Kinetic-QCL®
Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
U.S. License No.1775
カタログ番号：50-650U
注意：試験を実施される前に必ずよくお読み下さい

使用目的
この製品はヒト及び動物の非経口薬、生物製剤、医療機器に関する最終製品の In Vitro エンドトキシン試験に使用するために作られています。本製品は臨床検体中のエンドトキシンの検出またはヒト疾患の診断には使用できません。このテストは光度的にエンドトキシンを検出するために、Limulus Amebocyte Lysate (LAL)試薬およびインキュベーター付の光度計と然るべきソフトウェアを使用します。
1987 年 12 月、アメリカ合衆国食品医薬品局（FDA）は「ヒト及び動物の非経口薬、生物製剤、医療機器に関する最終製品のエンドトキシン検査としてのLALテストの検証のためのガイドライン」7を発行しました。このガイドラインは、1）
医薬品及び医療機器のためのエンドトキシン規格値を確
立、2）最終製品のエンドトキシンテストとしてのLALの使用の妥当性確認、3）ルーティン試験手順の作成、にあたりFDAが必要と考える手順、の概要をまとめたものです。
この説明書に述べられる手順はそのFDAガイドラインに従うものです。カイネティック比色法における同様の性能要求規定は米国薬局方で公表され定期的に更新されています9。
警告

凝固は、エンドトキシンとカブトガニの体内を循環するアメーバ細胞（amebocyte）の凝固タンパクとの反応であると立証しました。カブトガニの血液に適した抗凝固剤の開発に成功した後、LevinとBang４はエンドトキシンの存在に対して非常に高い感度を示すアメーバ細胞（amebocyte）水抽出物のライセートを調整しました。Solum5,6 とYoung、LevinとPrendergast8のグループはLALから凝固タンパクを精製してその特性を明らかにし、エンドトキシンと酵素反応を起こすことを示しました。
この LAL 比色法は、LAL エンドトキシン反応の初期部分を利用し活性化された酵素が発色基質に働き、p-ニトロアニリン（pNA）を遊離し、黄色の色を発するものです。

原理
Endotoxin
Proenzyme ――――――――→

EnzymeEnzyme
Substrate + H2O ――――――→ Peptide + pNA
グラム陰性細菌のエンドトキシンは LAL 中のある酵素前駆体の活性化を触媒させます。活性化の初期速度は存在するエンドトキシンの濃度によって決定されます。活性された酵素は無色の基質 Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA から pNAが遊離されるのを触媒します。遊離された pNA はインキュ
ベーション時間を通して 405 nm で測定されます。検体中のエンドトキシン量は、その反応時間を既知量のエンドトキシンを含んだスタンダード溶液の反応時間と比較して算出されます。

In Vitro検査のみに使用するための製品です。ヒトのエンドトキシン血症の In Vitro 診断には使用しないで下さい。
LAL試験はFDAによるヒト及び動物の非経口薬、生物製剤、医療機器の最終製品試験のガイドラインに沿って使用された場合、USPのウサギを用いたパイロジェン試験の代用とすることができます7。
背景Kinetic-QCL®はグラム陰性細菌のエンドトキシンを検出する定量的カイネティック測定方法です。検体はLAL／基質試薬と混合後インキュベーターつき吸光度計に設置され、時間の経過に伴う黄色の出現は自動的に測定されます。黄色が現れるまでの時間（反応時間）は存在するエンドトキシンの量に反比例します。つまり、大量のエンドトキシンの存在下では反応時間は短く、少量のエンドトキシンの存在下では反応時間は長くなります。未知の検体中のエンドトキシン濃度は検量線から算出することができます。
エンドトキシン検出におけるリムルス試験の使用は、アメリカカブトガニ（ Limulus polyphemus）がグラム陰性細菌に感染すると致命的な血管内凝固を引き起こすというBang1の観察から発展したものです。その後LevinとBang2,3はこのキットに含まれる試薬と保存条件
Kinetic-QCL® Reagent ----- 8 バイアル
各 バ イ ア ル に は ア メ リ カ カ ブ ト ガ ニ （ Limuluspolyphemus ） の 体 内 を 循 環 す る ア メ ー バ 細 胞（amebocyte）由来のライセートと発色性基質の混合物を凍結乾燥させたものが入っています。
使用の直前に各バイアルを 2.6 mlのLAL試験用水で溶解して下さい。もし複数のバイアルの使用を必要とする場合は、内容物をプールしてからご使用下さい。泡立
つのを避けるために穏やかにバイエルを回してください。
凍結乾燥されたKinetic-QCL® Reagentは 2～8℃で保存して下さい。長時間光に晒すのは避けて下さい。
溶解されたKinetic-QCL® Reagentは直ちに使用して下さい。溶解されたKinetic-QCL® Reagentは 2～8℃で8 時間安定です。溶解された試薬は-10℃以下で最長2 週間保存可能です。凍結・融解は一回のみ可能です。

