作成日：2020 年
更新日：

年

3 月 31 日
月日

麻痺性貝毒簡易分析キットによるスクリーニング法導入マニュアル
version 1

このマニュアルは、水産研究・教育機構中央水産研究所（代表機関）
・北海道立衛生研究所・北海道立総合研究機構水産研究本部中央水産試験場・岩手県水産技術センター・大阪府立環境農林水産総合研究所・大分県農林水産研究指導センター水産研究部・熊本県水産研究センター・日水製薬株式会社が参画した農林水産省「安全な農林水産物安定供給のためのレギュラトリーサイエンス研究委託事業（課題名：麻痺性貝毒の機器分析法の高度化及びスクリーニング法の開発）」で得られた成果を元に作成した。

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麻痺性貝毒簡易分析キットによるスクリーニング法導入マニュアル目次

１．はじめに ....................................................................................................................................... 3
２．簡易分析キットの概要と操作方法（１）簡易分析キットの構成 ........................................................................................................... 4（２）測定用抽出試料の調製方法 ................................................................................................. 4（３）簡易分析キットの操作方法 ................................................................................................. 5（４）分析結果の判定 ..................................................................................................................... 5（５）簡易分析キットの反応性の特徴............................................................................................ 7（６）画像解析を利用した判定部ラインの数値化 ..................................................................... 7
３．簡易分析キットによるスクリーニング法導入のための検討事項（１）抽出試料マトリクスの影響の検討 ..................................................................................... 9（２）測定試料の希釈倍率の設定 ............................................................................................... 10（３）スクリーニングレベルの設定 ........................................................................................... 10（４）現場サンプルの分析による検証 ........................................................................................ 11
４．国内各地のスクリーニング法導入にむけた検討事例（１）北海道 ................................................................................................................................... 12（２）岩手県 ................................................................................................................................... 16（３）大阪府 ................................................................................................................................... 20（４）大分県 ................................................................................................................................... 41（５）熊本県 ................................................................................................................................... 45
別添資料
麻痺性貝毒簡易分析キット（MT テスト イムノクロマト-PSP「ニッスイ」）説明書（製品添付文書）

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１．はじめに農林水産省消費・安全局により、2015 年３月、「生産海域における貝毒の監視及び管理措置について（26 消安第 6073 号）」が通知され、その補完として「二枚貝等の貝毒のリスク管理に関するガイドライン*」（以下ガイドライン）が制定された。当通知により、貝毒のリスク管理にスクリーニング法を導入することが可能となった。2017 年度から開始された農林水産省の「安全な農林水産物安定供給のためのレギュラトリーサイエンス研究委託事業（課題名：麻痺性貝毒の機器分析法の高度化及びスクリーニング法の開発）」では、麻痺性
貝毒のリスク管理に使用することを目指して麻痺性貝毒簡易分析キットを開発し、MT テス
ト イムノクロマト-PSP「ニッスイ」（以下キット）として 2019 年 2 月より市中供給を開始した。本マニュアルは、委託事業の成果をもとに、本簡易分析キットをスクリーニング法として導入するための手引きとして作成した。
*http://www.maff.go.jp/j/syouan/tikusui/gyokai/busitu/sizendoku/attach/pdf/index-9.pdf

3２．簡易分析キットの概要と操作方法（１）簡易分析キットの構成
本キットはイムノクロマト法を原理とした、麻痺性貝毒検出用の簡易分析キットである。
本キットはテストプレートと検体希釈液から構成されている（図１）。テストプレートは検体を添加する検体添加部、判定を行う判定部、検体名等を記入する ID 部から構成され、さらに判定部は、麻痺性貝毒の判定を行う試験部（T）、試験の成立を判断する対照部（C）からなっている（図２）。

図１．MT テスト イムノクロマト-PSP「ニッスイ」の構成

ID 部

判定部

検体添加部

対照部 試験部ＰＳＰＣ

Ｔ

図２．テストプレート各部の名称（２）測定用抽出試料の調製方法
A. 二枚貝の測定用抽出試料の調製
二枚貝試料をキットで分析する場合、測定用抽出試料の調製は公定法であるマウス試
験における抽出法（厚生省環境衛生局乳肉衛生課長通知「貝毒の検査等について」（昭和55 年 7 月 1 日、環乳第 30 号））に準じた以下の方法で抽出する。
１）二枚貝むき身を細切後にホモジナイズし、等量の塩酸（0.1 mol/L）を添加する。
２）pH2～4 であることを確認（範囲外の場合は濃度の高い塩酸で調整）したのちに、沸騰水中で加熱抽出（5 分間）する。
３）加熱抽出した試料を遠心分離して得た上清を測定用抽出試料とする。なお、遠心分離が出来ない場合は、キット分析に必要な抽出液量が少量であるため、静置して得られる上清部分を使用しても同様の結果が得られる。

4

B. 麻痺性貝毒原因プランクトンを含む海水試料の測定用抽出試料調製
原因プランクトンの１細胞に含まれる麻痺性貝毒成分は低濃度であることから、海水試料中の麻痺性貝毒成分をキット分析で検出するためには、海水試料をプランクトンネ
ットなどでろ過濃縮し、その後に抽出処理して測定用抽出試料とする必要がある。以下に調製方法を示す。
１）1 L の海水試料をオープニングが 15 µm 以下のプランクトンネットで 10 mL 程度までろ過濃縮する*。
２）ろ過濃縮した海水試料に等量の 0.2 M 酢酸を添加し、超音波破砕機等で細胞を破壊して測定用抽出試料とする。超音波破砕機等がない場合は、試料を凍結・解凍するか、短時間加熱して細胞を破壊する。
*100 倍に濃縮した海水試料では、Alexandrium tamarense が 5-10 cells/mL の場合に検出可能（及川ら．
水産技術，6（2）, 161－167, 2014）．

（３）簡易分析キットの操作方法
キット分析の際は、二枚貝の測定用抽出試料は付属の希釈液で 20 倍以上に、貝毒原因プ
ランクトンを含む海水試料の測定要抽出試料は 5 倍以上に希釈し、そのうち 100 µl をテス
トプレートの検体添加部に添加して、20 分後に判定部に出現する赤いラインにより判定を行う。ただし、分析時のキットの反応性は麻痺性貝毒成分の量と種類により左右される（２．
（４）参照）。そのため、付属の希釈液での希釈に際しては、目的に沿った希釈倍率を検討したうえで適切な希釈倍率を用いることが必要である（３．
（２）参照）。
測定用抽出試料の調製（マウス試験と同様の抽出）
抽出試料の希釈（付属希釈液で適切な倍率に希釈）
テストプレートへの添加（検体添加部へ 100 µL 添加）
判定（20 分後に判定部のラインを見て判定）
図３．キット分析の操作フロー（４）分析結果の判定
テストプレートの検体添加部に希釈液で希釈した測定用抽出試料を添加して 20 分後に判定を行う。判定部の対照部（C）に赤いラインが出現していることで正しく反応が進んだことを確認する。試験部（T）のラインは測定液中の毒成分量が多くなるにしたがい薄くなり、高い毒量の測定液ではラインが確認できなくなる（図４）。毒成分を含まない測定試料では

5

対照部（C）と試験部（T）の両方に赤いラインがはっきりと出現する（図５）。反応が正常に進んでいない場合にはは対照部（C）にラインが現れない（図６）。有毒および無毒の二枚貝試料を本キットにより分析した際の判定部の写真を図７に示した。
対照部 試験部ＰＳＰ

Ｃ

Ｔ

対照部 試験部

ＰＳＰ

Ｃ

Ｔ

図４．測定液中に麻痺性貝毒成分が含まれる場合の判定部のライン
対照部 試験部

ＰＳＰ

Ｃ

Ｔ

図５．測定液中に麻痺性貝毒成分が含まれない場合の判定部のライン
対照部 試験部ＰＳＰ

Ｃ

Ｔ

対照部 試験部

ＰＳＰ

Ｃ

Ｔ

図６．反応が正常に進んでない場合の判定部のライン

図７．簡易分析キットによる二枚貝抽出液の分析例（目視判定 無毒：++、検出下限未満：+、2.0MU/g：±、その他：-）
6

（５）簡易分析キットの反応性の特徴
麻痺性貝毒成分は、サキシトキシンとその類縁体を総称するものであり、麻痺性貝毒成分には多数の成分が知られている。国内の麻痺性貝毒原因プランクトンや毒化した二枚貝にも多数の成分が含まれており、毒化原因となったプランクトンや、毒化した二枚貝の種類が異なれば、測定試料に含まれる麻痺性貝毒成分の組成も異なる。本キットは、国内で検出される主要な麻痺性貝毒成分の多くに反応性を持つが、反応性の強さは成分により異なる（表１）。本キットは、測定試料に含まれる毒成分の量により試験部（T）に出現するラインの色調が異なるとともに、毒成分の組成によっても試験部（T）のラインの色調が異なる可能性がある。
表１．各種の麻痺性貝毒成分に対する簡易分析キットの反応性
Toxin
Concentration
2000nM
1000nM
500nM
250nM
20nM
10nM
5nM
2.5nM
0nM

