（）

【短報】

産業動物

B 細胞モノクローナル増殖が証明された
牛伝染性リンパ腫のホルスタイン種乳牛の 症例坂口加奈 ）＊堀内雅之 ）＊＊＊＊誠希 ）＊＊前澤古林与志安 ）チェンバーズ・ジェームズ ）‐）帯広畜産大学獣医学研究部門（〒永田内田

帯広市稲田町西‐）東京大学大学院農学生命科学研究科（〒‐

現所属：北海道 NOSAI オホーツク統括センター（〒＊＊

現所属：東京大学大学院農学生命科学研究科＊＊＊‐

現所属：家畜改良センター岩手牧場（〒

現所属：株式会社 栄養・病理学研究所（〒＊＊＊＊＊

現所属：東京大学大学院農学生命科学研究科

渡邉謙一 ）

健樹 ）小島一優 ）和幸 ）線壽 ）＊＊＊＊＊猪熊）北海道北見市美園

OSG 国際防疫獣医学講座（〒‐− ）東京都文京区弥生−−）

岩手県盛岡市下厨川字穴口）‐＊＊＊＊創 ）＊＊＊

東京都文京区弥生 − − ）＊京都府綴喜郡宇治田原町立川古池谷

動物医療センター（〒要歳轉馬‐−）東京都文京区弥生−−）

約

カ月齢のホルスタイン種乳牛が乳量減少を呈した。体表リンパ節腫大を認め骨盤腔内には複数の大小腫瘤を触知した。末梢血白血球数は，／µ で、分裂像を含む異型リンパ球が多数認められた。BLV 抗体陽性であったため牛伝染性リンパ腫と診断され廃用となり、帯広畜産大学に搬入された。大学における追加検査として実施された腫大リンパ節の細胞診検査では、異型性の高い中大型リンパ球が ％認められた。また、血清 LDH 活性は ，U／ 、LDH- および分画はそれぞれ ，U／ とU／ 、さらに血清 TK 活性は ，U／といずれも著増していた。免疫グロブリン重鎖遺伝子の再構成を利用した B リンパ球クローナリティ解析を実施したところ、末梢血はモノクローナルな B リンパ球の増殖であることが証明された。病理学的検査では全身のリンパ節腫大と主要臓器への腫瘍化した B リンパ球浸潤が認められ、本症例は牛伝染性リンパ腫であると確定診断された。B リンパ球クローナリティ解析は末梢血の異常リンパ球出現を証明する手段として有効であり、牛伝染性リンパ腫の生前診断法のひとつとして有用と考えられた。
キーワード：牛伝染性リンパ腫、クローナリティ解析、腫瘍マーカー
北獣会誌

，〜（）

牛伝染性リンパ腫は牛伝染性リンパ腫ウイルス（Bo-診所見が用いられる［ ‐ ］。また、このほか、血清中 LDHvine Leukemia virus：BLV）の感染が原因によって生活性とそのアイソザイム分画の変化、および血清チミジじる B リンパ球の悪性腫瘍である［ 、］。その病態は全身ンキナーゼ（thymidineの様々なリンパ組織が腫瘍性に増殖するものであるが、瘍マーカーとして利用される［ - ］。さらに医学および伴腫大リンパ節の部位や腫大程度は様々であり、周辺臓器侶動物領域では、腫瘍化した B リンパ球のモノクローナの圧迫度合いや腫瘍が浸潤した臓器の障害によって臨床ル増殖を検出するための分子生物学的検査法（クローナ徴候も多様である［ 、］。本疾患の臨床診断としては、一リティ解析）が診断に応用されている。近年、この方法

般的には末梢血リンパ球数増多と異常リンパ球（腫瘍化は牛でも開発されたものの［ 、 ］、臨床例での応用例はしたリンパ球）の検出、および腫大したリンパ節の細胞未だ多くない。今回、末梢血リンパ球増多症と体表リン連絡責任者：猪熊〒TEL壽‐

東京大学大学院農学生命科学研究科
東京都文京区弥生−−

FAX−−−−

kinase：TK）活性の増加が腫動物医療センター

E-mail : ainokuma@g.ecc.u-tokyo.ac.jp
北獣会誌

（）

（パ節の腫大を呈した典型的な牛伝染性リンパ腫症例において、B 細胞のモノクローナル増殖を証明したので、その概要を報告する。

歳．血液および血液化学検査所見（第 病日、大学搬入時）

RBC． ×／µAST

UdHb． g／dGGT

Ht．％

LDH，U／U／U／

例

MCV．f

LDH-，MCHC

． g／d

LDH-，

カ月齢のホルスタイン種乳牛で、Platelet／µ

LDH-U／

WBC， ／µLDH-U／

Sta／µ（％）

LDH-Seg， ／µ（％）

TK，

Eos／µ（％）

TP

． g／d

Lym， ／µ（％）

Albumin． g／dMon／µ（％）

A／G．

BUN

． mg／d症
症例は

表歳

カ月齢時初産後、人工授精をするも受胎せず、搾乳を継続していた個体である。

日ほど前から乳量が減少してきたことを主訴に診察依頼があった。初診時（第病日）、症例は食欲を示すものの著しく削痩しており、左右腸骨下リンパ節の腫大が認められた。また、直腸検査において複数の大小腫瘤を触知した。なお、当該牧場では）

