研究助成業績報告集

第 22 回（2014 年度）バイエル循環器病研究助成『深部静脈血栓症』

公益財団法人循環器病研究振興財団

No

研

＊

目

次 ＊

究

課

題

研 究 者

頁

1

静脈における凝固因子分泌と深部静脈血栓症

竹藤 幹人

1

2

遺伝子改変血栓症モデルマウスを用いた深部静脈血栓症の病態解析と新規治療法の開発

坂野 史明

8

3

低用量ピルとプロテインＳ抗原量・活性及び遺伝子変異に
関する研究

三好 剛一

11

4

脊椎手術における静脈血栓塞栓症の実態と早期診断方法に
関する研究

吉岡 克人

18

静脈における凝固因子分泌と深部静脈血栓症

名古屋大学医学部附属病院

Ⅰ. 緒言
深部静脈血栓症はエコノミークラス症候群と呼ばれ、身近な問題として国民の関心も高く、厚生労働省のホームページにおいても注意を呼びかけられている。これまでの循環器分野の研究は、心臓と動脈に関する研究が多く、静脈をテーマにした研究は、ほとんどされていない。
これまでの静脈血栓症のマウス動物モデルの多くは、薬物・物理的刺激により静脈内皮に重篤な傷害を与え、血小板などの血球細胞の機能評価が行われてきた。薬物・物理学的刺激のいずれも、静脈内皮に大きな障害を与えていることから、静脈内皮を評価する実験による深部静脈血栓の研究はほとんどされていなく、深部静脈血栓症における静脈の機能評価は十分されていない。
申請者らはこれまで、G タンパク質共役受容体（G protein-coupled receptor, GPCR）が制御する細胞シグナルと疾患の関わりについて研究を行ってきた 1), 2), 3)。G タンパク質は、心不全、高血圧、動脈硬化など、様々な循環器疾患との関連が示されてきた。アンギオテ
ンシン II 受容体やアドレナリン受容体とＧタ
ンパク質は共役して作用することが知られて
おり、疾患発症時の細胞内シグナル伝達において重要な働きをすることが報告されてきた。
様々な循環器疾患と G タンパク質の研究は行われてきたが、深部静脈血栓症を G タンパク質の関連についての報告はない。本研究では、
深部静脈血栓形成時における静脈内皮細胞のG タンパク質の役割について検討した。
細胞生物学的手法を用いて深部静脈血栓症の発症メカニズム・細胞シグナルを解明し、動物実験モデルを用いて、深部静脈血栓症の病態解明へ繋がる研究に発展させることを本研究の目的とする。

1

循環器内科 病院助教
竹 藤 幹 人

Ⅱ. 対象・方法(a) von Willebrand factor 測定
HUVEC 細胞 (PromoCell 社、ドイツ)を用
いて、HUVEC 細胞から分泌される vonWillebrand factor (vWF)を測定した。細胞を96-well dish で培養させ、80-100％コンフル
エントになったことを確認後、血清を除いた培養液で 24 時間培養した後、Thrombin もし
くは Histamin を添加し、HUVEC 細胞を刺激し、培養液を回収した。回収した培養液中の vWF 濃度を EILSA 法によって解析した。
96-well plate に抗 vWF 抗体（Dako 社、A0082）
を加え、24 時間、4 度で静置した。抗 vWF
抗体がコーティングされた 96-well plate に測定したい培養液 100 l を入れ、12 時間、4 度で静置した。12 時間後、PBS で 96-well plate
を wash した後、抗 vWF /HRP 抗体（Dako社、P0026）を加え、1 時間、室温に静置した。1 時間後、PBS で plate を洗浄後、plate
reader により vWF を測定した。
(b) siRNA 導入
標的遺伝子に対する siRNA（QIAGEN 社）
を各遺伝子に対して 3 種ずつ用意し、実験を行った。各遺伝子に対するターゲット配列を
表 1 に示す。
HUVEC 細胞を 96-well plate にて 24 時間
培養後、siRNA 導入を行った。siRNA 導入は
Lipofectamine RNAiMAX(LifeTechnologies 社)を用い、連続 2 日間、
siRNA 導入を行い、2 回目の siRNA 導入 24
時間後より実験に使用した。siRNA のノックダウン効率については qPCR もしくはウエス
タンブロット法により確認を行った。
また、siRNA 導入により viability への影響についても評価しており、siRNA 導入によりcell viability に影響がないことを、いずれのsiRNA でも確認している。

