“Current Status of Gene Therapy in Japan Regulatory Issues”
日本の遺伝子治療における規制面での現状

山口照英（金沢工業大学/日本薬科大学）
内田恵理子（国立医薬品食品衛生研究所）

Disclosure of COIAuthors：Teruhide Yamaguchi, Eriko Uchida

I have no COI with regard to our presentation.

本日のお話• 国際調和• ICH Biodistribution• 臨床研究法へ適用• ゲノム編集International harmonization except for ICH
framework (ICH外の枠組みでの規制調和の進展)
IPRP（国際薬事規制当局プログラム）で再生医療等製品の規制調和を推進
第12回薬事規制当局サミットの合意を踏まえ、「細胞治療WG」と「遺伝子治療WG」でそれぞれ実施
2018会合で、ウイルスベクター等を用いた遺伝子治療製品を人に投与したときの生体内分布（biodistribution）を評価するための試験デザイン・手法について科学的考え方をまとめたリフレクションペーパー※を合意（遺伝子治療WG）

今後、IPRPウェブサイトで公表予定。また、ICHガイドライン化を検討予定。
※ ”Expectations for Biodistribution (BD) Assessments for Gene Therapy (GT)

Products”

厚生労働省・中島宣雅さん2018年より

Biodistribution RPPublication(s)Reflection paper: Expectations for Biodistribution (BD) Assessments forGene Therapy (GT) Products
http://development.iprp.backend.dev6.penceo.com/sites/default/files/201809/IPRP_GTWG_ReflectionPaper_BD_Final_2018_0713.pdf
Mol Ther Methods Clin Dev. 2016; 3: 16022.
Published online 2016 Apr 20. doi: 10.1038/mtm.2016.22
PMCID: PMC4837973
Biodistribution studies: understanding international expectations

File(s)GTWG - Mandate Document, dated 17 October 2018

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IPRF

BD EDITINGmemberA new ICH guideline on Biodistribution
Posted 14 June 2019 | By Zachary Brennan

Regulators from Argentina, Israel, Jordan and Saudi Arabia were recently approved by theInternational Council for Harmonisation (ICH) Assembly as Regulatory Observers. The approvals
came at a meeting from 1-6 June in Amsterdam.
ICH said the meeting was its largest biannual meeting ever and that progress was made on existing
guidelines, training materials to support guideline implementation, the details of an ICH meeting in
Silver Spring, MD, on 31 October on the revision of the guideline ICH E8 on clinical trials, and thecouncil decided to work on four new topics.
The four new topics for ICH harmonization include:•Q5A(R2) Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Humanor Animal Origin, which is proposed as an update and to expand the scope of the guideline toinclude new biotech products, such as viral-like particles and viral-vectored particles.
•A new Guideline on Non-clinical Biodistribution Studies for Gene Therapy Products, whichwill “recommend types of the nonclinical studies with which collection of biodistribution datais considered informative and/or necessary to support dosing in early clinical trials, and which
will provide guidance on the design of the studies. This will result in streamlined developmentof the gene therapy products with higher scientific rigor while minimising the unnecessary
use of animals.”
ICH also said it plans to publish on its website the results of a survey conducted this year on
monitoring the adequacy of implementation and adherence to ICH guidelines. In addition, ICH isholding a public stakeholder meeting in Tokyo on 25 July 2019.

