RESEARCHRESOURCESDIVISION研究基盤開発部門

知の共創プロジェクト・共創ラボ用

RRD

研究技術支援案内- 2024 年発行 -国立研究開発法人理化学研究所
脳神経科学研究センター
研究基盤開発部門発行 2024 年 7 月

本冊子の引用や転載を禁止します。

目次
研究基盤開発部門（RRD）の概要 ……………………………………………………………………… 1
動物資源開発支援ユニット
哺乳動物実験施設 ………………………………………………………………………………………… 5
研究技術支援業務 ………………………………………………………………………………………… 6
マウスの胚操作 ………………………………………………………………………………………… 6
コンジェニックマウス作製 …………………………………………………………………………… 7
トランスジェニックマウス作製 ……………………………………………………………………… 7
CRISPR/Casシステムを用いたゲノム編集マウス作製 ……………………………………………… 7
ノックアウトマウス作製（現在受付停止中）…………………………………………………………7
ES細胞樹立（現在受付停止中）…………………………………………………………………………7
マウスのSPF化 ……………………………………………………………………………………………7
ラットのSPF化 ……………………………………………………………………………………………7
子宮内エレクトロポレーション（現在受付停止中）…………………………………………………8
ポリクローナル抗体作製 ……………………………………………………………………………… 8
マーモセットの供給 …………………………………………………………………………………… 8
共用実験施設及び材料 …………………………………………………………………………………… 8
マウス・ラット行動解析施設 ………………………………………………………………………… 8
行動解析機器一覧 ……………………………………………………………………………………… 9
特殊動物飼育用レンタル室 ……………………………………………………………………………10
サル類（マカクサル・マーモセット）の手術・処置施設 …………………………………………10
マウス系統の共有 ………………………………………………………………………………………10
水生動物実験施設 ………………………………………………………………………………………… 11

生体物質分析支援ユニット
研究技術支援業務 ………………………………………………………………………………………… 12
DNA配列解析（プラスミド抽出・前処理反応・配列解析） …………………………………………
13
バイオアレイ解析（バイオアナライザ） ……………………………………………………………14
遺伝子多型解析 …………………………………………………………………………………………15
遺伝子微量定量解析 ……………………………………………………………………………………16
次世代シーケンス解析（前処理・シーケンス解析） ………………………………………………17
質量分析 …………………………………………………………………………………………………18
ペプチド合成 ……………………………………………………………………………………………
20
タンパク質精製 …………………………………………………………………………………………
21
アミノ酸分析 ……………………………………………………………………………………………21
自動細胞分取分析 ………………………………………………………………………………………22
実験器具洗浄 ……………………………………………………………………………………………22
生体物質分析支援業務において使用している主要機器 ……………………………………………23
テクニカルパーソネルサポートセクション(TPSS) …………………………………………………… 24
TPSS:分子生物学実験 (プラスミドの作製と増幅) …………………………………………………
25
TPSS:組織学実験（組織染色および画像撮像）………………………………………………………25
TPSS:組織学実験（AAVマイクロインジェクション）…………………………………………………
26
TPSS:バイオイメージング実験（TissueCyteを用いたマルチセクショニング画像撮影）………26
TPSS:ウイルス作製実験…………………………………………………………………………………27
共用実験施設 ……………………………………………………………………………………………… 28
共用機器コーナー（CUE）………………………………………………………………………………28

機能的磁気共鳴画像測定支援ユニット
電子顕微鏡技術支援ユニット………………………………………………………………33………………………………………………………………………… 35

附録
RRD管理の実験施設配置図 …………………………………………………………………………………36

脳神経科学研究センター研究基盤開発部門（RRD）

概要
研究基盤開発部門（RRD）は、脳神経科学研究センター（CBS）を中心に研究技術開発・支援を行う組織である。現在、当部門は組織構成図(ページ4) に示すように4つの支援ユニットから構成され、担当する技
術分野は多岐にわたる。
各支援ユニットの業務内容については、下記のウェブサイトおよび本
支援案内を参照いただきたい。
https://cbs.riken.jp/jp/faculty/rrd/支援業務の区分け

RRDが行う主な研究支援業務は、以下のように区分される。
・研究技術支援

研究基盤開発部門 部門長
上口 裕之（M.D., Ph.D.）

理研内の研究室等(ラボ)からの依頼を受けて試料を預かり、充分な知識と経験をもったRRDの技術者が最適な条件でこれを解析し、あるいは試料を基に有体物を作製する。支援項目は組織構
成図(ページ4)に示す。大部分の支援は理研コアファシリティ管理システム（以下、R-COMS）からオンラインで申込むことができる。
・テクニカルパーソネルサポートセクション（TPSS）によるカスタマイズ技術支援
TPSSは、ラボにより密着してサポートを行う、ラボの人手不足時に実働する、ラボが保有しない技術を提供するなど、ラボのニーズにカスタマイズしてこたえる技術支援である。また、ラボが新規開拓した先端技術の移転を受けて、他のラボに提供する。
・共用実験施設の管理業務支援
RRDに設置された共用実験施設、およびその施設内の共用研究機器の維持・管理を行う。ラボのメンバー（所属長、研究員、テクニカルスタッフ、パートタイマー、研修生など）は適宜利用者登録の上、R-COMSにて事前予約を行うことでこれらを自ら使用することができる。各ユニットの共用機器リストは、ページ9・30～32・35に示す。
・技術普及支援
RRDが新規研究機材の展示会や既有機器の講習会などを企画し、神経科学をはじめとする種々の研究に必要な最新技術を理研メンバーに普及支援する。
・外部連携
共同研究や受託試験制度を用いて、RRDの一部の研究技術支援を理研外にも普及する。
RRDの利用者
RRDはCBS内の組織であるため、主な利用者はCBSメンバーであるが、施設、機器、人員等の状況が許す限り、全理研メンバーを対象とする。また一部の研究技術支援は、理研外からの利用も可能とする。
支援業務の利用料金（受益者負担金）
RRDの運用経費は、主にCBSの予算によって賄われる。RRD支援業務利用には、料金（受益者負担金）が課せられる。
実験動物、試料・データの所有権
研究支援業務としてRRDがラボから預かる実験動物、試料、ならびに支援業務の結果から得られた有体物およびデータの所有権は、別途取り決めがない限り、依頼者のラボに属する。上記の試料等な
らびに紙・電子媒体などのあらゆるデータは、一定期間RRDにおいて保管した後、または依頼元ラボが閉鎖された場合には、それらを廃棄抹消する（但し、ヒトゲノム・遺伝子解析をはじめヒト由来
資料に関するデータは別扱いとする）。

1

成果の発表にあたってのお願い
今後もRRDの研究技術支援を継続するためには、研究成果への貢献が求められる。
各ユニットの研究技術支援、共用実験施設、および共用機器を用いて得られた研究成果を発表する際には、「方法」、「謝辞」などにその旨を記載していただきたい。共同研究として技術支援を受けた
場合は、共著としていただきたい。
センター、部門、および、各ユニットの英語名は下記のとおりである。
脳神経科学研究センター (CBS)RIKEN Center for Brain Science
研究基盤開発部門 (RRD)
Research Resources Division
動物資源開発支援ユニット (ARD)
Support Unit for Animal Resources Development
生体物質分析支援ユニット (BMA)
Support Unit for Bio-Material Analysis
機能的磁気共鳴画像測定支援ユニット (fMRI)
Support Unit for Functional Magnetic Resonance Imaging
電子顕微鏡技術支援ユニット（EMT）
Support Unit for Electron Microscopy Techniques（記入例）註）ユニット名 (###) には上記の英語名を記載。
1. Materials and Methods [スペースに余裕がある場合]
XXX was analyzed using the YYY at the Support Unit for ### in RIKEN Center
For Brain Science, Research Resources Division (RRD).
2. Acknowledgments [必ず記述]
i) Methodsに利用したユニットの記載がない場合
We are grateful to the Support unit for ###, RIKEN CBS Research Resources
Division, for technical help with XXX service.

We thank the Support Unit for ###, RIKEN CBS Research Resources Division,
with special thanks to Ms. YY and Mr. ZZ for XXX analysis.
ii) Methodsに利用したユニットの記載があり、担当スタッフの貢献度が高い場合
We thank Ms. XX for technical assistance with YYY.
iii) RRDのいくつかのユニットを利用した場合
We thank the staff of Research Resources Division, RIKEN Center for Brain
Science, for generation of AAA mice and analysis of ZZZ.
3. 利用したユニットのスタッフが共著者となる場合
所属は、Support Unit for ###, Research Resources Division,
RIKEN Center for Brain Science2

RRDスタッフ数
組織

スタッフ数（内：パートタイマー数）

研究基盤開発部門
動物資源開発支援ユニット
動物飼育管理動物健康管理研究技術支援ゼブラフィッシュ部門
事務
生体物質分析支援ユニット
研究技術支援・共用実験室管理
TPSS
事務

1
49
4
4(1)
15 (11)3 (1)2024年7月1日現在
備考

業務委託者 49名

11 (1)
52(2)機能的磁気共鳴画像測定支援ユニット
研究技術支援事務41

電子顕微鏡技術支援ユニット
研究技術支援2

事務1
スタッフ数に部門長とユニットリーダーは含まない

3

研究基盤開発部門（RRD）
部門長 上口裕之 （M.D., Ph.D.）

動物資源開発支援ユニット（ARD）
動物実験施設ユニットリーダー 新美君枝（D.V.M, Ph.D.）- 哺乳動物実験施設（マウス, ラット, ウサギ, マカクサル, マーモセット, 特殊動物）- 水生動物実験施設（ゼブラフィッシュ）哺乳動物
研究技術支援受 託：

共用実験施設及び材料- マウス・ラットの行動解析施設- 胚操作- コンジェニックマウス作製- トランスジェニックマウス作製- CRISPR/Casシステムを用いた遺伝子改変マウス作製- ノックアウトマウス作製 - ES細胞樹立- マウス・ラットのSPF化- 抗体作製- 子宮内エレクトロポレーション - 動物健康管理- マーモセットの供給- マーモセットの灌流固定- マーモセットの手術補助指導並びに補助： - 動物実験の実施に関わる指導・補助- サル・マーモセットの手術・処置施設- マウス系統の共有

ゼブラフィッシュ
研究技術支援

受 託：

- 胚操作

- トランスジェニックフィッシュ作製- ノックアウトフィッシュ作製- CRISPR/Casシステムを用いた遺伝子改変フィッシュ作製CRI - 精子凍結保存- ゼブラフィッシュ健康管理
共用実験施設及び材料- 飼育施設- 遺伝子注入装置

