日本大学 医学部 機能形態学系 細胞再生・移植医学分野 教授 松本太郎

脱分化脂肪細胞 (dedifferentiated fat cells: DFAT)
DFATの調製法と特徴

DFATの治療効果

 成熟脂肪細胞を「天井培養」という方法で培養することにより調製される間葉系幹細胞(MSC)に類似した多能性細胞
 細胞表面抗原・遺伝子発現プロファイル、多分化能、液性因子分泌プロファイルは脂肪由来幹細胞(ASC)と高い相同性を示す
 少量の脂肪組織からドナー年齢や基礎疾患に影響されず均質な多能性細胞を大量調製できる

種々の血管新生因子を分泌（特にHGF, VEGF, SDF-1, Leptinの分泌が高い）
血管構成細胞(ペリサイト、血管内皮細胞）への分化能
各種虚血モデル動物(マウス、ウサギ、ブタ）への移植実験にて血流改善・血管増生作用
 SCIDマウス下肢虚血モデルに対し、ヒトDFAT移植群は、生理食塩水投与群やヒト末梢血単核球移植群に比べ有意な血流改善作用（非臨床POC)【上図】

Matsumoto T, Kano K, et al. J Cell Physiol 215:210, 2008
Matsumoto T, Kano K, et al. J Cell Physiol 215:210, 2008

Watanabe H, Matsumoto T, et al. Sci Rep 10:9211, 2020

治療用細胞としてのDFATの優位性
細胞原料に関する優位性

調製効率・細胞純度に関する優位性

成熟脂肪細胞1g中に1,000,000細胞均質な細胞集団

脂肪由来幹細胞(ASC)
1g中に20,000細胞ヘテロな細胞集団

 脂肪組織に大量に存在する成熟脂肪細胞を原料とするため、ドナーの負担が最小限ですむ
 成熟脂肪細胞は酵素処理後、その浮遊性を利用することにより簡単に高純度な細胞を単離できる
 吸引脂肪組織は、美容クリニック等にて健康ドナーから閉鎖回路で取得できるため、他家移植用細胞医薬品の細胞原料としても優位性が高い

 初代培養で得られるDFATの細胞数はASCに比べて6倍以上多い
 DFATの異種細胞の混入率はP0〜P3まで0.1%未満であり、ASCに比べ著明に低い
 DFATは細胞純度を高めるための継代培養を必要とせずP1で移植可能
 DFATはドナー年齢や基礎疾患に影響されず安定した性能を保持した細胞が得られる産業化に向けた取り組み
臨床研究第１症例の経過

重症下肢虚血に対する自家DFAT移植によるFirst-in-Human臨床研究
試験デザイン:
単一群、非盲検、非対照、単群比較、治療
対象疾患:
閉塞性動脈硬化症(ASO)に起因する
重症下肢虚血 (CLI )目標症例数:
4 名 (低用量群 2名, 高用量群 2名)
介入方法:
虚血肢への自家DFAT細胞を筋肉内注射する (低用量群: 1 x 105/kg, 高用量群: 3 x 105/kg)
一次エンドポイント:
安全性 (有害事象), 観察期間: 52週
二次エンドポイント:
有効性, 観察期間: 4, 12, 24, 36, 52 週
試験開始日:
2020年2月〜

Pre

Post 36w

74歳・女性
Fontaine IV度, Rutherford 5群
糖尿病, 高血圧症, 慢性腎不全（血液透析）
喫煙なし
皮膚潰瘍(左IV趾）DFAT low dose (1x105/kg） 筋注
評価項目

移植前

移植後4週

移植後12週

移植後24週移植後36週

移植後56週

有害事象

ーなし

なし

なし

なし

なし

皮膚潰瘍サイズ

10 mm

7 mm

7 mm

4 mm

3 mm

1 mm

足関節上腕血圧比

0.44

0.55

0.56

0.61

0.55

0.58

24 mmHg

38 mmHg

57 mmHg

55 mmHg

60 mmHg

61 mmHg

0〜100: 無痛〜最大の痛み

66

55

47

1660

6分間歩行試験
最大歩行距離(ACD)

60 m

192 m

6分間歩行可6分間歩行可59 m

6分間歩行可6分間歩行試験
跛行出現距離(ICD)

29 m

180 m

6分間歩行可6分間歩行可38 m

6分間歩行可(ABI)

経皮酸素分圧（TcPO2）

疼痛スケール（VAS)

AMED再生医療実用化研究事業 (2018-2020)
http://www.med.nihon-u.ac.jp/department/saisei/dfat/research.html

 生物由来原料基準に適合した臨床グレ-ドDFATの製造法・規格を確立済 臨床研究で使用するDFATの品質・安全性に関してPMDA合意取得済
 重症下肢虚血に対する自家DFATを用いたFirst-in-Human臨床研究を実施中(坐骨神経痛)(坐骨神経痛) 全観察期間において有害事象なく、高い治療効果が認められた想定する治療の概要・標的疾患① 自家製品：患者から約10mLの脂肪組織を吸引採取し、DFATを製造(凍結製品・複数バッグ）、移植施設に運搬し、使用時に解凍し患部に注射する特長：
 組織採取に伴う患者の侵襲が極めて低い (外来処置室で局所麻酔下に採取可能）
 高齢者や基礎疾患を有する患者でも安定した治療効果が期待できる 既存治療に比べ低コスト (１回の組織採取で５回以上の治療が可能)
標的疾患：
 重症下肢虚血、変形性膝関節症、脊髄損傷、脳梗塞など② 他家製品： 美容クリニック等で脂肪吸引術により摘出された健康ドナー脂肪組織を原料として、凍結DFAT製品を大量製造、移植施設に運搬し、使用時に解凍し患者に投与する
特長:
 原料が「ヒト（同種）細胞原料供給ガイダンス」（経産省）の基準に合致し、国内安定供給が可能
 純度が高く安定した品質のMSC様細胞を大量調製できる
 大規模なCPFや特殊な試薬、機器が必要なく、低コストで製造可能
標的疾患
 重症下肢虚血、変形性膝関節症、難治性潰瘍、脊髄損傷、脳梗塞、急性GVHD、ARDSなど