GTX1/4

GTX2/3dcGTX2/3

GTX5

GTX6

C1/2

±
+
++
++
NT
NT
NT
NT
++

NT
NT
NT
NT
±
+
++
++

NT
NT
NT
NT
±
±
++
++
++

NT
NT
NT
NT
±
+
++
++
++

NT
±
+
++
NT
NT
NT
NT
++

NT
NT
NT
NT
±
++
++

試験部（T）のラインの濃さ：- < ± < + < ++NT: 未試験（５）画像解析を利用した判定部ラインの数値化
簡易分析キットでは目視による判定が基本となるが、分析直後のテストプレートをスキャナー等で撮影し、撮影画像を薄層クロマトグラフィーや電気泳動ゲルの画像を解析する
ソフト（市販ソフト：JustTLC、フリーソフト：Image J など）を用いて解析し、ラインの濃淡を数値化することが可能である。図８に JustTLC による解析例を示したが、テストプレー
トの画像（図８上）のうち判定部を選択して解析すると、クロマトグラム（図８下）が得られる。このクロマトグラムでは左側ピークが対照部（C）のライン、右側のピークが試験部（T）のラインを示している。解析ソフトでは赤く塗りつぶされたピーク面積を数値として求めることができるので、ラインの濃淡を数値として比較することが可能となる。また、対照部（C）のラインが、異なる試料間でも同様な濃度で発色することから、異なる環境で撮影した画像を解析したデータ、異なるソフトで解析したデータ、異なる条件で撮影した画像を解析したデータなどについても、試験部（T）の数値を対照部（C）の数値で除した T/C 値
を用いることで、ある程度の比較が可能である。

7

図８．簡易分析キットの対照部（C）と試験部（T）の判定ラインの JustTLC による解析
上：解析に用いたテストプレートの画像
下：対照部（C）と試験部（T）の画像部分を解析して得られるクロマトグラム

8３．簡易分析キットによるスクリーニング法導入のための検討事項
農林水産省消費・安全局による通知（26 消安第 6073 号）では、規制値よりも確実に毒量が低い検体を効率的に判別する目的で、公定法であるマウス試験法以外の方法をスクリー
ニング法として導入することが可能とされている（下記参照）。スクリーニング法を導入す
るには、規制値より低い値をスクリーニングレベルとして設定し、スクリーニング法ではこのスクリーニングレベルを確実に判定することが求められる。判定の結果、スクリーニング
レベルを超える可能性があると判定された場合は、必要に応じて公定法等で検査を行い、規制値を超える毒量であるか確定する。一方、スクリーニング法によりスクリーニングレベルを超えないと判定されればマウス試験法などの検査をせずに出荷することが可能である。
したがって、スクリーニング法の導入には、適切なスクリーニングレベルを設定し、簡易測定法によりスクリーニングレベルを確実に判定することが求められている。
【参考】スクリーニング法（二枚貝等の貝毒のリスク管理に関するガイドライン）「公定法又はそれと同等以上であることが確認された検査法による検査よりも多くの検体を効率的に検査することが可能となるよう、毒量が規制値よりも確実に低い検体を判別するためのスクリーニング法を導入することができる。スクリーニング法を使用する場合には、規制値より確実に低いと判定できるレベル（スクリーニングレベル）を設定する。このレベルを超える場合は、毒量が規制値を超える可能性があるた
め、必要に応じて公定法等で検査結果を確認する。
」

そこで、本キットを用いたスクリーニングを現場に導入するには、
１）二枚貝抽出のマトリクスによる影響の評価
２）各種毒力の抽出試料による希釈倍率の検討
３）スクリーニングレベルの設定
４）現場サンプルの分析による検証といった検討を行い、設定したスクリーニングレベルを確実に判定できることを確認する必要がある。また、これらの検討は毒化原因藻ごと、二枚貝種ごとに必要となるほか、貝種や原因藻が同じであっても、海域により含まれる麻痺性貝毒成分の組成が大きく異なる場
合には、海域ごとの検討も必要となる。
（１）抽出試料マトリクスの影響の検討
スクリーニング対象とする二枚貝種の無毒の抽出液を、付属の希釈液で 20 倍以上に希釈して分析し、対照部（C）と試験部（T）に赤いラインが明瞭に現れるか確認する。二枚貝の抽出試料は、マウス試験で無毒（検出限界以下）とされても、少量の麻痺性貝毒成分を含む
場合がある。ここでの検討に使用する抽出試料は、そのような少量の麻痺性貝毒成分も含む
9

ことがないよう、毒成分の有無を機器分析で確認した試料、あるいは長期間にわたり貝毒原
因藻にさらされておらず、麻痺性貝毒成分を含む可能性のない二枚貝の抽出試料を使用する。キット分析の結果、対照部（C）および試験部（T）の両方に赤いラインが明瞭に現れた
場合、以降の検討に進む。赤いラインが明瞭に現れない場合は、当該二枚貝抽出液により反応阻害が生じていると思われることから、当初より希釈倍率を上げて対照部（C）と試験部（T）に赤いラインが明瞭に現れる希釈倍率を確認し、以降の検討についてはそれより高い
希釈倍率で行う。
なお、これまでに、ホタテガイ、マガキ、アサリ、アカガイ、トリガイ、ヒオウギ、ホッキガイ、タイラギ、ナミガイ（市場名白ミル）では反応阻害は確認されていない。
（２）測定試料の希釈倍率の設定
簡易分析キットでは、判定したい毒力（=スクリーニングレベル）より低い毒力では試験部（T）に赤いラインが現れ、それより高い毒力ではラインがほぼ見えない状態となる希釈倍率を設定する必要がある。
このような希釈倍率を設定するため、
１．スクリーニング法を導入する海域で、対象となる二枚貝種から得られた測定用抽出試料
で、スクリーニングレベルを前後した毒力（マウス試験で求めた毒力）のものを複数用意する。
２．用意した測定用抽出試料について、付属の希釈液で各種の希釈倍率に希釈し、簡易キッ
トで分析する。
３．判定したい毒力（=スクリーニングレベル）より低い毒力で試験部（T）に赤いラインが現れ、それより高い毒力でラインがほぼ見えない状態となる希釈倍率を見いだす。
という手順が必要となる。
しかし、１．に示したような各種の毒力を示す測定用抽出試料を準備することが難しい場合
は、スクリーニングレベルより高い毒力の測定用抽出試料を、無毒の測定用抽出試料で希釈して、各種の毒力に相当する測定用抽出試料を調製し、同様な検討を行う。詳細は、「４．
国内各地のスクリーニング法導入にむけた検討事例」を参考にされたい。
（３）スクリーニングレベルの設定
スクリーニングレベルの設定の際に、最も考慮すべきは、マウス試験の毒力が 4 MU/g を超えるものを誤って 4 MU/g 未満と判定してしまう偽陰性（キットでスクリーニングレベル
以下とされたにもかかわらずマウス試験毒力値が 4 MU/g を超えている事例）が生じないよ
うにすることである。そのため、スクリーニングレベルは規制値である 4 MU/g より低いレベルに設定し、設定したスクリーニングレベルで簡易キットによる判定が可能であることが必要である。
（２）における希釈倍率の検討の結果をもとに、規制値以下の毒力値で、な10

おかつキットで確実に判定できる毒力値をスクリーニングレベルに設定する。繰り返しになるが、偽陰性の可能性がない、安全なスクリーニングレベルを設定することが重要である。
なお、農林水産省委託事業では、2 MU/g をスクリーニングレベルとしてホタテガイ、マガキ、アサリ、アカガイ、トリガイ、ヒオウギについて各種検討を行った。
（４．
（１）～（７））。
（４）現場サンプルの分析による検証
スクリーニング法を導入する海域で採取されマウス試験を行った二枚貝抽出試料について、並行してキット分析を行い、マウス試験の毒力と簡易分析キットでの判定に齟齬がないか、多くの試料で検証する。問題があった場合には、試料に含まれる麻痺性貝毒成分の量や毒組成を調べて、その原因を明らかにするとともに、偽陰性が起こる危険性を検討し、必要に応じ、判定基準やスクリーニングレベルの設定を見直す。

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４．国内各地のスクリーニング法導入にむけた検討事例
農林水産省委託事業では、国内の複数の海域で、異なる麻痺性貝毒原因プランクトンで毒化した二枚貝について、本キットによるスクリーニング法導入のための検討を行った。本キットによるスクリーニング法の検討を進めるにあたっては、これらの事例が参考になる。
（１）北海道噴火湾で Alexandrium tamarense を原因藻として毒化するホタテガイについて、スクリー
ニング法を導入することを目的として、簡易分析キットによる測定時の希釈倍率を検討するとともに、スクリーニングレベルを検討した。
１） 希釈倍率の検討
噴火湾海域で毒化し、食品衛生法規制値の 4 MU/g を超過した有毒ホタテガイ（マウス
毒力：7.7 MU/g）および同一海域で採取された無毒ホタテガイ（マウス毒力：不検出）試料を使用した。無毒ホタテガイ試料は、HPLC 法による成分分析においても麻痺性貝毒成分は不検出であった。この無毒ホタテガイの測定用抽出液と、噴火湾東部海域で 2015 年に毒化し、マウス毒力が 7.7 MU/g の測定用抽出液を表１に示す割合で混合し、各毒力に相当するホタテガイ抽出液を調製した。
表１．希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法
調製した試料の毒力

毒化ホタテガイ試料（7.7 MU/g）の割合

無毒ホタテガイ試料の割合

1 MU/g 相当
2 MU/g 相当
3 MU/g 相当
4 MU/g 相当
5 MU/g 相当

1
1
1
1
1

6.7
2.85
1.567
0.925
0.54

このように得た測定用抽出液を付属の希釈液で 20 倍～100 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析した。図１にキット分析の判定部の写真を示すが、無毒試料（0MU/g 相当）ではすべての希釈倍率において対照部（C）および試験部（T）に明瞭なラインが形成されたことを確認し、抽出マトリクスが判定に影響することがないと確認できた。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、2 MU/g 相当の抽出液では、40 倍～80 倍の希釈
では試験部（T）のラインが薄れていたのに対して、100 倍の希釈ではラインが明瞭に確認できる。一方、1 MU/g 相当の抽出液では 80 倍以上の希釈倍率において、試験部（T）のラインが明瞭に確認できた。
また、ラインの濃淡を数値化したデータを表２に示した。0 MU/g 相当の試料ではすべての希釈倍率で、1 MU/g 相当の試料では 80 倍以上の希釈倍率で試験部（T）の数値が高く
12なっていた。また、2 MU/g 相当の試料では、40 倍～80 倍の希釈倍率で試験部（T）の数
値が低くなっており、ともに目視での判定を支持する結果が得られた。

