NoSpin HepaRG™ 細胞

簡易培養ガイド

どうやって培養するの？
①培地調製②融解・播種③ Induction④代謝試験

NoSpinHepaRG編？

？

Triangle Research Labs — Now Part of Lonza⑤毒性試験

NoSpin HepaRG™ は BIOPREDIC International 社製造の成人肝機能のフェノタイプを有した肝セルラインです。ヒト初代肝臓細胞と相関した多くの特徴を持ち、初代細胞と同じ用途での使用が可能です。当細胞は細胞融解後の遠心およびセルカウントのステップを必要せず、CoA 記載の細胞数に基づいてプレートに播種するだけのスピーディーな実験構築を可能とします。各ロットは一貫した細胞数、生存率、機能性を有しています。
初代肝臓細胞と同様に、増殖しない使い切りの細胞製品です。

② 融解・播種～従来の HepaRG™ 細胞と比較して２ステップを省略する融解・播種プロトコル～
NoSpin HepaRG™ 細胞① NoSpin HepaRG™ 培地調製
完全培地の調製
融解 / 播種用完全培地（MH100 ＋MHTAP）

誘導試験用 完全培地
（MH100 ＋MHIND）

従来の HepaRG™ 細胞

改良された凍結プロトコル（凍結バイアルにつき 0.5 ml 細胞）

クラシカルな凍結プロトコル（凍結バイアルにつき 1 ml 細胞）

0.5 ml / 8 million cells / 10% DMSO

1.0 ml / 8 million cells / 10% DMSO

～改良された融解プロトコル～～クラシカルな融解プロトコル～① 7.5ml の融解 / 播種培地で融解し、8ml 細胞懸濁

① 9 ml の融解 / 播種培地で融解および細胞懸濁液を調製する（8ml / 8 million cells / 0.5% DMSO）（融解 / 播種培地 w/0.5%DMSO）

遠心、セルカウントのステップを省略

基本培地

MH-100融解 / 播種用添加剤（MHTAP）

誘導試験用添加剤（MHIND）

100 ml 調製済基本培地に添加剤を全量加える。

100 ml 調製済基本培地に添加剤を全量加える。

毒性試験用 完全培地
（MH100+MHPIT）

代謝試験用 完全培地
（MH100 ＋MHMET)

7.5 ml 融解 / 播種培地

MH100-2

99 mL 基 本 培 地 に 1mL

細胞懸濁液をプレートに播種する（CoA に記載されている細胞播種量をご参照下さい）。

凍結バイアル

融解 / 播種培地

添加因子を加える。

8 ml 細胞懸濁液に＋αの融解 / 播種培地を添加する（CoA をご参照下さい）。

0.5 ml 細胞溶液

基本培地

添加因子

④ 0.96 million cells /ml の細胞密度に調整後、細胞をプレートに播種

基本培地

MH-100MH100-1③ セルカウント（Viability 、収量を確認）② CoA の細胞播種量にそって、細胞をプレートに播種

基本培地の調製 (MH100)② 遠心、Wash 、再懸濁

37℃ウォーターバス
90 秒

融解 / 播種培地

8 ml 細胞懸濁液
基本培地

基本培地

MH-100プレートタイプ

MH-100毒性試験用添加剤（MHPIT）

代謝試験用添加剤（MHMET）

100 mL 調整済み基本培地

100 mL 調整済み基本培地に添加剤を加える。に添加剤を加える。

NoSpinHepaRG 細胞
Lot: HNS1001の場合＊調製後の使用期限：冷蔵保存 1 か月以内

各ロットの CoAは右記サイトをご覧ください

6 well plate
12 well plate
24 well plate
48 well plate
96 well plate

オリジナルの細胞懸濁液 8 mlに融解 /播種培地を添加して、以下の容量にする

1ウェル当たりの9.1 ml
11.4 ml
9.5 ml11.4 ml
12.6 ml

2 ml
1 ml
0.5 ml0.2 ml0.1 ml

播種量

播種可能な
ウェル数

4111957126

細胞数 /ウェル2x106 cells
8x105 cells
4.8x105 cells
1.6x105 cells
7.2x10 4 cells

http://triangleresearchlabs.net/hepatocyte-inventory/nospin-heparg-inventory/

NoSpin HepaRG™ — 初代肝臓細胞のオルタナティブとしてHepaRG™ 細胞は初代肝臓細胞より長期間の培養が可能です（初代細胞 7日に対して21日間）
CYP 誘導試験やトランスポーター試験など多くの薬物動態アプリケーションに対応④ 代謝試験
代謝試験のタイムスケジュール同一ドナーのため、再現性の高い、一貫したデータを取得可能です

