Glycative Stress Research
Online edition : ISSN 2188-3610
Print edition : ISSN 2188-3602
Received : November 29, 2022
Accepted : February 21, 2023
Published online : March 31, 2023
doi:10.24659/gsr.10.1_27

Original article

Verification of improvement of periorbital wrinkles
by using Asakado Skin Care
Yoshikazu Yonei, Masayuki Yagi
Anti-Aging Medical Research Center / Glycative Stress Research Center,
Faculty of Life and Medical Sciences, Doshisha University, Kyoto, Japan

Glycative Stress Research 2023; 10 (1): 27- 42(c) Society for Glycative Stress Research（原著論文：日本語翻訳版）

Asakado 浅花堂スキンケア使用による目尻のシワ改善効果の検証腸脳力を活かした質の高い健康長寿実現のアプローチ
米井嘉一、八木雅之
同志社大学大学院生命医科学研究科アンチエイジングリサーチセンター・糖化ストレス研究センター、京都

抄録「化粧品機能評価法ガイドライン」シワグレードの 1 ～ 3 に該当する 35 歳以上 55 歳未満の健康な女性 3 4 名（43.4 ± 0.6 歳）を対象とし、試験化粧品を塗布側に、目尻を中心に 1 日 2 回、8 週間使用させ、反対側（無塗布側）は無処置とし、ハーフフェイス法による試験を行った。試験品はイナゴマメ（Ceratonia siliqua L.）
果実エキス、アイ（Polygonum tinctorium）葉 / 茎エキス、リボソーム化成分など多種類の成分を含有するス
キンケア化粧品とした。その結果、主要評価項目の塗布側の目尻シワグレード及び症例画像を用いた目尻シ

ワグレードは専門医による目視評価で 8 週後に有意な改善を示した。しかしながら無塗布側も有意に改善し、両側間に有意差はなかった。目尻シワレプリカ解析では塗布側も無塗布側も試験前後で有意な変化はみられなかった。副次評価項目の皮膚粘弾性（ R2 ）は塗布側も無塗布側も 8 週後に有意に改善したが、変化量には両側間に有意差はなかった。試験期間中に有害事象は認められず、試験品の安全性が確認された。本試験品に含まれる多種類の機能成分がリボソーム化成分の助けを受けて経皮吸収された後、反対側に作用した可能性について考察を加えた。仮説を検証するためには、今後の試験で試験品塗布後の有効成分の血中濃度を確認する必要がある。

連絡先： 教授 米井嘉一
同志社大学大学院生命医科学研究科アンチエイジングリサーチセンター／
糖化ストレス研究センター〒 610-0321 京都府京田辺市多々羅都谷 1- 3
TEL & FAX：0774 -65-6394 e -mail：yyonei@mail.doshisha.ac.jp
共著者：八木雅之 myagi@mail.doshisha.ac.jp（ 1 ）Glycative Stress Research 2023; 10 (1): 27-42
本論文を引用する際はこちらを引用してください。
(c) Society for Glycative Stress ResearchGlycative Stress Research

KEY WORDS : 化粧品、目尻シワ、皮膚弾力性、ハーフフェイス法、イナゴ マメ（Ceratonia siliqua）

はじめに除外基準を以下に示す。

シワは 30 歳ころから顔面に出始める。主要因は真皮に存在する線維芽細胞が生成する蛋白質、弾性線維とコラー
ゲンの量的ならびに質的変化によると考えられている

1, 2)

。

勿論、浅いシワは表皮の乾燥による表皮の構造変化も原因となる。常に日光に曝露される顔や頚部には深いシワが生じる。目尻のシワは人の視線が集まりやすく、気にする女性は多いため、美容皮膚科領域では目尻のシワ改善効果を有する化粧品の開発が期待されている。

1) 現在、何らかの疾患を患い薬物治療を受けている者
2) 精神疾患、睡眠障害、高血圧、糖尿病、脂質異常症や重篤な疾患の既往歴・現病歴のある者

3) 肝、腎、心、肺、血液等の重篤な障害の既往歴・現病歴のある者

4) 消化器官に併存疾患および重篤な既往歴のある者
5) 化粧品に対するトラブルの既往歴、現病歴のある者
6) アトピー性皮膚炎、口囲皮膚炎、酒さ様皮膚炎等の皮膚症状を有する者

本試 験の目的は、被験化粧品（Asakado 浅花堂スキン

7) 評価部位に影響を与えるような美容施術、美容医療のの 1 ～ 3 に該当する 35 歳以

8) 過去 3 ヶ月以内に以下の行為を行った者あるいは受ける目尻のシワの改善効果をハーフフェイス法により被験化

a. ホルモン補充療法
b. 強い保湿効果や、シワに関する効果を示し得る化 粧ケア）による目尻のシワ改善効果を検証することを目的に、目尻のシワがシワグレード

3)

上 55 歳未満の健康な女性を対象に、試験化粧品使用によ経験のある者

    た者

粧品塗布側と無塗布側の比較によって検証した。

        品類（アイクリーム、シーラー、パッチ等）の使用

c. 肌の改善を目的とする医薬品、医薬部外品、食品お方法        よびドリンク類の定期的な使用

対象
対象は、「化粧品機能評価法 ガイドライン」に基づき、

目 尻 シ ワ の シ ワ グ レ ード 標 準 写 真（http://www. jcss.jp/

9) 評価部位に傷や炎症を有する者
10) 過去 1ヶ月において、疾患治療を目的とした、薬物の使用、塗布習慣のある者（頭痛、月経痛などの頓服歴は除く）

journal /contents_ guideline5.pdf ）3) の 1 ～ 3 に 該 当 す る
35 歳 以 上 55 歳 未 満 の 健 康 な 女 性 63 名 を 募 集 し た。 試
験 対 象 者 に 該 当 す る 63 名 に 対 し て 事 前 検 査 & 使 用 前（SCR &Visit-1）を行い、選択基準に該当し、除外基準に

11) 日常的な飲酒量が純アルコール換算で平均 60 g /日を超妥当と判断された者の中より、被験者選抜基準に準じ 34

するおそれがあり、目鼻症状の悪化や抗アレルギー剤

抵触しておらず、試験責任医師の判断により試験参加が名を選抜し本試験の被験者とした。

    える者

12) 試験期間中、生活習慣を変更する可能性のある者（夜間勤務、長期の旅行など）

13) 試験期間中、花粉症など季節性アレルギー症状を発症などを使用する可能性がある者

14) 試験期間中、日焼け行為など、故意に直射日光にあた選択基準を以下に示す。

1) 試験参加の同意取得時点での年 齢 が 35 歳以上 55 歳未ることを控えることができない者

2) 健康な者で、皮膚疾患を含む、慢性身体疾患がない者
3) 目尻のシワがシワグレード標準写真の 1 ～ 3 に該当す

15 ) 妊娠中、授乳中あるいは妊娠の可能 性のある者
16 ) 現在、他ヒト臨床試験に参加している者、他ヒト臨床試験参加後、3 ヶ月間が経過していない者
17 ) その他、試験責任医師が本試験の対象として不適当と

4) 目尻のシワが ほぼ 左右対称にある者
5) 本試 験の目的、内容について十分な説明を受け、同意

試験デザイン

満の女性

る者

判断した者

能力があり、よく理解した上で自発的に参加を志願し、書面で本試 験 参加に同意できる者

6) 指 定された検査日に来所でき、検査を受けることのできる者

7) 試験責任医師が本試験への参加を適当と認めた者

本試験は被験化粧品使用による目尻のシワの改善効果
を被験化粧品塗布側と無塗布側を比較する並行群間遮蔽試
験（ハーフフェイス法）によって検証した。

被験 者は 8 週間にわたり朝 晩 のスキンケア後、被験化

粧品を容器から 1 プッシュ（約 0.5 mL ）手に取り指先で指（ 2 ）スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証

OH

定された目尻を中心に半顔全体に塗布し、なじませた。もう半顔は無塗布とした。観察回数は、使用前、使用 4 週後、
使用 8 週後の 3 回とし、専門医による目尻シワグレード目

視評価、症例画像を用いた専門医による目尻シワグレード
目視評価、目尻シワ部位写真（Visia, Canﬁeld Scientiﬁc,

HO

測定、医師による問診、副作用の発現有無 / 有害事象判定

O

Parsippany, USA）、目尻シワレプリカ解析、皮膚粘弾性を施行した。目尻シワ部位写真（Visia）、目尻シワレプリ

カ解析、皮膚粘弾性測定については温 度 21 ± 1 ℃ 、湿度

50 ± 5 % にて設定した環境試験室で実施した。被験者は生活日誌に試験期間中の被験化粧品使用状況、肌状態 / 体調の変化（有害事象調査）、生活状況の変化の有無、医薬

O

O
O

O

HO

OH
OH

O
OH

OH
Fig. 1. Novel compound that is extracted from Ceratonia
siliqua.

