臨床トピックス：最先端の分子病理解析法を日常病理診断へ導入

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臨床トピックス最先端の分子病理解析法を日常病理診断へ導入
加留部 謙之輔*

内容紹介
悪性リンパ腫はリンパ球由来の腫瘍で，かつて（FISH）法，一塩基置換を検出できるサンガーシークエンス法などの分子病理的解析法も診断に導入されつつある。

はやや稀な腫瘍であったが，一貫して増加傾向に

近年では，保険診療として多数の遺伝子を網羅あり，報告によってはここ 30 年で罹患率が２倍的に解析できるがんゲノム検査が導入され，名古1）近くに増えている 。他の腫瘍と同じく，リンパ屋大学医学部附属病院もがんゲノム医療中核拠点腫もその分類がますます複雑になってきているが，病院として多くの症例の解析に関与している。以それだけ病態メカニズムが明らかになってきたと上のように，現在の病理診断は HE 染色から始まも言える。

り，タンパク発現パターン，遺伝子異常パターン

本稿では，これまで筆者が関わってきた研究を振り返りながら，これからの人体病理学研究の方向性について考えていきたい。

Ⅰ．形態診断から遺伝子を組み込んだ複合診断へを組み込んだ包括的なものになってきていると言える。

Ⅱ．最新の分子病理技術を日常診断に応用する―成人 T 細胞白血病 / リンパ腫
上述したように現代の病理診断は，病変を隅々悪性腫瘍の病理診断は，手術や生検で摘出されまで解析してから成されているように思える。した病変部検体の肉眼像および組織像を基本に成さかし，まだまだ病変組織において「目に見えない」れている。また，40 年ほど前から病理学研究に所見というのは数多く存在する。これらを可視化導入されてきた免疫染色は，特定のタンパク質をすることは，現代の人体病理学，病理診断学の大標的とする抗体を用いて組織内（in situ ）におけるきなテーマとなっている。筆者がこれまで主に取発現局在を目で見ることができる画期的な技術でり組んだ疾患のひとつ，成人 T 細胞白血病 / リあり，現在では日常病理診断に完全に定着していンパ腫（adult T-cell leukemia/lymphoma：ATLL）る。さらに，遺伝子の染色体上での転座を狙い撃の研究を例に挙げて述べていきたい。

ちで同定できる fluorescent in situ hybridization

これはヒト T 細胞白血病ウイルス -I 型（HTLV1）によるウイルス関連腫瘍で，同ウイルスは世界的に見ても本邦に有意に高頻度に存在しており，Key words
悪性リンパ腫，分子病理，診断病理，成人 T 細胞白血病 /リンパ腫＊Kennosuke Karube：名古屋大学大学院医学系研究科
臓器病態診断学 / 名古屋大学医学部附属病院病理部

それに伴い ATLL の発生頻度も本邦，特に南方の九州，沖縄地区で高くなっている。ATLL 以外のウイルス関連腫瘍といえば，Epstein-Barr ウイルス（EBV）が関与するリンパ腫，胃がんおよび上現代医学 69 巻 1 号

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令和 4 年 6 月（2022）

ATLL（n=62）

サザンブロット法

陽性

RNAscope

陰性
評価不能qPCR

生検年代

2010〜2014年

2015〜2019年

図１ ATLL の診断における，サザンブロット法，HTLV-1-RNAscope，HTLV-1-qPCR を比較したもの
縦の列は各症例を示し，年代別に左から古い順に並んでいる。HTLV-1-RNAscope 法と HTLV-1-qPCR 法を組み合わせることでSBH 法をほぼ代替できることがわかる。古い年代の標本は RNAscope 法よりも qPCR 法の方が検出感度は高い。矢印の症例は SBH法で陰性と判断されたが，RNAscope 法でウイルスが検出され，SBH 法における偽陰性が明らかになったものである。
（文献 6 より引用）

