福岡県保健環境研究所年報第49号，75－78，2022

短報
食品中のビニール様片の同定手法の検討
古谷貴志・新谷依子・小木曽俊孝・堀就英
福岡県内のファミリーレストランにて、喫食した料理の中にビニール様片が含まれていたとの苦情が寄せられ、異物の同定を行った。タンパク質の検出法の1つであるニンヒドリン反応試験により呈色が確認できたため、苦情品がタンパク質由来であると推定されたが、ニンヒドリンは第一級アミンを有するナイロン類も呈色する可能性がある。そこで、フーリエ変換赤外分光法（FT-IR法）、SDS-PAGE及びウエスタンブロット法を用いて、ビニール様片の定性試験を検討した。その結果、ビニール様片が卵白アルブミンを主体とする物質であると同定され、当該手法が卵由来の異物同定の手法として有効であると推察された。
［キーワード：異物検査、卵、FT-IR、SDS-PAGE、ウエスタンブロット法］
１

はじめに
近年、食品の表示偽装や化学物質の混入など、食に関す（SDS-PAGE）及びウエスタンブロット法を用いた同定手法を検討した。

る様々な問題が発生しており、消費者の食の安全・安心に対する関心は一段と高まっている。
なかでも食品への異物混入は視覚や食感で確認できる

２

方法

２・１

測定試料ケースが多く、問題になりやすい。食品の異物混入は、食

当研究所に搬入されたビニール様物質は複数の淡黄色

品衛生法第6条に、「異物の混入又は添加その他の事由にを帯びた透明な断片であり、大きさは最大で長軸約14 mm、より、人の健康を損なう恐れのあるもの」と記されており、短軸約5 mmのものであった。薄い膜状で一部は丸まった

法令違反とされる可能性がある。一方、異物が混入するこ形状をしており、搬入された全重量は0.45 mg、搬入時のとによる食品及び企業側への被害は、商品価値の低下、企物性は、弾力は認められず、軽く押し付けると割れる状態

業への信頼性及びイメージダウンにつながり、甚大な被害であった（写真1）。

を受けかねない。このようなことからも、食品に混入した異物の材質を特定することは重要である。
令和3年6月に福岡県内のファミリーレストランにて、ポテトサラダ、ブロッコリー及び鶏卵を耐熱容器で焼成した料理の喫食中に、食品中からビニール様の物質が見つかったとの苦情が保健福祉環境事務所に寄せられた。苦情を受けた同所からの依頼を受け、検査を実施した。卵料理における類似事例として、東京都健康安全研究センターによる

写真1 当課に搬入されたビニール様片平成25年度1)及び平成28年度2)の苦情相談事例報告があり、これらの報告事例を基に、当研究所でニンヒドリン反応試

２・２

験を実施した結果、ビニール様片はタンパク質由来の物質と推定された3)。

機器・装置

超 純 水 は 製 造 装 置 MilliQ® Advantage A10 （ Merck
MILLIPORE（株）製）を使用し製造した。卓上小型振としかし、ニンヒドリン試薬は、ポリアミド系樹脂である

う機はインビトロシェーカーWave-SI（TAITEC（株）製）

ナイロン類でも末端の第一級アミンと反応し呈色する可を使用し、泳動装置、ブロッティング装置及び泳動及びブ能性がある。そのため、搬入されたビニール様片の材質がロッティング用電源は、ラピタス2連ミニスラブ電気泳動

