143

輸入食材中からの病原体、特に寄生虫卵や原虫のシストの検出の試み及び疫学的調査＜平成 21 年度助成＞

輸入食材中からの病原体、特に寄生虫卵や原虫のシストの検出の試み及び疫学的調査
大（大阪府立大学大学院

1.

西

義

博

生命環境科学研究科獣医学専攻）

症新法と略す）で五類感染症に指定されており、はじめにヒトの症例は保健所への届出の義務がある。最近

平成 22 年度において、我が国の総合食料自給の報告では本症は年々増加傾向にあり、2008 年

率は生産額ベースでは 69 ％を保持しているもの

度では 871 症例もの報告があり、2009 年度でもの、カロリーベースでは 4 0 ％を下回っており、786 症 例と多かった（ 図 1）5) 。これらの多くの症

食材の多くを輸入に頼っている 1)。品目別に見る

例は AI D S 患者や男性同性愛者間での感染およと、野菜類でも自給率は生産額ベースで 8 1 ％、び発展途上国への渡航による感染であると報告さカロリーベースで 7 7 ％であり、残りを輸入に頼っれている。しかし、届出された症例の中には、感2)ている 。この様な中で、輸入食品は食品衛生法

染源の不明な国内感染例も多く含まれている。こに基づいて空港や港の検疫所で検疫されており、の不明な症例の感染源の一つとして、毎日輸入さ

輸入手続きにおいてはモニタリング検査制度としれる食材の中に赤痢アメーバ原虫のシストで汚染3)て行われている 。しかしながら、検疫所でのモしたものがあり、これらによって感染したものがニタリング検査は野菜などの農産食品において抗あるのではないかと考えられた。現に、1994 年

菌性物質等、残留農薬、添加物、成分規格等、カには輸入キムチが原因と考えられる有鉤嚢虫症のビ毒及び遺伝子組み換え食品に限られ、しかも全発生もあった 6）。また、2005 年には中国産や韓国

体の 10 ％ほどしか検査が行われず、病原体の検産のキムチが回虫卵で汚染しているかの新聞報道

4)

査はほとんど行われていない 。

もあり、厚生労働省も輸入キムチについて再検査

一方、アメーバ赤痢は「感染症の予防及び感染を行った 7)。この時、我々の研究室にも唐辛子な症の患者に対する医療に関する法律」（以下、感染どに付着した回虫卵を殺滅する処理法についての

1000

871

症例数

800
610

600
378

400

465

752

801

786

520

276

200
0

429

698

1999

2001

2003

2005

2007

年度
http://idsc.nih.go.jp/idwr/ydata/report - Ja.html より作図
図 1 アメーバ赤痢患者の届出数の年次変化 5）

2009

144

浦上財団研究報告書

問い合わせもあった。

Vol.20（2013）

目、次いでアメリカ産が 91 品目と多く、さらにこのようなことから、今回、スーパーなどで売

タイ産やミャンマー産を多く購入した。その他はられている輸入食材、特に生食する輸入野菜類へ

表 2 の通りであった。購入した輸入野菜で中国産の赤痢アメーバ原虫のシストや寄生虫卵の付着のが多かったのも安価な“もやし”を多く購入したた有無を疫学的に調査することを目的とした。さらめである。また、サラダは原材料が複数国から輸に、赤痢アメーバ原虫のシストが検出された場合

入され、国内で細切された後に混ぜて販売されては、問題提起し、感染予防などの啓発を行いたい

いたものもあった。

と考えた。

2.2

検査方法

2.2.1 輸入野菜の洗滌方法

2.

