課題番号
研究課題名：25指103：新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態の解析および新規治療法の開発
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：土肥多恵子、高木智
キーワード
研究成果

：乾癬、慢性皮膚疾患、Th17 細胞： 我々は T 細胞シグナル伝達に関わる因子である RhoH を欠損するマウスが、BALB/c 背景において乾癬様の慢性皮膚炎を自然発症することを見出した。これまでに、炎症部位に Th17 細胞が浸潤し Th17 関連サイトカインが過剰産生されていることを見出している。Th17 細胞の増加は皮膚炎症状を示す前から亢進しており、また RhoH 欠損 Th17細胞を RAG 欠損マウスに移入しただけで病態が再現出来ることから、
Th17 細胞の増加が乾癬症状の原因であることが示唆された。実際、
in vitro においても RhoH 欠損ナイーブＴ細胞は Th17 分化が亢進しており、Ｔ細胞内で RhoH が欠失することにより Th17 への分化が増強することが明らかとなった。この分子機構についてはシグナル伝達を中心に現在解析を進めている。また、乾癬に対する IL-22BP の治療効果を検討する目的で、リコンビナント IL-22BP-Fc 融合蛋白を大量精製し、RhoH 欠損マウスに静脈内投与したところ、乾癬症状が有意に抑制された。従って、IL-22BP 蛋白が乾癬に対する治療薬として利用出来る可能性を示した。

Subject No.

：25-103

Title：Analysis of pathogenesis and progression of psoriasis by utilizing novel
psoriasis mouse model.

Researchers ：Harumi Suzuki, Taeko Dohi, Satoshi Takaki
Key word：psoriasis, Th17 cells, chronic dermtitis

Abstract：RhoH, a hematopoietic linage cell specific atypical small GTPase, functions as

an adaptor for ZAP70, Syk, and lck, therefore plays an important role ondevelopment and activation of T cells. We found that RhoH deficient micespontaneously developed psoriasis-like chronic dermatitis with age in BALB/cbackground.

We have found that Th17 cells were infiltrated in inflamed skintissue and thus Th17 responses were dominated.

This year, we found that

increased Th17 cells in RhoH-KO mice was observed even before diseaseprogression, and transfer of Th17 cells from RhoH-KO mice into RAG-KO normal
mice restored psoriasis-like dermatitis, indicating that increased Th17 cells inRhoH-KO mice was major cause of the disease.

Indeed, RhoH-deficient naive

CD4 T cells showed augmented induction of Th17 cells in vitro, demonstratingthat this Th17 polarization was T cell intrinsic.

We are now seeking molecularmechanism why RhoH deficiency causes Th17 polarization.

To test the effect ofIL-22BP against psoriasis, we prepared IL-22BP-Fc fusion protein by affinity
purification, and confirmed the binding of IL-22 to the protein.

Intra-venous

introduction of the IL-22BP-Fc into the RhoH deficient mice inhibited dermatitis
progression, indicating that IL-22BP could be a good candidate for novelanti-psoriasis drug.

Researchers には、分担研究者を記載する。

25指103 : 新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態解析と新規治療法の開発

年次計画と 達成状況

RhoH欠損マウス
RhoH+/+

27年度

26年度

25年度

疾患部位でのIL-17、IL-22の産生増加を認め、さらにCCR6陽性Th17CD4T細胞が集積していることを示した。所属リンパ節においてもTh17が増加していた。Th17支配による慢性炎症であり、乾癬モデルとして適当であると考えられた。