E. coli O55:B5 Endotoxin ------------ 2 バイアル
各バイアルには 50～200 EU の凍結乾燥されたエン
ドトキシンが入っています。溶解液量は各キットのCertificate of Analysis（COA、試験成績表）に記載されており、溶解後 50 EU/ml（もしくは IU/ml）になるように計算されています。COA で指定された液量のエンドトキシン試験用水で溶解してボルテックスの高スピードで最低 15 分は撹拌して下さい。液量はロットごとに異なります。使用の前には必ず室温に戻し 15 分強く撹拌して下さい。エンドトキシンはガラスに付着しやすいのでこれは重要です。
凍結乾燥状態の E. coli O55:B5 Endotoxin は 2～8℃で冷蔵して下さい。溶解後のエンドトキシンは 2～8℃で4 週間安定です。
このエンドトキシンはユーザーの利便性のために提供されるものです。他のエンドトキシンをスタンダードとして使用することも可能ですが、その場合そのエンドトキシンの比色法における性能を Reference Standard
Endotoxin（RSE、エンドトキシン標準品）を基準として決定する必要があります。
COAは下記のページよりはダウンロードしてください。
http://www.lonza.co.jp/products/endotoxin/exam_rec
ord.html
LAL Reagent Water --------- 3 バイアル（各 30 ml）
Kinetic-QCL® Reagent、E. coli Endotoxinの溶解、エンドトキシンの溶解、検体の希釈調整に使用されます。
LAL 試験用水は 2～8℃で保存して下さい。
キット以外に必要な材料及び装置
１． エ ン ド ト キ シ ン フ リ ー の 希 釈 用 ガ ラ ス 試 験 管（13X100mm, N207 か同等のもの）
２． 個別包装されたメスピペット
３． 自動ピペットと個別包装もしくはラック入りのエンドトキシン試験用チップ
４． 使い捨ての無菌マイクロプレート。ルーティン使用に先立ち、マイクロプレートが各ライセートのロットについて、下記の「パフォーマンス特性」に記述されている直線性の基準を満たしているかの確認が必要
５． 試薬リザーバー（ロンザ製品 25-364 か同等のもの）
６． 8 チャンネルピペッター
７． 検体の pH 調整が必要であれば、0.1N 水酸化ナトリウム溶液もしくは 0.1N 塩酸溶液を必要に応じて使用する
８． マイクロプレートリーダー（ELx808TM ロンザ米国カタ
ログ番号 25-315）
９． WinKQCL®ソフトウェア
１０． タイマー及びボルテックス

