４. Do not expose the Loopamp Reaction Tube, master mix. preparation
tubes to UV light. Change in color or degeneration in these materials
caused by ultraviolet lamp sometimes results in misjudgment.
５. This kit is designed for research use only.
６. If the operator does not have the experience or knowledge in the field of
nucleic acid testing, there is a possibility of false judgment. Therefore,make sure that the kit is used under the supervision of the experienced
and knowledgeable technicians.
７. Eiken Chemical Co., Ltd. does not bear any responsibility for false
judgment or any consequential damage derived from the false judgment
caused by non－capability problems such as operation error.
８. Use the kit before the expiration date, which is labeled on the outer box（Exp.Date）.
９. The reagent tube is made of polypropylene and the main material for kit
case is paper. The institution disposing the reagent tube and caseshould bear the responsibility and abide by the clinical waste disposal
regulations, water pollution prevention law, and any other regulation
related.

（3） After the enzyme inactivation, irradiate the reaction tube with UV lamp
（wavelength at 240～260nm or 350～370nm）from the bottom andobserve the fluorescence light from the side of the tube wearing
protective goggles that can efficiently block ultraviolet light. When
green fluorescence similar to positive control is observed, the sample isjudged as positive. When no fluorescence like negative control isobserved, the sample is judged as negative.
The copy number does not necessarily correlate with the fluorescenceintensity.
☆ For examples of detection cases using this reagent, refer to the products
introduction page in Eiken GENOME SITE （ URL ； http://loopamp.
eiken.co.jp/e/）.

【Caution for use】
１．Handling the reagent
1）This reagent kit should be stored at －20℃. To prevent the reagent fromdeterioration, only take it out from the freezer before use.
2）Keep the reagent on ice for reagents preparation and later use. Before
use, spin down the tubes to recollect the solution on the tube wall or on
the cap, well mix the solution and spin down again.
3）Read cautions for handling each reagent carefully before use.

Product Name

Unit
96tests＜Loopamp DNA 増幅試薬キット使用の場合＞
2 × Reaction Mix.（RM）
12.5 μL
Primer： FIP
40 pmol
BIP
40 pmol
Loop－F ※4
20 pmol
Loop－B※420 pmolF3
5 pmolB3
5 pmolFluorescent Detection Reagent（FD） 1.0 μL
Bst DNA Polymerase
1.0 μL
Distilled Water（DW）
X μL（適量）®

蛍 光・目 視 検 出 試 薬【特 徴 】LAMP（Loop－ mediated Isothermal Amplification ）法は、① 1 種類の酵素のみを使用して遺伝子増幅反応が等温で進行する 1）, 2），② 6 領域を認識する 4 種類の primer を合

1 year

本試薬は、Loopamp DNA 増幅試薬キット又は Loopamp RNA 増幅試薬キット（RT－

2 × Reaction Mix.（RM）
12.5 μL
Primer： FIP
40 pmol
BIP
40 pmol※4Loop－F20 pmol※4Loop－B
20 pmolF3
5 pmolB3
5 pmolFluorescent Detection Reagent（FD） 1.0 μL
Enzyme Mix.（EM）1.0 μL
Distilled Water（DW）
X μL（適量）

LAMP）を用いた核酸増幅反応時に予め添加しておくだけで、紫外線照射装置を用いる【キット内容】

LMP221

96 テスト分※1

Fluorescent Detection Reagent（FD）【References】※1：（1）Notomi T. et al. : Nucleic Acids Research 28, No.12, e 63（2000）
2）Nagamine K. et al. : Clin. Chem. 47, No. 9, 1742－1743（2001）
3）Mori Y. et al. : Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No.1,150－154（2001）
4）Tomita N. et al. Abstract for The 73rd Annual Meeting of the Japanese
Biochemical Society（2000）
5）Mori Y. et al. Abstract for the 23rd Annual Meeting of the Molecular
Biology Society of Japan（2000）
6）Tomita N. et al. Abstract for the 26th Annual Meeting of the Molecular
Biology Society of Japan（2003）
7）Nagamine K. et al. : Molecular and Cellular Probes 16,No.3.223－229（2002）
8）The guideline for the bio－safety and bio－hazard（by the Japanese Society
for Bacteriology ）: Japanese Journal of Bacteriology 54, No.3, 667 － 715（1999）

