２．調査研究［食品科学部］

バイダスを用いたサルモネラ迅速検出法の検討
財団法人

沖縄県環境科学センター
麻布大学
日本ビオメリュー株式会社
財団法人

901-2111

沖縄県浦添市経塚 720 番地 *1

229-8501

神奈川県相模原市渕野辺 1-17-71*2

107-0061

東京都港区北青山 2-12-28*3

103-0015

東京都中央区日本橋箱崎町 44-1*4

東京顕微鏡院

中川
中村
澤口
伊藤

弘、福村
菜美子
勧、内田
武

圭介
和之

Study of simple and rapid detection of Salmonella spp. using VIDAS
Hiroshi Nakagawa*1, Keisuke Fukumura*1, Namiko Nakamura*2 , Susumu Sawaguchi*3,
Kazuyuki Uchida*3, Takeshi Ito*4（*1 Okinawa Environmental Research & Technology Center, 720 Kyoduka, Urazoe,
Okinawa 901-2111）（*2Azabu University, 1-17-71 Fuchinobe, Sagamihara, Kanagawa-ken, 229-8501）（*3bioMerieux Japan Ltd., 2-12-28 Kita-Aoyama, Minato-ku, Tokyo, 107-0061 ）（*4Tokyo Kenbikyoin Foundation, 44-1 Hakozaki-cho, Nihonbashi, Chuou-ku, Tokyo,
103-0015 ）第 26 回 日本食品微生物学会学術総会発表
日本食品微生物学会雑誌 原著論文受理（平成 18 年 6 月 2 日）

−6−

Number of both incidence and patient of food-borne diseases caused by Salmonella are
still higher rank in total food-borne diseases, although they have been decreasing in years.
Needs of simple and rapid alternative method for Salmonella testing have been very highin food industry because conventional culture method includes two enrichment procedures
and takes more than five days to isolate typical colony of Salmonella , its identification etc.
from food samples. VIDAS is an enzyme-linked fluorescent assay（ELFA）system which
consists of instrument for fully automation and its reagents. In this study, we compared
two protocols of VIDAS methods and conventional culture method for detecting Salmonellaby using 40 food samples. Performances of protocols "VIDAS ICS + plate" and "VIDAS SLM
AFNOR validated method" especially showed higher sensitivity than conventional culture
method. These protocols were excellent also in terms of rapidity on time to results inaddition to gain higher sensitivity. We also compared SMID2, new chromogenic agar platefor selective isolation of Salmonella with DHL agar, traditional agar plate for Salmonella
testing. On SMID2, typical colonies of Salmonella were much easier to identify（mainly by
its characteristic color）, and frequency of appearance of typical colony by bacteria otherthan Salmonella were much lower, although recovery rate of Salmonella were not different
between the two media.

−7−

１．緒言

Concentration Salmonella 、 以 下 VIDAS ICS） を 用

近年、サルモネラ食中毒は減少傾向にあるが依いた。

然として件数、患者数共に上位を占めている。サ
ルモネラ食中毒の主要な原因食品としては鶏卵と2-2測定原理

バイダス（ミニバイダス）

バイダス（ミニバイダス）は、ELFA を原理とその加工品、その他食肉類とその加工品等があげられる。食品中に存在するサルモネラは共存する

する自動免疫蛍光測定装置である。

他の菌と比較して菌量が少なく、また加熱、冷凍

専用試薬はスパーとストリップから構成されてあるいは乾燥等によって損傷を受けている場合がいる。スパーの内壁には抗体が固相されており、あるため、本菌を検出する際には従来から前増菌

検体中の特異抗原を捕捉する。この抗原にストと選択増菌の 2 段階の培養が行われている。そリップ中のアルカリフォスファターゼ標識抗体がのため食品からのサルモネラの分離、同定には 5結合し、さらにアルカリフォスファターゼがスト

日間以上を要することから、迅速で簡易なサルモ

リップ中の 4-メチルウンベリフェリルリン酸をネラ検出法の確立が望まれている。近年、分離培

加水分解する。続いて蛍光強度が測定され、判定

養では酵素基質培地が、確認試験では ELISA 等のまで自動で行われる。なお上述した VIDAS ICS は、

免疫学的手法、DNA プローブ法や PCR 法等の病本原理によりサルモネラを特異的に集菌するため

因遺伝子検索、さらに生化学的性状試験を応用しの試薬である。
ミニバイダスの検出項目（食中毒関連）には E.