品服用状況、サプリメント類の使用状況、月経有無につい有効性評価項目て記録した。

専門医による目尻シワグレード目視評価

対象とした｡ 被験者 34 名（女性）の年齢は、43.4 ± 0.6 歳「新規効能取得のための抗シワ製品評価ガイドライン」には、2.265 ± 0.122 であった。

ア付けを行った。

本試 験は 34 名で試 験を開始し、全 34 名が 完遂、解析であり、割付時の専門医による目尻シワグレード目視評価

試験開始時は日本香粧品学会（ http://www.jcss.jp/ ）がおいて定めたシワグレード 3) に基づき、試験開始時のスコ
各観察時は各測定 ポイントで、試験開始時または前回

試験品
試験品は約 40 年にわたって、自然界に存在する天然成分の有効性に着目し、最新の皮膚科学に基づいて、高性能・高品質の化粧品開発を行ってきた株式会社ナボカルコス

メティックス（東京）（Nabocul Cosmetics, Tokyo, Japan）
がこれまでの実績に基づき、天然素材を原料とした有効性の高い物質を活用し、さらに新しい美をもたらすという理念を掲げて社内研究チームと外部研究開発機構の協力のもと立ち上げた浅花堂プロジェクトの新商品として製造したの測定ポイントの写真を参照しながらシワグレード評価に基づきスコア付けを行い、各グレードの標準写真に当てはまらない場合は、その中間値あるいは 1 / 4 値のスコアを用いた（ 2. 5 や 2.25 など）。

症例画像を用いた専門医による
目尻シワグレード目視評価

試験開始時はシワグレード 標準写真 3) に基づき、目尻の症例画像の試験開始時のスコア付けを行った。

製品である。

各観察時は各測定ポイントで、試験開始時または前回

配合成分は次に示す：イナゴマメ果実エキス、アイ葉 /の測定 ポイントの写真を参照しながらシワグレード 評価

茎エキス、カミツレ花エキス、グルコシルヘスペリジン、に基づきスコア付けを行い、各グレードの標準写真に当て

グルコシルルチン、ヒメフウロエキス、ヒドロキシプロリ

ン、コエンザイム A、コンドロイチン硫酸 Na、サッカロ
ミセス溶解質エキス、ヒアルロン酸 Na、β - グルカン、ポ

はまらない場合は、その中間値あるいは 1/ 4 値のスコアを用いた（ 2.5 や 2.25 など）。

リアスパラギン酸 Na 、ミリスチン酸オクチルドデシル、

目尻シワレプリカ解析

セルロース、アデノシン三リン酸 2 Na、アルギニン、アロまで採取したサンプルを反射用 3 D レプリカ解析システム

ユビキノン（酸化型コエンザイムQ10）、ヒドロキシエチル
エベラ葉エキス、グリコシルトレハロース、グリセリルグ

ルコシド、グリチルリチン酸 2K、ヒドロキシフェニルプ
ロパミド 安息香酸、パルミチン酸アスコルビル、ナイアシ

ンアミド、パルミチン酸レチノール、コーン油、加水分解
水添デンプン、甘草エキス、水添レシチン、キサンタンガム、
カルボマー、BG、EDTA-2Na 、グリセリン、PEG- 60 水
添ヒマシ油、ヒドロキシアセトフェノン、ペンチレングリ
コール、水。代表的な成分は地中海沿岸に由来するイナゴ
マメ (Ceratonia siliqua) 莢から分離・発見された新しい化合物成分で、分子式は C23 H 24 O13 で、構造式は下図の通りである（Fig. 1 ）4)。

被験者の左右目の際 5 mm 部位よりちりめんシワ部位

ASA- 03RXD（アサヒバイオメッド、東京）を用いて解析した。サンプル解析範囲は、1) 目尻から約 5 ～ 7 mm 部
位より 1.0 cm × 1.0 cm の範囲、2) 目尻から約 10 ～ 12 mm
部位より 1.0 cm × 1.0 cm の範囲とし、0 度、180 度の双方
より解析実施し、平均を採用値とした。評価項目は以下の
通 りとした。

1) 目尻より約 5 ～ 7 mm

シワ面積率 / シワ体積率 / 総シワ平均深さ / 最大シワ平

均深さ / 最大シワ最大深さ / シワ個数

2) 目尻より約 10 ～ 12 mm

シワ面積率 / シワ体積率 / 総シワ平均深さ / 総シワ最大

    深さ / シワ個数

（ 3 ）Glycative Stress Research

副次評価項目
皮膚粘弾性測定

キュートメーター Cutometer MPA580®
（Courage-Khazaka,001）。本試験については臨床試験事前登録を行った（UMIN# 000046645）。

Köln, Germany）を用いて、左右顔、耳朶下と唇端とを結んだ中心部を 5 回測定し、R 2 値を基準にした、最上値・最下値データを削除した 3 回測定値の平均を使用した。

結果

その他評価項目

専門医による目尻シワグレード目視評価 ( Table 1 )目尻シワ部位写真（ VISIA）

VISIA-Evo（Canﬁeld Scientiﬁc）を用いて左右顔面を撮

影し、目尻シワ部位をトリミングにて抽出した。

有効性評価項目

塗布側において、 使用前（2.27 ± 0.12）→ 使用 4 週後

（2.20 ± 0.120）→ 使用 8 週後（2.10 ± 0.12）と減少し、使用前と比較して使用 4 週後（ p = 0.005）および、使用 8 週後（ p < 0.001）で有意に改善した（Fig. 2）。

無塗布側においても、使用前（2.27 ± 0.12）→ 使用 4 週

安全性評価項目

医師による問診 / 副作用の発現有無 / 有害事象判定後（ 2.21 ± 0.12）→ 使用 8 週後（ 2.10 ± 0.12）と減少し、は被験者の自覚症状、および有害事象の発現について確認

週後（ p < 0.001）で有意に改善した。

事前検査 & 使用前時には背景調査票、以降の観察時にし、カルテに記録するとともに問診、適切な処置を行った。

使用前と比較して使用 4 週後（ p = 0.029）および、使用 8
両側間に有意差はなかった。

症例画像を用いた専門医による

目尻シワグレード目視評価 ( Table 1 )統計解析
解析対象項目は、専門医による目尻シワグレード目視評
価、症例画像を用いた専門医による目尻シワグレード目視
評価、目尻シワレプリカ解析、皮膚粘弾性測定とし、検査

結果数値は Microsoft Office Excel 2016（Microsoft Corp.）
を用いて累計表に集計し、基本統計量として平均値、標準偏差、標準誤差、最大値、最小値を算出した。解析に用いる数値は実測値および使用前よりの変化量とした。カテ
ゴリーデータとして得られる各検査項目は検査時点ごとの集計を行った。統計解析は SAS（SAS 9.4 ）または SPSS

（ Statistics 26 ）など適切な統計解析ソフトを用いて実施し、塗布側において、使用前（2.27 ± 0.12） → 使用 4 週後

（2.18 ± 0.12）→ 使用 8 週後（ 2.08 ± 0.120）と減少し、使用前と比較して使用 4 週後（ p < 0.001）および、使用 8 週後（ p < 0.001）で有意に改善した（Fig. 3 ）。

無塗布側においても、使用前（ 2.27 ± 0.12）→ 使用 4 週後（2.19 ± 0.12）→ 使用 8 週後（ 2.06 ± 0.12）と減少し。

Wilcoxon の符号付順位検定による経時比較において、使用前と比較して使用 4 週後（ p = 0.003）および、使用 8 週後（ p < 0.001）で有意に改善した。
両側間に有意差はなかった。

すべての検定について有意水準は両側検定で 5 % とした。

目尻シワレプリカ解析 ( Table 2 )粧品塗布側と無塗布側の比較を対応のある t 検 定（両側検深さ / 最大シワ平均深さ / 最大シワ最大深さ / シワ個数、目視評価より得られるスコアは、ノンパラメトリックとし平均深さ / 総シワ最大深さ / シワ個数について、塗布側に群間比較について、解析データは、各検査時の被験化定）で統計解析を行った。専門医による目尻シワグレードて取り扱い、群間での比較には Wilcoxon の符号付順位検定を行った。

経時比較について、解析データは、使用前と使用後の各目尻より 5 mm のシワ面積率 / シワ体積率 / 総シワ平均

目尻より 10 〜 12 mm のシワ面積率 / シワ体積率 / 総シワ
おいて有意に改善した項目はなかった。両側間に有意差はなかった。

観察期との比較を対応のある t 検定で統計解析を行った。

副次評価項目アは、ノンパラメトリックとして取り扱い、経時比較にはR 2 について、塗布側において使用前（ 0.788 ± 0.012）→ 使 用 4 週 後（0.780 ± 0.011）→ 使 用 8 週 後（0.809 ±0.009）と推移し、対応のある t 検 定による経時比較において、使用前と比較して使用 8 週後（ p = 0.004）で有意に改善した（ Fig. 4 ）。
無塗布側についても使用前（ 0.792 ± 0.010）→ 使用 4 週
後（0.803 ± 0.009）→ 使用 8 週後（0.815 ± 0.007）と推移し、対応のある t 検定による経時比較において、使用前と比較して使用 8 週後（ p < 0.001）で有意に改善した。

専門医による目尻シワグレード目視評価より得られるスコ

Wilcoxon の符号付順位検定を行った。

倫理審査
本 試 験 はヘルシンキ宣言（ 2013 年 10 月フォルタレザ 改訂）に基づく倫理的原則、および「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針（ 2017 年一部改正）」に則り、「一般社団法人糖化 ストレス研究会」（東京都中野区）にてヒ
ト試験倫理委員会の承認のもとに施行した（GSE #2022-

皮膚粘弾性測定 ( Table 3 )（ 4 ）スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証

Table 1. Periorbital wrinkle grades assessed by specialized doctors.

VisualPhotographic
imagesComparison
between groups

Time Comparison

Periorbital
wrinkle grades
AppliedNon-applied
AppliedNon-applied

Before4W

P value

8W

P value

2.27 ± 0.12

2.20 ± 0.12

0.005

2.10 ± 0.12

< 0.001

2.27 ± 0.12

2.21 ± 0.12

0.029

2.10 ± 0.12

< 0.001

2.27 ± 0.12

2.18 ± 0.12

0.001

2.08 ± 0.12

< 0.001

2.27 ± 0.12

2.19 ± 0.12

0.003

2.06 ± 0.12

< 0.001

p value (4W) p value (8W)
0. 527

1.000

0.782

0. 597

Periorbital wrinkle grades are assessed by visual inspection and photographic images. Results are expressed as mean values ± SEM, n = 34. Wilcoxon
signed-rank sum test is used for analysis of the time comparison with before usage and the comparison between applied side and non-applied side. SEM,
standard error mean.

