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紫蘇葉の抗腎炎 ・抗動脈硬化作用に関する研究

紫 蘇葉 の抗 腎炎 ・抗 動脈硬 化 作用 に関 す る研 究

本多義昭(京 都大学大学院薬学研究科教授)

3時 間 煎 じ て 作 成 し た(400m1,乾1.緒燥 重 量3.3g,

言抽 出 効 率6.1%)。

腎疾 患 を増悪す る要因 には様々 な もの があ るが,

紫 蘇 葉 煎 液 を 減 圧 下 で50m1

ま で 濃 縮 し,DiaionHP‑20(三菱 化 学,東その一 つ に高 タンパク食 があ る。 シ ソ科 に属 するを 充 填 し た カ ラ ム(1.0×48cm)に

ハー ブ類 は肉 ・魚料 理 な どの タンパ ク食 品 に添 え

250m1ずられ る ことが多 いが,こ れは,消 臭や殺 菌 ・殺 線ア セ ト ン で,順虫作 用の ほか,高 タ ンパ ク食 による腎臓 に対 する

縮 後,200m1の80%EtOHに

懸 濁 さ せ,さ有害作 用の 抑制が な され てい る可 能性が 考 えられ

沈 殿 と 上 清 に 分 離 し た 。50%およ び100%McOHる。和 製ハ ー ブの代 表 である紫蘇 は,香 味 ・着 色

溶 出 画 分 を 混 合 し,逆料 として広 く用 いられ るが,漢 方薬 として も様 々ラ ム(Cosmosil75C18‑PREP,2.2×50cm)にな薬効 が知 られ てお り,な かで も本草書 に記載 のア プ ラ イ し,移あ る,魚 介 類の 中毒に対 する紫蘇 の作用 は,直 接30:70:0.1を的 な解 毒作 用の ほか,上 記の高 タンパ ク食 による量680‑1260ml)を有害 作用の 阻止 を も含 んでい ると解す る ことがで部 分 を 濃 縮 し,さきる。

5C、$‑MS,20×250mm,溶我 々は,こ れ までの研 究課程 のなか で,紫 蘇 葉

つ のH20,50%MeOH,100%MeOH,
次 溶 出 し た 。H20溶

出 液 は,濃動 相 と し てH20/MeOH/TFA
用 い て,化合 物1(56mg,溶ら にHPLCによ り(CosmosiI
出:H20/MeOH/

速:4.Om1/min),化物2(6.1mg,tR28.4min)と,3(6.9mg,

特 に慢 性腎 炎に有効 で ある ことを,臨 床 的 また実

tR35.7min),化合 物4(tR18.6min)と,

験的 に明 らかに して きたが,本 研 究で は,成 分分5(tR46.6min)を単 離 し た 。 化 合 物1‑5は,,13C‑NMR,FAB‑MSの有効 成分の 解明 と作用 メカニ ズムを明 らか にす る

文 献 値 と の 比 較 か ら,そことを 目的 とした実験 を行 った 。

[R‑91ucuronosyl(1→2)β合

スペ ク トグラム のれ ぞ れluteolin7‑0‑
一glucuronide]1),

apigenin7‑0‑[R‑glucuronosyl(1→2)β2.材

出得 た。 溶 出 量1260‑2700m1

TFA45:55:0.1,流lH‑

ら に

相 シリカゲル を充填 した カ

お よび紫蘇 葉 を構成 生薬 とす る柴 朴湯 が,腎 疾 患

析 と薬理活性 試験 とを組 み合わ せ,紫 蘇 葉が 持つ京)吸 着 さ せ,一料 および 方法
glucuronide]1',scutellarein7‑O‑R‑glucur‑

2.1紫蘇葉 の各種 成分 の単離 ・構 造決 定onide(scutellarin)2',rosmarinicacid3',caf‑

実 験で用 いた紫 蘇葉 は,京 都 大学大 学院 薬学研

feicacid3)と究 科附 属薬 用植 物 園 で栽 培 し,新 鮮 葉 の ま ま一2.2血ム細胞 の増殖抑 制試験

20℃ で保存 した もの を使 用 した。 紫 蘇葉 煎液 は,
夏 に収穫 した シ ソ(No.32,新鮮重 量54.6g)を液 体窒 素 で凍 結後 に 粉砕 し,800m1の沸 騰 水で同定 した。
管平 滑筋 培養細 胞 お よび腎 メサ ンギ ウ(1)培

