福岡県保健環境研究所年報第41号，84－87，2014

短報
福岡県におけるノロウイルスの検出状況
芦塚由紀・吉冨秀亮・吉山千春・濱﨑光宏・石橋哲也・堀川和美
2010 年度から 2013 年度にかけて福岡県（福岡市、北九州市、久留米及び大牟田市を除く）の食中毒疑い事例の検査により検出されたノロウイルス遺伝子の塩基配列について解析を行った。その結果、2010 年度はGII/13、2011、2012 及び 2013 年度はGII/4の検出事例が最も多かった。ノロウイ
ルスGII遺伝子の系統樹解析では、2012 年 3 月以前の事例で検出された遺伝子型は、GII/4/Ehimeの近縁であったが、2012 年 3 月の事例でGII/4/Sydney型( 2012 変異株)が最初に検出されており、その後の事例で検出されたGII/4型はすべて 2012 変異株であることがわかった。
［キーワード：ノロウイルス、系統樹解析、遺伝子型別］
１が 19 事例 125 検体であった。そのうちノロウイルスが検はじめに
ノロウイルスはわが国において冬季を中心に流行する出されたのは 47 事例 259 検体であった。各事例において感染性胃腸炎の主要な原因ウイルスである。嘔吐、下痢な検出された主な遺伝子型の配列を整理し、解析を行った。

どの急性胃腸炎症状を発症し、集団食中毒の原因ともなる。
ノロウイルスはキャプシド遺伝子配列の類似性をもとに、

２・２

ノロウイルスの検査方法

GIからGVまでの遺伝子グループに分類されており1)、その検体をPBS(-)で約 10 %懸濁液とし、10,000 rpmで 20

中で主に人に感染するのはGIとGIIである。さらにGIには分間遠心分離した上清からQIAamp Viral RNA Mini Kit

15 以上、GIIには 19 以上の遺伝子型が存在し、流行の主(QIAGEN)を用いてウイルスRNAの抽出を行った。抽出した2)流を担っているのはGII/4と考えられている 。

RNAはDNase処理をした後、SuperscriptⅢ(Invitrogen)を国内におけるノロウイルスの流行の特徴としては、2006用いて逆転写反応を行った。得られたcDNAを基にPCRによ年度におけるGII/4の大流行が挙げられる3)。また、2012

りノロウイルス遺伝子のキャプシド領域を増幅した。PCR

年には新しいGII/4変異株(GII/4/Sydney/NSW0514)が出現

増 幅 用 の プ ラ イ マ ー と し て 、 ノ ロ ウ イ ル ス GI に は4)し 、2012 年度は全国的にノロウイルスによる集団発生事

G1SKF/G1SKRをノロウイルスGIIにはG2SKF/G2SKRを用いた7)。

例や食中毒事件が多発した5)。

PCRを行った後、アガロースゲル電気泳動により増幅バン

ウイルス性食中毒事件の 99 %はノロウイルスによるもドが確認されたものについてダイレクトシーケンスを行のと報告されている6)。そのため、事件発生時における原った。増幅されたキャプシド領域( 282 bp)から近隣結合因ウイルスや遺伝子型の解析は、集団発生における感染経法(NJ法)により系統樹を作成し、遺伝子型を決定した。系路を特定し、健康被害の拡大を防止するために重要である。

統 樹 解 析 に は 塩 基 配 列 解 析 ソ フ ト ウ ェ ア Molecular

また、シーズン毎や地域別の流行傾向を把握することは、

Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) version5を用い今後の食中毒の予防につながると考えられる。

た。系統樹の検定はブートストラップ法（ 500 回サンプ

今回は、2010 年 4 月から 2014 年 3 月までの間に当リング）により行った。

所において検査し、検出されたノロウイルスの塩基配列について解析を行ったので報告する。

３２

状況を表 1 に示した。2010 年度は、9 事例のうち GI が 3 事

結果

各年度において検出されたノロウイルス遺伝子型の検出材料及び方法２・１

調査材料

例、GII/4 以外の GII が 4 事例あり、4 年間の中では GII/4

2010 年 4 月から 2014 年 3 月の間に、福岡県（福岡の割合が少ない状況であった。2011 年度は GII/4 が 13 事

市、北九州市、久留米市及び大牟田市を除く）でウイルス例中 4 事例で最も多く、GII/2 が 3 事例であった。2012性食中毒が疑われた事例（ 93 事例）において採取された

