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ここまで来た! 酵母のタイトな変異体作製法
田中 誠司
国立遺伝学研究所・微生物遺伝研究部門
 温度感受性変異（temperature-sensitive mutation: ts）に代表されるような条件致死変異は、必須遺伝子の機能解析において有用かつパワフルなツールである。しかし、変異体の取得が比較的簡単な酵母においてさえ、機能解析を行うのに十分なタイトな変異を単離することは、労力を要する実験である。
この点を克服するべく、Varshavsky 研で開発された温度感受性デグロン（temperaturesensitive degron: td）は、目的遺伝子の転写とタンパク産物の安定性の両方を同時に制御することで、簡便にタイトな酵母高温感受性変異を得ることを可能にした画期的な系であった（Dohmen et al. 1994 Science 263:1273‒6）。さらに、オリジナルの td 法ではタイトな変異が得られなかった遺伝子についても、系のさらなる工夫によりタイトな変異が得られることが、他研究室から報告されている。また近年、td 法とは別の新たな手法として、目的タンパク産物の分解を薬剤で制御する、オーキシンデグロン（auxin-inducible degron: AID）法が鐘巻らにより開発された（西村 et al. 2009 Nature Methods 6:917-22）。AID 法は、目的タンパクの分解を薬剤添加のみで誘導できるという利点を持つ。しかしながら依然として、これらの方法では実験目的に適した十分タイトな変異体が得られないことも多く、そのような場合には、既存の ts 変異を td や AID と組み合わせることで、よりタイトな変異を単離することが試みられている。実際、このような手法が有効であることは多くの例で示されているが、独立の ts 変異が必要になることで、td 法や AID 法が追求して来た「簡便さ」が犠牲になることは否めない。
今回我々は、AID 法に転写制御を組み合わせるという改良を行い、従来の td 法や AID 法
ではタイトな変異体を得ることができなかった遺伝子群について、その作製の「簡便さ」は維持したままでタイトな変異を取得することに成功し、同法を改良 AID 法（improved auxininducible degron method: iAID 法）と名付けた。本発表では、DNA 複製関連因子での iAID変異体作製を例にとり、その実際を紹介したい。

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