たもの等さまざまな迅速検査法が開発、実用化さ
れている

1）,2）

coli O1576）、7）、サルモネラ 3）、4）、5）、キャンピロバ

。

クター 8）、黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシン

自動免疫蛍光測定装置（ミニバイダス）およびその専用試薬を用いたサルモネラの検出は、海外

9）、リステリア 10）、リステリアモノサイトゲネス

で高く評価されており、その報告も多い 3）,4）,5）。

11、12）があり、目的によって専用試薬を使い分ける。

本研究は食品中のサルモネラの検出について、
自動免疫蛍光測定装置（ミニバイダス）およびそ

測定時間は検出項目によって異なり、約 40 〜 70分である。

の専用試薬を用いたプロトコールを、日本における公定法と比較し、その有用性について検討した。

2-3供試菌株

また、新たに開発されたサルモネラの分離培地でSalmonella Enteritidis IFO3313（以下 SE）

ある SMID2 寒天平板培地の評価もあわせて行っSalmonella Typhimurium ATCC14028（以下 ST）

た。
2-4供試材料

２．材料および方法
2-1サルモネラ検出用自動測定装置および卵類（鶏卵、温泉卵）、卵加工品（プリン、カスター
ド菓子、ポテトサラダ）、冷凍食品（餃子、グラタン、

専用試薬

ピラフ、鶏から揚げ）、肉類（豚肉、生姜焼き用

ELFA（Enzyme Linked Fluorescent Assay）を原

豚肉、馬肉、ハンバーグパティ）、肉加工品（ソー理とするミニバイダス（日本ビオメリュー）を用

セージ、ローストビーフ、生ハム）、野菜類（カッいた。また、専用サルモネラ用試薬として、バト野菜 3 件）、鶏肉類（もも 3 件、手羽先、骨付イダスアッセイキットサルモネラ（VIDAS assay

き肉、軟骨、チキンパティ、鶏ミンチ、正肉ミンチ、

kit Salmonella 、 以 下 VIDAS SLM） お よ び バ イ ダ

ささみミンチ、皮 2 件、砂肝 2 件、もつ、きんス ICS サルモネラ濃縮用キット（VIDAS Immuno-

かん、ハート、レバー 3 件）きのこ類（まいたけ）−8−

の合計 40 検体を用いた。

それ以外は 35℃で 16 〜 20 時間培養した。

2-5供試材料の細菌数確認⑵

バイダス ICS+plate 法（Fig. 1）

供試材料の汚染度合を確認するため、一般生菌

前 増 菌 液 0.8ml を バ イ ダ ス ICS で 濃 縮 し、 濃

数および大腸菌群数を以下の方法で測定した。供縮液を DHL 寒天培地（栄研化学：以下 DHL）お試材料 25g を滅菌ストマッカー袋に採取し、こよび SMID2 寒天培地（日本ビオメリュー：以下

れに滅菌済み生理食塩水 225ml を加えて 230rpm

SMID2）に塗抹し、35℃で 22 〜 26 時間培養した。

で 30 秒間ストマッキングし、必要に応じて 10

サルモネラ未接種試験で出現したサルモネラと疑倍ずつ段階希釈した後シャーレ 2 枚に 1ml ずつわれる集落は TSI 培地（栄研化学：以下 TSI）お分注した。一般生菌数は標準寒天培地（栄研化

よび LIM 培地（栄研化学：以下 LIM）に接種し、学）で混釈して 35℃で 48 時間、大腸菌群数はデ35℃で 22 〜 26 時間培養した。この確認試験でソキシコレート寒天培地（栄研化学）で混釈してサルモネラの生化学性状を示した場合は O 多価

35℃で 20 時間培養した後常法に従って菌数を算

血清（デンカ生研）で凝集したものをサルモネラ出した。

陽性とした。サルモネラを接種した供試材料について分離培地上に出現したサルモネラが疑われる

2-6サルモネラ接種試験法

集落は、SE を接種したものについては O 多価血⑴

清で、ST を接種したものについては O4 血清（デ接種菌液の調製と菌数確認
接種菌液は前述 2 菌株を10 〜 30cfu/100μl になるよう調製し各供試材料に接種した。接種菌液

ンカ生研）で凝集したものをサルモネラ陽性とした。

の菌数の確認は、菌液をトリプトソイ寒天培地（日本ビオメリュー：以下 TSA）平板 10 枚にそれぞれ100μl ずつ滴下しコンラージ棒で表面塗抹後、35℃で 24 時間培養後に出現した集落を数え算出

Sample25g

BPW 225ml

した。

0.8ml
⑵

供試材料の調製と菌液の接種

VIDAS ICS

供試材料の可食部 25g を、検体 1 種類につき3 件、それぞれ滅菌ストマッカー袋に無菌的に採取した。うち 2 件には SE または ST の菌液をそ

35℃
16～20hrs.