３．Handling reaction tubes
1）Only use the specified Loopamp Reaction Tube for fluorescence detec－tion. Other reaction tubes might have different optical transparency andcause misjudgment.
2）Take full care when handling reaction tubes since they are vulnerable toscratches or damages.
3）Check carefully to see if reaction tubes have any crack or scratch before
use. Crack or scratch on the tube might not only cause false judgment
but also contaminate the equipment. If the tubes are broken inside thereaction block of the Loopamp Turbidimeter（Realtime or End Point）, thereaction solution can spill inside the equipment and cause unrecoverable
contamination and malfunctioning.
4）By comparing the solution volume in all tubes, check visually if properamount of sample solution / master mix. has been dispensed into thereaction tube.

μL／テスト＜Loopamp RNA 増幅試薬キット（RT－LAMP）使用の場合＞量が多く、簡易検出に適している 3 ）, 4）, 5）, 6），等の特徴を有する新しい遺伝子増幅法です。

0.1 mL × 1 tube

２．Caution for the sample preparation
For the preparation of the sample solution, do not use buffers containing
the chelating reagents such as TE buffer. If chelating reagent is added to
the reaction solution, manganese ion binding with Calcein will bechelated and the fluorescence light is released even when no amplifi－
cation takes place. Also, a sample containing a large amount of Ca, Zn or
Fe ion might cause false positive test result.

23.0

計

使用するため特異性が高い，③ 増幅効率が高く、短時間に増幅可能である，④ 増幅産物

ことにより目視での検出（以下、蛍光目視検出と呼ぶ。）を可能にします。

Storage Expiration Code No.
－20℃＊＊ 2008 年 1 月改訂（第 4 版）
＊ 2006 年 4 月改訂（第 3 版）

研究用

【Unit，Storage，Expiration，Code No.】
Loopamp®Fluorescent Detection
Reagent

この説明書をよく読んでから使用してください。

3LP2219―D）内は、試薬チューブに記載されている表示です。

合【測定原 理 】

20.0

計

μL／テスト※4：必ずしも必要ありませんが、Loop primer を入れることで増幅時間が約 1 /3 にLAMP 法は極めて多量の核酸が合成され、副産物であるピロリン酸イオンも多量に生成短縮されます 7）。

するという特徴を有する遺伝子増幅法です。本試薬中に含まれているカルセインは、はじめマンガンイオンと結合して消光していますが、LAMP 反応が進行すると生成するピロ（2）分注後、チューブを軽く数回叩いて混合する（以下、タッピングと呼ぶ。）か、リン酸イオンにマンガンイオンを奪われ蛍光を発し、さらに反応液中のマグネシウム

転倒混和，あるいはボルテックスミキサーにて 1 秒間 ×3 回の撹拌により十分混合

イオンと結合することで蛍光が増強されます 6）。この原理により LAMP 反応の有無を容易した後、微量簡易遠心機に数秒かけて（以下、スピンダウンと呼ぶ。）、これをマスに蛍光目視検出することができます。

ターミックスとします。ボルテックスミキサーでの撹拌は過剰に行うと、酵素が失活する可能性がありますので、1 秒間 × 3 回を厳守してください。なお、調製したマスターミックスはすぐに使用してください。

【使用法】☆ サ ン プル 溶液 の調製 に は， EDTA 等 の金属キレート化合物を含有する buffer

１．必要な器具・装置・試薬（TE buffer 等）は用いないでください。詳細は【操作上の留意事項】をご参照くだ○ Loopamp DNA 増幅試薬キット、又は Loopamp RNA 増幅試薬キット（RT－

