博

士

学
内

位

容

の

要

お

よ

び

論

文

旨

審 査 の 結 果 の 要 旨
平 成 20 年 度

平 成 21 年 12 月 30 日

関

西

医

科

大

学

は

し

が

き

本集は学位規則（昭和 28 年 4 月 1 日文部省令第 9 号）第 7 条による公表を目的として平成 21 年 3 月 31 日までに本学で学位を授与した者の論文内容の要旨および審査の結果の要旨を収録したものである。

◎
掲載順

学位記番号

氏

名

1491

甲第 830 号 前

羽

宏

医

甲第 831 号 小

西

博

士
論

史

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18535882

1492

学

将

文

題

目

頁

Non-invasive detection of ischemic left ventricular
dysfunction using rest gated SPECT: expectation ofsimultaneous evaluation of both myocardial perfusion
and wall motion abnormality................................................ 1
Gene transfer into guinea pig cochlea using adeno-

矢

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18338819

associated virus vectors....................................................... 21493

Long-Term Donor-Specific Tolerance in Rat Cardiac
Allografts by Intrabone Marrow Injection of Donor Bone
Marrow Cells........................................................................ 3

甲第 832 号 郭可泉

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18192918

1494

甲第 833 号 覺道（櫛田）奈津子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17543283

1495

甲第 834 号 谷

Fibroblast growth factor-2 stimulates adipogenic
differentiation of human adipose-derived stem cells............................................................................................... 5

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17545218

Hodgkin’s Reed-Sternberg cell line (KM-H2) promotesa bidirectional differentiation of CD4+CD25+Foxp3+
T cells and CD4+ cytotoxic T lymphocytes from CD4+
naive T cells ......................................................................... 61496

Facilitation of hematopoietic recovery by bone grafts

尻甲第 835 号 宋

力

昌

燁

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18514748

with intra-bone marrow-bone marrow transplantation............................................................................................... 71497

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18431236

Analysis of Tolerance Induction Using Triple Chimeric Mice:
Major Histocompatibility Complex-Disparate Thymus,
Hemopoietic Cells, and Microenvironment........................ 91498

The combination of glycyrrhizin and lamivudine can

甲第 836 号 崔

甲第 837 号 若

文

松

昊

隆

宏

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17982673

reverse the cisplatin resistance in hepatocellular
carcinoma cells through inhibition of multidrug
resistance-associated proteins .......................................... 101499

N-methyl-N-nitrosourea-induced mammary

甲第 838 号 豊島（塚本）麗子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17611653

carcinogenesis is promoted by short-term treatment
with estrogen and progesterone mimicking pregnancy
in aged female Lewis rats .................................................. 11

1500

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18199003

LPS Induces Hypoxia-Inducible Factor 1 Activation in
Macrophage-Differentiated Cells in a Reactive Oxygen
Species-Dependent Manner .............................................. 12

1501

Human cord blood cells can differentiate into retinal

甲第 839 号 西

甲第 840 号 小

憲

池

直

一

郎

子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18320714

nerve cells .......................................................................... 14

1502

甲第 841 号 神

原

知

子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19951072

Propofol Suppresses Prostaglandin E2 Production in
Human Peripheral Monocytes........................................... 15

1503

Immunohistochemical identification of messenger

甲第 842 号 藤

田

賢

吾

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18642007

RNA-related proteins in basophilic inclusionsof adult-onset atypical motor neuron disease ................... 171504

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18794646

The Alpha 2A-Adrenergic Receptor Gene Polymorphism
Modifies Antidepressant Responses to Milnacipran ........ 181505

Elevated intracellular calcium in neutrophils in patients

甲第 843 号 分

野

甲第 844 号 山

正

戸

貴

史

子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19400826

with Down syndrome ......................................................... 191506

Neuroprotective effects of amyloid β-derived non-toxic

甲第 845 号 熊正梅

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17499922
PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17391709

tripeptide (Aβ32–34, Ile-Gly-Leu) against toxic amyloid
β-induced neuronal toxicity in vitro and in vivo ............... 20

1507

Circulating Naïve and CD4+CD25high Regulatory

甲第 846 号 三

好

秀

明

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18376303

T Cells in Patients With Autoimmune Pancreatitis.......... 22

1508

Helix-rich transient and equilibrium intermediates of

甲第 847 号 松

村

義

隆

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18295961

equine β-lactoglobulin in alkaline buffer ........................... 23

1509

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19239433

Phagocytosis of heat-killed Staphylococcus aureus byeosinophils: comparison with neutrophils ........................ 25

1510

Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guérin suppresses

甲第 848 号 畑埜

甲第 849 号 横

泰

子

井

崇

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18703465

inflammatory Th2 responses by inducing functional
alteration of TSLP-activated dendritic cells...................... 26

1511

Increased nitric oxide production by T-and B-cells in
idiopathic nephrotic syndrome .......................................... 28

甲第 850 号 居

原

田

安

奈

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19153775

1512

甲第 851 号 松

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18390819

Angiotensin II type 1 receptor blocker preservestolerance to ischemia-reperfusion injury in Dahl
salt-sensitive rat heart ....................................................... 29

1513

Hepatitis B Virus X Protein Shifts Human Hepatic

甲第 852 号 村

久

田

誠

治

美

樹

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19263472

Transforming Growth Factor (TGF)-βSignaling from
Tumor Suppression to Oncogenesis in Early Chronic
Hepatitis B.......................................................................... 30

1514

Contribution of neural cell adhesion molecule (NCAM)
to hemopoietic system in monkeys................................... 32

乙第 664 号 加

藤

順

子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18575864

1515

乙第 665 号 福

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18442205

Effect of biliary obstruction and internal biliary drainage
on hepatic cytochrome P450 isozymes in rats.................. 33

1516

The acupuncture treatment of severe axial dystonia

乙第 666 号 谷

島

愼
万

太
喜

郎
子

PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16259404............................................................................................. 34

2009 年

第 2・3・4 合併号【1491】
まえば
ひろふみ
氏 名（本 籍）前 羽 宏 史（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 830 号
学位授与の日付 平成 20 年 5 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Non-invasive detection of ischemic left ventricular dysfunction using rest gated SPECT:
expectation of simultaneous evaluation ofboth myocardial perfusion and wall motion
abnormality
論文審査委員

主査（教授）松田博子（教授）澤田敏 （教授）岩坂壽二

論文内容の要旨【研究背景】
高度左心機能障害を有する慢性心不全患者において，その原因疾患を同定することは治療方針を決定する上で重要である．その原因疾患の中でも虚血性心疾患は，生命予後を規定する重要な因子であるものの，一方では血行再建を行うことにより生命予後の改善が見込めるという特徴を有する
ため，これら患者群においては心筋虚血を検出す
ることは必須である．冠動脈造影検査は虚血性心疾患の診断に大きな位置を占めるものの，高齢者
や糖尿病・腎障害を合併する患者群では造影剤腎症を来たすことがあり躊躇することをしばしば経験する．非侵襲的検査による確定診断が望ましい
ものの，その方法，手段が確立していないのが現状である．心電図同期心筋 SPECT 検査は局所の心筋灌流と壁運動異常を同時に評価できる特徴を有し，その乖離部を評価することにより負荷検査を用いることなく慢性虚血領域を診断可能な利点を有する．
【研究目的】
安静心電図同期心筋 SPECT を用いて，高度左心機能障害を有する慢性心不全患者において，虚血性心筋症患者を特徴付けることが可能か否かを検討することを目的とした．
【研究方法】
対象患者は左室造影もしくは心臓超音波検査に

1

おいて，左室駆出率 40％以下を示した 54 人の慢性心不全患者とした．虚血性心筋症の定義は心筋梗塞，血行再建の既往，または左前下行枝近位部に 75％以上の有意狭窄を認めるもの，2 枝以上に75％以上の有意狭窄を認めるものとし，非虚血性心筋症の定義は冠動脈疾患の既往がなく，冠動脈造影においても40 ％以上の狭窄を認めないものとした．これらの定義を満たした虚血性心筋症 32
人，非虚血性心筋症 22 人に加え，正常対象群 71
人と比較することにより検討を行った．
99m
Tc-tetrofosmin 740 MBq を用いた安静時心電図同期 SPECT を撮像し，局所心筋灌流および壁運動は心電図同期プログラムより自動的に算出された数値を用いて評価を行った．従来の心電図同期 SPECT は 20 セグメントモデルであるが，正常群の検討から我々日本人の small heart においては，心基部心筋灌流の評価に対する信頼性が乏し
いと考えられたため，心基部 6 セグメントを除いた 14 セグメントモデルを使用した．各領域の核種集積率が正常対象群の平均 −1 SD 以下の領域を
集積低下領域，平均 −2 SD 以下の領域を高度集積低下領域と定義した．また，局所壁運動が正常対象群の平均 −1 SD 以下の領域を収縮能低下領域，
平均 −2 SD 以下の領域を高度収縮能低下領域と定義し検討を行った．
【結果】
虚血性心筋症と非虚血性心筋症において，左室駆出分画，左室拡張末期容量に差は認められず（各々，31±7 vs. 27±9％，161±60 vs. 189±69 ml），
収縮能低下領域数と高度収縮能低下領域数はいずれも差を認めなかった（各々，13.5±1.1 vs. 13.6±0.9領域，10.6±2.0 vs. 9.9±3.0 領域）が，心尖部領域においては（（6.7±1.1 vs. 5.6±2.0 領域，p<0.001））と虚血性心筋症群で有意に多く認められた．集積低下領域数は，虚血性心筋症において有意に多く認められた（9.3±3.8 vs. 2.0±2.8 領域，p<0.0001）．
ROC 解析から集積低下領域数が 4 以下の場合，
感
度＝88％，特異度＝91％をもって非虚血性心筋症を鑑別することが可能であった．更に，非虚血性心筋症患者が高度集積低下領域を全く有さなかったのに対し，虚血性心筋症は高度集積低下領域を4.4±0.2 領域認めた．
【考察】
従来の報告では，虚血性心筋症は壁運動異常が2冠動脈の走行に依存し局在するのに対し，非虚血性心筋症はび漫性に壁運動が低下することが多いとされる一方で，壁運動評価のみでの鑑別は困難であるとの報告もある．本研究では心尖部領域の高度収縮能低下数の比較により両者の鑑別が可能であると考えられた．冠動脈疾患により，高度左心機能障害を来たす場合，心尖部を含む広範囲の虚血および心筋障害が必須であることの裏づけであると考えられる．つぎに心筋灌流に関しては，不可避である attenuation の関与もあり，虚血性心筋症の検出能力は一定の見解が得られていない．
本研究においては，14 領域中 4 領域以上に集積低下を認める場合虚血性心疾患であることが高い
特異度をもって示されが，これに関しては心電図
同期 SPECT を用いて，拡張期イメージのみを使用することにより部分容積効果を減弱させることを介して虚血性心筋症を鑑別できたものと考えられる．本法により運動あるいは薬物負荷を行う
ことなく，安静像のみで虚血性心筋症を鑑別し得たことは，NYHA class IV と評価し得る非代償性
うっ血性心不全状態である患者に対しても，有用であることを意味し，臨床的に極めて意義深いことと考えられる．
【結語】
心筋灌流と局所壁運動を同時に評価可能な安静
心電図同期心筋 SPECT を用いることにより，高度左心機能障害を有する慢性心不全患者から，虚血性心筋症患者を検出することが可能である．
審査の結果の要旨
慢性心不全の原因が虚血性心疾患の場合は，血行再建により予後の改善が見込めるため，原因疾
患を同定することが重要である．本研究は，安静時心電図同期心筋 SPECT 検査で，心尖部に高度収縮能低下領域数が多くある場合，また中等度集積低下領域数が 14 領域中 4 以上の場合，虚血性心筋症の可能性が高いことを示した．非侵襲的検査による鑑別方法を示した本研究は臨床的に有意義であり，学位に値すると考える．

関西医大誌

第 61 巻【1492】こにしまさや
氏 名（本 籍）小 西 将 矢（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 831 号
学位授与の日付 平成 20 年 5 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Gene transfer into guinea pig cochlea using
adeno-associated virus vectors
論 文 審 査 委 員 主査（教授）藤澤順一（教授）伊藤誠二 （教授）山下敏夫

論文内容の要旨【研究目的】
内耳への遺伝子導入の技術は有効な治療法のな
い感音難聴の新しい治療戦略になりうると考えられている．この技術にはベクターの選択が重要なのはもちろんのこと，内耳の構造上局所投与を必要とするために臨床応用可能な投与手技を用いることが望ましい．過去には，主にアデノウイルス
ベクター (Ad) がその遺伝子導入効率の高さから用いられてきたが，コルチ器への遺伝子導入には内リンパ腔への投与手技が必要であると報告されている．しかしながら内耳に対する手術侵襲は大きいために，コルチ器をターゲットとした臨床使用は困難と考えられている．今回我々は臨床応用を念頭におき，ウイルスベクターとして毒性の少ないアデノ随伴ウイルスベクター (AAV) に着目し，また臨床応用可能な外リンパ腔への投与手技を用いてモルモット内耳への遺伝子導入を試みた．
【研究方法】
ハートレー系成熟モルモットの内耳へ eGFP
(enhanced green fluorescence protein) を発現する
AAV を局所投与し，コルチ器への遺伝子発現の分布を観察した．AAV はサイトメガロウイルス(CMV) プロモーターを有し，2 型をベースとした
2/1，2/2，2/5，2/7，2/8，2/9 のハイブリッド 6 種を使用した．内耳への投与方法は人工内耳手術に準じ，蝸牛基底回転の外リンパ腔内へ直接ベクターを投与した．eGFP を発現する Ad も同様の手技で投与し，遺伝子発現の分布を比較した．投与 7 日

2009 年

3

第 2・3・4 合併号

後に深麻酔をかけて断頭し，両側の内耳を取り出した．surface preparation と凍結切片を作成し，蝸
牛コルチ器内の遺伝子発現分布を観察した．聴覚機能の評価として，投与前と投与 7 日後に聴性脳
幹 反 応 (auditory brainstem response: ABR) を 施行し，その閾値変化を比較した．また AAV の細胞
表面受容体として考えられているヘパラン硫酸，
perlecan，integrin α5β1 の蝸牛内分布についても
免疫染色法にて検討した．
【結果】
今回使用した AAV の血清型 6 種全てにおいて，
蝸牛内への遺伝子導入が可能であった．遺伝子発現の分布は各血清型でやや異なっているものの，全ての血清型で内有毛細胞への発現が認められた．最も効率よく遺伝子導入可能であったのはAAV-2/2 であり，外有毛細胞へは AAV-2/1, -2/2, -2/9で遺伝子発現を認めた．AAV-2/1, -2/2, -2/7, -2/8,-2/9 においては Spiral limbus や Spiral ligament の線維細胞にも遺伝子発現を認めた．Ad 投与耳において遺伝子発現は外リンパ腔を裏打ちする細胞に限局していた．形態学的評価では AAV 投与後に有毛細胞の消失は認めず，また ABR においてもベクター投与前後において閾値変化は 4, 8, 16 kHzのいずれの周波数においても10 dB以下であった．
これらはコントロール群においても同様の結果であった．遺伝子発現の分布は蝸牛の基底回転には強く，頂回転に向かうほど減衰する傾向にあっ
た．AAV の細胞表面受容体であるヘパラン硫酸や
perlecan，integrin α5β1 の蝸牛内分布と遺伝子発現のあった細胞の分布との間には相関を認めな
かった．
【考察】
臨床応用可能なアプローチによりAAVを内耳へ投与し，コルチ器内への遺伝子導入が確認された．ABR において閾値変化がみられず，コルチ器も形態学的に保たれていることより，投与手技は安全でベクターの内耳毒性もなく，臨床応用に結びつく可能性を示唆していた．ベクターを外リンパ腔に投与した場合，Ad では遺伝子発現は外リン
パ腔内に限局していたが，AAV ではコルチ器，特に内有毛細胞に優位に遺伝子発現を認めた．この違いはベクターによるコルチ器基底膜の透過性の違いが関与していると推察するが，ヘパラン硫酸
等の AAV 受容体の分布と AAV の遺伝子発現の分布との直接的な相関は認めることができなかった．
今後はターゲティングを目的とした AAV の開発，他臓器への影響，遺伝子発現期間の検討にくわえ，難聴モデル動物での有毛細胞の保護や再生の可能性について検討していく必要があると考える．
審査の結果の要旨
小西氏は，有効な治療法のない感音難聴等に対する遺伝子治療法の開発を念頭に，アデノ随伴ウ
イルス (AAV) をベクターとした蝸牛コルチ器への遺伝子導入の可能性を検討した．その結果，AAVの外リンパ腔への投与により，コルチ器の機能および形態に影響を及ぼすことなく，コルチ器内有毛細胞に導入遺伝子を発現させることに成功した．この成果は，内耳障害の遺伝子治療に向けた重要な一歩であり，学位に値すると考える．

【1493】かくかせん
氏 名（本 籍）郭可 泉（中国）学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 832 号
学位授与の日付 平成 20 年 5 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Long-Term Donor-Specific Tolerance in Rat
Cardiac Allografts by Intrabone Marrow Injection of Donor Bone Marrow Cells
論 文 審 査 委 員 主査（教授）薗田精昭（教授）池原進 （教授）今村洋二

論文内容の要旨【はじめに】
免疫抑制剤の開発やその処方の改善がなされているにもかかわらず，臓器移植後の慢性拒絶応答の制御や生涯にわたる免疫抑制剤の使用による副作用などの問題は解決すべき点として残されている．免疫抑制剤の作用は非特異的な免疫応答の抑制であり，移植臓器特異的な免疫応答のみを抑制する免疫寛容（トレランス）の誘導が最も効果的かつ安全な移植臓器の生着を保障するものと考えられる．骨髄移植 (BMT) は血液系細胞をドナー