Table 2. Replica analysis of periorbital wrinkles.

Comparison
between groups

Time Comparison

Replicaanalysis

BeforeArea ratio of
wrinkles (5 mm)

μm 2/mm 2/100

Volume fraction of
wrinkles (5 mm)

μm 3/mm 2/100

Average depth of
total wrinkles(5 mm)

μm

Average depth of
maximum wrinkles(5 mm)

μm

Maximum depth of
maximum wrinkle(5 mm)

μm

Number ofwrinkles (5 mm)

N/mm

Area ratio of
wrinkles (10 mm)

μm 2/mm 2/100

Volume fraction of
wrinkles (10 mm)

μm 3/mm 2/100

Average depth of
total wrinkles(10 mm)μm

Maximum depth of
total wrinkle(10 mm)μm

Number ofwrinkles (10 mm)

N/mm

Applied2.73 ± 0.18

Non-applied

2.66 ± 0.16

Applied39.39 ± 2.70

Non-applied

38.22 ± 2.37

Applied149.90 ± 1.74

Non-applied

150.17 ± 1.62

Applied152.22 ± 2.10

Non-applied 152.84 ± 1.70
Applied401.12 ± 9.80

4W

P value

8W

3.00 ± 0.19

0.015

2.88 ± 0.18

3.10 ± 0.19

0.088

0.008

43.51 ± 3.05

2.98 ± 0.18

0.019

0.017

41.56 ± 2.74

46.12 ± 3.43

0.097

0.010

150.57 ± 1.63

43.35 ± 2.70

0.661 152.79 ± 1.72

0.051

0.255 151.77 ± 1.23

0.197

0.461 156.45 ± 2.50

0.030

0.302 156.14 ± 1.47

0.035

151.68 ± 1.56
153.44 ± 1.96
154.47 ± 1.50
410.30 ± 14.13

Non-applied 402.40 ± 13.26 399.63 ± 10.06
Applied0.55 ± 0.02

Non-applied

0.54 ± 0.02

Applied2.79 ± 0.25

Non-applied

2.70 ± 0.22

Applied41.04 ± 3.98

Non-applied

39.45 ± 3.41

Applied155.19 ± 2.85

Non-applied 155.12 ± 2.44
AppliedNon-applied 400.44 ± 8.46
Applied0.49 ± 0.03

Non-applied

0.49 ± 0.03

0.013

0.315 432.84 ± 14.97 0.006
0.718 426.13 ± 15.23

0.107

0.58 ± 0.02

0.027

0.021

0.56 ± 0.02

0.58 ± 0.02

0.374

0.016

3.23 ± 0.29

0.57 ± 0.02

0.001

0.017

2.89 ± 0.25

3.10 ± 0.24

0.226

0.027

47.97 ± 4.85

2.98 ± 0.23

0.002

0.019

42.51 ± 3.87

45.83 ± 4.05

0.202

0.032

155.92 ± 2.82

43.68 ± 3.67

0.584

157.48 ± 2.73

0.682 156.09 ± 2.58
0.056 155.97 ± 2.34

0.442

399.15 ± 7.91

0.817 382.77 ± 7.16

0.025

402.70 ± 11.18 409.28 ± 12.87 0.277 413.55 ± 14.60

p value p value(8W)

P value (4W)

0.185

0.53 ± 0.03

0.011

0.025

0.49 ± 0.03

0.52 ± 0.02

0.981

0.51 ± 0.03

0.049

0.730 0.750
0.746 0.564
0.474 0.379
0.706 0.629
0.365 0.642
0.307 0.880
0.084 0.787
0.090 0.745
0.309 0.980
0.343 0.007
0.036 0.992

Periorbital wrinkle is analyzed at 5 mm and 10-12 mm from the corner of the eye. Results are expressed as mean values ± SEM, n = 34. Paired t test is used foranalysis of the time comparison with before usage and the comparison between applied side and non-applied side. SEM, standard error mean.

（ 5 ）Glycative Stress Research

Periorbital wrinkle grades (visual)

2.4
2.3
2.2

Applied side(n = 34)
Non-applied side (n = 34)
2.27
2.27

2.21

*

2.20

**

2.1

2.10
2.10 ***

***

2.0
1.9
1.8

Before4 weeks

8 weeks

Fig. 2. Visual inspection assessment of periorbital wrinkle grades by a specialized doctor.

The mean value ± SEM, n = 34. Applied side, test-product topically applied for 8 weeks. *p < 0.05, **p < 0.01,***p < 0.001 vs before usage, Wilcoxon signed-rank sum test. SEM, standard error mean.

Applied side(n = 34)
Non-applied side (n = 34)

Periorbital wrinkle grades (images)

2.4
2.3
2.2

2.27
2.27

2.19 **
2.18

***

2.1

2.08 ***
2.06 ***

2.0
1.9
1.8

Before4 weeks

8 weeks

Fig. 3. Visual assessment of periorbital wrinkle grades by specialized doctors using casephotographic images.
The mean value ± SEM, n = 34. Applied side, test-product topically applied for 8 weeks. **p < 0.01, ***p < 0.001
vs before usage, Wilcoxon signed-rank sum test. SEM, standard error mean.

（ 6 ）スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証

Table 3. Skin Viscoelasticity Measurement.

R0
R2
R5
R6
R7

Comparison
between groups

Time Comparison

Skinelastisity

Before4W

P value

8W

P value

Applied0. 32 ± 0.01

0. 34 ± 0.01

0. 001

0. 33 ± 0.01

0.024

Non-applied

0. 31 ± 0.01

0. 33 ± 0.01

0. 004

0. 32 ± 0.01

0.165

Applied0.79 ± 0.01

0.78 ± 0.01

0.320

0. 81 ± 0.01

0.004

Non-applied

0.79 ± 0.01

0. 80 ± 0.01

0.179

0. 82 ± 0.01

0.001

Applied0. 58 ± 0.02

0. 51 ± 0.02

0.000

0. 56 ± 0.02

0.163

Non-applied

0. 58 ± 0.02

0. 55 ± 0.01

0. 001

0. 56 ± 0.01

0.055

Applied0. 37 ± 0.01

0. 34 ± 0.01

0. 0230. 35 ± 0.01

0.342

Non-applied

0. 37 ± 0.01

0. 34 ± 0.01

0. 0080. 35 ± 0.01

0.021

Applied0. 42 ± 0.01

0. 39 ± 0.01

0. 0000. 42 ± 0.01

0.351

Non-applied

0. 42 ± 0.01

0. 41 ± 0.01

0. 0220. 42 ± 0.01

0.264

p value (4W) p value (8W)
0.479

0.552

0.089

0.589

0.031

0.805

0.747

0.803

0.052

0.948

Skin elasticity is Measured by Cutometer. Results are expressed as mean values ± SEM, n = 34. Paired t test is used for analysis of the time comparison with
before usage and the comparison between applied side and non-applied side. R0, Uf; R2, biological elasticity (Ua1/Uf1); R5, net elasticity (Ur/Ue); R6,
viscoelasticity (Uv/Ue); R7: elastic recovery (Ur1/Uf1); SEM, standard error mean.

0.84

Applied side(n = 34)
Non-applied side (n = 34)

Skin elasticity (R2)

0.82
0.803

0.80

#

0.815 ***
0.809 **

0.792
0.788

0.78

0.780

0.76

0.74

Before4 weeks

Fig. 4. Skin elasticity changes.

8 weeks

The mean value ± SEM, n = 34. Applied side, test-product topically applied for 8 weeks. **p < 0.01, ***p < 0.001
vs before usage, # p < 0.05 vs non-applied side, paired-t test. SEM, standard error mean.

（ 7 ）Glycative Stress Research

また対応のある t 検定による群間比較において、塗布側

が無塗布側に対して、使用 4 週後（ p = 0.027）で有意に低かった。8 週後には両側側に有意差はなかった。

化物系の低分子化合物等が少量含まれている。近年、イナゴ マメの新たな機能に関する研究が進められており、樹皮抽出物は L - チロシンを基質とするチロシナーゼに対して阻害作用を示し、臨床試験では 28日間の塗布で紫外線に安全性
試 験品が 起因と考えられる副作用はすべての被験者において確認されなかった。

よる色素沈着の肌色の均一性 が 3 % 改善された 6)。イナゴ
マメ莢果（ pod ）抽出物が潰瘍性大腸炎や胃潰瘍などの消化器疾患の予防及び治療効果を有することが報告されている 7, 8)。イナゴマメ抽出物には、新規ポリフェノール化合物
としてイソフェルラ酸と没食子酸とがそれぞれグルコースにエステル結合した化合物（C 23 H 24 O13 ）が含まれ（Fig. 1）、

考察

イナゴマメの種子抽出物に α - グルコシダーゼ阻害活性が結果の概略
本試験は、目尻のシワがシワグレード標準写真 3) の 1 ～

3 に該当する 35 歳以上 55 歳未満の健康な女性 34 例を対象に、被験化粧品使用による目尻のシワの改善効果を被験化あり、体重増加の抑制効果を有する4)。効果評価により、「OLANDU」はコラーゲンCOL 1 A 1 遺伝子の発現を促進
し、コラーゲン生成を促進し、シワを薄くする可能性が報告している 9)。

