信州医誌，62⑸：309〜378，2014

信州大学において審査された医学博士論文要旨
氏
名(所属講座)

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員
主

査

副

査

嶋根
哲 甲第949号
（歯科口腔
外科学）

25. 3.31 Clinical Signiﬁcance of apoptosis‑associated 本 田 孝 行 宇佐美真一
小泉知展
speck‑like protein containing a caspase江口隆 甲第950号（外科学⑵）

24. 9.30 Sivelestat Prevents Cytoskeletal Rearrange- 天 野
ments in Neutrophils Resulting from Lung Re‑
expansion following One‑Lung Ventilation
during Thoracic Surgery（シベレスタットは胸部外科手術における片肺換気後の再膨張による好中球の細胞骨格変化を抑制する）

伴碧 甲第951号
（形成再建
外科学）

26. 3.31 Developed Lower‑Positioned Transverse Lig- 森 泉 哲 次 村 田 敏 規
多田剛
ament Restricts Eyelid Opening and Folding

三 島 吉 登 甲第952号
（形成再建
外科学）

25. 3.31 The Supraorbital Margin of Japanese Who 森 泉 哲 次 村 田 敏 規
多田剛
Have No Visible Superior Palpebral Crease

花村
徹 甲第953号（外科学⑵）

25. 9.30 Androgen metabolite‑dependent growth of 天 野
hormone receptor‑positive breast cancer as apossible aromatase inhibitor ‑resistancemechanism（アロマターゼ阻害剤耐性メカニズムとしてのホルモンレセプター陽性乳癌におけるアンドロゲン代謝産物依存性増増殖機構）

丸 山 真 弘 甲第954号（内科学⑵）

26. 3.31 Risk factors for pancreatic stone formation 田 中 榮 司 角 谷 眞 澄
駒津光久
in autoimmune pancreatitis over a long‑termcourse（自己免疫性膵炎の長期経過における膵
石形成の危険因子）

小 原 久 典 甲第955号（分子腫瘍学）25. 3.31 Lipocalin2 enhances the matrix metallo- 本 田 孝 行 谷口俊一郎
菅野祐幸
proteinase ‑9 activity and invasion ofrecruitment domain in Oral Squamous Cell
Carcinoma（ASC の口腔扁平上皮癌における臨床的有用性について）
純 川眞田樹人本田孝行

and Determines Japanese as Being With or
Without Visible Superior Palpebral Crease（発達した下位横走靱帯は開瞼と上眼瞼の折れ
たたみの抵抗となり，日本人の瞼を一重と二重に分ける）

and Persistently Lift the Eyebrow in PrimaryGaze is Higher and More Obtuse Than Those
Who Do Not（正面視のとき持続的に眉毛を挙上している一重瞼の日本人は持続的に眉毛挙上しない二重瞼の人よりも眼窩上縁が高く丸い）
純 大森
栄
塩沢丹里

extravillous trophoblasts under hypoxia（Lipocalin2は低酸素環境で MMP‑9活性と絨毛外トロフォブラストの浸潤を亢進させる）
No. 5, 2014309

審査学位論文要旨

田耕 甲第956号（加齢生物学）25. 9.30 Ubiquinol ‑10 Supplementation Activates 谷口俊一郎 鈴 木 龍 雄
山田充彦
M itochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence Accelerated Mice（還元型コエンザイムＱ10の老化促進モデルマウス（SAMP1）への投与はミトコンドリア機能を活性化し，老化を遅延する）

渡 邉 貴 之 甲第957号（内科学⑵）

26. 3.31 Clinical features of a new disease concept, 田 中 榮 司 本 田 孝 行
菅野祐幸
IgG4‑related thyroiditis（IgG4関連甲状腺炎の臨床的特徴）

張雷 甲第958号（泌尿器科学）26. 3.31 Functional Roles of Transient Receptor 大 橋 俊 夫 大 森栄山田充彦
Potential Melastatin 8 (TRPM 8)Channels in
the Cold Stress‑Induced Detrusor Overactivity Pathways in Conscious Rats（ラット冷えストレス誘発排尿筋過活動の機序における温度感受性受容体（TRPM 8）の機能的役割の考察）

髙 梨 哲 生 甲第959号
（神経可
塑性学）

25. 3.31 Synovial deposition of wild‑type transthyr- 鈴 木 龍 雄 加 藤 博 之
樋口京一
etin‑derived amyloid in knee joint osteoarthritis patients（変形性膝関節症患者の関節滑膜には野生型トランスサイレチン由来のアミロイドが沈着する）岩 谷 勇 吾 甲第960号（内科学⑵）

25. 3.31 Reduced expression of αGlcNAc in Barrettʼs 菅野祐幸 宮川眞一
森泉哲次
oesophagus adjacent to Barrettʼs adenocarcinoma ―a possible biomarker to predict themalignant potential of Barrettʼs oesophagus（バレット腺癌に隣接するバレット食道では
αGlcNAc の発現が低下している〜バレット食道の悪性化を予測するバイオマーカーとしての
可能性〜）

野口
渉 甲第961号（泌尿器科学）26. 3.31 The relationship between α1 ‑adrenergic 塩 沢 丹 里 大 森栄菅野祐幸
receptors and TRPM8 channels in detrusor
overactivity induced by cold stress in ovariectomized rats（卵巣摘出ラットにおける冷えストレス誘発排尿筋過活動に対する α1アド
レナリン受容体と皮膚発現する TRPM 8受容体の関連についての検討）

白 津 和 夫 甲第962号（分子病理学）25. 3.31 Loss of gastric gland mucin‑speciﬁc O‑ 谷口俊一郎 菅 野 祐 幸
佐々木克典
glycan is associated with progression of
diﬀerentiated‑type adenocarcinoma of thestomach（胃腺粘液に特異的な ‑グリカンの消失は分化型胃癌の進行に関与する）

北 川 敬 之 甲第963号（外科学⑴）

25. 3.31 Downregulation of the microRNA biogenesis 田 中 榮 司 塩 沢 丹 里
中山淳
components and its association with poor
prognosis in hepatocellular carcinoma（肝細胞癌におけるマイクロ RNA 生合成因子の制御と予後との関連）310

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

平 山 周 一 甲第964号
（脳神経
外科学）

26. 3.31 Regenerative capacity of bulbar projection 多 田

植竹龍一（循環病態学甲第965号

26. 3.31 Adrenomedullin‑RAMP2 system suppresses 樋 口 京 一 谷口俊一郎
菅野祐幸
ER stress‑induced tubule cell death and is
involved in kidneyprotection（アドレノメデュ
リン‑RAMP2システムは，小胞体ストレス誘導性細胞死を抑制し，腎保護に働く）

甲第966号
M D.
ABDUS
SALAM
MONDOL（分子細胞生化学）

26. 3.31 Nox4 redox regulation of PTP1B contributes 谷口俊一郎 本 郷 一 博
中山淳
to the proliferation and migration of glioblastoma cells by modulating tyrosine‑phosphorylation of coronin‑1C（Nox4‑PTP1B レドッ
クスシグナルは，coronin‑1C のタイロシンリ
ン酸化を介して膠芽腫細胞の増殖と運動に寄与
する）

五味志文
（内科学⑸

26. 3.31 TRPM4 Channels Mediate Hypertonicity‑in- 田 渕 克 彦 塩 沢 丹 里
川眞田樹人
duced, Ca ‑impermeable, Non‑selective Ca-

（発生再生
医学））

甲第967号（循環器

tion Currents in a Cervical Cancer Cell Line,
HeLa Cells（TRPM 4チャネルは，子宮頸がん
細 胞 株 HeLa 細 胞 に お い て 高 浸 透 圧 誘 発 性
Ca 非透過性非選択的カチオン電流を生じる）

病態学））

山崎佐枝子
（内科学⑸

neurons during development : a quantitative
neuronal analysis with functional correlation（嗅球投射ニューロンの再生能：再生ニューロンの定量評価並びに機能解析）

剛 本郷一博田渕克彦

甲第968号

25. 3.31 Presence of diastolic dysfunction in patients 本 田 孝 行 天 野純
岡元和文
with peripheral artery disease（閉塞性動脈硬化症患者における拡張障害の検討）

向山啓二郎 甲第969号（運動機能学）25. 3.31 Factors inﬂuencing the residual rib hump 本 郷 一 博 角 谷 眞 澄
森泉哲次
after posterior spinal fusion for adolescent

（循環器
病態学））

idiopathic scoliosis with Lenke 1 and 2 curves（Lenke type１，２型思春期特発性側弯症に対する後方矯正固定術後に残存する肋骨隆起に関連する因子）
鈴 木 尚 徳 甲第970号（泌尿器科学）25. 3.31 Eﬃcacy and safety of advanced renal cell 小 泉 知 展 中 山
大森
carcinoma patients treated with sorafenib :roles of cytokine pretreatment（進行性腎癌に対するソラフェニブの有効性および安全性：
サイトカイン先行投与の効果）

淳
栄奥 原 禎 久 甲第971号（内科学⑵）

26. 3.31 Serum Levels of Interleukin‑22 and Hepati- 竹 下 敏 一 本 田 孝 行
瀧伸介
tis B Core‑related Antigen Are Associatedwith Treatment Response to Entecavir Therapy in Chronic Hepatitis B（Ｂ型慢性肝炎のエンテカビルによる治療効果に対する血清イン
ターロイキン22とＢ型肝炎コア関連抗原の影響）No. 5, 2014311

審査学位論文要旨

平林佳奈枝 甲第972号（小児医学）

25. 3.31 Risk factors for diabetes mellitus and impair- 駒 津 光 久 本 田 孝 行
菅野祐幸
ed glucose tolerance following allogeneic
hematopoietic stem cell transplantation inpediatric patients with hematological malignancies（小児血液腫瘍患者における同種造血幹細胞移植後の糖尿病および耐糖能異常の発症
危険因子）

竹内崇博
（内科学⑸

甲第973号

26. 3.31 Electrocardiographic J waves are associated 山 田 充 彦 天 野純
岡元和文
with right ventricular morphology and function : evaluation by cardiac magnetic resonance imaging（心電図上のＪ波は右室の形態と機能に関係している：心臓 M RI を用いた評価）

平賀理佐子 甲第974号
（分子細胞
生化学）

26. 3.31 Nox4‑derived ROS Signaling Contributes to 谷口俊一郎 竹 下 敏 一
奥山隆平
TGF ‑β‑induced Epithelial‑mesenchymal
Transition in Pancreatic Cancer Cells（膵癌細 胞 の EM T に お け る 活 性 酸 素 産 生 遺 伝 子
Nox4の機能的役割）

酒 井 康 弘 甲第975号（分子病理学）26. 3.31 High endothelial venule‑like vessels and 中 山
lymphocyte recruitment in testicularseminoma（精巣セミノーマにおける高内皮細静脈様血管とリンパ球の動員）

原山雄太
（法医学）

甲第976号

26. 3.31 Analysis of Y chromosome haplogroups in 花 岡 正 幸 中 山淳
野見山哲生
Japanese population using short amplicons
and its application in forensic analysis（短鎖増幅産物を応用した日本人集団のＹ染色体ハプ
ログループの解析と法医学試料の解析への応用）

藤原麻衣子 甲第978号（分子病理学）26. 3.31 Expression of long‑form N ‑acetylgluco- 樋 口 京 一 森 泉 哲 次
佐々木克典
samine‑6‑O‑sulfotransferase 1 in human highendothelial venules（ヒト高内皮細静脈における長鎖型 ‑アセチルグルコサミン6‑ 硫酸転移酵素１の発現）

小林信光
（法医学）

甲第979号

25. 3.31 Polymorphisms of the Tissue Inhibitor of 浅 村 英 樹 菅 野 祐 幸
野見山哲生
M etalloproteinase 3 Gene Are Associatedwith Resistance to High‑Altitude Pulmonary
Edema (HAPE)in a Japanese Population :A
Case Control Study Using Polymorphic Microsatellite M arkers（日本人における高地肺水腫に対する疾患抵抗性と TIMP3遺伝子多型との関連について：マイクロサテライトマー
カーを用いた症例対照研究）

清 水 健 司 甲第980号（遺伝医学･
予防医学

26. 3.31 M icroarray and FISH ‑based Genotype‑ 小 池 健 一 池 田 修 一
宇佐美真一
Phenotype Analysis of 22 Japanese Patientswith Wolf‑Hirschhorn Syndrome（Wolf‑
Hirschhorn 症候群の日本人患者22名におけるマイクロアレイと FISH 解析を用いた遺伝型‑
表現型相関の検討）

（循環器
病態学））

（社会予防
医学））

312

淳 塩沢丹里本田孝行

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

駒 津 和 宜 甲第981号（外科学⑵）

26. 3.31 Surgical Outcomes of Acute Type A Aortic 池 田 宇 一 岡 元 和 文
川眞田樹人
Dissection in Elderly Patients（高齢者急性Ａ型大動脈解離の手術成績）

倉 石 修 吾 甲第982号（運動機能学）26. 3.31 Pedicle Morphology Using Computed Tomo- 角 谷 眞 澄 本 郷 一 博
森泉哲次
graphy‑based Navigation System in Adolescent Idiopathic Scoliosis（特発性思春期側弯症における CT‑based navigation system による椎弓根径，長さの計測）森田進 甲第983号（内科学⑵）

25. 3.31 Characteristics and prediction of hepatitis B 宮 川 眞 一 竹 下 敏 一
本田孝行
e‑antigen negative hepatitis following seroconversion in patients with chronic hepatitis
B（慢性Ｂ型肝炎患者の HBe 抗原のセロコンバージョン後の HBe 抗原陰性肝炎の特色と発症の予想）

小林実喜子 甲第984号
（病態解析
診断学）

26. 3.31 Reappraisal of the immunophenotype of pan- 本 田 孝 行 菅 野 祐 幸
角谷眞澄
creatic intraductal papillary mucinous neoplasms (IPMNs) ―gastric pyloric and small
intestinal immunophenotype expression in
gastric and intestinal type IPMNs―（膵管内
乳頭粘液性腫瘍（IPM N）の免疫染色に基づいた表現型の再評価―胃型 IPM N と腸型 IPMNにおける胃幽門粘膜および小腸粘膜の形質発
現）吉川健太郎 甲第985号（小児医学）

25. 3.31 Safety,tolerability,and feasibility of antifun- 山 田 充 彦 大 森栄花岡正幸
gal prophylaxis with micafungin at 2 mg/kg
daily in pediatric patients undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation（小児同種造血幹細胞移植患者におけるミカファンギン２mg/kg の連日投与による真菌感染症予防の安全性，忍容性および実施可能性）

野 沢 祐 一 甲第986号（内科学⑵）

26. 3.31 KIR, HLA, and IL28B Variant Predict 樋 口 京 一 宮 川 眞 一
花岡正幸
Response to Antiviral Therapy in Genotype 1
Chronic Hepatitis C Patients in Japan（日本人ジェノタイプ１型Ｃ型慢性肝炎患者に対する抗ウイルス療法治療効果予測に KIR ，HLA，
IL28B 遺伝子多型が与える影響について）

古 澤 徳 彦 甲第987号（外科学⑴）

25. 3.31 Surgical Treatment of 144 Cases of Hilar 天 野Cholangiocarcinoma Without Liver‑Related
M ortality（肝門部胆管癌切除例144例の検討―
術後肝不全死０％―）

岩佐陽一郎 甲第988号
（耳鼻咽喉
科学）

25. 3.31 OTOF mutation screening in Japanese severe 福 嶋 義 光 小 池 健 一
村田敏規
to profound recessive hearing loss patients（常染色体劣性遺伝形式をとる日本人高度〜重度難聴患者におけるOTOF 遺伝子変異スクリー
ニング）

No. 5, 2014

純 西澤
理
田中榮司

313

審査学位論文要旨

吉 村 豪 兼 甲第989号
（耳鼻咽喉
科学）

25. 3.31 M assively parallel DNA sequencing facili- 福 嶋 義 光 小 池 健 一
村田敏規
tates diagnosis of patients with Usher syndrome type 1（Usher 症候群タイプ１症例の遺伝子解析における次世代シークエンサーの有用性）

羅宏 敏 甲第990号（加齢生物学）26. 3.31 An interleukin‑33 gene polymorphism is a 谷口俊一郎 鈴 木 龍 雄
田渕克彦
modiﬁer for eosinophilia in rats（インターロ
イキン33遺伝子多型はラットにおける好酸球増多症の修飾因子である）

安 出 卓 司 甲第991号（加齢生物学）25. 3.31 Long‑term trial of corticosteroid therapy for 樋 口 京 一 天 野 直 二
角谷眞澄
the recurrence of cerebral amyloid angiopathy‑related hemorrhages: a case study using［11C］BF‑227 amyloid‑PET（脳アミロイド
アンギオパチー関連再発性脳出血に対する長期
副腎皮質ステロイド治療の試み：［11Ｃ］BF‑
227アミロイド PET を用いた症例検討）

氏
(所

名
属)

学位授与
番
号

授与年月日

博

士

論

文

名

学位審査委員主査

副査

村 田 和 也 甲第７号
（保健学専攻
医療生命
科学分野
医療生命
科学領域）

26. 3.20 Hydrogen Peroxide Content and pH of Expir- 髙

小 林 路 子 甲第８号
（保健学専攻
医療生命
科学分野
医療生命
科学領域）

26. 3.20 Incidence of Legionella and heterotrophic 奥 村 伸 生 寺 田克
川上由行
bacteria in household rainwater tanks in
Azumino, Nagano prefecture, Japan（日本の地方都市長野県安曇野市における家庭用雨水貯留槽水中のレジオネラおよび従属栄養細菌の挙動）

竹 澤 由 夏 甲第９号
（保健学専攻
医療生命
科学分野
医療生命
科学領域）

26. 3.20 siRNA down‑regulation of FGA mRNA in 石 田 文 宏 寺 田克
奥村伸生
HepG2 cells demonstrated that heterozygous
abnormality of the Aα‑chain gene does not
aﬀect the plasma ﬁbrinogen level（siRNA を用いた HepG2細胞の FGA mRNA 発現抑制実
験は，フィブリノゲン Aα鎖遺伝子のヘテロ型異常では血漿フィブリノゲン濃度を低下させないことを明らかにした）314

ed Breath Condensate from Patients with
Asthma and COPD（喘息およびCOPD患者における呼気凝集液中の過酸化水素濃度と pHの検討）

昌星 相良淳二
藤本圭作

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

Clinical Signiﬁcance of apoptosis‑associated speck‑like protein containing a caspase recruitment
domain in Oral Squamous Cell Carcinoma（ASC の口腔扁平上皮癌における臨床的有用性につい
て）
嶋

根

哲

（論文の内容の要旨）

分化誘導行った。NHEK と HaCaT の分化前，分化【背景】口腔扁平上皮癌（OSCC）は2008年には世界後１日目と２日目の mRNA とタンパク質を採集し，的に263,900人が新規に罹患し128,000人が死亡したこ

ASC と IVL の mRNA 発現を定量的 PCR でタンパとが報告された。診断や治療の改善にもかかわらず５ク質発現とを western blot 法でそれぞれ検討した。

年生存率は依然として60％を下回る状況である。予また正常細胞と口腔癌細胞株での比後の改善には，OSCC の進展や転移を正確に診断す

NHEK，HaCaT と 口 腔 癌 細 胞 株 の ASC と IVL のるための分子マーカーが重要である。apoptosis‑as-mRNA 発 現 を 定 量 的 PCR で タ ン パ ク 質 発 現 と をsociated speck‑like protein containing a caspasewestern blot 法で同様に検討した。

recruitment domain（ASC）は M asumoto らにより

【結果】１．In vivo IHC により正常口腔粘膜では

HL‑60細胞にアポトーシスを誘導する際に細胞質にASC は分化が進行した顆粒層から有棘細胞層に多く形成されるタンパク質として同定され，炎症と細胞死

発現していた。OSCC では cancer pearl 周囲に多くに関係していることが示唆された。ASC は癌抑制遺発現しており，低分化 OSCC では発現はほとんど認

伝子様に作用することも報告され，大腸癌，前立腺癌

められなかった。単変量解析の結果では ASC は原発と悪性黒色腫では ASC 領域の DNA のメチル化が報

部位，Ｔ分類，病期，病理学的分化度，浸潤様式とリ告された。これらの所見から，ASC 発現と癌の予後

ンパ細胞浸潤と統計学的有意な相関が認められた。

との関連も示唆されている。そこでわれわれはOSCC

Kaplan‑meier 法では ASC 発現レベルの違いは５年における ASC 発現とその臨床的意義について検討を生存率で統計学的有意差が認められた。疾患特異的生行った。また，ASC 発現とアポトーシスおよび分化存率を end‑point とした多変量解析では ASC 発現はとの関連について検討を加えた。

独立した予後因子であり ASC 高発現群は生存率が高【方法】１．In vivo 対象は1990〜2005年に信州大学

いこと統計学的に認められた。IHC と蛍光抗体法に

医学部附属病院特殊歯科・口腔外科にて OSCC と診

より ASC と IVL の共在が観察された。TUNEL 法

断された未治療例119例。抗 ASC 抗体により免疫組の結果からは ASC の発現が多い OSCC はアポトーシ

織化学的手法（IHC）により病理組織切片上の ASC

スが多いことが認められた。

陽性細胞数を算出し，同症例の臨床病理学的所見（性２．In vitro NHEK と HaCaT を用いた分化誘導実別，年齢，Ｔ分類，Ｎ分類，病期，原発部位，病理学

験からは ASC と IVL は共に分化後では mRNA 量も的分化度，リンパ細胞浸潤，浸潤様式）および予後

タンパク量も増加することが認められた。NHEK，（５年生存率）との関連を統計学的に解析（単変量おHaCaT と 口 腔 癌 細 胞 株 を 使 用 し た 定 量 的 PCR とよび多変量解析）した。また，ASC 発現と上皮細胞

western blot 法では NHEK，HaCaT で ASC と IVLの分化との関連を明らかにするため，ASC および粘が口腔癌細胞株に比 し発現が高かった。

膜上皮細胞の分化マーカーである involucrin（IVL）【考察】本研究において正常口腔粘膜では分化進行発現を IHC と蛍光抗体法により染色し，比検討をに伴い ASCの発現が増加することが認めら れ た。

行った。加えて，ASC とアポトーシスとの関連を検OSCC において ASC は cancer pearl 周辺に発現して討するため，アポトーシス発現状況を TUNEL 染色いた。正常な大腸と皮膚では表層で ASC 発現が認めで調べ，ASC 発現状況との比 検討を行った。

られたことが報告されている。皮膚の癌化の過程で２．In vitro ASC と分化との関連を検討するために

ASC は癌抑制遺伝子として作用することが報告され以下の実験を行った。正常細胞における分化前後でのており，大腸癌，前立腺癌と悪性黒色腫では DNA メ

ASC の 変 化 を 検 討 す る た め に 正 常 ヒ ト 角 化 細 胞

チル化により発現低下し結果としてアポトーシスに対（NHEK）と不死化ヒト角化細胞（HaCaT）を用いし抵抗する可能性が示唆 さ れ て い る。本 研 究 で はNo. 5, 2014

を行うため

315

審査学位論文要旨

ASC 発現減少は病理学的悪性度と相関し，予後不良と HaCaT の分化前，分化後１日目と２日目の ASCとも相関していた。ASC 発現は細胞分化とアポトーと IVL の mRNA 発現を定量的 PCR でタンパク発現

シスと関連していることが示され，なんらかの役割を果とを western blot 法で検討した。また正常細胞と口たしている可能性が考えられた。ASC 発現は OSCC

腔癌細胞株での ASC と IVL について同様に検討しのアポトーシスを誘導する可能性が考えられ ASC はた。

OSCC において予後や悪性度の指標として有用であることが示唆された。

その結果，嶋根らは次の結果を得た。
１．疾患特異的生存率を end‑point とした多変量解析（論文審査の結果の要旨）

では，ASC 発現は独立した予後因子であり ASC

ASC は癌抑制遺伝子様に作用することも報告され，高発現群は生存率が有意に高いことが確認された。

種々の悪性腫瘍では ASC 領域の DNA のメチル化が２．IHC と蛍光抗体法により ASC と IVL の共在が報告された。これらの所見から，ASC 発現と癌の予観察された。細胞株を用いた研究では分化が進むに後との関連も示唆されている。そこでわれわれは口腔

つれ ASC のタンパク・mRNA 発現が増加するこ扁平上皮癌（OSCC）における ASC 発現とその臨床とが示唆された。

的意義について検討を行った。また，ASC 発現とア

３．ASC 発現はアポトーシスが起きている周囲に発ポトーシスおよび分化との関連について検討を加えた。

現していた。また，TUNEL 法の結果からは ASC

In vivo：OSCC と診断された119例を対象とし，抗の発現が多い OSCC はアポトーシスが多いことがASC 抗体により免疫組織化学的手法により ASC の認められた。

発現量を評価し，同症例の臨床病理学的所見および予

これらの結果より ASC 発現は OSCC で独立した予後との関連を統計学的に解析した。また ASC と分化後因子であり，ASC 低発現な OSCC は予後不良であとの関連を検討するため，分化マーカーである in-

ることが示唆された。また ASC は分化やアポトーシ

volucrin（IVL）発現との比スと関連していることが示され，なんらかの役割を果検討を行った。加えて，ASC とアポトーシスとの関連を検討するため，アポたしている可能性が考えられた。ASC 発現は OSCC

ト ー シ ス の 発 現 状 況 を TUNEL染 色 で 調 べ，ASCのアポトーシスを誘導する可能性が考えられ，ASC発現状況との比は OSCC において予後や悪性度の指標として有用で検討を行った。

In vitro：ASC と分化との関連を検討するために以下の実験を行った。分化前後での ASC の変化を検討するために正常ヒト角化細胞（NHEK）と不死化ヒトあることが示唆された。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

角化細胞（HaCaT）を用い分化誘導行った。NHEKSivelestat Prevents Cytoskeletal Rearrangements in Neutrophils Resulting from Lung Re‑expansion
following One‑Lung Ventilation during Thoracic Surgery（シベレスタットは胸部外科手術における片肺換気後の再膨張による好中球の細胞骨格変化を抑制する）
江口隆（論文の内容の要旨）

害の治療に用いられているが，シベレスタットが好中【背景】術中片肺換気は胸部外科手術後に生じる肺障球による肺微小循環障害を改善したという報告がある。

害の原因として知られる。また，好中球は肺障害の発これらから，我々は２つの仮説を立てた。第１は，術生において重要な役割を果たしている。循環血液中の中片肺換気により好中球細胞骨格変化が生じるという好中球は，その活性化により細胞骨格に変化が生じ，仮説で，第２は，シベレスタット投与により好中球の変形能が低下して微小血管の通過が困難となり，肺毛変形能が改善するという仮説である。これらの仮説を細血管に停滞すると考えられている。好中球の細胞骨証明するために，肺葉切除を施行する症例において前格変化が胸部手術における片肺換気とどのように関向き無作為化研究を施行した。

わっているか明らかにはされていない。一方，好中球【方法】2006年10月から2008年２月にかけて，原発性

エラスターゼ阻害剤であるシベレスタットが急性肺障

肺癌あるいは転移性肺腫瘍に対し，当科で肺葉切除が316

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

予定され，本試験への同意が得られた16名の症例を対を抑制し，肺葉切除を施行した症例において酸素化を象とした。症例は無作為にコントロール群（８名）と改善した。好中球の細胞骨格変化は片肺換気後の肺障

シベレスタット群（８名）に割り当て，コントロール

害を惹起し，これに対して周術期にシベレスタットを群では生理食塩水10ml/h，シベレスタット群ではシ投与することで術後合併症を抑制できる可能性がある。

ベレスタット溶解液10ml/h（投与薬剤量0.2mg/kg/（論文審査の結果の要旨）h）をそれぞれ手術開始から手術終了まで投与した。

術中片肺換気は胸部外科手術後に生じる肺障害の原

片肺換気開始直後（point１），再膨張直前（point２），

因として知られ，好中球は肺障害の発生において重要および再膨張後30分（point３）において末梢動脈血な役割を果たしている。循環血液中の好中球は，そのを採取した。好中球の細胞骨格変化はＦアクチンの局活性化により細胞骨格に変化が生じ，変形能が低下し在によって評価した。蛍光染色によりＦアクチンが細て微小血管の通過が困難となり，肺毛細血管に停滞す

胞膜直下に存在するＦアクチンリム形成を有する好中ると考えられている。一方，好中球エラスターゼ阻害

球の全好中球に占める割合を測定し，これを自動血球剤であるシベレスタットが好中球による肺微小循環障

計数器により測定した全好中球数にかけ，Ｆアクチン

害を改善したという報告がある。これらから，我々はリム形成を有する好中球数を測定した。他に，酸素化術中片肺換気による好中球細胞骨格変化，および，こを評価するために PaO ，好中球走化因子として血漿の細胞骨格変化に対するシベレスタットの効果を明ら

インターロイキン８（IL‑8），活性酸素としてマロンかにするため，肺葉切除を施行する症例において前向ジアルデヒド（MDA）についても測定した。PaO /き無作為化研究を施行した。

FiO （Ｐ/Ｆ）比は point１と point３で測定し，結果

原発性肺癌あるいは転移性肺腫瘍に対し，当科で肺はその変化率で示した。

葉切除が予定された16名の症例を対象とした。症例は【結果】男女比（男性/女性）は７/９で，平均年齢は無作為にコントロール群（８名）とシベレスタット群

71.4歳であった。術後に重篤な合併症を発症した症例（８名）に割り当てられ，コントロール群では生理食は認めなかった。コントロール群とシベレスタット群

塩水10ml/h，シベレスタット群ではシベレスタットの比において，年齢，性別，手術部位，喫煙歴，術溶解液10ml/h（投与薬剤量0.2mg/kg/h）をそれぞ

前呼吸機能，片肺換気時間，出血量，切除肺の容量にれ手術開始から手術終了まで投与した。片肺換気開始

有意差を認めなかった。

直後（point１），再膨張直前（point２），および再膨

全好中球数は 両 群 と も に，point１ と 比

し て，張後30分（point３）において末梢動脈血を採取し，point２で増加し point３でさらに増加する傾向を認め

全好中球数，Ｆアクチンリム形成を有する好中球数，た。両群の時系列データに有意差は認めなかった。
Ｆアクチンリム形成を有する好中球数においても，
全好中球数と同様に，point１と比して，point２で増加し point３でさらに増加する傾向を認めた。シベ
レスタット群はコントロール群と比して point２，

point３において低値であり，両群の時系列データに有意差を認めた。

PaO /FiO （Ｐ/Ｆ）比，血 漿 イ ン タ ー ロ イ キ ン ８（IL‑8），マロンジアルデヒド（M DA）について測定した。Ｐ/Ｆ比は point１と point３で測定し，結果はその変化率で示した。
そして，江口らは次の結果を得た。
１．術中片肺換気中，およびその後の再膨張により，Ｆアクチンリム形成を伴う好中球数が増加した。

PaO の変化率はコントロール群0.81±0.07，シベ

２．シベレスタット投与群ではＦアクチンリム形成を

レスタット群0.98±0.05であり，シベレスタット群で伴う好中球数が，コントロール群に比べ低値であっ有意に高かった。

た。

血漿 IL‑8は増加を認めず，両群間の時系列データに有意差を認めなかった。血漿 M DAは，コントロー
ル群において point１と比して point３で有意に高値であったが，両群間の時系列データに有意差を認め

３．シベレスタット投与群ではＰ/Ｆ比の変化率が，コントロール群に比べ高値であった。
４．IL‑8は両群で上昇を認めなかった。
５．MDA はコントロール群で再膨張後に上昇を認めなかった。

たものの，両群間の時系列データに有意差を認めな【結論】片肺換気後の再膨張は循環血液中の好中球のかった。

細胞骨格変化を生じるが，シベレスタットはこの変化

これらの結果より，片肺換気後の再膨張は循環血液No. 5, 2014317

審査学位論文要旨

中の好中球の細胞骨格変化を生じ，シベレスタットは期にシベレスタットを投与することで術後合併症を抑この変化を抑制し，肺葉切除を施行した症例において制できる可能性があることを示唆している。よって，酸素化を改善すると考えられた。好中球の細胞骨格変

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が化は片肺換気後の肺障害を惹起し，これに対して周術あるものと認めた。

Developed Lower‑Positioned Transverse Ligament Restricts Eyelid Opening and Folding andDetermines Japanese as Being With or Without Visible Superior Palpebral Crease（発達した下位横走靱帯は開瞼と上眼瞼の折れたたみの抵抗となり，日本人の瞼を一重と二重に分ける）
伴（論文の内容の要旨）

碧について調べた。

【目的】人類学によると，日本人は，土着の縄文人と，【結果】⑴ 眉毛を押さえると，一重瞼群は33人全てが東アジアから移住してきた弥生人に分類される。弥生開瞼できなかったが，二重瞼群は後天性眼瞼下垂症で人は，狭い瞼裂，一重瞼の厚い耐寒性のある構造の眼あっても開瞼できた。⑵ 眼窩隔膜の背側にある LTL

瞼を持ち，高い位置に丸い構造の眼窩上縁があった。

は，33人の一重瞼群中23人で１本であり，10人が２本

一方で，縄文人は，大きな瞼裂の二重瞼で，眼窩上縁かそれ以上だった。二重瞼群では，33人中18人で１本は平らで低い位置にあったと報告されている。また，で，13人は２本かそれ以上，２人ははっきりしたもの

内側眼窩縁と外側眼窩縁の間の眼窩脂肪下端のスペーがなかった。一重瞼群では，眼窩隔膜下部の背側にあスに下位横走靱帯（以下 LTL）が存在し，それによる LTL の中で最も尾側のものの太さの平均は1.15±

り狭い瞼裂，一重瞼，重たい瞼が形作られることが報

0.44mm で，これは二重瞼群の平均0.88±0.45mm

告されている。それらの形態は，弥生人の顔貌の特徴

より p＝0.0136で有意に太かった。顕微鏡下に組織学でもある。現代日本人は，縄文人と弥生人の特徴を持っ的検証を行ったところ，一重瞼群の LTL の膠原線維ている。一重瞼であるということは，眼瞼前葉が折れは二重瞼群より太かった。

たたまれないこと，視野を保つために眉毛挙上する必【考察】重瞼群は眼窩隔膜下部の背側に，太さも数も要があることを示しており，このことにより弥生人の多い LTL を持っているが，二重瞼群の LTL は発達子孫であるかどうかを見極めることができるのではな

していなかった。さらに，眉毛の動きをおさえた検証

いかと考え，我々は今回の検証を行った。一方で我々の結果，発達した LTL を持つ一重瞼群では，開瞼とは，縄文人の子孫の日本人には生まれつき重瞼線があ瞼の折れたたみが強く制限されたが，LTL の発達しり，眼瞼前葉が重瞼線で折りたたみ可能なので，眉毛ていない二重瞼群では，強い開瞼の制限はなかった。

挙上しなくても十分に視野が得られるのではないか

LTL の発達の程度の違いが，日本人において，弥生と推測した。先天性眼瞼下垂症患者の診察の際には，人系か縄文人系かの顔貌の違いを決定すると考えられ

開瞼時に前頭筋収縮で代償的に眼瞼前葉を持ち上げなた。発達した LTL は開瞼と眼瞼の折れたたみを制限いように，指で眉毛を固定した上で眼瞼挙筋機能を評するだけでなく，眼窩脂肪を低い位置に保つ。そして価する方法を用いるが，今回我々は，この方法を，その結果として狭い瞼裂，一重の厚ぼったい上眼瞼とLTL がどのように開瞼の抵抗となっているかを調べなり，それは弥生人の顔貌の特徴を示している。一方るために用いた。我々の仮説を明らかにするために，で。LTL が発達していない人は，開瞼も瞼の折れた⑴ 指で眉毛挙上をおさえることが開瞼の抵抗となる

たみも制限されないので二重瞼の大きな瞼裂となる。

か ⑵ 発達した LTL が開瞼と瞼の折れたたみを制限発達していない LTL は，眼窩脂肪を西洋人のようにしているかどうかを日本人の一重瞼群と二重瞼群で検上眼窩に入り込ませるのかもしれない。そしてそれら証した。

は縄文人の顔貌の特徴を示している。

【方法】検証は66名の日本人（一重瞼群33名，二重瞼

（論文審査の結果の要旨）

群33名）手術患者を対象に行った。⑴ 指で眉毛を動人類学によると，日本人は，土着の縄文人と，東ア

かなくすると開瞼が制限を受けるか，⑵ LTL の発達

ジアから移住してきた弥生人に分類される。弥生人は，の程度により日本人を一重瞼と二重瞼に分類できるか

狭い瞼裂，一重瞼の厚い耐寒性のある構造の眼瞼を持318

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

ち，高い位置に丸い構造の眼窩上縁があった。一方で，その結果，以下の成績を得た。

縄文人は，大きな瞼裂の二重瞼で，眼窩上縁は平らで１．眉毛を押さえると，一重瞼群は33人全てが開瞼で低い位置にあったと報告されている。また，内側眼窩きなかったが，二重瞼群は後天性眼瞼下垂症であっ縁と外側眼窩縁の間の眼窩脂肪下端のスペースに下位ても開瞼できた。

横走靱帯（以下 LTL）が存在し，それにより狭い瞼

２．眼窩隔膜の背側にある LTL は，33人の一重瞼群裂，一重瞼，重たい瞼が形作られることが報告されて中23人で１本であり，10人が２本かそれ以上だった。

いる。それらの形態は，弥生人の顔貌の特徴でもある。

二重瞼群では，33人中18人で１本で，13人は２本か

現代日本人は，縄文人と弥生人の特徴を持っている。

それ以上，２人ははっきりしたものがなかった。一一重瞼であるということは，眼瞼前葉が折れたたまれ重瞼群では，眼窩隔膜下部の背側にある LTL の中ないこと，視野を保つために眉毛挙上する必要があるで最も尾側のものの太さの平均は1.15±0.44mm

ことを示しており，二重瞼であるということは眼瞼前で，これは二重瞼群の平均0.88±0.45mmより p＝

葉が重瞼線で折りたたみ可能なので，眉毛挙上しなく

0.0136で有意に太かった。顕微鏡下に組織学的検証ても十分に視野が得られるということを示しているのを行ったところ，一重瞼群の LTL の膠原線維は二ではないかと伴らは考えた。このことにより弥生人の重瞼群より太かった。

子孫か縄文人の子孫であるかどうかを見極めることが以上より，伴らは発達した下位横走靱帯は開瞼の抵できるのではないかと考え，伴らは今回の検証を行っ抗となり，瞼の折れたたたみを制限し，日本人の瞼をた。

一重瞼と二重瞼にわけられると結論した。そして，一

検証は66名の日本人（典型的な一重瞼群33名，二重瞼か二重瞼かというのは弥生人と縄文人の特徴でも重瞼群33名）手術患者を対象に行った。まず，指で眉あり，そこから現代日本人を弥生人の子孫か縄文人の毛を動かなくすると開瞼が制限を受けるか，次に，子孫か見極める手がかりのひとつとなりうると考えた。

LTL の発達の程度により日本人を一重瞼と二重瞼に主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値が分類できるかについて伴らは調べた。

あるものと認めた。

TheSupraorbital Margin ofJapaneseWho HaveNo VisibleSuperior PalpebralCreaseand Persistently Lift the Eyebrow in Primary Gaze is Higher and More Obtuse Than Those Who Do Not（正面視のとき持続的に眉毛を挙上している一重瞼の日本人は持続的に眉毛挙上しない二重瞼の人よりも眼窩上縁が高く丸い）
三