Gene Symbol
siRNA Target Sequence
Gene Symbol
siRNA Target Sequence
SYT11
CTGGATCTTGTATAGACCAAT TRAPPC6A CTGTGTGTGTGGAATCTGAAASYT11CAGCATCGAGTTCCTCGTTAT TRAPPC6A GACCTACGTCCTGCAAGACAASYT11CAGCTGCGTCTCCAACGTTGA TRAPPC6A CGGCAGCGTCACTGCCCAGTA
SYT12AAGGGCCTCTTTGACAAGGTA TRAPPC6B TAGCATTTACGTGTGGCTTAASYT12CACGCTGAACGTGGCGGTGAT TRAPPC6B ATGCATGACTGCAATCCTAATSYT12AACGTGGGCCATGTCATCATT TRAPPC6B CTACGGTATTCAAGAAACAAASYT13ACGAGCTAAGCACAAGATCAA
TRAPPC9CACGTTCACAATCAACATCAASYT13CAGGAGGAATTTAGTTATTGA
TRAPPC9 CCCGTCGTCAGGCATGTGAAASYT13CAGCAGATCATCTTTAAGCTA
TRAPPC9AACGATTACTGTGAACGGTTA
SYT14CTGCATTGCTAACAACTGTTATSNARE1 CCGCGACGTTGTGGACCTGAASYT14TATGGTGTACATCGCATGAAATSNARE1
CCAGCTGAGCACCCGAATAAASYT14TACAGTAGTGAAGCATCAATATSNARE1
GAAGCTGTTGATAGTATTGAASYT14LCACGGATCAAGAGATGTCCAA
UNC13ATGCGACCAAATCCAAGAACAASYT14LTAGAGTCACGATGAATACAAT
UNC13AATGAATAACACTCAACAGCTASYT14LGCGGCCAAATCCAGTATACAAUNC13A
CCGCCCTATTATACTACGTCASYT15GCGGCGCTTCCTCCAATCCAA
UNC13B
AGGGTTCACCAGATAAATTTA
SYT15
CAGCCTGACTGTGGTGCAGAA
UNC13BCAGGAGCTACCTCCAGAGGAA
SYT15
CCCTTGAAGAATGAGACCCTA
UNC13B
CTGCTCTGCGTGCGCGTTAAASYT16CACGTTGATGATTTCCGTTTA
UNC13CCTCAGCGTCACTTATGGTGAASYT16TTCGCTGGTTAACATAAGCAA
UNC13CATGATTCTTATCAGGGAGCTA
SYT16
CTGCGGTTTCTCACAGTGATA
UNC13CATGTACGATGTCTACAAGGTA
SYT17TTGATCCTTTCTACAATGAAT
UNC13D
CTGGTGTACTGCAGCCTTATA
SYT17
TCCGCTGTTGGCGAGGGCAAA
UNC13DTTGCGCCAGGCCATCAAGATA
SYT17
CAGCCGTGGAGCAGTGGCATA
UNC13DTGGGCTTCGCAGGATCTTTAASYT2TACCTCAGTTATGCAACCTTA
USE1
CGCCCAGAGTGTCATCAAGAASYT2CACCTTCAAGGTGCCATACCAUSE1TCGAATCATGCCTAAACTCAASYT2CACACCTTTCACGGACACTGA
USE1
GGCGTCGAGGCTGGAGCTAAA
SYT3ACCGTGAATTCATCTCCTTGAUSO1
TTGGCCGATCAAGATCAGAAASYT3CACCATGTCAGGAGACTACGAUSO1AAGGCTCATATATTCAACGTA
SYT3TCCTCGAATCTCCATCCCTAAUSO1ATACGTAATGATGGCGTCTTA
SYT4CTTGAGAGTAATGTCACTATA
VAMP1
CCCTGGGACTTTGCAGTCAAASYT4CAGAGTCGGCATGGCCACCTAVAMP1ATGACCAGTAACAGACGACTASYT4ATGGATTGAATTAGTAGACCAVAMP1TGCCATCATCGTGGTAGTTATSYT5
CCCGGCCAAGCCTGGACTCTAVAMP2AACAAGCGCAGCCAAGCTCAASYT5CCCGAGACCGGCCAAAGCCAAVAMP2TGGGAGCGTCCAGCATGTTAASYT6CACAGTGATTAAGTGTCGGAAVAMP2CCCATTAGTTCTTGTATCACASYT6TGCGCTTACCCAGGACGTTAAVAMP3AACGAGCGCAGCCAAGTTGAASYT6CTGGAACGAGATGCTGGCATA
VAMP3
TCCCTAGAAGAGAACCCTCTA
SYT7CTGGGCAAACGCTACAAGAATVAMP3
CAGGCGCTTCTCAATTTGAAASYT7CCGCAATGACGTCATCGGCAAVAMP4TGGAACGTTGAGAATGTCCAASYT7CTCGGCCACTGATGAGACTAAVAMP4TCAGTCGGTAACCAAATGCTASYT8CCAGCTGGCACCACAGCTATA
VAMP4
AAAGATTGCTGCATAATTTAASYT8CCGCTCCGAACTGAGCCCGTA
VAMP5
CTGCAGCAGCGTTCAGACCAASYT8CTCCACCTGCATGGCTGGCAAVAMP5
TTGGTGTTTGCTCTCCCTTGASYT9AAGGATCGTTATACGTCTTCAVAMP5CAGGATGCAGGCATTGCCTCASYT9AATCGTTATTCCAACATAATA
VAMP7
TCCAGACTACTTACGGTTCAASYT9CAAGATCGGACTATGAACAAAVAMP7TAGGGCAATCGTGTCGCTAAT
SYTL1
TCCCTGGACACTTACGTACAAVAMP7CGCCGCTAGTCTTATGAGCTA
SYTL1
CTGCGAAGGTGTCCTCCCATA
VAMP8
CTGGTGCCTTCTCTTAAGTAA
SYTL1
CCGAGCGTCTATGCGCAGGAAVAMP8CCGACTAGGCGAATTCACTTASYTL2AAGTCGCAGAAAGATACTCAAVAMP8AAGACCTTTCAGTATCCCTAASYTL2AAGAGTAGTCACAAACATGTTVPS33AACGGCTATGAGCACATATTGASYTL2CACAGTTAAGAGGGTCTGGTAVPS33A
TAGTTTGGGATGAATACCTAA
SYTL3
AAGCGCAAGACTGGAGTCCAAVPS33A
CAGCTTAGATCTCATTCCATT
SYTL3
CACGGAAGTTTAATTAGCATT
VPS33BTGCCGAGGACAAGGTGTTTAA
SYTL3
CTGGCATAGTCAGGTATTGAAVPS33BCAGCGTTGGATCAACACTGTA
SYTL4
AGGCGACTAAAGAATGAGTTA
VPS33BCCGCATCAAGAATATGCGATASYTL4CTCATAAGCGTTTCTACCCAAVPS45
CAGGCCATGGTCCACGAACTA
SYTL4
CTGGGCCGTTTGAGTCCCAAAVPS45GACAGCGGGCCTGGTATGAAASYTL5TGGCAAGTGGCCTATCAACTAVPS45
TTGCTGAGATTGGTAGCAATA
SYTL5
ATCGCGCAGCTAAGGATTATAVTI1A
CACACGAATAGTCATCGAGTASYTL5TTGGACTTAGACGGTCAACATVTI1A
ATGATCCGTGTTGAAGGCGAA
TC2N
AGGGTTCACGCTGATAGCTGAVTI1A
GTCGTCCGACTTCGAAGGTTA
TC2N
TAGCTCGGGAGAGTTGATTTA
VTI1B
AAGGACCTTGCTAAACTCCAT
TC2N
CTCATTAAGCTTTACAGTCGAVTI1B
ATGATATACCAAGGTAATAAATGOLN2
ACCGCATTGTAGAGAGCCTAA
VTI1B
CGCGGCCTCCATGAAGACCTATGOLN2
AACAGTGACTCAACTCGTCTAYKT6TGCCTTGAACATCACGATCAATGOLN2TAGCGAGAAGGATGACCTTTA
YKT6CCCATCCTAAGCAGCTTCCAA
TRAPPC10 TCCGAAGATGATTCACCTAGAYKT6TTGGGCAAATGAAACCATAAA
TRAPPC10 CTGGTTAATAGTGATAGTTGA
TRAPPC10 CCGAACCTCTATTGTGGACAATRAPPC4ATGGAGGAGCTAGGTCCATAA
TRAPPC4CTCCGAAAGATTTATGAGATT
TRAPPC4CCGCCTCACTTCTAATGAGAATRAPPC5 CACCTACATCTCCGTGCCCAA
TRAPPC5 CAAGGAGAACAGCACGCTCAA
TRAPPC5CACGCTCATGATCAAGTTCGAGene Symbol
siRNA Target Sequence
Gene Symbol
siRNA Target Sequence
APBA1
CCCGAAGACTTGATCGATGGASEC31BCGCCTAGTCTTCATCAGTCAA
APBA1
CCGGCGGATGCCTCGCTCCAA
SEC31B
CCCAGCGTCTGGAGTATCTATAPBA1CACAGTCCCATTTGCATATCASEC31BTTGATGCAGTGATGTACTTAAAPBA2TTCGCGCATATCACTAATAAA
SNAP23
TACCACATGAATTCAGATTTAAPBA2TAGGATGACTGTATTCGAGGASNAP23
CAGGCCTATTAACATCATACAAPBA2CACGCAGTAACTAAAGCTTTA
SNAP23AAGAGGTTGTTACCTCAGTAAATG10CTGGATTTACCTGTCCCTGAA
SNAP25CAGAGCTCACGTTGCATTGAAATG10AGCGTCCGAAGTGATTAAATA
SNAP25
AAGATTAAGTTATACCAGCAAATG10ATGGAATATTTCATCTCACCA
SNAP25
AAGATGCTGGGAAGTGGTTAAATG7AACGAGTATCGGCTGGATGAA
SNAP29CAGAAGATCGACAGCAACCTAATG7TCCCGTCAGCCTGGCATTTGA
SNAP29ATGGTGGACAAGATGGACCAAATG7ATCAGTGGATCTAAATCTCAA
SNAP29CCGGCTGACAACCAAAGTGGABET1
CACTGATGTCGTGGCGCTTTA
SNAPINCAGGAACGACTGAGACGGCTABET1CACAACTGGATTTCTAGGTAASNAPINACGCGTTGTCTTGGTTAACAA
BET1
ATGGGAACTATGGCTATGCTASNAPINTTCGTCTTACCCATTTATGTA
BET1L
CTGCTTCTCACTCTTGTATTASNCAATGGATGTATTCATGAAAGGA
BET1L
CCCGGGCGCTGTGGAAGAGATSNCACATGCTTATAAGCAACATGAA
BET1LTGCAATGATAATTGTGGGTCA
SNCACCCAGTCATGACATTTCTCAABNIP1ACGAACGATCCTGGATGCAAASNCBCCCGACTCCCATTAACCTCGABNIP1
TCGCCGGGAGCTGACGGACAASNCBACCCGAGAAGGTGTGGTACAA
BNIP1
CACGTCCGGATCTGTAACCAASNCBAGGGAGGAATTCCCTACTGAT
C1orf142
CTCCAGCATAGTTGAGATCAASRA1
CAGGCGCTCGCTGCTTACCAA
C1orf142
CAGCGGTTTATTGGAAAGCCA
SRA1
CAGGGCCCTGATGGTTCATTA
C1orf142
CAGAACAGAGTCTCACGTTAASRA1
CAGGGAAACGAACAAGAGTCACOPA
CACACGGGTGAAGGGCAACAASTX10CTCCTCGTTCTCATCTTACTACOPA
TCCGATGATCAGACCATCCGASTX10CTGGAAGAGACCATCGGTATA
COPA
CTGGCGCATGAATGAATCAAASTX10CAGCAGCTGATCATGGATGAACOPB1
CACGTTAATTAACGTGCCAATSTX11CGCCAGGTTCAAGAATTGCAACOPB1AACTCCAGATGGGAGACTTTTSTX11CAGCATCAAGCGCGACACCAACOPB1TTCGCTGCATCTATAACTTATSTX11AGCACTCAAATTGAAGTATCACOPB2
AGGCGTGAATTGCATTGATTASTX12AAGAATTTGATGAGCCAGCTA
COPB2
CAGGTTTCAAGGGTAGTGAAASTX12AGCGAGCTGCTTACTATCAGA
COPB2
ACGATTCTTCAGAGTATGCAASTX12TCCCTTAGACATGTACCGGAACPLX1CACGGCCGTGTTCACTTCTAA
STX16
TCCAACGTAATTGGTCAGATA
CPLX1
CCCGGCCATACTTGCGTGTGASTX16CCGGATTAAGCAGAAGATGAACPLX1AACGTTAGACTGCAATACTAASTX16CAGGCGTTTAACCGACGCTTTCPLX2CAGCAGATCCGAGATAAGTATSTX17TTGCAATTTGGTCCAACTATACPLX2CAGATAGGTAGCAGAGACCAASTX17ACCCTGAATTGGAGACCTTAACPLX2CAGGGTGCTTCAGATGAGCAASTX17
AAGCTAGTTCTCAGAGTTTGACPLX3CAGCTGAGAAGTGTCACGTCASTX18
CCGCGTGTGGATCCTCTTCTTCPLX3TACGAGGAGTATCAGAAGCAASTX18CAGAGAGCCATCCGAGTTAAACPLX3TCCGCGAAACCTAGTGCTGAASTX18AAGCAATTCAGCAACTACGAACPLX4CACTTCGAGCTATTTAGCTAASTX19CAGGCAGAATACATCAACAGACPLX4CATGGACTTGGATACCATAAASTX19AAGACCGACTTCAAGAACTAACPLX4AACCACGATGATCCATTGACASTX19CAGAAATTAGTCTGTGCCCTA
DOC2A
TCGGATGATGCCACCGCCCTASTX1A
ACAAAGTTCGTTCCAAGTTAA
DOC2A
CCGCCTCAAGCCTTCGCAGAASTX1A
GAGGGCCGTGTCTGACACCAA
DOC2A
CACGAGTGTGTTGCACGTTTASTX1AAGAACTCATGTCCGACATAAA
DOC2B
ATGAGGAGTTCTGTTACGAGA
STX1B
AAGGTTCGGTCCAAATTGAAA
DOC2B
CACATGCTTCACTCAATGATT
STX1B
AACCCAGATGAGAAGACCAAA
DOC2B
CAGGGAGTTCCCATCTAGTCA
STX1B
CCGGAAGTTCGTGGAGGTAATGABARAPL1 TACAGTGATGAGAGTGTCTATSTX2
CAGTGGATCTTCGGATACGAAGABARAPL1 CAGCTGCAAGTTCTTGTATAASTX2CACGGAAGAAGCACAACCGAAGABARAPL1 CAGCTGCTAGTTAGAAAGGTT
STX2
CAGCTAGTTTGTGCTAATTAAGABARAPL2 TTAGACTAGTAAATTATCATASTX3
CCCGGAAGAAATTGATAATTAGABARAPL2 AACACTTGCTTCACTAGAATASTX3CAGCCTTAAATTAAGCTCTTAGABARAPL2 CGCGAAGATTCGAGCGAAATASTX3TCAGGGTGAGATGTTAGATAAGOSR1CATGATAGTGTTGAAGCCTAASTX4CAGCTCGGACGAAGAGGACAAGOSR1GAGGCAGGTAAACCAATCAAASTX4TCCGGACAATTCGGCAGACTAGOSR1CACTGTGGTATTTATAGTATTSTX4AGGAAGCTGATGAGAACTATAGOSR2
TAGCCTTAGGTATTCCTAGAASTX5ATCAATAGCCTCAACAAACAAGOSR2
CTGGTTGTTTGCAGTAGATTASTX5CAACCGGTGGCTCATGGTCAAGOSR2CACTCGGAAGTGTGAGCTTTA
STX5
CAGTGGAAATTGAAGAGCTAALLGL1TGGGAGATTGTCCACCATAATSTX6CAGGCTGAAGCTAAATAGAGA
LLGL1
CCGCGAGGGCTTCACATGGAASTX6AACCTAGTCATTAATGAGTAA
LLGL1
CACGGTAGCCACCACACCTTA
STX6CACCAACGAGCTGAGAAATAALLGL2CAACCAGATCCTGATCGGCTASTX7CAGCAGTATACTAACCAGCTT
LLGL2
CTCGTTGTCATCTGGGACCTASTX7CAGCAGATTATCAGCGCAAATLLGL2CTGCATCTCAGTGATCCACGASTX7TTGCTGTAGATTGCCTAGTAANAPGTGGAGCGAGCTGGAAAGCTTASTX8CAACAACGAAATCAATATGAANAPG
TCCGTACTTCATTACAGTCATSTX8TTGGATGATCTTGTAACTCGANAPG
AAGGCTGTACAGTTATATCAASTX8CAGGTCCAGCCTGATGAGTGA
NRXN1
CTGGGACGACATATATCTTTA
STXBP1AAGGACCCGCCGACTGCTAAA
NRXN1
CCGCACGCATTCATAAAGCAASTXBP1
CCCGCTATGGGCACTGGCATA
NRXN1
CTGGCCAGTGATCGAGCGCTASTXBP1ACGGTGGACTCCGATTATCAANRXN2CGCCATAGTAAGCGACGGCAASTXBP2CTGATCCAGCATGCCAATGTANRXN2GAGAGTTAATATTGCCCATTASTXBP2CCCGGCCATCCGCTACCGCAA
NRXN2
ACGGGAGTGGGCGCCACCCAASTXBP2CACGGACAAGGCGAACATCAA
NRXN3GACAGGGAGTATTACGTGTAASTXBP3
CAGGTTGATCCAGAATGTAAANRXN3CAGGATTATAAAGAGATATCASTXBP3
TGGGTTAGAATTCGACATCGA
NRXN3
ACCAGTGTGCGTGTAACTTTA
STXBP3
CAGGTGTATACTCTTGATGTA
RPH3ALCTGCCTTATTGAAACCATCTASTXBP4
AACGCTGGCGCTTGAATCTAA
RPH3ALAGGGACCGGAAAGGCGACAAASTXBP4
CAGGGCTTAGCAAGAATCCTT
RPH3ALGAGGTTTGGCTTGGCATGAAASTXBP4
TAGCAATGTGGTCATCACGAASCFD1CTGACAATACCGCTAAGCTAASTXBP5TTAGCCGATCACGGAGTTCAASCFD1CAGAAGAACCTTACTATGATASTXBP5
AAGTTCGATTATTATATGAGASCFD1CACGATGTACTGGATTTCCATSTXBP5
CTGGTGGCATTGAAGGCGTAASEC22ACTACGAGTTTATAAAGTCCAASTXBP5L
CTGGAGAAAGATCTCATTGTA
SEC22ACACCGGCTGGCGGAATGTCAA STXBP5LTAGGAGATCATCAGTATACAASEC22ACAGGGCAAGGCTCCCGATTAT STXBP5LCAAGCAGAACTTGTTATTCAASEC22B
ATCATGGTGGCCAATATCGAASTXBP6
CAGGTTAATGGTATCGATCCTSEC22BCAAGCCATATATATTAGGGAASTXBP6
AAGGCGAATATTTAACTTATA
SEC22B
CCAGGATGCGAAGTACTTGAASTXBP6CGGAGCGATTTCCTCCGAGAASEC22CCAGATGGAGTGCAGCTTGGAASYNPRGAGCTCTCTAGTCTTCATTAASEC22CCCAGGTCGAGGTTCTGCAGAASYNPR
TAGCGTTTGCCTACCCATTCASEC22CTCCGGGAGCAGTGATGTCAAA
SYNPR
CAGCCCTGTTATGTCAAGCTT
SEC31A
CTGGTAGCTTCTGGTGCTAATSYPCAGCATCGAGGTCGAGTTCGASEC31A
GCCATGGACACTAGTACTGTA
SYP
CTCCTTAACCACCTAGTCAAA
SEC31A
AAGCTAGATGATGCCAGCAAASYPAAGGCCGTTAGGGAAATCCAASYPL1AAGGAACCTAAGTGAGGTATASYT1TACTCGGAATTGGGTGGCAAASYPL1CAGACCCTAGTCAAAGGGTTA
SYT1CACATCTGATCCTTACGTGAASYPL1ATGATAGACTTTGTTGTTACASYT1
TTCCGTAGTGATATTGTAACASYPL2
CAGTGCCAATTGGCCCACTAASYT10AGCTATCATATAGATCCTGTASYPL2CCCATGGTTACTCAAGGACAASYT10CTGCTATTGTATAAAGTAGCASYPL2TGCCTGGACCCAGGTATCTTASYT10AACGATGAGTTTCCACAAGGA