Impact of BD Guideline for Gene Therapy• ウイルスベクターがどのような生体分布（BD)をし、かつその持続性や消長を解析することにより、非臨床試験をどのようにデザインするか• ウイルス排出を予測し、どのような排出試験を実施するかをデザインする• 第3者への伝播リスクや第1種使用におけるモニタリングをデザイン

遺伝子治療製品の指針
生体内分布
遺伝子治療用製品の安全性及び有効性を評価するための基礎データとして、適切な動物を用いて遺伝子治療用製品の生体内分布を明らかにすること。生体内分布の解析から、目的とする生体組織への分布だけでなく、目的としない生体組織及び生殖細胞への分布を明らかにすることにより、ヒトでの安全性や生殖細胞への意図しない組込みリスクを評価する際に着目すべき器官を明らかにすることが可能になる。ベクターの分布や消失を含めた持続性を明らかにすることにより、ヒトでの適切な解析時期に関する情報が得られる。

本日のお話• 国際調和• ICH Biodistribution• 臨床研究法へ適用• ゲノム編集

遺伝子治療臨床研究に関する指針改正のポイント
臨床研究法との関係「臨床研究法」に規定される遺伝子治療等臨床研究を実施する場合、臨床研究法の遵守すべき規定に加えて、改正指針の第１章、第３章に規定される項目を遵守する必要がある。
遺伝子治療等臨床研究に関する指針改正案
第１章 総則第２章 遺伝子治療等臨床研究に関し遵守すべき事項等
第３章 臨床研究法に定める臨床研究に該当する遺伝子治療等臨床研究に関し遵守すべき事項等
第３章において、臨床研究法による規定の他に、指針の上乗せとして遵守すべき事項○ 有害事象発生時の手続き「疾病等」という介入治療との因果関係がある事項のみを報告の対象としているが、指針では、「有害事象」として因果関係の有無に関わらず報告の対象としている。
○ 試料及び情報、倫理審査委員会の審査資料の保管期間を10年間とする
遺伝子治療等を行う事での身体への影響を長期間フォローする必要があるため、臨床研究法に規定される保管期間よりも長期間となっている。
○ 海外への試料・情報を提供する場合の手続き
海外への試料・情報を提供する場合の手続きについて、指針で規定している。
○ 厚生労働大臣への意見を求める手続き
遺伝子治療等臨床研究の実施や研究計画書の変更にあたっては、臨床研究法の手続きに加え、指針においては、大臣に意見を求めるよう規定している。

研究計画書の作成及び研究計画書の変更（軽微な変更を除く）
臨床研究法への対応
厚生科学審議会

意見を聴く
意見を述べる※共同研究の場合は、総括責任者が所属する研究機関の長が一括して行う。

研究機関の長厚生労働大臣意見を求める

許可又は不許可その他研究に関し必要な措置について決定

許可を求める

研究責任者

総括責任者

必要に応じて調査を行う
意見を述べる
意見を求める
倫理審査委員会

臨床研究法では厚生労働大臣への計画の提出のみ。中央審査が不要

研究計画書の作成及び研究計画書の変更（軽微な変更を除く）
臨床研究法への対応
厚生科学審議会

意見を聴く
意見を述べる※共同研究の場合は、総括責任者が所属する研究機関の長が一括して行う。

研究機関の長厚生労働大臣意見を求める

許可又は不許可その他研究に関し必要な措置について決定

許可を求める

研究責任者

総括責任者

必要に応じて調査を行う
意見を述べる
意見を求める

一体化して審査を実施することで2重審査を避けられる

認定臨床研究審査委員会
倫理審査委員会

臨床研究法では厚生労働大臣への計画の提出のみ。中央審査が不要

重篤な有害事象の定義
重篤な有害事象⑴ 死亡⑵ 死亡につながるおそれのある有害事象⑶ 治療のために医療機関への入院又は入院期間の延長が必要とされる有害事象⑷ 障害⑸ 障害につながるおそれのある有害事象⑹ ⑴から⑸までの規定に準じて重篤である有害事象⑺ 後世代における先天性の疾病又は異常臨床研究法における「疾病等」と定義は同じ。
因果関係の有無に関わらず、報告の対象となる。

本日のお話• 国際調和• ICH Biodistribution• 臨床研究法の適用• ゲノム編集• 遺伝子治療臨床研究• Ex-vivo遺伝子治療臨床研究• 遺伝子治療製品