日本大学産官学連携知財センター （NUBIC)〒102-8275 東京都千代田区九段南4-8-24 日本大学会館
Tel: 03-5275-8139 Fax: 03-5275-8328 E-mail: nubic@nihon-u.ac.jp

http://www.nubic.jp

日本大学 医学部 機能形態学系 細胞再生・移植医学分野 教授 松本太郎

目的・背景
 脱分化脂肪細胞(DFAT)は実用性の高い治療用細胞であるが製造法に課題があった
脱分化脂肪細胞(DFAT)

現行の製造法の問題点

T12.5 flask

 成熟脂肪細胞を「天井培養」することにより調製される間葉系幹細胞(MSC)に類似した細胞
 細胞形質、機能、治療活性は脂肪由来幹細胞(ASC)と高い相同性を示す
 少量（１ｇ）の脂肪組織から患者を選ばす均質な多能性細胞を大量調製できる

 市販フラスコを用いた天井培養はハンドリングが困難
 脂肪細胞を脱分化させるために20% ウシ胎仔血清(FBS)が必要
 最終製品（新鮮細胞懸濁液）製造後、24時間以内に投与が必要

研究成果の概要
 天井培養フラスコなどの発明により従来法より効率性、汎用性、安全性に優れた製造法を確立した
天井培養フラスコの開発

新しいDFAT調製法の概略

 細胞播種操作が容易
 培地の汚染が起こりにくい 培養面積あたりの培地量が少ない（従来法の 1/4〜1/5）
 顕微鏡観察が可能
 培地交換が可能
 ガス交換効率が改善
PCT/JP2016/082413 WO2017/078007,
特許第6832586号, 欧州特許第3372667号, 米国特許第11299699号• ゼノフリー調製用培地を開発• 最終製品を凍結細胞懸濁液に変更• DFAT調製キットを開発① 効率性の向上
・ 5 mLの脂肪組織から3週間の培養期間（P1)で、5 x 108 個のDFATを調製できる② 汎用性の向上
・ 多くの細胞加工施設で一定の品質のDFATを製造できる
・ 最終製品は長期間保存可能で複数回投与にも対応できる③ 安全性の向上
・ 動物由来タンパク質が患者体内に入るリスクを避けることができる

他の研究／技術との相違点・応用分野
 他の脂肪由来細胞に比べ、組織採取に伴う侵襲性、調製効率、細胞純度といった面で優位性が高い
臨床応用におけるDFAT、ASC、SVF細胞の比較

適応疾患リスト

項目

DFAT

ASC

SVF細胞 (ADRCs)

組織採取の侵襲性

きわめて低リスク

低リスク

比較的高リスク

組織採取量< 10 mL

30-50 mL

200-300 mL

組織採取時の麻酔法

局所麻酔

静脈麻酔

全身麻酔

細胞培養
(培養期間)
得られる細胞数(最小継代数)

必要(>3 週間)

必要(>3 週間)

不必要

5x108 個 (P1)

1x107-1x108 個 (P3)1x106 - 1x108 個

高い>99.9%

比較的高い
>99%

非常に低い
0.2-1%

幹細胞分画の純度
幹細胞のクオリティ

ドナー年齢や基礎疾患 ドナー年齢や基礎疾患 ドナー年齢や基礎疾患の影響を受けにくいの影響を受けるの影響を受ける

変形性膝関節症(OA)モデルラットに対する治療効果

 重症下肢虚血 (CLI) 変形性膝関節症
 歯槽骨欠損
 難治性皮膚潰瘍
 脊髄損傷
 脳梗塞
 急性GVHD
 急性呼吸窮迫症候群(ARDS)
 その他
 DFAT関節内投与はラットOAモデルの軟骨変性を抑制する

 MSCやASCで治療効果が認められている疾患はすべて適応候補となる
 先行するMSC/ASC細胞治療の大部分をより安全・安価なものとして発展させる可能性がある

今後の展開，実用化へのイメージ
 重症下肢虚血に対する医師主導治験を実施するとともに、変形性膝関節症などコモンディジーズへの適応拡大を予定
DFAT実用化に向けた工程表

治療用細胞としてのDFATの特長

均質なASC様細胞を低侵襲・安価に製造可能患者を選ばず安定した品質・性能を示す
自家細胞医薬品として開発するメリット大こんな企業の方を探しています DFAT細胞医薬品の開発・販売承認を検討していただける DFATの製造技術向上(自動培養装置など）に関心がある
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より安価、より 均質、低侵襲のより間葉系幹細胞に類似した細胞

あなた
希 の望脂に 肪変 がわる。
DFATに関する情報はこちら
http://www.med.nihonu.ac.jp/department/saisei/
dfat.html