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タクアン漬けの血圧上昇抑制作用およびその作用機序の解析＜平成 26 年度助成＞

タクアン漬けの血圧上昇抑制作用およびその作用機序の解析
松岡＊寛樹 ・高橋＊＊朝歌 ・熊倉＊＊＊慧（＊高崎健康福祉大学大学院健康福祉学研究科食品栄養専攻、
＊＊

1.

緒

東日本栄養医薬専門学校、＊＊＊高崎健康福祉大学）

らかになっている 3, 4 ）。

論

漬物の健康効果を考えるとき、前提として食塩2013 年、「和食」がユネスコの世界無形文化遺産

過剰摂取と高血圧の議論が生じる。漬物由来の食に登録され、その基本は「ご飯と漬物と汁そして塩量は約 1 g と低く、現代漬物は冷蔵技術と調味お菜」にある。近年の日本人の食生活は、米飯中心技術により十分に低塩化されているため、野菜のの食欲を満たすための食事から、おかずが多い豊重要な摂取源であることは今も変わらない。漬物

かな食事へと変化してきた。バブル景気以降、「食の機能性研究は、原料野菜の機能性成分や食物繊の欧米化」、「食の簡便化」は、肉や乳製品の需要維についての間接的な研究結果から推定されていを高め、食生活における油脂過剰摂取の傾向が強ることがほとんどである。漬物加工が直接的にメくなり、生活習慣病のリスクが高まっている。伝統

リットとなる数少ない研究として、乳酸菌による的な和食素材においては、味噌や醤油は抗酸化因

プロバイオティクスならびにプレバイオティクス

1, 2 ）、に関することが挙げられる。糠漬けやキムチにお味噌汁の摂取が食塩感受性の高血圧を抑制するだ

いては、GABA が乳酸菌によって富化することがけでなく、脳・心・腎臓機能保護作用を有するこ明らかになり6 ）、特に、血圧調節酵素阻害剤およとが報告されている3, 4 ）。他方、1975 年代の日本

び GABA 富化糠床で漬けた野菜は抗高血圧作用食がメタボリックシンドローム予防に有効との報を有することが報告されている 7, 8 ）。これらのこ告がなされ 5 ）、個々の素材だけでなく、豊かになとから、漬物は原料野菜由来ならびに発酵熟成にりつつ時代の食生活の健康効果に注目が集まって由来する機能性因子が期待できる素材であるにもいる。

関わらず 9 ）、その健康効果に関するデータは不足

子や抗血小板凝集因子など多様な機能を有し食塩は、「塩梅」といった言葉に表されるように、している。

「出汁」とともに素材の味を引きだす和食の基本でこれまで、我々はタクアン漬けの黄変化機構とある。これまで、疫学的研究により食塩の過剰摂

黄色関連物質の機能性に着目した研究を進めてき

取は昇圧を誘導し、漬物は過剰摂取の要因の一つた。その過程で、製造初期に⾏われる天日干しやとされてきた。食塩単独投与と異なり、食品では塩押しといった漬物固有の脱水処理が、ダイコン血圧上昇を抑制する食物繊維、アミノ酸・ペプチの二次代謝に影響を及ぼすことを見出した。さらドやポリフェノールなどが同時摂取される。これに、脱水過程で、微生物発酵非依存的に GABA

らの食品成分は血管・臓器に対する保護効果も高の経時的な蓄積が起こるという知見を得た10 ）。そく、それに起因する各種疾患を予防することが明こで本研究では、GABA を蓄積させたタクアン漬らかになってきた。味噌においては、一日当たりけの摂取が、他の GABA 含有食品と同様に抗高3g の食塩摂取でも昇圧効果は示さないことが明血圧効果を発揮できるかについて明らかにするこ

26

浦上財団研究報告書とを目的とした。
2.