ゲノム編集技術について

ゲノム編集技術とは、人工の制限酵素（DNA を切断する酵素）を用いた遺伝子改変技術である。これらの技術を利用することにより、ゲノム上の狙った部位に任意に変異（塩基の置換、挿入又は欠失）を誘導することができる。
主なゲノム編集技術概要
原理図（出典：JST-CRDS 調査報告書）
制限酵素（タンパク質）を用いて遺伝子を切(1) ZFNs
（Zinc Finger Nucleases）断する手法。特定の塩基配列に結合する機能を持つ部位（ガイド）と遺伝子を切断する機能を持つ部位（ハサミ）から構成される。

(2) TALENs

制限酵素（タンパク質）を用いて遺伝子を切（Transcription Activator Like Effecter断する手法。ZFN と同様にガイドとハサミかNucleases）ら構成されるが、ZFN に比べガイドをより細かい単位で構築できるので、特定の塩基配列を認識する精度が高い。

(3) CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced
Short Palindromic Repeats /CRISPR Associated Protein 9）

ガイド RNA（核酸）と制限酵素（タンパク質）を用いて遺伝子を切断する手法。バクテリアの免疫機構が起源であるにも関わらず、多くの生物種で切断活性を示す。ガイド RNA の設計は比較的簡便にできるため、ゲノム編集が容易とされている。

環境省作成資料

第１回遺伝子治療等臨床研究に関する指針の見直しに関する専門委員会（平成29年4月12日）資料

ゲノム編集治療の臨床試験登録件数（ClinicalTrials.gov, 2019.6)
世界的ニア50以上のプロトコールが実施

件数
2520

15

TALENの開発
10

CRISPR/Cas9の開発

50
2009

2010

2011

2012

2013
2014
CRISPR
TALEN

2015
ZFN

2016

2017

2018

2019

年

• 日本ではまだ実施されていないが、海外ではゲノム編集の臨床試験が急増• CRISPR/Casを用いたゲノム編集による臨床開発が大きな割合を占める• 多くがex-vivoゲノム編集だがin vivoゲノム編集でも有用性が示唆
15

Clinicaltrial.govに登録済のゲノム編集臨床試験
受理
年
2009

対象疾患状況

ゲノム編集の種類、導入法

HIV

終了

ZFN

アデノex vivo

標的細胞・組織・臓器
T細胞

2010

HIV

終了

ZFN

アデノ

ex vivo

2010
2012
2014
2015

HIV
HIV
HIV
HIV

終了
実施中
実施中
リクルート中

ZFN
ZFN
ZFN
ZFN

アデノ
アデノ
mRNA
mRNA

ex vivoex vivoex vivoex vivo

2015

HIV

リクルート中

ZFN

mRNA

2016
2016

血友病B
ムコ多糖症1型

リクルート中
未実施

ZFN
ZFN

2016

ALL、CML

リクルート中

TALEN

AAV
AAV
mRNA
（CARはレンチ）

2016

非小細胞肺がん実施中

CRISPR

未実施

ZFN

リクルート中

TALEN

膀胱がん
未実施
腎細胞がん
未実施
前立腺がん
未実施
ムコ多糖症2型
未実施
EBｳｲﾙｽ性腫瘍
未実施
ﾊﾟﾋﾟﾛｰﾏｳｲﾙｽ性子宮頚2017
未実施
部上皮内部腫瘍
2017
食道がん
リクルート中CRISPRCRISPRCRISPRZFNCRISPRTALEN,CRISPRCRISPR

2016 子宮頚部前がん病変
2016
2016
2016
2016
2017
2017

小児ALL

plasmidmRNA(CARはレンチ）

AAV
plasmid

標的遺伝子 ゲノム編集目的

治験段階

CCR5

KO

Phase 1

T細胞

CCR5

KO

Phase 1

CCR5
CCR5
CCR5
CCR5

KO
KO
KO
KO

Phase 1/2
Phase 1/2
Phase 1/2
Phase 1

ex vivo

T細胞
T細胞
T細胞
造血幹細胞
T細胞

CCR5

KO

Phase 1in vivoin vivo

肝臓
肝臓

アルブミン座アルブミン座

遺伝子導入
遺伝子導入

Phase 1
Phase 1

ex vivo

T細胞

TCR, CD52

KO （UCART19)