材料と方法

2.1

検体の輸入野菜

１）1 品目につき 2 パック（包装）ずつを購入し、1 パックは寄生虫学的検査に用い、もう１つ

平成 21 年 11 月から平成 23 年 3 月までに、スーパーなどで外国産の表示のある輸入野菜 533 品目の方は赤痢アメーバ原虫のシストを検出する
ために、DNA の抽出に用いた。

（重複有り）を購入した。購入した輸入野菜の品

２）1 パ ッ ク ご と に 0.05 ％ tween 液 加 PBS

目数の内訳を表 1 に示す。購入品目として最も多（Phosphate buffered saline）液の 2 リットル

かったものは“もやし”であるが、これは原料のに 30 分間、浸漬し、野菜の表面を洗滌した。

豆が輸入され国内で発芽させたもので、安価で

３）洗滌液はガーゼ 1 枚で濾過して 3,500 回転 10あったので多くを購入した。その他、輸入野菜で分間、遠心して沈渣を得た。

多かったものはアスパラガスや根菜類などで、店

４）ホルマリンエーテル法（以下、MGL 法と略す）

頭で長く保存できるものであった。これらは洗滌

及びショ糖液遠心浮遊法では、沈渣にホルマ

されずに土壌が付着したままで販売されていた。

リン液で固定後保存した。濾紙培養法では、輸入野菜の輸入国の内訳では、中国産が 241 品

沈渣を固定せずにそのまま使用した。また、

表1

表2

輸入野菜の品目数

品目名

品目数

輸入国別の輸入野菜の品目数

輸入国

品目数

もやし

105

中国

241

アスパラガス

57

アメリカ

93

サラダ

53

タイ

79

ニンニクの芽

45

ミャンマー

37

ネギ

37

韓国

22

ブロッコリー

27

フィリピン

10

セロリ

26

オーマン

8

オクラ

23

メキシコ

7

ゴボウ

21

ペルー

6

ショウガ

21

ニュージーランド

6

サトイモ

19

台湾

6

タマネギ

17

フランス

5

キムチ

11

オーストラリア

4

その他

71

オランダ

2

合計

533

ベトナム

1

その他 b)

13

合計

540

その他（10 品目以下）：ネギカット、ニンジン、枝豆、三度豆、水、ニンニク、落花生、キヌサヤ、シイタケ、インゲン豆、エンドウ豆、シシトウ、干し芋、アーモ
ンドダイズ、カボチャ、クワイイモ、パプリカを含む

a)

（5）a)

（1）

（1）

（ ）内の数は他の輸入国との重複を含むb)
不明及び我が国の 3 品目を含む(7)

輸入食材中からの病原体、特に寄生虫卵や原虫のシストの検出の試み及び疫学的調査

145

polymerase chain reaction（以下、P C R と略

Mini Kit（Qiagen 社）を用いて、キットの説明書

す）を用いた赤痢アメーバ原虫の検査用とし通りに行った。

ては、沈渣を固定せずに冷凍保存後に DNA

２）検査方法の抽出に用いた。

① Tachibana et al.（1991）9) の方法

2.2.2 寄生虫学的検査法 8)
１）MGL 法赤痢アメーバ原虫の30 - kDa cystein rich protein（peroxiredoxin）遺伝子の531bpを増幅する primer

定法通りの方法で行った。沈渣をヨード・ヨー（Eh_POR29 と Eh_POR549）を表 3 に示した。温ドカリウム液で染色して赤痢アメーバ原虫のシス度条件は denaturation を 94℃ 1 min、annealing を

トの検出を試みた。

5 9 ℃ 90 sec、elongation を 7 2 ℃ 90 sec、4 0 cycles

２）ショ糖液遠心浮遊法（original では 30 cycles）で行った。

輸入野菜の多くは土壌等でかなり汚れていたた② Tachibana et al.（1991）9) の方法

め、ホルマリン液固定後にショ糖液遠心浮遊法を赤 痢 ア メ ー バ 原 虫 の peroxiredoxin の 遺 伝 子

用いて集シストを行った。ホルマリン液固定済みの 100bp を 増 幅 す る primer（ P11 と P12）を 表 3の検体を PBS 液で 2 ml に調製後、この液の下部に示した。温度条件は denaturation を 94 ℃ 1 min、にショ糖液（比重 1.200）を注加し、2,500 rpm で 5