．×

U／

U／U／

年

前に同居牛に牛伝染性リンパ腫が発症していた。これらの所見から、症例が牛伝染性リンパ腫を発症していることを疑い、血液検査を実施したところ白血球数，／µ で、末梢血塗抹標本では分裂像を含む異型性を示すリンパ球がほとんどであった。BLV 抗体は陽性であり、症例は家畜共済号廃用事故と認定された後、第病日に帯広畜産大学に搬入された。
搬入時検査では体温．℃、心拍回／分、呼吸数回／分で、著しい削痩、浅頸および腸骨下リンパ節の腫大がみられた（図、図）。眼球はやや突出しており、茶褐色の水様便を排泄した。直腸検査を実施したところ、左右内腸骨リンパ節が手掌大に腫大していた他、子宮頸管右側および卵巣近傍に直径〜cm の腫瘤が触知された。血液検査では貧血および著しいリンパ球増多症が認められた（表）。血液塗抹標本の観察では強い異型性を呈する核をもつ大型リンパ球が多数認められた（図図．左腸骨下リンパ節の腫大（矢印））。血液化学検査では AST と GGT 活性の軽度増加に加えて、LDH 活性の著増がみられた（表）。腫瘍マー図．症例の外貌（第 病日、大学搬入時）
症例は削痩が著しく体表リンパ節の腫大が認められた（矢頭：左腸骨下リンパ節）

北獣会誌

（）

図 ．血液塗抹標本ギムザ染色像
Bar＝ µm
強い異型性を示す核をもつ大型のリンパ球が多数認められた（）

カーとしての、LDH アイソザイム解析では全ての分画リンパ球＋大リンパ球の割合がで高値がみられ、血清 TK 活性も著しく高値を示した（表％を超えていた［ ］。

末梢血から抽出した DNA 中の BLV プロウイルス量を）。

キット（ウシ白血病ウイルス検出キット：TaKaRa、滋腫大した左腸骨下リンパ節を G 針で穿刺し、細胞診賀）を用いて、測定したところ、 ，copies／ng DNAを行ったところ、末梢血にみられたのと同様の強い異型と著増していた。またクローナリティ解析は、免疫グロ性を持つリンパ球が優勢であった。小リンパ球（リンパブリン重鎖（H 鎖）の遺伝子再構成を利用した PCR を球の核の直径が赤血球の直径％、中リン

Maezawa らの方法［ ］により実施した。すなわち、免疫個分以上） ％グ ロ ブ リ ン 重 鎖（Immunoglobulin heavy chain：IgH））、牛リンパ腫の細胞診診断基準である中可変領域を増幅するプライマーセット（BoVHF1 : 5 -パ球（同個分未満）個分） ％、大リンパ球（同であり（図AGC CCT GAA ATC CCG GCT CA-3 /BoVHR1 : 5 TCC AGG AGT CCT TGG CCC CA-3 ）を用いて、末梢血 DNA をテンプレートとした PCR を実施し、そのPCR 産物をキャピラリー電気泳動装置（Qsep -Lite Bio-Fragment Analyzer：Bioptic Inc．、台湾）および％アガロースゲル電気泳動により解析した。いずれの方法
でも本症例の末梢血由来 DNA は明瞭な単一バンドを呈し、リンパ球のモノクローナルな増殖と判定された（図）。

病理学的検査所見
症例は第図．左腸骨下リンパ節細胞診所見
ギムザ染色 Bar＝ µm
分裂像を含む強い異型性を持つリンパ球が優勢であり、中・大リンパ球は ％認められた

病日に安楽死処置後、病理解剖に供された。

全身のリンパ節（浅頸、膝窩、乳房上、腸骨下、内腸骨、肺門）が顕著に腫大していた。腫大したリンパ節割面は乳白色髄様であり、固有構造は置換されていた。同様の乳白色髄様を呈する腫瘍性病変は腎臓、心臓、子宮、硬膜下、下垂体前葉に認められた。腫大リンパ節の病理組

