各種脂肪摂取後 TGーリッチリポ蛋自の血襲

および細胞内代謝過程におよ{ます影響
福井医科大学第 3内科
中井継彦(研究代表者〉
玉井利孝(協同研究者)
笈田耕治(1/)(1)研究目的および研究の社会的意義

本邦の男性，女性ともに平均寿命が延長し，欧米先進国を凌駕しつつある。死因の内訳として，結核，肺炎などの感染性疾患の著しい減少，脳血管疾患特に脳出血の減少が大きく寄与している。しかし，逆に虚血性心疾患による死亡率が漸増し，欧米型に近づこうとしている。その原因としては，日本人のライスタイルの欧米化，とりわけ栄養素の摂取内容の推移が注目されている。総蛋白摂取に占める動物性蛋白質の割合および総脂肪摂取に占める動物性脂肪の割合が昭和 20~30年代の 20~30%から昭和 57年には約 50% に達している。植物油に含まれるリノール酸，リノレン酸などの必須脂肪酸が高脂血症を改善させるが，動物油脂に含まれる飽和脂肪酸は血中コレステローノレを上昇させると報告されており，植物油摂取の有用性が啓蒙されている。
疫学的に，植物性脂肪が動物性脂肪よりも動脈硬化性疾患の惹起性が少ないとされ，植物性脂肪の使用が推奨されている。しかし，その詳細な機序に関しては未だ十分明らかにされていない。種々の脂肪を経口摂取すると，小腸にて消化吸収され，腸管リンパ管を経由して外因性血疑リポ蛋白として大循環に入る。外国‑48を含有するカ性リポ蛋白は腸管由来であるから，ヒトではアポ蛋白 (apo) B
イロミクロンとして小腸細胞より分泌され，未梢の毛細血管内皮細胞に存在するTG) が加水分解
リポ蛋白リパーゼによりカイロミクロンのトリグリセライド Cを受ける。その結果，カイロミクロンレムナントが形成されるが，肝細胞によって素早く取り込まれ，血中から処理される。しかし，摂取する脂肪の種類によっ‑198て前述の TGーリッチリポ蛋白の代謝過程にいかなる差異が認められるかについては十分明らかにされておらず，本研究において，これらの謀題を検討する。乳製品や油脂製品であるバター，マーガリンや生タリームを経口摂取し，被験者の‑48などを分析す
血媛およびリポ蛋白分画中の各種脂質，各種アポ蛋白. apo Bーロッチリポ蛋白を採る。さらに，三種の脂肪摂取によって生じた血中の TG取，調整し，レムナント代謝の主要細胞である培養肝脂肪と動脈硬化の発症，進展と密接に関連する培養動脈平滑筋細胞やマクロファージを用いて両者の相互反応性や細胞内リポ蛋白代謝過程におよぼす TG リッチリポ蛋白の影響について検討する

E(1I)経口脂肪負荷における apoB‑
48含有リポ蛋白代謝;生クリーム負荷テスト

TGーリッチリポ蛋白代謝には肝臓および小腸を介する 2つの代謝経路が存在‑
100及び apoB‑48が重要な役割し，その調節には 2種の apoB亜分画. apoB‑
100は肝臓由来.apoB‑48は小腸由を果たしている。特にヒトにおいては apoB来とされ，その臓器特異性がリポ蛋白代謝マップの中で注目されている。著者らはこれまで高 TG血症(原発性高脂血症あるいは糖尿病に伴う続発性高脂血症〉

LDLの apoB‑48比 (apoB‑48の患者における apoB亜分画動態を検討し. VapoB全体に占める%)は TG リッチリポ蛋白，特に外因性の TGリッチリポ蛋‑48比が各種病態における高 TG血症の成因を検白代謝と密接に関係し. apoB討する指標のーっとなり得ることを報告した。
高脂肪食の投与あるいは脂肪負荷試験(経口または経静脈〉の目的は，外因性脂肪に対する個人の反応性を知ることとともに，外因性リポ蛋白およびアポ蛋白代謝変動を検討する際の有用な方法の一つである。本研究では経口脂肪 l回大量投与を行い，外因性リポ蛋白代謝について. apoB‑48をとして検討するとともに，外因性脂肪に対する個人の反応性を規定する因子について検討した。
(1)対象および方法

5歳から 43歳(平均30)歳〉の健常男子 8名であり，空腹時血嫌脂質お対象は 24
時間絶食後の早朝空腹時に市販の生クよびアポ蛋白濃度は正常であった。約 1‑199