希
20 倍

40 倍

釈

倍

50 倍

60 倍

0 MU/g 相当

1 MU/g 相当

2 MU/g 相当

3 MU/g 相当

4 MU/g 相当

5 MU/g 相当

図１．ホタテガイの毒力別試料におけるキット分析

13

率
80 倍

100 倍

表２．ホタテガイ測定用抽出液の判定部ラインの目視判定および数値化データ

0 MU/g相当

1 MU/g相当

2 MU/g相当

3 MU/g相当

4 MU/g相当

5 MU/g相当

試験部（T）の目視判定
判定部 対照部（C）
ラインの 試験部（T）
数値
T/C
試験部（T）の目視判定
判定部 対照部（C）
ラインの 試験部（T）
数値
T/C
試験部（T）の目視判定
判定部 対照部（C）
ラインの 試験部（T）
数値
T/C
試験部（T）の目視判定
判定部 対照部（C）
ラインの 試験部（T）
数値
T/C
試験部（T）の目視判定
判定部 対照部（C）
ラインの 試験部（T）
数値
T/C
試験部（T）の目視判定
判定部 対照部（C）
ラインの 試験部（T）
数値
T/C

20倍
＋＋
8134
6398
0.787
±
9609
615
0.064
－
8126
166
0.020
－
6046
40
0.007
－
9175
36
0.004
－
5910
2
0.000

40倍
＋＋
10636
9875
0.928
＋
9930
1538
0.155
±
8964
656
0.073
－
9746
480
0.049
－
11231
436
0.039
－
9369
442
0.047

希釈倍率
50倍 60倍＋＋ ＋＋9092 10737
4782 8058
0.526 0.751＋＋
6510 9237
1702 2196
0.262 0.238＋＋
8568 9333
871 1585
0.102 0.170±±5949 6479
542 1025
0.091 0.158±±
6208 6197
259
450
0.042 0.073－±
6060 5422
33
257
0.005 0.047

80倍 100倍＋＋ ＋＋
9349 11508
7605 5084
0.813 0.442＋＋ ＋＋6948 8957
3788 4527
0.545 0.505＋＋＋
7188 7115
1431 3615
0.199 0.508＋＋
9459 7699
1374 2091
0.145 0.272±＋
8381 7733
918 11290.109 0.146±±
6695 6454
686
825
0.102 0.128

２） スクリーニングレベル（仮）の設定
１）で行った希釈倍率の検討において、2 MU/g 相当の試料では希釈倍率が 40 倍～80 倍の範囲で試験部（T）のラインが薄くなっていた。また、1 MU/g 相当の試料では、希釈倍率が 80 倍以上で試験部（T）のラインが明瞭に確認できた（図１）。さらに、数値化したデータでは 80 倍以上でラインが濃くなっていることがわかった（表２）。以上より、希釈
倍率を 80 倍として分析することで、2 MU/g 以上の毒力の試料については偽陰性なく判定することが可能と考えられ、2 MU/g をスクリーニングレベルとしてさらに検討を進めることとした。
３） 現場試料での検証

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北海道沿岸海域において採取したホタテガイ（可食部）235 検体について、マウス毒性試験を行うとともに、希釈倍率 80 倍で本キットにより分析した。その結果、マウス毒力が不検出の試料では試験部（T）のラインが明瞭に確認できたが、2.0 MU/g 以上の試料では試験部（T）にラインが薄く確認されるか、もしくはラインが確認できなかった（図
２）
。

マウス毒力

マウス毒力

マウス毒力

（目視）

（目視）

（目視）

5.6 MU/g

2.7 MU/g

2.8 MU/g

（＋）

（＋）

（±）

不検出

2.7 MU/g

2.3 MU/g

（＋＋）

（＋）

（＋）

17.4 MU/g

26.4 MU/g

2.0 MU/g

（－）

（－）

（＋）

15.8 MU/g

6.8 MU/g

7.7 MU/g

（－）

（－）

（－）

6.4 MU/g

3.2 MU/g

6.7 MU/g

（－）

（±）

（－）

2.2 MU/g

2.2 MU/g

4.6 MU/g

（＋）

（＋）

（＋）

3.0 MU/g

2.2 MU/g（＋）（＋）

図２．北海道産ホタテガイのキットによる分析（マウス毒力：2 MU/g 以上の陽性検体）
これまでのところ、2.0 MU/g より高い毒力の試料はすべて試験部（T）のラインが薄く確認されるか、またはラインが確認できず、2.0 MU/g 以上の試料を基準値未満と判定する偽陰性は認められないという結果が得られた。引き続き、現場海域でのデータ蓄積を進めるが、キット分析時の希釈倍率 80 倍とすることで、北海道沿岸海域のホタテガイについて、2 MU/g をスクリーニングレベルとして本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。

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（２）岩手県
大船渡湾で Alexandrium tamarense を原因藻として毒化するホタテガイについて、スクリーニング法を導入することを目的として、簡易分析キットによる測定時の希釈倍率を検討するとともに、スクリーニングレベルを検討した。
１）希釈倍率の検討
大船渡湾では無毒ホタテガイを確保できなかったため、2018 年に山田湾で採取されたものを無毒ホタテガイとして使用した。なお無毒ホタテガイ試料は機器分析（蛍光 HPLC 分析法）による分析でも麻痺性貝毒成分に該当するピークは検出されなかった。この無毒ホ
タテガイの測定用抽出液と、大船渡湾で 2017 年に毒化し機器分析による分析結果から換算したマウス検査の毒力が 18.6MU/g の測定用抽出液を表１の割合で混合し、各毒力に相当するホタテガイ抽出液を調製した。
表１ 希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法
調製した試料

毒化ホタテガイ試料

無毒ホタテガイ試料の毒力(18.6 MU/g)の割合の割合

5 MU/g 相当

1

2.72

4 MU/g 相当

1

3.65

3 MU/g 相当

1

5.2

2 MU/g 相当

18.3

1 MU/g 相当

117.6

このように得た測定用抽出液を付属の希釈液で 2 倍～100 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析し、表２に判定結果を示す。無毒試料ではすべての希釈倍率で対照部（C）および試験部（T）ではっきりとラインが形成されたことを確認し、抽出マト
リクスが判定に影響することがないと確認できた。
麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、3 MU/g 以上の毒力に相当する抽出液で 60 倍の以下の希釈の場合に試験部（C）のラインがはっきりと確認できないのに対して、80 倍以上の希釈では試験部（T）にラインがはっきりと確認出来た。一方、2 MU/g 相当の抽出液では、40 倍以上の希釈倍率で試験部（T）のラインがはっきりと確認出来た。
ラインの濃淡を数値化したデータを表３～表５に示した。表３の 4 MU/g 相当の試料および表４の 3 MU/g 相当の試料では、40 倍および 20 倍の希釈倍率、表５の 2 MU/g 相当の試料では 20 倍の希釈倍率で試験部（T）の数値が低くなっていた。また、表３～５で弱いラインが形成される±の C/T 比は 0.063～0.190 の範囲であり平均 0.114 となった。

16

表２ ホタテガイの希釈倍率の検討結果
毒値

希釈倍率

（MU/ｇ）

20

40

60

80

100

5 MU/g 相

－

－

－

±

±

－

±

±

±

＋

±

±

±

＋

＋

±

＋

＋

＋

＋

±

＋

＋

＋

＋

当

4 MU/g 相当

3 MU/g 相当

2 MU/g 相当

1 MU/g 相当凡例）＋：ライン形成、±：弱いライン、－：ラインなし
表３ ホタテガイ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

100

＋

10955

3419

0.312

80

±

9935

1890

0.190

60

±

10463

1647

0.157

40

±

10363

767

0.074

20

－

8425

466

0.055

表４ ホタテガイ測定用抽出液（3 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

100

＋

12099

4271

0.353

80

＋

11445

3729

0.326

60

±

9792

1712

0.175

40

±

8830

666

0.075

20

±

11049

706

0.064

17

表５ ホタテガイ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

100

＋

10015

4225

0.422

80

＋

11911

4233

0.355

60

＋

10013

2937

0.293

40

＋

13377

1992

0.149

20

±

8488

537

0.063

２）スクリーニングレベルの設定
岩手県では、毎年度、漁業関係者が協議して貝毒の自主対策を決めている。令和元年度以降もこれまでと同様に殻付き出荷用のホタテガイは 3 MU/g 以上で出荷自粛を講じる方針である。
4 MU/g を超えた場合：自主規制
3 MU/g 以上～4 MU/g 未満：検体採捕日から検査結果判明日まで自粛
2 MU/g 以上～3 MU/g 未満：貝毒原因プランクトンの出現状況に応じて自粛検討
１）で行った希釈倍率の検討では、はっきりとラインが形成される++とラインが形成される＋を陽性と判定すると、40 倍希釈で 2 MU/g と 3 MU/g を区別して判定できることから、スクリーニングレベルを 3 MU/g とした。
３）現場試料での検証
大船渡湾の他、岩手県沿岸の他の海域において自主検査を実施した試料について、２）で検討したスクリーニングレベル 3MU/g 付近の試料について検査機関の協力を得て実証試験をした結果、偽陽性はあるものの概ね 40 倍の希釈倍率で判定可能であった（表６）。
以上のことから、大船渡湾を含む岩手県沿岸で Alexandrium tamarense を原因藻として毒化するホタテガイについては、スクリーニングレベル 3MU/g として 40 倍の希釈倍率で判定可能と考えられた。