さい。

LAMP）
○ マスターミックス調製用滅菌チューブ（ 0.5 mL 又は 1.5 mL）☆ プライマーセットと組み合わせて使用する場合、マスターミックスの調製は各プラ＊○ ピペット（ 0.5 ～10μL，10 ～ 100μL，100 ～1,000μL）

イマーセットの調製に従ってください。

○ フィルター付きチップ○ Loopamp 反応チューブ

４．Caution for the detection○ 反応チューブ冷却用アルミ製ラック1）Carry out the fluorescence visual detection after the amplification
reaction and successive inactivation of the enzyme. If the inactivation
procedure failed, it might cause false judgment. If necessary, save thedetection result as picture format using digital camera.
2）Never irradiate the reaction tube with UV light for long period or it mightcauses false judgment due to the increasing of the fluorescencebackground or the quenching of the fluorescence light.

○ 氷（クラッシュアイス）及びアイスボックス

３．操作法（Loopamp DNA 増幅試薬キット又は Loopamp RNA 増幅試薬キット（RT－ LAMP）の手順に従ってください。）＊ １）マスターミックスとサンプル溶液の混 合（氷上で行ってください。）○ 微量簡易遠心機（1）使用試薬キットに応じて、Loopamp 反応チューブにマスターミックスを分注し、○ 8 連マイクロチューブ用簡易遠心機

サンプル溶液を添加して全量 25μL とします。

○ ボルテックスミキサー※2,3○ Loopamp 濁度測定装置（ リアルタイム，エンドポイント）○ ヒートブロック（反応停止用）※2

５．Handling reaction tubes after use＊

1）The caps of the used reaction tubes should not be opened.
Contamination of amplified products on other samples may not only
cause false judgment of the test result but also pollute testing area. In
this case, a correct test result may not be obtained unless pollution iscompletely removed.
2 ） Keep the cap of the used tube completely closed and dispose it,
according the relevant regulations or instructions, by incineration or after
double bagging it with sealable vinyl bag. To prevent the amplified
products from dispersing, do not conduct autoclave sterilization
treatment for disposal.

○ 紫外線照射装置（波長 240～ 260nm，350～ 370nm） ※2※2：適応装置，反応停止機能，紫外線照射装置の条件については、Eiken GENOME SITE

（URL；http://loopamp.eiken.co.jp/）をご参照ください。

20μL

5μL

スピンダウンします。また、混合の際は気泡が立たないように注意します。

（1）Loopamp 濁度測定装置（リアルタイム、エンドポイント）又はインキュベーター

※3：蛍光目視検出の場合、Loopamp 濁度測定装置（リアルタイム、エンドポイ（ 温 度 精 度 が ± 0.5 ℃ 以 内 ： ホ ッ トボン ネット付） に調製， 分注済みの 反応ント）はインキュベーターとして利用します。検出に際しては別途、紫外線チューブをセットし、60～ 65 ℃（63 ℃ 推奨）で 30～ 60 分間インキュベートします。
（設計した primer によって条件が異なるので、あらかじめ条件検討が必要です。）

２．試薬の調製
1） 蛍光・目視検出試薬は－20℃で凍結しませんので、そのまま氷上で保存してください。

【Caution for Handling】

なお、Loopamp DNA 増幅試薬キット，Loopamp RNA 増幅試薬キット（RT－LAMP）

１. LAMP reaction is very sensitive and even the slightest amount of
amplified product tainted into the reaction might cause false result.
Therefore, avoid this type of contamination and carry out the sample
and reagent preparation in different clean benches.
２. When ultraviolet lamp is used for the fluorescence visual judgment, do
not stare directly at the UV light. Since UV light is harmful to the eyes,
even watching for a short period would irritate eyes and cause symptoms
similar to conjunctivitis. Look at it through glass board or protective
goggles.
３. When handling the sample, always abide by the biohazard countermeasures 8）.