リーム 200g (200mZ)を 3分以内に経口摂取させ， 5時間後まで経時的に採血Ch)，血祭 TGおよびリン脂質 (PL)はそし分析した。血媛コレステロール (poA‑，l A‑n，B，C n，C‑illおよび E濃度はれぞれ酵素法で測定した。血媛 a
司SRID法により測定した。リポ蛋白は既報の趨遠心法により分析した。 VLDL中 apo‑
B 亜 分 画 の 分 析 は 趨 遠 心 法 に よ り 得 ら れ た VLDL を lmM

H8.
2 で 24時 間 十 分 に 透 析 し て 試 料 と し た 。 Bio‑Rad社 製
EDTA‑2Na，pProteanCellを用いて， 0.1% SDS含有 3~15% gradientpolyacrylamidepoB‑I00，gelelectrophoresis(PAGE)を行い， VLDLアポ蛋白を分離した。 aB‑
48，E，A‑N，C群がそれぞれ分離された。 apoB 亜分画の同定は LDL(apoovineserumalbuminの重合体を標準蛋白として計算
B‑I00)との比較および bensitometerで測定し， apoB‑48の apoB全体に占した分子量より行った。 DB‑48比)を計算した。測定値は mean:tSEで示した。脂肪負荷時のめる%(poB‑48比の変動を負荷前の値と血凝脂質，リポ蛋白，アポ蛋白濃度および apairedttest で検定した。なお，投与した生クリームの脂肪含有量は TG
102.
8g，PL7.
4g，Ch1.0gであった。
(2)結果

空腹時の血撲脂質，リポ蛋白およびアポ蛋白濃度は Ch184.
3:
t9.
0腿 /dl，TG108.
7土 16.
3略 /dl，PL197.
9:
t5.
9昭 /
dl，HDL‑Ch64.
3:
t2.4腿/d，lapoA‑1135.
5土 8.
5昭 /dl，apoA‑n29.
8:t1.2略 /dl，apoB72.
7土 5.
7昭 /dl，apoC‑n3.1土 0.4略/dl，apoC‑ill8.
1土0.
6腿 /dl，apoE3.
7土 0.
1昭 /dlであった。脂肪負荷後血媛脂質はいずれも増加を示したが，特に血媛 TGのZ)分画の増加が著明であった。この増加の大部分は VLDL (d<1.006g/mTGの増加によるものであったが， IDL‑TGの増も認められた (Fig.1)。血祭0分より有意に増加を示し， IDL‑TGはこれに遅れて 120および VLDL‑TGは6分より有意に増加した。しかし一方， TGの増加反応は個体義が大きいことが観察された。そこで脂質負荷に対する血媛 TG反応の程度を評価するために

Patschらの方法に準じて血祭 TGの増加量を算出した。すなわち，脂肪負荷後1時間値より 5時間値までの 5個の血媛 TG値をプロットし，そのうち最大値200‑2個の平均値と負荷前値との差を計算した。 TG増加量 (mg/dl) = (TGm.
.+TG'od) / 2ーTG，:最大値， TG番目に高い値， TG，:前値〕。こ叫 : 22o (TGm，れにもとづいて，血媛 TG が 185mg/dl 以上増加した 4 例Cl85~328略/dl)と増加が 164腿/dl 以下であった 4 例 (65~16佃g/dl)との 2 群に分けてそれぞれ高反応群 (Hyper‑responder:H群〉および低反応群 (Low‑responder:L群)として以下の検討を行った。なお TG叫は H 群では 323.6~569.4mg/dl ，L 群では 127.8~259.1mg/dl であった。 E群および L 群の臨床背景および空腹時脂質，リポ蛋白，アポ蛋白濃度は Table1のごとくであった。
耳群と L群に分けた血疑 TGの変動は Fig.
2のごとくである。コレステロー

20分から有意に増加した。一方， VLDL‑Chは60分
ルりの変動では血疑 Chは1から有意な増加を示した。 LDL‑Ch，HDL‑Chには有意な変動は認めなかった。
しかし， HDL‑ChをE群と L群に分けて検討すると E群において経時的な減少傾向がみられた。血疑 PLは経時的に漸増した。血媛アポ蛋白濃度についてみpoA‑1および apoA‑H濃度は脂肪負荷後それぞれ有意な変動を認めなると， apoA‑1濃度は E群で L群に比べて低値であった。 apoB濃度も脂かったが， a肪負荷後に有意な変化を認めなかったが， H群において L群に比して高値でpoE濃度についてもほぼ同様の結果を得た。血援 apoC‑Hおよあった。血祭a‑ill濃度も脂肪負荷により有意な変動を認めなかったが apoB，apoEと同び C
様に E群において L群に比し高値を示した。次に血疑 TG増加反応と空腹時の血凝脂質，リポ蛋白，アポ蛋白濃度との聞の相関関係について検討した。血媛TG増加反応は血祭 TG(r=0.87， pく 0.
005)，VLDL‑TG (r=0.81， p)， VLDL‑Ch (r=0.81， pく 0.
01)および apoC‑ill (r=0.7，1 p<<0.010.
05) 濃度とそれぞれ有意な正の相関はを示した。すなわち，空腹時の血媛TG，VLDL脂質濃度あるいは apoC‑ill濃度が高いほど脂肪負荷後の TG増加反応が大であることが示された。
さらに，経口脂肪負荷時のリポ蛋白変動におよぽす外因性リポ蛋白の影響をみるために apoB‑48の変動を検討した。 Fig.
3に B‑48比の変動を示した。 E群 4例の B‑
48比の変動は脂肪負荷前平均 4.6%であったが，脂肪負荷後増加