4由来細胞に置換し，同時にドナー MHC 特異的ト
レランスの誘導と維持を可能にする方法であるが，従来の経静脈的骨髄移植 (IV-BMT) は，移植前処置にともなうレシピエントに対する負担，生
着不全，あるいは移植片対宿主病 (GvHD) などの問題点もあり，臨床応用を考える上で，より有効な骨髄移植法の開発が必要である．これらの点を解決するために我々が確立した骨髄移植法が骨髄内骨髄移植 (IBM-BMT) である．MHC の異なる異系（アロ）BMT において，IV-BMT 施行群に比し
IBM-BMT 施行群では 1）ドナー由来血液系細胞および間葉系細胞の早期の置換・回復，2）ドナー
免疫系細胞の早期再構築，が認められ，従来の IVBMT では不可能であった難治性自己免疫疾患モ
デルマウス (MRL/lpr) の治療にも成功している．
さらに，3）IBM-BMT を施行することにより前処置としての放射線照射量を軽減させてもドナー
MHC 特異的トレランスの誘導とその長期的な維持が可能であり，4）IV-BMT 施行群に比べ GvHDの発症頻度も低いことが判明している．これらの利点を生かし，我々は IBM-BMT と同時に下肢，肺，あるいはラ氏島移植を行い，いずれの場合もドナー特異的トレランスの誘導と，免疫抑制剤を使用すること無しに移植臓器の長期生着という結果が得られている．本論文では IBM-BMT における利点を利用して異系心臓移植を行い，移植後の組織学的・免疫学的検討を通して IBM-BMT の有効性を確認した．
【研究方法】
1．IBM-BMT：ドナーとして F344 ラットを，またレシピエントとして MHC の異なる BN ラットを用いた．ドナー F344 ラットより採取した骨髄細胞 (BMCs) をレシピエントである BN ラットの骨髄内 (IBM-BMT) あるいは静脈内 (IV-BMT) に移植した．レシピエントに対する移植前処置として，フルダラビン投与および放射線照射（3.5 Gy
× 2 回～ 5.0 Gy ×2 回）を行った．
2．異所性心臓移植：骨髄移植と同日にドナー
F344 ラットの心臓を右頸部に異所性に移植した．
3．解析：フローサイトメトリー法によりドナー細胞の置換を解析した．ドナー特異的トレランスの誘導と維持はMLRおよびに皮膚移植片の生着によりを確認した．また移植した心臓の病理組織学的検討を行った．

関西医大誌

第 61 巻

【結果】
1．IBM-BMT 施行群においては，放射線照射量
および移植細胞数を減少（3.5 Gy× 2 回，3 ×107
BMCs）させても 70％の細胞がドナー由来である
マクロキメリズムが観察され，IV-BMT 施行群ではドナー由来細胞の生着は認められなかった．
2．上記の条件で心臓移植を行った場合，IBMBMT 施行群では移植した心臓は長期間（10ヶ月以上）生着し機能したが，IV-BMT 施行群では移植した心臓は 1ヶ月以内に拒絶された．
3．病理組織学的検討の結果，IBM-BMT 施行群においては移植した心臓の冠状動脈内膜の肥厚は軽度であったが，IV-BMT 施行群では中等度～重度の肥厚が認められると共に顕著な心筋細胞萎縮が観察された．
4．IBM-BMT施行群においてはMLRおよび皮膚移植片の生着（24 週以上）によりドナー特異的ト
レランスの誘導と維持が確認されたが，IV-BMT
施行群においてはドナー特異的なトレランスは誘導されておらず皮膚移植片は早期に拒絶された（10 日以内）．
【考察】
以上の結果から，移植前処置を軽減しても IBMBMT を用いることでドナーマクロキメリズムとドナー特異的トレランスが容易に誘導され，かつ長期に亘り維持される事が明らかになった．病理
組織学的検討においても慢性拒絶応答の兆候は認められず，また移植した心臓は長期間機能していることが明らかにされ，IBM-BMT が臓器移植に際しても有効な手段であることが確認された．ト
レランス誘導のメカニズムに関して，IBM-BMT
施行群においては胸腺内にドナー由来樹状細胞が認められドナー特異的トレランスの誘導に関与していることが示唆されたが，さらに胸腺髄質上皮についても今後検討を加えてゆきたい．
審査の結果の要旨
申請者らが開発した新しい骨髄移植の方法（骨髄内骨髄移植）は，mild な前処置によっても，レ
シピエントにおけるドナーの造血系の細胞への置換率が向上することが判明している．本研究は，ラットを用いて心臓移植にこの骨髄内骨髄移植を併用することにより，mild な前処置（3.5 Gy，2 回分割照射と 1 回のフルダラビンの投与）により，2009 年

第 2・3・4 合併号

免疫抑制剤を長期間使用することなく，慢性の拒絶反応を抑制できることを証明したものである．
以上より，本法はヒトの臓器移植にも将来応用が可能であり，十分に学位に値する価値ある研究と考えられる．

【1494】
かくどう
くし だ
な つ こ
氏 名（本 籍）覺道（櫛田）奈津子（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 833 号
学位授与の日付 平成 20 年 5 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Fibroblast growth factor-2 stimulates adipogenic differentiation of human adipose-derived
stem cells
論文審査委員

主査（教授）薗田精昭（教授）池原進 （教授）楠本健司

論文内容の要旨【はじめに】
近 年，脂 肪 組 織 に 成 体 幹 細 胞 (ASCs; adiposederived stem cells) が存在し，骨，軟骨，脂肪など多系統の細胞への分化能があることが明らかにされている．脂肪組織は，形成外科手術の際の余剰組織として採取が容易で，局所麻酔下で採取可能である．また骨髄幹細胞採取に比較して皮下脂肪
組織採取は侵襲や採取後の疼痛が少ないので，ドナーサイトの変形・欠損も非常に少なく利点が多い．
一方，Fibroblast growth factor 2 (FGF-2) は別名
basic FGF と呼ばれ，線維芽細胞や血管内皮細胞，
軟骨細胞および骨髄由来間葉系幹細胞の増殖因子として知られている．既に遺伝子組み換え FGF-2
製剤は臨床使用が認可され，褥瘡，皮膚潰瘍治療に有用に使用されている．FGF-2 は ASCs の骨分化を抑制し，軟骨分化を促進することが報告されているが，脂肪分化における影響については未だ明らかにされていない．本研究では FGF-2 によるASCs の増殖と脂肪分化への効果とそのメカニズ
ムについて検討を行った．

5【研究方法】
ASCs をブロック状腹部皮下脂肪組織より調製し，3 継代目を以下の実験に用いた．ASCs を 1×103
cell/cm2 にて播種し，7 日間 10％FBS 添加 DMEM
培地で増殖させた（増殖期）後，14 日間脂肪分化培地 (DMEM+insulin, IBMX, indomethacin) にて培養を行った（脂肪分化期）．その際，増殖期，脂肪分化期それぞれに FGF-2 (10 ng/ml) を添加し，FGF-2 の無添加群をコントロールとした．また，培養期間を通して DMEM 培地のみにて培養を行い，脂肪分化させなかった細胞を Not induced 群とした．細胞増殖度は MTT Assay にて測定した．
また GPDH 活性，脂肪分化マーカー (PPAR-γ,
GLUT4, C/EBP) を Real-time RT-PCR にて測定し，分化 14 日目において Oil red O 染色を行って脂肪蓄積量を測定し各群の脂肪分化度を比較検討した．
【結果】
増殖期に FGF-2 を添加した群は，コントロール
群と比較して有意に MTT Assay 値，GPDH 活性，
Oil red O 染色度，脂肪蓄積量が増加し，細胞増殖と脂肪分化の促進が観察された．中でも FGF-2 を増殖期のみに添加し脂肪分化期に添加しなかった群で著明に脂肪分化の促進を認めた．一方，脂肪分化期のみ FGF-2 添加した群では，コントロール
群と比較し増殖や分化の促進効果を認めなかった．
FGF-2 を用いて ASCs を増殖させることにより経時的に PPARγ の発現が増加したが，C/EBPα 発
現の増加を認めなかった．Not induced 群は分化
14 日目でも脂肪分化はほとんど認めなかった．
【考察】
本研究の結果から，FGF-2 は ASCs の増殖と脂肪分化を促進させることが明らかになった．脂肪分化の促進には PPARγ の発現が関与することが示唆された．さらに，FGF-2 添加培地を培養初期の増殖期に用いることにより少量のドナー（脂肪組織）から脂肪への分化能を有する幹細胞（ASCs）
を大量に調製することが可能であることがわかった．
幹細胞を応用した再生医療では，少量のドナー組織から分化能を有する幹細胞を大量調製することが求められる．本研究の結果に基づいて，今後
ASCs の培養初期に FGF-2 添加することで脂肪組

6

関西医大誌

織の再生医療を有効に進めることが可能になった．
審査の結果の要旨
脂肪組織由来幹細胞 (ASCs) の増殖期と脂肪分化期への FGF-2 による影響を検討した．その結果，FGF-2 は脂肪組織由来幹細胞 (ASCs) の増殖と脂肪分化の両者を促進させ，特に増殖期にのみ
FGF-2 を添加すると ASCs の脂肪細胞への分化が著明に促進することが明らかになった．また，
FCF-2 による脂肪分化の促進に PPARγ の発現が関与することも示された．以上より，FGF-2 添加培
地を培養初期の増殖期に用いることにより少量のドナー由来脂肪組織から脂肪への分化能を有する幹細胞 (ASCs) を大量に調製することが可能であることが示された．今後，培養中の FCS を除外す
るなどの改良は必要なものの，培養初期に FGF-2を添加することで ASCs を脂肪組織の再生医療に応用する可能性が示唆され，医学上価値ある研究と認められた．

【1495】
たにじりつとむ
氏 名（本 籍）谷 尻
力 （兵庫県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 834 号
学位授与の日付 平成 20 年 5 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Hodgkin’s Reed-Sternberg cell line (KM-H2)
promotes a bidirectional differentiation of
CD4+CD25+Foxp3+ T cells and CD4+ cytotoxic
T lymphocytes from CD4+ naive T cells
論文審査委員

主査（教授）池原進（教授）薗田精昭 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【はじめに】
免疫機構は様々な生体内の恒常性を維持しており，腫瘍細胞排除といった抗腫瘍免疫も例外ではない．これに対して腫瘍細胞自身が宿主の抗腫瘍
免疫を回避し，自身の保全を試みる機序が tumor

第 61 巻surveillance である．この tumor surveillance に宿
主自身の制御性 T 細胞 (Treg) が密接に関与している傍証が蓄積されつつある．ヒトの卵巣癌などの固 形 腫 瘍 で は 腫 瘍 局 所 に 多 数 の CD25+Foxp3+
Treg が浸潤しており，tumor surveillance に関与している事が明らかにされた．これらの Treg は宿主の胸腺で成熟した後，腫瘍細胞により末梢流血
中から腫瘍局所へと化学遊走されたものと考えられている．近年，造血器悪性腫瘍である Hodgkin
病 (HD) においても他の固形腫瘍同様に腫瘍局所に多数の Treg が浸潤していることが報告された．
我々はこれまでに Hodgkin’s Reed-Sternberg (HRS) 細胞由来の細胞株である KM-H2 が抗原提示能を有し，ヒト CD4+ T 細胞を分化増殖させることを報告してきた．一方で Treg は末梢血液中の前駆細胞から局所で分化誘導されることも知られている．そこで KM-H2 がヒト末梢血 CD4+ T 細胞
細胞から CD25+Foxp3+ Treg へと直接分化誘導することが可能かどうかを検証する目的で今回の研究を開始した．
【研究方法】
インフォームドコンセントを得た健常者から末梢血を採取し，単核球層を比重遠沈法にて分離し，
磁気ビーズ法により Naïve CD4+ T 細胞を採取した．末梢血 Naïve CD4+ T 細胞と，20 Gy 照射にて不活化させた KM-H2 を共培養し，CD4+ T 細胞について，表面抗原，細胞内・核内物質及びサイト
カイン産生能についてフローサイトメトリーを用いて解析を行った．この CD4+ T 細胞を不活化させていない KM-H2 を含めた各種腫瘍細胞株と再度共培養し，腫瘍細胞株に与える細胞傷害性について比色法により解析した．
【結果】
KM-H2 は共培養した末梢血 Naïve CD4+ T 細胞
を CD69+CD25+ 細胞群と CD69+CD25− 細胞群へと分化・誘導した．CD25+ 細胞群は制御性サイト
カインである IL-10 と IFN-γ の両者を産生し，RTPCR法にてFoxp3を発現することが確認された．このCD25+ 細胞群はFoxp3+IFN-γ− 細胞とFoxp3−IFNγ+ 細胞の独立した二つの細胞集団により構成されていること事が核内染色法により確認された．
以上より KM-H2 は末梢血 Naïve CD4+ T 細胞を
CD25+Foxp3+ 細胞へと直接分化誘導する能力を持つ事が確認された．一方，CD25+Foxp3− 集団の2009 年

7

第 2・3・4 合併号

細胞は Granzyme B と TIA-1 を発現しており，
CD4+
CTL と同様の表現型を持っていた．この CD4+
CTL は親細胞である KM-H2 に対して強力な細胞傷害能を示した．反面，CD4+ CTL は固形腫瘍由来の Hela 細胞には全く細胞傷害性を示さなかった．KM-H2 以外の各種悪性腫瘍由来細胞株についても同様の解析を加えたところ，CD25+Foxp3+細胞を誘導するには腫瘍細胞株が抗原提示能を有している事が必須であることが明らかとなった．
いずれの腫瘍細胞株で Foxp3+ 細胞を誘導した場合にも必ず CD4+ CTL が同時に誘導されていることから両者が協調的に分化・誘導・機能している事が示唆された．
【考察】
これまで腫瘍に浸潤した Foxp3+ Treg は宿主の胸腺由来であるとの考え方が主流を占めてきた．
卵巣癌細胞等は CCR4 のリガンドである CCL22 を発現しており，CCR4 陽性の Foxp3+ Treg が腫瘍周辺へ動員されているとの報告がある．しかし我々の結果は抗原提示能を持つ腫瘍細胞株はin vitroで
ヒト Naïve CD4+ T 細胞を直接 Foxp3+ T 細胞へと転換できることを示している．従って in vivo でも抗原提示能を有する悪性腫瘍細胞は末梢流血中のNaïve CD4+ T 細胞を前駆細胞として腫瘍局所でFoxp3+ T 細胞を generate している可能性が示唆された．他方，腫瘍に浸潤した Treg が臨床像において果たす役割についても様々な考察がなされてきた．腫瘍局所に Foxp3+ Treg が多く浸潤しているほど予後不良であると，各種固形腫瘍の臨床研究において報告がなされている．これら臨床経過との相関より腫瘍に浸潤した Treg が宿主の抗腫瘍
免疫を阻害し，結果として腫瘍細胞の増殖を助長していると考えられてきた．しかし HD 等の造血器悪性腫瘍ではむしろ腫瘍局所での Foxp3+ Tregが多いほど予後良好であるとの報告がなされ，両者での相反する結論が議論の的となっている．
今回我々は HD 等の抗原提示能を有する腫瘍
細胞は Foxp3+ Treg と同時に大量の CD4+ CTL を
generateすることを示した．これらのCD4+ CTLが親細胞である腫瘍細胞の進展を阻害し，それにより予後を改善している可能性が示唆された．現
今，Treg depleting therapy の前臨床的研究が盛んに行われているが，本研究の結果により，抗原提示能を持つ造血器悪性腫瘍には固形腫瘍とは異なった治療戦略を創案する検討の余地があると考えられる．
審査の結果の要旨
癌患者の予後は局所における制御性 T 細胞
(Treg) の浸潤度が高いと不良とされているが，一部の腫瘍では逆の成績が報告されている．申請者
は Hodgkin リンパ腫に由来する樹立細胞株 (KMH2) の in vitro 実験系において naïve CD4+ T 細胞から KM-H2 細胞自身に作用する Treg 細胞と CTL が誘導されることを示し，抗原提示能をもつ腫瘍に共通する現象であることを明らかにした．本研究は坦癌局所の免疫監視機構において新しい機構の存在を示唆した点で重要である．

【1496】そうしょうよう
氏 名（本 籍）宋昌 燁（中国）学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 835 号
学位授与の日付 平成 20 年 9 月 25 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目Facilitation of hematopoietic recovery by bone
grafts with intra-bone marrow-bone marrowtransplantation
論 文 審 査 委 員 主査（教授）薗田精昭（教授）池原 進 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【はじめに】
骨髄移植が難治性疾患の治療に用いられて久し
いが，ドナー細胞の生着後においても T 細胞依存性の液性免疫の回復が特に成人の患者において遅延することが知られている．マウスを用いた移植実験においても，通常の静脈内法 (IV-BMT) で異系骨髄移植を行うと，T 細胞依存性抗原に対する免疫応答の回復が悪いことが報告されている．申請者らは，以前，骨髄ストローマ細胞を補う目的
でドナーマウス骨（骨髄細胞を吹き出したもの）
を同時移植すると，骨内の骨髄ストローマ細胞が胸腺にも移住し胸腺細胞の positive selection に関8与する，すなわち，ドナー由来の T 細胞はドナータイプの MHC 拘束性を獲得し，T 細胞，B 細胞，
抗原提示細胞 3 者の完全な連携が成立することにより T 細胞依存性の液性免疫が回復することを見い出した (Exp. Hematol. 28: 950, 2000)．
最近，骨髄内移植法 (IBM-BMT) は IV-BMT 法と比べて移植効率が非常に高く，移植の成立しに
くい組み合わせであっても成功することが，我々のみならず他の研究室においても報告されるようになった (Blood 97: 3292, 2001)．従って，ドナー
マウス骨を IBM-BMT と同時に移植すれば，加齢マウスにおいてもまた移植骨髄細胞数が少なくても T 細胞機能の回復も含めた移植の成立を誘導できる可能性が考えられる．
そこで，今回申請者は，まず，生後 2–3 日齢と4–5 週齢の骨由来骨髄ストローマ細胞の増殖力および造血幹細胞の支持能力を比較した．さらに，ドナー骨髄細胞を IV-BMT あるいは IBM-BMT したマウス（生後 15–16 週）に骨の同時移植を行い，生存率が上昇するか，また生着促進の機序について検討した．
【方法と結果】
1．生後 2–3 日齢と 4–5 週齢のマウス骨由来骨髄ストローマ細胞の比較
生後 2–3 日齢あるいは 4–5 週齢の C57BL/6 マウスの骨髄細胞を 2 週間培養し，ストローマ細胞形
成率を比較したところ，生後 2–3 日齢の方が有意に高かった．また，これら 2 種の骨髄ストローマ
細胞上に生後 4–5 週齢の C57BL/6 マウスより精製した造血幹細胞を播き，5 日間培養してチミジンの取り込みを測定することにより，造血幹細胞に対する増殖支持能を比較した．この場合も生後2–3 日齢の方が有意に高い値を示した．従って，
生後 2–3 日齢のマウス由来骨髄ストローマ細胞
は，増殖能および造血支持能において生後 4–5 週
齢よりも優れていると考えられる．
2．ドナー骨同時移植における生着促進とその機構の解析
レシピエントマウス（C57BL/6）に致死量（5.5 Gy
を 4 時間間隔で 2 回）の放射線を照射し，C3H マ
ウスより得た 5×106 の骨髄細胞をレシピエントの
脛骨内に直接移入した (IBM-BMT)．他のレシピエ
ントには，同数の骨髄細胞を尾静脈内に投与した(IV-BMT)．一部のレシピエントには，腎臓と皮下

