応用例854）TSKgel FcR-IIIA-5PWを用いた抗体成分の分取
350

75UVConc B
pH30025065

B 100%Fr 2（53-55 min）

556200Fr 3（55-57 min）

45

1505pHmAU

Fr 1（51-53 min）

7Fr 4（57-59 min）

35

Fr 5（59-61 min）

100
50

2540-50

Fr 6（61-63 min）

15010390 min

551分から67分まで2分毎に分取、TSKgel FcR-IIIA-NPRで分析（右図）-520304050＜測定条件＞（上図. 分取カラム）
カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-5PW（7.8 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 6.0）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 4.0）
グラジエント : B 0 %（0-8 min）, B 0-100 %（8-68 min）,B 100 %（68-78 min）
流
速 : 0.5 mL/min
温度 : 20 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試
料 : ヒト化抗体（5 mg）

60

7080

Fr 7（63-65 min）
Fr 8（65-67 min）

0510
＜測定条件＞（右図. 分析カラム）
カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-NPR（4.6 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液+150 mmol/L NaCl（pH 6.5）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液+150 mmol/L NaCl（pH 4.5）
グラジエント : B 0-100 %（2-20 min, リニア）流
速 : 1.0 mL/min
温度 : 20 ℃
検出 : UV（280 nm）
試
料 : ヒト化抗体（分取した画分をそのまま注入）

1520 min■FcRカラムを用いた文献
1）FcRカラムで分離した3つの抗体ピークのN-結合型糖鎖構造と生理活性の関係を分析、また抗体とFcRの結合様式を解析

M. Kiyoshi et al., Assessing the Heterogeneity of the Fc-Glycan of a Therapeutic Antibody Using an Engineered Fcγ Receptor IIIa-immobilized Column,
Scientiﬁc Reports, 2018, 8:39552）均一N-結合型糖鎖を付加した人工抗体の活性や安定性を検証、またFcRカラムを用いて人工抗体のクロマト保持時間を比較

R. Wada et al., Inﬂuence of N-glycosylation on eﬀector functions and thermal stability of glycoengineered IgG1 monoclonal antibody with homogeneousglycoforms, MAbs. 2019 Feb/Mar; 11(2):350-372

3）FcRカラムで分離した抗体の3つのピーク分画をLC/MSで分離、糖鎖構造を解析

Tosoh Bioscience, Characterization of TSKgel FcR-IIIA-NPR HPLC Column by Top Down Mass Spectrometry, LCGC North America, 37(2) (2019) p142-144

4）FcRカラムでバイオシミラー抗体およびオリジナル抗体の製造ロットにおける抗体の糖鎖の違いを解析

L. Xie et al., Demonstrating Analytical Similarity of Trastuzumab Biosimilar HLX02 to Herceptin ® with a Panel of Sensitive and Orthogonal Methods
Including a Novel FcγRIIIa Aﬃnity Chromatography Technology, BioDrugs. 2020 Feb 185）異なる細胞株（セルライン）を用いて発現した抗体のN-結合型糖鎖の構造および物性の違いについて報告

H. Kosuge et al., Highly sensitive HPLC analysis and biophysical characterization of N-glycans of IgG-Fc domain in comparison between CHO and 293
cells using FcγRIIIa ligand, Biotechnol. Progress. 2020: e3016, https://doi.org/10.1002/btpr.3016■製品一覧
粒子径カラムサイズ

価格

用途0023513 TSKgel FcR-IIIA-NPR

品番

品名

5 μm

4.6 mm I.D. × 7.5 cm

480,000円

分析0023532 TSKgel FcR-IIIA-5PW

10 μm

7.8 mm I.D. × 7.5 cm480,000円

分取※ TSKgel , NPR は日本等における東ソー株式会社の登録商標です※本研究の一部は国立研究開発法人日本医療研究開発機構（AMED）の「次世代医療・診断実現のための創薬基盤技術開発事業」の支援によって行われました。課題番号：2017年度：JP17ae0101003※掲載のデータ等はその数値を保証するものではありません。お客様の使用環境・条件・判断基準に合わせてご確認ください