粧品塗布側と無塗布側を比較する並行群間遮蔽試験（ハーフフェイス法）によって検証した。

試験品に含まれるレチノイド 化合物（パルミチン酸レチノール）は、光老化皮膚の治療に有効な外用剤として数十年今回の試験の有効性評価項目である専門医による目尻シにわたり使用されており、ナイアシンアミドはシワ改善作用

ワグレード目視評価と症例画像による目尻シワグレード目を有する医薬部外品である。角化細胞のレチノイド応答性

視評価では、塗布側で有意な改善が見られたものの、無塗布側においても有意な改善を認め、シワについては群間有意差がなかった。一方、目尻シワレプリカ解析では差がなかった。浅い目尻シワについては前後比較の繊細な変化が、専門医による目視では検知されたが、レプリカ解析で遺伝子を検証した試験では、ビタミンA エステルであるプロ
ピオン酸レチニルの活性が、ナイアシンアミド（ Nam）およびイナゴマメ果実エキスにより増強ことが示されている10)。
本試験品においても、このような相乗効果が期待できる。

は困難であった可能 性が考えられた。

・アイ葉 / 茎エキス Polygonum tinctorium

布側に有意な改善が認められたが、無塗布側でも改善して植物で、タデ アイ（蓼藍）とも呼ばれている。藍は主に染料おり、両側間の解析 でも有意差は認められなかった。

として使用されていたが、古くから解毒や解熱にも効果が副次評価項目の皮膚粘弾性測定については、8 週後に塗一方、試 験 品 に は 多 種 類 の 機 能 性 成 分 や 皮 膚への浸アイ（Polygonum tinctorium）とは「 藍 」と書くタデ科の知られていた。現在は研究が進み、抗腫瘍作用、抗酸化、透性を高める乳化剤やリボソーム化成分が含まれている。

抗炎症、抗ウイルス、抗アレルギー 11)、抗腫瘍作用 12) など

ハーフフェイス法では、機能性成分が皮膚塗布により経皮多くの効能・効果が発見されている。藍から抽出した主要吸収された結果、結構を介して顔面反対側に影響を及ぼし化合物の一つであるトリプタントリンが、ヒト皮膚線維芽細

た可能 性が 残ってしまう。
考察の流れとしては、含有成分の効能について文献的情報を収集し、シワへの作用、経皮吸収の可能性について推考した。また、どのような追加試験を行えば、経皮吸収して反対側に効果を及ぼしたことが検証できるかについて考察を加えた。

試験品の成分について
はじめに、試験品の機能性に関与する代表的な成分について解説する。

産 生 を 強 く 阻 害 す る こ と を 見 出 し た。 肝 細 胞 増 殖 因 子（ HGF ）は、正常な細胞機能の調節に加え、悪性細胞の形
質転換やがん細胞の増殖・浸潤・転移に関与することが明らかにされており、HGF 産生阻害は、悪性細胞の形質転換や腫瘍の進行に対し抑制的に作用すると推測される12)。

2, 4 -dinitrofluorobenzene（ DNFB）誘発アトピー性皮膚炎
マウスを用いた実験では、藍抽出物が血清中の IgE およびインターロイキン - 4 濃度を抑制、病変皮膚のマスト細胞由来のカスパーゼ -1の発現を抑制し、臨床症状を改善した 11)。

化粧品領域では、藍抽出物が保湿作用、炎症を抑える作用、・イナゴマメ ( Ceratonia siliqua L. ) 果実エキス

イナゴマメ（Ceratonia siliqua L.）は、主に地中海地方を原産とするマメ科植物である。イナゴマメの莢果、すなわ

ち、イナゴマメの莢及び果肉はキャロブ（carob）と呼ばれ、古くから食用又は食品原料として利用されてきた。成熟した莢果は長さ 10 〜 25 cm 程度で、甘味を呈する。イナゴ
マメの莢果には、多糖類、セルロース及びミネラル類が多5)胞において様々な HGF 誘導物質によって刺激される HGF

く含まれ、抗酸化ポリフェノール やタンパク質や非炭水

美白作用、抗酸化作用、肌の弾力性を高めてシワを改善する作用が報告されている13)。

我々の研究室では紅蓼（Persicaria hydropiper）
抽出物に、

in vitro 試験で強力な AGEs 生成抑制作用、アルデヒド（3DG, GO, MGO）生成抑制作用があることを報告している14)。類縁種のアイ（Persicaria tinctorium）抽出物が同様の抗糖化作用を有するか否かについては、今後の検証が待
たれる。

（ 8 ）

スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証

・カミツレ花エキス Anthemis nobilis

試 験品には、5 ドロキシプロリンの他に、レシチン、ル

カミツレ（別名：ジャーマンカモミール、学名：Anthemis

チン誘導体（グルコシルルチン）、パルミチン酸アスコルビ

でにハーブ療法として用いられ、中世には消化器系の不調（Merck KGaA, Germany）27, 28) は、ヒドロキシプロリン、ルnobilis）は、ヨーロッパを原産とし、紀元前 1 世紀頃にはすや膨満感の緩和や睡眠を促す効果が記録されている。現在においても、乳児から大人まで幅広い年齢層で不安感、筋ル が 加 わっている。Merck 社の複合原料 RonaCare VTA

チン誘導体、リン酸アスコルビル Mg を含むリポソームが皮膚に浸透することにより、ヒアルロン酸を分解酵素から肉の痙攣、皮膚のトラブル、消化器系の不調を緩和・改保護 すると同時に細胞外マトリックスであるグルコサミノ

善するハーブとして評価されており、ヨーロッパの代表的

グルカンの合成促進を発揮するよう設計されており、本試なメディカルハーブとして位置づけられる験品でも同様に作用が 期待できる。

15, 16)。花はリンゴ様のフルーティーでふくよかな芳香をもち、その香りが鎮静・リラックス効果をもたらすことから現在では世界各国でハーブティーとして愛飲されている17)。主な成分は、テルペノイド 類のセスキテルペン、α -ビサボロール、カマズレン、フラボノイド 類のアピゲニン、ケルセチン、パ
18, 19)ツレチン、ルテオリンとそれらのグルコシド である・ナイアシンアミド

ナイアシンアミド（別名：ニコチン酸アミド、ビタミンB3）とはビタミン B3 の一種で、魚、肉、豆、穀物などの食物に含まれ、医薬部外品として認証を受けている。

In vitro では セラミド合成促進作用が知られている。ヒ。

カミツレ花 Anthemis nobilis（Chamomile：flower, AN）、

ト正常培養ケラチノサイト（角化細胞）に各濃度のナイアシ

berry, CO）、ドクダミ草 Houttuynia coradata（ Doku-dami：
whole plants, HC）、 ブドウ葉 Vitis vinifera（Grape：leaf,
VV）を含むミックスハーブは臨床試験において、オープン試験にて HerbMix 製品 600 mg / 日、12 週間摂取にて血中CML および 3D G の減少、 皮膚粘弾性の改善（皮膚弾力20)（R2, R7）の上昇）、二重盲検試験にて製品 3,000 mg /日、8 週間摂取にて血中 CML および 3 DG（ p < 0.1）の減少傾

ラミドへの取り込 みで測定したところ、濃度 1 μM 以上のセイヨウサンザシ 果 実 Crataegus oxyacantha（Hawthorn：

向、自覚症状の善スコア 改善

21)、二重盲検試験にて製品

ンアミドを添 加し、セラミド合成合成を 14 C - セリンのセ

ナイアシンアミドの添 加は、 有 意（ p < 0.01）にセラミドの 合成を高めた 29)。

培養ケラチノサイトに 10 μM ナイアシンアミドを添加し、細胞間脂質構成成分であるセラミド、脂肪酸およびコ

レステロールの合成を 14 C - 酢酸の各脂質への取り込みで測定した結果、10 μM ナイアシンアミドの添加は、セラミ

ドだ け でなく脂肪 酸および コレステロールの合成も有意

100 mg /日、12 週間摂取にて血中 3D G の減少、上腕皮膚のメラニン量指数および 色差 b*（黄色の指標）の低下を認（ p < 0.01）に促進した 29)。

膚粘弾性の改善に寄与した可能性 がある。

りに細 か いシワを有する28 名の日本人被験者（31- 49 歳、・ヒドロキシプロリン

保湿剤を、残りの半顔にナイアシンアミド 未配合 O/ W 型

め 22)、安定した 抗 糖化作用を発揮している。本成分は皮近畿大学医学部皮膚科 河田 暁 教授らは、ナイアシンア

ミド のヒト皮膚シワにおける有用性を検証した 30)。目の周

平均 39.4 歳）の半顔に 4 % ナイアシンアミド 配合 O / W 型

体内で最も多く存在する蛋白質であるコラーゲンは、骨、皮膚、軟骨、血管などの結合組織の正常な構造と強度を維持するための必須蛋白である。コラーゲンの全アミノ酸（ AA ）の 57 % をグリシン、プロリン、ヒドロキシプロリン（Hyp）が占めている 23)。ヒドロキシプロリンは、皮膚の I 型
コラーゲン中にも豊富に含まれるアミノ酸で、プロリルヒ

ドロキシラーゼによるプロリンの翻訳後修飾を介して不可

逆的に合成される。ヒド ロキシプロリンは、I 型コラーゲ

ン内の Gly-X-Y の繰り返し配列の「 Y 」の位置に存在する。
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン合成およびコラーゲンや関連組織の三重らせん構造の熱力学的安定性に重要な役割を担っている24, 25)。プロリンのヒドロキシル化にはアス
コルビン酸（ビタミン C）が必要であるため、ビタミン C 欠

