ПЛОЩАДКА ОТКРЫТЫХ
КОММУНИКАЦИЙ OPENBIO

СБОРНИК ТЕЗИСОВ
VII МЕЖДУНАРОДНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ
МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ: ВИРУСОЛОГОВ,БИОТЕХНОЛОГОВ, МОЛЕКУЛЯРНЫХ
БИОЛОГОВ И БИОФИЗИКОВ
НАУКОГРАД КОЛЬЦОВО - 2020

VII МЕЖДУНАРОДНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ
МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ:БИОФИЗИКОВ, БИОТЕХНОЛОГОВ,МОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОЛОГОВ И ВИРУСОЛОГОВ
Сборник тезисов

Новосибирск
Наукоград Кольцово
2020УДК 577.2:62.01:578+(001)ББК 28.07:30.16:28.4
М431

М431

VII Международная конференция молодых ученых: биофизиков, биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов — 2020:cб. тез. / АНО «Иннов. центр Кольцово». — Новосибирск : ИПЦ НГУ,2020. — 642 с.
ISBN 978-5-4437-1114-0Сборник тезисов составлен на основе материалов, присланных
российскими и иностранными учеными в оргкомитет Международной конференции молодых ученых биотехнологов, молекулярных
биологов, вирусологов и биофизиков, проходящей в рамках площадки открытых коммуникаций OpenBio-2020.
Издание предназначено для преподавателей и научных сотрудников, аспирантов, магистрантов и студентов, интересующихся актуальными проблемами и разработками в области биотехнологии,вирусологии, молекулярной биологии и биофизики.
Тезисы публикуются в авторской редакции.

УДК 577.2:62.01:578+(001)ББК 28.07:30.16:28.4

ISBN 978-5-4437-1114-0© АНО «Инновационный центр
Кольцово», 2020

3раздел 1БИОТЕХНОЛОГИЯ

ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ И ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ПАСЛЕНА
ЧЕРНОГО С ЦЕЛЬЮ РАЗРАБОТКИ ПИЩЕВОГО КОНСЕРВАНТАSTUDY OF THE PROPERTIES AND CHEMICAL COMPOSITION
OF BLACK NIGHTSHADE (SOLANUM NIGRUM L.)
FOR THE DEVELOPMENT OF FOOD PRESERVATIVE
О. В. Астафьева, З. В. Жаркова
Астраханский государственный медицинский университет
O. V. Astafyeva, Z. V. Zharkova
Astrakhan State Medical University
E-mail: astra39@list.ruАннотация
Паслен черный (Solanum nigrum L.) — малоизученный объект в нашей стране, нонашедший широкое применение в других странах. Целью работы было исследование химического состава, антибактериальных и антиоксидантных свойств экстрактов S. nigrum для разработки пищевого консерванта.

Abstract
Black nightshade (Solanum nigrum L.), a few studied object in our country, but which
has found wide application in other countries. The aim of this work was to study the chemical composition, antibacterial and antioxidant properties of S. nigrum extracts for the development of a food preservative.
© О. В. Астафьева, З. В. Жаркова, 2020

4pаздел 1

Plants are one of the sources of antimicrobial and antioxidant substances thatcan be used as preservatives.
The object of this work was S. nigrum, which is few studied and not used in
Russia.
Extraction of biologically active substances was carried out with water and
70 % alcohol from the roots, stems and roots of S. nigrum. Then the extractants
were evaporated by a rotary vacuum evaporator.
The antibacterial activity was studied by the agar diffusion method and by themethod of serial dilutions. Antioxidant activity was determined by DPPG test.
By chromatographic methods (TLC, HPTLC, HPLC), compounds such as
quercetin, aspartic, fumaric, pyruvic, acetic, citric, and succinic acids were identified, which most likely cause antibacterial and antioxidant properties.
The aqueous extracts of the stems had the highest antibacterial activity, but
did not have an antioxidant effect. Hydroalcoholic extracts of the leaves hadhigh antioxidant activity, but relatively low antibacterial activity. The optimalcomposition of extracts of leaf and stem of S. nigrum with preserving properties
is a composition consisting of an aqueous extract of the stem, ethanol (70 %)extracts of the stem and leaves in a ratio of 1: 1: 1, respectively. This composition
showed high both antibacterial and antioxidant activity.
The results obtained are the basis for the development of a food preservative
based on the compositions of S. nigrum extracts.

Биотехнология

5ОПЫТ СОЗДАНИЯ ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО
СЕКВЕНАТОРА В КИТАЕ *EXPERIENCE OF CREATINGA HIGH-THROUGHPUT SEQUENCER IN CHINA
П. К. Афоничева, Д. А. Белов, Ю. В. Белов, А. А. Евстрапов
Институт аналитического приборостроения Российской академии наукP. K. Afonicheva, D. A. Belov, Yu. V. Belov, A. A. Evstrapov
Institute for Analytical Instrumentation of the Russian Academy of Sciences
E-mail: polina.afonicheva@gmail.com
АннотацияВ последние годы в России значительные материальные ресурсы были направлены на обеспечение независимости от зарубежных поставщиков в области высокопроизводительного секвенирования, а также на достижение лидирующих позицийна мировом рынке. Целью настоящего исследования является опыт китайских организаций в попытке войти в список передовых компаний среди разработчиков высокопроизводительных секвенаторов. Рассмотрены модели секвенаторов китайского
производства как выпускаемые по лицензионным соглашениям, так и собственной
разработки.

Abstract
In recent years significant material resources in Russia have been used to ensure independence from foreign suppliers in high-throughput sequencing, as well as to achievea leading position in the world market. The aim of this research is the experience ofChinese organizations in an attempt to become one of the leading companies among thehigh-throughput sequencer developers. Models of Chinese-made sequencers are considered.

Высокопроизводительное секвенирование (Next Generation Sequencing,
NGS), вытеснившее классический метод секвенирования по Сэнгеру в задачах анализа полного генома, экзома и транскриптома за счет снижения
стоимости и трудоемкости анализа, занимает более половины объема ми© П. К. Афоничева, Д. А. Белов, Ю. В. Белов, А. А. Евстрапов, 2020*Работа выполнена по Государственному заданию № 075-01073-20-00.

6pаздел 1рового рынка и консолидирован вокруг американских компаний Illumina
и Thermo Fisher Scientific. Не меньший интерес представляют компании
Китая, способные потеснить лидеров.
Ряд NGS секвенаторов, произведенных в Китае по лицензии от других
компаний, схож по характеристикам с зарубежными аналогами:– NextSeq CN500 (Berry Genomics) и NextSeq 550AR (Annoroad Gene
Technology) — аналоги NextSeq 500 (Illumina);– BioelectronSeq 4000 (Boao Biological Group), использующий технологию
Ion Torrent;– DA8600 (Daan Gene) — аналог Ion Proton;– два секвенатора компании BGI Genomics: BGISEQ-100, основанный натехнологии Ion Torrent, и BGISEQ-1000, основанный на технологии cPAL от
Complete Genomics.
Пять китайских компаний заявляют о разработке своих собственных
секвенаторов.
Секвенатор BIGIS компании Zixin Pharmaceutical Industrial, основанныйна устаревшей технологии 454, имеет мало шансов на выход даже на китайский рынок.
Одномолекулярный секвенатор GenoCare 1600 Single Molecular Sequencer компании GeneMind Biosciences Company Limited успешно прошел
клинические испытания в 2019 году, обладает оригинальными решениямии может выйти на рынки NGS.
Секвенатор HYK-PSTAR-IIA компании Huayinkang Gene Technology использует технологию, аналогичную технологии SOLiD, которая не применяетсяв современных секвенаторах, но имеет некоторые преимущества по сравнениюс ними. Компания утверждает о наличии оригинальных решений, однако факты применения HYK-PSTAR-IIA за пределами Китая отсутствуют.
Компания Anxun Biotechnology (Axbio) заявляет о разработке нанопорового секвенатора AXP100. Информация о результатах его применения
отсутствует, что ставит под сомнение готовность устройства.
Компания BGI Genomics выпускает секвенаторы DNBSEQ-400,
DNBSEQ-50, DNBSEQ-T7 и DNBSEQ Tx, которые широко используютсяи не уступают аналогам. Однако у компании, несмотря на их утвержденияхо патентной чистоте применяемых технических решений, есть проблемыс выходом на рынки Европы и Северной Америки.
Анализ опыта китайских компаний показал, что для удовлетворения
собственных нужд страны целесообразно производство секвенаторов наоснове известных методов, однако для выхода на мировой рынок необходимо создание оригинальных технологий.

Биотехнология

7СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ В СОЧЕТАНИИС НАНОСТРУКТУРИРОВАННЫМИ СМАРТ-СКАФФОЛДАМИКАК ИНСТРУМЕНТ РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ *STEM CELLS IN COMBINATION WITH NANOSTRUCTURED SMARTSCAFFOLDS AS A TOOL FOR BONE TISSUE REGENERATION
Ф. С. Ахатова, Е. А. Науменко, И. Д. Гурьянов, Р. Ф. Фахруллин
Казанский (Приволжский) федеральный университет
F. S. Akhatova, E. A. Naumenko, I. D. Guryanov, R. F. Fakhrullin
Kazan (Volga Region) Federal University
E-mail: akhatovaf@gmail.com
Аннотация
Стволовые клетки взрослого организма обладают потенциалом в формировании костной ткани и могут быть использованы для ее регенерации, например, притравмах опорно-двигательного аппарата. Матриксы на основе биополимеров в сочетании с наноматериалами могут использоваться как эффективные носители длястволовых клеток и ускорять регенеративные процессы.

Abstract
Adult stem cells have the potential to form bone tissue and can be used for its regeneration, for example, in injuries of the musculoskeletal system. Matrices based on biopolymers
in combination with biocompatible nanomaterials can be used as effective carriers for stem
cells and accelerate regenerative processes.

Modern advances in stem cell biology open up opportunities for creating new
approaches to the treatment of a number of diseases, including diseases of themusculoskeletal system, both caused by dysfunctions of the body’s metabolic systems and resulting from trauma. These areas, suggesting a personalized approachto therapy and surgery, can include cell replacement therapy, drug therapy, or© Ф. С. Ахатова, Е. А. Науменко, И. Д. Гурьянов, Р. Ф. Фахруллин, 2020*
The work is performed according to the Russian Government Program of Competitive
Growth of Kazan Federal University. This studywas funded by Russian Foundation for
Basic Research and the Government of the Republic of Tatarstan (grant #18-415-160010).

8pаздел 1

a combination of both. The main idea is to stimulate the body’s own regenerative
abilities by promoting survival, proper migration, proliferation and differentiation of endogenous progenitor stem cells. In addition, to increase their own poolof progenitor cells, they can be introduced from the outside. The creation of cell
grafts to replace bone tissue defects and their effective engraftment in patients is
an urgent problem in regenerative medicine. Despite its relative strength, bone
tissue is susceptible to destruction as a result of trauma, genetically determined
pathological fragility due to a deficiency of organic matter and resorption. Successful bone repair is possible only in the presence of high titers of mesenchymal
stem cells. To create a sufficient pool of stem cells in the area of a bone tissue
defect, it is promising to apply them on 3D biopolymer carriers, the composition
and mechanical properties of which can be modulated by using various types ofpolymers, dopants, including nanomaterials, and by methods of matrix formation. At present, matrices have been developed based on various polymers, both
artificial and natural, suitable for transplantation. A promising approach to matrix formation is the use of nanomaterials. Biocompatible halloysite nanotubes
were used as a nanomaterial to modulate the properties of composite matrices.
The nanotubes were loaded with small molecules (forskolin) to accelerate thedifferentiation of stem cells in the bone direction. The gradient distribution of
nanoparticles within the matrix allowed us to simulate the microenvironment ofstem cells closer to the native one. It was revealed that the growth of mesenchymal
stem cells for 14–20 days on gradient matrices led to a spontaneous transition ofcells to differentiation in the bone direction. Further, the matrices we developed
were used for implantation into the area of bone defects with subsequent analysisof the rate of matrix degradation, the release of nanotubes into the surrounding
tissues, and the formation of blood vessels. The release of halloysite nanotubes
into the surrounding tissues was recorded using enhanced dark-field microscopy
and it was shown that the nanotubes remain in the surrounding tissue without theformation of any histological changes.

Биотехнология

9РАЗРАБОТКА МУЛЬТИПЛЕКСНЫХ
ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ
АНТИБИОТИКОВ: СВОЙСТВА ИММУНОРЕАГЕНТОВИ ВЫБОР ФОРМАТА АНАЛИЗА *DEVELOPMENT OF MULTIPLEX IMMUNOCHROMATOGRAPHIC TESTSFOR ANTIBIOTICS DETECTION: PROPERTIES OF IMMUNOREACTANTS
AND CHOICE OF ANALYSIS FORMAT
А. В. Бартош, Д. В. Сотников, О. Д. Гендриксон, А. В. Жердев, Б. Б. Дзантиев
Федеральный исследовательский центр
«Фундаментальные основы биотехнологии» РАН, Москва
A. V. Bartosh, D. V. Sotnikov, O. D. Hendrickson, A. V. Zherdev, B. B. Dzantiev
Research Center of Biotechnology RAS, Moscow
E-mail: bartoshlab@yandex.ruАннотация
Исследованы особенности одновременного проведения в потоке на мембранном
носителе нескольких иммунохимических взаимодействий для реализации мультиплексного иммунохроматографического анализа. Работа выполнена с использованием антител, специфичных к антибиотикам разных классов, конъюгатов гаптен-белокв качестве реагентов, конкурирующих с антигенами в пробе за связывание с антителами, и наночастиц золота в качестве маркера. Для иммунореагентов, специфичных к стрептомицину, тетрациклину, хлорамфениколу и линкомицину определены
равновесные константы связывания. Сопоставлены варианты с разной продолжительностью взаимодействий, определяемой расположением зон связывания намембране; охарактеризовано влияние этого параметра на интенсивность регистрируемого оптического сигнала и пределы обнаружения (ПрО) аналитов. Показано,что часть иммунореагентов нечувствительна к этому варьированию, тогда как длядругих наблюдались 5–50-кратные отличия ПрО. В оптимальной тест-системе дляодновременной детекции четырех антибиотиков ПрО линкомицина, хлорамфеникола, стрептомицина и тетрациклина составили 0,4; 0,01; 4 и 1 нг/мл соответственно.
© А. В. Бартош, Д. В. Сотников, О. Д. Гендриксон, А. В. Жердев, Б. Б. Дзантиев,2020*Исследования проведены при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант 18-08-01397).

pаздел 1

10

Abstract
The features of simultaneous carrying out of several immunochemical interactions ina flow on a membrane for the implementation of multiplex immunochromatographic analysis have been investigated. The work was implemented using antibodies specific to antibiotics of different classes, hapten-protein conjugates as reagents, competing with antigens
in the sample for binding to antibodies, and gold nanoparticles as a marker. Equilibrium
binding constants were determined for immunoreagents specific to streptomycin, tetracycline, chloramphenicol and lincomycin. Variants with different duration of interactions
determined by the location of binding zones on the membrane were compared; the effectof this parameter on the intensity of the recorded optical signal and the limits of detection(LOD) of analytes was characterized. It was shown that some of the immunoreagents areinsensitive to this variation, while for others there were 5–50-fold differences in the LODs.
In the optimal test system for the simultaneous detection of four antibiotics, the LODs oflincomycin, chloramphenicol, streptomycin, and tetracycline were 0.4; 0.01; 4, and 1 ng/ml,
respectively.

Задача исследования состояла в изучении аналитических параметровпар иммунореагентов в мультиплексном иммунохроматографическом анализе (ИХА). Интеграция нескольких монопараметрических тест-системв мультиплексную тест-систему связана с несколькими существенными
проблемами. Проведение реакций между реагентами разной специфичности на одной тест-полоске требует изменения положения зон связываниядля разных аналитов и, соответственно, условий взаимодействия для них.
Прежде всего изменяется продолжительность взаимодействия реагентовв растворе, когда меченые антитела и компоненты пробы перемещаютсяк зоне связывания. Скорость движения потока, замедляющаяся с увеличением расстояния от старта, и изменение концентраций реагентов существенно влияют на чувствительность анализа и степень связывания метки
(и, соответственно, на достоверность визуальной оценки получаемых результатов). Данная ситуация требует рассмотрения отличий моно- и мультипараметрического ИХА, выявления оптимального расположения зонсвязывания и его зависимости от характеристик иммунных взаимодействий. Количество возможных расположений резко возрастает с ростом
количества зон связывания (N) и равно N! (т. е. 24 для четырех аналитов).
Поэтому трудоемкая проверка всех вариантов должна быть заменена простыми методиками оценки отдельных реагентов.
Исследование проводилось для систем детекции антибиотиков — опасных для здоровья контаминант пищевой продукции животного происхождения. Для отобранных иммунореагентов определены равновесные
константы связывания антиген-антитело, составившие 5,5 × 1011, 4,5 × 1011,

Биотехнология

11

4,1 × 1011 и 2,9 × 1011 М–1 для тетрациклина, линкомицина, хлорамфениколаи стрептомицина соответственно. Синтезированы конъюгаты наночастиц
золота со специфическими и антивидовыми антителами для реализации
ИХА; охарактеризованы их размеры и состав. Изучено влияние расположения зон связывания на параметры детекции каждого из антибиотиков.
Рассмотрены три положения аналитической зоны (4, 11,5 и 19 мм от старта);показано, что предел детекции и рабочий диапазон анализа определяются
расстоянием от края рабочей мембраны до зоны иммобилизации конъюгатов гаптен — белок, т. е. продолжительностью взаимодействия иммунореагентов (в том числе вследствие замедления скорости потока). Установлены
сочетания иммунореагентов, чувствительные и нечувствительные к этому
варьированию расстояния. Охарактеризованы интенсивность окрашивания аналитической зоны в отсутствие аналита в пробе и ПрО для разных
антибиотиков в зависимости от положения зоны связывания на тест-полоске. Показано, что отличия ПрО для оптимального и неоптимального
положения могут составлять от 5 до 50 раз. С учетом характеристик различных пар иммунореагентов реализованы варианты мультиплексногоИХА для одновременного определения трех и четырех антибиотиков. ПрОв системах с оптимальным расположением зон связывания составили 0,4;
0,01; 4 и 1 нг/мл для линкомицина, хлорамфеникола, стрептомицина и тетрациклина соответственно. Продолжительность ИХА — 10 минут. Данные
параметры обеспечивают эффективность практического применения разработанных тест-систем.

pаздел 112СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ОНКОМАРКЕРА MIA
БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МИКРОАНАЛИЗОМ *BIOLUMINESCENT MICROANALYSISTO DETECT MIA TUMOR MARKER
Е. Е. Башмакова, А. Н. Кудрявцев, Л. А. Франк
Институт биофизики СО РАН, Красноярск
E. E. Bashmakova, A. N. Kudryavtsev, L. A. FrankIBP SB RAS, Krasnoyarsk
E-mail: bashmakovae@ibp.ruАннотация
Предложен вариант конкурентного биолюминесцентного иммуноанализа длявыявления онкомаркера MIA (белка с меланома-ингибирующей активностью). Получены высокоочищенные препараты рекомбинантного MIA и его гибрида с Са2+-регулируемым фотопротеином обелином и охарактеризованы как основные элементы
аналитической системы. Проведены успешные эксперименты по выявлению MIA
в модельных образцах разработанным иммуноанализом.

Abstract
A variant of competitive bioluminescent immunoassay for the detection of the tumor
marker MIA (melanoma inhibitory activity protein) has been proposed. The recombinant
MIA and the hybrid protein MIA–Ca2+regulated photoprotein obelin have been obtained
and characterized as key elements of the analytical system. Experiments to detect MIA inmodel samples have been successfully carried out, and the prospect of the proposed analytical approach has been shown.

Своевременная диагностика одного из самых агрессивных типов рака —меланомы кожи — является актуальной проблемой современной клинической онкологии. Белок с меланома-ингибирующей активностью MIA(Melanoma Inhibitory Activity protein) ассоциирован с прогрессированием
© Е. Е. Башмакова, А. Н. Кудрявцев, Л. А. Франк, 2020*Исследования выполнены при финансовой поддержке гранта президента РФдля молодых ученых — кандидатов наук МК-772.2020.4.

Биотехнология

13меланомы и выступает в роли раннего индикатора терапевтического ответа для оценки новых меланома-ингибирующих препаратов. В настоящее
время для определения уровня MIA в сыворотке или плазме крови существует ряд импортных иммуноферментных наборов сэндвич-типа на основе колориметрической детекции с использованием пероксидазы хренав качестве репортера. Ни один из них не предназначен для клинического
применения. Отечественных аналитических систем для определения уровня MIA в настоящее время нет. Низкое пороговое значение MIA в сыворотке (6,5–9,4 нг/мл) обуславливает высокие требования к чувствительности
анализа по его выявлению.
Ранее нами было показано, что биолюминесцентный анализ на основе Са2+-регулируемого фотопротеина обелина обеспечивает чувствительность, сравнимую с таковой радиоизотопного анализа.
В ходе работы были созданы различные варианты генетических конструкций, кодирующих рекомбинантный белок MIA, его гибридный вариант MIA-обелин, и получены высокоочищенные препараты этих белков экспрессией в E.
coli с последующей хроматографической очисткой. Химическим синтезом получен конъюгат фотопротеина обелина с антителами к MIA.
В модельном анализе сэндвич-типа показано, что молекулы полученного рекомбинантного MIA распознаются соответствующими антителамив условиях твердофазного иммуноанализа сэндвич-типа (см. рисунок, а),в том же диапазоне концентраций, что и коммерческий MIA, обладающий
биологической активностью.

Схема биолюминесцентного иммуноанализа белка MIA,где а — биолюминесцентный иммуноанализ MIA сэндвич-типа;б — конкурентный иммуноанализ MIA. Ab1, Ab2 — коммерческие антитела к MIA;
Ab2-OL — химический конъюгат обелина с антителами к MIA;
MIA-OL — гибридный белок MIA-обелин

Показано, что гибридный белок MIA-обелин обладает Са2+-зависимой
биолюминесцентной активностью обелина, близкой к таковой обелина ди-

14pаздел 1кого типа. Домен MIA в составе гибрида распознается соответствующими
антителами, что показано твердофазным иммуноанализом. Таким образом,оба полученных рекомбинантных белка могут конкурировать за связывание с анти-MIA антителами в разрабатываемом микроанализе.
Модельный анализ MIA конкурентного типа проводили по схеме,представленной на рисунке, б. Полученный биолюминесцентный сигнал был обратно пропорционален концентрации рекомбинантного MIA
в диапазоне от 2,5 нг/мл до 2500 нг/мл, что включает диагностически
важный интервал.

Биотехнология

15НОВЫЕ НАНОЧАСТИЦЫ PLGA С ХЛОРИНОМ Е6ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИNOVEL PLGA NANOPARTICLES WITH E6 CHLORINEFOR PHOTODYNAMIC THERAPY
В. А. Бегановская 1, М. Б. Сокол 2, Н. Г. Яббаров 2,3,
М. Р. Молляева 2, М. В. Фомичёва 2, И. С. Худяева 4,
Д. В. Белых 4, О. М. Старцева 5, Е. Д. Никольская 2,31Российский химико-технологический университет
им. Д. И. Менделеева, Москва
2Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
3Институт химической физики им. Н. Н. Семёнова РАН, Москва
4Институт химии Коми НЦ УрО РАН
5Сыктывкарский государственный университет
им. Питирима Сорокина
V.A. Beganovskaya1, M. B. Sokol 2, N. G. Yabbarov2,3,
M. R. Mollaeva 2, M. V. Fomicheva 2, I. S. Khudyaeva 4,
D. V. Belykh 4, O. M. Startseva 5, E. D. Nikolskaya 2,3
1

D. Mendeleev University, Moscow
2
IBCP RAS, Moscow
3
Semenov Institute of Chemical Physics RAS, Moscow
4
Institute of Chemistry Komi SC UB RAS
5Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education«Pitirim Sorokin Syktyvkar State University»
E-mail: elenanikolskaja@gmail.com
Аннотация
Фотодинамическая терапия применяется для лечения злокачественных новообразований с помощью фотосенсибилизаторов, в качестве которых часто применяют хлорин е6 (XL). Получение наночастиц PLGA, содержащих новые аналоги XL, позволит увеличить эффективность и уменьшить побочные эффекты терапии. Былиполучены наночастицы с производными XL, проведен анализ их свойств, лучшие
© В. А. Бегановская, М. Б. Сокол, Н. Г. Яббаров, М. Р. Молляева, М. В. Фомичёва,И. С. Худяева, Д. В. Белых, О. М. Старцева, Е. Д. Никольская, 2020pаздел 116наночастицы обладали диаметром 182 нм, доказали сохранение свойств субстанциии ее пролонгированное высвобождение за 120 ч.

Abstract
Photodynamic therapy is used to treat malignant neoplasms using photosensitizers,
which are often chlorin e6 (XL). Obtaining PLGA nanoparticles containing new analogs
of XL will increase the effectiveness and reduce the side effects of therapy. Nanoparticles
with XL derivatives were obtained, an analysis of their properties was carried out, the best
nanoparticles were 182 nm in diameter, and the preservation of the properties of the substance and its prolonged release in 120 h were proved.

Метод фотодинамической терапии основан на применении фотосенсибилизаторов (ФС) — веществ, чувствительных к свету, например хлорин
е6, и лазерного излучения с длинной волны, соответствующей максимуму
поглощения ФС. Однако ФС обладают рядом недостатков, таких как темновая токсичность, гидрофобность, низкая селективность действия. С целью увеличения эффективности действия и снижения побочных эффектов получают различные системы доставки ФС. Наночастицы на основе
сополимера молочной и гликолевой кислот (PLGA) широко применяютсяв этих целях, поскольку частицы с размером менее 250 нм способствуют
пассивному транспорту ФС в поврежденные органы, а контролируемое
высвобождение инкапсулированных ФС обеспечивает пролонгированный
эффект.
Были получены полимерные частицы с оригинальными производнымиXL (рис. 1) и определены их физико-химические характеристики (рис. 2).
Наночастицы были получены методом одинарного эмульгирования.
В качестве полимера использовали PLGA-COOH 50/50, стабилизатора
эмульсии — поливиниловый спирт. Соотношение органической фазык водной составило 1:10, как и ФС к полимеру.
Наилучшими характеристиками обладали наночастицы NP- XL2 (см. рис. 2). Средний диаметр частиц составил 182 нм, PDI 0,129, чтосоответствует критериям пассивного транспорта полученных частиц
вопухолевые ткани. По спектру NP-XL-2 можно сделать вывод о сохранении свойств субстанции XL-2 после включения в полимерную матрицу
(рис. 3, В). Изучение кинетики высвобождения XL-2 из наночастиц показало наличие двухфазного профиля релиза и высвобождение около 70 %субстанции за 120 ч (рис. 3, Г), что подтверждает наличие пролонгированного эффекта.

Биотехнология

17

Рис. 1. Структурные формулы оригинальных производных XLСредний
Частицы диаметр,нмNP-XL-1 252 ± 64
NP-XL-2 182 ± 79
NP-XL-3 245 ± 46
NP-XL-4 214 ± 52
NP-XL-5 224 ± 71
NP-XL-6 255 ± 68ДзетаИндекс
Общеепотенциал,полидиссодержание
мВперсности (PDI) ФС, масс. %–15,0 ± 2,94
0,117
0,21
–22,2 ± 3,75
0,129
4,63
0,139
3,18
–17,2 ± 3,12
0,131
3,81
–15,2 ± 4,33
0,247
3,53
–17,4 ± 3,61
–19,6 ± 2,86
0,213
2,45

Степень
включения
ФС, масс.%
5,04
87,7
64,1
82,9
80,6
72,3

Рис. 2. Физико-химические параметры полученных частиц

18pаздел 1

Рис. 3. Распределение размеров наночастиц NP-XL-2 по интенсивности
светорассеяния (А); распределение дзета-потенциала NP-XL-2 (Б);спектр наночастиц NP-XL-2 в ДМСО в сравнении с субстанцией XL-2 (В);кинетика высвобождения XL-2 из NP-XL-2 при рН 7,4 (Г)Таким образом, были получены наночастицы с новыми производными XL, были изучены их характеристики, наилучшая партия частиц NPXL-2 обладала заявленными характеристиками. Следующий этап работы
заключается в сравнении эффективности полученных частиц с субстанцией, поскольку применение наночастиц NP-XL-2 позволит увеличить биодоступность XL-2 и селективность действия in vitro и in vivo.

Биотехнология

19СМЕНЯЕМОСТЬ ТЕХНОЛОГИЙ
ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ ДНК *NEXT GENERATION SEQUENCING TECHNOLOGIES TURNOVER
Д. А. Белов 1, Д. В. Бочарова 1, Г. С. Лавров 1, Я. И. Алексеев 1,2, А. А. Евстрапов 1
1Институт аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург
2
ООО «Синтол», Москва

D. A. Belov 1, D. V. Bocharova 1, G. S. Lavrov 1, Ya. I. Alekseev1,2, A. A. Evstrapov 1
1

Institute for Analytical Instrumentation RAS, St. Petersburg
2
Syntol Ltd, Moscow
E-mail: onoff_10@mail.ruАннотацияВ работе выполнен анализ причин декоммерциализации трех технологий высокопроизводительного секвенирования ДНК: пиросеквенирования компании
454 Life Sciences, секвенирования SOLiD компании Life Technologies и одномолекулярного секвенирования компании Helicos BioSciences. Выявлены недостатки, повлиявшие на уход этих технологий с рынка.

Abstract
The work describes decommercialization of three high-throughput sequencing technologies: pyrosequencing from 454 Life Science, SOLiD sequencing from Life Technologies, and single-molecule sequencing from Helicos BioSciences. Disadvantages that influenced these technologies withdrawal from the market are revealed.

Объем мирового рынка высокопроизводительного секвенирования ДНК
в 2019 году, по оценкам Grand View Research, составил 9,78 млрд долл. США и,по прогнозам Data Bridge, будет расти в среднем на 19,6 % в год. Высокий рострынка вызывает либо развитие, либо исчезновение существующих технологий.
Цель работы — анализ причин декоммерциализации технологий высокопроизводительного секвенирования.
© Д. А. Белов, Д. В. Бочарова, Г. С. Лавров, Я. И. Алексеев, А. А. Евстрапов, 2020*Работа выполнена по Государственному заданию Министерства науки и высшего образования Российской Федерации № 075-01073-20-00 по теме № 0061-2019-0017.

pаздел 120

В настоящее время с рынка исчезло три коммерческие технологии.
Технология пиросеквенирования компании 454 Life Sciences, основаннаяна детектировании неорганического пирофосфата (PPi), обеспечивала
длинные прочтения, высокую скорость работы и была мало чувствительна к GC-составу, но в 2016 году производство и поддержка приборов былипрекращены. Вытеснение технологии пиросеквенирования технологией
полупроводникового секвенирования, предсказанное еще в 2013 году [1],вызвано следующими причинами:– существенные эксплуатационные затраты из-за высокой стоимости
реагентов;– значительный диаметр используемых микросфер;– высокие капитальные затраты из-за дорогостоящей оптической системы.
В 2005 году была разработана технология секвенирования SOLiD(Sequencing by Oligonucleotide Ligation and Detection), основанная на циклическом лигировании коротких олигонуклеотидов, меченых флуорофорами.
Преимущество технологии заключалось в высокой точности (до 99,99 %)и производительности (30 млрд п.н.).
Основные недостатки технологии: короткая длина прочтений (50–75 п.н.), длительность анализа (7–14 дней). После объявления компани- ейLife Technologies в 2013 году об окончании развития, на смену технологии
SOLiD пришла технология секвенирования путем синтеза с детекцией сигнала флуоресценции от компаний Illumina.
Технология одномолекулярного секвенирования true Single Molecule
Sequencing (tSMS)™ основана на детектировании флуоресцентно-меченных нуклеотидов. Небольшая длина чтения до 50 п. н., большое количество
ошибок (3–5 %), а также вывод на рынок технологии одномолекулярного
секвенирования компании Pacific Biosciences в 2010 году привели к оттоку
покупателей. В конце 2012 года компания Helicos Biosciences была признана
банкротом.
Все три приведенные технологии имели свои преимущества перед конкурентами, однако их недостатки наибольшим образом отразились на важнейших показателях конкурентного рынка — стоимости и времени проведения анализа.
Литература
1. Зубов В. В. Секвенирование по Ротбергу (потенциал полупроводникового
секвенирования) // Биомика. 2013. Т. 5, № 12. С. 48–61.

Биотехнология

21ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ НОВЫХ МАТЕРИАЛОВС РЕГУЛИРУЕМЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ
СМЕШЕННОГО ОКСИДА ЖЕЛЕЗА И ЕГО КОМПОЗИТОВ *PREPARATION AND RESEARCH OF NEW MATERIALSWITH CONTROLLED RELEASE OF BIOLOGICALLY ACTIVECOMPOUNDS BASED ON MIXED IRON OXIDE AND ITS COMPOSITES
Е. Н. Бобрикова 1, Е. В. Дмитриенко 1,2
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
E. N. Bobrikova 1, E. V. Dmitrienko 1,2
1

ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University

2

E-mail: elena.dmitrienko@niboch.nsc.ruАннотацияВ настоящее время магнитным наночастицам уделяются особое внимание в области биомедицины, в частности, для целевых систем доставки биологически активных соединений (БАС). В данной работе получены и охарактеризованы 12 типов наноматериалов для доставки таких БАС, как противоопухолевые препараты, а также
короткие синтетические олигонуклеотиды.

Abstract
At present, special attention is paid to magnetic nanoparticles in the biomedical field,
in particular, for targeted delivery systems of biologically active compounds (BAS). In thiswork, 12 types of nanomaterials were obtained and characterized for the delivery of such
BAS as antitumor drugs and short synthetic oligonucleotides.

Благодаря сочетанию магнитных свойств с нанометровой шкалой, магнитные НЧ являются привлекательным материалом для биомедицинских
© Е. Н. Бобрикова, Е. В. Дмитриенко, 2020*Работа выполнена при поддержке АААА-А17-117020210021-7 и РНФ 18-14-00357.

22pаздел 1и технологических применений. Возможность направленного изменения
формы и размера, магнитных НЧ позволяет получать наноматериалы, сопоставимые с биологическими объектами, которые могут легко взаимодействовать и легко включаться в процессы, протекающие в живых системах. Действительно, диапазон размеров МНЧ очень разнообразен и может
быть близок к размерам вирусов (20–450 нм), белков (5–50 нм) и клеток
(10–100 мкм) в зависимости от методов синтеза и предполагаемой стимуляции клеточного поглощения. Таким образом, целью данной работы является получение и исследование наноматериалов на основе Fe 3O4 и его композитов в качестве компонентов систем доставки биологически активных
веществ.
В ходе работы были получены и исследованы 12 типов наноматериалов.
Синтез магнитных наночастиц проводили с помощью метода соосаждения солей, варьируя условия и состав реакционной среды путем добавления детергентов (tween-20, tween-80) и поверхностно активных веществ
(полиэтиленгликоль, олеиновая кислота). Был также предложен вариант
функционализации поверхности МНЧ с целью получения композитных
магнитных наноматериалов и нанокапсул на основе нейлона-6. Полученные МНЧ обладали различной морфологией с размерами от 16 до 250 нм.
При исследовании цитотоксичности полученных наноматериалов показано, что все типы МНЧ, кроме III и IV, не образуют АФК и нетоксичны дляклеток линии А549. Изучена эффективность взаимодействия полученных
наноматериалов с биологически активными соединениями, такими каксинтетические олигонуклеотиды и противоопухолевый антибиотик — доксорубицин (DOX). Эффективность взаимодействия МНЧ-олигонуклеотид
обладает незначительной зависимостью от нуклеотидной последовательности, максимальная емкость МНЧ характерна для олиготимидилатной
последовательности и достигает (4,8 ± 0,2) × 10 – 8 моль/мг. Максимальная
емкость для противоопухолевого препарата наблюдается для нанокапсул
943 ± 15 мкг/мг DOX и композитных МНЧ 868 ± 37 мкг/мг DOX. В ходеэкспериментов установлено, что эффективность высвобождения доксорубицина является рН-зависимой. Показана противоопухолевая активность
конструкции НЧ-DOX на живых системах. На лабораторных животных
продемонстрировано отсутствие токсичности МНЧ и доказана эффективность конструкции МНЧ-DOX, превосходящая свободный препарат попротивоопухолевой активности.

Биотехнология

23ОЦЕНКА ИММУННОГО ОТВЕТА НА ДНК-КОНСТРУКЦИИ
ПРОТИВ АКТУАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙEVALUATION OF IMMUNE RESPONSE TO DNA VACCINES AGAINSTACTUAL VIRAL INFECTIONS.
М. Б. Боргоякова, Л. И. Карпенко, А. П. Рудомётов, Д. В. Шаньшин,С. В. Беленькая, А. А. Исаева, В. С. Несмеянова, Н. В. Волкова,Д. Н. Щербаков, Е. В. Старостина, А. В. Зайковская,Н. В. Данильченко, Л. А. Орлова, А. А. Ильичёв
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
M. B. Borgoyakova, L. I. Karpenko, A. P. Rudometov,
D. V. Shanshin, S. V. Belenkaya, A. A. Isaeva, V. S. Nesmeyanova,
N. V. Volkova, D. N. Shcherbakov, E. V. Starostina, A. V. Zaikovskaya,
N. V. Danilchenko, L. A. Orlova, A. A. Ilyichev
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: borgoyakova_mb@vector.nsc.ruАннотация
Были созданы ДНК-конструкции, содержащие гены белка S и его домена RBDвируса SARS-CoV-2. Иммунизация мышей ДНК-вакцинами вызвала формирование
антител, специфично распознающих вирусные белки S и RBD и обладающих высокой нейтрализующей активностью. Также было показано, что у мышей в результате
иммунизации формируется специфический Т-клеточный ответ.

AbstractDNA-based vaccines were engineered containing genes of SARS-CoV-2 S protein andits receptor-binding domain (RBD). Following immunization of mice antigen-specific antibodies with high neutralization activity and T-cell response were measured.

События 2020 года в области мирового здравоохранения показали, насколько важно иметь платформы, на основе которых можно быстро создать
© М. Б. Боргоякова, Л. И. Карпенко, А. П. Рудомётов, Д. В. Шаньшин, С. В. Беленькая, А. А. Исаева, В. С. Несмеянова, Н. В. Волкова, Д. Н. Щербаков, Е. В. Старостина, А. В. Зайковская, Н. В. Данильченко, Л. А. Орлова, А. А. Ильичёв, 2020

24pаздел 1безопасную вакцину на вновь возникший вирус. Такими платформами, безусловно, являются стратегии создания иммуногенных конструкций на основе нуклеиновых кислот. Так, можно получить готовые прототипы вакцинуже через несколько недель после прочтения вирусного генома. ДНК-конструкты создаются de novo, не имея в своей основе инфекционных агентов,что повышает их безопасность и возможность использования для групп риска: пожилых, детей и людей с ослабленным иммунитетом.
Целью данного исследования являлась оценка иммунного ответа на введение ДНК-вакцин, содержащих полный ген белка S и его рецептор-связывающего домена RBD вируса SARS-CoV-2, мышам BALB/c.
Белок S является поверхностным гликопротеином, отвечающим за связывание и проникновение вируса в клетки-мишени. RBD — рецептор-связывающий домен, содержащий большое количество эпитопов нейтрализующих антител. Были получены две ДНК-вакцины: pVAX-S-PG и pVAXRBD-PG, кодирующие белки S и RBD. С целью повышения иммуногенности
конструкций их вводили животным в оболочке конъюгата полиглюкина соспермидином. Также была сформирована группа животных, которой одновременно вводили pVAX-RBD-PG и белок RBD. Контрольной группе вводили физраствор.

Рис. 1. Схема иммунизации и забора крови у мышей: введение вакцин
на 0,13 и 29 дни, забор крови на 19 и 43 дниДинамику гуморального иммунного ответа исследовали с помощью
ИФА. Анализ показал существенное усиление иммунного ответа в группах,иммунизированных pVAX-RBD-PG (в сочетании с белком и без), через двенедели после третьей иммунизации по сравнению с более ранними показателями.
У групп, иммунизированных вакциной pVAX-RBD-PG, были обнаружены высокие титры специфических антител, что было показано

Биотехнология

25

в ИФА. При этом наиболее высокие титры показаны в группе, иммунизированной комбинированной вакциной pVAX-RBD-PG+белок RBD(1:113400 и 1:170100 на RBD и S-белке, соответственно) (рис. 2). Сывороткииз этой группы также с гораздо более высокой эффективностью нейтрализовали вирус SARS CoV-2 штамм nCoV/Victoria/1/2020 в реакции вирус-нейтрализации.
Специфический Т-клеточный ответ оценивали с помощью метода
ELISpot. Было показано, что спленоциты мышей из групп, вакцинированных pVAX-RBD-PG+белок RBD и pVAX-S-PG, гораздо сильней ответили набелковую стимуляцию выбросом IFNγ, чем контрольная группа.

A

БРис. 2. Специфичность иммунного ответа на 43 день, показанная в ИФА:
А — RBD в качестве антигена; Б — белок SТаким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, чтосозданные конструкции могут быть основой для будущей вакцины против
COVID-19.

pаздел 126ВЫЯВЛЕНИЕ ПРОТЯЖЕННЫХ РНК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКОГО КНИ-БИОСЕНСОРА *DETECTION OF EXTENDED RNAs USING AN ELECTROCHEMICALSOI FET BIOSENSOR
А. Е. Булгакова, Е. В. Дмитриенко
Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
Новосибирский государственный университет
A. E. Bulgakova, E. V. Dmitrienko
ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University
E-mail: elena.dmitrienko@niboch.nsc.ruАннотация
Разработан электрохимический КНИ-биосенсор для выявления мРНК белка
тропонина и патогенных бактериальных рРНК. Исследованы незаряженные аналоги НК в качестве специфических зондов, продемонстрировано специфичное выявление НК-маркеров с чувствительностью 10–19 М.

Abstract
An electrochemical SOI FET biosensor has been developed to detect mRNA of cardiac troponin and pathogenic bacterial rRNAs. Uncharged nucleic acid analogs were studied as specific probes. Specific identification of nucleic acid markers with high sensitivity(10–19 M) was demonstrated.

Разработка сверхчувствительных биосенсорных систем — актуальное
направление биотехнологии в настоящее время из-за возможности быстрого, специфичного и количественного определения биоаналитов. Благодаря
выверенному процессу изготовления, высокому соотношению сигнал/шуми реакции в реальном времени, электрохимические биосенсоры являются
золотым стандартом для повседневного применения. Области применения
© А. Е. Булгакова, Е. В. Дмитриенко, 2020*Работа выполнена при поддержке АААА-А17-117020210021-7 и РНФ 18-14-00357.

Биотехнология

27биосенсоров очень широки: анализ контаминации пищевых продуктов,контроль окружающей среды, устройства мониторинга состояния больного, диагностикумы для обнаружения биологически значимых молекул. Выявление с помощью биосенсорных устройств таких биомаркеров, как ДНКи РНК, позволяет получить ценную информацию для ранней диагностики,мониторинга различных типов опухолей и генетических заболеваний, особенно когда это невозможно осуществить на месте, используя традиционные методы, в силу длительного выделения и дорогостоящего лабораторного оборудования, которое трудно транспортировать и использовать в местах оказания медицинской помощи.
В качестве высокочувствительного электрохимического биосенсорного
устройства может выступать микро- и/или нанопроволочный транзисторсо структурой «кремний на изоляторе» — КНИ-биосенсор. Принцип детекции биомолекул с использованием данного типа биосенсора основан натом, что заряды биомолекул, адсорбированных на поверхности нанопроволоки, индуцируют образование компенсирующих зарядов в наноразмерной
структуре. В результате возникает ток, который течет между двумя электродами, фланкирующими нанопроволоки. Таким образом, связывание биомолекул в исследуемом образце на поверхности сенсорного элемента приводитк изменению его поверхностного потенциала и, как следствие, к изменению
силы тока, проходящего через сенсорный элемент. Преимущество таких
биосенсоров заключается в label-free детекции, высокой чувствительностии малом количестве образца при анализе.
В рамках данной работы на синтетических модельных системах исследована возможность выявления мРНК белка тропонина, ассоциированногос гибелью сердечной мышцы при инфаркте миокарда, и патогенных бактериальных рРНК с применением КНИ-биосенсора. В ходе работы был проведен сравнительный анализ эффективности и селективности гетерофазной
гибридизации нативных олигонуклеотидов и незаряженных производных
НК –фосфорилгуанидиновых аналогов олигонуклеотидов (ФГО) в качестве
специфических зондов, иммобилизованных на поверхность сенсора. Незаряженные аналоги НК, в том числе ФГО, перспективны как зонды при разработке биосенсорных устройств, в которых формирование специфического сигнала ассоциировано с изменением локального заряда вблизи сенсорной поверхности, к которым относится КНИ-биосенсоры. В рамках предложенных модельных систем продемонстрирована возможность образования
специфичного гибридизационного комплекса мишень/комплементарный
зонд. Показана высокая чувствительность анализа на аттомолярном уровне,что демонстрирует перспективы КНИ-биосенсора в экспресс-диагностике.

pаздел 128ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОГО ШТАММА
МИКРОВОДОРОСЛЕЙ CHLORELLA SOROKINIANA AM-02 *ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF A NEW STRAIN
OF MICROALGAE CHLORELLA SOROKINIANA AM-02
С. С. Булынина, Э. Э. Зиганшина, Р. Ф. Ахметова, А. М. Зиганшин
Казанский (Приволжский) федеральный университет
S. S. Bulynina, E. E. Ziganshina, R. F. Akhmetova, A. M. Ziganshin
Kazan (Volga region) Federal University
E-mail: SvSBulynina@stud.kpfu.ruАннотацияВ настоящее время в мире резко возрос интерес к биотехнологиям на основе
разнообразных микроводорослей как с целью получения ценных биопродуктов изних, так и с целью создания производств, ориентированных на переработку разнообразной биомассы (в том числе и отходов производства). Так, впервые на основе
результатов оптимальных параметров роста нового штамма Chlorella sorokiniana
АМ-02 было исследовано влияние дополнительных источников азота и серы напродуктивность микроводорослей. Полученные результаты позволяют рассмотреть
данный штамм зеленых микроводорослей в качестве перспективного агента биоремедиации водных экосистем, загрязненных высокими уровнями нитратов, фосфатов и сульфатов.

Abstract
At present, the world has increased interest in biotechnologies based on a variety of
microalgae, both with the aim of obtaining valuable bioproducts from them, as well aswith the aim of creating industries focused on processing a variety of substrates (including
wastes). Thus, based on the results of the optimal growth parameters of the strain Chlorellasorokiniana AM-02, the effect of additional sources of nitrogen and sulfur on the productivity of microalgae was studied for the first time. The results allow us to consider this strainof green microalgae as a promising agent for the bioremediation of aquatic ecosystems
contaminated with high levels of nitrates, phosphates, and sulfates.
© С. С. Булынина, Э. Э. Зиганшина, Р. Ф. Ахметова, А. М. Зиганшин, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке «Российского фонда фундаментальных исследований» в рамках научного проекта № 18‐34‐20002.

Биотехнология

29Представители разнообразной группы фотосинтезирующих микроорганизмов обладают высоким потенциалом для крупномасштабного культивирования с целью производства широкого спектра ценной продукции (в томчисле пигментов, антиоксидантов, белков, липидов), однако информациидля проведения успешных коммерческих испытаний все еще недостаточно.
Эффективность таких биотехнологий в первую очередь зависит от особенностей метаболизма вида, а также от параметров, влияющих на его рости продуктивность.
Объектом исследования была культура зеленых микроводорослей Chlorella sorokiniana AM-02, выделенная в 2018 году из водоема города Казани
(Россия). С целью подбора оптимального состава питательной среды дляэффективного культивирования штамма AM-02 инокулят микроводорослей культивировали в фотобиореакторе объемом 3,6 л (Labfors 4 Lux, Infors
HT) с контролем основных параметров. Образцы для контроля роста и продуктивности микроводорослей (в том числе параметры роста, содержание
пигментов в клетках, а также потребление основных компонентов культуральной среды) отбирали после каждого светового и темнового периода.
Эксперименты по подбору оптимального состава среды позволили заключить, что увеличение концентрации нитрата натрия от 180 до 720 мг/лположительно отразилось на количестве клеток и сухом весе микроводорослей. В заданных условиях штамм АМ-02 активно утилизировал нитрати сульфат-ионы (100%-я эффективность удаления), а также значительно
снижал концентрацию фосфат-ионов в среде культивирования. Отдельно
стоит отметить, что добавление дополнительного источника азота в среду
культивирования стимулировало синтез пигментов. Таким образом, показатели роста и продуктивности штамма C. sorokiniana AM-02 выносят егов ранг перспективных для производства биомассы, пигментов и биоремедиации водных сред, загрязненных высокими уровнями азота, фосфораи серы.

pаздел 130ЭКСПРЕССИОННЫЕ СИСТЕМЫДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕРМИНАЛЬНОЙ
ДЕЗОКСИНУКЛЕОТИДИЛТРАНСФЕРАЗЫ BOS BOVIS
EXPRESSION SYSTEMS FOR BOS BOVIS TERMINALDEOXYNUCLEOTIDILTRANSFERASE BIOSYNTHESIS
Ю. П. Буренкова, В. В. Щур, С. А. Усанов, А. В. Янцевич
Институт биоорганической химии НАН Беларуси, Минск, Беларусь
Y. P. Burenkova, V. V. Shchur, S. A. Usanov, A. V. YantsevichInstitute of Biophysics and Cell Engineering,
National Academy of Sciences of Belarus, Belarus, Minsk
E-mail: ms.yuliyab@mail.ruАннотация
Синтезирована нуклеотидная последовательность гена терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (ТдТ) Bos bovis, предназначенная для направленной
эволюции фермента с целью получения термостабильных форм с измененной субстратной специфичностью. Созданы плазмидные вектора для гетерологической экспрессии ТдТ (pCW-TdT и pET20b-TdT) в клетках E.coli штаммов DH5α и BL21(DE3).

Abstract
The Bos bovis terminal deoxynucleotidyltransferase (TDT) gene was synthesized, intended for directed enzyme evolution in order to obtain thermostable forms with alteredsubstrate specificity. Plasmid vectors for heterologous expression of TDT (pCW-TdT,
pET20b-TdT) in E. coli cells of DH5α and BL21 (DE3) strains have been created.

Введение
ТдТ, открытая около 60 лет назад, остается одним из мало изученных
ферментов, катализирующих синтез ДНК. Фермент способен включать
случайные дНТФ в цепь ДНК и создавать геномный материал de novo [1].
ТдТ быка — один из самых активных ферментов. Однако наиболее изучены ТдТ человека и мыши [1]. Так, в PDB 39 записей для структуры ТдТ© Ю. П. Буренкова, В. В. Щур, С. А. Усанов, А. В. Янцевич, 2020Биотехнология

31мыши и ни одной для ТдТ быка (идентичность 81 %). Это же касается систем гетерологической экспресии [1, 2].
Целью работы было создание систем экспрессии ТдТ в клетках E. coli.
Осуществлен синтез гена, пригодного для получения транкированных ТдТи мутагенеза. Получение стабильных форм ТдТ с измененной субстратной
специфичностью открывает возможности разработки метода направленного
энзиматического de novo синтеза одноцепочечной ДНК в водных средах [3].
Материалы и методы
Последовательность гена ТдТ быка (NP_803461, 1560 п.о.) оптимизирована для экспрессии в E. coli. Фосфорамидитным методом синтезировано
42 олигонуклеотида с T m перекрытий 72 °С (ДНК-синтезатор H32, K&A,
100 наномолярный масштаб, CPG 1000 Å). Депротекция и отщепление —34 % NH3 водный (16 ч, 55 °C), ТФЭ-очистка — Supelclean ENVI С18 (Supelco).
Проведена ПЦР-сборка гена (термоциклер Терцик, ДНК-технологии)с клонированием в вектор pJET1.2/blunt (ThermoScientific). Добавлены
сайты рестрикции к 5’(Nde I) и 3’(HindIII) концам, 6His-метка на N-конец.
Синтетический ген клонирован из промежуточного вектора в вектора экспрессии pET20b и pCWori по сайтам Nde I и HindIII. Секвенировали на
3500xL Genetic Analyzer, AB.
Штаммы BL21(DE3) и DH5α E. coli трансформировали полученными
плазмидами. Индивидуальные колонии с рекомбинантной плазмидой культивировали в среде LB (100 мкг/мл Amp) при 37 °C и 220 об/мин до оптической плотности D600 = 0,6. Индуцировали синтез добавлением IPTG (1 мМ).
Экспрессию белка проводили 13 часов при 20 °C и 180 об/мин. Фермент былочищен металл-хелатной хроматографией.
ВыводыВ ходе работы получен ген ТдТ, оптимизированный для направленной инженерии фермента. Созданы вектора для гетерологической экспрессии ТдТв клетках E. coli штаммов DH5α и BL21(DE3): pCW-TdT (tac-промотор) и для
BL21(DE3) E. coli — pET20b-TdT (T7-промотор). Направленная инженерияТдТ позволит лучше понять механизмы биосинтеза ДНК и сделать шаг к разработке методов ферментативного de novo синтеза ДНК в водных средах.
Литература
1. Curr. Opin. Struct. Biol. 53, 22–31. 2018.
2. Biochem. Insights 3, 41–46. 2010.
3. Nat. Biotechnol. 36, 645–650. 2018.

pаздел 132СПЕЦИФИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И КОНТРАСТНЫЕ СВОЙСТВА
МАГНИТНЫХ НАНОЧАСТИЦ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ
СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ
SPECIFIC ACTIVITY AND CONTRAST PROPERTIES OF MAGNETIC
NANOPARTICLES MODIFIED WITH SERUM ALBUMIN
А. В. Бычкова 1, М. Н. Якунина 2, М. В. Лопухова 1,
В. С. Покровский 2,3, Д. С. Хачатрян 412Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
3Российский университет дружбы народов, Москва
4НИЦ «Курчатовский институт», Москва
A. V. Bychkova1, M. N. Yakunina 2,
M. V. Lopukhova 1, V. S. Pokrovsky 2,3, D. S. Khachatryan4
1

2

IBCP RAS, Moscow
N. N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Moscow
3
RUDN University, Moscow
4
National Research Centre «Kurchatov Institute», Moscow
E-mail: anna.v.bychkova@gmail.com

АннотацияНа поверхности магнитных наночастиц закреплено покрытие из сывороточного
альбумина. Полученные частицы со средним диаметром 35 нм стабильны в золе. Показано двухкратное ингибирование роста опухоли при в/а введении крысам с РС-1,без побочных реакций, и стойкое выраженное контрастирование сосудов опухолипри КТ-исследовании.

Abstract
The coating of human serum albumin has been crosslinked on the surface of magnetic
nanoparticles. The synthesized particles (~35 nm) stable in sol have been intraarteriallyadministered in tumor (hepatocellular carcinoma) implanted to rats. Long-term (within
14 days of the experiment) presence of the particles in the tumor vascular bed and inhibition of the tumor growth have been detected without side effects.
© А. В. Бычкова, М. Н. Якунина, М. В. Лопухова, В. С. Покровский, Д. С. Хачатурян, 2020Биотехнология

33Разработка наносистем на основе магнитных наночастиц для терапиии диагностики опухолей является одним из наиболее активно развиваемых
направлений современной нанобиотехнологии. Целью нашей работы былополучение наносистем с диаметрами от 20 до 50 нм на основе магнитных
наночастиц (МНЧ) магнетита с устойчивым ковалентно сшитым покрытием из человеческого сывороточного альбумина (ЧСА), проведение оценки
переносимости, специфической активности и контрастирующих свойств
наносистем при в/а введении.
Устойчивые покрытия из ЧСА на МНЧ получали путем свободнорадикального сшивания адсорбированных молекул ЧСА на поверхности МНЧпо реакции Фентона.
Клинические исследования выполнены на 8-недельных половозрелых
крысах–самцах (n = 21) массой тела 80–100 г. Трансплантацию РС-1 выполняли в заднюю группу мышц бедра (бассейн кровоснабжения бедренной
артерии, a. femoralis) по 0,25 мл 20%-й взвеси опухолевой ткани в растворе Хенкса. Экспериментальной группе (n = 9) с развившимся опухолевом
узлом в/а однократно вводили 0,3 мл (60 мкг МНЧ). Контрольной группе
(n = 12) в/а вводили физиологический раствор.
Оценку контрастирования опухоли проводили двукратно через 30 минут и 13 дней. КТ-исследование опухолевого узла показало выраженное
контрастирование сосудистого русла опухоли с плотностью сосудов от–47 до –80 HU при плотности ткани опухоли от –24 до –26 HU.
Ингибирование роста опухоли определяли на основании индекса прироста в группах (ИПО = Vt/V0) на 4, 7, 10, 13, 16 и 20-е сутки после начала
лечения (Vt), для чего определяли Vcp опухолей перед началом и на сутки
наблюдения. В группе контроля (V0 = 6513,4 ± 52,2мм3) на 21-е сутки роста
после трансплантации на 41-е сутки (окончание наблюдения) Vcp 13-кратно увеличился до Vt20 = 76121,3 ± 3275,4 мм3. ИПО в этот период составил
Vt4/V0 = 1,39 ± 0,34, Vt7/V0 = 2,5 ± 0,9, Vt10/V0 = 4,9 ± 2,0, Vt13/V0 = 7,5 ± 3,2,
Vt16/V0 = 9,9 ± 4,2, Vt20/V0 = 12,9 ± 5,6. В группах эксперимента отмечено двукратное торможение роста опухоли. Опухоли с V0 = 6315,9 ± 2418,56 мм3в начале лечения на 41-й день наблюдения выросли до Vt20 = 39416,4 ±± 35808,5 мм3. ИПО в этот период составил Vt4/V0 = 1,3 ± 0,2, Vt7/V0 = 1,3 ±± 0,15, Vt10/V0 = = 1,7 ± 1,3, Vt13/V0 = 3,1 ± 2,9, Vt16/V0 = 4,5 ± 4,3, Vt20/V0 = 6,4 ±± 5,4. Локальных и системных токсических эффектов не отмечали.

pаздел 134РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ И ТЕХНОЛОГИИ
БИОДЕГРАДИРУЕМОЙ УПАКОВКИ «EAT PACK» *DEVELOPMENT OF A RECIPE AND TECHNOLOGY
OF BIODEGRADABLE PACKAGING “EAT PACK”
А. В. Васильева
Алтайский государственный технический университет
им. И. И. Ползунова, Барнаул
A. V. Vasileva
AltSTU, Barnaul
E-mail: vasilevaann97@yandex.ruАннотацияНа сегодняшний день наиболее остро стоит проблема потребления и переработки упаковочных полимерных материалов, разрабатываются биопластики, полностью распадающиеся на H2O и CO2, не наносящие вред окружающей среде, полученные из натурального возобновляемого сырья. В пищевой промышленности
наметился тренд на создание «съедобных» упаковок.

Abstract
Today, the most acute problem is the consumption and processing of packaging. At the
moment, bioplastics (completely decomposing into H2O and CO2 that are not harmful tothe environment), obtained from natural renewable raw materials, are being developed,
and a trend towards the creation of “edible” packaging is outlined in the packaging materials of the food industry.

Согласно «Комплексной программе развития биотехнологий в Российской Федерации на период до 2020 года», производство биодеградируемых
полимеров является важным направлением программы в условиях ужесточающихся требований к защите окружающей среды и роста стоимости ути© А. В. Васильева, 2020*Работа выполнена в рамках госзадания Минобрнауки РФ (мнемокод 0611-2020013; номер темы FZMM-2020-0013, ГЗ № 075-00316-20-01).

Биотехнология

35лизации отходов. В этой связи целью нашего исследования было создание
биодеградируемой «съедобной» упаковки.
На начальном этапе реализовано решение создания упаковочных материалов из картофельного крахмала. Использовалось свойство молекулы
крахмала — амилопектина — рваться и переплетаться под воздействием
температуры и агрессивных сред, создавая аналог пластика.
Технология состоит из следующих этапов: сначала из сырья получают
клейстер, где для интенсификации процесса гидролиза крахмала используется уксусная кислота. В качестве пластификатора добавляется глицерин.
Затем полученную вязкую массу формуют процессом литья (полученная
масса выливается на форму) и сушат до необходимой влажности.
Массу сушили двумя способами: при температуре окружающей среды (23 ± 2) °С и в конвекционной печи (60–70 °С) на формах. Первый способ сушки был признан нецелесообразным из-за большой длительности
(4–6 дней) и повышенного риска микробиологической обсемененности.
После сушки конвекционным способом высушенная пленка-пласт былатонкой, прозрачной, легко ломалась и крошилась.
Для нивелирования этого недостатка было принято решение увеличить
толщину и влажность готовой пленки путем замены части крахмала пюрированной фруктовой составляющей из банана. Несомненным преимуществом банана как сырья для переработки является высокое содержание
устойчивых к высокой температуре микронутриентов, низкая себестоимость и повсеместная доступность. Кроме того, в связи с быстрой потерей
товарных достоинств бананов в процессе хранения, возникает проблема
утилизации или переработки дефектных плодов, которая частично решается в рассматриваемом исследовании.
Для сушки бананово-крахмальной массы использовался способ конвекционной сушки в печи при температуре до 70 °С в течение 6–7 часов. Притаком способе на поверхности образовывалась легкая сухая корка, препятствуя дальнейшему выходу влаги, в результате материал приклеивалсяк форме, из-за чего рвался при последующем снятии.
Для устранения проблемы использовался диэлектрический (микроволновый) нагрев. Поскольку выдавленную влагу не требуется испарять, обезвоживание за счет выдавливания происходит практически без затрат энергии, что значительно повышает эффективность сушки. После интенсивного
нагрева в процессе сушки масса на формах остывает и затем легко снимается.
Таким образом, удалось получить продукт с низкой влажностью, обеспечивающей длительное хранение, с хорошей пластичностью, не размокающий при упаковывании в нее продукции в течение 10–12 ч.

pаздел 136РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ГЕЛЯ С АРТИЛИЗИНОМДЛЯ ТЕРАПИИ РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ
DEVELOPMENT OF THE COMPOSITION AND TECHNOLOGY
OF ARTILISIN GEL FOR WOUND INFECTION THERAPY
А. М. Воробьёв 1, М. Н. Анурова 1, А. В. Алёшкин 1, В. А. Гущин 2,
Д. В. Васина 2, Н. П. Антонова 2, Е. Р. Мехтиев 1
1Московский научно-исследовательский институт эпидемиологиии микробиологии им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора
2ФГБУ «НИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва
A. M. Vorobev 1, M. N. Anurova 1, A. V. Aleshkin 1, V. A. Gushchin 2,
D. V. Vasina 2, N. P. Antonova 2, E. R. Mekhtiev 1
1

G. N. Gabrichevsky Moscow Research Institutefor Epidemiology and Microbiology, Moscow
2
FSBI «National Research Center for Epidemiology and Microbiology
named after the honorary academician N. F. Gamaleya», Moscow
E-mail: vorobjew.alex2010@yandex.ruАннотация
Разработан гель на основе гидроксиэтилцеллюлозы для терапии раневых инфекций, содержащий в качестве действующего вещества рекомбинантный модифицированный эндолизин (артилизин) LysECD7-SMAP. Доказана эффективность
препарата в опыте на животных.

Abstract
A gel based on hydroxyethylcellulose for the treatment of wound infections has beendeveloped, containing the recombinant modified endolysin (artilisin) LysECD7-SMAP asan active ingredient. The effectiveness of the drug has been proven in animal experiments.

Эндолизины — ферменты бактериофагов, которые синтезируютсяв конце литического цикла вируса и разрушают клеточную стенку бактерии, способствуя высвобождению зрелых вирусных частиц. По сравнению
© А. М. Воробьёв, М. Н. Анурова, А. В. Алёшкин, В. А. Гущин, Д. В. Васина,Н. П. Антонова, Е. Р. Мехтиев, 2020Биотехнология

37

с бактериофагами, эндолизины обладают более широким спектром действия и более простой технологией получения, что делает их перспективными кандидатами для разработки бактерицидных препаратов на их основе.
Объектом исследования является рекомбинантный модифицированный эндолизин (артилизин) LysECD7-SMAP, полученный биотехнологическим методом с использованием штамма-продуцента, несущего плазмиду,кодирующую белок.
В рамках данной работы был определен спектр его бактерицидной активности, разработан препарат в форме геля для применения на раневой
поверхности и доказаны его эффективность и безопасность.
Показан более широкий спектр бактерицидной активности артилизинапо сравнению с бактериофагом ECD7. В то время как бактериофаг проявляет активность в отношении Escherichia coli, Shigella sonne и Shigella flexner,артилизин был активен в отношении Listeria monocytogenes (89,6 % убитых
клеток), Staphylococcus aureus (47,25 % убитых клеток), Acinetobacter baumannii (99,8 % убитых клеток), E. coli (91 % убитых клеток), Enterobacter spp.
(57,8 % убитых клеток) и Pseudomonas aeruginosa (75,4 % убитых клеток).
На основе артилизина разработан гель, содержащий в качестве вспомогательных веществ гидроксиэтилцеллюлозу и полиэтиленгликоль. Выбранные полимеры обладают формообразующими, биоадгезивными и пенетрационными свойствами. Подобраны оптимальные концентрации вспомогательных веществ, определены технологические показатели и сроки хранения. Доказано, что препарат сохраняет свои свойства в течение трех месяцев при температуре хранения 4 ± 2 °С и влажности 60 ± 5 %. Исследование
стабильности в процессе хранения продолжается.
Проведена валидация методик определения показателей качества (подлинность и специфическая активность).
Доказана эффективность препарата при испытании на животных, а также отсутствие токсического действия и иммунного ответа при применениина раневой поверхности.
Полученные данные позволяют судить о перспективности данного направления борьбы с бактериальными инфекциями на фоне возрастающей
антибиотикорезистентности и открывают новые возможности в создании
эффективных и безопасных бактерицидных препаратов.

pаздел 138ФОТОЗАВИСИМОЕ РАЗРУШЕНИЕ ХЛОРОФИЛЛА АВ ПРИСУТСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ АСТАКСАНТИНА,ВЫДЕЛЕННОГО ИЗ КЛЕТОК HAEMATOCOCCUS PLUVIALIS *PHOTO-DEPENDENT DEGRADATION OF CHLOROPHYLL A
IN THE PRESENCE OF VARIOUS FORMS OF ASTAXANTHIN ISOLATEDFROM HAEMATOCOCCUS PLUVIALIS CELLS
Е. В. Вязов 1, Р.Г. Гончарик 1, Е. А. Куликов 2,
С. В. Алешин 2, А. А. Селищева ,31Институт биофизики и клеточной
инженерии НАН Беларуси, Минск, Беларусь
2Национальный исследовательский центр
«Курчатовский институт», Москва
3Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова
Y. V. Viazau 1, R. G. Goncharik 1, Е. А. Kulikov 2,
S. V. Aleshin 2, А. А. Selishcheva 2,3
1

Institute of Biophysics and Cell Engineering,
National Academy of Sciences of Belarus, Belarus, Minsk
2
NRC Kurchatov Institute, Moscow
3
M. V. Lomonosov Moscow State University, Moscow
E-mail: yauhen.viazau@gmail.com
Аннотация
Изучено влияние астаксантина на разрушение хлорофилла а под действием
красного света. Показано защитное действие астаксантина как в форме эфиров, таки в свободной форме с разной долей цис-изоформ. Предположительно, оно обусловлено эффективным тушением генерирующегося на свету синглетного кислорода.
Установлено, что при низкой концентрации астаксантина его защитное действие
выраженнее в более полярной среде.

© Е. В. Вязов, Р. Г. Гончарик, Е. А. Куликов, С. В. Алешин, А. А. Селищева, 2020*Работа выполнена при поддержке Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований (грант № Б19РМ-010) и Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 19-54-04003).

Биотехнология

39

Abstract
The effect of astaxanthin on the degradation of chlorophyll a under action of
red light has been studied. The protective effect of astaxanthin in such system has
been shown for both its ester form and free form with different shares of cis-isoforms. Presumably, it is due to the efficient quenching of singlet oxygen generated
in the light. It was found that at a low concentration of astaxanthin, its protective
effect is more pronounced in a more polar environment.
Кетокаротиноид астаксантин является эффективным природным антиоксидантом. На данный момент слабо изучены различия в антиоксидантной
активности цис- и транс-изоформ астаксантина и его эфиров, и практически не изучено их влияние на окисление хлорофилла светом или различными окислителями. Мы предполагаем, что функции астаксантина (и егоэфиров) определяются как структурой самой молекулы, так и окружающейее средой, в первую очередь ее диэлектрической проницаемостью.
В данной работе изучено влияние астаксантина на фотоиндуцированное
окисление хлорофилла а (Хл а) в 100%-м ацетоне (полярная среда) и смеси
гептан:бутанол 82:18 (слабополярная среда). Хл а экстрагировали ацетономиз клеток Spirulina platensis. Эфиры астаксантина экстрагировали 100%-мгексаном из клеток Haematococcus pluvialis, а затем разделяли с помощью колоночной хроматографии и перерастворяли в 100%-м ацетоне либо в смеси гептан:бутанол 82:18. Для приготовления раствора свободного астаксантина использовали коммерческий трансастаксантин (Sigma-Aldrich).
Часть раствора свободного транс-астаксантина освещали белым светом
4 ч (3000 лк), что приводило к частичной изомеризации (появлялось ≈ 7 %цис-изомеров астаксантина). К 500 мкл экстракта Хл а (концентрация —29 мкМ) добавляли по 500 мкл растворов астаксантина (в положительноми отрицательном контролях добавляли 500 мкл соответствующего растворителя) и освещали 2 ч 20 мин красным светом (610–700 нм, 2300 лк) при
24 °С. Конечная концентрация всех форм астаксантина — 4 мкг/мл смеси(в пересчете на свободный трансастаксантин), что составляет 6,7 мкМ. Положительный контроль не освещали.
Используемый в опытах красный свет практически не поглощается молекулами астаксантина, однако эффективно поглощается Хл а, что позволяет исключить эффект экранирования. В опытах наблюдалось подавление
фотозависимого разрушения Хл а при внесении в смесь астаксантина. Прииспользованной относительно небольшой концентрации астаксантина разрушение Хл а было снижено на 22–43 % по сравнению с отрицательным

pаздел 140контролем (без астаксантина), где разрушалось около 40 % молекул Хл а.
В отдельных опытах нами было показано подавление разрушения Хл а втаких условиях при добавлении тушителя синглетного кислорода. Таким
образом, можно говорить о том, что астаксантин защищает Хл а от окислительной деструкции, вызванной действием синглетного кислорода, генерируемого на свету, вероятно, участвуя в тушении последнего. В данных
опытах в среднем не было выявлено существенных различий по величине
действия между формами астаксантина. В то же время защитный эффект
астаксантина был значительно менее выражен в слабополярной среде (гептан:бутанол), чем в полярной (ацетон).
Литература
1. Naguib Y. M. Antioxidant activities of astaxanthin and related carotenoids // J. Agric.
Food Chem. 2000. Vol. 48(4). P. 1150–1154. doi: 10.1021/jf991106k
2. Hussein G., Sankawa U., Goto H., Matsumoto K., Watanabe H. Astaxanthin, a carotenoid with potential in human health and nutrition // J. Nat. Prod. 2006. Vol. 69(3).
P. 443–449. doi: 10.1021/np050354+

Биотехнология

41АНАЛИТ-ЗАВИСИМАЯ АКТИВАЦИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ
АНТИСМЫСЛОВОЙ ДНК
ANALYTE-DEPENDENT ACTIVATION
OF THERAPEUTIC ANTI-SENSE DNA
Е. Д. Григорьева, Д. Д. Недорезова
Университет ИТМА, Международный научный центр SCAMT,Санкт-Петербург
E. D. Grigorieva, D. D. Nedorezova
ITMO University, SCAMT laboratory, St. Petersburg
E-mail: grigorieva@scamt-itmo.ruАннотация
Перспективной разработкой в генной терапии рака является использование антисмысловых олигонуклеотидов (антисенс) — коротких ДНК-фрагментов, способных подавлять экспрессию генов за счет запуска антисмысловых механизмов в клетке [1]. Связываясь с целевой РНК, антисенс-цепь формирует стабильный РНК-ДНКдуплекс, который деградирует под действием эндорибонуклеазы RNase HI, специфично гидролизующей связь О5’–P РНК, находящейся в комплексе с ДНК [2].
Для улучшения стабильности, эффективности и селективности подхода было предложено создать ДНК-конструкцию на основе бинарных антисенс для более эффективного и высокоселективного расщепления целевых мРНК.

Abstract
Promising development for the cancer gene therapy is the application of therapeutic
antisense oligonucleotides (antisense) — short DNA fragments responsible for suppressing
gene expression by triggering antisense mechanisms in the cell [1]. By binding to the target
RNA, the antisense strand forms a stable RNA-DNA duplex, which is degraded by the endoribonuclease RNase HI, which specifically hydrolyzes the O5’–P RNA bond in a complex
with DNA [2]. To improve the stability, efficiency and selectivity of the approach, it was
proposed to create a DNA construct based on binary antisense for more efficient and highly
selective cleavage of mRNA target.

© Е. Д. Григорьева, Д. Д. Недорезова, 2020pаздел 142Бинарный подход используют две синтетические цепи ДНК Аsoa и Asob,которые представляют собой исходную последовательность антисенс,разделенную на две части, каждая из которых оборудована аналит-распознающими руками [3]. В качестве целевой РНК предполагается использовать
мРНК гена домашнего хозяйства, а в качестве аналита — ген, высокоспецифичный для раковых клеток. Таким образом, становится возможным аналит-зависимая активация антисмысловых механизмов против мРНК генав клетке, поскольку стабильный РНК-ДНК-дуплекс образуется лишь в присутствии аналита.
В данной работе описывается разработка и оптимизация ДНК-конструкции на основе аналит-зависимой активации антисенс за счет использования
двух коротких последовательностей Asoa и Asob, способных активировать
расщепление выбранной мРНК мишени только в присутствии раковой маркерной последовательности — мРНК гена MYCN, высокоамплифицированного в клетках нейробластомы. Предварительные исследования in vitroс использованием синтетической РНК последовательности и E.coli RNase HIподтверждают описанные свойства ДНК-конструкции. Следующим этапом
исследования являются эксперименты на раковых клетках, в результате которых можно будет сделать заключение об эффективности ДНК-конструкции в условиях эукариотических клеток.
Стоит отметить, что разработанную ДНК-конструкцию в будущем будет возможно адаптировать для различных целевых и маркерных мРНК,так как она состоит из легко модифицируемых олигонуклеотидов. Разработанная технология является новым подходом к использованию коротких
антисенс, что позволит исследователям всего мира по-новому взглянуть нагенную терапию рака.
Литература
1. Rinaldi C., Wood M. Antisense oligonucleotides: the next frontier for treatment ofneurological disorders // Nat Rev Neurol. 2018. Vol. 14. P. 9–21.
2. Plashkevych O., Li Q., Chattopadhyaya J. How RNase HI (Escherichia coli) promoted
site-selective hydrolysis works on RNA in duplex with carba-LNA and LNA substituted
antisense strands in an antisense strategy context? // Mol. BioSyst. 2017. Vol. 13. P. 921–
938.
3. Gerasimova Y. V., Peck S., Kolpashchikov D. M. Enzyme-assisted binary probe
for sensitive detection of RNA and DNA // Chem Commun (Camb). 2010. Vol. 46.
P. 8761–8763.

Биотехнология

43ИЗМЕНЕНИЕ МИКРОФЛОРЫ В КИШЕЧНИКЕ ЛИЧИНОК
КОЛОРАДСКОГО ЖУКА LEPTINOTARSA DECEMLINEATAПРИ РАЗВИТИИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ
BACILLUS THURINGIENSIS *ALTERATIONS IN MIDGUT BACTERIAL COMMUNITY
OF LEPTINOTARSA DECEMLINEATA DURING BACTERIAL INFECTION
BACILLUS THURINGIENSIS
Е. В. Гризанова 1, Д. С. Терещенко1, Т. И. Криницына1,
Г. В. Калмыкова 2, Н. И. Акулова 2, И. М. Дубовский 2
1Новосибирский государственный аграрный университет
2Сибирский федеральный научный центр
агробиотехнологий РАН, Новосибирск
E. V. Grizanova 1, D. S. Tereshenko1, T. I. Krynytsyna 1,
G. V. Kalmykova 2, N. I. Akulova 2, I. M. Dubovskiy 2
1

2

Novosibirsk State Agrarian University
Siberian Federal Scientific Centre of Agro-Bio Technologies of the RAS, Novosibirsk
E-mail: katalasa_2006@yahoo.com

Insect microbiota plays an important role in the life of insects, and can also
be a method for pest control in agriculture. The gut microbiota could be an additional contributor to the virulence of Bacillus thuringiensis bacteria. The bacterial
infection with B. thuringiensis in the larvae of the Colorado potato beetle Leptinotarsa decemlineata leads to a qualitative and quantitative change in the composition of the intestinal microbiota, with a different effect of spores and crystalline
endotoxin of bacteria on the main representatives of the microbial community.
Elevated level of genes expression of pattern-recognition receptor, serine proteases and prosaposin-like protein were detected in the midgut of infected insects.
A search was carried out for symbionts in the intestines of the Colorado potato
beetle with the aim of modifying them for the synthesis of RNA interfering constructs that block various physiological systems of insects.
© Е. В. Гризанова, Д. С. Терещенко, Т. И. Криницына, Г. В. Калмыкова, Н. И. Акулова, И. М. Дубовский, 2020*
This work was supported by grant of President № MK-318.2020.11, and RSF № 1916-00019.

pаздел 144БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И МИКРОКЛОНАЛЬНОЕ
РАЗМНОЖЕНИЕ PINUS SYLVESTRIS L.
BIOLOGICAL FEATURES AND MICROPROPAGATIONOF PINUS SYLVESTRIS L.
А. С. Дәкібай 1, М. Ж. Каирова 2, Р. Т. Омаров 1
1Евразийский национальный университет
им. Л. Н. Гумилева, Нур-Султан, Казахстан
2Ботанический сад, Нур-Султан, Казахстан
A. S. Dakibay 1, M. J. Kairova 2, R. T. Omarov 1
1

L. N. Gumilyov Eurasian national university, Nur-Sultan city, Kazakhstan
2
Botanical garden, Nur-Sultan city, Kazakhstan
E-mail: markaigai@mail.ruАннотация

Широко распространенный вид сосны Pinus sylvestris L. обладает рядом преимуществ благодаря наличию фитонцидов, фиторемедиационным и другим свойствам.
Изучены свойства семян, собранных в популяции сосны из Северо-Казахстанской
области. В целях микроклонального размножения проведен подбор режима стерилизации почек сосны с полным исключением контаминации и использованием среды LP+6-БАП для дифференциации тканей.

Abstract
The widespread species of pine Pinus sylvestris L. has a number of advantages due to thepresence of phytoncides, phytoremediation and other properties. The properties of seeds
collected in the pine population from the North Kazakhstan region were studied. For the
purpose of plant micropropagation, the selection of the sterilization mode of pine buds was
carried out, with the complete elimination of contamination and the medium LP+6-BAP isused for tissue differentiation.

Из хвойных деревьев самым распространенным видом считается сосна
обыкновенная Pinus sylvestris L. [1]. Известно, что в хвое сосны обыкновенной содержится большое количество фитонцидов [2]. Хвойные породы,© А. С. Дәкібай, М. Ж. Каирова, Р. Т. Омаров, 2020Биотехнология

45благодаря сложному строению своих иголок, способны задерживать частицы пыли и тяжелых металлов (16,8 кг/год), очищая воздух от выхлопных газов [3]. Вечнозеленые растения P. sylvestris L. положительно влияютна восстановление почв, аккумулируя кадмий, и в целом более адаптированы к загрязняющим факторам [4, 5]. Трехлетние саженцы P. sylvestris L.
могут накапливать свинец в хвое, стволах, ветвях и максимально в корнях
(156,4 мг/кг) [6]. Кроме того, древесина сосны обыкновенной характеризуется большой степенью звукопоглощаемости [7].
Таким образом, сосна обыкновенная относится экономически важному
природному объекту. Классическим способом разведения хвойных растений считается вегетативное размножение, требующее больших затрат трудаи времени. Черенкование растений дает хороший результат (60–70 %), ноих укоренение занимает длительный период [8]. Микроклональное размножение является быстрым и эффективным методом получения здоровых
растений сосны [9–11]. Целью нашей работы является изучение некоторых
биологических особенностей и использование метода микроклонального
размножения P. sylvestris L.
Определение массы 1000 семян, собранных в 2019 году в лесах Северо-Казахстанской области, проведено по общепринятой методике. Семенной материал промывали в мыльной и проточной воде, затем 20 минут обрабатывали в 1%-м растворе пермаганата калия. Всхожесть определяли на
13-е сутки после проращивания семян в рулонах в четырех повторностях.
В качестве эксплантов для микроклонального размножения были использованы гипокотили проростков и почки P. sylvestris L. Почки отобраны у визуально здоровых сосен, растущих в Ботаническом саду. Для стерилизации
гипокотилей и почек сосны использован 1-, 3- и 4%-е растворы гипохлорит
натрия, полученные разведением (v/v) средства «Белизна» (с содержанием
5%-го активного NaOCl). После дезинфекции растительный материал промывали стерильной водой 3–4 раза по 1–3 минуты. После дезинфекции гипокотили размером 0,5–0,7 см и почки, освобожденные чешуек, поместилина питательные среды MS (Murashige and Skoog, 1962) без фитогормонов
и LP (Quirin and Lepoivre, 1977) с добавлением 6-БАП (5 μM) [9–11].
Проведено определение массы 1000 семян популяции сосны из Северной
Казахстанской области, которая в среднем составила 8,507 ± 0,019 грамм.
Вхожесть семян этой популяции в среднем была на уровне 58,5 %. После
7 дней проращивания семян длина гипокотилей составила 0,1–2,0 см.
При инкубировании на среде MS 77 гипокотилей, полученных из 7–
11 дневных проростков семян, обнаружена их контаминация. Использование протокола стерилизации с обработкой в 1%-м растворе дезинфектан-46pаздел 1та в течение 1, 3 и 5 минут привела к инфицированию данных эксплантов до
90 %. Наряду с гипокотилями в качестве эксплантов использованы свежесобранные почки сосны обыкновенной, которые обрабатывали в 3- и 4%-храстворах дезинфектанта в течение 15 и 30 минут с последующей трехкратной промывкой в стерильной воде.

Инкубирование почек сосны обыкновенной на среде LP+6-БАППри использовании метода микроклонального размножения древес- нокустарниковых и других растений особое внимание уделяется оптимизации режимов стерилизации эксплантов, собранных в различных местахих обитания. Так, при сборе материала в Ботаническом саду в Нур-Султане обнаружены различные насекомые-вредители, такие как сосновая тля(Aphidoidae), являющаяся переносчиком инфекций. В целом подбор способа стерилизации растительных эксплантов зависит от обеспеченности
теми или иными реагентами, и часто более токсичные вещества (например, сулема или хлорид (II) ртути) заменяют на хлорсодержащие растворы
[9–11]. На 5-е сутки инкубирования эксплантов, обработанных 3%-м раствором NaOCl в течение 15 минут, обнаружена контаминация почек соснына уровне 10 % (см. рисунок). Не выявлено инфицирования при вариантах
стерилизации почек в 3%-м растворе NaOCl в течение 30 минут и при 15и 30-минутной обработке в 4%-м дезинфектанте. В сравнении с данными
других исследователей стерилизация почек P. sylvestris L. в 3- и 4%-м растворе NaOCl с уменьшением времени экспозиции до 15 минут имеет определенное преимущество [10, 11]. В наших экспериментах, благодаря подбору
оптимального режима стерилизации, обнаружено, что после 30-дневного

Биотехнология

47инкубирования эксплантов сосны обыкновенной на среде LP+6-БАП заметны морфологические изменения, свидетельствующие о дифференциации
тканей. Дальнейший подбор питательных сред и оптимизация их гормонального состава для улучшения морфогенеза и ризогенеза позволит получить целые растения-регенеранты такой ценной культуры, как P. sylvestris L.
Литература
1. Бабич Н. Д., Соколов Н. Н., Бахтин А. А. Бесценный дар тайги. Архангельск,1996. 224 с.
2. Ларнатович П. А., Сумина А. В. Изучение фитонцидной активности древесной
растительности в городской среде (на примере г. Минусинска) // Наука без границ.
2018. № 11 (28). С. 40–44.
3. Guerrero C. C. Urban Trees and atmospheric pollutants in big cities: Effects in
Madrid / Thesis (Doctoral). E.T.S. I. Montes, Forestal y del Medio Natural (UPM). 2014.
212 p.
4. Placek A., Grobelak A., Kacprzak M. Improving the phytoremediation of heavy
metals contaminated soil by use of sewage sludge // Int. J. Phytoremediation. 2016.
Vol. 18(6). P. 605–618.
5. Bęś A., Warmiński K., Adomas B. Long-term responses of Scots pine (Pinus sylvestrisL.) and European beech (Fagus sylvatica L.) to the contamination of light soils with diesel
oil // International Journal of Phytoremediation. 2016. Vol. 18(6). P. 605–618.
6. Джалил Пур Бабак, Ширвани А. Использование сосны обыкновенной для фиторемедиации почвы // Лесной Вестник. 2011. № 4. С. 189–191.
7. Ivanova Y., Vitchev P., Hristodorova D. Study on the influence of some factors on
the sound absorption characteristics of wood from Scots Pine // Chip and Chipless Woodworking Processes. 2018. Vol. 11(1). P.65–72.
8. Nielsen U. B., Rasmussen H. N., Jensen M. Rooting Nordmann fir cuttings for
Christmas trees // Working Papers of the Finnish Forest Research Institute. 2009. Vol. 114.
P. 48–52.
9. Nunes S., Sousa D., Pereira V.T. et al. Efficient protocol for in vitro mass
micropropagation of slash pine. // In Vitro Cell.Dev.Biol.-Plant. 2018. Vol. 54. P. 175–183.
10. De Diego N., Montalbán I. A., Moncaleán P. In vitro regeneration of adult Pinus
sylvestris L. trees // South African Journal of Botany. 2010. Vol. 76, Iss. 1. P. 158–162.
11. Lebedev V., Shestibratov K. Effect of PGR pulse treatments and ethylene precursor
and inhibitors on Scots pine micropropagation // BMC Proc. 2011. Vol. 5(Suppl 7). P. 150.

pаздел 148

АНАЛИЗ ТРАНСКРИПТОМА RANA TEMPORARIAНА РАННИХ СТАДИЯХ ЭМБРИОГЕНЕЗА *TRANSCRIPTOME ANALYSIS OF RANA TEMPORARIAIN THE EARLY STAGES OF EMBRYOGENESIS
В. А. Дикая 1, А. О. Травина 2, Д. И. Остромышенский 2,
О. И. Подгорная 2, А. С. Комиссаров 1
1Университет ИТМА,Международный научный центр SCAMT, Санкт-Петербург
2Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург
V. A. Dikaya 1, A. O. Travina 2, D. I. Ostromyshensky 2,
O. I. Podgornaya 2, A. S. Komissarov 1¹ Laboratory of Applied Genomics, SCAMT, ITMO University, St. Petersburg² Institute of Cytology RAS, St. Petersburg
E-mail: animeshizik@gmail.com
Аннотация
Было показано, что повторы ДНК активно транскрибируются в раннем эмбриогенезе при активации родительского генома и при их ингибировании дальнейшее
развитие эмбриона невозможно [1]. Цель данной работы — осуществить качественный и количественный анализ транскриптома ооцитов о R. Temporaria (взятой в качестве модельного организма) для понимания роли состава кодирующей и некодирующей частей в раннем эмбриогенезе с акцентом на повторяющиеся области.

Abstract
It has been shown that DNA repeats are actively transcribed in early embryogenesis
when the parent genome is activated and when they are inhibited, further development of
the embryo is impossible [1]. The aim of this work is to perform qualitative and quantitative
analysis of the transcriptome of oocytes about R. Temporaria (taken as a model organism)
to understand the role of coding and non-coding parts in early embryogenesis with anemphasis on repetitive areas.
© В. А. Дикая, А. О. Травина, Д. И. Остромышенский, О. И. Подгорная, А. С. Комиссаров, 2020*
Gratitude is expressed to the Russian Scientific Foundation for the provided material
support (19-74-20102).

Биотехнология

49

The reads were obtained using Illumina HiSeq 2500. The transcriptome was denovo assembled using Trinity. Abstract of encoding parts was made with the helpof Trinotate and EggNOG-mapper. In addition, we compared continents withNCBI Nucleotide database. Raw reeds were also compared with a rough versionof the genome by the STAR program. The tandem repeats in the genome wereannotated by the Tandem Repeat Finder and classified from the reeds using a written script. The dispersed repeats were predicted using RepeatModeler2, the mostcommon ones being compared with those known on the Censor website.
The 27,126 contigs were collected. With Trinotate and EggNoG 22.9 % of reads
were annotated, only 9.91 % of matches were found in NCBI. However, 93.48 %of unassembled reads were localized in the draft genome (NCBI assembly:
GCA_009802015.1). Repeats (satellite DNA) with sizes from 5 to 114 Mb with thehighest frequency of occurrence were found, most of them are not described indatabases, except for CR1 and major Satelite S1a. The high replicability of the two
repeats is represented in reads of different data. At present, thanks to the results
obtained, oligonucleotides for FISH and RNA-FISH mapping have been selected.
Analysis of the transcriptome of R. Temporaria. In the future, a manual annotation of repetitions for early embryogenesis is planned.
Литература
1. Probst A. V., Okamoto I., Casanova M. et al. A Strand-Specific Burst in Transcriptionof Pericentric Satellites Is Required for Chromocenter Formation and Early Mouse
Development // Developmental Cell. 2010. Vol. 19(4). P. 625–638.

pаздел 150КОНСТРУИРОВАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА
ПАНДЕМИЧЕСКИХ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ ВАКЦИН *CONSTRUCTION OF CULTURE MEDIA FOR THE PRODUCTION
OF PANDEMIC CULTURE VACCINES
Н. Б. Думченко
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
N. B. Dumchenko
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: dumchenko@vector.nsc.ruАннотация
Сконструированы бессывороточные питательные среды ВекторВак-ПС2и ГПС-1 для производства живой культуральной гриппозной вакцины, не уступающие по своим характеристикам зарегистрированной бессывороточной питательной
средой SFM4 MegaVir.

Abstract
Serum-free culture media VectorVac-PS2 and GPS-1 for the production of live cultural
influenza vaccine have been designed, which are not inferior in their characteristics to theregistered serum-free culture medium SFM4 MegaVir.

Производство живых культуральных вакцин актуально в связи с участившимися вспышками пандемичных вирусных инфекций. Известно, чтокультуральные живые вакцины имеют ряд преимуществ перед другими вакцинами, таких как возможность быстрой наработки больших объемов дозвакцины, стандартизованность производства, отсутствие в вакцине компонентов животного происхождения. Основным субстратом для культивирования вирусов являются культуры клеток, выращенные на специально
подобранных питательных средах. Для повышения эффективности и рен© Н. Б. Думченко, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке стипендии Президента Российской Федерации молодым ученым и аспирантам (СП-1746.2018.4) и государственного задания ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

Биотехнология

51табельности технологию производства можно усовершенствовать за счетразработки новых питательных сред для конкретных культур клеток. Намисконструированы бессывороточные среды ВекторВак-ПС2 и ГПС-1 для ужезарекомендовавшей себя технологической платформы живой культуральной гриппозной вакцины. Была проведена оценка пролиферативной активности клеток MDCK в сравнении с зарегистрированной бессывороточной
питательной средой SFM4 MegaVir. В культуре клеток MDCK, культивируемой в среде SFM4 MegaVir с добавлением 5- и 1%-й сыворотки, наблюдается
изменение морфологии клеток: клетки увеличиваются в размерах, образуют тяжи, пролиферативная активность культуры снижена и составляла
2,0. Разработанные бессывороточные среды ВекторВак-ПС2 и ГПС-1 прикультивировании клеток MDCK обеспечивают рост клеток, клетки имеют типичную для данной культуры морфологию, формируют монослой
на 2–3-и сутки роста, сохраняют высокую пролиферативную активность
(индекс пролиферации культуры клеток составляет 3,2 и 3,8 соответственно). При культивировании вакцинных штаммов вируса гриппа в клеткахMDCK показано, что продукция вируса гриппа в культуре клеток MDCK
в бессывороточных средах ВекторВак-ПС2 и ГПС-1 сравнима с продукцией
вируса гриппа в среде SFM4MegaVir и составляет 8,5–9 lg ЭИД50/0,5 мл.

V.

pаздел 152ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИ И ПРИМЕНЕНИЯ
ПРОТИВОВИРУСНЫХ СРЕДСТВНА ОСНОВЕ ДВУСПИРАЛЬНЫХ РНК
PROSPECTS FOR THE DEVELOPMENT AND APPLICATIONOF ANTIVIRAL PREPARATIONS BASED ON DOUBLE-STRANDED RNA
В. В. Ермолаев, Ю. С. Аликин,Ю. В. Телегина, В. П. Клименко, М. В. Алексеева
Институт медицинской биотехнологии ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»Роспотребнадзора, Бердск, Новосибирская обл.
V. Ermolaev, Yu. S. Alikin, U. V. Telegina, V. P. Klimenko, M. V. Alekseeva
FBSI SRC VB “Vector”, Rospotrebnadzor, Berdsk, Novosibirsk region
E-mail: ermolaev_vv@vector.nsc.ruАннотация
Разработана экспериментальная противовирусная композиция, включающая двуспиральную РНК бактериофага φ6 и молекулярную конструкцию на основе декстрана с включением этиотропного агента амантадина. Имеются экспериментальные данные об эффективности противовирусных препаратов на основе
дсРНК, в том числе интерферон-индуцирующих и иммуномодулирующих свойствах дсРНК бактериофага φ6. В связи с этим представляется перспективным проведение исследований биологической активности разработанной композиции в целях ее возможного применения в медицине и ветеринарии.

Abstract
An experimental antiviral composition including double-stranded RNA of bacteriophage phi6 and a molecular construct based on dextran with the inclusion of the etiotropic agent amantadine has been developed. There are experimental data about the effectiveness of antiviral drugs based on dsRNA, including the data about interferon-inducing
and immunomodulatory properties of dsRNA of the bacteriophage phi6. In this regard, it
seems promising to conduct research on the biological activity of the developed composition with a view to its possible application in medicine and veterinary medicine.

© В. В. Ермолаев, Ю. С. Аликин, Ю. В. Телегина, В. П. Клименко, М. В. Алексеева,2020Биотехнология

53Острые респираторные вирусные заболевания человека (в число которых входит грипп) имеют широкое распространение в мире. Как правило,под «гриппом» понимаются заболевания, вызываемые примерно 200 видами вирусов, со сходной симптоматикой. Это является одной из причин низкой эффективности вакцинации против гриппа. Также известно, что семейство коронавирусов (Coronaviridae) вызывают широкий спектр патологий
человека и животных.
Разрабатываемые в последнее время противовирусные лекарственные
препараты на основе индукторов интерферона обладают способностью
подавлять широкий спектр вирусов. В число разработанных препаратов
этого класса входит медицинский препарат Ридостин и его ветеринарный
аналог — Вестин, разработанные с использованием двуспиральных РНКв качестве активного компонента. За основу действия данных лекарственных средств были взяты интерферон-инду-цирующие механизмы действия
вирусов, в роли которых они выступают, индуцируя в организме синтез интерферонов и других белков-цитокинов, в то же время не оказывая на организм разрушительного эффекта. Активация эндогенной цитокиновой сетиспособна формировать состояние неспецифической резистентности против
вирусов, бактерий и их токсинов. Также препараты на основе РНК могут подавлять «цитокиновый шторм» вирусов, что может иметь большое значениев борьбе с коронавирусными заболеваниями. Кроме того, индукторы интерферона способны активировать фагоцитоз нейтрофилов и макрофагов,натуральные киллеры, действуют на Т- и В-клеточные звенья иммунитета.
Внедрение эффективных способов применения разработанных препаратов
позволяет использовать их в целях экстренной профилактики и лечения вирусных заболеваний человека и животных, коррекции иммунодефицитов,усиления вакцин.
Препараты при проведении экспериментов показывали высокую
степень защиты от гриппа (сем. Orthomyxoviridae) у мышей (23–83 %)и птиц (65–72 %). Это, а также их способность подавлять другие вирусы различных семейств послужило основанием для их рекомендациив качестве противовирусных средств для людей. Клинические испытания
инъекционной формы препарата Ридостин при гриппе и ОРВИ показали ее высокую эффективность. Через сутки после однократной инъекции
температура нормализовалась у 20 % пациентов, у 60 % понижалась доуровня 37–38 °С, способствующего оптимальному развитию противоинфекционного процесса. Свою эффективность показывала и мазевая
форма Ридостина. Так, интраназальное применение мази в период эпидсезона оказало выраженный защитный эффект у представителей группы

pаздел 154риска. ОРВИ развивалось только у 3,6 %, тогда как при использовании
препарата курантил, тоже индуктора интерферона, заболеваемость составила 10 %. Защитный эффект сохранялся в течение трехмесячного наблюдения за испытуемыми.
Кроме того, данные по применению противовирусного препарата Вестин (Ридостин) при ассоциативных гастроэнтеритах на примере поросят
показывали, что данный препарат способен эффективно подавлять коронавирусные и ротавирусные инфекции по сравнению с антибиотиками и химиотерапевтическими препаратами.
Другие испытания препаратов на основе РНК, в том числе Вестина,подтвердили их способность повышать эффективность вакцинации напримере птиц.
Не менее перспективными представляются разработки препаратовна основе двуспиральных РНК бактериофага φ6. Данный бактериофаг
содержит дсРНК, представленную тремя сегментами, размером 6370,
4100 и 3000 п.н. [1], поражает фитопатогенную бактерию Pseudomonas
phaseolicola, непатогенную для человека и животных.
Исследования, проведенные в ИМБТ ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» на белых
беспородных мышах, показывают, что дсРНК бактериофага φ6 вызывает
повышение синтеза α-интерферона, максимальный уровень которого наблюдался через 5 часов после введения. И хотя к концу первых суток после
инъекции уровень ИФН-альфа в крови мышей снижался, эффект оставался
достаточно выраженным. Кроме того, препарат фаговой дсРНК повышал
активность перитонеальных (брюшинных) макрофагов. Эффект наблюдался уже через 5 часов после введения и по-прежнему возрастал к концу первых суток [2].
Нами разработан экспериментальный композиционный препарат,включающий в себя дсРНК бактериофага φ6 в качестве активного компонента и молекулярную конструкцию на основе декстрана с включением в нее этиотропного агента амантадина в качестве внешней оболочки [3]. В связи с ранее установленными противовирусными и иммуномодулирующими свойствами препаратов на основе дсРНК представляется
перспективным проведение исследований биологической активности
данной композиции в целях возможного применения в медицине и ветеринарии.
Литература
1. Vidaver A. K., Koski R. K., Van Ethen J. L. // J. Virol. 1973. Vol. 11. No. 5. P. 799–805.
2. Ермолаев В. В., Клименко В. П., Аликин Ю. С. и др. Способ получения и иссле-Биотехнология

55дование биологических свойств двуспиральной РНК бактериофага φ6 // Биофармацевтический журнал. 2017. Т. 9, № 3. С. 21–23.
3. Ермолаев В. В., Апалев П. В., Телегина Ю. В. и др. Способ получения композиционных препаратов на основе рибонуклеиновых кислот: сб. тезисов // Междунар. конф. молодых ученых биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов.
23–25 окт. 2019 г. Новосибирск; Наукоград Кольцово, 2019. С. 70–76.

pаздел 156ЭНДОФИТНЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ: ПЕРСПЕКТИВА
ПОВЫШЕНИЯ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТИ КОРМОВ *ENDOPHYTIC MICROORGANISMS:PROSPECTS FOR INCREASING FEED GOOD QUALITY
А. И. Ерошин, И. И. Идиятов, А. М. Тремасова
Федеральный центр токсикологической, радиационнойи биологической безопасности, Казань
A. I. Eroshin, I. I. Idiyatov, A. M. Tremasova
Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan
E-mail: erosartur@yandex.ruАннотация
Проблема контаминации кормов микроскопическими плесневыми грибамии продуктами их жизнедеятельности в последнее время обозначилась весьма острои является определяющим доброкачественность фактором. Среди множества методов деконтаминации преимуществ больше у биологических. По результатам
исследования антагонистической активности эндофитный штамм Bacillus subtilis
EAM11 показал высокую эффективность в отношении возбудителей фузариоза, чтопозволяет говорить о потенциале его использования для разработки биологического препарата, обладающего свойствами пестицида.

Abstract
The problem of fodder contamination with microscopic mold fungi and their metabolic
products has recently become very acute and is a factor determining good quality. Among themany decontamination methods, biological ones have more advantages. According to the results of the study of antagonistic activity, the endophytic strain Bacillus subtilis EAM11 showed
high efficiency against the causative agents of fusarium, which suggests the potential of using
it for the development of a biological preparation with pesticide properties.

Степень контаминации растительного кормового сырья микромицетами непосредственным образом отражается на его качестве. Применение
© А. И. Ерошин, И. И. Идиятов, А. М. Тремасова, 2020*Работа выполнена в рамках выполнения гранта МК-1582.2020.11 (соглашение
№ 075-15-2020-225 от 27.04.2020).

Биотехнология

57

химических и физических методов обработки имеет некоторые недостаткии не проходит бесследно. В этой связи эндофитные микроорганизмы, колонизирующие те же экологические ниши, что и фитопатогены, могут служить основой для разработки безопасных эффективных препаратов биологического происхождения. В настоящей работе приведены результаты
оценки антагонитической активности эндофитного штамма Bacillus subtilis
EAM11 в отношении возбудителей фузариоза.
Исследования проводились с использованием метода встречных культур, агаровых блоков, модифицированного штриха и отсроченного антагонизма на тестовых культурах патогенов Fusarium sporotrichioides и Fusarium
oxysporum. Результаты, полученные каждым из методов, взаимодополнили
друг друга. С помощью метода встречных культур установлено, что исследуемый штамм обладает фунгистатическим алиментарным антагонизмомв отношении обеих тестовых культур, ширина зоны ингибирования роста
мицелия составила 20,61 ± 0,49 мм и 27,53 ± 0,65 мм соответственно. Противогрибковая активность, выявленная методом агаровых блоков, в данном случае отражала способность сохранить зону нанесения, составилав отношении F. sporotrichioides 1,89 ± 0,03, F. oxysporum — 2,34 ± 0,07. Метод
модифицированного штриха показал способность изолята к росту и выделению противогрибковых веществ на среде с патогеном, результат сокультивирования культур выражался в наличии зоны задержки роста патогена,которая составила, соответственно, 12,50 ± 0,35 мм и 15,00 ± 0,35 мм. Метод
отсроченного антагонизма характеризовал фунгистатическую активность
веществ, выделяемых штаммом-антагонистом, результат действия которых выражался степенью ингибирования роста F. sporotrichioides на 81,08 %,F. oxysporum — 88,29 %.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что штамм Bacillus subtilis EAM11 обладает достаточно высокой антагонистической активностьюв отношении возбудителей фузариоза и может быть использован для разработки биологического препарата, обладающего свойствами пестицида.

pаздел 1

58

CRISPR/CAS9 ОПОСРЕДОВАННЫЙ НОКАУТ ГЕНАIFITM3 В КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА *CRISPR/CAS9-MEDIATED KNOCKOUT OF IFITM3 IN HUMAN CELLS
Н. В. Ещенко 1, М. В. Сергеева 2, Е. С. Журавлёв 1,
А. Б. Комиссаров 2, Г. А. Степанов 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2
НИИ гриппа им. А. А. Смородинцева, Санкт-Петербург
N. V. Eschenko 1, M. V. Sergeeva 2, E. S. Zhuravlev 1,
A. B. Komissarov 2, G. A. Stepanov 1
1

2

ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg
E-mail: stepanovga@niboch.nsc.ruАннотация
IFITM3 является членом семейства трансмембранных белков, индуцированных
интерфероном (IFITM). Эти белки играют важную роль в противовирусном ответе,ограничивая проникновение вируса в цитоплазму и его репликацию. Нокаут генаIFITM3 способствует повышению чувствительности клеток к заражению вирусом
гриппа А. Такая клеточная линия может быть использована для наработки вакцинных штаммов вируса гриппа как в научных лабораториях, так и в биотехнологическом производстве.

Abstract
IFITM3 is a member of the interferon-induced transmembrane protein (IFITM) family. These proteins play an important role in the antiviral response, limiting the penetrationof the virus into the cytoplasm and virus replication. Knockout of the IFITM3 gene increase
the sensitivity of cells to infection with the influenza A virus. Such a cell line can be used
to develop vaccine strains of the influenza virus both in scientific laboratories and in biotechnological production.
© Н. В. Ещенко, М. В. Сергеева, Е. С. Журавлёв, А. Б. Комиссаров, Г. А. Степанов,2020*Исследование выполнено при поддержке гранта Российского научного фонда
№18-75-10069.

Биотехнология

59Целью настоящей работы является получение клеточной линии с нокаутом гена IFITM3, продукт которого участвует в регуляции репликации
вируса гриппа А в клетках человека. Для этого была использована стратегия
направленного нокаута генов с применением технологии CRISPR/Cas9 геномного редактирования.
Для нокаута были сконструированы протоспейсеры, позволяющие вносить не только единичные разрывы, но и обеспечивать удаление протяженных участков гена-мишени. Были получены плазмидные конструкции,содержащие последовательности выбранных протоспейсеров, и на основе
фибробластов легких WI-38 VA-13 subline 2RA получены жизнеспособныеи активно делящиеся моноклональные клеточные линии. Среди них быливыделены те, что несут мутации, обеспечивающие сдвиг рамки считыванияв гене IFITM3. Нокаут гена-мишени подтверждали при помощи методов
ОТ-ПЦР и Вестерн-блот. Было показано, что моноклональные линии сосниженной экспрессией гена IFITM3 демонстрируют повышенную продуктивность в отношении вируса гриппа А. Для таких клеточных линий былпроведен транскриптомный анализ, подтверждающий наличие мутацийи снижение уровня экспрессии гена IFITM3, а также функциональный анализ генов, изменивших уровень экспрессии после заражения клеток вирусом гриппа А.
Таким образом, нами была получена клеточная линия с нокаутом генаIFITM3 и подтверждена возможность использования нокаута генов системы регуляции противовирусного ответа для повышения продуктивности
наработки вируса гриппа в клетках человека.

pаздел 1

60ИЗМЕНЕНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ
ПРОЦЕССОВ ФОТОСИНТЕЗА В ПРОРОСТКАХ КУКУРУЗЫПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ НАНОЧАСТИЦ СЕЛЕНА *CHANGES IN PHOTOSYNTHETIC ACTIVITY IN CORN SEEDLINGSUNDER THE INFLUENCE OF SELENIUM NANOPARTICLES
Е. В. Запрудская, О. В. Молчан
Институт экспериментальной ботаники
им. В. Ф. Купревича НАН Беларуси, Минск, Беларусь
E. V. Zaprudskaya, O. V. Molchan
Institute of Experimental botany of the NAS of Belarus, Minsk, Belarus
E-mail: zaprudskayakatya@mail.ruАннотация
Известно, что в определенных концентрациях селен может оказывать стимулирующее действие на ряд регуляторных функций в растениях, а его избыток является
токсичным. Наночастицы селена — одна из применяемых форм селена. Предполагается, что наночастицы селена в определенной концентрации будут воздействоватьна фотосинтетический аппарат, регулируя, таким образом, ключевые физиологические процессы в клетках растений.

Abstract
It is known that at certain concentrations, selenium can have a stimulating effect on
a number of regulatory functions in plants, and its excess is toxic. Selenium nanoparticles
are one of the used forms of selenium. It is assumed that selenium nanoparticles at a certain
concentration will affect the photosynthetic apparatus, thus regulating key physiologicalprocesses in plant cells.

Проростки кукурузы выращивали рулонным методом в течение 10 сут.
при уровне освещения 200 мкмоль кв. м –2 с–1 и 16 ч фотопериоде в присутствии наночастиц селена в диапазоне концентраций 0,5–100 мкмоль л–1.
© Е. В. Запрудская, О. В. Молчан, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке БРФФИ по договору № Б20М-044.

Биотехнология

61Было показано, что при добавлении наночастиц селена происходит увеличение длины надземной части проростков (см. рисунок, А). При этом ужек 7 сут. отмечено значительное снижение содержания хлорофилла в листе
(см. рисунок, Б). Также у опытных вариантов был меньше и уровень флаванолов в сравнении с растениями, выращенными без наночастиц (см. рисунок, В). Важно отметить, что под действием Se-наночастиц также была снижена водоудерживающая способность листьев проростков (см. рисунок, Г),что, скорее всего, связано с уменьшением толщины листовой пластинки.
Наблюдаемые эффекты свидетельствуют о воздействии наночастиц селенана фотосинтетический аппарат и собственно процессы фотосинтеза. Одним из возможных механизмов такого воздействия может быть снижение
активности АТФ-азы тилакоидных мембран в результате замещения селеном атомов серы в составе регуляторных белков. Таким образом, наблюдаемые эффекты могут быть следствием нарушения формирования протонного градиента в хлоропласте и транспорта электронов по ЭТЦ фотосинтеза.

А

Б

В

Г

Влияние nanoSe на длину надземной части проростков (А),содержание хлорофилла (Б), флаванолов (В)и относительную потерю воды (Г) листьями кукурузы

62pаздел 1В результате проведенной оценки влияния наночастиц селена на физиолого-биохимические параметры проростков кукурузы показано, что наночастицы в определенном диапазоне концентраций (0,5–100 мкмоль л–1)могут вызывать увеличение длины проростков, снижение уровня фотосинтетических пигментов и флаванолов, а также уменьшение водоудерживающей способности листьев проростков кукурузы. Наблюдаемые эффекты
предположительно обусловлены нарушением первичных процессов фотосинтеза.

Биотехнология

63ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ БИОФУНГИЦИДА
ОРГАМИКА Ф ДЛЯ ТОМАТА ЗАЩИЩЕННОГО ГРУНТА
EFFECTIVENESS OF ORGAMICA F BIOFUNGICIDEFOR PROTECTED GROUND TOMATO’S
Д. Д. Зиганшин 1, М. А. Лукьянцев 2, А. С. Сироткин 1
1Казанский национальный
исследовательский технологический университет
2
ООО «Органик Парк», Казань
D. D. Ziganshin 1, M. A. Luk’jancev2, A. S. Sirotkin 1
1

2

FSFEI HE KNRTULLC Oraganic park, Kazan,
E-mail: ziganshind@gmail.com

Аннотация
Проведено изучение эффективности биофунгицида Оргамика Ф против заболеваний томата защищенного грунта. Показано, что по эффективности против корневых гнилей фузариозной этиологии, серой гнили, а также по урожайности опытный
препарат оказался эффективнее контрольного варианта и сравнимым со стандартным препаратом.

Abstract
The effectiveness of Orgamica F biofungicide against protected ground tomato diseases
was researched. It has been shown that in terms of effectiveness against root rots of fusarious etiology, gray rot, as well as yield, the experimental substance turned out to be more
effective than the control and comparable to the standard substance.

Биологические средства защиты растений являются альтернативой традиционным пестицидов, так как обладают рядом преимуществ: они экологически безопасны, не вызывают привыкания у вредителей и обладают
точечной эффективностью [1].
Одним из наиболее распространенных заболеваний тепличного томата
является фузариозное увядание, вызывающее раннее отмирание растений
© Д. Д. Зиганшин, М. А. Лукьянцев, А. С. Сироткин, 2020pаздел 164

и снижение урожая. Возбудитель болезни (Fusarium oxysporum, f. sp. lycopersici) развивается в ризосфере, проникает в проводящую систему растенийи распространяется по сосудам, выделяя токсины, разрушающие растительные клетки [2]. Для защиты растений томата от этих патогенов применяют микробиологические препараты на основе активных штаммов микроорганизмов [3].
Так, на основе штамма T. asperellum ВКПМ F-1323 компанией ООО «Органик парк» производится биофунгицид Оргамика Ф, представляющий собой суспензию конидий грибной культуры, полученной в процессе культивирования.
Для проверки эффективности использования биопрепарата ОргамикаФ в защищенном грунте в качестве тестовой культуры был выбран томат
гибрид F1 Примадонна. Мелкоделяночные испытания проводились в Свободзейском районе Преднестровской Молдавской Республики, в почвенно-климатической зоне, относящейся к черноземам лесостепной и степной
областей.
В ходе эксперимента проводили однократную обработку при протравливании автоматической машиной для обработки семян Hege 11 (WintersteigerAG, Австрия) и двукратную обработку опрыскиванием по вегетации ручным опрыскивателем Solo 462 (SOLO Kleinmotoren GmbH, Германия). Расход рабочей жидкости составил 1 л/т и 600 л/га. В качестве стандарта использовался препарат Фитоспорин-М, Ж (ООО «НВП «БашИнком», Россия) — биологический почвенный фунгицид на основе бактерий Bacillus
subtilis штамма 26Д с заявленным титром культуры 1 × 109 КОЕ/мл.
Схема эксперимента представлена в табл. 1, результаты представленыв табл. 2.
Таблица 1Схема обработки биопрепаратами томата гибрид F1 Примадонна
№
п/п
1
2
3
4

Вариант/препарат

Нормаприменения

Вариант 1 / Оргамика Ф, Ж
100 мл/кг +(1 × 108 КОЕ/мл)2,0 л/гаВариант 2 / Оргамика Ф, Ж
100 мл/кг +(1 × 108 КОЕ/мл)4,0 л/гаСтандарт / Фитоспорин-М, Ж 3 мл/кг + 1 л/
(1 × 109 КОЕ/мл)гаКонтроль (без обработки)–Схема применения
Протравливание +опрыскивание (двукратно)Протравливание +опрыскивание (двукратно)Протравливание +опрыскивание (двукратно)–Биотехнология

65Таблица 2Эффективность препарата Оргамика Ф, Ж против семеннойи почвенной инфекции на томате защищенного грунта
гибрид F1 Примадонна
Полевая всхожесть семян, %Развитие, %Эф-ть, %Развитие, %Эф-ть, %Развитие, %Эф-ть, %Развитие, %Эф-ть, %Развитие, %Эф-ть, %Развитие, %Эф-ть, %

3,5

63

6,5

58

13,2

42

2,0

88

3,8

82

5,0

72

95

3,0

68

6,3

59

12,8

44

1,6

90

2,8

87

4,5

75

Стандарт

94,8 3,7

61

7,0

55

13,1

43

1,6

90

3,1

85

4,7

74

21,4

111,5

93,7 9,5

–

15,4

–

22,9

–

16

–

20,7

–

18,1

–

19,2

100

Botrytis cinereaСерая плесень% к контролю
107,3
112,5

64-е
сутки

кг/м2

57-е
сутки

20,6

50-е
сутки

Урожть

21,6Вариант 2 Вариант 1Вариант опыта

95Контроль

Fusarium spp.
Фузариозные корневые
гнили
50-е
64-е
71-е
сутки
сутки
сутки

Против корневых гнилей фузариозной этиологии опытный биопрепаратв варианте 2 оказался эффективнее стандарта на 7 % при развитии болезнив контроле 9,5 %. В дальнейшем при развитии болезни в контроле (15–23 %)испытываемый препарат по эффективности не уступал стандарту. Против серой гнили на 50-е сутки роста испытываемый препарат в обеих кон-pаздел 166центрациях по эффективности был сравним со стандартом при развитии
болезни в контроле 16 %. В дальнейшем тенденция по эффективности сохранялась при развитии болезни в контроле 20,7–18,1 %. Увеличение урожая в варианте 2 (12,5 %) было аналогичным этому показателю в стандарте
(11,5 %), тогда как в варианте 1 (7,3 %) — уступало ему.
Таким образом, испытание препарата Оргамика Ф, Ж в качестве фунгицида для предпосевной обработки семян и обработки вегетирующих
растений томата защищенного грунта гибрид F1 Примадонна в условиях
Приднестровской Молдавской Республики показало, что по эффективности против корневых гнилей фузариозной этиологии, серой гнили, а такжепо урожайности опытный препарат оказался сравнимым со стандартным
препаратом Фитоспорин-М, Ж.
Литература
1. Анисимов А. И. Стратегии интегрированной защиты и широкомасштабного
контроля (единство и противоречия) : мат-лы 2-го Всеросс. съезда по защите растений. Т. I. Фитосанитарное оздоровление экосистем. СПб., 2005. С. 245–247.
2. Пискун С. Г., Поликсенова В. Д., Анохина В. С. Фитотоксическая активность
возбудителя фузариозного увядания томата. Минск, 2003.
3. Алексеева К. Л., Сметанина Л. Г. Биологическая защита томата от фузариозного увядания // Современные подходы и методы в защите растений. 2018. С. 13.

Биотехнология

67АНАЭРОБНЫЕ МИКРОБНЫЕ СООБЩЕСТВА,ВОВЛЕЧЕННЫЕ В ПРОЦЕСС СОВМЕСТНОЙ КОНВЕРСИИ
ПОСЛЕСПИРТОВОЙ БАРДЫ И СВЕКЛОВИЧНОГО ЖОМА *DYNAMICS OF ANAEROBIC MICROBIAL COMMUNITIESDURING THE PROCESS OF CO-DIGESTION OF DISTILLERS GRAINSWITH SOLUBLES AND SUGAR BEET PULP
Э. Э. Зиганшина, Д. Е. Белостоцкий,С. С. Булынина, П. Я. Ванков, А. М. Зиганшин
Казанский (Приволжский) федеральный университет
E. E. Ziganshina, D. E. Belostotskiy, S. S. Bulynina, P. Y. Vankov, A. M. Ziganshin
Kazan (Volga region) Federal University
E-mail: elvira.ziganshina@kpfu.ruАннотация
Увеличение объемов производства этилового спирта обозначило экологическую
значимость проблемы переработки послеспиртовой барды во всем мире. Свекловичный жом как отход свеклосахарной промышленности также является однимиз основных отходов многих регионов России. Использование данных отходов дляпроизводства биогаза путем микробной конверсии в анаэробных условиях способно снизить их негативное воздействие на окружающую среду. Результаты настоящей
работы показывают, что добавление гранулированного активированного угля стимулирует синтез биометана в ходе совместной микробной конверсии послеспиртовой барды и свекловичного жома.

Abstract
The increase in the production of ethanol, including its use as a biofuel, has indicatedthe environmental significance of the problem of processing distillery stillage all over theworld. Beet pulp as a waste of the sugar beet industry is also one of the main wastes inmany regions of Russia. The use of these substrates for biogas production through microbial anaerobic conversion can reduce their negative impact on the environment. The results© Э. Э. Зиганшина, Д. Е. Белостоцкий, С. С. Булынина, П. Я. Ванков, А. М. Зиганшин, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке «Российского фонда фундаментальных исследований» в рамках научного проекта № 18-29-25058.

68pаздел 1of this work show that the addition of granular activated carbon stimulates the synthesisof biomethane during the microbial conversion of distillers grains with solubles and sugar
beet pulp.

В настоящее время во всем мире ведется интенсивная деятельностьв поддержку возобновляемых источников для выработки энергии. В данном контексте процесс анаэробной микробной конверсии биомассы в биогаз является одним из выгодных технологий как с точки зрения высокой
энергетической ценности, так и экологической безопасности. Сельское хозяйство и переработка продукции агропромышленного комплекса в России
ежегодно производят огромное количество отходов, среди которых отходы
спиртового и сахарного производства являются одними из основных.
В данной работе впервые оценен потенциал выделения метана из послеспиртовой барды и жома сахарной свеклы в мезофильных условиях. Гранулированный активированный уголь (ГАУ) протестирован в качестве агента,стимулирующего анаэробный процесс. Так, отмечено, что внесение ГАУ(5 и 10 г/л) способствовало повышению скорости синтеза биометана за счетэффективного потребления микробными сообществами образующихся органических кислот и внедрения их в метаногенез. Для инициации анаэробного процесса применяли трансформированный коровий навоз.
Структура и динамика микробных сообществ, вовлеченных в совместную конверсию тестируемых субстратов, исследованы на основе анализа
гена 16S рРНК. Так, преобладающими бактериальными классами в анаэробных системах были Clostridia и Bacteroidia. Отмечено, что в реакторах, функционирующих с внесением ГАУ, наблюдалась более высокая численность
родов midas_g_2475 (Bacteroidales), DMER64 (Bacteroidales) и синтрофных
микроорганизмов рода Syntrophomonas (Clostridiales). Архейное сообществово всех системах было представлено доминантным родом Methanosarcina,а также метаногенами рода Methanoculleus, в то время как доля представителей родов Methanothrix и Methanomassiliicoccus была выше в реакторах с внесением ГАУ. Дальнейшие исследования позволят раскрыть и применить
успешные кооперации бактерий и метаноархей для эффективной анаэробной конверсии отходов.

Биотехнология

69

CONTERA: ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ
ПАНГЕНОМНЫХ ДАННЫХ
CONTERA: A TOOL FOR PREPARATION DATAFOR PANGENOMIC ANALYSIS
Д. С. Зилов, А. С. Комиссаров
Лаборатория прикладной геномики, SCAMT,Университет ИТМО, Санкт-Петербург
D. S. Zilov, A. S. Komissarov
Applied Genomics Laboratory, SCAMT Institute, ITMO University, St. Petersburg
E-mail: zilov@scamt-itmo.ruАннотация
Обычно сборщики геномов де-ново выдают по итогу сборки не цельные хромосомы, а только их части — контиги или скаффолды, которые отсортированы подлине. Тем самым сборка не является репрезентативной по отношению к реальному
геному. Дальнейшая структурная аннотация дает достаточно информации о наличии или отсутствии генов, но не о их ко-локализации. Эта информация может бытьполезной для предсказания функций малоизученных генов. Еще одна проблема
сборщиков — отсутствие проверки на контаминации и наличие адаптеров. В процессе подготовки ДНК для секвенирования возможно загрязнение образцов, чтовлияет на весь дальнейший анализ. Перед проведением сборки генома из геномных
прочтений удаляют адаптеры, но их удаление не всегда проходит удачно, что влияетна качество дальнейшей сборки. Мы создали Contera — инструмент для поиска контаминаций и адаптеров, ориентации и стандартизации черновых геномов. Conteraнаписан на Python может использоваться как на Unix системах, так и с помощью
веб-интерфейса. Мы предлагаем использовать инструмент для стандартизации сборок и дальнейшего использования в построении пан-геномов.

Abstract
De-novo genome assemblers frequently do not produce complete chromosomes, but
only parts of them — contigs or scaffolds, which are usually sorted by the length. Thus, theassembly is not representative in relation to the real genome. Further structural annotation
gives enough information about presence or absence of genes, but not about their co-lo© Д. С. Зилов, А. С. Комиссаров, 2020

70pаздел 1

calization. This information may be useful for predicting the functions of understudied
genes and may biophysics of transcription regulation. Another problem with assemblers
is the lack of contamination testing and the presence of adapters. In the process of preparing DNA for sequencing, samples may be contaminated, which affects all further analysis.
Adapters are removed from the reads before assembling the genome, but their removal
is not always successful, which affects the quality of further assembling. We have createdContera — a tool for orientation of draft genomes, contamination and adapters detection.
Contera is written on Python and can be used both on Unix systems and through the webinterface. We propose to use the tool for standardization of assemblies, so that in the future
it can be used to build better pan-genomes.

Methods and Algorithms
Two methods are used to determine the position and orientation of the contigs, with and without reference genome. In the first case, the contigs are aligned,sorted and oriented according to the reference genome. In the second case, when
there is no reference genome, the contigs are sorted according to GC-content.
Contaminants and adapters are detected by using BLAST versus all prokaryotic
genomes. Based on their results, only the adapters are removed from the genome,
and possible contaminations are written in a separate file.
Results
Contera analyzes one genome in an average of 20 minutes on 8 threads. As
a result, the user receives files:
1. Assembling a genome sorted according to reference or GC content without
adapters.
2. The list of possible contamination or genes obtained as a result of horizontaltransfer.
3. File with coordinates of adapters, if any.

Биотехнология

71ПЕРСПЕКТИВА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
ПРОШЕДШИХ БИОРЕМЕДИАЦИЮ И ОБОГАЩЕННЫХ
МИКРОВОДОРОСЛЬЮ CHLORELLA VULGARIS СТОЧНЫХ ВОДВ ГИДРОПОННОЙ СИСТЕМЕ
THE PROSPECT OF USING BIOREMEDIATED WASTEWATER ENRICHEDWITH MICROALGAE CHLORELLA VULGARISIN A HYDROPONIC SYSTEM
А. Д. Иванов
Кубанский государственный аграрный университет, Краснодар
A. D. Ivanov
Kuban State Agrarian University, Krasnodar
E-mail: Niob12345@gmail.com
Аннотация
Очистка сточных вод является важной экологической проблемой, перспективным решением которой является использование Chlorella vulgaris. В ходе исследования изучена возможность использования прошедших биоремедиацию сточных воддля выращивания овощных культур гидропонным способом.

Abstract
Wastewater treatment is an important environmental problem, and the use of Chlorella
vulgaris is a promising solution. In the course of the study, the possibility of using bioremediated wastewater for growing vegetables hydroponically was studied.

Рост населения приводит к увеличению сбросов сточных вод и нарушает экологическое равновесие, а также угрожает здоровью людей. Так,жидкие бытовые отходы могут содержать возбудителей брюшного тифа,кишечной палочки, а также яйца гельминтов. И если крупные фракции
можно удалить гравитационным осаждением, то биологические загрязнения требуют более глубокого подхода. Одним из решений такой проблемы
является биоремедиация [1], проводимая в промышленных очистных сооружениях.
© А. Д. Иванов, 2020pаздел 172

Но сточные воды, прошедшие процедуру очистки, могут использоватьсяи в сельском хозяйстве. Все более набирающая известность технология гидропоники [2] как нельзя лучше может быть использована в данном случае,ведь полученная в результате биоремедиации суспензия хлореллы, использованная в качестве водной среды, позволит извлечь дополнительную экономическую выгоду.
Цель данной работы — изучение возможности использования прошедших биологическую очистку сточных вод для выращивания овощей гидропонным методом.
В рамках данного исследования был проведен элементный анализ сточных вод, прошедших очистку, а также культивация овощных растений методом гидропоники с использованием трех разных водных сред, а именно:воды с микро- и макроэлементной добавкой, суспензии Chlorella vulgarisв сточной воде, суспензии Chlorella vulgaris в сточной воде и добавки.
Для выращивания была использована гидропонная система, собраннаяиз параллельно расположенных труб с вырезами для растений, оборудованная насосом, аэратором и LED-освещением. В качестве культуры былииспользованы томаты черри, огурец сорта Мурашка F1 и салат латук какнаиболее часто использующиеся в гидропонном производстве.
Важной чертой выращивания растений гидропонным методом является большая продуктивность, ведь в отличии от грунтового есть возможность создания так называемых вертикальных ферм, где на очень
ограниченной площади умещаются десятки и сотни растений. Особенно
перспективным этот факт выглядит в свете обилия сточных вод и их доступности.
Водные среды

Томат черри, г Огурец, г Салат латук, гВода с микроэлементной добавкой

38,2

59,7

263,5

Суспензия

42,5

68,6

310,4

Суспензия + добавка

45,9

72,8

328,7

Наилучший результат был получен при выращивании в смешанной среде хлорелла + микроэлементная добавка. В среднем прибавка в массе составила ~20 %, что указывает на перспективность использования очищенных
сточных вод для производства сельскохозяйственной продукции.

Биотехнология

73Литература
1. Шарапова И. Э. и др. Исследование и использование микроводорослей длябиоремедиации водных сред // Инновации в науке. 2012. № 13-1. С. 38–45.
2. Бабаханян М. А., Аствацатрян Н. З., Оганесян Л. Э. Возможности гидропоникив области производства экологически чистой продукции // Биол. журнал Армении.
1999. Т. 52, №. 1. С. 21–27.

pаздел 174ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ БИОАКТИВНОСТИ
АМФИПАТИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ
ПОЛИАСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ *SYNTHESIS AND STUDY OF BIOACTIVITY OF POLYASPARTIC ACIDAMPHIPATIC DERIVATIVES
М. И. Камалов, А. М. Павлюк, М. В. Моисеева, Д. В. Салахиева
Казанский (Приволжский) федеральный университет
M. I. Kamalov, A. M. Pavlyuk, M. V. Moiseeva, D. V. Salakhieva
Kazan (Volga Region) Federal University
E-mail: kamalovmi@gmail.com
Аннотация
Синтезированы полиаспарагиновая кислота и ее производные с алкиламинамии флуоресцентным красителем. Различными методами охарактеризованы коллоидные свойства полипептидов и их взаимодействие с клетками млекопитающих.

Abstract
Polyaspartic acid and its derivatives with alkylamines and fluorescent dye were synthesized. Colloidal properties of the polypeptides and their interaction with mammalian cells
was assessed by different techniques.

Полиаминокислоты — перспективная основа для создания биоактивных препаратов и переносчиков лекарственных средств. Полиаспарагиновую кислоту (pAsp) синтезировали методом жидкофазной термической
поликонденсации L-аспарагиновой кислоты с образованием промежуточного продукта — полисукцинимида (pSI), который далее гидролизовалив щелочных условиях [1]. В реакции аминолиза pSI с алкиламинами получали амфипатические конъюгаты pAsp различной степенью модификации.
© М. И. Камалов, А. М. Павлюк, М. В. Моисеева, Д. В. Салахиева, 2020*Исследования выполнены при поддержке гранта РНФ №19-74-00114 и в рамках
программы повышения конкурентоспособности Казанского (Приволжского) федерального университета среди ведущих мировых научно-образовательных центров
на 2013–2020 гг.

Биотехнология

75

Для оценки клеточной доступности полипептида и его производных
синтезировали конъюгаты с флуоресцентным красителем Lucifer yellow
ethylenediamine (pAsp-LY). Структуру полученных полипептидов подтверждали методами ИК-Фурье, ЯМР-спектроскопии и флуориметрии.
Анализ коллоидных свойств полипептидов в водных растворах методом
динамического рассеяния света показал, то амфипатические производные
pAsp образуют анионные микро- и наноразмерные ассоциаты с повышенной полидисперсностью. Установлено, что полипептиды ассоциируют наповерхности клеток млекопитающих, усиливая их отрицательный дзета-потенциал на 4,2–5,5 мВ. По данным МТТ-теста амфипатические производные pAsp не обладают цитотоксическим эффектом в широком диапазоне
концентраций (1–2000 мкг/мл). По данным лазерной сканирующей конфокальной микроскопии флуоресцентно-меченный конъюгат pAsp-LY проникает в клетки млекопитающих и обнаруживается в цитозоле в везикулярных структурах. Клеточное поглощение pAsp-LY было пропорциональноего концентрации в среде.
Полученные результаты могут быть использованы для создания биоактивных препаратов на основе амфипатических производных pAsp, обладающих высокой биосовместимостью и доступностью для клеток млекопитающих.
Литература
1. Salakhieva D., Shevchenko V., Nemeth C. et al. Structure-biocompatibility andtransfection activity relationships of cationic polyaspartamides with (dialkylamino)alkyl
and alkyl or hydroxyalkyl side groups // Int. J. Pharm. 2017. Vol. 517(1–2). P. 234–246.
doi:10.1016/j.ijpharm.2016.12.007

pаздел 176ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛЕКТИНОВ
БАКТЕРИЙ НА ФОРМИРОВАНИЕ БИОПЛЕНОК В ПРОЦЕССАХ
ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД
ESTIMATION OF THE ABILITY OF BACTERIAL EXTRACELLULARLECTINS FOR THE FORMATION OF BIOFILMS IN THE WASTE WATERTREATMENT
А. В. Кобелев, С. В. Клементьев, А. С. Сироткин, Т. В. Вдовина
Казанский национальный исследовательский
технологический университет
A. V. Kobelev, S. V. Clementyev, A. S. Sirotkin, T. V. Vdovina
KNRTU
E-mail: alexei-ksu@mail.ruАннотация
Исследована способность формировать биопленки у изолята р. Acinetobacter на
18 часов роста под влиянием нативных растворов и суспензий бактерий Bacillus subtilis и Escherichia coli. Экспериментальные исследования показали, что совместное
культивирование бактерий р. Acinetobacter с Bacillus subtilis и Escherichia coli увеличивают формирование биопленки в среднем на 66 % и 22 %, соответственно, по сравнению с контролем.

Abstract
The ability to form biofilms in the isolate of Acinetobacter spp. for 18 hours of growthunder the influence of native solutions and suspensions of bacteria Bacillus subtilis andEscherichia coli was investigated. Experimental studies have shown that the co-cultivationof bacteria Acinetobacter spp. with Bacillus subtilis and Escherichia coli, increased biofilm
formation, on average, by 66 % and 22 %, respectively, compared to controls.

В процессе формирования биопленок, участвующих в биологической
очистке сточных вод, важную роль выполняют лектины — сложные углеводспецифичные белки, которые могут участвовать в агрегировании микробных
клеток и их адгезионном связывании с поверхностью подложки (субстрата).
© А. В. Кобелев, С. В. Клементьев, А. С. Сироткин, Т. В. Вдовина, 2020Биотехнология

77Целью данной работы являлось исследование формирования биопленокпод воздействием внеклеточных лектинов культур бактерий, выделенныхиз сточных вод.
В работе были использованы изоляты бактерий р. Acinetobacter, Bacillus
subtilis и Escherichia coli, взятых из коллекции микроорганизмов кафедры
промышленной биотехнологии КНИТУ.
Вначале получали маточные культуры бактерий р. Acinetobacter, Bacillus
subtilis и Escherichia coli путем периодического культивирования на МПБв течение 18 часов. Далее выращенные клетки стерильно вносили в пробирки Эппендорфа с питательной средой в трех вариациях: 1) контроль — бездобавления нативного раствора и суспензий других бактериальных культур; 2) с добавлением нативного раствора (как источника внеклеточных
лектинов) Bacillus subtilis и Escherichia coli; 3) с добавлением суспензий бактерий Bacillus subtilis и Escherichia coli.
Нативные растворы получали путем трехкратного центрифугирования
культуральной жидкости при 10000 об/мин в течение 10 минут.
После 18 часов микробного роста в вариациях, описанных выше, культуральную жидкость сливали, пробирки промывали физиологическим
раствором и заполняли 0,1%-м водным раствором генцианвиолета. После
10 минут экспозиции раствор красителя сливали, тщательно промывали
дистиллированной водой для удаления красителя, не связанного с компонентами биопленки. Экстракцию связанного красителя осуществляли этанолом. Полученные экстракты анализировали фотометрически при длине
волны 570 нм.
Полученные результаты показали, что добавление к клеткам р. Acinetobacter нативных растворов Bacillus subtilis и E. coli обусловило увеличение
способности к формированию биопленки в среднем на 15 % и 10 % по сравнению с контролем. Следует отметить, что совместное культивирование
клеток р. Acinetobacter с клетками B. subtilis и E.coli обусловило увеличение
способности к формированию биопленки в среднем на 66 % и 22 % соответственно, по сравнению с контролем.

pаздел 178РОЛЬ L-КАРНИТИНА В СИСТЕМЕ ПОВЫШЕНИЯ
ХОЗЯЙСТВЕННО-ПОЛЕЗНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЯИЧНЫХ КУРВ РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ
THE ROLE OF L-CARNITINE IN A SYSTEM OF INCREASING
ECONOMIC INDICATORS OF HENS DURING EARLY ONTOGENESIS
В. А. Корчагина, Т. О. Азарнова,И. С. Луговая, Е. А. Золотухина, Д. В. Аншаков
Московская государственная академия ветеринарной медициныи биотехнологии — МВА им. К. И. Скрябина, Москва
V. A. Korchagina, T. O. Azarnova, I. S. Lygovaya,
E. A. Zolotukhina, D. V. Anshakov
FSBEI OF HE MSAVM&B — MBA named after K. I. Scriabin, Moscow
E-mail: korchagina.viktorya2014@yandex.ruАннотация
Предынкубационное трансовариальное использование L-карнитина определило повышение хозяйственно-полезных признаков у молодняка яичных кур в раннем онтогенезе, в частности, фиксировали увеличение живой массы, ректальной
температуры, скорости оперения, эмбриональной жизнеспособности. Полученные
позитивные эффекты были обусловлены снижением интенсивности липопероксидации.

Abstract
The use of L-Carnitine during pre-incubation transovarial process showed an increaseof economic benefits of young hens during early ontogenesis. To be more precise, an increase in weight, rectal temperature, plumage rate, and embryonic viability were recorded.
The obtained positive effects were due to a decrease in the intensity of lipid peroxidation.

Как известно, качество молодняка суточного возраста сопряженос результативностью промышленного птицеводства. Особи, полученные изпартии, где вывод цыплят яиц превосходит 78–80 %, с высокими показате© В. А. Корчагина, Т. О. Азарнова, И. С. Луговая, Е. А. Золотухина, Д. В. Аншаков,2020Биотехнология

79лями живой массы и других критериев развития, являются биологически
полноценными и востребованными.
Для повышения параметров развития используют различные биостимуляторы-антиоксиданты. В нашей работе будут представлены результаты исследований влияния L-карнитина на эмбриогенез яичных кур породы Декалб Уайт.
Проведенная экспериментальная работа показала, что оптимальный рас- творизучаемого метаболита способствовал снижению интенсивности липопероксидации, что выразилось в снижении МДА на 11,4 %, ОШ в 1,5 раза приповышении АОА в 1,3 раза соответственно по сравнению с контролем. Указанное свидетельствует о снижении вероятности деструктивных и дисфункциональных явлений в клетке, ткани и организме в целом. Заявленное сопровождалось увеличением массы молодняка суточного возраста на 11 %, а среднее
соотношение массы цыпленка к массе яйца составило в опытной группе 70 %
и 68 % в контрольной, бальной оценки ПАСГАР и ОПТИСТАРТ на 0,3 балла,ректальной температуры на 0,37 °С, эмбриональной жизнеспособности — вывод цыплят и выводимость имели преимущество относительно контроля на
12 % и 9 % соответственно (вывод и выводимость 88,89 % и 96,55 % у цыплят
опытной группы против 76,96 % и 87,78 % контрольной). При этом количество
отходов инкубации снизилось на всех этапах эмбриогенеза. Наиболее значимые различия фиксировали по числу «замерших», которые в опытной группене зафиксированы, при этом «кровяные кольца» встречались в два раза реже,а «задохликов» было в три раза меньше. Также одним из показателей полноценности является наклев, который в норме происходит между тупым концоми серединой яйца, а при неправильном положении или небольшом размере
эмбриона — в остром конце или в середине. На выводе наклев осуществлялся
в 50 % случаев ближе к середине против 80 % в контроле, а остальные 50 %
в опытной группе имели наклев ближе к тупому концу, что характеризовало
правильность положения и крупные размеры особей, при этом цыплята былиболее подвижными. Наряду с этим представители опытной группы имели более высокую скорость оперяемости (более длинные маховые перья I порядка встречались в большем количестве в опытной группе, в среднем на 5,5 %),что по данным Бессарабова Б.Ф. (2015) свидетельствует о более полноценном
использовании белка яйца цыпленком в эмбриогенезе. Указанные аспекты
создают запас прочности для вынужденного голодания молодняка суточного
возраста, что неизбежно и обусловлено производственным циклом, транспортировкой до цеха выращивания или подсобного хозяйства.
В ходе исследования нами зафиксировано, что предынкубационное использование L-карнитина имеет несомненную ценность для повышения хозяйственно-полезных показателей молодняка суточного возраста.

pаздел 180ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ЕВИРУСА ЖЕЛТОЙ ЛИХОРАДКИ
THE PRODUCTION RECOMBINANT PROTEIN E
OF YELLOW FEVER VIRUS
Е. И. Кривошеина, М. Ю. Карташов,Т. П. Микрюкова, С. А. Пьянков, В. А. Терновой
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
E. I. Krivosheina, M. Yu. Kartashov,T. P. Mikryukova, S. A. Pyankov, V. A. Ternovoi
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: krivosheina_ei@vector.nsc.ruАннотация
Получен бактериальный штамм-продуцент рекомбинантного белка Е вируса
желтой лихорадки, содержащий антигенные детерминанты характерные для этого
вируса, и выделен очищенный рекомбинантный антиген. На его основе сконструирована экспериментальная тест-система для выявления антивирусных антител IgGчеловека, которая успешно апробирована для выявления антител в сыворотках иммунизированных людей.

Abstract
We obtained a bacterial strain-producer of the recombinant protein E of the yellow
fever virus containing viral epitopes and the purified recombinant antigen was isolated. On
its basis the experimental EIA test system for the detection of human anti-viral IgG antibodies has been constructed which has been successfully tested for the detection of serum
antibodies in immunized humans.

На территории России циркуляция вируса желтой лихорадки (ВЖЛ) неотмечена, но своевременная диагностика необходима для идентификации
завозных случаев данной инфекции и оценки эффективности иммунизации вакциной против вируса желтой лихорадки. Для создания специфической иммунологической тест-системы для выявления антител против ВЖЛ© Е. И. Кривошеина, М. Ю. Карташов, Т. П. Микрюкова, С. А. Пьянков, В. А. Терновой, 2020Биотехнология

81необходимо выбрать и получить вирусный антиген, который позволит максимально эффективно выявлять антивирусные антитела в организме инфицированного или вакцинированного человека. Одним из таких белков
является поверхностный белок Е ВЖЛ. По литературным данным, его пространственную структуру формируют три домена, причем третий домен,формирующий иммуноглобулин-подобную структуру, несет совокупность
эпитопов, обеспечивающих нейтрализацию вируса и дифференциацию дляразличных флавивирусов.
Цель работы — получение фрагмента рекомбинантного белка E вируса
желтой лихорадки и оценка его использования для выявления антител человека к вирусу желтой лихорадки.
Нами получена гибридная плазмида pET160-Е, содержащая фрагмент
гена белка E в бактериальной системе E.coli. Созданный бактериальный
штамм-продуцент обеспечивал получение рекомбинантного фрагмента
белка Е ВЖЛ и выделение очищенного рекомбинантного антигена. Оптимизация оптимальных условий наработки рекомбинантного белка Е ВЖЛобеспечила высокий синтез рекомбинантного белка, который достигал до
7,1 мкг/мл при пятичасовой инкубации после добавления ИПТГ.
Для определения диагностической значимости полученного рекомбинантного белка Е ВЖЛ нами был проведен ряд экспериментов с использованием ИФА для тестирования сывороток крови добровольцев, которые
содержали антитела к ВЖЛ, вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ), вирусу
лихорадки денге, вирусу гепатита С. В качестве отрицательного контроля
использовали сыворотку крови человека, которая не содержит антител ник одному из вышеперечисленных вирусов. Присутствие или отсутствие
антител в используемых сыворотках было подтверждено коммерческими
тест-системами для выявления IgG/IgM к ВКЭ, вирусу лихорадки денге,вирусу гепатита С. Результаты тестирования аффинно-очищенного рекомбинантного белка Е ВЖЛ показывают, что использование рекомбинантного аналога вирусного белка Е позволяет выявлять специфические антитела к ВЖЛ в сыворотках вакцинированных людей в экспериментальной
тест-системе ИФА. При этом полученный рекомбинантный антиген неимеет перекрестных иммунных реакций с другими флавивирусами (вирусом денге, вирусом клещевого энцефалита и вирусом гепатита С). Следовательно, мы можем сделать вывод, что полученный рекомбинантный белокЕ ВЖЛ можно использовать для дифференциальной иммунодиагностикис целью выявления антител к ВЖЛ.

pаздел 182ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ОТРАЖЕННЫХИ МАЛОКРАТНО РАССЕЯННЫХ ФОТОНОВНА ПРОЦЕСС ПОСТРОЕНИЯ СТРУКТУРНЫХ ИЗОБРАЖЕНИЙВ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИSTUDY OF THE INFLUENCE OF REFLECTED AND LOW SCATTEREDPHOTONS ON THE PROCESS OF CONSTRUCTION OF STRUCTURAL
IMAGES IN OPTICAL COHERENT TOMOGRAPHY
И. В. Кулешов, В. О. Черешнев
Тамбовский государственный технический университет
I. V. Kuleshov, V. O. Chereshnev
Tambov State Technical University
E-mail: vitaliy-cha1999@yandex.ruАннотация
Представлены результаты исследования, в ходе которого получены матрицы
дисперсии структурных изображений оптического когерентного томографа биотканей человека и кровеносных сосудов in vivo, отражающие процессы рассеяния и отражения фотонов.

Abstract
The paper presents the results of a study in the course of which dispersion matrices ofstructural images of an optical coherence tomograph of human biological tissues and bloodvessels in vivo, reflecting the processes of scattering and reflection of photons, were obtained.