関西医大誌

第 61 巻にドナー骨（生後 2–3 日齢あるいは 4–5 週齢のマウスより採取）も移植した．
生存率は，生後 2–3 日齢のドナー骨を移植した
IBM-BMT 群が最も高く，次いで生後 4–5 週目のドナー骨移植 IBM-BMT 群や IBM-BMT のみの群が高かった．一方，IV-BMT のみの群や，IV-BMT と骨移植併用群は移植 15 週以内に全マウスが死亡した．生後 2–3 日齢のドナー骨には，レシピエン
トマウスの生存率を上昇させる作用が高いと考えられる．従って，以降の実験では，IBM-BMT のみの群（IBM-BMT alone 群）と生後 2–3 日齢のドナー骨移植 IBM-BMT 群（IBM-BMT+bone graft群）との間で置き換わり等について詳しく比較検討した．
末梢血，骨髄，脾臓および胸腺細胞の FACS 解析により，IBM-BMT+bone graft 群ではすべての系統の血球がドナータイプに置換していたが，
IBM-BMT alone群ではレシピエントタイプのままであった．また，緬羊赤血球に対するプラーク形成細胞法を用いた解析から，IBM-BMT+bone graft
群のマウスの脾臓由来 T 細胞はドナータイプの
MHC 拘束性を獲得していることが明らかになった．さらに，混合リンパ球反応法で，IBM-BMT+
bone graft 群のマウス脾臓細胞は，ドナーとレシピ
エント両方に対してトレランスになっていることも見い出した．
次いで，実際にレシピエントの骨髄，脾臓およ
び胸腺にドナーの骨髄ストローマ細胞が移住し生着しているかを解析するために，これらの組織あるいは培養によって得られた付着性細胞を骨髄ス
トローマ細胞に対して特異的な抗体と抗ドナータ
イプ H-2 抗体とで二重染色した．IBM-BMT+bone
graft 群において，ドナーの骨髄ストローマ細胞が生着していることが確認された．一方，IBM-BMT
alone 群では，各組織の付着性細胞はレシピエントタイプであった．
【総括】
IBM-BMT法に生後2–3日齢のドナー骨同時移植
を組み合わせることにより，加齢マウスにおいてもまた移植骨髄細胞数が少なくても T 細胞機能の回復も含めた移植の成立を誘導できることが明らかとなった．レシピエントの骨髄，脾臓および胸腺へのドナー骨髄ストローマ細胞の移住と生着が，重要な役割を果たしていると考えられる．

2009 年

第 2・3・4 合併号

審査の結果の要旨
本研究は，マウスを用いて，骨髄内骨髄移植の際に，生後 4–5 週齢のマウスよりも，生後 2–3 日
齢の若いマウスの骨を同時に移植する方が，移植
骨髄細胞数が少なくても，T 細胞を含めた造血系の細胞の早期回復が期待できることを明らかにしたものである．その理由として，ストローマ細胞の増殖力並びに造血幹細胞支持能が，生後 2–3 日
齢のマウスのストローマ細胞の方が，優れている
こと，さらに，ドナー骨髄ストローマ細胞のレシ
ピエントの骨髄，脾臓および胸腺への移住能力に差があることが判明した．これら事実は，骨髄内骨髄移植を実施する際，ストローマ細胞の補充という点からは，ドナーの年齢を充分に考慮する必要があることを示唆するもので，充分，学位に値する研究と考える．

【1497】さい
ぶん
こう
氏 名（本 籍）崔文 昊（中国）学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 836 号
学位授与の日付 平成 20 年 9 月 25 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Analysis of Tolerance Induction Using Triple
Chimeric Mice: Major Histocompatibility Complex-Disparate Thymus, Hemopoietic Cells, andMicroenvironment
論 文 審 査 委 員 主査（教授）福原資郎（教授）池原 進 （教授）薗田精昭

論文内容の要旨【はじめに】
近年 allogeneic 骨髄移植法は，多種の難病の有効な治療方法として確立されつつあるが，胸腺機能の低下した老齢者への骨髄移植は，十分に T 細胞の機能が回復せず，その成功率は低い．我々は以前，胸腺機能の低下した老齢化宿主に対して，胸腺移植を併用した骨髄移植法が有効であることを示した (PNAS 1996)．しかしながら，同じ donorから胸腺組織を手に入れるのは困難が予想され

9

る．今回，我々は host と major histocompatibility(MHC) と異なるドナーの骨髄細胞と第 3 者からの胸腺を移植し，その有効性を検討した．また，実際に老齢化促進モデルであるsenescence-accelerated
mouse P1 strain (SAMP1) マウスも用いて解析した．
【研究方法】
実験 1：致死量の放射線を照射した 8 週齢の胸腺を欠く Nude マウス，胸腺摘除を行った BALB/c
マウス（どちらも H-2d）に，当教室で開発した骨髄内骨髄移植法により 8 週齢の C3H マウス (H-2k)の骨髄細胞を 1×107 個移植し，同時に腎被膜に胎生 16 日の B6 マウス (H-2b) の胸腺を移植する群（トリプルキメラマウス），骨髄細胞と同じ C3H マ
ウスの胸腺を移植する群，さらに胸腺移植を行わない群を作製した．
実験 2：致死量の放射線を照射した老齢化促進
モデル SAMP1 マウス (H-2k) に，骨髄内骨髄移植法により 8 週齢の BALB/c マウスの骨髄細胞を3×107 個移植し，同時に胎生（16）日の B6 マウスの胸腺を移植する群（トリプルキメラマウス）と胸腺移植を行わない群も作製した．
以降，生存率，キメリズム，リンパ球機能，免疫寛容，及びその機構について解析した．
【結果】
実験 1：ヌードマウスや胸腺摘除マウスは，骨髄移植のみの群はほとんどが移植後 8 週以内に死亡した．胸腺を移植した群では，トリプルキメラ
マウス，MHC の一致した胸腺を移植した群は，12週以上の長期間生存した．トリプルキメラマウス
では移植胸腺の生着を認め，かつ明らかな graftversus-host disease (GVHD) や，host-versus-graft
disease (HVGD) は見られなかった．すべての群のマウスで，造血系の細胞は骨髄細胞由来であったが，T 細胞は CD4, CD8 サブセットとも胸腺移植を行わない群より，胸腺移植を行った群の方が多く見られ，かつトリプルキメラマウスと MHC の一致した．胸腺を移植したマウスではほぼ同じ数であった．また，mitogen による T 細胞の反応性も，胸腺移植を行わない群は低下していたが，胸腺移植を行った群では十分な反応性を示し，さらにトリプルキメラマウスと MHC の一致した胸腺を移植したマウスは同等であった．さらに，トリ
プルキメラマウスでは当該の 3 種類の MHC に対10して，免疫寛容を認めた．その機構として，移植
胸腺内に骨髄由来及び移植胸腺由来の樹状細胞を認め，DC による negative selection の機構が考えられた．
実験 2：老齢化促進モデル SAMP1 マウスでも，非胸腺移植群より胸腺移植を行ったトリプルキメ
ラは長期間生存した．キメリズムでは，胸腺移植をしない群は拒絶反応が起こり骨髄由来の細胞は生着しなかったが，トリプルキメラは生着し，かつ骨髄細胞由来の CD4，CD8T 細胞，及び B 細胞を認めた．Mitogen による T 細胞の反応性も，無処置の SAMP1 マウスや胸腺移植を行わない群では低下していたが，胸腺移植を行った群では十分な反応性を示した．さらに，当該の 3 種類の MHCに対しても，免疫寛容を認めた．
【考察】
胸腺機能の低下した宿主において，胸腺を併用した allogeneic 骨髄移植法は，骨髄細胞の donorと異なる第 3 者からの胸腺でも有効で，かつ十分な免疫機能と寛容を得て長期間生存できることが明らかになった．さらに，複数の donor からの臓器移植への応用も可能であることが分かり，老齢化宿主への多種の疾患への治療法につながるものと考えられる．
審査の結果の要旨
胸腺機能の低下した老齢者への骨髄移植は，十分に T 細胞の機能が回復してこないため，その成功率は低いことが知られている．
本研究では，胸腺機能の低下した宿主（マウス）を用いて，同種骨髄移植の際，胸腺移植を併用した．胸腺移植は，組織適合抗原 (MHC) が骨髄ド
ナーやレシピエントの MHC とは異なる第 3 者からの胸腺移植を行っても，免疫機能が充分に回復
し，免疫学的寛容が誘導され，マウスは長期間生存できることが判明した．将来，この方法は，ヒトへの応用の可能性もあり，また，老齢化宿主の
多種多様の疾患治療法にもつながるものと考えら
れ，充分，学位に値する研究と考える．

関西医大誌

第 61 巻【1498】わかまつたかひろ
氏 名（本 籍）若 松 隆 宏（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 837 号
学位授与の日付 平成 20 年 9 月 25 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目The combination of glycyrrhizin and lamivudine
can reverse the cisplatin resistance in hepatocellular carcinoma cells through inhibition ofmultidrug resistance-associated proteins
論 文 審 査 委 員 主査（教授）中邨智之（教授）螺良愛郎 （教授）權

雅憲

論文内容の要旨【はじめに】
肝細胞癌 (HCC) 患者に対する化学療法としてシスプラチン (CDDP) などが用いられる．しかし抗癌剤に対する自然耐性の他に多剤耐性関連蛋
白 (MRP) による抗癌剤耐性獲得のため，進行肝癌に対する化学療法の奏功率は低く予後不良である．その奏功率を上げるためには MRP による多剤耐性を克服することが必要と考えられる．そこで CDDP 使用時に，MRP を基質とし，また臨
床で広く用いられるグリチルリチン (GLY) やラミブジン (LAM) を併用することで MRP を介した
modulator 効果により抗腫瘍効果が増強するかど
うかについて，我々は CDDP 耐性培養肝癌細胞株を新たに樹立し，耐性獲得細胞における MRP のmRNA 発現量解析や，耐性株に対する薬剤の抗腫瘍効果の変化，また細胞内 CDDP 濃度測定を行い検討した．
【研究方法】
培養肝癌細胞株 (Huh7) に低濃度 CDDP を加え継代を行い，生き残った細胞にさらに高濃度のCDDP を加え継代を繰り返していく事で CDDP
5 μg/ml に耐性を持つ細胞株を樹立した．続いてHuh7 野生株と樹立した耐性株において alamar
blue assay を用いて CDDP による抗腫瘍効果について検討を行った．次に野生株及び耐性株において RT-PCR, real-time PCR を行い MRP1, 2, 3, 4, 5，
さらに薬剤耐性関連膜輸送蛋白である MDR1,

2009 年

11

第 2・3・4 合併号

GST-π の発現について検討した．そして (i) 耐性株に CDDP を単独投与した場合，(ii) 耐性株に CDDPと GLY を併用投与した場合，(iii) 耐性株に CDDPと LAM を併用投与した場合，(iv) 耐性株に CDDPと GLY・LAM を併用投与した場合の生存率によりそれぞれの抗腫瘍効果を検討した．更に CDDP
投与時の野生株内及び耐性株内 CDDP 濃度を原子
吸光分析法により比較し，続いて上記 (ii)，(iii)，(iv)における各細胞内 CDDP 濃度の変化について検討した．
【結果】樹立した耐性株で対数増殖することを確認した．培養 72 時間後の CDDP による IC50 は耐性株
で野生株の 14.1 倍であった．CDDP 投与後，経時的に耐性株では生存率の低下を認めなかったが，
野 生 株 で は 有 意 に 生 存 率 が 低 下 し た．MRP1,
MDR1, GST-π の発現量は野生株・耐性株でそれぞれ差を認めなかったが，MRP2, 3, 4, 5 の発現量は耐性株で野生株に比べそれぞれ有意に多かった．
CDDP による生存率は (i) に比べ (ii), (iii) は有意に低下し，(iv) では (ii), (iii) よりも更に有意に低下した．細胞内 CDDP 濃度は，(i) では野生株に CDDP
投与した際の 36.4％と減少したが，(ii)，(iii) では(i) より有意に上昇し，(iv) では (ii)，(iii) より更に有意に上昇を認めた．
【考察】
これまで CDDP 耐性獲得の原因として細胞内CDDP 濃度の減少が関連することが肺癌の CDDP
耐性株において報告されている．今回我々は肝細胞癌において MRP ファミリー (MRP2, 3, 4, 5) がCDDP 耐性株で野生株より高発現し，CDDP の細胞内濃度が CDDP 耐性株で野生株に比べ減少している事を確認した．MRP2, 3, 4, 5 の増加によりCDDP が細胞外へより多く排出され細胞内 CDDP
濃度が減少する事が耐性獲得に関連すると考えられた．また，CDDP 耐性株に CDDP を単独投与した場合より CDDP に GLY, LAM を併用投与する事で生存率が低下し，その際細胞内 CDDP 濃度が上昇している事を確認した．これらは GLY, LAM
が CDDP の modulator となり MRP を介した細胞からの CDDP 排出が抑制された事によるものと考えられた．
以上より CDDP に modulator となる薬剤を併用投与する事により，MRP を介した CDDP 排出を阻害することで細胞内 CDDP 濃度が上昇し抗腫瘍効果が増強し，肝細胞癌の CDDP 耐性を克服する事が示唆された．
審査の結果の要旨
癌細胞が抗癌剤に対する耐性を獲得するために，肝癌などではシスプラチン等抗癌剤治療の奏功率が低い．このメカニズムは多薬排出トランス
ポーターの発現増加によるところが大きいとされている．若松氏は，多薬排出トランスポーターの
うち，MRP2, 3 をグリチルリチンで，MRP4, 5 をラミブジンで競争阻害することによりシスプラチ
ンの排出を抑制でき，耐性の問題を改善できることを示した．本研究は現在の抗癌剤治療の問題を克服するための方向性を示したものであり，学位授与に値する．

【1499】
とよしま
つかもと
れい こ
氏 名（本 籍）豊島（塚本）麗子（神奈川県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 838 号
学位授与の日付 平成 20 年 9 月 25 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目N-methyl-N-nitrosourea-induced mammary
carcinogenesis is promoted by short-term
treatment with estrogen and progesterone
mimicking pregnancy in aged female Lewis rats
論 文 審 査 委 員 主査（教授）神崎秀陽（教授）螺良愛郎 （教授）岡崎和一

論文内容の要旨【目的】
疫学的に，若年満期妊娠は乳癌のリスクを減少させる．これは人種を問わずみとめられ，副作用なしに乳癌を予防し得る唯一の生理的現象である．この現象はラットにもみとめられ，発癌物質への曝露前あるいは直後の若年期での妊娠は乳癌発生率や多発率を減少させ潜伏期を延長する．
ラットにおける妊娠による乳癌発生予防効果は3ヶ月齢以下の若年ラットへのエストロゲンとプ12

ロゲステロンの短期投与で妊娠環境を模倣することにより遂成可能である．経産婦の減少をみる現在，未産婦に対してエストロゲンとプロゲステロ
ン処置を施すことにより，妊娠を模倣するホルモン環境を作出し，乳癌抑制ができれば，有用な試みと考える．しかし，疫学的にみると，35 歳以上の高齢での初回満期妊娠は同年齢層の未産婦に比して乳癌リスクが上昇する．しかし，高齢ラットへの短期エストロゲンとプロゲステロン投与の乳癌発生に及ぼす実験的検討は未だなされていな
い．そこで今回，高齢 Lewis ラットに，妊娠期ホルモン環境を模倣したエストロゲンとプロゲステ
ロンの短期投与の N-methyl-N-nitrosourea (MNU)
誘発乳癌に与える影響について検討した．
【方法】
7 週齢雌 Lewis ラットに 20 mg/kg の MNU を腹腔内投与し，24 週齢時に乳腺腫瘍を触知するラット
は実験から除外し，任意に選別した 5 匹も乳腺の発育を観察するため屠殺し，残りの半数（25 匹）に 0.5 mg 17β-estradiol および 32.5 mg progesteroneを含有する 21 日間徐放錠 (E/P) を皮下に留置し，E/P 非投与群（25 匹）と乳癌の発生につき比較検討した．ラットは乳腺腫瘍の腫瘍最大径が 1 cm以上になった時点あるいは 48 週齢で屠殺した．
屠殺時にはすべてのラットの乳腺腫瘍とともに“正常”乳腺組織を 10％中性緩衝ホルマリンで固定し，パラフィン包埋し，4 μm の薄切切片を作製し，HE 染色を行い，<1 cm の微少乳腺腫瘍を摘出するとともに，乳腺腫瘍の組織分類を行った．
また，≧ 1 cm 乳癌切片はケラチン 14 やエストロ
ゲン受容体 (ER) とプロゲステロン受容体 (PgR)
に対する免疫染色を行った．
【結果】
MNU 誘発 ≧ 1 cm 乳癌発生率は E/P 投与群では非投与群と比較して増加し（投与群：非投与群=60％：44％），潜伏期間は短縮した（投与群：非投与群 = 28.7 週：34.6 週）．また，腫瘍の多発率（ラットあたりの全乳癌個数）は有意に上昇した（投与群：非投与群=1.8：0.8）．なお，E/P 投与群
ではエストロゲンレセプター (ER) およびプロゲ
ステロンレセプター (PgR) 陰性の乳癌が有意に増加し，基底細胞形質を発現する細胞の不規則な出
現とコメド壊死を呈する乳癌が増加した．

