Niigata Dent. J. 49（1）：35 － 38,

2019

新第 52 回

35

潟

新潟歯学会

歯学会

学会

抄

録

内の洗浄能や嚥下障害を機能的に回復できることを明ら総会かにした（Nature Commun., 2013）。さらに最近，昭和大学との共同研究により，多能性幹細胞から誘導した唾

日時

平成 31 年４月 13 日（土） 午前 10 時 20 分～

液腺原基の同所的な移植により，成体での機能的な唾液場所

新潟大学歯学部講堂

腺再生に成功した（Nature Commun. 2018）。
これらのことから歯のみならず唾液腺を含めて，口腔［特別講演］器官の機能的な再生による包括的な口腔器官再生医療の実現可能性が示された。本講演では，歯科治療を含めた次世代器官再生としての口腔器官の機能再生を目指して未来の口腔器官再生医療の実現に向けた基礎研究の戦略と進展を紹介すると共に，その現状と課題を考察したい。

国立研究開発法人

理化学研究所

生命機能科学研究センター

器官誘導研究チーム

チームリーダー辻孝［略歴］
新潟大学大学院理学研究科修了，九州大学大学院理学研究科博士後期課程を満期退学。山之内製薬（当時）研

口腔器官はヒトの生活に密接に関係しており，その機究員（昭和 61 ～平成元年），日本たばこ産業（株）医薬能不全は生活の質にかかわる重要な課題となる。そのた探索研究所主任研究員（平成６～ 13 年）を経て，平成

め健康長寿社会の実現には，歯や唾液腺などの口腔器官

13 年より東京理科大学基礎工学部，助教授。平成 19 年の医療において，新たな治療の確立に向けてパラダイムより教授。平成 21 年より東京理科大学・総合研究機構，シフトが期待されている。歯科医療では，外傷や齲蝕，教授。同大学院・基礎工学研究科，教授を兼務。平成

歯周疾患による歯を喪失に対する治療方法として入れ歯26 年より独立行政法人理化学研究所，発生・再生科学やブリッジ，インプラントによる歯の機能代替治療も広総合研究センター，グループディレクター，11 月よりく普及しているものの，咬合系の機能的な回復につなが組織改組により同研究所，多細胞システム形成研究センる生物学的な治療法が期待されている。

ター，平成 30 年より同研究所，生命機能科学研究セン

歯科医療における大きな目標は，喪失した歯を再生により取り戻す「歯の器官再生治療」である。歯の再生治

ター，器官誘導研究チーム，チームリーダー。博士（理学）。

療は，審美的にも，生理的，機能的にも完全な回復につ

平成 20 年より，株式会社オーガンテクノロジーズ，ながる新たな生物学的治療技術として期待されている。

取締役を兼任。平成 20 年，フランス・ルイ・パスツー

私たちは，正常発生可能な歯胚を再生するための三次元

ル大学，客員教授，東京歯科大学，東京理科大学，北里的な細胞操作技術である「器官原基法」を開発し（Nature大学医学部，客員教授を歴任。平成 28 年より関西学院

Methods, 2007），再生歯胚を歯の喪失部位へ移植するこ大学，神戸大学医学部，慶應義塾大学医学部，客員教授。とにより，再生歯が萌出，咬合し，歯根膜を介して骨とNature Publishing Group “Scientific Reports” Editorial

連結機能すると共に，外部からの侵害刺激を中枢に伝達

Board Member。

しうる神経機能も再生することを明らかにした（PNAS. 2009）。さらに，早期の歯の機能改善に向けて，現在の骨結合型インプラント治療から歯周組織を有する次世代インプラントを開発し，生理的な歯の移動や知覚［一般講演］
１

Sub-MIC のグルコン酸クロルヘキシジンが in vitro
複合バイオフィルム形成に及ぼす影響の回復が可能であることを実証した（Sci.Rep. 2014）。
現在では，より早期の社会実装を目指して，大型動物であるイヌを用いた非臨床試験を進めている。

新潟大学大学院医歯学総合研究科

一方，口腔疾患として唾液腺の機能低下による口腔乾う蝕学分野○鈴木裕希，大墨竜也，長谷川泰輔，竹中彰治，野杁由一郎

燥症が社会的な課題である。口腔器官再生医療の実現に向けて唾液腺の再生研究を進め，器官原基法により再生【目的】

した唾液腺原基を唾液腺全摘出マウスの唾液腺導管に接近年，最小発育阻止濃度以下（sub-MIC）の抗菌剤存続し，再生唾液を口腔内に分泌させ，口腔乾燥症の口腔在下で，バイオフィルム形成（Biofilm formatiom：BF）－ 35 －