の試薬は室温で解凍し、解凍後は直ちに氷上で保存してください。

（2） 増幅反応後にヒートブロックを用いて酵素失活操作を行い、反応を停止させます。
（酵素の失活操作は必ず行ってください。）
なお、酵素失活条件は使用キットにより異なります。

DNA 増幅試薬キットの場合、80℃，2min 又は 95℃，2min

2）マスターミックスの 調 製 （氷上で行ってください。）

RNA 増幅試薬キット（RT－ LAMP）の場合、80℃，5min 又は 95℃，2min（1）別途用意したマスターミックス調製用滅菌チューブに、Loopamp DNA 増幅試薬
キット又は Loopamp RNA 増幅試薬キット（RT－ LAMP）の各試薬と Fluorescent
Detection Reagent（FD）を、必要なテスト数分、次表の割合（1 テストあたり）で

２／２

2μL

RNA 増幅試薬キット

２）増幅反応及び検出照射装置が必要です。

143 Nogi, Nogi－machi, Shimotsuga－gun, Tochigi, Japan

サンプル溶液添加量

23μL（2）ピペッティング又はキャップを閉めた上でのタッピングにより良く混合した後、○ 広幅の眼鏡又は防護面

Manufacturer

マスターミックス分注量
DNA 増幅試薬キット、又はインキュベーター（温度精度が ±0.5℃ 以内：ホットボンネット付 ）＊ （3）増幅反応終了後、紫外線照射装置（波長 240~260nm，350~370nm）を用い、反応チューブ底面より紫外線を照射して反応チューブの側面より目を分注します。

眼鏡等で保護した状態で観察します。陽性コントロールと同様に緑色の蛍光

なお、Fluorescent Detection Reagent（ FD）を添加した時点で、ボルテックス

を発すれば陽性、陰性コントロールと同様に蛍光を発しなければ陰性と判定

ミキサーにより十分に混和した後、Bst DNA Polymerase 又は Enzyme Mix.（ EM）

します。

を添加するようにしてください。

なお、蛍光の強さとサンプルのコピー数の間に相関はありません。

１／２

Read this instruction carefully before use☆ 本 試 薬 を 用 い た 検 出 例 は 、 Eiken GENOME SITE （ URL ； http://loopamp.

【 包装単位・貯蔵方法・有効期間・製品コード 】

eiken.co.jp/）内の製品紹介ページをご参照ください。

製

品

名

包装単位

貯蔵方法

For research use only
有効期間Rev. January 2008（Ver.4）＜Loopamp DNA Amplification Kit＞

製品コード
®

Loopamp® 蛍光・目視検出試薬【操作上の留意事項】

96 テスト分

－20 ℃

1 年間

１． 試薬の取扱い
1）本試薬は必ず遮光下－20℃で保存してください。試薬の劣化を防止するために、使用

1）Notomi T. et al. : Nucleic Acids Research 28, No.12, e 63（2000）

2）試薬の調製、保存は氷上で行ってください。試薬を使用する際には、一旦スピン

2）Nagamine K. et al. : Clin. Chem. 47, No.9, 1742－1743（2001）

ダウンしてチューブの管壁やキャップに付着している試薬を落とした後、十分混合し3）Mori Y. et al. : Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No.1, 150－154（2001）

再度スピンダウンしてからご使用ください。

4）富田 憲弘 他 : 第 73 回 日本生化学会大会発表抄録集（2000）

3）各試薬の操作上の留意事項をよく読んでご使用ください。

5）森 安義 他 : 第 23 回 日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集（2000）

２．サンプルの調製に際しての留意点

6）富田 憲弘 他 : 第 26 回 日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集（2003）

サンプル溶液の調製には、EDTA 等の金属キレート化合物を含有する buffer（ TE7）Nagamine K. et al. : Molecular and Cellular Probes 16, No.3, 223－229（2002）

buffer 等）を用いないでください。金属キレート化合物が反応液に入るとマンガンイオ8）日本細菌学会バイオセイフティー委員会：日本細菌学雑誌, 54, No.3, 667－715（1999）

