単純ヘルペスウイルス肺炎の一症例

症―細胞学的特徴と細胞診標本から抽出された核酸を使った
厚生連医師 第１４巻 １ 号 ６６〜６８ ２００５
Polymerase Chain Reaction（PCR）による同定―例

単純ヘルペスウイルス肺炎の一症例―細胞学的特徴と細胞診標本から抽出された核酸を使った
Polymerase Chain Reaction（PCR）による同定―
病理センター、細胞診断室：細胞検査士 １）、細胞診指導医 ２）
遺伝子診断室（中越遺伝子診断研究会）：臨床検査技師 ３）、病理医 ４）
いとう伊藤

たもつは

せがわ ひで ひろ

きね ふち保 １）、長谷川秀浩 ３）、杵渕かた ぎり

たか みつ

片桐丘充 １）、小杉こ

すぎひさ よしおお はし久良 １）、大橋

背景：ウイルス性肺炎は小児の中で頻度の高いものであり、また後天性免疫症候群（AIDS）や免疫抑制状態の患者の日和見感染としてしばしば認められる。
それゆえ、ウイルスを同定することは診断上重要であると考える。症例：４７歳、女性、胸部 X 腺撮影で S１０〜S６ に集塊状陰影あり、また全肺に散布性の粒状影もあり、画像状は肺癌を強く疑うがはっきりせず。精密検査のため気管支鏡を施行し、キュレットと洗浄を行い、細胞診で核内封入体を持ったウイルス感染によると考えられる細胞を認めた。そのため、ウイルス同定の目的に、PCR を行った。考察：細胞学的にヘルペスウイルス感染を疑い，PCR 法により単純ヘルペスウイルス核酸（herpes simplex virus―deoxynucleic acid,HSV―DNA）を検出し、ヘルペスウイルスと同定された。PCR 法はウイルス感染症の診断に有効であると考えられた。

こいし ざわしげ かず

たまきいか重一 １）らし とし ひこ珠紀 １）、五十嵐俊彦 ２）４）症例

年齢：４７歳性別：女性
現病歴
胸部 X 腺撮影で S１０〜S６ に集塊状陰影あり、また全肺に粒状影もあり、CEA６０、ツベリクリン反応１０×１２mm であった。画像上は肺癌を強く疑うが、小粒状影は結核か癌転移かはっきりせず。精密検査のため気管支鏡を施行、B１０ 入口部は狭窄しており、その部位をキュレットと洗浄をおこなった。
喀痰、尿、血液、いずれも結核菌は陰性であった。

キーワード：核内封入体、ヘルペスウイルス感染細胞、細胞診標本からの核酸抽出、Polymerase Chain Reaction（PCR）

緒のり典子 １）、石澤言

細胞学的所見多数の気管支上皮と少数の白血球や塵埃細胞などの見られる背景に無構造な核を持った細胞（写真 １）や核内に好酸性の封入体を持った細胞（写真 ２）が多数認められた。また、多核巨細胞化した細胞（写真３）も出現しており、ヘルペスウイルス感染を疑った。
そのうえ、腺癌を疑う核小体明瞭で、核腫大し、クロマチン増量した異型細胞も認められた（写真 ４）。
組織学的所見
肺 B１０ 入口部と B６ および B８―１０ の突起部よりの肺生検にて、高分化管状腺癌、または細気管支肺胞上皮型腺癌と診断された（写真 ５）。

上気道に感染するウイルスは多数あるが、下部気道、肺の感染をきたすものは少ない。しかしウイルス性肺炎小児の中で頻度の高いものである。また、後天性免疫症候群（AIDS）や免疫抑制状態の患者の日和見感染としてしばしば認められる １）。それゆえ、ウイルスを同定することは、診断、治療上重要であると考える。
今回、われわれは気管支キュレッテージおよび気管支洗浄の細胞診で腺癌を疑う異型細胞とともに核内封入体をもった細胞が出現し、ウイルス感染を疑うが、細胞学的形態だけでは確定診断はできず、Polymerase
chain reaction（PCR）法により遺伝子解析を実施し、同定を試みたので報告する。

DNA 抽出顕微鏡下において、核内封入体を有する細胞を確認しながら２７G 注射針にてこれを採取し、フェノール／クロロホルム法により DNA 抽出を行った ２）。
DNA 解析
サイトメガロウイルス DNA の検出は Akrigg.A 等３）４）
により解析された CMV の固有配列部分のなかで前初期 immediate―early（IE）の一部をコードするプライマーを用いて増幅される１４６bp を標的領域とし，また、単純ヘルペスウイルス DNA の検出は HSV 糖蛋白 gB をコードする領域のなかで Domingues 等 ５）により設定されたプライマーを用いて増幅される１４８bp を標的領域として PCR 増幅を行った。その増幅産― 66 ―