18

表６ ホタテガイの希釈倍率の検討結果
海域

毒値
（MU/

希釈倍率

備考

20

40

60

80

100

ｇ）
南部海域

4.1

－

－

－

－

下降期

大船渡湾西部

2.1

－

±

＋

＋

上昇期

三陸町

2.3

±

±

＋

＋

釜石湾

3.8

－

±

下降期

釜石湾

2.8

＋

＋

下降期

釜石湾

3.1

－

－

下降期

釜石湾

2.8

－

±

下降期

釜石湾

2.3

－

±

下降期

＋

上昇期

凡例）＋：ライン形成、±：弱いライン、－：ラインなし、空欄：未測定

19

（３）大阪府
１．大阪湾で毒化したアサリにおけるスクリーニング法の検討
大阪湾で Alexandrium tamarense を原因藻として毒化するアサリについて、スクリーニン
グ法を導入することを目的として、簡易分析キットによる測定時の希釈倍率を検討するとともに、スクリーニングレベルを検討した。
１）希釈倍率の検討
大阪湾では無毒アサリを確保できなかったため、2018 年に広島湾で採取されたものを無毒アサリとして使用した。なお無毒アサリ試料は HPLC 法による分析でも麻痺性貝毒成分に該当するピークは検出されなかった。この無毒アサリの測定用抽出液と、大阪湾で 2014
年に毒化しマウス検査の毒力が 11 MU/g の測定用抽出液を表１の割合で混合し、各毒力に相当するアサリ抽出液を調製した。
表１ 希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法

調製した試料の毒力

毒化アサリ試料

無毒アサリ試料（11 MU/g）の割合の割合

4 MU/g 相当

11.75

2 MU/g 相当

14.5

1 MU/g 相当

110

このように得た測定用抽出液を付属の希釈液で 40 倍～400 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析した。図１にキット分析の判定部の写真を示すが、無毒試料ではすべての希釈倍率で対照部（C）および試験部（T）ではっきりとラインが形成されたことを確認し、抽出マトリクスが判定に影響することがないと確認できた。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、2 MU/g 以上の毒力に相当する抽出液で 40 倍および 60 倍希釈の場合に試験部（C）のラインが確認できないのに対して、80 倍以上の希釈では試験部（T）にラインが僅かに確認出来る。一方、無毒あるいは 1 MU/g 相当の抽出液では 60 倍以上の希釈倍率で試験部（T）のラインが確認出来た。
また、ラインの濃淡を数値化したデータを表１～表４に示した。表２の 2 MU/g 相当の試料では、40 倍および 60 倍の希釈倍率で、4 MU/g 相当の試料では 40 倍～100 倍の希釈倍率で試験部（T）の数値が低くなっていた。また、無毒試料では全ての希釈倍率で試験部（T）の数値が同様な高い数値となっており、ともに目視での判定を支持する結果が得られた。

20

4 MU/g 相当

2 MU/g 相当

1 MU/g 相当

無毒試料（希釈倍率）

400 倍

200 倍

100 倍

80 倍

60 倍

40 倍

図１．無毒および各種の毒力に調製したアサリの測定用抽出試料のキット分析

表１ アサリ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部（C）

試験部（T）

T/C

400

＋

14686480

1742400

0.119

200

＋

13283240

1210880

0.091

100

±

11925760

831480

0.070

80

－

9527400

628640

0.066

60

－

11959320

363480

0.030

40

－

8937560

3289200.037

21

表２ アサリ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部（C）

試験部（T）

T/C

400

＋

15852480

2168320

0.137

200

＋＋

15051280

3068000

0.204

100

＋

95740801113680

0.116

80

±

11666120

1179840

0.101

60

－

14917480

653720

0.044

40

－

11268600

4683600.042

表３ アサリ測定用抽出液（1 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部（C）

試験部（T）

T/C

400

＋＋

15146160

5169760

0.341

200

＋＋

11492440

4650920

0.405

100

＋

10524440

2521440

0.240

80

＋

15026200

1068800

0.071

60

＋

12174440

1605720

0.132

40

±

9262880

10025200.108

表４ アサリ測定用抽出液（無毒）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部（C）

試験部（T）

T/C

400

＋＋

14000920

6212800

0.444

200

＋＋

18790640

7474720

0.398

100

＋＋

18275360

7000440

0.383

80

＋＋

14648840

9183360

0.627

60

＋＋

15853280

6793360

0.429

40

＋＋

17849640

8146600

0.456２）スクリーニングレベル（仮）の設定
１）で行った希釈倍率の検討では、2 MU/g および 4 MU/g 相当の測定用抽出試料で希釈

22倍率が 40 倍および 60 倍で試験部（T）のラインがほとんど見えなくなっていた。また 1
MU/g 相当の試料では、希釈倍率が 40 倍および 60 倍で試験部（T）のラインが確認できた。
さらに数値化したデータでは 60 倍で僅かにラインが濃くなっていることがわかった。以上
より、希釈倍率を 60 倍として分析することで、2 MU/g より低い毒力の試料については偽陰性無く判定することが可能と考えられ、2 MU/g を仮のスクリーニングレベルとしてさらに検討を進めることとした。
３）現場試料での検証
大阪湾において 2016 年（図２）および 2018 年（図３）に採取したアサリについて、マウス試験を行うとともに、希釈倍率 60 倍で本キットにより分析した。その結果、2016 年に採取したアサリではマウス毒力が不検出および 2.2 MU/g の試料では僅かに試験部（T）のラインが確認できたが、3.2 MU/g 以上の毒力の試料では試験部（T）にラインは確認出来なかった。
2018 年採取のアサリは、全て 2.0 MU/g 以上の毒力であったが、2.0 MU/g の試料で僅かにラインが確認できたほかは、試験部（T）にラインは確認できなかった。これまでのところ 4
MU/g より高い毒力の試料はすべて試験部（T）にラインは確認されず、4 MU/g 以上の試料を規制値以下と判定する偽陰性はないという結果が得られた。引き続き現場海域でのデー
タ蓄積を進めるが、キット分析時の希釈倍率 60 倍とすることで、大阪湾のアサリについて
2 MU/g をスクリーニングレベルとして本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。

対照部(C） →試験部(T） →（マウス毒力） 3.2 MU/g

4.2 MU/g

49.7 MU/g

2.2 MU/g

不検出

213.7 MU/g 174.8 MU/g 99.5 MU/g

対照部(C） →試験部(T） →（マウス毒力） 不検出

不検出

図２ 2016 年に大阪湾で採取したアサリのキットによる分析

23

不検出

不検出

対照部(C） →試験部(T） →（マウス毒力）3.0 MU/g

4.2 MU/g

3.0 MU/g

2.0 MU/g

4.6 MU/g

222.4 MU/g 223.0 MU/g

対照部(C） →試験部(T） →（マウス毒力）2.2 MU/g

2.4 MU/g

2.8 MU/g

図３ 2018 年に大阪湾で採取したアサリのキットによる分析
２．大阪湾で毒化したアカガイにおけるスクリーニング法の検討
大阪湾で Alexandrium tamarense を原因藻として毒化するアカガイについて、スクリーニ
ング法を導入することを目的として、簡易分析キットによる測定時の希釈倍率を検討するとともに、スクリーニングレベルを検討した。
１）希釈倍率の検討
大阪湾では HPLC 法でピークが検出されない無毒アカガイを確保できなかったため、2010 年に採取されたサンプル（HPLC 法で 0.46 MU/g）を蒸留水で 1/2 希釈したものを無毒抽出液として使用した。なお同抽出液については事前に 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 に希釈したものをイムノクロマトキットで分析し、原液では試験部（T）の発色が薄く T/C 比が低くなったものの、1/2 以上の希釈で試験部（T）と対照部（C）の比（T/C 比）が高位で安定したため、1/2 希釈液をもって無毒サンプルに代えた。この無毒アカガイの測定用抽出液と、大阪湾で 2014 年に毒化したアカガイについて、毒化前期（ピーク前）と毒化後期（規制解除前）の、マウス試験の毒力がそれぞれ 11.45 MU/g，5.13 MU/g の 2 サンプルについて測定用抽出液を表１の割合で混合して 4 MU/g に相当する試料を調整し、さらに前述の無毒アカガイ抽出液で 1/2、1/4 に希釈することで 2MU/g 相当、1 MU/g 相当の試料を調整した。前期と後期に分けたのは、貝毒のスクリーニングが自主規制開始と終了に適用される可能性と、山本・及川（2017）によりアカガイでは毒化期間中の毒成分が大きく変化する可能性を考慮したためである。

24

表１ 希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法

調整した試料の毒力調整したアカガイ試料 無毒アカガイ試料の割合の割合

前期（11.45MU/g）

1

1.86

後期（5.13MU/g）

1

0.28

このように得た測定用抽出液を付属の希釈液で 50 倍～120 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析した。図１に毒化前期のキット分析の判定部の写真を示すが、無毒試料ではすべての希釈倍率で対照部（C）および試験部（T）ではっきりとラインが形成されたことを確認し、抽出マトリクスが判定に影響することがないと確認できた。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、4 MU/g の毒量に相当する抽出液で 100 倍希釈まで試験部（T）のラインが確認出来ず、120 倍で薄いラインが発現した。また、2 MU/g の毒力に相当する抽出液では 50 倍および 60 倍希釈の場合に対照部（C）のラインが確認できないのに対して、
80 倍以上の希釈では試験部（T）にラインが僅かに確認出来る。一方、無毒あるいは 1 MU/g相当の抽出液では 50 倍以上の希釈倍率で試験部（T）のラインが確認出来た。
また、前期においてラインの濃淡を数値化したデータを表２～表５に示した。表３の 2
MU/g 相当の試料では、60 倍の希釈倍率で、4 MU/g 相当の試料では 50 倍～100 倍の希釈倍率で試験部（T）の数値が低くなっていた。また、無毒試料では全ての希釈倍率で試験部（T）の数値が同様な高い数値となっており、ともに目視での判定を支持する結果が得られた。

