ULTRON
高速液体クロマトグラフィー用充填カラム

技 術 資 料
光学分割クロマトグラフィー用充填カラム,

ULTRON ES-OVM

目（オボムコイド）

次ページ
1はじめに

22pH とキャパシティーファクターの関係

23

分析温度の影響24

有機溶媒に対する安定性35

移動相緩衝液の種類と分離能36

内径 6mmφカラムによる分離の向上

47

セミ分取カラム

8医薬品の分離例

79仕様および価格

75-1-～

6No.5

1. はじめにULTRON ES-OVM は、逆相タイプで使いやすい、ピーク形状がよい、微量代謝物質の研究に供しやすい、分析対象物質の適用範囲が広い、など多くの優れたメリットがあり需要が増大しております。
「技術資料 4 Ver.2」では充填カラムの基本的特性について説明しましたが、その後検証を重ねました項目についてご説明致します。

2. pH とキャパシティーファクターの関係
酸性化合物は、pH の増加に対してキャパシティーファクターが減少し、塩基性化合物は逆に増加します。
'移動相 pH をオボムコイドの等電点（3.9～4.3）以下にしますと、酸性化合物のキャパシティーファクターが急激に減少します（図 1 参照）。
ULTRON ES-OVM の使用可能な pH 範囲は 3～7.5 です

3. 分析温度の影響
分析温度を 5～40℃に変化させ、保持時間、理論段数、分離度に与える影響を検証しました。
理論段数は、40℃において最大で、5℃の約 4 倍となり、分離度は 20℃付近で最大となりました（表 1 参照）。
ULTRON ES-OVM は、40℃においても変性することなく使用できます。

Column Tempereture
5℃

11℃

19℃

28℃

40℃

k’1k’2

18.67

11.49

7.79

4.97

2.59

23.94

14.59

9.68

6.05

3.06

α1.28

1.27

1.25

1.22

1.18N1N2Rs4467221059

1224

1899

380563796890

1282

1.12

1.35

1.44

1.21

1.08

Column：ULTRON ES-OVM (4.6mmφ×150mm)
Mobile phase：20mM-KH2PO4 (pH=4.6)/C2H5OH = 100/10
Flow rate：1.0 mL/min.
Detector：UV-220nm (0.08AUFS)
Sample：Propranolol

Mobile phase：20mM-KH2PO4 /C2H5OH = 100/ 5
Flow rate：1.0 mL/min.
Detector：UV-220nm (0.08AUFS)

図1

pH とキャパシティーファクター-2-

4. 有機溶媒に対する安定性
アセトニトリルおよびエタノールの 50%水溶液を 0.5mL/min で 50 時間直接カラムに流して、随時光学分割能を調べましたが、変化は全くありませんでした。
疎水性の強い試料は、有機溶媒を 50%まで添加して分析することができます。また、吸着した試料の洗浄にも使用できます。

CH 3CN / H2O = 1 / 1
0.5 mL / min.
50 hrsColumn：ULTRON ES-OVM
Mobile phase：20mM-KH2PO4 (pH=4.6)/C2H5OH= 100 / 10
Flow rate：1.0 mL/min.
Temp.：Ambient
Detector：UV-250nm
Sample：Benzoin

図 2 通液前のクロマトグラム

図 3 通液 50hrs 後のクロマトグラム

5. 移動相緩衝液の種類と分離能
光学異性体の分離は移動相の選択が重要です。一般的には 20mM-KH2PO4 水溶液ある
いはリン酸緩衝液（ k1 / k2）に有機溶媒を添加した移動相を使用しますが、他の緩衝液（ギ酸、酢酸、クエン酸）についてもリン酸緩衝液とほぼ同等の分離が得られることを確認しました。
また、ギ酸アンモニウム緩衝液でランニングしましたが光学分割能には変化はありませんでした。

αRs20mM リン酸二水素カリウム水溶液 pH=4.62.667.4720mM ギ酸－ギ酸アンモニウム pH=4.62.556.0920mM 酢酸－酢酸ナトリウム pH=4.62.756.40