養血管 平滑筋細 胞お よび メサンギ ウム

細 胞 の 調 製:マウ ス 血 管 平 滑 筋 細 胞 の 単 離 ・培 養

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浦上 財 団研 究報 告 書Vol.9(2001)

は,以 下 のよ うに行 った。細胞 培養液 として は,た 後,IFN一

Dulbecco'smodifiedEaglemedium/F12

TNF‑a,LPSfromE.Coli.setotypeO26

nutrientmixture3:1(GibcoBRL,Gaithers‑

B6(Sigma,St.Louis,MO),NG‑monometh‑burg,MD,USA)に,100U/mlpenicillinG;γ(Phamingen,SanDiego,CA),yl‑L‑arginine(L‑NMMA),紫100μg/mlstreptomycin(GibcoBRL)を混合

蘇葉 エ キス な どの 薬 物 を,10%FCS培

養液 に直 接溶解 して投 与した もの を使用 し,必 要 に応 じてFCS(Walker‑し,さら に48時 間 培 養 し た 。 そ の 後 培 養 液 を 回 収sville,MD,USA)をし,等量 の グ リ ー ス 試 薬(1%sulfanilamide/ン酸 と0.1%N‑1‑naphthyl‑ethylenedia‑混合 した。Balb/cマウス(20週齢 ♀)か ら腹大 動脈 を摘 出 し,コ ラゲ ナー

5%リ

ゼ処 理 を施 す ことに よ り血管細 胞の懸 濁液 を調 製

minedihydrochlorideをした。 また,マ ウス メサンギ ウム細胞 の単離,培成)と養 は,MacKayらを測 定 し た 。 亜 硝 酸 イ オ ン濃 度 は,0〜10‑4Mのの 方 法4)に よ り行 っ た。実 験合 わ せ,10分には5〜15継 代 の培養 メサ ンギウム細 胞 を使 用 しNaNO2溶た。

し た 。 ま た10%FCS培(2)細胞増殖 の測定:培 養血管平 滑筋 およびのRNAをず っ撒 き,17%FCS培

cDNAプ

養液 にて4日 間 イ ンキ ュ
含 まな い もお ける 吸光 度

液 を 用 い て 作 成 し た 検 量 線 に よ り定 量
養液 に溶 解 した各 薬物 をマ ウ ス 培 養 メ サ ン ギ ウ ム細 胞 に投 与 後,24時

メサンギ ウム細胞 を96穴 プレー トに各穴5×103個

ベ ー トした。 そ の後,培 地 をFCSを使用 直前 に混合 して作後 の540nmに抽出 し,マウ スiNosに間後対 す る

ロ ー ブ を 用 い たNorthernblot解析 を行 った。の に交換 して さらに2日 間イ ンキ ュベ ー トす る こ
3.結果とによ り,細 胞 を静止期 に同 調 させ た。そ の後,各種 細胞増 殖刺激 剤お よび薬物 を含 む培養液 に培地 を交換 して20時 間イ ンキ ュベー ト後,1穴あたり0.33μCiの[3H]thymidine(6.7Ci/mmol)を3.1培

養 メサ ンギ ウム細 胞 に対す る増 殖抑 制作用

紫 蘇葉煎 液 は,1%FCSを

含 む培 地で 増殖 を投与 し,さ らに4時 間 インキ ュベー トした。 細胞誘導 され た培 養 メサ ンギウム細胞 のDNA合をPBSで3回

用量 依 存的 に有 意 に抑 制 し(p〈0.001),IC,。

洗 浄後,細 胞内 に取 り込 まれ た放成をは射活性 を液 体 シンチ レーシ ョンカ ウンター で測定8.8μg/mlで あ った(Fig.1)。 な お,こ れ らの作した。放 射活 性 はcpmで用が 紫蘇葉煎 液の細 胞毒性 に よる もの ではな い こ表記 し,薬 物 の増殖 抑制活性 の強 さは,%ofcontrol=(薬物投与 群のcpm一 無 血 清培 地群 のcpm)/(薬物 非投 与群 のcpm‐,血清培 地群 のcpm)と,その値 か ら算出 したIC5。で示 した 。
(3)平滑 筋細 胞 か ら遊 離 さ れ たNOおとを確認 す るた め に,煎により生 細胞 数 を 検 討 した。 そ の結 果,OD57。 の 値 でcontrol;1.103±0.180,紫よび液(50,ug/ml)で24時