島

吉

登

（論文の内容の要旨）【対象と方法】対象は鼻骨骨折または眼窩下壁骨折で【背景と目的】人類学的研究から，日本人の起源は弥眼 窩 の3D ‑CT 撮 影 を し た 男 性23例（平 均24.5歳±

生人と縄文人に分けて考えられており，移民系の弥生7.2）で，10例は明らかな重瞼線がなく持続的に眉毛

人は寒冷への耐性のため瞼裂が狭く，はっきりした重を挙上しており，13例は重瞼線があり持続的な眉毛挙瞼線がなく，丸く高い眼窩上縁をもち，原住民である

上をしていなかった。重瞼線がない群は指で眉毛が動

縄文人は瞼裂が広く，重瞼線が明らかで，平らで低いかないようにすることで開瞼が制限されることを確認

眼窩上縁をもつのが特徴とされている。

した。

これらの特徴のなかで，瞼裂縦径が狭い（目が小さ重瞼線のない群はある群にくらべて眉毛を挙上してい）と眼窩上縁は高く，瞼裂縦径が広い（目が大きいるかを評価した。瞳孔の中心を通る垂線上で眉毛のい）と眼窩上縁が低いという点は，解剖学的矛盾があ最上点をとり，内眼角と外眼角を結んだ線との距離をる。この矛盾に対し，重瞼線がなく目が小さい日本人計測した。

は，前頭筋の持続的収縮で眉毛と上眼瞼前葉を挙上し次に，正面視で持続的に眉毛を挙上していることは，て開瞼しているため，正面視で持続的に眉毛挙上する

3D‑CT の正面像での眼窩上縁の高さに影響するかを際の機械力によって眼窩上縁が丸く高くリモデリング評価した。顔面の正中線と頰骨前頭縫合の中点との距されるという仮説を検証した。

離を HD（horizontal distance）とし，眼窩上縁の最No. 5, 2014319

審査学位論文要旨

上点と HD の線との距離を VD（vertical distance）
として VD/HD を各群間で比 した。

明らかな重瞼線をもたず持続的に眉毛を挙上している群において眼窩上縁が高くなると矢状断での眼窩上最後に，正面像での眼窩上縁の形状と矢状断での眼縁が鈍になるという関連をわれわれは証明し，その原窩上縁の形状に関連はあるかを評価した。眼窩最上点

因についての仮説を述べたが，確証には至っていない。

を通る矢状断でフランクフルト平面と平行な線と眼窩縄文人またはコーカソイドで，片側の重度先天性眼瞼

上壁前方の接線との角度を計測し，上記の VD/HD

下垂があり，下垂側は強く眉毛挙上をして健側は眉毛との関連を検討した。

挙上をしていない症例の眼窩上縁を評価することで証【結果】明らかな重瞼線のない群では，重瞼線のある

明できるだろう。

群に比べて眉毛が高かった。重瞼線のない群の方が，重瞼線のある群に比べて眼窩上縁が高く，眼窩上縁の（論文審査の結果の要旨）
日本人の起源に関する人類学的研究から，渡来系の矢状断像が鈍角だった。

弥生人は瞼裂縦径が狭く，はっきりした重瞼線がなく，【考察】明らかな重瞼線をもたず，正面視で眉毛を持

丸く高い眼窩上縁をもち，原住民である縄文人は瞼裂

続的に挙上している10例は，重瞼線があり眉毛を挙上

縦径が広く，重瞼線が明らかで，平らで低い眼窩上縁していない13例よりも目が小さいにも関わらず，眼窩をもつのが特徴とされている。

上縁が高かった。眼窩上縁の高さは瞼裂縦径の大きさ

これらの特徴のなかで，瞼裂縦径が狭いと眼窩上縁とは矛盾するが，眉毛の高さとは関連がみられた。正は高く，瞼裂縦径が広いと眼窩上縁が低いという点は，面から見た眼窩上縁の高さと矢状断での眼窩上縁の形

解剖学的矛盾がある。この矛盾に対し，重瞼線がなく状をみた検討では，眼窩上縁が高いと眼窩上縁の形状

瞼裂縦径が狭い日本人は，前頭筋の持続的収縮で眉毛が鈍であった。これらの結果から，重瞼線のない群でと上眼瞼前葉を挙上して開瞼しているため，正面視では正面視で持続的反射的な前頭筋の収縮による眉毛挙持続的に眉毛挙上する際の機械力によって眼窩上縁が上をし，同時に眼窩上縁周囲の軟部組織を機能的に引丸く高くリモデリングされるという仮説を三島らはたき上げて開瞼するため，眼窩上縁に機械的圧迫が働き，て，それを検証した。

高く鈍な眼窩上縁を形成すると考えられる。

対象は鼻骨骨折または眼窩下壁骨折で眼窩の3D‑

２群間における目の大きさと眼窩上縁の高さの矛盾

CT 撮影をし た 男 性23例（平 均24.5歳±7.2）で，10に対する説明として，馬場らは寒冷への耐性をあげて例は明らかな重瞼線がなく持続的に眉毛を挙上しておいる。大陸からの移民である弥生人は寒冷への耐性のり，13例は重瞼線があり持続的な眉毛挙上をしていな

ために凹凸の少ない平らな顔貌が必要で，脳の肥大かった症例である。重瞼線がない群は指で眉毛が動か化・前方移動と上顎洞の拡大により縦方向に引き伸ばないようにすることで開瞼が制限されることを，三島された平らな顔と高く丸い眼窩上縁を獲得したと仮説

らは確認した。

しており，同じく寒冷に強い厚く目の小さい一重瞼を重瞼線のない群はある群にくらべて眉毛を挙上して備えることは一見矛盾しない。しかし人類学の研究はいるかを評価した。瞳孔の中心を通る垂線上で眉毛の発掘された骨格に基づいて行われるため，重瞼線や前最上点をとり，内眼角と外眼角を結んだ線との距離を頭筋の持続的反射的収縮による眉毛挙上など軟部組織計測した。

の特徴については評価ができないとはいえ，高く丸い

次に，正面視で持続的に眉毛を挙上していることは，眼窩上縁では，眼窩内組織が広く外気にさらされると

3D‑CT の正面像での眼窩上縁の高さに影響するかをいう点で，寒冷環境に適応するために獲得したとする評価した。顔面の正中線と頰骨前頭縫合の中点との距説には疑問が残る。

離を HD とし，眼窩上縁の最上点と HD の線との距

頭蓋顔面の骨や関節は機械刺激を受けて成長し機能離を VD として VD/HD を各群間で比 した。

する。筋収縮，咀嚼，脳の拡大，重力，歯列矯正用装最後に，正面像での眼窩上縁の形状と矢状断での眼具などの外力はリモデリングと呼ばれる生物学的適応

窩上縁の形状に関連はあるかを評価した。眼窩最上点の過程を通して骨の形や位置に影響を与える。正面視を通る矢状断でフランクフルト平面と平行な線と眼窩で前頭筋が持続的に収縮して眉毛を挙上する機械刺激

上壁前方の接線との角度を計測し，上記の VD/HD

により，眼窩上縁もリモデリングを受ける可能性があとの関連を検討した。

るといえる。
320

その結果，三島らは次の結論を得た。
信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

１．明らかな重瞼線のない群では，重瞼線のある群に比べて眉毛が高かった。

正面視で持続的反射的な前頭筋の収縮による眉毛挙上をし，同時に眼窩上縁周囲の軟部組織を機能的に引き２．重瞼線のない群の方が，重瞼線のある群に比べて眼窩上縁が高かった。

上げて開瞼するため，眼窩上縁に機械的圧迫が働き，高く鈍な眼窩上縁を形成すると考えられると結論付け

３．眼窩上縁が高いほど，眼窩上縁の矢状断像が鈍角だった。

た。よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

これらの結果から，三島らは，重瞼線のない群ではAndrogen metabolite‑dependent growth of hormone receptor‑positive breast cancer as a possible
aromatase inhibitor‑resistance mechanism（アロマターゼ阻害剤耐性メカニズムとしてのホルモ
ンレセプター陽性乳癌におけるアンドロゲン代謝産物依存性増殖機構）
花

村（論文の内容の要旨）

徹の培養条件における各クローンの GFP 発現率をモニ

閉経後ホルモン感受性乳癌において，アロマターゼ

タリングすることで，アンドロゲン代謝産物依存性の阻害剤（AI 剤）は乳癌局所でのエストロゲン産生を

ER 活性上昇を示すクローンを選択し Variant 細胞株

抑制し，エストロゲン受容体（ER）の活性を阻害し増を樹立した。Variant 細胞株においてアンドロゲン

殖を抑制するが，その際に相対的に過剰となったテスである TS や DHT，その代謝産物である3β‑diol は，

トステロン（TS）やジヒドロテストステロン（DHT）

エストロゲン応答遺伝子を誘導し，親株のＥ10細胞になどのアンドロゲンがアンドロゲン受容体（Androgen

比べ高い細胞増殖を励起することが確認された。これ

receptor；AR）を介して腫瘍抑制的に働くことも作

らの Variant 細胞株では，HSD3B1の発現上昇，AR

用機序のひとつと考えられている。しかしながら，AI発現の低下が認められ，アンドロゲンから3β‑diol へ剤耐性機構においては，アンドロゲンがどのようなの代謝促進，AR を介するシグナル伝達の減弱が，エ役割を果たすかは十分に分かっていない。これまでのストロゲン枯渇，アンドロゲン過剰の条件への適応を報告では，3β‑hydroxysteroid dehydrogenase type 1

促進していると考えられた。さらに，親株であるＥ10（HSD3B1）によりDHTからアロマターゼ非依存的に細胞に HSD3B1遺伝子を過剰発現させた場合，ある産生される5α‑Androstane‑3β，17β‑diol（3β‑diol）

いは AR 阻害剤を作用させた場合に，Variant 細胞株

が，アンドロゲン活性とエストロゲン活性も併せ持ち，同様にエストロゲン枯渇，アンドロゲン過剰条件へのホルモン感受性乳癌の増殖に寄与することで，AI 剤

適応が誘導されることが確認された。次に，間質細胞耐性機構として働きうることが示されている。本研究のアロマターゼによりアンドロゲンから産生されたエでは，ホルモン感受性乳癌においてアンドロゲン代謝

ストロゲンの乳癌細胞増殖に対する効果をみるモデル

産物依存性の細胞増殖機構が AI 剤治療により誘導さとして，ヒト乳癌組織由来の間質細胞とこれらの細胞

れるか，その場合にどのような機序で誘導されるのか，

株との共培養モデル系を構築した。この共培養モデル

この機構が AI 剤耐性機構として実際に働きうるかど

系を用いて Variant 細胞株が実際に AI 剤耐性を示す

うかを検証することを目的とした。

かどうかを検証した。この共培養モデル系で，Vari-

まず，個々の細胞の ER 活性を視覚的に評価するた
めに，MCF‑7乳癌細胞株に Estrogen response ele-ant 細胞株の AI 剤感受性は親株のＥ10細胞に比べ有意に低いことが確認された。

ment（ERE）‑green ﬂuorescent protein（GFP）遺以上より，AI 治療を想定した培養条件からアンド伝子を導入した安定細胞株を作成した（Ｅ10細胞）。

ロゲン代謝産物依存性細胞増殖機構を持つ細胞株を樹AI 剤治療環境の in vitro モデル系としてステロイド

立し，HSD3B1発現の上昇，AR 発現の低下が，アン枯渇培地に TS を添加した培養条件，すなわちエスト

ドロゲン代謝産物依存性の ER 活性化および細胞増殖

ロゲン枯渇かつアンドロゲン過剰となった培養条件をを増強することで，AI 剤感受性を低下させると考え用いた。この培養条件でＥ10細胞を３カ月間培養し，られた。

複数の AI 剤耐性クローンをピックアップした。種々
No. 5, 2014321

審査学位論文要旨（論文審査の結果の要旨）

シグナルの抑制の意義について検討した。

閉経後ホルモン感受性乳癌において，アロマターゼ

４．ヒト乳癌組織由来の間質細胞とこれらの細胞株と阻害剤（AI 剤）は乳癌局所でのエストロゲン産生をの共培養モデル系を用いて Variant 細胞株が AI 剤

抑制し，エストロゲン受容体（ER）の活性を阻害し，耐性を示すかどうかを検証した。

その際に相対的に過剰となったアンドロゲンがアンド

その結果，花村は以下の結論を得た。

ロゲン受容体（AR）を介して腫瘍抑制的に働くこと

１．Variant 細胞株においてアンドロゲンである TS

でその作用を発揮する。3β‑hydroxysteroid dehy-

や DHT，その代謝産物である3β‑diol は，エスト

drogenase type 1（HSD3B1）によりジヒドロテスト

ロゲン応答遺伝子を誘導し，親株のＥ10細胞に比べステロン（DHT）からアロマターゼ非依存的に産生高い ER 活性および細胞増殖をもたらすことが確認される5α‑Androstane‑3β，17β‑diol（3β‑diol）はされた。

エストロゲン活性を持ちホルモン感受性乳癌の増殖を

２．Variant 細胞株では，HSD3B1の発現上昇，AR促進することが報告されている。今回，ホルモン感受発現の低下が認められ，アンドロゲンから3β‑diol

性乳癌細胞株を用いてこのようなアンドロゲン代謝産への代謝促進，AR を介するシグナル伝達の減弱が，物依存性の細胞増殖機構が AI 剤耐性機構として働く

エストロゲン枯渇，アンドロゲン過剰の条件への適かどうかを検証した。

応を促進していると考えられた。

まず MCF‑7乳癌細胞株に Estrogen response ele-

３．親株であるＥ10細胞に HSD3B1遺伝子を過剰発

ment（ERE）‑green ﬂuorescent protein（GFP）遺現させた場合，あるいは AR 阻害剤を作用させた伝子を導入したＥ10細胞を作成し，これをステロイド

場合に，Variant 細胞株同様にエストロゲン枯渇，枯渇培地にテストステロン（TS）を添加した培養条

アンドロゲン過剰条件への適応が誘導されることが件，すなわち AI 剤治療を想定した培養条件で長期培確認された。

養し，５つの耐性株クローンを得た。種々の培養条件

４．Variant 細胞株の AI 剤感受性は親株のＥ10細胞における各クローンの GFP 発現率をモニタリングし，に比べ有意に低いことが確認された。

アンドロゲン代謝産物依存性の ER 活性上昇を示すク

これらの結果により，本研究では，AI 剤治療を想

ローンを選択し２つの Variant 細胞株を樹立した。

定した培養条件からアンドロゲン代謝産物依存性細胞

得られたVariant細胞株を用い次のような実験を行っ増殖機構を持つ細胞株を樹立し，その Variant 細胞

た。

株を用いた実験から，HSD3B1発現の上昇，AR 発現

１．Variant 細胞株において各種ステロイド投与時のの低下が，アンドロゲン代謝産物依存性の ER 活性化

細胞増殖，ER 活性およびエストロゲン応答遺伝子

および細胞増殖を増強することで，AI 剤感受性を低の発現について親株との比 検討を行った。

下させることが示唆された。よって，主査，副査は一２．各細胞株における各種ステロイド代謝酵素，ホルモンレセプターの発現量を比 検討した。

致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

３．親株のＥ10細胞における HSD3B1過剰発現，AR

Risk factors for pancreatic stone formation in autoimmune pancreatitis over a long‑term course（自己免疫性膵炎の長期経過における膵石形成の危険因子）
丸

山

真

弘

（論文の内容の要旨）

う特徴的な免疫異常が認められ，現在では，全身性疾【背景と目的】自己免疫性膵炎（以下 AIP）は膵腫大

患「IgG4関連疾患」の膵病変と認識されるようになっとびまん性膵管狭細像を呈する特異な膵炎で，膵病変た。急性期の病態として捉えられていた AIP が長期

局所に著明なリンパ球・形質細胞浸潤を認め，ステロ

経過で膵石灰化をきたすことが明らかとなり，通常のイド治療に良好に反応するため，発症に自己免疫学的慢性膵炎に移行しうる可能性も示唆されている。今回機序が想定されている疾患である。AIP は血中 IgG4の研究目的は，AIP 長期経過観察例における膵石形

値の上昇と病変局所に IgG4陽性形質細胞の浸潤とい成の危険因子を明らかにすることである。

322

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨【対象と方法】1998年８月から2011年７月に当科で診（論文審査の結果の要旨）

断・治療された AIP 患者93名の内，３年以上経過観

自己免疫性膵炎（以下 AIP）は，従来は急性期の察が可能であった69名（平均観察期間：91カ月）を対病態として捉えられていたが，長期経過で膵石灰化を象とした。検討項目として，患者背景（観察期間，ア来すことが報告され，通常の慢性膵炎に移行しうる可ルコール摂取量，ステロイド治療，再燃），血液所見能性も示唆されてきた。AIP における膵石形成の危（ Amylase， HbA1c， IgG， IgG4，Ｃ3，Ｃ4， sIL2

険因子や機序に関しては不明である。そこで丸山らは，，画像所見（膵石，CT 検査による膵腫大，R，CIC）AIP の長期経過における膵石形成機序として，１）

内視鏡的逆行性膵管造影検査による膵管狭細の有無）

膵炎発作後の，膵実質に対する本症特有の障害や高度を設定し，膵石形成との関連について検討した。診断な炎症性組織障害や膵壊死，２）膵管狭窄の後遺的変時に膵石が存在した17例のうち経過で膵石が増加・増化による膵液うっ滞の２つの可能性を想定し，信大病院

大した８例と，新規に膵石が出現した20例を加えた28

消化器内科で３年以上経過観察が可能であった AIP

例を膵石形成群とし，経過中膵石を認めなかった32例

69例を対象に，膵石形成群と非形成群の２群に分け，を膵石非形成群とし，この２群間で後ろ向きに比 検

後向きに患者背景，血液検査，画像検査を比 検討し

討した。

た。

【結果】２群間での単変量解析において，患者背景は，その結果，丸山らは以下の結果を得た。

再燃が膵石形成群に多い傾向を認めたが統計学的な

１．AIP 69例の長期経過で，ａ）膵石の新規出現は

有意差はなく，その他の背景も両群間で有意差を認

20例，ｂ）診断時に膵石を認め経過で増加・増大はめなかった。血液所見は，いずれも両群間で有意差８例，ｃ）診断時に膵石を認め経過で変化なしは９を認めなかった。画像所見は，AIP診断時の膵頭部例であり，本症は長期経過で膵石形成する病態と考腫大（Ｐ＝0.006）と，膵頭部のWirsung管とSantorini

えられた。

管の両者の膵管狭細所見（Ｐ＝0.010）が，膵石形成

２．患者背景において，観察期間およびアルコール摂群で有意に多く認めた。多変 量 解 析 で は 膵 頭 部 の取は膵石形成と関連していなかった。有意差はない

Wirsung 管と Santorini 管の両者の狭細所見が膵石が，再燃は膵石形成と関連性が示唆された。

形成と有意に関連していた（odds ratio 4.4，95％

３．血液検査において，AIP の活動性マーカーと考。また，ス
conﬁdence interval 1.3‑15.5，Ｐ＝0.019）

えられる項目（IgG，IgG4，Ｃ3，Ｃ4，sIL2‑R）はテロイド治療後においても Wirsung 管と Santorini

膵石形成と関連性はなく，本症特有の活動性・炎症管の両者の後遺的狭細所見が膵石形成群で多く認めらの程度と膵石形成との関連性は確認できなかった。

れた。

４．画像検査において，膵石形成の危険因子として，【考察】膵頭部腫大による Wirsung 管と Santorini 管

単変量解析にて診断時の① 膵頭部腫大，② 膵頭部の両者の狭細所見が長期に持続することによって，よの Wirsung 管と Santorini 管の両者狭細が同定さり上流膵管内の膵液うっ滞が生じ，結果として膵石形

れ，多変量解析にて後者（OR 4.4，p＝0.006）が成にいたると考えられた。膵炎発作後の膵壊死が膵石同定された。

灰化に関連している可能性も想定されたが，膵酵素や

５．膵石形成群では，ステロイド治療後にも後遺的なAIP の各種活動性マーカー値と膵石形成とは関連を① 膵頭部腫大，② 膵頭部の Wirsung 管と Santor-

認めず，また臨床的に強度の膵炎発作を呈する症例も

ini 管の両者狭細を認める症例が多かった。

認めず，このような機序は消極的と考えられた。今回

６．① 膵頭部腫大，② 膵頭部の Wirsung 管と Santo-の検討では，結果としてステロイド治療による膵石形

rini 管の両者狭細膵が，膵全体の膵液うっ滞を生じ，成予防効果は示せなかったが，今後の検討課題と考える。

長期経過で膵石形成を引き起こすと考えられた。
７．AIP の長期経過において，膵石非形成例に比べ，【結語】AIP における膵石形成の有意な危険因子は，

主膵管内膵石を認める高度な膵石形成例では，血清膵頭部の Wirsung 管と Santorini 管の両者の狭細所

Amylase 値および HbA1c 値の変化が目立つ傾向見であり，主に膵液うっ滞が膵石形成を引き起こすとにあったが，有意な関連性は確認できなかった。

考えられた。

これらの結果より，AIP は長期経過で膵石形成を来す病態であることが明らかとなった。さらに，AIP

No. 5, 2014323

審査学位論文要旨の長期経過における膵石形成の危険因子として，①こすという機序が考えられた。本研究は，AIP の長膵頭部腫大，② 膵頭部の Wirsung 管と Santorini 管

期経過における膵石形成の実態ならびに機序の解明にの両者狭細が同定され，これらは，膵頭部の膵管狭窄寄与した。よって，主査，副査は一致して本論文を学が膵全体に膵液うっ滞を生じさせ，膵石形成を引き起位論文として価値があるものと認めた。

Lipocalin2 enhances the matrix metalloproteinase‑9 activity and invasion of extravillous trophoblasts
under hypoxia（Lipocalin2は低酸素環境で MMP‑9活性と絨毛外トロフォブラストの浸潤を亢進
させる）
小

原

（論文の内容の要旨）

久

典

機能の解析を行った。

【目的】絨毛外トロフォブラスト（以下 EVT）は，【結果】LCN2は妊娠初期絨毛において，EVT，サイ

妊娠初期に脱落膜や子宮筋層に浸潤し，らせん動脈のトトロフォブラストと脱落膜細胞に強い発現を認めた再構築に関与し，正常な妊娠の維持に重要な役割を果が，シンシチオトロフォブラストでは発現を認めなたすと考えられている。一方，EVT の浸潤不良は妊かった。分離培養した EVT と JAR 細 胞 に お い て，

娠高血圧症候群や子宮内胎児発育遅延などの疾患に関

rLCN2添加により，増殖能は変化しなかったが，浸連すると考えられている。これまで EVT の浸潤調節

潤能と M MP‑9活性は共に用量依存的に増加し，500には Matrix Metalloproteinase（以下 MMP）
，酸素

ng/ml 添 加 で 浸 潤 能 は EVT で325％（Ｐ＜0.01），

濃度，内分泌因子やサイトカインなどが関与している

JAR 細胞で215％（Ｐ＜0.01）に増加し，M MP‑9活と報告されているが，その調節機序ははっきりと分かっ

性は EVT で169％，JAR 細胞で147％に増加した。

ていない。Lipocalin2（以下 LCN2）は鉄イオン輸送，また，LCN2発現抑制により，JAR 細胞の浸潤能はバクテリアの増殖抑制などの様々な機能が報告されて26％まで，MMP‑9活性は51％まで低下したが，500いる分泌タンパクであるが，M MP‑9の安定化・作用

ng/ml の rLCN2添加により浸潤能は61％まで回復し増強や腫瘍細胞の浸潤能亢進にも関わることが報告さた。酸素濃度の影響では，EVT と JARの両細胞ともれている。またLCN2は，妊娠中の血中濃度増加や妊娠

低酸素ほど LCN2 mRNA 発現，MMP‑9活性は増加

後期のトロフォブラストでの発現も報告されているが，し，浸潤能も亢進した。特に JAR 細胞の浸潤能は，その機能や分布は不明である。そこで今回，妊娠初期

20％酸素下に比絨毛での LCN2の発現や機能，特に EVT の浸潤調節0.01）に増加したが，LCN2発現抑制により逆に12への関与と，妊娠初期の子宮内に特徴的な低酸素環％まで著明に抑制された。さらに，この２％酸素下の境・酸素濃度勾配との関連に関して検討した。

LCN2発現抑制 JAR 細胞に500ng/ml の rLCN2添加【方法】文書により同意を得て，人工妊娠中絶術によを行うと，浸潤能は79％まで回復した。

り得られた合併症のない妊娠７〜10週の妊娠初期絨毛【結論】本研究により，LCN2は妊娠初期絨毛におい組織を，以下の実験に用いた。まず，ホルマリン固定て，特に EVT，サイトトロフォブラスト，脱落膜細した妊娠初期絨毛での LCN2発現を免疫組織染色に胞で強い発現を認めることが示された。また，培養細て検討した。次に絨毛組織から分離培養した EVT と，胞の実験結果から，LCN2が EVT の浸潤能を亢進さ

EVT 様の性質を示す絨毛癌細胞株 JAR での LCN2

せ，その作用は MMP‑9活性増強を介していること発現を RT ‑PCR，蛍 光 免 疫 染 色 と western blot 法が示唆された。さらに LCN2は低酸素環境におけるで確認した。さらにこれらの細胞において組み換え

EVT の浸潤能亢進にも関与していると考えられた。

LCN2（rLCN2）添 加 や 特 異 的 shRNA 導 入 に よ る

以上より，LCN2は妊娠初期の EVT の浸潤調節に重LCN2発 現 抑 制 を 行 い，LCN2の 浸 潤 能，増 殖 能 と要な役割を果たしていると考えられた。

MM P‑9活性への影響を，matrigel invasion assay，（論文審査の結果の要旨）

して，２％酸素下で211％（Ｐ＜WST‑1assayと gelatin gel zymographyにてそれぞ絨毛外トロフォブラスト（以下 EVT）は，妊娠初れ検討した。同様の方法を用いて，21％，５％，２期胎盤形成過程において脱落膜や子宮筋層に浸潤し，％の異なる酸素環境下における LCN2の発現変化と正常な妊娠維持に重要な役割を果たすと考えられる。

324

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

一方，EVT の浸潤調節機序は十分には解明されていな い。Lipocalin2（LCN2）は，M M P‑9の 安 定 化 な

１．LCN2は，妊娠初期の EVT，サイトトロフォブ
ラストと脱落膜細胞に強い発現を認めた。

ど種々の作用が報告され，妊娠中の血中濃度増加や妊２．LCN2は EVT 細胞，JAR 細胞で発現を認めた。

娠後期のトロフォブラストで発現も報告されているが，３．これらの細胞の増殖能に LCN2は影響しなかっ妊娠初期絨毛での発現や機能は不明である。そこで小原久典は，妊娠初期絨毛での LCN2の発現や機能，
特に EVT の浸潤調節への関与の検討を行った。まず，
妊娠７〜10週の妊娠初期絨毛組織における LCN2発
現を免疫組織染色にて検討し，妊娠初期絨毛組織からた。
４．浸潤能，MM P‑9活性は rLCN2添加により亢進
し，LCN2発現抑制により低下した。
５．酸素濃度低下は EVT 細胞，JAR細胞での LCN 2
発現，M MP‑9活性，浸潤能を亢進させた。

分離培養した EVT 細胞と，EVT 様の性質を示す絨

６．酸素濃度低下による JAR 細胞の浸潤能亢進は

毛癌細胞株 JAR での LCN2発現を RT ‑PCR，west-

LCN2発現抑制により著明に抑制され，rLCN2添加

ern blot 法で確認した。これらの細胞で組み換え LC-

により回復した。

N2（rLCN2）添加や shRNA 法による LCN2発現抑本研究は妊娠 初 期 絨 毛，特 に EVT で の LCN2発制を行い，LCN2の浸潤能，増殖能，M MP‑9活性へ現を示し，LCN 2が M MP‑9の活性調節等を介しての影響を matrigel invasion assay，WST‑1 assayとEVT 浸潤調節に関与することを初めて示した。さら

Gelatin gel zymographyにて検討した。同様の方法に，妊娠初期胎盤形成過程における子宮内腔の低酸を用いて，21％，５％，２％の酸素環境下における

素環境・酸素濃度勾配が，LCN 2発現調節を介して

LCN2発現変化と浸潤能，M MP‑9活性への影響を解EVT の浸潤調節を行っている可能性を初めて示した析した。

論文である。よって，主査，副査は一致して本論文をその結果，以下の成績を得た。

学位論文として価値があるものと認めた。

Ubiquinol‑10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in SenescenceAccelerated Mice（還元型コエンザイムＱ10の老化促進モデルマウス（SAMP1）への投与
はミトコンドリア機能を活性化し，老化を遅延する）
田耕（論文の内容の要旨）投与による老化や老化関連疾患の抑制メカニズムの解【背景・目的】コエンザイムＱ10（CoQ10）はミトコ

明をめざし，ubiquinol‑10投与の効果が最も高かった

ンドリアでエネルギー生産に関与する電子伝達系の重肝臓と加齢性難聴に直接関連する内耳について，分子要な因子であり，強力な脂溶性抗酸化物質でもある。

生物学的手法により解析した。

加齢に伴い血漿や組織中の CoQ 濃度が減少するため，【方法】SAMP1マウス雌（日本エスエルシー）に１，

抗老化サプリメントとして使用されてきた。しかしそ

７，13カ月齢から，0.3％ ubiquinol‑10含有 CE‑2飼の作用機序についてはほとんど解明されていない。

料を自由摂取させた（それぞれ幼若，成熟，高齢群）。

CoQ10は 生 体 内 で は 大 部 分 が 還 元 型 CoQ10（ubi-

体重，試料摂取量，老化度評点を毎月測定し，２，７，quinol‑10）として存在するが，従来は酸化型 CoQ1013および19月齢でマウスを屠殺して組織を摘出した。

のみがサプリメントとして使用可能であった。老化促

また，HepG2細胞に３μM の ubiquinol‑10を添加し，進モデルマウス SAMP1は短寿命と促進老化を特徴と48時間培養した。肝臓，内耳，および HepG2細胞のするモデルマウスで，加齢性難聴や老化アミロイドー

酸化ストレスやミトコンドリア機能に関連するマーカ

シス等の老化関連疾患を発症する。促進老化の原因とーや遺伝子の発現を解析した。

して，ミトコンドリア機能の低下や加齢に伴う高酸化【結果・考察】１）加齢性難聴：SAMP1マウスの聴ストレス状態が指摘されて来た。田らは，ubiquinol‑

性脳幹反応を測定した結果，対照群では７月齢で高音10を補給することにより，SAMP1マウスの促進老化

域障害が全個体に出現したが，幼若期 ubiquinol‑10が遅延することを既に明らかにしている（Yan J et

開始群では障害程度が低く，19月齢でも高音域の聴力。本研究では，ubiquinol‑10
al. Exp Gerontol 2006）を保持するマウスが存在した。また，成熟期や高齢期

No. 5, 2014325

審査学位論文要旨

開始群では高音域障害を回復できなかったが，中低音学的手法により解析した。

域の聴力の保持が認められた。２）酸化ストレスマー

SAM P1雌マウスに１，７，13カ月齢から，0.3％

カー；加齢によって増加する酸化脂質量（マロンジア

ubiquinol‑10含有 CE‑2飼料を自由摂取させた。体重，

ルデヒド），酸化タンパク質（カルボニル化タンパク

飼料摂取量，老化度評点を毎月測定し，２，７，13およ質），DNA 損傷頻度（AP site）が ubiquinol‑10投与

び19カ月齢でマウスを屠殺して組織を摘出した。また，群では有意に減少し，高齢期からの投与でも効果が得

HepG2細 胞 に ３μM の ubiquinol‑10を 添 加 し，48時られた。加齢に伴い悪化する抗酸化指標 GSH/GSSG

間培養した。肝臓，内耳，および HepG2細胞の酸化も ubiquinol‑10投与群では改善していた。３）ミト

ストレスやミトコンドリア機能に関連するマーカーやコンドリア機能；Sirtuin 遺伝子群やミトコンドリア

遺伝子の発現を解析した。

機能関連遺伝子（Pgc1a，Ppara 等）の発現量とそれらのタンパク質 量 の 加 齢 に 伴 う 有 意 な 減 少 は ubi-

その結果，田 耕は次の結論を得た。
１．SAMP1マウスは ubiquinol‑10を補給することにquinol‑10投与によって改善された。また，脱アセチよりル化酵素である Sirtuin タンパク質の活性化により

１）老化度評点の加齢に伴う上昇が抑制された。

PGC‑1αやミトコンドリアの抗酸化関連因子 SOD2２）加齢性難聴の進行を軽減した。

や IDH2のアセチル化程度が減少した。さらに ubi-

３）加齢に伴い増加する酸化脂質量，酸化タンパク

quinol‑10投与によりミトコンドリア電子伝達系の複質や DNA 損傷頻度が減少し，GSH/GSSG も改合体善していた。

， の機能改善が認められ，ミトコンドリア数，

ATP 生産量，ミトコンドリアタンパク質調整因子４）Sirtuin 遺 伝 子（Sirt1，Sirt3 ）や ミ ト コ ン ド（NRF2，TFAM ）などの加齢に伴う減少が抑制されリア機能関連遺伝子（Pgc1a 等）の発現量と，そた。

れらのタンパク質量の加齢に伴う減少が，改善さ

HepG2細胞への ubiquinol‑10投与によって，ミトれていた。また，PGC‑1αや，ミトコンドリア

コンドリア量の増加，酸素消費量の増加，ROS 生産で発現する抗酸化関連因子 SOD2，IDH2のアセの抑制，NAD/NADH 比の上昇が認められた。

チル化程度が減少した。さらに ubiquinol‑10投

PGC‑1α，Sirt1を介した ubiquinol‑10投与効果の与によりミトコンドリア電子伝達系の複合体，

メカニズムとして，PGC‑1α，Sirt1の上流因子であの機能改善が認められ，ミトコンドリア数，

る cAMP 量の増加と CREB，AMPK，LKB1のリン

ATP 生産量，ミトコンドリアタンパク質誘導因

酸化状態の亢進が認められた。

子（NRF2，TFAM ）などの加齢に伴う減少が以上の結果により，ubiquinol‑10の老化や加齢疾患抑制された。

抑制作用として，従来の直接的な抗酸化作用だけでは

２．HepG2細胞への ubiquinol‑10投与によって，ミなく，Sirt1，Sirt3，PGC‑1αなどを介したミトコン

トコンドリア数の上昇，酸素消費量の増加，ROS

ドリア機能の活性化による酸化ストレスの抑制という生産の抑制，NAD/NADH 比の上昇が認められた。

新しいメカニズムの重要性を示唆した。

また Sirt1や Adenylyl cyclase の阻害剤の投与は（論文審査の結果の要旨）

ubiquinol‑10の効果を抑制した。

コエンザイムＱ10（CoQ10）は ミトコンドリアで以上の結果により，ubiquinol‑10の老化や加齢疾患

エネルギー生産に関与する電子伝達系の重要な因子で抑制作用として，従来の直接的な抗酸化作用だけではあり，治療薬や抗老化サプリメントとして使用されてなく，Sirt1，Sirt3，PGC‑1αなどを介したミトコン

きた。しかし抗老化効果や，その作用機序については

ドリア機能の活性化による酸化ストレスの抑制というほとんど解明されていない。我々は，加齢に伴い減少

新しいメカニズムの重要性を示唆した。このような田する還元型 CoQ10（ubiquinol‑10）を補給すること

耕の研究成果は，ubiquinol‑10による老化/加齢疾患により，老化促進モデルマウス SAMP1の促進老化が抑制効果の新たなメカニズムの一端を明らかにした。

遅延することを明らかにしてきた。本研究では，ubi-

非常に重要であり，かつ意義あることと考えられた。

quinol‑10の加齢疾患抑制メカニズムの解明をめざし，よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とubiquinol‑10摂取によって CoQ の集積が最も高かっして価値があるものと認めた。

た肝臓と聴力に直接関連する内耳について，分子生物326

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

Clinical features of a new disease concept,IgG4‑related thyroiditis（IgG4関連甲状腺炎の臨床的特
徴）
渡

邉

貴

之

（論文の内容の要旨）

IgG4関連疾患の疾患特徴を有すものであり，IgG4関【目的】IgG4関連疾患は諸臓器に炎症や線維化をきた

連甲状腺炎として IgG4関連疾患に含有されうる病態

す全身性疾患であり，代表的な病変として自己免疫性であると考えられた。

膵炎，硬化性胆管炎，涙腺唾液腺炎，尿細管間質性腎（論文審査の結果の要旨）炎，後腹膜線維症がある。我々は以前，自己免疫性膵

IgG4関連疾患では甲状腺機能低下を多く合併する炎症例において甲状腺機能低下を有意に多く合併することが報告されている。IgG4関連疾患の代表的な病ことを報告し，また同様の報告は他施設よりもなされ変として自己免疫性膵炎，硬化性胆管炎，涙腺唾液腺ている。今回 IgG4関連疾患で認められる甲状腺機能炎，尿細管間質性腎炎，後腹膜線維症があるが，IgG4

低下が IgG4関連疾患に含有されうる病態か検討した。

関連疾患で認められる甲状腺機能低下が IgG4関連疾【方法】対象は IgG4関連疾患症例114例であり，主診患に含有されうる病態か検討した。

断の内訳は自己免疫性膵炎92例，M ikulicz 病15例，

IgG4関連疾患症例114例を対象とし，甲状腺機能低IgG4関連硬化性胆管炎７例であった。甲状腺機能低下・甲状腺自己抗体合併頻度，IgG4関連疾患活動性下・甲状腺自己抗体合併頻度，IgG4関連疾患活動性マーカー，ステロイド治療への反応性，甲状腺画像所

マーカー，ステロイド治療への反応性，甲状腺画像所

見，甲状腺病理所見を後ろ向きに比 検討した。

見，甲状腺病理所見を後ろ向きに比 検討した。
【結果】① 114例中22例（19％）に甲状腺機能低下

その結果，渡邉は次の結論を得た。
１．114例中22例（19％）に甲状腺機能低下（TSH＞（TSH＞４mIU/L）を認めた。22例中11例は顕在性甲

４mIU/L）を認めた。22例中11例は顕在性甲状腺状腺機能低下（FT4＜１ng/dL）であり，11例は潜在機能低下（FT4＜１ng/dL）であり，11例は潜在性性甲状腺機能低下（FT4 １ng/dL）であった。甲状甲状腺機能低下（FT4 １ng/dL）であった。甲状腺機能低下例では抗サイログロブリン抗体陽性または

腺機能低下例では抗サイログロブリン抗体陽性また

抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体陽性を半数に認めた。

は抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体陽性を半数に認め② 甲状腺機能低 下22例 と 甲 状 腺 機 能 正 常92例 の 血

た。

清学的比

では，甲状腺機能低下群において IgG，２．甲状腺機能低下22例と甲状腺機能正常92例の血清IgG4，免疫複合体，β2ミクログロブリンは有意に高学的比では，甲状腺機能低下群において IgG，値であり，Ｃ3は低値であった。③ ステロイド治療前IgG4，免疫複合体，β2ミクログロブリンは有意に後の TSH・FT4の評価が可能であった甲状腺機能高値であり，Ｃ3は低値であった。

