地球環境研究,Vol.12(2010)♯汚濁池沼への酸素供給が有機物分解および微生物群集へ与える影響
千賀有希子＊

渡辺徳＊

泰キーワード：水域への酸素供給､ 有機物分解､ 微生物群集､ 有機汚濁
ような環境下で､ 物質循環がどのように影響を受けるの

１. はじめにかについての研究は行われていない｡

水域における溶存酸素 (DO) は､ 水生生物の呼吸､水域における有機物分解は､ 栄養塩の回帰および底泥微生物による好気的有機物分解および還元性化学物質のの堆積速度に大きく関与し､ 水質や一次生産などの物質酸化などによって消費される｡ これらの過程による DO循環を決定する重要な過程である｡ 本研究では､ 高溶存の消費速度が水中への酸素の供給を上回る時､ 水域の貧酸素環境が有機物分解に与える影響を明らかにするため酸素化が引き起こされる｡ 酸素の水への溶解度は低くに､ 室内実験において試水に純酸素をバブリングするこ(冷たく酸素を十分に含んだ水でも､ その溶存量は同じとで高溶存酸素環境下をつくり､ その試水中の有機物量

容積の空気に含まれている酸素の５％以下)､ なおかつを時間を追って測定した｡ 有機物分解は､ 溶存有機炭素

大気中の酸素分圧が比較的低い (0.21気圧) ことから､(DOC) の減少を指標とした｡ また､ 水域における好気水域の DO の欠乏は頻繁に起こる (Horn and Goldman

的有機物分解は主に従属栄養微生物によって行われる｡

2＋1983)｡ DO が欠乏した水中では､ H2S や Fe など還元

このことから､ 高溶存酸素環境が微生物に与える影響を､性化学物質の蓄積が起こり､ 水生生物の死が頻発する｡

蛍光染色した微生物を蛍光顕微鏡下で観察・計数するとさらに､ 長期にわたる無酸素化は､ 好気性有機物分解がともに､ 標準寒天培地によって培養した従属栄養細菌の十分に進行せず､ 未分解の有機物が蓄積し水質を著しくコロニーについても観察・計数し検討した｡

悪化させる｡
これまでに貧酸素化した水域を改善する試みがいくつも提案されており､ バブリングすることによって空気や純 酸 素 を 供 給 す る 方 法 (Huttunen et al. 2001 ；２. 方法

２−１. 試水の調製

Tsukada et al. 2006；Gantzer et al. 2009) や湖水の躍実験には､ 生活排水の流入をうけ有機汚濁化が進んだ層の破壊を避けるために酸素が飽和している表層水を送池 (立正大学構内､ パドマ池) を用いた｡ この池水に有り込む方法 (Ashiley 1988) などが開発され実施されて機物あるいは窒素源としてグルコース (５mgC L−1) ときた｡ 近年では､ 圧力をかけて多量の酸素を水に溶け込アスパラギン酸ナトリウム (0.5mgN L−1) を加え､ さませた高圧酸素水を､ 無酸素化した底層に送り込む方法

らに汚濁化した試水を調製した｡ 実験開始時における汚(WEP システム､ 松江土建株式会社) が開発され注目濁水の組成を表１に示す｡ この試水を２L の透明ポリビされている｡ この方法は､ 水圧を利用するため酸素の溶解効率が高い､ 高濃度の DO を含んだ水を水平に拡散

表１. 人工有機汚濁水の組成
濃できる､ 底泥を巻き上げる水泡を発生しないなど多くの利点を持つ｡ 低下した DO についても比較的短時間で回復できると報告されている｡ しかしながら､ 供給される DO は､ 非常に高濃度 (大気平衡時の２〜３倍) である｡ 特に一次生産が起こらない湖の底層には存在しえ度＋0.1 mgN l−1−0.2 mgN l−1

NO3−

0.8 mgN l−1

全有機窒素 (TON)

4.2 mgN l−1

溶存有機炭素 (DOC)

16.4 mgC l−1

NH4NO2ないほど高い溶存酸素環境を形成することとなる｡ この＊♯立正大学地球環境科学部環境システム学科
2009年度立正大学大学院地球環境科学研究科オープンリサーチセンター業績

13汚濁池沼への酸素供給が有機物分解および微生物群集へ与える影響 (千賀・渡辺)