間 メサ ンギ ウム細 胞 を培 養 し,MTT法

蘇 葉 煎 液;1.225±0.159と,有 意 な差異 は認 められな かった。

iNOSmRNA発現の 測定:培 養メ サ ンギウ ム細次 に紫蘇葉 煎液 に含 まれる培養 メサ ンギ ウム細胞 か らのNO産

生 は,そ の 安定 代 謝物 で あ る亜胞増 殖抑制活 性化 合物の単 離 を行 った。 紫蘇葉 煎

硝酸 イオ ンの培地 中濃度 に よ り測定 した。 メサ ン

液 をDiaionHP‑20樹脂 に吸着 させ,水,50%メ

ギ ウム細 胞 を96穴 プレ ー トに3×104個 ずつ 撒 き,

タ ノー ル,100%メ

タ ノー ル,ア セ トン と,順 次

10%FCS含溶出 し,さ らに,水 溶出画 分 を80%エ タ ノー ルで有 培養 液で48時 間 イ ンキ ュベー トし31

紫蘇葉の抗腎炎 ・抗動脈硬化作川に関する研究

FiglInhibitor‑effectofperillaextractandprednisolone(PSL)on1°oFCS一
inducedmesangialcellproliferation.Valuesarerepresentedasmean±S.D.
(〃=5).**‡

ρく0.001.

処 理 し,上 清 と沈殿 に分画 した。各画 分の も との

glucuronosy1(1→2)R‑glucuronide](2),紫 蘇葉煎 液25μg/mlにscutellarein7‑0‑/3‑glucuronide(scutellarin)

相 当す る濃 度で の細胞 増

殖 抑制 作 用 を検討 した と ころ,主 な活 性 成分 は(3),caffeicacid(4),rosmarinicacid(5)を50%お よび100%メ タ ノール溶 出 画分 に移 行 し た

単離こ とが示 され た こ とか ら,50%および100%メタ・同 定 した(Fig.2)。

各 化 合 物 は,1%FCSによ り誘 導 さ れ た 培 養

ノール溶 出画分 を合 わせ,逆 相 シリカゲル ク ロマ

メ サ ン ギ ウ ム 細 胞 の 増 殖 を 用 量 依 存 的 に 抑 制 し,トグ ラフィー によ り,活 性成 分の分離 を行 った。

各 化 合 物 のIC,。 は,活その結果,luteolin7‑0‑[R‑glucuronosyl(1→μM)>3(9。0μM)>1(17.5μM)>2(IC50>402)R‑glucuronide](1),apigenin7‑O‑[R一、μM)>4(ICso>40μM)でluteolin7‑0・【6‑glucuronosyl{1→2)β一glucuronide1〔1)apigenin7‑0{s‑glucuronosyl〔1→2)B‑glucuronide1(2〕scutellarein7‑0‑g‑glucuronide(scutellarin)p)

caffeicacid(4)rosmarinicacid(5)Fig.2Structureofactiveconstituentsisolatedfromperillaextract.

性 の 強 い 順 に,5(3.6

あ っ た(Fig.3)。32

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浦上 財 団研 究報 告 書Vol.9(2001)

抑 制 活 性 と ほ ぼ 同 程 度 で あ っ た(紫蘇 葉 煎 液;

46%ofcontrol,rosmarinicacid;51%ofcon‑trol,Fig.4)0
3.2培

養 平 滑 筋 細 胞 に 対 す るNO産

生誘 導 作

用紫 蘇 葉 煎 液 は 単 独 で,血管 平 滑 筋 細 胞 か らの 亜硝 酸 イ オ ン 遊 離 を 用 量 依 存 的 に,かμg/m1,P〈0.01)誘はIFN一つ 有 意 に(5導 し た(Fig.5)。

γ お よ びTNF一α(各100U/m1)とその 作 用顕著

な 相 乗 作 用 を 示 し た(Fig.6)。Northerblot解Fig.31nhibitoryeffectofcaffeicacid(■),1uteolin7‑0‑[β・glucuronsy1(1→2)β・glucuronide1(:).apigenin

7‑0・1β ・glucuronsyl(1→2)1(乙)scutellarin(こ).ros‑
maninicacid(●),andprednisolone(▲)on1%FCS‑
inducedmesangilcellproliferation.'p<O.Oo."p<0.01.̀"'pく0.001.