実験方法

2-1

タクアン漬けの試作と試料の調製

Vol.24（2017）2-3

食塩感受性高血圧モデルラットを用いた
タクアン漬けの抗高血圧試験

4 週齢雄性食塩感受性高血圧症ラット（DahlIwai S : DIS/Eis）および 4 週齢雄性食塩抵抗性高2013 年 8 〜 12 月 お よ び 2014 年 9 〜 11 月 に 高血圧症ラット（Dahl-Iwai R : DIR/Eis）を日本エス

崎市内で栽培された「干し理想」ダイコンを用いエルシー株式会社より購入した。予備飼育では、た。日干し脱水および塩押し脱水を 2 週間行った粉末飼料（MF、オリエンタル酵母工業株式会社）

後、それぞれ 4 ℃下で 1 〜 2 ヶ月間の塩蔵処理をと水道水を自由摂取させ、１週間の馴化飼育を行った。処理後、液体窒素による急速凍結後、凍行った。その後、飼料に食塩を添加し、さらに１10 ）。

週間の馴化飼育を行った。各タクアン漬け試料は、乾燥粉末試料中の塩分は、純水で抽出し、電量滴2 - 3 と同様な GABA 相当量になるように通常飼料

定式塩分計で測定した。GABA は乾燥試料を塩酸に添加した。食塩濃度は飼料に対して 8 ％になる加水分解し、OPA 試薬によるプレカラム誘導体化ように調製した。6 週齢に達した DIS 25 匹を収縮による HPLC にて測定を行った。

期血圧がほぼ平均的になるように 1 群 5 匹に分け、2-2 本態性高血圧モデルラットを用いたタクアン漬けの抗高血圧試験

7 週間の投与試験を行った。食塩群（対照群）、塩ラットは 4 週齢の高血圧自然発症ラット（SHR/群）、日干し低用量群（L-DR 群）、日干し中用量Hos）を日本エスエルシー株式会社より購入した。

群（M-DR 群）とした。試験期間は、最も長く生実験動物は、ステンレス製の 5 連ゲージに入れ、存していた群の中で 1 匹目が死亡した段階で終了

室温 23 ± 2 ℃、相対湿度 60 ± 5％に調節されたとした。尿サンプルは、ラットを代謝ゲージにい飼育室で明時間（7 : 00 〜 19 : 00）、暗時間（19 : 00

れ、絶食状態で 17 時〜翌朝 9 時までの 16 時間尿〜 7 : 00）の光調節下で飼育した。試料は 2013 年を採取した。

産の 1 ヶ月間塩蔵した日干しタクアン漬けおよび2-4結乾燥、冷凍粉砕を行い、実験用試料とした

押し低用量群（L-SR 群）、塩押し中用量群（M-SR

塩押しタクアン漬けを用いた。飼料中の食塩濃度

高脂肪・高コレステロール食飼育ラットに対するタクアン漬け摂取の影響を 0.6 ％とし、タクアン漬け由来の GABA 濃度を7 週齢雄性脳卒中易発性高血圧自然発症モデル基準として、低用量群（0.2 mg/kg BW/ 日）、中ラット（SHRSP/Izm）を日本エスエルシー株式会用量群（1.0 mg/kg BW/ 日）、高用量群（5.0 mg/社より購入した。１週間の馴化飼育後、高脂肪食kg BW/ 日）になるように調製した。11 週齢より（1％食塩、0.5％コール酸、1.25％コレステロール、投与を開始し、飼料と飲水は自由摂取させた（525％牛脂）により 1 週間の馴化飼育を行った。各匹 / 群）。陽性対照群（GABA 群）として GABA

タクアン漬け試料は、中用量群（正味乾燥重量とを溶かした水を与えた（1.0 mg/kg BW/ 日）。尿して 0.15 ％）ならびに低用量群（正味乾燥重量とサンプルは、ラットを代謝ゲージにいれ、17 時〜して 0.03％）になるように通常飼料に添加した。9翌朝 9 時までの 16 時間尿を採取した。非観血式

週齢に達した DIS 25 匹を収縮期血圧がほぼ平均自動血圧測定装置（BP-98A、ソフトロン社）を用的になるように１群 5 匹に分け、7 週間の投与試いて、心拍数、収縮期血圧ならびに拡張長期血圧験を行った。食塩群（対照群）、塩押し低用量群の測定を行った。

（L-SR 群）、塩押し中用量群（M-SR 群）、日干し低用量群（L-DR 群）、日干し中用量群（M-DR 群）

タクアン漬けの血圧上昇抑制作用およびその作用機序の解析27とした。尿サンプルは、ラットを代謝ゲージにいれ、をマイクロプレートにとり、492 nm の吸光度を絶食状態で 17 時〜翌朝 9 時までの 16 時間尿を採測定した。

取した。
2-5アンジオテンシン変換酵素（ACE）阻害活性試験

タクアン漬け粉末 0.5 g に 5 mL の純水もしくは3.