Phase 1

ex vivo

T細胞

PD-1

KO

Phase 1in vivo

子宮頚部

HPV

KO

Phase 1

ex vivo

T細胞

TCR, CD52

KO (UCART19)

Phase 1ex vivo
ex vivoex vivoin vivoex vivo

T細胞
T細胞
T細胞
肝臓T細胞

KOKOKO
遺伝子導入
KO

Phase 1
Phase 1
Phase 1
Phase 1
Phase 1in vivo

子宮頚部

KO

Phase 1

ex vivo

T細胞

PD-1
PD-1
PD-1
アルブミン座PD-1
HPV16,
HPV18 E7
PD-1

KO

Phase 2

厚生労働省「遺伝子治療等臨床研究に関する指針」の改正（2019．3）
改正の方向性⚫ 「遺伝子治療等」及び「最終産物」の定義として、外部から遺伝子を導入せずに行うゲノム編集技術を用いる場合を追加。
⚫ 研究計画書の記載事項として、ゲノム編集技術を用いた遺伝子治療等臨床研究に対応するため、研究計画書に記載すべき事項として、遺伝子の改変に用いるタンパク質、核酸等の情報に関する事項を追加。
改正の方向性

現行「遺伝子治療等」の定義（第二の一）
この指針において「遺伝子治療等」とは、疾病の治療や予防 この指針において「遺伝子治療等」とは、疾病の治療や予防をを目的として遺伝子又は遺伝子を導入した細胞を人の体内に投 目的として遺伝子又は遺伝子を導入した細胞を人の体内に投与与すること、及び特定の塩基配列を標的として人の遺伝子を改 することをいう。
変すること又は遺伝子を改変した細胞を人の体内に投与することをいう。
「最終産物」の定義（第二の十六）
この指針において「最終産物」とは、被験者に投与する最終
この指針において「最終産物」とは、被験者に投与する最終的に作製された疾病の治療又は予防のための遺伝子が組み込ま 的に作製された疾病の治療又は予防のための遺伝子が組み込まれたＤＮＡ及びこれを含むウイルスその他の粒子（以下「組換 れたＤＮＡ又はこれを含むウイルスその他の粒子（以下「組換え遺伝子等」という。）、又は特定の塩基配列を標的として遺 え遺伝子等」という。）等をいう。
伝子を改変するために用いるタンパク質若しくは核酸等をいう。
研究計画書の記載事項（第十八）①～⑦ （略）①～⑦ （略）⑧ 導入する遺伝子及び遺伝子の導入方法⑧ 導入する遺伝子及び遺伝子の導入方法⑴ 開発の経緯⑴ 開発の経緯⑵ 導入する遺伝子⑵ 導入する遺伝子⑶ 遺伝子の導入方法⑶ 遺伝子の導入方法⑷ 被験者に投与する最終産物の組成⑷ 被験者に投与する最終産物の組成⑨ 遺伝子の改変に用いるタンパク質又は核酸等の情報（新設）⑴ 開発の経緯⑵ 導入するタンパク質や核酸等⑶ 遺伝子の改変の方法⑷ 被験者に投与する最終産物の組成⑩～㉜ （略）⑨～㉛ （略）
厚生労働省「第6回及び第７回遺伝子治療等臨床研究に関する指針の見直しに関する専門委員会（平成30年1月19日、3月12日）」資料より作成