咽頭がん，ヒト乳頭腫ウイルス（human papilloma

そこで我々は，2010 年初頭に開発された超高virus：HPV）が関与する子宮頸がんがよく知られ感度の RNA in situ hybridization 法（RNAscope®）ている。これらの病理診断においては，原因ウイを用いて，比較的少量でも HTLV-1 感染に特異ルスを直接同定する方法が日常診断でも普及して的な mRNA を検出する試みを始めた 4）。HTLV-1

いる。

が感染細胞において発現を誘導する mRNA とし

EBV に関しては，感染細胞内にはウイルスがて 代 表 的 な も の に tax と HTLV-1 bZIP factor

産生する特殊な RNA（EBV-encoded small RNA：（HBZ）がある。しかし，前者は ATLL の腫瘍細EBER）が 大 量 に 含 ま れ て お り， 通 常 の in situ胞において高率に DNA の欠損が認められるため，

2）

hybridization 法で容易に検出することができる 。

必ずしも発現していない一方，後者は腫瘍化してHPV に関しては，EBER のように大量に存在すも 100% 発現が保たれるとの報告があり 5），このる RNA はまだ確認されていないが，HPV が細胞知見に基づいて HBZ に対する検査系の確立を試周期に関与する Rb タンパクの働きを抑えるため，みた。この検出法がうまくいかなかった場合を見代償的にがん抑制遺伝子である p16 タンパクの発込 ん で，HTLV-1 の DNA を 直 接 検 出 す る PCR

現が上昇することを利用して，p16 の免疫染色が法（HTLV-1-qPCR 法）も同時に行い，両者の結果

3）

HPV 感染を示す指標として用いられている 。

をサザンブロット法と比較した。結果として，

一方，HTLV-1 に関しては，これまで診断に使

HBZ-RNAscope 法は感度約 70% であり，HTLV-用できる存在量の多い RNA や，ウイルス感染細1-qPCR 法と組み合わせることでサザンブロット胞に特異的に発現するタンパクは同定されないま法を代替し得る検査系を確立することができたまであった。HTLV-1 の腫瘍細胞への感染を証明（図１）6）。HBZ-RNAscope 法は感度 70% であっするためには，サザンブロット法でウイルスたが，これは検体の古さによることが大きく，直DNA を同定することが gold standard であったが，近２年（2018〜2019 年）の生検標本ではほぼ 100%複雑な手技のため通常の院内検査室で行うのは困検出可能であった。これは，通常生検直後に行わ難なことが多く，外注検査会社か大学の実験室にれる日常病理診断では十分使用可能な方法である依頼することが必要であり，結果として検査結果と言える。の取得には１カ月近くかかっていた。

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B

図２ ATLL-HH の組織像
A：大型で核小体明瞭な HRS 細胞が認識できる（HE 染色，× 400）
。B：HRS 細胞に HBZ の発現が確認できる（HBZ-RNAscope，× 400）。
（筆者提供）

Ⅲ．HTLV-1 の「見える化」がもたらした新規病態の発見

RNAscope 法に関する論文発表も終え，技師の手技も安定してきた時期に遭遇した。69 歳，男性
でリンパ節腫大を主訴に生検，組織上は典型的な上記の HBZ-RNAscope 法，HTLV-1-qPCR 法をホジキンリンパ腫であった。しかし，EBER-in組み合わせることで，これまでサザンブロットのsitu hybridization は陰性で，B 細胞マーカーが陰結果が出るまで約１カ月かかっていた ATLL の性であるなど通常と異なる特徴を有していた。ま診断が劇的（数日）に短縮された。さらに，顕微鏡た，HTLV-1 キャリアであるとのことから，とりで直接ウイルスを「見る」ことができ，病理診断にあえずHBZ-RNAscope を行った。その結果，HRSおけるストレスも大きく軽減した。日常診断にお細胞において HTLV-1 感染が世界で初めて証明

