病理組織診断における免疫染色
Immunohistochemistry in Diagnostic Surgical Pathology
伊藤智雄

Tomoo Itoh神戸大学医学研究科病理学講座病理診断学分野・同医学部附属病院病理診断科
要旨

免疫染色は現代の病理診断学にとってなくてはならない．様々な目的の抗体があり，上皮性マーカーとしてはサイトケラチン類，その他目的によって様々なものが用いられる．血球マーカーは主に悪性リンパ腫の診断に用いられ，L26，CD3 を中心として多様な抗体が用いられている．間葉系マーカーとしては，平滑筋には αSMA その他が用いられるが，単独での判断は控えるべきである．
横紋筋肉腫には myogenin や MyoD1 といった新たな有用なマーカーが登場した．悪性黒色腫に対しても SOX10 という優秀な新規抗体が得られ，今後の普及が待たれる．治療選択に有用な免疫染色としては特に乳癌におけるエストロゲン，プロゲステロン受容体，さらに HER2 が広く検索されている．近年肺腺癌の一部に EML4-ALK 融合遺伝子陽性群が見出され，分子標的療法の適応決定に免疫染色が用いられるようになった．今後とも新たな抗体の登場などにより，より免疫染色の重要性は高まってゆくものと思われる．

キーワード：免疫組織化学，免疫染色，抗体，病理診断

病理診断学において，免疫染色は極めて重要な技術となっている．その目的は多岐にわたり，腫瘍分類，悪性度推測，

2. 代表的な抗体

特定のウイルスや細菌などの検索，構造の推定など様々で，

2.1

近年は分子標的療法の適応を決定する極めて重要な役割を担

人体を構成する細胞は大きく上皮性細胞と非上皮性細胞にうようにもなってきている．本稿では免疫組織診断学の基礎分類される．前者から発生した悪性腫瘍が癌腫 carcinoma でから注意点まで紹介する．

あり，後者からのものが肉腫 sarcoma である．腫瘍を上皮性上皮性マーカーか非上皮性かを区別することは腫瘍診断学の基本中の基本と1.

免疫組織診断学の基礎なる．大部分は H&E 染色で十分に判断が可能であるが，腫病理診断学は前述のごとく，形態が基本である．ヘマトキ

瘍が未分化となれば免疫染色が要求されてくる場合が多い．

シリン hematoxylin とエオジン eosin の 2 種類の色素を用い

特に細胞が紡錐形へと変化した紡錐形細胞癌などでは免疫染た H&E 染色がその基本である．この染色は非常に優秀であ色がその診断に用いられる．主な上皮性マーカーを表 1 にり，現在でもよく訓練された病理医の眼は極めて正確な診断示す．主要な上皮細胞マーカーとしてはサイトケラチン類がを提供する．しかし，人間が扱う以上，その再現性にブレが挙げられる．これは上皮細胞の主要な骨格蛋白であり，分子生じることはやむを得ず，また，いかなる専門家といえども量に基づき約 20 のサブタイプが知られる．通常，上皮性細H&E 染色のみでは客観性の高い診断を常に提供することは胞であることを確認するためには広いサブタイプを認識する難しい．個々の病理医はすべての分野に精通することは不可抗体が用いられ，カクテル抗体が用いられることもある．よ能であり，補助として免疫染色をいかにうまく使うかが，診く使用されるカクテル抗体に AE1/AE3 があり，これは 2 つの断の正確性を大きく左右することは言うまでもない．H&E抗体 AE1 と AE3 をカクテル化したものである．前者が CK10/染色で大部分の診断はなされるが，それのみでは不十分な場

12/14/15/16/19 を，後者が CK1/3/4/5/6/7/8 を認識し，非常に合，合目的な抗体が選択され，その結果を踏まえて再度形態幅広い上皮細胞を認識する．その他，よく使用されるものにと併せた総合判断がなされ，最終診断に至るのである．