生体物質分析支援ユニット（BMA）- ゼブラフィッシュ系統の保存と提供

ユニットリーダー 宮坂信彦（Ph.D.）

研究技術支援- DNA配列解析（プラスミド抽出, 前処理, 配列解析）- 遺伝子微量定量解析- バイオアレイ解析- FANTOM3クローンの分与- 質量分析
- ペプチド合成- タンパク質精製- 実験器具洗浄- 実験補助支援- 遺伝子多型解析- 次世代シーケンス解析- アミノ酸分析- 自動細胞分取分析

テクニカルパーソネル
サポートセクション(TPSS)- 分子生物学実験- ウイルス作製実験- バイオイメージング実験

共用実験施設- 放射線管理区域 ラジオアイソトープ実験棟CBS共用実験室- 共用機器コーナー
・分子生物学実験室
・遺伝子定量解析室
・ 組織標本作製室
・画像撮影・解析室#1, #2
・クロマト分析室・生化学実験室- フリーザールーム（レンタル）

技術普及支援- RRD研究用機器展示

外部連携- 受託試験

- 組織学実験

・P2/レベル2実験室
・超解像顕微鏡室#1, #2・フローサイトメトリー室- 研究技術教育セミナー（BMAクラス）

機能的磁気共鳴画像測定支援ユニット（fMRI）
研究技術支援（指導並びに補助）-ヒト用MRIを用いたヒトを被検体とする測定- fMRI測定予備実験、トレーニング

外部連携- 共同研究ユニットリーダー 岡田 知久（M.D., Ph.D.）- 同サルを被検体とする測定- 倫理審査- 受託試験

電子顕微鏡技術支援ユニット（EMT）

ユニットリーダー 窪田芳之（Ph.D.）

研究技術支援（指導並びに補助）- 連続電顕切片画像撮影と神経構造の３次元再構築解析- 高圧凍結法による神経微細構造解析

共用実験施設- Focus Ion Beam-SEM- FE-SEM- 高圧凍結装置- ウルトラミクロトーム - 画像解析用PC

RRD事務局（脳神経科学研究センター センター長室）
業務内容- RRD全体の事務業務- RRDシステム管理業務- R-COMS対応

2024.7.1

4

動物資源開発支援ユニット
動物資源開発支援ユニット（ARD）は、信頼度が高く、質の良い実験動物を研究者に提供するために、動物実験施設の維持管理を行っている。また、その施設を利用して、動物実験に関わる諸技術
や材料を研究者に提供している。動物実験に関わる様々な事務手続きに関しても支援を行う。
哺乳動物実験施設
動物実験施設の規模
現在の施設の規模を下表に示す。
（2024年7月1日現在）

研究棟
面積
動物種と収容能力
マウス（5匹／ケージ）

脳西棟
付属

脳中央棟

脳東棟

脳西棟・ライフ
サイエンス棟6,000㎡

263㎡

140㎡

412㎡

4,346㎡

872㎡

12,033㎡

脳遺伝学棟 脳池の端棟

合計

6,000

50

-

-

14,000-20,050（約100,250匹）

ラット（3匹／ケージ）

-

-

-

-

840

-

840（約2,520匹）

ウサギ（1匹／ケージ）

-

-

-

-

10

-

10

マカク属サル（1匹／ケージ）

-

20

29

5

-

-

54

マーモセット（4匹／ケージ）

-

-

-

59

-

-

59（約236匹)

マーモセット（8匹／ケージ）

130

-

-

16

-

-

146（約1,168匹)

動物の飼育管理
動物実験施設においてはマウス、ラット、ウサギ、マカク属サル、マーモセットを飼育している。
マウスおよびラット、マカク属サル、マーモセットについては微生物コントロールを行っている。
なお、原則として動物の所有者はラボである。
動物の飼育管理はARDが定めた動物種毎の標準操作手順書に従って行う。飼育担当者は専門業者に外部委託するが、これは競争入札によって決定される。
動物の健康管理
動物実験施設における動物の健康管理には、動物個体の体調を毎日見とどけるほか、動物の搬入、検疫、飼育管理など様々な角度からの注意が必要である。この観点から、ARDでは実験動物健康管理セクションを設けている。このセクションには現在獣医師4名が配置され、以下の業務を担当している。

動物実験施設の獣医学的管理
マウス・ラットの健康モニタリング、マカク属サル・マーモセットの定期的健康診断、動物の疾
病診断と治療・予防、動物の国内・外からの搬入並びに購入に当たっての健康証明書等の事前調査、搬入動物の検疫、動物の搬出（輸出を含む）のための健康証明書作成などを行う。
動物実験施設の整備・維持・管理
飼育・実験施設の整備・管理、飼育管理面の監督、ラボの施設利用調整および利用許可（動物ケージの割り振りを含めて）、施設訪問者の資格審査などを行う。

マウス・ラットの健康モニタリング
ARDが実施しているマウス・ラットの健康モニタリング方法は以下の通りである。モニタリングは
マウス・ラットの健康維持のために極めて重要である。また、この方式はマウス・ラットを搬出する場合、搬出先に問われることがある。
マウス：各飼育室に、モニタリング用ケージを3〜7個置き、各ケージに1〜3匹のマウスを飼育している。モニタリングケージには、同室で飼育していた複数のケージから床敷を入れ、2週間毎に行われるケージ交換の時も同様に汚染床敷を入れる。検査には、各飼育室で3ヶ月以上飼育されたマウスを使用する。
5

ラット：各飼育室に、モニタリング用ケージを3〜6個置き、各ケージに1〜3匹のラットを飼育している。モニタリングケージには、同室で飼育していた複数のケージから床敷を入れ、毎週行われるケージ交換の時も同様に汚染床敷を入れる。検査には、各飼育室で3ヶ月以上飼育されたラットを使用する。
モニタリング動物の検査：

内部検査はARDが3ヶ月毎に行い、外部検査は（公財）実験動物中央研究所（International
Council for Laboratory Animal Science Monitoring Center）に依頼し、6ヶ月毎に行う。
飼育室毎のモニタリングマウス、ラット数を以下に示す。

内部検査：

外部検査：

マウス：各飼育室の2個のモニタリングケージから2匹ずつのマウスをモニタリングする。
ラット：各飼育室の2個のモニタリングケージから1匹ずつのラットをモニタリングする。

飼育室のモニタリング用ケージで6ヶ月以上飼育されたマウス、ラットから無選択的に1匹を選んで検査に供する。

健康モニタリング検査成績の判定
モニタリング成績については、ARDの実験動物健康管理セクションの獣医師が検討して判定結果を出す。問題があれば飼育管理者をはじめ、関係者に指示を与えて対策を講じる。

研究技術支援業務
ARDは以下の技術支援を行っている。

マウスの胚操作
体外受精 ： 成熟精子と未受精卵を培地内で受精させる。受精卵は、凍結胚にして保存または仮親に移植して産仔を得ることに用いる。
顕微授精 ： 約4週齢の幼若マウスから取り出した未成熟精子を未受精卵に顕微鏡下で注入して受精卵を得る。精子の運動能に障害がある場合でも受精が可能である。
受精卵移植： 産仔を得る為に仮親の卵管内に受精卵を移植する。これにより、SPF化や多数の個体を計画的に得ることが可能となる。
胚の凍結保存 ： 個体で維持繁殖する必要がなくなった系統から得た受精卵を凍結保存する。
精子の凍結保存： 個体で維持繁殖する必要がなくなった系統の精子を凍結保存する。
凍結胚の個体化： 凍結保存している胚または他機関より送られてきた凍結胚を融解し、仮親へ移植して産仔を得る。
凍結精子の個体化： 凍結保存している精子または他機関より送られてきた凍結精子を融解し、体外受精により得られた受精卵を仮親へ移植して産仔を得る。

6

コンジェニックマウス作製
遺伝子改変マウスの遺伝的背景をB6/J系統などに置き換えたい場合に、体外受精を行うことで自然交配の場合よりも短期間で次世代の産仔を得ることができる。依頼者の希望する世代数分の戻し交配を行うことが可能である。

トランスジェニックマウス作製
依頼者は、キアゲン社plasmid kitと同等以上の精製度で抽出したプラスミドを制限酵素で消化後、アガロースゲルで泳動し、導入遺伝子（トランスジーン）のみを切り出す。導入遺伝子は、キアゲン社のQIAquick Gel Extraction kitで精製しelution bufferで溶出し、最終濃度が20〜50ng/µl とした溶液50µl（BACトランスジーンの場合は、1〜10ng/µl濃度の溶液50µl）を用意する。ARDスタッフは、導入遺伝子を受精卵雄性前核へ顕微注入して仮親へ移植し、得られた2〜3週齢仔の尾片を依頼者へ届ける。依頼者によるgenotypingの結果を受け、陽性個体を依頼者に提供する。導入遺伝子の受け取りから陽性個体の引渡しまで、おおよそ2ヶ月である。

CRISPR/Casシステムを用いたゲノム編集マウス作製
依頼者が作製した標的配列と相補的なguide RNAとCas9 mRNA（あるいはCas9タンパク質）をマウス前核期
受精卵にインジェクションし、これを偽妊娠マウスへ移植する。これにより得られた2週齢仔の尾片を依頼者に渡す。依頼者によるgenotypingの結果を受け、陽性個体を依頼者に渡す。guide RNAとCas9 mRNAの受け取りから陽性個体の引き渡しまで、おおよそ2ヶ月である。2014年度からこのサービスをスタートした。

ノックアウトマウス作製（現在受付停止中）
依頼者が作製したターゲッティングベクターをES細胞へ導入し、約300個のES細胞コロニーのピック
アップを行う。依頼者が判別した相同組換え陽性ES細胞を胚盤胞に顕微注入して仮親に移植し、離乳したキメラマウスを依頼者に提供する。約300個のES細胞コロニーから1〜30程度の相同組換えES細胞のラインを得ることができ、6ラインを顕微注入すると約2ラインが次世代へ遺伝子を伝達する。
ターゲッティングベクターの受け取りからキメラマウスの引渡しまで、おおよそ3〜4ヶ月である。

ES細胞樹立（現在受付停止中）
依頼者から提供されたマウスを用いて胚盤胞を得たのち、約3週間でES細胞を樹立する。遺伝的背景
がC57BL/6の場合、雄と過排卵誘起して交配させた雌マウス2匹から、少なくとも2ラインのES細胞を樹立する。

マウスのSPF化
受精卵移植によるSPF化： SPF化を行う系統の受精卵をSPFの仮親に移植し離乳まで哺育させる。
子宮摘出によるSPF化：無菌的に子宮から摘出した胎児齢18〜19日の胎仔をSPFの里親のもとで離乳まで哺育させる。