annealing を 59 ℃ 90 sec、elongation を 72 ℃ 90 sec、

分間、遠心し、ショ糖液層とホルマリン液層との40 cycles（original では 30 cycles）で行った。

境界部を回収した。回収した液は 10 倍量の P B S③ Haque et al.（1998）10) の方法

液で遠心洗滌し、沈渣を得て、赤痢アメーバ原虫

赤 痢 ア メ ー バ 原 虫 の SSUrRNA 遺 伝 子 の 約の検出に用いた。

900bp を 増 幅 す る primer（1st PCR 用：E1 と３）濾紙培養法

E2、2nd PCR 用 : E3 と E4）を 表 3 に示した。温

MGL 法で線虫の虫体を検出したので、一部の度条件は denaturation を 94 ℃ 30 sec、annealing

検体では糞線虫の有無を確認するために濾紙培養を 43 ℃（1st P C R）又は 62 ℃（2nd P C R）30 sec、を行った。

elongation を 72℃ 1 min、35 cycles で行った。

2.2.3 PCR

11）
.
の方法
④ Evangelopoulos et al（2000）

１）DNA の抽出方法

赤痢アメーバ原虫の SSUrRNA 遺伝子の 427bp

輸入野菜から回収した沈渣は土壌を多く含んでを増幅する primer を 表 3 に示した。温度条件はいるものがあったため、P C R の阻害物質除去のdenaturation を94 ℃30 sec、annealing を58 ℃30sec、

ために DNA の検出キットとして QIAamp DNA

elongation を 72 ℃ 1 min、40 cycles で行った。

Stool Kit（Qiagen 社）を用いた。手技はキットの⑤ Dorris et al.（2002）12) の方法

説明書に準じて行った。ただし、キットでは検体

糞線虫の SSUrRNA遺伝子の390bp を増幅するの 200μl を使用することになっていたが、今回primer を 表 3 に 示 し た。温 度 条 件 は denaturationの検査では輸入野菜の洗滌後の沈渣をすべて使用

を 94℃ 30 sec、annealing を 55℃ 30 sec、elongation

した。また、lysis buffer を用いて 95℃での溶解後、を 72 ℃ 30 sec、40 cycles で行った。

上清をすべて回収して DNA の抽出に用いた。最３）反応条件後に、検体からの DNA の抽出は 39.75μl の滅菌

輸 入 野 菜 か ら の 検 体 の DNA 液 39.75μl に、水にて回収し、P C R を行うまで冷凍保存した。

TaKaRa ExTaq buffer 5μl、dNDP mixture 4μl、土壌線虫からの DNA の抽出は QIAamp DNA

forward primer 0.5μl、reverse primer 0.5μl、

146

浦上財団研究報告書

Vol.20（2013）

表 3 PCR に用いた primer の配列

ターゲットの遺伝子

Primer の配列（5 → 3 ）Entamoeba histolytica
peroxiredoxin geneE. histolytica
peroxiredoxin geneta a a g ca cca g ca ta ttg tc
tta a ttcca tctg g tg g tg g
g g a g g a g ta g g a a a g ttg a c
ttcttg ca a ttcctg cttcg a
tttg ta tta g ta ca a a
g ta ( a /g ) ta ttg a ta ta ct
a a tg g cca a ttca ttca a tg
ttta g a a a ca a tg cttctct
a ca ttttg a a g a cttta tg ta a g ta
a g a g a a g ca ttg tttcta g a tctg
a a a g a tta a g cca tg ca tg
g cctg ctg ccttccttg g a

Primer 名

①
②

③

④
⑤

Eh_POR29
Eh_POR549
P11
P12
E1
E2
E3 (EH1)
E4 (EH2)
EhL
EhR
Strong_SSUAF_39
Strong_SSU22R_428