CAM5.2 がある．これは低分子サイトケラチンを認識し，以前 CK8/18 あるいは CK8/18/19 に対する抗体とされていたが，最新の知見では主として CK8，弱く CK7 に反応する抗体とされている 1）．このマーカーは扁平上皮には通常反応しない．

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2013 年 2 月 26 日受付

解説

病理組織診断における免疫染色その他，MOC31, Ber-EP4 などが中皮腫との鑑別に用いられ 2），EMA，34βE12 など様々なものが目的に応じて用いられている．由来不明の腫瘍では，上皮性マーカーの染色は極めて重要・必須であるが，血管肉腫などをはじめとして多く
33【著作権者：社団法人 日本顕微鏡学会】

表1抗体

主な上皮性マーカー

概要

主な用途

注意

AE1/AE3

汎上皮マーカー上皮性腫瘍の診断

肉腫などにも陽性の場合あり．
肝細胞癌には陰性

CAM5.2低分子量サイトケラチン

小細胞癌や肝細胞癌の診断

扁平上皮癌などには陰性

34βE12

高分子量サイトケラチン

前立腺癌の診断（基底細胞の有無）．基底細胞の描出．

EMA

上皮性マーカー

滑膜肉腫，未分化大細胞リンパ腫など

CK7

原発不明腺癌の診断に用いるペア

CK20

上皮性マーカーとしての信頼性は低い．

通常の腺癌．前立腺癌，大腸癌は陰性
通常の腺癌は陰性．大腸癌などが陽性．

CK5/6

CK5 と 6 を認識中皮腫（陽性）と肺腺癌（陰性）の鑑別

単独では判断しない

Carletinin

中皮マーカー

同上特異度は低い．他腫瘍にも陽性．

BerEP4

中皮腫と腺癌の鑑別に用いる上皮性マーカー

中皮腫（陰性）と肺腺癌（陽性）の鑑別

単独では判断しない

MOC31

同上同上

同上

表2抗体

主な血球系マーカー

概要

主な用途

注意

LCA

汎リンパ球マーカー

細胞由来不明の際に用いられる

一部の悪性リンパ腫は陰性

L26（CD20）

日本で確立された代表的 B 細胞マーカー

B 細胞リンパ腫

リツキサン治療後は陰転化の場
合あり

CD79a

L26 より幅広い B 細胞マーカー

芽球性あるいは形質細胞性腫瘍の診断全例に用いる必要はない

CD3

代表的 T 細胞マーカー

T 細胞性腫瘍

芽球性では陰性のこともCD5T 細胞，一部の B 細胞リンパ腫

B 細胞リンパ腫の鑑別．特に小リンパ球性リンパ腫とマントル細胞リンパ腫

T 細胞の発現とは区別する．

CD10

胚中心マーカー

濾胞リンパ腫，バーキットリンパ腫など

やや染色が難しい

CD23

濾胞中心樹状細胞（FDC）マーカー

小細胞性リンパ腫の診断．FDC の描出．

一部の濾胞リンパ腫も陽性

cyclin D1

マントル細胞リンパ腫のマーカー

B 細胞リンパ腫の鑑別

骨髄腫にも陽性．偽陰性に注意．

bcl-2

Apoptosis 抑制蛋白

濾胞リンパ腫と反応性濾胞の鑑別．バー
キットリンパ腫は陰性．

bcl2 陽性≠濾胞リンパ腫．濾胞リンパ腫の一部も陰性．

κとλイムノグロブリン軽鎖

軽鎖制限の有無から B 細胞リンパ腫診断．

免疫染色は軽鎖制限の検出率は低い

CD15

Reed Sternberg 細胞のマーカー

ホジキンリンパ腫

感度はやや低い

CD30

Ki-1 抗原を認識

ホジキンリンパ腫，未分化大細胞リンパ腫

活性化リンパ球も陽性