20mM クエン酸－リン酸水素ニナトリウム pH=4.62.496.42

緩 衝 液 の 種 類

分析条件は図 2 に同じ-3-

6. 内径 6mmφカラムによる分離の向上
内径 4.6mmφ、及び 6.0mmφカラムで移動相の流量を変え検証しました。分離が不十分な場合には、カラムボリュームを大きくした内径 6mmφカラムの選択が効果的です。
◎カラムボリュームが大きいほど Rs 値は大きくなります。
◎流速 1mL/min の場合、6mmφ×150mm カラムの圧力は、4.6mmφ×150mm カラムの 60～70%程度になります。
6.1 流速と HETP の関係
移動相：20mM KH2 PO4 (pH=4.6)/C2 H5 OH = 100/10
流速：1.0 mL / min.

温度：25 ℃

検出：UV-250nm

注入量：0.4µL (1.5mg/mL)
試

図46.2

料：Benzoin

流速と HETP の関係

カラムサイズによる分離の比較

カラム：ULTRON ES-OVM
移動相：20mM KH2 PO4 (pH=4.6)/C2 H5 OH = 100/20
流速：1.0 mL / min.

温度：25 ℃

検

出：UV-220nm

カラム：ULTRON ES-OVM
移動相：20mM KH2 PO4 (pH=4.6)/C2 H5 OH = 100/10
流速：1.0 mL / min.

温度：25 ℃

検出：UV-220nm-4-7. セミ分取カラム
ULTRON ES-OVM Prep はアミノ化シリカゲル（120Å、10µm）をべースにしています。
タンパク質系のリガンドは、アフィーニティータイプに属しますので、吸着サイトが小さく、負荷量が少ない傾向にありますが、ラセミ体の試料は純度が高く、夾雑物が少ないため、 Rs 値の大きな試料は高純度で分取することが可能になります。
7.1 流速と理論段数および分離度の関係
流速の増加と共に理論段数と分離度はゆるやかに低下してきます（図 9 参照）。分析
カラム 4.6φで 1mL/min の場合、20φでは約 19mL/min の流速に相当しますが、実際はRs 値と分取時間を考慮して決める必要があります。
7.2 試料希釈溶媒の影響
分取カラムに試料溶液を大量に注入する場合、試料溶媒の種類によって理論段数やピーク形状に影響を及ぼす場合があります。
試料を良溶媒で溶解、希釈する場合や、貧溶媒で希釈した時の理論段数への影響を図10 に示しました。
Propranolol は水やアルコールに溶解しますが、アルコールの方が良溶媒のため、注入容量が 50µL 以上で理論段数の低下が起こります。水で希釈した場合には 100µL 注入しても理論段数の低下は認められません。
これらのことから、試料は良溶媒で溶解させ、さらに溶出力の弱い溶媒で希釈して注入することができれば一番望ましいと思われます。

カラム：ULTRON ES-OVM Prep

カラム：ULTRON ES-OVM Prep

(20φ×250mm)(20φ×250mm)

移動相：20mM KH 2PO 4 (pH=4.6)/C 2 H 5 OH = 100/10

移動相：20mM KH 2PO 4 (pH=4.6)/C 2 H 5 OH = 100/20

温度：25 ℃

流速：9mL/min

検出：UV-220nm (0.04AUFS)

温度：25 ℃

試料：Chromezanone

検出：UV-220nm

試料：Propranolol
絶対注入量 0.8µg（一定）

図 9 流速と N、Rs の関係

図 10 試料希釈溶媒と理論段数-5-

7.3 分離度と試料負荷量の関係
試料最大負荷量は分離度（ Rs）によって大きく異なってきますので、分析カラムで極力 Rs 値が大きくなるような分析条件の探索が重要になってきます。
表 3 に Rs が 1.06 の場合と Rs が 3.17 の場合を例にとって最大負荷量の目安を示しています。また、図 11～15 にクロマトグラムを示します。

Rs 値と最大負荷量

表3分離度(Rs)

完全分離(mg)