バイオサイエンス事業部
東 京 本 社 営 業 部 ☎（03）5427-5180 〒105-8623 東 京 都 港 区 芝 3 - 8 - 2
大 阪 支 店 バイオサイエンスG ☎（06）6209-1948 〒541-0043 大阪市中央区高麗橋4-4-9
名古屋支店 バイオサイエンスG ☎（052）211-5730 〒460-0008 名 古 屋 市 中 区 栄 1 - 2 - 7
福岡支店☎（092）781-0481 〒810-0001 福岡市中央区天神1-13-2
仙台支店☎（022）266-2341 〒980-0014 仙台市青葉区本町1-11-1☎（0467）76-5384 〒252-1123 神奈川県綾瀬市早川2743-1
カスタマーサポートセンター
バイオサイエンス事業部ホ−ムペ−ジ https://www.separations.asia.tosohbioscience.com/
HPLC Applications Database https://www.separations.asia.tosohbioscience.com/applications-database-jp
お問合わせE-mail ●製品全般、カタログに関するお問い合せ hlc@tosoh.co.jp●カラム、分離に関するお問い合せ
tskgel@tosoh.co.jp●装置の技術相談に関するお問い合せ csc@tosoh.co.jp
3011GD-品番0994138 A

高性能アフィニティークロマトグラフィーカラム

TSKgel FcR-ⅢAシリーズ®

抗体のN-結合型糖鎖に起因するFc領域の構造変化を識別
ADCC活性の異なる抗体を分離することが可能

高性能アフィニティークロマトグラフィーカラム

ADCC活性が高い抗体を強く保持

TSKgel FcR-ⅢAシリーズ®

高速分析用カラム「TSKgel FcR-IIIA-NPR 」

応用例

遺伝子組換えヒトFcγレセプターIIIaをリガンドとして用いています。
天然型に比べ安定性が向上しています。

1）品質管理への応用（抗体医薬品のロット間差の確認）

抗体試料を直接分離することが可能です。
精製や前処理の必要がありません。
UV 280 nm（mV）

非特異的吸着が少ないPEEKカラムを用いています。
短時間での分離が可能です（20分）（。平衡化時間を含めると30分/サイクルでの測定が可能）

N ew（A）ロット18

分取用カラム「TSKgel FcR-IIIA-5PW」

7Peak 240 %

65

Peak 134 %4

Peak 326 %321

TSKgel FcR-IIIA-NPRと同一のリガンドを用いているため同等の分離選択性を示します。

76Peak 142 %54

Peak 236 %Peak 322 %

32100-1-10

約5 mgの抗体試料を負荷することが可能です。

（B）ロット28UV 280 nm（mV）

抗体Fc領域のN-結合型糖鎖構造の違いを認識し、抗体のADCC活性と相関がある抗体を分離することが可能です。

51015min051015min＜測定条件＞カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-NPR（4.6 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 6.5）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 4.5）
グラジエント : B 0-100 %（2-20 min, リニア）流
速 : 1.0 mL/min
温度 : 25 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試料 : 市販抗体医薬品（2ロット）

1回の分取クロマトグラフィーで構造解析、活性測定に必要な量を分取することが可能です。

概 要2）工程解析への応用（CHO細胞で培養した抗体の分析例）

8抗原結合部位

7UV 280 nm（mV）

6Fab領域

Fc領域

低活性5

高活性Day 4432Day 610：N-アセチルグルコサミン：マンノース：ガラクトース：シアル酸：フコース

TSKgel FcR-IIIA-NPR-1

Day 8051015min

抗体医薬品

分析例
（クロマトグラム）・ Fc領域の糖鎖構造により活性が異なる⇒ 品質変動の要因となり得る

糖鎖構造の違いを認識し、活性に相関のある分離

Day 10Day 12Day 140

主な用途

51015202530min＜測定条件＞カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-NPR（4.6 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 6.5）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 4.5）
グラジエント : B 0-100 %（2-20 min, リニア）
流速 : 1.0 mL/min
温度 : 25 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試
料 : mAb、5 μg＊培養開始後一定期間経過後のCHO細胞培養液を採取、フィルターろ過、ProteinAゲルで簡易精製し測定＊細胞培養液試料は次世代バイオ医薬品製造技術研究組合のご厚意によります● 特性解析 → 文献１）
、
２）
、
３）
● 細胞株のスクリーニング