結果および考察3-1

本態性高血圧自然発症ラットを用いた
タクアン漬けの抗高血圧試験

80％メタノールを加えて 4，25，40 ℃で 24 時間振タクアン漬摂取による SHR の収縮期血圧の変化

とう抽出、または 80 ℃で 1 時間振とう抽出した。

を図 1 に示した。１回目の実験では日干しタクア抽出後、遠心分離（5000 rpm, 20 分）して上清を集ン漬けおよび塩押しタクアン漬けともに高用量群めた。80％メタノール抽出により得た上清は、減ならびに中用量群で行った。2 回目の実験では、

圧濃縮でメタノールを除去後、純水で 5 mL に定容中用量群ならびに低用量群で行った。タクアン漬した。ねじ付き試験管に、8 mM Bz-Gly-His-Leu

け摂取による飼育中の採水・採食量および体重増

80μL、2M NaCl 30μL、試料 10μL を加えて混加率、解剖後の臓器重量に有意な群間差は認めら合し、37 ℃で 5 分間プレインキュベーションした。

れなかった。1 回目の実験においては、H-DR な

ここに 60 mU/mL ACE 80μL を加え、37 ℃で 1

らびに H-SR 群の心拍数は飼育期間中 350 bpm 前時間反応させた。1M 塩酸 50μL を加えて反応停後を推移したが、他の実験群は実験開始時には心止させた。ここに、キノリン 150μL、塩化ベンゼ

拍数は約 350 bpm であり、終了時は 400 bpm を越ンスルフォニル 50μL を加えて呈色反応を行い、えていた。

エタノールを 150μL 加えた。この反応液 180μL

図1

収縮期血圧については、対照群において投与開タクアン漬け摂取による本態性高血圧ラットの収縮期血圧の変化

Symbols; ● : control, ○ : GABA, ▲ : L-DR, ◇ : M-DR, ◆ : H-DR
▼ : L-SR, □ : M-SR, ■ : H-SR.

28

浦上財団研究報告書

Vol.24（2017）

始時と比較して有意に上昇した。各投与群におい用量群の間に用量依存的な抑制効果が認められては、収縮期血圧が約 200 mmHg まで上昇したあた。心拍数については、対照群と比べて M-SR 群たりから、血圧上昇抑制効果が認められた。DRは有意に低下した。血液分析により、SHR で低下群および SR 群とも高用量群と中用量群の間に用が認められた BUN ならびに ACE 活性に差は見ら量依存的な抑制効果が見出された。DR 群の低用れなかったが、SHR で変化の見られなかった血清量投与下では、血圧値が対照群とほぼ同等になっクレアチニンは全ての投与群において低値を示したのに対し、SR 群では中・低用量群の血圧の変た。電解質の分析においては、血中電解質濃度は化はほぼ同等であった。血液分析により総タンパ一定に保たれていたが、それぞれの試料投与群にク値やクレアチニン値の変化は認められず、BUNおいて用量依存的に尿中 Na/K 比を上昇し、ナト値が低下傾向にあったため、腎機能改善効果が示リウム排出を亢進させた。タウリンについては、唆された。さらに、飼料摂取群の ACE 活性は対血中での変動は小さかったが、尿中では SR 群で照群ならびに GABA 群に対し、低値を示したこ用量依存的に増加した。タウリンは抗酸化性などとから、タクアン漬けには GABA 以外にも血圧上の機能を有することから、心不全治療薬としても昇に関わる ACE 阻害因子を有する可能性を見出使われている。また、肝臓における含硫化合物のした。

最終代謝産物として知られている。タクアン漬け

3-2

食塩感受性高血圧発症ラットを用いた
タクアン漬けの抗高血圧試験にはタウリンが含まれていないが、その摂取によりタクアン漬け内含硫化合物の摂取により、合成

タクアン漬摂取による食塩感受性ラットの収縮が活性化したと考えられた。結果として、タウリ期血圧の変化と死亡率の結果を図 2 に示した。飼ン合成が活性化することで、心臓ならびに腎臓に育期間中、食塩負荷条件における DIS ラットの採対する負荷を軽減することで生存率の上昇に寄与

水・採食量および体重増加率、解剖後の臓器重量すると推察された。さらに、血漿グルコースは対に有意な群間差は認められなかった。タクアン漬

照群と比較し全ての投与群において有意に低値をけ摂取により生存率は改善される傾向にあり、特示し、試料群間の比較においても DR 群は SR 群に M-SR 群は高い生存率を示した。血圧は３週目より低下していたため、血糖上昇抑制効果が認めより上昇抑制傾向を示し、SR 群は低用量群と中られた。

