技術情報

電気泳動・分析

FAQ
電気泳動とアガロース

Q.
A.

緩衝液で洗浄することによって、ゲルを維持することができます。

アガロース電気泳動では、どのような緩衝液条件で最良の分解能を得ることができますか？

Q.

ウェルあたりのDNA量はどのくらいですか？

回収の必要がない小さなDNA断片（<1,000 bp）では、A.

ウェルあたりのDNA量は状況によってさまざまです。
最も重要なことは、分解したいバンドにDNAがどれだ

1X TBE緩衝液の使用が推奨されます。ゲルをTBE緩衝液で作成すると、 TAE 緩衝液で作成したゲルよりも鮮明なバンドが得られます。TBE はより良い分解能をもたらし、間隔が狭く鮮明なDNAバンドの形成を可能にチジウムブロマイドで染色したゲル上で鮮明なバンドします。

として検出できるDNA量は約 100 ng です。GelStar®染

大きなDNA断片（>15,000 bp）では、1X TAE緩衝液の使用が推奨されます。 TAE の緩衝能力は TBE よりも低いため、長時間電気泳動を行う場合には、緩衝液を再循環させるか、定期的に陽極チャンバーと陰極チャンバーの間で緩衝液を攪拌する必要があるかもしれません。緩衝液不足となる時間は、ボルト / 時間や使用上での緩衝液の深さは3〜5 mmにしてください。緩衝で安定的に検出される最小DNA量は、約10 ngです。エ色などのさらに高感度の染色法を用いると、染色されるゲル上の DNA 量は少なくてすみます。 GelStar® で染色したゲルでは、わずか 20 pg の dsDNA を検出できます。ウェル上への最適なDNA量は、目的のバンドに存在する総 DNA 量比によって計算されます。 DNA の出現量が定かでない場合は、可能であればいくつかのレーンにさまざまな量を使用してください。
ウェル上のDNAの最適量は、目的のバンドに存在する液が少なすぎると、ゲルが乾燥する可能性がありま総DNA量の比率から計算できます。計算方法は以下のす。緩衝液が多すぎると、陽極と陰極間の回路抵抗がようになります。

低下し、ゲル全体の電圧勾配が低下します。これによってDNAの動きが不十分となり、余分な発熱やバンドの変形が生じる恐れがあります。

Q.

最良の分解能を得るにはゲルをどのようにキャストすべきですか？

A.

ロンザでは、通常ゲルを3〜4 mmの厚さでキャストします。必要となるゲル量は、キャスティングチャンバーの底面積を測定し、ゲルの厚さで乗じることによって簡単に見積もることができます。薄いゲルは、 GelBond® サポートフィルムおよび / または垂直装置に使用できます。
電界側のコームの厚さも、分解能に大きな影響を与えます。薄いコーム（1 mm）はDNAバンドの幅を狭めます。コームが厚過ぎると、分離したDNAバンドはかなり幅広くなります。

Q.

A.

目的の断片 (kbp)

DNAサンプルのサイズ (kbp)

× 100 = % 目的のバンド中のDNA

電気泳動・分析されるチャンバーの大きさによって異なります。ゲルけ存在するかということです。エチジウムブロマイド

注記：鮮明なバンドを形成する最大DNA量は約100 ngです。

例： DNA サンプルサイズは 48.5 kbp でゲル上で泳動させると、8断片に分離します。目的の断片は2.3kbpです。
計算方法：1 µgのDNAを使用する場合、使用されたサンプル 1 µg の 4.7% が目的の断片として示されます（47 ng）。

2.3 kbp× 100 = 4.7% 目的のバンド中のDNA
48.5 kbp
バンドをさらに鮮明にするには、スクロースまたはグDNAのバンドが時々波状になります。しかしそのようになるのは1つまたは2つのレーンのみです。この原因

リセロールベースのローディングバッファーの代わりは何ですか？

No.50655 ）などの Ficoll® ベースのローディングバッ

コームの歯に付着した乾燥したアガロースが、原因にファーをご使用ください。低分子量のグリセロールをなることがあります。ゲルを作る前に、コームの歯にに、ロンザ DNA ローディングバッファー（カタログ

使用することによって電気泳動の U 字型のバンドが生ついた残余乾燥アガロースを確認してください。取りじないようDNAがウェルの側面に並ぶようにします。

除かないと、これが新規に作成されたアガロースと付イオン強度が高すぎるローディングバッファーは、着してコームを取り除く際にウェルを壊します。これバンドを不鮮明にする原因となる可能性があります。

はゲルがトランスイルミネーター上になければ通常観

理想的には、DNAサンプルには泳動緩衝液と同じ溶液察されません。さらに、低温融解アガロースを使う場を使用するべきです。これが不可能な場合は、泳動緩合、コームをはずすときは特に細心の注意を払う必要

衝液よりも弱いイオン強度をもつサンプル緩衝液を使があります。ゲルをあらかじめ 4 ℃で 30 分間冷却す用してください。

る、および / またはコームをはずす前にゲルを冷たい

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FAQ
続き

Q.

