関東森林研究論 文72-1(2021)

３種の有機物濃度が菌根性きのこの菌糸伸長に及ぼす影響
小林久泰 1 ・倉持眞寿美 1１ 茨城県林業技術センター
要旨：ホンシメジ，シモフリシメジ，アカハツ，アミタケの４種 13 系統の菌根性きのこを用いて菌糸培養試験を行った。 MNC 培地を基本として，グルコース，酵母抽出物，カザミノ酸を３段階の濃度に変えた寒天培地を作り，菌糸伸長速度を比較した結果，全般的な傾向として，栄養源の濃度が高いと菌糸伸長が良い傾向があったが，ホンシメジの３系統では，グルコース濃度が低い方が良く伸長する場合があるなど，菌種間だけでなく，系統によっても菌糸伸長に適した有機物の濃度が異なっている可能性が伺えた。
キーワード：ホンシメジ，シモフリシメジ，アカハツ，アミタケ，MNC 培地

Effects of three organic compounds on mycelial growth of ectomycorrhizal mushrooms.
Hisayasu KOBAYASHI1 , Masumi KURAMOCHI1
1 Ibaraki Pref. For. Res Inst., Naka, Ibaraki 311-0122, JAPAN
Abstract: A mycelial growth experiment was conducted with 13 strains of 4 ectomycorrhizal fungal species, Lyophyllum shimeji,
Tricholoma portentosum, Lactarius akahatsu and Suillus bovinus. Mycelial growth rates were compared among MNC agar media
with three different concentrations of organic compounds such as glucose, yeast extract and casamino acid. As a result, while growthrates in media rich in nutrient were generally higher than those in media poor in nutrient, opposite results were obtained in somecases. For example, mycelial growth rates of 3 Lyophyllum shimeji strains in glucose-poor media were higher those in glucose-richmedia. They suggested that different species may have different optimal concentrations for nutritional sources.
Keywords: Lyophyllum shimeji, Tricholoma portentosum, Lactarius akahatsu, Suillus bovinus, MNC agar medium

Ⅰ はじめにめ，現在使用している培地の３種類の有機物濃度につい

菌根性きのこは一般的に栽培が困難なため，直売所なて，比較検討を行った。

どにおいて高値で取引されており，その栽培化に成功す
れば，林家の副収入源として大いに期待される。菌根性Ⅱ 材料と方法

きのこは植物と共生して生活していることから，密閉容１．供試菌株 茨城県林業技術センターに保存されて器の中で菌根合成させ，それを順化させることで子実体いる４種 13 系統の菌根性きのこ培養菌糸を供試した（表を発生させることが可能である。Yamada らはこの方法で-1）。

13 種類の菌根性きのこの栽培試験を行い，このうちで４２．菌糸伸長調査方法 基本培地として使用した培地

種類の菌根性きのこで子実体発生に，残りの４種類の菌は MNC 寒天培地である（１）（表-2）。有機物である，グ根性きのこで子実体原基形成に成功した（２）。しかし，ルコース，酵母抽出物，カザミノ酸について，表-2 に示発生する子実体は小さく，実用化のためには，菌根合成すように，標準濃度（中央の値），1/2 濃度，２倍濃度のの段階でより多くの菌根を作らせる必要があると考えら

３つの異なる濃度の処理区を設けた。酵母抽出物はれる。

Thermo Fisher Scientific 社製 Oxioid yeast extract

多くの菌根を作らせるためには，菌糸を大量に準備すを，カザミノ酸は Becton, Dickinson, and Company 社

る必要があるが，菌根性きのこの菌糸伸長速度は一般的

製 BD Bacto casamino acid を用いた。それぞれの処理に腐生性きのこに比べて遅く，菌糸増殖を効率的に行う区において，濃度を変える有機物は１種類のみとし，他必要がある。そこで，今回は菌糸を効率よく培養するたの有機物は標準濃度とした。それゆえ，グルコースのみ－153 －（受理日 2021 年 2 月 17 日）

変えたもの２種類，酵母抽出物のみを変えたもの２種類，側４方向への菌糸伸長量をノギスで計測し，１日あたりカザミノ酸のみを変えたもの２種類及び標準濃度の合計の伸長速度を算出した。得られた値から，菌種，系統，７種類の培地を作成した。培地の pH は測定せず，未調整

