ECOS™ X Competent E. coli DH5α
イーコスエックス 高効率大腸菌コンピテントセル
ECOS™ X Competent E.coli DH5α マニュアル（第 2 版）1806KM

製品名
ECOS™ X Competent E. coli DH5αCode No.

包装単位310-07733

100 µl×10 本314-07731

100 µl× 2 本

Ⅰ 製品説明本品は大腸菌 DH5αのコンピテントセルです。本品ではヒートショック処理後の SOC 培地を使用した回復培養が不要なため、形質転換実験を 6 分で行うことができます。
また、形質転換効率が高いため、高効率が必要となる実験に使用することができます。

Ⅴ 注意
・ 本品は試験研究用ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。本品の取り扱いはマニュアル記載内容通りに行って下さい。
マニュアル記載内容と異なった取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。
・ 本品に関連する技術については、現在特許出願中です。

■ 特 長・ 短時間で高効率形質転換が可能
・ 高度なクローニングやライブラリー作製に使用可能

Ⅱ 遺伝子型
DH5αF－, Φ80dlacZ⊿M15, ⊿（lacZYA-argF）U169, hsdR17（rk－mk＋）, recA1, endA1, relA1, deoR, supE44, thi-1,gyrA96, λ－Ⅲ 形質転換効率＜関連製品＞ECOS™ 6 分間プロトコールを以下の条件で実施した場合
DH5α

製品名9≧ 1×10 （cfu/µg pUC19 DNA）

・ コンピテントセルを 25℃のウォーターバスで約 2/3 量を融解して DNA溶液を添加。
・ 形質転換には pUC19 DNA を使用。
・ 全て氷上で連続的に操作。
・ アンピシリンは 50 µg/ml で使用。
・ LB プレートは 4℃のものを使用。

保存温度： －80℃

ECOS™ Competent

310-06231100 µl× 2 本

316-06233

100 µl×20 本

314-06234

100 µl×80 本

317-06246

50 µl×40 本

ECOS™ Competent317-06241

100 µl× 2 本

E. coli JM109

313-06243

100 µl×20 本

311-06244

100 µl×80 本

株式会社ニッポンジーン

E. coli XL1-Blue

TEL 076-451-6548

311-06521

100 µl× 2 本

317-06523

100 µl×10 本

備考

形質転換効率≧1×107 cfu/µg(pUC19 DNA）
* ECOSTM 1 分間
プロトコールでの効率

315-06524

100 µl×20 本

318-06531

100 µl× 2 本

314-06533

100 µl×10 本

312-06534

100 µl×20 本* ECOS 1 分間
プロトコールでの効率Bac’n’Roll Beads

314-06251

100 回分大腸菌塗布用ｶﾞﾗｽﾋﾞｰｽﾞ

Ligation-Convenience Kit(2×Ligation Mix)

315-05963

10 回分

319-05961

100 回分

Hi-Competence Broth319-01343

1 ml×20 本

ECOS™ Competent

・ 温度変化の少ない条件下であれば長期間安定して保存することができます。長期保存による形質転換効率低下の目安は、1 年間で約 1/2 に低下する程度です。
・ 一度の凍結融解（再凍結）を行うと、形質転換効率が約 25～30％程度低下する可能性があります。凍結融解（再凍結）を行う場合は、融解、操作は氷上で素早く行い、－80℃で再凍結して下さい。また、凍結融解の繰り返しは形質転換効率の大幅な低下の原因となりますので避けて下さい。
・ これらの内容については製品の性能として保証するものではありません
ので、ご了承下さい。

包装単位
50 µl×40 本

E. coli DH5α

ECOS™ Competent

Ⅳ 保存と凍結融解（再凍結）について

Code No.
310-06236

E. coli BL21(DE3)≧1×106 cfu/µg(pUC19 DNA）
TM

1 液ﾀｲﾌﾟのﾗｲｹﾞｰｼｮﾝｷｯﾄ
大腸菌用回復培地

その他詳細についてはニッポンジーンのホームページをご覧ください。
https://www.nippongene.com/siyaku/index.html

www.nippongene.com

Ⅵ ECOS™ 6 分間プロトコール（高効率迅速形質転換法）

Ⅷ プロトコールに関する注意本プロトコールは、大腸菌の形質転換を高効率に短時間（6 分間）で行うことができる優れたプロトコールです。

ECOS™ 6 分間プロトコールは、薬剤にアンピシリンを使用する場合にのみ有効です。
薬剤耐性機構の違いにより、薬剤にカナマイシンやテトラサイクリンを使用する場合には形質転換効率が低下しますので、熱処理後に培地を添加し回復培養を行ってからプレートに移して下さい。