検体の採取及び調整
微生物またはエンドトキシンにより汚染されないように注意して下さい。検体または試薬に接触する器具は全てエンドトキシンフリーでなければなりません。清潔なガラス器
具を 250℃で 30 分間乾熱処理を行うと、エンドトキシンフリーになります。適切な予防措置を取り、二次的な環境汚染から脱パイロジェン化した器具を保護して下さい。
経験上、滅菌個別包装プラスチックピペット及びピペット
チップのほとんどはエンドトキシンフリーですが、通常使用する前に試験して下さい。
エンドトキシンフリーの水酸化ナトリウムまたは塩酸を使用して、検体の pH を 6.0～8.0 の範囲に収まるよう調整する必要があるかもしれません。必ず検体の一部を取り分けて pH を測定し、検体全体が pH メーターの電極によって汚染されないようにして下さい。非緩衝液の pH は調整しないで下さい。
試験される検体は、全細菌活性が停止するように保存されなければなりません。そうしないと、時間の経過とともにエンドトキシン値が上昇する可能性があります。例えば、検体を 2～8℃で保存する場合、その保存時間は 24 時間未満とし、24 時間以上保存する場合は凍結して下さい。
もしKinetic-QCL®試薬を溶解する希釈液の容器が開封済みあるいはロンザ製品でない場合は、希釈液単独でエンドトキシン汚染の試験を実施して下さい。
Kinetic-QCL®アッセイの種類
Kinetic-QCL® アッセイによるカイネティック比色法試験にはインキュベーター付マイクロプレートリーダーとWinKQCL®ソフトウェアをご使用下さい。マイクロプレートリーダーとWinKQCL®の操作方法を理解しておくことが重要ですので、より詳しい情報についてはそれぞれの操作説明書をご参照下さい。
Kinetic-QCL®アッセイには 4 種類の基本的な試験タイプがあり、それぞれLAL試験の異なる特性に対応するものです。
１． 一般試験（ROUTINE）
一般試験とは未知濃度のエンドトキシンを既知のエンドトキシンスタンダードに比較して計算するものです。
一般試験の一部として、製品によるエンドトキシン反応の阻害あるいは促進を調べる目的で、陽性コントロール（Positive Product Control、PPC）を含むオプションもあります。PPCは既知のエンドトキシンをスパイクとして検体に加えたものです。WinKQCL® ソフトウェアが自動的にPPCの回収量を計算します。
２． 阻害/促進試験（INHIBITION/ENHANCEMENT）
LAL 反応は酵素反応であるため、最適な pH 範囲と特定の塩および 2 価の正イオンの条件を必要とします。時として検体がそのような最適な条件を変えてしまい、ライセートがエンドトキシンに反応しないことがあります。LAL 反応を阻害する検体による陰性結果は必ずしもエンドトキシ
1

ンが存在しないことを意味するものではありません。
阻害/促進試験は製品をどの程度まで希釈すれば阻害や促進を克服できるかを決定するための試験です。検体の希釈は陽性コントロール（Positive Product Control、PPC）を伴う必要があります。既知のエンドトキシン添加量（スパイク）と比較するために、WinKQCL® ソフトウェアがPPCの回収量を計算します。この方法により、製品をどの程度まで希釈すればLAL反応の阻害が生じないか決定することができます。

以下の表はキットに含まれるエンドトキシンから希釈系列を作成するための案です。全ての希釈濃度を検量線に使う必要はありません。他の希釈方法を用いることもできます
し、キットに含まれているものとは異なるエンドトキシンを使用することも可能です。もしキットに含まれているもの以外のエンドトキシンを使用する場合は、FDAのガイドラインに従いエンドトキシン力価試験を実施してCSEの活性を決定することが必要となるかもしれません。7
エンドトキシン３． エンドトキシン力価試験（RSE/CSE）
エンドトキシン力価試験はエンドトキシン標準品（Reference Standard Endotoxin、RSE）を基準としてキットに含まれるエンドトキシン（Control Standard Endotoxin、CSE）の力価を決定するための試験です。
試験にはRSEの希釈系列一系列とCSEの希釈系列一系列以上が必要です 。WinKQCL®ソフトウェアが自動的に平均的な活性値を EU/ng 又は EU/ml の単位で算出します。
EUやng以外の単位を入力するオプションもあります。
４． 初期品質確認試験（INITIAL QUALIFICATION）
初期品質確認試験はFDAの「ヒト及び動物の非経口薬、生物製剤、医療機器に関する最終製品のエンドトキシン検査としてのLALテスト検証のためのガイドライン」７に記述されている必要条件に基づいてデザインされています。この試験は分析者の初期資格認定及び再認定の一部として必要であり、またKinetic-QCL® の新しいロット毎に実施されるべきものです。
初期品質確認試験はエンドトキシンスタンダードの各ポイントの log (エンドトキシン濃度) vs. log(反応時間)の相関を使用します（注：濃度ごとに平均しません）。他の試験では各濃度の平均の反応時間を使用します。
初期品質確認試験では検体の試験は行いません。
試薬の調整
使用前に試薬を常温に戻してください。
未知濃度のエンドトキシンを測定するためには、有効な検量線がKinetic-QCL®試験毎に必要です。
測定できるエンドトキシン濃度範囲が広いため、検量線を作成するためのエンドトキシンスタンダードの濃度を調整することにより定量範囲を調節することが可能です。最低 3 濃度のスタンダードが必要とされます。
Kinetic-QCL®は 0.05 EU/ml～50 EU/mlの範囲で直線性を示すように最適化されています。ただし、各ユーザーは特定の製品の必要条件に応じて検量線を短くすることも可能です。比色法LAL試験の検量線を短縮することにより検体のエンドトキシン値がより正確に予測されるかもしれないというデータが出ています。ユーザーは製品検体の一般試験のために比色法LAL試験の検量線範囲を確立する前に、FDAがカイネティックLAL法のために定めた暫定的なガイダンス 10 の必要条件に通じていることが推奨されます。