図
図．免疫グロブリンの重鎖（H 鎖）の遺伝子再構成を利用した末梢血 B リンパ球のクローナル解析（A）キャピラリー電気泳動像（B） ％アガーゲル電気泳動像
どちらも bp に明瞭なモノクローナルバンドが認められた（矢頭）．左腸骨下リンパ節の病理組織学的検査所見
Bar＝ µm（A）HE 染色では異型性を示す中〜大型の独立円形細胞が増殖しており、リンパ腫と診断された腫大リンパ節の免疫染色検査では、（B）CD 陰性、（C）CD 陽性および（D）BLA 陽性を呈し、腫瘍細胞は B リンパ球と診断された
北獣会誌

（）

（）

織学的検査では、異型性を示す中〜大型の独立円形細胞定義は明確にされておらず、主観的であいまいな部分がが増殖しており、リンパ腫と診断された。また、腫大リ残っている。リンパ球は腫瘍化していなくても、各種抗ンパ節の免疫染色検査では、増殖した腫瘍細胞は T リン原刺激により異型性を呈し、「反応性リンパ球」と呼ばパ球表面マーカーである CD には陰性であったが、Bれる形態変化を示すことが知られている［ ］。医学領域

リンパ球表面マーカーである CD と BLAに対してはでは腫瘍化リンパ球は「異常リンパ球」と呼ばれ、「反陽性を呈し、B リンパ球と診断された（図）。

応性リンパ球」と区別されている［ ］。今回、B リンパ考球の IgH 遺伝子再構成を利用した PCR を用いてクロー察ナリティ解析を実施したところ、本症例由来 DNA は単

本症例は削痩と乳量減少を呈した BLV 陽性牛に、著一バンドを示し、増加した末梢血リンパ球が B リンパ球

しいリンパ球増多症と体表リンパ節腫大が認められ、生のモノクローナル増殖であることが証明された。モノク前に牛伝染性リンパ腫と診断された典型的な牛伝染性リローナル増殖は、腫瘍性増殖を意味しているため、本症ンパ腫症例であった。本症例は BLV プロウイルス量の例の末梢血リンパ球は腫瘍化した「異常リンパ球」であ著増を示しており、安楽死後の病理学的検査においてもることが示された。クローナリティ検査は末梢血に出現体表のみならず体腔内の多中心的なリンパ節腫大、およした異型度の高いリンパ球が「異常リンパ球」であるこび腫瘍化 B リンパ球の主要臓器への浸潤が認められ、牛とを客観的に示す手段として有用と考えられた。しかし伝染性リンパ腫であることが確認された。

ながら、今回用いた検査法が腫瘍化した B リンパ球を検牛伝染性リンパ腫の生前診断については、家畜共済事出する感度は約％と報告されており［ ］、本検査陰性

務取扱要領に廃用要件が明記されており、「一般臨床症が必ずしもリンパ腫を否定することにならない点に留意状を伴うものであって次の基準のいずれかを満たしたもする必要がある。また、牛の造血器腫瘍としては B リンのとする。なお、アの基準による場合は、原則として抗パ球腫瘍である牛伝染性リンパ腫に遭遇する機会が多い

体検査または PCR 法の結果を参考にして疫学的な検討が、T リンパ球性のリンパ腫や骨髄性白血病の発生も報を加えて慎重に取り扱うこと。
（ア）体表若しくは体腔告されている［ - ］。リンパ腫を疑うものの、クローナ内のリンパ節の複数の腫大または胸腺の腫大が認められ、リティ解析により B リンパ球のモノクローナルな増殖がかつ、血液検査において異型リンパ球数が末梢リンパ球確認できない場合、検査系の感度が低くて陰性を示して数の％以上認められるもの、または腫大リンパ節の生いる可能性に加えて、B リンパ球以外の腫瘍であること体組織学的検査において多数の異型リンパ球が認められも想定して、骨髄検査や免疫組織化学検査を追加して診るもの、（イ）
血液検査において末梢リンパ球数が断を進める必要があると考えられる。

，3個／mm 以上認められ、かつ、抗体検査または PCR 法の本研究の一部は科研費Hにより実施された。

結果陽性のもの」と規定されている。本症例は臨床現場貴重な症例をご提供いただきました十勝 NOSAI の獣医における検査で（ア）（イ）のどちらの基準をも満たし師各位に深謝します。ており、牛伝染性リンパ腫と診断されて大学に搬入され引用文献たものである。
しかし、実際の症例では生前に上記基準を満たすもの［ ］Angelos JA, Thurmond MC : Bovine lymphoma.