表 1：siRNA の標的配列(c) 深部静脈血栓症マウスモデル
深部静脈血栓症モデルを用いて実験を行った 4)。
週齢 8 週のマウスをペントバルビタールを用いて麻酔し、開腹後、下大静脈を剥離した。右腎静脈
直レベルで腹部下大静脈を 27G 注射針とともに結紮し、27G 注射針を抜き取り、下静脈狭窄を作製した。
狭窄作成 48 時間後に再開腹し、腹部静脈を取り出し、静脈内に形成された血栓を取り出した。静脈内で形成された血栓の性状、重さ、長さを評価した。

2

(d) 遺伝子欠損マウス
Tamoxifen 誘導性内皮特異的 Gq/11１）に連続 5日間、Tamoxifen を腹腔内注射し、最終投与日から 1 週後に実験に使用した。
Tamoxifen 投与（－）の状態では、コントロー
ルマウスと同様に血管内皮に Gq/11 が発現し、tamoxifen投与により血管内皮からGq/11 が欠損することを確認している。

内皮に有することが示唆された。

(e) データ解析
2 群の解析にはｔ検定を用い、3 群以上の解析には ANOVA を用いて、データ解析を行った(*<0.05, ** <0.01, *** < 0.001)。
Ⅲ. 結果
Gq/11 と vWF 分泌について
G タンパク質が静脈血管内皮からの凝固因子分泌に関与しているかを調べるため、HUVEC 細胞からの vWF 分泌量を測定した。G タンパク質には４つのサブファミリーが知られているが（Gs,Gi, Gq/11, G12/13)が知られている。本研究では、Gq/11,
G12/13 のサブファミリーを評価するため、siRNA導入により HUVEC の Gq/11, G12/13 を欠損させ、vWF 分泌について検討を行った。
コントロール群では、Thrombin、Histamin、Phorbol 12-Myristate 13-acetate (PMA) 刺激
により経時的に vWF の分泌が増加した（Figure
1）。
Thrombin 刺激下 vWF 分泌は Gq/11 欠損により抑制されたが、G12/13 欠損では、その分泌は抑制されなかった（Figure 1a）。Gq/11 が Thrombin 刺激に伴う vWF 分泌に関与していることが示唆されたため、他の刺激によって誘発される vWF 分
泌についても検討した。検討の結果、Gq/11 欠損により Histamin 誘発性の vWF 分泌は抑制されたが、PMA 刺激による vWF 分泌は抑制されなかった（Figure 1b, c）。
これらのデータは、Gq/11 は静脈内皮細胞におけるvWFの分泌に関与していることが示唆された。
Gq/11 のsiRNA 導入は、
GPCR を介するThrombin
もしくは Histamin 刺激による vWF 分泌を抑制
するが、GPCR を介さない PMA 刺激による vWF
分泌には影響していないことから、siGq/11 によるvWF 分泌抑制は siRNA の非特異的な作用でなく、GPCR・G タンパク質が制御する分泌機構が静脈

3Figure 1. HUVEC 細胞からの vWF 分泌。
a) Thrombin 刺激、b) Histamin 刺激、c) PMA 刺激。

細胞内 vWF と細胞表面 vWF
Gq/11 siRNA による HUVEC 細胞からの vWF分泌低下が（１）分泌能低下もしくは（２）産生低下による vWF 分泌低下を評価するため,細胞表面に局在する vWF と細胞内 vWF を評価した(Figure 2)。
HUVEC 細胞表面 vWF は、細胞をホルマリン固定後、抗 vWF 抗体を用いて免疫染色を行った。
Thrombin 刺激により速やかに細胞表面へ vWFが分泌されることが確認された(Figure 2a)。
siRNA による Gq/11 欠損により、細胞表面へのvWF の分泌が抑制された (Figure 2a, b)。