低下10例において，TSH は治療後に有意に低下し

３．ステロイド治療前後の TSH・FT4の評価が可能（p＝0.005），FT4は有意に上昇した（p＝0.047）。④であった甲状腺機能低下10例において，TSH は治

顕在性甲状腺機能低下群，潜在性甲状腺機能低下群，療後に有意に低下し（p＝0.005），FT4は有意に上IgG4関連疾患における甲状腺機能正常群，甲状腺機昇した（p＝0.047）。

能が正常な他疾患の４群における甲状腺容積の比 で

４．顕在性甲状腺機能低下群，潜在性甲状腺機能低下

は顕在性甲状腺機能低下群の甲状腺容積は他群と比群，IgG4関連疾患における甲状腺機能正常群，甲して大きいという結果であった。⑤ IgG4関連疾患

状腺機能が正常な他疾患の４群における甲状腺容積

診断時に甲状腺癌が同時に診断された１例（甲状腺機の比 では顕在性甲状腺機能低下群の甲状腺容積が能正常）の甲状腺切除検体において，局所への IgG4

他群と比 して大きい結果であった。

陽性形質細胞浸潤（IgG4陽性形質細胞185個/HPF，

５．IgG4関連疾患診断時に甲状腺癌も同時に診断さ

IgG4/IgG 陽性細胞比64％）と濾胞構造の消失を認めれた１例（甲状腺機能正常）の甲状腺切除検体におた。

いて，局所への IgG4陽性形質細胞浸潤と濾胞構造【結論】IgG4関連疾患にみられる甲状腺機能低下はの消失を認めた。

No. 5, 2014327

審査学位論文要旨

これらの結果より IgG4関連疾患にみられる甲状腺うる病態であることが示唆された。よって主査，副査機能低下は IgG4関連疾患の疾患特徴を有すものであは一致して本論文を学位論文として価値があるものとり IgG4関連甲状腺炎として IgG4関連疾患に含有され認めた。

FunctionalRoles ofTransient Receptor PotentialMelastatin 8(TRPM8)Channels in theCold Stress‑
Induced Detrusor Overactivity Pathways in Conscious Rats（ラット冷えストレス誘発排尿筋過活動の機序における温度感受性受容体（TRPM8）の機能的役割の考察）
張（論文の内容の要旨）

雷0.1μmol/kg, BCTC inhibited the cold stress‑in-

Aims:To investigate functional roles of transient

duced detrusor overactivity.

receptor potential melastatin 8 (TRPM8) channels,

Conclusions:TRPM8 channels antagonist, BCTC,

we determined if TRPM 8 channel antagonist could

inhibited detrusor overactivity in rats sprayed with

inhibit the detrusor overactivityinduced bymenthol

menthol.Furthermore,the BCTC inhibited the cold

spray and low temperature.

stress‑induced detrusor overactivity. Therefore,

Methods:Two days prior to cystometric investiga-

TRPM8 channels expressing within the skin medi-tion, the bladder of 10‑week‑old Spague‑Dawley

ate detrusor overactivity elicited by menthol sprayrats were cannulated. After 20 min of baseline

and exposure to low temperature.

cystometry period at room temperature (RT :27±

（論文審査の結果の要旨）

2 ℃), the TRPM 8 channel antagonist, N‑(4‑tert‑

Previous studies showed that both cold stressbutylphenyl)‑4‑(3‑chloropyridin‑2‑yl)pi‑perazine‑1(Imamura, Neurourol Urodyn, 2008) and menthol‑carboxamide(BCTC),or vehicle,was administeredstimulation (Chen Z,Neurourol Urodyn,2010)elicit-

through a jugular vein catheter (n＝6). A 90%

ed detrusor overactivity in conscious rats. It ismenthol solution, which was TRPM 8 channel

reported that transient receptor potential melas-agonist, was sprayed onto rump to leg skin once

tatin 8 (TRPM 8) channels in skin and/or sensory

every 5 min for 20 min, and then cystometricneurons are activated by menthol and low tempera-

measurements were repeated.After a 30‑min recov-

ture(＜25〜28°
C)stimulation (M ckemyDD,Nature,

ery period, the rats were intravenously administer-

2002;Reid G, Nature, 2001).

ed 0.1μmol/kg BCTC. Five minutes later, theyIn this study, to investigate functional roles ofwere again sprayed,and then cystometric measure-transient receptor potential melastatin 8 (TRPM8)

ments were recorded.In separate experiments,can-in the cold stress‑ and menthol spray‑induced

nulated rats were intravenously administered 0.001,

detrusor overactivity, we determined if TRPM8

0.01, or 0.1μmol/kg BCTC (n＝6 each dose)at RT.

channel antagonist could inhibit the both stimuli‑

Five minutes later,they were transferred to expose

induced responses.

low temperature (LT : 4±2 ℃). During LT expo-

Two days prior to cystometric investigation, thesure, the cystometric measurements were recorded

bladder of 10‑week‑old Spague‑Dawley rats werefor 20 min.

cannulated. After 20 min of baseline cystometry

Results:The rats sprayed with menthol exhibited

period at room temperature (RT : 27±2 ℃), thethe decrease of the voiding interval, micturition

TRPM8 channel antagonist,N‑(4‑tert‑butylphenyl)‑volume, and bladder capacity. After treatment of

4‑(3‑chloropyridin ‑2‑yl)pi‑perazine‑1‑carbox-

BCTC,the rats did not show these decreases.Expo-

amide (BCTC), or vehicle, was administeredsure to LT elicited detrusor overactivity character-through a jugular vein catheter.

ized with decreased voiding interval, micturition

１．A 90% menthol solution was sprayed onto

volume,and bladder capacity.However,at 0.01 andrump to leg skin once every 5 min for 20 min,and328

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

then cystometric measurements were repeated.

detrusor overactivity that characterized with

After a 30‑min recovery period, the rats weredecreases of voiding interval,micturition volume,

intravenously administered 0.1μmol/kg BCTC.

and bladder capacity during LT exposure. How-

Five minutes later, they were again sprayed andever, the high dose, 0.01 and 0.1μmol/kg BCTC‑

cystometry recorded.

treated rats partially inhibited the cold stress‑

２．The cannulated rats were intravenously ad-

induced detrusor overactivity.

ministered 0.001,0.01,or 0.1μmol/kg BCTC.Five

３．TRPM8 channel antagonist, BCTC inhibited

minutes later,they were exposed to low tempera-

the detrusor overactivity induced by menthol‑ture (LT : 4±2 ℃) for 20 min of cystometric

spray on the skin. BCTC also inhibited the coldmeasurements.

stress‑induced detrusor overactivity.

Results from these study:

This study concluded that TRPM8 channels ex-

１．The rats sprayed with menthol exhibited thepressing within the skin mediate detrusor over-decrease of the voiding interval, micturition vol-activity elicited by menthol spray and exposure toume, and bladder capacity. After treatment of

low temperature.
主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値

BCTC, the rats did not show these decreases.
２．Both the BCTC‑free and 0.001μmol/kg BCTC‑があるものと認めた。

treated rats exhibited cold stress ‑induced

Synovial deposition of wild‑type transthyretin‑derived amyloid in knee joint osteoarthritis patients（変形性膝関節症患者の関節滑膜には野生型トランスサイレチン由来のアミロイドが沈着する）
高

梨

哲

生

（論文の内容の要旨）きに登録し調べた。手術で得られたおよそ直径１cm【背景と目的】野生型トランスサイレチン（transth-の滑膜組織をコンゴーレッド染色と免疫組織化学染色

は老人性全身性アミロイドーシス（senileyretin：TTR）

を施行した。TTR 由来のアミロイド陽性の場合は，systemic amyloidosis：SSA）の原因となり，高齢者

TTR 遺 伝 子 の ４ つ 全 て の エ ク ソ ン に つ い て 直 接において心臓の障害による緩徐進行性心不全を呈する。

DNA シークエンス法で塩基配列から変異の有無を調

野生型 TTR 由来アミロイドは内臓器官への沈着が起べた。術中の肉眼的な関節内所見や合併症，急性期反こらない場合でも腱や靱帯といった軟部組織への沈着

応蛋白や心電図・胸部Ｘ線の異常所見といった対象患が見られ，手関節では正中神経を圧迫し手根管症候群

者の臨床情報は診療録から検索した。本研究は丸の内を引き起こすとされる。この野生型 TTR 由来のアミ

病院の倫理委員会で承認され（No. 10‑01），各患者にロイドが軟部組織に優先的に沈着する明確な理由は不インフォームドコンセントを得て行われた。

明だが，関節滑膜も常に機械的ストレスに曝されてい【結 果】232名 か ら 得 た322の 検 体 を 解 析 し た。21名

る軟部組織の１つであり，機械的ストレスが重要な役（男性５名，女性16名，平均79.0±4.6歳）から得た26割を果たしているかもしれない。老いたサバンナモン

検体（8.1％）でアミロイド沈着を認め，これらは抗キーにおいて，関節滑膜への TTR アミロイド沈着にTTR 抗体で染色された。18名は不均一なアミロイドよる膝関節での出血性関節炎の報告がある。加齢に関の蓄積を滑膜上皮下の疎性結合織に認め，時に結節を連して関節軟骨と軟骨下骨の変性が起こっている変形

形成していた。残りの３名では脂肪織内の小血管壁へ性膝関節症患者の手術で得られたヒト検体において，の沈着が見られた。これらの患者は臨床経過も検査

滑膜への TTR アミロイド沈着の有無と組織学的所見，

データも術中の関節内所見にも特記すべきことはな

また臨床所見との関連性の有無を調べた。

かった。TTR 遺伝子の解析では変異を認めなかった。

【方法】丸の内病院で変形性膝関節症に対して関節形

TTR アミロイド陽性群と陰性群では患者年齢におい成術または人工関節置換術を行った患者232名（男性て有意差が見られた（79.0±4.6歳 vs. 72.4±9.3歳，31名，女性201名，平均73.0±9.1歳）を連続的に前向。ロジスティック回帰分析では加齢が膝関
p＜0.001）

No. 5, 2014329

審査学位論文要旨

節へのアミロイド沈着に関して独立した危険因子（オッ26検体（8.1％）でアミロイド沈着を認め，これら

ズ比71.02，95％信頼区間4.25‑1831.08）であった。

は全て抗 TTR 抗体で染色された。

【結論】野生型 TTR 由来アミロイドの滑膜組織への２．18名は不均一なアミロイドの蓄積を滑膜上皮下の沈着は長期間の機械的ストレスや SSA の部分症状と疎性結合織に認め，時に結節を形成した。残りの３考えられ，変形性膝関節症患者のおよそ８％に認めら

名では脂肪織内の小血管壁への沈着が見られた。

れた。滑膜へのアミロイド沈着による明らかな臨床経３．これらの患者では臨床経過，検査データ，術中の過の特徴は認められず，このタイプのアミロイドーシ

関節内所見の全てにおいて特記すべきことがなかっ

スが変形性膝関節症の進行を加速するか否かは不明で

た。

あった。

４．TTR 遺伝子の解析では変異を認めず，野生型（論文審査の結果の要旨）

TTR 由来のアミロイドが沈着していると考えられ野生型トランスサイレチン（transthyretin：TTR）

た。

は老人性全身性アミロイドーシス（senile systemic

５．TTR アミロイド陽性群と陰性群では患者年齢に

amyloidosis：SSA）の原因となり，高齢者においておいて有意差が見られた（79.0±4.6歳 vs. 72.4±

心臓の障害による緩徐進行性心不全を呈する。野生型

9.3歳，p＜0.001）。ロジスティック回帰分析では，

TTR 由来アミロイドは内臓器官への沈着が見られな

加齢が膝関節へのアミロイド沈着に関して独立したい場合でも腱や靱帯といった軟部組織への沈着を生じ，危険因子であった（オッズ比71.02，95％信頼区間

手関節では正中神経を圧迫し手根管症候群を引き起こ

4.25‑1831.08）。

すとされる。また老いたサバンナモンキーにおいては，

これらの結果より野生型 TTR 由来アミロイドの滑関節滑膜への TTR アミロイド沈着による膝関節での膜組織への沈着は長期間の機械的ストレスや SSA の

出血性関節炎の報告がある。加齢に関連して関節軟骨部分症状と考えられ，変形性膝関節症患者のおよそ８と軟骨下骨の変性が起こっている変形性膝関節症患者％に認められた。滑膜へのアミロイド沈着による明らの手術で得られたヒト検体において，滑膜への TTR

かな臨床経過の特徴は認められず，このタイプのアミアミロイド沈着の有無と組織学的所見，また臨床所見

ロイドーシスが変形性膝関節症の進行を加速するか否との関連性の有無を調べた。

かは不明であった。

その結果，高梨は次の結論を得た。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値

１．232名から得た322の検体を解析した結果，21名があるものと認めた。

（男性５名，女性16名，平均79.0±4.6歳）から得たReduced expression of αGlcNAc in Barrettʼs oesophagus adjacent to Barrettʼs adenocarcinoma― apossible biomarker to predict the malignant potential of Barrettʼs oesophagus（バレット腺癌に隣接するバレット食道では αGlcNAcの発現が低下している〜バレット食道の悪性化を予測するバ
イオマーカーとしての可能性）
岩

谷

勇

吾

（論文の内容の要旨）の糖鎖は胃癌の tumor suppressor として機能するこ【目的】バレット食道の悪性化を予測する有効なバイとが示唆されている（Karasawa et al.J.Clin.Invest.

オマーカーに関しては定まったものはない。非還元末

2012；122；923‑934）。しかしながら，バレット食道端に α1，４結合した‑アセチルグルコサミンを有における αGlcNAc の働きに関しては未だ明らかに‑グリカン（αGlcNAc）は胃粘膜の腺粘液細な っ て い な い。今 回 我々は バ レ ッ ト 食 道 に お け る胞から分泌されるユニークな糖鎖で，バレット食道の

αGlcNAc の発現低下がバレット腺癌の発癌に関わっ

腺粘液細胞内にも存在する。αGlcNAc の生合成に関ているのか検討を行った。

わる糖転移酵素である α1，4‑ ‑アセチルグルコサ【方法と結果】35例のバレット腺癌の病理標本に対し，

ミン転移酵素（α4GnT）を欠損した α4GnT ノック

αGlcNAc とそのコア蛋白である MUC6，さらに腸アウトマウスでは胃腺癌が自然発生することから，こ型化マーカーである CDX2の免疫染色を行った。コン

する

330

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

トロール群として，バレット腺癌を有さないバレット

胞内にも存在する。αGlcNAc の生合成に関わる糖転食道35例（食道扁平上皮癌で食道摘出が施行された症

移酵素である α1，4‑ ‑アセチルグルコサミン転移例）の病理標本に対し，同様の染色を行った。正常胃酵素（α4GnT）を欠損した α4GnT ノックアウトマ

粘膜では αGlcNAc と MUC6は同じ細胞で陽性とな

ウスでは胃腺癌が自然発生することから，この糖鎖はるが，バレット腺癌に隣接す る バ レ ッ ト 食 道 で は胃癌の tumor suppressorとして機能することが示唆

MUC6の発現に対しαGlcNAcの発現が有意に低下しされている（Karasawa et al. J. Clin. Invest. 2012；ており（Ｐ＝0.0025），αGlcNAcの発現低下がバレッ

122；923‑934）。しかしながら，バレット食道におけ

ト食道の発癌に関与している可能性が示唆された。特にるαGlcNAcの働きに関しては未だ明らかになっていその傾向は腫瘍径の小さい症例（20mm 以下），腫瘍ない。本研究ではバレット食道における αGlcNAcのの深達度の浅い症例（Ｍ癌）に強く見られ，αGlcNAc

発現低下がバレット腺癌の発癌に関わっているのか検は発癌の比 的早期の段階に関与していると推測され討を行った。

た。また，癌の粘液形質が腸型である症例，背景粘膜35例のバレット腺癌の病理標本に対し，αGlcNAcに腸上皮化生を伴う症例においても αGlcNAcの発現とそのコア蛋 白 で あ る MUC6，さ ら に 腸 型 化 マ ー

低下は顕著であり，αGlcNAcの発現低下とバレット食カーであるCDX2の免疫染色を行った。コントロール

道・腫瘍の腸型化には関連があると考えられた。さらに，群として，バレット腺癌を有さないバレット食道35

バレット腺癌に隣接する粘膜において，αGlcNAc

例（食道扁平上皮癌で食道摘出が施行された症例）のと腸型マーカーである CDX2の発現には負の相関がみ

病理標本に対し，同様の染色を行った。

られた。

その結果。岩谷は次の結論を得た。

【考察】バレット腺癌に隣接するバレット食道では

１．バレット腺癌の背景上皮では，本来 MUC6と同

αGlcNAc の 発 現 が 低 下 し て お り，αGlcNAc が バ等に染色される αGlcNAc の発現低下が見られた。

レット腺癌の発癌を予測するバイオマーカーとなりう

２．特にその傾向は腫瘍径の小さい症例（20mm 以る可能性が示唆された。胃酸や胆汁酸の逆流によって

下），腫瘍の深達度の浅い症例（Ｍ癌）に強く見らもたらされる食道の炎症がバレット食道の発癌に深くれた。

関与することは広く知られている。α4GnT ノックア

３．癌の粘液形質が腸型である症例，癌の背景粘膜にウトマウスでは IL‑1βなどの炎症性サイトカインや腸上皮化生を伴う症例においても同様の傾向がみら

CCL2などのケモカインの発現が上昇することが報告れた。

されているが，炎症を伴うバレット食道でも CCL2な

４．バレット腺癌に隣接する粘膜において，αGlcNAc

どのケモカインが上昇しており，αGlcNAc はこれらと腸型マーカーである CDX2の発現には負の相関がの炎症に対して抑制的に働くことで発癌を予防していみられた。

るものと推測された。また，バレット食道の腸型化はこれらの結果より，αGlcNAc はバレット食道の発発癌に深く関与すると考えられているが，腸型化マー癌に関与している可能性が示唆された。特に発癌の早カーである CDX2は IL‑1β・NF‑κB を介す る 経 路期の段階に，バレット食道の腸型化の経路と関係するで発現することが知られている。同様に α4GnT ノッ

ことによって関与している可能性が考えられる。また，クアウトマウスでも IL‑1βの発現が亢進しており，

αGlcNAcがバレット腺癌の発癌を予測するバイオマー

αGlcNAc が発現低下することで腸型化が促進され，カーとなりうる可能性が示唆された。よって，主査，

発癌が促進される可能性も示唆された。αGlcNAc が副査は一致して本論文を学位論文として価値があるもバレット腺癌の予測因子となりうるか，今後の前向きのと認めた。

検討が必要である。
（論文審査の結果の要旨）
バレット食道の悪性化を予測する有効なバイオマー
カーに関しては定まったものはない。非還元末端に
α1，４結合した ‑アセチルグルコサミンを有する ‑グリカン（αGlcNAc）は胃粘膜の腺粘液細胞から分泌されるユニークな糖鎖で，バレット食道の腺粘液細No. 5, 2014331

審査学位論文要旨

The relationship between α1‑adrenergic receptors and TRPM8 channels in detrusor overactivity
induced by cold stress in ovariectomized rats（卵巣摘出ラットにおける冷えストレス誘発排尿筋
過活動に対する α1アドレナリン受容体と皮膚発現する TRPM8受容体の関連についての検討）野

口

渉（論文の内容の要旨）

4.30±0.54：2.02±0.26（Ｐ＜0.01）であった。室温【目的】臨床上，閉経後の女性が頻尿や尿意切迫感な

下：低温下の膀胱容量（ml）はsham群0.83±0.08：

どの過活動膀胱様症状を訴え受診することを経験する。

0.63±0.10（Ｐ＜0.05）， OVX 群 が0.76±0.11：

エストロゲン欠乏と排尿機能の関連について諸家の報

0.43±0.07（Ｐ＜0.01）で あ っ た。Sham 群，OVX

告があるが，現時点では不明な点が多い。また寒冷季

群とも室温下と比節や急激な冷えなどの冷えストレスにより過活動膀胱短縮および膀胱容量の縮小が認められ，特にOVX群で症状が増悪することを日常生活で経験することがある。

は顕著であった。ナフトピジル投与の OVX 群の低温

我々は以前の研究で，ラットにおいて冷えストレスに下での排尿間隔は4.30±0.79，膀胱容量は0.75±0.14より排尿筋過活動が引き起こされる実験モデルを確立

で，生食投与の OVX 群と比 し冷えストレス誘発排している。今回，閉経後の冷えストレスによる過活動

尿筋過活動の抑制を認めた。

膀胱の機序解明を目的とし，卵巣摘出ラットを用いて【考察】エストロゲンは下部尿路症状に関与しており，検討した。

閉経後は排尿機能に変化が生じると言われている。わ【方法】30週齢雌 SD ラットを，卵巣摘出群（OVX，れわれは今回冷えストレスを与え OVX 群と sham 群n＝16）と偽手術群（sham，n＝８）に分け，卵巣摘に膀胱機能で差がないか検討した。室温下では OVX

出術あるいは偽手術を施行し，５週間後，両群とも室群では sham 群と比 し膀胱容量の縮小傾向は認めた

温下（28±２℃）で20分間の無拘束無麻酔膀胱内圧測が，有意差は認められなかった。しかし，冷えストレ

定 を 行 い，basal pressure，micturation pressure，スを与えると sham 群と比排尿間隔，排尿量，膀胱容量について評価を行った。

活動を生じ有意な排尿間隔の短縮，膀胱容量の縮小をその 後，OVX 群（n＝８）と sham 群（n＝８）に 生認めた。TRPM 8は25‑28℃で賦活化される温度感受

食を静注後低温下（４±２℃）に移行し，冷えストレ

性チャンネルであり，OVX 群では sham 群と比スを与え20分間膀胱機能を評価した。また OVX 群のmRNA およびタンパク質レベルで皮膚の TRPM 8がうち８匹に，ナフトピジル（1.0mg/kg）を静注し，増加しており，OVX 群の冷えストレスによる著明な

５分後に低温下に移行し20分間膀胱機能を評価した。

排尿筋過活動の一因と考えられた。皮膚はエストロゲ

その後，皮膚を摘出し，thermosensitive transientンによって影響を受けやすい臓器と考えられており，

receptor potential melastatin 8（TRPM 8）の発現を

エストロゲンの欠乏が何らかの経路で TRPM 8の増加

タンパクおよび mRNA レベルで測定し，OVX 群とにつながったと考えられる。またナフトピジルを投与

sham 群間で比 を行った。

することにより冷えストレスによる排尿筋過活動が抑【結果】皮膚の mRNA レベルの TRPM 8受容体の発制された。このことから，冷えストレスによる排尿筋

現 は OVX 群（2.36±0.61）が sham 群（0.83±0.12，

過活動の機序に αアドレナリン受容体が一部関与してＰ＜0.01）と比いると考えられた。

し有意に増加していた。また皮膚組し低温下では有意に排尿間隔のし OVX 群では排尿筋過し織に免疫染色を行い TRPM 8受容体陽性の面積の割合【結論】OVX 群では皮膚の TRPM 8受容体の発現がを画像解析した。OVX群（0.0063±0.0011）がsham増加した。OVX 群が sham 群と比群（0.0031±0.0005，Ｐ＜0.01）と 比し mRNAによる排尿筋過活動が著明である一因として考えられと同様に有意に増加していた。膀胱機能において室温た。またその機序の一部に，α1アドレナリン受容体

下，低温下とも sham群，OVX群間の basal pressure，が関与していると考えられた。

micturation pressure に有意な差は認められなかっ

し冷えストレス（論文審査の結果の要旨）た。室温下： 低 温 下 の 排 尿 間 隔（分）は sham群 がエストロゲン欠乏と排尿機能の関連について諸家の4.16±0.36：2.98±0.48（Ｐ＜0.05）， OVX 群 が報告があるが，現時点では不明な点が多い。泌尿器科332

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

学講座では冷えストレスによりラットが排尿筋過活動２．皮膚の mRNA レベルの TRPM 8受容体の発現はを生じることを報告し，病態モデルについて研究を重OVX 群が sham 群と比ねている。今回，閉経後の冷えストレスによる過活動

また皮膚組織に免疫染色を行い TRPM 8受容体陽性

膀胱の機序解明を目的とし，卵巣摘出ラット（OVXの面積の割合を画像解析し，OVX 群が sham 群と群）を用い，健常ラット（sham 群）と比比 し mRNA と同様に有意な増加を認めた。

し冷えス

し有意に増加していた。

トレスを与えると排尿機能にどのような影響を認める

以上より，卵巣摘出ラットの冷えストレスによる排か測定した。また温度感受性チャンネルの１つである

尿筋過活動は皮膚の TRPM 8の増加が一因であると考TRPM 8の皮膚における発現の変化について，そしてえられた。またナフトピジルの投与により排尿筋過活

α1アドレナリン受容体拮抗薬であるナフトピジルを動が抑制されたため，α1アドレナリン受容体が冷え投与することで排尿機能にどのような影響を及ぼすか

ストレスによる排尿筋過活動に何らかの経路で関与し検討した。その結果以下の結果を得た。

ていることが示唆された。この卵巣摘出ラットの冷え

１．排尿機能は Sham 群，OVX 群とも室温下と比ストレスによる排尿筋過活動と，皮膚の TRPM 8受容し低温下では有意に排尿間隔の短縮および膀胱容量

体増加の関連性を示し，今後 TRPM 8受容体拮抗薬がの縮小が認められ，特に OVX 群では顕著であった。

冷えストレスによる過活動膀胱治療薬になりうる可能

ナフトピジル投与の OVX 群の低温下での排尿は，性を示唆した論文を主査，副査は一致して本論文を学

生食投与の OVX 群と比 し冷えストレス誘発排尿位論文として価値があるものと認めた。

筋過活動の抑制を認めた。

Loss of gastric gland mucin‑speciﬁc O‑glycan is associated with progression of diﬀerentiated‑typeadenocarcinoma of the stomach（胃腺粘液に特異的な ‑グリカンの消失は分化型胃癌の進行に
関与する）
白

津

和

夫

（論文の内容の要旨）生じることが明らかとなり，αGlcNAc の消失が胃癌【背景と目的】免疫組織化学的手法の進歩により粘液発生のトリガーとなっている可能性が示唆された。こ

形質による胃癌の分類が可能となり，胃癌の粘液形質れまでヒトの胃癌における αGlcNAc 消失の有無とと臨床病理学的パラメータや生存率との相関について

臨床病理学的因子との相関を検討した報告はない。その検討がなされている。特に胃型粘液細胞のマーカー

こで本研究では，胃癌の病理標本において，従来用いとして MUC5AC および M UC6を，また腸型粘液細られている粘液形質のマーカーである MUC5AC，胞のマーカーとして M UC2および CD10を対象に，こM UC6，M UC2，CD10に対する抗体を用いた免疫組

れらマーカーの発現の有無と腫瘍の進行や生存率との織化学的分析に加え，αGlcNAc に対する特異抗体で相関が報告されており，粘液形質の分析は胃癌の進行ある HIK1083抗体を用いた免疫組織化学的分析を行や予後を予測する上で重要な手法の一つであると考えうことで，αGlcNAc の消失と臨床病理学的パラメーられる。一方，胃粘膜の深層から分泌される腺粘液にタおよび生存率との相関を検討した。

は非還元末端にα1，４結合した‑アセチルグルコサ【方法】2002年から2005年に相澤病院外科で胃癌に対ミン（αGlcNAc）残基を有するユニークな ‑グリカする手術を行われた214例の病理標本につき，MUC5ンが存在し，それらの大部分はそのコアタンパクであAC，M UC6，MUC2，CD10および αGlcNAc の発現

る MUC6に結合している。αGlcNAc は Helicobacterを免疫組織化学的に分析し，臨床病理学的パラメータ

pylori（H.pylori）の成長と運動能を抑制することが示

および癌特異的５年生存率との関連を検討した。

されているが，αGlcNAc の生合成を触媒する糖転移【結果】MUC6を発現した102症例のうち55症例（53.9

酵 素，α1，4‑N ‑acetylglucosaminyltransferase％）で αGlcNAc の発現を認めなかった。分化型胃（α4GnT）をコードするA4gnt遺伝子のノックアウト

癌では MUC6を発現した54症例のうち33症例（61.1

マウスでは，H.pylori感染がない状況でもhyperplasia‑％）において αGlcNAc が陰性であり，αGlcNAc のdysplasia‑carcinoma sequence により分化型胃癌が消失は分化型癌において壁深達度（ ＝0.009），病期

No. 5, 2014333

審査学位論文要旨（＝0.009），静脈侵襲（ ＝0.009）と有意に相関し胃癌が生じることが明らかとなり，αGlcNAc の消失ていた。また MUC6陽性の分化型胃癌患者のうち，が胃癌発生のトリガーとなっている可能性が示唆され

αGlcNAc 陰性の腫瘍を有する患者は αGlcNAc 陽性た。本研究では，胃癌の病理標本において，従来用いの腫瘍を有する患者と比 して，有意に低い癌特異的られている粘液形質のマーカーである MUC5AC，５年生存率を示した（ ＝0.048）。一方，未分化型胃癌

M UC6，M UC2，CD10に 加 え，αGlcNAc に 対 し 免

では，M UC6を発現した48症例中22症例（45.8％）で

疫組織化学的分析を行うことで，αGlcNAc の消失とαGlcNAc の発現が認められなかったが，αGlcNAc

臨床病理学的パラメータおよび生存率との相関を検討の消失と臨床病理学的パラメータおよび生存率との相した。

関は認められなかった。粘液マーカーでの分析では，その結果，白津は次の結論を得た。

分化型胃癌において MUC6陰性の腫瘍は MUC6陽性

１．分化型胃癌ではMUC6を発現した54症例のうち33の腫瘍と比 して有意に壁深達度が深く（ ＜0.001），

症例において αGlcNAc が陰性であり，αGlcNAc

リンパ節転移の頻度が高く（ ＝0.03），病期が進行しての消失は分化型癌において壁深達度，病期，静脈侵おり（ ＝0.014），リンパ管侵襲（ ＜0.001）と静脈侵襲襲と有意に相関していた。また MUC6陽性の分化（ ＜0.001）の頻度が高く，腫瘍径が大きい（ ＝0.01）

型胃癌患者のうち，αGlcNAc 陰性の腫瘍を有する

傾向が認められた。また MUC2陰性の分化型胃癌は患者は αGlcNAc 陽性の腫瘍を有する患者と比MUC2陽性の癌と比 して有意に静脈侵襲の頻度が高して，有意に低い癌特異的５年生存率を示した。

かった（ ＝0.03）。しかし分化型癌において，MUC6

２．未分化型胃癌では，MUC6を発現した48症例中22および MUC2を含む粘液マーカーの発現の有無は癌症例で αGlcNAc の発現が認められなかったが，特異的５年生存率と有意には相関していなかった。未αGlcNAc の消失と臨床病理学的パラメータおよび分化型癌では粘液マーカーの発現と臨床病理学的パラ

生存率との相関は認められなかった。

メータおよび生存率との相関は認められなかった。

３．分化型胃癌においてMUC6およびMUC2の発現は【結論】M UC6陽性の癌細胞における αGlcNAc の消いくつかの臨床病理学的パラメータと相関を認めた。

失が，分化型胃癌の進行と予後に有意に相関している

しかし分化型癌において，MUC6および MUC2をことが示された。粘液マーカーのうち MUC6の発現含む粘液マーカーの発現の有無は癌特異的５年生存低下は腫瘍の進行と有意に相関すると考えられたが，率と有意には相関していなかった。

予後との相関は明らかでなかった。よって，分化型胃４．未分化型癌では粘液マーカーの発現と臨床病理学

癌患者においては，M UC6に加えて αGlcNAc の発的パラメータおよび生存率との相関は認められな現を免疫組織化学的に分析することが，腫瘍の進行やかった。

予後を予測する上で重要であると考えられた。

以 上 の 結 果 よ り，MUC6陽 性 の 癌 細 胞 に お け る（論文審査の結果の要旨）

αGlcNAc の消失が，分化型胃癌の進行と予後に有意

胃粘膜の深層から分泌される腺粘液には非還元末端にに相関していることが示された。分化型胃癌患者におα1，４結合した ‑アセチルグルコサミン（αGlcNAc）

いては，MUC6に加えて αGlcNAc の発現を免疫組残基を有する‑グリカンが存在し，それらの大部分

織化学的に分析することが，腫瘍の進行や予後を予測

はそのコアタンパクである MUC6に結合している。

する上で重要であると考えられた。よって主査，副査

αGlcNAc の生合成を触媒する糖転移酵素 α1，4‑N ‑は一致して本論文を学位論文として価値があるものとacetylglucosaminyltransferase（α4GnT）を コ ー ド

認めた。

する A4gnt 遺伝子のノックアウトマウスでは分化型

Downregulation of the microRNA biogenesis components and its association with poor prognosis in
hepatocellular carcinoma（肝細胞癌におけるマイクロ RNA 生合成因子の制御と予後との関連）
北

川

敬

之

（論文の内容の要旨）者数の上位を占め，肝炎ウイルス感染・飲酒・肥満と【背景と目的】肝癌は本邦あるいは世界的にも癌死亡

いった背景因子が知られている。しかしその発生や悪334

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

性化の詳細な分子機構は完全には解明されていない。

ピジェネティックな制御を受けていることが示された。

本 研 究 で は 肝 癌 に お け る miRNA 生 合 成 に 関 わ る【結論】miRNA 生合成因子は非ウイルス性の肝癌に遺伝子（miRNA生合成因子（miRNA‑biogenesis‑

おいてしばしば低下しており，患者の予後に関連する）の発現変化とその分子機
related（miRBir）gene）

だけでなく，肝癌発症のリスク因子がヒストンのメチ

構，更に肝癌発症に関わる背景因子・臨床病理像・予ル化といったエピジェネティックなメカニズムにより後との関連について検討を行った。

miRNA 発現低下に影響を及ぼす可能性が示唆された。

【方法】1998年12月から2010年３月までの期間に国立

この新しいメカニズムの発見は，今後の肝がんにおけがん研究センター中央病院で切除された肝癌検体47例

る診断や予防，予後の評価につながることが期待され（腫瘍部および背景肝）（HBV 感染：11例，HCV 感る。

染：16例，非ウイルス性（NBNC）：18例，HBV既往（論文審査の結果の要旨）：２例）を対象とし，14種類のmiRBir gene（Drosha，

肝癌は本邦あるいは世界的にも癌死亡者数の上位をDgcr8， p68， p72， Xpo ‑5， Dicer， Ago1‑4 and

占めているが，その発生や悪性化の詳細な分子機構はPiwil1‑4）の発現を quantitative real time‑PCR に

完全には解明されていない。近年18〜22塩基の短い小て測定し，臨床病理因子，予後との関連を解析した。

分子 RNA（miRNA）の発現異常が，癌の発生や進更に肝癌細胞株（KYN2，HepG2）を用いて，定量展に関わることが報告され，またmiRNA生合成に関

RT‑PCRによる5‑Aza‑deoxycytidine処理後のmiRBir

わる遺伝子異常の発癌への関与も示されている。本研

gene の発現変化，miRBir gene のプロモーター領域

究では肝癌における miRNA 生合成に関わる遺伝子での bisulﬁte sequencing による CpG islandsの DNA（miRNA 生 合 成 因 子（miRNA ‑biogenesis‑related

メ チ ル 化 お よ び chromatin‑immunoprecipitation‑（miRBir）gene））の発現変化とその分子機構，更にPCR（CHIP‑PCR）に よ る histone H 3 Lysin 27の発症に関わる背景因子・臨床病理像・予後との関連に

トリメチル化（H3K27me3）について解析した。

ついて検討を行った。

【結果】14種類のmiRBir geneのうち７遺伝子（Dgcr8，

肝癌検体47例（腫瘍部および背景肝）を対象とし，p68，p72，Dicer，Ago3，Ago4，Piwil4）が 背 景 肝

14種類の miRBir gene（Drosha，Dgcr8，p68，p72，に比し腫瘍部で発現が有意に低下（p＜0.05）していXpo‑5，Dicer，Ago1‑4 and Piwil1‑4）の 発 現 をた。この７遺伝子は HCV 感染検体では有意差を認めquantitative real time‑PCR にて測定し，臨床病理因

ず，HBV 感染検体では３遺伝子（p68，p72，Dicer，子ならびに予後との関連を解析した。さらに細胞株

Ago3）のみで低下を認めたが，NBNC 検体では６遺（KYN2，HepG2）を用いて，定量 RT ‑PCR による伝子（Dgcr8，p68，p72，Dicer，Ago3，Ago4）で有意CpG islandsの DNAメチル化および CHIP‑PCRによな低下を 認 め た。NBNC で miRBir gene の 発 現 低

る histone H3Lysin 27のトリメチル化（H3K27me3）下が多く見られたため，ウイルス以外の背景因子がについて解析した。

miRBir gene の発現異常に関わる可能性を考え，背その結果，北川らは次の結論を得た。

景肝における肝癌発症のリスク因子と miRBir gene

１．14種類の miRBir gene のうち７遺伝子（Dgcr8，の関連を検討した。その結果，飲酒（Piwil1，2 andp68，p72，Dicer，Ago3，Ago4，Piwil4）が 背 景

3）・喫煙（Ago1，Ago2，Ago3Exportin‑5，Dgcr8）・

肝に比し腫瘍部で発現が有意に低下（p＜0.05）し糖尿病（Ago1），多中心性腫瘍（Ago1，Ago3，Ago4，ていた。特に NBNC HCC での発現低下が顕著でDicer，Piwil1，Piwil2and p72）での発現低下が見らあった。

れた。腫瘍部では p68と p72の発現が腫瘍の分化度が２．背景肝での miRBir gene の発現低下には，肝発下がる程低下していた（p＜0.01）。また Dicer，p68

癌の危険因子であるタバコ，アルコール，糖尿病のの発現低下は腫瘍再発との関連が示された。miRBir

関連が示唆された。また，腫瘍の多発性との関連がgeneの発現低下にエピジェネティックな制御が関示唆された。

与している可能性を考え，肝がん細胞株（HepG2，

３．p68と p72の発現が，腫瘍の分化度が下がる程低KYN2）を用いて検 討 し た と こ ろ，CpG islands の下することを認めた（p＜0.01）。また Dicer，p68

DNAメチル化による直接的な制御ではなく，miRNAの発現低下は腫瘍再発との関連が示された。

生合成に関わる遺伝子の一部が H3K27me3によりエNo. 5, 2014

４．肝癌細胞株を用いた検討で，これら７つの遺伝子335

審査学位論文要旨

は epigenetic な制御（プロモーター領域のメチル

miRNA生合成因子の制御にヒストンのメチル化といっ化の関与は乏しく H3K27のトリメチル化の制御がたエピジェネティックな制御の関与を示した。この新関連している）を受けていること示した。

しい機構の発見は，今後の肝癌における診断や予防，以上のことから，miRNA 生合成因子が特に非ウイ予後の評価につながることが期待される。よって主査，

ルス性の肝癌においてしばしば低下していることを示

副査は一致して本論文を学位論文として価値があるもし，その発現低下は肝癌発症のリスク因子に特に関係のと認めた。

が深く，また予後にも関連することを示した。さらに，

Regenerative capacity of bulbar projection neurons during development: a quantitative neuronalanalysis with functional correlation（嗅球投射ニューロンの再生能：再生ニューロンの定量評価
並びに機能解析）
平