ン９本に1.8L ずつ分取した｡ 常時エアポンプ (MP-2N,Shibata) でエアレーションを行ったポリビン (Air)､酸素ガス発生装置 (オージネーター600､ 近畿酸素) で＞90％酸素バブリングを行ったポリビン (O2)､ および何もバブリングしなかったポリビン (Control) を３本ずつ調製した｡ 空気と酸素の供給はガラスストーンを経て約１L min−1で行った｡ これらのポリビンを実験期間中25℃､ 暗条件下に静置し､ 溶存酸素濃度 (DO)､ 溶存有機態炭素 (DOC)､ 生菌数および全菌数を測定するためにポリビン中の水を経時的に採取した｡ 採水時には､懸濁物が一定となるようによく撹拌した｡

２−２. 測定と解析

図１. 溶存酸素濃度 (DO) の経時変化

溶存酸素は､ 水サンプルを採取する前に蛍光式酸素計(HQ3d, HACH) で測定した｡ DOC 濃度は､ 採水した水をガラス繊維ろ紙 (GF/F, Whatman) でろ過後､TOC 計 (TOC-5000A, Shimadzu) で測定した｡ 全菌数
は､ ろ過をしない水サンプルにグルタルアルデヒドを２％添加し生物を固定した後､ DAPI (46-diamidino-2phenylindole) で染色し蛍光顕微鏡下で観察し計数した｡
生菌数は､ 標準寒天培地 (日水製薬株式会社) を用い､25℃､ 暗条件下で２週間培養し､ 出現したコロニーを観察後､ 計数した｡ 測定値の多重比較検定には､ TurkeyKramer 法 (StatView software Version J 5.0, SAS Institute) を用いた｡
図２. 溶存有機態炭素 (DOC) 濃度の経時変化

３. 結果および考察有機物分解を促進することを示している｡ 屋外に底泥と実験期間中の DO は､ Control で70〜80％､ Air でほ地水をいれて空気供給の影響を観た実験においても､ 何ぼ100％､ O2で200〜300％であった (図１)｡ これらのも供給しない水槽の水中の有機物 (DOC＋懸濁態有機

結果は､ 未飽和､ 飽和および過飽和と３種類の DO 環炭素 (POC)) は80日経っても減少しなかったのに対し境が形成されていたことを示している｡ O2の DO 濃度て､ 空気供給をおこなった水槽では約半分に減少したは､ バブリングを停止してから気泡が消えるのを待って(千賀と渡辺 2008, 2009)｡ 有機物の分解には､ 好気的測定したため､ 酸素ガス発生装置稼働時には実際にはもっに進行する過程 (好気性の一般細菌ら) と嫌気的に進行と DO 濃度は高かったと推察される｡ Control の DO は､する過程 (脱窒細菌､ 硫酸還元菌､ 鉄細菌など) がある｡

３日目で大きく減少した｡ これは､ 有機物分解が３日まどちらの分解過程が有意であるのかは議論の的であるが､でで大きく進行しており (図２)､ これにともなう酸素一般的には好気的分解の方が有意であると言われている消費の結果であったと考えられた｡(Holmer 1999；Romantschuk et al. 2000；Gallizia et

どのサンプルも DOC は､ 時間とともに減少した (図al. 2004)｡ 我々の結果は､ この見解に準ずる｡

２)｡ Air と O2の DOC は４日目､ Control は５日目まAir と O2の供給条件では DOC の減少に有意な差はで大きな減少傾向にあり､ その後は緩やかに減少した｡

観られなかった｡ この結果は､ ある一定以上の酸素を供Air と O2の減少に比べると Control の減少が遅かった

給しても､ 好気的有機物分解が特に活発化するわけではことから､ 有機物分解は空気および酸素の供給によってないことを示している｡ 本実験では､ 何故過剰に酸素を促進されることが示された｡ この結果は､ 好気的環境が供給した水中内で有機物分解が活性化されなかったのか

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図３. 全菌数 (a) と生菌数 (b) の経時変化ははっきりと明らかにできなかった｡ 過剰な酸素は活性る捕食があげられる (Watanabe 1975；渡辺 1990)｡