36

新潟歯学会誌が促進されるという報告が散見される。口腔において洗49（1）
：2019

２

心理ストレスによるセロトニン（5HT）機構の変調
は大縫線核（NRM）での咬筋侵害応答を増大させる

口液をはじめとする抗菌成分は，唾液により希釈され，時間経過とともに sub-MIC となるため，逆に BF を促進する可能性がある。そこで本研究では，う蝕病原細菌

１２で あ る Streptococcus mutans と，Streptococcus oralis

新潟大学大学院医歯学総合研究科

新潟大学大学院医歯学総合研究科

口腔生理学分野

顎顔面口腔外科学分野○清水志保 1,2，中谷暢佑 1,2，高木律男 2，岡本圭一郎 1，

お よ び Actinomyces naeslundii の ３ 菌 種 か ら 成 る in

山村健介 1

vitro 複合バイオフィルムモデルを確立し，sub-MIC のグルコン酸クロルヘキシジン（CHG）を作用させた際の複合 BF に及ぼす影響について検討した。

【目的】

【方法】

顎顔面部への侵害情報は，三叉神経脊髄路核尾側亜核Tryptone-yeast extract（TYE）培地で培養した菌液（Vc）を経由し，上位脳に伝えられる。また上位脳からを 1：1：103［S. mutans ： S. oralis ： A. naeslundii］のVc への下行路として，下行性疼痛制御系がある。その割合で混合し，Calgary Biofilm Device を用いて培養し主役として大縫線核（NRM）が知られ，Vc の興奮性をた。12 時 間 初 期 付 着 さ せ た 後，0.05% sucrose 含 有調節することで顎顔面部の侵害応答を制御する。我々はTYE 培 地（TYE+S） で ４ 日 間 培 養 し た。 ４ 日 後，最近，ストレスに伴う顎顔面痛の増大は，Vc の興奮性1/10MIC（0.06μg/ml）の CHG 添加 TYE+S で２日間の増大を基盤とすることを解明した。一方，ストレスは培養した。コントロール群として CHG 無添加 TYE+S

NRM などの下行性疼痛制御系の変調をきたし，Vc ので２日間培養した。バイオフィルム形態を走査型電子顕興奮性を増大させると考えられているが，詳細な脳機構微鏡（SEM）および共焦点レーザー顕微鏡（CLSM）では不明である。本研究の目的は，NRM での咬筋侵害応観察した。生菌数をコロニーカウント法で算出し，各種答に対するストレスの影響と，同部でのセロトニン細菌の割合と S. mutans の BF 関連遺伝子の転写量をリ（5HT）機構の関与を，神経興奮のマーカーである Fos

アルタイム PCR で解析した。

タンパクの発現を指標に解明することである。

【結果および考察】【方法】

SEM 像より，両群とも球菌を主体とするバイオフィSD 雄ラットを用い，繰り返し強制水泳ストレス処置ルムが観察された。CLSM 像より，CHG 作用群は，コ（FST，10 分 / 日×３日）または非ストレス処置（Sham）ントロール群と比較してバイオフィルムの厚みが増したを 実 施 し た。 翌 日， 咬 筋 へ の ホ ル マ リ ン 刺 激 によ るが， 生 菌 数 は 7.4 × 107CFU（CHG 群 ） お よ び 7.0 ×

NRM での Fos の発現を免疫組織化学的手法にて定量し10 CFU（コントロール群）で有意差はなかった。各細た。検討項目は FST による NRM での１）Fos または菌種の割合は９割以上を Streptococcus 属が占有してい5HT 陽性細胞数に対する影響，２）Fos/5HT の共発現た。CHG 作用後の S. mutans は，全ての BF 関連遺伝細胞数への影響，３）5HT 再取り込み阻害薬（SSRI，子の発現が増加傾向を示した。Sub-MIC の CHG 作用後

FST 処置後，腹腔内投与）の繰り返し投与による Fosにバイオフィルム量は増加したが，生菌数は増加せず，発現への影響である。

マトリックス量の増加と推測された。また，バイオフィ【結果】

7ルムの空隙が減少し，付着界面を密に覆うようなバイオNRM での Fos 陽性細胞数／切片は，Sham 群（19.5 個）

フィルム構造の変化が観察され，厚みよりも密度を増加と比べ，FST 群（35.8 個）で有意な増加を認めた。一方，させていると推察された。

5HT 陽性細胞数／切片は，有意に減少した（Sham 群：【結論】28.3 個，FST 群：20.5 個）。Fos・5HT 共発現細胞数／

Sub-MIC の CHG は S. mutans の BF 関連遺伝子に影響を与え BF を促進することが示唆された。

切片に差はなかった（Sham 群：5.3 個，FST 群：6.3 個）が，全 Fos 陽性細胞数／切片に対する Fos・5HT 共発
現 細 胞 数 ／ 切 片 の 割 合 は Sham 群（27.5%） と 比 較 しFST 群（17.6%）では有意に減少した。SSRI の繰り返し投与は，FST 群で Fos 陽性細胞数を有意に減少させたが，Sham 群では変化は見られなかった。
【結論】
繰り返しストレスによる NRM での咬筋侵害応答の増大は，5HT 機構の変調によることが示唆された。