最大負荷量(mg)

1.06－0.2

3.17

12

カラムサイズ 20φ×250mm、分離度は負荷量が 10～30µg での値です。
最大負荷量は分離の限界値です。

カラム：ULTRON ES-OVM Prep
(20φ×250mm)
移動相：20mM KH 2PO 4 /C 2 H 5 OH = 100/20
流速：9mL/min

分析圧：60kg/cm 2

図 11

温度：25 ℃

検
試

出：UV-220nm
料：Propranolol

Propranolol 10µg

カラム：ULTRON ES-OVM

図 12

Propranolol 0.2mg

図 15Bunitrolol 2mg

prep(20φ×250mm)
移動相：20mM KH 2PO 4 (pH6.5)/C 2H 5 OH = 100/3

図 13

流速：9.9mL/min

温検

度：25 ℃
出：UV-220nm

Bunitrolol 30µg

図 14Bunitrolol 1mg-6-8. 医薬品の分離例
表 4 医薬品の分離度
Substance

Rs

Substance

Rs

Acetyl pheneturide

2.74

Chlorpheniramine

4.09

Mephobarital

1.70

Alimemazine

6.06

Chlorprenaline

2.34

Methylphenidate

1.13*

Alprenolol
Bay K-8644(Dihydropyridine
Derivative)
Benproperine

1.09*

Dimethindene

4.33

Oxprenolol

1.38

5.92

Disopyramide

2.04

Pindolol

2.04

Flurbiprofen

1.27

Profenamine

3.31

3.27

Glutethimide

1.36

Proglumide

1.76

Benzoin

7.71

1.73

1.42

Biperiden

3.17

Glycopyrronium
bromidePromethazine
Propranolol

1.30

Bunitrolol

3.08

Homochlorcyclizine

3.04

Tolperisone

3.91

Chloperastin

2.85

Hydroxyzine

2.15

Trihexyphenidyl

5.16Chlormezanone

6.48

Ibuprofen

1.33

Trimipramine

3.69

Chlorphenesin

2.23

Ketoprofen

1.99

Verapami1

1.49

Meclizine

3.71

Substance

Rs＊Column Size 6.0φ×150mm

9. 仕様および価格
品

名平均粒子径(µm)

カラムサイズ(mm)

用途

定価(円)

ULTRON ES-0VM ナローボアカラム

5150×2.0 I.D.

血中薬物分析

180,000

ULTRON ES-OVM

5150×4.6 I.D.

一般分析用

180,000

高分離用

250,000

5150×6.0 I.D.

ULTRON ES-OVM・G

510×4.0 I.D.

ガードカラム32,000ULTRON ES-OVM

10250×4.6 I.D.

セミ分取検討用

165,000

ULTRON ES-OVM Prep

10250×20.0 I.D.

セミ分取用

1,650,000

ULTRON ES-OVM Prep・G

1015× 8.0 I.D.

セミ分取ガードカラム66,000〃※お問い合せ下さい●カラムフィッティングはウォーターズ型と互換性があります。
●カラム封入液は水 / 2-プロパノール = 2 / 1 水溶液です。
●他のカラムサイズはお問合せ下さい。
※仕様は改良のため、予告なく変更することがありますのでご了承下さい。

-7-

ULTRON 技術資料
No.1 ポリマー系有機酸専用カラム ULTRON PS-80H
No.2 ポリマー系糖,糖アルコール専用カラム
ULTRON PS-80N,PS-80C,PS-80P
No.3 非水系 ULTRON GPC カラム
No.4 光学分割カラム ULTRON ES-OVM カラム
Ver.2

No.5
No.6
No.7

光学分割カラム ULTRON ES-OVM カラム
光学分割カラム ULTRON ES-OVM(ナローボアカラム)
光学分割カラム ULTRON ES-OVM カラム〒612-8307

京都市伏見区景勝町50番地2TEL 075-621-2360 FAX 075-602-2660
e-mail: info@shinwa-cpc.co.jp
U R L : http://shinwa-cpc.co.jp/
LN1005B-8-