関西医大誌

第 61 巻【結論】
1．高齢における妊娠を模倣する短期のエスト
ロゲンとプロゲステロン曝露は乳癌発生の危険を増大した．
2．発生した乳癌は ER, PgR 陰性のものが多く，
コメド壊死を高頻度にみた．
3．高齢期の短期エストロゲンとプロゲステロ
ン曝露は予後不良乳癌の発生を促進する．
審査の結果の要旨
ヒト疾患の病態解析に動物モデルは必須である．ヒトでは高齢満期産は乳癌リスクを増すが，動物を用いた再現実験は行われていない．今回
ラットにおいてこの現象を再現しうることを実証した価値ある検討と評価され，学位に相応する研究であると判断された．

【1500】にしけんいちろう氏 名（本 籍）西憲一郎（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 839 号
学位授与の日付 平成 20 年 9 月 25 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目LPS Induces Hypoxia-Inducible Factor 1
Activation in Macrophage-Differentiated Cells
in a Reactive Oxygen Species-Dependent
Manner論 文 審 査 委 員 主査（教授）中邨智之（教授）伊藤誠二 （教授）薗田精昭

論文内容の要旨
Introduction
マクロファージは様々な炎症部位で作用するが，このような部位である血管外の間質は正常組織に比べ一般的に酸素分圧が低い．先天性免疫反応を司る細胞が，低酸素環境においても生存能力
や生理学的機能を維持することを可能とする何らかの仕組みが存在するはずである．低酸素はサイ
トカインレセプターや表面蛋白発現，サイトカイ
ン分泌，接着，移動，貪食，細胞生存など骨髄性2009 年

第 2・3・4 合併号

細胞の性質に多様な影響を及ぼす．低酸素は，細胞や組織が低酸素状態に適応するために重要なエ
リスロポエチンや VEGF や解糖系酵素や炎症性
メディエーターなどの蛋白合成を増加させる遺伝子発現を誘導する．低酸素誘導性因子 1 (HIF-1[hypoxia-inducible factor 1]) は，酸素ホメオスタシ
スを調節するマスター転写因子である．HIF-1 は構成的に発現しているHIF-1βと誘導によって発現する HIF-1α のサブユニットから二量体を構成されており，支配遺伝子の制御領域に存在する HRE(Hypoxia Response Element) に結合し遺伝子の発現を誘導する．HIF-1 の生物学的活性の調節は，
HIF-1α サブユニットの生成，分解，転写活性によって主に担われていると現在では考えられている．
HIF-1α の蛋白発現量と転写活性の調節のメカ
ニズムはすでに広く研究されていて以下のような知見が得られている．HIF-1α は酸素分圧依存性の水酸化により制御されており，分子状酸素存在下 に お い ては VHL (von Hippel-Lindau tumorsuppressor protein) を含むユビキチン結合酵素複合体によるユビキチン化の結果，HIF1α 蛋白質は細胞内で半減期が 5 分程度でプロテアソーム分解
されて発現量が低く維持されている．低酸素状態においては酵素反応における基質つまり酸素の減少のため HIF-1α のプロリン残基の水酸化が抑制され，その結果 HIF-1α 蛋白は安定化し細胞内での発現量が増加する．HIF-1α の転写活性化能は，
正常酸素分圧ではアスパラギン残基の水酸化により HIF-1α と p300/CBP との相互作用を妨げ，抑制的に調節されている．プロリンとアスパラギンの水酸化酵素は分子状酸素と α ケトグルタル酸を基質として利用する．プロリン水酸化酵素 PHD(prolyl hydroxylase domain-containing protein) と
ア ス パ ラ ギ ン 水 酸 化 酵 素 で あ る FIH-1 (factor
inhibiting HIF-1) は二価の鉄 (Fe 2+) をその触媒として含むため，鉄のキレート剤である desferrioxamine は正常酸素分圧において HIF-1α の安定化と転写活性化を誘導する．対照的に，HIF-1β はほ
とんどの細胞において安定して発現している．
様々な生理的刺激により非低酸素状態でもHIF-1α 蛋白質の蓄積や低酸素誘導性遺伝子発現の調節が引き起こされる．内毒素 lipopolysaccharide(LPS) は敗血症性ショックの発症に影響を与える

13

強力な炎症性因子である．LPS はマクロファージにおいて NF-κB 経路を介して炎症性サイトカインの産生を誘導する．
骨髄系細胞の条件的遺伝子破壊の研究より，炎症反応とくにマクロファージの機能発現においてHIF-1α が重要な役割を果たしている事が証明されていたが，LPS 誘導性の HIF-1 活性化の分子機序は明確ではなく，特に単球からマクロファージへの分化の過程との関連を解析した研究は今まで存在しなかった．
この研究において我々は，単球 – マクロファー
ジの分化モデルとしてヒト単球性白血病細胞である THP-1 細胞を用い，細胞の分化過程と関連つ
けて LPS による HIF-1 活性化の機序を分子生物学的に解析した．
Materials and Methods
モデル系としてヒト単球性白血病細胞である
THP-1 細胞を使用した．マクロファージへの分化
は phorbol-12-myristate-13-acetete (PMA) の添加により行った．低酸素処理は，1％ O2–5％ CO2–94％
N2 に調整された培養器により行った．
Results
単球系細胞である THP-1 細胞を PMA 刺激によりマクロファージ様に分化誘導させた細胞においては，LPS が容量依存性，時間依存性に HIF-1α
蛋白質発現を誘導するが，未分化の THP-1 細胞ではその反応が認められなかった．また，LPS は
HIF-1α 蛋白質蓄積のみならず，HIF-1α の転写活性化能を増強させ HIF-1 の支配下遺伝子の発現を増強した．THP-1 細胞の分化により HIF-1α のmRNA レベルは上昇し，さらに LPS により刺激することで，HIF-1α の mRNA レベルは上昇した．
また，抗酸化剤である N-acetylcysteine (NAC)
が LPS 誘導性の HIF-1α 蓄積を著明に抑制するの に 対 し，NF-κB 阻 害 剤 で あ る BAY11-7082,
resveratrol や NOS 阻害剤である L-NAME は LPSにより誘導される HIF-1α 蛋白質蓄積に影響を及ぼさなかった．分化 THP-1 細胞は，LPS により乳酸の産生が増加するがこの増加は，NAC，アスコ
ルビン酸前処置により有意に抑制された．
Discussion
THP-1 細胞を用いたマクロファージモデルにおいて，LPS による HIF-1α 蛋白質蓄積には HIF-1αmRNA レベルの上昇による蛋白生成の増加が関与

14

していることが示された．また，抗酸化剤，NFκB 阻害剤，NOS 阻害剤を使用した実験結果により，LPS による HIF-1α mRNA レベルの上昇には，
NF-κB 活性化や NO を介した経路ではなく reactive
oxygen species (ROS) を介したシグナル経路が関与していることが示唆された．
さらに，LPS による HIF-1α の活性化は未分化の THP-1 細胞では認められず，分化 THP-1 細胞
でのみ HIF-1 の活性化が認められることから，マクロファージの機能維持に HIF-1 の働きが必要であることが示唆された．このような知見は，少なくともマクロファージが関与する炎症において低酸素誘導性の遺伝子応答が重要な役割を担っている事を示すもので，HIF-1 を標的とした炎症制御の新たな方法の開発につながる可能性がある．
審査の結果の要旨
低酸素は低酸素誘導因子 (HIF-1) を介して生体に多くの影響を及ぼす．本研究では自然免疫に重要な役割を果たすマクロファージの機能にもHIF-1
が重要な役割を果たすこと，低酸素のみならず
LPS もマクロファージにおける HIF-1 産生を促進すること，さらにその過程には NF-κB 活性化やNO を介した経路ではなく，活性酸素種 (ROS) を介する経路が重要であることを示した．以上の結果は炎症とマクロファージ，HIF-1 の関連をより明確にしたものであり，博士号に値する．

関西医大誌

第 61 巻【1501】こいけなおこ
氏 名（本 籍）小 池 直 子（兵庫県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 840 号
学位授与の日付 平成 20 年 9 月 30 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Human cord blood cells can differentiate into
retinal nerve cells
論 文 審 査 委 員 主査（教授）薗田精昭（教授）池原進 （教授）松村美代

論文内容の要旨【はじめに】
網膜神経細胞の変性が視機能障害の主要な原因とされている中，薬物療法や網膜移植など網膜再生に対する様々な研究が行われてきたが，未だ臨床的に有用な方法は見付かっていないのが現状である．近年これらの疾患に関して，人工網膜の作成や再生治療が注目を集めており，再生治療の一手法として神経幹細胞が網膜神経細胞へ分化する
ことが報告されている．最近，我々はマウスやラットを用いて骨髄細胞が網膜神経細胞へ分化可能であることを見いだした．これらにより網膜変性疾
患治療への新たな可能性が示唆された．
ヒト臍帯血細胞は以前より血液疾患に対する治療として用いられてきたが，造血系幹細胞だけでなく神経細胞を含め様々な細胞に分化可能である
ことが近年報告されており，様々な疾患に対する治療法としての可能性が期待されている．このような背景から，今回我々は SCID マウスを用いてヒト臍帯血細胞の網膜神経細胞への分化の可能性について研究を行った．
【方法】
ヒト臍帯血から Lymphoprep を用いて単核球分画を抽出し抗ヒト lineage 抗体と magnetic beads を用いて lineage 陰性細胞を enrich した．8 週齢のSCID マウスに抗 asialo GM1 抗体を注射した後，網膜下に PKH26 で標識した前述の lineage 陰性ヒト臍帯血細胞 2×106 (5 μl) を注入した．
2 週間後，SCID マウスより眼球を摘出し，網膜下注入部位を含む厚さ 10 μm の切片を作成し，HE2009 年

15

第 2・3・4 合併号

染色と免疫染色を行った．
免疫染色は抗ヒト nestin
抗体，抗ヒト MAP2 抗体，抗ヒト NSE 抗体，抗 βIII tubulin 抗体，抗 rhodopsin 抗体を用いて行い，
核は DAPI を用いて染色した．染色後，共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した．また，眼球よりRNA を抽出し cDNA を作成して Real Time PCR を行い human GAPDH, human rhodopsin の発現量を
検討した．
【結果】
臍帯血細胞の網膜下注入 2 週間後の HE 染色にて網膜下の注入部位に様々な形態の細胞の増殖を認め，免疫染色の結果，臍帯血由来細胞の中に
nestin, MAP2, NSE, β-III tubulin, rhodopsin 陽性の細胞を認めた．
また，Real Time PCR の結果，human GAPDH は
human retina，lineage 陰性臍帯血細胞だけでなく，
ヒト臍帯血細胞注入 SCID マウスの眼球にも発現が認められた．さらに human rhodopsin の発現を検討したところ，human retina だけでなくヒト臍
帯血細胞注入 SCID マウスの眼球にも発現が認め
られた．
【結論】
Lineage 陰性ヒト臍帯血細胞を抗 asialo GM1 抗体処理後の SCID マウスの網膜下に注入した．2
週間後に眼球摘出を行い免疫染色検討を行った
ところ，注入細胞の中に神経細胞，網膜神経細胞
マーカー陽性の細胞を認めた．また PCR にて
rhodopsin の発現を認めた．これらの結果より，ヒト臍帯血細胞は網膜神経細胞に分化しうる可能性が示唆された．

り，医学上価値ある研究と認められる．

【1502】かんばらともこ
氏 名（本 籍）神 原 知 子（京都府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 841 号
学位授与の日付 平成 21 年 1 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Propofol Suppresses Prostaglandin E2
Production in Human Peripheral Monocytes
論 文 審 査 委 員 主査（教授）伊藤誠二（教授）中邨智之 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【目的】
単球／マクロファージは，自然免疫，獲得免疫において重要な働きを担っている．また，これらの細胞が産生するプロスタノイド，とりわけプロ
スタグランジン (PG) E2 は，炎症，免疫機能に大きな影響を及ぼすと考えられている．プロポフォ
ル (2,6-diisopropylphenol) は，麻酔の導入・維持だ
けではなく，集中治療室における処置や鎮静にも広く使用される麻酔薬である．この薬は，抗酸化作用を持ち，好中球の貪食活性を減弱し末梢血中の単核球からの炎症性サイトカインの分泌を抑制することにより，抗炎症作用を持つと報告されている．しかし，プロポフォルによる PGE2 産生に審査の結果の要旨
網膜神経細胞の変性は視機能障害の主要な原因とされているが，いまだ臨床的に有用な再生治療

対する影響についてはほとんど知られていない．
今回我々は，ヒト末梢血中の単球を用いてプロポ
フォルが PGE2 産生に及ぼす影響を調べたので報法は開発されていない．本研究は，ヒト臍帯血由来
lineage 陰性細胞を SCID マウス網膜下に直接注入
し，網膜神経細胞への分化の可能性について検討している．移植 2 週間後に眼球を摘出して nestin,
MAP2, NSE, β tubulin III, rhodopsin 抗体を用いる
免疫組織学的検討を行ない，注入細胞中に神経細胞，網膜神経細胞マーカー陽性細胞を認めている．
以上の結果より，ヒト臍帯血由来細胞中に網膜神経細胞に分化する細胞の存在が示唆された．臍帯
血は再生医療の細胞源として近年注目されてお告する．
【方法と結果】
ヒト末梢血から単球を分離し，プロポフォル(0–60 μM) の存在下にリポポリサッカライド (LPS)(100 ng/ml) で 18 時間刺激し，培養液中の PGE2，ト
ロンボキサン (TX) B2，腫瘍壊死因子 (TNF)-α の濃度を酵素免疫法にて測定した．LPS の刺激によりプロスタノイド濃度は劇的に増加し，プロポ
フォルはそれを著明に抑制した．これは，ラク
テートデヒドロゲナーゼ (LDH) の測定により，プ16ロポフォルの細胞毒性によるものではないことがわかった．また，プロポフォルは TNF-α の濃度に影響を与えなかった．
PGE2, TXB2 の産生が共にプロポフォルにより抑制されたため，その抑制がシクロオキシゲナー
ゼ (COX) レベルかそれより上流の酵素において起こっていることが推測された．そこで，細胞内COX-1, 2 の蛋白発現をフローサイトメトリーによって測定した．COX-1 は LPS，プロポフォルのどちらにも変化を示さなかった．一方，COX-2 はLPS 刺激により著明に増加していたが，プロポ
フォルによる変化は見られなかった．このことから，プロポフォルは COX の蛋白発現を変化させないといえる．
過去の論文から，ヒト単球においてプロポフォ
ルが誘導型 NO 合成酵素 (iNOS) 発現を抑制する
ことにより COX 活性の低下を導く可能性を考え，
我々は NOS の基質である L-アルギニンと選択的
iNOS 抑制剤である 1400 W を加えて培養を行いPGE2 の濃度を測定した．その結果，L-アルギニン
を加えてもプロポフォルによる PGE2 抑制作用に影響はなかった．また，1400 W を加えても，LPS
刺激による PGE2 産生増加に変化はなく，そこにL-アルギニンを加えても影響はなかった．このことから，NO はヒト単球において PGE2 産生と無関係であるようだ．
次に，プロポフォルが COX 活性に与える影響を調べた．市販のキットを用いて精製された COX
酵素においてプロポフォルは濃度依存的に COX-2活性を抑制した．ヒト単球についてはどうかを調べるために，LPS で 16 時間刺激した後洗浄した
ヒト単球を，アラキドン酸 (10 μM) を含む培養液中でプロポフォルとともに 1 時間培養し，上澄み液中の PGE2, PGD2, TXB2 の濃度を測定した．プロ
ポフォルは PGE2, PGD2, TXB2 の濃度をすべて抑制しており，COX-2 活性を抑制した．さらに深く
その抑制作用を明らかにするために，増量したア
ラキドン酸 (100 μM) を用いて同様の実験を行うと，プロポフォルの COX-2 活性の抑制作用が減弱した．
過去の論文において，PGE2 がインターロイキン(IL)-10の産生を促しているというものがあることから，我々は，ヒト単球をプロポフォルの存在下に LPS で 18 時間刺激し，培養液中の IL-10 の産

関西医大誌

第 61 巻

生量を測定した．LPS 刺激により IL-10 は明らかに増加し，その増加はプロポフォルによって濃度依存的に抑制された．しかし，COX 阻害剤によるIL-10 産生量への影響はみられなかったため，IL10 はプロポフォルの PGE2 抑制作用に関係していないと考えた．
臨床において用いられるプロポフォルである
ディプリバンは，脂肪乳濁液に溶解しており，その主要な構成要素はアラキドン酸の基質となるリ
ノール酸を多く含有するダイズ油である．それゆえ，このディプリバンの溶媒がプロポフォルのCOX 活性抑制作用に影響を及ぼしている可能性がある．そこで我々は，これについてプロポフォ
ルとディプリバンの比較を行った．その結果，双方とも PGE2 の産生を抑制しているが，その抑制作用はプロポフォルよりディプリバンのほうが著明に減弱していた．
【結語】
プロポフォルは LPS により活性化されたヒト末梢血中の単球において PGE2 産生を抑制することが分かった．このプロポフォルによる PGE2 抑制
作用は，COX 蛋白発現や基質による影響ではな
く，COX 活性の抑制によるものであった．それゆえ，プロポフォルは，炎症，免疫において重要な効果を持つであろうと考えられる．
審査の結果の要旨
プロポフォルは LPS により活性化されたヒト末梢血中の単球において PGE2 産生を抑制する．したがって，プロポフォルは，炎症，免疫において重要な効果を持つ可能性が考えられる．このプロポフォルによる PGE2 抑制作用は，COX 蛋白発現や NO による影響ではなく，COX-2 活性の抑制によると考えられた．以上の結果は，ヒト末梢血中の単球におけるプロポフォルと PGE2 との関連をより明確にしたものであり，博士号に値する．

2009 年

第 2・3・4 合併号【1503】ふじたけん
ご
氏 名（本 籍）藤 田 賢 吾（兵庫県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 842 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Immunohistochemical identification ofmessenger RNA-related proteins in basophilic
inclusions of adult-onset atypical motor neuron
disease
論文審査委員