40min.

DH 、S ID235℃
22～26hrs.

TSI、 I

35℃
22～26hrs.

れぞれ 100μl 接種し、1 件はサルモネラ未接種で試験に供した。
2-7サルモネラの検出法⑴

Interpretation（serotype testing
if necessary）

検体の希釈および前増菌
検体 25g に 225ml の滅菌ペプトン緩衝液（栄研化学：以下 BPW）を加え、230rpm で 30 秒間
ストマッキングした。その後、公定法における卵と卵加工品（後述 7-4-1）は 35℃で 20 〜 24 時間、−9−

Fig. 1. VIDAS ICS+plate method

⑶バイダス SLM ; AFNOR（仏名：Association

トラチオネートブイヨン（栄研化学：以下 TT）

Francaise de Normalisation）承認法（Fig. 2）にそれぞれ接種し、42℃で 20 〜 24 時間培養した。

前 増 菌 液 0.1ml を 10ml の ラ パ ポ ー ト バ シ リ

これら培養液 1 白金耳を DHL および SMID2 にそ

アディスソイブイヨン（日本ビオメリュー：以

れぞれ画線塗抹し、35℃で 18 〜 24 時間培養した。

下 RVS） へ、 別 途 1ml を 10ml の ミ ュ ー ラ ー コ

サルモネラ未接種試験で出現した集落のうちサルフマンテトラチオネートブイヨン（日本ビオメ

モネラが疑われる集落は TSI および LIM に接種し、リュー：以下 MKTTn）へそれぞれ接種した。前35℃で 18 〜 24 時間培養した。これらの確認培

者は 42℃、後者は 35℃でそれぞれ 6 〜 8 時間培

地でサルモネラの生化学性状を示した場合、およ養した培養液を前者は 1ml、後者は 0.1ml それぞびサルモネラを接種した供試材料について分離培

れ 10ml の M ブイヨン（日本ビオメリュー）に接

地上に出現したサルモネラが疑われる集落につい種し、42℃で 16 〜 20 時間培養した。培養後、各々ては血清学的試験でサルモネラの有無を判定しの培養液から 1ml ずつ採取し混ぜ合わせた 2ml をた。

100℃で 15 分熱処理し、その 0.5ml をバイダス
SLM に分注し、ミニバイダスで測定した。

Sample25g

SampleBPW 225ml

25g

0.5ml

BPW 225ml

35℃
16～20hrs.

0.1ml
42℃

RV 10ml

1ml

RVS 10ml

6～8hrs.

KTTn 10ml

35℃

DH 、S ID2

0.1ml

1ml

broth 10ml
1ml

42℃
16～20hrs.

Heating
0.5ml

VIDAS S

42℃
20～24hrs.

broth 10ml

TSI、 I

1ml
100℃
15min.

35℃
20～24hrs.

TT 10ml

35℃
18～24hrs.
35℃
18～24hrs.

Interpretation（serotype testing
if necessary）

45min.

Interpretation

Fig. 2. VIDAS SAFNOR validated method

Fig. 3. Conventional culture method(For Eggs)⑷ -2. 卵以外の食品（Fig 4）
前増菌液 1.5ml を 15ml のハーナテトラチオネー
ト ブ イ ヨ ン（ 栄 研 化 学： 以 下 HTT） に 接 種 し⑷公定法