ラットのSPF化
子宮摘出によるSPF化：無菌的に子宮から摘出した胎児齢21〜22日の胎仔をSPFの里親のもとで離乳まで哺育させる。

7

子宮内エレクトロポレーション（現在受付停止中）
子宮内エレクトロポレーションは、in vivoで神経前駆細胞に外来遺伝子を導入するための有力な方法である。電極をあてる脳部位および胎児の発生時期のどのタイミングでエレクトロポレーションを行うかに応じて、特定のサブセットの神経細胞を標的とすることが出来る。

ポリクローナル抗体作製
依頼者によって調製された抗原を用い、ウサギ・マウス・ラットのいずれかの動物種でポリクローナル抗体を作製する。動物種や免疫計画などは、依頼者と協議の上決定するが、免疫期間、試験採血日程など、依頼者の希望に沿うよう柔軟に対応する。オプションでELISAでの抗体価チェックを行っている。

マーモセットの供給
2007年にマーモセットを新規導入し、その後自家繁殖を軌道に乗せて、希望するラボに提供している。年間約50匹の供給体制を整えている。

共用実験施設及び材料

マウス・ラット行動解析施設
行動解析施設は下記A, Bの2つに区分けされ、それぞれ利用目的、利用方法が異なる。
A. 共 用 行 動 解 析 室定

義：共同利用を目的とし、ARDが解析機器を整備、維持・管理する。利用は時間単位
もしくは日数単位とする。
適用場所：脳中央棟8階、脳遺伝学棟2階および3階
利用調整：R-COMSによる予約申し込みとする。
1回の予約制限は原則として15日以内（休日は除外）とする。機器によっては長期の利用を認めるが、この場合は機器担当者と事前に協議する。
料
金：R-COMSの予約実績を元に、時間単位ないしは日数単位で課金する。
そ の 他：一部エリアでは、マウスへのウイルスベクター（P1A/P2Aレベル）の接種と、ウイルス接種マウスを用いた行動解析実験が可能である。

B. レンタル解析室
定

義：ラボが一定期間ARDから貸与を受けて利用する（例えば、3ケ月、6ケ月、1年）。
室内で利用する機器は持ち込みを含めてラボで準備する。利用期間並びに利用方法
はPIと協議の上決める。

適用場所：脳遺伝学棟2階の共用行動解析スイート3および3階301b室
利用調整：利用ラボのPIとARDで協議する。
料金：原則はスペース料金に動物実験施設としての運用上の経費を加算する。

8

行動解析機器一覧
棟

部屋番号

R-COMS 旧部屋番号

有無

WC0535

107-1

WC0535

マウス長期行動リズム解析装置 (30 ch)

なし

N810-2

WC0536

107-3

WC0536

モーリス水迷路なし

205

WC0543

恐怖条件付け実験装置 (2 ch)

なし

206

WC0960

受動的回避反応実験装置 (8 ch)

なし

205-1

WC0961

バーンズ円形迷路なし--

8方向放射状迷路

なし

-

-

(解剖室)

なし

205-A

WC05533-chambers 装置

なし

205-C

WC0959

オープンフィールド実験装置 600 x 600 (4 ch)あり

N810-3WC0543

N810-4

WC1176

N810-5

WC0539N810-6

WC0959N811-1

WC1177

205-D

WC0965

明暗往来実験装置 (4 ch)あり

N811-2

WC0544205

WC0964

驚愕反応実験装置 (4 ch)

なし

205-B

WC0966

テールサスペンション&強制水泳実験装置 (2 ch)

なし

205-F

WC0545

高架式十字迷路 (two-maze)

205-F

WC0545

Y字型迷路

205-B

WC0966

超音波解析装置なし

206

WC0960

ローターロッドなし

206

WC0960

ホールボード実験装置

なし

205-E

WC0548

オープンフィールド実験装置 500 x 500 (4 ch)

あり

206

WC0960

恐怖条件付け実験装置 (2 ch)

なし

-

-

(処置室)

なし

107-4

WC0551

強制水泳実験装置

なし

107-4

WC0551

代謝ケージ

なし

205-1

WC09615-choice装置

なし

N811-3B

N811-4

WC0545

WC0547

N811-5

WC0548N811-6

WC0550

N812

脳遺伝学棟

防音室の

N810-1

N811-3A

脳中央棟

行動解析機器名・施設名

旧機器ID

（西棟）

機器ID

WC0551あり

N814

WC0552

107-1

WC0552

スキャネット12ch

あり

N815

WC0554

-

-

(処置室)

なし

301c

WC0528

驚愕反応実験装置 (4 ch)

なし

301c

WC0541

ローターロッド （1 ch）x 2 setsなし

301c-1

WC0526

テールサスペンション&強制水泳実験装置 (2 ch)あり

301c-2

WC0531

モーリス水迷路あり

301c-3

WC0532

恐怖条件付け実験装置 (2 ch)あり

311c-1

WC0530311c-2

WC0527311e

WC0529202a-

レンタルルーム

なし

202c

-

レンタルルーム

なし

202d

-

レンタルルーム

なし

WC1016

インテリケージ（ 4 ch ）なし

WC1017

インテリケージ（ 4 ch ）なし

WC10185-choice装置（ 12 ch ）

なし

202f

-

レンタルルーム

なし

202h

-

レンタルルームなし

202e

高架式十字迷路 (single-maze)
明暗往来実験装置 (4 ch)
オープンフィールド実験装置 500 x 500 (4 ch)
アクティビティーセンサーシステム
スキャネット

9

あり
あり
あり

特殊動物飼育用レンタル室
脳東棟5階506室に特殊動物飼育用レンタル室を設けている。ここではマウス、ラットに加えて特殊な動物（フェレット、ハタネズミ等）を飼育できる。飼育管理は全て利用者自身が行う。ARDにない飼育器材はラボで準備する。飼育動物は飼育室と研究室間を自由に移動できる。

サル類（マカクサル・マーモセット）の手術・処置施設
定

義：頭部手術などのための手術室、ホルマリン灌流固定などに使用できる解剖室、術後や急性機能不全の個体を管理治療するためのICU室、薬剤投与等のための処置室からなる。
共同利用を目的とし、ARDが施設を整備・維持・管理する。利用は時間/日数単位とする。

適用場所：脳西棟3階310室・311室、脳中央棟9階N905-1・S906-1・ S906-2・ S906-3
利用調整：R-COMSによる予約申し込みとする。
料
金：R-COMSの予約実績を元に課金する。

マウス系統の共有
CBSのラボがThe Jackson Laboratory (JAX)からこれまでに直接購入したマウス（JAX®Mice）は、
CBS内で共有して使用することができる。CBSに存在するJAX®Miceの系統一覧を作成し、CBS内HPに公開している。http://cbs.intra.riken.jp/mouse/

10

水生動物実験施設
ゼブラフィッシュ実験施設の規模
この施設は2004年3月、脳池の端棟に設置された。
飼育施設は872㎡であり、ここに特大タンク40個, 大型タンク4,320個, 中型タンク2,160個, 小型タン
ク4,120個を備え、約20万尾のゼブラフィッシュが飼育できる。当施設では徹底した水質管理がなされ、水温は28.0〜28.5 ℃に保たれている。
また、当施設には365㎡の実験室があり、ここは胚操作室、顕微鏡室、系統保存室、遺伝子資源保存室に別れ、それぞれの目的に応じた器材が設置されている。
なお、当施設はナショナルバイオリソースの中核機関となっており、CBSの岡本客員主管研究員を代表として、我が国における有用なモデルゼブラフィッシュの収集、保存、提供などを行っている。
2018年4月から、支援業務を一部変更し、受益者負担にて支援を行っている。
研究技術支援業務
ゼブラフィッシュ実験施設では以下の研究技術支援を受託としてあるいは指導として行う。
ゼブラフィッシュの飼育管理
施設におけるゼブラフィッシュの飼育管理は、定められたマニュアルに従ってARDスタッフが行う。
2018年度からは受益者負担となり、初めて水生動物実験施設を利用する際には、オリエンテーショ
ンを受講し、申請書の提出が必須である。また、飼育については別途申請書が必要。
ゼブラフィッシュ精子凍結
2018年度より新たに受益者負担のサービスとして開始した。系統保存等のために精子を凍結する。
凍結保存の場合、1系統3〜5匹の保存を推奨して行う。
トランスジェニック・ノックアウト・ノックイン ゼブラフィッシュ作製
インジェクション用プラスミドの構築からトランスジェニックフィッシュ作製さらには選別、系統維持までを行う。
プラスミド構築 ： インジェクション用プラスミドはTol2 elementを持ったベクター上にて構築する。また、改変BACs (Bacterial Artificial Chromosomes)を用いたトランス
ジェニック系統作成のためのベクター構築やCRISPR/Casシステムを使ったノックイン、ノックアウトのためのguide RNA及びCas9 mRNAの合成等。
インジェクション：構築したプラスミドや改変BAC・guide RNA/Cas9 mRNAをゼブラフィッシュ受精
卵に注入し、飼育室にて生殖可能時（約4-5ヶ月）まで管理する。
識
別： 陽性個体の選別はPCR法か各種トランスジェニックフィッシュとの掛け合わせによって行う。選別後、陽性個体を維持する。
系統維持： 陽性個体の系統維持、継代方法についてはARDスタッフと相談の上、実施願う。

機器利用支援施設には上記の技術支援を行うための各種機器類(行動実験,電気生理,イメージングなど)が整備されているが、これらの機器は申し出により自由に利用できる。利用に当たってはスタッフが指導あるいは補助を行う。

11

生体物質分析支援ユニット
生体物質分析支援ユニット(BMA)では、ラボから依頼された細胞および生体物質（タンパク質・核酸・アミノ酸など）の分析・解析やペプチド合成などを研究技術支援として、またテクニカルパー
ソネルサポートセクション (TPSS)のスタッフによる分子生物学実験、組織学実験、バイオイメージ
ング、ウィルスベクター作製などをカスタマイズ技術支援として提供する。さらに理研のメンバー
がいつでも利用できる共用実験施設の維持・管理および技術指導を担当している。共用機器コーナー(CUE)には、種々の研究に利用できる汎用性の高い研究機器、利用に専門技術が必要な研究機器、およびラボでは購入が難しい高額研究機器などを用途ごとに分けて設置している。これらの共用機器を円滑に利用するため、また生体物質分析についての基礎技術普及のために、保有の研究機器の原理とその応用や関連解析ソフトウェアについての講習会や最新の研究機器および器材などの展示会も開催している。

