(23)

奈医誌. リ.N
araM
ed.Ass.
)40，23~28，平 1

小児糸球体疾患の尿蛋白分析
一‑SDSPAGE を用いて一一崎

奈良県立医科大学小児科学教室

松永健司，平康二，坂本仲也

河原信吾，上辻秀和
URINARYPROTEINANALYSISINVARIOUSGLOMERULARDISEASESINCHILDHOOD‑USINGSDふPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS‑.
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ASAKAMOTO，
TAKESHIMATSUNAGA，KOUJITAIRA，.
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ediatrics，Nara Medical University

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anuary30，1989SummaりIn59chi1drenw
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1ardiseases，ana
1ysisofurinar
ypr
o‑lyacrylamidegele1ectrophoresis(SDふ PAGE).
tein was performed using 7.5% SDS中 o
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osingglomerulo‑nephritis. In 19A nephropathy orur
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Henoch‑Schon1einpurpuran
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estigationofproteinuria.
IndexTerITlsurinar
yproteinana1ys
is，SDS‑po1yacry1amide gelelectropl
閣で由 (SDS‑PAGE)緒

言対象

lii白尿は最も重要な腎症候の一つで、ありその推移は腎対象は奈良医大小児科ならびにその関連病院にて診断

病変の病勢を知る上で、有力な指標となロうるもさらに近された微小変化ネフローゼ症候群 15例，巣状糸;sj(体硬化年，量的検討のみならず尿蛋白組成の検討が電気泳動症 4例，急性糸球体腎炎 2例，急速進行性糸球体腎炎 l法，高速液体クロマトグラブィーなどによりなされ病態例， IgA腎症 14例，紫斑病性腎炎 10例，膜性増殖性腎との関連性が報告されてきたり"の.今回我々は小児各種炎 3例， I良性腎症 4例，ノレーブス腎症 4例，溶血性尿毒糸球体疾患の尿蛋白分析を SDS ポリアグリノレア Eドゲ例，の計 59例(男児 38例，女児 21例)である.
症症候群 2ふ PAGE) を用い，腎組織像やネフロノレ電気泳動法 (SDーゼ症候群(ネ症)のステロイド反応性と対比検討したので報告する.

方 法1) 腎組織像の観察

経皮的腎生検により得られた腎組織片ーは三分しそれぞ松 永 健 司 ( 他 4名)(24)

A
ドJし~しC山ι
:SegmentalSclerosi
百 20%

DSegmentalSclerosis 15%

ιー‑'‑ーー回目A

25.
018.01
3.08.
46.
8MWX 104
Fig.1.Densitometri
cpatternso
fSDふ PAGEofur
inar
yproteins.
(A) Minimal change nephroti
csyndrome (Case1)(B) Minimal change nephroti
csyndrome (Case2)
珂 glomerulo‑nephritis(C出 e3)(C) Focalsclerosi(D) Focalsclerosi
時 glomerulo‑nephritis(C剖 e4)
れ光学顕微鏡，蛍光顕微鏡，電子顕微鏡学的検索に供し2) 尿の採取

osin(H‑E)，Periodicacidた.光顕像は Haematoxyline

腎生検前日の 24f1寺悶尿より 30cc採 取 し 検 索 ま でshiff(PAS)，Silv
ermethenilmin
eandMassont
richrome‑70'Cに保存した.

(SM‑MT) 染色にて観察した.蛍光抗体法による IgG，3) 尿 ji白定量及び尿の前処理IgA，IgM，C3及び Fibrinogenrelatedantigen の沈Biuret法により測定し泳動前に尿蛋白量が 150mgjdl

着は FITC 標識抗ヒト IgG，IgA，IgM，C3，Fg家兎となるように濃縮または希釈した.濃縮にはポリエチレ血清を用いた直接法により観察した.

ングリコーノレ 20000を用いた.