42℃で 18 〜 22 時間培養した後、その 1 白金耳⑷ -1. 卵と卵加工品（Fig. 3）

を DHL および SMID2 に画線塗抹し、35℃で 22

前増菌液 0.5ml を 10ml のラパポートバシリアディ〜 26 時間培養した。サルモネラ未接種試験で出スブイヨン（日本ビオメリュー：以下 RV）とテ

現した集落のうちサルモネラが疑われる集落を− 10 −TSI および LIM に接種し、35℃で 22 〜 26 時間培

結果をそれぞれ Table 2 および Table 3 に示した。

養した。これらの確認培地でサルモネラの生化学

SE を 接 種 し た 場 合 に サ ル モ ネ ラ が 検 出 さ性状を示した場合、およびサルモネラを接種した

れ た の は、 公 定 法 で は 36 件（90.0%） で あ っ

供試材料から出現したサルモネラと疑われる集落

た が、 バ イ ダ ス ICS+plate 法 お よ び バ イ ダ ス

については前述の血清学的試験でサルモネラの有SLM ; AFNOR 承認法では 39 件（97.5%）であった。

無を判定した。

ST を接種した場合は、公定法では 39 件（97.5%）、
バイダス ICS+plate 法では 38 件（95.0%）、バイ
ダス SLM ; AFNOR 承認法では 40 件（100%）か

Sampleらサルモネラが検出され、いずれの菌を接種した

25g

BPW 225ml
1.5ml

HTT 15ml
DH 、S ID2
TSI、 I

場合においてもバイダス SLM ; AFNOR 承認法が35℃
16～20hrs.

最も検出率が高い結果であった。サルモネラを接種した合計 80 試験におけるサルモネラの検出は、

42℃
18～22hrs.

公定法では 75 件（93.8%）、バイダス ICS+plate
法 で は 77 件（96.3%）、 バ イ ダ ス SLM ; AFNOR
承認法では 79 件（98.8%）で、バイダスを用い

35℃
22～26hrs.

た両プロトコールは公定法よりも検出率が高い結果が得られた。

35℃
22～26hrs.

3-3公定法との一致率

Interpretation（serotype testing
if necessary）

サルモネラ接種および未接種の合計 120 試験における公定法との一致率は、バイダス ICS+plate法では 91.7%、バイダス SLM ; AFNOR 承認法でFig. 4. Conventional culture method(For samples except eggs)

は 92.5% であった。また、サルモネラを接種した合計 80 試験における公定法との一致率は、バ
イダス ICS+plate 法、バイダス SLM ; AFNOR 承認