主査（教授）杉本哲夫（教授）山田久夫 （教授）中村加枝

論文内容の要旨【背景と目的】「運動ニューロン病 (MND)」は運動神経が選択的に変性を来たす疾患の総称である．MND の内にはいくつかの亜型が報告されており，その 1 つに「好塩基性封入体 (BI) を伴う MND」がある．若年発症の BI を伴う MND は，1941 年より相次いで報告されているが，成人発症の BI を伴う MND
は報告が数少なく，疾患概念は確立されていな
い．病態は不明であるが BI は好塩基性であるため核酸との関連が指摘されている．そこで我々はKusaka らにより報告された成人発症の BI を伴っ
た MND 2 例（1990, 1993 年）において本疾患に出現する BI における RNA 関連タンパクの関与について免疫組織化学的に検討した．
【対象と方法】
対象は，36 歳時に構音障害と右上肢筋力低下にて発症し 42 歳で死亡した男性例と，53 歳時に右下肢筋力低下で発症し58 歳で死亡した男性例である．いずれも進行性の筋力低下を呈して呼吸不全で死亡し，病理学的に中枢神経細胞内に広範に BIが認められた．これらの症例の大脳皮質神経細胞と脊髄前角細胞の細胞質に見られる BI を methylgreen-pyronin (MGP) 染 色 お よ び poly A binding
protein 1 (PABP1), T cell intracellular antigen 1(TIA-1), ribosomal protein S6 (rpS6), ribosomal
protein L28 (rpL28), decapping enzyme 1 (Dcp1),
TAR-DNA binding protein 43 (TDP-43), alpha-17

internexin に対する抗体を用いて免疫組織化学を
行った．
【結果】
2 例の BI の染色結果は同様であった．BI は MGP
染色では桃色に染色され，RNAase を処理後のMGP 染色では，BI の染色性が消失したため RNAを含有していることが示唆された．また抗 PABP
1 抗体，抗 TIA-1 抗体，及び抗 rpS6 抗体を用いた免疫染色では，ほぼすべての BI が陽性反応を示した．一方で，抗 rpL28 抗体，抗 Dcp1 抗体，抗TDP-43 抗体，
抗 alpha-internexin 抗体では免疫反応性は認められなかった．
【考察】
本研究において，免疫組織化学的に局在を検討した PABP1, TIA-1, Dcp1 はいずれも mRNA に特異的に結合する RNA 結合蛋白である．今回の検討により，BI が複数の mRNA 結合蛋白に対する抗体で陽性反応を示したことから，BI には mRNAが含有されていると推察された．mRNA が細胞質内で凝集体を形成した，いわゆる RNA granule には，現在 3 種が知られている．すなわち，transport ribonucleoprotein particles (transport RNPs),
processing bodies, stress granules である．transport
RNPs は翻訳前の mRNA を細胞内の適切な翻訳の場まで輸送する構造物で，60S リボゾーム (rpL28)を含有している．processing bodies は翻訳の終了
した mRNA を一時的に貯蔵した構造物で，mRNAのキャップ構造を除去するための Dcp1 を含有している．一方 stress granules は，細胞に対して何らかのストレスが加わった場合に翻訳を停止してmRNA を一時的に凝集・保護する構造物で，TIA-1,
40S リボゾーム (rpS6) を含有している．
今回のわれわれの検討で，BI の免疫組織化学的
特徴はstress granuleに類似していることが示された．したがって，成人発症の BI を伴う MND の病
因には，細胞内に stress granule を形成し，存続するような特定のストレスが関与している可能性が示唆された．
審査の結果の要旨
成人発症の好塩基性封入体を伴う運動ニューロン病は，報告が数少なく疾患概念が確立されていない．本研究は封入体形成への核酸の関与に着目し，各種の関連マーカーを用いた免疫組織化学染

18

関西医大誌

色法を駆使し，2 症例の解析を行った．その結果，封入体はmRNAの凝集体であることを強く示唆する証拠を得た．この新知見は疾患の概念形成と今後の病因解明に資するところが大きく，学位に値するものと認定された．

【1504】わけのまさたか
氏 名（本 籍）分 野 正 貴（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 843 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目The Alpha 2A-Adrenergic Receptor Gene
Polymorphism Modifies AntidepressantResponses to Milnacipran
論文審査委員

主査（教授）中邨智之（教授）中井吉英 （教授）日下博文

論文内容の要旨【研究目的】
選 択 的 セ ロ ト ニン 再 取 り 込 み 阻 害薬 (SSRIs)
paroxetineとセロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬 (SNRIs) milnacipran は，日本でうつ病の第一選択薬としてしばしば使用されるが，日常診療では 50–60％の反応率である．抗うつ薬反応の個人差には遺伝的背景が起因している可能性がある．
α2A-アドレナリン受容体 (ADRA2A) は，自己受容体として全身交感神経活動の調整において中心的役割を果す．近年，ADRA2A の機能的欠損がうつ病，注意欠陥多動障害，Tourette 症候群の原因として関係しているとの報告がある．
この研究では，ADRA2A のプロモータ部位に位置する C-1297G 遺伝子多型 (rs1800544) の遺伝的変異の影響が，SSRIs/SNRIs の抗うつ薬反応における予測因子となりえるか日本人うつ病患者で調査した．
【研究方法】
研究は関西医科大学精神神経科で行なわれ，関西医科大学と大阪大学の倫理委員会によって承第 61 巻認された．すべての参加者から書面によるイン
フォームド・コンセントを得た．DSM-IV でうつ病と診断された日本人 93 患者がこの研究に参加
し，paroxetine か milnacipran に無作為に割り当て
られ，薬物投与前と投与後 2 週間ごとにハミルトンうつ病評価尺度 (HAM-D) で評価され，6 週間治療した．ADRA2A C-1297G 遺伝子多型が抗うつ薬の有効性の相関解析で考慮された．統計解析には SAS バージョン 8.2 を用いた．
【結果】
93 名（男性／女性：45/48；paroxetine/milnacipran：
46/47；年齢：48.2±14.3 歳）が研究に登録された．
Paroxetine 19 名，milnacipran 17 名が研究から脱落し，合計 57 名（男性／女性：30/27；paroxetine/
milnacipran：27/30；年齢：49.3±12.6 歳）が解析の評価基準を満した．
臨床改善では，paroxetine 27 名と milnacipran
30 名両群とも著明に改善した (P<0.001) が，両群間に有意差はなかった．Paroxetine 群 54.3％，
milnacipran 群 55.3％に副作用を認めたが両群間に有意差はなかった (P=1.000)．
57名をADRA2A C-1297G 遺伝子多型のC/C, C/G,G/G の 3 グループに分類し，3 遺伝子型間で HAM-D
経 時 6 週 変 化 率 (P=0.019) (repeated measures
ANOVA) と 4 週 (P=0.034)，6 週時 (P=0.028)(ANOVA) の HAM-D 変化率に有意差を認め，抗うつ反応は，G/G より C アレル保有者で良かった．
C アレルを優性遺伝子と考え，C アレル保有者とG/G 群で抑うつ症状の改善を比較した．Milnacipran
群で C アレル保有者が G/G 群より，HAM-D 経時
6 週変化率 (P=0.037)，2 週時 (P=0.022)，4 週時(P=0.044) HAM-D 変化率で著明な改善を示したが，paroxetine 群では有意差を認めなかった．
【考察】
我々の研究結果はADRA2Aがうつ病治療で重要な役割を果すことを示唆した．この研究では，
paroxetine と milnacipran は同等の臨床効果と副作用を持つことを証明した．また ADRA2A 遺伝子
多型が SSRIs/SNRIs，特に milnacipran の抗うつ反応に関連している可能性を示した．ADRA2A 発現レベルが，milnacipran の効果に関係したかもしれないが，C-1297G 遺伝子多型によってもたらされる機能変化はまだ in vivo/in vitro で十分確認されていない．

2009 年

第 2・3・4 合併号【結語】
ADRA2A遺伝子多型はmilnacipranの反応を予測する適正な候補因子になるかもしれない．我々の結果はまだ予備的であり，より多くの症例が我々の結果を確認するのに必要とされる．しかし我々の知る限り，この研究は SNRI 反応と ADRA2A 変
異の相関を示した最初の研究である．
審査の結果の要旨
うつ病において，選択的セロトニン再取り込み阻害薬 (SSRI) とセロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬 (SNRI) は現在第一選択薬であるが，約 4 割の患者で効果がみられない．分野氏は，うつ病患者 93 名が参加する 6 週間の前向き臨床研究を行い，前シナプス自己受容体であるアドレナリン受容体 α2A 遺伝子のプロモーター部位の
1 塩基多型が SNRI，SSRI に対する反応性に影響することを見出した．本研究は，ゲノム情報を用いて治療選択するテーラーメイド医療に生かすことが期待されるものであり，学位に値する．

【1505】やまふみこと
氏 名（本 籍）山 戸 史 子（奈良県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 844 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Elevated intracellular calcium in neutrophils inpatients with Down syndrome
論文審査委員

主査（教授）中邨智之（教授）伊藤誠二 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【背景】
ダウン症候群 (Down syndrome: DS) の患者では易感染性，白血病，自己抗体の出現など免疫異常に関連した病態を高率に合併する．易感染性の原因の一つとして好中球の走化能，貪食能の低下が報告されているが，その機序の詳細は不明である．
近年，好中球が活性化する際のセカンドメッ

19

センジャーとして細胞内カルシウム濃度 ([Ca2+]i)が注目されており，その濃度変化は好中球活性化の指標になると考えられている．
今回私たちは DS における易感染性の原因を明らかにする目的で，DS 患児の好中球の [Ca2+]i を測定し，若干の知見を得たので報告する．
【研究方法】
DS 患児 27 名（DS 群：8.6±4.6 歳）と対照としての健康小児 14 名（C 群：12.0±3.9 歳）からヘパリン加血（静脈血 3 ml）を採取し，遠心分離法によって好中球を調整 (5.0×106/ml) した．
調整した好中球を蛍光色素 fura-2AM で処理した上で，[Ca2+]i を蛍光分光光度計で定量し比較した．さらに好中球刺激物質 N-formyl-methionylleucyl-phenylalanine (fMLP) を添加した場合と添加しない場合で，[Ca2+]i の変化を DS 群と C 群の両群間で比較した．
【結果】① fMLP を添加しない好中球において [Ca2+]iは，DS 群において C 群に比して有意に高値であった (70.6±28.0 nM vs. 44.4±16.0 nM, p<0.01)．
② fMLP を添加した場合の [Ca2+]i の最高値も，DS 群において有意に高値であった (250±91 nM
vs 167±60 nM, p<0.01)．
③ 一方，fMLP による刺激後，[Ca2+]i の上昇速
度は C 群に比して DS 群では緩除で，[Ca2+]i が最高値に達するまでの時間は，DS において有意に長かった（23.3±13.4 vs 12.4±6.8 秒 , p<0.01）．
④ DS 群では，無刺激時および fMLP 刺激時，いずれの場合においても年齢（0.8 ～ 9.3 歳）と [Ca2+]iの間に有意な相関関係が認められた（それぞれ相関係数 r=0.576, r=0.492, p<0.01）．一方，C 群（4.4 ～ 17.8 歳）では，いずれの場合も両者の間に有意な相関関係は認められなかった．
⑤ 血清 Ca 濃度は DS 群で有意に低値を示した（DS 群：8.2±0.9 mg/dl，C 群：9.2±0.3 mg/dl,
p<0.01）．
【考察】
好中球内の Ca は，細胞内情報伝達物質として機能しており，その濃度は無刺激下においては極
めて低く保たれている．しかしひとたび刺激が加わると，細胞外またはカルシオソーム（細胞内貯蔵部位）から Ca2+ が動員され [Ca2+]i が上昇する．
したがって [Ca2+]i は細胞内外の Ca の流出入のバ20

ランスで調節されている．
今回，DS 患児の好中球機能を活性化刺激による [Ca2+]i の変化で評価した結果，刺激に対する反応遅延がみられた．この機序については不明であるが，DS 患児において [Ca2+]i が有意に高値である一方，血清 Ca 濃度が有意に低値であったことから，DS では細胞内外の Ca の流出入バランスが細胞内に傾いていることが一因と思われた．すな
わち無刺激下でも Ca2+ が好中球内に高濃度で維持されているため，刺激に対する Ca2+ の濃度勾配による動員が起こりにくくなる可能性が考えられた．
いずれにせよ細胞内 Ca の動員が遅延すると好中球貪食能が低下することが知られており，今回の検討結果から DS 患児の易感染性の原因の一つとして『好中球の活性化遅延』が示唆された．
また DS 患児において，年齢と [Ca2+]i の間に有意な相関関係が認められた．健常成人において無刺激下の [Ca2+]i は加齢とともに上昇し，刺激に対する [Ca2+]i の動員は遅延するという報告がある．DS では，30 歳を過ぎた頃から早期の老化が認められるが，DS においてのみ小児期から年齢と [Ca2+]i の間に相関関係がみられたことは，DSにおける全身細胞の早期老化現象を反映している可能性が示唆された．
審査の結果の要旨
ダウン症候群患者では易感染性，自己抗体の出現などの免疫異常を高率に合併する．山戸氏は好中球活性化シグナルのセカンドメッセンジャーである Ca2+ 濃度がダウン症候群患者で変化している可能性を考え，ダウン症候群患児 27 名，健康小児 14 名の好中球を採取してその細胞内 Ca2+ 濃度を測定した．その結果，ダウン症候群患者の好中球ではベースラインの Ca2+ 濃度が高く，刺激に対しておこるCa2+濃度上昇が遷延することを見出した．本研究はダウン症候群患者の免疫系におこる異常の一端を明らかにしたものであり，学位に
値する．

関西医大誌

第 61 巻【1506】しゅん
ずんめ
氏 名（本 籍） 熊
正 梅（中国）学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 845 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Neuroprotective effects of amyloid β-derived
non-toxic tripeptide (Aβ32–34, Ile-Gly-Leu)
against toxic amyloid β-induced neuronaltoxicity in vitro and in vivo
論 文 審 査 委 員 主査（教授）伊藤誠二（教授）杉本哲夫 （教授）日下博文

論文内容の要旨【研究目的】
アミロイド β 蛋白はアルツハイマー病の病原ペプチドであり，その毒性メカニズムに基づいて毒性を防ぐ戦略が探索されてきた．これまでの報告では比較的高濃度（10 μM 以上）のアミロイド β蛋白を用いて解析されてきたが，我々の研究室では，アルツハイマー病患者の脳脊髄液内濃度相当（10 nM 以下）のアミロイド β 蛋白がホスファチ
ジルイノシトール 4-リン酸要求性のクロライド
イオンポンプ活性を抑制し，神経細胞内クロライ
ドイオン濃度を上昇させ，ついでグルタミン酸誘発興奮毒性による神経細胞死を増悪させることを明らかにした．さらに，アミロイド β 蛋白がホス
ファチジルイノシトール 4-キナーゼ (PI4K) 活性を直接阻害すること，アミロイド β 蛋白の部分ペ
プチドの Aβ31–35 を同時添加することにより，毒性アミロイド β 蛋白による PI4K 活性阻害および培養海馬神経細胞によるグルタミン酸興奮毒性による神経細胞死の増悪を抑制することを明らかにした．申請者は，アミロイド β 蛋白毒性に対して，拮抗薬として有用なアミロイド β 蛋白部分ペプチドの最小単位および修飾ペプチドの in vitro 探索と，その in vivo 作用を検討した．
【研究方法】
1．ラット脳海馬神経細胞初代培養方法：胎生
19日齢のWistar系ラット脳より培養海馬神経細胞を作製し，培養 4 日目から非神経細胞除去のため

2009 年

第 2・3・4 合併号

5 μM Ara-A 処理し，8 日目から 2 日間アミロイド β
蛋白 (10 nM Aβ1–42) およびアミロイド β 蛋白部分
ペプチド (10 nM) を単独または同時添加した．グ
ルタミン酸興奮毒性の観察のために，培養 10 日目に 10 μM グルタミン酸含有無血清培養液で 10 分
間処理し，その後 8 日目からの培養液と同じ培養液に交換し，2 日間（12 日目）培養した．
2．細胞生存活性測定：細胞生存活性は，ミトコンドリア活性を反映する WST-8 還元活性と細胞膜障害を反映する乳酸脱水素酵素 (LDH) 漏出
量により評価した．
3．組換えヒト PI4K 蛋白の調製：human PI4KIIα
vector を Escherichia coli DH5α に導入し，発現誘導
後，産生された GST-PI4KIIα蛋白を GST-Sepharose
4B で精製した．
4．組換えヒト PI4K 活性測定：PI4K 活性は，アミロイド β 蛋白 (10 nM Aβ1–42) およびアミロイ
ド β 蛋白部分ペプチド (10 nM) を単独または同時に含む反応液に組換え PI4KIIα と PI および[γ-32P]ATP を加えた．反応後生じたリン酸化リン
脂質を薄層クロマトグラフィーを用いて分離し，
オートラジオグラムにて計測した．
5．海馬内注入方法：4ヵ月齢のヒトタウ V337M
変異体蛋白発現マウスを麻酔下で脳位置固定装置に固定し，人工髄液に溶解したアミロイド β 蛋白(100 nM Aβ1–42) およびアミロイド β 蛋白部分ペプ
チド (100 nM acetyl-Aβ32–34) を単独または同時に脳海馬 CA1 領域 (AP −2.0 mm from the bregma,
LAT −1.0 mm, DV +1.5 mm) に注入（注入量 1.5 μl,
0.22 μl/min）した．麻酔覚醒後，飼育ケージに移動した．
6．モリスの水迷路試験：海馬内注入から 1ヵ月
後，水迷路試験を行った．始めの 3 日間は，避難台に目印のポールを立て，無目印空間（プール周囲に白布で天井まで囲む）で遊泳の事前訓練（4
試行：1 日 4 回〈1 回 1 分〉，30 分間隔）を行った．実験開始から 5 日間避難台を水面下 (0.5 cm)に沈め 4 方向（東西南北：4 試行）から遊泳させ，
5 日目の 4 試行後，避難台を除去し，1 分間遊泳させた．すべての遊泳記録をビデオに撮り，行動解析ソフト (SMART 2.5 version, Panlab-s) で解析した．
7．脳組織染色：行動実験終了後，麻酔下に 4％パラホルムアルデヒドにて還流固定し，脳を摘出21