次に、細胞内 vWF を評価するため、細胞膜透
過処理試薬により細胞膜に穴をあけ、細胞内 vWF
を抗 vWF 抗体により免疫染色を行った（Figure2c）。染色の結果、細胞内 vWF は control siRNAと Gq/11 siRNA の HUVEC 内の vWF 発現量には差はなく、Gq/11 siRNA は vWF の細胞内産生には影響しないことを確認した。
Figure 2 の結果より、Gq/11 は HUVEC 細胞のvWF 産生を制御しているのではなく、vWF 分泌を制御していると考えられた。Figure1c に示した、Gq/11 siRNA がPMA刺激によるvWF分泌を抑制しないことも、Gq/11 siRNA が細胞内 vWF 産生に影響を及ぼさないことを示唆していると考えられた。

vWF は細胞内では P セレクチンなどのほかの分子とともにWeilbel-Palade body と呼ばれる顆
粒内に存在し、Weilbel-Palade body が細胞膜と融合し、細胞外へと分泌されることが知られている 5), 6)。
Gq/11 が Weilbel-Palade body 形成に影響を及ぼしているかを検討した。siRNA により HUVEC
細胞内の Gq/11 欠損させ、細胞内の Weilbel-Paladebody を GFP-vWF と抗 P セレクチン抗体で免疫染色した。免疫染色の結果、siRNA による Gq/11
欠損により、Weilbel-Palade body の減少は認められなかった。
Figure 2 と Figure 3 の結果より、Gq/11 が vWF
産生や Weilbel-Palade body 形成に影響を与える
ことなく、
vWF 分泌に関与していると考えられた。
Figure 3. Gq/11 と Weilbel-Palade body

深部静脈血栓形成と Gq/11
深部静脈血栓症について、マウスモデルを用いて、評価を行った。週齢 8 週のマウスにペントバ
ルビタール麻酔した後、開腹し、腹部下大静脈に狭窄を作製した（Figure 4a）。48 時間後に再開腹し、腹部下大静脈を取り出た。静脈狭窄により、
腹部下静脈内に血栓が形成されることを確認した。
（Figure 4b)。
細胞実験より、Gq/11 が静脈内皮からの vWF 分
泌に関与していることが示唆されたことから、
tamoxifen誘導性の内皮細胞特異的Gq/11 欠損マウスを作成し 7)、コントロールマウスと同様、腹部下大静脈に狭窄を作製し、静脈内に形成される血Figure 2. HUVEC 細胞表面 vWF と細胞内 vWF。
(a,)Thrombin 刺激による細胞表面 vWF,の経時的変化(抗 vWF抗体による免疫染色)。(b) 同グラフ (c) 細胞内 vWF の免疫染
色vWF と Weibel-Palade body4

が関与しているかについて siRNA を用いて、網羅的に解析した（表１）。
SNARE タンパク質は哺乳類では約 80 種報告
されており、全ての SNARE タンパク質に対して3 種類ずつの siRNA を用意した。HUVEC 細胞に各 SNARE タンパク質の siRNA 導入し、SNARE タンパク質を欠損させた。各 SNARE タ
ンパク質を欠損させたHUVEC細胞にThrombin
を添加し、siConrol のvWF 分泌量を100％とし、検討した。解析の結果、SNARE タンパク質（SNARE X）を欠損させることにより、vWF の分泌量が 60％以上減少することを見出した（Figure 5）。また siSNARE X は基礎 vWF 分泌量に影響していないことを確認している（datanot shown）。

栓を評価した。内皮特異的 Gq/11 欠損マウスでは、形成される血栓の長さ、重さともに、コントロー
ルマウスと比較し、縮小していることが示された（Figure 4b, c, d）。これらの結果より、静脈内皮の Gq/11 が深部静脈血栓の形成に関与していると考えられた。
Figure 4. 深部静脈血栓症と Gq/11 (a) 術シェーマ、(b)静脈内
血栓像、(c, d) 血栓の重量・長さ

Figure 5. siRNA を用いた網羅的スクリーニング

SNARE タンパク質と深部静脈血栓（１）SNARE X の遺伝子欠損マウスを用vWF 分泌と SNARE タンパク質
Figure2 および Figure 3 の結果より、Gq/11 がWeilbel-Palade body と細胞膜と融合に関与し、vWF の細胞外分泌を制御しているという仮説をたてた。
細胞内顆粒と細胞膜の融合にはSNAREタンパ
ク質が関与していることが知られている 8), 9)。顆粒と細胞膜の膜表面にSNAREタンパク質が局在している。顆粒の SNARE タンパク質と細胞膜のSNARE タンパク質が結合することにより、細胞質内の顆粒が細胞膜へ移動し、顆粒と細胞膜が結合・融合し、顆粒内の物質が細胞外へと分泌される。vWF 分泌に、いずれの SNARE タンパク質

Figure 6. SNARE X 欠損マウスを用意し、in vivo 実験を行った 。SNARE X 欠
損マウスでは、特に体重などの変化を認めなかっ5

た (Figure 6)。
Figure 6. SNARE X 欠損マウス

次に、G タンパク質欠損マウスと同様、SNAREX 欠損マウスにも深部静脈形成モデルを用いて、血栓形成について評価を行った（Figure 7）。
SNARE 欠損マウスでは深部静脈血栓の長さ、重さともに抑制されていた。

表２．骨髄移植

骨髄移植５週間後に体重を測定したが、4 群に特に有意な差は認めなかった（Figure 8a）。
表２に示したマウス群に深部静脈血栓術を施行した（Figure 8b, c）。
「Wild type から骨髄移植を受けた SNARE X ノックアウトマウス」と「ノックアウトから骨髄移植を受けた wild type マウス」
は、ともに、コントロール群（ドナー、レシ

Figure 7. SNARE X と深部静脈血栓（a） 血栓の長さ、(b) 血栓の重さ

SNARE タンパク質と深部静脈血栓（２）深部血栓の形成には静脈の他、血球細胞も働いている。SNARE X はユビキタスに発現しており、血球細胞のSNARE Xが血栓形成により強く関与している可能性がある。血球細胞の影響の有無を検討するため、X 線照射後に、表２に示す骨髄移植を行った。

Figure 8. 骨髄移植 8 週後の深部静脈血栓a) 体重、(b) 血栓長さ、(c) 血栓重量6

ピエントともに wild type）よりも血栓の長さ、重さともに減少していた。しかし、「Wild type から骨髄移植を受けたSNARE Xノックアウトマウス
群」が「ノックアウトから骨髄移植を受けた wild
type マウス群」よりも血栓が縮小していしている傾向にあった。これらの結果は、血球成分に存在する SNARE X よりも、血球成分以外
血球成分以外の組織のSNARE Xが深部静脈血栓形成に関与していることが示唆しており、筆者ら
は血管内皮のSNARE Xが深部静脈血栓に関与していると考えている。

Ⅶ．参考文献1) Sivaraj KK, Takefuji M, Schmidt I, et al.
G13 controls angiogenesis throughregulation of VEGFR-2 expression. Dev
Cell. 2013; 25(4):427-434.
2) Takefuji M, Krüger M, Sivaraj KK, et al.
RhoGEF12 controls cardiac remodeling by
integrating G protein- andintegrin-dependent signaling cascades. J
Exp Med. 2013; 210(4):665-673.
3) Takefuji M, Wirth A, Lukasova M, et al.
G(13)-mediated signaling pathway isrequired for pressure overload-induced
cardiac remodeling and heart failure.
Circulation. 2012; 126(16):1972-1982.
4) Brill A, Fuchs TA, Chauhan AK, et al. vonWillebrand factor-mediated platelet
adhesion is critical for deep veinthrombosis in mouse models. Blood. 2011;
117(4):1400-1407
5) Weibel ER. Fifty years of Weibel-Paladebodies: the discovery and early history ofan enigmatic organelle of endothelial cells.
J Thromb Haemost. 2012 Jun;
10(6):979-984.
6) Rondaij MG, Bierings R, Kragt A. et al.
Dynamics and plasticity of Weibel-Paladebodies in endothelial cells. Arterioscler
Thromb Vasc Biol. 2006 May;
26(5):1002-1007.
7) Herroeder S, Reichardt P, Sassmann A, etal. Anaphylactic shock depends onendothelial Gq/G11. J Exp Med. 2009 Feb
16; 206(2):411-420.
8) Wu LG, Hamid E, Shin W, et al. Exocytosis
and endocytosis: modes, functions, andcoupling mechanisms. Annu Rev Physiol.
2014; 76:301-331.
9) He B, Guo W. The exocyst complex inpolarized exocytosis. Curr Opin Cell Biol.
2009 Aug; 21(4):537-542.

Ⅳ. 考察
G タンパク質は、細胞遊走や細胞収縮などの現象を制御していることが知られ、外部からの刺激を 7 回膜貫通型受容体(GPCR)が受け、GPCR と共役して働いている。本研究で用いた Histaminなどの細胞外刺激の受容体は GPCR であり、
GPCR/G タンパク質のシグナルが静脈内皮細胞からの vWF 分泌を制御していることを明らかにした。
細胞内では vWF は Weilbel-Palade body に含
まれ、Weilbel-Palade body が細胞膜と融合し、Weilbel-Palade body 内の vWF が細胞外へ分泌される。小胞子と細胞膜の架橋には SNARE タン
パク質が関与しており、本研究では、SNARE タ
ンパク質が vWF の分泌に関与していることを invitro、in vivo 実験で明らかにした。
助成期間内の研究結果は Figure1-8 に示した通りであるが、
今後の研究について、筆者らの仮説、
preliminary な実験結果も踏まえて、記載する。
Figure1－8 のデータでは Gq/11 と SNARE のシグ
ナル伝達について示していないが、SNARE を用いた生化学的な質量分析法では Gq/11 下流で活性化される Rac/Cdc42 関連分子が SNARE と結合することを見出している。またメタボローム解析
や質量分析法を用いた in vivo 解析を用いて、静脈内の凝固因子分泌の細胞シグナル経路を検討し
ている。
Ⅴ．結論
本研究では、静脈内皮の凝固因子分泌機構が深部静脈血栓形成に関与していることが示唆され、Ｇタンパク質 Gq/11 が凝固因子分泌を制御していると考えられた。