201‑

し， 60分で8.9%とピークに達した後，再び減少を示した。しかし，その変動は個体差が大であった。

(皿)経口脂肪負荷に置ける apo8‑
48含有リポ蛋白代謝:バターおよびマーガリン
負荷テスト(1)対象および方法

5歳から 43歳の健常男子 7名である。空腹時血祭脂質，リポ蛋白およ対象は 2:t， TG 108.
8土 13.
9 mg/dl，Ch 191.5土 11.0mg/dl， PLびアポ蛋白濃度 f

195.
3:
t6.
5腿 /dl，HDL‑Ch63.
6土 3.
3mg/dl，apoA‑1 143.
8土 2.
6略 /dl，apoA‑II32.
3:t0.
8腿 /dl，apoB76.7土 6.
6昭 /dl，apoC‑1 32.
3土 0.
3昭 /dl，apoC‑ill7.
8土 0.
5mg/dl，apoE 4.
0土 0.
2略 /dlであった。 1
4
時間絶食後の早朝空腹時に，ボター〔粗脂肪81.0%，脂肪酸組成 C%) :C.
"4.
2，C帥 2.
3，C.
.1.2，C18" 2.
6，C;
"，2.
8，C1•• 10.
9，C1".31.0，C1"
125.
5，Cm，10.
5，C1"
11.3J100E あるいはマーガ Uン〔粗脂肪81.6%，脂肪酸組成C%) :C.
5，C山1.0，" 21C1".9.
0，C1&8 8.
0，C 1
5.
5，C1".6
2.
5，CI80 31.0，C""0.
5，C'U0.
4J100gを食パ削0gとともに経ロ摂取させた。その後 5時間まで経時的に採血し分析した。
ン6分析方法は前記と同様である。
(2) 結果脂肪負荷後の血祭脂質はいずれも増加を示したが，とくに血媛 TGの増加が著明であった。脂肪負荷後の血祭およびリポ蛋白の TG濃度の変動をみるとCFig.4)，血祭 TCの増加の大部分は VLDLCd<1.006g/ml)分闘の増加

DL‑TGの増加もみられた。しかし，バによるものであった。パター負荷では， I
ター，マーガリン聞で比較すると，リポ蛋白 TG濃度に差を認めなかった。血祭およびリポ蛋白のコレステロール濃度の変動をみると C
Fig.5)，いずれの負DL，LDL，HDL分画荷においても VLDL‑Chの有意な増加が認められたが， Iには明らかな変動は認められず，両者負荷の潤でもリポ蛋白コレステロール濃度の差は認めなかウた。血疑アポ蛋白濃度の変動は血凝脂質の変化に比し変化が少ないかあるいは認められず，両者負荷の比較でも一定の差異は認められな202かった。 Fig.
6に d<1.006g/ml分画の apoB‑48比の変動を示した。脂肪負荷後増加し，ピークに達した後減少したロバター，マーガリン両者間で変動の様相に一定の差異を認めなかったが，個体差が大であることが示された。同様に，各対象における apoB‑48比の変動を Fig.7に示した。次に，外因性脂poB‑48代謝の影響を検討した。脂肪負荷
肪に対する個人の反応性に及ぼす aに対する反応の程度の指標として，負荷後の血奨 TGの最大値および TG増加poB‑48比の前値は， TGの最大値， TG増加量のいずれとも量を用いた。 a相関関係を示さなかったが，負荷後の apoB‑48比の最大値は， TGの最大値と有意な負の相関を示した(バター.
05，マーガリン
r=‑0.75， pく 0r=‑0.86， p<0.01)(
Fig.
8)。同様に apoB‑48比の最大値は， TG増加量との聞にも，マーガロンでは有意な負相関 (r=‑0.76，p<0.05)，バターでs) を示した。
は有意ではないか負の棺関傾向 (r=‑0.69，n(N)考 察
外因性リポ蛋白代謝を検討する手段のーっとして，各種脂肪負荷テストが行われ，外因性脂肪に対する反応性についての多くの実験結果が報告されている。外因性脂肪に対する個人の反応性を把握することは臨床的にもきわめて重要である。
すなわち，食事性脂肪摂取と動脈硬化症との関連について明らかにされ，