栄養源の種類と濃度ごとに平均値を求め，栄養源の濃度のまま使用した。

間の差に関して，Wilcoxon-Mann-Whitney 符号順位検定

それらの寒天培地を 120℃で 20 分間オートクレーブ滅を行った。

菌した後，直径 90mm，深さ 15mm の滅菌プラスチックシ
Ⅲ 結果と考察

ャーレに各 15ml 分注して，平板培地を作成し，前述の各系統を培養した。各処理区４枚のシャーレを供試した。

ホンシメジ，シモフリシメジ，アカハツ，アミタケの各シャーレには直径 5.5mm のコルクボーラーで撃ち抜いコロニーの形態はいずれも同心円状で，２個の菌糸片かた菌糸片を２つずつ４cm 離して接種後，乾燥防止のためらの菌糸伸長に対する相互の影響は認められなかった。

幅５cm のラップで縁をシールした。その後，暗黒 20℃のホンシメジ６系統の１日毎の菌糸伸長速度について，培養器に入れ，培養した。培養期間は各菌種の成長量が表-3 に示す。グルコースは３系統で５g/L 区の菌糸伸長２cm 弱になる期間を目安に設定し，ホンシメジは 14 日が最も良く，酵母抽出物はすべての系統で１g/L 区の菌間，シモフリシメジとアミタケは 35 日間，アカハツは 42

糸伸長が良く，カザミノ酸はすべての系統で 0.46g/L 区日間とした。14 日後～42 日後に接種した菌糸片から外の菌糸伸長が良い傾向を示した。このように，純粋な炭水化物であるグルコースは低濃度の処理区で，菌糸伸長表-1. 使用した系統が良かったのに対し，有機態窒素を含む酵母抽出物やカ

Table.1 Strains used in this study.

ザミノ酸では高濃度の処理区で菌糸伸長が良い傾向に

種名

系統名
KM11
MK8MK13
ホンシメジ
MK55
MK56
MK57AT615
シモフリシ
AT660
メジ
MK10AT561
アカハツ
AT583
MK11
アミタケ
AT606

分離年月日不明
2003.10.10
2002.10.10
2006.10.20
2006.10.20
2006.12.28
1997.10.131998.11. 32003.11. 4
1997. 7. 3
1997. 9.24
2003.11.13
1997. 9.30

あったことから，ホンシメジの菌糸伸長には有機態窒素

採集地
不明
八郷町
常陸大宮市
不明
不明
常陸大宮市
常陸大宮市
常陸大宮市
那珂市
鉾田市
那珂市
那珂市
常陸大宮市の存在が有効である可能性が考えられた。ただし，統計的な有意差（p<0.05，以下同じ）が認められたのは５処理区のみで，うち有意に高かったのは４処理区であった。
シモフリシメジ３系統の１日毎の菌糸伸長速度について，表-4 に示す。AT-615 以外の２系統でグルコースは 20g/L 区の菌糸伸長が最も良く，酵母抽出物は１g/L区の菌糸伸長が良く，カザミノ酸は 0.46g/L 区の菌糸伸長が良い傾向を示した。３種類の栄養源いずれも高濃度の処理区で菌糸伸長が良い傾向にあったことから，シモフリシメジの菌糸伸長には有機物が全般的に有効である可能性が考えられるが，系統によっては異なる傾向となった。ただし，上述した処理区のうち，統計的な有意表-2. MNC 培地の組成（下線部は処理区として条件を振った栄養源とその分量）
Table.2 Composition of MNC medium (Underlines show

差が認められたのは４処理区のみで，全てが有意に高かった。
アカハツ３系統の１日毎の菌糸伸長速度について，表nutrients modified in this study)-5 に示す。グルコースは２系統で 20g/L 区の菌糸伸長が

名称
分量
蒸留水
1L
ブドウ糖
5g, 10g,20g
カザミノ酸
0.12g, 0.23g，0.46g
酵母抽出物
0.25g, 0.5g，1.0g
リン酸２水素カリウム
1.0g
硫酸マグネシウム７水和物 0.5g
酒石酸アンモニウム
0.5g
硫酸亜鉛（0.2％保存液） 0.5ml
クエン酸鉄（1％保存液） 0.5ml
チアミン（0.01％保存液） 0.5ml
寒天
15.0g

最も良く，酵母抽出物は２系統で 0.5g/L 区の菌糸伸長が良く，カザミノ酸は２系統で 0.46g/L 区の菌糸伸長が良い傾向を示した。有機態窒素源を含む酵母抽出物とカザミノ酸で異なる処理区で菌糸伸長が良い傾向にあったことから，アカハツの菌糸伸長に影響を及ぼすのは，限られた有機態窒素である可能性が考えられた。ただし上述した処理区のうち，統計的な有意差が認められ，有意に高かったのは２処理区であった。
アミタケ１系統の１日毎の菌糸伸長速度について，
表-6 に示す。グルコースは５g/L 区の菌糸伸長が最も良－154 －関東森林研究72-1(2021)