LAL 試験用水

ＬＡＬ試験用水に加える濃度（EU/ml）の量

エンドトキシン溶液の量50.50.050.005

0.9 ml0.9 ml0.9 ml0.9 ml50 EU/ml を 0.1 ml
5 EU/ml を 0.1 ml
0.5 EU/ml を 0.1 ml
0.05 EU/ml を 0.1 ml

１．50 EU/ml のエンドトキシンストック溶液 0.1 ml を 0.9 mlの LAL 試験用水に加えて 5 EU/ml エンドトキシン溶液を調整します。次のステップに進む前にこの溶液をボルテックスで強く 1 分以上撹拌して下さい。
２．上記の 5 EU/ml のエンドトキシン溶液 0.1 ml を 0.9 mlの LAL 試験用水に加えて、これを 0.5 EU/ml エンドトキシン溶液とします。次のステップに進む前にこの溶液をボルテックスで強く 1 分以上撹拌して下さい。
３．上記の 0.5 EU/ml のエンドトキシン溶液 0.1 ml を 0.9ml の LAL 試験用水に加えて、これを 0.05 EU/ml エンドトキシン溶液とします。次のステップに進む前にこの溶液をボルテックスで強く 1 分以上撹拌して下さい。
４．上記の 0.05 EU/ml のエンドトキシン溶液 0.1 ml を 0.9ml の LAL 試験用水に加えて、これを 0.005 EU/ml エンドトキシン溶液とします。次のステップに進む前にこの溶液をボルテックスで強く 1 分以上撹拌して下さい。
試験方法
WinKQCL® ソフトウェアとマイクロプレートリーダーの操作に関する更に詳しい情報については、マイクロプレートリーダーとソフトウェアのマニュアルを参照して下さい。
１．

２．

試験のためのテンプレート（TEMPLATE）を作成して下さい。テンプレートには分析者の名前、アッセイの種類、試薬のロット番号、エンドトキシンスタンダードの数と濃度、N 数、マイクロプレート上のスタンダードと検体の配置の情報が必要です。
アッセイの種類（Type of Assay）は KQCL を指定して下さい。初期設定のテンプレートのパラメーターは以下の通りであり、事前の確認なしに変更はしないで下さい。
Delta t (seconds)
150
Measurement Filter (nm)405
Delta mOD
200
Number of Reads
40

３．

スタンダード及び検体をマイクロプレートに分注する際のガイド用にテンプレートを印刷して下さい。
４． WinKQCL® の 指 示 に 沿 っ て テ ン プ レ ー ト を 実 行（”Run”）して下さい。
５． 注意深くブランク（LAL 試験用水）、エンドトキシンス
タンダード、製品検体、陽性コントロール（下記の「製品による阻害」を参照）などを 100μl ずつマイクロプレートの適切なウェルに分注して下さい。
６． プレートをリーダーに設置して蓋を閉じて下さい。
Kinetic QCL® リーダーを使用する場合は、インキュベーション室にプレートを送るためにUPキーを押して下さい。
７． 37℃±1℃で 10 分間以上プレートを前加温して下さい。
８． 前加温が終わりに近づいたら、必要なKinetic-QCL®
ReagentをLAL Reagent Water（1 バイアルにつき 2.6ml）で溶解して下さい。穏やかにただし十分混合して下さい。
９． 試薬をリザーバーにプールし、リザーバーを穏やかに揺らして撹拌して下さい。
１０． Kinetic-QCL®リーダーを使用する場合は、蓋を開け、DOWNボタンを押してマイクロプレートをインキュベーション位置から取り除いて下さい。
１１． ８チャンネルのマルチピペッターを使って最初の列（A1～H1）から全てのウェルにKinetic-QCL® 試薬を 100μＬずつ分注して下さい。できるだけ手早く試薬を加えて下さい。泡が立つのを避けて下さい！
１２． 直ちにダイアログボックスの OK ボタンを押して試験を開始して下さい。