酸素となりうることから､ 分解を担う好気性細菌が一部この形態の差が､ 細菌を捕食するものの存在によって影阻害された可能性もある｡

響されるのであれば､ 今後は細菌の捕食者への酸素供給

全菌数は､ どのサンプルも２日目で減少し､ その後ほの影響も検討する必要があるだろう｡

ぼ一定であった (図３−a)｡ サンプル間に大きな差は標準寒天培地上に出現したコロニーは､ ０日目は黄色見られなかった｡ Air と O2の生菌数は､ 10日以降大きいコロニーが優占していた (図５)｡ ２日目には､ Con-く減少した (図３−b)｡ Air と Control の生菌数に大trol と Air でピンクのコロニーが､ O2でピンクと赤いきな差は見られなかった｡ Control は､ 実験期間中ほぼコロニーが優占した｡ ６日目の Control と Air では黄一定であった｡ 全菌数は死滅した細菌や活性をもたない色と白 (薄ピンク) のコロニーの優占に変化し､ O2で細菌も計数してしまうが､ 生菌数はある程度活性をもっは赤いコロニーが優占したままであった｡ Control とた細菌を計数することができる (但し､ 用いた培地上でAir での優占種はほぼ同じであったが､ O2は異なって生育できるものに限る)｡ 10日目の生菌数の減少は､ バいたと考えられる｡ 本研究では､ 出現したコロニーを同ブリングによる撹拌によって付着性の細菌の生育が阻害定するまでには至らなかったが､ コロニーの色や形態かされたことが推測された｡ 全菌数と生菌数の結果から､

ら O2のコロニーは明らかに他のサンプルと異なってい空気または酸素を供給することによって細菌は大きく増た｡ この結果は､ 酸素の供給によって優先する好気性細殖するわけではないことが解った｡ この結果は､ 有機物菌が異なることを示している｡ 水中の物質循環は主に微分解が空気を供給した場合も酸素を供給した場合も大き生物によって行われている｡ したがって､ 優占する細菌な差がなかったという結果を補足するものと考えられた｡

が変わるということは､ 微生物ループによってつながっ蛍光顕微鏡での観察によって､ Control の細菌の形態ている細菌以外の微生物群集にも影響を与え､ 結果としは６日目に長さが数100mm 以上の糸状性細菌が増え､て物質循環を大きく変える可能性がある｡

10日目には糸状性細菌は大きく減少しサイズの小さな桿

21世紀は水の世紀ともいわれ､ 水問題は社会の大きな菌や球菌が優先することが解った (図４)｡ これは､ 実関心ごとになってきている (島谷ら 2003)｡ 世界的にみ験初期に大きく増殖した糸状性細菌が､ 10日目には原生ても閉鎖性水域の富栄養化やそれにともなう水域生態系動物などによって捕食され､ 減少したと考えられた｡の劣化など水質をめぐる問題は改善されていない｡ 近年､Air と O2の糸状性の細菌は６日目､ 10日目においても水質改善に向けた技術の開発が注目されている｡ 本研究検出された (図４)｡ 一般的に大型の原生動物は撹拌にで注目した酸素を貧酸素水へ供給する方法は水質改善によって生育が阻害される可能性がある｡ そのため､ バブ向けた技術開発の１つであり､ さらなる発展が期待されリングを行った Air と O2では､ 大きな糸状性細菌が残っている｡ 水域生態系の基本原理および保全を念頭に､ いていたものと考えられた｡ 両サンプルにおける細菌形態

つ､ どのように貧酸素水に酸素を供給するかを重点的にの変化はほぼ同じであった｡ しかしながら､ Control と検討していく必要があるだろう｡ 我々は､ 本研究によっは異なっていた｡ 細菌数制限の一因として原生動物によて有機物分解が高溶存酸素環境下であっても溶存酸素飽15汚濁池沼への酸素供給が有機物分解および微生物群集へ与える影響 (千賀・渡辺)

図４. DAPI 染色による細菌形態

図５. 標準寒天培地上の好気性細菌のコロニー

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地球環境研究,Vol.12(2010)

和環境下であっても差がないことを明らかにした｡ また､Horne AJ, Goldman CR (1983) Oxygen and Carbon Dioxide.