Многократное рассеивание оптического излучения, наличие спекл-шумов, а также характеристики используемого источника излучения и видасканирования в плече образца значительно усложняют биомедицинскую
визуализацию структур биообъекта при помощи ОКТ. Изучение основополагающих принципов ОКТ, в частности исследование роли отраженныхи малократно рассеянных фотонов на процесс построения структурных
изображений, позволит в дальнейшем усовершенствовать технические
средства диагностики в офтальмологии и дерматологии [1].
© И. В. Кулешов, В. О. Черешнев, 2020Биотехнология

83Цель данной работы заключается в дифференцировании отраженныхи малократно рассеянных фотонов посредством построения вариационной
матрицы структурного ОКТ-изображения.
Основным объектом исследования являются структурные ОКТ-изображения кожных покровов и кровеносных сосудов человека in vivo, полученные при помощи нестандартной оптической системы на базе интерферометра Майкельсона.
Показатели анизотропии и коэффициентов рассеяния ткани и сосудов
сильно различаются, следовательно, им соответствует различное количество актов взаимодействия, что выражается разностью между соседними
А-сканами изображения [2, 3]. Для проверки данной гипотезы были рассчитаны дисперсии интенсивности соответствующих пикселей изображения.
Дисперсия была рассчитана по стандартной формуле:x)
2  i 1(xi
,
n 1
n

2

где n изначально равнялось 5. А-скан исходного изображения и дисперсиядля пяти соседних сканов представлена на рисунке.

Структурное ОКТ-изображение кожи, сосуда и крови человека in vivo (слева)и изображение матрицы дисперсий (справа); размер изображения 2 × 2 мм

p=ƒдел 184Таким образом, построение матрицы дисперсий структурных ОКТизображений (В-сканов) позволяет производить моделирование вли- янияотраженных и малократно рассеянных назад фотонов, демонстрирует
возможность дифференциации различных типов структурных изображений in vivo, обладает потенциалом для увеличения ГКЗ и визуализации глубоких структур глубоких слоев тканей.
Литература
1. Черешнев В. О. Исследование отраженных и малократно рассеянных фотонов
посредством построения матрицы дисперсий ОКТ изображений / В. О. Черешнев,С. Н. Абдулкарим, С. Г. Проскурин // Современные наукоемкие технологии. 2019.
№ 12-1. С. 118–122.
2. Черешнев В. О. Дифференциация структур кожи, кровеносных сосудов и крови посредством построения вариационной матрицы ОКТ изображения / В. О. Черешнев, И. М. Романенко, И. В. Кулешов, С. Г. Проскурин // Современные наукоемкие технологии. 2019. № 10 (Ч. 2). С. 319–323.
3. Черешнев В. О. Построение ОКТ изображений биологических тканей на основе анализа интенсивности пикселей / В. О. Черешнев, С. В. Фролов, А. Ю. Потлов,С. Г. Проскурин // Модели, системы, сети в экономике, технике, природе и обществе.
2019. № 3 (31). C. 104–112.

a,%2е.…%л%г,85ВАЛИДАЦИЯ СИСТЕМЫ ВОДОПОДГОТОВКИ И ВОДЫИНЪЕКЦИОННОЙ В ГНЦ ВБ «ВЕКТОР» РОСПОТРЕБНАДЗОРА
VALIDATION OF WATER TREATMENT SYSTEM AND INJECTION
WATER IN THE SRC VB VECTOR ROSPOTREBNADZOR
Н. С. Куцерубова, С. В. Усова, Е. С. Башкина,М. П. Богрянцева, Е. А. Нечаева
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово
N. S. Kutserubova, S. V. Usova, E. S. Bashkina,
M. P. Bogryantseva, E. A. Nechaeva
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: kutserubova_ns@vector.nsc.ruАннотация
Вода занимает ключевое место в любом современном фармацевтическом производстве. И в отношении валидации подготовка воды относится к наиболее сложными ответственным процессам, которые требуют тщательного подхода и непосредственно влияют на качество лекарственных препаратов. Согласно рекомендациям PIC, основной целью валидации системы водоподготовки является получение
убедительного подтверждения, что система водоподготовки является стабильнойи контролируемой.

Abstract
Water plays a key role in any modern pharmaceutical production. And in terms ofvalidation, water preparation is one of the most complex and responsible processes that
require a careful approach and directly affect the quality of drugs. According to the PIC recommendations, the main goal of water treatment system validation is to obtain convincing
confirmation that the water treatment system is stable and controllable.

Целью данного исследования является получение документального
подтверждения того, что система водоподготовки, применяемая в ГНЦ ВБ«Вектор» Роспотребнадзора, является воспроизводимой.
© Н. С. Куцерубова, С. В. Усова, Е. С. Башкина, М. П. Богрянцева, Е. А. Нечаева,2020

pаздел 186

Для получения воды для инъекций используются методы многоступенчатой очистки, обратный осмос, ионный обмен с дальнейшей поэтапной
дистилляцией. По эффективности эта система не имеет равных, удаляя
99,9 % примесей.
Прежде чем валидировать процесс водоподготовки, нами были разработаны нормативные документы, валидационный мастер-план, отражающийвсе необходимые моменты, проводимые при валидации.
Была проведена квалификация оборудования, использованного при валидации, квалифицированы помещения, где находится система водоподготовки.
Забор проб осуществляли согласно валидационному мастер-плану в течение 5 месяцев.
При валидации были использованы лабораторные методы оценки показателей воды (электропроводность, рН, микробиологическая чистота, бактериальные эндотоксины).
Результаты проведенной работы представлены в таблице.
Наименование
показателейрН (водородный
показатель), ед. рНЭлектропроводность,мкСм/см
Тяжелые металлы, %Микробиологическая
чистота
Бактериальные
эндотоксины, ЕЭ/млЗаключение:Контрольные точки
1

2

3

4

5

5,8

5,8

5,8

5,9

5,7

0,61

0,60

0,66

0,74

0,77

Среднее M ± m
5,8 ± 0,03
p > 0,05 при p = 0,95
0,68 ± 0,03
p > 0,05 при p = 0,95Менее 0,00001

Менее 0,00001

Соответствует требованиям

Соответствует
требованиям

Менее 0,25 ЕЭ/млМенее 0,25 ЕЭ/млВода для инъекций соответствует требованиям НДКонтрольные анализы воды свидетельствуют, что процесс водоподготовки приводит к получению надежных и соответствующих нормам спецификации результатов, и поэтому считается валидированным.

Биотехнология

87СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ГЕНОМНЫЙ АНАЛИЗ
О-АНТИГЕН СВЯЗАННЫХ ГЕНОВ В ГЕНОМАХ БАКТЕРИЙ
COMPARATIVE GENOMICS ANALYSIS OF O-ANTIGEN RELATEDGENES IN PROKARYOTIC GENOMES
П. Д. Кучур, Д. С. Зилов, А. С. Комиссаров
Лаборатория прикладной геномики, SCAMT,Университет ИТМО, Санкт-Петербург
P. Kuchur, D. Zilov, A. Komissarov
Applied Genomics Laboratory, SCAMT, ITMO University, St. Petersburg
E-mail: chesnokova@scamt-itmo.ruАннотация

О-антиген бактерий является поверхностной клеточной структурой, опосредующей взаимодействие бактерий с окружающей средой, в том числе с растениямии животными [1]. В случае последних О-антиген приобретает патогенные свойства [2]. Данная работа является первым масштабным анализом всех бактериальных геномов с целью поиска генов, вовлеченных в синтез О-антигена.

Abstract
Somatic or bacterial O-antigen is a surface cell structure that provides interaction between bacteria and the environment including plants and animals [1]. In the case of animals, O-antigen acquires pathogeniсity [2]. Our research is the first large-scale analysisof all bacteria sequences, which are obtained from NCBI to identify O-antigen in various
taxonomic groups.

Bacterial genomes were obtained from the ftp site of the NCBI database. The
size of the downloaded data was 736 billion bp, forming 19320047 fragments, ofwhich 38725 are plasmid sequences. The obtained data were annotated with the
PROKKA program. To move from the unique IDs of each fragment to a complete bacterial taxonomy, a converter was written using the ‘taxonomizr’ package of the R language. Search for the key genes involved in the synthesis of theO antigen was carried out using a Python script. The search for the key O-antigen genes (wzx — 54709 copies/wzy — 28593/wzz — 52561) demonstrates its© П. Д. Кучур, Д. С. Зилов, А. С. Комиссаров, 2020pаздел 1

88

presence in 593 bacterial genera belonging to 173 families. It is noteworthy thatabout a third (42) of families are gram-positive, although O-antigen is typical forgram-negative bacteria. Genes involved in O-antigen biosynthesis are also foundin plasmids. These plasmids are identified in Rhizobium favelukesii, R. leguminosarum, R. phaseoli, Escherichia coli, Serratia marcescens and Klebsiella variicola.
The most frequent gene is wzxE, which was identified in 99 plasmids of Rhizobium leguminosarum. In addition, the plasmids also contain single copies of thefollowing genes: wzxC, wzyE, wzzB, and wzzE. The total number of genes for thebiosynthesis of O-antigens in plasmids is 127 copies. The results obtained willserve as an aid for the study of the genetic basis for the synthesis and variability ofO-antigenic structures in a wide group of prokaryotic organisms, including those
not only pathogenic for humans.
References
1. Holt K. E., Lassalle F., Wyres K. L. et al. Diversity and evolution of surface
polysaccharide synthesis loci in Enterobacteriales // ISME Journal. 2020. Vol. 14(7).
P. 1713–1730.
2. Velichko N. S. et al. Structural and genetic characterization of the colitose-containing
O-specific polysaccharide from the lipopolysaccharide of Herbaspirillum frisingense GSF30T // Int. J. Biol. Macromol. 2020. Vol. 161. P. 891–897.

Биотехнология

89микроРНК-ОПОСРЕДОВАННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СПЛАЙСИНГАДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ *microRNA-MEDIATED REGULATION OF SPLICINGFOR TREATMENT OF GENETIC DISEASES
Н. А. Логвина 1, Н. Шомрон2, Л. Фарберов2, Т. С. Зацепин 1
1Сколковский институт науки и техники, Москва
2Тель-Авивский университет, Израиль

N. A. Logvina 1, N. Shomron 2, L. Farberov 2, T. S. Zatsepin 1
1

Skolkovo Institute of Science and Technology, Moscow
2
Tel Aviv University, Israel
E-mail: n.logvina@skoltech.ruАннотация
Синдром Вагнера является генетическим заболеванием, которое может вызываться рядом мононуклеотидных замен в гене VCAN. Все известные мутации вызывают нарушения сплайсинга, приводящие к пропуску экзона мРНК. Это открывает
возможность лечения за счет регуляции сплайсинга. Нами представлена новая система регуляции альтернативного сплайсинга с помощью пре-микроРНК и показана
возможность коррекции сплайсинга мРНК гена VCAN с помощью олигонуклеотидных переключателей сплайсинга (SSO).

Abstract
Wagner’s syndrome is a genetic disorder that can be caused by various SNP in the
VCAN gene. In all cases described in the literature, mutations cause splicing disorders,leading to an increased level of mRNA that does not contain the required exon. This opens
up the possibility of treatment by regulating splicing with therapeutic oligonucleotides. We
present here a new system for regulating alternative splicing using pre-miRNAs and analyze the possibility of correcting VCAN mRNA splicing using oligonucleotide splicing
switches (SSO).

© Н. А. Логвина, Н. Шомрон, Л. Фарберов, Т. С. Зацепин, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-54-06009.

pаздел 190Альтернативный сплайсинг, заключающийся в изменении включенияили пропуска экзонов, приводит к получению разных транскриптов мРНК.
В процессе сплайсинга происходит взаимодействие двух сложных РНК-белковых комплексов — сплайсосомы и «микропроцессора» — комплекса белков, участвующих в биогенезе микроРНК на ранних стадиях. При этом существуют как механизмы координации, так и конкуренции между сплайсосомой и «микропроцессором». Новый механизм регуляции сплайсинга
реализуется за счет комплементарности отдельных пре-микроРНК с компонентами сплайсосомы. Взаимодействие пре-микроРНК со сплайсосомной РНК сдвигает равновесие в сторону диссоциации сплайсосомного комплекса и изменяет эффективность включения экзонов с необычно высоким
участком комплементарности сплайс-сайта к U1. Такие сплайс-сайты часто
оказываются малоэффективными, поскольку слишком сильное взаимодействие U1 с мРНК затрудняет конформационные перестройки в сплайсосомеи способствует исключению экзона.
Одним из генов, содержащих такой экзон, является VCAN, мутациив котором вызывают синдром Вагнера. Причиной заболевания являются
мутации, затрагивающие сплайсинг экзонов 7 и 8. Для лечения этого заболевания возможна коррекция сплайсинга либо с помощью антисмысловых
олигонуклеотидов, либо путем регуляции описанного выше нового механизма. В данной работе предложена новая система коррекции сплайсингас помощью микроРНК, а также изменение сплайснга VCAN SSO олигонуклеотидами.
Литература
1. Agranat-Tamir L. et al. Nucleic Acids Res. 2014. Vol. 42 (7). P. 4640–4651. https://doi.
org/10.1093/nar/gkt1413
2. Mattioli, C. et al. Wiley Interdiscip Rev RNA. 2014. Vol. 5 (5). P. 647–658. https://doi.
org/10.1002/wrna.1236

Биотехнология

91ОБНАРУЖЕНИЕ РНК SARS-CoV-2 У БОЛЬНЫХ
COVID-19 И БЕССИМПТОМНЫХ НОСИТЕЛЕЙ МЕТОДАМИ
ЦИФРОВОЙ ПЦР И ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ
DETECTION OF SARS-CoV-2 RNA FOR COVID-19 PATIENTSAND ASYMPTOMATIC CASES OF INFECTION
BY REAL-TIME AND DIGITAL PCR
Р. Ю. Лутковский, В. А. Терновой,Е. П. Пономарева, А. В. Гладышева, Е. В. ЧубФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
R. Yu. Lutkovskii, V. A. Ternovoi, E. P. Ponomareva, A. V. Gladysheva, E. V. ChubState Research Centre of Virology and Biotechnology“Vector”, Koltsovo
E-mail: lutkovsky_ryu@vector.nsc.ruАннотацияДля выявления РНК SARS-CoV-2 нами были разработаны и использованы зарегистрированный Росздравнадзором РФ набор реагентов для ПЦР в реальном времени и лабораторная система цифровой ПЦР. Сравнение эффективности этих методов
проводили на панели из 171 случайно отобранных образцов носоглоточных смывов
пациентов c COVID-19. Оба метода показали свою высокую эффективность для выявления вирусной РНК, которая достигала 96,5 % для цифрового ПЦР. Полученные
результаты позволяют утверждать, что метод цифровой ПЦР более эффективно
выявлял вирусную РНК SARS-CoV-2 и показал свою высокую эффективность длябессимптомных пациентов.

Abstract
To detect SARS-CoV-2 RNA, we developed and used a kit for real-time PCR registeredby the Federal Service for Surveillance in Healthcare of the Russian Federation and experimental digital PCR system. Laboratory testing was performed on 171 randomly selectedpatient samples. Both methods showed high effectiveness for detecting viral RNA, whichreached 96.5 % for digital PCR. The results suggest that the digital PCR is more effectively
detected viral RNA SARS-CoV-2 and showed its high effectiveness for asymptomatic patients with SARS-CoV-2 infection.
© Р.Ю. Лутковский, В. А. Терновой, Е. П. Пономарева, А. В. Гладышева, Е. В. Чуб,
2020

92

pаздел 1В конце 2019 года в городе Ухань в Китае началось быстрое распространение нового респираторного вирусного заболевания, вызываемого коронавирусом SARS-CoV-2. Особенностью новой коронавирусной инфекции(COVID-19) является возможное развитие тяжелой вирусной пневмониис высоким уровнем летальности.
Методы ПЦР широко используются для диагностики различных вирусных заболеваний. Поэтому для выявления РНК SARS-CoV-2 нами былиразработаны и использованы зарегистрированный Росздравнадзором РФнабор реагентов для ПЦР в реальном времени (qPCR) и лабораторная система цифровой ПЦР (dPCR).
Лабораторное тестирование проводилось на 171 случайно отобранных
образцов носоглоточных смывов от пациентов, госпитализированных с января по апрель 2020 года. Сопоставление результатов этих двух методов
показало, что при qPCR количество выявленных положительных образцов
составило 109, отрицательных — 44, а сомнительных — 18. Тогда как у dPCRбыло обнаружено 115 положительных, 6 отрицательных и 50 сомнительных
образцов соответственно. Тем самым можно утверждать, что точность метода dPCR выше, чем у qPCR, и она составила 96,5 % для dPCR и только
74,3 % qPCR. При этом результаты, полученные методом qPCR, в целом
совпали с результатами dPCR. Учитывая полученные данные по сравнительному исследованию qPCR и dPCR, можно сделать вывод, что метод
цифровой ПЦР позволяет выявить существенно больше положительных по
SARS-CoV-2 образцов, собранных от реальных пациентов.
Далее нами была оценена концентрация вирусных частиц на различных
сроках инфекционного процесса у пациентов (количество копий вируснойРНК на мкл. пробы). Для анализа были отобраны 6 пациентов, у которых
забор образцов происходил в разные периоды времени заболевания. Былообнаружено, что количество вирусных частиц в момент забора образца припервичном обращении за медицинской помощью составляло около 100 копий/мкл. образца. Через двое суток концентрация вирусной РНК уменьшалась до 1 копии/мкл. У 50 пациентов, подозрительных на COVID-19, инфекция протекала в бессимптомной форме. Однако у них было обнаружено наличие вирусной РНК в носоглоточных смывах. Это могло позволять
бессимптомным пациентам инфицировать окружающих и распространять
инфекцию в популяции человека.
Таким образом, использование цифровой ПЦР позволило более эффективно выявлять РНК SARS-CoV-2 в носоглоточных смывах человека. Причем метод оказался наиболее эффективным для выявления бессимптомных
случаев коронавирусной инфекции у человека.

Биотехнология

93РАЗРАБОТКА ПАНЕЛИ РЕКОМБИНАНТНЫХ
ИММУНОДОМИНАНТНЫХ БЕЛКОВ ОРТОПОКСВИРУСОВДЛЯ ОТБОРА ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ
МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
DEVELOPMENT OF A PANEL OF RECOMBINANT IMMUNODOMINANTPROTEINS OF ORTHOPOXVIRUSES FOR SELECTION OF HIGHLY
EFFECTIVE NEUTRALIZING MONOCLONAL ANTIBODIES
Ю. А. Меркульева, Д. Н. Щербаков
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
Iu. A. Merkuleva, D. N. ShcherbakovState Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: j.a.merkulyeva@gmail.com
АннотацияВ работе впервые разработаны продуценты иммунодоминантных белков A30,
B7, D8 и M1, патогенных для человека ортопоксвирусов на основе клеточных линий
млекопитающих. Полученные рекомбинантные белки могут быть использованыв качестве лигандов для отбора эффективных моноклональных антител.

Аbstract
In this work, mammalian cell lines producing immunodominant proteins A30, B7, D8,
and M1 of orthopoxviruses pathogenic for humans have been developed for the first time.
These recombinant proteins can be used as ligands for the selection of effective monoclonal
antibodies.

Род Orthopoxviruses (OPV) включает несколько патогенных для человека
вирусов: вирус натуральной оспы (VARV), осповакцины (VACV), оспы обезьян (MPXV), оспы коров (CPXV) и оспы верблюдов (CMLV) [1]. Участившиеся вспышки заболеваний, вызванных OPV, и почти полное отсутствие
популяционного иммунитета требуют разработки эффективных средств
терапии и профилактики, в первую очередь — широко нейтрализующих
моноклональных антител (МкАТ) и вакцин нового поколения. Показано,© Ю. А. Меркульева, Д. Н. Щербаков, 2020pаздел 194

что антитела против иммунодоминантных белков OPV способны защитить
организм лабораторных животных от развития инфекции [2]. Поэтому первым шагом для отбора антител является получение рекомбинантных аналогов этих белков.
Целью данной работы была разработка продуцентов рекомбинантных
вариантов иммунодоминантных белков OPV на основе клеток млекопитающих.
На первом этапе на основе литературных данных и информации, представленной в базе иммунных эпитопов IEDB, были выбраны четыре иммунодоминантных белка OPV.
Нуклеотидные последовательности, кодирующие внеклеточные домены
белков А27, В7 и L1 VARV, амплифицировали при помощи ПЦР с введением
сайтов рестрикции и добавлением н. п., кодирующих His- и Avi-тэги.
Полученные фрагменты встраивали в интегративный вектор pVEAL2,
обеспечивающий стабильную экспрессию генов в клетках млекопитающих.
Затем на основе сравнительного анализа первичной структуры белка
D8 вирусов VARV, MPXV, VACV, CPXV и CMLV выводили усредненную
аминокислотную последовательность белка и проводили оптимизацию кодонного состава. Итоговую нуклеотидную последовательность синтезировали и встраивали в вектор pVEAL2.
Далее проводили липидо-катионную трансфекцию клеток линий СНОК1 и НЕК293FТ полученными плазмидами, а также селекцию положительных клонов добавлением антибиотика пуромицина. Культуры-продуценты культивировали на роллерных установках и проводили очистку
культуральной жидкости, содержащей рекомбинантные белки, с помощью
Ni-аффинной хроматографии.
Оценку полученных препаратов проводили с помощью белкового электрофореза по Лэммли.
При помощи иммунологических методов было показано, что рекомбинантные белки взаимодействуют со специфическими МкАТ, полученными
ранее и сыворотками крови реконвалесцентных доноров.
Литература
1. Virus taxonomy: 2017 release // ICTV. URL: http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy (дата обращения: 30.08.2020).
2. Moss B. Smallpox vaccines: Targets of protective immunity // Immunol. Rev. 2011.
Vol. 239(1). P. 8–26.

Биотехнология

95ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КОКТЕЙЛЯ БАКТЕРИОФАГОВДЛЯ ЭЛИМИНАЦИИ САЛЬМОНЕЛЛС ПОВЕРХНОСТИ КУРИНОГО ФИЛЕUSING BACTERIOPHAGE COCTAILS TO ELIMINATE SALMONELLAFROM THE SURFACE OF CHICKEN FILLET
Т. Э. Мизаева, К. М. Багандова, А. В. Алёшкин,И. А. Кисeлева, Э. Р. Зулькарнеев
Московский научно-исследовательский институт эпидемиологиии микробиологии им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора
T. E. Mizaeva, K. M. Bagandova, A. V. Aleshkin, I. A. Kiseleva, E. R. Zulkarneev
G. N. Gabrichevsky Moscow Research Institutefor Epidemiology and Microbiology Rospotrebnadzor
E-mail: toita.mizaeva@bk.ruАннотация
Бактерии рода Salmonella играют большую роль в загрязнении пищевых продуктов, инфицировании домашних птиц, скота и, как следствие, человека. Появление
серотипов сальмонелл с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) оказывает большое влияние на эффективность лечения антибиотиками, а увеличение
распространенности штаммов с МЛУ может привести к увеличению смертностиот сальмонеллезных инфекций. Альтернативой классическим химическим агентам
могут стать бактериофаги — вирусы, избирательно инфицирующие бактериальные
клетки, принадлежащие к одному виду или роду с последующим лизисом бактерии-хозяина, которые могут использоваться для деконтаминации овощей, фруктов,мяса, рыбы и т. д. в процессе их заводской переработки, перед упаковкой полуфабрикатов и готовой к употреблению продукции.

Abstract
Salmonella spp. play an important role in food contamination, infection of poultry,
livestock and, as a result, humans. The emergence of multidrug-resistant (MDR) Salmonella serotypes has a major impact on the effectiveness of antibiotic treatment, and an increasein the prevalence of MDR strains may lead to an increase in mortality from Salmonella© Т. Э. Мизаева, К. М. Багандова, А. В. Алёшкин, И. А. Кисeлева, Э. Р. Зулькарнеев, 2020

96pаздел 1

infections. An alternative to classical chemical agents can be bacteriophages — viruses that
selectively infect bacterial cells belonging to the same species or genus, followed by lysis of
the host bacterium, which can be used to decontaminate vegetables, fruits, meat, fish, etc.
in the process of their factory processing, before the packaging of semi-finished products
and ready-to-use products.

Дикий штамм Salmonella Enteritidis, выделенный на птицеводческом
предприятии в 2018 году, был использован для контаминации образцов куриного филе. Три вирулентных бактериофага, активных в отношении Salmonella, были получены из коллекции ФБУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского. Охлажденное куриное филе разделили на кусочки 5×5 см 2. Образцыв количестве 54 шт. были распределены по 18 кусочков в каждой группе.
Филе контаминировали S. Enteritidis в титре 105 КОЕ/мл по 100 мкл на каждый кусочек, оставляя на 15 мин. для подсыхания. Затем опытные образцы
обрабатывали коктейлем бактериофагов двумя разными разведениями: 1-югруппу в титре 109 БОЕ/мл, 2-ю группу в титре 106 БОЕ/мл, а на контрольные наносили SM буфер и растирали по всей поверхности образца. Опытные и контрольные образцы подсушивали в течение 15 мин. при комнатной температуре, герметично закрывали и закладывали на хранение при
t 4 ± 2 °С. Микробиологический мониторинг осуществляли в шести точках:30 мин., 1, 2, 3, 6, 10 дней. Количество активных клеток Salmonella spp. определяли в соответствии с ГОСТ 31659–12 из десятикратных разведений на
XLD агаре.
Коктейль бактериофагов позволил снизить количество клеток Salmonella в группе 1 на 3,2 log КОЕ/г (снижение более 99 %), в группе 2 на 2,1 log
КОЕ/г (снижение более 99 %) по сравнению с контрольной группой в течение 24–48 часов. Используемые в эксперименте бактериофаги обладают
широким спектром литической активности и эффективны на сложной поверхности с точки зрения адсорбции бактериофага на клетке-мишени.
Таким образом, полученные результаты показали, что бактериофагив качестве как средства биоконтроля могут использоваться для существенного снижения бактериальной обсемененности сальмонеллами пищевых
продуктов, в том числе куриного филе.

Биотехнология

97МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
ПЕПТИДОВ И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ *METHOD FOR ISOLATION AND PURIFICATION OF BIOLOGICALLYACTIVE PEPTIDES AND STUDY OF PROPERTIES
И. С. Милентьева, Л. С. Дышлюк
Кемеровский государственный университетI.

S. Milenteva, L. S. Dyshlyuk
Kemerovo State University
E-mail: irazumnikova@mail.ruАннотацияВ структуре белков, которые содержатся в пищевых продуктах, обнаружены
аминокислотные последовательности, имеющие соответствие с биологически активными пептидами. Разработан метод выделения и очистки биологически активных пептидов, содержащихся в гидролизатах казеина. Исследованы антиоксидантные, пребиотические свойства биологически активных пептидов, выделенных избелков молока.

Abstract
In the structure of proteins contained in food, amino acid sequences have been foundthat correspond to biologically active peptides. A method has been developed for the isolation and purification of biologically active peptides contained in casein hydrolysates. The
antioxidant, prebiotic properties of biologically active peptides isolated from milk proteins
have been studied.

На рынке биологически активных добавок в последнее время появляются БАДы на основе пептидов для профилактики гипертонии. Все эти БАДыпредставлены в основном импортными производителями. Поэтому производство биологически активных добавок на основе пептидов или обогащение кисломолочных продуктов, например молока, является актуальным.
© И. С. Милентьева, Л. С. Дышлюк, 2020*Работа выполнена в рамках гранта Президента РФ по государственной поддержке ведущих научных школ (НШ-2694.2020.4).

98pаздел 1Интерес представляет разработка метода выделения и очистки биологически активных пептидов, содержащихся в гидролизатах казеина. Для получения очищенных биологически активных пептидов в данной работе былиопробованы следующие методы: ультрафильтрация; гель-фильтрация насефадексе G-25; последовательные стадии: ультрафильтрация, препаративный электрофорез, обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная
хроматография. Во всех вариантах оценку степени чистоты биологически
активных пептидов проводили с помощью аналитического белкового электрофореза, масс-спектрометрии MALDI-TOF, а также аналитической обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
На основании полученных результатов для выделения и очистки биологически активных пептидов из ферментативных гидролизатов казеина рекомендована следующая схема: последовательные стадии ультрафильтрации на установке МФУ-Р-45-300, препаративного электрофореза
в 12,5%-м полиакриламидном геле в камере фирмы Bio-Rad и обращен- нофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе LC-20. В этом случает степень чистоты биологически активных
пептидов, выделенных из трипсинового гидролизата казеина, находитсяв диапазоне 86,7–92,4 %; выделенных из химотрипсинового гидролизата казеина — в диапазоне 88,9–95,4 %; выделенных из термолизинового гидролизата — в диапазоне 85,2–97,6 % [1, 2].
Все полученные пептиды, выделенные из трипсинового, химотрипсинового и термолизинового гидролизатов казеина, характеризуются выраженными антиоксидантными свойствами: величина тролокс-эквивалента длябиопептида состава Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu находится в диапазоне от 487 до 1345; для биопептида состава Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-LeuGly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val — от 505 до 1287; для биопептида
состава Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile — от 490 до 1400; для биопептида состава Lys-Glu-Asn — от 513 до 1454; для биопептида состава Tre-Gly-Glu-AsnHis-Asp — от 475 до 1325; для биопептида состава Lys-Glu — от 521 до 1500;
для биопептида состава Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu — от 509 до 1498; длябиопептида состава Leu-Leu-Tyr — от 501 до 1432 [3].
Анализ пребиотической активности рассматриваемых пептидов показал, что на рост бифидобактерий наибольшее влияние оказывают пептиды состава Lys-Glu, Lys-Glu-Asn и Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu, на ростлактобацилл — пептиды состава Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu, Lys-Glu
и Leu-Leu-Tyr. Показано, что значение пребиотического индекса для рассматриваемых биологически активных пептидов, выделенных из белков
молока, варьирует в диапазоне от 0,95 до 1,75, следовательно, все пептиды

Биотехнология

99характеризуются высоким пребиотическим действием на микрофлору желудочно-кишечного тракта
Литература
1. Разумникова И. С. Перспективный подход к созданию продуктов специального назначения при гипертонической болезни и хронической сердечной недостаточности / О. В. Козлова, А. В. Дороганова, Г. А. Аветисян // Техника и технология пищевых производств. 2010. № 1. С. 39–42.
2. Милентьева И. С. Биологически активные молекулы молока, как перспективы
будущего / И. С. Милентьева, А. А. Абрашина // Пищевые инновации и биотехнологии : мат-лы V Междунар. науч. конф. Кемерово, 2017. С. 3–4.
3. Milenteva I. S. Deriving biologically active peptides and study of their qualities /I. S. Milenteva, L. S. Dyshlyuk, A. Yu. Prosekov, O. O. Babich, M. V. Shishin // Science Evolution. 2016. Vol. 1, №. 2. Р. 20–33.

pаздел 1100РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО
ФАКТОРА РОСТА ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА rhPDGF-BB
PRODUCTION OF RECOMBINANT HUMAN PLATELET-DERIVEDGROWTH FACTOR rhPDGF-BB IN METHYLOTROPHIC YEASTPICHIA PASTORIS
А. В. Мистерова
Вятский государственный университет, Киров
A. V. Misterova
Vyatka State University, Kirov
E-mail: zeraxtas@gmail.com
Аннотация
Фактор роста тромбоцитов BB человека (PDGF-BB) является мощным митогеном, индуцирующим пролиферацию и дифференцировку клеток многих тканей
организма, в связи с чем рекомбинантный PDGF-BB имеет широкий потенциал дляприменения в медицине и науке, однако на сегодняшний день для российских пациентов не доступен ни один лекарственный препарат на основе этой молекулы.
Данная работа посвящена разработке перспективной технологии получения рекомбинантного PDGF-BB, которая может значительно увеличить доступность этой молекулы как для терапевтических, так и для исследовательских целей.

Abstract
Human platelet-derived growth factor BB (PDGF-BB) is a powerful inductor of cellproliferation and differentiation in numerous tissues of human organism. This allows recombinant human PDGF-BB to have a wide potential of use both in research and treatment. This paper describes production technology of human recombinant platelet-derived
growth factor BB using a promising host P. pastoris. The described technology may significantly increase availability of this molecule both for research and treatment.

ЦельНа данный момент известны две технологии производства rhPDGF-BB:с использованием в качестве продуцента E. coli и дрожжей S. cerevisiae. Однако большое преимущество имеет использование в качестве продуцента
© А. В. Мистерова, 2020Биотехнология

101метилотрофных дрожжей P. pastoris: возможность секреции функционально активного целевого белка в культуральную жидкость, наличие сильного
индуцибельного промотора AOX1, рост до более высоких оптических плотностей, что позволяет получать высокий выход активного целевого белка.
Таким образом, целью данной работы является разработка эффективной
технологии получения рекомбинантного PDGF-BB надлежащего качествадля использования в дальнейших разработках.
Методы
Целевой ген hPDGFB был клонирован в экспрессионный вектор
pVR2Xba по рестрикционным сайтам XhoI/XbaI. Полученным вектором
трансформировали клетки дрожжей P. pastoris X33 методом электропорации и провели скрининг полученных клонов на «дозу гена» на среде YPD
с 0, 500 и 2000 мкг/мл селективного агента зеоцина. У отобранных высококопийных клонов определяли уровень экспрессии целевого гена в ходекультивирования на среде BMMY с содержанием 1 % метанола.
В ходе подбора оптимальных условий для продуцента была выбрана классическая трехступенчатая схема культивирования: выращивание
инокулята на среде YPD до OD 2–6 о.е.; культивирование в колбах на среде BMGY с добавлением 3 % глицерина в течение 48 ч; индукция на среде
BMMY c добавлением 3 % метанола в течение 72 ч. Продуктивность при оптимальных условиях составила ок. 100 мг/л.
Разработка технологии выделения и очистки rhPDGF-BB велась в соответствии с концепцией CIPP (Strategies for protein purification, Cytiva). Настадии захвата был проведен скрининг катионообменных сорбентов с учетом следующих параметров: емкость по целевому белку, неспецифическая
сорбция примесей, скорость потока; подобраны условия нанесения. В результате был выбран сильный катионообменник с синтетической матрицей. На стадии промежуточной очистки от белков продуцента (HCP) вместо общепринятой хроматографии на сорбенте Heparin HP была применена хроматография «в проскок» на анионообменном сорбенте. Содержание
HCP определялось с помощью набора Pichia pastoris HCP ELISA Kit (Cygnus
technologies, #F140).
Результаты
Получена перспективная технология производства rhPDGF-BB с эффективностью ок. 60 %. Полученный rhPDGF-BB имеет чистоту более 98 %, содержание HCP 36,6 нг/мг. Показана пролиферативная активность полученного rhPDGF-BB на клетках эндотелия пуповины (см. рисунок).

102pаздел 1

А

В

100μm

Рост клеток эндотелия пуповины: А — среда Эрла 199;B — среда Эрла 199 + 40 нг/мл rhPDGF-BB

100μm

Биотехнология

103ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК
АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЖЕЛУДКА ЧЕЛОВЕКАOBTAINING AND CHARACTERIZING THE CELL LINEOF HUMAN GASTRIC ADENOCARCINOMA
А. А. Мурылёва 1, А. В. Слита 1, С. Л. Воробьёв 2Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологиии микробиологии им. Пастера
2Национальный центр клинической морфологической диагностики,Санкт-Петербург1

A. A. Muryleva 1, A. V. Slita 1, S. L. Vorobyov 2
1

2Saint-Petersburg Pasteur InstituteNational center for clinical morphological diagnostics, St. Petersburg
E-mail: anna.myruleva.a@gmail.com

Аннотация
Существует ряд опухолей, которые на ранних стадиях развития не дают выраженной клинической картины. Одним из таких новообразований является ракжелудка, который в структуре смертности от злокачественных новообразованийу мужчин стоит на втором месте, а у женщин — на третьем.
В связи с большой распространенностью заболевания и высокой смертностьюот него актуальна разработка экспериментальных моделей. В качестве таких моделей в современной онкологии широко используются перевиваемые культуры опухолевых клеток пациента. Работа посвящена получению постоянной клеточной линии
аденокарциномы желудка человека и описанию ее свойств.

Abstract
There is a number of tumors that do not have clear clinical presentation in the earlystages of development. One of such neoplasms is stomach cancer which ranks second in the
structure of malignant tumors mortality in men and third in women.
Due to the high prevalence of the disease and high mortality from it, the developmentof experimental models is relevant. Continuous cultures of patient’s tumor cells are widelyused as such models in modern oncology. The work is devoted to obtaining a permanentcell line of human gastric adenocarcinoma and describing its properties.
© А. А. Мурылёва, А. В. Слита, С. Л. Воробьёв, 2020

104pаздел 1Клеточная линия аденокарциномы желудка человека была получена методом «переживающей культуры» из эксплантата опухоли пациента.
Проведенный гистологический анализ показал, что опухоль является
недифференцированной аденокарциномой желудка. Иммуногистохимическое исследование клеток выявило ядерную экспрессию белка р 53, характерную для низкодифференцированных опухолей. В клетках обнаружен
высокий индекс пролиферативной активности Ki67–85 %.
Клетки культивировались в флаконах (Nunk) в питательной среде DMEM(ThermoFisher) с добавлением 10%-й сыворотки плода коровы
(Gibco).
Клетки демонстрируют типичную морфологию эпителиальной ткани,в процессе роста образуя плотные островки, которые в дальнейшем сливаются в монослой. Отличаются высокой степенью вакуолизации. Иммуногистохимический анализ клеточной линии показал крайне высокий индекс
пролиферативной активности Ki67–95 %.
Клетки аденокарциномы желудка в большинстве случаев характеризуются высоким уровнем экспрессии цитокератинов 7 и 20. Отличительной
чертой клеток опухоли и клеток культуры является отсутствие экспрессии
этих белков. Это указывает на соответствие полученной культуры операционному материалу.
Клеточные кластеры представлены полиморфными, атипичными, отдельными резко анаплазированными клетками с крупными ядрами, грубым глыбчатым хроматином, выступающими ядрышками, неравномерной,частью васкуляризированной цитоплазмой, единичными перстневидными
клетками и наличием патологических митозов. Эти же черты присутствуюти в операционном материале.
Для оценки чувствительности клеточной линии к противоопухолевым
препаратам использовались: 5-фторурацил, цисплатин, лейковорин. Исследование показало, что линия клеток резистентна к исследуемым препаратам.
Таким образом, в ходе работы была получена постоянная клеточная линия недифференцированной аденокарциномы желудка человека кишечного типа.

Биотехнология

105ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГО ОТВЕТА АМФИПОДНА ПОЛИАКРИЛАМИДНЫЙ ГЕЛЬВ ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЕ ГЕМОЦИТОВ *STUDY OF AMPHIPOD IMMUNE RESPONSE TO POLYACRYLAMIDDEGEL USING PRIMARY CULTURE OF HEMOCYTES
А. А. Назарова 1, Е. П. Шчапова 1, А. Н. Гурков 1,2,
Е. В. Борвинская 1, М. А. Тимофеев 1,2
12Иркутский государственный университет
Байкальский исследовательский центр, Иркутск
A. A. Nazarova 1, E. P. Shchapova 1, A. N. Gurkov 1,2,
E. V. Borvinskaya 1, M. A. Timofeev 1,2
1

2

Irkutsk State University
Baikal Research Centre, Irkutsk
E-mail: annazarova1995@gmail.com

Аннотация
Была выполнена качественная и количественная оценка развития иммунного ответа гемоцитов амфипод Ommatogammarus flavus на полиакриламидный гельв первичной культуре. Показано отсутствие реакции гемоцитов на гель с гладкой
поверхностью.

Abstract
Cellular immune response of amphipods Ommatogammarus flavus to polyacrylamide
gel was assessed qualitatively and quantitatively in a primary culture of hemocytes. No
reaction of hemocytes was observed to the gel with smooth surface.

Имплантируемые оптические микросенсоры в гидрогелевых носителях — это перспективный инструмент для регистрации физиологических
параметров различных животных в динамике и in vivo. Важной характеристикой микросенсоров при их внедрении в живые организмы является им© А. А. Назарова, Е. П. Шчапова, А. Н. Гурков, Е. В. Борвинская, М. А. Тимофеев,2020*Работа поддержана грантом РНФ № 20-64-47011.

106pаздел 1муногенность. В качестве перспективной основы для получения подобных
сенсоров ранее был предложен полиакриламидный гель (ПААГ), которыйпри добавлении полиэтиленгликоля удалось эффективно применять в тканях млекопитающих в течение длительного времени [1], однако на других
группах животных подобных анализов не проводилось.
Целью работы являлось тестирование потенциальной иммуногенности
ПААГ для ракообразных на примере байкальского эндемичного вида амфипод Ommatogammarus flavus. Клетки гемолимфы ракообразных — гемоциты — отвечают за инкапсуляцию инородного тела, что сопровождаетсяих агрегацией и адсорбцией на поверхности чужеродного объекта. Ранее
нами была продемонстрирована эффективность первичной культуры гемоцитов амфипод в качестве инструмента, с помощью которого может бытьохарактеризована иммуногенность импланта [2], что и было использованов данной работе для определения свойств ПААГ.
Для подготовки первичной культуры отбирали гемолимфу O. flavus, отмывали клетки от компонентов гуморальной фракции гемолимфы и содержали выделенные гемоциты в среде Лейбовича L-15 с добавлением 15 %-йфетальной бычьей сыворотки при температуре 4 °С (предпочитаемая для
O. flavus). Показано, что в данных условиях до 90 % клеток сохраняет жизнеспособность в течение суток.
Подготовку ПААГ проводили в стеклянных капиллярах или металлических иглах с внутренними диаметрами 750 и 400 мкм соответственно. После
извлечения из капилляров получали гладкие гелевые нити, в то время какв случае игл поверхность геля была неоднородной. Количественно реакцию гемоцитов на гель оценивали по агрегации клеток через час, 5 часов
и 24 часа инкубации в культуральной среде.
Установлено, что неоднородная поверхность вызывает выраженную
адсорбцию гемоцитов на геле, в то время как реакции клеток на гладкий
ПААГ не наблюдали в течение суток. Таким образом, ПААГ с гладкой поверхностью является потенциально подходящей основой для подготовки
имплантируемых микросенсоров, применимых в гемолимфе ракообразных.
Литература
1. Heo Y. J. et al. Long-term in vivo glucose monitoring using fluorescent hydrogelfibers // PNAS. 2011. Vol. 108. P. 13399–13403.
2. Shchapova E. et al. Application of PEG-covered non-biodegradable polyelectrolyte
microcapsules in the crustacean circulatory system on the example of the amphipod Eulimnogammarus verrucosus // Polymers. 2019. Vol. 11. № 1246. P. 1–17.

Биотехнология

107ПРИМЕНЕНИЕ НАНОЧАСТИЦ PLGA, СОДЕРЖАЩИХ
ДИПРОПОКСИБАКТЕРИОПУРПУРИНИМИД,В ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
APPLYING OF PLGA NANOPARTICLES CONTAINING
DIPROPOXYBAKTERIOPURPURINIMIDEIN PHOTODYNAMIC THERAPY
Е. Д. Никольская 2, М. Д. Сапельников 1, Н. Б. Морозова 3,
Е. А. Плотникова 3, А. А. Панкратов 3, А. В. Ефременко 4,5,
А. В. Панов 1,6, М. А. Грин 1, Р.И. Якубовская 312МИРЭА — Российский технологический университет, Москва
Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
3ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, Москва
4Институт биоорганической химии им. М. М. Шемякина
и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва
5Биологический факультет МГУ, Москва
6Институт фармацевтических технологий, Москва
E. D. Nikolskaya 2, M. D. Sapelnikov 1, N. B. Morozova 3,
E. A. Plotnikova 3, A. A. Pankratov 3, A. V. Efremenko 4,5, A. V. Panov 1,6,
M. A. Grin 1, R. I. Yakubovskaya 3
1

MIREA — Russian Technological University, Moscow
2
IBCP RAS, Moscow
3
FSBI NMRRC, Moscow
4
Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry RAS, Moscow
5
Faculty of Biology MSU, Moscow
6
Institute of Pharmaceutical Technologies, Moscow
E-mail: elenanikolskaja@gmail.com
Аннотация
Разработка новых лекарственных форм гидрофобных веществ, имеющих высокую фармакологическую активность, за последние годы стала актуальным научным
направлением. Фотосенсибилизатор дипропоксибактериопурпуринимид (DPBPI)© Е. Д. Никольская, М. Д. Сапельников, Н. Б. Морозова, Е. А. Плотникова,А. А. Панкратов, А. В. Ефременко, А. В. Панов, М. А. Грин, Р. И. Якубовская, 2020

108pаздел 1с интенсивным поглощением в ближней ИК-области спектра — перспективный
препарат для фотодинамической терапии (ФДТ). Было показано селективное накопление наночастиц DPBPI на основе сополимера молочной и гликолевой кислот(PLGA) с размером менее 200 нм в клетках линии А549, а также доказана их противоопухолевая фотоиндуцированная активность при проведении ФДТ на модели
саркомы мягких тканей S37, излеченность животных достигала 33 %.

Abstract
The development of new dosage forms of hydrophobic substances, having high pharmacological activity in recent years has become a relevant scientific field. The photosensitizer dipropoxybacteriopurpurinimide (DPBPI) with intense absorption in the near infrared region of the spectrum is a promising drug for photodynamic therapy (PDT). Selective
accumulation of DPBPI nanoparticles based on a copolymer of lactic and glycolic acids(PLGA) with a size of less than 200 nm in A549 cells was shown, and their antitumor photoinduced activity was also proved during PDT on a model of soft tissue sarcoma S37, thecure rate of animals reached 33 %.

Бактериохлорины интенсивно поглощают свет в ближней ИК-области
спектра, их терапевтическое окно поглощения 750–850 нм расширяет возможности для лечения злокачественных новообразований за счет проникновения в ткани на глубину до 20–25 мм. Разработка метода получения и изучение терапевтического применения наночастиц (НЧ) PLGA, содержащихDPBPI, является актуальной задачей, поскольку НЧ смогут обеспечить пассивную селективную доставку DPBPI и контролируемое во времени высвобождение фотоактивной субстанции в опухолевой ткани, за счет чего будет
увеличена противоопухолевая эффективность препарата и снижена его неспецифическая токсичность.
Была разработана и оптимизирована методика получения НЧ, содержащих DPBPI. Средний диаметр частиц составил менее 200 нм, содержаниеDPBPI — около 18 мг/г, ξ-потенциал составил -17 мВ, индекс полидисперстности не выше 0,200. Методом лазерной сканирующей конфокальной микроскопии было показано, что DPBPI в составе исследуемых образцов (НЧс DPBPI и контрольный образец — DPBPI в кремофоре) интернализуется
клетками немелкоклеточной карциномы легкого человека линии А549 и накапливается в цитоплазматической области. Анализ кинетики накопленияDPBPI в клетках А549 показал увеличение времени элиминирования DPBPI,входящего в состав НЧ, в то время как контрольный образец элиминировался в 2 раза быстрее. Применение DPBPI в составе НЧ вызывало фотоиндуцированную цитотоксичность в отношении клеток А549, при этомтемновая токсичность отсутствовала, в отличие от контрольного образца.

Биотехнология

109Было показано накопление НЧ с DPBPI в опухолевой ткани in vivoи практически полное выведение DPBPI из организма через 48 ч, а из кожиза 24 ч. На 22 сут. после сеанса ФДТ НЧ с DPBPI в дозе 2,5 мг/кг значение
торможения роста опухоли (ТРО) у мышей с саркомой S37 составило 71 %.
В течение 90 сут. у 33 % мышей не было выявлено продолженного роста опухоли, УПЖ составило 83 %, а коэффициент излечиваемости — 33 %. Таким
образом, была показана эффективность применения НЧ с DPBPI в ФДТ.

pаздел 1110ВЛИЯНИЕ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ НА СПОСОБНОСТЬ
КЛЕТОК-ПРОИЗВОДНЫХ НЕРВНОГО ГРЕБНЯ ИЗ ДЕРМАЛЬНОЙ
ПАПИЛЛЫ ВИБРИССЫ КРОЛИКА ИНДУЦИРОВАТЬСЯВ НЕЙРОНАЛЬНОМ НАПРАВЛЕНИИ
INFLUENCE OF CRYOCONSERVATION ON THE ABILITYOF CELL-DERIVATIVES OF THE NERVOUS COMB FROM THE DERMALPAPILLA OF THE RABBIT VIBRISSA INDUCED IN NEURAL DIRECTIONО. Ю. Новикова, Г. А. Божок, Т. П. Бондаренко
Институт проблем криобиологиии криомедицины НАН Украины, Харьков, Украина
O. Novikova, G. Bozhok, T. Bondarenko
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicineof the National Academy of Science of Ukraine, Kharkov, Ukraine
E-mail: oyunovikova@biolik.com.uaАннотация
Клетки дермальной папиллы представляют собой пул клеток-производных
нервного гребня, сохраняющих плюрипотентность в период постнатального оногенеза. Они обеспечивают рост волоса и регенерацию волосяного фолликула в течение жизни, однако при помещении в условия in vitro проявляют широкую индукционную пластичность. В данной работе проанализирована возможность длительного
хранения культур мультиклеточных сфероидов клеток дермальной папиллы кролика путем криоконсервирования. В качестве критериев оценки сохранности и стабильности исследована экспрессия основных иммуноцитохимических маркеров
(βІІІ-тубулина, виментина, глутаминсинтетазы).

Abstract
Dermal papilla (DP) cells are a pool of neural crest (NG) derived cells that stay pluripotent while postnatal ontogenesis. They provide hair growth and hair follicle regeneration
throughout life, but in vitro, exhibit broad induction plasticity. In this work, we studied
long-term storage of cultures of multicellular spheroids (MS) of rabbit DP cells by cryopreservation. The expression of the main immunocytochemical markers (βIII-tubulin, vimentin, glutamine synthetase) was studied as criteria for assessing the safety and stability.
© О. Ю. Новикова, Г. А. Божок, Т. П. Бондаренко, 2020Биотехнология

111Клетки дермальной папиллы (КДП) представляют собой пул клеток-производных нервного гребня (НГ). Известно, что клетки ДП являются однимиз нескольких типов клеток-производных НГ, сохраняющих плюрипотентное состояние в постнатальном онтогенезе. В условиях организма данные
клетки способствуют росту волоса и регенерации структур волосяного
фолликула. Также показана их способность in vitro осуществлять эпителио-мезенхимальный переход и индуцироваться во многих направлениях.
В связи c высокой пластичностью и легкостью получения клетки ДП представляют значительный интерес для регенеративной медицины, особенно
неврологии. Нами были исследованы особенности роста 2D- и 3D-культур
клеток из ДП ВФ вибрисс кролика при разных условиях культивирования,а также влияние криоконсервирования на потенциал их индукции в нейрональном направлении.
Получение культуры КДП проводили методом эксплантов по собственной методике. Культивирование в средах разного состава продемонстрировало, что существует зависимость формирования монослоя или МС отналичия фетальной сыворотки телят в среде для культивирования. Во всехбессывороточных средах культура ДП была представлена мультиклеточными сфероидами, формируемыми за счет агрегации клеток.
Иммунофенотипический анализ клеток ДП кролика был проведен наразных этапах культивирования: в нативной культуре и после деконсервирования. Было обнаружено положительное окрашивание исследуемых
культур на два вида белков цитоскелета: βІІІ-тубулин и виментин. После
индукции в нейрональном направлении было отмечено, что уровень специфического свечения в культуре на 7-е сутки не отличался от такового в неиндуцированной культуре. На 21-е сутки наблюдалось значительное усиление свечения, увеличение зоны, занимаемой филаментами. Кроме того,происходил значительный рост отростков клеток. Содержание виментинав клетках, входящих в состав МС, было значительно выше, чем в клетках
монослоя. По-видимому, это связано с участием виментина в агрегации клеток и поддержании межклеточных связей при формировании 3D-культур.
Окрашивание антителами к глутаминсинтетазе показало наличие экспрессии данного белка в нативной культуре, что свидетельствует о протекании
глутаматного цикла в данных клетках в норме. Аналогичная экспрессия
маркеров сохранялась после криоконсервирования, таким образом, оно неоказывает влияния на конституциональные структурные особенности клеток ДП.

pаздел 1112ХАРАКТЕРИСТИКА АНТАГОНИСТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
ЛАКТОБАЦИЛЛ, ВЫБРАННЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ *CHARACTERISTICS OF ANTAGONISTIC PROPERTIESOF LACTOBACILLI SELECTED FOR THE TREATMENTOF ENDOMETRITIS IN COWS
О. А. Новикова 1, А. С. Сюткина 2, Е. О. Задорина 1
12Вятский государственный университет
Вятская государственная сельскохозяйственная академияO. A. Novikova 1, A. S. Syutkina 2, E. O. Zadorina 1
12

Vyatka State University
Vyatka State Agricultural Academy
E-mail: novikovavgu@gmail.com

АннотацияВ работе проведены исследования антагонистической активности трех штаммов
лактобацилл: Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747, Lactobacillus plantarum
ПЛ-98 ВКПМ В-11746, Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839 в отношении выделенных изолятов лекарственно-устойчивых госпитальных инфекций и микробных составляющих экссудата гнойного-катарального эндометрита у коров.

Abstract
Studies of 3 lactobacilli strains’ anthogonistic activity: lactobacillus plantarum PL99 VKPM B-11747, Lactobacillus plantarum PL-98 VKPM B-11746, Lactobacillus buchneri BСh-99 VKPM B-11839 have been conducted in this research on isolates of drug-resistant nosocomial infections and microbial components of the cows’ purulent-catarrhal
endometritis exudate.

© О. А. Новикова, А. С. Сюткина, Е. О. Задорина, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта федерального государственного бюджетного учреждения «Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере».

Биотехнология

113

В работе использовали три штамма лактобацилл: Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747, Lactobacillus plantarum ПЛ-98 ВКПМ В-11746,
Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839, депонированные во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов. Антагонистическую активность штаммов лактобацилл изучали в отношении 71 штамма клинических культур возбудителей госпитальных инфекций, в том числе антибиотико-резистентных, с использованием двухслойной методики Фредерика.
Установлено, что все три штамма лактобацилл обладают высокой антагонистической активностью в отношении всех индикаторных штаммов,зона задержки роста от 15 до 60 мм и более.
Кроме того, изучали антагонистическую активность лактобактерийв отношении культур, выделенных из содержимого матки коров, больных
гнойно-катаральным эндометритом. В результате исследований 30 пробгнойного экссудата были выделены и идентифицированы следующие микроорганизмы: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Escherichia coli,
Escherichia coli лактозонегативная, Salmonella sp., микроскопические грибы
рода Candida sp. и Endomices lactis.
В результате изучения антагонистической активности исследуемых
штаммов лактобацилл (см. рисунок) по методике Фредерика в отношении
выделенных из гнойного экссудата микроорганизмов задержка зоны роста
составляла от 20 до 60 мм, что говорит о высокой антагонистической активности лактобактерий.

Антагонистическая активность лактобацилл в отношении
Escherichia coli: 1 — Lactobacillus plantarum ПЛ-99;
2 — Lactobacillus plantarum ПЛ-98

114pаздел 1Полученные экспериментальные результаты показали, что три штамма: Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747, Lactobacillus plantarum
ПЛ-98 ВКПМ В-11746, Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839 обладают
высокой антагонистической активностью в отношении всех тест-штаммов,в том числе выделенных непосредственно от животных, больных эндометритом, что говорит о перспективности их использования при лечении данного заболевания.

Биотехнология

11
5ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ МАРГАНЦА В СРЕДЕНА РОСТ И РАЗВИТИЕ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ
SOLANUM TUBEROSUM L. IN VITRO *EFFECT OF MANGANESE CONCENTRATION IN THE MEDIUM
ON GROWTH AND DEVELOPMENT DURING CULTIVATIONSOLANUM TUBEROSUM L. IN VITRO
О. А. Ножкина 1, А. И. Перфильева 1, С. С. Хуцишвили 2
1Сибирский институт физиологиии биохимии растений СО РАН, Иркутск
2Иркутский институт химии им. А. Е. Фаворского СО РАН
O. A. Nozhkina 1, A. I. Perfileva 1, S. S. Khutsishvili 2
1

Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS, Irkutsk
2
A. E. Favorsky Irkutsk Institute of Chemistry SB RAS
E-mail: alla.light@mail.ruАннотация
Проводили исследование влияния различных концентраций Mn в среде культивирования при выращивании картофеля Solanum tuberosum L. на его рост и развитие. Содержание Mn оказывает влияние на биометрические характеристики растения. При концентрации Mn, увеличенной в 100 раз по сравнению с контролем, рострастений не наблюдался. Исследование методом ЭПР показало рост интенсивности
сигнала Mn с ростом концентрации соли марганца в питательной среде для культивирования растений, что говорит об увеличении концентрации металла в органах
растения и подтверждается элементным анализом.

Abstract
A research was made of the effect of different concentrations of Mn in the cultivation
medium when growing potatoes Solanum tuberosum L. on its growth and development.
The Mn content influences the biometric characteristics of the plant. No plant growth wasobserved at a Mn concentration increased by 100 times as compared to the control. A investigation using the EPR method showed an increase in the Mn signal intensity with an increase in the concentration of manganese salt in the nutrient medium for plant cultivation,© О. А. Ножкина, А. И. Перфильева, С. С. Хуцишвили, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ № 20-016-00152.

pаздел 1

116

which indicates an increase in the concentration of metal in plant organs and is confirmed
by elemental analysis.

Марганец является важным микроэлементом для растений. Этот химический элемент входит в виде кофактора в состав множества ферментов,участвующих в фотосинтезе и образовании витаминов. Марганец влияетна физиолого-биохимические процессы, происходящие в растении. Так, онспособствует увеличению содержания сахаров и их оттоку из листьев, ускоряет рост растений и созревание семян. Из-за его недостатка в питательной среде растения испытывают стресс. В то же время как тяжелый металл
марганец полезен растениям лишь в узком диапазоне. В настоящий момент
недостаточно сведений о фитотоксичности Mn и влиянии его высоких концентраций на жизнеспособность растений. В настоящей работе проведено
исследование влияния различного содержания марганца в среде при культивировании Solanum tuberosum L. на его рост и развитие.

абВлияние различных концентраций Mn в средепри культивировании S. tuberosum L. на рост (а) и развитие (б) растений

Биотехнология

11
7Эксперименты проводили на растениях картофеля in vitro сорта Лукьяновский. Микроклональное размножение пробирочных растений осуществляли с помощью черенкования на агаризованной питательной среде
Мурасиге — Скуга, различающейся по содержанию соли марганца. В питательную среду элемент вводился в виде MnSO4×5H2O в расчете 0,0241 г/л(норма). Также использовались варианты питательной среды без сульфата
марганца и с увеличением содержания соли в 2, 5, 10, 20 и 100 раз от нормы.
Растения культивировали в факторостатных условиях в течение 30 суток,периодически замеряя длину и подсчитывая количество листьев (см. рисунок). По окончании эксперимента определяли биомассу надземной частии биомассу корней, проводили анализ элементного состава и исследование
методом ЭПР.
Отсутствие соли марганца в питательной среде резко сказалось на приросте растения и биометрических параметрах в сравнении с контролем.
При этом на среде со стократным превышением соли от нормы растения
характеризовались отсутствием корней, увяданием листьев и медленным
приростом. Биомасса надземной части растений была ниже контроля
в 3 раза. Исследование тканей растений методом ЭПР показало резкий ростинтенсивности спектральных линий от парамагнитного иона марганца (типичный секстет со спином S = 5/2) с ростом концентрации соли в среде.

pаздел 1118УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ УСЛОВИЙ ПОСТАНОВКИ МЕТОДА
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗАДЛЯ ДИАГНОСТИКИ НОДУЛЯРНОГО ДЕРМАТИТА
IMPROVEMENT OF THE CONDITIONS FOR SETTING
THE METHOD OF ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE DIAGNOSISOF NODULAR DERMATITIS
Н. К. Оразымбетова, М. С. Сейсенбаева, Г. Д. Наханова,Ж. К. Кошеметов, Б. К. Умуралиев, О. В. Червякова
Научно-исследовательский институт проблем биологической
безопасности, Республика Казахстан
N. K. Orazymbetova, M. S. Seysenbayeva, G. D. Nakhanova,
Zh. K. Koshemetov, B. K Omuraliev, O. V. Chervyakova
Research Institute of Biological Safety Problems, Kazakhstan
E-mail: niki_taraz1991@mail.ruАннотация
Целью исследования была усовершенствование и оптимизация условий
постановки иммуноферментного анализа (ИФА), основанного на использовании
рекомбинантного белка LSDV095 вируса нодулярного дерматита для обнаружения
антител к вирусу нодулярного дерматита крупного рогатого скота (НД КРС) в пробах
сывороток от иммунных, больных и переболевших животных. Рекомбинантный
белок LSDV095 НД КРС бактериально экспрессирован в клетках E.Coli T7 и очищен
методом металло-аффинной хроматографии. Были подобраны оптимальные
рабочие разведения рекомбинантного белка и растворов для сенсибилизации
лунок планшет, а также подобраны температурно-временные режимы и раствордля ИФА.
На основе рекомбинантного белка и антивидового конъюгата, приготовленногос применением антивидовых антител, был оптимизирован метод ИФА для детекции
антител к НД КРС в сыворотках крови. Применение ИФА для тестирования
гомологичных иммунных сывороток животных позволило выявить антителак данному вирусу в 95 % случаев. Параллельное исследование этих сыворотокв РДП показало 90%-е совпадение результатов. Метод показал специфичные

© Н. К. Оразымбетова, М. С. Сейсенбаева, Г. Д. Наханова, Ж. К. Кошеметов,Б. К. Умуралиев, О. В. Червякова, 2020Биотехнология

11
9результаты, так как все исследованные негативные и гетерологичные сыворотки
были отрицательными в ИФА.

Abstract
The aim of the study was to improve and optimize the conditions for setting up an
enzyme immunoassay (ELISA) based on the use of recombinant protein LSDV095 of thenodular dermatitis virus for detecting antibodies to the bovine nodular dermatitis virus(bovine ND) in serum samples from immune, sick and diseased animals. Recombinant
protein LSDV095 ND of cattle is bacterially expressed in E. Coli T7 cells, and purified bymetal-affinity chromatography. The optimal working dilutions of recombinant protein andsolutions for sensitization of the wells were selected, as well as temperature and time modes
and solution for ELISA were selected.
Based on a recombinant protein and an anti-specic conjugate prepared using an- tispecic antibodies, the ELISA method for detecting antibodies to bovine PD in blood sera
was optimized. The use of ELISA for testing homologous immune serums of animals
allowed detecting antibodies to this virus in 95 % of cases. A parallel study of these serumsin DPR showed a 90 % coincidence of results. The method showed specific results, since all
the studied negative and heterologous sera were negative in the ELISA.

Введение
Нодулярный дерматит крупного рогатого скота (НД КРС) — инфекционная болезнь крупного рогатого скота, сопровождающаяся лихорадкой,отеком подкожной соединительной ткани и органов, образованием кожных
узлов, поражением глаз, слизистой оболочки дыхательного и пищеварительного трактов [1, 2].
Мировая эпизоотическая ситуация по особо опасным вирусным болезням животных показывает, что ареал их распространения неуклонно расширяется. Это касается и такой опасной болезни для сельскохозяйственных
животных, как ящур, чума мелких жвачных животных, бешенства и НД
КРС [3–5].
На сегодняшний день наиболее опасными болезнями животных с точки
зрения тяжести заболеваний, опасности возникновения и развития эпизоотии, а также сложности организации и проведения карантинных мероприятий является НД КРС.
Несмотря на достижения в молекулярной биологии в последние десятилетия и внедрение новых методов диагностики, таких как ПЦР, в ветеринарную практику основными и массовыми исследованиями на инфекции у животных остаются ретроспективные методы, одним из которых
является ИФА. Указанный метод основан на обнаружении специфических
антител в сыворотках крови животных, выявляемых при помощи антигенов, обладающих родовой специфичностью по отношению к возбудителям

120pаздел 1инфекции. Несмотря на то что метод ИФА ранее применялся различными
исследователями для диагностики НД КРС и даже были разработаны наборы для метода ИФА, эти результаты остались только на уровне научных
исследований и не нашли широкого применения в ветеринарной практике.
Это связано с отсутствием способа получения антигенов, с высокой специфичностью и активностью, которые необходимы для постановки ИФА [6].
Исходя из этого, необходимо было усовершенствовать условия постановки ИФА для диагностики НД КРС на основе рекомбинантного белка,который бы имел более высокую специфичность.
Материалы и методы
Штамм вируса НД КРС. В процессе проведения
экспериментальных исследований был использован производственный штамм
«Dermatitisnodularis/2016/Atyrau/KZ» вируса НД КРС.
Антиген. Для изготовления рекомбинантного антигенного белка
LSDV095 вируса НД КРС использовали штамм-продуцент E. coli Т7/pET/
LSDV095. Штамм-продуцент хранили при температуре минус (80 ± 1) °Св виде глицеринового стока.
Контрольные сыворотки. При постановке ИФА использовали гетерологичные сыворотки вирусов диареи и инфекционного ринотрохеита крупного рогатого скота, оспы коров, ящура типов А и О, приготовленные в НИИпроблем биобезопасности. В качестве негативного контроля использовали
сыворотки крови здоровых телят.
Животные. В опытах использовали телят в возрасте 6–8 месяцев, кроликов весом 2-3 кг.
Ферменты и реагенты. В исследованиях использовали пероксидазу хрена производства фирмы «Сигма» США и 96-луночные микротитровальные
пластины фирмы «Costar» (США).
Приготовление антисывороток. При получении антисыворотки к вирусу НД КРС для иммунизации использовали очищенный антиген (штамма «Dermatitisnodularis/2016/Atyrau/KZ»). Схема гипериммунизации телят
состояла из трех введений в область предлопаточных лимфоузлов с интервалом между введениями в 1-ю неделю в комплексе с ГОА, конечная концентрация 0,1 % (2-е введение) и Montanide ISA 70 в разведении 1:1 (3-евведение). За 21 день до начала цикла гипериммунизации телятам вводили
антиген в дозе по 10 см3 с активностью 7,41 lgТЦД50/млв каждый предлопаточный лимфоузел.
Через 7 сут. после последней инъекции у телят брали пробы крови и проводили контроль антителообразования в РДП.

Биотехнология

121Получение антивидовой сыворотки. Для получения антивидовой (антибычьей) сыворотки в качестве антигена для иммунизации кроликов весом
2–3 кг использовали γ-глобулин нормальной сыворотки крови КРС, выделенный спиртовым методом Кона. Полученную сыворотку использовалидля выделения из нее антивидовых антител.
Аффинная очистка антивидовых антител. Аффинную очистку антивидовых антител проводили с помощью 2,5%-го раствора глутарового альдегида. Преципитирующую активность препарата определяли в реакции
диффузионной преципитации (РДП).
Реакция диффузионной преципитации (РДП). Преципитирующую активность вируса определяли в РДП по общепринятому методу [7].
Содержание белка определяли по методу Lowry, используя в качестве
стандарта бычий сывороточный альбумин (БСА) фирмы «Sigma» (США) [8].
Выделение иммуноглобулинов G из специфических антисывороток.
Выделение иммуноглобулинов G (ИгG) из специфических антисывороток
проводили спиртовым осаждением по методу Кона [9].
Конъюгация иммуноглобулинов G с пероксидазой хрена. Конъюгацию иммуноглобулинов G с пероксидазой хрена осуществляли по методу Уилсони Накане [10].
Результаты исследованияС целью оптимизации условий постановки непрямого варианта ИФАнами были проведены исследования по определению оптимальной концентрации рекомбинантного белка и рабочей дозы антивидового конъюгата, а также влиянию различных условий постановки ИФА на его чувствительность.
Определение оптимальной дозы для сенсибилизации рекомбинантным
белком осуществляли методом их шахматного титрования со специфической сывороткой НД КРС и нормальными сыворотками, буфером для
ИФА. В качестве твердой фазы использовали 96-луночные плоскодонные
планшеты разных производственных фирм «Costar», «Nunc» и «TPP». Порезультатам ИФА среди них самым оптимальным оказался планшет фирмы «Costar». Белки испытывали в концентрациях 1,0, 2,5, 5,0, 7,5, 10,0, 12,5,
15,0 и 17,5 мкг/мл, которые растворяли в 0,01 М КББ с рН 9,5. Для разведения рекомбинантного белка вируса НД КРС при подборе концентрации,используемые для сенсибилизации лунки планшет, были испытаны следующие растворы: 0,01 М КББ с рН 9,5; 0,01 М ФБС с рН 7,4; 0,15 М хлористый натрий и 0,025 Трис HCL. Результаты исследований представленыв табл. 1 и на рисунке.

pаздел 1122

Таблица 1Результаты подбора концентрации белков вирусовдля сенсибилизации лунки планшет

Антигены

Разведение
Разведение специфической сыворотки нормальной
сыворотки

Испытанные
Титрконцентрации 100в РДПбелка, мкг/мл
1
+
2,5
+
5
+
7,5
+
10
+
12,5
+
15
+
17,5
+

200

400

800 1600 3200 6400 100

200

+
+
+
+
+
+
+
+

–
+
+
+
+
+
+
+

–
+
+
+
+
+
+
+

–
–
–
–
–
–
–
+

–
–
+
+
+
+
+
+

–
–
–
–
–
–
+
+

–
–
–
–
–
–
–
–

–
–
–
+
+
+
+
+

Примечания
1. «+» — положительный результат в ИФА.
2. «-» — отрицательный результат.

3500
3000
2500
2000
НС

1500

СС

1000
500
0
1
2,5
5
7,5
10
12,5
15
17,5
мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/млРезультаты подбора концентрации белков вирусовдля сенсибилизации лунки планшет

Биотехнология

123

Из результатов, представленных в табл. 1 и на рисунке, видно, что оптимальная концентрация рекомбинантного белка вируса НД КРС для сенсибилизации лунки планшет составляет 5,0 мкг/мл, а для приготовления
разведений рекомбинантного белка приемлемым оказался солевой раствор
0,01 М КББ с рН 9,5.
В дальнейшей работе для сенсибилизации лунок планшетов нами былииспользовано 5,0 мкг/мл белков вируса НД КРС.
Для определения рабочего разведения антивидового иммунопероксидазного конъюгата предварительно титровали в непрямом варианте ИФА состандартными (нормальная и специфическая) сыворотками. Предельным
титром серии конъюгата считали максимальное его разведение, которое
способно выявить специфических антител при отрицательном результатес нормальными сыворотками. За оптимальное рабочее разведение конъюгата принимали его восьмикратный предельный титр (табл. 2).
Таблица 2Определение рабочего разведения
антивидового конъюгата в ИФА при НД КРСКонъюгаты
Серия Разведения
конъюгата
1

50
100
200
400
800
1600
3200
6400

Разведения специфической сыворотки
100
+
+
+
+
+
+
+
–

200

400

800

+
+
+
+
+
+
–
–

НД КРС
+
+
+
+
+
+
+
+
+
–
–
–
–
–
–
–

Разведение
нормальной
сыворотки

1600 3200 6400

100

200

–
–
–
–
–
–
–
–

+
+
–
–
–
–
–
–

–
–
–
–
–
–
–
–

+
+
+
–
–
–
–
–

–
–
–
–
–
–
–
–

Примечания
1. Разведения конъюгатов и сывороток выражены в обратных величинах.
2. «+» — положительный результат в ИФА.
3. «-» — отрицательный результат.

124pаздел 1Полученные в результате проведенных исследований иммуноферментные препараты оказались активными и специфичными, предельный титрантивидового конъюгата в ИФА составил 1:3200 и рабочий титр 1:800 соответственно (см. табл. 2).
Кроме того, в ходе опыта по оптимизации условий постановки непрямого варианта ИФА на основе рекомбинантного белка для серодиагностикиНД КРС испытывались разные варианты температурно-временных режимов сенсибилизации плашек диагностическими препаратами, взаимодействия компонентов реакции и времени ее учета при выявлении антителс применением различных буферных систем.
Для приготовления рабочих разведений иммуноферментных диагностических препаратов и отмывания лунок планшет испытывали следующие
буферные растворы:– физиологический раствор, содержащий твин-80 в различной концентрации (0,5 %; 1 %; 1,5 %);– 0,01 М ФБС с рН 7,4, содержащий твин-80 в различной концентрации
(0,5 %; 1 %; 1,5 %);– 0,025 Трис HCL, содержащий твин-80 в различной концентрации
(0,5 %; 1 %; 1,5 %);– проточную воду, содержащую твин-80 в различной концентрации
(0,5 %; 1 %; 1,5 %);Для забивки свободных центров лунок планшет после их сенсибилизации иммуноглобулинами испытаны 0,25; 0,3; 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 % концентрации бычьего сывороточного альбумина в 0,01 М ФБС растворе.
В результате проведенных исследований установлено, что оптимальным буферным раствором для разбавления рекомбинантного белка вирусаНД КРС для сенсибилизации лунок планшет является 0,01 М КББ с рН 9,5.
Также опытным путем установлено, что оптимальным раствором для разведения диагностических препаратов, используемых при постановке ИФА,и отмывания лунок планшет является 0,01 М ФБС с рН 7,4, содержащий
твин-80 в концентрации 1 %.
Для забивки свободных центров лунок планшет с целью снятия неспецифического фонового уровня после сенсибилизации рекомбинантным белком вируса НД КРС лунки необходимо обработать 5,0%-м раствором обезжиренного сухого молока, приготовленного на 0,01 М ФБС.
Оптимизированный вариант ИФА был испытан нами для обнаружения
антител к вирусу НД в сыворотках крови КРС. В качестве гетерологичных
проб были исследованы пробы сывороток к вирусам диареи и инфекционного ринотрохеита крупного рогатого скота, оспы коров, ящура типов А иБиотехнология

12
5

О, приготовленные в НИИ проблем биобезопасности. В качестве негативного контроля использовали сыворотки крови здоровых телят.
Результаты показывают, что оптимизированный вариант ИФА с применением рекомбинантного белка и антибычьего конъюгата позволяет выявлять антитела к данному подтипу в 100 % случаях при тестировании гомологичных иммунных сывороток телят. Все исследованные отрицательныеи гетерологичные сыворотки показали отрицательные результаты в ИФА.
ЗаключениеВ результате проведенных исследований усовершенствованы условия
постановки непрямого варианта ИФА для выявления антител к вирусу НД
КРС. Определены оптимальные концентрации рекомбинантного белка
LSDV095 вируса НД КРС для сенсибилизации лунки планшет, который составляет 5 мкг/см3. Рабочее разведение антивидового конъюгата для постановки непрямого варианта ИФА для серодиагностики нодулярного дерматита
составило 1:200. Оптимизированный вариант ИФА, пригодный для выявления антител к НД КРС, показал высокую специфичность и чувствительность.
Литература
1. Гуненков В. В. Заразный узелковый дерматит крупного рогатого скота : сб.
науч. тр. ВГНКИ. М., 2005. Т. 66. С. 46–54.
2. Сюрин В. Н., Самуйленко А. Я., Соловьев Б. В., Фомина Н. В. Нодулярный дерматит // Вирусные болезни животных. М., 1998. С. 747–750.
3. Gibbs E. P., Taylor W. P., Lawman M. J. P., Bryant J. Classification of peste des petits
ruminants virus as the fourth member of the genus morbillivirus // Intervirology II. 1979.
P. 268–274.
4. Бакулов И. А. Эпизоотическая ситуация в мире по особо опасным болезням
животных к концу ХХ столетия : мат-лы Междунар. науч.-практ. конф., 15–16 авг.
2000. Покров, 2000. С. 11–17.
5. Бакулов И. А., Котляров В. М. Мировая эпизоотическая ситуация по болезням
диких животных : мат-лы Междунар. науч.-практ. конф., 16–18 апр. 2002. Покров,2002. С. 2–6.
6. Евстифеев В. В., Барбарова Л. А., Нигматуллина Д. И. и др. Усовершенствование средств ретроспективной диагностики хламидиоза животных // Ветеринарная
медицина. 2013. Вып. 97.
7. Фримель Г. Иммунологические методы. М., 1987. С. 428–429.
8. Lowry O. H., Rosebrough N. I., Farr A. L. et al. // J. biol. Chem. 1951. Vol. 193.
P. 265–275.
9. Фримель Г. Иммунологические методы . М., 1987. 472 с.
10. Wilson M. B., Nakane P. K. Recent development in the periodate method of conjugating horseradish peroxidase (HRPO) to antibodies // Biomedical Press. 1978. P. 215–244.

pаздел 1

126ВЛИЯНИЕ НАНОКОПОЗИТОВ СЕЛЕНАВ ПРИРОДНЫХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТРИЦАХНА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ РИЗОСФЕРНЫХ БАКТЕРИЙ *EFFECT OF SELENIUM NANOCOMPOSITES HAVING NATURALPOLYMERIC MATRICES ON THE VIABILITY OF RHIZOSPHERICBACTERIA
А. И. Перфильева 1, О. А. Ножкина 1, М. С. Карепова 1, Б. Г. Сухов 2Сибирский институт физиологиии биохимии растений СО РАН, Иркутск
2Иркутский институт химии им. А. Е. Фаворского СО РАН
1

A. I. Perfileva 1, O. A. Nozhkina 1, M. S. Karepova 1, B. G. Sukhov 2
1

Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS, Irkutsk
2
A. E. Favorsky Irkutsk Institute of Chemistry SB RAS
E-mail: alla.light@mail.ruАннотация
Исследовано влияние нанокомпозитов (НК) селена, полученных путем химического синтеза на основе природных полисахаридных матриц — арабиногалактана,крахмала и каррагинана, на жизнеспособность бактерий, выделенных из ризосферы растений. Выявлено отсутствие бактериостатической и бактерицидной активности НК селена и крахмала (НК Se/Кр), НК селена и каррагинана (НК Se/Кар)в отношении ризосферных бактерий Rhodococcus erythropolis и Pseudomonas oryzihabitans. НК селена и арабиногалактана (НК Se/Аг) оказывал бактериостатическоеи антибиопленочное воздействие на бактерию Acinetobacter guillouiae. Полученные
данные и ранее опубликованные результаты о положительном влиянии НК селена в природных матрицах на растения открывают перспективы дальнейшего исследования эффектов НК Se/Кр и НК Se/Кар при внесении в почву в комплексес ризосферными бактериями для повышения устойчивости культурных растенийк стрессовым факторам.

© А. И. Перфильева, О. А. Ножкина, М. С. Карепова, Б. Г. Сухов, 2020*Исследование поддержано грантом Президента Российской Федерации молодых ученых — кандидатов наук № МК-1220.2019.11.

Биотехнология

12
7

Abstract
The effect of selenium nanocomposites (NCs) obtained by chemical synthesis andbased on natural polysaccharide matrices — arabinogalactan, starch and carrageenan —on the viability of bacteria isolated from the rhizosphere of plants. It has revealed that both
NC of selenium and starch (NC Se/St) and NC of selenium and carrageenan (NC Se/Car)
have no bacteriostatic and bactericidal activity against rhizospheric bacteria Rhodococcus
erythropolis and Pseudomonas oryzihabitans. In contrast, NC of selenium and arabinogalactan (Se/AG) has the bacteriostatic and antibiofilm effects on the bacterium Acinetobacter
guillouiae. The data obtained and the previously published results on the positive effect ofselenium NCs having natural matrices on plants offer the future prospect for further investigations of effects of NC Se/St and NC Se/Car when added to the soil in combination withrhizospheric bacteria in order to increase the resistance of cultivated plants to stress factors.

Ранее нами был исследован ряд нанокомпозитов (НК) селена в природных матрицах в качестве веществ для оздоровления культурных растений от фитопатогенных бактерий. Важной характеристикой таких новых
агентов является их воздействие НК на окружающую среду, в частности,на жизнеспособность представителей почвенной микрофлоры. Цель настоящей работы — изучить влияние НК селена в природных полисахаридных матрицах на жизнеспособность почвенных микроорганизмов,выделенных из ризосферы растений. Исследования проводились на трехштаммах, различающихся по морфологическим и физиолого-биохимическим признакам: Acinetobacter guillouiae, Rhodococcus erythropolis, Pseudomonas oryzihabitans. В работе использовали следующие НК: нанокомпозит селена и арабиногалактана (НК Se/Аг, 6,4 % Se); нанокомпозит селенаи крахмала (НК Se/Кр, 12,0 % Se); нанокомпозит селена и каррагинана (НКSe/Кар, 2,0 % Se). Все НК были синтезированы в Иркутском институте химии. В экспериментах использовали растворы НК с содержанием селена
0,000625 %. Для исследования наличия антибактериального эффекта НКиспользовали метод мутности бактериальной суспензии, метод диффузиив агар и определение интенсивности биопленкообразования (планшетный метод).
Было выявлено, что НК Se/Аг обладал подавляющей активностью поотношению к микроорганизму A. guillouiae, снижал прирост в 2 раза посравнению с контролем. Возможно, такой эффект связан с биологическими свойствами арабиногалактана. Однако НК Se/Аг не оказывал влияниена прирост суспензий родококка и псевдомонад. Вероятно, такие различияв эффекте НК связаны с различием в строении клеточной стенки бактерий,обеспечивающей устойчивость микроорганизма к стрессовому фактору.

128pаздел 1Эксперименты демонстрируют отсутствие бактериостатического эффекта
НК Se/Кр и НК Se/Кар по отношению к исследуемым микроорганизмам. НК
Se/Аг на 30 % достоверно снижал биопленкообразование бактерии A. guillouiae по сравнению с контролем. Не выявлено негативного влияния НК
Se/Кр на биопленкообразование ризосферных бактерий. НК Se/Кар дажестимулировал образование биопленок у бактерий P.oryzihabitans.
Наличие бактерицидного эффекта у НК определяли по ширине зоныингибирования вокруг лунок на чашке со средой. Обнаружена ярко выраженная зона отсутствия роста P. oryzihabitans под влиянием НК Se/Кар, еевеличина достигала 12 ± 0,3 мм. Во всех остальных вариантах эксперимента
ингибирования роста бактерий не обнаружено.
Полученные новые данные и ранее опубликованные результаты о положительном влиянии этих НК на растения открывают перспективы дальнейшего исследования внесения в почву НК Se/Кр и НК Se/Кар в комплексес ризосферными бактериями для повышения устойчивости культурных
растений к стрессовым факторам.

Биотехнология

12
9ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕГРАДАЦИИ ГЕРБИЦИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ
ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯНА ОСНОВЕ ПОЛИ-3-ГИДРОКСИБУТИРАТАВ ПОЧВЕННЫХ МИКРОЭКОСИСТЕМАХ *STUDY OF THE DEGRADATION OF HERBICIDAL DRUGSWITH PROLONGED ACTION BASED ON POLY-3-HYDROXIBUTIRATEIN SOIL MICROECOSYSTEMS
О. Д. Петровская
Сибирский федеральный университет, Красноярск
O. D. Petrovskaya
Siberian Federal University, Krasnoyarsk
E-mail: olga.petrovskaya.@mail.ruАннотация
Разработка экологически безопасных препаратов нового поколения с контролируемым высвобождением гербицида, c использованием специального покрытияили матриц (носителей) является актуальным направлением биотехнологии в сельском хозяйстве. В данной работе матрицей для депонирования гербицида являлся
биоразрушаемый полимер — поли-3-гидроксибутират [П(3ГБ)] с наполнителем изберезовых опилок.

Abstract
The development of environmentally friendly preparations of a new generation with
controlled release of the herbicide using a special coating or matrices (carriers) is an urgent
area of biotechnology in agriculture. In this work, the matrix for the deposition of theherbicide was a biodegradable polymer — poly-3-hydroxybutyrate [P (3HB)] with a filler
from birch sawdust.

© О. Д. Петровская, 2020*Исследования выполнены при поддержке Проекта «Агропрепараты нового поколения: стратегия конструирования и реализации» (Соглашение № 074-02-2018-328)
в соответствии с постановлением Правительства Российской Федерации от 9 апреля
2010 г. № 220. «О мерах по привлечению ведущих ученых в российские вузы».

130pаздел 1Введение
Современное сельское хозяйство невозможно без применения средств
защиты культурных растений (пестицидов). Гербициды составляют однуиз самых больших групп пестицидов, используемых для защиты культурных растений от сорняков [1]. Большинство применяемых гербицидов недостигают намеченной цели, основная масса этих веществ аккумулируетсяв биологических объектах, загрязняет почвы, водоемы, вызывает гибель полезных организмов. Использование пестицидов для обработки сельскохозяйственных культур приводит к включению пестицидов в пищевые цепи,что определяет высокую опасность этих поллютантов для экосистем [2].
В последние годы все больше внимания уделяется разработке препаратовс контролируемым выходом активного вещества за счет депонирования ихв биоразрушаемые материалы [3]. Полигидроксиалканоаты (ПГА) — биоразлагаемые полимеры микробиологического происхождения, которые являются перспективными материалами для создания таких систем. Свойства
ПГА, такие как долгосрочная биоразлагаемость и возможность полученияиз них полимерных изделий в различных физических состояниях (порошки, растворы, расплавы), открывают им перспективу построения долгосрочных форм препаратов на их основе.
Целью работы является исследование биодеградации экспериментальных
форм препаратов гербицидного действия в почвенных микроэкосистемах.
Материалы и методы
Образцы полимера П(3ГБ) были синтезированы с использованием
штамма Cupriavidus eutrophus B10646 по авторской технологии [4].
Используемые пестициды: метрибузин [4-амино-6-трет-бутил-3-метилтио-1,2,4-триазин-5(4Н)-ОН] (далее МЕТ) является системным избирательным гербицидом из группы 1,2,4-триазинонов. Трибенурон-метил [метиловый эфир 2-[6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-ил(метил) карбомоилсульфамоил] бензойной кислоты] (далее ТРИБ) представляет собой системный
селективный гербицид из группы сульфонилмочевин. В качестве наполнителя полимера использовали березовые опилки, полученные измельчением
древесины березы на деревообрабатывающем станке МД 250–85 (компания
«СтанкоПремьер», Россия).
Для получения форм гербицидов в виде гранул использовали сырую
пасту полимера, увлажненную этанолом, смешанную с березовыми опилками и гербицидом с применением гранулятора Fimar (Италия). Соотношение компонентов в формах было следующим: П(3ГБ)/опилки/герицид как
50/40/10 (вес.%).

Биотехнология

131Деградацию гранулированных форм исследовали в почвенных микроэкосистемах. Для этого в контейнер с почвой помещали исследуемые формыв центр на глубину не более 1 см по три штуки в мешочке из органзы. Инкубировали в термостате при температуре 30 °С и при комнатной температуре (21–23 °С) и 50 %. После инкубационного периода гранулы изымали изпочвы, очищали и высушивали. Деградацию форм оценивали каждые двенедели в течение четырех месяцев весовым методом.
Для анализа почвенных проб использовали общепринятые микробиологические методы. Общую численность органотрофных бактерий определяли на мясопептонном агаре, численность микромицетов — на агаре
Сабуро.
РезультатыВ результате культивирования получен П(3ГБ), имеющий следующие
свойства: средневесовую молекулярную массу Mв = 561 кДа; полидисперстность (D) = 4,6; степень кристалличности — 76 %. В ходе эксперимента
были сконструированы экспериментальные формы в виде гранул (рис. 1),
содержащие П(3ГБ)/березовые опилки/гербицид (МЕТ или ТРИБ) в соотношении 50/40/10 %. Масса гранул составляла 5–6 мг. Результаты деградации экспериментальных форм представлены на рис. 2. Исследование биоразрушения экспериментальных форм в течение длительного эксперимента
(четыре месяца), показало их медленную деградацию и длительное функционирование в почве. Остаточная масса гранул составила около 75 % отизначального веса и не зависела от режима инкубации и вида депонированного гербицида.

Рис. 1. Фото экспериментальных формpаздел 1

132

Б

А

Рис. 2. Динамика изменения массы гранул П(3ГБ)/Опилки/МЕТ и П(3ГБ)/Опилки/ТРИБ в зависимости от условий инкубации: А — инкубированиепри комнатной температуре; Б — инкубирование в термостате при 29 °СВ данном исследовании получены и охарактеризованы препараты экспериментальных форм метрибузина и трибенурон-метила, внедренных в матрицу разлагаемого поли-3-гидроксибутирата, смешанного с древесными
опилками. Исследуемые препараты обладали длительным периодом биоразрушения в почвенных микроэкосистемах, что является важным свойством для препаратов пролонгированного действия.
Литература
1. Wang Y., Qian C., Yan X., Liu H. Preparation and characterization of controlledrelease poly (melamine-formaldehyde) microcapsules filled with 2, 4-D isooctyl ester //International Journal of Polymeric Materials and Polymeric Biomaterials. 2017. Vol. 66,№ 18. P. 963–969.
2. Roy A., Singh S. K., Bajpai J., Bajpai A. K. Controlled pesticide release frombiodegradable polymers // Central European Journal of Chemistry. 2014. Vol. 12. Iss. 4.
P. 453‒469.
3. Shershneva A. M., Murueva A. V., Zhila N. O., Volova T. G. Antifungal activity of
P3HB microparticles containing tebuconazole // Journal of Environmental Science and
Health, Part B. 2019. P.196–204.
4. Киселев Е. Г., Демиденко А. В., Барановский С. В., Волова Т. Г. Масштабирование технологии синтеза биодеградируемых полигидроксиалканоатов в условиях опытного производства // Журнал Сиб. фед. ун-та. 2014. Сер. 2. Биология. № 7.
С. 134–147.

Биотехнология

13
3ПОКАЗАТЕЛИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
РЕМОНТНОГО МОЛОДНЯКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТАНА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ РАЗНЫХ ДОЗТКАНЕВОГО БИОСТИМУЛЯТОРАNONSPECIFIC RESISTANCE INDICES OF REPLACEMENT YOUNG
CATTLE AGAINST THE BACKGROUND OF USING DIFFERENT DOSESOF TISSUE BIO-STIMULANT
И. А. Пушкарев
Федеральный Алтайский научный центр агробиотехнологий, Барнаул
I. A. Pushkarev
Federal Altai Scientific Center of Agro-Biotechnologies, Barnaul
E-mail: pushkarev.88-96@mail.ruАннотация
Научно-хозяйственный опыт проведен в 2020 г. на базе АО «Учхоз «Пригородное» Индустриального района г. Барнаула Алтайского края на ремонтном молодняке
крупного рогатого скота. Нами по принципу аналогов было сформировано четыре
подопытные группы ремонтных телочек по 10 голов в каждой. При подборе животных учитывались возраст (1 месяц) и живая масса (51,0 кг). Продолжительность
опыта составляла 14 дней. Контрольным животным подкожно однократно вводили
физиологический раствор в дозе 3,0 мл/гол., в I опытной группе тканевой биостимулятор в дозе 2,0 мл/гол., во II — 3,0 мл/гол., в III — 4,0 мл/гол. Опытную партию
тканевого биостимулятора изготовили из субпродуктов и боенских отходов пантовых оленей по запатентованной технологии. По результатам опыта установлено,что наиболее оптимальной дозой применения тканевого биостимулятора следует
считать 3 мл/гол., что способствует увеличению спонтанного НСТ-теста на 11,0 %(p ≤ 0,01), стимулированного НСТ-теста на 7,1 % (p ≤ 0,05) и повышению фагоцитарного индекса на 4,6 % (p ≤ 0,05).

Abstract
The science-based economic experiment was conducted in 2020 on the farm of the AO“Uchkhoz Prigorodnoye”, the Industrialniy District of the City of Barnaul, the Altai Region,
on replacement young cattle. Four trial groups of 10 comparable replacement heifers were
© И. А. Пушкарев, 2020

134pаздел 1

formed. When selecting the animals, their age (1 month) and live weight (51.0 kg) were taken
into account. The experiment lasted 14 days. In the control group, physiological salt solution
was injected once subcutaneously in a dose of 3 mL per head; the tissue bio-stimulant was injected as following: in the 1st trial group — in a dose of 2 mL per head; in the 2nd trial group —3 mL per head; in the 3rd trial group — 4 mL per head. The trial batch of tissue bio-stimulant
was made of velvet antler deer by-products and slaughterhouse offal according to the patented
technology. The research findings showed that the dose of 3 mL per head should be considered
the most optimal dose of the tissue bio-stimulant administration; this contributed to an increase in spontaneous NBT test value by 11.0 % (p ≤ 0.01), stimulated NBT test value by 7.1 %(p ≤ 0.05), and increased phagocytic activity of neutrophils by 4.6 % (p ≤ 0.05).

Введение
Основной целью при выращивании телят является достижение хорошей
интенсивности роста и низкой заболеваемости. Высокая заболеваемостьи смертность молодняка оказывает существенное влияние на экономическую эффективность ведения молочного скотоводства [1].
Заболеваемость телят во многом зависит от функциональной активности иммунной системы. Иммунная система молодняка крупного рогатого
скота в начальный период постнатального онтогенеза недостаточно сформирована, что делает телят восприимчивыми к бактериальным и вирусным
патогенам [2].
К факторам, оказывающим неблагоприятное влияние на иммунную систему телят, относят различного рода метаболические нарушения организма
коров матерей на поздних сроках беременности [3–4], низкое содержание
иммуноглобулинов в молозиве [5–6], погрешности в кормлении и содержании молодых животных [7]. Для поддержания естественных защитных силорганизма телят, снижения частоты случаев заболеваний и увеличения интенсивности их роста в практике ведения молочного скотоводства применяют различные биологически активные кормовые добавки и препараты [8–9].
Одними из таких препаратов являются тканевые биостимуляторы. Применение тканевых биостимуляторов в практике ведения молочного скотоводства является большим дополнительным резервом для увеличения
продуктивных показателей животных, повышения рентабельности отрасли
животноводства. В настоящее время на основании экспериментальных исследований установлено, что под влиянием тканевых препаратов происходит повышение общей реактивности организма, функционального состояния ретикулоэндотолиальной системы, улучшение процессов пищеварения
путем активации работы желудочных желез, стимулирование регенеративных процессов, газообмена, гликолиза, фосфорного обмена, гемопоэза уве-Биотехнология

13
5личение показателей естественной резистентности и других жизненно важных функций организма животных [10]. При этом остаются недостаточно
изучены вопросы, связанные с влиянием тканевых препаратов на становление неспецифической резистентности крови молодых животных.
В связи с этим целью наших исследований стало изучение уровня неспецифической резистентности крови ремонтного молодняка крупного
рогатого скота на фоне применения разных доз тканевого биостимулятора.
Материал и методы исследования
Научно-хозяйственный опыт проведен в 2020 г. на базе АО «Учхоз «Пригородное» Индустриального района г. Барнаула Алтайского края на ремонтном молодняке крупного рогатого скота. Схема опыта представлена в табл. 1.
Согласно схеме опыта, представленной в табл. 1, нами сформировано
четыре аналогичных группы ремонтных телочек по 10 голов в каждой. Приподборе животных учитывались возраст (1 мес.) и живая масса (51,0 кг).
Продолжительность опыта составляла 14 дней.
В ходе проведения опыта животные контрольной и опытных групп получали одинаковый рацион, сбалансированный по всем нормируемым элементам питания. Опытную партию тканевого биостимулятора изготовилииз субпродуктов и боенских отходов пантовых оленей по запатентованной
технологии. Материалом для приготовления тканевых препаратов служили
селезенка, лимфоузлы, печень, матки с плодами (2–3 мес.), плацента, отобранные во время убоя здоровых животных. Полученный нативный материал помещали в холодильник на 6 суток при температуре +2 +4 °С. После чеговесь материал в равных частях измельчали и помещали в поле ультразвука.
Таблица 1Схема опыта
Возраст ремонтных Доза подкожной
телок при введении
инъекции
препарата, мес. препарата, мл / голГруппа

nНаименование
препарата

Контрольная

10Физиологический
раствор

1

3,0

I опытная

10Тканевой
биостимулятор

1

2,0II опытная

10

1

3,0

III опытная

10

1

4,0

Тканевой
биостимулятор
Тканевой
биостимулятор

pаздел 1136Контроль качества на токсичность и реактогенность проводили на белых мышах, ГОСТ 31926-2013 «Средства лекарственные для ветеринарного
применения. Методы определения безвредности» и методические указания«По бактериологическому контролю стерильности ветеринарных биологических препаратов» № 115-6А от 03.06.1980.
Отбор проб крови для иммунологических исследований проводился
дважды: перед началом введения препарата и на 14-й день после инъекции.
Забор крови осуществляли из шейной вены в вакуумные пробирки (консервант литий гепарин).
Показатель спонтанного НСТ-теста определяли по количеству фагоцитов,поглотивших из раствора нитросиний тетразолий; стимулированный НСТтест — по количеству фагоцитов, инкубируемых со стимулятором (раствор
зимозана), поглотивших из раствора нитро синий тетразолий; фагоцитарный
индекс — путем подсчета количества фагоцитов, поглотивших латекс.
Данные, полученные в ходе опыта, подвергали биометрической обработке при помощи программного пакета Microsoft Excel 2016. Достоверность
результатов опыта по отношению к контрольной группе рассчитывали поt-критерию Стьюдента для независимых выборок, статистически значимыми считали различия при *p ≤ 0,05; **p ≤ 0,01. Достоверность результатов
биохимических показателей крови на 14-й день после инъекции препаратав сравнении с началом опыта по t-критерию Стьюдента для зависимых выборок, статистически достоверными считали значения при (*) p ≤ 0,05; (**)
p ≤ 0,01; (***) p ≤ 0,001.
Результаты исследования и их обсуждения
Показатели неспецифической резистентности крови ремонтного молодняка крупного рогатого скота представлены в табл. 2.
Таблица 2Показатели неспецифической резистентности крови
ремонтного молодняка крупного рогатого скота
Показатель

Контроль

0,35 ± 0,013
0,34 ± 0,009
0,54 ± 0,005
НСТ стим., у. ед.
0,56 ± 0,013Фагоцитарный
51,0 ± 0,71
индекс, %51,4 ± 0,76

НСТ спон., у. ед.

I опытнаяГруппа
III опытная
II опытная
032 ± 0,007
0,35 ± 0,006
0,36 ± 0,006
0,35 ± 0,013(**) 0,38 ± 0,005**(**) 0,38 ± 0,014*
0,55 ± 0,009
0,51 ± 0,006
0,52 ± 0,005
0,58 ± 0,009(*) 0,60 ± 0,010*(***) 0,59 ± 0,003(***)
51,4 ± 1,33
52,3 ± 1,59
51,3 ± 2,33
54,2 ± 0,75*
56,0 ± 1,19*(***) 57,0 ± 0,55***(*)

Биотехнология

13
7Проведя анализ данных, представленных в табл. 2, можно заключить,что перед началом опыта значимых достоверных различий по исследуемым
показателям между животными контрольной и опытных групп выявленоне было. После введения тканевого биостимулятора показатель спонтанного НСТ-теста, отражающего метаболический потенциал клеток, способных к фагоцитозу, в крови телочек I, II и III опытных групп увеличился
на 2,9–11,7 % (p ≤ 0,01). В сравнении с началом опыта рассматриваемый
показатель в крови животных контрольной группы уменьшился на 2,9 %,в опытных группах он стал больше на 5,5–9,3 % (p ≤ 0,01).
Самый высокий показатель стимулированного НСТ-теста, позволяющий оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидной активности фагоцитов, на 14 день после инъекции препарата отмечался у ремонтного молодняка II опытной группы, что на 7,1 % (p ≤ 0,05) больше, чемв контроле. У молодняка I и II опытных групп — 3,5 и 5,3 %. При сопоставлении значений стимулированного НСТ-теста с началом опыта выявлено
увеличение данного показателя в контроле на 3,7 %, в опытных группах рассматриваемое значение возросло на 5,4–17,6 % (p ≤ 0,001).
Фагоцитарный индекс нейтрофилов, отражающий поглотительную
способность фагоцитов, в крови ремонтного молодняка I, II и III опытных
групп стал больше на 2,8 % (p ≤ 0,05), 4,6 % (p ≤ 0,05), 5,6 % (p ≤ 0,001) соответственно в сравнении с аналогичным показателем в контроле. В сравнении с предыдущими значениями фагоцитарный индекс у телочек в контроле остался практически на том же уровне, с минимальным расхождением в 0,4 %. В опытных группах рассматриваемое значение увеличилось на
2,8–5,7 % (p ≤ 0,05).
Полученные в нашем опыте результаты согласуются с исследованиями
других авторов, изучавших влияние тканевых препаратов «Гамавит» и «БиоТЭК» на иммунную систему молодняка крупного рогатого скота [11–12].
Имеются две основные гипотезы, объясняющие влияние тканевых
препаратов на иммунную систему животных. Обе гипотезы не противоречат друг другу и взаимно дополняют одна другую. Первая гипотеза более
консервативна и утверждает, что иммунная система организма животных дает реакцию на внедрения чужеродного белка, мобилизуя защитные
силы организма [13]. Вторая свидетельствует о том, что, согласно учению
академика В. П. Филатова, в тканях животных, сохраняемых в условиях
неблагополучных для их существования, накапливаются особые вещества, называемые «биогенными стимуляторами». Из этих тканей выделены органические кислоты с большим молекулярным весом. Животные
ткани, находящиеся в препарате, при парентеральном введении медленно

138pаздел 1распадаются с образованием большого количества умеренных раздражителей, которые действуют на ферменты. С одними они вступают в химическую связь, присоединяясь к молекулам белка фермента, по отношениюк другим являются катализаторами. А так как нервная ткань, как полагал
академик В. П. Филатов, содержит необходимые высокоактивные ферментные системы, являющиеся наиболее чувствительными, то они первые испытывают влияние биогенных стимуляторов, чем и обеспечивается
руководящая роль нервной системы и коры мозга при применении тканевых препаратов. Под влиянием биогенных веществ повышается тонус
центральной нервной системы и вегетативной иннервации, улучшаетсяих регулирующие влияние на органы и ткани, в том числе и на органы
иммунной системы [10].
Нервная и иммунная системы организма животных тесно связаны
между собой. Доказано, что нервная система иннервирует центральныеи периферические иммунокомпетентные органы. Вырабатываемые нервной системой биологически активные вещества способны оказывать
влияние на функциональное состояние иммунной системы. Ключевым
звеном аппарата нервной регуляции иммунитета является гипоталамус.
Гипоталамус дает начало сложному эфферентному пути передачи центральных нейрорегуляторных влияний на иммунокомпетентные клетки,которые обладают соответствующими рецепторами к факторам нервной
регуляции [14].
Таким образом, введение тканевого биостимулятора ремонтному молодняку крупного рогатого скота в возрасте одного месяца в разных дозах способствует увеличению неспецифической резистентности организма. Наиболее оптимальной дозой применения тканевого биостимулятора следует
считать 3 мл/гол., что способствует увеличению спонтанного НСТ-теста на
11 % (p ≤ 0,01), стимулированного НСТ-теста на 7,1 % (p ≤ 0,05) и повышению фагоцитарного индекса на 4,6 % (p ≤ 0,05).
Литература
1. Garcia M. et al. Increasing intake of essential fatty acids from milk replacer benefits
performance, immune responses, and health of preweaned Holstein calves // Journal of
Dairy Science. 2015. Vol. 1. P.458–477.
2. Langel S. N. et al. Effect of feeding whole compared with cell-free colostrum on calf
immune status: The neonatal period // Journal of Dairy Science. 2015. Vol. 98. P. 3729–3740.
3. Ling T. et al. Maternal late-gestation metabolic stress is associated with changes in
immune and metabolic responses of dairy calves // Journal of Dairy Science. 2018. Vol. 101.
P. 6568–6580.

Биотехнология

13
9
4. Gerbert C. et al. Effects of ad libitum milk replacer feeding and butyrate
supplementation on behavior, immunes status, and health of Holstein calves in the postnatal period // Journal of Dairy Science. 2018. Vol. 101. P. 7348–7360.
5. Lora I. et al. Factors associated with passive immunity transfer in dairy calves:combined effect of delivery time, amount and quality of the first colostrum meal // Animal.
2018. Vol. 12. P. 1041–1049.
6. McGee M. et al. Review: passive immunity in beef-suckler calves // Animal. 2019.
Vol. 13. P. 810–825.
7. Jacometo C. B. et al. Maternal supply of methionine during late pregnancy is
associated with changes in immune function and abundance of micro RNA and mRNA in
Holstein calf polymorphonuclear leukocytes // Journal of Dairy Science. 2018. Vol. 101. P.
8146–8158.
8. Hussain D. A. et al. Effect of probiotic and synbiotic on faecal microbial count andcellmediated immunity in crossbred calves // Indian Journal of Animal Research. 2018. Vol.
52. P. 1452–1456.
9. Зинченко Д. А. Влияние тканевых биостимуляторов на организм животных //Междунар. журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2014. № 3.
С. 124–125.
10. Рубинский И. А., Петрова О. Г. Иммунные стимуляторы в ветеринарии Ульяновск : УГСХА, 2011. 168 с.
11. Топурия Г. М., Топурия Л. Ю. Иммунный статус крупного рогатого скота приприменении Гамавита // Извест. Оренбург. гос. аграр. ун-та. 2011. № 1. С. 69–71.
12. Блохин П. И. Влияние препарата «Био-ТЭК» на биохимические показатели
крови коров и полученных от них телят // Труды КубГАУ. 2011. №73(09). С. 2–9.
13. Даричева Е. Н., Ермолаев В. А. Тканевая терапия в ветеринарной медицине.
Ульяновск : УГСХА, 2011. 168 с.
14. Созаева Д. И., Бережанская С. Б. Основные механизмы взаимодействия нервной и иммунной систем. Клинико-экспериментальные данные // Кубанский науч.
мед. вестн. 2014. № 3. С. 145–150.

pаздел 1140ПОСТТРАНСЛЯЦИОННОЕ ПРИСОЕДИНЕНИЕ
ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА NRF2 К МОДУЛЬНОМУ
НАНОТРАНСПОРТЕРУ ПОСРЕДСТВОМ ЛЕЙЦИНОВОЙ МОЛНИИ *POSTTRANSLATIONAL ATTACHMENT OF THE NRF2 TRANSCRIPTION
FACTOR TO A MODULAR NANOTRANSPORTER VIA LEUCINE ZIPPER
А. С. Сабуров 1, Т. Н. Лупанова 2, А. В. Уласов 2
1Первый Московский государственный медицинский университет
им. И. М. Сеченова
2Институт биологии гена РАН, Москва
A. S. Saburov 1, T. N. Lupanova 2, A. V. Ulasov 2
1

I. M. Sechenov First Moscow State Medical University
2
Institute of Gene Biology RAS, Moscow
E-mail: saburovwh@gmail.com

Аннотация
Показана возможность посттрансляционного присоединения транскрипционного фактора Nrf2 к модульному нанотранспортеру (МНТ) при помощи белкового
мотива лейциновой молнии с высокой аффинностью.

Abstract
The possibility of post-translational attachment of transcription factor Nrf2 to modular
nanotransporter (MNT) via leucine zipper motif with high affinity was shown.

Транскрипционный фактор человека Nuclear factor-erythroid 2 p45-related factor 2 (Nrf2) является частью сигнального пути Nrf2/ARE, который,координируя целый спектр цитозащитных генов, обеспечивает сохранение
гомеостаза при окислительном стрессе. Регулируемые Nrf2 ARE-элементы
(Antioxidant Response Elements) контролируют глутатионовые и тиоредоксиновые антиоксидантные системы, ферменты детоксикации, гены ме© А. С. Сабуров, Т. Н. Лупанова, А. В. Уласов, 2020*Работа поддержана грантом Российского научного фонда (проект № 17-1401304).

Биотехнология

141таболизма липидов, углеводов и гема. Вызывает интерес вовлеченность
Nrf2 в патогенез множества заболеваний, связанных с окислительным
стрессом: нейродегенеративных, сердечно-сосудистых заболеваний, ракаи диабета. Применение низкомолекулярных индукторов Nrf2 на различных
клеточных и животных моделях давало значительный терапевтический эффект. С другой стороны, эти соединения отличаются неспецифичностью
действия.
Доставка полноразмерного Nrf2 в клетки-мишени лишена этого недостатка и может служить альтернативным подходом. Для этой цели мы планируем использовать МНТ, рекомбинантные белковые структуры, которые
доказали свою эффективность при доставке низкомолекулярных соединений и регуляторных белков в клетки [1]. Поскольку ограничения бактериального синтеза затрудняют наработку белка более 100 кДа, возникает задача посттрансляционного соединения рекомбинантных Nrf2 и МНТ, наработанных в E. coli. Для этого мы использовали высокоаффинный белковый
мотив лейциновой молнии.
В рамках настоящей работы на N-конец Nrf2 и C-конец МНТ быликлонированы фрагменты лейциновой молнии Ze/Zr [2]. Штамм E.Coli
BL21(DE3) использовался для наработки обоих белков. Выделение МНТпроводилось из растворимой фракции при помощи Ni-NTA аффинной
хроматографии. Nrf2 выделялся из телец включения лизированной биомассы клеток солюбилизирующим буфером с 8M Urea и 100 μM DTT, а затем
диализовался в PBS с 100 μM DTT. Комплекс МНТ с Nrf2 формировался
при 4 °C и различных молярных соотношениях (1:1, 2:1 и 4:1) в течение
18–21 часа. Образованный комплекс МНТ-Nrf2 был очищен с помощью
Ni-NTA аффинной хроматографии. Образование комплекса подтверждалось
иммуноблоттингом с антителами на Nrf2 и МНТ.
Проведенная работа показывает принципиальную возможность посттрансляционного объединения крупных белков при помощи высокоаффинной лейциновой молнии Ze/Zr.
Литература
1. Rosenkranz A. A. et al. Delivery systems exploiting natural cell transport processes ofmacromolecules for intracellular targeting of Auger electron emitters // Nuclear Medicine
and Biology. 2019.
2. Moll J. R. et al. Designed heterodimerizing leucine zippers with a ranger of pIs andstabilities up to 10−15 M // Protein Science. 2001. Т. 10, №. 3. P. 649–655.

pаздел 1142ЭФФЕКТ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ
IN VITRO КУЛЬТУР НА СООТНОШЕНИЕ ОСНОВНЫХ ФЛАВОНОВ
SCUTELLARIA BAICALENSISEFFECT OF CULTURE CONDITIONS AND DIFFERENTIATIONOF IN VITRO CULTURES ON THE RATIO OF MAIN FLAVONESOF SCUTELLARIA BAICALENSIS
С. А. Саламайкина 1,2, А. И. Соловьёва 2, А. Ю. Степанова 212Московский физико-технический институт
Институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева РАН, МоскваS. A. Salamaikina 1,2, A. I. Solov’eva 2, A. Yu. Stepanova 2
1

2

MIPT
Timiryazev Institute of Plant Physiology RAN, Moscow
E-mail: salamaikina.sa@phystech.eduАннотация
Исследовали влияние условий культивирования и дифференциации на соотношение пар основных флавонов — байкалин-байкалеин (BG-B) и вогонозид-вогонин
(WG-W) в in vitro культурах Scutellaria baicalensis в течение цикла культивирования.
У недифференцированных культур преобладал синтез пары BG-B. В культуре hairyroots при выращивании на жидкой или агаризованной средах доминировали разные
флавоны. В первом случае — флавоны, имеющие метильную группу, — WG-W, а вовтором — BG-B.

Abstract
The study of the influence of culture conditions and differentiation on the ratio ofpairs of the main flavones, baicalin-baicalein (BG-B) and wogonoside-wogonin (WG-W)
in in-vitro cultures of Scutellaria baicalensis was carried out. In undifferentiated cultures,
synthesis of the BG-B pair prevailed. In hairy roots culture grown on liquid or solid media,
different flavones dominated. In the first case, flavones with a methyl group, WG-W, dominated, and in the second, BG-B.

Scutellaria baicalensis Georgi — многолетнее лекарственное растение, синтезирующее широкий спектр биологически активных веществ фенольной
© С. А. Саламайкина, А. И. Соловьёва, А. Ю. Степанова, 2020Биотехнология

14
3природы, большинство из которых синтезируется в подземной части. Основными корнеспецифическими флавонами являются байкалеин (5,6,7-тригидроксифлавон, B), вогонин (5,7-дигидрокси-8-метоксифлавон, W) и ихгликозилированнные формы: байкалин (байкалеин 7-O-β-D-глюкуронид,BG) и вогонозид (вогонин 7-O-β-D-глюкуронид, WG). Различия в положении гидроксильных групп и наличии метильного радикала в составе данных флавонов определяют их различия в фармакологических свойствах.
Так BG и B проявили мощную противовирусную активность в системе invitro, что дает возможность для разработки критически необходимых противокоронавирусных препаратов. В свою очередь, W способен подавлять
рост опухолевых клеток, не повреждая нормальные диплоидные клетки.
Проблему получения растительного сырья в достаточном количестве
можно решить с помощью использования культивирования растительного материала в условиях in vitro. Поскольку синтез ценных флавонов происходит в корнях S. baicalensis, целесообразно использовать культуру корней (hairy roots) или полученные из них недифференцированные ткани —суспензионную или каллусную культуры.

Доля содержания BG, B, WG и W от суммы флавонов в in vitro культурах
S. baicalensis в течение цикла культивирования

144pаздел 1В своей работе мы исследовали влияние условий культивированияи дифференциации на соотношение пар флавонов BG-B и WG-W в in vitroкультурах S. baicalensis в течение цикла культивирования.
Объектами исследования был штамм hairy roots S. baicalensis, культивируемый на агаризованной и жидкой питательных средах, и полученные изних каллусная и суспензионная культуры.
С помощью HPLC было установлено, что у недифференцированных
культур на протяжении всего цикла культивирования преобладал синтез
пары BG-B (в каллусах — 91,0−98,2 %, в суспензии — 75,8−93,8 %) (см. рисунок). Главной отличительной чертой культуры hairy roots при выращивании на жидкой среде было самое высокое содержание глюкоронида —WG, которое падало только в течение первых 7 сут. культивирования и вфазе деградации, а суммарное содержание пары WG-W доходило до 70 %от содержания четырех основных флавонов. При культивировании бородатых корней на агаризованной среде содержание данной пары флавонов
значительно сокращалось и варьировало от 25 до 55 %. Отмеченные различия в дифференцированных и недифференцированных тканях могут
быть обусловлены различной активностью флавон 6-гидроксилазы, флавон
8-гидроксилазы и 8-O-метилтрансферазы, ответственных за образование
корнеспецифических флавонов из хризина. Этот вопрос требует
дальнейшего изучения.

Биотехнология

14
5КОБЫЛЬЕ МОЛОКО В РАЗРАБОТКЕ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ
ПРОДУКТОВ СПОРТИВНОГО ПИТАНИЯ
MARE’S MILK IN THE DEVELOPMENT
OF SPORTS NUTRITION PRODUCTS
Х. С. Сарсембаев 1,2, Ю. А. Синявский 2
1Алматинский технологический университет, Республика Казахстан
2Казахская академия питания, Алматы, Республика Казахстан
Kh. S. Sarsembayev1,2, Y. A. Synyavskiy 2
1

2

Almaty Technological University, Kazakhstan
Kazakh Academy of Nutrition, Almaty, Kazakhstan
E-mail: husein.a14@gmail.com

Аннотация
Вопрос быстрого восстановления спортсменов после тяжелых тренировок и соревнований является актуальным и требует поиска эффективных приемов и средств
адаптивного характера. Использование кобыльего молока при создании спортивного питания является новым и перспективным направлением, связанным не толькос уникальностью химического состава молока, но и его высокими иммунобиологическими характеристиками.

Abstract
The question of rapid recovery of athletes after hard training and competition is urgent
and requires the search for effective techniques and means of an adaptive nature. The use of
mare’s milk in the creation of sports nutrition is a new and promising direction associatednot only with the uniqueness of the chemical composition of milk, but also with its highimmunobiological characteristics.

На современном этапе в спорте пристальное внимание уделяется спортивному питанию, так как работоспособность спортсмена во многом зависит и повышается за счет хорошо подобранной стратегии питания [1, 2].
Совершенствование методов тренировки в разных видах спорта ведетк значительному увеличению затрат энергии, которое, в свою очередь, тре© Х. С. Сарсембаев, Ю. А. Синявский, 2020

146pаздел 1бует соответственного увеличения калорийности рациона питания спортсменов. Потребление нутриентов у спортсменов должно быть выше рекомендуемой суточной нормы для человека, не испытывающего повышенных
физических нагрузок [1, 3]. Одной из распространенных стратегий дляоптимизации периода восстановления является использование специализированного спортивного питания, которое помогает значительно быстрее
восстановиться после тренировок и соревнований [1, 4]. Следует отметить,что при конструировании специализированных продуктов спортивного
питания в большинстве используется соевый белок, сывороточные белки
молока и сухое коровье молоко.
Целью настоящего исследования является разработка спортивного питания на основе сухого кобыльего молока. Характеризуя кобылье молококак один из ведущих ингредиентов спортивного питания, следует отметить,что в кобыльем молоке содержится около 40 биологически активных ингредиентов, включая низкомолекулярные пептиды, свободные аминокислоты, лактоальбумины и глобулины, витамины А, С, В1, В2, В6, В12, лизоцим,макро- и микроэлементы. Молоко характеризуется высоким содержанием
полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) и наличием линоленовой кислоты семейства омега-3 [5].
Кобылье молоко, содержит лизоцим, обладающий антимикробным действием, уровень которого в 4–5 раз выше, чем в коровьем молоке [6]. Особенностью кобыльего молока является отсутствие в его составе трансжирных кислот, вызывающих атеросклероз, болезни системы кровообращенияи способствующих онкозаболеваниям [7,8]. Все это свидетельствует о егопищевой безопасности и высокой биологической ценности при использовании как в нативном, так и в переработанном виде.
Главные преимущества кобыльего молока заключаются в том, что более половины белковой фракции кобыльего молока представлены альбуминами и глобулинами, которые хорошо перевариваются и усваиваются,не вызывая нарушений со стороны желудочно-кишечного тракта и печени. Кроме того, кобылье молоко содержит высокий уровень лактоферрина, более низкое содержание α-казеина в сравнении с коровьим молоком,что определяет его гипоаллергенные свойства по сравнению с коровьим
молоком [11].
Отсутствие жесткой термической обработки кобыльего молока позволяет сохранять в нем все ферменты, витамины и биологически активные
вещества в нативном виде [9, 10].

Биотехнология

147

Жир кобыльего молока, содержащий полиненасыщенные жирные кислоты, уровень которых почти в 10 раз выше, чем в коровьем, легко усваивается организмом.
Кроме того, кобылье молоко значительно превосходит коровье по содержанию аскорбиновой кислоты, витаминов группы В, а также по макрои микроэлементному составу.
Для создания продуктов спортивного питания целесообразно использовать основные и вспомогательные ингредиенты в сухом виде, в связис чем нами в качестве базовой основы было использовано сухое кобылье
молоко и все ингредиенты в сухом виде. Учитывая химический состави физиолого-биохимические характеристики сухого кобыльего молока, нами была разработана рецептура смеси для спортивного питания наоснове сухого кобыльего молока с добавлением биологически активных
ингредиентов, которые позволяют быстро восстановить организм после тренировок и соревнований, а также повысить иммунитет, антиоксидантные, микробиоценознормализующие и детоксицирующие функции
организма. В 100 г сухого кобыльего молока содержится 17,5–17,7 г белка,15,0–15,5 г жира, 60,0–65,1 г углеводов, пищевая ценность сухого кобыльего
молока — в промежутке от 415 до 470 ккал.
Для приготовления продукта используют сухое кобылье молоко, сухое
обезжиренное коровье молоко, сухие сливки, витамины, минеральные вещества, сухие плоды облепихи, пектин цитрусовый, инулин, гинестеин, сухие штаммы молочнокислых- и бифидобактерий, фукоидан.
В продукте содержится около 20,73 г белка; 15,0 г жиров; 58,0 г углеводов;калорийность продукта составляет в среднем 450 ккал/100 г.
Жирнокислотный состав специализированного продукта на 20,9 %представлен мононенасыщенными жирными кислотами, на 23,0 % — полиненасыщенными и на 56,0 % — насыщенными жирными кислотами. Содержание ω-3 и ω-6 жирных кислот в специализированном продукте равняется 66,17 мг% и 70,95 мг% соответственно, отсутствуют трансизомеры
жирных кислот.
Ниже приведен состав сухой смеси для спортивного питания на 100 г:Сухое молоко кобылье — 55,0Сухие сливки — 30,0Сухая бактериальная закваска, включающая сухие штаммы лакто- и бифидобактерий — 0,4Сухое обезжиренное коровье молоко — 13,0Сухие зародыши пшеницы — 1

148pаздел 1Сухие плоды облепихи — 0,5Инулин — 0,2Пектин цитрусовый — 1
Генистеин — 0,02–0,022Витаминный премикс — 0,192–0,256
Бета-каротин (Веторон Е) 2 % — 0,020–0,025Минеральный премикс — 0,176–0,237Фукоидан — 0,15 мгКалорийность сухого продукта спортивного питания составляет око- ло
450 ккал на 100 г продукта. При суточном употреблении 100 г сухого
продукта, растворенного в 1 л воды или молока, спортсмен будет потреблять более 450 ккал энергии, необходимой для выполнения физической
нагрузки.
Исходя из приведенных данных, можно говорить о том, что кобылье
молоко, имея уникальный состав и высокую биологическую ценность, может быть использовано в качестве основы при производстве продуктов
спортивного питания, направленных на восстановление организма после
повышенных физических нагрузок в период тренировок, в соревновательный и постсоревновательный периоды с целью восполнения потребностив основных биологически активных ингредиентах и повышения физиолого-биохимического статуса спортсменов .
Литература
1. Лавриненко С. В., Выборная К. В., Кобелькова И. В. и др. Использование специализированных продуктов для питания спортсменов в подготовительном периоде
спортивного цикла // Вопросы питания. 2017. Т. 86, № 4.
2. Erdman A., Travis D. T., Burke M. Nutrition and Athletic Performance: Position of
Dietitians of Canada, the Academy of Nutrition and Dietetics and the American Collegeof Sports Medicine. 2016. 46 p. URL: https://www.dietitians.ca/downloads/public/noapposition-paper.aspx.
3. Hull M. V., Jagim A. R., Oliver J. M. et al. Gender differences and access to a sports
dietitian influence dietary habits of collegiate athletes // J. Int. Soc. Sports Nutr. 2016.
Vol. 13. P. 38.
4. Shirato M., Tsuchiya Y., Sato T. et al. Effects of combined β-hydroxy-β-methylbutyrate(HMB) and whey protein ingestion on symptoms of eccentric exercise-induced muscle
damage // J. Int. Soc. Sports Nutr. 2016. Vol. 13. P. 7.
5. Кисилевич Е. Э. Сухое кобылье молоко для детского питания : мат-лы IV Междунар. студ. науч. конф. «Студенческий научный форум». 2012. С. 56–58.
6. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок. Руководство Р4.1.1672-03. URL: http://base.garant.ru/4182073.

Биотехнология

149
7. СТ РК ИСО 12081-2010. Молоко и молочные продукты. Определение содержания кальция. Титриметрический метод. URL: http://online.zakon.kz/Document/
doc_id=37658323.
8. Скурихин И. М. Химический состав пищевых продуктов. М. : Легкая и пищевая промышленность, 1984. 358 с.
9. Попова Н. В. Инновация в технологии восстановления сухого молока какфактора управления качеством восстановленных продуктов переработки молока //Управление качеством товаров и услуг.2013. Т. 7, № 4. С. 161–186.
10. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок. Руководство Р4.1.1672-03. URL: http://base.garant.ru/4182073.
11. Codex alimentarius. Жиры масла производные продукты. М. : Весь мир, 2007.
65 с.

pаздел 1150КОНЪЮГАТ РЕКОМБИНАНТНОГО ТРЕТЬЕГО ДОМЕНА
АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА С НАНОЧАСТИЦАМИ
ПЛГА С ПАКЛИТАКСЕЛОМ: ФАРМАКОКИНЕТИКАИ ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬPACLITAXEL LOADED PLGA NANOPARTICLES CONJUGATEDWITH α-FETOPROTEIN THIRD DOMAIN: PHARMACOKINETICS
AND ANTITUMOR EFFICACY
М. Б. Сокол, Н. Г. Яббаров,М. Р. Молляева, М. В. Фомичёва, Е. Д. Никольская
Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
M. B. Sokol, N. G. Yabbarov, M. R. Mollaeva, M. V. Fomicheva, E. D. Nikolskaya
IBCP RAS, Moscow
E-mail: mariyabsokol@gmail.com
Аннотация
Паклитаксел (Ptx) обладает противоопухолевой активностью в отношении рядазлокачественных новообразований. Инкапсулирование гидрофобного Ptx в наночастицы из сополимера молочной и гликолевой кислот (ПЛГА) позволяет увеличитьего биодоступность и обеспечивает пролонгированное высвобождение Ptx. Конъюгаты частиц ПЛГА с векторной молекулой способствуют селективному накоплению
препарата в тканях-мишенях. Был разработан метод получения конъюгата частиц
ПЛГА, содержащих Ptx, с рекомбинантным третьим доменом альфа-фетопротеина
(rAFP3d-NP), который известен как специфичный онкомаркер. Целью работы являлось изучение фармакокинетики и противоопухолевой активности rAFP3d-NP.

Abstract
Paclitaxel (Ptx) shows antitumor activity against a number of malignant neoplasms.
Encapsulation of hydrophobic Ptx in nanoparticles (NPs) based on a copolymer of lactic
and glycolic acids (PLGA) increase Ptx bioavailability and provides its prolonged release.
Conjugates of NPs with a vector molecule promote selective accumulation of the drug intarget tissues. We developed a conjugate of Ptx-loaded NPs with a recombinant third domain of alpha-fetoprotein (rAFP3d-NP), the latter being a specific tumor marker. The aimof this work was to study the pharmacokinetics and antitumor activity of rAFP3d-NP.
© М. Б. Сокол, Н. Г. Яббаров, М. Р. Молляева, М. В. Фомичёва, Е. Д. Никольская, 2020Биотехнология

15
1

Methods
Pharmacokinetics and biodistribution: 120 female Wistar rats, IV route,
3 groups, dose equivalent to Ptx 6 mg/kg. Antitumor efficacy: 30 female BALB/cmice, 4T1 cell line (1 × 106) injected subcutaneously, 4 groups, dose equivalent to
Ptx 0.46 mg/kg, IV route, once every 5 days.
Results
All the pharmacokinetic profiles showed the typical biphasic pattern characterizing a rapid distribution phase, followed by an elimination phase (Fig. 1). FreePtx revealed a rapid achievement of the maximum concentration being detectablein serum only up to 8 h. The detection period of NPs and rAFP3d-NP was 12 h after administration.

Fig. 1. Pharmacokinetics profile of free Ptx, NPs and rAFP3d-NP (mean ± SD, n = 6)

Compared to free Ptx, treatment with both types of polymeric formulations
resulted in a decrease in drug clearance rate (Cl) from serum (Table). The level ofserum exposure of paclitaxel (AUC) was increased in case of NPs and rAFP3d-NP
compared to that obtained from free drug (p < 0,05).

pаздел 1

152

Plasma pharmacokinetic parameters of free Ptx,
NPs and rAFP3d-NP (mean ± SD, n = 6)
Formulations

Parameters
AUC(0→∞)
CL
Vd
t1/2
Cmax
Tmax

Units

Free Ptx

NPs

rAFP3d-NP

0,98 ± 0,09
6,13 ± 0,47
67,47 ± 4,53
7,63 ± 0,56
0,13 ± 0,01
0,083

4,24 ± 0,35
1,41 ± 0,12*
13,84 ± 1,24*
6,78 ± 0,51
9,16 ± 0,64
0,083

5,29 ± 0,36
1,13 ± 0,07*
12,38 ± 0,79*
7,57 ± 0,52
10,14 ± 0,60
0,083(μg/mL)*(h)(mg/kg)/(μg/ml)/h
L/kg
h
μg/mL
h

*p < 0,05.
All the formulations underwent a wide distribution to examined tissues(Fig. 2). The highest deposition was in the spleen, followed by the liver. NPs and
NP-rAFP3d less accumulated in the kidneys and heart than free Ptx, minimizing
systemic side effects.

Fig. 2. Tissue distribution of free Ptx, NPs and rAFP3d-NP (mean ± SD, n = 6)Биотехнология

15
3

The tumor growth rate in mice treated with rAFP3d-NP was significantly lower than that in the groups treated with free Ptx and NPs (Fig. 3). After the third
injection of rAFP3d-NP on day 11, we observed a decrease in tumor volume.

Fig. 3. (A) Tumor growth inhibition and (B) body weight changes after IV treatment of
free Ptx, NPs and rAFP3d-NP in mice (mean ± SD, n = 7)

The results obtained indicate a prolonged release of Ptx from NPs and rAFP3d-NP and confirm the effectiveness of targeted drug delivery to the tumor using
the vector molecule.

pаздел 1154ФОТОКАТАЛИТИЧЕСКАЯ ДЕСТРУКЦИЯ
БАКТЕРИЙ И ВИРУСОВ НА ПОВЕРХНОСТИ
САМООЧИЩАЮЩИХСЯ ТКАНЕВЫХ МАТЕРИАЛОВ *PHOTOCATALYTIC DEGRADATION OF BACTERIA AND VIRUSESON THE SURFACE OF SELF-CLEANING TEXTILE MATERIALS
М. И. Соловьёва 1,2, Д. С. Селищев 1,2, Г. А. Степанов 1,3, Е. С. Журавлёв 3,
М. В. Сергеева 4, А. Б. Комиссаров 4, В. В. Морозова 3, А. В. Бардашева 3,
Ю. Н. Козлова 3, В. А. Рихтер 3, Д. В. Козлов 1,2
12Новосибирский государственный университет
Институт катализа им. Г. К. Борескова СО РАН, Новосибирск
3Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
4НИИ гриппа им. А. А. Смородинцева, Санкт-Петербург
M. I. Solovyeva 1,2, D. S. Selishchev 1,2, G. A. Stepanov 1,3,
E. S. Zhuravlev 3, M. V. Sergeeva 4, A. B. Komissarov 4, V. V. Morozova 3,
A. V. Bardasheva 3, Y. N. Kozlova 3, V. A. Richter 3, D. V. Kozlov 1,2
1

Novosibirsk State University
2
BIC SB RAS, Novosibirsk
3
ICBFM SB RAS, Novosibirsk
4
Smorodintsev Research Institute of Influenza MoH, St. Petersburg
E-mail: smi@catalysis.ruАннотация
Специализированные ткани на основе природных и синтетических волокон,содержащие в своем составе фотокаталитически активный модификатор, способны под действием света очищать собственную поверхность от химических и биологических загрязнителей. На примере бактерий E. coli и S. aureus, бактериофага
РА136 и вируса гриппа А показано, что под действием света происходит инактива© М. И. Соловьёва, Д. С. Селищев, Г. А. Степанов, Е. С. Журавлёв, М. В. Сергеева, А. Б. Комиссаров, В. В. Морозова, А. В. Бардашева, Ю. Н. Козлова, В. А. Рихтер,Д. В. Козлов, 2020*Работа выполнена при поддержке проекта РФФИ №18-29-17055 и гранта Президента РФ № 075-15-2019-1086 (МК-3483.2019.3).

Биотехнология

155
ция биологических объектов на поверхности модифицированных тканей. Для вируса гриппа с использованием метода ОТ-ПЦР показано, что помимо инактивациипри длительном освещении происходит разрушение вирусных частиц и деструкция
генетического материала до низкомолекулярных соединений.

Abstract
Special fabrics based on natural and synthetic fibers, which contain photoactive modifier, are able to clean under irradiation their surface. According to experiments with E. coliand S. aureus bacteria, РА136 bacteriophage, and influenza A virus, inactivation of biological objects occurs on the surface of material under irradiation. It is shown using the
RT-PCR method that under long-term irradiation the degradation of virus particles anddestruction of genetic material to low-molecular compounds follows the inactivation.

Благодаря свойствам воздухопроницаемости, влагопоглощения, мягкости и гибкости хлопкосодержащие ткани широко используются в текстильной промышленности, но они также являются благоприятным субстратомдля стабилизации и переноса микроорганизмов. Для придания свойств самоочистки и обеспечения быстрой гибели микроорганизмов на поверхности ткани был разработан способ модификации хлопковых и хлопкополиэфирных тканей фотоактивным компонентом на основе нанокристаллического диоксида титана. Разработанные материалы способны под действием
света (УФ-А и синяя область спектра) полностью окислять низкомолекулярные соединения (спирты, кетоны, ароматические и гетеро-соединения)до углекислого газа и воды, а также обеспечивать окислительную деструкцию супрамолекулярных соединений и бактерий.
Изучение антибактериальной активности материалов проводили с использованием бактерий E. coli ATCC 25922 и S. aureus ATCC 25923. Для обоих объектов наблюдалось существенное увеличение скорости гибели наповерхности материала по сравнению с исходной тканью за счет образования высоко реакционноспособных частиц. В случае вируса гриппа
A/PR/8/34 (H1N1) его инфекционность, которую определяли методом
TCID50, полностью пропадала за 20 минут освещения, в то время как дляисходной ткани она детектировалась в течение часа. С использованием метода ОТ-ПЦР показано, что дальнейшее освещение фототкани приводитк деструкции генетического материала вируса и снижению количества вирусной РНК в анализируемых пробах вплоть до следовых количеств, чтоподтверждает механизм действия таких материалов.

pаздел 1

156

КОНСТРУИРОВАНИЕ ВЕКТОРА, ОБЕСПЕЧИВАЮЩЕГО
СТАБИЛЬНУЮ ПРОДУКЦИЮ ФОСФОЛИПАЗЫ
С BACILLUS THURINGIENSIS В BACILLUS SUBTILIS *CONSTRUCTION OF A VECTOR THAT PROVIDES STABLE
PHOSPHOLIPASE PRODUCTION WITH BACILLUS THURINGIENSISIN BACILLUS SUBTILIS
К. В. Старожилова 1, Ю. А. Меркульева 2, Д. Н. Щербаков 1,2
12Алтайский государственный университет, Барнаул
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
K. V. Starozhilova 1, Yu. A. Merkul’eva2, D. N. Shcherbakov 1,2
1

2

Altai State University, Barnaul
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: ksenka0611@mail.ruАннотацияДля повышения уровня синтеза белка в работе был сконструирован вектор, обеспечивающий стабильную продукцию фосфолипазы с Bacillus thuringiensis в Bacillus
subtilis.

Abstract
In order to increase the level of protein synthesis, a vector was constructed to provide
stable phospholipase production from Bacillus thuringiensis to Bacillus subtilis.

Фосфолипаза С — фермент класса гидролаз, катализирующий гидролиз
фосфолипидов на диацилглицериды и полярные фосфатсодержащие группы. В связи с широким использованием в технологических процессах очистки и рафинирования растительных масел в последнее время к этой группе
ферментов привлечено особое внимание, в частности, в пищевой отраслии в сфере производства биодизеля. Так как процессы переработки масел ча© К. В. Старожилова, Ю. А. Меркульева, Д. Н. Щербаков, 2020*Работа выполнена при поддержке государственного задания Министерства науки и высшего образования РФ, номер темы FZMW-2020-0002, «Разработка продуцентов рекомбинантных ферментов для сыроделия».

Биотехнология

157

сто сопряжены с высокими температурами, особый интерес представляют
термостабильные ферменты, источником которых выступают представители семейства Bacillus. Использование в качестве продуцентов природных
штаммов бактерий не всегда позволяет получать достаточные количества
целевых белков. Методы мутагенеза и селекции частично решают эту проблему, однако даже в этом случае уровень синтеза оказывается недостаточным для достижения рентабельности. Решить проблему выхода белка могут
методы генной инженерии, с использованием которых удается конструировать продуценты, обеспечивающие необходимый уровень синтеза белков.
Ранее нами были определены нуклеотидные последовательности, кодирующие фосфолипазу С ряда штаммов Bacillus thuringiensis. Был выбран перспективный вариант для анализа биохимических свойств, его последовательность была встроена в экспрессионный вектор pHT255 [1]. Однако уровень
синтеза фосфолипазы С, наблюдаемый в культуральной среде рекомбинантного штамма Bacillus subtilis, трансформированного полученным вектором,зависимый от наличия индуктора, оказался низким. Поэтому целью работы
было конструирование штамма Bacillus subtilis, обеспечивающего стабильную
продукцию фосфолипазы С Bacillus thuringiensis без добавления индуктора.
Для достижения поставленной цели вектор pHT255 обрабатывали эндонуклеазами рестрикции EgeI и BstaPI. ДНК, обработанную эндонуклеазами,очищали при помощи разделения в 1%-м геле агарозы. Полученную ДНК обрабатывали Pfu-полимеразой при 72 оС в течение 10 минут. После обработки полимеразой ДНК очищали от компонентов буферного раствора. Затем
проводили реакцию лигирования. Продуктами лигазной реакции трансформировали клетки Escherichia coli NebStable. Плазмидную ДНК выделяли избактериальных клеток с помощью коммерческих наборов. Структуру полученной рекомбинантной плазмиды подтверждали секвенированием.
Чтобы оценить уровень синтеза фосфолипазы С Bacillus thuringiensisв клетках Bacillus subtilis, эти клетки трансформировали полученным вектором. Затем одиночные клоны высевали в жидкую питательную среду. Спустя
24 часа отбирали аликвоту культуральной среды и анализировали при помощи электрофореза в ПААГ. На полученной электрофореграмме наблюдали бенд, соответствующий по молекулярной массе фосфолипазы С Bacillus
thuringiensis.
Литература
1. Меркульева Ю. А., Щербаков Д. Н., Бондарь А. А. Получение рекомбинантной фосфолипазы С Bacillus thuringiensis : мат-лы 56-й Междунар. науч. студ. конф.
МНСК-2018: Биология. 2018. С. 64.

pаздел 1

158ПОТЕНЦИАЛ PHYSCOMITRELLA PATENS КАК ИСТОЧНИКА
АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЯХ
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
THE POTENTIAL OF PHYSCOMITRELLA PATENS AS A SOURCE
OF ANTIMICROBIAL PEPTIDES UNDER VARIOUS CULTIVATIONCONDITIONS
Е. Г. Терещенко, О. А. Иванов
Институт экспериментальной ботаники им. В. Ф. Купревича НАНБеларуси, Минск, Беларусь
E. G. Tereshenko, O. A. Ivanov
Institute of Experimental botany of the NAS of Belarus, Minsk, Belarus
E-mail: protlife1984@gmail.com
АннотацияДля мха P. patens описаны антимикробные пептиды (АМП), принадлежащиек липидпереносящим белкам (ЛПБ) и гевеиноподобным пептидам, уровни экспрессии которых тканеспецифичны и зависимы от условий культивирования растения.
Прогнозируется наличие пептидных фрагментов гистонов Н2А, Н2В, Н4 и глицеральдегидфосфатдегидрогеназы (ГАДФ) с антимикробной активностью.

Abstract
For P. patens, antimicrobial peptides (AMPs) belonging to lipid transfer proteins (LTP)and hevein-like peptides are described. Their expression levels are tissue-specific and dependent on the cultivation conditions of the plant. The presence of peptide fragments ofhistones H2A, H2B, H4 and glyceraldehyde phosphate dehydrogenase (GAPDH) with antimicrobial activity is also predicted.

На протяжении 80 лет листостебельный мох P. patens активно используется как модельный организм и в качестве значимого биотехнологического растения для получения веществ различной природы. P. patens также
является объектом протеомных и пептидомных исследоваий. В ряде работ
демонстрируется разнообразие пептидов, непосредственно кодируемых
© Е. Г. Терещенко, О. А. Иванов, 2020Биотехнология

159

в геноме, а также высвобождающихся из белков в результате ограниченногои функционально значимого протеолиза (криптидов), и широкая амплитуда изменений их состава при изменении условий культивирования.
Биоинформатический анализ совокупности наборов геномных, транскриптомных и протеомных данных представляет собой всеобъемлющую
основу для идентификации генов-кандидатов, кодирующих предполагаемые АМП, самих АМП, а также криптидов в P. patens.
В ходе выполненного анализа установлено, что у P. patens не представлено большинство групп антимикробных пептидов, характерных для растений. Выявлено только две группы последовательностей, классифицируемых как классические АМП: ЛПБ и гевеиноподобные пептиды. Для их преформ характерно наличие специфичных сигнальных последовательностей,обеспечивающих внеклеточный транспорт и секрецию. Гевеиноподобные
пептиды представлены одной формой (Pp3c1_30410), кодируемой геном,расположенном на хромосоме 1 мха. Пептид экспрессируется во всех тканях растения, с наибольшими уровнями экспрессии в протонеме при культивировании на среде BCD c 0,5 % глюкозой, а также под действием метилжасмоната. ЛПБ представлены 20 формами и относятся к подклассу 2 этойгруппы белков. 6 ЛПБ не экспрессируются. Для 7 характерны слабые уровни
экспрессии во всех тканях, вне зависимости от условий культивирования.
Pp3c6_15620 и Pp3c7_3350 активно экспрессируются во всех тканях растения, наиболее выражено — в протонеме на среде BCD и освещении красным светом, а также в протонеме и гаметофорах на среде Кнопа. Для 5 ЛПБхарактерна тканеспецифичная, зависимая от условий культивирования
экспрессия — в спорофите на среде Кнопа (Pp3c19_18500, Pp3c21_18660,
Pp3c22_7170, Pp3c8_1210) и в гаметофорах, выращенных на среде Кнопа
и BCD (Pp3c5_8780).
В тканевых экстрактах и среде культивирования P. patens следует ожидать присутствия значительного числа криптидов-дериватов гистонов Н2А,
Н2В, Н4 и ГАДФ. Для гистонов в совокупности предсказывается 25 потенциальных криптидов, фактическое образование которых в различных условиях культивирования, а также точные границы последовательностей
должны быть установлены масс-спектрометрически при анализе пептидомов мха. Для ГАДФ предсказано 20 криптидов-продуктов протеолиза
ГАДФ по N-концу. 17 из них представлены 32-36-мерными пептидами, 3 —13-14-мерными. Как и в случае гистоновых дериватов, особенности образования ГАДФ-производных крипидов при различных условиях культивирования P. patens будет определено в дальнейшем при анализе пептидомов.

pаздел 1160ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ
НЕОРГАНИЧЕСКИХ И КОМПОЗИТНЫХ НАНОМАТЕРИАЛОВДЛЯ БИОМЕДИЦИНСКИХ ПРИМЕНЕНИЙ *SYNTHESIS AND INVESTIGATION OF INORGANIC AND COMPOSITE
NANOMATERIALS PROPERTIES FOR BIOMEDICAL APPLICATIONS
В. К. Фоменко, Е. В. Дмитриенко
Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
V. K. Fomenko, E. V. Dmitrienko
ICBFM SB RAS, Novosibirsk
E-mail: elena.dmitrienko@niboch.nsc.ruАннотацияВ работе представлены разработанные и оптимизированные методы получения
неорганических наночастиц и их композитов на основе наноматериалов диоксида
кремния и карбоната кальция для биомедицинских применений. Полученные наночастицы исследованы в качестве наноносителей противоопухолевых лекарственных
средств: доказана эффективность и оправданность применения конструкций в экспериментах in vitro.

Abstract
The paper presents the developed and optimized methods for the synthesis of inorganic
nanoparticles and their composites based on silicon dioxide and calcium carbonate nanomaterials for biomedical applications. The resulting nanoparticles have been investigated as
nanocarriers for anticancer drugs: the effectiveness and justification of using the constructs
in in vitro experiments has been proved.

Неорганические наночастицы широко представлены в исследовательских разработках основ систем доставки терапевтических препаратов. Особое внимание направлено на создание контейнеров для противоопухолевых
© В. К. Фоменко, Е. В. Дмитриенко, 2020*Работа выполнена при поддержке АААА-А17-117020210021-7 и РНФ 18-1400357.