山

周

一

（論文の内容の要旨）

μm 厚/嗅 球：400μm 間 隔＆脳：600μm 間 隔）を【目的】外側嗅索（LOT）は嗅球からの嗅覚情報を嗅作成し，抗 FG 抗体を用いて，FG 注入部位と FG皮質へ伝える重要な脳内伝導路である。生後２日（Ｐ（＋）の再生した僧帽細胞を DAB 反応後に可視化

2）の新生児ラットの LOT を切断すると，４週後にし，ステレオロジ⎜解析装置を用いて再生ニューロ

切断部を超えて嗅球から嗅皮質へ新たな神経線維の連ンを定量化した。計測は，各個体とも３回行い，実絡ができ，再生された嗅球投射ニューロン（僧帽細測値とニューロン総数の推定値のそれぞれの平均値

胞）により機能的にも嗅覚機能が正常に維持されるこを求めた。なお，不完全切断例は除外した。

とを報告した。しかし，LOT 切断の時期による嗅球⑶ 嗅覚機能検査：Ｐ7の新生児ラットの左 LOT の投射ニューロンの軸索再生の時期や本来の標的部位

切断12週後に，切断側の嗅覚機能を知る目的で，非（嗅皮質）に再生軸索を伸ばすニューロンの割合さら

切断側の右嗅球を吸引除去し，２‑３日間絶水後に，に再生ニューロン数と嗅覚機能の関係については不明

水と0.01％シクロへキシミド溶液を用いて嗅覚機であり，これらの課題を解明することを目的として本能を調べた。一部のラットは，FG を左嗅皮質に注研究を行った。

入し，FG（＋）の再生ニューロンを定量化した。

【方法】

【結果】

⑴ 嗅覚投射ニューロンの再生の時期：Ｐ7，Ｐ10お⑴ 再生の時期：Ｐ7 LOT 切断ラットの嗅球には，よびＰ14の新生児ラットの左 LOT を切断し，完全切断部後方の嗅皮質に注入された FG が逆行性に軸切断を客観的に評価する目的で，切断直後に切断部索輸送され，切断部を越えて，多数の FG（＋）僧後方の左嗅皮質（嗅結節・梨状皮質）に逆行性の蛍帽細胞が確認された。Ｐ10 LOT 切断ラットは，

光神経トレーサー（FB：Fast blue）を注入した。

FG（＋）僧帽細胞が見られない群とわずかに見ら

５週間生存させた後に，別の逆行性の蛍光神経トれる群に分かれた。Ｐ14 LOT 切断ラットでは，

レーサー（FG：Fluoro‑Gold）を切断部から離れたFG（＋）僧帽細胞はなかった。

後方の左嗅皮質に注入し，２日後に還流固定し，脳⑵ 再生ニューロンの定量評価：正常12週齢ラットのの凍結切片を作成し，蛍光顕微鏡で観察した。FB

FG（＋）僧帽細胞数は，平均実測値804±46個（100陽性の僧帽細胞のない完全切断例について，FG 陽％），ステレオロジー に よ る 平 均 推 測 値49,700±

性の再生した僧帽細胞の有無を観察した。

4,300個（100％）であった。Ｐ2LOT切断ラットで⑵ 再生ニューロンのステレオロジー定量解析：再生は，再 生 し た FG（＋）僧 帽 細 胞 数 は，そ れ ぞ れがおこることが確認されたＰ2とＰ7の新生児ラット561±53個（70％），35,100±4,500個（71％），Ｐ7の左 LOT を切断し，12週間生存させ，後方の左嗅LOT 切断ラットでは，再生した FG（＋）僧 帽 細皮質に FG を注入した。12週齢の正常ラットの左嗅胞 数 は，そ れ ぞ れ327±76個（42％），19,700±

皮質にも FG を注入した。FG 注入２日後に還流固

5,000個（40％）であり，３群間で有意差（Ｐ＜0.01）

定し，左嗅球・左脳の連続凍結切 片（冠 状 断/50

を認めた。

336

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨⑶ 再生ニューロンによる嗅覚機能：Ｐ7 LOT 切断

２．再生ニューロンの定量評価については，正常12ラットの78％（14/18）では，嗅覚は正常に維持さ

週齢ラッ ト の FG（＋）僧 帽 細 胞 数 は，平 均 実 測れていた が（正 解 率：90±３ ％），22％（４/18）

値804±46個（100％），ステレオロジーによる平均

で は 無 嗅 覚 で あ っ た（正 解 率：50±２ ％）。嗅 覚

推 測 値49,700±4,300個（100％）で あ っ た。Ｐ2（＋）ラット（ n＝２）の再生した FG（＋）僧帽細胞

LOT 切 断 ラ ッ ト で は，再 生 し た FG（＋）僧 帽

数の平均実測値は，328個と294個であり，平均推測

細胞数は，それぞれ561±53個（70％），35,100±

値は23,400個と21,300個であった。嗅覚（−）ラッ

4,500個（71％）であり，Ｐ7 LOT切断ラットでは，ト（n＝２）の再生したFG（＋）僧帽細胞数の平均実再生した FG（＋）僧帽細胞数は，それぞれ327±

測値は，173個と137個であり，平均推測値は13,00076個（42％），19,700±5,000個（40％）であった。

個と9,600個であった。

３群間で有意差（Ｐ＜0.01）が認められ，ニューロン【結論】の再生率は軸索切断時のラットの日齢とともに減少⑴ LOT 切断後，嗅球投射ニューロンが再生可能なすることが明らかとなった。

時期は，Ｐ0〜Ｐ10の間であることが明らかとなった。

３．再生ニューロンによる嗅覚機能評価を行うと，Ｐ
7 LOT 切断ラットの78％（14/18）では，嗅覚は⑵ Ｐ2もしくはＰ7 LOT 切断ラットの FG（＋）再正常に維持されていたが（正解率：90±３％），22

生ニューロン数は，正常のそれぞれ約70％ ＆ 40％％（４/18）では無嗅覚であった（正解率：50±２に減少しており，切断時期が遅くなるほど自然再生％）。嗅 覚（＋）ラ ッ ト（n＝２）の 再 生 し た FG

するニューロン数が少なくなることが明らかとなっ（＋）僧帽細胞数の平均実測値は，328個と294個でた。

あり，平均推測値は23,400個と21,300個であった。

⑶ 再生ニューロンが正常の約40％に減少している

嗅覚（−）ラット（n＝２）の 再 生 し た FG（＋）

Ｐ7 LOT 切断ラットの多く（78％）では，嗅覚機

僧帽細胞数の平均実測値は，173個と137個であり，能は正常に維持されていたが，嗅覚を失ったケース

平 均 推 測 値 は13,000個 と9,600個 で あ っ た。再 生が少数存在し，その再生ニューロンは正常の約26ニューロンが正常の約40％に減少しているＰ7LOT％以下に低下していた。

切断ラットの多く（78％）では，嗅覚機能は正常以上の結果より，形態的並びに機能的両面から，嗅に維持されていたが，嗅覚を失ったケースが少数存

球投射ニューロンの再生能が明らかにされた。
（論文審査の結果の要旨）在し，その再生ニューロンは正常の約26％以下に低下していた。

本研究で平山は，ラットの主要な嗅覚伝導路である

以上により，ラットにおいて外側嗅索切断後，軸索外側嗅索（LOT）切断後の嗅球投射ニューロン（僧切断された嗅球投射ニューロンが自然再生し得る時期

帽細胞）の軸索再生に関して，再生する時期の特定，が明らかにされた。また，切断時期の違いによる再生

再生ニューロンの定量化，ニューロンの再生率と嗅覚率の変化が，ステレオロジーによる再生ニューロン数

機能の関係などの未解明な課題を明らかにすることをの相対的/絶対的比

目的として，ラットについて LOT 切断，再生ニューに再生ニューロン数と機能との関係についても明らか

ロン数計測並びに嗅覚機能検査などの実験を行った。

にされ，生物学的にも臨床医学的にも意義があるもの

その結果，平山は次の結果を得た。
１．再生の時期については，Ｐ7 LOT 切断ラットの検討により明らかにされた。更と考えられ，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

嗅球で，切断部後方の嗅皮質に注入された神経ト
レーサー（FG）が逆行性に軸索輸送され切断部を越えて多数の FG（＋）僧帽細胞が確認されたこと，
Ｐ10 LOT 切断ラットでは，FG（＋）僧帽細胞が見られない群とわずかに見られる群に分かれたこと，
およびＰ14LOT切断ラットでは，FG（＋）僧帽細胞はなかったことから，Ｐ0〜Ｐ10にあることが明らかになった。
No. 5, 2014337

審査学位論文要旨

Adrenomedullin‑RAMP2 system suppresses ER stress‑induced tubule cell death and is involved in
kidney protection（アドレノメデュリン‑RAMP2システムは，小胞体ストレス誘導性細胞死を抑制し，腎保護に働く）
植

竹

龍

一

（論文の内容の要旨）により小胞体（ER）ストレスセンサータンパク質の【背景と目的】アドレノメデュリン（AM ）は，様々な一つである PERK が活性化された。一方，RPTEC

生理活性を有するペプチドである。AM 受容体 CLRに AM を投与すると，PERK 下流因子である CHOPには，受容体活性調節タンパク質 RAM P が重合し，の活性化が抑制され，細胞死が抑制された。

受容体特性を制御している。我々はこれまでにRAMP

TUN モデルにおいて RAMP2 では，尿細管細胞

サブアイソフォームの中でも，RAMP2ノックアウトの空胞化と，ER ストレスにより誘導される因子であマウス（RAMP2 ）のみが，AMる BiP，CHOP の発現上昇を認めた。

の発生異常や臓

器障害を再現することを報告してきた。AM および

AM による治療実験では，AM を投与した野生型

RAM P2は，腎臓においても発現しており，血管，糸球マウスでは TUN により引き起こされた尿細管細胞の体，尿細管などに広く分布する。また近年，血中AM

空胞化と BiP，CHOP の発現上昇が抑制された。一濃度が慢性腎臓病の長期予後予測の上で，最も感受方，RAMP2 を用いて AM による治療実験を行っ性の高いパラメータとなることが報告されており，腎たところ，野生型マウスに対し AM を投与した時に不全の病態に AM ‑RAM P2系が関与していることが認められた腎障害の軽減効果は認められなかった。

示唆されている。本研究では，RAMP2 を用いて，CDDP 投与モデルにおいて RAMP2 では，血清腎臓病モデルを作成し，AM ‑RAM P2系の腎臓にお尿素窒素（BUN）やクレアチニンの上昇といった腎ける生理作用を検討した。

機能の低下を示す所見が認められ，尿細管細胞の異常【材料及び方法】① RAM P2 を用いてストレプトゾも確認された。また，この時の遺伝子発現を検討した

トシン（STZ）投与による

ところ RAMP2 では，細胞死を誘導する因子（p53，型糖尿病モデルを作成

し，糖尿病性腎症における AM ‑RAM P2系の役割をBax）の発現上昇が認められ，さらに炎症性サイトカ検討した。② ヒト近位尿細管上皮細胞（RPTEC）を

インやケモカイン（TNF‑α，MCP‑1）の発現上昇，

用いて尿細管細胞に対する STZ の直接の作用と AM

酸化ストレスマーカー（NADPH オキシダーゼサブの保護効果を検討した。③ RAMP2 を用いて小胞

ユニット：p67，p47）の発現上昇，ER ストレスマー

体（ER）ストレスを直接惹起する薬剤であるツニカ

カー（BiP，CHOP）の発現上昇も確認された。

マイシン（TUN）を投与して，ER ストレスに対す【結論】以上の結果から，AM ‑RAMP2系は，腎臓にる AM ‑RAM P2系の役割を検討した。④ 野生型マウ

おいて炎症，酸化ストレスおよび ER ストレスの過剰

ス お よ び RAMP2 を 用 い て 浸 透 圧 ポ ン プ に よ り

な活性化を抑制し，臓器保護的に働いていることが明

AM を持続投与する実験を行い，TUN投与による腎障

らかとなった。

害に対するAM の治療効果を検討した。⑤ RAM P2（論文審査の結果の要旨）を用いて尿細管障害を引き起こす薬剤であるシスプラ

アドレノデュリン（AM ）は多彩な生理活性を有す

チン（CDDP）を投与して尿細管障害に対する AM ‑るペプチドである。AM の受容体は，Ｇタンパク質

RAM P2系の役割を検討した。

共役型受容体である CLR と受容体活性調節タンパク【結果】STZ モデルに お い て RAMP2 で は，野 生

質 RAM P2ま た は RAMP3の 複 合 体 で あ る。AM と型と比 し，糸球体病変に変化を認めなかったが，予RAMP2のホモ型遺伝子欠損マウスは胎生致死となるこ

想外に近位尿細管に刷子縁の破綻を伴う細胞死が特徴とから，AM ‑RAM P2系の重要性が示唆されている。

的に認められた。

一方で，成体の腎臓においてもAM および RAMP2は

RPTECを用いた検討では，RPTECには，グルコー

発現しているが，その病態生理学的意義は不明である。

ス類似物質である STZ を特異的に取り込むトランス

そこで植竹龍一は，RAM P2ヘテロノックアウトマウ

ポーターである GLUT2が発現しており，STZ 投与

ス（RAMP2 ）を用いて，腎障害モデルを作成し，

338

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

腎臓における AM ‑RAM P2系の生理学的意義を検討した。

れ，これは AM 投与により抑制された。
６．ツニカマイシン（TUN）
モデルにおいて，RAMP2

その結果，植竹龍一は次の結論を得た。
１．ストレプトゾトシン（STZ）
モデルにおいてRAMP2
は野生型マウス（WT）と比は腎機能の低下と尿細管の異常が確認された。また，
ER ストレスの亢進も認められた。

して，糸球体病変に７．WT に対して AM による治療実験を行ったとこ

差は認められなかったが，尿細管の異常が認められ

ろ，TUN 投与により生じた腎障害が軽減した。一た。

方，RAMP2 に対してAM による治療実験を行っ

２．尿細管の異常は血糖値を正常化しても，改善は認たところ，腎障害の軽減効果は認められなかった。

められず，高血糖ストレス以外の原因により尿細管

８．シスプラチンモデルにおいて，RAMP2 は腎機が障害されている可能性が示唆された。
３．ヒト近位尿細管細胞（RPTEC）に対し STZ を能の低下と尿細管の異常が確認された。また，遺伝子発現を検討したところ，細胞死，炎症，酸化スト

直接添加したところ，細胞死の亢進が確認され，こレス，ER ストレスが亢進していた。

れは AM 投与により抑制された。

以上の結果から，植竹龍一は，AM ‑RAMP2系が，４．STZ モ デ ル に お い て RAM P2 の 尿 細 管 で は
オートファジーの亢進が確認された。

尿細管の ER ストレスを制御することにより細胞死を抑制し，腎保護的に働くことを初めて明らかとした。

５．RPTEC に対し STZ を添加したところ，小胞体

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とし（ER）ストレスセンサータンパク質の一つであるて価値があるものと認めた。

PERK およびその下流シグナルの活性化が確認さ

Nox4 redox regulation of PTP1B contributes to the proliferation and migration of glioblastoma cellsby modulating tyrosine‑phosphorylation of coronin‑1C（Nox4‑PTP1B レドックスシグナルは，
coronin‑1C のタイロシンリン酸化を介して膠芽腫細胞の増殖と運動に寄与する）
Md. Abdus Salam M ondol（論文の内容の要旨）

ylation of coronin‑1C is regulated by the Nox4‑

Glioblastoma multiforme is a common primary

PTP1B pathway. Finally, ablation of coronin‑1C

brain tumor in adults and one of the most devastat-attenuated the proliferative and migratory activity

ing human cancers. Reactive oxygen species (ROS)of the cells. Collectively, these ﬁndings reveal thatgenerated by NADPH oxidase (Nox)4 have recent-Nox4‑mediated redox regulation of PTP1B serves

ly been a focus of attention in the study of glioblas-

as a modulator, in part through coronin‑1C, of thetomas, but the molecular mechanisms underlying

growth and migration of glioblastoma cells, andthe actions of Nox4 remain elusive.In this study,weprovide new insight into the mechanistic aspect ofdemonstrated that silencing of Nox4 expression by

glioblastoma malignancy.

Nox4‑targeted siRNA suppressed cell growth and（論文審査の結果の要旨）

motility of glioblastoma U87 cells, indicating the

Glioblastoma is the most aggressive brain tumor

involvement of Nox4. Furthermore, Nox4‑derived

with poor prognosis.Nox4 expression was previous-

ROS oxidized and inactivated protein tyrosine phos-ly reported to be upregulated in glioblastoma cells

phatase (PTP): 1B : PTP1B in its active formand consider to play a role in cellular functions

downregulates cell proliferation and migration. By

related to the malignant phenotype, but its

aﬃnity puriﬁcation with the substrate‑trapping

regulatory mechanism is largely unknown. His

mutant of PTP1B,tyrosine‑phosphorylated coronin‑

principal aim of this study was to characterization

1C was identiﬁed as a substrate of PTP1B. Itsof the regulation and function of the Nox4 and totyrosine phosphorylation level was suppressed bydissect the pathway downstream of Nox4 redox

Nox4 inhibition,suggesting that tyrosine‑phosphor-signaling involved in the bioactivities of glioma

No. 5, 2014339

審査学位論文要旨

６．Coronin‑1C, associated with malignancy ofcells.

glioblastoma is tyrosine‑phosphorylated.

It was found that,
１．Nox4 mRNA was prominently expressed and７．Tyrosine phosphorylation level was suppressed

involved in spontaneous ROS production in

byNox4 inhibition,suggesting that tyrosine‑phos-

glioma cells.

phorylation of coronin‑1C is regulated by the

２．Silencing of Nox4 expression by Nox4‑target-

Nox4‑PTP1B pathway.
In summary, his study establishes the Nox4‑

ed siRNA suppressed cell growth and motility of

PTP1B‑coronin 1C axis as a novel redox signaling

glioblastoma U87 cells.
３．Nox4‑derived ROS oxidized and inactivatedpathway contributing to glioblastoma development.

protein tyrosine phosphatase (PTP):1B :PTP1B

Thus, the discovery suggests a critical mediating

in its active form downregulates cell proliferationrole of Nox4 redox signaling in gliomagenesis.

and migration.

Nox4 may serve as a potential molecular target in

４．Tyrosine ‑phosphorylated coronin ‑1C was
identiﬁed as a substrate of PTP1B.

the development of therapeutic agents for malignant gliomas.

５．Ablation of coronin‑1C attenuated the prolifer-

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

ative and migratory activity of U87 cells.

TRPM4 Channels Mediate Hypertonicity‑induced,Ca ‑impermeable,Non‑selective Cation Currents
in a Cervical Cancer Cell Line,HeLa Cells（TRPM4チャネルは，子宮頸がん細胞株 HeLa細胞において高浸透圧誘発性 Ca 非透過性非選択的カチオン電流を生じる）
五

味

志

文

（論文の内容の要旨）【結果】HeLa 細胞において高浸透圧刺激は，電流電【背景と目的】細胞外の浸透圧が細胞内の浸透圧より圧関係がほぼ直線的で，逆転電位が〜０mV の I を高くなると，細胞は一旦縮むが，regulatory volume

誘発した。I は，脱分極電位で時間依存性の活性化

increase（RVI）機構によりもとの容積に戻る。RVIを示した。I は，Na 透過性であり，Ca 非透過性は生理的な状態下で常に作動しており，RVI を障害であった。I は，FFA とエコナゾールで抑制されたすると細胞周期が止り，アポトーシスが生じる。したが，アミロライドやルテリウムレッドに非感受性だっがって，RVI の分子機構の解明は，腫瘍に対してアた。以上より，I を構成するサブユニットは TRP

ポトーシス誘発的に作用する新たな薬物の開発につなである可能性が考えられた。RT ‑PCR による解析でがる可能性がある。そこで本研究では，子宮頸がん細は，HeLa 細 胞 で は TRPC1，Ｃ6，Ｍ3，Ｍ4，Ｍ7，

胞株 HeLa 細胞を用いて，RVI が生じる分子機構を

Ｍ8，Ｖ1，Ｖ2の 発 現 が 認 め ら れ た。こ の 中 で 上 記明らかにすることを目的とする。

生物物理学的特性および薬理学的特性を有するチャ【方法】パッチクランプ法のホールセルモードで，高ネルは TRPM 4チャネルであるので，HeLa 細胞に浸透圧の細胞外液で RVI を引き起こし，その時流れ

TRPM 4のドミナントネガティブ体を発現すると，

る非選択的陽イオンチャネル（I ）電流を測定した。

I は有意に減少した。最後に，HeLa 細胞内に投与

さらに細胞外液に，種々のチャネルブロッカー（フルする Ca バッファーを増強すると，高浸透圧刺激はフェナム酸（FFA），エコナゾール，アミロライド，

I を誘発しなくなった。しかしホスホリパーゼＣのルテニウムレッド）を投与し，I の薬物感受性を評

阻害薬 U73122は，I を抑制しなかった。

価した。またRT‑PCRを使い，非選択的陽イオンチャ【考察】HeLa 細胞において，高浸透圧刺激は何らか

ネルサブユニット TRP の遺伝子の発現の解析を行っの機序で細胞内 Ca 濃度を上昇させ TRPM 4チャネ

た。最後に，TRPM 4のドミナントネガティブ体をルを活性化し，I を誘発し RVI を生じる。したがっHeLa細胞に発現し，I を構成する分子の同定を行って，TRPM 4チャネルを抑制する FFA の子宮頸管内た。

や腟内への投与は，新しい子宮頸がんの治療法となる

340

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

可能性がある。

２．I 電流は，アミロライドやルテニウムレッドに（論文審査の結果の要旨）

非感受性で，フルフェナム酸やエコナゾールに感受

細胞外の浸透圧が細胞内の浸透圧より高くなると，性である。

細 胞 は 一 旦 縮 む が，regulatory volume increase

３．HeLa 細胞には，TRPC1，Ｃ6，Ｍ3，Ｍ4，Ｍ7，（RVI）機構によりもとの容積に戻る。RVI は生理的

Ｍ8，Ｖ1，Ｖ2が発現していたが，このうちI チャネ

な状態下で常に作動しており，RVI を障害すると細ルの生理特性や薬理特性に一致するのは TRPM 4

胞周期が止り，アポトーシスが生じる。したがって，だけである。

RVI の分子機構の解明は，腫瘍に対してアポトーシ
ス誘発的に作用する新たな薬物の開発につながる可４．これと一致して，ドミナントネガティブ TRPM 4は，I 電流を有意に抑制した。

能性がある。そこで本研究では，子宮頸がん細胞株

５．I チャネルは，細胞内 Ca により活性化された

HeLa 細胞を用いて，RVI が生じる分子機構を明らが，この反応にはホスホリパーゼＣは関与していな

かにすることを試みた。

かった。

パッチクランプ法のホールセルモードで，高浸透圧

これらの結果より，HeLa 細胞では細胞外浸透圧がの細胞外液で RVI を引き起こし，その時流れる非選

上昇すると，何らかの Ca 透過性チャネルが開口し択的陽イオンチャネル（I ）電流を測定し，その生て細胞内 Ca 濃度が上昇し，TRPM 4チャネルが開理的・薬理的特性と，transient receptor potential

口して I 電流が生じ，RVI が生じると結論した。し（TRPM ）4チャネルに対するドミナントネガティブ

たがって，TRPM 4チャネルを抑制する FFA の子宮体の効果の検討から，I チャネルの分子実態を探っ

頸管内や腟内への投与は，新しい子宮頸がんの治療法

た。

となる可能性があると考えられた。

その結果，以下の結果を得た。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文と１．I 電流は，Na 透過性，Ca 非透過性の非選択

して価値があるものと認めた。

的カチオン電流であり，膜電位依存性活性化を示す。

Presence of diastolic dysfunction in patients with peripheral artery disease（閉塞性動脈硬化症患者における拡張障害の検討）
山

崎

佐枝子

（論文の内容の要旨）

natriuretic peptide（BNP）は133.68±225.1pg/mL【目的】末梢動脈疾患（peripheral arterial disease：であった。120例のうち，BNP 100pg/mL 以上の症PAD）と心不全は多くの危険因子を共有する。PAD

例は36人（30％）であった。BNP 100pg/mL以上をの5.8から13.9％に心不全が合併するという報告があ予測する因子を単変量のロジスティック回帰分析でるが，日本人の PAD 症例における心不全の合併率は解 析 す る と，年 齢，推 算 糸 球 体 濾 過 量（estimated

明らかでなく，その病態に関し，心エコーの指標を用

glomerular ﬁltration ratio：eGFR），高血圧，拡張早いて検討したものはない。本論文では PAD に合併す

期の左室流入血流速度（Ｅ）と僧帽弁輪部速度（eʼ）のる心不全の病態を明らかにすることを目的とする。

比（Ｅ/eʼ
）が有意であ っ た。BNP 100pg/mL 以 上【方法】当院に入院した PAD120例（平均年齢74.3歳，と未満の群の平均Ｅ/eʼはそれぞれ16.4±6.5と10.7±

男性104名）を解析対象とした。PAD は足関節上腕血3.8（p＝0.001），また平均 eGFR は そ れ ぞ れ52.7±

圧比（ankle‑brachial index：ABI）0.9以下と定義

25.5と64.4±19.5 ml/分/1.73 m （ p＝0.003）でした。透析例と心不全入院の既往例は除外した。BNPあった。一方，冠動脈病変の有無や左室駆出率は両群100pg/mL以上の群と未満の群に分け，２群間をｔ検に有意差を認めなかった。Ｅ/eʼ（４分位）と年齢，

定，Mann‑Whitney検定で比 した。BNP高値に関わ性別，eGFR，左室駆出率を用いて，BNP 100pg/mL

る因子について単変量解析，多変量解析を行い，オッ以上の予測可能性を多重ロジスティック回帰分析にズ比を求めた。

より検討した結果，Ｅ/eʼ
高値のみが有意な予測因子【結果】平均の左室駆出率は65.5±13.6％，平均brain

で あ っ た（オ ッ ズ 比2.310，95％ 信 頼 区 間1.371‑

No. 5, 2014341

審査学位論文要旨

3.891，p＝0.002）。

未満の群と比べ，有意に年齢が高く，心房細動が多く，【考察】PAD 患者の BNP が高い理由として，年齢，

高血圧の合併が多かった。また拡張期血圧が高く，腎腎機能障害，虚血性心疾患などが考えられたが，いず

機能が悪く，HDL コレステロール値が低かった。一

れも統計学的には有意ではなかった。拡張障害の指標

方，冠動脈病変の有無や左室駆出率（ejection frac-

であるＥ/eʼが有意な因子であり，PAD 患者に拡張障

tion：EF）は両群に有意差を認めなかった。拡張早害が生じる原因として高血圧，心房細動の合併が多い期の左室流入血流速度（Ｅ），Ｅと僧帽弁輪部速度事が考えられた。

（eʼ
）の比（Ｅ/eʼ），肺静脈の拡張期順行性血流速度

PAD 患者の管理において，動脈硬化の危険因子に（PVF‑D）と左房径が BNP 高値群で有意に高かった。

介入し，心血管イベントを予防することが大変重要で

BNP 100pg/mL 以上と各因子の相関係数を求めると，ある。PAD 患者では心不全の既往がなくても BNP

Ｐ値が有意かつ相関係数が0.3以上のものは，年齢，が高い，すなわち心機能障害が合併していることが明

推算糸球体濾過量（estimated glomerular ﬁltration

らかとなった。PAD 管理に重要な運動療法や代表的，Ｅ/eʼであった。BNP 100pg/mL 以
ratio：eGFR）

な薬物療法であるシロスタゾールは，心不全を悪化さ上を予測する因子を単変量のロジスティック回帰分析

せる可能性がある。そのため，PAD 患者に BNP をで解析すると，年齢，eGFR，Ｅ/eʼ
が有意であった。

測定し，心機能障害の有無をスクリーニングすること

Ｅ/eʼ（４分位）と年齢，性別，eGFR，EF を共変量

は，非常に重要であると考えられる。

に用いて，BNP 100pg/mL 以上の予測可能性を多重（論文審査の結果の要旨）

ロジスティック回帰分析により検討した結果，Ｅ/eʼ

当院に入院した末梢動脈疾患（peripheral arterial
disease：PAD）120例を解析対象とした。PAD は足高値のみが有意な予測因子であった（オッズ比2.310，
95％信頼区間1.371‑3.891，p＝0.002）。

関節上腕血圧比（ankle brachial index：ABI）0.9以

これらの結果から，PAD には心不全の既往がなく下と定義した。透析例と心不全入院の既往のある例はても BNP が高い症例が含まれていることが分かった。

除外した。brain natriuretic peptide（BNP）高値に

BNP が高い理由として，高血圧や心房細動を背景に関わる因子について多変量解析を行い，オッズ比を求した拡張障害がみられることが示唆された。本研究は，めた。

PAD の管理においては，BNP を測定し，心機能障

その結果，山崎佐枝子は以下の点を明らかにした。

害の有無をスクリーニングすることが非常に重要であPAD120名の平均の左室駆出率は65.5±13.6％，平ることを示した臨床上重要な研究であり，主査，副査

均 BNP は133.68±225.1pg/mL で あ っ た。120例 のは一致して本論文を学位論文として価値があるものとうち，BNP 100pg/mL以上の症例は36人（30％）で認めた。

あった。BNP 100pg/mL 以上の群では，100pg/mL

Factors inﬂuencing theresidualrib hump after posterior spinalfusion for adolescent idiopathicscoliosis
with Lenke 1 and 2 curves（Lenke type１，２型思春期特発性側弯症に対する後方矯正固定術後に残存する肋骨隆起に関連する因子）
向山（論文の内容の要旨）

啓二郎
影響するかを検討した。

【目的】脊柱側弯症手術において，術後の rib hump

【方法】対象は2005年８月から2011年３月までに，思が軽減するということは整容上重要であると考えられ

春期特発性側弯症 Lenke type１，２カーブに対している。しかし術後，主胸椎カーブ（main thoracic

direct vertebral body derotation（DVBD）を併用し

curve）の Cobb 角は大きく改善しているにもかかわた skip pedicle screw ﬁxation を 施 行 し た40例（男らず，rib hump が残存してい る 症 例 も 多 い。今 回

性２例，女性38例，平均年齢14.9歳）である。平均観

我々は，Lenke type１，２の思春期特発性側弯症患察期間は21.2カ月（６‑48カ月）であった。術前，術者に対する後方矯正固定術後，rib humpが残存する要後に inclinometer を用いて apical trunk rotation

素，またhumpの残存が患者満足度（satisfaction）に（ATR）を測定し，hump の大きさの指標とした。対342

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

象患者は術後 ATR によりＡ群（ATR≦10度），Ｂ群

側弯症患者に対する後方矯正固定術後肋骨隆起が残存（ATR＞10度）の２群に分け，各々のパラ メ ー タ をする要素，また隆起の残存が患者満足度に影響するか

比を検討した。

した。患者満足度は SRS‑22の術後 self image，

satisfaction の subscore を用い検討した。さらに術対象は，direct vertebral bodyderotation（DVBD）

中，Ponte osteotomyを追加した症例群と追加しなを併用した skip pedicle screw ﬁxationに よ る 後 方い症例群とにわけ，術後の ATR 改善率を比矯正固定術を施行した思春 期 特 発 性 側 弯 症 Lenke

検討し

た。

type１，２ 患 者40例（男 性 ２ 例，女 性38例，平 均 年【結 果】術 前 の ATR は Ａ 群12.4±1.1°，Ｂ 群18.3±

齢14.9歳）であった。術前，術後にinclinometerを用

1.8°CT に よ る 頂 椎 回 旋 角（Apical rotation）は 術

いて apical trunk rotation（ATR）を測定し，hump

前 に Ａ 群 13.9± 7.8°
，Ｂ 群 13.9± 7.8°
，術 後 apicalの大きさの指標とした。対象患者は術後 ATR により，Ｂ群17.2±2.1°であった。
rotation はＡ群12.0±1.5°

Ａ 群（ATR≦10度），Ｂ 群（ATR＞10度）の ２ 群 に術前の apical translation はＡ群31.1±24.0mm，Ｂ分け，術前術後の各パラメータを比群50.2±19.6で有意差が認 め ら れ た（p＜0.05）。一

足度は SRS‑22の術後 self image，satisfactionの sub-

方で術前後の Cobb 角およびその矯正率，矯正後のscore を用い検討した。また，術中より大きな矯正を

apical translation には有意差を認めなかった。術後得るための Ponte osteotomyの追加が肋骨隆起の改の SRS‑22における self image はＡ群：4.0±0.7，Ｂ

善に影響するのかを検討した。

群：3.8±0.2であったが有意差は認められなかった。

した。患者満

その結果，向山啓二郎は次の結果を得た。

Satisfaction で は Ａ 群：4.1±0.7，Ｂ 群：4.0±0.8

１．術後の残存肋骨隆起の大きさに影響を与える因子で有意差は認められなかった。しかし ATR の改善

は術前の肋骨隆起の大きさ，側弯の頂椎の回旋の大率と術後 self image，satisfaction は有意に強い相関きさであった。カーブの大きさ，カーブの柔軟性な（self image は相関係数0.64，p＜0.0.1，satisfaction

ど，他のパラメータに有意差は認めなかった。

は相関係数0.52，p＜0.05）を認めた。ATR の改善

２．術後残存する肋骨隆起の大きさでは術後満足度に率 は Ponte osteotomyを 追 加 し た 症 例，追 加 し なは有意な差が認められなかった。ATR 改善率と術かった症例で有意差を認めなかった。

後の患者満足度の間には有意な相関が認められた。

【考察】思春期特発性側弯症では，hump の改善のた

また主胸椎カーブの Cobb 角，その改善率は術後めに古くから胸郭形成術が行われ，良好な成績が報告

self image に有意な相関を認めた。

されてきた。しかし2004年に Lee らによる DVBD の３．Ponte osteotomyは肋骨隆起の改善には影響を報告以来，さまざまなデバイスが開発され，その有効与えていなかった。

性と低侵襲性が報告されている。我々は胸郭形成術を

これらの結果より，側弯症手術においては頂椎の回行わない DVBD を併用した後方矯正固定術を施行し，旋変形を取り除くことが術後の肋骨隆起を減じるため

術後 hump 残存に関する因子について検討した。そに必要なことであると考えられた。また，術後残存しの結果，術後 hump 残存に明らかに関与する要素はた肋骨隆起の大きさそのものは患者の満足度や self

術前の ATR と術前，術後の頂椎の回旋角であった。

image に有意な影響は与えず，ATR の改善率に影響

Cobb 角の矯正に加え，頂椎の回旋変形を取り除くこされることが明らかになった。満足度は肋骨隆起の軽とが術後の hump を減じるために必要なことである

減のみが直接影響するものではなく，冠状面の矯正なと考えられた。また，術後残存した hump の大きさ

ど，複数の因子が影響を与えていることが示唆された。

そのものは患者の満足度や self image に有意な影響

よって，主査，副査は一致して本論分を学位論文としは与えず，ATR の改善率に満足度が影響されることて価値があるものと認めた。

が明らかになった。
（論文審査の結果の要旨）
脊柱側弯症手術においては整容面の改善が重要であり，肋骨隆起の改善も重要な目的のひとつであるが，術後残存する症例も多数存在する。今回胸椎に主たるカーブが存在する Lenke type１，２の思春期特発性No. 5, 2014343

審査学位論文要旨

Eﬃcacy and safety of advanced renal cell carcinoma patients treated with sorafenib:roles of cytokine
pretreatment（進行性腎癌に対するソラフェニブの有効性および安全性：サイトカイン先行投
与の効果）
鈴

木

（論文の内容の要旨）【背景と目的】日本人の進行性腎細胞癌に対するサイ

尚徳多変量解析では CRP 高値と肝転移が有意な予後不良因子として示された。

トカイン治療後のソラフェニブ長期使用については国

ソラフェニブ治療による有害事象の頻度は皮膚障害

内 相臨床試験で，十分に許容され予後を延長すると（67％）が最も多く，次いで消化器症状（26％），高された。しかし，臨床試験での患者母集団はサイトカ

血圧（22％），倦怠感（19％）骨髄抑制（10％），出イン治療抵抗症例のみであり，その結果を日常実臨床

血（６％）等があったが，臨床試験等以前の報告と同に直接当てはめることは出来ない。現在，ソラフェニ様あった。

ブはサイトカイン治療後のセカンドラインとしてだけ【考察】日常実臨床でのソラフェニブ治療に関する効

でなくファーストラインとして使われるようになって果と安全性を確認した。生存率に関しては過去の報告

おり，日常実臨床での効果を確認することは極めて重より良好であったが，安全性については同等であった。

要である。進行性腎細胞癌に対するソラフェニブの使

この検討においてソラフェニブ治療前にサイトカイン

用に関する後向き，質問紙法ベースの検討を行った。

投与が施行された症例は低リスクの症例がより多く含【対象と方法】長野県および山梨県における信州大学

まれていた可能性があるが，サイトカイン先行投与が泌尿器科学教室関連12の医療施設におけるソラフェニ

OS および PFS 延長に寄与したと考えられた。

ブ治療を行った患者110例を対象とした。患者の臨床

進行性腎細胞癌日本人患者に対するソラフェニブ治

データは質問票を用い，患者背景，性別，年齢，既往療は実臨床においても効果的で十分許容されるもので歴，以前のサイトカインまたは分子標的薬の治療歴，あった。

Karnofskyの PS を含む MSKCC によるリスク分類，（論文審査の結果の要旨）

血液データ等を回収，解析した。全生存期間（OS），

進行性腎細胞癌に対するサイトカイン治療後のソラ無増悪生存期間（PFS），PFS 予後不良因子，安全性

フェニブ長期使用は臨床試験で十分に許容され予後のの検討を行った。

延長が証明されているが，実際はサイトカイン治療抵【結果】全体の OS は中央値に到達しなかった。ソラ抗症例以外にも使用されることがあり，その結果を日フェニブ治療前にサイトカイン投与を受けた66例は，常実臨床に直接当てはめることはできない。進行性腎サイトカイン先行投与を受けていない44例に比べ OS細胞癌に対するソラフェニブの有効性および安全性には有意に長く（p＝0.002），また腎摘除術を受けた症

ついての日常実臨床の調査を目的とし，信州大学泌尿

例に限ってもソラフェニブ治療前にサイトカイン投与器科で30症例，関連施設11施設80症例における110例を受けた58例は，サイトカイン先行投与を受けていなを対象とした後向き，質問紙法ベースの検討を行い，

い28例に比べ OS は有意に長かった（p＝0.034）。

全生存期間および無増悪生存期間を主評価項目として，全体の PFS 中央値は11カ月であった。ソラフェニ

リスク因子の評価，有害事象を検討した。

ブ治療前にサイトカイン投与 を 受 け た66例 の PFS

その結果，鈴木は以下の結果を得た。

はサイトカイン先行投与を受けていない44例に比べ１．生存期間，一方で腎摘除PFS は有意に長かったが（p＝0.017）

全生存期間は中央値に到達せず，１年生存率77.5

術を受けた症例に限ってみるとソラフェニブ治療前に％であった。MSKCC 分類（Favorable risk と Inter-

サイトカイン投与を受けた58例は，サイトカイン先行

mediate and Poor risk の２群にわけた）でみると投与を受けていない28例に比べ PFS は有意に延長しFavorable が有意に予後良好であった（Ｐ＝0.025）。