7

遺伝子改変血栓症モデルマウスを用いた深部静脈血栓症の病態解析と新規治療法の開発
国立循環器病研究センター

分子病態部・上級研究員

坂

野 史 明

に限って VWF を切断するため、出血副作用の少なⅠ．緒 言

い血小板凝集制御分子として注目されている。

深部静脈血栓症（DVT）や肺塞栓症などの静脈血申請者らは ADAMTS13 欠損マウスを樹立し、本栓塞栓症の発症機序については従来不明な点が多か

欠損マウスでは血小板血栓形成が亢進すること 7, 8)、

ったが、動物モデルを用いた解析から、近年その理

脳梗塞モデルおよび心筋梗塞モデル実験にて梗塞巣解が進んだ 1)。マウス下大静脈の部分狭窄や、電気が拡大すること 9, 10)を報告してきた。本研究では分解を利用した内皮活性化により DVT を引き起こ

ADAMTS13 欠損マウスを用いて、ADAMTS13 にすモデルが開発され 2)、これらを用いた検討から、

よる VWF 活性制御と DVT 発症の関係性を明らか

初期病変の形成に血小板が必須の役割を担うことがにし、組換え体 ADAMTS13 による DVT 治療効果明らかにされている。血小板接着タンパク質であるを解析することで、DVT 予防、治療に ADAMTS13

フォンビルブランド因子（VWF）の欠損マウスでは、を応用可能か検証することを目的とした。

DVT 発症が抑制される 3)。また、血小板と VWF の結合を阻害する抗体を野生型マウスに投与すること

Ⅱ．対象・方法

で DVT を予防できることから、VWF を介した血小板の活性化が DVT 発症のトリガーになると考えら【実験動物】

れている 3)。活性化血小板は好中球から Neutrophil

野生型129/Sv マウスおよび129/Sv マウス系統のExtracellular Traps（NETs）と呼ばれる染色体

遺 伝 的 背 景 を 持 つ ADAMTS13 欠 損 マ ウ ス

DNA を含む核内容物の放出を促し、これを足場と（Adamts13–/–）7)を解析対象とした。

して凝固反応が亢進する 4)。また、活性化血小板自動物実験は国立循環器病研究センター動物実験委
員会の承認を得て実施した。

体もポリリン酸という凝固促進物質を放出することが明らかにされている 5)。静脈血栓はフィブリン主【組換え体 ADAMTS13 の精製】

体の凝固血栓であり、血小板凝集塊の取り込みは動脈血栓に比べて少ない。しかし、最近の知見から凝ヒト ADAMTS13 発現プラスミドを CHO 細胞に

固カスケードの起動に、血小板-VWF 相互作用と白導入し、培養上清中に分泌された組換え体ヒト

血球活性化が重要となることが明らかにされ、これ

ADAMTS13 を回収後、HiTrap SP カラムを用いてらを標的とした新たな治療戦略が期待できる状況に精製した 11)。得られた ADAMTS13 の活性は特異的ある。

蛍光基質 FRETS-VWF73 を用いて測定した 12)。

VWF はモノマーが多数連なったマルチマーとして血中に分泌され、その血小板接着活性はマルチマ【電気分解による下大静脈障害深部静脈血栓症

ーが大きいほど強い。血中では ADAMTS13 という（DVT）モデル 2, 13】

特異的プロテアーゼが VWF マルチマーを適度に断トリブロモエタノール麻酔下、マウス下大静脈に片化することで正常な止血機能が維持されている 6)。

ステンレス電極を挿入して 200µA または 100µA で

ADAMTS13 活性が欠乏すると VWF 依存性の過剰

10 分間通電した。電極の電気分解の結果生じるフリ

血小板凝集により、血栓性血小板減少性紫斑病といーラジカルにより、血管内皮細胞が活性化し、血栓う微小血管障害症が引き起こる 6)。ADAMTS13 は、形成が誘発される。生じる血栓が最大となる処置 2

高ずり応力環境下や VWF が血小板と結合した場合日後に採血して末梢血血小板数を測定後、実体顕微8

鏡下に下大静脈内血栓を取り出し、その湿重量を測定した（図 1）
。また、ADAMTS13 投与による治療効果を検証するため、一部の処置マウスに組換え体
ヒト ADAMTS13（2,600 U/kg）を静注して同様に解析した。

図 1 電気分解による DVT モデル
図 2 DVT 誘発 2 日後の下大静脈内血栓重量
WT：野生型マウス群（N = 13）, Adamts13–/–：Adamts13–/–

Ⅲ．結 果

マウス群（N = 15）, WT+rhADAMTS13：野生型マウスに組換え体ヒト ADAMTS13 を投与した群（N = 8）, Adamts13–/–+rhADAMTS13 ： Adamts13–/– マ ウ ス に 組 換 え 体 ヒ ト
ADAMTS13 を投与した群（N = 9 ）, ＊ P < 0.05 vs.
ADAMTS13–/–群.

まず、200 µA・10 分間の通電条件により DVT を誘発した結果、Adamts13–/–マウスでは野生型マウスに比べて、消耗性と考えられる血小板減少が重症化した（野生型 = 41.1 ± 19.4 x 104/µL，N = 9;

Adamts13–/– = 15.3 ± 8.8 x 104/µL, N = 6；平均値 ±SD; P < 0.01）。この条件下では、Adamts13–/–マウ

Ⅳ．考 察
マウス下大静脈障害 DVT モデルを用いた検討のスで処置 2 日以前に死亡する個体が出現した（9 匹

結果、Adamts13–/–マウスでは野生型マウスに比べ中 3 匹，野生型マウスは 9 匹中死亡個体は 0 匹）。

て静脈血栓形成亢進が認められた。この Adamts13–

Adamts13–/–マウスは静脈血栓誘発刺激に脆弱であ/–マウスの症状は、組換え体ヒト ADAMTS13 の投り、致死性の塞栓が生じた可能性がある。

与により、野生型マウスと同レベルにまで改善され血管障害刺激をより穏やかな 100 µA・10 分間のたことから、少なくともマウスでは ADAMTS13 が通電条件にすると、野生型、Adamts13–/–マウス共

DVT の抑制に寄与していることが明らかとなった。

に処置 2 日目までに死亡例は見られず、血小板減少

DVT 患者の次世代シークエンサーを用いた解析かも緩やかに留まった。しかし、下大静脈内に形成さら、ADAMTS13 遺伝子変異が DVT 発症と有意なれた血栓の重量は Adamts13–/–マウスで野生型マウ関連を示すことも報告されており 14)、ADAMTS13スに比べて大きく（野生型 = 5.6 ± 4.4 mg，

によるVWF依存性血小板接着・凝集の抑制は、
DVT

Adamts13–/– = 10.9 ± 8.4 mg）、ADAMTS13 欠損がをはじめとする静脈血栓塞栓症発症においても重要

DVT 悪化の原因となることが確認された（図 2）。

な役割を担っていると考えられる。

そこで、通電処置後のマウスに組換え体ヒト
ADAMTS13 を投与して治療効果を解析した結果、

Ⅴ．結 論

この投与により Adamts13–/–マウスの血栓重量は野生型マウスと同レベルにまで改善することが明らか

本研究により、マウス DVT 発症におけるになった（野生型〈投与なし〉= 5.6 ± 4.4 mg，野生ADAMTS13 の病態生理学的重要性を解明すること

型〈投与あり〉= 4.0 ± 3.2 mg，Adamts13–/–〈投与ができた 15)。現在、DVT の治療には主に抗凝固薬あり〉= 4.8 ± 3.2 mg）（図 2）。

が用いられるが、長期投与では出血合併症が出現し、投与中止は再発を招くため、副作用の少ない新規治98)療薬の開発が待たれている。ずり応力や血小板接着

Banno F, Chauhan AK, Kokame K, et al. The

依存的に VWF を切断する ADAMTS13 は、病的血

distal

栓のみを溶解し、出血リスクの低い DVT 予防、治ADAMTS13 are required for regulation of in

療薬として格好の候補分子になると考えられる。

vivo thrombus formation. Blood 2009 ; 113 :carboxyl-terminal

domains

of5323-5329.
9)Ⅵ．研究協力者

ADAMTS13

田 嶌 優 子ischemic

国立循環器病研究センター 分子病態部・流動研究

a mouse model of acute myocardial infarction.
Thromb Haemost 2012 ; 108 : 1236-1238.
11) Akiyama M, Takeda S, Kokame K, et al.
CrystalⅦ．参考文献
Mackmanof

thenoncatalytic

domains of ADAMTS13 reveal multipleN.

New

insights

intodiscontinuous exosites for von Willebrandmechanisms of venous thrombosis. J Clinfactor. Proc Natl Acad Sci USA 2009 ; 106 :Invest 2012 ; 122 : 2331-2336.

19274-19279.

Diaz JA, Obi AT, Myers DD Jr, et al. Critical
of

mouse

modelsof12) Kokame K, Nobe Y, Kokubo Y, et al.

venous

FRETS-VWF73, a first fluorogenic substrate

thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol

for ADAMTS13 assay. Br J Haematol 2005 ;2012 ; 32 : 556-562.

129 : 93-100.

Brill A, Fuchs TA, Chauhan AK, et al. von

13) Diaz JA, Hawley AE, Alvarado CM, et al.

Willebrand factor-mediated platelet adhesion

Thrombogenesis with continuous blood flow

is critical for deep vein thrombosis in mousein the inferior vena cava. A novel mousemodels. Blood 2011 ; 117 : 1400-1407.

model. Thromb Haemost 2010 ; 104 :Fuchs TA, Brill A, Wagner DD. Neutrophil

366-375.

extracellular trap (NET) impact on deep vein

7)

structures

thereview6)

possible

ADAMTS13 safeguards the myocardium in

国立循環器病研究センター 分子病態部・部長

5)a10) Doi M, Matsui H, Takeda H, et al.

宮 田 敏 行4)

damage:aggravates

Blood 2010 ; 115 : 1650-1653.

国立循環器病研究センター 分子病態部・室長

3)

brain

deletionameliorating postischemic hypoperfusion.