Биотехнология

161средств, способных к избирательному концентрированию и пролонгированному высвобождению лекарств, что приводит к снижению токсичности и повышению эффективности терапии. Несмотря на многочисленные
поисковые работы и высокий потенциал идеи «умных» доставщиков, насегодняшний день до клинической практики не допущен ни один препаратна основе неорганических наночастиц (НЧ), обладающий универсальной
адресной и избирательной системой транспорта. Одной из проблем приконструировании подобных препаратов является поиск доступных методов
синтеза стабильной монодисперсной суспензии нанометровых частиц удовлетворительного качества для применимости в биомедицине, способныхк эффективному связыванию и высвобождению лекарственного средства.
В ходе данной работы разработаны воспроизводимые протоколы получения суспензии НЧ на основе диоксида кремния и карбоната кальция,а также их композитов, обладающих оптимальными параметрами для основ систем доставки противоопухолевых препаратов: наноразмерность
(до 200 нм), монодисперсность, биосовместимость, а также рН-чувствительность. Для полученных наноматериалов, отвечающих требованиям
применимости in vivo, рассмотрена возможность получения композитов наоснове НЧ и биосовместимого полимера нейлона-6. Показана возможность
УФ-иммобилизации олигонуклеотидов на поверхность композитных наноматериалов, что позволяет использовать олигонуклеотид-направленную
стратегию в системе доставки терапевтических средств в дальнейших исследованиях. Все полученные материалы охарактеризованы методами динамического светорассеяния, просвечивающей электронной микроскопии,а также ИК-спектроскопии.
Для наноматериалов и их композитов изучены условия связыванияи высвобождения противоопухолевого антибиотика — доксорубицина.
В модельных экспериментах показана высокая эффективность, рН-чувствительность и пролонгированность высвобождения как для НЧ на основе карбоната кальция, так и для диоксида кремния. С помощью МТТ-теста
подтверждено отсутствие токсичности синтезированных НЧ, а также показана эффективность ингибирования роста клеток НЧ, несущими доксорубицин, превышающая использование индивидуального антибиотика.

pаздел 1

162СТРУКТУРНЫЙ ДИЗАЙН КОМПЛЕКСОВ Pt(II)НА ОСНОВЕ НОВЫХ АНАЛОГОВ КАРБОПЛАТИНАДЛЯ СОЗДАНИЯ СОЕДИНЕНИЙ С ВЫСОКОЙ
ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
STRUCTURAL DESIGN OF Pt(II) COMPLEXES BASEDON NEW ANALOGUES OF CARBOPLATIN TO CREATE COMPOUNDSWITH HIGH ANTITUMOR ACTIVITY
М. В. Фомичёва 1,2, Т. А. Подругина 3, А. А. Логвинов 3, Е. Д. Никольская 1,2,
М. Р. Молляева 1,2, М. Б. Сокол 1,2, Н. Г. Яббаров 1,2
1Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
2Всероссийский научный центр
молекулярной диагностики и лечения, Москва
3Химический факультет МГУ, Москва
M. V. Fomicheva1,2, T. A. Podrugina3, A. A. Logvinov3, E. D. Nikolskaya1,2,
M. R. Mollaeva1,2, M. B. Sokol1,2, N. G. Yabbarov1,2
1

IBCP RAS, Moscow
RRCMDT, Moscow
3
MSU, Chemical faculty, Moscow
2

E-mail: fom.marg@mail.ruАннотацияДля улучшения терапевтических свойств препаратов платины, создания эффективных препаратов в отношении резистентных опухолевых клеток и снижения
общей токсичности синтезируют новые, структурно модифицированные аналоги
Pt(II). Был проведен синтез новых структурных аналогов на основе 3-гидроксикарбоплатина и исследована зависимость активности комплексов от структуры
лигандов в эксперименте по определению цитотоксической активности в отношении клеток линии A549 и H69. Лидерное соединение проявило активность в 22 разабольшую, чем у карбоплатина.

Abstract
To improve the therapeutic properties of platinum preparations, create effective drugs
against resistant tumor cells and reduce overall toxicity, new, structurally modified analogs© М.В. Фомичёва, Т.А. Подругина, А.А. Логвинов, Е.Д. Никольская, М.Р. Молляева,М.Б. Сокол, Н.Г. Яббаров, 2020Биотехнология

16
3
of Pt (II) are synthesized. The synthesis of new structural analogs based on 3-hydroxycarboplatin was carried out, and the dependence of the activity of the complexes on the
structure of the ligands was investigated in an experiment to determine the cytotoxic activity against A549 and H69 cells. The leader compound was 22 times more active thancarboplatin.

Известно, что опухолевые клетки и ткани, подвергшиеся химиотерапии, приобретают фенотип множественной лекарственной устойчивости(МЛУ), выражающийся в снижении интенсивности накопления препаратовв трансформированных тканях и, как следствие, в уменьшении эффективности их действия. Актуальная задача на сегодняшний день заключаетсяв создании новых аналогов противоопухолевых препаратов для преодоления МЛУ и увеличении их эффективности. В химиотерапии для лечения
злокачественных новообразований применяют препараты платины (II),такие как цисплатин, карбоплатин (Kpt) и оксалиплатин. Создание новых
аналогов препаратов платины, структурно подобным утвержденным лекарственным формам, но обладающих улучшенными характеристиками является востребованным.

Схема синтеза новых аналогов Pt(II) на основе KptБыл проведен синтез новых структурных модификаций на основе 3-гидроксикарбоплатина (см. рисунок) и исследована зависимость активности
комплексов от структуры лигандов (см. таблицу).

pаздел 1

164Варьирование структурных фрагментов в базовом соединении — Kpt, —обладающим известной противоопухолевой активностью, и проведение испытаний in vitro позволило выявить соединение-лидер (Kpt5) и обозначить
некоторые закономерности в зависимости структура-свойство.
Исследование цитотоксической активности новых аналогов Pt(II)Название

R

A2

Kpt3
Kpt5

Bn
2NH3
COC11H23 2NH
3

Kpt6

COC4H9Bn–

Kpt7Карбоплатин (Kpt)

2NH3
dach
2NH3

A549
IC50 (мкМ)
34,20
3,25

H69
IC50 (мкМ)
63,20
3,10

37,31

57,47

11,35
39,70

8,84
70,20

Был проведен анализ цитотоксической активности синтезированных
соединений в отношении клеток немелкоклеточной карциномы легкого
человека линии A549 и мелкоклеточной карциномы легкого человека H69.
Анализ проводили с помощью МТТ-теста. Из таблицы видно, что соединение Kpt7 обладало активностью в 4–5 раз большей, чем у Kpt. Соединения
Kpt6 и Kpt3 проявили активность на одном уровне с Kpt. Наибольшей
активностью (в 12 раз эффективнее в отношении A549 и в 22,5 раза эффективнее в отношении H69 по сравнению с Kpt) обладало соединение Kpt5.
Следовательно, увеличение длины алкильного заместителя способствует
значительному повышению активности аналога.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о высокой противоопухолевой активности новых синтезированных аналогов платины (II)по сравнению с коммерчески доступными препаратами сравнения — Kpt.

Биотехнология

16
5ГИДРОЛАЗЫ КАК ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ИНСТРУМЕНТ БОРЬБЫС ТОКСИГЕННЫМИ МИКРОМИЦЕТАМИ *HYDROLASE AS AN ENZYMATIVE TOOLTO FIGHT TOXIGENIC MICROMYCETES
С. Р. Хабирова 1, И. И. Идиятов 2, Э. А. Шуралев 1
1Казанский (Приволжский) федеральный университет
2Федеральный центр токсикологической,радиационной и биологической безопасности, Казань
S. R. Khabirova 1, I. I. Idiiatov 2, E. A. Shuralev 1
1

2

Kazan (Volga region) Federal University
Federal Center for toxicological, radiation, and biological safety, Kazan
E-mail: galliamova95@mail.ruАннотация
Среди многочисленных методов деструкции микотоксинов биодеградация микроорганизмами и ферментами является эффективным и перспективным подходом для устранения опасных свойств токсичных метаболитов грибов. Настоящее
исследование — первый этап в изучении ферментов-гидролаз у отобранных антагонистов микромицетов Aspergillus и Fusarium. Результаты эксперимента показали,что отобранные штаммы обладают амилолитической активностью и, следовательно,являются потенциально способными к деградации грибов.

Abstract
Among the numerous methods for the destruction of mycotoxins, biodegradation by
microorganisms and enzymes is an effective and promising approach to eliminate hazardous properties of toxic fungal metabolites. The present study is the first stage in the study ofhydrolase enzymes in selected antagonists of micromycetes Aspergillus and Fusarium. The
experimental results showed that the selected strains have amylolytic activity and, therefore, are potentially capable of fungi degradation.

Афлатоксин В1 и зеараленон являются опасными микотоксинами из-заих токсичности, канцерогенности и эстрогенности. Чтобы снизить их нега© С. Р. Хабирова, И. И. Идиятов, Э. А. Шуралев, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-316-90001.

166pаздел 1тивное воздействие на людей и животных, необходимы успешные средства
борьбы с их продуцентами. Применение микроорганизмов для биодеградации микромицетов может быть эффективным способом повышения безопасности пищевых продуктов и кормов для животных.
Целью настоящих исследований является изучение биологических особенностей отобранных микроорганизмов, в том числе их ферментативных
свойств. В процессе многоступенчатого скрининга микроорганизмов-антагонистов плесневых грибов Aspergillus и Fusarium в модельных опытах invitro и in vivo были отобраны безопасные микроорганизмы с высокой фунгицидной активностью и возможностью применения в качестве биопрепаратов по борьбе с токсигенными микромицетами. Для биодеградации микромицетов и микотоксинов у отобранных микроорганизмов необходимо
наличие экзоферментов, относящихся к классу гидролаз. Это связано с тем,что условием эффективного лизиса патогенных грибов и/или использования грибного мицелия как источника питания является комплексное действие различных гидролитических ферментов.
В связи с этим в первую очередь была изучена амилолитическая активность отобранных микроорганизмов-антагонистов посредством культивирования на содержащей крахмал среде (состав среды: 10 г пептона,5 г КН2РО4, 2 г крахмала, 15 г агар-агара на 1 л дистиллированной воды).
Питательную среду разлили по стерильным чашкам Петри, затем на застывшую поверхность среды штрихом по диаметру чашки провели высев
исследуемого микроорганизма. Все чашки инкубировали в термостате при
37 ºС. По истечении 4 сут. чашки извлекли из термостата и в каждую добавили по 3 мл раствора Люголя. При наличии крахмала среда окрашиваласьв интенсивно синий цвет (что наблюдали в контроле), что свидетельствовало бы об отсутствии у исследуемого изолята амилолитической активности.
Окрашивание среды в желто-бурый цвет — признак наличия способностик гидролизу крахмала (как показано на рисунке).

Результат исследования амилолитической активности
изолятов микроорганизмов

Биотехнология

167

В результате исследования было выявлено, что отобранные изоляты-антагонисты микромицетов обладали амилолитической активностью. Данные
штаммы, как было установлено ранее, обладают способностью к подавлению роста и развития микроскопических грибов, следовательно, необходимо более глубокое изучение и других ферментов-гидролаз.

pаздел 1168ОСОБЕННОСТИ НОКАУТА ГЕНОВ В СУСПЕНЗИОННОЙ
КУЛЬТУРЕ ARABIDOPSIS THALIANA ПРИ ПОМОЩИ
РНП-КОМПЛЕКСОВ *FEATURES OF KNOCKOUT GENES IN A SUSPENSION CULTURE
OF ARABIDOPSIS THALIANA USING RNP
С. А. Хозеева, Н. В. Пермякова
Институт цитологии и генетики СО РАН, НовосибирскS. A. Khozeeva, N. V. Permyakova
Institute of Cytology and Genetics, Novosibirsk
E-mail: khozeevasophie@gmail.com
Аннотация
Система редактирования генома CRISPR/Cas9 доказала свою эффективность,универсальность и простоту во многих исследованиях на клетках человека, животных, бактерий и растений. В частности, эта система открывает большой потенциалдля селекции и исследования генома растений. Для того чтобы получить высокий
процент эффективности мутагенеза, нужно учитывать множество факторов, таких
как: тщательный подбор sgRNA, метод доставки системы и выбор селективного маркера. В своей работе мы использовали рибонуклеопротеидные комплексы (РНП),состоящие из очищенного рекомбинантного фермента Cas9 и транскрибированной
in vitro sgRNA, которые доставлялись в клетки Arabidopsis thaliana при помощи биобаллистики.

Abstract
The CRISPR / Cas9 genome editing system has proven its efficiency, versatility andsimplicity in many studies on human, animal, bacterial and plant cells. In particular, thissystem opens up great potential for breeding and research of the plant genome. In orderto obtain a high percentage of mutagenesis efficiency, many factors must be taken into account, such as: careful selection of sgRNA, method of delivery of the system and selection
marker. In our work, we used ribonucleoprotein complexes (RNPs) consisting of purified
recombinant Cas9 enzyme and in vitro transcribed sgRNA, which were delivered to Arabidopsis thaliana cells using bioballistics.
© С. А. Хозеева, Н. В. Пермякова, 2020*Исследования выполнены при поддержке гранта РНФ № 17-14-01099.

Биотехнология

16
9Использование культивируемых суспензионных клеток растений в качестве платформы для продукции рекомбинантных белков приобретает всебольшую популярность. Культура растительных клеток имеет несколько
преимуществ для производства рекомбинантных белков, включая возможность изменения пути посттрансляционных модификаций, низкий рисквирусного заражения и низкую стоимость питательных сред. Отсутствие
согласованной нормативной базы для фармацевтических препаратов, полученных из целых трансгенных растений, побудило к разработке суспензионных культур растительных клеток в качестве платформы для молекулярного производства, поскольку растительные клетки аналогичны другим
системам на основе ферментеров, в отношении которых действуют правила для надлежащей производственной практики (GMP). Тем не менее естьнеобходимость в гуманизации пути N-гликозилирования белков в суспензионной культуре клеток растений. Инактивация эндогенных генов, ответственных за присоединение специфичных для растений гликановых структур, снизит потенциальную иммуногенность белков для человека.
В нашей работе мы использовали белок Cas9, смешанный с sgRNA,нацеленные на гены α-1,3-фукозилтрансферазы (FucT11/12) и β-1,2-ксилозилтраснферазы (XylT), кодирующие ферменты, переносящие специфичные для растений α-1,3-фукозу и β-1,2-ксилозу, которые отсутствуют у млекопитающих, бактерий и дрожжей.
Были проведены две биобаллистические трансформации суспензионной культуры клеток A. thaliana без отбора полученными РНП-комплексами, эффективность сайт-специфического мутагенеза составила по генам
FucT11/12 от 0,9 % до 3,4 %, а по гену XylT — от 2,5 % до 94,9 % (по результатам анализа TIDE). Также проведены две биобаллистические трансформации суспензионной культуры клеток A. thaliana c отбором и оптимизированными РНП-комплексами, где эффективность сайт-специфического мутагенеза составила: FucT11 — 30 %, FucT12 — 26,7 %, XylT — 33,3 % (по данным рестрикционного анализа).
Также было проведено исследование для дальнейшей модификации
системы отбора отредактированных клеток. Был найден ген AFB5, нокаут
которого дает устойчивость к гербициду пиклораму, что дает возможность
оптимизировать селективный отбор в случае редактирования генома растения при помощи РНП.

pаздел 1

170ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО
ЭКЗОПОЛИСАХАРИДА КОЛАНОВОЙ КИСЛОТЫНА ОРГАНИЗМ МЛЕКОПИТАЮЩИХSTUDY OF THE BACTERIAL POLYSACCHARIDE COLANIC ACID
INFLUENCE ON MAMMALS ORGANISM
С. А. Цветикова 1, А. А. Забавкина 1,
В. Г. Никонорова 2, В. В. Криштоп 1, Е. И. Кошель 1
12Университет ИТМО, Санкт-Петербург
Ивановская государственная медицинская академияS. A. Tsvetikova 1, А. А. Zabavkina 1,
V. G. Nikonorova 2, V. V. Chrishtop 1, E. I. Koshel 1
1
2

ITMO University, St. Petersburg
Ivanovo State Medical Academy
E-mail: zvetikova@scamt-itmo.ruАннотация
Взаимодействие между бактериями кишечника и организмом хозяина осуществляется с помощью ряда механизмов, в том числе посредством продукции метаболитов и крупных регуляторных молекул. Колановая кислота является бактериальным
экзополисахаридом и в норме продуцируется под действием низких температур (до20 °С), защищая бактерии от факторов внешней среды [1]. При исследовании нематод было обнаружено, что данный полисахарид способен влиять на их продолжительность жизни и на метаболизм [2]. В настоящем исследовании анализируется
влияние колановой кислоты на метаболизм мышей и проводится предварительная
оценка его токсических свойств.

Abstract
Interaction between intestinal bacteria and the host organism occurs through a number of mechanisms, including implication of metabolites and large regulatory molecules.
Colanic acid is a bacterial exopolysaccharide and is normally produced under low temperatures (up to 20 °С), protecting bacteria from environmental factors [1]. When studying
nematodes, it was found that this polysaccharide is able to affect their lifespan and me© С. А. Цветикова, А. А. Забавкина, В. Г. Никонорова, В. В. Криштоп, Е. И. Кошель, 2020Биотехнология

171tabolism [2]. Current study analyzes the effects of colanic acid on mouse metabolism andprovides a preliminary assessment of its toxic properties.

Выделение колановой кислоты (КК) проводилось по ранее описанному протоколу выделения образца, применяемого для культур клеток [2] изштамма Escherichia coli pBhya-CAB [3]. Согласно полученным результатам
МТТ-теста, КК не обладает цитотоксичностью в диапазоне концентраций
от 3,95 до 1000 мкг/мл при времени воздействия 72 часа в клеточных линиях
HCT-116 и IMR-32.
Для исследования in vivo токсичности КК были выбраны дозировки 2,7,
10,7, 16 и 21,3 мг в день. Наблюдение проводили в течение 30 дней, после
чего животных (5 групп по 5 мышей) выводили из эксперимента. Во всехэкспериментальных группах было отмечено повышение физической активности при сохранении нормального социального поведения. Фенотипические изменения (возникновение очагов алопеции) наблюдались во всехэкспериментальных группах. Набор массы тела был снижен в сравнениис контрольной группой, за исключением группы, получавшей 10,7 мг ККв день. Было зафиксировано увеличение масс сердца и печени, а масса почек
уменьшалась. Среди прочих эффектов при гистологическом анализе былаотмечена потеря кардиомиоцитами исчерченности, что является признаком дистрофии.
КК обладает стимулирующим эффектом на млекопитающих, что выражается в повышении уровня физической активности. Однако, несмотряна отсутствие признаков цитотоксичности, данный образец КК вызывает
признаки общей токсичности, причем развитие этих признаков зависит отвремени получения и дозировки. Предполагается, что дальнейшая очистка
может снизить уровень токсичности, что позволит рассматривать КК каквещество с широким потенциальным спектром применения.
Литература
1. Navasa N., Rodríguez-Aparicio L., Martínez-Blanco H. et al. Temperature has
reciprocal effects on colanic acid and polysialic acid biosynthesis in E. coli K92 // Appl.
Microbiol. Biotechnol. 2009. Vol. 82, № 4. P. 721–729.
2. Han B. et al. Microbial Genetic Composition Tunes Host Longevity // Cell. 2017. Vol.
169, № 7. P. 1249–1262.
3. Wu H., Chen S., Ji M. et al. Activation of colanic acid biosynthesis linked toheterologous expression of the polyhydroxybutyrate pathway in Escherichia coli // Int. J.
Biol. Macromol. 2019. Vol. 128. P.752–760.

pаздел 1172СТРУКТУРИРОВАНИЕ ТКАНЕЙВ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ
ПОСРЕДСТВОМ АНАЛИЗА ИНТЕНСИВНОСТИ ПИКСЕЛЕЙ
STRUCTURING OF TISSUES IN OPTICAL COHERENT TOMOGRAPHY
BY MEANS OF ANALYSIS OF PIXEL INTENSITY
В. О. Черешнев, И. В. Кулешов
Тамбовский государственный технический университет
I. V. Kuleshov, V. O. Chereshnev
Tambov State Technical University
E-mail: vitaliy-cha1999@yandex.ruАннотация
Представлены результаты исследования структурных изображений оптического когерентного томографа, в ходе которого получены гистограммы интенсивности
пикселей, демонстрирующие различия в распределении среднего значения соответствующей аппроксимации гамма-распределения.

Abstract
The paper presents the results of a study of structural images of an optical coherence
tomograph, during which histograms of pixel intensity were obtained, demonstrating differences in the distribution of the average value of the corresponding approximation of the
gamma distribution.

Разрешающая способность современных ОКТ позволяет производить
построение структурных изображений до микронного масштаба, однако исследования субклеточного уровня остаются все еще недоступными.
Тем не менее есть некоторые свидетельства того, что анализ изображений
спекл-структур ОКТ позволяет извлечь дополнительную информациюо клетках тканей in vivo [1].
Целью данной работы является выявление закономерных связей между
структурными ОКТ-изображениями с помощью анализа изменения интенсивности пикселей отдельных частей изображений.
© В. О. Черешнев, И. В. Кулешов, 2020Биотехнология

173Основным объектом исследования являются структурные ОКТ-изображения кожных покровов и кровеносных сосудов человека in vivo, полученные при помощи нестандартной оптической системы на базе интерферометра Майкельсона.
Для количественного выражения эффекта гетерогенности тканей произведено построение гистограммы интенсивностей пикселей, соответствующих участкам кожных покровов, кровеносных сосудов, крови и областибез биоткани [2].
Для выявления закономерностей гистограмм, результаты аппроксимированы методом наименьших квадратов функцией гамма-распределения:f  x, ,   x1

1   x
 e ,
 






где Г — гамма функция Эйлера: ()  x a1e x dx , α — число степеней
0свободы, β — коэффициент масштаба.
Полученные распределения представлены для области кожи и сосуда отражают четкие различия в распределении интенсивностей пикселей и среднего значения α ∕ β соответствующих графиков гамма-распределения, которое составило α ∕ β = 2,7 · 10–4 для области крови и α ∕ β = 7,0 · 10–4 для кожи,α ∕ β = 8,0 · 10–4 для области без биоткани. Теснота подгонки соответствует
R2 ~ 0,95, демонстрируя хорошее количественное соответствие обработанных данных.

Гамма-распределения, соответствующие гистограммам интенсивности пикселейдля области воздуха (синий), крови (красный) и кожи (зеленый)174pаздел 1Таким образом, построение гистограммы интенсивности пикселей различных структур ОКТ-изображений с последующей подгонкой гамма-распределений демонстрирует возможность дифференциация различных тканей [3].
Литература
1. Черешнев В. О., Абдулкарим С. Н., Проскурин С. Г. Исследование отраженныхи малократно рассеянных фотонов посредством построения матрицы дисперсийОКТ изображений // Современные наукоемкие технологии. 2019. № 12-1. С. 118–122.
2. Черешнев В. О., Романенко И. М., Кулешов И. В. и др. Дифференциация структур кожи, кровеносных сосудов и крови посредством построения вариационной матрицы ОКТ изображения // Современные наукоемкие технологии. 2019. № 10 (Ч. 2).
С. 319–323.
3. Черешнев В. О., Фролов С. В., Потлов А. Ю. и др. Построение ОКТ изображений биологических тканей на основе анализа интенсивности пикселей // Модели,системы, сети в экономике, технике, природе и обществе. 2019. № 3 (31). C. 104–112.

Биотехнология

175РАЗРАБОТКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЦР ТЕСТ-СИСТЕМЫДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КАРБАПЕНЕМ-УСТОЙЧИВОЙKLEBSIELLA PNEUMONIAE
DEVELOPMENT AND USING PCR TEST SYSTEMS FOR DETECRINGCARBAPENEM RESISTANT KLEBSIELLA PNEUMONIAE
А. И. Чижикова 1,2, Е. С. Лисицына 3, А. М. Стойнова 1,2
12Российский университет дружбы народов, Москва
Институт биохимической технологии и нанотехнологии, Москва
3
ООО НПФ «Литех», Москва
A. I. Chizhikova 1,2, E. S. Lisitsyna 3, A. M. Stoinova 1,2
1

2

Peoples’ Friendship University of Russia, Moscow
Institute of Biochemical Technology and Nanotechnology, Moscow
3
OOO NPF «LYTECH», Moscow
E-mail: chizhikva-anna@list.ruАннотация
Инфекционные заболевания являются глобальной проблемой здравоохранения в 21 веке. Существует огромное количество штаммов бактерий, которые являются резистентными к антибактериальным препаратам и препаратам резерва.
Такие резистентные микроорганизмы вызывают серьезные заболевания, которые
имеют продолжительное лечение, высокую стоимость терапии. Klebsiella pneumoniae вызывает около 30 % поражений мочевыводящих путей, до 25 % госпитальных
пневмоний и 17 % раневых. Для подбора правильного курса лечения, коррекции
схемы лечения, снижения стоимости терапии и предотвращения распространения
резистентных штаммов в стационарах необходима своевременная детекция карбапенем-устойчивой Klebsiella pneumoniae. Карбапенемазы трудно детектировать в рутинной практике, самым точным, чувствительным, надежным и дешевым методом
станет разработанная ПЦР тест-система для выявления карбапенем-устойчивой
Klebsiella pneumoniae.

Abstract
Infectious diseases are a global public health problem in the 21st century. There area huge number of bacterial strains that are resistant to antibacterial drugs and reserve© А. И. Чижикова, Е. С. Лисицына, А. М. Стойнова, 2020

176pаздел 1

drugs. Such resistant microorganisms cause serious diseases that have long-term treatment,high cost of therapy. Klebsiella pneumoniae causes about 30 % of urinary tract lesions, up
to 25 % of hospital-acquired pneumonia and 17 % of wounds. To select the correct courseof treatment, correct the treatment regimen, reduce the cost of therapy and prevent the
spread of resistant strains in hospitals, timely detection of resistant Klebsiella pneumoniae
carbapenem is necessary. Carbapenemases are difficult to detect in routine practice; themost accurate, sensitive, reliable and cheap method will be the developed PCR test system
for the detection of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae.

K. pneumoniae клинически является наиболее значимой клебсиеллой,а также — причиной более 70 % человеческих инфекций из этого рода.
У людей K. pneumoniae чаще всего локализуется в желудочно-кишечном
тракте, на коже и в носоглотке. Является важной причиной возникновения серьезных инфекций в обществе, таких как некротическая пневмония,гнойные абсцессы печени, эндогенный эндофтальмит.
Для лечения инфекций, вызванных K.pneumoniae, используются цефалоспорины, фторхинолоны и триметоприм-сульфаметоксазол (котримоксазол).
Устойчивость к данным антибиотикам обуславливает задержки в соответствующей терапии, а также рост заболеваемости и смертности у пациентов.
Глобальные исследования 2000-х годов показали, что от 20 до 80 % K.pneumoniae устойчивы к антибиотикам первой линии, включая цефалоспорины,фторхинолоны, аминогликозиды и карбапенемы. Именно поэтому терапияпо лечению внутрибольничных инфекций, вызванных данной бактерией,является сложной. Проблемой является приобретенная устойчивость к антибиотикам данной группы среди грамотрицательных бактерий, в особенности
энтеробактерий. Формирование устойчивости связано с различными механизмами, но наиболее значимым является продукция карбапенемаз.
В настоящее время наблюдается тенденция к созданию комплексных
мультиплексных систем, позволяющих проводить мультипараметрический
анализ при минимальных затратах. В связи с этим создание мультиплексной ПЦР-тест-системы для обнаружения карбапенем-устойчивой K.pneumoniae представляется актуальной задачей.
Разработанная мультиплексная ПЦР тест-система для обнаружения
карбапенем-устойчивой K.pneumoniae, продуцирующей карбапенемазы
типов KPC и OXA48-like, отличается высокой специфичностью и чувствительностью, простотой и безопасностью работы, быстрым временем
анализа (до трех часов). Логичным продолжением работ станет внедрение
данной тест-системы в рутинную практику клинико-диагностических лабораторий, что позволит повысить качество проводимых бактериологических исследований.

Биотехнология

17
7НАНОФОРМЫ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ:ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯНА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ *NANOFORMS OF LIPOIC ACID: PRODUCTION AND STUDYOF INFLUENCE ON FUNCTIONAL ACTIVITY OF PLATELETS
В. А. Щелконогов 1,2,3, А. В. Шипелова 1, А. М. Синебрюхова 1,
Е. С. Дарнотук 1, Н. С. Шастина 1, О. А. Баранова 2,3, А. В. Чеканов 2,3,
К. Д. Казаринов 3, Э. Ю. Соловьёва 2, А. И. Федин 212МИРЭА-Российский технологический университет (ИТХТ), Москва
Российский национальный исследовательский медицинский университет
им. Н. И. Пирогова Минздрава России, Москва
3Фрязинский филиал Института радиотехники и электроники
им. В. А. Котельникова РАН, Фрязино
V. A. Shchelkonogov 1,2,3, A. V. Shipelova 1, A. M. Sinebryukhova 1,
E. S. Darnotuk 1, N. S. Shastina 1, O. A. Baranova 2, A. V. Chekanov 2,
K. D. Kazarinov 3, E. Y. Solovieva 2, A. I. Fedin 2
1

2

MIREA-Russian technological University (ITHT), Moscow
Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow
3
Kotelnikov Institute of Radioengineering and Electronics,
RAS (Fryasino branch), Fryazino
E-mail: vasiliy9999@yandex.ruАннотация
Были разработаны наноформы (липосомы и нанодисперсии), содержащие липоевую кислоту (ЛК), с размером частиц от 50 до 250 нм, характеризующиеся 85 ± 10 %эффективностью включения (ЭВ) ЛК в наночастицы (НЧ), ее медленным высвобождением из наноформ, а также обладающие высокой стабильностью при длительном хранении при комнатной температуре. Более того, было установлено, что в на© В. А. Щелконогов, А. В. Шипелова, А. М. Синебрюхова, Е. С. Дарнотук,Н. С. Шастина, О. А. Баранова, А. В. Чеканов, К. Д. Казаринов, Э. Ю. Соловьёва,А. И. Федин, 2020*Исследования выполнены в рамках Государственного задания (№ гос. регистрации АААА-А19-100390063-9).

178pаздел 1нодисперсиях (НД) удалось солюбилизировать ЛК в 1,5 раза выше (7 мг/мл), чемв липосомах (5 мг/мл), что является существенным преимуществом. Было показано,что липосомы и нанодисперсии с ЛК подавляют агрегацию тромбоцитов (Тц), обусловленную арахидоновой кислотой, и предложен механизм антиагрегационного
действия.

Abstract
Nanoforms (liposomes and nanodispersions) with lipoic acid (LA) with size of particles 50 — 250 nm were obtained and characterized by 85 ± 10 % encapsulation efficiencyof LA in NP, its slow release from nanoforms, and possessing stability during long-term
storage at room temperature. In addition, it has been found that in nanodispersions (ND)
it was possible to solubilize LA 1.5 times higher (7 mg/ml) than in liposomes (5 mg/ml),
which is a significant advantage. It has been established that liposomes and nanodispersions with LA inhibit platelet aggregation caused by arachidonic acid, and the mechanismof antiplatelet action was proposed.

Сосудистые заболевания головного мозга относятся к числу наиболее
распространенных форм патологии ЦНС. Ежегодно более 15 млн человекво всем мире переносят инсульт [1]. К наиболее важным патогенетическим
механизмам развития ишемического инфаркта головного мозга относят [2]:нарушения сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостазов, возникновение и прогрессирование окислительного стресса, воспалительные
реакции, деструкцию ГЭБ и др. Терапия данной патологии включает применение препаратов, проявляющих антиоксидантное действие, подавляющих
воспалительные процессы и препятствующих образованию тромбов. Однимиз наиболее универсальных и перспективных антиоксидантов в комплексной терапии ишемии головного мозга является липоевая кислота. Однакоона малорастворима в воде и, попадая в организм, быстро связывается с белками и биодеградирует под действием различных ферментов, что приводитк уменьшению антиоксидантного и терапевтического действия.
Поэтому целью данной работы является получение различных наноформс ЛК для солюбилизации ЛК в водных растворах, их пролонгированного
высвобождения, защиты от биодеградации при попадании в организм, а также исследование их влияния на функциональную активность тромбоцитов.
Вначале получали наноформы с ЛК: липосомы и нанодисперсии.
Липосомы с ЛК получали из фосфатидилхолина (ФХ) методом «пассивной» загрузки, диспергируя липидную плкнку фосфатно-солевым буферным раствором (ФБР, pH 7,4) с последующей экструзией. Нанодисперсии
«масло-в-воде» с ЛК получали методом ультразвукового диспергирования
после инжекции ФБР и стабилизатора в органическую фазу, содержащую

Биотехнология

179

ЛК и ФХ. Затем удаляли органический растворитель и избыток воды припониженном давлении. Размер, индекс полидисперсности (ИП) и ζ-потенциал наночастиц определяли методом динамического и электрофоретического светорассеяния.
В результате проведенных исследований были получены фосфатидилхолиновые липосомы с ЛК и нанодисперсии с ЛК на основе ФХ, 0,4 % Плюроника
Ф68 и ФХ, Ф68 в ФБР (рН 7,4). Размеры полученных наноформ с ЛК колебались в диапазоне 50–250 нм, а значения ИП < 0,23, что подтверждало однородность наносуспензий. Полученные ЛК-наноформы были электронейтральными (значения поверхностного заряда не превышали –5,5 мВ).
При сравнении характеристик полученных наноформ ЛК (ФХ-липосоми НЭ) установили, что в нанодисперсиях удалось солюбилизировать ЛК
в 1,5 раза, использовав максимальную концентрацию ЛК 7 мг/мл, в то времякак для получения липосом с ЛК использовали концентрации 1 и 5 мг/мл. Придальнейшем увеличении концентрации ЛК (7–10 мг/мл) в липосомах происходило выпадение ЛК в осадок и образовывались нестабильные дисперсии с размером частиц более микрона. При этом удалось добиться достаточно высокой
эффективности включения (ЭВ) ЛК в НД (на основе ФХ), равной 85–95 %, в товремя как ЭВ ЛК в липосомах составляла 75–80 %. Более того, необходимо отметить, что в полученных НЭ (в состав которых входил ФХ) содержание ЛКв два раза превышало содержание ФХ (ЛК:ФХ–2:1), в то время как в липосомах содержание ФХ значительно превышало содержание ЛК (ЛК:ФХ–1:8).
Нанодисперсии с липоевой кислотой на основе Плюроника Ф68 (ЛКФ68 и ЛК-ФХ-Ф68) были гетерогенными (ИП > 0,3) и состояли из двухфракций НЧ: 50–90 нм (15–20 %) и 130–250 нм (85–90 %). Полученные результаты связаны с образованием мицелл Плюроника Ф68, при озвучивании размер которых был менее 100 нм. Более того, было обнаружено, чтополеченные наноформы с ЛК были стабильными при длительном хранении
(более 12 месяцев) при комнатной температуре.
Методом крио-ПЭМ была изучена морфология наночастиц. Было обнаружено, что ФХ-липосомы в основном представляют собой гомогенную
систему, состоящую из однослойных везикул. В свою очередь ФХ-НД представляют систему, состоящую из однослойных и мультислойных наноструктур сферической формы, практически не различающихся по размерам.
Далее изучали кинетику высвобождения ЛК из наноформ при помощи
диффузионной ячейки Франца, загружая в донорную камеру липосомы илиНД, а в акцепторный отсек — ФБР. В результате исследований было обнаружено, что из ФХ-липосом за 24 часа высвободилось 45 ± 3 % ЛК, а из НДне более 60 %. Данный процесс высвобождения ЛК из НЧ может обеспе-180pаздел 1чить пролонгированное действие активной фармацевтической субстанциии поддержание ее терапевтической концентрации в крови.
На следующем этапе работы оценивали влияние полученных наноформЛК на агрегацию тромбоцитов (Тц) в плазме крови, выделенной из крови, полученной у здоровых доноров. В качестве индуктора агрегации Тц использовали арахидоновую кислоту (АК), поскольку в результате ее действия образуются различные метаболиты, в том числе и продукты перекисного окисления
липидов (ПОЛ). В ходе проведенных исследований было обнаружено, что липосомы с ЛК (1–2 мМ) подавляют агрегацию тромбоцитов на 30–45 % относительно контроля. Все типы нанодисперсий с ЛК (1,3–3,8 мМ) эффективней
на 35–80 % ингибировали агрегацию Тц, вызванную АК. В свою очередь водорастворимые препараты и наночастицы без ЛК практически не оказывали
влияния на агрегацию Тц. Вероятнее всего ЛК в наноформах способна лучше
проникать внутрь клеток за счет взаимодействия липидов с мембраной клеток или в результате рецептор-опосредованного эндоцитоза.
Антиоксидантное действие наноформ ЛК оценивали по содержанию
тиобарбиатурат активных продуктов (ТБК-АП) в образцах обогащеннойТц плазмы (ОТП), инкубированными с АК. В результате исследований
было выявлено, что в процессе агрегации Тц, обусловленной АК, происходит окисление липидов в ОТП. При этом добавление липосом с ЛК иливсех типов НД с ЛК к образцам плазмы крови приводило к значительному
уменьшению концентрации ТБК-АП (1,5–16 раз). Наиболее эффективным
антиоксидантным действием обладали все типы НД с ЛК при использовании максимальной концентрации ЛК. Кроме того, было обнаружено, чтонаноформы, не содержащие ЛК, и водорастворимая форма ЛК незначительно влияли на образование продуктов ПОЛ в плазме крови при активацииТц с помощью АК. Предполагаемым механизмом антиагрегационного действия ЛК наноформ можно считать ингибирование ею процесса инициирования продуктов ПОЛ с помощью АК.
Таким образом, на основании полученных результатов исследований
можно сделать заключение о том, что наноформы с ЛК являются перспективными для дальнейших исследований по оценке их нейропротекторногои антикаогулянтного действия на различных экспериментальных моделях.
Литература
1. Benjamin E. J., Virani S. S., Callaway C. W. et al. Heart disease and stroke
statistics-2018 update: a report from the American Heart Association // Circulation. 2018.
Vol. 137, № 12. P. 67–492.
2. Гусев Е. И., Скворцова В. И. Ишемия головного мозга. М. : Медицина, 2001. 328 с.

Биотехнология

181ЛЕГКО-МОДИФИЦИРУЕМЫЕ МНОГОЦЕЛЕВЫЕ
НАНО-НОСИТЕЛИ НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯНА ОСНОВЕ ДЕНДРИМЕРОВ И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛДЛЯ ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ *TUNABLE MULTIPLE-TARGETING DENDRITIC NANOSCAFFOLDSFOR DIAGNOSTICS AND THERAPEUTIC APPLICATION
Н. Г. Яббаров, М. Б. Сокол,Е. Д. Никольская, М. Р. Молляева, М. В. Фомичёва
Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
N. G. Yabbarov, M. B. Sokol, E. D. Nikolskaya, M. R. Mollaeva, M. V. Fomicheva
IBCP RAS, Moscow
E-mail: marvint@inbox.ruАннотация
Антитела в качестве векторных молекул нашли широкое применение в дизайне
препаратов направленного действия для диагностического и терапевтического применения. Однако неспецифические методы конъюгации с использованием низкомолекулярных химических агентов часто приводят к формированию нежелательных
продуктов реакций, агрегатов, а использование ферментов требует многоступенчатой предварительной модификации конъюгируемых молекул. В нашей лабораториибыл получен 15-членный пептид C-DCAWHLGELVWCT-N с замещенным остатком Glu9 на фторфенилпроизводное лизина, способный взаимодействовать в Fcрегионами антител крысы, человека, кролика и мыши в пределах наномолярных значений Kd, что позволяет модифицировать различные носители широким спектром
антител практически в один шаг.

Abstract
Antibodies (Abs) conjugation with various scaffold has found application in therapeutics and diagnostics design. Cys and Lys are utilized as the basic moieties during the Ab
conjugation. Often this strategy leads to formation of undesirable heterogeneous products.
© Н. Г. Яббаров, М. Б. Сокол, Е. Д. Никольская, М. Р. Молляева, М. В. Фомичёва,2020*
The research was supported by Russian Foundation for Basic Research (contract №
18-29-09022\19).

182pаздел 1

Alternative approaches were developed to perform controlled modifications: incorporation of site-specific amino acid analogues; generation bioorthogonally reactive groups by
enzymes; enzyme-mediated conjugation; conjugation of the thiol group of the substituted
cysteine; conjugation via the N-terminal amine group. We designed 15 amino acids peptide (C-CDCAWHLGELVWCTC-N) analogue, with substituted Glu9 residue with fluorophenyllysine that able to interact with Ab Fc regions of different species.

General targeting scheme of nanocarriers modified with full-size antibodies
applying the universal peptide linker

We design self-assembling easy-tunable simple and effective nanoscaffolds
based on polyamideamine dendrimers. Carboxyl-terminated G4 dendrimers
were coupled with the NH2-PEG-COOH and the peptide via NHS-activated esters. Abs were conjugated with dendrimers, loaded with FAM, by adjusting pHfrom 7.4 to 8.5. The resulted conjugate characterized with 12–15 nm size, negative surface charge (–17 ± 2.2 mV), and ability to bind, besides human IgGs, also
murine IgG2, rat IgG2c and rabbit IgG Abs. Z-domain competitive binding analysis displayed site-specific Fc-oriented dendrimer surface opsonization with Abs.
SPR data analysis revealed 27 nM Kd value for Herceptin, 16 nM for mouse anti
human CD326 IgG2b, and 48 nM for rabbit anti mouse IgG2c. MS data analysis confirmed covalent Abs binding with Lys248. The analysis revealed that:
Her2+ A549 cells specifically internalized labeled with trastuzumab conjugates;
mouse anti-human E-selectin labeled conjugates successfully penetrate stimulated
HUVEC cells layer in vascular permeability assay; rabbit Abs modified conjugate
effectively and reversible bound mouse HRP-conjugated IgGs. These results evidenced that the designed dendrimer-based conjugate have broad perspectives as
the universal systems for development of drug delivery systems for therapy anddiagnostics, biosensors, and can be applied in vitro and in vivo.

Биотехнология

18
3ХИМИКО-ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ ПОДХОДЫ К СНИЖЕНИЮ
УРОВНЯ ОШИБОЧНОСТИ В СОСТАВЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ
ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ДЛЯ СБОРКИ ГЕННЫХ КОНСТРУКЦИЙCHEMICAL AND ENZYMATIС APPROACHES OF ERROR CORRECTIONWITHIN SYNTHETIC OLIGONUCLEOTIDES FOR GENE ASSEMBLY
К. И. Яковлева 1,2, И. С. Довыденко 1, Г. Ю. Шевелев 1,2
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
K. I. Yakovleva1,2, I. S. Dovydenko1 G. Y. Shevelev 1,2
1

ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University

2

E-mail: k.iakovleva7@g.nsu.ruАннотацияВ данном исследовании был рассмотрен подход к устранению ошибок в составе
протяженных нуклеотидных последовательностей путем модификации существующих протоколов химического синтеза олигонуклеотидов в совокупности с последующим использованием метода ферментативной коррекции. Применение данного
подхода приводит к снижению доли ошибочных продуктов, вследствие чего наблюдается существенное уменьшение степени расщепления комплексов под действием
эндонуклеаз.

Abstract
In this study the using the modification of the existing protocols for the chemical oligonucleotide synthesis approach for elimination errors in long oligonucleotide sequences was
propose. Complexes application of this approach with enzymatic error correction leads toa decrease in erroneous products.

Синтез протяженных двухцепочечных ДНК имеет большое значениедля генной терапии, молекулярной биологии, генной инженерии и синтетической биологии, так как позволяет создавать синтетические нуклеиновые кислоты с заданной последовательностью нуклеотидов без использова© К. И. Яковлева, И. С. Довыденко, Г. Ю. Шевелев, 2020

184pаздел 1ния матрицы ДНК. Наличие ошибок в составе генных конструкций может
приводить к потере биологической активности и является недопустимымни в одной из сфер применения. Продукты реакции сборки часто содержат мутации, которые в большинстве своем являются результатом ошибок,накопленных при химическом синтезе олигонуклеотидов. Таким образом,основным недостатком высокоточного синтеза генов остается качество исходных олигонуклеотидов, используемых для сборки.
Данное исследование направлено на выявление типов ошибок в синтезируемых олигонуклеотидах и их устранение путем модификации существующих протоколов синтеза. В ходе выполнения работы было продемонстрировано, что использование усовершенствованных протоколов значительно
снижает долю ошибочных продуктов. В сочетании с методом ферментативной коррекции ошибок, основанном на использовании эндонуклеаз, расщепляющих содержащую несоответствия двуцепочную ДНК [1], возможно
значимо повысить качество продуктов химического синтеза олигонуклеотидов.
Литература
1. Sequeira A. F et al. T7 endonuclease I mediates error correction in artificial genesynthesis // Molecular Biotechnology. 2016. Vol. 58(8–9). P. 573–584.

185раздел 2БИОФИЗИКА

АКТИВАЦИЯ ОТОЛИТОВОГО АППАРАТАВО ВРЕМЯ ТЕСТА ИМПУЛЬСА ГОЛОВЫ
ACTIVATION OF OTOLITH ORGANSDURING HEAD IMPULSE TEST
А. Д. Абдыкеримов, В. П. Дёмкин, М. О. Плешков
Томский государственный университет
A. D. Abdykerimov, V. P. Demkin, M. O. Pleshkov
Tomsk State University
E-mail: method396@gmail.com
Аннотация
Целью работы являлось исследование функционирования отолитовых органов во время теста импульса головы. Отолитовый аппарат — часть вестибулярной системы, ответственной за восприятие положения головы, а также вектора
гравитации и ускорений прямолинейных движений. Во время быстрых поворотов головы (например, во время теста импульса головы) на отолитовые органы
действует сила инерции. Для оценки величины вклада центробежной силы в активацию отолитовых органов была использована физико-математическая модель
динамики отолитов. В результате симуляции были получены значения ускорений
отолитовых органов, в несколько раз превышающие пороговые значения их чувствительности.
© А. Д. Абдыкеримов, В. П. Дёмкин, М. О. Плешков, 2020pаздел 2

186

Abstract
The aim of this work was to study the functioning of the otolith organs during thehead impulse test. The otolith apparatus is a part of the vestibular system responsible forthe perception of the position of the head, as well as the vector of gravity and accelerationof rectilinear movements. During rapid head turns (for example, during the head impulsetest), inertial forces act on the otolith organs. To assess the value of the contribution ofcentrifugal force to the activation of the otolith organs, a physical and mathematical modelof the dynamics of otoliths was used. As a result of the simulation, the values of the accelerations of the otolith organs were obtained several times higher than the threshold valuesof their sensitivity.

Отолитовый аппарат — важнейшая структурная часть вестибулярной
системы человека, отвечающая за восприятие линейных ускорений головыи силы тяжести. Отолитовые органы имеют сложную структуру, состоящуюиз волосковых клеток — механорецепторов, которые укоренились в желе,называемом отолитовой мембраной, а поверх нее находится слой отокониальных тел карбоната кальция. Таким образом, динамика этой системы
очень близка к маятнику с критическим затуханием.
Для выявления отклонений в работе вестибулярного аппарата используются различные тесты. Все они в основном направлены на количественную оценку функции полукружных каналов. Например, тест импульса
головы является общепринятым методом функционального тестирования шести полукружных каналов, заключающимся в резком повороте головы амплитудой 15–30° со скоростью около 150–300 градусов в секундуи одновременным фиксированием взгляда испытуемого на стационарном
объекте, расположенном перед ним. Однако эта методика в том виде,в каком она была сформирована, не учитывает вклад отолитовых органовв вестибулоокулярный рефлекс в целом. Считается, что за восприятие поворотов отвечают только полукружные каналы, хотя при таких скоростях
вращения головы отолиты неизбежно должны испытывать центробежное
ускорение.
Для оценки величины ускорения, приложенного к отолитовым органам, нами была выбрана модель динамики, учитывающая силы вязкостии упругости и модифицированная для работы в неинерциальной системе
отсчета при наличии вращения. В качестве внешнего стимула выступала
центробежная сила. Форма стимула была рассчитана усреднением записей
угловой скорости поворота головы 50 испытуемых во время теста импульса головы в горизонтальной плоскости. Расстояние от оси вращения доотолитовых органов было измерено из 20 снимков МРТ здоровых людей

Биофизика
ика

187

с использованием свободного ПО 3D-Slicer. Для вычисления величины
центробежных сил, приложенных к отолитовым органам, а также для расчета линейного смещения отолитовой мембраны использовался программный пакет Matlab.
В результате симуляции были получены значения ускорений отолитовых органов, в несколько раз превышающие пороговые значения их чувствительности (в 0,08–0,14 м/с2), а также смещение отолитовой мембраны как функция времени, где максимальное смещение мембраны равно
0,2 мкм.
На основании полученных результатов выдвинута гипотеза о вкладе
отолитов в вестибулоокулярную реакцию на поворот головы при больших
скоростях (более 100°/с).

pаздел 2188ИССЛЕДОВАНИЕ ФОТОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
ТИОСЕМИКАРБАЗОНА Dp44mT И ЕГО КОМПЛЕКСОВС ИОНАМИ ЦИНКА МЕТОДАМИ ЯМР И ХПЯ *INVESTIGATION OF THE PHOTOCHEMICAL PROPERTIESOF THIOSEMICARBAZONE Dp44mT AND ITS COMPLEXESWITH ZINC IONS BY NMR AND CIDNP
А. С. Архипова 1,2, В. А. Тимошников 1, О. Ю. Селютина 1,3, Н. Э. Поляков 1,3
1Институт химической кинетикии горения им. В. В. Воеводского СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН, Новосибирск
A. S. Arhipova 1,2, V. A. Timoshnikov 1, O. Yu. Selyutina1,3, N. E. Polyakov 1,3
1

Voevodsky Institute of Chemical Kinetics and Combustion SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
ISSCM SB RAS, Novosibirsk
E-mail: alinaarkhipova349@gmail.com
АннотацияНа протяжении многих лет тиосемикарбазоны (ТСК) привлекают значительное
внимание ученых к своим химическим и биологическим свойствам. Также известно,что вещества ряда тиосемикарбазонов обладают фотохимической активностью, чтооткрывает возможности для их использования в фотодинамической терапии. Однако работы по изучению механизмов таких реакций не проводились. В данной работе
исследуется фотохимические свойства хелатора ионов металлов ди-2-пиридил-кетон-4,4-диметил-3-тиосемикарбазона Dp44mT и его хелатных комплексов с ионами
цинка. Интерес к Dp44mT вызван тем, что данное вещество проявляет селективную
противоопухолевую активность. Исследование проводилась методами ЯМР и химической поляризации ядер (ХПЯ).

Abstract
For many years, thiosemicarbazones (TSC) have attracted considerable attention ofscientists to their chemical and biological properties. It is also known that a number of© А. С. Архипова, В. А. Тимошников, О. Ю. Селютина, Н. Э. Поляков, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 20-33-70019.

Биофизика
189
ика
thiosemicarbazones have photochemical activity, which opens up possibilities for theiruse in photodynamic therapy. However, studies on the mechanisms of such reactions havenot been carried out. In this work, the photochemical properties of the metal ion chelator
di-2-pyridyl-ketone-4,4-dimethyl-3-thiosemicarbazone Dp44mT and its chelate complexes with zinc ions are investigated. Interest in Dp44mT is due to the fact that this TSC exhibits selective antitumor activity. The study was carried out by the methods of NMR andchemically induced dynamic nuclear polarization (CIDNP).

С 1950-х годов была обнаружена противораковая активность тиосемикарбазонов (ТСК). В литературе описано, что основной механизм действия
заключается в ингибировании рибонуклеотид редуктазы. Кроме этого, ТСКспособны образовывать хелатные комплексы с ионами металлов, такимикак железо, медь, цинк — жизненно важными элементами для нормального
функционирования клеток, тканей и организма в целом. С этой особенностью связан другой механизм противоракового действия, основанный нанеконтролируемой генерации активных кислородных радикалов. Кроме
того, недавние исследования показали, что некоторые ТСК демонстрируют
усиление противоопухолевой активности в фотоиндуцированных реакциях, однако детальный механизм действия описан не был [1, 2].
Таким образом, целью данной работы являлось исследование фотохимической активности ТСК Dp44mT (см. рисунок), а также его комплексовс ионами цинка в реакциях с участием доноров и акцепторов электрона.
В качестве доноров были выбраны N-ацетил-замещенные аминокислоты
тирозин и триптофан, а в качестве акцепторов выступали хиноны.

Структура тиосемикарбазона Dp44mT

На основании данных, полученных методами ЯМР и ХПЯ, был сделан вывод, что Dp44mT а также его комплексы с ионами цинка являются
фотохимически активными при облучении светом 308 нм. Показано, чтоDp44mT способен вступать в реакцию переноса электрона как с донорами,так и с акцепторами электрона.

pаздел 2190Литература
1. Mrozek-Wilczkiewicz A. et al. Iron chelators in photodynamic therapy revisited:
Synergistic effect by novel highly active thiosemicarbazones // ACS Med. Chem. Lett. 2014.
Vol. 5. P. 336–339.
2. Mrozek-Wilczkiewicz A. et al. Iron chelators and exogenic photosensitizers. Synergy
through oxidative stress gene expression // J. Cancer. 2017. Vol. 8. P. 1979–1987.

Биофизика
ика

191

УПРАВЛЕНИЕ БИОПРОЦЕССАМИ
ПУТЕМ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭМП НА ИХ БИОРИТМЫ
MANAGEMENT BIOPROCESS BY THE ACTION
OF EMF ON THEIR BIORHYTHMS
П. И. Бабич, В. Н. ЗарубинООО «Сибирский инновационный центр», Новосибирск
P. I. Babich, V. N. Zarubin
LLC “Siberian innovation center”, Novosibirsk
E-mail: sicenter@bk.ruАннотация
Рассматриваются теоретические и практические вопросы управления биопроцессами в живых организмах в результате электромагнитного воздействия на ихбиоритмы. На основе полученных результатов разработан метод ресинхронизирующей физиотерапии и аппарат «ФизиоМаг» для лечения заболеваний путем устранения десинхронозов.

Abstract
Theoretical and practical issues of management bioprocess in living organisms as a result of electromagnetic action on their biorhythms are considered. Based on the results
obtained, a method of resynchronizing physiotherapy and the “PhysioMag” apparatus fortreating diseases by eliminating desynchronosis have been developed.

Исследование относится к области хрономедицины/хронофизиотерапии. Согласно свойству ритмичности живой материи, все биопроцессы,протекающие в организме, носят колебательный характер и имеют своибиоритмы. Поэтому любое заболевание в организме сопровождается отклонением биоритмов от нормы — хронопатологией (десинхронозом). Таким
образом, лечить заболевания можно не только путем воздействия на биопроцессы методами фармакотерапии, но и методами хронофизиотерапии
путем коррекции отклонений, возникших в биоритмах больного организма,и устранения хронопатологий. Это открывает новое направление в области
© П. И. Бабич, В. Н. Зарубин, 2020

192pаздел 2биомедицины: управление биопроцессами в больном организме путем воздействия на их биоритмы соответствующей частотой ЭМП. Однако проблема заключается в отсутствии аппаратных методов лечения десинхронозов.
Для решения проблемы на основе явления усвоения ритма живыми организмами в компании разработан и запатентован метод ресинхронизации
(восстановления) биоритмов в больном организме. С целью реализации
этого метода разработан и запатентован аппарат хронофизиотерапии «ФизиоМаг», который прошел клинические испытания. Использование частотной составляющей ЭМП из диапазона биоритмов здоровой ткани, в которой возникла патология, является необходимым и достаточным условиемдля возникновения явления усвоения ритма только в больной ткани и неоказывает побочного действия на организм. Таким образом, в результате
прямого воздействия на биоритмы больной ткани метод обеспечивает безопасность лечения, позволяет добиться гарантированного положительного
терапевтического эффекта и относится к таргетной физиотерапии. Положительная динамика лечения на аппарате «ФизиоМаг» по отдельным заболеваниям превышает 95 %.

Биофизика
ика

193

СТРУКТУРНЫЙ ДИЗАЙН АНТИТЕЛА
ПРОТИВ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТАС ЦЕЛЬЮ РАСШИРЕНИЯ ЕГО СПЕЦИФИЧНОСТИ *BROADENING OF THE SPECIFICITY OF ANTIBODY AGAINSTTICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS USING STRUCTURAL DESIGN
И. К. Байков, Л. А. Емельянова, О. В. Голота,Л. М. Соколова, Г. Б. Каверина, Н. В. Тикунова
Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
I. K. Baykov, L. A. Emelianova, O. V. Golota,
L. M. Sokolova, G. B. Kaverina, N. V. Tikunova
ICBFM SB RAS, Novosibirsk
E-mail: ivan_baykov@mail.ruАннотация
Цель исследования — адаптировать антигенсвязывающую область перспективного антитела против вируса клещевого энцефалита для более прочного связыванияс поверхностным гликопротеином Е штаммов Сибирского и Европейского субтипов вируса. Был исследован эффект восьми мутаций по трем положениям антитела,в одном случае удалось добиться увеличения сродства в 2–2,5 раза. Результаты сопоставлены с результатами молекулярной динамики.

Abstract
The aim of the study was to modify the antigen-binding region of the promising antibodу against the tick-borne encephalitis virus for stronger binding to envelope glycoprotein E of Siberian and European subtypes of the virus. The effect of eight mutations atthree positions of the antibody was studied; in one case it was possible to achieve a twofold
increase in affinity. The results are compared with the results of molecular dynamics simulations.
© И. К. Байков, Л. А. Емельянова, О. В. Голота, Л. М. Соколова, Г. Б. Каверина,Н. В. Тикунова, 2020*Данная работа была выполнена при поддержке Фонда РНФ, проект № 19-7400107.

pаздел 2194Создание терапевтических антител против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) по-прежнему актуально, поскольку доля вакцинированного
населения России составляет около 7 %, а во многих странах Европы этотпоказатель также низкий. Ранее было получено протективное химерное антитело chFVN145 против ВКЭ. Из-за различий в области эпитопа это антитело существенно прочнее (в 10–100 раз) связывается с рекомбинантным
доменом D3 вирусного гликопротеина Е штаммов Дальневосточного субтипа ВКЭ, нежели с аналогичными белками Сибирского или Европейского
субтипов ВКЭ. Цель исследования — адаптировать антигенсвязывающую
область этого антитела для более прочного связывания с рекомбинантными
доменами D3 гликопротеина Е Сибирского и Европейского субтипов ВКЭ(далее белки D3_Zau и D3_Eu).
А

Thr313

WT+D3_EuБ

50H+D3_Eu
Phe_H97

Phe_H97
3.0Å

Tyr_L32

Tyr_L32
Thr331
Thr331

2.6Å

Thr313

His_L50
Tyr_L50

ВГ

50Q+D3_Eu

97L+D3_Eu

Tyr_L32

Phe_H97

Thr313

Leu_H97
Tyr_L50
Thr331

Gln_L50
Thr331

Thr313

Tyr_L32Пространственные модели комплекса белка D3_Eu с исходным антителом (А —синим показаны атомы с перекрыванием Ван-дер-Ваальсовых радиусов более
0,6Å) либо мутантными вариантами 50H (Б), 50Q (В) и 97L (Г). Оранжевыми синим показаны легкие и тяжелые цепи антитела соответственно. Бежевым —домен D3. Красным выделены остатки 313 и 331 домена D3

Биофизика
ика

195

На первом этапе была проанализирована пространственная структура
комплекса «антитело-фрагмент вирусного гликопротеина Е». Посколькув обоих целевых белках вместо остатка Ala313 находится более объемный
Thr313 и происходит перекрывание с аминокислотными остатками антитела (см. рисунок, А), то были предложены восемь аминокислотных заменпо трем положениям антитела, снижающих пространственные затруднения
(некоторые структуры приведены на рисунке, Б, В, Г).
Антитела, каждое из которых содержало одну из этих мутаций, были получены в форме дисульфид-стабилизированных одноцепочечных антител.
Измерение сродства мутантных антител к вирусным белкам с использованием биосенсора Proteon XPR36 показало, что в случае одного из мутантных
антител (данные не опубликованы) удалось добиться увеличения сродствак белкам D3_Zau и D3_Eu в 2–2,5 раза. С помощью методов молекулярной
динамики была предпринята попытка разработать протокол, который в будущем позволил бы с достаточной достоверностью оценивать in silico вклад
предполагаемых мутаций и ранжировать варианты антител по степени
сродства к целевым вирусным белкам.
В дальнейшем планируется исследовать эффект от введения других стабилизирующих мутаций, которые позволят более значительно увеличить
сродство антитела к европейскому и сибирскому вариантам гликопротеина Е ВКЭ.

pаздел 2196РАСЧЕТ ДОЗОВЫХ КОЭФФИЦИЕНТОВ КОНВЕРСИИПРИ ПОСТУПЛЕНИИ С КОРМОМ РАДИОАКТИВНЫХ ИЗОТОПОВ
ЙОДА В ОРГАНИЗМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
CALCULATION OF DOSE CONVERSION FACTORSWHEN INTRODUCED RADIOACTIVE IODINE ISOTOPES WITHEATABLE IN THE CATTLE ORGANISM
М. А. Басова, Э. Н. Денисова, Ю. А. Кураченко
Всероссийский научно-исследовательский институт радиологиии агроэкологии, Обнинск
M. A. Basova, E. N. Denisova, Yu. A. Kurachenko
Russian Institute of Radiology and Agroecology, Obninsk
E-mail: maribasova97@mail.ruАннотация
Аварии, происходящие на атомных станциях и исследовательских реакторах,сопровождаются выбросами в окружающую среду радиоактивных изотопов, в томчисле радионуклидов йода, таких как 131I, 132I, 133I и 135I, поступающих в организмс пищей и воздухом. Опасность данного ряда изотопов в первые недели после ядерной аварии заключается в облучении щитовидной железы. Ранее нами были проведены расчеты критической дозы в щитовидной железе при экспериментальном
кормлении телят и коров 131I, а также получен коэффициент конверсии «Бк => Гр/с».
В связи с этим целесообразно исследовать коэффициенты конверсии для остальных
изотопов йода.

Abstract
Accidents at nuclear power plants and research reactors are accompanied by releases
into the environment of radioactive isotopes, including radionuclides of iodine, such as 131I,
132 133
I, I and 135I, entering the body with food and air. The danger of this series of isotopes in
the first weeks after a nuclear accident is exposure to the thyroid gland. Previously, we calculated the critical dose in the thyroid gland during experimental feeding of 131I calves andcows, and also obtained the conversion factor “Bq => Gy/s”. In this regard, it is advisable tostudy the conversion factors for the remaining isotopes of iodine.

© М. А. Басова, Э. Н. Денисова, Ю. А. Кураченко, 2020Биофизика
ика

197

Целью работы является расчет коэффициентов конверсии для радиоактивных изотопов йода, а именно 131I, 132I, 133I и 135I, путем моделирования щитовидной железы (ЩЖ) при помощи программы транспорта излучений MCNP.
ЩЖ крупного рогатого скота моделируется двумерным осесимметричным телом, состоящим из девяти сегментов, полученных осевыми и радиальными цилиндрическими сечениями. Эти сегменты симметрично расположены на трахее, имеют разный внешний диаметр и высоту, соединяются
попарно, образуя четыре излучающих тела. Пятый источник имитирует перешеек (см. рисунок).

Радиальное (слева) и осевое сечение расчетной модели ЩЖ (MCNP5).
Таблица содержит размеры цилиндрических слоев ЩЖРазмеры ЩЖ для коровы массой ~500 кг имеют средние значения
20,0 см3 и 20,6 г., плотность ткани ЩЖ ~1,03 г/см3, элементный состав взятиз литературных источников.
Изотопная активность распределена равномерно по объему ЩЖ. Точные
расчеты (MCNP5) были проведены для: а) переноса β-излучения в ЩЖ, сопровождающегося образованием вторичного излучения и его дальнейшим
переносом с учетом всех процессов, включая генерацию и транспорт тормозных, Оже-электронов и др.; б) переноса собственного γ-излучения 131Iс учетом генерации и транспорта рентгеновского и флуоресцентного излучений и др. Диссипация энергии контролировалась до 1 кэВ, интегральная (по энергии) дисперсия дозы составляла < 0,1 %. Полученные коэффициенты конверсии для взрослых коров, учитывающие работу как β-, таки γ-источника, являются следующими:• 131I – 2,34*10–12 Гр/с на 1 Бк;• 132I – 6,73*10–12 Гр/с на 1 Бк;pаздел 2

198• 133I – 4,35*10–12 Гр/с на 1 Бк;• 135I – 9,51*10–12 Гр/с на 1 Бк.
Динамику каждого радиоактивного йода в ЩЖ не трудно рассчитать,используя камерную модель метаболизма. При помощи коэффициентов
конверсии можно получить зависимость мощности дозы от времени, далее
интегрированием вычисляется средняя доза в ЩЖ.

Биофизика
ика

199

СИЛОВЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯВ МОДЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ «АНТИГЕН-АНТИТЕЛО»,ОЦЕНЕННЫЕ МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ
FORCE CHARACTERISTICS OF INTERACTIONSIN THE MODEL SYSTEM “ANTIGEN-ANTIBODY”
ESTIMATED USING ATOMIC FORCE MICROSCOPY
В. С. Белозёров, И. В. Конышев, Л. Г. Дудина
Вятский государственный университет, Киров
Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, Сыктывкар
V. S. Belozyorov, I. V. Konyshev, L. G. Dudina
Vyatka State University, Kirov
Institute of Physiology of the Komi Scientific Centerof the Ural Branch of the RAS, Syktyvkar
E-mail: belozerovvs@mail.ruАннотацияС использованием метода атомно-силовой микроскопии были оценены силовые
характеристики межмолекулярного взаимодействия в модельной системе «антиген-антитело». Установлено наличие специфического компонента указанного взаимодействия, а также неспецифической составляющей, определяемой главным образом агломерацией молекул-сенситинов на минеральных носителях.

Abstract
The force characteristics of intermolecular interaction in the model system “anti- genantibody” were estimated using atomic force microscopy. The presence of a specificcomponent of this interaction, as well as a non-specific component determined mainly by
the agglomeration of sensitine molecules on mineral surfaces, has been identified.

Атомно-силовая микроскопия (АСМ), наряду с оптической и магнитной ловушками, является одним из основных биофизических подходовдля оценки силовых характеристик взаимодействия между биологическими микрообъектами, такими как антиген-антитело, лиганд-рецептор и др.
© В. С. Белозёров, И. В. Конышев, Л. Г. Дудина, 2020

200pаздел 2Изучение механизмов таких взаимодействий лежит в основе разработки
новых средств диагностики, профилактики и лечения инфекционных заболеваний.
Цель работы состояла в количественной оценке и изучении структуры
силовых характеристик взаимодействия в системе «антиген-антитело» с использованием атомно-силовой микроскопии.
В эксперименте использовались АСМ-зонды серии PNP-DB с жесткостью консоли 0,06 нН/нм, имеющие радиус закругления иглы ~20 нм. Поверхность кантилевера покрывалась молекулами липополисахарида (ЛПС),выделенного методом водно-фенольной экстракции из бактериальной культуры Yersinia pseudotuberculosis, выращенной при температуре 10 °C. В качестве подложки использовалась слюда, функционализированная препаратом
антител, специфических к О-боковым цепям указанного ЛПС (МкАТ2). Отрицательным контролем служила слюда, покрытая бычьим сывороточным
альбумином (БСА).
Силовые характеристики взаимодействия выражены в средних значениях силы разрыва связей и работе сил адгезии, а также в виде гистограмм
распределения силовых характеристик, представленных на рисунке.

Гистограммы распределения для (А) силы взаимодействия
и (Б) работы сил адгезииНа основе полученных данных были установлены достоверные различия (p > 0,99) в средних значениях силы взаимодействия «ЛПСМкАТ2» (0,719 ± 0,062 нН) в сравнении с взаимодействием «ЛПС-БСА»(0,599 ± 0,045 нН). Характерной чертой специфического взаимодействия
является наличие высокоамплитудных (>1 нН) разрывов связи. Для разры-Биофизика

201

ва всех связей взаимодействия «ЛПС-МкАТ2» должна быть затрачена существенно большая работа по сравнению с системой «ЛПС-БСА».
Неспецифическая составляющая вносит значительный вклад в регистрируемые характеристики оцениваемых связей. Наличие такого неспецифического компонента может объясняться, помимо взаимодействия минеральных носителей целевых молекул, способностью ЛПС и МкАТ к самосборке и образованию агломератов на АСМ-зонде и подложке. Взаимодействие данных агломератов может приводить к образованию сложных
комплексов с множеством связей как специфической, так и неспецифической природы. Выделение строго специфической компоненты во взаимодействии «антиген — антитело» остается одной из основных проблем силовой спектроскопии.

pаздел 2202ИССЛЕДОВАНИЕ ГИПЕРПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ОТВЕТА
МЕМБРАНЫ ЭРИТРОЦИТОВВ МОДЕЛИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СИНДРОМА *STUDY OF THE HYPERPOLARIZATION RESPONSE OF ERYTHROCYTESMEMRANE IN THE MODEL OF METABOLIC SYNDROME
Ю. Г. Бирулина, Е. Е. Буйко, Л. Ф. Алибаева, И. В. Петрова, С. В. Гусакова
Сибирский государственный медицинский университет, Томск
Yu. G. Birulina, E. E. Buyko, L. F. Alibaeva, I. V. Petrova, S. V. Gusakova,
Siberian State Medical University, Tomsk
E-mail: birulina20@yandex.ruАннотация
Воспроизведена модель диет-индуцированного метаболического синдрома(МС) на крысах. Потенциометрическим методом установлено, что амплитуда гиперполяризационного ответа (ГО) эритроцитов крыс с МС менялась разнонаправленно в зависимости от воздействующего агента: при стимуляции Са2+-ионофором
А23187 — снижалась, при действии электронно-донорной системы аскорбат–феназинметасульфат — повышалась по сравнению с амплитудой ГО крыс контрольной
группы.

Abstract
The model of diet-induced metabolic syndrome (MS) was performed in rats. The
amplitude of the hyperpolarization response (HR) of erythrocytes was evaluated by thepotentiometric method. It was shown that the amplitude of the HR of rat erythrocyteswith MS changed depending on the acting agent: after stimulated with calcium ionophore
A23187 — decreased, after the electron donor system was applied — increased comparedto the amplitude of HR rats of the control group.

Нарушения со стороны системы крови, развивающиеся при метаболическом синдроме (МС) и сахарном диабете (СД) 2-го типа, часто приводятк изменению структурно-функционального статуса эритроцитов, которые
© Ю. Г. Бирулина, Е. Е. Буйко, Л. Ф. Алибаева, И. В. Петрова, С. В. Гусакова, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке Совета по грантам Президента Российской Федерации (МК-143.2020.4).

Биофизика

203традиционно служат моделью для изучения ионного транспорта плазматических мембран в норме и при патологии.
Целью данного исследования явилось изучение гиперполяризационного
ответа (ГО) мембраны эритроцитов при метаболическом синдроме у крыс.
Исследование выполнено на крысах-самцах линии Wistar, которые былиразделены на контрольную и опытную группу (по 11 и 12 животных в каждой группе). Крысы контрольной группы содержались на стандартной диете. Крыс опытной группы содержали в течение 12 недель на высокожировойи высокоуглеводной диете. Материалом для исследования служили осажденные эритроциты, которые получали путем центрифугирования (1000 g,
4°С) гепаринизированной крови животных. Для регистрации изменений
мембранного потенциала эритроцитов использовали потенциометрический
метод, основанный на том, что в присутствии протонофора ClCCP распределение протонов зависит от МП (Еm): Em = RT/F (pHi — pH0), где рНi и рН0 —значения рН цитоплазмы и среды инкубации соответственно.
Внесение в суспензию
эритроцитов
кальциевого
ионофора
А23187 (0,5 мкМ) либо электронно-донорной системы аскорбат (10 мМ)-феназинметасульфат (ФМС, 0,1 мМ) приводило к развитию гиперполяризационного ответа (ГО), который в обоих случаях обусловлен открыванием
Са2+-зависимых К+-каналов. Амплитуда ГО, стимулированного А23187,
снижалась у эритроцитов крыс с МС на 13 % (n = 6, р < 0,05) по сравнениюс данными, полученными у животных контрольной группы. В то же времяв этих условиях не отмечалось изменений скорости развития ГО и скорости
восстановления МП эритроцитов крыс обеих групп. Амплитуда ГО, полученного при добавлении к суспензии эритроцитов электронно-донорной
системы аскорбат-ФМС, повышалась на 17 % (n = 6, р < 0,05) у крыс с МС посравнению с амплитудой ГО крыс контрольной группы. Также отмечалось
повышение скорости восстановления МП эритроцитов крыс с МС, тогдакак скорость развития ГО значимо не отличалась от параметров ГО эритроцитов крыс контрольной группы.
Полученные различия исследуемых параметров у крыс использованных
групп, вероятно, связаны либо с конформационными нарушениями структурных белков Са2+-зависимых К+-каналов при МС, либо с нарушениямисо стороны регуляторных белков, влияющих на Са 2+-зависимую калиевую
проницаемость эритроцитов.

pаздел 2204ХОЛОДНАЯ ПЛАЗМЕННАЯ СТРУЯКАК НОВЫЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ПОДХОД *COLD PLASMA JET AS A NEW ANTITUMOR APPROACH
М. М. Бирюков 1,2, Е. А. Патракова 1,2,
О. А. Коваль 1,2, О. С. Троицкая 1, Д. Е. Закревский 31Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт физики полупроводников им. А. В. Ржанова, Новосибирск
M. M. Biryukov 1,2, E. A. Patrakova 1,2, O. A. Koval 1,2,
O. S. Troitskaya 1, D. E. Zakrevsky 3
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
Rzhanov Institute of Semiconductor Physics SB RAS, Novosibirsk
E-mail: biryukov.mm@ya.ruАннотацияВ ходе работы выявлены культуры опухолевых клеток, наиболее чувствительные к облучению холодной плазменной струей (ХПС), оптимизированы продолжительность и физические параметры облучения, позволяющие оказывать селективное воздействие. Показано, что облучение опухолей in vivo приводит к увеличению
концентрации белка HMGB1 в сыворотке крови мышей-опухоленосителей.

Abstract
In this work, we analyzed cancer cells with the highest sensitivity to cold atmospheric plasma (CAP) treatment. To obtain the selective cytotoxic effect towards cancer cells,
physical parameters of irradiation were optimized. We demonstrated the increase in serum
HMGB1 level in tumor-bearing mice after the CAP irradiation.

© М. М. Бирюков, Е. А. Патракова, О. А. Коваль, О. С. Троицкая, Д. Е. Закревский,2020*Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 19-19-00255 и гранта РФФИ№ 20-34-90021.

Биофизика

205Одним из перспективных направлений терапии злокачественных новообразований является применение холодной плазмы для индукции гибели
раковых клеток. Холодная плазма представляет собой ионизованный газс температурой, не превышающей 40 °С. Частицы газа при взаимодействиис веществами окружающей среды запускают каскады реакций, приводящихк образованию активных форм кислорода и азота, которые обуславливают
биологические эффекты плазмы.
Цель работы
Сравнение чувствительности культур клеток мыши и человека к облучению холодной плазмой, оптимизация параметров облучения и выявление
механизмов клеточной гибели.
В работе применяли установку с газоразрядным устройством, созданную сотрудниками ИФП СО РАН. Культуры клеток мыши (CT26, B16,
MX-7) и человека (MCF-7, MCF-10A, A549, Wi-38), растущие в 96-луночных
планшетах, обрабатывали ХПС, после чего оценивали жизнеспособностьв МТТ-тесте. Параллельно жизнеспособность клеток оценивали в реальном времени с помощью клеточного анализатора iCELLigence. Для анализа
клеток в состоянии апоптоза применяли проточную цитометрию с окрашиванием Annexin V/PI. Визуализацию морфологии облученных клеток
осуществляли с помощью системы ZOE. Для анализа противоопухолевого
действия ХПС клетки MX-7 в количестве 5*105 трансплантировали подкожно мышам линии C3H/He. Пальпируемые опухоли облучали ХПС в различных режимах. Для анализа влияния ХПС на иммунную систему проводили
тестирование образцов сыворотки крови на секретируемые цитокины и хемокиноподобный белок HMGB1.
Определены условия облучения, обеспечивающие селективное цитотоксическое действие ХПС на онкотрансформированные клетки человека
(MCF-7, A549) в сравнении с нормальными (MCF-10A, Wi-38) клетками
того же гистологического происхождения. Среди исследуемых культур
онкотрансформированных клеток мыши наибольшая чувствительностьк ХПС выявлена для клеток рабдомиосаркомы MX-7.
С помощью световой микроскопии установлено образование апоптотических телец в облученных клетках. Методом проточной цитометрии показано, что вследствие обработки ХПС доля клеток, на поверхности которых
присутствует фосфатидилсерин, увеличивается с 6,8 до 17,9 %, что является
одним из признаков гибели клеток по пути апоптоза.
В экспериментах in vivo на мышах линии C3H/He с трансплантированными подкожно клетками MX-7 продемонстрировано двукратное увеличе-206pаздел 2ние концентрации HMGB1 в сыворотке крови мышей-опухоленосителей
через 24 часа после обработки. Важно отметить, что такой эффект отсутствовал у здоровых мышей, облученных ХПС.
Полученные данные демонстрируют селективный цитотоксический
эффект холодной плазмы в отношении онкотрансформированных клеток.
Увеличение концентрации белка HMGB1 в сыворотке крови мышей-опухоленосителей говорит о вовлеченности иммунной системы в ответ на облучение.

Биофизика

207ОЦЕНКА ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ АМФИФИЛЬНЫХ
ТРИАЗИН-КАРБОСИЛАНОВЫХ ДЕНДРОНОВ *ASSESSMENT OF HEMOLYTIC PROPERTIES OF AMPHIPHYLICTRIAZINE-CARBOSILANE DENDRONS
О. С. Боева 1,2,3, Н. Ю. Кнауэр 1,3, Е. А. Пашкина 1,3,
А. А. Актанова 1, В. И. Архипова 2,3, Х. Санчес-Ньевес 4,
Ф. Х. де ла Мата4, Р. Гомес4, Е. К. Апарцин 2,31Научно-исследовательский институт фундаментальнойи клинической иммунологии, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
4
Departamento de Química Orgánica y Química Inorgánica,
Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, Spain

O. Boeva 1,2,3, N. Knauer 1,3, E. Pashkina 1,3, A.Aktanova 1, V. Arkhipova 2,3,
J. Sánchez-Nieves 4, F. J. de la Mata 4, R. Gomez 4, E. Apartsin 2,3
1

Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
ICBFM SB RAS, Novosibirsk
4
Department of Organic and Inorganic Chemistry,
University of Alcala, Alcala de Henares, Spain
E-mail: o.boeva@g.nsu.ruАннотацияВ работе оценена гемолитическая активность новых систем доставки лекарств —триазин-карбосилановых дендронов. Нами показано, что инкубирование эритроцитов с дендронами в присутствии собственной сыворотки доноров значительно
снижает дозозависимый гемолитический эффект дендронов. Полученные данные
представляют интерес для дальнейшей разработки систем доставки лекарств.
© О. С. Боева, Н. Ю. Кнауэр, Е. А. Пашкина, А. А. Актанова, В. И. Архипова,Х. Санчес-Ньевес, Ф. Х. де ла Мата, Р. Гомес, Е. К. Апарцин, 2020*Исследование выполнено при поддержке гранта РФФИ 18-33-20109_мол_а_вед,гранта MINECO CTQ-2017-85224-P, гранта Президента РФ МК-2278.2019.4.

208pаздел 2

Abstract
In this work we studied the hemolytic properties of the new delivery system for drug —triazine-carbosilane dendrons. We showed that incubation of erythrocytes with dendrons
in the presence of donors’ own serum significantly reduced dose-dependent hemolytic effect. The data obtained are of interest for future development drug delivery system.

Современные системы лекарственной доставки должны обладать защитными свойствами по отношению к транспортируемой молекуле, бытьбезопасными и иметь низкую гемолитическую активность. В работе оценивалась гемотоксичность амфифильных карбосилановых дендронов второгои третьего поколений (DG2, DG3) — высокосимметричных молекул, способных к сборке в супрамолекулярные комплексы.
2%-я суспензия эритроцитов 12 условно здоровых доноров обрабатывалась растворами DG2 и DG3 (0,3 мкМ, 1 мкМ, 3 мкМ, 10 мкМ, 30 мкМ
и 100 мкМ) в фосфатно-солевом буфере (PBS), в растворе альбумина (40 г/л)и в собственной сыворотке крови донора. В качестве отрицательного контроля использовалась суспензия без добавления растворов дендрона, а вкачестве положительного контроля — 10% р-р Triton X-100. Образцы инкубировались 60 минут при 37 °C. Оценка уровня свободного гемоглобина
проводилась спектрофотометрически. Статистическая обработка производилась с использованием критерия Манна — Уитни, различия достоверны
при p < 0,05.
Нами показан дозозависимый эффект DG2 и DG3 при инкубации в PBS
и растворе альбумина. Уровень гемолиза в сыворотке был достоверно ниже,чем в PBS и растворе альбумина. Мы полагаем, что дендроны активно связываются с компонентами донорской сыворотки, что значительно снижаетих токсичность. Также обнаружено, что дендрон DG3 имеет большую гемолитическую активность, чем DG2.
Полученные данные представляют интерес для дальнейшей разработки
систем доставки лекарств с использованием амфифильных карбосилановых дендримеров.

Биофизика

209ОПРЕДЕЛЕНИЕ УСЛОВНОГО ВОЗРАСТА ЭРИТРОЦИТОВ
МЕТОДОМ СКАНИРУЮЩЕЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ
DETERMINATION OF THE CONDITIONAL AGE OF ERYTHROCYTESBY SCANNING FLOW CYTOMETRY
А. В. Гисич 1,2, Е. С. Ястребова 1,3, Д. И. Строкотов 1,41Институт химической кинетики и горения
им. В. В. Воеводского СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3НМИЦ им. Е. Н. Мешалкина, Новосибирск
4Новосибирский государственный медицинский университет
A. V. Gisich1,2, Е. S. Yastrebova1,3, D. I. Strokotov1,41

Voevodsky Institute of Chemical Kinetics and Combustion SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
National Medical Research Center E. N. Meshalkina, Novosibirsk
4
Novosibirsk State Medical University
E-mail: a.gisich@g.nsu.ruАннотация

Данная работа посвящена методам определения условного возраста эритроцитов с целью изучения их морфологических и функциональных свойств от времени
нахождения в кровотоке.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:1) разработка подходов по определению условного возраста одиночного эритроцита;2) применение предложенных подходов к исследованию 15 доноров и пациентов;3) проверка гипотезы о наличии корреляции между особенностью (точкой перегиба) в возрастной функции популяции эритроцитов и содержанием гликированного гемоглобина.
В результате работы было опробовано три подхода определения возраста с различным учетом неравномерной скорости потери объема и гемоглобина в течении
жизни эритроцита. Явной зависимости между возрастом точки перегиба и долей
гликированного гемоглобина не наблюдается при всех используемых подходах,следовательно, тестируемая гипотеза в работе не проявила себя должным образом.
© А. В. Гисич, Е. С. Ястребова, Д. И. Строкотов, 2020

210pаздел 2Видимо, поведение точки перегиба описывается другими физико-биологическими
особенностями.

Abstract
This work is aimed on methods to determine the nominal age of erythrocytes in orderto study their morphological and functional properties which depend on a spent time in
the bloodstream. To achieve this goal, the following tasks were set:
1) development of approaches to determine the nominal age of a single erythrocyte;
2) application of the proposed approaches to the study of 15 donors and patients;
3) testing the hypothesis about the presence of a correlation between a feature (inflection point) in the age function of the erythrocyte population and the content of glycatedhemoglobin.
As a result of the study, three approaches for determining the age were tested, taking
into account the uneven rate of volume and hemoglobin loss during the life of the erythrocyte. The relationship between the age of the inflection point and the proportion of glycatedhemoglobin is not observed for all the approaches used, therefore, the hypothesis being
tested did not work properly. Apparently, the behavior of the inflection point is describedby other physico-biological features.

В течение 100–120 дней жизни эритроциты претерпевают многочисленные изменения: уменьшается объем, содержание гемоглобина, площадь
поверхности, образуются и отпадают микровезикулы и многое другое. Причем начальные изменения объема и гемоглобина быстрые. Последующие
изменения происходят медленно. Из литературных данных известно, чтополовина общего изменения происходит в течение первой недели в кровообращении. По истечении срока жизни эритроциты перерабатываются, выводятся организмом из кровотока и заменяются.
Возможность определения возраста эритроцитов способна улучшить диагностику сахарного диабета, наличие которого определяется уровнем гликированного гемоглобина (HbA1c). Изменения средней продолжительности
жизни эритроцитов достаточно, чтобы привести к клинически значимым
различиям в содержании HbA1c у диабетиков с одинаковым средним уровнем глюкозы в крови. Более того, характеризация популяции эритроцитовпо возрастным показателям дает возможность обнаружить нарушения в организме, связанные с дисфункцией эритропоэза и элиминации эритроцитов.
Эксперименты проводились при комнатной температуре в течение четырех часов после забора донорской периферической крови (в ЕДТА). Эритроциты измерялись на оригинальном сканирующем проточном цитометре
(разработанном в лаборатории), позволяющем регистрировать угловые
зависимости (индикатрисы) светорассеяния от одиночных клеток, находящихся в водном потоке, со скоростью до 1000 клеток в секунду.

Биофизика

211Таким образом, в ходе работы был разработан подход по определению
условного возраста эритроцитов, основанный на корреляции параметров
«объем эритроцита — количество гемоглобина». По результатам исследования доноров/пациентов найдена нелинейность корреляции в области малых объемов эритроцитов. Доказано отсутствие связи между особенностьюв возрастной функции популяции эритроцитов и содержанием HbA1c.

pаздел 2212СОЗДАНИЕ ПОДХОДОВ ДЛЯ ПРЕДСКАЗАНИЯ
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КОМПЛЕКСОВ
ПРОИЗВОДНЫХ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ *DEVELOPMENT OF APPROACHES FOR PREDICTING THE
PHYSICOCHEMICAL PROPERTIES OF COMPLEXESOF NUCLEIC ACID DERIVATIVES
В. М. Голышев 1,2, А. А. Ломзов 1, Д. В. Пышный 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
V. M. Golyshev 1,2, A. A. Lomzov1, D. V. Pyshnyi1
1

ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University

2

E-mail: golyshev@niboch.nsc.ruАннотация
Разработка подходов для рационального дизайна и быстрого достоверного анализа свойств новых производных нуклеиновых кислот является актуальной задачей химии и физической химии. Нами разработаны подходы экспериментальной
характеризации физико-химических свойств коротких олигомеров новых производных нуклеиновых кислот, и опробованы методы компьютерного моделирования,которые позволяют предсказывать особенности их структуры и гибридизационных
свойств.

Abstract
The development of approaches for rational design and rapid reliable analysis of theproperties of new nucleic acid derivatives is an urgent problem in chemistry and physical chemistry. We have developed approaches for the experimental characterization of thephysicochemical properties of short oligomers of newly synthetized nucleic acid derivatives, and have tested computer simulation approaches for the prediction of their complexes structure and hybridization properties.
© В. М. Голышев, А. А. Ломзов, Д. В. Пышный, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-34-90127 и РНФ № 18-14-00357.

Биофизика

213Олигонуклеотиды и их производные используют для исследования молекулярно-биологических процессов в качестве терапевтических агентови диагностических зондов. Их применение основано на способности образовывать комплексы с комплементарными последовательностями нуклеиновых кислот. Существует большое число производных нуклеиновых кислот, среди которых наиболее распространенными являются фосфотиоатные
производные (PS), замкнутые нуклеиновые кислоты (LNA), пептидил-нуклеиновые кислоты (PNA), морфолиновые производные (PMO). В ИХБФМСО РАН были предложены два типа производных: глицин-морфолиновые
(gM) и фосфорил-гуанидиновые (PG) олигонуклеотиды. Целью данной работы является создание подходов для изучения и предсказание физико-химических свойств новых производных нуклеиновых кислот.

Cтруктура производных нуклеиновых кислот gM (слева) и PG (справа)Разработана термодинамическая модель, позволяющая определять термодинамические параметры формирования отдельных структурных элементов тандемных комплексов НК как нативных, так и модифицированных,с использованием коротких олигонуклеотидов (например, пентамеров).
С использованием методов молекулярной динамики разработаны алгоритмы создания компьютерных моделей, проведения моделирования и анализа
структуры и гибридизационных свойств данных производных. Показано,что in silico методы позволяют адекватно характеризовать структуру аналогов НК, а величины энергий гибридизации близки к экспериментально
наблюдаемым величинам.

214pаздел 2Сравнительное исследование структуры и термической стабильности
комплексов gM и PG производных и нативных комплексов нуклеиновых
кислот методом молекулярной динамики показало: а) возможность образования стабильных двойных спиралей в обоих случаях; б) близость энергий
формирования отдельных структурных элементов, рассчитанных на основании анализа МД-траекторий, оказываются близки к экспериментально
определенным величинам.
Полученные результаты показывают возможность рационального дизайна новых производных in silico и возможность достоверного прогностического расчета их свойств.

Биофизика

215

РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ
ОПТИМАЛЬНЫХ МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ
СОБАК ПОРОДЫ РОТВЕЙЛЕР
DEVELOPMENT OF A METHOD FOR DETERMINING
INDIVIDUAL OPTIMAL MORPHOMETRIC PARAMETERS OF DOGSOF ROTTWEILER BREED
Т. А. Гончарова, А. А. Печерицын
Томский государственный университет
T. A. Goncharova, A. A. Pecheritsyn
Tomsk State University
E-mail: goncharovata.biomed@yandex.ruАннотацияВ кинологическом стандарте каждой породы описаны значения морфометрических параметров, считающиеся оптимальными. В связи с несовершенством стандартов большой индивидуальной изменчивостью внутри породы и различиями в содержании и уровне активности отдельных представителей породы эти значения неявляются оптимальными для каждой отдельной собаки. В данной работе предложен
подход, предусматривающий построение математической модели тела собаки.

Abstract
The cynological standard of each breed describes the values of morphometric parameters that are considered optimal. Due to imperfect standards, large individual variability
within the breed and differences in the content and level of activity of individual representatives of the breed, these values are not optimal for each individual dog. In this paper, anapproach is proposed that provides for the construction of a mathematical model of the
dog’s body.

Традиционно для оценки тела собаки измеряют более десяти различных
морфометрических параметров. В данной работе были сделаны измерения
шести параметров: роста, длины корпуса, обхвата груди, ширины груди,глубины груди, обхвата пясти. Проведены измерения 38 собак породы рот© Т. А. Гончарова, А. А. Печерицын, 2020

216pаздел 2вейлер старше года. На основе полученных данных были посчитаны индексы, отражающие пропорциональность телосложения. Для каждой собакипо результатам осмотра и пальпации был определен индекс кондиции тела.
Индекс определялся по визуальной 9-точечной шкале, рекомендованнойWSAVA (см. рисунок).

Шкала индексов кондиции тела собак, рекомендованная
Всемирной ветеринарной ассоциацией мелких животных
(World Small Animals Veterinary Association)В качестве параметров, описывающих физическое состояние тела собаки, в данной работе используются значения зоотехнических индексов
костистости K, массивности M, компактности C и грудного индекса G. Текущее состояние тела задается точкой в четырехмерном пространстве параметров K, G, M, C. В таком подходе поиск оптимального состояния тела собаки — это задача определения параметров Kopt, Gopt, Mopt, Copt, для которых
расстояние от идеального состояния минимально.
Зоотехнические индексы следующим образом связаны с морфометрическими параметрами
lp
wg
lg
lg
K  100,G  100, M  100,C  ,hxghlгде l — длина корпуса собаки, h — высота в холке, lp — обхват пясти, lg —обхват груди, xg — глубина груди, wg — ширина груди.
Для каждого параметра найдена его линейная регрессия по остальным
переменным и вычислен показатель VIF (variance inflation factor), который
связан с коэффициентом детерминации R2 соотношением
VIF 

1(1 R)2.

Биофизика

217Параметр, для которого VIF максимален и превышает некоторое пороговое значение, был отброшен. Эта процедура повторялась для оставшихся
параметров до тех пор, пока значение VIF для всех переменных не стало
меньше порогового.
Вычисления проделаны с помощью свободного ПО Gnumeric. В результате найдено, что независимыми переменными являются длина корпуса l,обхват пясти lp, обхват груди lg и ширина груди wg, а высота в холке и глубина
груди зависят от переменных l и lg:
xg = a1l + a2lg, h = b1l + b2lg.

Для реализации вышеописанной модели была написана программа навстроенном языке ПО Matlab 2015b. С помощью нее проведены расчеты
идеального состояния для 38 собак породы ротвейлер.
Анализ результатов этих расчетов показывает, что данная модель может
применяться для расчета оптимальных параметров состояния тела у кобелей, у сук — с осторожностью. Для увеличения точности результатов предложенного метода необходимо увеличить выборку изученных объектов дляповышения репрезентативности данных. Также необходимо включить в математическую модель дополнительные параметры, например, длину лап,обхват головы, возраст, тип конституции и т. д.

pаздел 2218ОЦЕНКА ГЕНЕРАЦИИ АФК НА ПОВЕРХНОСТИ МАГНИТНЫХ
ЧАСТИЦ, ОБЛАДАЮЩИХ ПЕРОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ *ESTIMATION ROS GENERATION ON THE SURFACE OF MAGNETICPARTICLES WITH PEROXIDASE-LIKE ACTIVITY
М. Г. Горобец, М. И. Абдуллина, М. В. Лопухова, А. В. Бычкова
Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
M. G. Gorobec, M. I. Abdullina, M. V. Lopuhova, A. V. Bychkova
IBCP RAS, Moscow
E-mail: maria.g.gorobets@gmail.com
АннотацияС использованием субстратов оФДА и ТМБ продемонстрирована генерация активных форм кислорода (АФК) в растворах магнитных наночастиц (МНЧ), пероксидазы хрена (HRP) и Fe(II) в присутствии пероксида водорода. Для МНЧ показана
зависимость количества продуктов окисления от концентрации МНЧ в золе, обусловленная присутствием Fe(II) на поверхности частиц. Также исследовано влияние
белка на генерацию АФК на поверхности МНЧ.

Abstract
The generation of reactive oxygen species (ROS) in solutions of magnetic nanoparticles (MNPs), horseradish peroxidase and Fe(II) is demonstrated in presence of hydrogen
peroxide using oPDA and TMB. It is shown that the quantity of the oxidized products
depends on the concentration of MNPs in sol. This effect is caused by presence of Fe(II) on
the surface of MNPs. Influence of the protein on the ROS generation on the MNPs surface
is also studied.

МНЧ в течение последних десятилетий используются при создании
функциональных материалов биомедицинского назначения, например, дляадресной доставки лекарственных веществ, магнитной сепарации и магнитно-резонансной томографии. МНЧ при физиологических условиях об© М. Г. Горобец, М. И. Абдуллина, М. В. Лопухова, А. В. Бычкова, 2020*Исследование выполнено при частичной поддержке гранта Президента РФ
МК-3601.2019.3.

Биофизика

219

ладают активностью пероксидазы и каталазы, содержащих в своем составе
гем (комплексное соединение с железом). Данные МНЧ получили название
IONzymes. IONzymes вызывают генерацию АФК под действием пероксида
водорода и замедляют рост опухолей.
Целью данного исследования было изучение процессов генерации АФКпод действием МНЧ и пероксида водорода. Для оценки генерации АФК использовались о-фенилендиамин (оФДА), продукт окислительной модификации которого имеет максимум поглощения при 418–455 нм, и 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ), образующий при взаимодействии с АФК продукт с максимумом поглощения при 370, 450 и 650 нм.
Показана генерация радикалов в системах, содержащих МНЧ, с использованием оФДА (рис. 1) и ТМБ (рис. 2). С использованием оФДА также продемонстрирована генерация радикалов в растворах HRP и Fe(II) в присутствии пероксида водорода (см. рис. 1). В данных растворах генерация радикалов обусловлена взаимодействием железа с пероксидом водорода.

Рис. 1. Кинетика генерации продукта окисления (λmax = 418 нм) 0,07 мМ оФДАпод действием: 1 — МНЧ 0,037 мг/мл + 9,8 мМ Н2О2 (базовая линия от МНЧ);2 — 3,6*10–8 мМ HRP + 0,036 мМ Н2О2; 3 — 0,07 мМ FeSO4.7H2O + 0,84 мМ Н2О2

220pаздел 2

Рис. 2. Спектры УФ-/видимой области систем, содержащих:1 — МНЧ 0,012 мг/мл; 2, 3 — МНЧ 0,012 мг/мл + 0,25 мМ ТМБ + 210 мМ H2O2
до (2) и после (3) добавления стоп-реагента (1 н H2SO4)

Рис. 3. Зависимость оптической плотности
(λmax = 418 нм для оФДА, λmax = 450 нм для ТМБ) от концентрации МНЧв системах: (а) 0,07 мМ оФДА + 9,8 мМ Н2О2 + МНЧ (базовая линия от МНЧ),(б) МНЧ (1); 0,25 мМ ТМБ + МНЧ +210 мМ H2O2 до (2) и после (3)добавления стоп-реагента (1 н H2SO4)

Генерация продуктов окисления оФДА и ТМБ зависит от концентрацииМНЧ в растворе в диапазоне концентраций МНЧ 0,0025–0,036 мг/мл (дляоФДА) и 0,0037–0,37 мг/мл (для ТМБ) (см. рис. 2). Показано, что данный

Биофизика

221

эффект обусловлен присутствием железа (II) на поверхности МНЧ (в отсутствие железа (II) на поверхности МНЧ окисленный оФДА не генерируется).
Для ТМБ отмечено, что системы, содержащие стоп-реагент (1 н H2SO4), демонстрируют более значительный рост по сравнению с системами, в которые стоп-реагент не был добавлен.
Также исследовано влияние белка на генерацию окисленного оФДА поддействием МНЧ и Н2О2. В присутствии человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) отмечено снижение образования окисленного оФДА, вероятно, обусловленное снижением процесса генерации радикалов на поверхности МНЧ вследствие образования белкового слоя на поверхности МНЧ(рис. 3).

pаздел 2222СТРУКТУРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЕРЕДАЧИ СИГНАЛА
БАКТЕРИАЛЬНОЙ СЕНСОРНОЙ ГИСТИДИН-КИНАЗОЙ *STRUCTURAL STUDIES OF SIGNAL TRANSDUCTION
BY A BACTERIAL SENSOR HISTIDINE KINASE
И. Ю. Гущин, А. А. Ремеева, И. М. Гончаров, В. В. Назаренко, Ю. Л. Рыжиков
Московский физико-технический институт
I. Yu. Gushchin, A. A. Remeeva, I. M. Goncharov,
V. V. Nazarenko, Yu. L. Ryzhykov
Moscow Institute of Physics and Technology
E-mail: ivan.gushchin@phystech.eduАннотацияДля получения информации об окружающей среде большинство бактерий использует трансмембранные белки-сенсоры. Примером такого сенсора является
реагирующая на нитраты и нитриты гистидин-киназа NarQ из кишечной палочки.
Ранее нами были получены кристаллографические структуры фрагментов NarQв различных состояниях. В данной работе представлена информация об очистке
полноразмерной NarQ, а также восстановлении ее атомарной структуры при помощи методов молекулярного моделирования и малоуглового рентгеновского рассеяния.

Abstract
In order to get information about their environment, most of bacteria utilize transmembrane sensor proteins. An exemplary sensor is nitrate- and nitrite-responsive histidine
kinase NarQ from Escherichia coli. Previously, we determined crystallographic structuresof fragments of NarQ in different conformations. In this work, we present the data about
purification of full length NarQ and its atomistic structure obtained using molecular modeling and small angle X-ray scattering.

Многие бактерии и другие микроорганизмы живут в быстро меняющихся условиях окружающей среды. Для реакции на изменения в большинстве
© И. Ю. Гущин, А. А. Ремеева, И. М. Гончаров, В. В. Назаренко, Ю. Л. Рыжиков, 2020*Исследования выполнены при поддержке Российского научного фонда (РНФ),проект №18-74-10053.

Биофизика

223

случаев они используют трансмембранные белки-сенсоры, детектирующие
события вне клетки и посредством структурных перестроений передающиеэту информацию внутрь клетки [1]. Несмотря на важность сигнальных систем для жизнедеятельности бактерий, а также их роль во многих бактериальных заражениях, механизмы работы трансмембранных сенсоров досих пор не до конца изучены. Так, атомарная структура трансмембранного
сегмента известна лишь для нескольких белков, тогда как каждый вид бактерий насчитывает десятки сенсоров. Более того, ни для одного из трансмембранных белков пока не получена полноразмерная структура высокого
разрешения. Причиной этого являются сложности в работе с мембранными
белками, а также общая динамичность как самих сигнальных белков, таки их комплексов с белками-партнерами.
Одним из наиболее хорошо изученных бактериальных сенсоров является реагирующая на нитраты и нитриты гистидин-киназа NarQ из кишечной
палочки. NarQ состоит из семи структурных доменов: периплазматического
сенсорного домена, трансмембранного домена и внутриклеточных доменовHAMP, S-helix, GAF-like, DHp и CA (каталитический домен). Ранее намибыли получены структуры фрагментов NarQ, содержащих три первых
домена — как в присутствии природного лиганда, аниона NO3–, так и в егоотсутствие [2–4]. На основе данных структур был расшифрован механизм
передачи информации о связывании лиганда сенсорным доменом внутрь
клетки посредством поршнеобразных движений составляющих трансмембранный домен α-спиралей относительно друг друга.
Тем не менее для полного понимания механизма передачи сигнала гистидин-киназами вообще и в частности сенсором NarQ, требуется восстановление структуры полноразмерного белка в активном и неактивном состояниях. Нами была проведена очистка образцов полноразмерной NarQ,солюбилизированной как в детергенте (DDM), так и в сополимерах стиренаи малеиновой кислоты (SMA). Показано, что при помощи обоих подходов
можно получить образцы высокой чистоты, однако для образцов в DDM
наблюдался повышенный протеолиз, а также агрегация. Использование
SMA позволяет сохранить мембраноподобное окружение белка, однако получаемые частицы мембраны обладают большой гетерогенностью.
Полученные образцы полноразмерной NarQ были разделены при помощи гель-фильтрационной хроматографии и изучены методом малоуглового
рентгеновского рассеяния. Показано наличие в растворе частиц с радиусами гирации в диапазоне 100–150 Å, а также соответствие кривых рассеяния
модели белка, построенной на основе полученных ранее структур и моделейпо гомологии для тех доменов, структура которых на данный момент не-

224pаздел 2известна. Полученные результаты показывают перспективность использования сополимеров SMA для солюбилизации мембранных белков, а также
сочетания молекулярного моделирования и малоуглового рентгеновского
рассеяния для получения информации о динамичных сигнальных белках.
Литература
1. Gushchin I., Gordeliy V. Transmembrane Signal Transduction in Two-Component
Systems: Piston, Scissoring, or Helical Rotation? // BioEssays. 2018. Vol. 40. P. 1700197.
https://doi.org/10.1002/bies.201700197.
2. Gushchin I., Melnikov I., Polovinkin V. et al. Mechanism of transmembrane signaling
by sensor histidine kinases // Science. 2017. Vol. 356 P. eaah6345. https://doi.org/10.1126/
science.aah6345.
3. Gushchin I., Melnikov I., Polovinkin V. et al. Crystal Structure of a Proteolytic
Fragment of the Sensor Histidine Kinase NarQ // Crystals. 2020. Vol. 10. P. 149. https://doi.
org/10.3390/cryst10030149.
4. Gushchin I., Orekhov P., Melnikov I. et al. Sensor Histidine Kinase NarQ Activates
via Helical Rotation, Diagonal Scissoring, and Eventually Piston-Like Shifts // International
Journal of Molecular Sciences. 2020. Vol. 21. P.3110. https://doi.org/10.3390/ijms21093110.

Биофизика

225

ПРОБЛЕМЫ СРАВНЕНИЯ СИСТЕМ
ЭЛЕКТРООКУЛОГРАФИИ И ВИДЕООКУЛОГРАФИИПРИ ПРОВЕДЕНИИ ТЕСТА ИМПУЛЬСА ГОЛОВЫ
COMPATIBILITY PROBLEMS OF ELECTROOCULOGRAPHY
AND VIDEOOCUOGRAPHY SYSTEMS DURING A HEAD IMPULSE TEST
В. А. Зайцев, М. О. Плешков
Томский государственный университет
V. A. Zaycev, M. O. Pleshkov
Tomsk State University
E-mail: vasilysushi@gmail.com
АннотацияНа сегодняшний день самыми распространенными методами детектирования
движения глаз являются видеоокулография (ВОГ) и электроокулография (ЭОГ).
В рамках данной работы был проведен тест импульса головы с помощью обеих методик и выявлены проблемы совместимости данных систем.

Abstract
The most common eye-tracking methods are video-oculography (VOG) electrooculography (EOG) nowadays. In this study, the head-impulse test was performed using VOG and
ENG methods both and then compatibility problems of these systems were determined.

Вестибулярная система играет ключевую роль в ориентации организмав пространстве, поддержке равновесия и стабилизации взгляда во время
движения.
Тест импульса головы — один из общепринятых методов диагностики
вестибулярного аппарата. Во время теста происходит быстрый поворот головы небольшой амплитуды, что в свою очередь вызывает вестибулоокулярный рефлекс — движение глаз в сторону, противоположную движению
головы. Вестибулярная функция оценивается на основании характера движения глаз относительно движения головы.
© В. А. Зайцев, М. О. Плешков, 2020

226pаздел 2Существует ряд методов отслеживания и записи движения глаз, среди
которых наиболее простыми и как следствие распространенными являются
видеоокулография (ВОГ) и электроокулография (ЭОГ). Оборудование дляВОГ представляет собой очки с камерой, которая определяет ориентацию
оптической оси глазного яблока в пространстве, а также детектирует угловую скорость головы при помощи встроенных гироскопов. Суть метода ЭОГзаключается в снятии корнео-ретинального потенциала глаза, изменяющего
свою ориентацию в пространстве при повороте. Для этого на лицо пациента
крепится до восьми электродов: справа и слева от глаза (для детектирования
горизонтального движения) и сверху и снизу (для детектирования вертикального движения). В предыдущих наших работах была показана принципиальная возможность применения ЭОГ для проведения теста импульса головы.
Однако на данный момент нет информации о надежности результатов,полученных при помощи данной методики.
В настоящей работе было проведено сравнение ЭОГ и ВОГ путем одновременной записи движения глаз обоими методами во время проведения теста импульса головы в горизонтальной плоскости. Запись сигналов осуществлялась устройствами MPAQ (Maastricht, the Netherlands) и ICS Impulse (GNOptometrics, Taastrup, Denmark), представляющих методы ЭОГ и ВОГ соответственно. На лицо добровольца были прикреплены электроды ЭОГ слеваи справа для каждого глаза, а поверх электродов были надеты очки ВОГ. Обесистемы калибровались по трем точкам, расположенным в линию на расстоянии 7,5° друг от друга. Обработку данных производили в пакете Matlab r2014b.
После предобработки (удаление шумов, передискретизация) сигналы скорости глаз обеих систем и скорости головы были выровнены по времени с использованием кросс-корреляции. Из имеющихся сигналов были получены
пиковые скорости глаз и головы для каждого проведенного импульса головы.
Далее было проведено сравнение систем по следующим показателям: пиковая скорость глаз, отношение пиковых скоростей глаз и головы, а также
форма сигналов.
В результате исследований были выявлены такие проблемы, как несоответствие формы сигналов различных систем и асимметрия влево, что наданный момент не позволяет сделать вывод о достоверности сигнала ЭОГдля расчета ключевых параметров теста импульса головы.
Обозначенные проблемы связаны, прежде всего, с различием в физических принципах, на которых основана запись сигналов методами ЭОГ и ВОГ.
В дальнейшем для верификации полученных сигналов необходимо сравнение методов ЭОГ и ВОГ с «золотым стандартом», так называемым методом Search Coil Technique.

Биофизика

227

ПОИСК НОВОГО ТИПА ПРОСТРАНСТВЕННОЙ ОРГАНИЗАЦИИ
НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В ГЕНОМЕ ЧЕЛОВЕКА *SEARCH FOR A NEW TYPE OF SPATIAL ORGANISATIONOF NUCLEIC ACIDS IN HUMAN GENOME
А. А. Замосковцева 1,2, А. А. Ломзов 1,2, М. Р. Кабилов 1, Д. В. Пышный 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
A. A. Zamoskovtseva 1,2, A. A. Lomzov 1,2, M. R. Kabilov 1, D. V. Pyshnyi 1
1

ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University

2

E-mail: zamosk_n@mail.ruАннотация
Обнаружен новый тип пространственной организации нуклеиновых кислот, названный псевдоузлом TW-типа. В данной работе разработан алгоритм биоинформатического анализа нуклеотидных последовательностей генома человека, которые
потенциально могут образовывать такие структуры, а также проанализирована
принадлежность найденных участков генам, интронам и экзонам.

Abstract
A new type of spatial organization of nucleic acids, called the TW-type pseudoknot,
was found. In this work, we developed an algorithm for bioinformatic analysis of the human genome that can potentially form this structure type. We analysed the localization of
the sequences to genes, introns or exons.

Недавно в ИХБФМ СО РАН был обнаружен новый тип пространственной организации нуклеиновых кислот. Этот самоограниченный комплекс,содержащий два двуцепочечных фрагмента и одноцепочечные петли между
ними, был назван псевдоузлом TW-типа. Цель работы — определить воз© А. А. Замосковцева, А. А. Ломзов, М. Р. Кабилов, Д. В. Пышный, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ (20-04-00719) и в рамках государственного задания № А-0309-2016-0004.

228pаздел 2можность реализации псевдоузлов TW-типа цепочками ДНК живых системи изучить их свойства.
Для этого мы предложили граничные условия на размеры нуклеотидных
последовательностей, необходимые для образования псевдоузлов TW-типа,такие как ограничение длин отдельных блоков. С учетом сформулированных условий разработан алгоритм биоинформатического поиска последовательностей, которые потенциально могут образовывать псевдоузел TW-типа. На его основе был написан скрипт на языке Python, который мы применили для анализа генома человека. Рассмотрены и обнаружены структурыс двуцепочечными блоками длиной от 5 до 20 пар оснований. Возможность
формирования псевдоузлов TW-типа обнаруженными последовательностями проверена с использованием программного пакета RNAstructure[1]. Для создания модельной системы выбрана наиболее представленная
структура, которая встречается более 200 раз в нашей выборке и равномерно распределена по всем хромосомам. Образование псевдоузлов TW-типаодной цепью ДНК было подтверждено методами термической денатурациис оптической регистрацией сигнала, гель-электрофореза и атомно-силовой
микроскопии. Анализ биологической роли таких структур в геноме человека был проведен с помощью BLAST [2] и BEDTools. [3] Проанализирована
принадлежность полученных последовательностей генам, интронам илиэкзонам. Начаты экспериментальные исследования физико-химическихи молекулярно-биологических свойств выбранных нуклеотидных последовательностей.
Литература
1. Reuter J. S., Mathews D. H. RNAstructure: software for RNA secondary structure
prediction and analysis // BMC Bioinformatics. 2010. Vol. 11. P. 129.
2. Altschul S. F., Gish W., Miller W. et al. Basic local alignment search tool // J. Mol. Biol.
1990. Vol. 215(3). P. 403–410. doi:10.1016/S0022-2836(05)80360-2
3. Aaron R. Qu., Ira M. H. BEDTools: a flexible suite of utilities for comparing genomic
features // Bioinformatics. 2010. Vol. 26, Iss. 6. P. 841–842.

Биофизика

229

СРАВНЕНИЕ И АНАЛИЗ РАЗЛИЧИЙ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
МАГНИТНЫХ НАОЧАСТИЦ IN VITROCOMPARISON AND ANALYSIS OF DIFFERENCES IN BIOLOGICALPROPERTIES OF MAGNETIC NANOPARTICLES IN VITRO
А. Р. Ильясов, Т. Р. Низамов
Национальный исследовательский технологический университет
«МИСиС», Москва
А. R. Iliasov, T. R. Nizamov
National University of Science and Technology MISIS, Moscow
E-mail: ilyasov.1997@inbox.ru, nizamov.timur@gmail.com
АннотацияВ ходе работ по исследованию воздействия наночастиц различного строения наопухолевые клетки in vitro в низкочастотном магнитном поле мы обнаружили интересное явление: два типа наночастиц, очень близких с точки зрения физико-химических свойств, существенно отличались влиянием на жизнеспособность клеток.
По результатам серии проведенных экспериментов и анализа научных публикаций
было предложено объяснение обнаруженному явлению, а именно: гибель клетокпри их инкубации с наночастицами в переменном низкочастотном магнитном полезависит от количества частиц и степени их агрегации внутри везикул клеток.

Abstract
We carried out experiments to study an effect of different magnetic nanoparticles ina low-frequency magnetic field on tumor cells in vitro and discovered an interesting phenomenon: two types of nanoparticles having similar physicochemical properties significantly differed in their effect on cell viability. Based on experiments results and scientificpublications analysis, a phenomenon explanation was proposed, namely, whether cells dieor not when they are incubated with nanoparticles in an alternating low-frequency magnetic field depends how closely nanoparticles aggregate in vesicles inside cells.

В лаборатории были получены наночастицы типа ядро-оболочка с диаметром магнитного ядра 10 нм из магнетита (Fe3O4). После этого одна группа наночастиц была дополнительно покрыта оболочкой из диоксида крем© А. Р. Ильясов, Т. Р. Низамов, 2020

230pаздел 2

ния (SiO2), а другая нет. Для обеспечения стабильности в водных растворахобе группы наночастиц были покрыты ПАВ полиэтиленгликолем (ПЭГ).
Тестом на цитотоксичность полученных образцов служил стандартный
спектрофотометрический MTS-метод. На первый день клетки культуры
PC3 высаживались в 96-луночный планшет в концентрации 10 тыс./лунка.
На второй день в лунки добавлялись наночастицы в концентрации 150 мкг/мл. Спустя 24 часа инкубации наночастиц с клетками, планшеты былипомещены в низкочастотное переменное магнитное поле с амплитудой
100 мТл и частотой 180 Гц. На 4-й день эксперимента в лунки закапывался MTS-краситель. Полученные результаты демонстрировали отсутствие
влияния наночастиц без оболочки из диоксида кремния в низкочастотном
магнитном поле на выживаемость клеток. В то время как выживаемость
клеток, к которым добавляли наночастицы с SiO2 оболочкой, значительно
снижалась относительно контроля (лунки с клетками, к которым не добавляли никаких наночастиц), достигая 35 %.
Был проведен обширный обзор научных публикаций на данную тему,по результатам которого выдвинута гипотеза, потенциально объясняющая
наблюдаемый эффект. Для ее подтверждения приготовили блоки из эпоксидной смолы с клетками, инкубированными с наночастицами. Срезы данных блоков изучили методом просвечивающей электронной микроскопии(ПЭМ). Выяснилось, что частицы без жесткой оболочки из оксида кремнияв везикулах клеток агрегировали значительно более плотно. Расчет в компьютерной модели показал, что более плотная агрегация наночастиц способствует уменьшению кинетической энергии агрегатов в условиях воздействия магнитного поля. То есть частицы с оболочкой из оксида кремния
сильнее воздействовали на клетки вследствие их менее плотной агрегации.
Таким образом, в работе было установлено, что наночастицы, имеющие
очень схожие магнитные свойства, могут проявлять различные биологические свойства в магнитном поле. Было предложено объяснение наблюдаемого эффекта.

Биофизика

231ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ УДАРНЫХ ВОЛН НА МИКРООРГАНИЗМЫВ РАСТВОРАХ С СЕНСИБИЛИЗАТОРАМИ *SHOCK WAVES ACTION TO MICROORGANISMS IN SOLUTIONSWITH SENSITIZERS
А. Т. Ишемгулов, С. Н. Летута, С. Н. Пашкевич
Оренбургский государственный университет
A. T. Ishemgulov, S. N. Letuta, S. N. Pashkevich
Orenburg State University
E-mail: azamat.ischemgulov@yandex.ruАннотация
Изучались особенности инактивации планктонных бактериальных культур лазерными импульсами в растворах с молекулярными сенсибилизаторами (эритрозини родамин). Обсуждается механизм повреждения бактерий, основанный на действии ударных волн, вызванных быстрым локальным нагревом сенсибилизаторовпри импульсном возбуждении.

Abstract
Inactivation of planktonic bacterial cultures by laser pulses in solutions with molecularsensitizers (erythrosine and rhodamine) was studied. Mechanism of bacterial damage isdiscussed based on the action of shock waves caused by the rapid local heating of sensitizers
upon pulsed excitation.

Изучались особенности инактивации планктонных бактериальных
культур E.coli и B.subtilis (концентрация в растворе порядка 10 8 мл–1) короткими лазерными импульсами (15 нс) в растворах с молекулярными
сенсибилизаторами (эритрозин и родамин, концентрация порядка 10–4 М).
В зоне облучения возможны следующие механизмы повреждения бактерий:тепловые (прямая гипертермия), механические (действие ударных волн,генерируемых быстрой тепловой релаксацией сенсибилизаторов) и фотохимические (действие активных форм кислорода). Было установлено, что© А. Т. Ишемгулов, С. Н. Летута, С. Н. Пашкевич, 2020*Исследование поддержано Минобрнауки России, проект № FSGU-2020-0003.

232pаздел 2снижение жизнеспособности бактерий, оцениваемой по КОЕ и микроскопии, наблюдается не только в зоне лазерного облучения, но и на некотором расстоянии от нее (5 и 10 мм). На таком удалении тепловые или фотохимические механизмы эффективно не действуют, поэтому было сделано
предположение, что гибель бактерий возможна в результате механических
повреждений, вызванных ударными волнами. Волны в растворах с сенсибилизаторами были зафиксированы по изменению рассеяния пересекающего
кювету луча He-Ne-лазера. Величина наблюдаемых волн росла с увеличением плотности мощности возбуждения. Механизм генерации таких волнсвязан с поглощением лазерного излучения сенсибилизаторами и переводом энергии в тепло за короткое время (наносекунды), что сопровождается
возникновением и схлопыванием микропузырьков в среде. С ростом энергии возбуждения увеличивается и количество выделяемого тепла. Выживаемость бактерий в зоне непосредственного облучения зависит от многих
параметров (характеристики и тип бактериальной стенки, сенсибилизатора,энергия возбуждения), в то время как вне зоны облучения выживаемость
зависит только от расстояния и энергии возбуждения. Полученные результаты свидетельствуют, что лазерная инактивация бактерий возможна и внезоны непосредственного облучения, и могут быть полезны при разработке
новых стратегий борьбы с микроорганизмами.

Биофизика

233ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ТРИФЕНИЛФОСФОНИЕВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ
САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ С ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМИ ЗОНДАМИ *INTERACTION OF TRIPHENYLPHOSPHONIUM DERIVATIVESOF SALICYLIC ACID WITH FLUORESCENT PROBES
Р.А. Ишкаева, Т. И. Салихова, А. Рагад, О. В. Цепаева, Л. Р. Григорьева,Д. В. Пономарев, А. В. Немтарев, В. Ф. Миронов, Т. И. Абдуллин
Казанский (Приволжский) федеральный университет
R. A. Ishkaeva, T. I. Salikhova, A. Raghad, O. V. Tsepaeva, L. R. Grigor’eva,
D. V. Ponomaryov, A. V. Nemtarev, V. F. Mironov, T. I. Abdullin
Kazan (Volga region) Federal University
E-mail: r.a.ishkaeva@gmail.com
АннотацияВ работе исследовано взаимодействие АФК-чувствительных флуоресцентных
красителей DCF и DCFDA с трифенилфосфониевыми производными (ацетил)салициловой кислоты. Показано, что взаимодействие сопровождается образованием
наноразмерных агрегатов и модулирует флуоресценцию красителя в зависимости отдлины алкильного линкера соединений.

Abstract
In this work, the interaction of DCF and DCFDA, ROS-sensitive fluorescent dyes, withtriphenylphosphonium derivatives of (acetyl)salicylic acid was studied. The interaction wasshown to result in the formation of nanosized aggregates and modulates dye fluorescencedepending on the length of alkyl linker of the compounds.

Модификация биоактивных молекул трифенилфосфониевыми (ТФФ)группами является эффективным подходом к улучшению их физико-химических и фармакокинетических свойств. Объектами настоящего исследова© Р. А. Ишкаева, Т. И. Салихова, А. Рагад, О. В. Цепаева, Л. Р. Григорьева, Д. В. Пономарев, А. В. Немтарев, В. Ф. Миронов, Т. И. Абдуллин, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-34-90139 и в рамках Программы повышения конкурентоспособности КФУ.

234pаздел 2ния явились ТФФ конъюгаты (ацетил)салициловой кислоты с разной длиной алкильного линкера, синтезированные в качестве потенциальных противоопухолевых средств, а также флуоресцентные красители 2’,7’-дихлорфлуоресцеин (ДХФ) и его диацильное производное (ДХФДА), используемыедля детектирования активных форм кислорода. Флуоресценцию красителей индуцировали в реакции фентоновского окисления пероксидом водорода в присутствии хлорида кобальта (II). Было обнаружено, что синтезированные конъюгаты ингибируют окисление/флуоресценцию красителейв диапазоне исследуемых концентраций 1–100 μМ пропорционально длине
алкильного линкера.
Для выяснения механизма ингибирующего эффекта охарактеризовано
взаимодействие ТФФ-конъюгатов с зондами методом динамического рассеяния света. Установлено образование смешанных агрегатов, средний гидродинамический диаметр которых уменьшался приблизительно от 830 до
220 нм с удлинением линкера производных ацетилсалициловой кислоты,наряду с увеличением однородности и положительного дзета-потенциала
(от +6 до +40 мВ). Результаты свидетельствуют о том, что удлинение алкильного линкера способствует образованию комплексов ТФФ-конъюгатовс ДХФДА/ДХФ, что, вероятно, может приводить к ингибированию окисления красителей. В то же время обнаружено, что наиболее липофильные
ТФФ-конъюгаты ингибируют флуоресценцию предварительно окисленных
красителей, по-видимому, вследствие пространственного сближения и самотушения молекул зонда. Сходный ингибирующий эффект ТФФ-конъюгатов наблюдали в отношении клеток млекопитающих, предварительно
окрашенных красителями, что указывает на эффективное проникновение
конъюгатов и их взаимодействие с красителем внутри клеток. Дополнительно установлено, что ТФФ-конъюгаты в определенных условиях образуют наноразмерные ассоциаты с доксорубицином, что может представлять
интерес для создания противоопухолевых композиций на основе синтезированных соединений.
Литература
1. Tsepaeva O. V.et. al. Synthesis, anticancer and antibacterial activity of betulinic andbetulonic acid C-28 triphenylphosphonium conjugates with variable alkyl linker length //Antiсancer Agents Med Chem. 2020. Vol. 20(3). P. 286–300.
2. Цепаева О. В. и др. Фосфониевые соли на основе салициловой и ацетилсалициловой кислот, обладающие антибактериальной и антиоксидантной активностью.
Пат. 2704025 РФ, заявитель и патентообладатель ФГБУН ФИЦ «КазНЦ РАН»; опубл.: 23.10.2019; Бюл. № 30.

Биофизика

235

ВЛИЯНИЕ ИЗОТОПНОГО D/H-СОСТАВА СРЕДЫ НААКТИВНОСТЬ И СТРУКТУРУ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА *INFLUENCE OF THE D/H ISOTOPIC COMPOSITION OF THE MEDIUM
ON THE ACTIVITY AND STRUCTURE OF HORSERADISH PEROXIDASE
С. В. Козин, А. А. Кравцов
Южный научный центр РАН, Ростов-на-Дону
S. V. Kozin, A. A. Kravtsov
Federal Research Centre The Southern Scientific Centre of the RAS, Rostov-on-Don
E-mail: kozinsv85@mail.ruАннотация
Снижение содержания дейтерия в реакционной среде приводило к уменьшению
активности пероксидазной реакции окисления о-дианизидина пероксидом водорода и локальным изменениям в структуре фермента.

Abstract
A decrease in the deuterium content in the reaction medium led to a decrease in theactivity of the peroxidase reaction of the oxidation of o-dianisidine with hydrogen peroxide
and to local changes in the structure of the enzyme.

В природе содержание дейтерия в воде колеблется в разных регионах
планеты, но в среднем находится на уровне около 150 ppm [1]. Экспериментально установлено, что даже относительно небольшое изменение изотопного состава воды существенным образом сказывается на метаболизмекак микроорганизмов [2], так и высших растений и животных [3]. Целью
работы было выяснение механизмов влияния низких концентраций дейтерия (50 ppm) на функциональные особенности пероксидазы хрена (ПХ)и структуру бычьего сывороточного альбумина (БСА).
При исследовании ферментативной реакции в модельной системе
«о-дианизидин — ПХ — H2O2» проводили линеаризацию в двойных об© С. В. Козин, А. А. Кравцов, 2020*Исследование выполнено при поддержке РФФИ (проект № 19-44-233005) и государственного задания ЮНЦ РАН (№АААА-А19-119040390083-6).

pаздел 2236ратных координатах Лайнуивера — Берка (рис. 1). Анализ полученной
экспериментальной прямой показал, что максимальная скорость реакции
окисления о-дианизидина пероксидом водорода ПХ была ниже в среде,приготовленной на воде с низким содержанием дейтерия. Константа Михаэлиса, полученная в координатах Лайнуивера — Берка, для ферментативной реакции, протекающей в обедненной дейтерием среде, составила
0,033 ± 0,003 мМ, тогда как в среде с природным содержанием дейтерия Km= 0,026 ± 0,002 мМ.
Основной

V0-1, с/нмоль

Основной
Основной
Основной
Основной

-31Основной
-11

150 ppm
50 ppm
9

29

49

69

89
[H2O2]-1, ммоль-1

Рис. 1. Зависимость начальной скорости пероксидазного окисления
о-дианизидина от начальной концентрации пероксида водорода в координатах
Лайнуивера — Берка в среде с пониженным содержанием дейтерия (pH = 7,5)Особенности собственной триптофановой и тирозиновой флуоресценции могут быть обусловлены тем, что количество тирозина в белке БСА составляет девятнадцать против семи в молекуле ПХ. При возбуждении светом с длиной волны 280 нм интенсивность флуоресценции БСА была примерно в 2,5 раза выше, чем в ПХ. Для БСА интенсивность флуоресценциипри длине возбуждения 280 и 297 нм практически не отличалась (разницане превышала 5 %). Это может означать, что основной вклад в совместную
флуоресценцию БСА вносят остатки триптофана. В ПХ происходило резкое увеличение интенсивности флуоресценции при 280 нм. Таким образом,основной вклад в совместную флуоресценцию фермента вносят тирозиновые остатки. Максимум испускания для БСА составил 335 нм, а для ПХ —310 нм. Коротковолновый максимум флуоресценции у молекулы ПХ возможно связан с гидрофобным окружением тирозиновых остатков. Средас пониженным содержанием дейтерия не повлияла на положение максиму-Биофизика

237

мов в спектрах опытных белков, но при этом вызвала снижение интенсивности флуоресценции (рис. 2).

Рис. 2. Интенсивность триптофановой и тирозиновой флуоресценции (280 нм),флуоресценции БСА и ПХ в среде с пониженным содержанием дейтерия (50 ppm)

Исследование КД-спектров показало, что форма спектров ПХ и БСА неотличались в обеих средах, таким образом, среда с концентрацией дейтерия
50 ppm не оказала влияния на вторичную структуру обоих белков.
Литература
1. Bykov M. I., Dzhimak S. S., Basov A. A. et al. Voprosy Pitaniia. 2015. Vol. 84(4).
P. 89–96.
2. Киркина А. А., Лобышев В. И., Лопина О. Д. и др. Биофизика. 2014. Vol. 59(2).
P. 399–407.
3. Lobyshev V. I., Kalinichenko L. P. Isotopic effects of D2O in biological systems. M. :Nauka, 1978.

pаздел 2238ВЛИЯНИЕ ЭМОДИНА НА РЕАКЦИИ
ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ
INFLUENCE OF EMODIN ON LIPID PEROXIDATION
П. А. Кононова 1,2, О. Ю. Селютина 1,3, Н. Э. Поляков 1,3
1Институт химической кинетики и горения
им. В. В. Воеводского СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН, Новосибирск
P. A. Kononova 1,2, O. Yu. Selyutina1,3, N. E. Polyakov 1,3
1

Voevodsky Institute of Chemical Kinetics and Combustion SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
ISSCM SB RAS, Novosibirsk
E-mail: kononova_polina@bk.ruАннотация

Эмодин — хинон-хелатор растительного происхождения, способный влиять наокисление липидов. Эксперименты показали, что эмодин имеет прооксидантную
активность в реакции перекисного окисления линолевой кислоты в присутствии
ионов железа. В экспериментах с модельными мембранами POPC обнаружено, чтоу эмодина существенно изменяется pKa при взаимодействии с линолевой кислотой
внутри бислоя.

Abstract
Emodin is a plant-derived quinone chelator capable of affecting lipid oxidation. Experiments have shown that emodin has pro-oxidant activity in the reaction of linoleic acidperoxidation in the presence of iron ions. In experiments with model membranes POPC, it
was found that emodin significantly changes pKa when it interacts with linoleic acid inside
the bilayer.

Эмодин (6-метил-1,3,8-тригидроксиантрахинон) — хелатор растительного происхождения [1]. Эмодин обладает антипролиферативной активностью, блокирует репликацию ДНК, а также усиливает генерацию свободных
© П. А. Кононова, О. Ю. Селютина, Н. Э. Поляков, 2020Биофизика

239

радикалов. Хотя основной механизм противоракового действия эмодина —связывание с ДНК, однако существует дополнительный механизм действия
хинонов-хелаторов, связанный с генерацией свободных радикалов, которые
могут повреждать клеточные мембраны. Данная работа посвящена исследованию этого дополнительного фактора, связанного с влиянием хинона-хелатора на окисление ненасыщенных липидов, составляющих клеточную
мембрану. Изучалось влияние эмодина на перекисное окисление линолевой
кислоты в присутствии ионов железа в избытке молекулярного кислородас помощью ЯМР-спектроскопии. Анализировались продукты и скорости
реакций. Также изучалось взаимодействие эмодина с модельными мембранами POPC (1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин) методами
оптической и ЯМР-спектроскопии и методом молекулярной динамики [2].
Основные продукты реакции перекисного окисления в мицеллах линолевой кислоты — продукты полимеризации, в небольшом количестве присутствуют гидропероксиды и альдегиды. Присутствие эмодина приводитк появлению дополнительных продуктов. Также в присутствии эмодина
возрастает наблюдаемая константа скорости реакции.
Таким образом, исследование показало, что в данных условиях эмодин
демонстрирует про-оксидантную активность. В экспериментах с модельными мембранами POPC обнаружено, что эмодин взаимодействует с линолевой кислотой внутри бислоя, при этом существенно изменяется pKaэмодина.
Литература
1. Dong X., Fu J., Yin X. et al. Emodin: A Review of its Pharmacology, Toxicity andPharmacokinetics // Phytother. Res. 2016. Vol. 30. P. 1207–1218. https://doi.org/10.1002/
ptr.5631
2. Selyutina O. Yu., Kononova P. A., Polyakov N. E. Experimental and Theoretical Studyof Emodin Interaction with Phospholipid Bilayer and Linoleic Acid // Applied Magnetic
Resonance. 2020. https://doi.org/10.1007/s00723-020-01233-x

pаздел 2240ОЦЕНКА СИЛ МЕЖМОЛЕКУЛЯРНОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯВ СИСТЕМЕ «БАКТЕРИЯ — АНТИТЕЛО» С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ОПТИЧЕСКОЙ ЛОВУШКИ
FORCE SPECTROSCOPY OF INTERACTIONS IN THE MODEL SYSTEM“BACTERIA — ANTIBODY” BY OPTICAL TRAPPING
И. В. Конышев, В. С. Белозёров, Л. Г. Дудина
Вятский государственный университет, Киров
Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, Сыктывкар
I. V. Konyshev, V. S. Belozyoro, L. G. Dudina
Vyatka State University, Kirov
Institute of Physiology of the Komi Scientific Centerof the Ural Branch of the RAS, Syktyvkar
E-mail: konyshevil@yandex.ruАннотацияС помощью лазерной ловушки определена сила межмолекулярного связывания
клеток бактерий рода Yersinia двух видов с моноклональными антителами разной
специфичности. Установлена значимость в оцениваемом взаимодействии О-боковых цепей липополисахарида Y. pseudotuberculosis.

Abstract
An interaction force between Yersinia sp. cells (two species) and complementary or heterologous monoclonal antibodies has been evaluated by optical trapping. The significanceof O-side chains of Y. pseudotuberculosis LPS in this interaction has been confirmed.

Yersinia pseudotuberculosis — грамотрицательная бактерия, вызывающая
системное заболевание (псевдотуберкулез), протекающее в форме острого
гастроэнтерита с поражением регионарных компонентов лимфатической
системы. Основным структурным компонентом наружной мембраны данного возбудителя является липополисахарид (ЛПС) — один из ключевых
факторов вирулентности, опосредующих начальное взаимодействие бактерий с клетками организма хозяина и дальнейшее развитие патогенеза. В по© И. В. Конышев, В. С. Белозёров, Л. Г. Дудина, 2020Биофизика

241следние годы для изучения механизмов взаимодействия «бактерия — эукариотическая клетка» применяются современные биофизические подходы,одним из которых является метод лазерной ловушки.
Нами был разработан метод определения сил взаимодействия между
бактериальными клетками и стеклянной подложкой, функционализированной моноклональными антителами (МКАт) двух типов: МКАт2, специфически взаимодействующими с О-антигеном ЛПС Y. pseudotuberculosis,и МКАт7, связывающимися с белковым эпитопом наружной мембраны иерсиний. В качестве отрицательного контроля использовали стекла, обработанные бычьим сывороточным альбумином (БСА). Факт сенсибилизации
стекла использованными препаратами МКАт был подтвержден иммунохимически. Клетки Y. pseudotuberculosis O1b, несущие О-антиген, и клетки Y.
pestis EV, на поверхности которых он отсутствует, сближали с подложкамис помощью аксиальной лазерной ловушки, после чего оценивали силу разрыва связи в каждой системе.
Среднее значение сил отрыва клеток Y. pseudotuberculosis О1b от стекла,функционализированного препаратом МКАт2 (5,86 ± 3,31 пН), оказалось существенно (р > 0,99) выше по сравнению со стеклами, покрытыми
МКАт7 (2,00 ± 1,77 пН) и БСА (1,97 ± 1,33 пН).
Иная картина наблюдалась при сравнении взаимодействующих объектов на основе клеток Y. pestis EV: сила отрыва клеток от стеклянной подложки, функционализированной МКАт7 (9,60 ± 4,86 пН), напротив, оказалась
достоверно (р > 0,99) выше сравнительно с иммобилизованными на стекле
МКАт2 (4,20 ± 2,93 пН) и BSA (4,62 ± 5,16 пН).
Совокупность представленных данных однозначно указывает на наличие выраженной специфической составляющей в исследуемых взаимодействиях. Так, клетки психрофильного возбудителя Y. pseudotuberculosis O1b
при низких температурах культивирования продуцируют полную форму
ЛПС, включающего О-боковые цепи, и поэтому достаточно прочно связываются с МКАт2. Клетки Y. pestis EV , лишенные О-боковых цепей, несут
белковый эпитоп, специфически распознаваемый антителами МКАт7.

pаздел 2242ИЗУЧЕНИЕ СКОРОСТИ СОЗРЕВАНИЯ МИНЕРАЛЬНОГО
КОМПОНЕНТА ЭМАЛИ ЗУБОВ ЧЕЛОВЕКА ПРИ НАРУШЕННОМ
АМЕЛОГЕНЕЗЕ МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ *STUDYING THE RATE OF MATURING OF THE MINERAL COMPONENTOF HUMAN TEETH ENAMEL IN DISTURBED AMELOGENESISBY ATOMIC POWER MICROSCOPY
А. С. Коршунов 1, В. П. Конев 1, В. Д. Вагнер 2, К. Н. Курятников 1
12Омский государственный медицинский университет
Национальный медицинский исследовательский центр стоматологиии челюстно-лицевой хирургии, Москва
A. S. Korshunov 1, V. P. Konev 1, V. D. Vagner 2, K. N. Kuryatnikov 1
1

Omsk State Medical University
2
CRIDMFS, Moscow
E-mail: Andrey_K_180588@mail.ruАннотация
Установлено, что одинаковые по скорости темпы роста в длину и ширину эмалевых призм при нарушенном амелогенезе до 30 лет приводят к неправильным ихпропорциям и ухудшают качество эмали.

Abstract
It has been established that the same growth rates in length and width of enamel prisms
with impaired amelogenesis up to 30 years, lead to their incorrect proportions and worsen
the quality of enamel.

Мутации в генах вызывают нарушение процесса амелогенеза с формированием фенотипов незрелой эмали зубов человека [1, 2].

© А. С. Коршунов, В. П. Конев, В. Д. Вагнер, К. Н. Курятников, 2020*Работа выполнена в рамках государственного задания АААА-А18118011190073-0 и при поддержке фонда «УМНИК» (договор № 15815ГУ/2020).

Биофизика

243Цель исследования
Изучить размеры эмалевых призм в различные периоды постнатального
онтогенеза при нарушенном амелогенезе методом атомно-силовой микроскопии.
Материал и методы
Анализировали длину и ширину эмалевых призм в программе Image
Analysis NT-VDT при нарушенном амелогенезе (НА) по методике ОмГМУ
(Патент РФ № 2458675 от 20.08.2012, патент РФ № 2702903 от 14.10.2019).
РезультатыПри НА самый быстрый темп роста эмалевых призм наблюдается в направлении, увеличивающем длину призмы (15–20 лет — 5,04 ± 0,21 нм.,21–30 лет — 6,23 ± 0,14 нм.), однако темп роста на плоскости, увеличивающий ширину призмы (15–20 лет — 4,32 ± 0,12 нм., 21–30 лет — 4,45 ±± 0,21 нм., 31–40 лет — 4,86 ± 0,25 нм., 41–50 лет — 5,22 ± 0,11 нм.,51–60 лет — 5,21 ± 0,27 нм.), является очень схожим с темпом роста длины,что приводит к неправильному изменению формы эмалевых призм.
ВыводыПри нарушенном амелогенезе в процессе созревания эмалевые призмы
приобретают неправильную форму.
Литература
1. Конев В. П., Вагнер В. Д., Коршунов А. С., Серов Д. О. Особенности созревания
минерального компонента эмали ретинированных зубов при дисплазии соединительной ткани // Институт стоматологии. 2019. Т. 84, № 3. С.102–103.
2. Varki R., Sadowski S., Pfendner E., Uitto J. Epidermolysis bullosa // I. Molecular
genetics of the junctional and hemidesmosomal variants. 2010 Р. 31–32.

pаздел 2244ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ
ЛИПИДОВ С УЧАСТИЕМ
ХЕЛАТНЫХ КОМПЛЕКСОВ ТИОСЕМИКАРБАЗОНОВ *THE STUDY OF LIPID PEROXIDATION PROCESSES INVOLVINGCHELATE COMPLEXES OF THIOSEMICARBAZONES
В. Е. Кошман 1,2, О. Ю. Селютина 1,3, В. А. Тимошников 1, Н. Э. Поляков 1,3
1Институт химической кинетики и горения
им. В. В. Воеводского СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН, Россия
V. E. Koshman1,2, O. Yu. Selyutina1,3, V. A. Timoshnikov 1, N. E. Polyakov 1,3
1

Voevodsky Institute of Chemical Kinetics and Combustion SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
ISSCM SB RAS, Novosibirsk
E-mail: kosmanvova2010@mail.ruАннотация

Тиосемикарбазоны (ТСК) вызывают повышенный интерес ученых из различных областей науки благодаря широкому спектру их химической и биологической
активности. Их противораковую активность всегда связывали со способностью
ингибировать рибонуклеотид редуктазу. Однако последние исследования указывают на большую роль окислительного стресса в противоопухлевой активности
ТСК. В данной работе на примере тиосемикарбазона Dp44mT изучались процессы
перекисного окисления липидов с участием хелатных комплексов с ионами железаи меди. Взаимодействие хелатных комплексов Dp44mT с липидным бислоем и ихроль в реакции перекисного окисления липидов исследовалось на модельных системах методами импульсного ЯМР.

Abstract
Thiosemicarbazones (TSC) are of great interest to scientists from various fields of science, due to the wide range of their chemical and biological activity. Their anticancer activity has always been associated with the ability to inhibit ribonucleotide reductase. However,© В. Е. Кошман, О. Ю. Селютина, В. А. Тимошников, Н. Э. Поляков, 2020*Работа выполнена при поддержке РФФИ, грант № 20-33-70019.

Биофизика

245

recent studies indicate a major role of oxidative stress in the antitumor activity of TSC. In
this work, using the example of thiosemicarbazone Dp44mT, the processes of lipid peroxidation with the participation of chelate complexes with iron and copper ions were studied.
The interaction of Dp44mT chelate complexes with the lipid bilayer and their role in thereaction of lipid peroxidation was studied on model systems by pulsed NMR methods.

Хелатные комплексы тиосемикарбазонов перспективны как потенциальные противораковые агенты, активность которых связана со способностью ингибировать рибонуклеотидредуктазу. Однако недавние исследования указывают на важную роль окислительного стресса в противоопухолевой активности тиосемикарбазонов [1]. Этот аспект их биологической
активности в настоящее время очень мало изучен и представляет большой
интерес для медицинской химии.
В данной работе изучались процессы перекисного окисления липидовс участием хелатных комплексов тиосемикарбазона с ионами металлов.
В качестве хелатора выступает соединение Dp44mT (см. рисунок).

Структура тиосемикарбазона Dp44mTПроводились эксперименты в модельных системах (липосомах и бицеллах). Методами ЯМР и оптической спектроскопии изучались окислительно-восстановительные свойства комплексов Dp44mT с железом и медьюв реакции перекисного окисления липидов. Также было изучено взаимодействие комплексов Dp44mT с липидной мембраной.
Литература
1. Richardson D. R., Kalinowski D. S., Richardson V. et al. 2-Acetylpyridine Thiosemicarbazones are Potent Iron Chelators and Antiproliferative Agents: Redox Activity, Iron
Complexation and Characterization of their Antitumor Activity // J. Med. Chem. 2009.
Vol. 52. P. 1459–1470.

pаздел 2246ВЫЯВЛЕНИЕ БЕЛКОВ, АССОЦИИРОВАННЫХ С РАЗВИТИЕМ
КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА НА РАННИХ СТАДИЯХ *REVELATION OF PROTEOMIC INDICATORS FOR COLORECTALCANCER IN INITIAL STAGES OF DEVELOPMENT
К. А. Мальсагова
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии
им. В. Н. Ореховича, Москва
K. A. Malsagova
IBMC, Moscow
E-mail: malsagova.ka@gmail.com
АннотацияНа сегодняшний день колоректальный рак (КР) является наиболее опасной онкопатологией с высоким уровнем инвалидизации и смертности в популяции. Наранних стадиях развития, когда симптомы отсутствуют, но эффективность терапии
высока, КР практически не диагностируется. Поиск надежных белковых маркеровдля ранней диагностики чрезвычайно важная научно-практическая задача. Анализ
посттрансляционных модификаций (ПТМ) белков, сопровождающих развитие онкопатологии, также может значительно повысить качество и уровень диагностики
КР. В данной работе был проведен сравнительный протеомный анализ образцов
плазмы крови, полученных от 41 здорового добровольца и 28 пациентов с КР на разных стадиях развития заболевания. Основной задачей исследования являлось определение изменения содержания белков, возможных модификаций белков, которые
вероятно ассоциированы с развитием КР на ранних стадиях развития.

Abstract
Colorectal cancer (CRC) at a current clinical level is still hardly diagnosed, especially with regard to nascent tumors, which are typically asymptotic. Searching for reliablebiomarkers of early diagnosis is an extremely essential task. Identification of specificpost-translational modifications (PTM) may also significantly improve net benefits and tailor the process of CRC recognition. We examined depleted plasma samples obtained from41 healthy volunteers and 28 patients with CRC at different stages to conduct comparative© К. А. Мальсагова, 2020*Работа была выполнена при поддержке гранта РНФ № 19-14-00298.

Биофизика

247

proteome-scaled analysis. The main goal of the study was to establish a constellation of protein markers in combination with their PTMs and semi-quantitative ratios that may support and realize the distinction of CRC until the disease has a poor clinical manifestation.

По результатам протеомного анализа было определено 119 и 166 белкову пациентов с диагнозом КР I–II и III–IV стадий соответственно. Большая
группа белков (44 белка) отвечает за развитие иммунного ответа, метаболизма липидов и ответа на стресс. Содержание части белков было значимо
(p < 0,01) для I–II стадий КР [1]. Среди белков, специфичных I–II стадии КР,наиболее заметными являлись цитокины (кластерин, C4b-связывающий
белок, гликопротеин CD59 и др.), белки лектинового пути. Наблюдались
значительные изменения уровня содержания в образцах крови белков интер-альфа-трипсина (ITIH1, ITIH2, ITIH3 и ITIH4), что, вероятно, связанос их влиянием на развитие злокачественного процесса. Было обнаружено,что значимо изменяется при КР содержание в крови альфа-1-кислотного
гликопротеина 2, альфа-1B-гликопротеина, гаптоглобина и богатого лейцином альфа-2-гликопротеином, участие которых в развитии онкопатологии
пока не изучено. Кроме того, были выявлены ПТМ белков, которые, согласно литературным данным, связаны с развитием КР, включая фосфорилирование кининогена 1, альфа-2-HS-гликопротеина, ацетилирование витамина
D-связывающего белка и ингибитора протеазы C1 плазмы, которые также
могут участвовать в ответе организма на опухолеобразование [2]. В результате исследования было показано, что вклад цитокинов и белков внеклеточного матрикса является наиболее значимыми факторами в развитии КРна ранних стадиях. Возможно, это обусловлено том, что рост опухоли тесно
связан с хроническим асептическим воспалением, потерей стабильности
внеклеточного матрикса. Белки аполипопротеин E, C1 и B-100 участвуютв процессах репарации ДНК и регуляции пути mTOR и PI3K.
Литература
1. Kopylov A. T. et al. Revelation of Proteomic Indicators for Colorectal Cancer in
Initial Stages of Development // Molecules. 2020. Vol. 25, № 619. P. 1–20.2. Tikhonov D. et
al. Super Secondary Structures of Proteins with Post-Translational Modifications in Colon
Cancer // Molecules. 2020. Vol. 25, № 3144. P. 1–17.

pаздел 2248ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЯ НИФЕДИПИНАС ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТОЙ
THE STUDY OF THE COMPLEXATION OF NIFEDIPINEWITH GLYCYRRHIZIC ACID
А. В. Мастова 1,2, О. Ю. Селютина 1,3, Н. Э. Поляков 1,3
1Институт химической кинетики и горения
им. В. В. Воеводского СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН, Новосибирск
A. V. Mastova 1,2, O. Yu. Selyutina1,3, N. E. Polyakov 1,3
1

Voevodsky Institute of Chemical Kinetics and Combustion SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
ISSCM SB RAS, Novosibirsk
E-mail: mastova-anna99@yandex.ruАннотация

Глицирризиновая кислота (ГК) — тритерпеновый гликозид растительного
происхождения, известный своей высокой и разнообразной биологической активностью (противовоспалительной, противоязвенной, антиаллергической, противовирусной, противоопухолевой и др.). Кроме того, ГК способна образовывать
самоассоциаты и комплексы с лекарственными средствами, что приводит к снижению токсичности и усилению терапевтического действия лекарственных препаратов, что делает ее перспективным агентом для доставки лекарств. В предыдущих
работах на примере комплексообразования ГК с нифедипином и лаппаконитином
было показано значительное увеличение терапевтической активности на моделях
адреналин-индуцированной гипертензии и индуцированной CaCl2 аритмии [1].
В данной работе будет рассмотрено влияние концентрации ГК и рН раствора накомплексообразование с нифедипином.