3）TSKgel FcR-IIIA-NPRによるモノクローナル抗体の分離（細胞株による糖鎖の違い）
70細胞株（セルライン）（CHO細胞、HEK細胞など）による抗体の糖鎖の違い、細胞株スクリーニング → 応用例2)60● 培養条件の最適化● 上流製造工程管理

細胞培養容量のスケールアップや培養法の変更時における抗体の糖鎖性状変化の確認● 製品ロット品質管理

精製抗体の糖鎖性状のバッチ毎の確認およびトレンド分析 → 応用例１）● 抗体成分の分取（TSKgel FcR-IIIA-5PW）ExpiCHO-Rituximab

50Absorbance

細胞培養日数と抗体の糖鎖性状の経時変化の確認 → 応用例３）

100Expi293-Rituximab
Expi293-Trastuzumab
ExpiCHO-Trastuzumab

40503020100-100024681012 14 16 18Elution volume（mL）

2022242628％ Gradient

バイオシミラー抗体とオリジナル・リファレンス抗体との類似性評価 → 文献４）

＜測定条件＞
溶離液A : 20 mmol/L 酢酸ナトリウム緩衝液 ＋ 50 mmol/L NaCl（pH 5.0）
B : 10 mmol/L グリシン‒HCl 緩衝液（pH 3.0）
リニアグラジエント : 図中表記
流
速 : 0.6 mL/min
温度 : 25 ℃
検出 : UV（280 nm）
試料 : Expi293-Rituximab,ExpiCHO-Rituximab,
Expi293-Trastuzumab,ExpiCHO-Trastuzumab（14 μM, 10 μL）
データは東京大学大学院工学研究科の津本浩平先生、長門石暁先生のご厚意によります
Ref.; H. Kosuge et al., Biotechnol. Progress, 2020;e3016,
https://doi.org/10.1002/btpr.3016

抗体のN-結合型糖鎖に起因するFc領域の構造変化を識別
ADCC活性の異なる抗体を分離することが可能

高性能アフィニティークロマトグラフィーカラム

ADCC活性が高い抗体を強く保持

TSKgel FcR-ⅢAシリーズ®

高速分析用カラム「TSKgel FcR-IIIA-NPR 」

応用例

遺伝子組換えヒトFcγレセプターIIIaをリガンドとして用いています。
天然型に比べ安定性が向上しています。

1）品質管理への応用（抗体医薬品のロット間差の確認）

抗体試料を直接分離することが可能です。
精製や前処理の必要がありません。
UV 280 nm（mV）

非特異的吸着が少ないPEEKカラムを用いています。
短時間での分離が可能です（20分）（。平衡化時間を含めると30分/サイクルでの測定が可能）

N ew（A）ロット18

分取用カラム「TSKgel FcR-IIIA-5PW」

7Peak 240 %

65Peak 134 %4Peak 326 %321TSKgel FcR-IIIA-NPRと同一のリガンドを用いているため同等の分離選択性を示します。

76Peak 142 %54

Peak 236 %Peak 322 %

32100-1-10

約5 mgの抗体試料を負荷することが可能です。

（B）ロット28UV 280 nm（mV）

抗体Fc領域のN-結合型糖鎖構造の違いを認識し、抗体のADCC活性と相関がある抗体を分離することが可能です。

51015min051015min＜測定条件＞カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-NPR（4.6 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 6.5）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 4.5）
グラジエント : B 0-100 %（2-20 min, リニア）流
速 : 1.0 mL/min
温度 : 25 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試
料 : 市販抗体医薬品（2ロット）

1回の分取クロマトグラフィーで構造解析、活性測定に必要な量を分取することが可能です。

概 要2）工程解析への応用（CHO細胞で培養した抗体の分析例）

8

抗原結合部位

7UV 280 nm（mV）

6Fab領域

Fc領域

低活性5

高活性Day 4432

Day 610：N-アセチルグルコサミン：マンノース：ガラクトース：シアル酸：フコース

TSKgel FcR-IIIA-NPR-1Day 8051015min抗体医薬品分析例（クロマトグラム）・ Fc領域の糖鎖構造により活性が異なる⇒ 品質変動の要因となり得る糖鎖構造の違いを認識し、活性に相関のある分離