ナイロン類ではないことを確認するためにフーリエ変換

槽 AE-6530、ホライズブロット2M AE-6687及び myPower

赤外分光法（FT-IR法）、またタンパク質由来の物質であⅡ 300 AE-8135（いずれもアトー（株）製）を使用した。

ることを確認するためにポリアクリルアミド電気泳動法

FT-IR 装 置 は Agilent 660 FT-IR spectrometer/ Agilent 610

福岡県保健環境研究所 （〒818-0135 太宰府市大字向佐野 39）- 75 -

FT-IR Microscope（Agilent Technologies（株）製）を使用しいる試薬を用いた。

た。
３
２・３

試薬

結果

３・１

FT-IR試験

メタノール（LC/MS用）、酢酸（特級）はいずれも関東

ビニール様片と加温した鶏卵卵白のFT-IR測定を実施し化学（株）製を用いた。コマジーブリリアントブルーはナた。黒線は鶏卵卵白、灰色線はビニール様片のスペクトル

カライテスク（株）製を用いた。

結果を示す（図1）。

ウエスタンブロットキットはモリナガFASPEK卵ウエス
タンブロットキット（卵白アルブミン）（（株）森永生科学研究所製）を用いた。ローディング緩衝液用試薬はEZ
Apply（アトー（株）製）、2-メルカプトエタノール（バイオラッドラボラトリーズ（株）製）を用いた。電気泳動用
有色分子量マーカー EzStandardPrestainBlue AE-1450、泳動用 バ ッ フ ァ ー 試 薬 EzRun C+ 、 電 気 泳 動 用 既 製 ゲ ル
e-PAGEL 12.5 %、ブロッティング試薬EzBlot、洗浄液Ez
TBS、ブロッキング試薬EzBlock BSA、Tween20はいずれもアトー（株）製を用いた。ブロッティング用器材はブロッ

図1 FT-IR試験結果

ティング用ろ紙Absorbent Paper CB-09A、ブロッティング用PVDF膜Clear Blot Membrane-p AE-6665（いずれもアトータンパク質を測定した場合、ペプチド結合（アミド結合）（株）製）を用いた。二次抗体はHRP Goat Anti-Rabbit IgGに特徴的なピークであるAmide （Ⅰ 1650 cm-1付近）、Amide Ⅱ（ H ＋ L ）（ Jackson Immuno Research 製 ）、 検 出 試 薬 は（1540 cm-1付近）及びAmide Ⅲ（1240 cm-1付近）において、EzWestBlue（アトー（株）製）を用いた。

ビニール様片及び鶏卵卵白で、それらのピークを確認することができた。また、1500 cm-1以下の指紋領域において、

２・４

検査方法

２・４・１

ビニール様片とタンパク質を主成分とする鶏卵卵白の波形は酷似していた。また、ナイロン類のFT-IR結果5）と比FT-IR試験

ビニール様片と比較する食品として、市販の鶏卵を湯浴中で加温し、得られた卵白部分を測定に使用した。

明らかに異なる形状をしていた。以上のことから、当該ビビニール様片の表面を適宜削り、FT-IR測定に用いた。
測定はATR法で実施し、分解能を4 cm-1、積算回数を16較した結果、3300 cm-1付近の波形はポリアミド系樹脂類と回ニール様片がポリアミド系樹脂を主成分とするナイロン類ではないことが確認された。に設定して行った。
３・２２・４・２

SDS-PAGE

SDS-PAGE

食品中に含まれるタンパク質由来のビニール様片は、過SDS-PAGEは消費者庁通知の別添アレルゲン関係 4)を参去に同様の報告があり、共通して卵を用いた調理食品で報考に実施した。ポリアクリルアミドゲルは12.5％の市販の告されている1),2),6),7)。今回対象となった食品も、加熱したゲルを使用した。ビニール様片の参考品として鶏卵アルブ卵白を含む食品であった。このことから、今回のビニールミン（富士フィルム和光純薬（株）製）を超純水で0.5 mg/mL

様片が卵由来のタンパク質であることを調べるため、に調製したものを使用した。ビニール様片をピンセットでSDS-PAGEを行った（図2）。

一部取り、2-メルカプトエタノールを加えたローディング

対照品として泳動した鶏卵アルブミン（以下卵白アルブ

緩衝液に溶解、95℃で5分加温し、さらにこの溶解液をロミン）は分子量が約45,000であり、卵白を構成するタンパーディング緩衝液で10倍希釈したものを使用した。

ク質の54％を占めている 8) 。搬入されたビニール様片のSDS-PAGEの結果、分子量45,000付近にタンパク質のバン２・４・４

ウエスタンブロット法

ドが確認され、また参考として同時に電気泳動した卵白アウエスタンブロット法は消費者庁通知の別添アレルゲルブミンと同じ分子量であった。よって、当該ビニール様ン関係4)に記載の方法に準じて実施した。一次抗体及び卵片は卵白アルブミンが大部分を占める卵白由来のタンパ

白アルブミン標準溶液（10 ng/mL）はモリナガFASPEK卵ク質で形成された物質と確認された。

ウエスタンブロットキット（卵白アルブミン）に付属して- 76 -

４

考察及びまとめ
FT-IR 測定、SDS-PAGE 及びウエスタンブロット法の結果より、料理に混入していたビニール様片は、ポリアミド系樹脂のようなビニールではなく、卵白由来のタンパク質を主成分とする物質と同定した。また、これらの手法は卵由来のビニール様片の同定手法として有効であると考えられた。
当該ビニール様片は東京都 1), 2)や神奈川県 6), 7)で報告されていた過去の事例と同様に卵白部分が加熱によりビニ
図2 SDS-PAGE結果
1：マーカー