小児糸]味体疾患の j求蛋白分析4) 7.5% SDS‑PAGEによる尿蛋白分析

A

前述のごとく前処理した尿 50μI と sampl巴 buffer，ulを等量混合し 90'
C 5分間 incubation を行い 7.
550%ゲソレに添加し一管当り 8mA で SDS‑PAGE を行いクマシーブリリアントフツレ‑ G250にて染色後，脱色(25)4Lr‑ーロBPB)
しデンシトメトリーを行い，プロムフェノーノレ青 (に対する相対易動度より尿蛋白分子量を求めた.尚，分子量マーカーとして

SDS‑PAGE Molecular weightstandards(Biorad) を用いた.

結B果1) 特発性ネフローゼ症候群(ネ症)fν~

ネ症のうちステロイド剤(ス剤)に反応性の微小変化
群 2例 (Case1，2) にはアルブミン峰に一致する分子量68000にピークを認めるのもとアノレブミンとトランス

8000，84000にピークを認め
アェリンに一致する分子量 6るものがあった.一方ス剤に抵抗性のネ症で腎組織所見

Case3，4)でから巣状糸球体硬化症と診断した 2例 (は分子量 14万 30万程度の高分子蛋白の出現を認めた
(Fig.
l).

C2) 急性糸球体腎炎

8000に最も大きなピアノレブミン￨峰に一致する分子量 64万以上の高分子領域にも二つの bandをークと分子量 1Fig.
2).
認めた (3) IgA腎症，紫斑病性腎炎
IgA腎症 14例の中で光顕像が軽度メサンギウム増殖で細胞性半月体 5 %のみを有した C
ase6では尿蛋白像はアノレブミンとトランスフェリンに一致したピークを認めた.一方臨床的に血尿と高度の蛋白尿を伴いメサンギCase7)
ウム増殖に 20%の線維性半月体を有した症例 (の尿蛋白像はアノレプミンに一致する分子量のピークの他に高分子蛋白の出現を複数認めた.紫斑病性腎炎lOOUでも IgA 腎症と類似した所見を呈していた. 光顕像が 122.
10 14.
56.
8MW
X104Fig.
2.Densitometri
cpatternsofSDS‑PAGE ofurinaryprotems.
田 phritis(C出 e5)(A) Acuteglomerulo‑(B) Membranousnephropathy(Case10)(c) Membranoproliferativ
e glomerulo‑nephritis(Case11)%の半月休を有する ISKDCilla の Case8 では尿~認めた. Type I
I の一例も高分子尿蛋白が出現してい白像はアノレブミンに一致する分子量のピークが主体であFig.
2).
た (ase9 では尿蛋り，半月体が 50%の ISKDCNa の C6) その他の腎疾忠4
万一 30万の高分子蛋白のピーグを複数認
白像で分子量 1

腎組織 WHO分類の C
lassN と Class V のノレープ

めた (Fig.
3).

ス腎炎ではともに分子量 14
万一 30万の聞に複数の高分子4) 膜性腎症

ase14で蛋白のピークを認めた. HUS の急性期の C

tage1， I
I の症例の尿蛋白
膜性腎症で電顕所見が S
像はアノレブミンに一致する分子量のピークの他に分子量14万以上の高分子蛋白の出現を認めた (Fig.
2).
5) 膜住:
1増殖性腎炎4万は分子量 130万の高分子蛋白のピークを複数認めた.

光顕像で 90%の糸球体に線維性半月体と尿細管萎縮を

ase1
5 の尿蛋白像では認めた急速進行性糸工求体腎炎 CType 1 の Case1
1 ではアノレプミンに一致する分子アノレブミンに一致する分子最のピークに次いで分子量約量のピークが最も大きいが高分子領域に複数の bandを20万の高分子蛋白のピークと他に分子量 23000~47000 の松 永 健 司 ( 他 4名)(26)

A
MildMesangialProliferationeCellularCrescent5%

B川へ
人‑‑1一回‑'‑'

18.
013.
08.
46.83.
7 2.
3

MildMesangialP
roliferationeFibrousCrescent20%，
SegmentalSclerosis22%

MWXl04C)
人一

MildMesangialP
roliferation
eCellularC
rescent 12%
ISKDCillaD巴M
esangialP
roliferation
ModerateCellularCrescent50%
ISKDCIVa~一一司ιー」

25.
018.
014.
59.
468冒MWX104Fig.
3. Densitom巴tricpatternsofSDふPAGEofurinaryproteins.
(A) IgAnephritis(Case6)(B) IgAnephritis(Case7)
Ienoch‑Sch凸nleinnephritis(Case8)(C) l
Ienoch‑Sch凸nleinnephritis(Case9)(D) l
低分子量蛋白の bandを三本認、めた (Fig.
4).