1. モデルマウスの病因、病態の解析

RhoH-/乾癬モデルマウスとしての妥当性

レパトアは変化なし。自己抗体も検出できず。RAG-/-により症状消失することから、Ｔh17細胞 の移入で病態が再現できた。

Th17細胞の病態関与
Treg細胞の関与
Treg特異的RhoH-CKOマウスで脾臓の肥大、炎症発症を認めた。

RhoH欠損によるTh17分化亢進の分子機構
シグナル伝達解析中

2. 新たな治療戦略の開発

乾癬症状を自然発症

抗IL-22BP抗体投与
in vivo遺伝子導入
は不成功

IL-22BP-Fc融合蛋白をRhoH欠損マウスに投与すると症状の軽減が認められた。

IL-22BP遺伝子導入
IL-22BP蛋白による治療

3. ヒト乾癬におけるRhoH遺伝子の寄与
RhoHとTAGAPの細胞内での結合を示した。

TAGAPとの関連性
ヒトDNP解析

数個のSNP変異により蛋白の安定性が減少することが明らかとなった。（SNPと疾患の関連性）

乾癬患者リンパ球中のRhoHの解析

1. モデルマウスの病因、病態の解析

2. 新たな治療戦略の開発

3. ヒト乾癬におけるRhoH遺伝子の寄与

25-26年度の成果

27年度の計画

炎症部位でTh17応答が亢進し、Th17細胞の移入により病態が再現できた（病因）。
RhoH欠損によりTh17配向性が亢進する（乾癬発症とは無関係）。

RhoH欠損によるTh17分化
亢進の分子メカニズムを検討。TGFβ/smadシグナル、IL-６/STATシグナル、RORγtの発現制御などに着目する。

IL-22BP-Fc融合蛋白を精製し、結合活性を確認。
IL-22BP蛋白投与によりRhoH欠損マウスの乾癬症状が軽減した。

予防効果は実証されたが、乾癬発症後でのIl-22BP投与でも症状は軽減されるか（治療効果は？）

RhoHのヒトSNP変異体は蛋白の安定性が低下（ユビキチン依存性）。

症例数を増やし、特定の病態、進行度と相関が出るか検討

乾癬患者の末梢血単核球でのRhoH発現は今のところ健常人と有意差なし。

Th17細胞でRhoH発現が低下する生理的意義を検討する。

ヒトTh17細胞においてRhoH発現が低下していることを発見。

乾癬発症機序の解明と新規治療法の開発

課題番号：25指103
研究課題名：乾癬モデルマウスにおけるＴ細胞分化、活性化の解析
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：鈴木春巳
キーワード
研究成果

：乾癬、Th17、RhoH：我々は T 細胞シグナル伝達に関わる因子である RhoH を欠損するマウスが、BALB/c 背景において乾癬様の慢性皮膚炎を自然発症することを見出した。この慢性皮膚炎が自己免疫疾患かを検討したが、自己抗体の存在を検討したところ、肝臓組織に反応するような自己抗体や他の部位での腸炎、膵炎、肝炎などの慢性炎症症状も認められず、広範に自己免疫症状を呈していることはないことがわかった。
TCRVβ鎖のレパトアについても変化は見られなかった。昨年度はTreg の関与についてさらに検討を進めた。RhoH 欠損 Treg 細胞は、in vitro においては増殖抑制活性に変化は見られず、RhoH の欠損により Treg の機能が低下しているとは考えられなかった。そこで、
foxP3-Cre、RhoH-Flox マウスを作製して、Treg でだけ RhoH を欠失させることに成功した。Treg 特異的 RhoH 欠損マウスは、老齢になると局所的な皮膚炎を発症し、末梢リンパ組織の肥大がみられたが、乾癬様の症状は再現できなかった。従って、RhoH は Treg の何らかの機能に関与してはいるが、RhoH 欠損による乾癬の発症には Tregは殆ど関与していないものと考えられた。

課題番号：25指103
研究課題名：乾癬モデルマウスにおける慢性皮膚炎症の発症機序の解明
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：土肥多恵子
キーワード
研究成果

：乾癬、炎症、RhoH：我々は T 細胞シグナル伝達に関わる因子である RhoH を欠損するマウスが、BALB/c 背景において乾癬様の慢性皮膚炎を自然発症することを見出した。炎症部位における詳細な解析を行い、多数の CD4T細胞、特に Th17 型（CCR6 陽性）の T 細胞が炎症部位に浸潤していることを示した CD8T 細胞、B 細胞、好中球などの浸潤はみられないが、樹状細胞は真皮、表皮へと浸潤していた。これに伴い、炎症皮膚組織において、IL-17,IL-22, IL-6 などの炎症性サイトカインが過剰に産生されていた。RhoH 欠損マウスに IL-22 欠損マウスを交配すると乾癬症状が見られなくなったことから、IL-22 の産生は疾患誘導に必須であることが明らかとなった。さらに、in vitro でのナイーブ T 細胞からの Th17 分化誘導系において、RhoH 欠損細胞で Th17への分化亢進がみられた。従って、RhoH 欠損による Th17 分化亢進は、T 細胞レベルで直接的に起こっている現象であることがわかった。現在、この分子メカニズムを解明すべく、シグナル伝達を中心とした解析を進めている。