25

図１．無毒および各種の毒力に調製したアカガイの測定用抽出試料のキット分析（前期）
表２ アカガイ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（前期）

26

表３ アカガイ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（前期）

表４ アカガイ測定用抽出液（1 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（前期）

表５ アカガイ測定用抽出液（無毒）の判定部ラインの目視判定および数値化データ（前期）後期の試料については 30 倍～80 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析した。図２に毒化後期のキット分析の判定部の写真を示す。無毒試料は前期と同じ試料である。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、4 MU/g の毒量に相当する抽出液では 40 倍希釈で試験部（T）の薄いラインが発現した。また、2 MU/g～無毒に相当する抽出液ではすべての希釈率で試験部（T）にラインが僅かに確認出来た。後期においてラインの濃淡を数値化し27

たデータを表６～表９に示した。表７の 2 MU/g 相当の試料では、30 倍～40 倍の希釈倍率で、表６の 4 MU/g 相当の試料では 30 倍～60 倍の希釈倍率で試験部（T）の数値が低くなっていた。また、無毒試料では全ての希釈倍率で試験部（T）の数値が同様な高い数値となっており、ともに目視での判定を支持する結果が得られた。

図２．無毒および各種の毒力に調製したアカガイの測定用抽出試料のキット分析（後期）
表６ アカガイ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（後期）

28

表７ アカガイ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（後期）

表８ アカガイ測定用抽出液（1 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（後期）

表９ アカガイ測定用抽出液（無毒）の判定部ラインの目視判定および数値化データ（後期）29２）スクリーニングレベル（仮）の設定
１）で行った希釈倍率の検討では、アカガイ前期の抽出液で 2 MU/g で 60 倍、4 MU/g 相当の測定用抽出試料で希釈倍率が 100 倍で試験部（T）のラインがほとんど見えなくなっていた。また 1 MU/g 相当の試料では、希釈倍率が 50 倍以上の希釈率で試験部（T）のラインが確認できた。さらに数値化したデータでは 50～60 倍でラインが濃くなっていることがわかった。以上より、希釈倍率を 50 倍として分析することで、2 MU/g より低い毒力の試料については偽陰性（規制値 4 MU/g より高い毒力の試料を誤って 4 MU/g 未満と判断すること）
無く判定することが可能と考えられた。前期のスクリーニングでは規制値を超える前の漁獲物を早期に把握する目的から、2 MU/g を仮のスクリーニングレベルとしてさらに検討を進めることとした。
一方、アカガイ後期の抽出液では 4 MU/g 相当の測定用抽出試料で 40 倍希釈から試験部（T）のラインが確認された。後期のスクリーニングにおいては規制値を下回る直前ないし直後の漁獲物を把握することが目的となるため、4 MU/g を仮のスクリーニングレベルとしてさらに検討を進めることとした。
３）現場試料での検証
大阪湾において 2013 年、2014 年、および 2015 年に採取したアカガイについて、マウス試験を行うとともに、前期と後期に分けて希釈倍率 50 倍（前期（図 3）、後期（図 4））と 80倍（前期（図 5）、後期（図 6））で本キットにより分析した。その結果、50 倍希釈のアカガ
イ前期では概ね 3 MU/g を上回る試料では試験部（T）にラインは確認出来なかった。一方、後期では概ね 4 MU/g 以上の試料で試験部（T）のラインは消失していたが、2014 年の 10 月
および 2015 年の 7 月の試料で 4 MU/g を上回っているにも関わらす薄いラインが確認出来た。また、80 倍希釈では前期では概ね 3.5 MU/g を上回る試料で、後期では 4 MU/g を上回る試料で試験部（T）にラインは確認出来なかった。
これまでのところ、アカガイ前期においては 50 倍、80 倍希釈とも 4 MU/g を上回る試料
はすべて試験部（T）にラインは確認されず、4 MU/g 以上の試料を規制値以下と判定する偽陰性はないという結果が得られた。引き続き現場海域でのデータ蓄積を進めるが、キット分
析時の希釈倍率 50 倍とすることで、大阪湾のアカガイについて 2 MU/g をスクリーニング
レベルとして本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。一方、後期では時期が進むにつれ判定が不安定となる可能性が示唆された。アカガイでは原因プ
ランクトン衰退後も貝体内での毒成分の変換により STX の割合が増加することが明らかになっている（山本・及川 2017）。毒成分の変化を考慮したキットの運用については、さらなるデータの蓄積と体制の検討が必要である。

30

図３ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したアカガイのキットによる分析（前期 50 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

図４ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したアカガイのキットによる分析（後期 50 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

31（マウス毒力）3.0 MU/g

4.2 MU/g

4.6 MU/g

222.4 MU/g 223.0 MU/g

図５ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したアカガイのキットによる分析（前期 80 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

図６ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したアカガイのキットによる分析（後期 80 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

32

３．大阪湾で毒化したトリガイにおけるスクリーニング法の検討
大阪湾で Alexandrium tamarense を原因藻として毒化するトリガイについて、スクリーニ
ング法を導入することを目的として、簡易分析キットによる測定時の希釈倍率を検討するとともに、スクリーニングレベルを検討した。
１）希釈倍率の検討
無毒抽出液には 2015 年に大阪湾で採取されたサンプル（HPLC 法で無毒）を使用した。
この無毒トリガイの測定用抽出液と、大阪湾で 2014 年に毒化したトリガイについて、毒化前期（ピーク前）と毒化後期（規制解除前）の、マウス試験の毒力がそれぞれ 10.14
MU/g，10.75 MU/g の 2 サンプルについて測定用抽出液を表１の割合で混合して 4 MU/g に相当する試料を調整し、さらに無毒トリガイ抽出液で 1/2、1/4 に希釈することで 2 MU/g
相当、1 MU/g 相当の試料を調整した。前期と後期に分けたのは、貝毒のスクリーニングが自主規制開始と終了に適用される可能性と、アカガイと同様毒化期間中の毒成分が変化する可能性を考慮したためである。
表１ 希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法

調整した試料の毒力調整したトリガイ試料 無毒トリガイ試料の割合の割合

前期（10.14MU/g）

1

1.54

後期（10.75MU/g）

1

1.69

このように得た測定用抽出液を付属の希釈液で 50 倍～120 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析した。図１に毒化前期のキット分析の判定部の写真を示すが、無毒試料ではすべての希釈倍率で対照部（C）および試験部（T）ではっきりとラインが形成されたことを確認し、抽出マトリクスが判定に影響することがないと確認できた。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、4 MU/g の毒量に相当する抽出液で 100 倍希釈まで試験部（T）のラインが確認出来ず、120 倍で薄いラインが発現した。また、2 MU/g の毒力に相当する抽出液では 50 倍から 60 倍で試験部（T）にラインが僅かに確認出来る。一方、無毒あるいは 1 MU/g 相当の抽出液では 60 倍以上の希釈倍率で試験部（T）に濃いラインが確認出来た。
また、前期においてラインの濃淡を数値化したデータを表２～表５に示した。表３の 2
MU/g 相当の試料では、50 倍～60 倍の希釈倍率で、4 MU/g 相当の試料では 50 倍～100 倍の希釈倍率で試験部（T）の数値が低くなっていた。また、無毒試料では全ての希釈倍率で試験部（T）の数値が高い数値となっており、ともに目視での判定を支持する結果が得られた。

33

図１．無毒および各種の毒力に調製したトリガイの測定用抽出試料のキット分析（前期）
表２ トリガイ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（前期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

±

6630

296

0.0447

100

－

6280

134

0.0213

80

－

8218

79

0.0097

60

－

7632

34

0.0044

50

－

6067

113

0.018634

表３ トリガイ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（前期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

＋

5285

405

0.0767

100

＋

4646

304

0.0654

80

＋

7602

303

0.0399

60

±

4782

137

0.0286

50

±

6293

140

0.0222

表４ トリガイ測定用抽出液（1 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（前期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

＋

8681

1154

0.1329

100

＋

7253

940

0.1296

80

＋

5655

577

0.1021

60

＋

7674

588

0.0767

50

±

5923

386

0.0651

表５ トリガイ測定用抽出液（無毒）の判定部ラインの目視判定および数値化データ（前期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

＋＋

7770

3127

0.4025

100

＋＋

7905

2319

0.2933

80

＋＋

6625

3258

0.4918

60

＋＋

5586

2300

0.4118

50

＋＋

5768

2312

0.4008後期の試料についても 50 倍～120 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 180711）により分析した。図２に毒化後期のキット分析の判定部の写真を示す。無毒試料は前期と同じ試料である。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、4 MU/g の毒量に相当する抽出液の場合 120 倍希
釈で試験部（T）の薄いラインが発現した。また、2 MU/g に相当する抽出液では 60 倍希釈で試験部（T）の薄いラインが発現した。後期においてラインの濃淡を数値化したデータを35

表６～表９に示した。表７の 2 MU/g 相当の試料では、80 倍の希釈倍率で、表６の 4 MU/g相当の試料では 50 倍～80 倍の希釈倍率で試験部（T）の数値が低くなっていた。また、無毒試料では全ての希釈倍率で試験部（T）の数値が同様な高い数値となっており、ともに目視での判定を支持する結果が得られた。

図２．無毒および各種の毒力に調製したトリガイの測定用抽出試料のキット分析（後期）
表６ トリガイ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（後期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

±

6203

230

0.0371

100

±

6813

232

0.0340

80

－

6457

135

0.0209

60

－

4991

78

0.0156

50

－

7453

79

0.010636

表７ トリガイ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（後期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