Abstract
Glycyrrhizic acid (GA) is a plant-derived triterpene glycoside, known for its high anddiverse biological activity (anti-inflammatory, anti-ulcer, anti-allergic, antiviral, antitumor,etc.). In addition, GA is able to form self-associations and complexes with drugs, which© А. В. Мастова, О. Ю. Селютина, Н. Э. Поляков, 2020Биофизика

249

leads to reducing toxicity and increasing of the therapeutic effect of drugs, which makes it
a promising agent for drug delivery. In previous studies, a significant increase in therapeutic
activity was shown on the models of adrenaline-induced hypertension and CaCl2 induced
arrhythmia using the example of GA complexation with nifedipine and lappaconitine [1].
In this study, we will consider the dependence of the concentration of GA and pH of thesolution on complexation with nifedipine.

Глицирризиновая кислота — тритерпеновый гликозид из экстракта
корня солодки. Благодаря широкому спектру билогической активностии способности к самоассоциации и комплексообразованию с различными
гидрофобными молекулами лекарств, ГК является перспективным агентомдля доставки лекарственных препаратов [2]. Известно, что процесс самоассоциации ГК сильно зависит от pH раствора. ГК имеет три кислотных
группы, с константами диссоциации: pKa1 = 3,98, pKa2 = 4,62, pKa3 = 5,17.
При депротонировании существенно изменяется критическая концентрация мицелообразования ГК. Можно предположить, что степень диссоциации ГК будет влиять также и на ее комплексообразование с лекарственными препаратами.
Данное предположение было проверено методами оптическойи ЯМР-спектроскопии. Были изучены образцы с различными значениями
pH раствора: 3,8; 4,2; 5,0; 6,1, что соответствует протонированной, частично
депротонированной и полностью депротонированной форме ГК. Были получены зависимости оптической плотности растворов нифедипина от концентрации ГК и проанализированны их ЯМР-спектры. Также методом ЯМРбыли измерены коэффициенты диффузии для комплексов нифедипина с ГКпри этих значениях pH. Было обнаружено, что происходит нелинейное изменение коэффициента диффузии комплексов в зависимости от pH, чтоможет означать изменение структуры комплексов при частичной и полной
диссоциации ГК.
Литература
1. Polyakov N. E., Khan V. K., Taraban M. B., Leshina T. V. Complex of Calcium
Receptor Blocker Nifedipine with Glycyrrhizic Acid // J. Phys. Chem. B. 2008. Vol. 112.
P. 4435–4440.
2. Selyutina O. Yu., Polyakov N. E. Glycyrrhizic acid as a multifunctional drug carrier — from physicochemical properties to biomedical applications: a modern insight on theancient drug // Int. J. Pharm. 2019. Vol. 559. P. 271–279.

pаздел 2250КОНТРАСТНЫЕ АГЕНТЫ НА ОСНОВЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО
СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА И НИТРОКСИДОВ ДЛЯМАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ *CONJUGATES OF NITROXIDES AND HUMAN SERUM ALBUMIN
AS CONTRAST AGENTS FOR MAGNETIC RESONANCE IMAGING
Д. Е. Митин, Д. А. Суворов, К. А. Клочихин, А. С. Чубаров
Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
Новосибирский государственный университет
D. E. Mitin, D. A. Suvorov, K. A. Klochihin, A. S. Chubarov
ICBFM SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University
E-mail: chubarovalesha@mail.ruАннотация
Работа направлена на получение и исследование свойств конъюгатов человеческого сывороточного альбумина с новыми стерически затрудненными нитроксильными радикалами. Проведен ряд экспериментов по оценке
возможности использования полученных конъюгатов в качестве контрастных агентов для МРТ.
Abstract
The work is aimed at obtaining and studying the properties of Human serum albumin
conjugates with new sterically-hindered nitroxides. A number of experiments to evaluate
the possibility of using the conjugates as contrast agents for MRI were done.

Among the many imaging modalities for medical diagnostics, magnetic resonance imaging (MRI) is one of the most useful thanks to its ability to noninvasively generate three-dimensional detailed anatomical images with high spatial reso© Д. Е. Митин, Д. А. Суворов, К. А. Клочихин, А. С. Чубаров, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 19-13-00235 и совместной программы «Михаил Ломоносов» Минобрнауки РФ и DAAD.

Биофизика

251

lution. Current clinical MRI methods depict the spatial distribution and chemical
environment of water protons. To enhance the differences between native water1
H and a region of interests, contrast agents are often employed. Despite theirunquestionable utility, metal-based contrast agents may present toxicity concerns.
Thus, there is extensive interest in the development of “metal-free” MRI contrast
agents that make use of entirely organic-based components. Based on the previous
work and experience, in this proposal we would like to produce MRI probes using
another non-metal MRI contrast agents — nitroxide-based organic radicals.
Human serum albumin (HSA) could be used as an attractive candidate for thedevelopment of drug delivery systems due to its enhanced uptake in tumor tissue,
biodegradability, stability etc. The main aim of the project is to develop convenientand efficient methods for synthesis of modified HSA protein with variable amountof different types of sterically shielded nitroxyl radicals [1].
Four albumin-nitroxide conjugates were prepared and tested as metal-free organic radical contrast agents for MRI. Each HSA bears 4-5 nitroxides conjugated
via homocysteine thiolactone moieties. The conjugates were characterized by electron paramagnetic resonance spectroscopy (EPR), MALDI ToF MS and circulardichroism spectroscopy. These molecular conjugates retain important physicaland biological properties of HSA component, and the resistance of their nitroxidegroups to bioreduction was enhanced. Initial tests of biocompatibility checked
for the formation of potentially toxic aggregates using sodium dodecyl sulfate
polyacrylamide gel electrophoresis and MTT test for cytotoxicity. The relaxivities
r1 and r2 are similar for these four conjugates and are much greater than thoseof their individual components. 1H-MRI phantom images in vitro were obtained.
Литература
1. Dobrynin S., Kutseikin S., Morozov D. et al. Human Serum Albumin Labelled with
Sterically-Hindered Nitroxides as Potential MRI Contrast Agents // Molecules. 2020.
Vol. 25. P. 1709.

pаздел 2252ИССЛЕДОВАНИЕ ЖИВЫХ КЛЕТОК
МЕТОДОМ ДИНАМИЧЕСКОЙ СПЕКЛ-ИНТЕРФЕРОМЕТРИИSTUDYING OF LIVING CELLSBY DYNAMIC SPECKLE-INTERFEROMETRY METHOD
Ю. А. Михайленко 1, А. П. Владимиров 1,2, А. А. Бахарев 1
1Екатеринбургский научно-исследовательский институт
вирусных инфекций «Вектор»,2Уральский федеральный университет им. первого Президента России
Б. Н. Ельцина, Екатеринбург
Yu. A. Mikhaylenko1, A. P. Vladimirov 1,2, A. A. Bakharev 1
1

ERIVI, FBRI SRC VB «Vector» Rospotrebnadzor, Ekaterinburg
2
Ural Federal University, Ekaterinburg
E-mail: mikhaylova_ya@eniivi.ruАннотация
Целью доклада является ознакомление с выявленными закономерностями исследований неразрушающим методом динамической спекл-интерферометрии живых
клеток Л-41 и RD при различных внешних воздействиях (изменение температуры
окружающей среды, действие двух типов вирусов) и при разморозке клеток.

Abstract
The report aim is to familiarize with the revealed regularities of studying living L41 andRD cells by the non-destructive dynamic speckle interferometry method under various external influences (environment temperature changes, the exposure to two types of viruses)and during cell defrosting.

При освещении прозрачного объекта через матовое стекло когерентным
излучением в плоскости изображения объекта образуется в макроскопическом смысле однородная, но в микроскопическом смысле — неоднородная
структура рассеянного излучения, которая представляет из себя спеклы случайного размера и яркости. Спеклы (в переводе с англ. speckle — пятно) являются результатом интерференции многих когерентных волн со случайными
© Ю. А. Михайленко, А. П. Владимиров, А. А. Бахарев, 2020Биофизика

253

амплитудами и фазами. В результате перемещения объекта, изменения егоформы, протекания микроскопических процессов, локально изменяющих
высоту рельефа поверхности или показатель преломления среды вблизи поверхности, спекл-картина будет меняться — наблюдается динамика спеклов.
Актуальной задачей является выявление связи между параметрами, характеризующими процессы в биологических объектах, вызывающие случайные изменения амплитуд и фаз волн, с характеристиками динамики
спеклов. В работе [1] для тонкого прозрачного объекта представлена теорияи методика, позволяющие по спекловым изображениям изучать изменения
средних значений, дисперсии и времена релаксации разности оптических
путей волн, проходящих через объект.
Целью настоящей работы было установление закономерностей изменения
сигналов динамики спеклов в пространстве и во времени в плоскости изображения монослоя культивированных на стеклянной подложке и размороженных клеток при больших оптических увеличениях и различных внешних
воздействиях (изменение температуры окружающей среды, действие вируса).
Объектом исследования являлся монослой клеток культур Л-41 КД/84, RD— интактных и зараженных вирусами герпеса первого типа и энтеровируса ECHO11.
Для записи спекловых картин в качестве источника света использован
полупроводниковый лазерный модуль с длиной волны λ = 650 нм, 532 нми мощностью 20 мВт. Излучение от модуля попадало на матовый расcеиватель, далее на кювету с объектом исследования. В опытах использовалась
монохромная телекамера типа Видеоскан — 415/П/К-USB с матрицей фотоприемников размером 6,5 × 4,8 мм, содержащую 780 × 582 ячеек размером
8,3 × 8,3 мкм. Частота ввода кадров — до 25 Гц. Время экспонирования телекамеры составляло 9 с. Запись кадров — картин спеклов — осуществляласьв течение времени до 24 часов.
Исследуемым параметром являлся коэффициент корреляции η фрагмента цифрового спеклового изображения, зарегистрированного в начальный и текущий моменты времени:m1 n1
1[Ai, j  A][Bi, j  B]m n(1)
 i0 j0m1 n1 ,m1 n1
1
1
2
2[Ai, j  A] [B  B]m n i0 j0m n i0 j0 i, j









где Ai,j — цифровое значение интенсивности I на участке размером m×nпикселей в начальный момент времени, Bi,j — цифровое значение интенсив-254pаздел 2ности I на этом же участке через время τ, i, j — номера пикселей участковв направление осей x и y соответственно, A — средняя величина цифрового
значения интенсивности I на участке в начальный момент времени, B —средняя величина цифрового значения интенсивности I на участке через
время τ.
В докладе отражены результаты изучения неразрушающим методом динамической спекл-интерферометрии реакции клеток при изменении температуры окружающей среды от 26 °С до 37 °С с разной скоростью, установлены закономерности при исследовании размороженных клеток указанным
методом, предложен диапазон температур для исследования процессовв живых клетках, проведено сравнение результатов воздействия на клетки
вирусами ECHO11 и герпеса первого типа.
Литература
1. Владимиров А. П. Динамическая спекл-интерферометрия микроскопических
процессов, протекающих в тонких биологических объектах // Известия вузов. Радиофизика. 2014. Т. 57, № 8–9. С. 632–645.

Биофизика

255ВАЛИДАЦИЯ ТЕСТИРОВАНИЯ АРИТМОГЕННОСТИ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ КАРДИОМИОЦИТОВ, ПОЛУЧЕННЫХИЗ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ
СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЗДОРОВОГО ДОНОРА *DRUGS ARRYTHMOGENICITY TEST VALIDATION USING HUMANCARDIOMYOCYTES DERIVED FROM INDUCED PLURIPOTENTSTEM CELLS OF A HEALTHY DONOR
А. Д. Подгурская, М. М. Слотвицкий, В. А. Цвелая,Ш. Р. Фролова, С. Г. Романова, К. И. Агладзе
Московский физико-технический институт
A. D. Podgurskaya, M. M. Slotvitsky, V. A. Tsvelaya, S. R. Frolova,
S. G. Romanova, K. I. Agladze
Moscow Institute of Physics and Technology
E-mail: alisapodgurskaya@mail.ruАннотация
Валидирован тест на аритмогенность in vitro (формирование ре-ентри на стандартном линейном препятствии) при применении циклофосфамида (ЦФ). Отсутствие
ре-ентри обнаружено в диапазоне концентраций 213–852 μМ ЦФ. Максимальная усваиваемая частота снизилась до 25 ± 7 %. После обработки ЦФ не менялся уровень распределения коннексина 43, получено зависящее от времени разрушение α-актинина.

Abstract
The arrhythmogenicity test in vitro (re-entry formation on a standard linear obstacle)
was validated when using cyclophosphamide (CP). The absence of reentry was found in
the concentration range of 213–852 μM CP. The maximum capture rate dropped up to
25 ± 7 %. After CP treatment, the distribution level of connexin 43 did not change, anda time-dependent degradation of α-actinin was obtained.
© А. Д. Подгурская, М. М. Слотвицкий, В. А. Цвелая, Ш. Р. Фролова, С. Г. Романова, К. И. Агладзе, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-315-90113.

256pаздел 2Ранее авторами был разработан экспериментальный метод оценки кардиотоксичности с применением монослоев кардиомиоцитов, полученныхиз индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) пациентов. Он заключается в оценке вероятности возникновения спиральных
волн (ре-ентри) под воздействием вещества, необходимого и достаточного
условия для возникновения аритмий, методом оптического картирования.
Данный метод определения аритмогенности веществ изначально разрабатывался с использованием блокатора E-4031 и лидокаина [1], был проверен в двух модельных системах: монослое кардиомиоцитов, полученных изИПСК здорового донора, и в монослое неонатальных крысиных кардиомиоцитов — с использованием антибиотика эритромицина [2]. Тестирование
вещества циклофосфамида (ЦФ), опосредованно действующего на потенциал-зависимые ионные каналы, позволило раскрыть механизмы возникновения аритмий при воздействии на сердце и валидировать данное тестирование на аритмогенность.
Получены результаты по влиянию ЦФ на скорость проводимости и максимальную усваиваемую частоту (МУЧ) в монослое пациент-специфичных
человеческих кардиомиоцитов, полученных из ИПСК здорового донора,проведено тестирование на аритмогенность in vitro, изучено влияние ЦФ нацитоскелет кардиомиоцитов. В клинике вещество является аритмогенным,механизм возникновения аритмий in vitro при воздействии ЦФ в малых
дозах (до 100 мг/кг) мало изучен. В диапазоне действующих на монослой
концентраций 213–852 μМ ЦФ (~4–18 мг/кг) получены дозозависимостиСП и МУЧ, было выявлено снижение МУЧ до 25 ± 7 % при наибольшей
действующей концентрации ЦФ. В результате тестирования на аритмогенность in vitro вероятность возникновения ре-ентри на стандартном линейном препятствии под воздействием ЦФ была нулевой. Данный результат
согласуется с ранее полученными данными [1, 2].
Снижение МУЧ может быть вызвано нарушением функционирования
ионных каналов и/или межклеточных контактов либо повреждением целостности клеточных структур. Ранее авторами влияния ЦФ на ионные
каналы выявлено не было. После воздействия ЦФ уровень распределения щелевых контактов — коннексина-43 в монослое кардиомиоцитов —оставался неизменным. Зависящее от времени разрушение α-актинина было обнаружено и свидетельствовало о влиянии ЦФ на структуру
кардиомиоцитов. В дальнейшем данный тест может применяться дляизучения эффектов веществ на сердечной ткани, полученной из ИПСКпациентов с распространенными генетическими мутациями, а именно
каналопатиями.

Биофизика

257

Литература
1. Slotvitsky M. et al. Arrhythmogenicity Test Based on a Human-Induced Pluripotent
Stem Cell (iPSC)-Derived Cardiomyocyte Layer // Toxicol. Sci. Oxford University Press.
2019. Vol. 168, № 1. P.70–77.
2. Podgurskaya A. D. et al. The Use of iPSC-Derived Cardiomyocytes and Optical
Mapping for Erythromycin Arrhythmogenicity Testing // Cardiovasc. Toxicol. 2019.

pаздел 2258ВЛИЯНИЕ ФОТОИНДУЦИРОВАННОГО ТРАНСПОРТА
АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ В НЕЙТРОФИЛЬНЫЕ ЛЕЙКОЦИТЫНА АКТИВАЦИЮ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ
EFFECT OF PHOTOINDUCED ASCORBIC ACID TRANSPORT IN
NEUTROPHILIC LEUKOCYTES ON MYELOPEROXIDASE ACTIVATION
А. А. Птицын, Л. Т. Рязанцева, В. П. Октябрьский
Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого
A. A. Ptitsyn, L. T. Ryazantseva, V. P. Oktyabrskiy
Peter the Great Saint Petersburg Polytechnic University
E-mail: android.android.1980@mail.ruАннотацияВ данном исследовании показан фотоиндуцированный транспорт аскорбиновой
кислоты в нейтрофильные лейкоциты в присутствии фотосенсибилизатора. Обсуждается роль витамина в фотоактивации миелопероксидазы в условиях лазерного
облучения крови человека.

Abstract
This study shows the photoinduced transport of ascorbic acid to neutrophilic whiteblood cells in the presence of a photosensitizer. The role of vitamin in the photoactivationof myeloperoxidase under laser irradiation of human blood is discussed.

В настоящее время известно, что лазерное облучение крови (ЭЛОК)индуцирует повышение активности миелопероксидазы (МПО), обладающей бактерицидными свойствами и функцией разрушения эндогенного
пероксида водорода. Поскольку в системе крови присутствуют различные
низкомолекулярные антиоксиданты (АО), которые должны отчасти нивелировать действие активных форм кислорода, образующихся при лазерном облучении (ЛО) крови, то для вскрытия молекулярных механизмов
действия ЛО крови на активность МПО корректнее рассматривать процессы, протекающие при облучении нейтрофильных лейкоцитов в присутствии АО.
© А. А. Птицын, Л. Т. Рязанцева, В. П. Октябрьский, 2020Биофизика

259

В настоящей работе в качестве антиоксиданта использовали аскорбиновую кислоту (АК), являющуюся необходимым компонентом всех тканейи клеток живых организмов, где она в нормальной физиологической концентрации (в плазме — 7,4 · 10–5 моль/л) поддерживает на низком стационарном уровне свободнорадикальные автоокислительные процессы. Эксперименты проводили на модельных системах с использованием в качестве
фотосенсибилизатора экзогенного гематопорфирина (полоса Соре с λ max =387 нм (ε = 48 · 103 М–1см–1)), который получали из гемоглобина человека.
Для облучения использовали твердотельный лазер на монокристалле алюмината иттрия, легированного неодитом, АИ:Nd3+(λ = 540 нм).
Было обнаружено, что при облучении клеток в присутствии гематопорфирина (ГП) в концентрациях 2 · 10–16, 4 · 10–16 и 8 · 10–16 моль/л наблюдается уменьшение содержания АК в экстрацеллюлярном пространстве на 25, 27 и 35 %соответственно. Это позволяет говорить о фотоиндуцированном транспорте
витамина в нейтрофильные лейкоциты в результате пероксидного окисления
липидов мембран в присутствии ГП. Увеличение концентрации витаминав клетке приводит к изменению функциональных свойств МПО: МПО-активность нейтрофильных лейкоцитов в присутствии АК (7,4 · 10–5 моль/л) вышетаковой в суспензии клеток без АО на 30 % при рН 6,0 (см. рисунок, а).

абАктивность МПО облученной системы Нф-ГП: 1,3 — в присутствии
и 2,4 — после удаления ГП; 3,4 — в присутствии аскорбиновой кислоты;рН реакционной смеси: а) 6,0 и б) 7,4; доза облучения — 0,6 Дж/см2При рН 7,4 степень активации МПО в системе Нф-ГП-АК после удаления несвязанного модификатора выше (см. рисунок, кривая 4) исследу-260pаздел 2емого параметра в присутствии ГП в растворе (см. рисунок, кривая 3); так,при концентрации модификатора 4 · 10–16 моль/л в анализируемой системе
МПО-активность облученной суспензии после исключения ГП из раствора
достоверно повышается на 19 %. Этот факт свидетельствует в пользу того,что АК исключает участие свободных молекул ГП в реакциях, приводящихк изменению МПО-активности нейтрофилов. Методом хемилюминесценции было установлено, что смесь АК с ГП в используемых концентрацияхне генерирует активные формы кислорода, таким образом, витамин проявляет только антиоксидантные свойства, защищая компоненты системы отдействия сенсибилизатора.

Биофизика

261

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПЛАЗМИНОГЕНА С ПОВЕРХНОСТЬЮ
МОДИФИЦИРОВАННЫХ МАГНИТНЫХ НАНОЧАСТИЦ *INTERACTION BETWEEN PLASMINOGEN
AND MODIFIED MAGNETIC NANOPARTICLES
Э. З. Садыкова 1, Е. А. Костанова 1,
М. И. Бирюкова 1, А. Г. Мурадова 2, А. В. Бычкова 1
12Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва
Российский химико-технологический университет им. Д. И. Менделеева,Москва
E. Sadykova1, E. Kostanova1, M. Biryukova1, A. Muradova2, A. Bychkova1
1

IBCP RAS, Moscow
D. I. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia, Moscow

2

E-mail: sadykova.leonora@gmail.com, anna.v.bychkova@gmail.com
Аннотация
Исследовано взаимодействие плазминогена — белка фибринолитической системы — с поверхностью частиц, ядром которых являются магнитные наночастицы оксидов железа, модифицированных оксидом кремния и аминогруппами илисывороточным альбумином человека (ЧСА), и десорбция плазминогена с поверхности частиц. Проведена оценка фибринолитической активности плазминогена наповерхности частиц. Подтверждена возможность неоднократного использования
частиц для сорбции плазминогена.

Abstract
The work includes the synthesis of particles consisting of the magnetic iron oxide coremodified with silicon dioxide and amino groups, as well as modified with human serum
albumin (HSA), and the study of the adsorption of plasminogen on the particles surface,
the study of desorption of plasminogen from the particles and the study of fibrinolytic
activity of plasminogen on the particles surface. The possibility of repeated use of particles
for sorption of plasminogen has also been confirmed.
© Э. З. Садыкова, Е. А. Костанова, М. И. Бирюкова, А. Г. Мурадова, А. В. Бычкова, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РНФ, проект № 18-7300350.

262

pаздел 2В последнее десятилетие в связи с интенсивным развитием приборных
количественных методов анализа крови больных в острых патологических
состояниях или при развитии хронических заболеваний требуется проведение быстрых процедур по извлечению из крови белковых маркеров-аналитов. Одним из таких маркеров может являться плазминоген — белок-предшественник плазмина, играющего главную роль в фибринолитической
системе. Цель настоящей работы — исследование взаимодействия плазминогена с поверхностью магнитных частиц, модифицированных диоксидом
кремния и аминогруппами [1], и частиц, модифицированных человеческим
сывороточным альбумином (ЧСА) [2]. Нами доказано связывание в среднем около 0,22 и 0,33 мг плазминогена на 1 мг частиц, модифицированных диоксидом кремния и аминогруппами, и частиц, модифицированныхЧСА соответственно. С помощью коммерчески доступных наборов определения активности плазминогена НПО «Ренам» (Россия) подтверждено
сохранение до 30 % фибринолитической активности белка. На основе количественных оценок связывания и элюции плазминогена, данных о сохранении плазминогеном функциональных способностей на поверхности
частиц, доказанной возможности эффективной десорбции плазминогенаи повторного использования частиц, а также литературных данных о достаточной гидрофильности и инертности в биологических жидкостях частицс аналогичными по составу покрытиями мы предполагаем возможности
применения созданных нами частиц для транспорта плазминогена, а такжедля его извлечения из раствора. Полученные нами данные по неспецифическому связыванию плазминогена обладают высокой значимостью в связис широким распространением в настоящее время работ по модификации
поверхности магнитных частиц диоксидом кремния с различными функциональными группами, а также сывороточным альбумином, традиционно
используемым для снижения неспецифической сорбции при работе с кровью и плазмой.
Литература
1. Zaytseva M. P., Muradova A. G., Sharapaev A. I. et al. Fe3O4/SiO2 core shellnanostructures: preparation and characterization // Russian Journal of Inorganic
Chemistry. 2018. Vol. 63. P. 1684–1688. doi:10.1134/S0036023618120239
2. Bychkova A. V., Rosenfeld M. A., Leonova V. B. et al. Free-radical cross-linkingof serum albumin molecules on the surface of magnetite nanoparticles in aqueous
dispersion // Colloid J. 2013. Vol. 75. doi:10.1134/S1061933X13010031

Биофизика

263

НАРУШЕНИЕ ПЛАСТИЧНОСТИ СИНАПСОВВ ПРЕФРОНТАЛЬНОЙ КОРЕ МЫШЕЙ С МОДЕЛЬНЫМ
СТРЕССОВЫМ РАССТРОЙСТВОМ
IMPAIRED SYNAPTIC PLASTICITY OF THE PREFRONTAL CORTEXIN A MOUSE MODEL OF STRESS DISORDER
А. В. Сербина 1, А. О. Богданов 1, Ю. В. Панкратов 2
1Балтийский федеральный университет им. И. Канта,Институт живых систем, Калининград
2Уорикский университет, Школа биологических наук,Соединенное Королевство, Ковентри
A. V. Serbina 1, A. O. Bogdanov 1, Y. V. Pankratov 2

1
2

Immanuel Kant Baltic Federal University, School of Life Sciences, Kaliningrad
The University of Warwick, School of Life Sciences, United Kingdom, Coventry
E-mail: serbina_elena@bk.ruАннотация

Было показано, что в патогенезе посттравматического стрессового расстройства (ПТСР) важную роль играет изменение активности тормозной системы префронтальной коры. Префронтальная кора контролирует импульсивное поведениеи участвует в реализации когнитивных функций мозга [1,2]. Имеющиеся данные обизменении торможения в префронтальной коре при стрессовых состояниях противоречивы: имеются сведения, как об уменьшении [3–5], так и об увеличении активности ГАМКергической системы [6–8]. В данной работе мы моделировали ПТСРу животных и исследовали, каким образом изменение активности ГАМКергической
системы под воздействием стресса отразится на пластичности синапсов префронтальной коры и поведении животных.

Abstract
It has been shown that changes in the activity of inhibitory system in the prefrontal
cortex play an important role in post-traumatic stress disorder (PTSD) pathogenesis. The
prefrontal cortex controls impulsive behavior and brain cognitive functions [1, 2]. The data
available on remodeling of inhibition in the prefrontal cortex under stress exposure arecontradictory: there is information about both a decrease [3, 4, 5] and an increase in the ac© А. В. Сербина, А. О. Богданов, Ю. В. Панкратов, 2020

264pаздел 2

tivity of the GABAergic system [6, 7, 8]. Here we used murine model of PTSD to investigate
how changes in the activity of the GABAergic system under the exposure of stress would
affect synaptic plasticity in the prefrontal cortex and the behavior of animals.

Для воспроизведения экспериментальной модели ПТСР на мышах C57BLмы использовали протокол «единичного длительного стресса» (ЕДС) [9].
Формирование стрессового состояния у животных подтверждали по изменениям, которые возникали в поведении животных после воспроизведения
протокола ЕДС. Для оценки поведения животных использовали тест «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт». Чтобы определить,каким образом меняется активность ГАМКергической системы при формировании ПТСР, мы при помощи технологии пэтч-кламп регистрировали миниатюрные ингибирующие постсинаптические токи (мИПСТ) в пирамидных
нейронах третьего слоя префронтальной коры. Для исследования влияния
активности тормозной системы на пластичность синапсов регистрировали
полевые возбуждающие постсинаптические потенциалы (пВПСП) в третьем
слое префронтальной коры и индуцировали долговременную потенциацию(ДВП) при помощи 20 высокочастотных электрических стимулов.
По результатам оценки поведения животных было подтверждено, что после прохождения протокола ЕДС животные действительно проявляют при-Рис. 1. Результаты тестирования поведения животныхв приподнятом крестообразном лабиринте,где *** — р ≤ 0,001 для теста Стьюдента

Биофизика

265знаки тревожного стрессового состояния, наблюдаются увеличение смещенной активности, уменьшение локомоторной активности, превалирование
норкового инстинкта и снижение исследовательского поведения (рис. 1). Приэтом поведение контрольной группы не отличалось от результатов тестирования группы ПТСР до воздействия стресса, что свидетельствует об одинаковом психоэмоциональном состоянии животных до начала эксперимента.
Результаты анализа мИПСТ пирамидных нейронов префронтальной
коры свидетельствуют о значительном увеличении активности тормозной
синаптической передачи у животных, подвергшихся воздействию стресса.
В группе ПТСР амплитуда и частота мИПСТ была значительно выше, чемв контроле (рис. 2).

Рис. 2. Стресс увеличивает активность тормозной синаптической передачив префронтальной коре, где * — р ≤ 0,05, ** — р ≤ 0,01 для теста СтьюдентаМы также обнаружили, что увеличение активности тормозной синаптической передачи в префронтальной коре животных с модельным ПТСР негативно влияет на способность синапсов к индукции долговременной потенциации (рис. 3).
Таким образом, полученные данные указывают на то, что воздействие
стресса вызывает увеличение активности тормозной синаптической передачи в префронтальной коре. Высокая активность тормозной системы
препятствует нормальной индукции ДВП синапсов, что наиболее вероятно
связано с наблюдаемыми изменениями в поведении животных, сниженным
исследовательским интересом и когнитивными способностями.

pаздел 2266

Рис. 3. Стресс ингибирует способность синапсов к индукции
долговременной потенциации, где ***— р ≤ 0,001 для теста Стьюдента

Литература
1. Bremner J. D Neuroimaging in Posttraumatic Stress Disorder and Other Stress-related Disorders // Neuroimaging Clin. N. Am. 2007. Т. 17, № 4. P. 523.
2. Fogaça M. V., Duman R. S. Cortical GABAergic dysfunction in stress and depression:
new insights for therapeutic interventions // Front Cell Neurosci. 2019. Т. 13. P. 87.
3. Czéh B. et al. Chronic stress reduces the number of GABAergic interneurons in theadult rat hippocampus, dorsal-ventral and region-specific differences // Hippocampus.
2015. № 25. P. 393–405.
4. Matsumoto K. et al. GABA(A) receptor neurotransmission dysfunction in a mousemodel of social isolation-induced stress: possible insights into a non-serotonergic mechanism of action of SSRIs in mood and anxiety disorders // Stress. 2007 Mar. Vol. 10(1).
P. 3–12.
5. Vaiva G. et al. Low posttrauma GABA plasma levels as a predictive factor in the development of acute posttraumatic stress disorder// Biological Psychiatry. 2004 Feb 1. Vol.
55(3). P. 250–254.
6. McKlveen et al. Chronic stress increases prefrontal inhibition: a mechanism forstress-induced prefrontal dysfunction // Biol. Psychiatry. 2016. Vol. 80. P. 754–764.
7. Dubin M. J. et al. Elevated prefrontal cortex GABA in patients with major depressive
disorder after TMS treatment measured with proton magnetic resonance spectroscopy //Psychiatry Neurosci. 2016 Apr. Vol. 41(3). P.E37–45.
8. Michels L. et al. Prefrontal GABA and glutathione imbalance in posttraumatic stressdisorder: Preliminary findin // Psychiatry Research: Neuroimaging. 2014. Vol. 224. P.
288–295
9. Yamamoto S. et al. Single prolonged stress: toward an animal model of posttraumaticstress disorder // Depress. Anxiety. 2009. Т. 26, № 12. P. 1110–1117.

Биофизика

267

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФРАКЦИОННОГО РЕЗЕРВА КРОВОТОКАВ КОРОНАРНЫХ СОСУДАХ МЕТОДОМ ЛОКАЛЬНОЙ
ГЕМОДИНАМИКИ *
DETERMINATION OF THE FRACTIONAL RESERVE OF BLOOD FLOW
IN CORONARY VESSELS BY THE METHOD OF LOCAL HEMODYNAMICS
А. Т. Суюндукова 1, В. С. Мельничук 1, В. П. Дёмкин 1, К. В. Завадовский 2
1 Томский государственный университет
2
НИИ кардиологии Томского НИМЦA. T. Suyundukova 1, V. S. Melnichuk 1, V. P. Dyomkin 1, K. V. Zavadovskiy 2,
1

Tomsk State University
Scientific Research Institute of Cardiology,
Tomsk National Research Medical Center RAS,
2

E-mail: almagul.suyundukova@mail.ru, osbereg@yandex.ru,
demkin@ido.tsu.ru, konstzav@gmail.com
Аннотация
Целью данной работы является разработка метода вычисления фракционного
резерва кровотока для неинвазивной диагностики пациентов с подозрением или известным заболеванием коронарной артерии.

Abstract
The aim of this work is to develop a method for calculating the fractional reserve forthe diagnosis of functionally of functionally significant coronary artery stenosis in patientswith suspected or known coronary artery disease.

Ишемическая болезнь сердца (ИБС) является одной наиболее распространенных кардиологических заболеваний и основной причиной смертности в мире [1]. ИБС обусловлена стенозирующим атеросклерозом коронарных артерий (КА), который ограничивает кровоток к сердечной мышцеи может к привести тяжелым последствиям, в частности, к острому инфар© А. Т. Суюндукова, В. С. Мельничук, В. П. Дёмкин, К. В. Завадовский, 2020*Результаты исследования получены при поддержке Программы повышения
конкурентоспособности ТГУ.

268

pаздел 2кту миокарда и острой сердечной недостаточности. В связи с этим необходима разработка методов и средств оперативной оценки состояния сердечно-сосудистой системы на основе применения быстрых, экономичных и неинвазивных методик диагностики коронарных сосудов, которые пригодныдля широкого использования в целях своевременного и оперативного выявления предпатологических состояний [2]. Возможности прямых измерений морфологических и гемодинамических параметров сосудов ограничены, в то время как математическое моделирование коронарного кровотокана основе доступных экспериментальных данных позволяет обеспечить
детальную информацию о состоянии сосудов. Успех численного эксперимента зависит от соответствия математической и вычислительной моделей
реальным физическим процессам, протекающим в системе кровообращения человека. В общем случае гемодинамические процессы описываются
трехмерными нестационарными уравнениями Навье — Стокса совместно с уравнениями динамики эластичных оболочек сосудов с учетом пространственной геометрии сосудов, физических свойств крови и вариации
сердечной нагрузки. Решение таких многопараметрических задач связанос огромными вычислительными затратами, что требует применения высокопроизводительных систем и решения проблем, связанных с минимизацией ошибок метода вычисления. Поэтому лучшее в практическом отношении
качество или эффективность любой модели достигается как оптимальный
компромисс между адекватностью модели к оригиналу и простотой, обеспечивающей необходимую точность и возможность ее использования попрямому назначению.
В данной работе рассмотрена 2D-модель локальной гемодинамики
коронарных сосудов и предложен метод вычисления фракционного резерва
кровотока для оценки функциональной значимости стенозов коронарных
артерий у пациентов с подозрением или установленным диагнозом ИБС.
В основу модели заложен ряд принципиальных положений, определяющих
особенности гемодинамики в стенозированных сосудах. Для вычисления
скорости кровотока использовано уравнение Навье — Стокса совместнос уравнением непрерывности в двумерном приближении. Проведен вычислительный эксперимент по определению фракционного резерва кровотока для значимых размеров стеноза: 40, 50, 60, 70 и 80 % диаметра артерии.
Результаты расчетов сравнены с данными более сложных моделей и лабораторных экспериментов. Разработанный метод локальной гемодинамики
коронарных сосудов и расчета фракционного резерва кровотока можно
использовать для проведения персонифицированной оценки значимости
стеноза и принятия врачебного решения.

Биофизика

269

Литература
1. Timmis A., Townsend N., Gale C.P. et al. European Society of Cardiology:
Cardiovascular Disease Statistics 2019. // Eur Heart J. 2020.Vol. 41(1). P. 12–85. doi:10.1093/
eurheartj/ehz859
2. Мочула А. В., Мальцева А. Н., Шипулин В. В., Завадовский К. В. Оценка миокардиального кровотока и резерва — физиологические основы и клиническое
значение перфузионной сцинтиграфии в обследовании пациентов с хроническим
коронарным синдромом // Российский кардиологический журнал. 2020. Т. 25, № 2.
С. 74–80.

pаздел 2270ОСОБЕННОСТИ БИОХИМИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ МОЛОКА КОЗВ ПЕРВЫЕ ДВЕ НЕДЕЛИ ЛАКТАЦИИFEATURES OF BIOCHEMICAL PARAMETERS OF GOAT MILKIN THE FIRST TWO WEEKS OF LACTATION
В. В. Тюлина, И. В. Милаёва, М. С. Царькова
Московская государственная академия ветеринарной медициныи биотехнологии — МВА им. К. И. Скрябина
V. V. Tjulina, I. V. Milaeva, M. S. Tsarkova
Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology
named after K. I. Skryabin
E-mail: ira-gurievich@list.ruАннотацияПо результатам исследования молока коз ультразвуковым методом установлено, что наибольшим колебаниям в течение лактации подвержено содержание жирав молоке и молозиве коз. В первый день лактации содержание жира более низкое,а во второй день повышается в 1,8 раза и удерживается на таком высоком уровне натретий день. В дальнейшем происходит снижение этого показателя до минимального значения в четвертый день, потом повышение на 40,2 % в пятый день и плавное
снижение на 10,36 % до девятого дня.

Abstract
According to the results of the study of goat milk by the ultrasound method, it was
found that the fat content in the milk and colostrum of goats is subject to the greatest fluctuations during lactation. On the first day of lactation, the fat content is lower, and on thesecond day it increases by 1,8 times and is kept at such a high level for 3 days. In the future,
this indicator decreases to the minimum value on day 4, then increases by 40,2 % on day
5 and gradually decreases by 10,36 % to day 9.

Значимость изучения физико-биологического статуса животного приопределении статуса развития и жизнедеятельности его организма в настоящее время очевидна и неоспорима. Физико-биологический статус животного определяется суммой концентраций различных биологически
© В. В. Тюлина, И. В. Милаёва, М. С. Царькова, 2020Биофизика

271

активных веществ (липидов, белков и т. д.) в биологических жидкостях
организма (таких как кровь, молоко, моча и т. д.). Измерение этого статуса может дать ценную информацию о состоянии организма животного, наличии или отсутствии патологий, помочь в оценке хозяйственной
ценности и продуктивности животного. Молочное козоводство является перспективной отраслью животноводства и активно развивается. Этосвязано с особенностями козьего молока, его высокой усвояемостью, возможностью использовать его для детей грудного возраста.
Физико-химический состав молока коз непостоянен и подвержен влиянию различных факторов, начиная от возраста животного и его рациона
питания до его происхождения, периода и номера лактации. Для коз первой лактации на долю железистого аппарата молочной железы приходится примерно 62,6 ± 0,41 %, а на долю соединительной ткани 38,1 ± 0,25 %.
Соотношение паренхимы и стромы составляет 1,8:1. В последующие лактации наблюдается значительное разрастание железистой паренхимыи сокращение стромы — все эти процессы оказывают влияние на синтетические процессы, происходящие в молочной железе, и биохимический
состав молока.
Исследовалось молоко физиологически здоровых коз русской белой породы, полученное при первой лактации. По результатам биохимического
анализа отмечено, что у коз происходит изменение содержания жира, белка,лактозы, минеральных солей в зависимости от дня лактации.
Таблица 1Биохимические показатели молока коз в разные дни лактации
%
Жир
Белок
Лактоза
Соли

День
1-й
5,89 ±
1,03
5,7 ±
0,56
8,41 ±
0,67
1,33 ±
0,39

День
2-й
9,49 ±
1,67
3,69 ±
1,52
5,45 ±
1,33
0,86 ±
0,75

День
3-й
6,67 ±
0,63
3,53 ±
1,66
5,21 ±
0,94
0,82 ±
0,38

День
4-й
3,80 ±
0,42
4,57 ±
1,21
4,60 ±
1,38
0,80 ±
0,24

День
5-й
8,03 ±
0,35
3,72 ±
0,93
5,49 ±
1,05
0,87 ±
0,95

День
6-й
7,92 ±
1,61
3,38 ±
0,87
4,99 ±
1,24
0,79 ±
1,52

День
7-й
6,66 ±
0,87
3,39 ±
0,34
5,01 ±
0,42
0,79 ±
0,69

День
8-й
5,70 ±
1,07
3,52 ±
0,43
5,20 ±
0,26
0,82 ±
1,97Максимальное количество минеральных солей наблюдается в первый
день лактации — выше на 35,34 % по сравнению со средним значением

pаздел 2272остальных дней, затем показатель снижается до значения 0,8 и изменяется
незначительно на 0,5–1 %.
Максимальный уровень лактозы отмечается в первый день лактации
выше на 35,2 % по сравнению со средним значением остальных дней, затем
снижается, потом повышается на пятый и тринадцатый день, а в остальныедни изменяется в пределах 2–5 %.
Максимальный уровень белка отмечается в первый день лактации вышена 35,26 % по сравнению со средним значением остальных дней, затем этотпоказатель начинает постепенно снижаться, но снижение происходит нелинейно, так в четвертый день наблюдается повышение уровня белка на
18,24 %, в тринадцатый день небольшое повышение на 13,48 %, а минимальное значение наблюдается на двенадцатый день лактации.
Таблица 2Биохимические показатели молока коз в разные дни лактации
%
Жир
Белок
Лактоза
Соли

День
8-й
5,70 ±
1,07
3,52 ±
0,43
5,20 ±
0,26
0,82 ±
1,97

День
9-й
6,94 ±
0,55
3,42 ±
1,73
5,06 ±
1,68
0,80 ±
0,29

День
10-й
10,52 ±
0,81
3,49 ±
0,49
5,15 ±
1,26
0,81 ±
1,53

День
11-й
5,58 ±
0,95
3,6 ±
0,68
5,31 ±
1,38
0,81 ±
0,72

День
12-й
5,67 ±
1,46
3,33 ±
0,17
4,89 ±
0,29
0,81 ±
0,37

День
13-й
8,55 ±
0,14
4,32 ±
1,28
6,39 ±
1,99
0,99 ±
1,67

День
14-й
5,63 ±
0,68
3,49 ±
0,34
5,16 ±
0,59
0,81 ±
1,45

Наибольшим колебаниям подвержено содержание жира в молокеи молозиве коз. В первый день лактации содержание жира более низкое,а во второй день повышается в 1,8 раза и удерживается на таком высоком уровне на третий день. В дальнейшем происходит снижение этого
показателя до минимального значения в четвертый день, потом повышение на 40,2 % в пятый день и плавное снижение на 10,36 % до девятого
дня. На десятый день опять повышение на 10,52 %, потом снижение и натринадцатый день повышение на 27,38 %, а потом опять снижение на
27,76 %.
Важным показателем является отношение количества жира к количеству белка в молоке и молозиве коз. Для коз первой группы все пробы
можно разделить по этому показателю на четыре подгруппы: 1-, 4-й деньБиофизика

273

лактации 0,8–1; 8-, 11-, 12-, 14-й день — 1,6–1,7; 3-, 5-, 6-, 7-, 9-, 13-й день —1,9–2,3; 2-, 10-й — 2,6–3.
Таким образом, наиболее существенно отличается молоко первого днялактации (молозиво), в нем содержится значительно больше солей, лактозыи белка. Наибольшим колебаниям подвержено содержание жира в молоке.
Проявляются пики максимального содержания жира во 2-, 3-, 5-, 10-, 13-йдень, когда средний уровень жира 8–10 %, в остальные дни общий уровень
жира 5–6 %.

pаздел 2274МОДЕЛЬ МЕМБРАННОГО ПОТЕНЦИАЛА КЛЕТКИ ПУРКИНЬЕ
MODEL OF THE MEMBRANE POTENTIAL OF THE PURKINIER CELL
Я. В. Фрицлер, А. Н. Шуваев
Сибирский федеральный университет, Красноярск
Y. V. Fritsler, A. N. Shuvaev
Siberian Federal University, Krasnoyarsk
E-mail: fri.yana@mail.ruАннотация
Построена математическая модель клетки Пуркинье, включающая в себя: два канала Na+, три канала K+, три канала Ca2+ и два типа кальций-активируемых калиевых
каналов. В результате получена модель мембранного потенциала клетки Пуркинье,учитывающая сложность структуры с более физиологичным вкладом от ВК-каналов.

Abstract
A mathematical model of the Purkinje cell has been constructed, which includes: two
Na + channels, three K + channels, three Ca2 + channels and two types of calcium-activated potassium channels. As a result, a model of the membrane potential of the Purkinje cell
was obtained, taking into account the complexity of the structure with a more physiologicalcontribution from BK channels.

Клетка Пуркинье имеет сложную структуру и функциональную организацию, позволяющие данному типу клеток иметь самый большой синаптический поток в мозге. Регулирование функционирования клеток Пуркинье
осуществляется различными ионами: натрия, калия, кальция и т. п.
На данный момент существует ряд математических моделей мембранного потенциала клеток Пуркинье, однако эти модели включают в себя разные
наборы сигнальных путей. Так, не существует модели, которая включаетв себя сложность структуры клеток Пуркинье и имеет более физиологичный вклад от ВК-каналов.
Модель основана на анатомических реконструкциях отдельных клеток
Пуркинье и включает 10 различных типов зависимых от напряжения кана© Я. В. Фрицлер, А. Н. Шуваев, 2020Биофизика

275

лов, описываемых уравнениями Ходжкина — Хаксли, полученных на основе данных фиксации напряжения, специфичных для клеток Пуркинье. Этиканалы включают в себя быстрый и постоянный канал Na +, три канала K +,зависящих от напряжения, каналы Ca2 + T-типа, P-типа и R-типа, два типакальций-активируемых калиевых каналов (ВК).
Таким образом, уравнение динамики потенциала мембраны имеет следующий вид:dV (iNa  iK  iCa  iBK )

,
dt
Cm

где iNa, iK, iCa, iBK — токи от натриевых, калиевых, кальциевых, кальций-зависимых калиевых каналов, Cm — емкость мембраны.
Так как в модель включены ВК-типы каналов, было необходимо смоделировать динамику кальция: вход кальция осуществляется через VGCC
(потенциал-зависимые кальциевые каналы T-, P- и R-типа), отток кальция
производится PMCA (Ca2+ АТФаза плазматической мембранны), моделируемого с помощью уравнения Хилла.
В результате получена динамика мембранного потенциала клеток Пуркинье, показанная на рисунке. Полученный результат соответствует поведению известных моделей и экспериментальным данным.

Динамика потенциала клетки Пуркинье

Построенная математическая модель сохраняет в себе особенности
строения и функционирования, но имеет более физиологичный вклад от
ВК-каналов.

pаздел 2276ДИАГНОСТИКА СОСТОЯНИЯ ГЕМОСТАЗАС ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕОРИИ НЕЧЕТКИХ МНОЖЕСТВ *DIAGNOSTICS OF A CONDITION OF GEMOSTASISWITH THE USE OF FUZZY SET THEORY
А. О. Цыбулина 1, Л. Ю. Котловская 2, В. П. Дёмкин 1, В. В. Удут 212Томский государственный университетНИИ фармакологии и регенеративной медицины им Е. Д. Гольдберга, Томск
A. O. Tsibulina 1, L. Yu. Kotlovskaya2, V. P. Demkin 1, V. V. Udut2
1

2

Tomsk State University
Pharmacology Institute of Tomsk RNMC
E-mail: aotsibulina1986@mail.ruАннотация
Целью научной работы является повышение достоверности медицинской диагностики нарушений системы гемостаза на основе теории нечетких множеств в условиях неопределенных и неполных данных.

Abstract
The aim of the research is to increase the reliability of medical diagnostics of the hemostasis system disorders based on a fuzzy set theory under conditions of uncertain andincomplete data.

Свертывание крови — это сложный биохимический процесс, активируемый повреждениями сосудистой стенки или клеток крови. Расстройства
системы гемостаза могут привести к фатальным осложнениям: кровотечению или тромбозу, что делает исследование свертывания крови приоритетным исследованием. Состоятельность кровоснабжения — ключевой позиции нормальной жизнедеятельности — определяется изменениями гемостатического потенциала. Таким образом, адекватная оценка и мониторинг
гемостатического потенциала при использовании лекарственных средств,© А. О. Цыбулина, Л. Ю. Котловская, В. П. Дёмкин, В. В. Удут, 2020*Результаты исследования получены при поддержке Программы повышения
конкурентоспособности ТГУ.

Биофизика

277

направленных на предупреждение и лечение тромботических осложнений, позволит контролировать кровоток в важных органах, предупреждая
острые нарушения и обеспечивая ускорение процессов регенерации.
На сегодняшний день исследователи «вооружены» весомым набором
«локальных» и «глобальных» методов оценки системы гемостаза. Однаков рутинной практике используется ограниченный набор, а результаты даютприблизительную характеристику гемостатического потенциала. Расширение арсенала методик, увеличивая диагностическую ценность, дает фрагментарные представления о процессе свертывания крови. Неструктурированность, неточность и неполнота результатов тестов исключает целостное
представление о состоянии системы гемостаза. Также имеет место пересечение данных в группах тестов, что запутывает ситуацию, поскольку естьпрямые и обратные связи, есть бивалентность действия различных факторов, способствующих и препятствующих коагуляции. Таким образом, гемостатический потенциал как интегральное свойство крови является предметом теории нечетких множеств.
В данной работе представлена физико-математическая модель процесса
гемокоагуляции, основанная на фазовых представлениях о структуре кровии изменениях ее вязкоупругих свойств в процессе коагуляции с использованием метода резонансной низкочастотной пьезотромбоэластографии [1].
Комплексная оценка гемостатического потенциала производится на основе
обработки данных «локальных» и «глобальных» тестов, характеризующих
отдельные факторы процесса свертывания крови и их влияние на изменение вязкоупругих свойств крови с применением теории нечетких множеств.
Этот подход к выяснению механизмов изменения вязкостно-упругих характеристик цельной крови, отражающих состояние гемостаза, позволит
достичь понимания фармакокинетики лекарственных средств, направленных на предупреждение и лечение тромботических осложнений, позволит
контролировать состояние гемостаза и управлять приведением его в норму
посредством противотромботической терапии.
Литература
1. Тютрин И. И., Удут В. В. Низкочастотная пьезотромбоэластография цельной
крови: алгоритмы диагностики и коррекции гемостазиологических расстройств.
Томск : ТГУ, 2016. 170 с.

278pаздел 3Вирусология

ПРОТЕЙНЫЙ БАКТЕРИОФАГ PM16 ИНДУЦИРУЕТ
АДАПТИВНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ *PROTEUS BACTERIOPHAGE INDUCES
ADAPTIVE IMMUNE RESPONSE DURING IMMUNIZATIONАл Аллаф Л.
Новосибирский государственный университет
Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
Al Allaf L.
Novosibirsk State University
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
E-mail: allaflina@gmail.com
Аннотация
Иммунизация мышей бактериофагом PM16 вызывает формирование анти- генспецифических В- и Т-лимфоцитов. Кроме того, стимуляция спленоцитов иммунизированных животных бактериофагом PM16 или рекомбинантным капсидным белком по-разному влияет на выживание и активацию B- и T-лимфоцитов.

© Ал Аллаф Л., 2020*Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда, грант 19-7500065.

Вирусология
ия

279

Abstract
We have shown that immunization of mice with proteus bacteriophage PM16 lead toestablishment of antigen-specific B- and T-cell populations. Additionally, ex vivo stimulation of immune splenocytes with PM16 phage or its recombinant capsid protein differentially influence T- and B-cell survival, indicating phage may selectively support T-cell
response.

Using phage-therapy as a treatment strategy of bacterial infections has raised
a lot of questions about bacteriophages immunogenicity. Recent studies showedthat phage-induced immune response depends on different factors.
Current work aimed at evaluation of cell types responsible for adaptive
immune reactions against bacteriophages. Mice Balb/c were immunized withbacteriophage PM16 using 109 phage forming unit per mice three times. After
immunization animals were sacrificed, spleen cells were isolated and stimulatedwith either PM16 or recombinant capsid protein in vitro in multiple conditions
over the course of 8 days. During stimulation, cell phenotype and proliferation
status were assessed using flow cytometry.
Analysis of cell phenotype dynamics showed that stimulation of control
mice cells with either bacteriophage or recombinant capsid protein led tosurvival of T-helper cells, while B-cells were the minor population showing
constant decrease during experimental time course (Pic. 1 and 2). Stimulation of
immunized mice cells with bacteriophage led to more prominent B-cell survival(Pic. 1). Interestingly, cells stimulated with recombinant capsid protein showedsignificantly more prominent B-cell survival compared to T-cell survival. In
addition, this stimulation led to survival of follicular B-cells based on number ofcells, expressing CD23 surface marker.

Pic. 1. Lymphocyte dynamics during ex vivo cell stimulation with bacteriophage PM16

280pаздел 3

Pic. 2. Lymphocyte dynamics during ex vivo cell stimulation
with recombinant phage protein

Pic. 3. CFSE-labelled lymphocyte proliferation analysis after stimulation
with bacteriophage PM16 and recombinant capsid protein

Toshow that cell survival was antigen-specific we analyzed cell proliferation using
dilution of cell tracer CFSE. Stimulation of control mice cells with bacteriophage/protein did not stimulate cell proliferation. Cells from immunized mice showedprominent proliferative response both to stimulation with bacteriophage andrecombinant capsid protein. Interestingly, stimulation with protein made cells
more readily proliferative, generating up to 4 cell populations by day 4.
Our findings demonstrate that bacteriophages may potentially be utilized for
immunization or antibacterial treatment to modulate immune response as theyboth trigger establishment of antigen-specific B-cell population both T-helper
dependent and T-helper independent.

Вирусология

281

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДЕТЕКЦИИ РНКГРИППА А И КОРОНАВИРУСА SARS-CoV-2 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ПРОТОКОЛА ИЗОТЕРМИЧЕСКОЙ АМПЛИФИКАЦИИ
DEVELOPMENT OF METHODS FOR INFLUENZA A
AND SARS-CoV-2 RNA DETECTIONUSING ISOTHERMAL AMPLIFICATION PROTOCOL
Д. Н. Антропов 1, Е. С. Журавлёв 1, А. Б. Комиссаров 2,
Л. К. Курбатов 3, Д. С. Новопашина 1, Г. А. Степанов 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Научно-исследовательский институт гриппа
им. А. А. Смородинцева, Санкт-Петербург
3Институт биоорганической химии им. М. М. Шемякина
и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва
D. N. Antropov 1, E. S. Zhuravlev 1, A. B. Komissarov 2,
L. K. Kurbatov 3, D. S. Novopashina 1, G. A. Stepanov 1
1

Institute of Сhemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg
3
Shemyakin — Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry RAS, Moscow
E-mail: antr0povdn@yandex.ruАннотация

Цель исследования — разработать методы выявления вирусных РНК с использованием модифицированного протокола NASBA с детекцией в режиме реального
времени и комбинации NASBA с Cas13a-опосредованной интерференцией. В качестве моделей выбраны РНК вирусов гриппа А и коронавируса SARS-CoV-2. Показано, что разработанные протоколы позволяют детектировать присутствие до 10–100 копий фрагментов вирусных РНК в реакции, при этом общее время протоколов детекции составляет менее часа.

Abstract
The aim of the research is the development of the viral RNA detection methods using
modified Real-time NASBA protocol and the combination of NASBA and Cas13a-mediated© Д. Н. Антропов, Е. С. Журавлёв, А. Б. Комиссаров, Л. К. Курбатов, Д. С. Новопашина, Г. А. Степанов, 2020

282pаздел 3interference. Influenza A and SARS-CoV-2 RNAs were chosen as the models. It was shown,that the protocols developed allow the detection of down to 10–100 copies of viral RNA
fragments in the reaction, with the total run time of the detection protocols being less thanan hour.

В условиях сезонных ежегодных эпидемий вирусных инфекций особое
значение приобретают методы быстрой и эффективной детекции вирусных нуклеиновых кислот в биологических жидкостях на ранних стадиях
заболевания.
Цель данной работы — разработать методы выявления вирусных РНК с использованием подходов изотермической амплификации. За основу взят протокол амплификации фрагментов РНК, описанный ранее как метод NASBA.
В качестве моделей для исследования выбраны РНК вирусов гриппа А икоронавируса SARS-CoV-2. Для специфичной изотермической амплификации фрагментов вирусных РНК мы использовали комбинацию ферментов,включающую ревертазу M-MuLV, РНКазу H, фрагмент Кленова ДНК полимеразы I E. coli и РНК-полимеразу фага T7. Нами было показано, что разработанный состав ферментов и реакционного буфера позволяет проводить
многократную амплификацию фрагментов РНК-мишеней на 6–8 порядковв течение 15–120 минут.
Одним из перспективных направлений в выявлении РНК патогеновв настоящее время является разработка методов на основе Cas13-опосредованной интерференции. На модельных фрагментах РНК вирусов гриппаА и коронавируса SARS-CoV-2 было показано, что за счет высокого уровня амплификации модифицированный нами протокол может применятьсяв сочетании с Cas13-опосредованной детекцией. Общее время проведения
реакции амплификации с последующей визуализацией результата за счетрасщепления неспецифического РНК-субстрата с флуоресцентной меткой
может составлять менее часа.
Альтернативным подходом к визуализации результатов реакции изотермической амплификации является детекция в режиме реального временис применением интеркалирующего красителя SYBR Green II. Было показано, что амплификация целевого фрагмента вирусных РНК происходитс экспоненциальным ростом в течение первых 30–40 минут, что позволяет
количественно детектировать фрагменты РНК вирусов гриппа А и коронавируса SARS-CoV-2 с чувствительностью до 10–100 копий.
Разработанные протоколы амплификации и детекции вирусных РНКмогут стать основой для разработки новых систем диагностики инфекционных заболеваний человека.

Вирусология

283

ПРОИЗВОДНЫЕ (1S)-(+)-КАМФОРА-10-СУЛЬФОКИСЛОТЫВ КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ФИЛОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ *
DERIVATIVES OF (1S)-(+)-CAMPHOR-10-SULFONIC ACIDS
AS INHIBITORS OF FILOVIRUS INFECTIONS
Д. В. Баранова 1, А. С. Соколова 1, О. И. Яровая 1, Д. Н. Щербаков 2,
Е. Д. Мордвинова 2, Н. Ф. Салахутдинов 1
1Институт органической химии им. Н. Н. Ворожцова СО РАН, Новосибирск
2Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
D. V. Baranova 1, A. S. Sokolova 1, O. I. Yarovaya 1, D. N. Shcherbakov 2,
E. D. Mordvinova 2, N. F. Salakhutdinov 1

1

N. N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry SB RAS, Novosibirsk
2State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: Darya_B00@mail.ruАннотация
Изучение влияния гетероциклических заместителей и функциональной группы
(1S)-(+)-камфора-10-сульфокислоты на противовирусную активность в отношении
филовирусов.

Abstract
Study of the influence of heterocyclic substituents and functional group of (1S)-(+)camphor-10-sulfonic acid on antiviral activity in relation to philoviruses.

Разработка эффективных противовирусных агентов, обладающих широким спектром противовирусной активности, особенно актуальна в случае поиска веществ, проявляющих активность в отношении эмерджентных
вирусов. В современной медицинской химии для повышения эффективности фармакологически активных веществ используют метод функционали© Д. В. Баранова, А. С. Соколова, О. И. Яровая, Д. Н. Щербаков, Е. Д. Мордвинова, Н. Ф. Салахутдинов, 2020*Исследования выполнены при поддержке Российского научного фонда, грант
19-73-00125.

284pаздел 3зации заведомо биологически активных соединений. Данный метод может
включать в себя, например, введение в остов гетероциклических фрагментов или изменение функциональных групп. Камфора — бициклический
монотерпеноид, имеющий 1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептановый остов.
Ранее нами было показано, что гетероциклические производные камфоры
являются перспективным исходным соединением для синтеза ингибиторов
вирусных инфекций [1, 2]. Целью данной работы было проведение химических модификаций производного камфоры — (1S)-(+)-камфора-10-сульфокислоты и изучение противовирусных свойств синтезированной библиотеки соединений (см. рисунок).

В результате работы получен широкий ряд сульфамидов для последующего исследования в отношении филовирусов. С использованием псевдовирусной системы, имеющей на своей поверхности гликопротеины вирусов
Марбург и Эбола обнаружена высокая противовирусная активность синтезированных агентов на ранней стадии вирусной репликации. Установлено, что присутствие заместителя в С-2 положении амидов (1S)-(+)-камфора-10-сульфокислоты ответственно за проявление противовирусной активности в отношении вируса Эбола.

Вирусология

285

ПОЛУЧЕНИЕ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО ШТАММА
ГРИППА В С ХИМЕРНЫМ ГЕМАГГЛЮТИНИНОМНА ОСНОВЕ ЛИНИЙ ВИКТОРИЯ И ЯМАГАТА *RESCUE OF COLD-ADAPTED INFLUENZA B STRAIN
WITH CHIMERIC HEMAGGLUTININ BASEDON VICTORIA AND YAMAGATA LINEAGES
П.-Ф. Вонг, Е. В. Крутикова, Е. А. Баженова, К. В. Баранов, Е. А. Степанова
Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург
P.-F. Wong, E. V. Krutikova, E. A. Bazhenova, K. V. Baranov, E. A. Stepanova
Institute of experimental medicine, St. Petersburg
E-mail: po333222@gmail.com
Аннотация
Получен штамм вируса гриппа В c химерным гемагглютинином, head-домен
которого получен от вируса линии В/Виктория, stalk-домен — от вируса линии В/Ямагата. Внутренние гены вируса унаследованы от донора аттенуации живой гриппозной вакцины типа В. Химерный реассортант будет использоваться для разработки живой гриппозной вакцины с расширенными протективными свойствами против штаммов гриппа В, относящихся к разным генетическим линиям.

Abstract
Influenza B strain expressing chimeric hemagglutinin (HA) was rescued. The head domain of this HA is taken from the B/Victoria lineage strain, and stalk domain is from the B/
Yamagata (B/Yam) lineage strain. The neuraminidase (NA) gene is from the B/Victoria (B/Vic) lineage strain. Internal genes of the virus are inherited from the Russian master donor
virus for live attenuated influenza vaccine of B subtype. The engineered reassortant might
be used to develop live influenza vaccines with broad protective capacity against both lineages of influenza B virus.

© П.-Ф. Вонг, Е. В. Крутикова, Е. А. Баженова, К. В. Баранов, Е. А. Степанова, 2020*Работа поддержана грантом Президента Российской Федерации MK3336.2019.4.

286pаздел 3

Introduction
Worldwide co-circulation of two influenza B genetic lineages — B/Victoria
and B/Yamagata underscores the need of vaccines with broad cross-protective
potential. To induce a cross-protective immunity, a promising approach is the development of genetically engineered formulations containing antigenic sites fromboth genetic lineages. The HA stalk domain is relatively conserved but poorly immunogenic. Therefore, targeted induction of HA stalk-specific antibodies might
result in broader cross-protection. We developed a reassortant strain with chimeric HA, to study the potential of sequential immunization strategy for inducing
cross-lineage protection after immunization.
Materials and methods
Influenza B viruses B/Brisbane/60/2008 (B/Vic) and B/Phuket/3073/2013 (B/Yam) were received from CDC USA. Master donor virus of Russian LAIV B/
USSR/60/69 (B60) was developed at the Institute of Experimental Medicine. For
plasmid construction, Phusion Green Hot Start II High-Fidelity polymerase andSuperScript III One-Step RT-PCR kits were used for PCR amplification. Restriction enzymes BsmBI and SapI, T4 ligase were used in restriction digest and ligation. The virus was rescued through standard 8-plasmid protocol, pCIPolISapIT
vector (CDC USA) was used for reverse genetics of the reassortant.
Results
3 fragments of HA were obtained: the 1st fragment starting from 5’-UTR to nt
202 of B/Yam virus, the 2nd fragment containing nt from 203 to 957 (corresponds
to head domain, from A42 to A293 aa) of B/Vic virus, the 3rd fragment coveringresidues from 955 nt to the end of the segment of B/Yam virus. BsmBI sites between
these fragments were generated by primers in PCR. The chimeric HA segment wasconstructed by triple ligation of fragments. Chimeric HA gene was cloned intopCIPolISapIT plasmid by SapI sites. 8 plasmids, encoding influenza B genes: chimeric HA, NA from B/Vic strain, 6 genes from B60 virus, were co-transfected byelectroporation of Vero cells to rescue the chimeric virus. Hemagglutination activity of chimeric HA of the rescued virus with 1 % chicken red blood cells is 128.
Conclusions
Reassortant of influenza B virus with chimeric HA domains from two different
genetic lineages, based on the cold-adapted influenza B strain B60, was rescued.
The ability of engineered reassortant to induce cross-reactive immune response
against both influenza B lineages strains will be further evaluated using a sequential immunization schedule.

Вирусология

287

ИЗОЛЯЦИЯ, ХАРАКТЕРИЗАЦИЯ И ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ
АНАЛИЗ ДВУХ НОВЫХ ШТАММОВ ВИРУСА НГАРИ,ОБНАРУЖЕННЫХ В ИКСОДОВЫХ КЛЕЩАХ В ГВИНЕЕISOLATION, CHARACTERIZATION, AND PHYLOGENETIC ANALYSISOF TWO NEW STRAINS OF NGARI VIRUS DETECTEDIN IXODID TICKS FROM GUINEA
А. В. Гладышева, Р. Б. Баяндин, Е. В. Протопопова, В. А. Святченко
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
A. V. Gladysheva, R. B. Bayandin, E. V. Protopopova, V. A. Svyatchenko
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: gladysheva_av@vector.nsc.ruАннотация
Вирус Нгари (NRIV) — переносимый комарами вирус из рода Orthobunyavirus. Является высокопатогенным и способен вызывать геморрагическую лихорадку у человека. Нами впервые был обнаружен вирус Нгари на территории Гвинеи — в иксодовых клещах, собранных с крупного рогатого скота. Посредством
пассирования на культуре клеток Vero было выделено два штамма Tintin/Kankan/
Guinea/2018 и Sabadou/Kankan/Guinea/2018 NRIV. Инфекционный титр вируса составил 107 ТЦПД50/мл. Выполнено полногеномное секвенирование обоих штаммов
NRIV. Общая длина генома NRIV — 12 269 п. о. Уровень гомологии нуклеотидной
последовательности с наиболее близким штаммом Adrar NRIV составил 96 (сегментS) и 98 % (сегменты M, L). При этом данные штаммы кластеризовались в отдельную
генногруппу на филогенетическом дереве.

Abstract
The Ngari virus (NRIV) is a mosquito-borne virus of the genus Orthobunyavirus. Thisvirus is pathogenic for humans and associated with hemorrhagic fever. We are detected of
the Ngari virus in ixodid ticks collected from cattle in Guinea. The Tintin/Kankan/Guinea/2018 and Sabadou/Kankan/Guinea/2018 strains of the Ngari virus were isolated withusing Vero cells. The virus infectious titer was 107 TCID50/ml. The sequences of complete
genome of the NRIV were determined. The length of the NRIV genomes are 12 269 bp. The© А. В. Гладышева, Р. Б. Баяндин, Е. В. Протопопова, В. А. Святченко, 2020

288pаздел 3

level of the nucleotide sequence identity with the closest Adrar strain of NRIV was 96 %(S-segment) and 98 % (M, L-segments), respectively. Moreover, these strains were clusteredinto a separate genetic group on the phylogenetic tree.

Вирус Нгари — переносимый комарами вирус из рода Orthobunyavirus(семейство Peribunyaviridae, отряд Bunyavirales). Данное семейство является
одним из самых крупных и содержит более 170 вирусов, в том числе несколько вирусов, имеющих важное значение для общественного здравоохранения. NRIV является высокопатогенным и способен вызывать геморрагическую лихорадку у человека. Геном NRIV состоит из трех сегментов РНКотрицательной полярности: S, M и L. NRIV — это естественный реассортант двух ортобуньявирусов: Bunyamwera (сегменты L и S) и Batai (сегмент
M). На сегодня в международной базе GenBank депонировано всего лишь5 полногеномных последовательностей NRIV.

Филогенетическое дерево, построенное по М-сегменту NRIVВ данном исследовании впервые был обнаружен вирус Нгари на территории Гвинеи. Был произведен скрининг иксодовых клещей, собранныхс крупного рогатого скота в регионах г. Киндия и Канкан. ПЦР-анализом
в 12 пулах клещей (Amblyomma variegatum, Rhipicephalus geigyi, Rh. boophilus) была обнаружена РНК вируса Нгари. Далее посредством пассирования на культуре клеток почки африканской зеленой мартышки (Vero) быловыделено два штамма Tintin/Kankan/Guinea/2018 и Sabadou/Kankan/Guin-Вирусология

289

ea/2018 NRIV. Инфекционный титр вируса составил 10 7 ТЦПД50/мл. Намибыло произведено полногеномное секвенирование всех трех сегментов
штаммов Tintin/Kankan/Guinea/2018 и Sabadou/Kankan/Guinea/2018. Проведено депонирование полногеномных последовательностей в международной базе данных GenBank под номерами MT929317–MT929322. Общая
длина генома NRIV составила 12 269 нуклеотидов: сегмент S — 954 п. о.,сегмент М — 4439 п. о., сегмент L — 6876 п. о. Филогенетический анализ
однозначно показал, что обнаруженные штаммы NRIV являются реассортантами и имеют S-сегмент вируса Bunyamwera, и M-сегмент вируса Batai(см. рисунок). Наиболее близкородственным к штаммам Tintin/Kankan/
Guinea/2018 и Sabadou/Kankan/Guinea/2018 является штамм Adrar NRIV(GenBank ID: KJ716848), который был изолирован в Мавритании в 2010 годуот коз во время вспышки лихорадки долины Рифт. Уровень гомологии нуклеотидной последовательности составил 96 (по сегменту S) и 98 % (по сегментам M, L). При этом оба штамма кластеризовались в отдельную генногруппу на филогенетическом дереве.
В ходе данного исследования на территории Гвинеи в иксодовых клещах, собранных с крупного рогатого скота, впервые был обнаружен вирус
Нгари. Определенные нами полногеномные последовательности штаммов
Tintin/Kankan/Guinea/2018 и Sabadou/Kankan/Guinea/2018 станут основойдля будущих исследований, направленных на изучение генетических особенностей NRIV, связанных с изменением вирулентности при реассортации
буньявирусов, а также будут использованы для совершенствования генетической диагностики этой инфекции.

pаздел 3290АВУЛАВИРУСЫ ПТИЦ, ВЫЯВЛЕННЫЕВО ВРЕМЯ МОНИТОРИНГА ВИРУСОВ ГРИППА АНА ТЕРРИТОРИИ СИБИРИ В 2019 Г. *AVIAN AVULAVIRUSES DETECTED DURING THE MONITORINGOF INFLUENZA A VIRUSES IN THE TERRITORY OF SIBERIA IN 2019А. А. Дерко 1, 2, Н. А. Дубовицкий 1, А. Г. Мархаев 1, Т. А. Мурашкина 1,
А. А. Суворова 1, К. А. Шаршов 1, А. М. Шестопалов 1
1Федеральный исследовательский центр фундаментальнойи трансляционной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет

A. A. Derko 1,2, N. A. Dubovitskiy 1, A. G. Markhaev 1,
T. A. Murashkina 1, A. A. Suvorova 1, K. A. Sharshov 1, A. M. Shestopalov 1
1

Federal Research Center of Fundamental
and Translational Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
E-mail: a.derko@g.nsu.ruАннотацияВ ходе мониторинга вирусов гриппа А у диких водоплавающих птиц Сибири
было выявлено 23 гемагглютинирующих вируса, которые по результатам ПЦР неявлялись вирусом гриппа А. По итогам полногеномного секвенирования было установлено, что данные изоляты относятся к подсемейству Avulavirinae и принадлежатк двум видам авулавирусов: AAvV-4 и AAvV-6. Все изоляты были получены от птицрода Anas, семейства утиные (Anatidae).

Abstract
During the monitoring of influenza A viruses in wild waterfowl in Siberia, 23 hemagglutinating viruses were detected, which, according to the results of PCR, were not influenza A. Based on the results of genome-wide sequencing, it was found that these viruses© А. А. Дерко, Н. А. Дубовицкий, А. Г. Мархаев, Т. А. Мурашкина, А. А. Суворова,К. А. Шаршов, А. М. Шестопалов, 2020*Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда, проект
№ 20-44-07001.

Вирусология

291

belong to two species, AAvV-4 and AAvV-6 of Avulavirinae subfamily. All isolates wereobtained from birds of the genus Anas, family Anatidae.

Авулавирусы птиц (AAvV) составляют подсемейство Avulavirinae семейства Paramyxoviridae. AAvV-4 и AAvV-6 способны вызывать респираторные
заболевания и нарушения в репродуктивной системе птиц. Об обнаружении AAvV часто сообщается в рамках мониторинга вирусов гриппа у диких водоплавающих птиц в разных странах. Синергический эффект между
разными видами РНК-вирусов в пределах организма одного хозяина может
значительно влиять на динамику заболевания. Так, например, наблюдалось
увеличение распространенности птичьего коронавируса у птиц, коинфецированных вирусами гриппа [1].
В 2019 году было собрано 1178 клоакальных мазков от диких птиц из
7 регионов Сибири. В результате культивирования проб на развивающихся
куриных эмбрионах [2] было получено 23 гемагглютинирующих изолята,которые были проверены на наличие гена М вируса гриппа А методом ПЦР«в режиме реального времени» с использованием набора реагентов «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) на амплификаторе «CFX96» (Bio-Rad Laboratories, США). По результатам ПЦР все 23 изолята не содержали искомого гена. Полногеномное
секвенирование проводили на платформе Miseq (Illumina, США), РНК получали при помощи набора «RNeasy Mini» (Qiagen, Германия). Библиотеки
кДНК готовили с использованием набора для подготовки «NEBNext Ultra
RNA Library Prep» (New England Biolabs, США). В результате было установлено, что 14 изолятов из 23 относятся к виду авулавирус AAvV-4, а 9 изолятов — к виду авулавирус AAvV-6 (см. таблицу).
Все изоляты были выделены от 8 видов отряда гусеобразные (Anseriformes), семейства утиные (Anatidae), рода Anas. Наибольшее количество
изолятов было получено от особей вида чирок-свистунок (Anas crecca).
Процент выделения всех авулавирусов от общего количества собранных
проб составил 1,95 (95 % ДИ: 1,16–2,74 %). Для вирусов гриппа А, выделенных в этих же регионах в 2019 г., этот показатель составил 3,99 (95 % ДИ:
2,87–5,11 %).

pаздел 3292Количество проб, собранных в разных регионах Сибири в 2019 г.
Количество
выделенных
изолятов AAvV-4 *Новосибирская область
225
0Омская область
191
1Республика Тыва350Республика Бурятия
245
2Приморский край323
7Амурская область
104
2Сахалинская область
55
2
Всего
1178 (100 %)
14 (1,19 %)Место сбора

*Количество
пробКоличество
выделенных
изолятов AAvV-6 **
0
3
0
1
2
3
0
9 (0,76 %)AAvV-4 — авулавирус птиц 4, род Paraavulavirus
AAvV-6 — авулавирус птиц 6, род Metaavulavirus**Авулавирусы AAvV-4 и AAvV-6 обладают гемагглютинирующей активностью, что позволяет выявить их из общего количества проб при помощи
стандартной методики проведения РГА [2]. Однако, согласно имеющимсяв литературе данным, не все штаммы данных видов имеют гемагглютинирующую активность. Ежегодные единичные сообщения о выделении новых
изолятов с изменениями в геноме, как высоко-, так и низкопатогенными,говорят о том, что различные авулавирусы одновременно развиваются среди широкого спектра видов птиц по всему миру [3]. Патогенный потенциал
вирусов подсемейства Avulavirinae, представленность этих вирусов в популяциях птиц, соотношение с вирусом гриппа А на данный момент остаются
неизвестными и требуют дальнейшего изучения.
Литература
1. Wille M., Avril A., Tolf C., Schager A., Larsson S., Borg O., Olsen B., Waldenström J.
Temporal dynamics, diversity, and interplay in three components of the virodiversity ofa Mallard population: Influenza A virus, avian paramyxovirus and avian coronavirus //Infection, Genetics and Evolution. 2015. Vol. 29. P. 129–137.
2. McGinnes L.W., Pantua H., Reitter J., Morrison, T. G. Newcastle Disease Virus:
Propagation, Quantification, and Storage // Current Protocols in Microbiology. 2006. 1:
15F.2.1–15F.2.18.
3. Aziz-ul-Rahman Munir M., Shabbir M. Z. Comparative evolutionary and phylogenomic analysis of Avian avulaviruses 1–20 // Molecular Phylogenetics and Evolution, 2018.
Vol. 127. P. 931–951.

Вирусология

293СЛУЧАИ ОБНАРУЖЕНИЯ РНК КОРОНАВИРУСА SARSCOV-2 У НОВОРОЖДЕННЫХ В НОВОСИБИРСКЕ
DETECTION OF SARS-COV-2 RNA IN NEWBORNS IN NOVOSIBIRSK
Е. П. Емельянова 1, Ю. В. Кононова 1, Е. В. Замятина 2,
Е. А. Казачкова 1, О. П. Хрипко 1, И. А. Цыцорина 2,
Е. С. Серебренникова 2, В. И. Гогонина 2, А. М. Шестопалов 1
1Научно-исследовательский институт экспериментальнойи клинической медицины, Новосибирск
2Центральная клиническая больница СО РАН, Новосибирск
E. P. Emelianova 1, Y. V. Kononova 1, E. V. Zamyatina 2,
E. A. Kazachkova 1, O. P. Khripko 1, I. A. Tsytsorina 2,
E. S. Serebrennikova 2, V. I. Gogonina 2, A. M. Shestopalov 1
1

Research Institute of Experimental and Clinical Medicine
FRC FTM SB RAS, Novosibirsk
2
Central Clinical Hospital SB RAS, Novosibirsk
E-mail: blood-boom-chacha@mail.ruАннотация
COVID-19 — инфекционное заболевание, вызываемое коронавирусом SARSCoV-2. Коронавирусы — семейство РНК-содержащих вирусов. Авторы представляют результаты диагностики COVID-19 у новорожденных, проводившейся с помощью ОТ-ПЦР в режиме реального времени.

Abstract
COVID-19 is a new infectious disease caused by the SARS-CoV-2 coronavirus. Coronaviruses are a family of RNA viruses. The authors present the results of the diagnosis of
COVID-19 in newborns, which is carried out using real-time RT-PCR.

Важную роль в понимании проблем, связанных с COVID-19, играет возможность внутриутробного трансплацентарного инфицирования.
© Е. П. Емельянова, Ю. В. Кононова, Е. В. Замятина, Е. А. Казачкова, О. П. Хрипко, И. А. Цыцорина, Е. С. Серебренникова, В. И. Гогонина, А. М. Шестопалов, 2020

294pаздел 3Данные о перинатальной инфекции SARS-CoV-2 по-прежнему остаются
малочисленными.
На базе ФИЦ ФТМ СО РАМН в период с апреля по сентябрь 2020 годабыла проведена диагностика образцов пуповинной крови, мазков с последаи кала 55 новорожденных, а также молозива их матерей на наличие SARSCoV-2 методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Пробы были получены для диагностики из родильного дома ЦКБ СО РАН.
По результатам ПЦР, у трех новорожденных было выявлено наличиеSARS-CoV-2 в пробах кала и у одного — положительная проба пуповинной крови. Эти пробы были получены от разных пациентов. Также SARSCoV-2 был обнаружен в пробах из последа и плода, полученных в результате
выкидыша на сроке беременности 19–20 недель у инфицированной, получившей полный курс лечения и имевшей на момент поступления в роддом
отрицательный мазок матери.
На основе полученных данных можно говорить о возможности
вертикальной трансмиссии SARS-CoV-2. Проблема перинатального
COVID-19 требует дальнейшего всестороннего исследования.
Литература
1. Вашукова М. А., Цинзерлинг В. А., Семенова Н. Ю., Луговская Н. А.,Наркевич Т. А., Суханова Ю. В. Возможна ли перинатальная COVID-19: первые результаты // Журнал инфектологии. 2020. № 12(3). С. 51–55.
2. Чепурнов А. А., Шаршов К. А., Казачинская Е. И., Кононова Ю. В.,Казачкова Е. А., Хрипко О. П., Юрченко К. С., Алексеев А. Ю., Воевода М.
И., Шестопалов А. М. Антигенные свойства изолята коронавируса SARSCoV-2/human/RUS/Nsk-FRCFTM-1/202, выделенного от пациента в Новосибирске // Журнал инфектологии. 2020. № 12(3). С. 42–50.

Вирусология

295

ОРИГИНАЛЬНЫЙ БАКТЕРИОФАГ ENTEROBACTER, EC151
A NOVEL ENTEROBACTER BACTERIOPHAGE, EC 151
Г. А. Ждид 1,2, В. В. Морозова 2, Ю. Н. Козлова 2,
А. Ю. Тикунов 1,2, Н. В. Тикунова 1,2
12Новосибирский государственный университет
Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН,Новосибирск
G. A. Jdeed 1,2, V. V. Morozova 2, Yu. N. Kozlova 2,
A. Yu. Тikunov 1,2, N. V. Tikunova 1,2
1

2

Novosibirsk State University
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosiborsk
E-mail: ghadeerjdeed@outlook.com
Аннотация

Выделен и охарактеризован новый бактериофаг EC151, специфичный к штамму
Enterobacter cloacae КЭМТК 2064. По морфологии капсида бактериофаг был отнесенк семейству Siphoviridae. Размер генома EC151 составил 60,754 н. п. В геноме содержатся 50 предполагаемых открытых рамок считывания, 36 из которых кодируют
белки с известными функциями. По данным филогенетического анализа основных
структурных белков фага, они имеют большее сходство с белками бактериофагов,специфичных к Escherichia, Pseudomonas и Vibrio, чем с белками других энтеробактерных бактериофагов. Предположительно, бактериофаг EC151 относится к новому
роду семейства Siphoviridae.

Abstract
A novel bacteriophage EC151 specific to the Enterobacter cloacae strain CEMTC 2064 was
isolated and characterized. It was assigned to the family Siphoviridae according to the morphology of the capsid. The size of the EC151 genome was 60754 b.p. The phage genome contains 50 putative open reading frames, 36 of which encode proteins with predicted functions.
According to the phylogenetic analysis of the main proteins of the phage EC151, a greater
similarity was found with the proteins of bacteriophages specific to Escherichia, Pseudomonas,
and Vibrio, than with the proteins of other Enterobacter phages. And according to the same
analysis, the phage EC151 was suggested to belong to a new genus of the family Siphoviridae.
© Г. А. Ждид, В. В. Морозова, Ю. Н. Козлова, А. Ю. Тикунов, Н. В. Тикунова, 2020

296pаздел 3

The genus Enterobacter includes anaerobic, motile, gram negative bacilli,
belonging to the family Enterobacteriaceae. The genus Enterobacter includes 22
species. Among them, only certain ones are associated with hospital acquired
infections. Enterobacter species are members of the ESKAPE group, the leading
cause of resistant nosocomial infections. bacteriophages represent a promisingalternative to antibiotics to treat infections caused by antibiotics resistant bacteria.
Currently, there are 33 genomes of Enterobacter phages in the NCBI GenBank
database.
Here, we report the genome sequence and characteristics of a novel phage
EC151 that infects Enterobacter cloacae CEMTC 2064. According to the structureof the virion (Fig. 1), the phage EC 151 was classified to Siphoviridae family. The
EC151 genome has 60,754 base pairs and contains 50 putative genes, 36 of themencode proteins of predicted function based on sequence similarity, these include:
structural proteins, and enzymes like RNase, helicase and DNA polymerase, theexistence of the latter indicates that the EC151 phage doesn’t need to use thebacterial polymerase when replicating (Fig. 2).

Fig. 1. EC151 virion

Phylogenetic analysis of the EC151 putative proteins revealed that some of
the key genes’ products of the EC151 genome (capsid protein, terminase, DNA
polymerase, and tape measure protein) have more similarities with proteins from
Escherichia, Pseudomonas and Vibrio phages, than with the proteins of other
Enterobacter phages (Fig. 3). The analysis suggested that Enterobacter phage EC
151 belongs to a new genus in the Siphoviridae family.

Вирусология

Fig. 2. EC151 annotated genome

Fig. 3. Phylogenetic tree comparison of EC151 tape measure proteinwith proteins of similar phages297pаздел 3298РЕТРОСПЕКТИВНАЯ ДИАГНОСТИКА ОРТОПНЕВМОВИРУСНОЙ
ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
NEW DIAGNOSTIC TEST KIT FOR ORTHOPNEUMOVIRUS IN CATTLE
USING INDIRECT ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY
Е. А. Журавлёва
Федеральный научный центр —Всероссийский научно-исследовательский институт экпериментальной
ветеринарии РАН им. Я. Р. Коваленко и К. И. Скрябина, Москва
E. A. Zhuravleva
All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine
named after K. I. Scriabin and Y. R. Kovalenko, Moscow
E-mail: zhuravleva.zhenya@gmail.com
Аннотация
Ортопневмовирусная инфекция крупного рогатого скота, ранее респиратор- носинцитиальная инфекция (РСИ КРС), принадлежит к роду Ortopneumovirusсемейства Pneumovirinae. За рубежом считается одним из основных возбудителей
респираторных заболеваний крупного рогатого скота, особенно молодняка. Эта инфекция встречается и в России. Разработанная тест-система, использующая метод
непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) позволяет выявить антитела к ортопневмовирусной инфекции в сыворотке крови переболевших и вакцинированных животных.

Abstract
Orthopneumovirus infection of cattle, formerly known as bovine respiratory syncytial
virus infection (BRSV), belongs to the genus Ortopneumovirus of the Pneumovirinae family. Abroad, it is considered one of the main causative agents of respiratory diseases in cattle,
especially young animals. This infection is also found in Russia. A newly- developed test
kit using indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) makes it possible to detect
antibodies to orthopneumovirus infection in the blood serum of recovered and vaccinatedanimals.

© Е. А. Журавлёва, 2020Вирусология

299

Ортопневмовирусная инфекция (респираторно-синцитиальная инфекция, РСИ) крупного рогатого скота (КРС) характеризуется высокой заболеваемостью (порядка 80 %) и смертностью не более 2–3 %. Инфекция
распространена во многих странах, встречается и в России. Недостаточная
оснащенность лабораторий диагностическими средствами не позволяет
оценить реальную распространенность РСИ. Лабильность возбудителя
осложняет проведение вирусологического исследования, что повышает
значимость ретроспективной диагностики. Нами была разработана и испытана тест-система для выявления антител к возбудителю РСИ при помощи иммуноферментного анализа. В качестве антигена был использован
штамм 375, специфичность которого подтверждали методом иммунохроматографии с использованием коммерческого набора RSV Stick One Step(Израиль). Культуральный вирус с титром 5–5,5 lg ТЦД50/см3 концентрировали осаждением на ультрацентрифуге при 35 тыс. об/мин в течение 1,5 часов и очищали в градиенте сахарозы. В качестве конъюгата использовали
антитела кролика к иммуноглобулинам КРС, меченные пероксидазой хрена. Оптимальная концентрация антигена составила 100 мкг/мл с временем
адсорбции 1 ч при 37 °С. Оптимальное разведение сыворотки составило
1:100, время инкубации 1 час при температуре 20 °С или 30 мин при 37 °С.
Экспозиция с мечеными антителами составляла 30 мин при температуре
20 °С; уменьшение до 15 минут приводило к снижению чувствительности,а увеличение до 1 часа не оказывало существенного влияния. В качестве
субстрата был использован коммерческий раствор тетраметилбензидина. Оптимальное время инкубации с субстратом составило 15 минут. Дляопределения специфичности, чувствительности и диагностической ценности тест-системы в испытания были включены пробы сыворотки переболевших РСИ, вакцинированных животных, иммунная сыворотка к вирусам
инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, болезни слизистых, парагриппа-3, фетальная сыворотка. Предварительно все пробы были исследованы в реакции нейтрализации (РН) для определения антител к возбудителю РСИ. Результаты ИФА учитывали по изменению оптической плотностипри длине волны 450 — 605 нм. Ложноположительные реакции не превышали 4 %, ложноотрицательные отсутствовали, совпадаемость ИФА и РНсоставила 95,8 %, воспроизводимость — 98 %.

pаздел 3300СОЗДАНИЕ ПАНЕЛИ ПСЕВДОВИРУСОВ ЭБОЛА *CREATION OF THE EBOLA PSEUDOVIRUS PANEL
А. В. Зыбкина, Д. Н. Щербаков
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
A. V. Zybkina, D. N. ShcherbakovState Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: zybkina_av@vector.nsc.ruАннотацияВ работе описано создание панели рабдовирусных и лентивирусных частиц,псевдотипированных поверхностным гликопротеином (GP) вируса Эбола. Для получения псевдовирусных частиц сконструированы плазмиды, содержащие гены GP.
Проведен анализ функциональной активности полученных псевдовирусных частиц.

Abstract
The work describes the creation of a panel of rhabdovirus and lentiviral particles
pseudotyped with the surface glycoprotein (GP) of the Ebola virus. To obtain pseudoviralparticles, plasmid genes GP were constructed. The analysis of the functional activity of theobtained pseudoviral particles was carried out.

Вирус Эбола вызывает геморрагическую лихорадку с высоким уровнем летальности. Крупные вспышки в Западной Африке в 2014–2015 годахи Демократической Республике Конго в 2018–2019 годах заставляют обратить повышенное внимание на эту группу вирусов. В настоящее время отсутствуют лицензированные препараты против вируса Эбола. Разработку
препаратов задерживают в том числе строгие правила и опасность работы с натуральным вирусом. В последнее время разработан ряд подходов,позволяющих изучать особенности гуморального иммунного ответа с ис© А. В. Зыбкина, Д. Н. Щербаков, 2020*Исследование поддержано грантом РФФИ № 19-34-90076 «Аспиранты».

Вирусология

301

пользованием псевдотипированных вирусоподобных частиц одного цикла. Данная технология безопасна и высокоэффективна. С использованием
этого подхода получают вирусоподобные частицы, псевдотипированные
поверхностным гликопротеином исследуемого вируса, при этом подобные
частицы не способны к репликации, что обеспечивает высокую степень
безопасности работы.
В ходе работы по получению рабдовирусных и лентивирусных частиц,псевдотипированных поверхностным гликопротеином (GP) вируса Эбола,на первом этапе была сформирована коллекция плазмид, кодирующих поверхностные белки представителей рода Эболавирус. Для этого проведен
анализ доступных геномов вируса, представленных в базе данных GenBank,и выбраны последовательности, кодирующие GP штаммов: Zaire ebolavirus,
Sudan ebolavirus, Reston ebolavirus, Tai Forest ebolavirus, Bombali ebolavirus.
Синтез нуклеотидных последовательностей GP осуществлен коммерческой фирмой (ДНК-синтез, Москва). Соответствие нуклеотидной последовательности подтверждено секвенированием. Последовательности быликлонированы в составе коммерчески доступного вектора ph. Для анализа
функциональности полученными плазмидами трансфецировали клетки
НЕК293FТ. Способность к трансдукции полученных частиц оценивали припомощи панели культур клеток млекопитающих, в среднем она составила
порядка 200000 RLU.

pаздел 3302АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ АССОЦИАЦИИ
ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА С РИСКОМ РАЗВИТИЯ
ОНКОПАТОЛОГИЙ РАЗЛИЧНЫХ ЛОКАЛИЗАЦИЙ *ANALYSIS OF THE RESULTS OF STUDIES OF THE ASSOCIATIONOF HUMAN PAPILLOMAVIRUS WITH THE RISK OF DEVELOPINGONCOPATHOLOGIES OF VARIOUS LOCALIZATIONS
М. К. Ибрагимова, Е. В. Кокорина, М. М. Цыганов, Н. В. Литвяков
Научно-исследовательский институт онкологии
Томского национального исследовательского медицинского центра РАН
M. K. Ibragimova, E. V. Kokorina, M. M. Tsyganov, N. V. LitviakovCancer Research Institute, Tomsk NRMC
E-mail: imk1805@yandex.ruАннотацияВ настоящий момент малочисленны работы, где внимание уделяется вопросу
изучения влияния вируса папилломы человека (ВПЧ) на развитие таких онкопатологий, как рак легкого, рак молочной железы, рак яичника и т. д. Обсуждаются путиинфицирования, возможные молекулярные механизмы злокачественной трансформации с участием ВПЧ и значение инфицированности для тактики лечения больных. Однако данный вопрос остается открытым.

Abstract
At the moment, in a small number of works, attention is paid to the study of the influence of the human papillomavirus (HPV) on the development of such oncopathologies
as lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, etc. The pathways of infection, possible molecular mechanisms of malignant transformation involving HPV and the importance of
infection for the treatment of patients are discussed. But one way or another, this question
remains open.

© М. К. Ибрагимова, Е. В. Кокорина, М. М. Цыганов, Н. В. Литвяков, 2020*Работа поддержана грантом РФФИ 20-015-00023 А.

Вирусология

303Актуальность работы
Основной эпидемиологической особенностью ВПЧ-инфекции является
широкое распространение. На протяжении всей жизни 8 из 10 человек инфицируются данным вирусом, и у 2–9 % из них ВПЧ-инфекция персистирует, приводя к онкологическим заболеваниям.
Целью данной работы является анализ мировых литературных данных
распространенности ВПЧ у больных с наличием злокачественных новообразований (ЗНО) толстого кишечника, гортани и ротоглотки, молочной
железы, легкого и яичника.
Материалы и методыБыл проведен поиск на глубину 26 лет по базам данных PubMed и Web
of Science. Проведен мета-анализ распространенности ВПЧ при помощи
программы Comprehensive Meta-Analysis 3.0. В таблице приведены данные,включенные в исследование.
Данные для проведения мета-анализа распространенности ВПЧпри ЗНО пяти локализаций

Локализация
Колоректальный
рак (КРР)Рак гортании ротоглоткиРак молочной
железы (РМЖ)Рак легкого (РЛ)Рак яичников
(РЯ)Количество
публикаций,включенныхв мета-анализ

Количество
образцов
опухолевого
материала

Количество
образцов
нормальной ткани

19

2049

830

28

4381

2345

29

2446

1144

30

2916

1487

29

2173

872

Результаты исследования
Частота инфицированности ВПЧ в опухоли при КРР составила 16 %,в нормальной ткани — 3 %. Результирующий относительный риск (RR) развития КРР при ВПЧ-инфекции составил RR(95 % CI) = 2,97(1,42–6,22) прир = 0,0039 (рис. 1).

304pаздел 3

Рис. 1. Результаты метаанализа частоты инфицированности ВПЧ при КРРПоказана высокая частота инфицированности ВПЧ карцином головыи шеи — 40,8 % (1,6–100 %). Установлено, что чаще всего вирус обнаруживался при раке полости рта (54 %), гортани (50 %) и ротоглотки (39 %).
Распространенность ВПЧ в опухолевой ткани молочной железы составила 25 % при инфицированности 4,5 % в нормальной ткани. Показатель
относительного риска развития РМЖ при ВПЧ-инфекции составил RR(95 % CI) = 3,6(2,3–5,6), при р = 2,82 × 10–8.
Результирующий относительный риск развития РЛ при ВПЧ составил
RR (95 % CI) = 3,49(2,43–5,01) при р = 0,000001. Распространенность ВПЧВирусология

305

в опухолевой ткани РЛ составила 28,7 % при инфицированности 7,3 %в нормальной ткани (рис. 2).

Рис. 2. Результаты метаанализа частоты инфицированности ВПЧ при РЛВыявлено, что распространенность ВПЧ в опухолевой ткани яичника
составила 22,4 % при показателе инфицированности 9,5 % в нормальной
ткани.
Выводы
Необходимо отметить значительный относительный риск развития РЛ,гортани и ротоглотки, КРР, РМЖ и РЯ при наличии инфицирования ВПЧ.
Это еще раз доказывает важность своевременного мониторинга папилломавирусной инфекции и подчеркивает необходимость дальнейшего включения ВПЧ-вакцинации в Национальный календарь профилактических
прививок.

pаздел 3306

N-АЦИЛГИДРАЗОНЫ КАМФОРЫ И ФЕНХОНА В КАЧЕСТВЕ
ИНГИБИТОРОВ ВИРУСА HANTAAN ВЫЗЫВАЮЩЕГО ГЛПС *CAMPHOR AND FENCHONE N-ACYLHYDRAZONES AS INHIBITORSOF HANTAAN VIRUS CAUSING HFRS
К. С. Ковалева 1, О. И. Яровая 1, А. В. Зайковская 2, Д. Н. Щербаков 2,
О. В. Пьянков 2, Ф. И. Зубков 3, Н. Ф. Салахутдинов 1
1Новосибирский институт органической химии
им. Н. Н. Ворожцова СО РАН
2Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
3Российский университет дружбы народов, Москва
K. S. Kovaleva 1, O. I. Yarovaya 1, A. V. Zaykovskaya 2,
D. N. Shcherbakov 2, O. V. Pyankov 2, F. I. Zubkov 3, N. F. Salakhutdinov 1
1

N. N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry SB RAS, Novosibirsk
2State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
3
RUDN University, Moscow
E-mail: kseniya.kovaleva3103@yandex.ruАннотация
Cинтезированы новые конъюгаты природных монотерпенов (+)-камфоры
и (–)-фенхона с эпоксиизоиндолами, содержащими карбоксильную функцию. Длясинтезированной библиотеки был проведен первичный скрининг в отношении вируса Хантаан и найдены его эффективные ингибиторы.

Abstract
New conjugates of natural monoterpenes (+)-camphor and (–)-fenchone with epoxyisoindoles containing a carboxyl function have been synthesized. For the synthesized library, an initial screening for the Hantaan virus was carried out and its effective inhibitors
were found.

© К. С. Ковалева, О. И. Яровая, А. В. Зайковская, Д. Н. Щербаков, О. В. Пьянков,Ф. И. Зубков, Н. Ф. Салахутдинов, 2020*Исследования выполнены при поддержке гранта РФФИ 18-03-00271.

Вирусология

307

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом — острое вирусное
природно-очаговое заболевание, характеризующееся системным поражением организма. Возбудитель ГЛПС относится к семейству буньявирусов и принадлежит к роду Hantavirus. Несмотря на тяжесть протекания этой болезнии широкое распространение, на сегодняшний день нет агентов, обладающих
специфической активностью к вирусам, вызывающим ГЛПС. Среди различных соединений, содержащих триметилбицикло[2.2.1]гептановую группировку, известны ингибиторы вирусов гриппа [1, 2], вируса Марбург [3], оспы[4, 5] и др. В представленной работе были синтезированы конъюгаты камфоры и фенхона с эпоксиизоиндолами, содержащими карбоксильную функцию.
Из (+)-камфоры и (–)-фенхона были получены гидразоны, далее по отработанной методике проводилась реакция карбоновых кислот с этилхлороформиатом и Et3N с последующим введением in situ в реакцию гидразонов камфоры и фенхона. Предложенный подход позволял выделять целевые соединения 1–14 с высокими выходами в виде смеси диастереомеров.

308pаздел 3Для синтезированной библиотеки N-ацилгидразонов 1–14 был проведен
первичный скрининг в отношении вируса Хантаан. Скрининг был проведен
коллегами из ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». Среди исследованных производных
было обнаружено соединение-лидер 10, ингибирующее вирус в концентрации 4 мкг/мл и обладающее SI = 230. Данные соединения обладают высоким
потенциалом для дальнейших исследований и создания новых противовирусных препаратов.
Литература
1. Sokolova A., Yarovaya O., Baev D., Shernyukov A., Shtro A., Zarubaev V.,
Salakhutdinov N. // Eur. J. Med. Chem. 2017. Vol. 127. P. 661.
2. Sokolova A., Yarovaya O., Semenova M., Shtro A., Orshanskay Y., Zarubaev V.,
Salakhutdinov N. // Med. Chem. Commun. 2017. Vol. 8. P. 960.
3. Kononova A., Sokolova A., Cheresiz S., Yarovaya O., Nikitina R., Chepurnov A.,
Pokrovsky A., Salakhutdinov N. // Med. Chem. Commun. 2017. Vol. 8. P. 2233.
4. Sokolova A. S., Yarovaya O. I., Bormotov N. I., Shishkina L. N., Salakhutdinov N. F. //Med. Chem. Commun. 2018. Vol. 9. P. 1746.

Вирусология

309

ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ КЛОНОВЫХ ВАРИАНТОВ ШТАММА ЛИВПВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫRESEARCH PROPERTIES OF CLONE VARIANTS
OF STRAIN LIVP OF VACCINIA VIRUS
Ю. В. Коняхина, И. В. Колосова, А. А. Сергеев, С. Н. Щелкунов
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
Y.V. Konyakhina, I. V. Kolosova, A. A. Sergeev, S. N. Shchelkunov
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: iuliakonyahina@yandex.ruАннотацияВ исследовании представлены данные получения клоновых вариантов штамма ЛИВП вируса осповакцины, сравнительного исследования динамики их ростана культуре клеток CV-1. На основании этих данных выбран клон № 1 (LIVP-1)
для оценки его свойств при интраназальном заражении мышей линии Balb/C.
Выполнены эксперименты по оценке динамики накопления LIVP-1 в легких мышей в течение 14 суток после заражения. Определены кривые изменения массы телаи массы легких интраназально инфицированных животных. Проводятся эксперименты по адаптации LIVP-1 к размножению в легких мышей.

Abstract
The study presents data on obtaining clonal variants of the LIVP strain of the vaccinia virus, a comparative study of the dynamics their growth on CV-1 cell culture. Basedon these data clone №1 (LIVP-1) was selected to evaluate its properties during intranasal infection of Balb/C mice. Experiments were performed to evaluate the dynamics of
LIVP-1 accumulation in the lungs of mice within 14 days after infection. Curves of changes
in body weight and lung weight of intranasally infected animals were determined. The experiments are being conducted to adapt LIVP-1 to reproduction in the lungs of mice.

Цель работы — получение клоновых вариантов вируса осповакцины,оценка их свойств при росте в культуре клеток, выбор наиболее инфекционного клона для дальнейшей адаптации на животных. Перед этапом пас© Ю. В. Коняхина, И. В. Колосова, А. А. Сергеев, С. Н. Щелкунов, 2020

310pаздел 3сирования вируса осповакцины на животных с целью вероятного изменения генотипа нами было проведено клонирование исходного вируса через
бляшку дважды под агарозой и один раз методом предельных разведений.
Получение клоновых вариантов вируса осповакцины необходимо для того,чтобы взятый нами для работы клон был однороден, имел конкретное количество пассажей и известную нуклеотидную последовательность генома.
Для получения клоновых вариантов был взят вирус осповакцины (ВОВ),штамм ЛИВП. Первое клонирование вируса ВОВ, штамм ЛИВП, проводили
через бляшку на монослое клеток под легкоплавкой агарозой. В результате
было отобрано несколько вирусных клонов. После 1-го клонирования заражали культуральные флаконы 25 см2 выделенными клонами, определялиих титры. Второе клонирование, которое проводили методом предельных
разведений, и третье клонирование осуществляли через бляшку под легкоплавкой агарозой.
После получения трех клоновых вариантов вируса осповакцины определяли динамику их роста на монослое культуры клеток CV-1 в сравнениис исходным ВОВ, штамм ЛИВП. Монослой культуры клеток CV-1 инфицировали с множественностью заражения 0,01 БОЕ/мл. Динамику роста
каждого варианта вируса оценивали через 0, 24, 48, 72 ч после заражения.
Клон № 1 (LIVP-1) был выбран для дальнейшего пассирования и адаптациик животным.

Рис. 1. Динамика роста клоновых вариантов ВОВ в культуре клеток CV-1

Вирусология

311

Динамику накопления вируса в легких после интраназального заражения (доза — 3х106 БОЕ/мышь) оценивали на мышах линии BALB/c массой
тела 14–18 г. Через каждые 2, 4, 6, 8, 10 суток эвтанизировали по 3 мыши методом цервикальной дислокации, вскрывали, извлекали легкие, из которых
получали гомогенаты. В гомогенатах легких определяли концентрацию/титр вируса методом бляшек на монослое культуры клеток CV-1.

Рис. 2. Динамика накопления ВОВ LIVP-1 в легких мышей, БОЕ/легкиеПри определении динамики накопления клона LIVP-1 в легких мышей отмечается тенденция к снижению количества вируса в легких после
4 суток, вплоть до минимально определяемого уровня на 10 сутки. В связис этим оптимальным сроком для извлечения легких для приготовления гомогенатов и дальнейшего пассирования вируса являются 3–4 сутки, когда
концентрация вируса в легких достигает максимального уровня до начала
элиминации вируса из легких.

pаздел 3312ПРОБЛЕМА ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ
ВИРУСОВ ПТИЦ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
THE PROBLEM OF REPRESENTING GENETIC DIVERSITY
OF BIRD VIRUSES CIRCULATING IN RUSSIAN FEDERATION
Д. Ю. Лепехина, Е. М. Харитонова, В. Ю. ЛагаМосковская государственная академия ветеринарной медициныи биотехнологии — МВА им. К. И. Скрябина
D. Yu. Lepekhina, E. M. Kharitonova, V. Yu. Laga
Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology —MVA named after K. I. Skryabin
E-mail: lepdauri@gmail.com
Аннотация
Определение филогенетических связей между представителями распространяющихся вирусных инфекций птиц является одной из актуальных задач современной
эпизоотологии ввиду экономической и здравоохранительной значимости данного
вопроса. Это позволяет оценивать динамику и предсказывать течения возможных
панзоотий, а также способствует разработке методов противоэпизоотологических
мероприятий.

Abstract
Determination of phylogenetic relationships between representatives of spreading viral
infections of birds is one of the urgent tasks of modern epizootology due to the economic and public health significance of this issue. It makes possible to assess the dynamics
and predict the course of potential panzootics, and also contributes to the development ofmethods of antiepizootic measures.

ВведениеВ мире на сегодняшний день циркулируют различные вирусы птиц. Самым известным является вирус гриппа птиц, он приносит значимый экономический ущерб птицеводству и влияет на здоровье людей. Тем не менее
© Д. Ю. Лепехина, Е. М. Харитонова, В. Ю. Лага, 2020Вирусология

313

прочие вирусные заболевания также вносят свой вклад в эпизоотологическую картину и требуют глубокого изучения.
Материалы и методы: база данных нуклеотидов GenBank®, MEGAX©
software — филогенетический анализ методом максимального правдоподобия.
Результаты
Анализ ресурсов GenBank® демонстрирует неравномерную представленность сиквенсов вирусных геномов. Наиболее часто публикуемыми являются последовательности вирусов птичьего гриппа и ротавирусной инфекции.
Данные о представленности геномов вирусов птиц в базе GenBank®

Возбудитель

Болезнь

Influenza virus AПтичий грипп
Avian
Вирус
encephalomyelitis энцефаломиелита
virus, Tremovirus A птицAvian pneumovirus(APV)Пневмовирус курБолезнь Марека
(нейролимфоматоз,Gallidalphaherpesvirus 2 паралич птиц)ParamixovirusБолезнь Ньюкасла
PMV-1, Newcastle (псевдочума
disease virus, NDV птиц)Инфекционная
бурсальная болезнь
(болезнь Гамборо,инфекционный
Infectious bursal
disease virus, IBD нефрозо-нефрит)Ротавирусная
инфекция птицRotavirus AВирусный энтерит
Duck enteritis virus утятКоличество Количество Количество
полных
частичных российских
геномов геномов
образцов
28 19627 541

873

6

74

1

0

15

0

35

547

3

1 385

7 107

151

92

4 683

65

20 52136 147

2 832

11

114

0

pаздел 3314Возбудитель
Egg-drop
syndrome-76
aviadeno-virus,
EDS-76Chicken anemia
virus, CAV
Avian leukosis
virus, ALV
Avian infectious
bronchitis virus,
avian
coronavirus, IBVБолезнь

Количество Количество Количество
полных
частичных российских
геномов геномов
образцов

Синдром снижения
яйценоскости,ССЯ-76
Инфекционная
анемия цыплят,синдром
дерматоподобной
анемии,«синее крыло»

18

29

0

226

579

4

Лейкоз птиц

188

1087

4

Инфекционный
бронхит

409

7 397

176

Для обоснования важности проведения молекулярно-генетического
анализа геномов вирусов птиц использовался пример вируса болезни Ньюкасла. Последовательности гена белка слияния (F), выделенные с территории России, кластеризовались с аналогичной последовательностью из Ирландии, а не с последовательностями из Украины или Средней Азии, какможно было бы ожидать.
ВыводДля воссоздания наиболее полной картины филогенетических связей
между мировыми и российскими штаммами вирусов птиц необходима более обширная представленность последовательностей вторых в международных базах данных.

Вирусология

315ХАРЕКТРИЗАЦИЯ ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩЕГО
МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ ВИРУСА
КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА IN VIVO
CHARACTERIZATION OF NEUTRALIZING MONOCLONAL ANTIBODY
AGAINST TICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS IN VIVO
А. Л. Матвеев 1, Л. Е. Матвеев 1, О. В. Стронин 2, И. К. Байков 1,
Л. А. Емельянова 1, Я. А. Клюсевич 1, Н. В. Тикунова 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Научно-производственное объединение по медицинским
иммунобиологическим препаратам «Микроген», Москва
A. L. Matveev 1, L. E. Matveev 1, O. V. Stronin 2, I. K. Baykov 1,
L. A. Emeljanova 1, Ya. A. Khlusevich 1, N. V. Tikunova 1
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
Microgen Scientific Industrial Company for Immunobiological Medicines, Moscow

2

E-mail: guterus@gmail.com
Аннотация
Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) является наиболее важным патогеном, переносимым клещами в семействе Flaviviridae и вызывает одну из самых тяжелых
нейроинфекций человека. В данном исследовании у нейтрализующего мышиного
моноклонального антитела (мкАТ) 14D5, которое ранее показало кросс-реактивное
связывание с несколькими флавивирусами, принадлежащими к группе клещевого
энцефалита, были изучены профилактические и терапевтические свойства у мышей BALB/c, инфицированных ВКЭ. До и после заражения мышам вводили мкАТ14D5 в дозах 100 мкг и 10 мкг на мышь. Моноклональное антитело 14D5 продемонстрировало высокую защитную эффективность при введении в высокой дозе через
один день после заражения, причем выживаемость была зависима от дозы ВКЭ.
Профилактическое введение мкАТ 14D5 было более эффективным, чем постконтактное введение; полная защита была продемонстрирована, когда мкАТ вводили заодин день до заражения. Кроме того, защитная эффективность мкАТ 14D5 была значительно выше, чем у сывороточного противоклещевого иммуноглобулина. Однако
© А. Л. Матвеев, Л. Е. Матвеев, О. В. Стронин, И. К. Байков, Л. А. Емельянова,Я. А. Клюсевич, Н. В. Тикунова, 2020

316pаздел 3никакой защиты не наблюдалось у мышей, получавших низкую дозу мкАТ 14D5 независимо от времени введения мкАТ и дозы ВКЭ. Также была исследована способность мкАТ 14D5 опосредовать ВКЭ-инфекцию у мышей, и результаты показали,что мкАТ 14D5 не усиливает TBEV-инфекцию независимо от времени введения
mAb. Был локализован нейтрализующий эпитоп мкАТ 14D5, он находится в 3 домене гликопротеина Е ВКЭ в области между 301–339 аминокислотными остатками,причем этот участок 3 домена является высококонсервативным среди флавивирусовиз группы клещевого энцефалита.

Abstract
Tick-borne encephalitis virus (TBEV) is the most important tick-transmitted pathogen
in the family Flaviviridae and causes one of the most severe human neuroinfections. In
this study, a neutralizing mouse mAb 14D5, which was previously shown to have cross-reactive binding to several flaviviruses belonging to the TBEV group, was examined for its
prophylactic and therapeutic effects in BALB/c mice infected with TBEV. Before and after
infection, mice were administrated mAb 14D5 at doses 100 μg and 10 μg per mouse. mAb
14D5 showed clear protective efficacy when injected at the high dose one day after infection, with survival rates that were TBEV dose-dependent. Prophylactic administrationof mAb 14D5 was more effective than post-exposure administration and complete protection was documented when the mAb was administered one day before infection. The
protective efficacy of mAb 14D5 was significantly higher than that of the anti-TBE serum
immunoglobulin. However, no protection was observed in mice received the low dose ofmAb 14D5 independent of the timing of mAb injection and TBEV dose. The ability of species-matched mAb 14D5 to mediate TBEV infection in mice was also investigated, and theresults indicated that mAb 14D5 did not augment TBEV infection independent of the timeof mAb administration. The neutralizing epitope for mAb 14D5 was localized in domain
III of glycoprotein E of TBEV in a region between residues 301–339, which is conserved
among flaviviruses from the TBEV group.

Вирусология

317

ЦИРКУЛЯЦИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙВ АГРОБИОЦЕНОЗЕ КАРТОФЕЛЬНОГО ПОЛЯVIRAL INFECTIONS CIRCULATION
IN THE POTATO FIELD AGROBIOCENOSIS
Н. В. Мацишина, О. А. Собко, П. В. Фисенко, И. В. КимФедеральный научный центр агробиотехнологии Дальнего Востока
им. А. К. Чайки, Уссурийск
N. V. Matsishina, O. A. Sobko, P. V. Fisenko, I. V. Kim
Far East Federal Research Center of agrobiotechnology
named after A. К. Chaika, Ussuriysk
E-mail: mnathalie134@gmail.com
Аннотация
Одним из важнейших факторов, влияющих на урожайность картофеля, являются
вирусные инфекции. В 2020 г. была выявлена эпифитотия вирусов картофеля. По данным ИФА было выявлено значительное заражение посадок картофеля PVY, PVS, PVM.
В собранных методом ПЦР насекомых выявили PVY (100 % встречаемости у лугового клопа и 50 % у картофельной коровки), PVX (50 % у картофельной коровки), PLRV
(50 % у клопа и 25 % у коровки), PVM (75 % у всех векторов), PVS (100 % у клопа). Методом ИФА в сорной растительности были определены следующие вирусы: PVS у Matricaria inodora var. agrestis Weiss, PVY и PLRV — Sonchus arvensis. Таким образом, на примере картофельного поля выявлены все этапы циркуляции вирусов в агробиоценозе.

Abstract
Viral infections are one of the most important factors affecting potato yield. In 2020,
the epiphytoty of potato viruses was detected. According to EIA data, a significant infectionof potato plantings with PVY, PVS, PVM was detected. In the collected insects, the PCR
method identified PVY (100 % occurrence in the meadow bug and 50 % for the 28-punctata potato ladybug), PVX (50 % for the 28-punctata potato ladybug), PLRV (50 % for themeadow bug and 25 % for the ladybug), PVM (75 % for all vectors), PVS (100 % for themeadow bug). The following viruses were identified by ELISA in weeds: PVS in Matricaria
inodora var. agrestis Weiss, PVY and PLRV — Sonchus arvensis. Thus, using the example
of a potato field, all stages of the viruses circulation in the agrobiocenosis were identified.
© Н. В. Мацишина, О. А. Собко, П. В. Фисенко, И. В. Ким, 2020

318pаздел 3

Viral infections are one of the most important factors affecting potato productivity[1]. Viruses are widespread in biocenoses and can infect a broad array of plant taxa,
which allows them to survive in natural reserves. Plants infection is possible both bya contact method (plant-plant) — in thickened crops plantings, and by means of insect vectors. This is aggravated by the fact that viral plant infections cannot be treatedwith traditional chemical actors [2].
In 2020 on the entomophytopathological area of a challenge infection context, an epiphytoty of potato viruses was detected. Symptoms were noted visually
and with photographs. To identify the infection type, potato leaves, weeds in thefield vicinity and the most common insect pests (field bug Lygus pratensis L. and28-punctata potato ladybug Henosepilachna vigintioctomaculata Motch.) were collected. ELISA was performed according to the standard method. Virus detection by
PCR was carried out using the “Fitoscreen” series reagents kit produced by Synthol.
The greatest manifestations of viral symptoms (4–5 points) were observed on plants
with maximum damage by insects (2–3 points for the meadow bug, 1–2 points forthe potato ladybug) in the early stages of the growing season. According to the ELISA data, a significant infection of potato plantings (53,85 % of experimental plants)
with PVY, PVS, PVM was detected, the most common was Y-virus (100 %), while
M and S-viruses were concomitant infections and were detected in 5,57 % of plants.
In the collected insects, the PCR method revealed PVY (100 % occurrence in themeadow bug and 50 % for the potato ladybird), PVX (50 % for the potato ladybug),
PLRV (50 % for the meadow bug and 25 % for the ladybug), PVM (75 % for all
vectors), PVS (100 % for the meadow bug). The following viruses were identified by
ELISA in weeds: PVS in Matricaria inodora var. agrestis Weiss, PVY and PLRV —Sonchus arvensis. It should be noted that wild camomile and field milk thistle are
the fodder base for vectors in the absence of agricultural plantings. The revealed
patterns of damage distribution and viral infection symptoms manifestation leave
no doubt about the mechanisms of infection. The detection of viruses in weeds indicates their natural focal origin, their detection in phytophages — the path of spread.
Thus, using the example of a potato field, all stages of the viruses circulation in
the agrobiocenosis were identified.
References
1. Rogozina E. V., Mironenko N. V., Chalaya N. A., Matsuhita Yu., Yanagisawa H.
Potato mosaic viruses affecting tuber producing plants Solanum L. species in the field genebank of VIR // Vavilov Journal of Genetics and Breeding 2019. Vol. 3. No. 23. P. 304–311.
2. Ryabtseva T. V., Kulikova V. I., Ilkevich O. G. Potato improvement by chemotherapy
in culture in vitro // International research journal. 2015. No. 10. Part 3. P. 66–68.

Вирусология

319

УНИКАЛЬНЫЕ РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ ВИЧ-1,ОБНАРУЖЕННЫЕ НА ТЕРРИТОРИИ СВЕРДЛОВСКОЙ ОБЛАСТИUNIQUE RECOMBINANT VARIANTS OF HIV-1 DETECTEDIN SVERDLOVSK REGION
Т. М. Налимова 1, Н. М. Гашникова 1, А. Н. Швалов 1,
А. В. Тотменин 1, Т. П. Сандарева 2, А. А. Поздеева 2
1Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
2Свердловский областной центр профилактикии борьбы со СПИД, Екатеринбург
T. M.Nalimova 1, N. M. Gashnikova 1, A. N. Shvalov 1,
A. V. Totmenin 1, T. P. Sandareva 2, A. A. Pozdeeva 2
12State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
Sverdlovsk regional center of AIDS prevention and treatment, Ekaterinburg
E-mail: nalimova_tm@vector.nsc.ruАннотацияНа территории Свердловской области доминирует распространение специфического российского субтипа А ВИЧ-1. При проведении молекулярно-биологических
исследований ВИЧ-1 на данной территории были выявлены 6 генетических вариантов вируса с мозаичной структурой, схожей с CRF03_AB ВИЧ-1.
Выполненные в работе углубленный филогенетический и рекомбинационный
анализы обнаруженных ВИЧ-1 доказали, что данные вирусы не могут быть отнесены к кластеру CRF03_AB, а являются уникальными ВИЧ-1, возникшими в результате отдельных рекомбинационных событий.

Abstract
Russian subtype A (A6) HIV-1 is predominately circulating on the territory of Sverdlovsk region. Molecular biological analysis of HIV-1 in this area revealed six genetic viralvariants of the with a mosaic structure similar to HIV-1 CRF03_AB.
The in-depth phylogenetic and recombination analyses of those HIV-1 variants showed
thatthese viruses represent novel HIV-1 variantsemerged due to individual recombination
events, and are not a part of the CRF03_AB cluster.
© Т. М. Налимова, Н. М. Гашникова, А. Н. Швалов, А. В. Тотменин, Т. П. Сандарева, А. А. Поздеева, 2020

320pаздел 3Мониторинг циркулирующих генетических вариантов является важным параметром характеристики формирования эпидемиологической картины распространения ВИЧ-1. Наблюдаемое увеличение вариабельности
ВИЧ-1 за счет распространения новых рекомбинантных форм вируса может сказаться на качестве диагностики ВИЧ-инфекции.
Целью работы было генотипирование рекомбинантных форм ВИЧ-1,выявленных в Свердловской области.
Исследовано 94 образца ВИЧ-1, собранных в Свердловской области
в 2019 г. С использованием платформы MiSeq получены прочтения 19 геномов ВИЧ-1 длиной 8 622 п. н., которые включали все области генома, кроме повторяющихся последовательностей LTR и 26 фрагментов ВИЧ-1,содержащих 2/3 генома (6220 п. н.). Для 49 ВИЧ-1 исследованы гены polи gag. При помощи онлайн-программы jpHMM установлено, что все шесть
найденных уникальных рекомбинантных форм (URF) ВИЧ-1 и референсный геном CRF03_AB ВИЧ-1 содержат схожий участок рекомбинациив гене pol (2700 п. н. ±40). Из них 5 URF имеют еще один общий участок
рекомбинации с CRF03_AB в области гена env ВИЧ-1 (8650 п. н. ±40) (см. рисунок). Для схожих участков геномов URF вируса и референсных геномов
CRF03_AB, А и В ВИЧ-1 были построены отдельные филогенетические деCRF03_ABRef
Ekat7eEkat41r
Ekat27eEkat15r_1
Ekat2_non-ef

Ekat50rОбозначения субтипов:A6
BРеференсный геном CRF03_AB
и 6 URF_А6В_ВИЧ-1 — jpHMMВирусология

321ревья. Исследуемые фрагменты URF ВИЧ-1 кластеризовались с вирусами
субтипов А и В, но не с CRF03_AB ВИЧ-1.
Среди исследованных URF только два варианта вируса статистически
достоверно формировали одну филогенетическую подветвь, подтверждая
эпидемическую связь пациентов-доноров ВИЧ, оставшиеся фрагменты URF
ВИЧ-1 располагались на отдельных ветвях генетических кластеров А и В.
ВыводыПри проведении молекулярно-генетического скрининга на территории
Свердловской области из 94 образцов ВИЧ-1, выделенных от ВИЧ-инфицированных жителей, 93 % ВИЧ-1 принадлежали субтипу А ВИЧ-1 (подсубтип А6). В 7 % были обнаружены и описаны новые URF_ВИЧ-1.
Углубленный филогенетический анализ доказал различное происхождение найденных шести вариантов URF ВИЧ-1, образованных в результате отдельных рекомбинационных событий. Выявленные ВИЧ-1 отнесенык новым уникальным формам URF А6В ВИЧ-1.

pаздел 3322МОДУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ МАКРОФАГОВ
МУЛЬТИГЕННЫМ СЕМЕЙСТВОМ MGF110
ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ *
MODULATION OF HOST GENE EXPRESSION BY AFRICAN SWINE
FEVER VIRUS MULTIGENIC FAMILY 110
М. В. Нефедьева, И. А. Титов
Федеральный исследовательский центр вирусологиии микробиологии, пос. Вольгинский
M. V. Nefedeva, I. A. Titov
Federal Research Center for Virology and Microbiology, Volginsky
E-mail: masha67111@mail.ruАннотация
Функциональная аннотация генома вируса африканской чумы свиней (АЧС)остается загадкой. В данной работе (использовался рекомбинантный вирус АЧС с делецией участка MGF 110 (АЧСΔMGF110) и секвенированием РНК с последующим
анализом дифференциальной экспрессии генов) мы впервые показали регуляцию
генов макрофагов свиней в первые часы после заражения вирусом. Индукция защитных механизмов клеточного противовирусного ответа при заражении рекомбинантным вирусом АЧСΔMGF110 делает его перспективным вакцинным кандидатом.

Abstract
The genome functional annotation of the African swine fever virus (ASFV) remains a mystery. Here, using recombinant ASFV with deletion MGF 110 region (ASFV
ΔMGF110) and RNA sequencing with following differential gene expression analysis we
studied the swine macrophages gene regulation at the first hours post infection. Noticed
induction of intrinsic antiviral immune response after ASFV ΔMGF110 infection, suggests
its strong protective potential as a vaccine candidate.

В странах с развитым свиноводством вирус АЧС имеет негативные социально-экономические последствия из-за отсутствия эффективной вак© М. В. Нефедьева, И. А. Титов, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 18-016-00216.

Вирусология

323

цины. Анализ аттенуированных штаммов показал отличия в составе вариабельных областей генома, а функции представителей большинства мультигенных семейств MGF остаются неизвестными.
В данной работе мы постарались выяснить роль генов MGF110 вирусаАЧС в индукции внутриклеточного иммунного ответа у свиней.
На основе вирулентного штамма Волгоград/14c методом гомологичной
рекомбинации был сконструирован химерный вирус АЧС с делецией 14 генов
(6040–13603) MGF110. Различий в кинетике репликации между исходным вирусом и АЧСΔMGF110 при заражении клеточной линии COS-1 не выявлено.
Для проведения РНК-секвенирования и анализа дифференциальной
экспрессии генов через 6 часов после заражения макрофагов свиней вирусом АЧСΔMGF110 и Волгоград/14c с множественностью заражения 0,1 былавыделена тотальная РНК с использованием Trizol LS и набора PureLink RNA
Micro Kit. Анализ качества РНК проводили на Bioanalyzer2100. Библиотеки РНК приготовлены с использованием NEBNext® Ultra™ RNA II Library
Prep Kit for lllumina® согласно инструкции. Полученные библиотеки былиразведены по протоколам Illumina и секвенированы при помощи HiSeq2500,а чтения картированы на геном Sus Scrofa (ID84). Дифференциальная экспрессия генов вычислена на основе LogFC в сравнении с неинфицированной культурой клеток. Статистически достоверные значения (p < 0,05) былианнотированы с использованием geneontology.org.
В результате проведенных исследований было получено 1182892,
12144228 и 12520148 прочтений для АЧСΔMGF110, Волгоград/14си неинфицированной культуры клеток макрофагов с картированием
10568758 (89,34 %), 11124249 (91,6 %) и 11467254 (91,59 %). Число дифференциально экспрессирующихся генов в макрофагах свиней через 6 часов после заражения составило 2079 для вируса АЧСΔMGF110 и 1525 дляВолгоград/14c. Основные различия в уровне экспрессии при зараженииАЧСΔMGF110 отмечены для генов, участвующих в агрегации нейтрофилов,регуляции продукции цитокинов, противовоспалительного иммунного ответа, положительной регуляции NK клеток и гидролазной активности. Призаражении вирусом АЧС Волгоград/14c выявлены активная экспрессия
генов, участвующих в клеточном ответе на ROS, продукции молекулярных
медиаторов воспаления и продукции цитокинов и процессах катаболического окисления фосфолипидов.
Результаты исследований показывают, что клеточный иммунный ответпри заражении макрофагов вирусом АЧСΔMGF110 свидетельствует о еговакцинном потенциале и открывает дальнейшие перспективы практического применения.

pаздел 3324МЕДИКО-СОЦИАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ
ПАРВОВИРУСНОЙ В19 ИНФЕКЦИИ
MEDICAL AND SOCIAL ASPECTS OF PARVOVIRUS B19 INFECTIONО. Н. Никишов, А. А. Кузин
Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова, Санкт-Петербург
O. N. Nikishov, A. A. Kuzin
Military Medical Academy named after S. M. Kirov, St. PetersburgАннотация
Парвовирусная инфекция (ПВИ) представляет собой одну из новых медико-биологических проблем, которая в основном разрабатывается специалистами в области
вирусологии. Ее клинические проявления характеризуются наличием различных
нозологических форм, что требует проведения дифференциальной диагностики какс другими вирусными инфекциями, так и с неинфекционными заболеваниями.

Abstract
Parvovirus infection (PVI) is one of the new biomedical problems, which is mainly
developed by virology experts. Its clinical manifestations are characterized by the presenceof various nosological forms, which requires differential diagnosis with both other viral
infections and noncommunicable diseases.

Парвовирусная инфекция представляет собой одну из относительно
новых проблем, которая входит в приоритетную область научных исследований вирусологии и инфектологии. Кроме детей разных возрастов, онаможет быть актуальна и для других социально значимых групп населения,прежде всего здоровых лиц из числа доноров крови и женщин, планирующих беременность. Согласно требованиям отечественных нормативных документов, в производстве лечебных препаратов из плазмы крови предполагается использование сырья, свободного от вирусов или с минимальной
вирусной нагрузкой.
Парвовирус В19 человека является одним из контаминирующих агентов,передача которого может осуществляться парентерально, через препараты
© О. Н. Никишов, А. А. Кузин, 2020Вирусология

325

крови или при трансплантации костного мозга и органов. Вирус поражает
главным образом клетки — предшественники эритроцитов. Заболевание
имеет широкий спектр проявлений. Тяжелыми осложнениями парвовирусной инфекции являются апластический криз, транзиторная анемия, парциальная красноклеточная аплазия костного мозга, фульминантный гепатиту иммунокомпрометированных лиц и людей с заболеваниями крови. Тяжелая форма заболевания развивается преимущественно у лиц с первичными
иммунодефицитами различной этиологии. Вирус обладает также тератогенным действием и вызывает водянку плода при трансплацентарной передаче.
Известно, что ДНК парвовируса В19 может определяться в крови клинически здоровых людей длительное время — до трех лет и более после перенесенного заболевания. Частота обнаружения ДНК парвовируса в крови
отечественных доноров составляет 1,0–1,9 %.
Вирус устойчив к стандартным режимам стерилизации гемопродуктов.
Донация с вирусной нагрузкой 105 и выше копий/мл при пулировании приводит к заражению 50 % реципиентов.
Установлено, что клинические проявления заболевания развиваются
у 0,12 % реципиентов, получивших препараты крови, содержащие PV B19.
По данным белорусских исследователей, у пациентов с патологией кроветворных органов случаи парвовирусной инфекции равномерно распределены по сезонам года, в отличие от экзантемной формы заболевания в общей
популяции, что может быть связано с парентеральным путем передачи инфекции. В ряде зарубежных стран исследование донорской крови на наличие ДНК PV B19 является обязательным; в нашей стране необходимость
проведения такого скрининга обсуждается.
Таким образом, требуется дальнейшее проведение комплексного научно-практического исследования, направленного на изучение заболеваемости и показателей специфического противовирусного гуморального иммунитета в сопоставлении с клинико-эпидемиологическими проявлениямиПВИ среди разных групп населения, объединенных определенными социальными условиями, способными обеспечить реализацию передачи возбудителя.
Parvovirus infection is a relatively new problem that is a priority area of virology and infection research. In addition to children of different ages, it can berelevant for other socially significant populations, especially healthy blood donors
and women planning pregnancy. According to the requirements of domestic regulations, in the production of therapeutic drugs from blood plasma is supposed

326pаздел 3

to use raw materials free from viruses or with minimal viral load. Parvovirus
B19 person is one of the contaminant agents, the transmission of which can be
carried out parenterally, through blood preparations or during transplantationof bone marrow and organs. The virus mainly affects cells — precursors of red
blood cells. The disease has a wide range of manifestations. Severe complicationsof parvovirus infection are aplastic crisis, transiemia anemia, particial red-celled
ap Severe complications of parvovirus infection are aplastic crisis, transient anemia, particial red-celled bone marrow aplasia, fulminant hepatitis in immunocompromised individuals and people with blood diseases. Severe form of thedisease develops mainly in persons with primary immunodeficiency of various
etiology. The virus also has a teratogenic effect and causes fetal water in transplacent transmission. It is known that the DNA of parvovirus B19 can be determinedin the blood of clinically healthy people for a long time, up to three years or more,
after the disease. The rate of detection of parvovirus DNA in the blood of domestic donors is 1,0–1,9 %. The virus is resistant to standard hemofood sterilization
regimes. Donation with a viral load of 105 and above copies/ml when bulletsed
results in the infection of 50 % of recipients. It has been established that clinicalmanifestations of the disease develop in 0,12 % of recipients who received blood
products containing PV B19. According to Belarusian researchers, in patientswith blood-making organ pathology cases of parvovirus infection are evenly distributed for the seasons of the year, as opposed to the exantem form of the diseasein the general population, which may be associated with parenteral transmission.
In a number of foreign countries, the study of donated blood for the presence of
PV B19 DNA is mandatory; in our country, the need for such screening is being
discussed. Thus, a comprehensive scientific and practical study aimed at studying
morbidity and indicators of specific antiviral humoral immunity in comparison
with clinical and epidemiological manifestations of PVI among different populations, united by certain social conditions that can ensure the implementation of
the transmission of the pathogen, is required.

Вирусология

327

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ВАРИАНТОВ ВИРУСА ЛЕЙКОЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА,ВЫДЕЛЕННЫХ В НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ
GENOTYPING OF VARIANTS OF THE BOVINE LEUKEMIA VIRUS
ISOLATED IN THE NOVOSIBIRSK REGION
И. П. Осипова 1, А. А. Селезнев 2, А. В. Тотменин 1,
А. Н. Швалов 1, М. П. Гашникова 1, Н. М. Гашникова 1
1Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
2
ИП Глава КФХ Турков В. Н., с. Покровка
I. P. Osipova 1, A. A. Seleznev 2, A. V. Totmenin 1,
A. N. Shvalov 1, M. P. Gashnikova 1, N. M. Gashnikova 1
1

State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
2
IE Head of KFH Turkov V. N., Pokrovka village
E-mail: osipova_ip@vector.nsc.ruАннотация
Впервые расшифрованы геномы вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) генотипа 4 и генотипа 7, выделенные на территории России. Изучены особенности их нуклеотидной и аминокислотной последовательностей.

Abstract
For the first time, the genomes of the bovine leukemia virus (BLV) of genotype 4 andgenotype 7 have been decoded in Russia. The features of their nucleotide and aminoacid
sequences have been studied.

Введение
Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС) вызывает развитие
злокачественного лимфопролиферативного заболевания коров. Высокая
распространенность ВЛ КРС приводит к экономическому ущербу и потере
генофонда ценных пород в хозяйствах. В международной базе данных от© И. П. Осипова, А. А. Селезнев, А. В. Тотменин, А. Н. Швалов, М. П. Гашникова,Н. М. Гашникова, 2020

328pаздел 3сутствует информация о последовательностях полных геномов вариантовВЛ КРС, циркулирующих среди поголовья КРС в России.
Цель исследования — изучить особенности последовательностей генома российских вариантов ВЛ КРС.
Материалы/методы
Исследовано 20 образцов крови от коров, имеющих предварительное
серологическое подтверждение наличия ВЛ КРС. Из клеток крови была выделена суммарная клеточная ДНК. Получены фрагменты вирусного генома
размером 7765 п. н., проведено их секвенирование с использованием платформы MiSeq IlluminaInc., выполнен филогенетический анализ, проведено
множественное выравнивание последовательностей с использованием референсных штаммов ВЛ КРС, депонированных в GenBank.
Результаты
Для 15 из 20 исследованных образцов крови получены, расшифрованыи проанализированы нуклеотидные и аминокислотные последовательности
почти полного генома ВЛ КРС (за исключением LTR). Филогенетический
анализ позволил отнести 11 вирусов к генотипу 4, 6 вирусов к генотипу
7 (см. рисунок). В одном образце крови коровы выделено одновременно
3 отличающихся варианта ВЛ КРС, 2 из которых относятся к седьмому,а один — к четвертому генотипу. Выявлены аминокислотные отличия в области гена env, характерные для вариантов ВЛ КРС генотипа 4.

Филогенетическое дерево исследованных геномов ВЛ КРСВирусология

329

ВыводыВ животноводческих хозяйствах Новосибирской области циркулируетне менее двух генетических вариантов ВЛ КРС — генотипа 4 и генотипа 7.
Наблюдается суперинфекция коров, в том числе разными генотипами ВЛ
КРС. Впервые расшифрованы геномы 17 вариантов вируса лейкоза коров,выделенных в России.

pаздел 3330ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСОВ ГРИППА А(H3N2),
ЦИРКУЛИРОВАВШИХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ В 2019–2020 ГГ. *CHARACTERISTICS OF INFLUENZA A (H3N2)
VIRUSES CIRCULATING IN RUSSIA IN 2019–2020
П. А. Петрова, Н. И. Коновалова,А. Ю. Бояринцева, Д. М. Даниленко, М. Ю. Еропкин
Научно-исследовательский институт гриппа
им. А. А. Смородинцева, Санкт-Петербург
P. A. Petrova, N. I. Konovalova, A. Yu. Boyarinceva,
D. M. Danilenko, M. Yu. Eropkin
Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg
E-mail: suddenkovapolina@gmail.com
Аннотация
Устойчивая циркуляция вирусов гриппа А(H3N2) обусловлена их способностью быстро эволюционировать и избегать иммунного распознавания путем модификации поверхностных белков — гемагглютинина и нейраминидазы. При таком
высоком уровне изменчивости вирусов гриппа, имеющиеся вакцины не обеспечивают долговременной протекции. Состав ежегодно пересматривается экспертами
Глобальной сети эпидемического надзора за гриппом ВОЗ и обновляется с учетом
данных об антигенных и генетических особенностях штаммов. Антигенный анализ
российских изолятов в сравнении со штаммами, циркулирующими в мире, позволяет наиболее точно определить эволюционные тенденции.

Abstract
The stable circulation of influenza A (H3N2) viruses is due to their ability to rapidly
evolve and avoid immune recognition by modifying surface proteins — hemagglutinin andneuraminidase. With such a high level of variability in influenza viruses, these vaccines do
not have long-term protection. Compiled annually reviewed by experts from the WHO
Global Influenza Surveillance Network and updated based on the antigenic and genetic© П. А. Петрова, Н. И. Коновалова, А. Ю. Бояринцева, Д. М. Даниленко,М. Ю. Еропкин, 2020*Исследования выполнены при поддержке стипендии Президента Российской
Федерации молодым ученым и аспирантам (Конкурс СП-2018).

Вирусология

331

characteristics of the strains. Antigenic analysis of Russian isolates, in comparison withstrains circulating in the world, makes it possible to accurately determine evolutionary
trends.

В последние годы вирусы гриппа А(H3N2) социркулируют совместнос вирусами гриппа А(H1N1)pdm09 и вирусами гриппа В. В рамках надзораза гриппом выделение вирусов гриппа на клеточных культурах является основной и важной задачей, поскольку дает возможность не только оценитьих антигенные характеристики, но и выявить соответствие циркулирующих среди населения штаммов вирусам, включенным в состав вакцин.
Для антигенного анализа циркулирующих вирусов А(H3N2) используются такие методы, как реакция торможения гемагглютинации (РТГА)и реакция нейтрализации, выполненная методом микрокультурального
ИФА cell-ELISA (МН). В 2019–2020 гг. было проанализировано 97 штаммов,выделенных в г. Санкт-Петербурге и полученных из Базовых вирусологических лабораторий. В отличие от трех предыдущих сезонов 2016 — 2019 гг.,в последнем сезоне большинство изолятов A(H3N2) сохраняли гемагглютинирующий титр в присутствии 20 нМ раствора озельтамивира карбоксилата, поэтому антигенный анализ в основном был проведен в РТГА.
Часть вирусов данного подтипа была протестирована как в РТГА, таки в МН. Результаты параллельного тестирования штаммов в РТГА и РНпоказали идентичность данных антигенного анализа, полученных обоими
методами.
Большая часть изученных вирусов (95,9 %) данного подтипа в прошедшем сезоне была антигенно родственна эталонному штамму А/Сингапур/INFIMH-0016-19/2016 и реагировала с антисывороткой, полученной к клеточной разновидности данного штамма до 1/2–1/8 гомологичного титра.
Только в трех городах (Санкт-Петербург, Калининград, Омск) изолированы
единичные вирусы (4,1 %), подобные A/Канзас/14/17, — штамму, введенному в состав вакцин на 2019–2020 эпидемический сезон. Представители
данных антигенных и генетических групп по своим свойствам существенно
отличались друг от друга. В результате этого протективность гриппозных
вакцин по компоненту A(H3N2) была существенно снижена, как это былопоказано в наблюдениях в системе сигнального надзора, поскольку вирусы,подобные A/Канзас/14/2017, не получили распространения в России в прошедшем сезоне. Также можно отметить, что большинство изолятов относились к генетической и антигенной группе 3С.2а1b и взаимодействовалис референс-штаммами данного клайда — А/Ла Риоха/2202/18, А/С. Петербург/RII-475/18 до 1–1/4 гомологичного титра.

pаздел 3332ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ
VIBRIO CHOLERAEPROSPECTS FOR USING VIBRIO CHOLERAE BACTERIOPHAGES
М. П. Погожова, Н. Е. Гайевская, А. О. Аноприенко
Ростовский-на-Дону научно-исследовательский
противочумный институт
M. P. Pogozhova, N. E. Gayevskaya, A. O. Anoprienko
Rostov-on-Don Plague Control Researsh InstituteE-mail: m_pogozheva@mail.ruАннотацияВо всем мире V. cholerae приобретает все большую устойчивость к противомикробным препаратам. Антибиотикорезистентные бактерии спровоцировали интерес к альтернативным методам терапии. В России и за рубежом специалисты вновь
стали обращать внимание на бактериофаги с позиции оценки не только диагностики
ряда заболеваний, но и их биологического потенциала при лечении и профилактике. Использование современных молекулярно-генетических методов исследования,включая анализ генома холерных фагов, для решения ряда фундаментальных и прикладных задач продолжает оставаться актуальным, позволяя доказать отсутствие
ряда генетических детерминант умеренности, что определяет пригодность фага дляконструирования диагностических и лечебно-профилактических препаратов.

Abstract
In the whole world, V. cholerae is gaining increasing resistance to antimicrobial drugs.
Antibiotic-resistant bacteria have sparked interest in alternative therapies. In Russia andabroad, specialists again began to attend to bacteriophages from the standpoint of assessing
their biological potential in the treatment, prevention, and diagnosis of various diseases.
The use of molecular genetic methods, including analysis of the genome of cholera phages
for solving fundamental and applied problems, continues to be relevant, allowing one toprove the absence of a number of genetic determinants of temperance, which will determine the suitability of the phage for the design of diagnostic and therapeutic and prophylactic drugs.