いても HTLV-1 キャリアの患者の場合は積極的された（図 2B）。この現象を初めて顕微鏡で見たに HBZ-RNAscope を行っていた。

時，すごく興奮したことを覚えている。

ここでようやく新規病態の発見の話に進むが，その後，HTLV-1 キャリアに発生したホジキンその前にホジキンリンパ腫を紹介したい。これはリンパ腫を沖縄県内の病院で集積し，同様の病態約 200 年近く前に同定された，人類で最も古くか（adult T-cell leukemia with HTLV-1 infected HRS-ら認識された悪性リンパ腫である。組織学的な特like cells：ATLL-HH）を８例同定することができ徴として，大型で明瞭な核小体を有する Hodgkin

た。これらの症例における HRS 細胞は第１例と& Reed-Sternberg（HRS）細胞の出現が挙げられ同様に B 細胞系マーカーが陰性で，CD4 などのる（図２A）。HRS 細胞の由来は長らく正体不明でT 細胞関連マーカーがしばしば陽性になること，あったが，技術の進歩により B 細胞由来であるEBV はまったく関与しないこと，予後が通常型ことがわかり，また約 40% の症例では EBV の感ホジキンリンパ腫よりも悪いことが判明した 8）。

染が確認される 7）。日常病理診断でしばしば遭遇以上の所見をもって，ATLL-HH はホジキンリする疾患であり，稀なものではない。
現在でも覚えている第１例は，上述の HBZ-ンパ腫に類似する新規疾患概念と考えられる。細胞の性質から，T 細胞系の HRS 細胞を伴う病態

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60と思われる。これは HRS 細胞が B 細胞由来であるというこれまでの概念を覆すものだが，それだけに，シングルセル解析を含めた詳細な解析が必要であるとの指摘を受けており，今後の研究課題として取り組む予定である。

おわりに
以上，HBZ-RNAscope 法の開発と日常病理診断への導入により，これまでに認識されなかった病態の発見に至った一連の研究について述べた。
HBZ-RNAscope 法は新しい検査法だが，そのプローブは市販のものを用いただけで，新技術を開発したのではない。ただ，リンパ腫の診断に応用しただけである。しかし，この方法を日常病理診断に導入したことは世界的にも先駆けたものであり，それにより新規病態を同定するに至った。
筆者は，基礎研究の成果を日常診断にいかに応用するかを常に考え，「使えそう」な技術を感度，特異度を中心に多方面から確認し，病理診断検査としての質を向上させることを主な目的として研究を行ってきた。名古屋大学には世界一流の基礎研究，研究技術が集積している。これらの技術を応用し，この地で次の時代の病理診断分野を開拓していきたいと考えている。

令和 4 年 6 月（2022）

利益相反
筆者は，中外製薬株式会社およびエーザイ株式会社より講演料を受けている。

文献1）Ye X, et al：Long-term time trends in incidence,survival and mortality of lymphomas by subtype
among adults in Manitoba, Canada：a population-based
study using cancer registry data. BMJ Open 2017；7：
e015106.
2）Howe JG, et al：Localization of Epstein-Barr virusencoded small RNAs by in situ hybridization. Proc NatlAcad Sci 1986；83：9006-9010.
3）Sano T, et al：Expression status of p16 protein is
associated with human papillomavirus oncogenic
potential in cervical and genital lesions. Am J Pathol
1998；153：1741-1748.
4）Wang F, et al：RNAscope: a novel in situ RNA analysis
platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. JMol Diagn 2012；14：22-29.
5）Satou Y, et al：HTLV-I basic leucine zipper factor genemRNA supports proliferation of adult T cell leukemia
cells. Proc Natl Acad Sci USA 2006；103：720-725.
6）Takatori M, et al：A new diagnostic algorithm usingbiopsy specimens in adult T-cell leukemia/lymphoma:
combination of RNA in situ hybridization andquantitative PCR for HTLV-1. Mod Pathol 2021；34：51-58.
7）Weniger MA, et al：Molecular biology of Hodgkin
lymphoma. Leukemia 2021；35：968-981.
8）Karube K, et al：Clinicopathological features of adult
T-cell leukemia/lymphoma with HTLV-1-infected
Hodgkin and Reed-Sternberg-like cells. Blood Adv
2021；5：198-206.