CD56

NK 細胞／神経／神経内分泌細胞

NK あるいは NK/T 細胞

神経性腫瘍なども陽性

CD4 およびCD8

一部の T 細胞T 細胞リンパ腫の分類．

陽性数の偏りはリンパ腫を意味しないgranzyme B,perforin, TIA-1

細胞傷害性 T 細胞

細胞傷害性 T 細胞リンパ腫や NK/T 細胞リンパ腫の診断

CD68, CD163

ともに組織球マーカー

組織球性腫瘍など

myeloperoxidase
および CD33

顆粒球系マーカー

顆粒細胞肉腫の間葉系マーカーにも陽性となることを知るべきである 3）．
2.2

血球系マーカー

特異度に注意組み合わせて診断が行われている．代表的な抗体を表 2 に示す．リンパ球系マーカーとしては leukocyte common anti-

血液系腫瘍は形態のみで細かな診断まで到達することはほgen（LCA）が，骨髄球系マーカーとしては myeloperoxidase

ぼ不可能であり，特に悪性リンパ腫はほぼ全例が免疫染色と（MPO），最近では CD33 が用いられるようになっている．

34

顕微鏡 Vol. 48, No. 1（2013）【著作権者：社団法人 日本顕微鏡学会】

判断するには L26 のほうがむしろ優れる点がある．広範囲のびまん性シート状の B 細胞の浸潤が B 細胞リンパ腫の診断根拠となるが，CD79a は形質細胞も認識するため，反応性においてもびまん性となることがあるためである．
リンパ腫診断では，通常 H&E 像からある程度の細分類の推測が行われ，これに応じた抗体を同時に染色する．小型から中型のリンパ球からなる B 細胞性腫瘍では CD5, CD10,
CD23, cyclin D1 が鑑別の基本となり，濾胞リンパ腫が疑わしければ bcl-2 を加え，胚中心の陽性の有無をみる．T 細胞性 リ ン パ 腫 で あ れ ば CD3 に 加 え， 場 合 に よ っ て は CD4,
CD8，その他 TIA-1 などの細胞傷害性 T 細胞のマーカーを加えることもある．鼻腔などで，NK/T 細胞リンパ腫が疑わしければ CD56，さらに EBER-in situ hybridization も追加で施行される．また T 細胞性リンパ腫の場合は CD56 を NK 系
図 1 リンパ節の L26 免疫染色．リンパ濾胞を形成する B 細胞に陽性．ここでは結節状の集簇を示し，非腫瘍性であることを示唆している．この抗体は我が国で樹立された代表的 B 細胞マーカーである．

腫瘍であることを否定するために常に染色することが推奨される．ホジキンリンパ腫が疑わしければ，CD30，CD15，近年では Pax-5 などの B 細胞系の transcription factor が診断に有用である 5）．リンパ腫か否かの診断が難しい場合は B 細胞の軽鎖制限の検討のため，κ，λ がよく用いられ，その他，なお，細胞像，臨床像などからリンパ球系あるいは骨髄球系

CD43 の異常発現の検討も行われることがある．リンパ腫のであることが明らかであるならば，これらのマーカーを敢え分類は多岐にわたり，すべての分類に対応した抗体の組み合て染色する必要性はない．悪性リンパ腫の診断の基本は Bわせは非現実的である．H&E 染色や臨床像からある程度の細胞性マーカーである L26（CD20）と T 細胞性マーカーで分類を推測し，これに対応した過不足のない抗体選択が求めある CD3 の 2 種類である．ちなみに世界中で使用されていられる．詳細は成書を参照されたい．