①

コンピテントセルの約 2/3 量が融解するまで氷上に静置する。（＊1）②

直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション溶液を添加する。（＊2）③

直ちにボルテックスで 2 秒間撹拌する。（＊3）④

氷上で 5 分間インキュベートする。

⑤

直ちに 42℃のウォーターバスで 30 秒間インキュベートする。

⑥

直ちに全量を LB プレートに移し均一に塗布する。
（＊4）⑦37℃で 12～16 時間インキュベートする。

Ⅶ 高効率のためのコツ
・ LB プレートは良く乾燥させたものを準備し、ご使用前に 4℃にて 30 分程度冷やしてからご使用下さい。また、セルを塗り拡げる際にガラスビーズをご使用される場合、予めガラスビーズをプレートに入れた上で 4℃にて冷やして下さい。
・ コンピテントセルをプレートに塗布する際に、ガラスビーズ（5～8 粒／プレート）を使用することで、均一にセルを塗り拡げることができます。
ご使用の際は、予めガラスビーズを LB プレートに入れておき、形質転換後のコンピテントセルをプレートにのせたら、直ちにプレートを横方向にシェイクすることで塗り拡げて下さい（全体にガラスビーズが行き渡るように、プレートの方向を変えながら 50～70 回程度シェイクすることで、均一に塗り拡げることができます）。
また、ガラスビーズには以下の製品の使用をお勧めします。
製品名

Code No.

包装単位

Bac’n’Roll Beads

314-06251

100 回分株式会社ニッポンジーン① コンピテントセルの約 2/3 量が融解するまで氷上に静置する。（＊1）↓② 直ちに、4℃または氷上で冷却したプラスミド溶液またはライゲーション溶液を添加する。（＊2）↓③ 直ちにボルテックスで 2 秒間撹拌する。（＊3）↓④ 氷上で 5 分間インキュベートする。
↓⑤ 直ちに 42℃のウォーターバスで 30 秒間インキュベートする。
↓⑥ 氷上で 2 分間インキュベートする。
↓⑦ あらかじめ 37℃で保温しておいた Hi-Competence Broth または SOC培地を、コンピテントセルの 4 倍量程度加え、37℃で約 30 分間インキュベートする。
↓⑥ 100 µl～全量を LB プレートに移し均一に塗布する。（＊4）↓⑦ 37℃で 12～16 時間インキュベートする。

（＊1） ウォーターバスでコンピテントセルを融解することも可能です。その場合、25℃で 30 秒程度加温することによりコンピテントセルの約 2/3 量が融解します。約 2/3 量が融解した時点で氷上に置いて、直ちに DNA 溶液を添加する次のステップに進んで下さい。完全に融解させた場合、形質転換効率が低下します。
（＊2） 添加する DNA 溶液の量はコンピテントセル容量の 5%以下にして下さい。5%以上の DNA 溶液を添加した場合には、形質転換効率が低下することがあります。
（＊3） 2 秒間のボルテックスは形質転換効率に悪影響を与えません。
ECOS™ X Competent E.coli はボルテックスに耐えられるように調製されています。
（＊4） LB プレートは 4℃のものを使用することができます。また、セレクシ
ョンに使用する薬剤は以下の濃度で使用することをお勧めします。
50 µg/ml
アンピシリン
25 µg/ml
カナマイシン
12.5 µg/ml
テトラサイクリン
薬剤濃度が高すぎる場合には、形質転換効率が低下する場合があります。
また薬剤濃度が低すぎる場合には、サテライトコロニー数が増加する場合があります。

ECOS™ X Competent E.coli DH5α マニュアル（第 2 版）1806KM