0 hours

融解および細胞播種

融解 / 播種培地（MH100 ＋ MHTAP）

NoSpin 細胞融解後、CoA 記載の細胞数に基づいてプレートに播種するだけ

24 hours

融解 / 播種培地の除去 → 代謝試験用培地に培地交換

代謝試験用培地（MH100 ＋ MHMET）

96 hours

テスト化合物を含む代謝試験用培地に培地交換代謝試験用培地（MH100 ＋ MHMET）③ Induction
Induction 試験のタイムスケジュール
融解 / 播種培地（MH100 ＋ MHTAP）

0 hours

融解および細胞播種

6 hours

融解 / 播種培地の除去 → 毒性試験用培地：
Pre-induction/Tox meduim に培地交換

72 hours

毒性試験用培地（Pre-induction/Tox meduim）の除去 → Inducer 化合物を含む誘導試験用培地に交換

誘導試験用培地（MH100 ＋ MHIND）

96 hours

Inducer 化合物を含む誘導試験用培地の培地交換

誘導試験用培地（MH100 ＋ MHIND）

120 hours

Inducer 化合物を含む誘導試験用培地の除去→ 基質を含む誘導試験用培地に培地交換

誘導試験用培地（MH100 ＋ MHIND）

Fold inductionof control CYP activity

20⑤ 毒性試験

毒性試験用培地：

毒性試験のタイムスケジュール

Pre-induction/Tox meduim（MH100 ＋ MHPIT）融解および細胞播種

24 hours

融解 / 播種培地の除去 → 毒性試験用培地：
Pre-induction/Tox meduim に培地交換

96 hours

NoSpin HepaRG™ における
CYP 1A2 2B6 3A4誘導試験

150 hours

144 hours

10168 hours

5

毒性試験用培地：

Pre-induction/Tox meduim の培地交換
毒性試験用培地：

Pre-induction/Tox meduim の培地交換
テスト化合物を含む毒性試験用培地：
Pre-induction/Tox meduim に培地交換

融解 / 播種培地（MH100 ＋ MHTAP）
毒性試験用培地：

Pre-induction/Tox meduim（MH100 ＋ MHPIT）
毒性試験用培地：

Pre-induction/Tox meduim（MH100 ＋ MHPIT）
毒性試験用培地：

Pre-induction/Tox meduim（MH100 ＋ MHPIT）
毒性試験用培地：

Pre-induction/Tox meduim（MH100 ＋ MHPIT）

0
1A2 - 50µM
Omeprazole

2B6 - 1mM
Phenobarbital

3A4 - 10µM
Rifampicin＊ NoSpin HepaRG™ 培地には抗生物質は含まれておりません。長期間の培養においては抗生物質の添加をお奨め致します。
＜ご参考製品：ペニシリン - ストレプトマイシン溶液 SIGMA-ALDRICH P0781 ＞

オーダー情報
製品番号

製品名サイズ

定価（円）

NSHPRG

NoSpin HepaRG 細胞> 8 x 106

71,000MH100HepaRG 基本培地

100 ml

15,000MHTAP

HepaRG 融解 / 播種用添加剤

1 Kit

15,000MHIND

HepaRG 誘導試験用添加剤

1 Kit

15,000MHPIT

HepaRG 毒性試験用添加剤

1 Kit

15,000MHMETHepaRG 代謝試験用添加剤

1 Kit

15,000!

＊各添加剤を HepaRG 基本培地（MH100）に添加して、ご利用いただきます

RES-LF1802-04