＋

7076

703

0.0993

100

＋

7092

739

0.1041

80

±

4985

185

0.0370

60

±

6400

350

0.0547

50

－

6399

129

0.0202

表８ トリガイ測定用抽出液（1 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化デー
タ（後期）

判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

＋＋

5751

1397

0.2430

100

＋＋

7927

1206

0.1522

80

＋＋

5615

678

0.1208

60

＋

6990

556

0.0795

50

＋

7819

649

0.0831

表９ トリガイ測定用抽出液（無毒）の判定部ラインの目視判定および数値化データ（後期）判定部ライン濃淡の数値化
データ
対照部(C) 試験部(T)
T/C

希釈倍率

ライン濃淡
の目視判定

120

＋＋

7770

3127

0.4025

100

＋＋

7905

2319

0.2933

80

＋＋

6625

3258

0.4918

60

＋＋

5586

2300

0.4118

50

＋＋

5768

2312

0.400837２）スクリーニングレベル（仮）の設定
１）で行った希釈倍率の検討では、トリガイ前期の抽出液で 2 MU/g で 50～60 倍、4 MU/g相当の測定用抽出試料で希釈倍率が 100 倍で試験部（T）のラインがほとんど見えなくなっていた。また 1 MU/g 相当の試料では、希釈倍率が 50 倍以上の希釈率で試験部（T）のラインが確認できた。さらに数値化したデータでは 50～60 倍でラインが濃くなっていることがわかった。以上より、希釈倍率を 50 倍として分析することで、2 MU/g より低い毒力の試料については偽陰性（規制値 4 MU/g より高い毒力の試料を誤って 4 MU/g 未満と判断すること）無く判定することが可能と考えられた。前期のスクリーニングでは規制値を超える前の漁獲物を早期に把握する目的から、2 MU/g を仮のスクリーニングレベルとしてさらに検討を進めることとした。
一方、トリガイ後期の抽出液でも 4 MU/g 相当の測定用抽出試料で 100 倍希釈から試験部（T）のラインが確認された。後期のスクリーニングにおいては規制値を下回る直前ないし直後の漁獲物を把握することが目的となるため、4 MU/g を仮のスクリーニングレベルとしてさらに検討を進めることとした。
３）現場試料での検証
大阪湾において 2013 年、2014 年、および 2015 年に採取したトリガイについて、マウス検査を行うとともに、前期と後期に分けて希釈倍率 50 倍（前期（図 3）、後期（図 4））と 80倍（前期（図 5）、後期（図 6））で本キットにより分析した。その結果、50 倍希釈のアカガ
イ前期では概ね 3 MU/g を上回る試料では試験部（T）にラインは確認出来なかった。また、後期においても 2.91 MU/g 以上の試料で試験部（T）のラインは消失していた。80 倍希釈では前期、後期とも 4 MU/g を上回る試料で試験部（T）にラインは確認出来なかった。
これまでのところ、アカガイ前期においては 50 倍、80 倍希釈とも 4 MU/g を上回る試料
はすべて試験部（T）にラインは確認されず、4 MU/g 以上の試料を規制値以下と判定する擬陰性はないという結果が得られた。引き続き現場海域でのデータ蓄積を進めるが、キット分
析時の希釈倍率 50 倍とすることで、大阪湾のトリガイについて 2 MU/g をスクリーニング
レベルとして本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。また、後期においても前期と同様の反応性であった。毒化後半のスクリーニングはマウス試験へ移行する時期を見極めて、安全性を確保しつつ早期に解除することが目的となるため、キット分析の希釈倍率をより高い 80 倍にすることで、大阪湾のトリガイについて 4 MU/g をス
クリーニングレベルとして本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。なお、本キットによる毒化後半のスクリーニングは、マウス毒性試験を開始する時期を判断するためのものであり、4 MU/g のスクリーニングレベルを下回ると判断された場合にマウス毒性試験を開始して、その結果により出荷自主規制解除の判断することが必要
となる。

38

図３ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したトリガイのキットによる分析（前期 50 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

図４ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したトリガイのキットによる分析（後期 50 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

（マウス毒力）3.0 MU/g

4.2 MU/g
39

対照部(C) →試験部(T) →4.6 MU/g

222.4 MU/g 223.0 MU/g

図５ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したトリガイのキットによる分析（前期 80 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

図６ 2013 年～2015 年に大阪湾で採取したトリガイのキットによる分析（後期 80 倍希釈、（）内はマウス毒量）。

40

（４）大分県
猪串湾で Gymnodinium catenatum を原因藻として毒化するヒオウギガイについて、2 MU/g
以下を確実に陰性判定できる新たなスクリーニング法を導入することを目的として、簡易分析キットによる測定時の希釈倍率を検討した。
１）希釈倍率及びスクリーニングレベルの検討
猪串湾では無毒ヒオウギガイを確保できなかったため、2017 年に佐賀関で採取されたものを無毒試料として使用した。無毒試料はマウス毒性試験及び ELISA 法による分析でも麻痺性貝毒は検出されなかった。この無毒試料の測定用抽出液と、猪串湾で 2017 年に毒化し、マウス試験の毒力が 4.89 MU/g の測定用抽出液を表１の割合で混合し、各毒力に相当するヒオウギガイ測定用抽出液を調製した。
表１ 希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法

調製した試料の毒力
1MU/g相当
2MU/g相当
3MU/g相当
4MU/g相当
5MU/g相当

毒化ヒオウギガイ試料 無毒ヒオウギガイ試料（4.89MU/g）の割合
の割合
100
389
200
289
300
189
400
89
1
0

上記の方法で得た測定用抽出液を付属の希釈液で 100 倍～500 倍に希釈して簡易分析キット（Lot 002）により分析した。図１にキット分析の判定部の写真、表２に目視判定及びT/C 値の結果を示す。
無毒試料ではすべての希釈倍率で対照部（C）及び試験部（T）ではっきりとラインが形成されたことから、抽出マトリクスが判定に影響することがないことを確認した。
麻痺性貝毒を含む測定用抽出液では、1 MU/g 及び 2 MU/g の毒力に相当する抽出液で、200 倍及び 300 倍において目視判定結果が異なることを確認した。さらに、数値化したデータでは、200 倍に比べ 300 倍で 1 MU/g 及び 2 MU/g の毒力における T/C 値の差が大きい
ことを確認した。
これらの結果から、希釈倍率を 300 倍で設定して分析を行うことで、2 MU/g 以下の毒力を確実に陰性判定できることが示唆された。

41

無毒試料

1MU/g相当

2MU/g相当

3MU/g相当

4MU/g相当

5MU/g相当（希釈倍率）

100倍

200倍

400倍

300倍

500倍

図１ 無毒および各種の毒力に調製したヒオウギガイの測定用抽出試料のキット分析結果
表２ ヒオウギガイ測定用抽出液（無毒～5 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定及び T/C
値

毒量

判定基準

目視
無毒試料
T/C値
1MU/ｇ 目視
相当
T/C値
2MU/ｇ 目視相当
T/C値
３MU/ｇ 目視
相当
T/C値
4MU/ｇ 目視相当
T/C値
5MU/ｇ 目視
相当
T/C値

100
++
0.49
0.05
0.06
0.10
0.09
0.06

200
++
0.51
±
0.13
0.09
0.08
0.05
0.10

希釈倍率
300
++
0.54
±
0.20
0.09
0.10
0.14
0.06

400
++
0.66
±
0.23
±
0.14
0.10
0.12
0.06

500
+
0.71
+
0.40
+
0.23
±
0.16
0.13
0.02

２）現場試料での検証
猪串湾及び佐賀関において 2017 年に採取したヒオウギガイについて、マウス試験を行うとともに、希釈倍率 300 倍で本キットにより分析した。その結果、マウス毒力が 1.9 MU/gの試料において僅かに試験部（T）でラインが確認できたが、2.3 MU/g 以上の毒力の試料では試験部（T）にラインは確認出来なかった（図 2）。T/C 値とマウス毒力を比較したところ、
42

毒力の増加に伴い T/C 値は低下し（R2=0.6316）、近似式（y = 0.389e-0.345x）から 2 MU/g 相当の毒力の T/C 値は 0.195 と算出された。スクリーニングレベルである 2 MU/g 相当の毒力のT/C 値を 0.195 と設定した場合、試験に供したサンプル 10 個体のうち、偽陽性及び偽陰性はともに認められなかった（図 3）。
また、猪串湾において 2016 年～2018 年に採取したヒオウギガイについて、ELISA 法を実施するとともに、希釈倍率 300 倍で本キットにより分析した。その結果、2.8 MU/g 以上の毒力の試料では試験部（T）にラインは確認できなかった。マウス試験において導き出された 2 MU/g 相当の毒力の T/C 値を 0.195 と設定した場合、試験に供したサンプル 35 個体のうち、偽陽性は 3 個体、偽陰性は認められなかった（図 4）。
これらの結果を総合的に判断した結果、猪串湾のヒオウギガイについて 2 MU/g をスクリーニングレベルとして設定することで、本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。

（マウス毒力）3.8MU/g

4.9MU/g

3.6MU/g

2.6MU/g

2.8MU/g（マウス毒力）2.3MU/g

不検出

不検出

1.9MU/g

不検出

図２ 2017 年に猪串湾及び佐賀関で採取したヒオウギガイのキットによる分析

43

0.7
0.6

T/C値

0.5
y = 0.389e -0.345x
R² = 0.6316
N=10

0.4
マウス検査値2MU/g相当

0.3

T/C値：0.195

0.2
0.1
0
0

1

2

3

4

5

マウス検査値（MU/g）

図３ ヒオウギガイのマウス検査と T/C 値の関係

0.8

0.7
0.6

T/C値

0.5
y = 0.3709e -0.204x
R² = 0.537
N=35

0.4
マウス検査値2MU/g相当

0.3

T/C値：0.195

0.2
0.1
0
0

2

4

6

8

ELISA検査値

図４ ヒオウギガイの ELISA 検査と T/C 値の関係

44

10

12

14

（５）熊本県
１）希釈倍率の検討
2014 年に熊本県沿岸で採取され、HPLC 法により検出限界以下のものを無毒マガキとして使用した。この無毒マガキの測定用抽出液と、熊本県沿岸で 2015 年に毒化しマウス試験の毒力が 5.72 MU/g の測定用抽出液を表１の割合で混合し、各毒力に相当するマガキ抽出液を調製した。
表１ 希釈倍率検討用の測定用抽出液の調製方法
調製した試料