る L26 であるが，実は我が国の札幌医科大学病理学第一講

2.3

間葉系マーカー4）座で樹立されたものであることは知っておきたい（図 1） ．

代表的な間葉系マーカーを表 3-6 に示す．間葉系細胞のB 細胞のマーカーとしては CD79a がより広い範囲を認識す

マーカーとしては古くから中間径フィラメントの一種である

るマーカーとして知られているが，B 細胞リンパ腫か否かをvimentin が用いられてきた．しかし，現在では vimentin 陽

表3抗体

主な筋系マーカー

概要

主な用途

注意

αSMA

平滑筋マーカー

平滑筋性腫瘍．筋上皮の描出．

筋線維芽細胞なども陽性

desmin

筋マーカー

筋系腫瘍

筋上皮は陰性HHF-35

筋アクチン

筋系腫瘍

calponin およびh-caldesmon

近年普及した平滑筋マーカー

平滑筋系腫瘍

myoglobin

横紋筋マーカー

横紋筋系腫瘍

myoD1 および
myogenin

未熟な横紋筋

横紋筋肉腫

表4抗体

筋線維芽細胞，筋線維芽細胞なども陽性

正常横紋筋は陰性

主な脈管系マーカー

概要

主な用途

注意

CD31

血管内皮マーカー

血管性腫瘍

信頼性は高いが組織球も陽性

CD34

血管内皮，幹細胞その他

血管肉腫，GIST など

特異度が低いfactor VIII

血管内皮マーカー

血管性腫瘍／巨核球

感度がやや低い

D2-40

リンパ管内皮マーカー

リンパ系腫瘍，血管性腫瘍，癌のリンパ管侵襲特異度は低い

解説

病理組織診断における免疫染色35【著作権者：社団法人 日本顕微鏡学会】

表5抗体

主な神経／神経内分泌性マーカー

概要

主な用途

注意

S100 蛋白神経系マーカー神経性腫瘍や色素細胞性腫瘍

核の陽性を確かめること

chromogranin A

神経内分泌顆粒に反応

優れた内分泌マーカー

小細胞癌では陰性のことがある

synaptophysin

神経／神経内分泌性マーカー

神経／神経内分泌腫瘍

CD56

NK 細胞／神経／神経内分泌細胞神経／神経内分泌腫瘍

neurofilament

神経細胞に発現する中間径フィラ
メント

中枢神経性腫瘍の診断

GFAP

神経膠細胞マーカー

神経膠細胞腫，上衣腫，唾液腺多形腺腫など

表6抗体
HMB45

特異度に注意

主な色素細胞性マーカー

概要
human melanin black 45

Melan A（MART1）

主な用途

注意

色素性細胞性腫瘍／ PEComa group

感度は高くない．特に desmoplastic
type は陰性が多い．

色素性細胞性腫瘍

desmoplastic type は陰性が多い．

MITF

比較的新たなマーカー

色素性細胞性腫瘍

核に陽性となる．desmoplastic typeは陰性が多い．

SOX10

最近登場した有用性の高いマー
カー

色素性細胞性腫瘍

desmoplastic type も陽性性をもってして間葉系由来細胞であると判断することはほとく細胞由来が不明である時にまず染色されるマーカーの一つ

んど行われなくなった．低分化の上皮系細胞も高頻度に陽性であり，最重要のものの一つである．特に悪性黒色腫の診断となるためである．特殊な目的を除き，診断上はこの抗体をを逃さぬようにするために有用性が高い．悪性黒色腫の診断用いる意義は乏しい．にはその他 HMB45，melan A などが普及しているが，近年軟部腫瘍も，非常に多岐にわたる分類がなされ，また相互SOX10 という新たなマーカーが登場し，大いに期待される．に類似するものが多く，最も診断の難しい分野の一つである．

きわめて感度が高く，通常のメラノーマに加え，通常のマー形態が最も重要であることに間違いはない．平滑筋マーカー

カーでは陰性となりやすい線維形成性黒色腫 desmoplastic

としては αSMA，desmin，HHF35 などが知られ（表 3），近melanoma でもほぼ全例に陽性である 11）．特異度も比較的高年では calponin や h-caldesmon なども用いられる

