ウェスタン用検出試薬キット

特長 1．世界初の二次抗体不要の検出システム(具体的性能は2．60分のワンステップ迅速検出が可能
裏面の使用例をご覧下さい)
3．複数抗原同時検出が可能
4．高感度検出が可能 （二次抗体との併用で更にシグナル増強）
5．リプロービングも簡単に可能
6．使用法は簡単（二次抗体の代わりに用いるだけ）
注1) Super とQuickは基本的に同じものですが、高感度検出用とワンステップや同時検出用に向けた取扱説明書付きです。
注2)一部検出し難い一次抗体種（マウスIgG1、ヤギ IgGなど）がありますが、マウスの場合、増強試薬によって高感度検出が可能です。
注3)検出する抗原や用いる抗体によって本品の性能は異なります。
注4)60分検出はタンパク質を転写済の膜からの処理時間です。

【作動原理】
抗原と１次抗体1

抗体検出試薬反応 添加

当社が独自開発した特殊な粒子で一次抗体を検出します。本粒子には多種の抗体に対し高い結合能を有するタンパク質分子が約100個提示され、また１粒子には約50分子のHRPが標識されています。
このため、高感度検出、シグナル増強、ワンステップ迅速検出、複数抗原同時検出等を可能とします。

検出【製品ライナップと価格】
製品番号
製品名
BCL-EZS21 Easy-WESTERN-II Super 基本セット
BCL-EZS22 Easy-WESTERN-II Super マーカー検出セット
BCL-EZS24 Easy-WESTERN-II Super マウス増感セット
BCL-EZS23 Easy-WESTERN-II Super フルセット
BCL-EZQ21 Easy-WESTERN-II Quick 基本セット
BCL-EZQ22 Easy-WESTERN-II Quick マーカー検出セット
BCL-EZQ24 Easy-WESTERN-II Quick マウス増感セット
BCL-EZQ23 Easy-WESTERN-II Quick フルセット

製品内容
高感度検出用 （50回分）
基本セット + マーカー検出試薬*
基本セット + マウスIgG増感試薬**
基本セット + マーカー検出試薬 + マウスIgG増感試薬
迅速度検出用 （50回分）
基本セット + マーカー検出試薬*基本セット + マウスIgG増感試薬**
基本セット + マーカー検出試薬 + マウスIgG増感試薬*：MagicMarkなど二次抗体で検出するマーカーを利用する場合に、Easy-WESTWRN-Ⅱで検出可能とする試薬です**：マウスIgGを一次抗体とする場合に検出感度を向上させます。特に、マウスIgG1を用いる場合は必須です。
何れも10mLのアッセイ系で50回分です【ウェスタン関連製品抜粋】
製品番号

内容量

製品名

BCL-125

Signal Booster Solution A & B セット
抗原抗体反応を増強する抗体の希釈液です。2液性の組成です。

BCL-SBN-01

Signal Booster Neo250 mL
抗原抗体反応を増強する抗体の希釈液です。1液性でタンパク質不含の組成です。

BCL-BKSW-01

Blocking sol. Trial set (western)
20 mL×4 set
カゼイン、変性カゼイン、BSA、化学物質を主成分とする4種のウェスタン用ブロッキング溶液のトライアルセット

BCA-AWS, AWM, AWU

オートウェスタン装置
１ 台
ウェスタン反応を自動で行う装置です。スタンダードタイプ、ミニタイプ、マルチタイプがあります。

BCL-WMN-01 他

Western Marker Neo (low, high, wide)

各 250 mL

250 μLHRP標識2次抗体検出用のウェスタンマーカーです。カラーマーカー入りのため転写確認も可能です。

【製造・販売元】【ご注文先】

株式会社ビークル〒606-8305
京都市左京区吉田河原町14-1
TEL: 075-762-5055
FAX: 075-762-3055
website: www.beacle.com
E-mail: information@beacle.com