年度は、GII/4 が 17 事例中 13 事例で、GII/4 の割合が極患者便及び従事者便等の合計 696 検体を検査した。内訳めて多い年であった。2013 年度は GII/4 が 8 事例中 4 件

は、2010 年度が 17 事例 171 検体、2011 年度が 30 事事例で、前年に比べると減少しているものの、半数は GII/4

例 222 検体、2012 年度が 27 事例 178 検体、2013 年度であった。GI の事例は GII に比べて少ないが、2010 年度

福岡県保健環境研究所 （〒818-0135 太宰府市大字向佐野 39）- 84 -

表 1 過去４年間の食中毒事例において検出されたノロウイルスの遺伝子型*
検査
事例年度

検出事例

146GI遺伝子型
718114120101792011301311201227171120131981計9347121112* 複数の遺伝子型が検出された場合は主要な遺伝子型を示した。

23321512424134235GII611111111121133114141

は 9 事例中 3 事例あり、4 年間の中では多い年であった。

2006 年度の全国的な大流行の際は GII/4 の 2006b 変異

図 1 に 2010 年度から 2013 年度の食中毒疑い事例で検出株が主流であったと考えられており、GII/4 に属するノロされたノロウイルスの塩基配列についての系統樹解析結ウイルスに数年おきに新しい変異株が出現して流行する果を示した。39 事例から検出された GII のうち、23 事例

ことにより、多くの集団発生を引き起こしていることが明が GII/4 で、GII/4 の 2012 年変異株である GII/4/Sydney

らかとなっている 5)。今後も、ノロウイルスの遺伝子型の型（2012 変異株）と近縁のものは、18 事例あった。最も解析により、変異株の出現やシーズン毎の流行の傾向等を早い時期の 2012 変異株は 2012 年 3 月の食中毒疑い事監視していくことが、感染症や食中毒による健康被害の拡例で検出されており、2012 年度以降に検出された GII/4大防止のために重要であると考えられる。

1の遺伝子型はすべて 2012 変異株であった。2012 年 3 月
より以前の事例で検出された GII/4 は、GII/4/Ehime 近縁文献株であった。

1) D. P. Zheng et al.: Virology, 346, 312-323, 2006.
2) 片山和彦：病原微生物検出情報, http://idsc.nih.go.

４考察jp/pathogen/refer/noro-kaisetu1.html.

2010 年度から 2013 年度の福岡県における食中毒疑い3) 国立感染症研究所：病原微生物検出情報，28，277-278，

事例の検査により検出されたノロウイルス塩基配列を解2007.

析した結果、2012 及び 2013 年度は GII/4 が主な遺伝子4) 田村 務：病原微生物検出情報, http://www.nih.go.

型であり、すべて 2012 変異株の近縁であった。GII/4 の

jp/niid/ja/norovirus-m/norovirus-iasrs/2957-pr39

2012 変異株は、2012 年 10 月に新潟県の集団発生事例で検出され、その後の調査研究で、2011 年度中にすでに全42.html.
5) 国立医薬品食品衛生研究所：http://www.nihs.go.jp

国の食中毒事例等から検出されていたことが確認されて4)いる 。福岡県においても、2012 年 3 月の事例に最初に/fhm/fhm4/fhm4-nov015.html.
6) 国立感染症研究所：病原微生物検出情報，32，352-353，
2011.

検出されており、その後に検出された GII/4 型はすべて2012 変異株に置き換わったと考えられた。ただし、ノロ

7) 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知：

ウイルスには遺伝子の組み替えが起こることが知られて
5)いることから 、正確な遺伝子型を同定するためには、さらに広い領域の塩基配列を解析する必要がある。今後はより長い塩基配列データを蓄積し、詳細な検討を行いたいと考えている。

- 85 -

ノロウイルスの検出法について，食安監発第1105001号，
2003.