E. histolytica SSUrRNA
gene
E. histolytica SSUrRNA
gene
Strongyloides stercoralis
SSUrRNA gene

TaKaRa ExTaq Hotstart version 0.25μl をそれぞ

増幅産物のサイズ（bp）
531
100
909
873
427
390

引用文献
Tachibanaet al., 1991 9)
Tachibanaet al., 1991 9)
Haque
et al., 1998 10)
Evangelopoulos
et al., 2000 11)
Dorriset al., 2002 12)

3．検 査 成 績

れ加えて、上記の温度条件で反応を行った。
土 壌 線 虫 を 用 い た PCR で は DNA 液 5μl に、

１）寄生虫学的検査法による検査
寄生虫学的検査法による結果を表 4、図 2 – 4 に示

滅菌水 34.75μl を加え、他の試薬類は上記と同じ量を加えて行った。

した。輸入野菜は土壌等でかなり汚れており、特に４）結果の判定

根菜類は土壌が付着したまま売られていた。この①アガロース電気泳動

ため、MGL 法では沈渣が多くて、MGL 法によるア

PCR 増幅産物は 3 %アガロース液を用いて電気

メーバ原虫のシストの検出には限界があった。この

泳動を行い、解析した。

ため、ショ糖液遠心浮遊法を併用することで、検体② DNA ダイレクトシーケンスからの沈渣を少なくし、検査を容易することができ

アガロース電気泳動で検出された目的のバンドた。これらの検査法では 1 ～ 4 核のアメーバ原虫のは QIAamp Gel Extration Kit（Qiagen 社）を用い

シストが全体で 294 検体中 22 検体（7.5％）から検出てゲルから抽出し、DNA 配列を DNA ダイレク

された（表 4、図 2 a ～ e）。また、繊毛虫のシストやコトシーケンス法により確認した。

クシジウムのオーシストも検出された（図 2 f & g）。

表4

輸入野菜からのアメーバ原虫のシスト及び土壌線虫などの検出状況

検出数（％）
検査法

検査数

アメーバ原虫シスト a)（虫卵, 幼虫, 成虫）（卵, 成虫）

土壌線虫類

ダニ

ホルマリンエーテル法 b)

325（15.6）3（9.4）

1（3.1）

ショ糖液遠心浮遊法

91

17（18.7）

31（34.1）2（2.2）

濾紙培養法

172

ND

14（8.1）1（0.6）

合計

294

22（7.5）48（16.3）4（1.4）a) 1 核 か ら 4 核 の ア メ ー バ 原 虫 の シ ス ト を 検 出 し たb) ホ ル マ リ ン エ ー テ ル（ M G L ）法

輸入食材中からの病原体、特に寄生虫卵や原虫のシストの検出の試み及び疫学的調査

図2

検出された種々の原虫のシストやオーシスト（× 40）

a 〜 e, アメーバ原虫のシスト（a, 1 核；b, 2 核；c, 3 核；d, 4 核；e, 1 核でグリコーゲン胞を持つ）f, 繊毛虫のシスト；g, コクシジウムのオーシスト

b

c

d

図3

輸入野菜に付着していた種々の土壌線虫
a, 虫卵から成虫まで（×10）；
b & C, 虫卵（×40）；
d, L1（×40）；
e, ♂ L4（×20）；
f, ♀ L4（×20）；
g, ♂成虫（×10）；
h, ♀成虫と L1（×10）；
i, 尾端の丸い線虫（×20）；
j, 大型の線虫（×10）
；