エンドトキシン濃度の計算
アッセイを通して、マイクロプレートリーダーおよびWinKQCL® ソフトウェアはマイクロプレートの各ウェルの405 nmにおける吸光度をモニターします。リーダーは各ウェルの最初の吸光度をブランクとして、吸光度が 0.200 増加するまでの時間を測定します。この時間は 反応時間（Reaction Time）と呼ばれます。WinKQCL®が自動的に各スタンダードの反応時間とそれに対応するエンドトキシン濃度のlog/log線形相関を計算します。検量線のパラメー
ターはレポートに表示されます。もし相関係数の絶対値が(r) ≥ 0.980 であれば、検量線構築に多項モデルを使用して検体のエンドトキシン濃度を予測することが可能です。この多項曲線モデル（POWERCURVETM）はWinKQCL®に含ま れて い る機 能で す（以 下の POWERCURVETM の項 参照）。
直線回帰
以下の情報はWinKQCL® がどのようにlog/log直線相関を実施し未知量の検体中のエンドトキシン濃度を計算するかの一例です。これらの計算を別途行う必要はありません。
各製品の各検体について、WinKQCL® は検体の反応時間から対応するエンドトキシン濃度を計算します。ソフトウ
ェ ア は 製 品 の 希 釈 に 配 慮 し て 自 動 的 に 最 終 TESTRESULTSを調整します。

直線相関計算例
スタンダード

注意：Kinetic-QCL® 試験はマイクロプレートの蓋を外したまま行って下さい。
パフォーマンス特性
直線性
エンドトキシン量を決定する濃度範囲の検量線の直線性の検証が必要です。希望する濃度範囲を含む最低 3 濃度以上のエンドトキシンスタンダードおよびブランクとしてのLAL 試験用水を、初期品質確認試験のテストパラメーターに従い最低 N=3 で測定して下さい。検量線範囲の濃度の桁ごとにスタンダードを追加して下さい。
算出された検量線の相関係数(r)の絶対値は≥0.980 でなければなりません。
再現性
優れた技術と小さな変動係数（C.V.）を確立するために、同じ検体を複数回（N）で測定する必要があります。変動係数（C.V.）は反応時間の「サンプル」標準偏差を平均で割ったものに等しく、通常%で表記されます。同一検体の N のC.V.（%）は 10%以下でなくてはなりません。経験があれば、3～4％程度が得られる筈です。

濃度平均反応（EU/ml）

時間（秒）Log[濃度]Log[平均反応時間]

陰性コントロール------

無反応------------

S10.0054351-2.301

3.639

S20.052496-1.301

3.397

S30.51406-0.301

3.148

S45.0895

0.699

2.952

S550.0561

1.699

2.749

１

------

1576------

3.198

2------

943------

2.975

検体

計算式については英語の使用説明書の p.11～12 を参照。

POWERCURVETM
もし相関係数の絶対値が(r) ≥ 0.980 であれば、多項モデルを用いて検量線を作成して検体のエンドトキシン濃度を予測することができます。この多項モデル（POWERCURVETM）は、検量線領域全体（5 log）においてエンドキシン濃度をより正確に予測します。
POWERCURVETMの使用にはWinKQCL®が必要です。
POWERCURVETM を使用する場合、検量線は多項方程式を定義するためにlog10[反応時間]とそれに対応するlog10[エンドトキシン濃度]を用いて作成されます。回帰曲2