Day 10Day 12Day 140

主な用途

51015202530min＜測定条件＞カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-NPR（4.6 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 6.5）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 4.5）
グラジエント : B 0-100 %（2-20 min, リニア）流
速 : 1.0 mL/min
温度 : 25 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試料 : mAb、5 μg＊培養開始後一定期間経過後のCHO細胞培養液を採取、フィルターろ過、ProteinAゲルで簡易精製し測定＊細胞培養液試料は次世代バイオ医薬品製造技術研究組合のご厚意によります● 特性解析 → 文献１）、２）、
３）
● 細胞株のスクリーニング

3）TSKgel FcR-IIIA-NPRによるモノクローナル抗体の分離（細胞株による糖鎖の違い）
70細胞株（セルライン）（CHO細胞、HEK細胞など）による抗体の糖鎖の違い、細胞株スクリーニング → 応用例2)60● 培養条件の最適化● 上流製造工程管理

細胞培養容量のスケールアップや培養法の変更時における抗体の糖鎖性状変化の確認● 製品ロット品質管理

精製抗体の糖鎖性状のバッチ毎の確認およびトレンド分析 → 応用例１）● 抗体成分の分取（TSKgel FcR-IIIA-5PW）

ExpiCHO-Rituximab

50Absorbance

細胞培養日数と抗体の糖鎖性状の経時変化の確認 → 応用例３）

100Expi293-Rituximab
Expi293-Trastuzumab
ExpiCHO-Trastuzumab

40503020100-100024681012 14 16 18Elution volume（mL）

2022242628％ Gradient

バイオシミラー抗体とオリジナル・リファレンス抗体との類似性評価 → 文献４）

＜測定条件＞
溶離液A : 20 mmol/L 酢酸ナトリウム緩衝液 ＋ 50 mmol/L NaCl（pH 5.0）
B : 10 mmol/L グリシン‒HCl 緩衝液（pH 3.0）
リニアグラジエント : 図中表記
流
速 : 0.6 mL/min
温度 : 25 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試
料 : Expi293-Rituximab,ExpiCHO-Rituximab,
Expi293-Trastuzumab,ExpiCHO-Trastuzumab（14 μM, 10 μL）
データは東京大学大学院工学研究科の津本浩平先生、長門石暁先生のご厚意によります
Ref.; H. Kosuge et al., Biotechnol. Progress, 2020;e3016,
https://doi.org/10.1002/btpr.3016

応用例854）TSKgel FcR-IIIA-5PWを用いた抗体成分の分取
350

75UV
Conc B
pH300
25065

B 100%Fr 2（53-55 min）

556200Fr 3（55-57 min）

451505pHmAU

Fr 1（51-53 min）

7Fr 4（57-59 min）

35Fr 5（59-61 min）

100
50

2540-50

Fr 6（61-63 min）

15010390 min

551分から67分まで2分毎に分取、TSKgel FcR-IIIA-NPRで分析（右図）-520304050＜測定条件＞（上図. 分取カラム）
カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-5PW（7.8 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 6.0）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液（pH 4.0）
グラジエント : B 0 %（0-8 min）, B 0-100 %（8-68 min）,B 100 %（68-78 min）
流
速 : 0.5 mL/min
温度 : 20 ℃
検
出 : UV（280 nm）
試
料 : ヒト化抗体（5 mg）

60

7080

Fr 7（63-65 min）
Fr 8（65-67 min）

0510
＜測定条件＞（右図. 分析カラム）
カ ラ ム : TSKgel FcR-IIIA-NPR（4.6 mm I.D. × 7.5 cm）
溶離液A : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液+150 mmol/L NaCl（pH 6.5）
B : 50 mmol/L クエン酸塩緩衝液+150 mmol/L NaCl（pH 4.5）
グラジエント : B 0-100 %（2-20 min, リニア）流
速 : 1.0 mL/min
温度 : 20 ℃
検出 : UV（280 nm）
試
料 : ヒト化抗体（分取した画分をそのまま注入）