所内向けウェブサイト

http://common.riken.jp/rrd/cominstru/indexj.html

研究技術支援業務
BMAにおける研究技術支援の利用に際して利用手順
利用希望者は、当ユニットのホームページから希望する業務案内を読み、支援内容、使用機
器、費用などを確認ください。依頼には、「理研コアファシリティ管理システム R-COMS」を利用する。なお、必要に応じて担当者と実験計画についての事前打ち合わせを行う。
稼働日
理化学研究所の就業日に稼働する。機器のメンテナンス、公式行事、年末年始などで稼働を停止する場合は、emailやホームページにて適時連絡する。
解析データの保存
解析データは、原則として解析終了後5年間保管する（例外：一部の技術支援においては、ヒト由来試料の解析結果は保管しない。また5年以内でもラボが閉鎖する場合は、保管データの全てを消去する）。
成果発表にあたって
BMAによる研究技術支援で得られたデータなどを研究論文などに公表する際には、「方法」や「謝辞」に当ユニットを利用した旨を記述する。また特殊な分析・解析や合成を行うなど支援の貢献度が高い場合は、担当スタッフへの謝辞や共著者とする事も考慮すること。

12

DNA配列解析（プラスミド抽出・前処理反応・配列解析）
脳中央棟 N010/011
１．支援の内容
プラスミド抽出
植菌済の培地容器を受領し、一晩培養後にプラスミド抽出作業を行う。
抽 出 は Biomek i7 （ Beckman Coulter） を 用 い 、 N u c l e o S p i n
Plasmid抽出キット（Macherey-Nagel）によるアルカリ-SDS法お
よびシリカメンブレン法で行う。抽出フォーマットは96-wellタ
イプと8-wellタイプの2種類である。また、384 wellから96 wellへの分注作業も受けている。

Biomek i7(Beckman Coulter)

前処理反応（サイクルシークエンス反応）
プラスミドやPCR productなどをテンプレートとしてサイクルシークエンス反応を行う。GCリッチ・高次構造をもつ配列を含むサンプルの処理（アルカリ処理）やPCRプロダクトの精製処理（ExoSAP酵素処理）も受けている。
DNA配列解析（サンガー法）
サイクルシークエンス反応後のサンプルから、過剰なBigDye Terminatoを磁気ビーズCleanSEQ（Beckman Coulter）を用いて除去する。
そ の 後 、 DNA ア ナ ラ イ ザ 3 7 3 0 x l ( Applied
Biosystems) を用いて泳動を行う。

3730xl(Applied Biosystems)

DNA配列解析業務として、プラスミド抽出からDNA配列解析までの依頼が可能である。

2．支援の流れ：方法・結果
プラスミド抽出方法①① 植菌された培地を37℃、17時間培養。
② 遠心により集菌。
③ 菌体をResuspension Bufferに懸濁。
④ Lysis Bufferを加え溶菌。
⑤ Neutralization Bufferを加え中和。
アルカリおよびSDSにより変性した大腸菌ゲノムDNAおよびタンパク質は不溶物となる。（アルカリ-SDS法）⑥ 除去フィルターにより溶解液から不溶物を除去。
⑦ シリカメンブレンフィルターにプラスミドDNAを吸着。
⑧ Wash Bufferでシリカメンブレンフィルターを洗浄後、Elution BufferによりプラスミドDNAを溶出。

抽出プラスミドの収量

②

③

④

⑤

⑧

HEK293細胞

30

20

20

10

10

0

・DNA配列解析: 約800 bpの解析が可能
・培養細胞へのトランスフェクション

40

Recover DNA (mg)

Recover D N A (m g )30⑦

抽出プラスミドの用途

抽出プ ラ スミ ド の収量
40

⑥

0

50

5 0Elution volume (µL) 1 1 0
Elu tion Volu m e (µL)
110

例）
大腸菌 DH5α株から96-wellキットを用いて蛍光タンパク発現プラスミドpmCyan-N1を抽出。
Lipofectamine 2000（ イ ン ビト ロジェ ン）を 用 いて
HEK293細胞へトランスフェクションした（右図）。

13蛍光顕微鏡写真前処理反応（サイクルシークエンス反応）[反応液組成][サイクルシークエンス反応条件]

Sample (Template DNA + Primer)

5.0 µlBigDye Terminator v3.1

1.0 µl

5 x Sequencing Buffer

3.5 µlDeionized Distilled Water

10.5 µl

Total

20.0 µl

DNA配列解析[サイクルシークエンス反応物の精製][泳動結果]
ACGCCGGACTTGTCC
CTTGCGCGGAACGTAGAGGAG~

サイクルシークエンス反応により未反応BigDye
TerminatorをCleanSEQを用いて除去する。

泳動図（ABI3730xl）

SampleMagnetCleanSEQ
解析データ（解析ソフト：4 Peaks）

バイオアレイ解析（バイオアナライザ）
脳中央棟 S004
１．支援の内容
Agilent 2100バイオアナライザを使用して、各種サンプルのDNA、RNA解析を行う。
次世代シーケンス解析用のサンプルの品質チェック(QC)にも用いる。
2．支援の流れ：方法・結果
サンプル濃度RNA Nano Chip: 25-500 ng/ul,
RNA Pico Chip: 200-5,000 pg/ul
DNA1000 Chip: 0.1-50 ng/ul
高感度DNA Chip: 5–500 pg/ul
各ウェルにサンプルを1uL加える。
バイオアナライザーで泳動する。

結果： Total RNAチェック

自動的に18S、28S等からRIN(RNA Integrity Number：RNA品質の指標)を算出。
通常7以上(Max10)で実験に用いる。

14

遺伝子多型解析
脳中央棟 N010/011
１．支援の内容
フラグメント解析 *蛍光ラベルされた対象となるDNA断片をジェネティックアナライザ 3130xl（Applied
Biosystems）を用いて電気泳動し、移動度やサイズを検出する。

ジェノタイピング①前処理（ゲノムDNA抽出）
Agencourt DNAdvance Kit（ベックマン・コールター)を使用し、マウスあるいはラットの尾または耳からゲノムDNA抽出を行う。その他のサンプル（セブラフィッシュの尾やヒトの爪など）のジェノタイピングにも対応している。
②前処理（PCR） *蛍光標識プライマーを用い、目的DNA断片を増幅する。
③サイジング *3130xl により増幅DNA断片の泳動を行う。
④ジェノタイピング qPCR
マウステイルなどの生体試料から抽出したゲノムDNAをテンプレートとし、リアルタイムPCR装置を使用してジェノタイピングを行う。
* 解析条件が定まっていない場合は条件検討も行なっている。（有償）
2．支援の流れ：方法・結果
フラグメント解析
サンプル受領3130xl 泳動条件設定

3130xl 泳動
Gene A

96℃ 2 min
熱変性

→ On ice

PCR産物をラベルしている蛍光の種類
サイズスタンダードの種類、長さ
ラベリングキットなどによる泳動条件設定

Gene B
Gene C

ジェノタイピング①前処理（ゲノムDNA抽出）
サンプル受領＜例＞
尾
耳

サンプル処理

＜解析例＞
WT

WT

KO

KO

③サイジングPCR

3130xl 泳動

Template DNA 10 ng
Primer 0.2 μM eachTaq 0.25 U

マウス
2 - 3 mm
1 or 2パンチ②前処理（PCR）

Genome DNA
DNAdvance

Gene I

Wild typeGen eExon
I
A
Exon B
Exon C Exon D① B Exon② C Exon D
Exon AExon①② About 100 bp
A b ou t 1 0 0 b p
ExonExon
A A
Gen e IIGene II③① ①③
A b ou Aboutt 2 0 0 b200
p bp

Knockout
Heterozygous① 蛍光標識Fw d プ ラ イ マー（ 野生型、 変異型共通）② 非標識Revプ ラ イ マ ー（ 野生型）
③ 非標識Revプ ラ イ マ ー（ 変異型）

ジェノタイピング qPCR
①前処理（ゲノムDNA抽出）
サンプル受領＜例＞
尾耳④qPCR解析qPCR

サンプル処理Template DNA 50 ng
Primer 0.3 μM each
THNDERBIRD 10μl

マウス
2 - 3 mm
1 or 2パンチ

Genome DNA
DNAdvance

15

解析例
QuantStudio12K

遺伝子微量定量解析
脳中央棟 C011

１．支援の内容・標的遺伝子の発現量を定量
cDNAサンプル、プライマー、プローブ(TaqMan Assayの場合)、Master Mixを混合した後、PCR反応
で発現値を算出する。TaqMan Assay、SYBR Green Assayに対応。
・SNPのジェノタイピング
cDNAサンプル、プライマー、2種類のプローブ、Master Mixを混合した後、PCR反応でSNPを検出。
・マウスジェノタイピング
gDNAサンプル、プライマー、プローブ(TaqMan Assayの場合)、Master Mixを混合した後、PCR反応
で発現値を算出する。TaqMan Assay、SYBR Green Assayに対応。
・SYBR Green Assayの条件検討
ユーザーの作製したプライマーセットの非特異的産物の有無、濃度条件を検討する。
2．支援の流れ：方法
PCR反応条件(Default)

TaqMan Assay
2X Master Mix・・・1X
Forward Primer・・・900nM
Reverse Primer・・・900nM
Probe・・・250nM
Template・・・10-100ng

95℃ 95℃
15
sec

10
min

40 サイクル

95℃

95℃

15 sec15
sec

QuantStudio 12K(Applied Biosystems)
60℃

60℃

1
min

15
sec

アニール
＆伸長

Dissociation Stage(SYBR Green Assay)

50℃

SYBR Green Assay

2X Master Mix・・・1X
Forward Primer・・・500nM
Reverse Primer・・・500nM
Template・・・10-100ng

2 min
UDG
分解

変性

酵素
活性化

3．支援の流れ：結果
増幅曲線

標準曲線 (検量線)

基準線
対数増殖
期

検量線は、増幅曲線より得られたCt値とQuantityに入力した
標準サンプルの定量値の値を使用して作成する。

対数増殖期の中に引いた基準線との接点時のサイクル数をもとにCt値を算出する。

溶解曲線

Result Table

Results Table
Well

Sample Name

Detector Name

Reporter

Task

Ct

1

Control_1/100

GAPDH_MGB

VIC

Standard

25.7

1

2

Control_1/10

GAPDH_MGB

VIC

Standard

28.02

10

標準サンプル

3

Control_1

GAPDH_MGB

VIC

Standard

31.68

100

の定量値

4

Sample A

GAPDH_MGB

VIC

Unknown

28.37

11.02

検量線より

5

Sample B

GAPDH_MGB

VIC

Unknown

30.27

2.924

算出された

6

Sample C

GAPDH_MGB

VIC

Unknown

28.02

10

定量結果

Quantity

増幅曲線より算出されたCt値をもとに検量線から各サンプルのQuantityを計算。

解析例

解析例
GAPDH

Probe A
Probe Aの相対値

測定結果

反応後のPCR産物を熱処理し解離させ、その後冷却しアニールさせる。ゆっくり温度を上げてゆき、その間の蛍光をモニタリングする．非特異な産物が含まれると複数のピークが生じるので，産物の特異性を確認することができる。
(SYBR Green Assayのみ)