し，後固定後 30％ sucrose 溶液に浸透させ，包埋後凍結切片を作製した．変性神経細胞の検出にはmethyl green pyronin Y (MGPY) 染色を行い，アポトーシス細胞の検出には cleaved caspase-3 antibody を用いて免疫組織化学染色を行った．左右それぞれの海馬 CA1, CA3 および dentate gyrus 領域の総細胞数あたりの染色陽性（変性）細胞数を計算した．
【実験結果】
1．アミロイド β 蛋白由来トリペプチド (Aβ32–34) のアミロイド β1–42 蛋白誘発毒性に対する保護作
用1）10 nM アミロイド β 蛋白 (Aβ1–42) による PI4K
活性阻害は，10 nM のアミロイド β 蛋白部分ペプ
チド (Aβ32–35) および Aβ31–35 由来の 3 つのペプチド断片 Aβ31–34, Aβ32–35 および Aβ32–34 によって有意に減弱した．
2）初代培養脳海馬神経細胞における10 nMアミ
ロイド β 蛋白 (Aβ1–42) のグルタミン酸誘発神経細胞毒性の増強が WST-8 還元活性の減少との LDH
遊離の増加によって観察され，その神経細胞障害の増強は 10 nM のアミロイド β 蛋白部分ペプチド(Aβ31–35) および Aβ31–34, Aβ32–35, Aβ32–34 によって有意に減弱した．
3）Aβ31–35 由来の3 つのペプチド断片のうち最も短い Aβ32–34 である Ile-Gly-Leu (IGL) は，1 nM から用量依存的に有意に 10 nM アミロイド β 蛋白
(Aβ 1–42 ) による PI4K 活性阻害と初代培養脳海馬神経細胞のグルタミン酸誘発神経細胞毒性の増強を減弱させた．一方，Aβ32–34 の逆配列を持つ Aβ34–32
ではこのような減弱効果は認められなかった．
2．修飾アミロイド β 蛋白トリペプチド (acetylAβ32–34, acetyl-Ile-Gly-Leu) のin vitroおよびヒトタウ V337M 変異体蛋白発現マウスにおけるア
ミロイド β1–42 蛋白誘発神経細胞毒性に対する保護作用
1）修飾アミロイド β 蛋白トリペプチド 3 種類
（acetyl-Ile-Gly-Leu, Ile-Gly-Leu-NH2 および acetylIle-Gly-Leu-NH2）のうち acetyl-Ile-Gly-Leu (acetylAβ32–34) は，1 nMから用量依存的に有意に 10 nMア
ミロイド β 蛋白 (Aβ1–42) による PI4K 活性阻害と初代培養脳海馬神経細胞のグルタミン酸誘発神経細胞毒性の増強を減弱させた．
2）海馬内アミロイド β 蛋白注入後 1ヵ月経過し22

たマウスにのモリスの水迷路試験では，アミロイ
ド β 蛋白 (Aβ1–42) 注入群は明らかな空間認知障害が認められた．アミロイド β 蛋白 (Aβ1–42) と修飾
アミロイド β 蛋白トリペプチド (acetyl-Aβ32–34) の同時注入群では空間認知障害の改善が認められた．
3）行 動 実 験 終 了 後 摘 出 し た 脳 切 片 の MGPY
染色および cleaved caspase-3 antibody の免疫組織
化学染色の結果，海馬 CA1, CA3 および dentate
gyrusのいずれの領域においてもアミロイドβ蛋白(Aβ1–42) 注入群は有意に障害細胞数の増加とアポトーシス様細胞数の増加が認められた．アミロイ
ド β 蛋白 (Aβ1–42) と修飾アミロイド β 蛋白トリペ
プチド (acetyl-Aβ32–34) の同時注入群では海馬のいずれの領域においても障害細胞数の減少が認められた．
【考察と結論】
非毒性修飾アミロイド β 蛋白トリペプチド(acetyl-Aβ32–34: acetyl-Ile-Gly-Leu) は，おそらく膜タイプの PI4KII 活性阻害を回復させることによって，in vitro および in vivo いずれの場合において，アルツハイマー病患者の脳脊髄液内濃度相当のアミロイド β 蛋白 (Aβ1–42) 毒性を保護するものと考えられる．これらのことから非毒性修飾アミ
ロイド β 蛋白断片 (acetyl-Aβ32–34) は，アルツハイ
マー病の治療薬としてアミロイド β 蛋白拮抗薬の開発に有用であると考えられる．
審査の結果の要旨
アルツハイマー病の病原ペプチドであるアミロ
イド β は，神経細胞膜の PI4K を阻害し，細胞毒性を発揮する．本研究で熊氏は，アミロイド β の部分配列である Aβ32–34 (IGL) がアミロイド β による PI4K 阻害とそれに引き続く細胞毒性をともに抑制できることを示した．さらに，アセチル化ア
ミロイド β 32–34 が AD モデルマウスにおいてアミ
ロイド β による神経死と記憶低下を抑制できることを示した．本研究は AD の治療薬のリード化合物を見出したものであり，学位に値する．

関西医大誌

第 61 巻【1507】みよしひであき
氏 名（本 籍）三 好 秀 明（山口県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 846 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目Circulating Naïve and CD4+CD25highRegulatory T Cells in Patients With Autoimmune Pancreatitis
論 文 審 査 委 員 主査（教授）權
（教授）池原雅憲

進 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【研究目的】
自己免疫性膵炎 (Autoimmune pancreatitis; AIP)
は，膵腫大と主膵管の狭細像を呈し，血清 IgG,
IgG4 の上昇や自己抗体の出現など，その発症に自己免疫機序の関与が疑われる膵疾患であるが，その病態については不明である．
一方，様々な自己免疫性疾患の発症に制御性 T
細胞 (Regulatory T cell; Treg) が関与していることが示唆されており，さらに Treg にいくつかのサブセットが存在することが報告されている．そのう
ち CD45RA 陽性の Naïve-Treg は，Treg の特異的転写因子である Foxp3 を発現し CD4+CD25high Tregと同様の抑制能を有するため，自己免疫性疾患との関与が予測されている．しかし AIP にこれらのTregがどのように関与しているかは未だ不明である．そこで今回われわれは，AIP 患者における末梢血中の各種Tregについて他の慢性膵炎と比較し検討を行った．
【研究方法】
当院とその関連施設で得られた AIP 患者 27 名
（平均年齢 62 歳（22–83 歳），男女比 18：9，ステ
ロイド投与群 12 名），健常人 32 名（平均年齢 63
歳（41–76 歳），男女比 23：9），アルコール性慢性膵炎 12 名（平均年齢 63 歳（45–91 歳），男女比9：3），特発性慢性膵炎 11 名（平均年齢 52 歳（22–80 歳），男女比 2：9）の末梢血中の CD4+CD25high(Conventional-Treg) 細 胞，CD4+CD25+CD45RA+(Naïve-Treg) 細胞をフローサイトメトリーを用い

2009 年

23

第 2・3・4 合併号て解析を行った．
【結果】
AIP 患者の Conventional-Treg は健常人・アルコール性慢性膵炎患者・特発性慢性膵炎患者と比較し有意に増加していた．一方，AIP 患者のNaïve-Treg は健常人・アルコール性慢性膵炎と特発性慢性膵炎を合わせた慢性膵炎患者と比較し有意に減少していた．さらにステロイド未投与群のAIP 患者の Conventional-Treg と血清 IgG4 値には正の相関 (R=0.53) が認められた．
【考察】
今回の検討において，AIP 患者の末梢血中のconventional-Treg は，健常人や他の慢性膵炎と比較し有意に増加していた．全身性エリテマトーデ
スや慢性関節リウマチなどの自己免疫性疾患では
CD4+CD25high Treg が減少しているとの報告が散見されるが，多発性硬化症では減少は認められないとの報告や，シェーグレン症候群では逆に増加しているとの報告もあり，自己免疫性疾患に
CD4+CD25high Treg の減少が必須のものではない
ようである．
AIP 患者では血清 IgG4 の上昇，膵や膵外病変に
IgG4 陽性形質細胞の浸潤を特徴とするが，その役割や機序については未だ分かっていない．Robinson
らは，高濃度の抗原が曝露されると TH2 反応が抑制され T H1 優位の反応に切り替わり，その結果
IL-10 産生制御性 T 細胞が増加し，産生された IL10がB細胞のIgG4クラススイッチを促すと報告している．以前我々は，AIP 患者の末梢血中の TH1型 CD4 陽性細胞が増加していることを報告しており，今 回 ス テ ロ イ ド 未 投 与 群 の A IP 患 者 のConventional-Treg と 血 清 IgG4 値 に 正 の 相 関(R=0.53) が認められたことを考え合わせると，Conventional-Treg の増加が高 IgG4 血症に関与している可能性が示唆された．
一方 Naïve-Treg は AIP 患者の末梢血中では，健常人，他の慢性膵炎患者と比較し有意に減少していた．Naïve-Treg は Conventional-Treg と同様の抑制能を有していると報告されており，AIP の発症に Naïve-Treg の減少が関与している可能性が示唆された．
審査の結果の要旨
自己免疫性膵炎 (AIP) は，発症に自己免疫機序の関与が疑われる膵疾患であるが，その病態については不明である．三好氏は，AIP 患者における末梢血中の各種制御性 T 細胞 (Treg) を他の慢性膵炎と比較し，conventional (memory)-Treg の有意な増加と Naïve-Treg の減少を見出した．本研究
は，AIP の発症や病態を解明する端緒となるもの
であり，学位に値すると認定された．

【1508】
まつむら
よしたか
氏 名（本 籍）松 村 義 隆（福井県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 847 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Helix-rich transient and equilibrium intermediates of equine β-lactoglobulin in alkaline
buffer論 文 審 査 委 員 主査（教授）藤井 茂（教授）伊藤誠二 （教授）中邨智之

論文内容の要旨【目的】
生命現象は様々な蛋白質によって支えられている．その蛋白質が生体機能を持つためには天然立体構造を形成しなければならない．よって，RNAから翻訳されたポリペプチド鎖がどのように折り畳まれて立体構造を形成するのかというフォール
ディング機構を知ることは生物物理学の重要課題の一つである．我々はウシの β ラクトグロブ
リンや src SH3 等，主に β 構造を有する蛋白質のfolding 過程を調べてきた．その結果，これらの蛋白質は α ヘリックスからなる中間体を生じ，それを経由して天然状態の β 構造になることが分かった．さらにウシの β ラクトグロブリンについては
フォールディング・コアが観測されている．そこで我々は，天然立体構造がウシとほぼ同様で比較を行うのに好都合なウマの β ラクトグロブリンに注目し，そのフォールディングを調べた．ウマの
β ラクトグロブリンはウシの β ラクトグロブリンと比較すると，（1）自由になっているシステイン

24

残基がないためジスルフィド結合の交換がなく，（2）酸性 pH からアルカリ性 pH まで単量体で存在でき，さらに（3）大腸菌からの発現，精製の系が確立されているので様々な変異体を作れるといういくつもの利点を持つ．今回私は，ウマのβ ラクトグロブリンのアルカリ性領域でのフォー
ルディングを研究し，酸性領域と同様に α ヘリックスを多く含む中間体が形成されることを明らかにした．
【研究方法】
ウマの β ラクトグロブリンはミルクから精製したものと大腸菌から発現，精製したものを用いた．
リフォールディングは変性剤グアニジン塩酸で変性させたウマの β ラクトグロブリンを希釈させ，低温用に特別に製作したストップト・フロー(SF) 法を用いた．またプローブとして α ヘリック
スの量を測定する円偏光二色性 (CD) を用いた．
低温で実験を行うときは溶液を凍らせないために，ウシの β ラクトグロブリンでも用いられたエ
チレングリコールを使った．
【結果】
ウマの β ラクトグロブリンはグアニジン塩酸により天然状態から変性状態に徐々に構造変化し，その転移曲線は尿素によるものとほぼ同じ結果であった．また低温においてフォールディングを行うために，45％エチレングリコール存在下においてもグアニジン塩酸による変性転移を調べたとこ
ろ，1 M 以下で天然状態を保ち 1.5 M の領域では平衡の非天然 α ヘリックス中間体を形成した．またそこからは濃度が上がるにつれて変性していった．これはウシの β ラクトグロブリンには見られない特徴である．またその転移曲線は温度依存がなく，酸性 pH 4 で見られるものと良く似ていた．
ここで 0％と 45％エチレングリコールでは構造変化がなく天然立体構造を保つことが分かった
ので，0％と 45％エチレングリコールの両条件でSF 法により変性状態から天然状態へ巻き戻るリ
フォールディングを行った．その結果，エチレン
グリコールの有無に関わらず，非天然の α ヘリックスを形成していると思われるバースト相が観測された．これは，ウマの β ラクトグロブリンが酸性 pH だけでなくアルカリ性 pH においても非天然 α ヘリックス中間体を形成してから天然状態まで折り畳まれることを示している．また，その関西医大誌

第 61 巻バースト相から天然状態までのフォールディング
速度は温度が下がるにつれて遅くなっていった．
これにより，α から β への転移について活性化エンタルピーを初めて導き出すことができた．ウマの β ラクトグロブリンは 45％エチレングリコール存在下で 80 kJ/mol，ウシの β ラクトグロブリンではそれぞれ 0％と 45％エチレングリコールでそれ
ぞれ 35 kJ/mol, 70 kJ/mol であった．さらにウシで見られたフォールディング・コアの観測を試みたが，ウマの場合は観測されなかった．
【考察】
今回の研究で，ウマの β ラクトグロブリンは酸性だけでなくアルカリ性においても非天然 α ヘリックス中間体を形成するフォールディング経路を持つことが明らかになった．また酸性でもアルカリ性でも単量体で，且つ平衡およびフォール
ディングにおいて非天然 α ヘリックス中間体を観測できる良いモデル蛋白質であることが示された．蛋白質は一般に負に帯電しているので，酸性では正電荷による静電反発から分子サイズが大き
くなり，その結果 α ヘリックスを形成することが研究報告されている．しかし我々により，フォー
ルディングの初期過程においては pH やエチレン
グリコールの有無に関わらず局所相互作用による構造変化が主であることが示された．また我々は以前に，天然構造の 2 次構造組成の異なる蛋白質
が，どの場合にも，それぞれ α ヘリックスを形成
してから固有の天然立体構造へ折り畳まれることを報告しているが，今回のウマの β ラクトグロブ
リンの場合もその経路を通っており，この経路の一般性がさらに強く示される結果となった．
審査の結果の要旨
松村氏は，ウマ β ラクトグロブリンを用いて，弱アルカリ性の条件下でもフォールディングの初期過程に中間体として α ヘリックスの多い構造をとることを初めて示した．この結果は，いくつかのタンパク質のフォールディング初期過程において現れる α ヘリックスを多く含む構造中間体は，ある限定された pH 条件でのみ現れるものではな
く，タンパク質がその構造を形成するために本質的に重要な中間体であることを一般化したもので学位に値する．

2009 年

第 2・3・4 合併号【1509】はたのやすこ
氏 名（本 籍）畑 埜 泰 子（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 848 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Phagocytosis of heat-killed Staphylococcus
aureus by eosinophils: comparison withneutrophils
論文審査委員

主査（教授）藤澤順一（教授）池原進 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【背景】
好酸球は，気管支喘息やアトピー性皮膚炎で組織傷害を起こし，それらの疾患の病因となることが考えられ，脱顆粒，活性化酸素産生，接着，走化能などの機能をもつことが知られている．しかし，細菌貪食の機能についての報告はなく，その機序も不明な点が多い．好中球が細菌を貪食・殺菌する機構についてはよく研究されているが，好酸球についてはほとんど報告がない．アレルギー性疾患では，好酸球の増多がしばしばみられる．
また，アトピー性皮膚炎では，膿痂疹などの皮膚細菌感染の合併や症状の増悪をよく経験する．それらのアレルギー性炎症の場で，好酸球が細菌を貪食し，殺菌を行っている可能性があるが，明らかではない．
細菌感染の際の主な役割を担っているのは，好中球である．好中球は，接着，走化，貪食，活性酸素産生，脱顆粒，殺菌などの機能を有し，細菌の貪食においては主役と考えられている．好中球の細菌貪食作用は，免疫グロブリンレセプターのCD16（Fcγ レセプター III），CD32（Fcγ レセプターII），補体レセプターの CD11b を介することが判明している．
一方，好酸球も好中球と同様，多彩な膜表面レセプターを発現している．中でも，免疫グロブリン
Fcγ レセプターでは CD32, 補体レセプターでは
CD35, CD11b が多く発現している．しかし，それらの膜表面レセプターを介した好酸球の細菌貪食

25

作用に関する報告はない．
【研究目的】
好酸球が，好中球と同様に，貪食能や過酸化水
素産生能を有するか否かを明らかにする．
【研究方法】
1．正常成人の末梢血から，好酸球と好中球を，CD16 negative selection と比重遠沈法でそれぞれ分離する．
2．分離した好酸球と好中球を，propidium iodide(PI) で染色したブドウ球菌で刺激した上で，活性酸素の標識物質であるdichlorofluorescein diacetate(DCF) を反応させ，フローサイトメトリーで過酸化水素産生能と貪食能とを，同時に定量的に測定した．
3．分離した好酸球と好中球を，Fcγ レセプター(CD16・CD32)，補体レセプター (CD35・CD11b)に対する抗体で反応させた後，フローサイトメト
リーで貪食能を定量的に測定し，それぞれの抗体による効果を検討した．
4．共焦点レーザー顕微鏡で，好酸球を DCF と
PI 染色したブドウ球菌に反応させ，好酸球が実際にブドウ球菌を貪食し，過酸化酸素を産生するかを確認した．
【結果】
1．好酸球は，貪食能・過酸化水素産生能ともに，好中球の約 50％であった．
2．貪食能は，好中球においては抗 CD16 抗体・
抗 CD32 抗体で有意に抑制されたが，好酸球では
抗 CD35 抗体で有意に抑制された．
3．共焦点レーザー顕微鏡で，好酸球内に PI 染
色したブドウ球菌を認め，またその食胞内に DCF
を認めた．
【考察】
好中球と好酸球の細菌貪食能および過酸化水素
産生能を，フローサイトメトリーで同時に定量化
し，好酸球も好中球と同様に細菌を貪食し，過酸化水素を産生することが確認できた．また，その細菌貪食能・過酸化水素産生能は，好中球の約 50％であることが分かった．そして，実際に好酸球がブドウ球菌を貪食し，活性酸素を産生することも確認できた．
さらに，好中球においては，Fcγ レセプターである CD16・CD32 に対する抗体で貪食は抑制されたが，好酸球では，補体レセプターである CD35