秋 山 正 志2)

geneneuroprotective role of ADAMTS13 by員

1)

Fujioka M, Hayakawa K, Mishima K, et al.

14) Lotta

LA,

Tuana

G,

Yu

J,

et

al.

thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol

Next-generation sequencing study finds an2012 ; 32 : 1777-1783.

excess of rare, coding single-nucleotide

Morrissey

JH,

Choi

SA.

variants of ADAMTS13 in patients with deep

Polyphosphate: an ancient molecule thatvein thrombosis. J Thromb Haemost 2013 ;links

11 : 1228-1239.

platelets,

SH,

Smith

coagulation,andinflammation. Blood 2012 ; 119 : 5972-5979.

15) Tashima Y, Banno F, Akiyama M, et al.

宮田敏行, 小亀浩市, 秋山正志ほか.

Influence of ADAMTS13 deficiency on

ADAMTS13 研究の最先端. 臨床血液 2012 ;venous53 : 672-679.

Haemost 2015 ; 114 : Epub ahead of print.

Banno F, Kokame K, Okuda T, et al.
Complete deficiency in ADAMTS13 isprothrombotic, but it alone is not sufficient tocause thrombotic thrombocytopenic purpura.
Blood 2006 ; 107 : 3161-3166.

10

thrombosis

in

mice.

Thromb低用量ピルとプロテイン S 抗原量・活性及び遺伝子変異に関する研究

国立循環器病研究センター
周産期・婦人科部

医師

三好 剛一

Ⅰ．緒 言

などアジア系人種では頻度が高く、プロテイ

近年、低用量ピル内服患者における血栓症

ンＳ徳島変異（K196E 変異）は約 55 人に 1が大きな社会問題となっている。ピル内服中人の頻度と報告されている 1)-6)。プロテイン Sの血栓症の発症頻度は 10 万人に 3-4 人と、一抗原量及び活性は年齢や性別により差がある

般的な発症頻度より数倍高くなることが報告

ことは分かっているが、現時点では標準値はされている。血栓症は脳梗塞や肺塞栓症に至存在しない。プロテイン S 遺伝子変異を有す

った場合は神経学的予後のみでなく生命予後れば血栓症を発症する訳ではなく、またプロにも関わるため、発症を予防することが臨床テイン S 遺伝子変異の有無とプロテイン S 抗

上極めて重要である。血栓症のリスク因子と原量及び活性が必ずしも相関していないこと

して、年齢（40 歳以上）、喫煙、肥満、家族も指摘されており、血栓症の発症には幾つか歴等が知られているが、それらのリスク因子の必要条件があると考えられる。

の有無に関わらず血栓症は発症するため、現一方で、妊娠や低用量ピルの内服などのエ

時点ではピル内服後の血栓症発症予測は困難

ストロゲン曝露によりプロテイン S 抗原量及と考えられる。

び活性が低下することは分かっている 7), 8)。

血栓症の発症機序に関してはまだ解明されしかし、エストロゲン曝露によりどの程度低ていない点も多いが、近年、様々な医療分野

下するのか、どの程度まで低下すると血栓症において遺伝子検査が広く臨床応用されるのを発症するのか、さらにそれらにプロテインに伴って、先天性の血栓性素因が注目されてS 遺伝子変異の有無がどのように関与していきている。欧米人では第 V 因子ライデン変異

るのかはまだ十分に検証されていない。そのが多いが日本人では見られない。先天性血栓ため、ピル内服患者における血栓症の発症に性素因として、アンチトロンビン、プロテイ

プロテイン S がどの程度関与しているかは現ン S、プロテイン C の欠損症がよく知られて時点では明らかでない。

いる。このうちプロテイン S 欠損症が日本人

本研究では、低用量ピルの内服前後におけ11るプロテイン S 抗原量・活性の変化及びプロ・主要評価項目

テイン S 遺伝子変異を調べることにより、①①

日本人女性（20-50 歳）におけるプロテイン S

内服前後のプロテイン S 抗原量・活性の変化

抗原量・活性の標準値（プロテイン S 欠損症②

プロテイン S 抗原量・活性と遺伝子変異の診断基準）の作成、②低用量ピルによるプの関連

ロテイン S 抗原量・活性の低下率と遺伝子変・副次評価項目

異との関係を明らかにすることを目的として①

血栓イベントの発症率いる。将来的には、ピル内服前のスクリーニ②

血栓イベント発症者と遺伝子変異の関連

ング検査としてプロテイン S 検査（抗原量・③

ピル内服前後のアンチトロンビン抗原

活性もしくは遺伝子検査）を導入することに量・活性及びプロテイン C 抗原量・活性より、血栓症の高リスク群を抽出できれば、の変化

血栓症の発症を予防することが期待されるた＜検査プロトコール＞

め、臨床的意義は大きいと考えられる。

採血時期はピル内服前及び内服 1 ヶ月後
測定項目①

プロテイン S 抗原量・活性、アⅡ．対象・方法

ンチトロンビン抗原量・活性、プロテイン C＜研究デザイン＞

抗原量・活性、PT、aPTT、D-dimer

多施設共同・前方視的観察研究

測定項目②

＜対象＞

変異）

新規の低用量ピル内服予定者※血栓イベント発生者ではシークエンス解析（20～50 歳までの女性）

を追加

除外規定

＜研究協力施設＞

プロテイン S 徳島変異（K196E①

3 ヶ月以内にピルを内服している場合

・国立循環器病研究センター②

出産後 3 ヶ月以内の場合

・茶屋町レディースクリニック③

抗凝固薬・抗血小板薬内服中の場合

両施設の倫理委員会における承認の下、被験④ピルの内服予定期間が 1 ヶ月未満（緊急者より文書による説明同意（国立循環器病研

避妊など）の場合

究センターバイオバンクの説明同意も含む）⑤

18 歳未満の場合を得た上で実施した。

⑥

遺伝性素因等の個別結果の開示を希望さ＜採血場所、測定場所及び保管場所＞

れない場合

・採血場所

その他、研究者が適切でないと判断した

茶屋町レディースクリニック

場合・測定場所及び保管場所⑦＜予定登録数及び症例登録期間＞

国立循環器病研究センターバイオバンクで集・症例登録期間： 2 年間積・保管、臨床検査室で測定・予定登録数：1350 人

遺伝子検査は国立循環器病研究センター分子＜評価項目及び観察期間＞

病態部で実施観察期間：低用量ピル内服後 6 ヶ月間

12Ⅲ．結 果ず）、陰性例と異なる変化を呈していたが、陽平成 26 年 8 月～平成 27 年 3 月までの 8 ヶ

性例は 1 例のみであり統計学的な検討は困難

月間に集積された 96 検体で解析を行なった。

であった。

21～50 歳までの平均 30±8 歳の生来健康なまた、現時点で集積された症例数では、プ

女性で、平均 BMI は 20±2、血栓症の家族歴

ロテイン S 抗原量・活性の正常値設定及び正を 2 例で有していたが、観察期間中に血栓イ

常群とプロテイン S 徳島変異（K196E 変異）

ベント発症者は認めなかった。処方された低群との比較検討は困難であった。

用量ピルの内訳を表 1 に示す。
表 2 低用量ピル内服前及び内服 1 ヶ月後の各種項目の表 1 低用量ピルの内訳（n=96）

エストロゲンは全て測定値（n=96）

エチニルエストラジオールで、代表的な含有量を記載

低用量ピル内服前及び内服 1 ヶ月後の測定値を以下に提示する（表 2、図 1～6）
。プロテイン S 抗原量・活性及びアンチトロンビン抗原量・活性はいずれも低用量ピル内服後に有意に低下した（p<0.05）。プロテイン C に関して、抗原量は低用量ピル内服前後で変化を認めなかったが、活性は低用量ピル内服後に有意に上昇した（p<0.05）。低用量ピル内服後に、PT-INR および aPTT は有意に延長、一方で D-dimer は有意に上昇した（p<0.05）。
プロテイン S 徳島変異（K196E 変異）のス
クリーニングを全例で実施した結果、1 例でヘテロ接合体変異が検出された。陽性例にお

図 1 低用量ピル内服前後のプロテイン S 抗原量

いて、プロテイン S 抗原量・活性は低用量ピ○はプロテイン S 徳島変異陽性例

ル内服後でいずれも平均値より低値を呈し、とくに活性がより低値であった。一方、プロ
テイン C 抗原量・活性はいずれもピル内服後に上昇、アンチトロンビン抗原量・活性はい
ずれもピル内服前後で変化を認めず（低下せ13図 2 低用量ピル内服前後のプロテイン S 活性

図 5○はプロテイン S 徳島変異陽性例○はプロテイン S 徳島変異陽性例

図 3 低用量ピル内服前後のプロテイン C 抗原量

図 6○はプロテイン S 徳島変異陽性例○はプロテイン S 徳島変異陽性例

低用量ピル内服前後のアンチトロンビン抗原量

低用 量ピル内 服前後 のア ンチト ロンビン 活性

低用量ピルの種類とプロテイン S 抗原量・活性に関して検討したところ、世代が上がる
につれて抗原量は高値を呈し（下がりにくくなり）、第三世代で活性が高い傾向が確認された。

表 3 低用量ピルの種類とプロテイン S 抗原量
年齢、BMI により補正
図 4 低用量ピル内服前後のプロテイン C 活性○はプロテイン S 徳島変異陽性例

14

表 4 低用量ピルの種類とプロテイン S 抗原量の変化行し、その作用機序から、活性型凝固補助因

年齢、BMI により補正し、超低用量ピルと各世代のピル子を蛋白分解して阻害するプロテアーゼ制御

を比較検討

機序、および活性型プロテアーゼ凝固因子を直接阻害するプロテアーゼインヒビター制御
機序に大別される 8)-11)。前者の中心的役割を担っているのがプロテイン C であり、プロテイン S はその補酵素として作用し、活性化プ
ロテイン C の抗凝固作用を高める働きをしている。本研究結果より、低用量ピル内服後にプロテイン S 抗原量・活性が有意に低下し、逆にプロテイン C 活性は上昇していた。低用