相対血(X)

測定結果(Y)

補正した定量結果(Y/X)

Sample A

6384

1

0.981

0.981

1

Sample B

8584

1.34

44.2

33

33.6

Sample C

7430

1.16

1.93 X 10 4

1.66 X 10 4

1.69 X 10 4

1. GAPDH（内部標準）の定量結果からRNA量の誤差を求める。
2. ProbeAの定量結果を１で求めた誤差で補正する。
3. 補正されたProbeAの定量結果をもとに、サンプル間の相対値を計算する。

16

次世代シーケンス解析 (前処理・シーケンス解析)
脳中央棟 S004
１．支援の内容

２．支援の流れ：ユーザーの手順

・前処理
Agilent社製SureSelectなどを用いて Genome DNA
からExonなど解析に必要な部分を濃縮し、次世代シーケンス用ライブラリー(Illumina用)を作製する。他のアプリケーションにも対応している。
(実績例：Whole Genome、ChIP-Seq、Methyl-Seq,
RNA-Seq、1細胞シーケンス[Quartz-Seq2]等)

連携先でシーケンスする場合
RRDと打ち合わせ

RRDでシーケンス
する場合
RRDと打ち合わせ

仕様決定
ライブラリー調製試薬購入

・MiSeqを用いたシーケンス解析
BMAでは、MiSeqを用いたシーケンスのみを行う。
Illumina用シーケンスライブラリーをMiSeqでクラスター形成、シーケンス、FASTQファイル作成をする。

サンプル調製(DNA・RNA等)

サンプル提出・連携支援 次世代シーケンス解析支援
打ち合わせからQCまでをRRDで行い、シーケンス
は外部委託する。NovaSeq、HiSeq Xに対応してい
る。

外部委託

次世代シーケンス
サービスへ

連携支援へ
外部委託はBMAより申し込み。
依頼の度に各研究チームに支払い請求書が送付される。

３．支援の流れ：方法・結果

事前打ち合わせ申込

・前処理

シーケンス試薬購入例) SureSelectを使用した、Exome解析

サンプルの提出• Genome DNA (3ug使用)• Covarisで断片化(150bp)

データ返却• アダプター付加• Sureselect(ビオチン化cRNAライブラリー）とハイブリダイズ(Exon領域)• ストレプトアビジンビーズで回収、濃縮• Indexを付加• サイズ確認、定量• シーケンシングへ

断片化装(Covaris)

次世代シーケンサー MiSeq

・シーケンス解析 (BMAでシーケンスする場合）• サンプルクオリティーチェック

・シーケンス解析 (連携支援でシーケンスする場合）• クラスター形成

・打ち合わせ時に使用するキット等を決める。
• シーケンス(*24時間)

・BMAでライブラリ調整。各種アプリケーションに対応。

• FASTQファイル生成(Exome、RNA-Seq、ChIP-Seq、Methyl-Seq等)
・QCはBioanalyzer、MiSeqを使用して行う。

• データ返却*150bpのPaired Run (V2試薬)の場合

・定量にはKAPAを使用。
・外部委託先でQC後にシーケンス

17

質量分析
脳中央棟 S002
１．支援の内容

２．支援の流れ：ユーザーの手順

各種化合物の質量測定
マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)法あるいはエレクトロスプレーイオン化(ESI)法を用いて、質量測定または精密質量測定を行う。

各種化合物の質量測定

タンパク質の同定・各種化合物の定量分析

修飾解析・定量分析
打ち合わせ

タンパク質の同定・修飾解析
タンパク質の酵素消化断片をnanoLCにより分離し、ESI法を用いてMS/MS測定をすることによりタンパク質同定または修飾解析を行う。四重極Orbitrap型質量分析計を用いた高精度同定・修飾
解析および網羅的比較定量(安定同位体ラベル化法、
ラベルフリー法)も行う。

（消化キット受取）分析条件の検討

消化前処理方法の検討

サンプル提出～ 1 day～ 2 weeks～ 1 week

データ受取りダーゲットタンパク質・低分子化合物の定量分析
三連四重極型質量分析計を用いた Multiple Reaction Monitoring (MRM) 測定によるターゲットタ
ンパク質および各種低分子化合物の高感度定量を行う。絶対定量には、安定同位体ラベルした内部標準物質を用いることを推奨している。
３．支援の流れ：方法・結果
各種化合物の質量測定
MALDI 測定

マトリックスの選択

ESI 通常測定

キャリブレーション

ターゲット上でのサンプルとマトリックスの共結晶化

キャリブレーション

測定(脱塩)
ナノスプレーチップへのサンプルの注入

測定（BioPharma Finderによる解析）

QExactive
・検出感度は、fmol-pmol オーダーが目安である。
・塩、界面活性剤等の使用は極力避ける。必要に応じて、濃縮脱塩チップによる処理を行う場合がある。

autoflex

タンパク質の同定・修飾解析
サンプル前処理（ろ過、または脱塩）

LC/MS の条件決定

LC-MS/MS 分析

DB 検索(MASCOT and/or Proteome Discoverer)（各種修飾の詳細解析）

Comparison of Specific and Ubiquitous Protein Expressions among Mouse Brain Regions,Cerebral Cortex (CTX), Hippocampus (HIP), and Cerebellum (CER)
LC-MS/MS Analysis

Protein Identification

Total of 4587 proteins were identified from
triplicate samples of the three brain regions.

・酵素処理は専用の実験スペース(N005)の利用が望ましい。
・データベース検索を行う際に、サンプルの由来や生物種情報が必要となる。

18

Vanquish Neo + QExactiveタンパク質の網羅的比較定量分析
脱塩

LC/MS の条件決定-Stable isotope labeling method-

データ解析(Proteome Discoverer)-Label-free method (LFQ)Comparison of Protein Expression
between CTX and CER
Volcano Plots

MS/MS spectrum (TMT labeling)

*

DB 検索
(MASCOT and Proteome Discoverer)

LC-MS/MS 分析

Sequence Information
Quantitative Information*

127N 127C

126 127N 128N 129N 130N 131N
127C 128C 129C 130C 131C

Vanquish Neo + QExactive
・iTRAQ/TMT, SILAC, 18O などを用いた各種安定同位体ラベル化法、ラベルフリー法を用いることで、多検体間の網羅的比較定量分析が可能である。

ターゲットタンパク質・低分子化合物の定量分析-Multiple Reaction Monitoring (MRM)法初期 Transition
リストの作成LC/MS の条件決定

Transition リストの完成

MRM 分析 (1)Methionine cycle metabolites
Cystathione
CholineBetaineIntensity

Intensity

Native peptide

Isotope-labeled peptide(Internal Standard)

SAM
Methionine
SAH

x
1/10

0
Retention time (min)データ解析(Pinpoint or TraceFinder)

Vanquish UHPLC + TSQ Altis- Quantitation using MRM method Peptide (angiotensin-II)*

MRM 分析 (2)123Retention time (min)

5MTHF
x 100

4

Easy-nLC 1200 + TSQ Vantage

・定量対象ペプチド・化合物のみを選択的に検出をするため、大変感度の高い手法である。
・タンパク質定量の場合、BMAにおいてTransitionリストを作成済みのものはメソッド開発をせず、すぐに定量可能。
・新規化合物の定量を行う際には、ユーザーによる試料の前処理方法の検討やBMAによるUHPLCとTSQの条件検討（Transitionの決定を含むMethod 開発など)が必要である。
* Modified from user’s publication: Mol Cell. 2015 Jun 18;58(6):1015-27.

19ペプチド合成脳中央棟 S003
１．支援の内容ペプチド合成自動ペプチド合成装置を用いて固相合成法によりペプチドを合成する。品質は逆相液体クロマトグ
ラフィーおよび質量分析(MALDI-TOF/MS)により測定する。粗ペプチドまたは凍結乾燥した精製ペプ
チドを依頼者に提供する。ペプチド精製のみの依頼も可能。
修飾
キャリアタンパク質(KLHまたはBSA)を架橋する事により、抗原ペプチドを作製する。
N末端 : Free, Ac, Fmoc 等
C末端 : Free, NH2, Resin 等
特殊合成
31残基以上の長鎖ペプチド、250μmol合成、ペプチドのビオチン化、蛍光化、環状化、または非天然アミノ酸、リン酸化アミノ酸などを多数含むペプチドを合成する。
2．支援の流れ：方法・結果
固相ペプチド合成法

合成
自動ペプチド合成装置を使用し、C末端側から順番にアミノ酸を伸長して、ペプチドを合成する。
合成スケールや配列により装置を使い分ける。
Liberty Blue

433A

MultiPep CF & MicroColumn

ペプチド分析
目的のペプチドは、HPLCで分離・分取して精製品とする。 粗ペプチドおよび精製ペプチドの品質は、HPLCとMALDI-TOF/MSを用いて確認する。

Crude peptide
Crude peptide
HPLC

TargetMS

TargetTargetTargetPurified peptide
Purif ied peptide
HPLC

Chromaster
HPLC conditions:
Column, Inertsil ODS-3 (250 x 4.6 mm I.D.)
Mobile phase, 1-51% CH3CN (contg. 0.1% TFA)
Flow rate, 1.0 mL/min

microflex
Column temp., 25℃
Analytical time, 50 min
Detection, UV at 215nm

20MSタンパク質精製
脳中央棟 C013

１．支援の内容

2．支援の流れ：方法・結果

抗体精製
AKTA(Cytiva(旧GEヘルスケア))を用いて、ペプチド抗体の精製を行う。
希望の精製法で精製を行う。

生体内タンパク質の精製

生体試料（脳、細胞、血清など）から特定のタンパク質精製を行う。タンパク質
は精製データと共に返却する。
標的タンパク質の精製
組み換えタンパクの分離、His-tag融合
タンパク、GST融合タンパク、IgG抗体、セリンプロテアーゼ精製も可能である。
AKTA Explorer 10

アミノ酸分析
脳中央棟 C013
１．支援の内容

2．支援の流れアミノ酸組成分析や神経伝達アミノ酸およびモノアミンの定量分析を高速液体クロマトグラフ装置とそれぞれに最適な手法と検出器を組み合わせて行う。クロマ
トグラムと分析結果を返却する。脳透析液中のアミノ酸やモノアミン測定にも対応する。