毒化マガキ試料

無毒マガキ試料の毒力(5.72 MU/g)の割合の割合

4 MU/g 相当

1

0.4

3 MU/g 相当

10.9

2 MU/g 相当

11.9

1 MU/g 相当

14.7

このように得た測定用抽出液を付属の希釈液で 150 倍～500 倍に希釈して簡易分析キッ
トにより分析した。図１にキット分析の判定部の写真を示すが、無毒試料ではすべての希釈倍率で対照部（C）および試験部（T）ではっきりとラインが形成されたことを確認し、抽出マトリクスが判定に影響することがないと確認できた。麻痺性貝毒を含む測定用抽出液について、4 MU/g 相当および 3 MU/g の抽出液では、350 倍、400 倍の希釈倍率の場合に試験部（T）のラインを確認することができた。2 MU/g 相当の抽出液では、希釈倍率
200 倍以上の場合に、また、1 MU/g 相当および無毒の試料では、希釈倍率 150 倍以上のすべての試料において試験部（T）のラインを確認することができた。
ラインの濃淡を数値化したデータを表２～表６に示した。表２の 4 MU/g 相当の試料および表３の 3 MU/g 相当の試料では、希釈倍率 350 倍以上で試験部（T）の数値が高い値となっており、表４の 2 MU/g 相当の試料では、希釈倍率 200 倍以上で試験部（T）の数値が高い値となっていた。また、1 MU/g 相当の試料（表５）、無毒の試料（表６）では、全ての希釈倍率で試験部（T）の数値が高い値となっており、ともに目視での判定を支持する結果であった。これらの結果から、本キットにより熊本県沿海のマガキ抽出液 4～3 MU/g相当の試料を判定する場合には希釈倍率 300 倍、2 MU/g 相当の試料を判定する場合には希釈倍率 150 倍が妥当であることが示された。

45

4 MU/g 相当

3 MU/g 相当

2 MU/g 相当

1 MU/g 相当

無毒試料（希釈倍率）

150 倍

200 倍

250 倍

300 倍

350 倍

400 倍

図１．無毒および各種の毒力に調製したマガキの測定用抽出試料のキット分析

46

500 倍

表２ マガキ測定用抽出液（4 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

500

－

1477.627

14.121

0.010

400

±

3423.770

218.385

0.064

350

±

2252.749

181.556

0.081

300

－

2114.749

18.5360.009

2503272.255

266.678

0.081

200

2935.477

28.5360.010

1502981.456

19.5360.007

表３ マガキ測定用抽出液（3 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

500

－

1837.213

6.121

0.003

400

±

3506.820

261.263

0.075

350

±

2123.870

215.435

0.101

300

－

2068.163

37.950

0.018

250

－

2822.698

32.536

0.012

200

－

2863.184

173.849

0.061

150

－

3409.284

28.5360.008

表４ マガキ測定用抽出液（2 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

500

±

1845.749

232.849

0.126

400

＋

2822.749

292.678

0.104

350

＋

1804.163148.314

0.082

300

±

2739.991

141.142

0.052

250

±

2957.234

246.971

0.084

200

±

2824.184

238.971

0.085

150

－

2682.870

36.6570.014

47

表５ マガキ測定用抽出液（1 MU/g 相当）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

500

＋

2368.749

946.920

0.400

400

＋

2312.870

1031.456

0.446

350

＋

2324.749

1128.870

0.486

300

＋

2199.456

186.435

0.085

250

＋

2378.163

699.335

0.294

200

＋

3616.335

943.335

0.261

150

±

3187.527

210.849

0.066

表６ マガキ測定用抽出液（無毒）の判定部ラインの目視判定および数値化データ
希釈倍率

ライン濃淡の目視判定

判定部ライン濃淡の数値化データ
対照部(C)

試験部(T)

T/C

500

＋

4055.991

4720.577

1.164

400

＋

3248.163

3683.284

1.134

350

＋

3525.627

2991.456

0.848

300

＋

3398.163

3577.991

1.053

250

＋

3606.163

4014.355

1.113

200

＋

4418.012

4804.205

1.087

150

＋

4690.991

2968.406

0.633２）スクリーニングレベルの設定
１）で行った希釈倍率の検討では、希釈倍率を 150 倍とした場合、2 MU/g 相当以上の毒力の試料で試験部（T）のラインが見えなくなっていた。一方で、1 MU/g 相当の試料および無毒の試料では、試験部（T）のラインが確認できていた。以上のことから、2MU/g 以上の毒力については、本キットによる判定が可能と考えられ、かつ 2 MU/g は規制値より十分に低い毒力であることから、スクリーニングレベルを 2 MU/g として、現場試料での検証を試みた。
３）現場試料での検証
熊本県沿海で 2013 年から 2018 年にかけて採取したマガキについて、マウス検査により麻痺性貝毒が確認された 27 試料（表７）を、２）で設定したスクリーニングレベル（2 MU/g）で判定するため、希釈倍率を 150 倍として本キットで分析した。その結果、マウス毒力が 4
MU/g 以上であった 1 試料（試料 No.1：37.21 MU/g）および 2 MU/g 以上 4 MU/ｇ未満であった 14 試料（試料 No.2-15：3.80～2.01 MU/g）は、試験部（T）でラインが確認できなかっ48

た。また、マウス毒力が 2 MU/g 未満の 12 試料（試料 No.16-26）のうち、10 試料は試験部（T）でラインを確認できており、設定したスクリーニングレベル（2 MU/g）で判定することができた。
一方で、マウス毒力が 2 MU/g 未満であるが、試験部（T）にラインが現れず偽陽性と判断された 2 試料（試料 No.18、21）については、HPLC 法で分析した定量値から換算した毒力では、試料 No.18 は 3.13 MU/g、試料 No.21 は 2.41 MU/g であり、どちらもマウス検査の結果より高い毒力で２ MU/g 以上であったため、本キットの試験部（T）でラインが現れなかったと考えられた。
今回の結果から、2 MU/g より毒力の高い試料はすべて試験部（T）にラインは確認されず、2 MU/g 以上の試料を規制値以下と判定する偽陰性はないという結果が得られた。このことから、キット分析時の希釈倍率を 150 倍とすることで、熊本県沿海のマガキについては本キットによるスクリーニング法を導入することが可能と考えられた。

49

表７ 2013 年～2018 年に採取したマガキの公定法及び目視判定結果

No

公定法

本キットでの(MU/g)

目視判定

1

37.21

－

2

3.80

－

3

3.57

－

4

3.52

－

5

3.50

－

6

3.39

－

7

3.19

－

8

2.67

－

9

2.40

－

10

2.38

－

11

2.31

－

12

2.29

－

13

2.17

－

14

2.15

－

15

2.01

－

16

1.99

±

17

1.98

±

18

1.98

－

19

1.96

＋

20

1.96

±

21

1.95

－

22

1.94

±

23

1.91

±

24

1.90

±

25

1.89

±

26

1.83

＋

27

1.81

±

50

平成３１年 ２月作成

麻痺性貝毒検出試薬

ＭＴテスト

イムノクロマト－ＰＳＰ「ニッスイ」――― 開発の経緯および特徴 ―――
ホタテガイやカキなどの二枚貝等が麻痺性の毒成分を有するプランクトンを捕食すると、体内に毒成分を蓄積します。それをヒトが食べると、食中毒症状を引き起すため、適切な貝毒のモニタリングが重要です。従来はマウス毒性試験によりモニタリング検査が行われてきましたが、検査の実施には飼育施設など特別な設備が必要でした。
本試薬は、イムノクロマト法を原理とした、麻痺性貝毒検出用の簡易キットです。特別な機器を必要とせずに簡単な操作で迅速に結果が得られます。

1)

2)
3)
4)
5)
6)

――― 全般的な注意 ―――
本試薬は食品および環境検査用試薬であり、麻痺性貝毒中毒発症の有無を診断する試薬
ではありません。本試薬の測定結果と麻痺性貝毒中毒発症との相関性については確認されていません。
添付文書をよく読み、記載された操作方法に従って使用してください。
本試薬は競合法のイムノクロマト法を測定原理としています。麻痺性貝毒の毒成分が含まれる場合は試験部のラインが減弱または消失しますので、判定にはご注意ください。
測定結果に基づく麻痺性貝毒の含有量については、マウス毒性試験、HPLC による機器分
析など、他の情報と併せて総合的に判断してください。
麻痺性貝毒は複数の毒成分を含んでおり、本試薬に使用している抗体は毒成分間で反応性に差があります。抗体の反応性と比毒性の傾向は異なります。
海域、貝種、季節等によって麻痺性貝毒の毒組成が異なりキットの反応性に影響する可能性があります。二枚貝等のモニタリング検査に利用する場合には、試験する海域毎に試験条件（抽出液の希釈倍率等）の事前検討が必要になります。

――― 形状・構造等〈キットの構成〉 ―――① テストプレート ･･････････････････････････････････････････････････････② 検体希釈液 ･･････････････････････････････････････････････････････････