表 5 低用量ピルの種類によるプロテイン S 活性の変化

量ピル内服後や妊娠中のプロテイン C 抗原

年齢、BMI により補正し、超低用量ピルと各世代のピル

量・活性に関しては、変化がなかったもの、を比較検討

増加したもののいずれの報告も存在する 9), 10)。
プロテイン S 抗原量・活性の低下に対して、急性期には代償性にプロテイン C 活性が上昇している可能性が考えられた。
一方、アンチトロンビンは、トロンビンや
Xa 因子を分解する作用をもつ重要な凝固抑制因子であり、ヘパリン投与中に低下することが臨床上よく知られている。本研究結果か
ら、低用量ピル内服後にアンチトロンビンのⅣ．考 察

抗原量・活性いずれも生理的な範囲内ではあ

経口避妊薬（ピル）はエストロゲンとプロるが低下を認めており、過凝固状態にあるこ

ゲステロンの合剤で、現在はエストロゲン含とが推察された。また、D-dimer の上昇から、量を 50 µg 以下に減少させた低用量ピルが主

線溶系の亢進も示唆された。

流となっている 8), 9)。エストロゲンは肝にお低用量ピルと凝固制御因子との関連を調査ける血液凝固因子産生を促進し、また血小板した従来の報告では 8)-11)、3～6 周期（ヶ月）や血管内皮にも作用し血液凝固を促進させる

内服後に測定しているのに対して、本研究でことにより、血栓症の危険因子と考えられては 1 周期（ヶ月）の時点で測定を行なっていいる。エストロゲンの低用量化により、血栓るが、1 周期（ヶ月）の時点で既に同様の変症の危険性は減少したが、ピル非服用者に比化が生じていることが確認された。これは、べ依然として血栓症のリスクは高いことが社

低用量ピル内服後の血栓症イベントの多くが会的にも問題となっている。

2～3 ヶ月以内に発生している臨床データと凝固制御機序は複雑でまだ十分に解明され合致する。低用量ピル内服後は、血栓症の症てない点も多いが、主に血管内皮細胞上で進状としては現れてなくとも、血液データ上の

15

変化は早期より生じており注意を要すると考宮田敏行・国立循環器病研究センター・分子

えられた。

病態部

血栓症予防の観点からエストロゲンの低用部長

鎌倉史郎・国立循環器病研究センター・臨床量化が進んでいるが、本研究でのサブ解析結

検査部

部長

果から、プロゲステロンの種類によるプロテ

宮本恵宏・国立循環器病研究センター・予防

イン S 抗原量・活性への影響も無視できない

健診部

可能性が示唆された。近年、プロゲステロン

西村邦宏・国立循環器病研究センター・予防の種類によってプロテイン S や組織因子経路

医学・疫学情報部

インヒビターへの影響が異なるとの報告もあ植田初江・国立循環器病研究センター・病理り 8)-11)、今後、さらに症例を集積する中で、部

エストロゲンの含有量のみでなく、プロゲス

松山高明・国立循環器病研究センター・臨床

テロンの種類に関する検討も必要と考えられ

検査部

部長

室長

部長

臨床病理科

医師

た。

Ⅶ．参考文献現時点で集積された症例では、プロテイン
S 徳島変異（K196E 変異）陽性例は 1 例のみ

1)

宮田敏行, 岡田浩美, 川崎富夫ほか. 日であり、統計学的な検討は困難であった。約

本人の血栓性素因. 臨床血液 2009; 50:

55 人に 1 人と報告されており、検出頻度とし

381-388.
2)ては妥当であったが、今後、さらなる症例の根木玲子, 宮田敏行. 遺伝性の凝固異常と静脈血栓塞栓症 . 今月の臨床 2011;

集積が必要と考えられた。

65: 166-169.
3)

Ⅴ．結 論
低用量ピル内服後 1 ヶ月の時点で既に凝固

Miyata T, Kimura R, Kokubo Y, et al.
Genetic risk factors for deep vein

制御因子に変化が生じており、過凝固状態でthrombosis

あることが確認された。特にプロテイン S 及

importanceびアンチトロンビン活性が有意に低下し、逆mutation. Int J Hematol 2006; 83:にプロテイン C 活性は上昇していた。今後、

217-223.

日本人特有の遺伝子変異であるプロテイン S

4)

among
of

proteinJapanese:S

K196E

Miyata T, Sato Y, Ishikawa J, et al.

徳島変異（K196E 変異）との関連性を明らか

Prevalence of genetic mutations inにするため、さらに症例の集積を進めていく

protein S, protein C and antithrombin

予定である。

genes in Japanese patients with deepvein thrombosis. Thromb Res 2009;
124: 14-18.

Ⅵ．研究協力者吉松

5)

淳・国立循環器病研究センター・周産期・婦人科部

Koenen RR, Tans G, van Oerle R, et al.
The APC-independent anticoagulant

部長

出田和久・茶屋町レディースクリニック・院

activity of protein S in plasma is長decreased by elevated prothrombin

16

levels due to the prothrombin G20210A
mutation. Blood 2003; 102: 1686-1692.
6)

Neki R, Fujita T, Kokame K, et al.
Genetic analysis of patients with deepvein thrombosis during pregnancy andpostpartum. Int J Hematol 2011; 94:
150-155.

7)

Faught W, Garner P, Jones G, et al.
Changes in protein C and protein S
levels in normal pregnancy. Am J
Obstet Gynecol 1995; 172: 147-150.

8)

van Vliet HA, Bertina RM, Dahm AE,
etal.

Different

contraceptives

effects

containing

of

oral

different

progestogens on protein S and tissue
factor pathway inhibitor. J Thromb
Haemost 2008; 6: 346-351.
9)

Blanco-Molina Á. Oral contraception in
women with mild thrombophilia: what
have we learned recently? Thromb Res
2012; 130: S16-18.

10) Tans G, Curvers J, Middeldorp S, et al.
A randomized cross-over study on theeffectsoflevonorgestrel-

desogestrel-containing

and
oral

contraceptives on the anticoagulant
pathways. Thromb Haemost 2000; 84:
15-21.
11) Raps M, Helmerhorst FM, Fleischer K,
Dahm AE, et al. The effect of different
hormonal contraceptives on plasma
levels of free protein S and free TFPI.
Thromb Haemost 2013; 109: 606-613.

17脊椎手術における静脈血栓塞栓症の実態と早期診断方法に関する研究金沢大学大学院医薬保健学総合研究科 先進運動器医療創成講座 特任助教

吉岡克人
Ⅰ．緒 言

Ⅱ．対象・方法

静脈血栓塞栓症（Venous thromboembolism:

対象は 2008 年 10 月から 2014 年 12 月までに行VTE）に対する医学的・社会的認識の向上に伴い、った脊椎手術 1268 例のうち、下記に示すプロトコ

整形外科領域では特に下肢の人工関節置換術後の合ールに従い検査を行い、以下の 7 群に該当する 604

併症として注目され多くの研究がなされている。一例とした。感染例や透析例、18 歳未満、術前に抗凝方で、脊椎領域における VTE の研究は少なく、脊固薬を服薬中の症例は除外した。Group 1：頸椎症

椎手術後の VTE に関してはいまだ十分に解明され性脊髄症に対して椎弓形成術を施行した 108 例、ていない。しかしながら、硬膜外血腫が危惧される

group 2：頸椎変性疾患に対し頚椎固定術を施行した

脊椎手術においても、最近では国外を中心に抗凝固59 例、group 3：胸腰椎変性疾患に多椎間固定術を薬による予防法が行われつつある現状を考えると施行した 93 例、group 4：腰部脊柱管狭窄症に対し

1)、今後国内でも安易に予防的抗凝固薬が使用され腰椎後方除圧術を施行した 120 例、group 5：腰椎る危険性がある。リスクの高い症例には予防的抗凝変性すべり症に対し腰椎椎体間固定術（1 椎間固薬の導入も検討の余地があると考えるが、そのた

PLIF：Posterior lumbar interbody fusion）を施行

めにも脊椎周術期 VTE の実態解明が必要である。

した 79 例、group 6：脊椎腫瘍に対し後方除圧固定

脊椎領域における最も大きな問題点は、単一疾患、術を行った 55 例、group 7：脊椎腫瘍に対し腫瘍脊単一術式による検討がほとんどないことである 2)。

椎骨全摘術を行った 92 例。
変性疾患である Group 1

過去の報告では異なる疾患や部位、手術方法が含まから 5 は手術部位、手術方法を統一し分類した。一れているため、それぞれの論文を比較することが不方、Group 6、7 では脊椎腫瘍という特殊な病態を可能である。そのため、VTE ガイドラインでは脊椎対象としており、手術部位は上位胸椎から腰椎まで手術と一括りで評価され、中リスク群と位置付けら含んだ。プロトコールは以下の如くである。VTE 予

れている。また、VTE 研究の多くは、下肢深部静脈防として、全例に対し下肢弾性ストッキング、間欠塞栓（Deep vein thrombosis: DVT）のスクリーニ

的空気圧迫法を麻酔開始時から離床まで行った。硬

ング検査は行っているものの、肺血栓塞栓

膜外血腫の危惧から予防的抗凝固療法は使用してい（Pulmonary thromboembolism: PTE）のスクリーない。全症例術後 7～10 日に下肢静脈ドップラーエ

ニングは併用していない。DVT が PTE の危険因子

コー、肺血流シンチグラフィーを施行し、血栓が疑であることは言うまでもないが、無症候性の PTE

われた場合は、症状の有無に関係なく静脈造影マルが症候性 PTE の危険因子であることから 3)、VTE

チスライス CT（64 列）を行い、血栓の有無を確認の実態を調査するには PTE のスクリーニングも重した。VTE 発生頻度を各群で比較し、さらに性別、要と考える。