ゲノム編集の遺伝子治療としての定義及び適用範囲
ゲノム編集による遺伝子切断
配列認識モジュールヌクレアーゼDNA二本鎖切断

A T G C T G
I

I

I

I

I

欠失による遺伝子不活化
相同組換え

I

T A C G A C
切断しないゲノム編集
エフェクター
脱アミノ化
NH2

ATGCTGATCTA

ATGCTGATUTA

I

I

I

I

I

III

I

I

I

I

TACGACTAGAT

I

I

I

I

I

I

I

I

I

I

TACGACTAAAT

脱アミノ化（デアミナーゼ）
リコンビナーゼ

エフェクター

脱メチル化

Me

ATGCTGATCTA

ATGCTGATCTA

I

I

I

I

I

I

I

I

I

I

I

I

TACGACTAGAT

I

I

I

I

I

I

I

I

I

I

TACGACTAGATDNAメチル化/脱メチル化
転写制御因子
ヒストン修飾点変異
組換え

遺伝子治療の範囲
遺伝子発現制御

現時点では含めないが明確にはせず

Ex vivo遺伝子治療• 再生医療等に用いられる細胞加工物へのゲノム編集の適用• 遺伝子治療にかかる定義は遺伝子治療臨床研究
指針による• 遺伝子改変の範囲については新たな定義が必要
現行第2条
２．遺伝子を導入する操作を行った細胞又は当該細胞に培養その他の加工を施したものを用いる医療技術（前号に揚げるものを除く。）
改正案１：
２．遺伝子を導入若しくは改変する操作を行った細胞又は当該細胞に培養その他の加工を施したものを用いる医療技術（前号に揚げるものを除く。）

省令第2条（第一種再生医療等技術） 第二条の二「・・・遺伝子を導入又は改変する操作を行った細胞･･･」の文言で対応※遺伝子治療等臨床研究に関する指針の文言と同じ
・Double Stand Break・Single Stand Break・based editing
・エピゲノム（メチル化）
・ヒストンの修飾

ここまでを対象とする（遺伝子治療等臨床研究と同じ）
どのように

Ex vivo遺伝子治療（阪大第二）第1種・プラスミド
・ウイルスベクター
・ゲノム編集（含：タンパク質、核酸）
ゲノム編集を行った細胞をバンク化

第2種第3種運用するのか？

プロモーター×造血幹細胞（リスク高）
・造腫瘍性の評価
・長期follow up ←特に重要細胞
iPS

ゲノム編集：細胞側のリスクも考慮
融合タンパク出現の懸念?

議論
・タンパク質：細胞外→培地添加物扱い
細胞内：なんらかの操作が必要→リスク？
・mRNA：タンパクの発現が一過性か、持続的かによってリスクは異なる？
・むしろ低分子化合物の方が懸念があるかもしれない

ゲノム編集を行った細胞をバンク化
ゲノム編集以外の・タンパク質（細胞内外）・mRNA（発現時間によらない）
・核酸・低分子化合物の添加

ゲノム編集による遺伝子改変の懸念点• オフターゲット作用の安全性• オフターゲット作用の検出手法• P53などのがん抑制遺伝子の変異リスク• オンターゲット部位の大きな変異や欠失• 染色体変異リスク（DSB関連）• ゲノム編集酵素の抗原性• In vivoゲノム編集における生殖細胞の改変リスク

ゲノム編集の安全性評価：オフターゲット作用の評価⚫Insilico解析によるオフターゲット部位の推定⚫細胞由来ゲノムDNAを用いたオ
フターゲット部位の確認⚫必要に応じて細胞を用いた評価
種々の条件下でのCRISPR/Cas9によるOff-targetをWGS解析よる解析からCas9、PAM配列、SgRNAの最適化
Zhang et al : Off-target effect in CRISPR/Cas9-mediated genome engineering. Molecular Therapy-Nucleic Acid.4, e264; 2015