系 統 シ ソ 由 来 の 紫 蘇 葉 煎 液25μg/mlに各 化 合 物 の 濃 度,すな わ ち,化相 当す る

合 物1(1.8,ug/m1),2(0.21μ9/ml),3(0.47μ9/m1),4(0.11μ9/ml),5(1.8μ9/ml)での,1%FCS誘

導メサ ン ギ ウ ム 細 胞 増 殖 に 対 す る抑 制 作 用 を 検 討 した 。 そ の 結 果,rosmarinicacid(5)のFig.5Effectofperillaextractonnitritereleaseofmurine
culturedVSMC.VSMCweretreatedwithvariouscon‑
centrationsofperillaextractfor48hours.Valuesare

みが有 意

expressedasmean±S.D.(〃な 活1生 を 示 し,そ二6).串'**,and輯

catestatistically‑significant(p<0.05,0.01,andO.001,の強 さは紫蘇 葉煎液 の細胞増 殖

respectively).

Fig.41nhibitoryeffectoftheconstituentsofperillaextracton1%FCS‑induced
mesangialcellproliferation.Theconcentrationofeachconstituentswas
luteolin7・0‑【

β一glucuronsy1(1→2)β一glucuronide〕(1);1.8μg/m1,apigeni117‑0・【β一glucuronsy1(1→2)β一glucuronide〕(2):0.21μg/m1.

scutellarin(3):0.47μg/m1.caffeicacid(4);0。11μg/m1,rosmaninicacid(o):1.8ug/ml,whichareequivalenttothatintheperil)adecoction
of25μg/m1.Valuesarerepresentedasmean±S.D.(A=5).***ρ

〈0.001.

㍉ndi‑

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紫蘇葉の抗腎炎 ・抗動脈硬化作用に関する研究

Fig.6EffectofperillaextractcombinedwithIFN‑y(a)orTVF‑a(b)onnitritereleaseinmurineculturedV"SMC.VSMCweretreatedwitheachsamplefor‑18hours.
Valuesareexpressedasmean±S.D.(ra=6).""indicatesstatisticallysignifi‑cant(p<0.001).

析 か ら,紫 蘇葉 煎液 はiNOSのmRNA発

現 を誘導す る ことが明 らか となった(Fig.7)。
一 方 で 紫 蘇 葉 煎 液 は,IFN一lipopolysaccharide(LPS,10μg/ml)によ る

大量 の亜硝酸 イオ ンの遊離 を用量依 存的 に,か つγ(100U/ml)+

有意 に(12.5μg/ml,P〈0.001)抑iNOSのmRNA発制 し,ま た現 を 抑制 し た(Fig.7,8)。 紫蘇葉 煎液の分 液操作 で は,紫 蘇葉煎 液の亜 硝酸 イ
オ ン遊 離誘導 活性 は,80%エ

タノール 不溶 画分 に主 に移行 したこ とか ら,活 性 成分 は多糖類 と考 えられ た。

Fig.7NorthernblotanalysisforiNOS.VSMCwerecultured
withnormalmedium(lane1),IFN‑y(100U/ml)
alone(lane2),perillaextrach(25kg/ml)alone(lane2),IFN‑y十periilaextract(lkg/ml),(lane4),IFN一
γ十perillaextract(25μg/ml),(lane5),IFN一γ十Fig.8EffectofperillaextractonIFN一γ1LPS‑inducednitrite

LPS(10ug/ml),(lane6),IFN‑y十LPS十perillareleaseofmurineculturedVSMC.VSMCweretreatedextract(25kg/ml),(lane7)for24hours,andthen

witheachsamplefor48hours.Valuesareexpressedas

mRNAwasextracted(a).Densitometryanalysisofthe

mean±S.D.(n=6)."'indicatesstatisticallysignifi‑

ratioofiNOSradioactivitytoGAPDH(b).

cant(Pく0.001).