なかった。
（p＝0.091）。

無増悪生存期間の中央値は11カ月であった。同様に

単変量解析では CRP 高値，Na 低値，肝転移などが有意な PFS に関する予後不良因子と考えられたが，344

M SKCC 分類でみると２群間に有意差は認めなかった（Ｐ＝0.253）。
信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

この結果がソラフェニブ単独の治療効果であるのか

３．有害事象を確認するため，サイトカイン治療の有無毎にみると，皮膚症状が手足症候群を含み67％と最多であった。

全生存期間はサイトカイン治療群が有意に予後良好で有害事象の頻度や内容は過去の報告と概ね同様であっあり（Ｐ＝0.002），無増悪生存期間はサイトカイン治た。

療群が有意に予後良好であった（Ｐ＝0.017）。さらに

本論文は多施設共同で110例のソラフェニブ使用症

腎摘後のサイトカイン治療の有無毎でみると，全生存例をまとめており実臨床を反映した結果であった。無期間はサイトカイン治療群が有意に予後良好であり増悪生存期間の中央値は過去の報告に比べ良好であっ（Ｐ＝0.034），無増悪生存期間では有意差はなかった

たことはサイトカイン先行投与が良好な生存期間に影（Ｐ＝0.091）。

響を与えている可能性も考えられた。またリスク因子

２．リスク因子の検討，多変量解析となったCRP陽性，肝転移を認める症例ではソラフェ

Ｐ＜0.05以下を示し た 項 目（肝 転 移 ・Na 低 値 ・ニブの効果が得られにくい可能性が示唆された。

CRP 陽性），M SKCC 分類の５因子で多変量解析を施行し，CRP 陽性（Ｐ＝0.004）と肝転移（Ｐ＜0.001）

以上から主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

が有意なリスク因子であった。

Serum Levels ofInterleukin‑22 and Hepatitis B Core‑related Antigen AreAssociated with Treatment
Response to Entecavir Therapy in Chronic Hepatitis B（Ｂ型慢性肝炎のエンテカビルによる治療効果に対する血清インターロイキン22とＢ型肝炎コア関連抗原の影響）
奥

原（論文の内容の要旨）

禎久
しＢ型慢性肝炎患者で有意に高く，IL‑6，CXCL9，【目的】我々はサイトカインやケモカインがＢ型慢性CXCL10，CXCL11は AST，ALT，ビリルビンと正肝炎の臨床的かつウイルス学的特徴に関連があるか，の相関し，HBsAg とは負の相関を示した。治療前のまた，Ｂ型慢性肝炎のエンテカビルによる治療への反IL ‑22の 上 昇（Ｐ＝0.031）と，HBsAg 低 値（Ｐ＝応とサイトカインとケモカイン，Ｂ型肝炎表面抗原

0.001）およびHBcrAg低値（Ｐ 0.001）は，良好な治（HBsAg），Ｂ型肝炎コア関連抗原（HBcrAg），Ｂ型

療結果と関連していたが，HBV DNA に関連は認め

肝炎ウイルス（HBV）DNA との関連について検討なかった。多変量解析では，IL‑22高値（hazard ratio＝した。

13.67，Ｐ＝0.046）と HBcrAg低値（hazard ratio＝【方法】患者群としてエンテカビルの治療を受けた48

10.88，Ｐ＝0.048）は，独立した VRの予測因子だっ人のＢ型慢性肝炎患者の治療前，治療後６カ月，12カ

た。IL‑22（Ｐ 0.001），HBsAg（Ｐ 0.001），HBcrAg月，24カ月の保存血清とコントロール群として10人の（Ｐ 0.001）は，VR 患者において治療に伴い有意な健常人の保存血清を用いて６つのサイトカイン（IL‑

減少を示した。

2，IL‑6，IL‑10，IL‑12p70，IL‑21，IL‑22）と５つ【結論】治療前IL‑22，HBsAg，HBcrAgはVRと有意の ケ モ カ イ ン（CCL2，CCL3，CXCL9，CXCL10，

な関連性を示していた。さらに，Ｂ型慢性肝炎におけCXCL11）を分析した。患者群では血清マーカーとしるエンテカビル治療では治療前 IL‑22高値，HBcrAgてアルブミン，AST，ALT，ビリルビン，血小板数

低値が VR の独立した予測因子であり新しい指標とを，ウ イ ル ス マ ー カ ー と し て HBsAg，HBcrAg，

なりうる可能性がある。

HBV DNA の量的測定も施行した。ウィルス学的反応（VR）は，治療後24カ月の血清 HBV DNA 量が（論文審査の結果の要旨）
Ｂ型慢性肝炎患者では，その病態や病期の形成に宿2.1log コピー/mL 未満と定義した。

主の免疫応答が関与していると考えられるが，未だ不【結果】39人の患者（81％）は，VRを達成した。VR患

明な点が多く，血中のサイトカインやケモカインを測者では HBsAg と HBcrAg の中央値が non‑VR 患者

定することによってＢ型肝炎の病態と関連することがより有意に低値だった。IL‑6（Ｐ＝0.031），CXCL9

報告されている。また，エンテカビルの投与によるウィ（Ｐ＝0.002），CXCL10（Ｐ＝0.001）は，健常人と比ルス抑制は肝障害の改善だけでなく肝細胞癌の発症を

No. 5, 2014345

審査学位論文要旨

抑えることが報告されている。本研究ではサイトカイ
ンやケモカインがＢ型慢性肝炎の臨床的かつウイルス

ロールに比べＢ型慢性肝炎患者で高値だった。
２．Non‑VR 患者と比して VR 患者では治療前の学的特徴に関連があるか，また，Ｂ型慢性肝炎のエン

IL‑22が有意に高く，治療前の HBsAg，HBcrAg

テカビルによる治療への反応とサイトカイン・ケモカ

は有意に低値で，治療とともに減少した。

イン，ウイルスマーカーや血清マーカーとの関連について検討した。

３．IL ‑6，CXCL9，CXCL10，CXCL11は，AST，
ALT，ビリルビンと正に相関し，HBsAg とは負にエンテカビルの治療を受けた48人のＢ型慢性肝炎患相関した。

者の治療前，治療後６カ月，12カ月，24カ月の保存血４．多変量解析の結果，IL‑22 27.8pg/mL 以上，

清と10人の健常人の保存血清を用いて，IL‑2，IL‑6，

HBcrAg 5.7logU/mL 以下が VR を予測するため

IL ‑10，IL ‑12p70，IL ‑21と IL ‑22，CCL2，CCL3，の独立した因子だった。

CXCL9，CXCL10と CXCL11を Luminex cytokine

これらの結果よりIL‑6，CCL2，CXCL9，CXCL10

assaysystemを用いて分析した。また，血清マーカーは健常人と比 するとＢ型慢性肝炎患者で高値であり，としてアルブミン，AST，ALT，ビリルビン，血小板

Ｂ型，Ｃ型肝炎の炎症と相関するという既報を支持する

数を，ウイルスマーカーとして HBsAg，HBcrAg，

データであった。治療前 IL‑22，HBsAg，HBcrAg

HBV DNA の測定も施行した。ウィルス学的反 応

はVRと有意な関連性を示していた。さらに，エンテ（VR）は，治療後24カ月の血清HBV DNA量が2.1log

カビル治療では治療前 IL‑22高値，HBcrAg 低値がコピー/mL 未満と定義したVRの独立した予測因子であり新しい指標となりう

その結果，奥原は次の結論を得た。

る可能性が示唆された。主査，副査は一致して本論文

１．IL‑6，CCL2，CXCL9，CXCL10は健常人コントを学位論文として価値があるものと認めた。

Risk factors for diabetes mellitus and impaired glucose tolerance following allogeneic hematopoietic
stem cell transplantation in pediatric patients with hematological malignancies（小児血液腫瘍患者における同種造血幹細胞移植後の糖尿病および耐糖能異常の発症危険因子）
平

林

佳奈枝

（論文の内容の要旨）

は血縁者間末梢血幹細胞移植，６名は非血縁者間臍帯

【背景と目的】同種造血幹細胞移植（HSCT）の治療

血移植を受けた。21例で初回移植時の前処置には全身

成績は向上しているが，小児期 HSCT 後患者におけ放射線照射を用いた。移植後急性期は連日または数日る晩期障害が問題となっている。中でも内分泌疾患の毎に早朝食前に血糖測定を行った。21例において移植頻度が高い。近年，小児期に HSCT を受けた患者で後の耐糖能評価として経口ブドウ糖負荷試験を行った。

糖尿病（DM ）の若年発症が報告されているが，その耐糖能異常の診断にはアメリカ糖尿病学会の基準を用発症危険因子については明らかにされていない。本研いた。発症危険因子の解析には χ2検定または Fisher

究では，小児血液腫瘍患者における同種 HSCT 後のの直接法を用い，p＜0.1を示した因子について多変

DM および耐糖能異常（IGT）の発症危険因子を同定

量解析を行った。p＜0.05を統計学的有意とした。

することを目的とした。

【結果】５例が DM ，５例が IGT と診断され，DM ＋【対象と方法】当科で同種 HSCT を施行され，移植

IGT の 累 積 発 生 率 は 移 植 後 ５ 年 が11.6％，10年 が後２年以上が経過した小児血液腫瘍患者のうち，耐糖

69.3％であった。評価時に肥満者はいなかった。空能検査を受けた22名（男７，女15）について診療録を

腹時血糖，HbA1c，空腹時インスリン，インスリン用いて後方視的に検討した。初回移植時年齢，耐糖能

抵抗性の指標である HOMA‑IR と M atsuda ISI は，

評価時年齢，移植から耐糖能評価までの期間の中央値

DM ＋IGT 群と正常群（NGT 群）で有意差を認めた。

は，各々7.4歳（0.8‑13.5歳），14.1歳（6.3‑21.8歳），

NGT 群12例中，２例に HOMA‑IR の高値を認めた。

5.9年（2.0‑14.7年）であった。３名は２回以上の血インスリン分泌指数は DM ＋IGT 群と NGT 群で有縁者間移植を受けた。残り19名は単回移植で，６名は意差を認めなかった。多変量解析で DM ＋IGT の発

血縁者間骨髄移植，３名は非血縁者間骨髄移植，４名症に関与する因子として，移植時年齢６歳以上が抽出

346

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨された。DM ＋IGT 群は移植後に早朝食前血糖値が有が問題となっている。中でも内分泌疾患の頻度が高い。

意に上昇したが，NGT 群は移植前後で有意差を認め近年，小児期に HSCT を受けた患者で糖尿病（DM ）ず，移植前処置から移植後60日までの早朝食前血糖値の若年発症が報告されているが，その発症危険因子

は DM ＋IGT 群が NGT 群より有意に高かった。高については明らかにされていない。今回，平林らは小血糖を反復する症例（移植急 性 期 の 早 朝 食 前 血 糖

児血液腫瘍患者における HSCT 後の DM および耐糖150mg/dl以上が４回以上）は DM ＋ IGT 群に多い傾能異常（IGT）の発症危険因子を同定するため，同種向を認めた。糖尿病家族歴，原疾患，移植ソース，グ

HSCT 後２年以上が経過した小児血液腫瘍患者のう

レード

ち，耐糖能検査を受けた22名（男７，女15）について

以上の急性移植片対宿主病（GVHD），慢性

GVHD，移植後の糖質コルチコイド投与期間やタク
ロリムス使用に関しては，有意差を認めなかった。19

診療録を用いて後方視的に検討した。
その結果，平林らは次の結論を得た。

例で早朝空腹時の血清レプチンとアディポネクチンを

１．22例中，５例が DM ，５例が IGT と診断され，測定したが，DM ＋IGT 群と NGT 群に有意差は認め

DM ＋IGT の累積発生率は移植後５年が11.6％，

られなかった。

10年が69.3％であった。

【考察】糖尿病は心血管病変を含む様々な慢性疾患の２．空腹時血糖，HbA1c，空腹時インスリン，イン

原因となり，患者の QOL を悪化させる。今回，移植

スリン抵抗性の指標である HOMA‑IR と Matsuda

後の耐糖能異常の発症危険因子を検討した。多変量解

ISI は，DM ＋IGT 群と NGT 群で有意差を認めた。

析の結果，移植時年齢６歳以上が DM と IGT の発症

正常群（NGT 群）12例中，２例 に HOMA‑IR の危険因子として同定された。

高値を認めた。インスリン分泌指数はDM ＋IGT群

移植急性期の高血糖反復は統計的に有意な発症危険と NGT 群で有意差を認めなかった。

因子としては同定されなかったが，DM ＋IGT 群は３．多変量解析の結果，DM ＋IGT の発症に関与する

NGT 群と比 して移植急性期の平均血糖値が有意に因子として，移植時年齢６歳以上が抽出された。糖高かった。Fuji らは血糖コントロールによって移植

尿病家族歴，原疾患，移植ソース，グレード 以上後の感染症や臓器障害の頻度が減少すると報告しておの急性移植片対宿主病（GVHD），慢性 GVHD，り，積極的な血糖コントロールが移植後耐糖能異常を移植後の糖質コルチコイド投与期間やタクロリムス軽減できるか今後の検討課題である。

使用に関しては，有意差を認めなかった。

今 回，DM ＋IGT 群 に 肥 満 者 は い な か っ た。An-

４．DM ＋IGT 群は移植後に早朝食前血糖値が有意に

naloro らは，メタボリックシンドロームを合併した

上昇したが，NGT 群は移植前後で有意差を認めず，

成人 HSCT 後患者において，インスリン抵抗性に関

移植前処置から移植後60日までの早朝食前血糖値は与するアディポサイトカインの異常を報告しているが，DM ＋IGT 群が NGT 群より有意に高かった。高血

今回の検討では DM ＋IGT 群と NGT 群で血中レプ糖を反復する症例（移植急性期の早朝食前血糖150

チンやアディポネクチン値に有意差を認めなかった。

mg/dl 以上が４回以上）は DM ＋IGT 群に多い傾HSCT 後の耐糖能異常には，肥満やアディポサイト

向を認めた。

カイン産生異常以外の要因が関与している可能性が示唆された。

５．19例で早朝空腹時の血清レプチンとアディポネクチンを測定したが，DM ＋IGT 群と NGT 群に有意耐糖能の評価時期が DM ＋IGT 群と NGT 群で異差は認められなかった。

なっていたことは，思春期におけるインスリン抵抗性

今回の研究で，小児期同種 HSCT 後に DM またはの影響や評価時年齢の違いによるのかもしれない。

IGT が高頻度に発症することが示され，発症危険因

NGT 群の一部の患者で HOM A‑IR が高値を示した子として移植時年齢６歳以上が同定された。発症危険

ことを踏まえると，NGT 群であっても DM ＋IGT に因子が示されたことは移植後耐糖能異常の早期発見・移行する可能性は否定できないため，慎重な経過観察

介入に有用であり，患者の予後改善につながる重要なが必要である。

知見と思われ，主査，副査は一致して本論文を学位論（論文審査の結果の要旨）文として価値があるものと認めた。

同種造血幹細胞移植（HSCT）の治療成績は向上しているが，小児期 HSCT 後患者における晩期障害
No. 5, 2014347

審査学位論文要旨

Electrocardiographic J waves are associated with right ventricular morphology and function:evaluation by cardiac magnetic resonance imaging（心電図上のＪ波は右室の形態と機能に関係している：心臓 MRI を用いた評価）
竹

内（論文の内容の要旨）

崇博36例であった。

【目的】近年，基礎心疾患を持たない若年者の突然死

右室の最大径と面積ではＪ群が non J 群と比 し有（心室細動）の原因として早期再分極症候群（Ｊ波症

意に大きいとの結果が得られた（最大径：p＝0.002，

候群）が提唱され，その原因や不整脈に至る機序に関

面積：p＝0.022）。しかし左室の最大径と面積では両して様々な方面から研究が進められている。当科入院群間で有意差を認めなかった。右室の面積収縮率はＪ時における心電図でもＪ波が存在する例を少なからず群が non J 群に比認めるが，心室細動などの致死性不整脈の既往がある

0.013）。左室の面積収縮率は両群間で有意差を認めな症例はそのごく一部であり，その意義はいまだに明らかった。

かになっていない。

して有意に低値であった（p＝

またＪ波の大きさと右室の最大径に関しては弱いがＪ波症候群は初期には Brugada 症候群の亜型と考正の相関が認められ，Ｊ波の大きさと右室の面積収縮

えられており，遺伝子の異常（SCN5A），性差（男率に関しては弱いが負の相関が認められた。Ｊ波の大性に多い），治療薬に対する反応，心室細動を生じる

きさと左室の計測値に関してはそれぞれ相関が認めら

直前に波形が変化することなど類似点が多く指摘されれなかった。

ている。Brugada 型心電図とＪ波を併存する症例に抗不整脈薬がＪ波に及ぼす影響も考慮し，抗不整脈

おいては致死性不整脈がより高率に発生するとの報告

薬を使用している症例を除外して同様の検討を行ったもある。また Brugada 症候群では CT・MRI を用いが結果に違いを認めなかった。

た研究で右室流出路に形態的な異常を認めたとの報告【考察】本研究ではＪ波の有無は右室の形態・機能とがなされている。

の関連を認めたが，左室の形態・機能とは関連を認め

我々はこれらの研究報告からＪ波を認める症例にもなかった。

右室の形態的異常が関与している可能性を考えて，心現在，Ｊ波は主に再分極の異常と考えられている。

臓 MRI を用いたＪ波の有無と右室の形態的・機能的

しかし脱分極の異常を示唆する心室遅延電位とＪ波の異常との関係について研究を行った。

関連を報告した論文も認められる。本研究の結果では【方法】2008年１月から2010年９月までに当院で心臓Ｊ波は再分極の異常のみで説明されうるものではなく，

MRI を施行した連続105例でＪ波の有無と右室の形態

右室の形態・機能異常による右室の伝導遅延，つまりと収縮能の関係を調べた。12誘導心電図上の関連する脱分極異常もＪ波に関与していることを示唆する。

２誘導以上でＪ点が基線から0.1mV 以上上昇しているものをＪ波と定義した。

臨床上認められるＪ波の多くは主に右室の形態・機能異常による伝導障害の存在により生じているが，そＪ波の陽性群（Ｊ群）と陰性群（non J 群）に分類の程度は様々であり，一般的には致死性不整脈を生じし，形態に関しては右室・左室の最大径，右室・左室ない症例が多く含まれていると考えられる。過去にはの中央部での拡張期の面積，また収縮能に関しては右心室細動直前にＪ波が増高しているとの報告があり，室・左室における中央部の面積での収縮率を計測してＪ波陽性例の中で何らかの負荷の増大により更に伝導検討した。

障害が増強した場合などにＪ波の波高が増高し心室細またＪ波の波高とこれらの計測値の相関も検討した。
【結果】不整脈源性右室心筋症（ARVC），脚ブロッ
クの症例，心房細動/粗動の症例はイプシロン波や脚動が生じやすくなるものと考えられる。
（論文審査の結果の要旨）
特発性心室細動（Idiopathic VF）既往症例では，ブロックによる伝導遅延，心電図上の基線が一定でな

VF 既往がない症例と比いことによってＪ点の高さに影響を及ぼすため除外し，性例が多いという論文が2008年に報告された（Ｊ波症

68例において解析を行った。Ｊ群が32例，non J 群が候群）
。また近年 Brugada 症候群症例で右室流出路の348

して有意に心電図上Ｊ波陽信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

形態異常，伝導異常を指摘する論文が多く報告されてかった。

いる。Ｊ波症候群は Brugada 症候群との類似性が多３．Ｊ波の波高は右室の最大径では弱い正の相関を示

く指摘されており，Brugada 型心電図を要する症例

し，面積収縮率では弱い負の相関を示した。Ｊ波のにＪ波を認めると心室性不整脈が更に高率で生じると波高と左室の測定値との間には相関は認められなされている。本研究は Brugada 症候群と同様にＪ波かった。

症候群でも右室の形態異常がＪ波の有無に関連していこれらの結果から，Ｊ波の有無は右室の形態・機能ることを調べたものである。

の異常と関連していると考えられた。Ｊ波は右室の形

心臓 M RI を施行した連続105例のうち心房細動や態異常による伝導遅延を示している可能性がある。

脚ブロックなどＪ波が正確に測定できない症例を除外

現在Ｊ波は早期再分極が原因と考えられている。しし，68例で検討した。Ｊ波の有無によって２群（Ｊ波かし脱分極異常を反映する遅延電位検査が陽性になる

陽性群とＪ波陰性群）に分類し，形態異常の有無を調との報告がある。本研究の結果からも，再分極だけでべた。MRI での形態異常の指標として右室と左室そはなく脱分極の異常がＪ波の形成に寄与している可能

れぞれの最大径，面積を測定した。また機能異常の指性が考えられる。また VF が生じる直前にＪ波の波高標として面積収縮率を測定した。更にＪ波の波高を測が増高したとの症例報告が多く発表されている。本研

定し右室・左室それぞれの測定値との相関を調べた。

究の結果からは，右室への負荷の増大により右室の伝その結果，竹内崇博は次の結論を得た。

導遅延が更に著明になった際に VF が生じやすくなる

１．Ｊ波陽性群では右室の最大径，中央部の面積はＪ
波陰性群と比して有意に拡大していた。また面積収縮率は有意に低下していた。

可能性が考えられる。
本論文は特発性心室細動の成因について検証した臨
床上有意義な研究であり，主査，副査は一致して本論

２．左室に関しては最大径，中央部の面積，面積収縮

文を学位論文として価値があるものと認めた。

率ともにＪ波陽性群と陰性群とに有意差を認めな

Nox4‑derived ROS Signaling Contributes to TGF‑β‑induced Epithelial‑mesenchymal Transition in
Pancreatic Cancer Cells（膵癌細胞の EMT における活性酸素産生遺伝子 Nox4の機能的役割）
平賀（論文の内容の要旨）

理佐子
新たな治療戦略を見出す可能性がある。

【背景と目的】上皮間葉移行（Epithelial‑Mesenchymal

一方，NADPH oxidase（Nox）ファミリーから産Transition 以下 EMT）は，上皮細胞が間葉系細胞に生される活性酸素は多様な生理学的現象においてシグ

形態変化する現象であり，これにより一定の極性があナル伝達物質として働くことが分かっている。Nox

り細胞同士が密に結合している上皮細胞が，間葉系細ファミリーは NADPH を基質として活性酸素を産生胞のように細胞間の結合が疎となり運動能を獲得する。

する酵素であり，Nox1‑5とDuox１，２の７つの構成

EMT の過程では紡錘様形態の獲得，N ‑cadherin や

メンバーから成る。膵癌においては，このうち Nox4

vimentinなど間葉系マーカーの発現上昇，E‑cadherin

由来の活性酸素が膵癌細胞の増殖に必要であることがや ZO‑1など上皮マーカーの発現抑制や Snail，Twist

報告されているが，Noxファミリーが果たしている多などの転写因子の誘導が起こり，上皮細胞が間葉系面的な役割を考えると，膵癌における発癌，癌形質の細胞様の表現型を獲得する。この EM T は初期胚発生

発現調節に Nox4が更に関与している可能性がある。

過程や創治癒過程において重要であることが明らかに実際に転移乳癌細胞におけるEMTの誘導には，TGF‑

なっているが，上皮系癌細胞が浸潤・転移能力を獲得す

βにより発現増強した Nox4が関わっていることが報る際にも重要な過程である。癌細胞ではgrouth factor，

告されている。しかしNox4が他の癌腫におけるEMT

cytokines，matrix protein などが EMT を促進してにも同様に関与しているのか，また Nox4の発現増強

おり，膵癌では TGF‑βが EMT の主要な誘導因子とおよび産生された活性酸素が如何なる蛋白質を標的として知られている。TGF‑βによる EMT 誘導のシグ

して修飾し，その活性を調節するか，そのシグナル伝

ナル伝達が解明されれば，膵癌の浸潤・転移に対する達については明らかにされていない。

No. 5, 2014349

審査学位論文要旨

本研究では膵癌細胞の TGF‑β依存性 EMT におけに Nox4が関与している可能性がある。本研究では膵

る Nox4の機能的役割について検討した。

癌細胞の TGF‑β依存性 EMT における Nox4の機能【方法】膵癌細胞株panc‑1細胞において，TGF‑βによる的役割について検討した。

NOx4発現をPCR法にて確認し，また活性酸素産生量

方法は，膵癌細胞株 panc‑1細胞において，TGF‑βについてluminol assayにて検討した。そしてNox4にによる Nox4発現を PCR 法にて確認し，また活性酸

対する干渉RNA（small interference RNA：siRNA）

素産生量についてluminol assayにて検討した。そして等を用いて，TGF‑βによるEMT誘導について検討した。

Nox4に対する干渉RNA（small interference RNA：EMT の確認は，細胞形態の観察または E‑cadherin，siRNA）等を用いて，TGF‑βによるEM T誘導についSnail の発現を指標とした immunoblot 法，免疫蛍光て検討した。EMT の確認は，細胞形態の観察または染色，migration assayで行った。また手術切除標本

E‑cadherin，Snail の発現を指標とした immunoblot

検体を用いて免疫組織染色を行い，Nox4，TGF‑β，法，免疫蛍光染色，migration assayで行った。また

N‑cadherin の発現について検討した。

手術切除標本検体を用いて免疫組織染色を行い，Nox4，【結果】膵癌細胞株 panc‑1細胞において，TGF‑βにTGF‑β，N‑cadherin の発現について検討した。

より Nox4の発現増強および Nox4由来活性酸素産生

その結果，平賀は次の結論を得た。

量の増加を認めた。Nox4由来活性酸素は，TGF‑β１．膵臓癌細胞において，TGF‑βにより Nox4の発による細胞形態変化，E‑cadherin の発現抑制および現増強および Nox4由来活性酸素産生量の増加を認

Snail の発現上昇を媒介し，TGF‑βによる細胞運動

めた。

亢進に必要であった。TGF‑β‑Nox4による EMT に

２．Nox4由来活性酸素は，TGF‑βによる細胞形態

は p38M APK のリン酸化亢進が伴っていた。さらに変化，E‑cadherin の発現抑制および Snail の発現

TGF‑β‑Nox4を介してPTP1Bの活性が抑制され，こ上昇を媒介し，TGF‑βによる細胞運動亢進に必要

れが E‑cadherin 低下（EM T 誘導）に必要であった。

であった。

またヒト膵臓がん組織では，TGF‑β，Nox4および
EMT を示唆する N‑cadherin の産生が亢進していた。

３．TGF‑β‑Nox4による EMT には p38MAPK のリ
ン酸化亢進が伴っていた。

【結論】膵癌における TGF‑β依存性 EM T において，４．さらに TGF‑β‑Nox4を介する PTP1B の活性抑Nox4はp38MAPKのリン酸化を亢進させ，またPTP1B

制が E‑cadherin 低下（EMT 誘導）に必要であっの活性を抑制することで癌細胞内のレドックス制御をた。

行い，EMT におけるシグナル伝達物質としての役割を果たしていることが示唆された。
（論文審査の結果の要旨）

５．ヒト膵臓がん組織では，TGF‑β，Nox4および
EMT を示唆する N‑cadherin の産生が亢進していた。

上皮間葉移行（Epithelial‑Mesenchymal Transition

これらの結果より，膵癌細胞における TGF‑β依存

以下 EM T）は上皮細胞が間葉系細胞に形態変化する

性 EMT において，Nox4が癌細胞内のレドックス制現象であり，これにより上皮細胞が運動能を獲得する。

御を行うことにより，EMT におけるシグナル伝達物

この EM T は上皮系癌細胞が浸潤・転移能力を獲得す

質として重要な役割を果たしていることが確認された。

る際にも重要な過程である。膵癌ではTGF‑βがEMT

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値の主要な誘導因子として知られている。TGF‑βにがあるものと認めた。

よる EMT 誘導のシグナル伝達が解明されれば，膵
癌の浸潤・転移に対する新たな治療戦略を見出す可能性がある。
一方，NADPH oxidase（NOX）ファミリーから産生される活性酸素は多様な生理学的現象においてシグナル伝達物質として働くことが分かっている。膵癌
においては Nox4由来の活性酸素が膵癌細胞の増殖に必要であることが報告されているが，Noxファミリーが果たしている多面的な役割を考えると，膵癌の EMT
350

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

High endothelial venule‑like vessels and lymphocyte recruitment in testicular seminoma（精巣セミ
ノーマにおける高内皮細静脈様血管とリンパ球の動員）
酒

井

康

弘

（論文の内容の要旨）

cell adhesion molecule 1（MAdCAM ‑1）に対する【背景と目的】Seminoma は精巣原発腫瘍の中で最も抗体と MECA‑79抗体を用いた蛍光二重染色を行い，頻度が高く，組織学的には，腫瘍胞巣周囲に腫瘍浸潤

これらの分子の発現の有無を検討した。またＬ‑セレ

リンパ球（tumor‑inﬁltrating lymphocyte；TIL）を

クチン･IgM キメラ・Ｅ‑セレクチン･IgM キメラを伴うことが特徴である。TIL は seminoma をはじめ

（6‑硫酸化）シアリルルイスＸに対する機能性プロー

様々な腫瘍の免疫監視や生長抑制に重要である上，予ブとして用い，in vitro selectin chimera binding

後との相関を指摘している報告もあり，TIL の腫瘍

assayを 行 っ た。加 え て CD20/CD79α（Ｂ 細 胞）・組織への浸潤機序の解明は腫瘍免疫を精察する上で非CD 3（Ｔ 細 胞 ）・MECA‑79の 免 疫 三 重 染 色 や CD 8

常に重要な関心事であった。今回我々は，TIL は高（細胞傷害性Ｔ細胞）
・MECA‑79の免疫二重染色を行い，内皮細静脈（high endothelial venule；HEV）様血管

HEV 様血管の内腔側に接着しているリンパ球を鏡という特殊な血管を介して供給されている可能性を考検し計測して，何れが優位のリンパ球サブセットかをえた。本来 HEV は二次リンパ組織に存在し，血液中統計学的に明らかにした。さらに CD8・Ki‑67の免疫からリンパ球を「ホーミング」させる役割を担う。古典

二重染色を施し，細胞傷害性Ｔ細胞が腫瘍組織に動員的にはまず，HEV の内皮細胞上に発現する6‑硫酸化された後の増殖傾向を調べた。

シアリルルイスＸがリンパ球上のＬ‑セレクチンと結合【結果】26例全例で TIL が腫瘍組織に認められ，そのすることで互いに弱く接着し，リンパ球の tethering

うち24例（92.3％）には TIL の集簇が顕著な部を中and rolling が起こる。その後ケモカインによって活心に MECA‑79陽性 HEV 様血管が出現してい た。

性化されたリンパ球は，自身に発現するインテグリン

HEV 様血管の密度は3.2±5.6/cm で，年齢・pT 分

を HEV 上に発現する細胞接着分子と結合させ，強固

類・Ｓ分類・Stage・リンパ節転移の有無との間にはな接着を営むことで HEV 内皮上に arrest して，相関は認められなかった。これらの HEV 様血管は

血管外組織への遊走が始まる。最近では，様々な炎症

HECA‑452抗体にも同様に陽性であり，両抗体の染性疾患や腫瘍において HEV に類似した血管が炎症部

色性から seminoma の HEV 様血管上には6‑硫酸化

位や腫瘍組織に出現し，生理的なホーミングと同様の

シアリルルイスＸが発現していることが示された。ま機序でリンパ球を局所に動員していると考えられていた in vitro selectin binding assayの結果，Ｌ‑セレク

る。しかし，seminoma は TIL を豊富に伴うにも関チン･IgM キメラの結合は同定に能わなかったが，Ｅ‑わらずその報告がない。今回我々は，精巣 seminoma

セレクチン･IgM キメラは HEV 様血管の内腔面に結で HEV 様血管の出現とホーミング関連分子の発現や合した。従って HEV 様血管に発現する6‑硫酸化シア

その機能性，さらに HEV 様血管を介したリンパ球動

リルルイスＸは，員や増殖の様式を明らかにすべく，本研究を施行した。

硫酸化が一部不全なものも含まれてはいるが，潜在的【材料と方法】信州大学医学部附属病院で seminomaにはこの糖鎖構造はセレクチンとの結合能を有すること病理診断された精巣手術材料26例を対象とした。ホルとが機能性に示された。さらに，ホーミングに関する

マリン固定パラフィン包埋組織標本を用い，extended

細胞接着分子のうち VCAM ‑1・MAdCAM ‑1は陰性

core 1 O‑glycan 上の6‑硫酸化‑アセチルグルコサミンの６位の‑アセチルラクトサだったものの ICAM ‑1の発現がみられたことから，

ミンを認識するMECA‑79抗体とシアリルルイスＸを認

リンパ球の HEV 様血管を介した血管外遊走のうち識するHECA‑452抗体で免疫染色を行い，seminoma

tethering and rolling と arrest に必要なホーミの HEV 様血管に発現する糖鎖構造を調べた。リンパング関連接着分子が備わっていることが証明された。

球ホーミングに関する細胞接着分子であるintercellular

実際これらの HEV 様血管には多数のリンパ球が接着

・vascular celladhesion molecule 1（ICAM ‑1）

している様子が顕微鏡下で確認でき，その数を計測す・mucosaladdressin
adhesion molecule 1（VCAM ‑1）

ると CD3 T 細胞の方が CD20/CD79α B 細胞より有No. 5, 2014351

審査学位論文要旨

意に多く（p＜0.0001），従って HEV 様血管を介 しchimera binding assayを 行 っ た。さ ら に 抗 CD3・たリンパ球動員はＴ細胞が優位であると考えられた。

抗 CD20/CD79α・抗 CD8各抗体と M ECA‑79抗体を

Ｔ細胞の密度は最もリンパ球浸潤の著しい部の強拡大

用いた免疫多重染色を行い，HEV 様血管内腔面に接５視野を計測したところ780.8±318.1/HPFで，HEV着するリンパ球サブセットの数を計測した。

様血管の密度との間には相関は認められなかった。一

その結果，酒井は次の結論を得た。

方，CD8 細胞傷害性Ｔ細胞は HEV 様血管内にはご１．92.3％に MECA‑79 HEV 様血管を同定した。

く少数しか観察されないものの，腫瘍組織に存するＴ

そ の 数 は3.2±5.6/cm で，年 齢 ・pT 分 類 ・ Ｓ 分細胞はほとんどが CD8 細胞傷害性Ｔ細胞だった。血類・Stage・リンパ節転移の有無とは相関を認めな管外に存する CD8 細胞傷害性Ｔ細胞には Ki‑67陽性

かった。

のものが目立ったため，細胞傷害性Ｔ細胞は血管外に２．HEV様血管の内腔面がMECA‑79・HECA‑452両遊走された後に腫瘍抗原などによって刺激され，局所抗体に陽性であり， tethering and rolling stepで増殖している可能性が示唆された。

に必須な6‑硫酸化シアリルルイスＸが発現している【結論】精巣 seminoma では，TIL（特にＴ細胞）がことが分かった。また binding assayでは L‑selec-

HEV 様血管を介して腫瘍組織に動員され，さらに細tin･IgM の結合は同定できなかったものの E‑selec-

胞傷害性Ｔ細胞については HEV 様血管を介して腫瘍

tin･IgM の結合を認めたことから，6‑硫酸化シアリ

組織に動員された後に増殖していることが本研究で示ルルイスＸのうちされた。

の硫酸化は不完全な可能性があるものの，selectin（論文審査の結果の要旨）‑アセチルグルコサミンの６位との結合能を潜在的に有することを示した。

Seminoma は腫瘍胞巣周囲に腫瘍浸潤リンパ球（tu-

３． Arrest step に必要な CAM のうち ICAM ‑1の

mor‑inﬁltrating lymphocyte；TIL）を伴う two‑cell

みが HEV 様血管に発現していることが分かった。

pattern を特徴とする病理組織像を呈する。一方，

４．HEV 様血管に接着するリンパ球はＴ細胞がＢ細二次リンパ組織には高内皮細静脈（high endothelial

胞より有意に多く（p＜0.0001），Ｔ細胞の密度はvenule；HEV）というリンパ球ホーミングを担う特780.8±318.1/HPF で，HEV 様血管の密度との相殊な血管が存在する。本研究では，これに類似の形

関 を 認 め な か っ た。一 方，細 胞 傷 害 性 Ｔ 細 胞 は態・機能を有する HEV 様血管が seminoma にも出

HEV 様血管壁に接着しているものは少ないが，す現し，腫瘍免疫に重要な役割を担う TIL の腫瘍組織でに浸潤している TIL の大部分は細胞傷害性Ｔ細中への動員に寄与している可能性を検証した。

胞で，これらには Ki‑67陽性像が目立った。

Seminoma と病理診断された精巣手術材料26例をこれらの結果より，精巣原発 seminomaでは，HEV対象とし，M ECA‑79抗体を用いて免疫組織化学を行様血管を介してＴ細胞が優位に腫瘍組織に動員される

い HEV 様血管を同定した。またリンパ球ホーミング

一方で，細胞傷害性Ｔ細胞は HEV 様血管を介して少のうち tethering and rolling step に必要な6‑硫酸数が腫瘍組織に動員された後に，腫瘍細胞近傍で増殖化シアリルルイスＸや arrest step に必要な cell

していることが本研究で示された。これらは腫瘍組織

adhesion molecule（CAM ）のホーミング関連分子がへの炎症細胞浸潤という腫瘍免疫の初動を捉えた研究

HEV 様血管でも発現しているか否かを HECA‑452・として大変有意義なものであり，よって，主査・副査

抗ICAM ‑1・抗VCAM ‑1・抗M AdCAM ‑1各抗体を用は一致して本論文を学位論文として価値があるものといた免疫組織化学で調べるとともに，L‑/E‑selectin

認めた。

Analysis of Y chromosome haplogroups in Japanese population using short amplicons and its
application in forensic analysis（短鎖増幅産物を応用した日本人集団のＹ染色体ハプログループの解析と法医学試料の解析への応用）
原

山

雄

太

（論文の内容の要旨）

法医学分野において極めて一般的となっている。しか【背景・目的】今日，DNA 型解析による個人識別はしながら，法医実務では，腐敗・変性等の影響を受け

352

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

た劣化 DNA 試料を扱うことがあり，市販されているな解析結果を得ることができた。

個人識別キットでは解析が困難な場合が少なくない。

【考察】組換えや突然変異の少ないＹ染色体上の SNP

加えて，検査できる DNA 量が微量であることもしばを用いることは，男系の血縁関係の推定に極めて効果しばである。

的であると考えられ，今回複数の SNP を迅速に解析

一方，Ｙ染色体上にある男性特有の領域は組換えができるシステムを構築した。現在汎用されているＹ染

なく，突然変異が起こりにくいことから男系血縁の身色体の検査試薬と本システムの劣化 DNA の解析では，

元確認に用いられる。現在Ｙ染色体上の SNP 変異を検査試薬である AmpFlSTR Yﬁler Kit は高分子領域用いることで，約300の系統分類としてのハプログルーの解析が不良な傾向にあった。原因として，高度に劣プ分類が可能である。本研究は，日本人に特異的なＹ化した DNA 試料は様々な要因により DNA の断片化

染色体のハプログループに着目し，法医実務試料に対が進んでいるためと考えられる。一方，今回構築した応可能なハプログループ分類のためのシステムを構築

システムは短い PCR 増幅産物を解析対照とすることすることを目的とした。劣化した DNA 試料は高度にで高度に断片化した DNA の解析においても有効な結断片化されていることから，PCR 産物の短鎖化を行果が得られ，法医学的試料に適した検査方法であるこうとともに，微量な DNA 試料を解析し，同時に複数とが示唆された。また，ミトコンドリア DNA などのの SNP を解析するマルチプレックスシステムを構築