保湿剤を、二重盲検法に基づいて 8 週間にわたって塗布した。4 週目および 8 週目に日本化粧品工業連合会のガイド

ラインに基づいて、2 名の研究者による観察と写真の組み合わせ、「著効」「有効」「やや有効」「不変」「悪化」の 5段階で評価した結果、4 % ナイアシンアミド 配合保湿剤の塗布は、8 週目において 28 名のうち 18 名に中程度以上のシワ改善効果を示した。この結果は、ナイアシンアミドがシワ改善効果を有することを示すが、基剤によるナイアシ

ンアミドの浸透性向上が 寄与した可能性を指摘している30)。
ナイアシンアミドの抗シワ作用のメカニズムは、現時点では明確にされていないが、in vitro 試験においてコラーゲ

ン合成量が減少した培養ヒト線維芽細胞へのナイアシンア
ミドの添加によりコラーゲン合成量の有意な増加が報告さ

乏によりコラーゲン中のヒドロキシプロリンの割合が少な

れていることから 31)、コラーゲンの合成促進にある程度のくなり、安定性が低下し、壊血病を惹起する。

特異性があり、この作用が寄与している可能性が考えられヒドロキシプロリン摂取によって、肌のコラーゲン合成

る。また、その他、ナイアシンアミドが有する細胞賦活性の増加、表皮の角化細胞の増殖促進を示唆する報告があなど 複合的な作用メカニズムである可能 性も考えられる。

る。ヒドロキシプロリンの誘導体であるアセチルヒドロキ

今後の検証が待たれる。

シプロリンには、創傷治癒促進効果、角層水分量増加 26)
による保湿作用が知られている。

（ 9 ）Glycative Stress Research・シワ形成の機序影響が明らかになってきている。紫外線 B は表皮角化細胞

めにシワ形成の機序について概説する。

生 成・放出する。これらのサイトカインが真皮線維芽細胞

本試験における主要目標はシワ形成の予防である。はじシワは 30 歳ころから顔面に出始める。主要因は真皮にを刺激し、炎症性サイトカイン I L-1α 、I L- 6 や TNFα をおよびオートクライン様式で角化細胞を刺激し、コラーゲ

存在する線維芽細胞が生成する蛋白質、弾性線維とコラー

ンや弾性線維を切断する酵素 MMP-1、MMP-3、MMP-9

ちろん、浅いシワは表皮の乾燥による表皮の構造変化も原させ、これらの線維成分の切断が進みしわになると考えゲンの量的ならびに質的変化によると考えられる32-34)。も因となる。

などの mRNAと蛋白質レベルを高め、さらに活性を亢進られる44)。動物実験レベルでは弾性線維を切断するエラス

常に日光に曝露される顔や頚部には深いシワが 生じる。

ターゼ 活 性を抑えることにより、紫外線誘発シワ形成を農業従事者などではほとんど毎日多量の太陽光線を浴びる

著しく抑制できることから、シワ形成は主に弾性線維の量

深いシワが発症する。深 いシワに囲まれた皮膚は、やや黄コラーゲン線維を切断する MMP-1 の発現が明らかであり、ため、50 歳頃には特に頚部に菱形皮膚と呼ばれる三角形の色みを帯び、触れるとごわごわしている。菱形皮膚の真皮には病理組織学的に抗 CML 抗体陽性物質が真皮上層から的、質的変化によるとの考え方が提示されている34)。一方、
コラーゲンの減少がシワの原因との考え方も強い。

一方、紫外線 A は直接真皮線維芽細胞に働き、MMP-1。すなわち皮膚に AGEsなど線維蛋白質を切断する酵素の mRNA、蛋白レベルをも 20 歳ころではまだ見られず、紫外線を浴びない皮膚でB と A による MMP-1 の mRNA 亢進の引き金には、いずれ中層にかけて塊状沈着している35)の一種であるCML が沈着する。この変化は、顔面皮膚では高齢になっても見られない。紫外線を慢性に浴びた皮膚の加齢性変化であるが、シワとの関連は不明である。

高めるためにシワ形成に至ると考えられている45)。紫外線も活性酸素 が 関与している。さらに、最近、赤外線が紫外線同様に活性酸素を介して MMP -1 の活性亢進に関与していることが 明らかになっている46)。その細胞内活性化系

表皮を下から支える真皮を構成する成分としては、細胞成分と線維性組織を形成する間質成分（細胞外マトリック

路には MAPK が関与している47)。

ス成分）に二分され、主成分である間質成分は、大部分が紫外線を浴びる頻度に比例して、間質成分への影響が

コラーゲンからなる膠原線維とエラスチンからなる弾性線

大きくなり、シワの形成促進、色素沈着の増加など老化現

維、およびこれらの間を埋める基質で占められており、細胞成分としてはこれらを産生する線維芽細胞がその間に散在している1, 36, 37)。

象が 徐々に進行 する48)。コラーゲンについては、UVA 曝
露によりコラーゲン合成能の減少が報告されており49)、このような長期紫外線暴露後の細胞外マトリックス成分の産

コラーゲンは、3 本のペプチド 鎖 が 3 重らせん構造を成しており、各 ペ プチド 鎖はアミノ酸組成として、（グリシン – アミノ酸 X – アミノ酸 Y）n と表される 3 個ごとにグリシンを含む繰り返し構造をもち、アミノ酸 X とアミノ酸 Y にはプロリンおよび ヒド ロキシプロリンが 約 21 % を、アラニンが 約 11 % を占めることが知られている 38- 41)。

間質成分の大部分を占めるコラーゲンは I 型コラーゲン（80 - 85 %）と Ⅲ 型コラーゲン（10 -15 %）が一定の割合で生・分解系バランスの崩れが光老化の原因であると考えら
れている50)。このような背景から、紫外線曝露によって合成量 が 減少するコラーゲンの合成を促進することは、紫外線曝露による光老化の抑制に重要 であり、シワ形成を抑えるには抗酸化剤が有効と考えられる。
創傷治癒部位の線維芽細胞の中には、間葉系幹細胞マーカーである p75NTRを発現しているものがある。細胞培養

系では、コラーゲン線維に付着した線維芽細胞は、タンパ
ク質成長因子の存在下でも成長を停止し、健常組織の線維会合（同種の分子またはイオンが比較的弱い力で数個結合芽細胞の静止状態を模倣している。創傷治癒部位の線維芽し、一つの分子またはイオンのようにふるまうこと）する

細胞は増殖し、コラーゲン線維に取り囲まれている。このことによって構成された膠質状線維である42)。Ⅰ 型コラー

ことは、創傷治癒部位のコラーゲン線維に付着した線維芽

ゲンは皮膚や骨に最も豊富に存在し、強靭性や弾力をもた細胞に新たな増殖開始因子が 存在すること、コラーゲン

細い線維からなり、しなやかさや柔軟性をもたらす作用がHyp）が生成されることを示している。Pro-Hyp は、コラー
ゲンゲル上で培養した p75NTR 陽性線維芽細胞の増殖を誘発するが、p75NTR 陰性線維芽細胞の増殖は誘発しない。
Pro-Hyp は特定の線維芽細胞に対する低分子量の成長開始

せ、組織の構造を支える働きがある。Ⅲ 型コラーゲンは、あり、それぞれ皮膚のハリを支える1, 36, 43)。また、細胞成

分として線維芽細胞（fibroblast）は、真皮に分散しており、コラーゲン線維や弾性線維、ムコ多糖を産生する細胞である。必要に応じて線維芽細胞が活発に働きこれらの物質が順調に つくられている。
シワの形成に関与するコラーゲン線維と弾性線維、および表皮・真皮の移行部の基底膜の蛋白質に紫外線が与える由来のペプチド であるプロリルヒドロキシプロリン（Pro-因子であり、創傷治癒過程に関与している51)。

プロリルヒドロキシプロリン（Pro-Hyp）およびヒドロキ

シプロリルグリシン（Hyp-Gly）は、コラーゲン加水分解

物の摂取によりヒト血中に出現し、コラーゲンゲルに付着した線維芽細胞の増殖を促進し、コラーゲン産生を促進す（ 10 ）

スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証ることから、皮膚や関節症状の改善などコラーゲン加水分

解物の摂取による有益性に関連すると考えられている 52)。

Pro-Hyp は、ゼラチンやコラーゲン加水分解物の経口投与によっても組織に供給される。従って、ゼラチンやコラー

ゼ、特にスーパーオキシドジスムターゼの活性が上昇し、マロンジアルデヒド含量が減少し、マトリックスメタロプ
ロテアーゼ（ MMP-1 、MMP-3）の産生とヒドロキシプロ

リンの減少を惹起される60)。組織学的評価では、炎症性細ゲン加水分解物の補給は、慢性創傷に対する治療効果 が胞の浸潤、コラーゲン分解およびエラスチン異常を認めら期待できる。動物実験やヒト臨床試験において、ゼラチンれる。これらの結果は、 シワ形成につながる所見と考えらやコラーゲン加水分解物の摂取は、動物やヒトの褥瘡の治れ、ヒドロキシプロリンの減少が関与することを示している。

癒を促進し、糖尿病動物における創傷治癒遅延を改善する。

シワ形成予防シワの原因として最も大きいのは、UV 暴露など光老化であり、酸化 ストレスである1)。従って、抗酸化物質はシワ形成予防に有効である。試験品成分のイナゴマメ果実エ