6,7）．ただし，平滑筋性腫瘍とするためにはまず形態が矛盾しないこと，かつこれらのマーカーの複数陽性を確認することが推奨され

く，今後，悪性黒色腫の診断では主力マーカーとなってゆく可能性がある．
2.5

未分化腫瘍ならびに原発不明癌の診断る．横紋筋肉腫の診断には従来 myoglobin が用いられてきた

全 く 細 胞 の 由 来 が 分 か ら な い 場 合， 古 典 的 に LCAが，近年は myogenin や MyoD1 が特に有用である 8）．これら（CD45RB），S100，keratin（CK）の組み合わせが知られていは成人の成熟横紋筋には陰性であり，一方で横紋筋肉腫の大る．LCA は悪性リンパ腫を，S100 は神経系腫瘍や悪性黒色半は陽性となる．

腫などを，CK は主に上皮性腫瘍一般を認識する．一見対象

血管性マーカーとして最も信頼性が高いものは CD31 であとなる腫瘍が少ないようにもみえるが，現在でも有用性が高る（表 4）．しかし，このマーカーも組織球あるいは組織球系

い組み合わせ組み合わせであり，免疫組織学的診断学の基本

9,10）

．

中の基本である．この組み合わせ組み合わせが特に有用性がリンパ管マーカーとしては podoplanin に対する抗体である

高い状況は悪性黒色腫や悪性リンパ腫の診断と思われる．こD2-40 が広く用いられているが，特異度は低く，腫瘍性ではれらの腫瘍は非常に多様な形態を示す上に，「忘れたころ」血管腫にも広く陽性となることに注意を要する．に「意外な場所」で遭遇する．従って，HE のみでは想像も腫瘍に陽性となることが知られており，注意が必要である

2.4

神経 / 神経内分泌マーカーできない場合がある．筆者もこの 3 種の組み合わせに救われ代表的マーカーを表 5 に示す．広く用いられているのはたことは数知れない．また，vimentin の利用は前述のごとく

chromogranin A, synaptophysin, CD56 である．感度の問題か推奨しない．低分化であれば癌腫であろうとも高率に陽性をら組み合わせて検討されることが多い．CD56 は広い範囲の示し，かえって誤誘導される原因となる．

組織・腫瘍に陽性となることに注意すべきである．神経マー

原発不明癌の診断は病理医の腕の見せ所ともいえるが，同カーとしては S100 蛋白が広く使われる．このマーカーは全時に困難も伴う．免疫染色が発達した現代においても万能の36

