展における役割も重要と思われる．

−24−

担

研

究

分

報

告

目

次

Ⅰ．臨床・臨床病理
1）先天性多発性関節拘縮症の病因に関する病理学的研究
国立武蔵療養所神経センター微細構造研究部

35

埜

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哉

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晴

臣

2）mdxマウスの坐骨神経所見39

鳥取大学医学部脳研神経病理

3）DMDの脊髄前角−ALSの最近の知見を踏まえての再検討
国立療養所下志津病院神経内科

中

野

今

42

治

4）（1）諸種神経筋疾患における筋病変の各論的特性と臨床的意義について

47−1340例の検討結果−
東京都立神経病院

田4）（2）Emery‑Dreifuss型筋ジストロフィーの1例
東京都立神経病院 田

辺

等
55

辺

等

5）（1）特異な先天性ミオパチーの1例

60

東邦大学医学部第四内科

木

下

真

男

5）（2）筋緊張性ジストロフィー症のカルシウム代謝異常に関する研究
東邦大学医学部第四内科

木

下

真

63

男

6）Oculopharyngeal muscular dystrophyの筋病変−rimmed vaculoe型 distal myopathyとの比較検討
筑波大学臨床医学系神経内科

中

西

孝

67

雄

7）（1）Duchenne型筋ジストロフィー症の脳NMR画像の分析
鹿児島大学医学部第三内科

納

光

71

弘

7）（2）Duchenne型筋ジストロフィー症（DM）の骨格筋の超音波，
X線−CT，NMR（MRI）画像に関する研究，ならびにそのcarrier detectionへの応用
鹿児島大学医学部第三内科

74

納

光

弘

7）（3）Duchenne型筋ジストロフィー症の臨床細胞遺伝学的研究
鹿児島大学医学部第三内科

27

納

光

弘

79

8）Duchenne型筋ジストロフィー症における交感神経機能異常について−心電図所見から−
国立療養所筑後病院

馬

渡

志

82

郎

Ⅱ．組織化学・微細形態
9）（1）凍結乾燥切片を用いた微量定量組織化学−CA−Ⅲの筋線維レベルでの定量化の試み−

北海道大学医学部脳神経外科神経内科部門

田

代

87

邦

雄

9）（2）神経筋疾患におけるUltrasound imaging−CT所見および筋生検所見との関連について−
北海道大学医学部脳神経外科神経内科部門

田

代

邦

90

雄

10）骨格筋パラフィン包埋切片でのmuscle specific enolaseおよび
carbonic anhydrase Ⅲ染色によるfiber type識別の試み
名古屋大学医学部第一内科

杉

村

公

96

也

11）（1）筋ジストロフィーチキンの形態学的初期変化：
酵素組織化学的検討
九州大学医学部脳研神経内科

後

99

藤

幾

生

11）（2）Kearns−Sayre−Shy症候群の検討−未梢神経障害を伴った症例−
九州大学医学部脳研神経内科

104

後

藤

幾

生

12）培養下における正常及び筋ジストロフィー鶏のT‑systemの
微細構造−タンニン酸染色による検討−109

東京医科歯科大学医学部神経内科

塚

越

廣

13）（1）Becker型筋ジストロフィーにおける神経筋接合部の電顕的観察
金沢大学医学部神経内科

福

原

信

義

13）（2）Cytoplasmic body myopathyの臨床的，病理学的研究
金沢大学医学部神経内科

福

原

信

113

117

義

14）福山型先天性筋ジストロフィー症の筋細胞膜の変化について−Ⅰ．Freeze fracture法によるcaveolae密度の検討−

昭和大学藤が丘病院神経内科

28

若

山

吉

弘

122

Ⅲ．膜，カルシウム，Creatine Kinase15）Toxin−アフィニティーによる骨格筋形質膜の分離法
自治医科大学小児科 桃 井 真里子
16）インタクト赤血球からのPPI抽出分離法と筋ジストロフィー症赤血球への応用
国立武蔵療養所神経センター

133

吉

田

瑞

子

17）Duchenne型筋ジストロフィー（DMD）の筋小胞体機能（続報）
国立武蔵療養所神経センター

129

高

木

昭

137

夫

18）（1）Kearns−Shy症候群と類似した臨床症状を呈した

神経原性筋萎縮症の1例

142

宮崎医科大学第三内科

栗

原

照

幸

18）（2）Caイオン電極による筋細胞内外のCa濃度の測定：
マーカイン急性筋融解への応用
宮崎医科大学第三内科

栗

原

147

照

幸

19）筋肉酵素の漏出機構（白鼠を用いて）愛媛大学保健管理センター

152

植

田

啓

嗣

20）各種ミオパチー，心筋梗塞および健常人の運動負荷におけるミオグロビン（Mb）とクレアチンキナーゼ（CK）の血中への流出パターン157

徳島大学医学部第一内科

川

井

尚

臣

21）（1）カルモデュリン免疫ラットの神経筋に関する研究
金沢大学医学部神経内科

高

164

守

正

治

21）（2）組織培養法による受容体蛋白代謝回転とプロテアーゼ，
プロスタグランジンに関する研究
金沢大学医学部神経内科

高

守

正

170

治

21）（3）筋ミトコンドリア異常を伴う2種の特異な筋病態について金沢大学医学部神経内科

29

174

高

守

正

治

Ⅳ．エネルギー代謝他

22）（1）ジストロフィー鶏発育早期における活性酸素関連諸酵素
および解糖系酵素の異常について
自治医科大学神経内科

水

野

183

美

邦

22）（2）ワゴスチグミンによる agonist induced myopathyの

形態的研究

189

自治医科大学神経内科

水

野

美

邦

23）（1）固定・筋ジストロフィーの筋の glucose uptake
信州大学医学部第三内科

庄

192

司

進

一

23）（2）Nemaline myopathyの筋構造蛋白

信州大学医学部第三内科

197

庄

司

進

一

24）筋収縮のエナージェティクス−燐NMR法による筋ジストロフィー症病態の研究−
大分医科大学生理

山

203

田

和

廣

25）ミトコンドリアミオパチーの生化学的研究：scanning organ

spectrophotometerによる白血球電子伝達系の検討
新潟大学脳研究所神経内科

宮

208

武

正

26）生体内におけるクレアチンの代謝経路：14C−クレアチン腹腔内注射（ラット）にみられる尿中への14C−尿素の排出冲中記念成人病研究所

紫

213

芝

良

昌

27）（1）ミトコンドリア・ミオパチー：酵素学的診断法の確立
順天堂大学医学部脳神経内科

佐

218

藤

猛

27）（2）Duchenne型筋ジストロフィー症（D.D.）生検筋におけるKINK細胞の定量的解析

222

順天堂大学医学部脳神経内科

佐

藤

猛

28）（1）筋糖原病の病態分析−糖原病Ⅶ型における高尿酸血症の成因−
大阪大学医学部第二内科 垂 井 清一郎

22628）（2）Kearns‑Sayre症候群における coenzyme Q10代謝とcoenzyme Q10療法の検討

230

大阪大学医学部第二内科

30

垂

井

清一郎

29）核内 non−histone蛋白の局在と染色体との関連
1）アクチン様蛋白の検討237

東京大学医学部脳研神経内科

萬 年

徹

Ⅴ．遺伝子
30）筋ジストロフィー症遺伝子の単離の試み
東京都臨床医学総合研究所遺伝情報研究部

243

鈴

木

紘

一

Ⅵ．筋再生
31）ジストロフィーハムスターと正常ハムスター間の筋の交換移植についての研究（第3報）およびmdxマウスの骨格筋のヌード
マウスへの移植についての研究
帝京大学医学部第一内科

寺

尾

寿

夫

32）筋疾患における myosatellite cellの研究
大阪医科大学第一内科

253

茂

在

敏

司

瀬

貞

夫

33）実験的再生筋における筋芽細胞増殖因子の研究
東北大学医学部脳研脳神経内科

249

258

高

34）筋衛星細胞活性因子の検討

262

国立長野病院

小口喜三夫

Ⅶ．蛋白代謝35）筋ジストロフィー鶏胚の交感神経筋における蛋白質合成能の特異性についての研究（第一報）東京都神経科学総合研究所神経生化学

堀

267

眞一郎

36）Rimmed Vacuoleを伴う Distal MyopathyにおけるカテプシンB及びHの局在271

徳島大学医学部酵素研酵素化学

木

南

英

妃

37）白血球放出因子による筋崩壊機構の研究
国立療養所宇多野病院臨床研究部

275

斎

田

孝

彦

田

秀

夫

38）実験的クロロキンミオパチー−autolysosome の形態学的・生化学的検討−

国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

31

杉

278

39）Duchenne型筋ジストロフィー症の筋変性壊死機構
に関する形態並びに生化学的検討
熊本大学医学部第一内科

32

荒

283

木

淑

郎

Ⅰ．臨床・臨床病理

1）先天性多発性関節拘縮症の病因に関する
病理学的研究埜 中 征 哉＊
研究協力者

内

田

智

子＊

先天性多発性関節拘縮症（arthrogryposis

岡

田

理

美＊

pmaマウスは常染色体劣性遺伝をとり，ホモとmultiplex congenita）（以下AMCと略す）は数

ホモからホモが得られる．内反足を示す生後2月

多くの原因により惹起される症候群である．関節のpmaマウス5匹にネンブタールで麻酔した後，左心室より1．5％グルタール液で潅流固定し，腰髄拘縮といっても関節そのものには異常なく，その周囲の筋に何らかの原因があると考えられている．
筋あるいは中枢神経系の病理所見よりAMCは神

3〜5のレベルで脊髄，脊髄前根をとり出し，さらに大腿骨頭よりやや中枢の部で坐骨神経をとり

経原性と筋原性に二大別されている．神経原性で出した．Os04で後固定後エボンに包埋し，1′（切はWerdnig−Hoffmann病との，筋原性では先天片にトルイジンブルー染色を行い，最終倍率1000

性筋ジストロフィーとの異同が問題となることが倍の写真を作成し，有髄神経数とその直径分布をある．

みて病因がどこにあるか追求した．対照としては

我々は既知の神経筋疾患を除く12例の特発性AMCの骨格筋を組織化学的に検索し，病因がど

生後2月の同種（CAS）マウス5匹を使用し同様の方法で検索した．

こにあるか推察した．さらに絶勝骨神経が先天的に欠損し，ためにその支配筋が萎縮し，内反足をみるperonealmuscularatrophy（pma）マウスの結1）

病理学的検討をも行い，ヒトAMCとの対比を試
みた．

果

ヒトAMC

今回使用した筋はいずれもタイプ1，2A，2B線
経が約1／3ずつモザイク状に分布することで知られている．今回の組織化学的検索で1例（非特異

対象・方法
1）

的なタイプ2B線維萎縮のみ）を除き全ての症例に異常を認めた．最も重症の7月女児例では

ヒトAMC

生後3月から15歳までの12例で，平均5．7歳，男Werdnig−Hoffmann病にみられるような群萎縮性4，女性8名であった．何れの症例も3個所以を認めた（図1）．この例以外では異常の大半は筋上に関節拘縞があり，左右対称性であった．検索

線推タイプの分布異常であった．

した筋は主に手術の時得られたものであるが，一タイプ2線経の完全欠損が15歳男性の大腿四頭部は診断のために生検した．大腿四頭筋4，上腕筋で認められた（図2）．この例では同筋の筋力低

二頭筋4，膵腹筋3，その他1の筋に各種組織化

下が中等度に認められたが筋線維そのものはむし

学的染色を行い，ATPase染色により，タイ70
1，2A，2B，2C線経を分け，その直径を計測し−う肥大気味（80．6±8．1／ ）であった．タイプ1線
経が55％以上とタイプ1線維優位（多くはタイプ

た．

1線経の群化を伴っていた）が4例，タイプ2線

2）pmaマウス

維優位1例であった（図3）．未分化なタイプ2C
線経の増加は4例に認められた．
以上12例の組織学的，組織化学的所見をまとめ＊国立武蔵療養所神経センター微細構造研究部−35−

NUSCLE HLSTOCHEMISTFtYIN ANC
CHANQEIN FlBER8ほ∈

8m州Angut8r Flbor⊂】

FiborAtrop‡；。。， ロ
2Å

⊂コ

28

⊂：ここ＝二二二コ

FiborHyportrophy⊂コ

CHANGEIN DISTRIBUTl0N
SmaGroupAtrophy l

L8−00（iroupAtrophy ロ
RborTypoGrouplng■■

Flb8rTypoProdo【一肌 ⊂二二：＝＝＝＝：コ

図1

小径線経が群をなして存在し，いわゆ
るlargegroupatrophyの像を呈する．
3月男，大腿直筋，H＆E，×150．

FmOrTypoDot廟即Cy
ITyp02C

Flbor8

⊂＝：コ
■

l

．﹇﹈ロロ

DEGENERAT10N
NUCLEtIntorn81

FlBRO引SNORIJAL

50

100％（12CASE＄）

図4

AMC寝息筋の組織化学的所見．

たのが図4である．
2）pmaマウス
図2 筋線経は大小不同を示し，多くは80J′
径とやや肥大気味である．全ての筋線
経は酸化酵素反応活性高く，タイプ1
線経である．15歳男，大腿直筋，NADH−TR，×100．

今回使用したpmaマウス仝例で絶勝骨神経は
肉眼的にも欠損し，前脛骨筋，長指伸筋などその支配下の筋は全て細く，強い神経原性萎縮を示していた．また筋線経と筋線経の間には結合織の増生も著しかった．これらの筋をアセチルコリンエ
ステラーゼ（AChE）染色したが活性は全くなく，神経終板の存在は確かめられなかった．
Epon包埋切片でみると脊髄前角細胞に異常なく，前根の有髄，無髄神経の形態や分布にも異常は認められなかった（表1）．
考察

今回我々が対象としたAMCの患者は既知の神経筋疾患（先天性ミオバナーや筋ジストロフィー，
Werdnig−Hoffmann病など）を除いた特発性の
図3

半数以上の筋束では淡染するタイプ1
線維優位と群化（fibertypegrouping）
を示す．8歳女，大腿直筋，×200．

患者である．全月生下時より多くの関節に強い拘縞があり，その状態そのものは非進行性であった．
これらの患者では筋力低下がみられることが多く，−36−

表1 有髄神経総数およびその平均直径（±S．D．）lp m a マ ウス

照
直径 （
〃）

±
2
0
7

5

8

5

8 0
3 2
1 1
± ±
6 8
0 7
7 5

5

5

00
3
4
±
2
0
1
4

4
8

5

0
±
±

8

4

0
±

5

0
9
1

7

5

4
9

±
0
3
0
4

0
±

6

8
2
1

±
0
9
5

数

2

9
7

±
3
2
7

総

9

±
0
8
6

5

N ■

7

直径 （
〝）

5

0

8

坐骨神経

数

5

5

髄馳髄

4

腰腰腰

3

第第第

脊髄前根

対

総

5

lN ・

N＊：検査対象匹数

AMCにふり返って考えると，特発性AMCの中約5例に明らかな四肢筋力低下があった．
AMCの病理学的検索ではDrachmanら2）が報には神経の走行異常（分枝異常など）によるもの

告したように前角細胞の異常に起因するとの所見がかなり含まれているのではないかと考えられ，が多くみられている．しかし実際に筋生検すると神経原性AMCの一病因をなしていると推定され
る．

臨床症状の重篤さに比較してほとんど所見がみらが強く萎縮し，生検するような筋は比較的よく保神経側に異常があるため走行異常がくるのが，筋側に異常があるためか，今後の研究にまたねばたれているからであろう．神経原性のAMCではならない．

れないことが多いl）．これは多分，ある特定の筋群

ある特定の筋グループが選択的に侵されるとはいっても，系統的な異常であるはずなので，一見正常にみえる生検筋にも組織化学的染色など詳しい

ま

と

め

1．ヒト特発性AMCの多くは広い意味での神経原性筋変化によるものである．

検索でイ可らかの所見が得られるのは当然である．
今回の我々の検索の結果は筋線維タイプの分布の2．筋線維タイプの分布異常，タイプ2C線経の増異常であった．筋線経のタイプは支配する神経に加は発達途上筋への神経支配の異常を反映してよって左右されることを考えると，この分布の異いた．

常は神経の支配の異常を反映することになる．神3．pmaマウスの結果とあわせて考えるとAMC経の異常はどこに一次的なものがあるのかその部

は前角細胞の異常と限らず，もっと末梢の神経位は不明であるが，今回のように群萎縮などの所

異常（分枝異常など）でも起こりうることが示見に乏しく，筋線維タイプの分布の異常というこ唆された．

とを考慮すると，前角細胞よりもっと末梢のレベ
文

ルでの異常が推定される3）．
遺伝性のpmaマウスでは総腰骨神経の完全欠壬員により，それに支配されるべき筋線椎が萎縮結1）Dubowitz，Ⅴ．＆

合織化して，ために内反足をみたものである4）．脊London，1973．

献
Brooke，M．H．：Muscle

Biopsy．A Modem Approach．Saunders，

髄前根，坐骨神経まで対照と同じく全く差がない

2）Drachman，D．B．＆ Banker，B．Q．：Arthr0−

ことをみると，絶勝骨神経へと行くべき神経束がgryposis multiplex congenita．Case due to

他の神経内へと迷大したと考えざるを得ない．今

diseasesofanteriorhorncells．Arch．Neuro1．，の所，どの神経へ迷入したのか全く不明であるが，5：77−93，1961．
3）Swinyard，C．A．：Concepts of multiple con−

脾腹神経が正常のそれよりやや太くみえるので，genitalcontractures（arthrogryposis）inman

そのような神経へと迷入した可能性が強い5）．
pmaマウスの組織学的結果から，今一度ヒト−37−

and animals．Teratology，25：247−258，1982．

4）江崎孝三郎，安田幸雄，中村昌広，小野啓郎：究費補助金総合研究A．新たに発見された二つ遺伝性前・外側下腿筋萎縮マウス．実験動物，の神経・筋異常マウスの成因の解析と疾患モデ

30：151−155，1981．

ルとしての評価，昭和55−57年度研究成果報告5）埜中征哉，豊福照子，多田愛子：pmaマウスの書，1983，pp．29−39．

病因に関する病理組織学的研究．文部省科学研−38−2）mdxマウスの坐骨神経所見
中 村 晴 臣●
研究協力者

田

中

順

一●

高

田

邦

安■

Ⅹ染色体性劣性遺伝を示すmutant mouseと後根神経節，坐骨結節上部及び下部の坐骨神経（gene symbol，mdx）は，その遺伝形式，筋原性と考えられる筋組織病変，進行性の筋変性などか

幹，下腿屈筋内神経などを摘出し，1％四酸化オ

ら，筋ジストロフィー症，特にDuchenne型あるいはBecker型のモデル動物となりうると考えられに包埋して光顕並びに電顕的検索に供した．無髄た（Bulfieldetall））．筋病変の特徴は，変性や再倍電昆弓写真上で，500〜600本の軸索について行っ

生線経が群をなして出現する傾向があることのほた．

スミウムにて後固定ののち，型の如く epoxyresin
軸索直径の測定は，atrandomに撮影した10，000

か，全般的に筋線経の再生が著明で，かつ問質結
結合織の増生が少ないことなどである．従って他のモデル動物と比較すると，ジストロフィーモルモ

1果

7週目のmdxマウスにおいては，腰髄のットの筋病変に類似しているといえよう．他方，

前角細胞，前根，後根神経節，坐骨神経幹及び筋

dyマウスはmdxマウスよりもヒト筋ジストロフ

内神経で，対照マウスに比較して，明らかな異常

ィー症に類似の筋組織変化を示すが，末梢神経，は認められなかった．特にdyマウスにみられる

特に脊髄神経根に著しいdysmyelinationが認め如きamyelination，dysmyelinationはみられなられる（Bradley＆Jenkison2）；Okadaetal．3））

かった．坐骨神経幹について述べれば，後述の如ため，筋病変成立に神経性因子の関与が考えられている．mdxマウスではcholinestrase染色でみきabnormally com浣ned nerveを除き，有髄線
椎は良く保たれていた．無髄線経においても，各る限り，神経終末は正常であるとされている

軸索はSchwann細胞々体突起によく取り巻かれ（Bulfieldetall））が，その他の末梢神経系は全くていた（図1）．dyマウスにみる如き軸索変性は検索されていない．本報告ではmdxマウスの坐なかった．無髄軸索直径の平均値及び分布も，対骨神経系を検索し，その筋病変成立に対する神経

照群との間に差異はなかった（表1）．Schwann

性因子の関与の有無を知ることを目的とした．
表1

方

7TWeek・01d mdx mouse．

法

生後7週（3匹）及び5カ月（2匹）のmdxマウスと，対照とDiameterofunmyelinated axonsin
posteriorroot proximalportion

animals oflumbar of sciatic nerve

して生後7過のC57BL／6J

Spinalcord（＋／＋）及びC57BL／10N（＋／Y）マウス夫々

Cl O．32±0．18（580）

2匹を使用した．Pentobarbital sodium麻酔下に，左心室より生食水濯流後，カコジル酸緩衝液

0．43±0．14（575）C30．32±0．11（548） 0．43±0．14（520）
Dl O．42±0．23（551）● 0．43±0．15（608）
C：COntrOIs，D：mdx mouse加paraformaldehyde，glutaraldehyde混合液（pH7．3）にて濯流固定し，腰髄，その脊髄神経根

Valuesaremean土standarddeviation（FL）．
Numberof axonsexaminedisin parentheses．
．Significantdifferencecomparingwith
controIsbyt−teSt（p＜0．005）＊鳥取大学医学部脳研神経病理−39−

細胞々体はリボゾーム，小胞体，Golgi装置，ミト部に限局して，比較的明瞭な無髄神経野がみられコンドリアなどに富み，万顆粒もみられたほか，た（図3）．即ち種々の大きさの軸索が集団をな

VeSicleに富む．基底膜はよく発達し，dyマウスにし，全体はSchwann細胞々体で取り囲まれていみる如き基底膜の欠如する所見はなかった．

た．各軸索間にはSchwann細胞々体が侵入する

2

腰髄後根に関しては，5例中4例までは異が，軸索膜が互に相接する部位も少なくない．こ

常を認めなかったが，生後7週の1例で後根の一の後根における無髄軸索の直径平均値は0．42〟±

図1．2

CrossLSeCtionsfromtheproximalportionofthesciaticnerveOfa7−Week−Old mdx mouse，Showing wel1−developedunmyelinated nerve bundles（Fig・1）andanabnormallycombinedmyelinatedandunmyelinatednerve（Fig・2）・Magnification：×7，000and xlO，000，reSpeCtively．

図3，4

Cross−SeCtionsfromalumbarposteriorrootofa7−Week−Oldmdxmouse．
Therootcontainsafewpaleareas（insert，×220），COnSistingofabundant

unmyelinatedaxons．Axonlemmasapposeeachotherwithoutinvasionof
Schwann cell cytoplasmin some place and a hypomyelinated axon
（asterisk）is observed（Fig．3，×8，000）．Axons withlong mesaxons（asterisks）are also notedinthe surroundings（Fig．4，×12，000）．

一40−

0．23JJで，対照後根のそれ（0・32JJ±0・18〝及びる．無髄神経野の辺綾部にみられたhypomyelina−

0．32J ±0．11／ ）より大きい（p＜0・005）（表1）．

tionは，程度の差はあれ対照マウスの後根にも認められる．従って無髄神経野は髄鞘形成の未熟に最大直径は1．8J で，大部分の軸索は1・4〝以下であった．無髄神経野の辺綾部では，長いmesaxon基づくものであろう．更に5カ月のmdxマウス

で取り巻かれた比較的大きな軸索がみられた（図後根では，殆んどすべての無髄軸索がSchwann4）．また軸索直径に比し異常に薄い髄鞘をもった細胞々体に取り巻かれている点を考慮すれば，上線経も少数みられた（図3）．しかしdyマウスに

述の7週mdxマウスの無髄神経野は，髄鞘形成

みる如き，Schwann細胞基底膜の欠損乃至不完全の未熟乃至遅延に基づくものといえよう．
7週目のmdxマウスにみられたabnormally

さは認められなかった．
他の7週日mdxマウスや対照マウスの腰髄後combined nerve（Okada et a14））は，dyマウス

根では，無髄神経束は極めて小さい．しかし，すべての無髄軸索がSchwann細胞々体で取り巻か坐骨神経にて対照より高頻度にみられた所見であれるわけではなく，軸索膜が互に接する部位も少mdxマウスでは対照にもみられるほか，出現頻度

なからずみられた．また長いmesaxonで取り巻も高くなく，直ちに異常所見とはいい難い．

り，dysmyelinationの1つと考えられる．しかしかれた無髄軸索や，hypomyelinationを示す有髄本実験においては，坐骨神経系に軸索の変性は線経も，少数認められた．他方，5カ月のmdxマ

みられず，筋病変成立への神経性因子の関与はな

ウス後根では，大部分の無髄軸索はSchwann細いものと考えられる．

胞々体で相互に分散されているし，hypomyelina−
結

tionを示す線経もみられなかった．
3論

生後7週のmdxマウスの坐骨神経系には，腰7週目のmdxマウスの坐骨神経結節上部において，異常結合した有髄及び無髄神経（ab・

髄後根の一部分に限局した未熟な無髄神経野や，

normally combined nerve）が1ケ認められた．
即ち数本の軸索集団が薄い髄鞘層で取り巻かれた

軽度の髄鞘異形成をみるも，対照に比して明らかな異常所見は認められない．

線経で，軸索間にはSchwann細胞々体が侵入している部分もある（図2）．しかし，同様のCOm−
bined nerveが対照マウスの後根に1ケ認められ文献1）BulfieldG，SillerWGetal：Xchromosome−た．

1inked muscular dystrophy（mdx）in the

4 その他，dyマウスにみる如き変性に陥った
無髄軸索や，蜂巣状のSchwann ce11−aXOn net−

mouse（animalmodel）．Proc NatlAcad Sci
USA81：1189，1984．
2）BradleyWG，JenkisonM：Abnormalitiesof

workはみられなかった．

peripheralnerveSinmurinemusculardystro−

考察

phy．J NeuroI Sci18：227，1973・

7週のmdxマウス後根にみられた無駄神経野

3）OkadaE，MizuhiraVetal：Dysmyelination

は，極めて限局された部位の変化である．一般にin the sciatic nerveS Of dystrophic mice．J
NeuroI Sci28：505，1976．

マウスの無髄軸索の直径は1．5JJ以下であるが，dyマウスの無髄神経野では直径が6〟にも及ぶ軸索がみられ，明らかに有能線経になるべき軸索4）Okada E，Mizuhira V et

al：Abnormallycombined myelinated and unmyelinatedと考えられる．mdxマウスでは最大1．8〟の軸索

nervesindystrophicmice．JNeuroISci33：

で，小径有髄線経の直径に相当するものと思われ

243，1977．

−41−3）DMDの脊髄前角−ALSの最近の知見を踏まえての再検討
中 野 今 治＊1981年，Appelは筋萎縮性側索硬化症（以下ALSと略す）に対し，従来の通念である神経原説

著名に減少していることが予想される．したがっ

に対し，全く逆に筋原説を提唱した1）．彼によるにも変化が生ずるものと思われる．

て，Appelの仮説が正しければ，DMDの脊髄前角と，下位運動ニューロンを維持するためには骨格

一方，運動ニューロン疾患であるALSでは，こ筋由来のneurotrophic hormoneが必要であり，れまで脊髄前角が詳細に検索されてきた．その結ALSではこのホルモンが欠乏するために下位運果，最近になってBunina小体2），Spheroid3），4）など

動ニューロンの消失が起こるとされている（図の新知見が注目されるようになり，ALSの前角病

1）．

理の概念が大きく変わった．

進行したDuchenne型筋ジストロフィー症（以DMDでは現在最も有力を筋原説の他に，神経

下DMDと略す）では筋線経は高度に消失し，脂原説が唱えられてきたが，脊髄前角には病理学的

肪や結合織に置換され，neurOtrOphichormoneもには明らかな変化はないとされている5）．しかし，これらの観察は上記のALSにおける新知見以前のものであり，これらの知見に基づいてのDMD
脊髄前角の詳細な観察はまだなされていない．
そこで，今回このような視点からDMD脊髄前角を検索し，若干の知見を得たので報告する．
症例および方法
症例は1979年から1984年までに国立療養所下志津病院で死亡，剖検されたDMD16例である．年齢は13から24歳，平均18．9歳で全月男性である．対照として中枢神経あるいは末梢神経の原発性病変を有きない19例を使用した．年齢は16歳から29歳，
平均23・2歳で男12例，女6例，不明1例である．
ホルマリン固定，パラフィン包埋標本にて頸髄，
胸髄，腰髄の前角を観察した．染色はHEが主体で，一部では鍍銀，KB，PTAH染色も使用した．
一般にspheroidと呼ばれるものには，1）最近
ALSで注目されている10nmneurofilamentが不図1

Appelの仮説の模式図．筋細胞から分泌されたneurotrophic homOne（黒丸）が神経終末より取り込まれている．

＊国立療養所下志津病院神経内科

規則に集積したもの（図2A，B）と，2）neuro−axonaldystrophyで代表されるaxon terminal

近傍が膨隆したもの（図2C，D）の2種がある．
前者は主として軸索近位部の腫大と考えられており，HE染色では均質な扶育桃色にそまるが，注意
−42−

図2

DMD例に見られたspheroid．A，B：ALS型spheroid，内部はほぼ均質だが，注意深く観察すると繊細な線維状配列が認められる．C，D：非ALS型spheioids，Cでは細かい
顆粒状の内部構造を示し， Dでは均質に染まっている．HE
染色．A，C，D：×400， B二 ×200．

深く観察するとその内部に不規則にうねる雇載細な線維状配列が認められる．これに対し，後者の内結果
今1司検索した限りではDMD前角大型運動ニュ

部構造は様々の程度に好酸性を示す細顆粒状物質

ーロンの明らかな消失は認められなかった．しかか強い好酸性を呈する均質な物質より成っている．

し，数例において，前角のニューロピルが粗薄になりエオジン好性の胞体が明らかに認められる星

本稿では便宜上，前者をALS型spheroid，後者を非ALS型spheroidと呼ぶことにする．なお，
ALS型，非ALS型spheroidともその大きさに幅型グリヤがしばしば観察された．

があるが，観察の都合上短径20ミクロン以上のもspheroidのいずれも稀ならず見られた．そこで，それの認められた症例数をDMDと対照例とで比のに限って検索した．

一方，SpheroidはALS型および非ALS型

較してみた．ALS型spheroidはDMDでは16例
中11例［69％］に，対照例では19例中7例［37％］に見られ，DMDで有意に多く認められた（P＜0．05）．非ALS型spheroidはDMDでは16例中
ー43−

13例［81％］に，対照例では19例中6例［32％］に

4）非ALS型spheroid内に観察された見られ，これも有意差を示した（P＜0．002）．しかBunina小体類似の封入体（図4）．前角大型ニュ

し，いずれも1例当たりの数は少なく，せいぜい3〜4個であった．

ーロン内の好酸性封入体はいくつかの疾患で報告

少数ではあったが，DMD例で記載すべき所見として以下の様な変化が見られた．
1）ニューロンの胞体内に集積したneurofila＿ment（図3A）．ALSにおけるneurofilamentの蓄積部位は軸索近位部が多いが，時に胞体内にも同様の貯滑の存することが認められている4）．
2）大型の運動ニューロン内にある比較的大きい空胞．その内部に不規則な顆粒を含んでいる（図3B）．これはALSの脊髄前角大型運動ニューロン，とくに変性の明らかなニューロンの胞体内に観察されるものと良く似ている．

図4

DMDの非ALS型spheroidの内部に認められたBunina小体類似の封入体（矢印）．HE染色．×1000．

図5

DMDの一側前角の運動ニューロンに見られたcentralchromatolysis．A：
Chromatolytic neuronは正常ニューロン（矢印）に比較して丸く腫大している．B：Aの強拡大．核は偏在し，リボ7ステンも一方に押しやられて軸索損傷による逆行変性と区別出来ない像を呈している．HE染色．A：×100，

3）胸髄前角に見られた変性ニューロン（図3C）．NisslノJ、体が全く認められなくなっており均質に淡く桃色に染まった細胞質を示している．

図3

DMDに見られた運動ニューロンの変化．A：胞体内へのneurofilamentの蓄積．図の右上にはALS型spheroid（矢印）が見られる．B：胞体内の空胞．
内部に不規則な顆粒状物質が含まれている．C：変性した遅効ニューロン（矢印）．Nissl小体は消失し，胞体は均質に染まっている．HE染色．×400．

B：×400．

−44−

されているが，BuninaノJ、体は古典型ALSでのみているものとおもわれる．しかしながら，ALS型

確認されている．今回，前角運動ニューロンの胞

spheroidの出現が骨格筋の消失と関連があるか体内にはDMD例あるいは対照例のいずれにおいどうかという点に関しては今後の検索に待たねばてもBunina小体を見出すことはできなかった．

ならない．

5）DMDの一例において見られた胸髄前角運

今回の観察ではDMD前角運動ニューロンの消動ニューロンのChromatolysis（図5A）．正常ニ

失は明らかではなかった．TomlinsonらはDMD

ューロン（矢印）と比較するとchromatolytic
neuronは円形に艦大している．強拡大で＼見るとこ

脊髄前角ニューロンのmorphometryを行い大型ニューロンは減少していないと報告している7）．

のことはより明瞭で胞体は丸く膨化して核は偏在

一方，Kawamuraらは下肢切断後長期生存した正し，Nisslノト体はほとんど認められず，リボフステ

常例で，切断肢に対応する髄節の脊髄前角運動ニ

ンは胞体の一側に押しやられている（図5B）．こューロンのmorphometryを行った結果，大型ニのように，ここに見られた像は一般に軸索損傷にューロンの消失を認めている8）．しかし，この二つ対する再生像と考えられている逆行変性像と区別の報告は相対立するものではない．何故なら，後出来ない．Chromatolysisが一例性であることか者のニューロンはその軸索が切断されているのにら，その原因として外傷などの局在要因が考えら

対し前者にはそのようなことは無く障害の機構がれる．

異なると思われるからである．
今回の観察結果はAppelの仮説を支持するも考のではないが，さりとて反証と成るものでもない．

察

DMD前角にはspheroidを初めとしていくつ著者が検索したDMD例では前角運動ニューロン

かの変化が見られた．しかし，いずれの所見もの消失に到るには筋組織が消失してからの生存期

ALSを含め他の疾患にも認められるものであり，間が充分でなかったことも考えられるからである．

DMD特有の病変ではなく，非特異的な神経の変今後，通常の人工呼吸器や体外式人工呼吸器の使用が増えるものと思われるが，それによりDMD性過程を示すものと思われる．
Heyckら，TomiinsonらはDMD前角に萎縮したニューロンを見出し，筋細胞の消失に伴う二次的な変化と考えている6）・7）．
今回，観察した前角大型ニューロンの諸変化が患者の寿命が大幅に伸びた時，長期に亘ってtar−
getを失ったニューロンがどのような反応を示す
か興味ある問題である．そして，その時にこそAppelの仮説の真偽が問われるものと思われる．

彼らの言うように筋線経というtargetを失った
ことに起因しているかどうかは明らかでない．し結かし，このニューロンは正常のtargetを失った後でも逆行変性と区別出来ない像を呈する．すなわ
ち，targetは無くとも損傷された軸索を修復しようとする反応は維持されているものと思われる．
ALS型spheroidは前角運動ニューロンの軸索近位部に10rm neurofilamentが蓄積したもので

論

1）DMDの脊髄前角にはspheroidを初め幾つかの変化がみられた．
2）前角のニューロン消失は明らかではないが，spheroidとくにALS型spheroidを有する症例
が対照より多いことから，そこにはある程度の変性が生じているものとおもわれる．

あり，ALSで多発することから本疾患における前貴重な対照例の標本を提供して下さった東京大

角運動ニューロンの変性と密接に関係しているも学医学部病理，長嶋和郎先生に感謝致します．

のと考えられている．
DMD例ではALS型spheroidを前角に有する症例が対照例より有意に多いことから，前者の脊髄前角運動ニューロンにはある程度の変性が生じ

ー45−

文

献

1）Appel SH：A unifying hypothesis for the

CauSe Of amyotrophiclateral sclerosis，
parkinsonism，and AIzheimer disease．Ann．
Neuro1．，10：499，1981．

461，1984．

5）AdamsRD，Denny−BrownD，PearsonCM：
Diseases of muscle，a Studyinpathology．

2）Bunina TL：Intracellularinclusionsin

Hoeber，New York，1962．

fami1ial amyotrophiclateral sclerosis．（Rus・6）HeyckH，LaudalmG：Dieprogressivdystro−

Sian）．Zh．Nevropatol．Psikhiatr．（Korsakov

phischen Myopathien．Berlin，Springer

J・Neuropathol．Psychiatry），62：1293，1962．

Verlag，1969．

3）CarpenterS：Proximalaxonalenlargement7）TomlinsonBE，WaltonJN，IrvingD：Spinal

inmotor neuron disease．Neurology（Min−

COrd limb motor neurones in muscularneap．），18：841，1968．

dystrophy．J．Neurol．Sci．，22：305，1974．

4）Hirano H，DonnenfeldH，SasakiS，Nakano
I：Fine structural

8）KawamuraY，DyckPJ：Permanentaxotomy

observations of neuro・

byamputationresultsinlossofmotorneurons

filamentous changesin amyotrophiclateralinman．J．Neuropathol．Exp．Neuro1．，40：658，

SClerosis．J．Neuropathol．Exp．Neuro1．，43：

1981．

−46−

4）−（1）諸種神経筋疾患における筋病変の各論的特性と臨床的意義について−1340例の検討結果−

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美也

＊

＊

胤 雅

沢 田

●

事

＊

＊

野 小

●

＊

信 人

雅 和

潟 本

■

■

＊

内 宮

●

■

進郎雄

＊

四 忠

島 原

小松椿

研究協力者

はじめに

動ニューロン疾患22：進行性筋ジストロフィー筋ジストロフィーをはじめ諸種神経筋疾患の病（PMD）群54［Duchenne（DMD）型13，Becker

型・病態診断，重症度・予後の判定，治療効果の（BMD）型4，肢帯（LG）型17，顔面肩甲上腕検討等に際し，筋病変の解析（適応の吟味・方法論（FSH）型6，先天型（CMD）−福山型11，そのの習熟を条件とした筋生検による）は日常診療上他3〕，筋緊張性ジストロフィー（MD）56，諸

極めて有用である．一般に臨床検査の特異性を論

種先天性ミオバナー24，Kearns−Sayre

ずるに当っては、それぞれが総合判定のための補2，rimmed vacuole型

助手段であるという認識が前提となる．しかし多Guillain−Barre症候群（GBS）10，aCute

数のCaSe Studyとしての情報が蓄積され，maSSradiculoneuropathy12，pOlyneuropathy

studyとしての総論的知見が日常診療に応用され〜pOlyneuritis，multipleている現在，改めて各論的に，1例診断に貢献し得る所見特異性を再評価・再抽出し，その臨床的意義を更に明確にすることも重要な課題と考えられる．今回我々はこの点に着目し，表題の内容について検討，若干の知見を得たので報告する．
対象および方法
各種神経筋疾患1340例（1970年7月〜1984年9月虎の門病院，1984年10月以降東京都立神経病院
各自験例：男708，女632：3〜68歳），1633検体を対象とした．疾患・病型の内訳・例数は，筋萎縮性側索硬化症（ALS）［狭義の脊髄性進行性筋萎縮症（SPMA）を含む］78，Werdnig−Hoffmann
病（WH）14，Kugelberg−Welander病（KW）
31，Charcot−Marie−Tooth病（CMT）14，他の運＊東京都立神経病院（前・虎の門病院神経内科）＊＊虎の門病院神経内科＊＊＊金沢大学医学部神経内科＊＊＊＊東京都立神経病院神経内科＊＊＊＊＊東京都立神経病院検査料（病理）症候群

distal myopathy4；

mononeuropathy

一multiple mononeuritis114；多発性筋炎（症候群）216，SarCOidosis15，内分泌性ミオパテー38［糖尿病性amyotrophy13，甲状腺機能冗進症に伴うミオパチー3，甲状腺機能低下症に伴うミオパチ
ー〜Hoffmann症候群15，Cushing症候群に伴うミオパテー〜SterOidmyopathy7］，周期性四肢麻痺4，重症筋無力症22，若年一側上肢筋萎縮症
4，一側下肢筋萎縮症9，脊髄空洞症2，頚椎症
24：その他575であった．
以上の症例の臨床病態より最も適切と考えられた部位において施行した筋生検につき，rOutine
battery による組織学的・組織化学的（以上全例）・電顕的（324例）検索を行った．また，その所見を以下の要素分類（既報告）にしたがって再検討した：1）筋線経の大小関係・形状・分布［病変主座のmotorunit内局在との関係］（図1），2）筋fibertype異常（表1．図2），3）筋線推構築異常（表2），4）再生現象（表3），5）炎症性所見，6）その他の所見［筋核，筋終板，筋内神経，血管・ー47−

正 常 例l

図1

筋線維大小不同の基本的パターンおよびhistogramの模型的例示．
A．神経原性病態（群集萎縮；histogramで2峯型）（1） 小群集萎縮の多発 （萎縮角化線維2〜3個ないし数個程度の群集が，ほぼ均等に散在する．進行すると一部が癒合して一見大群集萎縮に類似するようにみえるところもあるが，本質的には他部に小群集萎縮の基本が観察される．とくに
ALS・SPMAでは，この小群集萎縮の形は経過中よく保たれている．また萎縮線経のmitochondriaの酵素浪縮現象が明らかである）：通常前角細胞障害の場合にみられる．
（2） 大群集萎縮 ・ なだらかな移行性 ・ 極度の萎縮線維 ：通常前根障害の場合にみられる．
（a） 大群集萎縮 （初期より，筋小束単位程度の大きさの群集萎縮がみられる．本質は萎縮の程度よりもその群をなす
萎縮線維数の数の大きいことにある）（b） なだらかな移行性 （大群集萎縮に近いが程度が軽く，かつ小乗毎に明らかな区画に乏しい移行を示す）（C） −極度の萎縮線推 の散在・群集（初期像よりやや開大した問質中に，一見核のみと誤認されるような，あるいは細胞質部のわずかに付着しているようなごく細い萎縮線経より−48−

（図1説明つづき）
なるが，周辺を詳細に観察することにより確実に萎縮線経であることがわかる，やや軽度の萎縮筋線椎との移行性が見出される）（3） 小角化線経の散在・一部群集 （初期像よりモザイク状に軽度〜中等度の小角化線経が散在することがむしろ特徴で，進行するにしたがって小群集〜大群集へ移行する）：通常末梢神経障害の場合にみられる．
B．筋原性病態（散在性萎縮；histogramで鏡像型）
横断面が円形化を示す萎縮・正常大・肥大線経の散在，en−domysiumの関大，中心核などの複合所見．
C．神経J京性・筋原性の音昆在病態
前記A・Bの性格が共存してみられる場合を指すが，一般にA（3）では筋原性病態がみかけ上官昆在している場合が多い．
D．fiber type atrophy
typeⅠまたはIIの選択的な萎縮（ときには他の一方の肥大を伴うことがある）で，typeI atrophywithorwithouttype
II（IIa orIIb）hypertrophy：typeII（IIa orIIb）
atrophy with orwithouttypeI hypertrophyのように表
現し得る．

表1

fiber typeに関する筋病変

A．非選択的変化SameneSSprOperty
B．選択的変化differentnesspropertyl）単系統性異常dysproportion

HtypeI（ii）p〉●peII①萎縮atrophy②肥大hypertrophy）（ ③構築異常
struCturalchange2）分布異常abnormaldistribution（》群集grouping（i）typeI②群集萎縮gTOupedatrophy（ii）typelI ）（③混在率増加predominance
C．分別異常abnormaldiscriminationl）再生過程regeneratingprocess2）分化障害disturbanceofdifferentiatiorL

三二；二

匿］
図2

筋fiber type別histogramの例示．
myosin ATPase活性像（アル＊1日則，pHlO．3）による．実線：typeII，点線：typeI．（1）正常像，（2）神経原性変化（2峯性）の例，（3）筋庶性変化（鏡像型）の例，（4）typeI atrophy，（5）type
II atrophy．

ー49−

表2

表3 再生現象に関する着目筋病変

主要な筋線維構築異常

1）一般病理学的変化①横紋構築の断裂．消失②basophilicfiber③壊死（necrosis・myOlysis）④phagocytosis⑤Splitfiber⑥opaquefiber（COntraCtionknot）⑦空胞化，空胞変性（診硝子様変性⑨脂肪変性⑳eosinophilicbody，basophilicmass
2）組織化学により強調される重要所見（Dringfiber・Snakecoil②Sarcoplasmicmass（Peripheral，CentraI）③targetfiber・targetOidfiber◎motheatenEiber・mitochondria酵素の筋帯下部活性増強・筋原線推間networkの乱れ（9 ミトコンドリア酵素濃縮現象（とくに神経原性萎結線推）⑥lipidstorage（deposit）

筋

病

変

A ．
従 来の いわゆ る
再生 現象
B ．
fib r ty f杷異 常① fibe r ty p e 分 別異常〔D → R （過 程 ））④ fib e r ty pe g ro u p in g
rD → R （終 了 ）〕④ fib e r ty p e g ro u p ed atro p h y 〔D 一・R →D；

a ．ta rg et （targ eto id ）fib er
C ．
筋緑維
中心部
病 変

前恨 障害 ・末 梢神経 障害（と くに高 率）b・〈；崇纂 莞慧 jD＝denervation R＝re・innervation

結果

上記の帰納法的検討により，種々の疾患・病型

圧）glycogenstorage（deposit）⑧MLG（mitochondria−lipid−glycogen）

群における筋病変の各論的特異性の程度に関し，以下の諸段階を提示し，その根接を指摘し得た

COmplex（図3）．

⑨rimmedvacuole⑩cytoplasmicbody
3）個々の先天性ミオパテーの特徴として報告された主要所見①centralcore，multicore，minicore

A群：構築異常・組織化学的所見などが本質的な特異性を有する場合．
1）筋病変の特徴が疾患・病型名とされているもの：centralcore disease，nemaline myopathy，l−disease］②myotube［myotubular，CentrOnuClear，Peri−

myotubular（centronuclear，pericentronuclear）

CentrOnuClearmyopathy］

myopathyなど．ただし，これらの構築異常が筋病（∋nemaline（rod）myopathy◎raggedredfiber［KEARNS−SHY（KEARNS−

変全体として主体をなしていること，他の胎生期構築の遺残やfibertypeの未分化・異常分化等のSAYRE）syndrome・Ophthalmoplegiaplus］⑤reducingbody【−myOpathy］⑥lysisofmiofibriles［myopathywith−】⑦fingerprintbody［−myOpathy】

所見を伴っていることなどが重要である．
2）酵素欠損症・蓄積疾患など：筋組織化学的方⑧sarcotubular alterationlsarcotubular法が確立されている場合（McArdle病における

myopathy】

phosphorylase欠損の証明など）に限り，且つ電⑨focallossofcrossstriationlfamilial−】

星頁的・分析化学的方法の併用により，その微細構⑩cap［−myOpathy］

築上の局在，定量性などが重要な所見として付加される．糖原病一般，amyloidosis，lipidosisなど

問質系の変化，その他．次に，各要素の組合せのの場合にも特異性の高い方法論の存在を条件にこ特徴と疾患・病型・病態に関する最終確定診断との位置にランクされ得る．

対比考察し，また吟味のため盲検診断テストを併用した．

B群：一般病理学的診断が疾患・病型診断となり得る場合．
1）多発性筋炎：（∋血管問質系病変（溶出性炎としての要素，すなわちi参出・浮腫・リンパ球を主−50−

図3 筋病変の例示（本文参照）：①A群，1）centralcoredisease，
NADH・TR，200×：②B群，1）多発性筋炎，［左］myolysisと血管問質へのリンパ球浸潤，［右］血管炎型：HE，40×；③C群，1）ALS，NADH・TR，100×；④C群，2）WH，

（
D

②

③

④

NADH・TR，100×；G）C群，3）Duchenne型筋ジストロ⑤⑥

フィー，trichrome変法，100×；（①C群，5）筋緊張性ジス
ト ロフィ ー，NADH・TR，100×：⑦C群，6）rimmed
vacuole型distalmyopathy，trichrome変法，［左］100×，⑦㊥［右］400×：⑧D群，1）Kugelberg−Welander病，HE，
100×．

−51一

体とする細月包浸潤・膠原線維増生などの全部また（WHの場合と類似）などが更に特徴的である．

は一部），および②筋線維病変（myolysisを主体

5）筋緊張性ジストロフィー：筋原性変化を背景とし，再生現象を含む）の要素につき，それぞれのとし，中心核（とくに鎖状核），筋翰核増加，筋原

程度に関する評価が可能である．

線維走行異常，ring fiber，SarCOplasmic mass，

2）sarcoidosis：非乾酪性で，giant cellを含む
類上皮肉芽塵の証明．部位によってはリンパ球浸typeI atrophy等を特徴とする．
6）rimmed vacuole型distal myopathy：多数

潤のみを認めることもあり，また筋束外，末梢神のrimmedvacuoleが存在し，それが筋小乗ごと経（排腹神経生検）に証明されることもある．

に出現率の差を示し，typeI fiberに好発する．

3）悪性腫瘍細胞の筋束内浸潤（lymphosar−
Comatosisの場合など，一見多発性筋炎様所見を呈し得るが，個々の細胞の病理学的同定により鑑別可能である．

背景病態としては筋原性変化のみならず神経原性変化も混在する．下月支遠位筋に特徴的にある．
7）Kearns−Sayre症候群：筋線維大小不同を背景に多数の典型的なraggedredfiberが認められ

C群：近縁病型との卓監別が問題となることはあ

る．時にtypeII（a，b）atrophy，typeIIb

るが，ほぼ単独に強く疑える場合（盲検診断上概deficiencyなどを認める．
D群：特徴的所見が指摘され得るが，尚鑑別をして90％以上の特異性をもつと考えられる）．
1）ALS（連続する概念としての成人・散発型の充分要するもの．

狭義のSPMAを含む）：小角化線維小群集の多1）Kugelberg−Welander病，Kennedy−Alter−

発，萎縮線経のミトコンドリア酵素活性の濃縮現象，非萎縮線経の月巴大・横断面円形化・中心核，Sung病：神経原性変化のうち，大群集萎縮・極度
萎縮線経の散在群集（pyknoticnuclearclumpを

fiber type sameness propertyを主体とする含む），小角化線経の散在等（いわゆる前根・末梢（fibertypegrouping，targetfiberの出現等も観神経障害型の所見）が主体であり，小角化線維小察はされ得るが極めて稀）．

群集の多発（前角細胞障害型の所見）には比較的

2）WH：大群集萎縮，筋線維微細構築とくにintermyOfibrillar networkにおける胎生期特性の一部遺残（日の粗い太い構造），fibertypeの分別異常（未分化性，および一部再生現象の可能性あり），その他中心核，問質の月旨肪織浸潤等を特徴とする．

な肥大線経，Splitfiber，multipleinternalnucleiも特徴的であり，時にfiber type groupingが認められる．
2）Charcot−Marie−Tooth病：遠性型筋萎縮・3）Duchenne型筋ジストロフィー：筋ジストロ
フィー一般の特徴に加え，と乏しい．また筋原性変化の混在も明らかで，mOtOr
unit内病態局在の多様性を示している．また著明く末梢神経障害の特徴を有するものの，筋病変自体に問質（en・は，一般のneuropathyの場合よりむしろKugel−

domysium・perimysium・epimysiumとも）の結

berg−Welander型に類似し，mOtOrunit内病態局在の多様性を示している．小角化線経の散在型の合組織増生，再生現象，Opaquefiber，histogram
上萎縮・正常大・肥大線経よりなる典型的なmir−rorimage（spectrum）型，時に小規模なリンパ球
浸潤，またfibertypepredominanceやfibertype
deficiency（とくに2B）を示す．

要素，fibertypegrouping（分別異常を含む），筋線維中心部病変はKugelberg−Welander病の場
合よりむしろ著明である．
3）Becker型・肢帯型・顔面屑甲上腕型・三好型

4）福山型筋ジストロフィー：Duchenne型とは各筋ジストロフィーは，筋ジストロフィー一般の共通点も多いが，筋線維径が全体として減少（年所見特異性は共診に認められるが，相互の鑑別は齢に比しても，正常大・肥大線経に乏しい），結合筋病変のみでは容易ではない．これらの諸型はと組織増生に比し脂肪浸潤がより著明であること，もに再生現象，Split fiberの出現を高率に示す．

intermyofibrillar networkの胎生期構造遺残性

Becker型ではpyknoticnuclearclumpないし極−52−

度の萎縮線経の散在・群集など一部に神経原性要考察およびまとめ素の加味が特徴として指摘される．三好型は病変

以上，我々は表題の如き検討をおこない，筋病の程度としてDuchenne型と類似し，また遠位型

変の各論的特異性に関する帰納法的な位置づけを

筋萎縮を示してはいるがrimmedvacuoleは認めおこない，若干の知見を得た．

られない．

1）諸種神経筋疾患1340例の筋病変を，確定診断

4）polyneuropathies，multiplemononeuritis：と対比して，病変の特異性に関するgrading（A

小角化線椎の散在，進展とともに一部群集を示し，〜E）を示した．その臨床的意義として，（∋筋線経target（targetoid）fiber，fiber typegrouping，の大小関係pattern等より，mOtOrunit内病態主fibertype分別異常（re−innervationの過程），そ座の局在，（診筋線維構築異常より筋自体に現われの他筋線維中心部病変の種々相（central dens

た直接的間接的な病態の推定，（診筋fibertype異常より，denervation，re−innervationの問題や

area，Central clear areaなど）も観察される．
5）Guillain−Barr6症候群：基本的に神経原性

fiber type別代謝異常，神経因子の関与，発生・変化を示すが，その主体は極度の萎縮線経の散発達に関する因子の検討，④再生現象，（9炎症所

在・群集（pyknotic nuclear clumpを含む），筋見，（8その他を指摘した．

小束ごとの平均直径の差，萎縮・正骨大・肥大線
維群間のなだらかな移行性である（前根障害型の

2）そのgrading中，A・B群は一般に特異性が認知されているが，本報告ではとくにC・D群に含め特徴の一部）．小角化線維小群集の多発の型や大群た諸疾患を中心に，その特異的所見の実用性と臨集萎縮の型は殆どみられない．また筋線維横断面

床的意義を「結果」記載中に含めた．また，E・F群

円形化中心核，筋線経の浮腫状膨化，endomysiumに関しても，今後の病因・病態に資し得る所見が〜perimysiumの浮腫二扶関大を示す．小角化線経含まれているが，とくにF群については，他の既の散在の型，fibertypegrouping，fibertype分存の疾患における筋病変との類縁性の解析により，別異常，target（targetoid）fiber，他の筋線維中心

その群の諸疾患の多系統病態の解明に貢献し得る部病変もしばしば認められる．

ものと考えられる．

E群：筋病変の特徴は指摘されてはいるが，そ文の特異性が個別診断上高くないもの．
1）諸種内分泌性ミオパテ一，2）重症筋無力症，

1）Dubowits，V．and

献
Brooke，M．H．：

3）周期性四月支麻痔，4）その他，があげられるが，biopsy：A

自験例既報告，一般文献報告例の如くであるため

London，Philadelphia，Tronto，1973．

modem

apprOaCh

Muscle，Saunders，

2）宇尾野公義，木下眞男： 筋病理アトラス ．医内訳根接は省略する．
F群：神経筋病態の加味（移行性・類縁性の問

学書院，1972．
3）田辺 等：アトラス「神経筋疾患の臨床」．脳と題を含む）．
1）種々の脊髄小脳変性症，家族性痙性対麻痔な神経，26：6，138，274，406，518，630，746，

ど，2）Parkinson症候群・他の錐体外路疾患，3）854，950，1046，1146，1974：27：6，130，

Shy−Drager症候群，4）ultisystematrophy，進行

250，1975．

性核上性麻痺，5）Fisher症候群，6）その他に於け

4）田辺 等：筋生検．綜合臨床，24：845，1975．

る神経筋病態などがあげられるが，これらには，

5）田辺 等：筋生検． 神経学 第2巻，沖中重雄
監，南江堂，1976，p，369．

各疾患自体の筋病変の特徴が存在するというよりも，むしろ，上記各群の一部の病態（とくに変性疾

6）田辺 等：筋生検による神経筋疾患の診断．￣内患における）が加味されている．その類縁性の解科セミナー，PNl，神経学的診断法 織田敏次

析の上で筋病変の特徴づけが重要である．

他・編，永井書店，1979，p．261．
7）a．松原四郎：慢性脊髄性筋萎縮症の臨床病理−53−

学的研究．金沢大十全医学会雉誌，90：676

Neuropathol．（Berl，），61：43−51，1983．
8）Matsubara，S．and Tanabe，H．：Hereditary−695，1981．

b．Matsubara，S．and Tanabe，H．：A

distalmyopathywithfilamentousinclusions．

Clinicopathological study of chronic

ActaNeurol．Scandinav．，65：363−368，1982．

hereditary motor neuropathy．Actaー54−4）−（2）Emery−Dreifuss型筋ジストロフィーの1例
田

⁝⁝

道 郎
太

孝新

井 花

松 立

⁝ ⁚ ⁝

信 治 彦

雅 英徳

■

●

■

潟 崎 取

■

●

内磯名

●

■

進祥也

雅 正

島 田 端

小 井河

研究協力者

辺

はじめに

頃より著しい脊柱変形のために，独立歩行不能とEmery−Dreifuss型筋ジストロフィー症は，なり歩行器を作製した．昭和59年1月，再精査希望で虎の門病院へ入院となった。

1979年のRowlandら1）の報告以来，最近再度注目されている．しかし，rigidspinesyndromeとの入院時現症：一般身体所見．身長計測不能．体
重35kg．血圧130／70mmHg．脈拍60／分．その他，
心，肺，腹部に異常を認めない．

異同など種々の問題点が指摘されている．今回，我々は本症の一孤発例を経験したので報告する．
症

神経学的所見（図1）：1）前頚部，屑甲上腕下腿に強い筋萎縮と筋力低下．2）頚部はほぼ最大伸展位に国定しており，脊柱の前屈制限と肘関節の屈例

患者：19歳，男性．
主訴：筋萎縮，筋力低下の再精査目的．
家族歴：神経筋疾患なし．近親婚なし．
既往歴：特記すべきことなし．
現病歴：妊娠・分娩経過には異常なし．1歳頃，斜頚と言われたが詳細は不明である．処女歩行は1歳2ヶ月で正常であった．3歳頃より歩行時の易転倒傾向が出現し，4歳時には某医大を受診し進行性筋ジストロフィー症と診断された．6歳頃

曲拘縮および足関節の尖足拘編を認めた．3）深部
腱反射はATRは保たれていたが、他は消失．
検査所見：CK360mIU／ml（MM96MB4％；
正常100以下），ALPlO．7K．A．U．（肝±骨2＋；
正常2．8−8．4）．胸部Ⅹ線上はCTR54％と心肥大を示し，通常の心電図ではSinus arrytlmia，
PAC，PVC，を認めた．そこで，ホルター心電図を施行したところ，上記所見に加え，AV dis＿には頭が後方へひかれる感じが出現した．11歳時に国立療養所西多賀病院を受診．上肢近位筋の筋萎縮と筋力低下，及び異状屑甲を認めたが下肢の筋萎縮は明らかではなかった．また，頚部前屈不能で，肘と足関節の拘縞を認めた．検査所見ではSOCiation．at光rrant COnduction．PAT with

blokなどの所見を得た．心エコーでは僧帽弁前尖の軽度逸脱を認めるのみで，大概正常であった．
肺機能では肺活量1．93g（48％）と拘束性障害を示したが血液ガス上は正常．

CK130（正常値0−19）で筋生検（前歴骨筋）は筋原性変化であった．胸部Ⅹ線上CTRは44％であったが，心電図所見は不明であった．以上の所見より非定型的な筋ジストロフィーと診断された．
その後，ほとんど症状は変化しなかったが，18歳

筋電図では，図2に示すように筋萎縮の強い部に一致して軽度筋原性変化を認めた．末梢神経伝導速度は正常であった
筋組織学的，組織化学的所見：筋生検は上腕二頭筋，傍脊柱筋で施行した．その後にアキレス腱
延長術時に俳腹筋を，頚椎変形矯正術時に頃舌筋＊東京都立神経病院（前・虎の門病院神経内科）＊＊虎の門病院神経内科＊＊＊虎の門病院整形外科＊＊＊＊国立療養所西多賀病院神経内科

をそれぞれ検索する機会を得た．なお，本症例はこの2回の整形外科的手術で著明な日常生活動作の改善をみている．採取された筋はただちに凍結−55−

図1 患者全身像．特異な筋萎縮と関節拘縞を示す．

され連続切片を作製，hematoxylin and eosin（HE），mOdified Gomori trichrome，PAS，Azan，NADH−TR，SDH，aldolase，M．bi。e。Sb酬 桐山抽山満潮phosphorylase，ATP（routine，pH4．6，4・2），などの染色を行なった．
上腕二頭筋（図3−a，b）では，筋線経の大小不

M佃S酬

ヰ叶硯中仙

同，円形化，endomysiumとperimysiumの拡大
およびfibrosisを認め，組織化学的にはtypel
fiber atrophyを認めた．
傍脊柱筋（図3−C，d）では，予想に反し変化は

噂rome血Sサ叶サ枠中

軽度で大小不同像の他myolysisやfibersplittingを認めた．なお組織化学的にはtypel predomi−nanceを示していた．

M・tib舶∂血か 車刷膵腹筋では筋線経の比較的保たれている線維束の他に図4−aに示すように，脂肪変性ringfiber，

図2」佃sarcoplasmicmassC7）ような所見を認める部が混10m父C在していたが，fiber typeの異常はあまり目立たなかった（図4−b）．

筋電図．萎縮の強い筋に一致して軽度筋原性変化を認める．

頗舌筋（図4−C，d）は，4筋のなかで変化が一
番強く，著明な大小不同，中心核，Opaque fiber，
phagocytosis，問質の拡大などを示していたが，上−56−

図3 筋生検像a）上腕二頭筋．HE染色×40b）同．ATPase活性像（pHlO．2）
C）傍脊柱筋．HE染色×100d）同．ATPase活性像（pH9．4）

腕二頭筋とは異なり逆にtype2fiberatrophyを

頚部，肘部の拘縞が早期より認められ，③筋萎縮示していた．

の分布が肩甲・上腕・下腿の分布をとり，（彰進行

以上を要約すると，4筋の筋生検像は質的にはは緩徐で，⑤心電図上洞機能不全が疑われること

同一で筋原性変化が主体でありその程度が異なる

よりEmery−Dreifuss型筋ジストロフィーと診断した．

と言えた．また図5に4筋のhistogramを示す
が，全ての筋においてtypel，type2共に小径化本症は，EmeryとDreifussによる報告2）によりがみられたが，特に上腕二頭筋ではtypel atro−

その存在と特殊性が明確にされ，以後同様の症例

phyを，傍脊柱筋ではtypel predominanceを，が蓄積されている．1979年Rowlandらは，上記のまた陽青筋ではtype2fiberatrophyを，それぞ本例でもみられた5つの点を強調し，Emery

れ認めfibertypeの異常は一定していなかった．
電顕は上腕二頭筋と傍脊柱筋で施行したが軽度

Dreifuss muscular dystrophyと呼ぶことを提案している．

筋原線経の粗繋化と筋細胞膜下の軽度のミトコン

本邦例で，この5項目を満足する症例の報告は，ドリアの集合がみられるのみであった．

Emery−Dreifuss型筋ジストロフィーとして報告

考1aratrophy with cardiomyopathyとして報告さされた3例3）4）5）の他に，Scapuloperonealmuscu−案

本症例は，①孤発例ではあるが男性であり，（診れた4家系9人6）〜9）がみられる．これらの例での

−57−

図4

筋生検像
a）膵腹筋．HE染色×100b）同．ATPase活性像（pHlO．7）
C）晩舌筋．HE染色不100d）同． ATPase活性像（pHlO．3）

筋電図，筋生検所見は本例と栗山ら5）の例を除い

床的特徴より本症をとらえる立場をとっている．

ては，全て神経原性変化もしくは神経原性と筋原

本症は，心伝導異常を伴い突然死をきたすとい性変化の混在のいずれかの所見である．すなわち，

う点において臨床的に非常に重要であるが，rigid

本邦例筋原性変化とされた本症は少ない．

Spinesyndromeとの異同も含め，今後十分な症例の蓄積と検討が必要と思われた．

組織化学的には，Hoplcinsら10），荒木ら4）は，
typel fiberatrophyを，Rowlandら1）はtype2
Bdeficiencyと報告しているがMawatariら6）と

ま

と

め

栗山ら9）はtypelとtype2は同等の萎縮をみた

Emery−Dreifuss型筋ジストロフィーの19歳孤としている．本例では先に述べたように各筋で発例を報告した．計4筋の筋組織学的及び組織化

fibertypeの異常は異なり，本疾患におけるfiber

学的検討を加えた．4筋共に筋原性変化が主体でtypeの異常は本質的なものではないと思われた．

あったが，fiber typeの異常は上腕二頭∴筋では

解剖例では1982年に工藤ら3）が脊髄の詳細な検typel atrophy，傍脊柱筋ではtypel predomi−

討を行ない前角細胞の脱落，gliosisなどを認めたと報告しているが，1974年のTakahashiら7）の例

nance，蹟舌筋ではtype2atrophyと一定しなかでは脊髄に異常を認めず筋原性変化が主体であるとしている．Rowlandら1）や古川11）は，古典的な神経原性，筋原性の立場にとらわれず，一つの臨−58−った．筋病理と本症の位置づけを中心に考察を加えた．

Neurol．Neurosurg．Psychiatry．29：338−342，

HLSTOGRAM

1966．

3）工藤英昭ら：Emery−Dreifuss型筋萎縮症（性染色体劣性遺伝，心筋症を伴う屑甲下腿型筋萎縮症）における脊髄病変．脳と発達，14：363−
369，1982．

4）荒木淑郎ら：Emery−Dreifuss muscular
dystrophyの一例．厚生省「神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研究，三好班，昭和57年度研究報告書，
1983，pp97−102．

5）栗山勝ら：EmeryrDreifuss型筋萎縮症の1家系．神経内科，20：61−63，1984．
6）Mawatari，S．＆Katayama，K．：Scapuloper−
onealmuscularatrophywithcardiopathy．An
Xlinked recessive trait．Arch．Neurol．，28：
55−59，1973．

7）Takahashi，K．，et al：Scapuloneuroneal
dystrophyassociatedwithneurogenicchange・

J．Neurol．Sci．．23：575−583，1974．
20

図5

40

8）早原敏之ら：脊柱可動性低下と心電図異常をDIAMETER（u）40

伴う神経原性屑甲下腿型筋萎縮症の1例．神経内科，1：545−551，1974．

Histogram．全ての筋において，typel，type2共に小径化をみるが，上腕二頭筋ではtypel atrophyを，傍脊柱筋ではtypel predominanceを，隕舌筋ではtype2 atrophyをそれぞれ示した．

9）栗山勝ら：関節拘絹と心障害を伴った屑甲下腿型筋萎縮症の1例．臨床神経，17：575−581，
1977．

10）Hopkins，L．C．，etal：Emery−Dreifusshumero−
neuroneal musculardystroply：anXlinked

文献myopathy with

1）Rowland，L．P．，etal：Emery−Dreifussmuscu・
lar dystrophy．Ann．Neuro1．，5：111−117，

unusual contracturer andbrady−Cardia．Ann．Neuro1．，10：230−237，
1981．

11）古川哲雄：伴性遺伝性筋ジストロフィー．星和

1979．

2）EmeryA．E．H＆DreifussF．E．：Unusualtype
of benign X−linked muscular dystrophy・J・−59−

書店，東京，1983，pp70−75．

5）−（1）特異な先天性ミオパチーの1例
木 下 美 男■研究協力者

藤 岡 俊 樹● 山 田 信 輿■ 馬 場 繁 二＊
仁

科

牧

子■

松

尾

宣

武川

沖

永

明日

低下及び深部腱反射の低下，筋力低下が著明．運は じ め に先天性ミオパテーの中には，Centralcore病や動失調，知覚障害，筋強直症，筋線維束性れん縮

Myotubular myopathyなどの，筋線維中心部に認めず．関節拘縮なし．助詞を使用した3語文をのみに，異常な組織学的所見を有するものがあり，

話し理解力は良好であり，精神発達は正常．

これらの他にも疾患特異性はないが，Target

検査所見：血清CPK13IU／L．Aldolasel．6

fiber，Targetoid fiberのような変化も知られて

IU，他の一般，生化学的検査は異常なし．脳波，

いる．我々は，上記のような所見とはいずれとも眼底，異常なし．髄液は細胞1／3，蛋白9mg／dl，糖異なった変化を筋線維中心部に有する症例を経験

61mg／dlと著変なく，骨髄像では，泡沫細胞はみし，若干の示唆を得たので報告した．

られず，直腸粘膜生検異常なし．筋電図では，四肢近位筋優位にSmallamplitudeshortduration症

例のmyogenic patternがみられPeroneal nerve

4歳．女児
主訴：全身筋緊張低下

MCVは54．5m／Sであった．骨レントゲンは，骨盤の低形成，トルコ鞍の拡大傾向がみられ，肋骨の家族歴：両親双方のいとこに1人ずつ，LCCあり．神経筋疾患は認めず．血族結婚なし．
既往歴：生後3カ月検診でLCCを指摘され，Riemenbiigel整復をうけるが整復されず，8カ月時に全麻下で関節形成術をうけている．
現病歴：出生時より全身の筋緊張低下に気づか

椎骨附着部周辺が不整で細少化し，第1，第2腰れていた．走頸5カ月，独りすわり12カ月，つかまり立ちは2歳4カ月，独り立ちは2歳8カ月，独り歩きは3歳頃にそれぞれ可能となっている．その後も運動発達は，徐々に進歩しているが，全身の筋緊張低下と運動発達のおくれは明らかだったた
め，筋疾患を疑われて当科受診した．出生時から性を欠く部分がみられ，連続切片ではこの病変は体重増加不良もみとめられていたが，3歳時には，
体重は12．6kg，身長は90．5cmと，標準範囲内にCatch upした．
入院時現症：独り歩きは10m，独り立ちは10分程度可能である．顔貌は異常なく，全身の筋緊張＊東邦大学医学部第日内科＊＊東京都立清瀬小児病院

椎の椎体前後径が短縮傾向にあった．
大腿四頭筋生検：ATPase染色では，すべてがTypeI線経であり（図1，2）横断面では，筋線経の大小不同とEndomysiumの結合組織増加が著明であった．そして個々の筋線維中心に酵素活
筋線経の全長にわたって存在するのではなく正常な筋組織内に巣状に分布していた（図3）．筋線維径の分布も筋原性パターンであり平均直径は24．93±8．03ノJmであった．電顕では，筋線維中心部に明瞭な基底膜と細胞膜により囲まれる線維芽細胞様の，問質由来と思われる細胞が一個存在しその周囲には，わずかに膠原線経も有季していた（図4）．その周囲は筋線経の基底膜，細胞膜が明瞭にとりかこんでおり，一部にDense zoneと細胞膜の陥入イ象がみとめられた．そして，筋線雄中心の，問質と，筋線維周囲のEndomysiumの問質が，一部で連絡している像もみられた．