Zilversmitは，とくに食後の高脂血症状態と動脈硬化症との関連について述べて.
5分にすぎないので，最近はカイロいる。カイロミクロンの血中での半減期は 4ミクロンレムナント粒子が注目され，多くの臨床及び実験成績によって，カイロLDLレムナントが動脈硬化惹起に関与していることが示
ミクロンレムナント， VpoBの面よりみると，小腸で吸収された脂質は小腸由来の apo唆されてきた。 aB‑48 とともにカイロミクロンとして分泌され，血中で TGの水解を受けた後，カイロミクロンレムナントとして肝臓に取り込まれる。すなわち，ヒトでは小腸

poB !
Il!
分l
函では主として apoB‑48を合成する。一方，ヒトの肝臓は apoはaB‑100のみを合成し， apoB‑48は合成しないと報告されている。以上ヒトでは
apoB‑
100，apoB‑48合成の臓器特異性が切らかである。従って，外因性リポ蛋白
203‑

とくに，カイロミクロンレムナント代謝のマーカーとして apoB
ω48を指標とすることは妥当であり，脂肪負荷後の apoB‑48の変動を検討することは外因性リポ蛋白代謝の研究に有用であると考えられる。

poB‑48を指標として脂肪負荷後の外今回の研究では，正脂血症者において， a因性リポ蛋白代謝を検討したところ， 3種の脂肪の聞では apoB‑48比の変動にpo明らかな差異は認められなかった。しかし，個体聞の変動の差は大であり， aB 亜分画代謝の個体差が示唆された。このことは，外因性リポ蛋白の処理の様相に個体差が大であることを示すものと言える。さらに，外国性脂肪に対する個人

poB!Il!分画代謝の影響を検討すると，脂肪負荷に対する反応の反応性に及ぼす apoB
‑48比の最大値とは負の相関関係を示した。このことは，脂肪負の大きさと a
荷後の TGリッチリポ蛋自の apoB‑
48含量が高くなる個体ほどそのリポ蛋白粒子の血中からの除去がすみやかであることを示すものである。この結果はカイロpoB‑48が一部は間接的にせよ関連している
ミクロンレムナントの認識機構に a可能性を示唆するものと考えられたが一掃の検討が必要である。
今後さらに， TG リッチリポ蛋白と各種細胞との相互反応性や細胞内リポ蛋白代謝過程におよぼす影響などについて研究を進める予定である。

‑204

Mean土 SE400

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1111 •300τョ明︒¥閉E5。o3060120180240vzeoh‑凹Z H d白‑100鍋Ea︒
宝﹄@ohBZ 制 J白 ﹂ ﹀ 司ceωEW

10̲200'0300

Time afterfat Ingestlon(min)窓口 deconcentrationsinor
iginalplas
ma，VLDLandIDL
Fig.1 TimeC
Qurseoftr
Iglycafterfatingestion

205ーTable1 C
linicalprofile and plasma concenlrat旧 国(mg!
dl:mean土SE)oflriglyceride(TG)，cho‑hospholipid(PL)，apolipoprolesterol(Ch)，ptein(apo)A
‑
I，A‑
J
I，8，
C二1
1，C‑
ll
IandEofthesu対ectsinv
estigatedinthepresentslu
dyHg
roupLgrou
p(n~4)(n~4)

AgeWeight(同)%Idealweight

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0土 3.
2.
965.
3土 0曲。士1.8125.
5土 0.
5+61.8土 5.
395.
8土2.
7

TG:Plasma
VLDLlDLLDL
HDL
Ch:Plasma
VLDLlDLLDL
HDL
PL:Plasma
ApoA‑I
ApoA‑II

1
土11.5
14
9.
94.
3土4.
62.
8土1.0

68.
5土4.1++
32.
4
土5.
1・*2.
0
土0.
83，81
94.
8土 1
1J，2
土1.00.
6173.
9土 1
4.5土1.0+.

120.
1土 1
5，261.5
土0，62
10.
6土1.l
125.
0土7，728.4土1.7

ApOB

7
7.4土1Iι
O3.
7土0，6

102.
3土 8.
667.
1土4.
64+
185.
3土 7.
145.
9土 14.
331.l土1.6
68.
0土3.
6.
22.
5土0
6.
9土0.
5・3.
9土0，3

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9.
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lasma加 glycerideωncentrationafterfatingestion.
H:hyperresponder，L:lower‑responder
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田 orapoBA8ratio(p訂印刷 apoB‑
48intotalapoB)afte
rfatingestion3'00~訂ハ召¥回 F E V‑a‑ ﹄↑︒羽田﹄陶WQ﹀".
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M.拠， mum8‑48 tal;O (%)
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2
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