顕微鏡 Vol. 48, No. 1（2013）【著作権者：社団法人 日本顕微鏡学会】

表7抗体

良悪性判断に用いる抗体や組織・臓器特異抗体

概要

主な用途

注意

MIB1

増殖マーカー（抗 Ki67 抗体）

増殖能評価

施設間誤差が大きい

p53

癌抑制遺伝子良悪性鑑別

びまん性に強陽性であれば悪性の可能性が高いが，評価は形態と併せて慎重に行う．

thyrogloblin

甲状腺濾胞上皮マーカー

原発巣推測

甲状腺未分化癌は陰性

hCG

ヒト絨毛性ゴナドトロピン

絨毛性腫瘍

抗原量が多いと，背景染色が強くなりやすい

Oct3/4胚細胞マーカーセミノーマ，胚細胞癌

SALL4

胚細胞マーカーセミノーマ，胚細胞癌，卵黄嚢腫瘍

PSA および PAP

前立腺マーカー

原発巣推測

TTF-1

肺呼吸上皮／甲状腺濾胞

原発巣推測

c-kit

肥満細胞，カハール細胞

GIST の診断

肥満細胞を真の陽性としないこと

cdx-2

腸上皮原発巣推測

多臓器の腸管型腺癌も陽性

HEP-PAR1

肝細胞肝癌と胆管細胞癌の鑑別

腫瘍での感度は低い．他臓器の癌も陽性．

表8抗体

治療選択にかかわるマーカー

概要

主な用途

注意

ER/PgR

女性ホルモン

乳腺の治療適応の判断

臓器特異性は高くない

HER2

c-erbB2

ハーセプチン適応判断

染色条件・判断は厳密に行う

ALK1

ALK 遺伝子産物

一部の未分化大細胞リンパ腫．近年では ALK 陽性腺癌が知られるようになり，分子標的療法の適応決定に重要．

遺伝子変異により染色パターンが異なる組み合わせというものは存在しない．ある程度の形態的絞りうになった．ただし，肺腺癌の ALK は通常の染色プロトコー込みを行った上で表 7 にあるような抗体を組み合わせ，免ルでは陽性とならず，高感度法を用いる必要がある 14,15）．

疫組織学的鑑別を進めてゆくことになる．腺癌であることが明らかである場合には上皮性マーカー CK7 と CK20 の組み

今後とも分子標的療法の適応決定のための免疫染色が次々と導入されてゆくことが予想される．

合わせを用いた原発巣の推測が広く用いられている 12）．しかし，大腸癌（CK7−, CK20+），前立腺癌（CK7−, CK20−）な

3.

免疫染色における注意点どを除き，この組み合わせが決定打となることは意外と多く免疫染色には様々な注意点がある．代表的なエラーは免疫ない．より複雑な組み合わせを用いた原発巣の推測法も多数

染色の失敗である．適切な免疫染色なくして，正確な免疫組提唱されているが，まだまだ十分とは言えない．いずにしろ織学的診断など到底不可能である．きわめて重要な問題であ形態・臨床像などを含めた総合判断が求められよう．

るがおろそかになっている場合も多い．必ず適切なコント

2.6

治療と結びつく免疫染色ロールを置き，十分な染色性チェックの後に診断に用いるよ

表 8 に代表的なものを示す．乳腺においては古典的にホうにする．また，どの抗体にも例外があることも十分に認識ルモン療法の適応決定にエストロゲン受容体（ER），プロゲスすべきである．特異度，感度とも 100％ということはまずあテロン受容体（PgR）が用いられる．近年の治療の進歩としてりえない．一つの免疫染色結果を盲信したことによる過診断

特筆すべきものの一つとして，多岐にわたる分子標的療法のはあとを絶たない．このような場合は，明らかに H&E 像が開発がある．しかし，これらの薬剤は一般的にきわめて高価異なるにも関わらず，免疫染色によってとんでもない誤誘導であり，適切な適応判断が求められる．それには様々な方法をされていることがほとんどである．特に信頼性が高いとさがあるが，最も簡便で重要であるのは免疫染色であろう．乳れるマーカーが危険であり，常に形態と併せた判断をするよ腺では HER2 がハーセプチンの適応決定に重要で，あらかうにすべきである．

じめ決められた手順で厳密に染色され，ガイドラインに沿った判定が行われている．近年では肺腺癌に EML4-ALK 融合

4.

遺伝子陽性群が我が国の研究者によって見いだされ，大きな以上，免疫染色について概説した．本稿で紹介した抗体は話題となっている

13）おわりに．ALK に対する分子標的薬も開発され，代表的なもののみであり，他にも有用な抗体は多数存在する．

免疫染色にて ALK の陽性を確認し，その適応が判定されるよ

また，新たな抗体も日々登場してきている．実用性の高い免解説

病理組織診断における免疫染色37【著作権者：社団法人 日本顕微鏡学会】

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病変（G1 期（赤），S/G2/M 期（青），アポトーシス（茶））．各期の細胞が乱雑な分布を示している（胞体の青色は非特異反応）．

疫多重染色（図 2）16,17） や迅速免疫染色など技術革新も進んでいる．筆者らは免疫組織化学に用いられる抗体データベー
スをインターネット上に公開している（“いむーの”http://immuno.med.kobe-u.ac.jp/）．是非，活用されたい．

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顕微鏡 Vol. 48, No. 1（2013）【著作権者：社団法人 日本顕微鏡学会】