図2

タクアン漬け摂取による食塩感受性高血圧ラットの収縮期血圧と死亡率の変化
Symbols : ● : control, ▲ : L-DR, ◇ : M-DR, ▼ : L-SR, □ : M-SR

タクアン漬けの血圧上昇抑制作用およびその作用機序の解析

29

高脂肪・高コレステロール食飼育ラットに対するタクアン漬け摂取の影響

害活性試験の結果を図 4 に示した。その結果、両高脂肪・高コレステロール食によるタクアン漬画分の阻害活性が高くなった。さらに、抽出温度け摂取の SHRSP に対する影響を検討した。本実条件の検討を行ったところ、抽出温度に依存して験では、飼育期間中、全ての群で採水・採食量お阻害活性が上昇し、40 ℃による抽出条件で最も阻よび体重増加率に有意な群間差は認められなかっ害活性が高くなった。また、DR ならびに SR 試料た。本飼料条件下ではタクアン漬けの摂取によるの塩分量は約 40 ％であり、両試料ともに同等の収縮期血圧に対する影響はほとんど認められず、阻害活性を示した。これらの結果から、両試料と対照群と飼料群の間で顕著な違いは認められなもに類似した阻害活性因子を有しており、それらかった（図 3）。SHR や DIS ラットで行ってきた血は高親水性であることが示唆された。また、抽出液ならびに尿の生化学的パラメーターについて時の有機溶媒濃度や高温条件による影響を受け易も、血中クレアチニンをやや低下させる傾向が認いことから、水抽出画分では抽出時にプロテアーめられるのみであった。また、飼料中の食塩含量ゼのような酵素による分解が進行し活性が増強すが低いためか、DIS でみられた尿中 Na/K 比につることが考えられた。

3-3

試料ともに 80 ％メタノール抽出画分より水抽出いても変化が認められず、ナトリウム排出亢進効
果は確認できなかった。血中総コレステロールについても、群間差は認められなかった。

図4

図3

タクアン漬け摂取による脳卒中易発性高血圧ラットの収縮期血圧の変化

Symbols : ● : control, ▲ : L-DR, ◇ : M-DR, ▼ : L-SR, □ : M-SR

4.

ま異なる抽出温度ならびに抽出溶媒条件下によるタクアン漬けエキスの ACE 阻害活性とめ

本研究助成により、漬物業界の標準的な方法にタクアン漬け抽出物のアンジオテンシン変換酵素（ACE）阻害活性基づいた製造されたタクアン漬けが、本態性ならSHR ならびに DIS ラットに対する抗高血圧効果

圧モデルラットに対して、抗高血圧効果を有するは、DR 試料よりも SR 試料において高い効果を示ことを明らかにした。これらの実験により、タクすことを明らかにした。そこで、SHR を用いた動アン漬けが血圧上昇を抑制するだけでなく、腎機物実験により ACE 活性の低下が認められたため、能を改善することを見出した。一方、SHRSP をDR ならびに SR の乾燥粉末試料における ACE 阻用いた実験では、高脂肪・高コレステロール食の3-4

びに食塩高負荷条件下における食塩感受性の高血30

浦上財団研究報告書

ため血圧が上昇しにくく、腎機能に対する影響はVol.24（2017）

謝辞

小さかった。各モデル動物における生化学的パラ本研究を遂行するにあたり、多大なる研究助成

メーターは異なる傾向を示したことから、飼料条を賜りました公益財団法人 浦上食品・食文化振興

件や系統差の影響を受けやすいことが考えられ、財団ならびに関係各位に心から感謝を申し上げ作用機序を明らかにする十分なデータは得られなます。

かった。
本研究では当初 GABA の機能性に着目していたが、GABA 投与量が同じになるよう飼料を調製したにも関わらず、SR 群の血圧上昇抑制効果は文

献1) H. Esaki et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 63 (9), 1637(1999).
2) H. Tsuchiya et al., J. Agric. Food Chem., 47, 4167 (1999).

DR 群よりも高くなった。昇圧因子である ACE 活3) M. Yoshinaga et al., Nutrition, 28(9), 924 (2012).

性は、ポリフェノールやペプチドに阻害されやす

4) D. D. Du et al., Clin. Exp. Hypertens., 365(5), 359 (2014).

11 ）く、GABA は阻害できない。ダイコンと同じ

5) 本間太郎, 日本食品科学工学会誌, 60(10), 541 (2013).