10 テスト
50 mL――― 測定方法〈測定原理〉 ―――
本品は、イムノクロマト法を原理とした、麻痺性貝毒の検出キットです。

9)――― 用法・用量〈操作方法〉 ―――
測定溶液の調製〔 必要な器具および試薬 〕
 マイクロピペット、メスシリンダーおよびビーカー ポリプロピレン製遠沈管（50 mL 容）および試験管
 粉砕機（フードカッターなど）、ホモジナイザー
 遠心分離機またはろ紙、ロート 塩酸または酢酸

297.5 mL
2.5 mL

有毒プランクトンのモニタリング：0.2M 酢酸の調製
酢酸（17.5M）と精製水を 1：87.5 の比率で混合し、必要量を調製してください。
（0.2M 酢酸の調製例）
精製水････････････････････････････････････････････････････････････････････
346 mL酢酸（17.5M）･･･････････････････････････････････････････････････････････････
4 mL

T

テストプレートは検体を添加する検体添加部、判定を行う判定部、検体名等を記入する ID 部から構成されています。さらに判定部は、麻痺性貝毒の判定を行う試験部(T)、試験の成立を判断す
る対照部(C)からなっています。
〔 測定原理 〕
判 定
対照部 部
試験部

7)
8)

検体添加部

ＰＳＰ
C

5)
6)

（0.1M 塩酸の調製例）
精製水････････････････････････････････････････････････････････････････････
塩酸（12M）･･･････････････････････････････････････････････････････････････〔 テストプレート各部名称 〕
判定部
対照部 試験部

3)
4)――― 操作上の注意 ―――
試薬は全て常温（15～25℃）に戻してから使用してください。
アルミ袋開封後のテストプレートは、直ちに使用してください。開封したものを室内に長時間放置すると吸湿して性能が劣化します。
検体採取に用いるチップは検体ごとに新しいものを使用してください。
テストプレートの検体添加部、判定部には手を触れないでください。偽陽性の原因となる場合があります。
抽出用の塩酸や酢酸はキットに含まれていないため、各施設でご準備ください。
塩酸（12M）や酢酸を取扱う際はドラフト内で排気しながらふたを開け、採取・作業してください。腐食性があるので、保護メガネ、手袋もつけて作業することをお勧めします。
抽出液を調製する際は発熱する恐れがあるため、塩酸をゆっくり添加してください。
テストプレートへは正確な量を滴下してください。測定溶液が少ない場合は展開不良、多すぎる場合は反応が正しく行われません。
食品（貝類など水産物）の試料抽出液の調製は、以下の操作方法のとおり、厚生省環境衛生局乳肉衛生課長通知「貝毒の検査等について」（昭和 55 年 7 月 1 日、環乳第 30 号）に準じた方法を用いてください。1)他の方法で行う場合は、各施設にてご検討ください。

〔 試薬の調製 〕
１．抽出液の調製
食品（貝類など水産物）：0.1M 塩酸の調製
塩酸（12M）と精製水を 1：119 の比率で混合し、必要量を調製してください。

――― 使用目的 ―――
食品（主に貝類など水産物）および環境中の麻痺性貝毒の検出。

ID 部

1)
2)

感作金コロイド
塗布部

標識抗原塗布部２．測定試薬の調製
1) テストプレート･･･ そのまま使用します。常温（15～25℃）に戻してから開封してください。
2) 検体希釈液･･･････ そのまま使用します。使用前に常温（15～25℃）に戻してください。
〔 操作方法 〕
１．検体の調製・抽出操作
食品（貝類など水産物）① 貝の可食部 100g に 0.1M 塩酸 100mL を加えホモジナイズし、pH3.0～4.0 であることを確認します。pH が範囲外のときは塩酸を用いて pH3.0～4.0 に調整します。
② 沸騰浴中で 5 分間加熱後、常温（15～25℃）になるまで放置します。
③ pH2.0～4.0 であることを確認し、精製水で 200mL に調整します。
④ 遠心分離（3,000 回転/分、10 分間程度）またはろ過し、これを試料抽出液とします。
有毒プランクトンのモニタリング① 海水をろ過濃縮します。
② 濃縮した海水と等量の 0.2M 酢酸を加えます③ プローブ式のホモジナイザーを用いて超音波破砕を行い、これを試料抽出液とします。
※プローブ式のホモジナイザーがない場合は凍結融解または加熱処理で抽出を行います。

①；オリゴヌクレオチドⅠ結合抗原②；金コロイド結合抗麻痺性貝毒モノクローナル抗体③；オリゴヌクレオチドⅠ’結合タンパク質④；抗マウス抗体
陰性例

試験部

陽性例

標識抗原塗布部にオリゴヌクレオチドⅠ結合抗原（①）、感作金コロイド塗布部に金コロイド
結合抗麻痺性貝毒モノクローナル抗体（②）が含有されており、判定部にはオリゴヌクレオチド
Ⅰ’結合タンパク質（③）が固相化されています（オリゴヌクレオチドⅠとⅠ’は互いに相補鎖をなしています）。測定溶液を滴下すると、標識抗原塗布部と感作金コロイド塗布部に含まれる
試薬①、②が溶け出して免疫反応を起こしながらニトロセルロース膜上を展開していきます。
試験部(T)の位置まで測定溶液が到達すると試薬①と③の DNA-DNA 相互反応により捕捉されます。
試料に麻痺性貝毒が存在しない場合は、陰性例で示した図のような複合体を形成するため試験部(T)にラインが出現します。一方、試料に麻痺性貝毒が含まれる場合は、試薬①と試料中の麻痺性貝毒が競合して、陽性例で示した下図のようになり試験部(T)は弱いラインまたは出現しません。
対照部(C)は麻痺性貝毒の有無に関わらず測定溶液が到達すれば抗マウス抗体（④）が反応して赤紫色のラインが出現します。

２．測定溶液の調製方法
食品（貝類などの水産物）
１．において調製した試料抽出液を、検体希釈液を用いて希釈し、測定溶液とします。
※測定溶液の希釈倍率は、検体を採取した海域や検体の種類によって異なる場合があります。
試験の開始の際は希釈倍率の検討を行い、試験条件を設定してください。また、反応が正しく進まない可能性があるので 40 倍以下の希釈率での使用は避けてください。
有毒プランクトンのモニタリング
１．において調製した試料抽出液を 5 倍に希釈し、測定溶液とします。
※測定溶液の希釈倍率は、有毒プランクトンの細胞数や試験目的によって異なります。また反応が正しく進まない可能性があるので 2 倍以下の希釈率での使用は避けてください。
〔 測定操作 〕① アルミ袋からテストプレートを取り出します。
② マイクロピペットで測定溶液 100μL を分取し、テストプレートの検体添加部に滴下します。
③ 室内温度（15～30℃）で、20 分間静置して反応させます。
④ 判定部に出現するラインの有無を目視で確認します。

――― 測定結果の判定法 ―――〔 測定結果の判定 〕
測定溶液を滴下して20分経過後、判定部に現れる赤紫色ラインの有無で判定します。
判定は以下の基準に従って実施してください。

――― 性
能 ―――
用法、用量欄の操作法により次の性能試験を行うとき以下の条件に適合します。
１．検出感度
麻痺性貝毒（ゴニオトキシン 2&3；GTX2&3）として 20nM。

1) 陽性
下図のように試験部(T)にラインが全く出現しない、または弱いライン、かつ、対照部(C)にラインが出現した場合は麻痺性貝毒の毒成分が含まれていると判定します。

２．特異性
本試薬は、GTX1&4、GTX2&3、デカルバモイル GTX2&3、GTX5、GTX6、C1&2 に反応性を示します（他の毒成分については未確認）。毒成分により反応性が異なります。

対照部 試験部――― 使用上または取扱い上の注意 ―――
１．一般的な注意事項
1) この添付文書をよく読み、記載された操作法に従って使用してください。
2) 使用期限の過ぎた製品は使用しないでください。
3) 試薬類は凍結させないでください。
4) 試薬は全て常温（15～25℃）に戻してから使用してください。
5) 反応時間は正確に行ってください。

ＰＳＰ

C

T

対照部 試験部

ＰＳＰ

C

T

2) 陰性
下図のように試験部(T)および対照部(C)の両方に明瞭なラインが出現した場合は陰性と判定します。
対照部 試験部

２．危険防止上の注意事項
1) 本キットの試薬類は、皮膚や粘膜、衣類等につけないでください。
2) 試薬が目や口に入った場合には、水で十分洗い流す等の応急処理を行い、必要があれば医師の手当を受けてください。
３．廃棄上の注意事項
1) 使用後の試薬は、十分量の水で流して廃棄してください。
2) 使用後の試薬容器および使用した器具等の廃棄の際には、廃棄物に関する規定に従って適切に処理してください。
3) 試料抽出液は、酸性のため中和して廃棄してください。

ＰＳＰ

C

T

3) 再検査試験部(T)のラインの有無に関係なく対照部(C)にラインが出現しない場合は、測定が適切に行われていないことが考えられます。測定操作法を再度確認の上、再試験を行ってください。
対照部 試験部――― 貯蔵方法・有効期間 ―――〔貯法〕
冷所（2～8℃）で保存してください。
〔 有効期間 〕
製造後12ヶ月。
外箱に使用期限を表示してあります。
――― 包装単位 ―――
ＭＴテスト イムノクロマト－ＰＳＰ「ニッスイ」 10 テスト用 ‥‥･･‥‥‥ Code 08629

ＰＳＰ

C

T

対照部 試験部

ＰＳＰ

C

T――― 参考文献 ―――
1) 厚生省環境衛生局乳肉衛生課長通知「貝毒の検査等について」（昭和 55 年 7 月 1 日、環乳第30 号）――― 問い合わせ先 ―――
日水製薬株式会社 カスタマーサポート〒110-0005 東京都台東区上野 3-24-6
TEL 03(5846)5707

製 造 発 売 元

日 水 製 薬 株 式 会 社
東京都台東区上野 3-24-6 〒110-0005 TEL 03(5846)5611（代）(9B03)