く，酵母抽出物は 0.5g/L 区の菌糸伸長が良く，カザミノみ合わせた状態での菌糸伸長速度の評価など，さらなる酸は 0.23g/L 区の菌糸伸長が良い傾向を示した。酵母抽検討が必要である。

出物を高濃度で含む処理区で菌糸伸長が良い傾向にあったことから，アミタケの菌糸伸長に影響を及ぼすのは，謝辞：本研究は，特別電源所在県科学技術振興事業「菌酵母抽出物に含まれる有機態窒素である可能性が考えら根性きのこの感染・育成技術の開発に関する試験研究事れた。ただし，統計的な有意差が認められたのは上述し業」により実施した。

た処理区のうち，１処理区のみで，有意に高い処理区はなかった。

引用文献

以上のことから，今回試験した４菌種については，全（１） Yamada A, Katsuya K (1995) Mycorrhizal

般的な傾向として，栄養源の濃度が濃いと菌糸伸長が良association of isolates from sporocarps andいように見えるが，ホンシメジの３系統のように，養分ectomycorrhizas with Pinus densiflora seedlings.

によっては低濃度の方が良く伸長するなど，系統によっ

Mycoscience 36: 315-323て菌糸伸長に適した有機物の濃度が異なっている可能性（２）Yamada A, Ogura T, Ohmasa M (2001) Cultivation ofが伺えた。
また，同じ菌種であっても系統が異なる場合，

mushrooms of edible ectomycorrhizal fungi associated

伸長速度が最大になる濃度の傾向が異なっているものもwith Pinus densiflora by in vitro mycorrhizal synthesis I.

認められた（例えば，ホンシメジ３系統，シモフリシメ

Primordium and basidiocarp formations in open-pot culture.

ジの AT-615 とそれ以外）。暫定的に表-3～6 の塗りつぶ

Mycorrhiza 11: 59-66

した部分が多いところを組み合わせた分量に培地組成を改変することは有用であると考えられるが，それらの組
表-3. ホンシメジの菌糸伸長速度（単位 mm/日，以下同じ）
Table 3. Growth rates of Lyophyllum shimeji strains
栄養源
グルコース
酵母抽出物
カザミノ酸系統＼濃度510200.250.510.120.23
0.46
KM-11
1.20
1.23
1.03＊
1.12
1.23
1.27
1.05＊ 1.23
1.24
MK-80.86
0.94
0.93
0.84
0.94 1.16＊
0.91
0.94
1.02
MK-13
1.07
1.20
1.20
1.08
1.20
1.29
0.99＊ 1.20
1.28
MK-55
1.29
1.27
1.27
1.10＊ 1.27 1.45＊
1.23
1.27
1.34＊
MK-56
1.37
1.28
1.29
1.10＊ 1.28 1.35＊
1.23
1.28
1.31
＊
MK-57
1.37
1.32
1.17
1.08
1.32
1.42
1.23
1.32
1.36
・＊は中央の濃度と比較して，高低にかかわらず有意差があることを示す（Wilcoxon-Mann-Whitney 符号順位検定, p<0.05，以下同じ）。
・塗りつぶした処理区は３処理区のうち平均値が最大であることを示す（以下，同じ）。
表-4. シモフリシメジの菌糸伸長速度
Table 4. Growth rates of Tricholoma portentosum strains
栄養源
グルコース
酵母抽出物
系統＼濃度
510200.250.51＊
AT-6150.28
0.340.29
0.28
0.340.31
AT-660
0.32
0.30
0.36＊
0.30
0.30 0.40＊
MK-100.25＊
0.21
0.28＊
0.20.210.24

0.120.310.310.21

表-5. アカハツの菌糸伸長速度
Table 5. Growth rates of Lactarius akahatsu strains
栄養源
グルコース
酵母抽出物
系統＼濃度
510200.250.51AT-561
0.32
0.290.39＊
0.42＊ 0.290.20AT-5830.290.410.45
0.39
0.410.41＊
MK-110.26
0.30
0.24
0.08
0.30 0.23＊

カザミノ酸
0.120.230.460.33
0.290.310.35＊ 0.410.43＊
0.220.30 0.14＊－155 －

カザミノ酸
0.23
0.46
0.34
0.32
0.30 0.38＊
0.210.28

表-6. アミタケの菌糸伸長速度
Table 6. Growth rates of a Suillus bovinus strain
栄養源
グルコース
系統＼濃度
51020AT-606
0.49
0.46
0.39＊

0.250.42－

酵母抽出物
0.510.460.41

156 －

0.120.45

カザミノ酸
0.23
0.46
0.460.43