蛍光法-神経伝達アミノ酸分析
電気化学検出法-モノアミン分析
サンプルの受け取り

神経伝達アミノ酸分析

・ニンヒドリン法- アミノ酸成分分析

モノアミン分析

DL-アミノ酸分析

ポストカラム法を用いて、遊離アミノ酸、アミノ
糖、タンパク質の加水分解物の分析を行う。
電気化学検出法

蛍光法(OPA法)

・蛍光法-神経伝達アミノ酸分析(OPA法，カラムスイッチング法)

分 析

プレカラム法を用いて、脳組織抽出液、髄液、血液、および 脳透析液からグルタミン酸、アスパラギン酸
およびGABAなどアミノ酸の定量分析を行う。
・電気化学検出法-モノアミン分析

1day 〜 1 week

データ返却
神経伝達アミノ酸分析

電気化学検出法を用いて、脳組織抽出液、髄液、血液、および脳透析液からモノアミン (ノルアドレナリン、ドーパ
ミン、セトロニン)とその代謝物などの定量分析を行う。
・神経修飾物質の分析
新規な化合物の分析メソッド開発を行い、定量分析を行う。

ニンヒドリン法
アミノ酸成分分析

蛍光法 神経伝達アミノ酸分析(OPA法、カラムスイッチング法)

電気化学検出法 モノアミン分析

21

5-HT

3-MT

HVA

ISO

DA
5-HIAA

NA

NM

MHPG

Epi

DOPAC

電気化学検出法-モノアミン分析

自動細胞分取分析
脳中央棟 S008
１．支援の内容
・混在した細胞群の中から、蛍光標識された特定の細胞をセル
ソーター FACSAria (BD社製）を用いて分取分析し、分取した細胞を返却する (必要に応じ、蛍光顕微鏡で撮像した画像
データも返却する）。1度に4種類の細胞集団を分取することが可能である。

384 well plate
single cell sorting

・一細胞解析に有用なインデックスソーティングに対応可能。
・分取後の純度など得られたデータは、フローサイトメトリー(FCM)解析専用ソフトウェア FlowJo（BD社製）にて解析する。
Sasagawa et al. Genome Biology 19:299, 2018

2．支援の流れ：方法・結果
脳組織を用いたFCM用サンプル調整の流れとYFP発現マウスを用いたFCM分取分析例（文献より転載）

脳から組織の切り出し*可能であれば白質を除く

1-2 mm 角に切断しチューブに回収

37℃振とう恒温槽でパパイン処理

ピペットで粉砕
2回フィルターメッシュ

ピペットチップで粉砕

フィルターメッシュ

よう化プロプヂウム溶液、ヘキスト溶液添加

A: Hoechst 33342による核染色, B: 散乱光の2パラメータードットプロット, C: PIヒストグラムデータ, D: 前方
散乱光とYFPの2パラメータードットプロット（プロット内の数値は各細胞集団の割合）

フローサイトメトリー解析および分取

E:凍結組織切片像(大脳皮質), F: 断片化した組織片, G:分取前の明視野画像, H:分取前の蛍光画像, I:分取後の明視野画像, J:分取後の蛍光画像, K: E, Fの張り合わせ画像 (定規A:200μm, B-G: 20μm)文献）生体の科学 62(2) 165-170, 2011

実験器具洗浄脳中央棟 S001

１．支援の内容

・CBS脳中央棟：
研究に使用したガラス器具の洗浄を行う。
実験をよりスムーズに進められるように乾熱滅菌、高圧蒸気滅菌（オートクレーブ)も行う。
・CBS全棟:
ピペットのチップ詰め替えおよび高圧蒸気滅菌(オートクレーブ)を行う。

2．支援の流れ：方法・結果① 洗剤液を用いて超音波洗浄を行う。洗剤には、無リン中性洗剤(2%スキャット20X-N)を使用する。
② 手作業(市水)に続き、自動洗浄機による流水水洗(市水→セントラル純水*)を行う。
*セントラル純水とは、活性炭→逆浸透膜(ROモジュール)→イオン交換(EDI装置)処理した純水である。

③ 洗浄した器具類を乾燥させ、アルミホイルで口栓をする。
④ 乾燥後、以下の何れかの条件で滅菌を行う。
註：熱処理を必要としない場合は、申込時に知らせてください。
22

生体物質分析支援業務において使用している主要機器
2024年7月1日現在
機器名

メーカー

型番

設置室

DNA配列解析DNAシーケンサー

アプライドバイオシステムズ

3730xl

脳中央棟 N011

自動分注ロボット

ベックマン・コールター

Biomek i7

脳中央棟 N010

遺伝子微量定量解析
リアルタイムPCRシステム

アプライドバイオシステムズ

7900HT, QuantStudio 12K

脳中央棟 C011

遺伝子多型解析
遺伝子解析システム

アプライドバイオシステムズ

3130xl

脳中央棟 N011

バイオアレイ解析
バイオアナライザ

アジレント

Agilent 2100 Bioanalyzer

脳中央棟 S004

次世代シーケンス解析
次世代シーケンサー

イルミナ

MiSeq

脳中央棟 C011

質量分析
MALDI TOF/TOF型質量分析装置

ブルカーダルトニクス

autoflex

脳中央棟 S002

三連四重極型質量分析装置
Orbitrapフーリエ変換質量分析装置
微量分析用高速液体クロマトグラフ

TSQ Altis/Vantage
サーモフィッシャー
サイエンティフィック

超高速液体クロマトグラフィー

Q Exactive
EASY nLC1200/Vanquish Neo

脳中央棟 S002/N008

Vanquish UHPLC

ペプチド合成ペプチド合成機

サーモフィッシャー
サイエンティフィック
CEM Corporation

433A Peptide Synthesizer
Liberty Blue
MultiPep CF
L-7450他
Chromaster, UV702他
microflex

脳中央棟 S003

MALDI TOF型質量分析装置

日立ハイテクノロジーズ
GLサイエンス
ブルカーダルトニクス

タンパク質精製システム

CytivaAKTA explorer10S Frac-950,
AKTA prime

アミノ酸分析
高速アミノ酸分析計

日立ハイテクノロジーズ

L-8900

島津製作所
エイコム
エイコム

LC-10Avp
700 シリーズシステム
HITEC-500

ベクトン・ディッキンソン

FACSAriaⅡ SORP,
脳中央棟 S008
FACSAria SORP,FACSymphony A3

高速液体クロマトグラフ

高速液体クロマトグラフ

脳中央棟 C013

脳中央棟 C013
脳中央棟 N004

自動細胞分取分析
フローサイトメトリーシステム

23テクニカルパーソネルサポートセクション (TPSS)BMAでは、2018年10月より新たにカスタマイズ技術支援を提供するテクニカルパーソネルサポート
セクション(TPSS)を発足し、専門技術員を配置した。本支援では、従来の研究技術支援よりもさらにラボの要望に寄り添った技術サポートを目指している。例えば、ラボにおけるルーティン実験では、ラボの実験プロトコールを用いて実験を代行する。また、ラボに備えがない実験技術ではアドバンスド技術支援として、その実験技術に精通したTPSSスタッフが実験および測定装置のオペー
レーターなどを行う。さらに、ラボが新たに開発した技術を他のラボへ普及するために、ラボから技術移転を受けた新規の支援を他のラボへ提供することも試みる。
所内向けホームページ http://common.riken.jp/rrd/cominstru/subaJpn/index/tpssj.html
TPSSによるカスタマイズ技術支援の利用に際して利用手順
1.初めてTPSSによる支援を利用する場合は、利用者とTPSSの担当者およびBMAユニットリーダーが参加する支援内容や実験スケジュールなどを含む実験計画の打ち合わせから開始する。
2.依頼には「理研コアファシリティ管理システム R-COMS」を利用する。アップロードする申込書は、上記のウェブサイトからダウンロードが可能である。
稼働日
完全登録制で、理化学研究所の就業日に稼働する。
解析データの保存
解析データは、原則として解析終了後5年間保管する。但し一部の技術支援においては、ヒト由
来試料の解析結果は保管しない。また5年以内でもラボが閉鎖する場合は、保管データの全てを消去する。
成果発表にあたって
TPSSを用いて得られたデータなどを研究論文に公表する際には「方法」や「謝辞」に当支援を利用した旨を記述する（ページ3参照）。また研究成果への貢献度が高い場合は、担当スタッフへの謝辞や共著者とする事も考慮すること。

技術支援業務項目
分子生物学実験• 新規プラスミドの作製と増幅
組織学実験• 脳定位固定下でのAAVマイクロインジェクション
• 組織染色および画像撮像
灌流固定、包埋、
免疫染色、in situハイブリダイゼーション、
LacZ、Nissl、CO、Hematoxylin染色など• デジタルスキャナおよび顕微鏡を用いた観察
バイオイメージング• TissueCyteを用いたマルチセクショニング画像撮影
ウィルスベクター作製• アデノ随伴ウィルスベクター作製• レンチウィルスベクター作製• 狂犬病ウィルスベクター作製

24

TPSS: 分子生物学実験 (プラスミドの作製と増幅)
中央棟 C010

１．支援の内容・プラスミド作製

新規プラスミドの構築をサポートする。元になるプラスミドDNAを提出してもらい、希望の方法で遺伝子の組換え、再構築をおこなう。デザインからの相談も受け付ける。
・プラスミド増幅
大腸菌からプラスミドDNAを必要量増幅・精製する。
精製はQIAGENのキットを使用。カラムサイズ別の収量の目安は以下の通り。
Miniprep：～20μg Midiprep：～100μg Maxiprep：～500μg

2．支援の流れ：方法・結果＜手順＞
依頼者から提出してもらった挿入遺伝子とベクターを依頼者の希望した組換え方法で組換える↓
依頼者の希望した方法でセレクションをおこなう↓
必要に応じてシークエンス解析をおこなう（BMA技術支援DNA配列解析に依頼）↓希望した収量に増幅・精製する↓
希望があればグリセロールストックを作製する↓
DNA濃度を測定↓
作業報告書と最終産物の受け渡しをする

TPSS: 組織学実験（組織染色および画像撮像）
中央棟 C005
１．支援の内容
1. 灌流固定
2. 切片作製（凍結サンプル、未凍結サンプル）
3. 各種染色(免疫染色、In situ ハイブリダイゼション,Nissl,Hematoxylin/Eosin染色など）
4. スライドガラスへのマウンティング
5. 観察、撮影(RRD CUE デジタルスライドスキャナー等使用）
2．支援の流れ：方法・結果<切片作製時の様子>＜手順＞
依頼者から受け取ったサンプル、試薬、プロトコールを使用し、中央棟C005で実験、もしくは依頼を受けた研究室で実験。
＜染色例＞