オフターゲット効果のリスク• オフターゲット結合• オフターゲット切断

転写阻害、転写因子等の結合阻害
DNA損傷、細胞集遅延、細胞死• オフターゲット変異

遺伝子機能阻害、がん化

特定認定再生医療等委員会におけるヒト多能性幹細胞を用いる再生医療等提供
計画の造腫瘍性評価の審査のポイント
腫瘍関連遺伝子(Cosmic census + Shibata list)のSNV/Indel 及びコピー数異常(CNV)を評価(iPS/ES細胞等由来細胞の評価に適用）
厚生労働省医政局研究開発課長通知 医政研発0613第3号（2016年）• アデノウイルスやプラスミド等を用いた遺伝子治療においても低頻度ではあるがゲノム編挿入変異は起きていると考えられている• 非増殖細胞や分化した細胞、CARTなどのがん治療などでは挿入変異や造腫瘍性についてゲノム変異の解析等を求めることはない

がん抑制遺伝子であるP53はCRISPR・CAS9によるゲノム編集を阻害する ⇒ p53がKOされた細胞で下ゲノム編集が起きやすい

CRIPSPR/Cas9によるゲノム編集をがん抑制遺伝子であるp53KOヒト網膜細胞に適用すると効率よくゲノム編集できるが、正常細胞ではクリスパーに対抗してがん抑制遺伝子が働き、編集に失敗しやすいことを報告。P53の影響で細胞が死んだり、増殖が停止するという。著者らは、結果としてがん化の恐れが高い細胞が多く残る可能性があると指摘
Haapaniemi et al: CRISPR/Cas9 genome editing induces a p53-mediated DNA damage response. Nat. Med. 2018
Ihry et al: p53 inhibits CRISPR-Cas9 engineering in human pluripotent stem cells Nat. Med. 2018

ゲノム編集の安全性評価：染色体転座リスク

Chen et al:Targeted Chromosomal Translocations and Essential Gene
Knockout Using CRISPR/Cas9 Technology in Caenorhabditis elegans.
Genome Research 2017

Ferguson & Frederick :DNA double strand break repair andchromosomal translocation: Lessons
from animal models. Oncogene 20: 5572 (2001)

Torres et al: Engineering human tumour-associatedchromosomal translocations with the RNA-guided
CRISPR–Cas9 system. Nature Communications 2014

従来の遺伝子付加型遺伝子治療とゲノム編集の差異• 遺伝子治療での造腫瘍性(発ガン）は造血幹細胞にレトロウイルス等の遺伝子挿入能のあるベクターで惹起• がん遺伝子に遺伝子発現のためのベクター由来プロモータの挿入• 従来の遺伝子治療でがん抑制遺伝子のオフターゲッ
ト変異が見つかった事例はしられていない（相同組換えと遺伝子KOの違い）• ゲノム編集はDSBの導入と細胞の遺伝子修復機構に依存⇒DSBによる染色体変異の評価、特に複数のサイトにDSBを導入するケース• フィラデルフィア染色体のような融合タンパク質の出現
リスク

ゲノム編集の他の安全性評価• ゲノム編集の適用と細胞の特性との関係（造血幹細胞へのゲノム編集）• インビボゲノム編集による生殖細胞の改変リスク• 長期ホローアップ（遺伝子挿入能のあるレトロウイ
ルスやレンチウイルスベクターでは遅発性の有害事象の調査が必要）：どのように設定するべきか• 免疫原性：異種抗原であるゲノム編集酵素の抗原性によって引き起こされる可能性

医薬品医療機器総合機構
第29回 科学委員会
平成30年7月3日

ゲノム編集技術について専門部会を立ち上げることを決定。
Concept-Paperを取りまとめる
専門部会名「ゲノム編集技術を用いた遺伝子治療製品開発における課題と品質・安全性評価のための要件」の専門部会： ゲノム編集を利用した遺伝子治療製品の品質特性解析や安全性の要件についてまとめる
委員長 山口照英