26

関西医大誌

に対する抗体で抑制された．したがって，好酸球の貪食のメカニズムは，好中球と異なり，Fcγ レ
セプターによる関与はなく，補体レセプターによる関与が示唆された．
【結論】
好酸球も，好中球の 50％程度の貪食能と過酸化
水素産生能を有している．そして，ブドウ球菌の貪食における一連の過程は好中球と同様であるが，その刺激に対する受容体は，好中球と好酸球とで異なっている．
審査の結果の要旨
畑埜氏は，アレルギー疾患で増多がみられる好酸球の細菌貪食能および過酸化水素産生能に注
目し，細菌の貪食・殺菌において中心的な役割を担う好中球と比較し解析した．その結果，好酸球
も好中球の 50％程度の貪食能および過酸化水素産生能を持っていること，および，抗中球とは異なったオプソニン受容体を介して貪食をおこなっていることを明らかにした．これらの結果は，ア
トピー性皮膚炎で併発する皮膚細菌感染症における好酸球の役割に示唆を与える新しい知見であり，学位に値すると考える．

【1510】よこいたかし
氏 名（本 籍）横 井
崇 （奈良県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 849 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guérin
suppresses inflammatory Th2 responses by
inducing functional alteration of TSLP-activateddendritic cells
論文審査委員

主査（教授）池原進（教授）薗田精昭 （教授）木梨達雄

論文内容の要旨【背景・目的】近年，先進諸国ではアレルギー疾患の増加が顕第 61 巻著であり，その制御が重要な課題となっている．
アレルギー性炎症は，Th2 細胞から産生されるサイトカイン (IL-4, IL-5, IL-13) による免疫反応により引き起こされるが，最近，アレルギーをもたらす免疫カスケードのさらに上流にアレルギー誘導因子が発見された．この誘導因子はアトピー性皮膚炎患者のケラチノサイトや気管支喘息患者の気道粘膜に異常発現している thymic stromal
lymphopoietin (TSLP) であり，このサイトカイン
により活性化された CD11c+ ミエロイド系樹状細胞 (dendritic cell: DC) が炎症性 (TNF-α+) Th2 サイ
トカイン産生細胞を誘導する．この際，TSLP-DC
上に発現する OX40 リガンド (OX40L) が必須であることも示された．したがって，TSLP-DC はアレ
ルギー疾患に対する治療の新しいターゲットになりえるものと考えられる．
Bacillus of Calmette and Guerin (BCG) は，結核のワクチンとして広く安全に使用され，DC を成熟・活性化する強力な免疫アジュバントとして知られている．我々は，以前，BCG により活性化された DC は IFN-γ を旺盛に産生する Th1 細胞を誘導することを報告した．こうした免疫アジュバン
ドの刺激を受けた DC によって Th2 細胞分化誘導能の制御が可能になれば，アレルギー疾患の有効な治療法の開発につながる．我々は，この作業仮説のもとに BCG の TSLP-DC に及ぼす影響を検討した．
【方法】
健常人ドナーの末梢血からマグネチックビーズ
法およびセルソーターを用いてCD11c+ DCを単離
し，TSLP または BCG の刺激による表面マーカーの発現，サイトカイン産生能，および Th 細胞誘導能を検討した．次に，TSLP 存在下および非存
在下の BCG で DC を刺激した後，アロ CD4+ T 細胞と共培養し，Th1 細胞および Th2 細胞の誘導能を細胞内サイトカイン染色により検定した．さらに，レギュレーションアッセイを用いて，誘導されたヘルパー T 細胞の抑制能を検討した．
【結果】
TSLP，BCG，および TSLP 存在下の BCG による刺激は，いずれも DC を強力に活性化し成熟させた．TSLP の単独刺激を受けた DC からは IL-12の産生を認めなかったが，BCG 単独刺激では大量の IL-12 を産生した．IL-12 の産生は TSLP 存在下2009 年

27

第 2・3・4 合併号の BCG 刺激でも同様に確認された．次に，DC 上
における OX40L の発現について検討した．DC は
TSLP 刺激によりその細胞表面に OX40L を強く発現し，BCG 刺激により抑制された．この BCG に
よる OX40L の発現抑制は RT-PCR でも確認され，遺伝子の転写レベルでの抑制と考えられた．
次に，TSLP および BCG の刺激を受けた DC とCD4+ naïve T 細胞を共培養し，誘導される T 細胞
からのサイトカイン産生を検討した．TSLP 単独
刺激の共培養 (TSLP-DC/T) ではTh1サイトカイン
である IFN-γ の産生はほとんど認められなかったが，炎症性 Th2 サイトカイン (IL-4, IL-5, IL-13,
TNF-α) の産生を認めた．しかし，BCG と TSLP の同時刺激 (BCG+TSLP-DC/T) では大量の IFN-γ とIL-10（制御性 Th1 サイトカイン）の産生を認め，
炎症性 Th2 サイトカインの産生はほとんど認めな
かった．この制御性 Th1 サイトカイン産生誘導系の共培養に IL-12 の中和抗体を添加すると IFN-γの産生が減弱し，さらにリコンビナント OX40L を添加すると炎症性 Th2 サイトカインの産生増加が認められた．ELIZA によるサイトカイン測定でも同様の結果が得られた．[3H]thymidine incorporation+

による CD4 T 細胞の増殖抑制試験では，BCG+
TSLP-DC/T は優位に T 細胞の増殖を抑制した．これに IL-10 中和抗体を添加すると抑制は解除された．すなわち，BCG+TSLP 刺激により誘導される Th1 細胞は機能的にも制御性である．
【考察】
従来のアレルギー疾患の治療は，主に免疫カスケードの下流に位置するエフェクター相に作用し，自覚症状の改善を得るものであった．今回，我々は，免疫アジュバンドである BCG によって炎症性 Th2 誘導性 DC を制御性 Th1 誘導性 DC に
機能変換できること，そしてこの機能変換は DC
表面上の OX40L 発現の抑制と DC からの IL-12 産
生誘導に依存することを明らかにした．こうした免疫カスケードの上流におけるアレルギー炎症の抑制機構の解明は，アレルギー疾患の根本的治療薬の開発を促すものと考える．
審査の結果の要旨
従来のアレルギー疾患の治療は，主に免疫カスケードの下流に位置するエフェクター相に作用し，症状の改善をはかるものであった．

今回，申請者らは，免疫アジュバンドである
BCG によって，アレルギーをもたらす炎症性 Th2誘導性樹状細胞 (DC) を制御性 Th1 誘導性 DC に
機能変換できること，そしてこの機能変換は DC
表面上の OX40L 発現の抑制と DC からの IL-12 産
生誘導に依存することを明らかにした．このような免疫カスケードの上流におけるアレルギー炎症の抑制機構の解明は，アレルギー疾患の根本的治療薬の開発を促すものである．

【1511】
い はら だあんな
氏 名（本 籍）居原田 安 奈（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 850 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Increased nitric oxide production by T-and
B-cells in idiopathic nephrotic syndrome論 文 審 査 委 員 主査（教授）池原進（教授）伊藤誠二 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【はじめに】
小 児 特 発 性 ネ フ ロ ー ゼ 症 候 群 (Idiopathic
Nephrotic Syndrome: INS) の主たる病因は，T 細胞の機能障害であると考えられてきた．しかし最近，B 細胞の機能障害も関与しているとの報告が相次いでなされている．また INS の蛋白尿を惹起する因子として患者血漿中の血管透過性亢進因子の存在が想定されており，その一つに一酸化窒素(NO) があげられる．しかしその代謝の速さゆえに今日まで NO を直接測定した報告はない．
【目的】
小児の INS の病因および蛋白尿の出現機序を明らかにするために，T 細胞と B 細胞の NO 産生量を検討する．
【対象と方法】

対象
INS患児12例（平均年齢7.3歳，発症時と寛解時），
その他の腎疾患患児 16 例（9.5 歳），および対照

28

としての健常小児 42 例（7.7 歳）を対象とし，両親からの同意を得た上で採血を行った．INS 患児とその他の腎疾患患児においては全例，副腎皮質ステロイド薬や免疫抑制薬の内服をしていない状
態で採血した．

方法① 対象から全血 100 μl を採血する．
② CD3 陽性細胞（T 細胞）と CD19 陽性細胞
（B 細胞）に対するモノクローナル抗体を反応させた上で，NO と特異的に結合する蛍光色素・4,5diaminofluorescein-FM diacetate (DAF-FM DA) を反応させる．
③ CD3 陽性細胞と CD19 陽性細胞から産生される細胞内 NO 量をフローサイトメーターで平均蛍光強度として定量する．
④ 対象の血漿中のNO代謝産物 (NOx) 濃度も比色分析法で測定する．
⑤ 細胞内 NO 産生量と血漿 NOx 濃度を INS 患児，その他の腎疾患患児，および対照小児の 3 群
間で統計学的に比較検討する．さらに INS 患児においては発症時と寛解時で細胞内 NO 産生量と血漿 NOx 濃度を比較する．
【結果】① T 細胞と B 細胞から産生される細胞内 NO 量
は INS 発症時には他の群に比べて有意に (P<0.01)
増加していたが，寛解時には健常小児と同程度に減少していた．
② 血漿 NOx 濃度も，INS 発症時には他の群に比べて有意に増加していた (P<0.01) が，寛解時には健常小児と同程度に減少していた．
③ 細胞内 NO 産生量と血漿 NOx 濃度は，寛解時の INS 患児とその他の腎疾患患児，健常小児の間では有意差が認められなかった (P>0.05)．
④ 血漿 NOx 濃度と尿蛋白量は，INS 患児では有意な正の相関を示したが，その他の腎疾患群では相関は認められなかった．
【考察】
INS の病因はいまだに不明であるが，T 細胞の機能障害が何らかの血管透過性亢進因子の過剰産生を生じ，その結果，糸球体上皮細胞の機能障害を起こし発症すると考えられている．実際に INS 患者の T 細胞培養上清をラットに投与することで，ラット腎糸球体基底膜の陰イオンを減少させて大量の蛋白尿が誘発されることが報告されている．

関西医大誌

第 61 巻しかし近年，ステロイドの無効な難治性の INS
患者において，抗 CD20 モノクローナル抗体・リ
ツキシマブの投与によって B 細胞が減少すると同時に寛解が得られ，B 細胞数の増加に伴って再発するという報告がなされ，INS での免疫機能異常
が T 細胞だけでなく，B 細胞にも存在する可能性が示唆されている．
また INS 患者で蛋白尿を来たす血管透過性亢進
因子としてはこれまで各種サイトカインが検討されてきたが，近年，NO の関与を示す報告も散見される．実際，NO が腎臓で重要な役割を果たす
ことはよく知られている．しかし過去の報告では
INS 患児における NO 代謝産物を測定しており，細胞種別の NO 産生量を評価したものはない．
申請者らは NO に特異的に結合する蛍光色素・
DAF-FM DA を用いて，CD3 陽性細胞（T 細胞）とCD19 陽性細胞（B 細胞）の NO 産生能を検討した．
その結果，INS 患児においては T 細胞と B 細胞において疾患活動期にのみ有意に NO 産生が亢進していること，そして血漿 NOx 濃度と尿蛋白量の間には有意な正の相関があることを明らかにした．
これらのことから INS の病因として「T 細胞とB 細胞を含む免疫調節細胞の機能異常によって過剰産生された NO が糸球体毛細血管透過性を増大させて，蛋白尿を惹起する」という機序が示唆された．
【結論】
小児の INS には T 細胞でだけでなく，B 細胞もその病因に関与している．そして INS 患児の蛋白尿出現にはそれらの細胞から産生される NO が重要な役割を演じている．
審査の結果の要旨
小児の特発性ネフローゼ症候群 (INS) の主たる病因は，T 細胞の機能異常によると考えられてきたが，本研究は，多数の INS 患児と他の腎疾患患児を比較して，T 細胞のみならず，B 細胞の異常，
特に NO の過剰産生が INS の病因に重要な役割を演じていることを，初めて明らかにしたもので，学位に充分値する研究と認定された．

2009 年

第 2・3・4 合併号【1512】
まつ
ひさせい
じ
氏 名（本 籍）松 久 誠 治（岐阜県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 851 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Angiotensin II type 1 receptor blocker
preserves tolerance to ischemia-reperfusion
injury in Dahl salt-sensitive rat heart
論文審査委員

主査（教授）中邨智之（教授）松田博子 （教授）伊藤誠二

論文内容の要旨【はじめに】
虚血性心疾患は先進国における主要な死因であり，生命予後，機能的予後は心筋梗塞領域の広がりと密接に関係している．また，高血圧は虚血性心疾患の大きなリスクファクターであり，梗塞領域を増加させない降圧療法が望まれる．
【研究目的】
本研究の目的は降圧薬として広く用いられているア ン ジ オ テ ン シ ン II タ イ プ 1 受 容 体 遮 断 薬(ARB) が高血圧心において虚血再潅流傷害を予防する機序を検討することである．高血圧心では心筋局所のレニン－アンギオテンシン系が活性化され，心筋細胞に酸化ストレスが加わることが知られている．この酸化ストレスは心筋肥大のシグナ
ルを活性化する一方，誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS) を過剰発現させて虚血等の種々のストレスから心筋細胞を保護する役割を果たしていると考えられている．そこで，このような高血圧心に抗酸化薬を投与することは iNOS の発現を抑制し，虚血耐性を減弱させることが推察される．これに対して，ARB が酸化ストレスを抑制し，iNOS の発現を抑制するにもかかわらず心筋虚血，再灌流障害に対する保護作用が惹起される機序は不明であった．そこで私は ARB が iNOS の代わりに内皮型一酸化窒素合成酵素 (eNOS) を活性化して心保護的に作用しているのではないかと考え研究を始めた．

29【研究方法】
6 週齢の食塩感受性 Dahl ラット (DS)，食塩抵抗性 Dahl ラット (DR) に対し，8％塩分食を 6 週間
与え，左冠動脈を 30 分間閉塞後，2 時間の再灌流を行った．ARB としてロサルタンを 2 週間投与
し，ARB 心筋虚血耐性における酸化ストレスの役割を検討するために抗酸化剤である N-(2-mercaptopropionyl)-glycine (MPG) を 2 週間投与した．心筋虚血耐性における iNOS と eNOS の役割を検討するために iNOS の選択的阻害剤である 1400 Wと非選択的 NOS 阻害剤である N-nitro-L-arginine
methyl ester (L-NAME) を冠動脈閉塞 30 分前に投与した．酸化ストレスの指標としてニトロチロシ
ン化タンパク (NT) を測定した．eNOS の活性化とiNOS の発現はリン酸化 eNOS と iNOS をそれぞれ
ウエスタンブロット法で定量することにより評価
し，iNOS 活性は L- シトルリンアッセイ法を用いて測定した．
【結果】
DSラットにおいてロサルタンとMPGは共にNTの産生と iNOS の発現を抑制したが，ロサルタン
のみが eNOS を活性化した．DR ラットにおいてはロサルタンと MPG は心筋梗塞サイズに影響を与えなかったが，DS ラットにおいてロサルタン
は梗塞巣を縮小したのに対し MPG は梗塞巣を増加させた．DS ラットにおいて 1400 W は iNOS 活
性の抑制に伴い梗塞巣を増加させたが，ロサルタ
ンは梗塞巣を増加させなかった．L-NAME はロサ
ルタンを投与した DS ラットにおいて NOS 活性を抑制し梗塞巣を増加させた．
【考察】
高血圧心における虚血耐性の機序と近年降圧療法に最も頻用される ARB の心筋保護効果の機序に関して DS ラットを用いて検討した．DS ラット
心では NT の産生で評価した酸化ストレスの亢進に伴って iNOS が過剰発現していたが，MPG と
1400 W がこの心臓において虚血，再灌流後の梗塞巣を増大させたことから，高血圧心では酸化ストレスに伴う iNOS の過剰発現が虚血耐性の獲得に重要な役割を果たしていると考えられた．一方，
ロサルタンは DS ラット心において iNOS の発現を抑制したが eNOS を活性化した．1400 W はロサ
ルタンを投与した DS ラット心の梗塞サイズに影響を与えなかったが，L-NAME はこの心臓におい

30

関西医大誌

て虚血，再灌流後の梗塞巣を増大させたことから，高血圧心におけるロサルタン投与下での虚血耐性の温存には eNOS の活性化が重要な役割を果たしていると考えられた．このように ARB は MPGのような非特異的抗酸化薬と異なり，酸化ストレスの原因を除去してiNOS依存性虚血耐性をeNOS
依存性虚血耐性に転換させる降圧薬として虚血性心疾患を伴った高血圧治療に貢献していることが示唆された．
審査の結果の要旨
ア ン ギ オ テ ン シ ン II タ イ プ 1 受 容 体 遮 断 薬(ARB) は高血圧心の虚血再灌流傷害を予防できる．松久氏はこの分子機序を高血圧心ラットモデ
ルを用いて研究した．ARB の投与は酸化ストレスを抑制することによって iNOS の発現をも抑制してしまうが，かわりに eNOS のリン酸化による活性化をもたらした．その結果，非特異的抗酸化剤
では梗塞領域が拡大するのに対して ARB は梗塞
領域を拡大させなかった．本研究は，虚血再灌流
傷害に対する ARB の特異的薬理作用を明らかにしたものであり，学位に値する．

【1513】むらたみき
氏 名（本 籍）村 田 美 樹（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 甲 第 852 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 1 項該当
学位論文題目
Hepatitis B Virus X Protein Shifts Human
Hepatic Transforming Growth Factor (TGF)-β
Signaling from Tumor Suppression to
Oncogenesis in Early Chronic Hepatitis B
論 文 審 査 委 員 主査（教授）伊藤誠二（教授）螺良愛郎 （教授）權

雅憲

論文内容の要旨【背景】
TGF-β シグナルは，リン酸化された Smad3 で，伝達される．リン酸化部位には，C 末端 (Smad3C)