考 案子量 60000‑130000の蛋白がfIighlys
巴lective に排i止されるが，巣状糸球体硬化症では高分子蛋白の出現を複数認めた.他方，腎炎群では増殖性病変，半月体の頻度，小児腎疾患の尿蛋白の分析を SDS‑PAGE に よ り 検

硬化性病変の進行に伴い高分子蛋白の出現が見られる傾討した結果，ネ症では硬化性病変の有無により尿蛋白パ向を示していた. 1966
年 Cameronらめにより IgG とタ ー γ が明らかに異なりス剤反応性の微小変化群では分トランスアェリンのクリアランス比より求めた S巴lec‑(27)

小児糸球体疾患の尿蛋白分析

immunodiffusion で求める際，抗 IgG血清は IgG のAH‑chain とも反応するため Wholemolecu
1eの IgGを川」

反映しがたいとの難点もある.今回の検討では IgG/トランスフェリン値との比較はなされていないが手授においてやや煩雑であるが SDS‑PAGE により得られた成績はス剤反応性或は組織像をよく反映すると思われた.
巣状糸球体硬化症での高分子蛋白尿排祉の機序として

arrier のみならず Sizebarrier の破綻がは， Chargeb

B考えられ，その成因として H
yperfiItration7)，メサンギ
ヴム増殖，硬化性病変，上皮細胞障害 8)等が考えられてdLいる.同様に腎炎群では半月体を高頻度に認める症例に高分子尿蛋自の排池がみられたが，半月体は強い基底膜の断裂等の傷害からフィプリンの漏出等によりボウマン氏嚢へのマグロブァージや上皮細胞の増殖を招来して形成されると考えられているの. さらに IgA 腎症で半月attern体を有する症例では糸球体由来の Dysmorphicpcの肉眼的血尿がしばしば見られるとの報告もある 10). かかる結果から巣状糸球体硬化症のみならず半月体形成腎炎の高分子蛋自の出現は基底膜の強い傷害の結果と考えられ，腎炎群においては蛋白尿の組成に加えて血尿の程度を検討することはより明確に腎組織傷害の程度を反映すると思われた.以上各種腎疾患の尿蛋白の分析を

SDふPAGE を用いて検討し，本方法は腎組織像やネ症のス剤反応性をよく反映し極めて有効であると思われ

Tこ.

D結 語
各種小児糸球体疾患息児の尿蛋自分析を SDS‑PAGEを用いて行い以下の結論を得た.

I. 小児ネ症の中でス剤に反応する微小変化群では，Highlyselective であるのに対してス剤抵抗性の巣状糸世‑‑‑'.

L20.
0 846.
84.
7 3.
22.
3冒on‑selec球体硬化症では高分子尿蛋白の出現を認め， N幽MW

Xl04Fig.
4.Densitometri
cpatternsofSDS‑PAGE ofurinar
yproteins.
IassV (Case(A) LupusnephritisW H Oc
12)(B) LupusnephritisW H Oc
1assI
V(Case13)(C) Hemolytic uremic syndrome (Case14)(D) Rapidly progressive glomerulo・ne‑phritis(Case15)tn
判 r index はネ症の糸球体基底膜の SeIectivity 判定に用いられス剤反応性を予知するのに成果を挙げてきた. しかし IgG， トランスフヱリン量を S
ingleradialtIveであった.

2. 腎炎群では半月体や硬化症病変の認められる症例
では高分子尿蛋白の出現が認められた.
(本論文の要旨は第 40同日本小児科学会奈良地方会にて発表した.)

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Ie
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