−60−

図1 大腿四頭筋生検（横断面）
ATPase染色pH9．4

図3 大腿四頭筋生検（横断面）
NADH染色図2 大腿四頭筋生検（横断面）
ATPase染色pH4．3

考

図4 大腿四頭筋生検 電顕像×3，500

接筋原線経が証明されることにより，Myotubular

今回，我々は，筋緊張低下を主症状として光顕及び琶昆削こより，筋線維中心部にのみ異常を見出myopathyは，筋線維ヰ心部に中心核を有し，これが筋線経の長軸方向に連続することにより，またされた症例を経験し，報告した．本症例は，生下Targetfiber，Targetoidfiberは神経原性変化で時より発症した筋力低下，筋緊張低下等の症状が認められ，特徴的な2層又は3層の構造を有する

非進行性であり，組織学的にTypeI線経の優位ことから，それぞれ，本例とは異なるものと考えを示したことから，COngenitalmyopathyの一型と考えられた．

現在病変が活動性を有していることを思わせる所

光顕では，筋線経の中心部に病変がみとめられ，見はなく，症状も非進行性であること等から，以連続切片による観察で，その病変は筋線経の全長前に生じた何らかのSubfiberfocalnecrosisからに連続して分布しない点が特徴的である．従来よの再生過程において，周囲からの問質組織が陥入り，筋線経の中心部に異常をきたす疾患として，した結果と考えられる．これはÅstr6mらも報告

Centralcore病，Myotubularmyopathy，Target

しているように従来より知られているが比較的稀

fiber，Targetoidfiberが知られているが，Central
core病では酵素活性が欠損するCoreの部分にはである．また，この陥大した問質と筋線経との間られる．また電星頁的所見は，筋原線経の破壊等，で，筋腱接合部様の構造がみられるが，生検部位−61−

が筋膜であること，及び連続切片上で正常の線経があらわれることから，正常の筋腱接合部とは異なるものと考えられる．いままでに報告された問造もみられ，今後の筋病理学的検索に際して注意すべき所見と思われた．

質の筋線維中心部への陥入例において，このよう文

献な所見のみられた例は見当らず，本例において特

1）木下真男，川崎研一：Myotubular（Centronu・

異的な何らかの機構が存在することを思わせるもClear）myopathy．神経進歩，20：48−58，のである．筋線維再生の中途での過誤である可能1976．

性もあるが，一方で，筋そのものの発生異常によ2）Kinoshita，M．，and Cadman，T．E．：

る可能性も充分に考えられる．必ずしも疾患特異

Myotubularmyopathy．Arch．Neuro1．，18：265

性を持つ変化とはかぎらないが，今後，先天性ミオパテーの筋組織を検討するうえで，注意すべき
所見と思われる．

−271，1968．

3）Satoyoshi，E．，andKinoshita，M．：Acasewith
muscle fiberswithcentral abnormalities：A
Variant of myotubular myopathy．Clinical

ま

と

め

Studiesin Myology：140−146．1971．（Amst．）

1）筋緊張低下を主症状とし，光顕及び電顕によ4）Walton，J．，：Disorder of Voluntary muscle．

り，筋線推中心部に異常をきたした一例を報告した．

5）Åstr6m，K．E．，Adams，R．D：Thepathologic

2）筋線維中心部に斑状に点在する病巣は問質由

reactions of skeletal muscle fibre．In

来の組織により成り立ち，Endomysiumの問質

HandbookofClinicalNeurology．：Diseaseofとの間で，連絡がみられた．

Muscle，Eds S．P．Ringel＆3）以前生じた何らかの形のSubfocalな筋破壊に対する反応と思われたが，筋腱接合部様の構−62−

4th ed．（ChurchillLivingstone）

H．L Klawans．

（American EIsevier：New York）

5）−（2）筋緊張性ジストロフィー症のカルシウム
代謝異常に問する研究
木 下 其 男＊研究協力者

大 島 久 二■ 斉 藤 栄 造■ 勝 島 聡一郎＊

カルシウムは，筋収縮のメカニズムに関連したシウムとして総量1gを経口負荷した．その後2時

重要な電解質成分である．一方，筋緊張性ジスト

間尿を2回連続採取した．又各採尿の中間点で採ロフィー症に，種々の内分泌代謝異常の合併する血した．腸管からのカルシウム吸収の指標として，ことが報告されており，さらにhyperostosis等のカルシウム負荷3時間後の血清カルシウム値の前骨病変の存在することも知られている．しかし，値からの増加量，及びカルシウム負荷2−4時間

本疾患におけるカルシウム代謝の異常の有無につ後の尿中カルシウム排泄の前値からの増加量を求いて詳細に検討した成績はほとんどない．今回

め，各々CalcemicResponse，CalciuricResponse

我々は，筋緊張性ジストロフィー症患者に経口カとした．副甲状腺ホルモンの生物学的活性としてルシウム負荷試験を行い，本疾患におけるカルシ

すぐれた指標とされる腎原性サイクリックAMP

ウム代謝及び＼カルシウム代謝調節に重要である副（cAMP）は，Broadusl）らの方法に準じ糸球体濾

甲状腺機能の異常の有無を明らかにすることを目過量で補正し，血清カルシウム値はPayne3）らの的とした．

方法を用い血清アルブミン値で補正した．又副甲状腺ホルモン（iPTH）はC末端のRadioim−

対象

muno Assayで測定した．

筋緊張性ジストロフィー症患者（以下MDと略す）3例を対象とした．男性1例，女性2例であ成り，平均年齢は38歳であった．対照として，筋萎績

縮性側索硬化症患者（以下ALSと略す）1例（男1）カルシウム負荷前の検査所見
カルシウム負荷前の各2回の血液及び尿の検査性，年齢46歳），正常人3例（全例男性，平均年齢

所見の平均値を図1に示した．血清カルシウム値

30歳）について検討した．なおMDのうち1例，は，正常人で9．37±0．12mg／dl（Mean±SD），

ALS例は長期間臥床例であった．

ALSでは10．35mg／dlであった．MDでは10．42±0．49mg／dlと正常人に比べ高い傾向を方認め，うち1例では11．1mg／dlと正常域を越え

法

Broadusl）らの方法を一部改変した鈴木2）の方高値であった．血清リン値は，ALSで4．3mg／dl

法により行った．検査前3日間はカルシウム700と正常上限であったが，MDでは1例で2．5mg／

mg，リン1200mg，NaC15gの一定食とした．一晩dlと低値であった．空腹時尿中カルシウム排壮量

禁食後，朝7時30分に19ゲージ異状針を留置し，は，正常人では0．11±0．02mg／100mlGFであっ

8時より1時間尿を連続2回採取した．午前10時

たが，ALSでは0．335mg／100mlGFと高値であに乳酸カルシウム6．2g（Ca800mg）と一定食った．MDでは1例は正常であったが，他の2例（Ca200mg，IP200mg，NaCll g）を投与し，カルで各々0．301，0．179mg／100mlGFと高値を示した．一方iPTHは正常人で1．7±0．10ng／ml，＊東邦大学医学部第四内科

ALSで0．7ng／ml，MDで0．36±0．20ng／mlで一63−

ControI H．D．

ControI M．D．

ControI M．D．

図2

ControI M．D．

経口カルシウム負荷後のCalcemic
Response及びCalciuric Response
O正常人■A．L．S．
●M．D．

斜線：鈴木2）の正常域⁚﹂ご∈001＼lO∈∪0﹂ご∈001＼ひ∈

図1

LU︻E00︻＼一〇∈∪10ControI M．D．

Controt M．D．

空腹時（カルシウム負荷前）の検査所
見
○正常人

2
11
0
Hours After Hours After
Oral Cakium Load Oral Calciul¶Load■A．LS．

図3●M．D．

斜線：本院正常域又は鈴木2）の正常域あり，全例正常域であった．副甲状腺ホルモンの経口カルシウム負荷後の腎原性CAMP（n−CAMP）及びiPTHの変化
○正常人
●M．D．

斜線：正常域

生物活性の指標とされる腎原性cAMP値については，MDl例で13．3nmole／100mlGFと著明な

mlGFと高値を示した．

高値を示した以外，正常域にあった．

カルシウム1g負荷後の副甲状腺機能の抑制に

2）カルシウム負荷後の検査所見

ついて図3に示した．カルシウム負荷4時間後，カルシウム1g経口負荷後のCalcemic

腎原性cAMP値は，正常人2例でそれぞれ58％，

Responseは，正常人では0．82±0．25mg／dlであ29％と良好な抑制を認めた．MDでは1例で腎原った．ALSでは0．25mg／dlと正常域であった性cAMPは，負荷後42％に減少したが，他の2例（図2）．これに対してMDでは1．28±0．06mg／

では109％，79％と抑制は不十分であった．iPTH

dlであり，仝例正常域を越えて高値であった．

については，MD2例でカルシウム負荷後抑制は

CalciuricResponseは，ALSでは正常域であった

不十分であった．

が，MDでは3例中2例で0．475，0．441mg／100−64−

表1に，各個人別に経口カルシウム負荷試験に

表1

経口カルシウム負荷試験の成績
AfterOralCa Load帥nary Cale帥ic Cak血c Res onseof％TRP CalcilmiPTH n・eAMP Re印0nSe R印叩nSe n・CAMPoriPTH

Case sCa dP
Myoto鵬cDyShO帥y

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−

−

−

T

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l

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一

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一

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一

一

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一

一

6

5

A．LS．
Normals

↓

丁

↑

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Contr01

†

一

▲

2

一

1

一

一
一

一

md n．d．

−

n．d．

n．d：nOt done

おける成績を示した．MDのCaselは，血清カル

カルシウム値は比較的高く，尿中カルシウム排泄

シウム値高イ直，血清無機リン値低値，％TRPは低量も高値であり，不用性骨萎縮の場合の検査成績値，尿中カルシウム排泄量は増加していた．さらと一致していることより4），高カルシウム血症及に腎原性cAMPは高値を示し，腸管カルシウム吸び高カルシウム尿症は現段階では必ずしもMD収の指標であるCalcemic Response，Calciuricに特異的な異常所見とはいえないものと考えられ

Responseは高値，血清カルシウム値の上昇に伴た．しかし副甲状腺ホルモンの生物活性のよい指

うiPTH及び腎原性cAMPの抑制は低下してい標とされている腎原性cAMPがMDで1例高値た．なお本例では手術は未施行であるが，非侵襲を示したことは，基礎倍においてもMDに特異的的検査では副甲状腺塵の存在は明らかでなかった．

な副甲状腺機能の異常の存在する可能性もあり，MD3例全例でCalcemic Responseは高値であり，カルシウム負荷後の腎原性cAMP又はiPTH

今後の検討が必要であろう．

の抑制が低下していた．一方ALSでは％TRPはて，カルシウム同位元素を用いたカルシウムバラ

腸管からのカルシウム吸収を検索する手段とし低下し，尿中カルシウム排泄は高値を示したが，ンスStudy5）があるが，手技が煩雑であった．

他の検査所見には異常を認めなかった．なお，

Broadusl）らは，経口的にカルシウムを負荷し，血Case3ではカルシウム負荷後の検査所見のみ異清カルシウム及び尿中カルシウム排泄の変化を観常を認めた．正常人では全例各種検査所見は正常

察し，腸管からのカルシウム吸収のよい指標であることを報告している．さらにこれらは，血清1，

域にあった．

25（OH）2ビタミンD値とよく相関することも知考按られている2）．MDでは3例全例カルシウム負荷

カルシウム・リン制限食後の空腹時の検査所見

後の血清カルシウム値の上昇，すなわちCalcemic

は，腸管からのカルシウム吸収に影響されないもResponseが高値であった．さらにCalciuricのと考えられている1）．今回の検討では，MDで空腹時血清カルシウム値，及び尿中カルシウム排泄

Responseも3例中2例で高値であった．したがって，MDでは腸管からのカルシウム吸収が冗進量が多い傾向を認めた．したがって．MDでは骨していることが示唆された．ALSではCalcemic

吸収が多くそれによる高カルシウム血症の結果，Response，CalciuricResponseは正常範囲内であ高カルシウム尿症を呈していることが示唆された．

り，MDにおけるカルシウム吸収の冗進は，単なしかし，長期間臥床しているALS患者でも血清る不用性骨萎縮に伴うものではなく，MDに特異−65−

的である可能性が示された．又，これまでに腸管と考えられた．さらにMDのCase3ではカルシからのカルシウム吸収は1，25（OH）2ビタミンD

ウム負荷後にのみ異常所見を認め，MDにおけるとよく相関することが知られている．MDにおけカルシウム代謝異常の検討には，基礎値のみならるビタミンD代謝産物に関する検討はこれまでず負荷試験等を含めた詳細な検索が重要であると十分でなく，腸管からのカルシウム吸収とビタミ考えられた．

ンD代謝産物との関連について，今後詳細に検討されるべき点と考えられる．

ま

と

め

カルシウム負荷後の副甲状腺機能の抑制は，副甲状腺機能冗進症患者において低下していること

その結果カルシウム負荷時の腸管からのカルシウ

MD3例に経口カルシウム負荷試験を施行した．

が報告され，カルシウムによる副甲状腺機能のム吸収が増加し，血i青カルシウムの上昇に伴う副Regulationの状態を知る上で重要な指標と考え

甲状腺機能の抑制が低下していた．したがって，られている．MDでは，カルシウム負荷後3例全

MDでは副甲状腺機能を含めたカルシウム代謝異

例で，血i青副甲状腺ホルモンあるいは腎原性常の存在することが示唆された．

CAMPのどちらかの抑制が不十分であり，カルシ
ウムによる副甲状腺機能のRegulationに異常のある可能性が示された．

文

献1）BroadusA．E．，MahaffeyJ．EりBartterF．C．，and

以上の成績より，MDでは骨からのカルシウム

Heer R．M．：Nephrogenous cyclic adenosineの遊触及び腸管からのカルシウム吸収の両者が増

monophosphateasaparathyroidfunctiontest．

加していることが示唆された．実際の骨において
これら両者のバランスが保たれているのか否かは，

J．Clin．Invest．60：771，1977．
2）鈴木康夫：糖質コルナコイド誘発骨組薯碁症の発今回の検討では明らかでなかった．しかし，MDに症機序並びに治療に関する研究おける骨のhyperostosisの成因についていまだ

59：919，1983．

その詳細は不明であり6），腸管からのカルシウム
吸収の増加は，このhyperostosisの成因を考える．，
上で興味深い成績と考えられた．
MDのCaselについては，諸検査の成績は原
発性副甲状腺機能冗進症のそれと類似していた．

日内分泌会誌，

3）Payne R．B．，Little A．J．，Williams R．B．，andMilnerJ．R．：InterpretationofserumCalcium碗

inpatientswithabnormalserumprOteins．Br．

Med．J．4：643，1973．
4）藤田拓男：骨粗寺基症．鉱質病．南江堂，東京，

実際にMDと副甲状腺艦あるいは過形成の合併

1980．

も近年報告されている7）．本例では非侵襲的検索

5）Avioli L．Ⅴ．：A new oralisotopic test ofのかぎり，明らかな副甲状腺腫瘍の存在は見出せCalcium absorption．J．Clin．Invest．44：128，なかった．手術は未施行であり，小腺腫あるいは1965．

過形成を完全には否定できないが，他のMD

2例6）IscherwoodI．and Mawdsley C．：Familial

でも同様のカルシウム代謝異常を認めたことより，

aspects of radiologic changein dystrophia

単なる原発性副甲状腺機能冗進症の合併でなく，myotonica．Acta Radiologica．1：110，1963．

MDではそれと類似した病態の存在する可能性が

7）原田俊一，井原康夫，池田恭治，松本俊夫，尾考えられる．しかし今回，対象患者は3例であり，

形悦郎：筋緊張性ジストロフィー症における原MDにおけるカルシウム代謝異常の詳細な検索に

発性副甲状腺機能冗進症の合併日内分泌会誌，

は，さらに症例数を増やして検討する必要がある

60：1059，1984．

−66−

6）Oculopharyngealmuscular diptrophyの筋病変−rimmed vacuole型distal myopathyとの比較検討
中 西 孝 雄■
研究協力者

は

じ

水

め

澤

英

洋書

内

藤

金

澤

一

郎・

あった．脳神経領域では両側の眼瞼下垂を認め，眼球運動も全方向（上方＞左方＞右方＞下方）に制限されていた．しかし，複視はほとんど訴えなに

Oculopharyngeal muscular dystrophy（OPMD：Victorら，1962年）は，1973年のDub−
OWitzの報告以来，筋線経にrimmed vacuole

かった．瞳孔，眼底は正常であった．眼輪筋，口輪筋，側頸筋，嘆筋に軽度の筋力低下と筋萎縮がありミオパテー顔貌を呈していた．鼻声の目立つ
構音障害と囁下障害があり，咽頭反射の低下とわずかな舌の萎縮を認めた．頸部では胸鎖乳突筋，（RV）を伴うミオバナーとして知られている．しかし，本邦ではOPMDの報告はまれでその筋障
害についてはまだ充分検討されていない．我々は，OPMDの1例を検索しRV型distal myopathy（DM）との比重交検討を行った．
症

覚書

僧帽筋も軽度に障害されていた．四肢では，上肢（近位4＋，遠位5￣），下肢（近位4￣，遠位5−）ともわずかに左側優位に筋力低下，筋萎縮を認めたがGowers徴候はなかった．ミオトニアや筋線維束攣縞を認めず，屈筋と伸筋の差も明らかではな
かった．深部反射は全般的に低下しており，病的反射は認めなかった．感覚系，協調運動および自律神経系には異常はなかった．

例

患者：H．M．41歳，男性（筑大神内119099−9）
主訴：腰部・両下肢の筋力低下，両側眼瞼下垂，
喋下困難，構音障害．
家族歴：父と息子に軽い眼瞭下垂とCKの軽度上昇を，娘にはCKの軽度上昇のみを認めた．2
名の同胞（弟と妹）は未検である．
既往歴：31歳のとき胃潰瘍にて内服治療を受けた．

検査所見：血液；WBC8300／mm3，RBC
335×104／mm3，HblO．6g／dl，Ht30．3％，Plat．
240，000／mm3，Creatinel．4mg／dl，CreatinineO．4

現病歴：25歳ころ鼻声と顔面の表情に乏しいことに気づかれ，31歳のとき眼瞼下垂と眼球運動制限も指摘された．39歳ころから腰が重く下肢がはる感じを覚え，100m位歩行すると疲れのため休

mg／dl，CK174−305mU／ml（正常5〜50），

息を要するようになった．約半年前から，手摺な
しでは階段を昇ることが困難となってきたため当科入院となった．

PSP，Fishberg試験は正常であったが，経静脈腎LDH333〜419U（正常50〜400），その他の生化学検査，前腕阻血下運動負荷試験，甲状腺機能，副腎機能は全て正常であった．尿；潜血（＋），
孟造影にて重複腎蓋，重複尿管を認めた．胸部Ⅹ線，心電図，髄液，脳波，脳CTは全て正常であ

入院時現症：身長165cm，体重41．5kg，血圧108／68mmHg，脈拍75／分（整）で，一般理学的所見には特に異常を認めなかった．

性パターンを認めた．骨格筋CT：殿部では小殿

神経学的所見：意識清明で精神・知能は正常でした．大腿では，内転筋，二頭筋が低吸収値を示

った．筋電図；顔面，頸部，四肢近位部にて筋原
筋，中殿筋よりも大殿筋の方がより低吸収値を示したが，大腿四頭筋はほとんど正常で薄筋もよく＊筑波大学臨床医学系神経内科

保たれていた．大腿では前肢骨筋，膵骨筋に比べ−67−

後腰骨筋，ひらめ筋が低吸収値であったが，俳腹筋はむしろよく保たれていた．
筋生検（左大腿四頭筋）：肥大した大径線経と萎縮した小径線推により著明な大小不同を呈した．
小径線経は非常に小さな（tiny）線経を多く含み，
ときに小角化状であり，少数ではあるが集族する傾向を認めた．萎縮線経にはときにRVを認め，
タイプ2線経にもあったがタイプ1線経に多く存在した．Pyknotic nuclear clumpがかなり見られ，中心核，fiber splittingも散見された．酸化酵素の染色では，ときに濃染する萎縮線経と筋鞘

図3

膜下にわずかに濃染する線経を認めたが，虫喰い

ミエリン様小体やさまざまの崩壊産物を含むautophagic vacuoleを認める．
それに按する筋原線経は比較的よく保像などの顕著なintermyofibrillar networkの乱

たれている（スケールは5J′）．

れはなかった．Raggedredfiberも認められなかった．ATPase染色ではタイプ1線推11％，タイ
プ2A線維67％，タイプ2B線維21％，タイプ2
C線維1％とタイプ2A線維優位を認めたが，明らかなtypegroupingはなかった．問質の線練化
は，萎縮線経が集族した所ではやや目立ったが全体的には軽度であった（図1）．
電顔では，RVに対応してミエリン様小体や線
維状構造物などさまざまの崩壊産物を含むauto−
phagicvacuoleを認めたが，核内封入体は見られなかった（図3）．ときどき筋鞘膜下に大きなミトコンドリアが集貨していたが，各々の構造の異常

図4は明らかではなかった．ただし，一ヶ所でのみ結結晶様封入体をもつ異常ミトコンドリ
ア（スケールは1JJ）．

晶様封入体を有する異常ミトコンドリアが認めら

図5
図1 著明な大小不同，ノ」、角化線経，rimmed
vacuole，pyknoticnuclearclump，中心核，fibersplittingなどを認める（HE染色，スケールは100ノ∠）．

−68一

生検筋々内神経．左の2本の軸索はSchwann細胞を欠いている．右の軸索は，部分的に数層の髄鞘を残すのみであり，Schwann細胞も変性し基底膜の重複が見られる（スケールは1JJ）．

れた（図4）．筋内神経線経には，髄鞘の崩壊，以上のことより，OPMDとRV型DMとは遺

Schwann細胞を欠いた軸索，Schwann細胞の変伝様式や筋障害の分布が全く異なる別々の疾患で性・基底膜の重複などさまざまな変性所見が見らはあるが，筋組織像については，進行の度合，被れた（図5）．

検筋の種類により多少の違いはあるものの，その本質的な所見はよく似ていると思われる．これは考察

筋電図所見についても同様で，両者とも筋原性パ

本例は，発症年齢は若いが優性遺伝を示す家族

ターンが主であるが神経原性パターンを認めるこ歴，特徴的な筋障害分布およびRVを伴う筋生検とも少なくないことが知られている．したがって，所見からOPMDと考えられる．本例で示された

このよようにOPMDの筋組織像の特徴は，RVに加え小rimmed vacuolar myopathyあるいはrimmed

角化線経やpyknotic nuclear clumpなどの一見

vacuolar diseaseと呼ぶことができる．

神経障害を思わせる所見である．この所見は，図2に示すように本邦に多いいわゆるRV型DM

このrimmed vacuolar myopathyの特徴のひとつである神経障害を思わせる所見の発現機序にの筋組織所見とよく似ている．ここで注意しなけ

ついてはまだよくわかっていない．本例では明らうな筋病変を呈する病態をまとめてればならないのは，被検筋の種類により所見が異かな筋内神経の変性が認められており，筋線経のなるということである．図2は典型的なRV型変性が比較的軽いことから，神経障害は二次的なDMの筋生検所見であるが，RVが多く

ミオパテ

ものというより一次的病変の可能性の方が大きい．

一様の変化の明らかな下腿筋に比べ，あまり侵さ

OPMDではこれまでに6剖検例が報告されておれていない大腿筋では大小不同，ごくわずかの小り，5例までは神経系に異常はなかったとされて角化線維およびRVを認めるのみである．同様にいる．しかし，最近Probstらは計測などにより詳

OPMDでも外眼筋や咽頭筋など障害の強い筋で細に検討し軽度ではあるが確実にdistal

は，筋線経の変性と問質の結合織の増生が著しく

axonopathyを認め，中枢でも運動ニューロンの数は保たれていたが変性所見があったと報告して前述の特徴が明らかでないため，単にphicと記載されている場合が多い．

dystro−いる．また，SchmittとKrauseは，OPMDに近縁な疾患として知られるoculopharyngodistal
myopathyの一剖検例にて運動ニューロンの変性を認めている．本邦では立石らにより，17歳ころ
四肢近位部の筋力低下，筋萎縮で発症，のち構音障害，喋下障害も伴い30歳で呼吸不全のため死亡したrimmed vacuolar myopathyと考えられる男子の一剖検例が報告されている．この例でも，それのみでは筋病変を説明することは困難であるとされた軽度の運動ニューロンの減少と変性があり，さらに神経細胞核にも筋鞘核に見られたものと同様の直細管状の封入体が認められている．

図2

Rimmed vacuole型distalmyopathyの筋生検所見．左の大腿四頭筋では大小不同のほか小角化線経，rimmed
VaCuOleを散見する程度であるが，右の前月至骨筋では筋線経の円形化，問質の増生などミオバナー様変化が進行している（HE染色，スケールは100／J）．

したがって，筋組織像，筋電図所見および∵剖検
所見を考えあわせると，rimmed vacuolar

myopathyの主体はミオバナーであるが，通常の意味の運動ニューロン疾患やニューロパテーではないごく軽度の神経系の障害をも伴っているという可能性が高い．
−69一2）Dubowitz，Ⅴ，＆
まとBrooke，M．H．：Muscle

biopsy．AmodemapprOaCh．W．B．Saunders，め

1．0culopharyngealmuscular dystrophyとLondon，1973，p．231−241．
3）Schmitt，H．P．＆Krause，K．H．：An autopsy

考えられる41歳男性例を報告した．
2．筋組織像は，rimmed vacuoleのほか小角Studyofafamilialoculophalyngealmuscular

化線経など一見神経障害を思わせる所見であり，

dystrophy（OPMD）with distal spread andrimmedvacuole型distalmyopathyとよく似て

neurogenicinvoIvement．Muscle Nerve，4：いた．

296−306，1981．

3．これらの病態はrimmed vacuolar4）Little，B．W．＆Perl，D．P．：Oculopharymgeal

myopathyとまとめて呼ぶことができる．その主

musculardystrophy．Anautopsiedcasefrom

体はミオバナーであるが，軽度ながら神経障害も

theFrench−Canadiankindred．J．Neurol．Sci．，

伴っていると思われる．

53：145−158，1982．

5）Probst，A．，Tackmann，W．，Stoeckli，H．R．et
文

献al．：Evidence for a chronic axonalatrophy

1）Rebeiz，JJ．，Caulfield，J．B．＆Adams，R．D．：

inoculopharyngeal

muscular

dustrophy．

ActaNeuropathol．（Berl．），57：209−216，1982．

Oculopharyngealdystrophy．A presenescent6）Tateishi，J．Nagara，H．，Ohta，M．et al．：

myopathy．A clinico−patholoic study・Ⅰn

Progressinneur0−0phthalmology（editedby

Intranuclearinclusionsin muscle，nerVOuSBrunette，J．R．＆tissue，andadrenalgland．ActaNeuropathol．

Barbeau，A．），Excerpta

Medica，Amsterdam，1969，Vol．2，p．12−31．

（Berl．），63：24−32，1984．

ー70−

7）−（1）Duchenne型筋ジストロフィー症の
脳NMR画像の分析
納
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明 登昭

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田 元 形

岡藤井

研究協力者

slice面は横断面，矢状面，冠状面を自由に得る事にDuchennemusculardystrophy（DMD）に於てが出来，横断面のSlice−lineはOM−1ineに平行は，知能障害などの中枢神経障害が指摘されていで，Slice幅は10mmである．猶，T．像で得られる

るが，Ⅹ線CT像では確定的な異常はみられていない．さて最近，NMR−CTがⅩ線CTで＼見出し

Tl値は1data5×5pixell（約4mm2）のTl値の平均値で，そのSDは殆んどが10％以下と再現得ない異常を検出し得る場合が知られており，性の高いものである．又，今回の収集matrixは全

我々もmitochondrialmyopathyなどのミオバナ
ーでNMR画像の異常を見出している．これまて128×128で施行し，SR像及びTl像のTrはで，我々の知る限りでは，DMDの脳のNMR画像

msec，Tdは300msecで統一した．

1000msec，Tdは200msec，IR像のTrは1000の検索はなされておらず，本研究はその異常の有結無を明らかにする事を目的として行なった．

果

写真1は上段が10歳男子の正常者代表例の対象と使用機器
症例4歳から10歳までの7例のDMDと7歳から14歳までの正常者7例（男4例，女3例）の頭部

NMR−CT像で，下段は8歳男子DMD代表例のNMR−CT像である．画像の種類は左端からSR像，Tl像，IR像である．
画像上DMDの全ての症例で，プロトン密度信

NMR−CT像について比較検討した．
検索に使用したNMR−CTは力旦Mark−JNMR

号強度，Tl値には特に異常は認められておらず，−CTで静磁場強度0．1Tesla（常伝導），共鳴周波表1に示してある様に脳内各部位のTl値の比較

数は4．5MHz，収集データ数は128×128matrix，

も正常者群と有意差は認められていない．

又は256×256matrixでspin warp法を用いて飽考

和回復像（SaturationRecovery像，SR像），反按

筋ジストロフィー症の頭部Ⅹ線CTの所見と復回転像（InversionRecovery像，IR像）及びTl
計算画像（Tl像）の3種類の画像を得る事が出来して，先天性筋ジストロフィー症で皮質性萎縮やる．パルス系列は180。Td90型90。によりSR像，Tl

脳室の拡大，自質のびまん性の低吸収場がみられ像を得，180．1p90。によりIR像を得ている．繰り返し時間Trは100msecから500msec（可変），待前頭葉の萎縮と間脳の萎縮などの報告4）5）が散見

ち時間Tdは50msecから600msec（可変）である．

るという報告1）2）3）や筋緊張性ジストロフィー症でされるが，DMDのⅩ線CT上の知見は少なく，
報告3）6）では脳萎縮が認められるとされている．

＊鹿児島大学医学部＊＊藤元病院＊＊＊国立療養所南九州病院

今回我々はNMR−CTがⅩ線CTと異なり，プ
ロトン密度，緩和時間，血流分布要素など，それ
一71−

写真1

表1
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8

2

2

5

6

2

4

3

2

4 ．0

3

0 ．9

1

4

9

1

4

3

5 ．5

1

1 ．8

1

1

4

1 0

8

6

2

8

4

2

9

9

N o r ■a i
l1
S
舞

r）
鶴

N

． S

M：平均

．

0

N ． S ．

SD：攫攣亀差

0
N

． S ．

N．S．：有量産なし

−72−

8

1 8 ．885

1 5 ．1
N

． S ．

N ． S

．

から得られる情報が多く，又，それらの情報には

昭和53年度研究成果報告書，1979，pp232−

露と 乙扇形での組織の生化学的側面を含蓄している234．

点に注目し検索を行なったわけである．更にこれ

4）大井長和，井村裕夫ら：筋緊張性ジストロフィ

までの筋ジストロフィー症のNMR−CTの報告

ー症の脳のCT−SCAN所見の検討．筋ジスト

は殆んどが，筋自体及び赤血球を対象としたもの

ロフィー症の病因に関する臨床的研究（三好で7）8），臨床的に頭部の検索をした報告は我々が調班）昭和55年度研究報告書，1981，pp72−75．

べた限りではなく，今回，本研究の結果画像上及5）小島進，田辺等ら：筋緊張性ジストロフィー症

びTlイ直の検索でも脳内の異常は認められなかっにおける脳CT・脳波・WAISを中心とした臨床たことは，極めて重要な意義をもつものといえよ的研究．筋ジストロフィー症の発症機序に関すう．

る臨床的研究（三好姓）昭和57年度研究報告書，
1983，pplO3−106．

文6）岡元宏，安武敏明ら：筋ジストロフィー症の献

CT像および髄液蛋白について．筋ジストロフ

1）丸山博，福山幸夫ら：先天型進行性筋ジストロ
フィー症の中枢神経異常に関する神経放射学的ィー症の臨床病態および疫学的研究（祖父江検討．筋ジストロフィー症の病因の究明に関す珪）昭和55年度研究成果報告書，1981，pp183−

る研究（沖中姓）昭和51年度研究報告書，1977，

189．

7）Ashley DL，GoldsteinJH：Invitro eryth−ppl16−118．

2）向山昌邦，祖父江逸郎ら：福山型先天性筋ジス

rocytewatertransportinDuchennemuscular

トロフィー症のCT像と脳剖検所見．筋ジスト

dystrophy：an NMRinvestigation．Neur−

ロフィー症の病因の究明に関する研究（枠中01ogy33：p1206−1209，1983・

班）昭和52年度研究報告書，1978，pp227−230．

8）Newman RJ，Bore PJ，et al：Nuclear3）西谷裕，板垣秦子ら：先天型筋ジストロフィー

magneticresonancestudiesofforearmmuscle症の中枢神経系障害について．筋ジストロフィ

in Ducuenne dystrophy．Br MedJー症の臨床病態および疫学的研究（祖父江班）

plO72−1074，1982．

−73−

284：

7）−（2）Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の骨格筋の超音波， Ⅹ線−CT，NMR（MRI）画像に問する研究， ならびにそのcarrier de＿tectionへの応用

＊

＊

＊

♯

彦郎章
＊

四
明 登 康

田 元 瀬

岡 藤 音

研究協力者

祐＝

山

元

国

光＝

彦＊

福

永

秀

敏＊＝

弘＊

Ⅰ）DMDならびにCarrier骨格筋のMagnetic（常伝導），共鳴周波数は4．5MHz，収集データ

Resonancelmaging（MIR）によるSPin−

一致は256×256matrixでTl像を得，これか

lattice reJaxation（Tl）tjmeの検討

らl datalOXlOpixell（約16mm2）のChangら（1981）1）はnuclear magnetic

Tltimeの平均値とSDを得た．尚，Tltime測定の際にカーソルはm．vastuslat．を中心とresonance（NMR）spectroscopyでdystro−

した部位におき，その左右の平均値をその個

phy chickenのpectralis muscleにおける

人の大腿四頭筋のTltimeとした．

Water prOtOnのSpin−lattice relaxation〔結果〕図1に示すような明瞭なTl像が32（Tl）timeとspin−Spin relaxation（T2）

名全員から得られた．正常対照男児，正常対

timeが有意に上昇していることを見由して照女性ならびにcarrierの全員に於てTl像いる．しかし，DMD患者の骨格筋におけるでは視覚上の明らかな差異を認めなかったが，DMD息児に於ては視覚上の明らかな異常がTl或いはT2timeに関する報告はこれまで
全く なされていない．最近，magnetic
resonanceimaging（MRI）により非侵襲的認められた．すなわち，9歳以下の比較的若にTltimeの測定が可能となったので，我々の増加を認め，10歳以上の比較的高年齢のはDMD患者ならびにcarrierの骨格筋で，DMD2名では骨格筋部でdensityのpatchy
な減少を認めた．このことは，Tltime実測値

はじめてのTltimeの検索を行った．
〔方法〕4−14歳のDMD患児8名，6−14
歳の正常対照男児8名，9−37歳のpossible
或いはdefinitecarrier女性8名二ならびに8〜38歳の正常対照女性8名の計32名を対象に，い年齢のDMD6名では骨格筋部でdensity

でも図2に示すように同様の結果が得られた．
すなわち，正常対照男児の大腿四頭筋のTltimeは，9歳以下の比較的若年群（5名）
で244〜279（平均±SD：268．4±15．2）msec

左右両側大腿四頭筋中央部横断面のTl計測であり，10歳以上の比較的高年齢群（3名）で画像（T．像）を得た．使用した機種は旭257−288（平均±SD：268．7±16．9）msecとMark−JNMR−CTで，静磁場強度0．1Tesla

年齢による差は認められなかった．ところが，
DMD患者では年齢による差が著明であり，＊鹿児島大学医学部＊＊藤元病院＊＊＊国立療養所南九州病院

9歳以下の6例仝例でTltimeは310〜326（平均±SD：313．2±8．3）msecと9歳以下
ー74−

図1

両側大腿出頭筋中央部横断面におけるTl像．上段が正常対照8 歳男子（F．K．），中段がDMD 6 歳患児（U．S．），下段がDMD10歳患児（S．T．）
MNがカーソル内のT．timeの平均値を示し，SDはその標準偏差を示す．左右のMN値の平均値をその個人の大腿四頭筋のTltimeとして使用した．

図2

有意の上昇（P＜0．005）を示した．これに反比較的若年DMD群，比較的高年齢
DMD群carrier群，ならびにそれぞれの群に対するnormal control群における大腿四頭筋T．time（T．value）．
単位はmsec．

し10歳以上のDMDに於てはTltimeは219と228msecと2例ともに10歳以上の正常対は，9歳以下の比較的若い年齢のDMDの骨

照のTltimeの範囲を下回って，有意の減少

格筋でTl値の有意の上昇をみたことはどの（P＜0．002）を示した．carrier女性8名のTltimeは262−289（平均±SD；277±9．6）

様に説明すべきであろうか．可能性としては，
DMD骨格筋では組織の自由水の増加が何ら

msecで正常対照女性8名のTltimeのかの原因で起こっているのか，又は，骨格筋

262−290（274．8±9．9）msecに比し有意の蛋白のCOmpOSition又はconformation
stateの変化が存在しているのかをあげるこの正常対照のT．timeの範囲を越えており，差を認めなかった．しかし，definitecarrierの3名のTltimeは284±6．2msecで正常対とが出来るが1），いずれにしても，この様なTl

照女性8名とわずかに有意差（0．1＜P＜0．2）

値の有意の上昇がむしろ病初期の息児グルーを認めた．

プに認められたということは，本疾患のpri−〔考案〕正常対照の皮下脂肪のTl値の平均

maryな病態の反映である可能性を残すだけ

は約170msecと筋肉のTl値に比らべかなりに重要な結果と考える．また，definitecarrier

低値をとることを考えると，10歳以上の進行群が対照女性群に比しわずかとはいえ有意差したDMD患児の骨格筋のT．1値が有意の低を認めたことも同じ意味で重要かもしれない．

下を示したことは，筋肉組織の脂肪変性の結

なお，Carrier detectionには，現時点では
MRIは明らかな有用性を見出すには至らな果として理解することも可能と思われる．で
−75−

かった．

41〜67（53．4±7．3）で，正常対照女性群の49〜65（57．8±4．8）に比しわずかながら有意II）DMDならびにCarrier骨格筋のX線−
CTにJ：るCT値の検討

照の範匪はり低値をとった1例は，血清CK

4−14歳DMD息児6例，6−14歳正常対レベルが正常なpossible carrierであった点，注目に値する．

の減少傾向（0．1＜P＜0．2）を認めた．正常対照男児6例，9〜37歳carrier女性7例，ならびに8〜38歳正常対照女性9例の計28名を対象に，休部Ⅹ線CTにて大腿四頭筋中央部のⅠⅠⅠ）超音波画像によるDMDならびにCar
rierの骨格筋の検討

横断像を得て，m，VaStuSlat．を中心とする部位のCT値の各人の左右の平均値を算出し，筋病変の検索に超音波をはじめて導入したプロットしたものが図3である．正常対照男のはHeckmattら（1980）2）であるが，これが児のCT値は55〜60（58±1．7）と狭い範囲に

DMDのcarrierdetectionに極めて有用であ存在していたが，DMD息児のそれは，仝例でるとのRottら（1982）3）の報告以来，これに32−49（40．2±8．4）と低値を示し，有意の減対する賛否の論争がLancet誌上で展開され

少（P＜0．005）を示した．また，Carrier群はているト7）．我々は，これに関する追試を行うと同時に，主成分分析による客観的得点表示
による分析を試みた．
〔方法〕4〜14歳のDMD息児8名，6〜14歳の正常対照男児5名，9−37歳のCarrier女
性10名，ならびに8〜38歳の正常対照女性9名の計32名を対象にして，右大腿四頭筋中央部の臨断面の超音波画像を得た．使用した機
種は1inear電子操作型超音波診断装置（ALOKA256）で，周波数3．5MHz，gain5，
撮影1．5×など全ての条件を一定にして白黒
ポラロイドフイルムに撮影記録を行った．
〔結果〕図4左図に示すように，正常対照に於ては表面より皮下組織，大腿四頭筋，筋膜，
大腿四頭筋，そして大腿骨が明瞭に観察された．これらのecogenicityの強さは大腿骨＞筋耳莫＞皮下組織＞大腿四頭筋の順であった．
これに対し，DMD息児の場合，いずれも，1）
大腿四頭筋のecogenicityの増加（Q），2）大腿骨のecogenicityの低下（B），3）Fasciaの不鮮明化（F），ならびに4）画面全体の反射像の繊細化（S）の傾向が明確に認められた．
これら数量化表示するためにそれぞれ4段階

匡13に分けて表示した．すなわちQ，B，FはそのDMD群，Carrier群，ならびにそれぞれの群に対する正常対照群における大腿四頭筋CT値．

ecogenicityが最もつよいものを4点とし，極めて弱いものを1点とし，その中間を2段階
ー76−主成分分析

図4 大腿四頭筋中央部横断面の超音波画イ象．
左図は正常対照11歳男子（H．H．）のもので，皮下組織，四頭筋，筋膜，四頭筋，そして大腿骨が観察される．右図はDMD10歳男子（S．T，）のもので，四頭筋のecogenicityの増加と大腿骨のecogenicityの低下，fascia像の不明瞭化，ならびに画面全体の繊細化がみられる．
図5に分けてそれぞれ3点と2点をつけた．Sに超音波画像の主成分分析による各群の因子得点．

関しては，繊細化のもっともつよいものを4点とし，正常を1点とし，その中間を2段階たものと考える．しかしながら，pOSSibleにわけそれぞれ3点，2点とした．これらのcarrierの中で明らかな異常を示した2例の配点は，blindにするために，予備知識をもた

うち，1例は血清CK値が正常であり，やはない第3着にやってもらった．Q／B，F，ならり超音波もcarrier detectionではそれなり

びにSの3つのパラメーターは互いに強いの有用性があるといえる．

相関が認められたため，三つのパラメーター
をまとめて一つのベクトルとして主成分とし文献て抽出した．その主成分に対して各症例毎に1）ChangDC，MisraLK，BeallPT，Fanguy

因子得点を算出し，各群ごとにプロットする

RC，Hazlewood CF．Nuclear magneticと図5の様になり，DMD息児は仝例正の得

resonancestudyofmusclewaterprotons

点となり正常対照男子は全例負の得点となっinmusculardystrophyofchickens．JCell

た．正常対照女性で1例だけ正の得点を示し
た．carrierの中で2例が対照女性より高い得

PhysiollO7：139r145，1981．
2）HeckmattJZ，Dubowitz V，Leeman S．

点を示したが，このうちの1例の血清CK値

Detection of pathologiCalは正常で＼あった．

dystrophic muscle with B−SCan〔考案〕我々の結果から考えると，DMDのultrasoundimaging．Lanceti：1289，1980．

carrierdetectionにおける役割は，Rottらの

3）Rott HD，Mulz D．Muskeldystrophie

主張する程には有用ではない．Rottらは充分

Duchenne：Konduktorinnenerfassung

な正常対照をとらず，また条件設定も厳密で

mit Ultraschall．Dtsch Med WschrlO7：

はないために，我々のデーターとやや差が出

1678−1681，1982．

一77−

changein4）Rott HD，SantellaniM，R6dlW，Nebel

6）RottHD，SantellaniM，BreimesserFH．

G・Duchenne MuscularDystrophy：car−Duchennemusculardystrophy‥rier detection by ultrasound anddetection by ultrasound and computer・

COmputerized tomography．Lancetii：

ized

1199，1983．

tomography

carrier

Lanceti＝111，1984．

7）SteinbickerV，VOnRohdenL，KrebsP，

5）HeckmattJZ，DubowitzV．Detectingthe

Szibor R．Duchenne muscular

Duchenne carrier by ultrasound anddystrophy：carrier detection by

COmputerized tomography．Lancetii：

ultrasound．Lanceti：1463，1984．

1364，1983．

一78−7）−（3）DucIlenne型筋ジストロフィー症の臨床細胞
遺伝学的研究

納
研究協力着

岸

邦

福

永

和…
秀

光 弘＊
古

敏…

諸
言
Duchenne型筋ジストロフィー症（DMD）はⅩ

庄
井

形

敏
昭

行＝

佐

野

雄

二＊

弘＊

ロフィー症患者7名を選んだ．患者の概略を表1に示す．

染色体連関の身性遺伝病であるがその発症機序は対照：24〜36歳の健康男子3名を対照とした．細明らかではない．一般に遺伝性疾患の原因は遺伝子の変異によると考えられているが，染色体の構胞の培養および固定：牛胎児血清を10％，フイト
へマグルチニンを 2％含む合成培養液

造異常を有する症例も報告されており，それらのRPMI1640に末梢血を5〜10容量％混合し，370C

場合，患者は光学顕微鏡で検出しうる染色体の転座や欠矢を有している．DMD患者においても，女で72時間培養した．培養終了の2時間前に臭化エ子患者の一部にⅩ染色体一常染色体相互転座例が前にコルセミド（最終濃度：0．05／Jg／ml）を加え見出されており1）・2），他に染色体構造異常に由来する症例の存在が予想されているが未だ発見されてた．培養終了後0．075M塩化カリウム溶液で20−25分間低張処理した後，カルノア液（メタノ

いない2）．DMD患者の中に相互転座以外の染色体

ール：酢酸＝3：1）で固定した．蒸気乾燥法に構造異常を有する症例が存在するか否かは興味あより染色体標本を作成した．

る問題である．

分染方法：スライドグラス上の染色体標本を約30チジウム（最終濃度：5〜7．5J g／ml）を，1時間

近年，染色体高精度分染技術の進歩3）により，染％の過酸化水素水溶液で5〜10分処理したのち蒸

色体異常の検出をより詳細に行なうことができる

留水で洗浄した．乾燥後0．25％トリプシン溶液でようになった．そこで本研究では，DMD患者の中

7〜12秒処理し，牛血清を含むハンクス液でトリに染色体の構造異常を有する症例が検出できるか

プシン作用を停止したのち，5％ギムザ液

否かを検討するため，患者のⅩ染色体の高精度分（pH6．4）で10分間染色した．
分染像の解析：高精度分染像の解析に用いる分裂染パターンを正常男子のものと比較した．ヒト遺伝子地図作成の国際会議4）において，DMDの遺表l Clinicalfeatures of DMD patients

伝子座がⅩ染色体短腕p21と決定されているの

examined．

で，本研究ではp21近傍に特に着目して分染像の検討を行なった．

喝e

法＊鹿児島大学医学部第三内科＊＊杏林大学保健学部疫学教室＊＊＊国立療養所南九州病院

軋 Vh L K m∵n V
K ︻L T⁚℃∴ん ︻L Y方

患者：8歳〜12歳の男子のDuchenne型筋ジスト

肌byUe血Is許ades

前期又は前中期の染色体は，伸展の度合に細胞間の変異があり，そのため分染像も細胞ごとに若干の差異がある．従って1細胞のみでの判定では必
ずしも正確な染色体診断はできない．そこで1名につき2個以上の高精度分染像を示すⅩ染色体を観察し，それらの分染像をISCN（1981）5）の標
準分染像と比較して染色体異常の有無を判定した．
T．F．

K．N．

K Al

結果および考察
正常対照のⅩ染色体の高精度分染像を図1に，DMD患者のⅩ染色体の高精度分染像を図2お図2

Highresolutionbandingpatternsof
XchromosomesfromDMDpatients．
Diagram on theleft sideis a

よび図3に示す．図1−3にはISCN（1981）によSChematic presentation of X

る標準分染像をあわせて示した．半数体染色体あChromosome fromISCN（1981）．

．
︳ミ：＝−

ミ▲言：亨・⁝■■■〜■睾

ヽ義たり2本以上のⅩ染色体について，Ⅹ染色体短腕W

p21近傍に着目して分染像を詳細に検討したとこ

一﹁︳︳−−山．■−一い■■ u h

で若干の差異がみられることがあるので，1人あ瑚−−響︑−■義・1000バンドと考えられる．高精度分染像は細胞間−りも多く，半数体染色体あたりに換算すると約〜徽〜︼轟像のバンド数は，ISCN（1981）の約850バンドよ竜嘗琶蓄熱厨評たりの標準分染像のバンド数は，左より約400，約
550および約850である．今回得られた高精度分染ろ，正常対照とDMD患者の間に差異は認められなかった．
一般に遺伝性疾患の原因として，変異遺伝子にKK TY．

A．N，

よる場合と染色体異常による場合が考えられてい図3Ilighresolutionbandingpatterns of
XchromosomesfromDMDpatients．
Diagram on theleft sideis aSChematic presentation of X
Chromosome fromISCN（1981）．
㌫裏鑓鮫ごるので，DMD患者においても染色体異常を有す

駁撃

る症例が存在する可能性があり，この点を高精度分染法を用いて検討したが発見できなかった．
文1）Lindenbaum，R・H．，Clarke，G．，patel，C．，
Moncrieff，ane Hughes，J．T．：Muscular

COl●lい0！
図1

献日igh rcsolution bandingpatterns of
X chr（）mOSOmeS from normal conL

dystr

OphyinanⅩ；1translocation female

SuggeStS that Duchennelocusis on X

trok Diagram on theleft sideis aSChematic presentation of X

Chromosome

Chromosome fromISCN（1981）．

short389−392，1979．

−80−

arm．J．Med．Genet．16二Acad．55：15−18，1979．

2）Jacobs，P．A．．Hunt，P．A．，Mayer，M．andBart，R．D．：Duchenne muscular dystrphy（DMD）

4）Report of the committee on the genetic

in a female with an X／autosome transloca−

constitution of the X and Y chromosome，tion：Further evidence that the DMDlocus

Cytogenet．CellGenet・37：176−204，1984・

isatXp21．Am．J．HumanGenet．33：513r518，

5）AnInternational system for Human CytoT

geneticNomenclature−HighResolutionBand−

1981．

3）IKeuchi，T．andSasakiM．：Accumulationofing（1981），Cytogenet．CellGenet・31：1−32，
1981．

early mitotic cellsin ethidium bromide−
treatedhumanlymphocytecultures．proc．Jpn．

一81−8）Duchenne型筋ジストロフィー症における交感神経機能異常について−心電図所見から−
馬 渡 志 郎＊
研究協力者

丸

山

福

岡

義

徹＝

藤

野

武

彦■＊

輔＝

塚

本

浩

介＊

は じ め にDuchenne型筋ジストロフィー症（DMD）は骨格筋だけでなく心筋の変性を釆たすことは良く知−JrrJrr｝〔−J′・rll

られており，したがって種々の心電図異常が報告されている．しかしながら，DMDの心電図におけるT波異常に関する報告は少なく，特にT波

notched｛へ⊥／＼JuへⅥについての報告はまだ見ない．私共はこのDMDにおけるnotchedT波について検討した．
対象と方法⊥∧Jハ⊥／LJ／しⅥ

対象は8歳から21歳までのDMD患者30名と，

ll

正常な同年齢層の男子500名（8歳〜22歳）であっ
た．DMD患者は明らかな心不全や呼吸器感染症のある者，及び心血管作動薬を服用している者は除いた．正常対照群においても心電図，心エコー断層法（UCG）及び胸写所見から器質的な心疾患の存在が疑われた者は除外した．
NotchedT波】．LLL．L jll11L．JJ
normalTwave

notchedTwave

図1心電図胸部誘導における，左は正常対照者の正常心電図，右はDMD患者のnotched T披（V2，V3）の例．

は標準12誘導の心電図における胸部誘導のいずれか1つ以上において，T汲下
行脚に明瞭な切痕とそれに続くnotchを有し，かつnotchの頂点は基線の上方に位置する時に陽性とした（図1）．
結果

NotchedT波は，DMD群においても対照群においても，右胸部誘導（Vl，V2，V3）に認められた．NotchedT波はDMD群では50％に，正常対

t15yo

115yo 卸

lrにidonc00f notdlOdTwavo＊国立療養所筑後病院＊＊九州大学医学部第一内科

図2

−82−

DMD群と正常対照群（control）におけるnotched T波の陽性率．

照群では20％に認められ，DMD群で有意に（P＜0．01）高率であった（図2）．しかも正常対照群におけるnotched T波陽性率は年齢の増加と共に減少したが，DMDでは年齢増加による減少傾向は認めなかった（図2）．
DMD患者におけるnotchedT汲陽性群と陰性群を比較すると，G）notchedT披陽性の心電図では，心拍数の増大傾向，及び心拍数補正のQT時間（QTc）の延長傾向が認められた（図3），（多心図3

エコー断層法によって．DMDで高頻度に認めら

DMDおよび正常対照群におけるnot−ched T波の有無と心拍数（HR）およびQT間隔（QTc）との比較．

れる左室後壁運動異常（LVPW asynergy）及び僧帽弁逸脱（MVprolapse）の頻度は，nOtChedT
波の有無で差異はなかった（図4），（診DMDの心電図の特徴的所見として従来より指摘されている
Vl誘導におけるR／S比の増大，及び心エコー
Mモード法による右心負荷の指標としての右室
径（RVD）は共に，nOtChed T波の頻度との相関は認めなかった（図5）．
考

50

察

心電図におけるnotched T波は心室における再分極（repolarization）過程の不均一化によることが明らかにされている1）．この再分極過程の不均一化をもたらす原因あるいは機構は，大きくnotclやdT normaけ

notd愴dT nOmlalT

LVPW aSynergy MV prolaPSe、図4

2つに分けられると考えられる．1つは器質的あ
るいは形態的な心臓の異常によって再分極過程に

DMDにおけるnotchedT波の有無と左室後壁運動異常（LVPW asynergy）
および僧帽弁逸脱との関係．ns＝有意差なし（p＞0．05）．

部分的遅延を釆たす場合であり，例えば心筋の虚血や肥大1〉あるいは小児の先天性心疾患などである．他の1つは心臓の交感神経系の機能異常による再分梅過程の不均一化であり2），例えば脳血管障害などである．

1．0

健康な若年男子にお．ける心電図上のnotchedT
波は，これを有する者に心拍数が多いことや，β一blockerの投与で消失することなどより，交感神

0．5

経機能の冗進によるものであることは既に指摘されている3）．
DMDにおいては，心筋の変性や胸郭の変形を有する者が多いので，心エコー断層法や心電図による器質的あるいは形態的異常を示唆するいくつかの所見とnotched T波との関連を検討したが，いずれの所見もnotched T波の有無で有意差を
−83−

J仏書S【

ndcllOdT normalT rNMT norTTdT
FNDhlUCG Ft／S8tVl
図5

DMDにおけるnotched T波と右重径（RVD）および心電図VlにおけるR／S比との関係．

認めなかった（図4，5）．一方DMDのnotchedによるものではなく，自律神経系の機能異常（交T汲陽性者では心拍数の増加傾向とQTcの延長

感神経系の機能冗進）によるものと考えられた．

傾向が認められた（図3）．心拍数は交感神経の機能冗進で増大することは周知の事実であり，QTc
も心臓交感神経の部分的あるいは相対的機能冗進

1）WatanabeY，TodaH，NishimuraM：Clinicalによって延長することは知られている4）．したがelectrocardiographicstudiesofbifidTwaves．

ってDMDの心電図におけるnotched T波の成Br．HeartJ．52：207，1984．

文

献

因は，心臓の器質的あるいは形態的変化に伴うも

2）SzentivanyiM，PaceJB，WechslerJS，Randallのというより，心臓における交感神経系の機能冗

WC：Locarized myocardial responses to

進によって心室再分極過程の不均一化を来たして

Stimulation of cardiac sympathetic nerveS．

いることによると考えられる．

Cir．Res．21：691，1967．

以前よりDMDにおいては，その病態あるいは3）Atterh6gJH，EkelundJG：Significance of

病因として自律神経系，あるいはカテコラミン代

primaryTwaveaberrationsintheelectrocar−

謝の異常を指摘する報告は少なくない5）．私共のdiogram of asymptomatic young men，ⅠⅠⅠ．

結果は，DMDの患者では心電図所見でも自律神

Systolic timeintervals and autonomic tone．

経系の機能的異常を有するものが高率に存在する

Scand．J．Clin．Lab．Invest．40：795，1980．

ことを示している．このことはDMDの病態を考4）BrowneKF，ZipesDP，HegerJJ，Prystowsky

える上で重要なことと考えられる．

EN：Influence of the autonomic nervOuS
SyStem On the Q−Tintervalin man．Am．J．

まとCardiol．50：1099，1982．

めDMD患者30名と，同性同年齢の正常対照群500

5）Rowland，LP，Layzer，RB：Ⅹrlinked reces・

名に心電図，心エコー断層法などの検査を行った．

Sive muscular dystrophy，in

心電図におけるnotchedT波は，DMDで有意にClinicalNeurology，edbyVinkenPJ，Bruyn

高率に認められた．DMDにおけるnotchedT波GW，Vo140，North−HollandPubCo．Amster−の成因として，心臓の器質的あるいは形態的変化

dam1979，p．349−414．

−84−

Handbook ofⅠⅠ．組織化学・微細形態9）−（1）凍結乾燥切片を用いた微量定量組織化学−CA一ⅠⅠⅠの筋線維レベルでの定量化の試み

田 代 邦 雄＊
研究協力者

は

じ

め

島

功

二＊＊

菊

地

誠

志＊

に

我々は，ヒト筋型炭酸脱水素酵素（CA一ⅢⅠ）の精製，特異抗体の作成およびRIA系，ELISA系の確立をし，本酵素が各種臓器中，骨格筋に特異的に多く存在し，しかも神経筋疾患患者血清中に上昇することから，新しい筋疾患のマーカーになりうることを報告してきた1）・2）．特に従来の筋疾患マーカーであるCPKが，TypeIIfiberに多く存在す
るのと比べ，CA一ⅠIIが酵素抗体法にてType I
fiberに主として存在することが証明されたことは3），種々の神経疾患のfibertype別の異常でCA−

図1

ⅠⅠⅠがCPKとは異なった動きを示すことも考えられ，神経筋疾患診断上特殊な位置を占めうること

今回の微量定量組織化学的方法に用いたfiber type groupingを示す生検筋
標本NADH−TR，×40も期待できよう．ただ，この点に関しての詳細な検討のためには，fibertype別のCA−IIIの量比のり出した（図2）．切り出し作業は，乾燥した無風

検索が重要である．今回は，この点を明らかにすの室内で全て手製の道具を用いて行った（図3）．

る目的で，凍結乾燥切片を用いた微量定量組織化

切片の重量は，Lowryのquartzfiberbalance法5）

学的方法で筋線維レベルでの定量化を試みたのでにて計測した．Calibration curveの作製には，報告する．

quinine−HCLの種々の大きさの結晶を，quartZ
fiber先端にのせ，そのたわみをマイクロメー

材料と方法

ター付きの実体塁頁微鏡で測定後，0．02N硫酸に溶

ヒト生検筋を用いNelsonらの方法4）で20JLの解してその螢光強度をHITACHI650−10Sfluor−

凍結乾燥切片を作成した．単一筋線維レベルの検

escence spectrophotometerにて測定した．この討に先だち，今回はfiber type groupingのある生検筋標本を使用した（図1）．凍結乾燥切片は偏方法での測定感度は，0．12JLg／divisionであっ

光顕微鏡下でfiber typeの分別は容易であり，した．重量測定後の切片はPBSに適宜音容解後，既fiber type groupingの部分をTypeI groupとTypeII groupが同一の大きさの切片（約10〜20に報告したマイクロプレートを囲相としてper−
0Xidaseを標識酵素とするサンドイッチELISA

個の筋線経の集団）となるよう実体顕微鏡下で切系6）にてCA−IIIを定量し，1gmdryweight当たりた．図4に，quartZ fiber balanceの模式図を示のCA−III量を求め，それよりfibertype別の量比＊北海道大学医学部脳神経外科神経内科部門＊＊国立療養所札幌南病院神経内科を求めた．切片切り出しは，計4回施行しその後の測定に供した．
ー87−

図3

切り出し作業に用いた手製の道具を示す．

図4

図2

凍結乾燥切片a．偏光顕微鏡で見た凍結乾燥切片，
fiber typeの識別が可能である．

Quartz fiberbalanceの模式図を
示す．

結

果

Fibertypegroup別の切片切り出しは，実体顕微鏡に偏光板を付けるとfibertypeの識別が出来（×200）

b．aの連続切片のNADH−TR染色，（×200）

るため10〜20個の筋線経を含む大きさで充分に可能であった．切片の重量は，平均0・7／ g（0・49−

C．切り出した凍結乾燥切片，右上がtypeI group，左下がtype IIgroupの切片を示す．（×40）1．1）であり，肉眼的に見て同一の大きさと思われたものは計量した結果もほぼ同一の重さであった．
表1にCArIIIの定量結果を示したが，Type l

表1両fibertypegroup別のCA−III含有量の比較

例

数

平均重量
（FL g）

TypeI

n＝4

fiber群
TypeII

fiber群

0．7

CA−111含有量（mg／gm．drywt，）
3．35（0．5〜1．1）
n＝4

0．7（0．5〜1．1）

1．01

fiber群は，TypeIIfiber群に比して，平均3倍以上（2．5−4．2倍）CA−ⅠⅠⅠ量が多かった．この結果
は，酵素抗体法にてのCA一ⅠⅠⅠの主たる局在がTypeIfiberであることや，Moynihan7）のrat
soleus，EDLでの生化学的データや，また，
Holmes8）のchickenskeletalmuscleでのそれとも矛盾しないと考えられた．
一88−

考

察

CA−IIIがCPKより，より鋭敏にTypeI fiber異CA−IIIは，分子量28，000とCPKに比して小さ

常を反映しうるかどうかを検討していくためには，く，骨格筋の可音容性分画に特異的に多く存在し，

CPKのfiber type別量比，骨格筋全体のfiber

しかも心筋に非常に少なく，他のⅠ型，ⅠⅠ型アイ

typeの比率，ならびに両酵素の血中逸脱の鋭敏度

ソザイムと抗原性を異にすることから筋疾患のマと血中半減期などを考慮していかなければならな

ーカー酵素として利点が多いと考えられたため，

い．いずれにせよ，CA−ⅠⅠⅠをCPKと比較検討しな

その臨床応用につき検討し報告してきた1）・2）．そのがらその臨床応用を追求していくことは価値ある

結果，CA−IIIはCPKと同程度に筋疾患の診断にことと思われる．

使用しうることが明らかとなってきた．また，CA−ⅠⅠⅠが赤筋に多いという種々の動物でのデータを考慮してヒト骨格筋，生検筋標本に酵素抗体法を

文
1）島

献

功二，田代邦雄，他：ヒト筋型carbonic

施行してみたところ実際にTypeI fiber（赤筋）

anhydraseアイに多いことが判明したので3），試みに，TypeI

radioimmunoassay（第一報）．臨床神経，23：

ソザイムⅠIl（CALIII）のfiber異常がその初期病理像とされるmyotonic

892，1983．

dystrophyの患者血清中CA−IIIをCPKと比較してみた．その結果は既に報告した如く，予備的な2）Shima，K．：Human muscle carbomic anhyd−

データではあるが，CA−IIIがCPKより，より鋭敏Chemicallocalizationin the human SkeletalにTypeI fiber異常を血中に反映する可能性を

muscle andits clinical application to the

示唆するものであった．この点に関して更に詳細

neuromusculardiseases．北海道医学雑誌，59：に吟味していくためには，fibertype別のCA−III

98，1984．

raseIII（CA−lII）−Purification，immunohisto−の量比を具体的な値として知っておくことも必要

3）Shima，K．，Tashiro，K．，et al：Carbonicと思われた．ヒト骨格筋のホモジネートをこの目

anhydraseIIIimmunohistochemicallocaliza−

的で使用することは，ヒト骨格筋がTypeI，IIfiberのモザイクをなす混合筋であることから不tionin human ske】etal muscle．Acta Neuro．

可能である．これに対して，凍結乾燥切片を用い

4）Nelson，J．S．，Tashir・0，K．：The analysis of

た微量定量組織化学的方法であれば検索可能であSkeletalmusclebyquantitativehistochemical

ると考え今回の検討の運びとなった．その結果

techniques．J．Neuropath．Exp．Neuro1．，32：

CA−IIIは，Type II fiber群に比してTypeI
fiber群に3倍強に多いことが明らかとなった．こ371，1973．

れは，酵素抗体法でのデータよりみて当然予想さ

patholリ59：237，1983．

5）Lowry，0．H．：Aquartzfiberbalance．，J．Biol．
Chemリ140：183，1941．

れたことではあった．しかし，TypeII fiber群

6）Hibi，N．，Shima，K．，etal：Developmentofaにも，CA−lIIが，1mg／gm dry weightとType

highly sensitive enzymeimmunoassay for

I fiber群に比し少ないが無視できない量存在す

SerumCarbonicanhydrase−IlI．，J．Neurol．Sci．，

ることが判明した．これは，酵素抗体法では，既65：333，1984．

存の固定法を施行してもある程度の抗原の流出が7）Moynihan，J．B．：Carbonicanhydraseactivity

避けられないため生じた差異によるものと推測さ

in mammalian skeletal and cardiac muscle．，

れた．今回のこれらのデータは検体数が少なく神Biochem．J．，168：567，1977．

経原性の異常筋を使用しており，あくまでも予備

8）Holmes，R．S．：Purification，mOlecular pro−的なものであり，今後は単一筋線維レベルでのperties and ontogeny ofcarbonic anhydrase

CA−ⅠⅠⅠの定量を行う予定である．これらに加えて，

isozymesりEur．J．Biochem．，78：511，1977．

−89−9）−（2）神経筋疾患におけるultrasoundimaging−CT所見および筋生検所見との問連について
田 代 邦 雄＊
研究協力者

松

浦

亨●

長

沼

隆

雄＊

島

功

二日

Trichrome，及びNADHTTR染色にて検討した．

は じ め に超音波画像ultrasoundimaging（以下UI）は結種々の疾患の検索に広く応用されているが，その果

神経筋疾患への応用はDubowitzら1）により試み

これらの症例について得られた画像のうち数例られているとはいえ，未だ多くの知見を得るに至を呈示する．正常大腿上方1／3の横断像（図1）でっていない．今回，我々は正常者及び神経筋疾患

は，右に示すCT像の如く各筋束はおおむね症例に於いてUIを施行し，CT及び筋生検所見と45〜60HUの均一な像として得られる．同図左はの関連を検討し，更にUIをガイドとしたneedle

この断面でイ中側より見た大腿四頭筋である．浅層

biopsyの有用性を確認したので報告する．

より皮下組織（a），大腿直筋（b），内側広筋（C），大腿骨（d）がよく同定され，音響インピーダンスギャッ

対象及び方法プの高い部分で超音波は反射散乱されるため筋膜

対象は神経筋疾患35例，正常コントロール3例
である．UIは，Sector方式が分解能の点で劣るた及び月旨肪組織の存在が明瞭に描出される．骨は高音響インピーダンスを持つため超音波の進行方向

め，リニアプローブを用いたBmode像の横断及へaCOuSticshadowを掃いた半月状の高輝度反射

び縦断により，周波数帯域は筋の描出にすぐれた像として示される．筋束内では，CTで描出されな

2．5〜5MHz，及び脂肪域の描出にすぐれた5〜10

かった筋月莫及び月旨肪組織が，横断像では点状の，MHzの帯域の双方を満足させるため5MHzを糸従断像では線状の反射として認められ，筋束全体

用いた2）・3）．焦点はcombinationmodeとし，gainのechogenesityには各筋群により軽度の差異をはおおむね45dB，neargain27dB，fargain2．5

認めた．図2は，発症より20年を経過したPMDのdBである．所見の検討は同一条件下で同一フイ

42歳女性例，大腿上部1／3の横断像である．中央に

ルム上に健常者及び症例の同一部位を同時記録す示す様にCT上は大腿四頭筋の著明な萎縮とる方法をとった．CTはシーメンス社製Somatom

heterogenousなⅩ線吸収値の低下を認め，二頭II及び日立CTW3〜40による頸部から下腿迄の10レベルの横断像を用いmean densityの計測及び形態学的変化の特徴について検討した．Nee−筋は一部モザイク状にSpareされている．同部を矢印方向から見たUIでは，皮下月旨肪の増生，筋束の萎縮，筋未聞組織の増生を示唆する散在性小点

dle biopsyには，超音波の特性によりdiffracted状反射像の増加を認める他，筋組織自体のSi邸Ialの大きい2．0mm≠4）のTravenol社Tru−

echogenesityの全体的上昇を認める．大腿骨の反Cutbiopsyneedleを用い，UIをガイドとして目射像は減弱し，aCOuStic shadowも正常例に比し的部位を採取後HE，Modified Gomori−

不鮮明である．二頭筋部で施行した生検では脂肪組織及び結合織の著明な増生を確認した．図3は，＊北海道大学医学部脳神経外科神経内科部門＊＊国立療養所札幌甫病院神経内科

6年を経過した著明な深部覚障害と軽度の筋脱力を伴い筋電図上神経原性変化を認めた32歳女性例−90−である．下腿横断像（図3A）は中段に示す如く胞を伴う遠位型ミオバナーの34歳女性例（図4）CT上mean density及び形態共に正常所見を呈では，下段に示す如く CT上特異な部位選択的及するが屈側方向（矢印）より見たUIでは，ひらめび、筋束内の虫くい状変化の所見を呈するが，大腿筋はおおむね正常像を呈するものの，排腹筋及び四頭筋部のⅩ線吸収度は60．6HUと正常で形態

後脛骨筋は散在性小点状反射の増大を示し，同部

学的にも明らかな変化を認めない．しかし，同症の開放筋生検では軽度の筋束間組織の増生と共に

例のUI所見は上段に示す如く，正常例に比し散

fibertypegroupingの所見を認めた．大腿四頭筋在性小点状反射の増大及び筋組織全体の（図3B）では，muSCle volumeの減少が明らかで，横断像の散在性小点状反射は縦断像では線状

echogenesityの上昇を示し，骨の反射は著明に減弱している．縦断像でも著明な全体的の反射として認められる．発症後4年をへた，空echogenesityの上昇を示し，CT所見との間に大−91−

図3（A，B）

きな解離を認めた．

性小点状反射像の増大と骨反射の減弱を認める．

この様な症例に対し，先に述べた如く UIガイ

矢印方向よりUIガイド下に施行したneedle

ド下にneedle biopsyを施行した．図5Aは正常

biopsyのHE像では，grOupatrOphyを伴った神大腿四頭筋でのneedle biopsyの様子を示してい

経原性変化を認めた．所謂K−W病女性例（図5

る．穿刺前の像より組織採取部位を決定し，局所C）のCT所見は，全体的な筋束の萎縮及び網の麻酔後1mm程度の小皮切を加え，UIにて筋線経

目状変化と共に軽度の筋束内虫くい状変化を認め，の走行方向を確認した上で生検針を刺入する．左UIでは散在性小点状反射の増大及び骨反射像のに示す如く，生検針の先端位置を確認した上で組減弱等の所見の他，筋組織全体のechogenesity上織採取を行うが，一度のsamplingで米粒大以上の組織採取が可能である．この例では筋膜をはさ昇の所見が認められ，同部で施行したneedle

んで採取が行われ，UI所見と標本の肉眼所見はよび中心核の増生を主体とする筋原性変化の混在すく一致することを確認した．この様な方法で実際る所見を得た．

biopsy上group atrophyを示す神経原性変化及の症例を検索した．SPMA男性例（図5B）では，
CT上筋群選択性に乏しいびまん性の筋萎縮と筋考察及び結論

未聞の拡大による網の目状変化を呈し，UI上散在CTの神経筋疾患への適用は1977年頃より報告−92−

され種々の所見を待ている．今回の我々の検討で挙げられる．即ち，（Dfastialreflexの増大，②筋も正常筋のⅩ線吸収度は諸家の報告の如く，おお束間組織の増生によると思われる散在性小点状反

むね45〜60HU内に存在し，筋束は，ほぼ均一に描射像の増加，③直下の骨反射像の減弱ないし消失，出された．神経筋疾患例では，比較的早期の段階
では筋束内の虫くい状変化の出現と，異常を呈す④筋組織自体の変化に由来すると考えられる背景る筋群の選択性が筋原性筋疾患に特徴的であり，段階では（D②は神経原性変化に，①は筋原性変化