147

148

浦上財団研究報告書

Vol.20（2013）

図 4 検出されたダニの成虫及び虫卵
a & b, ダニの虫卵（×40）；c, ダニの成虫（×20）

さらに、土壌線虫類による汚染も全体で 294 検ダイレクトシーケンス法で DNA 配列を調べたと

体中 48 検体（16.3 ％）で認められた（ 表 4、 図 3）。

ころ、Panagrolaimus spp. や Cruznema sp. などの濾紙培養法の結果では、発育可能な土壌線虫が全

土壌線虫の DNA と一致した。

体で 172 検体中 14 検体（8 . 1 ％）から検出された。

２）P C R による検査結果

一方、コナダニと思われるダニの卵や成虫も次 に、 先 ず、 赤 痢 ア メ ー バ 原 虫 を 検 出 す る

全体で 294 検体中４検体（1 . 4 ％）から検出された

P C R の検査法について再検討したところ、従来（表 4、図 4）。

法はいずれも検出感度が悪かった。このため、各また、濾紙培養法で検出された土壌線虫について PCR を行い、検出された DNA について DNA

検査法で P C R のサイクル数を増やすことで、検出感度をやや増やすことができた（図 5 – 7）。

原虫数／ tube

図6

PCR（検査法 ③）の検出感度

図7

PCR（検査法 ④）の検出感度

原虫数／ tube

図 5 PCR（検査法 ①）の検出感度

原虫数／ tube

輸入食材中からの病原体、特に寄生虫卵や原虫のシストの検出の試み及び疫学的調査

149

改良した P C R の各検査法での赤痢アメーバ原

豆類の汚染が高率（33.3 ～ 66.7 %）であり、中国虫の検出結果を 表 5 に示した。P C R に用いる検。
産のニンニクの芽やネギの汚染も見られた（表 6）

査法によっては検出感度に差が見られたが、赤痢

また、生食する野菜サラダなどへのアメーバ原虫

アメーバ原虫の DNA が全体で 499 検体中 38 検体の汚染も MGL 法で高率（41.7 %）に見られたが、（7.6%）に検出された。

赤痢アメーバ原虫を検出する P C R では陽性率は。
2 ％と低率であった（表 7）

赤痢アメーバ原虫の DNA が検出された輸入野菜の種類を見てみると、検査数が少ないけれども
表5

PCR による赤痢アメーバ原虫の検出率

検査法 a)

検出遺伝子

検査数

①

E. histolytica peroxiredoxin gene

74

0

②

E. histolytica peroxiredoxin gene55

16 (29.1)③

E. histolytica SSUrRNA gene

180

0

④

E. histolytica SSUrRNA gene190

22 (11.6)

499

38 (7.6)

合 計

陽性数（％）a) 番 号 は 表 3 の そ れ に 対 応 す る 。

表6

野菜の種類

PCR で赤痢アメーバ原虫が検出された輸入野菜の種類および輸入国

検査数

陽性数

陽性率

輸 入 国（陽性数）

エンドウ豆

3

2

66.7

中国 1、タイ 1

インゲン豆

2

1

50.0

オーマン 1

水

5

2

40.0

フランス 3

サンドマメ

6

2

33.3

オーマン 2

シシトウ

3

1

33.3

韓国 1

キヌサヤ

4

1

25.0

中国 1

ニンニクの芽

43

8

18.6

中国 8

ネギ

38

5

13.2

中国 5

ブロッコリー

24

3

12.5

アメリカ 3

オクラ

20

2

10.0

タイ 1、フィリピン 1

アスパラガス51

59.8

タイ 3、メキシコ 2

キムチ

11

1

9.1

韓国 1

セロリ

26

1

3.8

アメリカ 1

もやし

101

3

3.0

中国 3
アメリカ + 韓国

サラダ

51

1

2.0

合

388

38

9.8

計
表7

生食する野菜サラダやカットネギなどからの赤痢アメーバ原虫などの陽性率

方 法

検査数

ホルマリンエーテル法
ショ糖液遠心浮遊法

陽性数（ 陽 性 率 , ％）原虫のシスト

土壌線虫類

ダニ

36

15（41.7）1）3（8.3）

1（2.8）

3

0

0

0

濾紙培養法

20

ND

0

0

PCR

51

1（2.0）2ND

ND1 ) 1 核〜4 核の原虫のシストが検出された。
2 ) 赤痢アメーバ原虫の DNA が検出された。

ND, not done.