ンがキレートされ、鋳型の増幅に関係なく蛍光を発します。またサンプルに Ca，Zn，Fe イオン等の金属イオンを多量に含む場合も誤判定の原因になりますので留意してFluorescent Detection Reagent【 参考文献 】

時に箱から取り出してご使用ください。

2 × Reaction Mix.（RM）
12.5 μL
Primer： FIP
40 pmol
BIP
40 pmol
4Loop－F *20 pmol
4Loop－B *20 pmolF3
5 pmolB3
5 pmolFluorescent Detection Reagent（FD） 1.0 μL
Bst DNA Polymerase
1.0 μL
Distilled Water（DW）
X μL (ad q.s.)

LMP221＊＊【問い合わせ先】ください。

栄研化学株式会社

３．反応チューブの取扱い方法

フリーダイヤル

1）反応チューブは必ず専用の Loopamp 反応チューブをご使用ください。指定以外のお客様相談窓口
0120－308－421

反応チューブを使用した場合、光透過性の違いにより誤判定を招く可能性があります。
2）反応チューブは破損しやすいので、取扱いには注意してください。

【Characteristics】
LAMP（Loop－mediated Isothermal Amplification）method is a novel gene
amplification method capturing the following characteristics: ① Only one
enzyme is required and the amplification reaction proceeds under isothermal
condition 1 ）, 2 ）., ② It has extremely high specificity because of the use of
4 primers recognizing 6 distinct regions on the target., ③ It has high amplifi－
cation efficiency and enables amplification within a shorter time., ④ It
produces tremendous amount of amplified products which makes simple
detection possible3）, 4）, 5）, 6）.
This reagent allows the amplification reaction to be visually detected,using the ultraviolet（UV）lamp, by adding this reagent to the amplifi－cation
reagent of Loopamp DNA Amplification Kit or Loopamp RNA Amplification
Kit（RT－LAMP）before use.

【 Contents of the kit】

3）反応チューブは用いる前にキズ・ヒビ等が無いことを目視で確認してください。反応

23.0

μL ／test＜Loopamp RNA Amplification Kit（RT－LAMP）＞
2 × Reaction Mix.（RM）
12.5 μL
Primer： FIP
40 pmol
BIP
40 pmol
4Loop－F *20 pmol
4Loop－B *20 pmolF3
5 pmolB3
5 pmolFluorescent Detection Reagent（FD） 1.0 μL
Enzyme Mix.（ EM）
1.0 μL
Distilled Water（DW）
X μL (ad q.s.)

96 tests

Fluorescent Detection Reagent（FD）*1

チューブにキズ・ヒビ等があると、チューブの破損により装置を汚染する可能性があ

Total

Total

0.1 mL × 1 tube

20.0

μL ／test

ります。Loopamp 濁度測定装置（リアルタイム，エンドポイント）又はインキュベ＊1：The notation on reagent tube is shown in（ーターの反応ブロック内でチューブが破損した場合は、反応液が装置本体へ漏出し、）.

＊4；Loop primers are not necessarily required. However, the use of

Loop

primers shortens the amplification time by about 1/3 7）.

除去不能な汚染や故障の原因となります。

【Principle】

4）反応チューブにマスターミックス，サンプル溶液が添加されていることを、他のチュ

LAMP method can produce large amount of DNA amplification productas well as its by－product, pyrophosphate. Calcein included in the kit initiallybinds with manganese ion and thus remain quenched. When theamplification reaction proceeds, the manganese ion is deprived of Calcein by
the generated pyrophosphate, which results in the emission of fluorescence.
The free Calcein is apt to bind to magnesium ion in the reaction mixture sothat it strengthens the fluorescence emission 6）. This principle is applied influorescence detection of the LAMP reaction.