逆に筋未聞の艶聞に伴うと思われる網の目状変化

により強く対応すると考えられた．

のechogenesityの上昇，等の所見で，特に初期のがびまん性に認められる点が神経原性筋疾患の特UIをガイドとしたneedle biopsyは，従来の徴と思われた．筋CTは，この様に深部筋の検索

blindbiopsyに比較するとsamplingerrorの割合を大きくさげることが出来，数カ所の所見の対比を含め疾患特異性の検討，筋生検部位の決定に有用であるが，一方，論理的に描出される情報はピクセル内の平均化されたⅩ線吸収度に依存するや，経時的観察にも有用であり，又，UI自体が簡ため，低吸収値（月旨肪組織，月旨肪変性など）と，比のと思われ報告した．

便であるため外来的検査手段としても意味あるも較的高吸収値（結合組織等）の混在する例では，みかけ上の正常所見を呈すると考えられる．一方，
UIで得られる情報は，組織の音響インピーダンスの差に基づくため，より微細な組織学的変化を反映し，CT上異常を見ない早期の段階や仮性肥大の状態でも特徴的変化所見を得ることが出来る．
今回の検討で得られたUIの変化としては以下が
−93−

図5

−94−

文

献

Arbeitsphysio1．，26：21，1968．
3）猪飼道夫：超音波の人類学への応用．超音波医

1）Dubowitz，Ⅴ．：Investigationofneuromuscu・学，医学書院，東京，1973，p．544．

1ardisorders・JournaloftheRoyalCollegeof
Qhysicians of London，17：134，1983．

4）Hjelmroth．HiE，：Puncture needles and2）Ikai，M．，Fukunaga，T．：Calculationofmuscle

ultrasonicwavepropagationinultrasonicallyStrength per unit cross−SeCtional area ofguidedpuncture．Ultrasonicallyguidedpunc−

human muscle by means of ultrasonicture technique，Munksgaard，Copen hagen，

measurement．Int．Z．Angew．Physiol．einschl．

1980，p．25．

ー95−10）骨格筋パラフィン包埋切片でのmuscle specificenolaseおよびcarbonic anhydraseIII染色によるfiber type識別の試み
杉 村 公 也＊

研究協力着

衣 斐
杢

野

灰

本

加

藤

諌
兼

は じ め に従来の酵素組織化学染色では，ホルマリン国定

達＊

古

閑

寛＊

次■

松

岡

元日

名

倉

・宏＝

房…

佐

橋

功日日一書

幸

彦■

週間後にパラフィン包理を行い，4JJm厚の連続切片を作成した．

パラフィン包埋骨格筋標本の場合は酵素活性が失染色は間接法による酵素抗体法で行った．一次括し，酵素活性を利用した染色が困難であった．

抗体として，ヒト剖検腸腰筋より精製したCAlII

しかし，免疫組織化学の発展により，パラフィン

およびMSEを家兎に免疫して作成した血清を用包埋標本においても，抗原性が保持されていれば

い，2％牛血清アルブミン含有PBSにて200倍に酵素の局在が証明できるようになった．そこで希釈して用いた．本血清はCAIII，MSEに対し特

我々はcarbonic anl1ydraseIlI（CAIII）および

異的で，他のアイソザイムと交叉反応を示さなか

muscle specific enolase（MSE）が骨格筋に特異った．また対照として一次抗体に香え正常家兎血的に局在Ll）・2），しかも前者がtypel fiberに3），
後者がtype2fiberに優位に局在する4）ことによ清を用いた．二次抗体としてperoxidase標識山り，パラフィン包埋剖検骨格筋標本で酵素抗体法

BSA含有PBSにて80倍希釈して用いた．

を用いCAIIIおよびMSEを染色Lfiber typeの識別を試みた．

各切片は脱パラフィン後，内在性peroxidaseを不活化させるために過沃素酸5mM水音容液にて対象および方法

15分間インキュベート後，PBSでう先〜條し，一次抗体を60分間室温でインキュベートした．さらに対象として剖検腸腰筋20筋を用いた．剖検筋のPBSで洗i條後，二次抗体で60分間室温でインキュ原疾患は，ヲ吉10例，白血病4例，肝硬変2例，脳ベートし，PBSで洗i條し，内在性peroxidaseを不括化させるためにさらに10mMアゾ化ナトリウ

月重瘍，脳出血，悪性リンパ腫，神経芽細胞腫，

羊抗家兎免疫グロブリンのF（ab）2分画を，2％

Duchenne型筋ジストロフィー各1例であった．

ムを添加した，10mM過酸化水素含有20mg％

死亡時年齢は3歳〜77歳，死後標本採取までの経DABにて発色させ，水洗，脱水，透徹，封入後，鏡検に用いた．

過時間は2−31時間であった．
剖検骨格筋は緩徳ホルマリンで固定し，2〜8結＊名古屋大学医学部第一内科＊＊名古屋大学病態制御研究施設生体防御研究部門＊＊＊愛知県コロニー生化学＊＊＊＊愛知医科大学第四内科

果

CAIlI，MSE染色ともパラフィン包埋骨格筋切片ではcheckerboardpattemを示し，連続切片で比較すると，一部筋線経を除いて相反的に染色さー96−

るα，β，γの3種類のSubunitから成る分子舅約10万のdimerである2）・5）．そのうち劇ヲおよびαβ−enolaseは心筋，骨格筋に特異的に局在し，muSCle
specific enolase（MSE）と呼ばれている6）．前年
度我々が報告したように骨格筋新鮮凍結切片では嫌気性解糖系が優位なtype2fiberに優位に局在している4）．
一方carbonic anhydraseはC02のhydrationに関与し，Ⅰ，ⅠⅠ，ⅠⅠⅠの3種類のアイソザイムから成り，分子量は約3万である．そのうちCAlII
は骨格筋に特異的に局在Ll），新鮮凍結切片では
好気的エネルギー産生糸が優位なtypel fiberに優位に局在している3）．
骨格筋標本の病理学診断上，組織化学的染色によるfibertypeの識別は有用であり，従来は新鮮凍結切片においてATPase染色やNADH−TR
染色により行われていたが，パラフィン切片では困難であった．しかし免疫組織化学の発展により，パラフィン切片においても抗原性が保持されていれば，fiber type特異性の有る酵素を免疫組織化
図1

学的に染色することによってfibertypeの識別が間接法によるCAIII（刃，MSE（B）染
色．Typel fiberがCAIIIで，type2
fiberがMSEで染色されchecker−
board pattemを示している．70歳，女，肝硬変，死後経過時間4時間（×可能になった．我々はCAIIIがtypelfiberに，MSEがtype2fiberに優位に局在することを利用し，酵素抗体法によりfibertypeの識別をホルマリン固定パラフィン包理標本で行った．剖検標

180）．

本では死後時間が短い程fibertypeの識別が良く，
CAIIIは5時間以内，MSEは10時間以内のものでれており，パラフィン切片においてもCAIIIは識別可能であった．

typelfiberに，MSEはtype2fiberに染色され本法を用いることにより，剖検その他の際に新ると考えられた（図1）．
ホルマリン固定時間による染色性の差は明確で

鮮凍結標本の得られなかった骨格筋標本や，Hbはなかったが，固定までの死後経過時間による比結標本の検索が危険を伴う場合等に，ホルマリン

較では短時間のもの程fibertypeの識別が良く，

固定パラフィン包埋標本でのfibertypeの識別がCAIIIは5時間，MSEは10時間以内のものが可能であり，縦断切片でのfibertypeの識別も可

fiber typeの識別が可能であった．
なおほとんどの症例で原疾患によると考えられ能となり，臨床診断上有用と考えた．

抗原陽性者などの感染因子を持った患者で新鮮凍結る廃用性萎縮としてのtype2fiberatrophyが見語

ホルマリン国定パラフィン包埋剖検骨格筋標本られた．

において，酵素抗体法を用いCAIJIおよびMSE考

染色を行いfiber typeの識別を試みた．CAIIIで察

Enolaseは解糖系酵素であり，免疫学的に異なは死後5時間以内，MSEでは死後10時間以内の−97−

標本でfibertypeの識別が可能であった．新鮮凍
tionin結標本の得られなかった骨格筋パラフィン包埋標本においても，本法を用いることによりfiber
typeの識別が可能となり臨床診断上有用と考え
た．

human

skeletalmuscle．Acta

Neur＿

Opathol．（Berl），59：237−239，1983．
4）Ibi，T．，Sahashi，K．，etal．：Immunohisto．

Chemical demonstration of

β−enOlasein

humanSkeletalmuscle．MuscleNerve，6：661−663，1983．

文

献5）Fletcher，L．，Rider，C．C．，et1）Carter，N．，Jeffery，S．，etal．：Characterization

al．：Enolase

isoenzymes．lII．Chromatographic andim−

OfhllmanCarbonicanhydraselIIfromskeletal

munological characteristics of rat brain

muscle．Biochem．Genet．，17：837−854，1979．

enolases．Biochim．Biophys．Acta，452：245−

2）Rider，C．C．，Taylor，C．B．：Enolaseisoenzymes

252，1976．

inrattissues・Electrophoretic，Chromatogra−

6）Mokuno，K．，Riku，S．，etal．：SerummuSCle．

phicandkineticproperties・Biochim．Biophys．

SpeCific enolasein progressive muscularActa，365：285−300，1974．

dystrophyandotherneuromusculardiseases．

3）Shima，K．，Tashiro，K．，etal．：Carbonic

anhydraselIIimmunohistochemicallocaliza一−98−

J．Neurol．Sci．，63：345−352，1984．

11）−（1）筋ジストロフィーチキンの形態学的初期変化：
酵素組織化学的検討
後 藤 幾 生■
研究協力者

石

本

進

士

鈴

木

聡

北

口

哲

雄

黒

岩

義五郎

筋ジストロフィーチキン（Dyチキン）の筋病

法2）に．従ってreduced nicotinamide−adenine

変は，赤筋より自筋に生じやすいと報告されていdinucleotide tetrazolium reductase（NADH−

る1）．しかしその変化が，いかなる時期に，かつ，

TR），reducednicotinamideadeninedinucleotide

いかなる変化を生じるかについて，経時的に正常

phosphate−tetraZOlium reductase（NADPH−

チキンと対比した各種酵素組織化学染色による詳TR），malatedehydrogenase（MDH），SuCCinate

細な検討は少ない．今回，Dyチキン骨格筋の形態

dehydrogenase（SDH），α一glycerophosphate

学的初期変化を検討するため，各種酵素組織化学

dehydrogenase（α−GPD），glucose−6−phos−

的および電顕による検索を行った．

phate dehydrogenase（G−6PD），glutamate
dehydrogenase（GLD），β−hydroxybutyratede−

材料hydrogenase（β−HBD），1actatedehydrogenase

Dyチキン（line413）と正常対照チキン（line（LDH），CytOChromeoxidase，ubiquinone，phos−412）を用い，赤筋である前広背筋（anteriorlatis−

phorylaseの染色を行った．またnon−NAD−lin−ked α−GPDとして電子受容体にmenadioneを

simusdorsimuscle：ALD）と白筋である後広背筋（posteriorlatissimusdorsimuscle：PLD）を
経時的た各々3羽ずつを用いた．

用いた．α−GPD（vk3）およびLDHのisoen−
zymeのH typeを区別するため，ureaを付加した（LDH（urea））．酵素反応のincubation time

方はNADH−TRで30分，その他は60分とした．また法

鶏胚期第19日目よりふ化後6週目までのALD

電顕的定量的検索3）のため，ふ化後3週目の正常とPLD各々の各種酵素活性を組織化学的に半定

チキン，Dyチキン各々のPLDの電顕写真（×

量的に検討した．すなわち顕微鏡下の低倍率で酵

10，000）を無作為に20枚以上とり，ミトコンドリ

素活性の認められないものを（」，非常に弱く認め

アのVOlume density，Surface densityおよび数られるものを出，軽度のものを（巾，中等度のもの

をNEC−PC−8001にて計測した．その際，筋鞍下1を（−什），強い活性を示すものを（一十什）と表記した．

JLm以内のミトコンドリア，および，type2（aw）
線経の選択のため，筋鞘下に著明なミトコンドリ

その際，ふ化後1日目までは明らかな筋線維型は認めず，それ以後の時期でも酵素の種類により筋線維型分化の明瞭でないものが多数存在したため，

アの集積を認めるtypel（αR）線経と思われるものは対象より除外した．

その活性の強さの判定は個々の筋線維型に着目せ結ず，低倍率の顕微鏡下で筋組織標本全体の酵素活性の強さで判定した．染色法としてPearseの方＊九州大学医学部脳研神経内科

果

A．筋線経の諸酵素活性の経時的観察：
1．正常チキンおよびDyチキンにおける諸酵
素活性のALDとPLDの経時的比較．

ー99一

NADH−TR，SDH，MDHは正常チキンでふ化後正常チキンおよびDyチキンともに，NADH−
TR，NADPH−TR，SDH，LDH，LDH（urea），

ほぼ同じ活性を持続するが，Dyチキンでは

β一HBDは鶏胚期第19日からふ化後1週目にかけ

NADH−TR，SDHは1週目より，MDHは3週日てALDにPLDより強い酵素活性を認めた．

より活性が増加した．NADPH−TRでは1週目よ

MDHは正常チキンではふ化後1週目と3週目にり正常チキン，Dyチキンともに活性が増加する

ALDにPLDより強い活性を認めたが，Dyチキ
ンではその差異は明らかではなかった。逆にα−が，Dyチキンでは3週目よりその増加の程度はGPD（vk3）はふ化後1週目より，phosphorylase

NADH−TR，SDHはふ化後1週目より，NADPH

はふ化後3週目より正常チキン，Dyチキンとも−TR，MDHはふ化後3週目よりDyチキンによにPLDにより強い活性を認めた．正常チキン，Dy

り強い酵素活性を示すようになった（表2）．
B．電顕的定量的検討：

より著明であった．以上の結果，Dyチキンでは

チキンともにubiquinone，CytOChromeoxidase，
α−GPD（NAD），GLD，G−6PDはALDとPLD

ふ化後3週目のPLDのstereologicalanalysisの間に明らかな活性の差を認めなかった．しかしでは，ミト

DyチキンでのNADH−TR，NADPHTTR，
SDH，LDHのALDとPLDの間での活性の差（cu．JLCOmp／100cu．JL fiber）は，正常チキン
2．21±0．53に対して，Dyチキンでは3．66±0．31は，正常チキンのALDとPLDの差よりもふ化後であり，Surfacedensity（sq．pcomp．／100cu．JL

1週目以後少なくなった（表1，2）．

fiber）は，正常チキンの5．36±1．47に対してDy
チキンでは10．39±0．10，ミトコンドリア数（N／2．正常チキンとDyチキンALDの諸酵素活性の経時的推移および両者の比較
正常およびDyチキンのALDでは，CytO−
Chrome oxidase，a−GPD（NAD），α，GPD

コニドリアのvolume density

100sqJL）は正常チキン0．34±0．11に対してDy
チキン0．83±0．03といずれもDyチキンで増加を認めた．

（vk3），LDH，GLD，G−6PDは鶏胚期第19日より
ふ化後6週日まで，両群に酵素i舌性の明らかな変考化を認めなかった．またLDH（urea）はふ化後1察

A．正常チキン

週目より両群ともに活性の低下を認めた．NADH

正常チキン筋の鶏胚後期よりふ化後初期の各種−TR，NADPH T TR，SDH，MDH，

酵素活性の推移の検討では，鶏胚期第19日目はubiquinone，phosphorylase，βTHBDは両群ともにふ化1日目および1週目に種々の程度の活性の

ALDとPLDの活性の差異は明らかには認めな増加を示した．以上のごとく，Dyチキンと正常チキンの比較では，この期間中，両者に明らかな酵の差異は，ALDではふ化後よ素活性の差を認めなかった（表1）．

ドリア酸化酵素が増加したこと，PLDで1週目に3．正常チキンとDyチキンPLDの諸酵素活性の経時的推移および両者の比較．

LDH（urea）の活性が著減し3週目にphosphor−ylaseが著増したことより両者の差異がより明ら

正常チキン，Dyチキンともに，CytOChromeかになったといえる．特にPLDで3週目にaner−

OXidase，LDH，GLD，G−6PD，β−HBDは鶏胚期第19日目よりふ化後6週目まで，明らかな活性

Obicglycolysisに属するphosphorylaseが著増しの変化を認めなかった．また両者ともに，ふ化後備わったものといえる．

かった．赤筋としてのALDと自筋としてq）PLD
り1週目にNADHTR，NADPH−TR，SDHなどのミトコンたことはPLDの自筋としての特質がこの時期に活性の増加を示したものは，ubiquinone，α−GPD

B．Dyチキン（NAD），α−GPD（vk3），phosphorylaseで，特にDyチキンの赤筋であるALDは，ふ化後6週目

phosphorylaseは3週目に著増した．LDH（urea）

までは正常チキンと比較して全く変化を認めず，

はふ化後1週目に活性は両者ともに減弱した．

これは赤筋は自筋より筋病変が生じにくいというー100−

表l Variation with age of semiquZLntitativegrading of variousenzyme
activitiesin histochemistry of ALD．
E19
NADH−TR C

Pl l W

＋

＋十

D

＋＋

・一

㌫DH

＋

D

＋

C

＋

D

＋

Ubiquinone C

一

＋

D

＋十

一

＋

−

＋＋

＋＋

＿

＋＋

＋

−

＋十

十

一

＋＋

＋＋

十一＋＋

一

＋＋

＋

一

十

十

十
十

一

＋十

土
土

土
士

士

士

十

士

十

十

（VK3）

D

十

十

C

＋十

一

＋＋十

十＋十

＋＋＋

＋＋＋

十十十

D

＋＋

一

十十＋

＋＋十

十十＋

＋＋＋

十十＋

十十

士．一十

一十＋

＋＋

±

士

十

一

士
土

±
一

一＋十

十＋

LDH

Ⅰ皿H C

＋

十十

■＋

士

一

十十
十十

＿

一

士

＋十十

＋十

士

士

十十＋

十十十

＋

一一士
一

十十十

十十

士

＋

＋＋

十十

士
士

＋＋

＿

十

士

よ．GPD C

一

W

十十

十＋十

十一＋＋

D
一一

十
＋＋

＋

＋

Cyt．Ox C

＿

十＋
十

十
D

LGPD C

＋十十
−

6

十十

＋＋

一士

D
＋

W

＋＋

＋

NADPH−m C

SDR C

3

一十十十

十＋十

phosphoR C

＋
D

GLD

C

B＿HBD C

＋

一

一

士

D

一

一

士

＋
D

・

一

一

＋

＋

＋

十

±

十

十

＋

＋

十

十

一

士

一

一

十

一

士

一

一

士

＋
十

十十

＋

十

C

＋十

＋
＋

D

G−6PD

十＋

＋

＋

一

十

十十
十

一

一

一

十

＋

一

土

十十
一

十十

一

一

十

一

一

十

十＋
十十

十＋

A graded system（−tO＋ ）documented the strength of en2：yme aCtivityin
control（C）and dystrophic（D）Chicken5．
−；absentl±‥Very WeakI＋七〇十十十‥preSent｝mild tO StrOng aCtivity・

E19：19dayinincubation periods，

Pl：1day after hatching

−101−

表2

Variation with age of semiquantitative grading of various enzyme
activitiesin histochemistry of PLD．
E19

t NADH−TR C

pl l W

土D

土t NADPH−TR C

一
D

★

SDH

C

士

書

MDH C

士
十

D

＋

Ubiquinone C

土

十一十＋

一一士
一＋

一

一土

D
C

＋
十

＋一十

十一十十

＋・一十十

＋＋・一十十十

＋一十十

十一＋十

十十

＋一十十

十＋

−＋十

D

＋＋

十

十一＋十

＋

一

一

十十

土

＋

一
一

十

＋

＋

十

士

土

±

十

十

十

十

＋

一十十

十＋

＋＋

＋一十＋

｝

＋＋

＋一十十

十一十＋

十

十＋

一十十

十十

十一＋＋

十一＋十

十一十

C

土一十

十

一十十

土

±

＋十一十十十

＋

一

土

＋＋

＋一十

＋

上

LDH

＋−＋＋

＋−＋十

一

D

十一十十

＋−＋＋

C
D

LDH

十一十＋

士
一

＋

D

（Ⅷ3）

十一十＋

＋

一一＋

よ−GPD C

＋一十

十一十十

一＋＋

＋
D

よ−GPI）

J

十一十十

士−＋

十

Cyt・Ox C

土一十

十

士一十

D

6W

＋

一
一

3W

十

一十＋

十十

十十

十＋

十十

十十

＋

士

土

（urea）
十十

PhosphoR C

±

D

GLD

C

＋

一一＋

D
G−6PD C

士

＋

一

一＋

D

8−HBD C

一

一
一＋

一＋
一

一
一十

＋十一十＋十

上

土

土

±

一＋

＿

一十

±
±

＋＋−＋＋＋

＋

一

土
±

＋
十十一＋＋＋

土

＋−＋

士
D

±

土一十

一一＋

±
＋十一＋＋十

−
＿

＋

−

＿

＋

＿

土
十

−

＋

−

＋

土

十

＋

Agradedsystem（−tO＋＋＋）documented thestrengthofenzyme aCとivi亡yln con亡rol（C）and dystroph・1C（D）chlckens．

−‥absent，±：Verydeek，＋to十什：present，血1d teStrongactlvlty・
E19：19daysinincubation＋Discernible

differenceofperiodsI

Pl‥len2：ymeaCtivities

Chiekens．

−102−

day

afterhatching

betveencontrol

anddystrophic

報告1）と一致している．しかし自筋であるPLD

文

献は，鶏胚期19日目よりふ化後1日目までは，明ら

1）Holliday，T．A．，Julian，LH．andAsmundson，

かな酵素活性の差異は認めなかったが，1週目以V．S．：Muscle growthin selectedlines of

後より3週目にかけて，NADH−TR，NADPH，muscular dystrophic chickens．Anat．Rec．

TR，SDH，MDHなどのミトコンドリア酸化酵素

160：207−216，1968．

活性の増加を認めた．しかし他の酵素群には明ら

2）Pearse，A．G．E．：Standardmethodforbound

かな差異を認めなかった．このミトコンドリア酸

enzymes．Inhistochemistri：theoreticaland化酵素活性の増加は，この時期には明らかな筋病

applied．vol．2，3rded．，Churchi11Livingstone，変が生じていない事より，Dyチキン筋の初期変化と考えられる．これは電顕的定量的検索でも，

3）Eisenberg，B．R．，Kuda，A．M．：Stereologicalミト

Edinburgh，p．1324−1344，1972．

コンド））アのVOlume density，Surface

analysis of mammalian skeletal muscle．J．

density，および数の増加を認めたこと，およびPLDのwhitefiberのNADH−TR，formazan顆

ultrastructural Research51：176−187，1975．

4）石本進士，後藤幾生，大田典也，黒岩義五郎：

粒数の増加をふ化後1週目以後に認めたこと等4）筋ジストロフィーチキンの発達過程における形

より，これらミトコンドリア酸化酵素活性の増加

態学的初期変化．筋ジストロフィー症の病因のは，筋変性に至る以前に，ミトコンドリアの増加究明に関する研究（三好班），昭和54年度研究報を示唆しているとも考えられる．

告書，1980，pp．22−26．

一103−11）−（2）Kearns−Sayre−Shy症候群の検討−末楷神経障害を伴った症例−

後 藤 幾 生＊
研究協力者

は

じ

め

古

谷

本

村

博

和事

北

口

哲

雄＊

晩＊

黒

岩

義五郎＊

石

本

進

士＊

ながら短月井骨筋標本に行った変法Gomori−Tri−に

いわゆるmitochondrialmyopathyは症状が骨Chrome染色ではragged−red fiberは認められな格筋に限られる狭義のmitochondrial myopathy

かった．また四男（ⅠⅤ−4）は生来低身長で，胃潰とKearns−Sayre−Shy症候群（以下KSS），

瘍の術後，高度栄養障害のため1年の経過で22歳

Ophthalmoplegia plus，mitochondrial

で死亡している．

myopathy，enCephalopathy，lacticacidosisand

入院時現症：身長163cm，体重44kg．軽度のる

strokelikeepisodes（以下MELAS）1）等の中枢神経を含む全身に多彩な症状を呈するもの（mito−

いそうを認めた．血圧148／94mmHg，脈拍88／分
整．心雑音は聴取せず，腹部で腸音の冗進を認め

chondrial encephalomyopathy）2）に大別されている．今回，私達は進行性外眼筋麻痺，心伝導障

た．

害，感音性難聴，視神経・網膜萎縮，頭部CT上の異常，筋生検でのミトコンドリア異常などの所見に加え，髄液中の乳酸上昇，神経生検で著明な
大径有髄線維密度の低下を認めたKSSの一例を経験したので文献的考察を加え検討した．
症例：45歳，男性
主訴：眼瞼下垂，難聴
現病歴：出生時，幼児期の発育に異常なく，学業成績は中程度．20歳の頃より徐々に限瞼下垂が出現．30歳頃より労作時の全身倦怠感，下痢がひどくなり43歳より左側，45歳より右側の難聴および視力低下を自覚するようになったため，当科入院となった．
家族歴（図1）：両親がいとこ結婚．母親（ⅡⅠ−2）がvonRecklinghausen病．発端者の同胞では三男（ⅠⅤ−3）が27歳より消化器症状で発症し，多発性小腸憩室，高度栄養障害を伴ったポリニュー
ロバナーで6年の経過で死亡している3）．しかし＊九州大学医学部脳研神経内科

神経学的所見：知能正常．視力は右0．7，左0．1．
眼底では両側視神経，網膜の萎縮が認められたが色素沈着は見られなかった．中等度の眼瞼下垂，
全方向への高度の眼球運動障害あり．聴力は両側で高音域優位に低下．軽度の鼻声，廣下障害および眼輪筋，口輪筋，胸鎖乳突筋，屑甲筋，大殿筋，四肢近位筋に中等度から高度の筋萎縮，筋力低下を認めた．深部腱反射は低下．Gowers徴候陰性．
小脳症状，感覚異常は認めなかった．
検査所見：入院時，末梢血，一般血液生化学，
尿検査，血液ガス分析，血中乳酸・ビルビン酸に異常なく，心電図では2枚ブロックを呈していた．
小腸造影で多発性憩室症が認められた．髄液検査
では圧，細胞数は正常．蛋白は85mg／dl，乳酸は34．7mg／dlと上昇．脳波は軽度異常で，全誘導に散発性に徐波の混入を認めた．頭部CTscanでは，白質内にぴまん性に低吸収域が見られた（図2）．運動神経伝導速度は右脛骨筋で20m／secと低下．右膝腹神経の知覚神経伝導速度検査では，活動電位が誘発不能．針筋電図検査で1ま，筋庶性
変化と神経原性変化のき昆在を呈していた．聴覚性−104−

Pedjgree of family（59−1538）

HⅠ

Probandex卸ljned

図1 家系図査ではPl。。波の潜時が遅延していた．
糖新生，分解代謝の検索のため，阻血下運動負荷試験，グルコース，グリセロール，グルカゴン，
フルクトースの負荷試験を行ったが異常を認めなかった．
筋病理所見では，短俳骨筋のHE染色で筋線経の大小不同，局所的炎症細胞の集合，grOupatrO−
phyが認められ，mOdifiedtrichrome染色では筋鞘下に多数のragged−redfiberを，同部の電顕による観察では，異常封入体を有した大小不同の異常ミトコンドリアの集積が見られた（図3A）．俳腹神経のエボン包埋トルイジンブルー染色では，大径有髄線経の減少および軸索に比して薄い髄鞘が多く見られ，組織定量分析では，大径有髄線維

図2

頭部CT scan

1，038／mm2（正常4，503），小径有髄線維5，189／
mm2（正常5，726）と大径有髄線経の著明な減少

脳幹誘発電位検査はⅠ，Ⅴ波間の頂点潜時の延長を認めた（図3B）．無髄線推密度は正常であっを認め，正中神経刺激による短潜時体性感覚誘発

た．

電位検査では，N9波は記∃録不能．視覚誘発電位検
ー105−

考

案

本症例は進行性外眼筋麻痔，心伝導障害，難聴，
視神経・網膜萎縮，髄液中蛋白上昇，頭部CT上の異常，筋生検下異常ミトコンドリアが確認されKSSと診断した．本症例では髄液中の乳酸上昇，神経生検での大径有髄線経の著明な減少を認めた点が特徴的と考えられた．
KSSのCT所見については，これまでに基底核の石灰化，白質病変，皮質の萎縮などが報告されている4）が，剖検例で海綿状変性を認める事，en−
hance効果の無い事などより，本症例に見られた
白質の低吸収域は海綿状変性を反映していると考えられる．また，mitochondrialencephalomyopa−
thyにおける髄液中の乳酸，ビルビン酸が上昇しているとの報告がある5）．このうちKSS例では本例と同様，血中乳酸およびピルビン酸は正常であるが，髄液の乳酸およびピルビン酸が上昇しており，頭部CTにも異常が認められていることより，

図3A
上段：HE染色（×200）
中段：modified trichrome染色（×200）

下段：幌別こてミトコンドリア内にparacrystaline封入体を示す．
（barはlJJmを示す）
図3B

排腹神経のエボン包埋トルイジンブ
ルー染色（×400）
大径有髄線経の減少と軸索に比して薄い髄鞘を有する線経を示す．

−106−

のうち，13例に筋電図上神経原性変化を認めたと報告している．しかしながら，神経筋生検，剖検
における異常の報告では脱髄所見，脱髄および髄鞘再生所見が殆んどであり，本症例のような神経髄液の乳酸およびビルビン酸の上昇は中枢神経病
変の反映である可能性が考えられる（表1）．
mitochondrial myopathyに於ける末梢神経障
害の所見は稀なものではなく，Eggerら6）は13例
中4例にニューロバナーの症状を認めたとし，松線経の組織定量分析での異常の報告は，Peyron−nardら8）の一例にすぎない．彼らの報告と本症例を比較すると，筋電図，末梢神経伝導速度検査の原ら7）は32例のミトコンドリア異常を呈した
Chronic progressive external ophthalmoplegia

表1髄液中，乳酸，ビルビン酸の上昇を呈したmitochondrial encephalomyopathy

etS甘言，）e…U；晋昌，）etG禁？；・84）e…u措丁昌。）etF：澤8。）
Dtag．

MELAS

旬e，Sex

48y，F

MELAS
14γ，F

MELAS
14γ，F

KSS

43γ，F

KSS
45y，M

CT scan−綜冒錆 ；芯；−【【G

sIowburst SPike＆wave sp−ke＆waYe Slowburst sporadlc theta

言霊琵抒（霊帯詔；）17措：；三iy

Serum（mg／dり
1dCtate（4−16）

PyruVate（0・3−0・9）

16．5

38．9

ユニ弘

旦＝堅

墾二旦
0．82

6．72
0．56

12．1
0．90

CSF （mg／dり
1aCtate（10−16）

呈乙蓬一

堂j

匹」

翌週

旦生J

PyruVate（0．6−0．9）

1．47

1．41

3．09

1．29

0．76

表2

neuropathyを呈したmitochondrialencephalomyopathy

崇y；冒芦品Dね9．
Age．Sex
EMG

Ophthalmoplegia
Plus
37γ，M
BSAP
neurogenlc pattern

Motor conductton

etF三澤84）
KSS

4Sy．M
BSAP
neurogenlc pattern

Ulnar n．
25．3

Ulnar n．
27．0

not evoked

not evoked

MyeHnated fjber
denslty

decreased

decreased

Unmyel†nated fibernon¶aln011¶al

Veloc†ty（m／SeC）
Sensory conductlon
Veloc†ty（m／SeC）

Onion bulb

＋

ー107−

literature．J．Neurol．Sci．47：117，1980．

所見は一致しており，神経生検では，彼らの症例ではonionbulbを認めた点が異なるが，大径有髄

3）洪秀樹，田中明他：多発性小腸憩室，脂肪性肝線維密度の減少が著明であった点は共通している

硬変および胃切除（BII法）後の高度栄養障害（表2）．これがシュワン細胞の異常に起因するもに伴った重症polyneuropathyの1例．E］内会のか，軸索自体の異常に起因するものであるかは

誌，67（8）：86，1978．

現在の所不明であるが，ミトコンドリアの機能不4）Seigel RS，SeegerJF et al：Computed

全が軸索変性やhypomyelinationを起こした可tomographyin oculocraniosomatic disease

能性も考えられる．

（KeamS−Sayre syndrome）．Radiology，130：
159，1979．

以上，ぴまん性大脳自質病変が示唆されるうえに，末梢神経障害を伴ったKSSの一例を報告し

5）Kuriyama M，Suehara M et al：HighCSF

た．末梢神経障害や中枢病変については今後
MELASや他のmitochondrialmyopathyと対比

lactateandpyruvatecontentinKeams−Sayre

して検討する必要があると考えられる．

1984．

syndrome．Neurology（Cleveland），34：253，

6）EggerJ，Lake BD et al：Mitochondrial

文

献CytOpathy．A multisystem disorder with

1）PavlakisSG，PhillipsPCetal：Mitochondrial

raggedredfibersonmusclebiopsy．Arch．Dis．

myopathy，enCephalopathy，lactic acidosis・
andstrokelikeepisodes：Adistinctiveclinical

7）松原四郎，安田厚子他：OculocraniosomaticChild．，56：741，1981．

syndrome・Ann・Neurol・，16：481，1984・

neuromuscularfiber2）Fukul1araN，TokiguchiSetal：Myoclonus

diseasewithragged−redの1例．臨床神経，24：221，1984．

epilepsy associated with ragged−red fibers

8）PeyronnardJM，CharronLetal：Neuropathy（Mitochondrialabnormalities）．Diseaseentity

and mitochondrial myopathy．Ann．Neuro1．．

or a syndrome？Light and electronmicros−

7：262，1980．

CoplC Studies of two cases and review ofー108−12）培養下における正常及び筋ジストロフィー鶏の
T−Sytmの微細構琴−タンニン酸染色による検嗣ト一一
塚．越
研究協力者

磨■
士＊

松 永 高

」じlヽ

松 本 春 秋＊小 林 高 義＊ 古 川 哲 雄＊％，embryoextract5％，glucose6g／1，penicillin

は じ め に筋ジストロフィー症（以下筋ジスと略す）における筋内膜系の異常については，硝酸ランタンを用いたOguchiらの報告1）・2），Golgi変法によるScalesらの報告3）があり，本症の病因に関与する

G

200U／mlとした．経時的に位相差顕微鏡及びJenner−Giemsa染色標本の光量頁的観察を行うとともに電顕標本を作成した．電顕標本はBonilla4）

重要な初期変化とされている．しかしながら，この方法に従い，2．5％glutaraldehyde，8％タンニ
ン酸混合溶液中で30分間固定，PBS buffer

れらの方法は恒常的にT−SyStemを染色すると（pH7．2）で洗浄後1％オスミウム酸処理し，は限らず，また，発生段階を初期から観察した報

Series alcoholで脱水，Epon−aralditeへ包ま里し

告もない．我々はT−SyStem，SarCOplasmic

た．標本は厚切り切片無染色とし，日立H−800を

reticulum（SRと略す）を発生・分化の段階を追使用し200KVで観察した．

って経時的かつ恒常的に観察する目的で，タンニン酸染色を用い鶏胚筋分離培養を行い検討した．

結果

光践所見：正常，筋ジス鶏筋とも6日巨＝こは横
材料及び方法紋を形成し自発収縮をみとめた．培養30日目以後

正常及び筋ジス鶏胚（line412，413）11〜13日目

筋ジス鶏筋で儲線維径にややばらつきが観察され大胸筋を使用，実体顕微鏡下で筋を採取しRinal−

たが，経時的観察において，空胞形成，異常分枝，

dini液中で細切．0．25％trypsin液中で37℃8分

筋線推断裂などの変性所見には，培養5週まで両間incubate後，ピペッティング，750−1，000rpm
2分間の遠心分推，Rinaldini液洗浄を3回反復者に明らかな差はなく，それ以後ともに変性に陥し，最後に培養液をいれtrypsinの活性を停止さ

電顕所見：両者とも6日日以後タンニン酸によせビペッティング，もう一度遠心分散を行った．

った．
り染色されたT−SyStemが観察された．

上清を除去し充分ピペッティング後，レンズクリ

正常鶏筋：培養初期から，細胞表面に多数のーニング用シリコンペーパーを通し大型シャーレ

CaVeOlaがみとめられ，CaVeOlaと連続するコイに静置，37℃30分間incubate，Yaffeの方法により筋芽細胞の比率を増加させ，2×104cell／cm2にル状のT−SyStemも観察された（図1）．TTSyS−
temは主に筋原線経の走向と直交するように横紳月包数を調整，コラーゲン塗布カバースリップ上走するが（図2−A），一部縦走するT−SyStemも■で分牡培養を行った．培養液の組成は，Eaglesあり（図2−B），管径はやや不規則になっていssalts80％，horseserum15

た．正常鶏筋ではSRはほとんど観察されなかっMEMwithHanks

た．
筋ジス鶏筋：正常鶏筋と同様に，CaVeOlaと連＊東京医科歯科大学医学部神経内科

−109−

図3

図1

正常鶏筋培養6日目電顕像
細胞表面の多数のCaVeOlaとそれに連続するコイル状のT−SyStemがみとめられる．
200KV 無染色

筋ジス鶏筋培養12日目電顕像
細胞表面のCaVeOlaとそれに連続しているT−SyStemが観察される．
200KV 無染色Bar＝1／Jm

Bar＝1JLm

続するT−SyStemが観察された（図3）．T−SyS−
temは横走・縦走し格子状の構造をつくるが（図4−A），その一部に膨化した像がみとめられた．
この膨化は，他のT−SyStemと電子密度のほぼ等しいものと（図4−Bト），それよりも大きく，電子密度のより高い膨化（図4−B［＞）との2種がみとめられ，後者はその立体的観察によりjun−ctionalSRと考えられた．培養中〜後期においても，電子密度の高いjunctional SR（図5−AD）
図2
AB

正常鶴筋培盤6日目屯顕像
筋原線経の走向にほぼ直行して横走するT−SyStemがみとめられる．管径はやや不規則である．
正常鶏筋培養18日日電顕像
縦走及び横走するT−SyStemかみとめられる．管径はほぼ一様である．
200KV 無染色が観察され，またtriadのT−SyStem（図5−Bト）と並行して不規則な走向をとるSR（図5−BD）が観察された．
筋内膜構造を内部に有する空胞は培養後期に正常，筋ジス鶏筋両者にみとめられた．

Bar＝1／Jmー110−図5 筋ジス鶏筋培養24日員電頭像
A T−SyStemと連続した電子密度の高い膨化（D）がみとめられ，junctional
SRと考えられた．
B triadのT−SyStem（ト）と並行して不規則な走向をとるSR（D）が観察される．
200KV 無染色

図4 筋ジス鶏筋培養12日日電塁頁像
A 縦走・横走し格子状をなすT−SyStemに部分的膨化がみとめられる．
B Aの強拡大像．部分的膨化は，他のT−
systemと電子密度のほぼ等しいもの（ト）と，大きく電子密度のより高いもの（D）との2者があり，後者はjunc−
tional SRと考えられた．
200KV 無染色Bar＝1／′mBar＝1JLm

考水平ら6）がmicrotubulesを染色して以来，肝組

察

タンニン酸はgallic acid，ellagic acidなどの織，腎糸球体，小胞体など種々の組織に応用されフェノールカルボン酸ポリマーと糖，配糖体が結ている．筋組織T−SyStemのタンニン酸染色は合した構造を有し，その立体構造により多種多様

Bonillaらが生検筋で報告しているが，発生・分化なタンニン酸が存在するが，いずれも数多くのの段階を観察してはいない．我々の観察では，T−hydroxy基をもち金属，蛋白，糖などに強い結合性を示す5）．電顕標本のタンニン酸染色の機序は，

systemが横紋が形成される6日日から染色され，
caveolaとの連続性を確認された．培養初期から詳細は不明だが，膜表面のglycoproteinとタンニ

正常，筋ジス鶏筋両者に横走及び縦走するT−SyS−

ン酸が結合し電子密度を高めるためと考えられ，

temがみとめられたが，培養中期以後では走向の一111一

乱れ，部分的膨化は筋ジス鶏筋に多く観察された．

とめたが，培養中期以後ではこの変化は筋ジス

T−SyStemのこのような異常はDuchenne型筋ジ筋に多く観察された．

ストロフィー症でも観察されるが，一方，培養初期の正常筋や，bupivacainehydrochlorideにより3．膨化したjunctionalSRが筋ジス筋で観察された．

損傷を与えた筋の観察7）でも同様な変化がみとめられることから，再生・成熟過程におけるT−SyS−
temの変化と考えられる．

1）Oguchi，K．＆Tsukagoshi，H∴An electr。n

SRについては，従来正常筋ではTrsystemとmicroscopic study of the T−SySteminの交通はないとされており，Oguchiらは，硝酸ラ

progressive muscular dystrophy（Duchenne）

ンタンにより筋ジス筋のみでSRが染色されるこ

usinglanthanum．J．Neurol．Sci．，44：161，とから，T−SyStemとSRの交通を病的所見とし

1980．

文

献

た．一方，ScalesらはGolgi変法を用い，正常筋

2）Oguchi，K・，Yanagisawa，N．＆Tsukagoshi，でもSRが染色されると報告している．我々の実験では，正常鶏筋ではSRはほとんど染色されな

H・：ThestruCtureOftheT−SySteminhuman

かったが，筋ジス鶏筋では膨化した電子密度の高microscopic study．J．Neurol．Sci．，57：333，

いSRが観察された．これは，筋ジス筋の内膜系の1982．

musculardystrophy．Ahigh−VOltageelectron

異常としてT−SyStemとSRの交通が生じたもの

3）Scales，D・J・＆Yasumura，T．：Ⅰ．Stereoscopic

なのか，あるいは，筋ジス筋において膜表面のViewsofadystrophicsarcotubularsystem：

glycoproteinが変性しタンニン酸との結合性がSelective enhancement by a modified Golgi

高まった結果なのかは，今回の実験からは結論でStain．J．Ultrastr．Res．，78：193，1982．

きない．しかし，筋ジス鶏筋において，T−SyStem

4）Bonilla，E．：Staining of transverse tubular

及びSRのintramembranousparticledensityにSyStem Of skeletal muscle by tannic acid−

異常が出現することがCroweら8），Baskinら9）

glutaraldehydefixation．J．Ultrastr．Res．，58：

により報告されており，筋ジス筋ではT−SyStem

162，1977．

のみならずSRの形態的・機能的異常が存在し，この両者がATP−aSeを介する筋収縮過程の障害の原因となっていることが推測される．今回の方法
ではSRの全貌を観察することはできなかったが，これはSRの構造によるものか，あるいはタンニ

5）西岡五夫：タンニンに関する最近の研究．薬学雑誌，103：125，1983．
6）Mizuhira，Ⅴ．＆Futaesaku，Y．Proc．Elec．
Micro．Soc．Amer．，29：494，1971．
7）Miike，T．LNonaka，Ⅰ．et al：Behavior of

ン酸濃度，pHなど手技的問題かを検討し，本法にSarCOtubular system formationin exper−

改良を加えるとともに，他の染色法との電顕像のimentallyinduced regeneration of muscle

比較，組織化学の応用などを組合わせて，今後更に筋ジス筋のT−SyStem，SRの構造を検討していく予定である．

fibers．J．NeuroISci．，65：193，1984．
8）Crowe，L．M．＆Baskin，R．J∴Freeze−fracture
Ofintactsarcotubularmembranes．J．Ultrastr．
Res．，62：147，1978．

結論9）Baskin，R．J．＆Kawamoto，R．：Stereological

1．タンニン酸染色により，T，SyStemが経時的・恒常的に観察された．
2．培養の比較的初期から，正常・筋ジス鶏筋両者にT−SyStemの部分的膨化，走向の異常をみ−112−

analysisoftransversetubulesandsarcoplas一

mic reticulumisolated from normal anddystrophicskeletalmuscle・BiochietBiophy
Acta，771：109，1984．

13）−（1）Becker型筋ジストロフィーにおける神経筋
接合部の電顕的観察
福 原 信 義＊
研究協力者

は

じ

め

椿

忠

雄日

高

症例3

に

守

正

治＊

13歳男性．13歳になり歩客の異常に気づかれる．近位筋が軽度萎縮し，仮性肥大川．血Becker＆Kiener（1955）1）により伴性劣性遺伝

清CK1840−2420U／ml．

の進行性筋ジストロフィー（DMP）の良性型が、3症例とも筋電図ではミオパテーの定型的所見

それまでのDuchenne型DMPとは別の疾患単位を示した．

として報告されたが，彼らの報告が単に臨床経過の違いにのみ基づいていたため，はたしてBeck−

生検筋の処理：筋生検は局所麻酔下で上腕二頭er型DMPがDuchenne型DMPと本質的に異筋よりなされ，通常の如く，凍結切片について各なるものかどうかは議論のあるところである．一

種染色を行った．一方，電顕標本は筋生検用相子

方，Goebelら2）が，Becker3）の報告したオリジナに固定したまま2．5％グルタールアルデヒドルの家系で，筋電図，筋生検により筋原性所見に加えて神経原性変化がみられることを報告してか（pH7．4）で2時間固定後，神経筋接合部を中心として切り出し5），1％オスミュウム酸で2時間後国らは特に問題となっている．

定後，aralditeに包埋，光顕，電流で観察した．形は筋病変による二次的変化とは考えられない異常態計測したものは，全て正確に筋線経が縦断された標本を用いた．対照としては，手術時に採取さがみられる4）ことを報告しているが，今回，Beck−

れた非神経疾患患者（9〜24歳）の肋間筋を用い

er型DMPの生検筋について，あらためて線維タた．

我々は，既に，DMPの神経筋接合部（NMJ）に

イプ別にNMJの異常を検討したので報告する．

筋線維タイプの判定：筋線維タイプの判断は，対象と方法

Sj6strOmら（1982）6）7），Saltis＆Mendell（1974）8）の研究をもとにして，Z帯の中が100nm以上で，症例：

M帯の幅が広く，M線が5本確認できるものをタ

症例114歳男性．5歳で発症，現在歩行がや

イプⅠ，Z帯幅が100nm以下で，M帯の狭いものをタイプⅠⅠとして扱った．

や動話性ではあるが，走ることもでき，Gowers徴
候は認められない．仮性肥大（＋），血清CK562−

結

1471U／ml（正常＜20）．母方叔父も35歳より歩行

1）組織学的，組織化学的所見：
筋線維径の大小不同，問質の軽度の線維化，ご障害があり，血清CK28．
症例2

15歳男性．9歳時，歩行の異常と走るのが遅いということで発症．現在動謡性歩行で階段の昇降が困難．仮性肥大川．血清CK340−783
U／ml．母方祖父も9歳より歩行障害が始まり，64歳で死亡．母の血清CK42U／ml．

果

く少数のOpaquefiberなどがみられたが，中心核はまれであった．症例3では少数の再生線経，
fiber−Splittingがみられ，症例2，3ではタイプ線
経の小群化もみられた．症例1では，タイプⅠⅠ線
維優位（76．7％）であった．

＊金沢大学医学部神経内科＊＊都立神経病院
ー113−2）電顕所見：
1．筋線経の変化：NMJの観察を中心におき，光顕では全く異常の認められない部分を選んで電顕的観察を行った（図1）ため，Z帯のStreamingなどがわずかにみられたのみであり，後述のNMJの観察を行った筋線経では，ほとんど異常はみられなかった．
2．筋肉内神経の変化：上述のように正常にみえる筋線経の近くの有髄神経，無髄神経には，しばしばneurofilamentの配列の乱れ，グ））コーゲ
ン顆粒の増加，ミエリン像などの異常がみられた．

図1

アラルタイト包埋，トルイジン・ブルー
染色．×420

図23個の神経筋接合部がみられるが，2個はSSCのない単純な形である．

髄鞘の異常は認められなかった．
3．NMJの変化：Becker型DMPでは，3症例の25ブロックからの105個のNMJが観察され，対照では31個のNMJが観察された．Becker型
DMPでは同一筋線経に4−5個の軸索終末部がNMJを形成しているのが，しばしばみられた（図2）が，多くのNMJではsole−plateが著明に拡大し（図3），SeCOndary synaptic clefts（SCC）の数が減少し，長さも短小化していたが，幅は正常と思われた．また，Schwann細胞の突起または膠原線経が軸索終末部と後シナッブス膜の間に介入しているのはしばしばみられたが，軸索終末部自体の変性所見は軽度であった．写真上primary
Synaptic cleftsに連続して観察されるSSCの数（表1）は，対照のタイプⅠ線経では平均9．13±
4・01，タイプⅠⅠ線経では平均7．07土3．86で，両者に有意差はなかった．一方，Becker型DMPでは

×4，500タイプⅠ線経では4．71±2．55，タイプⅠⅠ線経では7・40±4・64であり，Becker型DMPのタイプI
線経は，そのタイプⅠⅠ線維および対照に比べ，SSCの数は有意に（P＜0．001）少なかった．
考察

本研究で用いた症例は，伴性劣性遺伝形式（症例1，2），特徴的な臨床像，血清CKの増加，筋電図所見などより，Becker型DMPであることは明らかである．Becker型の遺伝子の座位はXp21（短腕）9），であるのに，Duchenne型のそれは色盲との1inkageより良腕にある10）11）と考えられていたが，近年やはり短腕にあると報告され12），こ
−114−

図3

Sole−plateが拡大し，SSCのない極めて単純な形の神経筋接合部．Schwann細胞の突起が軸索終末部と後シナッブ
ス膜の間に入りこんでいる．×7，500

表1

Mean numbers of the secondary synaptic clefts
Compari50n

Type

工Fiberand Type
Type

8．13

Contr01±

工Fiber Type工エFiber

4．01

9．13

（n三31）

Becker−S伽SCular

6．87±4．82

Dystrophy
Compa工■ison

±

4．01

（n＝16）（n＝35）

工工Fiber Type
Type

7．07

±

工and

工エFibers

3．86

NS（n三15）

4．71±2．55（n＝105）

between7．40±4．64

p＜0・001（n三70）

betweenContr01andBecker■s

Musclユ1arDystrophy

p

く

0．02

p

く

0．001

NS

パテーでの変化18）に極めて類似していることかの面からは混乱している．しかし，筋病理学の立場からはBecker型とDuchenne型とでは非常にら，ネマリン・ミオパテー同様，筋の未熟性が問異なり，Becker型の病因には神経原性の因子が題となると思われる．従って，Becker型DMPのかなり関係しているのではないかとされている．

発症機序において，神経一筋の相互関係が重要な役

すなわち，Becker型では，群集萎縮，pyknotic

割をなしていると考えられる．

nuclearclump，小角化線経など，通常，脱神経とまされる所見が非常にしばしばみられる一方，Du−とめ

Becker型DMPでは，タイプⅠ筋線経のNMJ

chenne型で多くみられるopaquefiber，貪食細胞の浸潤はまれとされている13）14）．Becker型DMP

で，SSCの短小化，数の減少がみられ，その発症のNMJの変化は，これまでのDuchenne型
DMPで報告された所見15）l＄）に極めて類似してい機序において，神経一筋の相互関係が重要な役割をなしていると考えられる．

る．Duchenne型DMPにおけるNMJの変化は
文

筋病変による二次的な変化であるとする考えもあ

献るが，我々の症例では，筋力低下は臨床的に非常

1）Becker，P．E．＆Kiener，F．：Eine neue X−に軽く，観察部位も光学顕微鏡的に正常と思われchromosomale Muskeldystrophie．Arch．

る筋線経のNMJを選んでいるため，廃用性また

Psychiatr．Nervenkr．，193：427，1955・

は筋病変による二次的な変化とは考えられない．

2）Goebel，H．H．，Prange，H．，Gullota，F．etal．：

SSCの幅の拡大がないことより，重症筋無力症のBeckers

X−1inkedmusculardystrophy．

NMJとも異なる17）．また，筋ジストロフィーの研HistologlCal，enZyme−histochemical，and

究では，．得られた所見がジストロフィー病変とはultrastruCturalstudiesoftwocases，0riginally

直接関係のない，単なる再生所見をみているのでreported by Becker．Acta Neuropathol．
（Berl．），46：69，1979．

はないかということが常に問題であったが，タイ
プⅠ線経の方が変化が大きいことから，単なる再3）Becker，P．E．：Twonewfamiliesofbenign

生による所見でもないと考えられる．Becker型

sex−linked recessive muscular dystrophy．

DMPでみられるNMJの変化は，ネマリン・ミオ

Rev．Can．Bio1．，21：551，1962．

−115−4）福原信義，i易浅竜彦，鈴木正博ら：進行性筋ジmuscular dystrophy and G6

ストロフィー症の神経筋接合部の微細変化につP−D variants

COlourblindnessandXgbloodgroups．J．Med．

いて．臨床神経，16：981，1976．

Genet．，11：321，1974

5）Fukuhara，N．，Takamori，N．，Gutmann，L．，et

12）Kingstom，H．M．，Thomas，N．S．T．，Pearson，al．：Eaton−Lambert syndrome．Ultras−

P．L．，etal．：GeneticlinkagebetweenBecker

tructuralstudyofthemotorendplates．Arch．

musculardystrophyandapolymorphicDNA

Neuro1．，27：67，1972．

SequenCe On the short arm of the x6）Sj8str6m，M．，Angquist，K．−A．，Bylund，A．−

Chromosome．J．Med．Genet．，20：255，1983．

C．，et al：Morphometric analysis ofhuman13）BradleyW．G．，Jones，M．Z．，Mussini，J．LM．，

muscle fiber types．Muscle Nerve，5：538，

et al．：Becker−type muSCular dystrophy．

1982．

Muscle Nerve，1：111，1978．

7）Sj6str6m，M．，Kidman，S．，Larsen，K．H．，et

14）tenHeuten，R．＆DeVisser，M．：Histopath−al．：Z−and M−band appearanceindifferent

010gic findingsin Becker−type muSCular

histochemically defined types of humandystrophy．Arch．Neuro1．，41：7291984，

Skeletal muscle fibers．J．Histochem．Cyto−

15）Jerusalem，F．，Engel，A．G．＆Gomez，M．R．：
Duchennedystrophy．II．Morphometricstudy

Chem．，30：1，1982．
8）Saltis，L．M．＆

Ofmotorend−platefinestructure．Brain，97：

Mendell，J．R．：The finestructural differencesin human muscle fiber

115，1974．

types based on peroxidatic activity．J．

16）Harriman，D．G．F．：Acomparisonofthefine

Neuropathol．Exp．Neuro1．，33：632，1974．

StruCture Of motor end−platesin Duchenne9）Jacobs，P．A．，Hunt，P．A．，Mayer，M．，etal．：

dystrophyandinhumanneurogenicdiseases．

Duchenne muscular dystrophy（PMD）in a

J．Neurol．Sci．，28：233，1976．

family with an x／autosome translocation．

17）Engel；A．G．＆

Santa，T．：Histometric

Further evidence that the DMDlocusinat

analysisoftheultrastructureoftheneuromus・

Xp21．Am．J．Hum．Gent．，33：513，1981．

Cularjunctioninmyastheniagravisandinthe10）Emery，E．A．H．，Smith，C．A．B．＆Sanger，

myasthenicsyndrome．Ann．N．Y．Acad．Sci．，

R．：Thelinkage relations of theloci for

183：46，1971．

muscular18）Fukuhara，N．，Yuasa，T．，Tsubaki，T．，etal．：

dystrophy，COlour blindness and Xg blood．

Nemaline myopathy：histological，histo−

Ann．Hum，Genet．，32：261，1969．

Chemicalbenign（Beckertype）Ⅹ一borne11）Zatz，M．，ltskan，S．B．，Sanger，R．，et al．：

and ultrastructural studies．Acta

Neuropathol．（Berl．），42：33，1978．

Newlinkage data for the x−linked types of−116−13）−（2）Cytoplamicbodymyopathyの臨床的，病理学的研究
福

研究協力者

原

井 上 雄

Cytoplasmic body（CB）は，1962年KingEngell）によって最初に報告された封入体で，種々の神経筋疾患で時々認めるが，その成因について
はまだ明らかではない．Cytoplasmic body
myopathy（CBM）は，このような封入体が多数出現して骨格筋の病理変化の主体をなしているものであるが，今までにその報告は非常に少ない．
今回我々は，成人発症で呼吸筋障害による肺胞換気不全を呈したCBMの1例を経験したので，本症の臨床的，病理学的特徴について文献的考察

信 義＊
吉＊＊

吉

村

莱穂子＝

入院時所見：血圧100／74mmHg，脈拍102／分
整，体温36．4℃．昏睡状態で，自発呼吸なし．瞳孔は縮瞳し，対光反射正常．眼底にうっ血乳頭を認めた．眼球は正中位で，人形の目現象陽性．項部硬直なし．深部反射や腹壁反射は消失し，病的反射は陰性であった．
動脈血ガス分析は，pH7．0，PaO254．9mmHg，
PaCO2153mmHgと著明な呼吸性アシドーンス
を示していた．人工呼吸により意識は徐々に改善
したが，人工呼吸を中止すると呼吸は微弱で
Pa02とPaC02の逆転が容易に起った．血液検査
で軽度の肝機能障害とClの低下を認めたが，を加えて報告する．
症

例

患者：42歳，女性．
主訴：呼吸困難，頭痛，意識消失．
家族歴：両親が血族結婚であり，兄も56歳で呼吸筋障害による肺胞換気不全のため死亡しているが，その骨格筋にも多数のCBを認めており，本例と同一の疾患の可能性が考えられる．
既往歴：38歳時肝障害と蛋白尿を指摘されている．妊娠や分娩時に異常なし．
現病歴：生来健康であったが，25歳頃より歩行

CPKは91IUと正常であった．
意識清明後の神経所見では，知能や脳神経系に異常なし．四肢や体幹の筋肉は全体に萎縮性で，特に下肢の大腿部と下腿部，上肢遠位部に著明で，
1umbarlordosisを認めた（図1）．筋力は，下肢近位部，特に大腿外転筋群で2と著明に低下していたが，その他の筋力は比較的よく保たれていた．
線維束撃縞や仮性肥大は認めず，Gowers徴候陽性で，動揺性歩行を呈し，深部反射は下顎反射以障害が出現し徐々に階段を昇ったり，走ったりすることが困難になった．36歳頃より朝起床時に頭痛を感ずるようになり，38歳の昭和56年4月下旬頃より夜間の呼吸困難が出現した．5月には，日中にも呼吸困難を感ずるようになり，意識も傾眼傾向となり，精査のため当科外来を受診したが，診察を待っている間に急に意識消失を釆たして緊急入院した．
＊金沢大学医学部神経内科＊＊富山医科薬科大学第二内科

図1 患者全身像

一117−

外は消失していた．

てみえた．NADH染色では，異常はtypel fiber

入院後検査所見：胸部写真での深吸気と深呼気
時の横隔膜の位置は殆んど変化なく，呼吸機能も％VC50．6％，1秒率93％と拘束パターンを示しのみにみられ，異常構造物は染まらずに明るくぬけてみえ，またroutine ATPase染色ではfiber

た．経皮的横隔神経刺激試験では，潜時は左右各々typepredominanceやtypegroupingの所見は認めなかった．

8．8，9．2msecと正常であったが，振幅は両側とも電顕（図3）では，electron−denseな楕円形まに200JJVと低下し，刺激闇値も増加していた．筋たはamorhousな封入体が，Subsarcolemmal

電図は，全体にmyopathicpatternを示したが，regionやintermyofibrillar spaceに多数みられ，一部の筋ではpolyphasiclongdurationのNMU

その周囲に方向不定性に走行するthinの混入を認めた．末梢神経伝導速度は，脛骨神経を認めた．このような構造の周囲では，ミトコンのMCVが39．2m／secと軽度低下していたが，そドリアや他の細胞内小器官は殆んどみられず，隣の他では正常であった．髄液検査では圧が270接するmyofibrilではZ−band streamingが散見

mmH20と上昇していたが，蛋白や細胞数は正常されたが，そのSarCOmericpatternは比較的よくで，頭部CTスキャン，テンシロン試験，前腕部保持されていた．封入体の内部は，顆粒状構造物

筋阻血運動試験などにも異常は認めなかった．

とthinfilamentから成り，格子状構造は認めなか

filament

筋生検は，両側大腿直筋と肋間筋で施行したが，った．以上の封入体の所見は，従来報告されていその所見はほぼ同様であり，ここでは右大腿直筋

るCBの所見に一致すると思われた．また，顕著で生検の所見について述べる．HE染色（図2a）ではないがtubulo−reticularstructureも散見され，は，筋線経の大小不同，中心核の増加，少数の小角化線経などがみられ，特徴的所見として赤紫色

さらにそれらがhoney−COmb structureを形成しているイ象も認めた．

の異常構造物を有する線経を散在性に多数認めた．

以上の所見より，本例をCBMと診断した．凍結

しかし，Opaque fiberやbasophilic fiber，炎症筋切片の一部を，WeberとOsbornの方法で細胞浸潤，線維化などの所見は認めなかった．
ModifiedGomoritrichrome染色（図2b）でも，SDSpolyacrylamideゲル電気泳動を行ったが，筋蛋白の組成に特に異常はみられなかった．入院後

うすく赤紫色に染まる異常構造物がみられ，その約3年半経過を観察しているが，下肢帯の筋力低周辺部には赤色の封入体を多数認めた．PAS染色下は徐々に進行しており，また夜間に時々レスピ

では，異常構造物は染色されずに虫喰い状にぬけ

レーターの介助を必要とする状態が続いている．

図2

光顕像
a．HE染色 ×85
b．Gomori trichrome染色

図3 電昆巨像 ×3，600

×170
−118−

は予後不良である．

CPKは，160−200IUとやや増加傾向にある．

形態的所見のまとめを表2に示す．全例に共通

考

察した特徴は多数のCBの出現であり，組織化学的

CBMは，我々の調べた範囲では1970年のNa−にこの封入体は，Edstr8nら7）の症例を除く全例

kashimaら2）の報告以後現在までに表1に示す9においてtypel fiberにのみ出現している．ま報告21例が記載されている2）￣10）．その臨床像をまた，小角化線経やgroupatrophyなどの神経原性

とめると，常染色体優性遺伝の家族例15例，孤発変化を認めることもあるが，再生線経や炎症細胞の浸潤などを全く認めない点は特徴的で注目され

例6例であり，男女比は3対2とやや男性に多い．
発症年齢は1−53歳と様々で，20歳以後の成人発る．電顕では，CBのほか，filamentousbodyやtubuloreticular structureなどもしばしば認め，症例が9例（43％）みられる．筋力低下は，一般にまた10nmのintermediate filamentの増加やZ−

四肢近位筋，特に下肢帯に優位であるが，稀に遠位筋優位の症例も報告されている2），7）．また，顔面bandの異常も報告されている．以上の様なCBM筋や胸鎖乳突筋も各々24％，40％の頻度で侵されの臨床的，形態的特徴は，我々の症例の所見とよる場合がある．本例の様に呼吸筋麻痺を呈した症

く一致していると思われる．本例の場合，同胞に例も5例（24％）認め，Kinoshitaら3），Jerusalem
ら6），Patelら10）は，発病初期より呼吸筋障害の著であることから常染色体劣性遺伝型式をとってい明な症例を報告しており注目される．心筋障害やる可能性もあり興味深い．

も同様の所見を認めており，また両親が血族結婚

骨格異常も稀に報告されている．CPKは，一般に本症の成因を考える上で，CBの起源の解明が正常〜軽度上昇を示し，筋電図は通常筋原性変化

重要である．今までの報告では，Z−band由来，変を示すが，稀に神経原性変化や両者の混在を示す

性したmyofibril由来，intermediatefilament由こともあるようである．経過は一般に緩徐で予後来とするものなど様々であるが，Edstr仁imら7）の良好であるが，呼吸筋麻痔を早期から呈するもの

意見はこの点に関して注目すべき点がある．彼ら

表l Clinicalfeaturesincytoplasmicbody myopathy
Nak ashim ae t ．1 1 ．
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は，電顕にてintermediate filamentが増加して

2）Nakashima，N．，Tamura，Z．，Okamoto，S．，et

いること，抗desmin抗体でCBが陽性に染まる

al．：Inclusion bodiesin human neuromus−

こと，およびSDS−ゲル電気泳動で分子量55，000

cular disorder．Arch．Neuro1．，22：270−278，のdesminの増加を認めたことより，CBの形成に

1970．

desminが重要な関係があると述べている．この説

3）Kinoshita，M．，Satoyoshi，E．＆Suzuki，Y，：
Atypicalは，intermediatefilamentから成る平手骨筋細胞のdarkbodyがCBと形態的に類似していることか
らも興味が持たれる．本例ではSDS−ケリレ電気泳

myopathy with myofibrillar ag・

gregates．Arch．Neuro1．，32：417−420，1975．
4）Clark，J．R．，D

agostinS，A．N．，Wilson，J．，et動では特定の蛋白の増加を認めなかったが，この

al．：Autosomal

方法ではmyofibrillar proteinのみでなく可溶性
成分の混入している可能性もあり，今後ミクロ2

Clusionbodymyopathy：clinical，histologiC，dominant myofibrillar

次元電気泳動法や免疫組織化学的手法を用いての

istics．Neurology（Minneap．），28：399，1978．

histochemical，andultrastructuralcharacter−5）Goebel，H．H．，Muller，J．，Gillen，H．W．，etal．：

検討が必要と考えている．

Autosomaldominant

ま

と

in・

thy

め

CBの出現を主たる形態的特徴とする今までのspheroidbodymyopa−．Muscle＆Nerve，1：14−26，1978．

6）Jerusalem，F．，Ludin，HリBischoff，A．，etal．：

症例は，臨床的にも病理学的にも類似性が大きく，

Cytoplasmicbodyneuromyopathypresenting

CBMは一つの疾患単位として注目してよいと思

as respiratory failure and weightloss．J．

われる．

Neurol．Sciリ41：1−9，1979．

7）Edstr8m，LりThornell，L．E．＆Eriksson，A．：

文

献

Anewtypeofhereditarydistalmyopathywith

1）Engel，W．K．：Theessentialityofhisto−andCharacteristicsarcoplasmicbodiesandinter−

CytOChemicalstudiesofskeletalmuscleinthe

mediate（skeletin）filaments．J．Neurol．Sci．，
47：171−190，1980．

investigation of neuromuscular disease．

Neurology（Minneap．），12：778−794，1962．

8）Goebel，H．H．，Schloon，H．＆Lenard，H．G．，：
ー120−

Congenital myopathy with cytoplasmic
bodies．Neuropediatrics，12：166−180，1981．

patho1．，1：55−66，1982．
10）Patel，HりBerry，K．，MacLeod，P．，et

9）Wolburg，H．，Schlote，W．，Langohr，H．DリetCytoplasmic

body

myopathy：report

al．：

on

a

al．：Slowlyprogressivecongenitalmyopathy

iamilyandreviewoftheliterature．J．Neurol．

Withcytoplasmicbodies：reportoftwocases

Sci．，60：28ト292，1983．

and a review of theliterature．Clin．Neuro−ー121−14）福山型先天性筋ジストロフィー症の筋細胞膜の変化について−I．Freeze fracture法によるcaveolae
密度の検討
若 山 吉 弘■
研究協力者

熊

谷

俊

幸＝

渋

谷

誠

二●

本の一部を取り出し，細切し，2％オスミウム酸

は じ め に筋ジストロフィー症の病因として筋細胞膜異常

水溶液で2時間後固定し，エチルアルコールの上が注目され，本症では異常な筋細胞膜を通して多昇系列とプロピレンオキサイドにて脱水しエボン量に細胞内に竜売人したCaイオンによりCANPに包埋した．1JJの厚切り切片をトルイジンブル

等各種プロテアーゼが活性化され筋細胞変性が進ーにて染色し光顕にて観察，希望の部位を残してむと考えられている．そこで我々は今迄この筋ジ

トレミングしてから薄切，Ur．Pbの2重染色後，ストロフィー症における筋細胞8莫異常に注目し，電顕にて観察した．またfreeze−fracture法のた

Duchenne型筋ジストロフィー症（以下DMDとめの標本としてU字型筋甜子にはさみグルタール

略す）をはじめ各種筋ジストロフィー症でその筋アルデヒド固定した標本の一部を細切し，10％，細胞膜の内部構築をfreeze−fracture法を用いて20％，30％グルセリン水溶液中で，それぞれ筋組

検討してきたが，−DMDでみられるような筋細胞
膜の変化は顔面屑甲上腕型やmyotonic dystro−

織を室温で30分浸軟したものを用いた．浸軟後直
ちに液体窒素にて凍結し，EikoFDII凍結割断装

phyではみられず，DMDに特異的な変化のよう置に装着した．真空度2．5−4×10■7To汀で−に思われた．そこで今回は本邦に比較的多く，ま

120℃にて割断し直ちに電子銃にてプラチナとカた本邦の臨床研究者により確立された福山型筋ジーボンを蒸着し，レプリカ膜を作製した．レプリ

ストロフィー症（以下FCMDと略す）の筋細胞

カ膜の厚さは水晶発振子により監視し一定にした．

膜の変化をDMDと比較検討し，DMDの筋細胞

筋組織の付着したレプリカ膜は市販の塩素系漂白∬実の変化の特異性を検討する目的で本年度は特に剤にて筋組織を消化し，蒸留水にて3回洗浄後，筋細胞膜のCaVeOlae密度を中心に研究した．

グリッドにすくい電昆引こて観察し写真を撮影した．
この場合筋線経の同定は1）低倍にてSarcomere

材料と方法の外観がみえるもの，2）連続する内部構造に筋原

FCMD6例，組織化学的に正常な大腿四頭筋を線経がみえるもの，3）細胞膜にOrthogonalarray

もつ整形外科手術例6例よりの大腿四頭筋生検筋

やそのpitsが存在するものなどで行Li，またレプをU字型筋甜子にはさみ直ちに4°Cに冷却した
2．5％グルタールアルデヒド水溶液中で2時間固リカ膜の良否は1）細胞外空間がなめらかであるもの，2）筋細胞膜内粒子に大小不同が明らかであり，定した．また生検筋の一部は組織化学的検索用とbackgroundtextureがきめ細かく，かつ3）膜内してH・E，Gomori trichrome，DPNH，ATPase

粒子やorthogonal（pH9．4，4．6，4．3）染色を行った．電顕標本はU字型筋甜子にはさみグルタールアルデヒド固定標できるものなどで決めた．

＊昭和大学藤が丘病院神経内科＊＊愛知県コロニー中央病院小児神経科

arrayのpitsがはっきり同定

次にCaVeOlaeは正常筋線経ではSarcomereのA−Ijunctionを含んだⅠ帯に多く，A帯には比較的少ないので，SarCOmere全体が視野に入るようー122−比較的低倍の写真を用いるため，最終倍率40，000

DMDと本症とを区別する筋生検所見上での大き倍で焼付けた．このなかから正常対照群およびな相違点である．エボン包理の厚切り切片では変FCMD群のそれぞれ1例につき5P面，5E面
をat randomに取り出し，1枚のP面ないしE性筋線経でも変性の程度が軽いものでは筋線経の面の写真からSarcomere全体が入るよう少なくがみられるが（図1）通常の凍結切片のHEやとも1叫m2以上29．6／Jm2まで（平均約20〝m2）のareaに分布するすべてのcaveolaeからその密度