キス 53)、アイ葉 / 茎エキス 54)、カミツレ花エキス 55)、ヒメ
フウロエキス56, 57)、ユビキノンは抗酸化作用を有する。

ナイアシンアミド（ニコチンアミドとも呼ばれる）とニコチン酸（一般にナイアシンとも呼ばれる）は、生体内で互

ヒド ロキシプロリン（Hyp）単独投与によりシワ改善効

果を検証した報告はないが、Hyp 含有ペプチドに関する報告はいくつかある。コラーゲンペプチド 補給が、ヒトの皮膚の保湿、弾力、しわの改善に有効な治療法であるかを検証する目的で、3 % の Gly-Pro-Hyp を含むトリペプチド（Gly-X-Y）含有率 15 % 以上の低分子コラーゲンペプチド（LMWCP）の二重盲検無作為プラセボ対照試験が実施されている。 対象（ n = 64）は、プラセボまたは LMWCPの 1,000 mg を 1 日 1 回、 12 週間投与するよう無作為に割り当てられ、ベースライン時、6 週間後、12 週間後に、肌の潤い、しわ、弾力性のパラメータを評価した。プラセボ

いに変換されるため、ビタミンとしての効果は同様であ群と比較して、LMWCP 群では 6 週間後および 12 週間後

ミド は、水素の授受に関わる重要な補酵素の構成成分であ

12 週後、プラセボ 群に比べ、視覚評価スコアと皮膚のしわの 3 つ のパ ラメータが 有意に改善された。また、皮膚
弾力性については、LMWCP 群では 3 項目中 1 項目が 12る。両者を総 称してビタミン B (3) と呼ぶ。ナイアシンア
る 58)。ここでは、ニコチンアミド アデニンジヌクレオチド（NAD）とニコチンアミド アデニンジヌクレオチドリン酸（NADP）という 2 つのコードヒドロゲナーゼが中心的な重要性を持っている。ナイアシンアミドの外用は、経表皮水分損失の減少や角質層の水分量の改善など、表皮のバリア機能を安定化させる効果がある。ナイアシンアミドは、ケラに皮膚の水分補給値が有意に高かった。LMWCP 群では週後にベースラインから有意に改善し、プラセボ群に比べ

LMWCP 群では 3 項目中 2 項目が 12 週後に有意に高くなった。これらの結果から、LMWCP がヒトの皮膚の保湿、弾力、シワを改善するための健康機能性食品素材として使用

チンなどのタンパク質合成の増加、セラミド合成の促進、ケできる可能性が 示唆された 61)。

をもたらす。老化した皮膚では、ナイアシンアミドの局所に強調しあい統合的に作用して、シワ形成の改善に貢献し

ラチノサイトの分化の促進、細胞内の NADP レベルの上昇適用により、表面構造が 改善され、シワが 滑らかになる58)。
ルチンは、ケルセチン配糖体であり、抗酸化作用を有することが知られているバイオフラボノイドの一種である。
ルチンの生体内での効果を調べるために、ルチンを含むク

リームをヒトの皮膚に 4 週間塗布する二重盲検臨床試験が実施されている。30 ～ 50 歳の被験者 40 名を対象に、2 週

間後と 4 週間後に、真皮密度、皮膚の弾力性、カラスの足本試験では、試験品に配合されたこれらの成分が互いたと推測している。
・皮膚老化への糖化ストレスの関与

グルコースなどの還元糖は塩基性溶液中でアルデヒド基とケトン基を形成する。また脂質の β 酸化や過酸化によっても同様にアルデヒド基とケトン基を生じる。糖化ストレ

スとはアルデヒド基とケトン基が過剰に生成される状態を意味する。アルデヒドとケトンはカルボニル基をもつこと跡の長さと面積、目尻のしわの数を、コントロールとルチン含が特徴で、カルボニル基は電気陰性度の高い酸素原子に電有クリームのいずれかを塗布した後に分析した結果、ルチン

子が引き寄せられて分極し、炭素原子は求核攻撃を受けやは、皮膚の弾力性を高め、シワの長さ、面積、数を減少させすくなっている。これら反応基が蛋白質などの生体物質とシワ形成抑制を有することが確認された 59)。ルチンは、ヒト
皮膚線維芽細胞（HDFs）のコラーゲン、タイプ I 、アルファ 1（COL1A1）の mRNA 発現を増加させ、マトリックスメタロ
ペプチダーゼ 1（MMP1）の mRNA 発現を減少させることが確認されるとともに、ルチンの活性酸素消去活性が用量依存的に刺激されることを検証し、ルチンが 酸 化ストレス条件下で保護作用を発揮することが確認された 59)。

ヒドロキシプロリンはシワ形成に関与する。UVB 誘発

光老化マウスモデルでは、UV 照射により、皮膚のカタラー

非制御的に反応すると、翻訳後修飾（蛋白変性）、老廃物の蓄積、機能性蛋白の劣化、TCAサイクルの機能障害、細胞
内シグナルの活性化や組織障害を惹起し、加齢に伴う退行性変化の大きな要因になる62)。狭義のメイラード 反応は、還元糖と蛋白質の非酵素的、非可逆的の反応により、シッフ
塩基（Schiff base）の形成、アマドリ転移、様々な中間体形成を経て、蛋白糖化最終生成物（advanced glycation end

products: AGEs）の生成に至るまでの過程を意味する。

糖化 ストレスは皮膚老化の大きな危険因子である62, 63)。

糖化 ストレスによって皮膚を構成するコラーゲンやエラチ（ 11 ）Glycative Stress Research

ンが変性すると、弾力性の消失やたるみが生じる。AGEs

緩段階の弾力性部分に対する吸引段階の弾力性部分の比）保湿成分）の糖化は皮膚から水分蒸散を増やし、保湿機能± 0.14 と増加（改善）傾向を示した（ p = 0.076 ）が、R2（皮の蓄積は黄ばみを生じる。ケラチンやフィラグリン（天然を低下させる。フィラグリンの減少は皮膚バリアの破綻を64)

助長し、アトピー性皮膚炎の発症リスクを高める 。また、
糖化 ストレスは色素細胞のメラニン産生を亢進させる 65)。
・皮膚粘弾性の改善

副次評価項目

加齢に伴い皮膚の弾力性は失われる 。真皮の I 型コラー
2)

ゲン線維は三重らせん構造を有し、エラスチン線維とともに皮膚の弾力性を維持する役割を担う。加齢に伴い線維芽細胞からのフィブロネクチンなど 細胞外マトリックス成分の産生が低下し、コラーゲン、エラスチンの産生も低下する。また糖化ストレスによってコラーゲン線維が AGE 化して架橋を形成し、線維としての可動性が低下することが皮膚弾力性低下の大きな原因となっている66)。コラーゲン蛋
白を構成するリジンやアルギニン残基は糖化反応を受けやでは試験品塗布側で塗布前 0.51 ± 0.07から塗布 4 週後 0. 56
膚の元の状態に戻る能力と最大振幅の比）では試験品塗布

側で塗布前 0.62 ± 0.07 から塗布 4 週後 0.70 ± 0.09 と有意に増加し（ p = 0.002）、R7（曲線全体に対する弾力性回

復部分の比）でも試験品塗布側で 0.31 ± 0.04 から 4 週後

0.38 ± 0.14 と有意に増加した（ p = 0. 018）。
今回の試験では、R5、R7 に有意な変化はなく、R2 は有 意に低下しており、試験品では皮膚弾力性改善作用は確認できなかった。

これまでのミックスハーブ 69)、マンゴスチンエキス 70)、

マンゴスチン果皮抽出物配合黒酢飲料 71)、ヒシエキス 72)の経口摂取で、皮膚弾力性の改善作用 が 報告されている。
これらは AGEs 生成抑制作用を有する機能成分を含有している。

試験品の含有成分のうち、カミツレ花エキス、グルコシ

すく、AGE 化して線維間架橋を形成し、そのためにコラー

ルヘスペリジン、グルコシルルチンに AGEs 生成抑制作用

う変化を Fig. 5 に示す 20)。糖化 ストレスが 強い糖尿病患者考えられる。

ゲンは可動性を失う 66)。ヒトにおける皮膚弾力の加齢に伴では健常者に比べ R2 、R7 の弾力性曲線が下方シフトする。

AGE Reader で測定した皮膚 AGEs 蛍光量は皮膚 Stiffnessと正相関を示す 67)。

皮膚粘弾性 R2を指標にした過去の臨床試験を紹介する。

を含有するが、皮膚弾力性の 改善にまでは至らなかったと

塗布側と無塗布側との間に差が見られなかった理由
これまで述べたように、試験品の含有成分の特性をみれ

多種類の美容成分が 配合されている美容液の目尻のシワとば、シワ形成の緩和、皮膚弾力性の改善作用は説明がつく。

肌質改善効果の検証試験では、目尻シワの改善効果に加え、しかし問題は、今回の試験で塗布側と無塗布側との間に差

皮膚弾力性の改善を報告している68)。Cutometer の R5（弛

b)
0.70

0.55

0.65

0.50

Skin elasticity (R7)

Skin elasticity (R2)a)

が見られなかった点である。

0.60
0.55
0.50

Control (n = 77)

0.45
0.40
0.35
0.30

0.45
0.40

T2DM (n = 76)

35

40

45

50

55

60

65

70

0.25

75

Age (years)

35

40

45

50

55

60

65

70

75

Age (years)

Fig. 5. Transitional change by age of skin elasticity and impacts of glycative stress.
a) R2, b) R7. The mean value ± SEM, n = 77, healthy persons; n = 76, patients with type 2 diabetes (T2DM). Measurement of
the inside of an upper arm using Cutometer (Courage & Khazaka). R2, biological elasticity (Ua1/Uf1); R7, elastic recovery (Ur1/
Uf1); SEM, standard error mean.