注文先に販売店名が記載されていない場合は、㈱ビークルに直接ご注文いただくか、普段お使いの販売店にお問い合わせください。
Ver.1.0

Easy-WＥＳＴＥＲＮ-Ⅱ（EZW-Ⅱ)の使用例
1次抗体＋MAD
2次抗体の代わりに①標準法による高感度検出
SDSPAGE

転写

1次抗体

洗浄

ブロッキング
(1時間)

反応

洗浄反応

KDa

123洗浄(5分×3) (1時間) (5分×3) (1時間) (5分×5)

HuH7細胞のCell Lysate（一次抗体）：Anti-Vimentin, mouse IgG2a, 1/5000（二次抗体）： Anti-mouse IgG-HRP, rabbit poly, 1/5000：2nd Ab
EZW-II
12②迅速One Step ウエスタン

MADSDS
PAGE

検出or MAD 1/2000

12010080
60
5040605040

1/10量抗原でも強シグナル(一次抗体量を減少させても同様の結果です）

30

洗浄反応

洗浄検出(3分×3) (30分) (5分×5)

2nd EZW-II

KDa220

抗原量
１： 原液
２： 1/10液
３： 1/50液

1120
10080

ブロッキング(5分)

混合(5分)

HuH7細胞のCell Lysate（一次抗体）： Anti-Vimentin, mouse IgG2a
Anti-Vimentin, mouse IgG2a+MAD試薬（二次抗体）： Anti-Mouse IgG-HRP, 1/10000

3220

転写＋← vimentin

反応時間を約60分に短縮
２次抗体による定法と同等の検出感度302020④複数抗原の同時検出③簡便なリプローブ法
2次抗体

反応

MAD

シグナル弱い!!

検出SDS
PAGE

洗浄反応

洗浄(5分×3)(1時間)(5分×5)

KDa

KDa

220

220120110080120
11008060506050404030302020

ブロッキング
(1時間)

洗浄反応

洗浄反応

洗浄検出

←GAPDH←GFP

Detect-2KDa

KDa

220

220

MAD120110080112010080

洗浄60504060504030302020(5分×5)

同時検出でタンパク質の用量依存性も観察可能

HuH7細胞のCell Lysate（一次抗体）：Anti-Vimentin , mouse IgG2a, 1/10000（二次抗体）：Anti-mouse IgG-HRP, rabbit poly, 1/20000（三次反応）：MAD試薬, 1/2000

反応(5分×3) (1時間) (5分×3) (1時間)反応20(5分×3) (1時間)

2次抗体

洗浄1： -GFP
2-5： +GFP (2から5へ抗原量増加）

30

1次抗体

洗浄反応

5Detect-1⑤通常法に追加した増感法
転写1 2 3 4

KDa
220
120
100
80
605040

二次抗体で弱いシグナルをEZW-IIで再検出してシグナル増強可能

SDS
PAGE

洗浄(5分×3) (1時間) (5分×3) (1時間) (5分×5)

HuH7細胞のCell Lysate（一次抗体）：Anti-GFP, Rabbit poly, 1/2000
Anti-GAPDH, Rabbit mono, 1/10000(二次抗体）：MAD試薬, 1/2000＜Method＞
1st reaction↓
TBS-wash↓
2nd reaction↓
TBS-wash↓Detect-1↓
TBS-wash↓
3rd reaction↓
TBS-wash↓Detect-2(reprobe）

Detect-2

ブロッキング(1時間)

転写検出

HuH7細胞のCell Lysate（一次抗体）：Anti-Vimentin, mouse IgG2a, 1/10000（二次抗体）：Anti-mouse IgG -HRP, rabbit poly, 1/20000（再検出）：MAD試薬, 1/2000
Detect-1

MAD

1次抗体（ウサギ）
1次抗体（マウス)

検出

2次抗体とMADを混合しワンステップで行うことも可能です＜Method＞
1st reaction↓
TBS-T wash↓
2nd reaction →Detect-1↓
TBS-T wash↓
3rd reaction↓TBS-T wash↓
Detect-2

二次抗体反応後にMAD試薬反応を加えることによりシグナル増強可能
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