Gomori−trichrome染色標本ではこのような6−を算出した．正常対照群60枚，FCMD群60枚の関係しているものと思われる．このような♂−

caveolae密度から両群間の有意差を統計的に検lesionをもつ筋線経を電顕的に観察してみると図討した．

表面に底辺を置く楔形をしたいわゆる6Llesion

lesionはみられない．これには多分切片の厚さが2にみられるように筋原線経は疎しょう化し，
mitochondriaの膨化，SarCOtubularsystemの拡結果

FCMD生検筋の光顕的検索では筋線経の大小不同，変性，再生筋線経やPhagocytosisの存在，
内在核の存在，著明な問質結合織の増生がみられ，とくに発症早期からみられる問質結合織の増加は

図1張よりなる空胞形成や，SeCOndarylysosomeなどがみられ，特に注目されるのは筋線経の基底膜は残存しているものの，原形質膜が断裂しているのが観察される．
さて次に凍結割断法にて筋細胞膜内面構造を観FCMD生検筋のグルタールアルデヒド・オスミウム酸2重固定，エボン包埋標本の厚切り切片の光顕写真，筋線経の著
明な大小不同，円形化，トルイジン青に濃く染まる変性筋線
経と筋原線経が疎しょう化し，細胞表面に底辺を置くいわ
ゆる61lesionなどがみられる．（×250）
−123−

図2

FCMD生検筋の変性筋線維像．基底膜（矢尻）はよく保たれているが，筋細胞膜（矢印）は断裂している．筋細胞の内部では筋原線経は疎しょう化し，SarCOtubularsystemの拡張による空胞形成やelectron dense bodiesなど1ysosomeの存在がみられる．（×35，000）

察してみると，まず細胞質側のP面と細胞外脛側のE面と表l Caveolae density per square microninmuscle plasma membrane of normal andもにcaveolaeがみられ，P面ではFukuyama type congenital muscular dys−

CaVeOlaeの辺縁がsmoothであり，E面では辺プ縁

trophy（FCMD）

がやや隆起している．このようなcaveolaeはヒトも含め脊椎動物ではA−Ijunctionを含むI帯に多いが，このような傾向は本研究でも対照群，

FCr伯

Normal19．76士6．23d

18．35‡5．198
15．25 士 3．23

16．42‡7．36
19．77 士5．88
15．55！5．59
23．44士5．31

FCMD群ともにあるように思われた．ここでCaVeOlae密度はgroupmean±standarderrorof
the meanが正常群で18．11±1．59，FCMD群で20．54士8．01

18．17 士 3．74
21．32士2．91
23．11士7．48
12．46士1．67

19．25日．18b★

18．11日．59b★

a：Mean‡Standard deviation for each caseb：Group mean士Stan由rd error of the mean

19．25±1．18であり，両群間で統計的に有意差はみ＊られなかった（P＞0．5，表1）．

P〉0．5（two tailed t test）

られ，生検筋は筋線維径の大小不同，変性再生像考察

FCMDは生直後より筋緊張低下や筋力低下，関やphagocytosis，それにDMDと異なり病初期よ
り著明な問質結合織の増加がみられる．しかし光節拘縮，mental retardation，けいれん発作がみ

顕や従来の透過電昆削こよる観察では筋線維そのも−124−図3，4 Freezefracture標本の電顕写真で，図3は正常対照P
面，図4はFCMDのP面を示す．両図ともcaveolaeは矢尻で示されるが，両者に明らかを分布密度の差はみられな
い．（×40，000）−125−

のの変性様式はDMDのそれと変わらなかった．

討をし，FCMD筋のそれとの詳細な検討をおこな

従ってこのような筋線経の変化を来たす筋細胞躍莫

いたい．また来年度にはこの続きとしてortho−の内部構造を解析し，その変化をDMDのそれとgonal arrayをも含めた院内粒子の分布様式やそ比較検討する手始めとして本年度はcaveolae密の分布密度の解析へと進んでゆきたい．

度について検索した．
CaVeOlaeの生理学的役割については充分解明されてはいないが，現在3つの考えがある．

文献1）Ketelsen UP：Quantitative freeze fracture1）membrane reservOirとしての役割で，これはstudies of human skeletal muscle cell

元来，平ラ骨筋について伸展状態でり働くものと考え

membranes under normal and pathological

られたが，骨格筋では当てはまらないとされていCOnditions．In Angelini C，Danieli GA，る．

Fontanari D，eds．Muscular dystrophy2）横管系の一部としてのCaVeOlae．横管は筋細胞

research advances and new trends．Amster−

膜表面のCaVeOlae様構造より形成されるので，

dam：Excerpta Medica，1980，p79−87．

脊椎動物では横管の開口部はA−Ijunctionであ2）Bonilla E，Fischbeck K，Schotland DL：

り，ヒトの筋細胞膜ではA−Ijunctionも含めⅠ背Freezefracturestudiesofmusclecaveolaein

部にCaVeOlaeが多い．

human muscular dystrophy．AmJ Pathol，

3）pinocytoticvesicleとしてのcaveolae．筋細胞

104：167−173，1981．

は筋細胞膜とともにそのpinocytotic activityにより細胞外腔と活発な物質交換をおこなっている．

3）MoraM，ProttiA，CornelioF，PeluchettiD：

本研究ではFCMD群では正常対照群に比し統theoryofDuchennemusculardystrophy．Ital

計的に有意なcaveolae密度の差はみられなかっfreeze fracturecontributiontothemembrane

J NeuroI Sci Supp13：977102，1984．

た．DMDについては我々自身ではcaveolae密度

4）OsameM，EngelAG，ReboucheCJ，ScottRE：の検討をおこなってはいないが，3つの研究にてFreez6−fractureelectronmicroscopicstudyof

CaVeOlae密度の増加が報告されている1）2）3）．もしCulturedmusclecellsinDuchennedystrophy．

これが確かであると仮定すれば，FCMD筋では

In：Schotland DLed．Disordersofthemotor

DMD筋と何らかのpathophysiologiCな差が存在するのかもしれない．例えば培養ヒト骨格筋でunit．New York：John．Wiley＆Sons，1982，

はcaveolaeが非常に少ないと報告されている4）

5）Wakayama Y，Okayasu H，Kumagai T：

し，また虚血筋線経でもcaveolae密度は減少傾Quantitativefreeze−fractureelectronmicros−

向が出てくる5）ので，FCMD筋には再生筋線経やCOpic study of muscle plasma membrane of

変性筋線経の密度がDMD筋のそれとは異なる可能性もある．今後DMD筋のcaveolae密度の検

experimentalanoxicmyopathy．JNeuroISci−126−p489−501．

63，41ト421，1984．

III．膜，カルシウム，CreatineKinase15）Toxin−ア7イニティーによる骨格筋形質膜の分離法
桃 井 真里子＊
研究協力者

太 田 敏 子＊＊ 鴨 下 重 彦●

Muscle筋ジストロフィー症の成因・病態における膜異homogenize by Warling brender（a）
Cfg．140．000X g，20mln

常説は近年注目されており，細月包内の筋小胞体膜系に関しては広く検討されているが，形質膜は細胞内膜系に比して著しく少量であり，分散が困難

PPtl lligh speed homogenizer suplであることから生化学的情報が少ない．形質膜は78eC X

筋細胞の分化，機能に極めて重要な役割を持ち，Cfg．140．000X g，20min

ジストロフィー筋においても形質膜酵素の活性の2変化など，一次的異常を示唆する報告もある．本PPt3

研究では従来の非特異的分離法に代わるものとし2

cfg・13■000X

g，15・min（b）

Cfg・177．000X・g．50mh SUP3
PPt4（C）て，筋形質膜に存在するアセチルコリン・リセプ
ター（AChR）に対するア7イニティーによる形

図1

SuP4

ラット後肢筋からの粗膜画分の調整

質膜分経を検討した．固定相として批承知 プ叩わ（a）BufferA：0．3MKCl，0．25Mショ

Shmensisα−neurOtOXinをリガンドとし，担体と糖，25mMピロリン酸ナトリウム，10mMトリスーマレイン酸，lmMジチオ

してagaroseとpolystylene culture dishの2つを用い，各々による膜分艶を比較検討した．

スレイトール（pH7．5）．
（b）BufferB：0．25Mショ糖，10mM・トリスーマレイン酸，1mMジチオスレ

方粗膿画分の分離イトール（pH7．5）．
（C）BufferC：10mMトリスーマレイ

法

ラット後肢筋より図1の方法にン酸，1mMATP（pH7．5）．ppt4を粗膜画分とした．

て骨格筋粗膜画分を分艶1）．ppt4をBufferCに再浮遊し，更にアフイニティー分散に供−した．
Toxin一アフイニティーによる膜分離 批函如 才叩わえ，4℃，24hインキュベート後，溶液を除き，PBS

ShlmenSisα−neurOtOXin（Sigma）をCNBr−活性にて2回静かに洗浄し，更に3％BSA3mlを加え化Sepharose−6MBにカップリングさせ，0．1
mgToxin／mlケリレとした．粗膜画分（蛋白量47．4

4℃，．12h反応したものを用いた．対照として3％
BSAとのみ反応させたDishを用いた．Toxin−mg）を5mlToxin−agarOSeと4℃，24h反応後，カCOateddish内に粗膜画分（蛋白量9．48mg／ml）をラムに充填し，bufferCで洗浄後，1MCarbamyl−

加え，4℃，24hインキュベート後

Cholineにて溶出し，177，000×g，50分間遠心し，沈子重を回収膜画分とした．Dish法2）では，培養用

し，PBSにて軽く 2回洗浄後，1MCarbamyl−
Choline 3mlを加え4℃，5−6hインキュベー

polystylene dish（内径5ml，Lux社）を担体としトし，溶液を回収後，177，000×g，50分間遠心し，沈子査を回収膜画分とした．

た．PBSに溶解したToxin（1mg／ml）を3ml加＊自治医科大学小児科＊＊自治医科大学生物

形質膜マーカーの測定

溶液を除去

形質膜マーカーとして

OuabainーSenSitiveNa＋／K＋ATPase，AChR活性ー129−を用い，混入成分の指標としてOuabain−insen−

Na＋／K＋

sitive Na＋／K＋ATPaseを用いた．Na＋／

dishに結合せず回収されなかった事を示している．従って，膜細片の大きさと形質膜回収率は密K＋ATPase

活性はPostらの方法3）により，0．4

ATPaseのみの膜片はToxinTCOatedmMOuabainにより抑制される活性を，絵活性から引いたものをOuabain−insensitive活性とした．

1251−BGTBindingActjvity

AChR活性は，125トBungarotoxin結合活性としAdsorbedtoToxin−COatedDishて測定した．膜画分を125I−Bungarotoxin
フィルター上で非結合125トtoxinを除き，フィル
ターを6−カウンターで測定．1M Carbamyl−cholineと室温1hプレインキュベートしたものを●十ヽ

PのqJOのPくボ（excess）と室温l h反応後，DEAEセルロース・

一一■Toxin−COateddish

O・−OBSA−COateddishノヾックグラウンドとした．
SDS−ポリアクリルアミド電気泳動

各サンプ

10−14

ルを2％SDS，5％2−メルカプトエタノール中にて100℃，3分間ボイル後，10％SDS−ポリアク

図2

リルアミドケリレ上にて100V，6h泳動4）し，と4℃，24h反応後，非結合上清のAChR活性を測定し，結合AChRの％を求めた．

蛋白量はLowry法5）により，BSA

をスタンダードとした．
結果

アフイニティーによる形質膜分離

Toxin−COateddishへのAChRの結合
電気器官より精製したAChR（10￣15〜10−12moles）をToxin−COated dishCoomassie brilliant blue R−250にて染色した．
蛋白定量

1√12

Bindingact王vityadded（moles）

図2に示す

表l Preparation of muscle membraneby Toxin−Sepharose6MB様に，Toxin−COateddishには10￣15〜10￣12molesのAChRの約70％が結合し，一方，対照のBSA−
dishへのAChR活性の吸着はみられなかった．従ってDish上に固定されたToxinは結合活性を保F柑C町m罰ot摘箪還P・′還悠TP；萱童冒0・竃。
〜pliod

9．48

47．4

1．78

0・517

84・0

24・5

Unbound
1M

8．37

41．8

1．81

0．580

75・6

24・2

C8rbachol￣

持した状態で固定されていると考えられた．

125卜BGTb州ng

Toxin−agarOSe上での膜分画の結果を表1に示す．AChR活性は約70％Toxin−agarOSeに結合したが，1MCarbamylcholineによる溶出活性は1．5％であり，Na＋／K＋ATPase活性，蛋白量共に感度以下であり，結合した形質膜はagaroseカラ（pmol／mg prot）（tota−pmol〉

Applled

0．0114くXl）

0．540（100％〉

Unbound0．00390．168（30．8％1
0．008（1．5％）l M
C8rbachol

表2Preparationofmusclemembraneby Toxin−COated dishム内に留り，解柾されなかった．一方，表2に示す様に，Toxin−COated dish上には，約77％のAChR活性が結合し，42．6％がlM Carbamyl−cholineにて遊艶し，回収された．Ouabain−SenSi−
tive Na＋／K＋

ATPase活性は6％回収され，F仙（ぷ鵠mg）（憲即憲′h）霜0−竃乞。
ゎplled P．48
unbound

臥02

9・48
9．02

1・78

0・517

16・8

4・9

1・64

0・588

14・8

5・3

ばba。h。10．6710．040 21．5

0・989 −
125l−8GTbl爪dlng

Ouabain−insensitive Na＋／K＋ATPase活性は検（totalpm01）

出されなかった．AChR比活性は89倍増加し，座Pli8d

0．0114（Xl）

0．118

Unbound0．00276

0．0249（23％）

Ouabain−SenSitiveNa＋／K＋ATPase比活性は12はb．。h。−

1．01（×89）0．0460（42・6％〉倍の増加を示した．形質膜の内，AChRを含まず
−130−

日00％）

図3

SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（心 対照dishへの非特異的結合蛋白．
（B）ToxinーCOated

接に関係すると考えられる．high−Speed
homogenizerによる細切を7秒間，3回行うと，AChRi舌性の回収率は35％と著変なかったが，dishへの結合，非結合画分．
結論

筋形質膜画分は，Toxin−COated polystylene
dishによるAChRに対するアフイニティーを利Na＋／K＋ ATPaseは6％から3．7％と減少し，7秒間，7回では，後者は検出しえなかった．

用することにより，より単純な方法にて分画されSDS−ポリアクリルアミドゲル

膜にclusterを形成していることから，膜細片作

図3に対照た．AChRは成熟筋細胞膜上では主にシナプス後

dishから1M carbamylcholineにより回収された成の条件が収率に大き画分の10％ゲル上での分析を示す．uncoateddish

ATPaseの収率はAChR収率に比して低かったからは45Kの蛋白が検出された（A−a）．un−

が，AChRがclusterを形成しない培養筋細胞なCOated dish底に非特異的に吸着したactinの非どにおいては収率はより高いことが推定される．

く

影響し，Na＋／K＋

特異的遊艶と考えられる．BSA−COateddishから

又，他の形質膜上に特異的に表現されている分子，は染色しうるバンドは検出されず，COateddish上

例えばFucoseを含むオリゴ糖，トランスフェ））への非特異的吸着は無視しうると考えられた（Aンリセプター，等によるアフイニティーを利用し−b）．Toxin−COateddishへの非結合画分は結合画ての形質膜分離にも応用しうると考えられる．培分に比して45Kが多く38K39Kの2バンドは非結養細胞，生検筋などの微量サンプルの形質膜分経

合画分にのみ認められた（功結合画分の各蛋白の同には，特異的結合を利用する本法が殊に有用であ定は今後検討の予定であるが，形質膜マーカーのろうと思われ，今後，収率の増加を目的とした条

比活性の増大，及びOuabainLinsensitiveNa＋／K＋

件の検討を更に行い，ジストロフィー筋の形質膜

ATPase活性との比較からは，形質膜が高濃度に分離，生化学的検討を行う予定である．

分画されていることが推定される．
ー131−

文

献

−56，1977．

1）Philipson，K．D．andNishimoto，A．Y．：Efflux3）Post，R．L and Sen，A．K．：Sodium andofCa2＋fromCardiacSarcolemmalVesicles−

Potassium・Stimulated ATPase．：Methods
Enzymo1．，10：762−768，1967．

InfluenceofExtemalCa2＋and Na＋．，J．Biol．

Chem．，256：3698−3702，1981．

4）Laemmli，U．K．：Cleavage of StruCtural2）Mage，M．G．，McHugh，L．L．and Rothstein，

protensduring theAssembly ofthe Headof

T．L．：J．Immunol．Methods Mouse

BacteriophageT4．，Nature（Lond．），227：680−685，1970．

Lymphocytes with and without surface
immunoglobuin：preparative scale separa・

5）Lowry，0．H．，Rosebrough，N．J．，Farr，A．Let

tioninpolystylenetissueculturedishescoatedal．：ProteinMeasurementwith folin phenol

with specificically purified anti−

reagent．：J．Biol．Chem．，193：265−275，1951．

immunoglobulin．，J．Immunol．Methods．15：47

ー132−16）インタクト赤血球からのPPI抽出分離法と筋ジストロフィー症赤血球への応用
＝王＝

田

研究協力者

日

瑞 子■
安

藤

一

也＊

一晩4℃に放置後遠心によりsupernatantと的

私達は筋ジストロフィー症の細胞膜異常は，細residueに分駈した．そのresidueを6．7倍量の胞膜の刺激応答に関与するCa2＋調節機構，即ちC：M＝2：1で2回洗浄抽出した．supernatant

イノシトールリン脂質代謝にあると考えている．

を総て合わせ，総リン脂質定量の試料とし，residueはPPI抽出の試料とした．

そこで筋細胞のモデルとして赤血球を用いて，イ
ノントールリン脂質の検索を行うが，今だに茶黒色のresidueに，6．7倍量の0．25％濃塩酸をintact赤血球からポリホスホイノンタイド

含むC：M＝2：1を加え，捜拝後遠心（2，750×（PPI：diphosphoinositide：DPI，triphos−
phoinositide：TPI）の抽出方法がなく，ghostよg，20分，0℃〜4℃）を行い，Supernatantを得た．次いでresidueに6．7倍量の同一酸性C：M＝り抽出されている．というのは血色素をPPIより2：1を加え，撹拝を数回行いながら一時間放置

分馳出来ないためである．しかしイノントールリ

後，同一条件で遠心Lsupernatantを得た．さらン脂質系の代謝回転は非常に早く，その含量を調に3．4倍量の同一溶媒をresidueに加え，同様に処べるには，いち早く酵素活性を失活きせねばなら

理Lsupernatantを得，前2回の抽出液と合わせた．

ない．ghostを調整する間に，PPIは代謝すると考えられる．そこで私達はintact赤血球よりPPI抽

全抽出液をその1／5倍量のIN−HClで洗浄し，出を試み，得られた方法をDnchenne型筋ジスト

上層とbuffycoatを除去し，下層を得た．その下ロフィー症（DMD）の赤血球に応用した．

層を，その2／3量のC：M：IN−HCl＝3：48：47
で2回洗浄した．洗浄した下層に，その組成がC：

方法

M＝2：1になるようMeOHを加え，MeOHで赤血球の調整：赤血球は18−23歳の健康男子
リン血より得た．その赤血球をCa2＋（0．9mM）を稀釈したNH．OHでpH7．6−7．8に調整した．pH
調整はpHメーターで検出し，pH試験紙も併用した．

含むリン酸緩衝食塩水で3回洗浄し，43−45％ヘ

中和したPPI抽出液に，その1／5量の1．5MKCl

マトクリット値の浮遊液とした．処理は放て0℃で行った．

層にはその2倍量のCHC13を加え，挽拝し，その（8名）と同年齢のDMD患者（10名）の新鮮ヘパを加え，良く＝驚拝後2層分配した下層を得た．上PPlの抽出：はじめにPPI以外のリン脂質抽下層を前回の下層に加えた．その下屑をN2気流出を行った．1．5ml赤血球浮遊液に，4倍量の中で蒸発乾固し，C：M：H20＝75：25：2で溶

CHC13：MeOH＝2：1（60JLmOICa／gcellsl）を解した．不溶物は遠心（4，400×g，20分，0℃含む）を加え，挽拝後20分間放置した。次いで，C：〜4℃）により除去し，再びN2気流中で蒸発乾固

M＝1：1になるように，CHCl，を加え挽拝し，した後，50JJlのC：M：H20＝75：25：2で溶解＊国立武蔵療養所神経センターの操作は明記した以外0℃で行った．

し，蒋層クロマトグラフィーの試料とした．総てー133−

PPlの分離：PPI分離はシ））カゲル60薄層板を用いて，二次元展開法で行った．シリカゲル60薄CH30H：CH3COOH：H20＝40：17：15：12：8を用いた．

層板は，メルク社のHPTLCを1％しゅう酸カリ

DPl，TPlの検出と定量：DPIとTPIの検出はウムのMeOH：H20＝2：3の溶液に漬け，しゅ

ヨード蒸気中で行った．定量はBartett法2）を改う酸カリウムを含ませ，110℃で1時間乾燥したも良した方法でリン定量を行った．薄層板よりのを使用した．

DPI，TPIのスポットをかき取り，それを70％過塩

赤黒色で不溶物も含むPPI音容液を写真l Aの様に，TLC上にプロット

素酸で灰化した後，Fiske−Subbarow還元試薬，

し，C：M：28％

5％モリブデン酸アンモニウムと水を加え，7分

NH40H＝65：35：5で一次元展開を行った．トップまで展開した薄層板を取り出し，N2気流中で間沸騰水浴中で加熱発色させた．冷却後820mJJで比色した．

20分間乾燥後再び一次展開を行った（写真1B）．
色素を一次元展開方向に移動させるため

結果と討論

展開一

乾燥 を繰返した．色素が原点より充分触れた後，PPl抽出と分離：0．25％を含むC：M＝2：1

1時間N2気流中で乾燥し，二次元展開を行った．

をresidueに加え］驚拝すると赤茶色の血色素がi容

二次元展開液はCHC13：（CH。）2CO：出して来た．PPIと血色素は分離することは不可

C

縫

▲
＝
．
⁚
・
⁚
■
−
・
＝
・
・
⁝

P亡N

・

義

・
・
−
⁚
．
←
■
ト
．
−
■
′
H
＝
．
．
■

写真l
intact赤血球のPPI分散のTLCパターン
A）赤血球のPPI抽出液をプロットした原点
B）2回目の一次元展開で，血色素がわずか原点より移動C）5回の一次元展開で，血色素が原点より充分推れ（矢印），2次元展開で分離したDPIのとTPI汀）
しゅう酸カリ ウムを含むシリ カゲル60（メルク社
HPTLC）を使用．R：赤血球，S：牛脳から抽出した標準物
質．検出は30％Ammonium Bisulphate．

一134−

能という報告より，この血色素がresidueから総表1て音容出した状態で，PPI抽出完了とした．この抽DPIとTPI（牛脳）標準物質に対する
繰返し一次元展開の影響

出液をIN−HClで洗浄後，C：M：1N−HClで2回洗浄した．一般にbrain等からのPPI抽出液はnumber

1N−HClで洗浄した後，最後にC：M：0．01N−
HClで洗浄している．我々も赤血球から抽出した

DPI

TPI

Pllg

PIJg

PPI音容液に応用したが，PPIの約半量が上層に移

0．34
0．34

1．08
1．12

りに0．15MKClでも良いことが明らかとなった．

0．34

1．11

KClで洗浄後，蒸発乾回しC：M：H20＝75：
25：2で再び音容解したとき不溶物が出現した．こ

0．33

1．09

動し使用出来なかった．
中和したPPI抽出液を1．5MKClで洗浄した
時，2層分配するが，buffycoatは出現せず，色素の一部が上層に移動した．最近1．5M−KClの代の不音容物をアルカリ性C：M＝2：1に溶解し，
薄屑クロマトグラフ法でPPIの含量を調べた．そ

0．33

1．10

の結果PPIは検出されなかった．

0．33

1．08

最終的にPPI分離は，シリカゲル60TLCを用いて，C：M：28％Am＝65：35：5の展開溶液
で，一次元展開を数回繰返すことによって，PPI

0．32

1．08

より血色素を除去することに成功した．1回目の

0．32

1．08

展開では，ほとんどの血色素が原点に残った．2
回目の展開で写真l Bの如く，血色素は原点より離れ，4〜5回の一次元展開で血色素は充分原点
よDMD赤血球のDPIとTPI量は，赤血球の総リり敗れた．C：A：M：Ac：H20＝40：17：

ン月旨質に対しそれぞれ0．29±0．02％と1．00±0．05

15：12：8の二次元展開液で，写真1Cの如く，％であった．DPIは対照者のそれに比べ約66％に

DPI，TPIのスポットが得られた．

減少，TPIも約83％に減少している．これはDMD

このDPIとTPI量に対する一次元展開繰返し

赤血球のイノントール代謝系に何らかの異常があの影響を，牛脳から抽出したDPIとTPIの標準ることを示している．今後刺激に対する赤血球の物質を用いて調べた．その結果表1に示すように，

イノシトール代謝を調べ膜異常の原因究明を行う．

1−6回の一次元展開の繰返しは，DPIとTPI量になんの影響も与えなかった．

ま正常者とDMDのintact赤血球のDPlとTPJ
量：正常健康男子のintact赤血球のDPIとT−

め1）intact赤血球からPPI抽出分艶に成功した．

PI量は，赤血球の総リン月旨質に対して0．44±0．05％と1．20±0．09％であった（表2）．Michel13）がと2）DMD赤血球のDPIとTPI量は，対照者のそれに比べ減少していた．

ghostから抽出分推したDPIとTPI量に比較し，
DPIは約60％に減少し，TPIは300％に増加した．

文

献これはintact赤血球状で酵素活性を失括し，抽出

1）Hauser，G．＆Eichberg，J：Improved condi−

したのでTPIの分解を防ぐことが出来たと考え

tions forthe preservation and extraction ofられる．

polyphosphoinositides．Biochim．Biophy．Act．，

−135−

表2

赤血球のDPIとTPI量
総リン脂質に対するDPIとTPI含量の割合（％，mean±
S．E．）

DP］％

吉だ慧nerythrocyte o．75

TPI％

0．4

COntrOl

（n＝8）

0．44

±

0．05

1．20

±

0．09

D M D

（n＝10）

0．29

±

0．02．

1．00

±

0．05

326：201−209，1973．

activated polyphosphoinositide phosphodies・2）partlett，G．R．：PhosphorusAssayinColumn teraseintheplasmamembraneofhumanand
Chromatography．J．BioIChem．，234：466−468，

rabbit erythrocyte．Biochim．Biophy．Act．，

1959．

508：277−286，1978．

3）Allan，G＆Michell，R．H．：A calcium−

一136−17）Dudhenne型筋ジストロフィー（DMD）の筋小胞体機能（続報）
高

研究協力者

木

昭

荒 木
石

原

伝

夫＊
誠＊

藤

田

武

久＊

幸＊

杉

田

秀

夫＊

筋小胞体の主要な生理的機能は轟田胞内カルシウ
ムイオン（Ca）濃度の調節である．デュシェヌ型
筋ジストロフィー（DMD）の筋小胞体に機能障害が存在するか，あるいはそれが病因に関与するか否かを検討している．筋小胞体機能としてCa摂○■Ll 0−0．1 〇・・〇．tt■lJ

取とCa遊敵が大別される．我々は昨年度Ca遊離

○■Ll
C■†一〇

〇一量

の異常を示唆する結果を報告した1）．本年度はまずCa遊離異常が強く疑われる悪性高熱感受性ブタの場合を紹介し，その筋病変を検討した．次いでCa遊離機構の成長や分化に伴う変化をラット
骨格筋で検討した．第3にDMDにおけるカフェ

図1

インによるCa遊敵とCa誘発性Ca遊馳とを対含む溶液に2分間接触させて，筋小胞体にCaを負荷した．次いでG−0．1音容
液中にて各種濃度のカフェインによる拘縞を発生させた（功．そのカフェイン
拘縞のpeak tensionを40mMカフェ
イン（caf40）のもの（AとC）と比較して，濃度張力曲線を作製した．

比して，その異常につき考察を加えた．
方カフェイン拘縮テストの方法．まずス
キンドファイバーを3×10−7MCaを法

悪性高熱感受性（MHS）ブタの薄筋の一部を生検により採取し実験に使用した2）．ラット（約300gm，雄）の長址伸筋（EDL）とひらめ筋（SOL）を使用した．ヒト生検筋は10例の悪性高熱
ないし悪性高熱のうたがわれた症例，7例のCa誘発性Ca遊離は遠藤らの方法にならって，DMD症例より得られた．対照として外科手術にATPを含まない溶液中で分析した1）．骨格筋の際して小筋片の提供をうけた．ヒト生検筋は主に形態学的検索は従来の記載に従った2）．

上腕二頭筋である．
結

カフェイン拘縮の実験はスキンドファイバー法を応用した（図1）．一定条件下で筋小胞体にCa

果（1）MHSブタ

摂取を行わせた後で，G−0．1溶液中で各種濃度カ

MHSブタのスキンドファイバーは対照に比しフェインにより拘縞を発生させ，濃度張力曲線をて，低濃度カフェインによりより大きな拘縮を発作製した．その上で拘縞を発生させる間濃度，最生した（図2）．拘編の間借はMHSブタでは，

大拘縞の50％に要するカフェイン濃度を比較した．

1．1±0．7mMカフェイン（n＝10，mean±S．D．）
であり，対照では5．2±2．7（n＝9）であった．また＊国立武蔵療養所神経センター

最大の50％に要するカフェイン濃度はMHSブ−137−

S■︼■ニーO Uu■ト王︼U︼l

2

図2

4

6

8

10mM

ゆt︼︳こー○ ︼u■ト王︼U ︼lMHS（MH）と対照（CON）ブタにおけるカフェイン拘縞の比較．MHSブ
タでは低濃度カフェインにより著明な拘縞を発生した．

タで1．1±7．OmM（n＝10），対照ブタで6．6±2．8mM（n＝9）であった．いずれの指標に関してもp＜0．001で有意差と判定された．骨格筋の形態上の比較を行うとき，MHSブタには肥大筋線経の存在がみとめられた（図3）．肥大化はタイプ1，2

tl Il

Aと2Bのいずれにおいても存在した．筋線維タ

図3

イプの分布には両者で差異はなかった．タイプ2
B線経は76−78％を占め，その平均直径はMHS
ブタ，62±21〟m，対照ブタ56±17／Jm（p＜0．005）であった．壊死・再生筋線経は観察されず，筋の

】l l●

I●

l●

ll ll l1111111121りI

MHSと対照（control）ブタの筋直径分布の比較．MHSでは筋直径の大小不同が著明であり，大径の筋線経が全ての筋線維タイプにおいて観察された．

微細構造の変化は認められていない．
（2）ラット骨格筋におけるCa遊離の分化比較した（図4）．Ca親和性はEDLの方がよりラットのSOLとEDLを使用してカフェイン

大きいようであった．すなわちKm＝3．4×10−6M

拘縞のタイプ1およびタイプ2線経の差違を比較（SOL，n＝8）Km＝7．4×10−7M（EDL，n＝7）でした．タイプ1では0．5〜lmMカフェインで拘縞ありp＜0．001の危険率で有意差をみとめた．Caを呈する線経が少数あった．しかし多数のもので遊敵の最大速度は2．6±0．5min−1（SOL，n＝7），は2mMで拘縞が開始し，8mMで「最大拘縞を呈し

2．9±0．8min￣1（EDL，n＝7）であった．EDLにおた．濃度と張力関係は両者間で差をみとめなかっ

けるCa誘発性Ca遊艶を生後10日目と成熟後のた．閤値の平均は2．0±1．4mM（SOL，n＝6），
1．8±0．5mM（EDL，n＝5）であった．50％拘編に間で＼比較した．Ca親和性に関して生後10日目のも要するカフェイン濃度は2，4±1．4mM（SOL），

低いことが判明した．10￣SM以上のCaのもとで2．2±0，6mM（EDL）であった．

のはKm＝2．2×10￣6Mであり，成熟ラットよりは，Ca道経連度は成熟ラットと同等ないしそれ以Ca誘発性Ca遊艶をラットのSOLとEDLで上であった．

ー138−

C■ll●ln●C011tl●ttUr●

r■t●○tC■l●t●■●●
t mln−11

Tllr●th01d

C■lI●tn●
O

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3 ＄u

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≠
○
00

7 11

r

X

M ll
2 7 11

0

0
●

FK
4 ＄F

ラット赤筋（SOL）と白筋（EDL）におけるCa誘発性Ca遊離の比較．横軸：Ca誘発の刺激としたCa濃度．寿従
軸：Ca遊離速度．白筋の方が，より低濃度CaによりCa遊経が誘発された．
＊はP≦0．1で有意差をみとめた．

X

111

l川

図5

15

＋

ズ

7F

HK
3 0 11

10
▲
丁

YK

▲Y

t mHI

5

C o htr01■

図4−

t HH．7uHI

●
●

●

0
○
0

0●
●
●

ヒトMH症例およびMH疑診例（？
MH）におけるカフェイン拘縞の聞値．
黒丸：タイプ1線経，白丸：タイプ2
線経，×印：筋線維束．MH症例では低閥値の筋線経が多く存在している．

た．MH症例の白筋では10￣6Mで既に著明なCa（3）悪性高熱およびDMDのCa遊離
典型的悪性高熱より回復した症例では，カフェ

遊離があり，3×10￣6Mで最大速度に遺した．Ca

イン拘縞の闘値は低下していた（図5）．悪性高熱

遊離最大速度はMHで5．1±1，2min，1（type2，の不全型や疑診症例においては，タイプ2線経のn＝3），対照3．0±0．9（type2，n＝5）と増加して閥値は低下傾向である．タイプ1や筋線維東ではいた．DMD症例ではCa親和性は対照と同一であ境界値ないし正常域であった．ちなみにヒト対照った．しかし遊髄速度は最大値が1・7±1・3（typeでは，ラットの場合と異なりタイプ1の闘値はタ2，n＝4）とむしろ低値であった．typelや筋線

イプ2より有意に低下していた．
DMDでは2−3本の筋線維束を使用した場合

維束に関しても同一傾向であった．DMDでカフが多かった．7例中の6症例においてカフェイン

性Ca遊離の冗進は観察されなかった．

間借の低下をみとめた（図6）．この間値低下の程
度はMH典型例とほぼ同等であった．

考ェイン感受性の冗進した症例においても，Ca誘発察7に示した．対照では10−6−3×10￣6MにてCa（1）MHSブタの筋異常
MHSブタは養豚業において，豚ストレス症候

遊経が開始し，10−5Mにて最大遊離速度を呈し群（porcine stress syndrome）やむれ肉（pale，

Ca誘発性Ca遊離についての典型的結果を図ー139−

C●ll●ln●6011tr●Otl川●−Thl●●hoはC■−ln仙C●d C■r●l●■●●r■t●01t DHDIC■■●l●■●●

h血−tI

C■ll●tn●t MuI

5

10
⊥
T

C 0 11tl0 l■

D llD 0 ．
6 ▼

1．
2

t

7

X
X

XO
XX
X

13

図6

x

x

XX
X
×
X
X
X

○

9

15

X
X
X

X
O

X

X

・∴・・・
×
X
×

よ

E：＝］

X
X
X
X
0

◎

DMD症例におけるカフェイン拘縮閤値．対照例は筋線維束の値（n＝27，
mean±S・D．）を示した．8歳（8Y）の症例以外では闘値は低下していると判定された．

7

図7

SOft，eXudativepork）との関連で問題となってい

6

5

4

pC■

DMD，MHと対照（CON）におけるCa誘発性Ca遊艶の比較．白丸：タイ
プ2，黒丸：タイプ1線経．その他は図4に同じである．

る2）．この3種の症候は全く同一のものではない
かもしれないが，共通する骨格筋異常が存在する
ものと推定されている．MHSブタはストレスや性Ca遊経を筋線維タイプごとに比較した．ラッ

ある種の薬剤に暴露されなければ，正常状態にあトとヒトについて検討したが，動物種による違い

ると想像される．今回のカフェイン感受性の冗進が大きいことが指摘される．まずカフェイン拘縮の証明，あるいは従来の分維小胞体で使用した報（0・1mMEGTAを含む溶液中）に関して，ヒトで告3）から判断して，筋小胞体からのCa遊敵の異はタイプ1はタイプ2より感受性が高い（図5）．

常冗進の存在が確実である．筋収縮系や小胞体のラットのSOL（タイプ1）とEDL（タイプ2）のCa摂取には異常はないと推定される2）．すなわち
Ca遊馳異常がかなり原発的な病的過程と考えら

間には差違は認められなかった．Ca誘発性Ca遊離に関して，ラットのタイプ2のCa親和性はタれる．興味深い点は形態学的異常として筋肥大傾

イプ1より大きい．またタイプ2のCa親和性は向のみが観察されることであろう．壊死や再生現

成長後に増加することが判明した．

象はなく，筋分化も正常と判断された．微細構造

ラットとヒトに共通して，Ca誘発性Ca遊敗のにも異常は観察されていない．このような状態に

Ca依存性は赤筋（タイプ1）七より大きい傾向をおいて，ストレスや麻酔薬に対する抵抗が低下している事実は注目されよう．

認めた．これはタイプ1筋小胞体のCa容量がよ（2）Ca遊離機能の分化やDMDで観察されるCa遊艶の異常元進の原因

筋小胞体機能は筋線維タイプにより特徴的な差違が知られている4）．ヵフェイン拘露やCa誘発

り小さい事実と関係するのかもしれない4）．MHとして，筋の分化異常や未熟性の関与の可能性は少ないと推定された．

ー140−

（3）DMDのCa遊離異常

れはMH症例の異常と同程度であり，DMDで前回の報告と併せると11／14（79％）のDMD症例においてカフェイン感受性の冗進をみとめた5）．

MH類似症候が出現する事実を裏付けている．
（3）カフェイン感受性克進はDMDの早期の病態

異常の程度はMH典型例と同じであり，DMDにと推定された．その出現機序や筋変性上の意義はときとしてMH類似の麻酔副作用が出現したと今後解決されねばならない．

いう報告に合致している5）．カフェイン感受性冗
進の主要な原因は筋小胞体に由来すると推定して文

献いる．カフェインは筋小胞体のCa誘発性Ca遊艶1）高木昭夫，猪飼哲夫，春原経彦，杉田秀夫，石の機序を活性化してCa遊離を発生させるとされ

原伝幸：Duchenne型筋ジストロフィーの筋小ている6）．今回，ATP一濃度0の状態，すなわちCa

胞体機能，とくにCa遊離について．厚生省神経

再摂取の生じない条件下でCa誘発性Ca遊敵を疾患研究委託費（三好姓）．昭和58年度研究報告

直接的に測定した1）．この条件下ではDMDで検索した4例の全てでCa遊稚速度は対照よりむし

書，1984，pp162−165．
2）ArakiM，TakagiA，FujitaT，MatsubaraT：

ろ低値であった．ちなみにMH症例の1部でもPorcine malignant hyperthermia：caffeine

Ca誘発性Ca遊離は正常との結果を得た．ATP

COntraCture Of single skinned muscle fibers．

OmMの条件下ではCa誘発性Ca遊牡は生じにBiomed Res，（in press）

くいため，このような結果を得たとも考えられる．

3）Nelson TE：Dantrolene does not block

DMD骨格筋のカフェイン感受性冗進は早期に出Calcium pulse−induced calcium release from

現する異常と考えられる．すなわち収縮系機能や

a putative calcium channelin sarcoplasmic

筋小胞体Ca摂取能がほぼ正常な時期に既に観察

reticulum from malignanthyperthermia andされている．今後の問題として，DMDのカフェイ

normalpigmuscle．FEBSLett，167：123−126，

ン感受性冗進はCa遊馳異常に由来することをよ1984．

り直接的に証明する必要があろう．第2にDMD

4）高木昭夫：筋線経の生理，生化学とその病態，の筋変性との因果関係を追求することであろう．

脳と神経，34：929−938，1982．
5）TakagiA，Sunohara N，Ishihara T etal：

まとMalignant hypertherTnia and related neur0−

め（1）MHSブタの筋小胞体でCa遊離の異常克進

musculardiseases．MuscleNerve，6：510−514，が観察された．この現象はMHSブタの筋肥大や1983．

ストレス耐リ性の低下と関連していると推定した．

6）EndoM：Calciumreleasefromthesarcoplas−（2）約80％のDMD症例においてカフェインによmicreticulum．PhysioI Rev，57：71−108，1977．

る筋小月包体からのCa遊艶冗進が認められた．こー141−18）−（1）Kearns−Shy症候群と類似した臨床症状を呈した神経原性筋萎縮症の1例
栗 原 照 幸＊
研究協力者

岸

雅

彦＊

山

村

善

教＊

栗 林 忠 信＊ 鶴 田 和 仁＊

度，他方向へは高度の制限が見られる．両側に高度の神経性難聴を認める．文章をしゃべる事は不能だが，単語を発することは不明瞭ながらも可能である．囁下障害は認めず舌萎縮・線維束撃縮は認めない．中等〜高度の近位筋優位の四肢肢帯筋の萎縮・筋力低下を認める．協調運動障害，不随
意運動などは認めない．ったい歩きは可能だが，

年∴呈ノ：㍉1 ㌍﹂

我々は近位筋優位の筋萎縮，外眼筋麻痺，知能低下，難聴，末梢神経障害，性腺機能低下，頭部CT異常などC7）KeamS−Shy症候群において見られる症状を多数合併するが，筋生検所見は神経原性変化を呈しミトコンドリア異常を認めなかった
1例を経験した．このような症例は稀であり，わずかに迫ら1）の症例に類似点を見出すのみである
ので報告する．
症例：39歳男性，未婚．
主訴：歩行障害，知能低下，難聴．
現病歴：低体重にて出生したが発育は正常であった．昭和38年，18歳頃より原因不明の難聴，知能低下，性格の変化が出現し，昭和41年，21歳時に精神分裂病の診断にて精神病院に入院した．入院後，食事量に関係なくやせが進行，昭和58年頃
より歩行に異常が見られる様になり，昭和59年8月に約1週間の原因不明の意識障害がみられ，その後歩行不能となった．この為昭和59年9月当科人院となった．
既往歴：特記すべき事はない．
豪族歴：血族結婚，遺伝歴はない．
入院時現症：理学的所見では，身長160cm体重28kgで著明なやせを認め，女性型恥毛，葦丸萎
縮，小児様陰茎を認める以外に著変はない（図1）．神経′、ア：的所見では意識は清明だが，高度の知能低下を認める．眼瞼下垂，顔面・側頭筋の萎縮を認め，ミオバナー顔貌を呈している．眼底所見にて視神経萎縮・maCulardystrophyを認めるが，網膜色素変性は認めない．眼球運動は下転は中等

図1＊宮崎医科大学第三内科

ー142−

患者の全身像．著明なやせ，ミオバナー
顔貌を呈している．

しゃがみ立ちは不能である．感覚系は疎通性が悪く検査不能であるが，痛みには反応する．深部腱反射は消失しており，病的反射は認めない．
検査所見：検尿は正常で，末梢血はWBC3300，
RBC 359×104，Hb11．3g／dlと軽度貧血を認めるも未血像は正常である．生化学検査は入院時
GOT35IU／L（正常値0−38），GPT23IU／L（0−30），LDH820IU／L（160r365），ALPlO．9K．
A．（1．6−10．0），CK378IU／L（5−120）（MMtype
lOO％），ALD2．6IU／L（0．5−3．1），Creatine1．2
mg／dl（0．2−1．0），myOglobin26ng／ml（＜60）で筋肉由来酵素の上昇が見られる．蛋自分画・リボ
蛋自分画は正常である．血清学検査にも異常はな
く，抗アセチルコリン受容体抗体は陰性である．
血清鋼66FEg／dl，Ceruloplasmin26mg／dlであり，血液ガス分析は正常である．凝固系に異常はない．
尿生化学検査にてcreatineは190mg／dayと増加している．髄液検査は蛋白44mg／dlと正常上限
で，他は正常である．
内分泌学検査は，75g OGTT正常，T31．1ng／
ml，．T。9．2JLg／dl，TSH2．6JLU／ml，PTH1．1ng／mlと正常で，rapid ACTH負荷試験によるcor−

図2tisol，aldosteroneは正常，尿中17−KS 2．8mg／

頭部CTスキャン．自質に一致するび
まん性の低吸収域を認める．

day，尿中17−OHCS4．5mg／day，LHlOO．1mIU／
ml（2−32）†，FSHlO5．1mIU／ml（4L42）†，にてN9潜時は12．2msecと著明に延長し，中枢伝

LHLRH負荷試験によるLH，FSHは過敏反応，

導時間は7．Omsecと軽度の延長を認める．脳波検

尿中El・E2・E3正常，尿中testosterone22．3JLg／

査にて低電位及び，びまん性の徐波の出現を認め

day（24．Or118．6）J．以上よる．頭部CTスキャンにて図2の如く自質に一致り

hyper−

gonadotropichypogonadismと診断した．アミノ酸分析は正常，染色体は正常の46XYである．基礎

したびまん性の低吸収域を認めるが，基底核の石灰化は認めない．

代謝率は−17％，テンシロン試験は陰性である．

筋生検は右外側広筋と右短月非骨筋を行なった．

心電図・胸写に異常なし．四肢筋の筋電図検査

右外側広筋のHE染色標本でgroup atrophy，では，denervationpotentialがあり，NMUの数

Small angulated fiber，pyknotic nuclear clumpが減少し，giantpotentialを認めた．これらは筋がみられ，中心核も軽度増加しているが，壊死線

電図上神経原性変化である．myotonicdischarge

経や再生像，炎症細胞浸潤などはみられない．

は見られない．反復刺激にても，WaningやwaxT
ingは認めない．運動神経伝導速度は左尺骨神経

Gomori−trichrome変法染色にてragged−redfiberは見られない．NADH−TR染色にてsmall

47．0m／sec，左正中神経44．3m／sec，左俳骨神経

darkangulatedfiberが見られ，mOth．eatenfiber

26．8m／sec，左脛骨神経30．6m／secと特に下肢にも散見される．routine ATPase染色にてfiberて遅延している．感覚神経伝導速度は膵腹神経にtype groupingを呈し，type2位である（図3 A，B，C）．

て誘発電位は得られなかった．体性感覚誘発電位−143−fiberは92％と優図3 筋生検組織像．A〜Cは右外側広筋，Dは右短膀骨筋．
A．HE染色，125×，grOup atrOphy，Smallangulated fiber，
pyknoticnuclearclumpを認め，中心核も軽度増加している．
B．NADH−TR染色，125×，Smalldark angulated fiberが見られる．
C．routine ATPase染色，125×，typegrOupingが見られる．
D．HE染色，125×，grOup atrOphy，Smallangulated fiber，
pyknoticnuclearclumpを認め．中心核も軽度増加している．

Onion bulb formation．アミロイド及び異染性物㈱の異常は認めない．右肺腹神経のtoluidine blue
染色標本にて有髄線経の減少が見られるが，㈱

D）．電顕像にてミトコンドリア

Fiberdensity：6，265／mm2

NEE︑SLぷニーO LむqE⊃N

右短排骨筋でも右外側広筋とほぼ同様の所見が見られた（図3

Case：A77417

質の沈着はみられない．図4は有髄神経のヒスト
グラムであるが，総数6265本／mm2と中等度の減少を示し，一峰性の分布を呈し，特に大径線経の5減少が目だつ．

10

MyelinatedfiberdiameterLJJm）

図4 右月井腹神経有髄線経のヒストグラム．
一峰性分布を呈し，特に大径線経の減少が目立つ．
−144−

考は比較的まれで，松永ら2），葛原ら3），池田ら4）によ案

本症例の臨床像をまとめると 1）若年発症
2）孤発例 3）近位筋優位の神経原性筋萎縮
4）外眼筋麻痺 5）知能低下 6）神経性雉聴って報告されている．又，CPEOにhypogonadism

7）末梢神経障害

8）皐九萎縮（hyper−

た症例は幾つか報告されている．しかし，これらgonadotropic hypogonadism）となる．当症例のの報告例の中には本症例に見られた様な多彩な合外眼筋麻痺は慢性進行性外眼筋麻痔（Chronic

併症を同時に呈したものは数少なく我々の調べ得

progressive external ophthalmoplegia以下

た範囲ではわずかに迫らの報告1）が見られるに過CPEO）と呼ばれるものに相当すると思われる．

ぎない．彼らの症例は，表1に示す如く初発年齢を伴うもの5），pOlyneuropathyを伴うもの6），さらに本症例のCPEO以外の症状を部分的に合併しところでこの様に外月艮筋麻痺に多彩な症状を合併は40歳であるが孤発例で，進行性外眼筋麻痺，神するものとして，KearnS−Shy症候群が知られて

経性聾，神経原性筋萎縮，hypergonadotropic

おり，当症例で見られた合併症は，すべてKeams−Shy症候群に合併しうるものである．しかし

hypogonadismを伴っている．この症例もミトコ
ンドリア異常を伴わず神経・性腺系の障害による

Kearns−Shy症候群はミトコンドリア異常が見られる事がその疾患の特徴であり，本症例は2回のいる．迫らの症例では本症より知能障害は軽度で，筋生検にで慢性神経原性筋萎縮症に合致する所見

頭部CT上での白質の低吸収域は認められていなを呈しミトコンドリア異常を見出せなかった事か

いが，その他は本症例と同様の症状，所見を呈し

らKearns−Shy症候群とは異なる疾患とおもわ

1疾患単位となる可能性がある．

と思われる症状を多数合併し，本症例と酷似してれる．
結CPEOと筋原性筋萎縮症の合併例は多数ある

症候学的にKeams−Shy症候群と多くの共通が，本症例の様に神経原性筋萎縮症を伴ったもの

表1
症

当

例

初 発 年 齢語類似疾患との比較．
症

18

例

迫

ら の 症 例
40歳

歳

K ea r n s −Shy症候群20 歳以下
多 く は

家 族 歴

−

−

四肢近位筋群の萎縮＋＋＋

眼 球 運 動 障 害

＋

＋

＋

知 能 低 下＋＋＋神 経 性 難 聴＋＋＋

末 梢 神 経 障 害

＋

−

＋

小 脳 性 失 語 症

−

ー

＋

網 膜 色 素 変 性

−

ー

＋

性 腺 機 能 低 下

＋

＋

． ＋

−
ほ ぼ 正常不 完 全 右 脚 b l∝ k

自首 に一 致 し た

記載な し

心 電 図 異 常CSF

p rO te in

C

T

所 見

正

＋

常

び まん 性 低吸 収 域

−

上

昇

深 部自賛のびまん性低吸収 域＋

筋生検
而 t∝ h o n d ria 形 態 異 常神 経 原 性 変 化

＋

＋

−145−

＋

or

−

点を有しながら，ミトコンドリアの異常を認めな

身性筋萎縮を主徽とし，四肢筋の神経展性萎縮

い神経原性筋萎縮症の一例を報告した．類似症例と錐体路徽候を伴った1症例．神経内科 3：の報告は極めて稀である．

265，1975．

4）池田修一ら：筋原性および神経原性筋萎縮を伴文

う慢性進行性外E艮筋麻痺の1家系．神経内科

献1）迫 龍二ら：進行性外且艮筋麻痔，神経性聾，神12：447，1980．

経原性筋萎縮，hypergonadotropic hyp0−5）Lundberg，P．0．：Ocular myopathy withgonadismを伴う一症例．臨床神経 21：304，

hypogonadism．ActaNeuroIScand・38：142，

1981．

1962．

2）松永宗雄ら：外且艮筋・咽頭筋麻痔を伴った神経

6）Stephens，J．etal：Onfamilialataxia，neural

原性筋萎縮症の1家系．臨床神経12：171，

amyotrophy，and their association with1972．

progressiveextemalophthalmoplegia．Brain

3）葛原茂樹ら：進行性の外F艮筋・咽頭筋麻痺，全81：56，1958．

ー146−18）−（2）Caイオン電極による筋細胞内外のCa濃度の測定：マーカイン急性筋融解への応用
栗 原 照 幸＊
研究協力者

日

田

中

政

幸＊

的

筋ジストロフィー症では筋肉の再生より崩壊がより強く起こっているために筋原線経の減少が進

塩

屋

敬

一＊

山

村

善

教＊

筋標本は実験中95％02と5％C02のき昆合ガスを通じて酸素化を続けた．Ca−freeのタイローズ音容
液は5mMのEGTAを加えて作成した．

行性に生じていると考えられ，筋崩壊の発生機序

Caイオン交換樹脂を用いたイオン電極は図1を明らかにすることは重要であるが人が対象のため研究を進めにくい点も多い．近年急性筋融解のに示したように，微小管ガラス電極の先端600／ m
までシリコンに浸し，これを200℃，60分間加熟し実験モデルとして塩酸ブビバカイン（マーカイて，ガラス管の先端内面にシリコンを付着させてン）が取り上げられ，形態学的，生化学的研究が行から，0．1MCaC12音容液でガラス電榛を満たし，次

われている1）2）3）．筋崩壊の最初の段階には筋肉構に電極の上から陰圧をかけて電極の先端20叫m

造蛋白質の特異的分解にCa依存性中性プロテアの高さまでCaイオン交換樹脂を顕微鏡下で入れーゼが働いていると考えられ4），Caイオンの濃度を筋細胞内外で計測することは必要なことである

た．この電極の先端の直径は2JJmのものを用い，単一筋細胞へ挿入可能である．各々のイオン電極

が，これも技術的に困難で，現在まで直接的な計が作成されると，1本ずつCaの標準音容液6種類

測は文献上見当たらない．

（10￣lM，10￣2M，10−3M，10−4M，10￣SM，10L6

今回の実験は以上の事項を考えて，Caイオン交M）の中に浸して標準曲線を作成した．Ca濃度の換樹月旨を用いた微小管イオン電極を作成し，筋細胞内外のCaイオン濃度を測定することを第一の対数を横軸にとり，イオン電極を各標準溶液の中に浸した時のエレクトロメーターの読みを縦軸に目的とし，次に塩酸ブビバカインを用いた急性筋

とると両者はよく相関し，直線的に変化するので，融解の機序についても，現在まで細胞内Cai農度

Ca濃度を電位差（mV）として読みとることがでの増加が筋融解に関与していると推定されながらきる．

も直接筋糸田胞内のCa濃度を計測した文献はない
結ので，Caイオン電極を応用してこの点を明らかにすることである．

果

タイローズ音容液を筋細胞外液として実験に用いているが，このCai農度は1．67×10￣3Mである．

方法

筋細胞内Ca濃度は3本の異なるCaイオン電極

対照はウイスター系SPFラットの横隔膜毒雲本で計測したところ，3回の実験の各平均値はを用い，膜電位は3MKClを満たした微小管ガラ

2．64×10￣5M，9．88×10￣SM，1．75×10￣4Mといス電極によって計測し，塩酸ブビバカインは吉富

う結果を得た．
次に急性筋融解の実験を5mMの塩酸ブビバカ

製薬より提供された原未を5mMの濃度でタイローズ音容液に音容解して急性筋融解の実験に用いた．

インを用いて行った．まず膜電位の変化を5分間ずつプビバカインに浸して経過した時間ごとに35＊宮崎医科大学第三内科

分まで追跡すると表1のようにCaが細胞外に存−147−

Caion−eXChanger microelectrodel
1・
4 m rヮ
9Iass￠Ore

O．1M CaCl2

SiliconizedT：dCaion−eXChanger
l叫
」 ト
2t 3〃

図1

Caイオン交換樹脂を用いた微小管イ
オン電極

表1

塩酸プビバカインによる膜電位の変化

ブビバカイン5mMの濃度で細胞外液に加えた際，膜電位を5分間ごとに35分後まで計測したところ，細胞外液中にCaイオンが存在しても，しなくても膜電位はコントロールの−85mVより−62mVに低下するので，膜へのプビバカ
インの作用はCa濃度とは無関係に起こっていると考えられる．

5 m M B u p iv ac a in H C I in T y rd e ．S
S o l・【c a 2矩 L 52 州

5 m N t B u p iva ca in H C l ＋ 5 m N t E G T A
in C a 2 fre e T yr 等軋川
N o ． Of fib ers

T im e（m in I

N o ． of fibe rs

1
6
11
16
21
26
31

− 5
− 10
− 15
− 20
− 25
− 刃
− 35

16
15

−7 7 ．4 士 3 ．9
−77 ．4 士 6 ．8

27
21
刀
27
41

C o n tro ltTy rd e ls s o lu tio n ）RM Ptm V I

RM P

tm V l−7 6 ．6 士 6 ．0
−70 ．2 士 5 ．2
−6 5 ．9 士 8 ．1
−6 2 ．7 士 6 ．9

45
31
44
15
29
19
22

−78 ．0 士 3 ．8
−64 ．3 士 7 ．4
−65 ．8 士 5 ．7
−6 1 ．9 士 6 ．8
一朗 ．8 士 6 ．7
づ 9．9 士10 ．0−62 ．4 士 6 ．5

−8 5 ．5 士 2 ．6

41

−85 ．5 士 2 ．6

−148−

在している場合〔表の左〕でも，Caが細胞外に存在していない場合〔表の右〕でもコントロールの−85．5mVから−62．7mV，−62．4mVと夫々急速に低下することが，明らかになった．わずか35分でこのような膜電位の低下がみられ，プビバ
カインは急速に筋細胞膜に障害を与えることと，膜への障害は細胞外液のCa濃度には影響されない薬物の直接作用と考えられる．
筋融解の一つの指標として筋肉酵素を計測する
ために，横隔膜標本0．38gを100ml中の溶液に浸し，95％02と5％C02の混合ガスを通じて酸素化
しつつ，30分ごとに2時間後まで細胞外液を各回3mlずつ採取してCreatine Kinase（CK）とAl−
dolaseを測定した．図2にこの結果をまとめた．
細胞外液がコントロールのタイローズ溶液と，5mMのEGTAを加えてCa濃度がOMとなっている塩酸ブビバカイン溶液ではCKとAldolaseは有意に上昇せず，Caを含むタイローズ溶液中に5mMの塩酸プビバカインを含む溶液に筋標本を浸すと△印のグラフで示したようにCKもAl＿
dolaseも上昇することが明らかになり，これらの酵素の上昇は，膜電位が急速に低下した初めの30分以内ではみられず，それより遅れて60分，90分，120分後に時間経過と共により著明に上昇している．
筋標本の一部は対照と塩酸ブビバカイン5mM
50に2時間半浸した筋標本について凍結切片をつくり，組織染色を行って形態学的にも観察したとこ

図2

ろ，後者では図3に示すように，Opaquefiberや
empty sarcolemmaltubeといわれる筋変性像を認めた．
次に筋細胞内のCaイオン濃度が，細胞外液がCaを含むタイローズ溶液の時と5mMEGTAを60

90120mln塩酸ブビバカインによる筋肉酵素の漏出．
Caイオンを含まないタイローズ溶液
ではCK，Aldolaseは上昇しないが，Caイオンを含むタイローズ溶液では60分，90分，120分後に筋肉酵素が上昇する．

加えてCa−freeの時で異なるか否かを検索した．
細胞外液が1．52×10￣3MのCa浪度の際，塩酸ブ様にイオン電極の読みはCaがOMの時−52．0±

ビバカイン5mMのタイローズ溶液に30分間筋肉

2．OmV，細胞内Caについてもイオン電極の読み標本を浸した際の筋細胞内Ca濃度は1．47×10−3は膜電位を減算した後に−49．8mVとOMに極めMと測定され，細胞内外でのCa濃度の差がほとて近い値を示した．つまり細胞外液のCa濃度をO

んどなくなっていた．これに対して5mMEGTA

Mにした際には，筋細胞内のCa濃度は塩酸7を細胞外液に加えておくと塩酸ブビバカインは前

バカインを用いても上昇しないということである．

と同様5mMで30分間筋標本を浸しても，表2の又細胞外に通常に存在するmMオーダーのCa

ー149−

ビ

図3 横隔膜凍結切片標本
A．5mM塩酸ブビバカインに2時間半浸した横隔膜．HE染色
125×．3本のOpaque fiber（†）とempty sarcolemmal
tube（▲）がみられる．
B．Aの連続切片．NADH−TR染色．
C，D．タイローズ溶液に2時間半浸した対照の横隔膜
C．HE染色150×．D．NADH−TR染色150×．いずれも特記すべき変化を認めない．

表2

細胞外液がCa−freeの時：

細胞外Ca濃度がOMの時の筋細胞内Ca濃度の測定．
細胞外液にEGTA5mMを加えてCa−
freeとすると，塩酸ブビバカインを用いても筋細胞内のCa濃度は増加しな≡てi：：aine C …：：ミinCa−freeTyrode′sSol．

30分間浸した時の検索

し ヽ

細
胞
外
Ca

El
e
c
t
r
o
r
n
e
t
e
r
の
読
み

Ca
濃
度

N
三
1
6
，
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5
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．
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2
．
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0州

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V 、
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Ca

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．
い
−
4
9
．
8
、
＿
＿
一
′

細胞外のCa濃度が O Nt のときはBupivacaineHClで筋細胞膜が陣害されても，Caは外・一一内に入らないので増加しない．

−150−

は，塩酸プビバカインが30分間作用すると筋細胞

塩酸ブビバカインによる急性筋融解は，筋ジス

内もmMオーダーのCa濃度に上昇するというトロフィー症にみられる筋変性より急激に起こっ結果を得た．

ており，そのままの結果で疾患と同一視することはできないが，以上に述べた事項は，筋細胞膜の考障害が起こってCaイオンの透過性が増せば，按

筋細胞内外のCa濃度の測定，筋肉酵素の上昇，

元々高い濃度で細胞外液中にあるCaは外と内と膜電位の変化，筋の組織像等を総合して考察する．

が同一の濃度になっただけで筋崩壊が起こり得る

急性筋融解の機序を次のように考えると以上の結ことを示唆する．

果をすべて説明し得ると思われる．塩酸ブビバカ
結インはまず初めの30分ほどで膜を急速に障害し，

語

膜電位を−85mVより−62mVにまで低下させる．

Caイオン交換樹脂を用いた微小管イオン電極

筋細胞膜内外の電解質や物質の移動が容易に行われるようになると考えられる．そして細胞外のCa

た．塩酸ブビバカイン5mMを用いた急性筋融解を自作して筋細胞内外のCaイオン濃度を測定し濃度は通常mMオーダーである．タイローズ溶液
では1．5〜1．7mMと測定された．塩酸プビバカイの機序を検討したところ，初めに筋細胞膜の障害

ンを30分間作用させると筋細胞内もCaイオン電

し，mMオーダーのCa濃度となり，それに引き続いて筋融解が起こり筋肉酵素の漏出が起こり，組極で測定したところ1．47mMと上昇する．このレベルではmMオーダーで働く中性プロテアーゼも働き得るので筋原線経に蛋白分解が起こってくが起こって，Caイオンが細胞外より細胞内へ流入

織学的にもopaque fiberやempty sarcolemmal
tubeを認めた．

ると考えられる．そして60分，90分，120分と時間
文を追ってCKやAldolaseも上昇を認め，形態学的にもopaquefiberやemptysarcolemmaltube

献1）Benoit PW，Belt WD：Destruction andを認めた．細胞外のCa濃度をEGTA5mMを加regeneration

ofskeletalmuscle

after

treat一

えてOMとしておくと筋肉酵素は上昇しないし，

ment withlocal anaesthetic，bupivacaine

又筋細胞内Ca濃度も上昇しない．このことは，塩（Marcaine）．J Anat，107：547−556，1970．

酸プビバカインによって筋細胞膜が連続性を失う

2）Hall−Craggs ECB：Early ultrastructural

か孔が開き，筋細胞外のCa濃度はmMオーダー

changesin skeletalmuscle exposed to theと高いので，外から中へ入り，細胞内もmMオー

local anaesthetic bupivacaine（Marcaine）．
BrJ Exp Path，61：139−149，1980．

ダーのCa濃度になり筋融解が起こると考えられ
る．筋細胞内にはミトコンドリアや筋小胞体にCa

3）猪飼哲夫，高木昭夫，米本恭三：筋小胞体機能は高濃度に含まれ，前者では1．1〜2．5mM，後者でに対するマーカインの影響．臨床神経，24：65

は16〜20mMのCa濃度があるが，筋線維全体の−71，1984．

容積からみて，ミトコンドリアは3〜5％，筋小4）杉田秀夫，石浦章一：筋ジストロフイ「症とプ胞体は2〜4％の容積しかないので，たとえ両者

ロテアーゼ．神経進歩，24：821−830，1980．

から最大限Caが遊維されても筋細胞内のCa濃5）Bodensteiner，JB，Engel AG：Intracellular

度は0．7mMを越えることはないと計算されていcalciumaccumulationinDuchennedystrophyる5）．従って今回測定された1．47mMというレベand other myopathies：A study of567，000

ルは，筋細胞外より細胞内へ流入した可能性が高いのである．

musclefibersin114biopsies．Neurology（New−151−

York），28：439−446，1978．

19）筋肉酵素の漏出機構（白鼠を用いて）
植 田 啓 嗣■研究協力者

阿 部 千 史書 神 谷 和 恵＊

方は じ め に法

筋栄酵素の漏出機構には，（∋神経性，②体液性，5週齢の雄性ラット（SD系）をsolid−basal−③膜透過性，（彰筋肉内代謝障害性に加え，⑤栄養

diet（MF）−オリエンタル酵母製で飼育，その後性などの諸因子が関与しているものと想定される．
Duchenne型では，伴性劣性の遺伝様式をとり，一部のラットをsyntheticTdiet（表1）に切り替
え，飼育した．

且つ筋渠酵素の漏出が著明にみられる．この場合，
DNAの異常が如何なる過程を経て筋策酵素の漏定，開腹し，下大静脈から採血して，血清中の出と結びついているのか，逆に，酵素漏出が果た

Creatinekinase値，並びにpyruVateとlactateのしてDNA検索のindicatorとして用い得られる含量を測定した．

のか，実験の容易な雄性ラットを用いて検討してみた．

リンガ一・マンハイム社製）を用い，Chemtek式

そして上記のラットを適宜選んで，仰臥位で固Creatine kinaseはモノテストCK−NAC（ベー自動分析器を使用して，また，pyruVateとIactate
はデタミナーPA，デタミナーLA（協和メデック

表1

Diet

ス社製）を用い，Videochem式自動分析器を使用

l．Solid−basal−diet
MF（ORIENTAL YEAST CO．，LTD）
2．Synthetic−diet（％）
17％ p r10 ％ p r

5 ％ p rC a S e ln

1 7 ．01 0 ．05 ．0

d e x tr in

4 ．9

1 1 ．91 6 ．9Su C rO S e

7 0 ．07 0 ．07 0 ．0

o il

2 ．0

2 ．0

2 ．0

c e llu lo s e

1 ．0

1 ．P

1 ．0

sa lt m

4 ．0

4 ．0

4 ．0

してそれぞれ測定した．

結果

A．無処置ラットの血清creatine Kinase値（表2）
SOlid−basa卜dietで飼育し，各時点で採血，Creatinekinase活性を測定した．そしてその結果を表2の左端で示し，（）内にはそれぞれの体重をix tu r ev it a m in m

ix t u r e（V B l f re e ）

1 ．0

1 ．0

1 ．0

0 ．1

0 ．1

0 ．1

記載している．
その結果は，最高値が10，553U，最低値が427U
で，そしてその平均値は4，288Uとなり，正常ヒトの上限値が94Uであるのと比べると，いずれも高c h o lin e c h lo r id e

CaSein：Vitamin free
Oil L：plant 4．1iverl

く，且つ個体差が大きい．また，体重別にも並べてみたが，酵素値に一定の規則性は見出せなかった．
そして，採血までの操作が慣れるにつれて，個体差も小さく，且つ活性値は低下した（表3→表愛媛大学保健管理センター

4，5）．

−152−

表2

Creatine kinase activities and anesthesia

Free

Diethyl−etherlllO（138）427（247）
10370（184）2580（215）
4148（243）

4575（186）

945（181）5917（190）

Pentobarbital
50mg／mg

13……去‡壬訟（旦鱒）⑩

317（184）（呈Z塑）

543（190）573（221）598（214）

lノ

0．5mg

506（221）726（210）1．0mg

1720（181）1165（184）
4514（192）
1360（210）
811（212）（）：Body weight（）：Averageofclでatine kinase

表3 Effects of vitamin Bl free diet（1）Increase ratio of Creatine kinase Pyruvate Lactate
body weight（％）（u）（mg／d且）（mg／d￡）
Solid basal diet

132
123
120
133
120
126
（126）

Syntheticdiet（protein，17％）〜vitamin

Bl

free〜

113
112
118
126
117
103
（115）

Initialbody weight：155±9g
Duration ontheadded diet：5days（）：Average

C．ビタミンBl（VBl）欠乏食投与下ラットの血B．麻酔下ラットの血清creatine kinase値

清creatine kinase値（表2）
エーテル麻酔下のラット（表2，中央）では，最1．正常タンパク含量の食餌下では（表3）

高値が5，917U，最低値は317U，そしてその平均値

ラットを2群に分け，一群には表1のSOlid−は2，781Uとなり，やはりヒトより高値を示し，個

basalTdietを，他群には表1のSynthetic−dietの体差も大きく認められたが，概して，無処置のラ17％を投与し，5日後の体重変化率（％）と血清のットより低値を示した．

creatinekinase値，pyruVate濃度，lactate濃度を表示した．

また，ベントパルビタール麻酔下（表2，右端）のラットでは，50mg／ml音容液，0．5ml皮注5分後

この場合，Synthetic−diet投与群−VBl欠乏群

で，最高値726U，最低値506U，そしてその平均値（下段）はsolid−basal−diet投与群−COntrOl群

は589Uとなり，前記2群より低値を示し，且つ個（上段）に比べ，VBlfreeのビタミン混合を使用

体差が少なかった．しかし，上記溶液1．Oml皮注5

し，且つSuCrOSe含量を15％から70％に増量，その分後では1，720Uを示した．

分dextrin量を減量して，各栄養素の％を調整しー153−

ている点で違いがある．
その結果は，体重の増加ではcontrol群が126％，欠乏群が115％と欠乏群でやや低下．Creatine

dl，欠乏群が34．1mg／dlとなり，いずれも欠乏群で増加していた．
3．タンパク含量5％の食餌下では（表5）kinase値の平均値は，COntrOl群が1，086U，欠乏

ラットを2群に分け，一群には表1のSOlid−群が1，019Uと殆んど差はなく，且つ共に個体差

basal−dietを，他群には表1のSynthetic−dietのが大きかった．一方，pyruVate値の平均値はcon−

5％prを授与し，5日後の体重変化率（％）と血trol群が0．9mg／dl，欠乏群が1．4mg／dlで，欠乏群

清のCreatinekinase値，pyruVate濃度，lactate
濃度を測定した．

がやや高く，lactate値ではcontrol群が56．8mg／
dl，欠乏群は51．5mg／dlであった．

この場合，表3の食餌内容に比べ，COntrOl群

2．タンパク含量10％の食餌下では（表4）（上段）では同じ，欠乏群では表3の組成変化の上ラットを2群に分け，一群には表1のsolid−に，タンパク含量を17％から5％に減量，その分

basal−dietを，他群には表1のSynthetic−dietのdextrin量を増加して，各栄養素の％を調整した．

10％prを投与し，6日後の体重変化率（％）と血その結果は，体重の変化ではcontrol群が142

清のCreatinekinase値，pyruVate浪度，lactate％，欠乏群が92％と，著明な差がみられ，且つ，濃度を測定した．

Creatinekinase値も，その平均値はcontrol群がこの場合，表3の食餌内容に比べ，COntrOl群

885U，欠乏群が2，074Uと，欠乏群で増量，また，（上段）では同じ，欠乏群では表3の組成変化の上

pyruvate値の平均値はcontrol群が0．4mg／dl，欠に，タンパク含量を17％から10％に減量，その分乏群が1．0mg／dl，lactate値でもcontrol群がdextrin量を増加して，各栄養素の％を調整した．