© М. П. Погожова, Н. Е. Гайевская, А. О. Аноприенко, 2020Вирусология

333

В данном исследовании были использованы два кандидатных холерных
фага El 1 и Cl, входящих в число экспериментальных диагностических фагов V. cholerae О1 серогруппы биовара El Tor и Classical. Данные бактериофаги выделены из водных объектов окружающей среды. Изучение биологических свойств, электронно-микроскопическое исследование и выделениеДНК проводили общепринятыми методами. Геномная последовательность
бактериофагов была определена на платформе Miseq. Сравнение собранных
геномов бактериофагов с аннотированными последовательностями известных бактериофагов проводили при помощи алгоритма BLASTN. Наличиеили отсутствие нежелательных генов, характерных для умеренных бактериофагов, проверяли при помощи программного обеспечения Phage Analyzer(http://antiplague.ru/phageanalyzer/).
Исследованный холерный бактериофаг El 1 активен в отношении V. cholerae O1 серогруппы бивара El Tor, а вибриофаг — в отношении Cl биовара
Classical. После проведения трансмиссионной электронной микроскопии
было установлено, что фаг El 1 принадлежит к семейству Podoviridae. В своюочередь, фаг Cl относится к V морфогруппе и типу A семейства Myoviridae.
Исследованные бактериофаги имеют высокий спектр литической активности до 83,3 % на коллекции изолятов V. cholerae, выделенных на территории РФ с 2000 по 2019 г., и способны достигать титра на штамме-хозяине неменее 109 БОЕ/мл. На газоне индикаторной культуры бактериофаг El 1 образует прозрачные негативные колонии диаметром 1,0–2,0 мм, а фаг Cl —1,5–2 мм. Результат биоинформатического анализа показал, что бактериофаги El 1 и Cl относятся к ДНК-содержащим головчатым фагам из группы
Vibrio phage и являются оригинальными.
Кандидатные бактериофаги El 1 и Cl используются для дифференциации
холерного вибриона О1 серогруппы биовара El Tor и Classical. Исследованные фаги являются вирулентными и перспективными компонентами длясоздания лечебно-профилактических препаратов против холеры, что позволяет расширить возможности в тактике лечебных мероприятий.

pаздел 3334РАЗРАБОТКА ВЫСОКОИММУНОГЕННОЙ ЖИВОЙ
ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ПУТЕМ
ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННОЙ МОДИФИКАЦИИ NS1 БЕЛКА *DEVELOPMENT OF BROADLY PROTECTIVE LIVE ATTENUATED
INFLUENZA VACCINE BY TARGETED MODIFICATION OF NS1 GENE
П. И. Прокопенко, В. А. Матюшенко, Е. А. Степанова, Т. С. Котомина,А. К. Чистякова, Е. В. Крутикова, Е. Л. Циммерман, П.-Ф. ВонгИнститут экспериментальной медицины, Санкт-Петербург
P.I. Prokopenko, V.A. Matyushenko, E. A. Stepanova, T. S. Kotomina,
A. K. Chistiakova, E. V. Krutikova, E. L. Tsimmerman, Wong Pei Fong
Institut of Experimental Medicine, St. Petersburg
E-mail: pi.prokopenko@gmai.com
Аннотация
Быстрая эволюция вирусов гриппа часто приводит к несоответствию между рекомендованными ВОЗ штаммами вакцин и циркулирующими вирусами, что может
резко снизить эффективность вакцины. Cтратегии усиления перекрестной защиты
противогриппозных вакцин имеют высокий приоритет в области общественного
здравоохранения. Иммуногенные свойства живой аттенуированной гриппозной
вакцины (LAIV) могут быть улучшены путем усечения белка NS1 — модулятора
противовирусного врожденного иммунитета. Для усиления перекрестной защиты
вакцины усеченная часть NS1 может быть заменена иммуногенными Т-клеточными
эпитопами, консервативными для вирусов гриппа A и B.

Abstract
Rapid evolution of influenza viruses often results in mismatches between the WHO-recommended vaccine strains and circulating viruses, which can dramatically reduce the vaccine efficacy. Therefore, the strategies of enhancing cross-protection of influenza vaccines
have a high public health priority. Immunogenic properties of live attenuated influenza
vaccine (LAIV) can be improved by truncating NS1 protein, a known modulator of an© П. И. Прокопенко, В. А. Матюшенко, Е. А. Степанова, Т. С. Котомина, А. К. Чистякова, Е. В. Крутикова, Е. Л. Циммерман, Вонг П.-Ф., 2020*Работа поддержана грантом Президента Российской Федерации № МД327.2020.7.

Вирусология

335

tiviral innate immunity. The truncated part of NS1 can be replaced with immunogenic Tcell epitopes conserved across influenza A and B viruses to enhance cross-reactivity ofthe vaccine.

Reverse genetics methods were used to rescue LAIV viruses of H1N1 andH7N9 subtypes carrying either full-length NS1, or truncated NS1126 genes ona Leningrad/17 backbone. In addition, a modified NS1 126-PB1 virus was rescued
which encoded several CD8 T-cell epitopes of PB1 protein conserved across influenza A and B viruses [Nat Immunol. 2019; 20(5):613–625]. The expression of
NS1 protein in cells was determined by Western Blot analysis using NS1-specific monoclonal antibody. C57BL/6J mice were intranasally immunized twice at
a dose of 6.0 lgEID50, 21 days apart. Vaccine virus titers in lungs and nasal turbinates were assessed on day 3 after the first inoculation. Epitope-specific T-cell
responses were measured in lungs and spleens on day 7 after the second dose byflow cytometry (IFNγ ICS). Humoral immunity was assessed on day 21 after thesecond dose by ELISA to the whole virus antigen. Protection against heterologous
influenza virus challenge was monitored by viral load in the lungs, weight loss andsurvival rates.
The rescued recombinant LAIV viruses with truncated NS1 126 and a modified
NS1126-PB1 genes replicated in eggs and Vero cells at the same level as corresponding LAIV viruses, whereas their replication in MDCK cell was impaired. In contrast to the LAIV control viruses, the NS1-modified viruses didn’t replicate in themouse respiratory tract. Nevertheless, they induced high levels of virus-specificserum IgG antibody; in some cases, the IgG titers in the NS1-modified groups
exceeded the titers in the related LAIV group. The NS1-modified LAIVs also induced high levels of virus-specific CD4 and CD8 T cells, including the population of lung tissue-resident memory T cells expressing CD69 and CD103 surface
markers. The vaccines afforded significant protection of mice against virulent heterologous influenza viruses, emphasizing their cross-protective potential.
We generated a panel of NS1-modified LAIV candidates with a potential for
better immunogenicity and cross-protectivity. These viruses had improved safety
profile, as no active virus replication is detected in the respiratory tract. The immunity to the inserted PB1 epitopes will be further studied in relevant in vitro
models with PBMCs from HLA-typed donors.

pаздел 3336АДАПТИРОВАННЫЙ ВАРИАНТ ВИРУСА ГРИППА ВДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЙ IN VITRO И IN VIVO *ADAPTED INFLUENZA B VIRUS FOR IN VITRO AND IN VIVO STUDIES
Е. А. Прокопьева 1, 2, О. Г. Курская 1, М. В. Соломатина 1, И. А. Соболев 1
1Федеральный исследовательский центр фундаментальнойи трансляционной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет

E. A. Prokopyeva, О. G. Kurskaya, М. V. Solomatina, I. А. Sobolev
1

Federal Research Center of Fundamental and Translational Medicine, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
Email: e.prokopeva@g.nsu.ruАннотация
Полученный антигенно актуальный вирус гриппа В штамм В/Novosibirsk/40/2017MA моделирует у экспериментальных животных нелетальную гриппозную инфекцию с выраженными клиническими признаками заболевания. Данный штамм может быть использован для оценки эффективности противогриппозных препаратов,а также в качестве дополнительного инструмента прогнозирования эффективности
вакцины против дрейфующих штаммов.

Abstract
Obtained antigenically relevant influenza virus in strain B/Novosibirsk/40/2017-MA
simulates non-lethal influenza infection in experimental animals with pronounced clinicalsigns of the disease. This strain can be used to evaluate the effectiveness of anti-influenza
drugs, as well as as an additional tool for predicting the effectiveness of a vaccine against
drifting strains.

Вирус гриппа В обладает эпидемиологической значимостью из-за ежегодных сезонных подъемов заболеваемости. Получен адаптированный вариант вируса гриппа В штамм В/Novosibirsk/40/2017-MA, моделирующий
© Е. А. Прокопьева, О. Г. Курская, М. В. Соломатина, И. А. Соболев, 2020*Грант Президента Российской Федерации для государственной поддержки молодых российских ученых — кандидатов наук и докторов наук № МК-3318.2019.4.

Вирусология

337

у экспериментальных животных нелетальную гриппозную инфекцию с выраженными клиническими признаками заболевания. Описаны деструктивные изменения в легких и головном мозге, нарастающие в ходе инфекции.
Вирусологический анализ внутренних органов (легкие, головной мозг, печень, сердце, почки, селезенка) выявил репликацию вируса гриппа тольков легких. На данной модели гриппозной инфекции проведена оценка эффективности противовирусных лекарственных средств (осельтамивира
этоксисукцинат и Тамифлю®) in vivo и in vitro. Доказана высокая эффективность инновационного лекарственного средства «осельтамивира этоксисукцинат». Полученный антигенно актуальный вирус гриппа В штамм В/
Novosibirsk/40/2017-MA может быть использован для оценки эффективности противогриппозных препаратов, а также в качестве дополнительного
инструмента прогнозирования эффективности вакцины против дрейфующих штаммов.

pаздел 3338РАСТЕНИЯ РОДА MENTHA,
ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
PLANTS OF THE GENUS MENTHA WITH ANTI-VIRAL ACTIVITY
М. А. Проценко 1, Е. И. Филиппова 1,
Н. А. Мазуркова 1, И. Е. Лобанова 2, Г. И. Высочина 2
1Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
2Центральный Сибирский ботанический сад СО РАН, Новосибирск
M. A. Protsenko 1, E. I. Filippova 1, N. A. Mazurkova 1,
I. E. Lobanova 2, G. I. Vysochina 2
1

State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
2
Central Siberian Botanic Garden, Novosibirsk
E-mail: protsenko_ma@vector.nsc.ruАннотация
Противовирусную активность в отношении вируса гриппа А проявили экстракты, полученные из травы Mentha piperita, Mentha arvensis и Mentha crispa. Наивысшую
активность в отношении вируса гриппа субтипа H3N2 показали водные экстракты
Mentha arvensis и Mentha crispa, а в отношении вируса субтипа H5N1 — этанольный
экстракт Mentha piperita.

Abstract
Extracts obtained from the herb Mentha piperita, Mentha arvensis and Mentha crispa
shown antiviral activity against influenza A virus. Aqueous extracts of Mentha arvensis andMentha crispa revealed the highest activity against the H3N2 subtype influenza virus, andethanol extract of Mentha piperita revealed the highest activity against the H5N1 subtype
virus.

Растения рода мята Mentha, особенно мята перечная Mentha piperita L.,являются важнейшим лекарственным и эфиромасличным растительным
сырьем. Mentha piperita обладает противовоспалительными, антисептиче© М. А. Проценко, Е. И. Филиппова, Н. А. Мазуркова, И. Е. Лобанова, Г. И. Высочина, 2020Вирусология

339

скими, анальгетическими свойствами. [2]. Кроме этого, экстракты Mentha
piperita обладают противовирусной активностью против вирусов простого герпеса, болезни Ньюкасла, коровьей оспы, леса Семлики и Западного
Нила [3].
В качестве объектов исследования использовали траву Mentha piperita и Mentha arvensis, собранные в окрестностях Академгородка на дачном
участке города Новосибирска в 2018 году и траву Mentha crispa, собраннуюв коллекционном участке лекарственных растений ЦСБС СО РАН города
Новосибирска в 2018 году.
Из растений получали сухие водные и этанольные экстракты [1], которые исследовали на токсичность и противовирусную активность в отношении вируса гриппа субтипов A/Aichi/2/68 (H3N2) и A/chicken/ Kurgan/05/2005 (H5N1). Вируснейтрализующие свойства образцов оценивалипо изменению инфекционности вируса гриппа (титра) в монослое клетокMDCK в профилактической схеме внесения экстрактов и вирусов.
Индексы нейтрализации вируса гриппа субтипа H3N2 под действием
этанольных экстрактов Mentha piperita, Mentha arvensis и Mentha crispa находились в пределах от 2,75 до 3,25 lg, а под действием водных экстрактов —от 2,75 до 3,75 lg. В то время как индексы нейтрализации субтипа H5N1 поддействием этанольных экстрактов этих растений находились в пределах
от 1,75 до 2,75 lg, а под действием водных экстрактов — от 0,75 до 2,25 lg.
Следует отметить, что водный экстракт Mentha arvensis и этанольные экстракты Mentha piperita и Mentha crispa проявляют достоверную активностьв отношении обоих штаммов вируса гриппа.
Проявление вируснейтрализующей активности исследуемых экстракционных препаратов представляет потенциал растений рода Mentha для разработки и создания новых лекарственных противовирусных препаратов.
Литература
1. Проценко М. А., Трошкова Г. П., Косогова Т. А., Теплякова Т. В. Биологически
активные соединения плодовых тел и культивируемого мицелия базидиального гриба Aedaleopsis Tricolor // Фундаментальные исследования. 2014. № 12, ч. 1. С. 136–140.
2. Шамшева О. В. Применение средств растительного происхождения при ОРВИу детей // Детские инфекции. 2018. Т. 17. № 4. С. 43–45.
3. Herrmann E. C., Kucera L. S. Antiviral Substances in Plants of the Mint Family(Labiatae). III. Peppermint (Mentha piperita) and other Mint Plants // Proceedings of theSociety for Experimental Biology and Medicine. 1967. V. 124 (3). P. 874–878.

pаздел 3340ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОИДНЫХ И МИЕЛОИДНЫХ КЛЕТОК
ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У ПАЦИЕНТОВ С COVID-19
CHARACTERISTICS OF LYMPHOID AND MYELOID CELLSOF THE IMMUNE SYSTEM IN PATIENTS WITH COVID-19
Е. Г. Рында 1, А. Е. Гончаров 1, Н. Г. Антоневич 1,
О. В. Тимохина 1, Я. С. Минич 1, Е. А. Головач 1,
Д. В. Бобрукевич 1, М. Л. Доценко 2, Э. А. Доценко 2
1Институт биофизики и клеточной инженерии НАН Беларуси, Минск
2Белорусский государственный медицинский университет, Минск
A. G. Rynda 1, A. Y. Hancharou 1, N. G. Antonevich 1,
O. V. Timohina 1, Y. S. Minich 1, A. A. Halavach 1,
D. V. Babrukevich 1, M. L. Dotsenko 2, E. A. Dotsenko 2
1

The Institute of Biophysics and Cell Engineeringof National Academy of Sciences of Belarus, Minsk
2
Belarusian State Medical University, Minsk
E-mail: alenarynda@gmail.com
Аннотация
COVID-19 представляет собой заболевание, вызванное вирусом SARS-CoV-2,которое часто сопровождается возникновением пневмонии и острого респираторного дистресс-синдрома. Клиническая картина COVID-19 варьируется от легких
форм до тяжелых, и прогнозирование течения заболевания до сих пор остается неясным. Патогенез COVID-19 тесно связан с ответом организма на вирус. Нарушение
регуляции иммунитета наблюдается у пациентов с тяжелой пневмонией, связанной с COVID-19. Таким образом, раннее выявление предикторов неблагоприятных исходов и своевременное и адекватное лечение пациентов с тяжелой формой
COVID-19 является решающим для уменьшения смертности.

Abstract
COVID-19 is a disease caused by the SARS-CoV-2 virus that is often associatedwith pneumonia and acute respiratory distress syndrome. The clinical manifestation of
COVID-19 varies from mild to severe, and the prognosis of the course of the disease is© Е. Г. Рында, А. Е. Гончаров, Н. Г. Антоневич, О. В. Тимохина, Я. С. Минич,Е. А. Головач, Д. В. Бобрукевич, М. Л. Доценко, Э. А. Доценко, 2020Вирусология

341

still unclear. The pathogenesis of COVID-19 is closely related to the host immune responseto the virus. Impaired regulation of immunity has been observed in patients with severe
pneumonia associated with COVID-19. Thus early identification of predictors of adverse
outcomes and timely and adequate treatment of patients with severe COVID-19 is criticalto reduce mortality.

Введение
Появление нового коронавируса SARS-CoV-2 в 2019 году и приобретение им масштабов пандемии стало одним из сильнейших вызовов человечеству за последние десятилетия. Инфекция SARS-CoV-2 характеризуется
широким спектром клинических проявлений, синдромы которых начинаются от легких гриппоподобных симптомов и доходят до тяжелых пневмоний, когда пациенту необходимо экстренное вмешательство и респираторная поддержка.
Т-клетки имеют решающее значение для устранения респираторных
вирусных инфекций и обеспечения долговременной иммунной памяти.
Несмотря на то что изучение нового вируса и реакций организма на неговедется очень активно, до сих пор мало что известно об особенностях защитных реакций Т-клеток хозяина против SARS-CoV-2, хотя сообщалось,что тяжесть инфекции COVID-19 коррелирует с истощением CD4+ и CD8+популяций Т-клеток, а также повышением уровня маркеров истощения Тклеток *. Таким образом, важным шагом к выявлению первопричин такой
иммунной дисфункции является выявлении тех популяций Т-клеток, которые специфически активируются при воздействии антигенов SARS-CoV-2.
Цель исследования — провести анализ клеток иммунитета у пациентовс коронавирусной пневмонией, включающий определение количества клеток, стадий их дифференцировки, активации и истощения лейкоцитов, и,как итог, определение иммунных маркеров прогнозирования клинического
исхода заболевания.
Материалы и методыВ исследование были включены 57 пациентов с пневмонией, вызванной
коронавирусом SARS-CoV-2, подтвержденной с помощью ПЦР-теста и КТгрудной клетки. Пациенты были разделены на 2 группы: тяжелые / критические (S/C) пациенты (n = 18), которые лечились в отделении интенсивной
терапии и нуждались в ИВЛ; пациенты средней тяжести (М) (n = 39). Среди
пациентов группы S/C 10 умерло (D) и 8 вылечилось (Sv). Также были ис*

Chour W. et al. Shared Antigen-specific CD8+ T cell Responses Against the SARSCOV-2 Spike Protein in HLA A* 02: 01 COVID-19 Participants // medRxiv. 2020.

342pаздел 3пользованы образцы периферической крови от 19 здоровых доноров (HD).
С использованием проточного цитометра Attune NxT идентифицировали
миелоидные (миелоидные супрессорные клетки, моноциты, дендритные
клетки (DC)) и лимфоидные клетки (T, B, ILC, ЕК, ЕКТ-клетки и их субпопуляции), а также маркеры активации нейтрофилов и моноцитов (CD35,
CD32, CD88, CD282). Для анализа полученных данных использовали методы непараметрической статистики, кластерный и ROC-анализ.
Результаты и их обсуждение
Значительное снижение абсолютного количества Т-клеток, В-клеток,ЕК- и ЕКТ-клеток и процентного содержания ILC-клеток было показано какв группе S/C, так и в группе M, по сравнению с HD (p < 0,01). Увеличение
процентного содержания B-клеток было отмечено у S / C пациентов.
При сравнении группы S/C с M отмечалось снижение содержания
наивных Т-клеток, в то время как содержание субпопуляций TCM, TEM,TEMRA, T-регуляторных и активированных HLA-DR+ T-клеток существенно не изменилось. Отмечали увеличение количества истощенных PD-1+ Тклеток.
При анализе гранулоцитарных и моноцитарных миелоидных супрессорных клеток (G/M-MDSC) мы обнаружили повышенное относительное и абсолютное содержание CD15+ G-MDSC и M-MDSC (HD — 0,37 (0,25–2,37) %,M — 3,99 (2,44–7,89) %, S/C — 13,10 (4,17–20,19) %, p = < 0,000001) какв группе S/C, так и в M, по сравнению с HD, с более высокой частотой у пациентов S/C (p < 0,0001). Также наблюдалось перераспределение субпопуляций моноцитов в сторону промежуточных форм (HD — 5,4 (3,0–15,7) %,M — 16,2 (12,2–20,8) %, S/ C — 25,8 (22,6–30,9) %, p = 0,0001). Кроме того,в обеих группах наблюдалось уменьшение субпопуляций миелоидных
(mDC) (HD — 0,233 (0,165–0,270) %, M — 0,135 (0,100–0,190) %, S/C —0,020 (0,003–0,070) %, p = < 0,000001)) и плазмацитоидных дендритных
клеток (pDC). Однако у пациентов в группе S/C оно было более значимо
(p < 0,01).
Анализ более 100 параметров клеточного иммунитета пациентов
с COVID-19 позволил выявить значительные изменения как лимфоидного,так и миелоидного звена иммунной системы. Мы определили 3 параметра,связанных с неблагоприятным исходом: снижение частоты mDC и увеличение количества M-MDSC и B-клеток. Кластерный анализ с использованием
этих выбранных параметров точно разделил пациентов, находящихся в отделении интенсивной терапии, на 2 группы: D и Sv. ROC-анализ позволил
рассчитать чувствительность и специфичность каждого параметра и точек

Вирусология

343

сочленения (mDC — 95,9 / 100 / <0,02 %; M — MDSC — 85,7 / 86,2 / > 12,6 %;B-клетки — 91,8 / 86,2 / > 19,1 %).
Выводы
Лимфопения Т- и ЕК-клеток наблюдалась у всех пациентов с COVID-19,
однако она была более выражена у группы S/C. Значимых изменений в дифференцировке и активации Т-клеток не было обнаружено в обеих группах, сопровождаемых увеличением количества истощенных Т-клеток. Этоуказывает на анергию иммунной системы и может объяснить тяжелое течение болезни и случаи повторного заражения. Течение заболевания характеризуется уменьшением количества mDC и pDC, увеличением M-DSC
и перераспределением моноцитов в сторону промежуточной субпопуляции. Чрезвычайно низкое содержание mDC в периферической крови, повышение содержания M-MDSC в 4–5 раз и повышенное относительное содержание B-клеток по сравнению с группой здоровых доноров были определены как предикторы неблагоприятного исхода для пациентов с пневмонией,связанной с COVID-19.

pаздел 3344ОПТИМИЗАЦИЯ ВАКЦИННОЙ КОНСТРУКЦИИ
ПРОТИВ ЛИХОРАДКИ МАРБУРГ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
КАССЕТЫ ГЕНОВ GP-VP40-NP
OPTIMIZATION OF THE VACCINE CONSTRUCT AGAINSTMARBURG FEVER USING THE GP-VP40-NP GENE CASSETTE
А. В. Семенова, Г. Ф. Сиволобова, А. А. Гражданцева,О. В. Пьянков, Г. В. Кочнева
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
A. V. Semenova, G. F. Sivolobova, A. A. Grazhdantseva,
O. V. Pyankov, G. V. Kochneva
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: tkacheva_av@mail.ruАннотацияНа основе аттенуированного рекомбинантного штамма вируса осповакцины MVA
получена вакцинная конструкция, несущая встройку трех генов структурных белков
вируса Марбург GP-VP40-NP. Введение гена NP проведено c целью повышения протективности вакцинного конструкта при однократном режиме иммунизации.

Abstract
On the basis of an attenuated recombinant strain of vaccinia virus MVA, a vaccine
construct was obtained that carries an insertion of three genes of the structural proteinsof the Marburg virus GP-VP40-NP. The NP gene was introduced in order to increase theprotection of the vaccine construct in a single immunization regimen.

На основе высокоаттенуированного штамма MVA вируса осповакцины ранее нами был сконструирован рекомбинантный штамм MVA-GP-VP40-MARV,экспрессирующий кассету генов GP и VP-40 вируса Марбург (MARV) с образованием иммуногенных вирусоподобных частиц (ВПЧ). Штамм обеспечивает 100%-ю защиту морских свинок от летальной инфекции MARV (50 ЛД50)© А. В. Семенова, Г. Ф. Сиволобова, А. А. Гражданцева, О. В. Пьянков, Г. В. Кочнева, 2020Вирусология

345

при двукратной вакцинации в дозе 108 БОЕ/животное внутримышечно с интервалом 4 недели. Однако только 40%-я защита регистрируется при однократной иммунизации, которая является предпочтительной при ликвидации
вспышек такой быстротекущей инфекции, как лихорадка Марбург. Усилить
протективные свойства вакцинной конструкции можно путем введения дополнительного гена нуклеопротеина (NP) MARV в экспрессируемую кассету.
Основную роль в формировании ВПЧ играет матриксный белок
VP40 MARV, который обладает способностью к самосборке и почкованиюна мембране клетки. Включение в ВПЧ поверхностного гликопротеина GP
MARV является необходимым условием, поскольку он несет основные протективно значимые детерминанты вируса. Нуклеопротеин NP выполняет
роль внутреннего каркаса (кора) и стимулирует сборку ВПЧ. Кроме того,NP содержит дополнительные протективные Т-клеточные эпитопы [1].
Для введения трансгена NP MARV в геном вакцинного штамма MVAGP-VP40-MARV нами была сконструирована инсерционная плазмида pIGRmH5-NPmar-Pat, содержащая встройку гена NP под контролем
высокоэффективного раннего синтетического промотора mH5 вируса осповакцины. Ген NP MARV получали методом ПЦР на матрице кДНК геномнойРНК вируса с последующей оптимизацией его структуры методом направленного мутагенеза с целью удаления возможных сайтов терминации транскрипции ранних генов штамма MVA (GGGG, CCCC, TTTTTNT). Инсерционная плазмида обеспечивает встройку оперона mH5-NP-MARV в межгенный
промежуток генома MVA (18R — G1L) за счет гомологичной рекомбинации
между плазмидной и вирусной ДНК в инфицированных вирусом MVA клетках. Рекомбинантный штамм MVA-GP-VP40-NP-MARV получали методом
временной доминантной селекции с использованием в качестве доминантного селективного маркера гена устойчивости к пуромицину Pat.
Введение дополнительного гена NP MARV в вакцинный конструкт позволит, как мы рассчитываем, увеличить уровень продукции ВПЧ и обеспечит повышение протективности при однократной иммунизации против
лихорадки Марбург. Возможность 100%-й защиты при однократной иммунизации конструктами на основе MVA была показана для другой филовирусной инфекции — лихорадки Эбола [2].
Литература
1. Dye J. et al. Virus-like particle vaccination protects nonhuman primates from lethal
aerosol exposure with Marburg virus // Viruses. 2016, Vol. 8. P. 94. doi 10.3390/v8040094
2. Domi A. et al. Single dose of modified vaccinia Ankara expressing Ebola virus likeparticles protects nonhuman primates from lethal Ebola virus challenge // Scientific Reports. 2018. Vol. 8. P. 864. doi:10.1038/s41598-017-19041-y.

pаздел 3346ВИРУСЫ ГРИППА С ЛЮЦИФЕРАЗНЫМ РЕПОРТЕРОМДЛЯ ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫХ
НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ АНТИТЕЛ *INFLUENZA VIRUSES WITH LUCIFERASE REPORTER DESIGNEDFOR VACCINE-INDUCED NEUTRALIZATION ANTIBODY ASSESSMENT
М. В. Сергеева 1, А. А. Пулкина 1, 2, Е. А. Романовская-Романко 1,
А. С. Мустафаева 3, М. А. Стукова 1
1Научно-исследовательский институт гриппа
им. А. А. Смородинцева, Санкт-Петербург
2Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого
3Санкт-Петербургский государственный технологический институт
(технический университет)M. V. Sergeeva 1, A. A. Pulkina 1,2, E. A. Romanovskaya-Romanko 1,
A. S. Mustafaeva 3, M. A. Stukova 1
1

Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg
2Peter the Great St. Petersburg Polytechnic University
3
St. Petersburg State Institute of Technology
E-mail: mari.v.sergeeva@gmail.com

Аннотация
Реакция микронейтрализации широко используется в мировой практике длявыявления и определения образующихся в результате вакцинации вируснейтрализующих антител в сыворотках крови. Тест основан на ингибировании репродукции
вируса в чувствительных клетках, которую фиксируют по цитопатическому действию или специфическим окрашиванием. Использование вирусов, кодирующих
люциферазный репортер, позволяет сократить сроки проведения теста и упростить
процедуру детекции за счет прямого измерения биолюминесцентного сигнала.

© М. В. Сергеева, А. А. Пулкина, Е. А. Романовская-Романко, А. С. Мустафаева,М. А. Стукова, 2020*Работа поддержана грантом Президента Российской Федерации для молодых
ученых № 075-15-2019-226.

Вирусология

347

Abstract
Microneutralization assay (MNA) is the widely used method for assessment of the virus-neutralizing antibodies formed as a result of vaccination in blood serum. The test isbased on inhibition of viral reproduction in sensitive cells, which is fixed by cytopathic effect or specific staining. The use of viruses encoding a luciferase reporter makes it possible
to shorten the test time and simplify the detection procedure due to the direct measurement of the bioluminescent signal.

The aim of the present study was to design reporter influenza viruses andmethod for detection of neutralizing antibodies in post-vaccination serum samples.
By the reverse genetics we constructed influenza viruses with NanoLuc reporter
gene inserted in the NS1 protein ORF, that is early expressed during infection. We
generated reassortant influenza A viruses using the backbone of A/PR/8/34 strain
and surface antigens (HA and NA) from divergent strains (H1N1pdm09, H3N2,
H1N1, H5N1, H1swN1). Generated viruses were genetically stable, developed
bioluminescent activity during cell infection, but differed by their reproduction
activity.
The general MNA protocol was used as the basis for luciferase neutralization
assay (LNA) development — serum was pretreated with RDE, titrated 2-foldstarting from 1:10 and incubated with virus for 1h prior to addition to cells. The
multiplicity of infection was optimized to shorten the detection time up to 6 hpi.
Using LNA we assessed the blood serum samples obtained from volunteers
before and after vaccination with seasonal influenza inactivated vaccine. (Ethic
statement: Serum samples were obtained from the collection of the Smorodintsev
Research Institute of Influenza, originated from the epidemiological study, werecoded and impersonal). The results obtained were compared with the results ofclassical MNA and hemagglutination inhibition test (HI) using both reporter viruses and wild-type viruses.
The results of LNA correlated with the results of MNA, as well as with the HI
results. At the same time, the use of luciferase vectors significantly reduced thetime of the neutralization test due to the greater sensitivity of bioluminescent detection of viral reproduction compared to enzyme-linked immunosorbent assay
used in the classical microneutralization.

pаздел 3348ХИМЕРНЫЙ РЕАССОРТАНТ НА ОСНОВЕ ВИРУСОВ
ГРИППА А И В ИНДУЦИРУЕТ ОБРАЗОВАНИЕ АНТИТЕЛК ВИРУСАМ ГРИППА ОБОИХ ПОДТИПОВ *CHIMERIC A/B INFLUENZA REASSORTANT INDUCES ANTIBODYRESPONSE TO BOTH INFLUENZA SUBTYPES
Е. А. Степанова, Е. В. Крутикова, П.-Ф. Вонг, А. К. Чистякова
Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург
E. A. Stepanova, E. V. Krutikova, P.-F. Wong, A. K. Chistiakova
Institute of experimental medicine, St. Petersburg
E-mail: fedorova.iem@gmail.com
Аннотация
Химерный реассортант, гемагглютинин и нейраминидаза которого унаследованы от вируса гриппа В, а остальные 6 генов — от холодоадаптированного вируса
гриппа А, в эксперименте на животных вызвал индукцию иммунного ответа, направленного как против вирусов гриппа В, так и против вирусов гриппа А. По данным ИФА, IgG антитела в сыворотках иммунизированных животных связывалисьс вирусами гриппа А и В. Антигемагглютинирующая и вируснейтрализующая активность антител в сыворотках животных, привитых химерным вирусом, была детектирована против вируса гриппа В.

Abstract
Chimeric reassortant strain, with hemagglutinin and neuraminidase from influenza
B, and 6 genes from influenza A, induced antibody response against both influenza A and
B viruses in experiment. IgG serum antibodies in ELISA were detected against influenza
B and influenza A antigens. Anti-hemagglutinating and neutralizing activity was detectedagainst influenza B virus.

Введение
Разработка универсальных противогриппозных вакцин является приоритетной задачей. Живая гриппозная вакцина (ЖГВ) стимулирует развитие
© Е. А. Степанова, Е. В. Крутикова, П.-Ф. Вонг, А. К. Чистякова, 2020*Исследование выполнено при поддержке гранта Президента Российской Федерации № MK-3336.2019.4.

Вирусология

349

как гуморального, так и клеточного иммунного ответа, совместное действие
которых обеспечивает защитный эффект широкого спектра действия. Ранеена основе штамма ЖГВ нами был получен экспериментальный реассортант,содержащий модифицированные 4-й и 6-й сегменты генома: фрагмент, кодирующий эктодомен гемагглютинина, и кодирующая последовательность
гена нейраминидазы унаследованы от вируса B/Brisbane/60/2008, остальные сегменты генома, а также последовательности, отвечающие за упаковку
4-го и 6-го сегментов — от холодоадаптированного донора аттенуации ЖГВ
A/Ленинград/134/17/57. В данной работе оценивались показатели гуморального иммунного ответа после интраназальной иммунизации животных химерным генно-инженерным реассортантом на основе вирусов гриппа А и В.
Материалы и методы
Мыши C57bl/6J были дважды интраназально иммунизированы
химерным вирусом в дозе 6 lg ЭИД50/мл с интервалом в 3 недели. Через
21 день после второй иммунизации изучали уровни сывороточных антителк вирусам гриппа А и В в ИФА, РТГА и реакции микронейтрализации. В качестве антигенов использовали вирус гриппа B/Brisbane/60/2008 и вакцинный штамм ЖГВ A/17/New York/2015/5364 (H1N1).
Результаты
После двукратной интраназальной иммунизации химерным реассортантом в сыворотках мышей удалось детектировать иммуноглобулины класса
G, связывающиеся как с В, так и с А вирусом гриппа. Среднегеометрический
титр сывороточных IgG против вируса гриппа В составил 1:2256, против
вируса гриппа А — 1:282. В контрольной группе антитела были ниже детектируемого уровня (< 20). Как и ожидалось, антигемагглютинирующей
активностью антитела обладали только против вируса гриппа В (титр 1:20).
Вируснейтрализующая активность также была детектирована в реакциис гриппом В, нейтрализующей активности против гриппа А обнаружено небыло.
Выводы
Интраназальная иммунизация химерной вакциной на основе вирусов
гриппа А и В стимулировала образование сывороточных антител против
вирусов обоих подтипов. Антигемагглютинирующая и нейтрализующая активность была детектирована против вируса гриппа В.

pаздел 3350ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ И ГЕНЕТИКИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ
ЦИРКОВИРУСНОЙ БОЛЕЗНИ СВИНЕЙFEATURES OF THE STRUCTURE AND GENETICS
OF PORCINE CIRCOVIRUS
Я. Б. Стрельцова
Федеральный научный центр — Всероссийский научно-исследовательский
институт экспериментальной ветеринарии
им. К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко, Москва
Ya. B. Streltsova
Federal Scientific Centre VIEV, Moscow
E-mail: umesino@outlook.com
Аннотация
Обзор посвящен генетическому разнообразию цирковируса свиней (ЦВС), который является возбудителем цирковирусной болезни свиней (ЦВБС). Приведены свежие данные о генетике вируса, его таксономии, а также о многообразии генотипов.

Abstract
Porcine circovirus (PCV) is a causative agent of porcine circoviral disease (PCVD).
The article provides recent data on the genetics of the virus, its taxonomy, as well as on thediversity of genotypes.

Впервые вирус был описан 15 немецкими учеными в 1974 г. как контаминант перевиваемой клеточной культуры почек свиньи РК; выделенный
вирус не имел патогенных свойств и был назван ЦВС-1 [4]. В 1991 году в Канаде зафиксирована первая инфекционная вспышка, связанная с ЦВБС,выделенный вирус получил название ЦВС-2 [2]. В 2015 году учеными СШАвыделен ЦВС-3 [3]. В конце 2019 года в Китае обнаружен ЦВС-4 [6].
Согласно актуальным данным Международного комитета по таксономии
вирусов, цирковирусы объединяют в род Circovirus семейства Circoviridae [1].
На данный момент цирковирусы считают самыми микроскопическими
представителями царства вирусов, когда-либо обнаруженных у животных.
© Я. Б. Стрельцова, 2020Вирусология

351

Диаметр вириона составляет от 13 до 25 нанометра. Капсид состоит из
60 субъединиц белка, образуя форму додекаэдра. Геном представлен кольцевой одноцепочечной ДНК. Вирусы в зависимости от типов имеют следующие нуклеотидные последовательности: ЦВС-1 — 1758–1760 нуклеотидов(нт), ЦВС-2 — 1766–1769 нт, ЦВС-3 — 1999–2001 нт, ЦВС-4 — 1770 нт [1, 3].
Цирковирусы свиней содержат три основные рамки считывания (ORF),
расположенные в цепях репликативной формы (RF). Строение генома разных генотипов цирковируса представлено в таблице [1, 3].
Классификация ORF
Тип
ЦВС-1

ORF

Белки и их размер
(ак)Функция

ORF1

Rep — 312
Rep’ — 168Индуцируют репликацию

ORF2

Cap — 230–233

ORF1

Rep — 314
Rep’ — 297

Индуцируют репликацию

ORF2

Cap — 233–236

Определяет антигенность вируса

ORF3

104–105Индуцирует апоптоз

ORF4

60

ORF1
ORF2
ORF3

Rep — 296–297
Cap — 214
206

ЦВС-2

ЦВС-3

Подавляет активности каспазыи регулирует CD4 (+) и CD8 (+)Т-лимфоцитов во время инфекции ЦВС-2Индуцирует репликациюНа данный момент учеными проводится расшифровка генома ЦВС-4,однако уже существуют предположения о том, что его геном будет иметь
репликативный и капсидный белки [6].
В результате проведенного филогенетического анализа ЦВС-3 учеными
было предложено делить вирус на два подтипа: ЦВС-3а и ЦВС-3b [6].
Согласно последним исследованиям, основанным на филогенетическом
анализе последовательности генома ЦВС-2 и последовательностей ORF2,
ЦВС-2 принято делить на шесть генотипов: ЦВС-2а, ЦВС-2b, ЦВС-2c,
ЦВС-2d, ЦВС-2e и ЦВС-2f [5].

352pаздел 3Литература
1. Afolabi K. O., Iweriebor B. C., Okoh A. I., Obi L. C. Global Status of Porcine circovirus
Type 2 and Its Associated Diseases in Sub-Saharan Africa // Advances in Virology. 2017.
P. 1–16.
2. Ellis. J. Porcine Circovirus: A Historical Perspective // Veterinary Pathology. 2014.
Vol. 51(2). P. 315–327.
3. Klaumann F., Correa-Fiz F., Franzo G., Sibila M., Núñez J. I., Segalés J. Current
Knowledge on Porcine circovirus 3 (PCV-3): A Novel Virus With a Yet Unknown Impact
on the Swine Industry // Front Vet Sci. 2018; Vol. 5. P. 315.
4. Tischer I., Rasch R., Tochtermann G. Characterization of papovavirus-andpicornavirus-like particles in permanent pig kidney cell lines // ZBL.BAKT.REIHE A. 1974.
Vol. 226(2). P. 153–167.
5. Wei R., Jiexiong Xie, Theuns S., Nauwynck H. J. Changes on the viral capsid surface
during the evolution of porcine circovirus type 2 (PCV2) from 2009 till 2018 may lead toa better receptor binding // Virus Evolution. 2019. V. 5 (2). P. 1–12.
6. Zhang H. H., Hu W. Q., Yu Li J., Liu T. N., Zhou J. Y., Opriessnig T., Xiao C. T. Novel
circovirus species identified in farmed pigs designated as Porcine circovirus Hunan province, China // Transbound Emerg Dis. 2019. P. 1–5.

Вирусология

353

ОЦЕНКА ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТАПРИ ИММУНИЗАЦИИ ЩЕНКОВ ЕНОТОВИДНОЙ СОБАКИ
ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ
ПРОБИОТИКА СУБАЛИНASSESSMENT OF POST-VACCINATION IMMUNITY
AFTER VACCINATION OF PUPPIES RACCOON DOGS AGAINSTCANINE DISTEMPER APPLICATION OF PROBIOTIC SUBALIN
В. С. Тюфяков 1, А. С. Сюткина 2,3, И. И. Окулова 1,3
1Кировский государственный медицинский университет
Вятская государственная сельскохозяйственная академия, Киров
3Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего
хозяйства и звероводства им. проф. Б. М. Житкова, Киров

2

V. S. Tyufyakov 1, A. S. Syutkina 2,3, I. I. Okulova 1,3
1

Kirov State Medical University
Vyatka State Agricultural Academy, Kirov
3
B. M. Zhitkov Russian Scientific Research Instituteon Game Management and Fur Farming (VNIIOZ), Kirov
2E-mail: tufyakov24012002@gmail.com
АннотацияВ работе при вакцинации щенков енотовидной собаки против чумы плотоядных был использован пробиотик Субалин в дозе 10–20*107КОЕ/кг; были проведены
исследования на содержание γ-глобулинов, титр-антител и опсоно-фагоцитарной
реакции. Установлено, что пробиотик опосредованно стимулирует иммунитет посравнению с контрольной группой.

Abstract
In the course of vaccination of raccoon dog pups against plague — carnivores, the probiotic Subalin was used at a dose of 10–20∙107 KOE/kg, studies were conducted on thecontent of γ-globulins, antibody titer and opsonophagocytic reaction, and it was found thatthe probiotic indirectly stimulates the immune system by increasing the studies performed
compared to the control group.
© В. С. Тюфяков, А. С. Сюткина, И. И. Окулова, 2020

354pаздел 3Чума домашних и диких плотоядных животных — одна из самых распространенных и широко известных инфекционных болезней. Она наносит значительный экономический ущерб пушному звероводству и собаководствупо причине высокой летальности. В настоящее время при массовой вакцинопрофилактике против чумы плотоядных отход от этой болезни в звероводстве можно считать спорадическим. Для специфической профилактикив звероводческих хозяйствах применяют вакцины на основе живых штаммов «БИОНОР-D». Целью исследования было изучение влияние Субалинана формирование иммунного ответа при вакцинации енотовидной собаки против чумы плотоядных. Исследования проводили на пушных зверях
семейства Canidae в ООО «Звероводческое племенное хозяйство “Вятка”»Кировской области. Молодняку енотовидной собаки (в возрасте 60 дней)в корм добавляли препарат пробиотического действия Субалин в течение
5 дней (за 3 дня до вакцинации и 2 дня после) в дозе 10–20 ∙ 107 КОЕ/кг. К зверям контрольной группы Субалин не применяли. Определение иммунологических показателей проводили с использованием общепринятых методик:фагоцитарная активность нейтрофилов по методу А. С. Лабинской (1978),определение фракций белка (альбуминов, α-, β-, γ-глобулинов) нефелометрическим методом, бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) пометоду Т. А. Кузьминой и О. В. Смирновой (1966), титр вирусспецифических
антител методом иммуноферментного анализа (ИФА). Забор проб крови
производили до вакцинации и на 7, 14, 21 и 28-й день после проведенной иммунизации. В результате исследований установлено, что в опытной группе
на 14-й день содержание γ-глобулинов увеличилось в 1,5 раза, что составило
23,8 ± 1,043 % (Р < 0001) по сравнению с контролем 15,0 ± 0,43 %. При определении титра вирусспецифических антител установлено, что к 14-му днюв опытной группе титры-антител увеличились на 39,3 % (Р < 0001) (рис. 1),
фагоцитарная активность нейтрофилов — на 33,4 % (Р < 0001) (рис. 2) и бактерицидная активность сыворотки крови — на 43,7 % (Р < 0001) (рис. 3) посравнению с контролем. К 21 и 28-му дню исследования происходит снижение показателей как в опытной, так и в контрольной группах зверей.

Вирусология

355

0,6
0,5
0,4

опытная группа

0,3контрольная группа

0,2
0,1
0
до
вакцинации

7 день

14 день

21 день

28 день

Рис. 1. Динамика титров вирусспецифических антител (оптическая плотность)
60
50
40

опытная группа

30контрольная группа

20
10
0
до
вакцинации

7 день

14 день

21 день

28 день

Рис. 2. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

опытная группа
контрольная группа

довакцинации

7 день

14 день

21 день

28 день

Рис. 3. Динамика бактерицидной активности сыворотки крови (%)ВыводУстановлено, что применение Субалина в дозе 10–20∙107КОЕ/кг при вакцинации щенков против чумы плотоядных опосредованно стимулирует формирование поствакцинального иммунитета увеличением содержания γ-глобулинов, опсонофагоцитарной реакции и вирусспецифических антител.

pаздел 3356ОПРЕДЕЛЕНИЕ И АНАЛИЗ
ПОЛНОГЕНОМНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
СЕМИ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ АЛЬФАВИРУСОВ
SEQUENCING AND ANALYSIS OF COMPLETE GENOMESFOR SEVEN DIFFERENT SPECIES OF ALPHAVIRUSES
Ю. А. Хорошавин
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
Y. A. Khoroshavin
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: horoshavin_yua@vector.nsc.ruАннотацияВ исследовании были использованы образцы семи различных видов альфавирусов. В ходе работы определены их полногеномные последовательности и проведених сравнительный анализ с уже известными геномными последовательностями различных представителей рода Alphavirus.

Abstract
We used samples of seven different species of alphaviruses. In this study, the full-genomic sequences are obtained and their comparative analysis was carried outwith alreadyknown genomic sequences of different members of the genus Alphavirus.

В последние годы наблюдается всё более широкое распространение вирусов, передающиеся трансмиссивным путем через членистоногих переносчиков. Это объясняется как увеличением транспортной мобильности
человека, в том числе и межконтинентальной, так и расширением ареала
членистоногих переносчиков, связанным с климатическими изменениями.
Наиболее распространенным вектором вирусных заболеваний являются
комары. Вирусы рода Alphavirus семейства Togaviridae, вызывают как легкиеили даже бессимптомные заболевания человека и животных, так и тяжелые
заболевания с вероятностью летального исхода или тяжелой инвалидиза© Ю. А. Хорошавин, 2020Вирусология

357

ции. Эти вирусы широко распространены на всех континентах, в том числеи России, и передаются различными видами комаров. Расширение ареала
комаров в Евразии увеличивает вероятность появления новых видов альфавирусов на территории России.
Геном альфавирусов имеет две открытых рамки считывания, одна из которых кодирует неструктурные белки, а вторая структурные. Эта особенность позволяет встраивать последовательности структурных белков других вирусов. Учитывая мощный экспрессионный потенциал альфавирусови возможность инфицирования клеток путем трансфекции геномной РНК,это делает их перспективным вектором для продукции рекомбинантных
белков в клетках и возможной платформой для создания новых вакцин.

Филогенетическое дерево исследуемых альфавирусов в сравнении с прототипами

358pаздел 3Цель исследования — определение полногеномных последовательностей
различных видов альфавирусов, установление уровня гомологии с ближайшими прототипами и представителями известных антигенных комплексов
альфавирусов.
В исследовании мы использовали семь видов альфавирусов: вирус ЛесаСемлики, Чикунгунья, Гета, Синдбис, Пиксуна, Ндуму и Миддельбург. Посредством методов NGS и секвенирования по Сэнгеру были определены ихполногеномные нуклеотидные последовательности. Далее был проведен поиск гомологичных последовательностей в базе данных Genbank и их сравнительный анализ. Ни для одного из исследуемых штаммов не было найдено последовательностей со 100 % идентичностью, что говорит об их оригинальности. Уровень гомологии при сравнении наших последовательностейи самых близких прототипов составил от 97,99 до 99,58 %. Самые близкие
последовательности были выбраны в качестве прототипов для построения
филогенетического дерева (см. рисунок). При сравнении с прототипамии построении филогенетического дерева исследуемые последовательности
вошли в комплексы, соответствующие принятым представлениям о филогении и таксономии этих альфавирусов. Проведен анализ генетических особенностей этих видов вирусов. Обращает на себя внимание генетическая
схожесть исследованных альфавирусов с вирусом Синдбис (MG679373),
выделенным ранее на Алтае, и вирусом Гета, обнаруженным в Монголии
(EF631999) и России (EF631998) в комарах родов Aedes spp.и Culex spp.

Вирусология

359

ВПЧ-ПОЗИТИВНЫЙ РАК ГОРТАНИ:СВЯЗЬ С ЭФФЕКТОМ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОГНОЗОМ ЗАБОЛЕВАНИЯ
HPV-POSITIVE LARYNGEAL CANCER: CONNECTION WITH
THE EFFECT OF THE TREATMENT AND PROGNOSIS OF THE DISEASE
И. А. Цыденова 1,2, М. К. Ибрагимова 1, М. М. Цыганов 1,
Д. С. Долгашева 1,2, О. В. Черемишина 1, Н. В. Литвяков 1
1Научно-исследовательский институт онкологии
Томского национального исследовательского медицинского центра РАН
2Томский государственный университет
I. A. Tsydenova 1,2, M. K. Ibragimova 1, M. M. Tsyganov 1,
D. S. Dolgasheva 1,2, O. V. Cheremishina 1, N. V. Litviakov 1
1

Cancer Research Institute Tomsk,
Tomsk National Research Medical Center of RAS
2
Tomsk State University
Email: tsydenova422@gmail.com
АннотацияВ основе возникновения рака гортани (РГ) лежит длительное существование
хронических воспалительных процессов, индуцированных и поддерживаемых комплексным воздействием ряда этиологических начал. Однако до сих пор нет информации о влиянии ВПЧ-позитивного статуса на выживаемость и лечение пациентов
с РГ. Целью данной работы являются оценка наличия вируса папилломы человекаВПЧ в опухоли у больных РГ и оценка связи ВПЧ с эффектом лечения.

Abstract
The occurrence of laryngeal cancer (LC) is based on the long-term existence of chronic
inflammatory processes induced and maintained by the complex effects of a number of
etiological principles. However, there is still no information on the effect of HPV-positive
status on the survival and treatment of patients with LC. Thus, the aim of this work is toassess the presence of the human papillomavirus HPV in the tumor in patients with LC andto assess the relationship of HPV with the treatment effect.
© И. А. Цыденова, М. К. Ибрагимова, М. М. Цыганов, Д. С. Долгашева, О. В. Черемишина, Н. В. Литвяков, 2020

360pаздел 3Материалы и методыВ исследование включен 101 больной плоскоклеточным раком гортани
I–III стадии с морфологически верифицированным диагнозом; больные
находились на лечении в клинике НИИ онкологии Томского НИМЦ.
В качестве исследуемого материала был использован операционный
материал нормальной и опухолевой ткани гортани (~10–50 мм3) после
операции, помещенный в раствор RNAlater (Ambion, USA). ДНК выделялис помощью набора QIAamp DNA mini Kit (Qiagen, Germany). Выявлениеи генотипирование ДНК ВПЧ проводили методом мультиплексной
полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени наприборе RotorGene 6000 (Corbett Research, Australia) с использованием
комплектов реагентов фирмы Amplisens®) (Москва, Россия). Статистическая
обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных
программ Statistica 8.0 (StatSoft Inc., USA).
Результаты
Изрезультатов
проведенного
исследования
следует,чтоинфицированность ВПЧ в опухолевой ткани и прилежащем неизмененном
эпителии составила 16,8 (17/101) и 19,8 % (20/101) соответственно
(рис. 1). Всего ВПЧ был обнаружен в нормальной и/или опухолевой ткани
у 25 больных.

Рис. 1. Распространенность ВПЧ-инфекции при раке гортанив опухолевой ткани и в прилежащем эпителии

Вирусология

361

Важно отметить, что у 5 пациентов наличие ВПЧ наблюдалось
только в опухолевой ткани гортани, у 8 пациентов только в нормальной
ткани. У 12 больных вирус был обнаружен в обоих образцах. Во многих
исследованиях отмечены более высокие показатели безрецидивнойи общей выживаемости ВПЧ-позитивных пациентов по сравнению с ВПЧнегативными. Примечательно, что в группе ВПЧ-позитивных пациентовс РГ показана 100 % безметастатическая и безрецидивная выживаемость
(рис. 2).

Рис. 2. Безметастатическая (А) и безрецидивная (Б) выживаемость
ВПЧ-позитивных и ВПЧ-отрицательных больных РГ(log-rank test, p = 0,27 и 0,05 соответственно)Статистически значимые различия показаны только для безрецидивной
выживаемости (log-rank test, p = 0,05), рис. 2, Б. Кроме того, проведенный
анализ связи наличия ВПЧ в опухолевой ткани с эффектом лучевой терапиине показал статистически значимых различий.
Заключение
Полученные результаты указывают на важность и перспективность
проведения более подробного исследования в представленном направлении,поскольку до сих пор нет четкой информации о связи ВПЧ и рака гортани,и зависимости выживаемости от наличия ВПЧ у пациентов.

pаздел 3362

ПЦР-РВ КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ ТЕСТПРИ ОЦЕНКЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ
АТТЕНУИРОВАННЫХ ШТАММОВ ВИРУСА КРАСНУХИ В ОПЫТЕНА ОБЕЗЬЯНАХ МАКАКА-РЕЗУС
PCR-RT AS AN ADDITIONAL TEST FOR EVALUATING THE SPECIFICSAFETY OF ATTENUATED RUBELLA VIRUS STRAINSIN THE EXPERIMENT ON RHESUS MACAQUE MONKEYS
О. А. Шамсутдинова 1, И. Н. Лаврентьева 2, Д. Д. Карал-оглы 1
1Научно-исследовательский институт медицинской приматологии, Сочи2Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт
эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, Санкт-ПетербургO. A. Shamsutdinova 1, I. N. Lavrientieva 2, D. D. Karal-ogly 1
1

Research Institute of Medical Primatology, Sochi
2
St. Petersburg Pasteur InstituteE-mail: shamsutdinova-o-a@yandex.ruАннотация
Сравнительное изучение нейровирулентности вакцинных штаммов вируса
краснухи показало отсутствие остаточной нейровирулентности как у отечественного вакцинного штамма «Орлов-В», так и у штамма RA 27/3, входящего в состав
коммерческих культуральных живых вакцин. Показана информативность метода
ПЦР-РВ при контроле диссеминации аттенуированных штаммов и возможность использования ПЦР-РВ в качестве дополнительного теста при оценке специфической
безопасности аттенуированных штаммов живых вакцин.

Abstract
A comparative study of the neurovirulence of vaccine strains of rubella virus showed
the absence of residual neurovirulence in both the domestic vaccine strain «Orlov-B» andthe strain RA 27/3, which is part of commercial live culture vaccines. The informative valueof the PCR-RT method in controlling the dissemination of attenuated strains and the possibility of using PCR-RT as an additional test for evaluating the specific safety of attenuatedstrains of live vaccines is shown.

© О. А. Шамсутдинова, И. Н. Лаврентьева, Д. Д. Карал-оглы, 2020Вирусология

363

Разработка новых медицинских иммунобиологических препаратов,в том числе и живых вакцин, включает как контроль специфической активности, так и оценку специфической безопасности аттенуированных штаммов вирусов. Необходимо отметить, что в настоящее время единственным
рекомендованным методом оценки остаточной нейровирулентности аттенуированных вакцинных штаммов в тесте инрацеребрального заражения
обезьян является гистологическое исследование ЦНС экспериментальных
животных.
Принимая во внимание тот факт, что вакцины против кори, крас- нухи,эпидемического паротита и полиомиелита содержат хоть и ос- лабленные,но живые нейровирулентные вирусы, весьма актуальным представляется
разработка дополнительных тестов, подтверждающих стабильность
аттенуации и контроль экстраневральной диссеминации аттенуированных
штаммов, основанных на современных методах лабо- раторной
диагностики.
В настоящее время в лабораторной диагностике все чаще используют
молекулярно-биологический метод исследования — полимеразную цепную реакцию с детекцией в режиме «реального времени» (ПЦР-РВ), длякоторой характерна высокая специфичность, чувствительность и меньшая длительность реакции по сравнению с другими вирусологическими
методами.
Цель исследования — определение возможности использования метода
ПЦР-РВ в качестве дополнительного теста при определении степени остаточной нейровирулентности вакцинных штаммов вируса краснухи.
В исследовании были использованы два вакцинных штамма — «Орлов-В» и RA 27/3 и «дикий» штамм «Орлов», изолированный в 1979 г.
В. Н. Мешаловой от ребенка, больного манифестной формой краснухи. Вируссодержащий материал вводили в объеме 0,25 мл в зрительный бугор
каждого полушария головного мозга клинически здоровых обезьян видаMacaca mulatta, содержащихся в питомнике ФГБНУ «НИИ МП». Доза вакцинных штаммов вируса соответствовала 10 минимальным прививочным
дозам человека и соответствовала 10000 ТЦД50/0,5 мл. Клиническое наблюдение за обезьянами проводили ежедневно в течение 28 суток, на протяжении которых у животных инфицированных штаммами «Орлов-В» и RA
27/3, не было отмечено проявлений общих клинических и неврологических
симптомов, типичных для данного заболевания. Согласно результатам гистологического исследования различных отделов ЦНС обезьян, инокулированных вакцинными штаммами, средний балл поражений ЦНС составил
0,0–0,1. Для выявления РНК вируса краснухи из 10 % суспензии образцов

364pаздел 3тканей ЦНС, паренхиматозных органов, а также спинномозговой жидкости и плазмы периферической крови, использовали набор реагентов «АмплиСенс Rubella virus-FL» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора). Полученные
результаты ПЦР-РВ свидетельствуют об отсутствие инфекционного вирусав ЦНС и периферических органах обезьян, зараженных вакцинными штаммами, что может свидетельствовать в пользу высокого уровня аттенуации
вакцинных штаммов и отсутствии экстраневральной диссеминации аттенуированных штаммов.

Вирусология

365УВЕЛИЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ *INCREASE OF IMMUNOGENICITY OF THE VACCINIA VIRUS
С. Н. Якубицкий, Т. В. Бауэр, А. А. Сергеев,А. С. Кабанов, С. А. Пьянков, С. Н. Щелкунов
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор», р. п. Кольцово
S. N. Yakubitskiy, T. V. Bauer, A. A. Sergeev,
A. S. Kabanov, S. A. Pyankov, S. N. Shchelkunov
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: yakubitskiy@vector.nsc.ruАннотация
Изучен вопрос о том, как увеличение продукции внеклеточных вирионов, покрытых оболочкой (EEV), может влиять на вирулентные и иммуногенные свойства
вируса осповакцины (VACV) в зависимости от способа его введения в организм лабораторных мышей. Исследования проводили на принятом в России для противооспенной вакцинации штамме LIVP VACV. В состав гена A34R VACV направленно
ввели две точечные мутации, приводящие к достоверно большему формированию
EEV по сравнению с родительским штаммом LIVP. Созданный мутантный штамм
LIVP-A34R проявлял меньшую нейровирулентность и при внутрикожном введении
индуцировал повышенную продукцию противовирусных антител. Такой вариант
VACV может стать перспективной основой для получения аттенуированной и высокоиммуногенной вакцины против оспы и других ортопоксвирусных инфекций человека, а также использоваться в качестве вектора для конструирования живых рекомбинантных поливалентных вакцин против разных инфекционных заболеваний.

Abstract
In this work, we studied how an elevated production of extracellular enveloped virions(EEVs) and the route of mouse infection can influence the virulence and immunogenicity
of vaccinia virus (VACV). The research subject was the LIVP strain, which is used in Russia© С. Н. Якубицкий, Т. В. Бауэр, А. А. Сергеев, А. С. Кабанов, С. А. Пьянков,С. Н. Щелкунов, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского научного
фонда (грант № 19-14-00006).

366pаздел 3

for smallpox vaccination. Two point mutations causing an elevated production of EEVs
compared with the parental LIVP strain were inserted into the sequence of the VACV A34R
gene. The created mutant LIVP-A34R strain showed lower neurovirulence in an intracerebral injection test and elevated antibody production in the intradermal injection method. This VACV variant can be a promising platform for developing an attenuated, highly
immunogenic vaccine against smallpox and other orthopoxvirus infections. It can also be
used as a vector for designing live-attenuated recombinant polyvalent vaccines against various infectious diseases.

В данной работе впервые изучен вопрос о том, как увеличение продукции EEV VACV может влиять на вирулентные и иммуногенные свойства
вируса в зависимости от способа его введения в организм лабораторных
мышей. Исследования проводили на принятом в России для противооспенной вакцинации штамме LIVP VACV. В состав гена A34R VACV LIVPввели две точечные мутации, характерные для этого гена штамма IHD-J
VACV. На культуре клеток CV-1 показали, что созданный мутантный вариант LIVP-A34R продуцирует достоверно большее количество внеклеточных
вирусных частиц по сравнению с родительским штаммом LIVP.
Интрацеребральное заражение новорожденных мышей линииBALB/c показало, что штамм LIVP-A34R характеризуется сниженной
нейровирулентностью по сравнению с родительским LIVP.
При интраназальном заражении мышей линии BALB/c оба изучаемых
штамма VACV демонстрировали патогенное воздействие на организм животных, что выявлялось по клиническим признакам и снижению массы теламышей. При этом мутантный штамм VACV LIVP-A34R проявлял по этимпризнакам меньшую патогенность. Внутрикожное или подкожное введение
вирусов не приводило к снижению массы тела мышей и появлению клинических признаков заболевания даже при максимальной использованной
дозе вируса — 108 бляшкообразующих единиц.
Иммуноферментным анализом в сыворотках крови мышей, полученных через 28 сут. после заражения исследуемыми вирусами, тестировали
уровень антител, специфически взаимодействующих с вирионными белками VACV. При внутрикожной инъекции LIVP-A34R обеспечивал больший
иммунный ответ по сравнению с исходным VACV LIVP.

367pаздел 4МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ

ВЫЯВЛЕНИЕ МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНОМА ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ
ЧЕЛОВЕКА 16 ТИПА ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТЯЖЕЛЫХ
ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НЕОПЛАЗИЙ И РАКА ШЕЙКИ МАТКИ
DETECTION OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS 16 GENOME
METHYLATION FOR EARLY DIAGNOSTICS OF SEVERE CERVICALINTRAEPITHELIAL NEOPLASIA AND CERVICAL CANCER
Т. А. Абикеева 1,2, М. К. Иванов 1,3, В. В. Дзюбенко 21

АО «Вектор-Бест», р. п. Кольцово
Новосибирский государственный университет
3Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск
2

T. A. Abikeeva 1,2, M. K. Ivanov 1,3, V. V. Dzhubenko 1
1

AO “Vector-Best”, Koltsovo
Novosibirsk State University
3
Institute of Molecular and Cellular Biology SB RAS, Novosibirsk
2

E-mail: abikeeva97@gmail.com
АннотацияРак шейки матки — одна из наиболее распространенных причин женской онкологической смертности в мире, которую возможно снизить при своевременном
выявлении предраковых стадий заболевания. Более 90 % выявленных случаев РШМобусловлены персистенцией вируса папилломы человека высокого канцерогенного
© Т. А. Абикеева, М. К. Иванов, В. В. Дзюбенко, 2020

368pаздел 4риска, среди которых около 70 % — ВПЧ16. Для профилактики РШМ проводят регулярные скрининговые обследования женщин, основным методом которых является цитологический анализ цервикального мазка. Недостаток метода — его низкая
диагностическая чувствительность (40–70 %). Второй метод скрининга, рекомендованный ВОЗ, — выявление ДНК ВПЧ ВКР в образцах цервикальных соскобов, характеризуется более высокой чувствительностью, но низкой положительной предсказательной ценностью (ППЦ). В связи с этим в мире ведутся работы по поиску
биологических маркеров патологий ШМ, которые позволили бы улучшить диагностические характеристики методов скрининга. В ряде исследований показано, чточастота выявления аберрантного метилирования клеточных и вирусных маркеров
коррелирует с повышением тяжести поражения цервикального эпителия и риском
злокачественной трансформации.

Abstract
Cervical cancer is one of the most prevalent reasons for women’s oncological mortality worldwide, which could be significantly reduced by timely diagnostics of precancerous states. More than 90 % of detected cervical cancer cases are caused by the persistenceof high-risk human papillomavirus, where approximately 70 % are induced by HPV16.
For CC prophylaxis regular screenings are carried out using cytology of cervical smears
as a conventional method. The disadvantage of this method, however, is its low diagnostic
sensitivity (40–70 %). Another screening method, recommended by WHO, is HR HPV
DNA detection in cervical smear samples. Despite its higher sensitivity, it appears to havesmall positive predictive value. Thereby, the research works are being held to find biologicalmarkers of cervical pathology, which would allow to improve the diagnostic characteristics
of screening methods. Several studies have reported that the frequency of aberrant methylation of cellular and viral markers correlates with the severity of cervical epithelial lesion
and with the risk of malignant transformation.

Цель данной работы — разработать методику выявления аберрантного
метилирования участка гена L2 ВПЧ16 на основе метил-чувствительнойПЦР и оценить ее перспективность для диагностики тяжелых дисплазийи РШМ.
С помощью разработанной нами методики выявления аберрантного метилирования участка гена L2 ВПЧ16 проанализирована выборка из
67 образцов цервикальных соскобов с различными цитологическими диагнозами: 10 NILM, 25 LSIL, 17 HSIL, 15 CC (в соответствии с системой
Bethesda). В выборку включали только образцы, содержащие ДНК ВПЧ16,что определили с помощью коммерческих наборов (АО «Вектор-Бест»,Россия).
На выборке показана корреляция между частотой выявления метилированных форм ДНК вируса в образцах и стадией заболевания: NILM —10,00 %, LSIL — 8,00 %, HSIL — 70,59 %, CC — 86,67 %. Оценены диагно-Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

369

стические характеристики разработанного подхода: чувствительность
составила 78,13 %, специфичность — 91,43 %, ППЦ — 89,29 %, ОПЦ —82,05 %. Планируется апробация разработанной методики на расширенной выборке.

100

80

%

60

40

20

0

NILM

LSIL

HSIL

CC

Частота выявления метилированных форм ДНК ВПЧ16среди образцов с различными стадиями заболевания

pаздел 4370ЭКСПРЕССИЯ ТРАНСКРИПЦИОННЫХ ФАКТОРОВ
OTX2 И CRX В ПЕРИОД ПОСТНАТАЛЬНОГО СОЗРЕВАНИЯ
СЕТЧАТКИ У ПРЕЖДЕВРЕМЕННО СТАРЕЮЩИХ КРЫС OXYSEXPRESSION OF TRANCRIPTION FACTORS OTX2 AND CRX
IN THE RETINAL POSTNATAL DEVELOPMENT
IN A SENESCENCE-ACCELERATED OXYS RATS
А. К. Антоненко
Новосибирский государственный университет
A. K. Antonenko
Novosibirsk State Universiry
E-mail: antonenko-98@bk.ruАннотация
Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) — многофакторное нейродегенеративное заболевание, которое становится основной причиной необратимой потери
зрения у пожилых людей. Поскольку сетчатка у взрослых практически не способнак нейрогенезу, предполагается, что заложенные в период формирования сетчатки
структурно-функциональные особенности могут иметь отдаленные эффекты в онтогенезе. Показано, что изменение экспрессии регуляторных генов Otx2 и Crx вовремя постнатального нейрогенеза сетчатки влияют на соотношение подтипов биполярных нейронов и связаны со сдвигом времени дифференцировки фоторецепторов у крыс OXYS на более поздний период.

Abstract
Age — related macular degeneration (AMD) is a multifactorial neurodegenerative
disease that becomes the main cause of irreversible vision loss in older people. The adult
retina is not practically capable to neurogenesis. It is suggested that the structural andfunctional features in the period of retinal formation may have long-term effects in ontogenesis. It is shown that changes in the expression of the regulatory genes Otx2 and Crx
during postnatal retinal neurogenesis affect the ratio of bipolar neuron subtypes and areassociated with a shift in the time of differentiation of photoreceptors in OXYS rats toa later period.

© А. К. Антоненко, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

371

Сетчатка млекопитающих у взрослых практически не способна к нейрогенезу и регенерации. Следовательно, заложенные в период формирования
сетчатки структурно-функциональные особенности могут иметь отдаленные эффекты в онтогенезе, одним из которых является повышение предрасположенности к ассоциированным со старением заболеваниям, таким каквозрастная макулярная дегенерация (ВМД). ВМД — нейродегенеративное
заболевание сетчатки, которое становится основной причиной потери зрения пожилыми людьми.
Исследование направлено на выявление возможного вклада изменения
экспрессии генов Otx2 и Crx в сетчатке в постнатальный период в развитиеВМД на модели этого заболевания — линии преждевременно стареющих
крыс OXYS, у которых развивается ретинопатия, по своим проявлениям аналогичная «сухой» форме ВМД у людей. Гены Otx2 и Crx — это основные регуляторы дифференцировки биполярных нейронов и фоторецепторов, а нарушение их экспрессии приводит к ряду нейродегенеративных заболеваний.
Работа проводилась на самцах крыс OXYS и Вистар (контроль) в критические для постнатального нейрогенеза дни (0, 1, 3, 5, 7, 10, 14 и 20). Исследование экспрессии генов Otx2 и Crx методом real-time PCR показало, чтоу крыс OXYS четко прослеживается задержка в паттерне генов Otx2 и Crx
экспрессии на ~ 3–4 дня по сравнению с крысами Вистар. Это, вероятно,приводит к смещению времени дифференцировки биполярных нейронови фоторецепторов.
Далее мы оценили плотность Otx2+ нейронов, пан-биполярных нейронов (Vsx2+) и колбочковых биполярных нейронов (рековерин +) на 7,
10 и 14 дни (период дифференцировки биполярных клеток). Методом ИГХпоказано, что плотность Otx2+ нейронов в сетчатке крыс Вистар не изменялась с возрастом, а у крыс OXYS возрастала с 7 по 14 день. В возрасте
7 дней плотность Otx2+ нейронов у крыс OXYS была достоверно ниже, чему крыс Вистар. При этом плотность всех типов биполярных нейронов в возрасте 7 дней у крыс OXYS ниже, а в возрасте 10 дней — выше, чем у крысВистар. У крыс OXYS плотности рековерин+ биполярных нейронов резко
повышалась к 10, а затем снижалась к 14 дню. На 10 и 14 дни плотность
рековерин+ биполярных нейронов у крыс OXYS выше, чем у Вистар. Полученные результаты указывают на изменение соотношения подтипов биполярных нейронов у крыс OXYS, которое в дальнейшем может приводитьк функциональным изменениям в сетчатке и, соответственно, вносить
вклад в последующее развитие у крыс OXYS нейродегенерации.

pаздел 4372СЕКВЕНИРОВАНИЯ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
NEXT GENERATION SEQUENCING FOR CLINICAL DIAGNOSTICS
К. Ш. Арнаудова, О. В. Астафьева, З. В. Жаркова
Астраханский государственный медицинский университет
K. Sh. Arnaudova, O. V. Astafyeva, Z. V. Zharkova
Astrakhan State Medical University
E-mail: arnaudova@mail.ruАннотация
Современным и перспективным методом молекулярной диагностики является
полногеномное секвенирование, направленное на поиск мутаций в генах для обнаружения генетических и раковых заболеваний, выявления предрасположенностик их развитию и персонализированного подхода к терапии.

Abstract
A modern and promising method of molecular diagnostics is a next generation sequencing, which is aimed at searching for mutations in genes for detecting genetic andcancerous diseases, identifying a predisposition to their development and a personalized
approach to therapy.

Today, the most promising method for diagnosing diseases is a next genesequencing (NGS). The analysis of the obtained data using NGS in different
populations revealed the individual variability of the human genome. However,there is a need to differentiate the presence of genomic variants and their relationship with the development of the disease. To address this challenge, comprehensive databases are being created to document genomic variants, including sequence variants and structural genomic variants. In addition, the NGS
supplements data on the presence of correlations of genotypes with phenotypes
and analysis of the biochemical and functional consequences of specific sequence variants.
© К. Ш. Арнаудова, О. В. Астафьева, З. В. Жаркова, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

373

Knowledge of genomic sequence variants has greatly expanded the possibilities for accurate molecular diagnostics of genetically determined diseases andfacilitates personalized therapy. DNA analysis of tumors and analysis of aberrant
proteins in cancer have allowed the development of targeted therapy and approaches to immunotherapy of the disease.

pаздел 4374ТРИАЗИН-КАРБОСИЛАНОВЫЕ ДЕНДРИМЕРОСОМЫ КАКПЕРСПЕКТИВНАЯ ПЛАТФОРМА ДЛЯ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВ *TRIAZINE-CARBOSILANE DENDRIMERSOMESAS PROSPECTIVE DRUG DELIVERY PLATFORM
В. И. Архипова 1,2, Н. Ю. Кнауэр 1,3, Е. А. Пашкина 1,3,
О. С. Боева 1,2,3, А. Г. Веньяминова 1, Х. Санчес-Ньевес 4,
Ф. Х. де ла Мата 4, Р. Гомес 4, Е. К. Апарцин 1,2
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Научно-исследовательский институт фундаментальнойи клинической иммунологии, Новосибирск
4Факультет органической и неорганической химии,Университет Алькала, Алькала-де-Энарес, Испания
V. I. Arkhipova 1,2, N. Yu. Knauer 1,3, E. A. Pashkina 1,3,
O. S. Boeva 1,2,3, A. G. Venyaminova 1, J. Sánchez-Nieves 4,
F. J. de la Mata 4, R. Gomez 4, E. K. Apartsin 1,21

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology, Novosibirsk
4
Department of Organic and Inorganic Chemistry,
University of Alcala, Alcala de Henares, Spain
E-mail: v.arkhipova@g.nsu.ruАннотация

Работа направлена на получение наноразмерных везикул и исследование ихсвойств. Изучено взаимодействие наночастиц с противоопухолевыми препаратамии терапевтическими нуклеиновыми кислотами. Исследована эффективность доставки комплекса с лекарством в клетки.
© В. И. Архипова, Н. Ю. Кнауэр, Е. А. Пашкина, О. С. Боева, А. Г. Веньяминова,Х. Санчес-Ньевес, Ф. Х. де ла Мата, Р. Гомес, Е. К. Апарцин, 2020*Исследование выполнено при поддержке гранта РФФИ 18-33-20109_мол_а_вед, гранта MINECO CTQ-2017-85224-P, гранта Президента РФ МК-2278.2019.4.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

375This work is aimed at obtaining and studying the properties of nanoscale vesicles. Theinteraction of nanoparticles with anticancer drugs and therapeutic nucleic acids was studied. The efficiency of drug delivery into cells was studied.

Супрамолекулярные конструкции часто используются в качестве доставщиков лекарственных препаратов, так как инкапсуляция терапевтических агентов в наноразмерные ассоциаты с последующим контролируемым
высвобождением в клетках-мишенях позволяет увеличить эффективность
лекарства и снизить побочный токсический эффект.
Многообещающими структурными блоками для НЧ являются высокосимметричные молекулы — дендримеры и дендроны. Этот тип полимеров
выгодно отличается регулярностью структуры и возможностью контролируемого синтеза. В данной работе была синтезирована серия новых амфифильных дендритных молекул — гибридных триазин-карбосилановых дендронов. Наличие разветвленного гидрофобного блока стимулирует самосборку молекул в устойчивые двухслойные ассоциаты (дендримеросомы).
Дендримеросомы с высокой эффективностью инкапсулируют низкомолекулярные химиопрепараты, такие как доксорубицин и метотрексат; красители метиленовый синий и бенгальский розовый. Препарат-содержащие
конструкции имеют гидродинамический размер 60–100 нм (PDI 0,19–0,25)
и суммарный заряд ~+15 мВ. На примере доксорубицин-содержащих дендримеросом было показано, что конструкции накапливаются в клетках-мишенях в течение 4 ч совместной инкубации и вызывают гибель клеток в течение 24–72 ч.
Дендримеросомы также показали эффективность в доставке противоопухолевых НК (miR-34a, anti-miR-21) в опухолевые клетки. Комплексы
дендримеросом с олигонуклеотидами (400–500 нм) эффективно проникаютв опухолевые клетки как адгерентных, так и суспензионных линий, вызывая апоптоз.
Таким образом, амфифильные триазин-карбосилановые дендроны можно рассматривать как перспективную платформу для доставки низко- и высокомолекулярных лекарственных препаратов в клетки.

pаздел 4376НАЛИЧИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ МЕЖДУ ГЕНЕТИЧЕСКИМИ
МАРКЕРАМИ ДОМЕНА DBL1α И DBLβ ГЛАВНОГО ФАКТОРА
ВИРУЛЕНТНОСТИ PLASMODIUM FALCIPARUM (PFEMP1)В СЛУЧАЕ ТЯЖЕЛОГО ТЕЧЕНИЯ ТРОПИЧЕСКОЙ МАЛЯРИИ
THE INTERRELATION OF DBL1α AND DBLβ GENETIC MARKERS
OF THE PLASMODIUM FALCIPARUM ERYTHROCYTE MEMBRANE
PROTEIN 1 (PFEMP1) IN THE CASE OF SEVERE TROPICAL MALARIA
А. Р. Арюков, А. И. Ракин
Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова, Санкт-Петербург
A. R. Ariukov, A. I. Rakin
Military Medical Academy named after S. M. Kirov, St. Petersburg
E-mail: Arukov.artem@yandex.ruАннотация
Проведено исследование генотипических особенностей Plasmodium falciparum,вызывающих тропическую малярию, осложненную гемолитической анемией. Показано, что в случае тяжелой тропической малярии, сопровождавшейся развитием гемолитической анемии, в крови пациента выявлялись генетические маркерыPFEMP1, соответствующие доменам DBL1α и DBLβ. В случае неосложненного течения тропической малярии данные генетические маркеры отсутствовали.

Abstract
The work is dedicated to the study of the genetic characteristics of Plasmodium falciparum. Material for clinical studies are two cases of tropical malaria diagnosed between
September and October 2018 year in St. Petersburg hospitals. One case of the disease
flowed had and has been accompanied by severe anemia. Another case of the disease wasproceeding without complications. Routine polymerase chain reaction (PCR) was used toresearch. PCR was performed with primers to genes encoding the domains DBL1α, DBLβof PFEMP1. PCR with primers to DBL1α and DBLβ were positive in the case of hemolytic
anemia.

© А. Р. Арюков, А. И. Ракин, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

377Одним из наиболее частых признаков злокачественного течения тропической малярии служит гемолитическая анемия вследствие разрушения
эритроцитов в процессе эритроцитарного цикла развития паразитов. Однако выраженность признаков анемии не всегда напрямую зависит от уровня паразитемии. Клинических наблюдений, подтверждающих связь между
развитием тяжелой анемии с особенностями строения генома P. falciparum,пока недостаточно.
Цель работы. На примере клинических наблюдений подтвердить возможную связь клинических проявлений тропической малярии с особенностями генотипа возбудителей (P. falciparum).
Материалом для клинических наблюдений послужили два случая тропической малярии, выявленных в стационарах Санкт-Петербурга. В одномиз случаев заболевание протекало тяжело и сопровождалось развитием тяжелой анемии. Другой случай заболевания протекал без осложнений.
В ходе исследований мы использовали технологию полимеразной цепной реакции (ПЦР). Материалом служила высушенная кровь со стекол,приготовленных для препарата «толстая капля».
В результате проведенного микроскопического исследования препаратов «толстая капля» и «тонкий мазок» в крови пациента В. и пациента М.
были выявлены юные трофозоиты P. falciparum. Концентрация паразитовв обеих пробах составила более 5000 паразитов в 1 мкл крови.
Результаты ПЦР с видоспецифичными праймерами подтвердили присутствие в пробах крови пациентов В. и М. нуклеотидных последовательностей, характерных для генома P. falciparum.
Исследование проб с использованием праймеров к различным регионам var-комплекса P. falciparum показало, что реакции с кровью пациента В.
давали положительные результаты на нуклеотидные последовательности,соответствующие как домену DBL1α, так и домену DBLβ. В тоже время соответствующие исследования образцов крови пациента М. показали отрицательный результат (см. рисунок).
Таким образом, заболевание тропической малярией пациента В., прикотором выявлялись генетические маркеры PFEMP1, соответствующие доменам DBL1α и DBLβ, сопровождалось развитием осложнений —гемолитической анемии и острого почечного повреждения. При этом клинические проявления характеризовались субъективными ощущениями
тошноты, выраженной слабости, головной боли, а также объективными
признаками желтушности кожи и склер, гепато- и спленомегалии.

378pаздел 4Результаты электрофоретического разделения продуктов амплификациис праймерами к нуклеотидным последовательностям доменов DBL1α и DBLβ:
1 — маркер длин ДНК (50+ bp); 2–6 — праймеры DBLα-5’/DBLα-3’ (домен DBL1α);
7–11 — праймеры DBLβ-5’/DBLβ-3’ (домен DBLβ); 2, 7 — проба от здорового
донора; 3, 4, 8, 9 — проба от больного В.; 5, 6, 10, 11 — проба от больного М.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

379

ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ HAP1 С АУКСИН-ЗАВИСИМОЙ
ДЕГРАДАЦИЕЙ КОНДЕНСИНОВ И КОГЕЗИНА
CREATING A HAP1 CELL LINE WITH AUXIN-INDUCIBLE
CONDENSINS AND COHESIN DEPLETIONС. Д. Афонникова
Новосибирский государственный университет
Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
S. D. Afonnikova
Novosibirsk State University
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
E-mail: svetaafonnikova@gmail.com
Аннотация
Конденсины и когезин принадлежат к группе SMC-белков (Structural Maintenanceof Chromosomes), которые взаимодействуют с хромосомами на протяжении всего
клеточного цикла, а также участвуют в контроле активности генов. Для исследования функции этих белков мы создали клеточные линии, позволяющие быстро и полно проводить деплецию конденсинов и когезина.

Abstract
Condensins and cohesin belong to the SMC (Structural Maintenance of Chromosomes) proteins family, which interact with chromosomes throughout cell cycle and involved in control of gene activity. To study function of these proteins we created cell lines
with rapid and extensive depletion of condensins and cohesin.

Многочисленные исследования в области трехмерной организации хроматина в ядре показали иерархичность укладки хромосом. Они формируют компартменты, состоящие из топологически ассоциированных доменов
(ТАДов), образование которых происходит благодаря механизму экструзии
петли через белковый комплекс когезина.
Эксперименты по удалению какой-либо субъединицы когезина привелик потере петель и доменов. При это отмечено, что экспрессия генов карди© С. Д. Афонникова, 2020

380pаздел 4нально не меняется. Это может быть свидетельством существования других
компонентов, которые поддерживают устойчивость энхансер-промоторных взаимодействий. Подходящими кандидатами для исполнения подобных функций являются комплексы конденсина, также способные к экструзии хроматиновых петель.
Исследование роли обозначенных выше белков в контроле активности
генов проводилось путем ауксин-зависимой деградации белка, которая
позволяет направленно и обратимо снизить количество белка < 5 % от изначального в присутствии ауксина. Для работы были выбраны следующие
субъединицы: Rad21 когезина и SMC2 конденсинов 1 и 2. Модификация генов осуществлялась системой CRISPR/Cas9.
В результате работы были получены линии клеток с ауксин-зависимой
деградацией когезина (23R), конденсинов 1 и 2 (48S), одновременно когезинаи конденсинов (23RS). Также было проведено исследование динамики
деградации во времени. Согласно полученным данным после шести часов
уровень деградации у линий 23R и 48S составил 20–30 %. У линии 23RS
уровень ниже — до 7 %.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

381ГЕНОМНЫЙ АНАЛИЗ И SNP-ГЕНОТИПИРОВАНИЕ
ШТАММОВ YERSINIA PESTIS ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ВЕТВИ
2.MED4 СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА
GENOME ANALYSIS AND SNP-GENOTYPING OF YERSINIA PESTISSTRAINS OF THE PHILOGENETIC BRANCH 2.MED4
OF MEDIEVAL BIOVAR
А. Н. Балыкова, Г. А. Ерошенко
Российский научно-исследовательский противочумный институт
«Микроб», Саратов
A. N. Balykova, G. A. Eroshenko
Russian Anti-Plague Research Institute «Microbe»
E-mail: alinabalnik@gmail.com
АннотацияВ XVIII–XX веках в Прикаспии происходили многочисленные вспышки чумыс высоким уровнем летальности. Нами выявлена неизвестная ранее филогенетическая ветвь 2.MED4 Yersinia pestis средневекового биовара. Штаммы ветви
2.MED4 могли быть этиологическими агентами этих вспышек наряду с другой
ветвью 2.MED1. Целью исследования было проведение сравнительного геномного
анализа штаммов Y. pestis филогенетической ветви 2.MED4 и выявление молекулярно-генетических особенностей для разработки способа их идентификации методом ПЦР.

Abstract
In the XVIII–XX centuries, numerous outbreaks of plague with a high mortality rateoccurred in the Caspian-Sea region. We have identified a previously unknown phylogenetic branch 2.MED4 Yersinia pestis of the medieval biovar. The strains of the branch
2.MED4 could be the causative agents of these outbreaks, along with another branch
2.MED1 of Y. pestis. The aim of this study was to carry out a comparative genomic analysis of Y. pestis strains of the phylogenetic branch 2.MED4 and to identify the molecular-genetic features for the development of a method for their identification by PCR.

© А. Н. Балыкова, Г. А. Ерошенко, 2020

382pаздел 4В конце XVIII — начале XX веков в Прикаспии на территории Россиии Казахстана происходили многочисленные вспышки чумы, этиологический агент которых был неизвестен. Нами доказано, что по крайней мерес начала ХХ века вспышки в северной части Прикаспия были вызваны
штаммами Y. pestis филогенетической ветви 2.MED1 средневекового биовара, возможно, в них принимали участие и высоковирулентные штаммы
выявленной нами филогенетической ветви 2.MED4 [2, 3]. Эти сведения
определяют актуальность проведения сравнительного геномного анализа
штаммов 2.MED4 и выявления их молекулярно-генетических особенностей для последующего определения роли этих штаммов во вспышках чумыв Прикаспии.
Сравнительный геномный анализ трех ранее выявленных штаммов
Y. pestis ветви 2.MED4 проводили в программах Mega X, MUMmer3.0, порезультатам анализа найдено 10 маркерных SNPs. Были отобраны три таргетные SNPs в белок-кодирующих генах по геному референсного штамма
СО92: priA (A→ G в позиции 117694 гена YPO0110), apaH (C → A в позиции
522489 гена YPO0490), phnL (G → A в позиции 3869329 гена YPO3462). Фрагментное секвенирование осуществляли на анализаторе «AppliedBiosystems
3500xL». SNP-генотипирование методом ПЦР и фрагментного секвенирования выполнено на выборке из 26 штаммов Y. pestis из очагов чумы Прикаспия, соответствующих периодам выделения ранее исследованных штаммов
ветви 2.MED4. Найдено еще 5 штаммов Y. pestis средневекового биовара,относящихся к данной ветви.
Высокопроизводительное секвенирование всех 8 штаммов ветви
2.MED4 проводили в системе Ion PGM (Life technologies). Обработку данных секвенирования выполняли в программах Ion Torrent Suite software
4.2 и Newbler gsAssembler 2.6. Выравнивание полученных прочтений нареференсный геном штамма Y. pestis СО92 (номер доступа в GenBank
NC_003143.1) осуществляли с помощью DNASTAR Lasergene 15.3. Средний размер собранных геномов составил 4, 5 м. п. н., средняя глубина покрытия — 48-кратная. Нуклеотидная последовательность штамма Y. pestis
31 ветви 2.MED4 депонирована в базу данных NCBI GenBank под номеромJAAIKY000000000.
По результатам сравнительного анализа геномов 8 штаммов ветви
2.MED4 выявлено 10 маркерных SNPs и разработан способ их идентификации методом ПЦР и фрагментного секвенирования. Полногеномные последовательности штаммов Y. pestis ветви 2.MED4 могут быть использованыв качестве референсных для природных очагов чумы Прикаспия.

Литература

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия383

1. Kutyrev V. V. et al. Phylogeny and classification of Yersinia pestis through the lens ofstrains from the plague foci of Commonwealth of Independent States // Front. Microbiol.
2018. Vol. 9(1106). 1–11. DOI: 10.3389/fmicb.2018.01106.
2. Eroshenko G. A. et al. Circulation of Yersinia pestis in the Volga-Ural Sandy focus:
spatiotemporal analysis // Problems of Particularly Dangerous Infections. 2019. Vol. 3.
P. 51–57. DOI: 10.21055/0370-1069-2019-3-51-57.
3. Eroshenko G. A. et al. Phylogenetic analysis of Yersinia pestis strains of medieval
biovar, isolated in Precaspian North-Western Steppe plague focus in the XX century //Problems of Particularly Dangerous Infections. 2019. Vol. 2. P. 55–61. DOI: 10.2105
5/0370-1069-2019-2-55-61.

pаздел 4384ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО
БИСПЕЦИФИЧЕСКОГО БЕЛКА GNR-084 МЕТОДОМ ИММУНО-ПЦР
DETECTION OF RECOMBINANT BISPECIFIC PROTEIN GNR-084
BY IMMUNO-PCR
Е. Ю. Басова, Н. А. Литвинова, О. А. Cаввина, Р. Р. ШукуровООО МБЦ «Генериум», Москва
E. Yu. Basova, N. A. Litvinova, O. A. Savvina, R. R. Shukurov
OOO MBC “Generium”, Moscow
E-mail: eybasova@ibcgenerium.ruАннотация
Количественное определение рекомбинантного биспецифического антителав низких дозировках является важной задачей при проведении доклинических
(ДоКИ) и клинических исследований (КИ). Целью данного исследования являлась разработка высокочувствительного метода иммуно-ПЦР (и-ПЦР) для детектирования рекомбинантного биспецифического антитела GNR-084 в образцах
сыворотки крови человека. Ключевым элементом разработанного метода является использование конъюгата анти-Fab-GNR-084 антител с олигонуклеотидамис последующей амплификацией в режиме реального времени. Данный подход
позволил достичь предела количественного обнаружения лекарственной формы GNR-084 в лиофилизате после восстановления и разведения в 0,9 % NaCl дляпроведения инфузии 12,5 пг/мл. Полученные результаты открывают возможность
детектирования данного лекарственного средства в низких концентрациях припроведении ДоКИ и КИ.

Abstract
The quantitative determination of recombinant bispecific antibodies at low dosages is
an important task in pre-clinical and clinical studies. The aim of this study is to develop
a highly sensitive method of immuno-PCR for detection of recombinant bispecific antibody GNR-084 in serum. The key element of developed method is using a conjugate anti-Fab-GNR-084 antibody with oligonucleotides and followed by real-time amplification.
This approach allowed us to achieve a detection limit of 12.5 pg / ml for the solution of
GNR-084 that had been reconstituted from the lyophilized form in a solution of 0.9 % NaCl
© Е. Ю. Басова, Н. А. Литвинова, О. А. Cаввина, Р. Р. Шукуров, 2020Молекулярная биология
385
биологибиологияббиолог
ияfor infusion at 12.5 pg / ml. The
obtained results point to the possibility of detecting thisdrug at low concentrations during DoCI and CI.

ВведениеНа сегодняшний день проблема острого лимфобластного лейкоза(ОЛЛ) как в детском, так и подростковом возрасте все еще остается нерешенной [1]. Доля ОЛЛ составляет 25 % всех злокачественных заболеванийи до 75 % всех гемобластозов. Лекарственные препараты на основе рекомбинантных биспецифических антител имеют важное значение в мобилизации и усилении Т-клеточного иммунного ответа организма против злокачественных В-клеточных опухолей лимфоидного происхождения. В связис этим на базе ООО МБЦ «Генериум» разработан препарат, который представляет собой биспецифические антитела GNR-084. Молекула антител
GNR-084, содержащая Fc регион антител человека, способна одновременно
специфично взаимодействовать с CD19 и CD3. Препарат успешно прошел
ДоКИ и находится на стадии КИ, в ходе которых необходимо детектировать
низкие дозировки препарата в сложных биологических матрицах образца.
Существуют различные методы определения, среди которых широкое распространение получил иммуноферментный анализ (ИФА) [2]. Однако чувствительность метода не позволяет применять его для детекции аналитовв сверхнизких количествах. Объединение специфичного ИФА и высокочувствительного ПЦР в методе и-ПЦР обусловливает 10–10 000 кратное увеличение чувствительности за счет использования фрагмента ДНК в качестве
метки для детектирования взаимодействия антитело-антиген [3].
Целью настоящей работы является разработка метода и-ПЦР для количественного определения молекулы GNR-084 в сыворотке крови человека.
Материалы и методы
Методом количественной и-ПЦР определяли содержание GNR-084 в образцах сыворотки крови человека. Эксперименты проводились с модельными образцами и с образцами сыворотки (S1 Merck Millipore), которую
предварительно центрифугировали в течение 5 минут при 14000 об/мин,затем фильтровали через фильтр Millex-GP, 0,22 мкм, после чего смешивали с буферным раствором для разведения образцов (RDB) в соотношении
1:5. Раствор инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре и снова центрифугировали. Детектирование происходило следующим
образом: на поверхность планшета (Maxisorp, NUNC) иммобилизировали
поликлональные крысиные анти-Fab-GNR-084 антитела (МБЦ «Генериум»),после удаления несвязавшихся антител и блокировки вносили образец,pаздел 4386содержащий GNR-084, по завершении инкубации и промывки добавляли
конъюгат поликлональных крысиных анти-Fab-GNR-084 антител с олигонуклеотидами (МБЦ «Генериум»). Завершающим этапом было проведение
денатурации иммунокомплекса с помощью ТЕ буфера при нагревании 95 °Св течение 5 минут с последующим переносом смеси в ПЦР планшет и амплификацией. Схема анализа представлена на рис. 1.

Рис. 1. Схема проведения и-ПЦР для определения GNR-084

ПЦР в реальном времени проводили в программируемой 6-канальной оптической системе термоблока амплификатора CFX-96 (BioRad, Германия). Реакционную смесь готовили с использованием следующих реагентов: праймеров 5’-ATTGTTGCCCCCAAGCTAGAGTAAGTAGTT-3’;
5’-TATGCAGTGCTGCCATAACCATGA-3’ (Синтол) и ДНК-полимеразы
qPCRmix-HS SYBR (Евроген). Амплификацию проводили согласно следующей схеме:Стадия
Активация полимеразы
Денатурация
ОтжигЭлонгация

Время
5 мин
12 с
30 с
30 с

Температура, °С
95
95
50
72

Количество циклов
140Флюоресценцию измеряли на каждом цикле на фазе элонгации. Статистическая обработка осуществлялась с использованием программ Microsoft
Office Excel 2010 [4–8].
Результаты и обсуждение
Количественное определение рекомбинантных биспецифических антител в низких дозировках является одной из важных задач при проведении

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

387ДоКИ и КИ. В связи с этим нами был разработан метод на основе и-ПЦР,ключевыми стадиями которого являются:1) иммобилизация антител на твердой фазе (рис. 1, а);2) связывание антител с аналитом GNR-084 (рис. 1, б);3) образование и отмывка сэндвича-комплекса (рис. 1, в);4) денатурация сэндвич-комплекса и перенос в ПЦР-планшет;5) удлинение, амплификация и детекция ПЦР-продукта.
В данном исследовании в качестве твердой фазы нами были протестированы три разных подложки: 1) стандартные планшеты для ИФА Nunc
MaxiSorp, 2) стрипы Top Yield (компания Nunc) и 3) 96-луночные для ПЦР(Microamp TM Barcode). Для каждого раствора антител подбирали соответствующий буферный раствор: 1) фосфатносолевой буфер, 2) трис-буферный солевой раствор и 3) фосфатносолевой-БСА-ДНК лосося буферный
раствор [9]. Раствор антител вносили в лунки планшета, инкубировали
16 ч при +4 °С. Затем проводили и-ПЦР согласно раннее описанной схеме.
26,00
24,00

ИФА планшет

22,00

y = 3,1133x + 12,718
R² = 0,9961
Top Yield стрипы
y = 4,0692x + 17,93
R² = 0,9312

Ct

20,00
8,00
18,0
16,00

ПЦР планшет
y = 0,7003x + 23,773
R² = 0,4072

14,00
12,00
0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

log 10 концентрации GNR-084 в лунке

Рис. 2. Результат определения GNR-084 в модельных растворах при использовании
различных твердых фаз для формирования иммуно-комплексаИз полученных данных следует, что при использовании ИФА планшета наблюдается повышенная сорбционная емкость антител по сравнениюс другими (рис. 2).
Для повышения чувствительности и снижения фонового шума проведена оптимизация концентрации конъюгированных антител с ДНК-меткой,pаздел 4388блокирующих растворов и этапов промывки [10]. В результате этого предел
количественного определения GNR-084 в лиофилизате после восстановления и разведения в 0,9 % NaCl для проведения последующей инфузии составил 12,5 пг/мл и в образцах сыворотки 0,8 нг/мл (рис. 3).

Рис. 3. Результаты определения GNR-084
в восстановленном лиофилизате (а) и в растворе сыворотки (б)Выводы
Разработанный метод позволяет детектировать GNR-084 в восстановленном лиофилизате на уровне 12,5 пг/мл. Тем не менее предел количественного определения в образцах сыворотки крови человека составил 0,8 нг/мл.
Таким образом, необходима дополнительная оптимизация метода с целью
понижения предела обнаружения; в последующих экспериментах планируется также определение GNR-084 в клинических образцах пациентов.
Литература
1. Литвинов Д. В., Карелин А. Ф., Романова К. И., Румянцева Ю. В., Карачунский
А. И. Лечение острого лимфобластного лейкоза у детей: современные возможностии нерешенные проблемы // Pediatric Hematology/Oncology. 2015. № 10. С. 111.
2. Muller D., Karle A., Meißburger B., Hofig I., Stork R., Kontermann R. E. Improved
Pharmacokinetics of Recombinant Bispecific Antibody Molecules by Fusion to Human Serum Albumin // THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY. 2007. Vol. 282. No. 17.
P. 12650–12660.
3. Маерле А. В., Сергеев И. В., Алексеев Л. П. Метод иммуно-ПЦР: перспективы
использования // Иммунология. 2014. № 1. С. 44–48.

Молекулярная биология
389
биологибиологияббиолог
ия
4. ГОСТ Р ИСО 11843-2-2007 Статистические методы. Способность обнаружения. Ч. 2. Методология в случае линейной калибровки.
5. ОФС.1.7.2.0013.15 Полимеразная цепная реакция // Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV издание (2 ч.).
6. Adler M., Langer М., Witthohn К., Wilhelm-Ogunbiyi K., Schöffski P., Fumoleau P.,
Niemeyer C. M. Adaptation and performance of an immuno-PCR assay for thequantification of Aviscumine in patient plasma samples // Journal of Pharmaceutical andBiomedical Analysis. 2005. Vol. 39. Р.972–982
7. Barletta J. Applications of real-time immuno-polymerase chain (rt-IPCR) for the
rapid diagnoses of viral antigens and pathologic proteins // Mol. Aspects Med. 2006.
Vol. 27. Р. 224–253.
8. Crowther J. R. ELISA: Theory and Practice. Humana Press. Inc. Effective Blocking
Procedures // ELISA Technical Bulletin. 1995. № 3.
9. Abud J. E., Santamaría C. G., Oggero M., Rodriguez H. A. Methodological aspectsof Universal immuno-PCR on standard tubes // Analytical Biochemistry. 2019. Vol. 570.
P. 56–61.
10. Basova E. Yu., Goryacheva I. Yu., Rusanova T. Yu., Burmistrova N. A., Dietrich R.,
Märtlbauer E., Detavernier Ch., Van Peteghem C., De Saeger S. An immunochemical testfor rapid screening of zearalenone and T-2 toxin // Analytical and Bioanalytical Chemistry.
2010. Vol. 397. P. 55–62.

pаздел 4390ИЗУЧЕНИЯ ВЛИЯНИЯ ПРОЦЕДУРЫ КРИОКОНСЕРВАЦИИ
КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКАНА ПОКАЗАТЕЛИ ДНК-КОМЕТ
A STUDY OF THE EFFECTS OF CRYOPRESERVATION OF HUMANPERIPHERAL BLOOD CELLS ON DNA COMET ASSAY PARAMETERS
С. Н. Бах, Е. А. Щетникова
Институт биологии, экологии и природных ресурсов
Кемеровского государственного университета
S. N. Bach, E. A. Schetnikova
Institute of Biology, Ecology and Natural Resources Kemerovo State University
E-mail: sebastianbah430@gmail.com
Аннотация
Хранение, транспортировка клеток и манипуляции с ними сопровождаются риском повреждения ДНК, что приводит к ограничениям в использовании их в исследованиях. Решение данной проблемы — криоконсервация. Сравнение образцов
клеток показало снижение доли ДНК в хвосте комет (%ТДНК), замороженных при–80 °С (1,45 %) и при –196 °С (1,29 %) в сравнении с контролем (1,86 %).

Abstract
Cell’s storage, transportation and manipulation are accompanied by DNA damage risk,
which leads to limitations in their use in research. The solution — cryopreservation. Samples сcomparison showed that DNA Tail Intensity, % (TI) in cryopreserved cells at –80 °С
(1,45 %) and at –196 °С (1,29 %) decreases, in compare with control group (1,86 %).

Криоконсервация давно применяется для сохранения биоматериалов.
Однако ее механизмы и влияние на ДНК недостаточно изучены и требуют дальнейших исследований в целях определения эффективности данного
метода.
В качестве материала исследования использовалась цельная венозная
кровь шести здоровых людей. Для безопасной заморозки использовался ДМСО 10 %. Цельная кровь замораживалась при температурах –80 °С
© С. Н. Бах, Е. А. Щетникова, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

391

и –196 °С на периоды 1, 2 и 4 недели. Разморозка осуществилась быстров воде 37 °С. Оценка фрагментации ДНК проводились методом ДНК-кометв щелочной модификации.
Криоконсервация цельной крови не привела к значимому увеличению
параметра %ТДНК. Наблюдалось снижение показателей в замороженных
образцах по сравнению с контролем, как при –80 °С для показателя %ТДНК
(1,45 % [1,36–1,54]), так и при –196 °С для показателя %ТДНК (1,29 %[1,22–1,37], по сравнению с контролем 1,86 % [1,79–1,92], p < 0,01).
На основе результатов исследования был сделан вывод, что криоконсервация пригодна для продления срока хранения биоматериалов без вреда для
ДНК. Это обусловливает возможности применения криоконсервированных
клеток в медицинских и генетических исследованиях.

pаздел 4392РАЗРАБОТКА ПРОКAРИОТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ЭКСПРECСИИОСНОВНОЙ ПРОТЕАЗЫ 3CL SARS-CoV-2 *DEVELOPMENT OF THE PROKARYOTIC EXPRESSION SYSTEM
OF THE MAIN PROTEASE 3CL SARS-CoV-2
С. В. Беленькая 1,2, Д. В. Шаньшин 1, Д. Н. Щербаков 1,3,
О. И. Яровая 4, С. З. Вацадзе 51Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
2Новосибирский государственный университет
3Алтайский государственный университет, Барнаул
4Новосибирский институт органической химии
им. Н. Н. Ворожцова СО РАН
5Институт органической химии им. Н. Д. Зелинского РАН, Москва
S. V. Belenkaya 1,2, D. V. Shanshin 1, D. N. Shcherbakov 1,3,
O. I. Yarovaya 4, S. Z. Vatsadze 5
1State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
2
Novosibirsk State University
3
Altai State University, Barnaul
4
N. N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry SB RAS
5
N. D. Zelinsky Institute of Organic Chemistry RAS, Moscow
E-mail: belenkaya.sveta@gmail.com

АннотацияSARS-CoV-2 3CL — это цистеиновая протеаза, участвующая в протеолитическом расщеплении вирусного полипротеина до ряда функциональных белков, необходимых для его репликации. Данный фермент считается привлекательной мишенью для разработки агентов против новой коронавирусной инфекции. В результате
проделанной работы было разработано четыре варианта рекомбинантных векторов, pET21-3CLV, pET21-3CL, pET21-MBP-3CL и pET21-GST-3CL, обеспечивающих
синтез данной протеазы в клетках E. coli.
© С. В. Беленькая, Д. В. Шаньшин, Д. Н. Щербаков, О. И. Яровая, С. З. Вацадзе, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-04-6015 Вирусы.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиология

393

SARS-CoV-2 3CL is a cysteine protease involved in the proteolytic cleavage of the viral
polyprotein into a number of functional proteins required for its replication. This enzyme isconsidered an attractive target for the development of agents against the novel coronavirus
infection. As a result of the work done, four variants of recombinant vectors, pET21-3CLV,
pET21-3CL, pET21-MBP-3CL and pET21-GST-3CL, were developed, which provide thesynthesis of this protease in the E. coli cell.

Цель данной работы — разработка рекомбинантных векторов, обеспечивающих синтез протеазы SARS-CoV-2 3CL в прокариотической системе
экспрессии для изучения ее функций и структуры, а также для тестирования соединений-ингибиторов. Для достижения поставленной цели использовали два варианта нуклеотидных последовательностей, кодирующих 3CL,на их основе было проведено проектирование нескольких экспрессионных
векторов, содержащих этот ген. С помощью ОТ-ПЦР с матрицы вируснойРНК с использованием праймеров 3CLV-F (aaaaaaggatccagtggttttagaaaaatggcattcc) и 3CLV-R (aaaaaactcgagttggaaagtaacacctgagcattg) была получена
нуклеотидная последовательность нативной вирусной протеазы SARSCoV-2 3CL, которая была клонирована по уникальным сайтам рестрикции
(BamHI/Sfr274I) в составе экспрессионного вектора pET21а. Второй вариант нуклеотидной последовательности, кодирующий вирусную протеазу, был оптимизирован под экспрессию в системе E. coli и синтезированна заказ в составе экспрессионного вектора pET21а. Последовательности
мальтоза-связывающего белка и глутатион S–трансферазы были амплифицированы с помощью пары праймеров 3CL-M-F (5’-aaaaaacatatgaaaactgaag
aaggtaaactggtaat-3’) 3Cl-M-R (5’-aaaaaaggatccaccttgaaaataaagattttctccgtgatggtga
tggtgatgccttccctcgatcc-3’) и 3CL-G-F (5’-aaaaaacatatgtcccctatactaggttatt-3’) 3ClG-R (5’-aaaaaaggatccttttggaggatggtcgccac-3’) соответственно. После апликоны
были клонированы в состав вектора pET21-3CL по уникальным сайтам рестрикции (FauNDI/BamHI). В результате нами были сконструированы четыре варианта рекомбинантных векторов, pET21-3CLV, pET21-3CL, pET21MBP-3CL и pET21-GST-3CL, обеспечивающих синтез вирусной протеазыSARS-CoV-2 3CL.
Был проведен сравнительный анализ уровня экспрессии целевого белка в клетках E. coli штамма Bl21, трансформированных разработанными
рекомбинантными векторами. Анализ показал, что клетки, трансформированные плазмидой pET21-GST-3CL, обеспечивают наибольший синтез
целевого белка в растворимой форме.

pаздел 4394ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ
ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ГОЛОВЫ И ШЕИ *THE USING OF MODEL SYSTEMS TO STUDYHEAD AND NECK SQUAMOUS CELL CARCINOMA
А. А. Богданова 1,2, Н. Н. Немова 1, Т. О. Волкова 2
1Институт биологии Карельского научного центра РАН, Петрозаводск
2Петрозаводский государственный университет
A. A. Bogdanova 1,2, N. N. Nemova 1, T. O. Volkova 2
1

Institute of Biology Karelian Research Centre RAS
2Petrozavodsk State University
E-mail: arinabogdanova94@mail.ruАннотация
3D-модели активно применяются для изучения молекулярных особенностей
опухолей различных локализаций, а также подбора новых лекарственных препаратов и терапий. В работе представлены некоторые разновидности 3D-моделей,применяемые для изучения плоскоклеточного рака головы и шеи.

Abstract
3D models are actively used to study the molecular features of tumors of various localities and the selection of new drugs and therapies. This paper presents some types of 3Dmodels used to study head and neck squamous cell carcinoma.

Плоскоклеточный рак головы и шеи (ПРГШ) представляет собой гетерогенную группу опухолей и составляет около 85 % всех опухолей головыи шеи (ОГШ). По факторам риска ПРГШ делят на две группы — ВПЧ-позитивный (ВПЧ+) рак, связанный с вирусом папилломы человека, и ВПЧ-негативный (ВПЧ–) рак, ассоциированный со злоупотреблением алкоголеми курением.
© А. А. Богданова, Н. Н. Немова, Т. О. Волкова, 2020*Работа выполнена в рамках государственного задания Министерства науки ивысшего образования Российской Федерации ГБТ № АААА-А20-120070290151-6.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

395Модельные системы активно применяются для изучения молекулярных
особенностей ПРГШ и подбора стратегий лечения. В основном используются 3D-модели, которые лучше отражают сложность новообразованияпо сравнению с 2D-клеточными культурами. Существуют различные типы3D-моделей, но наиболее востребованной разновидностью являются сфероиды, разработанные для воссоздания условий роста in vivo, гетерогенности
популяции опухолевых клеток и взаимодействия опухоли с микроокружением. Сфероиды по сравнению с 2D-культурами содержат в себе несколько
разновидностей клеток и демонстрируют профили экспрессии генов, аналогичные опухолям организма. Поскольку сфероиды по некоторым характеристикам сопоставимы с опухолями in vivo, они часто используются дляапробации новых препаратов для химиотерапии. В исследовании M. Santiсфероиды, образованные клетками ВПЧ+ и ВПЧ — ПРГШ, используютсядля изучения свойств наноматериалов, содержащих платину (IV) в качестве
альтернативы соединениям с платиной (II) при химиотерапии [1].
Еще одной используемой моделью являются ксенографты, полученныеиз опухолевого материала пациентов, в мышах с иммунодефицитом. Ксенографты активно применяются в связи с тем, что являются более точной
моделью опухолей человека по сравнению с опухолями мышей или клеточными линиями, трансплантированными мышам. Чаще всего такие модели
используются для определения эффективности новых противоопухолевых
препаратов, выбора стратегии лечения, а также преодоления резистентности к лекарствам. В исследовании S. Bhatia такая модель использовалась дляизучения EphB4-Ephrin-B2 сигнального пути и его влияния на комбинированную терапию цетуксимабом, ингибитором рецептора эпидермального
фактора роста (EGRF). Было установлено, что после ингибирования EphB4Ephrin-B2 наблюдалось увеличение выживаемости мышей с ПРГШ, посредством усиления чувствительности как к ингибитору EGRF, так и лучевой терапии [2]. Ксенографты используются и для изучения процессов, связанныхс ростом опухоли и метастазированием, так, например, в работе Z. Zhuangрассматривалась взаимосвязь агрессивности ОГШ и экспрессии микроРНК(miR). Было установлено, что при ПРГШ наблюдается снижение экспрессии
miR-204-5p, выступающей в качестве супрессора опухолей, способного ингибировать рост и метастазирование. miR-204-5p подавляет эпителиальномезенхимальный переход и сигнальный путь STAT3 [3].
Таким образом, 3D-модели, такие как ксенографты и сфероиды, занимают важное место в исследованиях ПРГШ, что дает возможность не только
подобрать новые препараты для терапии, но и определить некоторые молекулярные особенности патологии.

396

pаздел 4Литература
1. Santi M. et al. Endogenously-Activated Ultrasmall-in-Nano Therapeutics: Assessment
on 3D Head and Neck Squamous Cell Carcinomas // Cancers. 2020. Vol. 12. №. 5. P. 1–12.
2. Bhatia S. et al. Inhibition of EphB4–Ephrin-B2 Signaling Enhances Response to
Cetuximab–Radiation Therapy in Head and Neck Cancers // Clinical Cancer Research.
2018. Vol. 24. №. 18. P.4539–4550.
3. Zhuang Z. et al. MicroRNA-204-5p is a tumor suppressor and potential therapeutic target in head and neck squamous cell carcinoma // Theranostics. 2020. Vol. 10. №. 3.
P. 1433–1453.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

397ТРАНСЛЕЗИОННАЯ АКТИВНОСТЬ PRIMPOL ЧЕЛОВЕКАНА ДНК-МАТРИЦАХ С N2-АДДУКТАМИ ГУАНИНА *TRANSLESION DNA SYNTHESIS BY HUMAN PRIMPOLON DNA TEMPLATES CONTAINING N2-GUANINE ADDUCTS
Е. О. Болдинова 1, П. П. Г. Годке 2, А. В. Макарова 1,
П. И. Прадеепкумар 2, Н. А. Мирославская 1
1Национальный исследовательский центр
«Курчатовский институт», Москва
2Индийский институт технологий, Бомбей, Индия
E. O. Boldinova 1, P. P. G. Ghodke 2, A. V. Makarova 1,
P. I. Pradeepkumar 2, N. A. Miropolskaya 1
1

National Research Centre «Kurchatov Institute», Moscow
2
Indian Institute of Technology Bombay, India
E-mail: lizaboldinova@yandex.ruАннотацияВ данной работе проанализирована транслезионная ДНК-полимеразная активность PrimPol на ДНК-матрицах, содержащих объемные повреждения ДНК N2-аддукты гуанина: N2-этил-Г, N2-изобутил-Г, N2-бензил-Г, N2-метил(1-нафтил)-Г,N2-метил (9-антраценил)-Г, N2-метил (1-пиренил)-Г, N2-метил (1,3-диметоксиантрахинон)-Г. Показано, что ионы Mn2+ и репликативные факторы PolDIP2 и RPA
стимулируют способность PrimPol «проходить» объемные повреждения ДНК.

Abstract
We studied translesion DNA synthesis by human PrimPol on DNA templates containing bulky N2-dG adducts: N2-ethyl-dG (N2-Et-dG), N2-izobutil-dG (N2-Ib-dG), N2benzyl-dG (N2-Bz-dG), N2-methyl(1-naphtyl)-dG (N2-Naph-dG), N2-methyl(9-anthracenyl)-dG (N2-Anth-dG), N2-methyl(1-pyrenyl)-dG (N2-Pyre-dG), N2-methyl(1,3-dimethoxyanthraquinon)-dG (LdG). We found that Mn2+ ions and replication factors
PolDIP2 and RPA stimulate PrimPol to bypass bulky DNA adducts.
© Е. О. Болдинова, П. П. Г. Годке, А. В. Макарова, П. И. Прадеепкумар, Н. А. Мирославская, 2020*
The reported study was funded by RFBR according to the research project № 19-54-45035.

398pаздел 4

PrimPol is an important piece of an elaborate puzzle of the genome integrity
maintenance. PrimPol’s primase activity is involved in a reinitiation of a DNA synthesis at stalled replication forks and its DNA-polymerase activity plays a role ina translesion synthesis (TLS) past DNA damage. A number of DNA lesions havebeen studied to be tolerated by PrimPol but there are much more of the lesions
presented in the genome PrimPol may encounter. We investigated PrimPol TLSactivity on a wide range of N2-dG adducts of different bulkiness and analyzed aneffect of the auxiliary proteins PolDIP2 and RPA on PrimPol TLS-activity on theselesions. We demonstrated that in the presence of Mg2+ ions PrimPol incorporates
correct dCTP opposite N2-ethyl-dG (N2-Et-dG) adduct but extension from thelesion is hampered. PolDIP2 and RPA stimulate the efficiency of nucleotide incorporation by PrimPol on undamaged template and on N2-Et-dG adduct. N2dG adducts of N2-izobutil-dG (N2-Ib-dG) size and bulkier block TLS-activityof PrimPol in the presence of Mg2+ ions. In the presence of Mn2+ ions PrimPol
recovers its TLS-activity on all studied N2-dG adducts incorporating mainly incorrect dATP and dGTP and possibly utilizes a lesion «skipping» mechanism.
PolDIP2 and RPA do not affect PrimPol activity on bulky N2-dG adducts in thepresence of Mg2+ or Mn2+ ions. PolDIP2 but not RPA significantly changes specificity of nucleotide incorporation by PrimPol on the undamaged template in
the presence of Mn2+ increasing misincorporation of dATP and dTTP. Together,
these findings establish that PolDIP2 and RPA can enhance bypass of non-bulky
adducts by PrimPol but bulky N2-dG adducts PrimPol tolerate using the lesion«skipping» mechanism stimulated by Mn2+ ions.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

399НОВАЯ ДЛИННАЯ НЕКОДИРУЮЩАЯ РНК — ПОТЕНЦИАЛЬНЫЙ
БИОМАРКЕР РАКА ПЕЧЕНИ И ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ *NOVEL LONG NON-CODING RNA AS A POTENTIAL BIOMARKER
OF LIVER AND PANCREAS CANCER
О. Ю. Буренина 1, Н. Л. Лазаревич 2, Т. С. Зацепин 1,3,
М. П. Рубцова 1,3, О. А. Донцова 1,3
1Сколковский институт науки и технологий, Москва
Российский научный онкологический центр им. Н. Н. Блохина, Москва
3Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова, Москва
2

O. Y. Burenina 1, N. L. Lazarevich 2, T. S. Zatsepin 1,3,
M. P. Rubtsova 1,3, O. А. Dontsova 1,3
1

2

Skolkovo Institute of Science and Technology, Moscow
N. N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Moscow
3
Lomonosov Moscow State University, Moscow
E-mail: o.burenina@skoltech.ruАннотацияРак печени и рак поджелудочной железы (РПЖ) — агрессивные онкологические заболевания, часто диагностируемые только на поздних стадиях ввиду
отсутствия выраженных симптомов и специфических биомаркеров. Среди злокачественных заболеваний печени наиболее распространены гепатоцеллюлярная
карцинома (ГЦК) и холангиокарцинома (ХЦР), причем встречаются и смешанные опухоли ГЦК-ХЦР. В случае дистального расположения ХЦР ее не всегда можно однозначно дифференцировать от РПЖ. Таким образом, актуальной
задачей исследования является поиск новых тканеспецифичных биомаркеров,ассоциированных с определенным видом рака. В настоящей работе мы впервые охарактеризовали новую длинную некодирующую РНК (днРНК) CHOL,ассоциированную с раком органов пищеварительной системы. Мы установили,что уровень экспрессии этой днРНК дифференциально изменяется в образцахХЦР и ГЦК по сравнению с прилежащими тканями, что позволяет рассматривать
© О. Ю. Буренина, Н. Л. Лазаревич, Т. С. Зацепин, М. П. Рубцова, О. А. Донцова,2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского Научного
Фонда (проект № 20-74-00141).

400

pаздел 4

CHOL РНК в качестве потенциального диагностического и/или прогностическо- гоонкомаркера.

Abstract
Liver cancer and pancreatic cancer (PC) are aggressive malignancies often diagnosed
only in the late stages due to the lack of pronounced symptoms and specific biomarkers.
Among liver cancers, the most common are hepatocellular carcinoma (HCC) and cholangiocarcinoma (CCA), whereas there are also mixed HCC-CCA tumors. In the case of
distal location of CCA, it is not always possible to clearly differentiate it from the PC. Thus,a search for novel tissue-specific biomarkers associated with a particular type of cancer isa challenging task for a research. In this work, for the first time we characterized a novel
long non-coding RNA (lncRNA) CHOL associated with cancers of the digestive system.
We found that the expression level of this lncRNA varies differentially in CCA and HCC
samples in comparison to adjacent tissues. This observation allows us to consider CHOL
lncRNA as a potential diagnostic and/or prognostic oncomarker.

ДнРНК — обширный класс регуляторных молекул, часто ассоциированных с различными типами рака. На сегодняшний день известно несколько
десятков днРНК, экспрессия которых изменяется при ХЦР и РПЖ, почтивсе из которых ассоциированы и с ГЦК. Ранее нами была описана новая
печень-специфичная днРНК HELIS, характерная для ГЦК и отсутствующаяв образцах ХЦР и РПЖ. В ходе поиска «комплементарной» днРНК, активно экспрессирующейся в РПЖ и ХЦР, мы обнаружили неохарактеризованный транскрипт, названный нами CHOL. Мы установили факт экспрессии
CHOL РНК в раковых клетках печени и поджелудочной железы человекаи определили ее преобладающую изоформу. Далее мы проанализировали
уровень экспрессии CHOL РНК в парных (норма/рак) образцах общей РНК,выделенной из постоперационных тканей печени пациентов с диагнозомХЦР и ГЦК. Было показано, что экспрессия CHOL РНК возрастает тольков образцах ХЦР, тогда как при ГЦК уровень экспрессии этой днРНК существенно снижается по сравнению с прилежащими тканями печени. Полученные результаты позволяют предсказать высокий потенциал CHOL РНКкак диагностического онкомаркера для дискриминации ХЦР и ГЦК.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

401

ГЕН MLIG-SKP1 НЕОБХОДИМ ДЛЯ ПРАВИЛЬНОГО
РАЗВИТИЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ У РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО
СВОБОДНОЖИВУЩЕГО ЧЕРВЯ MACROSTOMUM LIGNANO
MLIG-SKP1 IS REQUIRED FOR CORRECT SPERM DEVELOPMENT
IN THE REGENERATIVE FREE-LIVINGFLATWORM MACROSTOMUM LIGNANO *В. Вавилова 1, Е. Базарова 2, М. Бирюков 1,
К. Устьянцев 1, Е. Березиков 1
1Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
V. Vavilova 1, E. Bazarova 2, M. Biryukov 1,
K. Ustyantsev 1, E. Berezikov 1
1

Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
E-mail: eberez@bionet.nsc.ruАннотацияВ данном исследовании было проведено изучение влияния ультрафиолетого
излучения типа C (УФ-C) и химического канцерогена метилметансульфоната нагомеостаз и транскрипционный профиль модельного плоского червя Macrostomum
lignano, который является регенерирующим свободноживущим гермафродитом.
Гены, ранее аннотированные в соматических стволовых клетках (необластах)и клетках-предшественниках, уровень экспрессии которых значительно усиливалсяпри обработке УФ-С и метилметансульфонатом, были отобраны для последующего
функционального анализа с помощью РНК-интерференции.

Abstract
In our study, we have been investigating effects of high-energy ultraviolet C (UVC)
and a chemical carcinogen methyl methanesulfonate (MMS) on homeostasis and thetranscriptional profile of the regenerative hermaphrodite free-living model flatworm
Macrostomum lignano. Genes previously annotated as enriched in somatic stem cells(neoblasts) and progenitors and which were significantly upregulated upon the treatments,© В. Вавилова, Е. Базарова, М. Бирюков, К. Устьянцев, Е. Березиков, 2020*
The work was supported by RFBR grant No 18-04-01011.

402

pаздел 4

were selected for the subsequent functional analysis by RNA interference.

RNAi knockdown of one of the genes, a homolog of the human skp1 (S-Phase
Kinase Associated Protein 1) gave a prominent phenotype. SKP1 protein is an
essential component of the SCF (SKP1-CUL1-F-box protein) ubiquitin ligase
complex, which mediates the ubiquitination of proteins involved in cell cycle
progression, signal transduction and transcription. We found that the RNAitreated worms develop abnormally enlarged testes but otherwise appear normal.
By subsequent DIC microscopy analysis, we identified that the observed
morphology is due to incorrect morphology of spermatozoa that accumulate
in testes. Sperm cells of the RNAi-treated worms lack characteristic features ofnormal spermatozoa, such as distal process (feeler) and elongated head, andhave the shaft which resembles more the morphology of mid spermatid thanthat of the mature sperm. Additionally, the morphology of testes is changed,
they have less sperm cells and appear empty. The reduced production of mature
sperm is also confirmed by almost empty sperm vesicles compared to the control
animals.
Thus, we can conclude an essential role of Mlig-Skp1 gene for the correct
development of mature sperm in M. lignano.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

403

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ
СБОРКУ ВИРУСОПОДОБНЫХ ЧАСТИЦ ВИРУСА МАРБУРГ *RECOMBINANT PLASMID PROVIDING ASSEMBLY
OF VIRUS-LIKE MARBURG VIRUS PARTICLES
Н. В. Волкова, А. А. Исаева, О. С. Таранов,Е. И. Казачинская, Д. Н. Щербаков
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
N. V. Volkova, A. A. Isaeva, О. S. Taranov,E. I. Kazachinskaya, D. N. ShcherbakovState Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: tasha_wolkowa11.93@mail.ruАннотация
Вирус Марбург (MARV) вызывает у людей и приматов лихорадку Марбург
(Fever Marburg, FM) — заболевание, характеризующееся тяжелым течением, высоким уровнем контагиозности и летальности (от 30 до 90 %). Последние 30 лет непрекращаются исследования, направленные на разработку вакцины против вируса
Марбург. Одной из перспективных платформ являются вакцины на основе вирусоподобных частиц. В работе была сконструирована рекомбинантная плазмида, в составе которой содержатся гены белков NP и VP40, а также ген GP вируса Марбург.
Было показано, что сконструированная плазмида при трансфекции культуры клеток HEK293T обеспечивает формирование вирусоподобных частиц.

Abstract
The Marburg virus (MARV) causes Marburg fever (Fever Marburg, FM) in humans
and primates, a disease characterized by a severe course, a high level of contagiousness andmortality (from 30 to 90 %). For the last 30 years, work on a computer vaccine against the
Marburg virus has not stopped. Vaccines based on virus-like particles are one of the promising models. In this work, a recombinant plasmid was constructed, in which the genes of
the NP and VP40 proteins, as well as the GP gene of the Marburg virus, were established.
© Н. В. Волкова, А. А. Исаева, О. С. Таранов, Е. И. Казачинская, Д. Н. Щербаков,2020*Исследования выполнены при финансовой поддержке РФФИ № 18-04-00458.

404pаздел 4

It was shown that the constructed plasmid, upon transfection of the HEK293T cell culture,provides the formation of virus-like particles.

Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний
США MARV занесен в категорию приоритетных патогенов, представляющих высокий риск для национальной безопасности и здравоохранения.
Работа с вирусом Марбург сопряжена с высоким уровнем биобезопасности
(BSL-4). В настоящее время ведутся работы по получению профилактических препаратов против лихорадки Марбург на основе ряда платформ.
Одним из перспективных подходов в создании вакцин является платформана основе вирусоподобных частиц. Подобные вакцины имеют пониженную
реактогенность, а процесс их производства не требует больших затрат и соблюдения условий биобезопасности.
Поэтому целью данной работы стало получение рекомбинантной плазмиды, содержащей три основных белка вируса Марбург, способной вызвать
формирование вирусоподобных частиц при трансфекции клеток млекопитающих.
Существует много работ по получению ВПЧ филовирусов, однако нашподход отличается тем, что в работе по получению ВПЧ используется однарекомбинантная плазмида, одновременно содержащая гены трех целевых
белков вируса Марбург.
Для получения плазмиды был проведен биоинформативный анализ генома MARV, синтез генов, кодирующих целевые белки VP40, NP и GP вируса
Марбург, а также расчет специфических праймеров. Соответствующие геныбыли амплифицированы и клонированы в состав вектора pVAKS. Наличие
встройки подтверждали рестрикционным анализом и секвенированием пометоду Сэнгера.
Для получения вирусоподобных частиц была проведена трансфекция
эукариотических клеток HEK293T полученной плазмидой с помощью липофектамина 3000. Микроскопические исследования показали формирование
филоментоподобных структур спустя сутки после трансфекции культуры
клеток.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

405ВЛИЯНИЕ ЭКСПРЕССИИ TIM-3 И PD-1 НА ЦИТОКИНПРОДУЦИРУЮЩУЮ СПОСОБНОСТЬ Т-КЛЕТОК IN VITROВ НОРМЕ И ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ
THE INFLUENCE OF TIM-3 AND PD-1 EXPRESSION
ON THE CYTOKINE PRODUCTION BY T-CELLS IN VITROIN NORM AND BRONCHIAL ASTHMA
В. А. Галдина 1, Е. А. Блинова 2
1Новосибирский государственный университет
2Научно-исследовательский институт
фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск
V.A. Galdina1, E. A. Blinova2
1

2

Novosibirsk State University
Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology, Novosibirsk
E-mail: vikagaldina@gmail.com
Аннотация

Работа посвящена изучению патогенетических механизмов, лежащих в основе
аллергической бронхиальной астмы, в частности роли ингибиторных ко-рецепторов на Т-лимфоцитах. Поскольку эти рецепторы являются негативными регуляторами сигнала от Т-клеточного рецептора, они могут иметь существенное значениев развитии иммунного ответа, в том числе при аллергической астме.

Abstract
The study is focused on the investigation of pathogenic mechanisms, that is based in
the pathogenesis of allergic bronchial asthma, in particular on the role of T-cell inhibitory
receptors. Since these receptors are negative regulators of the signal from the T-cell receptor, they may contribute essentially to the development of the immune response, including
response in allergic asthma.

Бронхиальная астма (БА) — это гетерогенное хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей, в патогенезе которого играют важную
роль активированные Т-лимфоциты. В норме активация Т-клеток контро© В. А. Галдина, Е. А. Блинова, 2020

406pаздел 4лируется сигналами через негативные регуляторы — PD-1 и Tim-3. Участие
PD-1 и Tim-3 в патогенезе аллергических заболеваний изучено недостаточно, представленные в литературе данные противоречивы. Поэтому целью
данного исследования было определение уровня экспрессии коингибиторных рецепторов PD-1 и Tim-3 на Т-клетках и оценка их влияния на цитокин-продуцирующую активность Т-клеток при аллергической бронхиальной астме.
В исследование вошли 5 пациентов с аллергической БА (вне обострения) и 8 условно здоровых доноров. Выделенные из периферической кровиМНК культивировали в среде RPMI-1640, дополненной 10 % FCS, с активаторами PMA и Ionomycin в 24-луночных планшетах в течение 20 часов.
Выход цитокинов из клеток блокировали Brefeldin A. Клетки метили антителами против соответствующих антигенов (CD3, CD4, PD-1, Tim-3), затем
проводили внутриклеточное окрашивание антителами против IL-4 и IFNγ.
Клетки периферической крови окрашивали только антителами против
поверхностных маркеров. Анализ проб проводили на цитометре FACS
CantoII (BD, USA). Статистическую обработку данных проводили в программном обеспечении Statistica 6.0, используя непараметрические методы
сравнения.
Пациенты с БА характеризовались сниженным числом CD8 + клеток,экспрессирующих только Tim-3 и одновременно Tim-3 и PD-1, в крови относительно показателей доноров. После культивирования по экспрессии
Tim-3 и PD-1 Т-клетки доноров и пациентов не различались.
По продукции цитокинов достоверных отличий между группами доноров и пациентов с БА выявлено не было, но внутри групп были найдены
значимые отличия между субпопуляциями клеток в зависимости от экспрессии Tim-3 и PD-1. Так, в группе доноров CD4+ клетки с фенотипами
PD-1-Tim-3+ и PD-1+Tim-3+ больше продуцировали IL-4 (6,3 и 5,2 %, соответственно) относительно негативных по PD-1 и Tim-3 клеток (2,4 %).
В группе пациентов с БА CD4+PD-1-Tim-3+ клетки вдвое больше продуцировали IL-4, чем CD4+PD-1-Tim-3-. Относительно продукции IFNγ
в группе доноров CD4+PD-1+Tim-3+ и CD4+PD-1+Tim-3- продуцировали
больше IFNγ по сравнению с популяцией CD4+PD-1-Tim-3- клеток. Аналогичная картина наблюдалась для CD8+ клеток. В группе пациентов
только CD4+PD-1+Tim-3- и CD8+PD-1+Tim-3- показали значимые отличияв продукции IFNγ относительно негативной по PD-1 и субпопуляции.
Таким образом, вне зависимости от наличия аллергопатологии в условиях стимуляции PMA/Ionomycin не наблюдалось снижение продукции

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

407

IL-4 и IFNγ Т-клетками, экспрессирующими Tim-3 и PD-1, напротив, дляотдельных популяций, позитивных по данным маркерам, наблюдалось
усиление продукции. Возможно, для реализации негативной регуляции
через PD-1 и Tim-3 Т-клетке необходимо получить сигнал через Т-клеточный рецептор.

pаздел 4408ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ
МЕЛАНОМЫ В-16 НА ОСНОВЕ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОКИ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ *EVALUATION OF THE EFFICACY OF MELANOMA B-16 COMBINEDTHERAPY BASED ON DENDRITIC CELLS AND VACCINIA VIRUS
Т. А. Гамбург 1, Е. П. Гончарова 2, О. В. Марков 2, М. А. Зенкова 2
1

2

Novosibirsk State University
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
T. A. Gamburg 1, E. P. Goncharova 2, O. V. Markov 2, M. A. Zenkova 2
1

2

Novosibirsk State University
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
E-mail: H.tanja5@mail.ruАннотацияВ нашей работе мы показали, что ДК (дендритные клетки), праймированные
лизатом инфицированных вирусом осповакцины LIVP/GFP опухолевых клеток меланомы В-16, эффективно активируют специфические цитотоксические Т-лимфоциты in vitro. Комбинированная терапия меланомы В-16 мышей на основе вируса
осповакцины LIVP/GFP и дендритных клеток, активированных как опухолевыми,так и вирусными антигенами, увеличивает продолжительность жизни животных.

Abstract
In our work we showed that DC (dendritic cells) primed with a lysate of B-16 melanoma tumor cells, infected with vaccinia virus LIVP/GFP, effectively activate specific cytotoxic T-lymphocytes in vitro. Combination therapy of B-16 melanoma based on vaccinia
virus LIVP/GFP and dendritic cells, activated by both tumor and viral antigens, increases
the lifespan of animals.

Терапия опухолевых заболеваний с помощью дендритно-клеточных вакцин является одним из наиболее перспективных направлений современной
медицины. В настоящее время для получения функционально активных ДК© Т. А. Гамбург, Е. П. Гончарова, О. В. Марков, М. А. Зенкова, 2020*Исследование было поддержано грантом РФФИ № 18-34-20109.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

409

используют опухолевые антигены. В нашем исследовании мы проводили
активацию ДК как опухолевыми, так и вирусными антигенами. Исследования проводили на модели вирус осповакцины LIVP/GFP / меланома В-16.
Степень активации ДК оценивали по уровню экспрессии маркеров созревания с использованием метода проточной цитофлуорометрии. Результаты экспериментов показали, что уровень экспрессии маркеров созревания CD80, CD86 и CCR7 не меняется при выбранных способах активации
ДК. Однако анализ цитотоксической активности спленоцитов при использовании различных комбинаций вирусных и опухолевых антигенов длясозревания ДК показал, что максимальной цитотоксической активностью
против инфицированных вирусом клеток меланомы В-16 in vitro обладают
цитотоксические Т-лимфоциты, активированные ДК, для созревания которых был использован лизат инфицированных опухолевых клеток (рис. 1).

Рис. 1. Результаты анализа цитотоксического действия цитотоксических
Т-лимфоцитов на клетки В-16, инфицированные вирусом LIVP/GFP.
Стандартное отклонение рассчитано на основании значений клеточного индекса,посчитанного для 3 проб, p < 0,05

В экспериментах in vivo наблюдалась тенденция увеличения выживаемости животных, получавших комбинированную терапию, по сравнениюс контрольной группой (p < 0,07, рис. 2).

410pаздел 4

Рис. 2. Кривые выживаемости мышей в зависимостиот способа терапии меланомы В-16Таким образом, можно сделать вывод, что комбинированная терапияс использованием вируса осповакцины LIVP/GFP и ДК, активированных
лизатом инфицированных опухолевых клеток меланомы В16, вызывает активацию опухоль-специфичных цитотоксических Т-лимфоцитов и приводит к увеличению продолжительности жизни животных.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

411ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
ЭКСПРЕССИИ МРНК ГЕНОВ ERCC1, RRM1, TOP1, TOP2A,
TUBB3, TYMS, GSTP1 И BRCA1 У ПАЦИЕНТОВС НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ ЛЕГКОГО *PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF MRNA EXPRESSIONOF ERCC1, RRM1, TOP1, TOP2A, TUBB3, TYMS, GSTP1
AND BRCA1 GENES IN PATIENTSWITH NON-SMALL CELL LUNG CANCER
К. А. Гаптулбарова, М. М. Цыганов, Е. О. Родионов,М. К. Ибрагимова, Д. С. Долгашева, Н. В. Литвяков
Научно-исследовательский институт онкологии,Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН
K. A. Gaptulbarova, M. M. Tsyganov, Ye. O. Rodionov,
M. K. Ibragimova, D. S. Dolgasheva, N. V. Litvyakov
Research Institute of Oncology,
Tomsk National Research Medical Center of the RAS
e-mail: Xenia.gaptilbarova@yandex.ruАннотация
Сегодня для лечения больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) используют химиотерапию. Сейчас основной прогресс в лекарственном лечении ракалегкого связывают с использованием таргетных препаратов. Одним из подходовк персонализации назначения схемы химиотерапии при НМРЛ является оценка
экспрессии генов химиочувствительности (BRCA1, RRM1, ERCC1, TOP1, TOP2a,
TUBB3, TYMS, GSTP1 и др.), которые определяют чувствительность опухолевых клеток к отдельным химиопрепаратам в зависимости от уровня экспрессии.

Abstract
Today, chemotherapy is used to treat patients with non-small cell lung cancer (NSCLC).
Currently, the main progress in drug treatment of lung cancer is associated with the use oftargeted drugs. One of the approaches to personalizing the prescription of a chemotherapy© К. А. Гаптулбарова, М. М. Цыганов, Е. О. Родионов, М. К. Ибрагимова,Д. С. Долгашева, Н. В. Литвяков, 2020*Работа поддержана грантом РФФИ 20-015-00023 А.

412pаздел 4

regimen for NSCLC is to assess the expression of genes for chemotherapy (BRCA1, RRM1,
ERCC1, TOP1, TOP2a, TUBB3, TYMS, GSTP1, etc.), which determine the sensitivity oftumor cells to certain chemotherapy drugs depending on the expression level.

Материал и методыВ исследование были включены 59 больных НМРЛ IIB–IIIA стадии.
В качестве материала были использованы операционные образцы опухолевой и нормальной тканей, из которых выделяли РНК с помощью набора RNeasy Plus mini Kit (Qiagen, Germany). Уровень экспрессии восьми генов химиочувствительности BRCA1, RRM1, ERCC1, TOP1, TOP2a, TUBB3,
TYMS, GSTP1 оценивали при помощи обратно-транскриптазной количественной ПЦР в режиме реального времени (RT-qPCR). Статистические
расчеты проводились с использованием пакета прикладных программ
Statistica 8.0 (StatSoft Inc., USA).

Кривые безметастатической (A, Б, В) и общей выживаемости (Г) больныхв зависимости от уровня экспрессии ERCC1; BRCA1; GSTP1

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

413РезультатыС использованием метода Каплана — Мейера было показано, что принизкой экспрессии (менее 1) генов ERCC1, BRCA1 и GSTP1 (log-rank test
p = 0,0004, 0,01, 0,01) наблюдаются более высокие показатели безметастатической выживаемости по сравнению с группой пациентов с высоким уровнем экспрессии (более 1) этих генов.
У пациентов с уровнем экспрессии ERCC1 < 1 показатели 4-летней выживаемости составляют 80 % в сравнении с 29 % другой группы (log-rank
test p = 0,0004), то же установлено для гена BRCA1 (см. рисунок, А и Б). Показатели безметастатической выживаемости больных с высоким уровнем
экспрессии исследуемого гена статистически значимо ниже, 55 против 83 %(при log-rank test p = 0,01).
Анализ общей выживаемости позволил установить, что наибольшие
показатели были достигнуты у пациентов с гипоэкспрессией гена ERCC1,
86 против 55 % (log-rank test p = 0,002).
Заключение. Таким образом, комплексная оценка экспрессии генов химиочувствительности важна не только с точки зрения понимания неоднородности сложности в области молекулярной биологии НМРЛ, но и для более точного прогноза течения заболевания.

pаздел 4414МЕТАБОЛОМНЫЙ АНАЛИЗ ТКАНЕЙ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ
ОПУХОЛЕЙ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ЯМРВ ЖИВОТНОЙ МОДЕЛИ МЫШЕЙ ЛИНИИ SCID *METABOLIC ANALYSIS OF HUMAN MALIGNANT TUMOR TISSUESBY NMR IN AN ANIMAL MODEL OF SCID MICE
А. В. Глинских 1,2, О. А. Снытникова 1, И. А. Разумов 2,
И. В. Коптюг 1, Ю. П. Центалович 1, А. Е. Акулов 2
1Международный томографический центр СО РАН, Новосибирск
2Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
A. V. Glinskikh 1,2, O. A. Snytnikova 1, I. A. Razumov 2,
I. V. Koptyug 1, Yu. P. Tsentalovich 1, A. E. Akulov 2

1

International Tomography Center SB RAS, Novosibirsk Международный
томографический центр СО РАН, Новосибирск
2
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
E-mail: glinskikhav@gmail.com

Аннотация
Применение метаболомного анализа для изучения злокачественных опухолей
человека представляет большой интерес для области трансляционной медицины.
В данной работе метод ЯМР применяется для исследования глиобластомы человека
U87 и гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2 в модели мышей линии SCID.

Abstract
Implementation of metabolomic analysis for the study of human malignant tumors
exhibits great interest for the field of translational medicine. In this work, NMR method
is used to study human glioblastoma U87 and human hepatocellular carcinoma HepG2 in
a SCID mouse model.

© А. В. Глинских, О. А. Снытникова, И. А. Разумов, И. В. Коптюг, Ю. П. Центалович, А. Е. Акулов, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ № 17-54-33037
и № 18-33-20097.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

415Метаболомный подход находит широкое применение в изучении злокачественных опухолей, поскольку позволяет с высокой точностью определять молекулярные механизмы патологий и выявлять их потенциальные
биомаркеры. Важными инструментами в подобных исследованиях являются животные модели опухолей человека. Одним из наиболее широко применяемых в метаболомике аналитических методов является спектроскопия
ядерного магнитного резонанса (ЯМР), сочетающая высокую эффективность анализа метаболомных профилей и простоту экспериментальных
процедур.
В данной работе метод ЯМР метаболомного анализа применяется дляисследования глиобластомы человека U87 и гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2. Для моделирования данных опухолей человека быливыбраны мыши линии SCID. Ксенотрансплантация клеток HepG2 лабораторным животным проводилась подкожно, а клеток U87 как подкожно, таки ортотопически (в левое полушарие мозга). У мышей с U87 были взяты
образцы ткани головного мозга, подкожной опухоли и крови, а у мышей
с HepG2 образцы ткани печени, подкожной опухоли и крови.
В результате ЯМР-исследования были количественно определены концентрации более 45 метаболитов для образцов ткани мозга, печени, подкожных опухолей и более 35 — для сыворотки крови. Сравнительный анализ концентраций метаболитов тканей групп контроль/опухоль проводился с помощью t-теста Стьюдента. В ипсилатеральных областях головного
мозга в норме и при развитии U87 достоверные отличия были найдены по
23 метаболитам, в контралатеральных — по 12. Сравнение метаболомных
профилей ткани мозга при ксенотрансплантации глиобластомы и ткани
подкожной U87 выявило значимое влияние места локализации опухолевых
клеток (найдено 43 отличия). Результаты метаболомного профилирования
сыворотки крови контрольной группы и группы с U87 достоверно отличаются по 10 метаболитам. Анализ метаболомных профилей печени в контроле и при развитии подкожной HepG2, а также сыворотки крови этих жегрупп показал достоверные отличия в концентрациях 15 и 17 метаболитов
соответственно. При сравнении ткани печени группы HepG2 и ткани подкожной опухоли было выявлено 40 метаболитов отличия. Данное исследование предоставляет новые знания о метаболизме тканей мышей приразвитии злокачественных опухолей человека и демонстрирует эффективность метода ЯМР в метаболомике.

pаздел 4416РОЛЬ МЕТАБОЛИТОВ ЦИКЛА КРЕБСА В ФОРМИРОВАНИИ
УСТОЙЧИВОСТИ DROSOPHILA MELANOGASTERК ДЕЙСТВИЮ СТРЕСС-ФАКТОРОВ РАЗЛИЧНОЙ ПРИРОДЫ
(СТРЕССУ ЭНДОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ СЕТИ,ОКИСЛИТЕЛЬНОМУ СТРЕССУ, ТЕПЛОВОМУ ШОКУ) *THE ROLE OF KREBS CYCLE METABOLITES IN FORMATIONOF DROSOPHILA MELANOGASTER RESISTANCE TO DIFFERENTSTRESSES (ENDOPLASMIC RETICULUM, OXIDATIVE, HEAT SHOCK)
Д. А. Голубев, Д. В. Яковлева, Л. А. Коваль, А. А. Москалёв
Институт биологии Коми научного центра УрО РАН, Сыктывкар
D. A. Golubev, D. V. Yakovleva, L. A. Koval, A. A. Moskalev
Institute of Biology of Komi Science Centre of the Ural Branch RAS, Syktyvkar
E-mail: denismeatboy@gmail.com
АннотацияВ работе изучали влияние альфакетоглутаровой, янтарной, фумаровой, лимонной, яблочной кислоты на возрастную устойчивость Drosophila melanogaster к окислительному стрессу, гипертермии и стрессу эндоплазматической сети. Было обнаружено, что метаболиты цикла Кребса оказывают разнонапроавленный эффект напараметры выживаемости особей Drosophila melanogaster в условиях стресса.

Abstract
In this paper we studied the effect of alpha-Ketoglutaric, succinic, fumaric, citric, andmalic acids on the age-related resistance of Drosophila melanogaster to oxidative stress,
hyperthermia and endoplasmic reticulum stress. It was shown that metabolites of the Krebs
cycle have a multidirectional effect on the parameters of survival of Drosophila melanogaster under stress conditions.

© Д. А. Голубев, Д. В. Яковлева, Л. А. Коваль, А. А. Москалёв, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 19-75-00043 «Исследование
геропротекторных свойств метаболитов цикла Кребса на модели Drosophila melanogaster».

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

417Цикл Кребса — это ключевой этап дыхания всех клеток, использующих
кислород, центр пересечения множества метаболических путей в организме. Универсальность данного биохимического процесса и низкая токсичность его метаболитов позволяет рассматривать их в качестве мишеней дляразработки фармакологических препаратов, способствующих снижению
скорости старения без ухудшения возрастзависимых показателей.
В данной работе изучали влияние альфакетоглутаровой, янтарной,фумаровой, лимонной, яблочной кислот в концентрациях 10 нМ, 100 нМ,
1 мкМ, 10 мкМ, 100 мкМ и 1 мМ на продолжительность жизни самцов и самок Drosophila melanogaster. Прием метаболитов цикла Кребса оказал разнонаправленный эффект на параметры выживаемости в условиях действия
индуктора свободных радикалов параквата.
Для анализа устойчивости к действию окислительного стресса использовали раствор 20 мМ параквата (Methyl Viologen, Sigma). В качестве теплового шока использовали 35-градусную гипертермию. Стресс эндоплазматической сети индуцировали раствором 12 мкM туникамицина (Sigma Aldrich,США). Сбор данных осуществляли с помощью аппаратно-программного
комплекса DAM Drosophila Locomotor Activity Monitor (TriKinetics, USA).
По полученным данным рассчитывали перцентили (25, 50, 75, 90) выживаемости и строили кривые дожития. Для оценки статистической значимости
использовали точный критерий Фишера.
Было показано, что метаболиты цикла Кребса разнонаправлено влияют на параметры выживаемости особей Drosophila melanogaster в условиях окислительного стресса, теплового шока и стресса эндоплазматической сети.

pаздел 4418ПЕПТИДЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С МОЛЕКУЛОЙ
АНТИГЕНА-4 ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ T-ЛИМФОЦИТОВ (CTLA-4) *PEPTIDES INTERACTING WITH THE HUMAN CYTOTOXIC
T-LYMPHOCYTE (CTLA-4) ANTIGEN-4 MOLECULE
А. А. Гордеева 1, С. В. Подлесных 1, А. И. Шаповал 1,2¹ Алтайский государственный университет,Российско-американский противораковый центр, Барнаул, Россия
² Центр инноваций в медицине, Институт Биодизайна,Университет штата Аризона, Темпи, США
A. A. Gordeeva1, S. V. Podlesnykh 1, A. I. Chapoval 1,2¹ Altai State University, Russian-American Anti-Cancer Center, Barnaul, Russia² Center for Innovation in Medicine, Biodesign Institute,Arizona State University, Tempi, USA
E-mail: anastasia.17.98@mail.ruАннотация
Обсуждается применение пептидов как альтернативы моноклональным антителам к рецептору CTLA-4 для иммунотерапии онкологических заболеваний.