SNP 解析を併用することにより，劣化試料において，し，法医実務試料に対する有効性について検討した。

個人識別能力が飛躍的に向上すると考えられる。

【方法】日本人に変異が多いと推測されるＹ染色体上（論文審査の結果の要旨）の22個の SNP を，３つのマルチプレックス PCR 法

法医学実務では，腐敗・変性等の影響を受けた劣化により分類するシステム（システム１〜３）を構築しDNA 試料を扱うため，市販されている個人識別キッ

た。システム１により日本人を大別し（ハプログルー

トでは，解析が困難な場合が少なくない。加えて，検プ Ｃ，Ｄ，Ｄ1，Ｄ2，Ｄ3，Ｏ，O1a，Ｏ2，Ｏ3，Ｎ，査できる DNA 量が微量であることもしばしばである。

Ｑを分類する），システム２によりハプログループＤ2

劣化 DNA とは，主として DNA の断片化であり，この細分化，システム３によりハプログループＯ2の細のようなDNAを解析するためには，PCR増幅産物の分化を行った。いずれの SNP 解析も，法医実務試料

サイズを可能な限り短くすることが有効と考えられてで散見される断片化した DNA の解析のため，可能ないる。市販されている個人識別キットは，４塩基程度

限り短い PCR 増幅産物（77〜150bp）を生成するプの繰り返し配列の違いを見る Short Tandem Repeats

ライマーを新たに設計して施行した。これらのシステ（STR）型多型解析が用いられているため，PCR 増

ムを用いて，血縁関係のない日本人男性432人の血液幅産物の長さが大きくなる傾向にある。そこで，SNP

或いは口腔粘膜細胞を用いて分類を行い，その頻度をによる個人識別法に着目し可能な限り PCR 増幅産物確認した。また，DNA を人工的に分解させた試料及の短鎖化を行い，Ｙ染色体上の SNP を解析すること

び劣化が予想される硬組織から抽出した DNA についで，日本人に特異的なハプログループ分類を行った。

て，現在市販されているＹ染色体の検査試薬（Amp-

更に，微量試料に対応するため，Ｙ染色体上の SNP

FlSTR Yﬁler Kit）と，本システムの比 検討を行っを一度に解析するマルチプレックス PCR システムをた。

構築し，日本人集団のハプログループ分類のデータ集【結果】今回新たに構築した３つのマルチプレックス

積とともに法医実務試料に対する解析の有効性についシステムが良好に機能することを確認した。日本人て検討した。

432人の分類では，全13のハプログループに分類する
ことができたが，0.9％（４人）には変異が認められず，分析の標的とは異なるハプログループに属するとその結果，原山は次の結論を得た。
１．新たに構築したシステムで日本人集団を全13のハ
プログループに分類することができた。

推定された。高度に劣化している DNA 試料を用いて，

２．本システムで日本人集団に多いとされるハプログ

本システムの有効性を検討したところ，市販の Amp-

ループＤ2及びＯ2の細分化を行い，Ｄ2については

FlSTR Yﬁler Kit を用いた解析では高分子領域で極細分化することが可能であった。また，日本人集団

端に PCR 増幅効率が低下し判定が困難であったのにでハプログループＯ2に分類された殆どがハプログ

対し，本システムではこれらの劣化試料に対して有効

ループ O2b に属することが判明した。

No. 5, 2014353

審査学位論文要旨

３．本システムは SNP に着目し，PCR 産物を可能想定される断片化された DNA 解析にも有効な結果をな限り短鎖化することで，市販されている STR 型得ることができ，同様に断片化した試料に対応可能な解析では分析が困難であった法医実務試料でも解析

ミトコンドリア DNA 等の SNP 解析と併用すること可能であった。

で，法医実務上の個人識別に極めて有用であると考え以上の結果より，今回新たに開発したＹ染色体上のられる。よって，主査，副査は一致して本論文を学位

SNP を用いて系統分類するシステムは，法医実務で論文として価値があるものと認めた。

Expression of long‑form N‑acetylglucosamine‑6‑O‑sulfotransferase 1 in human high endothelial
venules（ヒト高内皮細静脈における長鎖型 ‑アセチルグルコサミン6‑ 硫酸転移酵素１の発
現）
藤

原

麻衣子

（論文の内容の要旨）

pcDNA1‑GlcNAc6ST ‑1 M #1，pcDNA1‑GlcNAc6【背景と目的】 ‑アセチルグルコサミンの６位の炭素

ST ‑1 M #2）およびそれぞれのＣ末端に FLAG を付に硫酸基を転移する‑アセチルグルコサミン6‑ ‑けたベクター（それぞれ pcDNA1‑GlcNAc6ST‑1 M

硫酸転移酵素（GlcNAc6ST）はヒトでは５種類が#1‑FLAG，pcDNA1‑GlcNAc6ST ‑1 M #2‑FLAG）

クローニングされており，そのうち GlcNAc6ST‑1とを作製し，HeLa 細胞に遺伝子導入した。この一連のGlcNAc6ST‑2はリンパ節，扁桃，パイエル板などの遺伝子導入 HeLa 細胞と Anti‑GlcNAc6ST ‑1‑N 抗二次性リンパ性臓器に存在する高内皮細静脈（high体，抗 FLAG 抗体であるＭ2抗体を用いたウェスタン

endothelial venule：HEV）に発現している。この２

ブロッティングと蛍光二重免疫染色を行い，長鎖型とつの酵素は HEV 内腔面に発現している6‑硫酸化シア

短鎖型の細胞内局在の違いを調べた。さらに細胞内にリルルイスＸ（6‑sulfo sLeX）の生合成に排他的に関おける長鎖型と短鎖型 GlcNAc6ST‑1の酵素活性の違

与し，Ｌ‑セレクチンを介したリンパ球ホーミングにいを調べるために，発現ベクター pcDNA1‑GlcNAc6

おいて重要な役割を演じている。ヒト GlcNAc6ST‑1

ST‑1 M #1と pcDNA1‑GlcNAc6ST‑1 M #2をそれぞ

cDNA の読み枠の長さは1,593bp であるが，その５ʼ

れ HeLa 細胞に遺伝子導入し，6‑硫酸化シアリルＮ‑

末端には翻訳開始メチオニンコドンが141bp 離れてアセチルラクトサミン（6‑sulfo sialyl LacNAc）を２個存在している。これら２つの翻訳開始メチオニン

認識するＳ2単クローン抗体を用いて Cell‑ELISA をコドンから転写が始まると，長鎖型と短鎖型の２種類行った。長鎖型および短鎖型 GlcNAc6ST‑1の蛋白のの GlcNAc6ST‑1が合成されることになる。これまで

発現レベルの違いを調べるため，それぞれ FLAG 付の多くの研究は短鎖型の GlcNAc6ST‑1を対象にしてきのベクターを遺伝子導入した HeLa 細胞とそれにおり，長鎖型に対する解析は行われていない。また，

対するＭ2抗体を用いて FACS 解析を行った。また，

長鎖・短鎖型に拘わらず，これまでヒトGlcNAc6ST‑

mRNA の発現レベルの違いを調べるために半定量的

1の内因性蛋白発現については確認されていない。本

分析 RT ‑PCRを行った。また，長鎖型 GlcNAc6ST ‑研究の目的は，ヒト GlcNAc6ST‑1における２個の翻1がヒトの組織で内在性に発現しているか否かを調べ

訳開始メチオニンコドンの間に存在するアミノ酸残基るため，ヒトのリンパ節組織切片に Anti‑GlcNAc6を認識する抗体を作製し，長鎖型 GlcNAc6ST‑1がヒ

ST‑1‑N 抗体と，HEV で発現している6‑sulfo sLeXトの組織において内因性に発現しているか否かを明らに対する特異抗体の M ECA‑79，ゴルジマーカーであかにし，さらに，長鎖型および短鎖型 GlcNAc6ST‑1

る抗 GM 130・抗 GS27・抗 Rab8抗体を用いた蛍光免の細胞内局在や酵素活性の違いを明らかにすることで疫染色を行った。

ある。

【結果】遺伝子導入したHeLa細胞のウェスタンブロッ【対象と方法】長鎖型ヒト GlcNAc6ST ‑1を特異的にティングと蛍光免疫染色で，Anti‑GlcNAc6ST ‑1‑N

認識する抗体である Anti‑GlcNAc6ST ‑1‑N を作製

抗体は長鎖型 GlcNAc6ST‑1を特異的に認識した。まし，その反応特異性を確認した。長鎖型および短鎖型

た，長鎖型 GlcNAc6ST‑1は核周囲に点状に存在し，GlcNAc6ST‑1をコードする発現ベクター（それぞれ

これは短鎖型 GlcNAc6ST‑1においても同様であった。

354

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

短鎖型，長鎖型 GlcNAc6ST ‑1の細胞内酵素活性を

長鎖型および短鎖型 GlcNAc6ST‑1の細胞内局在や酵

Cell‑ELISA により解析したところ，GlcNAc6ST ‑1

素活性の違いを検討した。

は両者とも GlcNAc6ST‑2より有意に高い酵素活性をその結果，藤原は次の結論を得た。

示したが，両者間で有意差は認められなかった。また，

１．遺伝子導入した HeLa 細胞のウェスタンブロッ

FACS 解析では長鎖型 GlcNAc6ST ‑1に比べて短鎖ティングと蛍光免疫染色で，Anti‑GlcNAc6ST‑1‑型の方が蛋白の発現が高く，半定量的分析 RT ‑PCR

N 抗体は長鎖型 GlcNAc6ST ‑1を特異的に認識しでは短鎖型の方が mRNA 発現も高かった。さらに，た。

Anti‑GlcNAc6ST‑1‑N抗体と各種ゴルジマーカーを用

２．長鎖型 GlcNAc6ST‑1は核周囲に点状に存在し，いたヒトリンパ節組織の蛍光二重免疫染色では，ヒト

これは短鎖型 GlcNAc6ST‑1においても同様であっの長鎖型 GlcNAc6ST‑1は HEV を構成する内皮細胞た。

の trans‑Golgi network（TGN）に発現していた。

短鎖型，長鎖型 GlcNAc6ST‑1の細胞内酵素活性【結論】Anti‑GlcNAc6ST‑1‑N抗体は長鎖型GlcNAc6ST‑

を Cell‑ELISA により解析したところ，GlcNAc61を特異的に認識し，免疫組織染色にも使用できることをST ‑1は両者とも GlcNAc6ST ‑2より有意に高い酵示した。また，長鎖型および短鎖型のヒトGlcNAc6ST‑1素活性を示したが，両者間で有意差は認められなの細胞内における局在はほぼ同じであり，両者におけかった。

る細胞内酵素活性は同等であることが示唆された。さ３．FACS 解析では長鎖型 GlcNAc6ST ‑1に比べ てらに，ヒトリンパ組織には長鎖型 GlcNAc6ST‑1が内短鎖型の方が蛋白の発現が高く，半定量的分析RT‑在性に発現しており，その大部分は HEV を構成する

PCR では短鎖型の方が mRNA 発現も高かった。

内皮細胞の TGN に局在していることを示した。
（論文審査の結果の要旨）

４．Anti‑GlcNAc6ST ‑1‑N 抗体と各種ゴルジマー
カーを用いたヒトリンパ節組織の蛍光二重免疫染色‑アセチルグルコサミンの６位の炭素に硫酸基をでは，ヒトの長鎖型 GlcNAc6ST‑1は HEV を構成転移する ‑アセチルグルコサミン6‑ ‑硫酸転移酵素

する内皮細胞の trans‑Golgi network（TGN）に（GlcNAc6ST）はヒトでは５種類がクローニングさ

発現していた。

れており，そのうち GlcNAc6ST‑1と GlcNAc6ST‑2

これらの結果より，Anti‑GlcNAc6ST ‑1‑N 抗体

はリンパ節，扁桃，パイエル板などの二次性リンパは長鎖型 GlcNAc6ST ‑1を特異的に認識することが性臓器に存在する高内皮細静脈（high endothelial

明らかとなった。また，長鎖型および短鎖型のヒト

venule：HEV）に発現している。この２つの酵素はGlcNAc6ST ‑1の細胞内における局在はほぼ同じで

HEV 内腔面に発現している6‑硫酸化シアリルルイス

あり，両者における細胞内酵素活性は同等であること

Ｘ（6‑sulfo sLeX）の生合成に排他的に関与し，Ｌ‑が示唆された。さらに，ヒトリンパ組織には長鎖型

セレクチンを介したリンパ球ホーミングにおいて重GlcNAc6ST‑1が内在性に発現しており，その大部分要な役割を演じている。ヒト GlcNAc6ST ‑1 cDNA

は HEV を構成する内皮細胞の TGN に局在しているの読み枠の長さは1,593bp であるが，その５ʼ末端にことを示した。よって，主査，副査は一致して本論文は翻訳開 始 メ チ オ ニ ン コ ド ン が 141bp離 れ て ２ 個を学位論文として価値があるものと認めた。

存在している。これら２つの翻訳開始メチオニンコド
ンから転写が始まると，長鎖型と短鎖型の２種類のGlcNAc6ST‑1が合成されることになる。これまでの多くの研究は短鎖型の GlcNAc6ST‑1を対象にしており，長鎖型に対する解析は行われていない。また，長鎖・短鎖型に拘わらず，これまでヒト GlcNAc6ST‑1の内因性蛋白発現については確認されていない。そこ
で，ヒト GlcNAc6ST‑1における２個の翻訳開始メチ
オニンコドンの間に存在するアミノ酸残基を認識する抗体を作製し，長鎖型 GlcNAc6ST‑1がヒトの組織において内因性に発現しているか否かを調べると共に，
No. 5, 2014355

審査学位論文要旨

Polymorphisms of the Tissue Inhibitor of Metalloproteinase 3 Gene Are Associated with Resistanceto High‑Altitude Pulmonary Edema(HAPE)in a Japanese Population:A Case Control Study Using
Polymorphic Microsatellite Markers（日本人における高地肺水腫に対する疾患抵抗性と TIMP3
遺伝子多型との関連について：マイクロサテライトマーカーを用いた症例対照研究）
小

林

信

光

（論文の内容の要旨）

る候補遺伝子を検索し，TIMP3 が検出された。また，【背景・目的】高地肺水腫（HAPE）は低酸素環境下

D22S280は TIMP3 内に局在することから TIMP3 がで発症する非心原性の肺水腫である。その原因は，低HAPE 発症に関連する可能性があると考え，同遺伝

酸素環境への曝露による肺血圧の亢進，肺血管透過性子の関連性を確証するために SNP を用いた詳細マッの亢進，肺胞上皮細胞の障害等が考えられているが，ピングを行った。その結果 rs130293 が有意差をもっ未だ未解明な部分も多い。HAPE では再発症例が多て疾患関連性を認めた。アリルＣの頻度は HAPE‑s

く，低酸素環境下に対する反応の個体差が原因の一つ

群で有意に低く疾患抵抗性を示した（OR＝0.22，95と考えられており，これまで HAPE 発症に関わる遺％ CI 0.09‑0.55）。また，ハプロタイプ解析では３つ伝子の研究が多く報告されているが，報告の多くは本の SNPs（rs738992，rs130287 ，rs130293 ）より構疾患発症に機能的に関与する一部の遺伝子解析である。

成されたハプロタイプにおいて，CAC が HAPE‑s 群

発症原因に関わる遺伝子検索には染色体上を網羅的にで有意に低く，このハプロタイプが HAPE への疾患検索する遺伝子解析が必要である。本研究では全ゲノ抵抗性に関連があると考えられた。

ムに存在する400種類のマイクロサテライト（MS）【考察】今回我々は TIMP3 の肺に関する報告に着目

マーカーを用いて相関解析を行い，日本人の HAPE

して SNPs 研究を行った。その結果，rs130293（Ｔ/に発症に関与する可能性のある候補遺伝子を同定した。

Ｃ）のアリルＣが HAPE に対して有意に疾患抵抗性

さらに候補遺伝子内に設けた一塩基多型（SNP）をであることを示した。これらの結果から，アリルＣの用いて詳細マッピングを行い，HAPE との関連につ存在が HAPE の発症に対して防御的な役割を果たしき検討した。

ていると考えられる。TIMP3はいくつかある TIM Ps【方法】研究対象はHAPE既往者群53人（HAPE‑s）のうち唯一細胞外質（ECM ）に強く結合し，MMPと，非発症者群67人（HAPE‑r）が対象である。HAPE‑の活性を制御することにより健常な組織を維持する。

sは登山中に2700m以上でHAPEを発症し，信州大学

TIMP/M MP システムの障害は，肺においては炎症

医学部附属病院で治療を受けた患者である。HAPE‑rや浮腫，気腫，線維化など様々な病態を引き起こすとは長野県登山協会および信州大学登山部に所属し，頻考えられている。HAPE では肺血管の透過性が亢進回に3000m 以上の登山を行い，これまで高山病や心し，肺水腫を起こすとされており，TIMP3の遺伝子疾患の症状を起こしたことがない者である。研究対象

多型による TIMP/MM P システムの不均衡が生じ，者からは同意を得た上で静脈血を採取し，遺伝子を抽結果として肺血管に影響を及ぼすことにより HAPE

出した。これらの検体を M S マーカーと共に PCR でが発症する可能性があると考えられた。

増幅した後，各マーカーのアリル頻度を用いて解析を【結論】本研究により，HAPE に関連する可能性のあ行った。その結果９個のマーカーで両群間に有意差をる新しい遺伝子を明らかにした。また，TIMP3遺伝認めた。その一つである D22S280が内在する TIM P3

子の SNP である rs130293のアリルＣが日本人におけ遺伝子（TIMP3 ）に着目し，６つの SNPs についてる HAPE の発症に対して疾患抵抗性であることを示

遺伝子型タイピングを行い，両群の遺伝子頻度を比

した。

した。
【結果】M S 解析では５個のマーカーで有意に疾患感（論文審査の結果の要旨）
高地肺水腫（HAPE）は低酸素環境下で発症する

受性を，４個のマーカーで有意に疾患抵抗性を認めた。

非心原性の肺水腫である。HAPE は再発症例が多く，そのうち疾患との強い関連を示した D22S280に着目

低酸素環境下に対する反応の個体差が原因の一つと考した。このマーカーとの，前後100kbpの範囲に存在す

えられており，これまで HAPE 発症に関わる遺伝子356

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨の研究が報告されているが，その多くは一部の遺伝子解析である。発症原因に関わる遺伝子検索には染色体を，４個のマーカーで有意に疾患抵抗性を認めた。
２．有意差を認めたマーカーのうち，D22S280は上を網羅的に検索する遺伝子解析が必要である。今回，TIMP3遺伝子内に局在した。

マイクロサテライト（M S）マーカーを用いた網羅的

３．TIM P3遺伝子の SNP を用いた詳細マッピング

遺伝子解析を行ない疾患に関連する候補遺伝子を検索を行い，その結果 rs130293 が有意差をもって疾患した。また，さらに候補遺伝子内に設けた一塩基多型

関連性を認めた。

（SNP）を用いて詳細マッピングを行い，HAPE と４．rs130293 のアリルＣの頻度は既往者群で有意にの関連につき検討した。

低く疾患抵抗性を示した

研究対象はこれまで HAPE を発症し，信州大学病

これらの結果から，TIMP 遺伝子内の rs130293ア

院で治療を受けた既往者53人と，何度も高地に到達しリルＣの存在が HAPE の発症に対して防御的な役割

高山病の症状を起こしたことがない非発症者群67人を果たしていると考えられる。TIMP/M MPシステムが対象である。研究対象者からは同意を得た上で遺伝の障害は，肺においては肺血管の構造に影響を及ぼし，子を抽出した。これらの検体を各 MS マーカーのア

様々な病態を引き起こすと考えられている。HAPE

リル頻度を用いて解析を行った。その結果９個のマーでは肺血管の透過性が亢進し，肺水腫を起こすとされカーで両群間に有意差を認めた。その一つである D22ており，TIMP3の遺伝子多型により TIMP/MMP シ

S280が内在する TIM P3遺伝子（TIMP3 ）に着目し，ステムの不均衡が生じ，結果として肺血管に影響を及

６つの SNPs について遺伝子型タイピングを行い，ぼし HAPE が発症する可能性を示唆している。

両群の遺伝子頻度を比 した。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とその結果，小林信光は次の結論を得た。

して価値があるものと認めた。

１．M S 解析では５個のマーカーで有意に疾患感受性

Microarrayand FISH‑based genotype‑phenotype analysis of 22 Japanese patients with Wolf‑Hirschhorn syndrome（Wolf‑Hirschhorn 症候群の日本人患者22名におけるマイクロアレイと FISH 解析を用いた遺伝型―表現型相関の検討）
清

水

健

司

（論文の内容の要旨）

先行して行ったＧ分染法もしくは4p 端部プローブの【背景と目的】Wolf‑Hirschhorn症候群（以下 WHS）

FISH 法にて4p 欠失が同定され WHS と診断されたは，４番染色体短腕（4p）遠位部の欠失に起因し，日本人22例を対象とした。マイクロアレイ法によりゲ

特徴的顔貌所見，成長障害，精神運動発達遅滞，およノムコピー数異常を確定し，BAC プローブを用いたびけいれんを主徴とする隣接遺伝子症候群である。解メタフェーズ FISH 法にて染色体再構成の詳細を確

析技術の進展により，4p 欠失領域および合併する領認した。臨床所見の詳細は各病院の臨床遺伝専門医か域の重複など詳細な遺伝型が明らかにされてきたことらの情報を論文提出者が再評価した。

に伴い，WHS の主要徴候の責任領域や，重症度との【結果】対象に認めた欠失切断点は多様であり，サイ相関が検討されてきた。しかしながら未解明な点は多ズは2.06‑29.42M b で全例 WHS 主要徴候の責任領

く，特に生命予後や発達予後に重要な影響を及ぼすけ域である WHS critical region 2（WHSCR2）を含んいれんにおいて，その責任領域の詳細や遺伝型⎜表現でいた。＜６Mb：６例，６‑15M b：11例，＞15Mb：

型の関連検討は重要課題と考えられている。本研究は，５例で，20例が端部欠失，２例が中間部欠失で，端部欠

日本人 WHS22症例においてマイクロアレイ法とメタ失のうち４例はその他領域の重複を伴っていた。マイクフェーズ FISH 法により得た遺伝型と，けいれんを

ロアレイ結果より11q 端部重複とのモザイクが疑われ含む臨床症状との関連の詳細を検討することを目的とた症例20と，Ｇ分染法で中間部欠失と正常細胞とのモザした。

イクと報告されていた症例15は，それぞれ詳細なメタ【対象と方法】2010年１月より2012年２月の期間，国フェーズ解析を実施し，4p 切断点が一致する der ⑷内８病院において，顔貌所見を含む臨床所見に加え，（４；11）（ p15.31； q25）［73％］と del⑷（p15.31）

No. 5, 2014357

審査学位論文要旨［27％］の構造異常モザイクと，del⑷（p15.33）［80％］

含めまだ不明な点は多い。今回，日本人 WHS22症例と del ⑷（p16.3）［20％］の異なる2種類の端部欠失において詳細な遺伝型―表現型の検討を行った。

のモザイクと判明した。

診察所見とＧ分染法もしくは FISH 法で WHS とけいれんを20/21（95％）に認め，欠失サイズ＜６Mb

診断された22例を対象とし，マイクロアレイ法によるではけいれん発症年齢１歳未満の頻度が２/６（33％），

詳細な欠失領域の同定と，BAC プローブを用いたメ

重積頻度は１/６（17％）であったのに対し，≧６Mb

タフェーズ FISH 解析による染色体再構成の確認をでは12/14（86％），13/14（93％）と高い傾向にあっ実施した。各病院の臨床遺伝専門医により情報提供さた。４例の難治性けいれんを認めた例において臭化カ

れた臨床所見の詳細を，論文提出者が再評価した。

リウム/ナトリウムが追加投与されており，全例に投その結果次の結論を得た。

与後の改善を認めた。眼の構造異常と腎臓合併症頻度

１．WHS 症例の4p 欠失範囲は2.06Mb‑29.42M b とに，合併頻度と欠失サイズの相関を認めた。顔貌所見多様であり，端部欠失20例，中間部欠失２例で，そは最小欠失の症例1と中間部欠失の症例13のみが非典の他領域の端部重複の合併例４例であった。

型例であった。従来報告のなかった合併症として，高２．複雑な構造異常モザイクが確認された２例は，一コレステロール血症を５例（36％）に，１例（５％）

方が不均衡転座と端部欠失，他方が欠失範囲の異なに多発性骨軟骨腫を認めた。

る２種類の端部欠失であった。

【考察】マイクロアレイ解析は詳細な欠失範囲の同定

３．けいれん発症20例において，重症度の指標としてに非常に有用な染色体検査であるが，モザイク率が偏っ設定した① 発症年齢１歳未満の頻度② 重積頻度は，た場合は検出限界があり，染色体再構成やモザイクの共に６M b 未満の欠失サイズをもつ症例に比べ，６最終的な判断にはメタフェーズ FISH 解析が有用でMb 以上の例で高い傾向にあった。また難治性けいあった。症例15のように同一個人の中で大小二種類のれんを認めた4例は全例臭化カリウム/ナトリウムの異なるサイズの端部欠失をもつモザイクの報告は過去

追加投与により改善した。

に例がなく，端部欠失の不安定性を示唆する症例と考えられた。

４．眼の構造異常と腎臓合併症の頻度に欠失サイズとの相関を認めた。また従来報告のなかった高コレス

けいれんについては，その重症度を発症年齢と重積テロール血症を14例中５例に認めた。

頻度から評価したが，≧６M b の欠失に重症度が高い収集した WHS 症例は，単純な4p 欠失だけでなく傾向がみられ，結果として発達遅滞の重症度につなが他領域の重複合併や時に複雑な構造異常のモザイクをると考えられた。一方，けいれんのない１例は，従来含む多様な遺伝型を呈していた。詳細な欠失サイズののけいれん責任遺伝子である LETM1 遺伝子を含む同定にマイクロアレイは有用であり，最終的な染色体

ものの，これより遠位の領域が保たれている中間部欠再構成やモザイクの判断にはメタフェーズ FISH 解失例であり，LETM1を含まない遠位の欠失でけいれん

析を組み合わせて行うことが重要であった。また既報を認める既報告との比 より，WHSにおけるもう一つ

告例との比 により，従来想定されていたけいれんののけいれん感受性領域が0.76‑1.3Mb に存在する可責任遺伝子よりも遠位に存在する CTBP1/CPLX1 が能性を示唆した。本領域内にはけいれんとの関連が動

新たなけいれんの感受性遺伝子と推察され，これらを物モデルにおいて示唆されている CTBP1/CPLX1 の含む６Mb 以上の欠失においてけいれんの重症度が高２遺伝子を内包しており，これらの新規感受性遺伝子

い傾向が認められ，WHS 健康管理における新たな指と LETM1 領域を含む≧６M b 欠失においては，けい標になりうる知見と考えられた。

れん発症後，臭化物治療や含めた注意深い対応が望まれ，WHS 健康管理における新たな進歩になりうる知

上記の研究内容について，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

見と考えられた。
（論文審査の結果の要旨）
Wolf‑Hirschhorn症候群（以下 WHS）は４番染色体短腕（4p）遠位部の欠失を含む隣接遺伝子症候群
であり，近年の解析技術の進歩により遺伝型―表現型の詳細が明らかになってきたが，けいれんとの関連を
358

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

Surgical Outcomes of Acute type A Aortic Dissection in Elderly Patients（高齢者急性Ａ型大動脈解離の手術成績）
駒

津

和

宜

（論文の内容の要旨）が残存しており，18例中10例で偽腔開存していた。最【背景と目的】急性Ａ型大動脈解離（aTAAD）に対

大 径 は，残 存 群 は2.5±1.1年 で＋2.83±4.58mm，する手術では高齢は risk factor の一つと考えられ，

非 残 存 群 は2.2±0.8年 で＋1.00±1.25mm で，両 群

70歳以上の aTAAD 手術での死亡率は16.1‑37.5％と間に有意差は認めなかった。

報告されている。高齢者 aTAAD に対する手術戦略【考察】高齢者 aTAAD 症例の手術成績は2002年に43は議論のあるところだが，Hemiarch 置換術（HAR），％，2010年に38.2％と報告されており，これらと比部分弓部置換術（PAR），全弓部置換術（TAR）のいして当院の成績は良好であった。70歳以上の症例にずれかが術者によって選択される。2004年以降，当院

おいては平均余命を考慮すると弓部の残存解離が予後では70歳以上の高齢者 aTAAD 症例に対しては entryに影響する可能性は低いと考え，我々は entry切除に切除を目的として可能な限り HAR や PAR を選択し主眼を置いた治療戦略で積極的にHARまたはPARを

低侵襲化を図った。今回，この戦略に則って治療した

選択している。早期死亡に関する有意差はなかったが高齢者 aTAAD 症例の手術成績について検討した。

体外循環時間と脳分離体外循環時間は有意に HAR＋

【対象と方法】2004年１月〜2012年４月に当院で手術PAR群で短く，在院期間も短い傾向にあった。今回のを施行した aTAAD 症例156例のうち70歳以上の59例

検討で，術中脳梗塞発症率が25.4％であり諸家の報告を対象として，HAR＋PAR 群と TAR 群で患者背景，

6.7‑22.7％より高かったが，2010年以降，脳分離体外手術手技，早期・中期成績を比検討した。また，

循環流量を送血圧30mmHg 以上，両側前頭葉の経皮

follow up CT で弓部〜下行大動脈の解離残存の有的酸素飽和度40％以上を指標に20ml/kg/分まで増量

無・最大径の変化についても検討した。手術は，血栓することにより2010年以降の脳梗塞発症率は4.8％と閉塞型で偽腔の厚さ10mm 以下の症例を除き，全例

改善し，近年の報告8.9‑9.8％よりも良い成績であっで緊急手術を行い，高齢者 aTAAD 症例では entry

た。また，手術時間，心停止時間，循環停止時間が切除を最重視し，上行大動脈または弓部小弯に entry

術中脳梗塞の risk factorであると報告されている。

を確認した場合もしくは観察可能範囲に entryを認め今回の検討で，脳梗塞の有無での２群比 を行うと，なかった場合にはHARを，小弯以外の弓部にentryを手術時間と心停止時間が脳梗塞発症群で有意に長く，確認した場合に PAR を，左鎖骨下動脈付近に entry

これらの報告と合致する結果となった。

を確認した場合には TAR を各々選択した。

術後12カ月以上の経過で CT follow した28例の検【結果】２群間で性別・年齢など患者背景に有意差は

討では平均2.4年の経過中に下行大動脈が2.2mm 増認められなかった。手術手技は HAR 47例，PAR４

大しており，諸家の報告と同程度の変化であった。残

例，TAR８例で，全体での entry切除率は94.9％，

存解離の有無による２群間比 では瘤の増大に有意差14例で併施手術を要した。手術時間に関しては，手術を認めなかった。Entry残存，偽腔開存，幅広な偽腔

時間は両群間に有意差を認めなかったが体外循環時間が瘤化に影響し遠隔期生存率を低下させると報告されおよび脳分離体外循環時間において HAR＋PAR 群ており，Entryを切除し偽腔を縮小化することが重要

で有意に短かった。早期成績は，両群合わせて４例のと考えられた。

在院死亡があり，いずれも解離による冠動脈灌流不全

本検討では再手術率2.3％，再手術５年回避率96.36に伴う急性心筋梗塞から低拍出量症候群に至ったこと％であり，初回手術時平均年齢77歳と日本人平均余命が原因であった。在院日数は HAR＋PAR 群37.0±を考慮すると満足のいく結果であり，70歳以上の症例

17.9日，TAR 群68.4±37.4日で，両群間に有意差はに HAR・PAR を施行することは合理的と考えられ認めなかったが HAR＋PAR 群で短い傾向にあった。

た。

Figure１に全生存曲線および大動脈関連イベント回【結語】高齢者 aTAAD に対する我々の手術戦略は死避曲線を示した。Follow up CT 28例中で18例で解離亡率が低く良好な成績であった。entry切除に主眼を

No. 5, 2014359

審査学位論文要旨

置いた手術戦略で，再手術や大動脈関連死の危険性をは両群間に有意差は認めなかったが，体外循環時増すことなく死亡率を低減することができた。

間・脳分離体外循環時間では HAR＋PAR 群で有（論文審査の結果の要旨）

意に短かった。

急性Ａ型大動脈解離（aTAAD）の手術において，４．早期成績では，在院死亡は４例（6.8％）でいず

手術手技や臓器保護技術の進歩をもってしても高齢れも大動脈解離に伴う冠灌流不全が関与したものでは未だ危険因子の一つである。aTAADに対する術式あった。周術期脳梗塞を15例（25％）に認めたが，選択は議論のあるところであるが，2004年以降，当2010年１月以降の脳分離灌流の ﬂow 増量以後は4.8

院では高齢者 aTAAD 症 例 に 対 し て は entry切 除 を％と改善を認めた。合併症率で両群間に有意差は認基本として低侵襲化を図ることでmortality・morbidity

めなかった。

を低減できると考え，可能な限り全弓部置換術を避け

５．平均 follow 期間は43.9カ月で，Follow 期間中にHemiarch 置換術や部分弓部置換術を選択する方針と14例の死亡があり，大動脈関連死は２例に認めた。

した。

また，１例に大動脈解離関連の再手術を要したが，2004年１月〜2012年４月当院で緊急手術を受けた70残存した弓部解離が原因で再手術を要した症例はな

歳以上のaTAAD症例59例について，患者背景，手術かった。大動脈関連イベント５年回避率は96％で関連要素，早期・中期成績について検討し，低侵襲化あった。

が図られた群（HAR＋PAR 群）と図られなかった群（TAR 群）で比６．術後１年以上経過した Follow up CT 28例の検討検討を行った。

では，Entry切除＋解離残存群での大動脈最大径のその結果，駒津和宜は次の結果を得た。

変化は解離非残存群と比べて有意な差を認めなかっ

１．患者背景は，男性20名・女性39名で，平均年齢はた。

77.0歳であった。年齢，性別，術前状態について両群間に有意差は認めなかった。

これらの結果より，高齢者aTAADに対する手術でentry切除を基本として Hemiarch 置換術や部分弓部

２．手術は，Hemiarch 置換術47例，部分弓部置換術

置換術を選択することは大動脈関連イベントのリスク

４例，全弓部置換術８例であり，14例で大動脈基部を上げることなく手術死亡を低減できると考えられた。

置換術や冠動脈バイパス術や併施などの併施手技を主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値要した。

があるものと認めた。

３．手術時間・心停止時間・循環停止時間・出血量でPedicleMorphologyUsing Computed Tomography‑based Navigation Systemin Adolescent Idiopathic
Scoliosis（特発性思春期側弯症における CT‑based navigation systemによる椎弓根径，長さの計
測）
倉

石

修

吾

（論文の内容の要旨）【対象と方法】AIS 患児15例（女児14例，男児１例），【はじめに】脊柱側弯症の矯正固定に椎弓根スクリュー

平均年齢14.1（11〜17）歳を対象とした。255椎510椎が使用され高い矯正率を認める。しかしながら日本人

弓根を測定した。平均 Cobb 角63.6（43〜100）度，小児の椎弓根は細く，スクリュー刺入にはスクリュー

Lenke type１：10例，Lenke type２：２例，Lenkeの椎弓根からの逸脱による脊髄，神経根損傷などの危type３：３例。Ｔ1からＬ5までの椎弓根の最大径とス険が伴う。そこで CT‑based navigation system によクリュー刺入経路の長さを navigation CT と stan-

る椎弓根径とスクリュー長の計測を行い，回避すべき

dard axial CT で測定した。

椎体レベルについて検討した。

【結果】平均椎弓根径は両Ｔ11，12，Ｌ5 左Ｌ3，４【目的】思春期特発性側弯症（以下 AIS）患者の椎弓以外でnavigationでの計測のほうが太くなった。右は根の形や長さに関して３次元解析の妥当性について

Ｔ3（Ｐ＝0.0009），Ｔ4（Ｐ＝0.000054），Ｔ5（Ｐ＝navigation CT と standard axial CT で計測し，比 ，0.0013），Ｔ7（Ｐ＝0.039），左はＴ4（Ｐ＝0.033）
，Ｔ5

検討した。

（Ｐ＝0.029）で有意差を認めた。平均椎弓根長は，左360

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

はすべて standard axial CT での計測の方が長くなっＬ5までの椎弓根（255椎510椎弓根）の最大径とスクた。Ｔ1（Ｐ＝0.00024），Ｔ3（Ｐ＝0.010），Ｔ4（Ｐ＝

リュー刺入経路の長さを navigation CT で測定した。

0.0043），Ｔ6（Ｐ＝0.010），Ｌ1（Ｐ＝0.0010），Ｌ2

navigation CT による３次元解析の妥当性について，（Ｐ＝0.0009），Ｌ3（Ｐ＝0.0051）で有意差を認めた。

standard axial CT でも計測し，navigation CT の測

右は胸椎レベルではＴ3以外は navigation CT での計定値と比 ，検討した。

測の方が長くなり，Ｔ7（Ｐ＝0.019）では有意差を認

その結果，倉石修吾は次の結果を得た。

めた。腰椎レベルでは standard axial CT での計測の１．平均椎弓根径は両Ｔ11，12，Ｌ5 左Ｌ3，４以外

方が長くなり，Ｌ2（Ｐ＝0.025）で有意差を認めた。

で navigation CT での計測のほうが太くなった。

【結論】胸椎の concave side で standard axial CT で２．平均椎弓根長は，左はすべて standard axial CTは椎弓根は細く長く測定される。よって，standard

での計測の方が長くなった。

axial CT でプランすると胸椎の concave side でスク

３．navigation CT で測定し手術で選択されたスク

リュー先端が大動脈に到達するする可能性が高くなる。

リューの太さについて術後 standard axial CT で評

また，CT‑based navigation system を使用した方が価すると，脊柱管内に２mm 以上逸脱したのは6.9より太いスクリューを刺入できる。よって刺入可能な％であった。

レベルも多くなる。

４．navigation CT で測定し手術で選択されたスク（論文審査の結果の要旨）

リューの長さについて，standard axial CT で評価

脊柱側弯症の矯正固定に椎弓根スクリューが使用さすると，対側に逸脱するような長いスクリューは選れ高い矯正率を認める。しかしながら日本人小児の椎択されていなかった。

弓根は細く，スクリュー刺入にはスクリューの椎弓根これらの結果より，胸椎のconcave sideでstandardからの逸脱による脊髄，神経根損傷などの危険が伴う。

axial CT では椎弓根は細く長く測定される。よって，

そこで CT‑based navigation system による椎弓根径

standard axial CT で術前に使用するスクリューの計とスクリュー長の計測を行い，回避すべき椎体レベル

画を立てると胸椎の concave side でスクリュー先端について検討した。

が大動脈に到達するする可能性が高くなる。また，

思春期特発性側弯症患児15例（女児14例，男児１例），平均年齢14.1（11〜17）歳を対象とした。平均
Cobb 角63.6（43〜100）度，Lenke type１：10例，
Lenke type２：２例，Lenke type３：３例。Ｔ1から

navigation を使用した方がより太いスクリューを刺入できる。よって刺入可能なレベルも多くなる。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Characteristics and prediction of hepatitis B e‑antigen negative hepatitis following seroconversion inpatients with chronic hepatitis B（慢性Ｂ型肝炎患者の HBe抗原のセロコンバージョン後の HBe
抗原陰性肝炎の特色と発症の予想）
森