40．2mg／dl，欠乏群が46．6mg／dlと，いずれも欠乏

その結果は，体重の変化はcontrol群が143％と群で増加していた．

増量，一方，欠乏群では94％と著明に減少した．
また，Creatinekinase値でも，その平均値はcon−

考案

trol群が601U，欠乏群が1，312Uと欠乏群で増加

ラットは実験動物として最もよく利用されていし，且つ欠乏群には，最高値が2，684U，最低値がる．そのため，酵素漏出の機構をDNAと関係づけ

573Uと大きな個体差が現われた．また，pyruVateて検索を進めていく上にも適当な動物であると考値の平均値はcontrol群が0．3mg／dl，欠乏群がえた．

0．8mg／dl，1actate値でもcontrol群が27．9mg／

しかし，DNAにどのような修飾を加えれば，筋表4 Effects of vitamin Bl free diet（11）Increase Ratio of CreatineKinase Pyruvate Lactate
body weight（％）（u）（mg／dE） （mg／dE）
Solid basal diet

140
139
142
150
（143）

Bl

free〜

9 9 0 8 8 91︵（protein，10％）〜Vitamin

35．2
22．1

0．3
0．1

28．5
25．8

（0．3）

833874

Syntheticdiet

0．5
0．3

Initialbody weight：155±15g
Duration ontheadded diet：6days（）：Average−154−（27．9）

表5

Effects ofvitamin Bl free diet（111）

Increase Ratio of CreatineKinase Pyruvate Lactate
body weight （％）（u）（mg／dE） （mg／dE）
Solid basal diet

135
147
142
143
（142）

（protein，5％）−Vltamin Bl free−2 4 1 2 1 2
9 9 9 9 9 9Syntheticdiet

Initial body weight：144±5g
Duration of theaddeddiet：5days（）：Average

菜酵素の漏出がもたらされるのか，それには，DNAを操作する以前に，どのような注意を払う

示しているが，それは開腹時の腹筋侵襲に由来するものかもしれない．
次に，摂取させる食餌との関係をみてみた．既必要があるのかをまず検討することが必要であろう．
第一に，ラットの尾から確実に採血することが雉しい．そのため，ラットを仰臥位で固定し，開腹して，下大静脈から採血した．
そしてその酵素値（表2）は当初予想していた値より異常に高く，且つそこに大きな個体差が認に，01sonら1）はビタ ミ ンE欠乏家兎で高creatine kinase血症がもたらされたと報じているが，私共は男子大学生で高率に高creatine
kinase血症が見出され，それが運動部所属，外食
生活者に多いことから，食事性欠陥−とりわけVB．欠乏によることを推察してきた2〜4）．

められた．この場合，使用しているラットは週令

そのため，ラットにVBl欠乏食を授与して，果と共に体重が増加している状態にあるので，個体たして高creatine kinase血症がおこるかを調べ

差は週齢によっているのではないかと考え，体重てみた．この実験では（表3，4，5），総べて，の順序に並べて酵素値を比較してみたが，そこにベントパルビタール（50mg／ml）0．5ml皮注5分は一定の規則性は見出せなかった．むしろ，不慣れなために，固定にてこずったラットほど高値を後に，動物を国定し，値を比較している．
ある種の酵素はホロ酵素（アポ酵素−タンパクとる印象をうけたので，麻酔剤との影響を調べて

質＋補酵素−ビタミン類）として作用している．

みた．

VB．の役割としては，補酵素，とりわけミトコンド

その結果は，非麻酔群よりエーテル麻酔群で，））アの膜に局在するpyruvate−decarboxylaseのェーテル麻酔群よりベントパルビタール麻酔下で補酵素としての意義が注目される．この場合，代低値をとる傾向がみられ，且つ個体差も減少した．

謝上の位置関係を考えると，その欠乏症状を引きその場合，エーテル麻酔下でもなお個体差がみら起こすためには，（∋酵素基質を増やすために食餌れたり，ベントパルビタール1．Oml皮注後の値が中のSuCrOSeを増加させる．また，decarboxylase

0．5ml皮注後より高いのは，麻酔過程の相の違いを狙って，（診低タンパク食にする．（∋VBl欠乏食で透過性に変化がもたらされてくるものと想定さを授与する．更に，代謝回転を遠くするために，れる．

④運動させることなどが必要なものと考えられる

なお，表2からみると，この操作による基礎値は317〜726Uとみなされ，ヒト正常値より高値をが，（五十（診（表3），あるいは（診のみを満たした条件では，高creatine kinase血症は認められなかー155−

ったが，（》＋②＋③を満たす条件（表4，5）にす

要があるものと考える．

ると，高creatine kinase血症が現われた．
VBl欠乏食を与えていくと，体重は増加せず，ラ文

献ットは，過敏になり，国定するのが難しくなるが，

1）OIson，R．E．and Carpenter，P．C．：The

麻酔には極めて弱い．そのためこの場合の血清

regulatory function ofvitaminE．Advances

creatine kinase値の上昇もある種の神経性因子

in Enzyme Regulation，5：325，1967．

によっているのかも知れない．

2）植田啓嗣，畑中良夫，野田温子，久保田道子，

おわ り に

省「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨

ラットの血清creatine kinase値の動向をみた床的研究」（三好址）昭和56年度研究報告書，

谷垣朋子：筋肉酵素の漏出機構について．厚生

ところ，値はヒトより高く，麻酔のあり方，特に1982，p．19二卜195．

麻酔の相によって著明に変動し，したがって，あ3）植田啓嗣，畑中良夫，宮内由美子，阿部千史，る種の神経性因子がcreatine kinase漏出に関与

久保田道子：筋肉酵素の漏出について．厚生省

していることが想定される．

「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床

ラットに高sucrose，イ氏タンパク，ビタミンBl的研究」（三好珪）昭和57年度研究報告書，

欠乏食を与えると，高creatine kinase血症がみられた．このような食事条件は，高creatine4）植田啓嗣，畑中良夫，阿部千史，神谷和恵，宮1983，p．184−187．

kinase血症を示した大学生と極めて類似してい内由美子，久保田道子：血清酵素とcreatine

るものと考えられる．

kinase．厚生省「筋ジストロフィー症の発症機

筋肉酵素の漏出が如何なる過程を経てDNA異常と結びついているのかを，ラットを用いて検索していくには，今後，上記の2点に考慮を払う必一156−

序に関する臨床的研究」（三好姓）昭和58年度研究報告書，1984，p．237−241．

20）各種ミオパテ一，心筋梗塞および健常人の運動負荷におけるミオグロビン（Mb）とクレアチンキナーゼ（CX）の血中への流出パターン
＊

臣

尚

井

＊

夫彦 夫
＊

俊善和

★

＊

＊

田 好

＊

芳

乾 西 三

＊

郎 洋彦

二
億

＊

田 野 井

＊

増 西 筒

＊

仁也美

代
克 克 千

立 村 村

足 田 木

研究協力者

ミオグロビン（Mb）とクレアチンキナーゼ

る．健常成人5例（全例男性，本学運動部月，21歳（CK）は主として骨格筋，心筋に存在し，それぞれから25歳）で14km走の運動負荷を加えた5）．Du−

固有の機能を持つものであるが，ともに各種の筋

chenne型筋ジストロフィー症3症例（全例男性，

崩壊時に容易に血中へ逸脱し，増加して認められ

7，12，15歳），50分の歩行訓練を行った．
検索例について経時的に採血し，同じ血i青につる．これら逸脱蛋白質の血中への流出や，その変動パターンは，それぞれの特徴（分子量について

いてMb値，CK活性イ直の測定を行った．
血清Mb値はラジオイムノアッセイ（RIA）

もMb17，500，CK80，000）に基づいて筋崩壊のあ（当科開発）1）により，また血清CK活性値は江り方を反映しているものと考えられる．
私達はこれまでに，各種筋疾患や心筋疾患につ橋・杉田法，一部Rosalki法にて測定した1）．

いて血清Mb値，血清CK活性値を経時的に測定

Mb，CKの各時刻における単位時間当年りの流し，それぞれの血中変動パターンを明らかにする

出量f（t）は次のごとく求めた．血中のMb値またとともに，筋崩壊量の推定を行い成績を発表してはCK活性値の時間的変動E（t）は，筋から血中へきた1）．

の流出速度と，血中からの消失速度の2因子によ今回は，Mb，CKの血中変動パターンより，両り規定され次式で表わされる．

蛋白質の各時亥りにおける単位時間当たりの血中へ

些也＝f（t）−kd・E（t）
dt」l▲＿の流出量の特徴を明らかにし，各種病態における

dE（t）

f（t）＝笥㌣＋kd・E（t）

筋崩壊機序の解明を試みた．

ここでkdは血中減衰率であり，各症例について血清Mb値，CK活性値を半対数グラフ上にプ

対象と方法
対象症例は急性心筋梗塞症例13例3）（男性11例，ロットし，その下行脚の勾配から求めた．

女性2例，40歳から74歳），LDHM−Subunit欠損

今回はとくにf（t）について述べるが，E（t）及症，18歳男性，本例は西村氏らの症例2）で前腕虚血
試験時の血清Mb値測定の依頼をうけたものでびf（t）曲線を積分してえられる総流出量J言f（t）
dt＝E（T）＋kdJ：E（t）dtの成績については，前ある．悪性高熱2例4），両例とも22歳男性でGOF，回述べた1）．

サタンニールコリンクロライド（SCC）による麻結

酔後に発熱，筋硬直，Mb尿をきたしたものであ＊徳島大学医学部第一内科＊＊沖中吉己念成人病研究所

果1）急性心筋梗塞症例
図1に急性心筋梗塞13例における，Mbおよび
一157−

fttl

EttI
JfttIdt

0．

10

20

30

48

50

図1急性心筋梗塞におけるMbおよびCKの流出パターン
E（t），f（t）およびIf（t）dtの関係

CKの竜充出パターン（平均値）を，E（t），f（t），お約11時間前後で最高値51U／ml／hとなり，その後よUlf（t）dtの経時的変化で示した．

も20−25時間までつづいている．すなわちMbの血中実測値の変動E（t）では，Mbは胸痛発作直流出は，CKに比して早期より始まり，より早期に後より上昇し，9時間で最高値1，400ng／mlに達停止するが，最高値に達する時間は両者が近接して9ないし11時間であった．

しその後下降しているのに対し，CKはMbに遅総流出量Jf（t）dtは，Mbでは約12時間後にほれて上昇し発作後19時間で最高値350U／mlに達ぼプラトーとなり，CKでは約24時間まで上昇ししている．
これに対して流出f（t）は，Mbでは胸痛発作直その後プラトーになっている．

後より流出が始まり，3時間で相当量の流出がみ

2）LDHM−Subunit欠損症
本例の前腕虚血試験におけるMbおよびCKられ，その後shoulderをつくり，約9時間後に最高値350ng／ml／hになり，その後急に減少していの流出パターンを図2に示した．

る．CKの流出f（t）はMbより遅れて始まるが，−158−

E（t）は，Mbでは試験後2時間で最高値24，000

lttI

EttI
JIttはt

8

図2

5

柑

ほ

刀

的聞）

LDH M−Subunit欠損症例におけるMbおよびCKの流出パターン／E（t），f（t）および f（t）dtの関係

ng／mlに達し，CKではMbより遅れて上昇し約8時間後に最高値8，000IU／Lに達し，その後の減達しているが，Mbに比べその後も相当時間にわ少も遅延．していた．

3）悪性高熱たり流出がつづいている．
悪性高熱症例1における，MbおよびCKの竜充

流出f（t）は，Mbでは前腕虚血試験の直後より始まり，2時間でピーク17，100mg／ml／hに達し以出パターンを図3に示した．

後急速に減少し停止した．CKの流出f（t）も試験

E（t）は，Mbでは，SCCの静脈注射直後より上

直後より始まり2時間でピーク3，200IU／L／hに昇し，1時間後に24，000ng／mlと最高値を示し，

−159−

図3

0

10

2ロ

0

柑

罰

30

48

50

（時間）

30

40

50

（時間

悪性高熱症例におけるMbおよびCKの流出パターン
E（t），f（t）およびJf（t）dtの関係

CKでは，Mbより遅れて徐々に増加して注射後出に著明な解艶がみられた．
症例2

27時間で最高値17，000U／mlとなった．

におけるMbおよびCKの流出パタ

流出f（t）は，Mbでは静脈注射直後より急激にーンは症例1とほほ同様であった．すなわち，Mb

増加し30分後に最高値25，800ng／ml／hに達したの流出f（t）はSCCの静脈注射後2時間で最高値

後急速に減少した．CKの流出f（t）は徐々に増加
し，Mbよりはるかに遅れて，静脈注射後20時間で1，100ng／ml／hに達し，CKの流出はMbより遅れ
静脈注射後30時間で最高値1，100IU／L／hに達し

ピーク2，000U／ml／hに達し，以後も長時間にわたた．

り流出が続いている．すなわちMb，CK両者の流

4）健常成人−160−

図4（a）に健常成人5例の14km走におけるMb，

ぞれ850ng／ml，500U／mlと上昇した．

CKの流出パターンを平均値で示した．

流出f（t）はMb，CKともに訓練直後にピーク

E（t）は，Mbでは運動終了直後に前値の2〜4をつくる上昇をきたした．この場合の流出量は相倍（98−225ng／ml）に上昇し，3−6時間で4当量で，健常人の運動の場合の約5倍量であった．

〜6倍（175−330ng／ml）となり最高値を示し，24

6）各種疾患の総括

時間でほぼ健常値に復した．CKでは12時間後に3−4倍となり最高値を示した．

のみをとり出し比較して示した．Mb，CKのf（t）

流出f（t）は，Mbで運動終了直後の値が最高値

曲線は症例により特徴のあるパターンを示し，ととなり，その後急速に減少し運動終了12時間後にはほとんど止っている．一方，CKのf（t）は，運図5に，前述の各種疾患のMb，CKのf（t）曲線

くにMb，CKそれぞれのf（t）のピークを示す時
間は特徴ある相違を示している．

動終了時に上昇がみられ，一時，ノッチをつく り，
つづいて主要ピークが6〜12時間後にみられ，24

考察

時間後には流出が止っている．終了直後の流出は筋ジストロフィー症の成因と発症機序の解明の時期的にMbの流出とほぼ一致し，個々の例によために，筋崩壊時における筋中各種成分の血中へって大小の幅がみられた．

の逸脱の様相を明らかにすることは重要な分野で5）DMD症例ある．私達は，このことについてMbとCKの両図4（b）に本症代表例として13歳男性の50分歩行者からの研究を行ってきた．

訓練時における成績を示した．E（t）は訓練前の本報告では，Mb，CKについて各時刻におけるMblOOng／ml，CK320U／mlから訓練により，それ単位時間当たりの血中への流出量f（t）を算出し，

（a）

f（0

E（O
〟（0虎Ilh圭ー1．31J l lZ Zl

38

11

Ht・．．誓L【CK】

lu／Whl（U／dI

ー1．】0

1

0

12

21

36

48

8●

12°

18●

疇同

匡】4

（a）14km走におけるMbおよびCKの流出パターン
E（t），f（t）およU／f（t）dtの関係（b）DMDの訓練におけるMbおよびCKの流出パターン
E（t），f（t）およUjf（t）dtの関係
−161−

24†

●一一一

Mb

O一一一q

CK

1泊 清

急性心筋梗害1前炭阻血試盈

LDH H−Subunit欠講症′′一′O、ヽ

′′

悪

性

高

ヽ
ヽ

っ一一一一・可′熱114紬走珪常人（運動負荷）タコド二二二二二二芦一一一一一一一一一一㌣＿＿＿
1訓積

1DMD（運動負荷）
20 （時間）図5

各種筋・心筋疾患におけるMb，CKの流出f（t）パタ■ン

f（t）曲線を各種疾患で比較し，筋崩壊機序の解明

は膜透過性冗進により容易に逸脱し，CKもそのを試みた．ここにとりあげたf（t）パターンは逸脱

時若干の逸脱はあるがその多くは筋線経の崩壊時

蛋白質の血中への流出をみるもので，これらが血に逸脱すると考えた．

中から消失する要因を含んでいない．例えば，従急性心筋梗塞では，Mb，CKの流出f（t）はとも

来，Mb，CKの血中の変動曲線E（t）において，Mbの消失がCKのそれより早いために常に血中の最に胸痛発作後，約10時間で最高になった．本症で高値に達する時間はMbが早くCKが遅れる現れてMb，CK両者が洗い流し現象によりほぼ同象とは異なる意味をもっている．さらにf（t）の考時に出てくると考えられる．従ってMbの初期流察に際して，次のごとく想定した．すなわち，Mb

出は，心ショックによる全骨格筋からの流出とみは血管閉塞により逸脱物が血中に出現できず，遅−162−

ることもできる．

の崩壊時にCKの多くが流出するとする想定に立LDH M−Subunit欠損症における発症の機序は，って，病態によって膜透過性冗進の状態が筋崩壊

骨格筋内のLDH M−Subunitの先天的欠損により嫌気性解糖による筋運動エネルギー産生機序にと解放してみられる場合（悪性高熱），両者が接近あるいはほぼ同時にみられる意味の異なる2つの支障が生じ，そのため運動負荷に際して筋障害を場合（心筋梗塞，LDH M−Subunit欠損），そしてきたすものと考えられる．本症では，Mb，CKのその中間の場合（健常人運動負荷）などのあるこ

f（t）はともに約2時間で最高となっており，膜透とを具体的に示した．これらの結果は筋ジストロ

過性冗進と筋線維崩壊がほぼ同時に起こることをフィー症の筋崩壊機序の解明に有用である．

想わせる．
悪性高熱では，Mb，CK両者の流出に著明な解文

散がみられた．Mbの流出が30分で最高値に達し献たのに対し，CKでは，はるかに遅れて20時間後に

1）川井尚臣，足立克仁，増田健二郎，乾 俊夫，
田村克也，西田菩彦，西野 洋，三好和夫：ピークを示した．これは，本症例の原因と考えら

Duchenne型筋ジストロフィー症におけるミオ

れるSCCには特異な筋月莫障害効果がある結果と考えられた．

厚生省・筋ジストロフィー症の発症桟序に関すグロビンとクレアチンキナーゼの流出の特徴．

健常人14km走では，Mbの流出f（t）は運動直る臨床的研究，三好班，昭和58年度研究報告書，

後にピークとなり，CKは少し遅れて6〜12時間

p．242，1984．

で七アークとなった．これは生理的．状態のものであ2）Nishimura，Y．，Ohyama，K．，Honda，N．，

り流出量は多くはないが，このような相当強度のIchiyama，A・andKanno，T．：Myoglobinuria

運動では，やはりまず膜透過性が高まり，続いて一部筋崩壊が起こることが考えられる．

due to LDH M−Subunit deficiency：A newhereditary myopathy・Muscular Dystrophy

DMDでは，すでに安静時よりMb，CKの持続（Ebashi，S．editor），Uriversity of Tokyo

的流出があるので，その流出パターンを知ること

Press，Tokyo，p．455，1982．

は困難である．今回は50分の歩行訓練を加え，直3）三好和夫，川井尚臣，足立克仁，斎藤史郎：心後にMb，CKともに相当量の流出のあることを筋梗塞と血清ミオグロビン．循環制御，4：確かめた．DMDでは，健常成人に比べ流出が起こり易いと言えるかもしれない．

111，1983．

4）田村克也：各種の筋崩壊時におけるミオグロビ
ンとクレアチンキナーゼの流出の特徴と推定筋

おわ り に崩壊量．四国医誌，40：666，1984．

各種筋・心筋疾患における，Mb，CKの血中へ

5）増田健二郎：運動とくに各種スポーツにおけるの流出パターンf（t）曲線をもとめ，それぞれの特

血中へのミオグロビンの流出と変動パターン．

徴を示した．筋崩壊において，膜透過性冗進の時

四国医誌，40：804，984

期にはMbの多くとCKの若干が流出し，筋線維−163−21）−（1）カルモデュリン免疫ラットの神経筋に問する
研究
高 守 正 治＊研究協力者

坂 戸 俊 一＊ 橋 井 美奈子＊
松 原 四 郎■日

一次抗体にはCaM一免疫ラットの希釈血清（1：的多岐にわたる細胞内情報伝達物質としての

4−1：65，536）および対照ラット血清を，二次Ca十十に対応するカルモデュリン（CaM）は，発症抗体にはperoxidase標識抗ラットIgGウサギ血清F（ab）2fractionを，Lそれぞれ用いた．抗体価はや病像にCa→十の関与が推察されているジストロ
フィー筋でも測定され論じられているが1），筋内

呈色した最大希釈倍数をもって表現した結果，の全体量の評価よりも，細胞内の局在とそれに対CaM−免疫ラットのそれは1：1，024−1：4，096

応する機能に分けて，疾患筋でのそれぞれの位置であった．
電気生理学的検査における本蛋白の機能を調べることも重要であろ上記のCaM−免疫ラットおう．本研究ではCaMで免疫したラットに抗CaM

よび1週おき4回にわたりadjuvantのみを注射

抗体が出現し，神経筋症状が発現する時期を選んした対照ラットから，横隔膜神経筋標本を得，ガで標本を得，invitroで神経筋シナプス伝達と筋ス（02：CO2＝95：5）負荷Ringer液（122mMの興奮収縮連関機構を調べた．

NaCl，4．7mMKCl，15．5mMNaHCO3，1．2mM
MgC12，1．2mMKH2P0．，2．6mMCaC12，11・5

方CaMの蟻酸々化処理

mMglucose）（37℃）内で実験に供した．神経筋法①9．5mlの蟻酸（99％

伝達は，微小電極により自発性微小終板電位

溶液）に0．5mlの30％H202を加え，室温で2時（MEPP），終板電位（EPP）（タラーレd−TC添加

間incubate後，2℃で30分間処理．（診牛脳より抽量2γ／ml：対照で必要な添加量2．5γ／ml）を指標

出精製したCaM50mgを1mlの蟻酸に溶解，として調べた．ACh quantum COntentは1Hz連

2℃，30分間処理．③②に（丑の3mlを加え2℃で続神経刺激による誘発EPPs振幅（11th〜60th）

150分間反応させたのち，蒸留水で稀釈後，透析膜の変異係数で表現，ImmediatelyreleasableACh
store量l ま100Hz連続神経刺激によるEPPs（1stを通し，CaM2mg／mlの濃度として2℃にて保有した．
免疫方法と抗体の証明

8〜10週齢の雌ルイ〜3rd）から算出するquantum contentで表現，
ACh mobilization rateは100Hz連続神経刺激に

ス・ラットに1過おき4回，上述の蟻酸々化処理

よるEPPsの最後の12発のquantumcontentで表を施したCaMlOOJLgを等量の完全Freunds ad−現した2）．筋収縮・弛緩機構の解析には，標本を等

juvantとともに皮内注射し，最終免疫より9〜22
日後までの間に，筋無力の臨床症状の発現を確認

尺性筋張力計にセット，白金板電極で筋全長にわたるmassive stimulationで直接刺激（筋内神経して屠殺した．抗CaM抗体は，microplate

刺激を避けるためタラーレd−TC6JLg／mlを潅流

ELISA法で測定した．抗原にはCaM5JLg／mlを，液に添加）して，誘発張力曲線を記録，また1次，2次微分回路を通して張力発生の速度，加速度を＊金沢大学神経内科測定した．最大強縮張力は250Hz反復刺激で誘発−164−

した．得られた張力曲線は，Activestateの概念

脱水を行い，エボン812包埋，超薄切片を作製してを導入し， 時間要素 ・ つよさ要素 に分け解析

電顕にて観察した．

した（表1）3）．post−tetanic twitch potentiation
は強縮負荷（50Hz，5秒間）10秒後，Caffeine−in−結果ducedtwitchpotentiationはCaffeine3mM添

CaMで免疫し抗体産生上昇を確認した

加2−5分後，NO。−−inducedtwitchpotentia−（ELISA法で×1，024−×4，096）ラットの横隔膜

tionはRinger液構成NaClをNaNO3（122mM）

神経筋標本を用いて調べた神経筋伝達機能では，に全置換したN0，−−Ringer液で2−5分処理

神経終末でのACh mobilization，immediately
releasablestoreおよび神経終末からのACh量子

後に誘発した単収縮張力を測定，解析し，各負荷前のそれと対比した変化（％）で表現した．
電顕的観察 採取した横隔膜筋を伸展位に保ち，性遊誰（EPPのACh quantum COntent）に有意な低下がみとめられ，MEPPの振幅低下もみられ

4％パラホルムアルデヒド，2．5％グルタルアルデ

た（表2）．しかし，神経筋接合部の形態には異常

ヒド固定液（0．1Mカコジル酸緩ノ衝液）にて2なく（図1A），シナプス襲上のAChRの分布にも−3時間前固定，緩衝液で洗浄・，神経筋接合部を異常は見出せなかったので（図1B），後シナプス月莫含む小片を切り出して1．5％オスミウム酸（0．1M側の病変はないものと判断され，MEPP振幅低下

カコジル酸緩衝液）にて2時間固定後，常法に従は，前シナプス機能異常（quantum sizeの減少）の反映と判断した．

いアルコール脱水，エボン812に包埋した．超薄切片を作製し，酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛で電筋収縮・弛緩機構の検査では，条件負荷を掛け

子染色後，電顕にて観察した．アセチルコリン受ない単・強縮張力とその微分分析から判断される容体（AChR）は，固定，洗浄後，perOXidaseラベ
ルアルファ・プンガロトキシン（α−BuTX）で染

active stateproperties（表1）に異常な（表3A），

色の後，上記同様オスミウム酸固定，アルコールであった（表3B）．一方，Caffeineによるtwitch

表1
Function

等尺性単収縮張力
単収縮張力の一次微分ピーク値（最大速度）
活動電位起生時から単収縮張力の一次微分ピーク値までの時間
Duration of active statepost−tetantic twitch potentiationも正常範囲内

Active state properties
AbbreviationPt
dPt／dtTdn／dt

PhysiologlCalevents

収縮弛緩要素と直列弾性要素の総合表現．
直列弾性要素を除いた収縮機構の表現。
・刺激により筋小胞体から遊離されるCa＋＋量．
・遊艶されたCa＋＋が収縮要素によって活用される割合．
・Activestatedecay関与．
筋弛緩の時間経過・TroponinからのCa＋＋removalと筋小胞体のCa十十再結合（外的コントロール）
・TroponinによるCa＋＋−bindingとMyosinによるATP−bindingの関係（内的コントロール）
刺激により筋小胞体から遊艶されるCa＋＋量．
活動電位がET COupling を誘起する閥値に関係する．

単収縮張力発生よりそのピーク
を経て，％の張力まで弛緩する
時間．
Activestatedecay

Tl／2R

単収縮張力の二次微分ピーク値（最大加速度）
Activestateintensity
Ofshortening
250／sec．反復刺激による最大強縮力．
Activestateintensity
Ofload−bearing

d2pt／dt2

POactin−nIyOSincross−bridgesの数とintrinsICStrength

最大強縮張力曲線の一次微分ピ−ク値

dPo／dtForce−Velosity関係および直列弾性要素．

ー165−

図1A

カルモデュリン免疫ラット横隔膜神経筋の電顕像．×3，650．

B
表2

Synaptic function

加drats叩飢uddmVI

輌河p併SOCJ

R響温芯紆nO

C劇1m¶t■セOd帽tS

O．75土0．205
n：120

0．44土0．204●

6．7土2．90

3．2土1．40●

∩・120

∩；45

考

75士5．7∩：120

70土4．5

280土65
n：45

188土80●lmm●dbtdyroteaSabto▲Ch8t010（quanta）

按

動物にin vivoで抗CaM抗体を産生せしめ発∩＝45症する神経筋障害をinvitroに調べると，シナプ
ス伝達ではAChのmobilization，StOre，releaseという神経終末側の機能異常が主であった（表∩：45

E押，叩tamCOntOnt
atl Hヱ

同神経筋接合部におけるシナプス襲先端に局在するアセチルコリン受容体．×8，760．

2）．これは，シナプス一般について，tranSmitter∩：45

turnover−Synthesis，tubulin kinase activation，
1340土450nて45805土さ50●

presynaptic protein phosphorylation，VeSicle−

n．45

membraneinteraction，tranSmitter releaseに

ACh−mObttはationrate■tlOOHZtquanta／soe．）5230土1750
m45

3240土123ダ

Ca♯・CaM系が関与するという理論4）に矛盾しな∩45

い．われわれの実験では，後シナプス側の異常は（M●an士S．D．l

・曲廿yd〝甘●れt什Om￠OnlroHHost）・

見出されず（図1A，B），phosphorylationによる
AChRmodulationにはCa十・rCaM系が関わるとpotentiationは正常の範囲を越え異常な上昇がみするSmilowitzらの説5）には反するが，これに関られ（表3C），NO3．によるtwitchpotentiationも異常であった（表3D）．これらの異常反応は，Palfreyらの説6）には矛盾しない．

activestateの つよさ要素

与するのはCa≠・CyClic AMP系であるとする（d2Pt／dt2）， 時間

骨格筋内でCa十・CaM系が関与するプロセス（TdPt／dt）の正常範囲を超えた増大を伴っとしては，（1）phosphorylasekinase7）と，glycogenていた（表3C，D）．図2に，これらの現象の実際

Synthase kinase−2の調節8），（2）myosinlight

を示している．筋の電顕像では，器質的異常は証

Chainkinaseの調節9），（3）筋小胞体proteinkinase要素

明し得なかった（図1A）．

（60，000

dalton proteinのphosphorylation，dephosphorylationによるCa■什−166−

release channel

表3筋張力曲線の生理および薬理学的分析
（B）

（A）

Cα■ltr∝瀬b醐
C誼drぬく托丁）M（■■jt仇47

PoSttetarktYdtchpotenbticn（％）−10晰b■代−tOt瑚t叫5○○C．ト

C抽Odrぬ小鳥I

Gα1肘dratst化7I C蜘kodrats（托○）4・1量〇・〇〇

dIpv劇ym−♂）0．010士0．0018

0．0け士0．m8

Pt
Td1′dh舶I

14量08

133土14．8

132士13．7

15士1♪

▼1′2RtlWI

5■量32

50土iT

血／d2 130士19．4

130土18．2

Potd

81●量3．90

30力量5♪5

Tdh／d lO8土0．9

110士5．7

吼41土色005

0．40士0．080

Tl／2R

98

血／dl少M●●d【Wl叫17土15

97士8．7

1いび仙士弧

tMun土aDJ（工カ（e）
T鵬tdlPOt併鵬a耽れbyCa付加（3mMH％）

T鵬Idpot戯れbyNO言一静轡訂00』耽れ匝）伽廿dratさ（帽7I C蜘kedrabtR8I

Cα血drd8hn C仙セOdrぬtld）

M

149士0．8

194士9．1

M

142土1m0

血／虎2

133士82

細2

178士11。8

123土山

T■Vd l12士1．0

121土52115土0．00，0おく仰吼01くPくP．005

110±i9182士3五〇0．005く匹血001

Pく0．001

TdPl／′d ll●土1．1

204士42．7
0．01くPく8005

Pくα001

Tl／2只

土6．7

Tl／2R llO士13

115士7．7

111士25（蜘土＆DJ（H●8∩土S♪Jの閉，開）の賦活10），が知られている．本研究は（1）に対する過剰反応は，この制御機構に対する抗について言及することが出来ないが，（2）について

CaM抗体のmodulationの結果と推察される．

はpost−tetanic twitch potentiationll）（表3B），
結張力発生速度12）（表1），強縮張力plateau維持13）

語（図2）の面から，少なくとも生理学的指標でみる

in vivoレベルで産生された抗CaM抗体によ

かぎりは抗体による異常は証明できなかった．本って障害を受ける神経筋機能をinvitroで調べ，研究で特に明らかであった事実は，（3）に対する抗シナプス伝達では神経終末でのtransmitterの運CaM抗体の修飾である．すなわち，筋小胞体Cal十搬，貯蔵，遊駈機構，骨格筋内では筋小胞体Ca≠のCaffeine−induced release14），およびT−SyStem

遊艶制御機構にあることを証明した．

を含む膜に作用Ltrigger Ca≠ release15）を促して筋小胞体Ca一片遊敵を促進するNO3￣の作用16）

文

献による等尺性単収縮張力増大現象の異常である

1）Klamut HJ，Lin CH，Strickland KP：Ca1−（表3C，D：図2）．Mac−Lennonら17）のモチリレによ

modulin content and Ca−aCtivated protease

れば，筋小胞体の二つのgatesのうちの一つは，

activityin dystrophic hamster muscles・Ca≠・CaM系の影響を受け，phosphorylatedで閉

Muscle＆NerVe1983：6：436−441．

鎖，dephosphorylatedで開放の状態になるとさ

2）Lambert EH，LindstromJM，Lennon VA：れ，われわれが証明した筋小胞体Ca≠遊維侃進剤

End−platepotentialsinexperimentalautoim−

ー167−

￡詔慧三

脚血伽鵬

■慧諾㌣

C二泰西噂噂と。．i
喝曙咽￡〔・善崇。。
一■シーニ■「−▲∴〔主＿−≡示−ルー小一小二賢人γとspC

Pd⊃○′dt

帰一 座C2 十．」

触≠−
図2

qS
垣

トl腑

虹

・∴

Io・ lq／mseC
ト一・1
9q nSeCニ

0．59／押Se⊂：〜α1mseC勺O mse（コントロール（上）およびカルモデュリン免疫ラットから得た横隔月莫筋の電気生理および薬理学的検討．指標，測定方法，aCtivestateの概念にもとづく意義付けについては表1
参照．

mune myasthenia gravisin rats．Ann N Y

phosphorylation and calmodulin．Proc Natl

Acad Sci1976：274：300−318．

Acad Sci USA1981：78：4708−4712．

3）TakamoriM，MoriK，IdeY，TsujihataM：6）Palfrey HC，RothleinJE，Greengard P：

Contractile andchemosensitivepropertiesof

Calmodulin−dependent protein kinase andmuscle treated with calciumionophore

associated substratesin Torpedo electric

A23187．J NeuroI Sci1981：51：207−215．

Organ．J BioI Chem1983：258：9496−9503．

4）I）eLorenzoRJ：Thecalmodulinhypothesisof7）CohenP，BurchellA，FoulkesJG，CohenPTW，neurotransmission．Cell Calcium1981；2：

Vanaman TC，Naim AC：Identification of

365−385．

thecalcium−dependentmodulatorproteinas5）SmilowitzH，HadjianRA，DwyerJ，Feinstein

the fourth subunit of rabbit skeletal muscle

MB：Regulation of acetylcholine receptor

phosphorylasekinase．FEBSLett1978；92：−168−

287−293．

13）Crow MT，Kushmerick MJ：Myosinlight8）Embi N，Rylatt DB，Cohen P：Glycogenchainphosphorylationin associated with asynthasekinase−2anephosphorylasekinase

decreasein the energy cost for contraction

arethesameenzgme．EurJ Biochem1979；

in fast twitch mouse muscle．J BioI Chem

100：339−347．

1982；257：2121−2124．

9）Walsh MP：Calmodulinーdependent myosin

14）SuJY，Hasselbach W：Caffeine−induced

lightchainkinases．CellCalcium1981；2：333

calcium release fromisolated sarcoplasmic−352．

reticulum ofrabbitskeletalmuscle．Pflugers
Arch1984：400：14−21．

10）Campbell KP，MacLennan DH：A
calmodulindependent protein．kinase system

15）Miyamoto H，Racker E：Mechanism offromskeletalmusclesarcoplasmicreticulum．

calcium release from skeletal sarcoplasmic

Phosphorylation ofa60，000rdalton protein・

reticulum．J MembrBiol1982：66：193−201．

J BioI Chem1982；257：1238−1246．

16）HommaI，Kurihara S，Sakai T：Effect of11）Manning DR，StullJT：Myosinlight chain

dantrolenesodium onexcitationrcontraction

phosphorylationandphosphorylaseaactivity

coupling of frog toe muscle・JapJ Physiol

in1976；26：53−61．

rat extensor digitorumlongus muscle．

Biochem Biophys Res Comm1979：90：164

17）MacLennanDH，CampbellKP，TakisawaH，TuanaBS：InAdvancesinCyclicNucleotide−170．

12）KushmerickMJ，CrowMT：InBasicBiology

and ProteinPhosphorylation Research，VoI・

ofMuscle（Twarog BM，et al，eds．），Raven

17（Greengard P，et a1．，eds．）Raven Press，

Press，New York，1981，pp159−172．

New York，1984，pp393−401．

ー169−21）−（2）組織培養法による受容体蛋白代謝回転とプロテ
アーゼ，プロスタグランジンに関する研究
高 守 正 治＊
研究協力者

糸 氏

薫＊ 井 手 芳 彦＊

安 田 厚 子＊目

1×105cell／cm2とした．培養液として，グルタミ

的今日まで，筋細胞内構造蛋白の分解機序として，ン入りEagleMEM中に，ストレプトマイシン・

ライソゾームのカテプシン群や，筋細胞サイトプ

ペニシリン混合液を1％加えたものに，（D15％ウ

ラスム中のカルシウム依存性中性蛋白分解酵素

マ血清＋5％chicken embryo extract（診20％ウ（Ca＋トーaCtivatedneutralprotease，CANP），プ

ラスミン系酵素，プロスタグランジン系，ATP依シ胎児血清のいずれかを添加したものを用いた．
受容体崩壊速度測定−4nM125〔Ⅰ〕−αBTX入り存系などの関与が考えられている．本研究では，培養液で，培養後4−6日目の培養細胞を90分間アセチルコリン受容体の崩壊過程におけるこれら

培養し，アセチルコリン受容体をラベルした後，の系の関与を図1のごとく想定し，その是非を検free toxinを洗浄し，各薬剤を加えた培養液で，討するため，各酵素系の阻害剤と，125〔Ⅰ〕−α−bun−

37℃，5％CO2下で培養を継続した．一定時間毎

garotoxin（125〔I〕一αBTX），培養筋細胞を用い，受に培養液を除去し，そのradioactivityをcount

容体蛋白の代謝について，生化学的に検討した．

L，新しく，同じ薬剤入りの培養液と交換した．
最後に培養液を除いた後，残った細胞をRubber

方法

policemanを使ってEagleMEMで洗浄しながら筋細胞初代培養一白色leg chicken受精後集め，そのradioactivityをcount L，それまでの10〜13日目のembryoの浅胸筋を用い，初代培養

培養液中のcountを加算してtotalcountとした．

を行った．浅胸筋を無菌的に取り出し，充分にミ各ディッシュ毎に，各時間における細胞内残存

ンチした後，0．3％のトリプシン液で単細胞に分放COuntのtotalcountに対する％を算出し，その平した．細胞を培養液にsuspend L，ゼラチンでコ均と標準偏差値を片対数グラフ上にプロットした．

ートしたプラスチックディッシュに移し，37℃，

結

5％CO2下で1晩培養した後，0．03％トリプシン
液で細胞を剥赦して集め，コーティング未処理の果（むアセチルコリン受容体の崩壊速度は，培養液

ディッシュで37℃，5％CO2下で30分培養し，デ内にchicken embryo extractを加えた時，薬剤ィッシュ底面に付着しているfibroblastと付着し無添加ではhalflife−time（Tl／2）約35時間で，片ていないmyoblastを分けた．myoblastのみを集対数グラフ上ほぼ直線を示した．これに対し，ラ

めて，培養液に再びsuspendした後，ゼラチンでイソゾーム系酵素，CANP，プラスミン系酵素すコートしたディッシュに移し，37℃，5％CO2下べての阻害剤であるロイペ70テン添加培養液中でで培養を行った．プラスチックディッシュは6m1，

は，推定Tl／2は約2倍に延長した．実験はロイペ

3ml入りのものいずれかを用い，細胞濃度は，約

プチン10，20，40，80JJMでおこなったが，延長効
果は薬剤濃度に相関し，40FLMでほぼpeakを示＊金沢大学神経内科

した（図2：培養後40時間で対照との有意差P＜
ー170−

d。亡匝

Lysosomak＿＿Le。。e。t王。＃

YeSicle enZYmemembrane

O一夕⊂＝⊃
CANP十・・・

Ptasmine叩印tin峯七 椚ilYt轟弓慧pti㌔8（。よ，業−○¶モCt王YeJ
PhoSPholipaseA2ヤーMepa亡血色象
1
AraChidonjc acidl小一−一一一一bd。me廿は血養PrOStagland了nE之llfT一・一−・Le。P弼J
ProteQlysIS

図1

アセチルコリン受容体崩壊過程の想定
A：ライソゾーム，プラスミン，CANP系
B：アラキドン酸カスケード←・・：本実験で用いた酵素阻害剤＊：本実験で有効であった酵素阻害剤

ペプテンより弱い，しかし有意な抑制効果をみた

0．001，m＝6）．

（診対照としてembryo extract無添加ウシ胎児血清入り培養液で培養したところ，薬剤無添加では，

n＝6）．150，200／JMについても実験を行ったが，受容体崩壊速度はTl／2が約16時間で，片対数グ細胞は変性または死滅し，効果を言及することは（図3；培養後40時間で対照との有意差P＜0．001，

ラフ上，やはり，ほぼ直線を示す結果を得た．こできなかった．

の条件下で，培養液中に抗プラスミン剤仁一amino
caproicacid（EACA）を加えたところ，その添加（∋筋細胞内構造蛋白崩壊について提唱されている，
Caイオンを介したアラキドン酸カスケードの図

濃度20，40，100，200JJMすべてについて影響はな

1Bのような関与を，受容体崩壊についても想定かった（図3：本図ではEACA200JLMのみを示す）．CANP阻害剤メルサリルを添加すると20，40

阻害剤メバクリンでは40／JMで，プロスタグラン〟Mでは有意差を認めなかったが，8叫Mでロイ

ジンサイタロオキンゲナーゼ阻害剤インドメサシ

し，検討した．その結果，フオスフォリパーゼA2

−171−

図2

アセチルコリン受容体崩壊に対する
ロイペプチンの効果

図4

アセチルコリン受容体崩壊に対する
インドメサシン，メバクリンの効果

n（dish number）＝6n（dish number）＝6

考接

アセチルコリン受容体蛋白（AchR）の崩壊には，ライソゾーム系が主役を演ずるとされ1），培養
筋細胞の受容体蛋白代謝に対する本系酵素阻害剤
添加の実験によっても，合成過程には影響することなく，崩壊過程が修飾を受ける事実が明らかにされている2）．受精鶏卵から得た骨格筋細胞培養を用いたわれわれの実験でも，ロイペプナンによる受容体崩壊のlife−time延長を認め（図2），このことを実証した．ロイペプテンはプラスミン系にも関与する酵素阻害剤であり，受容体の代謝回転や細胞内陥入（internalization）には，本系が関
0

10

20

さ0

40

○○

■くわ■】

与するという報告もある3）4）．しかし，抗プラスミ
図3アセチルコリン受容体崩壊に対するEACA，メルサリルの効果

ン剤EACAを用いたわれわれの実験では，これを支持する証左は得られなかった（図3）．CANP，n（dish number）＝6

プロスタグランジン系の筋細胞内構造蛋白崩壊への関与については，いくつかの報告5ト8）があるが，ンでは2JJMで，各々最も強い抑制効果を示した．その効果はTl／2を約2倍に延長させ，ロイペ

膜蛋白についての明確な検討はなされていない．

プナンの効果に匹敵するものであった（図4；培響を調べたところ，メルサリルの効果によって養後40時間で対照との有意差はメパタリンでP＜

CANPの若干の関与を（図3），またメバクリン，

われわれはAchR崩壊過程に対するこれらの影

0．001，m＝6：インドメサシンでP＜0．001，m＝

インドメサシンの効果によって，フオスフォリパ

6）．

ーゼA2，プロスタグランジン系の関連性を証明することができた（図4）．しかし，前者について
一172一

は，CANPを賦活するに必要な細胞内Ca十一のソースをどこに求めるべきかの問題があり，後者にreceptor：Effects of proteolysis on receptor

ついては，筋細胞内構造蛋白に対するE2のよう▲

4）Romstedt K，Beach RL，Festoff BW：には，膜蛋白の代謝に影響するプロスタグランジ

Acetylcholine receptor tumOVerin clonal

ンの種類を本実験結果だけでは特定できない．

musclecells：Role ofplasmin and effectsof

metabolism．J CellBio11982：92：176−182．

proteaseinhibitors．Muscle＆Nerve1983；

結

語

6：283−290．

骨格筋の組織培養法を用い，諸種酵素阻害剤の5）Reddy MK，EtlingerJD，Rabinowitz M，

培養液中添加によるアセチルコリン受容体蛋白のFischmanDA，ZakR：RemovalofZ−linesand

代謝回転を，アイソトープで定量し検討した．ラa−aCtinin fromisolated myofibrils by a

イソゾーム系が受容体崩壊に主役を演ずることを

Calcium−aCtivated neutral protease．J BioI明らかにしたが，プラスミン系関与の確証は得ら

Chem1975；250：4278−4284．

れなかった．さらに，CANP系の若干の関与と，

6）Kameyama T，EtlingerJD：Calcium−depen・

プロスタグランジン系の関連性を示唆する結果をdent regulation of protein synthesis and

得た．

degradationinmuscle．Nature（Lond）1979；
279：344−346．

文献7）RodemanHP，WaxmanL，GoldbergAL：The

1）DevreotesPN，FambroughDM：Turnoverof
acetylcholine receptors

inskeletal

Stimulationofproteindegradationinmuscle

muscle．

byCa2＋ismediatedbyprostaglandinE2and

ColdSpringHarberSympQuartBiol1976：

does not requlre the calciumTaCtivatedprotease．J BioIChem1982；257：8716−8723．

40：237−251．
2）LibbyP，BursztajnS，GodbergAL：Degrada−8）TakamoriM，KomaiK，Nitta N，ItoujiK：tionoftheacetylcholinereceptorincultured

Role of prostaglandin E，inmusclecells：Selectiveinhibitorsandthefate

abnormalityinduced by calciumionophore，

ofundegradatedreceptors．Cell1980：19：481

A23187．Neurology（Cleveland）1984：34：91

−491．

−94．

3）HatzfeldJ，MiskinR，ReichE：Acetylcholine−173−

contractile21）−（3）筋ミトコンドリア異常を伴う2種の特異な筋病態について
高 守 正 治＊研究協力者

松 原 四 郎＊いわゆるmitochondrialmyopathyの臨床像の多様性について既に多くの報告があるが，本研究

家族歴，既往歴に特記事項なし．現症では顔面，では筋病理像の多様性に注目し，その例として上肢で遠位，下肢で近位筋が比較的障害が強い．

mixed nemalineLmitochondrialの排腹筋の仮性肥大をみる．登琴性起立あり．平地

範疇に入る2例を提示する．また多くの筋病変にでは独歩可能だが著しく動揺性．アキレス腱反射

伴って出現し，mitochondriaの変化がみられる病を除き腱反射は減弱．病的反射，知覚や共同運動

myopathy

頚部，四肢筋の中等度の萎縮と筋力低下をみる．

理像の1つであるlobulatedfibreについて，慢性障害なし．弾性軟なび慢性甲状腺月重が認められる．

非対称性脊髄性筋萎縮症の1例を中心に検討する．

検査成績では血清CK531IU／L，アルドラーゼ〔症例1〕17歳，男（図1−A）5歳時下肢にはじまった筋力低下が四月支に拡大し緩徐に進行した．

11．9IU／L，尿酸10．1mg／dl，血中乳酸21．2mg／dl，

図1

ピルビン酸1．3mg／dlといずれも増加．T3，T4その

A：症例1
B：症例2
C：症例3

小金）尺人サ神経内科

−174−

図2

症例1 A：筋鞘下に赤紫色に染まる部分を有する線推（星印）とネマリン小体を有する線維（＊印）を示す．tri−
chrome変法
B：NADH−TR活性像で筋草宮下の高活性とmulti core（C）を認める
C：ネマリンノト体とミトコンドリア
D：ネマリン小体
E：ミトコンドリアの集積ー175−他の甲状腺機能は絶て正常であった．筋電図は筋原性変化を示した．大腿四頭筋生検で は，筋線維横断面の円形化，横径の大小不同，中心核の増加の筋原性変化が認められ，trichrome変法では（図2−A），筋鞘下に赤紫色に染まる局面をみ，また多数のネマ））ン小体を観察した．NADHLTR
活性像では（図2−B），筋鞘下高活性がめだち，また一部の線経にmulti−COreが認められた．
myosin ATPase活性像ではtypeI fibre
predominanceがみられた．電顕では非特異的な変性像に加え多数のネマリン小体（図2−C，D）
が観察され，これらを取り囲むようにして（図2−C），あるいは筋鞘下に密に集積して（図2−
E）ミトコンドリアが増加していた．三川の方法1）にもとづく筋構造蛋白のマイクロ2次元電気泳動（図3）では，2次元目を同一平坂上で泳動した正常筋と比較し，アクチンのbandはほぼ同じ強さであったが，デスミンと思われるbandの増加と，ミオシンのlight chain，とくにfast componentの減少が示唆された．

図3 症例1マイクロ2次元電気泳動〔症例2〕30歳，男（図1−B）．7歳頃より歩行が不安定となり，両側アキレス腱短縮を指摘された．以降緩徐に四肢筋力低下が進行した．家族歴，既往歴に特記事項なし．現症では四肢，躯幹に筋萎縮をみ，上肢より下肢に，また上肢では遠位部，下肢では近位部に著しく，アキレス腱短縮を伴った．腱反射は減弱し，膝蓋腱反射は消失していた．
病的反射，知覚および共同運動障害，筋痛，筋強直現象を認めなかった．検査成績ではCK活性，乳酸を含めて異常なく，筋電図は筋原性変化を示

図4

症例2 A：ragged−red fibre（＊印）．
ネマリン小体（矢印）．trichrome変法
B：ネマリンノJ、体C：ミトコンドリア内の結晶様封入体

した．大腿四頭筋生検では筋線維横断面円形化，
横径大小不同，中心核増加のミオパテー性変化に加え，Splitfibre，ringfibreが高頻度に存在した．
trichrome変法（図4−A）では多数のragged
redfibreがみられ，一部の線経にネマリン小体を一176−認めた．電顆では多数の線経にring fibreその他に高度の筋萎縮を認め，軽度の萎縮と筋力低下をのmyofibrilの走行異常が観察され，一部stria・
tionを示すネマリン小体が散見された（図4−

左上肢，右下肢と顔面筋にみるなど，全体に症状B）．主に筋鞘下にミトコンドリアの数の増加がみ観察された．腱反射の減弱があったが，病的反射，られ，その内部には頻繁に結晶様封入体（図4−

知覚および共同運動障害，球症状はなかった．血C）を伴っていた．

清CK活性を含め血液生化学的検査は総て正常．

が右に著しかった．萎縮した筋に線維束性攣縞が症例1，2はミトコンドリア異常とネマリン小筋電図はfibrillationおよびfasciculation

体の併有をみるという意味でmixed nemaline−

potential，随意収縮時のgiant action potential

mitochondrial myopathy （Komfeld2））の範疇に入れることができよう．症例1の病理像はを示し，脱神経の所見であった．末梢神経伝導速度，頭部CT像，脊髄造影で異常を認めなかった．

multi−COreの存在などKomfeldの例に一致する

大腿四頭筋生検では大小種々の規模の群集萎縮が点が多い．このCOreの部分はミトコンドリアで囲あり，萎縮線経の一部は角化線経で神経原性萎縮

まれるネマリン小体の集族（図2−C）に対応すを示す所見であった．萎縮線推中角化のめだたなると推定される．本例では甲状腺腫大を認めたが，いものの多くは，lobulatedfibreで，NADH−TR

甲状腺機能その他の検査データ上異常なく，筋病

活性像で筋鞘を底辺とし筋線維内部に向かう頂点変の原因である可能性は少ないと思われた．佐藤を有する三角形の強染部を持ち（図5−A），tri−

ら3）は甲状腺腫大を伴うKearns−Shy症候群の症例を報告している．ミトコンドリア異常とネマリ

chrome変法で同部は赤染色を呈した．lobulated

ン小体が認められた症例は本邦の福永ら4）の報告

fibretypegroupingを形成していた．この三角形の部分は電顕（図5−C）は，横断面でも縦断層で例を含め過去に7例が記載されているが，それら

fibreはtypeI

線維（図5−B）で，しばしばの臨床像は一定しない．症例1では，最近ネマリも多く三角形を呈するミトコンドリアと，脂肪とンミオパテーで報告されている5）筋構造蛋白の異思われる高電子密度の構造を密に含む区域に対応

常に類似の変化が2次元電気泳動で明らかになるすると考えられた．ミトコンドリアの一部にはし

一方で，ミトコンドリアミオパテーで一般的な血中乳酸，ビルビン酸の増加を示すなど，形態学的

ばしば結晶様封入体（図5−D）が観察された．

ばかりでなく生化学的に両疾患の要素を有している．症例2は結晶様封入体の存在，比較的に低い

metricspinalmuscularatrophyによく一致する．
lobulated fibreはBethlemら7）が顔面屑甲上腕

ネマリン小体の頻度などより，ミトコンドリアミ型筋ジストロフィーや肢帯型症候群で記載したの本例の臨床像はHardingら6）のChronic asym−

オパテ一により近い病態が考えられるものの，をはじめ数多くの筋疾患の病理所見の一部として

ringfibre，Splitfibreの高頻度であることがめだ
った特徴といえる．ネマリン小体，異常ミトコン

言及されている．その病理学的意味や発生機序は未だ不明確である．従来はミオパテーでの記載がドリア共にtypeI線経に発生しやすく，両病変の多いが，自験例では本例以外に対称性成人型慢性発生機序にfibretypeが関連する何らかの共通部

脊髄性筋萎縮症8）やrimmed vacuoleを伴ういわ

分があり，これが両者の共存の背景にある可能性

ゆる遠位型ミオバナーでも同様の変化を観察してが考えられる．

いる．これは本病変が筋原性，神経原性を問わず〔症例3〕60歳，男（図1−C）．10歳頃から腕を広い範囲の疾患で出現することを示しているが，挙上，外転すると肩甲骨が異常に突出することにその多くが比較的緩慢な経過の疾患である．殆ん気づいていた．20歳頃より右上月支および屑甲帯のど常にtypeI線経にみとめられfibre type

筋萎縮，筋力低下が出現，緩徐に進行した．58歳

許Oupingがしばしば同時に観察されることは，疾より下月支とくに右側が弱いことを自覚．家族歴，患の分類上の神経原性，筋原性の区別とは別に，既往歴に特記事項なし．現症では右上月支，屑甲帯本病変の発生に何らかの神経由来の要素が関与す

ー177−

図5

症例3 A：lobulated fibres．NADH−TR活性像
B：typeI fibregroupingとgroupatrophyを示す．myosin
ATP ase活性像（pH9．4）
C：三角形の部位に集積したミトコンドリアとlipid body
D：ミトコンドリア内結晶様封入体

科学，32：74−78，1981．

る可能性を示唆していると思われる．

2）Kornfeld，M∴Mixed nemaline−mitochon−
まとめ

1．mixednemalinermitochondrial

drial

myopathy．ActaNeuropathol．（Berl・）．

51：185−189，1980．

myopathyの病理像を呈した2症例を報告し，若干の考察を

3）佐藤武史ほか二内分泌異常を伴うKeamS−Shy症候群の1例（会），臨床神経，19：68，1979．

加えた．
2．chronicasymmetricsplnalmuscularatrophy4）福永秀敏ほか：眼筋麻痺とミトコンドリアの異の1例を報告するとともに，同例で観察した

常を伴ったネマリンミオバナーの1例，臨床神lobulatedfibreの病理学的検討を行った．本病変はミオバナーばかりでなく主に緩徐進行性の多様経，18：35−43，1978．
5）小口喜三夫，武田伸一ほか：Nemaline
myopathyの筋構成蛋白について，厚生省「神経な筋疾患で認められた．

疾患研究委託費」筋ジストロフィー症の発症機

文序に関する臨床的研究，（班長，三好和夫）昭和

献

1）三川隆：手軽なマイクロ2次元電気泳動と高感度蛋白染色法．微量蛋白分析のために，生体の58年度報告書，pp266−270，1984．
6）Harding，A．E．etal∴Chronicasymmetrical−178−

syndrome，J．Neurol．Sci．，18：351−358，1973．

spinalmuscularatrophy，J．Neurol・Sci・，59：
69−83，1983．

8）Matsubara，S．and Tanabe，H．：A clinico−7）Bethlem，J．etal．：Theincidenceoflobulated

pathological study of chronic hereditary

fibresin the facioscapulOhumeral type of

motorneuropathy，ActaNeuropathol．（Berl．），

muscular dystrophy and limb−girdle

61：43−51，1983．

−179−

ⅠⅤ．エネルギー代謝，他

22）−（1）ジストロフィー鶏発育早期における活性酸素
問連諸酵素および解糖系酵素の異常について
水 野 美 邦＊

研究協力者

大筋ジストロフィー症の発症機序に関して，我々

田

恵

子＊

て用いた．

は，筋細胞の変性過程に活性酸素による障害が関筋肉に10倍量の0．14MKClpH7．4を加えて与しているのではないかと考え，ジストロフィー

Dounce

鶏をモテリレとして検討をすすめてきた。これまで

し，4℃100，000g60分遠心後の上清にてsuperox−型ホモジェナイザ一にてホモジェナイズに活性酸素関連酵素であるsuperoxide dis・

idedismutase，glutathione peroxidase，glutath−mutase，Catalase，glutathione peroxidase，ione reductase，G6PDH，6PGDH，GA3PDH，

glutathione reductase，glucose

LDH

6−phosphateを測定し，4℃700g10分遠心後の上清にて

dehydrogenase（G6PDH），6−phosphogluconate

Catalase を，7000g 5分遠心後の上清にてphos−dehydrogenase（6PGDH）及び月旨質過酸化の指標

phofructokinaseとなるTBA反応物質がジストロフィー鶏におい600g5分遠心後の上清を用いた．superoxide dis−て有意に上昇していることを示し1）2），また解糖系

mutaseは，Misra＆Fridovich3）の方法，Catalase

酵素である glyceraldehyde−3−phosphate dehy−

はCohenら4）の方法，glutathioneperoxidase及drogenase（GA3PDH）は有意に低下していることを示した2）．今回はこれらの変化が僻化後何日びglutathionereductaseはPaglia＆Valentine5）の方法とその応用によった．G6PDH と6PGDH

目より出現するかを検討する目的で将化後8日目

はKingsら6）の方法を一部改変して用い，TBA

までのジストロフィー鶏及び対照鶏についてこれ

反応物質はTanizawaら7）の方法により，malon−

らの酵素とTBA反応物質の測定を行なった．さdialdehydeをスタンダードとして測定した．GA3

らに今回は解糖系の重要な酵素である

PDH

fructokinase

phospho−及び1actate dehydrogenaseを測定した．TBA

はWang＆AlaupoviC8）の方法，LDH

はShonk＆Boxer9）の方法，phosphofructokinase（LDH）の測定もあわせて行ない対照鶏と比較しはOpie＆

た．測定した諸酵素を図示したものが図1であり，改変して用いた．蛋白はLowry

活性酸素関連酵素はglucose−6−phosphateのところで解糖系と関連している．

り測定した．

NewsholmelO）の方法をそれぞれ一部

結

方

の測定には

法

ら11）の方法によ

果

蛋白濃度は，100，000g，7，000g，700g，の上i青

対象動物はNewHampshire系ジストロフィー

において8日日のみジストロフィー鶏より対照鶏

鶏（line413）とその対照鶏（line412）で受精卵をのほうが有意に高く，600gの上清では6日目のみ

入手，膵化後2日，4日，6日，8日目に各々4

対照鶏のほうが有意に高かったが，その他では有羽を断頭屠殺しその浅胸筋を材料として用いた．

意差は認められなかった．各酵素は蛋白1mgあた

なお2日日のみ検体が小さいため深胸筋もあわせりの比活性で示し，TBA反応物質は湿重量1gあたりで示した．
活性酸素関連酵素活性の測定結果を図2，3に＊自治医科大学神経内科−183一

H201＼
2d；◆2日・−一〇廿日202ノヽPor01ido dan■00

とこ包嵩V…Pv。．……t。．。。＿．富…
PeroxidaIion

ROHノ＜−GSS6人N▲DPH 8＿P的…．．。F川。．。8。，．6＿8．ノ＼、川．

…・霊：一yc。仙伸長Oihydroxy■COtOnO一戸H・…相Hフてこ。−。．。．仰．…‥人。．

Glycor013−P

3−P・Glycor▲t●12−P QlyeOr▲tO
I
Pho暮Pho●n01pyruv■lo

H●◆N▲DH、／PYruV■t●迎…D・ノ＼L．。t．t．
図1

今回測定した活性酸素関連諸酵素及び解糖系酵素の関係を示す
SOD：superoxide dismutase
GSHP：glutathione peroxidase
GSSGR：glutathione reductase
G6PDH：glucose6−phosphate dehydrogenase
6PGDH：6−phosphogluconate dehydrogenase
PFK：phosphofruCtOkinase
GA3PDH：glyceraldehyde−3−phosphate dehydrogenase
LDH：1actate dehydrogenase

示すが，SuperOXidedismutaseはCu−Zn，Mnともに僻化後8日目にdystrophy

次に解糖系酵素活性の測定結果を図5に示す．

において有意な

GA3PDH，LDHはともに醇化後日数とともに急上昇が認められた．catalaseはcontrol，dystro−
phyともに将化後日数とともに急速に低下するが，速な上昇を示すが，両者とも6E］目よりcontrol

4日目よりcontrolに比Ldystrophyで有意な高方phosphofructokinase

イ直が認められた．glutathioneperoxidaseも膵化

後6日目と8日目でCOntrOlよりもdystrophyのほうが有意に高値であった．

後低下を示すが，6日目よりdystrophyのほうでに比Ldystrophyで有意な低値が認められた．一は今回の測定では醇化

有意な高値が認められ，glutathionereductaseは将化後4日目と8日目でdystrophyのほうが有考察

意に高値であった．またG6PDHは醇化後4日目

今回の測定により，昨年度までに示したジスト

より，6PGDHは僻化後6日目よりdystrophyのほうが有意に高値となった．

ロフィー鶏における活性酸素関連酵素活性の上昇の多くは，膵化後4−6日目より出現することがTBA反応物質については，酵化後8日目まで

明らかとなった．この結果は，ジストロフィー鶏では有意差は認められなかった（図4）．

の発育の非常に早い時期より活性酸素の代謝回転ー184−

C●t81880Activity

cu−ZnSuperoxidoDi帥Ut的OAct一州y MnS叩OrOXidoDはmuta80Activity

ym01●H202も■t■lyZOd／min／Mg PrOtOin

Unit〜／mo plOtOin

2

4

0

81】■y●

0−−D＋COnIlOI

●＿＿●

図2

2
dy■tlOPhy‥

4
P．0．02

0

8

dさYS

2

4

0

8

血y8

日・Pく0・01

横軸は将化後の日数，縦軸は蛋白1mgあたりの酵素活性を示す
mean±SD（n＝4）
SuperOXide dismutase：

1unit＝epinephrineの酸化を50％抑制する酵素活性の冗進が出現することを示すものと考えられる．

回初めて検討した酵素であるが，我々の予想に反TBA反応物質に関しては，昨年度，ジストロフィ

し，醇化後6日目，8日目でジストロフィー鶏のー鶏において酵化後2週目より有意に増加するこほうが対照鶏よりも有意に高い活性をもつというとを示したが，この結果とあわせ，ジストロフィ

結果が得られた．この結果に関しては，さらに検ー鶏におけるTBA反応物質の上昇は，活性酸素討が必要と考えられるが，phosphofructokinase

関連酵素活性の上昇よりやや遅れ，醇化後10−14は解糖系全体の律速段階を形成する重要な酵素で日日ころより出現するものと考えられる．これにあり，この結果の通りであれば，ジストロフィー

関しては，ジストロフィー鶏における活性酸素の

鶏の発育早期に解糖系の元進が存在する可能性が生成上昇が，卯字化後初期には活性酸素関連酵素活考えられる．この解糖系の冗進によって生成され性の上昇による代謝回転の冗進によって代イ賞されるNADHが，分子状酸素の一電子還元を促進す

表面にあらわれないが，その後活性酸素の生成上ることにより活性酸素生成冗進の一因となってい昇がさらに進行すると，代謝回転の克進にて代イ賞る可能性もあり興味深い．筋肉内のphospho−
fructokinaseは，発育早期に成熟とともに消失す

され得ず出現してくるという説明が可能である．
解糖系の酵素に関しては，昨年GA3PDHの活るisozymeをもつことが他の動物で報告されて性がジストロフィー鶏において有意に低値である

おり12）13），今Eilの測定に関しても，isozymeや，ことを示したが，対照鶏においてみられる醇化後

COldlabilityなど生化学的性質の関与が考えられ，の急速な酵素活性の上昇がジストロフィー鶏にお今後この点についてさらに検討を加え，また成熟いても一応認められるものの軽度であり，将化後とともにジストロフィー鶏と対照鶏で本酵素活性

6日目より有意に低値となることが，今回明らかがどのように変動するかについても追って行きたとなった．今回あらたに測定したLDHにおいていと考えている．

も同様の傾向が認められた．
一方phosphofructokinaseは，LDHと同様今ー185−

Glutathione Reductase Activity

Glutathione Peroxidase Activity

nnole NADPH／minJrng PrOtein

2

4

6

8

2

dayS

4

6

8

dayS

6−PhoSPhog山COnate

Glucose6−Phosphate

Dohydrogenase Activity

Dehydrogenase Activity
nmJle NADPH／min／mg protein

nmoIe NADPH／min／mg protein0−・O COnIrol
ここdystrophy lO
P＜0．05
Pく0．02

承・
2

4

6

8

day8

8

2

4

6

図3 横軸は麒化後の日数，晃従軸は蛋白1mgあたりの酵素活性を示す
mean±SD（n＝4）

一186−

8

days

ま

TBA−reaCtive products Levelsとめ

ジストロフィー鶏における活性酸素関連酵素おnmole／g tissue

よび解糖系酵素の異常が僻化後何日目より出現するかを検討する目的で，将化後2日，4日，6日，8日目のジストロフィー鶏及びその対照鶏において，活性酸素関連酵素であるsuperoxide
dismutase，Catalase，glutathione peroxidase，

glutathione reductase，G6PDH，6PGDH 活性
及びTBA反応物質，解糖系酵素であるGA3
PDH，LDH，phosphofructokinase活性の測定を行なった．活性酸素関連酵素の多くでは塀化後4−6日目よりジストロフィー鶏において有意な高値が認められた．TBA反応物質は将化後8日目
までではジストロフィー鶏と対照鶏の間で有意差はなかった．解糖系酵素のうちGA3PDHとLDHは将化後6日目よりジストロフィー鶏において有意な低値が認められたが，phosphofructokinaseでは逆に6日目より有意な高値が認められた．

2

4

6

丁8

文

days

献

1）Mizuno，Y．：Changesin

図4 横軸は卵芋化後の日数，縦軸は湿重量1g
あたりのTBA反応物質量を示す

superoxide

dis一mutase，Catalase，glutathioneperoxidase，and
glutathionereductase activitiesandthiobar−

mean±SD（n＝4）

Glyceraldehyde3−PhoSPhatO
Dehydl000naSO▲ctivHy

L8°t8tO DohydropOnaSe▲￠tivity

Phosph01ructokinase Activity／

mn010NADH／Min／mg PrOtei†l

2
0■一〇

4

6
COntr01

図5

0

d■y8
●一一●

2
dyいlOPhy

−

6

8

diy8

2

・・・Pく0．01…・Pく0．001

横軸は畔化後のH数，縦軸は蛋白1mgあたりの酵素活性を示す
mean±SD（n＝4）

一187−

4

8

0

doY＄

bituricacid−reaCtiveproductslevelsinearlyfluorophotometry．Chem．Pharm．Bul1．，29：

StageSOfdevelopmentindystrophicchickens．

2910−2914，1981．

Exp．Neuro1．，84：58−73，1984．

8）Wang，C．−S．andAlaupoviC，P．：Glyceralde−2）Mizuno，Y．：Glucose−6−phosphate dehy−hyde−3−phosphate dehydrogenase fromdrogenase，6−phosphogluconate dehy−

human erythrocyte membranes．Kinetic

drogenase and glyceraldehyde−3−phosphatemechanismand competitivesubstrateinhibi−

dehydrogenase activitiesin early stages oftion by glyceraldehyde

developmentin dystrophic chickens．J．

Biochem．Biophys．，205：136−145，1980．

Neurol．Sci．，1985（inpress）．

3，phosphate．Arch．

9）Shonk，C．E．and Boxer，G．E．：En2：yme

3）Misra，H．P．andFridovich，I．：Theroleof

pattemSinhumantissues．I．MethodsfortheSuperOXide anionin the autoxidation ofdeterminationofglycolyticenzymes．Cancer

epinephrineandasimpleassayforsuperoxideRes．，24：709−721，1964．

dismutase．J．Biol．Chem．，247：3170−3175，

10）Opie，L．H．and Newsholme，E．A．：The

1972．

activities of fruCtOSe l，6−diphosphatase，

4）Cohen，G．，Dembiec，D．and Marcus，J．：

phosphofructokinase and phosphoenolpyru−

Measurement of catalase activityin tissue

VateCarboxykinaseinwhitemuscle and red

extracts．Anal．Biochem．，34：30−38，1970．

muscle．Biochem．J．，103：391−399，1967．

5）Paglia，D．E．andValentine，W．N．：Studies11）Lowry，0．H．，Rosebrough，N．J．，Farr，A．Land

Onthequantitativeandqualitativecharacteri・

Randall，R．J．：Proteinmeasurementwiththe

Zationoferythrocyteglutathioneperoxidase．

Folinphenolreagent．J．Biol．Cherri．，193：265

J．Lab．Clin．Med．，70：158−169，1967，−275，1951．

6）KingD．B．，King，C．R．andJacaruso，R．B．：

12）Thrasher，J．R．，Cooper，M．D．and Dunaway，

Avianmusculardystrophy：Thyroidalinflu−

G．A．：DevelopmentalChangesinheart andenceonpectoralismusclegrowthandglucose・

musclephosphofructokinaseiso2：ymeS．J．Biol．

6−phosphatedehydrogenaseactivity．LifeSci．，

Chem．，256：7844−7848，1981．

28：577−585，1981．

13）Dunaway，G．A．：A review of animal7）Tanizawa，H．，Sazuka，Y．andTakino，Y．：

phosphofructokinaseisozymes with an

Micro，determination oflipoperoxidein theemphasis on their physiologiCalrole．Mol．

mouse myocardium by thiobarbituric acid

Cell．Biochem．，52：75−91，1983．

ー188−22）−（2）ワゴスチグミンによるagonistinduced
myopathyの形態的研究
水 野 美 邦＊
金 子

研究協力者

筋ジストロフィー症における筋変性機序を検討

仁＊

結する為，その1モデルとして，neOStigmineによ果〈光顕所見〉1／Jm厚の横断像では，周囲の筋線経

るAgonistinducedmyopathyを作製し，神経筋よりやや肥大した円形の濃染する線経が散在性に接合部下の形態的変化を観察した．

見られた（図1）．このような筋線経は，正常対照，30分後の標本には見られず，60分にて出現，

材料・方法

120分後に更にその数が増加した．同厚の縦断像で体重350g〜410gの雄ウィスター系ラットを用いた．体重あたり0．5mgのneostigminemethyトは，神経筋接合部下の横紋構造の消失と，その周囲の過収縮が見られた（図2）．