B)

A)

FE102-2014/3
FE108-2014/3

GI/5(AJ277614)

96

FE9-2013/4

GI/9(AB039774)

34

FE159-2013/2

GI/7(AJ277609)
20

100

FE168-2013/2

FE80-2011/1

FE200-2013/3

GI/4(AB042808)
10

FE196-2012/3

FE223-2012/3

100
90

JX459908 GII.4/Sydney/NSW0514/2012/AU

FE72-2013/11

FE102-2012/11

GI/2(L07418)

38

GI/1(M87661)

100

FE171-2012/3
52

FE158-2013/2
FE150-2013/1

FE140-2012/12
91

JX459907 GII.4 Woonona/NSW3309/2012/AU

GI/8(AB081723)
97

FE114-2012/11

48

FE142-2011/3

FE91-2012/11

GI/3(U04469)

33
29

FE80-2012/10

GI/12(AB058525)

36

FE106-2012/11

GI/11(AB058547)

FE184-2013/2
24

GI/10(AF538679)

FE91-2014/2
DQ078814 Hunter504D/04O/AU(2004)

GI/13(AB112132)

100
56

AB220922 Hu/Sakai/04-179/2005/JP

29

FE188-2013/3

12変異株

FE89-2012/11

GI/6(AF093797)

91

2012

62 FE1-2012/4

EF126963 Hu/GII.4/Yerseke38/2006/NL-2

GI/14(AB112100)

64 AB434770 Hu/OC07138/07/JP-2(2007a)

FE147-2011/3
20AB541319 Osaka1/2007/JP(2007a)
FE64-2010/11

0.02
66

78

FE35-2010/10
FE179-2012/3

50 FE141-2012/1

FE148-2012/1
AB541316 Nigata4 2008(2006b)

1

AB447453 GII.4 Ehime1/2006/JP

2

8 EF126966 Njmegen115/2006/NL(2006b)

2

X86557 GII/4 Lordsdale/93/UK
86 X76716 GII.4 Bristol/93/UK

GII/8(AB067543)

32

GII/9(AY054299)

14

GII/6(AB039776)
99

13
11FE15-2013/4

GII/13(AY130761)
FE80-2011/1
87

FE113-2011/2
68 FE135-2011/3

4FE164-2012/2
GII/7(AJ277608)
21

GII/17(AF195847)
GII/11(AB112221)

33

FE27-2013/5
GII/3(AB067542)

15

FE48-2011/7

9673

FE47-2013/8

GII/14(AB078334)

97FE194-2012/3

図 1 2010 年度から 2013 年度に食中毒疑い事例で検GII/16(AB112260)

22GII/18(AB083780)

出されたノロウイルスの系統樹

5952

PCR により増幅されたキャプシド領域( 282bp )の塩

51398GII/2(X81879)
FE115-2011/12
FE17-2011/4

基配列から近隣結合法( NJ 法)により系統樹を作成した。A )、B ) は、各々GI 型、GII 型の系統樹を示した。

FE72-2012/10
FE123-2012/1293

FE42-2011/5
97 GII/5(AJ277607)

1256

系統樹の検定はブートストラップ法（ 500 回サンプリ

FE145-2012/1
GII/10(AY237415)

ング）により行った。FE- は今回当所で検出した株（検29

体番号-年/月）であり、その他は参照株である。

GII/15(AB058582)
GII/1(U07611)

71GII/12(AB039775)

60
97

0.05

- 86 -FE86-2011/1

（英文要旨）Genotype of Norovirus Circulating in Fukuoka Prefecture
Yuki ASHIZUKA, Hideaki YOSHITOMI, Chiharu YOSHIYAMA,
Mitsuhiro HAMASAKI, Tetsuya ISHIBASHI and Kazumi HORIKAWA
Fukuoka Institute of Health and Environmental Sciences,
Mukaizano 39, Dazaifu, Fukuoka 818-0135, Japan
Norovirus is the leading cause of acute gastroenteritis and foodborne disease in Japan. We examined fecal specimens collectedduring 2010-2014 in Fukuoka Prefecture. For analysis of norovirus, we performed sequence and genotype determination.
Phylogenic analysis showed that GII/4 was dominant in 2011/12, 2012/13, and 2013/14. The new strain of norovirus GII/4 was
first detected in March 2012. Since then, GII/4 strains detected were all new subtypes.
[Key words; norovirus, genotype, PCR, Phylogenetic analysis]- 87 -