田（論文の内容の要旨）進継続する。この様な病態は HBe 抗原陰性慢性肝炎と【背景と目的】Ｂ型ウイルス（HBV）キャリアの自然

呼ばれ，HBe 抗原陽性の慢性肝炎に比

経過は，HBV の活動性とそれに対する宿主の免疫応

動性が高く，肝硬変への移行や肝発癌が多いことが報答から，免疫寛容期，免疫排除期，免疫監視期に分類告されている。今回の研究では，HBe 抗原の SC 前される。免疫寛容期は HBV の活動性は高いが肝炎は後で長期経過観察可能であったＢ型慢性肝炎症例を対ない。免疫排除期になると肝炎を発症し HBV の活動

象に，HBe 抗原陰性慢性肝炎の臨床的特徴を検討し性は低下傾向となる。この過程で HBe 抗原陽性からた。

HBe 抗体陽性へ SC（seroconversion）すると HBV【対象と方法】HBe 抗原の SC 前３年から後３年以上の活動性が低下し肝炎が鎮静化する（免疫監視期）。

経過観察可能であったＢ型慢性肝炎例36例を対象とし

しかし，一部の症例では SC しても HBV の活動性がた。SC 後の経過観察期間の中央値は11.6年（範囲：低下しないか，一旦低下しても後に再活性化し肝炎が3.2〜26.0年）であった。経過中，HBe 抗原・抗体，

No. 5, 2014

し肝炎の活

361

審査学位論文要旨

HBs抗原量，HBcr抗原量，HBV DNA量，PC（pre‑性が低下し肝炎が鎮静化する（免疫監視期）。しかし，

core）変異，BCP（basal core promoter）変異を経一部の症例では SC しても HBV の活動性が低下しな

時的に測定した。SC 後の ALT 値の変動は積分 ALT

いか，一旦低下しても後に再活性化し肝炎が継続する。

値にて評価し慢性肝炎の有無を判定した。

この様な病態は HBe 抗原陰性慢性肝炎と呼ばれ，【結果】 対 象 の36症 例 は SC 前 に は 全 例 ALT 高 値

HBe 抗原陽性の慢性肝炎に比であった。SC前後に，１年以上 ALT 正常化（＜ 31く，肝硬変への移行や肝発癌が多いことが報告されて

IU/L）した場合を肝炎鎮静化とし，最初の ALT 正いる。今回の研究では，HBe 抗原の SC 前後で長期常化を鎮静化時点とした。肝炎が沈静化しない症例

経過観察可能であったＢ型慢性肝炎症例を対象に，（ALT≧31IU/L）を肝炎例とした。SC後２年目までは

HBe 抗原陰性慢性肝炎の臨床的特徴を検討した。

し肝炎の活動性が高肝炎鎮静化例が多く観察されたが，それ以降の鎮静化

HBe 抗原の SC 前３年から後３年以上経過観察可例は稀であった。そこで，SC後（HBe抗原陰性化後）能であったＢ型慢性肝炎例36例を対象とした。SC 後２年を過ぎても肝炎が鎮静化しなかった HBe 抗原陰の経過観察期間の中央値は11.6年（範囲：3.2〜26.0

性慢性肝炎例（n＝20）と SC２年以内に鎮静化した年）であった。経過中，HBe抗原・抗体に加え，HBs

非肝炎例（n＝16）を比検討した。両群間で年齢，

抗原量，HBcr抗原量，HBV DNA量，PC（pre‑core）

性別に差はなかった。ALT 値は SC 以降，HBcr 抗変異，BCP（basal core promoter）変異を経時的に原量は SC 後１年目以降に肝炎群で有意に高値であっ測定した。SC 後の ALT 値の変動は積分 ALT 値にたが，HBV DNA 量，PC 変異率，BCP 変異率は両て評価し慢性肝炎の有無を判定した。

群間で差は見られなかった。多変量解析では，SC 後

その結果，森田は次の結論を得た。

２年目のALT高値（≧31IU/L）のみが独立したHBe

１．HBe 抗原の SC に付随して起こる肝炎の鎮静化

抗原陰性慢性肝炎群の特徴因子であった（OR 42.0，

は SC 後２年目以内に起こり，これ以降の肝炎（肝95％炎の継続あるいは再燃）は HBe 抗原陰性慢性肝炎。一方，SC 後２
CI：4.3〜405.4，Ｐ＝0.001）

年目までに ALT 値が正常化した19例のうち４例（21％）に ALT 再上昇が見られ，HBe 抗原陰性慢性肝炎と考えられた。両群で年齢，性別，HBs抗原量に差と考えられた。
２．SC後２年目の ALT 高値が HBe抗原陰性慢性肝炎例では多くみられた。

はなかったが，SC 後２年目の HBV DNA 量，HBs

３．SC後２年目までにALT値が正常化しても，HBcr

抗原量，HBcr抗原量の比 では，HBV DNA量（７％抗原量と HBV DNA 量が高い場合は，肝炎再燃

vs. 60％，Ｐ＝0.037）と HBcr 抗原量（０％ vs. 44％，

（HBeAg 陰性慢性肝炎）の可能性が高い。

Ｐ＝0.033％）が高値の症例が肝炎群で有意に多かっHBe 抗原の SC に伴う肝炎の鎮静化は SC 後２年た。

目までに起こることが示され，これ以降も ALT 高値【結論】 HBe 抗原の SC に伴う肝炎の鎮静化は SC 後が続く場合は HBe 抗原陰性慢性肝炎の可能性が高い。

２年目までに起こり，この時点までに肝炎が鎮静化

一 方，SC 後 ２ 年 目 ま で に ALT 値 が 正 常 化 し て もしない場合は HBe 抗原陰性慢性肝炎の可能性が高HBcr 抗原量と HBV DNA 量が高い場合は，肝炎再い。一方，SC後２年以内に ALT 値が正常化しても燃（HBeAg 陰性慢性肝炎）の可能性が高いことが示

HBcr 抗原量と HBV DNA 量が高い場合は，肝炎再唆された。

燃（HBeAg 陰性慢性肝炎）の可能性が高いことが示唆された。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

（論文審査の結果の要旨）
Ｂ型ウイ ル ス（HBV）キ ャ リ ア の 自 然 経 過 は，
HBV の活動性とそれに対する宿主の免疫応答から，免疫寛容期，免疫排除期，免疫監視期に分類される。
免疫寛容期は HBV の活動性は高いが肝炎はない。免
疫排除期になると肝炎を発症し HBV の活動性は低下傾向となる。この過程で HBe 抗原陽性から HBe 抗体陽性へ SC（seroconversion）すると HBV の活動
362

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

Reappraisal of the immunophenotype of pancreatic intraductal papillarymucinous neoplasms (IPMNs)―gastric pyloric and small intestinal immunophenotype expression in gastric and intestinal type
IPMNs―（膵管内乳頭粘液性腫瘍（IPMN）の免疫染色に基づいた表現型の再評価―胃型
IPMN と腸型 IPMN における胃幽門粘膜および小腸粘膜の形質発現）
小

林

実喜子

（論文の内容の要旨）あった。一方，腸型 IPMN は主膵管に多く，幽門腺【背景と目的】膵管内乳頭粘液性腫瘍（IPMN）は粘様構造は見られず，背景膵実質の萎縮を伴い，高異型

液産生性の上皮性腫瘍性病変であり，主膵管や分枝膵度病変主体であった。胃型IPMNと胃腸混合型IPM N

管内に発生し，腺腫相当の軽度異型病変から上皮内癌はどの項目においても有意差は見られなかった。腸型相当の高度異型病変まで多彩な異型度の病変が含まれIPM N と胃腸混合型 IPMN において有意差がみられる。IPM N は形態およびムチンの免疫組織化学からたのは，①③④⑤であった。

４つの亜型（胃型，腸型，胆膵型，オンコサイト型）

免疫組織化学的には，MUC5ACとPDX1はすべてのに分類されおり，胃型と腸型が大部分を占めている。

IPM N に発現が見られた。MUC6は胃型および胃腸【対象と方法】33件の IPMN 手術切除材料を用いて，混合型が腸型に比べ有意に発現していた。GlcNAcα1

以下の免疫組織化学的検討により免疫表現型に基づ→4Galβ→Ｒは胃型および胃腸混合型にのみ発現がい て IPM N を 分 類 し，臨 床 的 ・ 病 理 組 織 学 的 特 徴見られた。MUC2と CDX2は腸型が胃型や胃腸混合型と組織発生について考察した。胃表層粘液細胞マーに比べ有意に発現していた。CPS1は腸型が胃型に比カー（M UC5AC），胃腺粘液細胞マーカー（MUC6，

べ有意に発現していたが，腸型と胃腸混合型に有意差

GlcNAcα1→4Galβ→Ｒ），胃幽門粘膜および十二指はなかった。SATB2の発現はみられなかった。

腸上皮細胞マーカー（PDX1），腸上皮マーカー（MUC2，【考察】胃型 IPMN は胃腺粘液細胞マーカー（MUC6，大腸上皮マーCDX2），小腸上皮マーカー（CPS1）

および GlcNAcα1→4Galβ→Ｒ）を発現し，腸上皮カー（SATB2）。

マーカー（MUC2および CDX2）をほとんど発現せず，【結果】M UC2の発現により，IPM N は胃型（n＝17），

胃幽門粘膜および十二指腸上皮細胞マーカー（PDX1）腸型（n＝８），胃腸混合型（衝 突 型＝７，混 成 型＝を発現していることから胃幽門粘膜上皮の特徴を有す

１）に亜分類された。亜型間に年齢および性別に違いるものと考えられた。腸型 IPM N には GlcNAcα1→はなかった。病理組織学的には，胃型 IPMN は胃腺

4Galβ→Ｒが発現せず，腸上皮マーカー（MUC2お窩上皮に類似した上皮より構成された乳頭構造を呈し，よび CDX2）と小腸上皮マーカー（CPS1）を発現し，深部に幽門腺様構造を有しているか，平坦な病変を形

大腸上皮マーカー（SATB2）を発現しないことから，成していた。腸型 IPMN は杯細胞より構成され，幽小腸粘膜上皮の特徴を有するものと考えられた。腸門腺様構造を欠いた絨毛構造を呈しているか，低乳頭型 IPM N には PDX1が発現していることから，腸型状病変を形成していた。胃腸混合型 IPM N は，胃型

IPM N は近位小腸（十二指腸）上皮の形質を有してIPM N と腸型 IPM N が境界をなして存在する衝突いると考えられた。

型（７例）と両方が境界不明瞭に混在している混成型（１例）認められた。
以下の６項目について比胃型 IPM N と腸型 IPMN の関係については，前者が後者に転換するという仮説と，それぞれが別発生で検討したところ（① 病あるという仮説がある。転換説の根拠は，胃型IPM N

変の主座（主膵管型か分枝膵管型か），② 膵管内結節にも MUC2がわずかに発現しており，胃型，腸型との有無，③ 幽門腺様構造の有無，④ 背景膵実質におもにびまん性に M UC5AC の発現がみられるというこ

ける萎縮の有無，⑤ 組織学的異型度，⑥ 浸潤癌合併とにある。一方，別発生であるという仮説の根拠としの有無），胃型 IPM N と腸型 IPMN において有意差ては，病変の主座が違うことや両者にみられる遺伝子がみられたのは①③④⑤であった。従来の報告と同様，

異常の異なることが報告されている。

胃型 IPMN は分枝膵管に多く，幽門腺様構造を有し，今回の検討では，胃型と腸型において，１）年齢の背景膵実質の萎縮は見られず，低異型度病変主体で差が認められないこと，２）病変の主座が違うこと，

No. 5, 2014363

審査学位論文要旨

３）胃腸混合型においては衝突型が多いこと，４）２．胃型は胃腺窩上皮に類似し幽門腺様構造もしくはGlcNAcα1→4Galβ→Ｒの発現が腸型では確認できな平坦病変を形成した。腸型は杯細胞より構成される

いこと，５）初期病変において両者は特徴的な免疫表

絨毛構造もしくは低乳頭状病変を形成した。胃腸混現型を示していることから胃型 IPMN と腸型 IPM N

合型は，胃型と腸型の両者を認めた。

は胃型が腸型に転換したのではなく，それぞれの組織

３．亜型間で年齢・性別に差はなかった。

発生が異なると考えられた。

４．胃型と腸型において①③④⑤，腸型と胃腸混合型【結論】M UC2の発現程度により，IPM N は胃型（胃においても①③④⑤に有意差があった。胃型と胃腸

幽門粘膜上皮の表現型）と腸型（十二指腸粘膜上皮の混合型は有意差がなかった。

表現型）に２大別された。両者の IPM N は免疫表現

５．全症例でMUC5ACとPDX1は認められ，SATB2型および臨床的・病理組織学的特徴からそれぞれ組織は認められなかった。MUC6は胃型および胃腸混合発生が異なっている可能性が示唆された。

型が腸型に比べ有意であった。GlcNAcα1→4Galβ（論文審査の結果の要旨）→Ｒは胃型および胃腸混合型にのみ認められた。

膵管内乳頭粘液性腫瘍（IPMN）は，形態およびムMUC2と CDX2は腸型が胃型や胃腸混合型に比べ有チンの免疫組織化学から，胃型と腸型 IPMN に２大意であった。CPS1は腸型が胃型に比べ有意であっ別される。

たが，腸型と胃腸混合型に有意差はなかった。

IPMN33例を用いて，各種免疫組織化学的検討からこれらの結果より，胃型は分枝膵管に多く，幽門腺

IPM N を分類し，臨床的・病理組織学的に検討した様構造を有し，膵実質の萎縮は見られず，低異型度病［胃表層粘液細胞マーカー（M UC5AC），胃腺粘液細変主体であった。一方，腸型は主膵管に多く，膵実質

胞（M UC6，GlcNAcα1→4Galβ→Ｒ），胃幽門およの萎縮を伴い，高異型度病変主体であった。

び十二指腸上皮（PDX1），腸上皮（M UC2，CDX2），

腸型は「大腸の villous adenoma に類似」とされて小腸上皮（CPS1），大腸上皮（SATB2）］。年齢・性いるが，本研究で十二指腸への分化が新たに証明され別および以下６項目について検討した［① 病変の主た。

座（主膵管型か分枝膵管型か），② 膵管内結節の有無，

本研究において，１）年齢差がない，２）病変の主③ 幽門腺様構造の有無，④ 背景膵実質における萎縮座が違う，３）混合型においては衝突型が多い，４）の有無，⑤ 組織学的異型度，⑥ 浸潤癌合併の有無］。

GlcNAcα1→4Galβ→Ｒが腸型にはない，５）初期病

その結果，小林実喜子は次の結論を得た。

変において両者は特徴的な免疫表現型を示すことから，

１．M UC2により，胃型（n＝17），腸型（n＝８），胃腸混合型 IPMN（衝突型＝７，混成型＝１）に亜 分類された。

胃型と腸型は組織発生が異なることが示唆された。
よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Safety, tolerability, and feasibility of antifungal prophylaxis with micafungin at 2 mg/kg daily inpediatric patients undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation（小児同種造血幹細胞移植患者におけるミカファンギン２mg/kg の連日投与による真菌感染症予防の安全性，忍容性および実施可能性）
吉

川

健太郎

（論文の内容の要旨）（上限50mg）/日による予防投与が保険適応となって【背景と目的】侵襲性真菌感染症（IFD）は，致死的いるが，小児患者における至適投与量等は明らかでなな転帰をとりやすい同種造血幹細胞移植（HSCT）

い。本研 究 で は，小 児 の 同 種 HSCT 患 者 に 対 す る

合併症の１つである。現在，同種 HSCT 患者においM CFG ２mg/kg/日の予防投与の有効性，安全性おては，アゾール系抗真菌薬による IFD 予防が推奨さよび移植関連合併症や薬剤の MCFG 血中濃度に与えれているが，副作用や免疫抑制薬との相互作用等の問る影響を評価した。

題がある。ミカファンギン（M CFG）はキャンディ【対象と方法】当院で2003年〜2011年に初回同種HSCT

ン系の抗真菌薬で，HSCT 患者においては１mg/kgを施行された小児患者38例（中央値7.3歳）を対象に，

364

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

MCFG２mg/kg/日（１回１時間）の点滴静注を移植５に上昇した例においても，MCFG 関連の有害事象が日以上前から開始した。投与終了は好中球数が500/μL

発現しなかった。さらに，MCFG はタクロリムス，

以上に到達後，イトラコナゾールの経口予防内服が可

シクロホスファミド，ステロイドなどの HSCT 関連

能であること等を条件とした。安全性の評価には有害

薬剤との明らかな相互作用はなかった。以上より，２

事象共通用語基準（CTCAE）を用いた。IFDは，proven

mg/kg/日の MCFG 投与は小児 HSCT 患者に対して（確実），probable（疑い），possible（可能性あり）例

安全性および忍容性が高い有効な IFD 予防法と考えに分類した。高速液体クロマトグラフ法を用いて，13られた。

例の血漿中 MCFG のトラフ濃度と10例のピーク濃度を測定した。

（論文審査の結果の要旨）
侵襲性真菌感染症（IFD）は，致死的な転帰をとり【結果】38例の小児同種HSCT患者に対して，MCFG

やすい同種造血幹細胞移植（HSCT）合併症の１つ

２mg/kg/日の予防投与を34‑196（中央値68）日間行っである。現在，同種 HSCT 患者においては，アゾーた。38例中25例がグレード２以上の急性 GVHD を発ル系抗真菌薬による IFD 予防が推奨されているが，症し，３例が白血病再発で死亡した。M CFG 予防投副作用や免疫抑制薬との相互作用等の問題がある。ミ

与中に，２例が probable または possible IFD を発症

カファンギン（MCFG）はキャンディン系の抗真菌薬したが，抗真菌薬の変更で改善した。IFD 発症２例

で，HSCT患者においては１mg/kg（上限50mg）/日に以外は MCFG の単独投与を完遂できた（94.7％）。

よる予防投与が保険適応となっているが，小児患者に

MCFGによる急性輸注反応は認めらなかった。M CFG

おける至適投与量等は明らかでない。本研究では，当の投与中に AST，ALT，Cr 値の上昇は認められず，院 で 2003年 〜 2011年 に 初 回 同 種 HSCT を 施 行 さ れ

T‑Bil値のみわずかに上昇した。MCFGの血漿濃度は，

た小児患者38例（中央値7.3歳）を対象に，小児の同平均トラフ値が3.04±1.21μg/mL（569検体），平均

種 HSCT 患者に対する M CFG ２mg/kg/日の予防投ピーク値が9.63±3.62μg/mL（44検体）で，トラフ値

与の有効性，安全性および移植関連合併症や薬剤のとピーク値は中等度に相関した（R ＝0.466）。グレー

M CFG 血中濃度に与える影響を評価した。

ド３（肝ステージ２）の急性移植片対宿主病（GVHD）

その結果，吉川らは次の結論を得た。

を発症した１例では，M CFG トラフ値が最高10.21
μg/mL まで上昇したが，副作用としての頻度の高い

１．MCFG 予防投与を34‑196（中央値68）日間行った。

頭痛，関節痛，不眠，発疹はみられなかった。この症

２．MCFG 予 防 投 与 中 に，２ 例 が probable ま た は例において M CFG トラフ値の上昇は T‑Bil 値の上昇

possible IFD を発症したが，抗真菌薬の変更で改と強く相関した（R ＝0.894）。タクロリムスの血中善した。IFD 発症２例以外は M CFG の単独投与を濃度は M CFG のトラフ値に影響を及ぼさなかった

完遂できた（94.7％）。

（R ＝0.040）。また，シクロホスファミドによる移植

３．MCFG による急性輸注反応は認められなかった。

前処置，ステロイドによる生着症候群や急性 GVHDMCFG の投与中に AST，ALT，Cr 値の上昇は認に対する治療は M CFG のトラフ値に影響しなかった。

められず，T‑Bil 値のみわずかに上昇した。

【考察】MCFG 投与後に明らかな関連有害事象は認め

４．MCFGの血漿濃度は，平均トラフ値が3.04±1.21

られず，probable/possible IFD を発症した２例を除，平均ピーク値が9.63±3.62μg/
μg/mL（569検体）

く全例が２mg/kg/日の予防投与を完遂できた。２mL（44検体）で，トラフ値とピーク値は中等度にmg/kg/日の MCFG 投与による IFD 予防の失敗率は相関した（R ＝0.466）。

5.3％ で，過 去 の 小 児 HSCT の 報 告（4.3〜24％）と比５．38例中25例がグレード２以上の急性 GVHD を発すると，同等もしくは優れていた。当科で過去症し，３例が白血病再発で死亡した。グレード３に行われたフルコナゾールやイトラコナゾールにより（肝ステージ２）の急性移植片対宿主病（GVHD）

真菌症の予防投与を行った28例の失敗率は8.3％で有を発症した１例では，MCFG トラフ値が最高10.21

意差はなかったが，IFDを発症した２例は致死あるいμg/mL まで上昇したが，副作用としての頻度の高は重度の後遺症を残したことから，MCFG２mg/kg/

い頭痛，関節痛，不眠，発疹はみられなかった。こ日投与法はより有効と考えられた。肝急性 GVHD にの症例において M CFG トラフ値の上昇は T‑Bil 値

よる T. Bil 値の上昇に伴って MCFG トラフ値が著明の上昇と強く相関した（R ＝0.894）。

No. 5, 2014365

審査学位論文要旨

６．タクロリムスの血中濃度は M CFG のトラフ値にHSCT 関連薬剤との明らかな相互作用はなかった。

影響を及ぼさなかった（R ＝0.040）。また，シクロ

以上より，２mg/kg/日の MCFG 投与が小児 HSCT

ホスファミドによる移植前処置，ステロイドによる患者に対して安全性および忍容性が高い有効な IFD

生着症候群や急性 GVHD に対する治療は MCFG予防法であることを示したことは移植患者の治療成績のトラフ値に影響しなかった。

の向上に繫がる重要な知見と思われ，主査，副査は一

今回の研究で，明らかな M CFG 関連有害事象は認致して本論文を学位論文として価値があるものと認めめられず，IFD 予防成功率は過去の報告や当科の過た。

去の成績と比 して同等もしくは優れていた。また，

KIR, HLA, and IL28B Variant Predict Response to Antiviral Therapy in Genotype 1 Chronic
Hepatitis C Patients in Japan（日本人ジェノタイプ１型Ｃ型慢性肝炎患者に対する抗ウイルス療法治療効果予測に KIR，HLA，IL28B 遺伝子多型が与える影響について）
野沢（論文の内容の要旨）

祐一95％ CI＝0.08‑0.75），KIR3DL1/HLA‑Bw4（＝【目的】ナチュラルキラー（NK）細胞は自然免疫に0.008，OR＝3.32，95％ CI＝1.37‑8.05），白血球数

よるウイルス排除において重要な役割を担っている。

（ ＝0.009；OR＝3.32，95％ CI＝1.35‑8.16）が独立

killer immunoglobulin‑like receptor（KIR）は，そした SVR の予測因子であった。本検討では，IL28Bのリガンドである特定の human leukocyte antigen

TT と KIR3DL1‑HLA‑Bw4が治療反応患者と関連が（HLA）を認識することで NK 細胞活性を調節してあり（ ＝0.0019），また一方で IL28B TT と同時にいる。特に KIR2DL3と HLA‑C1の組み合わせが白人

KIR2DL2‑HLAC1を持つ患者は治療抵抗性と関連しのＣ型肝炎ウイルス感染者に対する抗ウイルス療法のていた（ ＝0.0067）。

治療効果や自然排除に関連しているという報告がある【結論】日本人ジェノタイプ１型 HCV 患者において，が，日本人患者におけるこれら自然免疫遺伝子の働き

KIR3DL1/HLA‑Bw4，KIR2DL2/‑HLA‑C1，そ しは明らかになっていない。そこで今回我々は，ジェノて IL28BSNP はペグインターフェロン，リバビリン

タイプ１型慢性Ｃ型肝炎患者において，KIR 遺伝子，療法に対する治療効果予測因子となる可能性が示唆さ

HLA‑B，Ｃ，およびインターロイキン（IL）28Bsingle

れた。

（rs8099917）を測定
nucleotide polymorphism（SNP）
し，治療効果に与える影響を検討した。

（論文審査の結果の要旨）
ナチュラルキラー（NK）細胞は自然免疫によるＣ【方法】48週間のペグインターフェロンおよびリバビ

型肝炎ウイルス（HCV）などのウイルス排除においリン併用療法を受けたＣ型慢性肝炎患者115名を対象て重要な役割を担っている。NK 細胞には killer im-とし，PCR‑SSOP 法を用いて16種類の KIR 遺伝子

munoglobulin‑like receptor（KIR）と呼ばれる受容およびHLA‑B，Ｃを測定し，IL28B SNPと併せて治体が発現しており，そのリガンドである HLA クラス

療効果に寄与する因子を解析した。

を認識することにより NK 細胞活性を調節してい【結果】HLA‑Bw4は，治療に対する sustained vir-

る。KIR と HLA の組み合わせが白人の HCV 感染者

ological response（SVR）と有意差を持って関連しに対する抗ウイルス療法の治療効果や自然排除に関連ていた（ ＝0.017；odds ratio［OR］＝2.50）。同様

しているという報告があるが，日本人患者における検にKIRセントロメリィックＡ/Ａハプロタイプでも有意討はない。今回，日本人Ｃ型慢性肝炎患者において差を認めた（ ＝0.015；OR 3.37）。反対に，KIR2DL2

KIR，HLA に 加 え て イ ン タ ー ロ イ キ ン（IL）28B

またはKIR2DS2遺伝子を持つ患者は有意に SVR率がsingle nucleotide polymorphism（SNP）を測定し，低かった（ ＝0.015；OR＝0.30 ＝0.025；OR＝0.32）。

これら自然免疫遺伝子が治療効果予測に与える影響に

多変量解析では，IL28B TT genotype（ ＝0.00009；

ついて検討した。

OR＝6.87，95％

conﬁdence interval［CI］2.62‑

対象は48週間のペグインターフェロン・リバビリン

18.01），KIR2DL2/HLA‑C1（ ＝0.014；OR＝0.24，

併用療法を受けたＣ型慢性肝炎ジェノタイプ１型患者

366

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

115名である。PCR‑SSOP 法を用いて16種類の KIR

３．KIR3DL1＋/HLA ‑Bw4＋と IL28B TT の 組 み

遺伝子，HLA‑B，Ｃを測定し，IL28B SNP と併せ合わせでは SVR 予測に関する特異度は75％であっ

ウイルス学的著効（SVR）に寄与する因子の解析を

た。

行った。

４．KIR2DL2＋/HLA ‑C1＋と IL28B GT/GG の 組

その結果，野沢は次の結論を得た。

み合わせでは SVR となった症例は１例もなく治療

１．多変量解析では，IL28B SNP TT，KIR2DL2＋/

抵抗性と関連が強かった。

HLA‑C1＋，白血球≧4410/μL，KIR3DL1＋/HLA‑これらの結果より，NK細胞の活性を調節するKIR/

Bw4＋が SVR に寄与する独立した因子として抽出

HLA の組み合わせは日本人Ｃ型慢性肝炎治療におけされた。

る SVR に寄与する独立した因子であり，治療効果に

２．KIR3DL1＋/HLA ‑Bw4＋と KIR2DL2‑/HLA ‑重要な役割を果たしている可能性が示唆された。よっC1‑を組み合わせると，有意に SVR になりやすいて，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価ことが判明した。

値があるものと認めた。

Surgical Treatment of 144 Cases of Hilar Cholangiocarcinoma Without Liver‑Related Mortality（肝門部胆管癌切除例144例の検討―術後肝不全死０％―）
古

澤

徳

彦

（論文の内容の要旨）で有意差を認めなかった。術中出血量（1020ml vs【はじめに】肝門部胆管癌症例では，外科切除が長期745ml），周術期輸血（25.7％ vs 2.7％），FFP 投与

生存を可能にする唯一の治療とされている。しかし，量（1280ml vs 480ml）は第二期で有意に減少した。

肝門部は肝動脈や門脈が近接するという解剖学的な特手術関連死亡は第一期に１名認めた（脳梗塞，術後31徴による胆管癌の易浸潤性や，腫瘍の胆管水平方向進日）が，第二期では認めなかった（1.2％ vs 0％）。

展が治癒切除を困難としている。さらに，根治切除に

術後合併症率は第二期で有意に低率であった（86％は通常，拡大肝葉切除が必要となり，術後合併症，特。重症合併症率は第二期で減少したが有意vs 61％）に術後肝不全の危険性は高い。我々は肝門部胆管癌症

差は見られなかった（34.3％ vs 24.3％）。また，多例に対して，必要に応じて門脈塞栓術および減黄処置

変量解析で出血量（900ml 以上）が，術後合併症のを術前に行い，1990年から一貫して積極的な切除を行っ唯一の危険因子として規定された。治癒切除率（70ている。今回，我々が経験した過去23年間の肝門部胆％ vs 78％）および５年生存率（33％ vs 35％）は両管癌切除症例144例を検討し，短期および長期成績の群間で同等であった。多変量解析では術後長期生存の向上が得られたか否かを検証した。

予後不良因子として，リンパ節転移陽性および非治癒【方法】1990年から2012年に診療を行った肝門部胆管切除が規定された。

癌253例のうち，外科切除を行った144例を対象とした。

【考察】肝門部胆管癌に対する肝切除では，最近10年

1990年から2000年の70症例を第一期，2001年から2012

間で手術関連死亡率０％を維持し，また，術後肝不全

年の74症例を第二期とし，後ろ向きな検討を行った。

死を23年間にわたり経験していない。出血量の軽減が術前に閉塞性黄疸を認める症例には予定残肝の片葉胆術後合併症率の低下に寄与したと考えられた。

道ドレナージを行っている。また，腹部 CT から算出

【結論】近年10年間で短期手術成績，特に術中出血量される予定残肝容積が40％以下の症例には，術後肝および術後合併症率の改善が示された。治癒切除率の不全のリスクを軽減するため術前に切除予定葉の門脈向上が，術後長期生存率の改善に必要である。

塞栓術を施行し，予定残肝の肥大を図っている。T.

（論文審査の結果の要旨）

Bil＜２mg/dl，予定残肝容積＞40％が実現された時

肝門部胆管癌症例では，外科切除が長期生存を可能点で手術適応としている。手術関連死は術後90日以内にする唯一の治療とされている。しかし，肝門部は肝に発生した死亡（死因問わず）とし，術後重症合併症

動脈や門脈が近接するという解剖学的な特徴による胆は Clavien 分類のグレード ，管癌の易浸潤性や，腫瘍の胆管水平方向進展が治癒切と定義した。

【結果】患者背景，病理組織学的因子，術式に両群間
No. 5, 2014

除を困難としている。さらに，根治切除には通常，拡367

審査学位論文要旨

大肝葉切除が必要となり，術後合併症，特に術後肝不１．術中出血量（1020ml vs 745ml），周術期輸血（25.7

全の危険性は高い。我々は肝門部胆管癌症例に対して，％ vs 2.7％），FFP 投与量（1280ml vs 480ml）は必要に応じて門脈塞栓術および減黄処置を術前に行い，第二期で有意に減少した。

1990年から一貫して積極的な切除を行っている。今回，２．手術関連死亡は第一期に１名である（脳梗塞，術我々が経験した過去23年間の肝門部胆管癌切除症例後31日）が，第二期では認めなかった（1.2％ vs 0

144例を検討し，短期および長期成績の向上が得られ％）。

たか否かを検証した。

３．術後合併症率は第二期で有意に低率であった（861990年から2012年 に 診 療 を 行 っ た 肝 門 部 胆 管 癌
253例のうち，外科切除を行った144例を対象とした。
1990年から2000年の70症例を第一期，2001年から2012％ vs 61％）。
４．出血量（900ml 以上）は，多変量解析で術後合併症の唯一の危険因子として規定された。

年の74症例を第二期とし，後ろ向き検討を行った。術５．治癒切除率（70％ vs 78％）および５年生存率

前に閉塞性黄疸を認める症例には予定残肝の片葉胆（33％ vs 35％）は両群間で同等であった。多変量

道ドレナージを行っている。また，腹部 CT から算出

解析では術後長期生存の予後不良因子として，リンされる予定残肝容積が40％以下の症例には，術後肝パ節転移陽性および非治癒切除が規定された。

不全のリスクを軽減するため術前に切除予定葉の門脈

これらの結果より，近年10年間で短期手術成績，特塞栓術を施行し，予定残肝の肥大を図っている。T.

に術中出血量および術後合併症率の改善が示された。

Bil＜２mg/dl，予定残肝容積＞40％が実現された時

一方，長期予後の改善には新たな治療法の導入が必要

点で手術適応としている。手術関連死は術後90日以内と考えられた。

に発生した死亡（死因問わず）とした。

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文とその結果，古澤は次の結論を得た。

して価値があるものと認めた。

OTOF mutation screening in Japanese severe to profound recessive hearing loss patients（常染色体劣性遺伝形式をとる日本人高度〜重度難聴患者における OTOF 遺伝子変異スクリーニング）
岩

佐

陽一郎

（論文の内容の要旨）

192名の正常聴力者を対象とした。末梢血より抽出さ【はじめに】Auditory neuropathy spectrum disorder

れた DNA を用い，OTOF 遺伝子のスプライシング（以下ANSD）は感音難聴の中でも聴性脳幹反応（ABR）

部位を含む全エクソン領域を直接シークエンス法によ高度異常，耳音響放射（OAE）正常となる特徴的な臨床り解析した。病的変異の判断は，変異の種類，家系内像を呈する疾患である。OTOF 遺伝子は非症候群性での整合性，コントロール群における頻度などを検討

ANSD の原因として初めて同定された遺伝子であり，して行った。

先天性高度・重度感音難聴を呈する例が大部分である。

【結果】今回変異検索を行った160名のうち，16名に少非症候群性難聴患者において最も高頻度に認められなくとも一つの OTOF 遺伝子変異を認めた。内訳とる遺伝子として GJB2 が挙げられるが，海外（欧米，しては３名がホモ接合体，４名がコンパウンドへテロ

中東，アジアなど）においてはそれに次ぐものとして接合体，９名がヘテロ接合体であった。本研究で同定

OTOF 遺伝子が重要視されている。しかし，本邦におされた OTOF 遺伝子変異のうち５種類は海外でも報ける OTOF 遺伝子変異の頻度の検討については未だ告のある既知変異，２種類は新規ナンセンス変異，４

なされていないのが現状である。本研究の目的は日本

種類は新規ミスセンス変異であった。

人高度・重度感音難聴患者におけるOTOF 遺伝子変異【考察・まとめ】OTOF 遺伝子変異による難聴の場合，の頻度を検討することである。

生後数年は OAE が検出され ANSD の臨床像を呈す【対象・方法】本研究では，高度〜重度の非症候群性るが，その後 OAE が消失し，通常の感音難聴の臨床

難聴症例のうち，孤発例もしくは劣性遺伝形式をと像をとると言われている。本研究では ANSD 患者のる先天性難聴患者160名（ただし，GJB2，SLC26A4

みならず，通常の感音難聴患者に紛れている OTOF

変異による難聴と診断されているものは除く）および遺伝子変異による難聴患者を同定することを目的とし

368

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨た。

性遺伝形式をとる先天性難聴患者160名（ただし，今回変異検索を行った160人中７名（4.4％）の患

GJB2，SLC26A4 変異と診断されているものは除く）

者がホモ接合体もしくはコンパウンドへテロ接合体でを対象に，直接シークエンス法を用いて OTOF 遺伝

あり，OTOF 遺伝子変異による難聴と考えられる。

子の全エクソンの解析を行ったところ，160名のうちGJB2 遺伝子や SLC26A4 遺伝子変異による難聴患者16名に少なくとも一つの OTOF 遺伝子変異を認めた。

の割合を考慮すると，先天性高度・重度感音難聴患者

内訳としては３名がホモ接合体，４名がコンパウンドのうち少なくとも3.2％の患者が OTOF 遺伝子変異

へテロ接合体，９名がヘテロ接合体であった。本研究によるものと考えられる。これは海外の報告と比べてで同定された OTOF 遺伝子変異のうち５種類は海外

ほぼ同等の頻度である。また，今回同定された遺伝子でも報告のある既知変異，２種類は新規ナンセンス変変異の多くが本邦独自の変異であり，他の遺伝子同様

異，４種類は新規ミスセンス変異であった。GJB2 遺に他の人種とは異なる日本人独自の変異スペクトラム

伝子や SLC26A4 遺伝子変異による難聴患者の割合があることが示された。

を考慮すると，先天性高度・重度感音難聴患者のうち（論文審査の結果の要旨）

少なくとも3.2％の患者がOTOF 遺伝子変異によるもAuditory neuropathy spectrum disorder（以下のと考えられた。これは海外の報告と比べてほぼ同等

ANSD）は感音難聴の中でも聴性脳幹反応（ABR）の頻度であり，日本人の難聴患者においても OTOF

高度異常，耳音響放射（OAE）正常となる特徴的な遺伝子の重要性が認識された。また，今回同定された臨床像を呈する疾患である。OTOF 遺伝子は非症候

遺伝子変異の多くが本邦独自の変異であり，他の遺伝

群性 ANSD の原因として初めて同定された遺伝子で子同様に他の人種とは異なる日本人独自の変異スペクあり，先天性高度・重度感音難聴を呈する例が大部分

トラムがあることが示された。その中でも p. R1939Qである。非症候群性難聴患者において最も高頻度に認変異は founder eﬀect によって日本人の OTOF 遺伝

められる遺伝子として GJB2 が挙げられるが，海外

子変異の中で非常に多く認められる変異であることがにおいて（欧米，中東，アジアなど）はそれに次ぐも明らかとなった。OTOF 遺伝子変異が同定されればのとして OTOF 遺伝子が重要視されている。

人工内耳の効果が良好であるとの報告がなされている

本論文において岩佐陽一郎は，日本人高度・重度感ため，遺伝学的検査から治療効果に関する情報を得る

音難聴患者における OTOF 遺伝子変異の種類およびことができるため，臨床的にも非常に有用であると考頻度に関して検討を行った。

えられた。主査，副査は一致して本論文を学位論文と高度〜重度難聴，非症候群性，孤発例もしくは劣して価値があるものと認めた。

Massively parallel DNA sequencing facilitates diagnosis of patients with Usher syndrome type 1（Usher 症候群タイプ１症例の遺伝子解析における次世代シークエンサーの有用性）
吉

村（論文の内容の要旨）

豪兼子頻度も報告されてきている。

【はじめに】Usher 症候群は「感音難聴に網膜色素変Usher 症候群における遺伝子解析はサンガーシーク性症を伴う疾患」の代表であり，聴覚・視覚の重複障エンス法によるものや，過去の変異報告を基にマイク害を呈する。また難聴と前庭機能障害の発症時期や程ロアレイ法で検出する方法が報告されてきた。しかし，度により，臨床的に３つのタイプに分類されている。

前者は費用や労力の面で，後者は変異検出率に課題がその中でもタイプ１は先天性高度感音難聴に両側前庭あった。そこで我々は近年実用化されている，多数の原機能障害を伴い，さらに網膜色素変性症は思春期前に因遺伝子を網羅的に解析することが可能な次世代シー症状が出現し始めるという最も重篤な表現型を呈する。