Sulfateを腹脛内に注入し，30分，60分，120分後く電顕所見〉30分後の標本では，接合部下のミトコにそれぞれネンブタール麻酔下に下腿伸筋を取り

ンドリアの膨化がみられたが，神経終末，接合部，出した．直ちに2％グルタールにて同長国定し，オおよび筋線経の微細構造には，特に変化をみなか

スミウム酸にて後固定し，エボン包埋した．1／Jm
厚切片は，ToluidineBlueにて染色し，光顕的に経では，Z帯は消失し一様な横走する細線維のみ観察し，超薄切片は，ウラン・鉛二重染色し，電が見られた．又Sarcoplasmicreticulumは拡大・顕にて観察した．

空胞化をみた（図4）．ミトコンドリアは，膨化った（図3）．60分後の標本では，接合部下の筋線

し，クリスタの破壊，空胞化が見られた．神経終末のミトコンドリアの一部も同様な変化がみられた．120分後の標本では，60分の時と同様な変化が

図1120分の標本で見られた円形濃染する
筋線経．
図2＊自治医大神経内科−189−

神経筋接合部下の筋線経の横紋構造の消失．周囲の横紋は，変性部に向って集まるように見える．

観察された（図5）．
考案

不可逆性のコリンエステラーゼ阻害剤である有機燐化合物で，局所性の筋壊死の発生する事は，
Ariensら1）以来よく知られている．又，可逆性コリンエステラーゼ剤であるneostigmineにおいても，Lytle2），Engelら3）が，神経筋接合部及び筋線経の変化を観察し，更に，川淵ら4）は，同剤の連続投与による形態的変化を観察している．neostig−
min1回大量投与による急性変化は，Hudsonら5）
図330分の標本の神経・筋接合部．ミトコン
ドリアの膨化が見られる．

によると，筋線経の過収縮，Z帯の消失，ミトコン
ドリアの拡大，SarCOplasmicreticulumの空胞化が主体である．今回，我々の行なった実験でも，同様な変化が観察された．時間的経過を見ると，30分でミトコンドリアの膨化，空胞化，60分でZ帯の消失，SarCOplasmicreticulumの変化が生じた．光顕でみられた，円形の濃染線経については，
筋線経の過収縮のあらわれと考えられた．
Agonistinduced myopathyの発生機序については，Hudsonら5）は，形態的に神経終末のhyper−
activityを認め，脱神経により本症の発生が抑制されることから，抗コリンエステラーゼ剤の直接の影響によるものではないと述べた．又，Leonard

図460分の標本で見られた神経・筋接合部
下の筋変性．

ら6）は，本症がα−Bungarotoxinで予防され，又，Ca＋＋free の状態下では発生しないことから，
Ca十十の関与を考えている．
実験的ミオバナーは，多くのモデルが知られている．neostigmineによる，神経筋接合部下の筋変性は，機械的操作や細胞膜を破壊する化学物質などによるものとは異なり生理的な神経伝達物質であるacethylcholineの過剰によってひきおこされると考えられる点に特徴がある．又，Z帯の消失が見られる点，Caの過剰流入によるCANPの関与が本症の発生に関与していると推察され，筋ジストロフィー症における筋変性の発症メカニズ
ムに類似していると思われる．
文

献1）Ariens，A．Th．，Meeter，E．andVanBenthem，

図5 120分の標本の神経・筋接合部，変性部と健常部の境界は比較的明らかである．

RM．G，：Reversiblenecrosisattheend−plate−190−

regiOninstriatedmuscleoftheratpoisoned

部および横紋筋線経の変化．福岡医誌66（8）：500

with cholinesteraseinhibitors．Experimentia−511，1975

25：57−59，1969

5）Hudson，C，S．，Rash，T．E．，Tiedt，T．N．，

2）Lytle，R．B．andWellband，W．A．：Increased

Albuquerque，E．X．Neostigmine induced

Synaptic area of neuromuscular junctioninalterationsatthemammalianneuromuscularneostigmine−treatedrats．Anat．Rec．166：339，

junction．UltrastruCture．J．Pharmacol．Exp．

1970

Ther．205：340−356．1978

3）Engel，A．G．，Lampert，E．H．andSanta，T．：

6）Leonard，J．P．，Salpeter，M．M．：Agonist−

Study oflong−term anticholinesterase ther−

induced myopathy at the neuromuscular

apy．Neurol．23：1273−1281，1973

junctionis mediated by calcium．J．Cell．

4）川淵優，糸内光弘，渡辺進馬，井形昭弘，金関毅．：
Neostigmine

Biology．82：811−819，1979

投与によるラットの神経筋接合

ー191−23）−（1）固定・筋ジストロフィーの筋のglucoseuptake
庄

司

進

一＊

筋のエネルギー代謝の基質の一つである

た．37℃30分のincubation後に筋を取り出し，0℃

glucoseの筋細胞への取り込み（uptake）は，最初の0．9％NaCl溶液中で40分毎に液を換え3回洗の律速段階である．昨年度赤筋と自筋の比較，paS−
Sive stretchの効果，絶食，脱神経，固定の際の浄した．筋は腱を取り除き，湿重量を測定し，Soluene−350でi容解後，酢酸で中和し，triton X−

筋glucose uptakeの変化を報告した．今年は固100660m1−POPllg−POPOP O．2g−tOluene1340

定につきさらにくわしく検討し，固定する際の筋

mlの長さによってsoleus（SOL）ではglucose

mediumuptakeの変化の発現に要する時間が異なること

ratioを求めた．［UT14C］sucroseを3L0−methyl−を見出した．筋ジストロフィー・モデルのマウスのシンチレーションi容液中でCOuntした．
の一部も同様にcount Ldistribution［1−3H］glucoseの代わりに用いて，eXtraCellular

でextensordigitorumlongus（EDL）のglucose

SpaCeを求めblankuptakeの増加，SOLの減少がみられ，EDL出に用いた．

ととしてglucose uptakeの算
muscleのCOumtmediumのCOunt

SOLのglucoseuptakeの大きさが逆転している

distribution ratio

ことを見出した．この2点につき報告する．

glucose uptake＝（distribution ratio）−（extracellular space）〔noncollagen proteinの測定〕

材料と方法

20倍量の5mMbicarbonateO．1MNaClで筋を〔実験動物〕
固定の実験には，実験開始時50−70gのWister
系メスラットを用いた．

homogenate後，3倍量の0．1NNaOHを加え，38℃，1時間i容解後，上清と当量の10％TCAを筋ジストロフィー・モデル動物には，C57BL／6

加え，沈澱に0．1NNaOHを加え洛解し，Lowry

J−dy dy／dy

マウスとコントロールマウス（C57の方法で蛋白を測定した．

BL／6J−dy ＋／？）の5週齢を用いた．

結固定は，エーテル麻酔下に足関節をextensjonとflexionのextremepositionにギプスで固定した．
〔glucose uptake測定〕
Krebs−Henseleit bicarbonate buffer果［固定による筋湿重量とnoncollagen protein量の変化］
図1に示した通り

で，A・Bはextremeに5mM

extension，C・Dはextremeflexionの際の変化

SOdiumpyruvate，0．1mM又は1mM3−0，methyl

で，A・Cは湿重量を，B・Dはnoncollagenprotein
量を現わしている．縦軸は国定した側のEDLとglucose，3−0−methyl−［1−3H］glucose を含む
medium を95％02／5％C02で飽和させ筋をin−

SOLの対側対照との比をパーセントで示していCubateした．この際ラットの筋では筋を取り出す

る．横軸は固定の長さを示している．extensionで時の生体内での長さにdouble clip

はEDLは伸展された状態で，反対にSOLは短縮

で固定し，

passivestretchを加えincubatieした．この条件した状態で国定される．湿重量もnoncollagen

下でglucose uptakeは2時間まで直線性を示し

protein量も共にSOLに強い減少が起きている．
一方flexionではEDLは短縮した状態で，反対に＊信州大学医学部第三内科

SOLは伸展された状態で固定される．この場合は
ー192−

14d

B

14d

●EDL
O SOL
図1

固定後のEDLとSOLの湿重量とNCPの変化

A，B extended ankle
C，D flexed ankle
A，C

湿重量の対側対照との比（％）

B，D NCP量の村側対照との比（％）
mean

n＝5−7

EDLの方が湿重量もnoncollagenprotein量も共すなわち肢位に無関係に，言い換えれば筋が伸に強く減少し，SOLは2週間ではほとんど変化な展された状態でも短縮した状態でも固定によりし，ないしかえってhypertrophyを軽度示している．

EDLのglucoseuptakeは増加，SOLは減少の方向に変化した．

すなわち，両肢位の国定とも，短縮して固定さ〔固定によるglucose uptakeの変化〕

図3に24時間までの変化をn mole／g ww／hr，
37℃，1mMで示した．図3Aにextremeexten＿

図2A

Sion

れる筋の萎縮が強いことを示している．
にextreme extension

で固定した際のの際の変化を示した．EDLはほとんど不変

1日から14日までのglucose uptakeの変化を示

であるが，SOLは6時間以後有意に減少を示ししている．固定した側のEDLとSOLのglucose
uptake と村側対照との差をnmole／gww／hr，37℃，0．1mMで示した．EDLでは4日目，14日

た・一方図3Bにextremeflexionの際のglucos？
uptakeの変化を示した．EDLはほぼ不変であり，SOLは減少を示したが有意に達するのは24時間目で有意な上昇が認められた．SOLでは1日目以後であった．

後有意な減少が認められた．

すなわち，SOLの減少はこの筋が短縮した状態

図2Bにextremeflexionの固定の際の2日かで固定された際には速く起こり，伸展した状態でら14日までのglucoseuptake変化を示している．

固定された際は遅れた．これに対しEDLは変化

EDLは4日日以後有意に増加が，SOLは2日と14日に有意な減少が認められた．

が有意に達するのはさらに遅く，両肢位共に4日目で有意に達した（図2）．

−193−

GLUCOSE UPTAKEエ＼≧≧㌫＼JOEu

GLUCOSE UPTAKE

図2

匡l定後のglucose uptakeの変化
A extended ankle
B flexed ankle
mean±

SEM n＝3−7単位nmoles／g wet weight of muscle／hr at37℃，glucose＝0．1mM〔筋ジストロフィーの筋のglucose uptake〕のglucose uptakeが大であるという関係がマウ

図4に示した．Aは筋の湿重量を示す．Bは筋スでも成立することがコントロール・マウスで示

当たりのglucose uptake

37℃，1mMをn mole／muscle／h，で示す．Cは筋の湿重量当たりのglucoseuptakeをJL mOle／gww／h，37℃，1mMされている．しかし筋ジストロフィーではこれが逆転している．CではSOLに関しては筋ジスト

ロフィーで減少，EDLに関しては増加を示した．

で示す．筋ジストロフィー・マウスの筋の萎縮がAで示されている．Bで，白筋EDLより赤筋SOL
−194−

0
0
0

工＼ききでの一〇EU−

三きき望〇一〇∈u
図3

固定後24時間以内のglucose uptakeの変化

A extended ankle
B flexed ankle

考

mean

±

SEM n＝2−5単位nmoles／gwet weight ofmuscle／hrat37℃，glucose＝1mM

glucoseの0Xidationが低下していたと報告して案

固定による筋萎縮いる2）．今回のEDLのglucoseuptakeの増加と国定によって起こる筋萎縮は，固定される際のSOLの低下は，白筋と赤筋の差が小さくなる脱分筋の長さにより異なることは従来の報告に一致し化傾向を示し，脱神経と同様の変化の方向である．

た．短縮した状態での国定はEDL

但し固定ではSOLの低下が早く，脱神経では

もSOL

も萎

縮が強かったが，伸展した際の固定で認められた

EDLの増加が比較的早く来た．

hypertrophyの傾向はSOLで明確であった．
固定による筋glucose uptakeの変化

縮して固定された際には早く，伸展して固定されSOLで1成少，EDLで増加が認められた．

た際にはこれより遅いという結果は，国定の際の固定におけるglucose uptakeの報告は，マウス筋のエネルギー代謝の変化に，筋の固定時の長さのSOLが関係することを示している．

SOLのglucose uptakeの変化が，SOLが短で，固定後3時間と8時間の間に2−deoxyglucoseuptakeのinsulinに対する反応が筋ジストロフィーに於けるgIucose uptake

減弱したとNichoIson らが報告している1）．今回

マウスにおいてもラットと同様に赤筋であるの系ではinsulinは用いていないので，SOL

glucose uptakeの低下をinsulin

の

に対する

SOLが，白筋のEDLよりglucose uptakeが大であることがコントロールマウスで示された．筋

responseの低下とは考えにくい．固定後10日のラ

ジストロフィー・マウスではこれが逆転しており，ットSOL でglucose の0Xidation の低下を
Rifenberick らが報告している2）．これは今回のEDLがglucoseuptakeの増加とSOLでその低SOLのglucoseuptakeの低下と合うデータと考えられる．しかし彼らは白筋のplantaris でも同様の変化の方向を示しており，生化学的脱分化下が認められた．これは見かけ上脱神経・固定ととも言える変化である．

ー195−

C COntrOI
d dystrophy

ロSOL
田EDL
mean＋Sem

区14エ＼む一〇讐∈＼⊥OEu

紺一二ン

C

d

筋ジストロフィー・マウスの筋glucose uptake

A

筋の湿重量

B，C

筋glucose uptake

B

単位

C

単位JL mOle／gwet weight ofmuscle／hr at37℃，glucose＝lmMnmoles／muscle／hr at37℃，glucose

＝1mM

n＝10

文

献

1）NichoIson WF，Watson PA，Booth FW：
Glucose uptake andglycogen symthesisin56（2）：431−435，1984・
2）RifenberickDH，MaxSR：Substrateutiliza−

muscles fromimmObilizedlimbs．J．Appl．
Physiol：RespiratEnvironExercisePhysiol．

tion by disused rat skeletal muscles・
Am・J・Physiol・226（2）：295，297，1974・一196−23）−（2）Nemaline myopathyの筋構造蛋白
庄

司

研究協力者

進

一＊

武

田

伸

一♯

表1 症例

は じ め に先天性非進行性ミオバナーは，多くnoppy
infantとして発症し，運動発達遅延，Smallmuscle

Case AgeSex慧bulk，myOpathy様顔貌，骨格異常を示す一連の

1

13

M

疾患である．そのうちnemaline myopathyは，

istochemical
finding

bicepsrectus筋線維中のオ干状構造物（rod）を特徴とし，最も頻2■度が高い．組織化学的には，typeI fiberの優位性を認める事が多く，筋構造蛋白の分析でも

3日

5

3

M

M

uniformtypeI fiberbrachii

typeI fiber

femorisrectuspredominancetypeIIcfiber

femorispredominance（96％）

myosinのSlowformの優位性1）が指摘されてい● 熊本大 三池先生 症例＝神経センター 埜中先生 症例る．我々は，このnemalinemyopathyでuniform
typeI fiber を呈した症例の生検筋について，
myosinのIightchain構成が特異である事を昨年
度の班会議で報告した2）．Nemalinemyopathyに既に報告した方法に従って，二次元電気泳動を行なった．一次元目は，等電点電気泳動（IEF），

特異的な筋蛋白構成が明らかにされる事は，本疾二次元目はSDSポリアクリルアミドゲル電気泳患の病因を考える上だけでなく，他の天元性非進動（SDS−PAGE）とし，染色はCBBに依った．

行性ミオパテーとの関連を考えるためにも重要と

3．単一筋線経の分析考えられる．今年度は，臨床的にはnemaline

症例2については，生検筋の一部の小さな筋束

myopathyと診断されるが組織化学的には多様なを4mM EDTAを含んだ水冷下のrelaxing solu−

例を分析し，一部の症例については単一筋線経をtionに浸し，暗視野実体顕微鏡下で単一筋線経を分散し，単一筋線維上の蛋白構成についても明ら

分推し，上記の二次元電気泳動を行ない，Oakley

かにしたので報告する．

らの方法3）を一部改変して銀染色法を行なった．
記録は，Polaroid MP−4systemに依った．

対象と方法
結

1．症例
表1に示す臨床的並びに組織学的にnemaline

果

1．Nemaline myopathy筋の二次元電気泳動
図1にtypeI fiver predominancemyopathyと診断された3例の生検筋を対象とし，を呈した

凍結標本の10−20〝前後の厚切り切片1〜数枚をnemaline筋（症例2）の二次元電気泳動（IEF→

材料とし，0′Farrellのlysis buffer下で充分に

SDS−PAGE）を示した．この系では，myOSjnのhomogenize L，−80℃のdeepfreezerで保有しlightchain（LC），aCtin，trOpOmyOSin，trOpOnin

たものを出発材料とした．

C

2．電気泳動Myosinのlightchainの分析結果は，昨年報告し＊信州大学医学部第三内科

formが優位で，これにfast formのLClと3及びdesminのSpOt

を明瞭に区別できた．

た症例1に一致し，LClと2については，Slow

−197−

図1

Nemaline myopathy筋（症例2）の電気泳動像
IEFからSDS−PAGEへの二次元像を示す．Myosinのlightchain（LC）1，2，3，aCtin，trOpOmyOSin（TM），
troponin（TN）−C，desminの各spotが示されている．S，

fはそれぞれslow form， fast fom を表わす．
の混在を認めるが，fast formのLC2は欠如し増加している事も一致する点であった．

ていた．こうしたmyosinlight chainのpatternは，筋組織のpatternとしては，他の疾患では報図3である．LClと2についてのslowformの

告されていない．他の筋構造蛋白については，

優位性，fast formのLC2の欠如という意味では

troponinCがslowformのみである事と，desminの増加が認められた．

共通しているが，fast formのLClと3につい

以上3例のmyosinlightchainを比較したのがては症例ごとに異なっていた．Fast form

2．組織化学的に多様な例の比較

lについては，症例2と3に明らかで，13歳の症昨年報告した症例1が組織化学的にuniform
typeI fiberのLC

例1では少ない．逆にfast formのみであるLC

であり，症例2がtypeI fiber3については，症例1と2では明瞭で，3歳であpredominanceであるのに対し，type IIC
predominance（96％）を呈した症例3の結果を図る症例3では極めて少ない．これは，症例ごとの差とも考えられるが，LC3が胎生前期には認め2に示した．酸性側蛋白を明瞭に分離している中られない蛋白である事を考えると，筋の成熟化がで，myOSinの1ight chainについてみると，fast

続いていると考えられる．LClについては，筋のform優位の予想に反し，Slow formの優位性をSlowformへの転換を表現しているとも考えられ認めた．つまり，SlowformのLClと2に対し，る．

fast formのLClと量は少ないがLC3の混在

3．単一筋線椎の分析を認め，fast form

検体量が充分であった症例2については，単一のLC2は欠如していた．

TroponinCがslowformのみであり，desminが筋線経の分析をする事ができた．約20本の単一筋

−198−

図2

Nemaline myopathy筋（症例3）の電気泳動像
IEFからSDSrPAGEへの二次元像を示す．図中の説明は
図1に同じ．

線経の分離が可能で，銀染色法で分析したが，その二次元電気泳動の一例を図4に示す．Myosin

病，myOtubularmyopathy，COngenitalfibertype
disproportionは，組織学的あるいは組織化学的にのlight chainの部分のみを示すが，筋線経の特有な構造や特徴を有する点により診断されるが，patternと基本的に一致し，Slowformの優位性，

typeI fiberの優位は何れの疾患にも共通した所見である．今回，我々が検索の対象と した

fast formのLClと3のみの混在を認めた．これは検索した全ての検体に共通する所見であった．

nemaline myopathy

Nemaline筋にみるmyosinlightchainの特異なナーの中で最も頻度の高い疾患であるが，この疾構成は，筋線経の組み合わせによるのではなく，一本の筋線経の組成による事が明らかとなった．

患の筋構造蛋白の特徴を明らかにする事は，疾患群全体の考察の上で重要と考えられる．

は，先天性非進行性ミオバ

もとより，nemaline myopathy

こうした単一筋線経のmyosinlightchainの構成については，

は，Duchennemusculardystrophy筋の一部4），及びdenervation筋5）で認める事があるとされる．

構造的特徴であるnemaline rodに対応する所見

特にdenervationとの関連については今後の検討れてきた．Fiber typeに関連した所見としては，が必要である．

myosinのlight chainのslow formの優位性がとして，α−aCtinin やdesmin の増加6）が指摘さ注目された．今回，我々が明らかにした事は，
考

myosinlight chainの特異な構成を共通にする症察例が存在する事である．この結果は，既に報告さ

先天性非進行性ミオパテーは，遺伝学的にも，臨床像も共通した点が多く，その診断は組織学的れた一次元電気泳動の結果1）に一致し，幾つかのに行なわれる．Nemalinemyopathy，Centralcore

二次元電気泳動の結果7）をより詳細にしたと考え

一199−

図3

組織化学的に様々な所見を呈したnemaline myopathy筋の比較
上段からuniformtypeI fiberを呈した症例1，typeI
fiber predominance を呈した症例2，typeIIC fiber
predominanceを呈した症例3のIEFからSDS−PAGEへの二次元像．Myosinlight chainの部分のみを示す．

られる．しかも，この結果は，typeI，typeIIのpatternは一致していると考えられる．この事と言った組織化学的所・兄を越えて認められる．少なくともtypeI fiberpredominanceや，typeIIは，従来nemaline myopathy として呼ばれてきた疾患の中にnemaline rod と共に，一様な筋線

C predominanceのように筋の分化にdiffuseに経の分化の状態と特異なmyosinlightchain構成障害が認められる症例では，myOSinlight chainを有する疾患の中核と言うべき症例が数多く存在

ー200−

図4

単一筋線経の二次元電気泳動像
症例2の生検筋より分雛された単一筋線経の二次元泳動像
を銀染色により示した．Myosinのlight chain の部分のみが示されている．

する事を示唆する．問題点としては，混在する
fast formのLClと3に症例ごとの差を認めた点がある．これについては，lightchainのfoetal
formの検索を充分に行ないながら，筋の成熟化，
Slowformへの転換の面から検討する必要がある．
次に本研究が明らかにした事は，nemaline
myopathyにみる特異なlight chainの原因が，Myosinlightchainの分析で，fastformのLC2の欠如を認めない報告8）もあり，更に症例を重ねる必要がある．
最後に，nemaline myopathy以外の先天性非進行性ミオパテーの分析結果が待たれる．同じ
typeI fiberpredominanceでも結果が異なる事が期待されるからである．

単一筋線維内の蛋白構成にある事である．このような単一筋線維内の構成がdystrophy

おわ り に筋だけでなく，denervation筋で見られた事も注目される．

組織化学的に，uniformtypeI fiber，typeI

Nemaline筋でも病因として，神経系の要因が疑われるからである．

fiberpredominanCe，typeIICfiberpredominan−

今後は，まずmyosinのlight chain構成が特Ceを呈したnemalinemyopathyの生検筋につい異である例について，myOSin heavy chainの検て二次元電気泳動を用いて検索を行ない，myOSin
lightchainの特異な構成（LC1，2のslowform

索を進めることが必要である．Fibertypeの決定の優位性，LC1，3のfastformの混在，LC2はheavychainの先端にあるmyosinATPaseののfast formの欠如）を明らかにした．一部の症性質に依存するからである．

例について，単一筋線経の分析を行ない，全ての次に，組織化学的に筋線経の分化が一様でない

fiberで筋組織のパターンと同一の結果を得た．

nemalinemyopathyの検索も行なう必要がある．

最後に，貴重な症例を御提供いただきました，−201一熊本大学医学部小児科三池輝久先生，神経センタ

H．：Myosinlightchaincomponentsinsingle

ー微細構造研究部の埜中征哉先生，並びに御援助

fibers of Duchenne muscular dystrophy，をいただきました教室の柳沢信夫教授に深謝しま

Muscle Nerve5：399，1982．

す．

5）Billeter，R．，Heizmann，C．W．，Howald，H．＆Jenny，E．：Analysisofmyosinlightandheavy

文献Chain typesin single human Skeletalmuscle
fibers．Eur．J．Biochem．116：389，1981．

1）Sreter，F．A．，Astr6m，K−E．，Romanul，F．C．Aリ

Young，R．R．＆Jones，H．R．Jr．：Characteris・

6）Sugita，H．，Ishiura，S．，Nonaka，Ⅰ．，Ohashi，

tics of myosinin nemaline myopathy．

K．＆

J．Neurol．Sci．，27：99，1976．

Studyofnemalinemuscle．Proc．JapanAcad．，

・2）小口喜三夫，武田伸一，柳沢信夫，：Nemaline

Maruyama，K．：Gel electrophoretic

57B：59，1981．

myopathyの筋構造蛋白について，筋ジストロ7）Volpe，P．，Damiani，E．，Margreth，A．，

フィー症の発症機序に関する臨床的研究，三好Pellegrini，G．＆Scarlato，G．：Fast to slow

姓，昭和58年度研究報告書，1984，pp266．

Change of myosinin nemaline myopathy：3）Oakley，BR．，Kirsch，D．R．＆Morris，N．R．：

Electrophoretic andimmunologlC eVidence．
Neurology（Ny），32：37，1982．

A simplified ultrasensitive silver stain for

8）田中恵子，豊島至，福原信義，宮武正：Nemaline

detecting proteinsin polyacrylamide gels，Anal，Biochem，105：361，1980．

myopathy＝における筋蛋白質の研究，脳神経，

4）Takagi，N．，Ishiura，S．，Nonaka，Ⅰ．＆Sugita，

36：57，1984．

ー202−

24）筋収縮のエナージェテイクス−燐NMR法による筋ジストロフィー症病態の研究−
山 田 和 磨＊
研究協力者

米

谷

快男児●

田之倉

1．筋収縮のエナージェテイクス1〉

優＊

北

野

敬

明●

2．燐NMRによるジストロフィー筋の研究

生体におけるエネルギーの転換はすべての生命燐核磁気共鳴（31PNMR）により天然に存在す活動の根幹であり，筋肉の収縮は，生体におけるる燐のスペクトルを測定し，生きている筋肉やそエネルギー転換過程を代表するものである．筋収の他の組織を破壊することなくそのまま用いて，縮においては，ATPの化学エネルギーが収縮と細胞内の燐化合物の量およびその変化を知る方法

いう力学的エネルギーに転換されるが，クレアチが報告されて数年がたった．この方法は，筋肉にンキナーゼ反応が存在するために，実際に筋収縮

おりてはさらに生理学的な手法の導入が行なわれ，によって分解が観測されるものは，ATPではな

収縮機構を調べるための生理学的手法の一つとし

くして，クレアチン燐酸である．ま・た，これと同て発展した2）8）．また，この方法は骨格筋の他に多くの組織に用いられつつある．

時に無機燐酸の増大が観測される．

最初にラットの筋肉を用いて燐NMRスペク

筋肉の収縮におけるエネルギー転換の研究には，
化学的エネルギーの利用と，力学的エネルギーのトルを記録したHoultら（1974）3）によって，筋に産生との対応を調べることが必要となる．化学分

はATPの3種の燐酸に由来する一一3つのピーク，

析法を用いる化学エネルギーの利用（ATPの分

クレアすン燐酸のピーク，無機燐酸のピークおよ解量）の研究は，その方法が破壊的であるために，びグルコースー6−燐酸などからなる糖燐酸と同定大きな困難を伴う．したがって燐NMR法はそのされるピークが存在することが明らかとなった．

非破壊的性質のために，化学エネルギー利用の動態を調べる上でたいへん有利な方法である．■

また以上の他に，筋肉でこれまでその存在が全く知られていなかったシグナルが，燐酸ジエステ

一方，力学的エネルギーの産生は，収縮によっ

ルの周波数領域に存在することが明らかにされて筋のなした仕事量と，筋の熟発生量との和とした4）5）．このシグナルはカエルの筋肉にも存在するて求められる．すなわち，利用された化学的エネが，それに比べヒキガエルの筋肉に特に大きいこ

ルギーがすべて仕事として用いられるのではなくとが明らかにされている（図1）．このシグナルて，その一部は熟として散逸する．筋収縮の効率

は，Burtら（1976a）5）によってglycero1−3−phos−

は最大45％に達する．

phorylcholineであることが同定された．

収縮におけるエネルギー転換の研究を行なうにこのような燐酸ジエステル領域のシグナルにつは，一方では化学的変化（エネルギー利用）の測定

いて，特に重要なことは，それがジストロフィー

が，一方では熟発生およびブコ学的変化（発生張力症ニワトリの胸筋にかなり大量に存在する事実でおよび短縮距i牲）の測定がどうしても必要とされある4）．後に，Burtら（1976b）6）によって，ジスト

るのは，このような理由によるのである．

ロフィー症ニワトリに存在する燐酸ジエステルは，
L−Serine ethanolamine phosphodiesters（SEP）
であると同定されている．ジストロフィー症ニワ＊大分医科大学生理

トリの筋にSEPが増す理由は不明であるが，
−203−

Frog

Pi

Toqd

図2
10

0

−10

−20

Chemicqlshけt／PPm

図1

ウシガエル（frog）およびヒキガエル（toad）の男達工筋16本よ り得た燐
NMRスペクトル．ウシガエルの筋については合計352，ヒキガユルについて
は256のシグナル（FID）を積算した．
α，β，γ：ATPのα，βおよびγ一燐酸，PCr；クレアチン燐酸，PD：燐酸
ジエステル，Pi：無機燐酸．

カエルの骨格筋の強縮刺激による張力の発生（上方の記録）と熟発生（下方）．
熱発生の記録にみられる鋭い放状の変化は筋に加えた刺激電流によるアーティファクトである．このような記録から，筋は張力を維持するためにエネル
ギーを必要とすることがわかる．

4．燐NMRによる収縮におけるエネルギー利用の動態2）8）
上にのべたように，ジストロフィー筋におけるエネルギー利用と張力発生との間の連結の障害は

SEP代謝異常はジストロフィー筋における成熟

それほど著明ではないと思われる．それでは，ジ過程の異常を示していると思われる．

ストロフィー筋においてエネルギー産生の過程のどこに障害があるのであろうか．

3．ジストロフィー筋収縮のエナージエテイクス

筋肉におけるエネルギー転換の研究には，力学

カエルの骨格筋に強縮刺激を加えるとき，等尺的エネルギーの産出と，化学的エネルギーの利用

性張力の発生に伴って熟が産生される（図2）．等の対応を調べることが必要である．化学分析法を

尺性収縮にさいしては筋は外部にたいしてほとん

用いる化学エネルギーの利用の研究は，この方法

ど仕事をしないから，熟の産生は収縮のエネルギが破壊的であるためにたいへんな因艶を伴う．31PNMRはその非破壊的特性のために，化学ー利用と一致していると予想される．
Polinski とRall（1982）7）は膵化後16−33日のエネルギー利用の経時的変化を調べる上でたいへ

ニワトリの広背筋（PLD）について，正常およびジストロフィー筋の熟産生を調べている．それにん有利な方法である．
我々は筋収縮におけるエネルギー利用の経過をよると，張力の発生と比べた熟産生には正常筋とできるだけよい時間分解能をもって測定する目的

ジストロフィー筋でほとんど相違がみとめられなで大口径NMR試料管中で，できるだけ大量の筋い二・したがって，ジストロフィー筋では，エネル

組織を生理的状態に保ち，31PNMRスペクトルのギー利用と，収縮張力発生との問の連結はあまり

S／Nを向上させる方法を用い，上にのべたような障害されていない．しかし，刺激を持続するとき，収縮のエネルギー転換の研究を行ってきた．そのジストロフィー筋では正常筋のように張力が維持

結果，これまでに収縮によるクレアチン燐酸の消されず低下してしまうので7），エネルギー利用の費は収縮の経過中だけに生じているのではなく，その一部は収縮が弛緩した後さらに分解されるこ

過程のどこかに異常が存在すると考えられる．

ー204−

と（ATPあるいはPCrの収縮後分解）が明らか

クトロメータをトリガーして，RFパルスインタとなった．

ーバルを正確に4秒とした．30−60分おきに筋を

このように，NMRの測定感度を向上させ，その結果，ATP利用および回復過程の時間的経過を刺激し，収縮と同期したNMRシグナル（FID）を積算してS／Nの向上をはかった．

追求するために，NMR測定の時間分解能の向上

図4はこのような方法を用いて，カエルの骨格をはかることを目的として，基礎的研究を行なっ筋を対象として収縮による無機燐酸（Pi）の増加てきた．このようにして，現在では1回のNMRとクレアチン燐酸（PCr）の減少，およびその回復

測定すなわちシングルスキャンによって，よい定の時間的経過を調べた結果を示している（ウシガ

量性をもったスペクトルが得られるに到っている．

エル縫工筋，4℃）．時間零において，短い強縮刺この場合，時間分解能はミリ秒のオーダーに達している．

パルスを4秒おきに照射し，8ヶのNMRシグナ

激を加え，筋を2秒間持続的に収縮させた．600RF

BrukerWM200wb

ル（FID）を積算して測定の単位とし（時間分解

スペクトロメーターを用い，外径25mm試料管を筋チェンバーとし，約200gのウシガユルからそれ

能32秒），さらに同じ収縮を16回くり返して，収縮と同期したFIDを積算した．その結果収縮の直後

ぞれ1対の縫工筋を摘出し，8対の縫工筋を1回から約4分間，PCrの減少量はPiの増加量より

方法の概略をのべると8㌧の実験に用いた．6mM PipesRinger液（pH7），

も小さいことが示されている．実線はPiの回復のあるいは18mMbicarbonateRinger液（5％CO2，

経過に最も良く一致する指数関数を示している．

95％02で飽和，pH 7）を用いて筋チェンバーを濯流した．スペクトル観測には600RFパルスを照PCrの回復過程にも同じ曲線を描いてある．6mM射し，図3に示すように外部パルスを用いてスペ

速濯流を行った（〜60ml／min）．また，この図で示

図3

PipesRinger液（5％CO2，95％02で飽和）で高NMRによる筋収縮の研究を行なうためのシステムのブロ
ック・ダイヤグラム．太い実線はデータの移動を，細い実線
はパルスによる制御を，また中空の結線はRinger液などの移動を示す．スぺクトロメータは外部からのパルスで制御
する．
−205−

25

tetqni

16sqrtoriiotbull什ogs
Pi戦笥。。七㌔。転。、●●●土＿＿一一■ヽ一丁ざ−︒∈ミ︻LU巴丁寧−0∈ミTだ︼

●●

Tg二〇
∈∈
＼l
︻菖
3

RFintervqls：4S

20

10

30

40

Timり′min

図4

図5収縮による無機燐酸（Pi）とクレアチン燐酸（PCr）の減少，およびその回復の時間経過．ウシガ■ェル男達工筋，4℃．
実線はPiの回復の経過に最も良く一致する指数曲線である．PCrの回復過程にも同じ曲線を描いた．

図4に示したと同様の測定を10℃で行った結果，Piの増大とPCrの減少はよく一致して居り，4℃におけるような
両者間の不一致は認められない．

5．ジストロフィー症病態におけるエネルギー利用および産生障害の研究の見通しされているように収縮によって利用されたATP

ジストロフィー症において，エネルギー利用おは，収縮の弛緩後の回復過程において，酸素を消費することによって元のレベルに回復する．このよび産生の機構のどの過程に障害が生じているの

図に示されている回復過程の時間経過は，低温でから，現在までの．ところ明らかにすることは出来あるために非常に遅い．

ない．ニワトリ広背筋がカエル男達工筋とその形がかということについては，上にのべたような研究

図5は図4と同様の測定を10℃で行った結果をよく似ていることから，上にのべた燐NMR法を示している．600RFパルスを4秒おきに照射し，適用することが可能であり，収縮による動的なエ

さらに同じ収縮を16回くり返して，収縮と同期しネルギー利用経過を観測することができると考えたFIDを積算した．最も良い時間分解能を必要とられる．

するところでは4個のスペクトルについての測定
結果を平均した（時間分解能，16秒）．結果は，収一方では，エネルギー利用と産生の連結における障害は容易には捕足しがたいものであることが縮後のごく短い時間を除くと，Piの増大とPCr予測されて居るので7），細胞内pHを変化させるなの減少は良く一致して居り，4℃におけるような両どの負荷を加えることが必要であるかも知れない．

者の不一致はみとめられない．実線はPiの回復のそのための基礎的研究が進められているところで経過に一致する指数曲線．18mM bicarbonate

ある9）．
1

Ringer液（5％CO2，95％02）で濯流した．このように，31PNMRによって明らかにされた収縮後のPCrの遅延性の減少の温度依存性から，このような現象が，収縮後のATP利用の過程によるものであり（化学的過程），収縮蛋白の関与するメカニズムによることが強く支持される．

文献1）山田和廣：骨格筋の熟産生，病態生理，3：685−689，1984．

2）Dawson，M．J．，Gadian，D．G．andWilkie，D．R．：
Contraction and recovery ofliving muscles−206−

Studiedby3lPnuclearmagneticresonance．J．

Glonek，T．and Barany，M．：Identification

Physio1．，267：703−735，1977．

Ofanunknown3lPnuclearmagneticresonan・Ce・from dystrophic chicken as L−Serine

3）Hoult，D．I．，Busby，S．J．W．，Gadian，D．Gリ

ethanolamine phosphodiester．Archs．Bio−

Radda，G．K．，Richards，R．E．andSeeley，P．J．：
Observation of tissue metabolites using3lP

chem．Biophys．，182：683二689，1977．

7）Polinski，W．J．andRall，J．A．：Mechanicsand

nuclearmagneticresonance．Nature，252：285

energetics of muscle contractionin normal−286，1974．

−

4）Burt，C．T．，Glonek，T．and Barany，M．：

and dystrophic chickens．Am．J．Physio1．，
242：C19−C24，1982．

Analysis of phosphate metabolites，theintracellularpH，and the state of adenosine

8）Yamada，K．and Tanokura，M．：Post−

triphosphateinintactmusclebyphosphorus

COntraCtile phosphocreatine splittingin

nuclear magTletic resonance．J．Biol．Chem．

muscle as reveated by time−reSOIved

251：2584−25911976

nuclearmagneticresonance．Jpn．J．Physio1，，

a．

5）Burt．C．T．，Glonek，T．and Barany，M．：

3lP

33：909−919，1983．

Phosphorus−31nuclear magnetic resonance9）北野敬明，米谷快男児，田之倉優，山田和贋：

detection of unexpected phosphodiestersin

筋収縮張力及び熱産生に及ぼす細月包内pHの効

muscle．Biochemistry，15：4850−4853，1976b．

果．第62回日本生理学会大会発表予定．

6）Chalovich，J．Mり

Burt，C．T．，Cohen，S．M．，−207−

25）ミトコンドリアミオパテーの生化学的研究：
SCanning organ spectrophotometerによる白血球電子伝達系の検討
宮
研究協力者

西

澤

正

武

豊■

正■
斎

藤

敏

之＝

菅

野

富

夫＝

料として容易に得られる白血球に応用したので，は じ め にミトコンドリア異常症においてミトコンドリア

その結果を報告する．

の機能異常を生化学的に検索するためには従来，方生検により得た骨格筋細胞，または培養皮膚線維法

芽細胞よりまずミトコンドリアを単離する必要が白血球はヘパリン加採血した全血10mlより，デある．この単離ミトコンドリアを試料として，（1）キストランにて赤血球を沈降させ，その上清に1酸素電極による酸素消費の解析から障害部位を推分間の低浸透圧ショックをかけ，残存する赤血球定する，（2）分光学的に還元酸化差スペクトルを得，を溶血させて分散した．分社後の白血球は測定ま

これよりシトクローム各成分を定量する，（3）ミトで，充分に酸素化したグルコース添加（4．5g／1）リコンドリアに局在する酵素活性を直接測定する，

ン酸緩衝生食水にsuspendして更にこれに酸素の三つの方法が併用されてきた．その結果，現在をbubbleしておき，測定直前に軽く遠心してpe1−1etとした．採血後直ちに分艶しない場合には仝血までに電子伝達系の障害として，シトクロームb，
あるいはb／aa3の欠損症，CytOChromecoxidaseの欠損症（各種の臨床病型をとる），NADHあるのままで水冷保有した．採血6時間後に分馳した

いはsuccinateの0Ⅹidationの障害例が明らかに

採血後直ちに分馳した白血球で測定した場合と同されてきている．

様な結果の得られることを確認している．

白血球でも，また，分敵6時間後の白血球でも，生検筋を用いる場合には得られる試料の量に限この白血球pelletの表面にSOSPのOptical度があり，2回以上の生検は仲々困雉であることから，分析上皇的な制約がある．ミトコンドリア

fiber束の先端（probe）を近接させ（図1），一部のfiber束より試料を波長420nmから620nmまでを単敵する場合は分敵操作の過程で膨化が生じ，の可視光にて高速度にてscan L，pelletよりの反intactなミトコンドリアを単艶することは技術的射光を別のfiber束を介してphotomultiplierにに容易でない．またミトコンドリアを細胞体から導いた．図のprobeに照光用，測光用のfiber束

分離する以上，細胞体との機能的相関は失われ，が1束にまとめられている．
常温にて白血球試料を1秒に1回，波長420mm

insituでの機能を観察することはできない．

より620mmまで高速度でSCanして得られるスペ

そこで今回我々はミトコンドリアを単馳せず，細胞がintactな状態で，電子伝達系を直接観察す

クトルを16回加算してまず絶対スペクトルを得た．

るために，立石ライフサイエンス社製のSCanning

ついで，この絶対スペクトルをreference として，

OrganSpeCtrOphotometer（以下SOSP）を，試その後30秒毎に経時的に同様にして得られるスペ＊新潟大学脳研究所神経内科＊＊北海道大学獣医学部生理学

クトルとreferenceとの差を演算させ，差スペク
トルとして表示させて，これを経時的にモニター
一208−

PROBE

pROBE

020r：N2LEW∝Ⅵ陀PELLEで

図1

測定装置の模式図FJ︵凸○︶ OUudqhOSn司

5台0

6：O

Wavelength（nm）

図2

正常白血球へのDithionite添加10分後の差スペクトル

−209−

した．

ることとした．

図1は測定に用いたchamberの模式図で，左図の如く，単に遠心管内にてpellet にprobe をあてて測定する場合と，pelletをnylonmeshに

結正常白血球のpellet

果にDithionite

を加えて10のせて右図の如き自作の濯流装置内にset L，
mediumを濯流しながら窒素置換や各種阻害剤に分後の差スペクトルを図2に示す．還元型シトク

対する反応をみる場合とを目的に応じて使い分け

明瞭なpeakとしては認められていないが，aa。，

た．

C＋cl，β帯，γ帯の還元型シトクロームによる吸ロームbによる吸収はC＋clのpeakの屑となり，測定はまず濯流装置を用いて，可逆的な反応を収が明らかに認められた．この差スペクトルは立みる場合に常用される窒素置換によるanoxia．で生ずる還元反応を検討したが，白血球はこの測定石研究所により発表されているラット肝より単敵条件下ではanoxiaに対して抵抗性を示し，還元

窒素置換によるanoxiaで得られた還元マイナス型のスペクトルは得られなかった．そこで以下は酸化の差ネづクトル1〉あるいは濯流カエル脳2），ラ

遠心管系を用いて，reStinglevelを10分間観察した後，強力な還元剤であるsodium hydrosulfite

ット膵3）なとの記録とよく一致してい皐．
図3にはもう一例の正常白血球でのDithionite（以下Dithionite）を添加し，fullreductionの状

還元10分後の差スペクトルを示す．本例では先の態として10分後に得られる差スペクトルを分析す例にみられた吸収帯に加えて，470mmに吸収極大したミトコンドリア，あるいは濯流肝試料より，

八白○︶ pUud月hOSd司

5さ0

6ニO
Wavelen9th（nm）

図3

正常白血球へのDithionite添加10分後の羞スペクトルー210−

をもつ大きなpeakが認められた．このpeakはC＋cl＝1．39±0．20，b／C＋cl＝1．38±0．15（平Dithioniteによる還元後にaa。，C＋clのpeakよ均±標準偏差）であった．

りも遅れて出現してきて，しだいに増大する傾向を示した．SOSPを用いての測定は記載がないが，考

文献上このpeakは白血球に存在するmyeloper−
0Xidaseの吸収値と一致しているので，ミトコン

Cyanide−insensitive

ドリア外の物質に由来するものと思われるが，未NADPH oxidase

だ同定は行なっていない．正常白血球ではこの2が，ミトコンドリアについての記載は意外に少な型のいずれかが観察された．

い．古くは水上らにより分光学的にシトクローム

30秒毎に得られる差スペクトル上で波長605−察

白血球にはphagocytosis

に際して作動するな酸素消費があり，特にについては詳しい報告がある

a，b，Cの存在が確認されており，他組織との間に575，562−575，550−540nmでの吸収値の差を各々

大きな質的相違は認められていないが，形態的にシトクロームaa3，b，C＋clのredox state の示標として経時的にモニターしていくと，図4の如証明されるようにミトコンドリアの数は少ない．

き記録が得られる．これは比較のため，3つの記コース負荷により呼吸が抑制されるCrabtree

録を同一のChartに重ねて表示したものである．

果が認められる．また白血球ではTCAサイクル

Dithioniteによるfull reduction後のそれぞれのに入るピルビン酸は5％にすぎないとの報告もあ

二波長での吸収値の差からシトクロームaa。，b，り，ミトコンドリアへのエネルギー供給の依存度

C＋clの存在量比が算出される．正常白血球6例
より得られた各シトクロームの存在量比はaa3／

anoxiaに対して抵抗性を示す理由と考えられる．

白血球は好気的条件下でも解糖を行ない，グルは低いものとみなされる．これが窒素置換による︵凸○︶ のU⊂巾qHOS月々

10

図4

効

20

min

シトクローム各成分のredoxstate（説明本文）−211−

窒素置換による可逆的な還元反応はビルビン酸のioniteによる還元一酸化差スペクトルより各シ
トクロームの存在量比が算出された．

存在下に，モノヨード酢酸にて解糖系をblockしてはじめて得られた．

2）本法は容易に得られる白血球を試料として利

今回のSOSPを用いた結果から，白血球より，用でき，電子伝達系に障害を有するミトコンド

ミトコンドリアを単艶しないin situの状態で，リア異常症の簡便なScreeningと障害部位の推電子伝達系のredox stateが直接観察できること

定法として広く臨床応用が期待できる．

が示された．本法では電子の竜充れを経時的に追跡できるので，シトクロームの各成分の存在の有無は容易に確認できるばかりでなく，呼吸基質と各文

献

部位での阻害剤を併用すれば，電子伝達系の障害

1）Kobayashi，S．，et al．：Scanning spectro−部位の推定に有力な情報を提供すると期待される．

photometry fordynamicstudy ofthe organ

今回示した白血球を用いる方法は試料を容易に

OXidativemetabolism．Biomed．Resリ2：390−

得られ，再検も容易に行なえる利点があるが，全く同一の方法を培養線維芽細胞に応用することも

2）Kanno，T．andSaito，A．：Markedreduction

可能である．本法は電子伝達系の異常を知る

Ofthecytochromesinducedinabullfrogbrain

SCreening 法として簡便で，広く臨床応用が可能

by perfusingwith a calcium，deficient or aと思われ，現在実際の症例で検討を重ねている．

highpotassiumSOlution．Biomed．Res．，2：

397，1981．

699−704，1981．

ま

と

め

3）Kanno，Tリetal．：Dose−dependenteffectsof

1）SOSPにより白血球ミトコンドリアの電子伝

acetylcholine stimulating respiratory chain

達系のredox stateが，ミトコンドリアを単柾

and secretion ofisolated perfused rat

しないinpancreas．Biomed．Res．，4：175−186，1983．

situの状態で直接観察でき，Dith−−212−26）生体内におけるクレアチンの代謝経路：14C−クレア
チン腹腔内注射（ラット）にみられる尿中への14C−
尿素の排出
紫 芝 良 昌＊
研究協力者

三

好

小

島

和

夫＊

清

水

多恵子干

進●

田

村

克

門

脇

紀

子＊

也＝

私たちは従来，筋ジストロフィー症の成因をクジで採取したものを，濾過した後，その20mlをレアチン代謝の面から追求してきたが1）2），今回そHPLC（エルマー光学ERC−8710）を用いて分画の一環として，ラットを用いて行った加〝オ相実

し，各分画中の14C−放射活性を液体シンチレーシ

験の成績について述べる．動物，人においては，ョンカウンターで溜り走した．HPLCの条件は，クレアチンは主として筋中で，クレアチン燐酸あるいはクレアチンから徐々にクレアチニンに転化

NucreosillOSA（10jLm）を8mmX30cm のカラムに充填し，bufferO．01M，KH2PO4−H。PO4，

して尿中に排出し，これが唯一の代謝経路とされpH3．70をmobilephaseとして用い，25℃，カている．私たちは，動物筋においても，これと別

ラムプレッシャー40kg／cm2，2ml／minにクレアチンの分解代謝経路（水解あるいはアミた．
なお，14C−Creatine

ジン基の転移など）のあることを想定して研究を進めてきた．現在では，ある種のpseudomonasからクレアチンの分解酵素のいくつかが分維精製さで分画しの水解の対照実験を

pseudomonas creatinase（東洋紡研究所製3））を用いて行った．

れている（pseudomonas creatinase他3））．
成

材料と方法
実験はラットを用い，その腹腔内に放射活性ク
レアチンを注射して，尿中に排出する放射活性の績14C−（amidine eabeled）creatine試料：
非放射性基準物質（クレアチン，尿素，サルコシン）の混合試料をHPLCで分維した結果と実験に用いた14C一（amidinelabeled）creatine試料のクレアチンと尿素を測定した．
ラットはWistar系雄，約200gで，通常飼育（オ

放射活性分析の成績を対比して図1に示した．

リエンタル酵母社製MF）のものと，加えてネオ基準物質の分離はよく，また，放射クレアチン

マイシン経口投与（1日10〜40mg，実験の前3日

試料は99％が14C−Creatineであり，0．4％と極めてから6日間，飲料水に溶解した）を行ったものをわずかの尿素の放射活性が認められるのみであっ用いた．放射性クレアチンは14C−（amidine
labeled）creatine（NewEnglandNuclear製，21

た．
Pseudomonas creatinaseによる尿素の生成：

JLCi／1mg）で，その5〜20JLCiをラットの腹腔内に注射した．尿は注射後に屠殺したラットの膀胱

O．25unitを37℃，60分間作用させた結果を図2により採取したもの，あるいは24時間毎に代謝ケー示した．総活性に対し，クレアチン79％，産生さ＊沖中記念成人病研究所＊＊徳島大学医学部第一内科

1．C−Creatine試料にpseudomonas creatinase

れた尿素20％がみられる．

ー213−

むu

Ou︻SOUL巾Sl

巾巴Ul

タ巴コl

10

20

30

40

FraCtion No．
図2

10

20

30

Ps−Creatinase による14C−Creatine
らHC−ureaの生成か40

Fraction No．
図1

日C−Creatine（amidinelabeled）の放射活性

通常飼育ラットの成績：
通常飼育ラットに14C−Creatine20JLCiを腹腔内に注射し，24時間後に屠殺し，膀胱内尿を採取して検索した成績を図3に示した．
尿中の総活性に対して，クレアチン20％，尿素
76％の放射活性が認められた．

10

同じく通常飼育ラットに14C−Creatine20JLCiを腹腔内注射して採取した0〜24時間，24−48時間，
48−72時間尿の成績を図4に示した．

図3

1日尿量16−12mlに対して，1日尿中総放射活性は第1日目で高く，注射量の約3％が排出され，
−214−

20

30

40

Fra⊂tion No．

通常飼育ラット尿中14C−Creatineと14C−urea（膀胱内尿）（14C−Creatine腹腔内注射後24時間）

2日日以降減少した．放射活性の分画では，第1ネオマイシン投与ラットの成績：

日日で74％が尿素の位置にみられ・クレアチンのネオマイシン1日量40mgを実験3日前から実活性は4％と僅少であった・2日日以降の尿では，験期間中，経口投与したラットの成績を図5に示
放射活性が低下し，HPLCでの明確な分離は認め した．
られなかった．
1日尿量7−6mlで，各1日尿中の放射活性は，第1日日長も高く，注射量の約4％が排出さ

10

20■

30

10

0−24h

良妻 16mldpm U12．000

20

30

10

20

24−48h48−72h

13mt

12m1

72，ほ0

32．40030

図414C−Creatineの腹腔内注射後の尿中放射活性（通常飼育ラット）

10

各室

20

30

10

20

30

10

20

0−24h

24−48h48−72h

7ml

6m1

6m1

649，800

453．300

dpm l．742．300

38郁† 2，845．400 くる主射手叫000．000）
図5 14C−Creatine腹腔内注射後の尿中放射活性（ネオマイシン経口投与ラット）
−215−

刀

れた．2日目以降は減少したが，その程度は通常ットでの糞便培養結果でも大部分の微生物が押えラット程ではなかった．

られていることが示されている．

尿中の子吉性物質は，24時間尿において，多量のもし，ネオマイシンの経口投与によって腸内微クレアチン（71％）と通常ラットの場合よりは減生物の関与が除外されているとすれば，上の結果少しているが，明らかな尿素（10％）がみられた．
48，72時間尿ではクレアチンのピークをみるが，は，動物体内（この場合，骨格筋内が考えやすい）においてはクレアチンからクレアチニンへの緩徐

尿素のピークは明らかでなかった．

な転化と別に，クレアチンから尿素塵生の経路をネオマイシン投与ラットの糞便培養成績．通常含む急速な代謝ルートのあることを示唆している．

飼育ラット，ネオマイシン投与ラットの糞便を培

しかし，この点はなお考究してゆきたい．

養（SS，TCBS，マッコンキー，スキロ，ドリHJレスキー，血液培地）した結果は，通常ラットでは多のクレアチンを負荷した状態におけるものである．

なお，今回の実験での結果は，腹腔内に約1mg

数のE．coli，bacillus及びenterococcusがみられまた，観察期間は注射後数日の短時間であり，長たのに対し，ネオマイシン投与ラットでは前二者期にわたる緩徐な成績はみていない．

が完全に消失し，enterOCOCCuS，同定不能のグラ
ム陽性梓菌がわずかに証明されたのみであった．

ま

1．ラ

考

察

と

め

ット（通常飼育）の腹腔内に14C一（amidinelabeled）creatine（20JLCi，約1mg）を注

ラットに14C−（amidinelabeled）creatineを腹腔内に注射して尿中の放射物質をみる実験を行い，射すると，24時間尿に注射した活性の3−4％のまず，通常飼育ラットにおいて24時間尿中に多量た．この活性尿素はネオマイシン経口投与ラットの尿素の排出することを確かめ，ついで，併せてでは相当量が減少したが，しかしなお明らかな量

ネオマイシンの十分量を経口投与したラットにおが認められた．

放射活性が排出し，多量の放射性尿素が認められ

いて，尿素生成は減少したが，しかし明らかに存在することを認めた．

2．ラット体内では，クレアチンからクレアチ
ニンの緩徐な転化と別に，クレアチンから尿素を

文献的には，通常飼育動物においてもクレアチ

生じる，より急速なクレアチンの代謝ルートがあンの体内注射ないし経口投与で尿中尿素の排出をることを思わせる．しかしなお，腸内微生物の関確かめたものはみられない．動物，人に多量のク与を検討する必要がある．

レアチンを投与すると，それが腸内細菌によって破壊されるという考えは古くからあったが4），それは腸内クレアチンの消失という現象に基づくものであった．

文献1）三好和夫，紫芝良昌他：筋におけるクレアチン
代謝．筋ホモジュネートによる1−14C標識クレ

本実験においては，同じくラットにネオマイシ

アチンからの1−14C標識サルコシンの産生．厚ンを経口授与した場合に，尿中尿素は明らかに減生省「神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー

少したので，上の尿素の相当量は動物の腸管内に症の発症機序に関する臨床的研究（三好班）昭おいて微生物によってクレアチンから生じた尿素

和57年度研究報告書，1983，p．179．

が血中に再吸収されて尿中に排出したものと考え

2）三好和夫，紫芝良昌他：筋におけるクレアチンられる．しかし，この操作によってもなお残存してみられた尿中の尿素は動物体内で産生されたこ

代謝．骨格筋のクレアチン輸送の特性．同上．
昭和58年度研究報告書，1984，p．257．

とを思わせる．投与したネオマイ・シンの量は，一3）Tsuru，D．，Oka，I．and Yoshimoto，T．：

応十分量（動物，人において，腸管内における尿素

Creatinine decomposing enzymes inの分解を押える量5））であり，また，今回の実験ラ

psuedonomas putida．Agr．Biol．Chem．，40：

ー216−5）Dintzis，R．Z．and Hastings，A．B．：Theeffect1011，1976．

of antibiotics on urea breakdown4）Twort，F．W．andMellanby，E．：Oncreatine−inProc．Nat．Acad．Sci．，39：571，1953．

destroying bacilliin theintestine，and theirisolation．J．Physio1．，44：43，1912．

ー217−

mice．

27）一（1）ミトコンドリア・ミオパテー

酵素学的診断法の確立
佐 藤
研究協力者
目

猛■

安 野 みどり＊ 山 本 真 理＊

的肢，次いで上肢筋の脱力と萎縮が進行，さらに両ミトコンドリア・ミオパテーは外眼筋や四肢筋

下肢にアテトーゼ様不髄意運動を認めた．血中のの萎縮に加え，Keam−Sayre症候群や脳血管障
害，あるいはミオクローヌスなどの中枢神経障害

乳酸，ビルビン酸の増加があり，筋電図では四肢を伴う症例が知られている．さらに多くの症例はンにて大脳白質のぴまん性低吸収城を認めた．筋

高乳酸，高ビルビン酸血症を呈する．その原因と生検では多数の結晶状封入体を有する異常ミトコ
ンドリアを認めた．

してビルビン酸の酸化，糖新生系やミトコンドリ
アの電子伝達系酵素の障害が挙げられている．わ筋の神経原性変化，腎機能低下，頭部CTスキャ

れわれは生検筋組織および培養皮膚線維芽細胞か

症例3．44歳男性，症例2の兄（KearnS−Sayre
症候群不全症）．外眼筋麻痔，四肢の神経原性筋萎

らミトコンドリアを抽出し，ビルビン酸脱水素酵

縮と異常ミトコンドリア，雉聴，軽度腎機能不全，

素複合体（PDHcomplex）活性，およびミトコン
ドリア電子伝達系酵素の測定法を検討し，報告しCTスキャンでの大脳白質びまん性低吸収域などた．今年度はさまざまな臨床症状を呈するミトコ症例4．29歳男性（ミトコンドリア脳筋症），（山ンドリア異常症についての測定結果を報告する．

本，別府，椿，臨床神経，1984），四肢筋のミトコ

症例2（妹）と全く同様の病像を呈していた．

ンドリア・ミオバナーと脳血管障害様発作を伴い，症

例

高乳酸血症がみられた．

症例1．11歳女児（Leigh脳症）．幼小時より精神身体発達遅延があり，3歳時雨視神経萎縮，9
歳頃から小脳症状，脳神経障害，痙攣発作，呼吸障害などを反復するようになり入院した．血中乳酸25−177mg／dl（正常16mg／dl以下），ビルビン症例5．59歳女性，症例4の母．臨床症状は認
められなかったが，筋生検にて結晶状ミトコンド
リアが多数認められた．
症例6．41歳男性（ケリレマニウム長期服用後にみられたLipidstoragemyopathy）．大酒家の上，酸2．0〜3．8mg／dl（正常0．3−0．9mg／dl）と高値を呈し，アラニンやグルコース負荷試験で乳酸，
ビルビン酸の著明な上昇を認めた．高脂肪食にてゲルマニウム2000mg／Hと長期間大量服用してい一時軽快したが，肺炎を併発して死亡した．都立
小児病院（土屋裕，初鹿野浩）での剖検では脳幹，′J相違および脊髄灰白質に散在性壊死巣と小血管の増生を認めた．

感が加わったため，当院腎臓内科に入院，腎透析

症例2．40歳女性（KearnpSayre 症候群不全型）．15歳から徐々に難聴が出現，27歳から雨下が認められた．9月21日高度の腎不全にて死亡し＞り頃天堂大学医学部脳神経内科

ー）．29歳頃から下肢，次いで上肢の脱力に気付いた（常用量の約200倍）．昭和59年2月より食欲低下，筋力低下が生じ，腎不全，四肢末梢のしびれを施行されていた．ミオグロビン尿陽性，肝機能障害も高度であった．筋生検にて多数の月旨肪頼粒，
グリコーゲン顆粒の蓄積と巨大なミトコンドリア
た．
症例7．37歳男性（外眼筋麻痺を伴う．ミオパテ

一218−

結

た．36歳頃から眼瞼下垂，眼球運動障害に気付いた．血中乳酸，ピルビン酸の高値と筋生検にて

果

1．PDH complex

ragged red fiber を認めた．

症例1（Leigh脳症）の培養皮膚線維芽細胞の症例8．39歳男性（ミオクローヌスを伴ったミ

PDH complex

トコンドリア・ミオバナー），（群大・神経内科 矢1）．本例ではATP添加による不括化，Mg2＋，
Ca2＋による活性化は正常であった．すなわち島，平井）．20歳頃から四肢筋萎縮が進行，四肢のミオクローヌス，難聴，高乳酸，高ビルビン酸血症が認められた．
方活性が著明に低下していた（図PDH phosphataseは正常であった．またLipoamidedehydrogenase（E3）活性も正常であった．

法

他の5例（症例2，4，5，7，8）の皮膚線経1．皮膚線維芽細胞の培養：生検皮膚小片をEagleMEM＋8％仔牛血清にて培養，継代4−7芽細胞のPDH complex
た．

活性は全て正常であっ代のものを用いた．

2．ミトコンドリア電子伝達系酵素

2．ミトコンド））ア分画法：Stumpf（1981）によ生検筋は5例（症例2，3，6，7，8）にて測った．剥艶した線維芽細胞を250mMMannitol，2

定した（表1，2）．症例8のみSuccinatecyto−

mMEDTA，0．3％BSA，1mMATP，1mMME，

chromecreductaseおよびComplexIIが低値

10mMHepesbuffer（pH7．4）に浮遊，prOteaSeを作用させた．ホモジネート後，遠心（600g，8000
g，2回）にてミトコンドリア分画を得た．0．3M
SuCrOSe，2mMEDTA（pH7．0）に再浮遊，凍結融
解後，酵素活性を測定した．
生検筋からのミトコンドリア分画法はMa−
kinen＆Lee（1968）の方法によった．ミトコンド
リア分画はいずれも電顕で確認した．
3．ミトコンドリア電子伝達系酵素活性：Cyto−
Chrome c oxidase（Cyt．c oxd．）はSekuzu（1965）によった．Succinate cytochrome creductaseはKing（1967），NADH cytochrome
C reductase

はKing（1967），Succinate dehy−

drogenase CoQ reductase（Complex II）はZiegler＆Rieske（1967），Citrate synthase
MorganTHughes（1967）によった．
4．PDH complex：PDH complex

ははBlass（1970），戸島（1980）によった．Sodium〔1−14C〕
pyruvate

を基質に加え，発生した14C02を液シンにて測定した．PHDphosphataseはRobinson（1975）により，ATD添加による不活化，Ca2・，
Mg2＋による活性化をみた．

0
図1

ー219−

5

mln．

培養皮膚線維芽細胞のPDH complex
およびPDH phosphatase活性．

8その結果，既報のごとくLeigh脳症の1例に皮表l Mit．enzymesin muscles．

膚線推芽細胞のPDH complex
Cyt．c Suc．c NADH ConT）1．Cltrote
OXd．

red．

c red．

かと推定された．
9

ミトコンドリア電子伝達系酵素については，生16±115．0

7
6
山﹁＋︻ノ

±72．9

⊂ ノ

（n＝12）±61．5

Pyruvate decarboxylase（El）かLipoate
acetyltransferase（E2）の異常によるのではない

0

⊂ ノ

260

とLipoamide dehy−

drogenase（E。）活性は正常範囲内にあったため

7

6
7 ノ

2

20勺．8

0

6

hq

Contro1225．0

80
6
7J ︐ヽノ

7

2

0

157

8

118

1

8．

て ノ

202

2

161

22上1

■ 山 ．

2昭

7．

2

6．

2

221

7
7
1
7
山﹁＋︐⊃
− −
2
1

t ノ

的2

8

q95

5．

0

2．

た．PDH phosphataselI synth．

活性の低下をみ

検筋500mg，あるいは培養皮膚線推芽細胞において電子伝達系酵素活性の測定が可能であることを

12勺．q197．q
±qO．5

±92．5

報告した．特に線維芽細胞では検索材料の入手が（JLmOl／min／mg，mit．Protein）

容易なことや，繰り返して測定可能であり，代謝実験が可能などの利点がある．しかし，筋組織よ表2 Mit．enzymesin fibroblasts．

りは酵素活性値が低く，継代培養を重ねたものと

Cyt．c Suc．c NADH Co777Pl．Cltr（】te
OXd．

red．

c red．

初代とは酵素活性値が異なってくる可能性がある．

ⅠI synth．

生検筋と対比して，異常な酵素値を確認できると

2

2

＋■

2

2

⊂ノ

9

＋●

山

2

︐lJ

＋▲

q

2

q

1

8

＋■

てノ

＋−

︻ノ

＋●

2

8

てノ

＋I

︐ヽノ

7J

2

7

●くノ

＋■

6

てノ

︐ヽノ

＋■

2

︻ノ

︻ ノ

上10土q：q土2

いう点で意義が大きいと考えられる．
症例8では生検筋，および培養皮膚線維芽細胞665±lqq

5上l±6

78±11

共にComplexII（SuccinateCoQreductase）の738±6q20±8

52±5

低値が認められた．正常対照群での測定値の標準

句55±15

12±2●

77±8

偏差が大きいため，再検が望ましいが，症例8で

q5q土9
227土102

2

Contr01

q2．8

58．5

515

27

52．8

はComplex IIの構成成分であるSuccinate

±20．5

±16．5

±155

±8．9

±21．5

（∩＝10）

（10）

（6）

（q）

dehydrogenaseがある．

が他の構成蛋白の欠損の可能性（q）（JLmOl／min／mg．mit．Protein）

症例2，3のKearnsrSayre症候群不全型ではPDHcomplexおよびミトコンドリア電子伝達系を示した．症例8では皮膚線維芽細胞においても酵素は正常範囲内にあった．本症候群における高ComplexIIが低値を示した．
症例2では培養皮膚線維芽細胞のCyt．c oxd・

乳酸，高ビルビン酸血症の原因については，さらに他の関連酵素の検索が必要である．

が2回の測定にても低値を示したが，生検筋では結正常であったためその意義は保留した．

論

1．高乳酸，高ビルビン酸血症を伴うミトコンド

考

リア異常症8例について，生検筋および培養皮膚察

ミトコンドリア・ミオバナーの成人例において，

線絶芽細胞からミトコンドリアを抽出し，PDH

最近，NADH CoQreductaseやCytochromeb

complexおよび電子伝達系酵素活性を測定した．

欠損例が報告されている．われわれは本症候群の2．Leigh

臨床生化学的診断を容易にする目的で，生検筋と皮膚線維芽細胞についてPDHcomplexとミトコ

COmplex低値をみた．
3．ミトコンドリア・ミオバナーの1例にて生検

ンドリア電子伝達系酵素の測定法を確立し，さま筋および皮膚線維芽細胞のミトコンドリア内

ざまな症例について測定した．

ComplexII活性の低値をみた．

−220−

脳症の1例で皮膚線維芽細胞のPDH

文

献Fluctuating symptom and CT．Neurology，

1）佐藤猛，安野みどり，山本剛司：ミトコンドリ

1985，in press．

3）矢島日出萱，他：脳沈異常，乳酸・ビルビン酸

ア異常症の酵素学的診断．神経内科，21：1984，
印刷中．

の高値を伴った

Mitochondrial encephalomyopathy

mitochondriamyopathyの1

例．第91回日本神経学会関東地方会，昭和59年

2）YamamotoT．．BeppuH．，and TsubakiT．：

12月1日，東京．

；

一221−

27）−（2）DuchennC型筋ジストロフィー症（D．D．）生検筋におけるK／NK細胞の定量的解析

研究協力者

佐

藤

荒

畑

猛轟
音

一事A．G．Engel…

表l D．D．生検筋内NK細胞の定量化

は じ め に末梢血リンパ球，NK細胞およびそれらのサ7

1．

Count all muscle fibersin the biopsy．

セット像が，必ずしも病巣局所や個体全体の免疫2．

Count a11reactive endontysial cells．

能を反映しないことは既に知られている．従ってSubpopulations

組織レベルでの，これら浸潤細胞の解析は意義深

Leu−7＋，11−，4＋

いものと考えられる．そこでわれわれは，これまLeu−7＋，11＋，4−＋，＋＋で免疫組織化学的手段によって主として炎症性筋

Leu−7−，11＋，4−

十十十

疾患の浸潤細胞・サ7

3．

セットの解析を行って来た1）2）．

NK−aCtjvity★

＋

Average ce11counts／1000muscle fjbers
Were Obtained．

★‥．ref．（り（V）

さてD．D．で，その骨格筋中に少量ながら細胞浸潤の認められることは従来より知られているが，られている3）4）．

その意義については看過されて来た．昨年の本研

免疫組織化学的方法（光践）は，2JJ連続凍結切究班において，われわれは，D．D．でのこれら浸潤片法を用い，ローダミン（R）及びフルオレッセン細胞が主としてT8＋T細胞（cytotoxic／supres−ス（F）標識抗体による，直接または間接螢光抗体sor）及びやタロファージ（MF）から成り，さらに法を用いた．これらはR・Leu7／F・Leu4，R・

少数ながらNK細胞マーカーとされるLeu7抗原

Leull／F・Leu4，R・Leu7／F・Leullの）1剛こ

陽性細胞の混在することを報告した．

それぞれ二重染色された（表2）．さらに必要に応

今回は，D．D．筋中に出現したこれらNK細胞の役割について，さらに明らかにすることを目的とし，そのサブセット（表1）の定量的解析をすすめてきたのでここに報告する．

表22−u Serjal
SeCtions

1 2 3 4 5 6 7 8

対象と方法
対象：Duchenne

免疫組織化学的染色8例の生検骨格筋

方法：使用されたモノクローナル抗体は，Leu
7，Leull（NK細胞マーカー），Leu4（T細胞マーカー）およびM0−1（MFマーカー）である．こTrichrome
R−Leu 7，F−Leu4
R−Leull，F−Leu4
R−Leu 7，F−Leull
MAC（peroxidase）
Acid phosphatase
M0−1
HaE

れらのマーカーと，それによって標識された単核細胞のNK活性との関連は表1に示す如く考え

Stajnjng★

★●

R／Findicate direct orin−
directimmuno staining with
Rhodamine or FITClabeled＊順天堂大学医学部脳神経内科

antibody．

＊＊Mayo Clinic−222−

じてR・Leu（7＋11）を加えた．最終的には，これらのreconstruCtion

を行うことにより2），6種類のNK細胞サブセット（Leu7＋11￣，7￣11＋，7十
11＋と，これら各々についてLeu4＋もしくは4￣）が同定される．一般組織像の観察には，トリクロ
ーム染色，H＋E染色を用いた．C5b＿9COmplement
membrane attack complex（MAC）により壊死
筋線経を同定し非壊死筋線経から区別した5）（図1）．MFは酸性フオスファターゼ強陽性，M0−1
抗原陽性細胞として同定された．コントロール切
片には，一次抗体と同一濃度・サブクラスの正常
マウス免疫グロブリンを供し，以下同様に処理した．モノクローナル抗体の使用濃度（1〜5γ）は，あらかじめヒト末梢血リンパ球標本とアセトン固定凍結切片を用いて決められた．
NK細胞の定量的解析の手段として−生検筋のEndomysiumに出現した全てのサブセットを

図2

数え，また筋線推総数も数えて，最後に筋線維1000本あたりの浸潤細胞数として表示した．

（a）はEndomysiumの浸潤細胞を示す（トリクローム染色）．これらの筋線経
は非壊死筋線経であることがMAC陰性（b）から確認される．これらの浸潤細胞の多くはF・Leu4＋であるが，この中の2個（矢印）はR・Leu 7＋であった（C，d）．（×300）
結果