副委員長 小澤敬也

欧米の遺伝子治療関連ガイドラインとゲノム編集技術への対応

Stance of EU

ゲノム編集医薬品開発の重要課題◆ ゲノム編集用ツールの設計の適切性確認◆ オンターゲット効果及びオフターゲット変異の解析➢➢

どのような種類、どの程度の変異がおこるのかオフターゲット変異により起こりえる結果の予測解析◆ 遺伝子改変と提案されている治療効果との相関◆ 治療コンセプト（mode-of-action）に依存した有効性を示唆する結果（POC）、薬理効果、in-vivoの生体分布試験など◆ 安全性試験：➢オンターゲット効果やオフターゲット効果の同定、及びゲノム編集ツールの投与の経路等を考慮した一般毒性試験➢

ゲノム編集した細胞のクローナリティーや造腫瘍性
免疫原性➢

M. Renner: EU regulatory aspects of genome editing改変

Stance of EU

オフターゲットサイトの解析（１）

予測されるオフターゲット部位
Cas9-gRNAによる切断目的とする部位+

コンピュータ予測
in-silico解析による数塩基のミスマッチを許容する相同塩基配列の同定、予測（CRISPOR, Cas-Oft-Finder等による解析）

ターゲット配列のPCR増幅

細胞内あるいはin virto（cell free)でのゲノムワイドで偏りのないオフターゲッ
ト切断候補部位の評価（GUIDE-seq、BLESS、CIRCLE-seq等）

評価されたオフターゲット部位

代表的な標的細胞/組織でCasによる変異部位の検出
相同性に基づく方法と基づかない方法により同定されたオフターゲットサイトについて、代表的な細胞種（in vitro and/or in vivo）を用いて次世代シークエンサーやLAM-HTGTSにより解析
LAM-HTGTS: Linear amplification-mediated high throughput genome-wide translocation sequencing
注：改正案には具体的評価法までは記載されていない

M. Renner: EU regulatory aspects of genome editing改変

Stance of EU

オフターゲットサイトの解析（2）⚫ 評価試験において、Indel（挿入欠失）単独の頻度と（Indel の頻度＋ゲノム編集ツール）を定量➢ 改変した細胞での評価➢ 検出法の感度、閾値の妥当性（ゲノム編集細胞 VS. 細胞）➢ ゲノム編集の様式と編集される遺伝子の大きさの決定➢ オフターゲットゲノム編集によって引き起される事象の評価⚫ 染色体の転座や欠失の解析
特に目的としない異なる部位で起きている可能性の解析➢例：FISH、核型分析、アレイを用いたゲノムハイブリダイゼーションアッセイ（CGH）
Indel-frequency: ゲノムの挿入ないしは欠失、あるいはその両方の頻度
M. Renner: EU regulatory aspects of genome editingより

Stance of FDA ゲノム編集用製品での安全性評価⚫ ゲノム編集による遅発性有害事象のリスク要因 (ex vivo, in vivo)➢ ゲノム編集は宿主ゲノムに永続的な変化を与える➢ ゲノム編集は目的外のゲノム改変により、遺伝子発現の異常や染色体の転座、悪性腫瘍の誘導などをもたらす可能性がある➢ 組込型ベクターを用いてゲノム編集コンポーネントを導入する場合は挿入変異によるがん化のリスクがある➢ ゲノム編集コンポーネントや発現産物に対する免疫応答の可能性⚫ 非臨床安全性評価で考慮すべき事項➢ ゲノム編集に用いる技術➢ ex vivoで改変する細胞の種類➢ ゲノム編集コンポーネントのデリバリーに用いるベクター➢ 臨床での投与経路