Abstract
Peptides are discussed as alternatives to monoclonal antibodies to the CTLA-4 receptor
for immunotherapy of oncological diseases.

Рецепторы лигандов семейства В7, локализованные на мембране Тлимфоцитов, могут подавать сигналы и тем самым усиливать или снижать
иммунный ответ. Взаимодействие рецептора CTLA-4 с лигандами В7-1
(CD80) или В7-2 (CD86) приводит к супрессии иммунитета [1].
Целью работы было выявление и изучение иммунохимических свойств
пептидов, взаимодействующих с CTLA-4.
© А. А. Гордеева, С. В. Подлесных, А. И. Шаповал, 2020*Работа выполнена при поддержке государственного задания Министерства
науки и высшего образования РФ (№ FZMW-2020-0007) и РФФИ (№ 17-54-33003
и № 19-44-220008).

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

419

Для выявления пептидов, специфически связывающихся с CTLA-4,
использовали пептидные микрочипы, содержащие 330034 пептидов сослучайными аминокислотными последовательностями. Рекомбинантный
химерный белок CTLA-4Fc, содержащий Fc-фрагмент IgG1 человека,наносили на микрочипы. Взаимодействие CTLA-4Fc с пептидами намикрочипе определяли с помощью флуоресцентных вторичных антител
против иммуноглобулина человека. Для подтверждения специфичности
взаимодействия отобранных пептидов с CTLA-4 использовался метод
иммуноферментного анализа (ИФА).
Нами были выявлены 19 пептидов, расположенных на микрочипе,которые связываются CTLA-4Fc, но не связываются с другими
рекомбинантными белками [2]. Для дальнейших экспериментов былисинтезированы 8 пептидов. Один из синтезированных пептидов, подпорядковым номером р345, показал максимальное взаимодействие с CTLA-4Fc, которое определялось по увеличению оптической плотности в ИФАотносительно показателей контрольного пептида р333. Более того пептид
р345 снижал на 45 % взаимодействие CTLA-4 рецептора с В7-1 лигандом.
Таким образом, пептид р345 можно рассматривать как перспективную
молекулу
приразработке
иммуностимулирующего
препарата,блокирующего взаимодействие В7-1 и В7-2 лигандов с рецептором CTLA4, ингибирующего иммунный ответ. Пептид р345 может стать
альтернативой моноклональным антителам против CTLA-4 (таким, какипилимуиаб и тремелимумаб), которые используются в настоящее времяпри иммунотерапии онкологических заболеваний.
Литература
1. Шаповал А. И., Шаповал С. П., Щербакова Н. С., Щербаков Д. Н. Молекулы
контроля иммунитета семейства В7. Ч. 1. Общая характеристика и первые представители: B7-1, B7-2, B7-H1, B7-H2 И B7-DC // Биоорганическая химия. 2019. Т. 45.
№ 4. С. 225–240.
2. Подлесных С. В., Шаньшин Д. В., Колосова Е. А., Мурашкин Д. Е., Шапрова О. Н., Щербаков Д. Н., Шаповал А. И. Разработка стратегии поиска пептидных
блокаторов белков в составе молекулярных точек контроля иммунного ответа //Биоорганическая химия. 2018. Т. 44. № 2. С. 138–145.

pаздел 4420ВЗАИМОСВЯЗЬ ПРОТЕИНОВ И ЦИТОКИНОВ С ВЛИЯНИЕМ
HUMAN LEUKEMIA DIFFERENTIATION FACTOR
НА КЛЕТКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
RELATIONSHIP BETWEEN PROTEINS, CYTOKINES AND INFLUENCE
OF HUMAN LEUKEMIA DIFFERENTIATION FACTOR ON CELLSOF BREAST CANCER
К. И. Давлетова, А. В. Бернадо, А. А. Студеникина
Новосибирский государственный медицинский университет
Научно-исследовательский институт молекулярной биологиии биофизики — структурное подразделение
ФГБНУ ФИЦ ФТМ, Новосибирск
K. I. Davletova, A. V. Bernado, A. A. Studenikina
Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk,
Institute of Molecular Biology and Biophysics —subdivision of FRC FTM, Novosibirsk
E-mail: christina.davletova@gmail.com
Аннотация
Исследовали спонтанную и HLDF-индуцированную продукцию протеинови цитокинов клетками опухоли и крови у больных раком молочной железы с различной реакцией на дифференцирующую активность HLDF. В результате исследования установлено, что спонтанная продукция ERα и PGR клетками опухоли,а также HLDF-индуцированная продукция IL-10 клетками опухоли и HLDFиндуцированная продукция IFN-γ, VEGF и MCP-1 клетками крови различаютсяу больных раком молочной железы с различной реакцией на HLDF.

Abstract
The paper focuses on spontaneous and induced by HLDF production of cytokines andproteins by cancer and blood cells in patients with breast cancer with different reaction ondifferentiating activity of HLDF. The paper concludes that spontaneous production of ERα
and PGR by cancer cells as well as HLDF-induced production of IL-10 by cancer cells andIFN-γ, VEGF and MCP-1 by blood cells differ in patients with breast cancer with different
reaction on HLDF.
© К. И. Давлетова, А. В. Бернадо, А. А. Студеникина, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

421Предпосылки. Ранее нами было показано, что Human Leukemia
Differentiation Factor (HLDF) влияет на снижение относительного содержания низкодифференцированных клеток и на увеличение относительного
содержания высокодифференцированных клеток инвазивной карциномы
неспецифического типа молочной железы (ИКНТ МЖ) in vitro. Отсутствие цитотоксических эффектов, наряду с дифференцирующей активностью HLDF позволяет рассматривать данный фактор в качестве кандидатадля применения в дифференцировочной терапии рака молочной железы.
Целью настоящего исследования явилось изучение продукции протеинови цитокинов клетками опухоли и клетками крови у больных ИКНТ МЖс наличием и отсутствием реакции на HLDF.
Материал исследования — биоптат опухоли и периферическая
кровь 36 больных ИКНТ МЖ. Для определения спонтанной и HLDFиндуцированной продукции цитокинов клетками опухоли и крови однучасть образцов инкубировали в питательной среде DMEM-F12, а другуюпри тех же условиях с HLDF в концентрации 2 мкг/мл, после чего клетки
осаждали и получали супернатант. В супернатанте с помощью ИФА определяли концентрацию IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-17, IL-18, IL-1β,
IL-1Ra, TNF-α, IFN-γ, G-CSF, GM-CSF, VEGF и MCP-1 с использованием наборов реагентов производства АО «Вектор-Бест» и протеинов HRG, PAI-1,
CDH1, ERα, PGR с использованием наборов производства Cloud-Clone
Corp. (США). Статистическую обработку выполняли с использованиемSPSS Statistics 22.
В результате проведенного исследования были установлены различияв продукции протеинов и цитокинов в зависимости от влияния HLDF надифференцировку клеток ИКНТ МЖ in vitro. Спонтанная продукция ERαклетками опухоли была выше у больных с реакцией HLDF, а спонтанная
продукция PGR — у больных без реакции на HLDF. У больных ИКНТ МЖс реакцией злокачественных клеток на дифференцирующую активностьHLDF, HLDF-индуцированная продукция IL-10 клетками опухоли быланиже, чем у больных ИКНТ МЖ без реакции на HLDF. Что касается продукции протеинов и цитокинов клетками крови, то HLDF-индуцированная
продукция IFN-γ, VEGF и MCP-1 также была ниже у больных ИКНТ МЖс реакцией HLDF, по сравнению с больными без реакции на HLDF.
Не исключено, что оценка спонтанной продукции ERα и PGR клетками
опухоли, а также HLDF-индуцированной продукции IL-10 клетками опухоли и HLDF-индуцированной продукции IFN-γ, VEGF и MCP-1 клетками
крови в совокупности могут составить критерии, отражающие эффективность применения HLDF у больных ИКНТ МЖ.

pаздел 4422НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, СОДЕРЖАЩИЕ
ЛИПОФИЛЬНЫЕ N-(СУЛЬФОНИЛ)-ФОСФОРАМИДНЫЕ ГРУППЫ:ПОЛУЧЕНИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА *NOVEL OLIGONUCLEOTIDES CONTAINING LIPOPHILIC
N-(SULFONYL)-PHOSPHORAMIDATE GROUPS: SYNTHESISAND BIOLOGICAL PROPERTIES
А. С. Держалова 1,2, О. В. Марков 1, А. А. Фокина 2,3, Ю. Шиохама 4,
Т. С. Зацепин 5,6, М. Фуджи 7, М. А. Зенкова 1, Д. А. Стеценко 2,31Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
4Университет Рюкю, Окинава, Япония
5Сколковский институт науки и технологий,Инновационный центр «Сколково»6Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова
7Университет Киндай, Иизука, Фукуока, Япония
А. S. Derzhalova 1,2, O. V. Markov 1, А. А. Fokina 2,3, Yu. Shiohama 4,
Т. S. Zatsepin 5,6, M. Fuji 7, M. A. Zenkova 1, D. A. Stetsenko 2,31Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine
SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
4
University of the Ryukyus, Okinawa, Japan
5
Skolkovo Institute of Science and Technology, Innovation Centre Skolkovo
6
Lomonosov Moscow State University
7
Kindai University, Iizuka, Fukuoka, Japan
E-mail: alina.derzhalova@gmail.com© А. С. Держалова, О. В. Марков, А. А. Фокина, Я. Шиохама, Т. С. Зацепин,М. Фуджи, М. А. Зенкова, Д. А. Стеценко, 2020*
This work was supported by RSF grant № 19-74-30011 (cytotoxicity, confocal microscopy, flow cytometry, dynamic light scattering), RFBR grant № 18-515-57006 (oligonucleotide synthesis), and JMRF grant No. 2018JP002 (biological activity).

Аннотация

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

423Впервые синтезированы и охарактеризованы производные ДНК и РНК, включающие от одной до четырех липофильных додецилфенильных или гексадецильных
групп в межнуклеотидных положениях вблизи 3’- или 5’-конца. Была исследована
цитотоксичность модифицированных олигодезоксинуклеотидов и их способность
проникать в клетки без трансфекционного агента. Липофильные ѕіРНК, нацеленные на подавление экспрессии гликопротеина RGMa, проявляют ингибиторную
активность в культуре клеток.

Abstract
New DNA and RNA derivatives incorporating one to four lipophilic dodecylphenyl orhexadecyl groups at internucleotidic positions near the 3’ or 5’-end were synthesized andcharacterized. Modified oligodeoxynucleotides were checked for cytotoxicity and ability
to enter cells without transfection agents. Lipophilic siRNAs targeting repulsive guidance
molecule a (RGMa) have shown a notable gene silencing activity in cell culture.

Widespread application of therapeutic oligonucleotides is hampered by theirinefficient cellular uptake and poor bioavailability. Conjugates of antisense oligonucleotides and small interfering RNAs with neutral lipids have improved transfection ability and extended half-life in the blood stream with beneficial impact on
therapeutic activity in vivo [1].

Structures of lipophilic N-(sulfonyl)-phosphoramidate derivativesof DNA (A) and RNA (B)424pаздел 4

New DNA and RNA derivatives are described, which incorporate one tofour lipophilic N-(sulfonyl)-phosphoramidate groups, viz., dodecylphenyl orhexadecyl groups at internucleotidic positions near the 3’- or 5’-end (Figure).
The oligonucleotides were obtained by automated solid-phase synthesis using
Staudinger reaction with the corresponding sulfonyl azide to introduce the modifications, and characterized by RP-HPLC, PAGE and MALDI-TOF MS as described before [2].
Oligodeoxynucleotides containing one or two lipophilic groups next to the5’-end were not cytotoxic up to 20 uM for human RAW 264.7 or Mφ cells, andwere taken up by the cells much more efficiently than the unmodified counterpart.
As shown by confocal microscopy, the oligonucleotides localized in the cytosol
mainly in endosomes. Quantities of internalized oligonucleotide depended on thetype of modification and the cell line. Oligonucleotides with hexadecyl groups
were taken up better than the same with dodecylphenyl groups, and the ones carrying two lipophilic groups penetrated into cells more efficiently than those containing only one group.
Modified siRNAs containing two lipophilic groups next to the 3’-end of thepassenger strand or four groups at the 3’-ends of both strands were also obtained.
A known sequence targeting repulsive guidance molecule a (RGMa) was used [3].
The siRNAs with two groups showed similar gene silencing activity in PK-59 cells
as unmodified anti-RGMa siRNA, whereas siRNAs containing four modifications
in both strands were less active. The siRNA with two hexadecyl groups was thebest silencer.
References
1. De Smidt P. C., Le Doan T., de Falco S., van Berkel T. J. Association of antisense
oligonucleotides with lipoproteins prolongs the plasma half-life and modifies the tissue
distribution. // Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 4695−4700.
2. Burakova E. A., Derzhalova A. S., Chelobanov B. P., Fokina A. A., Stetsenko D. A. New
Oligodeoxynucleotide Derivatives Containing N-(Sulfonyl)-Phosphoramide Groups. //Russ. J. Bioorg. Chem. 2019. V. 45. № 6. P. 662–668.
3. Kitayama M., Ueno M., Itakura T., Yamashita T. Activated microglia inhibit axonal
growth through RGMa. // PLoS One. 2011. V. 6. № 9. e25234.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

425БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВЫХ ФОТОАКТИВИРУЕМЫХ
ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ БЕЛКОВ ИЗ САЛЬПЫ THALIA DEMOCRATICA *BIOCHEMICAL PROPERTIES OF NOVEL PHOTOACTIVATABLEFLUORESCENT PROTEINS FROM THE SALP THALIA DEMOCTRATICA
М. А. Добронос 1,2, Т. В. Чепурных 1, Н. Н. Случанко 3,
А. Ю. Гороховатский 1, И. В. Ямпольский 1
1Институт биоорганической химии
им. академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва
2Российский национальный исследовательский
медицинский университет им. Н. И. Пирогова, Москва, Россия
3Институт биохимии им. А. Н. Баха, Федеральный исследовательский
центр «Фундаментальные основы биотехнологии» РАН, Москва
M. A. Dobronos 1,2, T. V. Chepurnykh 1,
N. N. Sluchanko 3, A. Yu. Gorokhovatsky1, I. V. Yampolsky 1
1

Shemyakin — Ovchinnikov Institute of bioorganic chemistry SB RAS, Moscow
2
Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow
3
Federal Research Centre «Fundamentals of Biotechnology» RAS, Moscow
E–mail: m.dobronos@mail.ruАннотация

Клонированы новые флуоресцентные белки из морской сальпы Thalia democratica (ThFP1 и ThFP2). Показана их способность к фотоактивации, описаны некоторые
биохимические свойства.

Abstract
Two novel fluorescent proteins (ThFP1 and ThFP2) were cloned from the marine salp
Thalia democratica. Here we describe photoactivation and some biochemical properties of
ThFP1 and ThFP2.
© М. А. Добронос, Т. В. Чепурных, Н. Н. Случанко, А. Ю. Гороховатский, И. В. Ямпольский, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта Президента Российской Федерациидля государственной поддержки ведущих научных школ Российской Федерации
НШ-2605.2020.4

426pаздел 4Фотоактивируемые флуоресцентные белки (PAFPs) показывают уникальную способностью изменять свои спектральные характеристики поддействием интенсивного света определенной длины волны. Некоторыеиз таких белков после облучения становятся ярче, другие при фотоактивации изменяют спектр флуоресценции. Найденные нами при анализе
транскриптома сальпы Thalia democratica флуоресцентные белки (названные ThFP1 и ThFP2) были клонированы и экспрессированы в клетках
E. coli, после чего очищены с помощью металл-аффинной хроматографиии гель-фильтрации. Белки ThFP1 и ThFP2 показывают свойства фотоактивации при облучении 365 и 445 нм. Оба этих белка способны к многократному
фотопереключению, показывая очень похожий барьер энергии активации
Еа (22,36 и 23,97 ккал/моль для ThFP1 и ThFP2 соответственно). Несмотряна близкие значения Еа, скорость релаксации ThFP1 немного (~1,2–1,5 раза)меньше при исследованных температурах (3–35 оС), чем у ThFP2. Результаты
гель-фильтрации указывают на то, что олигомерный статус белков зависитот их концентрации, кроме того ThFP2 показывает склонность к мономеризации при фотоактивации. Было обнаружено, что кинетика фотоактивации
THFP1 является монофазной, тогда как фотоактивация ThFP2 — многоэтапный процесс. Способность к фотоактивации этих белков сохраняетсяпри экспрессии в клетках млекопитающих.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

427АНАЛИЗ АБЕРРАЦИЙ ЧИСЛА КОПИЙ ДНК ГЕНАPARP1 В ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ *ANALYSIS OF DNA COPY NUMBER ABERRATIONS PARP1 GENE
IN BREAST TUMOR
Д. С. Долгашева, М. К. Ибрагимова, М. М. Цыганов
Научно-исследовательский институт онкологии
Томского национального исследовательского медицинского центра РАН
D. S. Dolgasheva, M. K. Ibragimova, M. M. Tsyganov
Cancer Research Institute Tomsk National Research Medical Center RAS
E-mail: normikus.18.97@gmail.com
Аннотация
Поли (АДФ-рибоза) полимераза играет важную роль в восстановлении одноцепочечных и двухцепочечных разрывов ДНК. Как известно, активация гена PARP1 является альтернативным путем репарации ДНК в опухолевых клетках. В связи с этимнарушения в данном гене могут быть связаны с эффективностью лечения больных
раком молочной железы (РМЖ). Таким образом, целью исследования явилось изучение связи аберраций числа копий гена PARP1 при раке молочной железы с эффективностью и прогнозом заболевания.

Abstract
Poly (adp-ribose) polymerase plays an important role in the repair of single-strand
breaks (SSB) and double-strand breaks (DSB). As is known, PARP1 gene activation is analternative way of DNA repair in tumor cells. In this regard, violations in this gene may
be associated with the effectiveness of treatment of breast cancer patients. Thus, the aimof the study was to study the relationship between the copy number aberrations of the
PARP1 gene in breast cancer with the efficacy and prognosis of disease.

Материалы и методыВ исследование включены 85 больных люминальным В РМЖ IIA–IIIBстадии с морфологически верифицированным диагнозом. ДНК выделялииз биопсийных образцов опухолевой ткани с помощью набора QIAamp DNA© Д. С. Долгашева, М. К. Ибрагимова, М. М. Цыганов, 2020*Работа поддержана грантом РНФ № 19-75-00027.

428pаздел 4mini Kit (Qiagen, Germany). Целостность и чистоту ДНК оценивали методом
капиллярного электрофореза на приборе TapeStation (Agilent Technologies,
USA). Для оценки CNA проводили микроматричный анализ на микроматрицах (ДНК-чипах) высокой плотности (Affymetrix (USA) CytoScanTM HD
Array). Статистическая обработка данных проводилась с использованием
пакета прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoft Inc., USA).

Результаты
В 50,9 % случаев (58/114) наблюдалась амплификация PARP1; делеция
обнаружена в 31,6 % случаев (36/114); нормальное состояние гена наблюдалось у 20 пациентов (17,5 %). Далее мы оценили связь исследуемых параметров с эффектом неоадъювантной химиотерапии (НХТ) (рис. 1). Оказалось,что частота амплификаций в группе больных с объективным ответом статистически значимо выше по сравнению с группой пациентов со стабилизацией и прогрессированием (55,8 %, 43/77 случаев против 40,5 %, 15/37 случаев, p = 0,004).

Рис. 1. Связь CNA гена PARP1 в опухоли молочной железы с эффектом
неоадъювантной химиотерапии. ПР — полная регрессия, ЧР — частичная
регрессия, СТ — стабилизация, П — прогрессирование

Далее с использованием метода Каплана — Майера были оценены показатели общей и безметастатической выживаемости больных РМЖ в зависимости от наличия хромосомных аберраций исследуемого гена (рис. 2).
Несмотря на то что наличие амплификации определяло хороший ответ напроводимую химиотерапию, показатели безметастатической выживаемо-Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

429

сти таких больных были значительно ниже, чем у пациентов с делецией илинормальным состоянием гена (log-rank test p = 0,006), (рис. 2, А).

Рис. 2. Безметастатическая (А) и общая (Б) выживаемость больных раком
молочной железы в зависимости от CNA гена PARP1

Так, пациенты с делецией имели 100 % безметастатическую выживаемость. Статистически значимых различий в показателях общей выживаемости у исследуемых пациентов установлено не было (log-rank test p = 0,273)(рис. 2, Б).

Заключение
Таким образом, было показано, что наличие амплификации генаPARP1 сопряжено с хорошим ответом на НХТ. При этом амплификация
PARP1 связана с плохим прогнозом заболевания. Важно отметить, чтоданный показатель в опухоли молочной железы регистрируется более чему половины больных, что делает его хорошим прогностическим маркером.
Однако данный вопрос требует дальнейшего исследования, в том числе и надругих молекулярных подтипах рака молочной железы.

pаздел 4430

TGF-Β1 И ЕГО МЕМБРАННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ:СВЯЗЬ С ОСОБЕННОСТЯМИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ
ЗАБОЛЕВАНИЯ У БОЛЬНЫХ ЭСТРОГЕН-ПОЗИТИВНЫМ РАКОМ
МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ *TGF-Β1 AND ITS MEMBRANE RECEPTORS: RELATIONSHIP
WITH THE CLINICAL COURSE IN ESTROGEN-POSITIVE
BREAST CANCER PATIENTS
Т. А. Дронова 1,2, Н. Н. Бабышкина 1,2,3, С. В. Паталяк 1,
С. В. Вторышин 1,3, Е. М. Стонимская 4, Н. В. Чердынцева 1,2
1Научно-исследовательский институт онкологии Томского национального
исследовательского медицинского центра Российской академии наук2Томский государственный университет
3Сибирский государственный медицинский университет, Томск
4Санкт-Петербургский государственный университет
T. A. Dronova 1,2, N. N. Babyshkina 1,2,3, S. V. Patalyak 1,
S. V. Vtoryshin 1,3, E. M. Slonimskaya 4, N. V. Cherdyntseva 1,2
1

Саncеr Research Institute, Tomsk National Research Medical Center2
National Research Tomsk State University
3
Siberian State Medical University, Tomsk
4
St. Petersburg State University
E-mail: tanyadronova@mail.ruАннотация
Поиск молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с клиническими
характеристиками течения рака молочной железы (РМЖ) остается одним из приоритетных направлений фундаментальных исследований. Целью работы явилась
оценка SNPs генов TGF-β1, TGF-βR1, TGF-βR2, а также их белковой и генной экспрессии в зависимости от основных клинических параметров. Выявлены дополнительные молекулярно-генетические факторы, связанные с клинико-морфологическими характеристиками эстроген-позитивного РМЖ.
© Т. А. Дронова, Н. Н. Бабышкина, С. В. Паталяк, С. В. Вторышин, Е. М. Стонимская, Н. В. Чердынцева, 2020*Работа поддержана грантом РФФИ, Соглашение 17-29-06037.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

431

Identification of biomarkers associated with breast cancer clinical characteristics remains one of the priority areas of fundamental research. The aim of the study was to examine the SNPs of TGF-β1, TGF-βR1, TGF-βR2 gene as well as their protein and gene expression depending on the main clinical parameters. Additional molecular genetic factors
related to the clinical and morphological characteristics of estrogen-positive breast cancer
were identified.

Актуальность
Многофункциональность и вовлеченность белков семейства трансформирующего фактора роста бета 1 (TGF-β1) в координацию ключевых процессов в опухолевых клетках позволяет рассматривать их в качестве потенциальных молекулярных маркеров *.
ЦельПровести анализ однонуклеотидных замен в генах TGF-β1, TGF-βR1,
TGF-βR2 и их транскрипционной активности, а также анализ экспрессии
кодируемых ими белков в зависимости от клинико-морфологических характеристик эстроген-позитивного РМЖ.
Материалы и методыВ исследование включена 141 пациентка с эстроген-позитивным
РМЖ (T1–4N0–3M0). Уровень экспрессии mRNA TGF-β1, TGF-βR1, TGF-βR2,
SNPs TGF-β1 (rs1800469, rs1800470), TGF-βR1 (rs334354) и TGF-βR2(rs2228048) изучены с помощью ПЦР в режиме реального времени. Экспрессия белковых продуктов генов TGF-β1, TGF-βR1, TGF-βR2 определена
методом ИГХ.
Результаты
Носительство редких аллелей и генотипов полиморфизма rs334354 генаTGF-βR1 значимо ассоциировано с отсутствием распространенности опухолевого процесса в регионарные лимфатические узлы (р = 0,039 и 0,006 соответственно). Выявлена тенденция к повышению степени транскрипционной активности гена TGFβ1 в опухоли у больных репродуктивного возраста
(р = 0,071). При изучении особенностей экспрессии исследуемых белкову пациенток младше 50 лет отмечено увеличение содержания TGF-βR1 в опухоли (р = 0,030). Установлен высокий уровень экспрессии TGF-βR1-пози*Liu S., Chen S., Zeng J. TGF-β signaling: A complex role in tumorigenesis (Review) //Mol Med Rep. 2018. Vol. 1. P.699–704.

432pаздел 4тивных клеток у больных с гомогенным распределением эстрогеновых рецепторов в опухолевой ткани (р = 0,028).
Выводы
TGF-β1 и его мембранный рецептор TGF-βR1 могут рассматриватьсяв качестве потенциальных маркеров, связанных с клиническими характеристиками эстроген-позитивного РМЖ.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

433БИВАЛЕНТНЫЕ ДНК-УСТРОЙСТВА ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ
СПЕЦИФИЧНЫХ РНК ДЛЯ ТЕРАПИИ РАКАBIVALENT DNA-DEVICES FOR RNA-SPECIFIC INHIBITION
FOR CANCER THERAPY
М. В. Дубовиченко 1, Д. М. Колпащиков 1,2
1Институт SCAMT, Университет ИТМО, Санкт-Петербург
2Университет центральной Флориды, Орландо, США
M. V. Dubovichenko 1, D. M. Kolpashchikov 1,2
1

SCAMT Laboratory, ITMO University, St. Petersburg
2
University of Central Florida, USA
E-mail: dubovichenko@scamt-itmo.ruАннотацияМы разработали бивалентные ДНК-устройства на основе ДНКзимов, способные
каталитически расщеплять мРНК гена домашнего хозяйства раковых клеток эффективнее, чем одинарные ДНКзимы. Повышение эффективности обусловлено наличием двух ДНКзимов, ассоциированных в одном ДНК-устройстве.

Abstract
We developed bivalent DNA-devices based on DNAzymes that catalytically cleave
a housekeeping gene mRNA of cancer cells more effectively than single DNAzymes. The increase in efficiency is due to the presence of two DNAzymes associated in one DNA-device.

According to the World Health Organization, cancer is the leading causes ofhuman death in the world: for 2018, every sixth death is due to cancer. One of themodern solutions to treat cancer is gene therapy. One of the most common variations of gene therapy is therapeutic oligonucleotides (TONs) used for suppressionof target mRNA.
One of the significant disadvantages of TONs is loss effectiveness in interacting with the folded mRNA structure. Because of this problem, only 10 % of theinjected TONs are interacting with the target mRNA [1]. Increasing the efficiency
of TONs binding to folded RNA targets can reduce the therapeutically effective© М. В. Дубовиченко, Д. М. Колпащиков, 2020

434pаздел 4

concentrations of TONs and thus reduce side effects caused by high concentrationof injected drugs.
To solve this problem, we suggest using two DNAzyme-based TONs that cooperatively bind targeted RNA and cleave it at two adjacent sites. DNAzymes are
single-stranded DNA molecules that complementary recognize and catalyticallycleave target mRNA. DNAzymes contain mRNA-binding domains (arms) andcatalytic core.
We developed three bivalent DNA-devices (BiDVs), each of which consistedof two RNA-cleaving units (Dz1 and Dz2), but differed in the association modeof Dz1 and Dz2: EDM-38, HDM-75, HEG-Dzs (see Figure). As a cleavage target,
we used mRNA fragment of housekeeping gene EIF3C (RNA-60) overexpressedin colorectal cancer cells. This gene encodes the EIF3C subunit that is involved in
the mRNA translation. Inhibition of this gene leads to stopping the proliferation
with subsequent cell death [2].

The design of BiDVs constructs: A) EDM-38, B) HDM-75, C) HEG-Dzs, D) single
DNAzyme Dz1 (control)

We compared the catalytic efficiency of BiDVs with single DNAzyme (Dz1,
Figure 1D). Under single-turnover conditions, (2 μM cleavage agents, 1 μM
RNA-60 target) EDM-38 and HEG-Dzs agents demonstrated 82 and 92 % cleavage
increase in comparison with Dz1. Under multiple-turnover conditions, (10 nM
cleavage agents, 1 μM RNA-60 target) HDM-75 showed a 65 % increase, while
EDM-38 and HEG-Dzs showed a 10 % loss in cleavage rates in comparison with
Dz1. The results confirm the possibility of increasing the RNA cleaving efficiency
by BiDVs. The hypothesis requires further confirmation using RNA with moreМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

435

complex secondary structures than that of the studied model RNA target as wellas inside cells.
References
1. Zhou W. et al. Theranostic DNAzymes // Theranostics. 2017. № 4 (7). P. 1010–1025.
2. Song N. et al. Effect of siRNA-mediated knockdown of eIF3c gene on survival ofcolon cancer cells // Journal of Zhejiang University. 2013. № 6 (14). Р. 451–459.

pаздел 4436МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ РАЗВИТИЯ
ПАТОЛОГИЙ ПЕЧЕНИ У БОЛЬНЫХ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
2-ГО ТИПА В РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ)MOLECULAR GENETIC ENTERPRISES OF THE DEVELOPMENT
OF LIVER PATHOLOGIES IN PATIENTS WITH TYPE 2 DIABETESMELLITUS IN THE REPUBLIC OF SAKHA (YAKUTIA)
А. Т. Дьяконова, Х. А. Куртанов, Н. И. Павлова, У. П. Борисова
Якутский научный центр комплексных медицинских проблем, Якутск
A. T. Diakonova, H. A. Kurtanov, N. I. Pavlova, Y. P. Borisova
Yakut Scientific Center for Complex Medical Problems,Yakutsk
E-mail: dyakonovaa@bk.ruАннотация
Научные работы, проведенные в России и за рубежом, показывают частое сочетание СД 2-го типа и неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП), которое характеризуется накоплением липидов как в самих гепатоцитах, так и в межклеточном пространстве. Исследование однонуклеотидных полиморфизмов (SNP)
rs58542926 гена TM6SF2 и rs738409 гена PNPLA3 было проведено в лаборатории наследственной патологии отдела молекулярной генетики Якутского научного центра
комплексных медицинских проблем (ЯНЦ КМП). Всего по гену TM6SF2 выборка
составила 142 образца ДНК, в том числе 48 образцов ДНК индивидов, имеющихв анамнезе хронические неинфекционные заболевания печени и 94 образца ДНКздоровых добровольцев. По гену PNPLA3 было исследовано 397 образцов ДНК,в том числе 151 образец ДНК индивидов, имеющих в анамнезе хронические неинфекционные заболевания печени и 246 образцов ДНК здоровых добровольцев. Значение OR (95 % CI) для аллели Т составило 5,257 (2,862–9,654), для гомозиготного
генотипа ТТ — 10,227(3,165 — 33,047). При анализе распределения частот генотипови аллелей полиморфизма PNPLA3 (rs738409) среди здоровой выборки и выборки пациентов с заболеваниями печени достоверных отличий не обнаружено.

Abstract
Scientific work in Russia and abroad shows a frequent combination of type 2 diabetes
and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), which is characterized by the accumulation© А. Т. Дьяконова, Х. А. Куртанов, Н. И. Павлова, У. П. Борисова, 2020Молекулярная биология
437
биологибиологияббиолог
ияof lipids in both the hepatocytes
and in the intercellular space. The study of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of rs58542926 gene TM6SF2 and rs738409 gene PNPLA3 wascarried out in the laboratory of hereditary pathology of the Department of Molecular Genetics of the Yakutsk Scientific Center for Complex Medical Problems (NSC KMP). In total,
the TM6SF2 gene sample consisted of 142 DNA samples, including 48 DNA samples of individuals with a history of chronic non-infectious liver diseases and 94 DNA samples fromhealthy volunteers. The OR value (95 % CI) for the T allele was 5,257 (2,862–9,654), for
the TT homozygous genotype 10,227 (3,165–33,047). When analyzing the frequency distribution of genotypes and alleles of PNPLA3 polymorphism (rs738409) among a healthy
sample and a sample of patients with liver diseases, no significant differences were found.

Сахарный диабет 2-го типа (СД 2) является одной из наиболее социально значимых патологий в Республике Саха (Якутия). Распространенность
НАЖБП среди пациентов СД 2-го типа составляет 60–80 %, а частота развития НАСГ — 12–40 % [1, 2]. Биологические механизмы, НАЖБП, приводящие к внепеченочным заболеваниям, полностью не установлены. Тем неменее совокупные данные убедительно свидетельствуют о том, что периферическая резистентность к инсулину, дислипидемия и активация воспалительных путей, связанных с НАЖБП, имеют отношение к развитию внепеченочных заболеваний, в том числе к СД 2-го типа.
Одним из кандидатныx генов, вовлеченных в патогенез НАЖБП является пататинподобный фосфолипазный домен-содержащий белок 3 (PNPLA3), также известный как адипонутрин. Полиморфизм этого гена является
предиктором прогрессирующего течения НАЖБП и основным фактором
риска трансформации НАЖБП в цирроз. Исследования показывают, чтополиморфизм I148M может представлять общий модификатор фиброгенезапри заболеваниях печени [3].
На сегодняшний день TM6SF2 является одним из трех основных генов
наряду с PNPLA3 и GCKR, ассоциированных с НАЖБП. Однонуклеотидный
полиморфизм (SNP) rs58542926 в гене TM6SF2 представляет собой нуклеотидную замену гуанина на аденин, что в свою очередь приводит к замене
глутаминовой кислоты лизином в 167 (E167K) аминокислотном остатке [4].
Материалы и методы исследования
Исследование полиморфизмов rs58542926 гена TM6SF2 и rs738409 генаPNPLA3 было проведено в лаборатории наследственной патологии отдела
молекулярной генетики Якутского научного центра комплексных медицинских проблем (ЯНЦ КМП). Всего для гена TM6SF2 было исследовано 142 образца ДНК, 48 образцов ДНК индивидов, имеющих в анамнезе хронические
неинфекционные заболевания печени и 94 образца ДНК здоровых добро-pаздел 4438вольца. По гену PNPLA3 было исследовано 397 образцов ДНК, 151 образцов ДНК индивидов, имеющих в анамнезе хронические неинфекционные
заболевания печени и 246 образца ДНК здоровых добровольца. ВыделениеДНК проводилось с помощью коммерческого набора. Однонуклеотидный
полиморфизм определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Статистический анализ проведен с помощью программы Office
Microsoft Excel 2010 и Statistica 8.0. Частоты полиморфизмов определяли
путем прямого подсчета. Результаты считаются значимыми, когда значениер меньше, чем 0,05 (p < 0,05).
Результаты и обсуждение
Сравнительный анализ распределения аллелей полиморфизма
rs58542926 гена TM6SF2 установил, что группа больных так же, как и группа
здоровых, характеризовалась преобладанием носителей алелля С 62 и 88 %соответственно (табл. 1).
Таблица 1Распределения встречаемости генотипов и аллелей полиморфизма
rs58542926 в группе больных и контрольной выборки
Больные
Генотипы,аллели
С/С
С/T
T/T
С
T

(n = 48),
(%)
54,17
14,58
31,25
64,7
35,3

Контрольная
выборка
(n = 94), (%)
81,91
13,83
4,26
88,8
11,2

OR (95 % CI)Значи-

для аллели Тмость, p

Х20,000 *

20,691
5,257 (2,862–9,654)
27,6360,000 **

Примечание. Достигнутый уровень значимости при сравнении распределения
генотипов (*) и частоты аллелей (**) в группах сравнения больных и контрольной выборки, n — численность выборок, Х2с поправкой Йейтса.

Сравнительный анализ генотипов в группах больных и здоровых выявил преобладание лиц с генотипом СС (54 и 82 % соответственно). Приэтом генотип ТТ достоверно чаще встречался в группе лиц с хроническими

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

439

неинфекционными заболевания печени (31 %, p ≤ 0,005). Значение OR (95 %CI) для аллеля Т составило 5,257 (2,862–9,654), для гомозиготного генотипа
ТТ — 10,227 (3,165–33,047).
Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов
полиморфного гена PNPLA3 (rs738409) в выборке якутов, страдающих
СД 2-го типа, выявил преобладание генотипа GG (60,3 %), значительно
реже — генотип CC (9,9 %). Гетерозиготный генотип GC наблюдали у 29,8 %пациентов. Анализ распределения аллелей полиморфного локуса PNPLA3 (rs738409) показал более высокую частоту аллеля G — 75,2 %. АллельC встречается у якутов с частотой 24,8 %. Распределение генотипов полиморфизма rs738409 находилось в равновесии Харди — Вайнберга в исследованной выборке (p > 0,05). При анализе распределение частот генотипови аллелей среди здоровой выборки и выборки пациентов с заболеваниями
печени достоверных отличий не обнаружено. Частоты генотипов полиморфизма PNPLA3 (rs738409) приведены в табл. 2.
Таблица 2Сравнение частот генотипов и аллелей
среди больных и здоровых якутов

Генотипы,аллели
С/С
С/G
G/G
С

Больные
(n = 151) (%)
9,9
29,8
60,3
24,8

G

75,2

Контрольная
выборка
(n = 246) (%)
13,8
26,4
59,8
27,0
73,0

OR (95 % CI)Х2для аллели G
1,535

1,121

Значимость,p
0,464 *

(0,808–1,557)
0,361

0,548 **

Примечание. Достигнутый уровень значимости при сравнении распределения
генотипов (*) и частоты аллелей (**) в группах сравнения 1 и 2; n — численность
выборок, Х2 с поправкой Йейтса.

Заключение
Сравнительный анализ распределения аллелей полиморфизма
rs58542926 гена TM6SF2 установил, что группа больных так же, как и группа
здоровых характеризовалась преобладанием носителей аллеля С 62 и 88 %соответственно. Сравнительный анализ генотипов в группах больныхи здоровых выявил преобладание лиц с генотипом СС (54 и 82 % соответ-440

pаздел 4ственно). При этом генотип ТТ достоверно чаще встречался в группе лицс хроническими неинфекционными заболевания печени (31 %, p ≤ 0,005).
Значение OR (95 % CI) для аллеля Т составило 5,257 (2,862–9,654), для гомозиготного генотипа ТТ 10,227 (3,165–33,047).
Литература
1. Петунина Н. А., Тельнова М. Э. Неалкогольная жировая болезнь печени // Медицинский совет. 2016. № 4. С. 92–95.
2. Шаронова Л. А., Вербовой А. Ф., Вербовая Н. И., Пашенцева А. В. Взаимосвязь неалкогольной жировой болезни печени и сахарного диабета 2-го типа // РМЖ.
2017. № 22. С. 1635–1640.5.
3. Dongiovanni P., Donati B., Fares R., Lombardi R., Mancina R.M., Romeo S., Valenti L.
PNPLA3 I148M polymorphism and progressive liver disease // World Journal of Gastroenterology. 2013. Vol. 19. № 41. P. 6969–6978. doi: 10.3748/wjg.v19.i41.6969.
4. Vespasiani-Gentilucci U., Dell’Unto C., De Vincentis A., Baiocchini A., Delle Monache
M., Cecere R. Combining Genetic Variants to Improve Risk Prediction for NAFLD and Its
Progression to Cirrhosis: A Proof of Concept Study // Canadian Journal of Gastroenterology
and Hepatology. 2018. Vol. 2018. P. 1–10. https://doi.org/10.1155/2018/7564835

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

441

РАЗРАБОТКА ПОДХОДА К ВЫСОКОСПЕЦИФИЧНОЙ ДЕПЛЕЦИИ
РНК-МИШЕНЕЙ С ПОМОЩЬЮ ФОСФОРИЛГУАНИДИНОВЫХ
ЗОНДОВ И РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ *A DEVELOPMENT OF APPROACH TO HIGH-SPECIFIC
RNA-DEPLETION USING PHOSPHORYLGUANIDINE PROBESAND REVERSE TRANSCRIPTION REACTIONЕ. С. Дюдеева
Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
E. S. Dyudeeva
Institute of Сhemical Biology
and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
E-mail: jenyadudeeva@gmail.com
Аннотация
Фосфорилгуанидиновые олигодезоксирибонуклеотиды (ФГ-ОН) — тип незаряженных синтетических нуклеиновых кислот (НК), обладающих способностью связывать комплементарную мишень даже в растворах с ультранизкой ионной силой.
Показано, что комплекс ФГ-ОН с РНК может выступать в качестве субстрата для обратной транскриптазы (РНК-зависимой ДНК-полимеразы). Полученные результаты являются базисом для разработки подхода к высокоселективной деплеции РНК,основанной на уникальных гибридизационных свойствах ФГ-ОН и его ферментативном удлинении обратной транскриптазой.

Abstract
Phosphorylguanidine oligonucleotides (PG-ON) is a type of uncharged synthetic nucleic acids (NA), which is able to bind the complementary target even if the ionic strengthof the solution is ultra-low. It was shown that PG-ON primer with RNA template may be
a substate for reverse transcriptase (RNA-dependent DNA-polymerase). The results obtained is a basis for development of approach to high-selective RNA depletion, based on
unique hybridization properties of PG-ON and its enzymatic elongation by reverse transcriptase.
© Е. С. Дюдеева, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ 19-34-90132.

442pаздел 4Фосфорилгуанидиновые олигодезоксирибонуклеотиды — перспективный класс незаряженных синтетических НК [1]. Ранее были исследованы
гибридизационные свойства полностью и частично модифицированных
ФГ-ОН [1–3]: показано, что они способны образовывать комплексы с комплементарной НК-мишенью даже в деионизованной воде, в то время какстабильность нативных комплексов аналогичного нуклеотидного состава резко падает при понижении ионной силы раствора. Данное свойство
ФГ-ОН может быть перспективным в контексте «захвата» высокоструктурированных РНК-мишеней: низкая ионная сила будет дестабилизировать
внутреннюю структуру мишени, делая ее более «доступной» для связывания с ФГ-праймером.
Цель данной работы — апробация комплексов, содержащих ФГ-ОН, каксубстратов для реакции обратной транскрипции (ОТ). Используя модельный субстрат, образованный 10-звенным ДНК-праймером и 17-звенной
РНК-матрицей, проведен систематический поиск оптимальных условий
реакции ОТ: варьировали температуру реакции, концентрацию dNTP и самого субстрата, количество фермента. В результате выбраны оптимальные
условия, при которых количество абортивных продуктов элонгации быломинимальным. Продемонстрировано, что эффективность удлинения обратной транскриптазой нативного N10o и полностью фосфорилгуанидинового праймера N10*, остов которого не имеет заряда, близка в присутствии
5 мМ MgCl2. При понижении ионной силы буферного раствора реакционной смеси установлено, что ФГ-ОН, даже обладая полностью модифицированным остовом, может выступать в качестве праймера для реакции ОТ.
Эффективность удлинения праймера в этом случае лишь несколько уменьшается. Таким образом, полученные результаты могут быть базисом дляразработки подхода к селективному захвату высокоструктурированныхРНК с помощью ферментативного удлинения ФГ-праймеров при пониженной ионной силе среды.
Литература
1. Kupryushkin M. S., Pyshnyi D. V., Stetsenko D. A. Phosphoryl Guanidines: A New
Type of Nucleic Acid Analogues // Acta Naturae. 2014. V. 6. P. 116–118.
2. Lomzov A. A., Gorelov V. V., Golyshev V. M., Abramova T. V., Pyshnyi D. V. // J. Biomol. Struct. Dyn. 2015. V. 33. P. 90–91.
3. Dyudeeva E. S., Kupryushkin M. S., Lomzov A. A., Pyshnaya I. A., Pyshnyi D. V. Physicochemical Properties of the Phosphoryl Guanidine Oligodeoxyribonucleotide Analogs //Russ. J. Bioorg. Chem. 2019. V. 45. P. 709–718. doi 10.1134/S1068162019060153

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

443ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОЙ ГИПОКСИИ НА СВОЙСТВА
ОПУХОЛЬ-АССОЦИИРОВАННЫХ ФИБРОБЛАСТОВ *EFFECTS OF LONG-TERM HYPOXIA ON CANCER ASSOCIATED
FIBROBLAST PROPERTIES
М. С. Ермаков 1,2, О. А. Коваль 1,2, А. А. Нуштаева 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
M. S. Ermakov 1,2, O. A. Koval 1,2, A. A. Nushtaeva 1
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
E-mail: ermakovm97@gmail.com
АннотацияВ результате выполнения работы показано, что при культивировании опухоль-ассоциированных фибробластов (ОАФ) в условиях длительной гипоксии
наблюдается изменение уровня мРНК протоонкогена c-myc и генов-регуляторов
эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП). При подкожной трансплантации
иммунодефицитным мышам ОАФ, культивируемых в условиях гипоксии, образовывались опухолевые узлы, в отличие от клеток, культивируемых в нормоксии.

Abstract
In this work, we demonstrated that long-term cultivation of cancer associatedfibroblast (CAFs) under hypoxic conditions promotes the expression of proto-oncogene c-myc and transcriptional factors that regulates epithelial to mesenchymaltransition. Furthermore, CAFs cultivated under hypoxia become tumorigenic in
immunodeficient mice in compare with CAFs cultivated in normoxia.
Микроокружение опухоли оказывает влияние на пролиферацию опухолевых клеток, ангиогенез и метастазирование. ОАФ являются основным
© М. С. Ермаков, О. А. Коваль, А. А. Нуштаева, 2020*Исследование поддержано грантом РНФ № 20-74-10039.

444pаздел 4типом стромальных клеток в опухоли и могут участвовать в регуляции
адаптации опухоли к стрессовым условиям, в том числе гипоксии. Гипоксия
усиливает инвазивность ОАФ. Адаптацию клеток к гипоксии регулируют
многие факторы, такие как регуляторы экспрессии генов, связанных с ЭМП.
Экспрессия протоонкогена с-myc находится под контролем факторов, индуцируемых гипоксией (HIF), он играет критическую роль в пролиферациии метаболизме клеток.
Целью исследования являлось выявление изменения экспрессии мРНКгенов-регуляторов ЭМП в ОАФ в условиях гипоксии, а также изучение влияния гипоксии на туморогенность ОАФ при подкожной трансплантации
иммунодефицитным мышам.
В работе использовали полученную ранее персонализированную культуру клеток рака молочной железы BrC4f с фибробластоподобным фенотипом. Для реализации условий гипоксии использовали разработанный ранее
метод «импульсной гипоксии». Показано, что несколько раундов гипоксии
стимулировали изменение фенотипа клеток с фибробластоподобного в эпителиоподобный. После двух раундов «импульсной гипоксии» клетки BrC4f
использовали для выделения суммарной РНК или для подкожной трансплантации мышам линии SCID. В качестве контроля использовали клетки
BrC4f, культивируемые в условиях нормоксии.
Было показано, что после одного раунда гипоксии повышается уровень
мРНК ключевого гена-регулятора ЭМП — SLUG, однако после двух раундов — мРНК SLUG, и Zeb1 снижался до уровня мРНК этих генов в клетках
культуры с эпителиальным фенотипом, что, вероятно, связано с активацией в ОАФ обратного ЭМП процесса — мезенхимально-эпителиального
перехода при длительной гипоксии. После двух раундов гипоксии в ОАФнаблюдается повышение уровня мРНК c-myc в сравнении с нормоксией.
При подкожной трансплантации клеток BrC4f после двух раундов гипоксии опухолевый узел образовывался на 12–14 день после трансплантации. При перевивании клеток, культивируемых в условиях нормоксии, ненаблюдается формирование опухоли на месте введения клеток.
Полученные данные демонстрируют, что длительная гипоксия является
регулятором мезенхимально-эпителиального перехода в ОАФ и индуцирует туморогенность ОАФ.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

445ГИСТОН-ГИДРОЛИЗУЮЩИЕ АНТИТЕЛАПРИ ШИЗОФРЕНИИ: ВЗАИМОСВЯЗЬ ВОСПАЛЕНИЯИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА *HISTONE-HYDROLYZING ANTIBODIES IN SCHIZOPHRENIA:
THE RELATIONSHIP BETWEEN INFLAMMATION
AND HUMORAL IMMUNITY
Е. А. Ермаков 1,2, В. Н. Бунева 1,2, Г. А. Невинский 1,2
1Новосибирский государственный университет
2Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
E. A. Ermakov 1,2, V. N. Buneva 1,2, G. A. Nevinsky 1,2
12Novosibirsk State University
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
E-mail: evgeny_ermakov@mail.ruАннотация

Известно, что шизофрения связана с иммунными нарушениями. В данной работе обнаружено, что IgG из сыворотки больных шизофренией способны связыватьи гидролизовать различные гистоны. Поскольку внеклеточные гистоны запускают
воспалительные реакции, такие антитела играют защитную роль при шизофрениии являются перспективными биомаркерами.

Abstract
Schizophrenia is known to be associated with immune pathology. In this work, it was
found that IgG from the serum of schizophrenic patients is able to bind and hydrolyze various histones. Since extracellular histones trigger inflammatory responses, such antibodies
play a protective role in schizophrenia and are promising biomarkers.

Шизофрения связана не только с нейротрансмиттерным дисбалансом,но и с дисрегуляцией иммунной системы и хроническим вялотекущим вос© Е. А. Ермаков, В. Н. Бунева, Г. А. Невинский, 2020*Исследования поддержаны грантом РФФИ 20-015-00156, а также Стипендией
Президента РФ № СП-2258.2019.4.

446pаздел 4палением. Однако патологические процессы, приводящие к этому, до сихпор плохо изучены. Известно, что внеклеточные гистоны, попадающие вовнеклеточное пространство вследствие апоптоза и других вариантов клеточной гибели, инициируют воспалительные реакции. У больных шизофренией обнаружены антинуклеарные и антигистоновые антитела в низкой
концентрации. Известно, что среди огромного репертуара антител организма присутствуют каталитические антитела, которые связывают и гидролизуют антиген. Такая неканоническая функция антител расширяет функциональные возможности иммунной системы, но в некоторых случаях может
приводить к патологии *.
В этой работе мы показали, что поликлональные IgG у больных шизофренией не только эффективно связывают, но и гидролизуют пять гистонов (H1, H2a, H2b, H3 и H4). Препараты IgG были получены из сыворотки крови 25 больных и 15 здоровых доноров методом аффинной хроматографии. Для доказательства их гомогенности использовался SDS-PAGEи MALDI-TOF MS. Анализ гидролитической активности IgG проводилис помощью SDS-PAGE после инкубации IgG с гистонами. Уровень каталитической активности (%) оценивали по снижению интенсивности пятна
гистона после инкубации с IgG. С использованием общепринятых жестких
критериев доказано, что каталитическую активность проявляют непосредственно анализируемые IgG. Уровень гистон-гидролизирующей активности IgG в зависимости от типа гистона оказался статистически значимо
в 6–20,1 раз выше, чем у условно здоровых доноров. Исследованные биохимические свойства этих естественных каталитических IgG заметно отличались от канонических протеаз. Образование каталитических антител является признаком нарушений в иммунной системе больных. С другой стороны, разрушение внеклеточных гистонов снижает воспалительные реакции.
Можно предположить, что гистон-гидролизирующие антитела являются
связующим элементом между гуморальным иммунитетом и воспалительными реакциями при шизофрении.
Полученные результаты дополняют имеющиеся данные о связи воспаления и гуморальной иммунной системы при шизофрении. Каталитические
IgG могут оказаться перспективными биомаркерами шизофрении и других
заболеваний.

*Ermakov E. A., Nevinsky G. A., Buneva V. N. Immunoglobulins with non-canonicalfunctions in inflammatory and autoimmune disease states // International Journal of
Molecular Sciences. 2020. V. 21. № 15. P. 5392.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

447

LOLA — БЫСТРЫЙ И ПРОСТОЙ МЕТОД ДЕТЕКЦИИ
ОНКОГЕННЫХ ПЕРЕСТРОЕК T(4;11)(Q21;Q23) *LOLA — FAST AND EASY METHOD FOR THE DETECTION
OF THE ONCOGENIC TRANSLOCATION T(4;11)(Q21;Q23)
А. В. Замалутдинов 1, Н. А. Ломов 1, Е. А. Зеркаленкова 2, М. А. Рубцов 1,3
1Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова
2Национальный медицинский исследовательский центр детской
гематологии, онкологии и иммунологии им. Д. Рогачева
3Первый Московский государственный медицинский университет
им. И. М. Сеченова

A. V. Zamalu 1tdinov 1, N. A. Lomov 1, E. A. Zerkalenkova 2, M. A. Rubtsov 1,3
1

2

Lomonosov Moscow State University
Dmitry Rogachev National Research Center, Moscow
3
Sechenov University, Moscow
E-mail: avzamal@yandex.ru, lomov13@gmail.com

Аннотация
Хромосомная перестройка MLL-AF4 ассоциирована с острым лейкозом. Для еедетекции в настоящее время применяется метод FISH. Мы адаптировали для детекции этой перестройки метод лигирования запетленных участков (LOLA), который
проще и быстрее, чем FISH-анализ.

Abstract
MLL-AF4 chromosomal translocation is associated with acute leukemia. Nowadays,
FISH method is used for translocation detection. For this purpose, we adapted DNA-based
Loop Ligation Assay (LOLA), which is easier and faster than FISH-analysis.

Лейкозы часто сопровождаются хромосомными перестройками с участием гена лизиновой гистонметилтрансферазы MLL (KMT2A), в результате он сшивается с одним из многочисленных генов-партнеров. Тип перестройки влияет на прогноз и применяемые подходы к лечению. Проблема
© А. В. Замалутдинов, Н. А. Ломов, Е. А. Зеркаленкова, М. А. Рубцов, 2020*Работа выполнена при поддержке РНФ (грант № 19-75-10056).

448pаздел 4выявления перестройки состоит в том, что возможные точки разрывов
лежат на протяженном участке (кластере разрывов) гена, что осложняет
детекцию перестройки простыми методами, например, ПЦР. В настоящее
время используется техника флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)с двуцветными (dual color) пробами. Однако этот метод довольно дорог,сложен и занимает несколько дней.
Метод лигирования запетленных участков (Loop Ligation Assay, LOLA)позволяет детектировать спектр транслокаций, отличающихся локализацией точки разрыва на протяжении сотен тысяч пар нуклеотидов.
Метод заключается в отжиге в области транслокации в непосредственной близости друг к другу трех олигонуклеотидов, их дальнейшем лигировании и детекции образовавшегося продукта. Боковые олигонуклеотиды
комплементарны участкам двух генов-партнеров по перестройке, а также
содержат некомплементарные хромосоме концы, на которых отжигаются
универсальные праймеры. Концы среднего олигонуклеотида комплементарны двум удаленным участкам слитой хромосомы, а его средняя часть
представляет собой линкер, позволяющий сблизить участки химерного
гена с образованием петли. Если перестройка присутствует в ДНК, то пробы лигируются друг с другом и продукт лигирования детектируется методом ПЦР. Принцип проиллюстрирован на рисунке.

Принцип метода LOLAМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

449

Мы детектировали транслокацию MLL-AF4 как одну из самых частых
транслокаций гена MLL, наблюдаемых при острых лейкозах, особенно у детей первого года жизни. Для повышения специфичности метода мы применили стратегию вложенной ПЦР и провели подбор условий реакций.
ДНК выделяли из образцов костного мозга пациентов, полученногов период развернутого течения заболевания. Образцы содержали по крайней мере 80 % бластных клеток. Наличие транслокации t(4;11)(q21;q23)/
MLL-AF4 было доказано методами стандартного кариотипирования, FISHи ПЦР с обратной транскрипцией.
Метод является достаточно быстрым, дешевым, не требует сохранности
клеток в образцах и в перспективе может заменять FISH. Ограничением метода является качество анализируемой геномной ДНК.
Информированное согласие на диагностическое обследование было получено от законных представителей всех пациентов.

pаздел 4450ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА МЕТОДОМ АСМВ РАЗЛИЧНЫХ РЕЖИМАХ СКАНИРОВАНИЯVISUALIZATION OF HORSERADISH PEROXIDASE BY AFM
IN VARIOUS SCANNING MODES
И. А. Иванова, М. О. Ершова, Т. О. Плешакова, Ю. Д. Иванов
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии
им. В. Н. Ореховича, Москва
I. A. Ivanova, M. O. Ershova, T. O. Pleshakova, Yu. D. Ivanov
Institute of Biomedical Chemistry, Moscow
E-mail: i.a.ivanova@bk.ruАннотация
Единичные белковые молекулы пероксидазы хрена (ПХ) визуализированы методом атомно-силовой микроскопии (АСМ). Данные сканирования получены в режиме ScanAsyst® и в полуконтактном режиме на приборах NTEGRA Aura (NT-MDT, Зеленоград, Россия) (далее Aura) и Dimension FastScan Bio™ (Bruker, США) (далее DFS).
Показана сопоставимость результатов измерений, полученных в одном режиме наразличных приборах.

Abstract
Single molecules of horseradish peroxidase (HRP) protein have been visualized byatomic force microscopy (AFM). The AFM data were obtained in ScanAsyst® mode and intapping mode using NTEGRA Aura (NT-MDT, Zelenograd, Russia) and Dimension FastScan Bio™ (Bruker, USA) atomic force microscopes. The comparability of the results, obtained in the same mode with different atomic force microscopes, has been demonstrated.

Атомно-силовая микроскопия позволяет получать информацию, необходимую для изучения физико-химических свойств единичных макромолекул и макромолекулярных комплексов [1]. Полуконтактный режим
молекулярного детектора АСМ используется для визуализации иммобилизованных на атомарно ровную поверхность белков. В этом режиме происходит более деликатное воздействие зонда на объекты. Цель данной рабо© И. А. Иванова, М. О. Ершова, Т. О. Плешакова, Ю. Д. Иванов, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

451

ты — проанализировать и сопоставить результаты измерений, полученныхс помощью разных приборов.
В качестве объекта исследования был взят хорошо охарактеризованный гемсодержащий фермент — пероксидаза хрена. В настоящее времяПХ широко используется для моделирования структуры и функции ферментов, что дает возможность разработать подходы для создания новых
методов диагностики заболеваний с использованием молекулярных детекторов [2].
В результате работы получены АСМ-изображения поверхности свежесколотой слюды с биомолекулами, сорбированными из 10 –7 М буферного
раствора ПХ (рис. 1, а–в). Образцы приготовлены в идентичных условиях.

а

б

в

Рис. 1. Пример АСМ-изображений молекул белка ПХ, сорбированныхна поверхности слюды, полученных в режиме ScanAsyst (а) и в полуконтактном
режиме на приборах (б) DFS, Aura (в)Результаты АСМ-сканирования были обработаны, построена функция
распределения визуализированных объектов по высотам ρ (h) (рис. 2). Каквидно на рис. 2, максимум распределения для всех режимов измерений
совпадает и составляет 1,3,2 нм. Согласно [2] объекты с высотой ≈ 1,2 нмсоответствуют мономерам ПХ. Следовательно, при использовании полуконтактного режима измерения на обоих приборах визуализируются преимущественно мономеры белка. Однако для данных, полученных в режиме
ScanAsyst, наблюдается увеличение вклада частиц в правое крыло распределения, т. е. фиксируются объекты с большими высотами. Это означает,что в данном режиме также визуализируются олигомерные структуры белка. Следовательно, воздействие зонда на биомакромолекулы в этом режиме
является более деликатным по сравнению со стандартным полуконтактным
режимом.

pаздел 4452Результаты работы показали, что при сопоставлении АСМ-данных необходимо учитывать прибор и режимы сканирования, использованные дляпроведения измерений.
65
1110 (Aura)Относительное содержание частиц, %60

1111 (Aura)

55
50

1112 (Aura)

45
1110 (ScanAsyst)

40
351111 (ScanAsyst)

301112 (ScanAsyst)
251110 (DFS)20
151111 (DFS)101112 (DFS)

5
0
0

1

2

3

4

Высота, нмРис. 2. Функция распределения визуализированных объектов по высотам:данные, полученные в режиме ScanAsyst (линии с маркерами), в полуконтактном
режиме на приборах DFS (пунктирные линии), Aura (сплошные линии).
Приведены результаты трех технических повторов для каждого образца
(см. кодировку цветом в легенде)Литературы
1. Ivanov Y. D. et al. AfM imaging of protein Aggregation in Studying the impact ofKnotted electromagnetic field on A peroxidase // Scientific Reports. 2020. Vol. 10. №. 1.
Р. 1–9.
2. Veitch N. C. Horseradish peroxidase: a modern view of a classic enzyme // Phytochemistry. 2004. Vol. 65. №. 3. Р. 249–259.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

453НОВОЕ ПОКОЛЕНИЕ ЦИАНО-ЕНОН-СОДЕРЖАЩИХ
ТРИТЕРПЕНОИДОВ: ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ПОТЕНЦИАЛВ ОТНОШЕНИИ КЛЕТОК ГЛИО- И НЕЙРОБЛАСТОМ *NOVEL GENERATION OF CYANO-ENONE-BEARING TRITERPENOIDS:ANTITUMOR POTENTIALAGAINST GLIO- AND NEUROBLASTOMA CELLS
А. А. Ильина 1,2, О. В. Саломатина 1,3, Н. Ф. Салахутдинов 3,
М. А. Зенкова 1, А. В. Марков 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Новосибирский институт органической химии
им. Н. Н. Ворожцова СО РАН
A. A. Ilyina 1,2, O. V. Salomatina 1,3, N. F. Salakhutdinov 3,
M. A. Zenkova 1, A. V. Markov 1
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
N. N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry SB RAS
E-mail: humanity2206@mail.ruАннотация

Проведен скрининг противоопухолевой активности 9 новых амидов солоксолона в отношении клеток глио- и нейробластом человека и мыши. Установлено, чтолидерное соединение jil-7, несущее триптамидный заместитель, способно проникать
сквозь гемато-энцефалический барьер (ГЭБ), вызывать гибель опухолевых клеток путем индукции каспазо-зависимого апоптоза предположительно в результате прямого
взаимодействия с Akt1 и CHRM2 и блокировать подвижность клеток глиобластомы.

Abstract
The screening of antitumor activity of 9 novel amides of soloxolone in human and murine glio- and neuroblastoma cells was carried out. It was found that hit compound jil-7,© А. А. Ильина, О. В. Саломатина, Н. Ф. Салахутдинов, М. А. Зенкова, А. В. Марков, 2020*Исследования выполнены при поддержке гранта РНФ № 17-75-20120.

454

pаздел 4

bearing tryptamide moiety, can pass through blood-brain barrier, induced caspase-dependent apoptosis probably via direct interaction with Akt1 and CHRM2 and blocked motilityof glioblastoma cells.

Известно, что введение циано-еноновой фармакофорной группыв структуру полициклических соединений приводит к значительному
усилению уровня их биоактивности. Полусинтетический тритерпеноид
CDDO, несущий данную модификацию, и ряд его аналогов в настоящее
время находятся на различных фазах клинических испытаний на пациентах с широким рядом заболеваний, в том числе онкологических [1]. Ранее
нашей группой на основе 18βH-глицирретовой кислоты был синтезировани исследован аналог CDDO солоксолон метил (СМ), способный эффективно ингибировать опухолевый рост, развитие воспалительного ответаи гриппозную инфекцию in vitro и in vivo. Учитывая установленную в [2]взаимосвязь между формированием амидной группы в области кольца
Е CDDO и высоким уровнем накопления таких производных в тканях мозга мышей, целью настоящей работы являлся синтез амидов солоксолонаи исследование их противоопухолевого потенциала в отношении клеток
опухолей головного мозга.

Рис. 1. Химические структуры новых аналогов СМНа первом этапе работ было синтезировано 9 новых амидов солоксолона,несущих различные алифатические и ароматические заместители (рис. 1),
и проведен скрининг их способности проникать через ГЭБ с использовани-Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

455

ем двух независимых онлайн-платформ AlzPlatform и PreADMET. Показано,что 5 из 9 синтезированных производных потенциально способны накапливаться в мозге (рис. 2, А). Оценка цитотоксичности отобранных амидовна клетках глио- и нейробластом человека и мыши показала их высокую
цитотоксичность (медианная IC50 = 1,9 мкМ) за исключением sg-650, несущего N-метилпропан-1,3-диаминовый заместитель (рис. 2, Б). Кроме этого, в результате in silico анализа было установлено, что 3 из 5 выявленных
амидов солоксолона не являются субстратом для p-гликопротеина (рис. 2,Б), входящего в структуру ГЭБ и выполняющего откачку ксенобиотиков измозга обратно в кровяное русло.

Рис. 2. А. Потенциальная способность новых производных солоксолона
проникать сквозь ГЭБ. Зеленым и красным цветом отмечены соединения,обладающие и не обладающие данной активностью соответственно.
Б. Профиль цитотоксичности новых производных солоксолона.
В. Докинг-комплексы jil-7 (синий) с Akt1 и CHRM2 в сайтах связывания ихселективных ингибиторов (желтый)456

pаздел 4В результате более детального изучения механизмов цитотоксического
действия соединения-лидера jil-7 выявлена его способность запускать апоптоз (экстернализация фосфатидилсерина, активация каспаз-3/-7) и усиливать митохондриальный мембранный потенциал в клетках глиобластом
человека U-87 и U-118. Кроме этого, на данной модели с использованием
scratch-теста и технологии xCelligence установлено, что jil-7 в нетоксичных
концентрациях эффективно ингибирует подвижность опухолевых клеток.
На следующем этапе работы с использованием in silico подхода на основе
машинного обучения был идентифицирован список потенциальных белковых мишеней jil-7, которые далее были внедрены в генную ассоциативную
сеть, связанную с запуском апоптоза. В результате анализа полученной сетис последующей валидацией молекулярным докингом было установлено,что киназа Akt1 и мускариновый ацетилхолиновый рецептор CHRM2 могут рассматриваться в качестве первичных мишеней jil-7, определяющих егопроапоптотическую активность (рис. 2, В).
Литература
1. Markov A. V., Zenkova M. A., Logashenko E. B. Modulation of Tumour-Related Signaling Pathways by Natural Pentacyclic Triterpenoids and their Semisynthetic Derivatives //Curr. Med. Chem. 2017. Vol. 24. P.1277–1320, doi:10.2174/0929867324666170112115313.
2. Yang L., Calingasan N. Y., Thomas B., Charturvedi R. K., Kiaei M., Wille E. J.,
Liby K. T., Williams C., Royce D., Risingson R. et al. Neuroprotective effects of the triterpenoid, CDDO methyl amide, a potent inducer of Nrf2-mediated transcription // PLoS
One. 2009. Vol. 4, e5757, doi:10.1371/journal.pone.0005757.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

457ЭВОЛЮЦИЯ мтДНК МЛЕКОПИТАЮЩИХ:МЫШИ ХОДЯТ МНОГИМИ МАЛЕНЬКИМИ ШАГАМИ,СЛОНЫ — РЕДКИМИ БОЛЬШИМИ
mtDNA MAMMALIAN EVOLUTION:MICE WALK WITH MANY LITTLE STEPSWHILE ELEPHANTS WITH A FEW BIG ONESД. В. Ильющенко 1, К. В. Гунбин 2, К. Ю. Попадьин 1
1Балтийский федеральный университет
им. Иммануила Канта, Калининград
2Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
D. V. Iliushchenko 1, K. V. Gunbin, K. Yu. Popadin 1
1
2

Immanuel Kant Baltic Federal University, Kaliningrad
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
E-mail: iliushchenkodmitrii@gmial.com

АннотацияВ этом проекте мы используем выровненные митохондриальные геномы
(353 вида, 40 семейств, 13 генов), чтобы проверить гипотезу о том, что с уменьшением массы тела скорость эволюции будет быстрее из-за очень нейтральных замен,а с увеличением веса тела будет увеличиваться скорость эволюции из-за более радикальных замен.

Abstract
In this project, we use aligned mitochondrial genomes (353 species, 40 families,
13 genes) to test the hypothesis that, with a decrease in body weight, the rate of evolution
will be faster due to very neutral substitutions, and with an increase in body weight there
will be an increase in the rate of evolution overdue to more radical substitutions.

Introduction
Numerous associations of ecological and genetic traits are especially wellknown for mammalian species — which are well characterized ecologically anddeeply sequenced. It is known, that small-bodied short-lived (mice) mammalian© Д. В. Ильющенко, К. В. Гунбин, К. Ю. Попадьин, 2020

458pаздел 4

species have a higher rate of neutral evolution as compared to large-bodied longlived (elephants) species. Most likely this effect is driven by the different number of DNA replications of germ cells per unit of time (higher in mice versus
elephants). Also, it is known that slightly-deleterious variants, opposite to theneutral mutations, tend to accumulate faster in elephants versus mice becauseof their lower effective population size which leads to stronger genetic drift. Interestingly, both these most common categories of mutations together very often
lead to an approximately constant rate of molecular evolution: mice accumulate
numerous neutral substitutions, while elephants accumulate more rare and moredeleterious variants. Here we use mitochondrial genomes to test the hypothesisthat in physicochemical space “mice walk with many little steps while elephantswith a few big ones”.
Methods
Mitochondrial genes, which we used in this project allow us to analyze mammalian species with a complete sequenced mtDNA. We plan to find a physicochemical metrics of mtDNA evolution to analyze mice-specific and elephant-specific patterns of amino-acid substitutions.
Using codon alignment of mitochondrial genes we generated all possible trios of species within each family. For each species from each trio, we obtained
generation length as the main ecological factor. The approach is based on therelative ratio test: we compare two species B and C with different generation
length. If species B is more long-lived as compared to species C we expect that therate of neutral evolution will be decreased during the B-specific evolution, while
the rate of accumulation of slightly-deleterious variants will be increased. To test it
we use an outgroup species A to analyze the pattern of evolution between A-B and
A-C. Finally, we work with different outgroups for each pair of species to demonstrate the robustness of the observed effects.
Results
Our pilot results from the comparative-species scale demonstrate the expected
trend: long-lived species tend to accumulate more distant amino-acid substitutions as compared to short-lived species. Currently, we use additional propertiesof amino-acids to find a physicochemical signature of substitutions typical for
short-lived versus long-lived species.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

459

УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ ОККЛЮДИНА, КЛАУДИНА
И Е-КАДГЕРИНА В КЛЕТОЧНОЙ МОДЕЛИ
АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА
EXPRESSION LEVEL OF OCCLUDIN, CLAUDIN AND E-CADHERININ A CELL MODEL OF ATOPIC DERMATITIS
Е. Л. Искра
Государственный Санкт-Петербургский
педиатрический медицинский университет
E. L. Iskra
St. Petersburg State Pediatric Medical University
E-mail: e.iskra.doc@mail.ruАннотация
Плотные контакты — запирающие межклеточные контакты — максимально
сшиты специализированными белками клаудинами и окклюдинами. Роль плотных
контактов заключается в ограничении и регулировании параклеточной диффузии.
Клаудины и кадгерины отвечают за формирование связей между однотипными эндотелиальными клетками. С нарушением формирования плотных контактов связаны различные заболевания человека, в том числе атопический дерматит. Плотные
контакты могут быть мишенью для вирусных и бактериальных патогенов, что характерно для атопического дерматита.

Abstract
Tight contacts-locking intercellular contacts are maximally cross-linked by specialized
proteins claudins and occludins. The role of tight contacts is to limit and regulate paracellular diffusion. Claudins and cadherins are responsible for forming connections between
the same type of endothelial cells. Various human diseases, including atopic dermatitis,are associated with the violation of the formation of dense contacts. Close contacts can bea target for viral and bacterial pathogens, which is typical for atopic dermatitis.

Цель исследования — изучение уровня экспрессии окклюдина, клаудина и кадгерина в клеточной культуре атопического дерматита с целью оценки нарушения плотных контактов при данной патологии.
© Е. Л. Искра, 2020

460pаздел 4Материалы и методы исследования
Исследования проводились на клеточной культуре атопического дерматита. Иммуногистохимическая реакция была проведена с первичными
антителами к маркерам Claudin 10 Antibody, Occludin Antibody, E-Cadherin (Affinity Biosciences, 1:150). В качестве вторичных антител использовали
Alexa 647; ядра докрашивали DAPI. Для изучения объектов получали спектры флюоресценции и определяли количественные характеристики на конфокальном микроскопе ZEISS LSM 800. Флуоресценцию с определенными
спектральными характеристиками регистрировали в плоскости (по оси Х2D). Уровень экспрессии антител определяли с помощью программы
ImageJ как относительную площадь экспрессии.
Результаты исследования
Результаты исследования показали, что среднее значение площади экспрессии Claudin 10 в клеточной культуре атопического дерматита составило 15,4 ± 0,95, что было в 0,7 раз меньше, чем в культуре фибробластов кожичеловека. Уровень экспрессии оклюдина в культуре клеток атопического
дерматита был снижен в 4 раза по сравнению с уровнем экспрессии этого
маркера в культуре фибробластов кожи человека. Достоверного снижения
уровня Е-кадгерина нами выявлено не было.
Выводы
Было установлено, что уровни экспрессии молекул окклюдина и клаудина-10 достоверно снижены по сравнению с уровнем экспрессии этих же маркеров в клеточной культуре фибробластов, что свидетельствует о снижении
уровня плотных контактов в клетках при атопическом дерматите. Нами небыло получено различий в исследуемых культурах по уровню экспрессии
Е-кадгерина, представляющего собой клеточный адгезионный белок. Таким
образом, можно сделать вывод о том, что при атопическом дерматите происходит сбой в эпителиальной дифференцировке, что впоследствии приводит к такому патологическому состоянию, как атопический дерматит.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия
*

461

ДНК-АПТАМЕРЫ К PRIMPOL ЧЕЛОВЕКАDNA APTAMERS TO HUMAN PRIMPOL

Я. Г. Калюжная, К. А. Бондаренко, Е. О. Болдинова, А. В. Макарова
Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт», Москва
Ya. G. Kaluzhnaya, K. A. Bondarenko, E. O. Boldinova, A. V. Makarova
National research Centre «Kurchatov Institute», Moscow
E-mail: amakarova-img@yandex.ruАннотация
Получены и охарактеризованы in vitro девять ДНК-аптамеров к PrimPol человека,ингибирующие ДНК-полимеразную и праймазную активности. Четыре ДНК-аптамера специфически ингибировали ДНК-праймазную активность.

Abstract
Nine DNA aptamers to human PrimPol were obtained and characterized in vitro. Allaptamers inhibited DNA polymerase and primase DNA-activities. Four DNA aptamers
specifically inhibited DNA primase activity.

DNA primase and human DNA polymerase PrimPol re-initiates replication
after various DNA lesions using primase activity. Many chemotherapy drugs block
the rapid division of tumor cells through DNA damage. Inhibiting PrimPol activity can increase the effectiveness of chemotherapy. One way to inhibit enzyme
activity is to use aptamers. Aptamers are oligonucleotide RNA or DNA molecules
selected from RNA/DNA libraries and specifically interact with target molecules.
Using the SELEX method, 9 inhibitory DNA aptamers to human PrimPol wereobtained. In vitro testing of the inhibition of DNA polymerase and DNA primase
activities of PrimPol by the obtained DNA aptamers was carried out. Five aptamers inhibited the DNA polymerase and DNA primase activities of the enzyme,
while four aptamers selectively inhibited the primase activity. The resulting aptamers did not inhibit human DNA polymerases Pol eta, Pol iota, Pol kappa, Polbeta, which indicates their specificity.
© Я. Г. Калюжная, К. А. Бондаренко, Е. О. Болдинова, А. В. Макарова, 2020*Исследование поддержано грантом РФФИ № 18-04-00777.

pаздел 4462АССОЦИАЦИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНАSIRT1rs12778366 С ВОЗРАСТНОЙ МАКУЛЯРНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИЕЙ
ASSOCIATION OF SIRT1rs12778366 GENE GENETIC POLYMORPHISM
WITH AGE-RELATED MACULAR DEGENERATION
Н. С. Карпова 1, О. П. Дмитренко 1, М. К. Нурбеков 1,
О. И. Абрамова 2, Л. К. Мошетова 2, К. И. Туркина 2
1Научно-исследовательский институт общей патологиии патофизиологии, Москва
2Российская медицинская академия непрерывного
профессионального образования, Москва
N. S. Karpova 1, O. P. Dmitrenko 1, M. K. Nurbekov 1,
O. I. Abramova 2, L. K. Moshetova 2, K. I. Turkina 2

1

2

Research Institute of Pathology and Pathophysiology, Moscow
Russian Medical Academy of Continuing Professional Education, Moscow
E-mail: nataliiakarpova.sp@gmail.com

АннотацияВ исследовании выявлены особенности в распределении частот аллелей и генотипов анализируемого полиморфного локуса rs12778366 в гене SIRT1, ассоциированные c риском развития BMД. Полученные данные свидетельствуют o необходимости дальнейшего изучения ассоциации полиморфного локуса rs12778366 с ВМДв российской популяции.

Abstract
There were peculiar features of the alleles and genotypes frequency and distribution in theanalyzed polymorphic locus rs12778366 in the SIRT1 gene, which are associated with the riskof АMD development. The data obtained indicate the need for further study of the associationof the polymorphic locus rs12778366 with AMD in representatives of the Russian FederationНаиболее распространенной причиной слепоты и слабовидения у пожилых людей является возрастная макулярная дегенерация (ВМД) — сложное
© Н. С. Карпова, О. П. Дмитренко, М. К. Нурбеков, О. И. Абрамова, Л. К. Мошетова, К. И. Туркина, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

463многофакторное состояние, включающее в себя множество генетических,экологических и конституциональных факторов и характеризующееся поражением макулярной зоны сетчатки. Причины возникновения и механизм
развития этого заболевания до настоящего времени в полной мере не выяснены, а изучение молекулярных механизмов развития ВМД затруднено
из-за отсутствия in vitro моделей, воспроизводящих особенности данного
заболевания, а имеющиеся модели in vivo не позволяют точно представить
характеристики ВМД [1].
Полиморфные варианты гена SIRT1, расположенного в области q21.3 10-йхромосомы и являющегося важным геном-кандидатом в инициировании
развития ассоциированных с возрастом заболеваний, мало изучены. Предварительный анализ, исходя из подхода к генетическому картированию,основанному на выборе гена-кандидата, позволил нам предположить, чтополиморфизм гена SIRT1 (rs12778366) может быть важной детерминантой
развития ВМД. Z.Chen и др. (2017) показали, что rs12778366 SIRT1 ассоциирован с ВМД у гомозиготных носителей минорного аллеля С в китайской
популяции Хaнь, Liutkeviciene R. и другие исследователи выявили близкую к статистически значимой ассоциацию rs12778366 с развитием ВМДв литовской популяции по аллелю С [2, 3]. Поэтому целью исследования
было изучение частотных характеристик генотипов и аллелей SNP пoлимoрфизмa rs12778366 в гeнe SIRT1 и выявление взаимосвязи с риском развития ВМД в российской популяции.
В исследовании использовалась геномная ДНК, выделенная методом фенол-хлороформной экстракции из образцов буккального эпителия 28 пациентов с ВМД и 22 человек без ВМД. Генотипирование полиморфного локуса
rs12778366 гена SIRT1 проводили методом ПЦР РВ с использованием технологии конкурирующих TaqMan-зондов.
По результатам исследования выявлена значительная ассоциация полиморфного локуса rs12778366 в гене SIRT1 с заболеванием у гомозиготных
носителей аллеля Т. Полученные нами данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего изучения ассоциации полиморфизма rs12778366 в генеSIRT1 с ВМД с параллельным исследованием других генетических вариаций
гена SIRT1, которые также могут оказывать влияние на развитие данной патологии.
Литература
1. Lim L. S., Mitchell P., Seddon J. M., Holz F. G., Wong T. Y. Age-related
macular degeneration // Lancet. 2012. Vol. 379 (9827). P. 1728–1738. doi: 10.1016/
S0140-6736(12)60282-7.

464pаздел 4

2. Chen Z., Zhai Y., Zhang W., Teng Y., Yao K.. Single Nucleotide Polymorphisms of the
Sirtuin 1 (SIRT1) Gene are Associated With age-Related Macular Degeneration in Chinese
Han Individuals: A Case-Control Pilot Study // Medicine (Baltimore). 2015. Vol. 94. e2238.
3. Liutkeviciene R., Vilkeviciute A., Kriauciuniene L. and Deltuva V. P. SIRT1 rs12778366,
FGFR2 rs2981582, STAT3 rs744166, LIPC rs10468017, rs493258 and LPL rs12678919 genotypes and haplotype evaluation in patients with age-related macular degeneration // Gene.
2019. Vol. 686. P. 8–15.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

465АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА MC1R ДЛЯ ОСОБЕЙ ВИДАSUS SCROFA С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ KASP *ANALYSIS OF MC1R GENE POLYMORPHISM
OF SUS SCROFA SPECIES WITH KASP TECHNOLOGIES
В. Н. Кипень 1, Е. В. Снытков 2, А. А. Кривенко 3, М. М. Патрин 31Институт Генетики и Цитологии НАН Беларуси,Минск, Республика Беларусь
2Международный государственный институт
им. А. Д. Сахарова БГУ, Минск, Республика Беларусь
3
OOO «МАКСИМ МЕДИКАЛ», пос. Архангельское

V. N. Kipen 1, E. V. Snytkov 2, A. A. Krivenko 3, M. M. Patrin 3
1

Institute of Genetics and Cytology NAS of Belarus, Minsk
2
International Sakharov Enviromental Instituteof Belarusian State University, Minsk
3
OOO «MAXIM MEDICAL», Arkhangelskoe
E-mail: v.kipen@igc.byАннотация
Проведены тесты на специфичность, чувствительность и робастность для генотипирования полиморфизма c.367G>A гена MC1R с использованием технологии
конкурентной аллель-специфической ПЦР (KASP).

Abstract
The paper presents the results of tests for specificity, sensitivity and robustness for genotyping the c.367G> A polymorphism of the MC1R gene using the technology of kompetitive allele-specific PCR (KASP).

© В. Н. Кипень, Е. В. Снытков, А. А. Кривенко, М. М. Патрин, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке OOO «МАКСИМ МЕДИКАЛ» (пос. Архангельское, Московская обл., Российская Федерация, e-mail: max@
maxmedikal.com).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

466

pаздел 4Введение
Задача по дифференциации дикого кабана (Sus scrofa scrofa) и домашней
свиньи (Sus scrofa domesticus) может быть решена с использованием анализа полиморфных вариантов генов MC1R, NR6A1 и HEPH. При использовании метода ПЦР-ПДРФ для получения результата требуется 6–7 часов.
Многостадийность процесса сопряжена к тому же с аккумуляцией ошибок.
Этих недостатков лишена технология KASP (Kompetitive allele specific PCR,LGC Biosearch Technologies) — необходимое время получения итогового
результата генотипирования в этом случае составляет до 2,5 часов в однустадию, при проведении дополнительной процедуры плавления ампликона
общее время анализа составит не более 3,5 часа.
Цель исследования — оценить применимость технологии KASP для генотипирования полиморфизма c.367G>A (MC1R, Chr.6:g.181818G>A) набиологических образцах особей домашней свиньи (DS) и дикого кабана (WB).
Материалы и методы
Определение генотипа осуществляли с использованием технологии,основанной на конкурентной аллель-специфической ПЦР (KASP). Генотипирование проводили с использованием KASP Assay mix (KASP by Design,
KBD) и KASP Master mix (LGC Biosearch Technologies, Великобритания;ООО «Максим Медикал», РФ) в двукратной повторности. ПЦР проводилив объеме 10 мкл в термоциклире CFX96 (Bio-Rad, США) согласно имеющимся рекомендациям по KASP.
Результаты теста на специфичность рассчитывались как FR (false rate)в % = (число несовпадений генотипов для технологий ПЦР-ПДРФ и KASP) /(число проведенных реакций ПЦР) ∙ 100. Чувствительность технологии
KASP применимо к исследуемым полиморфным вариантам выраженав виде предела концентрации ДНК (limit of detection, LOD) для корректного
обнаружения генотипа. Для определения нижнего предела детектируемого количества генетического материала в реакции ПЦР была использована
серия разведений ДНК для 9 образцов с известным генотипом. Диапазон
тестируемого количества ДНК в реакции ПЦР составил 1,0–50,0 нг/реакцию — концентрации 1,0 нг/мкл, 2,0 нг/мкл, 5,0 нг/мкл, 10 нг/мкл, 20 нг/мкл,50 нг/мкл. В тесте на робастность (устойчивость) использовали различный
объем ПЦР-смеси (7,5 мкл, 10,0 мкл и 12,5 мкл) и 2 протокола ПЦР, рекомендованных LGC Biosearch Technologies, с температурой отжига праймеров 57,0 °С — «65–57 °С touchdown protocol» и «2-Step 57 °С protocol» *.
*URL: https://biosearch-cdn.azureedge.net/assetsv6/KASP-thermal-cycling-conditions-all-protocols.pdf

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

467Основные результатыДля полиморфизма c.367G>A (MC1R) генотип AA был выявлен
в 56,25 % случаев (DS — 54), генотип AG — в 16,67 % (DS — 5, WB — 11),
GG — 27,08 % (DS — 10, WB — 16), см. рисунок. Cпецифичность составила
100 % — результаты генотипирования с использованием технологи ПЦРПДРФ и KASP совпали полностью. Минимальное достаточное количествоДНК для корректного определения генотипа составило не менее 1,0 нг/реакцию при 42 циклах амплификации, при 36 циклах амплификации (т. е.
при использовании только основного протокола, без доамплификации по
3 цикла) LOD = 5,0 нг/реакцию. В тесте на робастность (устойчивость) прииспользовании объема ПЦР-смеси 7,5, 10,0 или 12,5 мкл для двух протоколов ПЦР «65–57 °С touchdown protocol» и «2-Step 57 °С protocol» случаи
некорректного определения генотипа или отсутствие продуктов ПЦР невыявлены. Таким образом, для технологии KASP при генотипировании пополиморфизму c.367G>A (MC1R) показана высокая робастность.

График аллельной дискриминации результатов KASP (а); стадия плавления
ампликона (характеризует относительную специфичность ПЦР) (б);результаты HRM-анализа (в, г)468pаздел 4ВыводыДля технологии генотипирования KASP при генотипировании полиморфизма c.367G>A (MC1R) определены высокие показателями специфичности, чувствительности и робастности. На основании полученных результатов может быть разработана тест-система для дифференциации дикого
кабана (Sus scrofa scrofa) и домашней свиньи (Sus scrofa domesticus) с использованием технологии KASP.

Молекулярная биология
биологибиологияббиология

469

IN SILICO АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА H3GA0051811 ГЕНА HEPHДЛЯ ЖИВОТНЫХ ВИДА SUS SCROFAIN SILICO ANALYSIS OF H3GA0051811 POLYMORPHISM
IN HEPH GENE FOR ANIMAL SPECIES SUS SCROFA
В. Н. Кипень 1, Е. В. Снытков 2, А. А. Кривенко 3, М. М. Патрин 31Институт Генетики и Цитологии НАН Беларуси,Минск, Республика Беларусь
2Международный государственный институт
им. А. Д. Сахарова БГУ, Минск, Республика Беларусь
3
OOO «МАКСИМ МЕДИКАЛ», пос. Архангельское

V. N. Kipen 1, E. V. Snytkov 2, A. A. Krivenko 3, M. M. Patrin 3
1

Institute of Genetics and Cytology NAS of Belarus, Minsk
2
International Sakharov Enviromental Instituteof Belarusian State University, Minsk
3
OOO «MAXIM MEDICAL», Arkhangelskoe
E-mail: v.kipen@igc.byАннотацияС использованием биоинформатических подходов доказан высокий дифференцирующий потенциал полиморфизма H3GA0051811 (HEPH) для различения особей
дикого кабан и домашней свиньи.

Abstract
Using bioinformatics applications, we have proven the high potential of the
H3GA0051811 (HEPH) polymorphism for differentiation between wild boar and domestic pig.

ВведениеВ ряде работ дискутировались положительные стороны и недостатки ряда подходов, направленных на решение задачи по дифференциации
дикого кабана (Sus scrofa scrofa) и домашней свиньи (Sus scrofa domesticus).
© В. Н. Кипень, Е. В. Снытков, А. А. Кривенко, М. М. Патрин, 2020Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

470pаздел 4На основании пилотного биоинформатического анализа в гене HEPHнами были выявлены дополнительные полиморфные варианты с предположительно высоким дифференцирующим потенциалом. Однако молекулярно-генетический анализ некоторых из них невозможен классическим
методом ПЦР-ПДРФ. Данное затруднение может быть решено с использованием технологии KASP (Kompetitive allele specific PCR, LGC BiosearchTechnologies), с применением которой возможны разработка и создание
полуколичественных тест-систем с использованием приборов Real-time
PCR в одну стадию.
Цель и задачи
Оценить частоту распространенности полиморфизма H3GA0051811 (генHEPH) среди особей вида Sus scrofa с использованием методов биоинформатики (определение генотипа in silico) на основании данных SRA *. На основании полученных результатов охарактеризовать предсказательный потенциал данного полиморфизма для дифференциации особей Sus scrofa scrofa(дикий кабан) и Sus scrofa domesticus (домашняя свинья).
Материалы и методы
В NCBI (National Center for Biotechnology Information) имеются геномыв формате SRA (проанализировано 32 проекта) для 406 особей вида Sus
scrofa: PRJEB35180, PRJEB37956, PRJEB9326, PRJEB9922, PRJNA186497,
PRJNA213179, PRJNA221763, PRJNA231897, PRJNA238851, PRJNA239399,
PRJNA255085, PRJNA260763, PRJNA281548, PRJNA305081, PRJNA309108,
PRJNA314580, PRJNA320525, PRJNA322309, PRJNA343658, PRJNA354435,
PRJNA378496, PRJNA418771, PRJNA478804, PRJNA485589, PRJNA488327,
PRJNA506339, PRJNA507853, PRJNA524263, PRJNA550237, PRJNA553106,
PRJNA622908 и PRJNA626370. Генотипы in silico для животных определялис использованием онлайн-алгоритма SRA-Blast (файлы в формате *.sam)и программы Unipro UGENE v.35.1. Определение генотипа для полиморфизма H3GA0051811 (ген HEPH) с использованием алгоритма BLAST былопроведено для 283 особей вида Sus scrofa, с покрытием в интересующем полиморфизме ≥5х. Для автоматизации процесса поиска, скачивания файловв формате *.sam, а также пакетного определения генотипа для первичного
анализа применяли скрипт на языке Python 3 с использованием дистрибутива языков программирования Anaconda. Дифференцирующий потенциал полиморфизма определяли с использованием ROC-анализа в SPSS v.20.0.
При наличии нижней границы асимптотического 95 % доверительного ин*

URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

471

тервала более 0,8 для параметра AUC (площадь под кривой) полиморфизм
позиционировался как генетический маркер с высоким дифференцирующим потенциалом.
Основные результатыДля полиморфизма H3GA0051811 (ген HEPH) для 7 (1,72 %) животных
вида Sus scrofa был выявлен генотип СС, для 2 (0,49 %) животных — генотип
CT, для 397 (97,79 %) животных — генотип TT.

Полиморфизм H3GA0051811 (ген HEPH) расположен на X-хромосоме.
В сборке генома вида Sus scrofa — Sscrofa11.1 (RefSeq GCF_000003025.6)
от 2017/02/07 — хромосомная позиция полиморфизма H3GA0051811 —Chr.X: g.52331447T>C. Данный полиморфизм находится в непосредственной близости от полиморфизма H3GA0051814 (ген HEPH) —Chr.X: g.53901464T>C, — дифференцирующий потенциал которого былпродемонстрирован нами ранее. Расстояние между полиморфизмами оценивается в 1 570 017 п. н., они расположены в пределах одного гена HEPH
(hephaestin, NCBI Gene ID: 100512938) и, соответственно, наследуются совместно — вероятность кроссинговера можно оценить предположительно
в 1,5 %.
По результатам ROC-анализа для определения дифференцирующего
потенциала полиморфизма H3GA0051811 (ген HEPH) значение параметра
AUC = 0,995 (95 % ДИ = [0,986–1,0]).

472pаздел 4Выводы
Таким образом, по результатам биоинформатического и статистического анализа показано, что для полиморфизма H3GA0051811 (ген HEPH) выявлен значительный дифференцирующий потенциал для различения особей Sus scrofa scrofa (дикий кабан) и Sus scrofa domesticus (домашняя свинья)между собой. Значимость данного полиморфизма для решения задачи дифференциации в пределах вида Sus scrofa сопоставима с потенциалом полиморфизма H3GA0051814 (ген HEPH). С использованием технологии KASPбудет проведено генотипирования особей вида Sus scrofa для проверки данного заключения на практике (in vitro).

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

473ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ ЛИПИДА А И ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ
СВОЙСТВ ЛИПОПОЛИСАХАРИДА RICKETTSIA SIBIRICA
STUDY OF THE STRUCTURE OF LIPID A AND PRO-INFLAMMATORYPROPERTIES OF LIPOPOLYSACCHARIDE OF RICKETTSIA SIBIRICA
А. В. Кондратьев, А. В. Костарной, П. Г. Ганчева,М. В. Соколова, П. В. Метальников
Национальный исследовательский центр эпидемиологиии микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи Минздрава России, Москва
A. V. Kondratiev, A. V. Kostarnoy, P. G. Gancheva,
M. V. Sokolova, P. V. Metalnikov
The National Research Center for Epidemiology and Microbiology
named after N. F. Gamaleya, Moscow
E-mail: raykes4@gmail.com
Аннотация
Впервые определена структура липида А Rickettsia sibirсica методами масс-спектрометрии. Изучена способность липополисахарида Rickettsia sibirсica индуцировать провоспалительный ответ в культуре эндотелиальных клеток мозга. Показано,что структура липида А, в частности распределение ацильных радикалов, схожас классической структурой липида А E. сoli, что проявляется в практически одинаковой способности ЛПС Rickettsia sibirсica и E. сoli индуцировать секреции медиаторов воспаления.

Abstract
The structure of lipid A of Rickettsia sibirsica was determined for the first time via mass
spectrometry. The ability of Rickettsia sibirica lipopolysaccharide to induce a pro-inflammatory response in a culture of brain endothelial cells was evaluated. It has been shownthat the structure of lipid A, in particular, the distribution of acyl radicals, is similar to theclassical structure of lipid A in E. coli: both LPS from Rickettsia sibirsica and E. coli have an
equal properties to induce the secretion of inflammatory mediators.

Rickettsia sibirica относится к риккетсиям группы клещевых пятнистых
© А. В. Кондратьев, А. В. Костарной, П. Г. Ганчева, М. В. Соколова, П. В. Метальников, 2020

474pаздел 4лихорадок (КПЛ) и является возбудителем сибирского клещевого риккетсиоза (сибирского клещевого тифа). В основе патогенеза риккетсиозов КПЛлежит паразитирование риккетсий в эндотелии сосудов с развитием воспалительных изменений. Бактериальный липополисахарид (ЛПС) — один изфакторов патогенности Rickettsia sibirica. К настоящему времени считается
доказанным, что биологическая активность бактериальных липополисахаридов обусловлена структурой липида А.
Цель работы — изучить структуру липида А и способность липополисахарида Rickettsia sibirсica индуцировать провоспалительный ответ посравнению с липополисахаридом E. coli. Структура и степень ацилирования липида А была определена методом MALDI-масс-спектрометрии.
В дополнительной серии экспериментов структура жирнокислотных
остатков была уточнена с использованием газо-жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Полученные данные
выявили значительное структурное сходство расшифрованной структурой липида А Rickettsia sibirica с классической структурой липида А энтеробактерий E. сoli.
Учитывая тропность Rickettsia sibirica к эндотелию, в качестве модельной системы in vitro для изучения провоспалительной активности ЛПСбыла выбрана культутра мозговых эндотелиальных клеток. После стимуляции ЛПС Rickettsia sibirica и ЛПС E. сoli (Sigma), в супернатантах былаопределена концентрация цитокинов, хемокинов и факторов роста с помощью мультиплексного анализа. Зафиксировано увеличение экспрессии
следующих цитокинов, хемокинов и факторов роста в ответ на добавление
ЛПС Rickettsia sibirica: IL-6, TNF-а, IL-9, IL-1a, LIX, IP-10, KC, MCP-1, MIP-2,
RANTES, G-CSF. Уровень секреции указанных медиаторов воспаления, индуцированный ЛПС Rickettsia sibirica статистически значимо не отличалсяот уровня секреции, индуцированном ЛПС E. сoli. Полученные данные коррелируют с результатами анализа структуры липида А, показавшего высокую степень сходства липида А Rickettsia sibirica и E. coli.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

475СИНИЙ ХРОМОБЕЛОК ИЗ МЕДУЗЫ RHIZOSTOMA PULMO:ОЧИСТКА, СВОЙСТВА И ПОДБОР УСЛОВИЙ КРИСТАЛЛИЗАЦИИ *THE BLUE CHROMOPROTEIN FROM JELLYFISH RHIZOSTOMAPULMO: PURIFICATION, PROPERTIES AND CONDITIONS FOR
CRYSTALLIZATION
Е. С. Корунова 1,2, А. Ю. Гороховатский 1, Т. В. Чепурных 1,
Р. Х. Зиганшин 1, А. С. Царькова 1, Ю. А. Мокрушина 1, И. В. Ямпольский 1
1Институт биоорганической химии
им. академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва
2Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова
E. S. Korunova 1,2, A. u. Gorokhovatsky 1, T. V. Chepurnykh 1,
R. Kh. Ziganshin 1, Yu. A. Mokrushina 1, A. S. Tsarkova 1, I. V. Yampolsky 1
1

Shemyakin — Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Moscow
2
Lomonosov Moscow State University
E-mail: elizavetakorunova8@gmail.com

Аннотация
Синяя окраска медузы Rhizostoma pulmo обусловлена хромобелком rpulFKz1.
Хромобелок имеет спектр поглощения с максимумами 420, 588 и 624 нм. Электрофоретическая подвижность выделенного белка в денатурирующих условиях соответствует 32 kDa. Разработан метод очистки белка и подобраны условия кристаллизации.

Abstract
The blue color of jellyfish Rhizostoma pulmo is caused by a chromoprotein rpulFKz1 withthe maxima at 420, 588 and 624 nm of an absorption spectrum. The electrophoretic mobility of the purified unfolded protein corresponded to 32 kDa. A method for purification andcrystallization of rpulFKz1 from R. pulmo was developed.
© Е. С. Корунова, А. Ю. Гороховатский, Т. В. Чепурных, Р. Х. Зиганшин,А. С. Царькова, Ю. А. Мокрушина, И. В. Ямпольский, 2020*Работа поддержана грантом Президента Российской Федерации для государственной поддержки ведущих научных школ Российской Федерации НШ2605.2020.4.

476pаздел 4Морские беспозвоночные демонстрируют широкий спектр окрасок,о химии которых до последнего времени было известно мало. Часто окраска
обусловливается хромобелком — комплексом апо-белка и связанного с нимкофактора. Ранее было показано, что синяя окраска медузы Rhizostoma pulmo обусловлена хромобелком rpulFKz1. Последовательность этого белка
имеет гомологию с цистеин-обогащенным доменом Frizzled и с Kringle-доменом *. Однако природа хромопротеина остается неизвестной.
Целью данной работы явилось получение rpulFKz1 в чистом виде, пригодном для структурных исследований, в частности для рентгеноструктурного анализа. Была разработана методика очистки rpulFKz1 из природного
источника, медузы R. pulmo, включающая в себя ступенчатое осаждение
сульфатом аммония, ионообменную и гель-фильтрационную хроматографии. Хромобелок характеризуется спектром поглощения с максимумами
при 420, 588 и 624 нм. Электрофоретическая подвижность выделенного белка в денатурирующих условиях соответствует 32 kDa. Обработка в геле белковой полосы rpulFKz1 периодатом и реактивом Шиффа дает характерное
окрашивание и указывает на то, что этот белок является гликопротеином.
Подвижность rpulFKz1 в условиях гель-фильтрации соответствует динамическому равновесию между мономерной и димерной формами хромобелка,с преобладанием димерной формы. Плавление rpulFKz1 в различных буферных растворах в присутствии флуоресцентного красителя Sypro Orangeпозволило определить диапазон условий, обеспечивающих наибольшую
стабильность белка. Найденные условия были использованы при кристаллизации белка rpulFKz1.

*
Bulina M. E., Lukyanov K. A., Yampolsky I. V., Chudakov D. M., Staroverov D. B.,
Shcheglov A. S., Gurskaya N. G., Lukyanov S. New Class of Blue Animal Pigments Basedon Frizzled and Kringle Protein Domains // The Journal of Biological Chemistry. 2004,
Vol. 279 (№ 45). P. 43367–43370.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

477ВЛИЯНИЕ УРОВНЯ PARP1 НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ
ЭКСЦИЗИОННОЙ РЕПАРАЦИИ ОСНОВАНИЙВ КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА *INFLUENCE OF PARP1 LEVEL ON BASE EXCISION REPAIR
EFFICIENCY IN HUMAN CELLS
А. С. Кочеткова 1,2, Е. С. Ильина 1,2, С. Н. Ходырева 1, О. И. Лаврик 1,2
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
A. S. Kochetkova 1,2, E. S. Ilina 1,2, S. N. Khodyreva 1, O. I. Lavric 1,2
1Institute of Сhemical Biology
and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk, Russia
2
Novosibirsk State University
E-mail: Kochetkovaalina96@gmail.com
Аннотация
Эксцизионная репарация оснований (ЭРО) — механизм, направленный на исправление одной из самых многочисленных групп повреждений структуры ДНК —модифицированных азотистых оснований. Важным регуляторным белком ЭРОявляется поли(АДФ-рибоза)полимераза 1 (PARP1), функция которой заключаетсяв поиске повреждений ДНК и инициировании сборки комплекса для их устранения. Для изучения роли PARP1 в регуляции ЭРО на экстрактах РНК и белков изклеточных линий HEK-293T с различным уровнем PARP1 мы исследовали зависимость экспрессии генов, кодирующих ряд ключевых белков ЭРО от экспрессии генаPARP1 и сравнили эффективности функционирования этих белков на ключевых
стадиях ЭРО.

Abstract
Base excision repair (BER) is a cellular mechanism aimed at correcting one of the mostnumerous groups of DNA structure damage — modified nucleobases. An important regulatory BER protein is a poly(ADP-ribose)polymerase 1 (PARP1), its function is to search
for DNA lesions and initiate the assembly of a complex for their correction. We used RNA© А. С. Кочеткова, Е. С. Ильина, С. Н. Ходырева, О. И. Лаврик, 2020*Работа поддержана грантом РФФИ № 17-00-00097.

478pаздел 4

and protein extracts from HEK-293T cell lines with different PARP1 levels for research
the dependence of expression of genes encoding some BER proteins on PARP1 expression
and comparing these proteins efficiency on key BER steps. The study will be necessary tounderstanding of the crucial role of PARP1 in BER.

ДНК незаменима и уникальна, сохранение стабильности ее структуры
имеет важное значение для жизнедеятельности организма и предотвращения развития различных заболеваний, в том числе онкологических. Заподдержание целостности генома отвечают системы репарации, обеспечивающие исправление различных повреждений в структуре ДНК. Система
эксцизионной репарации оснований (ЭРО) исправляет наиболее распространенные повреждения структуры ДНК — химически модифицированные азотистые основания. Считается, что для увеличения эффективностии ускорения репарационного процесса необходимы белки-регуляторы.
В случае ЭРО одним из таких белков является поли(АДФ-рибоза)полимераза 1 (PARP1), которая выступает в роли «сенсора» повреждений и инициирует запуск репаративных процессов в клетке путем привлечения белков-участников репарации к сайту повреждения посредством посттрансляционной модификации ядерных белков поли(AДФ)рибозой (PAR).
В данной работе мы изучали возможное влияние изменения уровня PARP1 в клетке на координацию работы и активность некоторых белков ЭРО, а также на экспрессию генов, которые их кодируют. В связис этим нами были выбраны клеточные линии с различным содержанием
PARP1: HEK-293T и HEK-293T-P1− (со сниженным содержанием PARP1);
HEK-293FT и HEK-293FT-P1−/− (с нокаутом по PARP1), из которых выделяли тотальную РНК и получали белковые экстракты. Мы также поставили
задачу оценить влияние окислительного стресса на статус ЭРО. Для этого
клетки HEK-293T и HEK-293T-P1− помещали в среду с 1 мМ H2O2 и через 2 ч
и 18 ч клетки собирали и выделяли экстракты белков.
В клетках с нокдауном и нокаутом по РARP1 по результатам ОТ-кПЦРдля генов РARP1, PARP2, UNG, APEX1, Polb было показано изменение в уровне мPHК этих генов. С помощью функциональных тестов с использованием 32P-меченых ДНК-дуплексов, моделирующих различные интермедиаты
ЭРО, и белковых экстрактов с различным уровнем PARP1 показано влияние PARP1 на эффективность синтеза PAR, удаление урацила, процессинг
апуринового/апиримидинового сайта и ДНК-полимеразную активность.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

479

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ХЛОРИДА КАДМИЯНА ФРАГМЕНТАЦИЮ ДНК ЛЕЙКОЦИТОВ КРЫСESTIMATION OF THE INFLUENCE OF CADMIUM CHLORIDEON DNA FRAGMENTATION OF RAT LEUKOCYTES
Е. Р. Кудояров, Д. Д. Каримов, Д. О. Каримов,Н. Ю. Хуснутдинова, С. С. Байгильдин, А. С. Фазлыева
Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека
E. R. Kudoyarov, D. D. Karimov, D. O. Karimov,
N. Yu. Khusnutdinova, S. S. Baigil’din, A. S. Fazlyeva
Ufa Scientific Research Institute of Occupational Health and Human Ecology
E-mail: e.kudoyarov@yandex.ruАннотация
Пероральное введение хлорида кадмия в организм крыс привело к статистически значимому повышению уровня фрагментации ДНК в лейкоцитах крови по сравнению с контрольными животными.

Abstract
Oral administration of cadmium chloride to rats led to a statistically significant increasein the level of DNA fragmentation in blood leukocytes, compared with control animals.

Кадмий и его соединения относятся к одной из 10 групп химических
веществ, вызывающих озабоченность в области общественного здравоохранения по данным Всемирной организации здравоохранения. Главной
областью применения кадмия являются химические источники тока, которые имеют широкое практическое применение. Это обуславливает распространение кадмия в антропогенных ландшафтах и высокую вероятность
кумуляции в продуктах питания. Кадмий является токсичным соединением с доказанной канцерогенностью (относится к I группе веществ поклассификации МАИР).
© Е. Р. Кудояров, Д. Д. Каримов, Д. О. Каримов, Н. Ю. Хуснутдинова, С. С. Байгильдин, А. С. Фазлыева, 2020

480pаздел 4Цель исследования — оценить влияние перорального введения раствора хлорида кадмия на фрагментацию ДНК лейкоцитов аутбредных белых
крыс. Работы по содержанию и затравке крыс проводили с соблюдением общепринятых этических правил и принципов, изложенных в рекомендациях
комитета по экспериментальной работе с использованием животных приМинистерстве здравоохранения Российской Федерации, рекомендацияхВОЗ и Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (ETS № 123; 1986 г.).
Экспериментальное научное исследование выполнено на 15 крысах-самцах массой 220–240 г. Животным из контрольной группы (n = 5) вводили
дистиллированную воду per os. Остальные животные (n = 10) были распределены по 5 особей на 2 группы в соответствии с полученной ими однократной дозой хлорида кадмия (1000 или 10000 мг/кг). Выведение животных изэксперимента с последующим отбором крови проведено на 5-е сутки (через
96 часов). После этого из 2 мл крови были выделены лейкоциты центрифугированием в градиенте фиколла (5 мин, 400 g). Для исследования фрагментации ДНК-клеток использовали метод электрофореза одиночных клетокв агарозном геле (ДНК-«комет») в модификации Singh и др. (1988). Микропрепараты ДНК-«комет» окрашивали флуоресцентным красителем SYBRGreen I, исследовали под микроскопом Zeiss Axio Imager.D2 (увеличение
100х) и фотографировали на камеру AxioCam MRc5. Определение содержания ДНК в хвосте комет (%) проводили в программе ImageJ 1.48 (Wayne
Rasband). Для сравнения групп рассчитывали H-критерий Краскела — Уоллиса и U-критерий Манна — Уитни в программе SPSS Statistics 21.
Доли ДНК в хвосте «комет» во всех трех группах значимо различались
друг от друга (H = 30,592, p < 0,001). Процентная доля ДНК в хвосте «комет»контрольных животных составила 3,41 ± 0,36 %. После однократной затравки раствором хлорида кадмия в дозе 1000 мг/кг доля ДНК в хвосте «комет»равна 6,13 ± 0,77 %, что выше, чем в контрольной группе (U = 7353, p = 0,004).
После введения крысам хлорида кадмия в дозе 10000 мг/кг доля ДНК в хвосте
«комет» равна 7,77 ± 0,62 % (выше значений в контрольной группе, U = 10514,
p < 0,001). Различия между группами животных, получивших хлорид кадмия,по процентной доле ДНК в хвосте «комет» оказались статистически значимыми (U = 16805, p = 0,022). Средняя доля «комет» с количеством ДНК в хвосте
более 10 % у контрольных животных составила 107,2 ‰, при затравке хлоридом кадмия в дозах 1000 и 10000 мг/кг — 266,3 и 379,1 ‰ соответственно.
Таким образом, повышение фрагментации ДНК в лейкоцитах животных
на 5-е сутки при однократном поступлении per os хлорида кадмия в дозах
1000 и 10000 мг/кг может свидетельствовать о необратимом характере повреждений структуры ДНК.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

481

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И ОЦЕНКИ ПРОГНОЗАПРИ МДС НА ОСНОВЕ СОМАТИЧЕСКИХ МУТАЦИЙВ ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕГУЛЯТОРАХ
TEST-SYSTEM FOR DIAGNOSTICS AND EVALUATIONOF PROGNOSIS AT MDS BASED ON SOMATIC MUTATIONSIN EPIGENETIC REGULATORS
Е. Д. Кулаева 1, П. В. Липилкин 212Южный федеральный университет, Ростов-на-ДонуРоссийский национальный исследовательский медицинский университет
им. Н. И. Пирогова, Москва
E. D. Kulaeva 1, P.V. Lipilkin 2
1

2Southern Federal University, Rostov-on-Don
Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow
E-mail: ekulaeva@sfedu.ruАннотация
Разработка дизайна тест-системы для диагностики и прогноза МДС на основе
анализа распространенных соматических мутаций в генах DNMT3A и ASXL1.

Abstract
Development of a test system design for diagnostics and prognosis of MDS based on
analysis of common somatic mutations in DNMT3A and ASXL1 genes.

Миелодиспластический синдром (МДС) — гетерогенная группа клональных заболеваний системы крови, возникающих вследствие мутации
гемопоэтической стволовой клетки и характеризующихся высоким риском
трансформации в острый лейкоз. Минусом существующих тест-систем длядиагностики МДС является отсутствие их явной клинической значимости.
Мы сосредоточились на создании тест-системы на основе соматических
мутаций в эпигенетических регуляторах ASXL1 и DNMT3A, для которыхуже определена частота встречаемости и прогностическая значимость
(см. рисунок).
© Е. Д. Кулаева, П. В. Липилкин, 2020

482pаздел 4

ASXL1 — белок группы Polycomb, регулирующий деубиквитинирование
гистона H2A. Мутации в ASXL1 часто выявляются у пациентов с риском
развития МДС и способствуют миелоидной трансформации. В тест-систему будет включена часто встречающаяся соматическая мутация c.1934dupG,анализируемая с помощью RT-PCR.
DNMT3A (ДНК-метилтрансфераза 3А), обеспечивает de novo метилирование. Соматические мутации в DNMT3A регистрируются в 20–30 % случаев МДС и могут быть фактором развития ОМЛ. Одной из самых частых
соматических мутаций в данном гене является замена 2645G>A в 23 экзоне,приводящая к нарушению функции белка, которая будет проанализированав тест-системе с помощью рестрикционного анализа экзона.
Ожидаемыми результатами работы будет являться создание тест-системы, сочетающей в себе диагностические и прогностические функции приМДС.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

483ОЦЕНКА УРОВНЯ РАЗЛИЧНЫХ МИКРОРНКНА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭКЗОСОМ ИЗ МОЛОКА *THE CONTENT OF MICRO RNA IN DIFFERENT MILK EXOSOMEISOLATION STAGES
А. Е. Кулешова 1, Л. В. Пурвиньш 2, Е. Е. Буркова 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
A. E. Kuleshova 1, L. V. Purvinsh 2, E. E. Burkova 1
1

Institute of Сhemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
E-mail: kuleshova@niboch.nsc.ruАннотация

Экзосомы осуществляют межклеточную коммуникацию путем переноса нуклеиновых кислот. Экзосомы молока доступны в промышленных масштабах, поэтомуони являются перспективными средствами направленной доставки лекарственных
препаратов. Определено абсолютное количество 20 различных микроРНК в разных
фракциях молока, а также описаны специфические паттерны их экспрессии.

Abstract
Exosomes carry out intercellular communication by transferring nucleic acids. Milk
exosomes are available on an industrial scale, so they are promising vehicles for targeted
drug delivery. The absolute number of 20 different microRNAs in different milk fractions,
including exosomal, was determined, and specific patterns of their expression described.

Экзосомы — нановезикулы, содержащиеся в различных биологических жидкостях и принимающие участие в межклеточной коммуникации.
Известно, что экзосомы молока содержат различные нуклеиновые кислоты, в частности микроРНК и мРНК. Среди всех биологических жидкостей,содержащих экзосомы, молоко является единственной, доступной в про© А. Е. Кулешова, Л. В. Пурвиньш, Е. Е. Буркова, 2020*Работа поддержана грантом РНФ 18-74-10055.

484pаздел 4мышленных масштабах. В связи с этим экзосомы молока являются перспективными кандидатами для адресной доставки лекарственных препаратов.
Анализ нуклеиновых кислот, содержащихся в экзосомах молока, является
актуальной задачей.
Для выделения экзосом из молока использовали протокол, который
включал в себя несколько стадий центрифугирования, ультрафильтрацию,ультрацентрифугирование и гель-фильтрацию.
Во фракциях молока, полученных на различных этапах выделения экзосом (жир, творожистый осадок, осадок и супернатант после ультрацентрифугирования, препарат после гель-фильтрации) определили абсолютное
количество 20 различных микроРНК. Для данных микроРНК определены
специфические паттерны относительной экспрессии в каждой из анализируемых фракций.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

485ВЛИЯНИЕ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ CRISPR РНКНА ЭФФЕКТИВНОСТЬ СИСТЕМЫ ГЕНОМНОГО
РЕДАКТИРОВАНИЯ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СОЧЕТАНИИС БЕЛКАМИ CAS9 ПОВЫШЕННОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ *EFFECT OF CRISPR RNA CHEMICAL MODIFICATIONSON THE EFFICIENCY OF GENOME EDITING SYSTEM AND THEIR USE
IN COMBINATION WITH HIGH-SPECIFIC MUTANT CAS9 PROTEINS
Н. А. Логвина 1, Е. А. Хабардина 1, Д. А. Стеценко 2, Т. С. Зацепин 1
1Сколковский институт науки и технологий, Сколково
2Новосибирский государственный университет

N. A. Logvina 1, E. A. Khabardina 1, D. A. Stetsenko 2, T. S. Zatsepin 1
1

Skolkovo Institute of Science and Technology, Skolkovo
2
Novosibirsk State University
E-mail: n.logvina@skoltech.ruАннотация

Введение химических модификаций РНК для геномного редактирования с помощью белка Cas9 позволяет улучшить характеристики системы, что необходимодля последующего применения в биомедицине. Новые модификации фосфатных
остатков обладают меньшей токсичностью, повышают стабильность РНК и эффективность разрезания ДНК комплексом CRISPR-Cas9. Производительность комплексов модифицированных РНК с высокоспецифичными белками HiFi и sniper Cas9отличается от комплексов с белком дикого типа благодаря интерференции между
изменением свойств РНК и влиянием аминокислотных замен на конформационные
переходы в комплексе.

Abstract
The use of chemical modifications of RNA for Cas9-mediated genome editing improves the characteristics of the system, which is necessary for subsequent use in biomedicine. New modifications of phosphate residues are less toxic, increase the stability of
RNA and the efficiency of DNA cleavage by the CRISPR-Cas9 complex. The novel RNA© Н. А. Логвина, Е. А. Хабардина, Д. А. Стеценко, Т. С. Зацепин, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного
проекта №19-04-00298.

486pаздел 4

modifications studied here affect the performance of the highly specific HiFi and sniper
Cas9 proteins due to the interference of their effects on the RNP structure.

Редактирование генома является мощным инструментом как для лечения различных заболеваний, так и для научных исследований. Наиболее популярной системой геномного редактирования сегодня является комплексCRISPR-Cas9, однако для рутинного использования необходимо повышение специфичности и эффективности системы. Для решения этой проблемы возможно как использование мутантных белков Cas9, обладающих
большей специфичностью, так и внесение химических модификаций в химически синтезируемые РНК. Нами предложены и новые, ранее не использовавшиеся для этой цели химические модификации РНК, которые былипротестированы в комбинации с уже известными паттернами. Были выявлены участки РНК, внедрение в которые данных модификаций повышает
эффективность системы CRISPR-Cas9. Комбинация химически модифицированных РНК с мутантными высокоточными белками Cas9 позволяет
повысить не только эффективность, но и точность редактирования генома.
Мы впервые проанализировали как «взаимодействуют» мутации в белкес модификациями РНК. Отличия в производительности комплексов Cas9дикого типа и с белками Hifi1 или sniper-Cas92 свидетельствуют о том, чтоэффекты от аминокислотных замен и модификаций в РНК не суммируются,но вызывают сложные изменения в работе комплекса, которые могут бытьобъяснены изменениями в его структуре.
Литература
1. Vakulskas C. A. et al. A high-fidelity Cas9 mutant delivered as a ribonucleoprotein complex enables efficient gene editing in human hematopoietic stemand progenitor cells // Nature Medicine. 2018. Vol. 24 (8). P. 1216–1224. doi.
org/10.1038/s41591-018-0137-0.
2. Lee J. K. et al. Directed evolution of CRISPR-Cas9 to increase its specificity // Nature Communications. 2018. Vol. 9 (1). P. 3048. doi.org/10.1038/s41467018-05477-x.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

487АНАЛИЗ КОДИРУЮЩИХ ОБЛАСТЕЙ ГЕНА BRCA1В ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ *ANALYSIS OF BRCA1 CODING REGIONS IN BREAST CANCER TUMOR
Е. А. Луцкая 2, А. М. Певзнер 1,2, Д. С. Долгашева 1,2,
М. К. Ибрагимова 1, М. М. Цыганов 1
1Научно-исследовательский институт онкологии Томского национального
исследовательского медицинского центра РАН
2Томский государственный университет
E. A. Lutskaya 2, A. M. Pevzner 1,2, D. S. Dolgasheva 1,2,
M. K. Ibragimova 1, M. M. Tsyganov 1
1

Research Institute of Oncology, Tomsk National Research Medical Centerof the Russian Academy of Sciences
2
National Research Tomsk State University
E-mail: lizalutzk@gmail.com

АннотацияВ наших предыдущих исследованиях было показано, что дефицит гена BRCA1, обусловленный такими изменениями в опухоли, как низкая экспрессия, наличие делеции и потеря гетерозиготности, может быть связан с эффектом химиотерапии и прогнозом заболевания. Однако даже при отсутствии этих факторов эффективность
терапии вариабельна. Определение других маркеров позволит более точно разрабатывать стратегию персонализированного лечения каждого конкретного пациента.

Abstract
In our previous researches it was found that BRCA1 gene deficiency caused by suchfactors as low expression levels, gene deletion or loss of heterozygosity may be associatedwith chemotherapy outcome and disease prognosis. However even in the absence of thesefactors therapy effectiveness may vary. Recognition of other markers would help develop
a strategy for personalized therapy for each patient.

© Е. А. Луцкая, А. М. Певзнер, Д. С. Долгашева, М. К. Ибрагимова, М. М. Цыганов, 2020*Работа поддержана грантом РНФ № 19-75-00027.

488

pаздел 4Материал и методыВ исследование было включено 15 больных с люминальным В РМЖ IIA–IIIB стадии. В качестве материалов были использованы операционные образцы опухолевой и нормальной тканей, из которых выделяли ДНК с помощью набора QIAamp DNA mini Kit (Qiagen, Germany). Оценку мутаций генаBRCA1 в опухоли и крови пациентов проводили при помощи секвенирования на приборе MiSeq™ Sequencing System (Illumina, USA) с использованием
панели Accel-Amplicon BRCA1, BRCA2, and PALB2 Panel (Swift Biosciences,
USA). Подготовка библиотек опухолевой ДНК и ДНК крови пациента производилась при помощи набора Swift Normalase KIT (Swift Biosciences, USA).
Обработка данных проводилась с помощью пайплайна GATK, генетические
варианты, обнаруженные в образцах опухолевой ткани молочной железы,аннотировали с помощью инструмента ANNOVAR.
РезультатыВ результате исследования установлено, что отсутствие соматических мутаций в гене BRCA1 ассоциировано с хорошим ответом на терапию таксотером в предоперационном периоде. Герминальные мутации
BRCA1:c.4837A>G (p.Ser1613Gly), c.999T>C (p.Ser333=), c.3548A>G (p.Lys1183Arg), c.3113A>G (p.Glu1038Gly), c.2612C>T (p.Pro871Leu), c.2311T>C(p.Leu771=), c.2082C>T (p.Ser694=) связаны с плохим ответом на НХТ таксотером, при отсутствии этих мутаций у пациентов отмечается эффект более
80 %. Появление пяти новых мутаций BRCA1 в опухоли под действием НХТнаблюдается у 13 % больных и это сопряжено с плохим ответом на НХТ таксотером. При назначении таксотера имеет смысл учитывать соматическиеи эти герминальные мутации гена BRCA1.
Заключение
Таким образом, более комплексная оценка изменений в гене BRCA1поможет в более точном назначении персонализированной химиотерапии,позволит улучшить показатели выживаемости и прогноза заболевания.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

489

ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МИКРОСПОРИДИЙ
ГОЛАРКТИЧЕСКОГО ВИДА АМФИПОД GAMMARUS LACUSTRISИЗ ВОДОЕМОВ БАЙКАЛЬСКОГО РЕГИОНА *GENETIC DIVERSITY OF MICROSPORIDIAN PARASITES
OF A HOLARCTIC AMPHIPOD GAMMARUS LACUSTRISFROM THE BAIKAL REGION
Е. В. Мадьярова, П. Б. Дроздова, М. Д. Димова, А. Н. Гурков,К. П. Верещагина, Р. В. Адельшин, М. А. Тимофеев
Иркутский государственный университет
E. V. Madyarova, P. B. Drozdova, M. D. Dimova, A. N. Gurkov,
K. P. Vereshchagina, R. V. Adelshin, M. A. Timofeyev
Irkutsk State Universiry
E-mail: madyarovae@gmail.com
АннотацияМы исследовали микроспоридий, паразитирующих на виде амфипод Gammarus
lacustris, который населяет водоемы байкальского региона (кроме озера Байкал)и другие водоемов Голарктики. Анализ данных секвенирования малой субъединицы рибосомной ДНК (мсрДНК) и транскриптомов Gammarus lacustris из различных
мест обитания показал, что этот вид преимущественно инфицирован представителями рода Dictyocoela.

Abstract
The goal of our work was to investigate the microsporidian parasites of a Holarctic
amphipod species Gammarus lacustris in water bodies in the Lake Baikal region and otherwater bodies of the Holarctic. With SSU rDNA and transcriptome sequencing data, wefound that the genus Dictyocoela is dominant in Gammarus lacustris.

© Е. В. Мадьярова, П. Б. Дроздова, М. Д. Димова, А. Н. Гурков, К. П. Верещагина,Р. В. Адельшин, М. А. Тимофеев, 2020*Исследование поддержано совместным грантом РНФ и ассоциации им. Гельмгольца № 18-44-06201.

490

pаздел 4Одними из уникальных представителей паразитофауны являются микроспоридии. Микроспоридии — очень разнообразная группа облигатных
внутриклеточных эукариотических паразитов, родственных грибам; ониинфицируют самые разные виды эукариот, включая некоторых протистов,беспозвоночных и позвоночных животных. На данный момент описано около 190 родов и более 1300 видов микроспоридий, почти половина из которых
инфицируют гидробионтов, а около 50 родов — водных членистоногих.
В данной работе мы исследовали генетическое разнообразие микроспоридий вида амфипод Gammarus lacustris Sars 1863. Данный вид амфипод
распространен в Голарктике и встречается в многочисленных мелководных
озерах, окружающих Байкал. В Байкале G. lacustris встречается только в нескольких закрытых заливах и сорах. В исследовании использовали G. lacustris из разных водоемов: озеро 14 (недалеко от пос. Большие Коты), а также
небольшие озера вокруг Байкала, заводь реки Ангары (черта г. Иркутска),оз. Шира (респ. Хакасия), озеро на Тибетском плато и некоторые водоемы
европейской части страны (например, Белое море неподалеку от м. Картеш).
Мы использовали нуклеотидные последовательности мсрДНК микроспоридий G. lacustris, взятые из NCBI Genbank и полученные в данном исследовании. Также провели поиск всех известных мсрРНК микроспоридийв опубликованных данных высокопроизводительного секвенирования
транскриптомов 180 особей G. lacustris (60 проб, по три особи на пробу)из озера 14 и 9 особей (три пробы по три особи на пробу) из водоема наТибетском плато.
Абсолютное большинство последовательностей мсрДНК микроспоридий G. lacustris принадлежат к роду Dictyocoela. Последовательности Dictyocoela были сгруппированы без явной географической привязки; например,некоторые последовательности из озера 14 были почти идентичны последовательности из точки отбора на северо-западе России. Анализ транскриптомных данных показал, что 42 из 60 образцов из озера 14 содержали
мсрРНК Dictyocoela, что соответствует примерно 33 % распространенности
Dictyocoela в этой популяции. Аналогичную картину мы наблюдали прианализе транскриптомов G. lacustris из водоема на Тибетском плато.
Таким образом, Dictyocoela является преобладающим микроспоридиальным паразитом у G. lacustris из разных регионов (от Шотландии до Тибета),что может говорить о существовании древней ассоциации между паразитом и хозяином.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

491

ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МЕЖДУ СТОП-ПЕПТИДОМ SECMИ РИБОСОМОЙ E. COLI МЕТОДАМИ
МОЛЕКУЛЯРНО-ДИНАМИЧЕСКОГО МОДЕЛИРОВАНИЯINVESTIGATION OF INTERACTION BETWEEN SECM STOP PEPTIDEAND E. COLI RIBOSOME BY MD SIMULATION METHODS
Г. И. Макаров, А. В. Шунялов
Южно-Уральский государственный университет, Челябинск
G. I. Makarov, A. V. Shunaylov
South Ural State University, Chelyabinsk
E-mail: makarovgi@susuАннотация
Стоп-пептид SecM способен обратимо останавливать трансляцию, связываясь со стенками рибосомного туннеля, что используется для регуляции синтеза
транслоказы SecA. Структура образующегося комплекса, предложенная Жангом,содержит существенные ошибки. Мы смоделировали структуру комплекса SecM,
хорошо объясняющую роль его критически важных аминокислотных остатков вовзаимодействии с рибосомой.

Abstract
SecM stop peptide is able to reversibly arrest translation, binding to the nascent peptide
exit tunnel (NPET) walls, what is used to regulate the synthesis of SecA translocase. The
structure of the SecM-NPET complex, proposed by Zhang, contains significant incorrectnesses. We have modeled the structure of the SecM-NPET complex, which well explains
the role of SecM critical amino acid residues in its interaction with the ribosome.

The nascent peptide exit tunnel (NPET) not only elicits nascent peptide fromthe ribosome, but also participates in the translation regulation. Some peptides,
so-called stop peptides, are able to bind the NPET walls alone or together withcofactors, arresting translation. SecM preceding the SecA translocase code in themRNA is one of these peptides: under SecA deficiency the arrest of the ribosome
by SecM leads to unwinding of the mRNA hairpin hiding the SecA start codon and© Г. И. Макаров, А. В. Шунялов, 2020

492pаздел 4

SecA synthesis. On the contrary, if SecA is abundant, the arrest of the ribosome by
SecM is terminated by binding its N-terminus to the Sec translocon and the subsequent completion of SecM synthesis without initiating SecA translation. It wasestablished that SecM is to contain the sequence F150XXXXWIXXXXGIRAGP166,
where X is a replaceable amino acid residue, to be capable to arrest translation.
Mechanism of translation arrest by SecM was studied by MD simulations andcryoEM. However, studying the structure of a peptide-NPET complex is a complicated problem. Thus, Zhang et al presented the structure of the SecM complex with
the E. coli ribosome, in which the conformation of the critical GIRAG sequence
contains two cis-peptide bonds. Whereupon, it is unlikely that anything in thisregion of the NPET is able to create such a conformation of the nascent peptide,although the published electron density indicates the general path of the peptide chain. Based on it, we simulated the structure of the SecM complex with theE. coli ribosome, which is characterized by stable interactions between the aminoacid residues critical to SecM activity and NPET, such as the A164 and R163 hydrogen bonds with U2585 and C2063 residues, hydrophobic contact of I 162 andA2062 base, stacking interaction and hydrogen bonds of W 155 with A789 residue.
Thus, the structure simulated by us is consistent with the known experimental
data. It can be assumed that these interactions enable SecM to bind strongly to
NPET impeding translocation. But the external force pulling the peptide from the
NPET is capable of breaking them, thereby translation arrest is reversible.
All the calculations were performed with the Lomonosov supercomputerof Moscow State University using GROMACS 5 and PLUMED 2 packages andparm99sb force field.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

493

ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ МОДИФИКАЦИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
A2503 НА РИБОСОМУ E. COLI МЕТОДАМИ
МОЛЕКУЛЯРНО-ДИНАМИЧЕСКОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ *INVESTIGATION OF A2503 RESISTANCE MODIFICATION IMPACT
ON THE E. COLI RIBOSOME BY MD SIMULATIONS METHOD
Т. М. Макарова
Южно-Уральский государственный университет, Челябинск
T. M. Makarova
South Ural State University, Chelyabinsk
E-mail: makarovatm@susu.ruАннотация
Консервативно метилированный остаток m2A2503 23S рРНК бактериальной
рибосомы подвергается дополнительному 8-метилированию с помощью метилтрансферазы cfr в ответ на присутствие ряда семейств антибиотиков, вызывая темсамым резистентность типа PhLOPSa.

Abstract
Conservatively monomethylated m2A2503 residue of 23S rRNA of bacterial ribosome
undergoes additional 8-methylation by cfr methyltransferase as a response of presence of
certain antibiotics families, inducing PhLOPSa type resistance.

Antibiotics, which induce the cfr methyltranferase, vary in its precise sites andpatterns of binding to the ribosome. This indicates that effect of the modification
most likely consists in conformational rearrangements of the binding site than insterical hindrances or certain bonds disruptions.
In order to investigate long-range effect of the resistance modification on
the ribosome, MD simulations of the wildtype ribosome and the ribosome with
m2m8A2503 were performed.
© Т. М. Макарова, 2020
All the calculations were performed with the Lomonosov supercomputer of Moscow
State University using GROMACS 5 packages and Amber14 force field.
*

494pаздел 4

The most immediate effect of the additional methyl group in the A2503 nucleobase was enhanced stacking interaction with its neighbor, G2061, and stabilizationof hydrogen bonds with A2062. The A-site of the ribosomal PTC (peptidyltransferase center) demonstrated two different allosterically regulated conformations in our previous investigation by MD simulations: an active (AP) and an inactive (PE) ones. The m2m8A2503 modification shifted conformations of certainrRNA residues around the PTC towards the AP state when A-site was in the inactive (PE) state. Thus, m2m8A2503 hyper-stabilizes the active conformation of the
A-site decreasing therefore the effect of antibiotics.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

495ВЛИЯНИЕ ФУНГИЦИДА ТИРАМАНА ГИСТОНОВЫЕ МОДИФИКАЦИИ *EFFECTS OF THIRAM FUNGICIDE ON HISTONE MODIFICATIONS
В. П. Максимова 1, О. Г. Усалка 2, Г. Р. Сагитова 2,
А. А. Пацюркевич 1, М. Г. Якубовская 1, К. И. Кирсанов 1
1Национальный медицинский исследовательский центр онкологии
им. Н. Н. Блохина, Москва
2Первый Московский государственный медицинский университет
им. И. М. Сеченова
V. P. Maksimova 1, O. G. Usalka 2, G. R. Sagitova 2,
A. A. Patsyurkevich 1, M. G. Yakubovskaya 1, K. I. Kirsanov 1

1

N. N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Moscow
2Sechenov University, Moscow
E-mail: lavarvar@gmail.com

Аннотация
Изучение влияния различных ксенобиотиков, в том числе гербицидов, инсектицидов и фунгицидов, на эпигенетическую регуляцию транскрипции является однойиз наиболее актуальных задач современной молекулярной онкологии. В ходе данного исследования мы впервые продемонстрировали способность фунгицида тирама
реактивировать экспрессию эпигенетически репрессированных генов за счет влияния на ацетилирование гистонов.

Abstract
The study of the effect of various xenobiotics, including herbicides, insecticides andfungicides, on the epigenetic regulation of transcription is one of the most urgent problems
of modern molecular oncology. During this work, we demonstrated for the first time theability of the fungicide thiram to reactivate the expression of epigenetically repressed genes
by affecting histone acetylation.

© В. П. Максимова, О. Г. Усалка, Г. Р. Сагитова, А. А. Пацюркевич, М. Г. Якубовская, К. И. Кирсанов, 2020*Исследование поддержано грантом РНФ № 18-75-00115.

496pаздел 4

Introduction
The action of various environmental factors on a person can lead to inherited
epigenetic changes, which in turn can cause neoplastic transformation. The mostinteresting agents for the analysis of epigenetic activity are hazardous chemicals,
including various pesticides. Histone modifications play a key role in realizing
the effects of exogenous agents on humans. The aim of this work was to study the
epigenetic activity of 10 pesticides and to analyze the effect of epigenetically active
agents on modifications of histones H3 and H4.
Materials and methods
The group of pesticides included: chlorpyrifos, glyphosate, carbalil, permethrin, captan, ziram, thiram, aldicarb, chlorothalonil, malathion. To analyze theepigenetic activity, HeLa TI cells with an epigenetically repressed retroviral vector
carrying the GFP reporter gene were used. To analyze the changes in the level ofpost-translational modifications of histones H3 and H4 and changes in the expression of the HDAC1 protein, Western blot were used. To study the activity ofhistone acetyltransferases, the HAT Activity Assay Kit were used. Changes in theexpression of genes encoding epigenetic regulatory enzymes were determined by
qRT-PCR.
Results
Screening of the epigenetic activity of 10 pesticides showed that the fungicide thiram caused an increase in the number of GFP-positive cells increases by
6,7 times. It was shown that under the action of this agent, the global acetylationof histone H3 increased by 1,5 times. It was also demonstrated that after thiramtreatment, there was a significant decrease in HDAC1 expression, both at themRNA level (2,1 times) and at the protein level (3,2 times), and the expressionof the SIRT1 gene decreased (by 1, 8 times). In addition, there was no thirameffects on the activity of histone acetyltransferases, including the expression of
the HAT1, CREBBP, P300 genes. It was also shown that after fungicide treatment,
there was no change in the methylation level of the sites H3K9me3, H4K20me3,
H3K4me3, and the mRNA level of the histone methyltransferases SUV39H1,2 andSUV420H1,2 and SETD1A,1B did not change.
Conclusion
The data obtained demonstrate that the pesticide thiram causes the reactivation of epigenetically repressed genes by affecting histone acetylation.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

497

РЕДАКТИРОВАНИЕ ИНТРОНОВ ГЕНА-ХОЗЯИНА
МАЛЫХ ЯДРЫШКОВЫХ РНК GAS5 КАК ИНСТРУМЕНТ
ФУНКЦИОНАЛЬНОГО АНАЛИЗА *EDITING OF THE SMALL NUCLEOLAR RNA HOST-GENE
GAS5 INTRONS AS A TOOL FOR ITS FUNCTIONAL ANALYSIS
А. М. Матвеева 1,2, Д. И. Виноградов 1,2, Е. С. Журавлёв 1, Г. А. Степанов 1,2
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
A. M. Matveeva 1,2, D. I. Vinogradov 1,2, E. S. Zhuravlev 1, G. A. Stepanov 1,2
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
E-mail: anastasiya.maatveeva@gmail.com
АннотацияНа основе клеток человека 293FT c помощью системы CRISPR/Cas9 были получены клеточные линии с точечными мутациями в генах индивидуальных малых
ядрышковых РНК, закодированных в интронах гена Gas5 (Growth Arrest Specific 5),и протяженными делециями в гене Gas5. Исследовано влияние мутаций на сплайсинг длинной некодирующей РНК Gas5, предложена гипотеза о его m6A-зависимой
регуляции.

Abstract
293FT-derived single cell clones were obtained with point mutations in individual
Gas5 (Growth Arrest Specific 5) intron-encoded small nucleolar RNA genes and large deletions in Gas5 gene using CRISPR/Cas9. The effect of mutations on the long non-coding
RNA Gas5 splicing was studied and a hypothesis about its m6A-dependent regulation was
suggested.

© А. М. Матвеева, Д. И. Виноградов, Е. С. Журавлёв, Г. А. Степанов, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 18-29-07073. Разработка методов, используемых в работе, проведена при частичной поддержке базового бюджетного финансирования Минобрнауки РФ (0245-2019-0001).

498

pаздел 4Редактирование интронов — перспективный инструмент изучения механизмов посттранскрипционного созревания РНК. Объектом данных
исследований выступили C/D-бокс малые ядрышковые РНК (мяоРНК),осуществляющие 2’-O-метилирование нуклеотидов рРНК в процессе ее созревания. Ранее нами была показана возможность редактирования в клетках человека генов индивидуальных мяоРНК, закодированных в интронах
гена Gas5 (Growth Arrest Specific 5). В рамках данной работы был проведен
функциональный анализ гена-хозяина мяоРНК с помощью редактирования
генов мяоРНК системой CRISPR/Cas9 путем внесения точковых мутаций,а также формирования протяженных делеций в структуре гена Gas5.
На основе клеток 293FT были получены клеточные линии с индивидуальными мутациями в генах SNORD75 и SNORD81. Путем независимых
экспериментов (ОТ-ПЦР и полнотранскриптомного секвенирования RNASeq) была проведена оценка уровня зрелых мутантных форм РНК-мишеней, показано снижение уровня зрелой формы РНК Gas5, проанализированы формы сплайсинга и обнаружены новые варианты с пропуском экзонов.
Биоинформатический анализ данных, представленных в доступных базах,выявил наличие в SNORD75 и SNORD81 специфических областей, участвующих в регуляции созревания предшественника днкРНК Gas5. Среди ассоциированных факторов была обнаружена группа факторов, осуществляющих и узнающих m6A модификацию, что позволило предположить m6A-зависимый путь регуляции сплайсинга Gas5.
На основе клеток 293FT были также получены линии с протяженными
делециями в одном из аллелей Gas5. В описанных линиях методами ОТ-ПЦРи полнотранскриптомного секвенирования продемонстрировано снижение
общего уровня транскриптов днкРНК Gas5 и образование зрелой формыс пропуском экзонов. Данные, полученные для гетерозиготных клеточных
линий, легли в основу гипотезы об активности только одного из двух аллелей Gas5 в клетках 293FT.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

499

АНАЛИЗ РЕЗИСТОМА УРОПАТОГЕННЫХ ШТАММОВMORGANELLA MORGANII, ВЫДЕЛЕННЫХНА ТЕРРИТОРИИ ГОРОДА КАЗАНИ *RESISTOME ANALYSIS OF UROPATHOGENICMORGANELLA MORGANII STRAINS ISOLATED IN KAZAN
Л. Ф. Миннуллина, Э. Р. Шайдуллина, А. М. Марданова
Казанский (Приволжский) федеральный университет
E-mail: masaco@mail.ruАннотация
Определен спектр антибиотикорезистентности трех уропатогенных штаммов M.
morganii, выделенных на территории г. Казани. Все штаммы обладают пониженной
чувствительностью к имипенему, а штаммы MM 1 и MM 4 — резистентностью к тигециклину. В геномах штаммов идентифицированы гены catA2 и blaDHA. Штаммыне являются продуцентами бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) и не содержат плазмида-опосредованных детерминант резистентности.

Abstract
We investigated the antibiotic resistance of three uropathogenic M. morganii strains
isolated in Kazan. All strains exhibited a low susceptibility to imipenem, whereas strains
MM 1 and MM 4 showed resistance to tigecycline. Genome analysis identified catA2 andblaDHA genes. The strains do not produce extended spectrum beta-lactamases and do notcontain plasmid-mediated resistance genes.

Условно-патогенная бактерия M. morganii является возбудителем широкого спектра вне- и внутрибольничных инфекций. Целью работы ста- лоопределение спектра антибиотикорезистентности и анализ резистома
уропатогенных штаммов M. morganii, различающихся по вирулентным
свойствам.
Штаммы M. morganii MM 1, MM 4 и MM 190, полученные из мочи больных с внебольничной инфекцией мочевыводящих путей (ИМП), были© Л. Ф. Миннуллина, Э. Р. Шайдуллина, А. М. Марданова, 2020*Работа выполнена в рамках государственной программы повышения конкурентоспособности Казанского (Приволжского) федерального университета среди
ведущих мировых научно-образовательных центров.

pаздел 4500отобраны из 4247 уропатогенных изолятов, выделенных в 2014–2015 гг. набазе ООО ЛДЦ «Биомед» (г. Казань). Методом последовательных микроразведений показано, что все штаммы обладают сниженной чувствительностью к имипенему (МПК 2–4 мг/л) и устойчивостью к ампициллину (МПК128–256 мг/л), амоксициллин-клавуланату (МПК 256/4 мг/л) и колистину
(МПК 256 мг/л), что является проявлением их природной резистентности.
Штаммы MM 1 и MM 4 оказались устойчивыми к тигециклину (МПК 1 мг/л).
Программа MOB-suite v. 3.0.0 не обнаружила у штаммов плазмид. Однако
программа AMRseq * идентифицировала в секвенированных геномах MM
1 (QUOO00000000), MM 4 (QPLM00000000) и MM 190 (QMKL00000000)
хромосомные гены catA2 и blaDHA, кодирующие хлорамфеникол-ацетилтрансферазу и AmpC цефалоспориназу соответственно. Транслированная
последовательность гена catA2 штамма MM 1 (локус DYH52_RS05390) лишьна 43 % гомологична продуктам генов MM 4 (локус DVJ80_RS17395) и MM
190 (локус DQ401_RS16625). Также у штаммов MM 4 и MM 190 был выявлен
ген blaDHA-1 (локусы DVJ80_RS07320 и DQ401_RS09620 соответственно),а у штамма MM 1 — ген blaDHA-27 (локус DYH52_RS02740).
Устойчивость к различным группам антибиотиков для одного и тогоже микроорганизма может варьировать в зависимости от региона. По данным платформы AMRmap **, изоляты M. morganii, выделенные за последние
10 лет на территории РФ в случае внебольничных форм ИМП, обладают
следующим профилем резистентности: 100,0 % проявляют устойчивостьк ампициллину, 88,2 % — к фосфомицину, 75,0 % — к цефиксиму, 56,3 % —к цефокситину, а 91,7 % проявляют сниженную чувствительность (категория I) к имипенему. В целом штаммы M. morganii MM 1, MM 4 и MM 190 обладают схожим профилем резистентности с большинством изолятов, выделенных в других регионах страны.
Таким образом, на основании оценки синергизма оксиимино-β-лактамов с клавулановой кислотой и анализа резистома, уропатогенные штаммы
M. morganii MM 1, MM 4 и MM 190 не являются продуцентами БЛРС и несодержат плазмида-опосредованных генов резистентности.