課題番号：25指103
研究課題名：乾癬モデルにおけるサイトカインを作用点とした治療戦略の開発
主任研究者名 ：鈴木春巳
分担研究者名 ：高木智
キーワード
研究成果

：乾癬、IL-22BP、Th17 細胞：本研究は RhoH 欠損マウスにおける乾癬様慢性皮膚炎モデルを対象として、乾癬の新規治療戦略の開発を目的とする。乾癬の病態形成において Th17 細胞による IL-23/IL-17/IL-22 軸の重要性が認識されており、実際に動物モデルにおいて抗 IL-17 抗体、抗 IL-22 抗体の治療効果が報告され、実用に向けて治験が進んでいる。本研究では、
IL-22 の内在性可溶性デコイ受容体である IL-22BP（IL-22RA2）の、乾癬に対する治療効果についての基礎的な検討を行うことを目的とする。IL-22BP の乾癬治療に関する報告はまだない。昨年度までにIL-22BP-Fc 融合蛋白を 293 細胞の培養上清より精製して調製した。
対照として IL-22 と結合しない変異体（66A/118A）も同時に調製している。この精製 IL-22BP 蛋白は電気泳動にてシングルバンドを示し、サンドイッチウエスタン法により、IL-22 との結合を確認している。精製 IL-22BP を毎週 25ug 静脈投与し、RhoH 欠損マウスの尾静脈より毎週 100ug の精製蛋白を投与したところ、IL-22 と結合出来ない変異体では乾癬症状が誘導されたのに対し、野生型 IL-22BP投与群では明らかに病態スコアが減少し、IL-22BP 投与が乾癬症状の緩和に効果的であることが示された。以上の結果より、IL-22BP蛋白は乾癬に対する新規の治療方法の候補として有効であることが明らかとなった。

研究発表及び特許取得報告について

課題番号：25指103
新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態の解析および新規新規モデルマウスを用いた乾癬の病因、病態の解析および新規主任研究者名：

鈴木春巳

論文発表
論文タイトル

著者

掲載誌

掲載号

年

Overexpression of RhoH permits to bypass the pre-TCR
checkpoint

Tamehiro N, Hiroyo Oda H, Shirai M, Suzuki H

PLoS ONE

102015The thymic cortical epithelium determines the TCR repertoire ofIL-17-producing γδT cells.

Nitta T, Muro R, Shimizu Y, Nitta S, Oda H, Ohte Y,T Goto M,
Yanobu R, Narita T, Takayanagi H, Yasuda H, Okamura T, Murata S,Suzuki H.

EMBO Rep162015

The Ras GTPase-activating protein Rasal3 supports survival ofnaive T cells.

Muro R, Nitta T, Okada T, Ideta H, Tsubata T, Suzuki H.

PLoS ONE

10

2015

Differential function of Themis CABIT domains during T celldevelopment.

Okada T, Nitta T, Kaji K, Takashima A, Oda H, Tamehiro N, Goto M,
Okamura T, Patrick MS, Suzuki H.

PLoS ONE

92014

212014102015692014

92014

15

2014

Therapeutic adenoviral gene transfer of a glycosyltransferase for
Kawamura YI, Adachi Y, Curiel DT, Kawashima R, Kannagi R,
prevention of peritoneal dissemination and metastasis of gastric
Cancer Gene Ther
Nishimoto N and Dohi T.
cancer.
Retrotransposition of long interspersed nucleotide element-1 is
Otsubo T, Hagiwara T, Okamura T, Ishizaka Y, Kawamura YI, Dohi T PLOS ONE
associated with colitis but not tumors in a murine colitic cancer
model
Pathological activation of canonical nuclear-factor κB by synergy
Dohi T, Kawashima R, Kawamura YI, Otsubo T, Hagiwara T,of tumor necrosis factor α and TNF-like weak inducer of apoptosis
Cytokine
Amatucci A, Michaelson J, Burkly LC.
in mouse acute colitis.
Oshio T, Kawashima R, Kawamura YI, Hagiwara T, Mizutani N,
Chemokine receptor CCR8 is required for lipopolysaccharideOkada T, Otsubo T, Inagaki-Ohara K, Matsukawa A, Haga T, Kakuta S, PLOS ONE
triggered cytokine production in mouse peritoneal macrophages
Iwakura Y, Hosokawa S and Dohi T
Obata Y, Furusawa Y, Endo TA, Sharif J, Takahashi D, Onawa S,
The epigenetic regulator Uhrf1 facilitates functional expansion ofFujimura Y, Takahashi M, Ikawa T, Otsubo T, Kawamura YI, Dohi T, Nature Immunologycolonic regulatory T cells.
Tajima S, Ohara O, Hori S, Ohno H, Koseki H, Hase K.
Lnk/Sh2b3 controls the production and function of dendritic cells Mori T, Iwasaki Y, Seki Y, Iseki M, Katayama H, Yamamoto K,
and regulates the induction of IFN-γ-producing T cells.
Takatsu K, Takaki S.