ーブとの液量比較で確認してください。

４．検出に際しての留意点
1）蛍光目視判定は、増幅反応，並びに酵素失活操作後に行ってください。酵素失活
操作を怠った場合誤判定となる可能性があります。記録が必要な場合は、判定時にデジタルカメラなどを用いて画像として保存してください。
2）長時間の紫外線照射は避けてください。蛍光バックグラウンドの上昇、あるいは強いUV の長時間照射による消光など誤判定を招く恐れがあります。

（2）After dispensing, gently tap the tubes for a few times（hereinafterreferred to as tapping）, or mix the solution by repeatedly inversing thetube, or mix by vortex mixer at about 1 second×3 times. After mixing
well, centrifuge the tubes for a few seconds（hereinafter referred to as
spin down）. And the mixture can be used as the master mix. for thereaction. Notice that too much mixing with the vortex mixer might
inactivate the enzyme, and assure that vortexing is conducted at
1 second×3 times. The prepared master mix. should be used as soon
as possible.

５． 使用後の反応チューブの取扱い【How to use】

1）反応後のチューブを装置から取り出すときにチューブのキャップが開かないよう、

１． Materials required but not provided

慎重に取り出してください。他検体の増幅産物によるコンタミネーションは誤判定の〇 Loopamp DNA Amplification Kit or Loopamp RNA Amplification Kit（RT－ LAMP）〇 Sterilized tubes for master mix. preparation（0.5 mL, 1.5 mL）〇 Micropipettes（0.5～10μL, 10～100μL, 100～1,000μL）〇 Pipette tips with filter〇 Loopamp Reaction Tube
〇 Aluminum rack for cooling tubes〇 Ice（crushed ice）and ice box〇 Centrifuge for micro－tubes〇 Centrifuge for 8－connected tubes〇 Vortex mixer〇 Loopamp Realtime Turbidimeter, Loopamp End Point Turbidimeter *2，3,
or incubator with hot bonnet（temperature accuracy within±0.5℃）〇 Heat block（for termination of the reaction）*2〇 UV lamp（wavelength at 240～ 260nm or 350～370nm）*2〇 Protective goggle or glass board

原因となるばかりでなく、検査環境そのものを汚染し、汚染を除去しない限り、以後の検査で正しい結果が得られなくなる可能性があります。
2）反応後のチューブはキャップを開けずに、焼却処理又は密閉できるビニール袋を二重に施し、廃棄の基準に従って処理してください。増幅産物の飛散防止のため、廃棄の際にオートクレーブ処理は行わないでください。

【 使用上又は取扱い上の注意 】
１． LAMP 反応は非常に鋭敏な反応であり、増幅産物等の DNA がごく微量でも混入すると誤った結果をもたらす原因となる恐れがあります。このようなコンタミネー
ションを回避するため、試薬及びサンプルの調製はクリーンベンチ等を使用してください。
２．蛍光目視判定時に紫外線照射装置を使用する場合、ランプより放射される紫外線（殺菌線）は有害で、点灯中のランプを短時間見つめただけでもあとで目が痛くなり、結膜炎に似た症状を起こしますので、紫外線を直接目に入れることは避けてください。
また点灯中のランプを見る必要があるときは、必ずガラス板を通すか、広幅の眼鏡＊2； For the information about applicable instrument, reaction termination

又は防護面をかけて判定してください。

function and condition for UV irradiation, refer to Eiken GENOME SITE
（URL；http://loopamp.eiken.co.jp/e/）.

３．感染性のある検体を扱う場合、その検体採取・取扱いについては必要なバイオハザー
ド対策をとってください 8）。

＊3；For the fluorescence visual detection, Loopamp Turbidimeter（Realtime

４．Loopamp 反応チューブ、マスターミックス調製用滅菌チューブにはＵＶ照射しない

or End Point）is used as an incubator.
As for the detection, a UV irradiator is required.