（ 12 ）

スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証

老化の仕方は個々により異なるが皮膚においても同様である 73-75)。乾燥肌になる人、しみやしわ、黄ばみが気にな

結論る人、弾力性が乏しくなる人など様々である。うるおい年

齢は皮膚水分量測定 63, 76)、しみ 年齢・しわ年齢は画像解析 76)、黄ばみ年齢は色差計や皮膚AGEs（advanced glycation

end products）蛍光測定 77)、もちはだ（はり）年齢は弾力性検査

20, 63, 78)

目尻のシワが気になる女性を対象に、試験品塗布による皮膚への作用を検証した結果、含有する多種類の機能性成分の総合作用の結果、目尻シワの改善が二つの評価法（診察によるシワグレード目視、画像によるシワグレード目視）によって視覚パラメータが定量化されてきた。

により認められた。しかしながら無塗布の反対側も同様にそして危険因子は全身、皮膚に共通である。抗酸化サプ改善を認め、塗布側と無塗布側との間に統計学的有意差はリメントを摂取すれば、体内も皮膚も同時に作用を受ける。

なかった。試験期間中に試験品に関する有害事象は認めら

抗糖化サプリメントであ っても同様である。

れず、安全性が確認された。一方、試験品は多種類の機能

今 回の試 験 品は、皮膚局 所 塗 布されたものであるが、成分を含み、含有成分の乳化とリボゾーム化による皮膚浸乳化剤やリボソーム化成分を併用しており、皮膚への浸透

透能の強化を企図していることから、成分が経皮吸収され性能は高いことが予測される。その結果、試験品の影響た後、反対側に移行して作用した可能性は否定できなかっが塗布部だけでなく無塗布部にも表れた可能性が考えられた。本推論を検証するためには、今後の試験で試験品塗布る。この問題については、試験品塗布後に有効成分の血中後に有効成分が経皮吸収されて、血中濃度の上昇を確認す

濃度変化を確認することで検証できると思われる。

る必要がある。

安全 性
安全性評価の結果、試験品が起因と考えられる副作用は確認されなかった。試験品の安全性については、特に問題

利益相反申告ないと判断した。

本 研 究を施 行 するにあ たり株 式 会 社 ナボカルコスメ
ティックスより支援を受 けた。

参考文献

9) Nabocul Cosmetics Co., Ltd. Developed a new brand1) Ichihashi M, Ando H, Yoshida M, et al. Photoaging of theskin. Anti-Aging Med. 2009; 6: 46-59

2) Ichihashi M, Yagi M, Nomoto K, et al. Glycation stressand photo-aging in skin. Ant-Aging Med. 2011; 8: 23-29.

3) Japanese Cosmetic Science Society. Wrinkle grade

standard photo of periorbital wrinkles. Guidelines forcosmetic function evaluation methods. (in Japanese)
http://www.jcss.jp/journal/contents_guideline5.pdf
4) Tsim K, Yashiro T, Dong T, et al. New polyphenol
compound. Patent JP6976014B1, 2021.
5) Zulim Botega D, Bastida S, Marmesat S, et al. Carob
fruit polyphenols reduce tocopherol loss, triacylglycerol
polymerization and oxidation in heated sunflower oil.
Journal of the American Oil Chemists’ Society. 2009; 86:
419-425.
6) Lall N, Kishore N, Momtaz S, et al. Extract from
Ceratonia siliqua exhibits depigmentation properties.
Phytother Res. 2015; 29: 1729-1736.
7) Rtibi K, Jabri MA, Selmi S, et al. Preventive effect ofcarob (Ceratonia siliqua L.) in dextran sulfate sodiuminduced ulcerative colitis in rat. RSC Advances. 2016; 6:19992-20000.
8) Rtibi K, Selmi S, Grami D, et al. Chemical constituentsand pharmacological actions of carob pods and leaves(Ceratonia siliqua L.) on the gastrointestinal tract: A review.
Biomed Pharmacother. 2017; 93: 522-528.

"Asakado" and announced "OLANDU", the latest
technology chemical compound in the aging care field.
Press Distribution, Jan 19, 2022. (in Japanese)
https://kyodonewsprwire.jp/prwfile/release/M106981/202
201196276/_prw_PR1fl_LS85a7Fd.pdf
10) Lam ECS, Li R, Rodrigues MR, et al. Enhanced retinoid
response by a combination of the vitamin A ester retinyl
propionate with niacinamide and a flavonoid containing
Ceratonia siliqua extract in retinoid responsive in vitro
models. Int J Cosmet Sci. 2021; 43: 102-106.
11) Han NR, Kang SW, Moon PD, et al. Genuine traditional
Korean medicine, Naju Jjok (Chung-Dae, Polygonum
tinctorium) improves 2,4-dinitrofluorobenzene-induced
atopic dermatitis-like lesional skin. Phytomedicine. 2014;
21: 453- 460.
12) Motoki T, Takami Y, Yagi Y, et al. Inhibition ofhepatocyte growth factor induction in human dermal
fibroblasts by tryptanthrin. Biol Pharm Bull. 2005; 28:
260-266.
13) Cella Cosmetics. Persicaria tinctoria leaf/stem extract.
“Ingredient Dictionary,” Cella Cosmetics. (in Japanese)
https://cella.jp/ingredient/detail.php?p_id=1370 (Accessedat Feb 7, 2023)
14) Takabe W, Yamaguchi T, Hayashi H, et al. Identificationof antiglycative compounds in Japanese red water pepper(red leaf variant of the Persicaria hydropiper Sprout).
Molecules. 2018; 23: 2319.

（ 13 ）Glycative Stress Research

15) Johnson LR, et. German chamomile. “Guide to Medicinal

Herbs”, Nikkei National Geographic Inc, Tokyo, pp145147, 2014. (in Japanese)16) Miraj S, Alesaeidi S. A systematic review study oftherapeutic effects of Matricaria recuitta chamomile(chamomile). Electron Physician. 2016; 8: 3024-3031.
17) Nagashima T. German chamomile. “ Herbal Tea: The
Healing of Science”, Flagrance Journal, Tokyo, pp42-43,
2010. (in Japanese)18) McKay DL, Blumberg JB. A review of the bioactivity andpotential health benefits of chamomile tea (Matricaria
recutita L.). Phytother Res. 2006; 20: 519-530.
19) Hayashi S. German chamomile. “The Encyclopedia ofMedical Herb”, Tokyodo Shuppan Co. Ltd, Tokyo, pp7475, 2016. (in Japanese)20) Kubo M, Yagi M, Kawai H, et al. Anti-glycation effectsof mixed-herb-extracts in diabetes and pre-diabetes. J
Clin Biochem Nutr. 2008; 43(Suppl. 1): 66-69.
21) Yonei Y, Miyazaki R, Takahashi Y, et al. Anti-glycation
effect of mixed herbal extract in individuals with prediabetes mellitus: A double-blind, placebo-controlled,parallel group study. Anti-Aging Med. 2010; 7: 26-35.
22) Kawai H, Shoshihara M, Kawakami H, et al. Anti-glycationand skin beautification properties from ingestion of
mixed herb extract: A placebo-controlled, double-lind,randomized, parallel-group study. Glycative Stress Res.
2016; 3: 236-245.
23) Li P, Wu G. Roles of dietary glycine, proline, andhydroxyproline in collagen synthesis and animal growth.
Amino Acids. 2018; 50: 29-38.
24) Gordon MK, Hahn RA. Collagens. Cell Tissue Res. 2010;339: 247-257.
25) Srivastava AK, Khare P, Nagar HK, et al. Hydroxyproline:
A potential biochemical marker and its role in thepathogenesis of different diseases. Curr Protein Pept Sci.
2016; 17: 596-602.
26) Cosmetic ingredients online. Basic information, purposeof formulation, and safety of hydroxyproline. Cosmetic
Ingredient Journal, the latest update at July 11, 2022. (inJapanese)https://cosmetic-ingredients.org/skin-conditioningmiscellaneous/1271/
27) Matsumoto Trading Co., Ltd. Ronacare VTA. “Databaseof Cosmetic Ingredients,” Sept 1, 2009. (in Japanese)
https://matsumoto-trd.com/product/pdf/concept/h02.pdf28) Matsumoto Trading Co.,Ltd. Ronacare ASCⅢ & Ronacare
VTA. “Database of Cosmetic Ingredients,” Oct 1, 2009.
(in Japanese)
https://matsumoto-trd.com/product/pdf/02/vo2/05.pdf
29) Tanno O. Improvement epidermal permeability barrier
by increasing de novo synthesis of ceramides. Fragrance
Journal. 1999; 27(10); 23-28. (in Japanese)30) Kawada A, Konishi N, Oiso N, et al. Evaluation of antiwrinkle effects of a novel cosmetic containing niacinamide.
J Dermatol. 2008; 35: 637-642.
31) Matts PJ, Oblong JE, Bissett DL. A review of the rangeof effects of niacinamide in human skin. International
Federation of Societies of Cosmetic Chemists (IFCC)
Magazine. 2002; 5: 285-289.
32) Fisher GJ, Datta SC, Talwar HS, et al. Molecular basisof sun-induced premature skin ageing and retinoid
antagonism. Nature. 1996; 379(6563): 335-339.