３．結果

法ともに 95.0% であった。

3-1供試材料からのサルモネラの検出
合計 40 検体中、サルモネラが検出されたもの

3-4分離培地の検討は公定法で 7 件、バイダス ICS+plate 法で 3 件、サルモネラ未接種の試験品 40 検体およびサル

バイダス SLM ; AFNOR 承 認 法 で 10 件 で あ っ た

モネラを接種した試験品 80 検体について、公定（Table 1）。

法およびバイダス ICS+plate 法での合計 240 試
験検体のうち DHL では 150 検体、SMID2 で分離

3-2食品にサルモネラを添加した場合のした場合は 155 検体からサルモネラが分離され、各法によるサルモネラの検出

両培地間で検出率には著しい差は認められなかっ各検体に SE（8.2 〜 16.9 cfu/100μl）、ST（10.3

た。分離培地の鑑別能を比較するため、分離培地〜 14.3 cfu/100μl）を接種し、公定法、バイダ

上でサルモネラが疑われた検体と培地別の結果をス ICS+plate 法およびバイダス SLM ; AFNOR 承

Table 4 に示した。サルモネラ未接種の 40 検体

認法の 3 法でサルモネラの検出状況を比較したにおいて培地上でサルモネラが疑われたが確認試− 11 −

験で陰性と判定された検体（偽陽性）について分数が少ない結果であった。またこれらサルモネラ

離培地別にみると、DHL は公定法では 15 検体、が疑われる集落を形成した検体は一般細菌数の菌

バイダス ICS+plate 法では 20 検体認められたの数が高いものや大腸菌群が検出されるなど細菌のに対し、SMID2 は公定法では 3 検体、バイダス

汚染度が高い傾向であった。

ICS+plate 法 で は 19 検 体 と、SMID2 は 偽 陽 性

Table 1. Detection of Salmonella from food samples tested
icrobiological flora ofsamples（cfu/g）
Total
Total viable
Conventional
VIDAS
culture method ICS+plate S (AFNOR)
count
coliforms
300
10
+
300
10
300
10
２
10
7.9×10
6.5×10
3.2×10 ４
300
10
300
10
300
10
300
10
４
10
1.2×10５３
1.2×10
1.4×10２
10
9.7×10４
9.5×10
1.4×10300
10３
101.2×10300
10５
４
1.9×105.1×10300
10６
５
4.6×10
4.1×10４++
3.0×102.2×10３
２
8.3×10
5.4×10４２
1.1×10
1.7×10６
４++
1.3×10
2.7×10３２
5.1×10
2.4×10４
2.4×105.1×10 ２
３２+++
2.5×109.9×10４２++
5.3×10
4.5×10
４
３
5.1×10
9.5×10５+
2.8×10 ３
1.2×10
４１
4.4×10
7.5×10
６１++
1.5×10
9.5×10５２
6.6×10
1.5×10２
3.6×10 ３
2.5×10５
４++
1.6×102.1×10４３
4.0×10
4.1×10４２
2.1×10
2.7×10
４
３
7.8×10
4.9×10３２+
5.6×10
1.8×10２+++
1.4×10 ４
7.5×10４
３+
1.1×105.1×10
40
40
40
7
3
10
Results

Category of food

The name of foods

Onsen tamago
Raw egg
Pudding
Egg-processed
Custard cakefood
Potato salad
Gyoza
Frozen foodGratin
Pilaf
Fried chickeneat
Pork
Pork seasoned with ginger
Horse meat
Hamburger patty
Sausage
Processed meat
Roast beef
product
Uncured ham
Vegetables
Cut vegetables 1
Cut vegetables 2
Cut vegetables 3
Chicken meat
Thigh 1Thigh 2Thigh 3Wing
Drumstick
Cartilage
Chicken putty
Ground meat 1
Ground meat 2
Ground breast tender
Skin 1Skin 2Gizzard 1
Gizzard 2
Giblets
Ovary
Heart
iver 1iver 2iver 3
ushroomaitake mushroom
Number of tests
Number of positive samples
Accordance with conventional culture method(number of samples)
Accordance rate with conventional culture
method
Egg

-

34

35

-

85.00%

87.50%− 12 −

Table 2. Comparison of each method for detection of Salmonella from food samples spiked with SE*
Results
Conventional
VIDAS
culture method ICS+plate S (AFNOR)
Onsen tamago
+
+
+
Egg
Raw egg+++
Pudding+++
Egg-processed
Custard cake
+
+
+
food
Potato salad
+
+
Gyoza
+
+
+
Frozen foodGratin
+
+
+
Pilaf
+
+
+
Fried chicken
+
+
+
Pork
+
+
+
eat
Pork seasoned with ginger+++
Horse meat+++
Hamburger patty+++
Sausage+++
Processed meat
Roast beef+++
product
Uncured ham+++
Cut vegetables 1+
Vegetables
Cut vegetables 2+++
Cut vegetables 3+
Thigh 1+++Chicken meat
Thigh 2+++Thigh 3
+
+
+
Wing
+
+
+
Drumstick+++
Cartilage+++
Chicken putty+++
Ground meat 1+++
Ground meat 2+++
Ground breast tender+++
Skin 1+++Skin 2+++Gizzard 1+++
Gizzard 2+++
Giblets
+
+
+
Ovary
+
+
Heart
+
+
+
iver 1+++iver 2+++iver 3+++aitake mushroom+++
ushroom40
40
40
Number of tests
36
39
39
Number of positive samples
90.00%
97.50%
97.50%
Positive rate
Accordance with conventional culture
37
37
method (number of samples)
Accordance rate with conventional culture
92.50%
92.50%
methodCategory of food

The name of foods*SE: Salmonella Enteritidis− 13 −

Number ofcells
innoculated
8.2
11.8
16.9
9.9
8.2
9.9
9.9
16.1
16.1
8.2
16.1
9.9
16.1
16.9
16.9
11.8
8.2
16.9
11.8
11.8
14.3
11.2
11.2
14.3
14.3
14.3
11.2
14.3
14.3
11.2
11.2
14.3
11.2
14.3
14.3
11.2
14.3
11.2
11.2
11.2

Table 3. Comparison of each method for detection of Salmonella from food samples spiked with ST*
Results
Category of food