線を作成するために使用される多項方程式の次数はアッセイのエンドトキシンスタンダードの数によって決定されます。多項次数は常にエンドトキシンスタンダードの数よりも一つ少なくなります。最大ではスタンダード数が 5 かそれ以上のアッセイで 4 次多項式となり、最低ではスタンダード数 3 のアッセイで 2 次多項式となります。
これらの多項方程式はWinKQCL® のPOWERCURVETMを使用すれば容易に解くことができます。以下は上記の表のデータセットを用いた多項方程式の解を求めた例です。
多項（POWERCURVETM）モデル
Y = A + BX + CX2 + DX3 + EX4
A = 3.08374
B = -0.20432
C = 0.02894
D = - 0.00596
E = - 0.00503
検量線のパラメーターはレポート上に表示されます。
WinKQCL®は各検体の反応時間から対応するエンドトキシン濃度を計算します。ソフトウェアは自動的に製品の希釈を考慮して最終のTEST RESULTSの値を算出します。
POWERCURVETM 多 項 モ デ ル は 初 期 品 質 確 認 試 験（INITIAL QUALIFICATION）には使用できないことにご注意下さい。FDAガイドラインに準拠する場合では直線回帰の使用が必要です。加えて、POWERCURVETM 多項モデ
ルはロンザ社製品のKinetic-QCL® とPYROGENT®-5000
試薬にのみ評価済みです。
製品による阻害
製品中の物質がLAL反応を阻害することがあります。
Kinetic-QCL®試験の場合、この阻害反応は反応時間を延長し、実際に検体中に存在するよりも少ないエンドトキシン量を示すことになります。各検体において、原液もしくは適切に希釈し、反応阻害がないことを確認する必要があります。
製品による反応阻害がないことを確認するには、検体（または検体の希釈物）の一部に既知量のエンドトキシンを添加 し ま す 。 添 加 す る エ ン ド ト キ シ ン 量 が 最 終 的 に 0.5EU/ml になるように、検体に加えることをお奨めします。もし検体自体が 1.0 EU/ml 以上のエンドトキシンを含んでいる場合は、添加されるエンドトキシン量が最終的に 5.0EU/ml になるように加えることをお奨めします。
阻害/促進試験（INHIBITION/ENHANCEMENT）において、スパイク溶液（PPC）を添加された検体はスパイク溶液を添加されない検体とともに測定され、各検体のエンドトキシン濃度及び添加されたエンドトキシンの回収量は自動的に計算されます。エンドトキシンの回収量は添加された既知量スパイクの 50～200%以内でなければなりません。10
スパイク溶液が添加された検体（またはその希釈物）は以下の方法のいずれかで調整することができます。

試験管を用いる方法：
4.95 ml の検体（またはその希釈物）に 50EU/ml のエンドトキシン溶液 50μl 加えます。この検体（またはその希釈物）は 0.5 EU/ml のエンドトキシンを含んでいます。使用の前に 1 分間強くボルテックスにかけて下さい。
プレートを用いる方法(1)：WinKQCL®のAssay Templateに従い、5 ＥＵ/mlのエンドトキシン溶液 10μlを 96 穴マイクロプレートの各PPCウェルに加えて下さい。それらのウェルに 100μlの検体（またはその希釈物）を加えて下さい。これで各ウェルは 0.5 EU/mlのエンドトキシンを含んでいることになります。穏やかに混合して下さい。
プレートを用いる方法(2)：WinKQCL®のAssay Templateに従い、96 穴マイクロプレートの各PPCウェルに検体（またはその希釈物）100μlを加えて下さい。それらのウェルに 5 ＥＵ/mlのエンドトキシン溶液 10μlを加えて下さい。これで各ウェルは 0.5 EU/mlのエンドトキシンを含んでいることになります。穏やかに混合して下さい。
もし検体（またはその希釈物）がこのKinetic-QCL® 試験を阻害することがわかった場合、検体は阻害がなくなるまで更なる希釈を必要とするでしょう。
阻害を示さない希釈の決定の例
検体の希釈
エンドトキシンの回収量1/100.125
阻害あり
1/200.212
阻害あり
1/400.550
阻害なし
はじめに検体を 10 倍単位の希釈系列で試験するとよいでしょう。阻害を生じないおおよその希釈率が決定されたら、その周辺を 2 倍単位の希釈系列で試験をして、より正確な希釈倍率を求めて下さい。
アッセイ限界と検体調整
LAL 反応の阻害と促進の程度は製品の濃度によります。
同じ製品をいくつかの異なる濃度で測定する場合、それぞれのパフォーマンス特性を確立することが必要となります。
従来のゲル化試験とは異なる阻害や促進の傾向が見られるかもしれません。
阻害を克服するために、エンドトキシンフリーの塩酸または水酸化ナトリウムで検体の pH を 6.0～8.0 に調節する必要があるかもしれません。