でください。ＵＶ 照射による変色・変質等で LAMP 反応に影響をもたらす場合があります。
５．本キットは、学術研究目的のみにご使用ください。

２．Reagents preparation

６．遺伝子検査の知識や経験をもたない場合、検査結果の判定を誤る危険性があります

1）Take out the Fluorescent Detection Reagent stored at －20℃ (not frozen)
and place the reagent directly on ice. Loopamp DNA Amplification Kit
and Loopamp RNA Amplification Kit（RT－ LAMP）should be thawed atroom temperature before use and also kept them on ice.
2）Preparation of master mix.（Operate on ice）.
（1）Dispense the necessary amount of Fluorescent Detection Reagent（FD）
and Loopamp DNA amplification reagents or Loopamp RNA amplifi－
cation reagents into the master mix. preparation tube according to thetable indicated below. Mix Fluorescent Detection Reagent （ FD ）,2×Reaction Mix.（RM）, Primers and Distilled Water（DW）using vortex
mixer, then add Bst DNA Polymerase or Enzyme Mix.（EM）.

ので、本キットの使用に当たっては遺伝子検査の知識、経験を有した技術者の指導の下で検査を実施してください。

＊ ７．本キットの性能に由来しない事由（操作方法を誤った場合等）による誤った結果，判定，またその判定に由来して発生した事項に対して、当社は一切の責任を負いません。
８．外箱に表示の使用期限（Exp. Date）内に使用してください。

＊ ９．試薬チューブはＰＰ，キットケースは紙を主な材質としています。廃棄の際は医療廃棄物等に関する規定及び、水質汚濁防止法等の各種規制に従い、各施設の責任にお＊＊ 製 造 販 売 元
栃 木 県 下 都 賀 郡 野 木 町 野 木1 4 3 番 地

いて処理してください。

２／２☆ For the preparation of the sample solution, do not use the buffer
containing the chelating reagent such as TE buffer. For details, refer tothe【Caution for use】.
☆ When used in combination with Loopamp Primer Sets, follow the
preparation instructions of each primer set to prepare the master mix.

３．Operation procedure（Follow the procedure of Loopamp DNA Amplifi－
cation Kit or Loopamp RNA Amplification Kit（RT－LAMP））
1）Mixing of master mix. and sample solution（Operate on ice）
（1）Dispense necessary amount of master mix. into each Loopamp
Reaction Tube according to the reagent to be used as in the following
table. Then add sample DNA or RNA to the master mix. and thevolume of the solution should be 25μL in total.
Master mix.

Sample solution

DNA Amplification Kit

23μL

2μL

RNA Amplification Kit（RT－ LAMP）

20μL

5μL

（2）Mix the solution well by pipetting or tapping the tube with the cap
closed and then spin down. Be careful not to cause air－bubbles whenmixing.
2）Amplification reaction and its detection.
（1）Set the reaction tubes in Loopamp Turbidimeter（Realtime or End Point）
or the incubator with hot bonnet（temperature accuracy within±0.5℃）,
and incubate them at 60～ 65℃ for 30～ 60 minutes（The reaction
condition is dependent upon the characteristics of the primer used,
therefore examine the optimum condition beforehand）.
（2）After the amplification reaction, terminate the reaction by inactivating
the enzyme using the heat－block（Never fail to inactivate the enzyme）.
The following different conditions are employed for the inactivation of
the enzyme for DNA Amplification Kit and RNA Amplification Kit（RT－LAMP）.
Loopamp DNA Amplification Kit ; at 80℃ for 2min or 95℃，2min
Loopamp RNA Amplification Kit（RT－LAMP）; at 80℃ for 5min or
95℃，2min

１／２

3LP2219― D