アブラナ科野菜の漬物である中島菜の水抽出画

6) 愛宕世高, 食品と開発, 36(6), 12 (2001).

分には ACE 阻害因子を有しているとの報告もあ

7) K. Oda et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 78 (5), 882(2014).

り12 ）、タクアン漬けの抗高血圧作用は GABA だ
けでなく、それ以外の阻害因子が関与しているこ

8) K. Oda et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 79 (2), 318(2015).とが考えられた。抗高血圧効果の作用機序の解明

9) 矢嶋信浩, 生物工学, 85(7), 321 (2007).のために、活性因子の構造解析は今後の重要な検10) 加藤亮, 日本食品科学工学会誌, 62(10), 492 (2015).

討課題である。

11) 渡辺敏郎, 日本食品科学工学会誌, 49(3), 166 (2002).
12) 三輪章志, 石川県農業総合研究センター, 2145 (1998).

Antihypertensive effect of takuan-zuke in hypertensive rats

Antihypertensive effect of takuan-zuke in hypertensive rats
Hiroki Matsuoka*, Asaka Takahashi **, Kei Kumakura****Graduate School of Food and Nutrition, Takasaki University of Health and Welfare**
Yamazaki College of Nutrition and Pharmaceutical***
Department of Health and Nutrition, Takasaki University of Health and Welfare
Introduction: Takuan-zuke is one of the most popular traditional foods in Japan.
It is classified into hoshi-takuan and shio-oshi-takuan depending on the dehydration
process used before the radish roots are pickled. The hoshi-takuan dehydration process
is a sun-drying method, and the shio-oshi-takuan dehydration process is a pickling
treatment that uses salt and pressing with stone weights (salt-pressed daikon). Takuanzuke is originally made via a process of salt-aging the dehydrated radish roots in salt and/or rice bran. Nowadays, the term “takuan-zuke” indicates dehydrated radish roots thatare further pickled in seasoning liquid for desalting and seasoning. Recently, we havereported that γ-aminobutyrate (GABA) levels in takuan-zuke increased during sun-drying
and salt-pressing process of the radish root. GABA is a depressive neurotransmitter in thesympathetic nervous system, and it also has a physiological function of reducing bloodpressure in mammals. In this study, we report the effect of supplementing takuan-zuke on
the blood pressure in hypertensive rats.
Methods: The shio-oshi- (SR) and hoshi-takuan (DR) utilized in the present study
were prepared by our loboratory. Dry powders of each feed type were obtained by freezecrushing after lyophilization. Measurements of blood pressure and heart rate. Experimental
1: Eleven-week-old male SHR/Hos rats were fed MF diet (Oriental Yeast Co. Ltd.)
containing 0.2, 1.0, and 5.0 (mg/kg body weight (bw)/day) GABA and 1.0% NaCl (w/w offeed) for 10-14 weeks ad libitum. Experimental 2: Six-week-old male Dahl S/Iwai (DIS)
rats were fed a MF diet containing 0.2 and 1.0 (mg/kg bw/day) GABA and 8.0% NaCl (w/w of feed) for 7 weeks ad libitum. Experimental 3: Nine-week-old male DIS rats were feda high fat and 1.0% NaCl diet containing 0.03% and 0.15% (w/w, after subtracting NaCl)takuan powders for 7 weeks ad libitum. Variables in the serum, plasma or urine weredetermined. Systolic blood pressure (SBP) and heart rate were measured using the tailcuff method. Determination of angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity.
The takuan powders were extracted with water or 80% methanol at 4 - 40 °C for 24 hours
or 80 °C for 60 min. The 80% methanol extract was concentrated in vacuo and diluted withwater. These aqueous and methanol extracts were assessed by ACE-inhibitory activity assay
in vitro.
Conclusion: We found that ingestion of takuan-zuke attenuated the increase in bloodpressure in rats subjected to spontaneous and salt-induced hypertension with kidney andheart damages. Furthermore, the antihypertensive activity of SR takuan was higher thanthat of DR takuan under conditions of the equal GABA levels in feed. The serum levelsof ACE of groups fed SR and DR takuan in SHR rats were lower than those in the control
group. However, GABA showed no inhibitory activity against the ACE. These phenomenasuggest that takuan-zuke has concomitant antihypertensive effects because of GABA andunknown ACE inhibitors. However, the mechanism of these effects is unclear. Furtherstudies are needed to elucidate the underlying mechanisms and compounds in takuan-zuke.

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