アガロースゲルにどの程度の電圧をかけるべきですか？

A.

プレキャストアガロースゲル

Q.

通常の水平電気泳動では、 4 〜 10 ボルト /cm でアガロースゲルに電圧をかけるよう推奨されます（ cm はゲル長ではなく電極距離を測定することによって決定ために専用のチャンバーを購入する必要がありますか？

A.

されています。ゲル用チャンバープラットフォームに用する場合はバンドの線が生じる可能性があります。

設置可能であれば使用に適しています。チャンバープ

電圧が低すぎると、小型（ <1,000 bp） DNA の泳動性ラットフォームを測定し、対応するプレキャストゲルが弱まり、拡散によってバンド幅が拡大します。のサイズを確認してください。例えば、OWL®

MetaPhor™アガロースゲルは、標準水平電気泳動シス
テムにおいて、4.5〜5ボルト/cmでDNAを最適に分離ケースとして、通常の水平電気泳動を用いた大型Centipede™ チャンバーは、14 cm × 24 cm Latitude™HT
プレキャストゲルに最適です。一方、OWL®B1EasyCast™
チャンバーは、 Reliant™ プレキャストアガロースゲルに 適 し て い ま す 。 ま た Latitude ™ チ ャ ン バ ー は 、Latitude™ミディゲルに最適です。結果はチャンバーの（>15 kb）DNA断片の分離があります。この場合の最大きさや構造によって変化することがあります。

します。電圧が高すぎると、主にゲルの過熱によりDNAの分解能が弱まります。もう1つの特殊な良の分離は<5ボルト/cmの電圧勾配で得られます。

NuSieve™3:1とNuSieve™ GTG™アガロースの違いは何でQ.

FlashGel™カセットの成分は有害ですか？

A.

す。 NuSieve™3:1 アガロースの分解範囲は 50bp 〜ます。カセット内の染色液は突然変異誘発物質となる1000 bp です。NuSieve™ 3:1 アガロースは、分析用電可能性があります。取り扱い時は、手袋、安全眼鏡、気泳動向けに設計されています。ゲル強度が高いた

研究用作業服を着用してください。カセットの取り扱め、様々なブロッティングに最適な製品となっていま

いと処理を行う際は、エチジウムブロマイドで染色しす。 NuSieve™ GTG™アガロースは低温融解アガロース

たゲルと同じ取り扱いおよび廃棄時の注意に従ってくです（ 4% で ≤65 ℃）。このアガロースの分解範囲はださい。

電気泳動・分析

NuSieve™3:1 アガロースは、標準融点アガロースでFlashGel™カセットに含まれる染色液は、OSHAおよびEU危険物基準では、含有分程度の少量であれば有害とみなされていません。 MSDS をオンラインで入手できすか？

A.

Reliant™および Latitude™プレキャストアガロースゲルは、標準水平電気泳動チャンバーで使用するよう設計します）。電圧が高すぎる場合、特にDNA >15 kbを使Q.

Reliant™および Latitude™プレキャストゲルを使用する

50 bp〜1000 bpです。NuSieve™ GTG™アガロースは、クローニング、連結、形質転換などへの使用が推奨されます。

Q.
A.

GTG™アガロースとは何ですか？
GTG™は、Genetic Technology Grade™の略です。GTG™等級アガロースは、予備的なDNA電気泳動または酵素によるDNA操作が必要な場合に推奨されます。これらのアガロースは、標準的な分子生物学の実験に最大限対応できるように試験されています。

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FAQ
続き

PAGEr™プレキャストゲル
Q.

Q.

所有しているゲルチャンバーに適しているのは、どのA.

PAGEr™プレキャストゲルですか？
A.

PAGEr™Goldプレキャストゲルには、pH 8.6の4%濃縮用ゲルが含まれています。濃縮用ゲルを使用すると、ゲ

PAGEr™プレキャストゲルは、9 cm × 10 cm および10 cm × 10 cm のサイズで販売されており、ほとんど

ル濃縮 / 分解境界において、タンパク質が凝集して濃縮（つまり堆積）されます。この濃縮効果により、よのミニ垂直システムに適しています。チャンバーにりよい分解能が得られます。

よっては、PAGEr™プレキャストゲルに最適となるようQ.に調整を行う必要があります。

ロンザ PAGEr™プレキャストゲルには濃縮用ゲルが含まれますか？ 濃縮用ゲルの目的は何ですか？

非変性ゲルを使いたいと考えています。どの製品がこれに該当しますか？

Standard Vertical Systems

PAGEr™ ゲル

PAGEr™ Minigel ChamberA.

9 cm × 10 cm
10 cm × 10 cm*

Bio-Rad® MiniPROTEAN® II, MiniPROTEAN® 3,
Mini-PROTEAN® Tetra, Mini-PROTEAN® Dodeca™
and Ready Gel® Cell Systems

9 cm × 10 cm

PAGEr™プレキャストゲルは、SDSまたはその他の変性物質（例： DTTや b-ME）を含みません。さらに、 SDSを含まないトリス-グリシン泳動緩衝液を使うこともできます。

Reverse the inner core gasket so the flat side faces outward.