YAMATO
リトラトームREM-700

フリージングミクロトーム

Nissl 染色

25

HE 染色

TPSS: 組織学実験（AAVマイクロインジェクション）
中央棟 N815 , 遺伝学棟311f
１．支援の内容

Angle Two Dual Stereotaxic/ Mouse(Leica) を使用し、マウスの脳内にAAVインジェクションを行う。( AAV
以外のウイルスベクター、神経ト
レーサー、薬物などの注入も可能）

2．支援の流れ：方法・結果＜手順＞
ガラスキャピラリー作製 (Sutter,Micropipette puller P-97）↓

テフロンチューブ片側にガラスキャピラリーを装着し、Angle Twoのアームにセット。反対側をハミルトンシリンジに装着し、シリンジポンプにセットする↓

マウスを麻酔にかけ、脳定位固定装置に固定↓

マウスの頭部を切開し、頭蓋骨を露呈↓

Angle Two を起動する↓

顕微鏡下で確認しながら、脳の高さを調節↓

Targetの位置を確認し、頭蓋骨に穴を開ける↓

AAVをキャピラリー先端から吸い上げ、Targetに合わせる
↓

AAV注入
↓

キャピラリーを引き抜き、縫合

Leica Angle Two Dual Stereotaxic/ Mouse↓

麻酔を止め、固定装置から外し、ケージに戻す

TPSS: バイオイメージング (TissueCyteを用いたマルチセクショニング画像撮影)
中央棟 C005, C107
１．支援の内容

2．支援の流れ：方法・結果

TissueVision社 TissueCyte 1400FC を使用し、マウス、ゼブラフィッシュなどの小動物の脳を高性能ビブ
ラトームでXY方向に自動セクショニングしながら、各断面を二光子レーザー顕微鏡で広範囲の蛍光画像として撮像を行う。

＜手順＞
脳ブロックの作製（包埋）脳ブロックを装置にセット

Ragan, T., et al. (2012). Serial two-photon tomography for
automated ex vivo mouse brain imaging. Nat. Methods 9, 255–258.

撮像の各種条件設定

画像撮像

画像処理（スティッチング）
TissueCyte
1400FC

画像データおよびサンプルの返却＜撮像例： B6.Cg-Tg(Thy1-YFP)HJrs/J ＞
TissueCyteスティッチングソフトウェア
3D 構築(Image J )26

TPSS: ウイルス作製実験
中央棟 C010

・アデノ随伴ウイルスベクター (AAV)
2．支援の流れ：方法・結果

１．支援の内容

・カスタムメイドのAAVを提供する（P1レベル）。 AAV作製実験は、安全キャビネット内で操作を行う。
・AAV作製に関する技術相談に応じる。
培養細胞とプラスミドの準備
依頼者が希望するAAVの受託作製を行う。
↓
培養細胞にプラスミドを導入し、AAV産生
a.AAVのセロタイプ↓
b.AAVに発現させる遺伝子
培養上澄液および細胞に含まれたAAVの回収
c.力価 (gc/mL)と分量(µL)↓
PEGによって、上澄液の濃縮※AAVに発現させる遺伝子を持つプラスミドは、↓依頼者が用意する。
超遠心によってAAVの精製と濃縮
希望するセロタイプによっては、必要なプラ↓
スミドを依頼者が用意する。
AAVの力価測定（qPCRまたはdPCR)

・狂犬病ウイルスベクター (RV)
１．支援の内容

2．支援の流れ：方法・結果・カスタムメイドのRVを提供する（P2レベル）。
・RV作製に関する技術相談に応じる。

RV作製実験は、安全キャビネット内で操作を行う。

RV作製支援を行うために、依頼者の状況を確認
A. 希望しているRVを作製するために必要なプラス
ミドと細胞を取得しているか
B. RVを使用する実験の承認を得ているか- 理研所内の遺伝子組換え実験申請書- 承認済みの大臣確認実験申請書（または上記と同等の資格の取得）

培養細胞とプラスミドの準備↓
培養細胞にプラスミドを導入し、RV産生↓
新しい培養細胞を用いてRVの増幅↓目的の外套タンパク質を発現している培養細胞にRVを投与（外套タンパク質の変更）↓
超遠心によってRVの精製と濃縮↓
RVの力価測定

依頼者が希望するRVの受託作製を行う。
a.RVの株および外套タンパク質
b.RVに発現させる遺伝子
c.力価 (IU/mL)と分量(µL)※全ての培養細胞とプラスミドは、 依頼者が用意する。

・レンチウイルスベクター (LV)
2．支援の流れ：方法・結果

１．支援の内容

・カスタムメイドのLVを提供する（P2レベル）。 LV作製実験は、安全キャビネット内で操作を行う。
・LV作製に関する技術相談に応じる。
培養細胞とプラスミドの準備
依頼者が希望するLVの受託作製を行う。
↓
培養細胞にプラスミドを導入し、LV産生
a. LVの外套タンパク質↓
b. LVに発現させる遺伝子
培養上澄液に含まれたLVの回収
c. 力価 (gc/mL)と分量(µL)↓
超遠心によってLVの精製と濃縮↓
LVの力価測定（RT-qPCRまたはdPCR)※全てのプラスミドは、 依頼者が用意する。

27

共用実験施設
BMAでは共用実験施設として、脳中央棟B1Fおよび1Fに設置した共用機器コーナーの維持・管理、および施設と共用機器利用に関する初期教育や利用説明を行っている。

共用機器コーナー（CUE）

所内向けウェブサイト
http://common.riken.jp/rrd/cominstru/subaJpn/index/indexcomj.html

１．支援の内容
脳中央棟に共用機器コーナー(CUE)が設置されている。ここには汎用あるいは専門性の高い共用機
器がその用途によりまとめられ、整備されている (B1F:10室、1F: 1室）。
利用はオンラインによる予約制であり、利用者登録をするとこれらの実験室にアクセスし、共用機器と作業スペースを利用できる。作業スペースには、シェーカー、パーソナル遠心機、ボルテック
スミキサーなど汎用小型機器も用意されている。

２．ユーザーの手順および支援の流れ
・利用者
利用者は、理研IDカードを持ち、管理者であるRRD生体物質分析支援ユニットリーダー（ 以下「UL」）が許可した者とする。
・利用申請の手順
利用には、R-COMS（理研コアファシリティ管理システム）のRRD/BMA_共同機器コーナー(CUE)利用登録（技術支援ID: WC-rbCE-0041）より共用機器コーナー利用登録が必要がある。また利用開始にあたり、施設管理担当者によるガイダンスを実施する（原則として毎週木曜日）。
なお、安全管理に特別な注意を払う必要がある実験を行う場合は、事前に安全管理部への手続きを
すること。
・利用期間
利用申請者は、新規申請の承認日より次年度の年度更新承認日の前日まで利用を許可される。
年度更新手続きはBMAからラボの予算管理者および利用者に連絡する。
・利用条件
１． 承認後、利用者は同施設にあるすべての機器を利用できる。ただし、安全管理に注意を払う必要のある実験を行なう場合は、安全管理部へ申請又は届け出を行い、それが承認又は受理されている必要がある。また、実験実施にあたっては、各自で該当する安全管理上のルールを厳守することが求められる。詳細は利用登録申請についてのHPを参照。
２． 機器は利用者自らが操作する（機器の利用説明および維持管理は、BMAの機器アドバイザーが担当する）。機器利用者は機器が共同利用であることを認識し、各機器の利用マニュアルに従って利用すること。一部の機器は機器アドバイザーあるいはメーカーによる初期講習が必要である。詳細は機器アドバイザーに相談すること。
３．利用は年間登録制(有料)である。また、年間保守契約を結んでいる機器や高価な共用消耗品を用意している機器に関しては別途受益者負担金を課している。その他の利用料が無料の機器に関しては、試薬などの消耗品は利用者のラボ負担となる。
４．各実験室には、サンプル調製等の作業スペースが設置されている。また、使用中の試薬や溶媒の一時保管が可能である。ただし、実験廃棄物は利用者に各ラボへ持ち帰ってもらう（クロマ
ト分析の廃液、P2/レベル2実験の培養液廃液など例外を除く）。
５．実験室内にあるPCには各自のデータを保存せず、BMAが用意した記録媒体でラボへ持ち帰る。その記録媒体は必ずWindows PCで初期化して返却すること。
６． 機器の故障があった場合は、速やかに担当機器アドバイザーに連絡すること。故障の原因が明らかに利用者にある場合は所属ラボに弁償してもらう。

28

・利用時間制限はない。B1Fの各実験室の鍵はキーボックスで、1Fの各実験室の鍵はIC錠によってよって管理されている。
・利用予約
機器利用はオンライン予約制である。理研コアファシリティ管理システム (R-COMS)を用いて（https://riken.simprent.jp/）、事前に利用予約すること (実験室内の共用PCでも予約･変更可能)。
・利用記録
利用者は各機器に備え付けのノートに必要事項（利用者名、ラボの略名など）を記載すること。
1年以上全く利用のなかった機器は、CUEから除外する対象となるので注意する。

３．実験室名2023年4月1日現在

・分子生物学実験室（N002）
超微量分光光度計、バイオシェカー、安全キャビネットが整備され、生細胞イメージング装置や遺伝子導入装置などを用いたP1、P1A（C.elegansに限る）、P2レベルの遺伝子組換え実験が可能である。
・遺伝子定量解析室（C011）
リアルタイムPCRシステムをはじめ遺伝子を微量定量するための装置や卓上型次世代シーケンサーが整備されている。
・P2/レベル2実験室（S009）
遺伝子組換え実験P1、P2レベルおよび微生物等取扱レベル１、レベル２のサンプル調整ができる。
また、組み換え体やウィルス産生細胞などの長期培養が可能である。
・組織標本作製室（C004）
自動あるいは手動でパラフィン包埋から切片作製まで行なえる。凍結ミクロトームや遺伝子銃も整備されている。
・画像撮影・解析室 #1（N003）
ベンチトップ型の蛍光顕微鏡と共焦点顕微鏡やスライドスキャナーなど汎用な画像解析装置が整備されている。ゲルやメンブレンなどのUV、蛍光、および化学発光を検出するイメージング装置もある。
・画像撮影・解析室 #2 （C107, 1F）
高倍率の撮像やタイリングが可能な共焦点レーザー走査型顕微鏡が整備されている。
Neurolucidaもここで利用できる。
・超解像顕微鏡室 #1（N005-1）
STED光による超解像イメージングが可能な共焦点レーザー顕微鏡が整備されている。高感度検出器 (HyD)と自由な波長で励起できるホワイトライトレーザーなどが利用できる。
・超解像顕微鏡室 #2（C012-1）
高速ライブセルイメージングが可能なスピニングディスク型超解像共焦点顕微鏡と格子構造照明
超解像顕微鏡が整備されている。CO2インキュベータとクリーンベンチも利用できる。
・クロマト分析室（N004）
各種液体クロマトグラフィーが整備されている。神経伝達モノアミン一斉分析、高感度ドーパミ
ン・セロトニン分析、アミノ酸（グルタミン酸、GABA）およびアセチルコリンの分析ができる。
タンパク質やペプチドの分取・分析も可能である。
29