*URL: https://amrseq.net/
URL: https://amrmap.ru/**

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

501КОРРЕКЦИЯ ИНТЕНСИВНОСТИ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИВ УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОЙ ИНКУБАЦИИ КУРДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ
ЭРИТРОЦИТОВ И ЛЕЙКОЦИТОВCORRECTION OF THE INTENSITY OF LIPID PEROXIDATION
IN CONDITIONS OF INDUSTRIAL INCUBATION OF CHICKENSTO INCREASE THE FUNCTIONALITY OF ERYTHROCYTESAND LEUKOCYTES
Т. В. Монстакова, Т. О. Азарнова, И. И. Кочиш
Московская государственная академия ветеринарной медициныи биотехнологии — МВА им. К. И. Скрябина
T. V. Monstakova, T. O. Azarnova, I. I. Kochish
Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology —MVA named after K. I. Skryabin
E-mail: tommi@list.ruАннотация
Глицинат кобальта в концентрации 0,05 %, используемый для трасовариальной
обработки яиц перед инкубацией, обладает выраженными антиоксидантными и гематопротекторными свойствами, определяющими сохранение и улучшение функциональности клеток крови (эритроцитов и лейкоцитов), обуславливая повышение
эмбриональной жизнеспособности и качества молодняка.

Abstract
Cobalt glycinate at a concentration of 0,05 %, used for trasovarian processing of eggs
before incubation, has pronounced antioxidant and hematoprotective properties that determine the preservation and improvement of the functionality of blood cells (erythrocytes andleukocytes), causing an increase in embryonic viability and the quality of young animals.

Избыточная генерация свободных радикалов, обусловленная оксидативным стрессом, сопряженным с условиями промышленной инкубации,неизбежно приводит к чрезмерному накоплению продуктов липоперокси© Т. В. Монстакова, Т. О. Азарнова, И. И. Кочиш, 2020

502

pаздел 4дации. Это определяет деструктивные явления и дисфункцию клеток крови. Известно, что эритроциты наиболее подвержены этому негативному
явлению, способствующему нарушению возможности переноса питательных веществ, снижению газотранспортных, деформационных, защитных,буферных и других их функций, важных для эмбриона.
Наряду с этим известно, что и клетки лейкоцитарного ряда при прогрессии окислительного стресса теряют способность не только к фагоцитозу,но в целом к защите организма, обеспечению регенерации и другим своим
предназначениям.
Для коррекции заявленных негативных явлений нами был синтезирован
биостимулятор глицинат кобальта, наносимый на яйцо перед инкубациейв концентрации 0,05 %.
Исследование сыворотки крови цыплят суточного возраста показало
снижение основных токсических продуктов ПОЛ: ИДС на 9,9 %, ДК в 1,3 раза,ТК на 2,2 %, ОДК на 23,4 %, ОШ на 11 %, при повышении ОАА на 28,3 %.
Обеспечение условий для сохранения целостности эритроцитов и активности ферментов синтеза обусловило увеличение эритроцитов на 8,9 %и гемоглобина на 13,8 %, создавая перспективы лучшей трофики тканей эмбриона и профилактики гипоксии. Наряду с этим снизилась вероятность
патологической микровезикуляции, определив увеличение площади поверхности, а вместе с тем и ее соотношения к объему в 1,1 раза по сравнению с контролем, создавая условия для лучшей деформации.
Несмотря на то что количество лейкоцитов в опыте и контроле былоравнозначным, изменение в лейкоцитарной формуле в виде повышения
количества моноцитов на 2,10 % указывает на возрастание фагоцитарной
активности, а также повышение ИСЛМ на 8,21, отражающий взаимоотношение звеньев иммунологического процесса.
Сохранение функциональности эритроцитов и лейкоцитов определило
повышение эмбриональной жизнеспособности особей (вывод цыплят и выводимость яиц превосходили контроль на 5,6 и 6,6 %) и их качества (преимущество по шкалам «Пасгар» и «Оптистарт» соответствовало 0,8 и 0,9 балла).

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

503

ВЛИЯНИЕ LMNB1 НА РЕПЛИКАТИВНОЕ СТАРЕНИЕ
ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА
THE EFFECT OF LMNB1 IN REPLICATIVE SENESCENCE
OF HUMAN FIBROBLASTS
Е. Е. Морозова 1, П. П. Лактионов 1,2, П. Сингх 1,3
12Новосибирский государственный университет
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск
3Школа медицины Назарбаев Университет, Нур-Султан,Республика Казахстан
E. E. Morozova 1, P. P. Laktionov 1,2, P. Singh 1,31

Novosibirsk State University
Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk
3
Nazarbayev University School of Medicine, Nur-Sultan, Republic of Kazakhstan
2E-mail: morozovae613@gmail.com
АннотацияВ ходе старения клетки начинают демонстрировать характерные морфологические и метаболические изменения. Клеточное старение сопровождается масштабными пространственными перестройками ядра, приводящими к формированию
специальных ядерных структур конденсированного хроматина (SAHF) и ассоциированной со старением деконденсацией центромер (SADS). Снижение уровня компонента ядерной оболочки ламина B1 приводит к нарушению структуры хроматина
и, как предполагается, участвует в механизме формирования SAHF и SADS. В результате проделанной работы получены генетические конструкции, кодирующие
различные направляющие РНК для получения делеции гена LMNB1 с помощьюCRISPR / Cas9. Была получена гетерогенная популяция клеток первичных фибробластов человека, несущих делецию гена LMNB1.

Abstract
Senescent cells demonstrate characteristic morphological and metabolic changes.
Cellular senescence is accompanied by large-scale spatial rearrangements of the nucleus
leading to the formation of senescence-associated heterochromatin foci (SAHF) and senescence-associated distension of centromeres (SADS). A decrease in the level of the nuclear© Е. Е. Морозова, П. П. Лактионов, П. Сингх, 2020

504pаздел 4

envelope component of lamin B1 leads to disruption of the chromatin structure and it is
supposed to be involved in the mechanism of SAHF and SADS formation. As a result of thework done genetic structures coding different guide RNAs to receive LMNB1 gene deletion
by CRISPR/Cas9 were obtained. A heterogeneous population of cells of primary humanfibroblasts carrying the LMNB1 gene deletion was obtained.

Introduction
Aging is a natural process that leads to gradual decrease in the аfunctional
capabilities of the organism. Cellular senescence is tightly linked with general organism ageing, as senescent cells accumulate in body tissues with age. Senescentcells demonstrate characteristic morphological and metabolic changes. Cellularsenescence is accompanied by large-scale spatial rearrangements of the nucleus
leading to the formation of senescence-associated heterochromatin foci (SAHF)
and senescence-associated distension of centromeres (SADS). A decrease in thelevel of the nuclear envelope component of lamin B1 leads to disruption of thechromatin structure and it is supposed to be involved in the mechanism of SAHF
and SADS formation. Lamins take part in numerous regulatory cellular processes that influence cell proliferation, differentiation, and apoptosis. The aim of thework is to characterize the role of lamin B1 in replicative cellular senescence.
Methods
To generate primary human fibroblasts carrying the LMNB1 gene deletion
we used CRISPR/Cas9 targeted mutagenesis. Guide RNAs were chosen using the
CRISPR Design resource and cloned into PX459 vector. The efficiency of guide
RNAs was determined using pEGxxFP system with following analysis by flow cytometry. Developed CRISPR/Cas9 targeted mutagenesis system was applied on
LF1 primary lung fibroblasts cell strain.
Results
Genetic structures coding different guide RNAs to receive LMNB1 gene deletion
by CRISPR/Cas9 were obtained. The efficiency of guide RNAs was determined byflow cytometry and the most effective were chosen for further work. Optimizationof targeted mutagenesis conditions by the CRISPR/Cas9 method for removal of
the coding region of the LMNB1 gene in primary human fibroblasts was carriedout. A heterogeneous population of cells of primary human fibroblasts carrying
the LMNB1 gene deletion was obtained.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

505

ДНК-АПТАМЕРЫ В РАСТВОРЕ: ТРЁХМЕРНАЯ СТРУКТУРА,КОНФОРМАЦИОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ,СПЕЦИФИЧЕСКОЕ СВЯЗЫВАНИЕ *DNA APTAMERS IN SOLUTION: STRUCTURE, CONFORMATIONALCHANGES, SPECIFIC BINDING
Р. В. Морячков 1, В. Н. Заблуда 1, А. С. Кичкайло 1,
В. А. Спиридонова 2, А. Н. Берлина 3, А. Е. Соколов 1
1Федеральный исследовательский центр
Красноярский научный центр СО РАН
2Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова
3Институт биохимии им. А. Н. Баха РАН, Москва
R. V. Moryachkov 1, V. N. Zabluda 1, A. S. Kichkailo 1,
V. A. Spiridonova 2, A. N. Berlina 3, A. E. Sokolov 1
1

Federal Research Center Krasnoyarsk Scientific Center SB RAS
2Lomonosov Moscow State University
3
A. N. Bach Institute of Biochemistry RAS, Moscow
E-mail: mrv@iph.krasn.ruАннотация
Аптамеры — короткие олигонуклеотиды, способные специфически связыватьсяс молекулярными мишенями благодаря своей уникальной пространственной форме. Определение их структуры может дать информацию о функциональных особенностях аптамеров и природе их избирательности. В данной работе представлены
подходы по определению пространственной структуры ДНК-аптамеров и их конформационных изменений напрямую в растворе с помощью метода малоуглового
рентгеновского рассеяния.

Abstract
Aptamers are short oligonucleotides that can specifically bind to molecular targets dueto their unique spatial shape. Determination of their structure can provide informationon the functional characteristics of aptamers and the nature of their selectivity. This work
© Р. В. Морячков, В. Н. Заблуда, А. С. Кичкайло, В. А. Спиридонова, А. Н. Берлина, А. Е. Соколов, 2020*Работа выполнена при поддержке РФФИ по проекту № 19-32-90266.

506pаздел 4

presents approaches to determining the spatial structure of DNA aptamers and their conformational changes directly in solution using small-angle X-ray scattering.

Аптамеры обычно селективно подбирают к мишени с помощью систематической эволюции лигандов путем экспоненциального обогащения [1]. Напрактике используются олигонуклеотидные однотяжевые цепочки длиной 10–100 оснований. Их применяют в терапии и диагностике, для доставки
лекарств к определенным биомолекулам, клеткам, тканям и целым органам,в изготовлении различных биосенсоров для детектирования определенных
белков, биомаркеров, ионов тяжелых металлов, вирусов или бактерий [2, 3].
Аптамеры обладают преимуществами перед антителами в том, что они имеют
гораздо меньшие размеры, дешевы в изготовлении и не вызывают иммунный
ответ в организме, причем для каждого аптамера легко создать антидот. Дляидентификации способа связывания аптамера, определения его активного
сайта, с целью повышения специфичности и аффинности, а также для возможности оптимизации его структуры возникает необходимость исследования пространственной структуры данного типа биомолекул. Ввиду сложности выращивания кристалла из однотяжевых нуклеиновых кислот для исследования с применением рентгеноструктурного анализа ведется поиск методов
характеризации структуры аптамеров напрямую в растворе. В данной работе
приведены примеры использования метода малоуглового рентгеновского
рассеяния (МУРР) для изучения пространственной структуры аптамеров, изменения их конформации при изменении внешних условий [4, 5]. Нами быларазработана методика, в которой с помощью методов МУРР и молекулярного
дизайна строится молекулярная модель молекулы в растворе и сравниваетсяс экспериментальными данными для проверки корректности модели [6].
Литература
1. Tuerk C., Gold, L. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNAligands to bacteriophage T4 DNA polymerase // Science. 1990. Vol. 249. P. 505–510.
2. Радько С. П. и др. Аптамеры как перспективные аффинные реагенты для клинической протеомики // Биомедицинская химия. 2007. Т. 53. С. 5–24.
3. Meyer C. et al. Cell-specific aptamers as emerging therapeutics // Journal of Nucleic
Acids. 2011. 904750. P.1–18.
4. Svergun D. I., Koch M. H. J. Small-angle scattering studies of biological
Macromolecules in solution // Reports on Progress in Physics. 2003. Vol. 66. P. 1735.
5. Mertens H. D. T., Svergun D. I. Structural characterization of proteins and complexes
using small-angle X-ray solution scattering // Journal of structural biology. 2010. Vol. 172.
P. 128–141.
6. Tomilin F. N. et al. Four steps for revealing and adjusting the 3D structure of aptamers in solution by small-angle X-ray scattering and computer simulation // Analytical andbioanalytical chemistry. 2019. Vol. 411. P.6723–6732.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

507ВЛИЯНИЯ ОСТРОГО ВВЕДЕНИЯ TC-2153 НА ЭКСПРЕССИЮ
СЕРОТОНИНОВЫХ 5-HT1A И 5-HT7 РЕЦЕПТОРОВИ ТРАНСКРИПТОВ BDNF У РУЧНЫХ И АГРЕССИВНЫХ КРЫС *THE EFFECT OF TC-2153 ON THE EXPRESSION OF SEROTONINERGIC
5-HT1A AND 5-HT7 RECEPTORS AND BDNF TRANSCRIPTS
IN TAME AND AGGRESSIVE RATS
В. С. Москалюк, Р.В. Кожемякина, Д. В. Базовкина,В. С. Науменко, Е. А. Куликова
Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
V. S. Moskaliuk, R. V. Kozhemyakina,
D. V. Bazovkina, V. S. Naumenko, E. A. Kulikova
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
E-mail: v.moskaliuk@g.nsu.ruАннотация
Агрессивные и ручные крысы (ИЦИГ СО РАН) различаются по уровню белка
BDNF и серотониновых 5-HT1A рецепторов. Показано влияние психотропного вещества ТС-2153 на экспрессию BDNF и серотониновых рецепторов. В данной работемы обнаружили эффекты генотипа и препарата на экспрессию различных транскриптов BDNF и рецепторов 5-HT1A и 5-HT7.

Abstract
Aggressive and tame rats (ICG SB RAS) differ in BDNF and serotonin 5-HT1A receptors
protein levels. The psychotropic drug TC-2153 affects both the expression of BDNF and serotonin receptors. In this study, we have found the genotype and drug effects on expressionof different BDNF transcripts and serotoninergic 5-HT1A and 5-HT7 receptors.

© В. С. Москалюк, Р. В. Кожемякина, Д. В. Базовкина, В. С. Науменко, Е. А. Куликова, 2020*
The study was supported by the Russian Scientific Foundation grant № 19-15-00029.
Cost of animal maintenance was supported by basic research project № 0324-2019-0041-C-01.

508pаздел 4

Introduction
Rats, selectively bred for high level (aggressive) and absence (tame) of aggression towards humans (Institute of Cytology and Genetics) demonstrate significant
difference in the brain-derived neurotrophic factor (BDNF) protein level and expression of serotonin receptors. Benzopentathiepin TC-2153 is known to affect
the BDNF and serotoninergic system and produces anti-aggressive behavior. The
aim of this study was to evaluate the effect of TC-2153 on the expression of BDNF
transcripts and serotonin receptors 5-HT1A and 5-HT7 in tame and aggressive rats.
Materials and Methods
Aggressive (n = 30) and tame (n = 30) adult male rats were treated with
10 or 20 mg/kg TC-2153 or vehicle. mRNA levels of eight BDNF transcripts
201–208 (Ensembl Database) and serotonin 5-HT1A and 5-HT7 receptors were
measured in the midbrain and hippocampus using RT-PCR. Data were analyzed
with two-way ANOVA (genotype and drug), followed by the post-hoc Fisher’stest. Statistical significance was set at p < 0,05.
Results
Tame rats demonstrated elevation of all BDNF transcripts except 206 in hippocampus and 5-HT1A receptor gene expression in both investigated brain structures, compared to aggressive. While aggressive rats showed higher mRNA level oftranscript 206 and 5-HT7 receptor in hippocampus and BDNF transcripts 203, 203,
204, 206 and 207 in midbrain in comparison to those in tame rats. TC-2153 decreased the expression of transcripts 202, 203, 204 and 205 in the midbrain of
aggressive rats and transcripts 202, 203, 204, 205, 207 and 208 in the midbrain oftame rats, without effect in hippocampus. The drug decreased the mRNA level of
5-HT1A receptor in hippocampus of both strains and the 5-HT7 receptor in hippocampus of aggressive animals.
Conclusion
We demonstrated the significant influence of selection to tame and aggressive
behavior and drug TC-2153 on the different transcripts of BDNF and serotonin
5-HT1A and 5-HT7 receptors. Thereby the investigated genes could be involvedin the mechanisms of aggressive behavior and in the anti-aggressive effect of
TC-2153.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

509

ВЛИЯНИЕ ПОСТЕПЕННОГО ПОВЫШЕНИЯ ТЕМПЕРАТУРЫНА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО МЕТАБОЛИЗМА
БАЙКАЛЬСКИХ ЭНДЕМИЧНЫХИ ГОЛАРКТИЧЕСКИХ АМФИПОД *EFFECT OF GRADUAL TEMPERATURE RISE ON EXPRESSION
OF ENERGY METABOLISM GENES IN BAIKAL ENDEMIC
AND HOLARCTIC AMPHIPODS
А. Д. Мутин 1, К. П. Верещагина 1, Л. Якоб 2,
Д. С. Бедулина 1, М. Лукассен 2, М. А. Тимофеев 1
1Иркутский государственный университет
Институт полярных и морских исследований
им. Альфреда Вегенера, Бремерхафен, Германия
2

A. D. Mutin 1, K. P. Vereshchagina 1, L. Jakob 2, D. S. Bedulina 1,
M. Lucassen 2, M. A. Timofeyev 1
1

Irkutsk State University
Alfred Wegener Institute Helmholtz Centre
for Polar and Marine Research, Bremerhaven, Germany
2

E-mail: andreimutin97@gmail.com
Аннотация
Проведена оценка экспрессии ключевых генов энергетического метаболизмаи оценка межвидовых различий в энергетическом метаболизме у байкальских эндемичных и голарктических амфипод.

Abstract
In the present study, the expression of key energy metabolism genes was evaluated, andinterspecific differences in energy metabolism in Baikal endemic and Holarctic amphipods
were assessed.

© А. Д. Мутин, К. П. Верещагина, Л. Якоб, Д. С. Бедулина, М. Лукассен, М. А. Тимофеев, 2020*
The work was supported by the Russian Science Foundation / Helmholtz Associationof German Research Centres (grant number 18-44-06201).

510pаздел 4

The aim of this study was to assess the expression of key energy metabolism
genes and assess interspecific differences in energy metabolism in Baikal endemic
amphipods of species Eulimnogammarus verrucosus (Gerstf., 1858) and Eulimnogammarus cyaneus (Dyb., 1874), as well as the Holarctic species Gammarus
lacustris Sars, 1863, under gradual temperature increase.
The control group was maintained at a temperature of 6 ± 0,8 °С throughout
the experiment. The experimental group was exposed under conditions of gradualtemperature increase (0,8 °С/day) for 24 days. For further analysis, animals werefrozen in liquid nitrogen at temperatures of 12,4, 18,8 and 23,6 °С of experimental
exposure.
According to the results of the study, a significant increase in the expressionof heat shock protein 70 (HSP70) gene in the Baikal species E. verrucosus wasshown when the temperature increased (18,8 and 23,6 °С), while the expressionof Na+, K+-ATPase, ATP-synthase (alpha subunit) and phosphofructokinase genes
decreased under these conditions. For the thermotolerant Baikal species E. cyaneus, a significant increase in the expression of HSP70 genes, as well as hexokinase, oxoglutarate dehydrogenase, actin, ATP-synthase (gamma subunit) was
observed, while the expression of Na+, K+-ATPase and ATP-synthase (alpha subunit) genes was significantly reduced. In the Holarctic species G. lacustris, there
was a significant increase in the expression of ATP-synthase (gamma subunit) and
HSP70 genes, while hexokinase expression significantly decreased.
According to the results of correlation analysis of the expression values ofthe studied genes in the species E. verrucosus, a strong positive correlation between glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and citrate synthase was shown.
The Baikal E. cyaneus had a strong positive correlation between the expression
values of the actin and HSP70 genes. For G. lacustris, a strong positive correlation between glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and pyruvate kinase gene
expression values was shown.
Thus, it has been shown that all studied amphipod species are characterized
by different energy supply strategies during a gradual temperature increase. Correlation analysis showed interspecific differences at the level of co-expression of
the studied genes. The obtained data indicate more pronounced changes in gene
expression under gradual temperature increase in two Baikal amphipod species
compared to Holarctic.

Молекулярная биология
биологибиологияббиология

511

CRISPR-CAS СИСТЕМЫ В МИКРОБИОМЕ КИШЕЧНИКА БОЛЬНЫХИ ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ: ИДЕНТИФИКАЦИЯ И РАЗНООБРАЗИЕ *CRISPR-CAS SYSTEMS IN HUMAN GUT MICROBIOMESIN HEALTH AND DISEASE: IDENTIFICATION AND DIVERSITY
М. С. Никитин 1,2, А. С. Ковтун 1,2, В. Н. Даниленко 1,2,
Н. В. Захаревич 1, И. И. Артамонова 1,3
1Институт общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН, Москва
2Московский физико-технический институт
3Институт проблем передачи информации им. А. А. Харкевича, Москва
M. S. Nikitin 1,2, A. S. Kovtun 1,2, V. N. Danilenko 1,2, N. V. Zakharevich 1,
I. I. Artamonova 1,3
1

The Vavilov Institute of General Genetics, Moscow
2
Moscow Institute of Physics and Technology
3
Institute for Information Transmission Problems RAS, Moscow
E-mail: mikhail.nikitin@phystech.eduАннотация
Основная функция CRISPR-Cas-систем — обеспечивать иммунный ответ у бактерий и архей при помощи коротких последовательностей, заимствованных из инородных для клетки элементов. В работе исследовалось разнообразие таких системв микробиомах здоровых людей и людей, больных ожирением или расстройствами
аутического спектра (РАС).

Abstract
CRISPR-Cas systems provide protection of bacterial and archeal cells from viruses andplasmids invasion using small pieces of their DNA embedded in cellular genome. In thiswork, we investigated CRISPR-Cas systems diversity in gut microbiomes of healthy people
and people with obesity or autism spectrum disorders.

© М. С. Никитин, А. С. Ковтун, В. Н. Даниленко, Н. В. Захаревич, И. И. Артамонова, 2020*Исследование было поддержано грантом РФФИ № 18-29-07087.

512pаздел 4Микробиом кишечника является самым многообразным в человеческом организме как по количеству входящих в него видов, так и по выполняемым функциям. К последним относятся пищеварение, защита отпатогенов, поддержка иммунной системы, регуляция метаболизма и другие. Было показано, что существует взаимосвязь между составом микробиома кишечника и такими болезнями, как РАС, болезни Альцгеймераи Паркинсона, ожирение и т. п. Поэтому описание и сравнительный анализCRISPR-Cas систем в кишечных микробиомах здоровых людей и больных
ожирением или РАС может быть интересно не только с точки зрения фундаментальной науки, но и для диагностики и терапии соответствующих
заболеваний.
Для исследования были взяты несколько когорт испытуемых. Данные,относящиеся к больным ожирением и соответствующей контрольной группе, были взяты из открытых источников проекта MetaHIT (Metagenome of
Human Intestinal Tract). Испытуемые не имели других болезней и были разделены на больных и здоровых на основании индекса массы тела с критическим значением в 30 кг/м 2. Данные, относящиеся к больным РАС, былиполучены в ходе недавно завершенного проекта по поиску генных маркеров
болезни в кишечном микробиоме.
Для нахождения CRISRP-Cas-кассет в метагеномных данных мы разработали процедуру, основанную на сопоставлении и последующей фильтрации результатов работы программ CRISPRCasFinder, Piler-CR и CRISPR Recognition Tool (CRT). Для отсеивания ложноположительных предсказаниймы выбирали кассеты, обнаруженные всеми тремя программами, либо находящиеся рядом с системой Cas-белков. Построенный список кассет былдополнен предсказанными структурами, повторы которых похожи по последовательности на повторы ранее утвержденных кассет.
В рамках исследования были обработаны микробиомы 331 испытуемогов рамках исследования ожирения и 60 — для исследования РАС. Для количественного сравнения разнообразия CRISPR-Cas-систем были выделены
следующие характеристики: количество кассет в расчете на 1 Гб собранных
контигов, среднее количество спейсеров в полных кассетах, количествои доля уникальных относительно ранее изученных кассет повторов. Первыедва параметра отражают разнообразие кассет и спейсеров в них, последниеже два — тот факт, что большинство исследований посвящено микробиомам здоровых людей.
Для сравнения выборок был использован t-критерий Стьюдента для неравных выборок с критическим значением 0,05. Испытуемые в исследовании ожирения были разделены на три группы на основании длины ридов

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

513

и технологии секвенирования. Для этих групп результаты сравнения по вышеописанному методу показали, что лишь для одной из групп значимо отличается длина полных кассет, при этом остальные гипотезы о значимости
различия средних не выполняются.
Для исследования РАС данные были разделены на две группы, так жена основе отличия протоколов секвенирования. Сравнение показало, чтоколичество и длина кассет статистически значимо не отличаются.

pаздел 4514ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКИЕ ЦИАНО-ЕНОН-СОДЕРЖАЩИЕ
ПОЛИЦИКЛИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯКАК ИНГИБИТОРЫ ЭПИТЕЛИАЛЬНО-МЕХЕНХИМАЛЬНОЙ
ТРАНСФОРМАЦИИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК *SEMISYNTHETIC CYANO ENONE-BEARING POLYCYCLICCOMPOUNDS AS INHIBITORS OF EPITHELIAL-TO-MESENCHYMALTRANSITION OF TUMOR CELLS
К. В. Одаренко 1,2, А. В. Сенькова 1, О. В. Саломатина 1,3,
Н. Ф. Салахутдинов 3, М. А. Зенкова 1, А. В. Марков 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Новосибирский институт органической химии
им. Н. Н. Ворожцова СО РАН
K. V. Odarenko 1,2, A. V. Sen’kova 1, O. V. Salomatina 1,3,
N. F. Salakhutdinov 3, M. A. Zenkova 1, A. V. Markov 1
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
N. N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry SB RAS
E-mail: k.odarenko@yandex.ruАннотация

Проанализирован эффект четырех циано-енон-содержащих производных глицирретовой и дезоксихолевой кислот на подвижность опухолевых клеток. Установлено, что наиболее активное соединение СМ эффективно ингибирует эпителиально-мезенхимальную трансформацию (ЭМТ) клеток А549, активированных
TGF-β, и метастазирование меланомы B16 in vivo. С помощью in silico подхода выявлено, что JNK1 и MMP-2/-9 могут рассматриваться в качестве первичных мишеней СМ.

© К. В. Одаренко, А. В. Сенькова, О. В. Саломатина, Н. Ф. Салахутдинов,М. А. Зенкова, А. В. Марков, 2020*Исследования выполнены при поддержке гранта РНФ № 17-75-20120.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

515

The effect of 4 cyano-enone-bearing derivatives of glycyrrhetinic and deoxycholic acids on motility of tumor cells was investigated. The most active compound SM was shownto inhibit epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) of TGF-β-activated A549 cells andmetastatic potential of melanoma B16 in vivo. Using in silico approach, it was found thatJNK1 and MMP-2/-9 can be considered as primary targets of SM.

Известно, что введение циано-еноновой фармакофорной группыв структуру природных полициклических молекул способствует значительному усилению уровня их биоактивности. Ранее нашей группой были синтезированы и исследованы циано-енон-содержащие производные глицирретовой (СМ, ТМ) и дезоксихолевой (pi-153, pi-156) кислот, обладающие
выраженным противоопухолевым потенциалом (рис. 1). Целью настоящей
работы являлась оценка способности данных соединений ингибировать
процесс ЭМТ опухолевых клеток, лежащий в основе их метастазирования.

Рис. 1. Химические структуры циано-енон-содержащих производных
глицирретовой (СМ, ТМ) и дезоксихолевой (pi-153, pi-156) кислотВ результате оценки способности исследуемых производных модулировать подвижность клеток меланомы мыши B16 и аденокарциномы легких человека А549 in vitro (scratch assay, нетоксичные концентрации) быловыявлено производное СМ, достоверно подавляющее миграцию на обеих
клеточных моделях.
Установлено, что СМ (0,5 мкМ) достоверно ингибирует процессы, связанные с приобретением клетками А549 мезенхимального высокоподвижного фенотипа при их активации TGF-β, включая приобретение клетками
веретенообразной формы, усиление их миграционных (рис. 2, А) и инвазионных (рис. 2, Б) характеристик. Кроме этого, инкубация TGF-β-стимулированных клеток А549 в присутствии СМ приводила к значительному
усилению экспрессии эпителиального маркера Е-кадгерина и снижению
экспрессии мезенхимальных маркеров фибронектина и виментина (рис. 2,
В). Выявленная способность СМ блокировать ЕМТ опухолевых клеток была516

pаздел 4далее верифицирована на мышиной модели меланомы B16 — было показано, что шестикратное внутрибрюшинное введение СМ (25 мг/кг) эффективно снижало количество поверхностных метастазов в легких и усиливало
экспрессию эпителиальных маркеров Е-кадгерина и ZO-1 в метастатических узлах.
Далее с помощью хемоинформатического подхода нами был определен
список потенциальных белковых мишеней СМ. В результате анализа генной
ассоциативной сети, реконструированной на основе выявленных мишенейи генов, чувствительных к действию TGF-β, идентифицированы мишени
СМ, наиболее вовлеченные в процесс ЭМТ: JNK1, MMP-2 и -9. C помощью
молекулярного докинга установлена способность СМ связываться с АТФазным доменом JNK1 и каталитическими доменами MMP-2 и -9 (рис. 2, Г).

Рис. 2. Оценка подвижности (А) и инвазионной активности (Б) клеток А549,
инкубированных в присутствии или отсутствии СМ и TGF-β с помощью
технологии xCelligence. В. Относительные уровни экспрессии маркеровЭМТ в клетках А549 (данные RT-PCR). Г. Докинг-комплексы СМ с JNK1,
MMP-9 и MMP-2 в сайтах связывания их селективных ингибиторов

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

517КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ СЕТЕЙВ ФИБРОБЛАСТАХ ЧЕЛОВЕКАС ПОМОЩЬЮ КОМПЬЮТЕРНОЙ МОРФОМЕТРИИQUANTIFYING MITOCHONDRIAL NETWORKS IN PRIMARYFIBROBLAST CELL CULTURE USING AUTOMATED IMAGE ANALYSIS
Е. В. Панферов 1,2, В. А. Ныров 1,3,
П. А. Слижов 1, Р. И. Глушаков 1, И. М. Спивак 1,2
1Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова, Санкт-Петербург
2Санкт-Петербургский Государственный университет
3Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого
E. V. Panferov 1,2, V. A. Nyrov 1,3, P. A. Slizhov 1,
R. I. Glushakov 1, I. M. Spivak 1,2
1

S. M. Kirov Military Medical Academy, St. Petersburg
2St. Petersburg State University
3Peter the Great St. Petersburg Polytechnic University
E-mail: panferov.aux@gmail.com

Аннотация
Предложен алгоритм количественного анализа митохондриальных сетей, показавший свою эффективность при исследовании влияния геропротекторов на первичные фибробласты больного с сегментарной прогерией — синдромом Коккейна.

Abstract
In this article we propose an algorithm for the quantitative analysis of mitochondrial
networks, which has shown its effectiveness in studying the effect of geroprotectors on the
primary fibroblasts of a patient with segmental progeria — Cockayne’s syndrome.

Митохондриальные сети формируются в различных клетках организма.
Наиболее подробно они описаны в фибробластах. К настоящему времени
опубликованы результаты исследований, показывающих, что характерные
митохондриальные сети можно наблюдать в первичных фибробластах человека [2] и что их структура может нарушаться при воздействии внешних
© Е. В. Панферов, В. А. Ныров, П. А. Слижов, Р. И. Глушаков, И. М. Спивак, 2020

518pаздел 4факторов, например, при гипоксии [1], или в клетках, полученных от пациентов с митохондриальными заболеваниями [2] или страдающих одной изформ ранней болезни Паркинсона, в основе которой лежат мутации генаparkin [4], или от больных с поздней инфантильной формой нейронального
цероидного липофусциноза, в основе которой лежит мутация гена ТРР1 одной из сериновых протеаз Tripeptidyl Peptidase 1 [3]. Ранее мы показали нарушение митохондриальных сетей при экранировании электромагнитного
поля Земли [5, 7]. Количественная оценка этих изменений часто вызывает
затруднения у исследователей в связи со сложностью анализа прижизненных препаратов. Целью данной работы являлось создание простого в использовании алгоритма, позволяющего количественно оценить измененияв морфологии митохондриальных сетей.

Рис. 1. Схема процесса обработки изображения: а — необработанные данные, б —результат подготовки изображения к бинаризации, в — итоговая сегментация,г — результат сегментации, наложенный поверх исходного изображенияДля визуализаци митохондриальной сети в клеточных культурах
использовалась прижизеннная окраска флуоресцентным красителем
MitoTracker GreenFM. Микрофотографии сетей были получены при помощи
конфокального микроскопа TCS SP5. Дальнейшая обработка и анализ производились в свободно распространяемой программе ImageJ. Полученные
изображения были подготовлены к сегментации при помощи частотно-Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

519

го фильтра (Bandpass Filter) с последующим вычитанием фона (Subtract
Background). Контраст полученного в результате изображения улучшался засчет адаптивного выравнивания гистограммы (CLAHE). Шум был сглаженпри помощи применения медианного фильтра к точкам, яркость которых
существенно отличалась от окружающих (Remove Outliers). Полученные
после обработки изображения были подвергнуты бинаризаци по методу
Оцу (Threshold), после чего к ним была применена операция скелетонизации (Skeletonize). Далее с помощью плагина AnalyzeSkeleton была проведена
оценка числа пересечений (ветвлений) сети, средней и максимальной длины фрагментов, а также общей длины митохондрий. Полученные данные
были проанализированы при помощи критерия Краскела — Уолиса в программном языке R.

Рис. 2. Результаты сравнения первичных фибробластов по средней длине сетей.
1 — здоровый контроль, 2 — клетки больного с синдромом Коккейна, 3 — клетки
больного с добавлением SkQ, 4 — клетки больного с добавлением метформина

Эффективность этого алгоритма показана на примере влияния геропротектора SkQ1 на фибробласты больного с синдромом Коккейна, являющегося аутосомным рецессивным наследственным синдромом с прогероидными
чертами.

520pаздел 4Литература
1. Baracca A., Sgarbi G., Padula A., Solaini G. Glucose plays a main role in human fibroblasts adaptation to hypoxia // The International Journal of Biochemistry & Cell Biology.
2013. Vol. 45(7). P. 1356–1365.
2. Benard G., Bellance N., James D., Parrone P., Fernandez H., Letellier T., Rossignol R.
Mitochondrial bioenergetics and structural network organization // J. Cell Science. 2007.
Vol. 120 (5). P. 838–848.
3. Van Beersel G., Tihon E., Demine S., Hamer I., Jadot M., Arnould T. Different
molecular mechanisms involved in spontaneous and oxidative stress-induced mitochondrial fragmentation in tripeptidyl peptidase-1 (TPP-1)-deficientfibroblasts // Bioscience
Reports. 2013. Vol. 33 (2). e00023.
4. van der Merwe C., Loos B., Swart C., Kinnear C., Henning F., van der Merwe L.,
Pillay K., Muller N., Zaharie D., Engelbrecht L., Carr J., Bardien S. Mitochondrial impairment observed in fibroblasts from South African Parkinson’s disease patients with parkin
mutations // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2014. Vol. 447(2).
P. 334–340.
5. Стефанов В. Е., Щеголев Б. Ф., Крячко О. В., Кузьменко Н. В., Сурма С. В., Спивак И. М. Модельное исследование биологических эффектов слабых статических
магнитных полей на организменном и субклеточном уровнях. // Доклады РАН. 2015.
Т. 461. № 4. С. 485–488.
6. Stefanov V. E., Shchegolev B. F., Kriachko O. V., Kuzmenko N. V., Surma S. V., Spivak
I. M. Model study of biological effects of weak static magnetic fields at the organismic andsubcellular levels // Doklady Biological Sciences, 2015. Vol. 461. P. 116–119.
7. Спивак И. М., Куранова М. Л. , Мавропуло-Столяренко Г. Р., Сурма С. В., Щеголев Б. Ф., Стефанов В. Е. Клеточный ответ на воздействие сверх слабых статических
магнитных полей // Биофизика. 2016. Т. 61. № 3. С. 516–522.
8. Spivak I. M., Kuranova M. L., Mavropulo-Stolyarenko G. R., Surma S. V., Shchglove
B. F., Stefanov V .E. The cell’s response to extremely weak static magnetic fields // Biophysics. 2016. Vol. 61. No 3. P. 435–439. IF 0.122.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

521

НОВЫЙ ХИМЕРНЫЙ АДЕНОВИРУС ЭФФЕКТИВЕН ПРОТИВ
ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК С ПОНИЖЕННОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ
КОКСАКИ-АДЕНОВИРУСНОГО РЕЦЕПТОРА *NEW CHIMERIC ADENOVIRUS IS EFFECTIVE AGAINST TUMOR CELLSWITH REDUCED COXSACKIE-ADENOVIRUS RECEPTOR EXPRESSION
А. П. Парамоник, C. C. Куцейкин, И. Д. Осипов, С. В. Нетесов
Новосибирский государственный университетA.

P. Paramonik, S. S. Kutseikin, I. D. Osipov, S. V. Netesov
Novosibirsk State University
E-mail: pa99@ngs.ruАннотацияБыл сконструирован онколитический штамм аденовируса Ad6/3-hTERT-GMCSF,
несущий химерный белок файбер, расширяющий спектр опухолевых мишеней длятерапии препаратами на основе аденовируса серотипа 6 (Ad6). Показана повышенная цитотоксичность в отношении клеток линии MDA-MB-231, экспрессирующихв низком количестве первичный рецептор для природного Ad6.

Abstract
An oncolytic adenovirus strain Ad6/3-hTERT-GMCSF was constructed. It carries chimeric fiber protein that broadens the spectrum of tumor targets for Ad6-based therapy.
Increased cytotoxicity towards MDA-MB-231 cells expressing low amounts of the primary
receptor for wild type Ad6 was shown.

Одними из самых распространенных векторов для онколитиков являются аденовирусы. Наиболее часто используется аденовирус серотипа 5 (Ad5).
Однако он обладает рядом недостатков, что наталкивает исследователей напоиск альтернативных серотипов.
Одним из вариантов является использование Ad6 в качестве онколитического агента [1, 2]. Тем не менее Ad5 и Ad6 для проникновения использу© А. П. Парамоник, C. C. Куцейкин, И. Д. Осипов, С. В. Нетесов, 2020*Работа поддержана в рамках государственного задания по финансированию
НИР № FSUS-2020-0035 и Программы ТОП-100 НГУ.

522

pаздел 4ют коксаки-аденовирусный рецептор (CAR), экспрессия которого сниженаво многих опухолях. Возможным решением является сдвиг специфичности
вируса за счет создания химерного белка файбер, отвечающего за связывание с первичным рецептором.
Ранее в лаборатории была получена шаттл-плазмида, несущая участки аденовируса серотипа 6 со вставками промотора hTERT и гена GMCSF.
В ходе данной работы с помощью гомологичной рекомбинации in vitro былапроизведена замена начального фрагмента гена белка файбер на фрагмент
аденовируса серотипа 3. Аденовирус серотипа 3 в качестве первичного рецептора использует белок десмоглеин, широко распространенный среди
опухолей. В результате был получен штамм Ad6/3-hTERT-GMCSF, несущий
встройку промотора hTERT для аттенуации вирусной репликации, генаGMCSF для усиления иммуногенности, а также химерный белок файбер.
Далее мы сравнили активность различных рекомбинантных вариантов
вируса в отношении клеток линии MDA-MB-231 со сниженной экспрессией
CAR [3]. Клетки заражали вирусом в MOI (количестве вирусных частиц наклетку) от 10 до 105 и инкубировали в поддерживающей питательной средепри температуре 37 °С. Цитотоксическая активность вирусов была измерена спустя 72 часа после заражения.
Наибольшую цитотоксичность показал химерный штамм вируса Ad6/3hTERT-GMCSF. При этом достоверные различия между действием данного

Сравнение цитотоксичности штаммов аденовирусана культуре клеток MDA-MB 231. Данные представлены в виде x ± SEM

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

523

штамма и действием штаммов с немодифицированным белком файбером
наблюдаются во всех разведениях, начиная с минимального. При заражении вариантом Ad6/3-hTERT-GMCSF в максимальном MOI выживает всего
36,2 % клеток, в то время как при заражении остальными штаммами в тойже дозе вируса процент жизнеспособности клеток составляет около 50 %.
Таким образом, данная модификация расширяет спектр опухолей, подлежащих лечению рекомбинантными аденовирусами серотипа 6.
Литература
1. Romanenko M. V. et al. Oncolytic Effect of Adenoviruses Serotypes 5 and 6 Against
U87 Glioblastoma Cancer Stem Cells // Anticancer Res. 2019. Vol. 39. № 11. P. 6073–6086.
2. Shashkova E. V, May S. M., Barry M. A. Characterization of human adenovirus
serotypes 5, 6, 11, and 35 as anticancer agents. // Virology. 2009. Vol. 394. № 2. P. 311–320.
3. Mach N. et al. Spectrum-wide exploration of human adenoviruses for breast cancer
therapy // Cancers (Basel). 2020. Vol. 12. № 6. P. 1–18.

pаздел 4524СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ОБЗОР ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ
ХАРАКТЕРИСТИК ПРОГРАММ СИНТЕЗА ГЕНОВИ КЛЮЧЕВЫХ ПАРАМЕТРОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХПРИ ОПТИМИЗАЦИИ ИХ СТРУКТУРЫ *COMPARATIVE OVERVIEW OF FUNCTIONAL CHARACTERISTICS
OF GENES SYNTHESIS PROGRAMS AND KEY PARAMETERS USEDIN OPTIMIZING OF THEIR STRUCTURE
И. М. Переверзев 1, Н. А. Торгашева 1,
О. И. Голосова 2, А. В. Тиунов 2, Г. Ю. Шевелев 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский центр информационных технологий «Унипро»I. M. Pereverzev 1, N. A. Torgasheva 1,
O. I. Golosova 2, A. V. Tiunov 2, G. Y. Shevelev 1
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Unipro Center for Infomation Technologies, Novosibirsk
E-mail: pereverzevi1994@mail.ruАннотация

Нами было разработано программное обеспечение для анализа и оптимизации
кодонного состава генных последовательностей, а также разбиения генных конструкций на олигонуклеотиды для последующей сборки из олигонуклеотидов. Проведено сравнение программ, используемых для разбиения генной последовательности на олигонуклеотиды для сборки, по выбранным нами критериям. Показано, чтосозданная нами программа разбивает генную последовательность на олигонуклеотиды наиболее оптимальным образом.

© И. М. Переверзев, Н. А. Торгашева, О. И. Голосова, А. В. Тиунов, Г. Ю. Шевелев,2020*Работа выполнена при поддержке Базового проекта «Разработка и создание
искусственных систем для целей синтетической биологии» Нацпроект Наука. 02452019-0002 (Молодежные лаборатории) (ГЗ-0009) (2019–2020 гг.)

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия525

We have developed software for the analysis and codon optimization of gene sequences, as well as splitting gene constructs into oligonucleotides for subsequent assembly fromoligonucleotides. A comparison of the programs used for splitting the gene sequence into
oligonucleotides for assembly was carried out according to the criteria we selected. It was
shown that the program we created splits the gene sequence into oligonucleotides in themost optimal way.

Одной из отличительных особенностей синтетической биологии является дизайнерский подход, широко применяемый к созданию биологических молекул или живых организмов, в результате которого происходит
значимое изменение свойств соответствующих объектов относительно ихприродных аналогов.
Знание основных программных решений, имеющихся в открытом доступе, позволяет выбрать оптимальную комбинацию программных инструментов для успешного решения задач, связанных с дизайном, и синтезом
соответствующих объектов. Данная работа посвящена анализу функциональных характеристик программ, используемых для синтеза генов, а также
разбору ключевых параметров, используемых при оптимизации их структуры. В работе проведена попытка охватить основные продукты, используемые для синтеза генов, находящиеся в открытом доступе.
Три модельные последовательности, длиной 717, 402 и 700 п. о., былиразбиты на олигонуклеотиды для дальнейшей сборки методом полимеразной циклической сборки при помощи различных программ: DnaWorks,
GeneDesign, GeneGenie (интернет-ресурсы) и GeneCut (разработанная намипрограмма). Разбиения проводились для различных длин и различных температур плавления перекрывающихся концов олигонуклеотидов. Для каждого разбиения были подсчитаны: разброс длин и температур плавления
перекрывающихся концов олигонуклеотидов, суммарная длина олигонуклеотидов. На основании этих параметров было проведено сравнение разбиений различными программами. В результате сравнения было определено, что при разбиении программой GeneCut суммарная длина олигонуклеотидов получается наименьшей среди всех программ. Разница в суммарной
длине олигонуклеотидов при разбиении GeneCut и другими программами
составляет до 20 %, что позволяет сократить расходы на синтез олигонуклеотидов.

526

pаздел 4Литература
1. Hoover D. M., Lubkowski J. DNAWorks: an automated method for designing
oligonucleotides for PCR-based gene synthesis // Nucleic Acids Research. 2002. Vol. 30(10).
P. 2–7. doi.org/10.1093/nar/30.10.e43
2. Swainston N., Currin A., Day P. J., Kell D. B. GeneGenie: optimized oligomer designfor directed evolution // Nucleic Acids Research.Vol. 42. Iss. W1. P. W395–W400. doi.
org/10.1093/nar/gku336
3. Richardson S. M., Nunley P. W., Yarrington R. M., Boeke J. D., Bader J. S. GeneDesign
3.0 is an updated synthetic biology toolkit // Nucleic Acids Research. 2010. Vol. 38(8).
P. 2603–2606. doi.org/10.1093/nar/gkq143
4. Richardson S. M., Wheelan S. J., Yarrington R. M., Boeke J. D. GeneDesign: Rapid,
automated design of multikilobase synthetic genes // Genome Res. 2006. P. 550–556.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

527ВЗАИМОСВЯЗЬ ТИПОВ ФАЗЕОЛИНА С КОЛИЧЕСТВЕННЫМИ
ПРИЗНАКАМИ ФАСОЛИ ОБЫКНОВЕННОЙ
RELATIONSHIP OF PHASEOLIN TYPESWITH QUANTITATIVE TRAITS OF COMMON BEANS
К. О. Плотников, В. А. Рябинина, Н. В. Блажко, С. Е. Пашковский
Научно-исследовательский центр «ИННОВАЦИИ», Новосибирск
K. O. Plotnikov, V. A. Ryabinina, N. V. Blazhko, S. E. Pashkovsky
Research Centre «Innovations», NovosibirskАннотация
Представлены данные о генетическом скрининге образцов фасоли по типу фазеолина методом ПЦР и белкового электрофореза, и его взаимосвязи с количественными признаками. Типирование проводилось по методике, предложенной J. Kamiи соавторами. Изучены 23 сорта фасоли Новосибирского ГАУ. В ходе исследования установлено, что 20 сортов обладают Т-типом фазеолина, 2 сорта — S-типом
и 1 сорт — N-типом. Обнаружены значимые различия между сортами с разным типом фазеолина по числу семян с растения и по массе 1000 семян.

Abstract
Results on the genetic screening of bean samples by phaseolin genotyping by PCR andSDS-PAGE electrophoresis are presented. PCR genotyping was performed according to themethod proposed by J. Kami et. al. 23 varieties of beans from Novosibirsk state agricultural university were studied by phaseolin type. The analysis showed that 20 varieties wereТ-type phaseolin, 2 varieties — S-type and 1 varieties had N-type. The presence of significant differences between varieties with different types of phaseolin in the number of seeds
per plant and the weight of 1000 seeds was found.

Фазеолин — основной запасной белок семян фасоли. Он имеет несколько типов, наиболее распространенными являются S- и Т-. Также отмечается
наличие связи между типом фазеолина и некоторыми ценными хозяйственными признаками, например содержанием общего белка.
В данной работе проведено типирование по фазеолину 23 сортов фасоли
зерновой с применением SCAR маркеров ПЦР и SDS-PAGE электрофореза.
© К. О. Плотников, В. А. Рябинина, Н. В. Блажко, С. Е. Пашковский, 2020pаздел 4528Также проведен анализ взаимосвязи с количественными признаками (масса
семян с растения, масса 1000 семян).
По результатам проведенного исследования было установлено, что
20 сортов обладали Т-типом фазеолина, 2 сорта — S-типом и 1 сорт имелN-тип, который ранее не определялся методом ПЦР. Для уточнения типов
фазеолина был использован белковый электрофорез в денатурирующих условиях.
При сопоставлении данных типирования с количественными показателями, представленными в таблице, установлено наличие различий между
сортами с разным типом фазеолина по числу семян с растения (Uэмп. = 0;Uкрит. = 4) и по массе 1000 семян (Uэмп. = 1; Uкрит. = 4). Высокой массой
1000 семян обладали сорта с Т-типом фазеолина, тогда как сорта с S-типом
имели большее число семян с растения.
Данные по числу семян с растения и массе 1000 семян по сортам
Наименование
сорта
Veenoorl
CreolaМухранула
ОранStringless
Katia
Bomba
CanarioКрасно-пестрая
Ключики белые
Романово
Мечта хозяйки
Зуша пестрая
Бийчанка пестрая
Лукерья
ИнгаРубинЗуша белая
Пестрая
Золотистая
Зуша черная

Типфазеолина
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
Т
S

Число семянс растения, шт.
25,20
33,40
18,50
52,00
30,30
33,20
39,40
34,00
23,60
43,20
25,60
33,60
23,00
16,00
56,40
35,80
33,30
33,40
28,90
40,40
67,20

Масса 1000 семян, г
463,70299,90543,30256,40325,30389,70319,50355,30488,50335,20455,40433,30614,50411,20357,70266,40445,90539,50401,20404,80243,10Наименование
сортаНерусcаBrunotМолекулярная биология
529
биологибиологияббиолог
ияТипЧисло семян
Масса 1000 семян, гфазеолинас растения, шт.
S
95,20
193,90
N
28,2
344,3

Полученные данные говорят о том, что тип фазеолина возможно использовать как молекулярный маркер при селекции фасоли зерновой попродуктивности, так как имеются статистически значимые результаты о егосвязи с ценными количественными признаками (масса 1000 семян, число
семян с растения).

pаздел 4530ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ БУККАЛЬНОГО ЭПИТЕЛИЯДЛЯ РАННЕЙ НЕИНВАЗИВНОЙ ДИАГНОСТИКИ
ПРИЖИВАЕМОСТИ ИМПЛАНТОВУ ЛЮДЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТАPROSPECTS FOR USING BUCCAL EPITHELIUM
FOR EARLY NON-INVASIVE DIAGNOSIS OF IMPLANT SURVIVALIN PEOPLE OF DIFFERENT AGES
А. А. Полякова, Д. С. Медведев
Санкт-Петербургский педиатрический медицинский университет
A. A. Polyakova 1, D. S. Medvedev 2
St. Petersburg State Pediatric Medical University
E-mail: aapol13@yandex.ruАннотацияВ настоящее время большинство пациентов стоматологического профиля среднего и пожилого возраста нуждаются в замещении дефектов зубных рядов с помощью имплантации. В связи с этим актуальной проблемой современной геронтологии и стоматологии является разработка методик по улучшению приживаемости
зубных имплантов. Одним из неинвазивных методов для достижения этой целиявляется использование молекулярной диагностики на материале буккального эпителия (БЭ).

Abstract
Currently, the majority of middle-aged and elderly dental patients require replacementof dentition defects using implantation. In this regard, an urgent problem of modern gerontology and dentistry is the development of methods to improve the survival rate of dental
implants. One of the non-invasive methods to achieve this goal is the use of moleculardiagnostics on the material of the buccal epithelium (BE).

В настоящее время большинство пациентов стоматологического профиля среднего и пожилого возраста нуждаются в замещении дефектов зубных
рядов с помощью имплантации. В связи с этим актуальной проблемой современной геронтологии и стоматологии является разработка методик по© А. А. Полякова, Д. С. Медведев, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

531улучшению приживаемости зубных имплантов. Одним из неинвазивных
методов для достижения этой цели является использование молекулярной
диагностики на материале буккального эпителия (БЭ).
В исследование были включены 2 группы пациентов среднего возраста
(45–59 лет) и пожилого возраста (60–75 лет), N = 10 для каждой группы.
БЭ был собран по стандартной методике и подвергнут иммуноцитохимическому окрашиванию. В качестве первичных маркеров использовали моноклональные антитела к СOX1, СOX2, клаудину-10. В качестве вторичных
антител использовали AlexaFluor 647. Морфометрию проводили на конфокальном микроскопе ZEISS LSM 980 и оценивали относительную площадь
экспрессии исследуемого маркера.
Нами было установлено, что уровень экспрессии СOX1 и клауди- на10 у лиц пожилого возраста снижается в 9,6 и 4,3 раз по сравнению с этимпоказателем у лиц средней возрастной группы. Экспрессия COX2 лиц пожилого возраста достоверно повышается в 5 раз по сравнению с этим показателем у лиц средней возрастной группы. Проведенные исследования
показали, что уровень экспрессии клаудина-10 снижен у людей старшей
возрастной группы, что выражается в нарушении плотных контактов между эндотелиальными клетками, а также снижении полярности клеток и скорости передачи сигналов, что влечет за собой значительное снижение числа
успешных имплантаций у людей пожилого возраста. Поскольку COX2 является маркером воспаления, уровень его экспрессии увеличивается в старшей возрастной группе, увеличение этого маркера также может являться
прогностическим маркером успеха имплантации.
Выявленное возрастное изменение экспрессии пула сигнальных молекулв БЭ у пациентов, проходящих замещении дефектов зубных рядов с помощью имплантации, может явиться основой для разработки нового метода
определения эффективности лечения этой патологии и ее диагностики наранних стадиях в зависимости от возраста пациента и давать прогноз обуспехе проводимого лечения.

pаздел 4532КОРЕКЦИЯ АЦИДОТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ У ЭМБРИОНОВ
ИНДЕЕК ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ФЕРУЛОВОЙ КИСЛОТЫCORRECTION OF ACIDOTIC STATES IN TURKEY EMBRYOSBY USING FERULIC ACID
А. М. Резвых, Т. О. Азарнова, В. И. Максимов, И. С. Луговая
Московская государственная академия ветеринарной медициныи биотехнологии — МВА им. К. И. Скрябина
А. M. Rezvykh, T. O. Azarnova, V. I. Maksimov, I. S. Lygovaya
Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology —MVA named after K. I. Skryabin
E-mail: rezvyh.99@mail.ruАннотация
Феруловая кислота, обладающая выраженными антиоксидантными и обменостимулирующими свойствами, определяющими оптимизацию водородного показателя крови, обуславливает повышение качества и жизнеспособности молодняка
индеек.

Abstract
Ferulic acid, which has pronounced antioxidant and metabolism-stimulating properties that determine the optimization of the pH of the blood, leads to an increase in thequality and vitality of young turkeys.

Гипоксия, неминуемо сопровождающая на разных этапах эмбриогенез
сельскохозяйственной птицы вследствие накопления организмом избытка
органических кислот, обуславливает развитие ацидоза, приумножающееся
действием сопровождающих промышленную инкубацию факторов стресса,что снижает качество и жизнеспособность эмбрионов и молодняка сельскохозяйственной птицы.
Для коррекции заявленных негативных явлений на яйцах индеек «Хайбрид Конвертер» трансовариально использовали феруловую кислоту, которая способствовала деинтенсификации липопероксидации (аномально воз© А. М. Резвых, Т. О. Азарнова, В. И. Максимов, И. С. Луговая, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

533растающей при воздействии сильных стрессоров), что выразилось в снижении цитотоксичных продуктов: изолированных двойных связей в 1,2, диеновых конъюгатов в 1,6 (р < 0,001), триеновых конъюгатов и оксодиеновых
конъюгатов равнозначно в 1,1, оснований Шиффа в 1,4 раза при увеличении
антиокислительной активности в 1,5 раза (р < 0,001) по сравнению с контролем. Заявленное обусловило повышение интенсивности центральных
метаболических процессов, а также их взаимосвязи, обусловив рост рНу индюшат суточного возраста на 1,07 % по сравнению с контролем и щелочной резервности крови на 8,5 %. Зафиксированные изменения являлись
позитивными, так как сопровождались повышением вывода индеек на
12,02 % (р < 0,01) и выводимости яиц на 6,66 %; а также преимуществом особей по шкалам «Пасгар» и «Оптистарт» на 0,5 балла (р < 0,05) и на 1,0 балл(р < 0,001) соответственно по сравнению с контролем.

pаздел 4534ВОЗМОЖНОСТИ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОТЕИНКИНАЗЫ
CDK8 ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ:СРАВНЕНИЕ С ЦИТАРАБИНОМ *EFFICACY OF CDK8 INHIBITION VERSUS CYTARABINEIN ACUTE MYELOID LEUKEMIA
М. Д. Родионова 1, Е. А. Варламова 2, А. В. Брутер 212Университет ИТМО, Санкт-Петербург
Институт биологии гена РАН, Москва

M. D. Rodionova 1, E. A. Varlamova 2, A. V. Bruter 2
1

2

ITMO University, St. Petersburg
Institute of Gene Biology RAS, Moscow
Email: demettoria@gmail.com

Аннотация
Селективное ингибирование транскрипционной протеинкиназы CDK8 — новый перспективный метод индукции гибели клеток острого миелоидного лейкоза.

Abstract
CDK8 is a promising therapeutic target for acute myeloid leukemia due to efficacy of its
inhibition, lack of toxicity and tolerance in patients.

Введение
Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) — тяжелая форма гемобластозов.
Стандартное лечение цитарабином и производными антрациклинов сопровождается полиорганной токсичностью, что обусловливает необходимость
поиска новых терапевтических подходов. В патогенезе ОМЛ установлена
роль протеинкиназы CDK8, важная для высокого транскрипционного потенциала опухолевых клеток. Cелективные ингибиторы CDK8 хорошо переносимы в эксперименте и могут быть перспективны в таргетной терапии ОМЛ.
© М. Д. Родионова, Е. А. Варламова, А. В. Брутер, 2020*Работа поддержана грантом Минобрнауки Российской Федерации (Соглашение 14.W03.31.0020 с Институтом биологии гена РАН).

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

535

Цель
Определить способность ингибитора CDK8 вызывать гибель культивируемых клеток ОМЛ в сравнении с цитарабином.
Материалы и методы
Клетки линии ОМЛ человека MV4.11 культивировали в среде RPMI1640 c добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМглутамина при 37 °С, 5 % СО2. Цитотоксичность цитарабина и селективного ингибитора CDK8 сенексина В оценивали в МТТ-тесте после инкубации
клеток; диапазон исследуемых концентраций 0,1–12,8 мкМ. Для изучения
распределения фаз клеточного цикла в культуру MV4.11 (5∙104 клеток в 3 млсреды) добавляли сенексин В или цитарабин до конечных концентраций
0,5 мкМ по отдельности или в комбинации. Через 1–3 сут клетки лизировали в буфере, содержащем неионный детергент и пропидия иодид, и анализировали флуоресценцию ядер в проточном цитофлуориметре.
Результаты
Ингибитор CDK8 вызывает гибель клеток MV4.11: IC 50 сенексина
B 0,17 ± 0,005 мкМ, цитарабина 0,4 ± 0,003 мкМ. Гибель клеток происходитпо механизму апоптоза: через 72 ч инкубации с сенексином B доля клетокв фазе G1 снизилась до 41 %, с цитарабином — до 29,15 %, в комбинации
сенексин B+цитарабин — до 15,9 %, а в контроле этот показатель составил
56 %. Распределение клеток в фазах S и G2/M при инкубации с сенексиномВ незначительно отличалось от контрольных клеток (11,5 и 7,99 % против
12,3 и 8,06 % соответственно), при инкубации с цитарабином снижалась
до 9,9 % в S-фазе и до 4,6 % в G2/M, а при использовании комбинации снижалась до 7,9 и 3,8 %. Через 3 суток инкубации клеток MV4.11 доля «событий» в субG1 области (апоптотическая фрагментация ДНК) возрастала до
39–41 % при действии сенексина B, до 56,3 % в ответ на цитарабин и до 72,3 %при комбинации препаратов по сравнению с 21 % в интактных клетках.
ВыводыВ субмикромолярных концентрациях фармакологический ингибитор
CDK8 вызывает апоптоз клеток ОМЛ (по нарастанию доли ядер с фрагментированной ДНК в линии MV4.11). В комбинации с цитарабином ингибитор CDK8 вызывает значительно более выраженную гибель клеток, чем прииспользовании одного цитарабина. Эти результаты подтверждают перспективность селективного воздействия на CDK8 в терапии ОМЛ. Отсутствие
общерезорбтивной токсичности ингибиторов CDK8 для взрослого организма позволяет считать перспективным их применение в клинике.

pаздел 4536ЭФФЕКТ СВЕРХЭКСПРЕССИИ ГЕНА HTR7 В СРЕДНЕМ МОЗГЕНА ПЛАСТИЧНОСТЬ СЕРОТОНИНОВОЙ СИСТЕМЫ МОЗГАУ МЫШЕЙ ЛИНИИ ASC — ГЕНЕТИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ ДЕПРЕССИИ *EFFECT OF HTR7 GENE OVEREXPRESSION IN MIBRAIN ON
PLASTICITY OF THE BRAIN SEROTONIN SYSTEM OF ASC MICE —THE GENETIC MODEL OF DEPRESSION
А. Я. Родный, И. А. Барабошкина, Т. В. Ильчибаева, Е. В. Антонов,Е. А. Куликова, Д. В. Базовкина, В. С. Науменко
Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
A. Ya. Rodnyy, I. A. Baraboshkina, T. V. Ilchibaeva, E. V. Antonov,
E. A. Kulikova, D. V. Bazovkina, V. S. Naumenko
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
E-mail: aleksandr1994rodny@gmail.com
Аннотация
Мышам линии ASC (Antidepressant Sensitive Catalepsy) с генетической предрасположенностью к депрессивно-подобному поведению в средний
мозгвводились аденоассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду
pAAV_Syn_HTR7-EGFP, обеспечивающую сверхэкспрессию гена Htr7, что привелок достоверному повышению подвижности в тесте Порсолта и повышению индекса
метаболизма серотонина (5-НТ). Полученные результаты указывают на снижение
депрессивно-подобного поведения.

Abstract
Adeno-associated viral particles carrying pAAV_Syn_HTR7-EGFP, providing overexpression of Htr7 gene, were injected in midbrain of ASC (Antidepressant Sensitive Catalepsy) strain mice with genetic predisposition to depressive-like behaviour that resulted insignificant mobility increase in Porsolt test and an increase in the serotonin (5-HT) metabolic index. The results indicate a decrease in depressive-like behavior.

© А. Я. Родный, И. А. Барабошкина, Т. В. Ильчибаева, Е. В. Антонов, Е. А. Куликова, Д. В. Базовкина, В. С. Науменко, 2020*Работа поддержана грантом РНФ № 19-15-00025. Животные содержались засчет средств бюджетного проекта № 0324-2019-0041-С-01.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

537Депрессивные расстройства являются сложной медико-социальной задачей из-за их высокой распространенности в современном обществе, снижения работоспособности и повышенного риска самоубийств. Несмотряна это, патогенез депрессивных расстройств до конца не ясен. Основным
препятствием является ограниченное число животных моделей. В лаборатории нейрогеномики поведения ИЦиГ СО РАН была получена линия мышей ASC с генетической предрасположенностью к депрессивно-подобному
поведению, что открывает возможности для исследования механизмов депрессии и способов ее коррекции с использованием современных молекулярно-генетических методов.
Среди большого количества гипотез возникновения депрессивных расстройств большое внимание уделяется серотониновой гипотезе. Большой
интерес представляют рецепторы серотонина 5-HT1A и 5-HT7, способные
формировать гетеродимеры, что ведет к интернализации пресинаптического рецептора 5-HT1A, ответственного за ингибирование выброса серотонина в синаптическую щель. Изучение механизма и последствий гетеродимеризации между 5–HT1A и 5–HT7 рецепторами в условиях сверхэкспрессии
5–HT7 рецепторов в норме и при развитии патологии является актуальным
вопросом для понимания нейробиологических механизмов депрессиии разработки новых, более эффективных методов терапевтического воздействия.
Было показано достоверное повышение подвижности в тесте Порсолтав группе AAV_HTR7_EGFP. Уровень экспрессии 5-HT7 в среднем мозге ожидаемо повысился, а уровень экспрессии 5-HT1A изменился. Однако индекс
метаболизма серотонина в группе AAV_HTR7_EGFP достоверно повысилсяво всех исследованных структурах.
Таким образом, впервые показан антидепрессивный эффект в результате сверхэкспрессии гена Htr7, кодирующего 5-HT7 рецептор, на линии
ASC — генетической модели депрессии.

pаздел 4538ЭФФЕКТ НОКАУТА ГЕНА CC2D1A, КОДИРУЮЩЕГО
ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР FREUD-1,
В ГИППОКАМПЕ НА НЕЙРОТРОФИЧЕСКУЮ СИСТЕМУ *
SUPRESSION EFFECT OF CC2D1A GENE ENCODING
TRANSCRIPTIONAL FACTOR FREUD-1 IN HIPPOCAMPUS
ON NEUROTROPHIC SYSTEM
А. Я. Родный, Д. В. Ерёмин,Т. В. Ильчибаева, В. С. Науменко, Е. М. Кондаурова
Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
A. Ya. Rodnyy, D. V. Eremin, T. V. Ilchibaeva,
V. S. Naumenko, E. M. Kondaurova
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk, Russia
E-mail: aleksandr1994rodny@gmail.com
Аннотация
Мышам линии С57Bl/6 в гиппокамп вводились аденоассоциированные вирусные частицы, несущие плазмиду AAV_Syn_shRNA-Freud-1 для подавления экспрессии гена Cc2d1a, что привело к ухудшению пространственной памяти и обучения.
Кроме того, экспрессия гена Creb оказалась сниженной, экспрессия гена с-Fos повышенной, а экспрессия белка proBDNF повысилась.

Abstract
Adeno-associated viral particles carrying AAV_Syn_shRNA-Freud-1 plasmid for suppression Cc2d1a gene expression were injected in hippocampus of С57Bl/6 mice, which
resulted in spatial memory and learning impairment. In addition, the Creb gene mRNA
expression was decreased, mRNA of с-Fos gene was increased and the expression of proBDNF protein was increased.

© А. Я. Родный, Д. В. Ерёмин, Т. В. Ильчибаева, В. С. Науменко, Е. М. Кондаурова,2020*Исследования выполнены при поддержке гранта РНФ № 19-15-00027. Лабораторные животные содержались за счет бюджетного проекта № 0324-2019-0041-С-01.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

539

Freud-1 (CC2D1A, Coiled-coil and C2 domain-containing protein 1A) принимает участие в имеющих критическое значение для функционирования
нейронов и их дифференциации внутриклеточных сигнальных процессах,опосредуемых транскрипционным фактором NF-κB, AKT, CREB (Cyclic
AMP-responsive element-binding protein 1). Одним из наиболее изученных
эффекторов, влияющих на функцию нейронов, является CREB, активирующий важную для пластичности мозга и памяти программу транскрипции.
Одним из самых важных факторов для нормального функционирования
долговременной памяти, обучения и нейрогенеза является нейротрофический фактор мозга (BDNF). Известно, что посредством TrkB рецепторов
CREB напрямую регулирует транскрипцию гена Bdnf, однако до сих пор неизвестно, как Freud-1 влияет на BDNF систему.
Исходя из вышесказанного, целью данной работы стало изучение эффекта
нокаута гена Cc2d1a в гиппокампе на экспрессию BDNF, TrkB, p75NTR и CREB,
а также на пространственную память и обучение.
Тестирование в водном лабиринте Морриса показало, что мыши из контрольной AVV_Scr группы успешно запоминали расположение платформы к четвертому дню, тогда как мыши из опытной группы AAV_shRNA_
Freud-1 продолжали терпеть неудачу в попытках найти платформу, а также
проводили меньше времени в целевом сегменте лабиринта (где ранее располагалась платформа) по сравнению с контрольной группой.
Нокаут гена Cc2d1a не повлиял ни на экспрессию мРНК гена Bdnf, ни наэкспрессию зрелой формы белка BDNF, однако экспрессия белка proBDNF
достоверно повысилась в группе AAV_shRNA_Freud1. В то же время экспрессия p75NTR и TrkB не изменилась. Уровень мРНК гена Creb был сниженв группе AAV_shRNA_Freud-1 по сравнению с группой AVV_Scr. Кроме
того, была измерена экспрессия генов с-Fos и Arc как генов быстрого реагирования связанных с нейропластичностью — уровень мРНК с-Fos достоверно повысился в группе AAV_shRNA_Freud-1, а уровень мРНК Arc неизменился.
Таким образом, впервые было показано влияние транскрипционного
фактора Freud-1 на BDNF-систему через регуляцию гена Creb.

pаздел 4540ХИМЕРНЫЕ ИММУНОГЕНЫ, НЕСУЩИЕ ФРАГМЕНТЫ
GP41 ВИЧ-1, СОДЕРЖАЩИЕ ЭПИТОПЫ BNABS *CHIMERIC IMMUNOGENS CARRYING FRAGMENTS
GP41 HIV-1 CONTAINING EPITOPES OF BNABS
А. П. Рудомётов, Н. Б. Рудомётова, Д. Н. Щербаков,А. А. Ильичёв, Л. И. Карпенко
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
A. P. Rudometov, N. B. Rudometova, D. N. Shcherbakov,
A. A. Ilyichev, L. I. Karpenko
State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
E-mail: rudometov_ap@vector.nsc.ruАннотацияВ данной работе описываются результаты исследования, направленного на получение и изучение антигенных и иммуногенных свойств экспериментальных ВИЧ-иммуногенов, несущих фрагменты gp41 ВИЧ-1. Показано, что полученные иммуногены
взаимодействуют с bnAbs, а при иммунизации лабораторных животных образуются
ВИЧ-специфические антитела, обладающие нейтрализующей активностью.

Abstract
This paper describes the results of a study aimed at obtaining and studying the antigenic andimmunogenic properties of experimental HIV immunogens carrying HIV-1 gp41 fragments.
It has been shown that the obtained immunogens interact with bnAbs, and during the immunization of laboratory animals, HIV-specific antibodies with neutralizing activity are formed.

Несмотря на то что в лечении антиретровирусными препаратами ВИЧ-инфицированных пациентов достигнут значительный прогресс, в настоящее
время считается, что только эффективная вакцина против ВИЧ-1 сможет
© А. П. Рудомётов, Н. Б. Рудомётова, Д. Н. Щербаков, А. А. Ильичёв, Л. И. Карпенко, 2020*Исследование выполнено при поддержке гранта Президента Российской Федерации МК-583.2020.4 (Соглашение от 07.04.2020 г. № 075-15-2020-001).

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

541

положить конец пандемии ВИЧ/СПИДа. В поддержку этого мнения может
говорить текущая пандемия COVID-19 на примере различных стран Африки, в которых ресурсы, предназначенные для борьбы с ВИЧ, перенаправленына борьбу с COVID-19, что увеличивает риск новых инфекций и количество
смертей, связанных с ВИЧ/СПИД.
На данный момент исследователи едины во мнении, что В-клеточный иммуноген должен быть направлен на консервативные антигенные детерминанты
поверхностных гликопротеинов ВИЧ-1 и индуцировать антитела, способные
нейтрализовать широкий спектр изолятов ВИЧ-1 (bnAbs). В исследованиях показано, что введение нейтрализующих антител может блокировать инфекциюу нечеловеческих приматов, что еще раз подчеркивает важность достижения
формирования bnAbs с помощью вакцинации. Более того, исследования bnAbs
к ВИЧ показывают, что успешная вакцина против вирусов с высокой антигенной вариабельностью должна в конечном итоге формировать пул поликлональных нейтрализующих антител к консервативным участкам вируса.
Целью данной работы было получение серии экспериментальных иммуногенов, несущих фрагменты gp41 ВИЧ-1 и исследование их антигенныхи иммуногенных свойств.
Ранее нами были получены и охарактеризованы два рекомбинантных
иммуногена MPER-TBI и YkuJ-MPER, содержащих по два участка MPER
(membrane-proximal external region) ВИЧ-1. На основе последовательности,кодирующей YkuJ-MPER, были получены четыре генетических конструкции с вариациями в эпитопах bnAbs 10Е8. С помощью дот-блот-анализа
установлено, что полученные иммуногены взаимодействуют с моноклональными антителами 10Е8, 2F5 и 4Е10. На основе полипептида MPERTBI получены варианты, содержащие фрагменты пептида слияния ВИЧ-1,фланкированные разными ликерными последовательностями. Получены
рекомбинантные плазмиды, кодирующие эти иммуногены.
Полученными конструкциями YkuJ-MPER, несущими варианты MPER области, была проведена иммунизация кроликов по двум схемам. Первая схема
иммунизации включала трехкратное введение MPER-TBI и однократное введение смеси трех вариантов YkuJ-MPER; вторая схема иммунизации включала трехкратное введение трех вариантов YkuJ-MPER и однократное введение
MPER-TBI. Анализ нейтрализующей активности сывороток показал, что иммунизация кроликов по схеме 1 индуцирует образование вирус-специфичных
антител, способных нейтрализовать env-псевдовирус SF162 (субтип B, tier 1).
Таким образом, сконструированные химерные белки могут быть использованы в различных стратегиях иммунизации, направленных на формирование нейтрализующих ВИЧ-1 антител.

pаздел 4542СКРИНИНГ ПАНЕЛИ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ
МОНОТЕРПЕНОИДОВ НА СПОСОБНОСТЬ БЛОКИРОВАТЬ
ПРОНИКНОВЕНИЕ ПСЕВДОВИРСУОВ ВИЧ-1 В КЛЕТКУ-МИШЕНЬ *SCREENING OF THE PANEL OF COMPOUNDS BASEDON MONOTERPENOIDS FOR THE ABILITY TO BLOCK PENETRATIONOF HIV-1 PSEUDOVIRUS INTO A TARGET CELL
Н. Б. Рудомётова 1, Н. С. Щербакова 1, Д. Н. Щербаков 1,
Л. И. Карпенко 1, А. C. Соколова 2, О. И. Яровая 2
1Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
2Новосибирский институт органической химии
им. Н. Н. Ворожцова СО РАН
N. B. Rudometova 1, N. S. Shcherbakova 1, D. N. Shcherbakov 1,
L. I. Karpenko 1, A. S. Sokolova 2, O. I. Yarovaya 2
1State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Koltsovo
N. N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry SB RAS

2

E-mail: nadenkaand100@mail.ruАннотацияВ настоящее время более 37 миллионов людей в мире инфицированы вирусом
иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1). В Российской Федерации зарегистрировано более 1,3 миллионов ВИЧ-инфицированных человек **. Антиретровирусная терапия (АРВТ) помогает продлить жизнь ВИЧ-инфицированным людям и улучшить ее качество, а также препятствует дальнейшему распространению
вируса в популяции, предотвращая новые случаи инфицирования. Ингибиторы
проникновения — относительно новый класс препаратов, чей механизм действия
обусловлен препятствием проникновения вируса в клетку-мишень. Разработка препаратов — ингибиторов проникновения — перспективное направление разработки
новых антиретровирусных препаратов.
© Н. Б. Рудомётова, Н. С. Щербакова, Д. Н. Щербаков, Л. И. Карпенко, А. C. Соколова, О. И. Яровая, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Правительства
Новосибирской области в рамках научного проекта № 19-44-540008.
**
URL: http://www.who.int/; http://www.unaids.org/.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

543

Currently, over 37 million people in the world are infected with human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1). More than 1.3 million HIV-infected people are registered in
the Russian Federation (http://www.who.int/; http://www.unaids.org/). Antiretroviral therapy (ARVT) helps to prolong the life of people living with HIV and improve its quality, andalso prevents the further spread of the virus in the population, preventing new infections.
Entry inhibitors are a relatively new class of drugs, whose mechanism of action is due tothe obstacle to the penetration of the virus into the target cell. The development of drugs —entry inhibitors — is a promising direction in the development of new antiretroviral drugs.

Псевдовирусные системы широко используются для изучения клеточного тропизма, распознавания рецепторов и механизмов ингибирования вируса, а также для разработки вакцин, получения антител и лекарственных
препаратов. Основным достоинством этой системы в случае ВИЧ-1 является возможность использования псевдовирусов, экспонирующих поверхностные белки множества вирусных субтипов, тем самым обеспечивая высокий уровень воспроизводимости результатов.
Цель работы — скрининг соединений на основе терпеноидов с использованием панели псевдовирусов ВИЧ-1 с целью поиска соединений, блокирующих проникновение ВИЧ-1.
В работе была использована международная референсная панель псевдовирусов ВИЧ-1, включающая псевдовирусы подтипов B, C, A/G, а также
региональная панель env-псевдовирусов, включающая варианты ВИЧ-1,циркулирующие на территории РФ (подтип А6, рекомбинантные формы
CRF02_AG и CRF63_02A). В качестве тестируемых веществ были использованы производные природных бициклических монотерпеноидов каркасного строения (камфора, борнеол, изоборниламин).
Согласно результатам нейтрализующего анализа перспективной оказалась группа соединений производных изоборниламина: IC50 для производного YaNv-7 составило 60,2–147,9 мкМ. Вещества этой группы показали
низкую токсичность (СС50 — 300–666,7 мкМ), при заметной специфической активности. Важно отметить, что производное YaNv-7 способно ингибировать проникновение псевдовирусов подтипов B, C, А6 и рекомбинантной формы CRF63_02A.
Таким образом, показано, что псевдовирусная система ВИЧ-1 может
быть использована для поиска перспективных соединений, способных блокировать проникновение псевдовирусов ВИЧ-1 в клетку-мишень.

pаздел 4544ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ХРОМОСОМСПЕЦИФИЧНЫХ
ЗОНДОВ ЙЕМЕНСКОГО ХАМЕЛЕОНА
(CHAMAELEO CALYPTRATUS) *OBTAINING AND CHARACTERIZATION OF CHROMOSOME-SPECIFIC
PROBES OF THE YEMENI CHAMELEON (CHAMAELEO CALYPTRATUS)
А. В. Румянцев, К. В. Тишакова
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск
Новосибирский государственный университет
A. V. Rumyantsev, K. V. Tishakova
Institute of Molecular and Cellular Biology SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University
E-mail: magakistian@mcb.nsc.ruАннотацияВ настоящей работе мы исследуем геном йеменского хамелеона (Chamaeleo calyptratus) с использованием хромосомспецифичных библиотек ДНК, что ляжетв основу хромосомной карты этого вида, необходимой для последующих геномных
сборок.

Abstract
In this work, we investigate the genome of the Yemeni chameleon (Chamaeleo calyptratus) using chromosome-specific DNA libraries, which will form the basis of the chromosome map of this species, which is necessary for subsequent genomic assemblies.

Семейство хамелеоновых включает более 200 видов из Африки и Южной
Евразии. Филогенетически хамелеоны близки агамовым и являются частью
крупного таксона Pleurodonta. Несмотря на необычное филогенетическое
положение, хамелеоновые довольно слабо изучены цитогенетически и покане вовлечены в геномные исследования. В нашей работе мы получили хромосомспецифичные библиотеки ДНК йеменского хамелеона (Chamaeleo calyptratus) (2n = 24) с помощью проточного сортинга и охарактеризовали их.
© А. В. Румянцев, К. В. Тишакова, 2020*Работа поддержана грантом РФФИ № 19-54-26017.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия545

Из одиннадцати библиотек только одна содержала две пары микрохромосом, тогда как остальные содержали по одной хромосоме каждая. Мы планируем использовать полученные библиотеки для секвенирования и анализа их генного содержания. Полученные данные позволят включить представителей хамелеоновых в сравнительные исследования геномов рептилий.

pаздел 4546ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ОНКОМАРКЕРА NFATC1
МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ СПЕКТРОСКОПИИДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙVISUALIZATION OF THE NFATC1 ONCOMARKER
BY ATOMIC FORCE SPECTROSCOPY FOR DIAGNOSTIC PURPOSES
Т. А. Садовская1, Ю. Д. Иванов2, Е. Ю. Смирнова1Московская государственная академия ветеринарной
медицины и биотехнологии — МВА им. К. И. Скрябина
2Институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича
1

T. A. Sadovskaya1, Yu. D. Ivanov2, E. Y. Smirnova1
Moscow State Academy of Veterinary
Medicine and Biotechnology of K. I. Scriabin
1

2

V. N. Orekhovich Institute of biomedical chemistryE-mail tatana123@mail.ruАннотация
Онкомаркер NFATc1 выполняет ключевую роль в антиген-зависимой пролиферации Т-лимфоцитов. С помощью атомно-силовой спектроскопии был исследован
размер этого белка. Белок NFATc1 нековалентно сорбировался на поверхности
подложки из свежесколотой слюды в виде плотных объектов диаметром от 1 до 3
нм. Результаты сканирования всех данных позволили построить распределение
визуализированных объектов. Всего обработано 855 объектов. Выявлено дваосновных пика высотой 1 и 1,8 нм. Высота визуализируемых объектов
соответствует молекулярной массе белка NFATc1 — 24 кДа.

Abstract
The NFATc1 tumor marker plays a key role in antigen-dependent proliferation of Tlymphocytes. The size, physical characteristics and chemical purity of this protein were
investigated using atomic force spectroscopy. The NFATc1 protein non-covalently boundto the surface of the freshly cleaved mica substrate in the form of dense objects with diameters ranging from 1 nm to 3 nm. The results of scanning all the data made it possible toconstruct the distribution of the rendered objects. A total of 855 objects were processed.
There were two main peaks 1 nm and 1,8 nm high. The height of the visualized objects
corresponds to the molecular weight of the NFATc1 protein — 24 kDa.
© Т. А. Садовская, Ю. Д. Иванов, Е. Ю. Смирнова, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

547

Дальнейшее успешное развитие медицинской диагностики на ранней стадии заболеваний требует разработки и внедрения более чувствительных методов анализа белков в биологических жидкостях по сравнению с традиционным иммуноферментным анализом. Белок NFATс1 — один из ключевых
факторов, инициирующих транскрипцию гена интерлейкина-2 и, в дальнейшем, пролиферацию Т-лимфоцитов. Экспрессия этого белка в клетках индуцируется при стимуляции мембранных рецепторов антигенами.
Для оценки размеров
молекул
белка NFATc1 был проведен
эксперимент по АСМ-визуализации адсорбированного белка NFATc1 наповерхности свежесколотой слюды сорта «мусковит». Белок NFATc1
нековалентно адсорбировался на поверхности подложки в видекомпактных объектов размерами от 1 до 3 нм из раствора с концентрацией
белка 10–6 М.

Рис. 1. АСМизображение поверхности
слюды с сорбированными
молекулами белка NFATc1 исечение участка, выделенного
маркерной линией.
Визуализация поверхности
выполнена на АСМ Dimension
3100 (VEECO, США).

548

pаздел 4

Рис. 2. Результаты обработки АСМ данных:Распределение визуализированных объектов по высотам

Результаты обработки данных сканирования позволили построить распределение всех визуализированных объектов по размерам. Высота этихобъектов составила от 1 до 3,2 нм, выделены два основных пика — с высотами 1 и 1,8 нм.
Полученные данные свидетельствуют о том, что белок NFATc1 адсорбирован как в мономерной форме (соответствует максимальной высоте объектов 1 нм), так и в олигомерной форме (максимальная высота объектов
составляет 1,8 нм). Высота визуализированных объектов соответствует молекулярной массе белка NFATc1 — 24 кДа.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

549

ПРОТЕОМНЫЙ СТРЕСС-ОТВЕТ РАЗЛИЧНЫХ ЧАСТЕЙ ТЕЛАЭНДЕМИЧНЫХ БАЙКАЛЬСКИХ АМФИПОД
EULIMNOGAMMARUS VERRUCOSUS НА ВОЗДЕЙСТВИЕ
АБИОТИЧЕСКИХ СТРЕССОВЫХ ФАКТОРОВ *PROTEOMIC STRESS-RESPONSE OF DIFFERENT BODY PARTS
OF BAIKAL ENDEMIC AMPHIPODS EULIMNOGAMMARUS
VERRUCOSUS TO ABIOTIC STRESS FACTORS
А. Е. Саранчина, Д. С. Бедулина
Институт биологии, Иркутский государственный университет
A. E. Saranchina, D. S. Bedulina
Institute of Biology, Irkutsk State University
E-mail: daria.bedulina@gmail.com
АннотацияУ эндемичных байкальских амфипод Eulimnogammarus verrucosus оценивали изменение белкового состава и накопление Бтш70 в мышцах, пищеварительной системе и головном сегменте при воздействии гипертермии, гипоксии и раствора хлорида
кадмия. Наиболее выраженным оказался стресс-ответ протеома пищеварительной
системы. Повышение содержания Бтш70 было сильнее при воздействии кадмия, чемпри других стрессорах.

Abstract
Changes in protein composition and Hsp70 level were estimated in muscles, head, anddigestive system of Baikal endemic amphipod Eulimnogammarus verrucosus under heatshock, hypoxia and cadmium chloride exposure. The digestive system demonstrated themost prominent response. Cadmium caused the highest accumulation of Hsp70 in all tissues among the treatments.

Озеро Байкал, древнейшее озеро на Земле, населено эндемичной, холодолюбивой и чувствительной к изменениям окружающей среды фауной.
© А. Е. Саранчина, Д. С. Бедулина, 2020*Исследование поддержано совместным грантом РНФ и ассоциации им. Гельмгольца № 18-44-06201.

550pаздел 4В свете возрастающей антропогенной нагрузки на озеро и ускоренного изменения климата становится актуальным развитие методов экологического мониторинга. Современные методы молекулярной экологии позволяют
оценить потенциал гидробионтов при резком изменении состояния окружающей среды и спрогнозировать состояние экосистем.
Целью исследования явилась оценка изменений белкового составав различных сегментах тела байкальских эндемичных амфипод Eulimnogammarus verrucosus Gerstf. при воздействии абиотических стрессовых факторов — гипертермии, гипоксии и интоксикации хлоридом кадмия.
Амфипод отлавливали в литорали южного Байкала и акклимировалик лабораторным условиям. Рачков быстро препарировали на льду, после
чего спинную мышцу, головной сегмент и кишечник с отростками гепатопанкреаса фиксировали в жидком азоте. Препарирование осуществлялив контрольной и тестовой группе после экспозиции в условиях острого температурного шока (1 ч, LT50) с последующим восстановлением (3 ч), гипоксии (6 ч, 3 мг/л O2) и хлорида кадмия (24 ч, LC10). Изменения в протеоме
оценивали методом двумерного электрофореза. Содержание Бтш70 оценивали методом вестерн-блоттинга.
На электрофореграммах отмечали снижение оптической плотности
большого количества белковых пятен после гипертермии. Гипоксия вызывала появление на гелях ряда низкомолекулярных (около 25 кДа) пятенв кислой области. Воздействие хлорида кадмия отражалось на размере пятна, соответствующего Бтш70, чего не наблюдалось при других стрессовых
воздействиях. Наибольшую лабильность проявил протеом пищеварительных органов E.verrucosus: отмечали достоверные изменения в составе белков при воздействии всех стрессоров.
Хлорид кадмия вызывал наиболее значительное увеличение содержания
Бтш70 по сравнению с температурным и гипоксическим воздействием вовсех исследованных органах и тканях.
Результаты исследования позволяют оценить целесообразность применения разных частей амфипод для выявления стресс-специфичных биомаркеров на уровне протеома.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

551

DDX3 РНК ХЕЛИКАЗА В КАЧЕСТВЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ
МИШЕНИ ДЛЯ ТЕРАПИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ:СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВПРИ МИРНК-ОПОСРЕДОВАННОМ ПОДАВЛЕНИИ
ЭКСПРЕССИИ DDX3 IN VITRO И IN VIVO *DDX3 RNA HELICASE AS THE PROMISING TARGETFOR CANCER THERAPY: COMPARATIVE
TRANSCRIPTOME ANALYSIS OF RNAI-MEDIATEDDOWNREGULATION OF DDX3 IN VITRO AND IN VIVO
О. В. Сергеева 1, Р. С. Ялчина 1, Т. А. Приказчикова 1, Т. О. Абакумова 1,
И. И. Курочкин 1, Т. С. Зацепин 1,2
12Сколковский институт науки и технологий, Москва
Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова

O. V. Sergeeva 1, R. S. Ialchina 1, T. A. Prikazchikova 1, T. O. Abakumova 1,
I. I. Kurochkin 1, T. S. Zatsepin 1,2
1

Skolkovo Institute of Science and Technology, Moscow
2
Lomonosov Moscow State University
E-mail: o.sergeeva@skoltech.ruАннотация
DDX3 является мультифункциональным белком, участвующим в регуляции
различных аспектов РНК метаболизма: транскрипции, трансляции, сплайсинга,транспорта и деградации РНК. Все эти свойства делают хеликазу DDX3 привлекательной мишенью для терапии онкологических и вирусных заболеваний. Мы использовали метод РНК-интерференции для ингибирования хеликазы DDX3 in vitro
и in vivo в печени мыши с целью описания всех функций и биологических путей,в которых участвует РНК-хеликаза. Нами были отобраны две миРНК с различной
эффективностью и определены условия ингибирования РНК хеликазы DDX3 in vitro
и in vivo. Мы провели сравнительный анализ профилей изменения экспрессии генов
in vitro и in vivo и обнаружили значимые отличия. Снижение уровня РНК хеликазы
DDX3 in vitro в первую очередь влияет на клеточный цикл и трансляцию, тогда как in© О. В. Сергеева, Р. С. Ялчина, Т. А. Приказчикова, Т. О. Абакумова, И. И. Курочкин, Т. С. Зацепин, 2020*Финансирование исследования: РНФ 19-74-00119.

552pаздел 4

vivo основные изменения происходят в процессах ДНК рекомбинации и репарации
повреждений ДНК. Также нами показано, что в зависимости от уровня экспрессии
хеликазы DDX3 наблюдаются различные фенотипы гепатоцитов in vivo, а также меняется вероятность появление апоптотических клеток. Полученные данные важныпри валидации РНК хеликазы DDX3 в качестве терапевтической мишени.

Abstract
DDX3 is a multifunctional protein involved in regulation of RNA metabolism, including transcription, translation, splicing, RNA transport, and RNA degradation [Y. Ariumi etal, 2014]. All these features make helicase DDX3 a perspective target for the treatment ofcancers and viral diseases. We used RNAi-mediated inhibition of DDX3 in vitro and in vivo
in the mouse liver to uncover and compare DDX3-dependent pathways. We selected two
siRNAs with different efficacy and defined the conditions of the DDX3 knockdown in vitro
and in vivo analysis. Comparison of gene expression profiles after DDX3 downregulation
showed significant differences between in vitro and in vivo data. Depletion of DDX3 RNA
helicase in vitro primarily affected the cell cycle and translation process, whereas in vivo
main changes occur during DNA recombination and DNA damage reparation. We also
demonstrated that phenotype distribution of hepatocytes and portion of apoptotic cells depends on the level of DDX3 helicase in vivo. The obtained data should be taken into accountduring validation of DDX3 RNA helicase as a therapeutic target.

В результате анализа транскриптомных данных после подавления экспрессии хеликазы DDX3 были обнаружены изменения в экспрессии 107 генов in vitro, тогда как in vivo изменения экспрессии отличались — от 66 генов на 6-й день после подавления DDX3 до 155 генов на 13-й день. Можно
выделить как общие изменения в биологических путях для in vitro и in vivo(снижение метаболизма жирных кислот, ксенобиотиков), так и отличающиеся процессы. На на 6-й день после подавления DDX3 in vivo изменения
лучше коррелируют с данными in vitro, тогда как после 13 дней подавления
DDX3 in vivo наблюдаются признаки воспаления, что приводит к изменению многих биологических процессов в печени.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

553ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ AS3MT, PECR И MUC7 В УВЕЛИЧЕНИИ
ВЕРОЯТНОСТИ РАЗВИТИЯ АЛКОГОЛЬНОЙ ЗАВИСИМОСТИ
POLYMORPHISM OF AS3MT, PECR, AND MUC7 GENES IN INCREASING
THE PROBABILITY OF ALCOHOLIC DEPENDENCE
Е. В. Снытков 1, В. Н. Кипень 2
1Международный государственный экологический институт
им. А. Д. Сахарова БГУ, Минск, Республика Беларусь
2Институт генетики и цитологии НАН РБ, Минск, Республика Беларусь
E. V. Snytkov 1, V. N. Kipen’ 2
1

International Sakharov Environmental Instituteof Belarusian State University, Minsk, Belarus
2
Institute of Genetics and Cytology NAS, Minsk, Belarus
E-mail: evsnytkov@gmail.com
Аннотация
Алкоголизм — хроническое заболевание, которое характеризуется пристрастием к алкоголю с психической и физиологической зависимостью от него. Намиизучено распределение частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов ряданеклассических для данной патологии генов у лиц, страдающих от алкогольной
зависимости, и у лиц из группы сравнения. Генетическими маркерами, ассоциированными с повышенной вероятностью развития алкогольной зависимости, являются: генотип GG (rs7085104, AS3MT), генотип GG (rs7590720, PECR) и аллельА (rs1109501, MUC7).

Abstract
Alcoholism is a chronic disease characterized by an addiction to alcohol with mental
and physiological dependence on it. We have studied the frequency distribution of alleles
and genotypes of polymorphic variants of a number of genes that are not classical for thispathology in persons suffering from alcohol dependence and in persons from the comparison group. Genetic markers associated with an increased likelihood of developing alcohol
dependence are: GG genotype (rs7085104, AS3MT); GG genotype (rs7590720, PECR); allele A (rs1109501, MUC7).

© Е. В. Снытков, В. Н. Кипень, 2020

554pаздел 4Введение
Алкогольная зависимость имеет ряд социальных проявлений, таких каквысокий уровень смертности, снижение уровня жизни людей, непреднамеренные травмы, криминальное поведение, дорожно-транспортные происшествия, суицид и др. В настоящее время дискутируются две основные
гипотезы: первая — генетический фактор развития алкогольной зависимости обусловлен совокупным влиянием множества низко- и среднепенетрантных генов, каждый из которых обладает незначительным эффектомпо отдельности; вторая — наибольший вклад в развитие алкогольной зависимости оказывает небольшое число высокопенетрантных генов. Нашаработа придерживается первой гипотезы.
Материалы и методы
Данное исследование проведено по типу случай-контроль и включает 353 добровольца, постоянно проживающих на территории Республики
Беларусь, для 142 из которых клинически установлена алкогольная зависимость (основная группа), в то время как 211 человек не имели пристрастияк спиртосодержащим веществам (группа сравнения). Группа сравнения поосновным демографическим критериям (пол, возраст, социальный статус
и пр.) соответствовала основной группе. Генотипирование по полиморфным вариантам rs7085104 (AS3MT), rs7590720 (PECR) и rs1109501 (MUC7)проводилось с использованием технологии плавления ампликона высокого разрешения (HRM — high resolution melting) на термоциклере в режиме реального времени CFX96 Touch (Bio-Rad). Валидация полученных
результатов осуществлена с использованием метода ПЦР-ПДРФ.
Результаты
Генетическими маркерами, ассоциированными с повышенной вероятностью развития алкогольной зависимости, оказались: генотип GG(rs7085104, AS3MT) — ОШ = 1,76 [95 % ДИ = (1,02–3,03)], p = 0,0490; генотип
GG (rs7590720, PECR) — ОШ = 2,53 [95 % ДИ = (1,27–5,03)], p = 0,0080; аллель А (rs1109501, MUC7) — ОШ = 1,92 [95 % ДИ = (1,39–2,65)], p < 0,0001.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

555

Для данных полиморфизмов имеется связь с шизофренией, алкоголизмом, расстройствами аутического спектра, поэтому полученные нами результаты будут способствовать дальнейшему поиску и анализу общих генетических компонент для аддиктивных заболеваний, включая алкогольную
зависимость.

pаздел 4556ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ EPHX2, MUC7 И DGK1
В УВЕЛИЧЕНИИ ВЕРОЯТНОСТИ РАЗВИТИЯ
НАРКОТИЧЕСКОЙ ЗАВИСИМОСТИ
POLYMORPHISM OF AS3MT, PECR, AND MUC7 GENESIN INCREASING THE PROBABILITY
OF DRUG DEPENDENCE DEVELOPMENT
Е. В. Снытков 1, В. Н. Кипень 2
1Международный государственный экологический институт
им. А. Д. Сахарова БГУ, Минск, Республика Беларусь
2Институт генетики и цитологии НАН РБ, Минск, Республика Беларусь
E. V. Snytkov 1, V. N. Kipen’ 2
1

International Sakharov Environmental Instituteof Belarusian State University, Minsk, Belarus
2
Institute of Genetics and Cytology NAS, Minsk, Belarus
E-mail: evsnytkov@gmail.com
Аннотация
Наркотическая зависимость представляет собой хроническое заболевание, длякоторого характерны множественные рецидивы, характеризуется постоянным влечением к употреблению наркотических веществ, часто сопровождается психическими и соматическими расстройствами. По нашим данным, генетическими маркерами, ассоциированными с повышенной вероятностью развития алкогольной
зависимости, являются rs73229090 (EPHX2), rs1109501 (MUC7), rs3735025 (DGKI).

Abstract
Drug addiction is a chronic disease, which is characterized by multiple relapses,
is characterized by a constant craving for the use of drugs, often accompanied by mental and somatic disorders. According to our data genetic markers associated with an increased likelihood of alcohol dependence are rs73229090 (EPHX2), rs1109501 (MUC7),
rs3735025 (DGKI).

© Е. В. Снытков, В. Н. Кипень

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

557Введение
Наркотическая зависимость — это хроническое заболевание, характеризующееся навязчивым поиском и употреблением наркотиков, которое
трудно контролировать, несмотря на пагубные последствия. Первоначальное решение о приеме наркотиков является добровольным для большинства людей, но повторное употребление наркотиков может привести к изменениям мозга, которые бросают вызов самоконтролю зависимого человекаи мешают его способности противостоять сильному побуждению к употреблению наркотиков. Эти изменения мозга могут быть стойкими, поэтому
наркомания считается «рецидивирующим» заболеванием — люди, выздоравливающие от расстройств, связанных с употреблением наркотиков, подвергаются повышенному риску возвращения к употреблению наркотиков
даже после многих лет отсутствия их приема.
Материалы и методы
Данное исследование проведено по принципу случай-контроль и включает 332 добровольца, постоянно проживающих на территории Республики
Беларусь, для 121 из которых клинически установлена наркотической зависимости (основная группа), в то время как 211 человек не имели пристрастия к наркотическим веществам (группа сравнения). Группа сравнения поосновным демографическим критериям (пол, возраст, социальный статус
и пр.) соответствовала основной группе. Генотипирование по полиморфным вариантам rs73229090 (EPHX2), rs1109501 (MUC7) и rs3735025 (DGKI)
проводилось с использованием технологии плавления ампликона высокого разрешения (HRM — high resolution melting) на термоциклере в режиме реального времени CFX96 Touch (Bio-Rad). Валидация полученных
результатов осуществлена с использованием метода ПЦР-ПДРФ.
Результаты
Генетическими маркерами, ассоциированными с повышенной вероятностью развития наркотической зависимости, являются: аллельA по полиморфизму rs1109501 (MUC7) — ОШ = 1,54 [95 % ДИ=(1,03–2,17)],
p = 0,0100; генотипы CC/CT по полиморфизму rs3735025 (DGK1) — ОШ == 2,12 [95 % ДИ = (1,30–3,46)], p = 0,0030; генотип А/А по полиморфизму
rs73229090 (EPHX2) — ОШ = 12,49 [95 % ДИ = (0,64–243,96)], p = 0,0480.

558pаздел 4Выявление лиц с повышенной вероятностью развития наркотической
зависимости на основе молекулярно-генетического анализа является современным подходом в борьбе с данной патологией, так как позволяет своевременно провести комплекс профилактических мероприятий.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия
*

559

АТФазы CLOSTRIDIOIDES DIFFICILE
CLOSTRIDIOIDES DIFFICILE ATPases

Ю. В. Сорокина, И. Н. Рыболовлев, Д. И. Тартаковская, Ю. Ф. Белый
Национальный исследовательский центр эпидемиологиии микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи, Москва
Yu. V. Sorokina, I. N. Rybolovlev, D. I. Tartakovskaya, Y. F Belyi
1

National Research Center for Epidemiology and Microbiology
named after N. F. Gamaleya, Moscow
E-mail: luvason@gmail.com

Аннотация
Впервые клонированы гены virB4 и virD4 Clostridioides difficile, сконструированы штаммы Escherichia coli, экспрессирующие данные нуклеотидные последовательности, и разработана технология очистки для выделения белков в чистом виде.
Очищенные VirB4 и VirD4 образовывали в водных растворах типичные высокомолекулярные олигомеры, обладающие нуклеотид-трифосфатазной активностью (гидролиз АТФ > ГТФ), зависящей от присутствия в реакционной смеси двувалентных
катионов и ионов калия и с оптимальной температурой 30–37 С. VirD4, но не VirB4,проявлял выраженную ДНК-связывающую активность.

Abstract
The genes coding for VirB4 and VirD4 of Clostridioides difficile were cloned and expressed in Escherichia coli. The corresponding proteins were isolated and characterizedbiochemically. In water solutions the purified VirB4 and VirD4 produced high-molecular-mass oligomers, which were able to hydrolyze NTPs (ATP preferably to GTP). The enzymatic activity was depended on the presence of divalent cations and K+ as the cofactor
with the optimal reaction temperature of 30–37 °С. VirD4, but not VirB4, demonstrated
DNA-binding activity.

Clostridioides difficile — грамположительная анаэробная палочка, вызывающая воспалительные поражения толстого кишечника человека. Ввиду
тяжести заболевания остро стоит вопрос о поиске новых подходов к еготерапии, в том числе отборе белков-мишеней, подавление активности ко© Ю. В. Сорокина, И. Н. Рыболовлев, Д. И. Тартаковская, Ю. Ф. Белый, 2020

560pаздел 4торых привело бы к остановке развития инфекции. В последнее время появились литературные данные о возможности снижения вирулентности
патогенных микроорганизмов путем воздействия на секреторные системы
IV типа.
Аппарат IV типа секреции является многокомпонентной трансмембранной белковой структурой, участвующей в вирулентности патогенных микроорганизмов и необходимой для транспорта белков и нуклеиновых кислот из бактериальной клетки в окружающую среду. В его состав, помимо
прочих, входят белки-АТФазы, необходимые для функционирования данной системы секреции. Из результатов биоинформационного анализа известно, что геном C. difficile кодирует белки, гомологичные АТФазам IV типасекреции Agrobacterium tumefaciens — VirB4 и VirD4. Данные белки могут
выступать в качестве новых мишеней для подавления развития клостридиальной инфекции, однако работ, посвященных выделению их в чистом видеи исследованию свойств, не проводилось.
Для получения цельноразмерных белков нами были созданы рекомбинантные системы экспрессии с использованием в качестве продуцентов
Escherichia coli, Lactococcus lactis, Bacillus subtilis и Bacillus megaterium. Наибольшей продукцией целевых белков характеризовались B. megaterium.
Однако даже в этой экспрессирующей системе получить препаративные
количества белков для их биохимического анализа не удавалось ввиду ихнизкой продукции. Поэтому было принято решение получить отдельно
ферментативные домены белков после замены гидрофобных NH2-концевых
областей на гетерогенные пептиды, облегчающие дальнейшую очистку и/или способствующие лучшей растворимости препаратов (6His-, GST-, MBPтэги). Наилучшие результаты были получены с использованием целевых
препаратов, содержащих в качестве тэга MBP (мальтозо-связывающий белок). Было установлено, что VirB4 и VirD4 C. difficile образуют олигомерыс молекулярной массой около 1 мД. Белки гидролизовали преимущественно
АТФ, но не ГТФ. АТФазная активность зависела от присутствия в реакционной среде солей двувалентных металлов (в первую очередь, Mg 2+) и ионов калия. Температура инкубации 30–37 °С являлась оптимальной для реакции. VirD4 обладал ДНК-связывающей способностью. При этом данная
АТФаза взаимодействовала не только с хромосомной, но и с плазмидной
двуцепочечной ДНК. Интересно, что ионы Mg2+ усиливали ДНК-связывающую активность, но в меньшей степени, чем Mn2+, Co2+ и Ca2+. Результаты
ДНК-связывающей активности VirD4 указывают на роль предполагаемого
аппарата IV типа секреции C. difficile в генетическом обмене у бактерий.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

561

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ
САРКОМЫ ЮИНГА
THE STUDY ON THE EFFICIENCY OF THE USE OF MOLECULARGENETIC METHOD FOR DIAGNOSIS OF EWING’S SARCOMA
К. В. Субботина
Институт химический биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
Новосибирский государственный университет
K. V. Subbotina
Institute of chemical biology and fundamental medicine SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University
E-mail: kristina_sybot@mail.ruАннотация
Саркома Юинга является одной из самых агрессивных злокачественных опухолей детского возраста, которая чаще всего поражает костную ткань. На данный момент существует определенная сложность проведения дифференциальной диагностики саркомы Юинга с другими опухолями. Поэтому нами была поставлена задача
разработать и исследовать молекулярно-генетический метод диагностики саркомы
Юинга, основанный на обнаружении химерных транскриптов с помощью Real-Time
PCR, который позволит наиболее точно и своевременно выявлять опухоль.

Abstract
Ewing’s sarcoma is one of the most aggressive malignant tumors of childhood, whichmost often affects bone tissue. At the moment, there is a certain difficulty in differential
diagnosis of Ewing’s sarcoma with other tumors. Therefore, we set the task to develop andstudy a molecular genetic method for diagnosing Ewing’s sarcoma, based on the detectionof chimeric transcripts using Real-Time PCR, which will allow the most accurate and timely detection of the tumor.

Саркома Юинга (СЮ) представляет собой остеолитическое злокачественное новообразование, которое отличается крайне быстрым рас© К. В. Субботина, 2020

562

pаздел 4пространением метастазов. В основе патогенеза СЮ лежит хромосомная
транслокация, в результате которой ген EWSR1 сливается с генами семейства ETS. Данная перестройка приводит к экспрессии химерного онкопротеина EWSR1-ETS, который участвует в регуляции транскрипции некоторых генов. Обнаружение одного из нескольких патогномоничных химерных
транскриптов является золотым стандартом диагностики.
В основном данное изменение генома детектируется с помощью метода FISH гибридизации. Для повышения информативности метода требуется проведение множественных гибридизаций, поэтому к одному из егонедостатков относится моноплексность, то есть возможность выявления
только одного транскрипта с помощью одной гибридизационной пробы.
Поэтому сейчас на первый план выходят такие методы, как Real-Time PCR,значительным преимуществом которой является мультиплексный подход.
С помощью введения в практику данного метода становится возможной
быстрая и точная дифференциальная диагностика СЮ с другими злокачественными новообразованиями.
Таким образом, целью нашей работы стала разработка метода диагностики СЮ на основе выявления химерных транскриптов с помощью RealTime PCR на препаратах РНК, полученных из фиксированной ткани в парафиновых блоках.
В ходе проведенного анализа базы данных Cosmic было обнаружено, что наиболее часто встречающимися транскриптами являются
EWSR1-FLI (60,46 %), EWSR1-ATF1 (8,32 %), EWSR1-ERG (5,22 %), EWSR1CREB1 (1,15 %). С помощью программы Vector NTI был выполнен дизайн
систем олигонуклеотидных праймеров и зондов для дальнейшего выявления наиболее часто встречаемых транскриптов гена EWSR1. Также былопроведено клонирование участков выбранных олигонуклеотидных последовательностей с использованием плазмидного вектора pBlueScript II SK(+)с дальнейшей возможностью использования их в качестве контрольныхДНК и РНК.
В результате выполненной работы был разработан широкодоступный
метод диагностики СЮ на основе выявления химерных транскриптов с помощью Real-Time PCR. С использованием данного метода был осуществлен
поиск молекулярных перестроек в предоставленных 40 образцах СЮ. Самой распространенной перестройкой являлась EWSR1/FLI (15). Перестройки EWSR1/ATF1 (10), EWSR1/ERG (5), EWSR1/CREB1 (1) встречались значительно реже, что сопоставимо с данными литературы.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

563

ПОДХОДЫ ХЕМО- И БИОИНФОРМАТИКИ ДЛЯВИРТУАЛЬНОГО СКРИНИНГА ПРАКТИЧЕСКИ
ВАЖНЫХ СВОЙСТВ ДВУХЪЯДЕРНЫХ БИСТИАЗОЛИ БИСТИАДИАЗОЛСОДЕРЖАЩИХ АМИНОВ *THE CHEM- AND BIOINFORMATICS METHODSFOR VIRTUAL SCREENING OF PRACTICALLY IMPORTANT
PROPERTIES OF BINUCLEAR BISTHIAZOLEAND BISTHIADIAZOLE-CONTAINING AMINES
Ю. В. Суворова, Е. А. Петухова
Ивановский государственный химико-технологический университет
Yu. V. Suvorova, E. A. Petukhova
Ivanovo State University of Chemistry and Technology
E-mail: yuliya_butina@mail.ruАннотация
Современная фармацевтическая химия требует быстрого поиска новых антибактериальных и противовирусных препаратов. Синтез новых лекарственных соединений — это достаточно продолжительный процесс. Для сокращения временных
затрат разработаны различные компьютерные программы, позволяющие по структурной формуле соединения спрогнозировать его свойства. В настоящей работе обсуждаются спектры биологической и антибактериальной активностей бистиазолови бистиадиазолов, полученные с использованием онлайн-доступных ресурсов PASS
и Anti-Bac-Pred.

Abstract
The contemporary pharmaceutical chemistry requires a quick search of new antibacterial and antiviral drugs. The synthesis of new medicinal compounds is a rather extended
process. To decrease the time required, various computer programs have been developedthat allow predicting the properties of the compound using the structural formula. This
work discusses the biological and antibacterial activities spectra of bisthiazoles and bisthiadiazoles obtained using the online resources PASS and Anti-Bac-Pred.
© Ю. В. Суворова, Е. А. Петухова, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке Гранта Президента РФ МК1396.2020.3.

564pаздел 4В качестве объектов исследования в данной работе выбраны гетероциклические соединения, содержащие в своем составе два 1,3-тиазольныхили два 1,3,4-тиадиазольных цикла, связанных различными спейсерами, такими как метил, этил, этенил, пропил, бутил (см. рисунок).

Структуры исследованных соединений

Прогноз биологической активности, выполненный с использованием
программы PASS [1], показал, что на потенциально проявляемые свойства
оказывает влияние не только природа гетероциклического фрагмента, нои характер спейсера. Так, молекула 1а с вероятностью 98,6 % может являться антагонистом фактора роста инсулина, молекулы 1b–d, 2 могут проявлять свойства ингибитора карбоксипептидазы, причем вероятность этого
уменьшается от 86,5 до 84,2 % в ряду 1b > 2 > 1c > 1d. Соединения 3а, 3b
и 4 с большой вероятностью могут выступить в роли ингибиторов АТФ-азы, в то время как 3с может быть использован как антидиабетик, а 3d —в качестве мукомембранного протектора, который выполняет защитную
функцию слизистых оболочек организма.
Анализ спектров антибактериальных свойств, полученных посредством
программы Anti-Bac-Pred [2], показал, что бистиазолы (1a–d, 2) гипотетически могут обладать антибактериальной активностью по отношениюк грамположительным бактериям Clostridium ramosum, т. е. потенциально
могут использоваться для восстановления микрофлоры кишечника и лечения дисбактериоза. Бистиадиазолы (3a–d, 4) с вероятностью 60–63 % могут
проявить противомикробную активность по отношению к грамотрицательному штамму бактерий Shigella sp., причем увеличение длины алкильного спейсера способствует снижению активности.

Литература

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

565

1. Поройков В. В. и др. Компьютерное предсказание биологической активности
химических веществ: виртуальная хемогеномика // Вестник ВОГиС. 2009. № 1(13).
С. 137–143.
2. Filimonov D. A. et al. Computer-aided prediction of biological activity spectra forchemical compounds: opportunities and limitation // Biomed. Chem.: Research and Methods. 2018. Vol. 1(1). P. 1–21.

pаздел 4566ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОЙ ХИМИОТЕРАПИИНА ДВИГАТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ СТАРЫХ КРЫС *THE EFFECT OF LONG-TERM CHEMOTHERAPYON THE LOCOMOTOR ACTIVITY OF ELDERLY RATS
А. В. Суховских 1,2, О. П. Молодых 1, В. С. Ушаков 1, М. О. Политко 1,
Д. К. Соколов 1, Е. В. Колдышева 1, Е. В. Григорьева 1,2
1Федеральный исследовательский центр фундаментальнойи трансляционной медицины СО РАН, Новосибирск
2Новосибирский государственный университет

A. V. Suhovskih 1,2,O. P. Molodykh 1, V. S. Ushakov 1, M. O. Politko 1,
D. K. Sokolov 1, E. V. Koldysheva 1, E. V. Grigorieva 1,2
1

Federal Research Center of Fundamental
and Translational Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
E-mail: anastasia-suhovskih@mail.ruАннотация
Работа посвящена изучению влияния противоопухолевого препарата темозоломида на двигательную активность и структуру эпифизарного хряща коленных
суставов старых крыс. Показано, что длительное применение препарата приводитк снижению двигательной активности, что сопровождается дегенеративными изменениями эпифизарного хряща большеберцовой кости.

Abstract
The work is devoted to the study of the effect of the antitumor drug temozolomide on
the locomotor activity and on the structure of the elderly rats knee joints cartilage. It has
been shown that long-term use of the drug leads to a decrease in locomotor activity whichis associated with degenerative changes in the tibial epiphyseal cartilage.
© А. В. Суховских, О. П. Молодых, В. С. Ушаков, М. О. Политко, Д. К. Соколов,Е. В. Колдышева, Е. В. Григорьева, 2020*Исследование выполнено при поддержке гранта РНФ (проект № 19-75-00051).
А. В. Суховских поддержана стипендией Президента Российской Федерации (СП1816.2019.4).

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

567Противоопухолевый цитостатический препарат темозоломид (ТМЗ) является стандартным для проведения химиотерапии злокачественных глиоми метастатических меланом. Использование ТМЗ имеет множество побочных эффектов, однако недостаточно изученным остается вопрос об ухудшении двигательных навыков пациентов после длительной терапии ТМЗ.
Целью данной работы являлось изучение влияния ТМЗ на двигательную
активность крыс Wistar и структуру эпифизарного хряща коленных суставов животных.
Для изучения эффектов препарата здоровым 9-месячным крысам перорально вводили ТМЗ (150 мг/м2) в течение 4 месяцев. Животные получали
5 циклов ТМЗ по 5 дней подряд с перерывами в 16 дней между циклами.
Двигательная активность (количество пересеченных квадратов и вертикальных стоек) животных до и после применения ТМЗ была оценены в тесте «открытое поле». Парафиновые срезы коленных суставов были окрашены гематоксилином и эозином для оценки морфологических измененийи морфометрии. Для детекции общих и сульфатированных гликозаминогликанов (ГАГ) срезы были окрашены альциановым синим.
Было показано, что ТМЗ снижает горизонтальную двигательную активность животных по сравнению с контрольной группой (p < 0,01), и изменения двигательной активности сопровождаются разрывами и разволокнениями, затрагивающим пролиферативную зону и зону зрелого хряща
бедренной и большеберцовой кости. Кроме того, введение ТМЗ приводилок значительным изменениям в высоте зон эпифизарного хряща большеберцовой кости, а именно к увеличению высоты зоны молодых хондроцитов
в 4 раза (p < 0,01), снижению высоты зоны созревания в 1,5 раза (p < 0,01)и уменьшению средней толщины эпифизарного хряща большеберцовой кости 2 раза (p < 0,001). Также введение ТМЗ приводило к увеличению содержания тотальных ГАГ в матриксе хряща и уменьшению количества сульфатированных ГАГ в хондроцитах.
Таким образом, ТМЗ снижает двигательную активность взрослых животных, оказывая негативное влияние на их моторные функции. Одним измеханизмов такого эффекта может быть нарушение структуры эпифизарного хряща коленного сустава и количества ГАГ, что требует осторожностипри назначении ТМЗ пожилым пациентам и разработки вспомогательных
протекторных препаратов, снижающих побочные эффекты на суставы.

pаздел 4

568

HSP90 КАК ДОЛГОСРОЧНЫЙ БУФЕР МУТАЦИОННОГО ГРУЗА *HSP90 AS A LONG-TERM BUFFER OF MUTATIONAL BURDEN
В. Н. Тимонина 1, А. Д. Сокол 1, Д. А. Кнорре 2,
Е. О. Третьяков 3, К. В. Гунбин 4, К. Ю. Попадьин 1,51Балтийский федеральный университет
им. Иммануила Канта, Калининград
2Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова
3Медицинский университет Вены4Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
5Федеральная политехническая школа Лозанны
V. N. Timonina 1, A. D. Sokol 1, D. A. Knorre 2,
E. O. Tretiakov 3, K. V. Gunbin 4, K. Y. Popadin 1,51

Immanuel Kant Baltic Federal University, Kaliningrad
2
Lomonosov Moscow State University
3
Medical University of Vienna
4
Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novisibirsk
5
Ecole Polytechnique Federale de Lausanne
Email: valeratimonina@gmail.com
Аннотация
Белки теплового шока играют важную роль в белковом гомеостазе клеток, поддерживая правильную конформацию поврежденных белков. Несколько доказательств предполагают роль hsp90 в буферизации мутационного груза у модельных
организмов. В данном проекте мы выдвигаем гипотезу о том, что hsp90 может действовать как долгосрочный буфер груза мутаций, влияя на эволюцию видов. Для доказательства данной гипотезы мы используем межвидовое сравнение экспрессионных и геномных данных.

© В. Н. Тимонина, А. Д. Сокол, Д. А. Кнорре, Е. О. Третьяков, К. В. Гунбин,К. Ю. Попадьин, 2020*
This work has been supported by the 5 Top 100 Russian Academic Excellence Projectat the Immanuel Kant Baltic Federal University, by the Russian Foundation for Basic
Research grant 18-29-13055.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

569

Heat shock proteins play an important role in protein homeostasis of cells maintaining the correct folding of disturbed proteins. Several lines of evidence suggest the role ofhsp90 in buffering mutational burden in model organisms. Here we propose a hypothesisthat hsp90 may act as a long-term buffer of mutational load influencing species evolution.
To prove the hypothesis we use interspecies comparison of expression and genomic data.

Heat shock proteins (hsp) maintain optimal folding of their clients - proteins,affected by environmental (temperature) or genetic (a load of slightly deleterious
mutations) perturbations. In several short-term experiments (typically from one
to several generations) it has been shown that hsp90 acts as a buffer of the mutational burden influencing the manifestation of slightly-deleterious variants [1, 2,
3, 4]. Here, we propose that hsp90 may also play a long-term evolutionary rolecompensating, for example, an increased mutational burden in species with low
effective population size (Ne). Thus hsp90 might be under stronger evolutionary
constraints in low-sized versus high-sized populations.
Taking into account that the number of fixed slightly deleterious nonsynonymous variants is higher in species with low effective population size [5, 6], we
expect that the expression level of hsp90 in these species is increased to partiallycompensate the high burden of slightly-deleterious nonsynonymous variants (SDNVs). Indeed using comparative species expression level data [8] we found outthat expression level of hsp90 is the lowest in Macaque, which is characterized by
the highest effective population size among other six analyzed [8] primates (Ne of
macaque ~ 80’000, Yuan et al.2012; human: 13’100-16’200; gorilla: 28’400-56’900;
chimp: 30’900–61’800; orangutan: 42’300–84’600, data from [9]).
Analyses of hsp90 expression pattern between different human tissues (thehighest in the ovary, GTEX portal *) and different stages of mammalian development (the highest expression is observed at early stages of development whenthe most essential genes are expressed) [9] is in line with supportive role of hsp90
during the development.
Next, we assumed that because of this potential compensatory role, hsp90
might be under stronger evolutionary constraints in low-sized versus high-sized
populations compared to other genes. In order to compare the level of relaxationof hsp90 in different mammalian species, we performed a linear regression analysis with scaling of variables between species-specific Kn/Ks of hsp90 (using only
1-to-1 orthologs of human Hsp90) and species-specific generation length (whichapproximates the effective population size) of 38 mammalian species. We obtained positive correlation (slope = 0,6906, p-value = 0,0006, R^2 = 0,021). In or*

URL: https://www.gtexportal.org/.

pаздел 4570

der to make the final conclusion about selection relaxation of hsp90 we compared
the hsp90 specific slope with slopes of genes that are evolutionary comparable
to hsp90. To derive such a subset of genes we performed Principal Component
Analysis taking into account evolutionary characteristics of human genes such as
the probability of being Loss of Function intolerant, haploinsufficiency [7], etc. aswell as structural features like average exon length, gene length, number of transcripts, etc.
We expect that the hsp90-specific slope should be less steep compared to othergenes. Across comparable genes, hsp90 has one of the lowest mean Kn/Ks that emphasizes its high level of evolutionary constraints. Moreover, detailed analysis ofslopes from linear regression models of Kn/Ks vs Generation length showed a robust signal of the decreased hsp90-specific slope versus the slopes of other genes.
Finally, we analyzed the distribution of cis-eQTLs (GTEX portal *) in hsp90
compared to a subset of similar genes (see the previous section). We observedthat hsp90 has a significantly lower proportion of cis-eQTLs that decrease its expression level than in other genes (One-Sample z-test p-value < 2.2e-16). This factsuggests that loss of expression of hsp90 due to its role in homeostasis maintenance should keep a constant expression level and so it has a deficit of regulatory
expression variants decreasing its expression level compared to other genes.
Altogether we observed several lines of evidence, confirming the compensatory role of hsp90 but more analyses are needed to confirm its long-term buffering
effect.
References
1. Fares M. A., Ruiz-González M. X., Moya A., Elena S. F., Barrio E. GroEL buffers
against deleterious mutations // Nature. 2002. Vol. 417(6887). P. 398.
2. Sangster T. A., Salathia N., Lee H. N., Watanabe E., Schellenberg K., Morneau K.,
Lindquist S. HSP90-buffered genetic variation is common in Arabidopsis thaliana // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2008. Vol. 105(8). P. 2969–2974.
3. Rutherford S. L., Lindquist S. Hsp90 as a capacitor for morphological evolution //Nature. 1998. Vol. 396.6709. P. 336.
4. Maisnier-Patin S., Roth J., Fredriksson Å. et al. Genomic buffering mitigates the effects of deleterious mutations in bacteria // Nat Genet. 2005. Vol. 37. P. 1376–1379.
5. Popadin K., Polishchuk L. V., Mamirova L., Knorre D., Gunbin K. Accumulationof slightly deleterious mutations in mitochondrial protein-coding genes of large versus
small mammals // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2007. Vol. 104(33),
P. 13390–13395.
6. Popadin K. Y., Gutierrez-Arcelus M., Lappalainen T., Buil A., Steinberg J., Nikolaev
S. I., Antonarakis S. E. Gene age predicts the strength of purifying selection acting on gene*

URL: https://www.gtexportal.org/.

Молекулярная биология
571
биологибиологияббиолог
expression variation in humansия
// American Journal of Human Genetics. 2014. Vol. 95(6).
P. 660–674.
7. Bartha I., di Iulio J., Venter J. et al. Human gene essentiality // Nat Rev Genet. 2018.
Vol. 19. P. 51–62. doi.org/10.1038/nrg.2017.75.
8. Brawand D., Soumillon M., Necsulea A., Julien P., Csárdi G., Harrigan P., Albert
F. W. The evolution of gene expression levels in mammalian organs // Nature. 2011.
Vol. 478(7369). P. 343–348.
9. Prado-Martinez J., Sudmant P. H., Kidd J. M., Li H., Kelley J. L., Lorente-Galdos, B.,
Cagan A. Great ape genetic diversity and population history // Nature. 2013. Vol. 499(7459).
P. 471–475.
10. Cardoso-Moreira M., Halbert J., Valloton D. et al. Gene expression across mammalian organ development // Nature. 2019. Vol. 571. P. 505–509.

pаздел 4572СПЛАЙС-ИЗОФОРМЫ MDM2 В КЛЕТОЧНЫХ МОДЕЛЯХ РАКАЛЕГКОГО И МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА *SPLICE ISOFORMS OF MDM2 IN CELL MODELS
OF LUNG AND BREAST CANCER
Е. К. Тананыкина 1, М. Пьячентини 2, Н. А. Барлев 1, О. Ю. Шувалов 1
1Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург
2Римский университет Тор Вергата

E. K. Tananykina 1, M. Piacentini 2, N. A. Barlev 1, O. Y. Shuvalov 1
1

Institute of Cytology RAS, St. Petersburg
2
University of Rome Tor Vergata
E-mail: liza.tananykina@gmail.com

Аннотация
Являясь Е3-убиквитин лигазой, MDM2 выступает в роли основного негативного регулятора р53. Амплификация гена MDM2 наблюдается во многих злокачественных образованиях. Более того, в малигнизированных клетках также наблюдает
оверэкспрессия большого числа спайс-изоформ MDM2. Однако их функции в опухолевых клетках практически не изучены. В данной работе мы исследуем потенциальную биологическую роль наиболее распространенных сплайс-изоформ MDM2:
MDM2-A, -B и -C.

Abstract
MDM2 (mouse double minute 2 homolog) is well-known as E3-ubiquitin-protein ligase and main negative regulator of p53. MDM2 amplification is detected in many typesof cancer. Moreover, there are a lot of spliced-isoforms of MDM2, which are also overexpressed in malignant cells. However, functions of those proteins in cancer cells are practically not studied. In this study we research the possible biological role of the most common
spliced-isoforms in cancer cells: MDM2-A, -B and -C.

Помимо р53, субстратами убиквитин-лигазы MDM2 являются и другие белки-супрессоры опухолей (Rb, Е-кадгерин и др.), а также некоторые
© Е. К. Тананыкина, М. Пьячентини, Н. А. Барлев, О. Ю. Шувалов, 2020*Работа выполнена при поддержке гранта Правительства РФ №14.W03.31.0029.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

573

известные онкогены (hTert, Snail, Slug). Помимо оверэкспрессии полноразмерной формы MDM2, во многих опухолях человека наблюдается также
экспрессия сплайс-изоформ, наиболее часто обнаруживаемыми из которых
являются: MDM2-A (ALT2), MDM2-B (ALT1) и MDM2-C (ALT3).
Мы провели оценку уровня экспрессии эндогенных полноразмернойи сплайс-изоформ MDM2 (А-, -B и -C) при помощи иммуноблоттинга в панели клеточных моделей рака легкого и молочной железы. Мы показали,что клетки данных линий экспрессируют различные уровни как полноразмерной, так и сплайс-изоформ MDM2.
Для выяснения свойств и молекулярных функций сплайс-изоформ
MDM2 нами были созданы клеточные линии карциномы молочной железы (SKBR-3) и немелкоклеточной аденокарциномы легкого (Н1299, Н460)
с оверэкспрессией полноразмерной формы MDM2, сплайс-изоформ
(MDM2-A, -B и -C) и «мутантной» формы MDM2 (С464А), которая не обладает убиквитин-лигазной каталитической активностью.
На полученных клеточных линиях мы проводили оценку влияния
сплайс-изоформ MDM2 на пролиферативный потенциал раковых клеток
путем мониторнига состояния клеток на приборе xCelligence и устойчивость к широко распространенным химиотерапевтическим препаратам:доскорубицину, цисплатину, этопозиду. Полученные данные позволяют судить о различных молекулярно-биологических свойствах основнойи сплайс-изоформ в исследованных клеточных моделях.

pаздел 4574ИММУНОГЕННЫЕ ПУТИ ГИБЕЛИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК,ИНДУЦИРУЕМЫЕ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИЕЙС ПРИМЕНЕНИЕМ НОВЫХ ФОТОАГЕНТОВНА ОСНОВЕ ПОРФИРАЗИНОВ *IMMUNOGENIC PATHWAYS OF CONTROLLED CELL DEATH
BY PHOTODYNAMIC THERAPY USING NEW PHOTOAGENTS
BASED ON PORPHYRAZINS
В. Д. Турубанова 1,2, Ю. В. Ефимова 2,3, И. В. Балалаева 1, Т. А. Мищенко 1,
М. О. Савюк 1, М. В. Ведунова 1, Д. В. Крысько 1,2,3
1Национальный исследовательский Нижегородский государственный
университет им. Н. И. Лобачевского
2Лаборатория исследования и терапии гибели клеток (CDIT), кафедра
анатомии и регенерации человека, Гентский университет, Гент, Бельгия
3Институт исследований рака, Гент, Бельгия
V. D. Turubanova 1,2, Yu. V. Efimova 1,3, I. V. Balalaeva 1, T. A. Mishchenko 1,
M. O. Savuk 1, M. V. Vedunova 1, D. V. Krysko 1,2,3
12

National Research Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod
Cell Death Investigation and Therapy (CDIT) Laboratory, Department of Human
Structure and Repair, Ghent University, Ghent, Belgium
3
Cancer Research Institute Ghent, Ghent, Belgium
E-mail: vikaturu@mail.ruАннотация

Иммуногенность умирающих раковых клеток определяет эффективность противораковой терапии. Фотодинамическая терапия (ФДТ) может вызывать иммуногенную клеточную смерть (ICD), которая характеризуется испусканием молекулярных
паттернов, связанных с повреждениями (DAMP), от умирающих клеток. Целью этойработы было проанализировать, могут ли фотосенсибилизаторы на основе порфиразинов (pz I или pz III), индуцировать ICD in vitro и in vivo при использовании
© В. Д. Турубанова, Ю. В. Ефимова, И. В. Балалаева, Т. А. Мищенко, М. О. Савюк,М. В. Ведунова, Д. В. Крысько, 2020*Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда
(проект № 18-15-00279).

Молекулярная биология
575
биологибиологияббиология условия индукции клеточной смерти, охарактев ФДТ. Определены оптимальные
ризована локализация порфиразинов в клеточных компартментах. Ингибиторным
анализом определен тип клеточной смерти. Показано, что раковые клетки, индуцированные ФДТ, высвобождали HMGB1 и АТФ и были поглощены дендритными
клетками in vitro. Мы демонстрируем, что раковые клетки после индукции гибели
клеток с помощью pz I-ФДТ или pz III-ФДТ являются протекторами при использовании в модели профилактической вакцинации против опухолей на мышах.

Abstract
The immunogenicity of dying cancer cells determines the effectiveness of cancer therapy. Photodynamic therapy (PDT) can induce immunogenic form of cell death (ICD),
which is characterized by the release of damage-associated molecular patterns (DAMP)
from dying cells. The aim of this work was to analyze porphyrazine-based PDT and tocharacterize their immunogenicity. The optimal conditions for the induction of cell death
have been determined, and the localization of porphyrazines in cell compartments has
been characterized. Inhibitory analysis determined the type of cell death. It was shown thatcancer cells induced by PDT released HMGB1 and ATP and were engulfed up by dendritic
cells in vitro. We demonstrate that cancer cells, after induction of cell death by pz I-PDT or
pz III-PDT, are effectively protect mice in a tumor prophylactic vaccination model.

В настоящий момент существующие терапии рака не гарантируют выздоровления и не обеспечивают защиту от рецидивов, при этом имея большое количество побочных эффектов. Концепция иммуногенной клеточной
смерти раковых клеток состоит в том, что умирающие опухолевые клетки
испускают DAMPs, которые узнаются антигенпрезентирующими клетками
иммунной системы. После антигены опухоли могут быть представлены Тклеткам, таким образом активируя реакции адаптивного иммунного ответа
[1]. Показана высокая эффективность фотодинамической терапии (ФДТ)при лечении опухолей разных типов [2]. Известно, что только не- сколько
фотосенсибилизаторов вызывают ICD и поэтому существует по- требностьв разработке новых фотосенсибилизаторов, которые могут вы- зывать ICD.
Цель данной работы — проанализировать, способны ли новые фотосенсибилизаторы тетра(арил)терацианпорфиразины индуцировать все характеристики иммуногенной клеточной смерти.
Мы определили оптимальные концентрации фотосенсибилизаторов и обнаружили, что при дозе 20 Дж / см2 (λex 615–635 нм) как pz I, таки pz III эффективно индуцируют гибель раковых клеток. Мы демонстрируем, что эти фотосенсибилизаторы локализованы преимущественно в аппарате Гольджи и эндоплазматическом ретикулуме. Гибель клеток, вызванная

576

pаздел 4

pz I-ФДТ, ингибировалась zVAD-fmk (ингибитор апоптоза), а pz III-ФДТ,ингибировалась z-VAD-fmk и ингибитором некроптоза, некростатином-1 s.
Раковые клетки, индуцированные pz I-ФДТ или pz III-ФДТ, высвобождали
HMGB1 и АТФ и были поглощены дендритными клетками костного мозга in vitro. Мы демонстрируем, что раковые клетки после индукции гибели
клеток с помощью pz I-ФДТ или pz III-ФДТ являются протекторами при использовании в модели профилактической вакцинации против опухолей намышах. В совокупности мы показали, что два новых порфиразина являются
мощными индукторами ICD, которые можно эффективно применять приФДТ для противораковой терапии.
Литература
1. Galluzzi L. et al. The hallmarks of successful anticancer immunotherapy // Science
Translational Medicine. 2019. V. 10. Iss. 459.
2. Garg A. D., Krysko D. V., Vandenabeele P., Agostinis P. Hypericin-based photodynamic
therapy induces surface exposure of damage-associated molecular patterns like HSP70 andcalreticulin // Cancer Immunol Immunother. 2012. V. 61. P.215–21.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

577ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА MALDI-TOF МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИДЛЯ МУЛТИПЛЕКСНОГО АНАЛИЗА ФАКТОРОВ ВОСПАЛЕНИЯВ СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА БЕЗ ЕЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО
ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ЕГО ВЕРЕФИКАЦИЕЙAPPLICATION OF MALDI-TOF MASS SPECTROMETRY
FOR MULTIPLEX ANALYSIS OF INFLAMMATION FACTORS WITHOUTITS PRELIMNARY FRACTIONATION
А. А. Тюлин 1, А. С. Тараскин 1,2, А. В. Протасов 1,2, О. А. Миргородская 212Санкт-Петербургский политехнический университет Петра ВеликогоНИИ гриппа им. А. А. Смородинцева Минздрава России, Санкт-Петербург
А. А. Tyulin 1, A. S. Taraskin 1,2, A. V. Protasov 1,2, O. A. Mirgorodskaya 2
1

Peter the Great St. Petersburg Polytechnic University
2
Smorodintsev Research Institute of Influenza,
Ministry of Health of the Russian Federation, St. Petersburg
E-mail: tyulin.aa@edu.spbstu.ruАннотацияНа настоящий момент известно множество биомаркеров, которые могут представлять интерес при диагностике сепсиса и системного воспаления, однако онинедостаточно надежны для использования в качестве единого критерия молекулярной диагностики. Поэтому основной задачей данного исследования являлась
верификация метода MALDI-TOF MS, с применением изотопно-меченных внутренних стандартов, обладающего потенциальной возможностью выступать в качестве
тест-системы, позволяющей единовременно и достаточно быстро количественно оценивать уровень биомаркеров воспаления в цельной сыворотке крове без еепредварительного фракционирования. Данный подход в перспективе может бытьиспользован для дифференциального мониторинга патологии, а также контроля затяжестью течения заболевания пациента. На выборке из 87 пациентов с гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей, вирусом гриппа А, коронавирусной
инфекцией и контрольной группы здоровых доноров был определен уровень таких
биомаркеров, как альфа-2-макроглобулин, альфа-2-HS-гликопротеин (фетуин А),сывороточный амилоид А с помощью предложенного масс-спектрометрического подхода и коммерческих наборов для иммуноферментного анализа. Заявлена
© А. А. Тюлин, А. С. Тараскин, А. В. Протасов, О. А. Миргородская, 2020

578pаздел 4возможность измерения фибринопептида А как еще одного маркера воспаленияс помощью разработанной методики. После анализа полученных данных была установлена линейная корреляционная зависимость измеряемых концентраций между
двумя разными методами.

Abstract
Currently, numerous biomarkers are known to be of interest in the diagnosis of sepsis
and systemic inflammation response syndrome (SIRS). However, none of the proposed
protein factors features the necessary reliability for use as a single, molecular diagnostic criterion. Therefore, the aim of this work was to validate a MALDI-TOF MS method allowing
quick and simultaneous detection of biomarkers in biological fluids (blood serum) without
fractionation. The method may permit differential pathology monitoring or severity forecasting. For 87 serum specimens, MALDI-TOF MS and enzyme-linked immunosorbent
assay (ELISA) were used to determine the levels of the following inflammatory markers:alpha-2-macroglobulin (α2-MG); alpha-2-HS-glycoprotein (fetuin A); and serum amyloid
A (SAA). The feasibility of fibrinopeptide A detection is also presented. After analyzing
concentrations measured by the two different methods, linear concentration correlations
were established.

Целью данного исследования являлась верификация метода MALDITOF масс-спектрометрии, который позволяет количественно определятьряд воспалительных маркеров: альфа-2-макроглобулин, альфа-2-HS-гликопротеин (фетуин А), сывороточный амилоид А и фибринопептид А всыворотках крови человека с применением изотопно-меченного внутреннего стандарта (пептида, содержащего стабильные изотопы кислорода 18O)
в цельной сыворотке крови без ее предварительного фракционирования.
На выборке из 87 пациентов, включающих в себя больных коронавирусной инфекцией, сепсисом, гриппом и контрольную группу здоровых доноров, количественно оценивали уровень следующих маркеров воспаления:альфа-2-макроглобулин, альфа-2-HS-гликопротеин (фетуин А) и сывороточный амилоид А. Уровни вышеперечисленных маркеров были измереныпри помощи разрабатываемого масс-спектрометрического подхода, предполагающего мультиплексность измерения маркеров. Полученные данные
были верифицированы с помощью коммерческого набора для иммуноферментного анализа (ИФА). В группе больных с наличием коронавирусной инфекции, гриппа и сепсиса было отмечено отклонение от референсных значений таких маркеров воспаления, как альфа-2-HS-гликопротеин (фетуин А)и сывороточный амилоид А. В результате сопоставления результатов двухметодов была выявлена положительная линейная корреляция метода ИФАи масс-спектрометрического подхода. В работе была исследована возмож-Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

579

ность измерения фибринопептида А как еще одного маркера воспаленияс помощью разработанной методики. Предлагаемый метод выступает ещеодним шагом в направлении к пациент-ориентированной диагностике и лечению, в том числе основанному на использовании рациональных принципов антибиотикотерапии.

pаздел 4580РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПЛАТФОРМЫДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕХАНИЗМОВ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ
СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ
МОДЕЛЬНОГО РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ПЛОСКОГО ЧЕРВЯ
MACROSTOMUM LIGNANO *DEVELOPING AN EXPERIMENTAL PLATFORM TO STUDYMECHANISMS OF STEM CELL DIFFERENTIATION USING
A MODEL REGENERATIVE FLATWORM MACROSTOMUM LIGNANO
К. В. Устьянцев 1, В. Ю. Вавилова 1, М. Ю. Бирюков 1,
Ф. Реиноите 2, Я. Вударски 2, С. Мутон 2, Е. В. Березиков 1
12Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
Европейский институт проблем биологии старения (ERIBA),Гронинген, Нидерланды
K. V. Ustyantsev 1, V. Yu. Vavilova 1, M. Yu. Biryukov 1,
F. Reinoite 2, J. Wudarski 2, S. Mouton 2, E. V. Berezikov 1
1

2

Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk
European Research Institute for the Biology of Ageing (ERIBA),
UMCG, Groningen, Netherlands
E-mail: eberez@bionet.nsc.ru

Abstract
Regeneration depends on the cell renewal by proliferation and differentiation of stem
cells (SCs). Partially due to the lack of suitable model organisms, we are only starting tograsp how SCs differentiate into various cell types during regeneration.

We are developing the free-living flatworm Macrostomum lignano as a modelto address many of the questions in the field of regeneration research due to its
unique features, such as production of single cell eggs, a transparent body, andwhole-body regeneration enabled by the SCs called neoblasts (NBs). We have developed a large experimental toolbox for this animal, including stable transgenesis© К. В. Устьянцев, В. Ю. Вавилова, М. Ю. Бирюков, Ф. Реиноите, Я. Вударски,С. Мутон, Е. В. Березиков, 2020*
The work was supported by the Russian Science Foundation grant № 20-14-00147.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

581

and gene knock-in using CRISPR/Cas9, which is unique among flatworms. To
study the molecular programs of SCs differentiation during regeneration, we havecreated a double-reporter transgenic M. lignano line where NBs and muscle cells
are labeled with green (mNeonGreen) and red (mScarlet) fluorescent proteins,respectively. The line allows isolation of NBs, differentiated muscle cells, and NBs
differentiating into muscle cells, by FACS. The study of transcriptional states of theisolated NBs, progenitors, and differentiated cells using single cell and bulk RNA
sequencing of cell populations will reveal the candidate genes driving differentiation into muscles. Successful validation of the platform will allow deciphering theunderlying mechanisms of SCs differentiation during regeneration in the othercell types.

pаздел 4582УРОВЕНЬ ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНК В ЛИМФОЦИТАХ
ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИМЫШЕЙ ЛИНИИ AFВ ОТДАЛЕННЫЙ ПЕРИОД ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ
THE LEVEL OF DNA DAMAGE IN PERIPHERAL BLOOD LYMPHOCYTESOF THE AF LINE IN THE LONG-TERM PERIOD AFTER IRRADIATION
К. М. Фабушева, Ю. В. Дворник
Институт радиобиологии НАН Беларуси, Гомель, Республика Беларусь
K. M. Fabusheva, Y. V. Dvornik
Institute of Radiobiology of NAS of Belarus, Gomel, Belarus
E-mail: expmodels@irb.basnet.byАннотацияВ отдаленный период после однократного облучения в дозе 3Гр у мышей линии Afнаблюдается повышенный уровень повреждения ДНК в лимфоцитах периферической
крови, что может быть обусловлено преждевременным радиационно-индуцированным старением и развитием неопластических процессов в организме животного.

Abstract
In the long term, after a single irradiation et a dose of 3 Gy, Af mice exhibit an increased
level of DNA damage in peripheral blood lymphocytes, which may be due to prematureradiation-induced aging and the development of neoplastic processes in the animal’s body.

Введение
Первичный эффект ионизирующего излучения заключается в образовании однонитевых или двунитевых разрывов в молекуле ДНК, приводящих к хромосомным абберациям. Повреждение ядра приводит к синтезу
измененных белков, которые впоследствии способствуют образованию
злокачественных опухолей, вторичных радиотоксинов, вызывающих лучевую болезнь и преждевременное старение. Метод ДНК-комет используетсядля исследования влияния генотоксических факторов окружающей средыв экспериментах in vitro и in vivo.
© К. М. Фабушева, Ю. В. Дворник, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

583Цель — оценить уровень повреждения ДНК в лимфоцитах периферической крови мышей линии Af в отдаленный период после облучения.
Материалы и методыВ эксперименте использовали мышей самцов линии Af, 2,5–3-месячного
возраста. Экспериментальная группа животных подверглась общему однократному равномерному облучению при помощи рентгеновской установки
X-Rad 320 (Precision X-ray Inc.) в дозе 3 Гр, мощность дозы 155cГр/мин.
Через 6 месяцев после облучения животные были выведены из эксперимента, был проведен анализ поврежденности ДНК на лимфоцитах, выделенных из гепаринизированной крови путем центрифугирования на градиенте плотности (Histopaque, Sigma). Уровень ДНК повреждений определяли
методом щелочного гель-электрофореза (метод ДНК-комет). Полученные
изображения ДНК-комет анализировали с использованием программного
обеспечения CometScore. В качестве показателя поврежденности ДНК использовали процентное содержание ДНК в хвосте ДНК-комет.
Результаты
Исследование уровня повреждения ДНК лимфоцитов периферической
крови мышей линии Af в норме и после воздействия ионизирующего излучения при помощи метода ДНК-комет показало, что процентное содержание ДНК в хвосте ДНК-комет в контрольной группе составило 6,90 ± 0,82 %.
В опытной группе данный показатель увеличился в 1,89 раз и составил
13,08 ± 1,95 % (p < 0,05).
Помимо этого, в группе облученных животных в 1,38 раза возросло количество поврежденных лимфоцитов периферической крови по сравнению с группой «Контроль», общая частота поврежденных ядер составила
25,08 ± 3,10 % в опыте и 18,17 ± 2,32 % в контроле.
Заключение
Инбредные мыши линии Af склонны к спонтанному образованию опухолей, преимущественно в легочной ткани и теле, уровень которого значимо возрастает при старении животных. В отдаленный период после однократного облучения в дозе 3Гр у мышей линии Af наблюдается повышенный
уровень повреждения ДНК в лимфоцитах периферической крови, что может быть обусловлено преждевременным радиационно-индуцированным
старением и развитием неопластических процессов в организме животного.

pаздел 4584ФОТОАКТИВИРУЕМАЯ СИСТЕМА CRISPR/
CAS9 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БЛОКИРУЮЩИХ
ФОТОРАСЩЕПЛЯЕМЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ *PHOTOACTIVATABLE SYSTEM CRISPR/CAS9 USING BLOCKING
PHOTOCLEAVABLE OLIGONUCLEOTIDES
Е. А. Хабардина 1,2, О. А. Семиколенова 1,2,
Н. А. Данилин 1,2, К. И. Махалова 1,2,3
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
2Научно-технологический университет «Сириус», Сочи3Новосибирский государственный университет
E. A. Khabardina 1,2, O. A. Semikolenova 1,2,
N. A. Danilin 1,2, K. I. Makhalova 1,2,3
1

Institute of Сhemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Sirius University of Science and Technology, Sochi
3
Novosibirsk State University
E-mail: o.semikolenova@g.nsu.ruАннотация

Разработан подход к созданию фотоактивируемой системы CRISPR/Cas9, содержащей белок Cas9 и химерную 102-звенную направляющую sgРНК или парунаправляющих crРНК/tracrРНК и блокирующие фоторасщепляемые олигодезоксирибонуклеотиды. Блокирующие олигодезоксирибонуклеотиды содержали фоторасщепляемые линкеры на основе 1-(2-нитрофенил)-1,2-этандиола в своем составе.
Продемонстрирована возможность фотоактивации геномного редактирования с использованием фоторасщепляемых блокирующих олигодезоксирибонуклеотидов.