年齢、手術部位、手術時間、BMI (Body mass index)、

そこで本研究では、脊椎手術全例に DVT 及び術後臥床期間、術前麻痺の有無、腫瘍の有無、につPTE のスクリーニングを行い、疾患、術式別に VTE

いて検討を行った。統計学的検討に χ2 検定、発生頻度を調査し、その危険因子について検討した。

Mann-Whitney U 検定、Fisher’s exact tests、二項さらに VTE の早期スクリーニングとして、可溶性

ロジスティック回帰分析を用い、有意水準を 5％とフィブリン(SF)、D-dimer の有用性について評価しした。また、術前、術後 1 日目に SF を、術前、術た。

後 7 日目に D-dimer を測定し、VTE あり群、VTEなし群で比較検討した。

18

表１ 多変量解析

Ⅲ．結 果
VTE の発生頻度は 10.6%(64/604 例)であり、DVTを 9.3％（56/604 例）、PTE を 1.8％（11/604 例）に認めた。DVT の内訳は遠位型 DVT が 48 例、近位型 DVT が 8 例であり、いずれも無症候性 DVTであった。一方、呼吸苦など症状を有した PTE 症
例は 0.59％(2/340 例)であった。2 症例とも、未分化
ヘパリン、及びワーファリン治療で改善している。
PTE11 例のうち DVT を併発していない PTE 単独

Ⅳ. 考察

発生が 8 例（72.7%）を占めた。遠位型 DVT48 例

術後VTE の発生頻度は、手術部位や手術方法、は全例経過観察のみであり、近位型 DVT 及び PTE

体位などによって異なることが知られている。しかの16 例中治療に同意を得た15 例に対して未分化ヘしながら、脊椎領域での研究の多くは脊椎全般を対パリンもしくは低分子ヘパリン、ワーファリンで治象としているものが多く、データベースやメタアナ療を行った。VTE の発生頻度は group 1 からリシスの検討も行われてはいるが、発生頻度は 0.3%

group7 それぞれ2.8%、
3.4%、
10.8%、
12.5%、
10.1%、～15.5%と報告により大きく異なる 4-7)。さらにス

15.1%、19.6%であった（図 1）。危険因子の検討で

クリーニングの有無や予防方法が施設によって異なは、女性（P=0.036）、高齢(P=0.006)、頸椎以外るという大きな問題点も抱えている。従って、過去（P=0.016）に有意差を認めた（表 1）。 また、SF、の脊椎手術後 VTE の研究では危険因子に対する明d-dimer を測定した結果、group 4 に相当する腰椎確な記述は少ない 8)。

除圧群においてのみ、術後 1 日目の SF が有意差を今回の検討では、頸椎手術(group 1, 2)の VTE

もって VTE あり群で高値であった（p=0.020）。一発生頻度は 3.0% (5/167 例)であり、しかも全例遠位方で、他の group では有意差は見られず、また、術型のみの VTE であった。一方腰椎手術(group 4, 5)

後 7 日目の d-dimer ではいずれの群においても有意では11.6% (23/199例)と手術部位でかなりの差があ

差を認めなかった。

ることが判明した。両群において術中体位は同じであり、手術時間や手術侵襲にも差はない。従って、頸椎という手術部位自体が、VTE 発生リスクを下げている要因と考える。また、頸椎での除圧術（group1）と固定術（group 2）では VTE 発生頻度にほとんど差がなく、同様に腰椎での除圧術（group 4）と固定術（group 5）でも VTE 発生頻度は同等であった。一般的に手術侵襲が高くなる固定術は VTE の

20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

危険因子となるが 9)、今回の結果からは同一部位でPTE + DVT術と固定術との間に、VTE 発生頻度に大きな差がな
PTE

いといえる。しかしながら、group 3 の多椎間固定
では VTE リスクが 10%を超え、近位型 DVT、PTE
が 40%を占めていた。Group 3 は group 5 とほぼ同様の手術方法であるが、固定範囲が広く、手術時間も大きく違いがあることから、やはり手術侵襲が非常に大きくなる場合は、VTE 発生頻度に影響を与えている可能性があると考える。

1
図1

あれば、少なくとも変性疾患に対する一般的な除圧

2

3

4

5

6

7

また、脊椎腫瘍手術に対する VTE の詳細な検討は過去に報告がなく、本研究では group 7 がVTE の内訳

19.6%と高率に VTE を認めた。
しかも、近位型 DVT、

19

PTE が 55.6%を占めるなど、より重症度が高くなる

り群で有意に高値を示したが、VTE に対する早期ス傾向にあった。腫瘍脊椎骨全摘術では、腫瘍椎体をクリーニングのマーカーとしては不十分な結果であ摘出するために椎体前方の動静脈（下大静脈など）った。一方、腫瘍例では高率に VTE が発生していを椎体から剥離することが必要であり、特殊な手術

た。
また、
DVT を併発しないPTE 単独発生が72.7％

操作自体がVTE の原因となっている可能性がある。

を占めており、リスクの高い症例に対しては、PTE

一般的に危険因子と考えられる BMI や術後臥のスクリーニングも必要であると考える。

床期間は、今回の検討では有意差がでなかった。
BMI 35 以上の症例は 8 例のみと、今回の症例群でⅥ. 研究協力者

は肥満症例が少なかったことが影響した可能性があ村上 英樹 金沢大学医薬保健学域機能再建学る。また、術後臥床による VTE 発生に関しては、（整形外科学）准教授

下肢弾性ストッキングや間欠的空気圧迫法による予出村 諭防を行ったため回避できたと考えた。

金沢大学医薬保健学域機能再建学（整形外科学）講師

DVT が PTE の危険因子であるため、DVT 予

加藤 仁志 金沢大学医薬保健学域機能再建学

防、DVT スクニーニングに関する注目度は高い。本

（整形外科学）助教

研究でも潜在的な危険因子とされる遠位型 DVT が

米澤 則隆 金沢大学大学院医学系研究科がん医35 例と最多であり、中でもヒラメ筋静脈での血栓を科学専攻 大学院生

88.6%に認めた。これは、スクリーニング検査なし

土屋 弘行 金沢大学医薬保健学域機能再建学

では見逃されやすい、無症候性の DVT が実際には（整形外科学）教授

多く存在していることを示している。
しかしながら、
PTE を認めた 11 例のうち 8 例は下肢静脈エコー、Ⅶ. 文献

静脈造影マルチスライス CT のいずれにおいても

1.

Strom

RG,

Frempong-Boadu

AK:

DVT を認めなかった。おそらく、スクリーニング検

Low-molecular-weight heparin prophylaxis 24 to

査時には DVT が既に遊離していたと思われる。

36 hours after degenerative spine surgery: risk of

Dearborn らは、
PTE 症例のいずれも臨床的に DVT

hemorrhage and venous thromboembolism. Spineの兆候はなかったと報告し 10)、Pateder らは

2013; 38: E1498-1502.

PTE10 例中 DVT 陽性だったのは 2 例のみだったと

2. Epstein NE : Intermittent pneumatic

報告している 11)。従って、DVT スクニーニングに

compression stocking prophylaxis against deep

おいては、スクニーニングの時期により血栓の有無

venous thrombosis in anterior cervical spinalや部位が異なることを認識する必要があると考える。

surgery: a prospective efficacy study in 200以上より、高齢女性、脊椎腫瘍手術、麻痺といった

patients and literature review. Spine 2005; 30:

複数の危険因子を併せ持つ症例では、DVT だけでな

2538-2543.

く PTE のスクリーニング検査を考慮すべきである。

3. Stein PD, Matta F, Musani MH, et al : Silent

また、VTE の早期スクリーニング検査として、

pulmonary embolism in patients with deep

d-dimer や SF が有用との報告が散見される。しかvenous thrombosis: a systematic review. Am J

しながら本研究では、腰椎除圧群においてのみ術後Med. 2010; 123: 426-431

1 日目の SF で有意差を認めたものの、感度は決し

4. Smith JS, Fu KM, Polly DW Jr, et al :て高いものではなく、スクリーニングとして十分な

Complication rates of three common spine

結果とは言えなかった。

procedures

and

rates

of

thromboembolism

following spine surgery based on 108,419
procedures: a report from the Scoliosis Research

Ⅴ. 結論
VTEの発生頻度はgroup 1 からgroup7それぞSociety Morbidity and Mortality Committee.

れ 2.8%、3.4%、10.8%、12.5%、10.1%、15.1%、

Spine 2010; 35: 2140-2149.

19.6%と group 間で差を認めた。頚椎手術での VTE

5. Gephart MG, Zygourakis CC, Arrigo RT, et

発生は非常に少なく、しかも遠位型 DVT のみであalった。除圧群における術後 1 日目の SF は VTE あThoracic/Thoracolumbar Spinal Fusion. World

20:

VenousThromboembolism

AfterNeurosurg 2012; 78: 545-552.
6. Sansone JM, del Rio AM, Anderson PA : Theprevalence of and specific risk factors for venous
thromboembolic disease following elective spine
surgery. J Bone Joint Surg Am 2010; 92: 304-313.
7. Oda T, Fuji T, Kato Y, et al : Deep venous
thrombosis after posterior spinal surgery. Spine
2000; 15: 2962-2967.
8. Brambilla S, Ruosi C, La Maida GA, et al :Prevention of venous thromboembolism in spinal
surgery. Eur Spine J 2004; 13: 1-8.
9. Goldhaber SZ : Risk factors for venous
thromboembolism. J Am Coll Cardiol 2010; 56:
1-7.
10. Dearborn JT, Hu SS, Tribus CB, et al.
Thromboembolic

complications

after

major

thoracolumbar spine surgery. Spine 1999; 24:
1471-1476.
11. Pateder DB, Gonzales RA, Kebaish KM, etal : Pulmonary embolism after adult spinal
deformity surgery. Spine 2008; 33: 301-305.

21