・生化学実験室（N005）
マイクロプレートリーダー、凍結乾燥機、濃縮遠心機など、生化学研究に必要な汎用機器が整備されている。 Biacore、NanoSightなどの目的が特殊な装置もある。
・フローサイトメトリー室（S008）
フローサイトメーター (FCM)と解析ソフトウェア、FCM用のサンプル前処理が可能な自動磁気細胞分離装置が設置されている。室内には、BMAの技術支援専用の機器もある。
・その他利用可能な機器
CBS共用機器として質量分析室（C308-2）、マイクロダイアリシスサンプリング機器など、共用機
器コーナー以外で利用可能な機器もある。
<<共創ラボのメンバーが理研内で利用できる共用機器のリスト>>

30

31

32

機能的磁気共鳴画像測定支援ユニット
機能的磁気共鳴画像測定支援ユニットは７テスラと３テスラのヒト用磁気共鳴画像装置を備え、脳神経科学研究センター（CBS）を始めとする理研内のラボに対して、ヒト及び動物を非侵襲的に計測する実験の技術支援を行っている。MRI実験施設では主に行われているfMRI実験に加えて、DTI,
MRA, MRSなどの測定を行うことができ、EEGとの同時計測も可能である。各種刺激提示装置（プロジェクター、イヤフォン、電気刺激など）が導入されており、多様な要求に応え得る実験環境を提供している。必要に応じて、被験者の状態（心拍や呼吸、両眼の眼球運動及び瞳孔径、筋電位、ボタン押し反応など）および刺激提示タイミングと傾斜磁場波形を、MRI装置が発生する撮像タイミ
ング信号と合わせて１つのデータとして記録し、MRIデータの後処理に活用することができる。当ユニットは、パルスシーケンス、解析方法、実験補助装置などについて独自に開発を行っており、
高空間分解能実現のためのマルチショットEPI撮像法、呼吸や拍動の信号への影響の除去、バイト
バーによる頭の動きの抑制などが既に利用可能である。特に未処理データであるk空間データを起点としてベンダーの処理に寄らない補正処理及び画像化処理を行うソフトウェア、各種データ可視化ソフトウェアの開発を進めており、利用者は、目的に応じた最新の技術を使った実験を実施することができる。また理研外部の研究者によるMRI装置を使った実験を可能にするため、受託試験制
度を設けている。

MRI装置仕様項目

3T MRI

7T MRI

製品名

MAGNETOM Prisma

SIGNA™ 7.0T

製造元

SiemensGE

静磁場(T)

2.89

7最大傾斜磁場強度(mT/m)

80

100

最大スルーレート(T/m/s)

200

200

受信RFチャネル数64

64

送信RFチャネル数2

8

ボディRFコイル

有無ヘリウム消費(L/month)002015年3月

2023年4月

導入時期

周辺機器
•
•
•
•
•
•
•

プロジェクター WUX5000 (Canon)
LCDゴーグル NNL社
音声刺激装置
生体信号測定装置（心拍、呼吸、他）
MRI対応EEG装置
ボタン応答装置
光ファイバ温度計

•
•
•
•

33

MRI室内用メガネ
バイトバー頭部固定装置
刺激提示用コンピュータ
アナログ信号記録用コンピュータ

共同研究と受託試験制度
理研外部ユーザーが利用する手段は２つある。理研内部の研究室との共同研究契約を締結した上で理研内部の実験計画として計測を行うか、受託試験制度を利用して計測を行うかのいずれかである。
後者の場合はデータ取得のみのサービスとなる。特にヒトを対象とする受託試験の場合、理研外部で倫理審査を受けていただく必要がある。 また、すでに備わっていない実験器具を利用する場合
は、安全性の審査が必要になる。
共同研究の手順
当ユニットを含む理研内のラボと実験について話し合いを行い、双方の合意が取れた上で、双方の施設にて共同研究計画を立ち上げる。ヒトを対象とする計測の場合、理研内部の倫理審査を受けることになる。予算の種類によってはご利用いただけない場合があるので、使用料支払いについて明
確にしておくことが重要である。
受託試験制度利用の手順
まず当ユニットにご相談ください。計測内容によってはご利用できない場合があり、プロジェクトが実施可能と判断された場合は、受託試験申請を行っていただく。計画内容に従い料金を支払い、実験開始、計画された全ての実験後、計測データをお渡しした時点で終了となる。

34

電子顕微鏡技術支援ユニット
電子顕微鏡技術支援ユニットは、電子顕微鏡を主な解析ツールとしており、シナプス結合や細胞内小器官の微細構造に関する研究を支援するための研究環境を提供している。専門知識と技術を持ったスタッフは、研究チームの要望を事前に議論・相談することで十分理解し、最適な研究方法の提案や、技術的なアドバイスを行う。また共用実験施設の研究機器の維持・管理や、研究技術の普及支援として、教育セミナーを開催している。
研究技術支援業務
電子顕微鏡技術支援ユニットは以下の技術支援を行っている。

電子顕微鏡
支援の内容
電顕観察用組織作製：脳や臓器などの生物試料を、化学固定し、金属染色を施し、樹脂に包埋する。
また、微細構造保持をよりよくするため、生の組織をHigh-Pressure Freezingし、樹脂置換し、包埋する手法も可能である。事前打ち合わせを行い、研究プロジェクト毎に、最適な組織処理方法の選択や支援などのサポートを展開する。

電子顕微鏡a) FIB-SEM（Focus Ion Beam-走査型電子顕微鏡）
FIBで薄くミリングして現れた新しいブロック表面をSEMで画像撮影する。この作業を繰り返し、
自動で連続電顕画像データを獲得する。作業は全自動で、切削厚が薄く設定できることから（> 4nm）高精細な再構築画像が得られる。効果的にミリングできる深さは100 µm程度であるため、100
x 100 µm程度のエリアの撮影が可能である。観察部位の試料は観察と同時に消失する。
b) FE-SEM
ウルトラミクロトームで切削した連続超薄切片を、連続性を保ったままウエハーあるいはテープに回収し、SEMでROIを連続撮影する。観察できる領域が広く、視野を変えて何度でも再観察できる。切片の厚さは> 40 nmである。
連続超薄切片画像の解析：NIH-image、VAST-Lite、Amiraなどを使い３次元再構築法などの画像解析法を指導する。

共用実験施設電子顕微鏡技術支援ユニットは、共用実験施設として、脳中央棟B1Fおよび1Fに設置した共用機器の維持・管理、および施設と共用機器利用に関する初期教育や利用説明を行っている。
機器リスト
機器名

メーカー

型番

FIB-SEM

ThermoFisher

Helios 5

FE-SEM日本電子

IT-800Ultramicrotome

Leica

ARTOS-3D

ATUM

RMC

ATUM

Ultramicrotome

Leica Microsystems

UC-6, FC-6

高圧凍結装置Leica Microsystems

EM ICE

光・電気刺激ユニット

Leica Microsystems

35

附録
RRD管理の実験施設配置図

脳遺伝学棟3階： 動物実験施設（マウス、ラット、ウサギ、胚操作室、行動解析室）

Vivarium Area (P2A)
P2A対応動物実験施設

脳遺伝学棟2階： 動物実験施設（マウス、ラット、行動解析室、ケージ洗浄室）

36

脳中央棟８階： 動物実験施設（マウス、行動解析室、検疫室）

脳中央棟９階： 動物実験施設（マーモセット）37

フロンティア・ライフサイエンス（FLS）棟： 動物実験施設（マーモセット）

脳西棟付属： 動物実験施設（マカクサル、マーモセット）
2階

3階

1階

38

脳東棟５階： 動物実験施設（マーモセット、特殊動物）

脳東棟地階： 動物実験施設（マカクサル）
MRI室

脳西棟3階：
動物実験施設（マカクサル）

39

脳池の端棟２階： ゼブラフィッシュ実験施設

RI棟： RI管理区域

40

脳中央棟地階： 生体物質分析施設（技術支援、TPSS 、共用機器コーナー（CUE））、
電子顕微鏡施設、胚凍結室

空調機械室

ﾏｰﾓｾｯﾄ神経構造（供用）

機械室

CBS

機械ﾋﾟｯﾄ

fMRI
MRI室

操作室

処置室

ﾄﾞﾗｲﾋﾟｯﾄ

B03

B08

B09

B09-1

B10

B04
空調機械室

RRD

RRD実験室(CUE)

RRD実験室(CUE)

実験室
(CUE)

倉庫
N001
N003

N004

N005

N005-1

階段

RRD実験室RRD実験室
(EMT)

N007

N008

N009

RRD
実験室
(TPSS)

RRD
実験室
(CUE)

C010

C011

N006

倉
庫

RRD
実験室
(EMT)

RRD
RRD
実験室(CUE) 実験室(TPSS)RRD実験室
(EMT)

EV

階段
下
倉庫

WC

C000
EV

N010

イ
ピ
ッ
ト

N011

C003

C004

C005

C006

C009

通信機械室

RRD実験室(CUE)

階段

RRD実験室C012-1
低温室
C012

RRD実験室大型

RRD実験室RRD実験室ﾌﾟﾘﾝﾀｰ
打合せ室

空調機械室
S001

S002

S003

S004

S005

倉庫

C015

倉庫
C014

C008

RRD実験室

EV
ﾎｰﾙ

EV

C103

WC

B02

ド
ラ

RRD実験室

階段
C007

Ｃ001

EV
ﾎｰﾙ

ﾌﾘｰｻﾞｰ
ﾙｰﾑ

WC

N002

胚凍結室

空調機械室

田中
ラボ

S005
-1

WC
ド
ラ

RRD居室

RRD
資材庫

S005
-2

S009

S006

S007

イ

S008

RRD実験室(CUE/TPSS)

空調機械室

ピ
ッ

B12

ト

脳中央棟１階： 生体物質分析施設（共用機器コーナー）、電子顕微鏡施設、センター長室41