第 61 巻と中央に位置するリンカー部 (Smad3L) が知られている．今回 TGF-β シグナル伝達が，B 型肝炎ウ
イルス (HBV) 持続感染に伴う癌化過程にどのように関わったかを，Smad3 のリン酸化に焦点を絞り，培養細胞，HBx トランスジェニックマウス，
ヒト B 型慢性肝疾患組織を用いて検討した．
【方法と結果】（1）B 型慢性肝炎において HBV 由来の HBx 蛋
白がc-Jun N-terminal kinase (JNK) を含むMAPKカ
スケードを活性化させ，癌化を促すと言われている．そこで HBx 導入培養肝細胞の Smad3 リン酸化及び標的遺伝子発現をWestern blot法で解析し，生物学的機能として DNA 合成能を検討した．HBxを過剰発現した培養肝細胞では，JNK が活性化され，Smad3L をリン酸化した．pSmad3L は c-Myc の転写を刺激し，細胞増殖を高めた．次にリンカー
部リン酸化を阻害すると，HBx 導入肝細胞で減弱していたTGF-β依存性のpSmad3Cを介したp21WAF1の転写促進や細胞増殖抑制能が，親肝細胞と同等に認められるようになった．これらから HBx/JNK/
pSmad3L 経路は細胞増殖に関与し，pSmad3C 経路
は細胞増殖抑制に関わっていると考えられた．
（2）Smad3KO マウス由来の線維芽細胞にリン
カー部リン酸化を欠くミュータントをノックイン
した細胞を用い，Smad3 リン酸化を検討した．
Smad3L リン酸化の程度に比して pSmad3C は阻害されたため，pSmad3L 癌化シグナルと pSmad3C 癌
抑制シグナルは，
相反する関係にあると思われた．
（3）HBx 蛋白をトランスジェニックマウスで過剰に発現させると肝癌が誘発される．そこで HBx
トランスジェニックマウスの肝組織（正常肝，前癌病変，肝癌）を用いて Smad3 のリン酸化及び標的遺伝子発現を免疫組織染色及び蛍光抗体法で確かめた．前癌病変から肝癌に進展するにつれてSmad3L のリン酸化，ならびに c-Myc の発現が増強
した．
（4）当院で肝生検を施行した B 型慢性肝炎 70
例，肝硬変 10 例及び肝癌 10 例において Smad3 の部位特異的リン酸化と標的遺伝子の発現を免疫
組織染色，蛍光抗体法で検討し，さらに Smad3L
リン酸化と炎症・線維化の程度，及び HBV-DNA
量との関係を調べた．ヒト慢性 B 型肝炎において，Smad3L リン酸化は炎症の程度に関わらず，HBVDNA 量と正の相関を示した．慢性肝炎組織の2009 年

31

第 2・3・4 合併号

Smad3 リン酸化は，pSmad3L 優位群と pSmad3C 優
位群に大別された．トランスジェニックマウス同様に肝炎の進行に伴って pSmad3L と c-Myc 発現は増強し，pSmad3C と p21WAF1 発現は減弱した．
（5）慢性 B 型肝炎 60 例を対象に 12 年間での累積発癌率を Smad3 の高リン酸化群，低リン酸化
群で比較した．肝細胞での高 pSmad3L 群と低
pSmad3C 群が高率に発癌していた．この群には，
F1, A1 症例や若年発症が含まれていた．
【結論】
B 型慢性肝炎において HBx 蛋白は，JNK を活性化し，pSmad3C/p21WAF1 を介する癌抑制シグナル
からpSmad3L/c-Mycを介する癌化シグナルへの転換を促した．Smad3 の部位特異的リン酸化は，肝発癌を予測する新規バイオマーカーとして，B 型
慢性肝炎患者に用いられることが期待される．
審査の結果の要旨
本研究は，in vitro ならびに HBx トランスジェ
ニックマウスを用いた in vivo 実験により，HBx 蛋
白による JNK 活性化 -Smad3 のリンカー部のリン
酸化 - c - Myc を介する一連の癌化シグナルが B 型
慢性肝炎の肝細胞癌の発癌機序に重要であることを明らかにし，さらに慢性 B 型肝炎患者生検サン
プルで癌化における Smad3L リン酸化の重要性を実証した．肝癌の発症機構の基礎研究から臨床研究に渡る体系的な研究で，学位に値する研究と考えられた．

【1514】か
とう じゅんこ
氏 名（本 籍）加 藤 順 子（京都府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 乙 第 664 号
学位授与の日付 平成 20 年 11 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 2 項該当
学位論文題目Contribution of neural cell adhesion molecule(NCAM) to hemopoietic system in monkeys
論 文 審 査 委 員 主査（教授）薗田精昭（教授）木梨達雄 （教授）福原資郎

論文内容の要旨【序論】
NCAM (CD56) は，主に神経細胞や NK 細胞に発現している接着分子であるが，申請者らは，最近マウスの造血支持細胞にも発現し，造血幹細胞との相互作用に重要な働きをしていることを見出した (Stem Cells, 23: 1389, 2005)．
また，マウス胎仔の骨髄付着性細胞から CD56を高発現する細胞株を樹立したところ，造血支持能のみならず，間葉系幹細胞としての性質も有することが明らかとなり，CD56 が間葉系幹細胞のマーカーとしても使用できる可能性が示唆された(Stem Cells, 24: 482, 2006)．
今回申請者は，CD56 がサルの造血系においても重要な役割を果たしているか，さらに CD56 が間葉系幹細胞のマーカーとなりうるかについて検討した．
【方法と結果】
1）サル骨髄付着性細胞の性状の解析
カニクイザル骨髄細胞中の CD56 陽性細胞はわずかであったが，2–3 週間培養後得られた付着性細胞（均一な線維芽細胞様の形態を示す）のほ
とんどが CD56 陽性となり，間葉系幹細胞のマーカーである CD29 の発現も見られた．一方，造血細胞のマーカーである CD11b, CD14 や CD34 の発現は培養後ほとんど検出されなくなった．
この付着性細胞は，脂肪細胞や骨芽細胞への分化誘導が可能であったことから，間葉系幹細胞としての性状を有すると考えられる．
2）サル造血幹細胞濃縮画分での CD56 の発現32

サル骨髄細胞より造血幹細胞を精製し，CD56の発現の有無を検討した．骨髄細胞より密度勾配
遠心法および磁気ビーズ成熟細胞除去法にて造血幹 細 胞 を 濃 縮 し て lineage-negative cells (Lin−cells) を得，抗 CD34 抗体と抗 CD56 抗体とで二重染色した．Lin− cells 全体の中では CD34+/56+ 細胞は 9.1％であったが，造血幹細胞が属する芽球画
分にゲートをかけた場合，CD34+/56+ 細胞の割合
は 20.6％に増加した．次に，CD34 +/56 + 細胞とCD34+/56− 細胞との造血コロニー形成能を比較したところ，CD34+/56+ 細胞の方で高い値が得られた．
3）骨髄付着性細胞の造血支持能と抗 CD56 抗体による造血阻害
サル骨髄細胞より Lin− cells を精製し，同一のサル由来の骨髄付着性細胞の上に播種して低濃度のサイトカインの存在下で培養したところ，3 週目まで活発な造血が観察された．培養液交換の際に得られた培養上清中の浮遊細胞は，メチルセル
ロース半固形培地で造血コロニーを形成した．一方，骨髄付着性細胞の非存在下で Lin− cells を培養した場合，2 週目以降細胞はほとんど回収できなくなり，骨髄付着性細胞が造血の維持に重要な役割を果たしていることが明らかになった．
骨髄付着性細胞と Lin− cells との共培養系に抗CD56 抗体を加えると，抗体の濃度依存的に造血幹細胞の増殖が抑制されたことから，骨髄付着性細胞や造血幹細胞上に発現されている CD56 分子
がサルの造血に関与していることが強く示唆された．
4）サル骨髄の組織学的検討
サル骨髄組織を抗CD56抗体で免疫染色すると，
CD56 陽性のストローマ細胞が散見された．CD56
陽性の造血細胞と CD56 陽性のストローマ細胞が接着している箇所も確認された．
【結論】
1）マウスと同様にサルの造血系においてもCD56は，造血幹細胞と造血支持細胞の相互作用に重要な働きをしていると考えられる．
2）CD56 は，CD56 同士で互いに結合するホモフィリック型の結合様式をとる．従って，造血幹細胞と造血支持細胞は，両者が発現する CD56 を介して結合している可能性が推察される．
3）CD56 を高発現している骨髄付着性細胞が，関西医大誌

第 61 巻間葉系幹細胞の性状を有することから，CD56 はマウスと同様に間葉系幹細胞のマーカーとして使用できる可能性がある．
審査の結果の要旨
NCAM (CD56) は，主に神経細胞や NK 細胞に発現している接着分子である．本研究は，サル骨髄由来CD34+ 細胞の一部と大半の骨髄付着性細胞がCD56 分子を発現しており，共培養系における骨髄付着性細胞の造血細胞支持能に CD56 分子が関与していることを明らかにしている．サル造血系において，CD56 分子が造血幹細胞と造血支持細胞の相互作用に関与していることを初めて示唆した点で価値ある研究と認められる．

【1515】
ふくしま
しん た ろう
氏 名（本 籍）福 島 愼太郎（徳島県）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 乙 第 665 号
学位授与の日付 平成 20 年 11 月 27 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 2 項該当
学位論文題目
Effect of biliary obstruction and internal biliary
drainage on hepatic cytochrome P450 isozymes
in rats
論 文 審 査 委 員 主査（教授）權 雅憲（教授）伊藤誠二 （教授）中邨智之

論文内容の要旨【研究目的】
肝の Cytochrome P450 は，多種多様な薬物等の外因物質，ステロイドホルモン等の生理的物質の代謝に重要な役割を果たしている．
P450 は，その多様な機能により，分子多様性が認められ，多くの P450 遺伝子の存在が報告されている．
これまでに，胆管結紮 (BDL) による閉塞性黄疸
モデルにおいて，P450 量は低下し，特に，雄生ラットに特異的な CYP2C11, CYP3A2 の活性は他の分子種と比較し，より強く低下し mRNA の発現量も低下すると報告されている．

2009 年

33

第 2・3・4 合併号

また，閉塞性黄疸－内瘻化モデルを用いた検討では，肝の P450 量は閉塞性黄疸において低下し，内瘻化により回復することが報告されているが，分子種の変化については明らかではない．
当研究では，ラット閉塞性黄疸－内瘻化モデルを用い，胆管閉塞ラットにおける胆道ドレナージ
前後の P450 分子種の変化について検討した．
【研究方法】
Wistar 系雄性ラットを用い，胆管閉塞－内瘻化モデルを作成した．胆管閉塞群では胆管閉塞 4 日
後に，また，内瘻群では胆管閉塞 4 日後に内瘻化しその 6 日後に肝を摘出した．P450 分子種 (CYP1A2,
CYP2B, CYP2C11, CYP2E1, CYP3A1, CYP3A2,
CYP4A1) の mRNA 発現を，Competitive RT-PCR 法を用いて分別定量した．また，肝のミクロゾーム
分画を調製し，P450 量，aniline 4-hydroxylase 活性，
aminopyline N-demethylase 活性，7-ethoxycoumarinO-deethylase 活性の各基質代謝活性を測定した．
【結果】
胆道閉塞により上昇していた血清ALT値および総ビリルビン値は，内瘻化 6 日目にはもとのレベ
ルまで回復し，閉塞性黄疸は消失した．
CYP 総量，各基質代謝活性は，閉塞性黄疸 4 日
目には低下し，内瘻化により回復した．
各 P450 分 子 種 の mRNA 発 現 量 は ，CYP2B,
CYP2C11, CYP2E1, CYP3A1, CYP3A2 で，胆管閉塞により有意に低下し，いずれの分子種も，内瘻化によりもとのレベルまで回復した．CYP1A2 のmRNA 発現量は，胆管閉塞により有意に低下し，内瘻化により回復したが，もとのレベルまでは回復せず，コントロールと比較して有意に低値を示した．CYP4A1 の mRNA 発現量は，胆管閉塞により低下せず，内瘻化により上昇した．
【考察】
胆管閉塞により CYP 総量は低下し，各 P450 分
子種のmRNA発現量が低下することを明らかにした．これは，閉塞性黄疸における CYP 総量の低下
は，CYP 各分子種が mRNA レベルで低下をきたす機序が存在する事を示唆している．
また，内瘻化前後の CYP の変化は，各分子種によって違いがある事より，その機序は単一ではな
く，複数の機序が存在する事を示唆している．
臨床的には，総胆管結石，胆管癌などによる閉塞性黄疸患者に対し，内視鏡的胆道ステント挿入などの胆道ドレナージが一般的に行われており，
黄疸改善に充分な効果が認められている．今回の検討でも，胆道閉塞により上昇していた血清 ALT
値および総ビリルビン値は，内瘻化後には回復し，閉塞性黄疸は消失した．同様に，低下していた CYP 総量も回復した．しかし，CYP 各分子種の mRNA 発現量は，内瘻化により充分回復しない
ものや，胆道閉塞で変化せず，内瘻化で増加するものもあった．これらより，閉塞性黄疸の一般的な指標である血清ALT値や総ビリルビン値が改善した後も，薬物代謝能への影響が残存している可能性があり，薬物投与は，慎重に行う必要があると考えられる．
審査の結果の要旨
チトクローム P-450 (CYP) は薬物や毒物などの活性化代謝や解毒代謝を担う酵素であり，数多くの分子種が存在している．本論文はラットの閉塞性黄疸－内瘻化モデルを用いて胆道ドレナージ前
後の CYP 分子種の変動を検討し，閉塞性黄疸の指標である従来の肝機能検査では評価できない
CYP 分子種の変動を見いだした．これらの成果は閉塞性黄疸解除後の薬物投与や手術の術前評価の新たな指標となる可能性があり，学位に値すると認められた．

【1516】
氏 名（本

たに

ま

き

こ

籍）谷

万喜子（大阪府）
学 位 の 種 類 博士（医学）学 位 番 号 乙 第 666 号
学位授与の日付 平成 21 年 3 月 24 日
学位授与の要件 学位規則第 5 条第 2 項該当
学位論文題目The acupuncture treatment of severe axial
dystonia
論 文 審 査 委 員 主査（教授）日下博文（教授）中村加枝 （教授）中井吉英

論文内容の要旨【はじめに】
ジストニアは異常な筋緊張によって身体のあら34

ゆる部位に不随意運動や姿勢異常をきたす疾患である．治療法は，ボツリヌス治療，Muscle Afferent
Block (MAB) 療法，手術療法などの西洋医学的治療が行われることが多く，鍼治療の報告は少数である．また本疾患は，神経内科領域で診断されることが多いが，中にはうつ病のような精神症状を合併している症例が存在し，また抗精神病薬の副作用を原因とする症例が少なくない．抗精神病薬の副作用で起こる遅発性ジストニアの治療は，精神科領域では難渋であることが知られているが，決定的な治療法のないのが現状である．本論文では，統合失調症治療経過中に頸部及び体幹に不随
意運動と異常姿勢を生じて発症した，重度の軸性ジストニア症例 1 例に対する鍼治療効果について報告した．
【研究方法】
症例は，初診時 28 歳の女性である．中学 3 年生時に，幻覚症状や辻褄の合わない言動がみられ，
小児保健施設を受診，約一年間入院した．一時治療を中断したが，時々幻聴が出現して，それに伴う被害関係妄想を認め，X−5 年 9 月に，Y 精神科病院を再受診した．統合失調症と診断され，薬物療法が再開されるとともに通所デイケアによる社会療法が導入された．精神症状は安定したが，X−
1 年 12 月頃より右肩が挙上する不随意運動が出現した．内服薬を調整したが徐々に不随意運動は増強し，体幹にも出現した．内服薬での治療が困難と判断され，X 年 7 月，鍼治療目的で関西医科大学精神神経科ジストニア外来を受診した．
ジストニアの症状は，安静座位および安静立位において，頸部が重度の左側屈を呈する場合と，
ほぼ正中位に立ち直る場合とを繰り返す不随意運動が著明であった．頸部には左側屈と同時に右回旋も認められた．体幹は左側屈および右肩甲帯挙上を呈した．不随意運動と異常姿勢の要因として，頸部の左側屈および右回旋をもたらす左胸鎖乳突筋の筋緊張亢進，左腹筋群の収縮不全による体幹の左側屈方向へのくずれと，体幹の左側屈を制御できない右脊柱起立筋の収縮不全が挙げられた．
右肩甲帯挙上の要因として，右僧帽筋（上部線維）の筋緊張亢進も存在した．
鍼治療は，左胸鎖乳突筋の筋緊張抑制を目的に左側の合谷，左腹筋群の筋収縮促通を目的に左側の衝陽，右脊柱起立筋の筋収縮促通を目的に右側

関西医大誌

第 61 巻の崑崙，右僧帽筋（上部線維）の筋緊張抑制を目的に右側の外関への置鍼を行って，効果を検討した．
鍼治療導入に際して，筆者らが行った頸部ジス
トニアに対する鍼治療効果とともに，本症例に対する治療適応の可能性および鍼治療の安全性について説明した．また，鍼治療継続中においていつでも鍼治療を中止することができる旨の説明も行い，鍼治療への同意を得た．
【結果】
治療開始初期には定期的な鍼治療が継続できず，十分な改善は得られなかったが，X+1 年 12
月以後週 1 回の頻度での鍼治療継続が可能となり，頸部および体幹の姿勢に改善が認められた．
X+3 年 5 月には安静座位では頸部および体幹は正中位に保たれ，不随意運動もみられなくなった．
【考察】
抗精神病薬の副作用として起こるジストニアの治療は，難渋であることが知られている．原因となった薬剤を中止あるいは減量することにより，ジストニアの改善を認めたという報告があるものの，精神症状の状態によっては，休薬・減薬を続けるのが困難な場合も多い．ジストニアの罹患筋に対して，東洋医学的な観点から考慮した循経取
穴による鍼治療を行い症状の改善を認めた．それにともなって精神症状にも安定を認めた．本症例の治療結果から，難治とされる，軸性ジストニア
を含む遅発性ジストニアに対する鍼治療の有用性が示唆された．
審査の結果の要旨
ジストニアは，薬剤投与，定位脳手術などいくつかの治療が試みられてはいるが，依然として難治性の障害である．著者らは，その治療に鍼治療を応用することを長年検討し，経穴への置鍼，集毛鍼を用いる治療法を独自に構築した．そして，
頸部ジストニア患者において 72.9％という高い臨床症状改善率を認めた．視床などの脳血流改善を
SPECT で確認した．
このように高い有効率を示した治療法を，統合失調症治療経過中に生じた重度の軸性ジストニア症例に対して行い著明な改善を認めた．難治とされる軸性ジストニアを含む遅発性ジストニアに対する鍼治療の有用性が示され，今後の臨床応用が期待される．学位に値するものと認定された．