クエンサーに注目し，Usher 症候群タイプ１症例の原

いずれのタイプも常染色体劣性遺伝形式をとるが，タ因遺伝子解析を行ったので，その結果につき報告する。

イプ１は原因遺伝子として６つの遺伝子（ MYO7A，【方法】タイプ１症例（17症例）に対し，次世代シー

USH1C ，CDH23 ，PCDH15 ，USH1G ，CIB2 ）がケンサーによる Usher 症候群原因遺伝子解析を施行

明らかになっており，諸外国においてはその原因遺伝した。検出された変異を1000人ゲノムにおけるアレル

No. 5, 2014369

審査学位論文要旨

頻度やコントロールにおける頻度などをもとに絞りこ

従来，遺伝学的検査手法としてサンガー法などが広くんだ上でサンガーシークエンス法にて確認した。また用いられてきたが，近年次世代シーケンサー（Mas-

次世代シーケンサーで病的変異がヘテロ接合体で検出

sively parallel DNA sequencing）の登場により短時された症例に関しては，対象遺伝子の全エクソン領域

間，低コストで網羅的に解析することが可能となってをサンガーシーケンス法で再解析した。

きている。

【結果】17症例中，16症例（94.1％）に１つ以上の病的本論文において吉村豪兼は多施設共同研究にて日本変異を同定した。また，７症例（41.2％）に MYO7A

人における Usher 症候群タイプ１症例17例を対象に遺伝子変異を同定し，本邦のタイプ１症例で最も頻度

原因遺伝子変異の種類，およびその頻度について明らの高い原因遺伝子であることが明らかとなった。またかにするとともに，解析手法として次世代シークエン

４症例において，Usher 症候群の原因となるバイアレサーを用いることの有用性について検討を行った。そリックな変異に加えて，さらにもう一つ別のUsher症の 結 果，17症 例 中，１ つ 以 上 の 病 的 変 異 を16症 例

候群原因遺伝子変異が同定された。さらに MYO7A（94.1％）に同定し，従来法と比遺伝子とPCDH15 遺伝子のdigenic inheritanceと考え効な解析手法であることを示した。また７症例（41.2られる症例を確認した。

％）に MYO7A 遺伝子変異を同定し，本邦のタイプ【考察】本研究は Usher 症候群における次世代シーケ

１症例で最も頻度の高い原因遺伝子であることが明らンサーによる遺伝子解析の初めての報告であり，またかとなった。また４症例において，バイアレリックな

本邦における原因遺伝子の種類および頻度を明らかと

２つの病的変異に加えて，他の Usher 症候群原因遺した初の報告である。本症候群のように多数の原因遺伝子にも病的変異を同定した。このように Usher 症

伝子が明らかとなっている疾患では，次世代シーケン候群の原因となるバイアレリックな変異に加えて，さサーは非常に効率の高い手法であり，また修飾遺伝子

らにもう一つ遺伝子変異を持つ症例では夜盲の出現時や digenic inheritance のように複数の遺伝子の関与期が有意に早く，modiﬁer の可能性があることを報が考えられる病態の解析にも有用と考えられた。

告した。さらに MYO7A遺伝子と PCDH15 遺伝子の（論文審査の結果の要旨）しても遜色ない有digenic inheritance と考えられる症例を確認し，次世

Usher 症候群は「感音難聴に網膜色素変性症を伴う疾患」の代表であり，聴覚・視覚の重複障害を呈する。

代シーケンサーによる解析は複数の遺伝子の関与が考えられる病態の解析にも有用と考えられた。

また難聴と前庭機能障害の発症時期や程度により，臨本論文はUsher症候群における次世代シーケンサー

床的に３つのタイプに分類されており，その中でもタによる遺伝子解析の初めての報告であり，また本邦にイプ１は先天性高度感音難聴に両側前庭機能障害を伴おける原因遺伝子頻度を明らかとした。得られた知見

い，さらに網膜色素変性症は思春期前に症状が出現しは今後の研究において重要と考えられる。以上により，始めるという最も重篤な表現型を呈するとされている。

主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値がUsher 症候群タイプ１に関しては現在までに原因遺伝あるものと認めた。

子として６つの遺伝子が海外で報告されてきている。

An interleukin‑33 gene polymorphism is a modiﬁer for eosinophilia in rats（インターロイキン33遺伝子多型はラットにおける好酸球増多症の修飾因子である）
羅宏

敏（論文の内容の要旨）に末梢血中の好酸球数に影響する修飾遺伝子が第１染【背景と目的】Matsumoto Eosinophilia Shinshu（MES）

色体上に存在することが明らかとされた。その後の研系ラットは末梢血における好酸球増多，および多く

究で好酸球増多症の原因は MES 系ラット系統の第19の臓器における好酸球浸潤炎症性病変を遺伝的に自然

染色体上の Cytochrome b‑245，alpha polypeptide発症するモデル動物である。以前の（ACI×M ES）×

（Cyba）遺伝子の機能喪失型突然変異であることが明

MES 戻し交雑ラット集団を用いた解析により，好酸

らかとされた。第１染色体上の修飾遺伝子に関しては，球増多症の主要原因遺伝子が第19染色体上に，さらACI 型の対立遺伝子が血中好酸球数を低下させる効370

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨果を有することが判ったが，その遺伝子は明らかとさ間で末梢血中好酸球数に有意差は認められなかった。

れていなかった。第１染色体上に存在するインターロ

この結果は，Il33 遺伝子多型の効果が戻し交雑ラッ

イキン33（Interleukin‑33；Il33 ）遺伝子にコードさ

ト集団において alarmin 活性の違いとして観察されれる IL‑33は，感染や傷害によって細胞死が起きた際たことを示唆した。

に細胞外に放出されて炎症反応を惹起する活性をもつ，【結論】以上の結果から，インターロイキン33遺伝子

いわゆる alarmin であり，ヒトやマウスにおいて多型はラットにおける好酸球増多症の修飾因子である

好酸球制御にも深く関与することが報告されていた。

と結論された。

そこで本研究では，ラット系統間のIl33 遺伝子の塩基（論文審査の結果の要旨）

多型検索，IL‑33蛋白の活性調査，および Cyba 遺伝

Matsumoto Eosinophilia Shinshu（MES）系ラッ

子と Il33 遺伝子との相互作用の解析を行い，Il33 遺トは末梢血における好酸球増多，および多くの臓器に伝子が好酸球増多症に対する修飾因子である可能性をおける好酸球浸潤炎症性病変を遺伝的に自然発症する検証した。

モデル動物である。以前の（ACI×MES）
×MES 戻【結果と考察】Il33 遺伝子の cDNA の塩基配列を決し交雑ラット集団を用いた解析により，好酸球増多症

定した結果，M ES 系ラットと ACI 系ラットの間でミの主要原因遺伝子が第19染色体上に，さらに末梢血中スセンス塩基置換が同定された。すなわち，171番目の好酸球数に影響する修飾遺伝子が第１染色体上に存のコドンの第１塩基が MES ではＧ（Ggt），ACI で在することが明らかとされた。その後の研究で好酸球はＡ（Agt）であるために，171番目のアミノ酸がグ増多症の原因は M ES 系ラット系統の第19染色体上のリシン（MES）からセリン（ACI）へ G171S 置換さ

Cytochrome b‑245，alpha polypeptide（Cyba）遺伝れることが予測された。IL‑33は細胞内でカスパーゼ

子の機能喪失型突然変異であることが明らかとされた。

３による切断を受けて不活性化される。G171S アミ

第１染色体上の修飾遺伝子に関しては，ACI 型の対ノ酸置換はカスパーゼ３による認識部位内に存在した。

立遺伝子が血中好酸球数を低下させる効果を有するこ

他のラット系統をスクリーニングした結果，ACI 系とが判ったが，その遺伝子は明らかとされていなかっラットと同一の塩基置換は BDIX 系ラットにも見つた。第１染色体上に存在する イ ン タ ー ロ イ キ ン 33

かったことより，この塩基置換は ACI 系ラットに特（Interleukin‑33；Il33 ）遺伝子にコードされる IL‑33

異的な変異ではなく，ラット系統間に保有される多型

は，好酸球制御にも深く関与することが報告されていであることが判明した。大腸菌強制発現系を用いてた。

MES 型，および G171S アミノ酸置換を含む ACI 型

これらの知見に基づき，ラット系統間の Il33 遺伝のリコンビナント IL‑33蛋白を調整し，その活性を調子の塩基多型検索，IL‑33タンパク質の活性調査，お査した。HEK293培養細胞を用いた NF‑κB 依存性レ

よび Cyba 遺伝子と Il33 遺伝子との相互作用の解析

ポーターアッセイにおいて，ACI 型 IL‑33により惹起を行い，Il33 遺伝子が好酸球増多症に対する修飾因される NF‑κB 活性は MES 型 IL‑33の約50％程度に子である可能性を検証した。

とどまることが確認された。また，マウスに腹腔内投与した場合，ACI 型 IL‑33投与群での末梢血中好酸球
数の上昇程度は M ES 型 IL‑33投与群と比その結果，羅 宏敏は次の結論を得た
１．Il33 遺伝子の cDNA の塩基配列を決定した結果，して有意MES 系ラットと ACI 系ラットの間でミスセンス塩に低かった。G171Sアミノ酸置換を有する ACI型 IL‑

基置換が同定された。ACI ラット系統には IL‑33に33もカスパーゼ３により切断されることが確認された。

G171S アミノ酸置換が存在する。

（ACI×MES）
×MES 戻し交雑ラット集団において，変 異 型 Cyba

遺 伝 子 の Il33 遺 伝 子 多 型 に 対 す る

２．G171S アミノ酸置換を含む ACI 型リコンビナント IL‑33は活性低下型である。

epistasis効果が確認された。すなわち，変異型Cyba① HEK293培養細胞を用いたNF‑κB依存性レポー

遺伝子をホモにもつ群では ACI 型の Il33 遺伝子をヘ

ターアッセイにおいて，ACI 型 IL‑33により惹起テロでもつ個体の方が MES 型のホモ個体よりも有意される NF‑κB 活性は MES 型 IL‑33の約50％程に低い末梢血中好酸球数をもっていた。一方，変異型

度にとどまることが確認された。

遺伝子をヘテロでもつ群では ACI 型の Il33

② マウスに腹腔内投与した場合，ACI 型 IL‑33投

遺伝子をヘテロでもつ個体と M ES 型のホモ個体との与群での末梢血中好酸球数の上昇程度は MES 型

Cyba

No. 5, 2014371

審査学位論文要旨

IL‑33投与群と比 して有意に低かった。

い末梢血中好酸球数を持っていた。

３．（ACI×MES）
×M ES 戻し交雑ラット集団におい以上の結果から，インターロイキン33遺伝子多型はて，ACI 型 Il33 遺伝子の血中好酸球数を低下させラットにおける好酸球増多症の修飾因子であり，そのる効果は，好酸球増多症を発症したラット群におい活性の強弱は好酸球関連疾患において重要な役割を持てのみ認められた。

つことが示唆された。このような羅宏敏の研究成果は①

遺伝子型をもつ戻し交雑ラット群で喘息など好酸球が関与するヒト疾患に対する，IL‑33

群と Il33を標的とした新たな制御法の開発にもつながる重要，Cyba
は Il33群との間で末梢血中

好酸球数に有意差は認められなかった。
②

一方，Cybaでは Il33

かつ意義あるものと考えられた。

遺伝子型をもつ交雑ラット群
群が Il33

群よりも有意に低

よって，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

Long‑term trial of corticosteroid therapy for the recurrence of cerebral amyloid angiopathy‑related
hemorrhages: a case study using［11C］BF‑227 amyloid‑PET（脳アミロイドアンギオパチー
関連再発性脳出血に対する長期副腎皮質ステロイド治療の試み：［11Ｃ］BF‑227アミロイド
PET を用いた症例検討）
安

出

卓

司

（論文の内容の要旨）めていない。アミロイド PET での SUVは14カ月月間【目的】脳アミロイドアンギオパチー関連再発性脳出で2.0から2.2へ増加し，微小出血面積も27カ月間で血の予防に対する副腎皮質ステロイド治療の長期効果

410.2mm から445.5mm へ増加していた。症例２でを明らかにすることを目的とした。

は副腎皮質ステロイド治療の開始29カ月後に多発性の【題目・方法】対象は脳アミロイドアンギオパチーの小再出血を発症し，ステロイド投与量が一時的に増量

ボストン診断基準において，Ｇ3からＧ4と診断されたされた。その後の17カ月間は再出血を認めていない。

男性１名と女性２名の３症例である。脳の Aβアミロ

アミロイド PET での SUV は18カ月間で1.5から1.4

イド沈着を評価するために BF277アミロイド PET をへ減少したが，微小出血面積は27カ月間で512.5mm

用いて検査し，全３例の脳にアミロイドの沈着を認めから560.8mm へ増加していた。症例３では副腎皮質た。Ｇ3と診断された66歳の男性例（症例１）では，ステロイド治療を開始して22カ月間再出血を認めておらプレドニゾロン（PSL）50mg/日が開始され，６カず，微小出血面積は13カ月間で152.5mm から154.1

月間で漸減中止としたが，その６カ月後には脳出血がmm へ微増していた。

再発した。このため，同様なステロイド治療が再開さ【考察】脳アミロイドアンギオパチー関連再発性脳出れた。Ｇ3と診断された69歳の女性例（症例２）では，血に対する副腎皮質ステロイド治療の長期効果は，臨

脳出血再発時にデキサメサゾン（DEX）16mg/日で床的には有効である印象だが，検査データから有効で開始し，一週間後には PSL 30mg/日へ変更，その後あるとの結論を導き出すことはできなかった。本邦で漸減して８mg/日で維持された。Ｇ4と診断された75開発されたBF227PETは脳アミロイドアンギオパチー

歳の女性例（症例３）では，PSL 30mg/日で開始さ関連のアミロイド沈着の可視化に有用であった。

れ，その後漸減し PSL ８mg/日で維持された。

（論文審査の結果の要旨）

観察期間内では，臨床像および M RI のＴ2＊画像

脳アミロイドアンギオパチー関連再発性脳出血の予での微小出血面積を画像解析で評価した。２つの症例防に対する副腎皮質ステロイド治療の長期効果を明らで は ス テ ロ イ ド 治 療 の 前 後 で，BF227ア ミ ロ イ ド

かにすることを目的とした。対象は脳アミロイドアン

PET によ っ て 後 頭 葉 に お け る SUV（standardized

ギオパチーのボストン診断基準において，Ｇ3からＧ4

uptake value）の評価を行った。

と診断された男性１名と女性２名の３症例である。方法【結果】症例１では副腎皮質ステロイド治療の開始

は脳の Aβアミロイド沈着を評価するために BF277

20カ月後に左前頭葉に小再出血を発症し，ステロイド

アミロイドPETを用いて検査し，全３例の脳にアミロ

パルス療法を施行した。その後33カ月間は再出血を認

イドの沈着を認めた。臨床経過は，Ｇ3と診断された

372

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

66歳の男性例（症例１）では，プレドニゾロン（PSL）

410.2mm から445.5mm へ増加していた。症例２で50mg/日で開始され，６カ月間で漸減中止としたが，は副腎皮質ステロイド治療の開始29カ月後に多発性の

その６カ月後には脳出血が再発した。このため，同様小再出血を発症し，ステロイド投与量が一時的に増量にステロイド治療が再開された。Ｇ3と診断されたされた。その後の17カ月間は再出血を認めていない。

69歳の女性例（症例２）では，脳出血再発時にデキサ

アミロイド PET での SUV は18カ月間で1.5から1.4

メサゾン（DEX）16mg/日で開始し，一週間後にはへ減少したが，微小出血面積は27カ月間で512.5mm

PSL 30mg/日へ変更・漸減し８mg/日で維持された。

から560.8mm へ増加していた。症例３では副腎皮質Ｇ4と診断された75歳の女性例（症例３）では，PSL

ステロイド治療を開始して22カ月間再出血を認めて30mg/日で開始され，その後漸減し PSL ８mg/日でおらず，微小出血面積は13カ月間で152.5mm から維持された。また，観察期間内では，臨床像および154.1mm へ微増していた。以上より，脳アミロイド

MRI のＴ2＊画像での微小出血面積を画像解析で評価

アンギオパチー関連再発性脳出血に対する副腎皮質スした。２つの症例ではステロイド治療の前後で，BF

テロイド治療の長期効果は，臨床的には有効である印

227アミロイド PET によって後頭葉における SUV

象だが，検査データから有効であるとの結論を導き出（standardized uptake value）の評価を行った。そのすこと は で き な か っ た。本 邦 で 開 発 さ れ た BF227

結果，症例１では副腎皮質ステロイド治療の開始20

PET は脳アミロイドアンギオパチー関連のアミロイ

カ月後に左前頭葉に小再出血を発症し，ステロイドパ

ド沈着の可視化に有用であった。

ルス療法を施行した。その後33カ月間は再出血を認めていない。アミロイド PET での SUVは14カ月月間

以上の結果より，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

で2.0から2.2へ増加し，微小出血面積も27カ月間でNo. 5, 2014373

審査学位論文要旨

Hydrogen Peroxide Content and pH of Expired Breath Condensate from Patients with Asthma and
COPD（喘息および COPD 患者における呼気凝集液中の過酸化水素濃度と pH の検討）
村

田

和

也

（論文の内容の要旨）

これら酸化ストレス指標は，呼吸機能，FeNO，喘息【背景】COPD と気管支喘息はともに気道の炎症性疾群における ACT score，COPD 群における LAV％と患であり気流の閉塞を特徴とする。病態の形成にはオは相関性は認められなかったものの，COPD 群におキシダント・アンチオキシダント不均衡が関与しておいて CAT score と H O 濃度の間には有意な相関性

り，酸化ストレスは肺障害や気道上皮等にアポトーシが確認された（r＝0.52，p＜0.01）。

スを引き起こすとともに，炎症性遺伝子の活性化，ア【考察】本研究より健常者に比べ気管支喘息およびンチプロテアーゼの不活化，粘液分泌や血管透過性の

COPD 患者において H O 濃度は有意に増加しており亢進などにも関与しているとされている。

pH は低下していた。この結果より H O は気管支喘

過酸化水素（H O ）は気管支喘息と COPD の病態形成における酸化ストレスメディエーターとして重要

息および COPD の病態形成に関与していることが示唆された。

な役割を担う因子である。呼気凝縮液における H O

これまでに気管支喘息患者の状態を評価するツールの解析では喫煙者および病期の進んだ気管支喘息・として ACT score や FeNO の有用性が報告されてい

COPD患者では健常者に比べH O 濃度が有意に上昇しる。本研究ではこれらのマーカーと酸化ストレスマーていたことが報告されている。同様に呼気凝縮液中のカーとの間に相関性を確認することができなかった。

pH は気管支喘息患者および COPD 患者で低下（酸今回，我々が対象とした患者群のほとんどが症状の安性化）しており気道炎症に深く関係しているとされて定しており吸入ステロイドまたは吸入ステロイド/長いる。しかし気管支喘息と COPD の気道炎症メカニ

時間作用型 β刺激薬合剤（ICS/LABA）による治療

ズムは互いに異なっている上に，呼気凝縮液の取扱に介入を行った患者である。一般にこれら薬剤の薬効は関しては明確な基準が示されていないため評価の方法

24〜48時間であるが詳細は不明な部分も多い。またこも一様でない。近年，呼気凝縮液中の H O と pH のれまでの報告では比 的重症な患者群を対象としたも濃度を測定することが COPD および喘息患者の病態のがほとんどであり本研究とバックグラウンド等が異を把握するうえで有用であるとされている。しかし，なったため酸化ストレスと呼吸機能，ACT

これまでに酸化ストレスマーカーと疾患の活動性・重FeNO と相関性が確認出来なかったことが考えられ

症度・表現型の関連性に関しては不明な点が多い。

る。

score，【目的】本研究では酸化ストレスマーカーと喘息の重CAT scoreは COPD の コ ン ト ロ ー ル 状 態 を 示 す症度および管理状態，COPD の重症度，表現型また有用なマーカーである。本研究でも呼吸機能検査や疾患の管理状態との関連性について解析する。

LAV％と相関性が確認され，H O とも相関していた。

【方 法】本 研 究 で は 喘 息29名，COPD 33名，健 常 者

近年，COPD の病態評価は呼吸機能や気腫病変のス

33名を対象とし，呼気凝縮液中の pH と H O を測定

コアリングだけでなく，患者の健康状態で重症度を評し た。そ の 後，各 疾 患 の コ ン ト ロ ー ル 状 態 を 反 映価することが重要だともされている。その点においてする ACT（Asthma Control Test），CAT（COPD

CAT score と相関性が確認された H O は患者の状態

Assessment Test）score や呼吸機能検査値，呼気一を評価出来る有用なマーカーであると言える。

酸化窒素濃度（FeNO），COPD患者の HRCT 画像上

pH に関して疾患群では健常者に比べ低下していたの低吸収域の volume（LAV％）との関連性を解析しが呼吸機能や ACT，CAT score とは相関していな

た。

かった。これは疾患群のコントロール状態や検体の【結果】健常者群に比べ気管支喘息・ COPD 患者では

CO 脱気が理由に挙げられる。特に CO 脱気に関して

呼気凝集液中のH O 濃度は上昇しており（3.42±0.66は多くの報告があるが，検体に与える影響などを今後

μM vs 8.75±0.88 and 7.44±0.89.），pH は低下し検討していく必要がある。

ていた（7.35±0.04 vs 7.14±0.07and 6.87±0.10.）。
374

本研究より酸化ストレスは病態形成に関与し，H
信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

O 濃度は COPD の疾患コントロールを反映し得る

価に値する。

マーカーになることが示唆された。

村田氏は臨床検査技師であるが，COPD と喘息の（論文審査の結果の要旨）

病態をよく勉強しており，バイオマーカーと病態との本論文は慢性閉塞性肺疾患（COPD）および気管支関係を詳しく評価している点も評価される。呼吸機能

喘息の病態に酸化ストレスが関与していることを示し，だけでなく，患者の症状，健康感，QOL を始めとし

COPD においては患者の健康状態と密接に関連するて，呼気中の一酸化窒素濃度の測定，COPD についことを示した論文である。COPD および喘息の病態ては気腫病変の客観的な評価と幅広く，両疾患の病態における酸化ストレスの関与については，すでに多くを評価し，酸化ストレスとの関係を検討している。過の論文が報告されているが，呼気凝集液を用いた検討

去の報告では，呼吸機能や重症度との評価は行われては数少ない。呼気凝集液は15分間の安静呼吸のみで採いるが，これだけ多くの評価項目で酸化ストレスとの取され，被検者への負担も少なく，経時的に何度も採関 連 を 同 時 に 検 討 し た 報 告 は な い。特 に，今 回 は取することが可能である。また，唾液によって希釈さ

COPD の症状をよく反映する CAT スコアと関連があれることが無く，臨床的に有用性が高い。この呼気凝ることを報告し，呼気凝集液中の酸化ストレスのバイ

集液を試料として選択した点は評価に値する。次に酸オマーカーが COPD の病勢のバイオマーカーとなり化ストレスのバイオマーカーとして過酸化水素と pH得ることを証明したことは大いに意義がある。

を選択した点について質疑を交わしたが，呼気凝集液

以上の審査の結果，本論文は信州大学大学院医学系の最大の欠点として，バイオマーカーの濃度が希釈さ研究科 博士後期課程 医療生命科学分野の博士論文

れて薄まっているため，蛋白やペプタイドといった物としてふさわしく妥当であると結論された。

質の測定には不向きである。また，揮発性のある物質の測定には有用である。これらの点を考慮して過酸化主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

水素と pH をバイオマーカーとして選択したことも評

Incidence of Legionella and heterotrophic bacteria in household rainwater tanks in Azumino, Nagano
prefecture, Japan（日本の地方都市長野県安曇野市における家庭用雨水貯留槽水中のレジオネ
ラおよび従属栄養細菌の挙動）
小

林

路

子

（論文の内容の要旨）

挙動と相関する指標を探索すると同時に，臨床微生物【研究目的】自然の恵である雨水の利用を推進するた学的観点からの検証を継続実施することにより，安曇めに，行政機関が，設置補助金交付による家庭用雨水

野地域における「安全な雨水」の利用拡大へと繫げる

貯留施設の設置を奨励している。長野県安曇野市でもだけでなく，健康被害の未然回避に益する実際的提言

既に「住宅用雨水貯留施設設置補助金」の制度を運用をも発信することへ結びつけることまでを視野に入れしている。一般家庭の雨水貯蔵タンクの貯留水は飲用ている研究である。

を前提としていないことから，健康被害の発生予防や【研究背景】雨水利用に関する研究は，浸水被害の緩危機管理に関する基準は示されていない。定期的な和に期待する都市型洪水防止効果の検討が主流で，一pH，COD 等の簡易な水質調査さえ実施されておらず，

般住宅という小規模システムでは，単に雨水利用の実

また，従属栄養細菌やレジオネラ等の細菌学的な汚染際例が報告されているに過ぎない。安曇野地域では畑状況調査も皆無である。更に，定期的なタンク清掃はへの水やりや庭の花木等のガーデニングに利用される実施されておらず，清掃を推奨することの科学的根拠ことが多いが，ガーデニングでは，既にレジオネラ肺も示されていない。健康被害に対する安全性が確認さ炎発症との関連性が指摘されている。新興感染症としれていない雨水貯留タンクの貯蔵水を安全活用するたて記載されたレジオネラ症は，今日では報告義務を有めに，従属栄養細菌およびレジオネラによる汚染状況

する四類感染症に位置づけられている。レジオネラはに加えて，天候，気温，降水量，pH，COD 等の変動

自然界に広く棲息分布していることから，一般家庭の要因との相互関係を統計学的に評価し，レジオネラの屋根に降った雨水を集水して蓄える貯留水が，従属栄

No. 5, 2014375

審査学位論文要旨

養細菌以外にレジオネラの汚染を受けている可能性は学的評価から，従属栄養細菌数が10 CFU/ml 以上で高いと考えられる。

あること，COD値が５mg/L未満であることがレジオ【研究対象と方法】本研究は安曇野市との連携によるネラの汚染状況の指標になり得る可能性が示唆された。

もので，安曇野市の家庭用雨水貯留施設設置補助金交

培養に長時間を要し，遺伝学的手法に依存せざるを得

付により設置した40家庭43個の雨水貯留槽について調ない，レジオネラ汚染の有無を把握するための普遍的査の協力を確認した。2012年６月，８月，10月の３回

な index‑parameter として位置づけるためには更な採水し，総計129サンプルを対象に調査した。採水日るデータ蓄積による検証が望まれる。

の天候，気温，降水量，pH，COD，従属栄養細菌数，（論文審査の結果の要旨）

レジオネラの定量培養と PCR 法による遺伝学的検出，本学位論文は，家庭用雨水貯留水からレジオネラ属検出したレジオネラについては遺伝学的手法で鑑別し菌の定量培養および遺伝学的検出を行い，同時に従属た。また，従属栄養細菌数や，pH，COD 等の変動要

栄養細菌数の計測，COD 値，pH 等を測定し，統計

因との相互関連性を統計学的に考察し，レジオネラの学的評価を行って，雨水貯留水中のレジオネラ属菌の挙動と相関する指標提案の可能性について評価した。

存在を示唆する指標を提案した研究である。

【研究成績】GVPC 培地によるレジオネラ定量培養で調査は長野県安曇野市との連携により行われた。43

は，129サンプル中，１つのサンプルからレジオネラの雨水貯留槽より，2012年６月，８月，10月の３季の，が検出（80CFU/100ml）されたのみであった。一方，

計129サンプルについて解析した結果，41サンプルか

PCR 法による検索では全体で31.8％のサンプルからら PCR 法によりレジオネラ属菌が検出され，検出率

レジオネラが確認された。６月と８月は43サンプル中は31.8％であった。遺伝学的鑑別から，その内の19

12サンプル（27.9％），10月は43サンプル中17サンプ

サンプル，46.5％がレジオネラ症の起因菌として重ル（39.5％）でレジオネラ陽性であった。レジオネ

要視されている，L. pneumophila であることが確認

ラ陽性サンプルについて，2‑step PCR 法による鑑別された。従属栄養細菌数は季節変動が見られなかったから，６月は83.3％（12サンプル中10），８月は41.6

ものの，レジオネラ属菌が検出されたサンプルの従属％（12サンプル中５），10月は23.5％（17サンプル中

栄養細菌数は，88.3％が10 CFU/ml 以上の菌数を計４）が，L. pneumophila であった。採水日前に晴天測した。COD 値については41サンプル中，40サンプが続いた後にレジオネラ陽性率が高く，雨天が続いた

ルが５mg/L 未満であった。pH についてはサンプル後には陽性率が低い傾向が認められた。また，陽性サ間で有意差はなかった。PCR 法によるレジオネラ属

ンプルの45.4％が COD 値 １mg/L を 示 し，COD 値

菌検出率が高い傾向にあったのは，採水日以前に降雨の増加に呼応して PCR 法によるレジオネラ陽性率ががなかったこと，採水地点が交通量が多い場所であっ低下する傾向が観察された。従属栄養細菌数は，季節たことが示された。

的変動は有意な差が見られなかった一方，レジオネラ

レジオネラ属菌は環境からヒトに感染することが特PCR 法陽性サンプルと1.0×10 /ml 以上の従属栄養

徴で，細胞内寄生性という性質を持ち，自然界ではア

細菌数とが高い関連性を示した。

メーバに寄生して増殖することから，レジオネラ属菌【データの考察と展望】交通量の多い採水地点でレジの存在を示唆する指標としてアメーバの有無が定説とオネラの高い検出率が認められ，粉塵中のレジオネラなっているが，細菌学的な汚染状況調査は皆無であり，が飛散し，降雨と共に雨水貯留槽に滞留したと考えら

健康被害の発生予防や危機管理に関する基準が示されれた。雨水 pH は3.6〜7.0で推移し，従属栄養細菌数ていない。また，レジオネラ属菌の培養は特殊な培地

およびレジオネラ陽性との有意な関連性は確認できなを使用することでコストがかかり，操作が煩雑な上にかった。レジオネラ PCR 陽性サンプルの従属栄養細判定まで長時間を要することから，一般の検査室では菌数について，対数データに対するヒストグラムを作成

緊急の対応が難しく，遺伝学的手法に頼らざるを得な

し，Kolmonogorov ‑Smirnov 検 定，Shapiro ‑Wilk

い現状である。

検定の結果，正規分布を示し，normdist 関数により，本研究において，従属栄養細菌数が10 CFU/ml 以

10 CFU/ml 以下である確率は0.117であった。デー

上であること，COD値が５mg/L未満であることがレタを解析した結果，2012年６月から10月の期間，家庭

ジオネラ属菌の存在を示唆する指標になりうる，として用雨水貯留槽水のレジオネラ汚染との相互関係の統計

提案された。この指標が，普遍的なindex‑parameter376

信州医誌 Vol. 62

審査学位論文要旨

として位置づけられるためには更なるデータ蓄積によ請者である「小林路子」に本研究の概略を述べさせた

る検証が望まれものの，本論文が新たに提案したレジ

のち，主査，副査からの質疑を行ったが，質疑についオネラ汚染を推定するための指標の意味は大きい。本ては別紙様式８号のようなやり取りが行われ，質疑に論文で提案された指標が，今後，雨水貯留槽水がレジ対する応答は概ね適切であることを確認し，本研究のオネラ属菌の感染源とならないための衛生管理対策を遂行に十分な学力を有しているものと判断した。よっ

構築していく上で，非常に意義深い。

て，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価

公開学位論文審査は平成26年１月20日（保健学科

値があるものと認めた。

211教室）17時から開催された。本審査会の冒頭，申siRNA down‑regulation of FGA mRNA in HepG2 cells demonstrated that heterozygous abnormalityof the Aα‑chain gene does not aﬀect the plasma ﬁbrinogen level（siRNA を用いた HepG2細胞の
FGA mRNA 発現抑制実験は，フィブリノゲン Aα鎖遺伝子のヘテロ型異常では血漿フィブリ
ノゲン濃度を低下させないことを明らかにした）
竹澤（論文の内容の要旨）

由

夏

を比

Ct 法にて定量した。また，ヘテロ型遺伝子異【背景と目的】フィブリノゲン（Fbg）は血液凝固カ

常を再現するために，mRNA 発現量が50％程度とな

スケードの最終段階に働く分子量340kDa の糖蛋白でる siRNA 濃度における FGA，FGB ，FGG mRNAあり，肝細胞で合成され血漿中に180‑350mg/dl 程度

定量と Fbg 蛋白量定量の実験を３回繰り返して行っ存在する。血漿中の Fbg は Aα，Bβ， γ鎖の３種のた。

ポリペプチドがＮ末端でＳ‑Ｓ結合した２量体を形成【結果】ヒト正常肝細胞由来 RNAの mRNA量を測定している。私は，Aα鎖遺伝子（FGA）のホモ型遺伝子した結果，FGA，FGB の発現量はほぼ等しく，FGG

異常を示す２例の無 Fbg 血症患者，Kurashikiとより２倍程度多く発現していた。HepG2細胞において

Yokkaichi を経験した。ところが予測に反して２例

は，FGA は FGG の２倍，FGB の４倍程度発現量がの患者の両親は，ヘテロ型遺伝子異常を有するにも関多かった。siRNAを導入して一過性に mRNAの発現

わらず Fbg 蛋白量は正常であった。同じ異常を持つ量を抑制した結果，siRNA の濃度依存的に mRNA

家系が国内で３例，中国で１例報告されており，何れの発現量は低下した。ヘテロ型遺伝子異常を HepG2の両親のFbg値も正常範囲内であった。そこで，FGA細胞で再現するために mRNA 発現量を50％程度にヘテロ型遺伝子異常では Fbg 蛋白量を低下させない

抑制した結果，NCに比べ FGAでは mRNA量46.3±のではないかと考え，Fbg産生HepG2細胞のFbg遺伝

4.4％の時，蛋白量77.7±7.1％，FGB ではmRNA量子（FGA，FGB ，FGG ）mRNA を定量するととも53.8±1.6％，蛋白量48.7±3.8％，FGG ではmRNAに，siRNA を導入して各遺伝子の mRNA 量を一過

量45.2±1.3％，蛋 白 量56.7±3.0％ で あ り，FGA性に抑制し，mRNA と蛋白量を比 検討した。

において有意に蛋白量が多かった（p＜0.05）。FGB ，【方 法】始 め に，ヒ ト 正 常 肝 細 胞 由 来 RNA と ヒ ト

FGG では mRNA 量が50％程度になれば蛋白量も50

肝癌細胞株 HepG 2細胞にお け る 各 Fbg 遺 伝 子 発 現％程度になるが，FGA では mRNA 量が50％程度で量を TaqMan プローブを用いた real‑time RT‑PCR

も蛋白量は80％程度存在することが明らかになった。

を行い定量した。次にFGA，FGB ，FGG に対する各【考察】FGA mRNA 量は FGB ，FGG mRNA 量よsiRNA を1.0‑30nM の範囲で濃度を変えて HepG2細り２倍程度多いため，その発現量を50％に抑制して胞に導入し，Negative Control siRNA を導入したも FGB ，FGG と同程度発現しており，Fbg 合成に

Negative Control，siRNA（−）の Normal Control

十分な量の Aα鎖ポリペプチドが産生されるために，（NC）を比 対象として一過性に mRNA 発現量を抑Fbg 蛋白量が減少しないと考えられた。したがって，制した。培養後，上清中の Fbg 蛋白量 を ELISA 法

ヒト肝細胞における Fbg 蛋白産生量は FGA mRNAにて測定するとともに，培養細胞から RNA を抽出し量ではなく，FGB または FGG mRNA 量が律速してreal‑time RT‑PCR を行い各遺伝子の mRNA 発現量いると考えられた。近年，HepG2細胞を用いた研究

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審査学位論文要旨

でBβ鎖ポリペプチド産生量が Fbg産生を律速してい量は FGG ‑mRNA量の２倍，FGB ‑mRNA量の４倍ると報告されており，私の結果と一致するものであっ

発現していた。

た。また，ナンセンス変異，フレームシフト，スプラ

次に３種の mRNA に作用する siRNA を HepG2細イシング異常により正常な mRNA が産生されない無胞に別々に導入して，各 mRNA 発現量を一過性に抑Fbg血症患者とヘテロ型遺伝子異常を示す両親のFbg

制し，30時間後に mRNA 量と Fbg 分泌量を測定し測定値を文献検索したところ，150mg/dl 以下症例はた。siRNAを1.0〜2.0nM 添加し FGA‑mRNA量が，FGB 異常では４/８人
FGA異常で１/16人（6.3％）

46.3±4.4％に減少した時に，Fbg 量が77.7±7.1％（50％），FGG 異常では11/12人（91.7％）であり，であったのに対して，FGB ‑mRNA量が53.8±1.6％

私の研究結果を裏付けるものであった。

に減少した時のFbg量は48.7±3.8％，FGG ‑mRNA【結語】FGA のヘテロ型遺伝子異常では Fbg 蛋白量量が45.2±1.3％に減少した時の Fbg 量は56.7±3.0が低下しないことが明らかになった。このため Fbg％であり，FGA において Fbg 量が有意に高値であっ

測定値が正常であるために気づかれない FGA 遺伝子

た（p＜0.05）。すなわち，FGAではmRNA量が約50

異常のヘテロ接合体がかなりの頻度で存在する可能性％程度に減少しても Fbg 量の減少は20％程度にとどが示唆された。

まることが明らかになり，仮説を見事に立証した。

（論文審査の結果の要旨）

さらに，ナンセンス変異などの原因により正常量の竹澤はフィブリノゲン（Fbg）が血漿中にほとんどmRNA が産生されないヘテロ患者の Fbg 測定値を検出できない無 Fbg 血症患者２例を経験した。遺伝

文献検索したところ，150mg /dl以下症例は FGAで

子解析の結果１例は Aα鎖遺伝子（FGA）のホモ型，6.3％，FGB で50％，FGG で91.7％であった。一方，

もう１例は FGA の複合ヘテロ型の異常であった。何他の原因により mRNA が減少しない患者におけるれの症例も mRNA 産生量が低下する遺伝子異常で150mg/dl以下症例は，FGAで85.7％，FGB で82.4％，あった。しかし２例の患者の両親はヘテロ型遺伝子異FGG で97.8％であった。このような頻度の大きな相常を有するにも関わらず，血漿Fbg量は正常であった。

違は，竹澤の実験結果を裏付けるものであった。

本学位論文はFGAヘテロ型遺伝子異常者では mRNA

公開学位審査会は平成25年９月11日に主査・副査の産生量が半減しても Fbg 蛋白量は半減しないという

ほか３名の出席のもとで行われた。審査会の冒頭に仮説を立て，実証した研究の報告である。

「竹澤由夏」に本研究の概略を述べさせた後に，主はじめにヒト正常肝細胞由来 RNAと Fbg産生肝細査・副査から別紙様式第８号のような質疑を行い，応胞株である HepG2細胞の Fbg 遺伝子（FGA，FGB ，答は概ね適切であることを確認し，本研究の科学的意

FGG ）mRNA 量 を real‑time RT ‑PCR 法 に よ り

義とその説明に関して十分な知識を有しているものと定量した。その結果，ヒト正常肝細胞では，FGA‑と評価した。

FGB ‑mRNA量はほぼ等しく，FGG ‑mRNA量の２倍発現していた。一方，HepG2細胞では，FGA‑mRNA

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以上，主査，副査は一致して本論文を学位論文として価値があるものと認めた。

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