150

4．考

浦上財団研究報告書

Vol.20（2013）

野菜に付着している原虫のシスト数は極めて少数

察であると考えられたため、DNA の抽出条件につアメーバ赤痢は赤痢アメーバ症とも言い、赤痢いても若干、改良して行った。しかし、PCR に

アメーバ原虫 Entamoeba histolytica によって惹起使用する primer の種類によっては検出感度が悪される人獣共通感染症であり、ヒトの症例は五類かった。今後も検討の余地があると考えられた。

感染症に指定されており保健所に報告され集計さPCR で赤痢アメーバ原虫に特異的な DNA 増幅

れている。この疾病は元々、土壌伝播性寄生虫病産物が検出されたことから、MGL 法で検出されであり、感染型のシストを経口的に摂取することた 4 核のシストは赤痢アメーバ原虫であると考えで感染する。シストに汚染した野菜類や水を介しられた。しかし、手技 ② で使用した primer は E.

て伝播する。最近、我が国におけるアメーバ赤痢

nuttalli と交差性が最近知られるようになったこの発生状況を見ると AIDS 患者や男性同性愛者間とから、primer の特異性が疑問視されてきた 15)。

での性的接触に感染によるものが多く報告されてPrimer の特異性についても今後の課題と考えらいるものの、感染経路の不明の症例も数多く報告れた。

13, 14）。このようなことから、感染源の赤痢アメーバ症は土壌伝播性及び水系伝播性の1 つに汚染した輸入野菜の生食による感染が疑わ疾病であり、輸入野菜を輸出している原産国の発れた。

展途上国ではまだまだ蠕虫感染症が多く存在し、されている

そこで今回、輸入野菜について赤痢アメーバ

土壌や野菜の汚染も高率であることが知られてい原虫のシストに付着があるのかどうかを寄生虫

る16)。我が国では食材を発展途上国からの輸入に学的検査法と PCR により検査したところ、寄生頼っていることから、今後も輸入野菜の赤痢ア

虫学的検査法では数種類の 1 核～ 4 核を有するア

メーバ原虫による汚染の有無等の監視体制が必要

メーバ原虫のシストが高率に検出された。しかし、であると考えられた。

MGL 法では、赤痢アメーバ原虫のシストによる汚染があるかどうかは判定が困難であった。また、

5．ま と め輸入野菜は多くが土壌の付着したまま輸入され、感染症新法によって赤痢アメーバ症は届出の義洗滌されずに販売されていたためか、自由生活世務があり、最近の届出数は年々増加している。こ代を有する土壌線虫も MGL 法で、かなり高率にの感染源の一つに輸入野菜の汚染が考えられた。

検出された。この土壌線虫の中に、ヒトに感染す

そこで今回、輸入食品、特に輸入野菜が赤痢アメー

る糞線虫が含まれているかどうかを濾紙培養法でバ原虫のシストに汚染しているかどうかの疫学検討したが、糞線虫は検出されなかった。しかし、的な調査を行った。2009 年 12 月から 2011 年 3 月

一般に線虫類はアレルゲンを多く含有するため、までに、スーパーで購入した輸入野菜 533 品目にこれら検出された土壌線虫類がアレルギーを引きついて寄生虫学的検査法及び PCR による検査を起こすかどうかも検討しなければならないと考え行った。多くの輸入野菜が土壌付きで売られておられた。

り、数種類のアメーバ原虫のシストが付着してい今回、赤痢アメーバ原虫の検出に用いた PCR

た。PCR でも赤痢アメーバ原虫に特異的な DNAの方法は既報の手技を引用したが、予備実験で検が高率に検出された。このことから、MGL 法で出感度を検討したところ、検出感度が悪かったた

検出された 4 核のアメーバ原虫のシストは赤痢ア

め、増幅する温度のサイクル数を増やした。輸入

メーバ原虫のそれと考えられた。また、数種類の輸入食材中からの病原体、特に寄生虫卵や原虫のシストの検出の試み及び疫学的調査

土壌線虫も検出された。このことから、輸入野菜
はかなり汚れており、輸入野菜を生食する場合はよく洗滌するか、よく加熱して食する必要があると考えられた。
謝

辞本研究を遂行するにあたり、多大な研究助成を賜りました（公財）浦上食品・食文化振興財団並びに関係各位に心より感謝を申し上げますとともに、貴財団のますますの発展をお祈り申し上げます。
［学会報告］