34

浦 上財 団研 究 報告 書Vol.9(2001)a)b)

Fig.9EffectofperillaextractonPDGF‑m(a}orTNF・

α一inducedDNAsynthesisof

murineculturedVSMC.QuiescentVSMCweretreatedwith10ng/mlPDGFor
100U/mlTNF・

α+0.1%FCSinmediumcontainingvariousconcentrationof

perillaextractfor24hours.L3H」Thymidinewasaddedforthelast4hou1・s.
"PSL"meansprednisolone(1μM).Valuesareexpressedasmean±S.D.(rt=3).
**andホ**indicatestatisticallysignificant(Pく0.01andO.001)comparedwith
thegroupwithoutperillaextract.

a)b)

Fig.10〔a)Inhibitor・effectofLNMMAonnit1・itereleaseofVSMCinducedwith
peri11acombinedwithTNF一α.VSMCweretl'eatedwith100U/mlTNF一

αand5kg/mlperillaextractwithorwithoutO.25mML‑NMMBfor48hours.Values
areexpressedasmean±S.D.(rz=6).(b)EffectofperillaextractonTNRa
inducedDNAsvnthesisofmurineculturedVSMC.VSMCweretreatedwith100
U/mlTNF一αinmediumcontaininglor5μg/mlperillaextract、、・ithorwithout

O.5mML・NMMAfor24tours.[3HIThymidinewasaddedforthelast4hours.Openandhatchedcolumnsindicatetheeffectsinnormalmediumand
mediumcontainingO.25mMLNMMA,respectively.Valuesareexpressedas
mean*S.D.(n3).

血 管 平 滑 筋 細 胞 は,PDGF(10,ug/m1)おびTNF一α(100U/ml)に

紫 蘇 葉 煎 液 は そ れ ら を 用 量 依 存 的 に,か(5,ug/ml,A<0.001)抑NMMA(0.5mM)は,PDGFによよ り増 殖 が 誘 導 さ れ,つ有 意 に制 し た(Fig.9)。L‑
よ る増 殖 刺 激に対 す る紫蘇 葉煎液 の抑制 作用 には影響 を及 ぼさな かったが,TNF一

α によ る増 殖刺激 に対 す る紫蘇 葉煎 液 の抑制 作 用 は,L‑NMMAによ り部 分

的 に で あ るが有 意 に(A<o.05)減弱 した(Fig.

10)0

35

紫蘇葉の抗腎炎 ・抗動脈硬化作用に関する研究
今 回実験 に用 いた紫蘇葉 煎液 および サイ トカイン併用 時 の濃度 におい て,細 胞 か らのLDH遊離glucosideと 同様 の体 内動態 を示 す と考 え られ る。
luteolin(6)はluteolin‑diglucuronide(1)と量 には有意 な差 は見 られ なか ったこ とか ら,紫 蘇比 較 して強 い培 養 メサ ンギ ウム細胞増殖 抑制作 用

葉の これ らの作用 は細胞毒 性 による もので はないを示 した ことか ら,invivoにと考 え られ た。

diglucuronide(1)も4.考制 作 用 に寄与 す る可 能性 が 示 唆 され る。一 方,察rosmarnicacid(5)を
紫 蘇 葉 煎 液 はマ ウ ス 培 養 メ サ ン ギ ウ ム 細 胞 の 増
殖 を抑 制 し,inび狛 り の 実 験 で は あ る が,紫が 糸 球 体 腎 炎 の 予 防,治蘇 葉 煎 液 に含 まれ る 細胞 増 殖 抑 制 活 性 成 分 と し て,3種の フ ラ ポ ン配 糖体(1‑3)とcaffeicacid(4)おの含有 量

蘇葉煎 液の細 胞増殖 抑制活 性ぼrosmarinicacid(5)単独 の活 性 で 代実 験 で は,紫蘇 葉 煎液 の 培

養 メ サ ン ギ ウ ム 細 胞 増 殖 抑 制 作 用 は,ほmarinicacid(5)にinvivoに

ラ ッ トに経口投 与 した と間後 か ら尿 中 に検 出 され てお り,

おいて もinvitroとぼros‑

由 来 す る こ と が 示 さ れ た が,同様 にメサ ンギ ウ

ム細胞 増殖抑制 作用 を示す と期待 される。
また紫蘇葉 煎液 は,培 養 マウス血管 平滑筋細 胞に対 して,細 胞 増殖抑 制作用 を示す と同時 に,単生 を誘導 し,IFN一 γ およ びTNF一 α との併 用 によ り顕著 な相 乗 作用 を
示 す一 方で,IFN一 γ+LPSによ る大量 のNO産生 を抑 制す る作用 を示 した。NOは
殖抑制 作用やLDH酸