J Immunol

193

2014

Lnk prevents inflammatory CD8+ T-cell proliferation andcontributes to intestinal homeostasis.

Katayama H, Mori T, Seki Y, Anraku M, Iseki M, Ikutani M, IwasakiY, Yoshida N, Takatsu K, Takaki S

Eur J Immunol

44

2014

Nov/CCN3 regulates long-term repopulating activity of murine
hematopoietic stem cells via integrin αvβ3

Ishihara J, Umemoto T, Yamato M, Shiratsuchi Y, Takaki S, Petrich
BG, Nakauchi H, Eto K, Kitamura T, Okano T

Int J Hematol

99

2014

学会発表
タイトル

発表者

場所

年月

7th ThymOZ
meeting

Helon
Island,Australia

2014年4月

第24回 KTCC

京都

2014年6月

第24回 KTCC

京都

2014年6月

第43回日本免疫学
京都会総会

2014年12月

Mori T, Iseki M, Takaki S.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

Yamazaki N, Takaki S.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

Lnk/Sh2b family adaptor protein Aps/Sh2b2 in B cells contributes
to germinal center B cell survival and optimal IgE production inIseki M, Kudo F, Takaki S.
vivo.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

Suppression of cytokine production from group 2 innate lymphoid
Kudo F, Seki Y, Takaki S.
cells by interferon-γ.

第43回日本免疫学
京都会学術集会

2014年12月

Themis regulates cytokine production in mature naive Okada T, Nitta T, Oda H, Tamehiro N,T cells
H
胸腺皮質上皮細胞によるγδT細胞の分化制御

新田RhoH欠損マウスで認められる乾癬様皮膚炎の解析

爲廣紀正、小田浩代、鈴木春巳

Rasal3, a newly identified Ras GTPase activating
protein is important for survival of naïve T cells
in the periphery
Lnk/Sh2b3 adaptor protein controls cytokine responses ofdendritic cells, and regulates the induction of IFN-γ-producing Tcells .
IgM+ plasma cells contribute to the sufficient production of IgG
by secreting IL-10 and IL-13.

学会名
Patrick MS, Suzuki

剛、室 龍之介、新田 幸子、小田 浩代、鈴木 春巳

Muro R, Nitta T, Okada T, Tubata T,

Suzuki H

United Eurpean
Sialic-acid-binding Ig-like lectins, potential peripheral markers for Kawamura YI, Maeyashiki C, Hagiwara T, Otsubo T, Akiyama J, Dohi
Gastroenterology
mucosal damage of inflammatory bowel disease.
T.
2014Wienna

2014年10月

食道扁平上皮癌におけるデスモゾーム関連分子のDNAメチ 萩原輝記, 大坪武史, 中野（田村）美和, 山田和彦, 日野原千ル化異常.
速, 三宅大, 清水利夫, 土肥多惠子, 河村由紀.

第87回日本生化学
京都会大会

2014年9月

Intestinal mucosal injury induced by anti-cancer agents ismediated by TWEAK/Fn14 and IL-13.

第43回日本免疫学
京都会総会

2014年12月

Sezaki T, Hirata Y, Kawamura YI, Dohi T.

その他発表(雑誌、テレビ、ラジオ等)
タイトル

特許取得状況について※出願申請中のものは(発表者

発表先

場所

年月日

登録番号

特許権者(申請者）

登録日(申請日)

出願国)記載のこと。

発明名称※該当がない項目の欄には「該当なし」と記載のこと。
※主任研究者が班全員分の内容を記載のこと。