Abstract
The approach to the design of photoactivatable system CRISPR/Cas9 included
Cas9 protein and chimeric 102-nt guide sgRNA or pair of guide crRNA/tracrRNA andblocking photocleavable oligodeoxyribonucleotides was developed. Blocking oligodeoxy© Е. А. Хабардина, О. А. Семиколенова, Н. А. Данилин, К. И. Махалова, 2020*Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-34-51026 (Научное наставничество, рук. Д. С. Новопашина).

Молекулярная биология
585
биологибиологияббиолог
ияribonucleotides contained photocleavable
linkers on the base of 1-(2-nitrophenyl)-1,2-ethanediol in their structure. The possibility of photoactivatable gene editing using photocleavable blocking oligodeoxyribonucleotides was demonstrated.

Регуляция путем облучения светом определенной длины волны позволяет эффективно управлять активностью различных молекулярно-биологических систем in vitro и in vivo. Введение фоточувствительных компонентовв состав олигонуклеотидов или белков позволяет изменять их активностьс высоким пространственно-временным разрешением в клетках. В зависимости от дизайна таких биомолекул возникает возможность их активировать, например, за счет удаления фотоблокирующей группы под действием
света, изменять их вторичную структуру за счет изменения конформации
введенного фоточувствительного линкера или расщеплять их на части засчет гидролиза фоточувствительного линкера.
CRISPR/Cas9 система является перспективным инструментом редактирования генома. Комплекс направляющих РНК (sgРНК или crРНК/tracrРНК) и Cas9 белка позволяет с высокой эффективностью вносить разрывыв заданные положения ДНК. Перспективным является создание фотоактивируемых CRISPR/Cas9 систем с целью контроля за их активностью с помощью облучения.
Целью работы являлась разработка фотоактивируемой системы CRISPR/
Cas9, содержащей белок Cas9, химерную 102-звенную sgРНК или пару направляющих crРНК/tracrРНК и блокирующие фоторасщепляемые олигодезоксирибонуклеотиды.
Для создания фотоактивируемой системы CRISPR/Cas9 нами были получены фоторасщепляемые олигодезоксирибонуклеотиды, комплементарные фрагменту направляющей РНК в области связывания с ДНК-мишенью.
Фоторасщепляемые олигодезоксирибонуклеотиды длиной 20 или 30 нуклеотидов содержали два или три фоторасщепляемых линкера на основе 1(2-нитрофенил)-1,2-этандиола в своем составе, позволяющих гидролизовать блокирующие олигонуклеотиды в течение 5 минут путем облучения
светом на длине волны 365 нм и запустить систему редактирования генома.
По данным термической денатурации и метода задержки в геле стабильность комплексов таких модифицированных олигонуклеотидов с направляющей РНК уменьшалась с увеличением количества линкеров.
Продемонстрирована возможность блокирования функций направляющей РНК с использованием немодифицированных олигодезоксирибонуклеотидов и возможность фотоактивации геномного редактирования с использованием фоторасщепляемых блокирующих олигодезоксирибонуклеотидов.

pаздел 4586ИНГИБИРОВАНИЕ ТИРОЗИЛ-ДНК ФОСФОДИЭСТЕРАЗЫ 1ЛИПОФИЛЬНЫМИ ПИРИМИДИНОВЫМИ НУКЛЕОЗИДАМИ *INHIBITION OF TYROSYL-DNA PHOSPHODIESTERASE 1
BY LIPOPHILIC PYRIMIDINE NUCLEOSIDES
И. А. Чернышова 1, А. Л. Захаренко 2,
М. Дреничев 3, С. Н. Михайлов 3, О. И. Лаврик 1,2
1Новосибирский государственный университет
2Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск
3Институт молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН, Москва
I. A. Chernyshova 1, A. L. Zakharenko 2,
M. Drenichev 3, S. N. Mikhailov 3, O. I. Lavrik 1,2
1

2

Novosibirsk State University
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
3
Engelhardt Institute of Molecular Biology RAS, Moscow
E-mail: chernyshova0305@gmail.com
Аннотация

Исследовано ингибирование ферментов репарации ДНК тирозил-ДНК фосфодиэстеразы 1 и поли(АДФ-рибоза)полимераз 1 и 2 липофильными производными
пиримидиновых нуклеозидов. Новые эффективные ингибиторы Tdp1 были обнаружены в серии нуклеозидных производных, обладающих 2’, 3’, 5’-три-О-бензоил-D-рибофуранозой и 5-замещенными урациловыми фрагментами. Среди изученных соединений ингибиторов PARP1/2 обнаружено не было (остаточная активностьв присутствии веществ 1 мМ составляла 50–100 %).

Abstract
The effect of lipophilic nucleoside derivatives on the DNA repair enzymes tyrosyl-DNA
phosphodiesterase 1 and poly (ADP-ribose)polymerases 1 and 2 was studied. Tdp1 inhibitors with half-maximal inhibitory concentrations (IC50) in the lower micromolar andsubmicromolar range were found in a series of derivatives with 2’, 3’, 5’- tri-O-benzo© И. А. Чернышова, А. Л. Захаренко, М. Дреничев, С. Н. Михайлов, О. И. Лаврик,2020*Работа поддержана грантом РФФИ 18-29-09037 МК.

Молекулярная биология
587
биологибиологияббиолог
ия uracil fragments. There are no PARP 1/2 inhibitors
yl-D-ribofuranose and 5-substituted
among the studied compounds (residual activity in the presence of 1 mM substances was
50–100 %).

Фермент тирозил-ДНК фосфодиэстераза 1 (Tdp1) считается важной
мишенью для противоопухолевой терапии на основе ингибиторов топоизомеразы 1 (Top1) [1]. Tdp1 играет ключевую роль в удалении аддуктов
Top1-ДНК, стабилизированных ингибиторами Top1, такими как камптотецин и его клинически значимые производные. В литературе описаны ингибиторы Tdp1 различных структур на основе различных классов природныхи синтетических соединений [2, 3], имеющие полумаксимальные ингибирующие концентрации (IC50) в диапазоне 0,015–10,000 мкМ. Недавно среди
дисахаридных нуклеозидов с липофильными группами была обнаружена
новая группа ингибиторов Tdp1, эффективных в субмикромолярном диапазоне концентраций [4]. Поэтому в качестве потенциальных ингибиторов
была выбрана серия липофильных нуклеозидных производных, обладающих 2’, 3’, 5’-три-О-бензоил-D-рибофуранозой и 5-замещенными урациловыми фрагментами.
Скрининг соединений проводился флуоресцентным методом, основанном на измерении интенсивности флуоресценции в реакции удаления
гасителя из флуорофора гаситель-ДНК олигонуклеотид, катализируемой
Tdp1 в присутствии ингибитора.
Выявлен ряд соединений, обладающих выраженным ингибирующим
действием, выявлена зависимость ингибиторной активности от структуры
соединений.
Показано, что липофильные пиримидиновые нуклеозиды имеют
IC50 в нижнем микромолярном и субмикромолярном диапазоне и обладают низкой цитотоксичностью. Таким образом, эти соединения могут считаться перспективными для дальнейшей разработки и оптимизации структуры соединений, сенсибилизирующих раковые клетки к топотекану.
Литература
1. Comeaux E. Q., Waardenburg R. C. A. M. Tyrosyl-DNA phosphodiesterase I resolves
both naturally and chemically induced DNA adducts and its potential as a therapeutictarget // Drug Metabolism Reviews. 2014. Vol. 46. № 4. P. 494–507.
2. Brettrager E. J., Waardenburg R. C. A. M. Targeting Tyrosyl-DNA phosphodiesterase
I to enhance toxicity of phosphodiester linked DNA-adducts// Cancer drug resistance(Alhambra, Calif.). 2019. Vol. 2. P.1153–1163.

588

pаздел 4

3. Zakharenko A. et al. Dual DNA topoisomerase 1 and tyrosyl-DNA phosphodiesterase
1 inhibition for improved anticancer activity // Medicinal Research Reviews. 2019. Vol. 39.
№ 4. P. 1427–1441.
4. Komarova A. O. et al. Novel group of tyrosyl-DNA-phosphodiesterase 1 inhibitors
based on disaccharide nucleosides as drug prototypes for anti-cancer therapy // Journal of
enzyme inhibition and medicinal chemistry. 2018. Vol. 33. №. 1. P. 1415–1429.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

589

КРАБОПОДОБНЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИД-ПЕПТИДНЫЕ
КОНЪЮГАТЫ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО ИНГИБИРОВАНИЯ
ОНКОГЕННЫХ МИКРОРНК *CRAB OLIGONUCLEOTIDE-PEPTIDE CONJUGATES FOR TARGETEDINHIBITION OF ONCOGENIC MICRORNAS
Д. А. Чиглинцева 1,2, О. А. Патутина 1, Т. Хейман 3, Е. В. Биченкова 3,
С. К. Гапонова 1, В. В. Власов 1, М. А. Зенкова 1
1Институт химической биологиии фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск
2Новосибирский государственный университет
3Университет Манчестера, Великобритания
D. A. Chiglintseva 1,2, O. A. Patutina 1, T. Heyman 3, E. V. Bichenkova 3,
S. K. Gaponova 1, V. V. Vlassov 1, M. A. Zenkova 1
1

Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine SB RAS, Novosibirsk
2
Novosibirsk State University
3
University of Manchester
E-mail: dashachiglintseva@gmail.com
Аннотация

Разработаны и исследованы новые миРНК-направленные сиквенс-специфические искусственные рибонуклеазы крабоподобной структуры, которые способны
осуществлять эффективное расщепление онкогенной миРНК-мишени в функционально значимых областях молекулы — в «5’-затравочной» и «3’-компенсаторной»областях миРНК.

Abstract
We designed and investigated the novel type of miRNA-targeted sequence-specific artificial ribonucleases with Crab-like structure, which effectively cleave oncogenic microRNAtarget at functionally significant “5’-seed” and “3’-compensatory” regions of miRNA.
© Д. А. Чиглинцева, О. А. Патутина, Т. Хейман, Е. В. Биченкова, С. К. Гапонова,В. В. Власов, М. А. Зенкова, 2020*Работа поддержана грантом РНФ 19-14-00250 и проектом базового бюджетного финансирования ПФНИ ГАН 2013-2020 № АААА-А17-117020210024-8.

590pаздел 4Нарушение экспрессии микроРНК (миРНК) наблюдается при множестве патологических состояний, в том числе при онкологических заболеваниях. Перспективной стратегией для инактивации избыточного количества
онкогенных миРНК является применение сиквенс-специфических искусственных рибонуклеаз (иРНКаз). Ранее нашей научной группой были разработаны миРНК-адресованные иРНКазы различной структуры, которые
осуществляли расщепление миРНК в 3’-области [1, 2] и в ее центральной
части [3], вызывая ее эффективное подавление в опухолевых клетках.
В данной работе разработаны и исследованы сиквенс-специфические иРНКазы нового дизайна — крабоподобные иРНКазы, состоящиеиз олигонуклеотида, комплементарного центральной части онкогенной
миРНК-21, и двух расщепляющих пептидов [(LeuArg) 2Gly]2, присоединенных по 5’- и 3’-концам адресующей последовательности. Уникальность разработанных нуклеаз заключается в способности конъюгатов осуществлять
расщепление миРНК в «5’-затравочной» и «3’-компенсаторной» областях
молекулы, имеющих решающее значение для специфичности и функционирования миРНК. Показано, что к 48 ч разработанные конъюгаты способны вызывать полную деградацию миРНК-мишени. Исключительной характеристикой разработанных нуклеаз является способность расщеплять
миРНК в каталитическом режиме, что подразумевает деградацию множества копий миРНК. Доказано синергическое действие конъюгата и РНКазы Н: в присутствии РНКазы Н число оборотов реакции увеличивается
в 25 раз, что, несомненно, будет способствовать эффективной деградации
миРНК в клетках.
Литература
1. Patutina O. A. et al. MiRNases: novel peptide-oligonucleotide bioconjugates thatsilence miR-21 in lymphosarcoma cells // Biomaterials. 2017. Vol. 122. P. 163–178.
2. Patutina O. A. et al. Catalytic knockdown of miR-21 by artificial ribonuclease: biological performance in tumor model // Front. Pharmacol. 2019. Vol. 10. P. 879.
3. Patutina O. A. et al. Dual miRNases for Triple Incision of miRNA Target: Design
Concept and Catalytic Performance // Molecules. 2020. Vol. 25. P. 2459.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

591РИСК СОМАТИЧЕСКИХ ДЕЛЕЦИЙ МИТОХОНДРИЙ ЗАВИСИТОТ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО ГЕНОМА *RISK OF SOMATIC MITOCHONDRIAL DELETIONS IS AFFECTED BY
THE SECONDARY STRUCTURE OF THE MITOCHONDRIAL GENOME
В. А. Шаманский 1, #А. А. Михайлова 1, #К. Ушакова 1, #А. Г. Михайлова 1,2,
С. Орешков 1, Д. Кнорре 3,4, Е. О. Третьяков 5, М. Зажицкая 6, С. В. Луковски 7,
Чиа-Вэй Лиу 8, Цу-Кунг Линь 8, В. С. Кунц 9,10, А. Реймонд 11,
И. Мазунин 12, Г. А. Базыкин 12,13, К. Гунбин 1,14, Ж. Фелле 15,
М. Танака 16–18, К. Храпко 19, К. Попадьин 1,11,15#

1Балтийский федеральный университет
им. Иммануила Канта, Калиниград
2Институт общей генетики им. Н. И. Вавилова, Москва
3
НИИ Физико-химической биологии им. А. Н. Белозерского МГУ, Москва
4
Institute of Molecular Medicine, Sechenov University, Moscow
5Венский медицинский университет, Austria
6Колумбийский университет, Нью-Йорк, США
7Институт молекулярной биологии,Квинслендский университет, Брисбен, Австралия
8Мемориальный госпиталь Гаосюн Чангун и университет Чангун, Тайвань
9Боннский университет, Бонн, Германия
10Университетская клиника Бонна, Бонн, Германия
11Центр интегративной геномики, Лозанна, Швейцария
12Сколтех, Сколково
13Институт проблем передачи информации им. А. А. Харкевича, Москва
14Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск
15Федеральная политехническая школа Лозанны, Швейцария
16Национальный институт биомедицинских инноваций,здоровья и питания, Токио, Япония
© В. А. Шаманский, А. А. Михайлова, К. Ушакова, А. Г. Михайлова, С. Орешков,Д. Кнорре, Е. О. Третьяков, М. Зажицкая, С. В. Луковски, Чиа-Вэй Лиу, Цу-КунгЛинь, В. С. Кунц, А. Реймонд, И. Мазунин, Г. А. Базыкин, К. Гунбин, Ж. Фелле, М. Танака, К. Храпко, К. Попадьин, 2020*
This work is supported by the 5 Top 100 Russian Academic Excellence Project at
the Immanuel Kant Baltic Federal University, and by the Russian Foundation for Basic
Research grant 18-29-13055.
#
These authors contributed equally to this work.

pаздел 4

592
17

18

Университет Juntendo, Токио, Япония
Итабаси Медикал Систем Больница общего профиля Миёси,Миёси-мати, Япония
Saitama Prefecture, 354-0041 Japan
19
Северо-Восточный университет, Бостон, США#

V. A. Shamanskiy 1, #A. A. Mikhailova 1, #K. Ushakova 1, #A. G. Mikhailova 1,2,
S. Oreshkov 1, D. Knorre 3,4, E. O. Tretiakov 5, M. Zazhytska 6, S. W. Lukowski 7,
Chia-Wei Liou 8, Tsu-Kung Lin 8, W. S. Kunz 9,10, A. Reymond 11,
I. Mazunin 12, G. A. Bazykin 12,13, K. Gunbin 1,14, J. Fellay 15,
M. Tanaka 16–18, K. Khrapko 19, K. Popadin 1,11,15
1

Immanuel Kant Baltic Federal University, Kaliningrad, Russia
2
Vavilov Institute of General Genetics RAS, Moscow, Russia
3
Belozersky Institute of Physico-Chemical Biology MSU, Moscow
4
Institute of Molecular Medicine, Sechenov University, Moscow
5
MedUni Wien, Vienna, Austria
6
Zuckerman Institute, Columbia University, New York
7
Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland,
St Lucia, Brisbane, Australia
8
Kaohsiung Chang-Gung Memorial Hospital and Chang-Gung University, Taiwan
9University Bonn, Bonn, Germany
10
University Hospital of Bonn, Bonn, Germany
11
Center for Integrative Genomics, Lausanne, Switzerland
12
Skoltech, Skolkovo, Russia
13
Institute for Information Transmission Problems, Moscow
14
Institute of Molecular and Cellular Biology SB RAS, Novosibirsk
15
EPFL, Lausanne, Switzerland
16
National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition, Tokyo, Japan
17
Juntendo University, Tokyo, Japan18
IMS Miyoshi General Hospital, Miyoshi-machi, Japan
19
Northeastern University, Boston, MA, USA
E-mail: v.a.shamanskiy@gmail.com
Аннотация
Старение связано с накоплением соматических мутаций как в ядерном, так и вмитохондриальном (мтДНК) геномах. На риск соматических делеций митохондрий
влияет вторичная структура митохондриального генома.

AbstractМолекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

593

Aging is associated with accumulation of somatic mutations in both nuclear and mitochondrial (mtDNA) genomes. Risk of somatic mitochondrial deletions is affected by thesecondary structure of the mitochondrial genome.

Ageing is associated with accumulation of somatic mutations. This process
is especially pronounced in mitochondrial genomes (mtDNA) of postmitotic
cells, where the accumulation of somatic mitochondrial deletions is associatedwith healthy ageing and mitochondrial encephalomyopathies. Deletions are often
flanked by direct nucleotide repeats, however, they do not provide an exhaustive
explanation of deletion distribution. We hypothesized that in parallel with the roleof direct repeats there is also a global secondary structure of mtDNA, shaping
deletion formation. Analyzing the folding energies of the heavy chain, which stays
single-stranded during mtDNA replication, we observed a potential contact zone
between 6–9 kb and 13–16 kb of the major arc of mtDNA. Describing the distribution of deletions in the human mtDNA we demonstrated that the contact zone
is 3-times more mutagenic under all else equal. The proposed topological model
improves our understanding of the mechanisms of deletion formation in the human mitochondrial genome.

pаздел 4594ОЦЕНКА ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА VEGF И VEGFR В БИОПТАТАХ
ИНТАКТНОГО МИОМЕТРИЯ ПРИ МИОМЭКТОМИИУ ЖЕНЩИН РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУППEVALUATION OF VEGF AND VEGFR EXPRESSION IN INTACT
MYOMETRIAL BIOPSIES IN DIFFERENT AGE GROUPS WOMENDURING MYOMECTOMY
А. И. Шаповалова
Научно-исследовательский центр «Санкт-Петербургский институт
биорегуляции и геронтологии»A. I. Shapovalova
St. Petersburg Institute of Bioregulation and Gerontology
E-mail: alexandra.sh7@mail.ruАннотация
Факторы роста эндотелия сосудов (VEGF) являются регуляторами репарации
тканей и в зависимости от их структуры и рецепторной специфичности могут также
способствовать рубцеванию. Повышенный уровень мембранного рецептора VEGFRоказывает позитивное действие на предотвращение избыточного рубцевания.

Abstract
Vascular endothelial growth factors (VEGFs) are tissue repair regulators and dependingon their structure and receptor specificity, they can also contribute to scar tissue formation.
The increased level of VEGFR has a positive effect on the prevention of excessive scarring.

Актуальность проблемыНа сегодняшний день выбор метода родоразрешения у женщин после
миомэктомии является важным для оптимального родоразрешения у женщин с рубцом на матке. Основным хирургическим методом лечения при наличии миомы матки у женщин, планирующих беременность, в настоящее
время является консервативная миомэктомия. На качество рубца оказывает влияние репаративная активность миометрия в области удаленных мио© А. И. Шаповалова, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

595матозных узлов. Регуляторами репарации тканей являются факторы роста
эндотелия сосудов (VEGF), и в зависимости от их структуры и рецепторной
специфичности они могут также способствовать рубцеванию. Особенно
важно, что повышенный уровень VEGFR оказывает позитивное действиена предотвращение избыточного рубцевания. До сих пор количественные
показатели для этого маркера в биоптатах интактного миометрия, ассоциированные с возрастом женщин, не установлены.
Цель исследования — установить зависимость экспрессии маркера
VEGF и VEGFR в биоптатах интактного миометрия и возраста женщин.
Материалы и методы исследования
Материал был получен методом трепан-биопсии интактного миометрияв зоне, прилежащей к миоматозному узлу во время лапароскопической консервативной миомэктомии. Операция проводилась на 7–10 день менструального цикла. Первую группу (n = 10) составили женщины в возрасте от
23 до 29 лет, вторую (n = 15) — от 30 до 47 лет. Иммуногистохимическая реакция была проведена с первичными антителами к маркеру VEGF и VEGFR(1:100; Novocastra). В качестве вторичных антител использовали Alexa 647;ядра докрашивали DAPI. Морфометрический анализ был проведен в программе «Морфология 5.2» (Видиотест, Россия) на конфокальном микроскопе Olympus. Площадь экспрессии, выраженную в процентах, и оптическую
плотность оценивали на системе компьютерного анализа микроскопических изображений «Видеотест-Морфология 5.0» с применением статистических методов. Критерий корреляции Спирмана (r = 0,8) применялся дляоценки взаимосвязи между возрастом пациенток и уровнем относительной
площади экспрессии маркера неоангиогенеза VEGF и RVEGF.
Результаты исследования
Среднее значение площади экспрессии VEGF и RVEGF в 1-й группе
было выше, чем во 2-й, и составило 14,7 ± 1,49 (ср. со 2-й: 7,4 ± 1,62). Коэффициент Спирмана между возрастом женщин и относительной площадью
экспрессии VEGF и RVEGF составил 0,8 (r = 0,8), что указывает на наличие
связи высокой тесноты.
Выводы
Экспрессия маркера VEGF и VEGFR в биоптатах интактного миометрияс возрастом уменьшается, что свидетельствует о снижении активности
процессов репарации, а значит, является неблагоприятным фактором дляобразования состоятельного рубца на матке у женщин старшего репродуктивного возраста.

pаздел 4596ДОСТАВКА МРНК ВАКЦИН ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППАС ПОМОЩЬЮ КАТИОННОГО ПОЛИСАХАРИДНОГО ПОЛИМЕРА
DELIVERY OF mRNA VACCINES AGAINST THE INFLUENZA VIRUS
USING A CATIONIC POLYSACCHARIDE POLYMER
С. В. Шарабрин, А. П. Рудомётов, Е. А. Волосникова,Л. И. Карпенко, С. И. Бажан, А. А. Ильичев
Государственный научный центр вирусологиии биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово
S. V. Sharabrin, A. P. Rudometov, E. A. Volosnikova,
L. I. Karpenko, S. I. Bazhan, A. A. Ilyichev *State Research Center of Virology
and Biotechnology “Vector” Rospotrebnadzor, Koltsovo
E-mail: sharabrin.sv@gmail.com
Аннотация
Важным аспектом разработки мРНК-вакцин является поиск эффективного способа доставки вакцины. Нами был использован катионный полисахаридный полимер, разработанный на базе ГНЦ ВБ «Вектор» для доставки мРНК, полученной матричным синтезом с ДНК-вакцины, кодирующей консервативный фрагмент стебля
гемагглютинина вируса гриппа. Было подобрано оптимальное зарядовое соотношение мРНК : полиглюкин, равное 1:3,75 для защиты и доставки мРНК-вакцины.

Abstract
An important aspect of the development of mRNA vaccines is the search for an efficientmethod of vaccine delivery. We used a cationic polysaccharide polymer developed on thebasis of SRC VB “Vector” for delivery of mRNA obtained by matrix synthesis from a DNA
vaccine encoding a conservative fragment of the hemagglutinin stem of the influenza virus.
The optimal charge ratio of mRNA: polyglucin was selected, equal to 1: 3.75, for the protection and delivery of the mRNA vaccine.

© С. В. Шарабрин, А. П. Рудомётов, Е. А. Волосникова, Л. И. Карпенко, С. И. Бажан, А. А. Ильичёв, 2020Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

597мРНК вакцины являются одной из новых, перспективных и активно развивающихся вакциновых платформ. Важным аспектом разработки
мРНК-вакцин является поиск эффективного способа доставки вакциныв клетку. Серьезной преградой для внутриклеточной доставки мРНК вакцины является клеточная мембрана и деградация РНК различными рибонуклеазами.
Одним из перспективных способов доставки мРНК являются катионные полимеры. Комплексообразование отрицательно заряженной мРНКс катионными полимерами происходит самопроизвольно в результате взаимодействия «заряд — заряд», образуя наноструктуры, которые способны
улучшать поглощение мРНК посредством эндоцитоза и защищать мРНК отдеградации нуклеазы.
В данной работе в качестве модели вакцины мы использовали мРНК,полученную матричным синтезом с ДНК-вакцины, кодирующей консервативный фрагмент стебля гемагглютинина вируса гриппа *.
Целью данной работы являлась разработка метода доставки мРНК-вакцины против вируса гриппа с помощью катионного полисахаридного полимера.
Катионный полимер представляет собой конъюгат полиглюкин:спермидин (PG), хорошо зарекомендовавший себя в том числе при разработке вакцины против ВИЧ CombiHIVvac. Молекулярный вес конъюгата — 42000,
на одну молекулу полиглюкина приходится 15 молекул спермидина (т. е.
45 катионов). Основными достоинствами конъюгата являются биосовместимость, биоразлагаемость, возможность упаковки молекул нуклеиновых
кислот. Положительно заряженный спермидин обеспечивает связывание
конъюгата с мРНК.
Нами были расчитаны концентрации полиглюкина на следующие зарядовые соотношения РНК:PG — 1:2, 1:2,5, 1:3,75 и 1:5, что соответствует соотношению по массе 1:8, 1:10, 1:15 и 1:20. PG и РНК были смешаныв выбранных соотношениях, кратко вортексированы и инкубированы прикомнатной температуре в течение часа. Критерием оптимального покрытия
мРНК полиглюкином служило замедление движения мРНК в электрическом поле в ходе электрофореза в агарозном геле, степень которого зависитот степени покрытия. Соотношение 1:3,75 оказалось наиболее оптимальным. В этом случае мы наблюдали максимальную разницу в подвижности
исходной РНК и РНК, покрытой PG в ходе электрофореза.
*Bazhan S. et al. Immunogenicity and Protective Efficacy of Influenza A DNA Vaccines Encoding Artificial Antigens Based on Conservative Hemagglutinin Stem Regionand M2 Protein in Mice // Vaccines. 2020. Vol. 8. P. 448.

598pаздел 4Таким образом, в результате проведенного исследования было подобрано оптимальное зарядовое соотношение мРНК:полиглюкин, равное
1:3,75 для защиты и доставки мРНК-вакцины. Полученные комплексы мРНК:полиглюкин были использованы для иммунизации лабораторных животных.

V.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

599ДВУЦЕПОЧЕЧНАЯ ДНК С 5′-ДМТ ЗАЩИТНЫМИ ГРУППАМИ:ПОЛУЧЕНИЕ И УЧАСТИЕ В ЛИГАЗНОЙ РЕАКЦИИ
5′-DMT-PROTECTED DSDNA: SYNTHESIS AND COMPETENCETO BLUNT-ENDED LIGATION BY T4 DNA LIGASE
В. В. Щур, Ю. П. Буренкова, А. И. Жолнерович, С. А. Усанов, А. В. Янцевич
Институт биоорганической химии НАН, Минск, Республика Беларусь
V. Shchur, Y. P. Burenkova, A. I. Zhauniarovich, S. A. Usanov, A. V. YantsevichInstitute of Bioorganic Chemistry NAS, Minsk, Belarus
E-mail: shchur931@gmail.com
Аннотация
Согласно нашей гипотезе, для осуществления селективного по сравнению с укороченными побочными продуктами лигирования полнодлинновой дцДНК в плазмидный вектор по тупым концам следует осуществить полимеразную цепную
сборку (ПЦС) дцДНК с использованием олигонуклеотидов, модифицированных по
5ʹ-OH концам диметокситритильной (ДМТ) группой, за исключением фланкирующих последовательность праймеров. Мы установили, что 5ʹ-ДМТ-олигонуклеотиды
могут быть успешно использованы для получения синтетической 5ʹ-ДМТ дцДНКс помощью ПЦС. Установлен факт, противоречащий нашей гипотезе: возможно осуществить эффективное лигирование 5ʹ-ДМТ дцДНК в плазмидный вектор по тупым
концам с помощью Т4 ДНК лигазы. Требуются дальнейшие исследования для изучения возможностей применения 5ʹ-ДМТ дцДНК.

Abstract
According to our hypothesis 5ʹ-OH functionalization by 4,4ʹ-dimethoxytrityl protecting group (DMT) of all oligonucleotides except flanking ones used for polymerase chain
assembly (PCA) of synthetic dsDNA would allow to perform selective blunt-end ligationof full-length dsDNA into plasmid vector as compared to shortened by-products. We discovered that 5ʹ-DMT-oligonucleotides can be successfully used during PCA of synthetic
5ʹ-dsDNA. Despite our hypothesis, 5ʹ-DMT dsDNA can be effectively ligated into bluntend linearized plasmid vector by T4 DNA ligase. Further work on the investigation of application of 5ʹ-DMT dsDNA is required.
© В. В. Щур, Ю. П. Буренкова, А. И. Жолнерович, С. А. Усанов, А. В. Янцевич,
2020

600

pаздел 4

The functionalization of 5ʹ-OH group in nucleic acids is of significant value
for molecular biology [1]. We assumed that 5ʹ-OH modification could also findapplication in dsDNA synthesis workflow.
A large number of a shortened by-products are formed during polymerase
chain assembly (PCA) of synthetic dsDNA from oligonucleotides. Shortened
by-products are more efficiently ligated to the blunt-ended vector as compared totarget dsDNA. We suppose that 5ʹ-OH functionalization by 4,4ʹ-dimethoxytrityl(DMT) protective group of all oligonucleotides except flanking ones will allow to
get predominantly a vector with a full length insert because DNA ligase will notjoin bulky hydrophobic 5ʹ-DMT ends of shortened inserts with vector ends.

Молекулярная биология
биологибиологияббиолог
ия

601

We use 2 model dsDNAs to test our hypothesis: short 65 bp sequence formedby annealing of two 5′-DMT oligonucleotides, 312 bp sequence synthesized by
PCA according to [2].
Earlier we observed stability of DMT-dT15 oligonucleotides in PCR conditions(heating at 98 °С for 15 min in DNA polymerase’s buffers with HPLC-UV-MS
detection) [3]. In the current study, we demonstrated that DMT-oligonucleotides
could be efficiently used for gene assembly as well as PCR amplification. We
showed that presence of DMT has only slight effect on DNA electrophoretic mobility in agarose gel.
Despite our assumptions, we found that the presence of 5ʹ-DMT protection
does not influence T4 DNA ligase activity in blunt-ended reaction (results for
65 bp fragment — on figure). Moreover, ligation products derived from 5ʹ-DMT
dsDNA unexpectedly demonstrated higher transformation efficiency as compared to 5ʹ-OH PCR product ligation.
Further work on the investigation of biological properties of 5ʹ-DMT dsDNA,
including testing of the DNA-enzymes, is required to test its application inmolecular biology.
References
1. Miller G. P. et al. Versatile 5’-functionalization of oligonucleotides on solid support:
amines, azides, thiols, and thioethers via phosphorus chemistry // The Journal of organic
chemistry. 2004. Vol. 69 (7). P.2404–2410.
2. Stemmer W. P. et al. Single-step assembly of a gene and entire plasmid from large
numbers of oligodeoxyribonucleotides // Gene. 1995. Vol. 164 (1). P. 49–53.
3. Буренкова Ю. П. Стабильность 5’-диметокситритильной защитной группыв условиях полимеразной цепной реакции / Ю. П. Буренкова, А. И. Жолнерович,В. В. Щур, С. А. Усанов, А. В. Янцевич // XXI Зимняя молодежная школа по биофизике и молекулярной биологии : тезисы докладов молодежной конференции, Гатчина, 24–29 февр. 2020 г. : в 2 т. / НИЦ «Курчатовский институт» — ПИЯФ, 2020. Т. 2.
С. 34–35.

pаздел 4602СОЗДАНИЕ ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРАСО СПЕЦИФИЧНОСТЬЮ К CD5 ЧЕЛОВЕКА
CREATING OF HUMAN CD5-SPECIFIC CHIMERICANTIGEN RECEPTOR
А. А. Юрина
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Россия
Новосибирский государственный университет
A. A. Yurina
Institute of molecular and cellular biology SB RAS, Novosibirsk
Novosibirsk State University
E-mail: a.yurina@g.nsu.ruАннотация
Онкологические заболевания Т-клеточного происхождения составляют небольшую долю гематологических заболеваний, однако характеризуются повышенной смертностью и слабо поддаются лечению. Перспективным методом лечения Тклеточных лимфом является иммунотерапия Т- или NK-клетками с химерными
антигенными рецепторами (chimeric antigen receptor, или CAR). CAR представляет собой химерную молекулу, ее внеклеточная часть распознает опухолевые антигены, а внутриклеточная запускает цитотоксическую реакцию. Одной из наиболее
привлекательных мишеней для элиминации злокачественных Т-клеток является
поверхностный белок CD5, однако он экспрессируется и на нормальных Т-лимфоцитах клетках, значительно затрудняя создание CAR T-клеточного препарата. Чтобы преодолеть это ограничение, мы предлагаем использовать CAR NK-клетки соспецифичностью к CD5.

Abstract
T-cell malignancies form a small part of hematological diseases, however, they arecharacterized by high mortality rate and treated poorly. The immunotherapy with T- or
NK-cells with chimeric antigen receptors (CAR) is a prospective treatment method for Tcell lymphomas. CAR is a chimeric molecule, its extracellular part recognizes tumor antigens, and intracellular one triggers a cytotoxic reaction. One of the most attractive targets
for the elimination of malignant T-cells is the surface protein CD5, but it is also expressed* © А. А. Юрина, 2020Молекулярная биология
603
биологибиологияббиолог
on normal T-lymphocyte cells,ия
which makes it hard to create a CAR T cell preparation. To
overcome this limitation, we propose to use CD5-specific CAR NK cells.

Введение
В CAR T-терапии используются модифицированные Т- или NK-клетки
пациента, нацеленные на поверхностные антигены опухолевых клеток. Однако при лечении T-ALL и PTCLs возникает серьезная проблема: доступные
антигены присутствуют как на поверхности опухолевых Т-клеток, так и наповерхности CAR T-клеток, и нормальных Т-лимфоцитах. Преодолеть этоограничение можно, используя другие модифицированные цитотоксические клетки иммунной системы — NK-клетки. NK-клетки представляют
собой CD3–CD5 — цитотоксические лимфоциты. Отсутствие экспрессии
CD5 делает NK-клетки подходящими для создания CD5-специфичных эффекторов для терапии Т-клеточных неоплазий.
Таким образом, целью данной работы является создание линии NK-подобных клеток с экспрессией CD5-специфичного CAR.
Материалы и методы
Ранее в лаборатории были получены последовательности, кодирующие
CD5-специфичные scFv. Указанные scFv были клонированы в лентивирусный вектор pCDH-CD8-41BBz, содержащий лидерную последовательность
каппа-цепи иммуноглобулина, трансмембранный район и цитоплазматическую часть CAR второго поколения.
Следующим этапом работы была вирусная трансдукция NK-подобных
клеток линии YT. Для этого клетки 293Т были трансфицированы плазмидами pMD2.G, psPax2 и векторными плазмидами. Через 48 часов после трансфекции супернатанты кондиционированных сред были сконцентрированыи использованы для инфекции спинокуляцией клеток YT с MOI = 10.
Результаты
Были сконструированы два варианта CD5-специфичных CAR, отличающихся порядком расположения VH- и VL-доменов. Полученные
конструкции кодируют CAR следующей структуры: scFv со специфичностью к CD5, шарнирная часть и трансмембранный район, заимствованный
от CD8a, сигнальная последовательность белков 4-1BB и CD3zeta. В качестве
репортеров в конструкциях использована изоформа рецептора LNGFR. Путем трансдукции клеток YT были получены две поликлональные линии,экспрессирующие CD5-специфичные CAR, и верифицирована поверхностная экспрессия. В дальнейшем будет изучена цитотоксическая активность
полученных линий в отношении CD5-позитивных раковых клеток.

604

УКАЗАТЕЛЬ АВТОРОВ

Абакумова Т. О. .................................. 551
Абдуллин Т. И. .................................... 233
Абдуллина М. И. ................................. 218
Абдыкеримов А. Д.............................. 185
Абикеева Т. А. ..................................... 367
Абрамова О. И. ................................... 462
Агладзе К. И. ....................................... 255
Адельшин Р. В. .................................... 489
Азарнова Т. О. ........................ 78, 501, 532
Актанова А. А. .................................... 207
Акулов А. Е. ........................................ 414
Акулова Н. И. ........................................ 43Ал Аллаф Л. ........................................ 278
Алексеев Я. И. ....................................... 19Алексеева М. В. .................................... 52Алешин С. В. ......................................... 38Алёшкин А. В. ..................................36, 95
Алибаева Л. Ф. .................................... 202
Аликин Ю. С. ........................................ 52Аноприенко А. О. ............................... 332
Антоневич Н. Г....................................................................340Антоненко А. К. .................................. 370
Антонов Е. В. ...................................... 536
Антонова Н. П. ...................................... 36Антропов Д. Н..................................... 281
Анурова М. Н. ....................................... 36Аншаков Д. В. ....................................... 78Апарцин Е. К. ............................... 207, 374
Арнаудова К. Ш. ................................. 372
Артамонова И. И................................. 511
Архипова А. С. .................................... 188
Архипова В. И. ............................. 207, 374

Арюков А. Р..................................................................................................376
Астафьева О. В. ............................... 3, 372
Афоничева П. К. ......................................5Афонникова С. Д. ............................... 379
Ахатова Ф. С. .......................................... 7Ахметова Р. Ф. .......................................28Бабич П. И. .......................................... 191
Бабышкина Н. Н. ................................ 430
Багандова К. М. .....................................95Бажан С. И. ......................................... 596
Баженова Е. А. ..................................... 285
Базарова Е. ........................................... 401
Базовкина Д. В. ............................ 507, 536
Базыкин Г. А. ...................................... 591
Байгильдин С. С. ................................. 479
Байков И. К. ................................. 193, 315Балалаева И. В. .................................... 574
Балыкова А. Н. ................................... 381
Барабошкина И. А. ............................. 536
Баранов К. В. ....................................... 285
Баранова Д. В....................................... 283
Баранова О. А. ..................................... 177
Бардашева А. В................................... 154
Барлев Н. А. ........................................ 572
Бартош А. В. ........................................... 9Басова Е. Ю. ......................................... 384
Басова М. А.......................................... 196
Бауэр Т. В. ........................................... 365
Бах С. Н. .............................................. 390
Бахарев А. А. ....................................... 252
Башкина Е. С. ........................................85Башмакова Е. Е. .....................................12Указатель авторов
Баяндин Р. Б......................................... 287
Бегановская В. А. .................................. 15Бедулина Д. С. .............................. 509, 549
Беленькая С. В. .............................. 23, 392
Белов Д. А.......................................... 5, 19
Белов Ю. В. ............................................. 5Белозёров В. С.............................. 199, 240Белостоцкий Д. Е. ................................. 67Белый Ю. Ф. ........................................ 559
Белых Д. В. ............................................ 15Березиков Е. ................................. 401, 580
Берлина А. Н. ...................................... 505
Бернадо А. В. ...................................... 420
Бирулина Ю. Г......................................................................202Бирюков М. Ю ............................. 401, 580
Бирюков М. М..................................... 204
Бирюкова М. И.................................... 261
Биченкова Е. В. ................................... 589
Блажко Н. В......................................... 527
Блинова Е. А. ...................................... 405
Бобрикова Е. Н...................................... 21Бобрукевич Д. В. ................................. 340
Богданов А. О. .................................... 263
Богданова А. А. ................................... 394
Богрянцева М. П. .................................. 85Боева О. С..................................... 207, 314
Божок Г. А............................................ 110
Болдинова Е. О. ........................... 397, 461
Бондаренко К. А. ................................ 461
Бондаренко Т. П. ................................. 110
Борвинская Е. В. ................................. 105
Боргоякова М. Б. ................................... 23Борисова У. П. ..................................... 436
Бочарова Д. В. ....................................... 19Бояринцева А. Ю. ............................... 330
Брутер А. В.......................................... 534
Буйко Е. Е. ........................................... 202
Булгакова А. Е. ..................................... 26Булынина С. С. .................................28, 67
Бунева В. Н.......................................... 445
Буренина О. Ю. ................................... 399
Буренкова Ю. П. ............................30, 599
Буркова Е. Е ........................................ 483
Бычкова А. В. ......................... 32, 218, 261

605Вавилова В. Ю. ............................ 401, 580
Вагнер В. Д. ......................................... 242
Ванков П. Я. ...........................................67Варламова Е. А. ................................... 534
Васильева А. В. ......................................34Васина Д. В. ...........................................36Вацадзе С. З. ........................................ 392
Вдовина Т. В. .........................................76Ведунова М. В. .................................... 574
Веньяминова А. Г.............................................................374
Верещагина К. П. ........................ 489, 509
Виноградов Д. И. ................................. 497
Владимиров А. П. ................................ 252
Власов В. В........................................... 589
Волкова Н. В. ................................. 23, 403
Волкова Т. О. ....................................... 394
Волосникова Е. А. ............................... 596
Вонг П.-Ф.............................. 285, 334, 348
Воробьёв А. М. ......................................36Воробьёв С. Л. ..................................... 103
Вторышин С. В. ................................... 430
Вударски Я........................................... 580
Высочина Г. И. ..................................... 338
Вязов Е. В...............................................38Гайевская Н. Е...................................... 332
Галдина В. А......................................... 405
Гамбург Т. А. ........................................ 408
Ганчева П. Г...............................................................................473
Гапонова С. К. ...................................... 589
Гаптулбарова К. А. .............................. 411
Гашникова М. П................................... 327
Гашникова Н. М........................... 319, 327
Гендриксон О. Д. .................................... 9Гисич А. В. ........................................... 209
Гладышева А. В.............................. 91, 287
Глинских А. В. ..................................... 414
Глушаков Р. И....................................... 517
Гогонина В. И. ...................................... 293
Годке П. П. Г..............................................................................397
Головач Е. А. ........................................ 340
Голосова О. И. ...................................... 524
Голота О. В. .......................................... 193
Голубев Д. А. ........................................ 416
Голышев В. М. ..................................... 212

606Гомес Р.....................................................................................................207, 374
Гончарик Р. Г................................................................................38Гончаров А. Е. ..................................... 340
Гончаров И. М. .................................... 222
Гончарова Е. П. ................................... 408
Гончарова Т. А. .................................... 215
Гордеева А. А. ..................................... 418
Горобец М. Г............................................................................218Гороховатский А. Ю. ................... 425, 475Гражданцева А. А. ............................... 344
Григорьева Е. В. .................................. 566
Григорьева Е. Д. .................................... 41Григорьева Л. Р.......................................................................................233Гризанова Е. В. ...................................... 43Грин М. А. ........................................... 107
Гунбин К. В........................... 457, 568, 591
Гурков А. Н................................... 105, 489
Гурьянов И. Д. ......................................... 7Гусакова С. В. ...................................... 202
Гущин В. А. ........................................... 36Гущин И. Ю. ........................................ 222
Давлетова К. И. ................................... 420
Даниленко В. Н. .................................. 511
Даниленко Д. М. ................................. 330
Данилин Н. А. ..................................... 584
Данильченко Н. В. ................................ 23Дарнотук Е. С...................................... 177
Дворник Ю. В. .................................... 582
де ла Мата Ф. Х. ........................... 207, 374
Дёмкин В. П. ........................ 185, 267, 276
Денисова Э. Н. .................................... 196
Держалова А. С. .................................. 422
Дерко А. А. .......................................... 290
Дәкібай А. С. ......................................... 44Дзантиев Б. Б........................................... 9Дзюбенко В. В..................................... 367
Дикая В. А. ............................................ 48
Димова М. Д. ....................................... 489
Дмитренко О. П. ................................. 462
Дмитриенко Е. В. ..................... 21, 26, 160
Добронос М. А. ................................... 425
Довыденко И. С. ................................. 183
Долгашева Д. С. ............ 359, 411, 427, 487
Донцова О. А....................................... 399

Доценко М. Л. .................................... 340
Доценко Э. А. ...................................... 340
Дреничев М. ....................................... 586
Дроздова П. Б. ..................................... 489
Дронова Т. А. ....................................... 430
Дубовицкий Н. А................................. 290
Дубовиченко М. В. ............................. 433
Дубовский И. М. ...................................43Дудина Л. Г...................................................................199, 240Думченко Н. Б. ......................................50Дышлюк Л. С. ....................................... 97Дьяконова А. Т ................................... 436
Дюдеева Е. С. ..................................... 441
Евстрапов А. А. ................................. 5, 19
Емельянова Е. П. ................................. 293
Емельянова Л. А. ......................... 193, 315Ерёмин Д. В. ....................................... 538
Ермаков Е. А. ....................................... 445
Ермаков М. С. ...................................... 443
Ермолаев В. В. .......................................52Еропкин М. Ю. ................................... 330
Ерошенко Г. А. ................................... 381
Ерошин А. И. .........................................56Ершова М. О. ...................................... 450
Ефимова Ю. В. ................................... 574
Ефременко А. В. .................................. 107
Ещенко Н. В. ..........................................58Жаркова З. В .................................... 3, 372
Ждид Г. А. ........................................... 295
Жердев А. В. ........................................... 9Жолнерович А. И. .............................. 599
Журавлёв Е. С. ................ 58, 154, 281, 497
Журавлёва Е. А. ................................... 298
Забавкина А. А. ................................... 170
Заблуда В. Н. ...................................... 505
Завадовский К. В. ................................ 267
Задорина Е. О. ..................................... 112
Зажицкая М. ....................................... 591
Зайковская А. В. ............................ 23, 306
Зайцев В. А. ......................................... 225
Закревский Д. Е. .................................. 204
Замалутдинов А. В. ............................ 447
Замосковцева А. А. ............................. 227
Замятина Е. В....................................... 293

Указатель авторов
Запрудская Е. В. .................................... 60Зарубин В. Н. ...................................... 191
Захаревич Н. В. ................................... 511
Захаренко А. Л. ................................... 586
Зацепин Т. С. ........... 89, 399, 422, 485, 551
Зенкова М. А. ........ 408, 422, 453, 514, 589
Зеркаленкова Е. А. .............................. 447
Зиганшин А. М.................................28, 67
Зиганшин Д. Д. ..................................... 63Зиганшин Р. Х. .................................... 475
Зиганшина Э. Э. ...............................28, 67
Зилов Д. С.........................................69, 87Золотухина Е. А. ................................... 78Зубков Ф. И. ........................................ 306
Зулькарнеев Э. Р.......................................................................................95Зыбкина А. В. ...................................... 300
Ибрагимова М. К. ... 302, 359, 411, 427, 487
Иванов А. Д. .......................................... 71Иванов М. К. ....................................... 367
Иванов О. А......................................... 158
Иванов Ю. Д................................. 450,546Иванова И. А. ...................................... 450
Идиятов И. И. ................................ 56, 165Ильина А. А. ....................................... 453
Ильина Е. С. ........................................ 477
Ильичёв А. А. ......................... 23, 540, 596
Ильчибаева Т. В. .......................... 536, 538
Ильющенко Д. В. ................................ 457
Ильясов А. Р.................................................................................................229
Исаева А. А. ...................................23, 403
Искра Е. Л. .......................................... 459
Ишемгулов А. Т .................................. 231
Ишкаева Р. А. ...................................... 233
Кабанов А. С. ...................................... 365
Кабилов М. Р...............................................................................................227
Каверина Г. Б. ...................................... 193
Казаринов К. Д. ................................... 177
Казачинская Е. И. ............................... 403
Казачкова Е. А..................................... 293
Каирова М. Ж........................................ 44Калмыкова Г. В...................................... 43Калюжная Я. Г......................................................................461
Камалов М. И. ....................................... 74Карал-оглы Д. Д. ................................. 362

607

Карепова М. С. ................................... 126
Каримов Д. Д. ..................................... 479
Каримов Д. О. ..................................... 479
Карпенко Л. И................. 23, 540, 542, 596
Карпова Н. С. ....................................... 462
Карташов М. Ю. ....................................80Ким И. В. ............................................ 317
Кипень В. Н. ................. 465, 469, 553, 556
Кирсанов К. И..................................... 495
Кисeлева И. А. .......................................95Кичкайло А. С. ................................... 505
Клементьев С. В. ...................................76Клименко В. П. ......................................52Клочихин К. А. .................................... 250
Клюсевич Я. А. ................................... 315
Кнауэр Н. Ю. ............................... 207, 374
Кнорре Д. А. ................................. 568, 591
Кобелев А. В. .........................................76Ковалева К. С. .................................... 306
Коваль Л. А. ........................................ 416
Коваль О. А. ................................. 204, 443
Ковтун А. С. ....................................... 511
Кожемякина Р. В. ................................. 507
Козин С. В............................................ 235
Козлов Д. В. ......................................... 154
Козлова Ю. Н. .............................. 154, 295Кокорина Е. В. .................................... 302
Колдышева Е. В.................................. 566
Колосова И. В. ..................................... 309
Колпащиков Д. М. ............................... 433
Комиссаров А. Б. .................... 58, 154, 281
Комиссаров А. С........................ 48, 69, 87Кондаурова Е. М. ............................... 538
Кондратьев А. В. ................................. 473
Конев В. П............................................ 242
Коновалова Н. И.................................. 330
Кононова П. А. ................................... 238
Кононова Ю. В. .................................. 293
Костанова Е. А..................................... 261
Конышев И. В. ............................. 199, 240Коняхина Ю. В. .................................. 309
Коптюг И. В. ....................................... 414
Корунова Е. С. .................................... 475
Корчагина В. А. .....................................78608Коршунов А. С. ................................... 242
Костарной А. В. .................................. 473
Котловская Л. Ю. ................................ 276
Котомина Т. С. .................................... 334
Кочеткова А. С. ................................... 477
Кочиш И. И. ........................................ 501
Кочнева Г. В......................................... 344
Кошель Е. И......................................... 170
Кошеметов Ж. К. ................................ 118
Кошман В. Е. ....................................... 244
Кравцов А. А. ...................................... 235
Кривенко А. А. ............................. 465, 469
Кривошеина Е. И. ................................. 80Криштоп В. В. ..................................... 170
Крутикова Е. В. .................... 285, 334, 348
Крысько Д. В. ...................................... 574
Криницына Т. И. ................................... 43Кудояров Е. Р..............................................................................................479
Кудрявцев А. Н...................................... 12Кузин А. А. .......................................... 324
Кулаева Е. Д. ....................................... 481
Кулешов И. В. ................................. 82, 172Кулешова А. Е. .................................... 483
Куликов Е. А. ......................................... 38Куликова Е. А. .............................. 507, 536
Кунц В. С. ............................................ 591
Кураченко Ю. А. ................................. 196
Курбатов Л. К. ..................................... 281
Курочкин И. И. ................................... 551
Курская О. Г..............................................................................336
Куртанов Х. А. .................................... 436
Курятников К. Н. ................................ 242
Куцейкин C. C. .................................... 521
Куцерубова Н. С. .................................. 85Кучур П. Д. ............................................ 87Лаврентьева И. Н. ............................... 362
Лаврик О. И. ................................. 477, 586
Лавров Г. С. ........................................... 19Лага В. Ю. ............................................ 312
Лазаревич Н. Л. ................................... 399
Лактионов П. П. .................................. 503
Лепехина Д. Ю. ................................... 312
Летута С. Н. ........................................ 231
Линь Цу-Кунг ..................................... 591

Липилкин П. В.................................... 481
Лисицына Е. С. ................................... 175
Литвинова Н. А. ................................. 384
Литвяков Н. В. ...................... 302, 411, 359
Лиу Чиа-Вэй ....................................... 591
Лобанова И. Е. .................................... 338
Логвина Н. А.................................. 89, 485Логвинов А. А. ................................... 162
Ломзов А. А. ................................ 212, 227
Ломов Н. А. ......................................... 447
Лопухова М. В. .............................. 32, 218Луговая И. С. ................................. 78, 532
Лукассен М. ........................................ 509
Луковски С. В. .................................... 591
Лукьянцев М. А. ................................... 63Лупанова Т. Н. .................................... 140
Лутковский Р. Ю. ................................. 91Луцкая Е. А. ........................................ 487
Мадьярова Е. В. .................................. 489
Мазунин И. ......................................... 591
Мазуркова Н. А .................................. 338
Макаров Г. И. ...................................... 491
Макарова А. В. ............................ 397, 461
Макарова Т. М. ................................... 493
Максимов В. И. .................................. 532
Максимова В. П.................................. 495
Мальсагова К. А. ................................ 246
Марданова А. М. ................................ 499
Марков А. В ................................. 453, 514
Марков О. В ................................. 408, 422
Мархаев А. Г............................................................................290Мастова А. В. ..................................... 248
Матвеев А. Л. ..................................... 315
Матвеев Л. Е. ...................................... 315
Матвеева А. М. ................................... 497
Матюшенко В. А. ............................... 334
Махалова К. И. ................................... 584
Мехтиев Е. Р.....................................................................................................36Мацишина Н. В. ................................. 317
Медведев Д. С. ................................... 530
Мельничук В. С. ................................. 267
Меркульева Ю. А. ......................... 93, 156
Метальников П. В. ............................. 473
Мизаева Т. Э. ........................................ 95Указатель авторов
Микрюкова Т. П .................................... 80Милаёва И. В....................................... 270
Милентьева И. С. .................................. 97Минич Я. С.......................................... 340
Миннуллина Л. Ф. .............................. 499
Миргородская О. А. ............................ 577
Миронов В. Ф...................................... 233
Мирославская Н. А. ............................ 397
Мистерова А. В. .................................. 100
Митин Д. Е. ......................................... 250
Михайленко Ю. А. .............................. 252
Михайлов С. Н. ................................... 586
Михайлова А. А. ................................. 591
Михайлова А. Г...................................................................591
Мищенко Т. А. .................................... 574
Моисеева М. В. ..................................... 74Мокрушина Ю. А. ............................... 475
Молляева М. Р.........................................15, 150, 162, 181
Молодых О. П. .................................... 566
Молчан О. В. ......................................... 60Монстакова Т. В. ................................. 501
Мордвинова Е. Д................................. 283
Морозова В. В. ............................. 154, 295Морозова Е. Е. .................................... 503
Морозова Н. Б. .................................... 107
Морячков Р. В. .................................... 505
Москалёв А. А. .................................... 416
Москалюк В. С. ................................... 507
Мошетова Л. К. ................................... 462
Мурадова А. Г.........................................................................261
Мурашкина Т. А. ................................. 290
Мурылёва А. А. ................................... 103
Мустафаева А. С. ................................ 346
Мутин А. Д. ......................................... 509
Мутон С. .............................................. 580
Назаренко В. В. ................................... 222
Назарова А. А...................................... 105
Налимова Т. М. ................................... 319
Науменко В. С. ..................... 507, 536, 538
Науменко Е. А. ........................................ 7Наханова Г. Д. ..................................... 118
Невинский Г. А. .................................. 445
Недорезова Д. Д. ................................... 41Немова Н. Н. ....................................... 394

609

Немтарев А. В..................................... 233
Несмеянова В. С. ...................................23Нетесов С. В. ...................................... 521
Нефедьева М. В. .................................. 322
Нечаева Е. А. .........................................85Низамов Т. Р.................................................................................................229
Никитин М. С. .................................... 511
Никишов О. Н. .................................... 324
Никольская Е. Д. ..... 15, 107, 150, 162, 181
Никонорова В. Г.................................................................170Новикова О. А. ................................... 112
Новикова О. Ю. ................................... 110
Новопашина Д. С. .............................. 281
Ножкина О. А. ............................. 115, 126Нурбеков М. К. ................................... 462
Нуштаева А. А. .................................... 443
Ныров В. А. ........................................ 517
Одаренко К. В. ..................................... 514
Октябрьский В. П. ............................... 258
Окулова И. И. ...................................... 353
Омаров Р. Т ........................................... 44Оразымбетова Н. К. ........................... 118
Орешков С. ......................................... 591
Орлова Л. А. ..........................................23Осипов И. Д. ........................................ 521
Осипова И. П. ...................................... 327
Остромышенский Д. И. ....................... 48
Павлова Н. И. ..................................... 436
Павлюк А. М. .........................................74Панкратов А. А. ................................... 107
Панкратов Ю. В. .................................. 263
Панов А. В. ......................................... 107
Панферов Е. В. ................................... 517
Парамоник А. П.................................. 521
Паталяк С. В. ....................................... 430
Патракова Е. А. ................................... 204
Патрин М. М................................ 465, 469
Патутина О. А. ................................... 589
Пацюркевич А. А. ............................... 495
Пашкевич С. Н. ................................... 231
Пашкина Е. А............................... 207, 374
Пашковский С. Е. ............................... 527
Певзнер А. М. ...................................... 487
Переверзев И. М. ................................. 524

610Пермякова Н. В. .................................. 168
Перфильева А. И. ......................... 115, 126Петрова И. В. ...................................... 202
Петрова П. А. ...................................... 330
Петровская О. Д. ................................. 129
Петухова Е. А. ..................................... 563
Печерицын А. А. ................................. 215
Плешакова Т. О. .................................. 450
Плешков М. О. ............................. 185, 225Плотников К. О. .................................. 527
Плотникова Е. А. ................................ 107
Погожова М. П. ................................... 332
Подгорная О. И. .................................... 48
Подгурская А. Д. ................................. 255
Подлесных С. В. .................................. 418
Подругина Т. А. ................................... 162
Поздеева А. А. ..................................... 319
Покровский В. С. .................................. 32Политко М. О. ..................................... 566
Поляков Н. Э. ................ 188, 238, 244, 248
Полякова А. А. .................................... 530
Пономарев Д. В. .................................. 233
Пономарева Е. П. .................................. 91Попадьин К. Ю..................... 457, 568, 591
Прадеепкумар П. И............................. 397
Приказчикова Т. А. ............................. 551
Прокопенко П. И ................................ 334
Прокопьева Е. А. ................................. 336
Протасов А. В...................................... 577
Протопопова Е. В................................ 287
Проценко М. А. ................................... 338
Птицын А. А. ...................................... 258
Пулкина А. А....................................... 346
Пурвиньш Л. В. ................................... 483
Пушкарев И. А. ................................... 133
Пышный Д. В. .............................. 212, 227
Пьянков О. В. ............................... 306, 344
Пьянков С. А. ................................. 80, 365Пьячентини М..................................... 572
Рагад А. ............................................... 233
Разумов И. А. ...................................... 414
Ракин А. И. .......................................... 376
Резвых А. М......................................... 532

Реймонд А........................................... 591
Реиноите Ф. ........................................ 580
Ремеева А. А. ...................................... 222
Рыжиков Ю. Л. ................................... 222
Рихтер В. А. ........................................ 154
Родионов Е. О. .................................... 411
Родионова М. Д. ................................. 534
Родный А. Я. ................................ 536, 538
Романова С. Г..........................................................................255
Романовская-Романко Е. А................ 346
Рубцов М. А. ....................................... 447
Рубцова М. П. ..................................... 399
Рудомётов А. П. ...................... 23, 540, 596
Рудомётова Н. Б. ......................... 540, 542
Румянцев А. В. ................................... 544
Рыболовлев И. Н. ............................... 559
Рында Е. Г....................................................................................340Рябинина В. А..................................... 527
Рязанцева Л. Т .................................... 258
Сабуров А. С....................................... 140
Саввина О. А. ..................................... 384
Савюк М. О. ........................................ 574
Сагитова Г. Р................................................................................................495
Садовская Т. А. ................................... 546
Садыкова Э. З. .................................... 261
Саламайкина С. А. ............................. 142
Салахиева Д. В. .................................... 74Салахутдинов Н. Ф. ..... 283, 306, 453, 514
Салихова Т. И. .................................... 233
Саломатина О. В.......................... 453, 514
Сандарева Т. П.................................... 319
Санчес-Ньевес Х. ........................ 207, 374
Сапельников М. Д. ............................. 107
Саранчина А. Е. .................................. 549
Сарсембаев Х. С. ................................ 145
Святченко В. А. .................................. 287
Сейсенбаева М. С. .............................. 118
Селезнев А. А. .................................... 327
Селищев Д. С. ..................................... 154
Селищева А. А. ..................................... 38Селютина О. Ю. ........... 188, 238, 244, 248
Семенова А. В. ................................... 344
Семиколенова О. А. ........................... 584
Сенькова А. В. .................................... 514

Указатель авторов
Сербина А. В. ...................................... 263
Сергеев А. А. ................................ 309, 365Сергеева М. В. ........................ 58, 154, 346
Сергеева О. В. ..................................... 551
Серебренникова Е. С. ......................... 293
Сиволобова Г. Ф. ................................. 344
Сингх П. .............................................. 503
Синебрюхова А. М. ............................ 177
Синявский Ю. А. ................................ 145
Сироткин А. С..................................63, 76Слижов П. А. ....................................... 517
Слита А. В. .......................................... 103
Слотвицкий М. М. .............................. 255
Случанко Н. Н..................................... 425
Смирнова Е. Ю.................................... 546
Снытков Е. В. ................ 465, 469, 553, 556
Снытникова О. А. ............................... 414
Собко О. А........................................... 317
Соболев И. А. ...................................... 336
Сокол А. Д. .......................................... 568
Сокол М. Б....................... 15, 150, 162, 181
Соколов А. Е. ...................................... 505
Соколов Д. К. ...................................... 566
Соколова А. C. ............................. 283, 542
Соколова Л. М..................................... 193
Соколова М. В. .................................... 473
Соловьёва А. И. .................................. 142
Соловьёва М. И. .................................. 154
Соловьёва Э. Ю................................... 177
Соломатина М. В. ............................... 336
Сорокина Ю. В. ................................... 559
Сотников Д. В. ........................................ 9Спивак И. М. ....................................... 517
Спиридонова В. А. .............................. 505
Старожилова К. В. .............................. 156
Старостина Е. В. ................................... 23Старцева О. М. ...................................... 15Степанов Г. А. ................. 58, 154, 281, 497
Степанова А. Ю. ................................. 142
Степанова Е. А. .................... 285, 334, 348
Стеценко Д. А. ............................. 422, 485Стойнова А. М. ................................... 175
Стонимская Е. М................................. 430
Стрельцова Я. Б. ................................. 350

611

Строкотов Д. И. .................................. 209
Стронин О. В. ..................................... 315
Студеникина А. А. ............................. 420
Стукова М. А. ..................................... 346
Субботина К. В. .................................. 561
Суворов Д. А. ..................................... 250
Суворова А. А. ................................... 290
Суворова Ю. В.................................... 563
Сухов Б. Г.....................................................................................126Суховских А. В................................... 566
Суюндукова А. Т ................................ 267
Сюткина А. С. .............................. 112, 353
Танака М. ............................................ 591
Тананыкина Е. К. ................................ 572
Таранов О. С. ...................................... 403
Тараскин А. С. .................................... 577
Тартаковская Д. И. ............................. 559
Телегина Ю. В. ...................................... 52Терещенко Д. С. .................................... 43Терещенко Е. Г......................................................................158
Терновой В. А. ................................. 80, 91Тикунов А. Ю. .................................... 295
Тикунова Н. В. ...................... 193, 295, 315Тимонина В. Н. ................................... 568
Тимофеев М. А. .................... 105, 489, 509
Тимохина О. В. ................................... 340
Тимошников В. А. ....................... 188, 244Титов И. А. .......................................... 322
Тиунов А. В. ........................................ 524
Тишакова К. В. .................................... 544
Торгашева Н. А. .................................. 524
Тотменин А. В. ............................. 319, 327
Травина А. О. ........................................ 48
Тремасова А. М. ................................... 56Третьяков Е. О. ............................ 568, 591
Троицкая О. С. .................................... 204
Туркина К. И. ..................................... 462
Турубанова В. Д. ................................ 574
Тюлин А. А. ........................................ 577
Тюлина В. В. ....................................... 270
Тюфяков В. С. ..................................... 353
Удут В. В. ............................................ 276
Уласов А. В. ........................................ 140
Умуралиев Б. К. .................................. 118

612
Усалка О. Г..................................................................................495
Усанов С. А. .................................... 30, 599
Усова С. В. ............................................. 85Устьянцев К. В.............................. 401, 580
Ушаков В. С. ........................................ 566
Ушакова К. .......................................... 591
Фабушева К. М.................................... 582
Фазлыева А. С. .................................... 479
Фарберов Л............................................ 89Фахруллин Р. Ф. ...................................... 7Федин А. И. ......................................... 177
Фелле Ж. ............................................. 591
Филиппова Е. И. ................................. 338
Фисенко П. В. ...................................... 317
Фокина А. А. ....................................... 422
Фоменко В. К. ..................................... 160
Фомичёва М. В. ............... 15, 150, 162, 181
Франк Л. А. ........................................... 12Фрицлер Я. В. ..................................... 274
Фролова Ш. Р.............................................................................................255
Фуджи М. ............................................ 422
Хабардина Е. А............................. 485, 584
Хабирова С. Р............................................................................................165Харитонова Е. М. ................................ 312
Хачатрян Д. С. ...................................... 32Хейман Т ............................................. 589
Ходырева С. Н..................................... 477
Хозеева С. А. ....................................... 168
Хорошавин Ю. А. ............................... 356
Храпко К. ............................................ 591
Хрипко О. П. ....................................... 293
Худяева И. С.......................................... 15Хуснутдинова Н. Ю. ........................... 479
Хуцишвили С. С. ................................ 115
Царькова А. С. .................................... 475
Царькова М. С. .................................... 270
Цвелая В. А. ........................................ 255
Цветикова С. А. .................................. 170
Центалович Ю. П. ............................... 414
Цепаева О. В........................................ 233
Циммерман Е. Л. ................................. 334
Цыбулина А. О. ................................... 276
Цыганов М. М. ...... 302, 359, 411, 427, 487
Цыденова И. А. ................................... 359

Цыцорина И. А. ................................... 293
Чеканов А. В. ....................................... 177
Чепурных Т. В.............................. 425, 475Червякова О. В. ................................... 118
Чердынцева Н. В. ................................ 430
Черемишина О. В. ............................... 359
Черешнев В. О. .............................. 82, 172Чернышова И. А. ................................. 586
Чиглинцева Д. А. ................................. 589
Чижикова А. И. ................................... 175
Чистякова А. К. ........................... 334, 348
Чуб Е. В. .................................................91Чубаров А. С. ....................................... 250
Шайдуллина Э. Р................................................................................499
Шаманский В. А. ................................. 591
Шамсутдинова О. А. ........................... 362
Шаньшин Д. В. .............................. 23, 392
Шаповал А. И. ..................................... 418
Шаповалова А. И................................. 594
Шарабрин С. В. ................................... 596
Шаршов К. А. ...................................... 290
Шастина Н. С....................................... 177
Швалов А. Н. ............................... 319, 327
Шевелев Г. Ю. .............................. 183, 524Шестопалов А. М. ....................... 290, 293Шиохама Я........................................... 422
Шипелова А. В..................................... 177
Шомрон Н..............................................89Шуваев А. Н. ....................................... 274
Шувалов О. Ю. .................................... 572
Шукуров Р. Р.................................................................................................384Шунялов А. В. ..................................... 491
Шуралев Э. А. ...................................... 165
Шчапова Е. П. ...................................... 105
Щелконогов В. А. ................................ 177
Щелкунов С. Н. ........................... 309, 365Щербаков Д. Н.......... 23, 93, 156, 283, 300,
306, 392, 403, 540, 542
Щербакова Н. С. .................................. 542
Щетникова Е. А. .................................. 390
Щур В. В. ....................................... 30, 599
Юрина А. А. ......................................... 602
Яббаров Н. Г......................................15, 150, 162, 181
Якоб Л. ................................................. 509

Указатель авторов
Яковлева Д. В. ..................................... 416
Яковлева К. И...................................... 183
Якубицкий С. Н. ................................. 365
Якубовская М. Г.................................................................495
Якубовская Р. И................................... 107
Якунина М. Н. ....................................... 32Ялчина Р. С. ......................................... 551
Ямпольский И. В. ........................ 425, 475

613Янцевич А. В. ................................ 30, 599
Яровая О. И. ................. 283, 306, 392, 542
Ястребова Е. С. .................................... 209

614СОДЕРЖАНИЕ
РАЗДЕЛ 1БИОТЕХНОЛОГИЯ
Астафьева О. В., Жаркова З. В. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВИ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ПАСЛЕНА ЧЕРНОГОС ЦЕЛЬЮ РАЗРАБОТКИ ПИЩЕВОГО КОНСЕРВАНТА ..................... 3Афоничева П. К., Белов Д. А., Белов Ю. В., Евстрапов А. А.
ОПЫТ СОЗДАНИЯ ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО
СЕКВЕНАТОРА В КИТАЕ ......................................................................... 5Ахатова Ф. С., Науменко Е. А., Гурьянов И. Д.,Фахруллин Р. Ф. СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ В СОЧЕТАНИИС НАНОСТРУКТУРИРОВАННЫМИ СМАРТ-СКАФФОЛДАМИКАК ИНСТРУМЕНТ РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ .................. 7Бартош А. В., Сотников Д. В., Гендриксон О. Д., Жердев А. В.,Дзантиев Б. Б. РАЗРАБОТКА МУЛЬТИПЛЕКСНЫХ
ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ
АНТИБИОТИКОВ: СВОЙСТВА ИММУНОРЕАГЕНТОВИ ВЫБОР ФОРМАТА АНАЛИЗА ........................................................... 9Башмакова Е. Е., Кудрявцев А. Н., Франк Л. А.
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ОНКОМАРКЕРА MIA
БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МИКРОАНАЛИЗОМ ..............................12Бегановская В. А., Сокол М. Б., Яббаров Н. Г., Молляева М. Р.,Фомичёва М. В., Худяева И. С., Белых Д. В., Старцева О. М.,Никольская Е. Д. НОВЫЕ НАНОЧАСТИЦЫ PLGAС ХЛОРИНОМ Е6 ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ............15СОДЕРЖАНИЕ

615

Белов Д. А., Бочарова Д. В., Лавров Г. С., Алексеев Я. И., Евстрапов А. А.
СМЕНЯЕМОСТЬ ТЕХНОЛОГИЙ
ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ ДНК ........19Бобрикова Е. Н., Дмитриенко Е. В. ПОЛУЧЕНИЕИ ИССЛЕДОВАНИЕ НОВЫХ МАТЕРИАЛОВ С РЕГУЛИРУЕМЫМ
ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ СМЕШЕННОГО ОКСИДА ЖЕЛЕЗАИ ЕГО КОМПОЗИТОВ ..............................................................................21Боргоякова М. Б., Карпенко Л. И., Рудомётов А. П., Шаньшин Д. В.,Беленькая С. В., Исаева А. А., Несмеянова В. С., Волкова Н. В.,Щербаков Д. Н., Старостина Е. В., Зайковская А. В.,Данильченко Н. В., Орлова Л. А., Ильичёв А. А. ОЦЕНКА
ИММУННОГО ОТВЕТА НА ДНК-КОНСТРУКЦИИ ПРОТИВ
АКТУАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ............................................23Булгакова А. Е., Дмитриенко Е. В. ВЫЯВЛЕНИЕ ПРОТЯЖЕННЫХРНК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКОГО КНИБИОСЕНСОРА ...........................................................................................26Булынина С. С., Зиганшина Э. Э., Ахметова Р.Ф., Зиганшин А. М.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОГО ШТАММА
МИКРОВОДОРОСЛЕЙ CHLORELLA SOROKINIANA AM-02............28Буренкова Ю. П., Щур В. В., Усанов С. А., Янцевич А. В.
ЭКСПРЕССИОННЫЕ СИСТЕМЫДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕРМИНАЛЬНОЙ
ДЕЗОКСИНУКЛЕОТИДИЛТРАНСФЕРАЗЫ BOS BOVIS ....................30Бычкова А. В., Якунина М. Н., Лопухова М. В., Покровский В. С.,Хачатрян Д. С. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬИ КОНТРАСТНЫЕ СВОЙСТВА МАГНИТНЫХ НАНОЧАСТИЦ,МОДИФИЦИРОВАННЫХ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ ......32Васильева А. В. РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ И ТЕХНОЛОГИИ
БИОДЕГРАДИРУЕМОЙ УПАКОВКИ «EAT PACK»............................... 34Воробьёв А. М., Анурова М. Н., Алёшкин А. В., Гущин В. А.,Васина Д. В., Антонова Н. П., Мехтиев Е. Р. РАЗРАБОТКА СОСТАВАИ ТЕХНОЛОГИИ ГЕЛЯ С АРТИЛИЗИНОМ ДЛЯ ТЕРАПИИ
РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ ...........................................................................36616Вязов Е. В., Гончарик Р. Г., Куликов Е. А., Алешин С. В., Селищева А. А.
ФОТОЗАВИСИМОЕ РАЗРУШЕНИЕ ХЛОРОФИЛЛА АВ ПРИСУТСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ АСТАКСАНТИНА,ВЫДЕЛЕННОГО ИЗ КЛЕТОК HAEMATOCOCCUS PLUVIALIS .........38Григорьева Е. Д., Недорезова Д. Д. АНАЛИТ-ЗАВИСИМАЯ
АКТИВАЦИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ АНТИСМЫСЛОВОЙ ДНК .....41Гризанова Е. В., Терещенко Д. С., Криницына Т.И., Калмыкова Г.В.,Акулова Н. И., Дубовский И. М. ИЗМЕНЕНИЕ МИКРОФЛОРЫВ КИШЕЧНИКЕ ЛИЧИНОК КОЛОРАДСКОГО ЖУКАLEPTINOTARSA DECEMLINEATA ПРИ РАЗВИТИИ
БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ BACILLUS THURINGIENSIS ..........43Дәкібай А. С., Каирова М. Ж., Омаров Р. Т.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И МИКРОКЛОНАЛЬНОЕ
РАЗМНОЖЕНИЕ PINUS SYLVESTRIS L. ................................................44Дикая В. А., Травина А. О., Остромышенский Д. И., Подгорная О. И.,Комиссаров А. С. АНАЛИЗ ТРАНСКРИПТОМАRANA TEMPORARIA НА РАННИХ СТАДИЯХ ЭМБРИОГЕНЕЗА ....48
Думченко Н. Б. КОНСТРУИРОВАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ПАНДЕМИЧЕСКИХ
КУЛЬТУРАЛЬНЫХ ВАКЦИН..................................................................50Ермолаев В. В., Аликин Ю. С., Телегина Ю. В., Клименко В. П.,Алексеева М. В. ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИИ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНЫХ СРЕДСТВНА ОСНОВЕ ДВУСПИРАЛЬНЫХ РНК ..................................................52Ерошин А. И., Идиятов И. И., Тремасова А. М. ЭНДОФИТНЫЕ
МИКРООРГАНИЗМЫ: ПЕРСПЕКТИВА ПОВЫШЕНИЯ
ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТИ КОРМОВ ..................................................56Ещенко Н. В., Сергеева М. В., Журавлёв Е. С., Комиссаров А. Б.,Степанов Г. А. CRISPR/CAS9 ОПОСРЕДОВАННЫЙ НОКАУТ
ГЕНА IFITM3 В КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА .................................................58Запрудская Е. В., Молчан О. В. ИЗМЕНЕНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ
ПРОЦЕССОВ ФОТОСИНТЕЗА В ПРОРОСТКАХ КУКУРУЗЫПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ НАНОЧАСТИЦ СЕЛЕНА ...............................60СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

617Зиганшин Д. Д., Лукьянцев М. А., Сироткин А. С.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ БИОФУНГИЦИДА
ОРГАМИКА Ф ДЛЯ ТОМАТА ЗАЩИЩЕННОГО ГРУНТА .................63Зиганшина Э. Э., Белостоцкий Д. Е., Булынина С. С., Ванков П. Я.,Зиганшин А. М. АНАЭРОБНЫЕ МИКРОБНЫЕ СООБЩЕСТВА,ВОВЛЕЧЕННЫЕ В ПРОЦЕСС СОВМЕСТНОЙ КОНВЕРСИИ
ПОСЛЕСПИРТОВОЙ БАРДЫ И СВЕКЛОВИЧНОГО ЖОМА ............67Зилов Д. С., Комиссаров А. С.
CONTERA: ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ
ПАНГЕНОМНЫХ ДАННЫХ ...................................................................69Иванов А. Д. ПЕРСПЕКТИВА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
ПРОШЕДШИХ БИОРЕМЕДИАЦИЮ И ОБОГАЩЕННЫХ
МИКРОВОДОРОСЛЬЮ CHLORELLA VULGARIS СТОЧНЫХ ВОДВ ГИДРОПОННОЙ СИСТЕМЕ ................................................................71Камалов М. И., Павлюк А. М., Моисеева М. В., Салахиева Д. В.
ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ БИОАКТИВНОСТИ
АМФИПАТИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ
ПОЛИАСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ ..................................................74Кобелев А. В., Клементьев С. В., Сироткин А. С., Вдовина Т. В.
ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛЕКТИНОВ
БАКТЕРИЙ НА ФОРМИРОВАНИЕ БИОПЛЕНОКВ ПРОЦЕССАХ ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД ........................................76Корчагина В. А., Азарнова Т.О., Луговая И. С., Золотухина Е. А.,Аншаков Д. В. РОЛЬ L-КАРНИТИНА В СИСТЕМЕ
ПОВЫШЕНИЯ ХОЗЯЙСТВЕННО-ПОЛЕЗНЫХ
ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЯИЧНЫХ КУР В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ ...............78Кривошеина Е. И., Карташов М. Ю., Микрюкова Т. П., Пьянков С. А.,Терновой В. А. ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО
БЕЛКА Е ВИРУСА ЖЕЛТОЙ ЛИХОРАДКИ ..........................................80Кулешов И. В., Черешнев В. О.
ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ОТРАЖЕННЫХИ МАЛОКРАТНО РАССЕЯННЫХ ФОТОНОВНА ПРОЦЕСС ПОСТРОЕНИЯ СТРУКТУРНЫХ ИЗОБРАЖЕНИЙВ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ............................ 82618Куцерубова Н. С., Усова С. В., Башкина Е. С., Богрянцева М. П.,Нечаева Е. А. ВАЛИДАЦИЯ СИСТЕМЫ ВОДОПОДГОТОВКИИ ВОДЫ ИНЪЕКЦИОННОЙ В ГНЦ ВБ «ВЕКТОР»РОСПОТРЕБНАДЗОРА.............................................................................85Кучур П. Д., Зилов Д. С., Комиссаров А. С. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ
ГЕНОМНЫЙ АНАЛИЗ
О-АНТИГЕН СВЯЗАННЫХ ГЕНОВ В ГЕНОМАХ БАКТЕРИЙ ..........87Логвина Н. А., Н. Шомрон, Л. Фарберов, Зацепин Т. С.
МИКРОРНК-ОПОСРЕДОВАННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СПЛАЙСИНГАДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ .......................... 89Лутковский Р. Ю., Терновой В. А., Пономарева Е. П., Гладышева А. В.,Чуб Е. В. ОБНАРУЖЕНИЕ РНК SARS-COV-2 У БОЛЬНЫХ
COVID-19 И БЕССИМПТОМНЫХ НОСИТЕЛЕЙ МЕТОДАМИ
ЦИФРОВОЙ ПЦР И ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ...........................91Меркульева Ю. А., Щербаков Д. Н. РАЗРАБОТКА ПАНЕЛИ
РЕКОМБИНАНТНЫХ ИММУНОДОМИНАНТНЫХ БЕЛКОВ
ОРТОПОКСВИРУСОВ ДЛЯ ОТБОРА ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ
НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ................ 93Мизаева Т.Э., Багандова К. М., Алёшкин А. В., Кисeлева И. А.,Зулькарнеев Э. Р. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КОКТЕЙЛЯ
БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ЭЛИМИНАЦИИ САЛЬМОНЕЛЛС ПОВЕРХНОСТИ КУРИНОГО ФИЛЕ ..................................................95Милентьева И. С., Дышлюк Л. С. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯИ ОЧИСТКИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПЕПТИДОВИ ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ..................................................................... 97Мистерова А. В. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ
РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА РОСТА ТРОМБОЦИТОВ
ЧЕЛОВЕКА RHPDGF-BB ........................................................................100Мурылёва А. А., Слита А. В., Воробьёв С. Л. ПОЛУЧЕНИЕИ ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК АДЕНОКАРЦИНОМЫ
ЖЕЛУДКА ЧЕЛОВЕКА ..........................................................................103Назарова А. А., Шчапова Е. П., Гурков А. Н., Борвинская Е. В.,Тимофеев М. А. ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГО ОТВЕТА

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕАМФИПОД НА ПОЛИАКРИЛАМИДНЫЙ
ГЕЛЬ

619

В ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЕ ГЕМОЦИТОВ ..........................................105Никольская Е. Д., Сапельников М. Д., Морозова Н. Б.,Плотникова Е. А., Панкратов А. А., Ефременко А. В., Панов А. В.,Грин М. А., Якубовская Р. И. ПРИМЕНЕНИЕ НАНОЧАСТИЦ
PLGA, СОДЕРЖАЩИХ
ДИПРОПОКСИБАКТЕРИОПУРПУРИНИМИД,В ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ................................................107Новикова О. Ю., Божок Г.А., Бондаренко Т. П. ВЛИЯНИЕ
КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ НА СПОСОБНОСТЬ
КЛЕТОК-ПРОИЗВОДНЫХ НЕРВНОГО ГРЕБНЯИЗ ДЕРМАЛЬНОЙ ПАПИЛЛЫ ВИБРИССЫ КРОЛИКА
ИНДУЦИРОВАТЬСЯ В НЕЙРОНАЛЬНОМ НАПРАВЛЕНИИ .........110Новикова О. А., Сюткина А. С., Задорина Е. О.
ХАРАКТЕРИСТИКА АНТАГОНИСТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
ЛАКТОБАЦИЛЛ, ВЫБРАННЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ .................................................................112Ножкина О. А., Перфильева А. И., Хуцишвили С. С.
ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ МАРГАНЦА В СРЕДЕНА РОСТ И РАЗВИТИЕ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ
SOLANUM TUBEROSUM L. IN VITRO ........................................................ 115
Оразымбетова Н. К., Сейсенбаева М. С., Наханова Г. Д.,Кошеметов Ж. К., Умуралиев Б. К., Червякова О. В.
УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ УСЛОВИЙ ПОСТАНОВКИ
МЕТОДА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗАДЛЯ ДИАГНОСТИКИ НОДУЛЯРНОГО ДЕРМАТИТА.......................118Перфильева А. И., Ножкина О. А., Карепова М. С., Сухов Б. Г.
ВЛИЯНИЕ НАНОКОПОЗИТОВ СЕЛЕНАВ ПРИРОДНЫХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТРИЦАХНА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ РИЗОСФЕРНЫХ БАКТЕРИЙ ............ 126

620Петровская О. Д. ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕГРАДАЦИИ
ГЕРБИЦИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРОЛОНГИРОВАННОГО
ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ПОЛИ-3-ГИДРОКСИБУТИРАТАВ ПОЧВЕННЫХ МИКРОЭКОСИСТЕМАХ .........................................129Пушкарев И. А. ПОКАЗАТЕЛИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ
РЕЗИСТЕНТНОСТИ РЕМОНТНОГО МОЛОДНЯКА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ
РАЗНЫХ ДОЗ ТКАНЕВОГО БИОСТИМУЛЯТОРА............................133Сабуров А. С., Лупанова Т. Н., Уласов А. В. ПОСТТРАНСЛЯЦИОННОЕ
ПРИСОЕДИНЕНИЕ ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА
NRF2 К МОДУЛЬНОМУ НАНОТРАНСПОРТЕРУ
ПОСРЕДСТВОМ ЛЕЙЦИНОВОЙ МОЛНИИ ......................................140Саламайкина С. А., Соловьёва А. И., Степанова А. Ю. ЭФФЕКТ
УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ
IN VITRO КУЛЬТУР НА СООТНОШЕНИЕ ОСНОВНЫХ
ФЛАВОНОВ SCUTELLARIA BAICALENSIS .............................................. 142
Сарсембаев Х. С., Синявский Ю. А. КОБЫЛЬЕ МОЛОКОВ РАЗРАБОТКЕ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ
СПОРТИВНОГО ПИТАНИЯ ..................................................................145Сокол М. Б., Яббаров Н. Г., Молляева М. Р., Фомичёва М. В.,Никольская Е. Д. КОНЪЮГАТ РЕКОМБИНАНТНОГО ТРЕТЬЕГО
ДОМЕНА АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА С НАНОЧАСТИЦАМИ
ПЛГА С ПАКЛИТАКСЕЛОМ: ФАРМАКОКИНЕТИКАИ ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ .................................... 150
Соловьёва М. И., Селищев Д. С., Степанов Г.А., Журавлёв Е. С.,Сергеева М. В., Комиссаров А. Б., Морозова В. В.,Бардашева А. В., Козлова Ю. Н., Рихтер В. А., Козлов Д. В.
ФОТОКАТАЛИТИЧЕСКАЯ ДЕСТРУКЦИЯ
БАКТЕРИЙ И ВИРУСОВ НА ПОВЕРХНОСТИ
САМООЧИЩАЮЩИХСЯ ТКАНЕВЫХ МАТЕРИАЛОВ ...................154Старожилова К. В., Меркульева Ю. А., Щербаков Д. Н.
КОНСТРУИРОВАНИЕ ВЕКТОРА, ОБЕСПЕЧИВАЮЩЕГО
СТАБИЛЬНУЮ ПРОДУКЦИЮ ФОСФОЛИПАЗЫ
С BACILLUS THURINGIENSIS В BACILLUS SUBTILIS............................ 156

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

621Терещенко Е. Г., Иванов О. А. ПОТЕНЦИАЛ PHYSCOMITRELLAPATENS КАК ИСТОЧНИКА АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВПРИ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЯХ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ...................158
Фоменко В. К., Дмитриенко Е. В. ПОЛУЧЕНИЕИ ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ НЕОРГАНИЧЕСКИХИ КОМПОЗИТНЫХ НАНОМАТЕРИАЛОВДЛЯ БИОМЕДИЦИНСКИХ ПРИМЕНЕНИЙ.......................................160
Фомичёва М. В., Подругина Т. А., Логвинов А. А., Никольская Е. Д.,Молляева М. Р., Сокол М. Б., Яббаров Н. Г. СТРУКТУРНЫЙ
ДИЗАЙН КОМПЛЕКСОВ PT(II) НА ОСНОВЕ НОВЫХ
АНАЛОГОВ КАРБОПЛАТИНА ДЛЯ СОЗДАНИЯ СОЕДИНЕНИЙС ВЫСОКОЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ ............ 162
Хабирова С. Р., Идиятов И. И., Шуралев Э. А. ГИДРОЛАЗЫКАК ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ИНСТРУМЕНТ БОРЬБЫС ТОКСИГЕННЫМИ МИКРОМИЦЕТАМИ ........................................165Хозеева С. А., Пермякова Н. В. ОСОБЕННОСТИ НОКАУТА ГЕНОВВ СУСПЕНЗИОННОЙ КУЛЬТУРЕ ARABIDOPSIS THALIANAПРИ ПОМОЩИ РНП-КОМПЛЕКСОВ ..................................................168Цветикова С. А., Забавкина А. А., Никонорова В. Г., Криштоп В. В.,Кошель Е. И. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО
ЭКЗОПОЛИСАХАРИДА КОЛАНОВОЙ КИСЛОТЫНА ОРГАНИЗМ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ................................................170Черешнев В. О., Кулешов И. В. СТРУКТУРИРОВАНИЕ ТКАНЕЙВ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ
ПОСРЕДСТВОМ АНАЛИЗА ИНТЕНСИВНОСТИ ПИКСЕЛЕЙ ......172Чижикова А. И., Лисицына Е. С., Стойнова А. М. РАЗРАБОТКАИ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЦР ТЕСТ-СИСТЕМЫДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КАРБАПЕНЕМ-УСТОЙЧИВОЙKLEBSIELLA PNEUMONIAE ......................................................................... 175
Щелконогов В. А., Шипелова А. В., Синебрюхова А. М., Дарнотук Е. С.,Шастина Н. С., Баранова О. А., Чеканов А. В., Казаринов К. Д.,Соловьёва Э. Ю., Федин А. И. НАНОФОРМЫ ЛИПОЕВОЙ
КИСЛОТЫ: ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯНА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ТРОМБОЦИТОВ..........177622Яббаров Н. Г., Сокол М. Б., Никольская Е. Д., Молляева М. Р.,Фомичёва М. В. ЛЕГКО-МОДИФИЦИРУЕМЫЕ МНОГОЦЕЛЕВЫЕ
НАНО-НОСИТЕЛИ НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯНА ОСНОВЕ ДЕНДРИМЕРОВ И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ
АНТИТЕЛ ДЛЯ ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ............................... 181
Яковлева К. И., Довыденко И. С., Шевелев Г. Ю.
ХИМИКО-ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ ПОДХОДЫК СНИЖЕНИЮ УРОВНЯ ОШИБОЧНОСТИ В СОСТАВЕ
СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ДЛЯ СБОРКИ
ГЕННЫХ КОНСТРУКЦИЙ ....................................................................183

РАЗДЕЛ 2ВИРУСОЛОГИЯ
Абдыкеримов А. Д., Дёмкин В. П., Плешков М. О.
АКТИВАЦИЯ ОТОЛИТОВОГО АППАРАТАВО ВРЕМЯ ТЕСТА ИМПУЛЬСА ГОЛОВЫ ..........................................185Архипова А. С., Тимошников В. А., Селютина О. Ю., Поляков Н. Э.
ИССЛЕДОВАНИЕ ФОТОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
ТИОСЕМИКАРБАЗОНА DP44MT И ЕГО КОМПЛЕКСОВС ИОНАМИ ЦИНКА МЕТОДАМИ ЯМР И ХПЯ ................................188Бабич П. И., Зарубин В. Н. УПРАВЛЕНИЕ БИОПРОЦЕССАМИ
ПУТЕМ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭМП НА ИХ БИОРИТМЫ .........................191Байков И. К., Емельянова Л. А., Голота О. В., Соколова Л. М.,Каверина Г. Б., Тикунова Н. В. СТРУКТУРНЫЙ ДИЗАЙН
АНТИТЕЛА ПРОТИВ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТАС ЦЕЛЬЮ РАСШИРЕНИЯ ЕГО СПЕЦИФИЧНОСТИ ........................193
Басова М. А., Денисова Э. Н., Кураченко Ю. А.
РАСЧЕТ ДОЗОВЫХ КОЭФФИЦИЕНТОВ КОНВЕРСИИПРИ ПОСТУПЛЕНИИ С КОРМОМ
РАДИОАКТИВНЫХ ИЗОТОПОВ ЙОДАВ ОРГАНИЗМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ...................................196СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

623Белозёров В. С., Конышев И. В., Дудина Л. Г. СИЛОВЫЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В МОДЕЛЬНОЙ
СИСТЕМЕ «АНТИГЕН-АНТИТЕЛО», ОЦЕНЕННЫЕ
МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ ........................199
Бирулина Ю. Г., Буйко Е. Е., Алибаева Л. Ф., Петрова И. В.,Гусакова С. В. ИССЛЕДОВАНИЕ ГИПЕРПОЛЯРИЗАЦИОННОГО
ОТВЕТА МЕМБРАНЫ ЭРИТРОЦИТОВВ МОДЕЛИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СИНДРОМА...............................202Бирюков М. М., Патракова Е. А., Коваль О. А., Троицкая О. С.,Закревский Д. Е. ХОЛОДНАЯ ПЛАЗМЕННАЯ СТРУЯКАК НОВЫЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ПОДХОД ...........................204Боева О. С., Кнауэр Н. Ю., Пашкина Е. А., Актанова А. А.,Архипова В. И., Санчес-Ньевес Х., де ла Мата Ф. Х., Гомес Р.,Апарцин Е. К. ОЦЕНКА ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
АМФИФИЛЬНЫХ ТРИАЗИН-КАРБОСИЛАНОВЫХ
ДЕНДРОНОВ............................................................................................207Гисич А. В., Ястребова Е. С., Строкотов Д. И. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
УСЛОВНОГО ВОЗРАСТА ЭРИТРОЦИТОВ МЕТОДОМ
СКАНИРУЮЩЕЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ .............................209Голышев В. М., Ломзов А. А., Пышный Д. В. СОЗДАНИЕ
ПОДХОДОВ ДЛЯ ПРЕДСКАЗАНИЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ
СВОЙСТВ КОМПЛЕКСОВ ПРОИЗВОДНЫХ НУКЛЕИНОВЫХ
КИСЛОТ ....................................................................................................212Гончарова Т. А., Печерицын А. А. РАЗРАБОТКА МЕТОДА
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ОПТИМАЛЬНЫХ
МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ СОБАК ПОРОДЫ
РОТВЕЙЛЕР .............................................................................................215
Горобец М. Г., Абдуллина М. И., Лопухова М. В., Бычкова А. В.
ОЦЕНКА ГЕНЕРАЦИИ АФК НА ПОВЕРХНОСТИ
МАГНИТНЫХ ЧАСТИЦ, ОБЛАДАЮЩИХ
ПЕРОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ .............................................. 218

624Гущин И. Ю., Ремеева А. А., Гончаров И. М., Назаренко В. В.,Рыжиков Ю. Л. СТРУКТУРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЕРЕДАЧИ СИГНАЛА БАКТЕРИАЛЬНОЙ
СЕНСОРНОЙ ГИСТИДИН-КИНАЗОЙ ............................................. 222
Зайцев В. А., Плешков М. О. ПРОБЛЕМЫ СРАВНЕНИЯ СИСТЕМ
ЭЛЕКТРООКУЛОГРАФИИ И ВИДЕООКУЛОГРАФИИПРИ ПРОВЕДЕНИИ ТЕСТА ИМПУЛЬСА ГОЛОВЫ ..........................225Замосковцева А. А., Ломзов А. А., Кабилов М. Р., Пышный Д. В.
ПОИСК НОВОГО ТИПА ПРОСТРАНСТВЕННОЙ ОРГАНИЗАЦИИ
НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В ГЕНОМЕ ЧЕЛОВЕКА..........................227
Ильясов А. Р., Низамов Т. Р. СРАВНЕНИЕ И АНАЛИЗ РАЗЛИЧИЙ
БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МАГНИТНЫХ НАОЧАСТИЦ
IN VITRO...................................................................................................229
Ишемгулов А. Т., Летута С. Н., Пашкевич С. Н. ИЗУЧЕНИЕ
ДЕЙСТВИЯ УДАРНЫХ ВОЛН НА МИКРООРГАНИЗМЫВ РАСТВОРАХ С СЕНСИБИЛИЗАТОРАМИ .......................................231Ишкаева Р.А., Салихова Т. И., А. Рагад, Цепаева О. В., Григорьева Л. Р.,Пономарев Д. В., Немтарев А. В., Миронов В. Ф., Абдуллин Т. И.
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ТРИФЕНИЛФОСФОНИЕВЫХ
ПРОИЗВОДНЫХ САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫС ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМИ ЗОНДАМИ .................................................233Козин С. В., Кравцов А. А. ВЛИЯНИЕ ИЗОТОПНОГО
D/H-СОСТАВА СРЕДЫ НА АКТИВНОСТЬ И СТРУКТУРУ
ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА ........................................................................235Кононова П. А., Селютина О. Ю., Поляков Н. Э. ВЛИЯНИЕ
ЭМОДИНА НА РЕАКЦИИ ПЕРЕКИСНОГО
ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ .......................................................................238
Конышев И. В., Белозёров В. С., Дудина Л. Г. ОЦЕНКА СИЛМЕЖМОЛЕКУЛЯРНОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯВ СИСТЕМЕ «БАКТЕРИЯ — АНТИТЕЛО»С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОПТИЧЕСКОЙ ЛОВУШКИ ........................240СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

625Коршунов А. С., Конев В. П., Вагнер В. Д., Курятников К. Н.
ИЗУЧЕНИЕ СКОРОСТИ СОЗРЕВАНИЯ МИНЕРАЛЬНОГО
КОМПОНЕНТА ЭМАЛИ ЗУБОВ ЧЕЛОВЕКАПРИ НАРУШЕННОМ АМЕЛОГЕНЕЗЕ МЕТОДОМ
АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ .............................................242
Кошман В. Е., Селютина О. Ю., Тимошников В. А., Поляков Н. Э.
ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО
ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ С УЧАСТИЕМ
ХЕЛАТНЫХ КОМПЛЕКСОВ ТИОСЕМИКАРБАЗОНОВ ..................244Мальсагова К. А. ВЫЯВЛЕНИЕ БЕЛКОВ,АССОЦИИРОВАННЫХ С РАЗВИТИЕМ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО
РАКА НА РАННИХ СТАДИЯХ .............................................................246
Мастова А. В., Селютина О. Ю., Поляков Н. Э.
ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЯ
НИФЕДИПИНА С ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТОЙ .................. 248
Митин Д. Е., Суворов Д. А., Клочихин К. А., Чубаров А. С.
КОНТРАСТНЫЕ АГЕНТЫ НА ОСНОВЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО
СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА И НИТРОКСИДОВДЛЯ МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ ........................250Михайленко Ю. А., Владимиров А. П., Бахарев А. А.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЖИВЫХ КЛЕТОК
МЕТОДОМ ДИНАМИЧЕСКОЙ СПЕКЛ-ИНТЕРФЕРОМЕТРИИ ..... 252
Подгурская А. Д., Слотвицкий М. М., Цвелая В. А., Фролова Ш. Р.,Романова С. Г., Агладзе К. И. ВАЛИДАЦИЯ ТЕСТИРОВАНИЯ
АРИТМОГЕННОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВС ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ КАРДИОМИОЦИТОВ,ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ИНДУЦИРОВАННЫХ
ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ЗДОРОВОГО ДОНОРА ...........................................................................255
Птицын А. А., Рязанцева Л. Т., Октябрьский В. П. ВЛИЯНИЕ
ФОТОИНДУЦИРОВАННОГО ТРАНСПОРТА АСКОРБИНОВОЙ
КИСЛОТЫ В НЕЙТРОФИЛЬНЫЕ ЛЕЙКОЦИТЫНА АКТИВАЦИЮ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ ......................................258

626Садыкова Э. З., Костанова Е. А., Бирюкова М. И., Мурадова А. Г.,Бычкова А. В. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПЛАЗМИНОГЕНАС ПОВЕРХНОСТЬЮ МОДИФИЦИРОВАННЫХ МАГНИТНЫХ
НАНОЧАСТИЦ ........................................................................................261
Сербина А. В., Богданов А. О., Панкратов Ю. В. НАРУШЕНИЕ
ПЛАСТИЧНОСТИ СИНАПСОВ В ПРЕФРОНТАЛЬНОЙ КОРЕМЫШЕЙ С МОДЕЛЬНЫМ СТРЕССОВЫМ РАССТРОЙСТВОМ ....263
Суюндукова А. Т., Мельничук В. С., Дёмкин В. П., Завадовский К. В.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФРАКЦИОННОГО РЕЗЕРВА КРОВОТОКАВ КОРОНАРНЫХ СОСУДАХ МЕТОДОМ ЛОКАЛЬНОЙ
ГЕМОДИНАМИКИ .................................................................................267
Тюлина В. В., Милаёва И. В., Царькова М. С. ОСОБЕННОСТИ
БИОХИМИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ МОЛОКА КОЗ В ПЕРВЫЕ ДВЕНЕДЕЛИ ЛАКТАЦИИ .............................................................................270Фрицлер Я. В., Шуваев А. Н. МОДЕЛЬ МЕМБРАННОГО ПОТЕНЦИАЛА
КЛЕТКИ ПУРКИНЬЕ ..............................................................................274Цыбулина А. О., Котловская Л. Ю., Дёмкин В. П., Удут В. В.
ДИАГНОСТИКА СОСТОЯНИЯ ГЕМОСТАЗАС ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕОРИИ НЕЧЕТКИХ МНОЖЕСТВ ..................276pаздел 3БИОФИЗИКААл Аллаф Л. ПРОТЕЙНЫЙ БАКТЕРИОФАГ PM16ИНДУЦИРУЕТ АДАПТИВНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ ....................278Антропов Д. Н., Журавлёв Е. С., Комиссаров А. Б., Курбатов Л. К.,Новопашина Д. С., Степанов Г. А.
РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДЕТЕКЦИИ РНКГРИППА А И КОРОНАВИРУСА SARSCOV-2 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРОТОКОЛА
ИЗОТЕРМИЧЕСКОЙ АМПЛИФИКАЦИИ .......................................... 281

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

627Баранова Д. В., Соколова А. С., Яровая О. И., Щербаков Д. Н.,Мордвинова Е. Д., Салахутдинов Н. Ф. ПРОИЗВОДНЫЕ
(1S)-(+)-КАМФОРА-10-СУЛЬФОКИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ
ИНГИБИТОРОВ ФИЛОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ............................283
Вонг П.-Ф., Крутикова Е. В., Баженова Е. А., Баранов К. В.,Степанова Е. А. ПОЛУЧЕНИЕ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО
ШТАММА ГРИППА В С ХИМЕРНЫМ ГЕМАГГЛЮТИНИНОМНА ОСНОВЕ ЛИНИЙ ВИКТОРИЯ И ЯМАГАТА ..................................... 285
Гладышева А. В., Баяндин Р.Б., Протопопова Е. В., Святченко В. А.
ИЗОЛЯЦИЯ, ХАРАКТЕРИЗАЦИЯ И ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ
АНАЛИЗ ДВУХ НОВЫХ ШТАММОВ ВИРУСА НГАРИ,ОБНАРУЖЕННЫХ В ИКСОДОВЫХ КЛЕЩАХ В ГВИНЕЕ ...............287
Дерко А. А., Дубовицкий Н. А., Мархаев А. Г., Мурашкина Т. А.,Суворова А. А., Шаршов К. А., Шестопалов А. М.
АВУЛАВИРУСЫ ПТИЦ, ВЫЯВЛЕННЫЕВО ВРЕМЯ МОНИТОРИНГА ВИРУСОВ ГРИППА АНА ТЕРРИТОРИИ СИБИРИ В 2019 Г..........................................................................................290Емельянова Е. П., Кононова Ю. В., Замятина Е. В., Казачкова Е. А.,Хрипко О. П., Цыцорина И. А., Серебренникова Е. С.,Гогонина В. И., Шестопалов А. М. СЛУЧАИ ОБНАРУЖЕНИЯ РНККОРОНАВИРУСА SARS-COV-2
У НОВОРОЖДЕННЫХ В НОВОСИБИРСКЕ .................................... 293
Ждид Г. А., Морозова В. В., Козлова Ю. Н.,Тикунов А. Ю., Тикунова Н. В. ОРИГИНАЛЬНЫЙ БАКТЕРИОФАГENTEROBACTER, EC151 ........................................................................295Журавлёва Е. А. РЕТРОСПЕКТИВНАЯ ДИАГНОСТИКА
ОРТОПНЕВМОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО
СКОТА МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА .......... 298
Зыбкина А. В., Щербаков Д. Н. СОЗДАНИЕ ПАНЕЛИ
ПСЕВДОВИРУСОВ ЭБОЛА ...................................................................300Ибрагимова М. К., Кокорина Е. В., Цыганов М. М., Литвяков Н. В.
АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ АССОЦИАЦИИ
ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА С РИСКОМ РАЗВИТИЯ
ОНКОПАТОЛОГИЙ РАЗЛИЧНЫХ ЛОКАЛИЗАЦИЙ .......................302

628

Ковалева К. С., Яровая О. И., Зайковская А. В., Щербаков Д. Н.,Пьянков О. В., Зубков Ф. И., Салахутдинов Н. Ф.
N-АЦИЛГИДРАЗОНЫ КАМФОРЫ И ФЕНХОНА В КАЧЕСТВЕ
ИНГИБИТОРОВ ВИРУСА HANTAAN ВЫЗЫВАЮЩЕГО ГЛПС......306
Коняхина Ю. В., Колосова И. В., Сергеев А. А., Щелкунов С. Н.
ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ КЛОНОВЫХ ВАРИАНТОВ ШТАММА
ЛИВП ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ .......................................................309
Лепехина Д. Ю., Харитонова Е. М., Лага В. Ю. ПРОБЛЕМА
ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ
ВИРУСОВ ПТИЦ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ............................................................312Матвеев А. Л., Матвеев Л. Е., Стронин О. В., Байков И. К.,Емельянова Л. А., Клюсевич Я. А., Тикунова Н. В.
ХАРЕКТРИЗАЦИЯ ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩЕГО
МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ ВИРУСА
КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА IN VIVO ...............................................315Мацишина Н. В., Собко О. А., Фисенко П. В., Ким И. В.
ЦИРКУЛЯЦИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙВ АГРОБИОЦЕНОЗЕ КАРТОФЕЛЬНОГО ПОЛЯ ..............................317
Налимова Т. М., Гашникова Н. М., Швалов А. Н., Тотменин А. В.,Сандарева Т. П., Поздеева А. А. УНИКАЛЬНЫЕ
РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ ВИЧ-1, ОБНАРУЖЕННЫЕНА ТЕРРИТОРИИ СВЕРДЛОВСКОЙ ОБЛАСТИ ...............................319
Нефедьева М. В., Титов И. А.МОДУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ
МАКРОФАГОВ МУЛЬТИГЕННЫМ СЕМЕЙСТВОМ MGF110
ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ ......................................322
Никишов О. Н., Кузин А. А. МЕДИКО-СОЦИАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ
ПАРВОВИРУСНОЙ В19 ИНФЕКЦИИ..................................................324Осипова И. П., Селезнев А. А., Тотменин А. В., Швалов А. Н.,Гашникова М. П., Гашникова Н. М. ГЕНОТИПИРОВАНИЕ
ВАРИАНТОВ ВИРУСА ЛЕЙКОЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА,ВЫДЕЛЕННЫХ В НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ ............................327

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

629Петрова П. А., Коновалова Н. И., Бояринцева А. Ю., Даниленко Д. М.,Еропкин М. Ю. ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСОВ ГРИППА А(H3N2),
ЦИРКУЛИРОВАВШИХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ
В 2019–2020 ГГ...............................................................................................................330Погожова М. П., Гайевская Н. Е., Аноприенко А. О. ПЕРСПЕКТИВЫ
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ
VIBRIO CHOLERAE.................................................................................332
Прокопенко П. И., Матюшенко В. А., Степанова Е. А., Котомина Т. С.,Чистякова А. К., Крутикова Е. В., Циммерман Е. Л., Вонг П.-Ф.
РАЗРАБОТКА ВЫСОКОИММУНОГЕННОЙ ЖИВОЙ
ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ПУТЕМ
ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННОЙ МОДИФИКАЦИИ NS1 БЕЛКА ................ 334
Прокопьева Е. А., Курская О. Г., Соломатина М. В., Соболев И. А.
АДАПТИРОВАННЫЙ ВАРИАНТ ВИРУСА ГРИППА ВДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЙ IN VITRO И IN VIVO .................................... 336
Проценко М. А., Филиппова Е. И., Мазуркова Н. А., Лобанова И. Е.,Высочина Г. И. РАСТЕНИЯ РОДА MENTHA,
ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ............ 338
Рында Е. Г., Гончаров А. Е., Антоневич Н. Г., Тимохина О. В.,Минич Я. С., Головач Е. А., Бобрукевич Д. В., Доценко М. Л.,Доценко Э. А. ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОИДНЫХИ МИЕЛОИДНЫХ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫУ ПАЦИЕНТОВ С COVID-19 .................................................................340Семенова А. В., Сиволобова Г. Ф., Гражданцева А. А., Пьянков О. В.,Кочнева Г. В. ОПТИМИЗАЦИЯ ВАКЦИННОЙ КОНСТРУКЦИИ
ПРОТИВ ЛИХОРАДКИ МАРБУРГ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
КАССЕТЫ ГЕНОВ GP-VP40-NP ............................................................344
Сергеева М. В., Пулкина А. А., Романовская-Романко Е. А.,Мустафаева А. С., Стукова М. А. ВИРУСЫ ГРИППАС ЛЮЦИФЕРАЗНЫМ РЕПОРТЕРОМДЛЯ ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫХ
НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ АНТИТЕЛ ..................................................... 346

630

Степанова Е. А., Крутикова Е. В., Вонг П.-Ф., Чистякова А. К.
ХИМЕРНЫЙ РЕАССОРТАНТ НА ОСНОВЕ ВИРУСОВ
ГРИППА А И В ИНДУЦИРУЕТ ОБРАЗОВАНИЕ АНТИТЕЛК ВИРУСАМ ГРИППА ОБОИХ ПОДТИПОВ ......................................348
Стрельцова Я. Б. ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ И ГЕНЕТИКИ
ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЦИРКОВИРУСНОЙ БОЛЕЗНИ СВИНЕЙ ............350Тюфяков В. С., Сюткина А. С., Окулова И. И. ОЦЕНКА
ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТАПРИ ИММУНИЗАЦИИ ЩЕНКОВ ЕНОТОВИДНОЙ СОБАКИ
ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ
ПРОБИОТИКА СУБАЛИН ................................................................. 353
Хорошавин Ю. А. ОПРЕДЕЛЕНИЕ И АНАЛИЗ
ПОЛНОГЕНОМНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
СЕМИ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ АЛЬФАВИРУСОВ ................................356
Цыденова И. А., Ибрагимова М. К., Цыганов М. М., Долгашева Д. С.,Черемишина О. В., Литвяков Н. В. ВПЧ-ПОЗИТИВНЫЙ РАКГОРТАНИ: СВЯЗЬ С ЭФФЕКТОМ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОГНОЗОМ
ЗАБОЛЕВАНИЯ .......................................................................................359
Шамсутдинова О. А., Лаврентьева И. Н., Карал-оглы Д. Д.
ПЦР-РВ КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ ТЕСТПРИ ОЦЕНКЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ
АТТЕНУИРОВАННЫХ ШТАММОВ ВИРУСА КРАСНУХИВ ОПЫТЕ НА ОБЕЗЬЯНАХ МАКАКА-РЕЗУС ....................................362
Якубицкий С. Н., Бауэр Т. В., Сергеев А. А., Кабанов А. С.,Пьянков С. А., Щелкунов С. Н. УВЕЛИЧЕНИЕ
ИММУНОГЕННОСТИ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ ..........................365РАЗДЕЛ
МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ
Абикеева Т. А., Иванов М. К., Дзюбенко В. В.
ВЫЯВЛЕНИЕ МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНОМА ВИРУСА
ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА 16 ТИПА ДЛЯ РАННЕЙ

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

631ДИАГНОСТИКИ ТЯЖЕЛЫХ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ
НЕОПЛАЗИЙ И РАКА ШЕЙКИ МАТКИ .............................................367
Антоненко А. К. ЭКСПРЕССИЯ ТРАНСКРИПЦИОННЫХ ФАКТОРОВ
OTX2 И CRX В ПЕРИОД ПОСТНАТАЛЬНОГО СОЗРЕВАНИЯ
СЕТЧАТКИ У ПРЕЖДЕВРЕМЕННО СТАРЕЮЩИХ КРЫС OXYS ...370Арнаудова К. Ш., Астафьева О. В., Жаркова З. В. СЕКВЕНИРОВАНИЯ
НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ..... 372
Архипова В. И., Кнауэр Н. Ю., Пашкина Е. А., Боева О. С.,Веньяминова А. Г., Санчес-Ньевес Х., де ла Мата Ф. Х.,Гомес Р.,Апарцин Е. К. ТРИАЗИН-КАРБОСИЛАНОВЫЕ
ДЕНДРИМЕРОСОМЫ КАК ПЕРСПЕКТИВНАЯ ПЛАТФОРМАДЛЯ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВ ............................................................ 374
Арюков А. Р., Ракин А. И. НАЛИЧИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ МЕЖДУ
ГЕНЕТИЧЕСКИМИ МАРКЕРАМИ ДОМЕНА DBL1Α И DBLΒГЛАВНОГО ФАКТОРА ВИРУЛЕНТНОСТИ PLASMODIUMFALCIPARUM (PFEMP1) В СЛУЧАЕ ТЯЖЕЛОГО ТЕЧЕНИЯ
ТРОПИЧЕСКОЙ МАЛЯРИИ ..................................................................376
Афонникова С. Д. ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ
HAP1 С АУКСИН-ЗАВИСИМОЙ ДЕГРАДАЦИЕЙ
КОНДЕНСИНОВ И КОГЕЗИНА ............................................................379
Балыкова А. Н., Ерошенко Г. А. ГЕНОМНЫЙ АНАЛИЗ
И SNP-ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ШТАММОВ YERSINIA PESTISФИЛОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ВЕТВИ 2.MED4
СРЕДНЕВЕКОВОГО БИОВАРА ............................................................381
Басова Е. Ю., Литвинова Н. А., Cаввина О. А., Шукуров Р. Р.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БИСПЕЦИФИЧЕСКОГО
БЕЛКА GNR-084 МЕТОДОМ ИММУНО-ПЦР ....................................384
Бах С. Н., Щетникова Е. А. ИЗУЧЕНИЯ ВЛИЯНИЯ ПРОЦЕДУРЫ
КРИОКОНСЕРВАЦИИ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
ЧЕЛОВЕКА НА ПОКАЗАТЕЛИ ДНК-КОМЕТ.....................................390Беленькая С. В., Шаньшин Д. В., Щербаков Д. Н., Яровая О. И.,Вацадзе С. З. РАЗРАБОТКА ПРОКAРИОТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ
ЭКСПРECСИИ ОСНОВНОЙ ПРОТЕАЗЫ 3CL SARS-COV-2 ............392

632Богданова А. А., Немова Н. Н., Волкова Т. О. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ
ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ГОЛОВЫ И ШЕИ ..............................394Болдинова Е. О., Годке П. П. Г., Макарова А. В., Прадеепкумар П. И.,Мирославская Н. А. ТРАНСЛЕЗИОННАЯ АКТИВНОСТЬ
PRIMPOL ЧЕЛОВЕКА НА ДНК-МАТРИЦАХ
С N2-АДДУКТАМИ ГУАНИНА ................................................................397
Буренина О. Ю., Лазаревич Н. Л., Зацепин Т.С., Рубцова М. П.,Донцова О. А. НОВАЯ ДЛИННАЯ НЕКОДИРУЮЩАЯ
РНК — ПОТЕНЦИАЛЬНЫЙ БИОМАРКЕР РАКА ПЕЧЕНИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ...................................................... 399
Вавилова В., Базарова Е., Бирюков М., Устьянцев К., Березиков Е.
ГЕН MLIG-SKP1 НЕОБХОДИМ ДЛЯ ПРАВИЛЬНОГО
РАЗВИТИЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ У РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО
СВОБОДНОЖИВУЩЕГО ЧЕРВЯ MACROSTOMUM LIGNANO ......... 401
Волкова Н. В., Исаева А. А., Таранов О. С., Казачинская Е. И.,Щербаков Д. Н. РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА,ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ
СБОРКУ ВИРУСОПОДОБНЫХ ЧАСТИЦ ВИРУСА МАРБУРГ........403
Галдина В.А., Блинова Е.А. ВЛИЯНИЕ ЭКСПРЕССИИ TIM-3 И PD-1
НА ЦИТОКИН-ПРОДУЦИРУЮЩУЮ СПОСОБНОСТЬ
Т-КЛЕТОК IN VITRO В НОРМЕ И ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ .. 405
Гамбург Т. А., Гончарова Е. П., Марков О. В., Зенкова М. А. ОЦЕНКА
ЭФФЕКТИВНОСТИ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ
МЕЛАНОМЫ В-16 НА ОСНОВЕ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОКИ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ................................................................408Гаптулбарова К. А., Цыганов М. М., Родионов Е. О., Ибрагимова М. К.,Долгашева Д. С., Литвяков Н. В. ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ
ЗНАЧИМОСТЬ ЭКСПРЕССИИ МРНК ГЕНОВ ERCC1, RRM1, TOP1,
TOP2A, TUBB3, TYMS, GSTP1 И BRCA1 У ПАЦИЕНТОВС НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ ЛЕГКОГО ..................................411
Глинских А. В., Снытникова О. А., Разумов И. А., Коптюг И. В.,Центалович Ю. П., Акулов А. Е. МЕТАБОЛОМНЫЙ АНАЛИЗ
ТКАНЕЙ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ЧЕЛОВЕКА

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

633МЕТОДОМ ЯМР В ЖИВОТНОЙ МОДЕЛИ
МЫШЕЙ ЛИНИИ SCID ..........................................................................414Голубев Д. А., Яковлева Д. В., Коваль Л. А., Москалёв А. А.
РОЛЬ МЕТАБОЛИТОВ ЦИКЛА КРЕБСА В ФОРМИРОВАНИИ
УСТОЙЧИВОСТИ DROSOPHILA MELANOGASTERК ДЕЙСТВИЮ СТРЕСС-ФАКТОРОВ РАЗЛИЧНОЙ ПРИРОДЫ
(СТРЕССУ ЭНДОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ СЕТИ,ОКИСЛИТЕЛЬНОМУ СТРЕССУ, ТЕПЛОВОМУ ШОКУ) .................416Гордеева А. А., Подлесных С. В., Шаповал А. И. ПЕПТИДЫ,ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С МОЛЕКУЛОЙ АНТИГЕНА-4ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ T-ЛИМФОЦИТОВ (CTLA-4) .......................418Давлетова К. И., Бернадо А. В., Студеникина А. А.ВЗАИМОСВЯЗЬ
ПРОТЕИНОВ И ЦИТОКИНОВ С ВЛИЯНИЕМ HUMAN
LEUKEMIA DIFFERENTIATION FACTOR
НА КЛЕТКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ...................................... 420
Держалова А. С., Марков О. В., Фокина А. А., Шиохама Я., Зацепин Т. С.,Фуджи М., Зенкова М. А., Стеценко Д. А. НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ
ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, СОДЕРЖАЩИЕ ЛИПОФИЛЬНЫЕ
N-(СУЛЬФОНИЛ)-ФОСФОРАМИДНЫЕ ГРУППЫ:ПОЛУЧЕНИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ..............................422
Добронос М. А., Чепурных Т. В., Случанко Н. Н., Гороховатский А. Ю.,Ямпольский И. В. БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВЫХ
ФОТОАКТИВИРУЕМЫХ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ БЕЛКОВИЗ САЛЬПЫ THALIA DEMOCRATICA ................................................425Долгашева Д. С., Ибрагимова М. К., Цыганов М. М.
АНАЛИЗ АБЕРРАЦИЙ ЧИСЛА КОПИЙ ДНК ГЕНАPARP1 В ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ .................................... 427
Дронова Т.А., Бабышкина Н. Н., Паталяк С. В., Вторышин С. В.,Стонимская Е. М., Чердынцева Н. В. TGF-Β1
И ЕГО МЕМБРАННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ: СВЯЗЬ С ОСОБЕННОСТЯМИ
КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ У БОЛЬНЫХ
ЭСТРОГЕН-ПОЗИТИВНЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ....... 430
Дубовиченко М. В., Колпащиков Д. М. БИВАЛЕНТНЫЕ ДНКУСТРОЙСТВА ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ СПЕЦИФИЧНЫХ РНКДЛЯ ТЕРАПИИ РАКА .............................................................................433

634Дьяконова А. Т., Куртанов Х. А., Павлова Н. И., Борисова У. П.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ РАЗВИТИЯ
ПАТОЛОГИЙ ПЕЧЕНИ У БОЛЬНЫХ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
2-ГО ТИПА В РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) ..................................436Дюдеева Е. С. РАЗРАБОТКА ПОДХОДАК ВЫСОКОСПЕЦИФИЧНОЙ ДЕПЛЕЦИИ РНК-МИШЕНЕЙС ПОМОЩЬЮ ФОСФОРИЛГУАНИДИНОВЫХ ЗОНДОВИ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ......................................441
Ермаков М. С., Коваль О. А., Нуштаева А. А.
ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОЙ ГИПОКСИИ НА СВОЙСТВА
ОПУХОЛЬ-АССОЦИИРОВАННЫХ ФИБРОБЛАСТОВ ....................443
Ермаков Е. А., Бунева В. Н., Невинский Г. А.
ГИСТОН-ГИДРОЛИЗУЮЩИЕ АНТИТЕЛАПРИ ШИЗОФРЕНИИ: ВЗАИМОСВЯЗЬ ВОСПАЛЕНИЯИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ..................................................445
Замалутдинов А. В., Ломов Н. А., Зеркаленкова Е. А., Рубцов М. А.
LOLA — БЫСТРЫЙ И ПРОСТОЙ МЕТОД ДЕТЕКЦИИ
ОНКОГЕННЫХ ПЕРЕСТРОЕК T(4;11)(Q21;Q23) ...............................447
Иванова И. А., Ершова М. О., Плешакова Т. О., Иванов Ю. Д.
ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА МЕТОДОМ АСМВ РАЗЛИЧНЫХ РЕЖИМАХ СКАНИРОВАНИЯ .............................. 450
Ильина А. А., Саломатина О. В., Салахутдинов Н. Ф., Зенкова М. А.,Марков А. В. НОВОЕ ПОКОЛЕНИЕ ЦИАНО-ЕНОНСОДЕРЖАЩИХ ТРИТЕРПЕНОИДОВ: ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ
ПОТЕНЦИАЛ В ОТНОШЕНИИ КЛЕТОК ГЛИОИ НЕЙРОБЛАСТОМ ...............................................................................453
Ильющенко Д. В., Гунбин К. В., Попадьин К. Ю. ЭВОЛЮЦИЯ МТДНК
МЛЕКОПИТАЮЩИХ:МЫШИ ХОДЯТ МНОГИМИ МАЛЕНЬКИМИ ШАГАМИ,СЛОНЫ — РЕДКИМИ БОЛЬШИМИ ....................................................457
Искра Е. Л. УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ ОККЛЮДИНА, КЛАУДИНА
И Е-КАДГЕРИНА В КЛЕТОЧНОЙ МОДЕЛИ
АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА ..............................................................459

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

635Калюжная Я. Г., Бондаренко К. А., Болдинова Е. О., Макарова А. В.
ДНК-АПТАМЕРЫ К PRIMPOL ЧЕЛОВЕКА ........................................461
Карпова Н. С., Дмитренко О. П., Нурбеков М. К., Абрамова О. И.,Мошетова Л. К., Туркина К. И. АССОЦИАЦИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОГО
ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА SIRT1RS12778366 С ВОЗРАСТНОЙ
МАКУЛЯРНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИЕЙ ........................................................462
Кипень В. Н., Снытков Е. В., Кривенко А. А., Патрин М. М. АНАЛИЗ
ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА MC1R ДЛЯ ОСОБЕЙ ВИДАSUS SCROFA С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ KASP .......... 465
Кипень В. Н., Снытков Е. В., Кривенко А. А., Патрин М. М.
IN SILICO АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА H3GA0051811 ГЕНА HEPHДЛЯ ЖИВОТНЫХ ВИДА SUS SCROFA ..................................................469
Кондратьев А. В., Костарной А. В., Ганчева П. Г., Соколова М. В.,Метальников П. В. ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ ЛИПИДА АИ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СВОЙСТВ
ЛИПОПОЛИСАХАРИДА RICKETTSIA SIBIRICA ..............................473
Корунова Е. С., Гороховатский А. Ю., Чепурных Т. В., Зиганшин Р. Х.,Царькова А. С., Мокрушина Ю. А., Ямпольский И. В. СИНИЙ
ХРОМОБЕЛОК ИЗ МЕДУЗЫ RHIZOSTOMA PULMO: ОЧИСТКА,СВОЙСТВА И ПОДБОР УСЛОВИЙ КРИСТАЛЛИЗАЦИИ ...............475Кочеткова А. С., Ильина Е. С., Ходырева С. Н., Лаврик О. И. ВЛИЯНИЕ
УРОВНЯ PARP1 НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЭКСЦИЗИОННОЙ
РЕПАРАЦИИ ОСНОВАНИЙ В КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА .....................477
Кудояров Е. Р., Каримов Д. Д., Каримов Д. О., Хуснутдинова Н. Ю.,Байгильдин С. С., Фазлыева А. С. ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ХЛОРИДА
КАДМИЯ НА ФРАГМЕНТАЦИЮ ДНК ЛЕЙКОЦИТОВ КРЫС ........479
Кулаева Е. Д., Липилкин П. В. ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИИ ОЦЕНКИ ПРОГНОЗА ПРИ МДС НА ОСНОВЕ СОМАТИЧЕСКИХ
МУТАЦИЙ В ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕГУЛЯТОРАХ .......................481
Кулешова А. Е., Пурвиньш Л. В., Буркова Е. Е. ОЦЕНКА УРОВНЯ
РАЗЛИЧНЫХ МИКРОРНК НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ
ВЫДЕЛЕНИЯ ЭКЗОСОМ ИЗ МОЛОКА...............................................483

636Логвина Н. А., Хабардина Е. А., Стеценко Д. А., Зацепин Т. С.
ВЛИЯНИЕ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ CRISPR РНКНА ЭФФЕКТИВНОСТЬ СИСТЕМЫ ГЕНОМНОГО
РЕДАКТИРОВАНИЯ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СОЧЕТАНИИС БЕЛКАМИ CAS9 ПОВЫШЕННОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ ..............485Луцкая Е. А., Певзнер А. М., Долгашева Д. С., Ибрагимова М. К.,Цыганов М. М. АНАЛИЗ КОДИРУЮЩИХ ОБЛАСТЕЙ ГЕНАBRCA1 В ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ................................... 487
Мадьярова Е. В., Дроздова П. Б., Димова М. Д., Гурков А. Н.,Верещагина К. П., Адельшин Р. В., Тимофеев М. А.
ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МИКРОСПОРИДИЙ
ГОЛАРКТИЧЕСКОГО ВИДА АМФИПОД GAMMARUSLACUSTRIS ИЗ ВОДОЕМОВ БАЙКАЛЬСКОГО РЕГИОНА ..............489
Макаров Г. И., Шунялов А. В. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ
МЕЖДУ СТОП-ПЕПТИДОМ SECM И РИБОСОМОЙ
E. COLI МЕТОДАМИ МОЛЕКУЛЯРНО-ДИНАМИЧЕСКОГО
МОДЕЛИРОВАНИЯ ................................................................................491
Макарова Т. М. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ МОДИФИКАЦИИ
РЕЗИСТЕНТНОСТИ A2503 НА РИБОСОМУ E. COLI МЕТОДАМИ
МОЛЕКУЛЯРНО-ДИНАМИЧЕСКОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ ...........493
Максимова В. П., Усалка О. Г., Сагитова Г.Р., Пацюркевич А. А.,Якубовская М. Г., Кирсанов К. И. ВЛИЯНИЕ ФУНГИЦИДА
ТИРАМА НА ГИСТОНОВЫЕ МОДИФИКАЦИИ ...............................495
Матвеева А. М., Виноградов Д. И., Журавлёв Е. С., Степанов Г.А.
РЕДАКТИРОВАНИЕ ИНТРОНОВ ГЕНА-ХОЗЯИНА
МАЛЫХ ЯДРЫШКОВЫХ РНК GAS5 КАК ИНСТРУМЕНТ
ФУНКЦИОНАЛЬНОГО АНАЛИЗА ................................................... 497
Миннуллина Л. Ф., Шайдуллина Э. Р., Марданова А. М.
АНАЛИЗ РЕЗИСТОМА УРОПАТОГЕННЫХ ШТАММОВMORGANELLA MORGANII, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ
ГОРОДА КАЗАНИ .............................................................................. 499
Монстакова Т. В., Азарнова Т. О., Кочиш И. И. КОРРЕКЦИЯ
ИНТЕНСИВНОСТИ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ В УСЛОВИЯХ
ПРОМЫШЛЕННОЙ ИНКУБАЦИИ КУР ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ
ФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ И ЛЕЙКОЦИТОВ .........501

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

637Морозова Е. Е., Лактионов П. П., Сингх П. ВЛИЯНИЕ LMNB1
НА РЕПЛИКАТИВНОЕ СТАРЕНИЕ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА...503
Морячков Р.В., Заблуда В. Н., Кичкайло А. С., Спиридонова В. А.,Берлина А. Н., Соколов А. Е. ДНК-АПТАМЕРЫ В РАСТВОРЕ:ТРЁХМЕРНАЯ СТРУКТУРА, КОНФОРМАЦИОННЫЕ
ИЗМЕНЕНИЯ, СПЕЦИФИЧЕСКОЕ СВЯЗЫВАНИЕ .........................505Москалюк В. С., Кожемякина Р.В., Базовкина Д. В., Науменко В. С.,Куликова Е. А. ВЛИЯНИЯ ОСТРОГО ВВЕДЕНИЯ TC-2153
НА ЭКСПРЕССИЮ СЕРОТОНИНОВЫХ 5-HT1A
И 5-HT7 РЕЦЕПТОРОВ И ТРАНСКРИПТОВ BDNF
У РУЧНЫХ И АГРЕССИВНЫХ КРЫС .................................................507
Мутин А. Д., Верещагина К. П., Л. Якоб, Бедулина Д. С., М. Лукассен,Тимофеев М. А. ВЛИЯНИЕ ПОСТЕПЕННОГО ПОВЫШЕНИЯ
ТЕМПЕРАТУРЫ НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО
МЕТАБОЛИЗМА БАЙКАЛЬСКИХ ЭНДЕМИЧНЫХИ ГОЛАРКТИЧЕСКИХ АМФИПОД .....................................................509
Никитин М. С., Ковтун А. С., Даниленко В. Н., Захаревич Н. В.,Артамонова И. И. CRISPR-CAS СИСТЕМЫ В МИКРОБИОМЕ
КИШЕЧНИКА БОЛЬНЫХ И ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ:ИДЕНТИФИКАЦИЯ И РАЗНООБРАЗИЕ ............................................511
Одаренко К. В., Сенькова А. В., Саломатина О. В., Салахутдинов Н. Ф.,Зенкова М. А., Марков А. В. ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКИЕ
ЦИАНО-ЕНОН-СОДЕРЖАЩИЕ ПОЛИЦИКЛИЧЕСКИЕ
СОЕДИНЕНИЯ КАК ИНГИБИТОРЫ
ЭПИТЕЛИАЛЬНО-МЕХЕНХИМАЛЬНОЙ
ТРАНСФОРМАЦИИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ..................................514
Панферов Е. В., Ныров В. А., Слижов П. А., Глушаков Р.И.,Спивак И. М. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ
МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ СЕТЕЙ В ФИБРОБЛАСТАХ
ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ КОМПЬЮТЕРНОЙ МОРФОМЕТРИИ ... 517
Парамоник А. П., Куцейкин C. C., Осипов И. Д., Нетесов С. В.
НОВЫЙ ХИМЕРНЫЙ АДЕНОВИРУС ЭФФЕКТИВЕН
ПРОТИВ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК С ПОНИЖЕННОЙ
ЭКСПРЕССИЕЙ КОКСАКИ-АДЕНОВИРУСНОГО РЕЦЕПТОРА ....521

638

Переверзев И. М., Торгашева Н. А., Голосова О. И., Тиунов А. В.,Шевелев Г.Ю. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ОБЗОР ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ
ХАРАКТЕРИСТИК ПРОГРАММ СИНТЕЗА ГЕНОВИ КЛЮЧЕВЫХ ПАРАМЕТРОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХПРИ ОПТИМИЗАЦИИ ИХ СТРУКТУРЫ ......................................... 524
Плотников К. О., Рябинина В. А., Блажко Н. В., Пашковский С. Е.
ВЗАИМОСВЯЗЬ ТИПОВ ФАЗЕОЛИНА С КОЛИЧЕСТВЕННЫМИ
ПРИЗНАКАМИ ФАСОЛИ ОБЫКНОВЕННОЙ ...................................527
Полякова А. А., Медведев Д. С. ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ
БУККАЛЬНОГО ЭПИТЕЛИЯ ДЛЯ РАННЕЙ НЕИНВАЗИВНОЙ
ДИАГНОСТИКИ ПРИЖИВАЕМОСТИ ИМПЛАНТОВУ ЛЮДЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА ..........................................................530Резвых А. М., Азарнова Т. О., Максимов В. И., Луговая И. С.
КОРЕКЦИЯ АЦИДОТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ У ЭМБРИОНОВ
ИНДЕЕК ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ФЕРУЛОВОЙ КИСЛОТЫ.........532
Родионова М. Д., Варламова Е. А., Брутер А. В. ВОЗМОЖНОСТИ
ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОТЕИНКИНАЗЫ CDK8ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ:СРАВНЕНИЕ С ЦИТАРАБИНОМ .........................................................534
Родный А. Я., Барабошкина И. А., Ильчибаева Т.В., Антонов Е. В.,Куликова Е. А., Базовкина Д. В., Науменко В. С. ЭФФЕКТ
СВЕРХЭКСПРЕССИИ ГЕНА HTR7 В СРЕДНЕМ МОЗГЕНА ПЛАСТИЧНОСТЬ СЕРОТОНИНОВОЙ СИСТЕМЫ МОЗГАУ МЫШЕЙ ЛИНИИ ASC — ГЕНЕТИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ
ДЕПРЕССИИ ............................................................................................536
Родный А. Я., Ерёмин Д. В., Ильчибаева Т.В., Науменко В. С.,Кондаурова Е. М. ЭФФЕКТ НОКАУТА ГЕНА CC2D1A,
КОДИРУЮЩЕГО ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР FREUD-1,
В ГИППОКАМПЕ НА НЕЙРОТРОФИЧЕСКУЮ СИСТЕМУ ............538
Рудомётов А. П., Рудомётова Н. Б., Щербаков Д. Н., Ильичёв А. А.,Карпенко Л. И. ХИМЕРНЫЕ ИММУНОГЕНЫ, НЕСУЩИЕ
ФРАГМЕНТЫ GP41 ВИЧ-1, СОДЕРЖАЩИЕ ЭПИТОПЫ BNABS ....540Рудомётова Н. Б., Щербакова Н. С., Щербаков Д. Н., Карпенко Л. И.,Соколова А. C., Яровая О. И. СКРИНИНГ ПАНЕЛИ СОЕДИНЕНИЙ

СОДЕРЖАНИЕ
ИЕ

639

НА ОСНОВЕ МОНОТЕРПЕНОИДОВ НА СПОСОБНОСТЬ
БЛОКИРОВАТЬ ПРОНИКНОВЕНИЕ ПСЕВДОВИРСУОВ
ВИЧ-1 В КЛЕТКУ-МИШЕНЬ .................................................................542
Румянцев А. В., Тишакова К. В. ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА
ХРОМОСОМСПЕЦИФИЧНЫХ ЗОНДОВ ЙЕМЕНСКОГО
ХАМЕЛЕОНА (CHAMAELEO CALYPTRATUS) ....................................... 544
Садовская Т. А., Иванов Ю. Д., Смирнова Е. Ю. ВИЗУАЛИЗАЦИЯ
ОНКОМАРКЕРА NFATC1 МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ
СПЕКТРОСКОПИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙ.............. 546
Саранчина А. Е., Бедулина Д. С. ПРОТЕОМНЫЙ СТРЕСС-ОТВЕТ
РАЗЛИЧНЫХ ЧАСТЕЙ ТЕЛА ЭНДЕМИЧНЫХ БАЙКАЛЬСКИХ
АМФИПОД EULIMNOGAMMARUS VERRUCOSUS НАВОЗДЕЙСТВИЕ АБИОТИЧЕСКИХ СТРЕССОВЫХ ФАКТОРОВ .... 549
Сергеева О. В., Ялчина Р.С., Приказчикова Т.А., Абакумова Т.О.,Курочкин И. И., Зацепин Т. С. DDX3 РНК ХЕЛИКАЗАВ КАЧЕСТВЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ МИШЕНИ ДЛЯ ТЕРАПИИ
ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ: СРАВНИТЕЛЬНЫЙ
АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВПРИ МИРНК-ОПОСРЕДОВАННОМ ПОДАВЛЕНИИ
ЭКСПРЕССИИ DDX3 IN VITRO И IN VIVO ........................................551
Снытков Е. В., Кипень В. Н. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ AS3MT,PECR И MUC7 В УВЕЛИЧЕНИИ ВЕРОЯТНОСТИ РАЗВИТИЯ
АЛКОГОЛЬНОЙ ЗАВИСИМОСТИ ................................................... 553
Снытков Е. В., Кипень В. Н. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ EPHX2,
MUC7 И DGK1 В УВЕЛИЧЕНИИ ВЕРОЯТНОСТИ РАЗВИТИЯ
НАРКОТИЧЕСКОЙ ЗАВИСИМОСТИ .............................................. 556
Сорокина Ю. В., Рыболовлев И. Н., Тартаковская Д. И., Белый Ю. Ф.
АТФАЗЫ CLOSTRIDIOIDES DIFFICILE ...................................................... 559
Субботина К. В. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ
ПРИМЕНЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО МЕТОДА
ДИАГНОСТИКИ САРКОМЫ ЮИНГА ...................................................561
Суворова Ю. В., Петухова Е. А. ПОДХОДЫ ХЕМОИ БИОИНФОРМАТИКИ ДЛЯ ВИРТУАЛЬНОГО СКРИНИНГА

640ПРАКТИЧЕСКИ ВАЖНЫХ СВОЙСТВ ДВУХЪЯДЕРНЫХ
БИСТИАЗОЛ- И БИСТИАДИАЗОЛСОДЕРЖАЩИХ АМИНОВ ...... 563
Суховских А. В., Молодых О. П., Ушаков В. С., Политко М. О.,Соколов Д. К., Колдышева Е. В., Григорьева Е. В. ВЛИЯНИЕ
ДЛИТЕЛЬНОЙ ХИМИОТЕРАПИИНА ДВИГАТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ СТАРЫХ КРЫС ....................566
Тимонина В. Н., Сокол А. Д., Кнорре Д. А., Третьяков Е. О.,Гунбин К. В., Попадьин К. Ю. HSP90 КАК ДОЛГОСРОЧНЫЙ
БУФЕР МУТАЦИОННОГО ГРУЗА .......................................................568
Тананыкина Е. К., Пьячентини М., Барлев Н. А., Шувалов О. Ю.
СПЛАЙС-ИЗОФОРМЫ MDM2 В КЛЕТОЧНЫХ МОДЕЛЯХ
РАКА ЛЕГКОГО И МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА ...................572
Турубанова В. Д., Ефимова Ю. В., Балалаева И. В., Мищенко Т.А.,Савюк М. О., Ведунова М. В., Крысько Д. В. ИММУНОГЕННЫЕ
ПУТИ ГИБЕЛИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК, ИНДУЦИРУЕМЫЕ
ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ
НОВЫХ ФОТОАГЕНТОВ НА ОСНОВЕ ПОРФИРАЗИНОВ .............574
Тюлин А. А., Тараскин А. С., Протасов А. В., Миргородская О. А.
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА MALDI-TOF
МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ ДЛЯ МУЛТИПЛЕКСНОГО АНАЛИЗА
ФАКТОРОВ ВОСПАЛЕНИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКАБЕЗ ЕЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО ФРАКЦИОНИРОВАНИЯС ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ЕГО ВЕРЕФИКАЦИЕЙ .......................................577
Устьянцев К. В., Вавилова В. Ю., Бирюков М. Ю., Реиноите Ф.,Вударски Я., Мутон С., Березиков Е. В. РАЗРАБОТКА
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПЛАТФОРМЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
МЕХАНИЗМОВ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОКС ПОМОЩЬЮ МОДЕЛЬНОГО РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО
ПЛОСКОГО ЧЕРВЯ MACROSTOMUM LIGNANO .................................. 580
Фабушева К. М., Дворник Ю. В. УРОВЕНЬ ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНКВ ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИМЫШЕЙ
ЛИНИИ AF В ОТДАЛЕННЫЙ ПЕРИОД ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ ......582
Хабардина Е. А., Семиколенова О. А., Данилин Н. А.,Махалова К. И. ФОТОАКТИВИРУЕМАЯ СИСТЕМА

СОДЕРЖАНИЕИЕ

641

CRISPR/CAS9 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БЛОКИРУЮЩИХ
ФОТОРАСЩЕПЛЯЕМЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ..........................584Чернышова И. А., Захаренко А. Л., Дреничев М., Михайлов С. Н.,Лаврик О. И.. ИНГИБИРОВАНИЕ ТИРОЗИЛДНК ФОСФОДИЭСТЕРАЗЫ 1 ЛИПОФИЛЬНЫМИ
ПИРИМИДИНОВЫМИ НУКЛЕОЗИДАМИ ........................................586
Чиглинцева Д. А., Патутина О. А., Хейман Т., Биченкова Е. В.,Гапонова С. К., Власов В. В., Зенкова М. А.
КРАБОПОДОБНЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИД-ПЕПТИДНЫЕ
КОНЪЮГАТЫ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО
ИНГИБИРОВАНИЯ ОНКОГЕННЫХ МИКРОРНК.............................589
Шаманский В. А., Михайлова А. А., Ушакова К., Михайлова А. Г.,Орешков С., Кнорре Д., Третьяков Е. О., Зажицкая М.,Луковски С. В., Лиу Чиа-Вэй, Линь Цу-Кунг, Кунц В. С.,Реймонд А., Мазунин И., Базыкин Г.А., Гунбин К., Фелле Ж.,Танака М., Храпко К., Попадьин К. РИСК СОМАТИЧЕСКИХ
ДЕЛЕЦИЙ МИТОХОНДРИЙ ЗАВИСИТ ОТ ВТОРИЧНОЙ
СТРУКТУРЫ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО ГЕНОМА ..........................591
Шаповалова А. И. ОЦЕНКА ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА
VEGF И VEGFR В БИОПТАТАХ ИНТАКТНОГО МИОМЕТРИЯПРИ МИОМЭКТОМИИ У ЖЕНЩИН
РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП ..........................................................594Шарабрин С. В., Рудомётов А. П., Волосникова Е. А., Карпенко Л. И.,Бажан С. И., Ильичёв А. А. ДОСТАВКА МРНК ВАКЦИН
ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА С ПОМОЩЬЮ КАТИОННОГО
ПОЛИСАХАРИДНОГО ПОЛИМЕРА ...................................................596
Щур В. В., Буренкова Ю. П., Жолнерович А. И., Усанов С. А.,Янцевич А. В. ДВУЦЕПОЧЕЧНАЯ ДНК С 5’-ДМТЗАЩИТНЫМИ ГРУППАМИ: ПОЛУЧЕНИЕИ УЧАСТИЕ В ЛИГАЗНОЙ РЕАКЦИИ ................................................599
Юрина А. А. СОЗДАНИЕ ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО
РЕЦЕПТОРА СО СПЕЦИФИЧНОСТЬЮ К CD5 ЧЕЛОВЕКА ............602

Научное издание

VII МЕЖДУНАРОДНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ
МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ:БИОТЕХНОЛОГОВ,МОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОЛОГОВ И ВИРУСОЛОГОВ
Сборник тезисов

Корректоры
Я. О. Козлова, Д. М. Валова
Верстка А. С. Терешкиной

Подписано в печать 20.10.2020 г.
Формат 60 × 84 1/16. Уч.-изд. л. 40. Усл. печ. л. 37,3.
Тираж 110 экз. Заказ № 200.
Издательско-полиграфический центр НГУ
630090, Новосибирск, ул. Пирогова, 2.