2：ビニール様片溶解液（10倍希釈）ール様に変化したものと推定された。ニンヒドリン反応試
3：

卵白アルブミン溶液（0.5 mg/mL）

験はタンパク質の同定試験として有効であるが、タンパク質以外の第一級アミンを有する物質とも反応する可能性があるため、ニンヒドリン反応試験のみでは不十分である

３・３

ウエスタンブロット法と考えられる。そこで、FT-IR 法、SDS-PAGE 及びウエス

SDS-PAGEの結果から、今回のビニール様片が卵白由来であると同定するため、より選択性の高いウエスタンブロタンブロット法を組み合わせることで、今回のような食品中のビニール様片の材質を同定する方法を検討した。

ット法を用いて、卵白アルブミンの同定を行った（図3）。

その結果、ニンヒドリン反応試験だけでなく、いずれかビニール様片においては、SDS-PAGEで使用した溶液をロの手法と複数組み合わせることにより、食品中に含まれるーディングバッファーで1,000倍希釈及び5,000倍希釈し、異物検査を迅速に対応できると考えられた。

使用した。
謝辞
今回の検査にあたり、協力して頂きました嘉穂・鞍手保
健環境福祉事務所に感謝いたします。
文献1) 下井俊子ら：東京都健康安全研究センター年報，65，161-166，2014.
2) 木村圭介ら：東京都健康安全研究センター年報，68，151-157，2017.
3) 古谷貴志ら：第69回福岡県公衆衛生学会，福岡，2022
年5月.
図3 ウエスタンブロット結果

4) 消費者庁次長通知；アレルギー物質を含む食品の検査

1：マーカー 2：卵白アルブミン標準物質（10μg/mL） 3：方法について（消食表題139号） 別添アレルゲン関係，ビニール様片溶解液（1,000倍希釈） 4：ビニール様片溶

平成27年3月30日.

解液（5,000倍希釈）

5) 食品衛生検査指針 理化学編 追補2019 第10章 異物，
公益財団法人日本食品衛生協会，2019.

ウエスタンブロッティングの結果、ビニール様片溶解液

6) 平成27年度食品等の苦情品検査, 横浜市衛生研究所

は分子量45,000付近に明瞭なバンドが確認でき、また、標検準品である卵白アルブミンも同様の分子量の位置でバン（ https://www.city.yokohama.lg.jp/kurashi/kenko-ドが確認出来たため、当該ビニール様片が卵白由来の物質であると確認された。

査情報

月報

2016年

4月号

iryo/eiken/geppo/2016/1604.files/160402.pdf）.
7) 食品等の苦情品検査（平成30年度）, 横浜市衛生研究所

このことから、アレルゲンの定性検査に使用するウエス検査情報

月報

2019年

5月号

タンブロッティングキットを用いることで、当該ビニール（ https://www.city.yokohama.lg.jp/kurashi/kenko-様片が卵白由来の物質であると同定することが可能であ

iryo/eiken/geppo/2019/1905.files/190504.pdf）.

った。

8) 西川研次郎：食品機能性の科学，株式会社テクノシス
テム, 2008年.

- 77 -（英文要旨）

Evaluating a method for identifying vinyl-like fragments in foodTakashi FURUTANI, Yoriko SHINTANI, Toshitaka KOGISO and Tsuguhide HORI
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
A restaurant in Fukuoka Prefecture received a complaint that there was a piece of vinyl-like material in a dish they hadconsumed. On investigation, the restaurant identified the foreign material from its color using the ninhydrin reaction test, a protein
detection method. While it was presumed that the material was derived from protein, it is known that ninhydrin may also stain
nylons with primary amines. Therefore, the vinyl-like fragments were tested qualitatively using Fourier transform infrared
spectroscopy (FT-IR), SDS-PAGE, and western blotting. Through this testing, the vinyl-like fragments were identified as asubstance mainly composed of egg white albumin. Further, the results suggest that this method is useful for identifying foreign
substances originating from egg.
[Key words ; Foreign substance examination , Egg , FT-IR , SDS-PAGE , Western Blotting ]- 78 -