色のついた検体について各ウェル最初の吸光度がブランクとして採用されるため、色のついた検体でも特別な問題は生じません。もしバックグラウンドの吸光度が≥1.5AU の場合、検体を希釈して再度アッセイしてください。

保存された検量線について
WinKQCL®に保存されている、既存の検量線を使用してアッセイを行うことが可能です。Kinetic-QCL® Reagent、LAL試験用水、Endotoxinのロットとマイクロプレートリーダーのパラメーターが保存されている検量線を作成した際に使用したものと一致するならば、新しい検量線用のエンドトキシンスタンダードをマイクロプレート上に設ける代わりに、保存されている検量線を利用することができます。
保存されている検量線を利用する場合は、スタンダード
コントロールを 1 点、log スケールで保存されていた検量線範囲の中間点をとって、アッセイして下さい。予測された濃度は既知濃度の±25％以内でなくてはなりません。
例えば、0.005～50 EU/ml の検量線を用いたアッセイにおいては、0.5 EU/ml のスタンダードコントロールのアッセイが必要です。

log 50= 1.6990
log 0.005= -2.3010--------------------------------------------ｌog 平均= -0.3010
Antilog -0.3010= 0.5
0.01～1 EU/ml の検量線を用いたアッセイにおいては、0.1 EU/ml のスタンダードコントロールのアッセイが必要です。
log 1.0= 0.0000
log 0.01= -2.0000--------------------------------------------ｌog 平均= -1.0000
Antilog -1.0000= 0.1
他の試験方法との相関
アメリカ合衆国においてはFDAがLAL試験の公式の使用を管理しています。FDAはLAL試験の標準化において大きな支援となる公式のLALとエンドトキシンの調 整 品 を 有 し て い ま す 。 FDA 標 準 LAL は
Kinetic-QCL®法向けに調整されたものではないため、この試験には使用されません。しかしながら、公式のエンドトキシンはこのキットに含まれるエンドトキシンを標準化するために使用されています。異なるエンドトキシンの調整品の活性は従来のゲル化法においても比色法においてもばらつきが見られます。このキットに含まれるエンドトキシンスタンダードはKinetic-QCL®アッセイを用いてFDAエンドトキシン標準品（FDA ReferenceStandard Endotoxin 、RSE） と 比較 され、そ の活 性 はCertificate of Analysis（試験成績表、COA）に指定された液量で溶解された時に 50 EU/mlになります。このスタンダードから希釈された検量線はRSEにおける 0.005～50 EU/mlの範囲を得ます。しかしながら、従来のゲル化法は 2 倍ごとの希釈により標準化されており、従ってそのばらつきは、標準化が連続的でばらつきが少な
い比色法LAL試験に比べると大きくなることにご留意下さい。
アメリカ合衆国以外のお客様へ
各国の監督機関がその司法権に従った他の試験実施基準を設けているかもしれませんのでご注意下さい。
参考文献
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3特許情報この製品の構成品は下記の US patent で保護されています。
43222174510241
5310657
商標
ELx808TMはBioTek Instruments社の商標です。
特別に表記された場合を除いて、ここにおける全ての商標は Lonza グループもしくはその系列のものです。

2008 年（平成 20 年）8 月改正
輸入発売元： ロンザジャパン株式会社
東京都中央区新川 2-20-8 協和新川ビル 8 階
電話 03-5566-0612 （代表）
FAX 03-5566-0619
http://www.lonza.co.jp

製造元：

Lonza Walkersville, Inc8830 Biggs Ford Road, Walkersville Maryland
http://www.lonza.com

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