8例の筋線維総数は34，151本（1714〜7357；
文＝4269）．

壊死筋線維比率は1．55％（0．25〜3．46）であった．非壊死筋線経のうちで，直接細胞浸潤を受けていたものの数は0．28％（0．05−0．80％）であった．Endomysiumに出現したLeu4＋，Leu7＋，Leu7＋4．，Leull＋，Leu

ll＋4−7ェノタイプ数は，それぞれ筋線維1000本
あたり73±25，15±10，2±1，0．7±1．0，1．0±1・0であった．さらに詳細については現在なお検討中
である．
考

察

Mokri，Engelら6）は，D．D．の初期病変として，
筋形質膜欠損の存在を見出し，その重要性を報告
図1

壊死筋線経を除外するために，その同定はトリクローム染色（a）及びMAC5）（b）免疫染色とで行った．（×600）

した．その後Carpenter，Karpatiら7）は筋形質膜の微小欠損が修復されずに放置された場合，当該筋は壊死に陥ることを指摘している．
−223一

細胞が一つの標的を破壊するには一個で充分であり，なおかつNK細胞は，リサイクリングされて次の標的に向うことから，たとえ量的に少ないとしても，その病因的意義は存在し得る．その意味でも，D．D．に出現するNK細胞の役割について
は，さらに詳細な検討を加える必要があるものと考えられた・またT細胞，MFとの相互作用や，各種リンフォカインの役割についても今後考えて
みたい．
文1）Arahata，K＆

献Engel，AG：Mon。Cl。nal

antibody analysis of mononuclear cellsin

myopathies．I：Quantitation of subsets
accordingtodiagnosisandsitesofaccumula−tionanddemonstrationandcountsofmuscle
fibersinvadedbyTcells・Ann・Neuro1．，16二

193，19842）Engel，AG＆

Arahata，K：M。n。Cl。nal

antibody analysis of mononuclear cellsin
myopathies．II：Phenotypesofautoinvasive

図3

Cellsin polymyositis andinclusion body

Leull十4￣細胞を示す（矢印）．（a）はF・Leu4＋細胞，（b）はR・Leull＋細胞，（C）はa，b二重露光写真である．

myositis・Ann．Neuro1．，16：209，1984
3）Lanier，LL，Le，AM et al：Subpopulations（×700）

Of human natural killer cells defined byexpression of the LeuL7（HNK−1）and Leu−

最近NK細胞による標的細胞破壊機序として
Tublar complex

11（NK−15）antigens．J．Immuno1．，131：1789，

による微小孔（50，150Å）の形

1983．

成が注目されているが，Fidzianskaら8）は，ヒト

4）Abo，T，Miller，CA et al：Characterization

胎児D．D．と考えられた症例の電顕的観察を行

Ofhumangranularlymphocytesubpopulation

ったところ，Killercellの浸潤による筋障害過程が存在することを示唆する興味深い結果を報告している．

expressing HNK−1（Leu−7）and Leu−11
antigensinthe bloodandlymphoid tissues
from fetuses，neOnateS and adults．Eur．J．

われわれの結果からは，最も強力なNK活性を有するとされるLeull＋7￣4￣フェノタイプは少Immuno1．，14二616，1984．

5）Engel，AG＆

Biesecker，G：Complement

なく，逆に弱いNK活性を示すLeu7＋11−4＋フェactivationin muscle fibernecrosis：demon−

ノタイプが，より優位なポピュレーションである

Strationofthemembraneattackcomplexof

ことが示された．このことは，D．D．筋障害過程にCOmplementinnecroticfibers．Ann．Neurol．，

おけるK／NK細胞の関与は，多発性筋炎における

12二289，1982．

抗原特異的T細胞のそれの様に活発なものでは

6）Mokri，B

ないことを思わせた．とはいえ，実験的には，NK
ー224−

＆

Engel，AG：Duchenne

dystrophy：Electron microscopic findingspointing to a basic or early abnormalityinmuscle cell necrosis unlessitis repaired．

plasma membrane of the muscle fiber・

Brain，102：147，1979．

Neuro1．，25：1111，1975．

8）Fidzianska，A．，Goebel，HHetal：

Killercellsin Duchenne disease：UltrastruCtural

7）Carpenter，S＆Karpati，G：Duchennemuscu−

Study，Neuro1．，34：295，1984．

lardystrophy．Plasmamembranelossinitiates

一225−28）−（1．）筋糖原病の病態分析−
糖原病ⅤⅠⅠ型における高尿酸血症の成因
垂

研究協力者

嶺
原

尾

郁

井

清一郎暮

夫♯

河 野 典 夫■ 清 水 孝 郎・尚 子■

山 田 祐 也＊ 高 橋 光、雄＊は じ め にに，ヘパリン加血梁をアンモニアの測定に供した．

糖原病Ⅵ1型（筋・赤血球ホスホフルクトキナー

乳酸とアンモニアは酵素法，イノシンとヒポキサ

ゼ欠損症）は，私共が最初の症例を記載して以

ンチンは高速液体クロマトグラフィー法によって求めた．

来1㌧ 現在まで18家系23症例が兄い出されている．
本症は，これまで，1）運動によって出現する筋症
状，2）軽度の溶血元進症状，を主徴とする代謝性

結

ミオパテーとして知られてきた2）・3）．ところが，最近本症に高率に痛風や高尿酸血症の合併すること

果

Ⅵ1型患者は，共に前腕運動試験において肘静脈
血中の乳酸の増加を認めなかった．これは，骨格が明らかにされ，Ⅵl型を特徴づける第3の臨床像

筋のホスホフルクトキナーゼ欠損に基づく解糖障
害を示す重要な所見である．

として注目されている4）・5）・6）．しかし，その成因については検索がなされていない．そこで，私共はⅥⅠ

乳酸反応が欠如したにもかかわらず，アンモニ型に合併する高尿酸血症の発現機作として，本症の主要な羅息月蔵器である骨格筋の病態代謝に注目

アは，健常者の5．6−7．9倍に及ぶ過大な増加反応を示した（図1）．

し，患者の運動筋におけるプリンヌクレオチドのさらに，アンモニアと同様に，イノンンやヒポ

異化について分析を試みた．

キサンチンも過大な増加反応を示した（図2，図
3）．

方

法

別々の家系に属するⅥ1型患者2名（症例1：44
歳男性1），症例2：20歳男性7りと健常者6名（19−38歳，男性5名，女性1名）を対象とした．Ⅵl型
患者は，共に高尿酸血症を有し（症例1：14．3
mg／dl，症例2：7．4mg／dl，正常値2．7−6．0），症
例1は尿中への尿酸排泄の冗進が確認されている．
既に報告した方法に従い8）・9），部分的阻血下前腕運動試験を行い，運動側の肘静脈より経時的に採血した．採血後，直ちに処理した6％過塩素酸抽
出液を，乳酸・イノシン・ヒポキサンチンの測定

考察

本研究では，阻血下前腕運動試験時の血中アン
モニアやイノシン，ヒポキサンチンの変動を分析した．これらのメタポライトは，骨格筋におけるプリンヌクレオチドの異化過程に由来するものである（図4）．まず，adenylatedeaminaseによって，AMPからIMP（inosine

5′一mOnOphos−

phate）とアンモニアが生ずる．アンモニアは容易に筋細胞膜を通過し静脈血中へ放出される．一方，
IMPは細胞内にとどまり，adenylsuccinateを経て再びAMPへ転換するか（プリンヌクレオチドサイクル），あるいはさらにイノシンやヒポキサン＊大阪大学医学部第二内科

チンへと代謝される．イノシンやヒポキサンチン
ー226−

▲

︵一︑一〇∈さの∪ⅥOU一POO一皿﹃︵一︑一〇∈ヱ巾で0∈∈＜巾ESの一d﹃

0

2

4

6

8

2

time（min）

4

6

8

time（min）
図2

図1 部分的阻血下前腕運動試験における糖原病Ⅵl型患者のアンモニア反応▲r−「▲：症例1，△・一一△：症例2
匹2】：健常者（平均±SE，n＝6）

部分的阻血下前腕運動試験における糖原病Ⅵl型患者のイノシン反応．

アンモニア同様に，静筋運動に伴う骨格筋のプリンヌクレオチドの異脈血中に現れてくる．なお，骨格筋ではXanthine

化過程の制御については，生理的にも不明な点が。Xidase活性が極めて弱いため，ヒポキサンチン

少なくない．本代謝過程を律速すると考えられても膜透過性に比較的優れいるadenylatedeaminaseは，アロステリック酵

がプリン体の終末代謝産物と考えられている．
ニア増加は乳酸増加と正相関（r＝0・91，p＜素として，わす めβではATPによって阻害を，ADPやAMPによって活性化を受ける10）．また，0．01）することを，私共は既に確認している．つまJ〃り，正常の運動筋では解糖代謝とプリンヌクレオ
チドの異化代謝とが，運動量に応じて促進される

ATPの低下とstoichiometricに変動することが，と考えられる．ところが，糖原病ⅥⅠ型患者では解ⅥⅠ型患者の運動筋では，ホスホフルクトキナーゼ

糖障害のために筋運動能が低下するにもかかわら欠損による解糖障害のために，ATP産生は低下

健常人においては，阻血下前腕運動時のアンモ〝わβにおいては，運動筋のIMPの増加は

最近，動物やヒトで明らかにされている11）．一方，ず，多量のアンモニアやイノンン，ヒポキサンチ

し逆にADPやAMPは増加すると推察される．

ンが運動筋から放出されることを，本研究で初め

そこで，基本的にはアデニンヌクレオチドのこれて明かにした（図1，2，3）．つまり，Ⅵt型の運らの変動が，Ⅵ1型患者の筋プリンヌクレオチドの動筋では，プリンヌクレオチドの異化が著しく冗異化を著しく冗進させると考えられるが，結論は進することを示している．

運動中の患者筋の分析によらねばならない．
一227−

0
5
0
4

︵一＼一〇∈さむ∪三雲巾×Odh POO一皿﹃

0

2

4

6

図4

8

骨格筋におけるプリンヌクレオチドの異化代謝と解糖代謝．

time（min）
図3 部分的阻血下前腕運動試験における糖原病Ⅵl型患者のヒポキサンチン反応．

様に説明し得る．即ち，ⅥⅠ型患者は筋症状の経験

さて，非常に激しい筋運動によって血中尿酸値

かし，男性の場合，社会生活上，女性に比べて強から，自らに適した運動量（運動強度）を体得していて，その範囲内で㌧行動するのが通常である．しが生理的に上昇することが古くから知られているい身体活動を強いられる機会が多い．したがって，が，そのメカニズムとして，Suttonらは筋のプリ筋におけるプリンヌクレオチドの異化もさらに増ン体の異化促進を示唆している12）．私共は糖度病

強され，高尿酸血症を示すに至ると考えられる．

VH型における高尿酸血症の成因についても，この高尿酸血症を呈する先天性酵素欠損症として，筋原性のメカニズムを想定した．即ち，ⅥⅠ型運動筋から過剰に放出されるイノシンやヒポキサンチ

Lesh−Nyhan症候群（HGPRT欠損症）と糖原病
Ⅰ型（グルコースー6−ホスファターゼ・システム

ンは，主として肝で，尿酸合成を促し，これがⅥⅠ

欠壬員症）が，よく知られている．これらの疾患で型に高尿酸血症をもたらすという機構である．既は，肝におけるプリン体のde novo合成の冗進に，Agamanolisの症例4）や本症例（症例1）において，尿中への尿酸排泄の冗進が確認されており，（hepatic factor）や，腎における尿酸排泄の低下

高尿酸血症は尿酸合成の過剰に基づくことが示さ

糖原病ⅥⅠ型における高尿酸血症の成因として，私れるとともに，私共の仮説とも矛盾しないと思わ共の提示する筋プリンヌクレオチドの異化冗進（renal factor）が，発現機作と見なされている．

れる．また，本症の高尿酸血症の合併は必ずしも（muscular factor）は，高尿酸血症の全く新たな全例に認められるわけでなく，現在男性例に限ら成立機構と考えられる．今後，本症に合併する溶

れている4）・5）・6）．この点も私共の仮説にそえば，次の血冗進がどの程度高尿酸血症の成立に関与してい−228−

るかといった問題も含め，さらに詳細な検討が必

5）Vora，S．，M．Davidson，C．Seaman，A．F．

要と思われる．

Miranda，N．A．Noble，K．R．Tanaka，E．P．
Frenkel，andS．DiMauro．Heterogeneityofthe結語

molecularlesionsininheritedphosphofructo−

別々の家系に属する糖J京病Ⅵ1型患者2例を対象

kinase deficiency．J．Clin．Invest．72：1995−に，部分的阻血下前腕運動試験を行い，肘静脈血中の運動筋に由来するメタポライトの変動を分析

2006（1983）．

6）嶺尾郁夫，河野典夫，j背水孝郎，鷲見誠一，松した．その結果，乳酸は増加しなかったが，アン沢佑治，野中共平，垂井清一郎：糖原病Ⅵ1型にモニアやイノンン，ヒポキサンチンは著しく増加

合併する高尿酸血症の成因一運動筋におけるプ

した．以上の成績から，ⅥⅠ型患者の運動筋では，リンヌクレオチドの分解冗進の関与について．

プリンヌクレオチドの異化が著しく冗進している

尿酸8：32−37（1984）．

ことが示された．したがって，糖原病ⅥⅠ型に合併

7）KoyamaW．KanayamaM．etal．（inprepara−

する高尿酸血症の主因は，尿酸合成の前駆物質でtion）あるイノンンやヒポキサンチンが運動筋から多量

8）Kono，N．，I．Mineo，T．Shimizu，S．Sumi，J．

放出されることにあると考えられ，筋原性高尿酸

Kang，K．Nonaka，and S．Tarui．Metabolic血症という新しい病態の存在が示唆された．

basisofimprovedexercisetolerance：Muscle
phosphorylase deficiency after glucagon

文献administration．Neurology

1）Tarui，S．，G．Okuno，Y．Ikura，T．Tanaka，M．

34：1471−1476（1984）．

Suda，and M．Nishikawa．Phosphofructo・9）Mineo，Ⅰ．，N．Kono，T．Shimizu，S．Sumi，K・kinase deficiencyin skeletal muscle．A new

Nonaka，andS．Tarui．Acomparativestudy

typeofglycogenosis．Biochem．Biophys．Res．

onglucagoneffectbetweenMcArdledisease

Commun．19：517−523（1965）．

and Tarui disease．Muscle＆Nerve．7：552−559（1984）．

2）Tarui，S．，Ⅰ．Mineo，T．Shimizu，andN．Kono．

PhosphofruCtOkinase deficiency and related10）Wheeler，T．J．andJ．M．Lowenstein．Adenylate

disorders．ln Neuromuscular Disease．G．

deaminase from rat muscle：regulation by

Serratrice，editor．Raven Press，New York．

purinenucleotidesandorthophosphateinthe

7ト77（1984）．

presenceof150mMKCl．J・Biol・Chem・254：

3）Shimizu，T．，N．Kono，I．Mineo，S．Sumi，K．

8994−8999（1979）．

Nonaka，and S．Tarui．Kinetic properties of11）Sabina，R．L．，J．L．Swain，C．W．01anow，W．G・

erythrocyte phosphofructokinasein patients

Bradley，W．N．Fishbein，S．DiMauro，andE・W・
Holmes．Myoadenylate deaminase

WithtypeⅥIglycogenosisfromtwo families．
Close similaritytolivertype phosphofructo−

deficiency：functionalandmetabolic

abnor一kinase．J．Inher．Metab．Dis．7：107−111

malities associated with disruption of the（1984）．

purinenucleotide cycle．J．Clin・Invest・73：
720−730（1984）．

4）Agamanolis，D．，A．D．Askari，S．DiMauro，A．
Hays，K．Kumar，M．Lipton，andA．Raynor．

12）Sutton，J．R．，C．J．Toews，G．R．Ward，andI・

MusclePhosphofructokinasedeficiency：two

H．Fox．Purinemetabolismduringstrenuous

CaSeSwithunusualpolysaccharideaccumula−

muscular exercisein man．Metabolism．29：

tion andimmunologically active enzyme

254−260（1980）．

protein．Muscle＆Nerve．3：456−467（1980）．
ー229−28）−（2）Kearns−Sayre症候群におけるcoenzyme QlO
代謝とcoenzyme QlO療法の検討
垂

研究協力者

小笠原

三

井

清一郎＊

郎■

西 川 嘉 郎＊ 依 藤 史 郎＊

曽 我 文 久＊河 野 典 夫■ 高 橋 光 雄＊

例2で著明な小脳失調を，症例1で軽度の知能低は じ め にKearnS−Sayre症候群は進行性外眼筋麻痺，網下を認めた．全例で運動負荷により血清Lac＋膜変性症，心伝導障害を三主徴とする代表的な

Pyr，Lac／Pyr比の異常上昇を認めた．髄液蛋白は

mitochondrialencephalomyopathyである．本症

4例で上昇，血清葉酸，髄液中葉酸の低下をそれ候群ではしばしば高乳酸血症，血中乳酸（Lac）／

ぞれ2例と4例で認めた．

ビルビン酸（Pyr）比の上昇が見られ，電子伝達系

Mt内膜電子伝達系活性およびCoQ含量は，昨の異常が想定されていながら原因不明で，治療法

年度報告の方法で判定した1）．培養皮膚線維芽細も確立されていない．又，COenZyme Ql。（CoQ）

胞におけるCoQ合成活性はFaustの方法4）に準はミトコンドリア（Mt）内膜電子伝達系の重要なじて以下のように測定した．5〜7代継代した細構成成分であるが，mitochondrial ence−

胞をトリプシン，EDTA処理により浮遊させ，

phalomyopathyにおけるCoQ代謝の検討は見ら60×50mmのdishに細胞数8×104個加え，10％

れない．私どもはKearns−Sayre症候群（KSS）の一例で血清およびMt分画中CoQが低下してウシ胎児血清を含むEagle

いることを報告した1）．又，松原ら2）Morgan−

ヒト血清含有）に3．3JLML（methy13−H）meth−Hughら3）はmitochondrialencephalomyopathy

ionine（3mci／JLmOle）を加え，37℃で4時間反応後，反応液を除却し，生理食塩水で洗浄し，そのにCoQ投与を試み，乳酸代謝が改善されることを報告している．
今回，私どもはKSSの5例につき，CoQ代謝およびCoQ投与の効果を検討したので報告する．

s MEM中で培養し，5日目にmethioninefreeのEagle′sMEM（10％後0．1NNaOHで細胞をi容解させ，CoQをクロロ
ホルム／メタノール（1：2，Ⅴ／V）で抽出し，窒素ガス中で乾固し，シリカケリレ蒋屑クロマトグラ
フィーで展開し，ヨウ素でCoQ分画を染め出して対象および方法

かき取り，液体シンチレーションカウンターで測対象としたKSS5例（男4例，女1例）の臨床定した．CoQ分画への3Hの取り込みからCoQ合像を表1に示した．三主徴を伴う完全型3例，心成活性を算出した．

伝導障害を欠く不全型2例（1例は心房性期外収筋組織中の過酸化月旨質はTBA法で測定した5）．

縮を合併）よりなり，年齢は19歳から40歳で，躍病

CoQ療法は1日120−150mgのCoQを経口投期間は5年から25年である．仝例にGomori tri−

与することにより行い，臨床症状，運動負荷時のChrome染色でragged red fiberを認めた．神経血中Lac＋Pyr濃度，Lac／Pyr比の測定，髄液所症状としては全例で感音性難聴が見られた他，症見，心電図などにより治療効果を評価した．

＊大阪大学医学部第二内科

−230−

表1
Patient

Clinicaldata on patients with KearnS・Sayre syndrome

Ⅳ0．

Age（years）
Sex

1

2

3

4

5

19

23

28

40

40

M

F

M

Id

M

Duratlon of
diBeaSelyears）
Ophthalmoplegla

5

13

14

16

25

十十

十◆

◆＋

＋

十十

十

十

十

＋

十

Retlnal Degeneration
Llmb muBele Weakness
ECG

at

reBt

af■ter十十

flrSt degr・ee VPV−Syndrome，AV−bloek，CRBBB CRBBB
ST−depression＊

exerCIse十APB

ST−depresSion

no

CRBBB

changenonormalchangeST−depression

VP8

Ragged red fiber・S
Electromyogram

十

myogenlc myogenlc and myogenle

myogenle myogenlCehange change
dernentla cerebeller・
ataxla

CNS8ymptOm8
CSF total protein（mg／dl．normalく40）

85

Eleetroencephalogramehange neurogenie ehange ehange

253

abnomal34

130

abnomalabnormalnomal

44
abnorma1a）

Folic acld levels（ng／ml）

十Serum l．8
CSF l．7

2．1
4．2

3．2
1．3

CSF／Serum ratl0

0．94

3．7
14．2

2．0

0．41

2．9
3．3

3．84

1．14

（a）nomal range f■or Serum rOlle acid．2．6−7．0mg／ml；CSF／Ser・u汀日ratlo or f011e aeld，3．0−5．0）

表2

Activitiesofmitochondrialelectrontransportsystemand
CoQ metabolismin KeamS−Sayre syndrome

pat．ient No．

1

NADH−Cyt C reducta8e

2．38

2
1．12

3
0．84

4
0．95

0．56

5

Patlents Contr01（n11nber）
1．17◆0．70

1．94＋0．91（12）

三享子二幸 ㍉昌；㍉∴寺∴幸三（mg／g Yet Velght）

SemmCoQ（〃g／ml）

0・30

0・65

0・50

0・85

0・40

0・54◆0・21

1・07◆0・17（12）漂鳥V漂霊ム 3：㌫ 1吉：写91；：…91≡：；1喜：≡81；：；ぷ：；；・・…ヲi…諾需…；
rib当主；完g笠tel。， N．。．。。 58▲ 68 N．。． 5。．。三18．。n・8・。8．9．28．2（7）ribroマ三霊1≡；ヲ迂完票…ein）N．。．。．52 。．51。．48 N．。．。．5。．。．。2n・8・。．47．。．1日7）（a）●r mOle8Sub8trate OXldlzed orreduced／雨n／g vet velght ofmSele；一，0・05くP＜0・10；一一，P＜0・01）

結湿重量あたりのCoQ含量はむしろ低下傾向にあ果1）KSS5例の骨格筋Mt内膜電子伝達系活性，
CoQ含量，線維芽細胞のCoQ合成活性を表2に示した．Mt分画の蛋白量は5例中4例で増加していたが，筋湿重量あたりの電子伝達系活性は，
NADH−CytochromeCreductaseが正常の29％，
Cytochrome oxidase活性が11％に低下していた
症例5（羅病期間25年）を除き，ほぼ正常範囲であった．又，Mt分画の増加にもかかわらず，骨格筋り（0．05＜P＜0．10），Mt蛋白量あたりのCoQ含量は5例の平均で正常の約1／3に低下していたが，症例4ではCoQの低下は見られなかった．線維芽細胞を用いたCoQ合成活性の測定結果では検討した3例全例で正常域であった．
2）生検筋中の過酸化脂質量はmalon dialde−hyde（MDA）量として82±21nnY）les／gwet

wtight（mean±S．D．）で正常対照（120±55n

ー231−Exercise
15watt10987Lactate6＋Pyruvate5
（mM）

4
3
2

1

0

0

10

20

0

30

10

20

（min）

Lactate300＋Pyruvate（mMX。i。）200

Before After
CoQtherapy CoQtherapy

図1CoQ療法前後における運動負荷時の乳酸，ピルビン酸代謝．A，Bは5例の平均値±S．E．を示す．C，Dは各症例の運動負荷時の乳酸＋ビルビン酸×分，乳酸／ピルビン酸×分の面積を示す．C，DのOpenCircleの横の番号は症例番
号を示す．

一232−

A
Before CoQ therapy
二二二÷宣avR

二iこノや宕V

I

l

■

⊥＿＿＿！

t

！

−aVR

、、一・＼㌧「＼

，

人」

．

Vl．

﹁十﹂

■

上れ

▲
l

J小心｛

一

∵」

1
・
1
■

1

−
1
■

−−−1一

一

▲

・一
■

㌦＿V3

「●へレへ
￣￣

図2A

l

￣−￣

￣し【−

症例1における心電図変化．CoQ療法前には明らかなCRBBBと第一度AV blockが見られたが約1年のCoQ
療法後CRBBBはほぼ消失している．

−233−

V5

J
−▼

B

Before CoQ therapy

at rest Omin．

2min．

5min．

10min．

15min．

20min．

（time after exercise）

After CoQ therapy（3months）
丁V2←一十血−H

￣▼￣￣▼

l

ト一一一一

■

■】￣菩￣￣▼▼￣￣・一一一里岬一二

at rest Omin．
図2B

2min．

5min．

10min．

15min．

20min．

症例2における運動負荷後のST低下に対するCoQ療法の効果．CoQ療法によりST低下はほぼ消失した．

moles／g wet weight）との問に差がなかった．

secと第1度AVブロックを呈し，又完全右脚ブ3）運動負荷時の血清Lac＋Pyr濃度，Lac／Pyr比の上昇に対するCoQ療法の効果を図1に示し化を示したものである．図に示していないがCoQ

た．運動負荷時の血清Lac＋Pyr濃度，Lac／Pyr

投与後3か月でPQintervalは正常化（0．16sec）

ロック（CRBBB）の見られた症例1の心電図変比の上昇はCoQ投与後徐々に改善し，投与開始数

し，その後再びPQ

か月で症例1，2は正常化，他の3例も改善を示

complexは次第に正常化し，1年の投与でintervalは延長したがQRSした．Lac／Pyr比の改善はより著明であった．

CRBBBはほぼ消失した．図2BはCoQ投与前

4）CoQ投与の髄液異常に対する効果は総蛋白

WPW症候群とCRBBBを呈し，運動負荷により量，Lac＋Pyr濃度，Lac／Pyr比で検討した．髄著明なST低下を見た症例2の負荷心電図所見で液蛋白量はCoQ投与前112±86mg／dl（mean±

ある．CoQ投与3か月で運動負荷後のST低下はSD，n＝5，正常＜40mg／dl）がCoQ投与3〜7消失している．本例では冠不全を除外するため，か月で50±42mg／dlと有意な低下（P＜0．05）を

心筋シンチグラフィ一，冠動脈造影，心筋生検を示した．Lac＋Pyr濃度は投与前2．27±0・57mM（mean±S．D．正常＜1．9mM）が投与後2．33±

施行したが冠動脈に狭窄や攣縞は見られず，心筋0．42mMと変化が見られなかった．Lac／Pyr比加が見られ，運動負荷時のST低下がMt機能異は15．6±3．5から12．3±1．8と軽度ながら有意な低常によることが示唆されたが，3か月間のCoQ投下が認められた（P＜0．05）．

与により運動負荷時のST低下は消失した．

5）心電図異常に対するCoQ療法の効果を図26）図3に著明な小脳失調の見られた症例2の書に示した．図2AはCoQ投与前PQintorvalO．28

字の改善を示す．本例は数年前より徐々に小脳失生検標本の電顕で形態的に正常なMtの著明な増−234−

Effects of CoQ therapy on ataxia
Before CoQ therapy④㊧⑳㊦㊨◎＠
AfterCoQ therapy（7months）⑥⑤⑳㊥㊨⑥⑥
図3

症例2における書字の改善，7か月のCoQ療法で書字に改善が見られる．

調が出現，歩行障害，構音障害，四肢運動障害をえられている8）が，Mtの増加に見合うだけの呈した症例である．CoQ投与前本症例は書字に際CoQ合成の増加がないことは明らかである．

し右手に左手をそえる必要があり，書字も拙劣でSchneiderらは9）submitochondrial particle

あったが7か月のCoQ投与で右手のみで書字可能となり，書字にも改善が見られる．本例では経（SMP）を用いた実験でCoQを含まないphos−
pholipidのliposomeをSMPと融合させると電時的に体性感覚誘発電位を記録しているが正中神子伝達系の活性は低下するが，CoQを大量に含む

経刺激時のN56の潜時が75msecから66msecとliposomeをSMPと融合させると電子伝達系の短縮し，髄液蛋白も253mg／dlから125mg／dlと減少が見られた．

他の電子伝達系構成成分の量が変化しなくとも，活性が上昇することを報告している．このことは
CoQ濃度が膜内で上昇すると電子伝達系活性が考察増加することを示すものである．Nakamuraら10）

CoQはMt内膜電子伝達系の重要な構成成分

はCoQを経口投与するとMt内膜に移行するこであるがMt異常症におけるCoQ代謝の研究はとを報告している．KSSの骨格筋において湿重量

少い．本研究で私どもはKSSの骨格筋ではMt分
画の著明な増加にもかかわらず，CoQ含量はむしあたりの電子伝達系活性が正常域にある症例が多いにもかかわらず，運動負荷により血清Lac＋

ろ低下傾向にあり，MtあたりのCoQ含量は著明

Pyr，Lac／Pyr比が異常高値を示すことは■inに減少していることを見出した．CoQはメバロ

Vivoの状態でPyr代謝異常，NADH酸化障害がン酸から合成される側鎖と，チロジンから水酸化，

存在することを示すものであり11），電子伝達系を

methyl化をへて合成されたキノン核よりなるが6）さらに賦活することの有効性を裏付けるものであmethyl donerとして3H−methionineを用いた実る．私どもの検討した症例は5例と少数であるが験ではCoQ合成活性は正常で，CoQ合成異常がCoQの大量投与によりPyr代謝および組織中のKSSの原因である可能性は否定的であった．KSS

NADH／NAD比の改善が見られることが明ら

で葉酸代謝異常があることはAllenら7）により報かとなった．又臨床的にも髄液蛋白の減少，心電告されているが，私どもの例で5例中4例に異常

図異常の改善を見，一例ではあるが小脳症状の改が見られた．methionine合成に葉酸が必要である

善が見られた．CoQ療法の有効性を確実に評価す

ことを考えあわせると，葉酸代謝異常によりCoQ合成が低下している可能性がある．

るにはさらに長期にわたり，より多数の症例でのKSSでは何らかの原因によりMt機能が低下

検討が必要であるが，現時点で最も有効な治療法と考えられる．

し，それを代償するためMtが増加していると考
−235−

文

献

Biochemical

1）垂井清一郎，ほか：KeamS−Sayre症候群の骨格筋ミトコンドリア電子伝達系の解析．厚生省

zymeQ

and

Clinical

Aspectsof

Coen−（FolkersK，YamamuraY，eds）Vol．

1，EIsevier，Amsterdam，1980，p．189・「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床7）AllenR，etal．：Kearns−Sayresyndromewith

的研究」第二班，昭和58年度報告書，1984，p．210．

reducedplasmaandcerebrospinalfluidfolate．

2）Matsubara S，et al．：A case of oculo−
craniosomatic neuromuscular disease withra草ged−redfibers・Clin Neurol（Tokyo）

3）Morgan−HughesJA，et al．：Mitochondrial
myopathies；results of exploratory ther・
trials．

Aspectsofexternalophthalmoplegia（CPEO）：Clinical，morphological and biochemical studies．

24：221−229，1984．

apeutic

Ann Neurol13：679，1983．
8）Mitsumoto H，et al．：Chronic progressive

Biochemical

Coenzyme

Q

andClinical（Folkers

K，Neurology（Cleveland）33：452，1983．
9）Schneider H，etal．：Lateral diffusion ofubiquinoneduringelectrontransferinphos−
pholipid−and ubiquinoneLenrichedmitochon−

Yamamura Y，eds）Vo14，EIsevier，Amster−

drial membranes．J BioI Chem

dam，1984，p．417．

1982．

257：10789，

4）FaustJR，etal．：Synthesisofubiquinoneand10）NakamuraT，et al．：Transferofexogenous

cholesterolinhuman fibroblasts：regulation

coenzymeQl。tOtheinnermembraneofheart

ofabranchedpathway．A．B．B．192：86，1979・

mitochondriain rats．in

Biochemical and5）MasugiF，et al．：Measurement of thiobar−

ClinicalAspectsofCoenzymeQ（Yamamura

bituriC acid valueinliver homogenate

Y，Folkers K，Ito Y，eds）Vo12，EIsevier，solubilized with sodium dodecylsulfate andAmsterdam，1980，p．3．

variation of the values affected byvitamin

11）Kreisberg RA．：Lactate homeostasis and

E anddrugS．VitaminS（Japan）51：21，1977．

lacticacidemia．AnnInternMed92：227，1980．

6）RudneyH：ThebiosynthesisofCoenzymeQ．

−236−29）核内non−histone蛋白の局在と染色体との関連
萬
研究協力者

清

水

輝

年

夫★

徹＊
中

瀬

浩

史＊

黒

田

正

明＊

筋ジストロフイ症の発症機序は未だ解明されてンに対するMcAbをもちいて，静止核内のアクいないが，1）疾患の原因がⅩ染色体上に存在す

チン（様）蛋白の存在について検討した．静止核におけるアクチン様蛋白の存在は電顕上7〜8Åのること，2）主として骨格筋に病変があることか
ら，骨格筋に特徴的な過程の障害が疑われ，解糖フィラメントからなる梓状体としてラットの的牛系代謝経路や筋収縮蛋白が検討されてきた．現在

核やニワトリの交感神経節の神経細胞核で記載さまでのところ，これらに原義的な異常を見出しえれてきた（Feldman and Peters，1972）．しかし，ず，膜とくに形質膜の異常が示唆され研究がなさ

この繊維がアクチンであるとの確証は未だ示されれつつある．しかしながら，膜説を確実に支持すておらず，又，フィラメント形成しないアクチンる所見は未だなく，別の立場から骨格筋の特徴をが存在するかどう■かについては仕事がない．

追求する必要もあると考える．
私共は，最も研究の遅れている核蛋白質（とく

アクチンに対するモノクロナール抗体の作成に非ヒストン蛋白質）のうち骨格筋に特徴的な成アクチンは臓器特異性があるが，種特異性に乏分を明らかにすることを目的にしている．核非ヒ

しいことから，トリ砂嚢よりアクチン（β，γ型）

ストン蛋白は量的に限られているため，少量でもを抽出精製し，Balb／Cマウスに免疫，通常の方可能なモノクロナール抗体法を利用し法によりモノクロナール抗体を調製した（mono−1） ヒト培養白血球，ヒト骨格筋より核を採取

clonal antibody，McAb）．

し非ヒストン蛋白質を分艶精製する．
2）

抗体の性質

2つの核からの非ヒストン蛋白質を電気泳動法により分析する．

3）

今回の実験には，2種の抗体（McAb5とMc

同時にモノクロナール抗体monoclonal

Ab6）を使用し，その反応性をImmunobloting法

Antibody，McAbを作成し，抗原決定を行とELISAで検討した．McAb5はトリ砂嚢のアう．

クチン以外に骨格筋（胸筋）・心筋・大脳のアクチ

4）螢光抗体法により，筋細胞核を特異的に認ンを認識し，McAb6はトリ砂嚢・骨格筋（大胸識する抗体をさがし，その抗原である成分

筋）・心筋のアクチンを認識するが，大脳のアクチを同定する．

ンは認識しなかった（図1）．

5）筋細胞核に特徴的な成分の免疫化学的検討を行う．

螢光抗体法による染色性の検討

現在以上の目的に沿って非ヒストン蛋白の分馳

トリの砂嚢・心筋・大胸筋・前広背筋・大脳・精製を開始した段階である．初年度は非ヒストン

頸髄・交感神経節より凍結切片を作成し4％ホル

蛋白分画に含まれていると考えられる収縮蛋白，

マリンで4分間固定後，McAb次いでFITC−ヤ

とくにアクチンについて，現在利用可能なアクチギ抗マウスIgG抗体を反応させ，螢光昆頁微鏡観察した．

McAb5は砂嚢・心室・大胸筋・前広背筋の細＊東京大学医学部脳研神経内科

ー237−

CHARACTEFIIZATl0N OF ACTIN−NONOCLONAL ANTIBODIES

Mか†＜

図1

ELISAによる抗アクチン抗体（McAb5，McAb6）の反応性．
SK．actin 大胸筋アクチン，giZ．actin 砂嚢アクチン，brain actin 大脳アクチン．

胞質を染め，大脳・脊髄の灰白質や大脳神経細胞と脊髄前角細胞の細胞質を染めた．肝細胞の染色性は軽度であった．これらの組織の細胞核の染色性を検討した所，交感神経節においてのみ少数例
で細胞核が明瞭に染められた（図2）．その染色パ
ターンは濃淡はあるが，ほぼ核全体が染まっていた．

McAb6は，砂嚢・心室・大胸筋・前広背筋の細胞質を染めたが，肝細胞質は淡く大脳・脊髄は染めなかった．交感神経節細胞も殆んど染めない．
これらの細胞核の染色性をみた所，少数の交感神経節細胞に明瞭に染まる核のあることがわかった．
その染色性はMcAb5と同様であった．
図2

交感神経節神経細胞のMcAb5（上）McAb6（下）の染色性を示す．×250

過去核内アクチン様蛋白は細胞分裂期の紡錘糸に存在すること，4滴牛核や交感神経節の神経細胞
一238−

核内に梓状構造体として記載されてきたが，今回以上の結果から，アクチン様蛋白がmonomer

我々の実験結果は交感神経細胞核で，フィラメン

あるいは01igomerの状態で静止核に存在するこト形成をしないで，mOnOmerあるいは01igomerのアクチンが静止核に存在することを示唆していとがあるが，形態的に染色体構成蛋白ではない．
このアクチン様蛋白の機能は未だ不明であるが今る．

後さらに病的材料を使って核内アクチン様蛋白の

このアクチン様蛋白の染色体との関係を調べる

分布を追求したい．

為，自然乾燥法で作成したヒト中期染色体標本上で螢光抗体法を施行した所，染色体そのものを染めてはいなかった．
従ってアクチンが，染色糸や染色体を構成する蛋白ではないと考えられる．

文献1）Feldoman，M．L．，andPeters，A．1972．Intranu−
dearrodsandsheetsinratcochlearnucleus．
J．Neurocyto1．，1：109−127

−239−

りII．

Ⅴ．迫

伝

子

30）筋ジストロフィー症遺伝子の単雛の試み
鈴 木 紘 一＊
研究協力者

大

野

今

城

茂

男＊

榎

森

康

文＊

忍＊ 川 崎 博 史＊

は じ め tニ

DNAをEcoRIで切断したものをプローブにしDNAのある部位に変異が生じると，DNAを切てプラークハイブリタふイゼーションを行った．プ

断する制限酵素の認識部位の新生や消失がおこり，ローブと強くハイプリグイズするものは反復配列

DNAを制限酵素で切断したときに生じる断片のを含むものとして除外し，ハイプリタイズしない

中に従来と異なる長さの断片ができる．このようファージクローンを選択する操作をくり返し，単なDNA断片の多型性（RFLP，RestrictionFrag−

一配列のDNAを含むと思われるクローンをえた．

ment Length Polymorphism）の遺伝と遺伝性疾患の遺伝との関係から，遺伝性疾患と関連する

実際には，図1に示すように黒く染まるタワーン

RFLPの単敵や遺伝子そのものの単雛が試みらたもの）を単離した．さらに，ベクターである1

れている1）・2）．Huntington病と強く関連する

ファージのEcoRI消化物とハイプリグイズしな

RFLPの単艶はこのよい例である3）．

いDNAを含むクローンを約60個ほどとり出し，筋ジストロフィー症（DMD）に関しては，英国のWilliamsonらのグループがこの手法を用いて以下の実験に用いた．

を除外し，黒く染まらないクローン（○印をつけ

DMDに関連する2種類のRFLPを単離している．しかしその連鎖や出現頻度はまだ満足のいくものではない4）・5）
我々は，DMDと相関性の高いRFLPをとり，さらにこれからDMD遺伝子そのものを単離することを最終の目標として研究をはじめた．
方法および結果
1．X染色体のDNAバンク
Ⅹテトラソミー患者（48ⅩⅩⅩⅩ）のリンパ球の中期の染色体をセルソーターで分画し，Ⅹ染色体区分をえる．この画分からDNAを抽出し，これを1gtWESに組込んだⅩ染色体のDNAバンクを
佐賀医大渡辺武教授，九州大学医学部榊佳之助教
授の御厚意によりいただいた6）．

図1

2．Single Copy DNA Fragmentの単離
DNAバンクを増殖させ，ヒトのtotalgenomic＊東京都臨床医学総合研究所遺伝情報研究部−243−

単一配列を含むDNA断片の単艶Ⅹ
染色体DNAのEcoRI断片を組込んだ1gtWESファージのプラークを，ヒトのtotal DNAのEcoRI断片をプローブとしてハイプリグイズさせたもの．
0印を付したプラークを選択した．

3．Southern BJotによる多型性の検討上で選択した約60個のクローンからDNAを単TaqI，MspIを中心にEcoRI，BglIIなどを用いて検討した．

赦し，これをニッタトランスレーションによっ

図2上段はこれらの制限酵素で切断した正常ヒて32Pでラベルした．一方，正常ヒトリンパ球からトDNAをⅩ染色体ライブラリーから単離した抽出したDNAを種々の制限酵素で切断し，これをアガ1コースゲル電気泳動で分放した．分離したDNA断片S25−1とS31で染めたものである．

DNAをSouthernプロット法でニトロセルロー

S25をプローブとした場合，すべて単一のバンドが検出されたので，S25が単一な配列を含むこと

ス膜に写した後，32PラベルのDNA断片をプロは明らかであるが，調べた3種の制限酵素では多ーブとして染色した．このうちいくつかの例を図

型性は見られなかった．S25についてはさらに多2，図3に示す．
DNAの塩基配列の中でCpGのCはメチル化

くのヒトDNAを検事するか，制限酵素を変えて検討すれば多型性が検出されるはずである．

を受けやすく，このためC→Tの変化が起こりやS31をプローブにすると（図2下段）smear状

すい．従って，CpGまたはTpGを認識する酵素をのパターンが見られた．この中に多塑性を示すも用いると多型性が生じる確率が高くなる．そこで，の（左から6番目，矢印の位置）も見出されたが，

図2

図3

Ⅹ染色体のDNAライブラリーから単離したDNA断片の多型性の検討（1）．
左端の横棒はサイズマーカー，上より順に23．1，9．4，6．55，4．37，2．32，
2．0，0．56kb．右側の矢印は多型性が見られる所を示す．
−244−

Ⅹ染色体のDNAライブラリーから単離したDNA断片の多型性の検討（2）．

用いたプローブの中に単一な配列の他に反復配列の部位が簡単に同定できるようなものが見出されも含まれているものと判断し，以後の分析から除れば，DMDの遺伝子の同定に極めて有利になる．

外した．

我々はRFLPを使う方法以外にも2，3の方法

図3上段は4種の正常ヒトDNAをBglIIで切断し，S115とハイプリタイズさせたものであを検討中で，これらの方法を合わせてDMD遺伝子の探索を行いたいと考えている．

る．左から2番目と4番目のDNAに多型性が見文

られ，その出現頻度も高そうである．S35−1をプ献ローブにした図3下段では，2−3本のバンドが1）Botstein，D．，White，R．L．，Skolnick，M．，＆

検出されたが，このうち右端のBglIIで切断した

Davis，R．W．：Construction of a geneticmap

ものに多型性が見られる．

using restriction fragmentlength polymor−

現在このようにしてⅩ染色体のDNAライブ

phism．Am．J．Human Genet．，32：314−331，

ラリーから単一配列を持つDNA断片で，多型を1980．

示す断片を集め，多型の出現頻度を検討している．

2）Aldridge，J．，Kunkel，L．，Bruns，G．，Tantrava−

今後は，多型を示す断片のⅩ染色体上での位置を

hi，U．，Lalands，M．，Brewster，T．，Moreau，E．，

調べ，Ⅹp21に近い断片を選択し，これをプローブとしてDMD患者で家系調査を行う．

Wilson，M．，Bhomley，W．，Roderick，T．，＆
Latt，S．A．：Astrategytorevealhighfrequen−
cyRFLPsamongthelmmanXchromosome・考

Am．J．Human．Genet．，36：546−564，1984．

察

DMD遺伝子の探索法としていくつかの手段が3）Gusella，J．F．，Tanzi，R．E．，Anderson，M．A．，

考えられるが，このうちRFLPを用いる方法は最Hobbs，W．，Gibbons，K．，Raschtchian，R．，

も確実な方法である．Huntington病の場合のよGillian，T．C．，Wallace，M．R．，Wexler，N．S．，＆

うにわずか12個のRFLPを調べただけでCarrier

Conneally，P．M．：DNAmarkersfornervous

detectionに使えるRFLPを単離した極めて幸運

system diseases．Science，225：1320−1326，

な例もあるが，一般にはDMDのCarrierの検索

1984．

に使えるようなよいRFLPがどの程度の時間と4）Murray，J．M．，Davies，K．E．，Harper，P・Sリ

労力を費やしたら単維できるかを予測することはMeredith，L．，Mueller，C．R．，＆Williamson，

非常に難しい．しかし，RFLP法では時間と労力

R．：Linkage relationship of a cloned DNA

をかければ確実に目的に近づいて行けることも事

sequence on the short arm of the X

実である．

chromosome to Duchenne muscular dystro−

今まで既知のマーカーでDMDと相関するもの

phy．Nature，300：69，71，1982・は知られていなかったが，最近オルニナントラン

5）Davies，K．E．，Pearson，P．L．，Harper，P．S．，

スカルパミラーゼがXp21．1に位置することが報

Murray，J．M．，0′Brien，T．，Sarfarazi，M・，＆

告された7）．従って，この遺伝子を出発点として遺Williamson，R．：Linkage analysis of cloned

伝子を探すことも可能になった．また，トランス

DNA sequence flanking the Duchenne

ロケーションによってリポソームRNAの遺伝子

muscular dystrophylocus on the short arm

部位にⅩ染色体の一部が移ったためにDMDがofthehumanXchromosome．Nucl．AcidRes．，

発症したと考えられる症例が報告されている8）．

11：2303−2312，1983．

リポソーム遺伝子は数百個の重複した配列からで

6）渡辺

武：医学のあゆみ，128：Flow

きているので，他の場合に比べ，トランスロケー
ションの部位の同定が簡単である．我国でも，ト

cytometry法による染色体分散．Tr64−T−71，

ランスロケーションによって発症した症例で転座

7）Lindgren，Ⅴ．，Martinville，B．，Horwich，A・L・，

−245−

1984．

Rosenberg，LE．，＆

Francke，U．：Human

Schmickel，R．D．＆Willard，H．F．：Duchenne

Ornithine transcarbamylaselocusmappedto

musculardystrophyinvoIvingtranslocationof

band Xp21．1near the Duchenne muscular

theDMDgenenexttoribosomalRNAgenes．

dystrophylocus．Science，226：698−700，1984．

Science，224：1447−1449，1984．

8）Worton，R，G．，Duff，C．，Sylvester，J．Eり

−246−

ⅤⅠ．筋

再

生

31）ジストロフィーハムスターと正常ハムスター問の筋の交換移植についての研究（第3報）およびmdxマウスの骨格筋のヌードマウスへの移植についての研究
寺 尾 寿 夫＊
研究協力者

は

じ

め

高

津

成

美＊

平

口

峰

子＊

EDL，コントロールとしてC57BL／6JのEDLに筋肉の再生がsatellitecellの活性化により起こを，1匹のヌードマウスの左右の下肢に移植した

ることは良く知られているが，ジストロフィー筋（図1）．この場合，EDLの上端（proximal側）はの再生に関しては多くの研究1）〜5）にも拘わらず，

hostであるでヌードマウスのEDL摘除後の空間

必ずしも明らかになっていない．我々は筋の移植に固定したが，下端（distal側）の腱となっているによる再生現象を研究しているが，これによる研究にはいくつかの利点がある．たとえばジストロ
フィー筋が正常動物内で如何に再生するかだけでなく，逆に正常筋の再生がジストロフィー動物内で受ける影響を知ることが出来る．また長期間の観察も可能である．
近年ヒトでも中筋の移植が行われているが，これらの骨格筋の移オ直に関しては明らかにすべき点が少なくない．
動物および方法
1）ジストロフィーハムスターの骨格筋の交換移
オ直ジストロフィーハムスターBIO14．6とコント
ロールハムスターBIO FIBを用い，これらの動物のEDLを互に交換移植した．またBIO14．6間
およびBIO FIB間のEDLの交換移植も行った．
EDLの移植法については既に述べた通りである6）・7）．この場合graftには軽いtensionを加えて両端を固定した．
2）mdxマウスのEDLのヌードマウスへの移植
ジストロフィーの骨格筋としてmdxマウスの
図1＊帝京大学医学部第一内科

一249一

mdxおよびC57BLのEDLのヌード
マウスへの移植部分はヌードマウスのEDL末端の残存する腱と（3）再生筋線維直径の変動係数

縫合し，神経の再支配が起こった時に機能が回復

図2は移植後4ケ月目の各交換移植の変動係数できる様に工夫した．

を示したものである．これにみる様にDys．→Dys．

3）これらのハムスターおよびヌードマウスは移の場合が変動係数がもっとも大きく，他の組合せ

植後，種々の時間後Sacrificeし，再生筋を取り出では差はみられなかった．

し，クリオスタットを用いて組織標本を作製し，しかし6ケ月を経た再生筋では図3の如く

H−E染色標本につき再生筋線経の数，直径，直径

Cont．→Dys．がもっとも大きく，Cont．一→Cont．がのバラ．ツキをKontronを用いて計測した．バラツキ（大小不同）は次の計算式によって変動係数

もっとも小さかった．

Variability coefficientとして計算した．

ーBIO14．6とコントロールハムスターBIO FIB

Variability coefficient

これらの結果をみるとジストロフィーハムスタ

Standard deviationXlOOO

を用いた4組のEDLの交換移植では，移植後6

mean fiber diameter

ケ月までは再生筋線維直径の変動係数には一定のなお，ジストロフィーハムスターの場合再生筋を

傾向はみられなかったことになる．

上中下の3部分に分け，またジストロフィーマウ
スの場合は上下の2部分に分けて各部分につき数‥

VariabiJity coefficientof regeneratednuscfe fibers
4months aner transpIantation（dystrophic hamster B鳳tl．6）

直径，変動係数の平均をもってその再生筋の数値とした．
果1）ジストロフィーハムスターの交換移植（1）再生筋の数
各組合せの再生筋線経の数を移植後6ケ月でみると，ジストロフィーのEDLをジストロフィー

一UOで−−−●00と≡一句て○＞結のhostに移植した場合（Dys．→Dys．）がもっとConL→ConL ConL→Dyまも多く，次いでDys．一→Cont．，Cont．一→Cont，，Cont．

Dyi→C椚t．

Dys．→Dy与．

一→Dys．の順となった．
TP＜0．02i

この結果をみると，これら4組の交換移植では，

図2

hostよりも移植するEDLの性質による所が大きく，EDLがジストロフィーの方がコントロールの

VariabiIitycoefficientof regeneratedmuscle fibers
6months aHer tranSPlantation（dystrophic hamSter B10，日．6）

場合よりも再生筋線経の数が多かった．

U

0

子

子

÷

与

O
▲
A
U
U
O

3．8／Jmでもっとも大きく，Dys．→Cont，も殆ど変■移植後6ケ月でみると，Cont．→Cont．が30．7±

0

らない．

O

それ以後は緩徐に増加するが4ケ月以後は殆ど変盲中 リ≡000ご≡qdてq＞

再生筋線経の直径は2ケ月まではかなり急速に，

0O（2）再生筋の直径O

Dys．はそれぞれ28．1±3．6JLm，26．6±5．2JLmであった．従って再生筋線経の直径はhostに依存する

O

らず30．0±3．4JLmであり，Dys．→Dys．，Cont．→

Cont．→ConL Cont，→Dys．
DyS．→ConL Dys＿→Dys．
（∩＝5〉
（∩三°）
（h＝5）
（∩三●）

所が大きく，hostが正常の場合はこれがジストロ
フィーの場合よりも大きいことが明らかになった．
ー250−

匡13

2）mdxおよびC57BL／6JのEDLのヌード
マウスへの移植数もC57BLに比Lmdxの方が多く，これか山′l
筋線経の数にも影響を与えていることは否定でさ（1）再生筋の数

ない．

図4の左半分はC57BL，また右半分はmdxの（2）直径

EDLをヌードマウスに移植後1ケ月を経たものである．この様に拒絶反応はみられない．

各再生筋を上下の2つに分け，各々の組織標本から計1000本の再生筋線経の直径を測定しその平表1は移植後1ケ月および2ケ月目の再生筋線

均を，その再生筋中の筋線経の平均直径とした．

経の数，直径，再生筋線経の直径のバラツキにつ

この平均直径の比率（mdx／C57BL）をみると

きまとめたもので，mdxのEDLの再生筋の数，直1．0より常に小さくなく，mdxのEDLの再生筋線

径，変動係数を，同じヌードマウスの他側下肢に経はコントロール側より細いことを示している．

移植したC57BLのEDLの再生筋線経の各数値（3）変動係数で除した比で示してある．再生筋線経の数の比は一方，再生筋線経の直経の大小不同を示す変動

移植後1ケ月，2ケ月ともに1．0より大でmdxの係数でみると，これはいずれも1．0より大きく，
mdxのEDLの再生筋線経は，同じヌードマウス

移植筋の方が再生筋線経の数が多いことを示している．ただし移植前のEDLそのものの筋線経の内でのC57BLのEDLの再生筋線経は，同じヌー
ドマウス内でのC57BLのEDLの再生筋線経よりも直径の大小不同が著しいことを示している．
以上mdxマウスとC57BLのEDLのヌード
マウスへの移植では，前述のハムスターの骨格筋の交換移植と異なり，hostは同一であり，再生筋
線経の特徴は移植するEDLの性質をそのまま反映していると考えられ，ジストロフィー側とコントロール側とを直接比較することができる．この実験はまだ移オ直後2ケ月目までの短時間のものであるが，その範囲ではmdxマウスのEDLの再生
筋はコントロールの同様な再生筋よりも，再生筋
線経の数は多いが，直径は小さく，大小不同が強図4mdx（右）とC57BL（左）のEDLのヌードマウス移植後の再生筋線維（移植後1ケ月）

いというジストロフィー筋の特徴を具えている様にみえる．もっともこれに関してはさらに長時間の多数例の観察が必要であろう．

表lまComparisonofnumber．diameterandvariability
COefficientofregeneratedmusclefibers（MDX／C57BL／6J）

ご：芯；慧i。。 nUmber diameter 霊監禁tと め

1．ジストロフィーハムスターBIO14．6とコント
ロールハムスターBIO F．Bとの間，およびBIO

14．6同志間，BIOFIB同志間にEDLの交換移植を行い次の結果を得た．

1

1．62

0．71

1．25

a）再生筋線経の数は移植するEDLがジストロ

2

1．05

0．64

1．56

フィーの場合にはコントロールの場合より大きく
なる．

1．32

0．85

1．14

1．60

0．引

1．05

b）再生筋線経の直径はhostがコントロールの場
合に，これがジストロフィーの時より大きくなる．
ー251−C）変動係数は移植後6ケ月日までは一定の傾向

transplantation

and▼regenerationinがみられなかった．

dystrophic hamster．Part

2．mdxマウスのEDLとコントロールマウス

Studies．ibid，23：52］卜536，1974．

C57BL／6JのEDLを同一のヌードマウスに移植して，その再生筋を移植後2ケ月まで比較し

the

2．Histochemical

4）Zalewski，A．A．：Survival，reinnervation，and
histochemical maturation of skeletal muscle

次の結果を得た．

XenOgraftsinthenudemouse．Exp．Neuro1．，a）再生筋線経の数，変動係数はmdxのEDLの58：261，1978．

再生筋で大きい．

5）Wakayama Y．，Schotland，D．L and Bonilla，b）再生筋線経の直径はコントロール（C57BL）

E．：Transplantation of human skeletalのEDLの再生筋の方が大きい．

muscle to nude mice：A sequential mor−
phologic study．Neurology，30：740，1980．

文献6）寺尾寿夫他：ジストロフィーハムスターと正常

1）Jasmin，G．and Bokdawala，F，：Muscle
tranrsplantationin normal

ハムスター問の筋の交換移植についての研究．

and dystrophic筋の発生と分化に関する基礎的研究，江橋址昭

hamsters．Rev．Can．Bio1．，29：197−201，1970．

和57年度研究報告書，p．9．

2）Neerunjun，J．S．and Dubowitz，Ⅴ．：Muscle

7）寺尾寿夫他：ジストロフィーハムスターと正常

tranSplantation and regenerationin the

ハムスター間の筋の交換移植についての研究

dystrophic hamster．Partl．HistologiCal（第2報）および再生筋の再移植について．江橋

Studies．J．Neurol．Sci．，23：505，519，1974．

】旺昭和58年研究報告書，p．20，1984．

3）Neerunjun，J．S．and Dubowitz，Ⅴ．：Muscle

ー252−32）筋疾患におけるmyosatellite cellの研究
茂 在 敏 司書
研究協力者

河

村

篠

田

恵

宏＊

小

西

慎

吾＊

一＊

小松原 千鶴子＊

竹

中

正

純●

myotonic dystrophyにおけるmyosatellite
cellについてはすでに昨年度の研究報告書1）で述数×100：％SCNと略す）を算出した．（診約1JJのエボン包埋トルイジンブルー染色横断面切片よりべたが，本年度はpolymyOSitisにおけるsatellite

100倍の光顕写真を作製．同光顕切片に連続する超cellについて検討を行った．

薄切片より電顕的にSatellitecellを観察し，Sub−

対象：63歳，47歳，43歳の女性3名と49歳の男

sarcolemmalnlLcleiとま監別，光顕写真上にプロッ

性1名の計4名のpolymyositis患者の大腿四頸筋生検組織について検討した（表1）．披検者の臨

トし，筋線維径とsatellitecellの分布，性状との床病型は，1958年のWalton＆

関係をhistometricalに検討した．③satellitecell

Adamsの分類2〉とparent muscle fiberの形態変化に関する検索をも行った．

により，女性が全例typeII，男性がtypeIIIで臨
床的にmixedconnectivetissuediseaseと診断さ結れた例である．またcase K．0．は生検約10日前よ果

4例の％SCN及び筋線維異常の有無を表2にりステロイド投与中の症例である．

示した．％SCNはcase S．T．で19．5，CaSe Y．M．
方

13．3，CaSe K．0．9．4，CaSe T．K．6．1であった．

法

通常の手技にて筋生検を施行，2．5％グルタール

COntrOlは38歳，44歳，65歳の明らかな神経筋疾患

アルデハイドと1％オスミウム酸にて2重固定後が認められなかった男性で％SCNは各々4．8，

エボン包埋した．（Dエボン包埋横断面切片より電3．3，3．1であった．

顕的にmean percentage ofsatellite cellnuclei（satellite cell核数÷total subsarcolemmal核

強く，多くの変性壊死線経とmyophagiaの出現

表1
E

対

象
凧USCLE

CLASSIFICATION

︶

O

h

︻u

▲ 几

SEX

光顕的観察での筋線維変性は，CaSeS．T．で最も●・（Valton＆Ad8■，1858）

POLYXYOSITIS
3

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．

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．

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▼ 一

一

3

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▲

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q

l

■

V

p

＊大阪医科大学第1内科

l

︐

l

7

1．ca5e T．X．

p

︐

■

3．ca引e X．0．

e

t

3

ほe S．T．

6l．

2．e85e Y．1．

表2

Quantitativeanalysisofthesate11ite
Ce11populationin polymyositis

l償

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l●lLid●ltoil…

①caSe S・T・⑳ca8e Y．打．③ca5e K．0．◎C85e T．K．

知
0s・重さ○−適・一∈−OL且EJN

M

S寄り〇三苫訊−〇・■﹄亡さN

図1

筋線維短径別にみたsatellitecell分布−254−

を認め（写真1−＠）case Y．M．，CaSe K．0．では比

く satellite cellが認められた．

較的軽度で変性線経が散見され（写真1−（診）casesatellite cellの大多数は，光顕的に著変なく電T．K．では非常に軽く，むしろangular atrophic
fiberよりなる神経原性萎縮がめだった．また変性

銀的にのみ構造異常を認める筋線経に観察された．

筋線経が多くみられる症例ほど％SCNは高値を変性を示す筋線経ではsatellitecellは稀にしか認示した．

められず，その胞体内構築は比較的良く保たれてまた，壊死には至っていないが光顕的に明らかな

satellite cellと筋線維径との関係は図1に示し

おり，ミトコンド1）アの増生，rOughendoplasmic

た．4症例の全てにおいて，肥大筋線経は認めら

reticulumの増生，ゴルジ装置の出現等の活性化

れず，小径線経が比較的多く認められ，Satellite

像はあまり強くなく，しばしば胞体の一部に突起

cellはそれぞれの径の筋線経に全般的に分布しての形成やsatellitecellとparentfiberの間隙の拡いた．ただしcase T．K．には10jL前後の神経原性大が観察された（写真2−（亘，（診）．また今回我々が観萎縮にもとづく小径線経が非常に多く認められるがsatellitecellは非常に少ないものであり，またCaSe S．T．では10JL前後の小径線経にも比較的多

写真2 caseS．T．の光顕的に変性を示すが壊死に至っていない筋線経の電景頁像
＠ 筋原線推構築の明らかな破綻，SatelT
litecellの胞体の一部に突起（†）の形成が認められる．
（診 筋原線経のZ．1ineが不明瞭化しsate1−
1itecellには突起の形成（†）が認められ，parent fiberとの間隙の拡大（；）
を認める．

写真1

エボン包埋トルイジンブルー染色光
顕像（×100）
＠ caseS．T．多くの変性筋線経の出現，
myophagiaを認める．
（診 case Y．M．変性線経が散在して認められる．

S：satellite cell
p：parent fiberー255−

察した範囲では填死線経にはsatellitecellは全くは至らないが明らかに変性像がみられる線経にお認められなかった．

いてはsatellite cellは突起の形成及びparent

考

fiberとの間隙の拡大を示しており，parentfiberの変性に伴いほとんどのsatellitecellが遊推して

案

Satellitecellは1961年Mauro3）により発見され，その後多くの実験的研究より筋の再生及びⅥ巴大化

しまうことが推測された．一方myotonicdystro−
phyでは既にのべたごとく填死線経にもsate11ite

現象に重要な役割を演じていると考えられている．

Cellがみられたが，そのsatellite cellはparent

polymyositisでは，％SCNはcontrolに比し

fiberと同様に変性していた．この所見は，高値を示し，Satellite cellの増生が存在すると考polymyositisではその病的過程が筋線維のみにえられた．これは黒岩らの昭和56年度の当研究班存在し，Satellit占 cellにはおよばないのに対しにおける報告6）と一致するものであった．このmyotonic dystrophyでは筋線維のみならずSatellite cellの増生は，変性筋線経が多くみられSatellite cellにもその病的過程が存在することを示すものかもしれない．

る症例において％SCNが高値をとることより，
変性筋線経の出現がsatellitecellの増生に重要な役割を演じているものと考えられた．検索した4症例では筋線経の月巴大化傾向が全く認められなか

結語ったが，％SCNは明らかに増加していたことよ①検討したpolymyositis全例において，％SCNは増加していた．

りこれらpolymyositisにみられたsatellite cellの増生は，筋線経の月巴大化と関連するものではな②satellitecellの増生は特定径の筋線経と関連するものではなかった．

いと考えられる．

③％SCNの増加は，変性筋線椎の出現頻度のSatellite cellの増生の主座は，光顕的に明らか高い筋により強かった．

にみられるような変性の強い筋線維ではなく，電①明らかな壊死におちいった線経には，Sate1−

顕的にのみ軽度の構造異常を認める筋線経にあり，また，特定径の筋線経に由来するものでもなかっ

1ite cellは認められなかった．

た．これらの所見は，昨年述べたmyotonicdystro−

Satellite cellが認められ，その細胞内構築は良く

phyにみられる傾向とほぼ一致するものであった．

保たれ，胞体はしばしば突起を形成し，parent
fiberとの間隙が拡大していた．

筋線維径とsatellitecellの出現，その性状との（9壊死には至らない変性筋線経には，稀に関連をみると，CaSeY．M．，CaSeK．0．や神経原性萎縮がその筋線維変化の中心となっている

文

献

CaSeT．K．では小径筋線経に分布するsatellitecell

1）茂在敏司，河村 宏，小西慎吾，竹中正純，増は少なかった．しかしながら筋線維変性の強い

井義一，篠田恵一：筋緊張性ジストロフィーにCaSe S．T．では10JL前後の小径線経が多く認められ，これらの筋線経にも比較的多くのSatellite

おけるsatellitecellの電顕的研究．厚生省「筋ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研

Cellが認められた．このような所見はcaseS．T．に究」（三好姓），昭和58年度報告書，1984，p．

みる小径筋線経の多くは非常にactiveな再生筋

106．

線経であり，CaSe Y．M．，CaSe K．0．やcase T．K．
における小径線椎は次第に変性が進行しつつある，あるいは活性が低いものであることを示すもので2）Walton，J．N．＆Adams，R．D．：Polymyositis．
Livingston，Edinburgh，1958．
3）Mauro，A．：Satellite cellofskeletalmuscle

あろう．

fibers．J．Biophys．Biochem，Cyto1．，9：493，

検討したpolymyositisでは壊死に至った線経には全くsatellitecellは認められず，変性壊死に

1961．

4）Schmalbruch，H．＆−256−

Hellhammer，U．：The

dystrophy．Neurol，29：401，1979．

number of satellite cellsin normal humanmuscle．Anat，Rec．，183：279，1976．

6）黒岩義五郎，石本進士，後藤幾生：筋疾患におけるSatellitecellの検討．厚生省「筋ジストロ5）Wakayama，Y．，Schotland，D．L．，Bonilla，E．
andOrecchio，E．：QuantitativeultrastruCtur−

フィー症の発症機序に関する臨床的研究」（三alstudyofmusclesatellitece11sinDuchenne好妊），昭和56年度研究報告書，1982，p．95．

−257−33）実験的再生筋における筋芽細胞増殖因子の研究
高

研究協力者

瀬

小 林 和 夫＊

貞

夫＊

鈴

木

博

義＊

関

沢

剛＊

は じ め に合液を用いた．培養は炭酸ガス培養器を使用，5損傷筋の再生は，除神経しても生じる事，i舌性％CO2，95％空気，飽和水蒸気下で37−38℃で行った．

化した筋衛星細胞においての形質膜にCaVeOlae
がしばしば出現する事1）などより，損傷筋筋線経（2）正常筋及び再生筋のホモジナイズ液の作製から衛星細胞へ何らかの情報が伝達され，衛星細250gウイスター系雄ラットの前脛骨筋を無筋

胞の分裂増殖がおこると考えられている．しかし的に露出，約5mmの横切開を5−6回加えた後ながら静止状態にあった衛星細胞を活性化させる

縫合，3日目の損傷筋を採取した．結合織を除去

組織内の因子については，いまだ明らかにされてした後，細切し4倍量の培養液とともにホモジナ

いない．

イズした．2000rpm，15分間遠心し培養液にて40％ホモジナイズ液を作製，その上清を0．45ミクロン

そこで我々は本班会議において検討してきた実験的再生筋の結果2）をもとに，壬員傷筋における筋再生の活発な時期の筋ホモジナイズ液を使い，培
した．
材料と方法
（1）培養細胞の増殖性の測定

へもTX⁝S一コ＼SJ﹂山J

養筋細胞L6の増殖に及ぼす因子について検討

培養細胞としてラット由来の筋芽細胞L6（FlowLaboratoriesInc．）を用い，15mmプラス
チックマルチウェルに種々の浪度（4−5×103／dish，4−5×104／dish，4−5×105／dish）で溝田胞を培養した．24時間後PBS（−）にて
洗濯，1ml／dishの培養液にて培養．0，1，2，
3，4日後に0．25％トリプシン処理にて細胞浮遊液を作製，0．5％トリパン青を0．5ml加え，生きた培養細胞のみを血球計算盤にて算出した．
さらに細胞濃度4〜5×104／dishの培養については9日間，24時間毎，同様の方法で細胞数を0算出した．各イ直は4検体の平均から求めた．培養
液は90％デルベッコMEM，10％牛胎児血清及び100単位／mlペニシリン，100JJg／mlストマイ混

2

q
DAYS

図1

種々の細胞濃度における筋芽細胞L6の増殖．
A：4〜5×105／dish
B：4−5×104／dish＊東北大学医学部脳研脳神経内科

C：4−5×103／dish−258−フィルター（Gelman SciencesInc．）に通した．

数において増殖性を検討するのが適当と考えられ正常筋ホモジナイズ液については，前歴骨筋に損た．
（2）筋ホモジナイズ液による筋芽細胞増殖促進活傷を加えず，同様の方法で作製した．

性の検討（3）筋芽細胞増殖促進活性の測定
筋芽細胞L6を15mmプラスチックマルチウ

表1のごとく，（∋正常筋ホモジナイズ液を種々

エルに4〜5×104／dish培養し，24時間後にの濃度で添加した場合，培養3日目の細胞数はPBS（−）で洗音條．培養液を（》1．6％，0．16％，

4．01〜6．00×105／dishであ り，対照（5．55±

0．016％の再生筋ホモジナイズ液，（診同様の濃度の0．95×105／dish）に比し，増殖性において有意の正常筋ホモジナイズ液，及び③対照として筋ホモ
ジナイズを添加しない培養液ととりかえた．72時

差は認められなかった．又（∋再生筋ホモジナイズ

間培養後トリプシン処理後，（1）と同様にして培養細胞数を算出した．

表1結正常筋及び再生筋モホジナイズ液の添加における筋芽細胞L6の増殖．

果

培養31相の欄胞数（×105／dish．n＝‥（1）筋芽細胞L6の増殖性の検討
培養細胞密度が4〜5×105／dishで培養した場合（図1−A），2日目で細胞数がピークに達す対照

5．55 ± 0．95

正常筋の添加1．6

1

4．91：土 0．69

0．16

％

4．84 ± 0．83

日に増殖性が著しく，4日日頃に細胞数がピーク

0．016X

5．27 土 0．73に達する（図2）．4−5×103／dishの場合（図再隼筋の添加1−C）は，増殖性は極めて遅い．以上の結果より

1．6‡

5．48 十 0．73

4〜5×104／dishで培養し，培養3日目の細胞

0．16

‡

5．62 ± 0．79

0．016X

5．11± 0，73

る．4−5×104／dishの場合（図1−B），2〜3

DAYS

図2

筋芽細胞L6の増殖．細胞濃度4−5×104／dishで培養した場合の増殖曲線を示す．
−259−

液を種々の濃度で添加した場合の細胞数（4．38−0．41×105／dish）にも，対照との間に有意差はみられなかった．
考察

近年，筋芽細胞の増殖因子として，ソマトメジ
ン類（somatomedin A，C，multiplication−
Stimulating activity）3），牛下垂体及び脳からのfibroblastgrowthfactor4），トランスフェ））ン等が明らかにされてきた．又筋細胞の融合を促進するものとしてインスリン，リノレン酸等の不飽和脂肪酸が知られてきた．さらにAllenら4）はfi＿
broblastgrowthfactor（下垂体由来）は局所の筋芽細胞を増殖させ，ソマトメジンは全身の筋組織の成長に関与するのであろうと考えている．しかしながら再生筋組織中からの筋芽細胞の増殖因子はまだ明らかにされてはいない．
筋芽細胞の増殖促進因子は本実験系においては見出せなかった．その原因として増殖促進因子が培養液で失括される可能性，損傷筋をホモジナ
図3