表 さ れ る こ とが 示 さ れ た。
今 回 のinvitroのき には,4時独で は マイル ドにNO産

よ びrosmar‑

単 離 ・同 定 し た が,そと比 活 性 と か ら,紫は,ほ蘇 葉

療 に 有 効 で あ る こ とが 示

唆 さ れ た 。 本 実 験 で は,紫inicacid(5)をおいて はluteolin‑

紫蘇 葉 煎 液の 細 胞増 殖 抑平滑 筋細 胞増化抑 制作 用 を示 し,抗 動脈硬化 的な作用 を示す一 方で,大 量 に産生 された ときには敗血症性 ショック状態 にお ける低血圧 を引き起 こ した り,毒 【生の強 いONOO一に変 化 して組

紫 蘇 葉 を 経 口 的 に摂 取 し た と き に は 結 果 が 異 な る

織障害 を引 き起 こす こ とが知 られ ている。 従っ て,

可 能 性 も考 え られ る 。 ヒ ト腸 管 内 に は 多 数 の 腸 内

今 回示 され た シソ のNO産細 菌 が 存 在 し,そな二 面的 な作 用は,生 体 内での薬理 効果 と して はβ 一glucuronidaseな
Shimoiら

れ ら の 中 に は β 一glycosidase,
ど を も つ 細 菌 が あ る5)。

は,luteolin7‑0一β一glucosideを

ラ ッ

生 に関 す る この よ う

好 ましい と思 われ る。
紫 蘇 葉煎 液 はPDGF,TNF一

α に よ って誘 導ト に経 口 投 与 し,その血漿 中か らア グ リコンであされ た血 管平滑 筋細胞 の増 殖 を抑制 した が,NOるluteolinと2種類 のluteolin‑monoglucur‑

は平 滑筋細胞 増殖 を抑 制 する ことか ら,こ の増殖onideを

検 出 し,luteolin7‑0一

抑制 作 用 にNO産

β 一glucosideを生誘 導 作用 が関 与 し てい る こ

検 出 で き な か っ た こ と か ら,1uteolin7‑0‑とが 予想 された。 しか し,NO合glycosideは

あ るL‑NMMAは,TNF一

腸 管 内 で 腸 内 細 菌 に よ りluteolinに分 解 さ れ た の ち に 吸 収 さ れ,その一部 が腸管粘 膜に 存 在 す るUDP‑glucuronyltransferaseによ成酵 素阻 害剤 で

α に よる増 殖 刺激 に対す る紫蘇葉 煎液 の抑 制作 用 について はそれ を部
分 的 に で はあ る が 有 意 に 減 弱 させ た も のの,り グ ル ク ロ ン 酸 抱 合 化 さ れ て 血 漿 中 に 現 れ る と考PDGFに察 し て い る6)。 今 回 の 実 験 に お い て 紫 蘇 葉 煎 液 よた。PDGFはり単 離 さ れ たluteolin‑diglucuronide(1)も,きが ある ため,紫 蘇 葉 煎液 のNO産

経 口 投 与 さ れ た 場 合 に はluteolin7‑0一

β 一よる増 殖刺 激 に つい て は影 響 し なか っそ れ 自身 がNO産

生 を抑制 す る 働生誘 導 作 用が それに打 ち勝つ こ とが 出来 なかった こ とが予 想36

浦 上財 団研 究 報告 書Vol.9(2001)

されるが,ど ちらの増 殖刺激 に対 して も,紫 蘇葉

紫 蘇葉 は血 管 平 滑筋 細 胞 にお け るiNos発煎 液 の細 胞増 殖抑 制 作用 の 大部 分 はNOを介 してNOを介さ現を産 生 させ る一 方で,サ イ トカ イ ンない ことが推測 され,増 殖 因子の細 胞膜 レセプ タによ って誘 導 された平 滑筋細胞 の増 殖を直 接的 にーに結合後 に誘 導 される,シ グナ ル トランス ダク