－ 36 －

学 会 抄 録

３

糖尿病治療薬メトホルミンは口腔扁平上皮癌細胞の４１

新潟大学大学院医歯学総合研究科

新潟大学大学院医歯学総合研究科

イタチザメ（Galeocerdo cuvier）の歯胚におけるエナメロイド形成と鋸歯形成遊走と増殖を阻害する

２371

口腔生化学分野
2

顎顔面口腔外科学分野

新潟大学大学院医歯学総合研究科

東京医科歯科大学大学院医歯学研究科○伊藤元貴 1,2，髙木律男 2，照沼美穂 1

硬組織形態学分野

硬組織構造生物学分野○牛村英里 1，大島勇人 1，田畑【目的】

純2

鋸歯は進化の過程で幾度も表れた形質で，軟骨魚類の２型糖尿病の第１選択薬であるメトホルミンは，膵臓・イタチザメやホホジロザメ，爬虫類のコモドオオトカゲ

肝臓・肺・結腸，および乳腺など様々な組織の癌においや獣脚類，哺乳類ではサーベルタイガー等に見られる。て抗癌効果を有することが報告されている。しかしながこのように鋸歯は主に肉食性の脊椎動物の歯の切縁にみら，口腔癌においてはその病態生理学的な作用機序はわられるもので，ステーキナイフの刃に例えられることもかっていない。そこで本研究では，口腔癌の中でも最もある。その鋸歯ひとつひとつの大きさ，その切縁上での多い口腔扁平上皮癌細胞（OSCC）におけるメトホルミ向きとそれによって生じる空隙等が歯の切断機能を高ンの抗癌効果の有無を，形態学的・生化学的に検討する

め，肉食性の動物に有利に働くと考えられてきた。しかことにした。

し，こうした形状の形成過程には不明の点が多い。そこ【材料と方法】

で，本研究では魚類を用いて，鋸歯の発生について調べ

日本人男性患者から採取し作製されたヒト歯肉扁平上ることにした。ただし，魚類の歯には，他の動物と異な皮癌細胞株である Ca9-22 細胞を用いて，メトホルミンる点がいくつかある。例えば他の動物の歯の最表層がエ5mM で細胞を刺激した。細胞の増殖と形態学的変化はナメル質であるのに対して，魚類ではエナメロイドといタイムラプスイメージング法による経時的な顕微鏡画像

う硬組織であることである。魚類の歯の発生を調べるに

および MTS アッセイにより解析した。癌細胞の悪性化はそれらの理解も必要であるため，エナメロイド形成もの指標となる細胞遊走は，スクラッチアッセイにより検併せて解析する。

証した。また生化学的分析としては，癌細胞の代謝およ

材料はイタチザメの仔魚（全長 12 ～ 15cm）を用い，び抗癌効果に関連するタンパク質の発現・活性変化を，顎堤の連続切片を作製して，組織観察した。その結果，ウェスタンブロッティング法にて解析した。

イタチザメの歯の発生は，粘膜上皮から陥入した歯堤が【結果と考察】

分岐せずに，屈曲しながら伸長することによって次々とタイムラプスイメージング法，MTS アッセイ，そし歯胚を形成することがわかった。すなわち，この屈曲部てスクラッチアッセイから，メトホルミンは Ca9-22 細内弯に歯胚が形成され，鐘状期初期まで進むと伸長した胞の増殖と遊走を有意に抑制していることがわかった。

歯堤がまた小さな屈曲を作り，そこで次の歯胚が形成さ

これらの抑制には，細胞の収縮と細胞表層の著しい形態れる。連続して発生する歯胚では急速に石灰化が始まり，変化が伴っていたことから，これらの変化が OSCC の歯胚形成時には鋸歯が形成される。鋸歯部分の上皮では転移能を軽減させていることが示唆された。ウェスタン

核が基底側に偏移していること，また歯胚上皮が重層にブロッティング法では，メトホルミンにより，細胞内のなるという特徴がみられる。それ以外の上皮細胞ではイエネルギー代謝を調節する分子である AMP キナーゼのタチザメ歯胚の上皮細胞は単層立方～円柱上皮であった活性化と，AMP キナーゼの下流にあり脂肪酸合成の律が，エナメロイド形成が始まっても顕著な極性は見られ速段階の酵素であるアセチル CoA カルボキシラーゼのなかった。むしろ，細胞核の偏位などを見る限り，エナ不活化が認められた。このため，メトホルミンが Ca9-メル芽細胞とは反対の極性に近く，その役割が大きく異22 細胞の脂肪酸合成を阻害している可能性が考えられなることが示唆された。