Novex® XCell SureLock® Mini-Cell or XCell II
Request the spacer for the XCell SureLock®,
Mini-Cell Chamber from Scientific Support, (Cat. No. 59900).

FisherBiotech® Vertical Minigel FBVE121,

9 cm × 10 cm
10 cm × 10 cm*
10 cm × 10 cm

電気泳動・分析

Owl Separations Systems Wolverine™ P82
Chamber comes with 2 sets of wedges.
Use the thinner wedges for the PAGEr™ Gold ゲル.

10 cm × 10 cm

FisherBiotech® Vertical Minigel FB-VE101,
Owl Separations Systems Penguin™ Model P8DS
Request adaptor for these chambers from Scientific Support,(Cat. No. 59902).

Hoefer® Mighty Small™ (SE250)
Replace the buffer chamber with a Deep lower bufferchamber for the SE260', order number 80-6148-78, fromGE Healthcare.

Daiichi 2, ISS chambers

9 cm × 10 cm
10 cm × 10 cm*

10 cm × 10 cm

To run one gel: Place one 10 × 10 cm cassette on wedge side ofchamber. Use suitable buffer dam on the other side. Use regular Daiichi/ISS wedges.
To run two gels: Widen the hole on the yellow port of the inner core. Replace the long arm wedges
with modified wedges. This chamber modification and new wedges are available from ScientificSupport.

Hoefer® Mighty Small™ (SE260)

9 cm × 10 cm
10 cm × 10 cm

EC 120 Mini Vertical Gel System

9 cm × 10 cm
10 cm × 10 cm

Biometra® Mini V Chamber

9 cm × 10 cm

CBS Scientific MGV System,(10 cm × 8 cm units)

9 cm × 10 cm

Sigma-Aldrich Mini Techware(11.3 cm × 10 cm units)

10 cm × 10 cm

Zaxis System 2000

10 cm × 10 cm

Hoefer® Mini VE

10 cm × 10 cm*Recommended for best fit.

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FAQ
続きQ.

タンパク質電気泳動

Q.

トランスファー, 泳動, サンプル緩衝液の組成は？

A.

トリス – グリシンゲル（Tris-HCl緩衝液システム）

Towbintransfer buﬀer (1X)

Running buﬀer (1X) Sample buﬀer (1X)

0.025 M Tris base25 mM Tris Base

0.192 M Glycine
0.05 – 0.1% SDS*
20% Methanol

192 mM Glycine
0.1% SDS*

ウェスタンブロッティングに最良なメンブレンは何ですか？

A.

62.5 mM Tris-HCl,
pH 6.82% SDS*
10% Glycerol
0.01% Bromophenol Blue
2.5% bME(2-mercaptoethanol)*

最良なメンブレンは以下の表を参照してください。

Nitrocellulose

PVDF

Nylon

Hydrophobic binding

Hydrophobic binding

Hydrophobic andelectrostatic binding

General purpose
membrane

SDS tolerant

Stable if baked

Low background

High background

High backgroundLow strength

High strength

High strength

Becomes brittle if baked

Suitable for protein
sequencing

Least suitable forWestern transfer*Omit for native proteins.
For best results use Lonza AccuGENE™ Electrophoresis BuffersQ.

グラディエントvs.均一（単一濃度）ゲルの違いは何でQ.

点とは何ですか？

すか？どちらを使用すべきですか？

A.

グラディエントゲルは、幅広いサイズの分解に適してタンパク質のゲル電気泳動にアガロースを使用する利A.

います。均一または単一濃度ゲルは、目的のタンパクリアクリルアミドの代替手段であり、いくつかの利点があります。に適しています。

–

高分子量（>600 kDa）のタンパク質を分離Q.

ゲルに載せるタンパク質量はどれくらいですか？

–

調製や取り扱いが簡単

A.

タンパク質量は、サンプルの純度や使用される染色方–タンパク質の回収が効率的法によって異なります。高純度のタンパク質では、ミ–使用されるタンパク質を免疫動物に直接使用してニゲルのレーン毎に、0.5 µg 〜 5 µg のタンパク質で通常は十分です。溶解した細胞のような混合物には、抗原産生を行えるレーン毎に 50 µg のタンパク質が必要となる場合があ–

毒性無し

ります。

–

垂直または水平装置を用いたゲルの利用

電気泳動・分析

質が狭いサイズ範囲に収まることがわかっている場合

アガロースゲルを用いたタンパク質の電気泳動は、ポタンパク質の染色液ごとの検出限界
Protein stain

Lower detection limit(protein/band)

Coomassie® Blue Stain

30 ng

Silver Stain

2 ng

SYPRO® Red Protein Gel Stain

4 ng – 8 ng

SYPRO® Ruby Protein Gel Stain

2 ng – 8 ng

SYPRO® Tangerine Protein Gel Stain

4 ng – 8 ng

ProSieve™ EXSafe Stain

8 ng – 15 ng

NOTE: Limits are based on optimal detection methods for each stain.

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