阻 害 す る作 用 を もつ こ とが 明 らか に な り,inシ ョンに関わ る反応 に対す る阻害作 用 な ど,そ のvitroの結 果で は あるが,動 脈 硬化 を抑 制 す る可

他 の作用 機序 が考 えられた 。

能 性が示 され た。

紫蘇葉 は漢 方で は蘇 葉 と称 して 気剤 と して使 用されて いる。 すで に我 々7)は,漢 方 での気 の病 態

文の発現 にサ イ トカ インが関与 して炎症 を きた し,

1)Yoshida,K.etal.Ph}・tochem.,33,917‑919(1993).

献2)Wang,Y.Q.etal.Chem.Pharm.Bull.,36,3206‑

気剤が これ を調 節 する可能性 を報 告 してい るが,3209(1988).

さ らに 『本草綱 目』 で は蘇 葉の薬 効の ひ とつ とし3)Fukui,H.etal.Phy‑tochem.,23,2398‑2399(1984).て 「和血 」 と記載 され るな ど,紫 蘇葉 は動脈硬 化4)Mackay,K.etal.KidneyInt.,33,677‑684(1988).

な どのよ うな細胞増 殖の関 与す る疾患 に対す る作

5)Kim,D.H.etal.Arch.Pharm.Res.21,17‑23(1998).

用 も期 待で きる と考 えて いる。血 管平 滑筋細胞 からiNos発

現 に よ って 産 生 され たNOは,その抗凝 固作 用,平 滑筋 細 胞増 殖抑 制作 用,LDL酸

6)Shimoi,K.etal.FEBSLet.438,220‑224(1998)7)Ono,T.etal.Jap.J.OrientalMed.,47,183(1997).
8)Shears,L.L.etat.J.Clin.Invest.,100,2035‑2042(1997).

化抑制 作用 な どによ り,動 脈硬化 の進 展を抑制 してい る8)と考 えられて お り,今 回 の実験 結果 か ら37

Anti‑nephriticandanti‑arteriosculeroticactivityofperillaleaves

Anti‑nephriticandanti‑arteriosculeroticactivityofpeYillaleaves

GishoHonda(GraduateSchoolofPharmaceuticalSciences,KyotoUniversity)

Theinhibitoryeffectsofperillaleavesanditsphenolicconstituentsoncytokine‑
inducedproliferationofmurineculturedmesengialcellswereinvestigated.DNAsynthe‑
sisofmesangialcellsstimulatedbyplateletderivedgrowthfactor(PDGF)ortumor
necrosisfactor(TNF)‑awasinhibitedbytheextractofperillaleaves.
Luteolin7‑o‑[βonosyl(1→2)β一glucuronosyl(1→2)β一glucuronide,apigenin7‑o‑[β一glucuronide,scutellare量n7‑o一

β 一glucuronide(scutellarin),caffeic

acid,rosmarinicacidwereisolatedasactiveconstituentsfromtheextract.
Theeffectsoftheextractofperillaleavesonnitricoxide(NO)productionby'
culturedmurinemesangialcellswereinvestigated.TheextractsignificantlyinducedNO
productionfrommesangialcells,whichwasenormouslyaugmentedwithoutcytotox‑
icitybycombinationwithinterferon(IFN)‑yorTNF‑a.Ontheotherhand,theextractsuppressedalargeamountofNOproductioninducedbyIFN‑ycombinedwith
lipopolysaccharide.Northernblotanalysisrevealedthatsucheffectsofperillaextract
weredependentoninducibleNOsynthasemRNAexpression.
Perillaextractexhibitedaninhibitoryeffectoncytokine‑inducedmesangialcell
proliferation,andthiseffectwassignificantlydecreaseduponcombinationwithNG‑
monomethyl‑L‑arginine(L‑NMMA),anon‑specificNOsynthaseinhibitor,suggesting
thatperillaextractinhibitsmesengialcellproliferationpartlythroughtheinductionof
NOproduction.Suchresultsindicatethatperillamaybeapromisingagentforthe
preventionoftheprogressionofnephritisandarteriosculerosis.

一glucur・