The name of foods

Onsen tamago
Raw egg
Pudding
Egg-processed
Custard cakefood
Potato salad
Gyoza
Frozen foodGratin
Pilaf
Fried chicken
Pork
eat
Pork seasoned with ginger
Horse meat
Hamburger patty
Sausage
Processed meat
Roast beef
product
Uncured ham
Cut vegetables 1
Vegetables
Cut vegetables 2
Cut vegetables 3
Thigh 1Chicken meat
Thigh 2Thigh 3Wing
Drumstick
Cartilage
Chicken putty
Ground meat 1
Ground meat 2
Ground breast tender
Skin 1Skin 2Gizzard 1
Gizzard 2
Giblets
Ovary
Heart
iver 1iver 2iver 3aitake mushroom
ushroom
Number of tests
Number of positive samples
Positive rate
Accordance with conventional culture method(number of samples)
Accordance rate with conventional culture
methodEgg

VIDAS
Conventional
culture method ICS+plate S (AFNOR)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
40
39
97.50%

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
40
38
95.00%

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
40
40
100.00%

-

39

39

-

97.50%

97.50%*ST: Salmonella Typhimurium− 14 −

Number of cells
innoculated（cfu/25g）
12.6
13.6
11.8
10.3
12.6
10.3
10.3
10.6
10.6
12.6
10.6
10.3
10.6
11.8
11.8
13.6
12.6
11.8
13.6
13.6
11.9
14.3
14.3
11.9
11.9
11.9
14.3
11.9
11.9
14.3
14.3
11.9
14.3
11.9
11.9
14.3
11.9
14.3
14.3
14.3

Table 4. Samples detected typical colony of Salmonella on selective agar plate

Category of foodEgg-processedfoodFrozen foodeat

The name of foods

Potato salad

GlatinPork seasoned with ginger
Horse meat
Hamburger patty
Cut vegetables 1
Vegetable
Cut vegetables 2
Cut vegetables 3
Thigh 1Chicken meat
Thigh 2Thigh 3Wing
Drumstick
Cartilage
Ground meat 1
Ground meat 2
Ground breast tender
Skin 1Skin 2Gizzard 1
Gizzard 2
Giblets
Heart
iver 1iver 3
ushroomaitake mushroom
Total number
Number of false positive samples**Results
Conventional
VIDAS ICS+plateculture method
S ID2 DH
S ID2
DH
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±
＋
±

3

20

26
15

26

19

± Sample confirmed negative by confirmation testing, althogh detected typical colonies on selective agar plate− 15 −

４．考察ることが推察される。

食材 40 検体を用い、公定法、バイダス ICS+

食品では、増菌培養後には多種類の菌が存在しplate 法、バイダス SLM ; AFNOR 承認法の 3 法をており全体に占める目的菌の数は少ないと報告さ比較検討した。その結果、バイダス SLM ; AFNOR

れている 15）。本研究ではサルモネラ損傷菌の回承認法が公定法およびバイダス ICS+plate 法より復を目的として前増菌に BPW を用いたが、これも高い検出率を示し、他の 2 法より優れた方法でにより食品中に存在する大腸菌群等の夾雑菌の生あることが示唆された。バイダス SLM ; AFNOR 承育が優勢になりやすかったことも考えられる。特認法は、選択増菌に ISO（International Organizationに大腸菌群数の高かったカット野菜 1 および 3

for Standardization）のサルモネラ検査（ISO6579）

等では、サルモネラを接種しても検出できない例

13）に指定されている RVS と MKTTn の 2 種類のがみられた。夾雑菌の増殖抑制と損傷菌を含めた液体培地を用いており、公定法の HTT だけではサルモネラの回収どちらがより重要かを本結果か増菌され難かったサルモネラが増菌されたと考えら明確にすることは困難であるが、いずれにせよられると共に、M ブイヨンでの増菌過程を加えサルモネラの検出率は選択増菌培地により大きくることにより鞭毛の発育が促進され、少量のサル

変動することから 16）、サルモネラを検出可能なモネラでも検出が可能となったと考えられる。M

菌量にまで確実に増殖させ、さらに夾雑菌の影響

ブイヨンは培地成分のマンノースとクエン酸ナトを抑えることができる増菌法がサルモネラの検出

リウムが栄養素となりサルモネラの発育を促進

率の向上につながるものと考えられる。

し、マンノースが鞭毛の非特異的な凝集を抑制し鞭毛の発育を促進することが知られている

14）。

今回分離培地として 2 種類の培地を用いた。
そ の う ち SMID2 は 日 本 ビ オ メ リ ュ ー が 新 た にバイダス ICS+plate 法も、サルモネラを接種し開 発 し た 培 地 で、 前 身 の SMID と 比 較 す る とた場合の検出率は公定法よりも高い結果であっSalmonella Arizonae 等の鑑別が可能になる等のた。このプロトコールでは ICS で集菌することで改良がなされたものである。この SMID2 および集落形成に十分な量のサルモネラが集菌できるとDHL の比較において、検出率に大きな差は認めともにサルモネラ以外の菌を効率よく排除するこられなかった。しかし、サルモネラ集落の鑑別のとができ、これが良好な結果につながったものと容易さは DHL と比較し SMID2 は定形集落の色調考えられる。