1. 大西義博：輸入食材からの寄生虫卵や原虫嚢子の検出の試み（予報）、第 67 回日本寄生虫学会西日本支部大会、2011 年 11 月７日（金沢大学）
2. 大西義博：輸入野菜に付着した寄生虫卵や原虫嚢子の検出及び疫学調査、第 81 回日本寄生虫学会大会、2012 年 3 月 24 日（神戸大学）
3. Yoshihiro OHNISHI：Detection of Cysts and Eggs from theImported Vegetables in Japan, The 1st AFSA International
Conference; Food and Safety and Food Security – OSAKA
2012, Sep. 15 – 17, 2012（Osaka Prefecture University)文献1) 農 林 水 産 省 ホ ー ム ペ ー ジ（2010a）平 成 22 年 度 食 料
自 給 率 を め ぐ る 事 情、http://www.maff.go.jp/j/zyukyu/zikyu_ritu/pdf/22slide.pdf
2) 農林水産省ホームページ（2010b）総合食料自給率（カロ リ ー・生 産 額 ）、 品 目 別 自 給 率 等、http://www.
maff.go.jp/j/zyukyu/zikyu_ritu/pdf/22sankou4.pdf
3) 厚生労働省ホームページ：食品衛生法に基づく輸入手続について — モニタリング検査制度、http://www.
mhlw.go.jp/topics/ysk_13/tp0419-1d.html
4) 食品分析開発センターホームページ（2009）検疫所
モニタリング検査について、http://www.mac.or.jp/
mail/090401/06.shtml
5) 感染症情報センターホームページ（2011）アメーバ赤151

痢の年別報告数、http://idsc.nih.go.jp/idwr/ydata/report-Ja.html
6) 永倉貢一、永山正雄（1995）輸入キムチが原因と思われる有鉤嚢虫症の 1 例、病原性微生物情報、16:183
7) 厚生労働省ホームページ（2005）韓国産及び中国産のキムチに関する調査状況について、http://www.
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浦上財団研究報告書

Vol.20（2013）

The survey on detecting eggs and cysts
from the imported vegetables
Yoshihiro Ohnishi
Division of Veterinary Medicine, Graduate School of Life and Environmental Sciences
Osaka Prefecture University
Abstract
In Japan, many foods are imported from many foreign countries. The safety of theseimported foods is protected but limited by the quarantine. On the other hand, the amoebic
dysentery with Entamoeba histolytica is specified in the law. The reported cases are
increasing from 1999 and reach a peak of 871 cases in 2008. One of the infection sources
is considered to be contaminated with cysts on the fresh vegetables imported.
This study was carried out to detect cysts of E. histolytica and eggs from the fresh
vegetables imported. The 533 samples of the imported vegetables were purchased from
Dec. 2009 to Mar. 2011. After the imported vegetables were washed with 2L of 0.01M
phosphate buffered saline solution with 0.05 % Tween 20 solution, the sediments werecollected for detection. As a result, several kinds of cysts, having one to four nuclei, weredetected from some of the imported vegetables by the combination methods with formalinether method and iodine staining. By PCR, DNAs of E. histolytica were also detected fromsome of the imported vegetables. Therefore, the cyst having 4 nuclei was suspected to bethat of E. histolytica. In addition, the eggs, larvae and adults of Panagrolaimus spp. andCruznema sp. were detected from washing solution by formalin-ether method. The larvaeof Strongyloides stercoralis were not detected by the culture method.
As a result, the imported vegetables are quite dirty. The prevention of infection wasconsidered to wash the imported vegetables well and carefully before eating fresh one.
(This study was supported by research grant of Urakami Zaidan and Food Foundation in2009)