ばかりではない。リンパ球増多症や体表リンパ節腫大を: Larrge Animal Internal Medicine, 5th ed. (Smith,呈すことのない、いわゆる非典型的な牛伝染性リンパ腫

BP. ed.), 1070-1073, Elsevier, St. Louis (2015)

症例も多く、食肉検査、あるいは安楽死後の病理学的検［ ］Constable PD, Hinchcliff KW, Done SH : Veteri-査で確定する症例が報告されている［ ‐ ］。このため、nary Medicine, A textbook of the diseases of cattle,リンパ腫の補助診断法として、血清 LDH や LDH アイソ

sheep,pigs,goats and horses, 11th, 785-794, Elsevier,

ザイム解析、あるいは TK 活性の測定が利用されていSt. Louis (2017)

る［ - ］。本症例でも血清 LDH 活性、LDH‐ およ び分画、および TK 活性のいずれもが高値を示し、これらの検査項目が牛伝染性リンパ腫の診断に有用であることがまた、上記診断基準のうち牛における異型リンパ球の獣会

誌

印刷中（

壽：牛伝染性リンパ腫の臨床診断、臨床獣医、［ ］猪熊）壽：異常リンパ球の検出による牛伝染性リンパ腫の臨床診断-鑑別のポイントとクローナリティ解再確認された。

北［ ］猪熊（）析、家畜診療、、 ‐ （）（）［ ］Sakamoto L, Obayashi T, Matsumoto K, Kobay-［］田川道人、下田ashi Y, Inokuma H : Serum thymidine kinase activ-

与志安、古岡秀文、石井三都夫、猪熊

ity as a useful marker for bovine leukosis, J Vet Di-

牛白血病のホルスタイン種乳牛‐agn Invest, 21, 871-874 (2009)［ ］Tawfeeq MM, Miura S, Kobayashi Y, Furuoka H,［症例、日獣会誌、、）］坂口加奈、前澤誠希、田中佑典、互野佑香、上沢彩、渡邉謙一、堀内雅之、古林与志安、猪熊

ity measurements for cases of bovine leukosis with

表リンパ節腫大と骨盤腔内腫瘤の認められない地方病

difficult clinical diagnoses, J Vet Med Sci, 75, 1213-性牛白血病ホルスタイン種乳牛の1217 (2013)

床医誌、
壽：地方病性牛白血病発症マー［、‐］宗村佳子、小川（壽：体症例、産業動物臨）仁、杉山恵美、藤川浩、村上

カーとしての乳酸脱水素酵素活性の評価、産業動物臨

賢二：東京都におけると畜牛の地方病性牛白血病発生

床医誌、

状況と牛白血病ウイルス浸潤状況、日獣会誌、 、、‐（）‐［ ］Konishi M, Kobayashi S, Tokunaga T, Chiba Y,
Tsutsui T, Arai S, Kameyama K, Yamamoto Y : Si-［（）］Harvey JW : Lymphocytes, Veterinary Hematol-

multaneous evaluation of diagnostic marker utility

ogy, A diagnostic guide and color atlas, 156-164,

for enzootic bovine leukosis, BMC Vet Res, 15 : doi.

Elsevier Saunders, St. Louis (2012)org/10.1186/s12917-019-2158-4 (2019)［K, Kobayashi Y, Inokuma H : Molecular diagnosis of］勝田逸郎：白血球系の基礎知識、ビジュアル臨床
血液形態学 改訂第［ ］Maezawa M, Watanabe K, Horiuchi N, Matsumoto［（壽：非典型的Inokuma H : Utility of serum thymidine kinase activ-［ ］三浦沙織、猪熊［崇、富樫義彦、渡辺由紀、古林［版、 ‐ 、南江堂、東京（）］Maezawa M, Akiyama N, Tagawa M, Watanabe

bovine B-cell lymphoma using PCR for immuno-K, Matsumoto K, Furuoka H, Inokuma H : A clinicalglobulin heavy chain gene, J Vet Med Sci, 82, 61-63

case of acute myelomonocytic leukemia in a Hol-(2020)

stein cow, J Vet Med Sci, 83, 819-823 (2021)］Takezawa S, Maezawa M, Tsuzuku S, Kakakami［ ］Maezawa M, Nakamichi A, Akiyama N, Tagawa

J, Oouchi Y, Inokuma H : Abnormal clonalities of B-M, Watanabe K, Kobayashi Y, Inokuma H : Acutelymphocytes in bovine leukemia virus-infected cat-myelomonocytic leukemia negative for alpha-naph-

tle with persistent lymphocytosis, J Vet Med Sci, 83,

thyl acetate esterase stain in a Holstein cow, J Vet

928-1932 (2021)

Med Sci, 83, 1643-1647 (2021)］田川道人、堀内雅之、松本高太郎、古林与志安、
古岡秀文、猪熊壽：リンパ節生検材料の細胞構成比率に基づいた牛白血病診断基準の検討、家畜感染症誌、、 ‐ （［］Itoh M, Kobu M, Takayama H, Ihiskawa Y, Kadoda K : Cytologic variants of γδ T cell lymphoma
in cattle, J Vet Med Sci, 73, 399-402 (2011)）

北獣会誌（）