Stance of FDA ゲノム編集用製品の臨床での考慮事項
フォローアップ期間：15年間（組込型ベクターと同じ）
１．オフターゲット活性に関する非臨床試験（INDELに関するin vivo, in vitro, insilico解析等）の結果に基づき遅発性有害事象のモニタリング計画を立案すること（例：肝細胞でがん抑制遺伝子に影響する場合、フォローアップ観察に肝がん発生の評価のモニタリング計画を組み込む）
２．ゲノム編集の標的組織に特異的な有害事象をモニタリングすること
３．ゲノム編集の標的組織を直接モニタリングすることが困難な場合（脳など）、ゲノム編集用製品の効果について代替案を提案すること
４．オフターゲット活性とオンターゲット活性の量比を求め、オンターゲット効果の測定値からオフターゲット活性を予測してフォローアップ計画を立てること
５．ゲノム編集用製品を全身投与する場合、臨床での安全性モニタリングは標的組織・臓器でのオフターゲット作用だけでなく、他の組織・臓器でのオフターゲット作用も調べること

FDA
Chemistry, Manufacturing, andControl (CMC) Information for
Human Gene Therapy
Investigational New Drug
対応するガイApplications (INDs) (Draft,ドライン等2018.7)
Long Term Follow-Up After
Administration of Human Gene
Therapy Products (Draft, 201.7)

ゲノム編集

EMA

日本
臨床研究

Guideline on the quality, nonclinical and clinical aspects ofgene therapy medicinal products
遺伝子治療臨床研（2018.3）
Guideline on quality, non-clinical 究指針
and clinical aspects of medicinal
products containing geneticallymodified cells（Draft, 2018.7 ）遺伝子治療の定義やゲノム編集による遺伝子の改変の定義は臨床研究指針が適用される（指針第1章）

特定の塩基配列を標有効成分として組換え核酸を含的として人の遺伝子ゲノム編集に用いるツールにつ む製品から構成され、遺伝子配の改変いての記載はない。
列の制御、修復、置換、挿入、遺伝子を改変した細欠失をヒトに引き起す製品
胞の投与

改変用酵素をコードするベクウイルスベクターやター（mRNAを含む）、改変用酵
ゲノム編集を ウイルスベクターやプラスミドにプラスミドに加え、特素タンパク質、ゲノム編集に用含めて製品及 加えて、mRNAによるゲノム編集
定の塩基配列を遺伝いられる核酸、ノックインするたびその原材料 について遺伝子治療に含まれる子を改変するためのめの核酸テンプレート、改変を行
タンパク質、核酸等
うための細胞
ゲノム編集はゲノムに永続的なオフターゲット効果のオンターゲット効果及びオフター変化
評価
ゲット変異の解析
遺伝子発現の異常や染色体の遺伝子改変に用いる遺伝子改変と提案されている治ゲノム編集の 転座、悪性腫瘍の誘導リスクタンパク質等による療効果との相関
重要課題
組挿入変異リスク
免疫反応
ゲノム編集した細胞のポリクp53の変異や染色体ゲノム編集コンポーネントや発ローナリティーや造腫瘍性現産物に対する免疫応答性
転座リスクについて免疫原性は言及なし

35ま と め⚫ IPRFでBiodistribution に関するCPがまとめられ、このCPに基礎として、ICH でBiodistribution ガイドラインの作成することが決まる。BDガイドラインは非臨床試験の基盤となる試験。どのようにBDデータを活用するかについてガイドラインに盛り込まれる⚫ 本年3月末で臨床研究法の移行期間が終了。遺伝子治療臨床研究も臨床研究法の適用のものとに実施⚫ ゲノム編集の開発が進んでおり、遺伝子治療臨床研究、ex-vivo遺伝子治療研究についてゲノム編集技術独自の安全性の課題への対応をとることにした⚫ 欧米では遺伝子治療に関する既存の規制や法律をゲノム編集にも当てはめるのが妥当とし、オフターゲット効果の解析や長期ホローアップなどの適用について情報発信⚫ PMDA科学委員会でゲノム編集についてのCPをまとめることとなり、これまでの議論の経緯についてはホームページで公開

ご清聴ありがとうございました