1520 min■FcRカラムを用いた文献
1）FcRカラムで分離した3つの抗体ピークのN-結合型糖鎖構造と生理活性の関係を分析、また抗体とFcRの結合様式を解析

M. Kiyoshi et al., Assessing the Heterogeneity of the Fc-Glycan of a Therapeutic Antibody Using an Engineered Fcγ Receptor IIIa-immobilized Column,
Scientiﬁc Reports, 2018, 8:39552）均一N-結合型糖鎖を付加した人工抗体の活性や安定性を検証、またFcRカラムを用いて人工抗体のクロマト保持時間を比較

R. Wada et al., Inﬂuence of N-glycosylation on eﬀector functions and thermal stability of glycoengineered IgG1 monoclonal antibody with homogeneousglycoforms, MAbs. 2019 Feb/Mar; 11(2):350-372

3）FcRカラムで分離した抗体の3つのピーク分画をLC/MSで分離、糖鎖構造を解析

Tosoh Bioscience, Characterization of TSKgel FcR-IIIA-NPR HPLC Column by Top Down Mass Spectrometry, LCGC North America, 37(2) (2019) p142-144

4）FcRカラムでバイオシミラー抗体およびオリジナル抗体の製造ロットにおける抗体の糖鎖の違いを解析

L. Xie et al., Demonstrating Analytical Similarity of Trastuzumab Biosimilar HLX02 to Herceptin ® with a Panel of Sensitive and Orthogonal Methods
Including a Novel FcγRIIIa Aﬃnity Chromatography Technology, BioDrugs. 2020 Feb 185）異なる細胞株（セルライン）を用いて発現した抗体のN-結合型糖鎖の構造および物性の違いについて報告

H. Kosuge et al., Highly sensitive HPLC analysis and biophysical characterization of N-glycans of IgG-Fc domain in comparison between CHO and 293
cells using FcγRIIIa ligand, Biotechnol. Progress. 2020: e3016, https://doi.org/10.1002/btpr.3016■製品一覧
粒子径カラムサイズ

価格

用途0023513 TSKgel FcR-IIIA-NPR

品番

品名

5 μm

4.6 mm I.D. × 7.5 cm

480,000円

分析0023532 TSKgel FcR-IIIA-5PW

10 μm

7.8 mm I.D. × 7.5 cm

480,000円

分取※ TSKgel , NPR は日本等における東ソー株式会社の登録商標です※本研究の一部は国立研究開発法人日本医療研究開発機構（AMED）の「次世代医療・診断実現のための創薬基盤技術開発事業」の支援によって行われました。課題番号：2017年度：JP17ae0101003※掲載のデータ等はその数値を保証するものではありません。お客様の使用環境・条件・判断基準に合わせてご確認ください

バイオサイエンス事業部
東 京 本 社 営 業 部 ☎（03）5427-5180 〒105-8623 東 京 都 港 区 芝 3 - 8 - 2
大 阪 支 店 バイオサイエンスG ☎（06）6209-1948 〒541-0043 大阪市中央区高麗橋4-4-9
名古屋支店 バイオサイエンスG ☎（052）211-5730 〒460-0008 名 古 屋 市 中 区 栄 1 - 2 - 7
福岡支店☎（092）781-0481 〒810-0001 福岡市中央区天神1-13-2
仙台支店☎（022）266-2341 〒980-0014 仙台市青葉区本町1-11-1☎（0467）76-5384 〒252-1123 神奈川県綾瀬市早川2743-1
カスタマーサポートセンター
バイオサイエンス事業部ホ−ムペ−ジ https://www.separations.asia.tosohbioscience.com/
HPLC Applications Database https://www.separations.asia.tosohbioscience.com/applications-database-jp
お問合わせE-mail ●製品全般、カタログに関するお問い合せ hlc@tosoh.co.jp●カラム、分離に関するお問い合せ
tskgel@tosoh.co.jp●装置の技術相談に関するお問い合せ csc@tosoh.co.jp
3011GD-品番0994138 A

高性能アフィニティークロマトグラフィーカラム

TSKgel FcR-ⅢAシリーズ®