た。今回の結果は，口腔癌細胞では脂肪酸合成が活発で興味深いことに鋸歯の根元の部分では，鋸歯縁に対しあり，この経路を特異的に遮断することが抗癌効果をもて縦断した場合，歯胚上皮が同心円状に並ぶ特有の像がたらすことを示唆している。本研究を踏まえ，今後，脂観察され，鋸歯縁形成に関与している可能性を示唆して肪酸合成をより特異的に阻害する薬剤の開発へとつなげいた。ていきたい。

－ 37 －

新潟歯学会誌

38

５

Relationship between clinical periodontal49
（1）
：2019

６

下歯槽神経再生における血管内皮細胞増殖因子の関与について

parameters and changes in liver enzymes levels
over an 8-year period in an elderly Japanese
population1212

新潟大学大学院医歯学総合研究科

3

予防歯科学分野

新潟大学大学院医歯学総合研究科

新潟大学大学院医歯学総合研究科

新潟大学大学院医歯学総合研究科○西田洋平 ，山田友里恵 ，大峡
1

Dental Hygiene Program, Faculty of Dentistry, Universitas Gadjah

歯科麻酔学分野

高度口腔機能教育研究センター
2

口腔解剖学分野

淳 ，前田健康 2，
3

瀬尾憲司 1

Mada, Yogyakarta, Indonesia
34

新潟大学大学院医歯学総合研究科

口腔生命福祉学科

Department of Preventive Dentistry and Dental Public Health,

Faculty of Dentistry, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia【目的】衛生士学科

末梢神経損傷は，神経に並走する血管の損傷を伴う。

○ウィディタエラストリア 1,2，葭原明弘 3，

近年，これらの血管の再生が損傷神経の再生に関与する

ハニンドリオリスドリアント 4，宮﨑秀夫 5ことが報告されているが，その詳細は不明な点が多く残5

明倫短期大学されている。血管内皮細胞増殖因子（VEGF）は脈管形成および血管新生に重要な役割を担う糖タンパクであ【Aims】An association between periodontal disease and liverる。しかし，損傷末梢神経の再生と VEGF の関連につ

enzymes has been reported previously. This study

いては，ほとんど知られていない。そこで本研究では末examined the relationship between clinical periodontal

梢神経再生における VEGF の関与について検討した。

parameters（CPP）and changes in liver enzymes levels【方法】
７～８週齢の C57BL6 マウスを使用し，全身麻酔下でin 265 non-institutionalized Japanese elderly aged 72years over 8 years.

下歯槽神経を露出させた後マイクロ剪刀で完全切断し【Materials and methods】た。神経切断後１，２，３，５，７日後の血管再生と神経軸The number of sites with probing pocket depth

索再生を免疫染色で観察した。次に，各時点での VEGF（PPD）≥ 6 mm and clinical attachment level（CAL）≥

受容体（VEGFR）-1,2 の発現を免疫染色で，VEGFA，B

6 mm were measured. Changes in liver enzymesの発現をウエスタンブロットで観察した。さらに，神経（alanine transaminase ［ALT］ and aspartate

切断から５日間，24 時間毎に抗 VEGF 抗体（1μg/ 日）

transaminase ［AST］） was grouped based on anyを局所投与し，切断後７日目における神経再生を免疫染

elevation of concentrations. The relationship was色によって評価した。

determined by logistic regression with adjustment for【結果】

confounders. Interaction test and stratified analysis

神経切断後２日目に，切断部断端からの再生血管の伸were then performed according to smoking status and長を認めた。３日目には両断端から伸長した血管の再接alcohol drinking habits, separately.

合が観察された。一方で，再生軸索は血管再生に遅れ，【Results】

５日目に末梢側断端へ到達した。VEGFA，B は神経切Elevation in ALT, but not AST, was significantly

断後２日目に最も強い発現を認め，その後経時的に減衰

associated with PPD（odds ratio［OR］=1.10）and

した。その受容体である VEGFR-1,2 は２～３日目に切CAL（OR=1.03）. A significant interaction of CPP on

断部周囲に多く分布していたが，５日目以降は認められ

ALT was observed with smoking status, but not with

なかった。抗 VEGF 抗体投与群では，再生軸索の伸長

alcohol drinking habit. The stratified analysis

抑制が認められた。

suggested that ALT was found to be significantly【結論】
VEGF-VEGF 受容体系は神経損傷により活性化し，correlated with PPD（OR=1.20）and CAL（OR=1.04）

末梢神経再生に寄与することが示唆された。

to those who were smoker.
【Conclusion】
The elevation in ALT levels might be associatedwith clinical periodontal parameters among noninstitutionalized Japanese elderly, and this association
was modified by smoking status.

－ 38 －