厚生連医誌

第１４巻

１号 ６６〜６８ ２００５５）Domingues RB, Lakeman FD et al : Application ofcompetitive PCR to cerebrospinal fluid samples frompatients with herpes simplex encephalitis, J Microbiol
３６：２２２９―２２３４，１９９８．
６）杵渕典子他、サイトメガロウイルス感染症と鑑別困難であった核内封入体を示した １ 症例、新潟県厚生連医誌２００３：１
３!：９８―９９．

物を１２．
５％ アガロースゲルにより電気泳動を行いEtBr 染色を施した後、UV イルミネーターを通し増幅産物へ確認を行った。その結果、（写真 ６）に示すように HSV 特異的蛋白増幅を示す１４８bp にバンドが認められた。

考察英 文 抄

今回、我々は腺癌を疑う異型細胞とともに好酸性核内封入体を持った細胞の出現した症例を経験した。異型細胞は組織診断により腺癌由来と確定された。また、ウイルス感染によると考えられた核内封入体を有する細胞は、PCR 法により HSV―DNA を検出し、ヘルペスウイルス感染によるものと同定された。
細胞学的にヘルペスウイルス感染が疑われ、PCR法 に よ り HSV―DNA を 検 出 し 同 定 す る こ と が で きた。PCR 法は感度や特異性に優れた検査法であり、ウイルス感染の診断に有効であると考えられた ６）。
最後に、本症例を提供していただいた上越総合病院
内科中島先生に御礼を申し上げます。

文録

A case of herpes simplex virus pneumonia diagnosedby cytological nuclear inclusion and Polymerase Chain
Reaction（PCR）with nucleic acid extracted from cytological specimen
Pathological Center, Laboratory of cytological diagnosis : Cytological technician １），Advising doctor of cytological diagnosis ２），Laboratory of genetic diagnosis :Clinical technician ３），Pathologist ４）
Tamotsu Itoh １），Hidehiro Hasegawa ３），Noriko Kinefuchi１），Shigekazu Ishizawa １），Takamitu Katagiri １），HisayoshiKosugi １），Tamaki Oohashi １），Toshihiko Ikarashi ２，４）

献１）飯島宗一他編集、現代病理学体系、東京：中山書店、１９９３；１４A，
３１４２）日本臨床検査技師会ライブラリーⅩⅤⅠ、臨床検査遺伝子・染色体検査教本、技術・操作編、DNA
抽出２７―３３、近代出版１９９８年、日本臨床検査技師会編
３）Akrigg A、Wilkinson GW, Oram JD. The structureof the major immediate early gene of human cytomegalovirus strain AD １６９．Virus Res １
９８５；２"：１０７―２１．
４）長谷川秀浩、片桐丘充、五十嵐俊彦、Polmerase chain
reaction（PCR）法による病理組織からの Cytomegalovirus（CMV）DNA の検出、新潟県厚生連医誌
２００
３：１２!：６―８．

We experienced a case of herpes simplex virus pneumonia（HSV infection）．Her chest simple X―ray film
showed nodular shadows with surrounding diffuse military
nodules, mimic to advanced lung cancer. Bronchoscopic
curettage and regurgitation were done to obtain cytological specimens. Cytological intranuclear inclusion suggested virus infection. HSV infection was confirmed by
PCR analysis with DNA extracted from cells attached on
specimen glass. This PCR maneuver was very useful in acytological study.
Key words : intranuclear inclusion, herpes simplex virus
infection（HSV），nucleic acid extracted from cytological
specimen, Polymerase Chain Reaction（PCR）― 67 ―

単純ヘルペスウイルス肺炎の一症例―細胞学的特徴と細胞診標本から抽出された核酸を使った
Polymerase Chain Reaction（PCR）による同定―

写真 １ パパニコロウ染色（×６０）
スリガラス状（無構造）の核を有する大きな細胞である。

写真 ４ パパニコロウ染色（×６０）
核は腫大し、クロマチン増量しており、明瞭な核小体を有する。細胞質はライトグリーンに染まり、微細空胞をみとめる。

写真 ２

写真 ５ ヘマトキシリン．エオジン染色（×２０）

パパニコロウ染色（×６０）

好酸性の核内封入体を有し、核縁肥厚し、核の相互圧排像もみられる多核巨細胞である。

腺癌組織が管状を呈していると考えられる部分と肺胞上皮細胞を置換性に増殖していると考えられる部位も認められる。

写真 ３ パパニコロウ染色（×６０）
核縁肥厚し、核の相互圧排像を示す多核巨細胞で、スリガラス状の核も認められる。

写真 ６ PCR. HSV-DNA の検出
PCR−PAGE for virus infection
CMV−DNA : Negative
HSV−DNA : Positive― 68 ―