が明瞭であり、かつ偽陽性の頻度も低く、鑑別がしかしながら、今回試験に供した食材は大腸菌

容易な点が優れた結果であった。この要因とし群による汚染度が高いものも多く、ICS で集菌しては、DHL でのサルモネラの検出は硫化水素のたにもかかわらず分離培地でサルモネラを分離す産生による黒色集落を指標にするが、多くの菌るのが困難なものも認められた。サルモネラ未接が抑制されるとはいえ、Citrobacter freundii およ

種時に三法いずれでもサルモネラが検出されたび Proteus spp. もまた黒色集落を形成し、しばし

1

2

検体の大腸菌群数は 10 〜 10 オーダーであった

ばサルモネラと見誤られることがあげられる。本のに対し、バイダス ICS+plate 法のみでサルモネ研究でも、いくつかのサンプルで DHL に発育し1

ラが検出できなかった検体の大腸菌群数は 10 〜た黒色集落がアピマニュアルキット（日本ビオメ

104 オーダーであった。検体に大腸菌群などの夾リュー）で Proteus と同定された。一方、SMID2雑菌が多い場合、バイダス ICS での集菌の際に類ではサルモネラに特異的なエステラーゼ活性によ属反応等の影響を受けることで、分離平板培地のり集落はピンク〜赤紫色を呈するが、本試験では選択と塗抹方法がサルモネラの検出に影響を与え

青紫色の集落についても全てを疑わしい集落と− 16 −

判定した。これらのうちサルモネラの血清によ件（93.8%）、 バ イ ダ ス ICS+plate 法 は 77 件

る判定が陰性となった集落は Proteus 、Serratia 、（96.3%）、バイダス SLM;AFNOR 承認法は 79Enterobacter 、Aeromonas 、Pseudomonas と 同 定件（98.8%）であった。

された。これらの菌を SMID2 に画線塗抹し集落を形成させサルモネラの集落と比較したところ、

3）バイダスを用いた 2 法の公定法との一致率は、91.7 〜 92.5% であった。

Pseudomonas についてはサルモネラ集落との鑑

4）サルモネラの分離培地 SMID2 は DHL と比較別は困難であったが、それ以外は色調等の鑑別がし検出率に著しい差は認められなかったが、可能であった。したがって、判定に慣れることにサルモネラ集落の色調が明瞭であり鑑別が容より、SMID2 に発育した集落の判定が容易になる

易で、かつ偽陽性も少なかった。

と考えられる。また最近、サルモネラの代表的な
生化学的性状である硫化水素産生能を有さない株が食中毒の原因となることが危惧されていることから、硫化水素非産生のサルモネラであってもサ
ルモネラと判定できる SMID2 は有効であると考えられる。
以上、バイダス SLM ; AFNOR 承認法は比較したプロトコール中最も検出感度が高く、検出時間
も公定法より約 2 日短縮となった。また、バイダス ICS+plate 法も検出時間は公定法より約 1 日短縮でき、検出感度も公定法より高い結果が得られた。さらに分離培地として DHL に加え SMID2を併用することで平板上のサルモネラ集落の鑑別も容易かつ確実となることから、これらは食品か
らのサルモネラの検出に有効な検査法と考えられ
る。

５．まとめ
食品からのサルモネラの検出について、公定法とバイダスを用いた 2 通りの検出法を比較検討した。また、サルモネラの分離培地 SMID2 の実用性についても併せて検討したところ次のような結果を得た。
1）供試材料からのサルモネラの検出は、合計 40
検体中、公定法で 7 件、バイダス ICS+plate
法 で 3 件、 バ イ ダ ス SLM ; AFNOR 承 認 法 で10 件であった。
2）SE および ST をそれぞれ接種した合計 80 試
験におけるサルモネラの検出は公定法では 75− 17 −

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