イズした時，沈澱側に因子が含まれている可能性なども否定はできないが，ホモジナイズ液の添加濃度の検討も必要と考えられる．
筋芽細胞の増殖促進因子を検索するうえで，筋損傷後3日目の再生筋．好塩基性の胞体をもつ多数のmyocyte，myOtubeが出現し（A：HE染色，×100），著明なRNAの増加が認められる（B：RNA
染色，×100）．

損傷，再生過程のどの時期の筋肉を採取するかも重要である．我々の実験結果（57年度本姓会議報告2〉）から，筋再生過程はラットの前歴骨筋を切断

以上のごとく再生筋組織における筋芽細胞増殖

用傷した場合，5時間後より壊死線経の周囲に多促進因子を検討するには，いくつかの問題点はあ

核白血球が出現，12時間後にマクロファージを含む単核球の浸潤がみられる．3−5日後に再生筋

るが，筋芽細胞増殖因子を明らかにしてゆく事は，
変性再生過程や種々の神経筋疾患の病態を解明す

がRNA染色（メチルグリーン・ピロニン染色）にるうえでも重要であろう．

て強陽性となり（図3），その後しだいに染色性が減少する．したがって今回の実験においては，活

ま

と

め

発な再生の初期段階である損傷3日員の筋を採取，損傷による再生筋のホモジナイズ液を培養液にホモジナイズ液を作製した．しかし今後さらに再添加し，培養筋細胞L6の増殖に及ぼす影響を検

生筋組織の採取時期についても検討すべきであろ討した．その結果再生筋ホモジナイズ液添加群と，つ．

対照群（非添加群）との間に有意の差は得られず，又，胎生期における筋芽細胞と衛星細胞の増殖性において，相異も指摘されている点より，衛星

本実験系においては再生筋組織中からの筋芽細胞増殖促進因子は明らかにしえなかった．

細胞のクローン培養下での実験系が必要とも考え
られた．
−260−

文

3）Ewton，D．Z．andFlorini，J．R．：Relativeeffects

献1）TerAvainen，H．：Satellite cells of striatedofthesomatomedins，multiplication−Stimulat一

muscle after compressioninjury solight asingactivity，andgrouthhormononmyoblasts

not to cause degeneration of muscle fibers．

andmyotubesinculture．Endocrinology，106：577−583，1980．

Z．Zellforsch．，103：320−327，1970．

2）高瀬貞夫，小林和夫，ほか：実験的再生筋に関

4）A11en，R．EリDodson，M．Ⅴ．，etal．：Regulation

する研究．筋ジストロフィー症の発症機序に関

ofskeltalsatellitecellproliferationbybovine

する臨床的研究（三好班），昭和57年度研究報告

pituitary fibroblast growth factor・Exp・Cell

書，1983，p．48．

Res．，152：154−160，1984．

−261−

34）筋衛星細胞活性因子の検討
小

目

口

書三夫＊

方

的

法

筋衛星細胞の活性化因子として，神経切断，血生後15日のddy系雄マウス各々5匹について

流遮断，自律神経ブロック剤（reserpine）につい

reserpinel．5mg／kgを腹腔内に注射後直ちにエて3H−thymidine radioautographyにより検討し報告してきたが，今回はこれらの因子の組合わせーテル麻酔し右後脚の坐骨神経を切断，同様にによる検討と電顕radioautographyによる形態学的観察を加えた．

図1

reserpineを注射後，右後脚の近位部を手術縫合糸で結紫し血流遮断30分間行った．左後脚はコント
ロールとした．上述の処置後24時間から各々のマ

筋衛星細胞は胞体が大きく，ミトコンドリアを認める．核は比較的euchromatinに富む．3H−thymidine露光銀粒子が認められる．×9，000＊国立長野病院

ー262一

図2

ウスに3H−thymidine

衛星細胞の核は不正形を呈し，euChromatinに富む．3H−
thymidineにより露光された銀粒子が観察される．筋核は円形．×15，000

30〜50jLCi／bwgを4回に分け，6時間毎に腹脛内注射し，実験開始48時間

Reynoldsで染色，EI立HS−9型電子顕微鏡で観察した．

後に後脚のgastrocnemiusを採取，3％グルター
ルアルデヒドで固定，1％オスミウム酸で後固定結したのち，脱水，epOn−aralditeに包埋．厚さ1FEmの標本を作製Ldipping法によりSAKURA果

Reserpine＋denervation群のlabelingindex

NRM2を塗布．4℃の冷蔵庫内で4週間露出．

は2．07，reSerpine＋ischemiaのlabelingindexは3．28，COntrOlは1．26であった．電子顕微鏡によるSDX−1で現像，ハイポで定着．トルイジンブルー

観察では各群間での形態学的な差は認められなか

でうすく染色後，各標本を油浸レンズで観察し標本ったが，筋衛星細胞で3H−thymidineを取り込む

中の3H−thymidineでラベルされた衛星細胞核を算出．標本の面積を画像解析装置で測定．1mm2の核（活性衛星細胞）はeuchromatinに富む場合が単位面積あたりのラベルされた衛星細胞の核数を多いものが認められた（図1，2）．一万3H−

1abelingindexとした．光顕標本の一部は超薄切

thymideneを取り込まない衛星細胞核と差がな
いものも観察された．

片とし，SAKUR NRH2をloop法により塗布し多く，胞体も核に比較して多くmicroorganelleが4−6週間4℃の冷蔵庫内で露出し，gOld−laten−sificationにより増感Lphenidonで現像，走着後
一263一

考

察

どのように行われるか明らかではない現在，これSatellite cellの活性化因子としては，Strept−

らの実験に電子塁頁微鏡radioautography等によOZOtOCin−induced diabetes mellitus，glucocor−

り微細構造の面からの観察も加えてゆく予定であticoid，grOWth hormon，meChanical stretch，る．

COmpreSSion，injury，mOtOraCtivityやdenerva−
tionが挙げられている．マウスおよびラットにお文

献けるdenervationによる活性については，形態学

1）Ontell，M．：Musclesatellitece11S：Avalidat−

的検討，Satel1itecellの核の増加やradioautogra−

edtechniqueforlightmicroscopicidentifica−

phyによる研究がある．Denervation後2−7日

tionandaquantativestudyofchangesintheir

でsatellitecellが増加，長い期間のものでは30日

populationfollowingdenervation．Anat．Rec．，

まで増加があったというものまである．若いマウ

178：211−228，1974．

スやラット程satellite cellの活性があり，adult2）McGeachie，J．andAllbrook，D．：CellproliferTになるとsatellitecellの活性はなくなる．加齢とationinskeletalmusclefollowingdenervation

ともにsatellitecellの活性は減少する．一方栄養

OrtenOtOmy．CellTissue Res．，193：259−267，

障害によりsatellitecellの活性は減少する．今回

1978．

の我々の実験では，denervation，ischemiaで3）Snow，M．H．：A quantative ultrastructural

Satellitecellの活性は増加，reSerpine大量投与による自律神経終末の非可逆的変化による自律神経

analysisofsatellitecellsindenervatedfast

ブロックではsatellitecellの活性が減少するとい

207：593−604，1983．

and slow muscles of the mouse．Anat．Rec．．

う結果を得た．さらにreserpine＋denervation群4）Campion，D．R．：Themusclesatellitecell：Aとreserpine＋ischemia群の間に差が出たが，数review．Int．Rev．Cyto1．，87：225L251，1984．

を増して検討してゆく．Satellitecellの活性化がー264−

ⅤⅠⅠ．蛋白代謝

35）筋ジストロフィー鶏胚の交感神経筋における蛋白質
合成能の特異性についての研究（第一報）
堀

研究協力者

日

眞一郎●

杉 浦 弘 子♯

大 谷 幸 子＊ 椿

的

忠 雄＝

様に頸部後根神経節，腰部後根神経節と区別して筋ジストロフィー鶏（ニューハンプシャー種

使用した．

413系）は遺伝的に筋ジストロフィーを発症する
実験動物であり，遺伝的筋ジストロフィー症の発〔3H〕−reuCineによる蛋白質の標識摘出した神経節はL−leucineを加えていない症の機序を研究するのに用いられる．筋ジストロ

BGJbmedium（ペニシリン，ストレプトマイシン

フィー鶏における遺伝子異常がいかなる機序で筋及びファンギゾン含）を調製し，このmedium0．3

ジストロフィーの発症をひきおこすのか未だ不明

mlにL−〔4，5−3H〕−leucine（5mci／ml）5〝1である．私達はneurite outgrowthを指標としてす）に対する反応性を検索したところ，筋ジスト（0．2nmoles）を添加した培養液中で95％02−5％CO2下で37℃，24時間培養した．培養後，神経節を冷却したacetone l mlで3回洗い，5M

ロフィー鶏では正常対照鶏に比べ，より早期に

Urea−1．5M thiourea−0．5％β一merCaptOethanol

NGFに対する反応性が低下することをみいだし液中にglasshomogenizerで懸濁し，遠心後，上た1）．この反応性の低下は筋ジストロフィーの発浦を二次元電気泳動にかけ，可音容化されたペプチ

交感神経節の神経成長促進因子（以下NGFと略症に先行していた．交感神経節のNGFに対するドを分散した．

反応性の低下がはたして遺伝子情報発現のレベル

二次元電気泳動

でとらえうるのか否かを検討するため，交感神経

0′Farrell法に平林2）による改良を加えた方法

節及び後根神経節における蛋白質の生合成の特異で行った．内径0．5mm長さ8．5cmの毛細管に1性を二次元電気泳動法を用いて検索した．

％agarose液A，B及びC（表1）を順次1．8cm，3．6cm，0．6cmと吸い上げて，一夜4℃に保有しゲル化した後，アルカリ側に上記の如く

実験方法
神経節の調製urea処

理したサンプルを2／Jlのせ，まず電圧が350Vに上ニューハンプシャー種の筋ジストロフィー鶏（413系）及び1司種の正常鶏（412系）の受精卵を将るまで定電流30JLA／tubeで流し，次後350Vの定電圧として1800V・時間となるまで泳動を6℃の卵し，20日胚を使用した．交感神経節は第6頸椎低温室で行った．urea処理したサン70ルにはスポから第2胸椎にかけて椎骨横突起の問に介在するットの位置の相対的指標として，正常鶏の大胸筋

左右3個ずつ計6個及び膨大した腰部脊椎の腹側をurea処理して得た可溶分画を泳動の直前に加

左右端に数珠状に連らなる神経節を摘出し，前者を頸部交感神経節，後者を腰部交感神経節としてえた．泳動後，10％TCAT5％Sulfosalicylicacid
液に1−2分間浸し，白濁として認められる蛋白使用した．後根神経節は交感神経節の摘出後，そ質の分散のパターンが良好であることを確認し，の直ぐ背側に位置する神経節を，交感神経節と同純水で30秒〜1分間洗った後，二次元目のSDS−＊東京都神経科学総合研究所神経生化学■ ＊＊東京都立神経病院

polyacrylamide（4−17％，W／V，gradient）slab
gel（95（W）×60（H）mm）電気泳動にかけた．
−267−

表l Compositions of agarose gels forisoelectric focusing．
arose−urea SOlution

0．04

9m

SOrbitoI

0．48

9m

Water

2．0

m1

urea

1．2

9m

thiourea

0．46

9m

agarOSe

工EF

arose s01ution

A

B

C

acidic neutral basic
agarose−urea SOiution O．4
pharmalyte pH

2．5−5

Pharmalyte pH

3−10

Pharmaiyte pH

4−

Pharmalyte pH

8

−10．5

m1
40

6．5

0．6

m1

40

1JI

0．4

ml

40

111

リ1

20

UI

SDS−pOlyacrylamidegel電気泳動を40V，10分，かったものの，生合成のゆっく りしたものあるい次いで，80V，約2 時間行った後，0．1％
CoomasassiebrilliantblueR250−50％TCAで染は非常に代謝の速いもの（いずれかを現在のとこ

色固定，7％酢酸−25％methanolで脱色を行っいは生合成量の量的な差が認められた．即ち，正た．指標として添加した筋蛋白の分艶パターンか常対照鶏では図1に矢印で示す様な蛋白質が認め

ら，蛋白質相互の分敵の良否を判定した．次いで，られるのに対し，筋ジストロフィー鶏では欠損もろ判定できないが）において，生合成の欠損ある

Enlightningで処理した後，乾燥し，Kodak社製

しくは低い生合成しか認められなかった．これら

Ⅹ一ray film（Ⅹ−Omat AR）に乾燥ゲルを密着さの差は頸部交感神経節でも，腰部交感神経節におせて，−80℃，15日〜20日間放置し，〔3H〕ラベル

いても一様に認められた．

された蛋白質をⅩ−rayfilm上に感光し観察した．

後根神経節における蛋白質合成能
20日鶏胚の後根神経節において，交感神経節と結同様に蛋白質生合成能の特異性を検索したところ，

果

生合成の盛んな蛋白質は等電点7から4．5，分子量

交感神経節における蛋白質合成能
20日鶏胚の交感神経節をL−〔4，5−3H〕−

94，000から30，000の間に観察された（図2）．しか

1eucineと12時間培養してラベルされる蛋白質は

し，Ⅹ−rayfilmとの密着時間をより長くすること

等電点7から4．5及び分子量94，000から30，000のにより，他の等電点及び分子量領域にもスポット

間に主として観察された（図1）．しかし，Ⅹ−rayが認められた．正常対照鶏と筋ジストロフィー鶏

filmとの密着時間を長くすることにより，よりアの問で比較したところ，生合成の盛んな蛋白質のルカリ側，より酸性側及びより高分子量，より低

みならず，生合成のゆっくりしたものあるいは代

分子量にわたってスポットが観察された．正常対
照鶏と筋ジストロフィー鶏の間の蛋白質合成能に謝の速いものにおいても，生合成の欠損といった差は今のところ認められなかった．図2は腰部後ついて比較したところ，生合成の盛んな蛋白質に根神経節での結果であるが，頸部後根神経節でもは生合成の欠損という様な大きな差は認められな同様の結果であった．生合成の盛んな蛋白質は比

ー268−

図1

Two−dimentional gel electrophoresis of synthesized
proteins．

較的狭い等電点及び分子量の範囲に局在している

考察ことから，これらに近い等電点及び分子量の蛋白

筋ジストロフィー鶏の骨格筋自身の異常に関す質については，電気泳動を行う際に，その領域にる研究は数多く報告されているが，神経系，殊に重点をおいて，拡大して検索する必要がある．交交感神経系の異常については不明である．近年，

感神経節と後根神経節の間の蛋白質合成能につい骨格筋への交感神経の直接支配が確かめられ3），4），ては，生合成の盛んな蛋白質においては共通して交感神経の骨格筋に対する役割が注目されている．

いた（図1，図2）．しかし，生合成のおそいかあ

ここで報告した実験結果は交感神経節の蛋白質合

るいは代謝の速い蛋白質においては多くの差を認成能が正常対照鶏と筋ジストロフィー鶏とでは異めた．これらの相違については，更に検索中であなることを示している．これらの相違と筋ジスト

る．

ロフィー発症の機序との関連については今後の研
−269一

図2

Two−dimentional gel electrophoresis of snythesized
proteins．

Lumbal dorsal root ganglion of20days chick−embryo．

文

究にまたねばならないが，筋ジストロフィー鶏における異常が交感神経系にも認められることを示

1）椿

忠雄，堀

献

眞一郎，大谷幸子：筋ジストロ

唆するものである．ここでは20日鶏胚での結果をフィー鶏及び：正常鶏の後根神経節及び交感神経示したが，醇化後の交感神経節では鶏胚時と異な節の神経成長促進因子に対する反応性の加齢にった蛋白質合成能のパターンを示していた（未呈ともなう変化について．「筋ジストロフィー症の示データ）．これは，交感神経節における遺伝子情報発現が個体発生の時期により変化することを示

疫学，臨床および治療に関する研究」昭和58年

唆しているが，筋ジストロフィー鶏における発症

2）Hirabayashi，T．：Two−dimensional gelの時期と蛋白質生合成能の特異性の変化を比較検electrophoresis of chicken skeletal muscle

討することによって，発症と遺伝子情報発現の特proteins with agarose gels

異性との関連が明らかになるものと考えられる．

dimension．Anal．Biochem．117：443，1981．

度研究報告書，1984，p．558．

inthe first

3）Kobayashi，T．，Tsukagoshi，H．＆Shimizu，まとY∴Trophiceffectsofsympatheticgangliaon

め

1．20日鶏胚の交感神経節での蛋白質合成能の特nomal and dystrophic chicken skeletal

異性において，正常対照鶏と筋ジストロフィー鶏

musclesintissueculture．Experiment．Neurol．，との間に質的差が認められた．それらの差は頸部

77：241，1982．

交感神経節においても腰部交感神経節においても

4）Kobayashi，T．，Matsumoto，Y．，Tsukagoshi，

同じであった．

H．，Kayanuma，K．＆Hori，S∴Finestructure2．生合成の盛んな蛋白質については生合成能にOfthesynapticendingsbetweensympathetic

交感神経節と後根神経節の間で質的な差は認めら

axons and skeletal muscle cells and of the

れなかったが，生合成のおそい蛋白質あるいは代varicositiesinthebundlesofneuritesintissue

謝の速い蛋白質については差が認められた．

Culture．Experiment．Neuro1．，85：187，1984．

3．生合成の盛んな蛋白質は等電点及び分子量共に比較的狭い範囲に局在していた．

一270−

36）Rimmed Vacuoleを伴うDistal MyopathyにおけるカテプシンB及びHの局在
木 南 英 妃＊
研究協力者

勝

沼

信

彦◆

伊

杉 田 秀 夫日暮

井
埜

邦
中

雄＝
征

檜

澤

一

夫■■

哉＝＊

査（HE，Gomori−Trichrome染色）並びに免疫組

は じ め にRimmedVacuole型distalmyopathyは常染色織学的検査を行った．

体劣性遺伝で，本邦において詳細に検討されてきヒトカテ70シンB及びHの精製は唐渡ら1）及た．近年，この特異なミオバナーにおけるリソゾ

びKirschkeら2）のラットカテプシンB及びH

ームの異常が示唆され，筋線経の変性とリゾソーの精製法を修飾して行った．凍結肝を用いるため，

ムのプロテアーゼとの関連に着目されつつある．

リソゾーム膜が破れ，細胞質に存在する内在性イ

リソゾームに含まれるプロテアーゼの中でもいンヒビターと複合体を形成している．そこで肝ホ

わゆるチオール性カテプシン群（カテプシンB，

モジネートをpH4．5で37℃，防腐剤の存在下でH及びL）は強いタンパク分解活性（筋構造タン

incubate L，インヒビターを破壊後，その遠心上パクの分解も含め）を有し，細胞内タンパク質の清を出発材料として図1の如く精製した．DEAE−

分解において主要な役割を荷っていることが明ら

celluloseでカテプシンBとHを分離し，その後かになっている．Muscular dystrophyと異なりカテプシンBはCMセルローズ，77イゲル501

Distrl myopathyはphagocytesの浸潤を伴わなを，カテプシンHはConA−セファローズ，ハイドいのが特徴であり，Rimmedvacuolesそりものがチオール怪力テプシン群を含むかどうかの検査はロオキンアパタイトを行い，それぞれ均一な標品を得た．一方，カテプシンB，H，Lなどのチオー本症において，リソゾームの異常を伴うか否か，

ルプロテアーゼに対する細胞内チオールプロテア

又筋萎縮との関連を調べる上でも基本的な課題とーゼインヒビター（TPI）3種の中，皮膚，消化管

思われる．

上皮などの上皮性起原の細胞に多量に存在する

我々はこのようなdistalmyopathyの病態を明TPトαをヒト皮膚上皮を出発材料としてラットらかにするため，カテプシンB，Hの筋組織におTPトαと全く同じ方法3）で精製し均一なタンパ

ける局在を免疫組織学的に検討した．合わせてチク標品を得た．10叫gのプロテアーゼ及びTPトα
を家兎皮内に2週間毎に3回注射し，最終注射後

オール性カテプシン群に対する内在性阻害タンパ

3〜4週間後に採血した．いずれの抗体もそれぞ

クの局在についても調べた．

れの抗原に特異的であることは免疫拡散二重法及材料と方法

びWesternblottingで確認した．

国立神経センターで保有されているdistal

硫安分画，DEAE−セルロースクロマトグラフィ

myopathyl例の筋生検標本について組織学的検ーのステップを経て得たIgGをペプシン消化し，F（ab′）2を得た．ベルオキシターゼ標識Fab＊徳島大学医学部酵素研＊＊徳島大学医学部第一病理＊＊＊国立武蔵療養所神経センターの調製は石川らの方法に従った．即ちF（ab′）2を還元し，ヒンジ部のSH基を露出させ，一方でマレ
ー271−

図2

Rimmed vacuole型distal myopathy
におけるカテプンンBの局在．抗ヒト
カテフ○シンBFab′−ベルオキシダーゼ

複合体を用いた免疫組織化学的証明（×800）

図1

ヒト肝からのカテフ￠シンB及びカテ
フ○シンHの精製法

ンB陽性であった．抗力テフ○シンHFab，一ベルオ
キンダーゼ複合体を用いた検査結果も同様でありイミド基をベルオキンダーゼに導入し，それら両

Rimmed vacuoleのみが強く染色されている（図者を反応させベルオキンダーゼ標識Fab′を調製する方法である．免疫組織化学法は今川らの方

3）．一方抗TPトαFab′−ベルオキンダーゼ複合体を用いての染色結果が図4に示されているが，

法5）を若干修飾して行った．

この場合には，筋糸田胞，Rimmedvacuoleいずれ

ホルマリン固定凍結切片の内在性ベルオキンダ

も陰性であった．

ーゼをH202でブロックし，対照血清で処理後，切片を先に調製したベルオキンダーゼ標識抗体と反考

察ラットの各種組織におけるカテプシンB，H及応させ，3，3′−diaminobenzidine tetrahydroch−
lorideで染色した．後染色はへマトキシレンで行

びTPI−α，βのレベルをベルオキンダーゼ標識抗った．

体を用いて，サンドウィッチ法で測定した結果では，骨格筋におけるカテプシンB及びHの含量
結果は極めて弱く，腎臓の約1／10及び1／27であった．

患者擢息筋切片をHematoxylin−Eosin染色及又，正常な骨格筋細胞は抗力テプシンBあるいはびGomori−Trichrome法で染色したところ，筋線H抗体で殆んど染色されず，わずかな浸潤細胞が経の大小不同，問質の増加，中心核の増加などの染色されるのみであった．ヒトにおける本症例に筋病変と共に，内容に塩基好性物質をもついわゆ

おいてもカテプシン，TPIいずれも骨格筋のサイ

ふRimmedvacuoleが観察された．そこで抗力テ′′■■シンB−Fab′一ベルオキンダーゼ複合体を用いトプラズムはbackgroundレベルの染色であり，Rimmed vacuoleのみが抗力テプシンB抗体及

ごり川一を直接法で免疫組織学的染色を行った結果

び抗力テプシンH抗体によって濃染された．このか図2に示されている．筋肉にみられるRimmed

結果はRimmed vacuolesが，リソゾーム由来でVaCul）leが強く濃染されており，筋細胞そのものあることを強く示唆している．塚越ら6）はDistalはbackgroundレベルの染色しかみられない．低倍率でみると，小さなものから大きなvacuoleまmyopathyでカテ70シンB

で殆んどすべてのRimmed vacuolesはカテプシ

medvacuoleがactiveなlysosomeであり，本症＆

L活性を含む多くのリソゾーム酵素活性の上昇を認めており，Rim−

−272−

∵
Rimmedvacuolesの成因とチオール性カテF／．1
ンとの，関係は興味ある今後の課題と思われる．
今回の報告は一症例のみの検討であり，今後，多くの症例について検索を重ねると共に，Rimmed
vacuole中の内容物及びカテプシン群を電子顕微鏡及び免疫電子顕微鏡的に追求して，Rimmed
vacuoleと筋線維変性との関連を追求する必要があると思われる．
文献
図3

Rimmed vacuole型distal myopathy
におけるカテプシンHの局在．抗ヒト
カテフ○シンHFab

1）Towatari，T．，Kawabata，Y．，andKatunuma，
N．：CrystallizationandpropertiesofcathepT−ベルオキンダーゼ

sinBfromratliver．Eur．J．Biochem．102：

複合体を用いた免疫組織化学的証明

279，1979．

（×800）

2）Kirschke，H．，Langner，J．，Wiederanders，B．，
Ansorge，S．，Bohley，P．，andHanson，H．：
CathepsinH：Anendoaminopeptidasefrom
ratliverlysosomes．ActaBiol．Med．Germ．
36：185，1977．
3）Kominami，E．，Bando，Y．，Wakamatsu，N．and
Katunuma，N．：Differenttissuedistributions
oftwotypesofthiolpr・Oteinaseinhibitorsfrom
ratliverandepidermis．J．Biochem．96：1437，
1984．
4）Ishikawa，E．，Imagawa，M．，Hashida，S．，

図4

Rimmed vacuole型distal myopathy
におけるチオールプロテアーゼインヒ
ビターーα（TPトα）の局在．抗ヒト
TPI−αFab′−ベルオキシターゼ複合体を用いた免疫組織化学的証明（×800）

Yoshitake，S．，Hamaguchi，Y．，andUeno，T．：
EnzymeJabelingofantibodiesandtheirfragmentsforenzymeimmunoassayand
immunohistochemicalstaining．J．Immunoas−
Say4：209，1983．

の筋変性がvacuoles内で進行している可能性も

5）Imagawa，M．，Yoshitake，S．，Hamaguchi，Y．，

考えられる．しかし，活性なプロテアーゼをもつ

Ishikawa，E．，Nitsu，Y．，Urushizaki，Ⅰ．，

非常に大きなrimmed vacuolesの成因は何であKanazawa，R．，Tachibana，S．，Nanazawa，N．，

ろうか．肝臓ではAntophagievacuolesの形成とandOgawa，H．：Characteristicsandevalua−

退縞は極めて速く，約10分の半減期で代謝回転しtionofantibody−horseradishperoxidaseており，そのことは活発なタンパク分解を反映しCOnjugatepreparedbyusingamaleimideている．従ってリソゾームのチオール性カテプシ

compound，glutaraldehydeandperiodate・J・ンを阻害するとvacuoles中のタンパク分解が抑AppliedBiochemistry4：41，1982．

制され，非常に多数の又，互いにゆ合した大きな

6）塚越康，松本春秋，佐野元規，石浦章一，杉vacuolesが形成される7）．しかし，本症ではカテプ

EB秀夫：Distalmyopathyの臨床的，形態学的

シン活性が抑制されているという証拠はない．

検討と1ysosome酵素活性「筋ジストロフィー−273−

症の発症機序に関する臨床的研究（三好姓），昭Appearanceofautolysosomesinratliverafter

和58年度研究報告書，1984，p．190．

leupeptintreatment．J．Biochem．91：1485，

7）Furuno，K．，Ishikawa，Tり

and

1982．

Kato，K．：

ー274−

37）白血球放出因子による筋崩壊機構の研究

君
研究協力者

田

孝

彦＊

松

田

修

一事

大

石

京

子■

松

田

享

子■

清

水

公

一＊

発熱，敗血症，外傷，火傷等に伴って著明は蛋で報告する．

白分解が生じる事が従来より知られていた．Gold−

実験方法

bergらはE．coliendotoxinをラットに注射した
場合，発熱に伴って骨格筋蛋白の分解が冗進する

ヒト白血球発熱物質はほぼDinarello等の方法

が，蛋白合成速度には変化のない事を報告していに従って作成した．即ちヒト末梢血よりFicol卜る．そうした発熱ラットの骨格筋を わ了 がffr0 で

Hypaque gradientの変法によって附着性の単球

370Cでインキュベートしても蛋白分解の加速状態が持続しているという．またプロスタグランデ

を待，それらを1時間加熱処理したstaphylococ−
cus albusにより刺激した後24時間インキュベー

ィンE2及びF28とアラキドン酸は骨格筋の蛋白トして培養上澄を得た．実験の一部ではこの培養分解を克進させ，この効果はインドメサジンやチ上をより発熱物質を分散するため同様にDinare1−

オール・70ロテアーゼ阻害剤であるロイペプシン

10等の方法に従って濃縮の後カラムにかけた．カあるいはEp475によって抑制されることから，おそらくリソゾーム内の蛋白分解を活性化すること

ラムはセファデックスG50ファインを予め0．1％ポリエチレングリコールを含む0．9％食塩で平によるのだろうと推測されている．
一方白血球由来の発熱物質は，視床下部におい衡させたものを用い，約15，000daltonのフラクシ
ョンを得た．この標本をPAG電気泳動にかけクてアラキドン酸放出を刺激することでプロスタグ

ーマシー・ブリリアント・ブルーで染めると3本ランディンの合成をもたらし，プロスタグランデのバンドを示す点はDinarello等の報告に一致し

ィンE2がより直接的に視床下部発熱中枢を刺激して発熱効果をもたらすと考えられている．こうた．しかし彼等が最良の方法としている発熱物質

した白血球由来の発熱物質はendogenous
pyrogenあるいはleucocytic pyrogenと呼ばれロマトグラフィーにかける方法はとらなかった．
また標準的IL−1試料として一般的なP388Dl株

るが，近年マクロファージより分泌されリンパ球より同様に培養上澄を得，一部は上記の方法に従

T細胞の増殖を誘導する因子として確立された

い精製を試みた．

に対する家兎抗血清を作成し，アフイニティーク

こうして得たIL−1標本あるいは白血球発熱物

インターロイキン1（IL−1）とほぼ同一物質ではないかと考えられるようになってきた．本研究で質のIL−1力価は，それらによるpeanuts agg−

は，IL−1あるいは白血球発熱物質が筋組織に与えlutinin非凝集性胸腺細胞（PNA一細胞）のレクる効果を形態学的に検索する予備実験として，ど乃

チン非存在下での増殖誘導能により測定した．発∽偏りの骨格筋にそれらが直接作用して筋蛋白分

熱物質としての力価は，一般に用いられる家兄に解の冗進をもたらすことを示す実験結果を得たの対し1時間後に生じる発熱効果により判定した．
IL−1あるいは白血球発熱物質の筋組織に対す＊国立療養所宇多野病院臨床研究部

る作用は，幼若ウイスターラットのヒラメ筋及びー275−

長屋母指伸筋をGoldbergらの方法によりインキュ

表2

ベートして調べた．Krebs−Ringer bicarbonate

Effect of humanleucocyticILlonprotein
degradationinrat

pufferに筋中への拡散を冗めるため5mMグルコ

Proteinsoleusmuscle■proteinNet

protein

Synthesis Degradation De9radationl（nmol tYrOSine′mq muscle′ hour）

ース，0．1単位／mlのインスリン，血中レベルの5
VlthIL−1★●倍のbranchedアミノ酸を投与し，30分間プレイ

Vithout

ンキュベートしたのち，緩衝液で充分透析したIL−

0．225

土

0．047

0．975

土

0．1日

0．750

土

士

0．026

0．503

土

0．048

0．2，5

土

0．037

＋0．472士

0．136＋0．455

土

0．108

王L−1●●0．208

Difference

十0．017Not1あるいは白血球発熱物質を，多くの場合0．5

土

0．028

（941〉
519nifieant pく0・01

t values are presented aS mean＄
暮■ n ＝10 musele sampleS

rabbitpyrogendose／mlとして投与し，さらに2

0．113

（15小目
p＜0・001

土S．E．

〜3時間インキュベートした（表1）．
表3

表1Muscleincubation withIL−1

protein degradationin rat soleus muscleH
山t．肌t ht■rot●1；1託qr■d■tlon

1・Soleus or extensor digitorumlongus muscles
Were dissected from male Wistar rats（60−809）．
Contralateralmuscles

werelユSed

for

Effect ofindornethacin onIL−lLinduced

lndαmethacin

工ndometh cci Inhibition（ml tyroSine／mq MuSCle／3
岨th Iも−10．661土0．125

Without0．286

量0．261土0．017

control

experiments．

工ムー1

0．042

0．269

士

hour）
−0．400 土 0．108（−611i pく0．001）

0．05】

not significant

2．Preincubated at370c for30zninutesin1．5ml
Stlmulation O・357士0．10 日◆
f1251i pく0．001）

Of Z（rebs−Rin9er bicarbonate buffer containing
5mH glucose．0．1unit／ml ofinsulin and fivetimes the normal plasma concentration of
branched−Chain aLnino acids，and equilibrated
Vith S亀。arbon dioxide and95も0Xygen・
3・Incubated vith工い1（1to2rabbit pyro9en
doses per milliliter）foヱ・3●
crude ェムーl from p】88DI
H Values are preSented aS mean与●★暮れ 岩6 柑Cle 8叫leS

not s的nificant

土

S．E．

を示した（表2）．ラベルしたフェニルアラニンのhours．

とり込みで筋の蛋白合成をみても，IL−1投与後蛋白分解あるいは合成はインキュベーションのに変化はない．また筋中のテロシン量も変化して間に1mg湿重量当りの筋組織よりとり込まれた，いないので筋培養液中のテロシン量の増加は，細あるいは筋組織より放出された，ⅠunOle単位のチ

胞内アミノ酸プールの単純な漏出の冗まりによるロンン量で表わした．また白血球発熱物質の筋組
織蛋白分解冗進の作用機序におけるプロスタグラ

ものでないと言える．チロンンは骨格筋中で合成の分解もされないから，IL−2あるいは白血球発

ンディンの役割を間接的に知るため，3×10￣6M

熱物質の実質の蓄積は筋細胞蛋白の実質の分解を濃度のインドメサジン投与が蛋白分解冗進に与え反映していると言える．

る影響をみた．

切り出したラット筋の蛋白分解速度は筋肉の由
来するラットの個性差の影響を受けることが予備結果

実験で示されたので，各実験の対照は実験に用いヒト白血球由来の白血球発熱物質あるいはIL−

た筋の村側肢より得たものを用いた．

1とP388Dl株由来のものを用いた場合を比較

3×10￣6M濃度のインドメサジンを加えた場

すると，ともに筋蛋白分解冗進作用を有していた合上記のIL−1あるいは白血球発熱物質の蛋白分が，培養上澄で較べた時には後者の方がより活性

解冗進効果は全く抑制され，それらを投与しないが低い傾向を示した．darkmuscleであるラット

対照群に近い蛋白分解を示した．その抑制率はイヒラメ筋とpalemuscleであるラット短錘指伸筋

ンドメサジンを加えない場合の−60％であり有意とでは実験結果に有意の差はない．

である（表3）．

ラット骨格筋をIL−1あるいは白血球発熱物質で処理すると，蛋白合成は変化しないが，蛋白分考察解の元進がみられ，実質の蛋白分解でみるとそのIL−1あるいは白血球発熱物質はIL−1として差はより著明で，StudentpairedTtestで有意差のT細胞増殖刺激効果と発熱効果でほぼ同一のー276−

共通作用を有しているのみでなく，筋蛋白に対しあるなら，本研究，Goldberg等の報告を総合する

分解冗進作用を有することが，わ 〝わ和でのラッと，蛋白分解と発熱中枢刺激はともにプロスタグ

トのpalemuscleおよびdarkmuscleを用いた実験で示された．こうした筋蛋白分解冗進作用はイ

ランディン合成冗進を介して発現していることが強く示唆されるといいうる．

ンドメサジンの投与で抑制され，白血球発熱物質
文の発熱中枢への作用がインドメサジンで抑制され献抗発熱効果がみられるのと共通の機序の働いてい1）Baracos，V．，Rodemann，H．P．，Dinarello，C・A・，ることが示唆された．発熱物質は視床下部でアラ

andGoldberg，A．L．：NewEngl．J．med．，308：

キドン酸放出を刺激することでプロスタグランデ

553−558，1983．

ィンE2合成を冗め，発熱効果をもたらすと考え

2）Dinarello，C．A．，Renfer，L．，andWolff．：S．M，：られている．我々の実験結果は最近Baracos等がproc．Natl．Acad．Sci．USA，74：4624−4627，

報告したものと大略一致し，それを確認したもの

1977．

である．Goldberg等はアラキドン酸，PGE2や3）Goldberg，A．L．martel，S．B．，andKushmerick，

F28，カルシウムイオノフォア等による筋蛋白分解

M．J．：meth Enzymo1．，39；82−94，1975・の加速を報告しており，・そうした効果はいずれもリソゾームのプロテアーゼインヒビターにより阻

4）Rodemann，H．P．andGoldberg，A．L．：J．Biol，

止されたとのことである．そうした結果が事実で

一277−

Chem．，257：1632−1638，1982．

38）実験的タロロキンミオパテー−Autolysosomeの形態学的・生化学的検討
杉 田 秀 夫■
研究協力者

佐

野

元

昨年より我々はrimmed vacuole（RV）を伴う

規■

石

浦

章

一■

チーが発症していることを確認したラットを用い

distal myopathyのモテリレとして実験的にタロロて以下の実験を行った．

キンミオバナーを作成し，組織学的，生化学的に検討してきた1）．今回はタロロキン長期投与によラットの肝臓を生理食塩水で充分濯流して，血液成分をできるだけ除いた．肝臓をとり出してり出現するautolysosomeの性質について主に生Potter−EIvehjem typeのホモジナイザー中で手化学的に検討したので報告する．

でmildにホモジナイズして，肝細胞をsubce1−
1ularfractionation2）した．各分画のリソゾームプ

方法

ロテアーゼ活性を測定し，次にリソゾームミトコ

実験的タロロキンミオバナーの作成方法は昨年

ンドリア分画をPercollによる密度勾配法3）でリ

同様，雄のウイスター系ラット体重約200gにタロ

ソゾームを分社し，比重及びプロテアーゼ，酸フロキン2燐酸を連日投与することにより作成した．

オスファターゼ活性を検討した．

60日間以上投与後，ひらめ筋にRVを伴うミオパ

Percollの比重はPharmacia社の密度カラー

表l Ly■○■○●〇m▲lprotM●▲￠thIt暮●●lnllY●r

EnZ ym ●￠■th●
p暮In 8 ■
L

tm U′
m oI

e■
th●
p●
ln B

○
○
ntr01

￠
hloroqllln●■
H ho m 0 0●
n tt●

．
24 5土
0．
0さ
2

8 1鮎0 ．
040
0．
8 8 5土0．
000 0．

0．
43 弘0 ．
1 1㌔ 0 ．
3 8 2±
0．
0 00

0．
4 1む0 ．
0 04

nu￠
l●
■
l Il■
Ctlo n0．
4 2 7出し0 00

0．
7 18 ±
0．
0虚 0．
20 触0 ．
14 5

0．
3 2 8土0．
10 2 0 ．
5 3 1量0．
117

0．
4 40 土0．
08 8

0．
4 4 む0 ．
125

1．
0 蝕0．
7 ㌔■0 ．
0 00 0．
0 72

1．
0 7土
0．
1 ■
■

ty ■
○
暮
O nl■
暮
Ir■
￠
tl0 11 0．
07 5 土
0．
3 04

2．
40 ±
0．
2

0011tr0 1

・￠
■
th●
p●
lll H

￠
htoroq山n●

○
○
ntlOI

d M o ro quln●m l010●
01
れ■I IrtCtlon

0．
20 0土
0．
080

0．
0 70土
0．
023 0．
1 13土
0．
0 04

0．
04 8士
0．
020 0．
7 4 0土0．
122

0．
7 1車0 ．
0 08

●
UP ●
ln■
t●
nt

．
0 10 土
0．
008

0 007
0．
02 0畑．
0 1 i 0 0 18土

0 0 0 0量0 02

0．
6 8 2士0．
1t ㌔

0．
4 3 0畑．
11 0■Pく0．05lU＝1mI010m01●′mh■■■く0．01＊国立武蔵療養所神経センター疾病研究第一部

ー278一

M●■n士S．D．

叩OC川C・aCtl州yU／mgI

叩小川恨日和tlvlty川／mgl

1untt＝1mlcromolo／mh
l：1mU／mg

図1

ー279−

マーカービーズを使用して定量的に測定した．

だ，myelin figure様の構造をしたautophagic

Cathepsin Bの活性はbenzyloxycarbonylLar−

vacuoleであった（図2）．これらのautophagic

ginilrarginine−4−methy1−7−COumarylamide（Z−vacuoleには酸性加水分解酵素が存在することよ

Arg−Arg−MCA）を基質としてpH6．0，Cathepsin

りautolysosomeであると判定される．

B＆Lの活性はZ−phe−Arg−MCAを基質としてpH5．5で，CathepsinHの活性はArg−MCAを用

2）リソゾーム内pH
FD−リソゾームミトコンドリア分画をpH7．0

いてpH6．8で測定した4）．

の測定medium中に入れて外液のpHを急速に1より測定した．fluorescein−dextran（FD）の螢光

M−tetramethylammoniumhydroxideで6．0に変化させたとき直ちに反応して変化する螢光強度をがpH dependentに大幅に変化することにより，リソゾーム外に放出された螢光量（1）の指標とする．

次にリソゾーム内のpHを大熊らの方法5）・6）にfluoresceinの螢光強度の変化から1）ソゾーム内のpHを推定した．
ラットの腹腔内にFD−70（fluoresceindextran
分子量70，000）を200mg／kgの割合で注射し，12時間後にSacrificeしてsubcellularfractionation
によりリソゾームミトコンドリア分画をとり出して測定medium中で螢光強度の変化を測定した．
結果肝細胞の各分画におけるリソゾームプロテアー
ゼ活性では，リソゾームミトコンドリア分画で正常コントロールに比較して有意の上昇が見られた．
とくにCathepsinBに関しては，正常コントロー
ルの約4倍と著明に上昇していた（表1）．マイク
ロゾーム分画を遠沈させた後のSupernatant（細胞質分画）にもやはりタロロキンミオバナー群でtionされたリソゾームがsubcellular fractionの．溝操作の段階で壊れやすいためであろう．

00uOOのOJOコに上昇が見られたが，これはタロロキンでinduc−

1）Percollによる密度勾配
Cathepsin B＆Lとacid phosphatase活性のpeakが一致しているfractionがリソゾームフラ

クションと考えられるが，正常コントロール群では比重1．12g／mlにpeakが存在していた．一方
タロロキンミオパテ一群ではpeakは比重1．06〜

0

2

4

較して著明に上昇していた．このCathepin B＆

Lの活性のpeakと一致したfractionを形態学的に観察すると，電子顕微鏡で筋細胞及び肝細胞に見られるようなcytoplasmic debrisをとりこん
−280−

．8

10

0

2

E畑dy＄OSOmdRD¶脚的￠On￠ObH7・0）く鴨＝川h打dySOSOm如RD∬○駈〇m冷血H7・㊥Jl蒜」lH2）
ln廿dy＄○＄OmdFDm船rO脚CO

1．07g／mlと比重の軽い方へ移動していた（図1）．
CathepsinB＆Lの活性は正常コントロールに比6ThlO（鵬＝（＄■1かく2I

FD¶uoro＄￠OnCObH7．の陶Gtt。n。＝血冊080m。＄こく2）〝這Vくル＋100

q＝V仙）V（Pl）＋120

l＝両Vと＄叩tOVOILJrrDat．＄

1仙恥100V∽

Vと○○鷹rdY01urnoatV

図3

考

Triton XTlOOでリソゾームを完全に破壊したと案き得られる螢光強度より全FDの螢光量を求め（1）

タロロキン長期投与により筋細胞にはauto−との差からpH7．0におけるリソゾーム内の螢光

phagicvacuoleの出現と，筋肉のホモジネートで量（2）を推定する．次に求めるべきpHにおけるFDの螢光量を実際に観測される螢光強度と（1）とCathepsinB＆Lの著明な上昇，筋構造蛋白の減少が見られた（既報）．肝臓では肝細胞に同様にの差で求め（2）との比（ratio）からリソゾーム内

autophagic vacuoleの出現があり，このauto−

pHをstandard曲線を用いて推定する（図3）．

phagic vacuoleには正常の］）ソゾームよりも高い活性をもつ酸性フ○ロテアーゼが存在していて，FDの各pHにおける螢光強度をpH7．0に対する比（ratio）であらわしたstandard曲線よりpHを測定したところタロロキンミオパテ一群では正autolysosomeであることが確認できた．肝細胞常コントロール群と差がなく，リソゾーム内pH

vacuoleはやはりautolysosomeであると考えらに上昇が見られなかった．タロロキン50mg／kg

れ，高いチオールプロテアーゼ活性をもつものと1回のみの注射の場合にはpH5．04と上昇してい思われる．

た（図4）．

の所見より推定すると筋細胞内のautophagic

タロロキンは従来よりlysosomotropicdrugとしてリソゾーム内pHを上昇するといわれてきた7）．しかしタロロキンミオパテ一群ではリソゾ；l；u〇三〇23−●b三〇三一■−〇三〇；中正

5．0

0．O IIH

R ■tloC 0 11tl0 l

PH0 ．
0 8 7 ±0 ．
0 04

pH

4．
7 1 土0 ．
12

0．
0 87土0．
0 08

pH 4．
00 土0．
10

0．
0 5 7 土0 ．
004■

pH 5．
0 4士0．
0 2■

nコ
コ8

C hIo ro 叫 In ●h h l0 1110 I
れ＝6

C h I0 10 q 山… h C Ut●．
▲Itor l I両
n ＝5

★pく0．01

ーム内pHは変化がなかった．したがって長期投

3）Kominami，E．，Hashida，S．，Khairallah，E．A．

与した場合にはタロロキンのpH上昇効果に対し

etal：Sequestrationofcytoplasmicenzymesてresistantなautolysosomeが出現するものとin an autophagic vacuole−lysosomalsystem

思われる．このようなリソゾーム内では酸性プロ

inducedbyinjectionofleupeptin．J．，Biochem．

テアーゼ活性が高く，pHが上昇していないこと

Chem．，258：6093，1983．

より蛋白分解を充分行なえる環境にあるのであろ

4）Barrett，A．J．：Fluometricassaysforcathep−

う．RVを伴うdistalmyopathyでも酸性プロテ

Sin B and cathepsinH with methylcoumar−

アーゼ活性の高いautolysosome内で筋蛋白が分解されているものと推定される．

ylamide substrates．Biochem．J．，187：909，
1980．

5）Ohkuma，S．＆Poole，B．：Fluorescenceprobe

文献measurement of theintralysosomal pHin

1）杉田秀夫，佐野元規，石浦章一，荻原弘一：実
験的タロロキンミオバナーLRimmed vacuoleを伴う違位型ミオバナーとの関連−．厚生省「筋living cells and the perturbation of pH by
Various agents．Proc．Natl．Acad．Sci．USA，
75：3327，1978．

ジストロフィー症の発症機序に関する臨床的研

6）Ohkuma，S．，Moriyama，Y．＆Takano，T．：

究」（三好］姓）昭和58年度研究報告書，1984，p．

Identification and characterization of a

195．

proton pump onlysosomes by fluorescein2）Appelmans，F．，Wattiaux，R．＆DeDuveC．：
Tissue fractionation studies5：The assoca−
tion ofacidphosphatasewithaspecialclassisothiocyanate−dextran fluorescence．Proc．
Natl．Acad．Sci．USA，79：2758，1982．
7）DeDuve，C．，De′Barsy，T．，Poole，B．etal

Ofcytoplasmicgranulesinratliver．Biochem．

Commentarylysosomotropic agents．Bio−

J．，59：438，1955．

Chem．Pharm．，23：2495，1974，

ー282−39）Duchenne型筋ジストロフィー症の筋変性壊死機構に問する形態並びに生化学的検討
荒 木 淑 郎●
研究協力者

内

野

誠■

でいかなる出現頻度の変動を示すのか，またOFは じ め にDuchenne型筋ジストロフィー症（DMD）の生と密接な関連を有するNF及びRFはいかなる検筋中には壊死筋線維（NF）や再生筋線維（RF）（OF）と呼経時変化を示すのかを明らかにするため，幼児期
より成人にいたる各年齢のDMD生検筋について

ばれる円形のやや肥大した，HE染色初め各種組

形態学的に検討を加え，また同時にfrozen sec−

織化学染色で顔染する筋線経が高率に認められ，tionによる筋構造蛋白の経時的変化について検DMD筋組織所見の特徴の一つとなっている．

索を行ったので報告する．また前回singleOFの

我々は昨年の本披会議で，このOFの病的意義に

筋構造蛋白分析の際，対照としてDMD生検筋中

ついて生化学的に検討するため，DMD生検筋かの正常横紋構造をもつ筋線経を用いたが，今回正らsingle fiberの形で分散したOFの筋構造蛋白

常人を対照にして再検討したので，その結果につの分析を行い，OFの一部は明らかに特徴ある筋

いても述べる．

に混じて，いわゆるopaque fiber

構造蛋白の変化を有する病的筋線経である可能性が高いことを報告したl）．

対象と方法

今回は， 壊死前段階 の筋線経としてのOFがDMDの比較的病初期より末期にいたる臨床経過

対象は4−24歳のDMD患者12例で，筋生検は大半は膵腹筋より行った（表1）．生検筋は組織化

表l Percentageofopaqueandnecroticmusclefibersin12
biopsies ofDuchenne musculardystrophy

霊：7（禁）慧d 憲二芸，霊慧（別崇慧iて別8ieePST Gastrotnemius

139

15（川．3）12（2．7）1306

129（9．9）12（0．9）

13

Tibialis a鵬

130℡

37（2．8）6（0．5）

4

15

Gastro印emiu5tlt川

153（12．日

l（0．3）

5

川

GaStrOCnemius618

26（3．1）5（0．7）

6

16

Gastroenemius

伯4
11日
，57
川甲

1
2

1

3

T

H

GaStO￠nemius

6（1．3）
t（8．2）‖（8．8）0（0）25（2．6）3川．3）
91（8・，） 3（〇・3）8日

GaStrOCnennius

9
柑

20
20

Gastro印ennius
GaStrOtnemius

2t2

11（l．5）

0（￠）

II
12

21
糾

GaStrO伊emjus
Gastro￠nemius593

日（3．2）

0（○）

220

轟（3．6）¶火山，591＊熊本大学医学部第一内科

ー283−

引用（6．6）0（￠）

1＄（0．5）

学染色（HE，Gomori，ATPase染色）及びacridi−
ne orange染色（螢光顕微鏡用）による形態観察

頻度及びacridine orange染色陽性筋線推頻度共に比較的近似した値を示し，17歳頃までは6〜12で，各生検筋に含まれる全筋線維数に対するOF，％程度にみられたが，17歳前後から急速に減少し，

NF，並びにRFを数えて，それぞれの頻度を百分

20歳以降は殆んど認め難くなった（図1）．frozen
sectionによる筋構造蛋白の経時的変化について率で算出した．なおRFの検索にあたっては
ATPase染色（pHlO．2，4．6，4．3）によるtype2

は，一次元電気泳動において年齢と共に55，000

C線維並びにacridine orange染色で筋線維全体が橙色に染色される筋線経を指標に用いた2），3）．

daltonprotein（desmin）の含量がactinと比較して相対的な増加を示した．その他の成分についてまた組織化学染色に使用したものとseriesのは一定した変化は認めなかった．また二次元電気

frozen sectionを用いて，一次元及び二次元電気泳動でも一次元と同様にfrozensectionではdes−泳動による筋構造蛋白の分析を行った．Single

minのspotが比較的明瞭に認められた（図2a，2fiberによる筋構造蛋白の分析は既に発表した方b）．

法1）によって行った．

singleOFの分析では，正常対照（12歳男子，26歳男子）との比較再検討で，正常対照群との間に結果差がないグループ（OFa）が33％，desminの減少（220〜1，309：文＝800）で，＿OF出現頻度は6．6％を示すグループ（OFbl）が36％，α−aCtinin及びdesminの有意な減少を示すグループ（OFb2）が（1．3−12．8），NF出現頻度は0．5％（0−2．7）で31％に認められた（表3）．

DMD12症例で検索した筋線経総数は9，598本あった（表1）．また再生筋線椎はATPase染色考によるtype2C線維頻度で8．3％（0−11．5），

察

acridine orange染色陽性線維頻度で6．4％（0DMDにおけるOFの出現頻度は他の神経・筋〜7．0）であった（表2）．OF，NF，及びRFの出疾患に比較して有意に高く4）・5），DMD筋組織所見

現頻度を経時的に観察すると，OFは症例によりの特徴の一つとなっている．その病的意義につい変動するが，年齢による増減は明らかでなく，平
均6．6％に認められた．NFは4〜7歳の若年で高ては，筋生検過程や標本作成過程で生じた単なる人工産物とみなす意見や，同じ人工産物にしても率（0．9〜2．7％）にみられたが，年齢が長ずるに従筋線経に内在する何らかの脆弱性が基盤にあり，って著しく減少し，17〜20歳では0．3−0％となっそれに機械的外力が加わって生じるた．一方RFはATPase染色によるtype2C線推artifacts と考える意見6），あるいはDMDの筋変

表2

Percentage oftype2C andAO positive fibersin DMO
musclesATPase stain

Case AgeNo．（years）

No．0t tibers

No．0fIibers AO positive
measured Iibers、；■（％）

一一

470

54（11．5）355

10日ト3）

362
397
213

60

0（8）

48

0（0）

83

1日．2）

糾

8（0）

2日（l．3）2799

1円（61）l133（7．1）‖636（l．9）

l

丁一

1

〇

2

21

1bb1

type2C（％）

︻コ▼

24Il川12T l川9measured

AGridine Orange stain

3173

1715

小sma＝fibers with strong bright orange fluorescense・−284−

120（7．0）25（6．9）日（6．1）
7日．8）

meaningful

l T

13

15181720

21（Years）

図l Change of the frequency of opaque，neCrOtic，and
regenerating muscle fibersin DMD muscles by age

N

7

11

15

16

17

17

20

24v

図2a Onerdimensional electrophoresis pattern of thebiopsied muscle of Duchenne muscular dystrophy−285−

性過程における初期変性像としてとらえる意
見7）〜10）などあり，今日なお一定の結論は得られていない．これまでOFについての研究は主として形態学的手法を用いて行われてきたが，我々はOFの病的意義について生化学的側面から検討するため，Singlefiberの形で分艶したOFc7）筋構造蛋白の分析を行い，OFの一部は特徴ある筋構造蛋白の変化を示すことを明らかにしてきた1），11）
ただ昨年の本姓会議では対照としてDMD生検筋中の正常横紋構造を有する筋線経を用いたので，今回新たに正常対照を用いて再検討を行い，基本
的には昨年報告した内容と同様の成績を得た．すなわち検索したOFの中に，正常対照と殆んど差がないグループの他に，desminの有意な減少を示
すグループ，さらにαraCtinin及びdesminの有

3I一・●

17y

意な減少を示すグループが確認された．この分析結果については二通りの解釈が可能である．一つは筋構造蛋白の変化を認めないものは人工産物的

図2b Two−dimensional electrophoresisに生じたいわゆるhypercontracted fiberで，筋patternOf the biopsieb muscles of

構造蛋白の変化を示すものは変性過程にある病的Duchenne muscular dystrophy

筋線維であるとする考えで，もう一つは埜中ら10）も指摘しているようにDMD生検筋を連続凍結切片で組織化学的に観察した場合，一本の筋線経にOFの部分や，壊死に陥ってghost状になった部

表3

Percerrtage of myofibrillar proteinsin opaque andcontrol muscle fibers

Numb8rOI

MYOSinSamplos

07訂0

07粁

19

21

0冒訂e

18

controげcontro川b

55000
α一入dinin

PrOtOInH chain

17・9±7・611・0±2・14・1±1・0

20・9±7・3

9■1±1・51・7±0・6

19・1±5・0

4・6±1ナ●37

18．9±4・112，7±3・24215．4±2・3

TN−T
＋
TM

d油OTI Actin

…

Light

（：hainl chain2

8・2±2・313恨4・616・3±6・7

31・7±3・8‥8・3±3・211・8±3・0‥■16・5±5・80・8±0・84・9±1・3・…

9・4±2・328・9±7・2

Light■30・8±7・0

27・0±5・6

3・8±一・0■NormallY Striatod muSClo罰b8rShom Duchonne PatlOntS・bNormal cくMtrOIs−286−

9・7±2・712■7±3・2

23・0±3・8・…・く・P＜0．001．・三・P＜0・01tConto−】vsOpaquOa・bl・b2・Contro川

7・4±2・813・3±4・9

M的n±S・D・・

24・0±6・6：■14・8±3・4

8・8±2・319・6±2・920・0±3・9

分，あるいは正常の染色性を示す部分とseg−
mentalに種々の変性段階のものが認められるとDMDにおいて筋萎縮が進行する背景には筋線経

ころから，筋構造蛋白もそれを反映して，殆んど正常に近いものから，特徴ある筋構造蛋白の変化

与するものと思われる．この点に関してKarpati6）は次の3つの因子を推定している．1）進行性の結を示すものまで種々の変性段階のものが観察され，合織増加により，筋線経の 窒息 状態がおこる．

OFa→OFbl→OFb2は一連の変性過程を表わす

2）壊死部を補修するための再生活動が障害されものとも考えられる．ただSingle fiberでの検索

る．3）筋再生の反復の結果，著しく筋鞘核が減少

結果と，経時的なOF，NFの出現頻度の推移を合し，筋線経の正常な営みができなくなる．

の変性・壊死に加えて，その他の未知の因子が関わせて考えると，前者の可能性がより高く，形態

これらの問題はDMDの筋萎縮のメカニズムを学的に同じOFとしてとらえられる筋線経に少なく考える上で，筋変性・壊死の問題と共に今後検討

とも二種類の質的に異なる筋線椎が含まれている

していかなければならない重要な課題と考えられものと考えられる．いずれにしてもsingle fiber

る．

での検索結果より，OFの一部にみられたα一

今回の検索で，経時的にみた場合，OF，NF，

actinin及びdesminの減少はこれらの蛋白がRFはそれぞれ特有の経時変化を示し，必ずしも

calciumaCtivatedneutralprotease（CANP）に
sensitiveな蛋白であ り，基本的にはCa十十三者が平行した動きを示さなかったが，前述したようにOFには質的に異なる少なくとも二種類の筋線経が含まれている可能性があり，今後人工産

ionophore12）やCANP13ト18）も用いたin vitroの実験結果と類似した変化であるところから，OF

物的に出現するOFとの形成にはCANPに代表されるある種のCal−区別した上で再検討する必要があり，今回の結果

ciumdependent proteaseの関与が推定された．

は必ずしもOF→NF→RFの筋変性・再生サイ

壊死前段階の病的OFを一方，frozen sectionでみられた筋構造蛋白のクルを否定するものではない．更に症例数を増し

変化はmassとしての変化で，必ずしも個々の筋て臨床経過を含めた筋萎縮進行パターンの特徴に

線経における筋構造蛋白の変化は反映していない．

ついて，詳細な検討が必要である．

desminの相対的増加はRFの増加によるものと推定されるが，形態学的にみられるRFの経時変

ま

と

め

化と必ずしも一致していないので，今後泳動パタ

4−24歳のDMD12例について，各年齢別のーン上はdesminと考えられるspotがdesminか

OF，NF，及びRFの出現頻度を検索し，併せて否か抗desmin抗体による確認を含めて更に検討

frozen section及びsingleOFによる筋構造蛋白の分析を行った．生検筋中のOF頻度は年齢によが必要である．
これまでDMD生検筋中のNFが病初期に比る差は明らかではなく，平均6．6％に認められ，

較的多数観察され，末期では少なくなる傾向にあ

NFは若年で高率（0．9−2．7％）にみられたが，年ることは一般的印象としては知られていたが，実際に臨床経過に伴うNFの出現頻度の推移につ齢が長ずるに従って著しく減少した（0−0．3％）．
RFは17歳頃までは6−12％に認められ，それ以いて検討した報告は殆んどなく，またNFと密接

降は急速に減少した．frozen sectionによる構造な関連を有するOF及びRFについても経時的変蛋白の分析では，年齢と共にdesmin含量の相対化についての検索は殆んど行われていない．今回の調査でNFは若年では比較的高率に出現し，年的増加がみられた．single OFによる分析では，33％は対照と差がなく，36％はdesminの減少を，

齢と共に減少して，20歳以降は殆んど認められな31％はα−aCtinin及びdesminの減少を示した．

いという結果が得られた．
NFの減少にもかかわらず．全体の筋線推数は

DMDの筋変性壊死機構におけるOFの役割を中
心に文献的考察を行った．

年齢と共に減少し，筋萎縮は確実に進行しており，
−287−

文
1）内野

9）Chou SM，Miike T，Crosby W，Amato s：

献誠，荒木淑郎，吉田理，楢川和利：UltrastructureofOpaquefibers（OFs）inDuchenne型筋ジストロフィー症におけるopa・

Duchenne muscular dystrophy（DMD）．

que fiberの筋構造蛋白に関する研究（第2報）．

Neurology（Minneap）29：594，1979．
10）埜中征哉，杉田秀夫：進行性筋ジストロフィー

臨床神経1985，in press．
2）MiikeT，TamariH，OhtaniY，NakamuraH，Matsuda I，Miyoshino S：A fluorescent
microscopy study of biopsied muscles from

症の病理−Opaque線経を中心として−．神経進歩 24：718−728，1980．
11）内野誠，荒木淑郎，吉田理．植川和利：infantile neuromuscular disorders．Acta

Duchenne型筋ジストロフィーにおけるOpa−

Neuropath（Berl）59：48−52，1983．

quefiberの筋構造蛋白に関する研究．臨床神経23：706−710，1983．

3）NonakaI，TakagiA，Sugita H：The signi−
ficanceoftype2cmusclefibersinDuchenne12）Uchino M，Chou SM：Effects of calcium

muscular dystrophy．Muscle Nerve4：326−

ionophore，A23187

333，1981．

Ultrastructuraland biochemicalstudy．Proc

4）SchmalbruchH：Contractureknotsinnormal
and diseased muscle fibers．Brain

96：637−640，1973．

Japan Acad56：480−485，1980．
13）Suzuki A，Nonami Y，Goll DE：Proteins
released5）Boxler K，Jerusalem F：Hyperreactive

0n murine muscle．

frommyofibri1sby

CASF（Ca2十一

activated sarcoplasmic factor）and trypsin．

（hyaline，Opaque，dark）muscle fibersin

Agric BioI Chem39：1461−1467，1975．

Duchenne dystrophy．J Neuro1219：63−72，

14）Sugita H，Ishiura S，SuzukiK，ImahoriK：
Ca−aCtivated neutral

1978．

6）Karpati G：A review of the morphologiC

protease anditsin−

hibitars：invitroeffectonintactmyofibrils．

features and consequences of muscle cellMuscle Nerve3：335−339，1980．

necrosisin Duchenne disease；Clues to the15）今堀和友：CANPとE−64．神経進歩

pathogenesis．

．InternationalCongressSeries

434，Neurology（edbyJargerWAH，Bruyn

GW et al），Excerpta Medica，Amsterdam，
1978，p，117−131．

24：807−813，1980．

16）杉田秀夫，石浦章一：筋ジストロフィー症とプ
ロテアーゼ．神経進歩 24：821−830，1980．
17）NelsonWJ，TraubP：PropertiesofaCa■柵−7）SclmalbruchH：Segmentalfiberbreakdown

activated protease specific for theinter・

Withdefectsoftheplasmalemmaindiseased

mediate−Sized filament protein vimentinin

human muscles．Acta Neuropathol（Berl）

Ehrlich−aSCites tumor cells．EurJ Biochem

33：129−141，1975．

l16：51−57，1981．

8）Cullen MJ，FulthorpeJJ：Stagesin fiber18）NelsonWJ，TraubP：Proteolysisofvimentin

breakdowninDuchennemuscumardystrophy．

and desmin by the Ca♯−aCtivated protease

Anelectron−microscopicstudy．J NeuroISci

SpeCific for these

24：179−200，1975．

proteins．MoI Cell Bio13：1146−1156，1983．

−288−

intermediate filament昭和59年度研究班名簿

昭和59年度 杉田班 名簿
区

分

氏

所

名

姓

長

杉

田

秀

夫

幹

事

垂

井

清一 郎

寿

夫

藤

高

木

昭

事

荒

木

淑

虎 の 門病 院神 経 内科

：
旺

月

嗣

愛 媛大 学 保 健管 理 セ ン ター

啓

小

口

書 三夫

国 立長 野 病 院光

鹿 児 島大 学 医 学 部 第三 内 科
〒890

川

井

尚

臣

其

男

東 邦 大学 医学 部 第 四 内科

栗

原

照

幸

宮 崎 医科 大 学 第 三 内科

後

藤

幾

生

九州 大 学 医学 部 脳神 経 病 研 究施 設 神 経 内科

南

英

妃

授

03− 964− 12 11

助 教 授

03 −813− 3111

部

03 −588− 1111

長

（
2016）
教

授

0963−63− 1111

教授

0899−24− 7111

副 院 長

02627− 5− 1581

助 教 授

0992−64− 2211

講師

0886−3 1− 3111

教

授03−468− 1251

助 教 授

09858−5 − 1510

助 教 授

092−6 41− 1151

講師

0886− 31−3111

部

長075− 461−5 121

主任

03− 588− 1111

東 京都 目黒区 大橋 2−17−6〒8 89−16

木教

徳 島 市蔵 本 町 3− 18− 15

下

〒8 12

06− 451−0051

鹿 児 島 市宇 宿 町 1208−1

木

〒 153

授

長 野 県更 級郡 上 山田町 3200

徳 島大 学 医学 部 第一 内科
〒7 70

教

松 山市 道 後 樋 又 10−13〒389−08弘0423− 41−2711

熊 本市 本 荘 1−1−1

田

納

長

東 京都 港 区 虎 の 門2−
2−2

植

〒790

部

東 京都 文 京 区本 郷 2−1−1

熊 本大 学 医 学部 第一 内 科〒860

連絡 の 際 の 電話

東 京都 板 橋 区加 賀 2−1ト1

夫郎

け る地 位

大 阪市 福 島 区福 島1−1−50

順 天堂 大 学 医学 部 脳 神経 内科

〒105
監

所属 にお

地

東京 都 小 平 市小 川 東町 4−ト 1

猛〒113
運 営 幹 事名帝 京大 学 医学 部 第一 内科
〒173

佐

設

在

大 阪大 学 医学 部 第二 内科
〒553

尾

施

国 立武 蔵 療養 所 神 経 セ ン ター疾 病 研 究 第一 部
〒187

寺

属

所

宮 崎 県宮 崎 郡 清武 町 木 原5200

福 岡 市 東 区馬 出 3−1−1

徳 島 大 学 医学 部 附属 酵 素 研 究施 設
酵 素 化 学部 門
〒 770

君

田

孝

彦

徳 島市歳 本町 3−18 −15

国立療 養 所 字 多野 病 院臨 床研 究部〒 616

京 都 市 右 京区 鳴 滝 普戸 山町8

紫

芝

良

昌

沖 中記 念 成人 病 研 究所 −

庄

司

進

一

信 州 大 学 医学 部 第 三 内科

杉

村

公

也

名 古 屋 大 学医 学 部 第 一 内科

〒 105

〒 390

〒466
鈴

木

紘

一

東 京 都 括 区虎 の 門 2−
2−2

講

師

0263− 35− 4600

助

手

052 −741− 2111

部長

03 −823− 2101

松 本 市 旭 3−
1−1

名 古 屋 市 昭和 区 鶴 舞町 65

東京 都 臨 床 医学 総合 研 究 所 遺伝 情 報 研 究部
〒113

研 究 月

東 京 都 文 京 区本 駒 込3−18−22
−291−

区

：
旺

分

氏

月

所

名

属

施

所

設

在

名

所属 にお

地

け る地 位高瀬貞夫

東 北大 学 医学 部 脳 疾 患研 究 施 設脳 神 経 内科

高

守

正

治

金沢 大 学 医学 部 神 経 内科

田

代

邦

雄

北海 道 大 学 医学 部脳 神 経 外 科

〒980

〒920

〒060
田

辺

等

塚

越

中

西

中

村

晴

授

0762− 62−8 15 1

助 教 授

011− 711− 1161

副 院 長

0423− 23−5 111

教

授

03− 813−6 111

教

授0298− 53−3196

教授0859− 33− 1111

部

長0423− 41− 2711

助 教 授

0762− 62− 8151

副 院 長

09425−2− 2195

教授03−8 15− 5411

助 教 授

02854−4− 2111

教授0252− 23− 6161

教

授0726− 83− 122 1

研 究 員

0423− 41− 2711

助 教 授

045−971− 115 1

医長0434−22− 25 11

副 参 事

0423−25− 388 1

府 中市 武蔵 台2−6−1

雄筑波 大 学 臨床 医 学系 神 経 内科

臣教

札幌 市 北 区北 14条 西 5 丁 目

東京 医 科 歯科 大 学 医学 部 神 経 内科

〒3050222 −74− 1111

金沢 市 宝 町 13−1

康

〒113
孝

助 教 授

仙 台市 星 陵町 1−1

東京 都 立神 経 病 院〒183

連 絡 の際 の 電 話

東京 都文 京区 湯 島 1−5−45

茨 城 県新 治郡 桜 村 天王 台 1−1−
1

鳥取 大 学 医学 部 脳幹 性 疾 患研 究施 設神 経 病理 部 門
〒68 3

埜

中

征

哉

〒 18 7
福

原

信

義

渡

志●郎

萬

年

徹

美

邦

福 岡 県筑 後 市 大字 蔵 敷 515

東 京 大学 医 学 部脳 研 究 施設 神 経 内科
〒 113

野

金 沢 市宝 町 13−1

国 立療 養 所 筑 後 病院 神 経 内科〒833

水

東 京都 小 平 市 小 川東 町 4−1−1

金 沢 大学 医 学 部 神経 内科
〒 920

馬

米 子 市西 町 86番 地

国立 武蔵 療 養 所 神経 セ ンタ ー微 細 構 造研 究 部

東 京都 文 京 区本 郷 7−3−1

自治 医科 大 学 神 経 内科
〒 329−04

栃木 県 河 内郡 南 河 内町
大字 薬 師 寺 331 ト1

宮

武

正

新潟 大 学 脳研 究 所神 経 内科
〒951

茂

在

敬

司

大 阪医 科 大学 第一 内科〒569

高槻 市 大 学町 2−7

吉

田

端

子

国立 武 蔵 療養 所 神経 セ ン ター 疾 病研 究 第 四部

若

山

吉

弘

昭和 大 学 藤 が丘 病 院神 経 内 科

〒187

〒227
公 募 班 員新潟 市旭 町通 一 番 町757

中

野

今

治

井

四街 道 市 鹿渡 934−5

眞 一郎

東京 都 神 経科 学 総合 研 究所 神 経 生化 学

真 里子

自治 医 科 大学 小 児科

〒182
桃

横浜 市 緑 区藤 が 丘 1−
30

国立 療 養 所下 志 津病 院神 経 内 科〒284

堀

東京 都 小 平市 小 川 東 町4一ト 1

府 中市 武蔵 台2−6

〒329−04

栃 木 県 河 内郡 南 河 内町
大 字 薬 師寺 331ト 1

ー292−

研 究 月
講

師

028 54− 4− 2111

区

分

氏

公 募 ∃
旺 月

山

所

名
田

和

廣

属

施

所

設

在

名

所属にお

地

け る地位

大 分 医科 大 学 生理 学
〒 879−56

連絡 の際 の 電 話

教授0975−49 −4411

所

長03−588− 1111

教授092−641− 1151

院

長

03−964− 1131

院

長0542− 45− 0101

大分 県 大分 郡 挟 間町
医 大 ヶ丘 1−1506

顧

問

三

好

和

夫

沖 中 記 念成 人病 研 究 所
〒 105

黒

岩

義 五郎

九州 大学 医 学部 脳 神 経病 研 究施 設神 経 内科
〒812

豊

倉

康

夫

公

義

福 岡市 東 区 馬 出3−1−1

東 京都 養 育 院附 属 病 院
〒 173

字尾野

東 京都 港 区 虎 の 門2−2−2

東 京都 板 橋 区栄 町 35−2

国立 静 岡 病院〒420

静 岡市 城 東町 24−1

ー293−