33) Chung JH, Seo JY, Choi HR, et al. Modulation of skincollagen metabolism in aged and photoaged human skin invivo. J Invest Dermatol. 2001; 117: 1218-1224.
34) Hachiya A, Kobayashi A, Ohuchi A, et al. The paracrinerole of stem cell factor/c-kit signaling in the activation ofhuman melanocytes in ultraviolet-B-induced pigmentation.
J Invest Dermatol. 2001; 116: 578-586.
35) Mizutari K, Ono T, Ikeda K, et al. Photo-enhanced
modification of human skin elastin in actinic elastosis
by N ε-(carboxymethyl)lysine, one of the glycoxidation
products of the Maillard reaction. J Invest Dermatol.
1997; 108: 797-802.
36) Asada Y. “Mechanism and functions of the dermis.” The
Encyclopedia of Cosmetic Dermatology. Chuo Shoin
Co.,Ltd. Tokyo, pp28-33, 2022. (in Japanese)37) Shimizu H. Dermis.” Textbook of Modern Dermatology.”
Nakayama Shoten Co., Ltd. Tokyo, pp13-20, 2018. (inJapanese)38) Hattori S, Kuwaba K. Cosmetics and Collagen.
“Manufacturing, Application and Development of
Collagens 2. CMC Publishing Co.,Ltd. Tokyo, pp143166, 2020. (in Japanese)39) Oki M, et. “collagen” Encyclopedic dictionary of chemistry,
Tokyo Kagaku Dojin, 1989; 814. (in Japanese)40) Okuyama K. “Molecular structure of collagen”
Manufacturing, Application and Development of Collagens
II,” CMC Publishing Co.,Ltd. pp1-12, 2020. (in Japanese)41) Seiwa Kasei Co Ltd. Hydrolyzed collagen derived fromfish scale. Patent JP2007326869A. Dec 20, 2007.
42) Keene DR, Sakai LY, Bächinger HP, et al. Type Ⅲ collagencan be present on banded collagen fibrils regardless offibril diameter. J Cell Biol. 1987; 105: 2393-2402.
43) Murakami Y, Adachi H, Sakaida T, et al. The Reduction
mechanism of the type III/I collagen ratio with aging: Agerelated change in meprin, a type III collagen propeptide
cleavage enzyme. Journal the Society of Cosmetic
Chemists of Japan. 2013; 47: 278-284. (in Japanese)44) Woodley DT, Kalebec T, Banes AJ, et al. Adult humankeratinocytes migrationg over nonviable dermal collagenproduce collagenolytic enzymes that degrade type I andtype IV collagen. J Invest Dermatol. 1986; 86: 418-423.
45) Herrmann G, Walscheke M, Lange TS, et al. UVA
irradiation stimulates the synthesis of various matrixmetalloproteinases (MMPs) in cultured human fibroblasts.
Exp Dermatol. 1993; 2: 92-97.
46) Schieke SM, Schroeder P, Krutmann J. Cutaneous
effects of infrared radiation: From clinical observations
to molecular response mechanisms. Photodermatol
Photoimmunol Photomed. 2003; 19: 228-234.
47) Calles C, Schneider M, Macaluso F, et al. Infrared A
radiation influences the skin fibrobrast transcriptome:
Mechanisms and consequences. J Invest Dermatol. 2010;
130: 1524-1536.
48) Asada Y. Acute and chronic skin lesions. “TheEncyclopedia of Cosmetic Dermatology.” Chuo ShoinCo., Ltd., Tokyo, pp195, 2002. (in Japanese)49) Tanaka H, Okada T, Konishi H, et al. The effect ofreactive oxygen species on the biosynthesis of collagenand glycosaminoglycans in cultured human dermal
fibroblasts. Arch Dermatol Res. 1993; 285: 352-355.
50) Obayashi K, Kyotani D, Masuda K, et al. Inhibitory（ 14 ）

スキンケアによる目尻のシワ改善効果の検証

effects of the plant extracts on matrix proteinases. Journal
the Society of Cosmetic Chemists of Japan. 1998; 32:
272-279. (in Japanese)
51) Sato K, Asai TT, Jimi S. Collagen-derived di-peptide,
prolylhydroxyproline (Pro-Hyp): A new low molecularweight growth-initiating factor for specific fibroblasts
associated with wound healing. Front Cell Dev Biol. 2020;
8: 548975.
52) Asai TT, Oikawa F, Yoshikawa K, et al. Food-derived
collagen peptides, prolyl-hydroxyproline (Pro-Hyp), andhydroxyprolyl-glycine (Hyp-Gly) enhance growth ofprimary cultured mouse skin fibroblast using fetal bovine
serum free from hydroxyprolyl peptide. Int J Mol Sci.
2019; 21: 229.
53) Ben Ayache S, Behija Saafi E, Emhemmed F, et al.
Biological activities of aqueous extracts from carob plant(Ceratonia siliqua L.) by antioxidant, analgesic andproapoptotic properties evaluation. Molecules. 2020; 25:3120.
54) Tokuyama-Nakai S, Kimura H, Hirabayashi Y, et al.
Constituents of flavonol O-glycosides and antioxidant
activities of extracts from seeds, sprouts, and aerial partsof Polygonum tinctorium Lour. Heliyon. 2019; 5: e01317.
55) Al-Dabbagh B, Elhaty IA, Elhaw M, et al. Antioxidant andanticancer activities of chamomile (Matricaria recutita
L.). BMC Res Notes. 2019; 12: 3.
56) Ben Jemia M, Aidi Wannes W, Ouchikh O, et al.
Antioxidant activity of Tunisian Geranium robertianum L.
(Geraniaceae). Nat Prod Res. 2013; 27: 2076-2083.
57) Catarino MD, Silva AMS, Cruz MT, et al. Antioxidant
and anti-inflammatory activities of Geranium robertianum
L. decoctions. Food Funct. 2017; 8: 3355-3365.
58) Gehring W. Nicotinic acid/niacinamide and the skin. J
Cosmet Dermatol. 2004; 3: 88-93.
59) Choi SJ, Lee SN, Kim K, et al. Biological effects of rutinon skin aging. Int J Mol Med. 2016; 38: 357-363.
60) Zhou Y, He L, Zhang N, et al. Photoprotective effect ofArtemisia sieversiana Ehrhart essential oil against UVBinduced photoaging in mice. Photochem Photobiol. 2021
Nov 12.
61) Kim DU, Chung HC, Choi J, et al. Oral intake of lowmolecular-weight collagen peptide improves hydration,
elasticity, and wrinkling in human skin: A randomized,
double-blind, placebo-controlled study. Nutrients. 2018;
10: 826.
62) Nagai R, Mori T, Yamamoto Y, et al. Significance ofadvanced glycation end products in aging-related disease.
Anti-Aging Med. 2010; 7: 112-119.
63) Yonei Y, Uenaka S, Yagi M, et al. Effects on skin by
dewaxed brown rice: An open label test. Glycative StressRes. 2021; 8: 29-38.
64) Furue M, Chiba T, Tsuji G, et al. Atopic dermatitis:
immune deviation, barrier dysfunction, IgE autoreactivity
and new therapies. Allergol Int. 2017; 66: 398-403.
65) Abe Y, Takabe W, Yagi M, et al. Inhibition of AGEinduced melanogenesis in B16 melanoma cells by iridoidcontaining plants. Glycative Stress Res. 2017; 4: 67-70.
66) Cerami A, Vlassara H, Brownlee M. Glucose and aging.
Sci Am. 1987; 256: 90-96.
67) Ishizaki K, Yagi M, Morita Y, et al. Relationship between
glycative stress markers and skin stiffness. Glycative
Stress Res. 2020; 7: 204-210.
68) Kaneko T, Miyata A, Ishida N. Cosmetic essence makes
both effects which looks younger than the actual age andskin improvement. Medical Consultation & New Remedies.

inhibit Maillard reaction, and reduce chronic diabetic
complications risk in streptozotocin-induced diabetic rats.
Anti-Aging Med. 2008; 5: 93-98.
70) Ohno R, Moroishi N, Sugawa H, et al. Mangosteen
pericarp extract inhibits the formation of pentosidine andameliorates skin elasticity. J Clin Biochem Nutr. 2015;57: 27-32.
71) Takabe W, Yagi M, Ogura M, et al. Effect of mangosteen
pericarp extract-containing black vinegar drink on skinquality through anti-glycative actions. Glycative StressRes. 2017; 4: 158-171.
72) Takeshita S, Ishioka Y, Uemura T, et al. Reducing
effect of the long term intake of water chestnut (Trapa
bispinosa Roxb.) pericap extract on glycative stress inthe placebo-controlled double blinded clinical trial and invitro inhibitory actions on low-density lipoprotein (LDL)
glycation. Glycative Stress Res. 2017; 4: 299-316.
73) Yonei Y, Mizuno Y. The human dock of tomorrow:
Annual health checkup for anti-aging. Ningen Dock. 2005;
19(6): 5-8.
74) Yonei Y, Takabe W. Aging assessment by anti-aging
medical checkup. Health Evaluation and Promotion.
2015; 42: 459-464.
75) Yonei Y, Takabe W, et al. What does the Anti-Aging
Medical Checkup show?: Data presentation. Health
Evaluation and Promotion. 2017; 44: 600-605.
76) Miyamoto K, Inoue Y, Hsueh K, et al. Characterizationof comprehensive appearances of skin ageing: An 11year longitudinal study on facial skin ageing in Japanese
females at Akita. J Dermatol Sci. 2011; 64: 229-236.
77) Nomoto K, Yagi M, Arita S, et al. A survey of fluorescencederived from advanced glycation end products in theskin of Japanese: Differences with age and measurement
location. Anti-Aging Med. 2012; 9: 119-124.
78) Yo K. The relationship between aging-related changes
in cheek appearance and skin properties. Journal of theJapanese Society for Cutaneous Health. 2012; 34: 108112. (in Japanese)

2016; 53: 807-814. (in Japanese)69) Yonei Y, Yagi M, Hibino S, et al. Herbal extracts（ 15 ）