有機物分解に大きく関与すると考えられる微生物群集がLimnology. MacGraw-Hill, Inc., New York, 125-145pp

空気または酸素の供給によって異なることを示した｡ 水

Huttunen JT, Hammar T, Alm J, Silvola J, Martikainen PJ

質改善に向けた技術開発へ向けて､ 本研究のデータが活かされることを期待したい｡(2001) Greenhouse gases in non-oxygenated and artificially oxygenated eutrophied lake during winter stratification J Environ Qual 30: 387-394
Romantschuk M, Sarand I, Petanen
 T, Peltola R, Jonsson-謝辞Vihanne M, Koivula T, Yrjal
a K, Haahtela K (2000)

本研究は､ 文部科学省私立大学学術研究高度化推進事業オーMeans to improve the effect of in situ bioremediation of

プンリサーチセンター (ORC) 整備事業 (研究代表者：高村contaminated soil: an overview of novel approaches.

弘毅)､ 文部科学省科学研究費基盤 (A) ｢高酸素水生成装置をEnviron Poll 107; 179-185

用いる汽水湖貧酸素水塊の水質改善及び湖底の底質改善｣ (研島谷幸弘 (2003) エコテクノロジーによる水質浄化の概念. 島

究課題番号：19201016､ 研究代表者：清家泰)､ 文部科学省科

谷幸弘ほか編 ｢エコテクノロジーによる河川・湖沼の水質浄学研究費若手研究 (B) ｢沿岸域における異化型硝酸還元過程化. −持続的な水環境の保全と再生−｣, ソフトサイエンスの解明に関する研究｣ (研究課題番号：20710011, 研究代表者：社, １−６pp

千賀有希子) による研究成果の一部である｡

千賀有希子, 渡辺泰徳 (2008) 汚濁池沼における窒素動態に対する水中への通気の影響 −水槽実験による解析−. 立正大

参考文献

学文部科学省学術研究高度化推進事業オープンリサーチセン

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千賀有希子, 渡辺泰徳 (2009) 汚濁池沼への空気供給が窒素おGallizia I, Vezzulli L, Fabiano M (2004) Oxygen supply for

よび炭素動態に与える影響. 地球環境研究, 11, 95−102pp

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Gantzer PA, Bryant LD, Little JC (2009) Effect of hypolimnetic oxygenation on oxygen depletion rates in two watersupply reservoirs. Water Res 43: 1700-1710
Holmer M (1999) The effect oxygen depletion on anaerobic
organic matter degradation in marine sediments. Est
Coast Shelf Sci 48, 383-390

cession of phytoplankton in Lake Yogo over 2 years: effectof artificial manipulation. Limnology 7: 3-14
Watanabe Y (1975) Effects of partial sterilization on
Epibenthic microbial community of river bed. Jap J Ecol
25: 53-60
渡辺泰徳 (1990) 水界食物連鎖の新しいイメージ. −見えてきた微小プランクトン−. 遺伝, 44, 23−26pp

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汚濁池沼への酸素供給が有機物分解および微生物群集へ与える影響 (千賀・渡辺)

The Effects of Artificial Oxygenation on Mineralization andMicrobial Communities in the Polluted Pond Water
SENGA Yukiko＊, WATANABE Yasunori＊＊

Department of Environment Systems, Faculty of Geo-environmental Science, Rissho University

Abstract:
To elucidate the effects of oxygen supply on mineralization and microbial communities in theorganically polluted water, we have studied the change of dissolved organic carbon (DOC) concentration in polluted water incubated under hypersaturation, saturation and subsaturation ofdissolved oxygen (DO) conditions; that is, pure oxygen supply, aeration, and without aeration(control). Countings of total bacteria and viable heterotrophic bacteria were also conducted. Incubation was carried out using experimentally polluted pond water under dark condition at 25℃ for
20 days. Decrease of DOC under subsaturation was slow compared to hypersaturation and saturation, while no significance difference was found between hypersaturation and saturation condition.
This result suggests that mineralization was not particularly enhanced by saturation. No significant difference in total bacterial counts was found among the three DO conditions. The viable
heterotrophic bacterial counts under subsaturation were higher than those under other conditions
at the end of experiment. The microscopic appearances of the fluorescence stained bacteria showedthat filamentous bacteria was present under all three conditions at 6 days, and then under saturation and subsaturation conditions at 10 days. The bacterial colonies on the agar platesdemonstrated that the dominant bacterial groups under hypersaturation were quite different fromthose under other conditions.
Keywords: Oxygenation, Mineralization, Microbial communities, Polluted pond water18